"選択的に、分子検出から、死細胞のDNAを有効なおよび死細胞方法がこのことにより生細胞があることを示していて、生存可能な微生物の存在の徴候として増幅分析から微生物に特有の信号増加の2つ以上の時点を測定していて、化学変性剤の追加によって混合から増幅分析抑制因子を除去していて、混合に存在する死んだ微生物に運転中のものの比率を決定している核酸増幅分析から陽非汚染された結果を得る前に死微生物細胞DNAを除去して含むを含有している混合薬から除外する方法。比率の中で判定のライブである死んだ微生物に混合物が治療または処理の有効性の効果の程度として中で用いられることができる、請求項1に記載の方法。化学変性剤が一つ以上の化学薬品の混成を具える、請求項1に記載の方法。増幅アッセイはPCRアッセイである、請求項1に記載の方法。混合物は血液および他の体液を有するものである、請求項1に記載の方法。PCRアッセイの実行は、敗血症の診断における菌血症および真菌血症試料からの生存細菌との相関を提供するものである、請求項4に記載の方法。混合の殺された細胞からの信号は抑制される、そして、混合の膜を危うくされた細胞は分析から除外される、請求項1に記載の方法。前述の背景技術からみて、方法シフトがライブで効果的に識別する方法対分子核酸ベースの分析技術例えば、発生するPCRの前により前の死微生物細胞DNAを開発することであることが分かる、そして、それも、例えば、PCR抑制剤を取り出して、目標DNAに集中するように設計された従来の隔離の高コストの負の効果を迂回する。驚くべきことに、本発明の実施例の実行によれば、PCRが血液に由来する生き残れる微生物細胞と相関することが示された。そして、選択的な血球溶解の組合せを使用した。そして、次の微生物細胞溶解およびPCRとともにそして、またはデオキシリボヌクレアーゼを洗った。このように、上記の従来の方法とは対照的に、本発明は、分子核酸ベースの技術の、PCRを含む、劇的に高コストのDNA隔離およびサンプル準備を単純化することによる、そして、DNAを分離しなくて、むしろ死微生物DNAおよび細胞の迅速な分離の後、天然微生物溶解物上の迅速なおよび単純な直接解析を実行することによって、生き残れる微生物細胞の選択的な濃縮に結果としてなることによる潜在的TTR優位性を実現しようとする。これは、敗血症の診断において特に、そして、予想外に有利で、本発明の好ましい実施例に一致することを達成される:I.すなわち、陽非汚染されたPCR結果より前の混乱させている死微生物細胞DNAの除去がその生細胞がそうであることを示すは、生存可能な敗血症微生物sの存在を提示して、この種のPCR結果意志として、示す現実的な血液微生物PCR=敗血症微生物。II血液からの周知の、死微生物細胞が血液培養において成長することができなくされているように、このように、重要な微生物に特有のPCRを測定しているいかなる2つ以上の時点も単一の血液培養ビンからの増加が生存可能な微生物を測定していなければならないと合図する。III血液からのPCR抑制因子は、化学変性剤の単純な組合せを介して除去されることができるchaotropes:洗剤、pH、塩類、アルコール類およびアミンを含んでいる合成物のような双極子瞬間を経た有機化学ベースの差動の救済及び酵素例えばヌクレアーゼ、プロテイナーゼその他そして、洗うこと。このことによりDNA隔離を迂回して、微生物溶解物―Direct―PCRを可能にするIV血液および血液培養に存在する生きている/死んだ微生物の比率が、それから、治療の、そして、処理の有効性を試験する効果の程度として使われることができる。したがって、分子検出から、改良された方法を選択的に死細胞のDNAを有効なおよび死細胞を含有している混合薬から除外するために提供することは、本発明の目的である。それは更なる目的であるの、効果的に識別する改良された方法が生きると定める本発明対分子核酸ベースの分析法より前の死微生物細胞DNAまたはPCRは事業を始めて、そして、それもPCR抑制剤を取り出して、目標DNAに集中するように設計されたそれらのような従来の隔離の高コストの負の効果を迂回する。例えば、次の微生物細胞溶解およびPCRとともにそして、またはデオキシリボヌクレアーゼを洗って、選択的な血球溶解の組合せを使用することによって、PCRおよび他の分子分析技術の結果を血液に由来する生き残れる微生物細胞の存在に関連させる方法を提供することは、本発明の他の目的である。改良された方法をBacteremiaおよびFungemiaサンプルから血液のダイレクトPCR技術および生き残れる微生物細胞を有する相関のための他の体液を実行するために提供することは本発明の更に別の目的である。そして、この種の改良された方法が特に敗血症の診断のために有利な本発明によって設けられている。更なる目的および本発明の効果は、その好ましい実施例の以下の説明から明らかである。本発明が記載されていたにもかかわらず、以下の実施例も本発明の実施例の特定の具体例として、そして、理解の明快さのために設けられている。前へ本願明細書においてセットとしての本発明の教示を考慮して、特定の変更及び改造がこのように元気または本発明の範囲から逸脱することなく、記載されているこれらの実施例になされることができることは、当業者にとって直ちに明らかである。カオトロピック剤別名カオトロピック試薬およびchaotropeは、高分子例えばタンパク質、DNAまたはRAの三次元構造を崩壊させる物質であって、それらを変性させる。カオトロピック剤は、非共有結合力例えば水素結合、ファンデルワールス力および恐水症の効果によって伝達されるinter―分子相互作用を安定させることを妨げる。円偏光二色性がchaotrope濃度依存的なファッションにおいて滴定されることができるにつれて手段によってそのようなものを検出したので、しばしば構造特徴。例えば、カオトロピック試薬は、含む:尿素6-8つのmol/1グアニジウム塩化物6mol/1リチウム過塩素酸塩4.5mol/1変性生化学加えて、負担を保護して、塩橋の安定化を防止することによって、高い一般的な塩類は、カオトロピック特性を有することができる。水素結合は無極性メディアでより強いので、塩類溶媒の双極子瞬間を増加させるは水素結合を不安定にすることもできる。円偏光二色性がchaotrope濃度依存的なファッションにおいて滴定されることができるにつれて手段によってそのようなものを検出したので、しばしば構造特徴。生化学および分子生物学の歴史的に役立つカオトロピック試薬の若干の例は、以下から成る:尿素6-8つのmol/1、グアニジウム塩化物6mol/1、リチウム過塩素酸塩4.5mol/1、alchohols、アミン特に4原子のアミン洗剤特に非イオン物質pH変化、ベタイン、プロリン、カルニチン、トレハロース、NP―40など、本発明とのBSA.In一致と同様に、実験DoEプロセスの設計が、有効な製剤範囲の最適化およびさまざまなchaotropes混合物または試薬またはカクテルの範囲の組合せのために使われた:それらがそれらのサイズ濾過および密度遠心分離に基づいて運転中の電池から容易に切り離されるように、aは死セル構造を変性させる;そして、b吹きさらしの有効なセルが切り離した結果として生じるchaotropeカクテルを作成する下流の分析増幅分析例えばPCRおよび有効な細胞派生内在性タンパク質と直接互換性を持つ、そして、それらのかなりの生化学動作を維持する溶液。事実上、カオトロピックカクテルはその差動の膜完全性に基づいて死細胞からライブで分化するために最適化される。そして、生存度相関分析のための有効な細胞内在性タンパク質動作を維持する。サンプル準備:優先血球溶解状況は、例えば、敗血症血液培養サンプルで見つかって、血液―微生物混合物から血球の優先均質化を産生する。均質化は、効果的にこれらの2つの人口を切り離している濾過水側によるFeed側所望の微生物細胞を保持するから不必要な血球流体のフィルタの移動を可能にする充分なレベル流体をつくるで発生することを必要とする。これらの溶解状況は、微生物細胞が完全なままで、このように、微生物細胞を保持することによって均質化血球の迅速な/感受性が高いフィルタベースの分離を可能にすることを可能にする。本発明によれば、それらの結果として生じる細胞片の差動の血球Lysisおよび充分な均質化はフィルタがFeed側上の微生物を保持する差動の濾過性を可能にしている流体レベルまで減らされた血球に使用される。このように、次の不毛な流体分析のために、完全な微生物を切り離す。直径0.45um0.22umとの間にO.煙突を測定しているポアサイズが充分でなければならないので、従来技術において人々に知られているポアサイズをフィルターに通す。しかしながら、これらの有効なポアサイズは、0.1より小さくありえたおよび微生物および差動の細胞片サイズ濾過性による0.45より大きくありえた。状況としては、所望の効果を成し遂げる洗剤、プロテイナーゼ、chaotrops、変性剤およびヌクレアーゼの最適化された組合せが挙げられるがこれらに限られない。微生物に特有のfilter―insituは微生物がフィルタのFeed側に捕えられると共に物理的なおよび生化学細胞壁溶解方法を使用するとして本願明細書において定められる、そして、/、または、次の微生物に特有の分析物分析は元の位置にあてはまった。元の位置にさらにまた、本願明細書において溶解を意味する、そして、または、所望の微生物細胞がフィルタのFeed側にまだ保持されると共に、次の分析は望まれていない干渉する細胞すなわちBlood細胞の差動の分離の後、発生する。このように、捕えられた微生物がフィルタをロードして、洗うために用いる残留するFeedFilter溶液においてたぶんつるされることを思われる。これらのここで、分離された、完全なおよび、フィルタを含まれた微生物を溶解させるために使用される体力は、酵素の細胞壁消化を含むがこれに限らずこの技術に熟練した人々に共通のそれらである。さらに、分離された微生物を含んでいるフィルタ側上の表面張力によって保持される残留する液体を接触させている直接の調査によるすべての微生物の本発明filter―insitu超音波処理によれば、あるいは、微生物からフィルタの反対側と接触していて、固体による孔を経て、その溶解エネルギーを移していない音のプローブによって、材料を濾過する。加えて、血球が差別的に溶解して、濾過される血液において釘で打ちつけられる微生物を捕えることが分かれたあとそれがフィルタFeed面に直接するにつれて、バクテリアおよびイーストの微生物溶解のためのsituのフィルタ―ビード―工場の効率が閉microfuge管において同様に発生することを驚くほど分かった。このように、filter―insituは、本明細書で定義されるように、より少ない操作汚染へのより少ない可能性を有するより効果的な処理を可能にしている敗血症サンプル準備の簡潔な簡略化したものである両方とも手動でより可撓性のフォーマット、そして、オートメーション化した装置デザインが。以下の実施例では使われるように、用語が技術すなわち流体だけが通過することができる媒体を配置することによって流体液体またはガスから固体の分離のために使われる機械であるか物理的な動作で共通して使うにつれて、濾過は使用される。典型的単純な濾過において、濾過されている液体の特大の粒子はフィルタが、流体の構造および小さい粒子が通過する格子を通過することができない。そして、濾過水になる。実施例実験は、DNAPolymerasePolMAおよび量的遺伝子に特有のPCRを経たゲノムDNAを経てフィルタ―ビードmill―insitu微生物溶解および分析物分析を比較するために行われた。結果は、図面の図1において例示される表に示される。相対的なqPCR値を比較することがここでされるときに、δCt値の解釈は有意差と考えられるために2より大きくなければならない。結果および結論:qPCR差が始まっている入力微生物スパイクおよび対応するフィルタ捕獲されたサンプルとの間に評価する親類は一般に、血液に釘で打ちつけられて、それからフィルタのFeed側に捕えられるさまざまな微生物の非常に高い回復を示す、そうすると、ビード工場はsituのフィルタ―工場とここで称されるフィルタの供給側に溶解した。PCRによって測定可能だった14の異なる微生物のうち、わずか4すべてのカンディダイースト28は、いかなる有意なPCR回復違いも示した。それでも、これらのイーストのために、かなりのDNAポリメラーゼ活性の増加が、これらの同じサンプルからあった。全体として、これは、優れた回復および高効率が高いDNAポリメラーゼ活性および増幅可能なゲノムDNAを産生しているsituの工場をフィルターに通すことを示した。予想外に、本発明に従う元の位置の従属するPolMAを濾過する太い赤いショーの有意な負の値は、マイクロfuge管の重要な改良標準ミリングでありえる。本発明による溶解物の微生物の検出に対する戦略は、図2として本願明細書に追加される線図にまとめられることができる。本発明の実施例のこの実施例は、従来のDNA隔離技術のための、そして、微生物lysate―direct―probe―based―PCR技術が実行されることを可能にするための必要を迂回するための本発明の適合性を示す。a.黄色ブドウ球菌SA標準血液培養カンディダコンセンサス分析、E.Coli、EfaeciumWBC洗剤ベース溶解、小球形にすることおよび、洗うことによって続かれるに封じられた。b.本発明に従う直接のプローブ手順がいずれの場合においてもPCRの溶解物のより高い許容度に関して優れていたことはTaqManの調査およびSYBRを使用している直接的な溶解物PCRの後、それを見つけられた30ulPCRで、5ulの少なくとも5000の微生物から検出される抑制のない最高17は、溶解物を機械加工する。血液培養陽性の瓶には―4000の微生物が入っている/ml培養組織の、下調べの2mlを配置することは8000の微生物/50ul溶解物を産生するPCR上部BCレベルは、分析許容度を必要としたの30ulPCR反応=160微生物の5ulいずれ。現在、推定する500のmicrobes/であるBCの検出の制限が、瓶詰めにする、または、10の微生物/ml、従って、5ul=2。10の微生物/瓶一般的なそしてそれから、=640/bottle検出可能でありえるに62倍になっている世代を必要としている5ul=0.2の微生物である。c.したがって、それは、本発明に従ってそれを示されたSAchaotrope洗剤MolYsisバッファおよびデオキシリボヌクレアーゼ処理の中を走って、1人のTEによって、ペレット及び洗浄が工場―直接的なプローブPCRと互換性を持つことになった。本発明の新規な改良された方法は、示された変性剤BectonDickinsonStaphS/RキットBectonディキンソンから市販されているサンプルの1/I0e6thだけがPCRにおいてあるのない血液培養ビード機械システムを変性剤を有する本発明の改良によって設けられているシステムと比較することによって、従来の技術の上の血液の感受性および許容度に関して、血液の改良は、利用されるダイレクトシステムを機械加工するDoE:グアニジン/トゥイーン、第三イオン/NaOH、トゥイーン/第三イオンその他更に本発明の開発の間の実験で、本願明細書に追加される図3に示される工程系統図に示されるにつれて、トリプシンおよびデオキシリボヌクレアーゼの追加が本発明の2つの困難な臨床サンプルの処理の間、観察されて詰まる重要な減少を可能にすることが証明された。本発明の大まかな基本的な原理および教示が変性剤対応天然溶解物ビード工場及び超音波学のすべてのバリエーションを最適化するために適用されることができる当業者によって認められるさまざまな生物学的組織サンプル血液、体液および軟部組織を含むがこれに限らずの―direct―probe/SYBR―PCR分析、だけでなくSA上で特に記載されているが、また、さまざまな病原体例えばいかなるバクテリア、菌類、ウイルス、寄生虫、その他も間に。上記例も、本発明によって設けられている方法の実行が定義済みの混合物の、または、運転中のおよび殺された電池の定義済みの混合物によってスパイクをつけられる環境サンプルの殺された細胞から信号を能率的に抑制することができることを示す。本発明に従うサンプルの処理が膜を危うくされた細胞を分析から除外する良好な方法であるかもしれない点に注意することも、価値がある。上の説明を要約すると、本発明は、更に下流の分析の前に細菌個体群の速いおよびeasy―to―performpre―治療を可能にしている新規な方法を提供する。本発明の潜在的多数の使用が当業者によって認められるにもかかわらず、本発明によって設けられている方法はDNAに大きな影響を及ぼすことができる―病原診断法、バイオテロリズムおよび微生物生態学を含むさまざまな分野のベースの診断法。本発明の好ましい実施例の実行において、細胞が成長しないので、微生物ターゲット信号の重要な増加を示す単一の血液培養から分離平等政策の約数を使用している少なくとも2つの別々の時点のいかなるPCR測定も微生物成長によりなければならないことは明らかである。それによって、生存可能な微生物汚染効果を無視するの存在を示す。生き残れる微生物溶解およびPCR準備の前に、すべての死細胞DNAが除去されるときに、血液の非成長ベースの単一ポイント陽性のPCR分析が生存可能な微生物の存在を示すと認められる-誘導されるいかなるPCRプロセスも露出する汚染。これは、DNasingおよびWashing離れて死細胞DNAによってデモをされることができる。特定の参照がPCRに本願明細書においてなされるにもかかわらず、本発明の改良がPCRまたは類似の方法論に限られていないItは更に認められることになっている。本発明用に考察される増幅分析としては、限定はされないが、他の周知の核酸ベースの技術例えばDNA増幅分析、サーモ安定ポリメラーゼを組み込んでいるPCR分析および等温詳しい説明方法が挙げられる。当業者が本発明の実施において、役立つさまざまな適切な増幅方法を思いつくことができる、そして、従って、本発明がこのことにより制限されることを目的としないと認められる。本発明がいずれでもおよびすべての方法のアプリケーションを有すると認められる。そして、手順および方法がDNA診断法を含む。かかるアプリケーションの例は限定されるものではないが、食品、水安全性、バイオテロリズム、健康診断/薬剤および/または病原検出を含んでいる何でも含んでいるそれらを包含する。食品業界において、本発明は、防腐剤の有効性をモニタするために用いることができる。本発明の方法には、すべての細胞に適用される可能性がある。細菌細胞が実施例において例証されるにもかかわらず、当業者は本発明の方法が多くの他の細胞タイプに適用されることができるということを従来技術において容易に知ることができる。本発明が、膜を崩壊させることができておよび/または細胞例えば細菌細胞を殺すことができる物質の識別のために用いられることもできる。多種薬剤の抵抗有機体が全盛で、保健機関および患者において広がった時から、新しい消毒薬の識別および/または抗生物質は現在優先権である。本発明の方法が、ツールとしての定量的PCRと結合して、細胞を培養して、成長を待つことに時間を費やさなければならないことのない消毒薬および/または抗生物質の衝撃を急速に、そして、うまく確認することができると更に認められる。ある場合には、有機体は培養組織に週まで何日もかかることができる、そして、このように、候補実質が細胞微生物のようなを殺すことが可能だったかどうか見る重要な時間かかることができる。他の例において、特定の有機体は細胞培養で成長しない。そして、従って、物質が効果的だったかどうかについて決定することを困難にする。このように、本発明の新規な方法を適用することは、新しい消毒薬および/または抗生物質の識別のために、時間および資源を確保することができる。本発明による新規な方法の更なる効果は、使いやすさである。例えばこれらの方法を用いて、大量のサンプルは、生細胞例えばバクテリアの存在を、容易に見つけるため検査されることができる。例えば、サンプルは、存在を見つけるため検査されることができる潜在的に完全な細胞膜を有する生きているバクテリア。他の実施形態では、環境サンプルは、生細胞例えばバクテリアの存在を見つけるため検査されることができる。これらのサンプルは、例えば、土壌から集められることができるかまたは、プラントの部分であることができる。本発明による方法が、解放の前に、そして、の後、処理された廃水のテストのために、更に用いられることができる。本発明による方法が、医薬のサンプル例えば気道、インプラントおよびカテーテル面からスツールサンプル、血液培養、痰、組織サンプルまた、切る損傷材料、尿およびサンプルをテストするために、更に用いられることができる。本発明による方法のアプリケーションの他の分野は、食品の制御でありえる。他の実施態様において、食品サンプルは、牛乳または乳製品ヨーグルト、チーズ、甘いチーズ、バターおよびバターミルク飲料水、飲料レモネード、ビールおよび液ベーカリ製品または肉製品から得られる。本発明の方法は、食品の防腐剤か食品例えば低温殺菌の抗菌性の処置が細胞増殖を防止したかどうか決定することができる。本発明による方法のアプリケーションの更なる分野は、製薬および美顔用製品例えば軟膏、クリーム、チンキ、液、溶液、低下、などの分析である。本発明の方法は、以前の方法をタイムリな警告および予防動きに不適当にしている長いインキュベーション時間日の範囲での課題を解決する。加えて、最新のPCRベースの方法は、偽陽性結果有機体が現実的でないにもかかわらず、有機体の陽性反応を示すを与えることができる。さらに、調査は、それらがまだ現実的であるにもかかわらず、若干の有機体が、特定の状況の下で、複製する能力を失うことができるということを最近発見した。より適当な環境へ移される場合、これらの現実的であるが、culturableでないVBNCバクテリアは従来の培養を使用して検出されることができなくて、成長するそれらの能力を回復するかもしれない。これらの欠点は、本発明の方法と組み合わせてこれらの有機体の遺伝物質/DNAの検出に基づいて分子方法を適用することによって解決される。このように、例えば、サンプルの生存可能な有機体に注意している速いおよび正確な結果汚染された水汚水、食品、医薬および/または化粧品は、汚染された製品が市民にリリースされるのを防止することができる。現在の時間がかかる方法と比較して、サンプルの偽陽性病原体が現実的でないにもかかわらず、病原体の陽性反応を示すおよび迅速なテストを最小化することによって、本発明の方法は、資源を保存することができる。加えて、本発明の方法は、生態学的な研究農業および/または生態学的なシステムのための特定の土壌の健康のための微生物共同体の潜在的に生き残れるメンバーを確認することができる。伝統的に、細菌共同体を確認することは、培養ベースの方法またはプレート数を使用して実行された。コロニーがより非常に計数されるほど、バクテリアは、より、オリジナルでサンプルroblemsであると推定される、しかしながら、時々この方法をタイムリなおよび正確な結果に不適当にしている長いインキュベーション時間日の範囲でから立つ。これらの欠点は、本発明の方法を利用している。本発明の方法を使用している分析を受けることができるバクテリアの中で非限定的な実施例、または、本発明の方法を使用しているサンプルの潜在的生存度を検出することは、成り立つ、に加えてSA前述したように:B.百日咳、Leptospirapomona、S.paratyphiAおよびB、C.diphtheriae、C.tetani、C.botidinum、C.perfringens、C.feseriおよびその他ガス壊疽バクテリア、B.anthracis、P.pestis、パスツレラムルトシダ、髄膜炎菌、N.gonorrheae、ヘモフィルス属influenzae、アクチノミセス属{Norcardiaで例えばあるアシネトバクター属バシラス科{例えば、バチルス属anthrasisバクテロイデス属{バクテロイデスフラジリスで例えばあるBlastomycosis、Bordetella、ボレリア属{Borreliaburgdorferiで例えばあるBrucella、カンピロバクター属、クラミジア、Coccidioides、コリネバクテリウム属{コリネバクテリウム属diptheriaeで例えばある大腸菌{Enterotoxigenic大腸菌およびEnterohemorrhagic大腸菌で例えばあるエンテロバクター属例えばエンターobacterエアロ遺伝子Enterobacteriaceaeクレブシエラ属、サルモネラ属例えばチフス菌、腸炎菌、セラチア属、エルシニア属、赤痢菌エリジペロスリックス属、ヘモフィルス属例えばヘモフィルス属インフルエンザタイプBヘリコバクター属、レジオネラ例えばレジオネラニューモフィラ菌Leptospira、リステリア属例えばリステリア菌Mycoplasma、マイコバクテリウム例えばらい菌およびヒト型結核菌ビブリオ属例えばコレラ菌Pasteurellacea、プロテウス、シュードモナス例えば緑膿菌Rickettsiaceae、Spirochetes例えば、Treponemaspp.Leptospiraspp.ボレリア属種。赤痢菌spp.Meningiococcus、Pneumococcusおよびすべての連鎖球菌例えば肺炎連鎖球菌およびGroupsA3BおよびCStreptococciウレアプラズマ属。トレポネーマpollidum、黄色ブドウ球菌、Pasteurellahaemolytica、コリネバクテリウム属diptheriaeトキソイド、髄膜炎菌多糖類、Bordetellapertusis、肺炎連鎖球菌、破傷風菌トキソイドおよびマイコバクテリウム‐ボビス。上記リストは、単に図示するだけのことを目的として、決してそれらの特定の細菌有機体に本発明を検出に制限するはずでない。本発明の特に好適な実施例は、PCRを利用する。PCRのための一般の手順は、米国特許第4,683,195号マリス、その他および米国特許第4,683,202号マリス、その他において教示される。しかしながら、増幅反応ごとに使用する最適PCR状況は、通常、分野の職人によって共通に使用されるコンピュータソフトウェアによって、経験的に決定されるかまたは推定される。多くのパラメータは、反応の成功に影響する。焼なまし温度および時間拡張時間、Mg2、pHおよびプライマ、テンプレートおよびデオキシリボヌクレオチドの相対的な濃度は、それらの一つである。通常、テンプレート核酸は、ポリメラーゼ反応の前に1~10分間の少なくとも約95°Cまで加熱することによって、変性する。ほぼ20―99サイクルの増幅は、90°C~0.05~1分間の96°Cの範囲の変性、48°Cから0.05~2分間の72°Cにわたっている温度の焼鈍および68°C~最適最後のサイクルを有する少なくとも0.1分間の75°Cの拡張を使用して実行される。実施例において、PCR反応は、各種類の0.5mmのdNTPおよび市販の熱安定DNAポリメラーゼの0.5~5台の装置に約100ngのテンプレート核酸、20uMの上流のおよび下流のプライマおよび0.05を含むことができる。従来のPCRのバリエーションは、逆転写PCR反応RT―PCRである、シングルに対する分子が立ち往生させた逆転写酵素第1の茂みRNAcDNA分子それからポリメラーゼ連鎖反応の次の増幅のテンプレートとして使用される。RNAの隔離は、公知技術である。RT―PCRを実施することにおいて、目標核酸が変性する熱であったあと、逆転写酵素は通常、反応サンプルに加えられる。増幅の予定のサイクルが起こる前に、反応はそれから、cDNAテンプレートを生成するために充分な時間量10―60分のための適切な温度例えば30―45°Cに維持される。当業者は、定量的結果が要求される場合、注意がそれが維持するかまたは増幅された核酸の相対的なコピーのために制御する方法を使用するためにされなければならないと従来技術において認める。定量的増幅の方法は、当業者にとって周知である。例えば、定量的PCRは、同時に同じプライマを使用している制御シーケンスの既知量を共同増幅することが必要でありえる。これは、PCR反応を調整するために用いることができる内部標準を提供する。PCRの他の二者択一は定量的PCRqPCRである。qPCRは小さい挿入または削除によって大きさにおいて目標と異なる内部相応する制御を使用している競争的技術に通されることができる。しかしながら、非競争的および動力学的定量的PCRが、使われることもできる。同時に標的配列と一緒に検出されることができる内部相応する制御とリアルタイム、動力学的PCR検出の組合せは、有利でありえる。PCR、RT―PCRおよび/またはqPCRのためのプライマは、その特定の有機体のために選択されるDNA領域を増幅するだけである地方または特定のバクテリアの範囲内で選択される。あるいは、すべての有機体のために一般的であるDNAの部分の雑種を作って、増幅するプライマは、選択される。選択および構造が従来技術において公知で一般にあるプライマ。一般に、1つのプライマは、増幅されるシーケンスの各先端にある。この種のプライマが、通常長さの10~35のヌクレオチドの間にあって、18~22のヌクレオチドの間から、好適な長さを有する。増幅されることができる最も小さいシーケンスは、長さ前方及び後方のプライマ、長さの20のヌクレオチドの両方ともで例えばある、シーケンスの場所が、少なくとも10のヌクレオチドによって切り離されるのほぼ50のヌクレオチドである。非常により長いシーケンスは、増幅されることができる。1つのプライマは、前方のプライマと呼ばれていて、増幅される領域の左端にある。前方のプライマは、順番に、DNA倍―足止めされるDNAが、一番上の索が5フィート~3フィート方向の両極性によって示される慣例を使用して描かれるの一番上の要素の領域と同一である。前方のプライマの配列は、それがDNAの一番上の要素と相補的であるDNAの要素に交雑するようなものである。他のプライマは、復帰プライマと呼ばれていて、増幅される領域の右端にある。すなわち、それが順番にそれと相補的であるように、プライマがそうである後退のシーケンスは、シーケンスを逆補うものである、DNAの一番上の要素の領域。復帰プライマは、DNAの頂端部に交雑する。PCRプライマは、多くの他の状況を前提としても選択されなければならない。PCRプライマは、テンプレートの1つを超える領域に雑種形成を最小化するのに長く十分でなければならない長さの好ましくは10~30のヌクレオチド。可能ならば、一塩基のロングランを有するプライマは、回避されなければならない。プライマは、40および60間の1パーセントのGC内容を好ましくは有しなければならない。可能ならば、プライマの3’末端のパーセントGC内容は、プライマの5’末端のパーセントGC内容より高くなければならない。プライマは、プライマすなわちパリンドロームの範囲内で他のシーケンスに交雑することができるシーケンスを含んではならない。同じPCR反応において使用する2つのプライマは、互いに交雑することが可能であってはならない。PCRプライマが上記の勧告に対する好ましくは選ばれた主題であるにもかかわらず、プライマがこれらの状況にかなうことは必要でない。他の下塗りには、動くことができるが、良い結果を得る下の可能性があることができる。所与のシーケンスの中でDNAを増幅するために用いることができるPCRプライマは、利用できる多くのコンピュータプログラムのうちの1つを使用して選択されることができる。この種のプログラムは、所与のシーケンスすなわち、PCRプライマの機能を最大にすることができる他の状況に加えて、この種のプログラムは、上で述べられる状況を前提として、プライマを選択するの増幅のために至適であるプライマを選択する。1つのコンピュータプログラムは、PCRプライマの選択のためのルーチンがあるGeneticsComputerGroupGCGは、最近Accelrysになった分析一括法案である。下で開示されるオリゴヌクレオチドプライマおよび調査は、多くの方法でなされることができる。これらのオリゴヌクレオチドを作る1つの方法は、購入可能な核酸シンセサイザを使用してそれらを総合することである。この種のシンセサイザのバラエティが、存在して、当業者に周知である。本発明と関連して役立つPCRの他の二者択一は、特定のDNAまたはRNA目標の検出の等温核酸増幅検査法である。非―核酸の等温増幅のための制限する実施例は、均一なリアルタイム索置換増幅圧延円増幅の基礎を形成されるPhi29DNAポリメラーゼである。DNA塩基配列決定のテンプレート、PNAオープナによって援助される二重DNA配列の圧延円増幅またはDNA分析物のループによって媒介される等温増幅。核酸は、雑種形成方法によって検出されることもできる。これらの方法では、ラベルをつけられた核酸は、ラベルをつけられたかラベルのない核酸の調査を含んでいる基板に加えられることができる。あるいは、ラベルのないかラベルのない核酸は、ラベルをつけられた核酸の調査を含んでいる基板に加えられることができる。実施例、MicroArrayAnalysis、マークSchena、ジョンワイリー社、ホーボーケN.J.2003のために、雑種形成方法は、中で開示される。核酸を検出する方法は、ラベルの使用を含み得る。例えば、識別用放射性同位元素は、写真フィルムまたは燐酸映像器放射性リン酸塩編入を検出して、定量化するためにを使用して検出されることができる。蛍光マーカは、発された光典型的な装置のために、米国特許第5,143,854号を参照を検出するために光検出器を使用して検出されることができて、定量化されることができる。酵素標識は、酵素に基板を提供して、酵素の基板に及ぼす作用によってできる反応製品を測定することによって、典型的に検出される。比色ラベルは、単に着色したラベルを視覚化することによって検出される。実施例において、増幅された核酸分子は、直接増幅生成物を核酸をさし込んでいる染料で染色することによって視覚化される。当業者にとって明らかであるように、典型的な染料は、含む、しかし、SYBR緑、SYBR青、DAPI、propidiumヨウ素、Hoeste、SYBR金および臭化エチジウムに制限する。増幅されたDNA分子にさし込まれる発光の染料の量は増幅産物の量に正比例する。そして、それは製造業者の指示に従ってFlurolmager分子Dynamicsまたは他の等価な装置を使用して便利に定量化されることができる。この種の方法のバリエーションは、選択されたものの染色および視覚化が続く増幅産物のゲル電気泳動である染料をさし込むこと。あるいは、標識化オリゴヌクレオチドハイブリッド形成プローブ例えば蛍光プローブ例えば蛍光反響エネルギー転送FRETの調査および比色プローブは、増幅を検出するために用いることができる。要求される所で、テストされている生物学的実体のゲノム配列典型の特定の増幅は塩基配列決定によって検査されることができるかまたは増幅産物が予測されたサイズを有することを証明していることができて、予測された規制消化パターンを呈することができるか、または、正しいクローンをつくられたヌクレオチド配列に交雑することができる。本発明には、キットが具備されている。例えば、キットは、特に、または、一般に有機体に対応する核酸分子を増幅することに役立つプライマ、バッファおよびDNAを分離するための試薬およびPCRのための試薬を含むことができる。キットは検出可能的に標識化オリゴヌクレオチドを含むこともできる。そして、それは興味がある有機体に対応するポリペプチドをコード化している核酸配列に交雑する。キットは、試験サンプルと比較して検定されることができて、含まれることができる制御サンプルまたは一連の制御サンプルを含むこともできる。キットの各構成要素は個々の容器の範囲内で囲まれることができる、そして、キットを使用して実行される分析の結果を解釈するための指示とともに、さまざまな容器の全てが単一のパッケージの範囲内であることができる。あたかも個々の刊行、特許または特許出願が引用したものとすることが特に、そして、個々に示されるかのように、すべての参考文献の内容は、同じ範囲に本願明細書に引用したものとすると、特許および公開された特許出願がこの用途の全体にわたって引用した。前述の詳細な説明は理解だけの明るさのために与えられた、そして、変更態様が当業者にとって明らかであるにつれて、不必要な限界はそこから理解されてはならない。それは本願明細書において設けられている情報のいずれも従来技術であるか関連するという承認でないために現在請求する発明またはそれ、いかなる刊行も特に、または、暗に、参照されて従来技術である。さもなければ定められない限り、本願明細書において用いられるすべての専門的なおよび科学的な用語は共通に、本発明が帰属する当業者によって従来技術において理解するのと同じ意味を有する。本発明が本発明の特定の実施例と関連して記載されると共に、それが更なる変更態様ができる、そして、この用途が続いている本発明のいかなるバリエーションも、使用法または改作をカバーすることを目的とすることが理解されよう、一般に、本発明が関係する技術の範囲内で周知であるか慣習的な実行の範囲内で来る、本発明の中で、そして、現在の開示からのこの種の離脱を含む原理、そして、そのことは先に記載される基本的特徴に適用されることができる、そして、中で以下の通りに、添付のものの範囲は請求する。また、本発明の好ましい実施例の中で確かな記載されていて、そして、上で特に例証する、本発明がこの種の実施例に限られていることが意図されない、そして、いずれの種類の限界は以下の請求項だけに含まれる。"