"対象の外来性DNAを、植物細胞ゲノムのあらかじめ選択された部位へ導入するための方法であって、a二本鎖DNA切断を細胞のゲノム中のあらかじめ選ばれた部位に引き起こす工程;b対象の外来性DNAを植物細胞中へ導入する工程;を含み、外来性DNAを直接DNA移入によって送達することを特徴とする方法。前記直接DNA移入が、対象の外来性DNAでコートされたマイクロプロジェクタイルの撃ち込みにより遂行される、請求項1記載の方法。前記対象の外来性DNAは、あらかじめ選択された部位に隣接するDNA領域と少なくとも80の配列同一性を有するDNA領域と隣接している、請求項1または2記載の方法。前記二本鎖DNA切断が、I-SceIをコードする遺伝子の導入により引き起される、請求項1~3のいずれか1項記載の方法。前記I-SceIをコードする遺伝子が配列番号1のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項4記載の方法であって、前記ヌクレオチド配列は、約50~約60のGC含量を有し、ただし、vii前記ヌクレオチド配列が、からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含まず;viii前記ヌクレオチドが、CCAAT、ATTGG、GCAATおよびATTGCからなる群より選択されるヌクレオチド配列を含まず;ix前記ヌクレオチド配列が、ATTTA,AAGGT,AGGTA、GGTAまたはGCAGGからなる群より選択される配列を含まず;x前記ヌクレオチド配列が、GまたはCの群より選択される連続する7個のヌクレオチドから成るGCストレッチを含まず;xi前記ヌクレオチド配列が、AまたはTの群より選択される連続する5個のヌクレオチドから成るATストレッチを含まず;およびxii前記ヌクレオチド配列がコドンTTA、CTA、ATA、GTA、TCG、CCG、ACGおよびGCGを含まない、ことを条件とする方法。I-SceIをコードする遺伝子が配列番号4のヌクレオチド配列を含む、請求項5記載の方法。植物細胞がトウモロコシ細胞である、請求項1~6のいずれかに記載の方法。トウモロコシ細胞が細胞懸濁液中に含まれる、請求項7記載の方法。前記植物細胞を、工程aに先立って植物フェノール化合物中でインキュベーションする、請求項1~8のいずれかに記載の方法。前記植物フェノール化合物がアセトシリンゴンである、請求項9記載の方法。対象の外来性DNAを、植物細胞のゲノムのあらかじめ選択された部位へ導入する方法であって、a二本鎖DNA切断を細胞のゲノム中のあらかじめ選択された部位に引き起こす工程;b対象の外来性DNAを植物細胞中へ導入する工程;を含み、二本鎖DNA切断が、ヌクレオチド配列によってコードされるレア切断エンドヌクレアーゼによって導入され、前記ヌクレオチド配列が約50~約60のGC含量を有し、ただし、i前記ヌクレオチド配列が、からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含まず;ii前記ヌクレオチドが、CCAAT,ATTGG、GCAATおよびATTGCからなる群より選択されるヌクレオチド配列を含まず;iii前記ヌクレオチド配列が、ATTTA,AAGGT,AGGTA、GGTAまたはGCAGGからなる群より選択される配列を含まず;iv前記ヌクレオチド配列が、GまたはCからなる群より選択される連続する7個のヌクレオチドから成るGCストレッチを含まず;v前記ヌクレオチド配列が、AまたはTからなる群より選択される連続する5個のヌクレオチドから成るATストレッチを含まず;およびvi前記ヌクレオチド配列が、コドンTTA、CTA、ATA、GTA、TCG、CCG、ACGおよびGCGを含まない、ことを条件とすることを特徴とする方法。ヌクレオチド配列が配列番号4のヌクレオチド配列を含む、請求項11記載の方法。対象の外来性DNAが、直接のDNA移入によって前記植物細胞中へ導入される、請求項11または12記載の方法。前記直接のDNA移入が、対象の外来性DNAでコートされたマイクロプロジェクタイルの撃ち込みにより遂行される、請求項11~13のいずれか1項記載の方法。前記対象の外来性DNAが、あらかじめ選択された部位に隣接するDNA領域と少なくとも80の配列同一性を有するDNA領域と隣接している、請求項11~14のいずれか1項記載の方法。前記二本鎖DNA切断が、I-SceIをコードする遺伝子の導入により引き起される、請求項11~15のいずれか1項記載の方法。植物細胞がトウモロコシ細胞である、請求項11~16のいずれかに記載の方法。トウモロコシ細胞が細胞懸濁液中に含まれる、請求項17記載の方法。前記植物細胞を、工程aに先立って植物フェノール化合物中でインキュベーションする、請求項11~18のいずれかに記載の方法。前記植物フェノール化合物がアセトシリンゴンである、請求項19記載の方法。対象の外来性DNAを植物細胞のゲノムのあらかじめ選択された部位へ導入するための方法であって、a二本鎖DNA切断を、細胞のゲノム中のあらかじめ選ばれた部位に引き起こす工程;b対象の外来性DNAを植物へ導入する工程;を含み、工程aに先立って植物細胞を植物フェノール化合物中でインキュベーションすることを特徴とする方法。前記植物フェノール化合物が、アセトシリンゴン3,5-ジメトキシ-4-ヒドロキシアセトフェノン、α-ヒドロキシ-アセトシリンゴン、シナピン酸3,5ジメトキシ-4-ヒドロキシケイ皮酸、シリング酸4-ヒドロキシ-3,5ジメトキシ安息香酸、フェルラ酸4-ヒドロキシ-3-メトキシケイ皮酸、カテコール1,2-ジヒドロキシベンゼン、p-ヒドロキシ安息香酸4-ヒドロキシ安息香酸、β-レソルシル酸2,4ジヒドロキシ安息香酸、プロトカテク酸3,4-ジヒドロキシ安息香酸、ピロ没食子酸2,3,4-トリヒドロキシ安息香酸、没食子酸3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸、およびバニリン3-メトキシ-4-ヒドロキシベンズアルデヒド、の群より選択される、請求項21に記載の方法、対象の外来性DNAを植物細胞のゲノムのあらかじめ選択された部位へ導入するための方法であって、a二本鎖DNA切断を、細胞のゲノム中のあらかじめ選択された部位で、レア切断エンドヌクレアーゼによって引き起こす工程;b対象の外来性DNAを植物へ導入する工程;を含み、前記エンドヌクレアーゼが核移行シグナルを含むことを特徴とする方法。配列番号1のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたDNA断片であって、そのヌクレオチド配列が、約50~約60のGC含量を有し、ただし、i前記ヌクレオチド配列が、からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含まず;ii前記ヌクレオチドが、CCAAT、ATTGG、GCAATおよびATTGCからなる群より選択されるヌクレオチド配列を含まず;iii前記ヌクレオチド配列が、ATTTA、AAGGT、AGGTA、GGTAまたはGCAGGからなる群より選択される配列を含まず;iv前記ヌクレオチド配列が、GまたはCの群より選択される連続する7個のヌクレオチドから成るGCストレッチを含まず;v前記ヌクレオチド配列が、AまたはTの群より選択される連続する5個のヌクレオチドから成るATストレッチを含まず;およびvi前記ヌクレオチド配列の、Leu、Ile、Val、Ser、Pro、Thr、Alaをコードするコドンが、前記コドンの位置2および3にTAまたはGCという二連コードを含まない;ことを条件とする、DNA断片。配列番号2のヌクレオチド配列を含む単離されたDNA断片であって、前記ヌクレオチド配列のGC含量が、約50~約60であり、i前記ヌクレオチド配列の位置28~位置30がAAGでなく;ii位置34~位置36のヌクレオチド配列がAATである場合は、位置37~位置39のヌクレオチド配列がATTまたはATAでなく;iii位置34~位置36のヌクレオチド配列がAACである場合は、位置37~位置39のヌクレオチド配列がATTでなく、同時に位置40~位置42のヌクレオチド配列がAAAであり;iv位置34~位置36のヌクレオチド配列がAACである場合は、位置37~位置39のヌクレオチド配列がATAでなく;v位置37~位置39のヌクレオチド配列がATTまたはATAである場合は、位置40~位置42のヌクレオチド配列がAAAでなく;vi位置49~位置51のヌクレオチド配列がCAAでなく;vii位置52~位置54のヌクレオチド配列がGTAでなく;viii位置58~位置63のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;ix位置67~位置69のヌクレオチド配列がCCCである場合は、位置70~位置72のヌクレオチド配列がAATでなく;x位置76~位置78のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置79~位置81のヌクレオチド配列がTTGでなく、同時に位置82~位置84のヌクレオチド配列がCTNであり;xi位置79~位置81のヌクレオチド配列がTTAまたはCTAである場合は、位置82~位置84のヌクレオチド配列がTTAでなく;xii位置88~位置90のヌクレオチド配列がGAAではなく;xiii位置91~位置93のヌクレオチド配列がTATである場合は、位置94~位置96のヌクレオチド配列がAAAでなく;xiv位置97~位置99のヌクレオチド配列がTCCまたはTCGまたはAGCである場合は、位置100~位置102のヌクレオチド配列がCCAでなく、同時に位置103~位置105のヌクレオチド配列がTTRであり;xv位置100~位置102のヌクレオチド配列がCAAである場合は、位置103~位置105のヌクレオチド配列がTTAでなく;xvi位置109~位置111のヌクレオチド配列がGAAである場合は、位置112~位置114のヌクレオチド配列がTTAでなく;xvii位置115~117のヌクレオチド配列がAATである場合は、位置118~位置120のヌクレオチド配列がATTまたはATAでなく;xviii位置121~123のヌクレオチド配列がGAGである場合は、位置124~位置126のヌクレオチド配列が;xix位置133~135のヌクレオチド配列がGCAでなく;xx位置139~位置141のヌクレオチド配列がATTでなく;xxi位置142~位置144のヌクレオチド配列がGGAである場合は、位置145~位置147のヌクレオチド配列がTTAでなく;xxii位置145~位置147のヌクレオチド配列がTTAである場合は、位置148~位置150のヌクレオチド配列がATAでなく、同時に位置151~位置153のヌクレオチド配列がTTRであり;xxiii位置145~位置147のヌクレオチド配列がCTAである場合は、位置148~位置150のヌクレオチド配列がATAでなく、同時に位置151~位置153のヌクレオチド配列がTTRであり;xxiv位置148~位置150のヌクレオチド配列がATAである場合は、位置151~位置153のヌクレオチド配列がCTAまたはTTGでなく;xxv位置160~位置162のヌクレオチド配列がGCAである場合は、位置163~位置165のヌクレオチド配列がTACでなく;xxvi位置163~位置165のヌクレオチド配列がTATである場合は、位置166~位置168のヌクレオチド配列がATAでなく、同時に位置169~位置171のヌクレオチド配列がAGRであり;xxvii位置172~位置177のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がGCAGGを含まないようになる選択に従って選ばれ;xxviii位置178~位置186のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がAGGTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;xxix位置193~位置195のヌクレオチド配列がTATである場合は、位置196~位置198のヌクレオチド配列がTGCでなく;xxx位置202~位置204のヌクレオチド配列がCAAでなく;xxxi位置217~位置219のヌクレオチド配列がAATでなく;xxxii位置220~位置222のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置223~位置225のヌクレオチド配列がGCAでなく;xxxiii位置223~位置225のヌクレオチド配列がGCAである場合は、位置226~位置228のヌクレオチド配列がTACでなく;xxxiv位置253~位置255のヌクレオチド配列がGACである場合は、位置256~位置258のヌクレオチド配列がCAAでなく;xxxv位置277~位置279のヌクレオチド配列がCATである場合は、位置280~位置282のヌクレオチド配列がAAAでなく;xxxvi位置298~位置303のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;xxxvii位置304~位置306のヌクレオチド配列がGGCである場合は、位置307~位置309のヌクレオチド配列がAATでなく;xxxviii位置307~位置312のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;xxxix位置334~位置342のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;xl位置340~位置342のヌクレオチド配列がAAGである場合は、位置343~位置345のヌクレオチド配列がCATでなく;xli位置346~位置348のヌクレオチド配列がCAAである場合は、位置349~位置351のヌクレオチド配列がGCAでなく;xlii位置349~位置357のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;xliii位置355~位置357のヌクレオチド配列がAATでなく;xliv位置358~位置360のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置361~位置363のヌクレオチド配列がTTGでなく;xlv位置364~位置366のヌクレオチド配列がGCCである場合は、位置367~位置369のヌクレオチド配列がAATでなく;xlvi位置367~位置378のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;xlvii位置382~位置384のヌクレオチド配列がAATである場合は、位置385~位置387のヌクレオチド配列がAATでなく;xlviii位置385~位置387のヌクレオチド配列がAATでなく;xlix位置400~位置402のヌクレオチド配列がCCCである場合は、位置403~位置405のヌクレオチド配列がAATでなく;l位置403~位置405のヌクレオチド配列がAATである場合は、位置406~位置408のヌクレオチド配列がAATでなく;li位置406~位置411のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;lii位置421~位置426のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;liii位置430~位置432のヌクレオチド配列がCCAでなく;liv位置436~位置438のヌクレオチド配列がTCAである場合は、位置439~位置441のヌクレオチド配列がTTGでなく;lv位置445~位置447のヌクレオチド配列がTATでなく;lvi位置481~位置483のヌクレオチド配列がAATでなく;lvii位置484~位置486のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置487~位置489のヌクレオチド配列がAATでなく、同時に位置490~位置492のヌクレオチド配列がAGYであり;lviii位置490~位置492のヌクレオチド配列がTCAである場合は、位置493~位置495のヌクレオチド配列がACCでなく、同時に位置496~位置498のヌクレオチド配列がAAYであり;lix位置493~位置495のヌクレオチド配列がACCである場合は、位置496~位置498のヌクレオチド配列がAATでなく;lx位置496~位置498のヌクレオチド配列がAATでなく;lxi位置499~位置501のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置502~位置504のヌクレオチド配列がTCAまたはAGCでなく;lxii位置508~位置510のヌクレオチド配列がGTAである場合は、位置511~位置513のヌクレオチド配列がTTAでなく;lxiii位置514~位置516のヌクレオチド配列がAATである場合は、位置517~位置519のヌクレオチド配列がACAでなく;lxiv位置517~位置519のヌクレオチド配列がACCまたはACGである場合は、位置520~位置522のヌクレオチド配列がCAAでなく、同時に位置523~位置525のヌクレオチド配列がTCNであり;lxv位置523~位置531のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;lxvi位置544~位置546のヌクレオチド配列がGAAである場合は、位置547~位置549のヌクレオチド配列がTATでなく、同時に位置550~位置552のヌクレオチド配列がTTRであり;lxvii位置547~位置552のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;lxviii位置559~位置561のヌクレオチド配列がGGAである場合は、位置562~位置564のヌクレオチド配列がTTGでなく、同時に位置565~位置567のヌクレオチド配列がCGNであり;lxix位置565~位置567のヌクレオチド配列がCGCである場合は、位置568~位置570のヌクレオチド配列がAATでなく;lxx位置568~位置570のヌクレオチド配列がAATでなく;lxxi位置574~位置576のヌクレオチド配列がTTCである場合は、位置577~位置579のヌクレオチド配列がCAAでなく、同時に位置580~位置582のヌクレオチド配列がTTRであり;lxxii位置577~位置579のヌクレオチド配列がCAAである場合は、位置580~位置582のヌクレオチド配列がTTAでなく;lxxiii位置583~位置585のヌクレオチド配列がAATである場合は、位置586~位置588のヌクレオチド配列がTGCでなく;lxxiv位置595~位置597のヌクレオチド配列がAAAでなく;lxxv位置598~位置600のヌクレオチド配列がATTである場合は、位置601~位置603のヌクレオチド配列がAATでなく;lxxvi位置598~位置600のヌクレオチド配列がATAでなく;lxxvii位置601~位置603のヌクレオチド配列がAATでなく;lxxviii位置604~位置606のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置607~位置609のヌクレオチド配列がAATでなく;lxxix位置607~位置609のヌクレオチド配列がAATでなく;lxxx位置613~位置615のヌクレオチド配列がCCAでなく;lxxxi位置613~位置615のヌクレオチド配列がCCGである場合は、位置616~位置618のヌクレオチド配列がATAでなく;lxxxii位置616~位置618のヌクレオチド配列がATAである場合は、位置619~位置621のヌクレオチド配列がATAでなく;lxxxiii位置619~位置621のヌクレオチド配列がATAである場合は、位置622~位置624のヌクレオチド配列がTACでなく;lxxxiv位置619~位置621のヌクレオチド配列がATTでなく;lxxxv位置640~位置645のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;lxxxvi位置643~位置645のヌクレオチド配列がTTAである場合は、位置646~位置648のヌクレオチド配列がATAでなく;lxxxvii位置643~位置645のヌクレオチド配列がCTAである場合は、位置646~位置648のヌクレオチド配列がATAでなく;lxxxviii位置655~位置660のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;lxxxix位置658~位置660のヌクレオチド配列がTTAまたはCTAである場合は、位置661~位置663のヌクレオチド配列がATTまたはATCでなく;xc位置661~位置663のヌクレオチド配列がATAでなく;xci位置661~位置663のヌクレオチド配列がATTである場合は、位置664~位置666のヌクレオチド配列がAAAでなく;xcii位置670~位置675のヌクレオチド配列のコドンが、その結果のヌクレオチド配列がATTTAを含まないようになる選択に従って選ばれ;xciii位置691~位置693のヌクレオチド配列がTATである場合は、位置694~位置696のヌクレオチド配列がAAAでなく;xciv位置694~位置696のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置697~位置699のヌクレオチド配列がTTGでなく;xcv位置700~位置702のヌクレオチド配列がCCCである場合は、位置703~位置705のヌクレオチド配列がAATでなく;xcvi位置703~位置705のヌクレオチド配列がAATである場合は、位置706~位置708のヌクレオチド配列がACAまたはACTでなく;xcvii位置706~位置708のヌクレオチド配列がACAである場合は、位置709~位置711のヌクレオチド配列がATAでなく、同時に位置712~位置714のヌクレオチド配列がAGYであり;xcviii前記ヌクレオチド配列がコドンTTA、CTA、ATA、GTA、TCG、CCG、ACG、およびGCGを含まず;xcix前記ヌクレオチド配列が、GまたはCの群より選択される連続する7個のヌクレオチドから成るGCストレッチを含まず;およびc前記ヌクレオチド配列が、AまたはTの群より選択される連続する5個のヌクレオチドから成るATストレッチを含まない、ことを条件とする、DNA断片。配列番号3のヌクレオチド配列を含む単離されたDNA断片であって、前記ヌクレオチド配列のGC含量が約50~約60であり、a位置121~位置123のヌクレオチド配列がGAGである場合は、位置124~126のヌクレオチド配列がCAAでなく;b位置253~位置255のヌクレオチド配列がGACである場合は、位置256~258のヌクレオチド配列がCAAでなく;c位置277~位置279のヌクレオチド配列がCATである場合は、位置280~282のヌクレオチド配列がAAAでなく;d位置340~位置342のヌクレオチド配列がAAGである場合は、位置343~345のヌクレオチド配列がCATでなく;e位置490~位置492のヌクレオチド配列がTCAである場合は、位置493~495のヌクレオチド配列がACCでなく;f位置499~位置501のヌクレオチド配列がAAAである場合は、位置502~504のヌクレオチド配列がTCAまたはAGCでなく;g位置517~位置519のヌクレオチド配列がACCである場合は、位置520~522のヌクレオチド配列がCAAでなく、同時に位置523~525のヌクレオチド配列がTCNであり;h位置661~位置663のヌクレオチド配列がATTである場合は、位置664~666のヌクレオチド配列がAAAでなく;i位置7~位置15のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、GまたはCの群からの連続する7個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;j位置61~位置69のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、GまたはCの群からの連続する7個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;k位置130~位置138のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、GまたはCの群からの連続する7個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;l位置268~位置279のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、GまたはCの群からの連続する7個のヌクレオチドのドストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;m位置322~位置333のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、GまたはCの群からの連続する7個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;n位置460~位置468のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、GまたはCの群からの連続する7個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;o位置13~位置27のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;p位置37~位置48のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;q位置184~位置192のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;r位置214~位置219のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;s位置277~位置285のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;t位置388~位置396のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;u位置466~位置474のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;v位置484~位置489のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;w位置571~位置576のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;x位置598~位置603のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;y位置604~位置609のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;z位置613~位置621のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;aa位置646~位置651のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;bb位置661~位置666のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれ;およびcc位置706~位置714のヌクレオチド配列のコドンが、その結果生じるヌクレオチド配列が、AまたはTの群からの連続する5個のヌクレオチドのストレッチを含まないようになる選択に従って選ばれる、ことを条件とする、DNA断片。1の位置のみが配列番号4のヌクレオチド配列と異なるヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、請求項26記載の単離されたDNA配列。10の位置のみが配列番号4のヌクレオチド配列と異なるヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、請求項26記載の単離されたDNA配列。配列番号4のヌクレオチド配列を含む、単離されたDNA配列。植物で発現可能なプロモーターに作動可能に連結された請求項24~29のいずれか1項記載の単離されたDNA断片を含む、キメラ遺伝子。外来性DNAを、植物ゲノムのI-SceI認識部位に挿入するための、請求項30記載のキメラ遺伝子の使用。I-SceIをコードする、植物で発現可能なキメラ遺伝子の設計、合成および解析4個のアミノ末端アミノ酸が核移行シグナルで置換されたI-SceIのコード領域を、次のプロセスを用いて最適化した:1.I-SceIタンパク質のアミノ酸配列を変更せずに、SynergyGeneoptimizer登録商標を用いて、トウモロコシに対して最も好ましいコドン使用にコドンを変換するプロセス;2.特異的な制限部位を作成または除去するために配列を調節して、合成I-SceIコード領域をユニバーサルコードのI-SceI遺伝子で交換するプロセス;3.前躯体mRNAスプライシングに影響する可能性のあるRNAの二次構造形成を回避するために、6bpより長いGCストレッチおよび4bpより長いATストレッチをすべて除去するプロセス;4.コドンの中の2と3の位置のCGおよびTAという二連コードを回避するプロセス;5.他の調節要素、例えば未成熟のポリアデニル化シグナルの候補隠れたイントロンスプライシング部位AAGGTAAGTおよびTGCAGG、ATTTA五量体、およびCCAATボックス配列CCAAT、ATTGG、CGAAT、およびATTCGを回避するプロセス;6.適合されたコード領域が上に述べた基準をすべて満たすかどうかを再確認するプロセス。そのようなヌクレオチド配列の可能な一例を、配列番号4に示す。配列番号4のヌクレオチド配列を有する合成DNA断片を合成し、CaMV35SプロモーターおよびCaMV35S3’終了およびポリアデニル化シグナルに作動可能に連結させたプラスミドpCV78;配列番号7を生成した。合成I-SceIコード領域をバクテリアの発現ベクター中にアミロースビーズ上でのタンパク質濃縮を可能にする融合タンパク質としてクローニングした。半精製されたI-SceIタンパク質の、I-SceI認識部位を含むプラスミドをインビトロで切断する能力を確認した。I-SceI部位が先行しプロモーターを欠くbar遺伝子を含むトウモロコシ細胞系統の単離二本鎖DNA切断が誘導する相同性を介する組換えの分析を発展させるために、核ゲノム中に単一コピーで組み込まれた、I-SceI認識部位が先行しプロモーターを欠くbar遺伝子を含むトウモロコシ細胞の懸濁液を分離した。I-SceIエンドヌクレアーゼをコードする植物で発現可能なキメラ遺伝子の送達、およびbar遺伝子の5’末端に作動可能に連結されたCaMV35Sプロモーターを含む修復DNAの共同送達、による二本鎖DNA切断誘導によって、35Sプロモーターが相同性を介する標的指向DNA挿入により挿入され、その結果ホスフィノトリシンPPTに対する耐性を与える機能的なbar遺伝子が得られる。分析を模式的に図1に表わす。標的座位を、従来のクローニング技術によって作動可能に次のDNA領域を連結することにより構成した:aノパリン合成酵素遺伝子からの3’末端終止シグナルおよびポリアデニル化シグナル、bプロモーターを欠くbarをコードするDNA領域、cI-SceI認識部位を含むDNA領域、dAtumefaciens遺伝子7からの3’末端終止およびポリアデニル化シグナル3’g7、eノパリン合成酵素プロモーター、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、および3’ocsシグナルを含む植物で発現可能なネオマイシン耐性遺伝子。このDNA領域を、T-DNAベクターのT-DNA境界間に挿入した。T-DNAベクターをpTTAM78と名付けたT-DNAのヌクレオチド配列については配列番号5を参照のこと。T-DNAベクターを直接用いて、EP0469273に記述された方法によりHe89由来のトウモロコシ細胞懸濁液を用いてトウモロコシのプロトプラストを形質転換した。T-DNAベクターをまたAgrobacteriumtumefaciensC58ClRifへも導入して、得られたAgrobacteriumをHe89由来の細胞系統を形質転換するために用いた。T24プロトプラストの形質転換により得られるおよび、14-1および1-20系統Agrobacteriumを介する形質転換により得られるなどの標的座位コンストラクトpTTAM78の単一コピーを含む多数の標的系統を同定した。N6M細胞懸濁培地中のこれらの標的系統から細胞懸濁液を確立し、振盪機120rpmで光を当て25°Cで増殖させた。懸濁液を毎週継代培養した。相同性に基づく標的指向挿入修復DNA、pTTA82は、T-DNA境界間に作動可能に連結された下記のDNA領域を含むT-DNAベクターである:abar遺伝子のアミノ末端部分のみをコードするDNA領域;b部分的なI-SceI認識部位認識部位の5’末端に位置する13個のヌクレオチドを含むDNA領域;cCaMV35Sプロモーター領域;d部分的なI-SceI認識部位認識部位の3’末端に位置する9個のヌクレオチドを含むDNA領域;eAtumefaciens遺伝子7由来の3’末端終止およびポリアデニル化シグナル3’g7;fキメラの植物発現可能なネオマイシン耐性遺伝子;gCaMV35Sプロモーターの制御下の欠落を有するI-SceIエンドヌクレアーゼをコードする遺伝子。pTTA82のT-DNAヌクレオチド配列を配列番号6に示す。この修復DNAを、ろ紙上に薄層として塗布した懸濁液由来の細胞中へ粒子を撃ち込むことによって、pCV78実施例1を参照のことと共同送達した。ろ紙をMahqlVII基質上にプレートした。DNAを細胞へ、PDS-1000/HeBiolistics装置を用いて撃ち込んだ。マイクロキャリアの調製およびその上へのDNAのコーティングは、ほとんどSanfordetal1992記載の通りに行った。粒子撃ち込みパラメーターは次の通りであった:標的距離9cm、撃ち込み圧力1350psi、ギャップ距離1/4、およびマイクロキャリア飛行距離11cm。撃ち込み直後に組織を、選択的でないMhilVII基質上に移した。粒子撃ち込みによる成功したDNA送達の対照として、3つの標的系統にも、CaMV35Sプロモーター制御下のキメラbar遺伝子を含むプラスミドDNApRVA52でコートされたマイクロキャリアによって撃ち込みを行った。撃ち込み4日後に、フィルタを、25mgLPPTを補ったMhlVII基質上に、または50mgLPPTを補ったAhx1.5VIIino1000基質上に移した。14日後に、フィルタを、標的系統T24および14-1用の10mgLのPPTを有する新鮮なMhlVII培地、および標的系統1-20用の25mgLのPPTを有するMhlVII基質の上に移した。2週間後に、標的指向挿入である可能性のあるイベントを、PPTに対するそれらの耐性に基づいて評価した。これらのPPT耐性イベントは、LiberlyLinkCornLeaf/SeedテストStrategicDiagnosticsIncにおいても陽性であった。撃ち込み38日後のPPT耐性カルスの数:PPT耐性イベントを、さらに10mgLのPPTを含むMhlVII基質上で継代培養し、またカルス材料を分子分析に用いた。20の独立のTSI候補を、サザン解析によって、35Sプロモーターならびにノパリン合成酵素遺伝子由来の3’末端終止およびポリアデニル化シグナルをプローブとして用いて解析した。予期された断片のサイズに基づいて、イベントはすべて完全な標的指向配列挿入イベントであるように見えた。その上、標的指向配列挿入イベントの約半分についてのさらに詳しい解析は、修復DNAまたはI-SceIをコードするDNAのいずれについても追加の非標的指向組込みを示さなかった。標的指向挿入イベントのうちの8つから増幅されたDNAの配列分析が、これらのイベントが確かに完全な相同組換えに基づいたTSIイベントであることを実証した。これらのデータに基づくと、相同組換えに基づいたDNA挿入対正常な非正統的組換の比率は、1-20に対する約30から、14-1に対する17、および24に対する約1まで変化する。Puchtaetal1996、pH5.8に調節し、2.5gLGelrite登録商標で凝固させた。Mhi1VII:0.5gL2-N-モルホリノエタンスルホン酸MES、0.2Mマニトール、2蔗糖、lmgL2,4-ジクロロフェノキシ酢酸2,4-D、を補ったN6培地、pH5.8に調節し、2.5gLGelrite登録商標で凝固させた。Mh1VII:0.2Mマニトールを含まない以外は、Mhi1VII基質に同じ。Ahxl.5VIIino1000:1000mgLミオ-イノシトール、0.1mgLチアミン-HCl、0.5mgLニコチン酸、0.5mgLピリドキシン-HCl、0.5gLMES、30gL蔗糖、10gLグルコース、1.5mgL2,4-D、を補ったMS塩類、pH5.8に調節し、2.5gLGelrite登録商標で凝固させた。LSIDhyl.5:0.5mgLニコチン酸、0.5mgLピリドキシン-HCl、1mgLチアミン-HCl、100mgLミオ-イノシトール、6mMプロリン、0.5gLMES、20gL蔗糖、10gLグルコース、1.5mgL2,4-D、を補ったMS塩類、pH5.2に調節した。N6M:マクロ要素:2830mgLKNO3、433mgLNH42SO4;166mgLCaCl2.2H2O;250mgLMgSO4.7H2O;400mgLKH2PO4;37.3mgLNa2EDTA;27.3mgLFeSO4.7H2O、MSミクロ要素:500mgLバクトトリプトン、0.5gLMES、lmgLチアミン-HCl、0.5mgLニコチン酸、0.5mgLピリドキシン-HCl、2mgLグリシン、100mgLミオ-イノシトール、3蔗糖、0.5mgL2,4-D、pH5.8に調節した。表1は、合成I-SceIコード領域に対する可能なトリヌクレオチドコドンの選択を表わす配列番号2中のヌクレオチド配列も参照のこと。表2は、合成I-SceIコード領域に対する好ましい可能なトリヌクレオチドの選択を表わす配列番号3中のヌクレオチド配列も参照のこと。"