"カチオン交換体、疎水性ゲルおよび/または染料ゲルを用いる1種またはそれ以上のネガティブクロマトグラフィー法および/または1種またはそれ以上のネガティブ吸着法により1種またはそれ以上の夾雑タンパク質を枯渇させる1種またはそれ以上の工程段階を含む、フィブリノゲン含有溶液の精製方法。スルホメチル基S型、スルホプロピル基SP型、カルボキシメチル基CM型または他の好適な負荷電官能基をカチオン交換体の官能基として使用する、請求項1に記載の方法。疎水性ゲルが官能基としてアルキル基を含む、請求項1に記載の方法。疎水性ゲルが官能基としてフェニル基または誘導体化フェニル基を含む、請求項1に記載の方法。疎水性ゲルが官能基としてプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはオクチル基を含む、請求項3に記載の方法。青色染料ゲルを染料ゲルとして使用する、請求項1に記載の方法。赤色または緑色染料ゲルを染料ゲルとして使用する、請求項1に記載の方法。染料ゲルが、BlueHyperD、MimeticBlueAgarose、MimeticBlueSAP6XL、MimeticBlue1P6XL、BlueTrisacrylPlusLS、BlueUniflow、BlueSepharose6FF、BlueSepharoseCL6B、RedSepharoseCL6B、FractogelTSKAFGreenおよび/またはMatrexgelGreenAである、請求項1、6または7の何れかに記載の方法。ネガティブクロマトグラフィー法および/またはネガティブ吸着法を5.5~9のpHで行う、請求項1~8の何れかに記載の方法。ネガティブクロマトグラフィー法の貫流液中またはネガティブ吸着法の上清中のフィブリノゲンの収率が≧50、好ましくは≧70である、請求項1~9の何れかに記載の方法。ネガティブ吸着法またはクロマトグラフィー法を含む工程段階を、フィブリノゲンへのプラスミノゲンの結合を弱める物質の存在下に行う、請求項1~10の何れかに記載の方法。血液、トランスジェニック動物の乳汁、もしくは培養上清から得られた混合物またはそれらから得られた画分を出発材料として使用する、請求項1~11の何れかに記載の方法。ヒト血漿、血漿画分またはクリオプレシピテートを出発材料として使用する、請求項12に記載の方法。フィブリノゲンを沈殿させる1種またはそれ以上の工程段階を含む、請求項1~13の何れかに記載の方法。グリシンまたは他のアミノ酸による1種またはそれ以上の沈殿を含む、請求項14に記載の方法。官能基としてリジンまたはリジン類似体を有するゲル材料上でプラスミノゲンを除去する1種またはそれ以上の工程段階を含む、請求項1~15の何れかに記載の方法。感染性粒子を枯渇させそして/または除去するための1種またはそれ以上の工程段階を含む、請求項1~16の何れかに記載の方法。以下の工程段階:血漿分画の調製、水酸化アルミニウム上への吸着、例えばウイルスのような感染性粒子の不活性化、沈殿、さらなる精製および/または不活性化段階、ネガティブクロマトグラフィー法および/またはネガティブ吸着法、限外濾過、滅菌濾過を組み合わせる、請求項1~17の何れかに記載の方法。請求項1~18の少なくとも1項に記載のように製造されたフィブリノゲン調製物。FXI含有量がOD280320当り≦1、好ましくは≦0.2ngである、請求項19に記載のフィブリノゲン調製物。FXII含有量がOD280320当り≦20、好ましくは≦10ngである、請求項19に記載のフィブリノゲン調製物。t-PA含有量がOD280320当り≦0.02、好ましくは≦0.01ngである、請求項19に記載のフィブリノゲン調製物。液体状態で30°Cで1ヶ月間貯蔵した後の低分子量フィブリノゲン分解フラグメントの割合が3未満である、請求項19に記載のフィブリノゲン調製物。フィブリン接着剤を生成するための、請求項19に記載のフィブリノゲン調製物の使用。フィブリンマトリックスを生成するための、請求項19に記載のフィブリノゲン調製物の使用。製剤成分NaCl、クエン酸Na3、ArgもしくはArg×HClおよびCaCl2、またはそれらとアミノ酸およびアミノ基含有芳香族化合物のような他の製剤成分との混合物を含む、請求項19~25の何れかに記載のフィブリノゲン調製物。従って、本発明は、安定性の高いフィブリノゲンを良好な収率で与えるフィブリノゲンの精製方法を示すという目的に基づいている。驚くべきことに、工業的規模でも経済的に実施することができ、かつ溶液中での安定性が著しく増大したフィブリノゲンをもたらす精製方法を見出した。従って、本発明は、1種またはそれ以上の夾雑タンパク質を、有機カチオン交換体、疎水性ゲルおよび/または染料ゲルを用いた1種またはそれ以上のネガティブクロマトグラフィー法および/または1種またはそれ以上のネガティブ吸着法により枯渇させる1種またはそれ以上の工程段階を含む、フィブリノゲンの精製方法に関する。本発明はさらに、上記の工程段階により得ることができ、そして室温で貯蔵した後の改善された安定性、および/またはフィブリノゲン分解プロテアーゼまたはそのプロ酵素の減少した含有量が顕著であるフィブリノゲン調製物に関する。本発明で提案される豊富な染料リガンドを担持する種々の染料ゲルは、種々のタンパク質を枯渇させることができ、高いフィブリノゲン安定性を有するフィブリノゲン含有溶液の製造を可能にする。しかしながら、TCP、BaSO4およびAlOH3のような僅かに可溶性の無機塩の使用は、本発明のフィブリノゲン調製物をもたらさない。しかしながら、本発明のゲル材料は、TCP、BaSO4およびAlOH3のような僅かに可溶性の無機塩と組み合わせて採用することもできる。30°Cで貯蔵したときの低分子量フィブリノゲン分解フラグメントの割合は、フィブリノゲンの安定性の尺度と考えられる。これらの分解フラグメントは、サイズ排除クロマトグラフィーにより、主フィブリノゲンピークよりも小さい分子量ピーク4または≦ピーク4を有するピークとして測定される。フィブリノゲン調製物は、液体状態で30°Cで貯蔵したときのフィブリノゲン分解フラグメントピーク4または≦ピーク4の絶対比が1ヵ月後に3未満、より好ましくは2.5未満であるならば、本発明の意味の範囲内で安定であると考えられる。本発明の意味の範囲内での精製は、クロマトグラフィー精製工程またはバッチ吸着工程であってよい。有用であることが判明した方法は、1種またはそれ以上の沈殿段階により、純度が50w/w、より好ましくは70wwであるフィブリノゲン調製物を初めに製造し、次いでカチオン交換体、疎水性ゲルおよび/または染料ゲルを用いる1種またはそれ以上のネガティブクロマトグラフィー法および/または1種またはそれ以上のネガティブ吸着法により、そして適切ならば追加の上記工程により、さらに精製する方法である。従来技術の方法と、本発明のネガティブクロマトグラフィーまたはネガティブ吸着工程段階とは根本的に異なり、該工程段階では、比較的小さい割合のフィブリノゲンだけが結合するか、またはフィブリノゲンが全く結合せず、従ってフィブリノゲンがクロマトグラフィー分離においてカラムを通過するように条件が選択される。こうして、フィブリノゲンの主たる部分は貫流液中に、または吸着の場合には上清中に存在する。本発明の工程段階の利点は、特に、フィブリノゲンの構造および機能性を妨害せず、これに加えて高い収率をもたらす条件の選択が可能であることである。本発明の工程段階では、特に沈殿による予備精製後に、副次的成分だけを実質的に結合して除去することが必要なので、カラム直径が小さく、かつ技術装置が簡単なためにコスト効果的の良い工業的実施が可能である。これと比較して、これまで記載されたフィブリノゲン結合によるクロマトグラフィー/吸着は幾つかの欠点を有する。フィブリノゲンが結合されるので、大きいカラム直径が必要であり、そして大量のゲル材料のため、また技術装置がより複雑なために、方法をよりコスト高にする。例えば塩勾配による溶出は、工業的製造に対して障害となることもある。若干の場合には、過酷な化学的条件の採用も必要であり、これは結合したフィブリノゲンを再び溶出するために、フィブリノゲンの機能性を妨害することがある。また若干の場合には、上記の精製はフィブリノゲンの大量損失を伴うか、またはそのほかに、例えばコストが高いか、また市販されていないゲル材料のために、フィブリノゲンの工業的精製には経済的に採用することができない。下記の実施形態が有利であることが判明した:カチオン交換体の官能基として、スルホメチル基S型、スルホプロピル基SP型、カルボキシメチル基CM型または好適な負荷電官能基を用いる、上記方法。カチオン交換体が、FractogelEMDSO3650、Macro-Prep50S、CM-SepharoseCL-6B、FractogelEMDCM-650、FractogelTSKCM-650、FractogelEMDCM、SPSepharose、HeparinFractogelおよび/またはHeparinSepharoseCL6Bである、上記方法。疎水性ゲルが官能基としてアルキル基を含む、上記方法。疎水性ゲルが官能基としてフェニル基または誘導体化フェニル基を含む、上記方法。疎水性ゲルが官能基としてプロピル、ブチル、フェニル、ヘキシルまたはオクチル基を含む、上記方法。用いられる疎水性ゲルが、MacroPrepMethyl、FractogelEMDPropyl650、FractogelEMDButyl650、FractogelTSKButyl650、MacroPreptButyl、ButylCellufine、ButylSepharose4FastFlow、ButylS-Sepharose6FastFlow、HIC-FractogelPentyl、HexylS-Sepharose6FastFlow、OctylSepharoseCL4B、HIC-FractogelHW65Propyltentakel、FractogelHW65Butyltentakel、FractogelTA650、PhenylSepharoseHP、PhenylSepharoseFastFlow、PhenylalaninSepharose、ThiopropylSepharose6Bおよび/またはPyridylS-Sepharose6FastFlowである、上記方法。染料ゲルが青色染料ゲルである、上記方法。染料ゲルとして赤色または緑色染料ゲルを用いる、上記方法。染料ゲルが、BlueHyperD、MimeticBlueAgarose、MimeticBlueSAP6XL、MimeticBlue1P6XL、BlueTrisacrylPlusLS、BlueUniflow、BlueSepharose6FF、BlueSepharoseCL6B、RedSepharoseCL6B、FractogelTSKAFGreenおよび/またはMatrexGelGreenAである、上記方法。ネガティブクロマトグラフィーおよび/またはネガティブ吸着の工程段階中に6~9のpHを用いる、上記方法。ネガティブクロマトグラフィーおよび/またはネガティブ吸着の工程段を0~30°Cの温度で行う、上記方法。ネガティブクロマトグラフィーの貫流液中またはネガティブ吸着の上清中のフィブリノゲンの収率が≧50、好ましくは70≧である、上記方法。ネガティブ吸着またはクロマトグラフィーを含む工程段階を、フィブリノゲンへのプラスミノゲンの結合を弱める物質の存在下に行う、上記方法。血液、トランスジェニック動物の乳汁、もしくは培養上清から得られた混合物またはそれら得られた画分からを出発材料として使用する、上記方法。ヒト血漿、血漿画分またはクリオプレシピテートを出発材料として使用する、上記方法。1種またはそれ以上の工程段階が水酸化アルミニウム処理を含む、上記方法。フィブリノゲンを沈殿させる1種またはそれ以上の工程段階を含む、上記方法。グリシンまたは他のアミノ酸による1種またはそれ以上の沈殿を含む、上記方法。官能基としてリジンまたはリジン類似体を有するゲル材料上でプラスミノゲンを除去する1種またはそれ以上の工程段階を含む、上記方法。感染性粒子を枯渇させそして/または除去するための1種またはそれ以上の工程段階を含む、上記方法。1つの工程段階が低温殺菌および/またはUV照射および/またはナノ濾過である、上記方法。1種またはそれ以上の限外濾過および/または透析を含む、上記方法。100~500kDaの分子量限界カットオフを有するフィルター材料を用いる、上記方法。1種またはそれ以上の滅菌濾過を含む、上記方法。以下の工程段階:血漿画分の調製、水酸化アルミニウム上への吸着、例えばウイルスのような感染性粒子の不活性化、沈殿、さらなる精製および/または不活性化段階、ネガティブクロマトグラフィー法および/またはネガティブ吸着法、限外濾過、滅菌濾過を組み合わせる、上記方法。さらなる精製がプラスミノゲンを除去する工程段階である、上記方法。個々の工程段階の順序および/または数を変更する、上記方法。本発明方法の一つを用い、そしてネガティブクロマトグラフィー法および/またはネガティブ吸着法を行った後、除去すべき血漿タンパク質をカチオン交換体、疎水性ゲルおよび/または染料ゲルから溶出させる、上記方法。FXII、プラスミノゲン、t-PAおよび/またはFXIを単離するための上記方法。上記方法の一つにより得ることのできるフィブリノゲン調製物。上記方法の一つにより製造されたFXII、プラスミノゲン、t-PAおよび/またはFXI。上記方法の一つにより製造されたフィブリノゲンを含む、医薬調製物の製造。上記方法の一つにより製造されたフィブリノゲンを含む、医薬調製物。FXI含有量がOD280320当り≦1、好ましくは≦0.2ngである、医薬フィブリノゲン調製物。FXII含有量がOD280320当り≦20、好ましくは≦10ngである、医薬フィブリノゲン調製物。t-PA含有量がOD280320当り≦0.02、好ましくは≦0.01ngである、医薬フィブリノゲン調製物。液体状態で30°Cで貯蔵したときのフィブリノゲン分解フラグメントの絶対比が1ヶ月後に、3未満、好ましくは2.5未満である、上記の医薬調製物。上記方法の一つによる医薬調製物の使用。フィブリノゲン欠乏状態を処置するための、上記方法の一つによる医薬調製物の使用。フィブリン接着剤の成分としての、上記方法の一つによる医薬調製物の使用。フィブリンマトリックスを生成するための、上記方法の一つによる医薬調製物の使用。診断助剤の成分としての、上記方法の一つによる医薬調製物の使用。多成分接着剤の成分としての、上記方法の一つによるフィブリノゲン調製物。製剤成分アルギニンを含む、多成分接着剤の成分としての、上記方法の一つによるフィブリノゲン調製物。製剤成分NaCl、クエン酸Na3、Arg×HClおよびCaCl2を含む、多成分接着剤の成分としての、上記方法の一つによるフィブリノゲン調製物。製剤成分NaCl0~500mM、クエン酸Na30~50mM、ArgもしくはArg×HCl0.05~2.0mol/lおよびCaCl20.1~5mM、またはその混合物を含む、多成分接着剤の成分としての、上記方法の一つによるフィブリノゲン調製物。上記方法の一つによるフィブリノゲン成分、FXIII成分およびトロンビン成分を別個の成分として含む、フィブリン接着剤。FXIIIが添加された上記方法の一つによるフィブリノゲン成分およびトロンビン成分を別個の成分として含む、フィブリン接着剤。さらなる実施形態は請求項の主題に関し、また本発明のさらなる特徴および利点は、好ましい実施形態ならびに実施例および図面の記載から明らかである。図面の簡単な説明は以下のとおりである:図1は、SEC-HPLCによるフィブリノゲン分解フラグメントに関するフィブリノゲン含有溶液の調査を示す。フィブリノゲン分解フラグメントの比率は30°Cで2ヶ月間の貯蔵で著しく減少でき、従って溶液中でのフィブリノゲンの安定性がネガティブ疎水性クロマトグラフィー法の使用により増大することが示されている。図1a:貯蔵する前に、ネガティブクロマトグラフィー方式での疎水性相互作用クロマトグラフィーによりさらに精製したフィブリノゲン含有溶液。図1b:30°Cで2ヶ月間貯蔵した後に、ネガティブクロマトグラフィー方式での疎水性相互作用クロマトグラフィーによりさらに精製したフィブリノゲン含有溶液。図1c:30°Cで2ヶ月間貯蔵した後に、ネガティブクロマトグラフィー法方式での疎水性相互作用クロマトグラフィーによるさらなる精製はしなかったフィブリノゲン含有溶液。フィブリノゲンという用語は、好ましくは、例えばヒト血液から得られたフィブリノゲンを含む混合物から精製することができるヒトフィブリノゲンを意味する。血液から得られた混合物という用語は、例えば全血液、血漿、血漿画分または血漿沈降物を意味する。ヒト血漿、クリオプレシピテートまたはコーン画分1からのフィブリノゲンが特に好ましい。フィブリノゲンはプールした献血血漿または個々の献血の両方から単離することができる。ヒトフィブリノゲンはトランスジェニック動物から得ることもできる例えば、US5,639,940参照。細胞培養物から組換え発現により得られたフィブリノゲン例えば、US6,037,457も包含される。従って、適切な培養上清またはそれから製造した画分からフィブリノゲンを単離することが可能である。しかしながら、フィブリノゲンを含み、かつ動物血液から、好ましくは哺乳類のような動物例えば、ブタ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジおよびイヌから得られた混合物から単離されたフィブリノゲンも包含される。夾雑タンパク質は、本発明の目的で、フィブリノゲンの他に血漿中に存在するか、またはトランスジェニック動物のミルク中または細胞培養上清中に出現する、原則として全てのタンパク質を意味する。それらは、特に好ましくは、タンパク質分解によりフィブリノゲンを分解できるフィブリノゲン分解タンパク質、またはフィブリノゲンのタンパク質分解のために予め活性化する必要のあるフィブリノゲン分解タンパク質の前駆体プロ酵素、またはフィブリノゲン分解プロテアーゼの活性化剤である。タンパク質分解過程は、フィブリノゲンよりも小さく、かつ低い分子量を有するであろうフィブリノゲン分解フラグメントを生じる。これに関して、タンパク質分解によりフィブリノゲンのアルファおよび/またはベータおよび/またはガンマ鎖に作用を及ぼすことが可能である。血漿からのフィブリノゲンの精製において可能な夾雑物として生じることのある、可能なフィブリノゲン分解または分解補助タンパク質またはその前駆体は、例えば血漿、FXIa、カリクレイン、VII因子活性化プロテアーゼFSAP、FXIIa、t-PAおよびu-PAのようなプラスミノゲンアクチベーター、トロンビン、メタロプロテアーゼMMP、ならびにそれらに対応する前駆体、例えばプラスミノゲン、FXI、プレカリクレイン、sc-FSAP、FXII、sct-PAおよびscu-PAのような一本鎖プラスミノゲンアクチベーター、プロトロンビンおよびpro-MMPなどである。以下の本文において、活性化された形態と個々の前駆体とは区別されない;これに対し、活性化されていないプロ酵素との呼称は、両方の形態を識別するために用いられる。本発明方法は、好ましくは、本発明の工程段階により、フィブリノゲン分解プロテアーゼまたはそのプロ酵素または活性化剤の枯渇を可能にする。後者は、例えばプラスミノゲン、FXI、プレカリクレイン、pro-MMPおよび/またはプラスミノゲンアクチベーターsct-FSAおよびscu-PAであってよい。枯渇率DFは、上記1、好ましくは2を超える。この場合、FXIIの割合を最小に、特に好ましくはOD280320当り≦20ngにすることが可能である。FXIの割合は、OD280320当り≦1ng、特に好ましくはOD280320当り≦0.2ngまで最小にすることができる。プラスミノゲンの割合は、特に好ましくはOD280320当り≦5ngまで低下することができる。本発明の工程段階は、特に好ましくは、溶液中でのフィブリノゲンの安定性および特にフィブリノゲン鎖のタンパク質分解安定性を増大する。フィブリノゲン分解タンパク質によるタンパク質分解によって生成した分解フラグメントは、種々の方法により検出することができる。ここで挙げることのできる例は、還元性またはSDSポリアクリルアミドゲル中での分画、例えばSECサイズ排除クロマトグラフィーHPLCのようなHPLC方法、または免疫学的方法である。残留フィブリノゲンの活性は、ClaussActaHaematol17237246に記載された伝統的方法によりさらに測定することができる。フィブリノゲン分解タンパク質の枯渇は、、例えば特に抗体を用いて例えば公知のELISA酵素結合免疫吸着アッセイまたはRIA放射性免疫アッセイ方法などにおいて検出することができる。抗体は、例えば、上記または他の公知のフィブリノゲン分解プロテアーゼに対して向けられる抗体である。しかしながら、枯渇は、フィブリノゲン溶液を液体状態で貯蔵し、そして貯蔵後の分解反応の程度を、同様に貯蔵した非枯渇対照と比較して測定することによって非特異的に検出することもできる。クロマトグラフィーは、本発明の目的で、フィブリノゲン含有溶液を液体流により固定相を通過させ、混合物の成分が分画されるようになる分離方法を意味する。固定相は、好ましくはクロマトグラフィーカラムの充填材料である。以下でゲル材料とも呼ばれる充填材料は、好ましくは、ほぼ同じ大きさの多孔質または非多孔質の粒子であって、その上に分離方式を確立する官能基が共有結合して存在するものから構成された固体支持体材料からなる。支持体材料は、アガロース、セルロースおよびデキストラン好ましくはSepharoseおよびSephadexのような生体高分子、または例えばメタクリレート、ポリビニルベンゼン、ポリスチレンおよびポリアクリルアミドのような合成重合体、または例えばシリカまたは多孔質ガラスビーズのような無機重合体であってよい。精製されるべきフィブリノゲンが夾雑タンパク質と共に溶解している溶液、ならびに可能な洗浄緩衝液および平衡化緩衝液は、移動相と考えられる。ネガティブクロマトグラフィー法は、本発明の目的では、固定相および移動相が、一方ではフィブリノゲンと固定相との反応が可能な限り弱いかまたはゼロであるが、他方では1種またはそれ以上の夾雑タンパク質と固定相との相互作用がフィブリノゲンよりも強いように選択されることを意味する。従ってフィブリノゲンは主にカラムを通過し、そして主に貫流液中に存在する>50が、1種またはそれ以上の夾雑タンパク質は主に固定相に結合される。カラムを前処理し、そしてフィブリノゲン含有溶液を負荷する前にゲル材料の必要条件により平衡化する。平衡化緩衝液は、好ましくはフィブリノゲンおよび夾雑タンパク質を溶解する溶液に相当する。フィブリノゲン損失を最小にするために、カラムの移動層になお残留するフィブリノゲンを洗浄除去することができ、洗浄緩衝液の体積はカラムの体積にほぼ相当する。洗浄緩衝液は、好ましくはフィブリノゲンおよび夾雑タンパク質が溶解された溶液に相当する。洗浄緩衝液は、適切ならば貫流液と組み合わせることができる。固定相に結合した夾雑タンパク質は適切な溶液で溶出することができ、そして場合によっては、固定相をコスト節約の理由でネガティブクロマトグラフィー精製段階のために再生により数回使用することができる。再生が不可能であるかまたは経済的でない場合には、使用したゲル材料を捨てる。しかしながら、固定相から溶出したタンパク質は、必要に応じて、これらのタンパク質成分を単離するための出発材料として用いることもできる。タンパク質濃縮物は、場合によっては、さらなる精製または工程段階により得ることができる。こうして、例えば特にプラスミノゲン、FXIIおよびFXIを製造することが可能である。原則として、本発明の目的のネガティブクロマトグラフィー法の固定相のためには、選択された条件下で、特に移動相を選択して、1種またはそれ以上の夾雑タンパク質とフィブリノゲンよりも強い相互作用に携わることのできる任意の材料を使用することが可能である。本発明の工程段階に含まれるゲル材料固定相は、カチオン交換体、疎水性ゲルまたは染料ゲルに属するものである。例えば、Amersham、Bio-Rad、Biosepra、Merck、PreseptiveBiosystems、Pharmacia、Prometic、TosoHaasから市販された広範囲のカラム材料または予備充填カラムがあり、これらは本発明に含まれると考えられる。いくつかについては本実施例において試験されている。移動相は個々のゲル材料に適合すべきである。しかしながら、一般的に5~9のpH値が好ましい。同様に、選択すべき緩衝系は、この範囲でよく緩衝するものである。その例はクエン酸塩、リン酸塩およびトリス緩衝液であろう。ネガティブクロマトグラフィー工程段階は、好ましくは2~30°Cの温度で行われる。カチオン交換体は、固定相であるイオン交換マトリックス上の荷電した位置に対して移動相の塩イオンとタンパク質とが競合するイオン交換クロマトグラフィーのゲル材料である。カチオン交換体は負に荷電した基を含み、そしてタンパク質の正に荷電した基と相互作用することができる。相互作用は、カチオン交換体およびタンパク質の表面上の正電荷の強さおよび電荷蜜度に依存する。タンパク質は、特定のアミノ酸の塩基性および酸性側鎖基のために、正または負の電荷を有し、全電荷状態は溶液のpHに依存する。しかしながら、アミノ酸組成のほかに、翻訳後修飾例えば、リン酸化なども、タンパク質の正および負の電荷が互いに中和し合う等電点PIに寄与する。フィブリノゲンは約5.1~5.5のpIを有し、むしろ酸性タンパク質に属する。好ましいカチオン交換体は、交換機能基官能基、リガンドとして、スルホメチル基S型、スルホプロピル基SP型またはカルボキシメチル基CM型を含む。しかしながら、本発明の目的で、カチオン交換体の範囲は、他の好適な負荷電官能基を有するもの、例えばヘパリンなども包含する。カチオン交換体は記載されており、また例えば、Amersham、Bio-Rad、Biosepra、Merck、PreseptiveBiosystems、Pharmacia、PrometicまたはTosoHaasなどから市販されている。好ましいカチオン交換体は、その場で消毒できるゲル、例えば、FractogelEMDSO3650Merck、Macro-Prep50SBioRad、CM-SepharoseCL-6BPharmacia、FractogelTSKCM-650Merck、FractogelEMDCM、SPSepharose、HeparinFractogelMerckまたはHeparinSepharoseCL6BPharmaciaなどである。カチオン交換体のための移動相は、好ましくは、選択されたpHで、フィブリノゲンが負の全体電荷を有しそして/または選択されたイオン強度で固定相の負荷電基と僅かな相互作用しか生じない一方で、固定相と1種またはそれ以上の夾雑タンパク質との間では依然として相互作用が生じるように選択すべきである。pHは、5.5を超え、特に好ましくは約6.0を超えて約9までであるべきである。使用できる塩は、カチオン交換体のために当業者に公知の塩、特に好ましくはNaClである。塩濃度は、好ましくは0~400mM、特に好ましくは0~100mMである。疎水性クロマトグラフィーは、通常は比較的に高い塩濃度で固定相の疎水性官能基リガンドと相互作用するタンパク質の非極性表面領域を含む。固定相としての疎水性ゲルは、合成重合体、シリカ、例えばSepharoseのような生体高分子であり、その表面は官能基としての疎水性リガンドにより修飾されている。疎水性リガンドは、好ましくは、直鎖状または分枝状であってよい1~24個を超える炭素原子Cを有するアルキル基、または芳香族リガンドである。可能な例は、C1メチル、C3プロピル、C4ブチル、C5ペンチル、C6ヘキシルおよびC8オクチル基、特に好ましくはプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルまたはオクチル基である。アルキル基は、例えばチオプロピルのように誘導体化されていてもよい。フェニル基、または例えばフェニルアニリンのようなフェニル誘導体を含む芳香族化合物も、好ましく用いられる。フェニル基は、例えばアルキル鎖に結合されていてもよい。例えばピリジル基またはその誘導体を用いることも可能である。疎水性材料は当業者に広く知られており、そして例えば会社Amersham、Bio-Rad、Biosepra、Merck、PreseptiveBiosystems、Pharmacia、PrometicおよびTosoHaasから市販されている。固定相として特に好ましいものは、例えば、MacroPrepMethylHICSupportBioRad、FractogelEMDPropyl650Merck、FractogelEMDButyl650Merck、FractogelTSKButyl650Merck、MacroPreptButylHICSupportBioRad、ButylCellufineAmicon、ButylSepharose4FastFlowPharmacia、ButylS-Sepharose6FastFlowPrototypPharmacia、HIC-FractogelPentylMerck、HexylS-Sepharose6FastFlowPrototypPharmacia、OctylSepharoseCL4BPharmacia、FractogelHW65PropyltentakelMerck、FractogelHW65ButyltentakelMerck、FractogelTA650Merck、PhenylSepharoseHighPerformancePharmacia、PhenylSepharoseFastFlowPharmacia、PhenylalaninSepharosePharmacia、ThiopropylSepharose6BPharmaciaまたはPyridylS-Sepharose6FastFlowPharmaciaである。タンパク質と固定相との疎水性相互作用は、官能基により影響されるだけでなく例えば、アルキル基の鎖長の増加は疎水性を高める、移動相を形成する溶液のイオン強度およびpHによっても大きく影響される。移動相は、用いられる固定相に応じて、1種またはそれ以上の夾雑タンパク質が固定相との疎水性相互作用に携わる一方で、好ましくは50を超えるフィブリノゲンがカラムを通過するように選択すべきである。可能な移動相および個々の固定相への適合は当業者に公知である。pHは、好ましくは約5を超えて約9までの範囲にある。疎水性相互作用クロマトグラフィーのための公知の塩、特に好ましくは、例えばNaCl、Na2SO4およびNH42SO4を用いることができる。塩濃度は、固定相に応じて0.01~2Mの範囲にある。アフィニティークロマトグラフィーは、支持体マトリックスに結合された個々のリガンド上へのタンパク質またはタンパク質基の特定の可逆的吸着を含む。好適な支持体マトリックスは、例えばSepharose4BまたはSepharoseCLのようなSepharoseであり、そのOH基はリガンドの共役結合に使用することができる。他の好適な支持体は、例えばFractogel、Sephacryl、Cellufineなどのような公知の重合体である。可能なモノ特異性リガンドは、例えば、フィブリノゲン分解タンパク質、例えばプラスミノゲン、FXI、プレカリクレインその他に対して向けられた抗体である。しかしながら、抗体のためのアフィニティーカラムは工業的規模ではコスト高であり、そして条件付でのみ経済的に効果的に採用することができる。従って、1種またはそれ以上の夾雑タンパク質、特にフィブリノゲン分解タンパク質を結合する染料は、基特異的リガンドとして本発明の枠内に包含される。青色、赤色および緑色染料は特に好ましい。相当する材料の例は、BlueSepharose6FFPharmacia、BlueSepharoseCL6BPharmacia、BlueTrisacrylPlusLABiosepraCiphergen、BlueHyperDBiosepraCiphergen、MimeticBlueAgarosePrometic、MimeticBlueSAP6XLPrometic、MimeticBlue1P6XLPrometic、RedSepharoseCL6BPharmacia、FractogelTSKAFGreenMerckおよび/またはMatrexgelGreenAAmiconである。さらなる染料ゲルは当業者に十分周知であり、そして市販されているか、または適切な製造業者が製造できる。移動層のpHは、好ましくは約5~約9の範囲にある。本発明の目的のネガティブ吸着法negativeadsorptionは、フィブリノゲン含有溶液を好適な容器中で、選択された条件下でフィブリノゲンを少量しか、または全く吸着しないが、1種またはそれ以上の夾雑タンパク質を吸着する吸着材料と混合することを意味する。従って、フィブリノゲンは主として溶液中に残る。この工程は不連続またはバッチ工程としても知られている。吸着のための条件は、夾雑タンパク質が吸着材料に結合するのに十分な時間および機会を有するように選択すべきである。例えば、混合は、例えば好適な温度で注意して攪拌することにより行うことができる。好適な温度は、例えば2~30°Cである。吸着材料としては、選択された条件下で1種またはそれ以上の夾雑タンパク質を結合でき、かつフィブリノゲンを少量しか、または全く吸着しない任意の材料を採用することが可能である。これらの材料はクロマトグラフィーについて上記したゲル材料を包含し、従ってカチオン交換体、染料ゲルおよび疎水性ゲルのグループに属する。好ましい溶液は、クロマトグラフィーのための好ましい移動層に相当する。結合した夾雑タンパク質を有する吸着材料は、当業者に公知の方法によりフィブリノゲン含有溶液から分離することができる。好ましくは、濾過、遠心および/または沈降の方法を挙げることができる。吸着材料は、好ましくは夾雑物を溶出し、緩衝液を交換することにより再生することができ、従って2回以上使用することができる。吸着材料から溶出したタンパク質は、必要ならば、これらのタンパク質成分を単離するための出発材料として用いることもできる。従って場合によっては、さらなる精製または工程段階によりタンパク質濃縮物を得ることが可能である。このようにして、例えば特にプラスミノゲン、FXII、XIの濃縮物を製造することが可能である。バッチ方式のネガティブ吸着法は、ネガティブクロマトグラフィー法に加えて、またはその代わりに使用できる技術である。本発明の工程段階は、工程収率を貫流液または上清で≧50、好ましくは≧70にすることができる。もう一つの実施形態において、フィブリノゲンへのプラスミノゲンの結合を弱める物質を本発明方法中に、特に本発明の工程段階中に加える。フィブリノゲンは、例えばプラスミノゲンのような他のタンパク質と結合する傾向を有することが知られている。これは、プラスミノゲンのような夾雑物を繰り返して部分的に共精製することに導く。共精製は結合弱化物質により最小にすることができる。これらの物質は、好ましくは、トラムキサム酸、PAMBAp-アミノメチル安息香酸、リシンおよび他のリシン類似体に加えて、ε-アミノカプロン酸のようなε-アミノ酸を包含する。フィブリノゲンの濃縮および単離は複数の工程段階を通常必要とすることが知られており、これら個々の精製段階の多数の可能な組み合わせがある。従って、本発明方法は、1種またはそれ以上の本発明の工程段階のほかに、フィブリノゲンの精製の従来技術に原則的に見出されうる追加の工程段階を含むことができ、これらは本発明に包含される。フィブリノゲンの精製における技術水準は既に十分に説明されているので、対応して引用した特許および刊行物は本発明に包含される。好ましい工程段階は、フィブリノゲンの大部分が結合し、その欠点である溶出の必要のあるクロマトグラフィーまたは吸着を含まない。好ましい実施形態において、本発明方法は、精製すべきフィブリノゲン含有溶液に水酸化アルミニウムAlOH3を添加する1種またはそれ以上の工程段階を含む。AlOH3はプロトロンビン複合体の因子を主に吸着し、例えば遠心および/または濾過により除去することができる。好ましい実施形態において、フィブリノゲンを沈殿させる1種またはそれ以上の工程段階を含む。沈殿のためにグリシンまたのアミノ酸を添加することが好ましい。グリシン濃度が十分に高いならば、これはフィブリノゲンの直接沈殿1段階グリシン沈殿に導く。しかしながら、別のまたは追加の可能性は、実施例にも示すように、フィブリノゲンが上清中に実質的に残り、かつ沈殿したタンパク質が例えば遠心により除去されるように第一段階におけるグリシン濃度を選択し、そして第二段階においてだけグリシン濃度の上昇により主要量のフィブリノゲンを沈殿させることである。上記のように、アミノ酸グリシンの代わりに他のアミノ酸を用いることも可能である。ここではアラニン、グルタミン、グルタミン酸を例としてあげることができる。しかしながら、他の公知の沈殿剤例えば、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウムまたはポリエチレングリコールなどをこの場合に用いることも可能である。もう一つの好ましい実施形態において、本方法は、リシンリガンドまたは類似のリガンドを有するゲルによりプラスミノゲンを枯渇させる1種またはそれ以上の工程段階を含む。その例は、Lysine-Sepharose、Lys-HyperD、Lys-Fracrogel、Aminohexyl-Sepharoseまたはその他であろう。これはプラスミノゲンの有利な枯渇に導き、該枯渇は、液体形態で貯蔵したときのフィブリノゲンの安定性に対して有利な効果をさらに有することがある。加えて、プラスミノゲンの枯渇は、フィブリノゲン濃縮物をフィブリン接着剤として採用する場合にも有利である。もう一つの好ましい実施形態において、本方法は、潜在的に存在する感染性粒子、例えばウイルスなどを実質的に可能な限り不活性化または枯渇させる1種またはそれ以上の工程段階を含む。フィブリノゲンをヒト血漿から単離する場合には、これは本発明方法の特に好ましい構成要素である。感染性粒子の不活性化または枯渇は、当業者に公知の技術により行うことができ、これらが本発明に包含される。例えば低温殺菌、乾燥状態での加熱、ナノ濾過、化学薬品添加例えば界面活性剤、照射またはその組み合わせなどの方法がある。もう一つの好ましい実施形態において、本方法は、限外濾過および/または透析を包含する1種またはそれ以上の工程段階を含む。これらの方法は、フィブリノゲン含有溶液の緩衝性を変えるため、すなわち該溶液の成分を変えるため、またはタンパク質溶液を濃縮するために有利に採用することができる。これは、貯蔵または医薬調製物としての使用に適する製剤成分を選択するために、精製段階の準備に、または本発明の工程段階の最後に特に好ましい。限外濾過は、例えばWO93/17776にも記載されているように、夾雑タンパク質を通過させるがフィブリノゲンを保持するフィルターの選択により夾雑タンパク質を枯渇させる機会をさらに与える。例えば300kDaの分子量限界カットオフを有する好適なフィルターを選択する場合には、本発明の工程中に、フィブリノゲン分解タンパク質も枯渇できることを示すことが可能である。従って、特に好ましい実施形態において、50~500kDaの分子量限界カットオフを有するフィルターが限外濾過のために使用される。もう一つの好ましい実施形態において、本方法は滅菌濾過を含む。これは、医薬調製物を製造する工程の最後に価値がある。好ましい実施形態において、本発明方法を提供するために、複数の上記工程段階を1種またはそれ以上の本発明の工程段階と組み合わせる。さらに、個々の工程段階の順序を変えることができる。例えば沈殿のような個々の工程段階を2回以上適用することが可能である。特に好ましい実施形態において、組み合わせは、1種またはそれ以上の本発明の工程段階のほかに、少なくともAlOH3吸着段階、1段階および/または2段階グリシン沈殿、および低温殺菌を含む。これらの工程段階は、リシンリガンドを有するアフィニティーカラムと有利に組み合わせられる。精製が終了した後、溶液成分を貯蔵に適する溶液で置き換える。例えば透析、限外濾過などのような可能な方法は当業者に公知であり、これらは本発明に包含される。精製に続いて滅菌濾過することができる。本発明の精製方法は、特に好ましい実施形態において、下記の工程段階からなる:-血漿画分の調製-水酸化アルミニウム上への吸着-例えばウイルスのような感染性粒子の不活性化-沈殿-さらなる精製および/または不活性化段階-1種またはそれ以上のネガティブクロマトグラフィー法または1種またはそれ以上のネガティブ吸着法-限外濾過および/または透析濾過-滅菌濾過特に好ましい実施形態において、さらなる精製段階は、例えばLys-Sepharoseのようなリシンリガンドを有するアフィニティーカラムを包含する。個々の工程段階の数および順序は変更できる。従って、例えば、1種またはそれ以上のネガティブ吸着またはクロマトグラフィー段階をAlOH3吸着の直後に行うことができる。これは、可能なフィブリノゲン分解タンパク質が早期時点で枯渇されるので、精製の後続工程でフィブリノゲンの安定性に対して有害効果をもはや及ぼすことができないという利点を有するであろう。特に好ましい実施形態を用いる場合には、添加したフィブリン溶解阻害剤を存在させることなく、フィブリノゲンを液体状態で30°Cにおいて1ヶ月間貯蔵する際のフィブリノゲンの分解を著しく減少させることができ、すなわちこの貯蔵時間中に著しく少ない低分子量分解フラグメントが生成する。SEC-HPLC分析により、残余のピークと比較した低分子量分解フラグメントの割合の増加は、リジンリガンドを有するアフィニティーカラムを使用する特に好ましい実施形態の使用の場合に、2.5未満、特に1.5~2未満であることを示すことができる。従って、本発明はまた、液体状態で30°Cにおいて1ヶ月間貯蔵した後にSEC-HPLCにより測定して、2.5~3未満のフィブリノゲン分解フラグメントを示すか、または全ピーク面積に対して約1.5~2.5未満しか分解フラグメントが増加しないようなフィブリノゲン濃縮物またはフィブリノゲンを含有する対応する医薬調製物に関する。本発明はさらに、本発明方法により精製されたフィブリノゲンに関する。こうして得られたフィブリノゲンまたは相当する医薬調製物は、好ましくはD280320当り≦0.2ngのFXIおよび/またはOD280320当り≦20ngのFXIIおよび/またはOD280320当り≦0.02ng、好ましくはD280320当り≦0.01ngのt-PAだけを含む。ネガティブクロマトグラフィー法またはネガティブ吸着法によりフィブリノゲンを精製するための本発明の工程段階中に染料カラム、カチオン交換体または疎水性ゲルに結合した夾雑タンパク質は、これらのタンパク質成分を単離するための出発材料として用いることができる。対応するタンパク質濃縮物は、対応するゲル材料からのタンパク質の溶出、および場合によっては、さらなる精製または工程段階により得ることができる。このようにして、例えばプラスミノゲン、t-PA、FXIIまたはFXIの濃縮物を製造することが可能である。従って、本発明は、1種またはそれ以上の血漿タンパク質を結合し、選択された条件下でフィブリノゲンを結合せず、そしてカチオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーまたは染料カラム上でのアフィニティークロマトグラフィーに適するゲル材料を用いる1種またはそれ以上のタンパク質の単離方法、および対応する医薬調製物の製造方法に関する。本発明はさらに、本発明方法により精製されたフィブリノゲンを含む医薬調製物の製造に関する。可能な医薬調製物は当業者に公知であり、そして添加物は予定する使用に依存する。当業者に公知の製剤成分およびフィブリノゲンの静脈内投与に適する製剤成分は、フィブリン接着剤として使用するためのものとは異なるだろう。中間貯蔵が凍結乾燥物として、液体状態または凍結状態で予定される場合には、特定の添加物についても考慮しなければならない。タンパク質のために公知の凍結乾燥助剤は、例えば、スクロース、マンノース、ガラクトースおよびグルコースのような糖類、例えばマンニトールもしくはソルビトールのような糖アルコール、またはアミノ酸である。該貯蔵形態のための可能な製剤成分は、1価金属塩例えば、塩化ナトリウムまたはカリウム、2価金属塩例えば、塩化マグネシウムまたはカルシウム、アミノ酸例えば、グリシン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、イソロイシン、炭水化物例えば、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、セルロース、ソルビトール、マンニトールおよびグリコサミノグリカン、界面活性剤例えば、ポリオキサマーまたはポリソルベート、カオトロピック剤例えば、尿素およびグアニジンまたはその誘導体、例えばアプロチニン、アルファ-2-アンチプラスミン、アルファ-2-マクログロブリン、アルファ-1-アンチプラスミン、C1-インヒビター、アンチトロンビン、プラスミノゲンアクチベーターインヒビターPAI、トロンビン活性化線溶抑制因子TAFIのような阻害剤、およびε-アミノカプロン酸のようなリシン類似体、血漿タンパク質例えば、FXIII、抗酸化剤例えば、アスコルビン酸、緩衝物質例えば、アルギニンのようなアミノ酸、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、トリスヒドロキシメチルアミノメタントリス、グリシルグリシン、炭酸塩、重炭酸塩のような緩衝系、またはその混合物である。pHは好ましくは約5~約8である。例えば下記の添加物は、フィブリノゲン溶液を液体フィブリン接着剤の成分として製造するために適する:NaCl0~400mM、クエン酸Na30~50mM、L-Arg×HCl0.1~1M、CaCl20~10mM、および場合によっては、アミノ酸、炭水化物および界面活性剤のような他の安定剤。本発明はさらに、本発明の1種またはそれ以上の工程段階を含む本発明方法により精製されたフィブリノゲンを含む医薬調製物の使用に関する。可能な用途は当業者に公知であり、そして本発明方法により製造されたフィブリノゲンは、フィブリノゲンの全ての公知用途に採用することができる。医療的使用は、好ましくはヒトに関するが、獣医学における使用も包含される。本発明のフィブリノゲン調製物は、フィブリノゲン欠乏状態の治療に一般的に適する。これらの欠乏状態は、広範囲の傷、重症出血、広範囲の火傷、薬剤投与または重症肝臓障害例えば、肝臓実質損傷のために損なわれた合成を伴うによる凝固の病理学的活性化消費性凝固障害、DIC播種性血管内凝固とも呼ばれるに関連して起きることがある。上記の後天性低フィブリノゲン血症血中フィブリノゲンの減少および無フィブリノゲン血症血中フィブリノゲンの不存在または大きな減小のほかに、肝臓でのフィブリノゲン合成の不存在または大きな減小により生じることのある先天性無フィブリノゲン血症または低フィブリノゲン血症の稀なケースもある。低フィブリノゲン血症および無フィブリノゲン血症に対しては、相当するフィブリノゲン欠乏状態を補うために、本発明のフィブリノゲン調製物は患者に好ましくは静脈内注射される。用量は、生じている欠乏のレベルにより決定される。フィブリノゲンは、いわゆるフィブリン接着剤の重要成分としてフィブリン療法において大きな重要性を有する。安定化されたフィブリンは、フィブリノゲンとトロンビンおよび助剤、例えばカルシウムおよびFXIIIとを組み合わせて形成されるので、フィブリン接着剤は血液凝固の最終段階を促進する。医学において十分周知であるフィブリン接着剤の広範な可能な使用がある例えば、SierraJournalofBiochemicalsApplication7309352MartinowitzSpotnitzThrombosisandHaematasis78661666RadosevichらVoxSanguinis72133143参照。重要なものとしては、止血、傷の閉鎖、縫合の密封および創傷の治癒が挙げられる。局所手術内止血は、実質性器官、および心臓血管の専門分野において重要である。肝臓または脾臓の傷害後の重度の出血でさえも、このようにして止めることができる。フィブリン接着剤は皮膚の創傷皮膚移植を包含するの閉鎖および固定、ならびに縫合例えば、十二指腸断端上の密封のためにも採用される。例としては、プラスチック硬膜代用品の密封および空洞の密封における使用、ならびに硬膜浸出液の一時的軽減処置のために胸膜を接着するための使用を挙げることができる。フィブリン接着剤は、骨、軟骨および腱のような結合組織の接着にも有利に使用することができる。トラネキサム酸のような物質が神経毒性であることが証明されているので、合成フィブリン溶解阻害剤を含まないフィブリノゲン成分は、例えば硬膜密封のための用途において特に、その利点を有する文献:MGSchlagRHopfUZifkoおよびHRedlActaNeurochir1446369。しかしながら、フィブリン接着剤は、術後癒着の防止にも用いられる。フィブリノゲンは、フィブリンマトリックスを製造するための成分としても使用することができる。このような担体材料は、例えば成長因子例えば、骨誘導タンパク質と一緒に骨および/または軟骨再生のためのマトリックスとして、抗生物質、細胞増殖抑制剤、抗炎症性添加物および/または創傷の治癒を促進する添加物のような活性物質を緩徐に放出するためにも使用することができる。この担体は、フィブリンと他の材料との混合物からなっていてもよい。フィブリンマトリックスは、バイオテクノロジーにおいて、例えば組織工学tissueengineeringにおける細胞および組織のための支持体材料および培養基として、または例えばバイオセンサーのようなインプラントを包むためのような広範囲の可能な用途を有する。本発明のフィブリノゲンは、診断助剤の成分としても使用することができる。本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、該実施例は限定的な効果を有することを意図するものではない。実施例1この実施例は、カチオン交換体材料および疎水性ゲルおよび染料ゲルが、フィブリノゲン含有溶液をネガティブクロマトグラフィー法により、フィブリノゲン安定性が出発材料と比較して増大するように精製できることを示す。フィブリノゲン出発材料は、EP0103196に記載されたように低温殺菌フィブリノゲン濃縮物を生成し、そしてグリシンの添加により分画沈殿させることによって調製した。富フィブリノゲン沈殿を最初に好適な水性溶剤50mMNaCl;20mMクエン酸三ナトリウム水和物、0.05NaN3pH7.3に溶解し、ネガティブクロマトグラフィー法を用いるさらなる沈殿段階のための出発材料として用いた。この精製段階に用いるクロマトグラフィーカラムφ0.7cmに、1.0mlの個々のゲル材料をそれぞれ充填した。個々のゲル材料に応じて、カラムを緩衝液1~3の一つで平衡化した。緩衝液1:50mMNaCl、50mMリン酸ナトリウムpH7.4、カチオン交換体および比較カラムのため緩衝液2:100mMNaCl、50mMリン酸ナトリウムpH6.5、疎水性ゲルのため緩衝液3:50mMリン酸ナトリウムpH、pH7.4、染料ゲルのため30~40mlのフィブリノゲン含有溶液を適切な緩衝液1~3表1参照に対して透析し、適切な緩衝液でOD280320が10になるまで希釈した。15mlのこのフィブリノゲン溶液を各カラムに負荷し、カラムを1.0mlの個々の緩衝液1~3でそれぞれ洗浄した。カラム貫流液および洗浄溶液を一緒にした。最初に、出発材料と比較した収率単位を測定するために光学濃度を光度計により280および320nmで測定したOD280320。この材料のアリコートを保留し、後続の貯蔵試験の分析のために0値を決定した。個々の洗浄溶液と一緒にしたカラム貫流液、および出発材料を、100mMNaCl、20mMクエン酸Na3、5L-ArgpH7.2を含む緩衝液に対して透析し、その1ml部分をナトリウムアジド最終濃度0.05と混合した。別に精製したこれらのフィブリノゲン調製物および対照としての出発材料を、30°Cで貯蔵時間3ヶ月まで貯蔵した。フィブリノゲンの安定性を各場合に適切な貯蔵期間後にSEC-HPLCにより測定した。これは、存在するタンパク質および分解産物をそれらの分子量により分画するサイズ排除クロマトグラフィーSECを伴う。フィブリノゲンのタンパク質分解から生じた低分子量フラグメントは、新しいピークフラグメントピーク4、および場合によっては増大した保持時間を有するさらなる新しいピークとして出現する。フラグメントピーク≦ピーク4の面積を測定し、全ピークのパーセンテージとして計算した。この値を貯蔵開始前0値の小部分に関して補正し、こうして求めた値を結果として表1に示す。それらは、加速条件下での貯蔵中の分解フラグメントの増加を反映する。分析は、SECカラムTOSOHAASからのTSKgelG4000SWXL、7.5×300mmを備えた適切なHPLC装置を用いて行った。タンパク質およびタンパク質フラグメントを、適切な貯蔵時間後に20~25°Cの好適な流通緩衝液runningbuffer中で0.5ml/分の流速で分画した。タンパク質およびタンパク質フラグメントピークを280nmで検出した。図1は、例として、SECHPLCを用いた典型的なフィブリノゲンの分離をもたらす。それは、Lysine-SepharoseクロマトグラフィーおよびネガティブHICにより精製したフィブリノゲン含有溶液の貯蔵開始前t=0、ゼロ値、図1a、および30°Cで2ヶ月間貯蔵後t=2ヶ月、図1bの分画を示す。これに対し、図1cは、ネガティブHICにより追加精製しなかったフィブリノゲン含有溶液の30°Cで2ヶ月間貯蔵後t=2ヶ月の分画を示す。このフィブリン含有溶液のゼロ値t=0は図1aと同様の分離結果を示すので示されていない。約15~16分の保持時間の主ピークはフィブリノゲンに相当する。約24分の保持時間を有するピーク、およびより長い保持時間を有するピークは、フィブリノゲン分解フラグメントである。図1bから、30°Cで2ヶ月間貯蔵後の分解フラグメントに相当するピーク下の面積は、疎水性ゲルの使用によって、同様に30°Cで2ヶ月間貯蔵したがHIC精製を行わなかった対照材料図1cと比較して、明確に減少することを示す。分解フラグメントピークの出現がより少ないことは、ネガティブHICによる精製後のフィブリノゲン安定性がより大きいことの証拠と考えるべきである。表1は、保持時間の増加を伴う分解フラグメントの割合の増加が、上記ゲル材料の一つを用いたフィブリノゲンの精製後に、対照出発材料よりも明確に少ないことを示す。これにより実証された、対照ネガティブクロマトグラフィー前の出発材料と比較して増大したフィブリノゲン安定性は、1ヵ月後すでに認められることが明らかであるが、その後はより長い貯蔵時間につれてさらに増大した。ある場合は、カラム材料の種々の質を、より長い3ヶ月間の貯蔵時間後に区別することも可能であるが、その傾向は2ヵ月後すでにみられていた。技術水準で公知のプラスミノゲンを枯渇させるLysine-Sepharose4Bを用いたアフィニティークロマトグラフィーと比較してさえ改善を達成することができた。通常約70を超える極めて良好な収率結果も、全体を通して達成された。この実施例が、多数の異なるカチオン交換体、疎水性ゲルおよび染料ゲルを用いて、フィブリノゲンの実質的な安定化、従って分解フラグメントの減少の達成が可能であることを明らかにしたので、上記クロマトグラフィー分離原理の群からの支持体材料を用いて、改善された安定性結果を達成できると予想することができる。実施例2この実施例では、他の青色染料ゲルを試験し、加えて、実施例1で用いたカチオン交換体FragtogelEMDSO3650Mおよび疎水性ゲルのphenylSepharoseHPのための移動相の条件を変更した。改善されたフィブリノゲン安定性は、貯蔵試験中の分解フラグメントの形成の減少によって再び確認された。フィブリノゲン分解タンパク質またはその不活性前駆体プロ酵素が枯渇されるかどうかについて、追加の検査を行った。用いた出発材料は、実施例1の類似の精製に加えて、好適な水性溶剤50mMNaCl;20mMクエン酸三ナトリウム、0.05NaN3pH7.4、表4の緩衝液SM中に回収した後、好ましくは該溶剤に対して透析した後に、Lysine-Sepharose上でも精製したフィブリノゲンであった。用いたクロマトグラフィーカラムQuiagenからのカラム本体φ=0.7cm、h=2.5cmに、1.0mlの個々のゲル材料をそれぞれ充填した。ゲル材料を適切な緩衝液で平衡化した。平衡化緩衝液:1a50mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH751b50mMNaCl20mMクエンNa3酸005NaN3pH652a50mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH652b50mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH702c50mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH752f150mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH753a50mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH653b50mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH753c500mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH753d1000mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH75フィブリノゲン含有負荷溶液は、場合によってはNaClの添加およびpHの調節により上記の緩衝条件に近似させ、そして自由滴下速度で1mlのゲル当り150または300OD280320のタンパク質量に相当する溶液体積に近似させた表2参照。カラムを各場合に適切な緩衝液で洗浄した。洗浄溶液を個々の貫流液と一緒にし、50mMNaCl、20mMクエン酸Na3、0.05NaN3pH7.4に対して4°Cで一夜透析した。貯蔵は30°Cにおいて種々の長さの貯蔵時間で行った。SEC-HPLCによる分析は、実施例1に記載したように行った。加えて、プラスミノゲン、XI因子およびXII因子の量をELISA測定により測定した。サンドイッチELISAにおいて、初めにプラスミノゲンをマイクロタイタープレート上の捕獲抗体として固定化したウサギポリクローナル抗体DadeBehringからのIgGに結合させた。検出は、同じポリクローナル抗体であるがペルオキシダーゼで標識したものにより行った。KordiaLifeSciencesオランダからのFXIIELISAキットを用い製造業者の情報に従って、FXIIを測定した。同様に、KordiaLifeSciencesオランダからのFXIELISAキットを用い製造業者の情報に従って、FXIを測定した。枯渇率DFは、出発材料中でOD280320当り測定されたタンパク質例えば、プラスミノゲン、FXIまたはFXIIの量と、個々のネガティブクロマトグラフィー後のフィブリノゲン含有溶液中でOD280320当り測定されたタンパク質の量との比である。結果を表2に示す。表2から明らかなように、他の試験した青色染料ゲルの使用も、分解フラグメントの出現の減少の達成、すなわちフィブリノゲン安定性の増大の達成のために好適であった。同時に、例として、ネガティブクロマトグラフィー法による分離パラメーターを適切に選択して、プラスミノゲン、FXIおよびFXIIを-異なる程度で-枯渇できることが実証された。予想されたように、カチオン交換体FractogelEMDSO3650は移動相緩衝液成分への依存性を示す。移動相のpHが約6.5~7.5である場合には、プラスミノゲンおよびFXIIの良好な枯渇を実証することができた。分離のpHが上昇すると、液体状態で貯蔵したときのフィブリノゲン安定性は低下するが、出発材料よりも依然として明らかに良好であった。他方において、低いpH値では、フィブリノゲンと官能基との相互作用が増加し、そしてカラム材料上に部分的に吸着されるためにフィブリノゲンの収率が低下するので、カチオン交換体FractogelEMDSO3650Mの場合の移動相のための最良条件は、約7.0のpH範囲にあった。塩濃度の同時上昇はフィブリノゲンの収率を改善するが、安定性は同時に幾分低下した。従って、FractogelEMDSO3650Mの場合には、塩濃度は好ましくは約50mMNaClの範囲に留まり、そして例えば1mlのゲル当り負荷される量を増加すると収率が改善するであろう。同様に、他のカチオン交換体のための移動相の最適組成を試験することも可能である。疎水性ゲルはまた、移動相への、特に緩衝液の塩濃度への依存性を示した。例えばphenylSepharoseHPを用いて、プラスミノゲンの枯渇およびフィブリノゲン安定性の上昇を広範囲のNaClにわたって良好なフィブリノゲン収率で達成することが可能であった。選択された条件の全ては出発材料と比較して上昇した安定性に導くので、原則として複数の条件を有利に用いることができる。他の疎水性ゲルおよび/または他の緩衝液条件を同様の方法で最適化することができる。さらに、この実施例における異なるゲルは、異なる程度でプラスミノゲン、FXIIおよびFXIの枯渇に寄与する。特に効果的なFXIIの枯渇は、例えば青色染料ゲルBlueHyperDおよびBlueTrisacrylPlusLS、BlueSepharose6FF、またはFractogelEMDSO3650Mのようなカチオン交換体によって達成可能であった。実施例3この実施例では、他の染料、カチオン交換体および疎水性ゲル、ならびにネガティブクロマトグラフィー法のための条件を試験した。出発材料は実施例2に記載したのと同じ精製スキームにより得た。カラムを、既に実施例2に記載したように下記の詳細な個々の緩衝液で平衡化した。150mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH75250mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH703a1000mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH753b2000mMNaCl20mMクエン酸Na3005NaN3pH75出発材料を適切な緩衝液に対して透析した。クロマトグラフィーカラムに、各場合に自由滴下速度で1mlのゲル当り150または300OD28032015mlまたは30mlと同等を負荷した。カラム貫流液の最初の0.5mlを捨てた。このカラムを1mlのそれぞれの緩衝液で洗浄した。この洗浄溶液をそれぞれの貫流液と一緒にし、50mMNaCl、20mMクエン酸Na3、0.05NaN3pH7.4に対して4°Cで一夜透析した。貯蔵は、30°Cにおいて2ヶ月間の貯蔵時間で行った。SEC-HPLCによる分析を実施例1に記載したように行い、そしてプラスミノゲン、FXIIおよびFXIの枯渇率DF測定を実施例2に記載したように行った。表3は、他の試験した青色染料ゲルの使用も、分解フラグメントの出現の減少のために適することを示す。実施例4実施例1~3で好適であることが判明したいくつかのゲル材料を、大規模でのそれらの有用性について試験した。このために、約500mlのゲル体積を有するクロマトグラフィーカラムを用い、フィブリノゲン含有溶液をポンプでカラムに通した。フィブリノゲン含有溶液は、低温殺菌フィブリノゲン溶液である限り、EP003196によるクリオプレシピテートを仕上げ処理することによって得た。低温殺菌したフィブリノゲン溶液を3倍体積の希釈溶液水中の3.5g/lNaCl;5.88g/lクエン酸三ナトリウム二水和物、pH7.5と混合した。1リットルの希釈溶液当り90gのグリシンを攪拌しながら加えた。得られた沈殿を遠心または濾過により除去し、捨てた。上清を、場合により固体L-Lys×HClまたはEACAの添加により200mML-Lys×HClまたはEACAにした。1リットル当りさらに75gのグリシンを加えた。富フィブリノゲン沈殿を遠心により得て、さらに処理するまで-25°Cで貯蔵した。さらに精製および痕跡量のプラスミノゲンを枯渇させるために、富フィブリノゲン沈殿を溶解し、そして好ましくは緩衝液20mMクエン酸三ナトリウム、50mMNaClpH7.4、場合により0.05NaN3を保存剤として含むに対して透析し、リガンドとしてL-リジル基を有するマトリックスを充填したクロマトグラフィーカラムにポンプで通した。貫流液を後続段階にさらに用いた。フィブリノゲンの安定性に影響を与える他の夾雑物を除去するために、フィブリノゲン含有溶液を種々の第二クロマトグラフィーカラムにポンプで通し、場合によっては緩衝液組成を予め変更した:A:フィブリノゲン含有溶液を、誘導体化したアントラキノン染料例えば、Prometicからの青色アガロースなどをリガンドとして担持するマトリックスを有する青色染料ゲルを充填したカラムφ6cm、体積約735mlに直接ポンプで通し、貫流液を集めた。このカラムを1カラム体積CVの緩衝液20mMクエン酸三ナトリウム、50mMNaClpH7.4、場合により0.05NaN3を保存剤として含むで洗浄した。B:フィブリノゲン含有溶液を0.1MHClの添加によりpH6.7に調節し、リガンドとしてSO3基を有するマトリックスFractogelEMDSO3650Mを充填したカラムφ6cm、体積約500mlまたはφ6cm、体積約147mlにポンプで通した。貫流液を集めた。このカラムを1CVの緩衝液20mMクエン酸三ナトリウム、50mMNaClpH6.5、場合により0.05NaN3を保存剤として含むで洗浄した。C:フィブリノゲン含有溶液を結晶質NaClの添加により1MNaClの最終濃度に調節し、リガンドとしてフェニル基を有する疎水性マトリックスphenyl-SepharoseHPを充填したカラムφ6cm、体積約500mlにポンプで通し、貫流液を集めた。このカラムを1CVの緩衝液20mMクエン酸三ナトリウム、1MNaClpH7.4、場合により0.05NaN3を保存剤として含むで洗浄した。D:フィブリノゲン含有溶液を結晶性NaClの添加により1MNaClの最終濃度に調節し、リガンドとしてブチル基を有する疎水性マトリックスMacroPreptButylHIC樹脂を充填したカラムφ7cm、体積約577mlにポンプで通し、貫流液を集めた。このカラムを1CVの緩衝液20mMクエン酸三ナトリウム二水和物、1MNaClpH7.4、場合により0.05NaN3を保存剤として含むで洗浄した。フィブリノゲン含有貫流液をそれぞれの洗浄溶液と一緒にし、そして初めに、使用に応じて好適な限外濾過工程により、OD280320=約2~200、好ましくは約20~160のタンパク質濃度にし、続いて次の成分:NaCl、クエン酸Na3×2H2O、L-Arg×HCl、場合によりCaCl2を含む溶液に対して透析することにより、フィブリノゲン調製物を製造した。最後の濃縮および滅菌濾過によりフィブリノゲン調製物を得て、これらをSEC-HPLC実施例1参照により30°Cで1ヶ月間貯蔵した後のフィブリノゲン分解フラグメントの含有量について試験した表4参照。これらの結果は、ネガティブクロマトグラフィー法の使用により大規模でも1ヶ月間の加速貯蔵後に生成した分解フラグメントδ≦ピーク4の差を2未満に減少することが可能であること、従って30°Cで貯蔵したときのフィブリノゲンの安定性が明確に上昇することを示す。実施例5この実施例では、バッチ方式で染料ゲルおよび疎水性ゲルを用いる二つのネガティブ吸着法を組み合わせた。フィブリノゲン含有溶液は、EP0103196に記載されたように出発材料としてのクリオプレシピテートをAlOH3で2回吸着することにより得た。特にフィブリノゲン分解タンパク質のような夾雑タンパク質を、バッチ方式でさらなる吸着を行うことにより減少/除去した。このために用いたゲル材料は、誘導体化したアントラキノン染料をリガンドとして有するBlueSepharose6FFであった。10gのフィブリノゲン含有溶液当り0.5gのフィルター-湿潤ゲルを加えた。後続の攪拌時間:90分。次いで染料ゲルを遠心により除去した25°Cおよび1500gで20分。フィブリノゲン含有上清をさらなるネガティブ吸着法に付した。このためにphenyl-SepharoseHPを用いた。このゲルは同様に10gのフィブリノゲン含有溶液当り0.5gの比で採用した。吸着に続いて、結合した夾雑タンパク質を有するゲル材料を遠心により除去した。後続の低温殺菌およびグリシン沈殿をEP0103196により行ったが、例外は沈殿を200mMリシルの存在下に行ったことであった。さらなる精製およびプラスミノゲンの除去のために、富フィブリノゲン沈殿を初めに好適な水性溶剤に溶解し、濾過し、そして好ましくは緩衝液20mMクエン酸三ナトリウム二水和物、50mMNaClpH7.4、場合により0.05NaN3を保存剤として含むに対して透析し、かつ約10の光学濃度に調節した後に、リガンドとしてL-リシル基を有するゲル材料を充填したクロマトグラフィーカラムにポンプで通した。フィブリノゲン含有溶液を、初めに、使用に応じて好適な限外濾過工程により、OD280320=約2~200、好ましくは約20~160のタンパク質濃度にし、続いて実施例4で述べた製剤成分を含む溶液に対して透析することにより、フィブリノゲン調製物を製造した。滅菌濾過によりフィブリノゲン調製物を得て、これらをSEC-HPLCで実施例1により安定性について試験した。これは、ピーク4およびより小さいピークに基づいて測定して、30°Cで1ヶ月間貯蔵した後およびゼロ値を減じた後に、<1.0の分解フラグメントの割合を明らかにした。この割合は、相当する対照仕上げ処理よりも明らかに小さい。この実施例により、溶液中でのフィブリノゲンの最大安定性を達成するために、バッチ方式でのネガティブ吸着法も使用できることを示すことが可能であった。さらに、複数のネガティブ吸着法の組み合わが可能であることが示された。さらに、ネガティブ吸着法および/またはネガティブクロマトグラフィー法による工程段階をフィブリノゲンの精製工程において、種々の点で合理的に統合可能であることが明らかである。従ってこの実施例では、前の実施例とは対照的に、ネガティブ吸着法を精製工程において極めて早期に、水酸化アルミニウム処理の直後に用いている。その後にのみ、低温殺菌、グリシンによる沈殿、およびLysine-Sepharoseによるさらなるプラスミノゲンの除去を行う。実施例6この実施例では、好適な孔径の選択による限外濾過によって、フィブリノゲン分解タンパク質をどの程度まで枯渇できるかを調べた。フィブリノゲン含有溶液は、低温殺菌沈殿の調製を含めてそこまで実施例1に従って進めることによって得た。さらなる精製およびフィブリノゲン分解タンパク質の枯渇のために、富フィブリノゲン沈殿を初めに好適な水性溶剤に溶解し、そして300kDaのカットオフを有する透析膜を用いて緩衝液20mMクエン酸三ナトリウム二水和物、50mMNaClpH7.4、場合により0.05NaN3を保存剤として含むに対して徹底的な透析濾過を行った。リガンドとしてL-リシル基を有するゲル材料を充填したクロマトグラフィーカラムに溶液をポンプで通すことにより、プラスミノゲンを除去した。フィブリノゲン含有溶液を、初めに、使用に応じて好適な限外濾過工程および膜カットオフ=300kDaにより、OD280320=約2~200、好ましくは約20~160のタンパク質濃度にし、続いて好適な製剤成分を含む溶液に対して透析することにより、フィブリノゲン調製物を製造した。最後の濃縮および滅菌濾過によりフィブリノゲン調製物を得て、これらをSEC-HPLC実施例1参照により貯蔵する前および30°Cで1ヶ月間貯蔵した後のフィブリノゲン分解フラグメントの含有量について試験した。これは、ゼロ値を減じた後に、従来の限外濾過による対照と比較して減少した分解フラグメントの割合を明らかにした。従って、300kDaのカットオフでの限外濾過により、さらなるフィブリノゲン分解タンパク質を枯渇でき、かつより安定なフィブリノゲン濃縮物を製造できることを示すことが可能であった。実施例7実施例1に記載したようにフィブリノゲン沈殿を調製し、Lys-Sepharose上でのネガティブクロマトグラフィー法によりさらに精製した。1リットルのフィブリノゲン溶液当り1モルの塩化ナトリウムにした後、butyl-Sepharoseを充填したクロマトグラフィーカラム上に該溶液を負荷した。カラムの貫流液を濃縮し、透析し、t-PA、プラスミノゲンおよびFXIの含有量について試験した。比較の仕上げ処理を対照として行ったが、butyl-Sepharose上でのネガティブクロマトグラフィー法は行わなかった。結果として、追加のHClがt-PA、プラスミノゲンおよびFXIの濃度を明確に減少すること、および30°Cで貯蔵した後に安定性が上昇することを示すことが可能であったHICを行った場合に、30°Cで1ヵ月後のフィブリノゲンフラグメントの割合は約20未満であった。実施例8実施例1に記載したようにフィブリノゲン沈殿を調製し、Lys-Sepharose上でのネガティブクロマトグラフィー法により精製した。さらにHICおよび/またはカチオン交換体により精製を行った。フィブリノゲン溶液を透析濾過および限外濾過により下記の製剤緩衝液中に移し、滅菌濾過後に30°Cでの加速貯蔵に付した:120mMクエン酸Na3100mMNaCl50glLArg×HClpH72220mMクエン酸Na3100mMNaCl70glLArg×HClpH72320mMクエン酸Na3100mMNaCl100glLArg×HClpH72420mMクエン酸Na3100mMNaCl50glLArg×HCl25mMCaCl2pH72520mMクエン酸Na3100mMNaCl70glLArg×HCl25mMCaCl2pH72620mMクエン酸Na3100mMNaCl100glLArg×HCl25mMCaCl2pH7274mMクエン酸Na3100mMNaCl50glLArg×HCl05mMCaCl2pH72812mMクエン酸Na3100mMNaCl50glLArg×HCl15mMCaCl2pH72920mMクエン酸Na3100mMNaCl50glLArg×HCl25mMCaCl2pH721020mMクエン酸Na3200mMNaCl50glLArg×HCl25mMCaCl2pH721120mMクエン酸Na3100mMNaCl70glLArg×HCl25mMCaCl2pH681220mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl1LHis25mMCaCl2pH721320mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl2LHis25mMCaCl2pH72144mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl05mMCaCl2pH721520mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl30mMアミノ安息香酸25mMCaCl2pH72164mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HClpH72174mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl2LHispH72184mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl2LHispH64194mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl2LHis05mMCaCl2pH72204mMクエン酸Na3100mMNaCl60glLArg×HCl25mMCaCl2pH72上記の製剤は極めて安定であり、フラグメント形成は極めて小さい程度でしか観察されなかった30°Cで1ヶ月間の貯蔵中に2未満のフラグメントδ≦ピーク4が生成する。これらの溶液は、液体状態で貯蔵でき、かつ2種またはそれ以上の成分からなるフィブリン接着剤の成分として役立てるのに適する。"