"以下の工程1~6を含む、Dリジンメチルエステル二塩酸塩からN2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを合成する方法。1Dリジンメチルエステル二塩酸塩を、345トリメトキシベンゾイルクロライドの存在下で反応させることにより、N2N6ビスLリジンメチルエステルを製造する工程;2工程1で得たN2N6ビスLリジンメチルエステルをアルカリとメタノールで処理して、N2N6ビスLリジンを製造する工程;3工程2で得たN2N6ビスLリジンを、NNジシクロヘキシルカルボジイミドDCCとNヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で反応させ、更にDリジンメチルエステルを添加して反応させて、N2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンメチルエステルを製造する工程;4工程3で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンメチルエステルをアルカリとメタノールで処理して、N2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンを製造する工程;5工程4で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンを、21Hベンゾトリアゾール1イル1133テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート及びエチレンジアミンの存在下で反応させて、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを製造する工程;及び6工程5で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを、三臭化ホウ素の存在下で脱メチル化して、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを製造する工程。N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミド、又はこれにペプチド、タンパク質、脂質又は糖が結合している化合物を有効成分として含む、粘膜免疫制御剤。CD161を発現する免疫細胞を活性化するための粘膜免疫制御剤である、請求項2に記載の粘膜免疫制御剤。CD161を発現する免疫細胞が、ナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞である、請求項3に記載の粘膜免疫制御剤。浮遊型のナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞を活性化し、接着型のナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞を抑制して粘膜免疫を制御する、請求項2から4の何れか1項に記載の粘膜免疫制御剤。TGDKの固相合成は、ペプチドの固相合成法に従い、DLys3分子を樹脂に結合させることから始まり、液体と固体の不均一反応で、収量が極めて低く、また、試薬が高価であるという問題がった。本発明が解決しようとする課題は、DLysを出発物質として使用して液相合成方法によりTGDKを合成する方法を提供することである。本発明が解決しようとする別の課題は、TGDKの新たな生物学的作用を調べ、主に自然免疫系に対する新たな作用を見出し、新たな粘膜免疫制御剤を提供することである。本発明者は上記課題を解決するために鋭意検討した結果、TGDKの工業的に可能な液相合成法を開発し、TGDKを大量合成することに成功した。更に本発明者らは、TGDKは従来の粘膜M細胞ターゲット剤としての機能に加え、自然免疫担当細胞ナチュラルキラー細胞および自然免疫と獲得免疫の橋渡しに関わるナチュラルキラーT細胞並びに免疫系の暴走過剰反応等を抑制する制御性T細胞に作用して、粘膜免疫を制御することを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。[1]以下の工程1~6を含む、Dリジンメチルエステル二塩酸塩からN2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを合成する方法。1Dリジンメチルエステル二塩酸塩を、345トリメトキシベンゾイルクロライドの存在下で反応させることにより、N2N6ビスLリジンメチルエステルを製造する工程;2工程1で得たN2N6ビスLリジンメチルエステルをアルカリとメタノールで処理して、N2N6ビスLリジンを製造する工程;3工程2で得たN2N6ビスLリジンを、NNジシクロヘキシルカルボジイミドDCCとNヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で反応させ、更にDリジンメチルエステルを添加して反応させて、N2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンメチルエステルを製造する工程;4工程3で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンメチルエステルをアルカリとメタノールで処理して、N2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンを製造する工程;5工程4で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンを、21Hベンゾトリアゾール1イル1133テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート及びエチレンジアミンの存在下で反応させて、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを製造する工程;及び6工程5で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを、三臭化ホウ素の存在下で脱メチル化して、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを製造する工程。[2]N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミド、又はこれにペプチド、タンパク質、脂質又は糖が結合している化合物を有効成分として含む、粘膜免疫制御剤。[3]CD161を発現する免疫細胞を活性化するための粘膜免疫制御剤である、[2]に記載の粘膜免疫制御剤。[4]CD161を発現する免疫細胞が、ナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞である、[3]に記載の粘膜免疫制御剤。[5]浮遊型のナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞を活性化し、接着型のナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞を抑制して粘膜免疫を制御する、[2]から[4]の何れか1項に記載の粘膜免疫制御剤。さらに本発明によれば、粘膜免疫制御剤の製造のための、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミド、又はこれにペプチド、タンパク質、脂質又は糖が結合している化合物の使用が提供される。さらに本発明によれば、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミド、又はこれにペプチド、タンパク質、脂質又は糖が結合している化合物をヒトを含む哺乳動物に投与することを含む、粘膜免疫を制御する方法が提供される。本発明によるTGDKの液相合成法は均一反応であり、収率は固相法の約3倍であり、製造原価も安価である。また、固相法の1回での最大合成量は10mgで1ヵ月を要するのに対し、液相合成では1000mgの合成を1週間で達成できる。また、本発明によれば、TGDKは、自然免疫系のナチュラルキラー細胞ナチュラルキラーT細胞を増やし、免疫反応の過剰反応を押さえる制御性T細胞にも作用することが判明したことから、TGDKを含む新規な粘膜免疫制御剤を提供することが可能になった。以下、本発明について更に詳細に説明する。本発明による、Dリジンメチルエステル二塩酸塩からN2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを合成する方法は、以下の工程1~6を含むことを特徴とする。1Dリジンメチルエステル二塩酸塩を、345トリメトキシベンゾイルクロライドの存在下で反応させることにより、N2N6ビスLリジンメチルエステルを製造する工程;2工程1で得たN2N6ビスLリジンメチルエステルをアルカリとメタノールで処理して、N2N6ビスLリジンを製造する工程;3工程2で得たN2N6ビスLリジンを、NNジシクロヘキシルカルボジイミドDCCとNヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で反応させ、更にDリジンメチルエステルを添加して反応させて、N2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンメチルエステルを製造する工程;4工程3で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンメチルエステルをアルカリとメタノールで処理して、N2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンを製造する工程;5工程4で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルLリジンを、21Hベンゾトリアゾール1イル1133テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート及びエチレンジアミンの存在下で反応させて、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを製造する工程;及び6工程5で得たN2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを、三臭化ホウ素の存在下で脱メチル化して、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミドを製造する工程。上記の工程1は、以下の実施例のProtocol1に記載の方法に準じて行うことができ、同様に、工程2はProtocol3に記載の方法に準じて行うことができ、工程3はProtocol4に記載の方法に準じて行うことができ、工程4はProtocol6に記載の方法に準じて行うことができ、工程5はProtocol8に記載の方法に準じて行うことができ、工程6はProtocol10の記載の方法に準じて行うことができる。更に本発明は、N2N6ビスN2N6ビスLリシルNLリジンアミド、又はこれにペプチド、タンパク質、脂質又は糖が結合している化合物を有効成分として含む、粘膜免疫制御剤に関する。本発明においては、CD161を発現する免疫細胞を活性化するために使用することができ、より具体的には、CD161を発現するナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞を活性化するために使用することができる。特に、本発明の粘膜免疫制御剤は、浮遊型のナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞を活性化するために使用することができる一方、接着型のナチュラルキラー細胞NK細胞又はナチュラルキラーT細胞NKT細胞を抑制するために使用することもできる。本発明の粘膜免疫制御剤において用いる化合物としては、TGDKのみならず、TGDKにペプチド、タンパク質、脂質又は糖が結合している化合物を用いてもよい。ペプチド、タンパク質、脂質又は糖は、TGDKに直接結合していてもよいし、適当なリンカーを介して結合していてもよい。このような化合物としては、例えば、国際公開WO2007/052641号公報に記載されているようなTGDKCH2CH2NHR式中、TGDKCH2CH2NHは、2NαNεbislysinylaminoethylamino基を示し、Rは、水素原子;ペプチド結合を介して活性エステル基を有する基;ペプチド結合を介してSH基と結合する基;ペプチド結合を介して結合しているペプチド、タンパク質、脂質又は糖:あるいはシッフベースを介して結合しているペプチド、タンパク質、脂質又は糖を示す。で示される化合物を挙げることができる。TGDKCH2CH2NHRで示される化合物は、国際公開WO2007/052641号公報に記載の方法に従って製造することができる。また上記したペプチド、タンパク質、脂質、ポリエチレングリコール類又は糖としては、抗原となり得るものであれば特に限定されず、任意のものを使用することができる。本発明の粘膜免疫制御剤のために用いることができる抗原としては、腫瘍抗原、病原体抗原およびアレルゲン抗原などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ここで言う病原体抗原とは、病原体に特有の抗原を意味し、ウイルス、細菌、寄生生物または菌類から得られる抗原である。病原体の具体例としては、コレラ菌、毒素原性大腸菌、ロタウイルス、クロストリジウムディフィシレ、赤痢菌、サルモネラチフィ、パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、ストレプトコッカスミュータンス、熱帯熱マラリア原虫、黄色ブドウ球菌、狂犬病ウイルスおよびエプスタイン‐バーウイルスなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、アレルゲン抗原としては、ハプテン、または花粉、ほこり、カビ、胞子、鱗屑、昆虫および食品由来の抗原などを挙げることができる。本発明の粘膜免疫制御剤においては、有効成分として使用する化合物TGDKなどは、薬学的に許容される担体と一緒に適当な製剤にすることができる。担体として、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤などを用いることができる。また、酸化防止剤のような添加剤を配合してもよい。製剤の形態は特に限定されず、液剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等の任意の形態とすることができる。賦形剤としては、例えば、乳糖、ショ糖又はブドウ糖等の糖類;バレイショデンプン又はコムギデンプン等のデンプン類;結晶セルロース等のセルロース類;無水リン酸水素カルシウム又は炭酸カルシウム等の無機塩類等、ポリエチレングリコール類等を使用することができる。結合剤としては、例えば、結晶セルロース、プルラン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、又はポリビニルピロリドン等、多機能性ポリエチレングリコール類等を使用することができる。崩壊剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、又はアルギン酸ナトリウム等、ポリエチレングリコール類等を使用することができる。潤沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油などを使用することができる。ナノ粒子化剤としてはコレステロールプルラン、多機能性ポリエチレングリコール類等日本油脂KKを使用することができる。本発明の粘膜免疫制御剤の投与経路は特に限定されず、経口投与でも非経口投与例えば、直腸投与、皮下投与、筋肉内投与、鼻腔投与および静脈内投与などでもよいが、好ましくは経口投与である。本発明の粘膜免疫制御剤の製剤中に含まれる有効成分である化合物の量は、投与対象又は患者の年齢、体重、症状等に応じて適宜設定することができるが、例えば、1μg~1000mg/kg/回、好ましくは10μg~100mg/kg/回とすることができる。本発明の粘膜免疫制御剤は、アジュバントと一緒に投与してもよい。アジュバントとしては、ワクチン抗原の投与に先立って投与しておくことにより免疫応答を増強できる物質であれば、任意の物質を使用することができる。殺菌微生物のように抗原性をもつもののほか,Alum硫酸アルミニウムカリウムなどや鉱物油のように非抗原性のものでもよい。Freundは1947年抗原水溶液を等量の油鉱物油85,界面活性剤15と混ぜ,乳剤の状態で注射すると抗体の産生量が増大することを見出した。これは不完全フロインドアジュバントincompleteFreundsadjuvantIFAと呼ばれ,これに結核菌の菌体成分を加えたものが完全アジュバントcompleteFsa.CFAである。このほか、水酸化アルミニウム,リン酸アルミニウムなどの鉱酸塩はアジュバント効果を示す。また、細菌内毒素、特にグラム陰性菌のリポ多糖類は抗体産生を著明に促進することができ、有効成分はLipidAにある。本発明では、上記したものをアジュバントとして使用することができる。アジュバントの投与経路は特に限定されず、経口投与でも非経口投与でもよい。以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。A実験材料1有機合成試薬DリジンOメチルエステル2HCl、345トリメトキシベンゾイルクロリド、Nメチルモルホリン、NNジメチルホルムアミド、三臭化ホウ素、フルオロイソチオシアネートFITC、ウシ胎仔血清FCSは、和光純薬工業から、21Hベンゾトリアゾール1イル1133テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、Nヒドロキシベンゾトリアゾール、NNジシクロヘキシルカルボジイミドはNovabiochem社から、活性化ポリエチレングリコール類は油化産業株式会社から購入した。RPMI培地、他の汎用試薬は日水製薬、和光純薬工業社、シグマ社、渡辺化学社等の製品を用いた。特殊蛍光ラベル輸入抗体はそれぞれの輸入元、和光純薬、タカラバイオ等を通して入手した。2細胞ヒト細胞およびサル腸骨骨髄細胞は常法に従い、フィコールグラゼント法でリンパ球を分離して用いた。TGDKの作用をナチュラルキラー細胞およびナチュラルキラーT細胞並びに制御性T細胞をそれぞれの細胞マーカーを用いて、フローサイトメーター分析を行い、調べた。B実験方法合成方法の概要および各行程の新化合物の略号と化学名を下記に示し、汎用試薬の略号は実験材料の項に記載した。1液相合成によるTGDKの大量合成法の概要概要をScheme1に示し、TGDKの化学名はscheme1の最後に記載した。2各行程の方法Protocol1の方法:DLysOMe2HClをDMF150mlに懸濁し、NMM40mlを加え、室温で10分撹拌する。この懸濁液にTMBCを溶解したDCM溶液を加え、室温で撹拌する。約48時間後、この懸濁反応液に水を加えて1Lとし、室温で30分間撹拌する。その後、1夜静置し、分離した水層をアスピレータで除き、DCM層を各50mlチューブに10mlずつ分注する。このチューブに水を加えて50mlとし上下混和して、DCM層を水で洗う。この操作を2回繰り返し、DCM層を回収留去し、少量のCH3CNを加え、凍結乾燥する。この評品をProtocol2に従って、精製し、生じた345Trimethoxybenzoicacidを除く。Protocol2の方法:凍結乾燥品をCH3CN12mlに溶かし、TFAを添加し、TFA酸性としたのち、Etherを加えて、50mlとし、ゲル化するまで、VortexSupersonic処理を行う。生じたゲルを分離し、これにEtherを加えて50mlとして、ゲル層を同様にEtherで4回洗除する。Ether層を除き、少量のCH3CNを加えて、凍結乾燥する。この操作により、分解で、生じた345Trimetoxybennzoicacidをほぼ完全に除去できる。Protocol3の方法:精製2TBOMe1gをDCM1mlに溶かし、KOH飽和MeOH溶液1mlを加え、室温で30min放置する。その後、DCM5mlおよび水5mlを加え、VortexSupersonic処理を行い、濃HCL1~2mlを添加して強酸性にする。この溶液に水を加えて、50mlとし、上下混和し、DCM層を分離して、このDCM層を水で洗除する。この操作を2回行い、分離したDCM層のDCMを留去して、少量のCH3CNを加えて、凍結乾燥する。Protocol4の方法:反応撹拌容器に撹拌子を入れ、この容器に2TBOH225gおよびDMF42mlを加えて、溶かし、HOBTおよびDCCを加え、室温で30分間撹拌する。数分で、活性エステル中間体が析出した懸濁液に、予め、DLysOMe2HClにNMM460μLを加え、室温で30分間撹拌した懸濁液をチップの先端をカットしたエッペンドルフのピペットで、不溶物ごと、一緒にできるだけゆっくりと滴下する。滴下終了後、反応撹拌懸濁液を室温で24時間撹拌する。Protocol5の方法:前操作の24時間の反応撹拌後、懸濁液を撹拌容器から50mlのポリエチレンチューブに移し、撹拌容器に残っている反応懸濁液残査をDMF1mlを加え、沈殿残査ごと、同チューブに移しとり、次に撹拌容器にDCM1mlを加えて丹念に洗除し、そのDCM溶液を同様に同チューブに移す。さらにDCM1mlを加え、同操作を行い、反応容器から遠心チューブに、丹念に反応懸濁液を沈殿ごと、一緒に移す。このチューブを遠心して沈殿を除き、上清を得る。遠心後、チューブの底に残っている沈殿に、DMF1mlおよびDCM1mlを加えて、同様な操作を行い、遠心して得た上清を最初に得た上清に加える。この合わせた上清中のDCMとDMF混液中のDMF量に注意を払い、この混液中のDMF量が5ml以上、10ml以下の場合、この混液を2本のチーブに分け、それぞれに水を加えて50mlとし、遠心してDCM層を分離し、このDCM層を同じように水で3回洗除する。洗除して得られたDCM層のDCMを留去し、少量のCH3CNを加えて、凍結乾燥する。CH3CN不溶物は痕跡程度のDCCUreaであるので、遠心して除く。Protocol6の方法:Protocol3と同じである。Protocol7の方法:4TBOHをCH3CN2mlに溶かし、もし不溶物がある場合は遠心して不溶物を除き、水を加えて、凍結乾燥する。この操作は、不純物をMSチャート上で認めない場合、省略しても差し支えない。Protocol8の方法:4TBOHをDMF2mlに溶かし、ジイソプロピルエチルアミン41μLを添加し、HBTUを加えて、直ちに、予め準備しているEDAエチレンジアミン11ml溶媒に1滴/1秒の速度で撹拌しながら滴下する。この滴下中はチューブをドライヤーで加温する。滴下終了後、同じようにドライヤーで10分間、加温し、その後、室温で60分間撹拌する。撹拌終了後、不溶物があれば、遠心して除き、その上清を4TBADMF溶液とする。2-9Protocol9の方法:4TBADMF溶液量と同じ量のDCMを加え、DMF量が10mlを超えている場合は4TBADMF溶液を2本のチューブに分ける。これらのチューブに水を加えて50mlとし、上下混和する。遠心してDCM層を分離し、DCM層を同様に水で洗い、DCMを留去して、CH3CNを加え、凍結乾燥し、4TBAを得る。2-10Protocol10の方法:4TBAをDMF05mlに溶かし、lauricacidDCM溶液を滴下し、CaCl22H20の結晶を直接加え、4TBAの反応液とする。BBr3溶液を1回に10ml用いて、2回行う。この反応は、BBr3の試薬の状態、実験室の湿度の状態、操作の手際さの状態が重要である。1第一BBr3分解:上記の4TBA溶液にBBr3を1スポイド単位量を激しく撹拌しながら、速やかに4単位量を約3ないし4分間をかけて、加える。4スポイド単位加えた時点で、添加反応液が白濁を生じる直前で止め、チューブを閉栓して、2~3分間激しく撹拌する。その後、5回目の1スポイド量を少しずつ、2分間かけて加える、反応液が少しずつ濁り始め、6回目の1スポイド量および残りをすべて加え、この操作を約4分間で終了する。反応液は懸濁状態になり、閉栓し、10分間、激しく撹拌する。第一回のBBr3添加撹拌反応時間は約17ないし18分間を要し、反応液は透明懸濁状態からゲル状半透明粘性液体に変化する。2第二BBr3分解:第一BBr3分解物に、BBr310mlを1スポイド単位量で数回に分けて、約2分間をかけて加え、第二BBr3分解操作を行う。第一BBr3反応液のゲル状態から淡褐色のサラサラ淡褐色液体になる。添加終了後、5分間、閉栓して激しく撹拌する。5分間の閉栓撹拌終了後、EDA250μLを少量ずつ加える。EDA滴下と同時に、爆発的に中和され、白煙を生じる。EDA滴下終了後、3分間撹拌し、次の蒸発乾固の行程に移る。3BBr3分解物の蒸発乾固操作:BBr3分解物の入ったチューブをドライヤーで熱く加熱し、蒸発乾固させる。この加熱蒸発乾固操作には約10分間を要する。反応の目安はチューブ内の液がサラサラ半液体からドロドロ乾固、さらにコロコロ乾固の状態に変わり、コロコロ乾固の状態が反応の終焉である。4BBr3分解乾固物の水付加分解:BBr3分解物のコロコロ乾固の状態に、水を速やかに加えて、5mlとする。この反応は水と激しく反応し、発熱発泡するので、注意深く行う。この水付加分解物を常温に冷却する。この分解物を遠心し、沈殿と上清に分け、上清をさらに同条件で遠心して得た上清に、それぞれの沈殿物に水1~2mlを加え、同様に遠心して得られた上清を加え合わせる。5CaCapture法によるCa塩共沈現象を利用するTGDKの精製:BBr3により、345トリメトキシ基が脱メチル化しgalloyl基を生成させると同時に、大過剰のBBr3の分解産物、ホウ酸、HBr等を大量に含む強酸性溶液である。この強酸性溶液に存在するTGDKを短時間に、効率的に精製する方法として、CaCapture法を考案した。上記のBBr3分解物の加え合わせた上清容量と同量のNMMを加え、まず、強酸性を中和する。この中和反応は発熱反応であるので、この溶液を室温でしばらく放置し、冷却する。この溶液に1MCaCl2水2mlを加えて、沈殿を生じさせ、5°Cで5分間、次いで4°Cで10分間放置し、沈殿を熟成させる。生じた沈殿を遠心して分取する。CaCl2を加えることにより、lauricacidのCa塩が生成し、同時にTGDKのgalloyl基のCa塩が生じる。Ca2による沈殿物の中にTGDKのCa塩が共沈して存在する。目的物は水に溶けやすいので、この沈殿物の水洗除は不可である。この沈殿物にDCMを加えて、30~35mlとし、Vortexで撹拌し、Ca2塩をDCM層に移し、除く。この場合、Sonicationは厳禁である。Sonicationにより、目的化合物が重合しやすくなり、不純物除去が困難になる。このDCM添加撹拌溶液を遠心し、生じた上部沈殿物をdecantationで採取する。この淡ベージュ色の沈殿物にさらに、DCM30~35mlを加え、Vortexを行い、遠心する。上部沈殿物に黄色液体が現れるので、この黄色液体をパスツールピペットで丹念に除き、下層のDCM層をdecantationで除去する。この操作をさらに繰り返し、黄色液体が生じなくなるまで行う。黄色液体が出なくなった沈殿に水5mlを加え、遠心して沈殿と上清にわけ、それぞれにTFA100μlを加えて、凍結乾燥を行う。上清からPureTGDKTFA塩、沈殿からOligoTGDKTFA塩が得られる。3合成過程の構造式および化学名並びに略号4TGDKの生物学的作用の実験方法:4-1TGDKの前処理:液相法で合成したTGDKはTFA塩であり、痕跡程度のlauricacidのCa塩を含むので、まず、はじめに、100TFAの少量に溶かし、その10倍量のエーテルを加え、生じた沈殿に再び100TFAの少量に溶かした。この操作を数回繰り返し、生じた沈殿をdryし、3NHCl少量に溶かし、凍結乾燥して、TGDKHCl塩として用いた。なお、試料は70エタノール滅菌下、エタノールを除去して滅菌PBSに溶解し、使用濃度に培養液で希釈して用いた。4-2TGDKの浮遊骨髄リンパ系細胞に対する作用サル腸骨骨髄細胞は常法に従い、フィコールグラジエント法で骨髄液からリンパ球系細胞を分離して用いた。得られた骨髄リンパ球系細胞5mlにTGDKの作用最終濃度01μMになるように調製したTGDK100μlを加え、12日間培養した。その間1日あるいは2日毎に浮遊生細胞の生細胞数および死細胞で求め、浮遊生細胞に対するTGDKの作用を観察した。4-3TGDKの接着骨髄リンパ系細胞に対する作用培養初期から中期にかけて、付着細胞は認められなかったが、その後、培養器の底に付着している接着細胞が認められたので、12日間培養し、接着細胞をEGTA法で剥離し、得られた細胞05mlにTGDK20μlを加え、15分間、常温で作用させ、FACS分析を行った。ナチュラルキラー細胞およびナチュラルキラーT細胞並びにT細胞の特異的細胞マーカー、CD16およびCD56ならびにCD3、さらにCD161を用いて行った。4TGDKのヒト末梢リンパ球系細胞に対する作用ヒト末梢血を常法に従い、リンパ球系細胞を分離して、骨髄細胞系の実験条件に準じて行った。C結果考察1液相合成によるTGDKの収量と純度液相合成法の各行程の収量と最終的に得られたTGDKの質量分析の結果をScheme3および図1に示した。液相合成法で得られたTGDKの質量分析の結果、ほぼ均質であることが確認された図1。液相合成法および固相合成の収率を出発原料に対するMole収率として表し、比較すると、DLysからTGDKが得られ、樹脂を用いる固相合成法にくらべ、高収率であることがわかった。製造原価は樹脂法に比べ、約100分の1に抑えることができた。2TGDKの生物学的作用TGDKの浮遊骨髄リンパ系細胞に対する作用図2にTGDKの各経時における相対浮遊生細胞数を示す。TGDKの効果をControlおよびTreatedを比較した場合、Day467の結果を除いて、双方の浮遊骨髄リンパ系細胞の生細胞数に有意の変化は認められなかったものの、Day4およびDay67において、TGDKの効果と考えられる生細胞数の有意の減少が認められた。この減少効果はTGDKの普遍的な細胞毒性によるとは考えにくい。一般に、薬物の細胞毒性による生細胞の減少は培養時間とともに、大きくなり、数日で完全に死滅する。しかし、TGDK処理において、Day467の培養で、生細胞が減少し、Day9からControlレベルまでに回復、さらにDay12では細胞の増殖が認められているので、TGDKの毒性によるものではないと考えられる。この生細胞数の減少はTGDKにより、NK細胞が活性化され、NK細胞の標的細胞の傷害により、生細胞が減少したと考えられる。2-2Day12培養浮遊骨髄リンパ系細胞のFACS1分析NK細胞のCD16CD56CD161およびNKT細胞のCD3CD16CD56CD161の表面マーカーを用いるFACS分析の結果を図3のA~Fに示した。CD16CD56の二重陽性細胞の割合は424からTGDK処理で443に、CD3CD16の二重陽性細胞の割合は216からTGDK処理で246に、CD3CD56の二重陽性細胞の割合は210からTGDK処理で250に、いずれも増加していると考えられる。これらの増加した細胞は表面マーカーから、NK細胞あるいはNKT細胞と考えられる。ヒトの場合、NK細胞の総数は約50億個と推定され、ヒトの総細胞数約60兆個と比べるとその数は約1000分の1と極めて少ない。生体の細胞、侵入してきた病原性細胞、生体から変わった異細胞、年老いた細胞など1000個をNK細胞あるいはNKT細胞1個が常時サーチし、異物を取り除いて、生体は守られている。このことに立脚すると、NK細胞、NKT細胞の01増減は生物学的に極めて意味深いものであり、これらのことから、TGDKはNK細胞およびNKT細胞を刺激し、増殖していると考えられる。2-3TGDKの接着骨髄リンパ系細胞に対する作用骨髄細胞をTGDKで処理し、12日間培養して、培養容器の底に付着して増殖している細胞をEGTAで剥離し、TGDKで15分処理し、FACS分析の結果を図4A、Bに示す。CD161およびCD16二重陽性細胞の割合が607から、TGDK処理により、136に、CD161陽性でCD16陰性細胞は211から、03に激減した。骨髄細胞は未分化細胞前駆細胞ホーミング細胞などの多くの集まりであり、12日間の培養により、それぞれに、分化したマクロファージ、樹状細胞、単球などの細胞は付着性で、培養容器の底に付着して増殖する。また、これらの細胞はCtypelectinを細胞表面に発現し、これらlectinの糖鎖とCaを介してCtypelectinreceptorであるCD161を持つNK細胞およびNKT細胞が結合し、培養器の底に付着していると考えられる。このような状態に、EGTAを加えることで、Caが除かれ、付着細胞から浮遊して来た細胞あるいはCD161を持つ付着性の細胞群を実験に供用したと考えられる。この浮遊細胞にTGDKを加えると、TGDKはCD161に結合し、CD161をマスクするので、もはや抗CD161抗体と結合できないので、FACS分析においては、CD161が発現しているNK細胞およびNKT細胞が劇的に減少した結果を示している。これらの結果はTGDKの作用の2面性を暗示していると考えられる。すなわち、血中などの浮遊状態ではNK細胞およびNKT細胞を刺激し、増殖して、生体に侵入してきた病原性細胞や生じた異細胞を取り除くことができることを示している。また、比較的固定された状態、たとえば粘膜などの自然免疫状態ではNK細胞の作用を制御し、異物が侵入すれば、ただちに活性化し、異物を取り除くと同時に、自然免疫の過剰反応を防止している。自然免疫反応の暴走と考えられる潰瘍性大腸炎などの難病にTGDKが非常に有効と考えられる。2-4TGDKの末梢リンパ球系細胞に対する作用TGDK存在下および非存在下、ヒトリンパ球系細胞を3日間培養し、T細胞およびNK細胞並びにNKT細胞のマーカー分子CD3、CD16、CD56を指標に、FACS分析を行った結果を図5に示した。TGDKの細胞毒性の認められない濃度、01mMでCD16、CD56ダブルポジテイブ細胞数がTGDK0μMに比べ、約18倍に、TGDK1mMでは約6倍に上昇した。"