配列番号3に示すアミノ酸配列を含み、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列を含み、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有するペプチド、あるいはそれをコードする核酸のNFкB活性上昇に関連する疾患を治療するための医薬の製造における使用。上記ペプチドが、配列番号1に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号2に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列からなり、あるいは-のアミノ酸配列のいずれかにおける1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有し、あるいは-のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、請求項1に記載の使用。上記NFкBの活性上昇に関連する疾患が、多発性骨髄腫、白血病、マントル細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、びまん性大細胞型性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、乳癌、卵巣腫、肺癌、子宮頸癌、前立腺癌、肝癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、咽頭癌、胆管癌、甲状腺癌、副甲状腺腫および皮膚と頭頚の扁平上皮癌からなる群から選ばれる請求項1または2に記載の使用。上記疾患が、白血病であり、例えば急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、成人型T細胞白血病からなる群から選ばれる請求項3に記載の使用。ペプチドあるいはそれをコードする核酸および任意に存在する薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む医薬組成物であり、上記ペプチドが、配列番号3に示すアミノ酸配列を含み、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列を含み、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、医薬組成物。上記ペプチドが、配列番号1に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号2に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列からなり、あるいは-のアミノ酸配列のいずれかにおける1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有し、あるいは-のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、請求項5に記載の医薬組成物。NFкBの活性上昇に関連する疾患を治療する方法であり、上記疾患を患っている患者にペプチドあるいはそれをコードする核酸を投与する工程を含み、上記ペプチドが、配列番号3に示すアミノ酸配列を含み;あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列を含み、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、方法。上記ペプチドが、配列番号1に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号2に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列からなり、あるいは-のアミノ酸配列のいずれかにおける1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有し、あるいは-のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、請求項7に記載の方法。上記NFкBの活性上昇に関連する疾患が、多発性骨髄腫、白血病、マントル細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、びまん性大細胞型性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、乳癌、卵巣腫、肺癌、子宮頸癌、前立腺癌、肝癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、咽頭癌、胆管癌、甲状腺癌、副甲状腺腫および皮膚と頭頚の扁平上皮癌からなる群から選ばれる請求項7又は8に記載の方法。上記疾患が、白血病であり、例えば急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、成人型T細胞白血病からなる群から選ばれる請求項9に記載の方法。特別に説明する場合以外、本明細書に用いられる科学ならび技術用語は当業者に通常知られている意味を指す。特別に必要な場合以外、単数で表される用語は複数を含み、複数で表される用語は単数を含む。前記の技術また方法は一般的に本分野に広く知られているあるいは本発明に引用されている参考文献に記載の常用方法に準じて行う。例えば、参照として本明細書に導入されるSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManualに記載の内容を参照する。いかなる理論に制限されなく、invivoにおけるNFкBシグナル経路の調節は主にкB抑制因子IKBに依存する。プロテオソームにおけるIKBの分解はIKBの32位および36位にあるセリンのリン酸化により促進される。IKB分解後NFкB分子の核定位配列が露見され、その後NFкB分子は細胞核内に転入し、標的遺伝子にあるкB反応エレメントに結合して、標的遺伝子の転写を調節するADDINENCITEADDINENCITEDATA。そのほかに、IKBの42位にあるチロシンのリン酸化はIKBの安定性に影響を与えることにより、NFкBシグナル経路の活性にも影響することも分かっているADDINENCITEADDINENCITEDATA。本発明は、RCAN1タンパク質のスプライシングアイソフォームであるRCAN11およびRCAN14がNFкBシグナル経路を抑制し、腫瘍細胞の生存を低減することを発見した。さらに、RCAN11のN末端にある103個アミノ酸のペプチドはIKBと互いに作用し、NFкBの活性を抑制し、腫瘍細胞の生存を低減することも初めて本発明者に発見された。そのため、RCAN1タンパク質はNFкBの内在性調節タンパク質であり、NFкBシグナル経路に影響を与え、NFкBの抑制因子のIKBと互いに作用し、42位のチロシンのリン酸化にも影響することが初めて本発明者に解明された。一つの態様において、本発明はペプチドあるいはそれをコードする核酸のNFкB活性上昇に関連する疾患を治療するための医薬の製造における使用であり、前記ペプチドが、配列番号3に示すアミノ酸配列を含み、あるいは、配列番号3に示すアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列を含み、且つ前記ペプチドがNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、使用を提供する。一つの実施態様において、前記ペプチドは、配列番号1に示すアミノ酸配列からなり、あるいは、配列番号2に示すアミノ酸配列からなり、あるいは、配列番号3に示すアミノ酸配列からなり、あるいは、-のアミノ酸配列のいずれかにおける1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有し、あるいは、-のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する。用語の含むが本発明の明細書および特許請求の範囲に使われる場合、ほかの要素あるいはステップは排除しない。本発明の目的のために、用語のからなるは用語の含むの好ましい態様であると考える。本明細書に用いられるペプチド、ポリペプチドとタンパク質は互いに交換でき、アミノ酸残基の重合体であり、ペプチド結合によって結合されてなる二つあるいは多数のアミノ酸を指す。重合体は線状、分岐状あるいは環状であり、天然存在およびまたはアミノ酸類似物を含むことができ、非アミノ酸で中断されてもいい。通常、アミノ酸重合体が長い場合はポリペプチドあるいはタンパク質と呼ばれることが好ましく、50個のアミノ酸からなりあるいはそれより短い場合はペプチドと呼ばれることが好ましい。本明細書に記載のペプチドは、任意の適切な従来の技術方法、例えば化学合成、組換え発現により製造されることができ、例えばSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManualおよびBlackwellScientificPublicationsに出版された、Nicholson編PeptideSynthesisにおけるAthertonとSheppardの第9章PeptideSynthesisの記載を参照することができる。本明細書において、修飾は本分野に広く知られている保存配列の修飾であり、アミノ酸置換、付加あるいは欠失を含む。アミノ酸修飾は本分野に既知の標準な技術により導入され、例えばタンパク質をコードする核酸内の部位特異的変異、分子クローニング、オリゴヌクレオチド特異的変異またはPCRを介したランダム変異を行う。保存アミノ酸置換はアミノ酸残基が類似な構造あるいは化学性質を備えるアミノ酸残基に置換されるものを含む。類似な側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、本分野で既に確認されている。それらファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸、酸性側鎖を有するアミノ酸、電荷を持たない極性側鎖を有するアミノ酸、非極性側鎖を有するアミノ酸、分岐状側鎖を有するアミノ酸および芳香族側鎖を有するアミノ酸を含む。当業者は上記以外の他のアミノ酸ファミリーを使用できることを知っている。類似な小さい変化は、また、アミノ酸の欠失あるいは挿入、あるいは両方を含む。本分野におけるよく知られたコンピュータープログラムにより、免疫学活性を失うことなく、どのようにアミノ酸残基を置換、挿入あるいは欠失できるかを見つけることができる。本分野における既知のコンピューター計算方法、例えばGapあるいはBestfitは、アミノ酸配列のアライメントを最適化して、類似あるいは同じアミノ酸残基を整列または定義することができる。例えば、前記の一個または複数のアミノ酸の置換は、配列番号1、2あるいは3のアミノ酸残基を類似な構造あるいは化学性質を有するアミノ酸残基例えばアルギニンとリシン、グルタミン酸とアスパラギン酸と、セリンとトレオニンと、グルタミンとアスパラギンと、バリンとロイシンとイソロイシンに変えることができる。例えば、前記の一個または複数のアミノ酸の欠失は、配列番号1の第1位にあるアミノ酸残基、配列番号2の第1位にあるアミノ酸残基、あるいは配列番号3の第9位にあるアミノ酸残基とすることができる。例えば、前記の一個または複数のアミノ酸の付加は、配列番号1の第1位にアミノ酸残基Alaを、配列番号2の第1位にアミノ酸残基Alaを、あるいは配列番号3の第9位にアミノ酸残基Alaを付加することができる。本明細書に用いられる用語NFкBシグナル経路を抑制するは、転写因子とするNFкBを抑制し、下流にある標的遺伝子の活性を調節することを指す。本明細書に用いられる用語同一性は、対応する二つのタンパク質鎖の中の同一あるいは類似な位置にある同じアミノ酸に対応するパーセンテージである。BLOSUM62arrayを用いたBLASTアルゴリズムにより、相同性のパーセンテージを計算する。そのアルゴリズムはNCBIウェブサイトから得られる。好ましい態様において、前記の配列同一性を有しているペプチドは機能的なホモログであり、即ち顕著な同一性を示し、またその対応するタンパク質と同様に機能を発揮する。好ましい機能的なホモログは、少なくとも約60、少なくとも約70、少なくとも約80、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、少なくとも約99あるいはそれより高い配列同一性を有している。本明細書において、用語核酸、核酸分子、ポリヌクレオチドまたはヌクレオチド配列は互いに交換でき、いかなる長さの重合物、例えばポリデオキシリボヌクレオチド、あるいはポリリボヌクレオチド分子、あるいは混合したポリデオキシリボヌクレオチドおよびポリデオキシリボヌクレオチドを指す。単鎖あるいは二本鎖、線状あるいは環状の、天然あるいは合成のポリヌクレオチドを含む。ある核酸に関して、コードするあるいはコードされたは、あるタンパク質に翻訳する情報を含むことを指す。タンパク質をコードする核酸は、核酸の翻訳領域内に非翻訳配列が含まれ、あるいは挿入された非翻訳配列を欠けることもできる。タンパク質をコードする情報はコドンにより指定される。一つの好ましい実施態様において、本発明の核酸は、ベクター、例えば発現ベクター、プラスミド、ウイルス、ファージミド、ファージ、コスミドあるいは人工染色体に含有される。本明細書に用いられる場合、発現ベクターは、一連の核酸エレメントを有する、組換えにより、あるいは合成により調製した核酸構築物である。この核酸エレメントによって、特定な核酸が宿主細胞内において転写されることが可能となる。例えば発現ベクターは、発現しようとする核酸配列をコードするほかに、発現する宿主に由来し適合できる複製またはコントロール配列、及びトランスフェクションされた細胞に選択可能な表現型を与える選択マーカーを含む。本発明の核酸は、プラスミド、染色体、ミトコンドリアDNA、プラスミドDNA、ウイルスあるいは核酸断片に導入されることができる。多くの適切な発現ベクターは、本分野において既知であり、且つ購入でき、例えば原核発現ベクター、酵母発現ベクター、哺乳動物発現ベクター、昆虫細胞発現ベクター、植物細胞発現ベクターがある。一つの好ましい実施態様において、本発明の核酸配列は、発現ベクター、例えばpcDNA31mychis、pSuperにおいて発現される。宿主細胞とは、ベクターを含んでおり、このベクターの複製またはあるいは発現をサポートする細胞である。宿主細胞は大腸菌細胞のような原核細胞、あるいは酵母細胞、昆虫細胞、両生動物細胞または哺乳動物細胞のような真核細胞としうる。本明細書に記載のタンパク質を発現する宿主細胞は本分野に用いられるいかなる真核細胞あるいは原核細胞、例えばHEK293、HEK293T、大腸菌細胞などであればよい。各種細胞の培養および発現、発現されたタンパク質の収集、精製ならび検出技術は既に当業者に知られている。それについて、例えばJPerbalAPracticalGuidetoMolecularCloningJohnWileyandSonsJSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarbourLaboratoryPressまたはFMAusubeletalCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenePubAssociatesandWileyInterscienceEdHarlowandDavidLaneを参照すること。もう一つの態様において、本発明はペプチドあるいはそれをコードする核酸のNFкB活性上昇に関連する疾患を治療するための医薬としての使用であって、前記ペプチドが、配列番号3に示すアミノ酸配列を含み、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列を含み、且つ前記のペプチドがNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、使用を提供する。もう一つの態様において、本発明は、NFкBの活性上昇に関連する疾患を治療する医薬薬物組成物であり、ペプチドあるいはそれをコードする核酸ならびに任意に存在する薬学的に許容できる担体または賦形剤を含み、前記のペプチドが、配列番号3に示すアミノ酸配列を含み、あるいは、配列番号3に示すアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列を含み、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する、医薬組成物を提供する。一つの実施態様において、前記ペプチドは、配列番号1に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号2に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列からなり、あるいは-のアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有し、あるいは-のアミノ酸配列と少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する。ペプチドあるいは核酸分子を医薬組成物へと調合することについては、GennaroALandGennaroARRemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy20thEdLippincottWilliamsWilkinsPhiladelphiaPACrowderTMetalAGuidetoPharmaceuticalParticulateScienceInterpharmCRCBocaRatonFLおよびNiaziSKHandbookofPharmaceuticalManufacturingFormulationsCRCPressBocaRatonFLを参考すること。もう一つの態様において、本発明は、NFкBの活性上昇に関連する疾患を治療する方法であって、前記疾患を患っている患者にペプチドあるいはそれをコードする核酸、またはそれを含む医薬組成物を投与し、前記ペプチドが、配列番号3に示すアミノ酸配列を含み、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列における1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列を含み、且つ前記のペプチドはNFкBシグナル経路を抑制する作用を有することを含む、方法を提供する。本発明に用いられる用語投与は、適切な方法により予定量の物質を患者に導入することを示す。本発明において、単離されたペプチド、単離された核酸分子、発現ベクター、組み換え細胞、医薬組成物あるいはワクチンは、所望の組織に到達しさえすれば、任意に常用な経路により投与されることができる。腹膜内、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、経口、局部、鼻内、肺内または直腸内のような多種の投与経路を採用してもよいが、本発明においては、以上挙げた例に制限しない。一つの実施態様において、前記ペプチドは、配列番号1に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号2に示すアミノ酸配列からなり、あるいは配列番号3に示すアミノ酸配列からなり、あるいは-のアミノ酸配列おける1個または複数のアミノ酸の修飾、例えば欠失、置換、挿入もしくは付加を介して得られたアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有し、あるいは-のアミノ酸配列と少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98または少なくとも99の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つNFкBシグナル経路を抑制する作用を有する。本明細書について、本発明に記載のペプチドはほかのペプチドと融合でき、ペプチドの生理学的あるいは薬学的な性質を修飾し、例えば安定性あるいは膜浸透性を増加させることができる。一つの実施態様において、本発明ペプチドは、ヒト免疫不全ウイルスHIVにおけるTatタンパク質と融合でき、ペプチドの膜浸透性を促進する。本明細書について、前記NFкB活性の上昇に関連する疾患は、疾患の発生、発達、持続あるいは再発がNFкB活性の上昇に関連する任意の疾患を指す。例えば、前記疾患が、多発性骨髄腫、白血病、マントル細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、乳癌、卵巣腫、肺癌、子宮頸癌、前立腺癌、肝癌、膵臓癌、食道癌、胃癌、咽頭癌、胆管癌、甲状腺癌、副甲状腺腫および皮膚と頭頚の扁平上皮癌からなる群から選ばれてもよい。一つの実施態様において、前記疾患は白血病であり、例えば急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、成人型T細胞白血病からなる群から選ばれる。本明細書について、治療は、疾患の病状を軽減、緩和、除去、干渉、阻止する、及び又は疾患の発生またはあるいは発達を遅らせることを指す。疾患の病状は臨床医師によりいかなる手段または方法で監視またはあるいは測量できる。ペプチドあるいはそれをコードする核酸がNFкBの活性を抑制するかどうかは、細胞核内のNFкBタンパクの量を測ることにより判断できる。本分野においてNFкBタンパク質を測る多くのアッセイが知られている。例えば細胞核タンパク質ウェスタンブロッティング、単離された核タンパク質を使う電気泳動移動アッセイ、レポーター遺伝子システムにより転写因子とするNFкBタンパク質の活性を測ることである。本発明の一つの実施態様において、ウェスタンブロッティングにより細胞核内のNFкBタンパク質の量を測定して、NFкB活性に対するRCAN1の抑制作用を研究する。本分野において、動物実験のようなinvivo実験あるいは細胞アッセイのようなinvitro実験により、ペプチドあるいはそれをコードする核酸がNFкBの活性上昇に関連する疾患の治療に用いられるかどうかを研究する。例えば、白血病がNFкBの活性上昇に関連する疾患であることが知られている。白血病は血液類腫瘍に属し、JURKATなどのような白血病細胞系は優れた白血病細胞モデルであり、特に短期培養した初代白血病細胞は、患者の末梢血から分離した直後に薬物検査に用いられ、細胞生存率に基づく細胞アッセイは薬物の効果およびメカニズムを反映できる。本発明において、白血病細胞系ならびに初代培養した白血病細胞をモデルとして、RCAN1の白血病治療効果を研究する。このモデルは、RCAN1が白血病を治療する優れた候補薬であることを証明できる。本発明のRCAN1タンパク質あるいはそのN末端にある103個のアミノ酸断片が新規NFкB抑制剤とする利点は以下のとおりである。RCAN1はヒトの体内に自然に存在している内在性タンパク質であるので、ヒトの体内においての免疫原性は非常に弱く、ヒトの体内における免疫システムにより急に除去されない。小分子化合物と比較して、ポリペプチド医薬は生物活性が高く、作用特異性が強いなどの利点を備えるので、ポリペプチド医薬の副作用は少なく、治療効果も顕著である。実施例本発明を下記の実施例によりさらに説明するが、実施例あるいはそれらの組み合わせは、本発明の範囲あるいは実施形態を制限すると解釈すべきではない。本発明の範囲は添付した特許請求の範囲において定義され、本発明書または本分野の一般的な常識に基づいて、本分野の当業者は、特許請求の範囲に定義される範囲を明瞭に理解する。本発明の主旨または範囲を外れない限り、当業者は、本発明に任意に変形あるいは変更してもよく、この変形また変更も本発明の範囲内に含まれる。実施例1:RCAN1発現ベクターの調製11材料PCR増幅用の酵素およびdNTP:Takarra社から購入;PCR増幅プライマー:上海生工社で合成;Takarra制限酵素:NewEnglandBiolab社から購入;TakaraT4リガーゼ:大連宝生物社から購入;真核発現ベクターpcDNA31mychis:Invitrogen社から購入;遺伝子ノックアウトベクターpSuper:Oligoengine社から購入;アデノウイルス発現ベクターAdenoX:Clontech社から購入;大腸菌DH5をInvitrogen社から購入。特別に説明される以外、ほかの慣用の化学試薬はすべて中国国内の分析試薬である。細胞系:HEK293細胞系をATCC社から購入した。HEK293細胞をウシ胎児血清を10含むDMEM培地に培養し、培養条件は、37°Cの定温とし、CO2を5含む細胞インキュベーターとした。細胞培養に関する用品をすべてInvitrogenから購入した。12実験手順121プラスミドの構築RCAN1の高発現ベクターを構築するために、pcDNA31RCAN11myc組換えプラスミドを構築し、以下のプライマーを用いてPCRによりヒトcDNAライブラリーを増幅させ、EcoR1ならびにKpnIにより酵素切断し、同じ酵素で切断されたpcDNA31mychisベクターとライゲーションした。RCAN11をクローニングするためのPCRプライマー:上流プライマー:ccgCTCGAGgccaccATGGAGGAGGTGGACCTGCA下流プライマー:atggtaccCCTCTTCTTCCTCCTTCヒトcDNAライブラリーをテンプレートとし、それぞれ前記プライマーを使って通常のPCRにより遺伝子断片を増幅させ、アガロースゲル電気泳動によりPCR増幅断片を分離また収集し、この断片の上流にEcoR1酵素切断サイトを、下流にKpnI酵素切断サイトをもたせた。PCRから得られたDNA断片はEcoR1KpnI二重酵素切断され、同じようにEcoR1KpnI二重酵素切断されたpcDNA31mychisベクターとライゲーションし、pcDNA31RCAN11myc組換発現プラスミドを得た。と同様な方法により、RCAN1ホモログアイソフォーム4用の真核発現ベクターであるpcDNA31RCAN14mycを構築した。RCAN14をクローニングするPCRプライマー:上流プライマー:ccgCTCGAGgccaccATGCATTTTAGAAACTTTAA下流プライマー:atggtaccCCTCTTCTTCCTCCTTCRCAN1遺伝子ノックアウトベクターを得るために、二本鎖のヌクレオチドをアニーリングし即ち、95°C、5分間、自然に冷却し、二重鎖を形成させた後、HindIIIならびBglIIで酵素切断されたpSuperベクターに挿入し、SiRCAN1を得た。二本鎖のヌクレオチドの配列は:DS511supersense:GatccccGAGGAAATGGAAAGAATGAGGttcaagagaCCTCATTCTTTCCATTTCCTCtttttaDS511superAS:AgcttaaaaaGAGGAAATGGAAAGAATGAGGTCTCTTGAACCTCATTCTTTCCATTTCCTCggg122アデノウイルスベクターの構築まず、pRCAN11EGFPおよびpRCAN14EGFPベクターを構築した。EcoRIまたはKpnI酵素でpcDNA31RCAN11mycあるいはpcDNA31RCAN14mycプラスミドを切断し、挿入物とする07kbのDNA断片を回収し、同じ酵素で切断されたpEGFPN3ベクターに挿入し、pRCAN11EGFPおよびpRCAN14EGFPベクターを得た。AdRCAN11およびAdRCAN14ベクターを構築した。NheIまたはNotI酵素でpRCAN11EGFPおよびpRCAN14EGFPベクターを切断し、挿入物とする14kbのDNA断片を回収し、同じ酵素で切断されたpShuttle2ベクターに挿入し、pShuttle2RCAN11EGFPおよびpShuttle2RCAN14EGFPを得て、IceuIまたはPISceI酵素でpShuttle2RCAN11EGFPおよびpShuttle2RCAN14EGFPを切断し、挿入物とする14kbの断片を回収し、同じ酵素で切断されたAdenoXアデノウイルスベクターに挿入し、AdRCAN11およびAdRCAN14ベクターを得た。123アデノウイルスの生産白血病細胞系は、一般的なトランスフェクション方法でトランスフェクションできないので、アデノウイルスを使用し、RCAN1タンパク質を発現させた。トランスフェクションの一日前、約106個のHEK293細胞を60mmのシャーレに接種し、リボソームLF2000または5μgのPac1酵素切断されたアデノウイルスベクターAdenoX、あるいはAdRCAN11およびAdRCAN14を利用し、細胞をトランスフェクションした。7日後、細胞を収集し、3回の凍結融解により細胞を溶解し、ウイルスを含んでいる溶解液を集め、05mlの細胞溶解液で60mmのシャーレに接種したHEK293細胞をトランスフェクトし、48時間後細胞を凍結融解してウイルスを集め、さらに同じ方法によりHEK293を二回トランスフェクトし、ウイルスを集めて実験に供した。ウイルス力価が約4×108mlであった。本発明において、特別な説明がある場合以外、細胞系および初代細胞に使われるトランスフェクト回数は30であった。実施例2:RCAN1の高レベル発現がNFкB活性を抑制するのに対して、RCAN1の低レベル発現がNFкB活性を増加する21NFкB核移植の実験手順HEK293細胞へRCAN1発現ベクターpcDNA31RCAN11mycをトランスフェクションする:リボソームLF2000でHEK293細胞をトランスフェクションし、4μlのLF2000を100μlのoptiMEMに加え、5分間後2μgのRCAN1発現ベクターpcDNA31RCAN11mycが添加された100μlのoptiMEMと混合し、室温で15分間静置し、培養したHEK293を含む35mmシャーレに加えた。48時間後細胞を単離し、溶解した:細胞核タンパク質抽出キットで細胞核を単離し、溶解した。12グリシンSDSPAGEにより細胞溶解液中のタンパク質を単離した。電気泳動および膜転写装置は、Biorad社のminiprotean3垂直電気泳動装置であった。WesternBlot法:antiNFкB抗体により細胞核内のNFкBレベルを検出した。AntiTBP抗体により検出されたTBPタンパク質を内部参考とした。SDSPAGEゲルおよびWesternBlotの具体的な方法はMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarbourLaboratoryPressに参照する。22NFкB核移植の実験結果RCAN1の高レベル発現を示した細胞の細胞核内におけるNFкB活性は顕著に低くなり、NFкBの核転移がRCAN1によって顕著に抑制されることが示された。RCAN1ノックアウトによりNFкBの核転移が顕著に高められることが示された。23NFкB活性蛍光指示システムの実験手順RCAN1発現ベクターならびにpNFкBluc、pRLTKでHEK293細胞を同時にトランスフェクションし、24時間後細胞を溶解し、DualLuciferase登録商標ReporterAssayで蛍光を測定した。24NFкB活性蛍光指示システムの実験結果その結果は、RCAN1高レベル発現がNFкB活性を抑制し、RCAN1ノックアウトがNFкB活性を顕著に高めることを示す。実施例3:RCAN1とIKBとの結合31方法手順HEK293細胞によってRCAN1発現ベクターをトランスフェクションした;48時間後細胞を収集し、溶解した;20μlの免疫共沈試薬ProteinAGagaroseおよび2μlの抗IKBα抗体を加え、4°Cにおいて一晩振とうした。2000g遠心で上澄みを除去し、PBSで沈殿を二回洗い、ローディングバッファを加えた;12グリシンSDSPAGEでタンパク質を単離し、タンパク質をPVDF膜に転移した。WesternBlot:antimyc抗体によりタンパク質を検出した具体的な方法についてAbcamの操作説明書参照。反対に、antimyc抗体を使用してタンパク質を沈殿させ、更にIKB抗体を使用し、WesternBlotを行った。SDSPAGE及びWesternBlot法は、具体的には実施例2の21を参照。32結果図に示すように、RCAN1タンパク質はIKBタンパク質と相互作用があった。実施例4:RCAN1がIKBのチロシンリン酸化に影響を与えた。41実験手順HEK293によってRCAN1ノックアウトベクターsiRCAN1をトランスフェクションした。48時間後細胞を収集し、溶解し、IKB抗体を使って免疫沈殿をした。免疫沈殿においては、タンパク質を12SDSPAGEゲルで分離し、PVDF膜に移した。Westernblotは、抗IKBY42リン酸化抗体を使って検出した。SDSPAGE及びWesternBlot法は、具体的には実施例2の21を参照。42結果その結果は、IKBの42位におけるチロシンリン酸化はRCAN1ノックアウトにより顕著に増加された。実施例5:RCAN1アデノウイルス導入による白血病細胞の死滅51材料白血病細胞株Jurkat、NALM6、CEM、MOLT4、Kasumi、HL60、THP1、HELを全てATCCから購入した。白血病初代細胞および細胞株はすべて10ウシ胎児血清を含むRPMI1640培地に培養され、細胞培養のための用品をすべてInvitrogenから購入した。培養条件は37°Cの定温で、CO2を5含む細胞インキュベーターとした。単核細胞用の単離液体Histopaque1077:Sigma社から購入。細胞生存率キットCelltiterGlo発光キット:Promega社から購入。52実験手順白血病初代細胞の単離は、Histopaque試薬を使い、15mlの遠心管に3mlのHistopaque1077試薬を加えたところ、上層が3mlの白血病患者の新鮮な末梢血となった。300gで30分間遠心し、第二層の単核細胞を採取し、10mlのPBSバッファ液で一回洗浄し、シャーレに接種した。白血病細胞株あるいは白血病初代細胞を、RCAN11及びRCAN14を発現するアデノウイルスを用いてトランスフェクトし、48時間後、細胞生存率キットで細胞生存率を測定した。53結果その結果は、RCAN11あるいはRCAN14の高レベル発現が、急性リンパ性白血病細胞系Jurkat、NALM6、CEM、MOLT4を死滅させ、生存率が約3060であった。RCAN11あるいはRCAN14の高レベル発現が、急性骨髄性白血病細胞系Kasumi、HL60、THP1、HELを死滅させ、生存率が約4080であった。急性白血病初代細胞におけるRCAN11の高レベル発現は顕著な細胞死滅死亡を引き起こすことができ、生存率が約55であったが、正常な血液細胞および病状の緩和した白血病患者の血液細胞に対し、殺傷作用はほとんどなかったことから、RCAN1が特異的に白血病細胞の死滅を引き起こすことが判明した。実施例6:NFкBを抑制するRCAN1の構造ドメインを確認する61材料pcDNA31RCAN1103mychisプラスミドの構築:プライマーT7または逆方向プライマーDS103KpnR:AtggtaccGCTTGTCTGGATTTGGCGGA、およびpcDNA31RCAN11mycを基質として、1103断片を増幅し、酵素切断サイトEcoR1ならびKpn1によりpcDNA31mychisに挿入し、pcDNA31RCAN1103mychis組換プラスミドを得た。pcDNA31RCAN103197mycプラスミドの構築:プライマーDSCR1103F:ccgCTCGAGgccaccatgCAGTTTCTGATCTCCCCTまたは逆方向プライマーBGHを使って、pcDNA31RCAN11mycを基質として、103197断片を増幅し、酵素切断サイトEcoR1ならびKpn1によりpcDNA31mychisに挿入し、pcDNA31RCAN103197myc組換プラスミドを得た。核トランスフェクションキットVCA1003:Lonza社から購入。62実験手順免疫共沈:HEK293細胞にRCAN1のNあるいはC末端を発現するベクターpcDNA31RCAN1103mychisおよびpcDNA31RCAN103197mycをそれぞれトランスフェクションし、実施例3に示す実験方法により免疫共沈実験を行った。NFкB活性蛍光指示システム:HEK293細胞にRCAN1のNあるいはC末端を発現するベクターpcDNA31RCAN1103mychisおよびpcDNA31RCAN103197mycをそれぞれトランスフェクションし、実施例2に示す方法によりNFкB活性を検出した。白血病細胞株Jurkat生存率の検出:RCAN1のN末端にある103個のアミノ酸を発現するプラスミドpcDNA31RCAN1103mychisを使って、核トランスフェクション法によりJurkat細胞をトランスフェクションし、CelltiterGlo発光キットで細胞生存率を検出した。63結果その結果、RCAN1のN末端にある103個のアミノ酸はIKBと互いに作用し、NFкBの活性を抑制することができたのに対して、RCAN1のC末端はNFкBの活性と関係がないことが判明した。RCAN1のN末端にある103個のアミノ酸が白血病細胞株Jurkatの生存率を低減できた。実施例7:NFкBを抑制するRCAN1ポリペプチドの精製および活性の測定71実験手順pTATRCAN1N103プラスミドの構築:TAT配列はヒト免疫不全ウイルスHIVにおけるTatタンパク質の第4557個のアミノ酸であり、このTAT配列はRCAN1のN末端ポリペプチドと融合され、ポリペプチドの細胞膜浸透性を促進させた。TAT断片を含むコードオリゴヌクレオチドTatgaggaagaagcggagacagcgacgaagaggatcccを、NdeIまたはXhoI制限酵素で切断したpet28b原核発現ベクターに挿入し、pet28bTATベクターを得て、さらにBamhIまたはXhoI酵素でpet28bTATベクターを切断し、RCAN11103のPCR断片を挿入した;当該PCRに関しては、PCR上流プライマー:CGGGATCCATGGAGGAGGTGGACCTG、下流プライマー:CCGCTCGAGCTTGTCTGGATTTGGCGGAであった。PCRのテンプレートはpcDNA31RCAN11myc発現ベクターであった。RCAN1N103ポリペプチドの精製:50ngのpTATRCAN1N103発現ベクターを100μlのBL21pLysS細胞にトランスフェクトし、その方法は氷浴で30分間、熱ショックで40秒、氷浴で5分間であった。TATRCAN1N103を発現するクーロンを100μgmlのアンピシリンを含んでいる200mlのLB培地に接種し、37°C、225rpmで16時振とうし、再び100μgmlのアンピシリンを含んでいる1リットルのLB培地に接種し、37°Cで一晩振とうした。10分間、5000gで遠心した後細胞沈殿を収集し、PBSで一回洗浄し、細胞沈殿を20mlの細胞混濁液に溶解し、15秒の超音波処理を3回供し細胞を粉砕し、16000g、4°Cで15分間遠心し、上澄みを集め、クロマトグラフィーカラムHisTrapTMを通した。500mMのイミダゾールを含んだ細胞混濁液でカラムからタンパク質を溶出し、PD10脱塩化カラムにより脱塩してから、10グリセリンのPBSにおいて80°C保存した。SDSPAGEゲル電気泳動後に、クマシーブリリアントブルー染色を使用して、単離および精製した後のタンパク質バンドを示した。。その精製したTATRCAN1N103ポリペプチドでJurkat細胞を処理した:10μMのTATRCAN1N103ポリペプチドでJurkat細胞を処理し、24時間後MTTで細胞生存率を検出した結果、TATRCAN1N103処理群のJurkat細胞生存率は正常な対照群より顕著に低くなった。