標的RNAの少なくとも連続5塩基と相補的な塩基配列を含む7塩基からなり、その配列中の1から4塩基がLNAlockednucleicacid修飾されており、細胞内においてtRNaseZLの作用により標的RNAを切断することによってこの標的RNAを転写する遺伝子の活性を低下または消滅させるヘプタマー型スモールガイド核酸。LNA修飾された塩基以外の塩基が2’Oメチル化修飾されている請求項1のヘプタマー型スモールガイド核酸。標的RNAが疾患に関連する遺伝子から転写されたRNAである請求項1または2のヘプタマー型スモールガイド核酸。疾患に関連する遺伝子がガンの発症に関連する遺伝子である請求項3のヘプタマー型スモールガイド核酸。請求項3または4のヘプタマー型スモールガイド核酸の有効量を含有する薬剤。ヘプタマー型sg核酸を薬剤成分とする場合の一つの課題は、生体内に投与された場合にその主効果tRNaseZLによる標的RNAの切断誘導が持続的に発揮されるように、生体安定性および温度安定性を向上させることである。このような課題に対して、アンチセンスRNAやsiRNAに対する修飾として実績のあるLNA修飾は有望であると考えられる。しかしながら、LNA修飾によってヘプタマー型sg核酸の主効果tRNaseZLによる標的RNAの切断誘導がどのように変容するかは一切知られていない。仮に、LNA修飾によってヘプタマー型sg核酸の主効果が大幅に損なわれることがあれば、LNA修飾による安定性の向上は薬剤成分としてのsg核酸においては好ましいものでない。本願発明は、ヘプタマー型sg核酸の主効果と安定性との観点から、ヘプタマー型sg核酸が生体内でその主効果を最大限に発揮することのできるLNA修飾条件を提供することによって、ヘプタマー型sg核酸の薬剤成分としての価値をさらに向上させることを課題としている。本発明は、前記の課題を解決するものとして、以下の発明を提供する。1標的RNAの少なくとも連続5塩基と相補的な塩基配列を含む7塩基からなり、その配列中の1から4塩基がLNAlockednucleicacid修飾されており、細胞内においてtTNaseZLの作用により標的RNAを切断することによってこの標的RNAを転写する遺伝子の活性を低下または消滅させるヘプタマー型スモールガイド核酸。2LNA修飾された塩基以外の塩基が2’Oメチル化修飾されている前記1のヘプタマー型スモールガイド核酸。3標的RNAが疾患に関連する遺伝子から転写されたRNAである前記1または2のヘプタマー型スモールガイド核酸。4疾患に関連する遺伝子がガンの発症に関連する遺伝子である前記3のヘプタマー型スモールガイド核酸。5前記3または4のヘプタマー型スモールガイド核酸の有効量を含有する薬剤。本発明1によれば、標的RNAの切断効率を許容範囲内に維持し、かつ、生体内での安定性に極めて優れてたヘプタマー型スモールガイド核酸が提供される。このヘプタマー型スモールガイド核酸は、薬剤成分として生体内に投与した場合に、その優れた安定性により標的RNAの切断効果を最大限に発揮することができる。本発明2によれば、LNA修飾塩基以外の塩基がさらに2’Oメチル化修飾されているため、標的RNAの切断効率がさらに優れたヘプタマー型スモールガイド核酸が提供される。本発明3から5によれば、例えばガン等の疾患治療または予防のための手段が提供される。本発明1のヘプタマー型スモールガイド核酸は、標的RNAの少なくとも連続5塩基と相補的な塩基配列を含む7塩基からなり、その配列中の1から4塩基がLNAlockednucleicacid修飾されている。LNAは、2’位の酸素原子と4’位の炭素原子がメチレンを介して架橋した人工核酸であり、例えば、2′O4′CmethyleneβDribofuranoseを含む核酸である。標的RNAは、その発現を抑制または消失させる対象となる遺伝子標的遺伝子の転写産物RNA、特にmRNAである。標的遺伝子の発現抑制とは、その遺伝子から転写合成されるタンパク質量が、25以下、好ましくは50以下、さらに好ましくは75以下、特に好ましくは95以下に低減することである。標的遺伝子は、その発現抑制または発現消失が産業上の利用価値を有する遺伝子であり、とくにその遺伝子の発現亢進が特定の疾患の原因となるような遺伝子以下、病原遺伝子と記載することがある。そのような病原遺伝子の例としては、例えば、ras、erbb2、myc、apcbrca1、rb、Bcl2、BGEF癌遺伝子、レニンなどの高血圧に関与する遺伝子、インスリンなどの糖尿病関連遺伝子、LDLレセプターなどの高脂血症関連遺伝子、レプチンなどの肥満関連遺伝子、アンギオテンシンなどの動脈硬化疾患関連遺伝子、痴呆の原因として知られているアポリポタンパク質およびプレセリニン、老化に関連する遺伝子などが例示される。これらの遺伝子およびそのmRNA配列は公知のデータベースNCBIヌクレオチドデータベース等において公知である。ヘプタマー型sg核酸は、塩基対合を介して標的RNAとtRNAアクセプターステム様二重鎖を形成することによって、tRNaseZLによる標的RNAの特異的切断を可能とするため、ヘプタマー型sg核酸の標的部位は、tRNATarmに類似する安定したヘアピン構造領域の直下となり、ヘプタマー型sg核酸はその7塩基だけでなく、安定したヘアピン構造を形成する約12塩基の特異性によって効果的にRNAを切断する。従って、ヘプタマー型sg核酸の塩基配列は、これらの標的遺伝子のmRNA配列情報から決定することができる。配列を決定したヘプタマー型sg核酸は、公知の化学合成を用いる方法、あるいは酵素的転写法等にて製造することができる。公知の化学合成を用いる方法として、ホスホロアミダイト法、ホスフォロチオエート法、ホスホトリエステル法等をあげることができ、例えば、ABI3900ハイスループット核酸合成機アプライドバイオシステムズ社製やNTSH6核酸合成機日本テクノサービス社製、Oligoilot10核酸合成機GEヘルスケア製により合成することができる。酵素的転写法としては、目的の塩基配列を有するプラスミドまたはDNAを鋳型として、T7、T3、SP6RNAポリメラーゼ等のRNAポリメラーゼを用いた転写をあげることができる。合成法または転写法により製造したヘプタマー型sg核酸は、次いでHPLC等にて精製する。例えばHPLC精製時には、triethylammoniumacetateまたはhexylammoniumacetateとacetonitrileの混合溶液を用いて、ヘプタマー型sg核酸をカラムから溶出する。その後、溶出体積の1000倍量の蒸留水で溶出溶液を10時間透析し、透析溶液を凍結乾燥した後、使用時まで冷凍保存する。使用時には蒸留水で最終濃度が100μM程度になるように溶解する。本発明のヘプタマー型sg核酸に用いられるLNA修飾核酸以外の核酸としては、ヌクレオチドまたはそのヌクレオチドと同等の機能を有する分子が重合した分子であればいかなるものでもよい。ヌクレオチドとしては、例えばリボヌクレオチドの重合体であるRNA、デオキシリボヌクレオチドの重合体であるDNA、RNAおよびDNAが混合した重合体、ヌクレオチド類似体を含むヌクレオチド重合体が、それぞれあげられる。特にRNAが好ましい。ヌクレオチド類似体としては、例えばRNAまたはDNAと比較して、ヌクレアーゼ耐性の向上または安定化させるため、相補鎖核酸とのアフィニティーをあげるため、細胞透過性をあげるため、あるいは可視化させるために、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、RNAまたはDNAに修飾を施した分子を挙げるこことができる。例えば、糖部修飾ヌクレオチド類似体やリン酸ジエステル結合修飾ヌクレオチド類似体等があげられる。糖部修飾ヌクレオチド類似体とは、ヌクレオチドの糖の化学構造の一部あるいは全てに対し、任意の化学構造物質を付加あるいは置換したものであればいかなるものでもよく、例えば、2’-O-メチルリボースで置換されたヌクレオチド類似体、2’-O-プロピルリボースで置換されたヌクレオチド類似体、2’-メトキシエトキシリボースで置換されたヌクレオチド類似体、2’-O-メトキシエチルリボースで置換されたヌクレオチド類似体、2’-O-[2-グアニジウムエチル]リボースで置換されたヌクレオチド類似体、2’-O-フルオロリボースで置換されたヌクレオチド類似体、エチレン架橋構造型人工核酸Ethylenebridgednucleicacid:ENA[NucleicAcidResearch32e175]等があげられ、さらにペプチド核酸PNAAccChemRes32624、オキシペプチド核酸OPNAJAmChemSoc1234653、およびペプチドリボ核酸PRNAJAmChemSoc1226900等をあげることができる。特に、2’-O-メチルリボースで置換されたヌクレオチド類似体2’Oメチル化修飾された核酸が好ましい。リン酸ジエステル結合修飾ヌクレオチド類似体としては、ヌクレオチドのリン酸ジエステル結合の化学構造の一部あるいは全てに対し、任意の化学物質を付加あるいは置換したものであればいかなるものでもよく、例えば、ホスフォロチオエート結合に置換されたヌクレオチド類似体、N3P5ホスフォアミデート結合に置換されたヌクレオチド類似体等をあげることができる[細胞工学1614631473][RNAi法とアンチセンス法、講談社]。ヌクレオチド類似体としては、その他に、核酸の塩基部分、リボース部分、リン酸ジエステル結合部分等の原子例えば、水素原子、酸素原子もしくは官能基例えば、水酸基、アミノ基が他の原子例えば、水素原子、硫黄原子、官能基例えば、アミノ基、もしくは炭素数1~6のアルキル基で置換されたものまたは保護基例えばメチル基またはアシル基で保護されたもの、核酸に、例えば脂質、リン脂質、フェナジン、フォレート、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、色素など、別の化学物質を付加した分子等を用いてもよい。核酸に別の化学物質を付加した分子としては、例えば、5’-ポリアミン付加誘導体、コレステロール付加誘導体、ステロイド付加誘導体、胆汁酸付加誘導体、ビタミン付加誘導体、Cy5付加誘導体、Cy3付加誘導体、6-FAM付加誘導体、およびビオチン付加誘導体等をあげることができる。本発明5は、前記のヘプタマー型ガイド核酸の有効量を含有する薬剤である。この薬剤は、本発明のヘプタマー型ガイド核酸それ単独で製剤化することもできるが、通常は薬理学的に許容される1つあるいはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により製造した医薬製剤として投与するのが望ましい。投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口投与、または口腔内、気道内、直腸内、皮下、筋肉内および静脈内などの非経口投与をあげることができ、望ましくは静脈内投与をあげることができる。経口投与に適当な製剤としては、乳剤、シロップ剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤などがあげられる。乳剤およびシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビトール、果糖などの糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類、pヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミントなどのフレーバー類などを添加剤として用いて製造できる。カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤などは、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトールなどの賦形剤、デンプン、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤、脂肪酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを添加剤として用いて製造できる。非経口投与に適当な製剤としては、注射剤、座剤、噴霧剤などがあげられる。注射剤は、塩溶液、ブドウ糖溶液あるいは両者の混合物からなる担体などを用いて調製される。座剤はカカオ脂、水素化脂肪またはカルボン酸などの担体を用いて調製される。また、噴霧剤は受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ有効成分を微細な粒子として分散させ吸収を容易にさせる担体などを用いて調製される。担体として具体的には乳糖、グリセリンなどが例示される。本発明で用いる核酸、さらには用いる担体の性質により、エアロゾル、ドライパウダーなどの製剤が可能である。また、これらの非経口剤においても経口剤で添加剤として例示した成分を添加することもできる。投与量または投与回数は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体重などにより異なるが、通常成人1日当たり10μgkg~20mgkgである。以下、実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、本発明は以下の例に限定されるものではない。LNA修飾したヘプタマー型sgRNAの試験管内での切断活性と安定性試験1材料と方法11組換えヒトtRNaseZLの調製ヒスチジン標識したヒトΔ30tRNaseZLを、Ecoli株RosettapLysSNovagenにおいて発現プラスミドpQE80LQuigenから過剰発現させ、ニッケル-アガロースビーズを用いて精製した非特許文献15。RNA合成標的RNA、T3H:5’GAUCAGAAGAUUCCAGGUUCGACUCCUGGCUGGCUCGGUGUAAGCAGGGUCGUUUU3:配列番号1はT7RNAポリメラーゼを用い、対応する合成DNAから合成した非特許文献8。転写反応は製造者Promegaが推奨する条件の下で行ない、RNAは変性ゲル電気泳動で精製した。次いで、T3HのRNA転写産物は製造者のプロトコールに従い蛍光色素で標識した非特許文献13。すなわち、バクテリアアルカリホスファターゼTakaraShuzoでRNA転写産物の5’リン酸を除去したのち、T4ポリヌクレオチドキナーゼおよびATPγSを用いてRNAをリン酸化した。次いで、単一の蛍光色素部分を5’リン酸化部位に付加し、この蛍光色素標識したRNAをゲル精製した使用した。以下の、5’をリン酸化し、2’Oメチル化および/またはLNA修飾したsgRNAを化学的に合成した。hepL0:5′pGGGCCAG3′配列番号2hepL2:5′pGgGCCaG3′配列番号3hepL3a:5′pgGgCcAG3′配列番号4hepL3b:5′pGgGcCaG3′配列番号5hepL4:5′pGgGcCag3′配列番号6hepL7:5′pgggccag3′配列番号7上記の各sgRNAにおいて、大文字は2’Oメチル化修飾塩基、小文字はLNA修飾塩基を示す。InvitroRNA切断アッセイ10mMTrisHClおよび15mMMgCl2を含有する溶液6μlに非標識RNAと組換えヒトΔ30tRNaseZLを混合し、蛍光色素で標識した標的RNAのinvitro切断アッセイを行なった非特許文献15、16。5または10のポリアクリルアミド8M尿素ゲル上で反応産物を分解した後、Typhoon9210でゲルを分析した。14Kd定量のためのゲルシフトアッセイヘプタマー/標的RNA複合体の解離定数を決定するため、蛍光標識したT3H01pmolを、無標識の各sgRNAhepL0、hepL2、hepL3a、hepL3b、hepL4、hepL7:各4100pmolと37°Cで10分間インキュベートした。反応溶液6μlは10mMTrisHClpH75および10mMMgCl2を含む。インキュベーションの後、サンプルは等量のローディングバッファー10mMTrisHClpH751mMEDTA005bromophenolblue005xylenecyanolFF50glycerolと混合し、次いで、TBEバッファー90mMTrisbase90mMboricacid15mMEDTApH83を用い、8非変性ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動した。電気泳動の後、Typhoon9210を用いて標識化RNAを定量した。同様にして、基質/tRNaseZL複合体の乖離定数をゲルシフトアッセイにより測定した非特許文献13。蛍光標識したT3Hと各sgRNA10pmolとのRNA複合体は、様々な量052μgの組換えヒトΔ30tRNaseZLにより、前記バッファー中で4°C、10分間インキュベートし、前記と同様の方法で分析した。2結果LNA修飾を含むヘプタマー型sgRNAがヒトtRNaseZLによる標的RNAの切断を誘導するかどうかを調べるため、2から7箇所のLNA修飾核酸を有する5個のヘプタマー型sgRNAを調製し、それぞれの切断誘導能を調べた図2。この目的のため、micropretRNAと類似するヘプタマー/T3HRNA複合体を試験基質として用いた非特許文献8、13。ヘプタマー型sgRNAのhepL2、hepL3a、hepL3bおよびhepL4は、それぞれ2、3、3および4核酸位置がLNA修飾されており、他の核酸の2’リボース炭素はOメリル化修飾されている図2A。hepL7は全核酸がLNA修飾されており、コントロールhepL0は全核酸が2′Oメチル化修飾されている。RNA切断アッセイは、組換えヒトtRNaseZLを用いて、単一ターンオーバー条件で行なった。hepL2による標的RNAT3Hの切断が観察されたが、その切断率は、hepL0の56であった図2B。全体として、切断率はLNA修飾核酸の増加に伴い減少し、hepL7の切断率はhepL0のわずか8であった図2B。次に、全反応中の各ステップがどのように切断効率に影響するかを明らかにするため、ヘプタマー型sgRNA/標的RNA複合体の解離定数、および基質/tRNaseZL複合体の解離定数を決定し、切断効率定数を調べた。ヘプタマー型sgRNA/標的RNA複合体の解離定数はゲルシフトアッセイにより決定し、これら複合体の有効濃度はそれらの推定された解離定数を用いた算出した。観察された切断効率定数は、基質の推定された有効濃度に基づき、単一ターンオーバー条件で得た。基質/tRNaseZL複合体の解離定数はまた、ヘプタマー型sgRNA/標的RNA複合体の推定された乖離定数を用いて、ゲルシフトアッセイにより決定した。hepL2T3H複合体に対するKd値039μMはhepL0T3H複合体に対するそれ044μMと比肩するものであった。全体として、ヘプタマー型sgRNA/標的RNA複合体のKd値はLNA修飾の数が増加するに従って増加し、hepL7T3H複合体では343μM以上であった表1。同様に、hepL2T3HtRNaseZL複合体のKd値040μMはhepL0T3HtRNaseZL複合体のそれ032μMと比肩するものでった。基質/酵素複合体のKd値は、LNA修飾の数が増加するに従って増加し、hepL7T3HtRNaseZLでは289μM以上であった表1。hepL0T3H複合体のkobs値は040min1であり、hepL2T3H複合体は020min1であるのに対して、他の複合体のkobs値は005min1以下に低下した表1。以上の詳細な分析に基づけば、各ステップがどのように切断効率に影響するかを理解することができる図2B。hepL2によるT3Hの切断効率が、hepL0による切断効率の56に減少したことは、kobs値が50に減少したことに依存していると思われる表1。hepL3a、hepL3bおよびhepL4によるT3H切断効率が1822に減少したことは、ヘプタマー/T3H複合体のKd値が32~70に増加した、基質tRNaseZL複合体のKd値が3倍以上に増加したこと、そしてkobs値が10以下に減少したことが原因であると考えられる表1。hepL7による切断効率が8まで劇的に減少したことは、hepL7T3H複合体のKd値が8倍に増加し、基質tRNaseZL複合体のKd値が9倍に増加し、そしてKobs値が13に減少したことが原因であると考えられる表1。以上のとおり、LNA修飾したヘプタマー型RNAは、tRNaseZL用のsgRNAとして機能することが示された。ただし、切断効率としてみたそれらの有効性は、全体として、LNA修飾数の増加とともに減少し、ヘプタマー型sgRNA/標的RNA複合体のKd値、基質tRNaseZL複合体のKd値、およびKobs値に影響を及ぼした図2、表1。しかしながら、血清および生細胞におけるLNA修飾化ヘプタマー型RNAの高い安定性を考慮すれば、試験した2~4LNA修飾したヘプタマー型sgRNAの切断効率が18~56に減少することは、それらを薬剤成分として使用する場合に十分な許容範囲である。LNA修飾したヘプタマー型sgRNAの細胞内安定性試験1方法ヒト293細胞、KMM1細胞、またはHeLa細胞081X105細胞ウエルを、24ウエルプレートにてheptamer型sgRNA1μMを加えた培地で培養した。ヘプタマー型sgRNAは、いずれも3’末端をFITC標識した、hepL0:5′pGGGCCAG3′配列番号2hepL3b:5′pGgGcCaG3′配列番号5を用いた。培養24時間後に細胞を集めPBSにて4回洗浄した。その後、細胞から全RNAをISOGENを用いて抽出し、20ポリアクリルアミドー8Mウレアゲル上で分離した。ゲルはTyphoon9210にて解析した。2結果図3に示されているように、LNA修飾されたヘプタマー型sgRNALNAは、2′Oメチル化のみのものよりも細胞内でより安定に存在できることが確認された。