"肥満の予防及び/又は治療用のラクトバチルスラムノーサスに属する微生物を有効成分として含有する抗肥満剤であって、ラクトバチルスラムノーサスに属する微生物がラクトバチルスラムノーサスATCC53103である抗肥満剤。大人一人当たりの投与量が、ラクトバチルスラムノーサスATCC53103の菌数として108~109CFU/日である請求項1記載の抗肥満剤。肥満の予防及び/又は治療用のラクトバチルスラムノーサスに属する微生物を有効成分として含有する抗肥満飲食であって、ラクトバチルスラムノーサスに属する微生物がラクトバチルスラムノーサスATCC53103である抗肥満飲食品。請求項1又は2記載の抗肥満剤の製造のためのラクトバチルスラムノーサスATCC53103の使用。請求項3記載の抗肥満飲食品の調製のためのラクトバチルスラムノーサスATCC53103の使用。従って、通常の食事を取りながら、肥満の大きな原因となる脂質トリアシルグリセロールが体内に吸収されることを防ぐことのできる手段の開発が強く求められていた。本発明者は、脂質が体内に吸収されるメカニズムに注目し、肥満の抑制方法に関し研究を行った結果、腸内の微生物叢フローラが脂質を摂取分解すれば、結果的に人が摂取する脂質は減少し、自然に肥満が防止できることに気づいた。そして、このような脂質を摂取分解しうる微生物について、鋭意検索を行っていたところ、乳酸菌に属する微生物中にそのような作用を有するものを見出し、本発明を完成した。すなわち本発明は、ラクトバチルスロイテリに属し、以下の1ないし3のアミノ酸配列または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるリパーゼを産生する微生物を有効成分とする抗肥満剤である。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてリパーゼ活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。また本発明は、ラクトバチルスロイテリに属し、上記1ないし3のアミノ酸配列または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるリパーゼを産生する微生物を有効成分とする抗肥満飲食品である。更に本発明は、下記5ないし7で表されるアミノ酸配列または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるサブユニットで構成されるグリセロール分解酵素である。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてグリセロール分解活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。更にまた本発明は、次の8で表されるアミノ酸配列または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表される腸管付着性プロテインである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然として乳酸菌を腸管粘膜細胞近傍に付着させる活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。本発明の抗肥満剤および抗肥満飲食物は、これを摂取することで通常の食事をしながらも脂質の腸管からの吸収を防ぐことができるものである。そして、乳酸菌は古くからヨーグルトや発酵乳等の発酵食品の製造に使用されているものであり、安全性も極めて高いものであるから、安心して摂取することのできるものである。本発明の抗肥満剤および抗肥満飲食品以下、抗肥満剤等ということがあるの有効成分である微生物は、乳酸菌であるラクトバチルスロイテリに属し、上記の1ないし3のアミノ酸配列配列表の1、3、5にそれぞれ対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるリパーゼ以下。本発明リパーゼ類というを産生することのできるものである以下、本発明乳酸菌という。この本発明リパーゼ類は、腸管粘膜細胞近傍に存在する脂質トリアシルグリセロール脂肪酸とグリセロールに分解し、本発明乳酸菌中に取り込まれる。そして、図1に示すように取り込まれた脂肪酸は菌体構成要素として利用され、グリセロールは種々の代謝経路を経て二酸化炭素、アセトン、エタノール、ラクテートあるいはロイテリンとなる。本発明乳酸菌は、上記のリパーゼ類を産生する能力、すなわち、上記リパーゼをコードするヌクレオチド配列遺伝子を有する他、トランスポーターをコードする遺伝子として次の4で表されるヌクレオチド配列配列表の8に対応を有することが好ましい。また、本発明には、下記4で表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつグリセロールトランスポーター活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記4で表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグリセロールトランスポーター活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。この遺伝子は、グリセロールを本発明乳酸菌の細胞内に取り込むトランスポーターをコードするものであり、取り込まれたグリセロールは、図1のように、乳酸菌内の酵素により代謝を受ける。更に、本発明乳酸菌は、前記式5ないし7で表されるアミノ酸配列配列表の配列番号9、11、13にそれぞれ対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるサブユニットで構成されるグリセロール分解酵素を有するものであることが好ましい。このサブユニット5ないし7で構成されるグリセロール分解酵素は、pdupropanediolutilizationオペロン中で機能するグリセロールデハイドラターゼglyceroldehydrataseであり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。なお、このサブユニット5ないし7をコードするヌクレオチド配列9ないし11配列表の配列番号10、12、14にそれぞれ対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記9ないし11で表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつグリセロール分解活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記9ないし12で表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグリセロール分解活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。更にまた、本発明乳酸菌は、次の8のアミノ酸配列配列表の配列番号15に対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表される腸管付着性プロテインを保有するものであることがより好ましい。この腸管付着性プロテインは、乳酸菌を腸管粘膜細胞近傍に付着させる作用を有するものであり、これを有する本発明乳酸菌は、一定の期間腸管粘膜近傍に存在し、安定に脂質を取り込むことが可能となる。なお、このプロテインをコードする次の12で表される遺伝子配列表の配列番号16に対応を、公知の手法により他の乳酸菌に組み込むことにより、腸管内での滞在時間の長い乳酸菌を得ることが可能となる。また、本発明には、下記12で表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつ乳酸菌を腸管粘膜細胞近傍に付着させる活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記12で表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ乳酸菌を腸管粘膜細胞近傍に付着させる活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明乳酸菌は、下記式16ないし20のいずれかで表されるアミノ酸配列配列表の配列番号17、19、21、23、25にそれぞれ対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるグリセロール分解酵素を有するものであることが好ましい。このグリセロール分解酵素は、アルコールデヒドロゲナーゼalcoholdehydrogenase;図1中のADH8であり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてグリセロール分解活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。なお、このグリセロール分解酵素16ないし20をコードする下記ヌクレオチド配列32ないし36配列表の配列番号18、20、22、24、26にそれぞれ対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記32ないし36のいずれかで表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつグリセロール分解活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記32ないし36のいずれかで表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグリセロール分解活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明乳酸菌は、下記式21もしくは22で表されるアミノ酸配列配列表の配列番号27、29にそれぞれ対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるグリセロール分解酵素を有するものであることが好ましい。このグリセロール分解酵素は、アルコールデヒドロゲナーゼalcoholdehydrogenase;図1中のADH8であり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてグリセロール分解活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。なお、このグリセロール分解酵素21または22をコードする下記ヌクレオチド配列37または38配列表の配列番号28、30にそれぞれ対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記37または38で表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつグリセロール分解活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記37または38で表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグリセロール分解活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明乳酸菌は、下記式23ないし25のいずれかで表されるアミノ酸配列配列表の配列番号31、33、35にそれぞれ対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるアルデヒドデヒドロゲナーゼaldehydedehydrogenaseを有するものであることが好ましい。このアルデヒドデヒドロゲナーゼは、図1中に示すaldehydedehydrogenase9であり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。なお、このアルデヒドデヒドロゲナーゼ23ないし25をコードする下記ヌクレオチド配列39ないし41配列表の配列番号32、34、36にそれぞれ対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記39ないし41のいずれかで表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記39ないし41のいずれかで表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明乳酸菌は、下記式26で表されるアミノ酸配列配列表の配列番号37に対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるグリセリン酸キナーゼglyceratekinaseを有するものであることが好ましい。このグリセリン酸キナーゼは、図1中に示すGlyceratekinase10であり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてグリセリン酸キナーゼ活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。なお、このグリセリン酸キナーゼ26をコードする下記ヌクレオチド配列42配列表の配列番号38に対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記42で表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつグリセリン酸キナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記42で表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグリセリン酸キナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明乳酸菌は、下記式27で表されるアミノ酸配列配列表の配列番号39に対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるグリセロールキナーゼglycerolkinaseを有するものであることが好ましい。このグリセロールキナーゼは、図1中に示すGK5であり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてグリセロールキナーゼ活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。なお、このグリセロールキナーゼ27をコードする下記ヌクレオチド配列43配列表の配列番号40に対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記43で表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつグリセロールキナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記43で表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグリセロールキナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明乳酸菌は、下記式28で表されるアミノ酸配列配列表の配列番号41に対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるグリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼglycerol3phosphatedehydrogenaseを有するものであることが好ましい。このグリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼは、図1中に示すGPD6であり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてグリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼ活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。なお、このグリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼ28をコードする下記ヌクレオチド配列44配列表の配列番号42に対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記44で表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつグリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記44で表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつグリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。また、本発明乳酸菌は、下記式29ないし32のいずれかで表されるアミノ酸配列配列表の配列番号43、45、47に対応または当該アミノ酸配列において1個または複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列で表されるトリオースリン酸イソメラーゼtriosephosphateisomeraseを有するものであることが好ましい。このトリオースリン酸イソメラーゼは、図1中に示すTriosephosphateisomerase15であり、本発明リパーゼの作用により生じたグリセロールを効率よく代謝することができるものである。ここでいう、1個もしくは複数個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列とは、これらのもとの配列と等価の配列を意味し、依然としてトリオースリン酸イソメラーゼ活性を保持する配列をいう。このようなアミノ酸配列としては、80以上の相同性を示すものが挙げられる。なお、このトリオースリン酸イソメラーゼ29ないし31をコードする下記ヌクレオチド配列45ないし47配列表の配列番号44、46、48に対応を、遺伝子工学の手法により他の乳酸菌等に組み込むことにより、グリセロール分解性の高い乳酸菌を得ることも可能となる。また、本発明には、下記45ないし47のいずれかで表されるヌクレオチド配列と相同性が80以上であって、かつトリオースリン酸イソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列及び下記45ないし47のいずれかで表されるヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつトリオースリン酸イソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列も含まれる。以上説明した本発明乳酸菌は、ラクトバチルスロイテリに属する微生物を、常法に従って遺伝子解析することにより得ることができる。例えば、多くのラクトバチルスロイテリに属する微生物について、リパーゼ1ないし3をコードする下記の遺伝子13ないし15配列表の配列番号2、4、6にそれぞれ対応と相同性が高いヌクレオチド配列が存在するかどうかを調べることにより、目的とする本発明乳酸菌を得ることができる。本発明において、ストリンジェントな条件とは、例えば、6×SSC1×SSCの組成:0.15MのNaCl、0.015Mのクエン酸ナトリウム、pH7.0、0.5SDS、5×デンハート、100μg/mLの熱変性ニシン精子DNAを含む溶液中で、プローブとともに50~65°Cの温度で一晩保存しハイブリダイズさせる、という条件が挙げられる。更に、トランスポーター遺伝子4を有する本発明乳酸菌、グリセロール分解酵素サブユニットをコードする遺伝子9ないし11、グリセロール分解酵素をコードする遺伝子32ないし38、アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子39ないし41、グリセリン酸キナーゼをコードする遺伝子42、グリセロールキナーゼをコードする遺伝子43、グリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子44、トリオースリン酸イソメラーゼをコードする遺伝子45ないし47、または腸管付着性プロテインをコードする遺伝子12を有する本発明乳酸菌も上記と同様にして得ることができる。上記した本発明乳酸菌の代表的なものとしては、理化学研究所の標準株であるラクトバチルスロイテリJCM1112Tを挙げることができる。本発明の抗肥満剤は、上記の本発明乳酸菌を、経ロ投与可能で生きたまま腸管に到遠させうる生菌剤とすることにより調製される。この剤形については特に制約はなく、例えば、粉末剤、顆粒、錠剤、カプセル剤などの固形、ゼリー、ペーストなどの半固形、懸濁液、シロップなどの液状であってもよい。これらの各剤形は製薬分野で公知の方法により製造することができる。上記抗肥満剤に配合される本発明乳酸菌は、公知の乳酸菌の培養方法を適用して培養を行うことができる。この培養方法としては、常法に従い本発明乳酸菌を液体培養し、得られた培養物をそのまま利用しても、また、この培養物から遠心分離等の手段により菌体を集めて用いても、あるいは培養物を凍結乾燥して粉末状にしたものを用いてもよい。固形状である本発明肥満剤の一般的な製法としては、本発明乳酸菌を、水、デンプン、微細結晶セルロース、小麦粉、砂糖などの担体とともに配合し、所望の形態とする方法が挙げられる。上記担体も公知であり、使用形態に合わせ、適宜選択して使用することができる。より具体的には、常法により培養して得られた本発明乳酸菌の菌体を凍結乾燥粉末とし、これ砂糖と混合することにより粉末剤を調製してもよい。また、本発明乳酸菌の菌体を適切な錠剤用担体とともに混合し、これを常法に従って打錠して錠剤を得ることもできる。更に、本発明乳酸菌の湿菌体をシロップ中に懸濁してシロップ剤としてもよい。本発明の抗肥満剤の調製に当たっては、必要に応じて他の成分、例えば、他の微生物や有効成分、あるいは甘味料、香料、着色剤などを含有していてもよい。上記のようにして得られる抗肥満剤の投与量は、対象の身体的状況、例えば健康状態、体重、年齢、既往症、使用される他の成分などを考慮して、適宜決定することができるが、一般的には本発明乳酸菌の菌数として、大人一人当たりおおよそ108から109CFU/日程度前後である。また、本発明乳酸菌を使用して抗肥満飲食物を調製するには、従来公知の乳酸菌の培養方法を利用して経口摂取可能な発酵食品とすればよい。具体的には、ヨーグルトなどの発酵乳、乳酸菌飲料、発酵ソーセージなどの食品とすることができ、これらの食品の製造は、使用乳酸菌の1部または全部を本発明乳酸菌とすることにより行うことができる。また、本発明乳酸菌をより多く含む形態とし、健康食品や機能性食品とすることもできる。この抗肥満飲食品の調製に当たっては、本発明乳酸菌単独でなく他の乳酸菌を含んでいても良いことは言うまでもなく、また、食品添加物または調味料などを加えてもよい。本発明乳酸菌は、後記実施例に示すように有意な体重増加抑制効果痩身効果が認められるものであるが、その理由は、次の通りと考えられる。すなわち、図1に示すように、本発明乳酸菌は、消化管内の脂肪分を、3つのリパーゼリパーゼ1~3の働きにより、グリセロールと脂肪酸に分解する。そして分解されたグリセロールは、本発明乳酸菌の有するトランスポーターPduF;4のヌクレオチドがコードするにより菌体内に取り込み、更に菌体内のグリセロール分解酵素遺伝子PduCDE;サブユニット5ないし7で構成されるにより代謝され、ロイテリンを産生、もしくは本菌自身のエネルギー源に変換される。一方、脂肪酸は、本菌の菌体成分として利用され、これが生体内に吸収されることはない。更に、8のペプチドは、本発明乳酸菌が人や哺乳動物の腸管に定着するための機能を有し、一定時間安定して本発明乳酸菌が腸管内に存在することを可能にする。以上のように、本発明乳酸菌は安定に腸管内に存在し、積極的に脂肪を分解し、かつその代謝物を利用ないしは更に代謝するために、脂質が腸管から体内に吸収されることを抑制し、通常の食事を摂取する場合であっても肥満を防止し、痩身効果の維持と向上をもたらすことができるものである。また、本発明の一つの態様として、本発明乳酸菌の肥満症の予防または治療のための使用を含むものであり、さらに、本発明乳酸菌の抗肥満剤の製造のための使用を含むものである。さらにまた、本発明のもう一つの態様として、肥満症の患者に本発明乳酸菌を投与することを特徴とする肥満症の治療方法を含むものであり、また、本発明抗肥満剤を投与することを特徴とする肥満症の治療方法を含むものである。以下、実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例により何ら制約されるものではない。実施例1LロイテリJCM1112Tの抗肥満効果試験:下記の材料および方法により、LロイテリJCM1112Tの抗肥満効果を調べた。使用材料および試験方法:1使用実験動物SPFグレードのウイスターWistar系ラット8週齢-雄;日本SLC株式会社の体重約180~200gのものを使用し、実験室搬入日より7日間の馴致期間を設け、実験を開始した。飼育環境は、温度22±1°C、湿度55±5、照明時間12時間8時~20時に設定し、ラットは1匹/ゲージとし、滅菌蒸留水を給水瓶にて、またラット用放射線滅菌固形試料CE-2、日本クレアを給餌器にて、それぞれ自由摂取とした。用いた飼育器具はすべて高圧蒸気滅菌器により滅菌したものを使用した。飼育繁殖用粗脂肪462被験菌液の調製被験菌として、LロイテリJCM1112T理化学研究所の標準菌であり、同所より分譲を受けたおよびLラムノーサスATCC53103GG株を使用した。これら被験菌は、MRS液体培地Oxidに接種して37°Cで一晩培養し、プレ培養液とした。このプレ培養液を1量となるように新たなMRS液体培地に添加し、37°Cで18時間培養したものを被験菌液とした。3被験菌液の投与前記実験動物を各被験菌投与群および対照群1群は各5匹に分け、上記被験菌液を被験菌投与群に経口投与により投与した。被験菌液の投与は、ゾンデを用い、強制的に行った。投与菌液は用時調製し、投与菌量はラット1匹当り109CFUとした。また、コントロール群には同容量のPBSを投与した。4体重測定および一般症状の観察実験動物の体重は毎日、体重計にて測定した。一般症状は毎日観察した。症状は個体別に記録し、顕著な変化がみられた症状項目を発現個体数で表した。5結果図2に、上記ラクトバチルス属細菌をそれぞれ投与したラット群および無投与のラット群について、経時的な体重の増加の様子を示す。この図から明らかなように、無投与群に比べ、LロイテリJCM1112T投与群は、有意に体重の増加が抑制されており、この程度は、LラムノーサスATCC53103投与群より大きかった。なお、実験動物の健康状態が良好であることは、順調な増体重の推移で示されると共に、各群のラットの検診から確認した。参考例1LロイテリJCM1112Tのゲノム解析:LロイテリJCM1112Tから、次の薬品を用い、以下の方法によりDNAを取得し、ゲノム解析を行った。DNA取得方法:薬品NucleiLysissolutionWizardgenomeDNApurificationkit;Promega社製生理食塩水50mMEDTApH7.050mg/mlリゾチーム溶液使用当日に、所定量のリゾチームを、TE緩衝液、025MTris-HClpH8.0又は10mMTris-HClpH8.0/10mMEDTA/0.5SDSで溶解し、調製する2mg/mlEDTAフェノールクロロホルムイソアミルアルコール25:24:1混液以下、PCIと略すクロロホルムイソアミルアルコール24:1混液以下、CIAと略す99エタノール70エタノールTE緩衝液方法1.LロイテリJCM1112Tを、静置条件下、37°Cで24時間培養し、得られた培養液50mlを3500rpmで、15分間遠心分離後、生理食塩水で懸濁する。2.1で得られた懸濁液を3500rpmで、15分間遠心分離し、上清を捨て50mMEDTA5mlで懸濁する。3.2で得られた懸濁液に、50mg/mlリゾチーム溶液を200μlを加え、37°Cで60分間インキュベートする。この際、エアーインキュベーターを使用する場合には、インキュベート時間を2-3時間とする。4.インキュベート後、3500rpmで15分間遠心分離し、上清を捨てる。5.4で得た沈殿物に、NucleiLysisSolution5mlを加え、80°Cで10分間インキュベートする。6.2mg/mlRNaseA1μlを加え、37°Cで45分間インキュベートする。7.PCI10mlを加え、混合し、3,500rpmで15分間遠心分離する。8.上清を新しいチューブに移し、さらにPCI10mlを加え、混合する。9.同様の操作を合計3回繰り返す。タンパク質層が確認できなくなるまで行う10.CIA10mlを加え、おだやかに混合後、3500rpmで15分間遠心分離する。フェノールの除去11.上清を新しいチューブに移し、エタノール沈殿を行う。12.11で得た沈殿物を、TE緩衝液1mlに溶解し、乳酸菌DNAを得る。ゲノム解析方法:上記のようにして得たDNAについて、構造遺伝子予測とアノテーションを行った。この構造遺伝子予測等は、GENOMEGAMBLERSakiyamaTTakamiHOgasawaraNKuharaSKozukiTDogaKOhyamaAHorikoshiKAnautomatedsystemforgenomeanalysistosupportmicrobialwholegenomeshotgunsequencingBiosciBiotechnolBiochem646706732000、GLIMMER20SalzbergSLDelcherALKasifSandWhiteOMicrobialgeneidentificationusinginterpolatedMarkovmodelsNucleicAcidRes265445481998およびBLASTprogramblastpAltschulSFGishWMillerWMyersEWandLipmanDJBasiclocalalignmentsearchtoolJMolBiol2154034101990の結果を併用して行った。また、ドメイン構造の解析は、INTERPROMulderNJApweilerRAttwoodTKBairochABarrellDBatemanABinnsDBiswasMBradleyPBorkPBucherPCopleyRRCourcelleEDasUDurbinRFalquetLFleischmannWGriffithsJonesSHaftDHarteNHuloNKahnDKanapinAKrestyaninovaMLopezRLetunicILonsdaleDSilventoinenVOrchardagniMPeyrucDPontingCPSelengutJDServantFSigristCJVaughanRandZdobnovEMTheInterProDatabase2003bringsincreasedcoverageandnewfeaturesNucleicAcidsRes313153182003;httpwwwebiacukinterproを、分子系統樹の作成には、CLUSTALWThompsonJDHigginsDGandGibsonTJCLUSTALWimprovingthesensitivityofprogressivemultiplesequencealignmentthroughsequenceweightingpositionspecificgappenaltiesandweightmatrixchoiceNucleicAcidsRes22467346801994;httpclustalwgenomeadjpを使用した。更に、使用したDNAおよびアミノ酸シークエンスは、NationalCenterofBiologicalInformationおよびKEGGdatabaseから、ラクトバチルス属細菌のドラフトシークエンスはDOEJOINTGENOMEINSTITUTEJGIhttpwwwjgidoegovJGImicrobialhtmlindexhtmlから入手した。以上の情報に基づき、13ないし15で示される遺伝子は、それぞれリパーゼをコードするものと、4で示される遺伝子は、トランスポーター遺伝子をコードするものと、9、10および11で示される遺伝子は、グリセロール分解酵素をコードするものと、12で示される遺伝子は、接着性遺伝子であることがそれぞれ判明した。また、32ないし38で示される遺伝子はグリセロール分解酵素をコードし、39ないし41で示される遺伝子はアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードし、遺伝子42で示される遺伝子はグリセリン酸キナーゼをコードし、43で示される遺伝子はグリセロールキナーゼをコードし、44で示される遺伝子はグリセロール3リン酸デヒドロゲナーゼをコードし、45ないし47で示される遺伝子はトリオースリン酸イソメラーゼをコードするものと判明した。参考例2グリセロール分解遺伝子の増幅:参考例1で精製されたDNAをテンプレート、次のヌクレオチド配列をプライマーとし、下記反応液を使用してPCRを行った。なお、PCR条件も下に示す。使用プライマーpduCDEF:CACCATGAAACGTCAAAAACGATTTpduCDER:AAAAGCTTAGTTATCGCCCTTTAGCPCR反応液テンプレートDNA:1μlKOD-plus:1μl10×KOD-plus緩衝液:5μldNTP各2mM:5μlプライマー20mm:各1μlMgSO425mm:2μl脱イオン水D.W.:34μlPCR条件194°Cで3分間保持する。294°Cで15秒間保持する。356°CTmで30秒間保持する。468°Cで3分30秒間保持する。52ないし4を30サイクル行う。64°Cで保存する。参考例3Lロイテリ由来リパーゼ遺伝子および接着性遺伝子の増幅:プライマーを下記のものに代える以外は参考例2と同様にしてPCRを行ない、リパーゼ遺伝子および接着性遺伝子を増幅した。使用プライマーリパーゼ15’ATGGTGAAATTGATGACAAT5’TTATTTAAATTGATCGCCAAリパーゼ25’TTGATTTATGTTTTAAAAGA5’CTATGACCGAGTTAAATACTリパーゼ35’ATGGAAATTAAAAGTGTTAA5’CTAAATTAAATTCAGTTCAG接着性遺伝子5’ATGTTCGGTCACGATGGCCG5’TCAAATTTCAGAAGGATCAT"