測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体の溶液と金コロイド溶液との混合液から得られる多価抗原測定用コンジュゲートであって、該混合液の該抗体濃度が、該抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の14~12の抗体濃度であることを特徴とする多価抗原測定用コンジュゲート。以下の1および2を含む多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。1請求項1に記載のコンジュゲート2測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体2の抗体のエピトープが、1の抗体のエピトープと同じ/異なる場合、若しくは1の抗体と2の抗体が同じ/異なる場合を含む。が固定化された不溶性メンブレン担体さらに以下の3~5を含む請求項2に記載の多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。3サンプルパッド4サンプルパッドに接して配置され、請求項21に記載のコンジュゲートを含有するコンジュゲートパッド5吸収パッド測定対象である多価抗原が、CRPまたはD-ダイマーである請求項2または3に記載の多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。試料中の測定対象である多価抗原の量を測定するイムノクロマト測定方法であって、請求項2~4のいずれかに記載のイムノクロマトテストストリップに試料を供給する工程を含むイムノクロマト測定方法。以下の1および2の工程を含む多価抗原測定用コンジュゲートを製造する方法であって、1の混合液の抗体濃度が、最大結合抗体濃度の14~12の抗体濃度であることを特徴とする多価抗原測定用コンジュゲートの製造方法。1多価抗原に対するモノクローナル抗体溶液と金コロイド溶液との混合液を得る工程2該混合液からコンジュゲートを得る工程本発明は、多価抗原を測定対象とし、金コロイドを標識体として用いるイムノクロマト測定方法において、広い測定範囲を有する多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップを提供することを課題とする。上記の課題を解決すべく、本発明者らは、サンドイッチ反応を原理とするイムノクロマト測定方法において、CRPやDダイマーのような多価抗原を測定する際、広い測定範囲を確保できないという問題点について次のように考察し、鋭意研究を行い、本発明を完成させた。考察1.測定対象がCRPやDダイマーのような多価抗原である場合、抗体との結合点が複数あるため、一価抗原抗原決定基が1つの抗原に比べて、抗原抗体反応を介して容易にコンジュゲートと測定対象多価抗原との凝集体が生成する。2.ラテックス凝集反応を利用するような溶液系での測定方法と異なり、イムノクロマト法では、上記の凝集体が毛細管現象により不溶性メンブレン担体中を展開し、測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体捕捉抗体ということがあるが固定化された測定ラインに到達する必要がある。3.そのため、生成する凝集体が大きくなるにつれて、イムノクロマトテストストリップを構成するサンプルパッド、コンジュゲートパッドまたは不溶性メンブレン担体の中を展開できる凝集体量数が低下し、その結果、捕捉抗体固定化部位でのサンドイッチ複合体コンジュゲート、測定対象および捕捉抗体の複合体が減少し測定シグナルが低下する。4.上記の測定シグナルの低下を起こりにくくするためには、より多くの凝集体が展開し、測定ラインに到達できるように、凝集体の粒子サイズを小さくする方法が考えられる。5.しかしながら、凝集体を小さくすると、相反して測定ラインのサンドイッチ複合体のシグナル自体は小さくなり、検出感度が低下するというイムノクロマト測定法に付随する問題点がある。本発明者らは、上記考察に基づき以下i~vの方策を検討した結果、vの方策の中でも特定の条件で製造されたコンジュゲートを用いたイムノクロマトテストストリップにおいて上記の問題点を解決しうることを見出した。i金コロイドの粒子サイズを調節し、凝集体の粒子サイズを制御する。ii界面活性剤の添加、pH、イオン強度などを調節することにより、抗原抗体反応を制御し、凝集体の粒子サイズを制御する。iii不溶性メンブレン担体の孔径を調節することにより、凝集体の展開を制御する。ivあらかじめ大きな凝集体を除去することにより、不溶性メンブレン担体中での展開を向上させる。v金コロイドに結合する抗体分子数量を制御し、凝集体の粒子サイズを制御する。すなわち本発明は、測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体が金コロイドと結合した多価抗原測定用コンジュゲートを用いたイムノクロマトテストストリップであって、該コンジュゲートが、該抗体の最大結合抗体濃度の14~12の抗体濃度となるように該抗体溶液と金コロイド溶液とを混合することにより得られたコンジュゲートである、イムノクロマトテストストリップである。本発明は以下の構成を有する。1測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体の溶液と金コロイド溶液との混合液から得られる多価抗原測定用コンジュゲートであって、該混合液の該抗体濃度が、該抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の14~12の抗体濃度であることを特徴とする多価抗原測定用コンジュゲート。2以下の1および2を含む多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。1前記1に記載のコンジュゲート2測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体が固定化された不溶性メンブレン担体3さらに以下の3~5を含む前記2に記載の多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。3サンプルパッド4サンプルパッドに接して配置され、前記21に記載のコンジュゲートを含有するコンジュゲートパッド5吸収パッド4測定対象である多価抗原が、CRPまたはD-ダイマーである前記2または3に記載の多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。5前記2~4のいずれかに記載のイムノクロマトテストストリップを用いて、試料中の測定対象である多価抗原を測定するイムノクロマト測定方法。6以下の1および2の工程を含む多価抗原測定用コンジュゲートを製造する方法であって、1の混合液の抗体濃度が、最大結合抗体濃度の14~12の抗体濃度であることを特徴とする多価抗原測定用コンジュゲートの製造方法。1多価抗原に対するモノクローナル抗体溶液と金コロイド溶液との混合液を得る工程2該混合液からコンジュゲートを得る工程本発明の多価抗原測定用コンジュゲート、これを用いた多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップおよびイムノクロマト測定方法によれば、多価抗原を測定対象物質とした広い濃度範囲での測定が可能になり、希釈などの煩雑な操作を回避できる。また、測定時の手間とコストが削減できるため、診療所や小病院で求められているPointofCareTestingPOCTという社会ニーズにも応えることができる。本発明における測定対象とは、モノクローナル抗体との結合部位を複数有する多価抗原をいう。CRP、Dダイマー、ヘモグロビンなどが例示されるがこれに制限されるものではない。本発明で用いられるモノクローナル抗体は、測定対象の多価抗原に対するモノクローナル抗体であり、当該抗体を産生するハイブリドーマは、一般的には、KohlerとMilsteinの方法Nature、第256巻495頁1975年参照に準じ、前記抗原で免疫した動物の脾臓細胞と同種のミエローマ細胞骨髄腫細胞とを細胞融合して作製することができる。また、測定対象に対する抗体が市販されていれば、それらを利用することが可能である。本発明において標識体とは、金コロイド粒子のことである。金コロイドの粒径は、イムノクロマトテストストリップの感度に大きく影響することが知られているが、本発明の金コロイドの粒径としては20~60nmが好ましく、特に35~45nmが好ましい。上記の金コロイドは一般に知られている方法、例えば、加熱したテトラクロロ金III酸水溶液にクエン酸三ナトリウム水溶液を滴下攪拌することによって製造することができる。抗体の金コロイドへの固定化は、通常物理吸着によって行う。本明細書では、上記のような標識体に測定対象の多価抗原に対するモノクローナル抗体あるいはコントロール用抗体が固定化されたものをコンジュゲートという。本発明における抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度とは、後述の実施例に記載した公知の塩滴定法によって求められる濃度をいう。すなわち、金コロイド溶液に対して各濃度の抗体溶液を添加して撹拌し抗体と金コロイドを反応させた後、塩10NaClを添加して金コロイドと抗体の混合液の色調変化の程度を観察し、抗体濃度を上げてもそれ以上色調変化が認められない状態を与える最小の抗体濃度を、最大結合抗体濃度とする。色調の変化は目視観察でも、その他の光学的手段で検出してもよい。実施例に示すようにpH条件を変動させた場合、求められた最大結合抗体濃度がより低いpH条件でコンジュゲートを作成することが好ましい。抗体溶液と金コロイド溶液とを混合した混合液より金コロイドにモノクローナル抗体が結合したコンジュゲートが得られるが、本発明では、該混合液の抗体濃度を、上記塩滴定法によって求められる最大結合抗体濃度の14~12の抗体濃度とすることにより、所望のコンジュゲートを製造することができる。本発明のコンジュゲートを得るための混合液の抗体濃度は上記最大結合抗体濃度の14~12である必要があるが、抗体濃度が14未満では測定感度が低下しすぎるため不適当であり、12より濃くなると抗原抗体反応による凝集体が急激に大きくなり、測定範囲が狭くなる。したがって、14~12の濃度が適当な感度を維持でき、広い測定範囲を達成できるため望ましく、13の濃度はよりいっそう望ましい。抗体を金コロイドに結合させる際の緩衝液とpHは、塩滴定法により最大結合抗体濃度を決定する際同時に決定され、2mmolLリン酸緩衝液または2mmolLホウ酸緩衝液pH89等から至適条件が決定される。抗体を金コロイドに結合させた後、金コロイド上の抗体が結合していない領域は、BSAなどを結合させブロッキングするのが好適である。なお、BSAなどを結合させブロッキングする場合には、BSAなどを結合させる前における混合液の抗体濃度を、最大結合抗体濃度の14~12にしておく必要があることはいうまでもない。このようにして得られたコンジュゲートは、変性を阻止するための変性阻止剤中に分散され保存される。この変性阻止剤としては、BSAなどの蛋白質、グリセリン、糖などが用いられる。本発明において、検出試薬とは具体的には少なくともコンジュゲートを含有する溶液である。検出試薬は、コンジュゲートを安定な状態に保ち、測定試料と混合されたときにコンジュゲートに固定化された抗体が測定対象と特異的に反応するのを促進する、あるいはコンジュゲートを迅速かつ効果的に溶解、流動化する目的で、例えば1種類以上の安定化剤、溶解補助剤等を含み得る。該安定化剤、溶解補助剤等としては、例えばウシ血清アルブミンBSA、スクロース、カゼイン、アミノ酸類などをあげることができる。また、検出試薬は、検出感度の向上を目的とし、必要に応じてポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、デキストラン、2メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン等の公知の増感剤を含み得る。更に検出試薬は、Ca2イオンのキレート剤であるEDTAやEGTAなども含み得る。なお、本明細書において、検出又は測定という用語は、測定対象の存在の証明及び/又は定量などを含めて最も広義に解釈する必要があり、いかなる意味においても限定的に解釈してはならない。本発明において、サンプルパッドとは、測定試料を受け入れる部位であり、パッドに成型された状態で液体の測定試料を吸収し、液体と測定対象とが通り抜けることができるどんな物質及び形態をも含む。サンプルパッドに適した材料の具体例として、ガラス繊維グラスファイバー、アクリル繊維、親水性ポリエチレン材、乾燥紙、紙パルプ、織物等が含まれるが、これらに限定されない。好適には、グラスファイバー製パッドが用いられる。該サンプルパッドには、後述するコンジュゲートパッドの機能を併せ持たせることも出来る。また、サンプルパッドには、後述する抗体固定化メンブレンにおける非特異的反応吸着を防止抑制する目的で、通常使用されるブロッキング剤等を含ませることができる。該ブロッキング剤としては、例えばNEOPROTEINSAVER東洋紡績株式会社、イムノブロックTM大日本製薬株式会社、ApplieBlock生化学バイオビジネス株式会社、SEABLOCKTMEIAWBEastCoastBiologics社、BlockingOneナカライテスク社、BSA、BlockingPeptideFragment東洋紡績株式会社、StartingBlockTMPBSBlockingBufferThermoFisherScientific社、SmartBlockTM、HeteroBlock、等から、特異的反応そのものに悪影響を与えないものを適宜選択可能である。本発明において、コンジュゲートパッドとは、測定対象と特異的に反応するコンジュゲートを内在し、測定試料が該コンジュゲートパッドを通過する際、コンジュゲートと試料中の測定対象物とが複合体凝集体を形成する機能を有する部位をいう。該コンジュゲートパッドは、それ単独で抗体固定化メンブレンに接するように配置されていてもよいし、あるいは、前記サンプルパッドと接触して配置され、毛細管流によってサンプルパッドを通過した測定試料を受入れ、引き続き該測定試料を毛細管流によって前記サンプルパッドとは異なる面で接触する別のパッドへ移送するように配置してもよい。なお、サンプルパッド、コンジュゲートパッドの一種以上の部位の選択や、選択された部位を抗体固定化メンブレンにどのように配置するかは、適宜に変更可能である。該コンジュゲートパッドに適した材料として、紙、セルロース混合物、ニトロセルロース、ポリエステル、アクリロニトリルコポリマー、ガラス繊維グラスファイバーまたはレーヨンのような不織繊維が挙げられるが、これらに限定されない。好適には、グラスファイバー製パッドが用いられる。後述の如く不溶性メンブレン担体にコントロール捕捉抗体を固定化する場合には、コンジュゲートパッドに、アッセイの信頼性を担保するためのコントロール抗体、例えば、標識体で標識され且つ測定対象物質と反応しない抗体や、標識体で標識されたKLHスカシ貝ヘモシアニンなどの高抗原性タンパク質などを含ませる。これらのコントロール抗体は、測定試料中に存在する可能性が考えられない成分物質であり、後述するコントロール捕捉抗体と適切に対応するよう適宜に選択可能である。また、抗原抗体反応がイオン感受性を持つ場合には、コンジュゲートパッドに金属イオン類または金属イオンのキレート剤であるEDTAやEGTAなどを含有させておいてもよい。3rdPadは、測定試料と検出試薬との反応成分のうち、測定に不要な成分を除去し、必要な反応成分が抗体固定化メンブレンをスムーズに展開できるようにすることを目的として配置させることができる。例えば、全血または全血を溶血させた試料を用いる場合には、血球や不溶性の血球破砕物などは測定に不要な成分として除去することが望ましい。また、この3rdPadには、抗原抗体反応により生成する凝集体の内、抗体固定化メンブレンに移動し、スムーズに展開できない位に大きくなった凝集体をあらかじめ除去するという付加的な効果を併せ持たせることも可能である。3rdPadとしては、液体と測定対象の成分とが通り抜けることができるどんな物質及び形態をも含む。具体例として、ガラス繊維グラスファイバー、アクリル繊維、親水性ポリエチレン材、乾燥紙、紙パルプ、織物等が含まれるが、これらに限定されない。好適には血球分離膜やそれに類する膜が用いられる。本明細書において、捕捉抗体を不溶性メンブレン担体に物理的あるいは化学的に担持させることあるいは担持させた状態を固定、固定化、固相化、感作、吸着と表現することがある。本発明のイムノクロマトテストストリップにおいて、捕捉抗体の不溶性メンブレン担体への固定化は、一般に周知の方法で実施することができる。例えば、フロースルー式の場合、上記の捕捉抗体を所定の濃度に調製し、その液を一定量、点あるいはなど特定のシンボル状に、不溶性メンブレン担体に塗布する。ラテラルフロー式の場合には、上記の捕捉抗体を所定の濃度に調製し、その液をノズルから一定の速度で吐出しながら水平方向に移動させることのできる機構を有する装置などを用いて、ライン状に不溶性メンブレン担体に塗布することにより行われる。この際、捕捉抗体の濃度は01mgmL~5mgmLが好ましく、05mgmL~2mgmLがさらに好適である。また、捕捉抗体の不溶性メンブレン担体への固定化量は、フロースルー式の場合には不溶性メンブレン担体に滴下する塗付量を調節することによって最適化でき、ラテラルフロー式の場合には上記の装置のノズルからの吐出速度を調節することによって最適化できる。特に、ラテラルフロー式の場合、05μLcm~2μLcmが好適である。なお、本発明において、フロースルー式メンブレンアッセイという場合は、試料等が不溶性メンブレン担体に対して垂直方向に通過するように展開する方式を指し、ラテラルフロー式メンブレンアッセイという場合は、試料が不溶性メンブレン担体に対して並行方向に移動するように展開する方式を指す。また、上記の捕捉抗体は、通常所定の緩衝液を用いて調製することができる。該緩衝液の種類としては、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グッド緩衝液など通常使用される緩衝液をあげることができる。緩衝液のpHは60~95の範囲が好ましく、65~85がより好ましく、70~80がさらに好ましい。緩衝液には、さらにNaClなどの塩類、スクロースなどの安定剤や保存剤、プロクリンなどの防腐剤等を含んでもよい。塩類はNaClなどのようにイオン強度の調整のために含ませるもののほか、水酸化ナトリウムなど緩衝液のpHを調整する目的で添加するものも含まれる。不溶性メンブレン担体に捕捉抗体を固定化した後、さらに、通常使用されるブロッキング剤を溶液あるいは蒸気状にして捕捉抗体固定化部位以外を被覆し、ブロッキングを行うこともできる。本明細書では、上記のように捕捉抗体が固定化された不溶性メンブレン担体を抗体固定化メンブレンということがある。なお、不溶性メンブレン担体には、コントロール捕捉抗体を固定化することができる。該コントロール捕捉抗体は、アッセイの信頼性を担保するための抗体であって、コンジュゲートパッドに含ませた対応するコントロール抗体を捕捉するものである。例えば、コンジュゲートパッドに標識されたKLHをコントロール抗体として含む場合には、抗KLH抗体などがコントロール捕捉抗体に該当する。コントロール捕捉抗体を不溶性メンブレン担体に固定化する位置は、アッセイ系の設計に適合するよう適宜選択することができる。本発明において、不溶性メンブレン担体単に、メンブレンと記載することがあるとしては、任意の材質が使用できる。例えば、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ナイロン類、ガラス、セルロースやセルロース誘導体などの多糖類あるいはセラミックス等があげられるがこれらに限定されない。具体的には、ミリポア社、東洋濾紙社、ワットマン社などより販売されているガラス繊維ろ紙やセルロースろ紙などをあげることができる。また、この不溶性メンブレン担体の孔径と構造を適宜選択することにより、凝集体がメンブレン中を流れる速度を制御することが可能である。凝集体がメンブレン中を流れる速度を制御することにより、メンブレンに固定化された抗体捕捉抗体に結合するコンジュゲート量を調節することができるため、メンブレンの孔径と構造は、本発明のイムノクロマトテストストリップのほかの構成材料との組み合わせを考慮して最適化することが望ましい。メンブレンとして、好適には、ミリポア社、HiFlowPlusHF180などが用いられる。本発明において、吸収パッドとは、抗体固定化不溶性メンブレン担体部を移動通過した測定試料を吸収することにより、測定試料の展開を制御する液体吸収性を有する部位である。ラテラルフロー式においては、ストリップ構成の最下流に設ければよく、フロースルー式においては、例えば捕捉抗体を固定化した膜の下部に設ければよい。該吸収体としては、例えば、ろ紙を用いることができるが、これに限定されない。好適には、Whatman社、740Eが用いられる。本発明において、イムノクロマトテストストリップとは、少なくとも抗体を固定化した不溶性メンブレンを含むものであればよく、さらに必要に応じて試薬成分や他のメンブレン等を含むものをいう。他のメンブレンとしては、サンプルパッド、コンジュゲートパッド、吸収パッド等が挙げられる。該テストストリップは、通常、プラスチック製粘着シートのような固相支持体上に配列させる。該固相支持体を測定試料の毛管流を妨げない物質で構成することはもとより、接着剤の成分を測定試料の毛管流を妨げない物質とすることは明らかである。なお、抗体固定化メンブレンの機械的強度を上げ且つアッセイ中の水分の蒸発乾燥を防ぐ目的でポリエステルフィルムなどをラミネートすることも可能である。該テストストリップは、テストストリップの大きさや、測定試料の添加方法位置、メンブレン上の抗体の固定化位置、シグナルの検出方法などを考慮した適当な容器ハウジングに格納搭載して使用することができ、このように格納搭載された状態をデバイスという。また、本発明の多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップは、少なくとも、多価抗原に対するモノクローナル抗体固定化メンブレンおよび、本発明の製造方法で作製された多価抗原に対するモノクローナル抗体が標識体に固定化されているコンジュゲートを含むものであればよく、測定条件、測定試料に応じて他の試薬や構成を含み得る。本明細書において試料測定試料または抗原液ともいうとは、主に生体生物由来の体液を言う。具体的には、血液、血清、血漿、尿、唾液、喀痰、膵臓抽出液、涙液、耳漏又は前立腺液などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。一般的には、血清、血漿が好ましい。また、上記の試料は適宜希釈液によって希釈することが可能であるが、本明細書では、希釈未希釈に係わらず試料または測定試料と表す。全血を検体とするときには、該希釈液に赤血球を溶血する作用を併せ持たせてもよい。この際の希釈倍率は適宜目的とする測定範囲に合わせて調節でき、好ましくは10倍から500倍である。上記の溶血作用を持たせた希釈液としては、精製水、pH60~100の緩衝液等が挙げられる。pH60~100の緩衝液としては10mmolL~20mmolLのものが好ましく、例えば、10mmolL~20mmolLのリン酸緩衝液、10mmolL~20mmolLのTrisHCl緩衝液、10mmolL~20mmolLのグリシンHCl緩衝液等が好ましい。また、溶血作用を増強し、試料のテストストリップでの展開速度を制御する目的で、これらの希釈液に抗原抗体反応に影響しない非イオン性の界面活性剤を添加することも可能である。また、上記の希釈液にCa2イオンのキレート剤であるEDTAやEGTAなどを含有させてもよい。本発明のイムノクロマトテストストリップの作製は実施例に記載の方法を適宜、修飾改変して行うことができる。コンジュゲートに由来するシグナルを測定する方法としては、公知の方法に従って行えばよく、例えば、吸光度あるいは反射光の強度を測定すればよい。次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。実施例11.塩滴定法による抗CRPモノクローナル抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の決定抗CRPモノクローナル抗体受託番号FERMBP11344のハイブリドーマが産生する抗体、以下単にFERMBP11344抗体というをpH60708090の4条件の緩衝液後記i~ivにて希釈して、各pHについて、102030405060708090100μgmLの抗体溶液を作製した。また、1ODmLの金コロイド粒径40nm溶液を02molLK2CO3を用いて、pH60708090の4条件のpHに調整した。各pH条件において、金コロイド溶液450μLに対して各濃度の抗体溶液を50μL添加し、この混合液中の抗体濃度をもとに最大結合抗体濃度を求めた。撹拌後、それぞれの混合液に10NaCl溶液100μLを添加し、室温で5分反応させた後、混合液の色調変化を目視で判定写真撮影し図1、抗体濃度を上げてもそれ以上色調変化が認められない状態を与える最小の抗体濃度を、最大結合抗体濃度とした。その結果、FERMBP11344抗体の金コロイド粒径40nmへの最大結合抗体濃度を3μgmL、至適感作pHをpH70に決定した。i2mmolLリン酸緩衝液pH60ii2mmolLリン酸緩衝液pH70iii2mmolLほう酸緩衝液pH80iv2mmolLほう酸緩衝液pH902.抗CRPモノクローナル抗体と金コロイドとの結合体コンジュゲートの作製FERMBP11344抗体と金コロイド粒径40nmとを、これらの混合液の抗体濃度が上記1で決定した最大結合抗体濃度3μgmL及び最大結合抗体濃度の45、35、12、13、14、16の濃度になるように、混合してコンジュゲートを作製した。すなわち、1ODmLの金コロイド溶液pH7020mLに対し、上記の各濃度になるように2mmolLリン酸緩衝液pH70で調製した抗体溶液を1mL添加し、室温で10分間撹拌した。これらの金コロイドと抗体との混合液それぞれに対し、10ウシ血清アルブミンBSA水溶液を2mL添加し、さらに5分間撹拌後、10°Cにて、10000rpmで45分間遠心し、沈渣コンジュゲートを得た。得られた沈渣に、ConjugateDilutionBufferScripps社製を12mL添加しそれぞれのコンジュゲートを懸濁し各コンジュゲートの吸光度を531nm使用した金コロイドの最大吸収波長で測定した。結果は図示せず。3.CRPと抗CRP抗体コンジュゲートとの反応により生成する凝集体の粒度分析上記2の最大結合抗体濃度3μgmL及び最大結合抗体濃度の4524μgmL、3518μgmL、1215μgmL、1310μgmLの濃度において作製した抗CRP抗体コンジュゲートを10mmolLリン酸緩衝液10mmolLPB、pH72または03オクチル硫酸ナトリウム03SOSPB、で希釈し1ODmLに調製した。これらのコンジュゲート溶液100μLに対して、コンジュゲートの希釈液と同一の希釈液300μLを粒度分布測定用ガラスキュベットに入れ、さらに30mgLのCRP標準液積水メディカル株式会社製、ナノピア用CRPキャリブレーターA4μLを添加してボルテックスミキサーにて1~2秒撹拌した後、粒度分布をダイナミック光散乱法により5分間測定した装置:野崎産業株式会社、NICOMPC370。混合液に添加した抗体濃度と反応開始5分後の凝集体の粒子径の関係を図2に示す。希釈液にリン酸緩衝液PBを用いたときには、抗体濃度が最大結合抗体濃度3μgmLの12の濃度よりも大きくなると凝集体の粒子径が急激に増大し100μm以上になるのに対し、最大結合抗体濃度の13~12の濃度で調製したコンジュゲートでは、凝集体の粒子径が70μm~80μmと小さな状態で維持された。また、03オクチル硫酸ナトリウム-リン酸緩衝液03SOSPBの場合には、抗体濃度が最大結合抗体濃度3μgmLの12より濃くなると凝集体の粒度粒子径が急激に増大し80μm以上になるのに対し、最大結合抗体濃度の13~12の濃度の混合液から調製したコンジュゲートでは、凝集体の粒子径が60μm~70μmと小さな状態で維持された。4.抗CRP抗体コンジュゲートを用いたイムノクロマトデバイスの作製1コンジュゲートパッドの作製上記2で調製した抗CRPモノクローナル抗体感作コンジュゲートを20ODmLとなるように、133カゼイン、4スクロース溶液pH75と混合して検出試薬を作製し、一定体積のグラスファイバー製パッド日本ポール社、No8964に該パッド体積の12倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70°C、30分間加温することにより乾燥させ、コンジュゲートパッドとした。2抗CRP抗体固定化メンブレンの作製ニトロセルロースメンブレンミリポア社、HF180の短辺の一端に、1mgmLに調製した抗CRPモノクローナル抗体受託番号FERMBP11345のハイブリドーマが産生する抗体、以下単にFERMBP11345抗体という及び25スクロースを含む10mmolLリン酸緩衝液pH72を、イムノクロマト用ディスペンサーXYZ3050BIODOT社を用いて1μLcmとなるよう設定し、ライン状に塗布した。ドライオーブン内で70°C、45分乾燥し、抗CRP抗体固定化メンブレンとした。3サンプルパッドの作製24mmolL塩化ナトリウム、05スクロース及び30mmolLエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAを含む20mmolLトリス塩酸緩衝液pH72を、一定体積に切断したグラスファイバー製パッドLydall社に該パッド体積の115倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70°C、45分乾燥し、サンプルパッドとした。4テストストリップの作製プラスチック製粘着シートaに上記抗CRP抗体固定化メンブレンbを貼り、該メンブレンの展開上流部側に抗CRP抗体cを配置し、さらに3rdPadhを装着した。次いで上記1で作成したコンジュゲートパッドdを配置装着した。さらにこのコンジュゲートパッドに重なるように上記3で作製したサンプルパッドeを配置装着し、反対側の端には吸収パッドWhatman社、740Eを配置装着した。また、最後に抗体固定化メンブレンおよび吸収パッドを被覆するように上面にポリエステルフィルムgを配置装着しラミネートした。このように各構成要素を重ね合わせた構造物に切断してテストストリップを作製した。該テストストリップは、アッセイの際、プラスチック製の専用のハウジングサンプル添加窓部及び検出窓部を有する、図3中図示せずに格納搭載し、イムノクロマトテストデバイスの形態にした。図3にテストストリップの模式構成図を示した。5CRP濃度の測定範囲の検討上記の種々の抗体感作濃度において作製したイムノクロマトテストデバイスを用いて、CRPの測定範囲を検討した。ナノピア用CRPキャリブレーターA積水メディカル株式会社製を用いて、CRP濃度15306030090018003000mgLの抗原液を作製し、各濃度の抗原液を03オクチル硫酸ナトリウム-10mmolLリン酸緩衝液pH72で30倍に希釈した。希釈した抗原液120μLをテストデバイスのサンプルパッド窓部に添加し、イムノクロマトリーダーICA1000浜松ホトニクス社を用いて5分後のテストデバイスの検出窓部の反射光強度を測定した図4。その結果、最大結合抗体濃度の12より高い濃度で混合液を調製したコンジュゲートでは、抗原CRP濃度300mgL位から測定シグナルがプラトーになったのに対し、最大結合抗体濃度の14~12の濃度で混合液を調製したコンジュゲートでは、抗原CRP濃度3000mgLまで測定シグナルが右肩上がりに増大した。また、最大結合抗体濃度の16の濃度で調製した標識体では、検出感度が著しく低下した。実施例2実施例1で求めた最大結合抗体濃度3μgmLまたはその13の濃度の混合液で作製したコンジュゲートを用いたイムノクロマトデバイスを用い、CRPの測定範囲と凝集体の粒度との関係を検討した。ナノピア用CRPキャリブレーターA積水メディカル株式会社製を用いて、CRP濃度015306030090018003000mgLの抗原液を作製し、各濃度の抗原液を10mmolLリン酸緩衝液pH72で100倍に希釈した。希釈した抗原液120μLをテストデバイスのサンプルパッド窓部に添加し、イムノクロマトリーダーICA1000浜松ホトニクス社を用いて5分後のテストデバイスの検出窓部の反射光強度を測定した図5-1。また、実施例13の方法と同様の方法で、CRP濃度0303003000mgLの抗原液について、凝集体の粒度分布を測定した図5-2。その結果、最大結合抗体濃度3μgmLの混合液で調製したコンジュゲートを用いたテストデバイスでは、CRP濃度0~300mgLにおいて、反射吸光度はCRP濃度に比例して増加し、300mgL以上の濃度でプラトーになった。このとき、凝集体の粒度は反射吸光度と同様、0~300mgLで約70~100nmとなり、300mgL以上の濃度でも約100nmのままであった。一方、最大結合抗体濃度の13の濃度の混合液で調製したコンジュゲートを用いたテストデバイスでは、反射吸光度はCRP濃度0~3000mgLまで濃度に比例して増加した。このとき、凝集体の粒度は69nmから74nmまでわずかに大きくなっただけであった。実施例31.塩滴定法による抗Dダイマーモノクローナル抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の決定1抗Dダイマーモノクローナル抗体バトロキソビン処理フィブリノゲンを免疫原としてKohlerとMilsteinの方法Nature、第256巻495頁1975年参照に準じ、前記抗原で免疫したマウスの脾臓細胞と同種のミエローマ細胞骨髄腫細胞とを細胞融合して当該抗体を産生するハイブリドーマを作製し、そのなかから、D-ダイマーに反応性の高いクローン672101を選択した。以下、クローン672101の産生する抗体を単に672101抗体という。2上記で得られた672101抗体を以下pH60708090の4条件の緩衝液後記i~ivにて希釈して、各pHについて、102030405060708090100μgmLの抗体溶液を作製した。また、1ODmLの金コロイド粒径40nm溶液を02molLK2CO3を用いて、pH60708090の4条件のpHに調製した。各pH条件において、金コロイド溶液450μLに対して、各濃度の抗体溶液を50μL添加し、この混合液中の抗体濃度をもとに最大結合抗体濃度を求めた。撹拌後、それぞれの混合溶液に10NaCl溶液100μLを添加し、室温で5分反応させた後、混合液の色調変化を目視で判定写真撮影し図6、抗体濃度を上げてもそれ以上色調変化が認められない状態を与える最小の抗体濃度を、最大結合抗体濃度とした。その結果、672101抗体の金コロイド粒径40nmへの最大結合抗体濃度を3μgmL、至適感作pHをpH80に決定した。i2mmolLリン酸緩衝液pH60ii2mmolLリン酸緩衝液pH70iii2mmolLほう酸緩衝液pH80iv2mmolLほう酸緩衝液pH902.抗Dダイマーモノクローナル抗体と金コロイドとの結合体コンジュゲートの作製672101抗体を上記1で決定した最大結合抗体濃度3μgmL及び最大結合抗体濃度の13の濃度になるように金コロイド粒径40nmと混合して、コンジュゲートを作製した。すなわち、1ODmLの金コロイド溶液pH8020mLに対し、上記の各濃度になるように2mmolLほう酸緩衝液pH80で調製した抗体溶液を1mL添加し、室温で10分間撹拌した。これらの金コロイドと抗体との混合液それぞれに対し、10ウシ血清アルブミンBSA水溶液を2mL添加し、さらに5分間撹拌後、10°Cにて、10000rpmで45分間遠心し、沈渣コンジュゲートを得た。得られた沈渣に、ConjugateDilutionBufferScripps社製を12mL添加しそれぞれのコンジュゲートを懸濁し各コンジュゲートの吸光度を531nm使用した金コロイドの最大吸収波長で測定した結果は図示せず。3.抗Dダイマーモノクローナル抗体コンジュゲートを用いたイムノクロマトデバイスの作製1コンジュゲートパッドの作製上記2で調製した抗Dダイマーモノクローナル抗体感作コンジュゲートを20ODmLとなるように、133カゼイン、4スクロース溶液pH75と混合して検出試薬を作製し、一定体積のグラスファイバー製パッド日本ポール社、No8964に該パッド体積の12倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70°C、30分間加温することにより乾燥させ、コンジュゲートパッドとした。2抗Dダイマー抗体固定化メンブレンの作製ニトロセルロースメンブレンミリポア社、HF180の短辺の一端に、1mgmLに調製した抗Dダイマーモノクローナル抗体murineMAbagainsthumanDdimerFDPfragmentcloneDD3B6、AmericanDiagnosticainc社製及び25スクロースを含む10mmolLリン酸緩衝液pH72を、イムノクロマト用ディスペンサーXYZ3050BIODOT社を用いて1μLcmとなるよう設定し、ライン状に塗布した。ドライオーブン内で70°C、45分乾燥し、抗Dダイマー抗体固定化メンブレンとした。3サンプルパッドの作製24mmolL塩化ナトリウム、05スクロース及び30mmolLエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAを含む20mmolLトリス塩酸緩衝液pH72を、一定体積に切断したグラスファイバー製パッドLydall社に該パッド体積の115倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70°C、45分乾燥し、サンプルパッドとした。4テストストリップの作製プラスチック製粘着シートiに上記抗Dダイマー抗体固定化メンブレンjを貼り、該メンブレンの展開上流部側に抗Dダイマー抗体kの塗布部を配置し、さら3rdPadを装着した。次いで上記1で作製したコンジュゲートパッドlを配置装着した。さらにこのコンジュゲートパッドに重なるように上記3で作製したサンプルパッドnを配置装着し、反対側の端には吸収パッドWhatman社、740Eを配置装着した。また、最後に抗体固定化メンブレンおよび吸収パッドを被覆するように上面にポリエステルフィルムqを配置装着しラミネートした。このように各構成要素を重ね合わせた構造物に切断してテストストリップを作製した。該テストストリップは、アッセイの際、プラスチック製の専用のハウジングサンプル添加窓部及び検出窓部を有する、図7中図示せずに格納搭載し、イムノクロマトテストデバイスの形態にした。図7にテストストリップの模式構成図を示した。5Dダイマー濃度の測定範囲の検討上記の2種類の抗体感作濃度において作製したイムノクロマトテストデバイスを用いて、Dダイマーの測定範囲を検討した。ナノピア用Dダイマーキャリブレーター積水メディカル株式会社製、60μgmLを市販ヒトプール血漿にて希釈した。希釈後のDダイマー濃度をナノピアDダイマー積水メディカル株式会社製を用いて測定したところ、各抗原液の濃度は041153100153194μgmLであった。各濃度の抗原液120μLをテストデバイスのサンプルパッド窓部に添加し、イムノクロマトリーダーICA1000浜松ホトニクス社を用いて10分後のテストデバイスの検出窓部の反射光強度を測定した図8。その結果、最大結合抗体濃度の混合液で調製したコンジュゲートでは、抗原Dダイマー濃度53μgmL位から測定シグナルがプラトーになったのに対し、最大結合抗体濃度の13の濃度の混合液で調製したコンジュゲートでは、153μgmLまで測定シグナルが右肩上がりに増大し、明らかに測定範囲が広がることが判った。