"生体から分離した被検試料について、下記~の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子の発現量を測定することを含む、初期乳がんの検出方法。ProteinBEX1ProteinLETM2mitochondrialprecursorMajorurinaryprotein6precursorVacuolarproteinsortingassociatedprotein18homologApolipoproteinEprecursorUncharacterizedproteinC10orf132homologApolipoproteinCIprecursorYEATSdomaincontainingprotein2Peroxisomeproliferatoractivatedreceptorgammacoactivatorrelatedprotein1BetataxilinRegulatorofGproteinsignaling11Centrosomalproteinof290kDaSterilealphamotifdomaincontainingprotein9likeATPdependentRNAhelicaseDDX18CathepsinGprecursor182kDatankyrase1bindingproteinBetabetacarotene910dioxygenaseCyclindependentkinaseinhibitor2Aisoform3CentromereproteinC1DynaminbindingproteinReceptortyrosineproteinkinaseerbB2precursorExtendedsynaptotagmin2Latenttransforminggrowthfactorbetabindingprotein2precursorLatexinMastermindlikedomainSerinethreonineproteinkinasePCTAIRE3Transcriptionelongationregulator1ZincfingerCCHCdomaincontainingprotein4Superkillerviralicidicactivity2like2Piwilikeprotein4KeratintypeIcytoskeletal10KeratintypeIcytoskeletal14LeukemiainhibitoryfactorreceptorTranscriptionelongationfactorSPT5前記、、~の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子の発現量を測定することを含む請求項1記載の方法。前記~の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子の発現量を測定することを含む請求項1記載の方法。前記、、~の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子の発現量を測定することを含む請求項3記載の方法。前記被検試料が血液試料である請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。遺伝子の発現量は、前記被検試料中に含まれる遺伝子産物の濃度に基づき測定される請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。本発明の目的は、初期乳癌を検出することが可能な、初期乳癌の検出方法を提供することである。本願発明者らは、細胞極性制御タンパク質であり幹前駆細胞の維持に関わるaPKC乳腺ノックアウトマウスを作製し、これが乳癌の早期病変を模擬する事、乳腺組織幹前駆細胞の異常増殖が起きている事を見い出した特許文献1。そして、後述の実施例に具体的に記載するように、その分子機構の解析から、ヒト乳癌の15~40程度で過剰発現し、実際に臨床的に診断治療標的となるErbB2分子の遺伝子転写制御を通じて、aPKCが乳腺組織幹前駆細胞の増殖を負に制御していることも見い出した。更に、ヒト乳癌検体104例の解析から、ヒト乳癌検体の152で、乳癌幹細胞マーカー、aPKC、ErbB2の異常など乳癌早期病変モデルマウス以下、モデルマウスと称すると酷似した異常を確認した。これらの一連の成果は、モデルマウスが、乳癌の診断マーカーや治療法の開発に利用できることを意味する。そして、このモデルマウスと、健常マウスの血中の各種ポリペプチドの量を測定し、両者の間で血中濃度に差があるポリペプチドを同定し、その遺伝子を特定することにより、初期乳癌のマーカーとなる遺伝子を特定し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、生体から分離した被検試料について、下記~の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子の発現量を測定することを含む、初期乳がんの検出方法を提供する。ProteinBEX1ProteinLETM2mitochondrialprecursorMajorurinaryprotein6precursorVacuolarproteinsortingassociatedprotein18homologApolipoproteinEprecursorUncharacterizedproteinC10orf132homologApolipoproteinCIprecursorYEATSdomaincontainingprotein2Peroxisomeproliferatoractivatedreceptorgammacoactivatorrelatedprotein1BetataxilinRegulatorofGproteinsignaling11Centrosomalproteinof290kDaSterilealphamotifdomaincontainingprotein9likeATPdependentRNAhelicaseDDX18CathepsinGprecursor182kDatankyrase1bindingproteinBetabetacarotene910dioxygenaseCyclindependentkinaseinhibitor2Aisoform3CentromereproteinC1DynaminbindingproteinReceptortyrosineproteinkinaseerbB2precursorExtendedsynaptotagmin2Latenttransforminggrowthfactorbetabindingprotein2precursorLatexinMastermindlikedomainSerinethreonineproteinkinasePCTAIRE3Transcriptionelongationregulator1ZincfingerCCHCdomaincontainingprotein4Superkillerviralicidicactivity2like2Piwilikeprotein4KeratintypeIcytoskeletal10KeratintypeIcytoskeletal14LeukemiainhibitoryfactorreceptorTranscriptionelongationfactorSPT5本発明によれば、従来法では検出が困難な早期の乳癌を検出することができる。従って、本願発明は、乳癌の早期治療や予防に大いに貢献するものと期待される。上記の通り、本発明の方法では、上記した~の遺伝子群から選ばれる少なくとも1つの遺伝子の発現量を測定することを含む。~の各遺伝子は公知であり、その塩基配列、cDNA配列及びそれによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、UniProtKBSwissProt及び/又はNCBIに登録されている。なお、異なるデータベースに登録されているものでも、NCBIのウェブサイトhttpwwwncbinlmnihgovgenbankindexhtmlから串刺し検索可能である。マウス及びヒトにおけるこれらの遺伝子のAccessionNoは下記表1の通りである。また、各遺伝子のcDNA配列及びそれがコードするポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号1~162の奇数番号に示す。それらからアミノ酸配列のみを取り出したものを配列番号1~162の偶数番号に示す。なお、下記表1に示されるように、同一の遺伝子であっても複数のcDNAアイソフォームが存在するものもある。これらの遺伝子は、下記実施例に具体的に記載するように、初期乳癌モデルマウスコントロール健常マウス比が12以上と075以下になったポリペプチドをコードする遺伝子をピックアップしたものである。これらの遺伝子のうち、~は、統計学的有意差が認められたものである。~は、同定できたポリペプチド数が少なく統計学的処理ができなかったものである。被検試料としては、血液試料血清試料、血漿試料を包含等の体液試料、癌組織からの生検試料等を挙げることができるが、患者の負担が少ない体液試料、特に血液試料が好ましい。下記実施例でも血中の濃度を測定している。遺伝子の発現量は、周知の種々の方法により測定することができる。例えば、下記実施例に具体的に記載する方法により、各遺伝子の遺伝子産物のタンパク質又はその断片下記実施例で測定した各ポリペプチドのアミノ酸配列は実施例に記載の濃度を測定することにより行うことができる。また、各遺伝子の遺伝子産物のタンパク質又はその断片のアミノ酸配列がわかっているので、これらのタンパク質又はその断片に対する特異抗体を常法により作製することができ、それらの特異抗体を用いた周知の免疫測定により上記各遺伝子の遺伝子産物のタンパク質又はその断片を定量することもできる。また、被検試料中の各遺伝子のmRNA量を測定することによっても行うことができるmRNA量を測定する場合には、被検試料は、乳房の生検試料が好ましい。mRNA量の測定は、常法によりmRNAからcDNAを調製し、その量を、各遺伝子に特徴的なプライマーセットサイズは18塩基~50塩基程度が好ましいを用いたリアルタイム検出PCR等の定量的遺伝子増幅法により測定することもできるし、各cDNAを標識し、上記遺伝子~を固定化したDNAチップと反応させてその結合量を測定する方法等により行うことができる。これらの方法は、遺伝子検査の分野において周知の方法であり、必要なキットも市販されているので、塩基配列がわかっている遺伝子については、当業者であれば容易に実施可能である。以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。1.モデルマウスとコントロールマウスの血液中の各種ポリペプチドの定量糖鎖親和性カラムによる血清糖鎖タンパク質分画をかました解析法糖鎖親和性カラムより詳細にはWheatGermAgglutininカラム、商品名GlycoproteinIsolationKitWGAを用い、以下の操作により特許文献1記載の初期乳癌モデルマウスの血液中の各ポリペプチドの濃度を測定した。なお、以下の記述でKOマウスは特許文献1に記載されたモデルマウスである。各5μLずつプールしたサンプル2ControlKOの各146w21w40wのペア↓各サンプル20mlずつ使用抗体カラムで高濃度血清タンパク質を除去↓脱塩、濃縮後タンパク質濃度75mg60mlに調整↓各サンプルを異なる質量のiTRAQ商品名試薬でラベルして混合↓糖鎖抗体カラムを用いて、糖たんぱく質と糖の結合していないタンパク質とで分画吸着分画と非吸着分画に分ける↓トリプシンで消化後2DLCSCXとC18で8フラクションに分ける。↓質量分析解析MALDITOFTOF4800用いた。ProteinPilotSoftware20解析を行った。その結果、モデルマウスコントロールマウス比が12以上と075以下であったポリペプチドをコードする遺伝子として、上記遺伝子~が同定された。各遺伝子についてのモデルマウスコントロールマウス比及び定量されたポリペプチド断片のアミノ酸配列の配列番号を下記表2に示す。SDSPAGEによる解析法4μLずつ採りプールしたものをサンプルとした。↓抗体カラムで高濃度血清タンパク質を除去ProteoPrep商品名20PlasmaImmunodepletionKitまたはProteomeLab商品名IgYR7SC↓脱塩、濃縮後約200250mgタンパク質を回収↓controlKOサンプルを異なる質量のiTRAQ商品名試薬でラベルして混合↓HPLCもしくはSDSPAGEによる分離分画HPLCによる分離分画iTRAQ商品名試薬でラベルをしたサンプル20μgをSMART商品名Systemを用いて分離分画を行った。カラムはゲルろ過カラムを用いた。SDSPAGEによる分離分画iTRAQ商品名試薬でラベルをしたサンプル20μgを10SDSポリアクリルアミドゲルで電気泳動を行い、レーンのゲルを分子量毎に20個に切り分けた。↓質量分析解析ESILITTOF:NanoFrontierLD日立ハイテク及びESIQTOF:QTofmicro、ESIQTOF:SYNAPTMSを用いて分析した。MascotのMSMSionsearchによる解析でタンパク質を同定した。その結果、モデルマウスコントロールマウス比が12以上と075以下であったペプチドをコードする遺伝子として、上記遺伝子~が同定された。各遺伝子についてのモデルマウスコントロールマウス比及び定量されたペプチド断片のアミノ酸配列の配列番号を下記表3に示す。なお、遺伝子番号とは、定量されたアミノ酸配列は同じであるが、異なるポリペプチドに由来するものである。その根拠は、実験手法的な問題で定量はできなかったが、とにそれぞれ特異的なマウスペプチドが多数同定されていることによる抗体この実験に用いた抗体は次の通りであった。抗aPKCマウスモノクローナル抗体、抗ALDHマウスモノクローナル抗体、抗ALDHウサギモノクローナル抗体ラットモノクローナル抗体免疫染色ヒト乳癌標本は、神奈川がん臨床研究情報機構から提供された。この実験に用いた研究プロトコールは、横浜市立大学及び神奈川がん臨床研究情報機構の倫理委員会により承認された。全ての患者から、組織サンプルを研究目的に使用することについて事前にインフォームドコンセントを得た。ヒト乳癌組織の凍結切片を10フォルマリンで固定した。一次抗体として、上記抗体を用いた。標識抗原は、DABplus商品名、DAKO社製で可視化し、切片をヘマトキシリンで対比染色した。上記操作は、具体的には次のように行った。一次抗体antiaPKCiotalambda1500dilantiALDH150dil凍結切片を10ホルマリンonice5min固定H2O5minPBS5min03hydrogenperoxidePBSRT30minPBS5min10正常ウサギ血清PBSでblocking37°C15min一次抗体4°CONPBS5min×3回ビオチン化抗マウス二次抗体10min以降,ヒストファインキット,ニチレイCode426032PBS5min×3回ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン5minニチレイCode426062PBS5min×3回DABplusDAKOCodeK3468核染脱水透徹封入結果を図1に示す。図1中、a、bはヒト乳癌標本中のaPKCλの代表的な免疫染色像である。aPKCλ陽性、同陰性。cはaPKCλ陰性癌のALDHの免疫染色像を示す。矢印はALDH陽性癌細胞を示す。スケールバーは100μmである。免疫蛍光法Cy3結合抗ウサギ抗体antiaPKCiotalambda1500dilantiALDH1200dilantiHER2150dil凍結切片を10ホルマリンonice5min固定H2O5minPBS5min10正常ウサギ血清TBSTでblockingRT30min一次抗体4°CONTBST5min×3回蛍光標識2次抗体DAPITBST5min×3回Prolonggoldantifadeで包埋。結果を図2に示す。図2中、a~cはaPKCλ陽性の乳癌症例、d~iはaPKCλ陰性の乳癌症例1、j~oは、さらなるaPKCλ陰性の乳癌症例2。aPKCλの染色及びDAPI染色並びにaPKCλとDAPIの統合画像。は、aPKCλ、ALDH、HER2の三重染色の統合画像。スケールバーは10μm。これらの2例の乳癌症例では、ほとんどの細胞はaPKCλを発現しておらず、ALDHとHER2の両方を発現していた。統計処理全ての統計解析は、PASWstatistics18商品名、SPSSInc製を用いて行った。P値が005の場合、有意であると考えた。この実験で用いた臨床病理学的パラメーターを下記表4に示す。臨床病理学的特徴とaPKCλ発現の相関を解析するために、χ2検定を用いた。症例数が5例未満の場合には、Fisherの正確確率検定を適用した。χ2検定及びFisherの正確確率検定の両方においてP値が005未満の場合、残差分析を行った。調製済残差の絶対値が196よりも大きい場合には、P値が005未満であることを反映していると考えた。下記表4に、この実験で調べた104例の乳癌症例の臨床病理学的パラメーター及びいくつかの組織化学パラメーターを列挙した。ER、PgR、HER2、ALDH及びaPKCλの発現を評価するために凍結組織切片を用いた。ERとPgRは、免疫組織化学反応性が10を超える場合に陽性であると定義した。HER2については、Hercep検定で2及び3を陽性と定義した。ALDHについては、腫瘍細胞の5が免疫組織化学反応性を示す場合に陽性とした。aPKCλについては、腫瘍細胞の20未満が免疫組織化学反応性を示す場合に陰性であると定義した。下記表5に臨床病理学的パラメーターとaPKCλ発現の相関を示す。臨床病理学的特徴上記表4に記載とaPKCλ発現の相関を解析するために、χ2検定を用いた。症例数が5例未満の場合には、Fisherの正確確率検定を適用した。aPKCλ陰性乳癌におけるHER2とALDHの相関も、Fisherの正確確率検定で解析した。χ2検定及びFisherの正確確率検定の両方においてP値が005未満の場合、残差分析を行った。調製済残差の絶対値が196よりも大きい場合には、P値が005未満であることを反映していると考えた。結果を下記表6に示す。表6に示されるように、aPKCλ陰性乳癌症例において、ALDHはHER2と正に相関していたP0015、Fisherの正確確率検定。ALDHHER2の調製済残差の値は25であった。"