"分子イメージング方法における使用のための二官能性化合物またはその塩であって、ここで、該二官能性化合物が以下の式:{式中、XおよびYのうちの1つはC=Oであり、かつ、他方はNRであり、各mおよびpは、独立して、0~6から選ばれ、R1は、放射性核種をキレートすることのできるキレーティング基であり、以下の:から選ばれ;R、R2、R3およびR4は、独立して、水素または場合により置換されたC17アルキル基であり;Bは、前記キレーティング基を反応性基に連結するためのリンカー基であり、以下の式:式中、各Qは、独立して、-NR5-、-CONR5-、-COO-、-NR5CONR5-、-NR5CSNR5-および-O-からなる群から選ばれ、各R5は、独立して、水素または場合により置換されたC17アルキル基であり、各qおよびsは、独立して、0~6から選ばれ、そして、各rは、独立して、1~6から選ばれる。により表され;Aは、Tに連結された反応した反応性基であり、Tは、対象中の着目の標的に結合可能なターゲティング基である。}により表され、さらにここで、前記方法が、以下のステップ:a前記二官能性化合物が前記着目の標的に結合するように、前記二官能性化合物を前記対象に投与するステップ;とb前記二官能性化合物の前記キレーティング基R1が前記着目の標的において放射性核種をキレートするように、放射性核種を含むイメージングプローブ組成物を前記対象に投与するステップ;とc前記放射性核種を検出して、生物系における前記着目の標的を画像化するステップ;とを含む、前記二官能性化合物またはその塩。前記式中、sが、独立して0~6から選ばれ、各rが、独立して1~6から選ばれ、かつ、qが、1~6から選ばれる、分子イメージング方法における使用のための請求項1に記載の二官能性化合物。前記分子イメージング方法が、PETまたはSPETである、分子イメージング方法における使用のための請求項1または2に記載の二官能性化合物。前記反応性基Aが、タンパク反応性の官能基である、分子イメージング方法における使用のための請求項1~3のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記タンパク反応性基が、マレイミド、アルデヒド、エステル、ヒドラジン、ヒドラジン誘導体、アルコキシアミン、アルコキシアミン誘導体、アルキン、アルケンまたはアジド基である、分子イメージング方法における使用のための請求項4に記載の二官能性化合物。R1が、以下の:である、分子イメージング方法における使用のための請求項1~5のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記式中、R2、R3およびR4がHである、分子イメージング方法における使用のための請求項1~6のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記式中、mが2または3である、分子イメージング方法における使用のための請求項1~7のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記式中、pが0または1である、分子イメージング方法における使用のための請求項1~8のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記式中、mが2であり、pが1であるか、または、mが3であり、pが0である、分子イメージング方法における使用のための請求項9に記載の二官能性化合物。前記化合物が、以下の式:により表される、分子イメージング方法における使用のための請求項1~10のいずれか1項に記載の二官能性化合物。Bが、以下の式:のいずれか1つにより表される、分子イメージング方法における使用のための請求項1~10のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記放射性核種が、スカンジウム、鉄、コバルト、銅、ガリウム、イットリウム、ジルコニウム、テクネチウム、インジウム、錫、レニウム、ガドリニウム、テルビウム、ホルミウムまたはルテチウムの同位体である、分子イメージング方法における使用のための請求項1~12のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記放射性核種が、Sc-44、Sc-47、Fe-52、Co-57、Cu-60、Cu-61、Cu-62、Cu-64、Cu-67、Ga-67、Ga-68、Y-86、Y-90、Zr-89、Tc-99m、Tc-94m、In-111、Sn-117m、Re-186、Re-188、Gd-153、Tb-149、Ho-166、またはLu-177である、分子イメージング方法における使用のための請求項13に記載の二官能性化合物。前記放射性核種が、ガリウムの同位体であるか、またはGa-68もしくはGa-67である、分子イメージング方法における使用のための請求項14に記載の二官能性化合物。前記ターゲティング基が、前記着目の標的における結合パートナーに結合することのできる特定の結合対のメンバーである、分子イメージング方法における使用のための請求項1~15のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記ターゲティング基および着目の標的が、受容体とリガンド、または抗体と抗原、またはグルコーストランスポーターなどの代謝プローブ/グルコース、低酸素状態/低酸素応答性部位、または骨塩/ビスホスホネート、またはアビジンもしくはストレプトアビジンもしくは関連タンパク質/ビオチンもしくはビオチン様誘導体、またはRNA/アンチセンスRNAである、分子イメージング方法における使用のための請求項1~16のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記ターゲティング基が、前記着目の標的における結合パートナーに結合することのできるペプチド、タンパク質、抗体、アプタマーまたは小分子リガンドである、分子イメージング方法における使用のための請求項1~17のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記ターゲティング基が、前記標識二官能性コンジュゲート組成物がアポトーシスまたは細胞死のイメージング研究において使用可能であるように、ホスファチジルセリンPSに結合可能なポリペプチドである、分子イメージング方法における使用のための請求項18に記載の二官能性化合物。前記ターゲティング基が、アネキシンVおよびシナプトタグミンのC2ドメイン、TIMP-2、CEA、RGDペプチド、ソマトスタチン受容体ターゲティングペプチド、ボンベシン、ガストリンまたはVCAMターゲティングペプチドを包含する、分子イメージング方法における使用のための請求項19に記載の二官能性化合物。前記着目の標的が、インビボの分子標的である、分子イメージング方法における使用のための請求項1~20のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記着目の標的が、病気の細胞または組織上で発現されるリガンドまたは受容体、病気の状態に関連する細胞表面抗原、癌特異的マーカーまたは組織特異的マーカーなどの腫瘍マーカーである、分子イメージング方法における使用のための請求項1~21のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記着目の標的が、分子イメージングを受けている対象における位置、器官、組織タイプまたは生理学的性質である、分子イメージング方法における使用のための請求項1~22のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記化合物が、二次イメージング標識をさらに含む、請求項1~23のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記二次イメージング標識が、蛍光またはルミネッセント特性を有する有機分子または金属錯体である光標識である、請求項24に記載の二官能性化合物。前記生物系が、分子イメージングもしくは治療を含む、病気もしくは状態の診断もしくは治療を受けている対象、または、その中でのターゲティング分子の生体内分布が評価される対象である、請求項1~25のいずれか1項に記載の二官能性化合物。前記治療が、放射性核種治療または前記二官能性分子と結合した放射性核種もしくは化学療法剤を用いる癌の治療である、請求項26に記載の二官能性化合物。前記二官能性化合物が、治療剤と会合しているかまたは結合している、請求項27に記載の二官能性化合物。分子イメージングまたは治療の方法における使用のためのキットであって、以下の:請求項1~28のいずれか1項に記載の二官能性化合物を有する二官能性分子組成物、ここで、前記化合物は、反応性基Aを介して生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルに連結されており;および放射性核種を含むイメージング組成物を含む、前記キット。生物系における着目の標的の分子イメージング方法であって、以下の:a請求項1~28のいずれか1項に記載の二官能性化合物を含む二官能性分子組成物を対象に投与するステップ;とb放射性核種を含むイメージングプローブ組成物を前記対象に投与するステップ、ここで、前記二官能性化合物のキレーティング基R1は、前記放射性核種をキレートすることができ;とc前記放射性核種を検出して、前記生物系における前記着目の標的を画像化するステップ;とを含む、前記方法。前記放射性核種が、前記着目の標的に放射線治療を送達することのできる放射性核種である、請求項30に記載の方法。前記放射性核種が、Sc-47、Cu-64、Cu-67、Ga-67、Zr-89、Y-90、In-111、Sn-117m、Tb-149、Gd-153、Ho-166、Lu-177、Re-186またはRe-188である、請求項31に記載の方法。感受性の官能部位を有する放射性トレーサーを調製することは難しいことがある。例えば、放射性トレーサーへの放射性同位体の組み込みは、タンパク構造を破壊しうる高温を伴いうる。感受性の官能部位を放射性トレーサー中に含ませることが望ましいことがあり、そのためには穏やかな条件を用いて調製しうる放射性トレーサーを提供する必要がある。その結果、改善された官能性と改善された分子イメージング特性を有するイメージングコンジュゲートが生成されうる。現在、1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-N,N’,N,N’-四酢酸DOTAは、分子イメージングおよび標的放射性核種治療において使用されるガリウム-68およびGa-67、In-111、Cu-64、Lu-177、Y-90などの他の金属放射性同位体のための一般的なキレーターである。しかしながら、約68分の68Gaの半減期に対してDOTAは約30分という長い放射性標識時間を有する。さらに、DOTA誘導体によるガリウムのキレーションは、しばしば約95°Cの高い標識温度を必要とする。本発明者らは、生物学的環境中で解離に対する適度なまたはもっと言えば亢進された安定性を保持しつつ、室温で迅速に放射性核種をキレートすることのできる二官能性分子を発見した。該二官能性分子は、金属キレーティング部分に加えて、体内の細胞、組織または生体分子などを標的とすることのできるターゲティング基などの機能的部位に該二官能性分子を結合させるための反応性部分を有する。もっとも一般的に、本発明は、標的群またはデリバリービヒクルのインビボでの分布および/または最終位置がモニターされうるように、放射性核種またはイメージング標識に連結するための三脚型六配座トリスヒドロキシピリジノンキレーティング部分と、対象中の特定の細胞もしくは組織を標的とするためのターゲティング基または薬剤、毒素もしくは他のそのような分子をデリバリーするためのデリバリービヒクルに連結するための反応性官能基を有する二官能性分子を提供する。したがって、第一の態様において、本発明は分子イメージング方法における使用のための二官能性化合物を提供し、ここで、該二官能性化合物は、以下の式:{式中、XおよびYのうちの1つはC=Oであり、かつ、他方はNRであり、各mおよびpは、独立して、0~6から選ばれ、R1は、放射性核種をキレートすることのできるキレーティング基であり、以下の:から選ばれ;R、R2、R3およびR4は、独立して、水素または場合により置換されたC17アルキル基であり;Bは、キレーティング基を反応性基に連結するためのリンカー基であり、以下の式:式中、各Qは、独立して、-NR5-、-CONR5-、-COO-、-NR5CONR5-、-NR5CSNR5-および-O-からなる群から選ばれ、各R5は、独立して、水素または場合により置換されたC17アルキル基であり、各qおよびsは、独立して、0~6から選ばれ、そして、各rは、独立して、1~6から選ばれる。により表され;Aは、Tに連結された反応した反応性基であり、Tは、対象中の着目の標的に結合可能なターゲティング基である。}により表される化合物またはその塩である。ここで、上記方法は、以下のステップ:a上記二官能性化合物が着目の標的に結合するように、該二官能性化合物を上記対象に投与するステップ;とb上記二官能性化合物のキレーティング基R1が着目の標的において放射性核種をキレートするように、放射性核種を含むイメージングプローブ組成物を上記対象に投与するステップ;とc上記放射性核種を検出して、生物系における上記着目の標的を画像化するステップ;とを含む。第一の態様の二官能性化合物は、標的位置まで生物系を循環することができる。そして、上記放射性核種が対象中に導入されたとき、該放射性核種は迅速に上記系を通過し、二官能性化合物とキレート結合する。このようにして、放射性核種の有効性を最大化するように、放射性核種は生物系に導入されてから短時間で着目の位置に固定されることができる。好ましくは、sは、独立して0~6から選ばれ、各rは、独立して1~6から選ばれ、qは、1~6から選ばれる。好ましくは、上記分子イメージングの方法は、PETまたはSPETである。他の側面において、本発明は、分子イメージングにおける使用のための放射性核種をキレーティングするための二官能性化合物を提供し、ここで、該化合物は、以下の式:{式中、XおよびYのうちの一つはC=Oであり、他方はNRであり;mおよびpはそれぞれ、独立して0~6から選ばれ;R1は、キレーティング基であり、以下の:から選ばれ;R、R2、R3およびR4は、独立して、水素または場合により置換されたC17アルキル基であり;Bは、キレーティング部分を反応性基に連結するためのリンカー基であり、以下の:式中、各Qは、独立して、-NR5-、-CONR5-、-COO-、-NR5CONR5-、-NR5CSNR5-および-O-からなる群から選ばれ、各R5は、独立して、水素または場合により置換されたC1―7アルキル基であり、各qおよびsは、独立して、0~6から選ばれ、そして、各rは、独立して、1~6から選ばれる。により表され;Aは、生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルに連結するための反応性基である。}により表される化合物またはその塩である。二官能性コンジュゲート化合物は、5分以下のオーダーの非常に短時間で金属放射性核種をキレートすることができ、かつ、それを室温においておよそ生理学的pHの水中で行うことができる三脚型六配座トリスヒドロキシピリジノンキレーティング部分を提供する。反応性部分は、キレーティング部分に連結されて、二官能性分子がターゲティング基またはポリペプチドもしくは他の生物分子、薬剤もしくはナノ粒子などの他のビヒクルとコンジュゲーションされることを可能とする。キレーティング基の迅速かつ低温での標識化は、二官能性分子が、キレーティング部分を介して68GaT1/268分などの半減期の短い放射性核種に、および、体温を超える放射性標識温度において変性しうるポリペプチドなどの温度感受性ターゲティング基に、の両方に連結されることを可能とする。キレーティング反応の効率は、非常に低いデリバリービヒクル濃度における標識化も可能とする。こうして、かなりの割合のデリバリービヒクルが放射性核種で放射性標識され、その結果として、非常に高い比放射能をもたらす。こうして、二官能性分子は、放射性標識コンジュゲートのための優れた前駆体を提供する。好ましくは、反応性基Aは、タンパク反応性の官能基である。タンパク反応性基は、タンパク質または修飾タンパク質またはペプチドまたは目的のために誘導体化された他のビヒクルと反応することができる。好ましくは、タンパク反応性基は、マレイミド基、アルデヒド、エステル、またはアルキン、アジド、アルケン、ヒドラジン、ヒドラジン誘導体、アルコキシアミン、アルコキシアミン誘導体、アミノキシもしくはチオール基などのクリック試薬である。マレイミド、アルデヒドおよびエステル基は、ペプチドチオール-またはアミン-含有残基システイン、リジンと効率的に反応し、それでコンジュゲートが容易に形成する。他の生体直交型官能基は、それらをアルキン、アジド、アルケン、ヒドラジン、アミノキシまたはチオール基とコンジュゲーションさせるために、ペプチドおよびタンパク質中へ工学処理されることができる。好ましくは、R1は、以下の式:により表される。好ましくは、R2、R3およびR4は、独立して、HまたはCH3である。キレーティング基のキレーション部位を置換基が立体的に障害しないよう、かつ、キレーターが脂溶性となりすぎないように、比較的小さな置換基を複素環上に有することが好ましい。したがって、好ましい実施態様において、R2、R3およびR4は、Hである。しかしながら、複素環基上の1つ以上のメチル置換基が、分子の溶解性および/または疎水性を調整するために使用されることができる。したがって、R2、R3およびR4のうちの1つ以上がCH3であることができる。好ましくは、mは、2または3である。好ましくは、pは、0または1である。より好ましくは、mが2であり、pが1であるか、または、mが3であり、pが0である。これはキレーティング基R1に5原子の三脚のアーム長さを与えるmp=3XおよびY。三脚のアーム長さが5原子である場合、三脚型基は、ガリウムなどの放射性核種をキレーティングするのに適している。リンカー基Bは、三脚型キレーティング部分と反応性官能基およびコンジュゲーションされた場合のターゲティング基またはキャリアービヒクルなどを接続する。リンキング基は、例えば、リンカーの長さを変えるために、基Q、q、rおよび/またはsを変えることによって調整されることができる。Aまたはキレーティング基を有する各アームに結合した四級炭素のいずれかまたはその両方がQに結合されうるように、リンカー基はいずれの方向に配置されてもよい。好ましい実施態様において、Bは、二官能性化合物が以下の式:により表されるように、配置される。Qにより表される官能基中の原子の順番は制限されない。言い換えれば、Qがアミド基である場合、キレーティング部分から反応性官能基に向かう基の順番は、-NR5-、ついで-CO-、またはその逆であってよい。好ましくは、少なくとも1つのQがアミド-CONR5-である。好ましくは、qが1、rが2および/またはsが1である。より好ましくは、qが1、rが2、およびsが1である。好ましくは、R5は水素である。好ましくは、Bは、以下の式:{式中、rは、1~6から選ばれ、かつsは、0~6から選ばれる。}のうちの1つにより表される。好ましくは、rが2であり、および/またはsが2である。好ましい実施態様において、二官能性化合物は、以下の式:{式中、A、s、m、X、Y、nおよびR1は本明細書において定義されたとおりである。}により表される。好ましい実施態様において、放射性核種は、テクネチウム、レニウム、銅、コバルト、ガリウム、イットリウム、ルテチウムまたは他のランタニド、インジウム、ジルコニウム、スカンジウムの同位体である。より好ましくは、放射性核種は、Tc-99m、Re-186、Re-188、Co-57、In-111、Cu-60、Cu-61、Cu-62、Cu-64、Cu-67、Tc-94m、Ga-68、Ga-67、Ga-66、Y-90、Y-86、Sc-44、Sc-47、Fe-52、Sn-117m、Tb-149、Gd-153、Ho-166、Lu-177、Zr-89、Bi-213またはCo-55であり、より好ましくは、放射性核種は、ガリウムであり、最も好ましくは、Ga-68またはGa-67である。好ましくは、ターゲティング基は、着目の標的における結合パートナーに結合することのできる特定の結合対のメンバーである。より好ましくは、ターゲティング基と着目の標的は、受容体とリガンド、または抗体と抗原、またはグルコーストランスポーター/グルコースなどの代謝プローブmetabolicprobe、低酸素状態/低酸素応答性部位、または骨塩/ビスホスホネート、またはアビジンもしくはストレプトアビジンもしくは関連タンパク質とビオチンもしくはビオチン様誘導体、またはRNAとアンチセンスRNAである。好ましくは、ターゲティング基は、着目の標的における結合パートナーに結合することのできるペプチド、タンパク質、抗体、アプタマーまたは小分子リガンドである。より好ましくは、ターゲティング基は、二官能性コンジュゲート組成物がアポトーシスまたは細胞死のイメージング研究において使用可能であるように、ホスファチジルセリンPSに結合可能なポリペプチドである。より好ましくは、ターゲティング基は、アネキシンVおよびシナプトタグミンのC2ドメイン、TIMP-2、CEA、RGDペプチド、ソマトスタチン受容体ターゲティングペプチド、ボンベシン、ガストリンまたはVCAMターゲティングペプチドを包含する。好ましくは、着目の標的は、インビボの分子標的である。より好ましくは、着目の標的は、その存在量またはリガンド占有率が決定される病気の細胞または組織上で発現されるリガンドまたは受容体、病気の状態に関連する細胞表面抗原、癌特異的マーカーまたは組織特異的マーカーまたは病気の状態において上方もしくは下方制御される正常過程のマーカーなどの腫瘍マーカーである。好ましくは、着目の標的は、分子イメージングを受けている対象における位置、器官、組織タイプまたは生理学的性質である。反応性基Aは、デリバリービヒクルに連結するためのものであることができる。本明細書に定義されたデリバリービヒクルは、小分子薬剤または毒素などの機能性分子を例えば生物系に送達する目的で該機能性分子を担持するための分子構造である。機能性分子は、デリバリービヒクル内に含まれるかまたはその表面に結合されることができる。機能性分子は、典型的に、機能性分子が生物系中の所与の位置で放出されうるように、デリバリービヒクルと可逆的に結合する。多くのかかるデリバリービヒクルが本分野で知られている。好ましくは、デリバリービヒクルは、ナノ粒子またはリポソームである。医薬品などの機能性分子は、ナノ粒子の表面に結合されるかまたはリポソーム内に含まれることができる。したがって、本発明の二官能性化合物がデリバリービヒクルに連結され、かつ放射性核種がキレーティング基R1によりキレートされる場合、対象の中を通るデリバリービヒクルにより運ばれる薬剤の移動は、放射性核種のイメージングによりモニターされることができる。反応性基は、生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルに加えて二次イメージング標識に連結されるためのものであることができる。好ましくは、二次イメージング標識は、光標識opticallabel、SPIOなどの常磁性標識、または量子ドットである。より好ましくは、該イメージング標識は、常磁性プローブを有するMRI造影剤である常磁性標識である。或いは、該イメージング標識は、蛍光またはルミネッセント特性を有する有機分子または金属錯体である光標識である。該標識は、例えば、光標識または常磁性標識の場合、二官能性化合物がマルチモーダルイメージングにおいて使用されることを可能とする。反応性基Aは、さらなる生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルと連結することができる。例えば、二官能性化合物は、対象中の特定の細胞を標的とするためのターゲティング基および医薬品を含むリポソームに放射性核種を連結することができる。こうして、標的薬物デリバリーが、生物系を通るその移動の間、モニターされることができる。分子イメージング方法は、放射性核種が生物系中に導入される前すなわち、プレ-ターゲティングpre-targetingまたは放射性核種が二官能性化合物のキレーティング部分にキレートされた後すなわち、プレ-アセンブルpre-assembledに、二官能性化合物またはそのコンジュゲートを生物系例えば、対象中に導入することを含んでよい。二官能性化合物またはコンジュゲートが、放射性核種より前に生物系中に導入された場合、二官能性化合物は、好ましいまたは標的の位置まで生物系内を循環することができる。そして、放射性核種が導入されたら、放射性核種は迅速に系の中を通過し、二官能性分子またはコンジュゲートとキレートする。こうして、放射性核種の有効性が最大化されるように、放射性核種は生物系への導入から短時間以内で着目の位置に固定されることができる。放射性核種が、生物系への導入前に二官能性化合物またはコンジュゲートにキレートされる場合、二官能性化合物は、該化合物に結合した生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチド、キャリアービヒクルまたは二次イメージング標識を有する二官能性化合物またはコンジュゲートの生物系内を通る移動をモニターするために使用されることができる。好ましくは、生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルが二官能性化合物に結合して、二官能性化合物組成物の生物系または対象への導入前に二官能性化合物コンジュゲートを形成する。好ましくは、生物系は、病気または状態の診断または治療を受けている対象である。治療は放射性核種治療であることができる。具体的には、治療は、例えばそれに結合したデリバリービヒクルを介して二官能性分子に結合した放射性核種または化学療法剤を用いる癌の治療であることができる。好ましくは、二官能性分子は、治療剤と会合しているassociatedwithかまたは結合boundtoしている。或いは、対象は、その中でのターゲティング分子またはデリバリービヒクルの生体内分布が評価される対象であることができる。第二の態様において、本発明は、分子イメージングにおける使用のための放射性核種をキレートするための二官能性化合物コンジュゲートを提供し、ここで、該コンジュゲートは、以下の式:{式中、XおよびYのうちの1つはC=Oであり、かつ、他方はNRであり、mおよびpは、独立して、0~6であり、R1は、キレーティング基であり、以下の:から選ばれ;R、R2、R3およびR4は、独立して、水素または場合により置換されたC17アルキル基であり;Bは、キレーティング部分を反応性基に連結するためのリンカー基であり、以下の式:式中、各Qは、独立して、-NR5-、-CONR5-、-COO-、-NR5CONR5-、-NR5CSNR5-、-O-からなる群から選ばれ、各R5は、独立して、水素または場合により置換されたC17アルキル基であり、各qおよびsは、独立して、0~6から選ばれ、そして、各rは、独立して、1~6から選ばれる。により表され;Aは、Tへの連結のための反応した反応性基であり、Tは、生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルである。}により表される化合物またはその塩である。さらなる態様において、本発明は、以下の:本明細書に記載の二官能性化合物を有する二官能性分子組成物であって、ここで、該化合物が反応性基Aを介して生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルに連結されている、上記二官能性分子組成物;および本明細書に記載の放射性核種を含むイメージング組成物を含む、分子イメージングまたは治療の方法における使用のためのキットを提供する。他の態様において、本発明は、以下の:本明細書に記載の二官能性化合物を有する二官能性分子組成物;および該二官能性分子に連結するための生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルを含む、分子イメージングまたは治療の方法における使用のためのキットを提供する。該キットは、本明細書に記載の放射性核種を含むイメージング組成物も含んでよい。他の態様において、本発明は、生物系における着目の標的の分子イメージングの方法を提供し、該方法は以下の:a本明細書に記載の二官能性化合物を含む組成物を対象に投与するステップ、ここで、該化合物は、反応性基Aを介して生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルに連結され;とb放射性核種を含むイメージング組成物を上記対象に投与するステップ、ここで、上記二官能性化合物のキレーティング基R1は、上記放射性核種をキレートすることができ;とc上記放射性核種を検出して、上記生物系における着目の標的を画像化するステップ;とを含む。他の態様において、本発明は、生物系における着目の標的または着目の移動の分子イメージングの方法を提供し、該方法は以下の:a本明細書に記載のキレーティング基を介して、二官能性分子に放射性核種をキレートするステップ、ここで、該化合物は、反応性基Aを介して生体部位、ターゲティング基、タンパク質、ポリペプチドまたはデリバリービヒクルに連結されて、放射性標識二官能性分子化合物を形成し;と、b上記放射性標識二官能性化合物を含む組成物を対象に投与するステップ;とc上記生物系における着目の標的または移動を画像化するステップ;とを含む。好ましくは、放射性核種は、着目の標的に放射線治療を送達することのできる放射性核種である。好ましくは、該放射性核種は、Cu-67、Re-186、Re-188、Y-90、Lu-177、Sc-47またはBi-213である。任意の態様の好ましいおよび随意的な特徴は、任意の他の態様に適用されてよい。具体的には、二官能性化合物の好ましい特徴が分子イメージングの方法に適用でき、その逆も同様である。ここに、本発明の実様態様が、付随する図面を参照して、例として非制限的に記載される。詳細な説明A:着目の部位のターゲティング二官能性化合物がターゲティング分子への連結のためのものである場合、さまざまな一次ターゲティング基が二官能性化合物に連結されて、キレーティング基を有する該二官能性化合物を問題の生物系における着目の異なるターゲットに導くことができる。一態様において、着目の標的は、それらがお互いに特別な特異性を有し、正常条件下で他の分子に優先してお互いに結合する分子対のメンバーとなるように、上記系において一次ターゲティング基に特異的に結合可能な特異的結合対のメンバーを含むだろう。特異的結合対の例は、本分野で周知であり、例えば、受容体とリガンド、酵素と基質、抗体と抗原が挙げられる。したがって、一次ターゲティング基は、特異的なインビボの分子ターゲットに結合するペプチド、タンパク質またはアプタマーなどの他の生体分子または小分子リガンドであることができる。着目の標的のクラスとして、病気の細胞または組織上に発現されるリガンドまたは受容体またはトランスポーター、病気の状態に関連した細胞表面抗原、或いは、腫瘍マーカー、例えば癌特異的マーカーまたは組織特異的マーカー、が挙げられる。一次ターゲティング基の一群は、本発明の二官能性分子コンジュゲートがアポトーシスまたは細胞死のイメージング研究に使用可能であるように、ホスファチジルセリンPSに結合可能なポリペプチドである。かかるポリペプチドの例として、アネキシンVおよびシナプトタグミンのC2ドメインが挙げられる。1つ以上のC2ドメインを含むポリペプチドは本分野で周知である。いくつかのポリペプチドがC2ドメインを1つしか有さない一方、他は2つ以上のC2ドメインを有し、該ドメインは一般に、名前の最後にアルファベット順に文字を付することによって記述される例えば、C2A、C2Bなど。C2ドメインを1つしか含まないタンパク質については、該ドメインは単純にC2ドメインと呼ばれる。以下の例はラットシナプトタグミンIのC2Aドメインを使用するが、他の種のシナプトタグミンのC2Aドメインなどの、PSに結合可能な他のC2ドメインが代わりに使用可能であった。C2ドメインを含むタンパク質のさらなる例として、シナプトタグミン1-13、セリン/スレオニンキナーゼ、ホスホリパーゼA2、ホスホリパーゼδ1、第V因子および第VIII因子を含む凝固カスケードにおけるコファクターならびにコピンファミリーのメンバーが挙げられるが、これらには限定されない。ヒトシナプトタグミンとして、シナプトタグミン1-7、12および13が挙げられる。本発明において使用されることのできる他のタンパク質として、癌細胞によって発現されるマーカーに特異的に結合可能であり、それによってバイオコンジュゲートを用いて癌細胞が画像化されることを可能とするポリペプチドが挙げられる。例として、本発明は、骨髄単球細胞系統の細胞および白血病細胞などのCD33を発現する癌細胞のイメージングのために、抗-CD33抗体またはその断片を使用することができる。Embersonetal.,J.Immunol.Methods.3052:135-51,2005を参照されたい。さらなる例は、メタロプロテイナーゼの発現が転移過程に関与するとされたため、マトリックスメタロプロテイナーゼ発現の画像化のためのTIMP-2などのメタロプロテイナーゼの組織インヒビターTIMPsの使用である。Giersingetal.,BioconjugChem.126:964-71,2001を参照されたい。本発明によるコンジュゲートの作製に使用可能なポリペプチドのさらなる例は、補体受容体2CR2である。糖タンパク質である癌胎児性抗原CEAに結合することのできる抗体も、糖タンパク質のこのファミリーのメンバーが結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、すい臓癌細胞、肺癌細胞、甲状腺髄様癌細胞および乳癌細胞において発現されるため、一次ターゲティング基として使用されることができる。さらなる例は、好適な反応性基Aを用いてRGDペプチド誘導体を二官能性化合物に連結することによって、腫瘍、動脈硬化性プラークおよび梗塞を起こした心筋層などの修復中の病気の組織において一般的にみられるような、血管新生中の組織の内皮において高度に発現されるαvβ3インテグリンへの、ペプチド配列アルギニン-グリシン-アスパラギン酸RGDの親和性を利用することができる。さらなる例は、好適な反応性基Aを用いてソマトスタチン類似体ペプチドを二官能性化合物に連結することによって、癌腫、甲状腺髄様癌種および他の神経内分泌腫瘍などの癌細胞の表面において高度に発現されるソマトスタチン受容体に結合しうるペプチド、オクトレオチド、またはソマトスタチンの他の関連類似体の親和性を利用することができる。他の例は、抗体の細胞接着分子への親和性を利用することができる。一例は、モノクローナル抗体、SER4のマクロファージ接着分子、シアロアドヘシンへの親和性である。シアロアドヘシンは、マクロファージ表面、そして、脾臓、肝臓、リンパ節、骨髄、結腸および肺のマクロファージ上などで多量に見出される。当業者は、ボンベシン、ガストリンまたはVCAMターゲティングペプチドなどの他のターゲティング基を使用することができるであろう。好ましくは、一次ターゲティング基は、二官能性化合物に結合するための官能基および一次ターゲティング基に連結するための反応性基を有するコンジュゲートとして、二官能性化合物に連結されることができる。これを達成するためのさまざまな可能性が当業者には明らかとなるであろう。例として、一実施態様において、一次ターゲティング基への部位特異的連結のための反応性基、例えば、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体などの生体分子中のチオール基への部位特異的連結のためのマレイミド基、が使用されてよい。その後、マレイミド基は、部位特異的にチオール基、例えば、目的のためにペプチドまたはタンパク質中に部位特異的に取り込まれたシステイン残基のチオール基、に連結されることができる。他の例において、二官能性キレーター中の反応性基は、ヒドラジンまたは類似の反応性の基が部位特異的に取り込まれて例えば、ヒドラジノニコチン酸誘導体、ヒドラゾンまたは類似の連結を形成しているタンパク質またはペプチドと部位特異的に反応することができるアルデヒドまたはケトン基であろう。いくつかの場合に、一次ターゲティング基は、好適なポリペプチドまたはタンパク質、或いはその断片またはドメインを含むことができる。したがって、都合上、本明細書中の方法が一般にポリペプチドを基準に記載されるが、これは、時には本分野ではペプチドと呼ばれる、アミノ酸のより短い配列も含むと理解されるべきである例えば、3から10アミノ酸までの長さから30、40または50アミノ酸までの長さ。この用語は、一般にタンパク質ならびにマルチドメインタンパク質と呼ばれる、二次、三次または四次構造を有するポリペプチドも含むと理解されるべきである。いくつかの実施態様および以下に示す例において、一次ターゲティング基として使用されるポリペプチドは、タンパク質ドメインである。タンパク質ドメインは、完全長タンパク質から独立して、構造を保持する能力を有する完全長タンパク質の断片であって、典型的に安定で折りたたまれた三次元構造を形成する。多くのタンパク質は、数個の構造上のタンパク質ドメインからなり、特別なドメインがさまざまな関連タンパク質で見出されるのは一般的である。タンパク質ドメインは、約25アミノ酸から500アミノ酸までの間の長さ、または50アミノ酸から250アミノ酸まで、または75アミノ酸から150アミノ酸まで、その長さが変化する。本発明において、ポリペプチドが抗体である場合、この用語は、天然または部分的もしくは全体として合成により作り出されたかにかかわらず、イムノグロブリンを表す。この用語は、抗体の抗原結合ドメイン;Fab、scFv、Fv、dAb、Fdなどの抗原結合ドメインを含む抗体断片;および二重特異性抗体を含む、任意のポリペプチドまたはタンパク質にも及ぶ。他の抗体または元の抗体の特異性を保持するキメラ分子を作り出すために、モノクローナル抗体および他の抗体を利用し、組換えDNAテクノロジーの技術を用いることは可能である。かかる技術は、抗体のイムノグロブリン可変領域または相補性決定領域CDRsをコードするDNAを、異なるイムノグロブリンの定常領域または定常領域フレームワーク領域に導入することを含むことができる。たとえば、欧州特許出願公開第EP0184187A号明細書、英国特許出願公開第GB2,188、638A号明細書または欧州特許出願公開第EP0239400A号明細書を参照されたい。抗体は、多数の方法により修飾可能であり、用語抗体分子は、必要とされる特異性を有する抗体の抗原結合ドメインを有する、任意の特異的な結合メンバーまたは物質に及ぶと理解されるべきである。したがって、この用語は、天然または完全もしくは部分的に合成である、イムノグロブリン結合ドメインを含む任意のポリペプチドを含む、抗体断片および誘導体に及ぶ。したがって、他のポリペプチドに融合されたイムノグロブリン結合ドメインまたは等価物を含むキメラ分子が含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現は、欧州特許出願公開第EP0120694A号明細書および欧州特許出願公開第EP0125023A号明細書に記載される。全抗体の断片が、抗原を結合する機能を発揮することが示された。結合断片の例は、iVL、VH、CLおよびCH1ドメインから成るFab断片;iiVHおよびCH1ドメインから成るFd断片;iii単一の抗体のVLおよびVHドメインから成るFv断片、ivVHドメインから成るdAb断片Ward,E.S.etal.,Nature341,544-5461989;v単離されたCDR領域;vi連結された2つのFab断片を含む二価断片である、Fab‘2断片;vii一本鎖Fv分子scFv、ここで、VHドメインとVLドメインが、2つのドメインが抗原結合部位を形成することを可能とするペプチドリンカーによって連結されているBirdetal,Science,242;423-426,1988;Hustonetal,PNASUSA,85:5879-5883,1988;viii二重特異性単鎖Fvダイマー国際特許出願第PCT/US92/09965号;およびix二重特異性抗体、遺伝子融合により構築された多価または多重特異性断片PCT国際特許出願公開第WO94/13804号パンフレット;Hlligeretal,P.N.A.S.USA,90:6444-6448,1993である。Fv、scFvまたは二重特異性抗体分子は、VHおよびVLドメインを連結するジスルフィド架橋の取り込みによって安定化されうるReiteretal,NatureBiotech,14:1239-1245,1996。CH3ドメインとつながったscFvを含むミニボディも、作製されることができるHuetal,CancerRes.,56:3055-3061,1996。アフィボディaffibodiesも一次ターゲティング基として使用されることができる。アフィボディは、多数の標的タンパク質またはペプチドに特異的に結合することのできる小さな高親和性タンパク質である。アフィボディは、多くの点でモノクローナル抗体を模倣し、抗体模倣剤antibodymimeticsに分類される。アフィボディの選定は限定的であってはならず、コンジュゲーションされていない抗TNF-αアフィボディなどの多くのアフィボディが本分野で知られている。抗TNF-αアフィボディは、E.コリ中で産生され、ヒトサイトカイン腫瘍壊死因子α、TNF-αを標的とする。TNF-αは、多面発現性炎症性サイトカインである。サイトカインは、数種の細胞によって産生されるが、特にマクロファージによって産生される。それは、局所的な炎症性免疫反応における主要な介在物として作用し、さらなる免疫調節機能を有する。TNF-αは、サイトカインのカスケードを開始し、血管透過性を増加させ、それによってマクロファージと好中球を感染部位に動員する、急性期タンパク質である。したがって、TNF-αは、アテローム性動脈硬化症病変における炎症および炎症に関する重要な標的である。二官能性化合物はそれぞれ、複数の一次ターゲティング基に連結されることができ、それによって、a着目の標的に対する各ターゲティング基の親和性の産物として全体的な親和性が増加するときの、上記標的に対する一次ターゲティング基の親和性、および/またはb標的に対する結合比率、すなわち、標的と一次ターゲティング基のインビボでの各遭遇の結果としての結合の可能性、を増加させる。B:イメージングプローブ二官能性化合物に結合することのできるイメージングプローブは、キレーティング基を介して結合される放射性核種を含む。本発明によって使用されるイメージングプローブ金属性放射性同位体は、インビトロまたはインビボのいずれかにおいて、プレ-ターゲティングまたはプレ-アセンブルアプローチのいずれかで二官能性化合物のキレーティング部分に結合する性質を有する。これを達成するための1つの可能性は、二官能性化合物のキレーティング部分に対する固有の結合親和性を有する放射性核種を使用することである。例として、68Ga3は、キレーティング部分のヒドロキシピリジノン基に結合することができ、PETイメージング技術において使用可能である。本発明によって使用される放射性核種プローブは、プローブが目的とする用途に応じてさまざまな異なる放射性核種を使用することができる。本発明のプローブの一部をなしうる放射性核種の例としては、テクネチウム、レニウム、銅、コバルト、ガリウム、イットリウム、ルテチウム、インジウム、ジルコニウム、スカンジウムの放射性同位体、すなわち、Tc-99m、Ga-67、In-111SPET、Cu-64、Cu-60、Cu-61、Cu-62、Tc-94m、Ga-68、Co-55、Zr-89、Sc-44PET、Cu-67、Re-186、Re-188、Y-90、Lu-177、Sc-47またはBi-213放射性核種治療が挙げられる。本発明は、放射性核種を単独で、または組み合わせて使用することができる。放射性核種は、溶媒和物、水和物、塩または弱いキレートなどの任意の形態であってよい。放射性核種の溶媒和物、水和物および弱いキレートは、本分野で知られている。放射性核種が放射性核種組成物中で対象に投与される場合例えば、二官能性化合物が対象中の放射性核種を投与後にキレートする場合、放射性核種は、医薬として許容可能な形態になければならない。例えば、放射性核種は金属イオンのクエン酸塩または酢酸塩であってよい。本発明は、例えば、マルチモーダルイメージングの実施を可能にするための、反応性基Aを介して二官能性化合物に連結されるかまたは会合することのできる光学標識または常磁性標識などの二次イメージング標識の使用も含みうる。光学プローブの例として、フルオレッセインなどのフルオロフォアおよびルミネッセント分子およびランタニド錯体などの錯体およびトリカルボニルレニウム-キノリネートコンジュゲートが挙げられる。光学プローブ並びに放射性核種およびMR造影剤を組み込む可能性は、モダリティーを組み合わせて診断および検出を促進する機会を提供し、例えば、PETまたはSPETによる全身のスキャニングによって全身レベルで病気の位置が同定できる一方、同じトレーサーが手術中に可視的に検出されて、病気の組織の同定を支援しうる。同様に、PETおよびMRイメージングの組み合わせは、高い感度PET、SPET、シグナルの定量PETおよび解剖学的解像度MRおよび微小環境の測定MRコントラスト増強法という利益を提供することができる。C:コンジュゲーション化学本発明の二官能性化合物は、生体部位、ターゲティング基、標識、タンパク質またはポリペプチドを二官能性化合物に連結するため、および/または、さらなる基および特性を本発明の二官能性化合物に導入するために、さまざまな化学および技術を使用しうる。したがって、本発明においては、例えば、タンパク質/ペプチド配列中のシステインのチオール側鎖に結合するための反応性基がマレイミド基である場合、反応性基は二官能性化合物にターゲティング基を連結する手段を提供する。本発明の用途本発明の二官能性化合物は、癌、循環器疾患、免疫疾患などの病気、ならびに、移植、炎症、白血球トラッキング、幹細胞トラッキング、アレルギーおよび感染などの関連する状態の分子イメージングのために使用されることができる。二官能性化合物は、癌および関節炎を治療するための放射性核種治療のためにも使用されることができる。本発明の二官能性化合物および放射性核種の適用として、放射性核種および/またはさらなる標識を使用することのできる、マルチモーダルイメージング研究などの広い範囲のイメージングおよび分光学的適用が挙げられる。本明細書に記載のとおり、二官能性化合物は、例えば、アポトーシスの検出のために二官能性化合物を使用する細胞死イメージングなどのインビボのイメージング適用のために特に有用である。これは、例えば化学療法への反応をモニターすることなどの腫瘍学、心筋梗塞後の損傷された心筋のイメージングなどの循環器の医薬品または心臓同種移植片の拒絶のイメージングなどの移植片拒絶の分野での多くの異なる医学的または研究的適用において有用でありうる。本発明は特に、放射性核種から放射されたガンマ線を検出して、サンプルまたは対象中の放射性核種の分布の三次元画像を提供するイメージング技術である、単一光子放射断層撮影法SPET、および、サンプルまたは対象中に導入されたポジトロン放射性核種によって間接的に放射されたガンマ線対を検出することによって三次元画像を提供する、ポジトロン放射断層撮影法PETなどの核医学イメージング技術に関する。例として、SPET研究はIn-111を用いて、PET研究はGa-68を用いて実施されることができる。しかしながら、当業者は、本発明において使用可能な他の好適なSPETおよびPET放射性核種を知っているであろう。一般に、本発明は、適切なイメージングプローブの選択により、ポジトロン放射断層撮影法PET、単一光子放射断層撮影法SPET、光画像法OIおよび核磁気共鳴画像法MRIのために、または適切な放射性核種の選択により例えば、Y-90、Lu-177、放射性核種治療のために使用されることができる。本発明の二官能性化合物は、2つの異なる技術を用いて検出可能なイメージングプローブの検出によるか、または二官能性化合物が限局されるようになる生物系中の部位において第二の標識を提供することによるか、最も好都合には、第二の標識を上記で詳細に説明した二官能性化合物と連結するかまたは会合させることによって、2つの異なる技術から情報またはイメージが引き出されるマルチモーダルイメージングの方法において使用されることができる。マルチモーダル研究は、共記録され、2つのモダリティーによる同時イメージングを必要とするか、または2つのステップにおいて行われるかも知れないが、一般的に、2つの技術を用いて得られた空間情報が比較可能であるように、同じサンプルを使用する。マルチモーダルイメージングの例としては、PET/CT、SPET/CT、PET/MRおよびSPET/MRが挙げられる。実施例1-キレーターCP256化合物52の合成トリスtert-ブチルエステル61および62を、以下の確立された文献の方法によって合成したG.R.Newkome,R.K.Behera,C.N.MoorefieldandG.R.Baker,JOrgChem,1991,56,7162-7167。ベンジルトリメチルアンモニウムハイドロオキサイドの存在下でのニトロメタンとアクリル酸tert-ブチルの反応により、ニトロトライポッドnitrotripod61を生成し、57の収率でエタノールから再結晶化した。次いで、61のニトロ基をアミンに還元して、ニッケル/アルミニウム合金から特別に調製したT-1ラネーニッケル触媒による水素化によって62を形成した。塩化アセチルによる62のアセチル化およびカラムクロマトグラフィーによる精製により、72の収率で63が得られた。次いで、tert-ブチル基をギ酸により除去して、生成物である化合物64を、エタノール/石油精から93の収率で再結晶化した。52を生成するための、三脚型骨格への二配座部分bidentatemoietiesのコンジュゲーションおよびその後の脱保護を、上に模式的に示す。DMF中のDCCIおよびHOBtによるカップリング反応において、1当量の三酸64を3.6当量の二配座化合物bidentatecompound60と反応させた。溶媒の除去後、保護された六配座リガンド65をカラムクロマトグラフィーによって50の収率で精製した。メタノールの酸性溶液HCl中での接触水素化Pd/Cによってベンジル保護基を除去した。触媒の除去後、52のトリスHCl塩をメタノール/ジエチルエーテルから沈殿させ、真空下で乾燥すると、白色固体として、0.4g74の52が得られた。実験の詳細すべての化学物質を、SigmaAldrichおよびAcrosOrganicsから購入し、それらは試薬グレード以上だった。溶媒は、FisherScientific、SigmaAldrichおよびVMRから購入した。NMR溶媒はGOSSScientificから購入し、NMR管はWilmadが製造した。TLCプレートアルミニウムで裏打ちしたシリカゲル60UV254およびカラムクロマトグラフィーのためのシリカゲルは、Merckから購入した。真空ポンプBOC-Edwardsにつないだ真空オーブンGallenkamp、250°C以下とみなされる中でサンプルを乾燥させた。40psiで自動撹拌しながらParr水素化装置室温においてサンプルを水素化した。KBrディスクを用いてPerkinElmerSpectrumoneFTIRにおいて赤外スペクトルを取得した。使用したソフトウエアは、Spectrumと呼ばれた。400MHzのUltra-shieldmagnetBrukerにおいて、XWin-NMRソフトウエアを用いて1H-NMRスペクトルを取得した。MestReNovaソフトウエアバージョン5.3MestrelabResearchによりスペクトルを分析した。質量分析サンプルをEPSRCMassSpectrometryCentre,SwanseaまたはtheMassSpectrometryfacility,King’sCollege,Londonに提出した。EPSRCにおけるサンプルは、WatersZQ4000四極子質量分析計ESI、FinniganMAT95XP高分解能ダブルフォーカシング質量分析計EI、CIまたはMicromassQuattroII四極子質量分析計EIで処理した。King‘sCollegeにおけるサンプルは、ThermofisherLCQDECAXPイオントラップ質量分析計で処理した。MolecularWerightCalculatorバージョン6.46を用いて同位体分布を計算した。得られたグラフデータを抽出し、MicrosoftExcel2003で処理した。2-クロロメチル-5-ヒドロキシピラン-41H-オンクロロコウジ酸5450gのコウジ酸350ミリモル、1当量を220mlの塩化チオニルに撹拌しながら添加した。反応容器を氷で冷却し、明るい黄色の懸濁液が形成されるまで、混合物を1時間撹拌した。混合物を真空濾過して、石油精で洗浄後、粗製の白色固体が得られた。この固体を温水から再結晶化すると、40gのオフホワイト結晶が71の収率で得られた。2―メチル-5-ヒドロキシピラン-41H-オンアロマルトールAllomaltol20gのクロロコウジ酸54125ミリモル、1当量を、100mlの蒸留水に添加し、50°Cで撹拌した。亜鉛末17gをゆっくりと溶液に加え、温度を70°Cに上昇させた。混合物を撹拌しながら、40mlの濃HClをゆっくりと90分間にわたって滴下して加えた。この時間の間にクロロコウジ酸が溶解した。70~80°Cでさらに3時間撹拌後、濃い茶色となった溶液を保温濾過して任意の固体を除去した。冷却後、1回あたり70mlのCH2Cl2で生成物を5回抽出した。溶液を脱水しNa2SO4、溶媒を真空中で除去した。粗製固体を温イソプロパノールから再結晶化すると、8.63gのベージュ色の結晶が55の収率で得られた。2-ヒドロキシメチル-3-ヒドロキシ-6-メチル-ピラン-41H-オン563gのアロマルトール5523.8ミリモル、1当量を、25mlの蒸留水中1.05gのNaOHの撹拌した溶液に添加した。2.2mlの37ホルムアルデヒド溶液を10分間にわたって、滴下して加えた。溶液を、室温でさらに18時間撹拌した。濃HClでpHを1に調整し、ここで白色沈殿が形成した。沈殿を完了させるために、溶液を4°Cで24時間冷却した。固体を濾過し、冷ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させると、2.92gの白色固体が78の収率で得られた。2-ヒドロキシメチル-3-ベンジルオキシ-6-メチル-ピラン-41H-オン5760mlのCH3OHに10gの5664ミリモル、1当量を添加し、溶液を還流温度まで加熱した。6mlのH2O中、2.82gのNaOH70ミリモル、1.1当量をゆっくりと還流中の溶液に添加した。12.05gの臭化ベンジル70ミリモル、1.1当量を還流中の溶液に対してゆっくりと30分間にわたって滴下して加えた。溶液をさらに16時間還流した。真空中で溶媒を除去し、残渣を180mlのCH2Cl2に溶解した。不溶性のNaBrを濾過して除去した。1回あたり100mlの5NaOH水溶液で有機層を2回洗浄し、その後、1回あたり100mlの水で2回洗浄し、脱水しNa2SO4、そして蒸発させると、透明な黄色の油が残った。該油をCH2Cl2および石油精から再結晶化させると、9.8gの白色固体が62の収率で得られた。1,6-ジメチル-2-ヒドロキシメチル-3-ベンジルオキシピリジン-41H-オン584.92gの5720ミリモル、1当量を、60mlのCH2Cl2に撹拌しながら添加した。3.4gの3,4-ジヒドロ-2-H-ピラン42.5ミリモル、2.2当量を添加し、続いて、触媒として60mgのp-トルエンスルホン酸を添加した。3時間撹拌後、混合物を分液漏斗に加え、40mlのNa2CO35で2回、続いて、40mlの蒸留水で2回洗浄した。有機層を脱水しNa2SO4、蒸発させると、黄色の油が得られ、これを20mlのEtOHに再溶解した。200mlのNH2CH340、水溶液を添加し、混合物を70°Cで18時間撹拌した。真空中で溶媒を除去し、得られた油を40mlのEtOHに再溶解した。2mlの濃HCl37を添加し、溶液を4時間還流した。真空中で溶媒を除去し、100mlの蒸留水を残渣に添加した。50mlのジエチルエーテルで2回溶液を洗浄した。次いで、10NのNaOH水溶液で水性相のpHを9に調整した。溶液を分液漏斗に加え、100mlのCH2Cl2で4回抽出した。有機層を無水Na2SO4で脱水し、溶媒を除去すると粗製の茶色固体が得られ、これを、CH3OHおよびジエチルエーテルから再結晶化すると、2.8gの白色結晶が54の収率で得られた。1,6-ジメチル-2-フタルイミドメチル-3-ベンジルオキシピリジン-41H-オン598.6gのトリフェニルホスフィン32ミリモル、1.2当量および4.8gのフタルイミド32ミリモル、1.2当量を、0°Cの150mlのTHF中、587g、27ミリモル、1当量の撹拌した懸濁液に添加した。6.47gのジイソプロピルアゾジカルボキシレート[DIAD]32ミリモル、1.2当量を、30分間にわたって滴下して加えた。溶液を放置して室温まで温め、さらに17時間撹拌し、その後、該溶液を濾過した。固体を冷THFで洗浄すると、9.92gの白色無定形固体が95の収率で得られた。1,6-ジメチル-2-アミノメチル-3-ベンジルオキシピリジン-41H-オン6010gの5926ミリモル、1当量を100mlのEtOHに溶解した。17mlのN2H45.5水溶液を添加し、溶液を3時間還流した。59は、還流が始まるまで完全には溶解しなかった。溶液を放置して冷却すると、その時点で凝固した。水を添加し、濃HClでpHを1に調整した。4°Cで一夜冷却後、溶液を濾過した。10NのNaOHで濾液のpHを14に調整し、100mlのCH2Cl2で5回抽出した。抽出液を併合し、Na2SO4で脱水した。真空中で溶媒を除去すると、6.2gの白色固体が92の収率で得られた。ジ-tert-ブチル4-ニトロ-4-[2-tert-ブトキシカルボニルエチル]-ヘプタンジオエート611.53gのニトロメタン25ミリモル、1当量を、10mlの1,2-ジメトキシエタンDMEに添加した。0.25mlのベンジルトリメチルアンモニウムハイドロオキサイドTritonBを添加し、溶液を70°Cに加熱した。9.93gのアクリル酸tert-ブチル77.5ミリモル、3.1当量を1回あたり1mlずつ、別に1回あたり0.25mlで2回のTritonBとともに添加して、温度を70~80°Cに維持した。試薬の添加を完了後、溶液を70°Cでさらに1時間加熱した。真空中で溶媒を除去し、残渣を60mlのCHCl3に再溶解し、分液漏斗に入れた。20mlのHCl10水溶液、続いて20mlの濃NaCl溶液で3回、有機層を洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、濾過し、真空中で溶媒を除去した。粗生成物を温EtOHから再結晶化し、濾過し、氷冷のEtOHで洗浄すると、6.4gの白色結晶が57の収率で得られた。T-1ラネーニッケル触媒1Lの3つ首丸底フラスコに、600mlの10NaOH溶液、続いて、40gのニッケル-アルミニウム合金を加えた。溶液を磁性スターラーバーで撹拌し、90~95°Cの温度で加熱した。40分間の加熱後、ニッケルが磁性スターラーに付着し始め、撹拌プロセスを妨げた。ここで撹拌をガラス棒により手動で継続した。1時間後、加熱を中止し、放置してニッケルを沈殿させた。ニッケル触媒が沈殿し、溶液が冷却したら、上清をデカントして廃棄した。200mlの蒸留水で3回、50mlのエタノールで5回、触媒を洗浄した。洗浄ステップの間、確実に触媒が液体で覆われて空気に露出しないように注意した。その後、4°Cの冷蔵庫中、50mlのエタノールのもとで触媒を貯蔵した。ジ-tert-ブチル4-アミノ-4-[2-tert-ブトキシカルボニルエチル]-ヘプタンジオエート62100mlのEtOHに5gの6111.24ミリモル、1当量を溶解した。4gのT-1ラネーニッケル触媒を添加した。40psi室温で7日間、溶液を水素化した。この期間中、H2圧を40psiに維持し、圧力がさらに減少しなくなったら反応を停止した。最初、61は完全には溶解しなかったが、水素化の間に完全に溶解した。セライトを通して溶液を濾過し、真空中で溶媒を除去すると、定量的収率で4.5gの油が得られ、これは数日そのまま置くと凝固した。4-アセチルアミノ-4-2-tert-ブトキシカルボニル-エチル-ヘプタンジオイックアシッドジ-tert-ブチルエステル635mlのCH2Cl2に、1gのトリエステル622.4ミリモル、1当量および0.3gのトリエチルアミン2.9ミリモル、1.2当量を添加した。氷浴で溶液を0°Cまで冷却し、0.23gの塩化アセチル2.9ミリモル、1.2当量を滴下して加えた。溶液をさらに4時間撹拌し、放置して室温までゆっくりと温めた。溶液を分液漏斗に注ぎ、15mlのHCl5水溶液で2回、15mlの濃NaClで1回、洗浄した。Na2SO4で溶液を脱水し、真空中で溶媒を除去した。最小量のEtOAcに残渣を溶解し、シリカカラムに負荷し、ここで、EtOAcおよびヘキサン1:1によるカラムクロマトグラフィーで精製して、0.79gの白色固体が72の収率で得られた。4-アセチルアミノ-4-2-カルボキシ-エチル-ヘプタンジオイックアシッド641.5gのトリエステル633.28ミリモルを20mlのギ酸96に添加し、4時間撹拌した。この後、1回あたり20mlのトルエンによる5回の共沸蒸留によってギ酸を除去した。EtOHおよび石油精から粗残渣を再結晶化すると、0.9gのオフホワイトの結晶が93の収率で得られた。4-アセチルアミノ-4-{2-[3-ベンジルオキシ-1,6-ジメチル-4-オキソ-1,4-ジヒドロ-ピリジン-2-イルメチル-カルバモイル]-エチル}-ヘプタンジオイックアシッドビス-[3-ベンジルオキシ-1,6-ジメチル-4-オキソ-1,4-ジヒドロ-ピリジン-2-イルメチル-アミド]65100mlの丸底フラスコ中の10mlの無水DMFに、0.4gの641.38ミリモル、1当量、1.29gの604.98ミリモル、3.6当量、0.67gのHOBt4.98ミリモル、3.6当量および1.03gのDCCI4.98ミリモル、3.6当量を添加した。N2雰囲気下、室温で48時間、混合物を撹拌した。溶液を濾過して、沈殿したDCUを除去した。真空中でDMFを除去した。残渣をメタノールに溶解し、4:1のCHCl3/CH3OHの移動相を用いるカラムクロマトグラフィーシリカゲルによって精製した。分画を併合し、脱水しNa2SO4、真空中で溶媒を除去すると、0.7gの白色固体が50の収率で得られた。4-アセチルアミノ-4-{2-[3-ヒドロキシ-1,6-ジメチル-4-オキソ-1,4-ジヒドロ-ピリジン-2-イルメチル-カルバモイル]-エチル}-ヘプタンジオイックアシッドビス-[3-ヒドロキシ-1,6-ジメチル-4-オキソ-1,4-ジヒドロ-ピリジン-2-イルメチル-アミド]トリス塩酸塩52CP2560.64gの650.63ミリモル、1当量を、肉厚の水素化用フラスコ中の40mlのCH3OHに溶解した。2.3mlのHClCH3OH中、1.25Mを溶液に添加した。0.2gのPd/C触媒を添加し、溶液を18時間水素化した室温、40psi。注意してフラスコを取り除き、溶液を濾過してPd/Cを除去した。真空中で溶媒を除去した。残渣を最小量のメタノールに再溶解した。生成物52をジエチルエーテルで沈殿させた。沈殿が沈んだら、上清を取り除き、冷ジエチルエーテルで沈殿を洗浄した。このプロセスを3回繰り返し、真空中で溶媒を除去すると、52のトリス塩酸塩が0.4g、白色固体として74の収率で得られた。実施例2-CP256のガリウムおよび鉄錯体の特徴づけならびにGa-67標識手順Ga-CP256およびFe-CP256錯体の形成は、表1および表2に示す質量分析データから明らかである。各錯体のプロトン化形態を検出し、マススペクトルからの同位体分布は表1に記録した計算値に一致する。Ga-CP256錯体は、ガリウムが原子量69および71の安定な同位体を有するため、MHに関して、m/z806およびm/z808において2つの分子種を有する。1:1以外のGa:リガンド比を有するGa-CP256の証拠はなかった。Fe-CP256錯体についての質量分析データは、予測した同位体分布に一致した。Ga-67によるCP256の放射性標識により、そのHPLCが非放射性Ga-CP256錯体のものと同一の溶出時間を有する単一の放射能ピークを示す生成物が得られた。実験の詳細錯体の調製Ga-CP-2561mgのCP256を1mlのメタノールに溶解して、RMMが848のCP256のトリスHCl付加物に基づき1.18mMのリガンド濃度とした。この溶液を0.3mgの無水GaNO33RMM255に添加して、1.18mMの濃度における1:1の金属対リガンドの化学量論比が得られた。Fe-CP256FeNO339H2ORMM=386を金属源とするが、Ga3錯体と類似する手順でFe3錯体を作製した。サンプルの分析サンプルをLC-MSにより分析した。HPLCシステムは、脱ガス装置、クオータナリーポンプquaternarypump、紫外可視光可変波長検出器およびオートサンプラーを備えた、Agilent1200システムであった。質量分析計は、Agilent6520Accurate-MassQ-TOFLC/MSであった。AgilentMasshunterワークステーション収集ソフトウエアを用いてサンプルを取得し、AgilentMasshunterQualitative分析ソフトウエアを用いてデータを分析した。使用したHPLCカラムは、AgilentZorbaxSBC18カートリッジカラム2.1mm×30mm、3.5μmであった。溶出液の流速は、0.5ml/分であり、移動相は、質量分析グレードの試薬を用いるグラジエント:A=H2O0.1ギ酸Fluka、34673およびB=メタノール0.1ギ酸Fulka、34671であった。グラジエントを表3に示す。スペクトルは、ヘキサキス1H,1H,3H-テトラフルオロプロポキシホスファジンC18H18N3O6P3F24、m/z=922.0098MHによるリファレンスマス補正referencemasscorrectionを用いるポジティブモードのエレクトロスプレーイオン化を用いて取得した。放射性標識サンプルのHPLCHPLC分析直列につながれたFC3600検出器とγ検出器プローブによりHPLC分析を実施した。HPLCシステムは、四重ポンプquadruplepump、脱ガス装置、UV検出器および手動のシリンジインジェクターを備えたAgilent1200シリーズであった。すべての分析に使用したHPLCカラムは、ガードカラムを備えたAgilentEclipseXDB-C185μm、4.6mm×150mmであった。ラジオTLCおよびラジオHPLCに使用した分析ソフトウエアは、LauraLablogicであった。すべての一般的試薬および消耗品は、Sigma-AldrichまたはFisherScientificから購入した。注入のための67Ga-クエン酸塩溶液は、MallinkrodtMedicalから入手し、74MBq/ml参照日において;6.5mMのクエン酸ナトリウム、135mMのNaCl、0.9のベンジルアルコールを含むであった。HPLC分析のための放射性標識手順CP256の1mg/ml原液を、1mlのプラスチック製の微量遠心管中のPBSバッファー中で調製した。放射性標識化溶液は、10μlのアリコートの原液をプラスチック製の微量遠心管中の90μlの標識化バッファーに添加して、100μl中、0.1mg/ml総リガンド濃度とした。10μlの67Ga-クエン酸塩を添加することによって、この溶液を放射性標識した。放射性標識条件を表4に示す。HPLC移動相0分における10Bから15分における90Bまでの直線勾配A=H2O中、0.1TFA、B=メタノール中、0.1TFA。流速は、1ml/分であった。HPLCサンプルの注入20μlのサンプルを、25μlのHPLCシリンジを用いて手動でHPLCに注入した。実施例3-Ga-67データによるCP256標識効率薄層クロマトグラフィーTLCにより測定した、表5中の放射性標識結果は、CP256は、DOTAがより高温で標識されたよりも低濃度の67Gaで、室温で放射性標識し、100の放射性標識化は10μMという低濃度においてであるが、DOTAについての放射性標識収率は10μMでわずか35であった。これらの結果を、図1にグラフで示す。実験の詳細すべての一般的な試薬および消耗品は、Sigma-AldrichまたはFisherScientificから購入した。専門的な化学物質および消耗品は、以下のとおりに購入した:pH4.6の酢酸塩バッファー溶液SigmaAldrich31048-1L;注入用の67Ga-クエン酸塩溶液MallinkrodtMedical74MBq/ml参照日において;6.5mMのクエン酸ナトリウム、135mMのNaCl、0.9のベンジルアルコールを含む;ガラスTLCプレートシリカゲル60、F254、250mm×750mmMerck;ITLC-SGストリップPallSciences。TLCプレートのスポッティングと実施手順シリカTLCプレートおよびITLC-SGストリップに、1μlの放射性標識錯体を、5mmのところに鉛筆でマークした起点にスポットした。シリカゲルTLCプレート上ではスポットを乾燥させたが、ITLC-SGストリップでは乾燥させなかった。深さ3mmの移動相を満たした展開槽100mlの広口サンプル瓶中にプレートを置いた。固定相および移動相を表8に列挙する。溶媒の先端が65mmの距離に到達するまで、TLCプレートを展開した。プレートを、展開槽から取り外し、80°Cに設定したオーブン中で乾燥させた。放射性化学物質の収率を、Lauraソフトウエアまたはインスタントイメージャーソフトウエアのいずれかを用いて決定した。TLCおよびITLC分析を、FC3600検出器およびγ検出器プローブを備えたMini-scanTLCスキャナーにおいて実施した。使用した分析用ソフトウエアは、LauraLablogicであった。Ultrotermソフトウエアを使用して、1282CompugammaGammaCounterLKBWallacにおいて、放射性サンプルを10秒間ウインドウ101-110カウントした。サンプル中の放射能の測定のために使用したキュリーメータは、CRC-25RCapintecであった。Imagerバージョン2.05ソフトウエアを備えたPackardInstantImagerにおいてエレクトロニックオートラジオグラフィーを実施した。ガス混合物は、1イソブタン、2.5二酸化炭素および96.5アルゴンであったAirproducts。TLC分析による放射性化学物質収率の決定のための放射性標識手順各リガンドの1.25mM原液を、表6に列挙した適切な標識化バッファー中で調製した。放射性標識化バッファーの連続添加によって原液を10倍に希釈して、125μM、12.5μM、1.25μM、125nMおよび12.5nMのリガンド濃度を有する追加の溶液を作製した。80μlの各溶液をプラスチック製の微量遠心管に添加し、20μlの67Ga-クエン酸塩1.5MBqで放射性標識して、最終リガンド濃度が、1mM、100μM、10μM、1μM、および100nMの放射性標識溶液を作製した。67Ga-DOTA溶液を加熱するために、ウエル中に油を入れたメタルヒーターブロックを使用した。放射性標識条件を表6に示す。実施例4-Ga-67で標識したCP256-動力学的安定性PD10サイズ排除によるアポ-トランスフェリン中の67Ga-CP256の安定性図2は、100μMAおよび10μMBのCP256の放射性標識溶液についての、PD10カラムからの67Ga-CP256の溶出プロフィールを示す。アポ-トランスフェリン中での希釈およびインキュベーション後、これらの溶液中のCP256濃度は、それぞれ、227μMおよび2.27nMであった。アポ-トランスフェリン中での4時間のインキュベーション後、該プロフィールは、参照バッファー中でのインキュベーションのそれとは変わらず、2.27μMまたは227nM溶液のいずれについても、67Gaがトランスフェリンに結合していないことまたはリガンドから67Gaが失われたことを示唆している。30kDaのMWCOフィルターを用いる放射性医薬品の安定性表7および図3に示す通り、すべての放射性標識トレーサーのフィルター膜への残留結合は低度であった5以下。アポ-トランスフェリン中での67Ga-クエン酸塩のインキュベーション由来の放射能の73が、4時間後にMWCOフィルターに結合していた。MWCO法は、4時間のインキュベーション時間にわたる、67Ga-CP256および67Ga-DOTA溶液中での67Gaからアポ-トランスフェリンへの無視できるトランスキレーション1以下も示す。100μMのCP256溶液アポ-トランスフェリン中、2.27Mの場合、参照バッファー中でのインキュベーション由来のバックグラウンド結合は、1高かった。67Ga-DTPAは、4時間のインキュベーション時間経過後、参照バッファー中の溶液と比べて、いくらかの解離とこの溶液中の放射能のさらなる10のフィルターへ結合を示した。実験の詳細専門的な化学物質および消耗品は、以下のように購入した:ヒトアポートランスフェリンSigmaAldrichT5391-10MG;SartoriusVivaspin50030kDaMWCOフィルターFisherScientificFDP-875-025B;PD10カラムGEHealthcare17-0851-01;アポ-トランスフェリンのUV分光光度分析は、CaryWinUVソフトウエアを備えたCaryUV分光光度計において実施した。波長を280nmに設定した。67Ga-クエン酸塩参照溶液の調製200μlのPBS中、20μlの67Ga-クエン酸塩をインキュベートすることによって、67Ga-クエン酸塩の参照溶液を作製した。メタルヒーティングブロック中、37°Cでこの溶液をインキュベートし、血清インキュベーションについてと同じやり方の分析のためにサンプルを取り出した。アポ-トランスフェリン溶液の調製1M原液の希釈によって、50mMのTRIS-HClバッファーpH7.5を調製した。重炭酸ナトリウムを25mMの濃度まで添加した。アポ-トラスフェリンの2.5mg/ml32μM溶液をこのバッファー中で調製した。67Ga-トレーサーの調製すべてのトレーサーの溶液を、100μMの濃度で放射性標識した。10μMのCP256溶液も調製した。放射性標識条件については、表9を参照されたい。各放射性標識トレーサーの10μlアリコートを30μlの適切なバッファーに添加して、pHを7から7.5の間に中和した。酢酸塩バッファー中で標識したトレーサーの場合には、このバッファーは、2MのTRIS-HClpH7.5であった。67Ga-CP256および67Ga-クエン酸塩の調製のためには、バッファーはPBSであった。詳細を表9に示す。アポ-トランスフェリン中でのトレーサーのインキュベーションプラスチック製の微量遠心管中のアポ-トランスフェリン溶液200μlを、メタルヒーティングブロック中、37°Cでインキュベートした。これに、20μlのpH-中和した各トレーサーを添加した。25mM重炭酸ナトリウムを含む50mMTRIS-HClのアポ-トランスフェリンを含まない参照バッファー中でも、20μlの各トレーサーをインキュベートした。参照バッファー中でのトレーサーのインキュベーション50mMTRIS-HCl200μl、アポ-トランスフェリンを含まないを、ヒーティングブロック中、37°Cでインキュベートした。pH調整した適切なトレーサー20μlをインキュベーションに加えた。分析のために、適切な間隔でアリコートを採取した。PD10カラムを用いるゲル濾過アポ-トランスフェリンのインキュベーションPBS溶出バッファーに添加した25mMの重炭酸ナトリウムにより、PD10カラムの平衡化と溶出を行った。参照バッファー25mMの重炭酸ナトリウムを含む50mMのTRIS-HCl中でインキュベートした20μlの各トレーサーを加え、上記のカラムを溶出することにより、67Ga-クエン酸塩、67Ga-CP256、67Ga-DOTAおよび67Ga-DTPAの標準的な溶出プロフィールを決定した。0.5mlの各分画についての総溶出放射能のパーセンテージを計算する各カラムについての総溶出放射能を、30個の分画それぞれについてのカウントを加算することによって計算した。そして、各分画についての溶出放射能を以下の式によって計算した。PD10ゲル濾過カラムからのアポ-トランスフェリンのUV溶出プロフィールPD10カラムからのトランスフェリンの溶出プロフィールを、UV分光光度法によって決定した。アポ-トランスフェリン非放射性、500μlの2.5mg/ml溶液をPD10カラムに入れ、PBSバッファーで溶出して、0.5mlの分画を集めた。サンプルを1mlの水晶キュベットに負荷し、追加の0.4mlのPBSで0.9mlまで希釈した。参照基準としてPBSを用い、280nmにおける吸収を測定した。30kDaのMWCO微量遠心分離フィルターを用いる、トレーサーの安定性の決定管の上部フィルター部分に100μl、25mMの重炭酸塩を含むPBSを加えた。各トレーサーについての4時間後のインキュベーション溶液5μlを添加し、微量遠心機中で、管を10,000gで8分間回転させた。さらなる100μlのPBSを洗浄のために添加し、再度、管を10,000gでさらに8分間回転させた。管のフィルター部分を取り出し、管とは別にガンマカウンター中でカウントした。放射能のMWCOフィルターへの結合のパーセンテージを、以下の式を用いて計算した。アポ-トランスフェリンのインキュベーションに関して、4時間後に三連で分析を行った。50mMのTRIS-HCl参照バッファー中でのインキュベーションに関しては、6回6つの管行った。上記のように平均値をとった。実施例5-CP256-マレイミドコンジュゲートの合成実験の詳細化合物4の合成は、先に報告されているZhouT.etal.,JMedChem.2006,49,4171-4182。サクシニミド3-マレイミドプロパノエート3の合成DMF30mL中、β-アラニン1.8g、20ミリモルおよび無水マレイン酸2g、20ミリモルの溶液を室温で3時間撹拌した。固体を完全に溶解した後、N-ヒドロキシサクシニミドNHS;2.3g、20ミリモルおよびジシクロヘキシルカルボジイミドDCC;4.6g、24ミリモルを溶液中に添加し、そして、混合物を室温で一夜撹拌した。溶液を濾過し、水100mlおよびジクロロメタン100mlで沈殿を洗浄した。濾液を集め、50mlの5NaHCO3で3回、塩水で1回、有機層を洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水し、減圧下でジクロロメタンを除去すると、白色固体55が得られた。この固体は、さらなる精製を必要とせず、次のカップリングステップのために直接使用可能である。化合物5の合成無水DMF50ml中、活性化した酸36ミリモルおよびアミン45ミリモルを、室温で一日、撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、クロロホルム:メタノール8:2を溶出液として用いるシリカゲルカラムにおいて残渣を精製し、溶出液として白色の泡を得た81。化合物6の合成無水DCM中のベンジル保護化合物5に、N2下で三塩化ホウ素12当量を氷浴中で添加し、混合物を室温で2日間撹拌した。過剰のBCl3を、MeOH、続いて1mLの濃塩酸を添加することによってクエンチングした。混合物を蒸発させて茶色固体を得て、これをメタノールに溶解し、アセトンを加えて沈殿させた。この手順を3回繰り返して、白色固体を得た72。化合物7の合成DCM20mL中の化合物620mgに過剰のEt3Nを添加し、混合物を室温で一夜撹拌した。蒸発させて溶媒を除去した後、残渣を1mLの0.1ギ酸溶液に溶解することによって固相抽出カラムに負荷した。カラムを最初に0.1ギ酸10mLで洗浄してトリエチルアミン塩酸塩を除去し、続いて、メタノール10mLで溶出した。メタノール溶液の分画を濃縮し、真空オーブンで乾燥させると、白色粉末が得られた80。実施例6-CP256-クロロサクシニミド6またはCP256-マレイミド7とC2Acタンパク質のコンジュゲーションC2Aは、アポトーシスを被っている細胞上に提示されるホスファチジルセリンを認識する。それは、チオール反応性作用物質による部位特異的標識を促進するために、システイン残基が遺伝子操作されているTavareR,TorresMartindeRosalesR,BlowerPJ,MullenGED.Efficientsite-specificradiolabelingofamodifiedC2AdomainofsynaptotagminIwith[99mTcCO3]:anewradiopharmaceuticalforimagingcelldath.BioconjugateChem2009;20:2071-2081を参照されたい。6または7のいずれかを用いて、得られた遺伝子操作されたタンパク質C2AcをCP256とコンジュゲーションした。同じ生成物を両コンジュゲーション反応から得た。C2Acの平均分子量は14997であり、したがって、C2Ac-7コンジュゲートは、15918.44の平均分子量を有すると考えられる。実測の平均分子量は、15970.85であり、これは、追加の鉄原子を有し、3つの水素原子を含まないC2Ac-7コンジュゲートに相当する。実験の詳細C2Ac2mg/mLの溶液中、2mgを、3:1のモル過剰のクロロサクシニミド-六配座キレーター6またはマレイミド-六配座キレーター7で、4時間、室温で処理した。PBSであらかじめ平衡化させ、Chelex上で貯蔵しておいたPD-10カラムを用いて、混合物を精製し、LC-MSにより分析した。実施例7-68GaによるC2Acタンパク質コンジュゲートの標識化および標識タンパク質に関する機能性データ本明細書に記載の方法にしたがって、C2Ac-7コンジュゲートを68Gaで放射性標識した。図4は、酢酸塩バッファー中で68Gaとわずか15分間インキュベーションした後の、高度なキレーションを示す。68Ga-標識コンジュゲートは、赤血球結合アッセイにおいてホスファチジルセリンPSへの特異的なカルシウム依存性の結合を示した図5を参照されたい。実験の詳細バッファー中のキレートされていない68Gaを以下のように調製した。ジェネレーターを2mlの0.1MHClで溶出して25MBqの68Ga溶出液を得た。1.5mlの濃HCl36を溶出液に加えて、HClの最終濃度4Mとして、ガリウム四塩化物アニオンを形成し、該溶液はすべての放射能をトラップしながら陰イオン交換カラムSAXSPEC,Chromafix30-PS-HCO3、45mg、Macherey-Nagel,Germanyを通過した。次いで、カラムを250μlの5MNaClで洗浄し、放射能は300μlの蒸留水により溶出し、溶出液pH1未満、約70MBqを5μlの1MNaOHおよび30μlの酢酸アンモニウムバッファー、pH6を加え、pHを7に上昇させることによって緩衝化した。100μlのPBS、pH6をその後添加した。200μlの予備濃縮し、緩衝化した68Ga溶液を100μl中100μgのC2Ac-7キレーターコンジュゲートに添加した。5分の間隔で、2μlの混合物をITLC-SGにスポットし、0.1Mクエン酸バッファーを移動相として使用してクロマトグラムを展開した。放射性標識C2Ac-7の赤血球RBC上のPSへの結合を、文献記載の方法にしたがって実施したTait,J.F.,Gibson,D.F.,andSmith,C.2004MeasurementoftheaffinityandcooperativityofannexinV-membranebindingunderconditionsoflowmembraneoccupancy.Anal.Biochem.329,112-119を参照されたい。保存ヒトRBCの市販の調製物をBeckman-CoulterHighWycombe,UKから得た。RBCのカルシウム滴定を、キャリアータンパク質として1mg/mLのBSAを含む50mMHEPES-ナトリウム、pH7.4、100mMNaCl、3mMNaN3中で実施した。1nMの68Ga標識C2AcHおよびカルシウムにより反応を準備し;RBCを添加し、そして、反応1mlを室温で8分間インキュベートした。次いで、細胞を遠心分離し7500RCFで3分間、上清を除去し、インキュベーションステップの間に使用したのと同じ濃度のカルシウムを含むアッセイバッファー1mlに細胞を再懸濁した。細胞を再び遠心分離して上清を除去し、ペレットを0.7mlのアッセイバッファー10mMのエチレンジアミン四酢酸EDTAに再懸濁して、カルシウム依存性に結合した68Ga標識C2Ac-7を放出させた。RBCを除去するための遠心分離後、上清中の放出された標識C2Ac-7をガンマカウンターを用いて測定した。式Y=CaN/[Ca]NEC50Nを用いて文献記載のとおりにEC50を計算し、ここで、Y=B/Bmaxであり、Bは、所与のカルシウム濃度において結合した放射性標識タンパク質の実際の量であり、Bmaxは、飽和カルシウム濃度において結合した放射性標識タンパク質の濃度である。KaleidagraphSynergySoftware,Reading,USを用いるLevenberg-Marquardtアルゴリズムに基づく日常の非線形曲線適合を用いて曲線のあてはめを実施した。実施例8-68Ga-C2AcコンジュゲートによるPETスキャニングおよびマウスにおける生体内分布マウスへの68Ga-C2Ac-7コンジュゲートおよびキレートされていない遊離の68Gaの注入の1.5時間後に撮影したPET画像を図6aおよび6bにそれぞれ示す。68Gaの存在を画像中の明るい白色の領域により示す。68Ga-C2Ac-7コンジュゲートの注入は、膀胱へ排出された少量の放射能を、ほとんど独占的な腎臓での取り込みによる放射能の血液および組織からの急速なクリアランスを示した図6a。これは、その放射能がゆっくりと血液プールから主にリモデリング中の骨へと消失することが見られた遊離の68Gaの注入により得られた画像図6bとは対照的である。実験の詳細68Ga標識C2Ac-7コンジュゲートを上記の通りに合成した。バッファー中のキレートされていない68Gaを、実施例7に記載の予備濃縮およびpH7への緩衝化法を用いて調製した。TLC分析を実施した。注入時までは、水酸化ガリウムの沈殿は検出されなかった。注入のための溶液を、0.22μmフィルターを通して濾過して、雌性C57B/6マウスn=4、各動物に対して100μl中10MBqの尾静脈に注入した。NanoPET/CTスキャナーBioscan,Paris,Franceを用い、PET収集時間1800秒、同時計数関係coincidencerelation:1~3で、PET/CTスキャンを取得した。画像再構築:SSRB2DLORによるOSEM、エネルギーウインドウ:400~600keV、フィルター:Ramlakカットオフ1、相互作用/サブセットの数:8/6。動物を90分で殺し、外植された器官は、生体内分布を決定するためにガンマカウンターでカウントした。実施例9-血清中での68GaによるCP256の標識図7は、血清中でのCP256による68Gaのキレーションならびに血清中でインキュベートした68Ga-塩化物、血清とともにインキュベートした、あらかじめ形成された68Ga-CP256-7錯体およびバッファー中でインキュベートした68Gaを示すための対照実験のサイズ排除ラジオクロマトグラフィーPD10カラムを示す。CP256による68Gaのキレーションの効率の尺度として、そして以下に記載のプレターゲティングアプローチの実行可能性を実証するために、標識化は血清中で行われ、したがって、血清トランスフェリンからの攻撃を伴うキレーションプロセスを表す。CP256と血清の混合物への68Ga塩化物の添加は、CP256サンプル濃度が23μM以上である場合に68Ga-CP256のそれに類似するサイズ排除クロマトグラムを生じるが、血清のみへの68Gaの添加は、68Ga-トランスフェリン錯体と遊離のガリウムの混合物と一致するクロマトグラムを生じる。これは、CP256が血清トランスフェリンと効果的に競合することを示す。さらに、68Gaを最初に血清で平衡化し、次いでCP256を添加した場合、ここでも、クロマトグラムは68Ga-CP256での観察と類似し、CP256が68Ga-トランスフェリン錯体から68Gaを抽出できることを示している。エタノール沈殿およびITLC実験は、CP256を含む血清中では、測定可能なタンパク質結合も検出可能な遊離の68Gaもなかったことを確認した。すべての68Gaは、上清のITLCの起点に留まった。これらの観察結果は、68GaとCP256のコンジュゲートが、インビボでの新規プレターゲティングングモードに使用可能であり、それによって、標的とされるCP256コンジュゲートが投与され、そして標的に結合可能となり、続いて、プレターゲティングされたCP256を位置決めするために68Gaが注入されることを示唆する。実験の詳細2つの異なる放射性標識技術を使用した。方法1においては、100μlのキレーターCP-256、PBS/重炭酸塩バッファー中2.35mM、1.17mM、589μM、117μM、34μMおよび11.7μM;pH7~7.5を300μlのヒト血清と混合する。10~15分後、20μlの68Ga溶出液を添加し、該溶液をプラスチック管中で38°Cでインキュベートした。第2の方法においては、20μlの68Ga溶液を300μlのヒト血清に添加した。15~20分後、100μlのキレーターCP-256を添加した。各時点で50μlのインキュベーション溶液をPD-10カラムの上部に適用し、PBSでカラムを溶出して0.5ml分画を集めた。ガンマカウンターPerkinElmerwizard31480自動ガンマカウンター、サンプルあたり10秒で分画をカウントした。インキュベートした溶液を、エタノール沈殿によっても分析し、ペレットおよび遠心分離後の上清をカウントして、タンパク質に結合した68Gaを決定し、そして、遠心分離された上清を、0.1Mクエン酸ナトリウムを移動相とするITLC-SGにより分析した。これらの条件において、遊離の68Gaは溶媒先端とともに移動しRf=1、68Ga-CP256は起点に留まったRf=0。実施例10-111InによるCP256の標識111In-塩化物は、ITLC-SGHSAにより決定して、5分後に約90の収率でCP256589μMと錯体を形成する。該錯体は、ヒト血清中で2時間インキュベートした場合、PD10サイズ排除クロマトグラフィーにより決定して、In-111の放出または血清タンパク質への結合が2未満であることを示した図8。実験の詳細酢酸塩バッファーpH=6の50μlアリコートを、HCl中の111InCl37MBq、MallinckrodtMedicalを入れたバイアルに添加した。CP256の589μM溶液を、0.5mgのCP256を1mlのPBSに溶解することによって調製した。このCP256溶液の100μlアリコートを上記111In溶液の50μLアリコートと混合した。5分間のインキュベーション後、111Inのスペシエーションを、先にヒト血清アルブミンHSAで飽和させて乾燥したITLC-SGストリップを用いて分析した。5:2:1の比の水、エタノールおよびアンモニアでクロマトグラムを展開した。これらの条件下、111Inは起点に留まるが、111In-CP256は溶媒先端まで移動する。実施例11-67Gaによるプレターゲティングモードを介する、抗体-CP256コンジュゲートのインビボでのイメージング前炎症性マクロファージにより発現されたシアロアドヘシン抗原に対するモノクローナル抗体、SER4を、最初に抗体ジスルフィド結合を2-メルカプトエタノールで還元し、次いで、そうして形成したチオール基をCP256-マレイミド7で処理することにより、CP256-マレイミド7とコンジュゲーションして、CP256-SER4を得た。以前に観察した非公開データ99mTcで標識したSER4のマウス中での典型的な生体内分布は、主に脾臓、そしてある程度の肝臓での取り込みによる、循環からの急速なクリアランスを反映している。67GaでCP256-SER4を標識することにより、67Ga-CP256-SER4が得られた。野生型マウスの群に、直接的に標識67Ga-CP256-SER4グループ1、またはコンジュゲーションしていないSER4、続いて5分後に67Gaクエン酸塩グループ2またはCP256-SER4、続いて67Gaクエン酸塩のいずれかを注入した。同じ実験を、シアロアドヘシンノックアウトマウスを用いても実施した。すべての動物を3時間後に殺し、放射能の生体内分布を決定した。結果を図9に示す。各器官について、グループ1についての生体内分布データを左側のカラムに示し、グループ2についての生体内分布データを中央のカラムに示し、そして、グループ3についての生体内分布データを右側のカラムに示した。グループ1は、67Ga-CP256-SER4の脾臓への強力なターゲティング36ID/gを示したが、グループ2は、67Gaクエン酸塩の非常に低い脾臓による取り込みを示した4ID/g。一方、グループ3は、CP256-SER4の先行注入が67Gaクエン酸塩の脾臓による取り込みを4ID/gから10ID/gまで増加させることができたことを示し、67Gaがかなりの程度まで抗体コンジュゲートの位置を追跡することを示唆している。グループ1はまた、循環血中の67Ga-CP256-SER4の高い放射能31ID/gを示すが、67Gaクエン酸塩グループ2はそうでなく7ID/g;CP256-SER4の先行投与グループ3が、血液プール中の保持を7から16ID/gまで増加させたことも示している。ノックアウトマウスは、脾臓ターゲティング挙動を示さず、このパターンがシアロアドヘシン発現に関連していることと一致する。これらの実験は、67Gaクエン酸塩の後からの注入による、CP256のプレターゲティングされた非標識バイオコンジュゲートのイメージングの実行可能性を実証する。実験の詳細SER4へのCP256のコンジュゲーションのために:リン酸塩緩衝食塩水中の2mg5mg/mLのSER4抗体に、25μLの50mMのEDTAを添加した。得られた溶液中に存在する金属イオンをキレートするために、溶液を室温で1時間放置した。そして、50,000mwcoのVivaspin2超遠心管中で、3000rpm、3×15分の遠心分離によって抗体を洗浄した。遠心分離ステップの合間に抗体を再懸濁し、0.1Mの金属を含まないリン酸塩バッファー、pH7の添加により2mLの体積に調整した。濃縮し、洗浄した抗体を約300μLの0.1Mリン酸塩バッファー中に集めた。抗体の還元のために、0.1Mリン酸塩バッファー、pH7で、2-メルカプトエタノール5μLを20μLに希釈した。3.8μL1000倍過剰の希釈した2-メルカプトエタノールを抗体に添加し、室温で30分間、還元を進行させた。0.1Mリン酸塩バッファーの添加により体積を1mlに調整し、還元した抗体をディスポーザブルのサイズ排除カラムPD10に適用した。還元した抗体を含む分画を併合し、すぐに0.77mgを8μLのDMSOに溶解した、40倍過剰のCP256-マレイミドを加えた。コンジュゲーション反応を37°Cで30分間加熱した。その後、50,000mwcoのVivaspin2超遠心管を先のように使用するが、0.1M酢酸アンモニウムバッファー、pH6を過剰のリガンドを除去するために使用して、コンジュゲーションされた抗体を洗浄した。濃縮したCP256-抗体を、0.1M酢酸アンモニウムバッファー、pH6中に集めた。45μLの67Gaクエン酸塩0.6~0.75MBqを90μL90μgのCP256-SER4に添加することによって、67ガリウム放射性標識を実施した。リン酸塩緩衝食塩水で350μLに希釈する前に、放射性標識を10分間進行させた。25μgの標識抗体を含む注射液を調製した。標識抗体の分析を、2mMEDTAを含む0.1Mリン酸塩バッファーを移動相として用いるサイズ排除HPLCによって実施して、動物への注入の前に、良好な放射性標識が達成されたことを確認した。野生型マウスの群C57B1/6、雄性8~10週、一群あたりn=2~3に、直接的に標識67Ga-CP256-SER4グループ1、またはコンジュゲーションしていないSER4、続いて5分後に67Gaクエン酸塩グループ2、またはCP256-SER4、続いて67Gaクエン酸塩のいずれかを注入した。各ケースにおいて使用した67Gaの放射能および抗体の量は同じであった。同じ実験を、ノックアウトマウスシアロアドヘシンノックアウト、C57B1/6、雄性8~10週、一群あたりn=2~3を用いても実施した。すべての動物を3時間後に殺し、組織の外植および体重測定およびカウントにより、放射能の生体内分布を決定した。実施例12-68Gaによるプレターゲティングモードを介する、抗体-C256コンジュゲートのインビボでのイメージング実施例11に記載のCP256-マレイミドとコンジュゲーションしたSER47を、実施例7に上記した通りに68Gaで標識することにより、68GA-CP256-SER4が得られた。3回の別個の時に、野生型マウスの群C57B1/6、雄性8~10週、一群あたりn=2~3に68Ga-CP256-SER4グループ1、またはコンジュゲーションしていないSER4、続いて1時間後に68Ga酢酸塩グループ2、またはCP256-SER4、続いて1時間後に68Ga酢酸塩グループ3のいずれかを注入した。すべての動物を68Ga注入の1.5時間後に殺し、放射能の生体内分布を決定した。結果を図10に示す。各器官について、グループ2についての生体内分布データを左側のカラムに示し、グループ3についての生体内分布データを中央のカラムに示し、そして、グループ1についての生体内分布データを右側のカラムに示した。グループ1は、68Ga-CP256-SER4の脾臓への強力なターゲティング3つの実験にわたり、20~50ID/gを示したが、グループ2は、68Ga酢酸塩の非常に低い脾臓による取り込みを示した2~5ID/g。一方、グループ3は、CP256-SER4の先行注入が68Ga酢酸塩の脾臓による取り込みを2~5ID/gから17~40ID/gまで増加させることができたことを示し、68Gaがかなりの程度まで抗体コンジュゲートの位置を追跡することを示唆している。これらの実験は、68Ga酢酸塩の後からの注入による、CP256のプレターゲティングされた非標識バイオコンジュゲートのイメージングの実行可能性を実証する。グループ3からのマウスのNanoPET/CT画像を図11Aに示す。該マウスは、CP256-SER4を用いる本発明のプレターゲティング方法を用いて撮像され:CP256-SER4に続いてGa-68酢酸塩を注入した8週齢のC57B1/6であった。該図は、標的化された肝臓/脾臓による取り込みを示す。比較のために、Ga-68酢酸塩のみを注射したマウスを図11Bに示し、血液プール中の保持および関節への蓄積を示す。実験の詳細実施例11の記載のとおりに、抗体をCP256にコンジュゲーションさせた。放射性標識のために、68Gaを68Ge/68Gaジェネレーターから溶出して実施例7に記載のように濃縮して、68Ga酢酸塩を得た。150μL105μgのCP256-SER4に150μLの68Ga酢酸塩16MBqを添加した。放射性標識反応を室温で5分間進行させた。35μgの放射性標識抗体を含む注射液を調製した。放射性標識抗体の分析を実施例11に記載の通りに実施した。野生型マウスC57B1/6、雄性8~10週、一群あたりn=2~3に、直接的に標識68Ga-CP256-SER4グループ1、またはコンジュゲーションしていないSER4、続いて1時間後に68Ga酢酸塩グループ2、またはCP256-SER4、続いて1時間後に68Ga酢酸塩のいずれかを注入した。各ケースにおいて使用した68Gaの放射能および抗体の量は同じであった。すべての動物を2~3時間後に殺し、組織の外植および体重測定およびカウントにより、放射能の生体内分布を決定した。各グループからの1匹の動物を、NanoPET/CTスキャナーBioscanを用いてスキャンした。68Ga酢酸塩または68Ga-CP256-SER4の注入直後にスキャンを開始し、1.5時間継続した。参考文献以下の参考文献は、すべての目的のために、その全体が参照することにより明示的に組み込まれる。"