"貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法であって、プロバイオティック、高分子量ポリマー及び有効量の静菌剤を含む半透過性微小球を形成すること、前記微小球を比較的高湿度の食品又は飲料中に導入すること、ここで、前記比較的高湿度の食品は水分10を超える残留水分レベルを有する、及び前記食品又は飲料を消費前に冷凍せずに少なくとも6週間貯蔵すること、を含む、貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法。前記プロバイオティックは、1logcfu以下の個体群の減少を経験する、請求項1に記載の方法。前記高分子量ポリマーがエチルセルロースである、請求項1に記載の方法。前記高分子量ポリマーがアルギネートである、請求項1に記載の方法。前記微小球が飲料中に存在する、請求項1に記載の方法。前記飲料が5未満のpHを有する、請求項5に記載の方法。前記微小球が、残留水分レベルが水分20を超える、好ましくは水分30を超える、好ましくは水分40を超える、より好ましくは水分50を超える比較的高湿度の食品中に存在する、請求項1に記載の方法。前記微小球が、水分活性が0.6を超える、好ましくは0.7を超える、好ましくは0.8を超える、より好ましくは0.9を超える比較的高湿度の食品中に存在する、請求項1に記載の方法。前記比較的高湿度の食品が、ペットフード、スナックフード、ヘルスバー、及び調理されていない予め包装された混合物を含む、請求項1に記載の方法。前記微小球がワックスを含まないことを条件として、前記微小球が多層組成物を有する、請求項1に記載の方法。前記微小球が500ミクロン未満の粒径を有する、請求項1に記載の組成物。貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法であって、プロバイオティック、高分子量ポリマー及び有効量の静菌剤を含む半透過性微小球を用意すること、前記微小球を比較的高湿度の食品又は飲料中に入れること、ここで、前記比較的高湿度の食品は水分10を超える残留水分レベルを有する、及び水を前記微小球中に入らせること、を含み、前記プロバイオティックは、前記食品又は飲料を冷凍せずに少なくとも6週間貯蔵した後に1.5logcfu以下の個体群の減少を経験する、貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法。従って、必要とされているのは、水分が10を超える食品中又は飲料中でのプロバイオティックスの貯蔵安定性を高める方法である。一実施形態において、本発明は、貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法であって、プロバイオティック、高分子量ポリマー及び有効量の静菌剤を含む半透過性微小球を形成すること、微小球を比較的高湿度の食品又は飲料中に導入すること、ここで、前記比較的高湿度の食品は水分10を超える残留水分レベルを有する、及び、前記食品又は飲料を消費前に冷凍せずに少なくとも6週間貯蔵することを含む、貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法であって、プロバイオティック、高分子量ポリマー及び有効量の静菌剤を含む半透過性微小球を用意すること、微小球を比較的高湿度の食品又は飲料中に入れること、ここで、前記比較的高湿度の食品は水分10を超える残留水分レベルを有する、及び、水を微小球中に入らせることを含み、プロバイオティックは、前記食品又は飲料を冷凍せずに少なくとも6週間貯蔵した後に1.5logcfu以下の個体群の減少を経験する、貯蔵安定なプロバイオティック含有食品又は飲料を提供する方法を提供する。貯蔵安定とは、プロバイオティックが、その健康上の利益を与えるのに十分な生存能を保持することを意味する。かかる量は、プロバイオティックの各菌株について当業者に知られている。好ましい一実施形態において、プロバイオティックは、1.5logcfu未満、好ましくは1.3logcfu未満、好ましくは1.1logcfu未満、好ましくは1.0logcfu未満、好ましくは0.9logcfu未満、好ましくは0.8logcfu未満の個体群の減少を経験する。これまで、当業者は、安定性を保つためにプロバイオティックを乾燥した状態に保つことは必須であると考えていた。出願人は、後述するように、有効量の静菌剤が含まれることを条件として、半透過性微小球を使用して良好な安定性を達成できることを驚くべきことに見出した。半透過性は、水に対して透過性であることを意味する。一実施形態において、透過性は、高分子量ポリマーに応じて変わる。微小球は、様々な従来の方法、例えば、流動床アグロメレーション、ゲルビーズ形成、噴霧乾燥、又はフォーム造粒などにより形成できる。一実施形態において、微小球が平均で500ミクロン未満の粒径を有するように条件が制御される。典型的には、プロバイオティックを、凍結乾燥し、次に、コーティング、分散、又は他の方法で微小球中に取り込ませる。一実施形態において、微小球は多層組成物である。多層の実施形態の一実施形態において、微小球はワックスを含まない。好適なプロバイオティック微生物の例としては、酵母、例えばサッカロミセス属Saccharomyces、デバロマイセス属Debaromyces、カンジダピキアCandidawPichia及びトルロプシス属Torulopsisなど、カビ、例えばアスペルギルス属Aspergillus、リゾプス属Rhizopus、ムコール属Mucor、トルロプシス属Torulopsis及びペニシリウム属Penicillium、並びに細菌、例えばビフィドバクテリウム属、バクテロイド属Bacteroides、クロストリジウム属Clostridium、紡錘菌属Fusobacterium、メリソコッカス属Melissococcus、プロピオニバクテリウム属Propionibacterium、ストレプトコッカス属Streptococcus、エンテロコッカス属Enterococcus、ラクトコッカス属Lactococcus、コクリア属Kocuriaw、スタフィロコッカス属Staphylococcus、ペプトストレプトコッカス属Peptostrepococcus、バチルス属Bacillus、ペディオコッカス属Pediococcus、ミクロコッカス属Micrococcus、リューコノストック属Leuconostoc、ワイセラ属Weissella、アエロコッカス属Aerococcus、オエノコッカス属Oenococcus及び乳酸桿菌Lactobacillusなどが挙げられる。乳酸桿菌の非限定的例としては、ラクトバチルスアシドフィルスLacidophilus、ラクトバチルスアリメンタリウスLalimentarius、ラクトバチルスアミロボラスLamylovorus、ラクトバチルスクリスパータスLcrispatus、ラクトバチルスブレビスLbrevis、ラクトバチルスカセ4Lcase4、ラクトバチルスクルバタスLcurvatus、ラクトバチルスセロビオサスLcellobiosus、ラクトバチルスデルブレッキーサブスピーシーズブルガリクスLdelbrueckiissBulgaricus、ラクトバチルスファルシミニスfarciminis、ラクトバチルスファーメンタムLfermentum、ラクトバチルスガセリLgasseri、ラクトバチルスヘルベティカスLhelveticus、ラクトバチルスラクチスLlactis、ラクトバチルスプランタラムLplantarum、ラクトバチルスジョンソニーLjohnsonii、ラクトバチルスロイテリLreuteri、ラクトバチルスラムノサスLrhamnosus、ラクトバチルスサケイLsakei、及びラクトバチルスサリバリウスLsalivariusが挙げられる。好適なプロバイオティックスは、JarrowFormulasから入手することができ、例えばラクトバチルスプランタラム299vLactobacillusplantarum299vIdealBowelSupport299vの活性成分;100億個の生菌数であり、又はカスタムプロバイオティックス、例えばラクトバチルスプランタラムLplantarum、ラクトバチルスラムノサスLrhamnosus、又はラクトバチルスアシドフィルスLacidophilusである。高分子量ポリマーは、質量平均分子量が50,000を超える。例えば、ケラチン、カゼイン、アルブミン、コラーゲン、グルテリン、グルカゴン、グルテン、ゼイン、ゼラチンおよびそれらの誘導体、キチンから又はキトサンから誘導されたポリマー、多糖ポリマー、例えばセルロース系ポリマー、例えばエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及び第四級化セルロース誘導体など、澱粉及びそれらの誘導体、アクリル系ポリマー又はコポリマー、例えばポリアクリレート、ポリメタクリレート及びそれらの共重合体など、ポリビニルアルコール、天然由来のポリマー必要に応じて第4級化されたものであってもよい、例えばアラビアガム、グアーガム、キサンタン誘導体又はカラヤガム、アルギネート、カラギーナン、ウルバン及び他の藻類コロイド、グリコアミノグリカン、ヒアルロン酸及びその誘導体、シェラック、サンダラックガム、ダンマル樹脂、エレミガム及びコパール樹脂、デオキシリボ核酸、ムコ多糖類、例えばヒアルロン酸など、コンドロイチン硫酸、カプロラクタム、プルラン、ペクチン、マンナン及びガラクトマンナン、及びグルコマンナン、並びにそれらの混合物及び/又はそれらの誘導体などの、多くの合成、天然又は変性ポリマーが意図される。前述の例示的なリストはともかく、多くの食品グレードの高分子量ポリマーが意図されることが理解されるであろう。好ましい高分子量ポリマーの非限定的な例としては、エチルセルロース及びアルギネートが挙げられる。必要に応じて、2種以上の高分子量ポリマーをブレンドしてもよい。理論に縛られるわけではないが、静菌剤は半透過性微小球の1つの重要な特徴である。添付の実施例から分かるように、少なすぎる静菌剤及び多すぎる静菌剤は両方とも生存率の低下をもたらす。静菌剤は、ナイシン、デカン酸、ラウリン酸、キトサン、安息香酸ナトリウム、フマル酸、ソルビン酸カリウム、PABA、プロピオン酸、トリクロサン、及びリノール酸から選択することができる。一実施形態において、静菌剤はラウリン酸である。静菌剤がラウリン酸である場合、ラウリン酸は、約0.3~約15、好ましくは約0.3~約12、好ましくは約0.4~約11、好ましくは約0.5~約10の質量範囲微小球の全質量に対するで好ましくは存在する。さらに、上記の範囲内の部分的組み合わせが意図される。本発明の微小球は、食品又は飲料中に組み込まれた場合、プロバイオティックスを安定化してより長い貯蔵寿命をもたらす。残留水分レベルが水分20を超える、好ましくは水分30を超える、好ましくは水分40を超える、より好ましくは水分50を超える比較的高湿度の食品中に微小球が存在する状況が特に好ましい。水分活性は、所与の温度での製品の表面における水蒸気の分圧/同じ温度での純水を超える水蒸気の分圧の飽和圧である。食品分野では、0.3以上乃至0.5以下の水分活性はセミドライsemidryと見なされており、0.5超乃至0.7以下の水分活性はセミモイストと見なされており、0.7を超える水分活性はモイストと見なされている。過去において、プロバイオティックスを含むセミモイスト及びモイスト食品は冷凍を必要とすると考えられていた。一実施形態において、0.6を超える水分活性、好ましくは0.7を超える水分活性、好ましくは0.8を超える水分活性、より好ましくは0.9を超える水分活性を有する比較的高湿度の食品中に微小球が存在する。一実施形態において、比較的高湿度の食品としては、ペットフード、スナックフード、ヘルスバー及び調理されていない予め包装された混合物、例えば粉ミルクなどが挙げられる。一実施形態において、微小球は飲料中に存在する。参考のため、ほとんどの飲料の水分活性は1.0である。一実施形態において、飲料は5未満のpHを有する。かかる飲料の例としては、果汁及び清涼飲料炭酸飲料が挙げられる。以下の例は例示のためだけのものであり、本発明の範囲を限定することを意図していない。全ての百分率は、特に断らない限り、質量を基準とする。例1本発明の典型的な微小球を、ミシガン州ミッドランドのザダウケミカルカンパニーTheDowChemicalCompanyから入手可能なETHOCELエチルセルロースエトキシル含有量48.0~49.5、25°Cでウッベローデ粘度計により580:20トルエン:エタノール溶液中で測定した溶液粘度12.6~15.4cPを3.33とラウリン酸を含む安定化用材料によりCustomProbioticsInc製の凍結乾燥されたラクトバチルスラムノサスLrhamnosus出発質量100gを変換することにより形成した。ラウリン酸及びエチルセルロースを、酢酸エチル80/エタノール20の溶剤ブレンド中に分散させて安定化用溶液を形成した。上記安定化用溶液をウルスターWurster法を使用して流動床コーターにより細菌に適用した。ウルスター法は、流動床コーターチャンバー中に窒素流により懸濁された固体粒子の流動床の底部にあるスプレーノズルの位置により特徴付けられる。粒子はスプレーノズルの上方の環状流に同伴する。ノズルスプレーは、粒子上に安定化用溶液の噴霧流をスプレーし、これにより均一な微小球が生じる。設定温度は80°Cであった。この温度により、約55°Cのチャンバー温度がもたらされた。流速は0.6g/分であった。プロセス圧は0.8バールであった。ノズル圧は1.8バールであった。このプロセスによって、光学顕微鏡により求めた場合に、粒径の平均が上記の500ミクロンの範囲内にある均一な球状粒子が生じた。微小球中に含まれていたラウリン酸の量を、各流動床被覆工程の最後に回復した細菌の量と各工程中にチャンバー中に噴射した安定化用溶液の総量とに基づいて推定した。微小球の組成を計算し、表1に質量範囲微小球の総質量に対するで示す。例2本発明の典型的な微小球を、プロバイオティック含有粉末バッチDは、IdealBowelSupport登録商標299v活性成分ラクトバチルスプランタラムLplantarum299v;1カプセル当り100億個の生菌数のカプセルを開けることにより得たJarrowFormulas製の5.4gのラクトバチルスプランタラムLplantarum299vと不活性成分;バッチEは、CustomProbioticsから入手した7.3gのラクトバチルスプランタラムLplantarumを0.27gのラウリン酸及びココナッツ油C=21.33g39.5;D=19.43g36とともに噴霧乾燥することにより形成した。ラウリン酸及び油をプロバイオティックと共に高温40~45°Cで溶融及び混合した。この混合物27gを100gのSURELEASEETHOCELエチルセルロース分散液固形分27中に分散させることにより調製し、粘度を調整するためにさらなる滅菌水を加えた。分散混合物を、MobileMinorスプレードライヤーに備え付けられた二液ノズルアトマイザーに送り込んだ。ノズルに対する空気圧を、6kg/時の空気流に等価な50の流れで1バールに固定した。噴霧乾燥は、窒素環境中で行い、入口温度を140°Cに固定し、混合物の供給速度を調整することにより出口温度を50°C±1°Cに設定した。サイクロンを使用して微小球を集め、次に、残留水分を除去するために微小球を真空引きした。微小球の組成を計算し、表2に質量範囲微小球の総質量に対するで示す。粉末の得られた粒径は、コールターカウンター技術により求めた場合に、平均粒径43ミクロンであった。例3本発明の典型的な微小球をゲルビーズ形成gelbeadingにより形成した。ココナッツ油バッチごとにそれぞれ2.85g、1.5g、0.75g及び0とラウリン酸の混合物を55°Cでブレンドし溶融させた。各得られた溶融物を細菌粉末IdealBowelSupport登録商標299v活性成分ラクトバチルスプランタラムLplantarum299v;1カプセル当り100億個の生菌数のカプセルを開けることにより得たJarrowFormulas製のラクトバチルスプランタラムLplantarum299vと混合したバッチE及びFは0.25gの内容物を使用、バッチG及びHは0.20gの内容物を使用。溶融物/細菌粉末を次にそれぞれアルギン酸ナトリウムKELTONELV、FMCbiopolymer、Mw=50000-75000Daの2溶液10.9375g中に分散させた。次に、各バッチの数滴をピペットにより別々の1M塩化カルシウム溶液に加えてアルギン酸ナトリウムを架橋させ、アルギネートに基づくゲルビーズ微小球を形成し、当該微小球を即座に脱イオン水中に移し入れた。微小球の組成を計算し、表3に質量範囲微小球の総質量に対するで示す。微小球の残りは水であった百分率は形成の比較的直後に求めた。微小球の得られた粒径は、光学顕微鏡により求めた場合に1000ミクロン以上であったが、マイクロピペットにより又は他の従来の方法によって、より小さく作ることができる。例4比較実質的に例2の方法によるが、ラウリン酸を除外し、21.6gのココナッツ油を使用して、比較用の微小球以下、比較用バッチ1というを形成した。例5比較実質的に例3の方法によるが、ラウリン酸を除外し、0.25gのプロバイオティック粉末内容物及び3.0gのココナッツ油を使用して、比較用の微小球以下、比較用バッチ2というを形成した。例6方法100mgの微小球を1mlの水中に懸濁し、次の方法:1サンプルを37°Cで一晩浸し、激しく渦混合して細菌を遊離させる;2粒子を37°Cで一晩浸した後に無菌カミソリ刃により細断する;3乳鉢と乳棒を使用してサンプルを磨砕する、のうちの1つを使用して処理することにより初期細胞数計測生存率を評価した。理解されるように、被覆されていない対照の場合、細菌を遊離させる必要がなかったため、サンプルを水中に一晩浸さなかった。同様に、安定性試験のためにすでに水中に浸した材料についての生存率の試験も、さらに一晩浸すことを必要としなかった。処理後、遊離細菌懸濁液に4mlのMRSブロス培地を加えた。次に、段階希釈を行い、100μlをMRS寒天上に蒔いた。細菌コロニーを数え、生存細胞数を微小球1グラム当りで記録した。例1に実質的に準じて微小球を作製し、蒸留水中に表4Aに記載のとおりの期間浸した後のそれらの生存率について試験した。例2及び4に実質的に準じて微小球を作製し、蒸留水中に所定期間浸した後のそれらの生存率について試験した。結果を表4Bに示す。例3及び5に実質的に準じて微小球を作製し、蒸留水中に所定期間浸した後のそれらの生存率について試験した。結果を表4Cに示す。例7比較例4に実質的に準じて微小球を作製し、カプセル化されていないラクトバチルスラムノサスLrhamnosusプロバイオティックに対してそれらの水吸収性について試験した。サンプルが平衡質量に達するまで、両方のサンプルを相対湿度約30の湿度室に入れた。質量変化は、サンプルにより吸収された水の量を示す。両方のサンプルが30.4の質量変化を示した。結果から、均一な疎水性カプセル化が水の吸収を妨げないことが確認された。本発明は本明細書に具体的に開示及び例示した実施形態に限定されないことが理解されるべきである。本発明の様々な修飾は当業者に明らかであろう。かかる修飾及び変更は、添付の特許請求の範囲に記載の範囲から離れずに行うことができる。さらに、各記載の範囲は、本明細書に含まれる特定の数値と範囲の全ての組み合わせ及び部分組み合わせを包含する。さらに、本明細書で引用又は記載した各特許、特許出願及び刊行物の開示は、それらの全内容を引用により本明細書に援用する。"