"CA15-3とCA15-3を認識する配位子A1との反応をポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液W中で行う工程を含むことを特徴とするCA15-3の免疫測定法。下記工程1~4を含む請求項1記載のヘテロジニアスな免疫測定法。工程1:不溶性担体Bに結合したCA15-3を認識する配位子A1とCA15-3の反応をポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液W中で行う工程。工程2:工程1のポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤をB/F分離で除く工程。工程3:工程1で得られた反応物に標識体Cを反応させる工程。工程4:工程3で得られた反応物中の標識体Dの量を計測する工程。前記水溶液W中の前記CA15-3の濃度が、0.5~400U/mLである請求項1又は2記載の免疫測定法。ポリエチレングリコールの数平均分子量が、2,000~200,000である請求項1~3のいずれか記載の免疫測定法。前記水溶液W中の前記ポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤の濃度が、1~7重量である請求項1~4のいずれか記載の免疫測定法。本発明の目的は、検体を希釈することなく、検体中に存在するCA15-3を精度よく広い濃度域で測定し得る方法を提供することにある。本発明者は、上記目的を達成すべく鋭意検討した結果、本発明に到達した。即ち本発明は、CA15-3とCA15-3を認識する配位子A1との反応をポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液W中で行う工程を含むことを特徴とするCA15-3の免疫測定法である。本発明の免疫測定法を用いることにより、再発乳癌や転移性乳癌において血中濃度の上昇が著しいことが知られているCA15-3を、検体を希釈することなく、広範囲な濃度域で精度よく測定することができる。CA15-3とCA15-3を認識する配位子A1との反応をポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液W中で行うことにより、検体を希釈することなく、広範囲な濃度域で精度よくCA15-3を測定することができる。水溶液W中のCA15-3の濃度は、測定精度の観点から好ましくは0.5~400U/mL、更に好ましくは0.5~300U/mLである。CA15-3を認識する配位子A1は、CA15-3を特異的に認識する物質であり、従来免疫測定で用いられた物が全て使用できる。即ち、CA15-3に対する抗体並びにレクチン、アビジン及びビオチン等の特異的な結合を生じる物質等が使用できる。また、CA15-3を特異的に認識する配位子1と、配位子1を特異的に認識する配位子2を組み合わせて用いることも可能である。配位子A1が抗体の場合、モノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよく、更に免疫活性を保持した抗体の分解物、例えば抗体をペプシンで消化して得られるFab’2、これを更に還元して得られるFab’等であってもよい。使用する配位子A1の量は、A1の種類やCA15-3の量等により適宜好ましい範囲を選択することができる。本発明に用いられるポリエチレングリコールの数平均分子量以下、Mnと略記は、2,000~200,000が好ましく、更に好ましくは5,000~100,000、特に好ましくは6,000~50,000である。Mn5,000以下であるとCA15-3と比較してMnが小さく、CA15-3を認識する配位子A1間との作用が起きにくくなる傾向にあり、またMnが200,000を超えると溶液の粘度が高くなり、免疫反応性が低下する傾向にある。本発明におけるMnはゲルパーミエーションクロマトグラフィーにより、溶媒としてテトラヒドロフランを用い、ポリエチレングリコールを標準物質として測定される。非イオン界面活性剤としては、アルキレンオキサイド以下、AOと略記付加型非イオン界面活性剤[高級アルコールのAO付加物、アルキルフェノールのAO付加物、ポリプロピレングリコールエチレンオキサイド付加物、ポリエチレングリコールプロピレンオキサイド付加物及び脂肪酸AO付加物]及び多価アルコール型非イオン界面活性剤等が挙げられる。非イオン界面活性剤におけるAOとしては、エチレンオキサイド以下、EOと略記、プロピレンオキサイド以下、POと略記及びブチレンオキサイド等が挙げられる。高級アルコールのAO付加物としては、炭素数8~24の高級アルコールデシルアルコール、ドデシルアルコール、ヤシ油アルキルアルコール、オクタデシルアルコール及びオレイルアルコール等のEO1~20モル付加物等及び炭素数8~24の高級アルコールのPO1~40モル付加物等が挙げられる。アルキルフェノールのAO付加物としては、炭素数7~36のアルキルフェノールノニルフェノール及びセチルフェノール等のEO1~40モル付加物等及び炭素数7~36のアルキルフェノールのPO1~40モル付加物等が挙げられる。ポリプロピレングリコールEO付加物としては、プルロニック型界面活性剤が挙げられ、プロピレンオキシドの繰り返し単位が10~100個のポリプロピレングリコールのEO2~40モル付加物等が挙げられる。ポリエチレングリコールPO付加物としては、エチレンオキシドの繰り返し単位が10~100個のポリエチレングリコールのPO2~20モル付加物等が挙げられる。脂肪酸AO付加物としては、炭素数8~24の高級脂肪酸ラウリル酸、ステアリン酸及びオレイン酸等のEO1~25モル付加物等が挙げられる。多価アルコール型非イオン界面活性剤としては、炭素数3~36の2~8価の多価アルコールグリセリン、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ソルビット及びソルビタン等の脂肪酸炭素数8~24エステル等、炭素数3~36の2~8価の多価アルコールの脂肪酸炭素数8~24エステルのEO及び/又はPO付加物等並びに脂肪酸炭素数10~18アルカノールアミドラウリン酸モノエタノールアミド及びラウリン酸ジエタノールアミド等等が挙げられる。これらの内、好ましいのはCA15-3とCA15-3を認識する配位子A1との反応性の観点から、高級アルコールのAO付加物及びアルキルフェノールのAO付加物であり、更に好ましいのは炭素数8~24の高級アルコールのEO1~20モル付加物であり、特に好ましいのはラウリルアルコールのEO1~10モル付加物である。ポリエチレングリコール及び非イオン界面活性剤はそれぞれ1種を単独で使用してもよく、2種以上を併用することも可能である。ポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤の含有量は、CA15-3を認識する配位子A1の種類等により種々の値を取り得るが、水溶液Wの重量を基準として、測定精度及び免疫反応性の観点から好ましくは1~7重量、更に好ましくは2~5重量、特に好ましくは3~5重量である。ポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液Wは、更に通常免疫反応に用いられる緩衝剤例えばリン酸及びグッド緩衝剤等、牛血清アルブミン等のタンパク質、食塩及び防腐剤等を含有することができる。CA15-3とCA15-3を認識する配位子A1との反応をポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液W中で行う工程を含む免疫測定法の内、最も好ましいのは、不溶性担体Bを用いたヘテロジニアスな免疫測定法であり、以下の工程1~4を含む免疫測定法である。工程1:不溶性担体Bに結合したCA15-3を認識する配位子A1とCA15-3の反応をポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液W中で行う工程。工程2:ポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤をB/F分離で除く工程。工程3:工程1で得られた反応物に標識体Cを反応させる工程。工程4:工程3で得られた反応物中の標識体Dの量を計測する工程。工程1における不溶性担体Bとしては、従来公知のもの等、例えば、ガラス又はポリスチレン等の高分子を素材とするビーズ、試験管又は微粒子等の形状のものが使用できる。また、配位子A1と不溶性担体Bの結合方法も従来公知の物理吸着法又は化学結合法等が使用でき、例えば、不溶性担体Bがポリスチレンの場合、物理吸着法が一般に用いられ、配位子A1を0.001~0.04W/V含有する炭酸緩衝液pH9.0に不溶性担体Bを適当時間浸漬することにより行われる。化学結合法としては、シランカップリング剤を用いて配位子をガラスに結合させる方法例えば、P.J.Robinsonら,Biochim.Biophys.Acta,242巻,1971年,p.659-661に記載の方法等がある。工程2は、通常B/F分離の操作で実施できる。例えば、液をアスピレーター等で除去し、脱イオン水、生理食塩水等を加えてCA15-3と反応した配位子A1を有する不溶性担体Bを洗浄し、再度液を除去することで、ポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を除くことができる。工程2は、工程1と工程3の間又は工程3と工程4の間に実施することが好ましく、両方で実施することが更に好ましい。工程3で使用される標識体Cは、標識物質と配位子A2の結合体である。標識物質は、従来公知のもの等、例えばラジオアイソトープ、蛍光物質、発光物質及び酵素等が使用でき、標識物質と配位子A2の結合は従来公知の方法等、例えば続生化学実験講座5免疫生化学実験法日本生化学会編、東京化学同人、1986年発行p102~112に記載の方法で実施することができる。標識物質がアイソトープの場合、例えばクロラミンTを酸化剤として用いて放射性ヨウ素を配位子A2のチロシン残基に導入できる。標識物質が蛍光物質の場合、例えばフルオレセインイソチオシアネートを緩衝液中で配位子A2に反応させると、配位子A2のリシン残基に結合する。標識物質が酵素の場合、例えば酵素の持つアミノ基と配位子A2の持つチオール基をN-スクシンイミジル6-マレイドヘキサノエート等のニ架橋性試薬で結合することができる。標識物質が発光物質の場合、例えばアクリジニウム誘導体-I同人化学研究所社製を緩衝液中で配位子A2に反応させると、配位子A2のアミノ基に発光化合物であるアクリジニウム誘導体を結合できる。標識体Cに用いられる配位子A2としては、前述のCA15-3を認識する配位子A1と同様のものが使用できる。この場合、工程1においてポリエチレングリコール及び/又はノニオン性界面活性剤を含有する水溶液W中でCA15-3との反応に用いられる配位子A1と同じものを配位子A2として使用可能であるが、CA15-3との認識部位結合部位が配位子A1と異なるもの、由来する動物が配位子A1と異なるもの等を使用する方が望ましい。工程3の反応は、通常の免疫反応に用いられる緩衝液例えば、緩衝剤と、タンパク質、食塩及び又は防腐剤等とを含む水溶液中で行われる。また、工程3の反応をポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤の存在下で行うことも可能である。工程4は、標識体Dに用いられる標識物質の種類に応じた従来公知の方法で実施できる。標識物質が酵素の場合を例示すると、酵素としてペルオキシダーゼを選択した場合、基質としてはABTS[2、2’-アジノ-ビス3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸ニアンモニウム]や、ルミノール類/過酸化物等が選択でき、それぞれ比色分光光度計を使用し波長は通常420nm、620~670nmで計測、発光検出光電子増倍管を用いたフォトンカウンティングで計測で計測できる。酵素としてアルカリフォスファターゼを選択すれば、基質はp-ニトロフェニルフォスフェート、4-MUP4-メチルウンベリフェリルリン酸又はAMPPD[3-2’-スピロアダマンタン-4-メトキシ-4-3’’-ホスホリルオキシフェニル-1,2-ジオキセタン]等が使用でき、それぞれ比色分光光度計を使用し波長は通常405nmで計測、蛍光蛍光測定機を使用し励起波長は通常365nm、測定波長は通常450nmで蛍光強度を計測、発光検出光電子増倍管を用いたフォトンカウンティングで計測で計測できる。本発明の方法に使用するポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する試薬を、標識体Cや不溶性担体B等と組み合わせて、測定試薬セットとして用意することが可能である。これにより、臨床診断に必要な検査を簡便に実施することが可能となる。以下、実施例により本発明を更に説明するが本発明はこれに限定されるものではない。[実施例1~7及び比較例1]<ポリエチレングリコール及び/又は非イオン界面活性剤を含有する水溶液Wの調製>脱イオン水10mLにリン酸二水素カリウム8mg、リン酸水素二ナトリウム50mg、塩化ナトリウム0.085g及び10重量のアジ化ナトリウム水溶液0.05gを加えて30分間撹拌を行った後、牛血清アルブミン0.02gを加えて完全に溶解するまで2時間撹拌した。更に表1に記載の量のポリエチレングリコール及び/又はラウリルアルコールEO9モル付加物を加えて1時間撹拌することにより実施例1~7で使用する水溶液W1~W7及び比較例1で使用する水溶液W’-1を調整した。<抗CA15-3モノクローナル抗体結合ビーズの調製>抗CA15-3モノクローナル抗体BIODESIGN社製をpH9の0.1M炭酸緩衝液に20μg/mlの濃度で溶解させた。直径3mmのガラスビーズ[株岡部製作所製ケイ酸塩ガラス]を加え、48時間反応させた後、0.1牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液でコーティングし乾燥させた。<ペルオキシダーゼ標識抗CA15-3モノクローナル抗体の調製>抗CA15-3モノクローナル抗体BIODESIGN社製及び西洋ワサビ由来ペルオキシダーゼ東洋紡社製を用い、文献[エスヨシタケ、エムイマガワ、イーイシカワ、エトール;ジェイ.バイオケム,Vol.9219821413-1424]に記載の方法でペルオキシダーゼ標識抗CA15-3モノクローナル抗体を調製した。<過酸化水素水の調製>200μlの35過酸化水素水を脱イオン水1リットルに溶解し、過酸化水素水とした。<基質液の調製>ルミノール[東京化成工業株社製]0.18g及び4-シアノメチルチオフェノール0.1gをpH8.5の0.1Mモル/Lトリス/塩酸緩衝液1リットルに溶解した。上記で調製した試薬を用いて、全自動酵素免疫測定装置[オリンパス株製スフィアライト180]により発光量の測定を行った。即ちまず、抗CA15-3モノクローナル抗体結合ビーズ1個が入った反応槽に検体10μL及びポリエチレングリコール及び/又はラウリルアルコールEO9モル付加物を含有する水溶液W130μLを加え、37°C、約7分間反応させた工程1。次いで、ポリエチレングリコール及び/又はラウリルアルコールEO9モル付加物をB/F分離で除いた工程2。次に工程1で得られた反応物に1牛血清アルブミン含有リン酸緩衝液で1000倍希釈したペルオキシダーゼ標識抗CA15-3モノクローナル抗体を140μL加えて反応させた工程3。最後に過酸化水素水70μL及び基質液70μLを更に加えて、工程3で得られた反応物中のペルオキシダーゼと反応させることにより、発光量を計測した工程4。上記検体として、0、0.5、300、400、1000U/mLの各濃度の標準CA15-3溶液を用い、上記水溶液Wとして上記水溶液W1~W7及びW’-1を用いて測定した発光量の値を表2及び図1に示す。図1から、本願発明の方法によればCA15-3の濃度が400U/mL以上の領域では傾きがやや小さくなるものの1000U/mLまでの領域で発光量からCA15-3の濃度を精度よく算出できるのに対し、比較例1の方法では300U/mL以上の領域では発光量が異常に低下し、1000U/mLでの発光量は400U/mLでの発光量より減少しているため発光量からCA15-3の濃度を算出できないことが分かる。"