第一抗体調製物に第一限外濾過を施して第二抗体調製物を提供し;第二抗体調製物にダイアフィルトレーションを施して、ダイアフィルトレーションされた中間抗体調製物を提供し;ダイアフィルトレーションされた中間抗体調製物に第二限外濾過を施して、第三抗体調製物を提供することを含み;第一限外濾過、第二限外濾過及びダイアフィルトレーションの一以上が約30°C~約50°Cで達成される、高度に濃縮された抗体組成物を調製するための方法。第一限外濾過、第二限外濾過及びダイアフィルトレーションの一以上が約35°C~約50°Cで達成される請求項1に記載の方法。第一限外濾過、第二限外濾過及びダイアフィルトレーションの一以上が約45°C以上で達成される請求項1に記載の方法。第一限外濾過、第二限外濾過及びダイアフィルトレーションの一以上が、約45°Cプラス又はマイナス5°Cで達成される請求項1に記載の方法。第一抗体調製物が、リットル当たり約0.1~約10グラムの抗体濃度を有している請求項1に記載の方法。第一抗体調製物が、リットル当たり約1~約5グラムの抗体濃度を有している請求項1に記載の方法。第二抗体調製物が、リットル当たり約10~約50グラムの抗体濃度を有している請求項1に記載の方法。第二抗体調製物が、リットル当たり約20~約40グラムの抗体濃度を有している請求項1に記載の方法。第三抗体調製物が、リットル当たり約50~約250グラムの抗体濃度を有している請求項1に記載の方法。第三抗体調製物が、リットル当たり約100~約230グラムの抗体濃度を有している請求項1に記載の方法。第三抗体調製物が、リットル当たり約170~約200グラムの抗体濃度を有している請求項1に記載の方法。ダイアフィルトレーションされた中間抗体調製物と第三抗体調製物が、限外濾過保持液を含む請求項1に記載の方法。中間抗体調製物がリットル当たり約25~約35グラムの抗体濃度を有し、第三抗体調製物がリットル当たり約170~約200グラムの抗体濃度を有する請求項1に記載の方法。抗体調製物が抗IgE抗体を含む請求項1に記載の方法。方法が約1~10時間で達成される請求項1に記載の方法。方法が約2~5時間で達成される請求項1に記載の方法。方法が約3時間で達成される請求項1に記載の方法。第一及び第二限外濾過が、約5~約50キロダルトンの公称孔径を有する限外濾過膜を用いて達成される請求項1に記載の方法。第一及び第二限外濾過が、約10~約30キロダルトンの公称孔径を有する限外濾過膜を用いて達成される請求項1に記載の方法。第一抗体調製物が、約100~約200キロダルトンの見かけ分子量を有する抗体を含む請求項1に記載の方法。第一抗体調製物が、約150キロダルトンの見かけ分子量を有する抗体を含む請求項1に記載の方法。第一限外濾過により第一抗体調製物が濃縮されて、リットル当たり約30グラムの抗体濃度を有する第二抗体調製物が提供され、第二限外濾過により中間抗体調製物が濃縮されて、リットル当たり約170~約200グラムの抗体濃度を有する第三抗体調製物が提供される請求項1に記載の方法。第一限外濾過と第二限外濾過が同じ限外濾過膜を用いて達成される請求項1に記載の方法。第一限外濾過と第二限外濾過が、再生セルロース複合体限外濾過膜で達成される請求項1に記載の方法。ダイアフィルトレーションにより、一定容量、一定濃度又はその双方でのバッファー交換が達成される請求項1に記載の方法。ダイアフィルトレーションにより、約5~約15倍容量のバッファー交換が達成される請求項1に記載の方法。ダイアフィルトレーションにより、約8倍以上の容量のバッファー交換が達成される請求項1に記載の方法。ダイアフィルトレーションにより、第一バッファーが第二バッファーに交換される請求項1に記載の方法。第一バッファーが、水性塩化ナトリウムとTRISバッファーの混合物を含み、第二バッファーが、水性塩化ヒスチジンと塩化アルギニンの混合物を含む請求項28に記載の方法。第一限外濾過、第二限外濾過、及びダイアフィルトレーションが、限外濾過膜を通るタンジェンシャルフロー濾過により達成される請求項1に記載の方法。第一限外濾過、第二限外濾過、及びダイアフィルトレーションが、同じ限外濾過膜を通るタンジェンシャルフロー濾過により達成される請求項1に記載の方法。第三抗体調製物の収率が、第一抗体調製物における抗体の重量の約70重量を越える請求項1に記載の方法。第三抗体調製物の収率が、第一抗体調製物における抗体の重量の約80~約100重量である請求項32に記載の方法。第一限外濾過が、約0.5L/分/ft2~約5L/分/ft2の再循環速度を有する請求項1に記載の方法。限外濾過及びダイアフィルトレーションが、約10~約50psiの膜間圧で達成される請求項1に記載の方法。約100CFU/mL未満の検出可能なバイオバーデンを有する抗体濃縮液が提供される請求項1に記載の方法。第一タンパク質混合物に第一限外濾過を施して第二タンパク質混合物を提供し;第二タンパク質混合物にダイアフィルトレーションを施して、ダイアフィルトレーションされたタンパク質混合物を提供し;ダイアフィルトレーションしたタンパク質混合物に第二限外濾過を施して、第三タンパク質混合物を提供することを含み、第一限外濾過、ダイアフィルトレーション、及び第二限外濾過の一以上が約30°C~約50°Cで達成されるタンパク質の濃縮方法。次の実施例は、上述した開示を使用する方法をさらに詳細に記載し、本明細書の種々の側面を実施するのに考慮される最良の形態を説明するためのものである。これらの実施例は、この開示の真の範囲を限定するものでは決してなく、むしろ例証目的のために提供されると理解される。実施例1rhuMAbE25の高濃度製剤化パイロット規模のUFシステムを使用して、rhuMAbE25を濃縮/製剤した。MilliporePelicon限外濾過/ダイアフィルトレーションシステムを、5.7平方フィート、10000ダルトンの再生セルロース複合膜を用いて構築した。システムは、膜ホルダー、WaukeskawModel6ロータリーローブ供給ポンプ、12の316Lステンレス鋼製再循環配管、及び再循環容器からなる。圧力表示器/トタンスミッターを、膜ホルダーの入口、出口及び透過部に配した。流量メーターを膜ホルダーの入口と透過部に配した。背圧調節バルブを膜ホルダーの出口に位置せしめ、保持液圧を制御し、膜間圧を達成した。40リットルの316Lステンレス鋼製のジャケット装備タンクを再循環タンクに使用した。このタンクにレベル表示器、頂部搭載攪拌機、ボルテックスブレーカー、及び底弁を取り付けた。温度制御は、タンクのジャケットに供給する温度調節されたグリセロールの使用で達成した。この運転中の供給液の流量は、一定流量2.85L/分に設定した。全ての使用前及び使用後の操作中、保持液圧の制御は、10psigの定数に設定した。限外濾過及びダイアフィルトレーション操作中、システムではCwall制御スキームを使用して、膜を通過する流束を制御した。例えばRvanReisらConstantCwallUltrafiltrationProcessControlJofMembraneScience130123140を参照のこと。プロセス開始前に、システム保存溶液を、まず2L/ft2の精製水と共に、ついで1L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーと共に、単一のドレインへのパスモードで流した。フラッシング後、0.5L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーを10分間、再循環させることにより、システムを平衡にした。再循環溶液のpHを調べて、平衡を確認した。ついで、タンク中のレベルを測定可能な最小値まで低下させ、入ってくるタンパク質プールの希釈度を最低にした。上述したQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、3.2gE25/Lであることが測定され、43.1L容量を有していた。タンパク質は、25mMのTRISバッファーと約200mMのNaClの溶液中に存在し、pHを6.2に調節した。運転を開始するため、タンパク質プールを再循環容器に移した。容器中において、頂部搭載のインペラでプールを攪拌し、温度を周囲温度に維持した。プロセス実施中、プールはUF1方式で50gE25/Lまで濃縮された。ダイアフィルトレーションの開始時において、再循環容器の温度設定点は40°Cまで上昇した。温度の上昇及び制御は、タンクの外側ジャケットに温グリコールを流通させることにより影響を受けた。ついで、プールを8ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。システムから出て行く濾液の流量に、再循環タンクに移ってくるバッファー溶液の流量を一致させることにより達成される一定容量で、ダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーション終了時、プールをUF2モードでさらに濃縮した。この段階はまた40°Cの高温設定点を使用して実施した。この最終濃度の目標は110g/Lであった。これは、供給流量を低下させる必要なく達成された。次に、供給ポンプを制御して、供給流路にわたって510psigの圧損を維持する低圧損混合を実施した。サンプルを再循環タンクから取り出し、約120g/Lの最終バルク濃度が測定された。表1に、UF1、DF及びUF2のスループット及び流束の結果を纏める。図2は、UF1、DF、UF2を含むプロセスの種々の段階又は方式中における、供給液の流量、タンク温度、供給dP、TMP、及び濾液の流量パラメータに対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図3は、E25濃度、流束、及びTMPに対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図4は、37°CでのUF1及びUF2に対して観測された圧損対タンパク質濃度に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。タンパク質プールを一連の工程により回収した。まず、再循環タンクのプールを、ロータリーローブ供給ポンプを使用し、Millipac200、0.22ミクロンの滅菌グレードフィルターを通してタンクからポンプ移送した。次に、タンパク質溶液を保持液ラインの最も高い位置に5psigの窒素ガスを吹き込んで、配管及び膜装置から排出した。最終段階は、5psigの窒素ガスをまた使用するタンクと供給ラインへのガス吹き込みであった。限外濾過、ダイアフィルトレーション、又は回収工程の一又は複数で使用される高温が粘性効果を低下させるため、周囲温度で実施する場合、実施例1と比較して生成物回収度が改善されていると考えられた。例えば、生成物回収中に温度制御を停止すると、この操作中にシステムはゆっくりと冷却され、膜装置からの回収が困難になった。あるいは、回収は、まず膜ホルダーから、ついで再循環容器から実施することができる。回収中の損失量を測定するために、1.74LのDF用バッファーをシステムに添加し、約5分再循環させ、上述したものと同じ順序を使用して回収した。ついで、この容量を、他のプールと共に、タンパク質濃度について分析した。結果を表2に纏める。プロセシング後、膜を、0.1NのNaOHを使用し、1L/ft2の単一パスフラッシュと、続く0.5L/ft2の30分の全再循環によって再生させた。これに、1L/ft2のPWフラッシュを続けた。これに、30分間、300ppmのMinncare溶液の全再循環を続けた。1L/ft2のPWでシステムを再度フラッシングし、最終的に0.1NのNaOHで15分間再循環させ、保存した。回収したプールを80gE25/Lまで希釈し、50mMのヒスチジン/150mMのトレハロース/0.02のポリソルベート20/pH6.0の最終製剤に調整した。生成物の品質を、入ってきたQプールと最終的に回収されたバルクの双方について、サイズ排除クロマトグラフィーにより評価した。このデータを表3に纏める。比較例2周囲温度でのrhuMAbE25の高濃度製剤化実施例1を次の点を除いて繰り返した。プロセスの前に、システム保存溶液を、最初に2L/ft2の純水と共に、ついで1L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーと共に、ドレイン方式まで単一パスで流した。フラッシング後、0.5L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーを10分間、再循環させることにより、システムを平衡にした。再循環溶液のpHを調べて、平衡を確認した。ついで、タンク中のレベルを測定可能な最小値まで低下させ、入ってくるタンパク質プールの希釈度を最低にした。上述したQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、3.3gE25/Lであると測定され、33.3L容量を有していた。タンパク質は、25mMのTRISバッファーと約200mMのNaClの溶液中に存在し、pHを6.2に調節した。運転を開始するため、タンパク質プールを再循環容器に移した。容器において、頂部搭載インペラでプールを攪拌し、温度を周囲温度で維持した。プロセス中、プールをUF1方式で50gE25/Lまで濃縮した。ついで、プールを8ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーションを、システムから出て行く濾液の流量に、再循環タンクに移ってくるバッファー溶液の流量を一致させることにより達成される一定容量で実施した。また周囲温度でダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードでさらに濃縮した。この最終濃度の目標は110g/Lであった。しかしながら、供給流路における高い圧損のため、この濃度は達成されなかった。この濃度を達成する試みにおいて、供給流路における圧損が50psigに達していたため、供給液の流量を約80gE25/Lのバルク濃度で1.4L/分まで低下させた。50psigの高い圧損に到達するまでUF2を続け、プロセスを停止させた。次に、フィードポンプを使用し、供給流路において5psigの圧損を維持する低い圧損混合を試みた。再度、ロータリーローブポンプが過剰圧に達したため、タンパク質溶液の粘性が達成を困難にした。サンプルを再循環タンクから取り出し、約104g/Lの最終バルク濃度であることが測定された。表4に、UF1、DF、及びUF2段階中に測定されたスループット値及び流束を纏めた。図5は、UF1、DF、UF2を含むプロセスの種々の段階及び方式中における供給液流量、タンク温度、供給dP、TMP、及び濾液流量パラメータに対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図6は、E25濃度、流束、及びTMPに対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図7は、24°CでのUF1及びUF2に対して観測された圧損対タンパク質濃度に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。タンパク質プールを複数の工程により回収した。まず、再循環タンクのプールを、ロータリーローブ供給ポンプを使用し、Millipac200、0.22ミクロンの滅菌グレードフィルターを通してタンクからポンプ移送した。次に、タンパク質溶液を、保持液ラインの最も高い位置に5psigの窒素ガスを吹き込んで、配管及び膜ユニットから排出した。ここでの生成物回収度は、粘性のある性質の溶液であるため、非常に乏しかった。最終段階は、5psigの窒素ガスをまた使用するタンクと供給ラインへのガス吹き込みであった。回収中の損失量を測定するために、1.85LのDF用バッファーをシステムに添加し、約5分再循環させ、実施例1の順序を使用して回収した。ついで、この容量を他のプールと共にタンパク質濃度のために分析した。結果を表5に纏める。プロセシング後、膜を、0.1NのNaOH、1L/ft2の単一パスフラッシュを使用し、続いて0.5L/ft2の30分の全再循環で再生させた。これに、1L/ft2のPWフラッシュを続けた。これに、30分間、300ppmのMinncare溶液の全再循環を続けた。1L/ft2のPWにより、システムを再度フラッシングし、最終的に0.1NのNaOHで15分間再循環させ、保存した。回収したプールを80gE25/Lまで希釈し、20mMのヒスチジン/250mMのスクロース/0.02のポリソルベート20/pH6.0の最終調製物に調整した。生成物の品質を、入ってきたQプールと最終的に回収されたバルクの双方について、サイズ排除クロマトグラフィーにより評価した。このデータを表6に纏める。実施例3最初のバッチ供給方式を用いたrhuMAbE26の高濃度調製物実施例1を次の点を除いて繰り返した。rhuMAbE26を濃縮/調製した。この実施例の生成物を毒性評価に使用した。MilliporePelicon限外濾過/ダイアフィルトレーションシステムを、11.4平方フィート30000ダルトンの再生セルロース複合膜を用いて組み立てた。供給液の流量を5.0L/分の一定流量に設定した。限外濾過及びダイアフィルトレーション操作中、保持液圧を約6-8psigに維持した。前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、6.7gE26/Lであると測定され、59.3L容量を有していた。入ってくるプールは再循環容器よりも多いので、UF1プロセスはバッチ供給モードで開始した。このモードにおいて、濾液がTFF膜を通ってドレインまで通過するのとほぼ同じ速度で、Qプールを再循環容器に添加した。残存Qプールを再循環容器に移した後、バッチモードでUF1プロセスを続けた。UF1の間に、プールを50gE26/Lまで濃縮した。ダイアフィルトレーションの開始時、再循環容器の温度設定点を40°Cまで上昇させた。温度の上昇及び制御は、タンクの外側ジャケットを通して流れてくる温グリコールに影響を受けた。ついで、プールを8ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。システムから出て行く濾液の流量に、再循環タンクに移送されてくるバッファーの流量を一致させることにより達成される一定容量で、ダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードで、109gE26/Lの最終濃度までさらに濃縮した。この段階はまた40°Cの高温設定点を使用して実施した。次に、フィードポンプを制御し、供給流路において5-10psigの圧損が維持されるようにした低圧損混合を実施した。表7に、UF1、DF及びUF2のスループット及び流束の結果を纏める。図8は、供給液の流量、タンク温度、供給dP、TMP、及び濾液の流量に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図9は、E26濃度、流束、及びTMPに対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図10は、UF1及びUF2において観測された圧損対タンパク質濃度に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。生成物回収の直前に、10mLのサンプルをバイオバーデンの検出及び滴定のために分析した。典型的な拒絶限界はmL当たり1000コロニー形成単位である。このテストの結果は1.8CFU/mLであり、この工程では適切な値であり、拒絶限界より十分に低い。回収中の損失量を測定するために、908.1mLのDF用バッファーをシステムに添加し、約5分再循環させ、上述したものと同じ順序を使用して回収した。ついで、この容量を、他のプールと共に、タンパク質濃度のために分析した。表8にその結果を纏める。回収したプールを80gE26/Lまで希釈し、50mMのヒスチジン/150mMのトレハロース/0.02のポリソルベート20/pH6.0の最終調製物に調整した。生成物の品質を、入ってきたQプール、UF1後の保持プール、DF後の保持プール、及び最終回収バルクに対して、サイズ排除クロマトグラフィーにより評価した。このデータを表9に纏める。実施例4毒性評価のためのrhuMAbE26の高濃度製剤-10kDと30kDの比較実施例3を次の点を除いて繰り返した。2つのパイロット規模のUFシステムを使用し、rhuMAbE26を濃縮/調製した。2つのMilliporePelicon限外濾過/ダイアフィルトレーションシステムを、11.4平方フィートの再生セルロース複合膜で、一方が10000ダルトンの孔径、他方が30000ダルトンの孔径のものを用いて、組み立てた。保持液圧は約6-9psigに維持した。10kDのプロセス前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、5.85gE26/Lであると測定され、62.4L容量を有していた。UF1の間に、プールを50gE26/Lまで濃縮した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードで、107.5gE26/Lの最終濃度までさらに濃縮した。表10に、UF1、DF及びUF2のスループット及び流束の結果を纏める。回収中の損失量を測定するために、987mLのDF用バッファーをシステムに添加し、約5分再循環させ、上述したものと同じ順序を使用して回収した。ついで、この容量を、他のプールと共に、タンパク質濃度のために分析した。結果を表11に纏める。図11は、10kDプロセスにおける、UF1、DF、UF2、及び低dPを含むプロセスの種々の段階又はモードに対する供給液流量、タンク温度、供給dP、TMP、及び濾液流量に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図12は、10kDプロセスにおける、UF1、DF、UF2、及び低dPを含むプロセスの種々の段階又はモードに対するE26濃度、流束、及びTMPに対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図13は、10kDプロセスにおける、UF1及びUF2において観測された圧損対タンパク質濃度に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。30kDのプロセス前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、5.85gE26/Lであると測定され、64.5L容量を有していた。UF1の間に、最初のプールを50gE26/Lまで濃縮した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードで、117.5gE26/Lの最終濃度までさらに濃縮した。表12に、UF1、DF及びUF2のスループット及び流束の結果を纏める。回収中の損失量を測定するために、918mLのDF用バッファーをシステムに添加し、約5分再循環させ、上述したものと同じ順序を使用して回収した。回収したプールを80gE26/Lまで希釈し、50mMのヒスチジン/150mMのトレハロース/0.02のポリソルベート20/pH6.0の最終調製物に調整した。結果を表13に纏める。図14は、30kDプロセスにおける、UF1、DF、UF2、及び低dPを含むプロセスの種々の段階又はモードに対する供給液流量、タンク温度、供給dP、TMP、及び濾液流量に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図15は、30kDプロセスにおける、UF1、DF、UF2、及び低dPを含むプロセスの種々の段階又はモードに対するE26濃度、流束、及びTMPに対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。図16は、30kDプロセスにおける、UF1及びUF2に対して観測された圧損対タンパク質濃度に対する経時的に観測又は測定されたプロセス値を示す。実施例5液状rhuMAbE25のスケールアップ実施例1を次の点を除いて繰り返した。生産規模のUFシステムを使用し、液状のrhuMAbE25を濃縮/調製した。生成物は、治療的用途及びヒトバイオ等価試行に使用することができる。MilliporePelicon限外濾過/ダイアフィルトレーションシステムを、30000ダルトンの孔径を有する、226平方フィートの再生セルロース複合膜を用いて組み立てた。各システムは、膜ホルダー、VikingS3Sロータリーローブ供給ポンプ、112の316Lステンレス鋼製再循環配管、及び250Lの再循環容器からなる。一つの250リットルの316Lステンレス鋼製でジャケットが施されたタンクを、再循環容器に使用した。このタンクの温度制御は、タンクのジャケットに供給される温度調節されたグリコールにより達成された。タンクのジャケットに供給されるグリコールの温度は、それぞれ蒸気供給熱交換器又は冷グリコール供給を使用し、上昇又は低下させた。この運転のために、供給液の流量を114L/分の一定流量に設定した。ダイアフィルトレーション用バッファーを分離タンクにおいて調製した。このバッファーの温度を、プロセス前に45°Cに設定した。これにより、プロセス中、正確に温度制御することができた。プロセシング前に、システム保存溶液を、まず1L/ft2の注射用の水と共に、ついで1L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーと共に、ドレインまでの単一パスモードでフラッシングした。フラッシング後、0.5L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーを10分間、再循環させることにより、システムを平衡にした。再循環溶液のpHを調べて、平衡を確認した。前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、5.2562gE25/Lであると測定され、1.141L容量を有していた。タンパク質は、25mMのTRISバッファーと約200mMのNaClの溶液中に存在しており、pHを6.2に調節した。運転の直前、このプールの温度設定点を45°Cに設定した。運転を開始するため、タンパク質プールを、0.22ミクロンの滅菌グレードフィルターを通して再循環容器に、タンクの約200Lのレベルまで移した。容器中、頂部搭載インペラでプールを攪拌し、温度を約に維持した。入ってくるプールは再循環容器よりも多いので、UF1プロセスはバッチ供給モードで開始した。このモードにおいて、濾液がTFF膜を通ってドレインに通過するのとほぼ同様の速度で、Qプールを再循環容器に添加した。残存Qプールを再循環容器に移した後、バッチモードでUF2プロセスを続けた。UF1方式の間、プールを約30gE25/Lまで濃縮した。ついで、プールを8ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション中、温度を40°C~50°Cで維持した。システムから出て行く濾液の流量に、再循環タンクに移送されてくるバッファーの流量を一致させることにより達成される一定容量で、ダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードで、>170gE25/Lの最終濃度設定点までさらに濃縮した。またこのUF2方式の段階は、45°C/-5°Cの高温設定点でも実施した。次に、低圧損混合を実施し、ここでフィードポンプを制御し、供給流路において5-10psigの圧損が維持されるようにした。サンプルを抜き出し、specスキャンを実施して、回収前の濃度を確認した。このサンプルの濃度は219gE25/Lであった。表14に、UF1、DF及びUF2段階中に測定されたスループット及び流束を要約する。生成物回収の直前に、30mLのサンプルを抜き出し、バイオバーデンの検出及び滴定に出した。結果は<0.13CFU/mLであった。タンパク質プールを一連の工程により回収した。まず、保持液ラインに添加された5LのDF用バッファーを使用し、単一パスモードで、膜から生成物を排出した。生成物を、7.4ft2、0.22ミクロンの滅菌グレード保護フィルターと、続いての2ft2、0.22ミクロンの滅菌グレード最終フィルターを通して、回収タンク中に濾過した。ついで、再循環タンクのプールを、ロータリーローブ供給ポンプを使用しタンクからポンプ移送した。次に、残ったタンパク質溶液を、5psigの窒素ガスを吹き込んで、タンク及び供給ラインから排出した。最終段階は膜ユニットへの吹き込みであり、最初の生成物の代わりに今はほとんどDF用バッファーを含んでいた。この段階ではまた保持液ラインの最も高い位置に適用される5psigの窒素ガスを使用した。回収したプールを、まず、DF用バッファーを使用して約153gE25/Lまで希釈した。最後に、プールを、20mMのヒスチジン/200mMのアルギニンHCl/0.04のポリソルベート20/pH6.0の最終調製物に調整した。ついで、回収したプール、希釈したプール、及び調整したプールの容量を、タンパク質濃度のためにそれぞれ分析した。結果を表15に纏める。図17は、UF1、DF1、DF2、UF2、及び低dPを含むプロセスの様々な段階又はモード中に対する供給液流量、タンク温度、供給dP、TMP、及び濾液流量のパラメータを示す。実施例6液状rhuMAbE25調製物実施例5を次の点を除いて繰り返した。生産規模のUFシステムを使用し、液状のrhuMAbE25を濃縮/製剤化した。MilliporePelicon限外濾過/ダイアフィルトレーションシステムを、30000ダルトンの孔径を有する226平方フィートの再生セルロース複合膜を用いて組み立てた。各システムは、膜ホルダー、VikingS3Sロータリーローブ供給ポンプ、112の316Lステンレス鋼製再循環配管、及び250Lの再循環容器からなる。一つの250リットルの316Lステンレス鋼製でジャケットが施されたタンクを、再循環容器に使用した。供給液の流量を114L/分の一定流量に設定した。全ての使用前操作及び使用後操作中、保持液圧の制御は、10psigの定圧に設定した。限外濾過及びダイアフィルトレーション操作中、システムではCwall制御スキームを使用して、膜を通過する流束を制御した。ダイアフィルトレーション用バッファーを分離タンクにおいて調製した。このバッファーの温度を、プロセス前に45°Cに設定した。これにより、全プロセス中、正確に温度制御することができた。前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、5.5438gE25/Lであると測定され、1.082L容量を有していた。タンパク質は、25mMのTRISバッファーと約200mMのNaClの溶液中に存在しており、pHを6.2に調節した。運転の直前、このプールの温度設定点を45°Cに設定した。運転を開始するため、タンパク質プールを、0.22ミクロンの滅菌グレードフィルターを通して再循環容器に、タンクの約200Lのレベルまで、移した。容器中において、頂部搭載インペラでプールを攪拌し、温度を周囲で維持した。入ってくるプールは再循環容器よりも多いので、UF1プロセスはバッチ供給モードで開始した。このモードにおいて、濾液がTFF膜を通ってドレインまで通過するのとほぼ同じ速度で、Qプールを再循環容器に添加した。残存Qプールを再循環容器に移した後、バッチモードでUF1プロセスを続けた。UF1の間に、プールを約30gE25/Lまで濃縮した。ついで、プールを8ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション中、温度を40~50°Cの間に維持した。システムから出て行く濾液の流量に、再循環タンクに移送されてくるバッファーの流量を一致させることにより達成される一定容量で、ダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードで、170gE25/Lより大きい最終濃度設定点までさらに濃縮した。この段階はまた45°C/-5°Cの高温設定点で実施した。次に、フィードポンプを制御し、供給流路において5-10psigの圧損が維持されるようにした低圧損混合を実施した。サンプルを抜き出し、specスキャンを実施して、回収前の濃度を確認した。このサンプルの濃度は191gE25/Lであり、プール容量は31.9Lであった。経時的なプロセスパラメータのグラフを、上述の図17で観測され要約されたものと比較した。生成物回収の直前に、30mLのサンプルを抜き出し、バイオバーデンの力価について分析した。このテストの結果は検出限界以下であった。タンパク質プールを一連の工程により回収した。まず、保持液ラインに添加された5LのDF用バッファーを使用し、単一パスモードで、膜から生成物を排出した。生成物を、7.4ft2、0.22ミクロンの滅菌グレード保護フィルター、続いて2ft2、0.22ミクロンの滅菌グレード保護フィルターを通して、回収タンク中に濾過した。ついで、再循環タンクのプールを、ロータリーローブ供給ポンプを使用しタンクからポンプ移送した。次に、残ったタンパク質溶液を、5psigの窒素ガスを吹き込んで、タンク及び供給ラインから排出した。最終段階は、最初の生成物の排出から、ほとんどのDF用バッファーを含有している膜ユニットの吹き込みであった。また、この段階では、未透過流れラインの最も高い位置に適用される5psigの窒素ガスを使用した。まず、回収したプールを、DF用バッファーを使用して約153gE25/Lまで希釈した。最後に、プールを、20mMのヒスチジン/200mMのアルギニンHCl/0.04のポリソルベート20/pH6.0の最終調製物に調整した。ついで、回収したプール、希釈したプール、及び調整したプールの容量を、タンパク質濃度について分析した。結果を表15に要約する。プロセス後、上述したようにして膜を再生させた。実施例7生成物の品質に対する高い温度の影響ヒスチジン及びQバッファー中に入れた30g/L及び150g/LのE25サンプルを、様々な温度で24時間保持した。サンプルを、濁度測定及びSECアッセイのために取り出した。Qバッファー中の30g/LのE25に対する濁度対温度の結果を図18に示す。図19は、23°C、40°C、50°C、60°C及び70°Cの温度において経時的に観測したE25の可溶性凝集体の量を示す。これらの温度のそれぞれに対して、4通りの時間間隔を、図18及び19中、1810及び1910として、左から右へ4本のバー群として示す。溶液濁度は、本質的に60°Cで24時間後も変化しなかった。70°C以下では、E25の有意な溶解性凝集物は観測されず、生成物サンプルが少なくとも60°Cで少なくとも24時間、実質的に安定していることが示唆される。実施例8バイオバーデンに対する高い温度の影響アルギニン及びヒスチジンバッファー中に入れた30g/LのE25サンプルに、2つの誘発生物体:グラム陽性菌;及びグラム陰性菌のmL当たり103コロニー形成単位を播種した。サンプルを1.5時間及び6時間後に取り出した。図20及び21の棒グラフに示されている結果は、これらの誘発生物体の双方とも、温度の上昇に伴い減少していることを示している。それぞれの観測された時間間隔に対する3通りの温度間隔は、図20及び21において、2010及び2110として、左から右へ3本のバー群として示す。示された播種は、30g/Lのタンパク質濃度を有するアルギニンバッファー中において実施した。実施例9プロセス流束に対する高い温度の影響0.2Mのアルギニン、25mMのヒスチジン、pH6.0のバッファー中に入れた10g/LのE25サンプルを、流束対膜間圧に対するそれらの影響のために評価した。図22は、システム温度の上昇により、UF/DF操作中にプロセス流束が増加することを示している。様々なバルク濃度、及び23°C、40°C及び46°Cの3通りの異なる温度で、流束偏位を実施した。物質移動係数及び濾液流束は約2~約3倍に増加し、プロセス時間はかなり低減した。実施例10rhuMAb抗CD20の高濃度製剤化パイロット規模のUFシステムを使用し、rhuMAb抗CD20を濃縮し、製剤化した。実施例1を次の点を除いて繰り返した。MilliporePelicon限外濾過/ダイアフィルトレーションシステムは、30000ダルトンの孔径を有する17.5平方フィートの再生セルロース複合膜を用いて組み立てた。システムは、膜ホルダー、VikingS1Lロータリーローブ供給ポンプ、12の316Lステンレス鋼製再循環配管、及び40Lの再循環容器からなる。背圧調節弁は、HDBaumannInc製であった。タンクジャケットに供給されるグリコールの温度は、電気熱交換器、冷グリコールの供給、又は双方を使用し、必要に応じて上昇又は低下させて調節した。この運転中、供給液の流量は、8.5L/分の一定流量に設定した。図23は、UF1、DF1及びUF2を含むプロセスの種々の段階又はモードにおいての0~20のスケールでの供給液の流量、2~12のスケールでのpH、0~5のスケールでの濾液の流量、0~45のスケールでのリサイクルタンクのレベル、0~100のスケールでの保持液dPに対する経時的な値の傾向を示す。限外濾過及びダイアフィルトレーション操作中、システムでは、一定の保持液圧と、続いての一定の供給液/保持液差圧制御スキームを使用して、膜を通過する流束を制御した。ダイアフィルトレーション用バッファーは分離タンク中で調製した。プロセス全体において正確な温度制御をするために、このバッファーの温度をプロセシング前に45°Cに設定した。プロセシング前に、システム保存溶液を、まず1L/ft2の注射用の水と共に、ついで1L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーと共に、単一のドレインへのパスモードで流した。フラッシング後、0.5L/ft2のダイアフィルトレーション用バッファーを10分間、再循環させることにより、システムを平衡にした。再循環溶液のpHを調べて平衡を確認した。前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、2.31g2H7/Lであると測定され、356L容量を有していた。タンパク質は、0.5Mの酢酸で5.3にpH調節された6mMのHEPES遊離酸/19mMのHEPESナトリウム塩及び25mMの酢酸ナトリウムの溶液中に存在していた。運転の直前、このプールの温度設定点を45°Cに設定した。運転を開始するため、タンパク質プールを、0.22ミクロンの滅菌グレードフィルターを通して再循環容器に、タンクに約40Lのレベルまで移した。容器中において、頂部搭載インペラでプールを攪拌して温度を40-50°Cに維持した。入ってくるプールは再循環容器よりも多いので、UF1プロセスはバッチ供給モードで開始した。このモードでは、濾液がTFF膜を通ってドレインまで通過するのとほぼ同じ速度で、Qプールを再循環容器に添加した。残存Qプールを再循環容器に移した後、バッチモードでUF1プロセスを続けた。UF1の間に、プールを約50g2H7/Lまで濃縮した。ついで、プールを10ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション中、温度を40~50°Cの間に維持した。システムから出て行く濾液の流量に、再循環タンクに移送されてくるバッファーの流量を一致させることにより達成される一定容量で、ダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードで、190g2H7/Lの最終濃度目標設定点までさらに濃縮した。図23において、この段階の終わりに、50psigへの定dP制御を導入したことに留意のこと。この段階はまた45°C/-5°Cの高温設定点で実施した。次に、フィードポンプを制御し、供給流路において20psigの圧損が維持されるようにした低圧損混合を実施した。サンプルを抜き出し、密度測定を実施して、回収前の濃度を確認した。このサンプルの濃度は189g2H7/Lであった。表16に、スループット及び流束の結果を纏める。タンパク質プールを、複数の工程により回収した。まず、保持液ラインに添加された0.2LのDF用バッファーを使用し、単一パスモードで、膜から生成物を排出した。生成物を、0.22ミクロンの滅菌グレード最終フィルターを通して、回収タンク中に濾過した。ついで、再循環タンクのプールを、ロータリーローブ供給ポンプを使用しタンクからポンプ移送した。次に、残ったタンパク質溶液を、5psigの窒素ガスを吹き込んで、タンク及び供給ラインから排出した。最終段階は膜装置への吹き込みであり、その装置は今最初の生成物の代わりにDF用バッファーを含んでいる。この段階ではまた保持液ラインの最も高い位置に適用される5psigの窒素ガスを使用した。必要であれば、回収したプールを、まず希釈用バッファーを使用して、約175g2H7/Lまで希釈した。最後に、プールを150g2H7/Lの目標濃度まで希釈し、7×の調整用バッファーにより、30mMの酢酸ナトリウム、7のトレハロース、0.03のポリソルベート20、pH5の最終調製物に調整した。ついで、回収したプール、希釈したプール、及び調整したプールの容量を、タンパク質濃度のために分析した。表17はその結果を表す。プロセシング後、膜を、0.1NのNaOH、1L/ft2の単一パスフラッシュの使用と、続いての0.5L/ft2の30分の全再循環で再生させた。これに、1L/ft2のPWフラッシュを続けた。これに、30分間、0.5L/ft2の1.4Minncare溶液の全再循環を続けた。1L/ft2のPWを用いて、システムを再度フラッシングし、最終的に0.1NのNaOHで15分間再循環させ、保存した。実施例11rhuMAb抗CD20の高濃度調製物パイロット規模のUFシステムを使用し、GMP製造設備でのヒトフェーズI臨床試験に使用するためのrhuMAb抗CD20を濃縮し、製剤化した。実施例10を次の点を除いて繰り返した。前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、3.729g2H7/Lであると測定され、262L容量を有していた。タンパク質は、0.5Mの酢酸で5.3にpH調節された6mMのHEPES遊離酸/19mMのHEPESナトリウム塩及び25mMの酢酸ナトリウムの溶液中に存在していた。運転の直前、このプールの温度設定点を45°Cに設定した。運転を開始するため、タンパク質プールを、0.22ミクロンの滅菌グレードフィルターを通して再循環容器に、タンクの約40Lのレベルまで移した。容器中で、頂部搭載インペラでプールを攪拌し、温度を40-50°Cに維持した。UF1の間、プールを約50g2H7/Lまで濃縮した。図24は、プロセシング中における-0.713963~295.989のスケールでのリサイクルタンクレベル、-0.237899~98.6629のスケールでの保持液dP、-0.356981~147.994のスケールでの供給液流量、-0.118994~49.3315のスケールでの濾液流量に対する経時的な値の傾向を示す。ついで、プールを10ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション中、温度は40~50°Cの間に維持した。システムから除去される濾液の流量に、再循環タンクに移送されてくるバッファーの流量を一致させることにより達成した一定容量で、ダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、プールをUF2モードで190g2H7/Lの最終濃度目標設定点までさらに濃縮した。図24において、この段階の終わりに40psigへの定dP制御を導入したことに留意のこと。この段階はまた45°C/-5°Cの高温設定点で実施された。次に、フィードポンプを制御して供給流路において20psigの圧損を維持するようにした低圧損混合を実施した。サンプルを抜き出して密度測定を実施し、回収前の濃度を確認した。このサンプルの濃度は194g2H7/Lであった。表18にスループット及び流束の結果を纏める。生成物回収の直前に、30mLのサンプルを抜き出し、バイオバーデンの検出及び滴定に出した。結果は陰性であった。タンパク質プールを実施例10の複数の工程により回収した。ついで、回収したプール、希釈したプール、及び調整したプールの容量を、タンパク質濃度のために分析した。表19はその結果を表す。膜は実施例10のようにして再生した。実施例12rhuMAb抗CD20GMPの高濃度製剤化実施例11を次の点を除いて繰り返した。前のQSepharoseクロマトグラフィー工程により得られたタンパク質プールは、5.106g2H7/Lであると測定され、196L容量を有していた。タンパク質は、0.5Mの酢酸で5.3にpH調節された6mMのHEPES遊離酸/19mMのHEPESナトリウム塩及び25mMの酢酸ナトリウムの溶液中に存在していた。運転の直前、このプールの温度設定点を45°Cに設定した。運転を開始するため、タンパク質プールを、0.22ミクロンの滅菌グレードフィルターを通して再循環容器に、タンクの約40Lのレベルになるまで移した。容器中で、頂部搭載インペラでプールを攪拌し、温度を40-50°Cに維持した。UF1の間、プールを約50g2H7/Lまで濃縮した。図25は、プロセシング中における0~300のスケールでのリサイクルタンクレベル、0~100のスケールでの保持液dP、0~150のスケールでの供給液流量、0~50のスケールでの濾液流量に対する経時的な値の傾向を示す。プールは10ダイアボリュームのダイアフィルトレーション用バッファーを用いてダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション中、温度は40~50°Cの間に維持した。システムから除去される濾液の流量に、再循環タンクに移送されてくるバッファーの流量を一致させることにより達成した一定容量で、ダイアフィルトレーションを実施した。ダイアフィルトレーションが終了したところで、再びこの段階のまさに終了時点で定dP制御を利用して、プールをUF2モードで190g2H7/Lの最終濃度目標設定点までさらに濃縮した。この段階はまた45°C/-5°Cの高い温設定点で実施された。次に、フィードポンプを制御して供給流路において20psigの圧損を維持するようにした低圧損混合を実施した。サンプルを抜き出して密度測定を実施し、回収前の濃度を確認した。このサンプルの濃度は191g2H7/Lであった。表20にスループット及び流束の結果を纏める。生成物回収の直前に、30mLのサンプルを抜き出し、バイオバーデンの検出及び滴定に出した。結果は陰性であった。タンパク質プールを実施例11の複数の工程により回収した。ついで、回収したプール、希釈したプール、及び調整したプールの容量を、タンパク質濃度のために分析した。表21はその結果を表す。膜は実施例11のようにして再生した。全ての刊行物、特許及び特許文献は、出典明示によりあたかも個々のものが援用されているかのように、その全体が出典明示によりここに援用される。本明細書は様々な特定かつ好適な実施態様及び技法について記載した。しかしながら、本明細書の精神及び範囲に入る限り、多くの変形や修正が可能であることが理解されなければならない。