"HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、前記抗体の少なくとも1つが、a抗体4785の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;b抗体4889の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;c抗体4935の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;d抗体5038の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;e抗体5082の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;f抗体5101の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;g抗体5106の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;h抗体5143の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;i抗体5144の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;ならびにj抗体5259の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体から成る群より選択される、抗体組成物。前記第一および第二組換え抗HER3抗体が、どちらも抗体a~jから選択される、請求項1に記載の抗体組成物。抗体a~jから選択される第三組換え抗HER3抗体を含む、請求項2に記載の抗体組成物。HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、前記第一および第二抗体のそれぞれが、請求項1で定義される抗体a~jの1つと同じエピトープに結合し、結合に関して競合する、抗体組成物。HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、前記抗体の少なくとも1つが、A抗体4785の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;B抗体4889の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;C抗体4935の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;D抗体5038の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;E抗体5082の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;F抗体5101の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;G抗体5106の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;H抗体5143の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;I抗体5144の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;ならびにJ抗体5259の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体から成る群より選択される、抗体組成物。前記第一および第二組換え抗HER3抗体が、どちらも抗体A~Jから選択される、請求項5に記載の抗体組成物。抗体A~Jから選択される第三組換え抗HER3抗体を含む、請求項6に記載の抗体組成物。HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、前記第一および第二抗体のそれぞれが、請求項5で定義される抗体A~Jの1つと同じエピトープに結合し、結合に関して競合する、抗体組成物。HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、a第一組換え抗体が、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から選択される任意の1つの参照抗体の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列とそれぞれ少なくとも90の配列同一性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、かつ第一組換え抗体が、前記参照抗体と同じエピトープに結合し、結合に関して競合する;ならびにb第二組換え抗体が、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から選択される任意の1つの参照抗体の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列とそれぞれ少なくとも90の配列同一性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、前記参照抗体がaの参照抗体とは異なり、かつ第二組換え抗体が、前記参照抗体と同じエピトープに結合し、結合に関して競合する、抗体組成物。2、3、4、5または6の組換え抗HER3抗体を含む、請求項1~9のいずれか一項に記載の抗体組成物。2つの組換え抗HER3抗体を含む、請求項10に記載の抗体組成物。第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一および第二抗体が、抗体:5082および5106、5082および4785、5082および5038、5082および5144、4889および5143、4785および5038、4785および5259、または5106および4889の重鎖CDR3および軽鎖CDR3配列を含む、請求項11に記載の抗体組成物。第一および第二抗体が、抗体:5082および5106、5082および4785、5082および5038、5082および5144、4889および5143、4785および5038、4785および5259、または5106および4889の重鎖CDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む、請求項12に記載の組換え抗体組成物。3つの組換え抗HER3抗体を含む、請求項10に記載の組換え抗体組成物。第一、第二および第三組換え抗体を含み、第一、第二および第三抗体が、抗体:5082、4785および5038、5082、5038および5106、5082、5106および5259、4889、5106および5259、または4889、5143および5259の重鎖CDR3および軽鎖CDR3配列を含む、請求項14に記載の組換え抗HER3抗体組成物。第一、第二および第三組換え抗体を含み、第一、第二および第三抗体が、抗体:5082、4785および5038、5082、5038および5106、5082、5106および5259、4889、5106および5259、または4889、5143および5259の重鎖CDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む、請求項15に記載の組換え抗HER3抗体組成物。4つの組換え抗HER3抗体を含む、請求項10に記載の組換え抗体組成物。前記組成物中の少なくとも1つの抗HER3抗体が、抗癌剤に結合した組換え抗HER3抗体を含む免疫複合体である、請求項1~17のいずれか一項に記載の組換え抗体組成物。抗癌剤が、細胞傷害剤、サイトカイン、毒素および放射性核種から成る群より選択される、請求項18に記載の組換え抗体組成物。請求項1~17のいずれか一項で定義される2つの抗体の結合特異性を有する二重特異性結合分子。前記2つの抗体の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む、請求項20に記載の二重特異性結合分子。請求項1~17のいずれか一項で定義される抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。請求項22に記載の核酸分子を含む発現ベクター。請求項22に記載の核酸分子または請求項23に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、前記核酸分子によってコードされる抗HER3抗体を発現することができる宿主細胞。抗HER3抗体の作製方法であって、請求項24に記載の宿主細胞を提供すること、前記宿主細胞を抗体の発現に適した条件下で培養すること、および生じた抗体を単離することを含む方法。少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗HER3抗体組成物の作製方法であって、それぞれ請求項1~17のいずれか一項で定義される組換え抗HER3抗体を発現することができる、少なくとも第一宿主細胞および第二宿主細胞を提供すること、第一および第二宿主細胞を第一および第二抗体の発現に適した条件下で培養すること、ならびに生じた少なくとも第一および第二抗体を単離することを含む方法。少なくとも第一および第二宿主細胞を別々のバイオリアクターで培養する、請求項26に記載の方法。少なくとも第一および第二宿主細胞を単一バイオリアクターで培養する、請求項26に記載の方法。請求項1~19のいずれか一項に記載の組換え抗HER3抗体組成物または請求項20もしくは21に記載の二重特異性結合分子、および少なくとも1つの医薬的に許容され得る希釈剤、担体または賦形剤を含む医薬組成物。ヒトまたは他の哺乳動物における癌の処置方法であって、請求項1~19のいずれか一項に記載の組換え抗HER3抗体組成物、請求項20もしくは21に記載の二重特異性結合分子、または請求項29に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。HER3の発現を特徴とする障害を有する患者の処置方法であって、請求項1~19のいずれか一項に記載の組換え抗HER3抗体組成物、請求項20もしくは21に記載の二重特異性結合分子、または請求項29に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む方法。HER3を発現する細胞においてHER3と他のErbBファミリー受容体との間のヘテロ二量体形成を低減するための方法であって、前記細胞を請求項1~19のいずれか一項に記載の組換え抗HER3抗体組成物、請求項20もしくは21に記載の二重特異性結合分子、または請求項29に記載の医薬組成物と接触させることを含む方法。HER3を発現する細胞の表面でHER3のインターナリゼーションを誘導する方法であって、細胞を請求項1~19のいずれか一項に記載の組換え抗HER3抗体組成物、請求項20もしくは21に記載の二重特異性結合分子、または請求項29に記載の医薬組成物と接触させることを含む方法。特定の抗HER3抗体が公知であり、一部の場合には臨床試験で検討されているという事実にもかかわらず、現在、治療用途のために承認されている抗HER3抗体はない。上記で概説したように腫瘍増殖の調節におけるHER3の極めて重要な役割を考慮して、HER3受容体を標的とする新しい抗体ならびにそのような抗HER3抗体の混合物が必要とされている。本発明は、HER3受容体を標的とする新規組換え抗体、ならびにヒト癌治療のため、例えば乳癌、卵巣癌、胃癌、およびHER3を発現するもしくは過剰発現するまたはHER3経路活性化のシグネチャーを有する他の癌例えばNSCLC、グリア芽細胞腫の治療のための、これらの抗体の2またはそれ以上を含む組成物および抗体と組成物の使用に関する。EGFRファミリーの他の受容体に対する使用可能なモノクローナル抗体を含む、そのような癌のための現在使用可能な治療と比較して、本発明の抗体は、単独でまたは、好ましくは、2もしくはそれ以上のそのような抗体を含む組成物中で、および場合により化学療法などの他の治療と組み合わせて、優れた臨床応答を提供し得ることが企図される。1つの態様では、本発明は、本明細書で抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259と称される抗体に基づく新規組換え抗HER3抗体、ならびにそのヒト化および/または親和性成熟変異体に関する。1つの実施形態では、本発明のこの態様は、本明細書で抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259と称される抗体の任意の1つの重鎖CDR3配列を含む組換え抗HER3抗体分子に関する。本発明のこの態様のさらなる実施形態には以下が含まれる:抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259の任意の1つの重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含み、前記抗体と結合に関して競合する組換え抗HER3抗体分子;これらの抗体の任意の1つの重鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列ならびに軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む組換え抗HER3抗体分子;ならびにこれらの抗体の任意の1つの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む、またはそれぞれこれらの抗体の任意の1つの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列と、それぞれ少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95の配列同一性、例えば少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98もしくは少なくとも99の配列同一性を有する、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、前記抗体と結合に関して競合する組換え抗HER3抗体。本発明の別の態様は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一抗体と第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体の一方または両方が上記で概説した抗体の群から選択される、組換え抗体組成物に関する。本発明のさらなる態様は、抗癌剤に結合した本発明の組換え抗HER3抗体を含む免疫複合体に関する。関連する態様は、少なくとも本発明の第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組成物であって、前記組成物中の少なくとも1つの抗HER3抗体が免疫複合体である組成物に関する。本発明のさらなる態様は、本発明の抗HER3抗体をコードするヌクレオチド配列を有する核酸分子、ならびにそのようなポリヌクレオチドを含む発現ベクターおよびそのような発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞に関する。本発明のなおさらなる態様は、本発明の抗体およびポリクローナル抗体組成物を作製するための方法に関する。本発明のなおさらなる態様は、本発明の抗HER3抗体または組成物をヒトまたは動物対象に投与することにより、前記対象において疾患を治療するための方法、特にヒトにおける癌の治療のための方法に関する。関連する態様は、ヒトまたは動物において疾患を治療するのに使用するための、特にヒトにおける癌の治療のための薬剤を製造するための本発明の1またはそれ以上の抗HER3抗体の使用である。本発明のなおさらなる態様は、HER3を発現するまたは過剰発現する細胞の表面でHER3のインターナリゼーションを誘導するための方法であって、細胞を本発明の組換え抗HER3抗体または免疫複合体または組換え抗HER3抗体組成物と接触させることを含む方法に関する。本発明のさらなる態様および特定の実施形態は、以下の説明および実施例から明らかになる。定義抗体または抗体分子という用語は血清の機能性成分を表し、しばしば分子抗体もしくは免疫グロブリンの集合体または1つの分子抗体分子もしくは免疫グロブリン分子と称される。抗体は、特異的抗原決定基抗原または抗原性エピトープと結合または反応することができ、続いて免疫学的エフェクター機構の誘導を導き得る。個々の抗体は通常単一特異性とみなされ、抗体の組成物はモノクローナルすなわち同一の抗体分子から成るまたはポリクローナルすなわち同じ抗原またはさらには別個の異なる抗原上の同一または異なるエピトープと反応する2またはそれ以上の異なる抗体から成るであり得る。それぞれの抗体は、その対応する抗原に特異的に結合することを可能にする独特の構造を有し、すべての天然抗体は、2つの同一の軽鎖および2つの同一の重鎖の同じ全体的基本構造を有する。抗体はまた、集合的に免疫グロブリンとしても知られる。本明細書中で使用される抗体単数または複数という用語はまた、キメラおよび一本鎖抗体、ならびにFab、Fvフラグメントまたは一本鎖FvscFvフラグメントなどの抗体の結合フラグメント、ならびに二量体IgA分子または五価IgMなどの多量体形態を包含するものとする。抗体は、ヒトもしくは非ヒト起源、例えばマウスもしくは他のげっ歯動物由来の抗体、または、例えばマウス抗体に基づく、キメラ、ヒト化もしくは再構成抗体であり得る。抗体の各重鎖は、典型的には重鎖可変領域VHと重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、典型的にはCH1、CH2およびCH3と称される3つのドメインを含む。各抗体軽鎖は、典型的には軽鎖可変領域VLと軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、典型的にはCLと称される単一ドメインを含む。VHおよびVL領域は、超可変性の領域配列および/または構造的に規定されるループにおいて超可変的であり得る、超可変領域にさらに細分され得る。これらはまた、フレームワーク領域FRと称されるより保存された領域が間に介在する、相補性決定領域CDRとも称される。各VHおよびVLは、典型的には、アミノ末端からカルボキシ末端の方向にFR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4の順序で配置された、3つのCDRと4つのFRを含む。可変領域内のアミノ酸残基は、Kabatの番号付け方式として知られる標準化された番号付け方法を用いて番号付けされることが多いKabatら1991SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth、米国メリーランド、ベセスダ。付属の配列表において、軽鎖LCDNA配列およびアミノ酸配列は、軽鎖可変領域VL配列とヒトカッパ定常領域配列の両方を含む。以下の実施例1で言及するように、ヒトカッパ定常領域は、アミノ酸TVAAP-ThrValAlaAlaProで始まり、C末端においてアミノ酸NRGECAsnArgGlyGluCysで終了する。それゆえ、本明細書で使用される場合、軽鎖可変領域配列またはVLは、ヒトカッパ定常領域の開始点の前のすなわちアミノ酸TVAAPの前の配列表における軽鎖配列のN末端部分を指すと理解される。抗体全体に関連して本明細書で使用される抗体番号、例えば抗体5082は、実施例で説明され、付属の配列表で定義される特定の抗体を指す。例えば、抗体5082は、配列番号18に示す重鎖可変領域配列と配列番号:44に示すIGHG1重鎖定常領域配列を含む重鎖、および上記で説明した軽鎖配列が軽鎖可変領域配列配列番号20の残基1-108とヒトカッパ定常領域配列配列番号20の残基109-214の両方を含む、配列番号20に示すアミノ酸配列を有する軽鎖を備える抗体である。本発明はまた、本明細書で述べる特定の抗体に由来するまたは基づく抗体を包含することが意図されており、そのような抗体は、特定の状況によって、以下の1つを含む:前記特定抗体の重鎖CDR3配列;前記特定抗体の重鎖CDR3配列と軽鎖CDR3配列;前記特定抗体の重鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列と軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列;または前記特定抗体の重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列、または前記重鎖可変領域配列および/もしくは軽鎖可変領域配列のヒト化および/もしくは親和性成熟変異体、またはそれぞれの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列と、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95の配列同一性、例えば少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98もしくは少なくとも99の配列同一性を有する重鎖および/もしくは軽鎖可変領域配列。本明細書で述べる特定の抗体に由来するまたは基づく抗体は、一般に前記特定抗体と同じHER3エピトープに結合し、好ましくは前記特定抗体と実質的に同じ活性を示す。抗体は、前記特定抗体と結合に関して競合する場合、前記特定抗体と同じHER3エピトープに結合するとみなされる。抗体の標的抗原との相互作用の特異性は、主として重鎖および軽鎖の6つのCDR内に位置するアミノ酸残基に存する。CDR内のアミノ酸配列は、それゆえ、CDRの外側の配列よりも個々の抗体間ではるかに可変的である。CDR配列は大部分の抗体-抗原相互作用に関与するので、異なる抗体からのフレームワーク配列に移植された特異的抗体からのCDR配列を発現する発現ベクターを構築することにより、特異的な天然の抗体またはより一般的に所与のアミノ酸配列を有する任意の特異的抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現することが可能である。結果として、非ヒト抗体をヒト化し、なおも元の抗体の結合特異性および親和性を実質的に維持することが可能である。ヒト化についてのより詳細な考察を以下で述べる。キメラ抗体は、その最も広い意味で、1つの抗体からの1またはそれ以上の領域と1またはそれ以上の他の抗体からの1またはそれ以上の領域を含む抗体を指す。本明細書で使用される場合、キメラ抗体は、一般に、部分的にヒト起源であり、かつ部分的に非ヒト起源である、すなわち一部が非ヒト動物、例えばマウスもしくは他のげっ歯動物またはニワトリなどの鳥類に由来する抗体である。キメラ抗体は、ヒトの抗抗体応答、例えばネズミ抗体の場合にはヒトの抗マウス抗体応答の危険性を低減するために、非ヒト抗体よりも好ましい。典型的なキメラ抗体の一例は、可変領域配列がマウスの免疫化に由来するネズミ配列であり、一方定常領域配列はヒトである抗体である。キメラ抗体の場合、非ヒト部分、すなわち典型的には可変領域配列のフレームワーク領域は、抗体をヒト化するためにさらなる変化に供され得る。ヒト化するという用語は、抗体が完全にまたは部分的に非ヒト起源であるという事実、例えば対象とする抗原でのマウスの免疫化から得られたネズミ抗体またはそのようなネズミ抗体に基づくキメラ抗体を指し、ヒトにおける免疫応答を回避するまたは最小限に抑えるために特定のアミノ酸、特にフレームワーク領域ならびに重鎖および軽鎖の定常ドメインのアミノ酸を置換することが可能である。すべての抗体はヒトの抗抗体応答を惹起する潜在能を有し、ヒトの抗抗体応答は、問題の抗体のヒトらしさhumannessの度合いとある程度相関することが知られている。免疫原性を正確に予測し、それによって特定の抗体のヒト抗抗体応答を予測することは不可能であるが、非ヒト抗体はヒト抗体よりも免疫原性が高い傾向がある。異種通常はげっ歯動物定常領域がヒト起源の配列で置換されたキメラ抗体は、一般に完全な異種起源の抗体よりも免疫原性が低く、治療用抗体はヒト化または完全ヒト抗体を目指す傾向にある。キメラ抗体または他の非ヒト起源の抗体に関しては、それゆえ、ヒトの抗抗体応答の危険性を低減するためにヒト化されることが好ましい。キメラ抗体に関して、ヒト化は、典型的には可変領域配列のフレームワーク領域の修飾を含む。相補性決定領域CDRの一部であるアミノ酸残基は、典型的にはヒト化に関連して変化させないが、一部の場合には、例えばグリコシル化部位、脱アミド化部位または望ましくないシステイン残基を除去するために、個々のCDRアミノ酸残基を変化させることが望ましいと考えられる。N結合グリコシル化は、トリペプチド配列Asn-X-SerまたはAsn-X-Thr[式中、XはProを除く任意のアミノ酸であり得る]中のアスパラギン残基へのオリゴ糖鎖の連結によって起こる。Nグリコシル化部位の除去は、好ましくは保存的置換によって、AsnまたはSer/Thr残基のいずれかを異なる残基に突然変異させることによって達成され得る。アスパラギンおよびグルタミン残基の脱アミド化は、pHおよび表面露出などの因子に依存して起こり得る。アスパラギン残基は、主として配列Asn-Gly中に存在する場合、およびより低い度合いでAsn-Alaなどの他のジペプチド配列中に存在する場合、特に脱アミド化を受けやすい。そのような脱アミド化部位、特にAsn-GlyがCDR配列中に存在する場合は、それゆえ、典型的には関与する残基の1つを除去する保存的置換によって、その部位を除去することが望ましいと考えられる。抗体配列のヒト化の数多くの方法が当分野において公知である;例えばAlmagroおよびFransson2008FrontBiosci.13:1619-1633による総説参照。1つの一般的に使用される方法はCDR移植であり、この方法は、例えばネズミ由来のキメラ抗体に関しては、ネズミ可変領域遺伝子に対するヒト生殖細胞遺伝子対応物の同定およびこのフレームワークへのネズミCDR配列の移植を含む。CDR移植はKabatのCDR定義に基づき得るが、最近の公表文献Magdelaine-Beuzelinら2007CritRev.OncolHematol.64:210-225は、IMGTの定義www.imgt.orgがヒト化の結果を改善し得ることを示唆した。CDR移植は、CDR移植した非ヒト抗体の結合特異性および親和性、したがって生物活性を低下させ得るので、親抗体の結合特異性および親和性を保持するためにCDR移植した抗体の選択位置に復帰突然変異を導入し得る。可能な復帰突然変異のための位置の同定は、文献および抗体データベースにおいて入手可能な情報を用いて実施することができる。復帰突然変異の候補であるアミノ酸残基は、典型的には抗体分子の表面に位置するものであるが、埋もれた残基または表面露出の度合いが低い残基は通常変化させない。CDR移植と復帰突然変異に代わる選択的ヒト化技術は、非ヒト起源の非表面露出残基を保持し、表面残基をヒト残基に変化させる、表面再構成である。特定の場合には、標的エピトープに対する結合親和性を改善するために1またはそれ以上のCDRアミノ酸残基を変化させることも望ましいと考えられる。これは親和性成熟として知られ、例えば抗体のヒト化が結合特異性または親和性の低下をもたらし、復帰突然変異だけでは結合特異性または親和性を十分に改善することができない状況では、場合によりヒト化と併せて実施され得る。様々な親和性成熟方法が当分野において公知であり、例えばBurksら1997PNASUSA、94巻、412417頁によって記述されたインビトロスキャニング飽和突然変異誘発およびWuら1998PNASUSA、95巻、60376042頁の段階的インビトロ親和性成熟法が挙げられる。上述したように、本発明は、ヒト化抗体、すなわちヒト化に供されたと表される抗体を包含する。これらは、本発明の抗体のヒト化変異体とも称され得る。特に、任意の特異的アミノ酸配列に関して本明細書で使用される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列という用語は、その特異的配列だけでなくその任意のヒト化変異体も包含するものとする。本明細書で述べる抗HER3抗体の親和性成熟変異体も本発明に包含されるものとする。本明細書で使用される場合、例えば参照配列と少なくとも90または少なくとも95の配列同一性、例えば少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の配列同一性を有する、特定の重鎖可変領域または軽鎖可変領域配列と比較して、特定の最小レベルの配列同一性を有する重鎖可変領域配列または軽鎖可変領域配列と言えば、そのような参照配列のヒト化および/または親和性成熟変異体を包含するが、これらに限定はされないものとする。組換え抗体という用語は、抗体のコード配列を含む1つの発現ベクターまたはおそらく2以上の発現ベクター、典型的には2つの発現ベクターでトランスフェクトされた細胞または細胞株から発現される抗体であって、前記コード配列が天然では該細胞に結合していない、抗体を指す。ベクターという用語は、核酸配列が、異なる遺伝的環境の間での輸送のためおよび/または宿主細胞における発現のために挿入され得る核酸分子を指す。核酸配列の転写のための調節エレメント少なくとも適切なプロモーターを担持するベクターは、発現ベクターと称される。プラスミドとベクターという用語は互換的に使用され得る。本発明に関連して使用される発現ベクターは、当分野で公知の任意の適切な種類、例えばプラスミドまたはウイルスベクターであり得る。ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の混合物という用語は、同じまたは異なる抗原上の異なる特異的抗原決定基と結合するまたは反応することができる2またはそれ以上の異なる抗体分子の組成物を指す。本発明に関連して、ポリクローナル抗体の個々の抗体は、HER3の異なる抗原決定基に結合する。好ましくは、本発明のポリクローナル抗体の個々の抗体は、HER3の異なるエピトープ、より好ましくは別個の実質的にオーバーラップしないエピトープに結合する。ポリクローナル抗体の可変性は、一般に抗体分子の可変領域に位置すると考えられる。組換えポリクローナル抗HER3抗体組成物は、HER3に結合する2またはそれ以上の組換えモノクローナル抗体の混合物を含む組成物である。抗体が種々のアイソタイプとして、例えばヒトアイソタイプIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2、またはネズミアイソタイプIgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3およびIgAとして存在することは当分野において周知である。本発明の抗体は任意のアイソタイプであり得る。本発明のポリクローナル抗体組成物の個々の抗体が2以上のアイソタイプの抗体を含むことは可能であるが、それらは、好ましくはすべて同じアイソタイプである。少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物は、特定の抗体の少なくとも2つを含むが、本明細書で述べる抗HER3抗体の3以上を含み得る。特定の場合、そのような組換え抗体組成物は、比較的大きな数の個々の抗HER3抗体、例えば10以下またはそれ以上、例えば15または20までを含み得るが、通常は10未満の異なる抗HER3抗体、すなわち2、3、4、5、6、7、8または9の抗体を含む。本発明の組換え抗体組成物は、より典型的には約6以下の異なる抗HER3抗体を含み、多くの場合それらは4以下の異なる抗HER3抗体を含む。好ましい実施形態では、本発明の組換え抗体組成物は、それゆえ、2、3または4の異なる抗HER3抗体、典型的には2または3の異なる抗HER3抗体を含む。CDRまたは相補性決定領域という用語は、主として抗体の結合特異性を決定することに関与する抗体の可変ドメインに認められる超可変領域を指す。Lefrancら2003,IMGTuniquenumberingforimmunoglobulinandTcellreceptorvariabledomainsandIgsuperfamilyV-likedomains,Dev.CompImmunol.27,55-77における定義参照。抗体の重鎖および軽鎖はそれぞれ、CDR1、CDR2およびCDR3と称される3つのCDR領域を含み、そのうちCDR3が最も大きな可変性を示す。エピトープという用語は、動物において抗原性または免疫原性活性を有する、より大きな分子例えば抗原または抗原性部位の一部分を表すために使用される。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を惹起するより大きな分子の一部分である。抗原性活性を有するエピトープは、当分野で公知の任意の方法によって測定した場合抗体が免疫特異的に結合するより大きな分子の一部分である。抗原性エピトープは必ずしも免疫原性であるとは限らない。抗原は、抗体または抗体フラグメントが免疫特異的に結合する物質、例えば毒素、ウイルス、細菌、タンパク質またはDNAである。抗原または抗原性部位は、非常に小さなものでない限り、多くの場合2以上のエピトープを有し、多くの場合免疫応答を刺激することができる。エピトープは直鎖状または立体配座であり得る。直鎖状エピトープは、一般に、抗体によって認識されるタンパク質分子上の約6~10の隣接アミノ酸から成る。これに対し、立体配座エピトープは、連続的に配置されていないが、抗体が特定の三次元構造を認識するアミノ酸から成る。タンパク質分子が三次元構造に折りたたまれた場合、エピトープを形成するアミノ酸が並置されて、抗体が立体配座エピトープを認識することが可能になる。変性タンパク質では直鎖状エピトープだけが認識される。立体配座エピトープは、当然、折りたたまれたタンパク質の外側になければならない。別個のエピトープという用語は、本発明の2つの異なる抗体が別個のエピトープに結合する場合、抗原結合に関して100未満の競合、好ましくは抗原結合に関して80未満の競合、より好ましくは抗原結合に関して50未満の競合、および最も好ましくはできる限り少ない競合、例えば抗原結合に関して約25未満の競合が存在するという事実を指す。同じ抗原への結合に関して互いに競合することができる抗体は、同じエピトープもしくはオーバーラップするエピトープに結合し得るかまたは互いのすぐ近傍に結合部位を有し得るので、競合は主として立体障害によって引き起こされる。抗体対の別個のエピトープについての分析は、当分野で公知の方法によって、例えばFACS蛍光活性化細胞選別もしくはHER3および個々の蛍光標識抗体を発現する細胞に関する他のフローサイトメトリー分析を用いた飽和抗体条件下での結合実験によって、またはフローセル表面に捕捉されたまたは結合したHER3抗原を用いた表面プラズモン共鳴SPRによって実施され得る。SPRを用いて抗体間の競合を測定するための方法は以下の実施例12で述べる。別個のエピトープは、好ましくは、本発明の組成物中の2つの異なる抗HER3抗体が、それらのそれぞれのエピトープに同時に結合することができるのに十分なほど抗原結合に関して低い競合を有するという意味でオーバーラップしてない。種々の度合いのオーバーラップが存在し得ること、および別個のエピトープは、それぞれの抗体がそれらのエピトープに実質的に結合することができる限り、ある程度のオーバーラップの存在にもかかわらずオーバーラップしていないとみなされ得ることは当業者に理解される。これは一般に、2つの抗体間の抗原結合に関する競合が約50未満である場合に当てはまるとみなされる。同様に、本発明の抗HER3抗体と結合に関して競合する抗体は、抗原結合に関して約50またはそれ以上の競合を示すものと定義され得る。同じ抗原上の異なるエピトープに結合する抗体は、エピトープの位置によって、それらが結合する抗原の活性に対し様々な作用を有し得る。抗原の活性部位にあるエピトープに結合する抗体は抗原の機能を完全にブロックし得るが、異なるエピトープに結合する別の抗体は、単独では抗原の活性にほとんどまたはまったく作用を及ぼさないこともあり得る。そのような抗体は、しかしながら、なおも補体を活性化し、それによって抗原の排除をもたらすことがあり、同じ抗原上の異なるエピトープに結合する1またはそれ以上の抗体と組み合わせた場合相乗効果をもたらし得る。本発明に関連して、エピトープは、好ましくはHER3の細胞外ドメインの一部分である。本発明の抗原は、好ましくは、抗体または抗体フラグメントが免疫特異的に結合する細胞外ドメインHER3タンパク質、ポリペプチドまたはそのフラグメントである。HER3関連抗原はまた、抗体または抗体フラグメントが免疫特異的に結合するHER3ポリペプチドの細胞外ドメインまたはそのフラグメントの類似体または誘導体であり得る。免疫グロブリンという用語は、一般に血液または血清中で認められる抗体の混合物の集合的名称として使用されるが、他の供給源に由来する抗体の混合物を表すためにも使用され得る。コグネイトVHおよびVLコード対という用語は、同じ抗体産生細胞内に含まれるまたは同じ抗体産生細胞に由来するVHおよびVLコード配列の元の対を表す。したがって、コグネイトVHおよびVL対は、そのような細胞が由来するドナー中に元々存在するVHおよびVL対合を示す。VHおよびVLコード対から発現される抗体という用語は、抗体または抗体フラグメントが、VHおよびVLLコード配列を含むベクター、プラスミドまたは他のポリヌクレオチドから産生されることを示す。コグネイトVHおよびVLコード対が完全な抗体としてまたはその安定したフラグメントとして発現される場合、それらは、それらが由来する細胞から元々発現される抗体の結合親和性および結合特異性を保持する。コグネイト対のライブラリは、コグネイト対のレパートリーまたはコレクションとも呼ばれ、個別に保持され得るかまたはプールされ得る。タンパク質またはポリペプチドとは、長さまたは翻訳後修飾にかかわりなく、あらゆるアミノ酸の鎖を意味する。タンパク質は、単量体として、または2もしくはそれ以上の集合したポリペプチド鎖、タンパク質のフラグメント、ポリペプチド、オリゴペプチドもしくはペプチドを含む多量体として存在し得る。ヘッドトゥーヘッドプロモーター二方向性プロモーターとしても知られるという用語は、プロモーターによって駆動される2つの遺伝子フラグメントの転写が反対の方向で起こるようにごく近接して位置するプロモーター対を指す。トランスフェクションという用語は、本明細書では外来DNAを細胞に導入することについての広義語として使用される。この用語はまた、外来DNAを細胞に導入するための他の機能的に均等内容の方法、例えば形質転換、感染、形質導入またはドナー細胞とアクセプター細胞の融合を包含するものとする。HER3ErbB-3としても知られるという用語は、背景技術の章で上述したヒト上皮増殖因子受容体3を表す。本明細書で使用される場合、この用語はHER3の変異体、アイソフォームおよび種ホモログを包含するものとする。好ましくは、HER3への本発明抗体の結合は、HER3と他のErbBファミリー成員とのヘテロマ複合体の形成、例えばHER2とのヘテロ二量体化を阻害することにより、HER3を発現する細胞すなわち典型的には腫瘍細胞の増殖を阻害する。本明細書で使用される場合、増殖を阻害する例えば細胞に関してという用語は、抗HER3抗体と接触した場合、抗HER3抗体の不存在下での同じ細胞の増殖と比較して細胞の増殖細胞数の増大または代謝の測定可能な低下、例えば少なくとも約10、好ましくはそれ以上、例えば少なくとも約20または30、より好ましくは少なくとも約40または50、例えば少なくとも約60、70、80、90、99またはさらには100の細胞培養物の増殖の阻害を包含するものとする。増殖阻害は、例えば以下の実施例で述べるように関連する癌細胞株において測定することができる。本明細書で使用される場合、二量体化を阻害するまたは二量体形成を阻害するという用語は、抗HER3抗体の不存在下での二量体形成と比較して抗HER3抗体の結合の結果として、他の受容体、特にHER2、のみならずEGFRまたはHER4とも二量体を形成するHER3の能力の測定可能な低下を指す。本明細書で使用される処置という用語は、症状または疾患状態を緩和する、軽減する、改善するまたは根絶する治癒するのに十分な量での本発明の抗HER3抗体または抗体組成物の投与を指す。本発明の2またはそれ以上の抗HER3抗体の投与は、一般に抗体の同時投与として、好ましくは処置に使用されるすべての抗HER3抗体を含む組成物の形態で行われる。しかし、本発明の2またはそれ以上の抗HER3抗体を別々に投与することも可能である。したがって、本明細書における、例えば少なくとも2つの抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物の投与と言えば、少なくとも2つの抗体をそのまま含む組成物の投与のみならず、抗体の別々の投与も包含することは言うまでもない。すなわち、本発明の2またはそれ以上の抗HER3抗体の組合せは、同時に、連続的にまたは別々に投与され得る。2つの配列、例えば可変領域配列の間の同一性パーセントは、2つの配列の最適アラインメントのために導入されねばならないギャップを考慮に入れて、それらの配列によって共有される同一位置の数同一位置の数/総位置数×100として計算されるを指す。配列の比較および2つの配列間の同一性パーセントの決定は、容易に入手可能なソフトウェアを用いて達成され得る。適切なソフトウェアプログラムは、オンラインでの使用とダウンロードの両方に関して、ならびにタンパク質配列とヌクレオチド配列の両方のアラインメントに関して、様々なソースから入手可能である。1つの適切なプログラムは、www.clustal.orgから入手可能な、あるいは、例えば、同じく様々な他のタンパク質およびヌクレオチドインフォマティクスツールを提供する、EuropeanBioinformaticsInstitutewww.ebi.ac.ukから入手可能な、ClustalWThompsonら1994NucleicAcidsRes11;2222:4673-80である。特定の実施形態本発明の1つの態様は、様々な新規抗HER3抗体に関する。したがって、1つの実施形態では、本発明は、本明細書で抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259と称される抗体の任意の1つの重鎖CDR3配列を含む組換え抗HER3抗体に関する。別の実施形態では、本発明は、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259の任意の1つの重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む組換え抗HER3抗体に関する。別の実施形態では、本発明は、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259の任意の1つの重鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列ならびに軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む組換え抗HER3抗体に関する。さらなる実施形態では、本発明は、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259の任意の1つの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む、または前記重鎖および/もしくは軽鎖可変領域配列のヒト化および/もしくは親和性成熟変異体を含む、またはそれぞれ前記重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列と少なくとも90もしくは少なくとも95の配列同一性、例えば前記配列と少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98もしくは少なくとも99の配列同一性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む、前記抗体と結合に関して競合する組換え抗HER3抗体に関する。さらなる実施形態では、本発明は、上記で定義した抗体のいずれかと同じエピトープに結合し、結合に関して競合する組換え抗HER3抗体、ならびに本明細書の別の部分で記述される、そのような抗体の1またはそれ以上を含む、好ましくは少なくとも2つのそのような抗体、例えば2または3のそのような抗体を含む抗体組成物に関する。以下の表1は、付属の配列表に示すように、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259の重鎖可変領域VHおよび軽鎖LC上記で説明したように、軽鎖配列は軽鎖可変領域VL配列とヒトカッパ定常領域配列の両方を含むのDNA配列およびアミノ酸配列についての配列ID番号を示す。表1:選択した抗HER3抗体の重鎖可変領域および軽鎖のDNA配列およびアミノ酸配列についての配列ID番号別の態様では、本発明は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一抗体と第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体の少なくとも一方が上記で概説した抗体の群から選択される、例えば組成物中の抗HER3抗体の両方または全部が上記で概説した抗体の群から選択される、組換え抗体組成物に関する。したがって、本発明のこの態様の1つの実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一および第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体のそれぞれが、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から成る群より選択される抗体の重鎖CDR3配列を含む、組換え抗体組成物に関する。本発明のこの態様の別の実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一および第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体の各々が、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から成る群より選択される抗体の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む、組換え抗体組成物に関する。本発明のこの態様のさらなる実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一および第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体のそれぞれが、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から成る群より選択される抗体の重鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列ならびに軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む、組換え抗体組成物に関する。本発明のこの態様のさらなる実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一および第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体のそれぞれが、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から成る群より選択される抗体の重鎖可変領域配列またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体ならびに軽鎖可変領域配列またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体を含むか、あるいは第一および第二抗体のそれぞれが、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から成る群より選択される抗体の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95の配列同一性、例えば少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の配列同一性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、かつ第一および第二抗体が、それらが由来するそれぞれの抗体と結合に関して競合する、組換え抗体組成物である。特定の実施形態は、HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、a第一組換え抗体が、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から選択される任意の1つの参照抗体の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95の配列同一性、例えば少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の配列同一性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、かつ第一組換え抗体が、前記参照抗体と同じエピトープに結合し、結合に関して競合する;ならびにb第二組換え抗体が、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から選択される任意の1つの参照抗体の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95の配列同一性、例えば少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の配列同一性を有する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、前記参照抗体がaの参照抗体とは異なり、かつ第二組換え抗体が、前記参照抗体と同じエピトープに結合し、結合に関して競合する、抗体組成物である。本発明のこの態様のなおさらなる実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一および第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体が、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から成る群より選択されるか、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体である、組換え抗体組成物である。本発明のこの態様のなおさらなる実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み、第一および第二抗体がHER3の別個のエピトープに結合し、かつ第一および第二抗体が、抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259と同じエピトープに結合し、結合に関して競合する抗体から成る群より選択される、組換え抗体組成物である。本発明のこの態様のさらなる実施形態は、HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、前記抗体の少なくとも1つが、a抗体4785の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;b抗体4889の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;c抗体4935の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;d抗体5038の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;e抗体5082の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;f抗体5101の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;g抗体5106の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;h抗体5143の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;i抗体5144の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体;ならびにj抗体5259の重鎖CDR3配列および軽鎖CDR3配列を含む抗体から成る群より選択される、抗体組成物である。好ましくは、前記第一および第二組換え抗HER3抗体はどちらも、上記に示す抗体a-jから選択される。組成物はまた、少なくとも第三組換え抗HER3抗体、好ましくは上記の抗体a-jから選択される抗体も含み得る。別の実施形態では、抗体組成物は、HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み得、前記第一および第二抗体のそれぞれは、上記に示す抗体a-jの1つと同じエピトープに結合し、結合に関して競合する。本発明のこの態様のさらなる実施形態は、HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む抗体組成物であって、前記抗体の少なくとも1つが、A抗体4785の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;B抗体4889の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;C抗体4935の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;D抗体5038の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;E抗体5082の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;F抗体5101の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;G抗体5106の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;H抗体5143の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;I抗体5144の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体;ならびにJ抗体5259の重鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3ならびに軽鎖可変領域のCDR1、CDR2およびCDR3を含む抗体から成る群より選択される、抗体組成物である。この実施形態では、前記第一および第二組換え抗HER3抗体はどちらも、好ましくは上記に示す抗体A-Jから選択される。組成物はまた、少なくとも第三組換え抗HER3抗体、好ましくは上記の抗体A-Jから選択される抗体も含み得る。別の実施形態では、抗体組成物は、HER3の別個のエピトープに結合する少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含み得、前記第一および第二抗体のそれぞれは、上記に示す抗体A-Jの1つと同じエピトープに結合し、結合に関して競合する。本発明のこの態様の1つの特定の実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体5082および5106と結合に関して競合し、かつ抗体5082および5106、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体5082の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体5106の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5106の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5106の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体5106の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体5106の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。別のそのような実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体5082および4785と結合に関して競合し、かつ抗体5082および4785、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体5082の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体4785の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体4785の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体4785の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体4785の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体4785の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。別のそのような実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体5082および5038と結合に関して競合し、かつ抗体5082および5038、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体5082の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体5038の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5038の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5038の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体5038の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体5038の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。別のそのような実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体5082および5144と結合に関して競合し、かつ抗体5082および5144、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体5082の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体5144の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5144の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5144の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体5144の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体5082の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体5144の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。別のそのような実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体4889および5143と結合に関して競合し、かつ抗体4889および5143、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体4889の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体5143の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体4889の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5143の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体4889の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5143の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体4889の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体5143の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体4889の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体5143の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。別のそのような実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体4785および5038と結合に関して競合し、かつ抗体4785および5038、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体4785の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体5038の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体4785の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5038の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体4785の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5038の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体4785の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体5038の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体4785の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体5038の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。別のそのような実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体4785および5259と結合に関して競合し、かつ抗体4785および5259、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体4785の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体5259の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体4785の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5259の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体4785の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体5259の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体4785の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体5259の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体4785の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体5259の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。別のそのような実施形態は、少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物であって、第一および第二抗体が、それぞれ抗体5106および4889と結合に関して競合し、かつ抗体5106および4889、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体;抗体5106の重鎖CDR3配列を含む抗体、および抗体4889の重鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5106の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体、ならびに抗体4889の重鎖および軽鎖CDR3配列を含む抗体;抗体5106の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体、ならびに抗体4889の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む抗体;抗体5106の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびに抗体4889の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体;またはそれぞれ抗体5106の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体、ならびにそれぞれ抗体4889の重鎖および軽鎖可変領域配列と、それぞれ、少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98または99の配列同一性を有する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体である、組換え抗体組成物に関する。下表2および3は、本発明による様々な抗HER3抗体の重鎖表2および軽鎖表3のCDR1、CDR2およびCDR3アミノ酸配列を示す。これらの抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む軽鎖のアミノ酸配列、ならびにエンコードDNA配列CHO細胞における発現のために最適化したを付属の配列表に示す。これらの配列の配列ID番号の概要については上記の表1参照。表2:選択した抗HER3抗体の重鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列表3:選択した抗HER3抗体の軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列本発明の別の態様は、本発明の抗体、すなわち抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259から成る群より選択される抗体、またはそのヒト化および/もしくは親和性成熟変異体をコードする、あるいはそのような抗体の重鎖および/もしくは軽鎖可変領域配列、またはそのような重鎖および/もしくは軽鎖可変領域配列と少なくとも90の配列同一性、好ましくは少なくとも95の配列同一性、例えば少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98もしくは少なくとも99の配列同一性を有する重鎖および/もしくは軽鎖配列をコードする、ヌクレオチド配列を含む核酸分子に関する。本発明のこの態様の1つの実施形態では、核酸分子は、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37もしくは39から成る群より選択されるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド配列の任意の1つと同じアミノ酸配列をコードする配列を含む。本発明のさらなる態様は、上記で定義した核酸分子を含む発現ベクターに関する。上述したように、本発明に関する使用のための発現ベクターは、当分野で公知の任意の適切な種類、例えばプラスミドまたはウイルスベクターであり得る。本発明のなおさらなる態様は、上記で定義した核酸分子を含む宿主細胞であって、前記核酸分子によってコードされる抗HER3抗体を発現することができる宿主細胞に関する。さらなる態様では、本明細書で開示される任意の2つの個々の抗体の結合特異性を1つの二重特異性結合分子において組み合わせ得る。そのような二重特異性結合分子は、好ましくは2つの選択抗体の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む。二重特異性結合分子は、二重可変ドメイン抗体、すなわち抗体の2本のアームが2つの異なる可変ドメインを含むものであり得るか、または二重特異性Fabフラグメントもしくは二重特異性scFvなどの抗体フラグメントの形態であり得る。抗HER3抗体および抗体組成物の生産本発明のさらなる態様は、本発明の抗HER3抗体または抗HER3抗体の混合物を生産するための方法に関する。本発明のこの態様の1つの実施形態は、抗HER3抗体を発現することができる上記で定義した宿主細胞を提供すること、前記宿主細胞を抗体の発現に適した条件下で培養すること、および生じた抗体を単離することを含む、本明細書で定義する抗HER3抗体を生産するための方法に関する。別の実施形態では、本発明は、本明細書で述べる少なくとも第一および第二組換え抗HER3抗体を含む組換え抗HER3抗体の混合物を生産するための方法であって、それぞれ組換え抗HER3抗体を発現することができる、少なくとも第一宿主細胞および第二宿主細胞を提供すること、第一および第二宿主細胞を第一および第二抗体の発現に適した条件下で培養すること、ならびに生じた第一および第二抗体を単離することを含む方法に関する。本発明の抗体または抗体組成物は、組換えモノクローナルまたはポリクローナル抗体の生産のための当分野で一般に公知の方法によって生産され得る。したがって、本発明の単一抗体の生産の場合、組換えモノクローナル抗体の生産のための当分野で公知の任意の方法を使用し得る。本発明の2またはそれ以上の抗HER3抗体を含む抗体組成物の生産のためには、個々の抗体を別々に生産し得る、すなわちそれぞれの抗体を別個のバイオリアクターで生産し得るか、または個々の抗体を単一のバイオリアクターで一緒に生産し得る。組成物中の異なる抗体の数が、例えば2または3より多い場合は、一般に費用効率の理由から抗体を単一のバイオリアクターで一緒に生産することが好ましい。他方で、組成物が少数の異なる抗体、例えば2、3または場合により4つの異なる抗体だけを含む場合は、異なるバイオリアクターで別々に生産するかまたは単一のバイオリアクターで一緒に生産するかの決定は個々の状況に基づいて行わねばならない。抗体組成物が2以上のバイオリアクターで生産される場合、各バイオリアクターから個別に精製された上清から得られた抗体をプールすることによって精製抗HER3抗体組成物を得ることができる。多数のバイオリアクターにおけるポリクローナル抗体組成物の生産のための様々な方法が国際公開第2009/129814号参照により本明細書に組み込まれるに記載されており、それらのアプローチでは、細胞株または抗体製剤を上流のより後の時点でまたは下流のプロセシングの前またはプロセシングの間に組み合わせる。単一バイオリアクターにおける2またはそれ以上の個別抗体の生産の場合、これは、例えば国際公開第2004/061104号または同第2008/145133号どちらも参照により本明細書に組み込まれるに記載されているように実施され得る。国際公開第2004/061104号に記載されている方法は、VHおよびVLタンパク質鎖が生産の間それらの元の対合で維持されることを確実にする、個々の宿主細胞のゲノムへの抗体コード配列の部位特異的組込みに基づく。さらに、部位特異的組込みは位置効果を最小限に抑え、それゆえポリクローナル細胞株における個々の細胞の増殖および発現特性は非常に類似すると予想される。一般に、この方法は以下を含む:i1またはそれ以上のリコンビナーゼ認識部位を有する宿主細胞;ii宿主細胞のものと適合性の少なくとも1つのリコンビナーゼ認識部位を有する発現ベクター;iiiスクリーニングベクターからの選択したVHおよびVLコード対を、完全長抗体または抗体フラグメントがベクターから発現され得るように発現ベクターに移入することによる発現ベクターのコレクションの作製スクリーニングベクターが発現ベクターと同一である場合はそのような移入が必要でないとこともある;iv発現ベクターのコレクションおよび宿主細胞のゲノム内のリコンビナーゼ認識部位とベクター内のリコンビナーゼ認識部位を組み合わせることができるリコンビナーゼをコードするベクターでの宿主細胞のトランスフェクション;vトランスフェクトした宿主細胞からポリクローナル細胞株を得る/作製すること;ならびにviポリクローナル細胞株から抗体組成物を発現させ、収集すること。国際公開第2008/145133号は、単一バイオリアクターにおける2またはそれ以上の異なる抗体の生産のための別法を述べている。この方法は、aベクターのそれぞれが、ポリクローナルタンパク質の別個の成員をコードする別個の核酸の少なくとも1コピーを含む、発現ベクターのセットを提供すること、b細胞のゲノムへの発現ベクターの部位特異的組込みを回避する条件下で宿主細胞を発現ベクターのそれぞれで別々にトランスフェクトし、それにより、それぞれの組成物がポリクローナルタンパク質の1つの別個の成員を発現する、細胞の2またはそれ以上の組成物を得ること;ならびにc細胞の少なくとも2つの組成物を混合してポリクローナル細胞株を得ることによる、2またはそれ以上の別個の成員を含むポリクローナル抗体または他のポリクローナルタンパク質を発現することができるポリクローナル細胞株の作製を含む。国際公開第2004/061104号および同第2008/145133号の方法はどちらも、組換えポリクローナル抗体を構成するすべての成員を単一バイオリアクターで生産し、単一工程で精製することを可能にし、それにより各抗体のための別々の生産および精製工程の必要性を回避して、同時に異なる抗体の驚くほど均一な生産をもたらすという利点を有する。国際公開第2008/145133号の方法は、各生産細胞が特定の抗体をコードするポリヌクレオチドの多数のコピーを担持し得るので、高い収率を提供するというさらなる利点を有する。本発明の抗体は、哺乳動物細胞ならびに非哺乳動物真核または原核細胞、例えば植物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、真菌、大腸菌E.coli等を含む、様々な種類の細胞において生産され得る。しかし、抗体は、好ましくは哺乳動物細胞、例えばCHO細胞、COS細胞、BHK細胞、骨髄腫細胞例えばSp2/0もしくはNS0細胞、NIH3T3などの線維芽細胞、またはHeLa細胞、HEK293細胞もしくはPER.C6細胞などの不死化ヒト細胞において生産される。核酸配列を宿主細胞にトランスフェクトするための方法は当分野において周知である例えばSambrookら、MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,第3版、2001参照。例えば国際公開第2004/061104号に記載されている部位特異的組込みに関して、適切な宿主細胞は、そのゲノム内に1またはそれ以上のリコンビナーゼ認識部位を含む。この場合、適切な発現ベクターは、宿主細胞のリコンビナーゼ認識部位複数可にマッチする組換え認識部位を含む。例えば部位特異的組込み方法を用いたスクリーニングベクターからの選択VHおよびVLコード対の移入に関するさらなる詳細は、国際公開第2004/061104号に見出され得る。2またはそれ以上の抗HER3抗体を含む本発明の抗体組成物を単一バイオリアクターで生産しようとする場合、類似した増殖速度および好ましくは類似した抗体発現レベルを有する細胞株を選択して、ポリクローナル細胞株を作製し得る。次に、個々の細胞株を所定の割合で混合することによってポリクローナル細胞株を作製する。ポリクローナル抗体を発現するポリクローナル細胞株を作製することならびにそのような細胞株を使用したポリクローナル抗体の生産に関するさらなる情報および例については、国際公開第2009/129814号、同第2004/061104号および同第2008/145133号参照により本明細書に組み込まれる参照。したがって、本発明の1つの実施形態は、本発明の2またはそれ以上の抗HER3抗体を発現することができるポリクローナル細胞株である。さらなる実施形態は、個々の細胞がそれぞれ単一のVHおよびVL対を発現することができ、全体としてのポリクローナル細胞株が、それぞれのVHおよびVL対が抗HER3抗体をコードする、VHおよびVL対のコレクションを発現することができる、ポリクローナル細胞株である。本発明の組換え抗体組成物は、ポリクローナルワーキングセルバンクpWCBからの1アンプルを、ポリクローナル細胞株によって発現される個々の抗体の相対的発現レベルの実質的な均一性を維持しながら十分なレベルの抗体発現を可能にする期間、適切な培地で培養することにより、単一バイオリアクターで製造され得る。約15~50日間の生産時間が通常適切である。流加培養または灌流培養などの当分野で公知の培養方法を使用し得る。培地は、好ましくは無血清培地、より好ましくは無血清および無タンパク質培地、例えば化学的組成の明らかな培地である。そのような培地は、典型的には生産のために使用される特定の細胞型の増殖用に設計され、数多くの適切な培地製剤が市販されている。組換え抗体組成物は、培地から得られ、慣用的精製技術によって精製される。これらには、例えば、イオン交換クロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィおよびゲル濾過などの後続精製段階と組み合わせたアフィニティクロマトグラフィが含まれ得、これらの精製技術は組換え抗体の精製のために頻繁に使用されている。2またはそれ以上の抗体を単一バイオリアクターでポリクローナル細胞株によって生産する場合は、ポリクローナル抗体組成物中の個々の成員すべての存在を、典型的には精製の後で、例えばイオン交換クロマトグラフィによって評価する。ポリクローナル抗体組成物の特性検定は、例えば国際公開第2006/007853号、同第2009/065414号、同第2011/042024号および同第2011/042027号本明細書中、出典明示により援用に記載されているように実施し得る。治療用組成物本発明の別の態様は、本発明の少なくとも1つの抗HER3抗体、または抗HER3組換えFabもしくは別の抗HER3組換え抗体フラグメント組成物を有効成分として含む医薬組成物である。好ましくは、そのような医薬組成物の有効成分は、2またはそれ以上の抗HER3抗体を含む上述したような抗HER3組換え抗体組成物である。そのような組成物は、癌の改善、予防および/または処置を目的とする。医薬組成物は、ヒトまたは家畜もしくはペットに投与され得るが、典型的にはヒトに投与される。本発明の治療用組成物中の個々の抗体間の比率、または本発明の個々の抗体が同時に、連続的にもしくは別々に投与される場合には、投与される抗体間の比率は、抗体が等量で投与される比率であることが多いが、これは必ずしもそうである必要はない。したがって、2つの抗HER3抗体を含む本発明の組成物は、それらを1:1の比率で含むことが多く、3つの抗HER3抗体を含む本発明の組成物は、それらを1:1:1の比率で含むことが多い。しかし、個々の抗体の特性によっては、異なる抗体を等しくない量で使用することが望ましい場合があり得る。本発明の組成物中の異なる抗HER3抗体についての適切な比率は、国際公開第2010/040356号参照により本明細書に組み込まれるに記載されているように決定され得、そこには、最適の効力および効果を有するコンビナトリアル薬剤を得るために、コンビナトリアル薬剤製品、例えばポリクローナル抗体組成物中の化学的実体間の最適化学量論比を特定し、選択するための方法が記載されている。本発明の少なくとも1つの抗体またはそのフラグメントに加えて、医薬組成物は、少なくとも1つの医薬的に許容され得る希釈剤、担体または賦形剤をさらに含む。これらには、例えば防腐剤、安定剤、界面活性剤/湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節するための塩および/または緩衝剤が含まれ得る。溶液または懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどの増粘物質をさらに含み得る。医薬組成物についての適切なpH値は、一般に、必要に応じて緩衝剤を使用して維持され、約5.5~8.5、例えば約6~8の範囲内、例えば約7である。従来の製薬慣例を用いて、例えば癌患者に投与する適切な製剤または組成物を提供し得る。投与は、典型的には治療的であり、これは、癌状態が診断された後に投与されることを意味する。任意の適切な投与経路、例えば、非経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻内、エアロゾル、坐剤または経口投与を使用し得る。本発明の医薬組成物は、典型的には液体溶液または懸濁液、より典型的には水溶液または水性懸濁液、特に等張水溶液または等張水性懸濁液の形態で投与される。本発明の医薬組成物は、それ自体公知の方法で、例えば従来の溶解、凍結乾燥、混合、造粒または糖剤化工程によって調製される。医薬組成物は、従来の製薬慣例に従って製剤され得る例えば、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy第21版、A.R.Gennaro編、2005、LippincottWilliamsWilkins、フィラデルフィア、ペンシルベニア、米国;およびEncyclopediaofPharmaceuticalTechnology、J.Swarbrick編、第3版、2006,InformaHealthcare,ニューヨーク、ニューヨーク、米国、参照。液体製剤に代わるものとして、本発明の組成物は、少なくとも1つの抗体を単独でまたは担体、例えばマンニトールと共に含む凍結乾燥形態で調製されてもよく、この場合、組成物は使用前に滅菌水などの液体で再構成される。医薬組成物は、約1~約95、好ましくは約20~約90の有効成分を含む。本発明による医薬組成物は、例えばアンプル、バイアル、坐剤、錠剤またはカプセル剤の形態などの単位用量形態で生産され得る。製剤は、癌性疾患または他の状態に対する治療を提供するために治療的または予防的に有効な量例えば病的状態を予防する、排除するまたは軽減する量でヒト個体に投与され得る。投与される治療薬の好ましい用量は、癌の重症度、特定の患者の全体的な健康状態、化合物賦形剤の処方、およびその投与経路などの変数に依存する可能性が高い。本発明による抗体および組成物の治療的使用本発明による抗HER3抗体および医薬組成物は、哺乳動物における疾患の処置または改善のため、特にヒトにおける癌の処置のために使用され得る。本発明の1つの実施形態は、ヒトまたは他の哺乳動物において癌に伴う1またはそれ以上の症状を予防、処置または改善する方法であって、本発明の抗HER3組換え抗体組成物の有効量を前記哺乳動物に投与することを含む方法である。特定の実施形態は、HER3の発現を特徴とする障害、特に癌を有するヒト患者を処置するための方法であって、本明細書で定義される組換え抗HER3抗体または、好ましくは、少なくとも2つの本明細書で定義される抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物を前記患者に投与することを含む方法に関する。さらなる実施形態は、HER3を発現する細胞においてHER3と他のErbBファミリー受容体との間のヘテロ二量体形成を低減するための方法であって、前記細胞を本明細書で定義される組換え抗HER3抗体または、好ましくは、少なくとも2つの本明細書で定義される抗HER3抗体を含む組換え抗体組成物と接触させることを含む方法に関する。本発明のさらなる実施形態は、ヒトまたは他の哺乳動物における癌に伴う1またはそれ以上の症状の処置、改善または予防のため、例えばHER3の発現を特徴とする障害を有するヒト患者の処置のための組成物を調製するための、本発明の抗HER3組換え抗体または抗体組成物の使用である。HER3発現レベルを含む多くの因子に基づき、以下の腫瘍型が特に本発明の抗体組成物による治療に適応され得る:乳癌、卵巣癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、膀胱癌、膵癌、頭頸部癌および非小細胞肺癌。本発明の抗体組成物は、HER3を発現する癌、例えば多くの乳癌、卵巣癌および胃癌などの特定の上皮癌の処置に特に適用できることが考えられる。これらの適応症のそれぞれに関して、2つの主要な臨床経路、すなわち1少なくとも1つの付加的な治療処置に関連する補助療法または2単独療法が考えられる。これら2つの選択肢を以下で簡単に論じる。1補助療法:併用療法としても知られる補助療法では、患者は、少なくとも1つの付加的な治療処置、典型的には化学療法剤もしくは抗腫瘍薬および/または放射線療法を併用して本発明の抗体で処置される。あるいはまたは付加的に、本発明の抗HER3抗体および組成物はまた、異なる抗癌抗体、例えばEGFRまたはVEGFを標的とする抗体と組み合わせて使用され得る。したがって、上記で列挙した一次癌標的は、標準的な第一選択療法および第二選択療法に加えて本発明の抗体または組成物の投与によって処置され得る。プロトコールの設計は、例えば腫瘍量の低減ならびに標準的な化学療法の通常用量を低減する能力によって評価される有効性に対応する。そのような用量の低減は、化学療法剤の用量関連毒性を低減することにより付加的なおよび/または長期的な治療を可能にし得る。本発明の抗体組成物を、癌細胞の終末分化を誘導することが知られている薬剤と組み合わせることにより、効果をさらに改善し得る。そのような化合物は、例えば、レチノイン酸、トランスレチノイン酸、シスレチノイン酸、フェニルブチレート、神経成長因子、ジメチルスルホキシド、活性型ビタミンD3、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ、12-O-テトラデカノイルホルボール13-アセテート、ヘキサメチレンビスアセトアミド、トランスフォーミング増殖因子β、酪酸、サイクリックAMPおよびベスナリノンから成る群より選択され得る。好ましくは、化合物は、レチノイン酸、フェニルブチレート、オールトランスレチノイン酸、活性型ビタミンDから成る群より選択される。本発明の抗体組成物および少なくとも1つの化学療法化合物または抗腫瘍化合物を含む医薬品は、癌療法における同時、個別または連続投与のための併用処置として使用され得る。化学療法化合物は、問題の特定の癌の処置に適する任意の化学療法剤、例えば、アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチンまたはオキサリプラチンなどの白金誘導体;植物アルカロイド、例えばパクリタキセル、ドセタキセルまたはイリノテカン;抗腫瘍抗生物質、例えばドキソルビシンアドリアマイシン;トポテカンなどのトポイソメラーゼ阻害剤;および代謝拮抗剤、例えばフルオロウラシルまたは他のフルオロピリミジンから成る群より選択される薬剤であり得る。また、本発明の抗体は、チロシンキナーゼ阻害剤TKIに関連する補助療法において使用され得ることも考えられる。これらは、受容体の細胞内チロシンキナーゼドメインと相互作用し、細胞内Mg-ATP部位に関して競合することによりリガンド誘導性受容体リン酸化を阻害する、合成の、主にキナゾリン由来の低分子量分子である。EGFRファミリー受容体をブロックするいくつかのチロシンキナーゼ阻害剤が現在臨床開発段階にある。これらのTKIの総説については、Spectorら2007BreastCancerRes.92:205参照。本発明の抗体組成物およびHER3を標的とする少なくとも1つのTKIを含む医薬品は、したがって、癌療法における同時、個別または連続投与のための併用処置としても使用され得る。他の実施形態では、本発明の抗体組成物を他の抗体治療薬と組み合わせて使用し得る。これらの例には、例えばEGFRに対する抗体Erbitux登録商標もしくはVectibix登録商標またはVEGFに対する抗体Avastin登録商標、ならびに他のRTK抗体、例えばHER2またはMETなどの1またはそれ以上の他のRTK標的に対する1またはそれ以上の抗体が含まれる。さらに他の実施形態では、本発明の抗体組成物は、免疫系の細胞を刺激することが知られている薬剤と組み合わせて使用してもよく、そのような併用処置は本発明の抗体組成物の効果の免疫介在性増強をもたらす。そのような免疫刺激剤の例には、組換えインターロイキン例えばIL-21およびIL-2が含まれる。2単独療法:腫瘍の単独療法における本発明に従った抗体の使用に関連して、抗体は、化学療法剤または抗腫瘍薬の同時使用を伴わずに、すなわち単独療法として患者に投与され得る。免疫複合体本発明の抗体および組成物の治療的使用についての別の選択肢は、免疫複合体、すなわち1またはそれ以上の抗癌剤と結合した抗体の形態である。特に別個のHER3エピトープに結合する本発明の2またはそれ以上の個別抗体を含む組成物の場合、これは細胞表面に架橋した抗体-受容体格子を生成し、それにより単一モノクローナル抗体の使用と比較して受容体インターナリゼーションのレベル上昇を潜在的にもたらし得ることが考えられる。そのような組成物の個別抗体の1またはそれ以上の、1またはそれ以上の抗癌剤への結合は、それゆえ、結合した抗癌剤を特異的かつ有効に腫瘍細胞の内部へと送達する可能性を有し、それにより本発明の抗HER3抗体の作用を増大させ、改善された腫瘍細胞死滅活性を提供する。細胞傷害性物質従来の化学療法剤および他の低分子抗癌薬、サイトカインこの場合複合体は免疫サイトカインと称され得る、毒素この場合複合体は免疫毒素と称され得るおよび放射性核種を含む、様々な種類の抗癌剤を本発明の抗体に結合することができ、少数の免疫複合体は既に臨床使用に関して承認されている。これらには、Zevalin登録商標90Yに結合したネズミ抗CD20抗体、Bexxar登録商標131Iに結合したネズミ抗CD20抗体およびMylotarg登録商標カリケアマイシンに結合したヒト化抗CD33抗体が含まれる。臨床試験で検討されている他の免疫複合体には、例えばドキソルビシンまたはメイタンシノイド化合物に結合した抗体が含まれる。臨床試験で検討されている免疫毒素には、切頭型シュードモナスPseudomonas外毒素Aに結合したいくつかの抗体が含まれる。IL-2に結合したヒト化EpCAM抗体を含む免疫サイトカインも試験されている。細胞傷害剤に結合させた本発明抗体の場合、これらは、例えば、アルキル化剤例えばカルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、代謝拮抗剤例えばメトトレキサート、カペシタビン、ゲムシタビン、アントラサイクリン例えばブレオマイシン、ドキソルビシン、マイトマイシンCならびに植物アルカロイド例えばドセタキセルおよびパクリタキセルなどのタキサン、ならびにビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンなどのビンカアルカロイドを含む、化学療法剤の主要なクラスのいずれかに属し得る。免疫複合体の使用は、抗癌剤を腫瘍に、特にインターナリゼーション後に腫瘍細胞の内部に特異的に向かわせるので、本発明の抗HER3抗体に基づく免疫複合体は、好都合にはカリケアマイシンもしくはメイタンシン誘導体などの高度細胞傷害性物質、または細菌毒素例えばシュードモナス外毒素A、ジフテリア毒素もしくは植物毒素例えばリシンなどの毒素に基づき得る。免疫複合体中の結合した抗癌剤は、一般に、血清中では比較的安定であるが、免疫複合体が標的細胞内にインターナライズされた場合薬剤の放出を可能にする不安定なリンカーによって抗体に連結される。適切なリンカーには、例えば、血清中の中性pHでは安定であるが、インターナリゼーション後にリソソーム内の弱酸性条件下で酸加水分解を受ける化学的リンカー、細胞内チオールによって切断されるジスルフィドリンカー、および血清中で安定であるが、細胞内区画では酵素切断を受けるペプチドリンカーが含まれる。様々な結合配置が、本発明の2またはそれ以上の抗体を含む組成物において想定され得る。例えば、2つの抗体に関しては、抗体を2もしくはそれ以上の異なる抗癌薬に結合するか、または一方の抗体を、他方の抗体に結合した酵素などの作用物質によって活性化されるプロドラッグに結合することが可能である。抗体指向性酵素プロドラッグ療法ADEPTの一般的な概念がモノクローナル抗体に関して記述されており、この場合、mAB-酵素複合体により腫瘍に標的化された酵素によってプロドラッグが活性化されるが、本発明は、この方法を特定の条件に適合させる可能性を提供し得る。したがって、正常組織への損傷を回避または低減しつつ、腫瘍細胞の死滅を特異的に増大させることが可能であり得る。抗癌性免疫複合体に関するさらなる情報については、Wuら2005NatureBiotechnology239:1137-1146;Schramaら2006NatureReviews/DrugDiscovery5:147-159;およびRohrer2009chimicaoggi/ChemistryToday275:56-60参照。用量および投与経路本発明の抗体および組成物は、問題の状態の処置に有効な量で、すなわち所望結果を達成するのに必要な投与量および期間で投与される。治療有効量は、治療されている特定の状態、患者の年齢、性別および体重などの因子、ならびに抗HER3抗体が単独処置として投与されるかまたは1もしくはそれ以上の付加的な抗癌処置と組み合わせて投与されているかによって異なり得る。腫瘍治療のための有効量は、患者において疾患の進行を安定化するおよび/または症状を改善する、好ましくは、例えば腫瘍サイズを低減することによって、疾患の進行を逆転させるその能力によって測定され得る。癌を阻害する本発明の抗体または組成物の能力は、例えば実施例で述べるような、インビトロアッセイによって、ならびにヒト腫瘍における効果を予測する適切な動物モデルにおいて評価され得る。適切な用法は、個々の特定状況において最適の治療応答を提供するために選択され、例えば単回ボーラスとしてまたは持続注入として、および場合によりそれぞれの症例の緊急性によって指示される投与量の調整を伴って投与される。本発明による抗体についての明確な投与量はまだ決定されていないが、治療的使用に関して承認されている類似製品例えばHER2またはEGFRに対するモノクローナル抗体との比較を通して一定の投与上の考慮事項を決定することはできる。したがって、本発明の抗体組成物の適切な投与量は、抗HER3モノクローナル抗体トラスツズマブHerceptin登録商標または抗EGFRモノクローナル抗体パニツムマブVectibix登録商標についての推奨投与量と同様であることが考えられる。個々の状態によって、Herceptin登録商標は、4mg/kgの初回用量およびその後週1回の2mg/kgの用量、または8mg/kgの初回用量およびその後3週間に1回の6mg/kgの用量のいずれかで乳癌の処置のために注入によって投与され、一方Vectibix登録商標は14日ごとに6mg/kgの用量で投与される。本発明の抗体組成物の適切な用量は、0.1-100mg/kg、例えば約0.5-50mg/kg、例えば約1-20mg/kgの範囲内であると考えられる。抗体組成物は、例えば、少なくとも0.25mg/kg、例えば少なくとも0.5mg/kg、例えば少なくとも1mg/kg、例えば少なくとも1.5mg/kg、例えば少なくとも2mg/kg、例えば少なくとも3mg/kg、例えば少なくとも4mg/kg、例えば少なくとも5mg/kg、および例えば最大50mg/kgまで、例えば最大30mg/kgまで、例えば最大20mg/kgまで、例えば最大15mg/kgまでの用量で投与され得る。投与は、通常は適切な間隔で、例えば週に1回、2週間に1回、3週間に1回、または4週間に1回、担当医師が適切と判断する期間にわたって反復され、担当医師は場合により必要に応じて用量を増加または減少させ得る。3つの別個の送達方法が本発明の抗体の送達のために企図される。従来の静脈内送達は、おそらく腫瘍の大多数についての標準的な送達技術である。しかし、卵巣、胆管、他の管等の腫瘍のような腹腔における腫瘍に関しては、腹腔内投与が、腫瘍において抗体の高用量を得るためおよび抗体のクリアランスを最小限に抑えるために好ましいことが証明され得る。同様に、一部の固形腫瘍は局所灌流に適した血管系を有する。局所灌流は、腫瘍の部位で抗体の高用量を得ることを可能にし、抗体の短期的なクリアランスを最小限に抑え得る。タンパク質または抗体の注入に基づく治療用製品と同様に、安全上の懸案事項は、主としてiサイトカイン放出症候群、すなわち高血圧、熱、震え、悪寒、iiタンパク質に対する免疫原性応答の発現すなわち組換え抗体製品に対する患者によるヒト抗体の発現、およびiiiHER3受容体を発現する正常細胞への毒性に関連する。そのような安全上の懸案事項を監視するために標準的な試験およびフォローアップ手順が用いられる。本出願において引用されるすべての特許および非特許参考文献については、それらの全体を出典明示により本明細書に援用する。本発明を以下の非限定的実施例においてさらに説明する。実施例1:抗HER3抗体のクローニング免疫化3匹の雌マウス、すなわち1匹のBALB/cJマウス、1匹のC57BL/6マウスおよび1匹のC3Hマウス8-10週齢を免疫化のために使用した。マウスを市販のHER3タンパク質RDSystems、カタログ番号348-RBで免疫化した。最初の4回の免疫化に関しては、HER3タンパク質をPBSに希釈し、フロイントアジュバントと1:1v/vで混合した。5回目および最後の免疫化は、アジュバントなしで、PBS中のHER3タンパク質で行った。アジュバントは、免疫応答を増強し、調節するために使用される。1回目の免疫化では完全フロイントアジュバントCFAを使用し、2回目、3回目および4回目の免疫化には不完全フロイントアジュバントIFAを使用した。IFAは鉱油から成る水中油型エマルションであり、CFAは、加熱殺菌した乾燥ミコバクテリウムMycobacterium種を添加したIFAである。どちらのアジュバントもデポー作用を有する。CFA中のミコバクテリウムは免疫系の強力な活性化を生じさせ、免疫応答の長期的な持続をもたらす。安定なエマルションだけをマウスに投与した。組換えHER3タンパク質10μgをそれぞれの免疫化に使用した。合計で、マウスは5回の注射を受けた。最初の4回の注射についてはすべてのマウスに抗原-アジュバントエマルション200μlを皮下s.c.注射し、5回目の注射についてはPBS中の抗原100μlを腹腔内i.p.注射した。免疫化、アジュバント、注射経路等の要約を表4に示す。マウスを頚椎脱臼によって犠死させ、脾臓と鼡径リンパ節を採取した。70μmセルストレーナーFalcon,BDBiosciences、カタログ番号352350に通して解離させることにより、単細胞懸濁液を調製した。3匹のマウスからの細胞をプールし、10FBSを含む冷RPMI-1640に再懸濁して、遠沈させた。表4:免疫化の要約ネズミ形質細胞のFACS選別赤血球を取り除くため、プールした細胞懸濁液を0.17MNH4Clに溶解した。溶解後、細胞を2FBS/PBSで2回洗浄した。細胞を2FBS/PBS1mlに再懸濁し、Fc-ブロック抗マウスCD16/CD32、BDBiosciences、カタログ番号553141と共にインキュベートして、1回洗浄した。2FBS/PBSに再懸濁した後、細胞を抗マウスCD43-FITCBDBiosciences、カタログ番号553270、抗マウスCD138-PEBDBiosciences、カタログ番号553714、抗マウスIgM-HorizonBDBiosciences、カタログ番号560575、抗マウスIgG1-APCBDBiosciences、カタログ番号550874、抗マウスMHCIII-A/I-Ed-ビオチンBDBiosciences、カタログ番号553622および抗マウスB220/CD45R-PerCPBDBiosciences、カタログ番号553093で20分間、暗所において染色した。細胞を洗浄し、ストレプトアビジン-APC-Cy7BDBiosciences、カタログ番号554063と共に20分間インキュベートして、洗浄した。細胞をFACSAria商標セルソーターでFACS選別した。B220lowMHCIIintCD43CD138IgM-である細胞を、PCR反応緩衝液を含む384ウェルマイクロタイタープレートに単細胞選別した。プレートを遠心分離し、凍結して、-80°Cで保存した。コグネイトVHおよびVL対の連結VHおよびVLコード-配列の連結を、形質細胞としてゲートした単一細胞に関して実施し、VHおよびVLコード配列のコグネイト対合を容易にした。手順は、1段階多重オーバーラップ伸長RT-PCRとそれに続くネステッドPCRに基づく2段階PCR手法を用いた。本実施例で使用したプライマーミックスはκ軽鎖だけを増幅する。しかし、所望する場合は、λ軽鎖を増幅することができるプライマーを多重プライマーミックスおよびネステッドPCRプライマーミックスに添加することができる。λプライマーを添加する場合は、λ陽性細胞が排除されないように選別手順を適合させるべきである。コグネイトVHおよびVL配列の連結についての原理は、国際公開第2005/042774号およびMeijerら2006JMolBiol.3583:764-72で詳細に説明されている。96ウェルPCRプレートを解凍し、選別した細胞を多重オーバーラップ伸長RT-PCRのための鋳型として使用した。単細胞選別の前に各ウェルに添加した選別緩衝液は、反応緩衝液OneStepRT-PCR緩衝液;Qiagen、RT-PCR用プライマーおよびRNアーゼ阻害剤RNasin,Promegaを含んだ。オーバーラップ伸長RT-PCRに使用したプライマーならびにプライマー濃度は、国際公開第2008/104183号の表3に列挙されているものと同じであった。これに、OneStepRT-PCR5EnzymeMix25倍希釈;QiagenおよびdNTPミックス各200μMを添加して、反応容量20μl中で所与の最終濃度を得た。プレートを55°Cで30分間インキュベートし、各細胞からRNAを逆転写RTさせた。RT後、プレートを以下のPCRサイクルに供した:94°C、10分、35×94°C、40秒、60°C、40秒、72°C、5分、72°C、10分。PCR反応は、ハイスループットを容易にするため24枚の96ウェルプレート用のPeelSealBasketABgeneを用いてH20BITThermalCyclerで実施した。サイクリング後、PCRプレートを-20°Cで保存した。ネステッドPCR段階については、所与の最終濃度を得るために各ウェル中に以下の混合物反応物20μlを含む96ウェルPCRプレートを調製した:1×FastStart緩衝液Roche、dNTPミックス各200μM、ネステッドプライマーミックス、PhusionDNAポリメラーゼ0.08U;FinnzymesおよびFastStartHighFidelityEnzymeBlend0.8U;Roche。ネステッドPCRに使用したプライマーならびにプライマー濃度は、国際公開第2008/104183号の表4に列挙されているものと同じであった。ネステッドPCRのための鋳型として、多重オーバーラップ伸長PCR反応物から1μlを移した。ネステッドPCRプレートを以下のサーモサイクリングに供した:35×95°C、30秒、60°C、30秒、72°C、90秒、72°C、10分。無作為に選択した反応物を1アガロースゲル上で分析し、約890塩基対bpのオーバーラップ伸長フラグメントの存在を確認した。PCRフラグメントのさらなるプロセッシングまで、プレートを-20°Cで保存した。ネステッドPCRからの連結したVHおよびVLコード対のレパートリーを、異なるドナーからの対を混合せずにプールし、分取用1アガロースゲル電気泳動によって精製した。ヒトκ定常軽鎖をコードする配列を、国際公開第2008/104183号に記載されているように、オーバーラップ伸長法によって連結したVHおよびVLコード対のプールしたPCR産物のVLコード領域にスプライスした。ヒトκ定常軽鎖コード配列を、κ軽鎖を有するヒト抗体のコード配列を含むプラスミドから、総容量50μl中、PhusionEnzyme2U;Finnzymes、1×Phusion緩衝液、dNTPミックス各200μM、hKCforw-v2プライマーおよびκ3’プライマー使用したプライマーおよび濃度については国際公開第2008/104183号の表5参照ならびにプラスミド鋳型pLL13810ng/μlを含む反応物において増幅した。反応物を以下のサーモサイクリングに供した:25×95°C、30秒、55°C、30秒、72°C、45秒、72°C、10分。生じたPCRフラグメントを分取用1アガロースゲル電気泳動によって精製した。各レパートリーからの精製プールPCRフラグメントを、次のものを含むオーバーラップ伸長PCR総容量50μlによる以下のスプライシングによって、ヒトκ定常コード領域の増幅精製したPCRフラグメント配列番号42にスプライスした:ヒトκ定常コード領域フラグメント1.4ng/μl、精製プールPCRフラグメント1.4ng/μl、PhusionDNAポリメラーゼ0.5U;FinnzymesおよびFastStartHighFidelityEnzymeBlend0.2U;Roche、1×FastStart緩衝液Roche、dNTPミックス各200μM、mhKCrevプライマーおよびmJHセットプライマー使用したプライマーおよび濃度については国際公開第2008/104183号の表5参照。反応物を以下のサーモサイクリングに供した:95°C、2分、25×95°C、30秒、55°C、30秒、72°C、1分、72°C、10分。生じたPCRフラグメント約4518bpを分取用1アガロースゲル電気泳動によって精製した。コグネイトVHおよびVLコード対のスクリーニングベクターへの挿入HER3に対して結合特異性を有する抗体を同定するために、得られたVHおよびVLコード配列を完全長抗体として発現させた。これには、VHおよびVLコード対のレパートリーを発現ベクターに挿入し、宿主細胞にトランスフェクトすることが含まれた。連結したVHおよびVLコード対を含む発現ベクターのレパートリーを作製するため、2段階クローニング手順を用いた。統計的に、発現ベクターのレパートリーが、スクリーニングレパートリーの作製に使用されるコグネイト対のVHおよびVLPCR産物の数の10倍に相当する数の組換えプラスミドを含む場合、すべてのユニークな遺伝子対が示される可能性は99ある。したがって、400個のオーバーラップ伸長V遺伝子フラグメントが得られた場合、すべてのユニーク遺伝子対の99の可能性を有するスクリーニングのために少なくとも4000クローンのレパートリーを作製する。簡単に述べると、ヒトκ定常コード領域にスプライスした、連結VHおよびVLコード対のレパートリーの精製PCR産物を、PCR産物の末端に導入した認識部位でXhoIおよびNotIDNAエンドヌクレアーゼにより切断した。切断し、精製したフラグメントを、XhoI/NotI消化哺乳動物IgG発現ベクター00-VP-002国際公開第2008/104183号に記載されているに、標準的な連結手順によって連結した。連結混合物を大腸菌に電気穿孔し、適切な抗生物質を含む2×YTプレートに添加して、37°Cで一晩インキュベートした。増幅したベクターのレパートリーを、標準的なDNA精製方法Qiagenを用いてプレートから回収した細胞から精製した。AscIおよびNheIエンドヌクレアーゼを使用した切断によるプロモーター-リーダーフラグメントの挿入のためにプラスミドを調製した。これらの酵素の制限部位は、VHおよびVLコード遺伝子対の間に位置した。ベクターの精製後、AscI-NheI消化二方向性哺乳動物プロモーター-リーダーフラグメントを標準的な連結手順によってAscIおよびNheI制限部位に挿入した。連結されたベクターを大腸菌で増幅し、標準的な方法を用いてプラスミドを精製した。作製したスクリーニングベクターのレパートリーを、従来の手順によって大腸菌に形質転換した。得られたコロニーを384ウェルマスタープレートに集約し、保存した。哺乳動物発現プラスミドの増幅のために2段階手順を使用した。最初に、水酸化ナトリウム中でインキュベートすることによって細菌を溶解し、DNAを変性させた。その後、TempliPhi増幅を実施したGEAmersham。この方法は、ローリングサークル増幅法によって二本鎖環状DNA鋳型を指数関数的に増幅するためにバクテリオファージΦ29DNAポリメラーゼを利用する。哺乳動物細胞における抗体発現のために、293Freestyle商標発現系Invitrogenを、製造者によって推奨される標準的なトランスフェクション条件を用いて適用した。トランスフェクションの前に細胞にバルプロエートを添加して50mMとし、その翌日、TryptoneN1を加えてトランスフェクション容量の1.5w/vの最終濃度にした。トランスフェクションの6日後に抗体を含む上清を採取した。標準的な抗IgGELISAで発現レベルを評価した。組換えHER3タンパク質への結合に関するスクリーニングELISA組換えHER3タンパク質を抗原として使用して、抗体特異性をELISAによって測定した。簡単に述べると、NuncMaxisorbプレートカタログ番号464718を、PBSで希釈した1μg/mlHER3タンパク質RDSystems、カタログ番号348-RBにより4°Cで一晩被覆した。50μlの2乳-PBS0.05Tween20中でのブロッキングに先立ち、プレートをPBS-Tで1回洗浄した。プレートをPBS-Tおよび20μlの2乳-PBS-Tで1回洗浄し、FreeStyle293トランスフェクタントからの上清10μlを添加して、室温で1時間インキュベートし、その後プレートを各ウェルにつきPBS-T、20μlで1回洗浄した。ウェルに結合した抗体を検出するために2乳-PBS-Tで1:25000希釈した二次抗体HRP-ヤギ抗ヒトκ軽鎖、Serotec、カタログ番号STAR100Pを添加し、室温で1時間インキュベートした。プレートをPBS-Tで1回洗浄した後、基質25μlKem-En-TecDiagnostics、カタログ番号4518を添加し、5分間インキュベートした。反応を停止させるため、インキュベーション後に1M硫酸25μlを添加した。450nmでELISAリーダーにて特異的シグナルを検出した。ELISAデータから480の陽性抗体クローンを同定し、配列分析およびHER3への結合の確認のために選択した。配列分析およびクローン選択ELISAによりHER3に結合すると同定されたクローンを元のマスタープレート384ウェル形式から回収し、寒天プレートに画線接種して単一コロニーを作製し、コロニーをLB培地培養物に取り、激しく振とうしながら37°Cで一晩インキュベートした。Qiaprep96ターボミニプレップキットQiagen、カタログ番号27193を用いてプラスミドDNAをクローンから単離し、V遺伝子のDNA塩基配列決定に供した。配列を整列させ、すべてのユニークなクローンを選択した。得られた配列のマルチプルアラインメントは個々のクローンのユニーク性を明らかにし、ユニークな抗体の同定を可能にした。配列決定したクローンの配列分析後、2~40を超える成員を有する関連配列の33のクラスターならびに一度だけ提示された20のクローン型を同定した。関連配列の各クラスターは、おそらく共通の前駆体クローンの体細胞超突然変異を通して誘導された。全体で、各クラスターから1~2個のクローンを配列および特異性の検証のために選択した。クラスター分析に基づき、119のクローンを小規模発現およびさらなる特性検定のために選択した。選択した抗体可変領域の配列を付属の配列表に示す。上記で説明したように、配列表に示す軽鎖配列はすべて、アミノ酸-TVAAP-で始まり、C末端の-NRGECで終了する、同じヒトκ定常領域を含む。抗体をコードするクローンを検証するため、DNAプラスミドを調製し、2ml規模でFreeStyleCHO-S細胞Invitrogenのトランスフェクションを発現のために実施した。トランスフェクションの6日後に上清を採取した。発現レベルを標準的な抗IgGELISAで評価し、組換えHER3タンパク質への結合に関するスクリーニングで上述したようにHER3特異的ELISAによって、およびHER3過剰発現細胞への抗体結合のハイスループットスクリーニング共焦点顕微鏡検査によって特異性を測定した下記参照。HER3過剰発現細胞への結合に関するスクリーニングOPERA119のクローンを、共焦点顕微鏡検査を用いてHER3過剰発現性乳癌細胞株MCF-7への結合に関してスクリーニングした。10000個のMCF-7細胞を384ウェル細胞担体プレートPerkinElmer、カタログ番号6007439の各ウェルに接種し、一晩付着させた。培地を再び廃棄し、細胞を2ホルムアルデヒド溶液Aldrichカタログ番号533998で洗浄し、固定した。洗浄後、抗体上清40μlを各ウェルに移し、プレートを2時間インキュベートして、その後ウェル中の培地を廃棄し、2μg/mlのAlexa-488標識ヤギ抗ヒトIgGHL、Invitrogenカタログ番号A11013、2μg/mlのCellMaskBlueInvitrogenカタログ番号H34558および1μMHoechst33342Invitrogenカタログ番号H3570を含む新しい培地30μlを各ウェルに添加して、プレートをさらに30分間インキュベートした。次にOPERAハイスループット共焦点顕微鏡PerkinElmerを用いて蛍光のレベルを測定した。ELISAおよびOPERA検証スクリーニングによって得られた結合データから、64のクローンを中規模発現のために選択した。実施例2:選択した抗HER3抗体の機能的特性検定67のユニークな抗体を、生存性アッセイを用いた機能試験のために選択した。細胞損傷は、代謝細胞機能および増殖を維持し、そのためのエネルギーを提供する細胞の能力の喪失を不可避的にもたらす。代謝活性アッセイはこの前提に基づいており、通常はミトコンドリア活性を測定する。細胞増殖試薬WST-1Rocheカタログ番号11644807001は、生細胞の代謝活性を測定する、すぐ使用できる基質である。この実施例では、WST-1アッセイを使用して、2μg/mlの種々の抗HER3抗体で癌細胞を96時間処理した後、代謝活性細胞の数を測定した。癌細胞株MDA-MB-175ATCCカタログ番号HTB-25、A431NSATCCカタログ番号CRL-2592、MCF-7ATCCカタログ番号HTB-22およびMDA-MB-453ATCCカタログ番号HTB-130を、2μg/mlの抗HER3抗体を含む培地中1000細胞/ウェルの濃度で96ウェルプレートに接種した。プレートを加湿インキュベータにおいて37°Cで4日間インキュベートした。次にWST-1試薬20μlを各ウェルに添加し、プレートを37°Cで1時間インキュベートした。次にプレートを軌道プレートシェーカーに移し、さらに1時間放置した。ELISAリーダーにて450nmと620nm参照波長で吸光度を測定した。代謝活性細胞MACのレベルの差を以下のように対照上清のパーセントとして計算した:代謝活性は生細胞の数と相関し、より低いMACはより高いレベルの抗体による細胞増殖阻害に対応すると推測される。選択抗体についてのこの分析の結果を以下の表5に示しており、表5では、個々の癌細胞株ならびに4つの細胞株にわたる阻害のメジアンレベルのデータが提供される。一連の機能活性を有するHER3抗体が同定され、レパートリー内の抗体が試験した癌細胞株の全部または大部分に対して阻害作用を示すことは、これらの結果から明らかである。表5:抗HER3抗体の存在下での代謝活性細胞MACパーセントHER3阻害に対して最も感受性の高い細胞株MDA-MB-175を使用して、表5の10の抗体に関して用量反応曲線を作成した:図1-10参照、これらの表は、種々の濃度の示された抗体で96時間処理したMDA-MB-175細胞の代謝活性を示す。試験したすべての抗体がMDA-MB-175細胞の増殖をブロックするが、図1-10に示すインビボデータに基づくと、抗体5101および5106が最も有効であると思われる。実施例3:抗HER3抗体によるHER3リン酸化の阻害この実施例は、抗HER3抗体がHER3のリガンド誘導性リン酸化を阻害できることを明らかにする。方法抗HER3抗体で処理した細胞株におけるHER3リン酸化のレベルを調べるため、抗体で1時間前処理し、その後10nMのヘレグリンβで刺激したMDA-MB-175およびMCF7細胞の全細胞溶解物に関してウエスタンブロット分析を実施した。細胞をT-75培養フラスコで増殖させ、80の集密度で培地を取り除いて、細胞を1×PBSで洗浄し、0.5FBSを含む培地5mlに希釈した10μg/mlの抗体で処理した。細胞を1時間処理し、その後標準的なRIPA緩衝液を使用して全細胞溶解物を調製した。各試料において総タンパク質濃度を測定し、タンパク質10μgを、リン酸化HER3pHER3に対する一次抗体を使用してウエスタンブロット法によって分析した。結果示されている抗体での1時間の前処理とそれに続く10nMヘレグリンβでの刺激後の細胞株MDA-MB-175およびMCF7におけるホスホ-HER3レベルのウエスタンブロット分析の結果を図11に示す。種々の抗HER3抗体はリガンド誘導性HER3リン酸化を様々な程度に阻害したが、このアッセイにおける最良の抗体は5101、5106、5259および4889であった。抗体5038および5143は、これらの細胞株においてリン酸化HER3のレベルに限られた効果しか及ぼさなかった。実施例4:2つの抗HER3抗体の混合物の機能的特性検定この実施例は、ヒトHER3への結合が確認された本発明の10の選択された抗HER3抗体の中の2つの抗体のすべての可能な混合物のインビトロ試験を述べる。抗体混合物を、4つの異なる癌細胞株:MDA-MB-175、MCF71nMヘレグリンβ、H14371nMヘレグリンβおよびA431NS1μg/mlの抗EGFR混合物9921024の増殖を阻害するそれらの能力に関して評価した。抗EGFR混合物9921024は、国際公開第2008/104183号に記載されている992および1024と称される2つの抗EGFR抗体の等量を含む。方法それぞれヒトHER3受容体への結合が確認されている抗体4785、4889、4935、5038、5082、5101、5106、5143、5144および5259を、最適効果を有する抗体混合物を同定するために2つの抗体のすべての可能な混合物において試験した。例えば384ウェルプレートにおいて種々の抗体の組合せを調製するために使用した方法は、国際公開第2010/040356号で一般的に述べられているものであった。さらなる詳細は下記で述べる。2つの抗体の混合物10の抗体を、1×PBS中で25μg/mlの濃度に希釈し、試験用の2つの抗体の混合物を調製するのに使用するために抗体溶液100μlを384ウェルフィーダープレートのウェルに添加した。試験した4つの細胞株のそれぞれについて、2つの別々の384ウェルプレートを使用し、細胞を含む培地46μlをウェルに添加した。Biomek3000ラボラトリーオートメーションワークステーションBeckmanCoulterを使用して、2つの異なる抗体のすべての組合せが提示されるように、フィーダープレートから2つの異なる抗体各2μlを、培地細胞を含む384ウェルプレートのウェルに添加した。加えて、プレートは、培地対照ウェル1×PBS培地50μl;細胞なし、未処理対照ウェル1×PBS培地50μl細胞;抗体なし、および付加的な対照として本発明の10抗体のうち1つだけと培地4μlを含む培地46μl細胞に加えてウェルを含んだ。2つの抗体の混合物を含むウェル、ならびに培地対照および未処理対照ウェルまたは本発明の単一抗体を含むウェルを有するプレートを加湿インキュベータにおいて37°Cで4日間インキュベートし、その後1×PBS中で1:1希釈した細胞増殖試薬WST-1、5μlをプレート上のすべての関連ウェルに添加した。次にプレートを37°Cで1時間インキュベートし、その後軌道シェーカーに移して、さらに1時間インキュベートした。ELISAリーダーにて450nmと620nm参照波長で吸光度を測定した。代謝活性細胞MACの量を実施例2で述べたように計算した。細胞株MDA-MB-175およびMCF-7を使用して、選択した混合物下記の表6において太字で表示しているに関して用量反応曲線を作成した。WST-1アッセイを実施する前に、適切な抗体および抗体混合物を、2FBSおよび1ペニシリン/ストレプトマイシンP/Sを添加した適切な培地中100μg/mlの最終総抗体濃度に希釈し、最高抗体濃度を含むウェルで50μg/mlの最終総抗体濃度を生じさせた。次に抗体の2倍連続希釈を実施した。その後適切な数の細胞を384ウェルプレートの実験ウェルに添加した。プレートを加湿インキュベータにおいて37°Cで4日間インキュベートした。代謝活性細胞MACの量を、実施例2で述べたように未処理対照のパーセントとして計算した。結果個々の抗体および2つの抗体の混合物を、MACとして計算した、細胞増殖へのそれらのメジアン効果によってランク付けをした。結果を以下の表6に示す。結果は、様々な混合物による増殖阻害のレベルは種々の細胞株の間で大きく異なるが、メジアンMACの差はそれほど顕著でないことを示す。モノクローナル抗体5082は最高レベルのメジアン増殖阻害最低MACを有することが認められたが、いくつかの抗体混合物は細胞株MDA-MB-175を阻害するうえで勝っている。表6の抗体および抗体混合物は4つの細胞株についてのメジアンMACに基づいてランク付けされているが、個々の抗体混合物はいずれか1つまたはそれ以上の細胞株で明らかにされた効果に基づいて興味深いものであり得ること、および単一細胞株だけでの高レベルの阻害低いMACは特定の種類の癌に対するインビボでの極めて有用な抗体の組合せになり得ることに留意すべきである。HER3の非オーバーラップエピトープおよびユニークなエピトープビンの組合せに結合する2つの抗体の混合物太字で表示について用量反応曲線を作成した。結果は、すべての混合物が、効力は異なるが、4つの細胞株すべてを阻害することを示す。表6:4つの癌細胞株MDA-MB-175、MCF7、H1437およびA431NSにおける2つの抗HER3抗体の混合物による癌細胞増殖阻害のレベル。阻害のレベルを代謝活性細胞のMACとして示す。Sym004は、非オーバーラップEGFRエピトープに対する2つの組換え抗EGFR抗体の混合物である;国際公開第2008/104183号およびPedersenら2010CancerRes.702:588-597参照。図12-15は、4つの異なる細胞株における抗HER3抗体の選択混合物上記の表において太字で表示した混合物の代謝活性を示す。図12は、MDA-MB-175細胞株における代謝活性を示し、図13は、1μg/mlのSym004の存在下でのA431NS細胞株における活性を示し、図14は、1nMヘレグリンβの存在下でのMCF7細胞株における活性を示し、図15は、1nMヘレグリンβの存在下でのH1437細胞株における活性を示す。実施例5:3つの抗HER3抗体の混合物の機能的特性検定この実施例は、ヒトHER3への結合が確認された本発明の選択された抗HER3抗体の中で非オーバーラップエピトープおよびユニークなエピトープビンの組合せを有する3つの抗体の混合物のインビトロ試験を述べる。抗体混合物を、4つの異なる癌細胞株:MDA-MB-175、MCF71nMヘレグリンβ、H14371nMヘレグリンβおよびA431NS1μg/mlの抗EGFR混合物9921024の増殖を阻害するそれらの能力に関して評価した。方法それぞれヒトHER3受容体への結合が確認されている抗体4785、4889、5038、5082、5106、5143および5259を、最適効力を有する抗体混合物を同定するために3つの抗体混合物において試験した。選択した抗体および抗体混合物を、実施例4で述べたWST-1生存性アッセイを用いて癌細胞株:MDA-MB-175、MCF71nMヘレグリンβ、H14371nMヘレグリンβおよびA431NS1μg/mlの抗EGFR混合物9921024の成長および増殖を阻害する能力に関して評価した。結果3つの抗体の試験した混合物すべてが、効力は異なるが、4つの細胞株すべてを阻害することが認められた。図16-19は、4つの癌細胞株における3つの抗HER3抗体の異なる混合物の代謝活性を示す。図16は、MDA-MB-175細胞株における代謝活性を示し、図17は、1μg/mlのSym004の存在下でのA431NS細胞株における活性を示し、図18は、1nMヘレグリンβの存在下でのMCF7細胞株における活性を示し、図19は、1nMヘレグリンβの存在下でのH1437細胞株における活性を示す。実施例6:抗HER3の2つの混合物による癌増殖の相乗作用的阻害この実施例は、特定の抗HER3抗体混合物が癌細胞の増殖を相乗作用的に阻害することを明らかにする。方法それぞれヒトHER3受容体に結合することが確認されている抗体5038、5082および5144を、2つの抗体の混合物、50385082および50825144として試験し、それぞれの場合に、細胞増殖の相乗作用的阻害を調べるため、2抗体の混合物を混合物中の2つの個々の抗体と比較した。選択した抗体および抗体混合物を、実施例4で述べたWST-1生存性アッセイを用いて癌細胞株MDA-MB-175の成長および増殖を阻害するそれらの能力に関して試験した。結果結果は、抗体の混合物50385082または50825144が癌細胞株MDA-MB-175の増殖を相乗作用的に阻害することを示す図20および21。実施例7:抗HER3抗体混合物と参照モノクローナル抗体の比較この実施例では、細胞株MDA-MB-175およびMCF-7における抗HER3抗体混合物50385082と参照抗体ペルツズマブおよびMM-121の類似体とのインビトロ比較について述べる。ペルツズマブは、HER2の二量体化アームに結合し、HER2/HER3ヘテロ二量体化をブロックする抗HER2抗体である。ペルツズマブ類似体は、国際公開第2006/033700号および米国特許出願第2006/0121044A1号に開示されているようにペルツズマブの軽鎖および重鎖アミノ酸配列を有する。MM-121は、HER3へのヘレグリンの結合をブロックし、したがってHER3の活性化をブロックする抗HER3抗体である国際公開第2010/019952号およびSchoeberlら、CancerRes.706:2485-94、2010年3月参照。方法実施例4で述べたように用量反応曲線を作成した。参照抗HER3モノクローナル抗体MM-121Merrimack;国際公開第2008/100624号に開示されている配列および参照抗HER2抗体ペルツズマブOmnitarg商標、2C4およびR-1273としても知られる;米国特許出願第2006/121044A1号に開示されている配列の類似体を、シグナルペプチドを有さないそれぞれの抗体のλ軽鎖MM-121またはκ軽鎖ペルツズマブ全体を合成し、隣接するNheIおよびNotI制限部位を付加して、HEK293細胞の一過性発現のために発現ベクターにクローニングすることによって作製した。それぞれの抗体の重鎖VH領域をシグナルペプチドなしで合成し、その後AscIおよびXhoI部位を付加して、生じた配列を軽鎖発現のために使用したのと同じ発現ベクターにクローニングしたところ、前記発現ベクターは、3つの定常IgG重鎖ドメインCH1、CH2およびCH3をコードする配列も同時に含んでいた。ベクターは、各抗体の2本鎖の発現のためにヘッドトゥーヘッド配向で一対のCMVプロモーターを含んだ。結果結果は、抗体混合物50385082が、2つの癌細胞株MDA-MB-175およびMCF7の増殖を阻害するうえで参照抗体MM-121より優れていることを示す。これらの細胞株を使用したところ、ペルツズマブに対する50385082の明らかな優位性は認められなかった。MDA-MB-175細胞における代謝活性を図22に示し、1nmヘレグリンβの存在下でのMCF7細胞の代謝活性を図23に示す。実施例8:抗HER3抗体混合物はHER3の分解を誘導するこの実施例は、2つの抗HER3抗体の混合物が、個々の抗HER3抗体と比較してより有効なHER3分解を誘導できることを明らかにする。ペルツズマブ類似体もこの試験で検討した。方法抗HER3抗体で処理した細胞株におけるHER3のレベルを調べるため、抗体で様々な時間処理したOVCAR-8細胞の全細胞溶解物に関してウエスタンブロット分析を実施した。細胞をT-75培養フラスコで増殖させ、80の集密度で培地を取り除いて、細胞を1×PBSで洗浄し、0.5FBSを含む培地5mlに希釈した20μg/mlの抗体で処理した。細胞を1、2、4、16または48時間処理し、その後標準的なRIPA緩衝液を使用して全細胞溶解物を調製した。各試料において総タンパク質濃度を測定し、タンパク質10μgを、HER3に対する一次抗体を使用してウエスタンブロット法によって分析した。結果HER3レベルの検討からの結果図24は、個々の抗体および混合物の両方が迅速なHER3分解を誘導することを明らかにした。しかし、抗HER3混合物は、個々の抗体と比較してより高レベルのHER3分解を誘導した。ペルツズマブ類似体はHER3分解を誘導することができず、これは、ペルツズマブがHER3ではなくHER2に結合することを考慮すると予想されたことであった。実施例9:抗HER3抗体混合物はHER3シグナル伝達を阻害するこの実施例は、2つの抗HER3抗体の混合物が個々の抗体よりも有効なHER3リン酸化および下流シグナル伝達の抑制を誘導できることを明らかにする。方法HER3リン酸化および下流シグナル伝達のレベルを調べるため、細胞株を抗HER3抗体で様々な時間処理し、全細胞溶解物に関してウエスタンブロット分析を実施した。MDA-MB-175細胞をT-75培養フラスコで増殖させ、80の集密度で培地を取り除いて、その後細胞を1×PBSで洗浄し、0.5FBSを含む培地5mlに希釈した10μg/mlの抗体で処理した。細胞を2、4、16または48時間処理し、その後標準的なRIPA緩衝液を使用して全細胞溶解物を調製した。各試料において総タンパク質濃度を測定し、タンパク質10μgを、pHER3、pAKTSer465、AKTおよびActinに対する一次抗体をそれぞれ使用してウエスタンブロット法によって分析した。結果HER3シグナル伝達の検討からの結果図25は、個々の抗体および混合物の両方がHER3およびAKTリン酸化の迅速な阻害を誘導することを明らかにした。しかし、抗HER3混合物は、HER3およびAKTリン酸化を阻害するうえで個々の抗体より優れていた。実施例10:抗HER3混合物のインビボ効力抗HER3モノクローナル抗体5038および5082ならびに50385082の混合物のインビボ効力を評価するため、化合物をA549肺癌異種移植モデルで試験した。方法2×106のA549細胞を8~10週齢の雌無胸腺ヌードマウスの左側腹部に皮下接種した。腫瘍をカリパスで週に2回測定し、mm3での腫瘍体積を式:幅2×長さ×0.5に従って計算した。115mm3の平均腫瘍サイズでマウスをランダム化し、処置を開始した。マウスを50mg/kgの5038、5082または50385082の腹腔内注射で週に2回5週間にわたって合計10回の注射処置し、その後を観察期間とした。実験は、抗EGFRモノクローナル抗体セツキシマブアイソタイプ対照としておよびビヒクル対照を含み、これらをそれぞれ抗HER3抗体に関するのと同じスケジュールに従って投薬および投与した。結果この試験の結果を図26に示しており、5038または50385082の組合せで処置したマウスでは、26日目処置開始から37日目まで処置に応答して腫瘍増殖が抑制されたことがわかる。この時点以後、2つの群の腫瘍は増殖し始めたが、成長はセツキシマブまたはビヒクル対照群と比較してより緩やかであった。この時点後の結果は統計的に有意ではないが、5038および50385082処置群における腫瘍は、対照群ならびにセツキシマブまたは5082摂取群における腫瘍と比較してよりゆっくり増殖する明らかな傾向がある。5082単独またはセツキシマブで処置したマウスは処置に応答せず、ビヒクル対照群と同様の腫瘍増殖速度を示した。要約すると、結果は、5038および50385082の組合せが、5082単独、セツキシマブまたはビヒクル対照での処置と比較してA549腫瘍異種移植片の成長を抑制するのにより良好であったことを示唆する。実施例11:個々のHER3ドメインへの抗HER3抗体のマッピングこの実施例は、機能活性を有する抗HER3抗体の作製したパネルが、ヒト/マウスキメラ受容体構築物への結合プロフィールによって示されるHER3細胞外ドメインECDのドメインIまたはドメインIIを対象とすることを明らかにする。方法抗HER3抗体パネルはマウスにおいて惹起されたため、自己耐性の概念により抗体はネズミHER3上に存在するエピトープを認識しないと予想される。その結果として、抗体はヒトHER3構築物に挿入されたネズミ配列に結合しないと予想されるので、個々のドメインをコードするヒト配列がネズミ配列で置換されたキメラ受容体構築物をエピトープマッピングのために使用することができる。ヒトおよびネズミHER3mRNA配列それぞれ受入番号M29366およびNM_010153.1をNCBIからダウンロードし、細胞外ドメインI-IVをKaniらJ.Biol.Chem.2005280:8238-8247によって述べられているように割り当てた。4つの各ヒト細胞外HER3ドメインがそれぞれのネズミDNA配列によって置換された、キメラヒト/ネズミドメイン交換変異体にN末端ヒスチジンタグを付し、遺伝子合成して、Hek293細胞において一過性発現させた。完全ヒトおよびネズミECD構築物をそれぞれ陽性および陰性対照として使用した。一過性発現させた受容体構築物からの上清を、ニッケルNTAカラムを使用してヒスチジンタグアフィニティクロマトグラフィによって精製し、精製したタンパク質を炭酸塩緩衝液中1μg/mlでELISAプレートにおいて一晩被覆した。その翌日ウェルを1BSA/PBS-Tでブロックし、ブロッキング緩衝液に希釈した抗体の滴定物を添加した。最後に、ウェルを洗浄し、HRPに結合したマウス抗ヒトIgGFcを添加してELISAを展開し、次に洗浄して、TMB基質を添加した。結果抗体5101および5106は、免疫化の過程で耐性が壊れ、ネズミHER3に対して反応したことが認められた図27-32。しかし5101および5106は、ドメインIがヒト配列を有する他のキメラ構築物よりもネズミDI-ヒトDII-IVHER3構築物すなわちネズミドメインIとヒトドメインII-IVを有する構築物でより低いELISA光学密度OD値を有するので、これら2つの抗体はヒトHER3のドメインIDI内に位置するエピトープに結合すると結論付けることができる。抗体5144および5259はネズミDIを認識せず、ネズミDII交換変異体に弱く結合した。これらの2つの抗体は、その結果、ヒトHER3上のドメインIおよびIIとオーバーラップするエピトープを対象とする。残りの抗体はネズミDI交換変異体を認識しなかったが、他の変異体に結合し、それゆえヒトHER3のドメインI上のエピトープを対象とする。抗HER3抗体のドメインマッピングを図27-32に示しており、これは、被覆したHER3抗原に対する抗HER3抗体および陰性対照の滴定である。結合抗体を抗ヒトFc抗体で検出した。抗Fc複合体とHER3Ec融合タンパク質との間の交差反応性のために、ヒトHER3Fcに対して高いバックグラウンドが認められる。しかし、陰性対照は特異的結合と非特異的結合の間の相違を明らかに示す。以下の表7は、種々の抗HER3抗体が標的とするHER3ドメインの概略を提供する。表7:種々の抗HER3抗体が標的とするドメインヒトHER3ECDとマウスHER3ECDとの間で交差反応する抗体実施例12:表面プラズモン共鳴による抗HER3抗体のエピトープビンニングこの実施例は、機能活性を有する抗HER3抗体の対がどのようにしてHER3ECDのドメインIまたはII上の少なくとも5つの非オーバーラップエピトープビンを標的とするかを明らかにする。方法Biacore2000装置GEHealthcare、デンマーク国で表面プラズモン共鳴SPR分析を用いて抗体対を試験することにより、抗体交差競合分析を実施した。CM5センサーチップGEHealthcare、デンマーク国を、製造者の指示に従って10000共鳴単位RUの抗テトラヒスチジン抗体Qiagen、ドイツ国と結合した。ヒスチジン標識HER3-Fc融合タンパク質RDSystemsをHBS緩衝液に希釈し、5μl/分の流速で抗ヒスチジン表面上に捕捉した。抗体の組合せを、40μg/mlの飽和濃度での競合結合実験において、競合を伴うおよび伴わない最大応答レベルを記録することによって評価した。10mMグリシン-HCl、pH2を注入してチップ表面を再生した。結果試験した10の抗HER3抗体は、5つの異なる非オーバーラップエピトープビンにクラスター化することが認められた図3334。エピトープビンIは、3つの抗体4785、4935および5143を含んだ。エピトープビンIIは抗体5082および4889を含み、そのうちmAb5082はエピトープビンIからのmAb5143と交差競合することも認められた。エピトープビンIIIはユニークであり、mAb5038だけを含んだ。エピトープビンIVはmAb5101および5106を含み、マウスHER3タンパク質とも交差反応した実施例11。最後に、エピトープビンVは抗体5144および5259を含み、これらはDIおよびDIIの両方に存在する類似のエピトープに結合することが認められた実施例11。図33は、抗体交差競合分析によるエピトープビンニングの結果を含む表を示す。最初に上部に列挙する抗体でHER3抗原を飽和させ、次に左側に列挙する抗体を注入することによって分析を実施した。セル内の数は、以下のように計算した競合パーセントを示す:1-競合を伴う最大応答/競合を伴わない最大応答×100箱で囲んだセルは、互いに少なくとも50阻害する抗体対を示す。抗体を競合プロフィールに従ってエピトープビンに割り当てる;図34参照、この図は割り当てられたエピトープビンの間の関係の図解を示し、重複する円は、オーバーラップするエピトープを有する抗体を表す。実施例13:抗HER3混合物のインビボ効力抗HER3モノクローナル抗体5038および5082ならびに50385082の混合物のインビボ効力を評価するため、化合物をBxPC3膵癌異種移植モデルで試験した。方法5×106のBxPC3細胞を8~10週齢の雌無胸腺ヌードマウスの左側腹部に皮下接種した。腫瘍をカリパスで週に2回測定し、mm3での腫瘍体積を式:幅2×長さ×0.5に従って計算した。165mm3の平均腫瘍サイズでマウスをランダム化し、処置を開始した。マウスを50mg/kgの5038、5082または50385082の混合物の腹腔内注射で週に2回3週間にわたって合計6回の注射処置し、その後を観察期間とした。実験には、上記で抗HER3抗体について述べたのと同じスケジュールに従って投薬および投与した、ビヒクル対照が含まれた。結果5038または50385082の組合せで処置したマウスでは、ビヒクル対照群のマウスと比較して腫瘍の増殖が有意に良好に阻害された図35。50385082で処置したマウスでは、ビヒクル対照群と比較して有意差が最初の処置から5日後に早くも認められ、試験期間を通じて持続した。5038で処置したマウスは、1日64日目を除き、57日目からビヒクル対照処置動物と比較して腫瘍増殖を抑制するうえで有意に良好であり、これは試験期間を通じて認められた。5038および50385082の組合せによる腫瘍増殖の有効な阻害はまた、生存率を見ても認めることができた。これらの処置はいずれも、ログランクマンテルコックス検定によって計算した場合、5038については0.003および50385082については0.001のp値でビヒクル対照群と比較して有意に良好であった図36。要約すると、5038および50385082の組合せは、ビヒクルと対照と比較してBxPC3腫瘍異種移植片を有する動物の腫瘍増殖を阻害し、生存率を改善するうえで有意に良好であった。"