"以下の工程を具備する、抗原を検出する方法:前記抗原を含有すると予想される第1の緩衝液に粒子を浸漬させる工程a、ここで前記粒子の表面には抗体およびマルチ銅酸化酵素CueOが固定されており、そして前記抗体は前記抗原に特異的に反応し、前記工程aにおいて得られた粒子を回収する工程b、前記工程bにおいて回収された粒子、酸化還元指示薬還元体、および第2の緩衝液を混合し、反応溶液を調製する工程c、ここで前記第2の緩衝液は、前記マルチ銅酸化酵素CueOの基質を含有し、前記第2の緩衝液は、0.3mM以上1.0mM以下の範囲に収まるイオン強度を有し、工程cにおいて得られた反応溶液に含有されるマルチ銅酸化酵素CueOの活性度を、吸光度測定法により測定する工程d、および以下の式が充足されれば前記第1の緩衝液が前記抗原を含有することが決定される工程e工程dにおいて測定された活性度>=1.4×ブランク値ここで、前記ブランク値は、前記抗原は用いられないが、前記粒子および前記第2の緩衝液は用いられる吸光度測定法により測定されたマルチ銅酸化酵素CueOの活性度を表す。請求項1の方法であって、前記粒子は金からなる、方法。請求項1の方法であって、第1の緩衝液は、トリス-塩酸緩衝液、トリス緩衝生理食塩水、またはリン酸緩衝生理食塩水である、方法。請求項1の方法であって、前記第2の緩衝液は、4.5以上5.5以下のpHを有する、方法。請求項1の方法であって、前記第2の緩衝液は、酸素およびプロトンを含有する、方法。請求項1の方法であって、第2の緩衝液は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、フタル酸緩衝液、または2-モルホリノエタンスルホン酸緩衝液である、方法。しかし、サンドイッチ法は、抗体108だけでなく、酵素110を具備しているラベル化抗体111をも必要とする。ラベル化抗体111は、抗体108と抗原109との間で生じる特異的反応の後に供給されることを必要とする。さらに、未反応のラベル化抗体111は除去されることを必要とする。本発明の目的の1つは、ラベル化抗体を用いずに、抗原を検出する方法を提供することである。本発明は、以下の工程を具備する、抗原を検出する方法に係る:前記抗原を含有すると予想される第1の緩衝液に粒子を浸漬させる工程a、ここで前記粒子の表面には抗体およびマルチ銅酸化酵素CueOが固定されており、そして前記抗体は前記抗原に特異的に反応し、前記工程aにおいて得られた粒子を回収する工程b、前記工程bにおいて回収された粒子、酸化還元指示薬還元体、および第2の緩衝液を混合し、反応溶液を調製する工程c、ここで前記第2の緩衝液は、前記マルチ銅酸化酵素CueOの基質を含有し、前記第2の緩衝液は、0.3mM以上1.0mM以下の範囲に収まるイオン強度を有し、工程cにおいて得られた反応溶液に含有されるマルチ銅酸化酵素CueOの活性度を、吸光度測定法により測定する工程d、および以下の式が充足されれば前記第1の緩衝液が前記抗原を含有することが決定される工程e工程dにおいて測定された活性度>=1.4×ブランク値ここで、前記ブランク値は、前記抗原は用いられないが、前記粒子および前記第2の緩衝液は用いられる吸光度測定法により測定されたマルチ銅酸化酵素CueOの活性度を表す。一態様において、本発明は、ラベル化抗体を用いずに、抗原を検出する方法を提供する。以下、図面を参照しながら、本発明の例示的な実施の形態が説明される。図1は、本発明による抗原を検出する方法の反応フローチャートを示す。工程a工程aでは、抗原104を含有すると予想される第1の緩衝液に粒子101が浸漬される。図3に示されるように、各粒子101は、マルチ銅酸化酵素102および抗体103を表面に具備する。以下、マルチ銅酸化酵素102は、CueOと記述される。固定される抗体103およびCueO102の量を増加させる観点から、各粒子101は10~20ナノメートルの直径を有する粒子からなることが好ましい。図1および図3に示されるように、抗体103およびCueO102が、粒子101の表面に固定されている。抗体103は抗原104と特異的に反応する。抗体103およびCueO102が容易に固定化する観点から、粒子101の材料の例は貴金属である。当該貴金属の例は、金、銀および白金である。金が好ましい。抗体103は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。抗体からFc領域またはその一部が人為的に除去されて作製された、FabフラグメントおよびFab’2フラグメントも抗体103として用いられ得る。CueO102は、酸化還元反応を触媒する酵素の一種である。図1に示されるように、CueO102は、酸素分子から構成される基質105の4電子還元を行い、そして生成物106として水が生成される反応を触媒する。CueO102の活性中心は、性質の異なる4個の銅イオンから構成され、この銅イオンの各々は、タイプ1、タイプ2、タイプ3a、およびタイプ3bと呼ばれる。大腸菌由来のCueOが用いられることが好ましい。抗体103及びCueO102を粒子101に固定する方法としては、以下の方法aが挙げられる。方法a:粒子101と、抗体103またはCueO102との間で生じる疎水性相互作用による非特異的吸着を利用する方法。本発明により検出される抗原104の例は、ウイルス、細菌、真菌、タンパク質、またはオリゴヌクレオチドである。ウイルス、細菌、または真菌が好ましい。第1の緩衝液の例は、トリス-塩酸緩衝液、トリス緩衝生理食塩水、またはリン酸緩衝生理食塩水である。好ましくは、当該第1の緩衝液は、中性付近のpHを有する。浸漬は、抗体103と抗原104との間の特異的結合をもたらす。その後、洗浄により、未反応の抗原104を含有する第1の緩衝液は、粒子101の表面から除去される。本発明では、抗原104と抗体103との特異的結合が、CueO102の酵素活性を上昇させる。工程b工程bでは、工程aにおいて得られた粒子101を回収する。より具体的には、遠心分離法によって粒子101は回収され得る。フィルタを用いて粒子101は回収され得る。工程c工程cでは、工程bにおいて回収された粒子101、酸化還元指示薬還元体、および第2の緩衝液を混合し、反応溶液を調製する。粒子101の第2緩衝液への添加に先だって、第2の緩衝液が酸化還元指示薬還元体を予め含有し得る。これに代えて、粒子101を第2の緩衝液に添加した後に、第2の緩衝液に酸化還元試薬還元体を添加し得る。第2の緩衝液は、CueO102の基質105を含有する。基質105の例は、酸素またはプロトンである。酸素およびプロトンは、市販されている一般的な緩衝液に含まれている。酸化還元指示薬の例は2,2‘‐アジノビス3‐エチルベンゾチアゾリン‐6‐スルホン酸ABTS、パラフェニレンジアミン、または2,6‐ジメトキシフェノールである。ABTSが好ましい。なぜなら、ABTS還元体は商業的に入手可能であり、容易に調達できるからである。第2の緩衝液は、4.5以上5.5以下のpHを有することが好ましい。水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、またはトリメチルアンモニウムが用いられて、第2の緩衝液のpHを調整する。第2の緩衝液の例は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、フタル酸緩衝液、または2-モルホリノエタンスルホン酸緩衝液MESである。酢酸緩衝液が好ましい。第2の緩衝液は、0.3mM以上1.0mM以下の範囲に収まるイオン強度を有することを必要とされる。0.3mM未満では、pHの安定性を確保することが困難である。1.0mMを超えると、後述される実施例からも明らかなように、第1の緩衝液に含有される抗体を検出することが困難となる。工程d工程dでは、工程cにおいて得られた反応溶液に含有されるCueOの活性度を、吸光度測定法により測定する。吸光度を測定するために、紫外可視分光光度計が用いられることが好ましい。吸光度を測定する具体的な手順を、以下、説明する。まず、工程cにおいて第2の緩衝液に粒子101を浸漬した後、吸光度を連続的に一定時間測定し、単位時間あたりの吸光度の変化量を記録する。CueOにより反応溶液に含有される酸化還元指示薬還元体は酸化される。酸化状態における酸化還元指示薬の吸光度は、還元状態における酸化還元指示薬の吸光度とは異なるので、酸化還元指示薬の変化量が吸光度から算出される。CueOの活性度は、単位時間あたりに酸化された酸化還元指示薬の変化量および測定に使用されたCueOの量から算出される。工程e工程eでは、以下の式が充足されれば第1の緩衝液が抗原を含有することが決定される。工程dにおいて測定されたCueOの活性≧1.4×ブランク値ここで、ブランク値は、抗原は用いられないが、粒子101および第2の緩衝液は用いられる吸光度測定法により測定されたCueOの活性度である。ブランク値は、工程cと平行して算出され得る。または、ブランク値は、予め算出され得る。以下の実施例1を用いて、本発明はより詳細に説明される。実施例1CueOの調製大腸菌由来K-12株のCueOは、以下に記述されるように、組換CueOとして大腸菌内で生産され、精製された。CueOの遺伝子は、大腸菌ゲノムDNALAPCR用genomeDNASet;タカラバイオ社製を用いるPCR法により増幅された。当該PCRにおいては、ヒスチジンタグをコードする塩基配列がオリゴDNAプライマーに付加され、CueOのアミノ酸配列のカルボキシル末端側にヒスチジンタグを付加した。増幅されたDNA断片は、発現ベクターpRSFDuet-1;MerckKGaA製にクローニングされたIn-FusionDry-DownPCRCloningKits;Clontechlaboratories社製。当該発現ベクターを用いて大腸菌BL21DE3;AgilentTechnologies社製が形質転換された。形質転換された大腸菌は、1mMの硫酸銅を含有するLB培地上で30°C、16時間培養された。回収した菌体よりペリプラズム画分が抽出され、ヒスチジンタグ精製カラムTALONCellThruResin;Clontechlaboratories社製および陰イオン交換カラムHiTrapQHP5mL;GEHealthcare社製を用いて、抽出液からCueOが精製された。脱塩カラムHiTrapdesalting;GEHealthcare社製を用いて、精製されたCueOの溶媒が10mMトリス-塩酸緩衝液pH7.5に置換された。その後、限外ろ過ユニットAmiconUltra-4、MWCO:30,000;Millipore社製を用いてCueO溶液は濃縮された。濃縮後のCueO溶液は、1mg/mLの濃度を有していた。CueO溶液の濃度は、BovineSerumAlbuminBSAをスタンダードとして用いて、Bradford法プロテインアッセイキットII;Bio-RadLaboratories社製に基づいて測定された。得られたCueO溶液は4°Cで保管された。抗体の調製抗ウシ血清アルブミンBovineSerumAlbumin抗体抗BSA抗体[Rabbit]、1mg/mL;BethylLaboratories社製が抗体103として用いられた。抗体は4°Cで保管された。CueO102及び抗体103の粒子101への固定20ナノメートルの直径を有する金粒子の分散液GoldColloid20nm;BBInternational社製を用いた。当該金粒子は、粒子101として機能した。この分散液12ミリリットルおよび抗体0.12ミリリットルを混合し、23°Cで40分間静置した。続いて、CueO溶液0.12ミリリットルを加え、23°Cで40分間静置した。さらに、ポリオキシエチレン20ソルビタンモノラウレートANAPOE―20;Affymetrix社製の10水溶液0.12ミリリットルを添加し、23°Cで10分間静置した。次に、粒子101に固定されなかったCueOおよび抗体を以下のように、除去した。CueO、抗体、およびポリオキシエチレン20ソルビタンモノラウレートを含有する金粒子の分散液を4本の遠心管肉厚PCチューブ3.0mL;ベックマンコールター社製に注いだ。各遠心管は、3ミリリットルの分散液を有していた。0.05ミリリットルのグリセロール>99.5;LifeTechnologies社製を各分散液の底部に沈めた。グリセロールは、クッションとして機能した。各遠心管をローターTLA―100.3;ベックマンコールター社製に入れ、遠心機OptimaTL;ベックマンコールター社製にセットした。4本の遠心管は、70,000rpm、4°Cで20分間、遠心された。各遠心管から上清を除き、濃縮された金粒子分散液約0.01ミリリットルx4本を残した。濃縮された金粒子分散液0.01ミリリットルに0.01のポリオキシエチレン20ソルビタンモノラウレートを含有するトリス-塩酸緩衝液pH:8.0、1mM、3ミリリットルを添加した。以下、この手順を手順Aという。得られた緩衝液は、以後T緩衝液と表記される。T緩衝液を添加した金粒子分散液を4本の遠心管肉厚PCチューブ3.0mL;ベックマンコールター社製に注いだ。各遠心管は、3ミリリットルの分散液を有していた。0.05ミリリットルのグリセロール>99.5;LifeTechnologies社製を各分散液の底部に沈めた。グリセロールは、クッションとして機能した。各遠心管をローターTLA―100.3;ベックマンコールター社製に入れ、遠心機OptimaTL;ベックマンコールター社製にセットした。4本の遠心管は、70,000rpm、4°Cで20分間、遠心された。各遠心管から上清を除き、濃縮された金粒子分散液約0.01ミリリットルx4本を残した。この手順を手順Bという。手順Aおよび手順Bをもう一度繰返した。このようにして濃縮された金粒子分散液を4本の遠心管から集め、T緩衝液を加えて容量を1.2ミリリットルに調整した。このようにして得られた金粒子分散液に含有されるCueOの濃度を、SDS-PAGE法により測定した。その結果は、0.02ミリグラム/ミリリットルであった。このようにして得られた金粒子分散液は4°Cで保管された。酢酸緩衝液の調製pHメータを用いてpHの値を測定しながら、酢酸に水酸化ナトリウムが加えられて、3のpHを有する1M酢酸緩衝液を調製した。当該酢酸緩衝液は5に希釈され、50mMの濃度を有する酢酸緩衝液pH:3を調製した。同様に、6のpHを有する1M酢酸緩衝液を調製した。さらに、50mMの濃度を有する酢酸緩衝液pH:6を調製した。ABTS溶液の調製22’アジノビスアンモニウム塩549ミリグラム、東京化成工業社製、以下、ABTSというを超純水で溶解して、10ミリリットルのABTS溶液100mMを調製した。以下、22’アジノビスアンモニウム塩をABTSという。ABTSは酸化還元指示薬として機能した。ABTS酢酸緩衝液の調製以下の表1に示される液体を混合し、1.0mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:3を調製した。同様に1.0mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:6を調製した。以下の表2に示される液体を混合し、0.5mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:3を調製した。同様に0.5mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:6を調製した。以下の表3に示される液体を混合し、5mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:3を調製した。同様に5mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:6を調製した。以下の表4に示される液体を混合し、10mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:3を調製した。同様に10mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:6を調製した。pHメータを用いてpHを測定しながら、1.0mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:6に1.0mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:3が添加され、1.0mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:5.5を調製した。pH調整時の温度は25°Cであった。同様に、1.0mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:4.5が調製された。同様に、0.5mM、5mM、及び10mMの濃度を有する各ABTS酢酸緩衝液pH:5.5を調製した。さらに0.5mM、5mM、及び10mMの濃度を有する各ABTS酢酸緩衝液pH:4.5を調製した。吸光度測定法によるCueOの活性度の測定CueOの活性度は、酸化還元指示薬を用いた吸光度測定法により測定された。吸光度測定のために、紫外可視分光光度計UV1600PC;島津製作所社製を使用した。測定容器として、1センチメートルの光路長を有するセルディスポーザブルセルセミミクロ;Kartell社製が用いられた。ブランク値の測定まず、ブランク値が以下のように測定された。ブランク値の測定においては、抗原は用いられなかった。ABTS酢酸緩衝液1.0mM、pH:4.5、0.98ミリリットルをセルに加えた後、当該セルを紫外可視分光光度計にセットした。次に、金粒子分散液0.02ミリリットルをセルに加えた。波長420ナノメートルにおいてABTS酢酸緩衝液の吸光度を連続的0.1秒間隔に60秒間測定した。図4は、測定結果を示す。60秒の間測定された吸光度の変化量から、以下の数式に基づいてCueOの活性度Umgを算出した。CeuOの活性度の単位について、1Uとは、60秒間に酸化されたABTSの量が1マイクロモルに等しいことを意味する。後述する表5にCueO活性度測定の結果が示される。CueOの活性度U/mg=A/εlBここで、Aは吸光度ナノメートル、εは波長420ナノメートルにおけるABTSのモル吸光係数であり、本実施例では36,000M-1cm-1であり、lは光路長であり、本実施例では1センチメートルであり、そしてBはCueOの濃度であり、本実施例では0.02ミリグラム/ミリリットルである。このようにして、ブランク値が測定された。抗原-抗体混合液の調製金粒子分散液0.6ミリリットルに、BSAによって被覆されたシリカビーズ直径300ナノメートル;25ミリグラム/ミリリットル;micromodPartikeltechnologie社製を抗原として0.06mLを加えた後、金粒子分散液を23°Cで30分間インキュベートした。抗原を捕捉した金粒子を遠心2500rpm、23°C、3分間により沈殿させ、上清を除いた。このようにして得られた沈殿にT緩衝液1ミリリットルを加え、緩衝液を懸濁した。得られた懸濁液は、第1の緩衝液に対応する。遠心2500rpm、23°C、3分間により、再度、金粒子を沈殿させた。得られた沈殿にT緩衝液1ミリリットルを加え、T緩衝液を懸濁した。遠心2500rpm、23°Cで3分間により、再度、金粒子を沈殿させた。得られた沈殿にT緩衝液0.6ミリリットルを加えて懸濁した。このようにして、抗原-抗体混合液を調製した。反応溶液の調製および吸光度の測定ABTS酢酸緩衝液1.0mM、pH:4.5、0.98ミリリットルをセルに加えた後、当該セルを紫外可視分光光度計にセットした。次に、金粒子分散液0.02ミリリットルをセルに加えた。波長420ナノメートルにおいてABTS酢酸緩衝液の吸光度を連続的0.1秒間隔に60秒間測定した。測定結果からCueOの活性度を測定値として算出した。このように算出された測定値は、後述される表5に示される。増幅率が以下の等式のように定義された:増幅率=測定値/ブランク値。1.0mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:4.5、5.0、および5.5および10mMの酢酸緩衝液濃度を有するABTS酢酸緩衝液pH:4.5、5.0、および5.5を用いて、上記と同様に増幅率が算出された。表5にそれらの結果が示されている。表5から明らかなように、酢酸緩衝液の濃度正確には、ABTS酢酸緩衝液に含有される酢酸の濃度が1.0mM以下である場合には、増幅率は1.4以上である。一方、酢酸緩衝液の濃度が5mM以上の場合には、増幅率は最大でも1.1であった。従って、増幅率が1.4以上であれば、抗原が検出されることを当業者は表5に基づいて理解するであろう。さらに、当業者は、本発明においてラベル化抗体111が用いられていないことを容易に理解し得るであろう。"