"本願明細書に記載された発明。発明の要旨第一の局面において、本発明は、Euphorbia属の植物、特にEuphorbiapeplus、Euphorbiahirta、および/またはEuphorbiadrummondiiの樹液に存在する化合物を提供する。その化合物は:a癌細胞を殺傷またはその増殖を阻害し得るが、正常な新生仔の線維芽細胞または自発的に形質転換したケラチノサイトに有意に影響を与えず;b95°Cで15分間加熱することによって破壊されない活性を有し;cアセトンによる処理によって破壊されない活性を有し;d95エタノールで抽出し得る活性を有し;そしてeメタロチオネイン遺伝子活性化を刺激する。好ましくは、その化合物単数または複数は、本明細書中で規定されるMM96L、MM229、MM220、MM237、MM2058、B16、LIM1215,HeLa、A549、MCF7、MCC16、およびColo16からなる群から選択された少なくとも1つの細胞株の増殖を阻害し得る。より好ましくは、その化合物単数または複数は、MM96L細胞における増殖を阻害し得るか、または分化を誘導し得る。さらにより好ましくは、その化合物はまた、正常なメラニン細胞の増殖を誘導し得る。好ましくは、その化合物はE.peplusまたはE.hirtaの樹液中に存在する。本発明が樹液または樹液抽出物において検出される化合物を参照して詳細に記載されるが、これらの化合物は、植物全体またはその一部に存在するかまたはそれらから抽出された場合、なお本発明の範囲内にあることが明確に理解される。第二の局面において、本発明は、上記のような活性化合物を薬学的に適切なキャリアまたは希釈剤とともに含む組成物を提供する。より好ましくは、その化合物は、ジャトロファン、ペプルアン、パラリアン、およびインゲナンからなる群から選択される。その化合物がジャトロファンである場合、それは好ましくはJakupovicら1998aによって定義される立体配座IIである。天然に生じるジャトロファン、ペプルアン、およびパラリアン骨格において観察される置換体は、本発明の範囲内であることが明確に理解される。これらは、以下の置換体およびアナログを含む。この型の化合物は、Euphobia属の種々の植物において見いだされているJakupovicら、1998a、b、c;Marcoら、1998。さらにより好ましくは、この化合物は、以下から成る群およびそれらの薬学的に受容可能な塩またはエステルから選択される:5,8,9,10,14-ペンタアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-15-ヒドロキシペプルアンペプルアンpepuluane;15-ペンタアセトキシ-9-ニコチノイルオキシ-14-オキソヤトロファ-61,11E-ジエンジャトロファンjatrophane1;2,5,7,9,14-ヘキサアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-15-ヒドロキシ-ヤトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン2;2,5,14-トリアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-7-イソブチロイルオキシ-9-ニコチノイルオキシヤトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン3;2,5,9,14-テトラアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-7-イソブチロイルオキシヤトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン4;2,5,7,14-テトラアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-9-ニコチノイルオキシヤトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン5;2,5,7,9,14-ペンタアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシヤトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン6;20-アセチル-インゲノールingenol-3-アンゲレートangelate。本発明の1つの好ましい実施態様において、この組成物は、β-アラニンベタイン塩酸塩またはt-4-ヒドロキシ-N,N-ジメチルプロリンをさらに包含する。第3の局面において、本発明はガンの処置方法を提供し、この方法は、抗ガン有効量の本発明の化合物を、このような処置を必要とする哺乳動物へと投与する工程を包含する。好ましくは、このガンは固形ガンである。より好ましくは、このガンは以下から成る群から選択される:悪性黒色腫、メルケルMerkel細胞ガンと扁平上皮細胞ガンと基底細胞ガンとを含む他の皮膚ガン、肺ガン、結腸ガン、前立腺ガン、頸部ガンおよび乳ガン。第4の局面において、本発明は新形成性細胞の増殖活性を阻害する方法を提供し、この方法は、この細胞を、抗増殖量の本発明の化合物へと曝す工程を包含する。これらの細胞はエキソビボまたはインビボのいずれかで処置され得る。第5の局面において、本発明は、紫外線の照射、電離放射線、マイクロ波照射、オゾンへの曝露などによって生じる、皮膚に対する損傷を予防または軽減する方法を提供し、この方法は有効量の本発明の化合物をこのような処置を必要とする被験体に局所的に投与する工程を包含する。本発明はこの局面において、日光性角化症、放射線治療の間に生じる皮膚損傷などの処置に使用され得る。第6の局面において、本発明は非新形成性細胞の増殖を刺激する方法を提供し、この方法は、この細胞を、増殖を誘導する量の本発明の化合物または組成物へと曝す工程を包含する。これは組織の再生を誘導するに有用であり、そして、T-リンパ球が本発明の組成物に応答して増殖するので、疾患状態に対する免疫応答を促進するに有用である。哺乳動物はヒトであり得るか、または家畜もしくはペットcompanionanimalであり得る。本発明の化合物はヒトの医療的処置での使用について適切であることが特に意図されるが、イヌおよびネコのようなペット、およびウマ、ウシおよびヒツジのような家畜、またはネコ科動物、イヌ科動物、ウシ科動物および有蹄動物のような動物園の動物の処置を含む、獣医学的処置にもまた適応可能である。本発明の化合物および組成物は任意の適切な経路によって投与され得、そして当業者は処置される症状に対して最も適切な経路および用量を容易に決定し得る。用量は臨床の医師または獣医師の裁量により、そして処置される症状の性質および状態、処置される被験体の年齢および全体的な健康状態、投与経路ならびに施されたかもしれない以前の処置に依存する。キャリアまたは希釈剤、および他の賦形剤は投与経路に依存し、そして当業者はやはり各々の特定の症例について最も適切な処方を容易に決定し得る。本発明の化合物は、経口的、局所的および/または非経口的注入静脈内注射を含むによって投与され得ることが意図される。薬学的組成物の調製のための方法および薬学的キャリアは、Remington’sPharmaceuticalSciences、第17版、MackPublishingCompany、Easton、Pennsylvania、USAのような教科書に記載のように、当該分野において周知である。本明細書の目的のために、用語包含するcomprisingとは含むが、限定されないincludingbutnotlimitedtoを意味し、そして用語包含するcomprisesが対応する意味を有することは、明らかに理解される。例えば、本願発明は以下の項目を提供する。項目1Euphorbia属の植物、特に、Euphorbiapeplus、Euphorbiahirtaおよび/またはEuphorbiadrummondiiの樹液に存在する化合物であって、a癌細胞を死滅または癌細胞の増殖を阻害し得るが、正常新生仔線維芽細胞または自発的に形質転換したケラチノサイトに有意に影響を与えない;b95°C15分間の加熱によって破壊されない活性を有する;cアセトンでの処理によって破壊されない活性を有する;d95エタノールを用いて抽出され得る活性を有する;かつeメタロチオネイン遺伝子活性化を刺激する、化合物。項目2本明細書中で定義される、MM96L、MM229、MM220、MM537、MM2058、HeLa、B16、LIM1215、A549、MCF7、MCC16およびColo16からなる群から選択される少なくとも1つの細胞株の増殖を阻害し得る、項目1に記載の化合物。項目3MM96L細胞の増殖を阻害またはMM96L細胞の分化を誘導し得る、項目2に記載の化合物。項目4正常メラニン細胞および/またはT細胞の増殖もまた誘導し得る、項目1~3のいずれか1項に記載の化合物。項目5薬学的に受容可能なキャリアまたは化粧品的に受容可能なキャリアとともに、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物を含有する組成物。項目6前記化合物が、ジャトロファン類、ペプルアン類、パラリアン類およびアンゲロイル置換インゲナン類、またはこれらのアセチル化誘導体、ならびにこれらの薬学的に受容可能な塩またはエステルからなる群から選択される、項目5に記載の組成物。項目7前記化合物が立体配座IIのジャトロファンである、項目6に記載の組成物。項目8前記化合物が表2で定義されるように置換されている、項目6または項目7に記載の組成物。項目9前記化合物が以下からなる群から選択される、項目5~8のいずれか1項に記載の組成物:5,8,9,10,14-ペンタアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-15-ヒドロキシペプルアンペプルアン;15-ペンタアセトキシ-9-ニコチノイルオキシ-14-オキソジャトロファ-61,11E-ジエンジャトロファン1;2,5,7,9,14-ヘキサアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-15-ヒドロキシ-ジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン2;2,5,14-トリアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-7-イソブチロイルオキシ-9-ニコチノイルオキシジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン3;2,5,9,14-テトラアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-7-イソブチロイルオキシジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン4;2,5,7,14-テトラアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-9-ニコチノイルオキシジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン5;2,5,7,9,14-ペンタアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン6;20-アセチル-インゲノール-3-アンゲレート;およびこれらの薬学的に受容可能な塩またはエステル。項目10前記キャリアが、β-アラニンベタインヒドロクロリドまたはt-4-ヒドロキシ-N,N-ジメチルプロリンを含有する、項目5~9のいずれか1項に記載の組成物。項目11癌を処置する方法であって、抗癌に有効な量の、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物を、このような処置が必要な哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。項目12前記癌が固形腫瘍である、項目11に記載の方法。項目13前記癌が、悪性黒色腫、メルケル細胞癌、扁平上皮癌および基底細胞癌を含む他の皮膚癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、頸癌、および乳癌からなる群から選択される、項目11または項目12に記載の方法。項目14放射線治療するためまたはDNA損傷物質を用いて治療するためのアジュバントとして使用される、項目11~13のいずれか1項に記載の方法。項目15腫瘍形成細胞の増殖活性を阻害する方法であって、該細胞を、抗増殖量の、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物に曝露する工程を包含する、方法。項目16非腫瘍形成細胞の増殖を刺激する方法であって、該細胞を、増殖誘導量の、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物に曝露する工程を包含する、方法。項目17T細胞の活性および/またはT細胞の増殖の誘導を刺激する方法であって、該細胞を、有効量の、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物に曝露する工程を包含する、方法。項目18項目16に記載の方法に従って免疫系の細胞を刺激することによって疾患状態を軽減する方法。項目19腫瘍形成細胞の分化を誘導する方法であって、該細胞を、有効量の、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物に曝露する工程を包含する、方法項目20前記細胞がインビボで処置される、項目15~18のいずれか1項に記載の方法。項目21前記細胞がエキソビボで処置される、項目15~18のいずれか1項に記載の方法。項目22紫外線照射、電離放射線、マイクロ波照射、またはオゾンへの曝露によって引き起こされる皮膚への損傷を予防または緩和する方法であって、このような処置を必要とする被験体に、有効量の、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物を局所投与する工程を包含する、方法。項目23前記損傷が日光性角化症である、項目22に記載の方法。項目24前記損傷が放射線治療の間に起こる、項目22に記載の方法。項目25前記哺乳動物がヒトである、項目11~24のいずれか1項に記載の方法。項目26癌の処置における、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物の使用。項目27紫外線照射、電離放射線、マイクロ波照射、またはオゾンへの曝露によって引き起こされる皮膚への損傷を予防または軽減するための、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物の使用。項目28癌の処置における、項目5~10のいずれか1項に記載の組成物の使用。項目29紫外線照射、電離放射線、マイクロ波照射、またはオゾンへの曝露によって引き起こされる皮膚への損傷を予防または軽減するための、項目5~10のいずれか1項に記載の組成物の使用。項目30癌の処置のための医薬の製造における、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物の使用。項目31紫外線照射、電離放射線、マイクロ波照射、またはオゾンへの曝露によって引き起こされる皮膚への損傷を予防または軽減するための医薬の製造における、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物の使用。項目32非腫瘍形成細胞の増殖を誘導するための医薬の製造における、項目1~4のいずれか1項に記載の化合物または項目5~10のいずれか1項に記載の組成物の使用。発明の詳細な説明本発明は、以下の非限定的な実施例および図面のみを参照として、詳細に記載される。実施例1Euphorbia樹液の腫瘍細胞株に対する阻害活性3つのEuphorbia種Euphorbiapeplus、EuphorbiahirtaおよびEuphorbiadrummondiiの樹液の、3つの異なる腫瘍細胞株の増殖を阻害する能力を試験した。正常皮膚線維芽細胞に対する活性をコントロールとして試験した。これらの細胞株を、5ウシ胎仔血清FCSを含有するRPMI培地中で維持し、そしてアッセイを同じ培地中で行った。樹液を、South-EastQueensland、SunshineCoasthinterland、Palmwoodsにある農地の耕土で無作為に成長させた植物から回収した。この植物の幹表面を、70エタノールで簡単に洗浄し、そしてエタノールで洗浄したはさみを使用して幹を切り、そして乳白色乳濁樹液を流出させた。この樹液を10mlの滅菌プラスチック遠心分離チューブに回収し、4°CでBrisbaneに輸送し、そして-20°Cで凍結保存した。使用前に、この樹液を、滅菌1.5mlエッペンドルフチューブ中で、滅菌MilliQ水を使用して、3125分の1まで順次5倍づつ希釈した。各希釈の10μLアリコートを、100μlの細胞株を含むマイクロタイタープレートウエルのそれぞれ2つに添加した。アッセイは2連で行った。5日後、細胞をコントロール未処理細胞サンプルと比較しての増殖の阻害について、盲検でblind試験した。この結果を表3~6に要約する。ここで試験した細胞株は、NFF正常皮膚線維芽細胞MM96L悪性黒色腫、脳転移HeLa頸部ガンHACat自発性形質転換ヒトケラチノサイトであり、そして、尺度は、0=効果無し~5=完全な細胞の死滅、である。表見出しでの希釈は、培養物への添加前のサンプルの希釈を指す。それゆえ、最終培養物中での希釈は、さらに約10倍高い。これらの結果から、以下のことが見出され得る:aE.peplusは、HeLa細胞に対して活性であり、そしてMM96L細胞に対してはより少ない程度で活性であった。bE.hirtaは、MM96L細胞に対して活性であり、そしてHeLa細胞に対して非常に強力に活性であった。cE.drummondiiは、MM96Lに対して他の2つのサンプルよりも低い効果を有し、そして試験した最も高い濃度でのみHeLa細胞を阻害した。dNFF正常線維芽細胞は1/5の希釈で激しく影響をうけたが、しかし他の希釈度では温和に影響をうけたのみであった。例えば、1/25の希釈では、NFF細胞の阻害は温和評点2だったが、MM96L細胞の阻害は激しかった評点4。1/125の希釈では、NFF細胞に対する効果は観察されなかった評点0が、MM96L細胞の激しい阻害評点4が1サンプルについて観察され、そして2連の他のサンプルではより温和な阻害評点1が観察された。HACat細胞これは正常ケラチノサイトの代表としてみなされ得るは、最も高い濃度でのみ阻害された。高い濃度のE.peplus樹液では、MM96細胞が直接的に殺傷されることは明らかであった。しかし、1/625の希釈までの低い濃度では、増殖阻害は観察されなかったが、生存する細胞は樹状であり、そして正常メラニン細胞の外観を呈していた。提案されるいずれのメカニズムにも制限されることは望まないが、E.peplusの樹液は、DNAを損傷する直接的に細胞傷害性の因子よりむしろ、分化を促進する少なくとも1つの因子を含み得ると見られる。実施例2Euphorbia樹液の活性に対する熱処理またはアセトン処理の影響実施例1に記載される実験を、E.peplusおよびE.hirtaについて、異なる細胞株調製物、異なる植物サンプルおよび異なる評点スケールを使用して、異なる人物により反復した。これらのサンプルは、実施例1に記載のように調製したか、または熱もしくはアセトンでの処理に供したかのいずれかである。植物樹液の希釈していない抽出物を95°Cで15分間、加熱した。アセトン処理については、40μlの抽出物を400μlのアセトン中に懸濁し、そしてチューブをボルテックスミキサーで振盪した。内容物を10,000gで3分間遠心分離し、そして上清アセトン可溶性画分を別のチューブに取り出した。ペレットおよび上清の両方を、開口したチューブ中で室温で排気ファンを作動させたヒュームフード中に一晩放置して残留アセトンをエバポレートした。これらの結果を表7~9に示す。ここで、は効果無しを示し、そして-は100の細胞の死滅を示す。Cは、培養物が汚染されたことを示す。この評価スケールを使用すると、これらの結果は実施例1におけるよりもさらに著しく、1:3125の希釈まで強力な阻害活性が観察された。しかし、NFF細胞のいくらかの増殖阻害がこの実験において見出された。熱またはアセトンのいずれも抗腫瘍活性に有意に影響を与えなかった。アセトン処理を行った場合、いくらかの活性は可溶性画分中にも見出されたが、ほとんどの活性はペレット中に見出された特にE.hirtaの場合。このことは、原因である化合物はその性質においてタンパク質ではなく、そして少なくとも1つの成分が脂質であり得ることを示唆する。実施例3E.peplusを使用するさらなる試験E.peplusはこれらの実験で試験した3つの植物の最も豊富なものであるので、さらなる実験にはこの種からの抽出物を使用した。このことは、活性が他の2つの種に存在しないことを意味すると考慮されるべきではない。NFFおよびMM96L細胞に加えて、MM229およびMM220ヒト悪性黒色腫細胞ならびにB16マウス悪性黒色腫細胞株を使用して、実施例2を繰り返した。コントロールとして等量の水、ならびにアセトン処理後のペレットおよび上清画分の1/20~1/12500の希釈物の添加を使用して、アッセイを2連で行った。この結果を表10に要約する。これらの結果により、実施例2で得られた結果が確認される。1/100~1/50の希釈では、NFF細胞に対する効果はないが、MM96L細胞の有意な阻害が観察された。これらの希釈で生存する黒色腫細胞は、正常なメラニン細胞の外観を呈した。他の2種のヒト黒色腫細胞株およびマウス黒色腫細胞株の阻害もまた、観察された。同様の結果が、メルケル細胞ガンMCC16または扁平上皮細胞ガンColo6細胞を使用して得られた。これらの結果を表11に示す。扁平上皮細胞ガンによって、500,000分の1の希釈でさえ、樹状細胞形態が示された。この粗抽出物の非常に強い力価はまた、メルケル細胞阻害に対しても明らかであり、これは、500,000分の1の希釈でもまた、なお明らかであった。実施例4E.peplusのエタノール抽出物E.peplusからの樹液の新鮮な調製物を、95水性エタノールでの抽出に供した。減圧遠心分離によって抽出後の可溶性画分からエタノールを取り除き、そしてこの画分を、5ウシ胎仔血清および抗生物質を含む組織培養培地RPMI1640中に、その最初の容量まで再構成した。エタノール抽出後に残存するペレットを減圧遠心分離により乾燥させ、そして上記のように組織培養培地中に、その最初の容量まで再構成した。粗樹液C、可溶性画分SおよびペレットPを上記のようにNFF細胞、黒色腫細胞株MM96L、MM537、MM229およびMM2058ならびにまた、結腸ガン細胞株LIM1215および肺ガン細胞株A549に対して試験した。アッセイを3連で行い、そしてサンプル添加後に4日間培養した後に評価した。この結果を表12に示す。ここで、は細胞の正常な外観を示し、は細胞数における可能な増加を示し、そして-は細胞の死滅を示す。得られた結果は、以前の実験の結果と整合した。やはり低用量でも、MM96L細胞は樹状の外観を呈した。全ての腫瘍細胞株および正常線維芽細胞株NFFは、粗樹液およびエタノール抽出により得られた可溶性画分1/20の希釈により死滅した。活性の大部分はエタノール可溶性画分に分配されたと見られた。肺ガン細胞株A459は、1/2500までの希釈で、粗樹液および可溶性画分の両方により影響され、特に感受性であると見られた。実施例5トランスフェクトMM96L悪性黒色腫細胞株における遺伝子発現についてのレポーターアッセイリン酸緩衝化生理食塩水中のE.peplus樹液希釈物を、構築物でトランスフェクトされたMM96L細胞または乳ガン細胞株MCF7を含むウエルに添加した。この構築物は、メタロチオネイン遺伝子の代わりに置換されたβ-ガラクトシダーゼレポーター遺伝子の上流にあるヒツジメタロチオネインプロモーターから構成される。それゆえ、このアッセイは遺伝子発現、特にメタロチオネイン遺伝子の可能性のある転写、翻訳および発現の尺度となる。細胞を4つの抽出物でマイクロタイタープレート中で20時間の間処理し、100μMZuSO4を添加して、そしてプレートをさらに5時間インキュベートし、そして培地を取り除いた。次いで、β-ガラクトシトシダーゼ活性を、1~2時間の間の37°Cでの細胞の発色性基質とのインキュベーションにより測定した。このアッセイは、遺伝子の転写活性についての高感度の試験として使用される。結果を図1に示す。これは、増加したβ-ガラクトシダーゼレポーター遺伝子発現によって測定される、メタロチオネイン遺伝子活性化の顕著な刺激があったことを示す。驚くべきことに、このことはサンプルをさらに希釈した場合により明らかとなった。E.peplus樹液がこの効果を媒介するメカニズムは分かっていない。ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害に特異的な公知の薬物が、より高い濃度の薬物でレポーター遺伝子の発現の増加を示すのに対して、E.peplusは逆の用量応答を示す。しかし、この結果は、このアッセイを用いて、E.peplus樹液または植物自体の中の活性な因子の精製をモニターし得ることを示す。メタロチオネインタンパク質は抗酸化活性を有し、そして重金属誘導性のガンに対する防御的役割に関連する。メタロチオネインプロモーターの活性化は、非常に感受性の乳ガン細胞株MCF7を除いて、直接的な細胞殺傷をもたらし得ないほど低い濃度のE.peplus樹液で生じた図2。これらの希釈でのMM96L黒色腫細胞の正常なメラニン細胞の樹状形態への外観における変化は、これらの効果におけるメタロチオネイン遺伝子の関連を意味し得る。実施例6エタノール可溶性抽出物の細分画実施例4の通りに実施した、95エタノールを用いた抽出によって得られた可溶性画分を、無勾配isocratic逆相高速液体クロマトグラフィーRP-HPLCに供した。100μlの粗抽出物を1mlの95エタノールに溶解し、4°Cで一晩、定期的に振盪した。この抽出物を10,000×gにて4分間遠心分離し、そしてこの上清を取り出しそして真空遠心分離によって乾燥した。固体を、かるく遠心分離した100μlのランニング緩衝液中で再構成し、そして可溶性物質を、、30×4mmのRP-300ガードカラムを備えた220×4mmのBrownleeAquaporeRP-300C8にかけた。このランニング緩衝液はアセトニトリル:水が50:50V/Vであり、そして流速は0.75ml/分であった。画分を、0.5分の間隔で回収し、そして195nmにおける吸光度プロフィールをモニターした。この吸光度プロフィールを図3に示す。画分を、上記のように、真空遠心分離によって乾燥し、500μlPBS中で再構成し、そしてMM96L細胞に対してそしてメタロチオネインレポーターアッセイ中でアッセイした。画分13~28全てがMM96L細胞の樹状の外観への完全な転換を誘導したが、細胞死は観察されなかった。この効果は、レポーターアッセイにおいて非常に顕著であり、ここでこの活性は、1/10,000の希釈においてすなわち、1/100,000の培養物中での最終濃度においてでもなお観察された。上記の結果に加えて、本発明者は、超遠心分離の後に、MM96L細胞に対する活性が上清中およびペレット中の両方において見いだされること、および活性は、分子量カットオフ膜を介してサンプルを通過させることによって除去され得ないことを見い出した。上記で試験した細胞株に加えて、MCF7乳ガン、細胞株の細胞の増殖は1/100,000までの最終希釈のE.peplus樹液によって阻害された。細胞数は、バイシンコニン酸bicinchoninicacid試薬Pierceを使用して評価した。結果を図2に示す。実施例7溶媒分画E.peplusの粗乳液のさらなる溶媒分画は、極性が増大する一連の溶媒によってもたらされた。1ml粗乳液には、遠心チューブ内で20mlジエチルエーテルを添加した。このチューブを振盪し、そして5000gにて5分間遠心分離し、層を分配した。このジエチルエーテル上層を取り出し、そしてこの手順を2回繰り返した。このエーテル画分を合わせ、ロータリーエバポレーター上で乾燥するまで濃縮し、そしてバイオアッセイのために1mlDME中で再構成した。同様の様式で、この残渣を酢酸エチルで抽出し、続いて塩化メチレンで抽出した。MCF7乳ガン細胞の細胞数の減少および樹状の外観への転換によって測定される場合、この最初のエーテル抽出物はこの活性の大部分を得た。しかし、活性はまた、酢酸エチル層および塩化メチレン層に由来する画分から証明された。最終の水可溶性水性画分において活性は見られなかった。この結果を、表13にまとめる。CMVプロモーター活性を、複製欠損アデノウィルス構築物によって感染されたHeLa細胞内にてアッセイした。この構築物において、E1a遺伝子は、CMVプロモーターによって駆動されるβ-ガラクトシダーゼに置換されていた。この結果は、表14に示されるように、感染された未処理の細胞のコントロール値の百分率として表記される得られた結果は、他の分化誘導因子例えば、ヒストンデアセチラーゼインヒビターまたはブチレートを用いた場合にみられる結果と定性的に同様であるが、これらの因子を用いた場合に見られる活性に比べてより強力な活性を有する。より高濃度にて粗抽出物およびジエチルエーテル抽出物を用いた場合に観察されるより低いプロモーター活性は、おそらくこれらの濃度において見られるHeLa細胞に対する細胞殺傷効果を反映する。さらなる溶媒分画実験において、粗液をメタノール:水17:3とn-ヘキサンとの間で分配し、トリテルペンヘプタン相からジテルペン極性相を分離するための以前の報告EvansおよびKinghorn1977に基づいて溶媒分配が期待された。しかし、予想外に、両方の相において活性が検出された。このことは、この系において有効成分activeprincipleが異常に挙動することを示唆する。別の溶媒分画アプローチでは、HPLC分析の前にサンプルを明澄化する必要が示唆された。この粗乳液を、70-95までのエタノールと混合し、4°Cで一晩振盪した。この混合物を1,000gにて10分間遠心分離し、そして上清を取り出し、そして粗液の元の体積の約3分の1まで濃縮した。この濃縮物に100アセトニトリルを30-60添加した。この得られた白色沈殿物を12,000gにて10分間の遠心分離によって除去した。TLCおよび質量分析法によって決定されるように、上清は、大環状ジテルペンジャトロファン類およびペプルアンに富んでいた。この観察結果は、活性素の富化のための適切な大規模プロセスへの方法を示す。実施例8エタノール可溶性抽出物のさらなる活性誘導細分画実施例7および図3に記載したHPLC細分画からの画分14および15を、クロマトグラフィーを繰り返すことによって、一定のダイオードアレイスペクトルを有する主要な対称ピークを選択することにより、さらに精製した例えば、画分14および15;画分14についての結果を図4および5に示す。MM96Lの樹状外観への転換を生じる際の精製した画分の活性を、細胞アッセイによって確認した。画分15の添加後のMM96L細胞への変化の特徴を、図6に示す。細胞を、抗体カップリング手順を使用して、顕微鏡写真として可視化した。この第一抗体、すなわちチロシナーゼ関連タンパク質1TRP-1に指向されたマウスモノクローナルを、ブロモ-クロロ-インドリルリン酸およびニトロブルーテトラゾリウムBCIP/NBTを発色基質として使用して、第二抗体、すなわちヒツジ抗マウスアルカリホスファターゼ結合体を用いて検出した。4日間のインキュベーションの後図6Aおよび6B、黒色腫細胞数の著しい減少およびそれらの形態の明白な変化があった。この細胞は、正常な成熟メラニン形成細胞の特徴である長く、紡錘形の樹状の外観に戻った。この視野における全ての細胞は、この変化した形態を採るようであった。これは、MM96L細胞集団の不均質な性質を考えると驚くべきことである。21日間のインキュベーション後、この処理した細胞は、図6Cおよび6Dに示されるように、クラスター内で互いに幾分平行に整列することが見られ、これは正常な成熟したメラニン形成細胞の特徴である。粗液を含むE.peplus由来の全ての樹状細胞誘導画分についても、同様の特徴が、観察された。画分14および15についてのエレクトロスプレイ質量分析は、780計算値779.315のm/zを有する2,5,7,14-テトラアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-9-ニコチノイルオキシジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン5、Jakupovicら、1998aの存在を示した。1DNMRを使用した場合の、画分14の核磁気共鳴NMR分析は、7ppmと9.4ppmとの間にダウンフィールドシグナルを与えた。これらは、環の9位におけるニコチノエート基内に存在するような、ピリジン様部分に一致する。また、トランス二重結合は、5-6ppmにおける大きなカップリング定数によって証明された。これはジャトロファン環式構造内の11、12内部二重結合に一致する。また、画分14において、負イオンモードでのエレクトロスプレイによって、m/z716計算値716.304、673M-ケテン、656M-AcOHを有する、2,5,7,9,14-ペンタアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-ジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン6、Jakupovicら、1998aであると同定した。画分15は、m/z597M-ケテン-AcOHを有する2,3,5,7,15-ペンタアセトキシ-9-ニコチノイルオキシ-14-オキソジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン1、Jakupovicら、1998aを含んでいた。従って、分光学的分析によって、HPLC上での、細胞殺傷活性および樹状活性を有する7-7.5分における初期溶出画分は、ジャトロファン5、6、および1の混合物を含んでいた。展開溶媒としてトルエン:アセトンを9:1で使用してHPTLC上でクロマトグラフにかけた場合、この結果は、HPLC画分14および15の挙動と一致する。UV陽性スポットは、終期溶出画分例えば、画分20-22、Rfが0.3-0.5と対照的に、原点、すなわちRfが0.0約から移動しなかった。これは、展開溶媒としてトルエン:アセトンを9:1でまたはヘキサン:酢酸エチルを4:1でのいずれかを使用する、HPTLC上でのクロマトグラフィーによって証明されるように、ジャトロファン3、2および4と比較して、ジャトロファン5、6、および1の相対的に極性の挙動を示す。これらの結果は、Jakupovicら、1998aによって、展開溶媒として石油:メチル-tert-ブチルエーテル1:1を使用して得られる結果例えば:ジャトロファン5:Rf0.04、ジャトロファン6:Rf0.103X、およびジャトロファン1:Rf0.11と同様である。初期HPLC画分からの質量分析データにおいて、E.peplus粗抽出物中にインゲナン誘導体後述を参照、または文献で報告され、そして表1に表された他の成分が存在するという証拠はない。実施例9薄層クロマトグラフィーTLCおよび高速薄層クロマトグラフィーHPTLC上での粗抽出物およびエーテル可溶性抽出物の生物学的活性誘導精製a実施例7で調製されたエーテル可溶性画分を、エチレングリコールジメチルエーテルDME中で再構成し、そして展開溶媒としてクロロホルム:酢酸エチル82:18を使用して、20×20cmシリカゲルプレート上でクロマトグラフした図7。このプレートをUV光箱上で観察し、そしてUV陽性バンドを同定し、ゲルから切り出し、DMEで溶出し、そしてMM96L黒色腫細胞株に対する阻害活性および形態転換について試験した。全体のゲルをUV吸収画分および非UV吸収画分にスライスすることによって、予備実験において、活性がUV吸収バンドと関連することが示された。ゲルの側片をクロロホルム中での0.1ヨウ素で染色することにより、他の、ヨウ素に対して強い陽性のバンドを明らかにした。しかし、これらは、無視できる活性を有することが見いだされた。Rf0.0A、Rf0.16-0.18B1、Rf0.22-0.24B2、Rf0.73-0.80C、Rf0.80-0.96DにおけるUV吸収バンドは、生物学的に活性であり、1/5,000希釈において、細胞数の減少および樹状細胞の外観への完全な転換が観察され得る。ゾーンB1、CおよびDを、第一次元にヘキサン:酢酸エチル1:1を、そして第二次元にトルエン:アセトン9:1を用いる二次元溶媒システムを使用して、シリカゲル60プレート上のクロマトグラフィーによってさらに精製したそれぞれ、図8A~8C。1/500希釈にて、細胞数の30より大きなMM96Lに対する阻害活性および樹状細胞の外観への完全な転換を有するUV吸収スポットを、その図に示す。Dゾーン由来の強くUVを吸収するスポット22および23図8Cを参照のことを、ゲルから切り出し、DMEで溶出し、そして真空遠心分離によって乾燥した。画分22および23の質量分析は、5,8,9,10,14-ペンタアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-15-ヒドロキシペプルアン、m/z639.5[M-AcOH]、すなわちペプルアンの存在を明らかにした。b図9に示されるように、展開溶媒としてトルエン:アセトン9:1を使用して、濃縮ゾーンを有する10×10cmのHPTLCシリカゲル60プレートMerckカタログ番号013748.1000上で、全ての粗液をクロマトグラフにかけた。UV陽性ゾーン1,Rf0.14;2,Rf0.23;3,Rf0.49;4,Rf0.54;5,Rf0.57;6,Rf0.63;および7,Rf0.73をゲルから切り出し、そしてDME/ジエチルエーテルを用いて溶出した。上記のように、この画分をMM96Lに対して試験し、そして画分1、3、4、5および6は、細胞阻害活性および細胞転換活性を有することが証明された。これらの画分は、展開溶媒として、ヘキサン:酢酸エチル4:1を使用して、HPTLCプレート上で別々にクロマトグラフにかけ、UV陽性バンドA,Rf0.17;B,Rf0.24;C,Rf0.42;D,Rf0.48;E,Rf0.52;F,Rf0.58;G,Rf0.62図10およびH,Rf0.02図11を得た。Gヨウ素陽性、図10を参照を除いた全画分は、1/5000希釈にて、細胞増殖阻害および完全な樹状形態への転換に関して、MM96L細胞に対して活性であった。画分A-FBは失われたおよびHの質量分析を、E.peplusの公表された成分の公知の分子質量イオンからの化合物の仮の割り当てと共に、表15に示す。ペプルアン=5,8,9,10,14-ペンタアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-15-ヒドロキシペプルアンジャトロファン2=2,5,7,9,14-ヘキサアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-15-ヒドロキシ-ジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン3=2,5,14-トリアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-7-イソブチロイルオキシ-9-ニコチノイルオキシジャトロファ-617,11E-ジエンジャトロファン4=2,5,9,14-テトラアセトキシ-3-ベンゾイルオキシ-8,15-ジヒドロキシ-7-イソブチロイルオキシジャトロファ-617,11E-ジエン従って、質量分析は、20-アセチル-インゲノール-3-アンゲレート画分A、ペプルアン画分A,CおよびD、ならびにジャトロファン2画分D3画分CおよびH、および4画分EおよびFの混合物を明らかにした。画分Hについての1H化学シフトデータを表16に示す。これらの帰属は、DQF-COSY、NOESYおよびTOCSY二次元スペクトルから決定されるように、ジャトロファン環状構造の存在を示した。画分Hのスペクトルは、2つのジアステレオマー配座最も有望であると考えられるをとるジャトロファン3、2つ以上の同様に置換したジャトロファンの混合物、または2つのニコチネート、1つのベンゾエート、およびイソ-ブチレート部分を有する新規のジャトロファンの存在と一致した。Jakupovicら1998aによるように、約6HzのJ4,5、ならびに5と8との間、および4と7との間に強いNOEを有し;DQFCOSYスペクトルにおいて交差したピークの全体としての欠如によって証明されるように、J7,8およびJ8,9が実質的にゼロであり、有望な環状配座はIIであった。任意のインゲノール構造の存在に一致するシグナルは存在しなかった。このサンプルを磁石から回収し、そしてそのアリコートは、MM96Lに対する強力な活性を証明し、これは、20μg/mlにおける完全な細胞死、および20pg/ml未満における樹状外観への完全な転換によって証明された。実施例10NMR分析画分Aを、展開溶媒として、ヘキサン:酢酸エチル4:1を使用して、HPTLC上のクロマトグラフィーによってさらに精製した。UV光箱上での吸収に対する添加剤として、側片を、メタノール中の70リン酸をゲルに噴霧することによって染色し、そしてヘアードライアーを用いたゲルの加熱による発色は、UV光下にて濃い青色バンドを示し、これは主なUV吸収バンドから分離され得た。このバンドと等価の非染色領域を、切り出し、エーテルを用いて溶出し、そして真空遠心分離によって乾燥した。約1mgのこの物質を4ml乳液から蓄積した。この物質を、NMR分析に供し、続いてバイオアッセイし、そして1ng/ml最終濃度を表す1/5×106希釈において完全な樹状形態への転換に関して活性であることを証明した。この物質は、NMRによって、表17に示されるようにC27H36O7、つまり20-アセチル-インゲノール-3-アンゲレートとして同定された。この知見は、表15に表される質量分析の証拠に一致する。しかし、HPLCによる活性誘導精製の質量スペクトルから、および画分Aから離れた他のTLC画分における、20-アセチル-インゲノール-3-アンゲレートの非存在は、これが唯一の活性画分ではないことを示す。むしろ、ジャトロファン1-6およびペプルアンはまた、NMRおよび質量分析データからの推察によって、関係づけられる。これは、TLCによって調製されるような画分Hジャトロファン3Nam/z830;表16の1DNMRの結果も参照について、およびHPLCによって調製されるような画分13および14ジャトロファン5、m/z779および1DNMR;ジャトロファン6、m/z716;ジャトロファン1またはジャトロファン6誘導体、m/Z597について特に本当である。Jakupovicら1998aは、パラリアンparalianeクラスの化合物がジャトロファンとペプルアンとの間の経路における中間体であることを提唱した。ジャトロファンおよびペプルアンの両方による抗癌細胞活性および樹状細胞転換が本発明において証明されているため、このパラリアンもまたこれらの特性を示すと結論づけることが合理的であるようである。実施例11調製薄層クロマトグラフィーによるマウス実験のための物質の調製実施例6に記載されるように、70エタノール中の15ml粗液をジエチルエーテルで抽出した。この抽出物を真空遠心分離によって濃縮し、そして約5mlDME中で再懸濁した。このDME抽出物を、展開溶媒としてヘキサン:酢酸エチル4:1を使用して、調製TLCプレートMerckPLC、シリカゲル60、カタログ番号005745.1000上でクロマトグラフにかけた。図12に示されるように、領域HおよびA-Fに対応するゾーンを切り出し、そして合わせ、エーテル/DMEで溶出し、そして真空遠心分離によって乾燥した。抽出物は、ジャトロファン2、3および4、ペプルアン、ならびに酢酸インゲナンに富んでいた。ペレットを、95エタノール中で懸濁し、そして10,000gにて10分間遠心分離した。上清6.0ml,10mg/mlを0.2mlアリコート内に分散し、そして-20°Cにて保存した。この抽出物を、MM96L黒色腫細胞株に対してアッセイし、そして高い能力を示し、1/5×106希釈においてもなお樹状細胞形態が明白であった;これは粗液の能力を複製した。このように調製した抽出物は、ジャトロファン2、3および4、ペプルアンならびに酢酸インゲナンに富んでいた。注入の直前に、20μlを、0.1-0.2mlの注入のために、5ウシ胎仔血清を含むRPMI1640組織培養培地を有する1mlに希釈した。エタノール溶液10mg/mlをコットンバッド0.2-0.4mlに吸収させ、マウスの局所塗布のために使用した。実施例12腫瘍細胞の皮下インプラントの増殖の阻害a5匹の4週齢のヌードマウスに、2×106個のMM96Lヒト黒色腫細胞を含む、0.1mlの組織培養培地を4つの異なる部位にs.c.注射した。3匹の処置したマウスに、5ウシ胎仔血清および20μgのエタノール抽出物を含む0.1mlRPMI培地を1、2、3、5、6、7、および8日目に注射した。さらに、その処置したマウスに、約5~10μlの10mg/mlエタノール抽出物または粗製の希釈していない樹液を4回まで局所適用した。処置したそれぞれのマウス上の異なる2つの部位に、エタノール抽出物または粗製の樹液で局所的処置を行った。1匹のマウスに12、13、および14日目に局所的処置を行い、そして他の2匹の処置したマウスは、15、19、20、および22日目に局所的処置を行った。腫瘍容積を32日目に測定した。局所的適用の前では、抽出物の注入は、腫瘍容積に明らかな効果を有さなかった。エタノール抽出物の局所的適用後に、一晩で腫瘍の外見に変化があった。腫瘍は、灰色がかった黒色になり、次いで固く、黒色のごつごつした外見になり、次いで痂皮形成が見られた。粗製の樹液で処置した腫瘍は、1日後に類似の変化を示した。時間がたつにつれて、エタノール抽出物および粗製の樹液の全体的効果は類似したため、局所的に処置した病変についての測定を組み合わせた。注射および局所的処置を与えたマウスにおいて、腫瘍容積は76減少したp<0.2。エタノール抽出物で処置した1つの腫瘍は、図13に示すように、完全に消失し、他の8つは、平らな黒色の痂皮に縮小した。他の3つの処置した腫瘍は、最初に類似の色の変化と腫瘍後退が示されたが、測定を行う10日前の局所的適用の中止後に再増殖した。b6匹の4週齢のC57BlackC57Blマウスに、105個のB16黒色腫癌細胞を含む、0.1mlの組織培養培地を下腹部の2箇所に注射した。腫瘍を4日間発達させ、次いで、3つの注射レジメ5ウシ胎仔血清を含む、0.1mlのRPMI培地中の20μgエタノール抽出物1、2、および4日目および1回の局所的処置4日目における5~10μlの10mg/mlエタノール抽出物に供した。最初の注射の8日後、腫瘍領域を定規を使用して測定した。処置によって、3匹の処置したマウスにおけるB16黒色腫腫瘍サイズは、3匹のコントロールマウスの腫瘍サイズと比較して、64p<0.05減少した。結果を表18に要約する。実施例13精製した抽出物によってヒト黒色腫細胞株MM96Lに誘導された遺伝子発現の変化10ウシ胎仔血清を含むRPMI1640培地中、150cm2プレートにおいて培養されたヒト黒色腫細胞株のMM96L細胞株を、精製抽出物とともに5CO2/空気中、37°Cで4時間インキュベートした。細胞をリン酸緩衝化生理食塩水PBSで洗浄し、PBS中に掻き取り、ペレット化し、1mlPBS中に再懸濁した。細胞をペレット化して300μlNP-40溶解緩衝液中に入れ、氷上に15分間放置した。細胞をペレット化し、上清をプロテイナーゼKおよびSDSとともに37°Cで15分間処理し、フェノールクロロホルムで抽出して、そして全RNAを酢酸アンモニウム/エタノールによって-20°Cで一晩沈澱させた。PromegamRNA単離キットを用いて、mRNAを単離し、次いで、33P標識されたdCTPの存在下で逆転写し、cDNAを生成した。cDNAをGenomeSystemshumanGeneDiscoveryArray1.2GDAにおいて、製造業者の説明書に従ってハイブリダイズさせた。このアレイをMolecularDynamicsPhosphorImagerで定量し、そしてImageQantおよびExcelソフトウェアで分析した。処理および未処理細胞に由来する2連のスポット容積の割合を算出し、そして遺伝子活性化割合>1または阻害<1のレベルを規定するために使用した。バックグラウンドは、代表的には500~1000カウントであるが差し引きされず;従って述べられた割合は、実際の変化より小さく見積もられている傾向がある。このアレイは、18,000を超える特有の配列、いわゆる発現された配列タグESTからのcDNAスポットを含んでいた。ESTのうち約3000が同定可能な、ヒト細胞の発現された遺伝子に由来した。試験されたヒト黒色腫細胞における多くのEST配列は、抽出物での処置によってアップレギュレートされたか、またはダウンレギュレートされたかのいずれかであった。割合の<30の標準偏差を有した2連に基づいた変化のみが、この段階において生物学的に有意であると考慮された。4時間という比較的短い処置時間が、薬剤について最も早くかつ最も重要な標的を同定するために使用されたことにもまた注意すべきである。遺伝子発現におけるさらなる主要な変化は、1次応答に依存して、この時間の後に生じるようである。いくつかの関連する公知の遺伝子これは、癌細胞の制御に関して直接的または間接的にのいずれかで有利であると思われるの転写物レベルにおける変化からの結果は、表19に要約される。この実施例において見られた細胞形態における変化は、主要な細胞骨格タンパク質であるアクチンと結合する多くのタンパク質の主要なダウンレギュレーションから生じることが予測され得る。レチノール結合タンパク質の増加はまた、ここで関与し得、そしてレチノイドの細胞内レベルの増加を介して分化された表現型の誘導にもまた関与し得る。太陽のUV照射によって誘導される現在または将来のDNA損傷の修復は、XP修復タンパク質の観察された誘導によって増強され得る。さらに、GADD45の減少およびイオン化照射耐性タンパク質DAP3は、放射線治療に対する腫瘍組織の感作において有用であり得る。後者の変化はまた注目すべきである。なぜなら、これは、MM96L細胞において、皮膚癌および黒色腫の原因であるUVBによって強力にアップレギュレートされるからである。免疫応答を増強することに関連性のある多くの分子、特にG-CSFが誘導される。これらのうちのいくつか例えば、主要組織適合複合体MHCのタンパク質は、免疫治療のため有用な属性であると考えられ、キラーT細胞活性を増強させる。細胞増殖の制御に最も重要な変化は、Gタンパク質およびPKC経路、ならびにプロテオソーム活性の増強の検出された変化に関する。経路の正常な平衡および経路相互作用例えば、Rasシグナル伝達によって媒介されるにおける増殖および変化を含む、多くの細胞プロセスに関して重要である細胞内シグナル伝達は、細胞について有害な結果を有するようである。プロテオソーム成分LAMP7-E1の誘導レベルは、実験におけるいずれの遺伝子について見出されたものの中で最も高く、そしてユビキチン経路を介して多くのタンパク質のプロセシングを大きく変化させると予測される。遺伝子発現アレイデータに基づくと、本発明の化合物は、以下の活性を有すると予測される:1.インビボで抗癌活性を導く様式で、Gタンパク質、PKCおよびRasシグナル伝達経路における遺伝子発現を調節することにおける活性2.標的またはエフェクタ細胞のいずれかにおいて、DNA修復および免疫応答を増強させることによって、太陽のUVおよび類似の因子からの損傷を寛解させることにおける活性3.防御タンパク質GADD45およびDAP3のダウンレギュレーションに基づく、放射線治療に対するアジュバントまたは他のDNA損傷因子での治療に対するアジュバントとしての活性。実施例14ヒトボランティアにおける日光性角化症の処置倫理委員会の承認を、QueenslandInstituteofMedicalResearchから、ヒト被験体における顔面日光性角化症の処置のための、臨床医の監督下でのE.peplusの粗製の樹液の使用の治験について得た。オーストラリアで生長した植物から得て、50グリセロール中で-20°Cで2週間保存した粗製抽出物を、綿棒塗布具を用いて、臨床的に診断された直径約5mmの日光性角化症の表面男性ヒトボランティアの顔面の左こめかみに適用した。約50μlを表面に送達した。1日後、2回目の適用を同じ部位に行った。1回目の適用の後、4~5時間にわたって何の反応も見られなかったが、その後、この部位で炎症反応が生じて、直径80~100mmの領域に広がった。1日後、適用部位および適用領域に対して遠位の局在性の部分において、新たな前悪性の部位がまた標的化されたかのように、局在性の腫脹および水疱形成が見られた。1回目の処置の4日後に、腫脹は鎮静化し、そして痂皮形成が罹患部位で明らかであった。14日後、痂皮は脱落し、その下部に新たな皮膚が出てきた。6週間後、処置した領域は、まだピンクがかっていたが、元々の日光性角化症の兆候はなかった。コントロールとして、同じボランティアの前腕部の正常皮膚の1cm2の部分もまた同様に処置した。局在性の軽度の炎症が見られ、これは、処置後7~10日で消失した。日光性角化症の処置に関連した強い炎症反応は、実施例13における遺伝子アレイスクリーニングから得られた免疫応答についての結果、および以下の実施例15におけるE.peplusの粗製樹液によってT細胞のインビトロの増殖の観察によって示唆されるように、キラーT細胞の漸増および増殖を反映し得る。キラーT細胞活性の増強は、免疫系による癌細胞の破壊において重要な過程であると考えられ、そして元来の処置部位に対して遠位の前悪性病変の認識および攻撃を説明することを補助し得る。実施例15正常メラニン細胞の細胞数に対する粗製樹液およびTLCからの精製画分AおよびHの効果12-O-テトラデカノイルホルボール-13-アセテートTPAは、インビトロでの正常メラニン細胞の培養のために必須である。なぜなら、これらの細胞は、TPAなしでは非常に不充分にしか増殖しないからである。予備実験において、実験の開始からTPAを添加することなく、E.peplus画分を培地に添加した。E.peplus画分を新鮮な培地に添加し、そしてスコアされた細胞数を、E.peplus画分またはTPAなしの新鮮な培地と比較した。このレジメの下で、TPA欠損培地において増殖させたコントロール細胞で得られた細胞数より、より多くのメラニン細胞数が得られた。興味深いことに、E.peplus画分含有培地における細胞は、TPAを含有する、いわゆる標準培地において増殖させた細胞より健常に見えた。従って、E.peplus由来の化合物は、細胞培養におけるツールとしてのTPAの使用より優れた代替物を提供し得る。第2の実験において、正常のメラニン細胞を、10ウシ胎仔血清、コレラ毒素、抗生物質およびTPAを含むRPMI1640培地中、1ウェルあたり5000細胞でプレートした。24時間後、培地を吸引によって細胞から除去し、そしてTPAを添加することなくしかし、特定された添加物を含む、新たな培地で置換した。細胞をさらに10日間インキュベートした後にスコア付けした。結果を表20に示す。先の実験において示された癌細胞株に対するこれらの濃度で観察された細胞阻害効果と対照的に、1/5,000,000希釈においてすら、細胞増殖効果が粗製および精製画分で注目されたことが明らかである。別個の試験において、インビトロでのT細胞増殖はまた、粗製のE.peplus樹液を用いたT細胞の処置後に得られた。正常メラニン細胞およびT細胞の両方がE.peplus樹液からの画分によって増殖が誘導されたので、この因子は、正常細胞の再生が有利である任意の医学的状態において、インビボまたはインビトロのいずれかにおいて、正常細胞についての細胞増殖因子として広範な適用を有し得る。その医学的状態としては、以下が含まれるが、これらに限定されない:a外傷の症例において、および外科的手術後、および熱傷からの回復における迅速な創傷治癒のための皮膚細胞ケラチノサイトの増殖。b移植のための膵臓島細胞の増殖。c免疫系のT細胞および他の細胞の増殖。日光性角化症の処置に対するヒトボランティア治験における適用時点後の作用の拡大が、適用領域に対するナチュラルキラーT細胞の漸増によって説明され得ることに注目することは興味深い。d肝臓、腎臓、結腸、肺、および眼に由来する老化および壊死組織の再生。e器官移植に対する代替物としての宿主組織の増殖。実施例16悪性黒色腫MM96L細胞数に対するベタインの効果異なるタイプのベタインを、最終濃度1mg/mlまで滅菌MilliQTM水中に溶解し、そして5000個のMM96L細胞を含む0.1mlの組織培養培地中に、先に記載したように希釈した。細胞を4日のインキュベートの後にスコア付けした。結果を表21に示す。試験したほとんどのベタインが細胞数に対する影響を有さなかったのに対して、βアラニンベタインヒドロクロリドホモベタインは、20μg/mlの最終濃度で細胞数を減少させ、そして細胞は、樹状の様相を呈した。t-4ヒドロキシN,N-ジメチルプロリンもまた、20μg/mlの最終濃度で細胞数を阻害した;しかし、細胞形態は、多樹状polydendritic形態の細胞形態に変化し、このことの意義は未知である。βアラニンベタインヒドロクロリドホモベタインは、別個にまたは組み合わせてのいずれかで、E.peplus粗製樹液またはその精製有効成分についての適切な処方物薬剤であり得るインゲノール、ペプルアン、およびジャトロファン1-6を含む。これは、低希釈のE.peplus成分で前悪性皮膚病変に対して局所的適用のために使用され得るか、または高濃度のE.peplus成分を有する抗癌剤として処方され得る。ベタイン自体は、抗癌剤として有用であることが示唆されている;例えば、Wiersemaらの米国特許第5,545,667号を参照のこと。それらの界面活性剤特性のために、ベタインは、化粧品における処方物成分として広範に使用される。それらの両性イオン特性に起因して、ベタインはまた、皮膚のより深層に他の成分の輸送を助け得る。E.peplus樹液またはそれらから得られた精製画分の非常に希釈された抽出物とともに、皮膚用化粧品調製物において使用されるベタイン例えば、ジャトロファン類、ペプルアン、パラリアン、またはインゲナンを含むは、別個にまたは組み合わせて、望ましくは、補完的な特性を有するべきである。グリシンベタインを含む、試験された全てのベタインのうち、β-アラニンベタインヒドロクロリドホモベタインのみが、たとえ中程度であっても、E.peplus樹液およびその画分と比較して、表現型逆転reversal効果を有した。本発明は、明瞭化および理解の目的でいくらか詳細に記載されているが、本明細書中に記載の実施態様および方法に対して種々の改変および変更が、本明細書に開示された本発明の概念の範囲から逸脱することなくなされ得ることは、当業者に明らかである。本明細書中に引用された参考文献は、以下の頁に列挙され、本明細書に参考として援用される。"