清澄化NH4OOCRCOONH4含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法であって、a水とアンモニアとを含む上部overhead、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部liquidbottomsを形成するために、>100°C~約300°Cの温度で超大気圧下で培地を蒸留し、b底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、c液体部分から固体部分を分離する、ことを含む方法。液体底部が少なくとも幾らかのNH4OOCRCOOH含み、且つ/又は固体部分が実質的にHOOCRCOOH化合物の酸のアミド酸、アミド及びイミドを含まない、請求項1に記載の方法。HOOCRCOOH及び水、任意にはNH4OOCRCOOHを液体底部から清澄化培地へ再利用することを更に含む、請求項1に記載の方法。培地の蒸留が、ジグリム、トリグリム、テトラグリム、スルホキシド、アミド、スルホン、ポリエチレングリコールPEG、ブトキシトリグリコール、N-メチルピロリドンNMP、エーテル、及びメチルエチルケトンMEKからなる群から選択される少なくとも1つのアンモニア分離溶媒の存在下、又はトルエン、キシレン、メチルシクロヘキサン、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、シクロヘキサン及びヘプタンからなる群から選択される少なくとも1つの水共沸溶媒の存在下で行われる、請求項1に記載の方法。前記液体底部中のHOOCRCOOHの濃度を増加させるために、液体底部から水を除去することを更に含む、請求項1に記載の方法。清澄化NH4OOCRCOONH4含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法であって、aアンモニア分離溶媒及び/又は水共沸溶媒を培地へ添加し、b水及びアンモニアを含む上部overhead、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部liquidbottomsを形成するために、十分な温度及び圧力で培地を蒸留し、c底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、d液体部分から固体部分を分離する、ことを含む方法。液体底部が少なくとも幾らかのNH4OOCRCOOH含み、且つ/又は固体部分が実質的にHOOCRCOOH化合物の酸のアミド酸、アミド及びイミドを含まない、請求項6に記載の方法。HOOCRCOOH及び水、任意には溶媒及び/又はNH4OOCRCOOHを液体底部から清澄化培地へ再利用することを更に含む、請求項6に記載の方法。培地の蒸留が、ジグリム、トリグリム、テトラグリム、スルホキシド、アミド、スルホン、ポリエチレングリコールPEG、ブトキシトリグリコール、N-メチルピロリドンNMP、エーテル、及びメチルエチルケトンMEKからなる群から選択される少なくとも1つのアンモニア分離溶媒の存在下、又はトルエン、キシレン、メチルシクロヘキサン、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、シクロヘキサン及びヘプタンからなる群から選択される少なくとも1つの水共沸溶媒の存在下で行われる、請求項6に記載の方法。前記液体底部中のHOOCRCOOHの濃度を増加させるために、液体底部から水を除去することを更に含む、請求項6に記載の方法。清澄化NH4OOCRCOOH含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法であって、a水とアンモニアとを含む上部overhead、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部liquidbottomsを形成するために、>100°C~約300°Cの温度で超大気圧下で培地を蒸留し、b底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、c液体部分から固体部分を分離する、ことを含む方法。液体底部が少なくとも幾らかのNH4OOCRCOOH含み、且つ/又は固体部分が実質的にHOOCRCOOH化合物の酸のアミド酸、アミド及びイミドを含まない、請求項11に記載の方法。HOOCRCOOH及び水、任意にはNH4OOCRCOOHを液体底部から清澄化培地へ再利用することを更に含む、請求項11に記載の方法。培地の蒸留が、ジグリム、トリグリム、テトラグリム、スルホキシド、アミド、スルホン、ポリエチレングリコールPEG、ブトキシトリグリコール、N-メチルピロリドンNMP、エーテル、及びメチルエチルケトンMEKからなる群から選択される少なくとも1つのアンモニア分離溶媒の存在下、又はトルエン、キシレン、メチルシクロヘキサン、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、シクロヘキサン及びヘプタンからなる群から選択される少なくとも1つの水共沸溶媒の存在下で行われる、請求項11に記載の方法。前記液体底部中のHOOCRCOOHの濃度を増加させるために、液体底部から水を除去することを更に含む、請求項11に記載の方法。清澄化NH4OOCRCOOH含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法であって、aアンモニア分離溶媒及び/又は水共沸溶媒を培地へ添加し、b水及びアンモニアを含む上部overhead、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部liquidbottomsを形成するために、十分な温度及び圧力で培地を蒸留し、c底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、d液体部分から固体部分を分離する、ことを含む方法。液体底部が少なくとも幾らかのNH4OOCRCOOH含み、且つ/又は固体部分が実質的にHOOCRCOOH化合物の酸のアミド酸、アミド及びイミドを含まない、請求項16に記載の方法。HOOCRCOOH及び水、任意には溶媒及び/又はNH4OOCRCOOHを液体底部から清澄化培地へ再利用することを更に含む、請求項16に記載の方法。培地の蒸留が、ジグリム、トリグリム、テトラグリム、スルホキシド、アミド、スルホン、ポリエチレングリコールPEG、ブトキシトリグリコール、N-メチルピロリドンNMP、エーテル、及びメチルエチルケトンMEKからなる群から選択される少なくとも1つのアンモニア分離溶媒の存在下、又はトルエン、キシレン、メチルシクロヘキサン、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、シクロヘキサン及びヘプタンからなる群から選択される少なくとも1つの水共沸溶媒の存在下で行われる、請求項16に記載の方法。前記液体底部中のHOOCRCOOHの濃度を増加させるために、液体底部から水を除去することを更に含む、請求項16に記載の方法。発酵培地が、ATCC寄託番号24725登録商標のファネロケーテクリソルポリウムPhanerochaetechrysorporium株ATCC寄託番号21419登録商標のコリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilus株受託番号FERMBP4535のゴードニアテラエGordonaterrae株ATCC寄託番号33025登録商標のロドコッカス‐ロドクラウスRhodococcusrhodochrous株ATCC寄託番号24725登録商標のファネロケーテクリソルポリウムPhanerochaetechrysorporium株受託番号FERMBP4535のゴードニアテラエGordonaterrae株ATCC寄託番号21419登録商標のコリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilus株ATCC寄託番号33025登録商標のロドコッカス‐ロドクラウスRhodococcusrhodochrous株ATCC寄託番号13697登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavus株ATCC寄託番号13698登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavus株ATCC寄託番号16869登録商標のアスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticus株ATCC寄託番号13696登録商標のアスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticus株ATCC寄託番号56747登録商標のアスペルギルスオリザエAspergillusoryzae株ATCC寄託番号24887登録商標のカンジダトロピカリスCandidatropicalis株ATCC寄託番号64041登録商標のロドトルラムシランギノRhodotorulamucilanginoHOOCRCOOH株リジン要求HOOCRCOOHサッカロマイセスセレビシエccharomycescerevisiae株C1ATCC寄託番号10020登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株アスペルギルステレウスAspergillusterreus株RC4’アスペルギルステレウスAspergillusterreus株CM85JATCC寄託番号10029登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株ATCC寄託番号20542登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株ATCC寄託番号32359登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株ATCC寄託番号32587登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株ATCC寄託番号32588登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株ATCC寄託番号32589登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株ATCC寄託番号32590登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株KATCC寄託番号36364登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株3アスペルギルステレウスAspergillusterreusTN484M1ATCC寄託番号56806登録商標のアスペルギルスイタコニクスAspergillusitaconicus株ATCC寄託番号31916登録商標のシュードモナス‐プチダPseudomonasputida株ATCC寄託番号20184登録商標のカンジダマルトCandidamaltoHOOCRCOOH株トルロプシスカンジダTorulopsiscandida株NC358及びFERMP番号3291のカンジダトロピカリスCandidatropicalis株、から成る群から選択される微生物の存在下で炭素源の発酵によって得られる、請求項1、6、11及び16に記載の方法。よって、NH4OOCRCOONH4化合物含む発酵培地から、実質的に純粋なHOOCRCOOH化合物の酸を直接製造する方法を提供することが望まれている。本発明者等は、清澄化NH4OOCRCOONH4含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法を提供する。この方法は、水とアンモニアとを含む上部overhead、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部liquidbottomsを形成するために、>100°C~約300°Cの温度で超大気圧下で培地を蒸留し、底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、並びに液体部分から固体部分を分離することを含む。また、本発明者等は、清澄化NH4OOCRCOONH4含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法も提供する。この方法は、アンモニア分離溶媒及び/又は水共沸溶媒を発酵培地へ添加し、水とアンモニアとを含む上部、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部を形成するために十分な温度及び圧力で培地を蒸留し、底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、液体部分から固体部分を分離することを含む。さらに、本発明者等は、清澄化NH4OOCRCOOH含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法も提供する。この方法は、水及びアンモニアを含む上部overhead、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部liquidbottomsを形成するために、>100°C~約300°Cの温度で超大気圧下で培地を蒸留し、底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、並びに液体部分から固体部分を分離することを含む。さらに、本発明者等は、清澄化NH4OOCRCOOH含有発酵培地からHOOCRCOOHを製造する方法も提供する。この方法は、アンモニア分離溶媒及び/又は水共沸溶媒を発酵培地へ添加し、水とアンモニアとを含む上部、並びに、HOOCRCOOHと少なくとも約20wtの水とを含む液体底部を形成するために十分な温度及び圧力で培地を蒸留し、底部を液体部分と、実質的に純粋なHOOCRCOOHである固体部分とに分離させるのに十分な温度及び組成を達成するために、底部を冷却及び/又はエバポレートし、液体部分から固体部分を分離することを含む。当然のことではあるが、以下の説明のうち少なくとも一部は、図における例示のために選択された方法の代表例を指すことを意図したものであり、添付の特許請求の範囲を除いて、本開示発明を定義又は限定することを意図したものではない。本発明の方法は、例えば図1を参照することにより理解される。図1は、本発明の方法の代表例10をブロック図として表したものである。本明細書中では、HOOCRCOOH化合物の酸、NH4OOCRCOOH化合物及びNH4OOCRCOONH4化合物式中、Rは、CH2、CHCH、CH2CHOH、CH23、CCH3CH、CH2CCH2、CHCHCHCH、CH28及びCH210であるが、それに限定されないに言及する。代表的なHOOCRCOOH化合物の酸は、マロン酸、フマル酸、リンゴ酸、グルタル酸、シトラコン酸、イタコン酸、ムコン酸、セバシン酸及びドデカン二酸式中、Rは、CH2、CHCH、CH2CHOH、CH23、CCH3CH、CH2CCH2、CHCHCHCH、CH28及びCH210から成る群から選択されるを含むがそれに限定されない。代表的な、NH4OOCRCOOH化合物は、一アンモニウムマロン酸、フマル酸一アンモニウム、リンゴ酸一アンモニウム、グルタル酸一アンモニウム、シトラコン酸一アンモニウム、イタコン酸一アンモニウム、ムコン酸一アンモニウム、セバシン酸一アンモニウム及びドデカン二酸一アンモニウム式中、Rが、CH2、CH2CHOH、CH23、CCH3CH、CH2CCH2、CHCHCHCH、CH28及びCH210から成る群から選択されるを含むがそれに限定されない。代表的なNH4OOCRCOONH4化合物は、マロン酸二アンモニウム、フマル酸二アンモニウム、リンゴ酸二アンモニウム、グルタル酸二アンモニウム、シトラコン酸二アンモニウム、イタコン酸二アンモニウム、ムコン酸二アンモニウム、セバシン酸二アンモニウム及びドデカン二酸二アンモニウム式中、Rが、CH2、CHCH、CH2CHOH、CH23、CCH3CH、CH2CCH2、CHCHCHCH、CH28及びCH210から成る群から選択されるを含むがそれに限定されない。生育槽12は、通常は備え付けの蒸気滅菌可能な発酵槽であって、NH4OOCRCOONH4化合物、NH4OOCRCOOH化合物及び/又はHOOCRCOOH化合物の酸含有発酵培地の製造に用いられる微生物培養物未記載の培養に使用し得る。そのような生育槽は本技術分野で公知であり、更には言及しない。この微生物培養物は、炭水化物糖等例えば、グルコース、シクロヘキサノール、アルカン例えば、nアルカン、植物ベースの油等の発酵性炭素源からNH4OOCRCOONH4化合物HOOCRCOOH化合物の酸を産生し得る微生物を含んでいてもよい。微生物の代表例としては、大腸菌Ecoli、アスペルギルスニガーAspergillusniger、アスペルギルステレウスAspergillusterreus、アスペルギルスイタコニクスAspergillusitaconicus、コリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumまた、ブレビバクテリウムフラバムBrevibacteriumflavum、エンテロコッカスフェカリスEnterococcusfaecalis、ベイヨネラパルビュラVeillonellaparvula、アクチノバチルススクシノゲネスAtinobacillussuccinogenes、ペシロマイセスバリオッティPaecilomycesVarioti、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、カンジダトロピカリスCandidatropicalis、バクテロイデスフラジリスBacteroidesfragilis、バクテロイデスルミニコラBacteroidesruminicola、バクテロイデスアミロフィラスBacteroidesamylophilus、肺炎桿菌Klebsiellapneumoniae、ファネロケーテクリソルポリウムPhanerochaetechrysorporium、コリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilus、ゴードニアテラエGordonaterrae、ロドコッカス‐ロドクラウスRhodococcusrhodochrous、アスペルギルスフラブスAspergillusflavus、アスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticus、アスペルギルスオリザエAspergillusoryzae、ロドトルラムシランギノサRhodotorulamucilanginosa、シュードモナス‐プチダPseudomonasputida、カンジダマルトサCandidamaltosa、及びそれらの混合物等が挙げられる。さらに、必要に応じて、NH4OOCRCOONH4化合物を含む発酵培地の調製において、他の微生物、エシェリキア属、アスペルギルス属、ウスチラゴ属、コリネバクテリウム属また、ブレビバクテリウムフラバム、エンテロコッカス属、ベイロネラ属、アクチノバチルス属、ペシロマイセス属、サッカロミセス属、カンジダ属、バクテロイデス属、クレブシエラ属、ファネロケーテ属、ゴルドナ属、ロドコッカス属、ロドトルラ属及びシュードモナス属及びトルロプシス属、デバリオミケス属、ハンゼヌラ属、ピキア属、クモノスカビ属菌種、例えば、リゾプスニグリカンスRhizopusnigricans、リゾプスアルヒズスRhizopusarrhizus、リゾプスオリザエRhizopusoryzae、リゾプスオリゴスポルスRhizopusoligosporus、リゾプスミクロスポラスRhizopusmicrosporous、リゾプスシルシナンスRhizopuscircinans、リゾプスホルモサRhizopusformosa等ムコール属クスダマカビ属カラクサケカビ属乳酸菌属大腸菌属が使用できる。フマル酸産生の好ましい微生物は、ATCC寄託番号10260のリゾプスオリザエRhizopusoryzaeWentetPrinsenGeerligs、有性世代株NRRL1526また、リゾプスオリザエRhizopusoryzaeNRRL1526ATCC寄託番号22959のリゾプスオリゴスポルスRhizopusoligosporusSaito、有性世代株NRRL2710寄託されたリゾプスミクロスポルスRhizopusmicrosporusvanTieghem、有性世代、ATCC寄託番号46436の、リゾプスコーニイRhizopuscohniiBerleseetDeToni、有性世代株U1ATCC寄託番号52315のリゾプスシルシナンスRhizopuscircinansvanTieghem、有性世代株NRRL1474ATCC寄託番号52918のリゾプスオリザエAspergillusoryzaeWentetPrinsenGeerligs、有性世代株NRRL2582ATCC寄託番号9363のリゾプスオリザエAspergillusoryzaeWentetPrinsenGeerligs、有性世代株NRRL395及びATCC寄託番号13310のリゾプスストロニファーRhizopusstoloniferEhrenbergFriesLind、有性世代株デザインのWaksman85として寄託されたリゾプスオリザエAspergillusoryzaeWentetPrinsenGeerligs、有性世代を含む。フマル酸製造に適した他の微生物は、マロラクチック酵素、フマラーゼ及びフマル酸脱水素酵素を欠如する乳酸菌宿主株を含む。このような微生物は、FAをグルコース、スクロース、フルクトース及びキシロース等の単糖マルトース等の二糖デンプン等の多糖及び糖蜜等の他の炭素源、転化高度糖蜜、シロップ、穀物、大麦穀物、穀物製品、デンプン加水分解物、コーンスチープリカー等から製造できる。さらに、これらの微生物は、ポテトデキストロース寒天PDAATCC培地336又はその流動培地投下物等の固形培地上で培養する場合に、FAを製造できる。フマル酸を含む発酵培地は、ATCC寄託番号9363のリゾプスオリザエRhizopusoryzaeWentetPrinsenGeerligs、有性世代株NRRL395、又は他のこれらの株から、100gLグルコース、06gL尿素、05mlLコーンスチープリカー、03gLKH2PO4、04gLMgSO47H2O0044gLZnSO47H2O、001gL酒石酸鉄、100gLCaCO3水中の300μgmLポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートTWEEN40登録商標及び300μgmLポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテートTWEEN20登録商標を含む滅菌液体培地で、32oCの4日間の培養によって作成できる。それは、米国特許第4564594号に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。フマル酸を含む発酵培地は、高揮発度糖蜜hightestmolassesの酵素又は酸転化によって産生される15gの転化糖、975g炭酸カルシウム、00375g硫酸マグネシウム7水和物015gリン酸カリウム、15mg硫酸鉄及び水140mL中約002液体発酵培地のww~約025液体発酵培地のwwの硫酸アンモニウム又は尿素の添加及び培地の滅菌によって調製される、滅菌液体培地における培養によってリゾプスオリザエRhizopusoryzae株から作成できる。この滅菌液体培地に続いて、リゾプスオリザエRhizopusoryzaeを接種し、約002液体発酵培地のww~約012液体発酵培地のwwの硫酸アンモニウム又は尿素を接種後24、48、72及び96時に、又はそれらの時間の組合わせ時間に添加して、28oC~32oCで7日間の発酵を行うことができる。それは米国特許第2912363号に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。マロン酸二アンモニウムマロン酸製造の好ましい微生物は、ATCC寄託番号24725登録商標のファネロケーテクリソルポリウムPhanerochaetechrysorporiumBurdsall、有性世代株VKMF1767ATCC寄託番号21419登録商標のコリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilusAkioetal株C42生命工学工業技術研究所Higashi1chome、Tsukubashi、Ibarakiken、Japan受託番号FERMBP4535のゴードニアテラエGordonaterrae株MA1及びTsukamuraが修正しRainey等がATCC寄託番号33025登録商標のNocardialucida株IMRU3890として寄託したロドコッカス‐ロドクラウスRhodococcusrhodochrousZopfを含み、これらは、式HOOCCH2COOR’式中、R’が、アルケニル、アリール、アラルキル又はC320アルキルであるで表されるマロン酸、又はマロン酸モノエステルを、グルコース等の単糖、デンプン及びセルロース等の多糖、及び木等の他の炭素源、コーン及び式NCCH2COOR’式中、R’がアルケニル、アリール、アラルキル又はC320アルキルであるで表されるシアン酢酸エステルから産生できる。さらに、これらの微生物は、ポテトデキストロース寒天ATCC培地336、酵母抽出物グルコース培地ATCC培地25、栄養寒天ATCC培地3又はこれらの流動培地等価物等の固形培地での培養の場合にマロン酸を、又はシアン酢酸エステルとのこのような培地での培養の場合にマロン酸エステルを産生できる。マロン酸二アンモニウムマロン酸を含む発酵培地は、グルコース、セルロース又は木の1炭素源を37oCでの液体静置培養として含む液体培地における培養によって、ATCC寄託番号24725登録商標のファネロケーテクリソルポリウムPhanerochaetechrysorporiumBurdsall、有性世代株VKMF1767、又は他のこのような株から産生できる。これは、Abbas等の、47CurrGenet492005に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。それは、接種後2日目及びその後3日ごとに水飽和O2で流す。ファネロケーテクリソポリウムPhanerochaetechrysoporiumによるマロン酸二アンモニウムマロン酸の製造はまた、FWPOTIS番号DEAC0676RL0183041721のNationalLaboratoryFieldWorkProposalFinalReport、Kingsley、MTRomine、RA及びLasure、LLのAmericanSocietyofMicrobiologyのAnnualMeetingでのポスター発表におけるEffectsofMediumCompositiononMorphologyandOrganicAcidProductioninPhanerochaetechrysosporiumに記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。マロン酸エステルを含む発酵培地は、生命工学工業技術研究所Higashi1chome、Tsukubashi、Ibarakiken、Japan受託番号FERMBP4535のゴードニアテラエGordonaterrae株MA1、ATCC寄託番号21419登録商標のコリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilusAkio等の株C42又はTsukamura修正のRainey等がATCC寄託番号33025登録商標Nocardialucida株IMRU3890として寄託したロドコッカス‐ロドクラウスRhodococcusrhodochrousZopfから、これらの微生物の1つの3mlの滅菌LB培地1ポリペプトン、05酵母抽出物、05NaClへの接種、及び30oCでの24時間の撹拌と共に培養によって産生できる。1mlの生じた細胞培養液を、グリセロール10、イソバレロニトリル02、酵母抽出物002、KH2PO402、MgSO47H2O002、FeSO47H2O10ppm、CoCl24H2O10ppm、CaCl22H2O1ppm及びMnCl24H2O7ppmを含む100mlの滅菌培地ApH72中に接種し、30oCで48時間培養する。培養の終了後、培養液を遠心分離する。生じる細胞ペレットの総量を、続いて脱イオン水で洗浄し、100mlの50mMリン酸緩衝液pH70中で懸濁する。理想的には、細胞懸濁液の濁度は、OD630nm5556である。この細胞懸濁液100gに、ゴードニアテラエGordonaterrae株又はコリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilus株を使用する場合にシアノ酢酸エチルを基質として添加し、30oCで1時間反応させ、モノエチルマロン酸を含む発酵培地を形成させる。ロドコッカス‐ロドクラウスRhodococcusrhodochrous株を使用する場合、100gのnモノエチルを基質として添加し、30oCで1時間で反応させ、モノnプロピルマロン酸を含む発酵培地を形成させる。高速液体クロマトグラフィーHPLCカラムTSKgelODS120ATosohCorp、46mmIDx25cm移動相5アセトニトリル、95水、01リン酸流速05ml分検出UV220nmによる分析は、シアノ酢酸エチルのモノエチルマロン酸への変換又はnプロピルシアノ酢酸のモノnプロピルマロン酸への変換を確認するために実施できる。反応終了後、細胞を遠心分離によって発酵培地から除去できる。2NHC1は、生じる溶液に添加し、pHを20に調整できる。その後、モノエチルマロン酸、反応生成物を、培地から酢酸エチルで抽出できる。無水硫酸ナトリウムを、生じる有機層に脱水のために添加でき、溶媒を蒸留によって除去し、モノエチルマロン酸が約899得られる。生命工学工業技術研究所Higashi1chome、Tsukubashi、Ibarakiken、Japan受託番号FERMBP4535のゴードニアテラエGordonaterrae株MA1及びATCC寄託番号21419登録商標のコリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilusAkio等の株C42による、式NCCH2COOR’で表されるシアン酢酸エステルからの、式HOOCCH2COOR’を有するこのようなマロン酸エステルの製造は、米国特許第6238896号にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。また、30oCでの1時間の反応の終了及び細胞除去後、けん化反応は、ゴードニアテラエGordonaterrae株又はコリネバクテリウムニトリロフィラスCorynebacteriumnitrilophilus株由来の発酵培地を、モノエチルマロン酸エステルからモノエチル基を除去しアルコールCH3CH2OHエタノール及びHOOCCH2COOを形成するのに十分な量のKOH等の強塩基で処理することによって実施できる。得られるHOOCCH2COOは、続いて適した発酵培地を形成するために処理できる。同様に、30oCでの1時間の反応の終了及び細胞の除去後、ロドコッカス‐ロドクラウスRhodococcusrhodochrous株由来の発酵培地をモノnプロピルマロン酸エステルからモノnプロピル基を除去しアルコールCH3CH2CH2OHnプロパノール及びHOOCCH2COO塩の形態を形成するのに十分な量のKOH等強塩基で処理することによって、けん化反応を実施できる。得られるHOOCCH2COOは、続いて適した発酵培地を形成するために処理できる。けん化反応を介してHOOCCH2COO及びR’OHを形成する脱エステル化が続く、この発酵培地におけるHOOCCH2COOR’エステルの産生アプローチ、及び発酵培地を生じるためのもの等は、式NCCH2COOR’で表される他のシアン酢酸エステルから生じるマロン酸エステルと共に使用できる。リンゴ酸二アンモニウムリンゴ酸製造のための好ましい微生物は、ATCC寄託番号13697登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavusLink、無性世代株A114ATCC寄託番号13698登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavusLink、無性世代株A57ATCC寄託番号16869登録商標のアスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticusSpeare、無性世代株WB465アスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticusSpeare、ATCC寄託番号13696登録商標の無性世代株A237及びATCC寄託番号56747登録商標のアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeAhlburgCohn、無性世代株NRRL3488を含み、これらは、グルコース、スクロース、フルクトース、ガラクトースソルボース及びキシロース等の単糖マルトース等の二糖デンプン等の多糖及びソルビトール等の他の炭素源、グリセロール、糖蜜、コーン等から、リンゴ酸二アンモニウムリンゴ酸を生じる。さらに、これらの微生物は、Czapek’s寒天ATCC培地312及びポテトデキストロース寒天PDAATCC培地336又はこれらの流動培地等価物等の固形培地で培養する場合にリンゴ酸二アンモニウムリンゴ酸を産生できる。リンゴ酸二アンモニウムリンゴ酸を含む発酵培地は、10グルコース、06ペプトン、0015KH2PO4、0015K2HPO4、001MgSO47H2O、001CaCl22H2O、5mgのNaCl、5mgのFeSO47H2O及び蒸留水これらの全ての割合は、容積あたりの重量によって、すなわち、立方センチメーターあたりのグラムを含む液体培地の1Lにおける好気培養によって、ATCC寄託番号13697登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavusLink、無性世代株A114、ATCC寄託番号13698登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavusLink、無性世代株A57、ATCC寄託番号16869登録商標のアスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticusSpeare、無性世代株WB465、ATCC寄託番号13696登録商標のアスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticusSpeare、無性世代株A237及びATCC寄託番号56747登録商標のアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeAhlburgCohn、無性世代株NRRL3488、又は他のこのような株から産生できる。1Lの溶液を、続いて30mLの部分に分け、それぞれ別々の250mlのフラスコに入れ、加圧下、120oCで15間加熱により滅菌する。乾燥加熱によって別々に滅菌した4のCaCO3割合は、容積あたりの重量によって、すなわち、立方センチメーターあたりのグラムを、続いてフラスコそれぞれに添加する。その後、ATCC寄託番号13697登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavusLink、無性世代株A114、ATCC寄託番号13698登録商標のアスペルギルスフラブスAspergillusflavusLink、無性世代株A57、ATCC寄託番号16869登録商標のアスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticusSpeare、無性世代株WB465、ATCC寄託番号13696登録商標のアスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticusSpeare、無性世代株A237及びATCC寄託番号56747登録商標のアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeAhlburgCohn、無性世代株NRRL3488等の微生物、又は他のこのような株又はこれらの組合わせを、培養液中に接種できる。微生物は、続いて200rpmで動くロータリーシェーカー上で7日間28oCで培養し、リンゴ酸Lリンゴ酸を含むpH約54~62の発酵培地を生じる。通常は、産生される発酵培地は約218mgmL~326mgmLのLリンゴ酸を含むことができる。上記培地及びこれらの固体等価物等の他の培地におけるアスペルギルスフラブスAspergillusflavus、アスペルギルスパラジチカスAspergillusparasiticus及びアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeからの発酵培地の作成は、米国特許第3063910号にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。グルタル酸二アンモニウムグルタル酸製造のための好ましい微生物は、ATCC寄託番号24887登録商標のカンジダトロピカリスCandidatropicalisBerkhout、無性世代株OH23、ATCC寄託番号64041登録商標のRhodotorularubraDemmeLodder、無性世代株AKU4817として寄託したロドトルラムシランギノサRhodotorulamucilanginosaJorgensenHarrisonvarmucilaginosa、無性世代、及びリジン要求サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae株C1を含み、これらはグルコース等の単糖及びアゼライン酸等の他の炭素源、nペンタデカン等からグルタル酸二アンモニウムグルタル酸を産生する。さらに、これらの微生物は、モルト抽出物寒天Blakeslee’s処方ATCC培地325YM寒天ATCC培地200又はYM培地ATCC培地200又はこれらの等価物等の培地上で培養できる。グルタル酸二アンモニウムグルタル酸を含む発酵培地は、ATCC寄託番号24887登録商標のカンジダトロピカリスCandidatropicalisCastellaniBerkhout、無性世代株OH23又は他のこのような株から、300mgのNH4H2PO4、200mgのKH2PO4、100mgのK2HPO4、50mgのMgSO47H2O、1μgのビオチン、01wv酵母抽出物及び100mlの蒸留水中の約1vvのnペンタデカンを含む液体培地における32oCでの培養によって産生できる。ATCC寄託番号24887のカンジダトロピカリスCandidatropicalisCastellaniBerkhout、無性世代株OH23を培養することによる、nペンタデカンを含む培地からの発酵培地の産生手順は、Okuhura等の、35AgrBiolChem13761971にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。グルタル酸二アンモニウムグルタル酸を含む発酵培地は、ATCC寄託番号64041登録商標の、RhodotorularubraDemmeLodder、無性世代株AKU4817として寄託した、ロドトルラムシランギノサRhodotorulamucilanginosaJorgensenHarrisonvarmucilaginosa、無性世代、又は他のこのような株から次の通り作成できる。ロドトルラムシランギノサRhodotorulamucilanginosa株は、10グルコース、05ペプトン、03モルト抽出物及び03酵母抽出物割合は全て、容積あたりの重量、すなわち、立方センチメーターあたりのグラムであるを含む100mLの液体培地を含む500mlフラスコ中で、撹拌と共に28oCで38時間培養する。最初のpHは、続いて60まで調整する。培養後、細胞を回収し、生理食塩水で3回洗浄し、続いてM200リン酸カリウム緩衝液pH75中で懸濁する。細胞懸濁液約2040mgmLを、続いてアゼライン酸4mgmLを3mlの02MTrisHCl緩衝液pH75中で28oCで24時間撹拌と共にインキュベートする。続いてこの発酵培地から遠心分離によって細胞を除去し、グルタル酸を含む清澄化発酵培地を生じる。上記工程によるロドトルラムシランギノサRhodotorulamucilanginosa株からの発酵培地の作成は、Ohsugi等の、48AgricBiolChem18811984にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。グルタル酸二アンモニウムグルタル酸を含む発酵培地は、次の通りリジン要求サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae株C1から産生できる。pH55を有し、1Lの水中の75gグルコース、75gNH4H2PO4、3gKH2PO4、0183mgMgSO47H2O、113mgニコチンアミド、015gビオチン、38mgパントテン酸カルシウム、75mgiイノシトール、33mgチアミン塩酸塩、9mgピリドキシン塩酸塩、132mgZnSO47H2O、788mgFeSO4NH42SO46H2O、073mgCuSO45H2O及び100mgLリジンHClを含む滅菌培地を調製する。培地を続いて、200ml部分を500mlの三角フラスコフラスコ中に分配し、リジン要求サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae株C1を接種する。リジン要求サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae株C1は、Mattoon等の、51BiochimEtBiophysActa6151961に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれ、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeC株に由来した。発酵を続いて30oCでロータリーシェーカー上で9日間実施でき、細胞を発酵培地から遠心分離によって除去する。得られる発酵培地を減圧下、35oCで10倍に還元できる。上記工程によるリジン要求サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae株C1からの発酵培地の作成は、Matton及びHaight、237JBiolChem34861962にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。イタコン酸二アンモニウムイタコン酸製造の好ましい微生物は、ATCC寄託番号10020登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株NRRL1960NRRL1960株由来のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株RC4’NRRL1960株由来のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株CM85JATCC寄託番号10029登録商標由来のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株NRRL265ATCC寄託番号20542登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株MF4845ATCC寄託番号32359登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株K26ATCC寄託番号32587登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株14IIATCC寄託番号32588登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株21IATCC寄託番号32589登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株25IIIATCC寄託番号32590登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株KATCC寄託番号36364登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株3ATCC寄託番号56806登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusTN484M1アスペルギルスイタコニクスAspergillusitaconicusKinshita、無性世代株NRRL161及びウスチラゴ属の担子菌Basidiomycetesを含み、これらはグルコース、スクロース、フルクトース、キシロース及びアラビノース等の単糖ラクトース等の二糖デンプン等の多糖及び糖蜜等の他の炭素源、サゴデンプン、サゴデンプン加水分解産物、コーンスチープリカー等からイタコン酸二アンモニウムイタコン酸を生じる。さらに、これらの微生物は、Czapek’s寒天ATCC培地312、ポテトデキストロース寒天PDAATCC培地336、モルト寒天培地ATCC培地323、モルト抽出物寒天Blakesleeの処方ATCC培地325モルト抽出物寒天ATCC培地324ポテトブドウ糖酵母寒天PDYATCC培地337又はこれらの流動培地等価物等の固形培地で培養した場合に、イタコン酸二アンモニウムイタコン酸を産生できる。イタコン酸二アンモニウムイタコン酸を含む発酵培地は、水中の140gLサゴデンプン加水分解産物、18gLコーンスチープリカー、12gLMgSO47H2O及び29gLNH4NO3を含む液体培地における培養によって、アスペルギルステレウスAspergillusterreusTN484株、又は他のこのような株から産生でき、Dwiarti等、98BioresourTechnol33292007に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。イタコン酸二アンモニウムイタコン酸を含む発酵培地は、NRRL1960株由来のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株RC4’及びNRRL1960株由来のアスペルギルステレウスAspergillusterreus株CM85Jから、Frenchpatent8805487及びGillet等、177JBact35731995に記載の通りグルコースを含む液体培地での35oCでの培養によって産生でき、それらの主題は引用により本明細書に組み込まれる。イタコン酸二アンモニウムイタコン酸を含む発酵培地は、ラクトースの代わりにグルコースを含む液体、ラクトースベース培地LBM又は同一培地における培養によって、ATCC寄託番号20542登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株MF4845から産生でき、それはLai等、104JBiosciBioeng92007に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。イタコン酸二アンモニウムイタコン酸を含む発酵培地は、水性培地における培養によって、ATCC寄託番号10020登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株NRRL1960から産生できる。この水性培地は、pHを65に調整し0175gLの液化酵素liquefyingenzymeNovozymesAS、Denmarkによって販売されるTERMAMYL120L登録商標を添加しながら均質化によって、350gLの乾燥固体の小麦デンプンの水溶液を作成することによって調製できる。この水溶液は、続いて蒸気注入滅菌器中に導入できる。続いて温度を100oC~105oCに7分間維持し、95oCまで冷却し、この温度で2時間撹拌タンク中で維持し、続いて35oCまで冷却し、流動化デンプン溶液を生じる。次に、130kgの乾燥個体を含む流動化デンプン溶液の所定量を、1400Lの発酵槽中に導入する。以下の材料を、続いてこの発酵槽に添加するi05kgのコーン抽出物、345kg塩化マグネシウム、03kg硫酸マグネシウム、09kg尿素、04kg塩化ナトリウム、0033kg硫酸亜鉛、005kg一カリウムリン酸塩、1kg塩化カルシウム、006kg硫酸銅及び03kg硫酸pHは36であったを含む100oCで30分間滅菌した栄養液、及びii029kgアミログルコシダーゼNovoIndustry、NovozymesAS、Denmarkによって販売される、AMG200L登録商標。最終容積を無菌水で1000Lに調整できるこの生成培地を、続いて撹拌し、通気し25gLグルコース、45gL硫酸マグネシウム、04gL塩化ナトリウム、0004gL硫酸亜鉛、0LgL一カリウムリン酸塩、05gLコーン抽出物、20硝酸アンモニウム及び05gL硫酸を含む発酵槽中で32~35oCに予め調製できる、20Lの35時間齢のATCC寄託番号10020登録商標培養のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株NRRL1960を接種できる。接種した1400Lの発酵槽中の培地温度を、続いて32oC~35oCに維持し、糖を消費後、且つ酸性度が最高且つ安定の場合に発酵を終了する。麦汁試料を1400Lの発酵槽から定期的に取り除き、イタコン酸含量を評価する。イタコン酸製造のための、ATCC寄託番号10020登録商標培養のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株NRRL1960のイタコン酸二アンモニウムイタコン酸製造のこの方法及び同様の方法は、米国特許第5231016号に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。イタコン酸二アンモニウムイタコン酸を含む発酵培地は、ATCC寄託番号10020登録商標のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株NRRL1960から、1Lの水中の0g~110gのスクロース及び0g~100gのグリセロール、05gのトウモロコシ抽出物CSLコーンスチープリカー、12gの硝酸アンモニウム、03gの水和硫酸マグネシウム、03gの酸化マグネシウム、0315gの水酸化カルシウム、005gの一カリウムリン酸塩及び0380gの水和硝酸銅を含む水性培地中の32oC~35oCでの培養によって産生でき、培地のpHは28~3の値まで硝酸溶液で調整できる。糖が消費され培地の酸性度が最大且つ安定である場合に、発酵を終了する。マストの試料を発酵の終了近くに取り出し、発酵培地の含量を評価する。ATCC寄託番号10020登録商標培養のアスペルギルステレウスAspergillusterreusThom、無性世代株NRRL1960からのイタコン酸二アンモニウムイタコン酸製造のこの方法、及びイタコン酸製造の同様の方法は、米国特許第5457040号、米国特許第3873425号及びMagnuson及びLasureeds、AdvancesinFungalBiotechnologyforIndustryAgricultureandMedicine、Chapter12OrganicAcidProductioninFilamentousFungi、pages307340KluwerAcademicPlenumPublishers2004にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。二アンモニウムシトラコン酸シトラコン酸を含む発酵培地は、次の通りイタコン酸を含む発酵培地から作成できる。約5ww~約20wwのイタコン酸を含む第一の発酵培地は、上記のように調製できる。必要ならば、第一の発酵培地は濃縮又は希釈し、これら、又は他の所望の、イタコン酸濃縮を得られる。細胞は第一の発酵培地から、遠心分離、濾過又は他の手段によって除去できる。イタコン酸は、続いて必要ならば、第一の発酵培地の酸での処理によって、遊離酸形態で置くことができる。通常は、pHは、15~5とでき、最も好ましくは2~25とすることができる。第一の発酵培地は、続いて任意には約50oC~約100oCで又は約100mm~約500mmHgの圧力で濃縮できる。好ましくは、得られた第一の発酵培地は、培地重量に対して約20ww~約80ww、又はより好ましくは約30ww~約50wwのイタコン酸濃度を有する。水に難溶性で添加した場合に共沸混合物を形成する溶媒等、プソイドクメン又はシクロヘキサノン、及びリン酸ピリジニウム等の触媒を、続いて第一の発酵培地に添加し、イタコン酸を脱水し且つシトラコン酸無水物へ異性化できる。得られるシトラコン酸無水物、溶媒及びおそらく他の発酵培地成分を含む第二の発酵培地を、続いて水溶液と適したpHで接触させ、シトラコン酸無水物を加水分解できる。この態様において、第三の発酵培地はシトラコン酸の製造における使用のために作成できる。例えば、培地の重量に対して91wwのイタコン酸濃度の2000kgのアスペルギルス属無菌糸の、第一の発酵培地が得られる。108°Cへの濃縮が実施でき、蒸留し、本質的に全ての水を第一の発酵培地から除去する。同量のプソイドクメン溶媒及び5gのリン酸ピリジニウム触媒を、続いて第一の発酵培地に添加する。水が生じなくなるまで大気圧で蒸留する。得られる第二の発酵培地は、282gのシトラコン酸無水物を含む有機溶液であり、第一の発酵培地の18のイタコン酸含量が得られる。また、第一の発酵培地中のイタコン酸の重量に対して3ww濃度の硫酸は、濃縮より先に第一の発酵培地に添加でき、上記の他の工程を同様に行い、119gのシトラコン酸無水物を含む有機溶液を生じ、収量は第一の発酵培地のイタコン酸含量で76である。アスペルギルス属培養、又は他のイタコン酸産生微生物の培養によって産生される第一の発酵培地由来のシトラコン酸無水物を含む第二の発酵培地の製造は、米国特許第5824820号にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。このようなシトラコン酸無水物、溶媒及びおそらく他の発酵培地成分を含む第二の発酵培地は、続いて適したpHで水溶液と接触させ、シトラコン酸無水物を加水分解することができる。このような態様において、第三の発酵培地をシトラコン酸の製造のために使用できる。ムコン酸二アンモニウムムコン酸を含む発酵培地は、ATCC寄託番号31916登録商標のシュードモナス‐プチダPseudomonasputidaTrevisanMigula株MW121112、又は他のこのような株から、次の通り好気培養によって産生できる。ATCC寄託番号31916登録商標のシュードモナス‐プチダPseudomonasputidaTrevisanMigula株MW121112の接種を、20mMのsodiumsuccinate、71gLのNa2HPO4、136gLKH2PO4、225gLNH42SO4、0246gLMgSO47H2O、00147gLのCaCl22H2O、000278gLのFeSO47H2O及び蒸留水を含む50mlの滅菌液体培地設計NOを含む250mlの振盪フラスコ中で調製する。接種は、250rpmでの撹拌と共に、30oCでの約20~約24時間の培養によって、濁度を200240klett単位に調製できる。pH69に調整されたNaOHを有し、20mMの酢酸ナトリウム、0426gLのNa2HPO4、0817gLのKH2PO4、112gLのNH42SO4、0738gLのMgSO47H2O、00294gLのCaCl22H2O、00167gLのFeSO47H2O、39gL酢酸及び蒸留水を含む12Lの滅菌、液体培地設計LP1を含む16Lの発酵槽で流加発酵を行うことができる。発酵槽に、150mLの接種菌液を接種でき、空気トルエン蒸気流速125cc分で揚水抜気を介して、トルエンを気相で発酵培地に供給する。発酵温度を30oCに維持し、10MNH4OH及び1MH2SO4溶液でpHを69に維持し、溶解酸素を600RPM撹拌及び5リットル分通気又は約05VVMで3090飽和に維持する。PLURONIC登録商標L61ポリオールBASFは、消泡剤として使用できる。発酵培地の濁度が90110klett単位に達する場合接種後約915時間、10ww酢酸、0114wwNa2HPO4及び0218wwKH2PO4を含む水溶液は、発酵槽培地に04mL分の速度で添加できる。空気トルエン蒸気速度は、続いて250cc分まで増大でき、培地濁度が250klett単位に達する場合に再度500cc分まで増大できる。空気トルエン蒸気速度は、濁度が450550klett単位に達しムコン酸生成物の15g1の濃度が発酵培地で達成されたら、最終的に750cc分まで増大できる。流加発酵は、通常2436時間継続される。得られる発酵培地は、続いてポリスルホン型超濾過膜PM100、分子量カットオフ100000を有するROMICON登録商標中空チューブクロスフロー限外濾過膜で濾過し細胞を除去できる。得られる透明な、本質的に無細胞の発酵培地のpHを、続いて濃縮H2SO4でpH115又は他の所望の、又は必要なpHまで調整する。14ggdwhrの最大特異的生産性は、流加発酵中に達成できる。発酵は、流加発酵サイクルを介して細胞成長を制限することによって行うことができる。発酵の初期段階中すなわち、細胞の接種後612時間、成長炭素源20mM又は12gL酢酸及び総リン酸塩3mMは、成長炭素源及びリン酸塩を利用してl2mMムコン酸濃度で0510klett単位接種後から50100klett単位まで細胞の成長を惹起するために過度に存在させることができる。この点で、成長炭素源及び必要なリン酸塩レベルが、発酵槽に供され、さらなる成長及び酵素誘導を提供する。ATCC寄託番号31916登録商標のシュードモナス‐プチダPseudomonasputidaTrevisanMigula株MW121112、又は上記培地における他のこのような株、及び他の同様の培地からの発酵培地の作成は、米国特許第4535059号にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。ムコン酸二アンモニウムムコン酸を含む発酵培地は、ATCC寄託番号20184登録商標のカンジダクロアカエCandidacloacaeKomagata等、無性世代株AJ4719として寄託したカンジダマルトサCandidamaltosaKomagata等、無性世代、又は他のこのような株から次の通り好気培養によって産生できる。ATCC寄託番号20184登録商標のカンジダクロアカエCandidacloacaeKomagata等の、無性世代株AJ4719として寄託したカンジダマルトサCandidamaltosaKomagata等の無性世代株を、脱イオン水中の1gLのカテコール、4gLのNH4NO3、4gLNaCl、115gLNa2HPO4、02gLのKH2PO4、01gLのKCl、10mgLのMgSO47H2O、10mgLCaCl22H2O、5mgLのFeSO47H2O及び500mgLの酵母抽出物を含む滅菌液体培地中に接種する。培養物を続いて、30oCで数日間成長させ、発酵培地を遠心分離し、細胞を除去する。本質的に無細胞の得られる発酵培地のpHを、続いて約pH20又は他の所望のpHに、必要なら2NHCl、濃縮H2SO4で調整する。ATCC寄託番号20184登録商標を有するカンジダクロアカエCandidacloacaeKomagata等の無性世代株AJ4719として寄託したカンジダマルトサCandidamaltosaKomagata等の無性世代、又は上記培地における他のこのような株からの発酵培地の作成は、Gomi及びHoriguchi、52AgricBiolChem5851988に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。二アンモニウムセバシン酸セバシン酸を含む発酵培地は、次の通り作成できる。カンジダ属、トルロプシス属、デバリオミケス属、ハンセヌラ属及びピチア属等の酵母を、第一炭素源としてnデカンを含む無菌培地、第一炭素源としてnデカンを含む、ブドウ糖欠乏修飾YM培地ATCC培地200又は当技術分野で周知の他の酵母培地の等価物等において、標準培養条件下で培養し、発酵培地を生じる。酵母培養によって調製される発酵培地は、第一炭素源としてnデカンを含みブドウ糖が欠如する修飾YMブロスATCC培地200培地において、ATCC寄託番号24887登録商標のカンジダトロピカリスCandidatropicalisCastellaniBerkhout、無性世代株OH23等の、カンジダトロピカリスCandidatropicalis株の培養から調製されることが好ましい。カンジダトロピカリスCandidatropicalis、又は他のこのような株及び酵母種からの発酵培地の作成は、Ulezlo及びRogozhin、40PriklBiokhimMikrobiol5332004にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。二アンモニウムセバシン酸セバシン酸を含む発酵培地は、次の通り作成できる。YM寒天培地の傾斜で培養したトルロプシスカンジダTorulopsiscandida株99由来の酵母トルロプシスカンジダTorulopsiscandida株NC358の1ループフルloopfulを含む接種菌液を、950mlの蒸留水に50mlのnデカン、2gNH4H2PO4、4gK2HPO4、05gMgSO47H2O、1gBACTO登録商標酵母抽出物、1mgMnSO4nH2O、1mgFeSO47H2O及び1mgZnSO47H2Oを含む、無菌、液体培地設計デカン培地の5ml中に接種できる。トルロプシスカンジダTorulopsiscandida株NC358は、トルロプシスカンジダTorulopsiscandida株99親に対するセバシン酸の還元生物同化を有する。接種菌液を続いて、2cmのストローク振幅の200rpmの相互振盪機上で28oCで2日間培養する。続いて5mlの培養培地を、500mlのフラスコ中の665のデカン培地中に接種し、28oCで58日間同一振盪機上で培養する。発酵工程中、2NNaOHの1日2回の添加によって培地のpHを75に維持できる。合計15Lの接種培地を、この様式で調製すべきである。pH70であり、950mlの蒸留水中の50mlのnデカン、3gNH4H2PO4、4gK2HPO4、02gMgSO4nH2O、1gBACTO登録商標酵母抽出物、1gカザミノ酸、1mgMnSO4nH2O、1mgZnSO47H2O、1mgFeSO47H2O及び10μgビオチンを含む滅菌、液体培地を、続いて調製できる。この培地はまた、コーンスチープリカー、モルト抽出物、POLYPEPTON登録商標、カザミノ酸、ビタミン混合物及びそれらの組合わせを含むように修飾できる。135Lのこの培地を含む30Lジャーの発酵槽MarubishiMSJS30Lに、続いて15Lの接種培地を接種する。続いて撹拌速度600rpm、温度25oCで培養を行い、発酵培地が所定濃度を含むまで、pHを65で83時間以上例えば、6日間等維持する。この工程を使用して発酵培地が得られる。トルロプシスカンジダTorulopsiscandida株99、及び他のこのような株由来のトルロプシスカンジダTorulopsiscandida株NC358からの発酵培地の作成は、Kaneyuki等、58JFermentTechnol4051980にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。二アンモニウムセバシン酸セバシン酸を含む発酵培地は、次の通り好気培養によって、FERMP番号3291のカンジダトロピカリスCandidatropicalis株、又は他のこのような株から産生できる。FERMP番号は、No52、4chome、Inagehigashi、Chibashi、Japanの、FermentationResearchInstitute、AgencyofIndustrialScienceandTechnologyによって割り当てられる受託番号であり、FERMP番号を有する微生物はそこから利用できる。FERMP番号3291を有し直鎖炭化水素から長鎖ジカルボン酸を産生する能力を有するトロピカリス株は、YM培地等の適した液体培地を含むインキュベーターで培養でき、1015gLの培養菌体を含む120Lの接種菌液が得られ、240Lのnデカンを含む且つ、任意にはブドウ糖欠如、修飾YM培地等の1200Lの適した滅菌培地を供給した反応器に接種菌液を入れる。この培地を混合しpH5に調整し、32oCで12時間培養する。なお培養中は、無菌空気を速度400L分で供給できる。培地のpHは培養中低下する傾向があるので、10NKOH溶液は培地のpHを5001に維持するために必要に応じて添加できる。12時間後、培地のpHは、70に変換され得る。そして培養はさらに72時間続ける。この後、二アンモニウムセバシン酸セバシン酸及び培養菌体を含む発酵培地1200Lが得られる、サラシ粉及び/又は次亜塩素酸塩を、続いて発酵培地の約50ppmに添加し、撹拌し、希望通り、又は必要であれば、後発酵を回避するために大気に曝露しこの条件下に5日間置く。発酵培地のpHは、同様に、希望通り、又は必要であれば調整できる。FERMP番号3291のカンジダトロピカリスCandidatropicalis株、又は他のこのような株での、基質としてのnデカン等の直鎖、飽和炭化水素由来のジカルボン酸を含む発酵培地の製造は、米国特許第4339536号に記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。ドデカン二酸二アンモニウムドデカン二酸を含む発酵培地は、次の通り好気培養によって、FERMP番号3291のカンジダトロピカリスCandidatropicalis株、又は他のこのような株から産生できる。FERMP番号3291を有し直鎖炭化水素から長鎖ジカルボン酸を産生する能力を有するトロピカリス株は、YM培地等の適した液体培地を含むインキュベーターで培養でき、1015gLの培養菌体を含む120Lの接種菌液が得られ、240Lのnドデカンを含む且つ、任意にはブドウ糖が欠如の修飾YM培地等の1200Lの適した滅菌培地を供給した反応器に接種菌液を置く。この培地を混合し、pH5に調整し32oCで12時間培養した。培養中、無菌空気を400L分速度で供給できる。培地のpHは培養中低下する傾向があるので、必要であれば培地のpHの5001での維持のために10NKOH溶液を添加できる。12時間後、培地のpHを、70に変換され得る。そして培養はさらに72時間継続する。その後、42kgm3のドデカン二酸110デカメチレンジカルボン酸、09kgm3のドデカン酸、11kgm3のnドデカン酸及び22kgm3の培養菌体を含む1200LでpH725の発酵培地が得られる。サラシ粉及び/又は次亜塩素酸塩を50ppm続いて発酵培地に添加し、撹拌し、希望通り又は必要であれば後発酵回避のため、大気に曝露しこの条件下に5日間放置する。pHは、同様に、希望通り、又は必要であれば調整できる。FERMP番号3291のカンジダトロピカリスCandidatropicalis株、又は他のこのような株からの発酵培地の作成は、米国特許第4339536号にも記載され、その主題は引用により本明細書に組み込まれる。発酵性炭素源例えば炭水化物及び糖を、任意により窒素源及び複合栄養素例えばコーンスティープリカー、ビタミン、塩、細胞成長及び/又は産物生成を改善し得る他の材料等の追加培地成分、並びに水と共に、微生物培養物の生育及び維持のために生育槽12に供給してもよい。一般的には、微生物培養物は、酸素富化ガス例えば空気の散布により提供される好気性条件下で培養される。一般的には、微生物培養物の培養の間、pH調節のために酸例えば硫酸及び水酸化アンモニウムを供給する。ある例未記載によれば、酸素富化ガスを酸素欠乏ガス例えば、CO2等に変えることにより、生育槽12内の酸素富化ガス散布により提供される好気性条件を、嫌気性条件に変更する。嫌気性環境により、生育槽12ではインサイチュinsituで、発酵性炭素源からHOOCRCOOH化合物の酸への生物変換を誘発できる。発酵性炭素源からHOOCRCOOH化合物の酸への生物変換の間、pH調節のために、水酸化アンモニウムを供給する。水酸化アンモニウムの存在によって、産生されたHOOCRCOOH化合物の酸の全てでなくても少なくとも一部は中和されてNH4OOCRCOONH4化合物となり、NH4OOCRCOONH4化合物を含有する培地が産生される。CO2の添加は、HOOCRCOOH化合物の酸の産生のための更なる炭素源を提供し得る。他の例によれば、生育槽12の内容物を、流部stream14を経由して、炭水化物源からHOOCRCOOH化合物の酸への生物変換用の別の生物変換槽16に移送してもよい。HOOCRCOOH化合物の酸の産生を生じさせる嫌気性条件を提供するために、生物変換槽16には酸素欠乏ガス例えばCO2を散布する。炭水化物源からHOOCRCOOH化合物の酸への生物変換の間、pH調節のために水酸化アンモニウムを供給する。水酸化アンモニウムの存在により、産生されたHOOCRCOOH化合物の酸の少なくとも一部は中和されてNH4OOCRCOONH4化合物となり、NH4OOCRCOONH4化合物を含有する培地が産生される。CO2の添加は、HOOCRCOOH化合物の酸産生のための更なる炭素源を提供し得る。他の例によれば、生物変換を比較的低いpH例えば3~6で行ってもよい。炭水化物源からHOOCRCOOH化合物の酸への生物変換の間、pH調節のために塩基水酸化アンモニウム又はアンモニアを供給してもよい。所望のpHに応じて、水酸化アンモニウムの存在又は不在により、HOOCRCOOH化合物の酸が産生されるか、或いは産生されたHOOCRCOOH化合物の酸の少なくとも一部が中和されて、NH4OOCRCOOH、NH4OOCRCOONH4化合物又はHOOCRCOOH化合物の酸、NH4OOCRCOOH及び/又はNH4OOCRCOONH4化合物を含む混合物となる。即ち、生物変換時に産生されたHOOCRCOOH化合物の酸は、任意により追加工程としてアンモニア又は水酸化アンモニウムを供給することにより、その後に中和されて、NH4OOCRCOONH4化合物を含有する培地が産生される。従って、NH4OOCRCOONH4化合物含有発酵培地とは通常、発酵培地がNH4OOCRCOONH4化合物と共に、添加及び/又は生物変換等により産生された任意の数の他の成分、例えばNH4OOCRCOOH及び/又はHOOCRCOOH化合物の酸を含むことを意味する。同様に、NH4OOCRCOOH含有発酵培地とは通常、発酵培地がNH4OOCRCOOHと共に、添加及び/又は生物変換等により産生された任意の数の他の成分、例えばNH4OOCRCOONH4及び/又はHOOCRCOOHを含むことを意味する。発酵性炭素源の生物変換の結果として生物変換を行う場所に応じて生育槽12又は生物変換槽16で生じる培地は、通常は不溶性固体、例えば細胞性バイオマスや他の懸濁物等を含む。そこで、蒸留前に流部18を経由して清澄化装置20に移送し、不溶性固体を除去して培地を清澄化する。これによって後の蒸留装置の汚損を低減し又は予防する。不溶性固体の除去は、数種の固液分離技術の何れかを単独又は組合せで用いて行うことができる。固液分離技術としては、限定されるものではないが、遠心分離や濾過限定されるものではないが、限外濾過、精密濾過又は深層濾過が挙げられる。が挙げられる。濾過技術は公知技術に基づいて選択し得る。可溶性無機化合物は、複数の公知の方法により除去することができる。例としては、限定されるものではないが、イオン交換、物理吸着が挙げられる。遠心分離の例として、連続ディスクスタック遠心分離が挙げられる。場合によっては、遠心分離後に、デッドエンド濾過やクロスフロー濾過等の研磨濾過polishingfiltration工程を追加すると有益である。斯かる濾過には、珪藻土等の濾過助剤を使用してもよい。研磨濾過として、より好ましくは限外濾過又は精密濾過である。限外濾過及び精密濾過膜は、例えばセラミックやポリマー等からなる。ポリマー膜の一例として、KochMembraneSystem850MainStreet、Wilmington、MA、USA製SelROMPSU20PpH安定限外濾過膜が挙げられる。これは分子量カットオフ25000ダルトンの市販ポリエーテルスルホン膜であって、通常は圧力0.35~1.38MPa最大圧力1.55Mpa、最高温度50°Cで使用できる。あるいは、濾過工程は、限外又は精密濾過を用いて単独で使用できる。こうして清澄化された、実質的に微生物培養物や他の固体を含まないNH4OOCRCOONH4化合物含有培地又はNH4OOCRCOOH化合物含有培地を、流部22を経由して蒸留装置24に移送する。蒸留装置24から水及びアンモニアが上部overheadとして除去されるとともに、任意により、少なくとも一部が流部26を経由して生物変換槽16或いは嫌気性モードで操作の場合、生育槽12で再利用recycleされる。一部の条件では、特定の蒸留温度及び圧力は重要ではなく、少なくとも蒸留上部が水及びアンモニアを含み、蒸留底部bottomsが少なくとも幾らかのNH4OOCRCOOH化合物と少なくとも約20wtの水を含むように、蒸留を実施すればよい。水の量は少なくとも約30wtがより好ましく、少なくとも約40wtが更に好ましい。蒸留工程からのアンモニア除去率は、温度を上昇させるに従って増加し、また、蒸留時に蒸気を注入することにより未記載増加させることができる。蒸留時のアンモニア除去率は、真空下で蒸留を行い、或いは蒸留装置に空気、窒素等の不活性ガスを散布することによっても増加させることができる。蒸留工程時の水の除去は、底部が少なくとも約20の水を含む限りにおいて、トルエン、キシレン、メチルシクロヘキサン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサン、ヘプタン等の有機共沸剤の使用により促進することができる。水と共沸混合物を形成し得る有機剤の存在下で蒸留を行うと、蒸留によって水相及び有機相を含む二相性底部が生じる。この場合、水相を有機相から分離し、蒸留底部として使用することができる。底部における水のレベルを少なくとも約30wtに維持すれば、アミドやイミド等の副生物を実質的に避けることができる。蒸留工程の好ましい温度は、圧力にもよるが、約50~約300°Cの範囲である。より好ましい温度範囲は、圧力にもよるが、約150~約240°Cである。約170~約230°Cの蒸留温度が好適である。蒸留温度とは底部の温度を指すバッチ蒸留の場合は、最終的に所望量の上部が得られた時点の温度でもよい。水混和性有機溶媒又はアンモニア分離溶媒を添加することにより、上述した範囲の蒸留温度及び圧力において、脱アンモニアが容易になる場合がある。斯かる溶媒としては、受動的水素結合を形成し得る非プロトン性、双極性、酸素含有溶媒が挙げられる。例としては、限定されるものではないが、ジグリム、トリグリム、ジメチルスルホキシドDMSO等のスルホキシド、ジメチルホルムアミドDMF及びジメチルアセトアミド等のアミド、ジメチルスルホン等のスルホン、γブチロラクトンGBL、スルホラン、ポリエチレングリコールPEG、ブトキシトリグリコール、N-メチルピロリドンNMP、ジオキサン等のエーテル、メチルエチルケトンMEK等が挙げられる。そのような溶媒は、清澄化培地中のNH4OOCRCOONH4又はNH4OOCRCOOH化合物からアンモニアの除去に役立つ。蒸留法によらず、蒸留は、底部に少なくとも幾らかのNH4OOCRCOOH化合物と、少なくとも約20wt、より有利には少なくとも約30wtの水とが保持されるように行うことが好ましい。蒸留は、大気圧、低大気圧又は超大気圧下で実施できる。共沸溶媒又はアンモニア分離溶媒なしに蒸留を行うような他の条件下では、蒸留は超大気圧下で、100°C以上~約300°Cの温度で行い、水とアンモニアを含む上部overheadとHOOCRCOOH化合物の酸及び少なくとも約20wtの水を含む液底部を形成する。超大気圧は典型的には、周囲雰囲気以上、約25気圧以下の範囲内である。水の量は、少なくとも約30wtが有益である。蒸留は、一段フラッシュonestageflash、多段式蒸留即ち、多段式カラム蒸留等が挙げられる。一段フラッシュは、任意の種類のフラッシャー例えば塗膜エバポレーター、薄膜エバポレーター、サーモサイフォンフラッシャー、強制循環フラッシャー等で行うことができる。多段蒸留カラムは、トレー、充填物packing等を用いて達成することができる。充填物は、不規則充填物例えばラシヒRaschigリング、ポールPallリング、バールBerlサドル等でも、規則充填物例えばコークスルザーKochSulzer充填物、インタロックスIntalox充填物、メラパックMellapak等でもよい。トレーは、任意のデザイン例えばシーブトレー、バルブトレー、バブルカップトレー等でもよい。蒸留は任意の理論段数で行うことができる。蒸留装置がカラムの場合、その構成は特に重要ではなく、カラムは周知の基準に基づいて設計することができる。カラムは、ストリッピングモード、精留rectifyingモード、又は分留fractionationモードの何れかで操作することができる。蒸留は、バッチモードで行ってもよく、半連続モード又は連続モードで行ってもよい。連続モードでは、培地を蒸留装置に連続的に注入してもよく、また、上部及び底部の形成に伴いこれらを連続的に装置から除去してもよい。蒸留により得られる蒸留物はアンモニア水溶液であり、蒸留底部はNH4OOCRCOOH化合物及びHOOCRCOOH化合物の酸の液体状の水溶液である。これらは更に、他の発酵副生物の塩即ち、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、乳酸アンモニウム等や、色素体を含んでもよい。蒸留底部を、流部28を経由して冷却装置30に移送し、常法により冷却してもよい。冷却法は重要ではなく、熱交換機熱回収型を使用することができる。フラッシュ気化冷却器を用いて底部を約15°Cまで冷却してもよい。15°C以下の冷却には、通常は冷蔵冷却剤を用いる。例としてはグリコール溶液や、それほど好ましくはないが、塩水等が挙げられる。収量の増大を図る目的で、冷却の前に濃縮工程を組み入れてもよい。更に、公知の、例えば、真空エバポレーションと共に、一体型冷却ジャケット及び/又は外部熱交換器を用いた徐熱等を用いて、濃縮及び冷却の両方を組み合わせてもよい。本発明者等は、液体底部に幾らかのNH4OOCRCOOHが存在することで、液体状の水溶液たるNH4OOCRCOOH含有底部に対するHOOCRCOOH化合物の酸の溶解性が低下し、これによって底部が容易に、少なくともHOOCRCOOH化合物の酸から実質的になる固体部分が少なくとも実質的に純粋な結晶HOOCRCOOH化合物の酸であることを意味する固体部分と、これに接する液体部分とに冷却誘導分離されることを見出した。HOOCRCOOH化合物の酸の溶解性はNH4OOCRCOOH水溶液で減少する。ここから本発明者等は、幾らかのNH4OOCRCOOHもまた溶液中に存在する方が、HOOCRCOOH化合物の酸を水溶液からより完全に結晶化できることを見出した。この事実によって、NH4OOCRCOOHが存在しない場合に必要な温度よりも高い温度で、HOOCRCOOH化合物の酸を結晶化する即ち、蒸留底部の固体部分を形成することが可能となる。蒸留底部を、固体部分を液体部分から分離するために、冷却後、流部32を経由して分離器34に導入する。分離は、加圧濾過例えば、Nutsche又はRosenmond型加圧濾過器、遠心分離等により達成できる。生じた固体産物を産物36として回収し、所望により標準法で乾燥してもよい。分離後、固体部分の表面に液体部分が残存することのないように、固体部分を処理することが望ましい。固体部分の表面に残る液体部分の量を最小化するための一つの方法は、分離した固体部分を水洗し、洗浄後の固体部分を乾燥することである未記載。固体部分を洗浄するための簡便な方法としては、いわゆるバスケット遠心分離の使用が挙げられる未記載。適切なバスケット遠心分離機は、TheWesternStatesMachineCompanyHamilton、OH、USAから入手できる。セパレーター35の液体部分即ち母液は、残存する溶解HOOCRCOOH化合物の酸、任意の非変換NH4OOCRCOOH、酢酸アンモニウム、乳酸類lactate、ギ酸類formate等の任意の発酵副生物、その他の微量不純物を含む場合がある。この液体部分を、流部38を経由して下流装置40に導入する。一例によれば、装置40は、混合物を適量の水酸化カリウムで処理することにより、例えばアンモニウム塩をカリウム塩に変換し、解氷剤deicerを作製する手段であってもよい。この反応で生じたアンモニアを回収し、生物変換槽16又は嫌気性モードで操作する生育槽12で再利用してもよい。得られたカリウム塩混合物は、解氷剤及び防氷剤antiicerとして有用である。HOOCRCOOH化合物の回収を促進し、更にはNH4OOCRCOOH化合物からHOOCRCOOH化合物の酸への変換を推進するために、固体分離工程34由来の母液を、流部42を経由して、蒸留装置24で再利用又はその一部を再利用してもよい。冷却誘導結晶化の固体部分は、実質的に純粋なHOOCRCOOH化合物の酸であり、ひいてはHOOCRCOOH化合物の酸の公知用途に有用である。HPLCを用いて、HOOCRCOOH化合物の酸のアミド酸やアミド及びミド等の窒素含有不純物の存在を検出してもよい。HOOCRCOOH化合物の酸の純度は元素炭素及び窒素分析により決定できる。アンモニア電極を用いてHOOCRCOOH化合物の酸の純度の粗近似値を決定することも可能である。状況や種々の操作入力によっては、発酵培地が清澄化NH4OOCRCOOH含有発酵培地又は清澄化HOOCRCOOH化合物の酸含有発酵培地である場合がある。斯かる状況では、実質的に純粋なHOOCRCOOH化合物の酸の産生を容易にするために、これらの発酵培地にNH4OOCRCOONH4、NH4OOCRCOOH及び/又はHOOCRCOOH、任意により、アンモニア及び/又は水酸化アンモニウムを添加するのが有利な場合もある。例えば、培地がNH4OOCRCOOH化合物含有培地又はHOOCRCOOH化合物の酸含有培地となるような方向に、発酵培地のpHを操作してもよい。上述した実質的に純粋なHOOCRCOOH化合物の酸の製造を容易にするために、これらの発酵培地にNH4OOCRCOOH、NH4OOCRCOONH4、HOOCRCOOH、アンモニア及び/又は水酸化アンモニウムを添加し、培地のpHを好ましくは6未満に調整してもよい。ある特定の形態によれば、蒸留工程24で得られる液体底部及び/又はセパレーター34から得られる液体部分から、HOOCRCOOH、NH4OOCRCOOH及び水を発酵培地及び/又は清澄化培地に再導入recycleするのが特に有利である。NH4OOCRCOOH含有培地については、そのような培地は通常、発酵培地がNH4OOCRCOOHと共に、添加及び/又は生物変換等により産生された任意の数の他の成分、例えばNH4OOCRCOONH4化合物及び/又はHOOCRCOOH化合物の酸等を含むことを意味する。合成のNH4OOCRCOONH4化合物水溶液が、実際の清澄化NH4OOCRCOONH4化合物含有発酵培地の代わりに使用できる。合成NH4OOCRCOONH4化合物溶液の使用は、実際の培地で確認される一般的な発酵の副生物の溶解性及び酸性度のため、本発明の工程における実際の培地の挙動の良好なモデルと考えられる。通常は、発酵中生じる主要な副生物は、乳酸アンモニウム及びギ酸アンモニウム等のモノカルボン酸の塩である。これらの不純物が蒸留工程中に存在する場合、全てのNH4OOCRCOONH4化合物がHOOCRCOOH化合物の酸に変換されない限り、優位な量でアンモニアを喪失し遊離酸を形成することは期待されない。これは、酢酸、乳酸及びギ酸が、マロン酸pKa569、リンゴ酸pKa513、シトラコン酸pKa615~62、イタコン酸pKa545、ムコン酸、セバシン酸pKa5450、及びドデカン二酸等のHOOCRCOOH化合物の酸の第二の酸性基より強酸の傾向があるからである。すなわち、乳酸及びギ酸及びさらに一水素フマル酸は、ジアニオンフマル酸より弱い塩基である。さらに、乳酸アンモニウム、及びギ酸アンモニウムは、HOOCRCOOH化合物の酸よりも有意に高い水溶性を示し、各々の培地中の濃度はNH4OOCRCOONH4化合物濃度の10未満である。加えて、たとえ蒸留工程時に酸ギ酸及び乳酸が形成されたとしても、これらは水と混和性であり、水から結晶化しないであろう。これは、母液即ち液体部分に溶解した酸不純物を残したまま、HOOCRCOOH化合物の酸のみが飽和に達し、溶液から結晶化する即ち固体部分を形成することを意味する。実施例1本実施例は、リンゴ酸二アンモニウム、イタコン酸二アンモニウム、マロン酸二アンモニウム及びドデカン二酸二アンモニウム等の、水性NH4OOCRCOONH4化合物からのアンモニアの放出を示す。3つ口1L丸底フラスコの外側の口に、温度計及びストッパーを取り付けた。中央の口に、5トレー1オールダーショウOldershawセクションを取り付けた。オールダーショウセクションに、蒸留ヘッドを装着した。氷冷500mL丸底フラスコを、蒸留ヘッド用のレシーバとして使用した。1L丸底フラスコに、蒸留水、表1に示すHOOCRCOOH化合物の酸及び濃縮水酸化アンモニウム溶液を入れた。内容物をマグネチックスターラーで攪拌し、すべての固体を溶解させた。固体が溶解した後、内容物を加熱マントルで加熱し、蒸留物350gを蒸留した。蒸留物を氷冷500ml丸底フラスコに採取した。蒸留物の最後の液滴を採取した時に、ポットの温度を記録した。ポットの内容物を室温まで冷却し、残留物の量及び蒸留物の量を記録した。その後、蒸留物のアンモニア含量を滴定により決定した。結果を表1に記録した。本発明の方法をその具体的な工程及び態様に即して記載したが、添付の特許請求の範囲に記載した本開示発明の精神及び範囲から逸脱しない限り、本明細書に記載の具体的な要素及び工程に代えて、広範な範囲から選択される均等物を用いてもよい。