"アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子及びDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子が欠失または弱化されており、脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子、遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子、脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子が導入または増幅されていることを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成する能力を有する変異微生物。アシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子のネイティブなプロモーター及び脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子のアテニュエーターを含むネイティブなプロモーターは、強力プロモーターに追加的に置換されており、短鎖脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子が追加的に導入されている請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。fabDHGオペロンのネイティブなプロモーター及びfabAオペロンのネイティブなプロモーターは、強力プロモーターに追加的に置換されている請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。アセテートキナーゼA酵素をコードする遺伝子ackAが追加的に欠失されている請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記微生物は、バクテリア、酵母及びカビからなる群から選択される請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記バクテリアは、脂肪酸代謝経路を有するバクテリアである請求項5に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸代謝経路を有するバクテリアは、コリネバクテリウムCorynebacterium属、ブレビバクテリウムBrevibacterium属及び大腸菌からなる群から選択される請求項6に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子は、fadE遺伝子である請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記DNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子は、fadRである請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素は、アシルコエンザイムAチオエステラーゼである請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素は、大腸菌由来のアセチルCoA:アセトアセチルCoAトランスフェラーゼまたはアシルコエンザイムAシンセターゼである請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素は、脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼである請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素は、脂肪酸アルデヒドデカルボニラーゼである請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記アシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子は、fadDであって、短鎖脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子はatoEである請求項2に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子は、fadLである請求項2に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子は、tesAアシルコエンザイムAチオエステラーゼをコードする遺伝子である請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子は、atoDAアセチルCoA:アセトアセチルCoAトランスフェラーゼをコードする遺伝子またはfadDアシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子である請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子は、luxC脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼをコードする遺伝子である請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子は、cer1脂肪酸アルデヒドデカルボニラーゼ1をコードする遺伝子である請求項1に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記炭化水素は、ペンタデカン、ヘプタデカン、オクタン、ノナン及びノネンからなる群から選択される請求項1~19のいずれか一項に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。前記強力プロモーターは、trcプロモーター、tacプロモーター、T7プロモーター、lacプロモーター及びtrpプロモーターからなる群から選択される請求項2または請求項3に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物。アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子fadE及びDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子fadRが欠失または弱化されており、アシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子fadDのネイティブなプロモーター及び脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子fadLのアテニュエーターを含むネイティブなプロモーターは、強力プロモーターに追加的に置換されており、脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素アシルコエンザイムAチオエステラーゼをコードする遺伝子、遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子、脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼをコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素脂肪酸アルデヒドデカルボニラーゼをコードする遺伝子が導入または増幅されていることを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成する能力を有する変異大腸菌。アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子fadE及びDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子fadRが欠失または弱化されており、fabDHGオペロンのネイティブなプロモーター及びfabAオペロンのネイティブなプロモーターが強力プロモーターに追加的に置換させており、脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素アシルコエンザイムAチオエステラーゼをコードする遺伝子、遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子、脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼをコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素脂肪酸アルデヒドデカルボニラーゼをコードする遺伝子が導入または増幅されていることを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成する能力を有する変異大腸菌。前記炭化水素は、ペンタデカン、ヘプタデカン、オクタン、ノナン及びノネンからなる群から選択される請求項22または請求項23に記載の炭化水素生成能を有する変異大腸菌。アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子及びDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子を欠失または弱化させて、脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子、遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子、脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子を導入または増幅させることを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成する能力を有する変異微生物の製造方法。アシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子のネイティブなプロモーター及び脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子のアテニュエーターを含むネイティブなプロモーターを強力プロモーターに追加的に置換させて、短鎖脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子を追加的に導入する請求項25に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物の製造方法。fabDHGオペロンのネイティブなプロモーター及びfabAオペロンのネイティブなプロモーターを強力プロモーターに追加的に置換する請求項25に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物の製造方法。アセテートキナーゼA酵素をコードする遺伝子ackAを追加的に欠失させる請求項25に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物の製造方法。前記微生物は、バクテリア、酵母及びカビからなる群から選択されることを特徴とする請求項25に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物の製造方法。前記バクテリアは、脂肪酸代謝経路を有するバクテリアである請求項29に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物の製造方法。前記脂肪酸代謝経路を有するバクテリアは、コリネバクテリウムCorynebacterium属、ブレビバクテリウムBrevibacterium属及び大腸菌からなる群から選択される請求項30に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物の製造方法。前記炭化水素は、ペンタデカン、ヘプタデカン、オクタン、ノナン及びノネンからなる群から選択される請求項25に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物の製造方法。請求項1~19のいずれか一項に記載の炭化水素生成能を有する変異微生物を培養して、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成させ、培養液から炭化水素を回収することを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素の製造方法。前記炭化水素は、ペンタデカン、ヘプタデカン、オクタン、ノナン及びノネンからなる群から選択される請求項33に記載の炭化水素の製造方法。請求項22または請求項23に記載の炭化水素生成能を有する変異大腸菌を培養して、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成させ、培養液から炭化水素を回収することを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素の製造方法。前記炭化水素は、ペンタデカン、ヘプタデカン、オクタン、ノナン及びノネンからなる群から選択される請求項35に記載の炭化水素の製造方法。本発明の目的は、アルカンを含む炭化水素生成能を有する変異微生物及びその製造方法を提供することにある。本発明の他の目的は、前記変異微生物を利用したアルカンを含む炭化水素の製造方法を提供することにある。前記目的を達成するために、本発明は、アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼacylCoenzymeAdehydrogenaseをコードする遺伝子及びDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子が欠失または弱化されており、脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子、遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子、脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子が導入または増幅されていることを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成する能力を有する変異微生物及びその製造方法を提供する。さらに本発明は、本発明に係る炭化水素生成能を有する変異微生物を培養して、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成させ、培養液から炭化水素を回収することを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素の製造方法を提供する。本発明は、アルカンを含む炭化水素生産に適するように変異させた微生物に、アルカンを製造するのに関与する酵素をコードする遺伝子を導入した変異微生物を提供する効果がある。他の方式で定義されない限り、本明細書において使用されたあらゆる技術的科学的用語は、本発明が属する技術分野に熟練した専門家によって通常理解されるものと同じ意味を有する。通常、本明細書において使用された命名法は、本技術分野において周知であり、しかも汎用されるものである。一観点において、本発明は、アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子及びDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子が欠失または弱化されており、脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子、遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子、脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子が導入または増幅されていることを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成する能力を有する変異微生物に関する。前記変異微生物において、アルカンを含む炭化水素の生成能を増加させるために、アシルコエンザイムAシンセターゼacylCoAsynthetaseをコードする遺伝子のネイティブなプロモーターnativepromoter及び脂肪酸外膜トランスポーターfattyacidoutermembranetransporterをコードする遺伝子のアテニュエーターattenuatorを含むネイティブなプロモーターを強力プロモーターstrongpromoterに追加的に置換することを特徴としており、短鎖脂肪酸外膜トランスポーターshortchainfattyacidoutermembranetransporterをコードする遺伝子が追加的に導入されてもよい。本発明の変異微生物において、アルカンを含む炭化水素の生成能を増加させるために、fabDHGfabDmalonylCoAacylCarrierproteintransacylasefabG3oxoacylacylCarrierproteinreductasefabH3oxoacylacylCarrierproteinsynthaseIIIオペロンのネイティブなプロモーター及びfabAbetahydroxydecanoylthioesterdehydraseオペロンのネイティブなプロモーターを強力プロモーターに追加的に置換されてもよい。また、前記変異微生物は、アセテートキナーゼA酵素をコードする遺伝子ackAが追加的に欠失されてもよい。本発明において、前記微生物は、バクテリア、酵母及びカビからなる群から選択されることを特徴としており、ここで、バクテリアは、脂肪酸代謝経路を有するバクテリアであってもよく、好ましくはコリネバクテリウムCorynebacterium属、ブレビバクテリウムBrevibacterium属及び大腸菌からなる群から選択され、さらに好ましくは、大腸菌であるが、グルコースを炭素源として使用できる微生物であれば、これに限定されない。本発明において、前記アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子は、fadE遺伝子であってもよく、前記DNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子は、fadRであってもよい。前記アシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子は、fadDであってもよく、追加的に導入されてもよい短鎖脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子は、atoEであってもよい。一方、前記脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子は、fadLであってもよい。本発明において、前記脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素は、アシルコエンザイムAチオエステラーゼであってもよく、前記遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素は、大腸菌由来のアセチルCoA:アセトアセチルCoAトランスフェラーゼまたはアシルコエンザイムAシンセターゼであってもよい。前記脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素は、クロストリジウムクルイベリClostridiumkluyberi由来の脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼであってもよく、前記脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素はシロイヌナズナArabidopsisthalianacol由来の脂肪酸アルデヒドデカルボニラーゼであってもよいが、導入される宿主細胞から発現して同じ酵素活性を示す限りこれに限定されるのではない。本発明において、前記脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子は、tesAアシルコエンザイムAチオエステラーゼをコードする遺伝子であってもよく、前記遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子は、atoDAアセチルCoA:アセトアセチルCoAトランスフェラーゼをコードする遺伝子またはfadDアシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子であってもよい。ここで、atoDAはatoDアセチルCoA:アセトアセチルCoAトランスフェラーゼαサブユニットacetylCoAacetoacetylCoAtransferasealphasubunitとatoAアセチルCoA:アセトアセチルCoAトランスフェラーゼβサブユニットからなる。前記脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子は、luxC脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼをコードする遺伝子であってもよく、前記脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子は、cer1脂肪酸アルデヒドデカルボニラーゼ1をコードする遺伝子であってもよい。本発明において、変異微生物に導入される組み換えベクターは、強力プロモーターを含むものであり、luxC、cer1、tesA、atoDAE遺伝子を含有するベクターであってもよく、前記組み換えベクターは、pTrc99aluxCtactesA、pTac15katoDAEtacCER1ベクターであってもよく、前記強力プロモーターは、trcプロモーター、tacプロモーター、T7プロモーター、lacプロモーター及びtrpプロモーターからなる群から選択されてもよいが、これに制限されることなく当業界において通常用いられるいずれの強力プロモーターを含んでもよい。他の観点において、本発明は、アシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子及びDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーターをコードする遺伝子を欠失または弱化させて、脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子、遊離脂肪酸を脂肪酸アシルコエンザイムAに転化させる酵素をコードする遺伝子、脂肪酸アシルコエンザイムAを脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子が導入または増幅させていることを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成する能力を有する変異微生物の製造方法に関する。前記変異微生物の製造方法において、アルカンを含む炭化水素の生成能を増加させるために、アシルコエンザイムAシンセターゼをコードする遺伝子のネイティブなプロモーター及び脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子のアテニュエーターを含むネイティブなプロモーターを強力プロモーターに追加的に置換してもよく、短鎖脂肪酸外膜トランスポーターをコードする遺伝子を追加的に導入してもよい。また、前記変異微生物の製造方法において、アルカンを含む炭化水素の生成能を増加させるために、fabDHGfabDmalonylCoAacylCarrierproteintransacylasefabG3oxoacylacylCarrierproteinreductasefabH3oxoacylacylCarrierproteinsynthaseIIIオペロンのネイティブなプロモーター及びfabAbetahydroxydecanoylthioesterdehydraseオペロンのネイティブなプロモーターを強力プロモーターに追加的に置換してもよい。また、前記変異微生物の製造方法において、アセテートキナーゼA酵素をコードする遺伝子ackAを追加的に欠失させてもよい。また他の観点において、本発明は、本発明に係る炭化水素生成能を有する変異微生物を培養して、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素を生成させ、培養液から炭化水素を回収することを特徴とする、アルカン、アルケン、アルキン及び芳香族炭化水素からなる群から選択される炭化水素の製造方法に関する。本発明では、脂肪酸をアルカンに転化させる代謝回路を新たに構成して、アルカンを含む炭化水素生成能を有する変異微生物を製造し、製造された変異微生物がアルカンを含む炭化水素を生産できるか否かを確認した。本発明に係るアルカンを含む炭化水素生産に適する変異微生物は、脂肪酸アシルコエンザイムAを短鎖脂肪酸アシルコエンザイムAsmallChainfattyacylCoAに転化させる酵素であるfadEアシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼ遺伝子及び脂肪酸代謝経路fattyacidmetabolismに関与する酵素の遺伝子らを調節するfadRDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーター遺伝子を弱化または欠失させることによって得られる。また、脂肪酸にCoAを付けるfadDアシルコエンザイムAシンセターゼ遺伝子及び外部の脂肪酸をe摂取するのに関与するfadL脂肪酸外膜トランスポーター遺伝子のプロモーターを強力なプロモーターで置換させることによって得られる。本発明に係る変異微生物を利用してアルカンを生産するのは、グルコースから転化された脂肪酸アシルACPがチオエステラーゼthioesteraseにより脂肪酸freefattyacidに転化され、脂肪酸はアシル-CoAシンテターゼacylCoAsynthetaseにより脂肪アシル-CoAfattyacyCoAに転化されてから、脂肪アシル-CoAレダクターゼfattyacylCoAreductaseにより脂肪アルデヒドfattyaldehydeに転化され、脂肪アルデヒドデカルボニラーゼfattyaldehydedecarbonylaseによりアルカンalkaneに転化されると推定することができる図1。本発明の一実施例では、アルカンを含む炭化水素の生産に適する変異微生物を製造するために、大腸菌W3110においてfadEアシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼ遺伝子及びfadRDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーター遺伝子を欠失させた。globalregulatorであるfadRDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーター遺伝子は、脂肪酸代謝経路fattyacidmetabolismに関与する大部分の遺伝子を調節する機能をする。グルコースのような炭素源がある場合には、fadR遺伝子が脂肪酸代謝経路fattyacidmetabolismに関与する大部分の遺伝子らを強く抑制repressionしているのに対して、グルコースのような炭素源がない場合には、fadRが抑制していた全ての遺伝子をリリースreleaseさせて脂肪酸を分解できることになる。従って、グルコースのような炭素源がある条件では、fadR遺伝子が脂肪酸代謝経路fattyacidmetabolismに関与する遺伝子を強く抑制repressionすることで、脂肪酸が分解されないため、本発明ではfadR遺伝子を欠失させることによって、グルコースが存在する条件でも脂肪酸が分解できるように改良した。fadEアシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼ遺伝子は、脂肪酸アシルコエンザイムAを短鎖脂肪酸アシルコエンザイムA形態のアセチルCoAに転化させるため、fadE遺伝子を欠失させることによって脂肪酸アシルコエンザイムAがアセチルCoAに転化されず脂肪酸アシルアルデヒドfattyacylaldehydeに転化されるように改良した。本発明のまた他の実施例では、脂肪酸アシルコエンザイムAから脂肪酸アルデヒドに転化させる酵素をコードする遺伝子luxC脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼをコードする遺伝子がクローニングされたptrc99aluxCtacCER1ベクターと脂肪酸アシルACPを遊離脂肪酸に転化させる酵素をコードする遺伝子tesAアシルコエンザイムAチオエステラーゼをコードする遺伝子及び脂肪酸アルデヒドをアルカンに転化させる酵素をコードする遺伝子cer1脂肪酸アルデヒドデカルボニラーゼ1をコードする遺伝子がクローニングされたpTac15katoDAEtaccer1を作製した後、これを前記変異微生物に導入させることによって、アルカン生成能を有する変異微生物WERPLD3110ptrc99aluxCtactesApTac15katoDAEtacCER1を作製した。また、本発明の実施例では、本発明により製造された変異微生物を培養して、ペンタデカン、ヘプタデカンを含んだガソリン範囲のアルカンalkaneであるオクタン、ノナン及びノネンを生産することだけを確認したが、ペンタデカン及びヘプタデカンの他にも微生物で生合成可能な種々の炭素を持った脂肪酸から飽和、不飽和炭化水素を生産でき、微生物で生合成可能な多様な炭素を持った脂肪酸から生産可能な飽和、不飽和炭化水素としては、デカンdecane、オンデカンundecane、トリデカンtridecane等が挙げられる。本発明において、変異微生物の培養及び回収過程は、通常知られた培養方法を用いて行われ、本発明の実施例で用いられた特定培地及び特定培養方法の他にもホエーwhey、CSLcornsteepliquor等のハイドロライセートhydrolysatesを用いてもよく、流加培養fedbatchculture、連続培養等の多様な方法を用いてもよいLeeetalBioprocessBiosystEng26632003LeeetalApplMicrobiolBiotechnol586632002LeeetalBiotechnolLett251112003LeeetalApplMicrobiolBiotechnol54232000LeeetalBiotechnolBioeng72412001。本発明において炭化水素は、炭素と水素だけからなる有機化合物を総称する概念で、分子構造により環状の炭化水素と鎖状の炭化水素で大きく分けて、単一結合だけからなる飽和炭化水素と、二重結合または三重結合を含有している不飽和炭化水素に区別される。本発明において弱化とは、該当遺伝子の一部塩基を変異、置換、または、削除させたり、一部塩基を導入させて該当遺伝子によって発現する酵素の活性を減少させたりすることを包括する概念で、該当遺伝子の酵素が関与する生合成経路の一部または相当部分を遮断するいずれのものを含む。本発明において欠失とは、該当遺伝子の一部または全塩基を変異、置換または削除させたり、一部塩基を導入させて該当遺伝子が発現しないようにしたり、発現しても酵素活性を示すことができないようにすることを包括する概念で、該当遺伝子の酵素が関与する生合成経路を遮断するいずれのものを含む。特に、下記実施例では、大腸菌W3110を宿主微生物として利用したが、他の大腸菌や、バクテリア、酵母及びカビを用いてもグルコースを炭素源として使用できる限り、これに限定されないことは、当業者には自明であろう。また、下記実施例では導入対象遺伝子として特定菌株由来の遺伝子だけを例示したが、導入される宿主細胞で発現して同様の活性を示す限りその制限がないことは、当業者には自明であろう。以下、本発明を、実施例を挙げて詳述する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に制限されないことは当業者において通常の知識を有する者にとって自明である。実施例11-1:fadE遺伝子の欠失WE3110の作製大腸菌W3110ATTC39936で配列番号1及び2のプライマーを利用したワンステップ不活化onestepinactivation方法WarneretalPNAS697664066452000を利用して、fadEアシルコエンザイムAデヒドロゲナーゼ遺伝子を欠失させて、抗生剤耐性を取り除いた。配列番号1WfadEk/oF:5-atgatgattttgagtattctcgctacggttgtcctgctcggcgcgttgttgtgtaggctggagctgcttc-3’配列番号2WfadEk/oR:5’-actgggcataagccgagaactccagcccgccgtactcttttttgatgatccatatgaatatcctccttag-3’1-2:fadR遺伝子の欠失WER3110の作製前記1-1で作製された大腸菌WE3110において、配列番号3及び4のプライマーを利用したワンステップ不活化方法WarneretalPNAS697664066452000を利用して、fadRDNA結合トランスクリプショナルデュアルレギュレーター遺伝子を欠失させて、抗生剤耐性を取り除いた。配列番号3WfadRk/oF:5-atggtcattaaggcgcaaagcccggcgggtttcgcggaagagtacattatgtgtaggctggagctgcttc-3配列番号4WfadRk/oR:5-ccggattggcgaaatagtgacgaccaatacgcgtatacagccctttcatcCATATGAATATCCTCCTTAG-31-3:fadDのネイティブなプロモーターをtacプロモーターで置換WERPD3110の作製前記1-2で作製された大腸菌WER3110において、fadD遺伝子の発現を強化するために強力なプロモーターであるtacプロモーターに置換えた。これのために、配列番号5及び6のプライマーを利用して、前記遺伝子除去と同様の方法で、ネイティブなプロモーターをtacプロモーターに置換えた。配列番号5WfadDpchF:5-gtataatcccggccccgcgagagtacaaacagttgtaactgaataattgcCGCGTCATACACATACGATT-3配列番号6WfadDpchR:5-ttgatctccgtcggaacgtccgcgggataacggttaagccaaaccttcttCATGGTCTGTTTCCTGTGTG-31-4:fadLのネイティブなプロモーターにあるアテニュエーター配列のtacプロモーターに置換WERPDL3110の作製1-3で作製された大腸菌WERPD3110において、fadDpromoter上に位置する転写調節機序に関与するアテニュエーター配列を強力なプロモーターであるtacプロモーターに置換えた。アテニュエーター配列の置換のために、配列番号7及び8のプライマーを利用して、前記遺伝子除去と同様の方法で、アテニュエーターを含むネイティブなプロモーターをtacプロモーターに置換えた。配列番号7WfadLpchF:5-gaaagtgctgctccagttgttaattctgcaaaatcggataagtgaccgaaCGCGTCATACACATACGATT-3配列番号8WfadDLpchR:5-actgcgactgcgagagcagactttgtaaacagggttttctggctcatgacCATGGTCTGTTTCCTGTGTG-31-5:ackA遺伝子の欠失WERAPDL3110の作製前記1-4で作製された大腸菌WE3110において、配列番号9及び10のプライマーを利用したワンステップ不活化方法WarneretalPNAS697664066452000を利用して、ackAアセテートキナーゼA:acetatekinaseA遺伝子を欠失させて、抗生剤耐性を取り除いた。配列番号9WackAk/oF:5-atgtcgagtaagttagtactggttctgaactgcggtagttcttcactgaaTAGGTGACACTATAGAACGCG-3配列番号10WackAk/oR:5-tgccgtgcgcgccgtaacgacggatgccgtgctctttgtacaggttgtaaTAGTGGATCTGATGGGTACC1-6:fabHDGオペロンのネイティブなプロモーターをtrcプロモーターに置換WERAPDLB3110の作製前記1-5で作製された大腸菌WERAPLD3110において、fabHDGオペロンからなる遺伝子の発現を強化するために強力なプロモーターであるtrcプロモーターに置換えた。このために、配列番号11及び12のプライマーを利用して、前記遺伝子除去と同様の方法で、ネイティブなプロモーターをtrcプロモーターに置換えた。配列番号11WfabHDGpchF:5-gtggtggctactgttattaaagcgttggctacaaaagagcctgacgaggcCGCGTCATACACATACGATT-3配列番号12WfabHDGpchR:5-gtccgcacttgttcgggcagatagctgccagtaccaataatcttcgtataCATGGTCTGTTTCCTGTGTG-3’1-7:fabAオペロンのネイティブなプロモーターをtrcプロモーターに置換WERAPDLBA3110の作製前記1-6で作製された大腸菌WERAPLDB3110において、fabAオペロンからなる遺伝子の発現を強化するために強力なプロモーターであるtrcプロモーターに置換えた。このために、配列番号13及び14のプライマーを利用して、前記遺伝子除去と同様の方法で、ネイティブなプロモーターをtrcプロモーターに置換えた。配列番号13WfabApchF:5-accgttttccatggccattacgttggctgaactggtttattccgaactgaCGCGTCATACACATACGATT-3配列番号14WfabApchR:5-gcgaccagaggcaagaaggtcttcttttgtataggattcgcgtttatctacCATGGTCTGTTTCCTGTGTG-3実施例22-1:pTrc99aluxCベクターの作製クロストリジウムクルイベリClostridiumkluyberi菌株DSMZ,no552,Germanの染色体DNAを鋳型として、配列番号15と16のプライマーでPCRを行って、脂肪酸アシルコエンザイムAリダクターゼをコードするluxC遺伝子切片を作製した。配列番号15cklluxCF:5-TATAGGTACCATGATAGATTGTTATTCATTGGATG-3配列番号16cklluxCR:5-TATTGGATCCTTAAATATTTAGACTACACCACGTT-3次に、前記製造されたluxC切片をtrcプロモーターの強い遺伝子発現を進行するpTrc99aプラスミドPhamaciA-biotech,Uppsala,Swedenに制限酵素KpnI及びBamHIを処理した後、T4DNAライゲーズを処理して、制限酵素で切断されたluxC切片及びpTrc99aプラスミドを接合させることによって、複製率が高いhighcopynumber組み換えプラスミドであるpTrc99aluxCを作製した。2-2:pTrc99aluxCtactesAベクターの作製野生型E.coli大腸菌W3110菌株の染色体DNAを鋳型として、配列番号17と18のプライマーでPCRを行って、アシルコエンザイムAチオエステラーゼをコードするtesA遺伝子切片を作製した。配列番号17tesAF:5-TATAGAATTCATGATGAACTTCAACAATGT-3配列番号18tesAR:5-TATTGAGCTCTTATGAGTCATGATTTACTA-3次に、前記製造されたtesA切片をtrcプロモーターの強い遺伝子発現を進行するpTrc99aプラスミドPhamaciA-biotech,Uppsala,Swedenに制限酵素EcoRI及びSacIを処理した後、T4DNAライゲーズを処理して、制限酵素で切断されたtesA切片及びpTrc99aluxCプラスミドを接合させることによって、複製率が高いhighcopynumber組み換えプラスミドであるpTrc99aluxCtactesAを作製した。2-3:pTac15katoDAEtacCER1ベクターの作製pKK223-3PharmaciA-biotech.,Uppsala,Swedenのtrcプロモーターとtrascriptionterminator部分をpACYC177NEB,Beverly,MA,USAに挿入して、pTac15Kを作製した。pTac15Kは、構成的constitutive発現のための発現ベクターであり、図5の切断地図に示された構成を持っている。シロイヌナズナArabidopsisthalianacol染色体のDNAを鋳型として、配列番号19と配列番号20のプライマーを用いてPCR反応を行った。これから確保されたCER1切片を前記pTac15kp15AoriginlowcopiesKmRKAISTMBELstocktacpromoter40kblapstockZhiGangQianetalBiotechnologyandBioengineering1046516542009andHiszczynskaSawickaandKur1997プラスミドに制限酵素SacI及びkpnIを処理した後、T4DNAライゲーズを処理して、制限酵素で切断されたCER1切片及びpTac15kプラスミドを接合させることによって、pTac15kCER1を作製した。次に、シロイヌナズナArabidopsisthalianacol染色体のDNAを鋳型として、配列番号21と配列番号22のプライマーを用いてPCR反応を行った。これから確保されたfatB切片をpTac15kCER1プラスミドに制限酵素XbaIとSphIを処理した後、T4DNAライゲーズを処理して、制限酵素で切断されたatoDAE切片及びpTac15kCER1プラスミドを接合させることによって、pTac15katoDAEtacCER1を作製した。これに用いられたプライマー対の塩基配列は下記のとおりである。配列番号19CER1F:5-TATAGAGCTCATGGCCACAAAACCAGGAGTCCTCACC-3配列番号20CER1R:5-TATTGGTACCTTAATGATGTGGAAGGAGGAGAGGC-3配列番号21atoDAEF:5-GCCATCTAGAATGAAAACAAAATTGATGAC-3配列番号22atoDAER:5-TATTGCATGCTCAGAACAGCGTTAAACCAA-3実施例3:変異微生物のアルカン生成能の測定実施例2-2及び2-3で作製されたpTrc99aluxCtactesA及びpTac15katoDAEtacCER1プラスミドを実施例1-7でアルカン生成に適するように作製したWERAPDLBA3110に導入して、変異微生物を製造し、大腸菌W3110ATTC39936を対照群菌株として用いた。アルカン生成能を有する変異微生物をアンピシリンampicillin及びカナマイシンkanamycinが各々50μg/mL及び30μg/mL添加されたLB平板培地で選別した。前記形質転化菌株を10mLLB培地に接種して、37°Cで12時間前培養を行った。その後、滅菌後80°C以上で取り出した100mLLBを含有した250mLフラスコにグルコース5g/Lを添加して、前記前培養額1mLを接種して、31°Cで10時間培養した。その後、蒸溜水1リットル当り20gグルコース、13.5gKH2PO4、4.0gNH42HPO4、17gcitricacid、1.4gMgSO47H2O、3g酵母エクストラクト、10mL微量金属溶液蒸溜水1リットル当り10gFeSO47H2O、1.35gCaCl2、2.25gZnSO47H2O、0.5gMnSO44H2O、1gCuSO45H2O、0.106gNH46Mo7O244H2O、0.23gNa2B4O710H2O、35HCl10mL含有の成分で構成された培地2.0リットルを含有した5.0リットル醗酵機LiFlusGX,BiotronInc.,Koreaを121°Cで15分間滅菌した後、室温まで降温した。1mMのIPTGを用いて導入あるいはエンジニアリングengineeringした遺伝子の発現を誘導し、培養液のpHは、50v/vNH4OHの自動供給によって6.8に維持した。前記培地中のグルコースをグルコース分析器STAT,YellowSpringsInstrument,YellowSprings,Ohio,USAで測定して、グルコースが全部消耗した時細胞を回収して蒸溜水で一回洗浄した後、100°Cの乾燥器で24時間乾燥した。その後、乾燥された菌株にクロロホルムchloroform2mLを添加し、3v/vH2SO4を含むメタノール1mLを添加した後、この混合物を100°Cで12時間反応させた。反応終了後、混合物を常温まで冷やして、混合物に蒸溜水1mLを添加して5分間激しく混ぜて、有機溶媒chloroform層と水水溶液層を分離させて、10,000rpmで10分間遠心分離して、有機溶媒層だけ採取して、ガスクロマトグラフィーgaschromatography分析を行うことによって、生成されたアルカンを測定した。その結果、表1に示された通り、野生型大腸菌W3110では、アルカンが生成されなかったが、本発明に係る変異微生物では、ペンタデカン及びヘプタデカンが、各々25mg/L及び40mg/L、及びガソリン範囲のアルカンのオクタン、ノナン及びノネンが、各々0.11564g/L、0.475g/L及び0.12276g/Lが生産された。この結果から、本発明に係る変異微生物がガソリン範囲のアルカンを成功的に生成することが確認された。"