25ヒドロキシビタミンDの存在について血液または血液成分を定性的にinvitroアッセイする方法であって、試料に、4~12個の炭素原子の炭素鎖長を有するペルフルオロアルキル酸、またはその塩を加える工程任意選択で試料を希釈液で希釈する工程混合物を抗ビタミンD抗体と共にインキュベーションにかける工程試料を、ビタミンDのコンジュゲートおよび競合的に抗ビタミンD抗体と結合する機能性標識と接触させる工程結合タンパク質に結合した標識化ビタミンD化合物の濃度を測定する工程を含む、方法。ペルフルオロアルキル酸が、ペルフルオロヘキサン酸、ペルフルオロオクタン酸、およびその混合物からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。ペルフルオロアルキル酸が希釈液中に含まれる、請求項1または2に記載の方法。インキュベーションの前に試料を希釈する、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。試料がヒト血清または血漿である、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。結合タンパク質が、磁性粒子上にコーティングした形態で提供される、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。機能性標識が、放射標識、蛍光標識、発光標識、ビオチン標識、金標識、酵素標識からなる群から選択される、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。濃度を、総25OHビタミンDに対する標準物質濃度を参照して測定する、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。ペルフルオロオクタン酸、またはその誘導体が、ペルフルオロオクタン酸、ペルフルオロオクタン酸アンモニウム塩、およびペルフルオロオクタンスルホン酸塩からなる群から選択される、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。請求項1から9のいずれか一項に記載の方法を利用する、血液または血液成分中の25OHビタミンDを測定するためのイムノアッセイ。固相上に固定化された25OHビタミンDに対して特異的な抗体と、ビタミンDおよび機能性標識のコンジュゲートとを含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法を使用してイムノアッセイを実施するためのキット。本発明は、1つの態様において、25ヒドロキシビタミンDの存在について血液または血液成分を定性アッセイするinvitroの方法であって、ビタミンD結合タンパク質からのビタミンDの放出を可能にするために、試料に、4~12個の炭素原子の炭素鎖長を有するペルフルオロアルキル酸、またはその塩を加える工程任意選択で試料を希釈液で希釈する工程混合物を固定化結合タンパク質、とりわけ抗ビタミンD抗体と共にインキュベーションにかける工程試料を、ビタミンDのコンジュゲートおよび競合的に抗ビタミンD抗体と結合する機能性標識と接触させる工程結合タンパク質に結合した標識化ビタミンD化合物の濃度を測定する工程を含む方法を提示する。別の態様では、本発明は、前述の方法を実施するためのキットに属する。さらに別の態様では、本方法は、ポイントオブケア検査に使用することができる。後者は、患者の治療場所またはその近くで検査することを意味し、すなわち血液試料を採取し、それらを診断研究所に送るのではなく、試料は、可能な限り数を制限したステップで、可能な限り回数を制限した手動操作を用いてアッセイを行うことが可能な、携帯型、好ましくは手持形のデバイスに直ちに導入することができる。広い意味で、本発明は、内因性結合タンパク質からビタミンDを放出するために4~12の炭素鎖長を有するペルフルオロアルキル酸またはその塩を使用したイムノアッセイによる、血液または血液成分、とりわけ血清または血漿中のビタミンDの測定に関する。考えられる限りでは、本発明では、ペルフルオロアルキルカルボン酸またはペルフルオロスルホン酸またはその塩を使用することができる。特にペルフルオロヘキサン酸またはペルフルオロオクタン酸を使用することができる。アッセイは、一般に希釈液アッセイバッファーを試料に加える工程抗ビタミンD抗体でコーティングした磁性粒子を加える工程試料をある一定量の時間インキュベートする工程ビタミンDのコンジュゲートおよび機能性標識を加える工程ビタミンDのコンジュゲートおよび抗体に結合した機能性標識の量を測定する工程を含む。このような試料は、血中の25OHビタミンDの存在をアッセイすることが望まれる対象、特にヒトから、当技術分野で既知の任意の方法で採取することができる。試料は、水性希釈液で希釈することが好ましい。希釈液は、アッセイバッファーであることが好ましい。希釈は、抗体の添加前、添加の間、または添加後に行うことができる。試料の希釈液またはアッセイバッファーは、水性系であってよく、好ましくはバッファー溶液であろう。緩衝pHは、60~80の範囲であることが好ましい。適当な希釈液には、例えばリン酸塩クエン酸塩バッファーが含まれる。バッファー中のペルフルオロアルキル酸の濃度は、01~3、好ましくは05のはずである。適当なバッファー溶液は、当技術分野で習慣的であり、ここでは説明は必要ではない。ペルフルオロアルキル酸は、別々の形で加えることができるが、好ましくは試料の希釈液、好ましくはアッセイバッファー中に含まれている。試料は、抗25ビタミンD抗体と接触している。後者は、試料に加えることができ、あるいは試料は、結合タンパク質を含有する反応バイアルに移すことができる。ビタミンDの抗体は、当技術分野で既知であり、ビタミンDのための既存のイムノアッセイで広く使用されている。これらの同じ抗体、ならびに他の結合タンパク質は、同様に本発明で使用することができる。例えば、ビタミンDの抗体の代わりに、ファージディスプレイ技術を用いて生成したような抗体フラグメントを使用してもよい。適当な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体であってよい。それらは、既知の方法、例えばポリクローナルヤギ抗ビタミンD、ポリクローナルウサギ抗ビタミンD、またはビタミンDのためのイムノアッセイへの適用から当技術分野で知られているようなビタミンDの任意の他の適当な抗体で得ることができる。適当な抗体は、例えば以下の参考文献HollisClinChem31111815~1819HollisClinChem393529~533で知られている。使用したような抗体は、固定化することが好ましい。それらは、固体担体を含む微粒子形態で使用することが好ましい。通常、抗体は、固相、例えば微量定量プレート上にコーティングされる。好ましい実施形態では、抗体は、磁性粒子上にコーティングされ、磁場におけるそれらの分離を促進する。抗体の添加後、試料をインキュベートすることができる。必要な時間は、試薬の濃度、結合タンパク質の種類、ならびにインキュベーション中の条件、例えば振盪および温度などの状況に応じて決まる。一般に、インキュベーション時間は、10秒間から数時間の範囲であり、好ましくは1分間から1時間である。自動化プラットフォームでは、短いインキュベーション時間が好ましい。最初のインキュベーション期間後、機能性標識を含むビタミンDのコンジュゲートを加える。ビタミンDの測定のためのイムノアッセイにおける競合的結合抗原として働くことができる多くの標識化化合物が知られている。典型的な標識は、放射標識、蛍光標識、発光標識、ビオチン標識、金標識、酵素標識である。競合的結合アッセイは当業者に知られており、とりわけ、本発明の方法のこの部分は、ビタミンDの測定に適していることが知られている任意の標識を使用して実施できるので、説明は必要ではない。使用できる標識は、特に、既存のビタミンDイムノアッセイに関する前述の参考文献に開示されるものである。濃度の測定を可能にする標識を用いて、結果として、試料中のビタミンDの濃度を測定する。測定した値の解釈は、較正測定、すなわち同じアッセイにおける標準物質の応答によって決定されることが理解されよう。本発明のアッセイの較正は、所定濃度の25OHビタミンDを含む標準物質を用意することによって行うことができる。標準物質中のビタミンDの濃度は、LCMSMS法を使用して測定することが好ましい。本発明は、別の態様では、血液または血液成分中の25OHビタミンDを測定するためのイムノアッセイの形態をした製品を示し、ここで、このアッセイは、上述の実施形態のいずれか1つに基づいた方法を使用する。より具体的には、このような製品は、イムノアッセイを実施するためのキットの形態で提供されよう。このようなキットは、関係する個々の試薬、すなわち抗体、標識化ビタミンD化合物および希釈液アッセイバッファーを含むことができる。これらの試薬は、別々に提供でき、そのため本発明のイムノアッセイでそれらを使用する際にのみキットを形成することができる。試薬は、部品からなる1つのキットとして、好ましくは一緒に提供され、好ましくは一緒に包装される。キットには、任意選択で、血液または血液成分の試料用の容器が含まれるが、習慣的に、別々に提供してもよい。通常、キットは、固相上に固定化した結合剤、および別個のコンジュゲート型ビタミンDを含む。異なる標識には異なる試薬が必要となり得るので、他のキット構成要素は、当技術分野の慣例通り、選択した標識に応じて決まる。本発明は、本明細書で先に記載された実施形態および式に限定されないことが理解されるべきである。特許請求の範囲において、含むという用語は、他の構成要素またはステップを除外しないことも理解されるべきである。単数名詞を参照して、例えばaまたはan、theなどの不定冠詞または定冠詞を使用する場合、これは、他のことが具体的に示されない限り、その名詞の複数形を含む。本発明は、以下の非限定的な実施例および添付の非限定的な図に関して例示される。ビタミンDの測定アッセイは、自動化プラットフォームを使用して行った。試料15μlに、試料希釈液アッセイバッファー255μlを加えた。希釈した試料100μlのアリコートを第2のインキュベーションウェルに移した。モノクローナル抗体でコーティングした体積が50μlの磁性粒子を、希釈した試料に加え、37°Cで45分間インキュベートした。続いてビオチン化ビタミンDの溶液50μlを加え、37°Cで7分間インキュベートした。次いでストレプトアビジンアクリジニウムエステル溶液50μlを加え、再度37°Cで7分間インキュベートした。結合および遊離型ビオチン化ビタミンDの磁気分離後、結合アクリジニウムエステルを定量した。材料常磁性粒子磁性粒子を、マウスIgGに対するポリクローナル抗体でコーティングした。粒子を、pH74の001MPBS、0138MNaCl中05mgmlの濃度で16時間の間、ローラー上でコーティングした。最後に、粒子を、005Mトリス005BSA含有01プロクリン950でブロックした。粒子を、16時間の間37°Cで04μgmg粒子の濃度の抗ビタミンDモノクローナル抗体の第2層でコーティングした。試料希釈液は、005BSAおよび05PFOAを含有するpH80の01Mトリスバッファーからなる。コンジュゲートは、ビオチン化ビタミンDである。コンジュゲートは、005ウシ血清アルブミンを含有するpH80の01Mトリスバッファー中に05ngmlの濃度で存在していた。プロトコル試料15μlに、試料希釈液アッセイバッファー255μlを加えた。希釈した試料100μlのアリコートを第2のインキュベーションウェルに移した。モノクローナル抗体でコーティングした体積が50μlの磁性粒子を、希釈した試料に加え、37°Cで45分間インキュベートした。続いてビオチン化ビタミンDの溶液50μlを加え、37°Cで7分間インキュベートした。次いでストレプトアビジンアクリジニウムエステル溶液50μlを加え、再度37°Cで7分間インキュベートした。結合および遊離型ビオチン化ビタミンDの磁気分離後、結合アクリジニウムエステルを定量した。トリガー試薬の添加によって化学発光シグナルが発生した。キュベット中で発生したシグナルは、試料または標準物質中の25ビタミンDの濃度に反比例する。元の試料中の25ビタミンDの濃度は、未知試料のシグナルを標準物質の応答と比較することによって計算することができる。結果以下の表および図1では、検量線を示している。25ビタミンD3標準物質は、ビタミンDを含まない血清で調製し、0~136ngmlの範囲であった。ビオチン化25ビタミンDは、136ngmlで7のレベルまで置換した。ペルフルオロオクタン酸放出およびペルフルオロヘキサン酸放出を用いて1セットの試料を測定した。結果は、非常に良好な相関があり、どちらの化合物も使用できることを示している。