"式Iの化合物:I式中、Aは、―CH=CHR、―CH=CH―CH=CHR又は―CH2CH2Rを表し、ここで、Rは、―CH3、―CH2SH、―CH2S―Cn式中、n=1―6である、―CH2―カルボキシル―、カルボキシル、式中、R=C1―C6アルキル又は、式中、R=C1―C6アルキルを表し;Bは、-CH2CH3、1―ヒドロキシエチル、イソプロピル又はn―プロピルを表し;Cは、イソブチル、2―ヒドロキシイソブチル又は1―メチルプロピルを表し;Dは、―CH3又は―CH2OHを表し;R1及びR2は、同一若しくは異なるものであり、独立してC1-C6アルキル又はモノ、ジ、又はトリフッ化アルキルを表すか、R1及びR2は、これらが結合している窒素原子と共に、酸素、SOn式中、nが0、1、2である、及び窒素、から選択されるもう一つのヘテロ原子を含む飽和又は部分的に不飽和の3から7員ヘテロシクロアルキル所望によりC1-C6アルキル及びフッ化アルキルで置換されていてもよいヘテロシクロアルキルを形成してもよい。[R―3―モルホリン―4―イル―プロピルチオ―Sar]3シクロスポリンA;[R―3―エチルイソプロピルアミノ―プロピルチオ―Sar]3シクロスポリンA;[R―3―4―メチル―ピペラジン―1―イル―プロピルチオ―Sar]3シクロスポリンA;及び、前記のあらゆる化合物の薬学的に許容し得る塩からなる群から選択される、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは1―ヒドロキシエチルであり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bはイソプロピルであり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bはn―プロピルであり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cは1―メチルプロピルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH2OHである、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cは2―ヒドロキシイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。化合物が、単独、又は、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされて存在する、請求項1に記載の化合物の少なくとも1つを含む医薬組成物。化合物が、単独、又は、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされて存在する、請求項1に記載の化合物の少なくとも1つを含む医薬組成物であって、前記組成物中の前記化合物の濃度が、約0.01から約0.05重量である、医薬組成物。ドライアイ、眼瞼炎、マイボーム腺疾患、アレルギー結膜炎、アトピー性角結膜炎及び春季カタル、翼状頸、対宿主性移植片病の眼の症状、眼アレルギー、アトピー性角結膜炎、春季カタル、ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、ベーチェット病、スティーブンスジョンソン症候群、眼類天疱瘡、ウイルス感染によって引き起こされる慢性眼表面炎症、単純ヘルペス角膜炎、眼酒さ及び結膜脂肪斑から選択される状況を処置するため、角膜移植拒絶反応を防止するため、および角膜又は眼の他の表面の手術により損なわれた角膜感度を回復するため、の方法であって、請求項1から11のうちのいずれか一項に記載の化合物を哺乳類に投与することを含む、方法。前記哺乳類がヒトである、請求項12に記載の方法。本発明は、以下の式Iの新規化合物又は薬学的に許容しうるこれらの塩に関する。I請求項に記載の式Iの新規化合物は、Cs骨格の3位アミノ酸サルコシンのα炭素への修飾の結果として生じ、Cs骨格は、本明細書で使用するとき、1つ以上の置換基A、B、C及びDの性質が互いに異なるシクロスポリン例えば、CsA、CsC、CsD、等を意味する。換言すると、Cs骨格は、3位アミノ酸のα炭素での部分を除いた、式Iの新規化合物を意味する。Aは、a―CH=CHR、b―CH=CH―CH=CHR又はc―CH2CH2Rを表し、式中、Rはa―CH3、b―CH2SH、c―CH2S―Cn、式中n=1~6、d―CH2―カルボキシル、eカルボキシル、fアルコキシカルボニル、式中、R=C1―C6アルキル又はg―CH2―アルコキシカルボニル、式中、R=C1―C6アルキルを表す;Bは、a-CH2CH3、b1―ヒドロキシエチル、cイソプロピル、若しくは、dn―プロピル、を表す;Cは、aイソブチル、b2―ヒドロキシイソブチル、又は、c1―メチプロピル、を表す;Dは、a―CH3又はb―CH2OHを表す。本発明の一実施形態では、式IAで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。IA一実施形態では、式IBで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは1―ヒドロキシエチル、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。IB一実施形態では、式ICで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bはイソプロピル、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。IC一実施形態では、式IDで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bはn―プロピル、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。ID一実施形態では、式IEで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cは1―メチルプロピル、及び、Dは―CH3である。IE一実施形態では、式IFで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cはイソブチル、及び、Dは―CH2OHである。IF一実施形態では、式IGで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cは2―ヒドロキシイソブチル、及び、Dは―CH3である。IG式Iでは、さまざまなタイプのシクロスポリン骨格のアミノ酸に、1から11までの数字で表したラベルがつけられる。前記修飾は、Cs骨格の位置3のアミノ酸3位のサルコシンのα炭素で生じる。修飾は、式Iの一部の、位置3のアミノ酸のα炭素での、水素原子の置換を一般に含む。式中、R1及びR2は、同一又は異なって、独立にaC1-C6アルキル若しくはbモノ、ジ、又はトリフッ化アルキル、を表し、cR1及びR2は、これらが結合している窒素原子と共に、酸素;SOn式中、nが0、1、2である;及び窒素、から選択されるもう一つのヘテロ原子を含む飽和又は部分的に不飽和の3から7員ヘテロシクロアルキル所望によりC1-C6アルキル及びフッ化アルキルで置換されていてもよいヘテロシクロアルキルを形成してもよい。化合物の実施例式Iの実施形態としては、以下の式Iの化合物位置3のアミノ酸のα炭素の部分のみが示される。波線は式IのCs化合物の残りを表すが挙げられるが、これらに限定されない。化合物の実施例1化合物の実施例2化合物の実施例3定義アルキルとは、1から6個の炭素原子を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、メチル、エチル、プロピル例えば、1―プロピル、イソプロピル、ブチル例えば、1―ブチル、イソブチル、sec―ブチル、tert-ブチル、ペンチル例えば、1―ペンチル、ネオペンチル及びヘキシル例えば、3―ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。フッ化アルキル又はフッ素化アルキルとは、本明細書で定義される、一つ以上のフッ素基により置換されたアルキルを意味する。アルケニルとは、2から6個の炭素原子及び1つ以上の二重結合を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、エテニル、プロペニル及びブテニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニルとは、2から6個の炭素原子及び1つ以上の三重結合を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、エチニル、プロピニル及びブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキルとは、3から6個の炭素原子を有する一価の飽和又は部分的に不飽和な、環状の炭化水素基を意味する。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクリルとは、3から6個の環原子を有する一価の飽和又は部分的に不飽和な、環状の炭化水素基を意味し、環原子の少なくとも1つが、窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子である。ラジカルは、炭素又はヘテロ原子にある。例としては、モルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラニル及びピラゾリニルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールとは、窒素、硫黄及び酸素から選択される1つ以上のヘテロ原子を有した一価の5から7員芳香族炭化水素基を意味する。例としては、イミダゾリル、ピリジニル、フリル、ピリミジニル及びピラジニルが挙げられるが、これらに限定されない。前記のアルキル、シクロアルキル、及びヘテロシクリル基は、本明細書で説明される1つ以上の置換基によって、独立して置換されてもよい。アミノとは、―NH2又はアミドゲン基を意味する。モノアルキルアミノとは、―NHR ́基を意味し、式中、R ́は本明細書で定義されるアルキルを表す。ジアルキルアミノとは、―NRR ́基を意味し、式中、R及びR ́は、独立して、本明細書で定義されるアルキルを表す。ヒドロキシルとは、―OH基を意味する。カルボキシルとは、以下の基を意味する。アルコキシカルボニルとは、以下の基を意味する。式中、Rは、本明細書で定義されるアルキルを表す。薬学的に許容しうる塩とは、化合物に対する生物学的効果を保持した、毒性がないか又はその反対に薬学的な使用に対して有害な、前記化合物の任意の塩を意味し、これらの塩は、当該技術分野において公知の有機及び無機対イオンから誘導可能である。合成実施例本発明を、以下の非限定的な合成実施例により説明する。特に明記しない限り、合成実施例において、以下の化学略語を使用する:Ac:アセトンDCM:ジクロロメタンLDA:リチウムジイソプロピルアミドMe:メチルTHF:テトラヒドロフラン特許請求される式Iの化合物の出発材料である、Cs骨格は、当該技術分野において利用可能な合成スキームおよび試薬を使用して調製することができ、商業的な供給業者から入手してもよい。本発明の新規化合物の合成のために使用する試薬もまた、商業的な供給業者から入手することができる。合成実施例1[R-3-モルホリン-4-イル-プロピルチオ-Sar]3シクロスポリンAステップ1:トルエン-4-チオスルホン酸S-3-クロプロピルエステルの合成:チオトシル酸カリウム50.0g、221mmol、1.0当量および1-ブロモ-3-クロロプロパン38.0g、241mmol、1.09当量を、室温で72時間、アセトン1L中で、ともに撹拌した。次いで混合物を濃縮した。次に、混合物をジクロロメタンと水の間に分配した。有機溶液をブラインで洗浄し2×、MgSO4を使用して乾燥し、濃縮し、トルエンとともに共沸させ、重量54g92の、淡黄色の油を得た。1HNMRCDCL3、ppmδ7.84d、J=8.4Hz、2H、7.37d、J=8.2Hz、2H、3.59t、J=6.1Hz、2H、3.15t、J=7.0Hz、2H、2.48s、3H、2.14m、J=7.0Hz、2H。ステップ2:トルエン-4-チオスルホン酸S-3-モルホリン-4-イル-プロピルエステルの合成トルエン-4-チオスルホン酸S-3-クロロ-プロピルエステル61.7g、233mmol、1.00当量、モルホリン22.2g、255mmol、1.09当量および炭酸カリウム33.8g、240mmol、1.06当量を、アセトニトリル1L中、50°Cで64時間、ともに撹拌した。混合物を濃縮し、次いで酢酸エチルと水の間に分配した。有機溶液を水で洗浄し2×、MgSO4を使用して乾燥し、濃縮して、重量61.5g84の淡黄色の油を得た。1HNMR300MHz、CDCl3、ppmδ7.83d、J=8.4Hz、2H、7.36d、J=8.2Hz、2H、3.68t、J=4.8Hz、4H、3.07t、J=7.0Hz、2H、2.47s、3H、2.39-2.33m、6H、1.84m.6.7Hz、2H。ステップ3:[R-3-モルホリン-4-イル-プロピルチオ-Sar]3シクロスポリンAの合成まず、ジイソプロピルアミン13.3ml、95mmol、10当量を、-78°C、窒素雰囲気下で、THF238ml中n-ブチルリチウムヘキサン類中2.5M、38ml、95mmol、10当量溶液に添加し;得られた混合物を90分間撹拌した。次に、THF38ml中のシクロスポリンA11.4g、9.5mmol、1.0当量;トルエンとともに使用する直前に共沸乾燥した溶液を混合物に添加し、それを次いで、同一の条件下-78°C、窒素雰囲気下にて、2.5時間撹拌した。次いで、THF5ml中のトルエン-4-チオスルホン酸S-3-モルホリン-4-イル-プロピルエステル13.5g、42.8mmol、4.5当量を添加し;得られた混合物を、2時間撹拌しながら、室温まで昇温させた。続いて、混合物を-20°Cまで冷却し、酢酸6.0ml、105mmol、11当量を添加した。混合物を一晩、室温まで昇温させた。混合物から溶媒を蒸発させた後、得られた混合物を、酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム溶液の間に分配した。有機相を、最初に塩化アンモニウム溶液で、次いでブラインで洗浄し;MgSO4を使用して乾燥し、濃縮した。粗成生物を、MPLCSiO2、ジエチルエーテル、次いで5メタノール/95ジエチルエーテル、次いで510アンモニア水/90メタノール/95ジエチルエーテルにより精製した。得られた材料を、HPLCSiO2、4.5MeOH/95.5ジクロロメタンによりさらに精製し、800mg6の白色非晶質の固体を得た。ESMSMH1361.9.1HNMRCDCl3、ppm、診断用プロトンδ7.95d、J=10Hz、1H、アミドNH、7.69d、J=8Hz、1H、アミドNH、7.35d、J=8Hz、1H、アミドNH、7.17d、J=8Hz、1H、アミドNH、5.97s、1H、サルコシンH。合成実施例2[R-3-エチルイソプロピルアミノ-プロピルチオ-Sar]3シクロスポリンAステップ1:トルエン-4-チオスルホン酸S-[3エチルイソプロピルアミノ-プロピル]エステルの合成トルエン-4-チオスルホン酸S-3-クロロ-プロピルエステル12.0g、45.3mol、1.00当量、N-エチルイソプロピルアミン4.2g、48.0mmol、1.05当量および炭酸カリウム6.9g、49.9mmol、1.10当量を、アセトニトリル160mL中、60°Cで18時間、ともに撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を、酢酸エチル500mLと水250mLの間に分配した。有機溶液をブライン250mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、得られた油を、MPLCクロマトグラフィーにより精製して、重量2.98g21の油を得た。1HNMRCDCl3、ppmδ7.83d、J=8Hz、2H、7.35d、J=8Hz、2H、3.08t、J=7Hz、2H、2.88m、J=7Hz、1H、2.48s、3H、2.39m、4H、1.75m、J=7Hz、2H、0.95t、7Hz、2H、0.90d.7Hz、6H。ステップ2:[R-3-エチルイソプロピルアミノ-プロピルチオ-Sar]3シクロスポリンAまず、n-ブチルリチウムヘキサン類中1.6M、17.5ml、28mmol、10当量を、THF70ml中ジイソプロピルアミン3.92ml、28mmol、10当量溶液に、0°Cで滴加した窒素雰囲気下にて。混合物を、-10°Cで30分間撹拌し、窒素雰囲気下で-78°Cまで冷却した。次に、THF10ml中のシクロスポリンA3.35g、2.8mmol、1.0当量;トルエンとともに使用する直前に共沸乾燥した溶液を添加し、反応混合物を、同一の条件下で、2.5時間撹拌した。次いで、THF10ml中のトルエン-4-チオスルホン酸S-[3-エチルイソプロピルアミノ-プロピル]エステル4.4g、13.9mmol、5.0当量を添加し、得られた混合物を室温まで昇温させ、1時間撹拌した。混合物を-78°Cまで冷却し、その後酢酸1.8ml、31mmol、11当量をそれに添加し;混合物を一晩、室温まで昇温させた。溶媒を蒸発させ、得られた混合物を、酢酸エチル600mLおよび飽和塩化アンモニウム溶液300mlの間に分配した。有機相を、最初に塩化アンモニウム溶液2×200mlで、次いで水200mlで洗浄し;MgSO4を使用して乾燥し、減圧下で濃縮して、粘性油を得た。粗成生物を、MPLCSiO2、酢酸エチル、次いで10メタノール/90酢酸エチル、次いで10メタノール中7Mアンモニア/90酢酸エチル、ヘキサンを用いた摩砕過剰な試薬の除去、SCXカラムの使用残存CsAの除去、および最終的にHPLCSiO2、4.5MeOH/95.5ジクロロメタンにより精製し、385mg10の白色非晶質の固体を得た。ESMSMH1362.11HNMR500MHz、CDCl3、ppm、診断用プロトンδ7.95d、J=10Hz、1H、アミドNH、7.68d、J=8Hz、1H、アミドNH、7.32d、J=8Hz、1H、アミドNH、7.18d、J=8Hz、1H、アミドNH、5.87s、1H、サルコシンH。合成実施例3[R-3-4-メチル-ピペラジン-1-イル-プロピルチオ-Sar]3シクロスポリンAステップ1:トルエン-4-チオスルホン酸S-[3-4-メチル-ピペラジン-1-イル-プロピル]エステルの合成トルエン-4-チオスルホン酸S-3-クロロ-プロピルエステル4.9g、18.4mol、1.00当量、N-メチルピペラジン1.9g、19.3mmol、1.05当量および炭酸カリウム2.7g、19.4mmol、1.05当量を、室温で64時間、アセトニトリル100mL中で一緒に撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル500mlと水250mlの間に分配した。有機溶液を水で洗浄し2×200mL、MgSO4を使用して乾燥し、濃縮し、MPLCにより精製して、重量2.1g36の淡黄色の油を得た。1HNMRCDCl3、ppmδ7.83d、J=8Hz、2H、7.35d、J=8Hz、2H、3.05t、J=7Hz、2H、2.47s、3H、2.41広い、4H、2.35t、J=7Hz、2H、2.29s、3H、2.47s、3H、2.39-2.33m、6H、1.82m、7Hz、2H。ステップ2:[R-3-4-メチル-ピペラジン-1-イル-プロピルチオ-Sar]3シクロスポリンAの合成まず、n-ブチルリチウムヘキサン類中2.5M、10.5ml、26mmol、10当量を、THF70ml中ジイソプロピルアミン3.7ml、26mmol、10当量溶液に、-78°Cで滴加した窒素雰囲気下にて。これらの同一条件下で、混合物を1時間撹拌した。THF15ml中のシクロスポリンA3.2g、2.6mmol、1.0当量;トルエンとともに使用する直前に共沸的に乾燥した溶液を混合物に添加し、混合物を同一の条件下で、2時間撹拌した。次いでTHF15ml中のトルエン-4-チオスルホン酸S-[3-4-メチル-ピペラジン-1-イル-プロピル]エステル4.3g、13mmol、5当量を添加し、得られた混合物を室温まで昇温させ、90分間撹拌した。混合物を-70°Cまで冷却し、その後、酢酸1.66ml、30mmol、11当量を添加した。混合物を一晩、室温まで昇温させた。次に、混合物から溶媒を蒸発させ、得られた混合物を、酢酸エチル500mLと飽和塩化アンモニウム溶液250mLの間に分配した。有機相を、最初に塩化アンモニウム溶液200mLで、次いでブライン200mLで洗浄し、MgSO4を使用して乾燥し、減圧下で濃縮した。粗成生物を、MPLCSiO2、ジエチルエーテル、次いで10メタノール/90ジエチルエーテル、次いで1010アンモニア水/90メタノール/90ジエチルエーテル、ヘキサンを用いた摩砕過剰な試薬の除去、SCXカラムの使用残存CsAの除去、および最終的にHPLCSiO2、6MeOH/94ジクロロメタンにより精製し、白色非晶質の固体を得た。ESMSMH1374.89.1HNMR500MHz、CDCl3、ppm、診断用プロトンδ7.92d、J=10Hz、1H、アミドNH、7.67d、J=8Hz、1H、アミドNH、7.30d、J=8Hz、1H、アミドNH、、7.18d、J=8Hz、1H、アミドNH、5.86s、1H、サルコシンH。試験データ安定性データ式Iの化合物は、メタノール性溶液中で安定を維持するという優位性を示す。これは、式Iの化合物を含む製剤が、望ましい保存可能期間を有することを示し、これは、このような薬剤が、通常、液剤、ゲル剤等として製剤されるため、眼用薬剤にとって重要である。本発明の化合物の実施例1~3の安定性を示すために、それらのMeOH中でのエピマー化のデータを、以下の表1の[R-3-ジエチルアミノエチルチオ-Sar]3シクロスポリンAのデータと比較した。表1[R-3-ジエチルアミノエチルチオ-Sar]3シクロスポリンAが、本発明の実施例1~3と類似する生物活性以下の表2を参照を有するにもかかわらず、ここに提示されるデータは、実施例1~3の化合物が、溶液中において、有意により安定であることを示している。[R-3-ジエチルアミノエチルチオ-Sar]3シクロスポリンAは、水性およびメタノール性溶液の両方において不安定であり、急速にエピマー化して、R-およびS-異性体の混合物を生じることがわかった。メタノール性溶液中、平衡比は約4:1R/Sである。エピマー化の相対的比率の分析は、500MHznmrスペクトルの比較により実施した。サルコシン中心硫黄原子に隣接したに結合したプロトンは、R-異性体中では約δ5.9で出現し、一方S-異性体中では、約δ6.5まで低磁場移動する。表2データ取得のために行った基本手順:メタノール中、50°Cにて実施した。変換率は500MHzNMRにより測定した。プロテアーゼ不含PPlaseアッセイプロテアーゼ不含PPlaseアッセイは、酵素シクロフィリンAによって触媒されたペプチド基質のシスからトランスへの変換率を測定する。阻害剤の添加が触媒される速度を遅らせ、Ki値が獲得される。材料アッセイ緩衝液:0.2μmフィルタで濾過した、pH7.8の35mMHEPES。50μMのDTTを毎日使用前に加えて、緩衝液を氷蔵した。酵素:ヒト組換えCypASigma社C3805酵素を、酵素希釈緩衝液pH7.8のHEPES20mM、40のグリセロール、50μMのDTT及び1μMのBSAで1Mに希釈して、-20°Cで保存した。基質:SUC―AAPF―pNABachemAG社、L―140020mg/mlを、0.5MのLiClのトリフルオロエタノール溶液で調製した。方法攪拌されるキュベットの温度を10.0±0.1°Cに維持するために、キュベットホルダ、攪拌機及びチラーからなるAgilent8453Spectrophotometerによって、すべての測定値を獲得した。温度は、温度プローブを用いてモニターされる。検査化合物のUV劣化を防止するために、光路にガラススライドを使用して、290nm未満の光を遮断した。1.5mlのアッセイ緩衝液を3ml石英キュベットに入れ、攪拌活発だが、キャビテーションを生成するほど高速ではないしながら10.0の±0.1°Cに冷却した。阻害剤を、100のDMSOで希釈し、続いて、DMSOの最大最終濃度が分析物中0.5となるまで、分析物に添加した。空試験のスペクトルを獲得し、続いて、3μLの酵素を添加2nMの最終濃度してから、3μLの基質を添加60μMの最終濃度した。空試験用に、300s又は500sの間、330nmで吸光度が測定された注:混合誤差を最小にするため、1回の素早い注入で基質を添加し、直ちに測定が開始されなければならない。反応速度定数を得るために、一次反応速度式を、阻害剤のそれぞれの濃度に対する、吸光度データと適合させた混合により、曲線の最初の誤差が生じるので、最初の10から15秒を除外した。触媒反応速度を、酵素反応速度定数マイナスバックグラウンド反応速度定数で算出した。阻害剤濃度に対する触媒反応速度定数を使用して、指数曲線を作成し、阻害剤に対するKi値を得た。カルシニューリンフォスファターゼCaNアッセイカルシニューリンは、活性化すると活性化T細胞の核因子NFATを脱リン酸化する、セリン―スレオニンタンパク質ホスファターゼであり、Tリンパ球の活性化において重要である。シクロフィリンACypAに結合したCsAは、カルシニューリン活性を阻害し、結果として免疫抑制効果をもたらす。CypAに結合した場合にCsAがカルシニューリンを阻害するだけでなく、いくつかのCsAアナログは、CypAの不在下でカルシニューリンを結合する。シクロスポリンアナログである、式Iの例示的な化合物の免疫抑制可能性を調べるために、カルシニューリンの活性を阻害する能力を、CypAの存在下及び不在下で測定した。使用されるCaNアッセイキットは、カルシニューリンフォスファターゼの活性を測定するための比色アッセイに基づいており、市販されているEnzoLifeScience社及びCalbiochem社。カルモジュリンもまたカルシニューリンの活性のために必要とされ、RIIリンペプチドはカルシニューリンに効力のあるペプチド基質として使用される。阻害剤との1:1の複合体にCypAを添加してCypA―依存性及びCypA―非依存性のカルシニューリン阻害の測定を可能にするために、我々は方法を修飾した。放出した遊離リン酸塩の検出は、標準的なマラカイトグリーンアッセイに基づく。使用した材料EnzoLifeScience社、CaNアッセイキット:BML―AK8042Xアッセイ緩衝液:pH7.5のトリス100mM、200mMのNaCl、12mMのMgCl2、1mMのDTT、0.05のNP―40、1mMのCaCl2マラカイトグリーン:BIOMOLGreen商標試薬カルモジュリンヒト、組換え体:氷上で解凍して、2Xアッセイ緩衝液と1:50で希釈してから、氷蔵した。カルシニューリン:素早く解凍し、直ちに氷蔵してから、1Xアッセイ緩衝液と1:12.5で希釈し、続いて氷蔵した。RII基質:915μLの超純水UPWを、0.75mMの最終濃度まで、1.5mgのバイアル基質に添加した。阻害剤:100のDMSO中に2.5mMの阻害剤。CypA:組換え体ヒトCypASigma社C3805、1mg/ml方法阻害剤希釈;阻害剤化合物を、ポリプロピレン低結合性96穴プレートで、UPWによって、最終アッセイ濃度5xで希釈した。CypAなし試料用に、10、1、01及び0.01μMの最終アッセイ濃度を得るために、阻害剤の4点希釈列を2連で調整した。CypAあり試料用に、CypAと1:1の阻害剤の複合体を得るために、7点希釈列、つまり、10、3.33、1.11、0.37、0.12、0.04、0.014μMの阻害剤とCypAの最終アッセイ濃度を調整した。CsA阻害剤コントロールも、10μMのCypAありとなしで、10μMのCsAの最終濃度を得るために、調整した。アッセイの設置;キットに付属の96穴プレートの半分のエリアを使用して、10μlのUPWを、2つの穴に加えて、非阻害コントロールを提供する。10μlの阻害剤又は阻害剤/CypA複合体を、適切な試料穴に加えた。25μlのCaMを有する2xアッセイ緩衝液を全ての穴に加えて、続いて5μlの1xアッセイ緩衝液に加えたカルシニューリンなしブランクの2つの穴を除く全ての穴穴当たり40Uの最終濃度に、5μlのCaNを加えた。反応温度を平衡化するために、30°Cで15分間オーブンにアッセイプレートを置いた。10μlのRII―ペプチド0.15mMの最終濃度の添加によって、反応が開始した。反応が線形である約60分間30°Cにて、この反応を進行させた。続いて、100μlのマラカイトグリーン試薬を加えることによって、反応を終了させた。室温で15分から30分間で発色させた後、プレートリーダMolecularDevices―SpectraMaxM5を使用して、620nmの吸光度を測定した。すべての吸光度の記録からカルシニューリンなしブランクを減算し、Log10阻害剤濃度に対するバックグラウンド修正吸光度をプロットして、データを分析した。GraphPadPrismSoftwareを使用して、データをS字応答曲線に当てはめた。混合リンパ球反応MLRアッセイMLRアッセイは、検査化合物の免疫抑制可能性を推定する別の手段である。生後6週間から8週間目のC57BL/6及びBALB/c雌マウスを、国立癌研究所のFrederickCancerResearchandDevelopmentフレデリック、メリーランド州から入手した。脾臓をすべてのマウスから無菌で採取して、すりガラススライドを用いて細胞を分解し、破片を沈殿させて、完全培地を用いて細胞を2回洗浄することによって、単個細胞浮遊液を調製した。完全培地は、10の熱不活化ウシ胎児血清FBS;AtlantaBiologicals社、ローレンスヴィル、ジョージア州、100μg/mLストレプトマイシン、100U/mLペニシリンG、0.25μg/mLアンフォテリシンBHyClone社、2mMのLグルタミンジペプチドHyClone社及び2×105Mの2―メルカプトエタノールシグマ社を添加した25mMのHEPES緩衝液HyClone社、ローガン、ユタ州を含有しているRPMI1640培地からなる。細胞を2回洗浄し、完全培地で再懸濁した。細胞数は、BeckmanCoulterZー1粒子計数器フラートン、カリフォルニア州を使用して、計測された。細胞生存度は、AccuriC6フローサイトメーターアナーバー、ミシガン州を使用したヨウ化プロピジウムPI染色によって、決定した。C57BL/6H―2b及びBALB/cH―2dの脾細胞を、キラーR及び刺激S細胞として、それぞれ使用した。それぞれの穴が2×105個のR及び8×105個のS細胞を含有するように、細胞を、3連で96穴平底ミクロタイタープレートCostar社、ケンブリッジ、マサチューセッツ州にて培養した。培養物を、さまざまな濃度の検査化合物、CsA又は培地の存在又は不在下で、37°Cで5日間、湿気を含む5のCO2中でインキュベートして、培養の最後の16時間、3H―チミジン3H―TdRでパルスラベルをしてから、Brandel96穴細胞ハーベスタゲイザースバーグ、メリーランド州を使用して収集した。該増殖を、Wallac1450MicrobetaTriLuxシンチレーションカウンタトゥルク、フィンランドのフィルターマット上の放射活性を計算することで測定した。X線照射による効果的な失活を確認するためのコントロールは、2×105細胞/穴で5μg/mLのPHAと共にS細胞を培養することにより、実施された。これらのコントロール培養を、MLRのために説明された条件と同じ条件で、3日間行った。つまり、リンパ球増殖を、上記した方法と同様に決定した。処置方法本発明の組成物は、ドライアイに苦しんでいる患者を治療するため、眼瞼炎及びマイボーム腺疾患を処置するため、角膜又は眼の他の表面の手術により損なわれた角膜感度を復元するため、アレルギー結膜炎並びにアトピー性角結膜炎及び春季カタルを処置するため、翼状頸、対宿主性移植片病の眼の症状、眼アレルギー、アトピー性角結膜炎、春季カタル、ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、ベーチェット病、スティーブンスジョンソン症候群、眼類天疱瘡、ウイルス感染によって引き起こされる慢性眼表面炎症、単純ヘルペス角膜炎、眼酒さ、結膜脂肪斑を処置するため、および角膜移植拒絶反応を防止するために用いられてもよい。国際ドライアイワークショップDEWSは、ドライアイを不安、視覚障害、及び、眼表面への潜在的損害を伴う涙液膜の不安定の症状を引き起こす、涙液及び眼表面の多因子病。涙液膜の増加したモル浸透圧濃度及び眼表面の炎症を伴うと定義する。涙液の欠乏又は涙液の過度の蒸発によって引き起こされる乾性角結膜炎などの状態も含まれる。眼瞼炎は、皮膚、それと関係した構造毛髪及び皮脂腺、粘膜皮膚移行部及びマイボーム腺を含んだ、上及び下まぶた辺縁の炎症を引き起こす慢性疾患である。進行期には、結膜、涙液膜及び角膜面に影響を及ぼすことも可能で、ドライアイと関連する場合がある。眼瞼の睫毛を支える領域に影響を及ぼしている上部、及び、主としてマイボーム腺開口部に影響を及ぼしている下部を有する、上部又は下部眼瞼炎に、眼瞼炎は一般に分類される。マイボーム腺疾患は、ほとんどの場合、一次性マイボーム腺炎、二次性マイボーム腺炎及びマイボーム脂漏症の、3つの形のうちの1つとして生じる。マイボーム脂漏症は、炎症のない、過度のマイボーム分泌によって特徴づけられる分泌過剰マイボーム腺疾患。一次性マイボーム腺炎は、対照的に、停滞して濃化したマイボーム分泌によって特徴づけられる閉塞性分泌過剰マイボーム腺疾患。二次性マイボーム腺炎は、マイボーム腺が上部蓋辺縁眼瞼炎から二次的に、炎症を斑状に起こす限局性炎症反応を表す。角膜感度障害は、多くの場合、光反応角膜整形手術、レーザーアシスト上皮下角膜曲率形成術LASEK、EPI―LASEK、カスタマイズされた経上皮非接触切除又は角膜神経が切断される他の方法などの、屈折矯正手術の後に生じる。角膜感度障害は、HSV―1、HSV―2及びVZVウイルスなどによる、ウイルス感染の後生じる場合もある。角膜感度障害を有する患者は、涙液産生及び蒸発が正常な場合であっても、眼が乾燥すると感じると多くの場合訴える。これは、角膜神経が手術によって切断されるか又はウイルス感染の後炎症を起こす場合に生じるこのような患者の乾燥が、実際に角膜神経障害の場合があることを示唆している。アレルギー結膜炎は、1つ以上のアレルゲンに対する過敏症から生じる結膜の炎症である。これは、急性、間欠性又は慢性の場合がある。これは、季節的に、つまり年の一定の時にだけ生じるか、又は、絶え間なく、つまり年の全体にわたって慢性的に生じる。季節的及び永続的なアレルギー結膜炎の症状としては、結膜の炎症に加えて、催涙、流涙、結膜血管の拡張、痒み、乳頭状過形成、結膜水腫、眼瞼の浮腫及び眼からの分泌が挙げられる。分泌は、一晩の睡眠の後、眼の上に痂皮を形成する場合がある。アトピー性角結膜炎は、アレルギー結膜炎の慢性、重度な形で、多くの場合視覚的な障害をもたらす。症状としては、痒み、灼熱感、疼痛、発赤、異物感、光感受性及び視界不良が挙げられる。特に一晩の睡眠から目ざめると、多くの場合、分泌をし、この分泌は、粘状、糸状そして粘液状となり得る。下結膜は、多くの場合、上結膜より顕著に影響を受ける。結膜は、蒼白色、浮腫状及び特徴のない状態から、乳頭増殖、上皮下の繊維増多、結膜嚢短縮、逆さ睫毛、眼瞼内反及び睫毛禿といった、進行疾患の特徴を有する場合まで変化する。患者によっては、斑点状上皮糜爛、角膜血管新生及び視野を損なう可能性のある角膜症の他の特性にまで、疾患は進行する。通常は、結膜の杯状細胞増殖、上皮偽管形成、並びに、増加した上皮の脱顆粒した好酸球及び肥満細胞が認められる。CD25Tリンパ球、マクロファージ及び樹状細胞HLA―DR.sup.、HLA―CD1が、角膜固有質において著しく上昇する。アトピー性角結膜炎のように、春季カタルは、アレルギー結膜炎の重度な形であるが、下結膜より上結膜に顕著に影響を及ぼす傾向にある。それは、2つの型で生じる。眼瞼型では、四角で、硬質な、平らに、密接して詰め込まれた乳頭突起が現れる。眼球角膜輪部型では、角膜周囲の結膜が、肥大し、灰色がかる。両方の型とも、多くの場合、粘液様分泌物を伴う。疼痛及び羞明、場合によっては中央の角膜プラーク及びトランタス斑点を伴って、角膜上皮の喪失が生じる場合がある。ブドウ膜炎ブドウ膜の炎症は、米国の視覚障害の約10の原因となる。水晶体過敏性眼内炎は、ヒト自己免疫性疾患である。全ブドウ膜炎は、眼のすべてのブドウ膜血管層の炎症を意味する。後部ブドウ膜炎は網脈絡膜炎を一般に意味し、前部ブドウ膜炎は虹彩毛様体炎を意味する。これらの炎症の炎症産物すなわち、細胞、フィブリン、過剰タンパク質は、眼の場合には、流体空間内、すなわち、前房、後房及び硝子体空間内に一般に見いだされ、炎症反応に密に関係した組織を浸潤する。ブドウ膜炎は、眼に対する外科手術又は外傷による傷害後に、関節リウマチ、ベーチェット病、強直性脊椎炎、サルコイドーシスなどの、自己免疫疾患の構成要素として、既知の病因に関連していない、扁平部炎、虹彩毛様体炎などの、孤立した免疫介在性眼疾患として、そして、抗体抗原複合体をブドウ膜組織内に堆積させる以下の一定の全身性疾患後に、生じ得る。これらの疾患は、合わせて、非伝染性ブドウ膜炎を表す。水晶体アナフィラキシーは、水晶体が原因抗原であるブドウ膜炎の重度の形である。水晶体タンパク質は、一般に、出生前から水晶体嚢によって隔離されている。これらのタンパク質が、損傷若しくは手術によって、又は、稀に白内障発症のときに眼内に放出された場合、これらのタンパク質は抗原性が激しくなり、自己免疫反応を刺激し得る。反応が中程度である場合、慢性ブドウ膜炎とみなされる。反応が非常に早く進行する場合、眼は、すべての部分において重度の炎症を起こす。この後者の反応が、水晶体アナフィラキシーと呼ばれている。ブドウ膜炎は、ベーチェット病の顕著な特徴で、口腔及び生殖器潰瘍、皮膚、血管、関節及び神経の兆候によっても特徴づけられる多系統炎症性疾患である。酒さは、特定の原因又は治療法のない、慢性及び一般的な外皮疾患である。酒さの発生は、複数の要因があると考えられる。可能性のある要因としては、ニキビダニとの接触、胃腸疾患又は血管拡張疾患、及び、食餌又は日光などの他のトリガが挙げられる。患者は、炎症性丘疹、浮腫、毛細血管拡張、鼻瘤及び眼の症状といった、さまざまな症状を呈する。酒さの眼の兆候としては、前部眼瞼炎といった眼瞼炎、結膜炎、虹彩炎、虹彩毛様体炎、角膜炎、マイボーム腺機能不全、毛細血管拡張、紅斑、霰粒腫、麦粒腫、眼瞼間充血、結膜充血、毛様体充血、眼球充血、痂皮、スリーブ及び表面的で断続的な角膜症が挙げられる。眼の症状は非特異的で、灼熱感、流涙、涙液分泌の低下、発赤、及び、異物感又はざらつき感又は乾燥感、刺激、痒み、霧視、光線過敏、涙目、充血した眼、灼熱感、毛細血管拡張、眼瞼縁の不規則性並びにマイボーム腺機能不全が挙げられる。結膜脂肪斑は、結膜に生じる、良性の、黄褐色の増殖成長である。結膜脂肪斑は、眼の刺激及び痒み、ドライアイ、結膜の炎症を引き起こし、眼の外見に影響を与える場合がある。炎症を起こした結膜脂肪斑は、眼の刺激を引き起こすか又は見苦しくなり、外科的な除去を必要とする場合もある。しかしながら、術後の瘢痕は結膜脂肪斑と同じように美容的に好ましくなく、外科的な除去後に結膜脂肪斑再生物が生じる場合がある。同種骨髄移植BMTは、悪性及び非悪性血液病のための確立した処置で、何万もの患者に毎年実施される。幹細胞移植片中の成熟したドナーT細胞は、有益な免疫効果の主要な媒介物であるが、移植片対宿主病GVHDの誘発、BMT患者の罹患率及び死亡率の大きな原因ともなる。寛容する抗原提供細胞によって発現されたタンパク質を、移植されたドナー由来T細胞が認識するときに、GVHDは生じる。したがって、この認識は、ドナーT細胞の活性化、増殖及び分化を誘発し、結果として寛容する標的組織への細胞性及び炎症性の攻撃をもたらす。皮膚炎、腸炎及び肝炎をもたらす急性又は慢性GVHDが、BMT後100日以内に、生じる。眼の症状としては、視覚不良、異物感、灼熱感、重度の光過敏、慢性結膜炎、ドライアイ及び眼痛が挙げられる。医薬組成物本発明は、また、少なくとも1つの一般式Iの化合物を含む医薬組成物に関する。この化合物は、単独、又は、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされて存在する。薬学的に許容される賦形剤は、組成物の有効成分と両立し、医薬組成物を投与される人に有害でないものである。このような適した賦形剤が2つ以上の混合物が、使用されてもよい。局所的な眼での適用のために、活発成分として、治療上有効量の本発明の化合物、又は、薬学的に許容されるこれらの塩を、従来の眼科学的に許容できる医薬品賦形剤と組み合わせて、局所的な眼での使用に適したユニット剤形での調製により、医薬組成物を調製することができる。治療上有効量は、通常、液体製剤中約00001から5w/vの間、好ましくは約0001から10w/vである。本発明の有効な化合物の有効量は、特定の化合物、及び、処置される状態に依存する。適切な量の選択は、十分に、当業者の知識の範囲内である。米国特許No.5,474,979は、そのすべての内容が参照により本明細書に組み込まれるが、眼科学的に許容できる医薬品賦形剤の例を提供する。この特許は、Allergan社によって製造されたRestasis登録商標、シクロスポリンA0.05で使用される賦形剤を開示する。"