"複数の試料のLp-PLA2酵素活性を測定する方法であって、標識されたPAFを含む溶液を調製する工程;複数の組織試料の各々を、調製工程の溶液と、およびPAFのシークエスター分子と接触させてPAF-シークエスター分子の複合体を形成する工程;該PAF-シークエスター分子の複合体を取り出す工程;およびLp-PLA2活性を検出する工程、を含む方法。接触工程が、複数の試料の各々を調製工程の溶液と第一に接触させる工程;その第一の接触工程の各々の溶液をPAFのシークエスター分子と第二に接触させてPAF-シークエスター分子の複合体を形成する工程を含み;取り出し工程が該PAF-シークエスター分子の複合体を沈殿化溶液と接触させて沈殿物および上清を形成する工程を含み;検出工程が沈殿物を上清から分離する工程;およびLp-PLA2活性を検出する工程を含むところの、請求項1記載の方法。取り出し工程がPAFのシークエスター分子の濾過を含んでなる請求項1または2記載の方法。少なくとも1試料が血液を含有する請求項1または2記載の方法。少なくとも1試料が血清、細胞溶解物、組織溶解物、尿または血漿から成る群より選択される請求項1または2記載の方法。少なくとも1試料がヒト由来である請求項1または2記載の方法。少なくとも1試料が約5μLの容量である請求項1または2記載の方法。複数の試料の各々を微小遠心管にアリコートすることをさらに含んでなる請求項1または2記載の方法。複数の試料の各々をマイクロタイタープレートのウェルにアリコートすることをさらに含んでなる請求項1または2記載の方法。標識されたPAFが放射標識されている請求項1または2記載の方法。標識されたPAFがトリチウム化されている請求項10記載の方法。標識されたPAFが14Cにて標識されている請求項10記載の方法。調製工程にて用いる溶液中、標識されたPAFがPAFの最大約20を含む請求項1または2記載の方法。調製工程にて用いる溶液中、標識されたPAFがPAFの約2.0を含む請求項1または2記載の方法。調製工程の溶液中、PAFの全濃度が少なくとも約20μMである請求項1または2記載の方法。PAFがLp-PLA2の基質である請求項1または2記載の方法。標識された、および標識されていないPAFを含む溶液が緩衝溶液である請求項1または2記載の方法。緩衝溶液がHEPES、塩化ナトリウムNaClおよびエチレンジアミン四酢酸EDTAを含有する請求項17記載の方法。調製工程の溶液および各試料を少なくとも約5秒間混合することをさらに含んでなる請求項1記載の方法。調製工程の溶液を各試料と一緒に約21°Cで少なくとも約1分間インキュベートすることをさらに含んでなる請求項19記載の方法。各試料を調製工程の溶液と一緒に約5分間インキュベートする請求項20記載の方法。PAF-シークエスター分子の複合体が、分解されていないPAF-シークエスター分子の複合体およびリゾホスファチジルコリンリゾ-PC-シークエスター分子複合体を含んでなる請求項1または2記載の方法。接触工程のシークエスター分子が外因性BSAである請求項1または2記載の方法。BSAが約10°C未満である請求項23記載の方法。BSAが約4°Cである請求項23記載の方法。BSAが約50mg/mLの濃度である請求項23記載の方法。接触工程のシークエスター分子が内因性ヒト血清アルブミンである請求項1または2記載の方法。第一接触工程の溶液およびシークエスター分子を約10°C未満で少なくとも約1分間インキュベートする請求項2記載の方法。沈殿化溶液がTCAを含有する請求項2記載の方法。TCAを含有する沈殿化溶液が約10°C未満である請求項29記載の方法。TCAが水に対して56容量/容量の濃度である請求項29記載の方法。TCAを第2接触工程の溶液と少なくとも約1分間インキュベートする請求項29記載の方法。遠心分離により沈殿が上清から分離される請求項29記載の方法。遠心分離が約10°C未満で少なくとも約5分間、少なくとも6,000gにて実施される請求項33記載の方法。遠心分離が4°Cにて約15分間実施される請求項33記載の方法。緩衝溶液を全計数反応またはブランク反応として用いるための少なくとも2つの容器にアリコートすることをさらに含んでなる請求項2記載の方法。容器が微小遠心管またはマイクロタイタープレートのウェルである請求項36記載の方法。緩衝溶液が、PAFが溶液に添加されていないところの、調製工程の溶液と同じである請求項36記載の方法。緩衝溶液の容量が各反応にて用いられる試料の容量とほぼ同じである請求項36記載の方法。少なくとも1つのブランク反応物を略同じ容量および濃度の調製工程の溶液およびシークエスター分子と接触させ、少なくとも2つの全計数反応のアリコートを略同じ容量の調製工程の溶液およびシークエスター分子の置換溶液ここで、置換溶液はシークエスター分子を含有しないと接触させることをさらに含む、請求項36記載の方法。各試料の上清部分、ブランク反応物および全計数反応物を別容器にアリコートすることをさらに含んでなる請求項40記載の方法。シンチレーションカクテルを上清、ブランク反応物および全計数反応物の各アリコートに接触させることをさらに含んでなる請求項41記載の方法。シンチレーション計数装置にてシンチレーションカクテルならびに上清、ブランク反応物および全計数反応物を少なくとも約1分間計数することをさらに含んでなる請求項42記載の方法。式:CPM全計数=CPM正味全計数VRT/VSA[ここで、CPM正味全計数=全計数反応物からの上清のアリコート中の正味平均計数;VRT=遠心分離前の最終反応溶液の全容量;およびVSA=シンチレーションカウンティング用にアリコートされた全計数反応物からの上清の容量である]を用いて全計数反応の正味平均計数としてCPM全計数を算出することをさらに含んでなる請求項43記載の方法。式:Lp-PLA2活性ナノモル/分/ml=SCPM試料-CPMブランクVST/CPM全計数VSAVT[ここで、S=調製工程の溶液中のPAF全量ナノモル;CPM試料=各試料からの上清の平均計数;CPMブランク=ブランク反応物からの上清の平均計数;VST=上清の総容量;CPM全計数=全計数反応物の平均計数;VSA=シンチレーションカウンティング用にアリコートされた各上清の容量;V=第一接触工程にてアリコートされた試料の全容量μL;およびT=第一接触工程の総時間分である]を用いて各上清のLp-PLA2活性を算出することをさらに含んでなる請求項44記載の方法。総添加計数用に調製工程の溶液のアリコートを少なくとも1つのブランク反応物に接触させることをさらに含んでなる請求項36記載の方法。調製工程の溶液のアリコートの容量が約1μLないし約20μLである請求項46記載の方法。調製工程の溶液のアリコートの容量が約10μLである請求項46記載の方法。シンチレーションカクテルを上清、ブランク反応物および総添加計数物の各アリコートに接触させることをさらに含んでなる請求項46記載の方法。シンチレーションカクテルと上清、シンチレーションカクテルとブランク反応物、ならびにシンチレーションカクテルと総添加計数物を、シンチレーション計数装置にて少なくとも約1分間計数することをさらに含んでなる請求項49記載の方法。式:CPM総添加計数=CPM正味スパイク計数VPAF/Vスパイク[ここで、CPM正味スパイク計数=総添加計数からの上清の正味平均計数;VPAF=第一接触工程にて添加した調製工程の溶液の容量;Vスパイク=総添加計数用にブランク反応の上清に添加した調製工程の溶液の容量である]を用いて容量調整した、総添加計数の正味平均計数としてCPM総添加計数を算出することをさらに含んでなる請求項50記載の方法。式:Lp-PLA2活性ナノモル/分/ml=SCPM試料-CPMブランクVST/CPM総添加計数VSAVT[ここで、S=調製工程の溶液中の全PAF量ナノモル;CPM試料=各試料からの上清の平均計数;CPMブランク=ブランク反応物からの上清の平均計数;VST=上清の全容量;CPM総添加計数=総添加計数の平均計数;VSA=シンチレーションカウンティング用にアリコートした各上清の容量;V=第一接触工程でアリコートした試料の全容量μL;およびT=第一接触工程の総時間分である]を用いて各上清のLp-PLA2活性を算出することをさらに含んでなる請求項51記載の方法。少なくとも1試料がLp-PLA2阻害剤を投与された動物由来である請求項1または2記載の方法。PAF、PAFのシークエスター分子および沈殿化溶液を含有する複数の試料におけるLp-PLA2酵素活性を測定するためのキット。沈殿化溶液がTCAを含有する請求項54記載のキット。故に、本発明の目的の1つは、標識された血小板活性化因子PAFを含む溶液を調製する工程;複数の組織試料の各々を調製工程の溶液およびPAFのシークエスターSequester分子と接触させ、PAF-シークエスター分子の複合体を形成する工程;該PAF-シークエスター分子の複合体を取り出す工程;およびLp-PLA2活性を検出する工程を含んでなる、試料中のリポ蛋白関連ホスホリパーゼA2Lp-PLA2酵素活性を測定する方法を提供することである。本発明の別の目的は、血小板活性化因子PAF、PAFのシークエスター分子および沈殿化溶液を含有する複数の試料におけるLp-PLA2酵素活性を測定するためのキットを提供することである。用語本明細書中用いるシークエスター分子は、他の分子および/または溶液から第2分子の分離を促進するように、単独または他の分子もしくは共同因子と相まって第2分子と複合体を形成し得る任意の分子をいう。例えば、シークエスター分子は第2分子に付着し、それを溶液から沈殿させる蛋白質であってもよく、または第2分子上で電荷を帯び、それが正または負電極に引き寄せられやすいようにする蛋白質であってもよい。PAFに対するシークエスター分子の例はウシ血清アルブミン以下BSAというおよびヒト血清アルブミンを包含するが、これらに限定されない。本明細書中用いるPAF-シークエスター分子の複合体は、シークエスター分子がPAFに接触し、他の分子および/または溶液からPAFの分離が促進されるようにシークエスター分子に結合したPAFをいう。一例として、BSAと複合体を形成してもよく、それは溶液から沈殿し得る。PAF-シークエスター分子の複合体はシークエスター分子との複合体中に、分解されていないPAFおよびリゾ-PCの両方を包含してもよい。PAF-BSA複合体はPAF-シークエスター分子の複合体の一例である。本明細書中用いるLp-PLA2酵素活性は、任意のLp-PLA2酵素活性を包含するが、これに限定されない。当該活性は酵素の基質との結合、生成物の放出、および/またはリン脂質もしくは他の分子の加水分解を包含するが、これらに限定されない。ポリペプチドは、ペプチド結合または修飾されたポリペプチド結合により各々他と結合している2つまたはそれ以上のアミノ酸を含んでなる任意のペプチドまたは蛋白質をいう。ポリペプチドは、通常ペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーと呼ばれる短鎖、ならびに通常蛋白質と呼ばれる長鎖をいう。ポリペプチドは20種の遺伝子コードアミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。ポリペプチドはプロセシングおよび他の翻訳後修飾のごとき自然工程だけでなく化学的修飾技法により修飾されたものも包含する。かかる修飾は基本書、さらには研究論文および多量の研究文献にて詳細に記述されており、当業者に知られている。任意のポリペプチドのいくつかの部位にて同じまたは異なる程度で同種の修飾が存在していてもよいということが理解されよう。また、任意のポリペプチドは多種の修飾を含んでいてもよい。修飾はペプチドバックボーン、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端を包含するポリペプチド中の任意の場所にて生じ得る。例えば、修飾はアセチル化、アシル化、ADP-リボシル化、アミド化,フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、閉環、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋形成、システイン形成、ピログルタミン酸形成、ホルミル化、γ-カルボキシル化、GPIアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨー素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白質分解的プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のγ-カルボキシル化、ヒドロキシル化およびADP-リボシル化、セレノイル化Selenoylation、硫酸化、蛋白質への転移-RNA仲介アミノ酸付加例えばアルギニル化およびユビキチン化を包含する。例えば、PROTEINS-STRUCTUREANDMOLECULARPROPERTIES,2ndEd.,T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NewYork1993andWold,F.,PosttranslationalProteinModifications:PerspectivesandProspects,pgs.1-12inPOSTTRANSLATIONALCOVALENTMODIFICATIONOFPROTEINS,B.C.Johnson,Ed.,AcademicPress,NewYork1983;Seifterら‘Meth.Enzymol.’182:626-6461990およびRattanら‘ProteinSynthesis:PosttranslationalModificationsandAging’Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-621992を参照のこと。ポリペプチドは分岐しているか、または分岐に関係なく鎖状であってよい。分岐鎖状および分岐環状のポリペプチドは翻訳後の自然工程から生じてもよく、さらに完全な合成法により合成されてもよい。本明細書中用いる沈殿化溶液は溶液からPAF-シークエスター分子の複合体を沈殿し得る任意の溶液をいう。沈殿化溶液はトリクロロ酢酸TCA、デキストランまたはポリエチレングリコールのごとき非イオン性ポリマーまたはMn2、Fe2、Co2、Ni2、Zn2、Cd2、Ca2、Ba2、Mg2、Pb2、Ag、Hg2およびPb2のごとき金属イオンを包含するが、これらに限定されない。沈殿化溶液に等電沈殿を利用してもよく、すなわち、溶液の塩濃度を変え、沈殿を促進してもよい。沈殿化溶液は有機溶媒添加により溶液の誘電率を変化させてもよい。沈殿化溶液中用いられてもよい有機溶媒は2-メチル-2,4-ペンタンジオールMPD、ジメチルスルホキシドDMSO、アセトンおよびエタノールを包含するが、これらに限定されない。沈殿化溶液は沈殿を促進するようにPAFのシークエスター分子含有溶液のpHを変化させてもよい。本明細書中用いる濾過または濾過するは溶液からの任意の物質の取り出しを包含するが、これらに限定されず、さらに濾紙、ワットマン紙、チーズクロス、あるいは物理的および/または化学的特性に基づき溶液から物質を特異的に取り出すカラムに、取り出すべき物質を含有する溶液を通すことを包含してもよい。取り出すべき物質はPAF-シークエスター分子の複合体を包含してもよい。濾過により物質を取り出すために用いられてよい物理的および化学的特性は、カラム充填剤に結合しやすくさせるイオン電荷、大きさ、分子量、極性および/または物質と結合する化学的部分を包含するが、これらに限定されない。溶液からの物質除去を促進するための濾過は重力、真空および/または遠心の使用を包含してもよい。本明細書中用いるシンチレーションカクテルは液体シンチレーションのために溶解度を高め試料の均一懸濁を維持し得る有機溶媒を一般的に含有している、溶質および溶液の混合物をいう。液体シンチレーション工程はβ線放出の捕獲による試料内のβ崩壊検出を含む。シンチレーションカクテル混合物はβ線放出を捕獲し、シンチレーション計数装置内の光電子増倍管にて検出可能である光子放出に変換するよう設計されている。いくつかのシンチレーションカクテルは市販されている。シンチレーションカクテルの組成の修飾は試料に依存して液体シンチレーションからの検出可能な読み取りに効果を及ぼし、および/または最適化し得るということが理解される。本明細書中用いる組織は血清、細胞溶解物、組織溶解物、尿、血漿、プラーク、単球またはマクロファージ細胞を包含する。当該組織はLp-PLA2、そのホモログまたはオルソログを発現するヒト、ヒトでない哺乳類または他の動物由来であり得る。本明細書で提供される式にて用いられる記号は乗法の数学関数である。Lp-PLA2は公知のリン脂質加水分解酵素である。Lp-PLA2はsn-2位にてリン脂質を分解しリゾホスファチジルコリンリゾ-PCおよび酸化された脂肪酸を生成し得る。PAFはsn-2位に炭素数2のアシル基を有し;故にPAFがLp-PLA2により加水分解される場合には、この短いアシル基はその分子の残渣、リゾホスファチジルコリンリゾ-PCより、水溶性アセテートとして切断される。リゾ-PCが水溶液から沈殿し得る条件下でアセテートは水溶性である。例えば、BSAのごときシークエスター分子は分解されていないPAFおよび/またはリゾ-PCと結合して、複合体を形成し得る。ついで、この複合体は溶液から除去され、溶液中に水溶性小分子この場合アセテートを残存させ得る。沈殿後の溶液に残存する水溶性小分子定量のために多数の方法が存在するということは当該分野にて理解されよう。例えば、アセテートは分解される前に放射標識に付し、液体シンチレーションにより検出してもよい。或いは、溶液から沈殿したホスホコリン量を検出し、Lp-PLA2活性を測定してもよい。本発明の一の実施形態は、試料中のLp-PLA2酵素活性を測定する方法であって、標識されたPAFを含む溶液を調製する工程;複数の組織試料の各々を、調製工程の溶液と、およびPAFのシークエスター分子と接触させてPAF-シークエスター分子の複合体を形成する工程;該PAF-シークエスター分子の複合体を除去する工程;およびLp-PLA2活性を検出する工程、を含む方法を提供することである。一の態様において、そのPAFのシークエスター分子は沈殿、遠心分離および/または濾過により除去することができる。もう一つ別の態様において、少なくとも一の試料を、Lp-PLA2阻害物質が投与されている動物より得る。さらなる実施態様にて、組織試料を調製工程の溶液に接触すること、およびPAFのシークエスター分子に接触させPAF-シークエスター分子の複合体を形成することは、同時または別段階順は任意で実施されてもよい。本発明のさらにもう一つ別の実施態様は、複数の試料中のリポ蛋白関連ホスホリパーゼA2Lp-PLA2酵素活性を測定する方法であって、標識された血小板活性化因子PAFを含む溶液を調製する工程;その複数の組織試料の各々をその調製工程の溶液と第一に接触させる工程;その第一の接触工程の各々の溶液をPAFのシークエスター分子と第二に接触させてPAF-シークエスター分子の複合体を形成する工程;該PAF-シークエスター分子の複合体を沈殿化溶液と接触させて沈殿物を形成する工程;その沈殿物を上清から分離する工程;およびLp-PLA2活性を検出する工程、を含む方法を提供することである。本発明の一の態様において、少なくとも一の試料は血液を含む。一の態様において、PAFのシークエスター分子は遠心分離および/または濾過により分離されてもよい。もう一つ別の態様において、少なくとも一の試料は容量が約5μLである。もう一つ別の態様において、複数の試料の各々を微小遠心管またはマイクロタイタープレート上のウェルにアリコートされる。本発明の別の態様において、標識されたPAFは放射標識されている。標識されたPAFはトリチウム化されているかまたは14Cで標識されていてもよい。本発明の別の態様において、標識されたPAFは溶液中PAFの最大20を含み、別の態様において、PAF溶液にて約0.4ないし約2.0である。PAFは溶液中少なくとも約20μMの濃度を有していてもよい。本発明の別の態様において、PAFはLp-PLA2の基質である。別の態様において、PAFは緩衝溶液中にある。緩衝溶液は4-2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジンエタンスルホン酸HEPES、塩化ナトリウムNaClおよびエチレンジアミン四酢酸EDTAを含有してもよい。本発明の別の態様において、調製工程の溶液を試料と少なくとも5秒間混合し、約21°Cで少なくとも約1分間インキュベートすることを含んでなる方法が提供される。試料は調製工程の溶液と一緒に約5分間インキュベートされてもよい。本発明の別の態様において、接触工程のシークエスター分子は外因性ウシ血清アルブミンBSAであるが、内因性ヒト血清アルブミンであってもよい。BSAの温度は約10°C未満であってもよく、約4°Cであってもよい。別の態様において、BSAは約50mg/mLの濃度である。さらなる別の態様において、シークエスター分子および試料は10°C未満で少なくとも約1分間インキュベートされる。本発明の別の態様において、沈殿化溶液はTCAを含有する。別の態様において、TCA含有沈殿化溶液は約10°C未満である。別の態様において、TCAは水に対して約56容量/容量の濃度を有する。別の態様において、第二接触工程の溶液はTCAを含有する溶液と少なくとも1分間インキュベートされる。沈殿は約10°C未満で約5分間、少なくとも約6,000gの遠心分離により上清から分離されてもよい。別の態様において、遠心分離は約4°Cで約15分間行われる。本発明のもう一つ別の態様において、緩衝溶液を全計数反応またはブランク反応として用いるための少なくとも2つの容器にアリコートする。これらの容器は微小遠心管またはマイクロタイタープレート上のウェルであってよい。もう一つ別の態様において、緩衝溶液は、PAFが溶液に添加されていないところの、調製工程の溶液と同じである。本発明のもう一つ別の態様において、全計数反応およびブランク反応のためにアリコートされた緩衝溶液の容量は各試料の反応に使用される試料の容量と同じである。調製工程の溶液およびシークエスター分子を、試料と同じ容量、濃度、接触および沈殿条件にて、ブランク反応として用いるための緩衝溶液のアリコートに添加してもよい。本発明のもう一つ別の態様において、少なくとも2つの全計数反応のアリコートを、略同じ容量の調製工程の溶液およびシークエスター分子の置換溶液この置換溶液はシークエスター分子を含有しないと接触される。試料および/またはブランク反応物に添加されるシークエスター分子を含む溶液とほぼ同じ容量で、緩衝溶液または蒸留水が全計数反応物の各々に添加されてもよい。本発明の別の態様において、各試料の上清部分、ブランク反応物および全計数Totalcount反応物が別容器にアリコートされる。上清、ブランク反応物および全計数反応物の各アリコートはシンチレーションカクテルに接触され、少なくとも約1分間シンチレーション計数装置にて計数されてもよい。本発明の別の態様において、CPM全計数は式:CPM全計数=CPM正味全計数VRT/VSA[ここで、CPM正味全計数=全計数反応物から由来の上清のアリコートにおける正味平均計数;VRT=遠心分離前の最終反応溶液の全容量;およびVSA=シンチレーションカウンティング用にアリコートされた全計数反応物から由来の上清の容量である]を用いて、全計数反応の正味平均計数として算出される。別の態様において、各上清のLp-PLA2活性は式:Lp-PLA2活性ナノモル/分/ml=SCPM試料CPMブランクVST/CPM全計数VSAVT[ここで、S=調製工程の溶液中のPAF全量ナノモル;CPM試料=各試料の上清の平均計数;CPMブランク=ブランク反応物の上清の平均計数;VST=上清の全容量;CPM全計数=全計数反応物の平均計数;VSA=シンチレーションカウンティング用にアリコートされた各上清の容量;V=第一接触工程にてアリコートされた試料の全容量μL;およびT=第一接触工程の総時間分である]を用いて算出される。本発明の別の態様において、緩衝溶液はブランク反応用に少なくとも2つの容器にアリコートされる。当該容器は微小遠心管またはマイクロタイタープレート上のウェルであってもよい。別の態様において、緩衝溶液は、PAFが溶液に添加されていないところの、調製工程の溶液と同じである。本発明の別の態様において、ブランク反応用にアリコートされた緩衝溶液の容量は各試料の反応に用いられる試料の容量と同じである。調製工程の溶液はブランク反応用に試料と同じ容量、濃度、接触および沈殿条件にて緩衝溶液アリコートへ添加されてもよい。本発明の別の態様において、調製工程の溶液アリコートは総添加計数Totaladdedcount用に少なくとも1つのブランク反応物と接触される。調製工程の溶液のアリコートの容量は約1μLないし約20μLであってもよく、または約10μLであってもよい。本発明の別の態様において、上清、ブランク反応物および総添加計数用の各アリコートはシンチレーションカクテルに接触され、少なくとも約1分間シンチレーション計数装置にて計数される。本発明の別の態様において、CPM総添加計数を式:CPM総添加計数=CPM正味スパイク計数VPAF/Vスパイク[ここで、CPM正味スパイク計数=総添加計数から由来の上清の正味平均計数;VPAF=第一接触工程にて添加した調製工程の溶液の容量;Vスパイク=総添加計数用にブランク反応物上清に添加された調製工程の溶液の容量である]を用いて容量調整した、総添加計数反応物の正味平均計数として算出した。本発明の別の態様において、Lp-PLA2活性を式:Lp-PLA2活性ナノモル/分/ml=SCPM試料-CPMブランクVST/CPM総添加計数VSAVT[ここで、S=調製工程の溶液中の全PAF量ナノモル;CPM試料=各試料上清の平均計数;CPMブランク=ブランク反応物から由来の上清の平均計数;VST=上清の全容量;CPM総添加計数=総添加計数の平均計数;VSA=シンチレーションカウンティング用にアリコートした各上清の容量;V=第一接触工程にてアリコートした試料の全容量μL;およびT=第一接触工程の総時間分である]を用いて各上清にて算出した。本発明の別の実施態様において、血小板活性化因子PAF、PAFのシークエスター分子およびTCAを含有する溶液を含んでなる複数の血液試料におけるリポ蛋白関連ホスホリパーゼA2Lp-PLA2酵素活性を測定するためのキットが提供される。下記実施例は本発明の種々の態様を説明する。当該実施例は添付の特許請求の範囲にて定義される本発明の範囲を限定しない。実施例実施例1.封鎖および沈殿のためのBSA濃度滴定BSA濃度および遊離3H-PAFとの接触時間を試験した。緩衝溶液中の濃度が200μMの3H-PAFを濃度1.04mg/mLないし16.67mg/mLのBSAに5分間または一晩接触させた。ついで、BSAおよびPAF複合体を7.78TCAで沈殿させ、4°Cで15分間、6,000gの遠心分離によりペレットを得た。溶液に残存する遊離3H-PAFの割合をシンチレーションカウンティングにより上清にて測定した。表1に示すように、沈殿として溶液から除去された遊離PAFの割合はBSA濃度およびインキュベーション時間の増大と共に増大した。実施例2.TCA沈殿の時間および温度の至適化緩衝溶液中の3H-PAFを濃度16.67mg/mLのBSAで封鎖し、氷上で5分間インキュベートした。PAFを7.78氷冷TCAで沈殿させ、氷上で15分間インキュベートするか、あるいは室温にて7.78TCAで沈殿させ、ついで室温にて5、10または20分間インキュベートした。表2で示すように、氷冷TCAおよび続く氷上での15分間のインキュベーションにおいて溶液に残存するPAF割合が最も小さかった。実施例3.PAF-BSA複合体遠心分離緩衝溶液中の3H-PAFを濃度16.6mg/mLのBSAで封鎖し、氷上で5分間インキュベートした。PAF-BSA複合体を7.78氷冷TCAで沈殿させ、氷上で15分間インキュベートした。沈殿したPAF-BSA複合体を微小遠心力800gないし13,000gにて遠心分離した。遠心分離後、溶液に残存する3H-PAF割合を測定した。5,000g未満の微小遠心力を用いて約1.3ないし約2のPAF-BSA複合体が溶液に残存した。微小遠心力を少なくとも6,000gに増大した場合、わずか約1.1またはそれ未満のPAF-BSA複合体だけが溶液に残存した。実施例4.経時的な反応温度に影響されるLp-PLA2活性37°Cおよび室温約21°CにてLp-PLA2をPAFと30分間反応させ、該活性をPAFから放出された生成物の放射能すなわち、毎分の壊変数/DPMとしてシンチレーションカウンティングにて測定した。反応速度は反応温度に関わらず30分間にわたり直線的であった。37°Cにて実施した反応は室温にて実施した反応より高いLp-PLA2活性を示した。30分でのLp-PLA2活性は37°Cでの反応については約80,000DPM、室温での反応については40,000DPMであった。実施例5.反応生成物のシンチレーションカウンティング用カクテル市販シンチレーション用カクテル3種を緩衝溶液中のPAF放射能を測定するために用いた。MicroScint-20登録商標、MicroScint-40登録商標およびScintisafe登録商標を試験した。PAF溶液40μLのカウント毎分CPMはMicroScint-40よりMicroScint-20が高かった。加えて、MicroScint-40中の反応生成物80μLの計数はMicroScint-20中の同じ反応生成物40μLの放射能の2倍には至らなかった。同様に、MicroScint-20はScintiSafeより非常に高い計数効率30を示した。実施例6.Lp-PLA2活性を測定するための血漿希釈液の直線性室温にて3H-PAFと5分間反応させたヒト血漿試料希釈液のLp-PLA2活性を測定した。16.67mg/mLの氷冷BSAでPAF基質を封鎖することで反応を終結させた。該PAF-BSA複合体を7.78氷冷TCAで沈殿させ、4°Cで15分間、6,000gの遠心分離によりペレットを得た。MicroScint-20カクテルを用いるシンチレーションカウンティングにより上清中の反応生成物を測定した。0.1μL/反応および5μL/反応の血漿を別々の反応で用いた。ヒト血漿試料にて測定されたLp-PLA2活性値は反応に添加したヒト血漿量に直線比例した。実施例7.マイクロプレート使用の複数の試料用Lp-PLA2活性アッセイアッセイバッファーを以下の仕様にて室温で調製し貯蔵した:100mMHEPES、pH7.4;150mMNaCl;および5mMEDTA。480μLの3H-PAF10.0Ci/mmolにて10μM=0.1mCi/mlおよび24.6μLのC16-PAF1-ヘキサデシル-2-アセチル-sn-グリセロ-3-ホスホコリンとしても知られている5.0mg/ml;MW:524をチューブにアリコートし、100反応用の3H-PAF溶液を調製した。該2溶液を混合し、フードにて風乾した。乾燥ペレットを12.0mLのアッセイバッファーに再懸濁し、20μMPAFの3H-PAF溶液すなわち0.4μMの3H-PAFおよび19.6μMの冷C16-PAFを調製した。Lp-PLA2活性アッセイについて、5μLのアッセイバッファー全計数およびブランクについて;n=8または2通りの血漿試料を96-ウェルプレートにアリコートした。各プレートをテープで密封し蒸発を防止した。プレートは21°Cに平衡させた。100マイクロリットルの3H-PAF溶液を各ウェルに添加し、混合し、21°Cで5分間インキュベートした。代わりに50μlの水を添加した、全計数として用いられる試料を除き、氷冷BSA溶液50μLの50mg/mLBSA水溶液を各ウェルに添加した。ついで該溶液を混合し冷蔵庫で5分間インキュベートした。氷冷TCA溶液25μLの56容量/容量の溶液を各ウェルに添加し、混合し、冷蔵庫で15分間インキュベートした。ついで該プレートを6,000gで15分間、4°Cで遠心分離した。各上清のアリコート45μLを96-ウェルのポリスチレンプレートに移した。3H-PAF溶液10μLを6ウェルに添加し、全計数として用いた。MicroScint-20シンチレーションカクテル200μLを各ウェルに添加し、プレートをテープで密封し、10分間最大速度のボルテックスにて混合した。ウェットティッシュでぬぐい、別のきれいなティッシュで乾かすことでプレートの静電気を除去した。トップカウントシンチレーション計数装置を用い各試料について2分間の試料計数を得た。Lp-PLA2活性を以下の式;Lp-PLA2活性ナノモル/分/ml=32CPM45μl-上清-CPMブランク/CPM10μl-スパイク-CPMブランク[ここで、CPM45μl-上清は各試料の平均計数であり、CPMブランクはブランクの平均計数であり、CPM10μl-スパイクは全計数の平均計数ある]を用いて算出した。実施例8.Lp-PLA2阻害剤で処置されたヒトにおけるLp-PLA2活性Lp-PLA2阻害剤またはプラシーボ投与から投与後144時間に至るまでのベースラインおよび予定した時間ポイントにて健常ボランティアから血漿試料を収集した。実施例7記載のとおり血漿試料をLp-PLA2活性についてアッセイした。薬剤処置されたボランティアにてLp-PLA2活性の有意な阻害>85が阻害剤投与後約1時間ないし約6~約8時間で観察された。測定された当該阻害は阻害剤の薬物動態学的データに相関していた。一方、プラシーボ処置されたボランティアにおいてはLp-PLA2活性の有意な減少は全く検出されなかった。血漿試料を分光光度的にアッセイした場合に、Lp-PLA2のほんの約30の阻害が阻害剤で処置されたボランティア由来の同試料から検出された。実施例9:ハイスループット放射分析によるLp-PLA2活性測定の検証実施例7記載の放射標識基質を用いるハイスループットLp-PLA2活性測定に関連する本発明の方法を、アッセイ内活性測定との比較ならびに抽出法にて決定される活性測定との比較により検証した。本発明の方法は0.2ナノモル/分/mLの検出限界LODおよび約100倍の線形ダイナミックレンジ0.5-48.5ナノモル/分/mlを有する卓越した性能特性を示した。加えて、2つの臨床試験、試験An=68および試験Bn=48の試料にて比較した場合に本発明の方法を用いて決定したLp-PLA2活性値は抽出法にて決定した値と大いに相関した。さらに、血漿試料が少量でよいこと、放射性有機廃棄物がないこと、および必要ならば自動化にてさらに増大され得る非常に高いハイスループットであることを包含する、抽出法に勝る多数の利点を提供する。本発明の放射標識基質実施例7を用いるハイスループットLp-PLA2活性アッセイのための分散成分分析は、プレート内アッセイ内の分散成分推定値CVが分散基準を満たすことを示した分散成分研究アッセイ内CVは約11.2;<15基準。アッセイ間CV推定値もまた分散基準を満たしたアッセイ間CVは約12.9;<20基準。ブランク血清および全計数ウェルの数を各2から各4へ増加した場合にアッセイ間における変動の減少の評価は付加したブランク血清および全計数ウェルにて約1.5であった。異なるピペットチップを用いた列間の分散に関する別の分析はアッセイ内CV推定値に約13の寄与を示した。本明細書にて引用した特許および特許出願を含め、すべての刊行物を出典明示により本明細書の一部とする。本出願が優先権主張する任意の特許出願もまた上記と同様に出典明示により本明細書の一部とする。"