"蛋白質を含む試料中の微生物数を蛍光染色法で測定する方法において、該試料に対して等電点沈殿による除蛋白を行った後に、該除蛋白試料中の微生物の生菌数を蛍光染色法で測定することを特徴とする微生物の生菌測定方法。蛋白質が酸沈殿性蛋白質を含むものである請求項1記載の測定方法。微生物が大腸菌又は大腸菌群である、請求項1記載の方法。試料中の微生物の生菌数が10の3乗CFU/ml未満である場合に、蛋白質を含む試料を培養増殖させる工程を加える、請求項1記載の方法。蛋白質を含む飲食品の製造過程において、請求項1~4いずれか1項に記載の方法により微生物の生菌測定を経ることを特徴とする、蛋白質を含む飲食品の製造法。しかしながら、非特許文献2の方法の場合、豆乳や牛乳のような蛋白質が多い食品では、食品由来のブランクの発光量が上昇し、検出感度が悪い傾向にある。また特許文献1及び非特許文献3の方法の場合も、単に蛍光染色法を適用するだけでは、牛乳などエマルジョン状態を基本とするサンプルや、濁りが多いサンプルの場合はブランクの数値が高くなり、感度が落ちるという問題点がある。さらに、特許文献2の方法の場合、エマルジョン粒子を細分化あるいは溶解するための界面活性剤の使用により細菌が死滅するため、死菌としてしか測定できないという問題点もある。このように、蛋白質を含む濁りが多い試料中の微生物を蛍光染色法で測定する場合、感度の低下や生菌として測定できない等の課題があり、微生物を生菌として感度良く測定することが困難な状況であると本発明者は認識する。上述の点に鑑み、本発明の目的は、蛋白質を含む試料中の微生物の測定において、微生物を生菌として迅速に、また簡易に感度良く検出する方法、あるいは生菌としての微生物数を測定する方法を提供することにある。前記課題を解決するために、本発明者は鋭意検討を行ったところ、蛋白質を含む試料を予め等電点沈殿による除蛋白を行った後に試料中の微生物を蛍光試薬による生菌染色することで、課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。さらに、試料中の微生物が少ない場合は試料中の微生物を培養増殖させる工程を上記方法に付加することによって、より測定感度を高めることができることを魅致した。すなわち本発明は1蛋白質を含む試料中の微生物数を蛍光染色法で測定する方法において、該試料に対して等電点沈殿による除蛋白を行った後に、該除蛋白試料中の微生物の生菌数を蛍光染色法で測定することを特徴とする微生物の生菌測定方法、2蛋白質が酸沈殿性蛋白質を含むものである前記1記載の測定方法、3微生物が大腸菌又は大腸菌群である、前記1記載の方法、4試料中の微生物の生菌数が10の3乗CFU/ml未満である場合に、蛋白質を含む試料を培養増殖させる工程を加える、前記1記載の方法、5蛋白質を含む飲食品の製造過程において、前記1~4いずれか1項に記載の方法により微生物の生菌測定を経ることを特徴とする、蛋白質を含む飲食品の製造法、に関するものである。本発明の測定方法によれば、蛋白質を含む濁りの多い試料であっても、試料中の微生物を生菌として迅速に検出し、あるいは微生物数を生菌として測定することが可能となる。本発明の微生物の生菌測定方法は、蛋白質を含む試料中の微生物数を蛍光染色法で測定する方法において、該試料に対して等電点沈殿による除蛋白を行った後に、該除蛋白試料中の微生物の生菌数を蛍光染色法で測定することを特徴とする。以下、本発明方法の実施形態について具体的に説明する。蛋白質を含む試料本発明の測定方法の対象となる試料は、蛋白質を含む試料である。例えば蛋白質を含む飲食品が例示され、試料の形態は特に限定されず、例えば液体状、ペースト状、半固体状又は固体状の試料のいずれでも適用することができる。液体状の試料の場合は殺菌処理した蒸留水で希釈して用いてもよく、固体状の試料の場合も殺菌処理した蒸留水に溶解または分散させ、適宜希釈したものを用いることができる。試料中に含まれる蛋白質としては、等電点沈殿によって沈殿する、いわゆる酸沈殿性蛋白質を含むことが好ましい。酸沈殿性蛋白質としては、大豆、エンドウ、菜種、小麦、とうもろこし等の植物性材料に含まれる蛋白質や乳等の動物性材料に含まれる蛋白質が挙げられ、具体的には大豆等に含まれるグリシニン、β-コングリシニン、オレオシンや、乳等に含まれるカゼイン等が挙げられるが、酸沈殿性の性質を有する蛋白質であればその起源や種類は限定されない。例えば蛋白質と脂質が会合しエマルジョン化した状態であること等により濁りの多い試料は、本発明において特に好適な測定対象として用いられる。このような試料の例としては、豆乳、粉末状植物性蛋白などの植物性蛋白製品や、牛乳、クリームなどの動物性蛋白製品、あるいはそれらの製造途中の中間製品等が挙げられる。試料の濁りの程度としては、試料を直接蛍光染色法に適用するとブランク値が高くなり、測定感度が低下してしまうレベルの濁度である場合に好適である。より具体的には、分光光度計を用いて試料を通過した透過光の波長660nmにおける吸光度OD660の値を濁度とした場合に、濁度が0.2以上、さらには0.5以上、特に1以上である場合に好適である。なお、OD660の測定は、工業用水試験法JISK0101の92透過光濁度において公定される方法を用いる。微生物本発明の測定方法において測定対象となる微生物は特に限定されず、一般細菌や大腸菌群の他、乳酸菌、ビフィズス菌、納豆菌、大腸菌、ウェルシュ菌、サルモネラ菌等の特定の細菌や、酵母、カビなどである。微生物の総数ではなく、特定の種類の微生物を選択的に測定したい場合は、各種微生物の選択培地の組成を参考に、非選択微生物の生育抑制物質を適宜選択し、試料に添加して選択増殖後に測定することができる。例えば大腸菌群を選択的に測定したい場合は、大腸菌群以外の微生物の生育抑制物質を添加する。大腸菌群以外の微生物の生育抑制物質としては、大腸菌群に比べ大腸菌群以外の微生物の生育をより抑制するものであればよく、例えば胆汁末、胆汁酸塩、デオキシコール酸、デオキシコール酸塩例えば、ナトリウム塩、ラウリル硫酸塩例えば、ナトリウム塩、ブリリアントグリーン、クリスタルバイオレットまたはメチレンブルーが好ましく用いられる。これらは、いずれか1種を用いてもよく2種以上を併用してもよい。また、特定の微生物のみを検出する試薬を用いても良い。特有の核酸配列に結合する蛍光標識プローブを利用したFISH法などが利用可能である。この場合は微生物の選択的な増殖は不要である。微生物の培養増殖本発明の測定方法に供する試料は必要により事前に培養し、増菌させてから測定に供することができる。この培養増殖工程は試料中の微生物の生菌数が少なく蛍光染色法において感度良く測定できない場合に本測定方法に加えるのが好適である。具体的には、試料中の微生物の生菌数が10の3乗CFUColonyFormingUnitの略ml未満、さらには10の2乗CFUml未満のレベルである場合は該工程を本測定方法に加えるのが好ましい。本測定方法においてこの培養増殖工程を加える段階は、等電点沈殿による除蛋白を行う前、あるいは除蛋白の後とすることができる。なお、特定の微生物を選択的に測定する場合は、上述の通り目的の微生物に応じた生育抑制物質の共存下で試料を培養して、培養後試料を得る。上記の培養増殖工程を加える場合の培養条件は、測定対象とする微生物の生育に適した条件とすることが好ましい。具体的には大腸菌群の場合、培養温度は35~37°Cが好ましい。培養時間は長いほど微生物の数が増え測定感度が向上する。一方で迅速に測定を行うことが求められる場合には測定感度が低下しないレベルでなるべく短い方が好ましい。例えば、試料の培養直前の初発菌数が約10CFU/mlの場合、培養時間を4時間以上とすれば、菌数を10の3乗CFU/ml以上とすることができる。菌数が10の3乗CFUml以上になると蛍光染色法による測定感度が向上し、より精密な測定結果を得ることができる。上記培養増殖工程の追加は、大腸菌や大腸菌群のように生菌数の測定よりむしろ生菌の検出自体が目的となる場合に特に有効である。また生菌数の測定を目的とする場合には、特定の培養条件において標準試料を用いて培養前後の生菌数の相関を取る方法等によって、培養工程前の真の生菌数を予測することも可能である。等電点沈殿による除蛋白本発明の測定方法に供する試料に対し、上述の通り必要により培養後、等電点沈殿による除蛋白処理を行い、試料から測定を阻害する蛋白質成分を除去する。具体的には試料に適当な酸を加え、試料のpHを蛋白質の等電点付近に調整するが、ここで用いる酸は特に制限されない。例えば、塩酸,硫酸,リン酸等の鉱酸や、クエン酸,リンゴ酸,酒石酸,乳酸,グルコン酸,フマル酸,コハク酸,酢酸,蓚酸などの有機酸を挙げることができ、2種以上の酸を混合して用いてもよい。好ましくはpH3~6、より好ましくはpH4~5に調整することで効率良く蛋白質を沈殿させることができる。このように、等電点付近のpH調整を行うことにより、微生物を死滅させることがなく、生菌の状態で微生物を含む除蛋白試料を回収することができる。等電点沈殿させた蛋白質成分の除去は微生物をろ過液に回収するのに適したフィルターでろ過するなどして行うことができる。好ましくは細孔径が5~20μm、更に好ましくは10~15μm程度のメンブレンフィルターを用いて蛋白質を除去し、微生物を含んだ試料液をろ過液として回収する。フィルターの細孔径は目的の微生物の大きさに応じて適したサイズのものを選択することができる。得られた除蛋白後の試料は、濁度OD660が0.2未満、好ましくは0.1以下となることが適当である。蛍光染色法による微生物の生菌数測定本発明の測定方法は、前記除蛋白後の試料を用いて試料中の目的とする微生物を蛍光試薬による生菌染色法で測定する。ここでの生菌染色法は、例えば試料液を更にろ過して微生物を細孔径が0.2~0.4μmのメンブレンフィルター上に捕捉し、フィルター上に捕集された微生物を蛍光染色試薬で染色し、顕微鏡等で観察することにより行うこができる。本発明で生菌を染色する試薬として6CFDAが挙げられる。6CFDA染色法の原理は以下の通りである。6CFDAは細胞内に浸透し、細胞内のエステラーゼにより蛍光性の6carboxyfluoresceinに加水分解される。この6carboxyfluoresceinは生細胞内に蓄積される。したがってエステラーゼ活性を持った生菌に青色励起光を照射した場合、6carboxyfluorescein由来の緑色蛍光を発する。死細胞ではエステラーゼ活性を持たないため、6CFDAは加水分解されず、蛍光性の6carboxyfluoresceinは生じない。生菌染色のための試薬は6CFDAに限らず、呼吸活性を指標とする試薬等の他の様々な試薬を選択することができる。また、フィルター上に捕集された微生物を数時間培養することでマイクロコロニーを形成させた後に蛍光染色を行ってもよい。微生物の計測はフィルター上に捕集された微生物を蛍光顕微鏡で観察することでされるが、微生物自動計測装置、すなわち光源、光源から発せられた励起光波長を取り出す分光フィルター、励起光によって励起された微生物が有する蛍光のみを取り出す蛍光分光フィルター、受光部、光電変換素子、微生物判断手段判断方法をプログラミングされたマイコン等で構成される装置により自動計測解析が可能であり、光洋産業株式会社製バイオプローラが好適に例示される。以上の通り、本発明の測定方法の適用により、従来にない簡易な操作で、従来よりも短時間で蛋白質を含む試料中の微生物の生菌の有無の判定検出や生菌数の測定ができるようになった。したがって本方法は例えば牛乳や豆乳など、比較的賞味期限が短いために製造後できるだけ速やかに出荷する必要がある製品の微生物検査に特に有用である。さらに、本発明の上記測定方法を利用した牛乳や豆乳等の蛋白質を含む飲食品の製造法を提供する。すなわち、上記測定方法を蛋白質を含む飲食品の製造過程において導入することができ、該製造過程においてサンプリングした試料を上記測定方法で微生物の生菌測定を経て、生菌の有無あるいは生菌数を品質管理指標とした該飲食品を製造することができる。以下、実施例を挙げて本発明の実施態様をより具体的に説明する。■実施例1豆乳における大腸菌の検出豆乳に大腸菌を接種し、本方法により大腸菌を検出することが可能であるかを調べた。なお、豆乳は濁度OD660が1を超えるものである。豆乳不二製油製、固形分10重量、蛋白質5重量400mlに、生育抑制物質としてデオキシコール酸を1gL、ブリリアントグリーンを133mgLとなるように加え混合した。当該混合液に大腸菌であるエシェリチアコリEscherichiacoliNBRC3301を10CFU/mlになるように添加して、37°Cで培養し、経時的に培養液をサンプリングした。サンプリングした試料40mlに濃塩酸100μlを添加し、混合攪拌した。45°Cで10分間保持した後に等電点沈殿した蛋白質成分を細孔径10μmのメンブレンフィルターアクロディスクバーサポアメンブレン:ポール社を用いてろ過除去した。ろ過液1mlを専用ろ過ファネルFJ-VKF03キット:光洋産業株式会社製で更に吸引ろ過し、フィルター上に大腸菌を捕捉した。さらに1mlの生理食塩水を用いてフィルター洗浄吸引ろ過を行なった。次に、蛍光染色試薬6CFDA:シグマアルドリッチ社150μgmlを100μlフィルター上に添加し、3分間放置後、吸引ろ過を行い、さらに蒸留水200μlでフィルター洗浄吸引ろ過した。そしてこのフィルター上の微生物を光洋産業製バイオプローラで生菌数として測定し、生菌の検出の有無を評価した。その結果、培養4時間で生菌数は10の3乗CFUmlまで上昇が確認され、エシェリチアコリが生菌として検出された。■実施例2豆乳における大腸菌群の検出豆乳に大腸菌以外の大腸菌群を接種し、本方法により大腸菌群を検出することが可能であるかを調べた。実施例1と同様にして、大腸菌の代わりに大腸菌群であるクレブシエラニューモニアKlebsiellapneumoniaNBRC14950を生理活性物質を加えた豆乳に添加して培養し、経時的に培養液をサンプリングし、得られた試料を等電点沈殿によって除蛋白した後、試料中の微生物の生菌数を測定し、生菌の検出の有無を評価した。その結果、培養6時間で生菌数は10の3乗CFUmlまで上昇が確認され、クレブシエラニューモニアが生菌として検出された。■実施例3豆乳における大腸菌の検出2市販の大腸菌群用選択培地であるBGLB培地日本製薬製80gを水1Lに溶解して、100°C、10分間滅菌したものを調製した。実施例1と同じ豆乳200mlに、上記液体培地を200ml混合した混合液中の各最終濃度は、胆汁末1重量、ブリリアントグリーン66ppm。当該混合液に大腸菌であるエシェリチアコリEscherichiacoliNBRC3301を10CFU/mlになるように添加した。以下実施例1と同様にして培養し、経時的に培養液をサンプリングし、得られた試料を等電点沈殿によって除蛋白した後、試料中の微生物の生菌数を測定し、生菌の検出の有無を評価した。その結果、培養4時間で細菌数の上昇が確認され、エシェリチアコリが生菌として検出された。■実施例4牛乳における大腸菌の検出牛乳に大腸菌を接種し、本方法により大腸菌を検出することが可能であるかを調べた。なお、牛乳も濁度OD660が1を超えるものである。実施例1と同様にして、豆乳の代わりに無脂肪乳高梨乳業製、固形分10重量、蛋白質4重量200mlを用いて培養し、経時的に培養液をサンプリングし、得られた試料を等電点沈殿によって除蛋白した後、試料中の微生物の生菌数を測定し、生菌の検出の有無を評価した。その結果、牛乳においても培養4時間で細菌数の上昇が確認され、エシェリチアコリが生菌として検出された。■実施例5粉末状分離大豆蛋白製品における大腸菌の検出粉末状分離大豆たん白製品の水溶液に大腸菌を接種し、本方法により大腸菌を検出することが可能であるかを調べた。なお、本水溶液も濁度OD660が1を超えるものである。実施例1と同様にして、豆乳の代わりに粉末状分離大豆蛋白製品不二製油製、固形分95重量、蛋白質86重量の10水溶液200mlを用いて培養し、経時的に培養液をサンプリングし、得られた試料を等電点沈殿によって除蛋白した後、試料中の微生物の生菌数を測定し、生菌の検出の有無を評価した。その結果、粉末状分離大豆たん白製品の水溶液においても培養4時間で細菌数の上昇が確認され、エシェリチアコリが生菌として検出された。■比較例1従来法による豆乳における大腸菌の検出実施例3と同様にして、生理活性抑制物質を含む豆乳とBGLB培地との混合液にエシェリチアコリを添加して培養し、経時的に培養液をサンプリングした。サンプリングした試料1mlにキレート剤ヘキサメタリン酸1重量水溶液100μlを添加し、よく混合攪拌した。次にこの混合溶液から100μlを採取し、界面活性剤川研ファインケミカル製アミゾール05重量溶液800μl添加し混合した後、引き続き酵素液Sigma社ProteasefromBacilluslicheniformisP4860を蒸留水で10倍希釈したもの1mlを加え、55°C、5分間処理した。この処理液全量を専用ろ過ファネルFJ-VKF03キット:光洋産業株式会社製で吸引ろ過した。さらに3mlの生理食塩水を用いてフィルター洗浄吸引ろ過を行なった。以下、実施例1と同様に蛍光染色し、試料中の微生物の生菌数を測定し、生菌の検出の有無を評価した。その結果、培養を4時間~8時間行っても細菌数の上昇を確認することはできず、エシェリチアコリが生菌として検出することができなかった。この原因は、界面活性剤や酵素液の処理によりエシェリチアコリが死滅してしまったためと考えられる。"