γGluAbuを乾燥重量あたり02以上含有する酵母エキス。γGluAbuを乾燥重量あたり05以上含有する酵母エキス。γGluAbuを乾燥重量あたり10以上含有する酵母エキス。前記酵母がサッカロマイセス属又はキャンディダ属に属する酵母である、請求項1~3のいずれか一項に記載の酵母エキス。前記酵母がサッカロマイセスセレビシエである、請求項1~3のいずれか一項に記載の酵母エキス。前記酵母がキャンディダユティリスである、請求項1~3のいずれか一項に記載の酵母エキス。酵母をAbu及びγGluAbuから選ばれる化合物を添加した培地で培養し、得られた菌体から酵母エキスを調製することを特徴とする、γGluAbuを含む酵母エキスの製造方法。前記培地は前記化合物を、Abuの場合は10ppm以上、γGluAbuの場合は1ppm以上添加され、前記酵母エキスはγGluAbuを乾燥重量当り02以上含有する、請求項7に記載の方法。前記酵母がサッカロマイセス属又はキャンディダ属に属する酵母である、請求項7又は8に記載の方法。前記酵母がサッカロマイセスセレビシエである、請求項7又は8に記載の方法。前記酵母がキャンディダユティリスである、請求項7又は8に記載の方法。前記酵母が、下記の性質のいずれか又は両方を有することを特徴とする、請求項7~11のいずれか一項に記載の方法:aγ-グルタミルシステイン合成酵素活性が増強されている、bグルタチオン合成酵素活性が弱化されている。アミノ基転移酵素活性又は/及びα-ケト酪酸合成酵素活性が増強するように改変され、かつ、γ-グルタミルシステイン合成酵素活性が増強し、又は/及びグルタチオン合成酵素活性が弱化するように改変された、γGluAbu含量が高められた酵母。アミノ基転移酵素が、BAT1遺伝子によってコードされる酵素であることを特徴とする請求項13に記載の酵母。アミノ基転移酵素が、UGA1遺伝子によってコードされる酵素であることを特徴とする請求項13に記載の酵母。α-ケト酪酸合成酵素が、CHA1遺伝子によってコードされる酵素であることを特徴とする請求項13~15のいずれか一項に記載の酵母。さらに、ペプチド分解酵素の活性が弱化されている、請求項13~16のいずれか一項に記載の酵母。請求項14~17のいずれか一項に記載の酵母から製造された酵母エキス。Abuを添加した酵母エキス原料に、γ-グルタミル基転移酵素を作用させることを特徴とする、γGluAbuを含む酵母エキスの製造方法。Abuの添加量は、酵母エキス原料の乾燥重量当り01以上であり、前記酵母エキスはAbuを、乾燥重量当り02以上含有する、請求項19に記載の方法。本発明は、先味型のコク味付与効果のある酵母エキス、及びそれを製造する方法を提供することを課題とする。本発明者らは、γGluAbuLγグルタミルL2アミノ酪酸が高いCaSRアゴニスト活性と極めて優れたコク味付与効果を有し、特にその呈味パターンが先味型であることを見出している。そして、酵母がAbuα-アミノ酪酸又はγGluAbuを細胞内に取込むこと、及び、Abu又はγGluAbuを含む培地で培養した酵母から酵母エキスを調製することによって、γGluAbuを含む酵母エキスを製造することができることを見出した。また、アミノ基転移酵素又は/及びα-ケト酪酸合成酵素の活性を上昇させることにより細胞内でのAbu生成が進行することも見出した。さらに、Abuを添加した酵母エキス原料に、γ-グルタミル基転移酵素を作用させることにより、γGluAbuを含む酵母エキスを製造することができることを見出した。これらの知見に基づいて、本発明は完成されるに至った。すなわち、本発明は以下のとおりである。1γGluAbuを乾燥重量あたり02以上含有する酵母エキス。2γGluAbuを乾燥重量あたり05以上含有する酵母エキス。3γGluAbuを乾燥重量あたり10以上含有する酵母エキス。4前記酵母がサッカロマイセス属又はキャンディダ属に属する酵母である、前記酵母エキス。5前記酵母がサッカロマイセスセレビシエである、前記酵母エキス。6前記酵母がキャンディダユティリスである、前記酵母エキス。7酵母をAbu及びγGluAbuから選ばれる化合物を添加した培地で培養し、得られた菌体から酵母エキスを調製することを特徴とする、γGluAbuを含む酵母エキスの製造方法。8前記培地は前記化合物を、Abuの場合は10ppm以上、γGluAbuの場合は1ppm以上添加され、前記酵母エキスはγGluAbuを乾燥重量当り02以上含有する、前記方法。9前記酵母がサッカロマイセス属又はキャンディダ属に属する酵母である、前記方法。10前記酵母がサッカロマイセスセレビシエである、前記方法。11前記酵母がキャンディダユティリスである、前記方法。12前記酵母が、下記の性質のいずれか又は両方を有することを特徴とする、前記方法:aγ-グルタミルシステイン合成酵素活性が増強されている、bグルタチオン合成酵素活性が弱化されている。13アミノ基転移酵素活性又は/及びα-ケト酪酸合成酵素活性が増強するように改変され、かつ、γ-グルタミルシステイン合成酵素活性が増強し、又は/及びグルタチオン合成酵素活性が弱化するように改変された、γGluAbu含量が高められた酵母。14アミノ基転移酵素が、BAT1遺伝子によってコードされる酵素であることを特徴とする前記酵母。15アミノ基転移酵素が、UGA1遺伝子によってコードされる酵素であることを特徴とする前記酵母。16α-ケト酪酸合成酵素が、CHA1遺伝子によってコードされる酵素であることを特徴とする前記酵母。17さらに、ペプチド分解酵素の活性が弱化されている、前記酵母。18前記酵母から製造された酵母エキス。19Abuを添加した酵母エキス原料に、γ-グルタミル基転移酵素を作用させることを特徴とする、γGluAbuを含む酵母エキスの製造方法。20Abuの添加量は、酵母エキス原料の乾燥重量当り01以上であり、前記酵母エキスはAbuを、乾燥重量当り02以上含有する、前記方法。以下、本発明を詳細に説明する。本発明の酵母エキスは、γGluAbuを乾燥重量あたり02以上含有する酵母エキスである。本発明の酵母エキスは、γGluAbuを、乾燥重量当り02以上、好ましくは05以上、より好ましくは10以上、特に好ましくは20以上含有する。本発明の酵母エキスの原料となる酵母は、後述する本発明の方法に用いられる酵母と同様である。本発明の酵母エキスは、性状は特に制限されず、粉体状でもよく、溶液であってもよい。また、本発明の酵母エキスは、従来の酵母エキスと同様の用途、例えば、調味料、食品添加物、又は健康食品等として利用することができる。本発明の酵母エキスは、コク味付与効果に優れている。コク味付与効果は、うま味や塩味の共存下でより発揮されるため、酵母エキスにL-グルタミン酸ナトリウムや呈味性ヌクレオチド等のうま味物質、及び/又は食塩等の塩味物質を添加してもよい。また、本発明の酵母エキスは、特に先味のコク味に優れている為、プロファイルの異なるコク味物質、例えば、GSHやγGluValGlyなど、又はこれらを含む酵母エキスを添加しても良い。また、調味料、食品添加物又は健康食品に、本発明の酵母エキスと共に、うま味物質及び/又は塩味物質を加えてもよい。尚、呈味パターンは、先味initialtaste、中味middletaste及び後味aftertasteに分けることができる。これらは相対的な概念であるが、通常、それぞれ喫食後0から2秒まで、2秒から5秒まで、及び5秒以降に感じる呈味である。また、前記先中味initialmiddletasteは0~5秒までに感じる呈味であり、後述の中後味middleaftertasteは、2秒以降約30秒前後までに感じる呈味である。本発明の酵母エキスは、例えば、下記に示す本発明の方法により製造することができる。本発明の第一の方法は、酵母をAbu及びγGluAbuから選ばれる化合物を含む培地で培養し、得られた菌体から酵母エキスを調製することにより、γGluAbuを含有する酵母エキスを製造する方法である。酵母は、Abu及び/又はγGluAbuを細胞内に取込み、細胞内にγGluAbuを蓄積し得る限り、野生株であっても、各種変異株又は組換え株であってもよい。変異株又は組換え株としては、γ-グルタミルシステイン合成酵素GSH1の活性を増強させた株、グルタチオン合成酵素GSH2の活性を弱化させた株、或いはこの2つの性質を併せ持った株が挙げられる。また、変異株又は組換え株として、細胞内のペプチドを分解するペプチド分解酵素、例えば、DUG1遺伝子、DUG2遺伝子、DUG3遺伝子、ECM38遺伝子にコードされる酵素の活性が弱化された株が挙げられる。さらに、酵母は、GSH1の活性の増強、及び/又は、GSH2の活性の弱化に加えて、ペプチド分解酵素活性が弱化されていてもよい。上記各遺伝子の塩基配列は、SaccharomycesGenomeDatabasehttpwwwyeastgenomeorgに開示されている。酵母は、細胞内にγGluAbuを蓄積することができる限り、特に制限されず、サッカロミセスセレビシエ等のサッカロミセス属、キャンディダユティリス等のキャンディダ属、ピヒアパストリス等のピヒア属、シゾサッカロミセスポンベ等のシゾサッカロミセス属等に属する酵母を例示することができる。中でも、酵母エキスの生産によく用いられているサッカロミセスセレビシエやキャンディダユティリスが好ましい。本発明の酵母は、1倍体でもよいし、2倍性またはそれ以上の倍数性を有するものであってもよい。GSH1等の酵素又はタンパク質の活性を増強させる方法としては、これらをコードする遺伝子の発現を増強させる方法が挙げられる。遺伝子の発現増強は、例えば、染色体上の遺伝子のプロモーターをより強力なものに変更する方法、染色体上に目的の遺伝子を挿入することにより多コピー化を促す方法、目的遺伝子を含むプラスミドを酵母に保持させる方法、又は、目的の酵素をコードする遺伝子の転写因子を活性化させる方法等が挙げられる。プロモーターは、各種レポーター遺伝子を用いることにより、在来のプロモーターの高活性型のものを取得してもよいし、或いは公知の高発現プロモーター、例えば、ADH1、PGK1、PDC1、TDH3、TEF1、HXT7などを用いてもよい。目的遺伝子の多コピー化は、例えば、CEN4の複製開始点を持つプラスミドや2μmDNAの複製開始点を持つ多コピー型プラスミドに目的遺伝子を挿入することにより、行うことができる。或いは、染色体上の任意の領域に目的遺伝子を導入する為に、トランスポゾンを用いても良いし、150コピーあるrDNA配列を標的に目的遺伝子を導入しても良い。一方、GSH2やペプチド分解酵素等の酵素又はタンパク質の活性を弱化させるには、これらをコードする染色体上の遺伝子のプロモーターをより弱化したものに変更することによって発現を弱化させる方法、目的の酵素に変異を導入することにより活性を低下させる方法、目的の酵素遺伝子の一部又は全体を染色体上から欠失させる方法、又は、目的の酵素遺伝子に他の配列を挿入することによって同遺伝子を不活化する方法等が挙げられる。尚、酵素活性の弱化には、酵素活性が野生株よりも低い場合、及び、酵素活性を完全に欠損した場合の両方が含まれる。γ-グルタミルシステイン合成酵素の活性の増強は、例えば米国特許第7553638号、大竹康之らバイオサイエンスとインダストリー、第50巻第10号、第989~994頁、1992年等に開示されている。また、米国特許第7553638号にはグルタチオン合成酵素遺伝子の破壊について開示されている。或いは、γ-グルタミルシステイン合成酵素をコードする遺伝子の転写因子であるYAP1を不活性化させることによってもグルタチオン合成酵素活性を低下することができる。サッカロマイセスセレビシエのGSH1、GSH2、及びYAP1をコードする遺伝子の塩基配列は、それぞれSaccharomycesGenomeDatabasehttpwwwyeastgenomeorgに開示されている。また、キャンディダユティリスのGSH1及びGSH2をコードする遺伝子の塩基配列は、米国特許第7553638号に開示されている。また、キャンディダユティリスのYAP1をコードする遺伝子の塩基配列は、特開200675122に開示されている。上記のような酵母は、自然界からのスクリーニング、各種変異処理、或いは遺伝子工学により育種したものであってもよい。各種変異処理には、EMS、DAPA、NTGなどの各種薬剤を用いることができ、変異処理した酵母を最適な培地にスプレッドし、生育した株から、GSH1活性が増強した株、又はGSH2活性が弱化した株を選択することにより、目的の変異株を取得することができる。遺伝子工学による育種方法は、特に制限されず、通常使用している方法を用いることができる。特に、サッカロマイセスセレビシエの遺伝子工学の具体的手法は、多くの書籍に記されている。また、キャンディダユティリスについても、近年各種の方法が報告されており、それらを用いても良い。例えば、ケミカルエンジニアリング1999年6月号23p28p、三沢典彦、FEMSMicrobiologyLetters165335340LuisRodriguezetal、WO9807873、特開平8173170、WO9532289、JournalofBacteriology、WO9814600、特開200675122、特開200675123、特開2007089441、特開2006101867などの先行文献にその具体的な手法が記されているので適宜参考にすることができる。次に、酵母エキスを製造する方法を説明する。まず、酵母を培地で培養する。培地は、酵母が増殖し得るものであれば特に制限されないが、実施例に記載したSD培地に限定されることなく通常工業的に用いられる培地を利用することができる。例えば、炭素源としてグルコース、蔗糖、糖蜜、エタノール、酢酸、亜硫酸パルプ廃液等を、窒素源として尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム硝酸塩等を、或いはコーンスチープリカー、カゼイン、酵母エキス、ペプトン、大豆蛋白分解物等を、燐酸、カリウム、マグネシウム源として、燐酸、燐酸カリウム、燐酸アンモニウム、過燐酸石灰、塩化カリウム、水酸化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等を、その他微量金属として、銅、マンガン、亜鉛、鉄イオン等の無機塩等を適宜組み合わせて含む培地などを例示することができる。酵母の培養に際して、上記培地にAbu、もしくはγGluAbu、又はこれらの両方を添加する。Abuはα-アミノ酪酸を、Gluはグルタミン酸を表す。Abu及びGluは、L-体である。これらの化合物は、培養開始時から培地に含まれていてもよく、培養途中の任意の時点で培地に添加されてもよい。培養途中での前記化合物の培地への添加は、好ましくは、培養終了時の0~50時間前なお、ここでは0時間前とは添加と同時に培養を終了することを意味する、より好ましくは01~24時間前、特に好ましくは05~6時間前である。また、培養途中での添加は、連続的に添加される形式でもよい。培地に添加するAbu及び/又はγGluAbuは、精製品純品であってもよいし、必要量のAbu及び/又はγGluAbuを含有する限り、これらの化合物を含む組成物であってもよい。前記化合物を含む培地での培養に先立って、前培養を行ってもよい。前培養に用いる培地は、前記化合物を含んでいてもよく、含んでいなくもよい。培地に添加する化合物の量は、培養開始時に添加する場合は、添加時の培養液中の最終濃度で、Abuでは通常10ppm以上、好ましくは25ppm以上、より好ましくは50ppm以上、更に好ましくは100ppmであり、γGluAbuでは通常1ppm以上、好ましくは5ppm以上、より好ましくは10ppm以上である。Abu及びγGluAbuの両方を添加する場合は、上記範囲に準じて濃度を設定することができる。化合物の量の上限は特に制限されないが、例えば費用の観点から100000ppm以下と設定することもでき、通常10000ppm以下、好ましくは1000ppm以下、より好ましくは500ppm以下である。一方、化合物が、培養途中の任意の時点で、又は、連続的に添加される場合は、添加量の累計が、培養開始時に添加する場合の最終濃度と同等な条件であればよい。培養条件は、通常の酵母エキスの製造と同様の条件を採用することができ、用いる酵母に応じて適宜変更することができる。バッチ培養、フェドバッチ培養、連続培養など任意の方法を使用することができる。サッカロマイセスセレビシエ、又はキャンディダユティリスの場合は、25~35°Cで、より好ましくは、27~33°Cで、更に好ましくは28~32°Cで振とう培養等により好気的に培養することが好ましい。上記のようにして酵母を培養すると、酵母の細胞中に、γGluAbuが蓄積する。培地にAbuを添加した場合、細胞内にAbuが蓄積するが、γGluAbuも蓄積する。これは、後述の実施例に記載したように、細胞内に取込まれたAbuが、細胞内のγ-グルタミルシステイン合成酵素の働きにより、γGluAbuに変換されることによるものである。尚、実施例に示すように、酵母中のγGluAbu又はγGluAbuGlyの含有量と、細胞中のGSHの含有量とは相関しないことから、従来の方法で製造された酵母エキスは、GSHを高濃度で含有する酵母から製造されたものであっても、γGluAbuを高濃度に含有しないと考えられる。これは、後述の実施例に記載するように、細胞内ではAbuの生成が制限されているためと推定される。好適な形態では、上記のようにして培養された酵母は、乾燥菌体重量あたり、通常004以上、好ましくは01以上、より好ましくは015以上、より好ましくは02以上、特に好ましくは04以上含有する。得られた酵母からの酵母エキスの調製は、通常の酵母エキスの調製と同様にして行えばよい。酵母エキスは、酵母菌体を熱水抽出したものを処理したものでもよいし、酵母菌体を自己消化や酵素添加により消化したものを処理したものでもよい。また、必要に応じて得られた酵母エキスを濃縮してもよいし、ペースト状でも、乾燥し粉末の形態にしてもよい。上記のようにして、γGluAbuの含有量が高められた酵母エキスが得られる。好適な形態では、酵母エキスは、γGluAbuを、乾燥重量当り02以上、より好ましくは05以上、さらに好ましくは10以上、特に好ましくは20以上含有する。本発明の第二の方法について説明する。第二の方法は、酵母細胞内にてAbu合成能を強化した酵母に関するものである。従来、酵母細胞内でのAbu合成経路は知られていなかったが、実施例に示すように、酵母内のアミノ基転移酵素により、αケト酪酸から生成することが明らかとなった。その為、酵母細胞内でAbu合成能が強化されると、γGluAbuの蓄積能が向上する。Abu合成能は、アミノ基転移酵素活性、又は、α-ケト酪酸合成酵素活性の増強によって、強化することができる。アミノ基転移酵素やα-ケト酪酸合成酵素の活性の増強は、前記GSH1等と同様にして行うことができる。本発明の酵母の一形態は、アミノ基転移酵素の活性が増強された酵母である。本発明の酵母の他の形態は、αケト酪酸合成酵素活性が増強された酵母である。本発明の酵母の他の形態は、アミノ基転移酵素の活性及びαケト酪酸合成酵素活性の両方が増強された酵母である。また、アミノ基転移酵素又は/及びα-ケト酪酸合成酵素の活性が増強された酵母は、第一の発明と同様に、γ-グルタミルシステイン合成酵素GSH1の活性が増強されていてもよいし、グルタチオン合成酵素GSH2の活性が弱化されていてもよい。或いはこの2つの性質を併せ持っていてもよい。更に、細胞内のペプチドを分解するペプチド分解酵素、例えば、DUG1遺伝子、DUG2遺伝子、DUG3遺伝子、ECM38遺伝子にコードされる酵素が弱化されていても良い。Abu合成能が強化された酵母、例えば、γ-グルタミルシステイン合成酵素活性、及びアミノ基転移酵素活性又は/及びαケト酪酸合成酵素活性が増強するように改変された酵母は、Abu及びγGluAbuを添加しない培地で培養したときでも、γGluAbuを著量蓄積する。このような酵母は、好適な態様、例えば後述のBAT1によりコードされるアミノ基転移酵素活性、及びGSH1活性が増強され、かつ、GSH2活性が弱化された酵母では、γGluAbuを、乾燥菌体重量あたり、好ましくは004以上、より好ましくは01以上、より好ましくは015以上、更に好ましくは02以上、特に好ましくは04以上含有する。また、同酵母から調製された酵母エキスは、乾燥重量あたりγGluAbuを02以上含有する。また、他の態様、例えば上記酵母において更にCHA1によりコードされるセリンスレオニンデアミナーゼ活性が増強された酵母は、γGluAbuを、乾燥菌体重量あたり、好ましくは01以上、より好ましくは015以上、より好ましくは02以上、更に好ましくは04以上、特に好ましくは05以上含有する。尚、Abu合成能が強化された酵母を培養する際に、培地にAbu及び/又はγGluAbuを添加してもよい。酵母は、細胞内にγGluAbuを蓄積することができる限り、特に制限されず、サッカロミセスセレビシエ等のサッカロミセス属、キャンディダユティリス等のキャンディダ属、ピヒアパストリス等のピヒア属、シゾサッカロミセスポンベ等のシゾサッカロミセス属等に属する酵母を例示することができる。中でも、酵母エキスの生産によく用いられているサッカロミセスセレビシエやキャンディダユティリスが好ましい。本発明の酵母は、1倍体でもよいし、2倍性またはそれ以上の倍数性を有するものであってもよい。酵母のアミノ基転移酵素として、アラニン:グリオキシル酸アミノトランフェラーゼAlanineGlyoxylateaminotransferase、分岐鎖アミノ酸トランスアミナーゼBranchedchainAminoacidtransaminase、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼAspartateaminotransferase、γ-アミノ酪酸トランスアミナーゼGammaaminobutyratetransaminaseなどを例示することができる。サッカロマイセスセレビシエでは既にこれらの酵素をコードする遺伝子が特定されており、各々AGX1システマティックネーム:YFL030W、BAT1システマティックネーム:YHR208W、BAT2システマティックネーム:YJR148W、AAT1システマティックネーム:YKL106W、AAT2システマティックネーム:YLR027C、UGA1システマティックネーム:YGR019Wにコードされている。また、キャンディダユティリスの場合も、近年各種遺伝子が報告されているし、近年のシークエンサーの進歩を利用して、全ゲノム配列を特定することにより、容易にそれらのホモログ遺伝子を特定することができるので、それらを利用すればよい。中でも、BAT1及びUGA1が好ましくは、特に、後述の実施例に記すように、BAT1はその効果が顕著であるので好ましい。活性が増強されるアミノ基転移酵素は1種でもよいが、任意の2種以上であってもよい。酵母のαケト酪酸合成酵素としては、CHA1遺伝子システマティックネーム:YCL064Cによってコードされるセリンスレオニンデアミナーゼ、及び、ILV1遺伝子システマティックネーム:YER086Wによってコードされるスレオニンデアミナーゼが挙げられる。活性が増強されるαケト酪酸合成酵素は1種でもよいが、任意の2種以上であってもよい。アミノ基転移酵素、及び、αケト酪酸合成酵素の活性は、GSH1の活性増強と同様に、各々の酵素をコードする遺伝子の発現を増強させることによって増強することができる。アミノ基転移酵素又は/及びαケト酪酸合成酵素の活性が増強され、γGluAbuを含有する酵母を用いた酵母エキスの製造は、第一の方法と同様にして行うことができる。本発明の第三の方法は、Abuを添加した酵母エキス原料に、γ-グルタミル基転移酵素を作用させることにより、γGluAbuを含む酵母エキスを製造する方法である。Abuにγ-グルタミル基転移酵素を作用させると、γGluAbuが生成する。したがって、Abuを含む酵母エキスに、γ-グルタミル基転移酵素を作用させることによっても、γGluAbuを含む酵母エキスが得られる。Abuを含む酵母エキスは、Abuを含む培地で培養した酵母から調製したものであってもよく、酵母エキス原料にAbuを加えたものであってもよい。酵母エキス原料としては、通常の方法で得られる酵母エキスを使用することができる。酵母エキスへのAbuの添加量は、酵母エキス原料の乾燥重量当り、通常01以上、好ましくは1以上、より好ましくは5以上、さらに好ましくは10以上である。γ-グルタミル基転移酵素による反応は、水又は緩衝液等の水性溶媒中で行う。具体的には、例えば、酵母エキス原料を水性溶媒に溶解し、γ-グルタミル基転移酵素を添加する。反応条件は、用いるγ-グルタミル基転移酵素に応じて適宜設定することができる。通常、pH3~9、15~70°Cで、1~300分間、好ましくはpH5~8、30~70°C、5~150分間反応させる。酵母エキス原料の水性溶媒中の濃度は、操作性の見地から定めればよい。通常、酵母エキス原料の乾燥重量として、01~50であり、05~20が好ましい。γ-グルタミル基転移酵素としては、グルタミナーゼ、γ-グルタミルトランスペプチダーゼγGTP等が挙げられる。酵素量は、γGTPについては、pH85、25°Cの溶液中で1分間あたりにγglutamylpnitroanilideより10μmoleのpnitroanilineを遊離する活性を1ユニットと定義した場合シグマ総合カタログ20082009年版の917ページに記載の定義、通常0001~1000unitsml、好ましくは0005~100unitsml、より好ましくは001~25unitsml、最も好ましくは005~10unitsmlである。グルタミナーゼについても、γGTPに準じて酵素量を適宜設定することができる。酵素反応後、γ-グルタミル基転移酵素を失活させるたための処理、例えば80~100°Cでの熱処理を行ってもよく、そのような処理を行わなくてもよい。γ-グルタミル基転移酵素の基質として、γ-グルタミル化合物、例えばGSHを反応液に加えてもよい。また、酵母エキスに含まれるGSHを基質としてもよい。この場合、GSHの含有量を高めた酵母、例えばGSH1及び/又はGSH2の活性を増強した酵母から調製した酵母エキスを用いることができる。酵母エキス中のGSHの含有量は、多ければ多いほうが良いが、通常乾燥重量あたり1~50、好ましくは1~30、より好ましくは5~20である。或いは、グルタミンをGSHと同様に利用することもできる。上記のようにして、γGluAbuの含有量が高められた酵母エキスが得られる。好適な形態では、酵母エキスは、γGluAbuを、乾燥重量当り02以上、より好ましくは05以上、さらに好ましくは10以上、特に好ましくは20以上含有する。得られた酵母エキスは、必要に応じて濃縮してもよいし、ペースト状でも、乾燥し粉末の形態にしてもよい。上記、第一~第三の発明で得られる酵母エキスに、その他のコク味物質を混合しても良い。このようなコク味物質としては、例えば、γGluX、γGluXGlyXはアミノ酸又はアミノ酸誘導体を表す。のようなペプチド、具体的にはGSHやγGluValGly、及び、これらを含有する酵母エキスが挙げられる。このようにして、先味から後味まで幅広い範囲でコク味を有する酵母エキスを製造することもできる。特に、先味と後味のコク味のバランスから、GSHの場合は、γGluAbuに対するGSHの存在比率は、03以上、好ましくは05以上、より好ましくは10以上、最も好ましくは30以上が好ましい。以下、本発明を実施例に基づいて更に具体的に説明する。なお、本発明は以下の実施例になんら限定されるものではない。尚、特記しない限り、以下に記載するアミノ酸及びアミノ酸誘導体は、L-体である。参考例1γGluAbuのコク味付与活性の評価γGluAbuについて、定量的な官能評価試験によりコク味付与活性の強度を調べた。定量的官能評価試験は以下のように実施した。グルタミン酸ナトリウム005gdl、イノシン酸一リン酸005gdl、及び、塩化ナトリウム05gdlを含有する蒸留水に、被験化合物を0001~05gdlにて混合した場合の、コク味付与活性の強度を測定した。前記グルタミン酸ナトリウム、イノシン酸一リン酸、塩化ナトリウムを含有する蒸留水に被検化合物を添加しないサンプルを無添加コントロールとした。被検化合物を溶解後に、無添加コントロールに対し酸性を呈したサンプルについては、NaOHで無添加コントロールに対しpHが±02の範囲内となるように合わせて使用した。官能評点は、コントロール:0点、強い:3点、非常に強い:5点として、n4で試験を実施した。また、尺度をより明確にするため、0001gdlのγGluValGlyの先味、中後味を各々30点とした。尚、中後味とは、中味から後味を合わせた時間で感じる呈味である。具体的には、先味、中味及び後味は、それぞれ喫食後0から2秒まで、2秒から5秒まで、及び5秒以降に感じる呈味であり、中後味は、2秒以降約30秒前後までに感じる呈味である。採点については、直線尺度法を用い、-5~0~5点の位置を示した直線に対し、該当する評点を位置として記入する方法を用いた。また、食品の調味開発を累積で1年以上経験し、うま味塩味溶液に添加したγGluCysGlyとγGluValGlyの力価の差が10倍前後と判定できる者定期的に確認をパネラーとした。上記添加濃度で幅広くコク味付与活性を示したが、代表的な濃度の結果を表1に示した。又、γGluAlaについて同様に評価した結果も表2に示した。両者は先味の評点が高い先味タイプであるが、γGluAbuは極めて力価が強いジペプチドであることが分かった。さらにγGluCysやその他ジペプチドについても、上記と同一の定量的な官能評価試験によりコク味付与活性の強度を調べた。その結果を表2に示した。γGluAbuが優れたコク味付与活性を有し、更にその呈味パターンにおいて先味の立ち上がりが優れていることが分かった。この先味の立ち上がりは、γGluCysに比べて極めて優位な点の一つである。また、γGluAbuは保存安定性に優れており、この点もγGluCysに比べて優位な点である。また、γGluAbuは、含まれるアミノ酸の残基数が2残基と短いので、含まれるアミノ酸の残基数が3残基であるトリペプチドと比較してより簡便かつ低コストで生産することが可能であり、産業上も非常に有利である。実施例1各種酵母エキス中のAbu、γGluAbu、及びγGluAbuGlyの検出各種酵母エキス酵母抽出物中のAbu、γGluAbu、及びγGluAbuGly含量を測定した。測定には以下の方法を用いた。ペプチドを6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートAQCを用いて蛍光誘導体化し、LCMSMSにより検出することより行った。具体的には、適当な濃度に希釈したサンプル25μL又は、1μMのAbu、γGluAbu、及びγGluAbuGlyを含む標準液25μLに、MillQ水25μL、5μM内部標準物質溶液3methylHisd2、シグマ社、Glyd2、シグマ社。いずれも安定同位体で標識されている。5μL、硼酸緩衝液日本ウォーターズ社製AccQFluor登録商標試薬キット付属品30μLを添加した。この混合物に、AQC試薬溶液上記試薬キットの試薬粉末をアセトニトリル1mL中に溶解することにより調製10μLを添加した。得られた混合物を10分間、55°Cで加熱後、01のギ酸水溶液100μLを加え、分析サンプルとした。次に前述のように調製した分析サンプルを、下記逆相の液体クロマトグラフィーで分離後に、質量分析装置に導入した。分離条件は下記の通り。1HPLC:Agilent1200シリーズ2分離カラム:UnisonUKPhenyl内径20mm、長さ100mm、粒子径3μmImtakt社製3カラム温度:40°C4移動相A:25mMギ酸水溶液をアンモニア水でpH60に調整した水溶液5移動相B:メタノール6流速:025mL/min7溶出条件:溶出は、移動相A及び移動相Bの混合液を用いて行った。混合液に対する移動相Bの比率は以下の通り。0分5、0分~17分5~40、17分~171分40~80、171分~19分80、19分~191分80~5、191分~27分5。その後、前述の分離条件によって溶出されたAbu、γGluAbu、およびγGluAbuGlyの誘導体化物を質量分析計に導入してマスクロマトグラムにより定量を行った。分析条件は下記の通り。1質量分析装置:ABSciexAPI3200QTRAP2検出モード:SelectedIonMonitoringポジティブイオンモード3選択イオン:表3Abu、γGluAbu、およびγGluAbuGlyの誘導体化物の定量は、解析ソフトAnalystver142を用いて行った。定量を行うための内部標準物質として、Abuの誘導体化物の場合は3methylHisd2の誘導体化物を、γGluAbu又はγGluAbuGlyの誘導体化物の場合はGlyd2の誘導体化物を、各々用いた。Abu、γGluAbu、およびγGluAbuGly標品、及び、誘導体化された内部標準アミノ酸の分析結果マスクロマトグラムを、それぞれ図1及び図2に示す。この方法を用いることにより、各種サンプル中のAbu、γGluAbu、及びγGluAbuGlyを測定可能なことがわかった。なお、γGluAbuの定量の際に、極まれにサンプルによって夾雑ピークが見られた場合は、第二のマスアナライザーでの選択イオンを、1452、或いは、1041を用いて定量した。実施例2各種市販酵母エキス中のγGluAbu含量測定実施例1の方法を用いて、各種市販酵母エキス中のγGluAbu含量乾燥重量当りを測定した。また、常法により、GSH含量も測定した。結果を表4に示す。表4に示すように各種酵母エキス中のγGluAbuは15ppm~920ppmの範囲であった。また、γGluAbuGSHの比率も一定ではなく、特にGSH含量が多いブランドほどその比率が低下する傾向が見られた。これは、後述の実施例に示すように、GSH生合成経路を担うGSH1及びGSH2はAbuやγGluAbuを基質として認識しうるが、そもそも細胞内のAbu生成量は制限されており、GSHの生成経路を強化したとしても、Abuが足りず菌体内にγGluAbuをあまり多く蓄積できないと考えられる。このことは、公知のGSH高含有酵母のγGluAbu含量は多くはないことを示唆している。実施例3サッカロマイセスセレビシエ標準菌株S288C株へのAbuの添加効果次に、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeの標準菌株であるS288C株に含まれるγGluAbu含量を測定した。また、同時に前駆体であるAbuの培地への添加効果も検証した。なお、S288C株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源部門NRBC:NITEBiologicalResourceCenter。〒2920818千葉県木更津市かずさ鎌足258にNBRC1136の番号で保存されており、分譲を受けることができる。また、同株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション12301ParklawnDriveRockvilleMaryland20852UnitedStatesofAmericaにもATCC26108の番号で保存されており、分譲を受けることができる。S288C株をSD培地と5gの硫酸アンモニウムを混合したものを100mlの滅菌水に溶解し、pHを52程度に調整し、フィルター濾過滅菌したもの得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようになお、吸光度は、BECKMANCOULTER社のDU640SPECTROPHTOMETERを用いて測定した。、SD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml、最終濃度で10ppmのAbuを含むSD培地、最終濃度で50ppmのAbuを含むSD培地、又は最終濃度で100ppmのAbuを含むSD培地に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で19時間振とう培養した。得られた培養液から、400ODunitsOD660が1である培養液1mlに含まれる菌体を1ODunitと定義する。分の菌体を遠心分離により採取した。上清は可能な限り取り除き、残った菌体を45mlのmilliQ水に懸濁した。再度遠心分離により菌体を集菌し、45mlのmilliQ水に再懸濁した。この操作を累計3回繰り返すことにより、菌体から培地分を完全に除去した。得られた洗浄菌体は、約15mlのmilliQ水に懸濁し、70°Cで10分間加熱した。この工程にて菌体内に含まれるエキス分を抽出した。次に、遠心操作によりエキスと菌体残渣を分離した。エキスから10kDaの遠心濾過膜MILLIPORE社:AmiconUltra05mL10Kカタログ番号UFC501096を用いて細胞デブリを除去し、得られた画分を実施例1と同様にしてAQC試薬にて誘導体化し、LCMSMSによりAbu、γGluAbu、及びγGluAbuGlyを測定した。また、乾燥菌体重量は、洗浄菌体を4時間104°Cで乾燥させることにより測定した。このようにして測定した一定量の培養液に含まれるAbu、γGluAbu、及びγGluAbuGly及び乾燥菌体重量から、乾燥菌体あたりに含まれるAbu、γGluAbu、及びγGluAbuGlyの含量を算出した。結果を表5に示す。表5に示す通り、Abuを培地に添加することにより、菌体内のγGluAbu含量が増加することがわかった。また、γGluAbuだけでなくγGluAbuGlyも蓄積したことから、酵母細胞内ではγGluAbuを基質とした何らかの酵素反応によりγGluAbuの一部がγGluAbuGlyに変換されることがわかった。なお、菌体洗浄工程で得られた洗浄液中のAbuを測定した結果、最終洗浄液にはAbuが含まれていなかった。菌体洗浄操作は、更にもう1回行っているため、4段分離により、洗浄工程で培地中のAbuは十分に除去されており、菌体抽出液に持ち越されていないことが確認された。また、後述の実施例記載のγGluAbu添加実験においても、最終洗浄液からはγGluAbuは検出されなかった。実施例4S288C株へのγGluAbu添加効果1次に、S288C株を培養する際における、培地へのγGluAbu添加効果を検証した。S288C株をSD培地に1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようになお、吸光度は、BECKMANCOULTER社のDU640SPECTROPHTOMETERを用いて測定した。SDP培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml:実施例3に記載のSD培地において、10倍濃度のYeastNitrogenBaseの調製時に、5gの硫酸アンモニウムを1gのプロリンで置換えた培地に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で振とう培養した。各々の菌株が対数増殖期になるように、NBRC10707株は465時間培養し、NBRC0988株は225時間培養した。更に、Abuを最終濃度で100ppmになるように添加して1時間培養を継続した。対象区として、何も添加せずに1時間培養した。なお、この時の培養液の吸光度は、Abu追添条件で約45であり、残糖も検出された。この得られた培養液から、実施例3と同様にしてエキス分を抽出し、各化合物の菌体内含有量を測定した。結果を表9、10に示す。その結果、Abuを無添加の条件では、菌体内のγGluAbuは検出されなかったが、Abu追添区では、γGluAbuが検出された。この結果からも、γGluAbuの蓄積には、Abuの供給が重要であることがわかった。実施例8酵母GSH1の基質特異性解析実施例3の結果より、酵母細胞内でAbuを基質とした何らかの酵素反応によりγGluAbuが生成することがわかったため、γ-グルタミルシステイン合成酵素の副反応の可能性を検証した。1酵母由来γグルタミルシステイン合成酵素遺伝子GSH1発現プラスミドpETGSH1の構築キャンディダユティリスATCC22023株のγ-グルタミルシステイン合成酵素をコードするGSH1遺伝子の発現プラスミドpETGSH1を以下の手順で構築し、エシェリヒアコリに導入した。前記菌株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション12301ParklawnDriveRockvilleMaryland20852UnitedStatesofAmericaにもATCC22023の番号で保存されており、分譲を受けることができる。1-1酵母用GSH1発現プラスミドpAURGSH1の構築まず、酵母用GSH1発現プラスミドpAURGSH1を、タカラバイオに委託し、以下の手順で構築した。キャンディダユティリスATCC22023株のGSH1遺伝子の塩基配列配列番号1を基に作製したプライマーG配列番号3およびプライマーH配列番号4、並びに鋳型としてATCC22023株の染色体DNAを用いたPCRにより、GSH1遺伝子を含む配列の増幅を行った。プライマーGは、ATCC22023株の染色体DNAのGSH1遺伝子の開始コドンを含む領域の5末端にKpnI認識配列および酵母発現プラスミドpAUR123タカラバイオ社の部分配列を付加したものである。プライマーHは、GSH1遺伝子のC末端塩基配列と相補的な塩基配列に、Hisタグをコードする配列と相補的な塩基配列、終止コドンTAAと相補的な塩基配列、XbaI認識配列、及びpAUR123の部分配列を付加したものである。PCRは、PrimeSTARMaxDNAポリメラーゼタカラバイオ社製を用い、マニュアルに従って行った。増幅された断片をInFusionAdvantagePCRCloningKitタカラバイオ社製を用いてpAUR123タカラバイオ社製のKpnIXbaIサイトに導入し、酵母用GSH1発現プラスミドpAURGSH1を構築した。1-2エシェリヒアコリ用GSH1発現プラスミドpETGSH1の構築続いて、エシェリヒアコリ用GSH1発現プラスミドpETGSH1を以下の手順で構築した。日本バイオサービス社より、キャンディダユティリスATCC22023株のGSH1遺伝子の塩基配列配列番号1を基に作製したプライマーI配列番号5およびプライマーJ配列番号6を購入した。プライマーIは、キャンディダユティリスATCC22023株の染色体DNAのGSH1遺伝子の開始コドンを含む領域の5末端にSpeI認識配列を含む塩基配列を付加したものである。プライマーJは、上記のpAURGSH1のGSH1遺伝子の終止コドンの外側の塩基配列と相補的な塩基配列の5末端にXhoI認識配列を含む塩基配列を付加したものである。プライマーIおよびプライマーJ、並びに鋳型として上記のpAURGSH1を用いたPCRにより、GSH1遺伝子を含む配列の増幅を行った。PCRは、プラスミドDNA、02μmolLの各プライマー、125unitのPrimeSTARHSDNAポリメラーゼタカラバイオ社製、10μLの5×PrimeSTAR緩衝液タカラバイオ社製、各25mmolLのdNTPdATP、dGTP、dCTPおよびdTTPを含む反応液50μlを調製し、98°Cで10秒加温した後、98°Cで10秒間、56°Cで5秒間、72°Cで2分間の工程を30回繰り返し、さらに72°Cで1分間加温することにより行った。PCR後の反応液3μlをアガロースゲル電気泳動に供し、GSH1遺伝子断片に相当する約20kbのDNA断片が増幅していることを確認した後、残りの反応液からEthachinmateニッポンジーン社製を用いて該DNA断片を精製し、25μlのdH2Oに溶解した。次に、得られたDNA溶液全量を用い、該DNA断片を制限酵素SpeIおよびXhoIで切断した後、MinEluteReactionCleanupKitキアゲン社製を用いて精製し、15μlのBufferEB10mMTrisHCl、pH85。キアゲン社製に溶解した。1μgの発現プラスミドpET21aノバジェン社製を制限酵素NheIおよびXhoIで切断後、MinEluteReactionCleanupKitを用いて精製し、15μlのBufferEBに溶解した。次に、得られたDNA溶液全量を用い、DNA断片をアルカリホスファターゼCIAPで脱リン酸化した後、MinEluteReactionCleanupKitを用いて精製し、10μlのBufferEBに溶解した。上記で得られたGSH1遺伝子を含む約20kbのDNA断片、および上記で得られた発現プラスミドpET21aノバジェン社製の約54kbのDNA断片を、TaKaRaLigationKitVer21タカラバイオ社製を用いて、16°Cで30分間反応させ連結した。該反応液を用いてエシェリヒアコリDH5α株コンピテントセルタカラバイオ社製を、ヒートショック法により形質転換し、該形質転換体を100μgmlのアンピシリンを含むLB[10gLバクトトリプトンディフコ社製、5gLイーストエキスディフコ社製、5gL塩化ナトリウムWako社製]寒天培地に塗布した後、37°Cで一晩培養した。生育してきた形質転換体のコロニーより、公知の方法によりプラスミドを抽出し、その塩基配列を公知の方法により決定した。得られたプラスミドは、3末端にHisタグをコードする配列が付加されたキャンディダユティリスATCC22023株由来GSH1遺伝子が、T7プロモーター下流に連結されたプラスミドであり、該プラスミドをpETGSH1と命名した。なお、キャンディダユティリスATCC22023株由来GSH1遺伝子の塩基配列及びそれによりコードされるアミノ酸配列を、それぞれ配列番号1および配列番号2に示す。続いて、pETGSH1を用いてエシェリヒアコリRosetta2pLysS株コンピテントセルノバジェン社製を、ヒートショック法により形質転換し、該形質転換体を100μgmlのアンピシリン及び30μgmlのクロラムフェニコールを含むLB寒天培地に塗布した後、37°Cで一晩培養した。生育してきた形質転換体のコロニーより公知の方法に従ってプラスミドを抽出し、制限酵素を用いてその構造を解析することにより、pETGSH1が保持されていることを確認した。このpETGSH1を保持するエシェリヒアコリRosetta2pLysS株を、エシェリヒアコリRosetta2pLysSpETGSH1と命名した。2C末端Hisタグ付加型組換え型Gsh1の精製上記のようにして得られたエシェリヒアコリRosetta2pLysSpETGSH1を100μgmlのアンピシリン及び30μgmlのクロラムフェニコールを含む3mLのLB培地の入った試験管に接種し、37°Cで16時間振とう培養した。得られた培養液のうち2mlを、100mlのLB培地が入った坂口フラスコに接種した。37°Cで2時間振とう培養後、終濃度が05mmolLになるようにイソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシドIPTGを添加して、さらに30°Cで4時間培養した。培養液を遠心分離して湿菌体を取得した。前記湿菌体を、300mMの塩化ナトリウムを含むpH80の100mmolLトリス-塩酸バッファー10mlに懸濁し、超音波処理により破砕した後、遠心分離して得られる上清から、Hisタグ付加タンパク精製キットであるNiSepharose6FastFlowGEHealthcare社製を用い、マニュアルに従いHisタグ付加組換え型Gsh1を精製し、続いて、PD10カラムGEHealthcare社製を用いて、マニュアルに従い脱塩を行った。この精製及び脱塩されたGsh1を、精製Gsh1として以降の実験に用いた。3GSH1の基質特異性解析上記で取得した精製組換え型GSH1246μg、100mmolLのTrisHCl株に導入し、URA3遺伝子を破壊することによって取得した。まず、配列番号7及び8に示すプライマーを用い、上記野生型株の染色体DNAを鋳型とするPCRにより、URA3の上流500bpを増幅した。また、配列番号9及び10に示すプライマーを用い、URA3の下流500bpを増幅した。PCRの条件は、熱変性94°C10sec、アニーリング55°C10sec、伸張72°C1min、25cycleであった。次に、エタノール沈殿によって精製したこれら2つのDNA断片を鋳型に、配列番号11及び12に示すプライマーを用いてオーバーラップPCRを行い、URA3遺伝子の上流500bp及び、下流500bpを結合した1kbのDNA断片を得た。このDNA断片で野生型株を形質転換した後、ウラシルを添加したSD培地で一晩培養し、5FOA平板培地に菌体を塗布した。得られた形質転換体からura3△0株を取得した。なお、本菌株はプライベート番号AJ14956が付与され、2010年8月18日付けで、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター〒3058566日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6に受託番号FERMP22000として寄託され、ブダペスト条約に基く国際寄託に移管され、受託番号FERMBP11299が付与されている。2プロモーター置換の為の鋳型プラスミドの作製まず、配列番号13及び14のプライマーを用い、サッカロマイセスセレビシエ野生株の染色体DNAを鋳型とするPCRによりURA3ローカスを増幅した熱変性94°C10sec、アニーリング50°C10sec、伸張72°C1min、25cycle。得られたDNA断片をエタノール沈殿により精製後、SphI及びEcoRIで消化し、プラスミドpUC19のSphIEcoRI部位に挿入し、pUC19URA3を得た。次に、配列番号15及び16に示すプライマーを用いてサッカロマイセスセレビシエ野生株の染色体DNAよりADH1プロモーター領域を増幅した。このDNA断片をPstIで消化し、PstIで消化及び、CIAP処理を行ったpUC19URA3のPstI部位に挿入し、pUC19ADH1pURA3を得た。なお、ADH1pが正しくURA3遺伝子と順方向に挿入されていることを当該近傍領域のシークエンスにより確認した。同様に、配列番号17及び18に示すプライマーを用いて増幅したADH1プロモーターをAatIIで消化し、AatIIで消化及び、CIAP処理を行ったpUC19ADH1pURAのAatII部位に挿入し、pUC19ADH1pURA3ADH1pを得た。なお、ADH1pが正しくURA3遺伝子と順方向に挿入されていることを当該近傍領域のシークエンスにより確認した。3染色体上のGSH1遺伝子へのADH1プロモーターの導入5’端にGSH1の上流配列をもつ配列番号19のプライマーTATTGCCCCAGTGTTCCCTCAACAACCTTGGTAGTTGGAGCGCAATTAGCGTATCCTGTACCATACTAATTCTCTTCTGCTCTTAACCCAACTGCACAGA、及びGSH1遺伝子の開始コドンから始まる一部のORF内配列を持つ配列番号20のプライマーATACCTTCATCCCTTATGTGTTCATTGTACGTCCTAGACTCAAACCACTGCAAAGGCGTGCCCAAAGCTAAGAGTCCCATTGTATATGAGATAGTTGATTを用い、pUC19ADH1pURA3ADH1pを鋳型にPCRを行い熱変性94°C10sec、アニーリング60°C10sec、伸張72°C4min、ADH1プロモーターに挟まれたURA3を持つDNA断片を調製した。このDNA断片でura3△0株を形質転換し、SD平板培地に塗布し得られる形質転換体から、GSH1プロモーターがADH1プロモーター-URA3-ADH1プロモーターに置換された株を取得した。4URA3選択マーカーの除去とGSH1遺伝子のプロモーター置換GSH1プロモーターがADH1プロモーター-URA3-ADH1プロモーターに置換された株を、ウラシル添加SD培地で一晩培養し、適量を5FOA平板培地に塗布した。生育するコロニーから、導入されたADH1プロモーター間の相同組換えにより、URA3が除去され、GSH1プロモーターがADH1プロモーターに置換した株AG1ura3△0を取得した。さらに、野生型ゲノムを鋳型に、配列番号21AGTTACAGCAATGAAAGAGCAGAGCGAGAG及び22ATTACTGCTGCTGTTCCAGCCCATATCCAAのプライマーを用いて増幅したDNAを前記株に導入することにより、URA3が野生型に復元し、GSH1プロモーターがADH1プロモーターに置換している株を取得した。本菌株をAG1株と命名した。一方、同様にura3△0株であるAJ14956に、野生型ゲノムを鋳型に、配列番号23AGTTACAGCAATGAAAGAGCAGAGCGAGAG及び24ATTACTGCTGCTGTTCCAGCCCATATCCAAのプライマーを用いて増幅したDNAを導入することにより、URA3が野生型に復元した株を得た。同株を、Control株と命名した。5Control株及びAG1株へのAbu添加効果次に、Control株及びAG1株をSD培地879884。なお、遺伝子操作に必要な遺伝子配列情報は、WO9532289、UGueldenerらの論文NucleicAcidsResearch2002Vol30No6e23、GritzLandDavisJの論文Gene25179188などに記載されている為、これら配列情報をもとに各種ツールを作製してもよい。CandidautilisのGSH1発現プラスミドを公知の方法により、以下のように構築できる。公知のプラスミドpRI177RyoIwakirietal2005Yeast2210791087を制限酵素BamHIで切断し、常法に従い精製することにより、直鎖状のプラスミドを取得できる。なお、プラスミドpR177と同等のプラスミドYRpGAPの調製方法は、特開200675122にも開示されている。一方、実施例9で構築したCandidautilisのGSH1の配列を含むプラスミドpAURGSH1を鋳型として、プライマーS配列番号25:GCAGCCCGGGGGATCATGGGGCTGCTATCATTAGG、5末端側の15塩基は制限酵素BamHIで切断した直鎖状のプラスミドの末端との相同配列及びプライマーT配列番号26:TAGAACTAGTGGATCTTAAGCCCTTTGGGTTGTTTATC、5末端側の15塩基は制限酵素BamHIで切断した直鎖状のプラスミドの末端との相同配列を用いたPCRによりGSH1のORF領域を増幅する。この際、プライマーS及びプライマーTの末端には、pRI177を制限酵素BamHIで切断する際に生じる末端配列に相同な配列を付加しておく。PCR産物を常法により精製し、精製するPCR産物と直鎖状のプラスミドをInFusionAdvantagePCRCloningKitタカラバイオを用いることにより連結することができる。目的通りの配列を有するプラスミドを選択することにより、CandidautilisのGSH1領域を含んだ自律複製型プラスミドpCGSH1を構築できる。pCGSH1の構築手順を図3に示す。更に、前記pCGSH1に、選択マーカーであるURA3遺伝子もInFusionAdvantagePCRCloningKitを用いることにより導入できる。具体的には、マニュアルに従い、プライマーU及びプライマーV配列番号28:TCATGGTCATAGCTGTTTCCを用いたPCRにより、pCGSH1の全長を増幅する。この際、プライマーの設定領域をマニュアルに従い設計することにより、目的の部位で平滑末端化した直鎖状のプラスミドを調製できる。一方、導入するURA3遺伝子は、公知の配列情報LuisRodriguezetal1998Yeast1413991406をもとに設計できるプライマーW配列番号29:GCGCGCTTGGCGTAACAAATAGCTCTCTACTTGCT、5末端側の15塩基は直鎖状のプラスミドの末端との相同配列、及びプライマーX配列番号30:CAGCTATGACCATGAGCAATCTACAACTTCGAAA、5末端側の15塩基は直鎖状のプラスミドの末端との相同配列を用いて、NBRC0988株のゲノム染色体を鋳型としたPCRにより増幅できる。この際、プライマーの末端には、直鎖状のプラスミドの末端配列を付加することにより、InFusionAdvantagePCRCloningKitによりプラスミドに連結できる。このようにして、自律複製型でかつ選択マーカーとしてURA3遺伝子を有するGSH1の発現ベクターpCGSH1URA3が構築できる。pCGSH1URA3の構築手順の概要を図4に示す。次に、公知のCandidautilisのエレクトロポレーション法ShigeruIkushimaetal2009BiosciBiotechnoloBiochem73879884により、CUD4F株にpCGSH1URA3を導入する。得られる形質転換体をSD培地にスプレッドし、生育する株の中から目的のプラスミドを有する形質転換体を選択することにより、GSH1発現強化株を取得できる。このGSH1発現強化株を、実施例7と同様に、Abuを含むSDP培地で培養すると菌体内にγGluAbuを蓄積する。実施例11酵母GSH2の基質特異性解析実施例3、4、5の結果より、酵母細胞内ではγGluAbuを基質とした何らかの酵素反応により蓄積したγGluAbuの一部がγGluAbuGlyに代謝されることがわかったため、グルタチオン合成酵素の副反応の可能性を検証した。1酵母由来グルタチオン合成酵素遺伝子GSH2発現プラスミドpETGSH2の構築サッカロマイセスセレビシエS288C株のグルタチオン合成酵素をコードするGSH2遺伝子の発現プラスミドpETGSH2を以下の手順で構築し、エシェリヒアコリに導入した。1-1酵母用GSH2発現プラスミドpAURGSH2の構築まず、酵母用発現プラスミドpAURGSH2を、タカラバイオに委託し、以下の手順で構築した。サッカロマイセスセレビシエS288C株のGSH2遺伝子の塩基配列配列番号31を基に作製したプライマーA配列番号33およびプライマーB配列番号34、並びに鋳型としてS288C株の染色体DNAを用いたPCRにより、GSH2遺伝子を含む配列の増幅を行った。プライマーAは、S288C株の染色体DNAのGSH2遺伝子の開始コドンを含む領域の5’末端にKpnI認識配列および酵母発現プラスミドpAUR123タカラバイオ社の部分配列を付加したものである。プライマーBは、GSH2遺伝子のC末端塩基配列と相補的な塩基配列に、Hisタグをコードする配列と相補的な塩基配列、終止コドンTAAと相補的な塩基配列、XbaI認識配列、及びpAUR123の部分配列を付加したものである。PCRは、PrimeSTARMaxDNAポリメラーゼタカラバイオ社製を用い、マニュアルに従って行った。増幅された断片をInFusionAdvantagePCRKitタカラバイオ社製を用いて酵母用発現プラスミドpAUR123タカラバイオ社製のKpnIXbaIサイトに導入し、酵母用GSH2発現プラスミドpAURGSH2を構築した。1-2エシェリヒアコリ用GSH2発現プラスミドpETGSH2の構築続いて、エシェリヒアコリ用GSH2発現プラスミドpETGSH2を以下の手順で構築した。日本バイオサービス社より、サッカロマイセスセレビシエS288C株のGSH2遺伝子の塩基配列配列番号31を基に作製したプライマーC配列番号35およびプライマーD配列番号36を購入した。プライマーCは、サッカロマイセスセレビシエS288C株の染色体DNAのGSH2遺伝子の開始コドンを含む領域の5’末端にNdeI認識配列を含む塩基配列を付加したものである。プライマーDは、上記のpAURGSH2のGSH2遺伝子の終止コドンの外側の塩基配列と相補的な塩基配列の5末端にXhoI認識配列を含む塩基配列を付加したものである。プライマーCおよびプライマーD、並びに鋳型として上記のpAURGSH2を用いたPCRにより、GSH2遺伝子を含む配列の増幅を行った。PCRは、プラスミドDNA、02μmolLの各プライマー、125unitのPrimeSTARHSDNAポリメラーゼタカラバイオ社製、10μLの5×PrimeSTAR緩衝液タカラバイオ社製、各25mmolLのdNTPdATP、dGTP、dCTPおよびdTTPを含む反応液50μlを調製し、98°Cで10秒加温した後、98°Cで10秒間、56°Cで5秒間、72°Cで2分間の工程を30回繰り返し、さらに72°Cで1分間加温することにより行った。PCR後の反応液3μlをアガロースゲル電気泳動に供し、GSH2遺伝子断片に相当する約15kbのDNA断片が増幅していることを確認した後、残りの反応液からEthachinmateニッポンジーン社製を用いて該DNA断片を精製し、25μlのdH2Oに溶解した。次に、得られたDNA溶液全量を用い、該DNA断片を制限酵素NdeIおよびXhoIで切断した後、MinEluteReactionCleanupKitキアゲン社製を用いて精製し、15μlのBufferEB10mMTrisHCl、pH85。キアゲン社製に溶解した。1μgの発現プラスミドpET21aノバジェン社製を制限酵素NdeIおよびXhoIで切断後、MinEluteReactionCleanupKitを用いて精製し、15μlのBufferEBに溶解した。次に、得られたDNA溶液全量を用い、DNA断片をアルカリホスファターゼCIAPで脱リン酸化した後、MinEluteReactionCleanupKitを用いて精製し、10μlのBufferEBに溶解した。上記で得られたGSH2遺伝子を含む約15kbのDNA断片、および上記で得られた発現プラスミドpET21aの約54kbのDNA断片を、TaKaRaLigationKitVer21タカラバイオ社製を用いて、16°Cで30分間反応させ連結した。該反応液を用いてエシェリヒアコリDH5α株コンピテントセルタカラバイオ社製を、ヒートショック法により形質転換し、該形質転換体を50μgmlのアンピシリンを含むLB[10gLバクトトリプトンディフコ社製、5gLイーストエキスディフコ社製、5gL塩化ナトリウムWako社製]寒天培地に塗布した後、37°Cで一晩培養した。生育してきた形質転換体のコロニーより、公知の方法によりプラスミドを抽出し、その塩基配列を公知の方法により決定した。得られたプラスミドは、3末端にHisタグをコードする配列が付加されたサッカロマイセスセレビシエS288C株由来GSH2遺伝子が、T7プロモーター下流に連結されたプラスミドであり、該プラスミドをpETGSH2と命名した。なお、サッカロマイセスセレビシエS288C株由来GSH2遺伝子の塩基配列及びそれによりコードされるアミノ酸配列を、それぞれ配列番号31および配列番号32に示す。続いて、pETGSH2を用いてエシェリヒアコリBL21株コンピテントセルノバジェン社製を、ヒートショック法により形質転換し、該形質転換体を50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地に塗布した後、37°Cで一晩培養した。生育してきた形質転換体のコロニーより公知の方法に従ってプラスミドを抽出し、制限酵素を用いてその構造を解析することにより、pETGSH2が保持されていることを確認した。このpETGSH2を保持するエシェリヒアコリBL21株を、エシェリヒアコリBL21pETGSH2と命名した。2C末端Hisタグ付加組換え型Gsh2の精製上記で得られたエシェリヒアコリBL21pETGSH2を100μgmlのアンピシリンを含む3mLのLB培地の入った試験管に接種し、37°Cで16時間振とう培養した。得られた培養液のうち2mlを100mlのLB培地が入った試験管に接種した。37°Cで2時間振とう培養後、終濃度が05mmolLになるようにイソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシドIPTGを添加して、さらに30°Cで4時間培養した。培養液を遠心分離して湿菌体を取得した。前記湿菌体を、300mMの塩化ナトリウムを含むpH80の100mmolLトリス-塩酸バッファー10mlに懸濁し超音波処理により破砕した後、遠心分離して得られる上清から、Hisタグ付加タンパク質精製キットであるNiSepharose6FastFlowGEHealthcare社製を用い、マニュアルに従いHisタグ付加組換え型Gsh2を精製し、続いて、PD10カラムGEHealthcare社製を用いて、マニュアルに従い脱塩を行った。その後、10kDaの遠心濾過膜MILLIPORE社:AmiconUltra05mL10Kカタログ番号UFC501096を用いて、マニュアルに従って、このサンプルを濃縮した。この精製、脱塩、及び濃縮されたGsh2を、精製Gsh2として以降の実験に用いた。3精製Gsh2を用いたγGluAbuGlyの生成上記で取得した精製Gsh2を用い、γGluAbuを基質としたγGluAbuGlyの生成可能性を検討した。下記組成の反応液を調製し、30°Cで22hrの酵素反応を行った。反応液組成精製Gsh2300μg500μlTrisHClのGSH2破壊株ゲノムを鋳型に、カナマイシン耐性遺伝子カセットKanMXに置換されたGSH2を含む領域を増幅した。PCRの条件は、熱変性94°C10sec、アニーリング50°C10sec、伸張72°C3min、25cycleであった。次に、エタノール沈殿によってDNA断片を精製した後、S288Cを形質転換し、G418を添加したYPD平板培地に菌体を塗布した。得られた形質転換体から、gsh2△0株を取得した。次に、この菌株を実施例3と同様にしてAbu添加効果を検証した。まず、gsh2△0株をSD培地8798842009及び48TCTAGATTAGTTCAAGTCGGCのプライマーを用いて、BAT1のORF領域を、配列番号49AAGCTTACAGACAAGAAACCGTC及び50TCTAGAGGCCTCGCTAATATACのプライマーを用いて、UGA1のORF領域をPCRにより、各々増幅した。得られたBAT1増幅産物は、制限酵素BamHI及びXbaIで消化し、pT7ベクターのBamHIXbaI部位に挿入し、pT7BAT1を得た。また、UGA1増幅産物は、制限酵素HindIII及びXbaIで消化し、pT7ベクターのHindIIIXbaI部位に挿入し、pT7UGA1を得た。このようにして得られたpT7BAT1を制限酵素BamHI及びXbaIで処理し、電気泳動による分離及び目的遺伝子断片の切り出しにより、BAT1のDNA断片を精製後、プラスミドpYES2ADH1pのBamHI及びXbaI部位に導入した。また、pT7UGA1を制限酵素HindIII及びXbaIで処理し、電気泳動による分離及び目的遺伝子断片の切り出しにより、UGA1のDNA断片を精製後、プラスミドpYES2ADH1pのHindIII及びXbaI部位に導入した。このようにして、BAT1の高発現ベクターpYES2ADH1pBAT1、及びUGA1の高発現ベクターpYES2ADH1pUGA1を調製した。BAT1及びUGA1の塩基配列を、各々配列番号51及び53に示す。また、これらの遺伝子によりコードされるアミノ酸配列を、各々配列番号52及び54に示す。2S288Cura3△0株の育種実施例9と同様の手法により、S288C株のura3遺伝子のORF領域を欠失させたS288Cura3△0株を育種した。3各種発現株の育種1で構築した各発現ベクターで、各々2で育種したS288Cura3△0を形質転換することにより、各遺伝子を高発現する菌株を育種した。具体的には、ZymoResearch社のFrozenEZYeastTransformationIIキットを用いて、S288Cura3△0のコンピテントセルを作製し、各発現ベクターを導入することによりS288CpYES2ADH1p株、S288CpYES2ADH1pBAT1株、S288CpYES2ADH1pUGA1株を取得した。4取得菌株の評価上記の各菌株を実施例3と同様にSD培地で培養評価した。結果を表13に示す。その結果、BAT1高発現株及びUGA1高発現株にて、細胞内のAbu含量に増加が見られた。また、細胞内で合成されたAbuはγGluAbuやγGluAbuGlyの基質として使用されるため、これら3化合物の合計量をモル比で比較すると、コントロール菌株は246μmolgDCW、BAT1高発現株は706μmolgDCW、UGA1高発現株は391μmolgDCWと算出され、各種アミノ基転移酵素の高発現により細胞内のAbu含有化合物含量が増加すること、即ち、Abu生合成能が高まることが明らかとなった。また、S288Cura3△0株を親株にして、実施例12でS288Cgsh2△0株を取得したのと同様の方法により、S288Cura3△0gsh2△0株を取得した。この菌株のコンピテントセルを作製し、各発現ベクターを導入することにより、S288Cgsh2△0pYES2ADH1p株及びS288Cgsh2△0pYES2ADH1pBAT1株を取得した。後者の菌株を、SD培地で培養評価するとγGluAbuを蓄積する。実施例15GSH1高発現かつアミノ基転移酵素高発現効果上記検討により、アミノ基転移酵素の高活性化、特にBAT1の高活性化により細胞内のAbu含有化合物の増加効果が見られた為、GSH1高発現との組合せ効果を検討した。実施例9で取得したウラシル要求性株のAG1ura3△0を、実施例14で作製したpYES2ADH1pBAT1で形質転換し、BAT1及びGSH1の高発現株である、AG1pYES2ADH1pBAT1株を育種した。この株を実施例3と同様にして、SD培地で培養し、菌体内のγGluAbu含量及び、抽出エキス固形分あたりのγGluAbu含量を算出した。その結果、AG1pYES2ADH1pBAT1株は、乾燥菌体重量あたりで1813ppmのγGluAbuを含有しており、また、同菌体から抽出したエキス分には、乾燥固形分あたりで約4560ppmのγGluAbuを含有していた。実施例16γ-グルタミル基転移酵素を作用させた、Abuを添加した酵母エキス固形分あたりにGSHを約8となるように試薬のGSH和光純薬工業株式会社を添加した酵母エキスの1水溶液を調製し、NaOHを用いてそのpHを70に調製した。この溶液に、粉末のAbuを水溶液中の最終濃度で800ppm、1600ppm、又は8000ppmになるように添加し、被検サンプルを作製した。また、Abuを添加しない酵母エキス水溶液をコントロールとした。これらの被検サンプルにγGTPシグマ社γGlutamyltranspeptidasefromequinekidney、コードG9270100UNを005mgmlになるように添加し、37°Cで120分間酵素反応を行った。反応液は、速やかに氷冷し、γGluAbu含量を測定した。また、反応液の一部を用いて固形分含量を測定し、酵素反応により生成したγGluAbuの固形分あたりの含量を算出した。その結果、図5に示す通り、Abu無添加区では、γGluAbuはほとんど生成しなかったが、Abuの添加量を増やすにつれ、γGluAbuの生成が見られた。実施例17γGluAbuを含有する酵母エキスの官能評価1まず、下記の手順にて官能評価用のサンプルを調製した。実施例4と同様にして、S288C株をSD培地及び56CTCTCTAGAGGGCAAATTGATGCTTCのプライマーを用いて、CHA1のORF領域をPCRにより増幅した。得られたCHA1増幅産物は、制限酵素HindIII及びXbaIで消化し、pT7ベクターのHindIIIXbaI部位に挿入し、pT7CHA1を得た。このようにして得られたpT7CHA1を制限酵素HindIII及びXbaIで処理し、電気泳動による分離及び目的遺伝子断片の切り出しにより、CHA1のDNA断片を精製後、プラスミドpYES2ADH1pのHindIII及びXbaI部位に導入した。このようにして、CHA1の高発現ベクターpYES2ADH1pCHA1を調製した。CHA1の塩基配列を、配列番号57に示す。また、この遺伝子によりコードされるアミノ酸配列を、配列番号58に示す。次に、実施例9で育種したウラシル要求性株のAG1ura3△0のBAT1のプロモーター領域を、Sofyanovichらの方法OlgaASofyanovichetalANewMethodforRepeatedSelfCloningPromoterReplacementinSaccharomycescerevisiaeMolBiotechnol48218227にもとづきPGK1のプロモーター領域に置換した。プロモーター置換用のDNAフラグメントは、論文記載のpPUPプラスミドと、BAT1置換用のプライマーとして、配列番号59GCCAGGCGGTTGATACTTTGTGCAGATTTCATACCGGCTGTCGCTATTATTACTGATGAATTGGCTCTCTTTTTGTTTAATCTTAACCCAACTGCACAGA及び60TTGGATGCATCTAATGGGGCACCAGTAGCGAGTGTTCTGATGGAGAATTTCCCCAACTTCAAGGAATGTCTCTGCAACATTGTTTTATATTTGTTGTAAAを用いて、PCRにより増幅することによって調製した。このようにして構築したウラシル要求性のGSH1及びBAT1増強株であるAGBura3△0株を、CHA1の高発現ベクターで形質転換することにより、GSH1、BAT1及びCHA1を高発現する菌株を育種した。具体的には、実施例14と同様にしてZymoResearch社のFrozenEZYeastTransformationIIキットを用いて、AGBura3△0株のコンピテントセルを作製し、pYES2ADH1pCHA1を導入することによりAGBura3△0pYES2ADH1pCHA1株を取得した。上記の菌株を実施例14と同様にSD培地で培養評価した。その結果、同菌株は乾燥菌体重量あたりで2024ppmのγGluAbuを含有していた。実施例20ペプチド分解酵素の破壊効果次に、GSH分解に関与すると報告されている酵素遺伝子DUG2の破壊効果を検証した。DUG2の塩基配列を配列番号61に、同遺伝子がコードするアミノ酸配列を配列番号62に示す。まず、DUG2の開始コドンより上流80塩基を付加した配列番号63のプライマー、及びDUG2の終止コドンより下流80塩基を付加した配列番号64のプライマーを用い、野生型株のURA3遺伝子を増幅した。PCRの条件は、熱変性94°C、10sec、アニーリング50°C、10sec、伸張72°C、2min、25cycleとした。得られたDNA断片でAG1ura3△0株を形質転換し、ウラシルを含有しないSD培地に塗布した。生育した形質転換体からAG1ura3△0のdug2D株以下、AG1dug2△0株を得た。AG1株及びAG1dug2△0株を実施例9と同様にして100ppmのAbuを含むSD培地で培養した。その結果、AG1dug2△0株の方が、より多くのγGluAbuを含有することがわかった。GSHを分解する酵素の破壊は、γGluAbuの蓄積に有益であることが示唆された。