"一般式Iの化合物またはその異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ:[式中、Z1は、不飽和の5員から7員の複素環または式-CH2x-CO-NH-NH-CO-CH2y-の基ここで、xおよびyは独立に、0から2の整数を示すを表し、Z2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Raによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Raはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-CONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R1は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rbによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、1個または複数の-O-、-S-または-NR-基によって好ましくは、1個または2個の-O-原子によって中断されていてもよいC1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-CONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rcによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、L1は、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基を表しここで、1個または複数好ましくは1または2個のメチレン基はそれぞれ、-CRe=CRf-、-C≡C-および-C=C=C-から選択される基によって置き換えられ、1個または複数好ましくは1から3個のメチレン基はそれぞれ、基Y1によって追加的に置き換えられていてもよく、Y1はそれぞれ独立に、-O-、-S-、-NH-、-NR’-、-NR’-CO-、-CO-NR’-、-CO-、-SO2-、-SO-および-CR’=N-ここで、R’はそれぞれ独立に、水素またはC1~6アルキルであるから選択され、Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよびハロゲン即ちF、Cl、BrおよびI、好ましくはFから選択されることができ、ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル、ハロゲン例えば、FまたはCl、C1~3ハロアルキル例えば、-CF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OPO3R、-OSO2Rおよび-OSiR4ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキルまたはC1~6ハロアルキルであるから選択され、L2は、結合または置換されていてもよいC1~6アルキレン基を表し、L3は、結合または置換されていてもよいC1~6アルキレン基を表す]。一般式IIを有する請求項1に記載の化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ:[式中、Z1は、不飽和の5員から7員の複素環または式-CH2x-CO-NH-NH-CO-CH2y-の基ここで、xおよびyは独立に、0から2の整数を示すを表し、Z2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Raによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Raはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R1は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rbによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、または-SOOR基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rcによって置換されていてもよいアリール基またはヘテロアリール基好ましくはアリール基ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、L1は、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基を表しここで、1または複数好ましくは1または2個のメチレン基はそれぞれ、-CRe=CRf-、-C≡C-および-C=C=C-から選択される基によって置き換えられ、1または複数好ましくは1から3個のメチレン基はそれぞれ、基Y1によって追加的に置き換えられていてもよく、Y1はそれぞれ独立に、-O-、-S-、-NH-、-NR’-、-NR’-CO-、-CO-NR’-、-CO-、-SO2-、-SO-およびCR’=N-ここで、R’はそれぞれ独立に、水素またはC1~6アルキルであるから選択され、Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよびハロゲン即ちF、Cl、BrおよびI、好ましくはFから選択され得、ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル、ハロゲン例えば、FまたはCl、C1~3ハロアルキル例えば、-CF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OPO3R、-OSO2Rおよび-OSiR4ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキルまたはC1~6ハロアルキルであるから選択され、L2は、結合または置換されていてもよいC1~6アルキレン基好ましくは結合を表す]。式IまたはIIにおいて、L1が、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくはC1~2アルキレンであり、ここで、1個または複数好ましくは1または2個のメチレン基はそれぞれ、基-CRe=CRf-によって、または基-C≡C-によって置き換えられており、Rdがそれぞれ、同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよびハロゲン即ち、F、Cl、BrおよびI、好ましくはFから選択され得、ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル、ハロゲン例えば、FまたはClおよび-CNから選択される、請求項1または請求項2に記載の化合物。式Iまたは式IIにおいて、Z1は、N、OおよびSから選択される2または3個のヘテロ原子を含有する5員の複素環を表し、Z2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Raによって置換されていてもよいフェニル、ピリジル、ピリミジニルまたはオキサジアゾリルここで、Raはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R1は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rbによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、または-SOOR基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rcによって置換されていてもよいアリール基ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、L1は、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくはC1~2アルキレンここで、1または2個のメチレン基例えば1個のメチレン基はそれぞれ、基-CRe=CRf-または基-C≡C-によって置き換えられ、Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシ、およびC1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシから選択され得、ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル例えば、メチル、ハロゲン例えば、FまたはClおよび-CNから選択されるを表し、L2は、結合または置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくは結合を表す、請求項1または2に記載の化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。式Iまたは式IIにおいて、Z1は、2個の窒素原子および1個の酸素原子を含有する5員の複素環を表し、Z2は、基Raによって一置換または二置換されていてもよいフェニル、ピリジルまたはピリミジニルここで、Raは、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよび-SO2Rここで、Rは、HまたはC1~3アルキルであるから選択され得るを表し、R1は、基Rbによって一置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbは、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシ、ヒドロキシおよび-CNから選択されるを表し、R2は、基Rcによって一置換もしくは二置換されていてもよいアリール基ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキルおよびC1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシから選択され得るを表し、L1は、1個または複数例えば、1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくはC1~2アルキレンここで、1または2個のメチレン基例えば、1個のメチレン基はそれぞれ、基-CRe=CRf-または基-C≡C-によって置き換えられ、Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシおよびC1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシから選択され得、ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキルおよびハロゲン例えば、FまたはClから選択されるを表し、L2は、結合またはC1~2アルキレン基を表す、請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ。基Z1が、下式から選択される、請求項1から5のいずれか一項に記載の化合物。式Ia、IIa、IbまたはIIbを有する、請求項1に記載の化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ式中、Z2、R1、R2、L1、L2およびL3は、請求項1から5のいずれか一項に記載されている通りである。L1が、基-CRe=CRf-、-C≡C-または-C=C=C-であるここで、ReおよびRfは、請求項1から7のいずれか一項に記載されている通りである、請求項1から7のいずれか一項に記載の化合物。L1が、基-CRe=CRf-であるここで、ReおよびRfは独立に、Hおよびメチルから選択される、請求項1から7のいずれか一項に記載の化合物。式IIcまたはIIdを有する、請求項1に記載の化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩またはプロドラッグ:[式中、Z2は、置換されていてもよいピリジル、フェニルまたはピリミジニル環、好ましくは1または2個好ましくは1個のハロ原子例えばClまたはFまたは1個のメチルスルホニル基によって置換されているフェニル環またはハロ原子例えばClによって、アルコキシ基例えばエトキシによって、もしくはメチルスルホニル基によって、置換されていてもよいピリジル環であり;R1は、置換フェニルまたはピリジル環、好ましくはハロ原子例えばCl、C1~6アルコキシ例えばメトキシ基、ヒドロキシまたはシアノ基によって置換されているフェニルまたはピリジル環であり、R2は、置換されていてもよいフェニル環、好ましくは1個のハロ原子例えばClによって置換されているフェニル環であり、L1は、cisまたはtrans-CH=CH-、好ましくはtrans-CH=CH-である]。下記から選択される、請求項1に記載の化合物またはその異性体、薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。化合物番号1、2、3、4、5、6、7、8、10、11、12、14、33、56および58から選択される請求項9に記載の化合物、それらの異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグ。化合物番号2、3、4、8、10、11、12、14および57から選択される請求項9に記載の化合物、それらの異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグ。下式以外である、前記請求項のいずれか一項に記載の化合物。請求項1または請求項2に記載の式IまたはIIの化合物を調製する方法であって:a一般式IIIの化合物を式中、Z2、R2およびL3は、前記の通りである一般式IVの化合物と式中、R1、Z1およびL1は、前記の通りであり、Lは、ハロゲン原子、例えばClなどの脱離基を示す反応させるステップ、b一般式IIIの化合物を式中、Z2、R2およびL3は、前記の通りである一般式Vの化合物と式中、R1およびL1は、前記の通りである反応させるステップ、c所望の場合には、こうして得られた化合物をその立体異性体に分割するステップ、および/またはdこうして得られた化合物を、その塩、特に薬学的に許容されるその塩に変換するステップのうちの少なくとも1つを含む方法。請求項1から14のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を、1種または複数の薬学的に許容される担体または添加剤と共に含む医薬製剤。治療において使用するための、請求項1から14のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。Wnt経路におけるシグナル伝達の過剰活性化によって影響を受ける任意の状態または疾患を治療および/または予防する際の、例えばβ-カテニンの活性化を伴うそのような状態または疾患を治療および/または予防する際に使用するための、請求項17に記載の化合物。腫瘍細胞、例えば腺癌などの癌腫の増殖または転移を予防および/または遅延させる際に、例えば、次の癌:結腸癌結腸直腸癌など、膵臓癌、胃癌、肝臓癌例えば肝細胞癌および肝芽腫癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌例えば黒色腫、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌および膠芽腫のうちのいずれかを治療および/または予防する際に使用するための、請求項17に記載の化合物。次の癌:結腸癌結腸直腸癌など、膵臓癌、胃癌、肝臓癌例えば肝細胞癌および肝芽腫癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌例えば黒色腫、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌および膠芽腫のうちのいずれかを治療または予防する方法において使用するための医薬品を製造する際の、請求項1から14のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。次の癌:結腸癌結腸直腸癌など、膵臓癌、胃癌、肝臓癌例えば肝細胞癌および肝芽腫癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌例えば黒色腫、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌および膠芽腫のうちのいずれかを撲滅または予防するためにヒトまたは非ヒト動物身体を治療する方法であって、前記身体に、有効量の請求項1から14のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む方法。細胞分化を促進および/または指示する方法例えばインビトロ方法であって、前駆細胞を有効量の請求項1から14のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と接触させることを含む方法。今般、標準Wntシグナル伝達のブロックにおいて活性を示し、詳細には、活性化核β-カテニンのレベルを低減し得る選択された群の化合物を発見した。APCおよびGSK-3βの下流で活性化β-カテニンの安定性に作用し得る限り、これらは、標準Wntシグナル伝達経路のさらに上流で作用することが公知の他の化合物よりも幅広い可能性を提示すると考えられる。そのような化合物は、一般の腫瘍細胞、詳細には、大腸癌、乳癌、非小細胞肺癌、前立腺癌および膵臓腺癌に随伴する腫瘍細胞の増殖を阻害するのに適している。本発明は、一般式Iの化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグを提供する:[式中、Z1は、不飽和の5員から7員の複素環または式-CH2x-CO-NH-NH-CO-CH2y-の基ここで、xおよびyは独立に、0から2の整数を示すを表し;Z2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Raによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Raはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-CONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し;R1は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rbによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、1個または複数の-O-、-S-または-NR-基によって好ましくは、1個または2個の-O-原子によって中断されていてもよいC1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-CONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し;R2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rcによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基;ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し;L1は、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基を表しここで、1個または複数好ましくは1または2個のメチレン基はそれぞれ、-CRe=CRf-、-C≡C-および-C=C=C-から選択される基によって置き換えられ;1個または複数好ましくは1から3個のメチレン基はそれぞれ、基Y1によって追加的に置き換えられていてもよく;Y1はそれぞれ独立に、-O-、-S-、-NH-、-NR’-、-NR’-CO-、-CO-NR’-、-CO-、-SO2-、-SO-および-CR’=N-ここで、R’はそれぞれ独立に、水素またはC1~6アルキルであるから選択され;Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよびハロゲン即ちF、Cl、BrおよびI、好ましくはFから選択されることができ;ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル、ハロゲン例えば、FまたはCl、C1~3ハロアルキル例えば、-CF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OPO3R、-OSO2Rおよび-OSiR4ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキルまたはC1~6ハロアルキルであるから選択され;L2は、結合または置換されていてもよいC1~6アルキレン基を表し;L3は、結合または置換されていてもよいC1~6アルキレン基を表す]。本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれにおいても、リンカーL1の定義において、全てのメチレン基は、基-CRe=CRf-、-C≡C-または-C=C=C-によって置き換えられてよいことが企図されている。したがって、適切なリンカーL1には、メチレン部分を含有しない基が包含される即ち、そのような基が全て、基-CRe=CRf-、-C≡C-または-C=C=C-によって置き換えられている。式Iにおいて、L3は好ましくは、直接結合または-CH2-基である。本発明による好ましい化合物は、一般式IIの化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである:[式中、Z1は、不飽和の5員から7員の複素環または式-CH2x-CO-NH-NH-CO-CH2y-の基ここで、xおよびyは独立に、0から2の整数を示すを表し;Z2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Raによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Raはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R1は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rbによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、または-SOOR基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rcによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基好ましくはアリール基ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し;L1は、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基を表しここで、1または複数好ましくは1または2個のメチレン基はそれぞれ、-CRe=CRf-、-C≡C-および-C=C=C-から選択される基によって置き換えられ;1または複数好ましくは1から3個のメチレン基はそれぞれ、基Y1によって追加的に置き換えられていてもよく;Y1はそれぞれ独立に、-O-、-S-、-NH-、-NR’-、-NR’-CO-、-CO-NR’-、-CO-、-SO2-、-SO-および-CR’=N-ここで、R’はそれぞれ独立に、水素またはC1~6アルキルであるから選択され;Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよびハロゲン即ちF、Cl、BrおよびI、好ましくはFから選択されることができ;ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル、ハロゲン例えば、FまたはCl、C1~3ハロアルキル例えば、-CF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OPO3R、-OSO2Rおよび-OSiR4ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキルまたはC1~6ハロアルキルであるから選択される;L2は、結合または置換されていてもよいC1~6アルキレン基好ましくは結合を表す]。本明細書に記載の化合物において、好ましいリンカーL1は、1または複数例えば、1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくはC1~2アルキレンを含むここで、1または複数好ましくは1または2個のメチレン基はそれぞれ、基-CRe=Crfまたは基-C≡C-によって置換され;Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよびハロゲン即ちF、Cl、BrおよびI、好ましくはFから選択されることができ;ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル、ハロゲン例えば、FまたはClおよび-CNから選択される。Z1が式-CH2x-CO-NH-NH-CO-CH2y-の基である式IおよびIIの化合物において、xおよびyは両方とも0であることが好ましい。本発明による特に好ましい化合物は、式IまたはIIの化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである:式中、Z1は、N、OおよびSから選択される2または3個のヘテロ原子を含有する5員の複素環を表し;Z2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Raによって置換されていてもよいフェニル、ピリジル、ピリミジニルまたはオキサジアゾリルここで、Raはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R1は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rbによって置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、または-SOOR基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し、R2は、1個または複数例えば1、2、3または4個の基Rcによって置換されていてもよいアリール基ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C2~4アルケニル、C2~4アルキニル、C1~4ハロアルキル例えばCF3、-CN、-NO2、-OR、-SR、-COR、-COOR、-OCOR、-OCONR2、-NR2、-NR-COR、-NR-COOR、-SOR、-SO2R、-SOORまたは-SO2NR2基ここで、Rはそれぞれ独立に、H、C1~6アルキル、C1~6ハロアルキル、C2~6アルケニルまたはC2~6アルキニルであるから選択され得るを表し;L1は、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくはC1~2アルキレンを表しここで、1または2個のメチレン基例えば1個のメチレン基はそれぞれ、基-CRe=CRf-または基-C≡C-によって置き換えられ;Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシおよびC1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシから選択されることができ;ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキル例えば、メチル、ハロゲン例えば、FまたはClおよび-CNから選択される;L2は、結合または置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくは結合を表す。本発明によるさらに特に好ましい化合物は、式IまたはIIの化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである:式中、Z1は、2個の窒素原子および1個の酸素原子を含有する5員の複素環を表し;Z2は、基Raによって一置換もしくは二置換されていてもよいフェニル、ピリジルまたはピリミジニルを表しここで、Raは、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシおよび-SO2Rここで、Rは、HまたはC1~3アルキルであるから選択され得る;R1は、基Rbによって一置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基ここで、Rbは、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、C1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシ、ヒドロキシおよび-CNから選択されるを表し、R2は、基Rcによって一置換もしくは二置換されていてもよいアリール基ここで、Rcはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、ハロゲン即ち、F、Cl、Br、I、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキルおよびC1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシから選択され得るを表し;L1は、1個または複数例えば1または2個の基Rdによって置換されていてもよいC1~4アルキレン基好ましくはC1~2アルキレンを表しここで、1または2個のメチレン基例えば、1個のメチレン基はそれぞれ、基-CRe=CRf-または基-C≡C-によって置き換えられ;Rdはそれぞれ同じか、または異なっていてもよく、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、ヒドロキシおよびC1~6アルコキシ例えばC1~3アルコキシから選択されることができ;ReおよびRfが独立に、H、C1~3アルキルおよびハロゲン例えば、FまたはClから選択される;L2は、結合またはC1~2アルキレン基を表す。式IおよびII中の基Z1の例には、次の基が包含される:これらの構造のうち、次の基が、Z1には特に好ましい:なおさらに好ましい態様では、したがって本発明は、次の式Ia、IIa、IbおよびIIbの化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグを提供する:式中、Z2、R1、R2、L1、L2およびL3は、本明細書中の前記で定義された通りである。好ましい実施形態では、Z2は、置換されていてもよいアリールもしくはヘテロアリール基、好ましくは1個もしくは2個好ましくは1個の基Raによって置換されていてもよいフェニル、ピリジルまたはピリミジニル基を表すかここで、Raはそれぞれ独立に、ハロゲン好ましくはClまたはF、ヒドロキシ、C1~6アルコキシ好ましくはC1~3アルコキシ、例えばメトキシまたは-SOR2ここで、Rは、HまたはC1~3アルキルであるである。特に好ましくは、Z2は、置換されていてもよいフェニルまたはピリジル基、例えば置換されていてもよいピリジルを表す。置換されている場合、環上の置換基は独立に、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、クロロ、フルオロおよびメチルスルホニルからなる群から選択することができる。好ましい置換基はエトキシ、クロロ、フルオロおよびメチルスルホニルである。1個または複数のそのような基は、環上で任意の環位置に存在してもよい。しかし、1個または2個のそのような基が、存在することが好ましい。2個の置換基が存在する場合、これらは一般に、同一である。基Z2の例には次の基が包含される:特に好ましい基Z2には次の基が包含される:好ましい実施形態では、R1は、1個もしくは2個好ましくは1個の基Rbによって置換されていてもよいフェニルもしくはピリジルを表し、ここで、Rbはそれぞれ独立に、ハロゲン例えばF、ClまたはBr、ヒドロキシ、C1~6アルキル好ましくはC1~3アルキル、例えばメチル、C1~6アルコキシ好ましくはC1~3アルコキシ、例えばメトキシまたはシアノである。特に好ましくは、R1は、置換されている例えば、一置換されているピリジル環を表す。好ましい置換基には、ヒドロキシ、メトキシおよびシアノ基、特にメトキシが包含される。基R1の例には、次の基が包含される:特に好ましい基R1には次の基が包含される:好ましい実施形態では、R2は、1個もしくは2個の基Rcによって置換されていてもよいフェニルもしくはピリジルここで、Rcはそれぞれ独立に、ハロゲン例えばFまたはClまたはC1~6アルコキシ好ましくはC1~3アルコキシ、例えばメトキシまたはエトキシであるを表す。特に好ましくは、R2は、置換されていてもよいフェニルである。置換されている場合、フェニル基上の環置換基は独立に、C1~3アルキル例えばメチルまたはエチル、メトキシ、エトキシ、クロロおよびフルオロからなる群から選択されていてもよい。1個または複数のそのような基は、環上で任意の環位置に存在してもよい。しかし、1個または2個のそのような基が、存在することが好ましい。特に好ましくは、フェニル環は、ただ1個のクロロ基によって、オルト位またはパラ位で、例えばオルト位で置換されている。基R2の例には、次の基が包含される:特に好ましくは、R2は、下式の基である:好ましい実施形態では、L1は、単一のメチレン基が、基-CRe=CRf-ここで、ReおよびRfは、本明細書中の前記で定義された通りである、基-C≡C-または基-C=C=C-のいずれかによって置き換えられているC1アルキレンリンカーである。リンカー基L1として特に好ましいのは、ReおよびRfが独立に、HおよびC1~3アルキルから選択される式-CRe=CRf-の基である。そのような基は、cisまたはtransのいずれかであってよいが、好ましくは、それらはtrans配置にある。特に好ましくは、リンカー基L1中のReおよびRfは同一であり、両方ともHか、または両方ともメチルのいずれかである。好ましいリンカー基L1は、-CH=CH-である。L1の例には、次の基が包含される:好ましい実施形態では、L2は結合であるか、またはC1~2アルキレン基例えば、メチレンである。好ましくは、L2は結合である。好ましい実施形態では、L3は結合である。本発明による特に好ましい化合物は、式IIcまたはIIdの化合物、その異性体例えば、立体異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである:[式中、Z2は、置換されていてもよいピリジル、フェニルまたはピリミジニル環、好ましくは1または2個好ましくは1個のハロ原子例えばClまたはFまたは1個のメチルスルホニル基によって置換されているフェニル環またはハロ原子例えばClによって、アルコキシ基例えばエトキシによって、もしくはメチルスルホニル基によって、置換されていてもよいピリジル環であり;R1は、置換フェニルまたはピリジル環、好ましくはハロ原子例えばCl、C1~6アルコキシ例えばメトキシ基、ヒドロキシまたはシアノ基によって置換されているフェニルまたはピリジル環であり;R2は、置換されていてもよいフェニル環、好ましくは1個のハロ原子例えばClによって置換されているフェニル環であり;L1は、cisまたはtrans-CH=CH-、好ましくはtrans-CH=CH-である]。次の化合物は、本発明による特に好ましい化合物の例である:本発明による特に好ましい化合物は、化合物番号1、2、3、4、5、6、7、8、10、11、12、14、33、56、57および58、およびその異性体、薬学的に許容されるその塩およびプロドラッグである。本発明によるさらに特に好ましい化合物は、化合物番号2、3、4、8、10、11、12、14および57、およびその異性体、薬学的に許容される塩およびプロドラッグである。一実施形態では、次の化合物それ自体は、本発明の範囲から除外される:別段に述べられていない限り、全ての置換基は、相互に独立している。下付文字が整数0即ちゼロである場合、その下付文字が付されている基が存在しない、即ち、その特定の基の両側の基の間に直接結合が存在することが意図されている。別段に述べられていない限り、本明細書中で結合に関する言及はいずれも、飽和結合を指すことが意図されている。アステリスクが本明細書中で示されているいずれかの置換基のいずれかの構造式中に存在する場合、これは、その置換基が分子の残りの部分に結合するポイントを示していると理解されたい。これらの式のいずれかが、2個のアステリスク2つの結合ポイントを示すを包含する場合、これらのうちのいずれか1個は、分子の残りの部分にある所望の結合ポイントに結合していてもよい。本明細書中で具体的に示されているそのような構造の配位は、これらが、示されている配位で結合すべきであることを暗示することを意図されていない。別段に述べられていない限り、ハロまたはハロゲン原子という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであってよい。好ましくは、これは、フルオロまたはクロロである。本明細書で使用される場合、アルキルという用語は、飽和炭化水素基を指し、直鎖および分岐アルキル基の両方に及ぶことが意図されている。そのような基の例には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、n-ヘキシルなどが包含される。アルキル基は好ましくは、1~6個の炭素原子、例えば1~4個の炭素原子を含有する。別段に述べられていない限り、本明細書中で述べられているアルキル基はいずれも、同じか、または異なってよい1個または複数の基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アミノまたはハロゲン原子例えばF、ClまたはBrによって置換されていてもよい。本明細書で使用される場合、アルケニルという用語は、1つまたは複数の炭素-炭素二重結合を有するアルキル基を指し、直鎖および分岐アルケニル基の両方を包含する。C2~6アルケニルという用語は、2から6個の炭素原子および1つまたは複数例えば1つまたは2つの二重結合を有するアルケニル基を指す。そのような基の例には、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、クロチル、ペンテニルおよびヘキセニルが包含される。別段に述べられていない限り、本明細書中に述べられているアルケニル基はいずれも、同じか、または異なってよい1個または複数の基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アミノまたはハロゲン原子例えばF、ClまたはBrによって置換されていてもよい。本明細書で使用される場合、アルキニルという用語は、1つまたは複数の炭素-炭素三重結合を有するアルキル基を指し、直鎖および分岐アルキニル基の両方を包含する。別段に述べられていない限り、本明細書中に述べられているアルキニル基はいずれも、同じか、または異なってよい1個または複数の基、例えばヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アミノまたはハロゲン原子例えばF、ClまたはBrによって置換されていてもよい。本明細書で使用される場合、ハロアルキルという用語は、1個または複数のハロ置換基を有するアルキル基を指す。そのような基の例には、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CCl3、-CHCl2、-CH2CF3などが包含される。本明細書で使用される場合、アルキレンという用語は、結合アルキル基を指し、任意の直鎖または分岐アルキレン基に及ぶことが意図されている。そのような基の例には、メチレン、エチレン、エタン-1,1-ジイル、プロピレン、プロパン-2,2-ジイル、1-メチルエチレン、ブチレン、1-メチルプロピレン、1,1-ジメチルエチレン、1,2-ジメチルエチレンなどが包含される。本明細書で使用される場合、不飽和複素環という用語は、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも1個のヘテロ原子を含有する任意の5員、6員または7員の一、二または三不飽和複素環に及ぶことが意図されている。複素環構造は、炭素原子を介して、または存在する場合には窒素原子を介して、分子の残りの部分に結合していてもよい。例えば、2個の炭素原子を介して、2個の窒素原子を介して、または1個の炭素および1個の窒素原子を介して結合していてもよい。好ましくは、2個の炭素原子を介して分子の残りの部分に結合している。別段に述べられていない限り、本明細書中で述べられている複素環はいずれも、同じか、または異なってよい1個または複数の基、例えばヒドロキシ、C1~6アルキル、C1~6アルコキシ、アミノ、シアノ、ニトロまたはハロゲン原子例えばF、ClまたはBrによって場合によって置換されていてもよい。複素環は、これがオキソおよびチオ系を包含するように、1個または複数のカルボニルまたはチオカルボニル官能基をさらに含有してもよい。不飽和複素環の例示的な例は、複素環のピロール、2H-ピロール、フラン、ピロリン、チオフェン、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピラゾリン、イミダゾリン、チアゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、ピリジン、2H-ピラン、4H-ピラン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、1,3-ジオキシン、1,4-ジオキシンおよびトリアゾールである。これらのうち、チアゾール、チアジアゾール、ピリミジン、ピリダジン、ピラゾール、チオフェンおよびトリアゾールが特に好ましい。本明細書で使用される場合、アリールという用語は、芳香環系に及ぶことが意図されている。そのような環系は、単環式または多環式例えば二環式であってよく、少なくとも1個の不飽和芳香環を含有する。これらが多環を含有する場合、縮合していてもよい。好ましくはそのような系は、6~20個の炭素原子、例えば6個または10個の炭素原子を含有する。そのような基の例には、フェニル、1-ナフチルおよび2-ナフチルが包含される。好ましいアリール基は、フェニルである。別段に述べられていない限り、アリール基はいずれも、同じか、または異なってよい1個または複数の置換基、例えばC1~4アルキル基、ヒドロキシ、メトキシ、トリフルオロメトキシおよびハロ基によって置換されていてもよい。本明細書で使用される場合、ヘテロアリールという用語は、複素環式芳香族基に及ぶことが意図されている。そのような基は、単環式または二環式であってよく、少なくとも1個の不飽和ヘテロ芳香環系を含有する。これらが単環式である場合、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも1個のヘテロ原子を含有し、芳香族系を形成するのに十分な共役結合を含有する5員または6員の環を含む。これらが二環式である場合、9~11個の環原子を含有し得る。ヘテロアリール基の例には、チオフェン、チエニル、ピリジル、チアゾリル、フリル、ピロリル、トリアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾロニル、オキサゾロニル、チアゾロニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリル、イソインドリル、ピリドニル、ピリダジニル、ピリミジニル、イミダゾピリジル、オキサゾピリジル、チアゾロピリジル、イミダゾピリダジニル、オキサゾロピリダジニル、チアゾロピリダジニルおよびプリニルが包含される。別段に示されていない限り、ヘテロアリールはいずれも、同じか、または異なってよい1個または複数の置換基、例えばC1~4アルキル基、ヒドロキシ、メトキシ、トリフルオロメトキシおよびハロ基によって置換されていてもよい。プロドラッグという用語は、生理学的条件下で本明細書に記載の化合物のいずれか、即ち式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、IIcまたはIIdの化合物に変換される任意の化合物を包含することが意図されている。適切なプロドラッグには、生理学的条件下で加水分解されて所望の分子になる化合物が包含される。当分野で公知の合成方法を使用して、容易に利用可能な出発物質から、本発明による化合物を調製することができる。好ましくは、化合物を、本発明の一部を形成する次の方法に従って得る。a一般式IIIの化合物を[式中、Z2、R2およびL2は、本明細書中の前記で定義された通りである]一般式IVの化合物と[式中、R1、Z1およびL1は、本明細書中の前記で定義された通りであり、Lは、ハロゲン原子、例えばClなどの脱離基を示す]反応させるステップ。反応を簡便には、例えばアセトニトリル、アセトン、DMF、DMSOまたはジオキサンなどの極性溶媒などの溶媒または溶媒の混合物中、塩化ホスホリルなどの脱水剤の存在下、便宜的には150°Cまでの温度で、好ましくは-20から80°Cの間の温度で実施する。b一般式IIIの化合物を[式中、Z2、R2およびL3は、本明細書中の前記で定義された通りである]一般式Vの化合物と[式中、R1およびL1は、本明細書中の前記で定義された通りである]反応させるステップ。反応を簡便には、例えばアセトニトリル、アセトン、DMF、DMSOまたはジオキサンなどの極性溶媒などの溶媒または溶媒の混合物中、塩化ホスホリルなどの脱水剤の存在下、便宜的には150°Cまでの温度で、好ましくは-20から80°Cの間の温度で実施する。c所望の場合には、こうして得られた化合物を分割して、その立体異性体にすること;および/またはdこうして得られた化合物を変換して、その塩、特に薬学的に許容されるその塩にすること。出発物質として使用される化合物は、文献から公知であるか、または市販されていることがある。別法では、文献から公知の方法によって、これらを得ることができる。本発明は、本明細書に開示されている化合物の全ての光学異性体および立体異性体を包含する。詳細には、本発明は、基L1にキラル中心を有する任意の化合物の鏡像異性体に及ぶ。一般式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、IIcまたはIIdの化合物は、その鏡像異性体および/またはジアステレオ異性体に分割することができる。例えば、これらがキラル中心を1つだけ含有する場合、これらは、ラセミ化合物の形態で得られるか、または純粋な鏡像異性体、即ちR体またはS体で得られる。ラセミ化合物として生じる化合物はいずれも、キラル相でのカラム分離などの当分野で公知の方法によって、または光学的に活性な溶媒からの再結晶化によって、その鏡像異性体に分離することができる。少なくとも2個の不斉炭素原子を有する化合物は、その物理化学的差違を元に、自体公知の方法を使用して、例えばクロマトグラフィーおよび/または分別結晶化によって、そのジアステレオ異性体に分割することができ、これらの化合物がラセミ体で得られる場合、それらを続いて、鏡像異性体に分割することができる。本発明はさらに、本明細書に開示されている化合物のある種の構造異性体を包含する。詳細には、本発明は、化合物のいずれの互変異性体にも及ぶ。認められるであろうが、本発明によるある種の化合物は互変異性体形態で、即ち、単結合および隣接する二重結合の変換を随伴するプロトンの移動を伴い得る化学反応の方法によって容易に相互変換される形態で存在し得る。基ReおよびRfの一方がヒドロキシルである場合、本発明の化合物は特に、ケト-エノール互変異性を受け得る。条件に応じて、化合物はケトまたはエノール形態のいずれかで主に存在し得、本発明は、本明細書に示されている構造式のいずれにおいても示されている特定の形態に限定することを意図したものではない。本発明による化合物は、無機または有機の酸または塩基を用いて、その塩に、特に薬学的に許容されるその塩に変換することができる。この目的のために使用することができる酸には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルホン酸、メタンスルホン酸、リン酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸およびアスコルビン酸が包含される。この目的に適し得る塩基には、アルカリおよびアルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化セシウム、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、シクロヘキシルアミンおよびジシクロヘキシルアミンなどのアンモニアおよび有機アミンが包含される。塩を形成するための手順は、当分野で慣用のものである。さらなる態様では、本明細書中に定義されている通りの式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、IIcもしくはIIdの化合物または薬学的に許容されるその塩を、1種または複数の薬学的に許容される担体または添加剤と共に含む医薬製剤を提供する。本発明による化合物およびその薬学的に許容される塩は、価値のある薬理学的特性、特にβ-カテニンに対する阻害作用を有する。Wnt経路においてシグナル伝達を阻害する、詳細には核β-カテニンのレベルを低減するその能力の観点から、本発明による化合物およびその薬学的に許容される塩は、Wnt経路におけるシグナル伝達の過剰活性化によって影響を受け得る任意の状態または疾患、詳細には、β-カテニンの活性化を伴う状態または疾患を治療および/または予防するために適している。Wntシグナル伝達経路という用語は、とりわけWnt、LRPLDL-受容体関連タンパク質、Frizzledおよびβ-カテニンによって通常は媒介されて、遺伝子発現の変化およびWnt活性に特徴的な他の表現型変化をもたらす一連の事象を指すために使用されている。Wnt経路は、様々な癌の病理において中心的な役割を果たしている。したがって本発明の化合物は特に、腫瘍細胞、詳細には腺癌などの癌腫の増殖および転移を予防および/または遅延させるために適している。より具体的には、化合物は、次の癌を治療および/または予防する際に有効である:結腸癌結腸直腸癌など、膵臓癌例えば膵臓腺癌、胃癌、肝臓癌例えば肝細胞および肝芽腫癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌例えば黒色腫、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌例えば卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺癌例えば甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌および膠芽腫。特に好ましくは、本明細書に記載の化合物は、乳癌、非小細胞肺癌、卵巣、甲状腺、結腸直腸癌、膵臓癌、前立腺癌および膠芽腫を治療および/または予防する際に使用することができる。乳癌、非小細胞肺癌、膵臓癌および結腸直腸癌の治療または予防は、本発明の特に好ましい態様を表す。本明細書で使用される場合、増殖という用語は、有糸分裂を受けている細胞を指す。増殖の遅延という用語は、化合物が癌細胞の増殖を阻害することを示す。好ましい実施形態では、増殖の遅延は、DNA複製が、未処置の細胞において観察されるよりも少なくとも10少ない、より好ましくは未処置の癌細胞において観察されるよりも少なくとも25少ない、さらにより好ましくは少なくとも50少ない、例えば75、90または95少ないことを示す。癌腫という用語は、上皮細胞から生じる任意の悪性増殖を指す。例示的な癌腫には、基底細胞癌腫、扁平上皮細胞癌腫および腺癌が包含される。腺癌は、腺上皮で発生する悪性腫瘍であり、結腸直腸、膵臓、乳房および前立腺の癌を包含する。よって、さらなる態様から考慮すると、本発明は、治療で使用するための式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、IIcもしくはIIdの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。別段に規定されていない限り、本明細書で使用される場合、治療という用語は、治療および予防の両方を包含することが意図されている。さらなる態様では、本発明は、結腸癌結腸直腸癌など、膵臓癌、胃癌、肝臓癌例えば肝細胞癌および肝芽腫癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌例えば黒色腫、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌または膠芽腫の治療または予防で使用するための式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、IIcもしくはIIdの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。別の態様では、本発明は、結腸癌結腸直腸癌など、膵臓癌、胃癌、肝臓癌例えば肝細胞癌および肝芽腫癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌例えば黒色腫、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌または膠芽腫を治療または予防する方法において使用するための医薬品を製造する際の式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、IIcもしくはIIdの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。結腸癌結腸直腸癌など、膵臓癌、胃癌、肝臓癌例えば肝細胞癌および肝芽腫癌、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、皮膚癌例えば黒色腫、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、甲状腺未分化癌、頭頚部癌、乳癌、前立腺癌または膠芽腫を撲滅または予防するためにヒトまたは非ヒト動物身体を治療する方法であって、前記身体に、本明細書に規定されている有効量の式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、Ic、IIc、IIdもしくはIIeの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む方法も提供される。Wntシグナル伝達経路を包含する胚発生の間のパターン形成を制御する発生経路を選択的に標的化する小分子は、多能性幹細胞の分化を多くの所望の組織種へと指示するのに役立つと考えられるWangら、ACSChemicalBiology、2010年11月16日を参照されたい。Wntシグナル伝達のモジュレーターとして、本明細書に記載されている化合物はまた、細胞分化の進展に対して効果を有する。したがって、本明細書に記載されている化合物は、再生医療において、例えば前駆細胞の系列特異的インビトロ分化のためのプロトコルにおいて使用するために役立つ特性を有する。前駆細胞とは、分化して別の細胞種、例えば幹細胞になり得る細胞を意味する。この態様では、本発明は、細胞分化を促進および/または指示する方法例えばインビトロ方法を提供し、その方法は、前駆細胞を、本明細書に定義されている有効量の式I、II、Ia、IIa、Ib、IIb、IIcもしくはIIdの化合物または薬学的に許容されるその塩と接触させることを含む。詳細には、適切な条件下で、前駆細胞が分化して新たな細胞種になるのに十分な時間にわたって、前駆細胞を前記少なくとも1種の化合物と接触させる。関連する態様では、本発明は、前駆細胞の細胞分化を特にインビトロで促進および/または指示するための、本明細書に定義されている通りの少なくとも1種の化合物の使用を提供する。好ましくは、前駆細胞は、全能細胞または多能性細胞、特に、胚幹細胞などの幹細胞である。好ましいのは、マウス、ラットおよびヒト細胞、特にヒト細胞などの哺乳動物の前駆細胞である。そのような幹細胞は、確立されている細胞培養から得ることができるか、または非組織破壊法を包含する当分野で知られている方法によって、哺乳動物組織に直接由来してもよい。好ましい実施形態では、前駆細胞は、分化して筋細胞例えば心筋細胞、神経細胞例えばドーパミン作動性神経細胞、内分泌膵臓細胞もしくは肝細胞または、さらに分化して筋細胞、神経細胞、内分泌膵臓細胞もしくは肝細胞になり得る細胞種である新たな細胞種になるように促進および/または指示される。特に好ましくは、前駆細胞は胚幹細胞であり、新たな細胞種は、心筋細胞、ドーパミン作動性神経細胞、内分泌膵臓細胞または肝細胞、特に心筋細胞である。本明細書に記載の化合物の所望の活性を達成するために必要な投薬量は、投与される予定の化合物、患者、状態の性質および重症度、投与方法および回数に左右されるはずであり、選択に従って変化または調節することができる。典型的には、投薬量は、1から100mg、好ましくは1から30mg静脈内投与の場合および1から1000mg、好ましくは1から200mg経口投与の場合の範囲であると予測され得る。本発明の化合物は、1種または複数の慣用の担体および/または添加剤を用いて、当分野で周知の技術に従って製剤化することができる。典型的には、組成物を、経口投与に、または例えば皮内、皮下、腹腔内もしくは静脈内注射による非経口投与に合わせる。したがって、適切な医薬形態には、活性成分を、場合によってコーンスターチ、ラクトース、スクロース、微結晶性セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、水/エタノール、水/グリセロール、水/ソルビトール、水/ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ステアリルアルコール、カルボキシメチルセルロースもしくは硬い脂肪などの脂肪族物質または上記のいずれかの適切な混合物などの1種または複数の慣用の不活性担体および/または賦形剤と共に含有するそのままか、またはコーティングされた錠剤、カプセル剤、懸濁剤および液剤が包含される。機能活性に関する標準なアッセイを使用して、本発明の化合物の薬理学的特性を分析することができる。本発明の化合物を試験するための詳細なプロトコルは、実施例において示す。本発明をここでは、次の非限定的な実施例および図面においてより詳細に記載する。実施例6から9は製剤の例であり、その際、活性物質についての言及は、1種または複数の、その塩を包含する本発明による化合物を示している。4-5-E-2-5-2,4-ジクロロフェニル-4-2-クロロフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジン化合物1の調製a2,4-ジクロロ-N-2-クロロフェニルベンズアミド2の調製:2-クロロアニリン5.15g、40.37mmolのジクロロメタン50mL中の溶液に、2,4-ジクロロベンゾイルクロリド18.88g、42.39mmolを、次いでトリエチルアミン6.1mL、44mmolを加えた。反応混合物を周囲温度で一晩撹拌し、酢酸エチル150mLを、続いて1NのHCl50mLを加えた。有機相を水およびブラインで洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色の固体を得た。2,4-ジクロロ-N-2-クロロフェニルベンズアミド2をさらに精製することなく、次のステップで使用した。収量:11g、90。1HNMRδ852762752738722708bN’-2-クロロフェニル-4-フルオロベンズイミドヒドラジド4の調製:2,4-ジクロロ-N-2-クロロフェニルベンズアミド26.0g、20mmolおよびPCl54.58g、22mmolのベンゼン40mL中の混合物を還流下で16時間撹拌した。溶媒を除去し、高真空下でさらに乾燥させた。残渣の2-クロロ-N-クロロ2,4-ジクロロフェニルメチレンベンゼンアミン3を氷水浴によって冷却した。無水THF20mLを、続いてヒドラジン一水和物5.0mLを加え、反応混合物を周囲温度で3時間さらに撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をエーテル:ヘキサン1:1、30mLと混合し、固体を濾過し、エーテル:ヘキサン混合物でさらに洗浄して、純粋な固体をN-アミノ-2,4-ジクロロ-N’-2-クロロフェニルベンズアミジン4として得た。収量:4.4g、70。1HNMRδ743738722698682641c2-メトキシイソニコチノヒドラジド6の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸51.0g、6.5mmolのCH3OH30mL中の溶液に、SOCl2数滴を周囲温度で加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、濃縮してエステルを得た。そのエステルのCH3OH中の溶液に、ヒドラジン一水和物2.0mL、37mmolを周囲温度で加えた。反応混合物を周囲温度で16時撹拌し、濃縮して2-メトキシイソニコチノヒドラジド6を白色の固体として得た。収量:0.87g、80。1HNMRδ100825731713466386dZ-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸8の調製:2-メトキシイソニコチノヒドラジド60.80g、4.89mmolのTHF20mL中の溶液に、マレイン酸無水物70.47g、4.79mmolを加えた。混合物を周囲温度で16時間撹拌した。固体を濾過し、真空下乾燥させて、純粋な化合物Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸8を白色の固体として得た。収量:1.02g、80。1HNMRδ832738722638390340e4-5-E-2-5-2,4-ジクロロフェニル-4-2-クロロフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジン化合物1の調製:Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸80.2g、0.75mmolのCH3CN中の懸濁液に、POCl30.37g、2.4mmolを加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をCH3CNに溶かし、N-アミノ-2,4-ジクロロ-N’-2-クロロフェニルベンズアミジン40.38g、1.2mmolのCH3CN中の溶液およびK2CO30.38g、1.2mmolで処理した。混合物を周囲温度で1時間撹拌し、2時間還流し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーFCC50~60EtOAc/ヘキサンに掛けて、表題化合物4-5-E-2-5-2,4-ジクロロフェニル-4-2-クロロフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジンを白色の固体として得た。収量:0.11g、28。1HNMRδ838762718403MS5253HPLC954-5-E-2-4-2-クロロフェニル-5-4-メチルスルホニルフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジン化合物2の調製aN-2-クロロフェニル-4-メチルスルホニルベンズアミド3の調製:4-メチルスルホニル安息香酸11.0g、5mmolのジクロロメタン50mL中の溶液に、塩化チオニル5mLを加えた。混合物を周囲温度で18時間撹拌した。全ての溶媒を除去した後に、残渣をジクロロメタン50mLに溶かした。その溶液に、o-クロロアニリン0.766g、6mmolを、続いてEt3N1.4mLを加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。1NのHClおよび水で洗浄した後に、有機層を濃縮して、N-2-クロロフェニル-4-メチルスルホニルベンズアミド3を固体として得た。収量:1.18g、76。1HNMRδ854843812746738715310bN-アミノ-N’-2-クロロフェニル-4-メチルスルホニル-ベンズアミジン5の調製:N-2-クロロフェニル-4-メチルスルホニルベンズアミド31.0g、3.23mmolのC6H650mL中の懸濁液に、POCl310mLを加えた。混合物を15時間還流させた。溶媒を除去した後に、残渣をTHF50mLに溶かし、H2NNH2H2O3mLを加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中2~5のメタノールによって精製して、N-アミノ-N’-2-クロロフェニル-4-メチルスルホニル-ベンズアミジン5を固体として得た。収量:0.8g、77。1HNMRδ7907757407056856405955703305c2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸62.0g、13mmolのMeOH30mL中の溶液に、塩化チオニル3mLを加えた。混合物を還流下で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をTHF30mLに溶かし、H2NNH2H2O3mLを加えた。混合物を0.5時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中5~10のメタノールによって精製して、2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8を固体として得た。収量:1.76g、81。1HNMRδ998825730713457386dZ-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9の調製:化合物8167mg、1.0mmolのTHF10mL中の溶液に、フラン-2,5-ジオン110mg、1.1mmolを加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をジクロロメタン10mLで希釈した。固体を濾過によって収集して、Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9を固体として得た。収量:190mg、71。1HNMRδ1045832736720641629390e4-5-E-2-4-2-クロロフェニル-5-4-メチルスルホニルフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジン化合物2の調製Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9180mg、0.68mmolのPhMe20mL中の懸濁液に、POCl30.2mLを加えた。混合物を還流で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をTHF20mLに溶かし、N-アミノ-N’-2-クロロフェニル-4-メチルスルホニル-ベンズアミジン5220mg0.68mmolを加えた。混合物を周囲温度で18時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中0~5のメタノールによって精製して、4-5-E-2-4-2-クロロフェニル-5-4-メチルスルホニルフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジンを固体として得た。収量:30mg、8.3。1HNMRδ8327907807407327104003305MS5351HPLC964-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリジン化合物3の調製a2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド3の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸11.0g、6.5mmolのCH3OH30mL中の溶液に、SOCl2数滴を周囲温度で加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、濃縮してメチル2-メトキシピリジン-4-カルボキシレート2を得た。2-メトキシピリジン-4-カルボキシレート2のCH3OH中の溶液に、ヒドラジン一水和物2.0mL、37mmolを周囲温度で加えた。反応混合物を周囲温度で16時間撹拌し、濃縮して、2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド3を白色の固体として得た。収量:0.87g、80。1HNMRδ100825731713466386bZ-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸4の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド30.80g、4.89mmolのTHF20mL中の溶液に、マレイン酸無水物70.47g、4.79mmolを加えた。混合物を周囲温度で16時間撹拌した。固体を濾過し、真空下で乾燥させて、純粋な化合物Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸4を白色の固体として得た。収量:1.02g、80。1HNMRδ832738722638390340cN-2-クロロフェニルイソニコチンアミド6の調製:イソニコチン酸51.0g、8.12mmolおよびSOCl22.4mLのDCM10mL中の混合物を2時間撹拌し、濃縮した。残渣をDCM20mLに溶かした。その溶液に、2-クロロベンゼンアミン1.7g、8.15mmolを、次いでトリエチルアミン1.4mL、10mmolを加えた。反応混合物を周囲温度で一晩撹拌し、酢酸エチル50mLを、続いて1NのHCl10mLを加えた。有機相を水およびブラインで洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色の固体を得た。収量:1.5g、80。N-2-クロロフェニルイソニコチンアミド6をさらに精製することなく次のステップで使用した。1HNMRδ884851848775743738732716710dN-アミノ-N’-2-クロロフェニルピリジン-4-カルボキサミジン8の調製:N-2-クロロフェニルイソニコチンアミド61.5g、6.45mmolおよびPCl51.6g、7.8mmolのベンゼン40mL中の混合物を還流下で16時間撹拌した。溶媒を除去し、高真空下でさらに乾燥させた。残渣Z-2-クロロ-N-クロロピリジン-4-イルメチレンベンゼンアミン7を氷水浴によって冷却し、無水THF20mLを、続いてヒドラジン一水和物1.2mLを加えた。反応混合物を周囲温度で3時間さらに撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をエーテル:ヘキサン1:1、30mLと混合し、固体を濾過し、さらにエーテル:ヘキサン混合物で洗浄して、純粋な固体をN-アミノ-N’-2-クロロフェニルピリジン-4-カルボキサミジン8として得た。収量:1.1g、70。1HNMRδ855743738707701686680638566e4-5-E-2-5-2,4-ジクロロフェニル-4-2-クロロフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジン化合物3の調製Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸40.2g、0.75mmolのCH3CN中の懸濁液に、POCl30.37g、2.4mmolを加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をCH3CNに溶かし、N-アミノ-N’-2-クロロフェニルピリジン-4-カルボキサミジン80.38g、1.5mmolのCH3CNおよびK2CO30.38g、1.2mmol中の溶液で処理した。混合物を周囲温度で1時間撹拌し、2時間還流させ、濾過した。濾液を濃縮した。残渣をFCC50~60EtOAc/ヘキサンに掛けて、表題化合物4-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリジンを白色の固体として得た。収量:0.11g、28。1HNMRδ858832774764760755750743735731709398MS4574644HPLC965-クロロ-2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリジン化合物4の調製a2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド3の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸11.0g、6.5mmolのCH3OH30mL中の溶液に、SOCl2数滴を周囲温度で加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、濃縮してメチル2-メトキシピリジン-4-カルボキシレート2を得た。2-メトキシピリジン-4-カルボキシレート2のCH3OH中の溶液に、ヒドラジン一水和物2.0mL、37mmolを周囲温度で加えた。反応混合物を周囲温度で16時間撹拌し、濃縮して2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド3を白色の固体として得た。収量:0.87g、80。1HNMRδ100825731713466386bZ-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸4の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド30.80g、4.89mmolのTHF20mL中の溶液に、マレイン酸無水物70.47g、4.79mmolを加えた。混合物を周囲温度で16時間撹拌した。固体を濾過し、真空下で乾燥させて純粋な化合物Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸4を白色の固体として得た。収量:1.02g、80。1HNMRδ832738722638390340b5-クロロ-N-2-クロロフェニルピリジン-2-カルボキサミド6の調製:5-クロロピリジン-2-カルボン酸51.0g、6.35mmolおよびSOCl22.4mLのDCM10mL中の混合物を2時間撹拌し、濃縮した。残渣をDCM20mLに溶かした。その溶液に、2-クロロベンゼンアミン1.0g、7.84mmolを、次いでトリエチルアミン2.0mL、14.43mmolを加えた。反応混合物を周囲温度で一晩撹拌し、酢酸エチル50mLを、続いて1NのHCl10mLを加えた。有機相を水およびブラインで洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮して、薄黄色の固体を得た。収量:0.8g、47。5-クロロ-N-2-クロロフェニルピリジン-2-カルボキサミド6をさらに精製することなく次のステップで使用した。1HNMRδ105865860828790744738730716708cN-アミノ-5-クロロ-N’-2-クロロフェニルピリジン-2-カルボキサミジン8の調製:5-クロロ-N-2-クロロフェニルピリジン-2-カルボキサミド60.8g、3.0mmolおよびPCl51g、4.8mmolのベンゼン30mL中の混合物を還流下で16時間撹拌した。溶媒を除去し、高真空下でさらに乾燥させた。残渣2Z-5-クロロ-N-2-クロロフェニルピリジン-2-カルボキシイミドイルクロリド7を氷水浴によって冷却し、無水THF20mLを、続いてヒドラジン一水和物1.0mLを加えた。反応混合物を周囲温度で3時間さらに撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をエーテル:ヘキサン1:1、30mLと混合し、固体を濾過し、エーテル:ヘキサン混合物でさらに洗浄して、純粋な固体をN-アミノ-5-クロロ-N’-2-クロロフェニルピリジン-2-カルボキサミジン8として得た。収量:0.5g、60。1HNMRδ843798765741732719713690685650536d5-クロロ-2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリジン化合物4の調製Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸40.2g、0.75mmolのCH3CN中の懸濁液に、POCl30.37g、2.4mmolを加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をCH3CNに溶かし、N-アミノ-5-クロロ-N’-2-クロロフェニルピリジン-2-カルボキサミジン80.38g、1.2mmolのCH3CN中の溶液およびK2CO30.38g、1.2mmolで処理した。混合物を周囲温度で1時間撹拌し、2時間還流させ、濾過した。濾液を濃縮した。残渣をFCC50~60EtOAc/ヘキサンに掛けて、表題化合物5-クロロ-2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリジンを白色の固体として得た。収量:0.11g、28。1HNMRδ833818778760739731709398MS4914821HPLC944-5-E-2-4-2-クロロフェニル-5-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジン化合物5の調製a2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド3の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸11.0g、6.5mmolのCH3OH30mL中の溶液に、SOCl2数滴を周囲温度で加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、濃縮して、メチル2-メトキシピリジン-4-カルボキシレート2を得た。2-メトキシピリジン-4-カルボキシレート2のCH3OH中の溶液に、ヒドラジン一水和物2.0mL、37mmolを周囲温度で加えた。反応混合物を周囲温度で16時間撹拌し、濃縮して、2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド3を白色の固体として得た。収量:0.87g、80。1HNMRδ100825731713466386bZ-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸4の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド30.80g、4.89mmolのTHF20mL中の溶液にマレイン酸無水物70.47g、4.79mmolを加えた。混合物を周囲温度で16時間撹拌した。固体を濾過し、真空下で乾燥させて、純粋な化合物Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸4を白色の固体として得た。収量:1.02g、80。1HNMRδ832738722638390340cN-2-クロロフェニル-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-カルボキサミド6の調製:エチル3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-カルボキシレート51.0g、6.4mmolおよび2-クロロベンゼンアミン1.23g、9.6mmolのトルエン20mL中の混合物に、AlMe32.0M、4.8mL、9.6mmolを滴下した。反応混合物を還流下で一晩撹拌し、1NのHCl5mLおよび酢酸エチル50mLで処理した。有機相を乾燥させ、濃縮した。残渣を、ヘキサン:酢酸エチル1:3で溶離するカラムクロマトグラフィーによって精製して、N-2-クロロフェニル-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-カルボキサミド6を得た。収量:1.0g、66。1HNMRδ998938852843748738740732722713256dN-アミノ-N’-2-クロロフェニル-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-カルボキサミジン8の調製:N-2-クロロフェニル-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-カルボキサミド61.0g、4.21mmolおよびPCl52g、9.6mmolのベンゼン40mL中の混合物を還流下で16時間撹拌した。溶媒を除去し、高真空下でさらに乾燥させた。残渣Z-2-クロロ-N-クロロ3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-イルメチレンベンゼンアミン7を氷水浴によって冷却し、無水THF20mLを、続いてヒドラジン一水和物5.0mLを加えた。反応混合物を周囲温度で3時間さらに撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をエーテル:ヘキサン1:1、30mLと混合し、固体を濾過し、エーテル:ヘキサン混合物でさらに洗浄して、純粋な固体をN-アミノ-N’-2-クロロフェニル-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-カルボキサミジン8として得た。収量:0.5g、47。1HNMRδ740720692682676652643628612525243e4-5-E-2-5-2,4-ジクロロフェニル-4-2-クロロフェニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジン化合物5の調製Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸40.2g、0.75mmolのCH3CN中の懸濁液に、POCl30.37g、2.4mmolを加えた。混合物を還流下で16時間撹拌し、周囲温度に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をCH3CNに溶かし、N-アミノ-N’-2-クロロフェニル-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-カルボキサミジン80.5g、1.99mmolのCH3CNおよびK2CO30.38g、1.2mmol中の溶液で処理した。混合物を周囲温度で1時間撹拌し、2時間還流させ、濾過した。濾液を濃縮した。残渣をFCC50~60EtOAc/ヘキサンに掛けて、表題化合物4-5-E-2-4-2-クロロフェニル-5-3-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-5-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イル-2-メトキシピリジンを白色の固体として得た。収量:0.1g、28。1HNMRδ832775769760755750745730708398235MS4625578HPLC98作用物質100mgを含有する錠剤各錠剤は:作用物質100.0mgラクトース80.0mgコーンスターチ34.0mgポリビニルピロリドン4.0mgステアリン酸マグネシウム2.0mgを含有する。作用物質、ラクトースおよびコーンスターチを一緒に混合し、ポリビニルピロリドンの水溶液で均一に湿らせる。湿った組成物をふるいに掛けメッシュサイズ2.0mm、50°Cで乾燥させた。滑沢剤を加え、最終混合物を圧縮して、錠剤を形成する。各錠剤の最終質量は、220mgである。作用物質150mgを含有する錠剤各錠剤は:作用物質150.0mg粉末化ラクトース89.0mgコーンスターチ40.0mgコロイドシリカ10.0mgポリビニルピロリドン10.0mgステアリン酸マグネシウム1.0mgを含有する。作用物質をラクトース、コーンスターチおよびシリカと混合し、ポリビニルピロリドン水溶液で湿らせる。湿った組成物を、メッシュサイズ1.5mmのふるいに掛ける。生じた顆粒を45°Cで乾燥させ、次いで、ステアリン酸マグネシウムと混合する。混合物から錠剤を圧縮する。各錠剤の質量は300mgである。作用物質10mgを含有するアンプル各アンプルは、作用物質10.0mg0.01Nの塩酸適量再蒸留水2.0mlまで添加を含有する。作用物質を必要量の0.01NのHClに溶かし、塩化ナトリウムで等張性にし、無菌濾過し、2mlアンプルに移す。作用物質50mgを含有するアンプル各アンプルは作用物質50.0mg0.01Nの塩酸適量再蒸留水10.0mlまで添加を含有する。作用物質を必要量の0.01NのHClに溶かし、塩化ナトリウムで等張性にし、無菌濾過し、10mlアンプルに移す。2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-エトキシピリジン化合物13の調製aエチル5-ブロモピリジン-2-カルボキシレート2の調製:5-ブロモピリジン-2-カルボン酸12.02g、10mmolのEtOH50mL中の懸濁液に、塩化チオニル5mLを加えた。混合物を周囲温度で18時間撹拌した。全ての溶媒を除去した後に、残渣をカラム2:1のヘキサン/酢酸エチルによって精製して、エチル5-ブロモピリジン-2-カルボキシレート22.3gをオイルとして得た。収量:2.3g、定量収率。1HNMRδ880800450144bエチル5-エトキシピリジン-2-カルボキシレート3の調製:エチル5-ブロモピリジン-2-カルボキシレート21.5g、6.5mmolのEtOH20mL中の溶液に、ナトリウム0.18g、7.8mmolのEtOH20mL中の溶液を加えた。混合物を還流で3時間撹拌した。全ての溶媒を除去した後に、残渣をカラム2:1のヘキサン/酢酸エチルによって精製して、エチル5-エトキシピリジン-2-カルボキシレート3をオイルとして得た。収量:0.26g、20。1HNMRδ838810823722445425140cN-2-クロロフェニル-5-エトキシピリジン-2-カルボキサミド4の調製:o-クロロアニリン0.68g、5.3mmolのPhMe20mL中の溶液に、AlMe33mLを加えた。混合物を周囲温度で0.5時間撹拌し、エチル5-エトキシピリジン-2-カルボキシレート30.26g、1.33mmolのPhMe10mL中の溶液に加えた。混合物を周囲温度で15時間撹拌し、1NのHCl20mLでクエンチした。混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、濃縮した。残渣をカラム2:1のヘキサン/酢酸エチルによって精製して、N-2-クロロフェニル-5-エトキシピリジン-2-カルボキサミド4を固体として得た。収量:310mg、96。1HNMRδ1055865830823742730705420150dN-アミノ-N’-2-クロロフェニル-5-エトキシ-ピリジン-2-カルボキサミジン5の調製:N-2-クロロフェニル-5-エトキシピリジン-2-カルボキサミド40.15g、0.64mmolのベンゼン20mL中の溶液に、PCl5650mgを加えた。混合物を還流で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をTHF30mLに溶かし、H2NNH2H2O3mLに加えた。混合物を0.5時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中5~10のメタノールによって精製して、N-アミノ-N’-2-クロロフェニル-5-エトキシ-ピリジン-2-カルボキサミジン5を固体として得た。収量:140mg、95。1HNMRδ820795750735720685655520410140e2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸62.0g、13mmolのMeOH30mL中の溶液に、塩化チオニル3mLを加えた。混合物を還流で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をTHF30mLに溶かし、H2NNH2H2O3mLに加えた。混合物を0.5時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中5~10のメタノールによって精製して、2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8を固体として得た。収量:1.76g、81。1HNMRδ998825730713457386fZ-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8167mg、1.0mmolのTHF10mL中の溶液に、マレイン酸無水物110mg、1.1mmolを加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をジクロロメタン10mLで希釈した。固体を濾過によって収集して、Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9を固体として得た。収量:190mg、71。1HNMRδ1080832736720641629390g2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-エトキシピリジン化合物13の調製:Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸90.30g、mmolのPhMe20mL中の懸濁液に、POCl30.5mLを加えた。混合物を還流で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をジクロロメタン20mLに溶かし、N-アミノ-N’-2-クロロフェニル-5-エトキシ-ピリジン-2-カルボキサミジン5240mg0.68mmolに加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をPhMe20mLに懸濁させ、3時間還流させた。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中0~5のメタノールによって精製して、2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-エトキシピリジンを固体として得た。収量:20mg、3.5。1HNMRδ833824789760720714410140MS5023HPLC994-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリミジン化合物11の調製aN-2-クロロフェニルピリミジン-4-カルボキサミド3の調製:ピリミジン-4-カルボン酸10.5g、4mmolのジクロロメタン30mL中の懸濁液に、塩化チオニル3mLを加えた。混合物を周囲温度で18時間撹拌した。全ての溶媒を除去した後に、残渣をジクロロメタン50mL中に懸濁させ、o-クロロアニリン1.0g8mmolに加えた。混合物を周囲温度で16時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をカラム2:1のヘキサン/酢酸エチルによって精製して、N-2-クロロフェニルピリミジン-4-カルボキサミド3を固体として得た。収量:0.28g、30。1HNMRδ1060935910865845750710bN-アミノ-N’-2-クロロフェニルピリミジン-4-カルボキサミジン5の調製:N-2-クロロフェニルピリミジン-4-カルボキサミド30.2g、0.86mmolのPhMe20mL中の懸濁液に、PCl50.65gを加えた。混合物を還流で3時間撹拌した。この溶液に、NH2NH2H2O3mLを加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。全ての溶媒を除去した後に、残渣をカラム2:1のヘキサン/酢酸エチルによって精製して、N-アミノ-N’-2-クロロフェニルピリミジン-4-カルボキサミジン5を固体として得た。収量:0.15g、70。1HNMRδ915870798735715680645560c2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸62.0g、13mmolのMeOH30mL中の溶液に塩化チオニル3mLを加えた。混合物を還流で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をTHF30mLに溶かし、H2NNH2H2O3mLに加えた。混合物を0.5時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中5~10のメタノールによって精製して、2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8を固体として得た。収量:1.76g、81。1HNMRδ998825730713457386dZ-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9の調製2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド8167mg、1.0mmolのTHF10mL中の溶液に、マレイン酸無水物110mg、1.1mmolを加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をジクロロメタン10mLで希釈した。固体を濾過によって収集して、Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9を固体として得た。収量:190mg、71。1HNMRδ1045832736720641629390e4-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリミジン化合物11の調製Z-4-2-メトキシピリジン-4-カルボアミド-4-オキソブタ-2-エン酸9200mg、0.75mmolのPhMe20mL中の懸濁液に、POCl30.5mLを加えた。混合物を還流で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をジクロロメタン20mLに溶かし、N-アミノ-N’-2-クロロフェニルピリミジン-4-カルボキサミジン5150mg0.6mmolに加えた。混合物を周囲温度で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をPhMe20mLに懸濁させ、3時間還流させた。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中0~5のメタノールによって精製して、4-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルピリミジンを固体として得た。収量:30mg。1HNMRδ883832770730710400MS4593HPLC992-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジン化合物12の調製aメチル5-ブロモピコリネート2の調製:メタノール80mL中の5-ブロモピコリン酸7.0g、35mmolが入った100mL丸底フラスコに、塩化チオニル3.0mLを周囲温度で滴下した。添加の後に、反応混合物を3時間還流加熱した。メタノールを除去し、酢酸エチル100mLを残渣に加え、重炭酸ナトリウム溶液を加えることによって、pHを7.0に調節した。有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を除去し、メチル5-ブロモピコリネート2を白色の固体として得、これをさらに精製することなく、次の反応ステップで使用した。収量:6.57g、86.9。bメチル5-メチルチオピコリネート3の調製:メチル5-ブロモピコリネート26.20g、28.7mmolの無水THF150mL溶液を、ナトリウムメチチオニドmethythionide2.51g、35.9mmolに加え、反応物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製した。メチル5-メチルチオピコリネート3が白色の固体として単離された。収量:3.0g、57.1。1HNMRδ858802760399258cメチル5-メチルスルホニルピコリネート4の調製:DCM30mL中のメチル5-メチルチオピコリネート31.50g、8.2mmolが入った100mL丸底フラスコに、mCPBA5.51g、77、25.0mmolを加えた。反応物を周囲温度で一晩維持した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、メチル5-メチルスルホニルピコリネート4を白色の固体として得た。収量:1.35g、76.5。1HNMRδ922840836402310dN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5の調製:トルエン20mL中の2-クロロアニリン1.20g、0.0093molをトリメチルアルミニウム2.0M、4.6mLに加え、次いでメチル5-メチルスルホニルピコリネート41.0g、4.65molを加え、混合物を80~90°Cに2時間加熱した。反応混合物を冷却し、1NのHCl溶液10mLを加えて酸性にした。次いで、ジクロロメタン100mLを加え、有機相を水100mLでさらに洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣をエーテル50mLと混合し、0.5時間撹拌した。固体を濾過し、乾燥させて、N-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5を薄黄色の固体として得た。収量:1.26g、87.2。1HNMRδ106921862851846745734712320eN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミジノヒドラジド7の調製:無水ベンゼン20mL中のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド51.26g、0.0040molを、PCl51.26g、6.0mmolに加え、混合物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させた。粗製のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリド6を黄色の固体1.60gとして得た。N-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリド6を無水THF30mLに溶かし、反応物を0°Cに冷却し、ヒドラジン一水和物9.0mLを加えた。反応物を0°Cに10分間維持し、0.5時間で周囲温度に加温した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、N’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド7を黄色の固体として得た。収量:1.22g、92.0。1HNMRδ902825817744737716689645562306f3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸8の調製:無水トルエン20mL中のN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド70.63g、1.94molが入った100mLフラスコに、マレイン酸無水物0.20g、2.04molを加え、反応物を周囲温度で1時間維持し、次いで3時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣を高真空下で乾燥させて、3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸8を黄色の固体として得た。収量:0.75g、95.6。g2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド9の調製:2-メトキシピリジン-4-カルボン酸2.0g、13mmolのMeOH30mL中の溶液に、塩化チオニル3mLを加えた。混合物を還流で2時間撹拌した。溶媒を除去した後に、残渣をTHF30mLに溶かし、H2NNH2H2O3mLに加えた。混合物を0.5時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムジクロロメタン中5~10のメタノールによって精製して、2-メトキシピリジン-4-カルボヒドラジド9を固体として得た。収量:1.76g、81。1HNMRδ998825730713457386h2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジン化合物12の調製ジクロロメタン20mL中の3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸80.21g、0.52mmolが入っている100mLフラスコに、塩化オキサリル0.20g、1.55mmolおよびDMF1滴を加えた。反応物を周囲温度で3時間維持した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させ、-20°Cに冷却した。ジクロロメタン10mLを、続いて2-メトキシイソニコチノヒドラジド90.10g、0.6mmolおよびトリエチルアミン0.5mLを加えた。反応混合物をこの温度で0.5時間維持し、次いで周囲温度に1時間加温した。溶媒を除去し、粗製のN’-[E-3-[4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニル-2-ピリジル-1,2,4-トリアゾール-3-イル]プロパ-2-エノイル]-2-メトキシ-ピリジン-4-カルボヒドラジド10を次のステップで使用した。N’-[E-3-[4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニル-2-ピリジル-1,2,4-トリアゾール-3-イル]プロパ-2-エノイル]-2-メトキシ-ピリジン-4-カルボヒドラジド10をジクロロメタン10mLに溶かし、トリフェニルホスフィン0.27g、1.0mmol、四臭化炭素0.34g、1.04mmolおよびトリエチルアミン0.18mL、1.30mmolを加えた。反応混合物を周囲温度で2時間維持した。最終化合物をカラムクロマトグラフィー1:3のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジンを黄色の固体として得た。収量:0.031g、11。1HNMRδ875862835829770760755748745739733732712401309MS5363HPLC96E-4-5-2-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルベンゾニトリル化合物10の調製aメチル5-ブロモピコリネート2の調製:メタノール80mL中の5-ブロモピコリン酸7.0g、35mmolが入った100mL丸底フラスコに、塩化チオニル3.0mLを周囲温度で滴下した。添加の後に、反応混合物を3時間還流加熱した。メタノールを除去し、酢酸エチル100mLを残渣に加え、重炭酸ナトリウム溶液を加えることによって、pHを7.0に調節した。有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を除去し、メチル5-ブロモピコリネート2を白色の固体として得、これをさらに精製することなく次の反応ステップで使用した。収量:6.57g、86.9。bメチル5-メチルチオピコリネート3の調製:メチル5-ブロモピコリネート26.20g、28.7mmolの無水THF150mL中の溶液を、ナトリウムメチチオニド2.51g、35.9mmolに加え、反応物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製した。メチル5-メチルチオピコリネート3を白色の固体として単離した。収量:3.0g、57.1。1HNMRδ858802760399258cメチル5-メチルスルホニルピコリネート4の調製:DCM30mL中のメチル5-メチルチオピコリネート31.50g、8.2mmolが入っている100mL丸底フラスコに、mCPBA5.51g、77、25.0mmolを加えた。反応物を周囲温度で一晩維持した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、メチル5-メチルスルホニルピコリネート4を白色の固体として得た。収量:1.35g、76.5。1HNMRδppm922840836402310dN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5の調製:トルエン20mL中の2-クロロアニリン1.20g、0.0093molに、トリメチルアルミニウム2.0M、4.6mLを、次いでメチル5-メチルスルホニルピコリネート41.0g、4.65molを加え、混合物を80~90°Cに2時間加熱した。反応物を冷却し、1NのHCl溶液10mLを加えて酸性にした。次いで、ジクロロメタン100mLを加え、有機相を水100mLでさらに洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣をエーテル50mLと混合し、0.5時間撹拌した。固体を濾過し、乾燥させて、N-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5を薄黄色の固体として得た。収量:1.26g、87.2。1HNMRδ106921862851846745734712320eN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド7の調製:無水ベンゼン20mL中のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド51.26g、0.0040molをPCl51.26g、6.0mmolに加え、混合物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させた。粗製のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリド6が黄色の固体1.60gとして得られた。N-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリド6を無水THF30mLに溶かし、反応物を0°Cに冷却し、ヒドラジン一水和物9.0mLを加えた。反応物を0°Cで10分間維持し、0.5時間で周囲温度に加温した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、N’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド7を黄色の固体として得た。収量:1.22g、92.0。1HNMRδ902825817744737716689645562306f3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸8の調製:無水トルエン20mL中のN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド70.63g、1.94molが入った100mLフラスコに、マレイン酸無水物0.20g、2.04molを加え、反応物を周囲温度で1時間維持し、次いで、3時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣を高真空下で乾燥させて、3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸8を黄色の固体として得た。収量:0.75g、95.6。g4-シアノ-安息香酸ヒドラジド9の調製:4-シアノ-安息香酸メチルエステル1.0g、13mmolのMeOH30mL中の溶液に、H2NNH2H2O3mLを加えた。混合物を周囲温度で16時間撹拌した。固体を収集し、CH3OHで洗浄して、4-シアノ-安息香酸ヒドラジド9を固体として得た。収量:0.8g、80。1HNMRδ793470330hE-4-5-2-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルベンゾニトリル化合物10の調製ジクロロメタン20mL中の化合物80.21g、0.52mmolが入った100mLフラスコに、塩化オキサリル0.20g、1.55mmolおよびDMF1滴を加えた。反応物を周囲温度で3時間維持した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させ、-20°Cに冷却した。ジクロロメタン10mLを、続いて4-シアノベンゾヒドラジド90.10mg、0.62mmolおよびトリエチルアミン0.5mLを加えた。反応物をこの温度で0.5時間、次いで室温で1時間維持した。溶媒を除去し、粗製のE-N’-3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリロイル-4-シアノベンゾヒドラジド10を次のステップで使用した。E-N’-3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリロイル-4-シアノベンゾヒドラジド10をジクロロメタン10mLに溶かし、トリフェニルホスフィン0.27g、1.0mmol、四臭化炭素0.34g、1.04mmolおよびトリエチルアミン0.18mL、1.30mmolを加えた。反応物を周囲温度で2時間維持した。最終化合物をカラムクロマトグラフィー1:3のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、E-4-5-2-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルビニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルベンゾニトリルを黄色の固体として得た。収量:0.035g、12.7。1HNMRδppm874860832817782763762749741713306MS530355220HPLC982-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-4-クロロフェニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジン化合物14の調製aメチル5-ブロモピコリネート2の調製:メタノール80mL中の5-ブロモピコリン酸7.0g、0.035molが入っている100mL丸底フラスコに、塩化チオニル3.0mLを周囲温度で滴下した。添加の後に、反応混合物を3時間還流加熱した。メタノールを除去し、酢酸エチル100mLを残渣に加え、重炭酸ナトリウム溶液を加えることによって、pHを7.0に調整した。有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を除去し、メチル5-ブロモピコリネート2を白色の固体として得、これをさらに精製することなく次の反応ステップで使用した。収量:6.57g、86.9。bメチル5-メチルチオピコリネート3の調製:メチル5-ブロモピコリネート26.20g、0.0287molの無水THF150mL中の溶液を、ナトリウムメチチオニド2.51g、0.0359molに加え、反応物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製した。メチル5-メチルチオピコリネート3を白色の固体として単離した。収量:3.0g、57.1。1HNMRδ858802760399258cメチル5-メチルスルホニルピコリネート4の調製:DCM30mL中のメチル5-メチルチオピコリネート31.50g、0.0082molが入った100mL丸底フラスコに、mCPBA5.51g、77、0.025molを加えた。反応物を周囲温度で一晩維持した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、メチル5-メチルスルホニルピコリネート4を白色の固体として得た。収量:1.35g、76.5。1HNMRδ922840836402310dN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5の調製:トルエン20mL中の2-クロロアニリン1.20g、0.0093molを、トリメチルアルミニウム2.0M、4.6mLに加え、次いで、メチル5-メチルスルホニルピコリネート41.0g、0.00465molを加え、混合物を80~90°Cに2時間加熱した。反応物を冷却し、1NのHCl溶液10mLを加えて酸性にした。次いで、ジクロロメタン100mLを加え、有機相を水100mLでさらに洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣をエーテル50mLと混合し、0.5時間撹拌した。固体を濾過し、乾燥させて、N-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5を薄黄色の固体として得た。収量:1.26g、87.2。1HNMRδ106921862851846745734712320eN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド7の調製:無水ベンゼン20mL中のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド51.26g、0.0040molをPCl51.26g、0.0060molに加え、混合物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させた。粗製のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリド6を黄色の固体1.60gとして得た。化合物6を無水THF30mLに溶かし、反応物を0°Cに冷却し、ヒドラジン水和物9.0mLを加えた。反応物を0°Cで10分間維持し、0.5時間で周囲温度に加温した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、N’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド7を黄色の固体として得た。収量:1.22g、92.0。1HNMRδ902825817744737716689645562306f3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸8の調製:無水トルエン20ml中のN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド70.63g、0.00194molが入った100mLフラスコに、マレイン酸無水物0.20g、0.00204molを加え、反応物を周囲温度で1時間維持し、次いで3時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣を高真空下で乾燥させて、3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸8を黄色の固体として得た。収量:0.75g、95.6。g2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-4-クロロフェニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジン化合物14の調製ジクロロメタン20mL中の3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸80.21g、0.52mmolが入った100mLフラスコに、塩化オキサリル0.20g、1.55mmolおよびDMF1滴を加えた。反応を周囲温度で3時間維持した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させた。ジクロロメタン10mLを、続いて4-クロロベンゾヒドラジド90.10g、0.6mmolおよびトリエチルアミン0.5mLを加えた。反応物をこの温度で0.5時間、次いで周囲温度で1時間維持した。溶媒を除去し、粗製の4-クロロ-N’-[E-3-[4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニル-2-ピリジル-1,2,4-トリアゾール-3-イル]プロパ-2-エノイル]ベンゾヒドラジド10を次のステップで使用した。4-クロロ-N’-[E-3-[4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニル-2-ピリジル-1,2,4-トリアゾール-3-イル]プロパ-2-エノイル]ベンゾヒドラジド10をジクロロメタン10mLに溶かし、トリフェニルホスフィン0.27g、1.0mmol、四臭化炭素0.34g、1.04mmolおよびトリエチルアミン0.18mL、1.30mmolを加えた。反応物を室温で2時間維持した。最終化合物をカラムクロマトグラフィー1:3のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、2-4-2-クロロフェニル-5-E-2-5-4-クロロフェニル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジンを黄色の固体として得た。収量:0.03g、11。1HNMRδ874860832817782763762749741713306MS5392HPLC984-{5-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イルエチニル]-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル}-ベンゾニトリル化合物33の調製a4-5-{1,2-ジブロモ-2-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-エチル}-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル-ベンゾニトリル2の調製:4-5-{2-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-ビニル}-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル-ベンゾニトリル10.1g、0.19mmolのDCM10mL中の溶液に、Br20.05g、0.28mmolのDCM10mL中の溶液を0°Cで滴下した。混合物を周囲温度で4時間撹拌し、NaHSO3aqおよびH2Oで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濃縮した。残渣をFCC50~100酢酸エチル/ヘキサンに掛けて、4-5-{1,2-ジブロモ-2-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-エチル}-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル-ベンゾニトリル2を得た。収量:0.1g、77。1HNMRδ878862838820780772738662530309b4-{5-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イルエチニル]-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル}-ベンゾニトリル化合物33の調製4-5-{1,2-ジブロモ-2-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-エチル}-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル-ベンゾニトリル20.1g、0.19mmolのベンゼン10mL中の溶液に、tBuOK0.05g、0.28mmolを少量ずつ0°Cで加えた。混合物を0°Cで1時間撹拌し、希酢酸および酢酸エチルで処理し、H2Oで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濃縮した。残渣をFCC50~100酢酸エチル/ヘキサンに掛けて、4-{5-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イルエチニル]-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル}-ベンゾニトリルを得た。収量:0.03g、39。1HNMRδ878862838820782762748309MS5282HPLC942-4-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジン化合物56の調製a4-シアノ-安息香酸ヒドラジド2の調製:4-シアノ-安息香酸メチルエステル11.0g、13mmolのMeOH30mL中の溶液に、H2NNH2H2O3mLを加えた。混合物を周囲温度で16時間撹拌した。固体を収集し、CH3OHで洗浄して、4-シアノ-安息香酸ヒドラジド2を固体として得た。収量:0.8g、80。1HNMRδ793470330bメチル5-ブロモピコリネート4の調製:メタノール80mL中の5-ブロモピコリン酸37.0g、35mmolが入った100mL丸底フラスコに、塩化チオニル3.0mLを周囲温度で滴下した。添加の後に、反応混合物を3時間還流加熱した。メタノールを除去し、酢酸エチル100mLを残渣に加え、重炭酸ナトリウム溶液を加えることによって、pHを7.0に調整した。有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を除去し、メチル5-ブロモピコリネート4を白色の固体として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。収量:6.57g、86.9cメチル5-メチルチオピコリネート5の調製:メチル5-ブロモピコリネート46.20g、28.7mmolの無水THF150mL中の溶液をナトリウムメチチオニド2.51g、35.9mmolに加え、反応物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製した。メチル5-メチルチオピコリネート5を白色の固体として単離した。収量:3.0g、57.1。1HNMRδppm858802760399258dメチル5-メチルスルホニルピコリネート6の調製:DCM30mL中のメチル5-メチルチオピコリネート51.50g、8.2mmolが入った100mL丸底フラスコに、mCPBA5.51g、77、25.0mmolを加えた。反応物を周囲温度で一晩維持した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、メチル5-メチルスルホニルピコリネート6を白色の固体として得た。収量:1.35g、76.5。1HNMRδ922840836402310e5-メタンスルホニル-ピリジン-2-カルボン酸2-クロロ-4-トリフルオロメトキシ-フェニル-アミド7の調製:トルエン50mL中の2-クロロ-4-トリフルオロメトキシ-フェニルアミン2.0g、9.29mmolをトリメチルアルミニウム2.0M、4.65mLに加え、次いでメチル5-メチルスルホニルピコリネート61.0g、4.65molを加え、混合物を80~90°Cに2時間加熱した。反応物を冷却し、1NのHCl溶液10mLを加えて酸性にした。次いで、ジクロロメタン100mLを加え、有機相を水100mLでさらに洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣をエーテル50mLと混合し、0.5時間撹拌した。固体を濾過し、乾燥させて、5-メタンスルホニル-ピリジン-2-カルボン酸2-クロロ-4-トリフルオロメトキシ-フェニル-アミド7を薄黄色の固体として得た。収量:1.26g、65。1HNMRδ106921868852740722320fN’-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド8の調製:ベンゼン20mL中の5-メタンスルホニル-ピリジン-2-カルボン酸2-クロロ-4-トリフルオロメトキシ-フェニル-アミド71.1g、2.79mmolをPCl51.26g、6.0mmolに加え、混合物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させた。粗製のN-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリドを黄色の固体1.60gとして得た。N-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリドを無水THF30mLに溶かし、反応物を0°Cに冷却し、ヒドラジン一水和物9.0mLを加えた。反応物を0°Cに10分間維持し、周囲温度に0.5時間で加温した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、N’-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド8を黄色の固体として得た。収量:0.56g、50。1HNMRδ902825744732706641562308g3-4-2-クロロフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸9の調製:無水トルエン20mL中のN’-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド80.45g、1.1mmolが入った100mLフラスコに、マレイン酸無水物0.20g、2.04molを加え、反応を周囲温度で1時間維持し、次いで3時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣を高真空下で乾燥させて、3-4-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸9を黄色の固体として得、これを、さらに精製することなく次のステップで使用した。収量:0.75g、95.6h2-4-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジン化合物56の調製ジクロロメタン20mL中の3-4-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-5-メチルスルホニルピリジン-2-イル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イルアクリル酸90.18g、0.368mmolが入った100mLフラスコに、塩化オキサリル0.20g、1.55mmolおよびDMF1滴を加えた。反応物を周囲温度で3時間維持した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させ、-20°Cに冷却した。ジクロロメタン10mLを、続いて4-シアノ-安息香酸ヒドラジド20.18g、1.1mmolおよびトリエチルアミン0.5mLを加えた。反応混合物をこの温度で0.5時間、次いで周囲温度で1時間維持した。溶媒を除去し、粗製のN’-[E-3-[4-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-5-メチルスルホニル-2-ピリジル-1,2,4-トリアゾール-3-イル]プロパ-2-エノイル]-2-メトキシ-ピリジン-4-カルボヒドラジドを次のステップで使用した。N’-[E-3-[4-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-5-メチルスルホニル-2-ピリジル-1,2,4-トリアゾール-3-イル]プロパ-2-エノイル]-2-メトキシ-ピリジン-4-カルボヒドラジドをジクロロメタン10mLに溶かし、トリフェニルホスフィン0.19g、0.736mmol、四臭化炭素0.24g、0.736mmolおよびトリエチルアミン0.18mL、1.30mmolを加えた。反応混合物を周囲温度で2時間維持した。最終化合物をカラムクロマトグラフィー1:3のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、2-4-2-クロロ-4-トリフルオロメトキシフェニル-5-E-2-5-2-メトキシピリジン-4-イル-1,3,4-オキサジアゾール-2-イルビニル-4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル-5-メチルスルホニルピリジンを黄色の固体として得た。収量:0.07g、30。1HNMRδ878862820778762758732712309MS6142HPLC964-[5-2-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-ビニル-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル]-ベンゾニトリル化合物57の調製a5-ヒドロキシ-ピリジン-2-カルボン酸メチルエステル2の調製:メタノール50mL中の5-ヒドロキシ-ピリジン-2-カルボン酸11.0g、7.2mmolが入っている100mL丸底フラスコに、塩化チオニル3.0mLを周囲温度で滴下した。添加の後に、反応混合物を3時間還流加熱した。メタノールを除去して、5-ヒドロキシ-ピリジン-2-カルボン酸メチルエステル2を白色の固体として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。収量:0.957g、86.9。b5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-カルボン酸メチルエステル3の調製:5-ヒドロキシ-ピリジン-2-カルボン酸メチルエステル20.5g、3.26mmol、メタンスルホン酸2,2,2-トリフルオロ-エチルエステル1.0g、5.34mmolおよびK2CO31.4g、9.8mmolのアセトニトリル50mL中の混合物を一晩撹拌した。固体を濾別し、濾液を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-カルボン酸メチルエステル3を白色の固体として得た。収量:0.437g、57.1。1HNMRδ848816738448399c5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-カルボン酸2-クロロ-フェニル-アミド4の調製:トルエン50mL中の2-クロロ-4-トリフルオロメトキシ-フェニルアミン2.0g、9.29mmolをトリメチルアルミニウム2.0M、4.65mLに加え、次いで5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-カルボン酸メチルエステル31.1g、4.65molを加え、混合物を80~90°Cに2時間加熱した。反応物を冷却し、1NのHCl溶液10mLを加えて酸性にした。次いで、ジクロロメタン100mLを加え、有機相を水100mLでさらに洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣をエーテル50mLと混合し、0.5時間撹拌した。固体を濾過し、乾燥させて、5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-カルボン酸2-クロロ-フェニル-アミド4を固体として得た。収量:1.0g、71。1HNMRδ106862840732746730712708dN’-2-クロロフェニル-5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシピコリンイミドヒドラジド6の調製:5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-カルボン酸2-クロロ-フェニル-アミド41.0g、3mmolのベンゼン20mL中の溶液に、PCl51.26g、6.0mmolを加え、混合物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させた。粗製のN-2-クロロ-フェニル-5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-カルボキシイミドイルクロリドを無水THF20mLに溶かし、反応物を0°Cに冷却し、ヒドラジン一水和物5.0mLを加えた。反応物を0°Cで10分間維持し、0.5時間で周囲温度に加温した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、N’-2-クロロ-フェニル-5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシピコリンイミドヒドラジド6を黄色の固体として得た。収量:0.56g、50。1HNMRδ825802744738730718682652532440e3-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-アクリル酸8の調製:無水トルエン20mL中のN’-2-クロロ-4-フェニル-5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシピコリンイミドヒドラジド60.45g、1.1mmolが入った100mLフラスコに、マレイン酸無水物0.20g、2.04molを加え、反応物を周囲温度で1時間維持し、次いで3時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣を高真空下で乾燥させて、3-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-アクリル酸8を黄色の固体として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。収量:0.75g、95.6。f4-[5-2-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-ビニル-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル]-ベンゾニトリル化合物57の調製ジクロロメタン20mL中の3-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-アクリル酸80.18g、0.368mmolが入った100mLフラスコに、塩化オキサリル0.20g、1.55mmolおよびDMF1滴を加えた。反応物を周囲温度で3時間維持した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させ、-20°Cに冷却した。ジクロロメタン10mLを、続いて4-シアノ-安息香酸ヒドラジド0.18g、1.1mmolおよびトリエチルアミン0.5mLを加えた。反応混合物をこの温度で0.5時間、次いで周囲温度で1時間維持した。溶媒を除去し、粗製の4-シアノ-安息香酸N’-3-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-アクリロイル-ヒドラジドを次のステップで使用した。4-シアノ-安息香酸N’-3-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-アクリロイル-ヒドラジドをジクロロメタン10mLに溶かし、トリフェニルホスフィン0.19g、0.736mmol、四臭化炭素0.24g、0.736mmolおよびトリエチルアミン0.18mL、1.30mmolを加えた。反応混合物を周囲温度で2時間維持した。最終化合物をカラムクロマトグラフィー1:3のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、4-[5-2-{4-2-クロロ-フェニル-5-[5-2,2,2-トリフルオロ-エトキシ-ピリジン-2-イル]-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル}-ビニル-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル]-ベンゾニトリルを黄色の固体として得た。収量:0.07g、30。1HNMRδ838820800780758732718440MS5503HPLC964-5-{2-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-1,2-ジフルオロ-ビニル}-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル-ベンゾニトリル化合物58の調製aメチル5-ブロモピコリネート2の調製:メタノール60mL中の5-ブロモピコリン酸7.0g、35mmolが入った100mL丸底フラスコに、塩化チオニル3.0mLを周囲温度で滴下した。添加の後に、反応混合物を3時間還流加熱した。メタノールを除去し、酢酸エチル80mLを残渣に加え、重炭酸ナトリウム溶液を加えることによって、pHを7.0に調整した。有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機溶媒を除去し、メチル5-ブロモピコリネート2を白色の固体として得、これをさらに精製することなく、次の反応ステップで使用した。収量:6.57g、86.9。bメチル5-メチルチオピコリネート3の調製:メチル5-ブロモピコリネート26.20g、28.7mmolの無水THF150mL中の溶液を、ナトリウムメチチオニド2.51g、35.9mmolに加え、反応物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製した。メチル5-メチルチオピコリネート3を白色の固体として単離した。収量:3.0g、57.1。1HNMRδppm858802760399258cメチル5-メチルスルホニルピコリネート4の調製:DCM30mL中のメチル5-メチルチオピコリネート31.50g、8.2mmolが入った100mL丸底フラスコに、mCPBA5.51g、77、25.0mmolを加えた。反応物を周囲温度で一晩維持した。溶媒を除去した後に、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、メチル5-メチルスルホニルピコリネート4を白色の固体として得た。収量:1.35g、76.5。1HNMRδ922840836402310dN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5の調製:トルエン20mL中の2-クロロアニリン1.20g、0.0093molをトリメチルアルミニウム2.0M、4.6mLに加え、次いで、メチル5-メチルスルホニルピコリネート41.0g、4.65molを加え、混合物を80~90°Cに2時間加熱した。反応物を冷却し、1NのHCl溶液10mLを加えて酸性にした。次いで、ジクロロメタン100mLを加え、有機相を水100mLでさらに洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣をエーテル50mLと混合し、0.5時間撹拌した。固体を濾過し、乾燥させて、N-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド5を薄黄色の固体として得た。収量:1.26g、87.2。1HNMRδ106921862851846745734712320eN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド7の調製:無水ベンゼン20mL中のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンアミド51.26g、0.0040molをPCl51.26g、6.0mmolに加え、混合物を一晩還流加熱した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させた。粗製のN-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリド6を黄色の固体1.60gとして得た。N-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドイルクロリド6を無水THF30mLに溶かし、反応物を0°Cに冷却し、ヒドラジン一水和物9.0mLを加えた。反応物を0°Cで10分間維持し、0.5時間で周囲温度に加温した。溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィー1:1のヘキサンおよび酢酸エチルで溶離によって精製して、N’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド7を黄色の固体として得た。収量:1.22g、92.0。1HNMRδ902825817744737716689645562306f3-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-2,3-ジフルオロ-アクリル酸9の調製:無水トルエン20mL中のN’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピコリンイミドヒドラジド70.84g、2.59mmolが入った100mLフラスコに、3,4-ジフルオロ-フラン-2,5-ジオン0.36g、2.59mmolを加え、反応物を周囲温度で1時間維持して、2Z-3-Z-N’-2-クロロフェニル-5-メチルスルホニルピリジン-2-カルボキサミドカルバモイル-2,3-ジフルオロアクリル酸8を得、次いで、3時間還流加熱した。溶媒を除去した後に、残渣を高真空下で乾燥させて、3-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-2,3-ジフルオロ-アクリル酸9を黄色の固体1.15g、96として得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。g4-5-{2-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-1,2-ジフルオロ-ビニル}-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル-ベンゾニトリル化合物58の調製ジクロロメタン20mL中の3-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-2,3-ジフルオロ-アクリル酸90.3g、0.68mmolが入った100mLフラスコに、塩化オキサリル0.40g、3.1mmolおよびDMF1滴を加えた。反応物を周囲温度で3時間維持した。溶媒を除去し、残渣を高真空下でさらに乾燥させ、-20°Cに冷却した。ジクロロメタン10mLを、続いて4-シアノ-安息香酸ヒドラジド90.33g、2.04mmolおよびトリエチルアミン0.5mLを加えた。反応混合物をこの温度で0.5時間、次いで周囲温度で1時間維持した。溶媒を除去し、粗製の4-シアノ-安息香酸N’-{3-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-2,3-ジフルオロ-アクリロイル}-ヒドラジド11を次のステップで使用した。4-シアノ-安息香酸N’-{3-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-2,3-ジフルオロ-アクリロイル}-ヒドラジド11をジクロロメタン10mLに溶かし、トリフェニルホスフィン0.27g、1.02mmol、四臭化炭素0.34g、1.02mmolおよびトリエチルアミン0.18mL、1.30mmolを加えた。反応混合物を周囲温度で2時間維持した。最終化合物をカラムクロマトグラフィー1/99~5/95のメタノール/DCMで溶離によって精製して、4-5-{2-[4-2-クロロ-フェニル-5-5-メタンスルホニル-ピリジン-2-イル-4H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル]-1,2-ジフルオロ-ビニル}-[1,3,4]オキサジアゾール-2-イル-ベンゾニトリルを固体として得た。収量:0.05g、13。1HNMRδ877861838810780758751746741310MS5662HPLC95化合物のIC50値STF/RENHEK293細胞ST-Luc7XTCF結合部位およびRenillaPromegaプラスミドを安定トランスフェクションされているを使用して、IC50値を算出した。HEK293細胞1ウェル当たり細胞80,000個をポリ-Lリシンでコーティングされた96ウェルプレートに播種した。播種の24時間後に、細胞を50Wnt3a含有調整培地中の様々な化合物濃度と共に、さらに24時間インキュベーションしたLWnt3a発現細胞ATCCから。最小の3回反復試験をそれぞれの試料について使用した。化合物に曝露した後に、細胞を溶解させ、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケ活性をGloMax商標96MicroplateLuminometerwithDualInjectorPromegaで測定した。XLfitidbsを使用して、阻害実験におけるIC50値を決定した。データを次の式にフィットさせた:IC50:Langmuir結合等温式:fit=AB×xC-B×1-exp-1×D×x/Dres=y-fit表1は、ある種の化合物のIC50値を示す。示されている値は全て、複数回の実験からの平均値である。化合物の安定性実験手順貯留されたヒトまたはラット肝臓ミクロソーム貯留された雄のものおよび雌のものを調製し、使用前は-80°Cで貯蔵した。ミクロソーム最終タンパク質濃度0.5mg/mL、0.1Mのリン酸緩衝液pH7.4および被験化合物最終基質濃度=3μM;最終DMSO濃度=0.25を、NADPH最終濃度=1mMを加えて反応を開始する前に37°Cで予めインキュベーションした。最終インキュベーション体積は25μLであった。対照インキュベーションがそれぞれの被験化合物について包含され、その際、0.1Mのリン酸緩衝液pH7.4がNADPHの代わりに加えられたNADPHなし。2つの対照化合物がそれぞれの種に包含された。全てのインキュベーションを、それぞれの被験化合物について単独で行った。それぞれの化合物を0、5、15、30および45分間インキュベーションした。対照NADPHなしを45分間だけインキュベーションした。適切な時点で、内部標準を含有するメタノール50μLを加えることによって、反応を停止させた。インキュベーションプレートを2,500rpm、4°Cで20分間遠心分離して、タンパク質を沈殿させた。定量分析タンパク質の沈殿の後に、試料の上清を4種までの化合物からなるカセット内で合わせ、Cyprotexの一般的なLC-MS/MS条件を使用して分析した。場合によって、代謝産物プロファイリングが必要な場合には、安定性アッセイの後に、化合物を4回インキュベーションし、その結果生じた4つのインキュベーションを貯留して、分析のためにより高い試料濃度を得る第2のアッセイを行った。次いで、親の30~50が分解する時点を、3つの異なるレベルの代謝産物プロファイリングおよび/または同定で調査することができた。データ分析時間に対するlnピーク面積比化合物ピーク面積/内部標準ピーク面積のプロットから、線の勾配を決定する。その後、半減期および固有クリアランスを、下記の式を使用して算出する:排出速度定数k=-勾配式中、V=インキュベーション体積μL/mgミクロソームタンパク質。2種の対照化合物をアッセイに包含させ、これらの化合物についての値が規定の限界内でなければ、結果を棄却し、実験を繰り返した。結果細胞増殖の阻害InuCyte商標生細胞イメージャー中での増殖アッセイを使用して、化合物10の存在下および不在下で細胞の増殖を評価した。実験手順全ての細胞をATCCAmericanTypeCultureCollectionから購入し、供給者の推奨に従って保持した。使用された細胞はRKO、HCT-15、WiDr、HT29、DLD-1、COLO320DMおよびCOLO205細胞であった。細胞1,000個を、推奨培地を有する96ウェルプレートに播種した。播種の翌日に、細胞培地を、0.05のDMSOおよび5、1または0.1μmol/Lの化合物10を含有する溶液に変えた。最低6回の反復試験で、全ての試料を評価した。プレートを、細胞培養インキュベーター内部のIncuCyte商標EssenBioScience内でインキュベーションした。イメージを2時間毎に取り込んで、細胞増殖を監視した。結果多くの結腸直腸癌CRCで生じる大腸腺腫性ポリポーシスAPC遺伝子における突然変異は、β-カテニンの無効な分解およびWntシグナル伝達の異常なアップレギュレーションをもたらす。結果として、CRC細胞は、アンタゴナイズされた標準Wntの結果として、細胞周期停止を受け得る。したがって、細胞増殖の動態を、選択されたWnt応答性CRC細胞系において、IncuCyte生命トラッキングシステムを使用することによって監視した。平行して、野生型APCおよびβ-カテニンを含有し、Wnt非依存性細胞増殖を示す結腸直腸癌細胞系RKOを、対照として使用した。DMSO対照、0.1μmol/L、1μmol/Lおよび5μmol/Lの化合物10で処置された後の細胞系RKO、HCT-15、WiDr、HT29、DLD-1、COLO320DMおよびCOLO205での細胞増殖プロファイルをそれぞれ、図1Aから1Gに示す。化合物10による標準Wntシグナル伝達の阻害は、細胞周期停止を促進し、APC変異型CRC細胞の増殖を特異的に低減した。IncuCyte商標によって測定された細胞増殖曲線は、野生型APCを含有するWnt非依存性CRC対照細胞系RKOと比較して、様々なAPC変異型CRC細胞における増殖の濃度依存性の低減を示している。プロットは、最小の2つの独立した実験からの代表的な値を示しており、全ての相対標準偏差は20未満である。細胞系HCT-15、WiDr、HT29、DLD-1、COLO320DMおよびCOLO205が用量依存性増殖阻害を示した一方で、対照細胞系RKOは示さなかった。それぞれの場合において、対照とは別に、DMSOでの曲線黒線は、他の試料よりも早い時間で周密に達し、このことは、細胞増殖の用量依存性阻害を示している即ち、化合物100.1μM、薄灰色の線;1μM、中間灰色の線;および5μM、濃灰色の線の濃度が上がるにつれて、増殖の阻害が大きくなる。Wnt経路の阻害実験手順ChemiluminescentAssayKitsBPSBioscience、NordicBiositeを使用してTNKS1カタログ番号80564、TNSK2カタログ番号80566およびPARP1カタログ番号80551に対して、化合物10および陽性対照として使用されるXAV939Novartis;Huangら、Nature2009、461、614~20頁の阻害活性を様々な用量で試験した二重に。手順は、製造者のプロトコルに従って行った。結果TNKS1/2のPARPドメインを阻害することによって、化合物10が標準Wntシグナル伝達を減少させるかを試験するために、TNKS1/2およびPARPの活性を監視するための生化学アッセイを行った。化合物10は、TNKS1およびTNKS2の自動PARシル化をインビトロで、それそれ46nmol/Lおよび19nmol/LのIC50値で減少させた。しかしながら、XAV939とは対照的に、化合物10は、20μmol/Lまでの用量で、PARP1の阻害を示さなかった。実験の結果を、図2TNKS1、3TNKS2および4PARPに示す。それぞれの場合に、図AはXAV939で得られた結果を示し、図Bは化合物10で得られた結果を示している。この実験の結果から算出されたIC50値は次の通りである:この実験の結果は、化合物10が、PARP1活性には影響を及ぼさないまま、TNKS1/2の自動PARシル化を特異的に阻害することによって、標準Wntシグナル伝達をブロックすることを示している。免疫組織化学的分析実験手順SW480細胞50,000個ATCC-供給者の推奨に従って維持をガラススライド上の24ウェルプレートに播種し、DMSO対照または0.5μmol/Lの化合物10に18時間曝露した。インキュベーションの後に、細胞をPBS中4のPFA中で10分間固定した。標準的なプロトコルに記載されている通りに、免疫染色を行った。使用される一次抗体は、β-カテニン610153、BDTransductionLaboratories商標またはAXIN276G6、CellSignalingTechnologyであった。使用される二次抗体は、DyLight549555ロバ抗マウスおよびCy2-ロバ抗ウサギ両方ともJacksonImmunoResearch、1:1000であった。ZeissAxiovert200M蛍光/生細胞撮像顕微鏡を倍率40倍で使用して、試料を撮像した。倍率63倍のZeissLSM780を、共焦点顕微鏡では使用した。結果AXIN2およびβ-カテニンの細胞分布の変化についての識見を得るために、化合物10で処理されたSW480細胞を免疫蛍光によって分析した。全β-カテニンの全般的な低減が、核β-カテニンの多大な低減を随伴して、全てではないがほとんどの化合物10処理されたSW480細胞で、500nmol/Lの用量で検出された。共焦点顕微鏡シャッタースピードは同じによって、細胞質AXIN2のレベルが有意に上昇し、蓄積された破壊複合体をおそらくは表す大きなタンパク質焦点が観察される図5に拡大挿入ことが明らかになった。化合物10曝露後のβ-カテニンの分解は、破壊複合体中のAXIN2の安定化によって調和が計られると考えられた。DMSOおよび化合物10で処理された細胞の画像は、図5に示されている。"