式の、式中、各R1およびR2が、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり;R3が、アルキル、アルケニル、アルキニル;R4KR4nであり;その各々が、0~6個のR5で置換され;R4が、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり;R5が、ハロゲン、アルキル、OR6、N2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり;Kが、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、またはであり;R6が、H、アルキル、または治療的物質であり;nが、1~4の整数であり;xが、2~10の整数であり;各yが独立して、0~100の整数であり;zが、1~10の整数であり;ならびに各Xaaが独立して、アミノ酸であるポリペプチドであって;水溶液中で、実質的にαヘリックス二次構造を有する、ポリペプチド。BCL2ファミリーポリペプチドに結合する、請求項1記載のポリペプチド。抗アポトーシスポリペプチドである、請求項1記載のポリペプチド。BH1ドメイン、BH2ドメインまたはBH3ドメインに結合する、請求項1記載のポリペプチド。ミトコンドリア細胞死を活性化する、請求項1記載のポリペプチド。細胞死を活性化する、請求項1記載のポリペプチド。細胞死を阻害する、請求項1記載のポリペプチド。BH3ドメインを含む、請求項1記載のポリペプチド。xが、2、3または6である、請求項1記載のポリペプチド。各yが独立して、3~15の間の整数である、請求項1記載のポリペプチド。R1およびR2が各々独立して、HまたはC1C6アルキルである、請求項1記載のポリペプチド。R1およびR2が各々独立して、C1C3アルキルである、請求項1記載のポリペプチド。R1およびR2の少なくとも一方がメチルである、請求項11記載のポリペプチド。R1およびR2がメチルである、請求項12記載のポリペプチド。R3がアルキルである、請求項1記載のポリペプチド。xが3である、請求項14記載のポリペプチド。R3がC8アルキルである、請求項15記載のポリペプチド。xが6である、請求項14記載のポリペプチド。R3がC11アルキルである、請求項17記載のポリペプチド。R3がアルケニルである、請求項1記載のポリペプチド。xが3である、請求項18記載のポリペプチド。R3がC8アルケニルである、請求項20記載のポリペプチド。xが6である、請求項19記載のポリペプチド。R3がC11アルケニルである、請求項19記載のポリペプチド。R3が直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルである、請求項1記載のポリペプチド。R3がR4KR4であり;および、R4が直鎖アルキル、アルケニル、またはアルキニルである、請求項1記載のポリペプチド。SEQIDNO:1のアミノ酸配列と少なくとも約60同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1記載のポリペプチド。R3がアルキルまたはアルケニルである、請求項15記載のポリペプチド。R1またはR2の少なくとも一方がアルキルである、請求項15記載のポリペプチド。R1またはR2の各々が独立して、HまたはC1C3アルキルである、請求項11記載のポリペプチド。R1およびR2がメチルである、請求項1記載のポリペプチド。xが3または7であり、およびzが0である、請求項1記載のポリペプチド。R3がC8またはC11のアルキルまたはアルケニルである、請求項1記載のポリペプチド。SEQIDNO:2のアミノ酸配列と少なくとも約80同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1記載のポリペプチド。細胞膜を介して輸送される、請求項1記載のポリペプチド。細胞膜を介して能動輸送される、請求項1記載のポリペプチド。蛍光部分または放射性同位元素を更に含む、請求項1記載のポリペプチド。23個のアミノ酸を含み;R1およびR2がメチルであり;R3がC8アルキル、C11アルキル、C8アルケニル、またはC11アルケニルであり;ならびにxが2、3または6である、請求項1記載のポリペプチド。アフィニティー標識を更に含む、請求項1記載のポリペプチド。標的化部分を更に含む、請求項1記載のポリペプチド。ビオチン部分を更に含む、請求項1記載のポリペプチド。図5に記されたポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドである、請求項1記載のポリペプチド。式のポリペプチドを生成する方法であって、式のポリペプチドを提供する工程;および式の化合物を触媒で処理し、閉環メタセシスを促進し、これにより式の化合物を提供する工程:式中、各R1およびR2が、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル;ヘテロアリールアルキル;またはヘテロシクリルアルキルであり;各nが独立して、1~15の整数であり;xが2、3または6であり;各yが独立して、0~100の整数であり;zが1~3の整数であり;および各Xaaが独立してアミノ酸であり;ならびにポリペプチドが水溶液中で、αヘリックス構造を含む工程を含む、方法。ポリペプチドが、BCL2ファミリーメンバーのポリペプチドに結合する、請求項43記載の方法。触媒がルテニウム触媒である、請求項43記載の方法。閉環メタセシスに続いて、還元剤または酸化剤を提供する工程を更に含む、請求項43記載の方法。還元剤がH2であるか、または酸化剤が四酸化オスミウムである、請求項46記載の方法。請求項1記載の化合物を被験者へ投与することを含む、被験者を治療する方法。追加の治療的物質を投与する工程を更に含む、請求項48記載の方法。請求項1記載の化合物を被験者へ投与することを含む、被験者の癌を治療する方法。追加の治療的物質を投与することを更に含む、請求項45記載の方法。式である、請求項1記載の化合物のライブラリー。アポトーシス促進のための候補化合物を同定する方法であって:ミトコンドリアを提供する工程;ミトコンドリアを、請求項1記載の化合物と接触する工程;シトクロムc放出を測定する工程;および請求項1記載の化合物の存在下のシトクロムc放出を、請求項1記載の化合物の非存在下のシトクロムc放出と比較する工程を含み、請求項1記載の化合物の存在下のシトクロムc放出の増加が、アポトーシス促進のための候補化合物として請求項1記載の化合物を同定する、方法。式の、式中、各R1およびR2が、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり;R3が、アルキル、アルキニル、アルキニル;R4KR4n、または天然のアミノ酸側鎖であり;その各々が、0~6個のR5で置換され;R4が、アルキル、アルキニル、またはアルキニルであり;R5が、ハロゲン、アルキル、OR6、N2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり;Kが、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、またはであり;R6が、H、アルキル、または治療的物質であり;R7が、アルキル、アルケニル、アルキニル;R4KR4n、または天然のアミノ酸側鎖であり;その各々が、0~6個のR5で置換され;nが、1~4の整数であり;xが、2~10の整数であり;各yが独立して、0~100の整数であり;zが、1~3の整数であり;ならびに各Xaaが独立して、アミノ酸である、ポリペプチドであって:;ならびに水溶液中で、実質的にαヘリックス二次構造を有する、ポリペプチド。式の、式中、各R1およびR2が、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり;R3が、アルキル、アルケニル、アルキニル;R4KR4nであり;その各々が、0~6個のR5で置換され;R4が、アルキル、アルキニル、またはアルキニルであり;R5が、ハロゲン、アルキル、OR6、N2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり;Kが、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、またはであり;R6が、H、アルキル、または治療的物質であり;nが、1~4の整数であり;xが、2~10の整数であり;各yが独立して、0~100の整数であり;zが、1~3の整数であり;ならびに各Xaaが独立して、アミノ酸である、ポリペプチドであって:;ならびに円偏光二色性により決定される場合、水溶液中で少なくとも5のαヘリックス性を有する、ポリペプチド。円偏光二色性により決定される場合、少なくとも35のαヘリックス性を有する、請求項55記載のポリペプチド。円偏光二色性により決定される場合、少なくとも50αヘリックス性である、請求項55記載のポリペプチド。円偏光二色性により決定される場合、少なくとも60αヘリックス性を有する、請求項55記載のポリペプチド。円偏光二色性により決定される場合、少なくとも70αヘリックス性を有する、請求項55記載のポリペプチド。円偏光二色性により決定される場合、少なくとも80αヘリックス性を有する、請求項55記載のポリペプチド。円偏光二色性により決定される場合、少なくとも90αヘリックス性を有する、請求項55記載のポリペプチド。式の、式中、各R1およびR2が、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり;R3が、アルキル、アルケニル、アルキニル;R4KR4nであり;その各々が、0~6個のR5で置換され;R4が、アルキル、アルキニル、またはアルキニルであり;R5が、ハロゲン、アルキル、OR6、N2、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光部分、または放射性同位元素であり;Kが、O、S、SO、SO2、CO、CO2、CONR6、またはであり;R6が、H、アルキル、または治療的物質であり;nが、1~4の整数であり;xが、2~10の整数であり;各yが独立して、0~100の整数であり;zが、1~3の整数であり;ならびに各Xaaが独立して、アミノ酸である、ポリペプチドであって;;式の、式中、R1、R2、Xaa、x、yおよびzが全て、先に式について定義されたものであるポリペプチドと比較して、円偏光二色性により決定されたαヘリックス性の少なくとも125倍の増加を有するポリペプチド。式のポリペプチドと比較して、円偏光二色性により決定されたαヘリックス性の少なくとも15倍の増加を有する、式である、請求項62記載のポリペプチド。式のポリペプチドと比較して、円偏光二色性により決定されたαヘリックス性の少なくとも175倍の増加を有する、式である、請求項62記載のポリペプチド。式のポリペプチドと比較して、円偏光二色性により決定されたαヘリックス性の少なくとも20倍の増加を有する、式である、請求項62記載のポリペプチド。式のポリペプチドと比較して、円偏光二色性により決定されたαヘリックス性の少なくとも25倍の増加を有する、式である、請求項65記載のポリペプチド。式のポリペプチドと比較して、円偏光二色性により決定されたαヘリックス性の少なくとも3倍の増加を有する、式である、請求項65記載のポリペプチド。式のポリペプチドと比較して、円偏光二色性により決定されたαヘリックス性の少なくとも4倍の増加を有する、式である、請求項65記載のポリペプチド。アポトーシスを阻害する候補化合物を同定する方法であって:ミトコンドリアを提供する工程;ミトコンドリアを、請求項1記載の化合物と接触する工程;シトクロムc放出を測定する工程;ならびに請求項1記載の化合物の存在下のシトクロムc放出を、請求項1記載の化合物の非存在下のシトクロムc放出と比較する工程を含み、請求項1記載の化合物の存在下のシトクロムc放出の減少が、アポトーシス阻害の候補化合物として請求項1記載の化合物を同定する、方法。詳細な説明本発明は、一部、BCL2ファミリータンパク質の架橋したαヘリックスドメインポリペプチドは、それらの未架橋の対応物よりも、改善された薬理学的特性を有するという発見を基にしている。更に驚くべきことに、架橋されたポリペプチドは、温度依存型およびエネルギー依存型の輸送機構により、細胞膜を透過することができることが発見された。これらのポリペプチドは、ふたつの非天然のアミノ酸間にテザーを含み、このテザーは、ポリペプチドのαヘリックス二次構造を著しく増強する。一般にテザーは、1個または2個のヘリックスターンの長さにわたって伸びる。従って、iおよびi3;iおよびi4;または、iおよびi7に位置したアミノ酸は、化学修飾および架橋の理想的な候補である。従って例えば、ペプチドが配列Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa8、Xaa9を有する場合、Xaa1とXaa4の間、またはXaa1とXaa5の間、またはXaa1とXaa8の間の架橋は、Xaa2とXaa5の間、またはXaa2とXaa6の間、またはXaa2とXaa9の間などの架橋のように有用である。加えてモデルポリペプチドは、ひとつはXaa1とXaa5の間、もうひとつはXaa9とXaa13の間に位置した、架橋の2個のセットの組込みにより調製された。この二重架橋は、二重結合メタセシス反応の慎重な立体化学制御により実現された。従って本発明は、配列を更に安定化するか、またはより長いポリペプチドの一配列の安定化を促進するための、ポリペプチド配列内の1個よりも多い架橋の組込みを包含している。これらのポリペプチドが、一部容易に合成するには余りにも長い場合は、独立して合成された架橋されたペプチドは、ネイティブケミカルライゲーションと称される技術により結合することができる。新規の架橋ポリペプチドは、例えば、1個または複数のαヘリックスドメインを有するタンパク質またはポリペプチドを模倣または試験するために有用である。ファミリーメンバーが少なくとも1個のαヘリックスドメインを有するひとつのタンパク質ファミリーは、BCL2タンパク質ファミリーである。これらのタンパク質は、細胞アポトーシス経路に関与している。一部のBCL2ファミリーメンバーは、プロアポトーシス機能を有し、他のものは、抗アポトーシス機能を有し、更に他のものは、細胞状態の変化により機能を変化する。従ってBCL2ファミリーメンバーの1個または複数のモチーフを模倣し、その結果様々なBCL2関連した活性を変調する、安定化したポリペプチドを作製することが望ましい。SAHB3BID化合物パネルの化学合成長さが変動するオレフィン側鎖を含むαα二置換された非天然のアミノ酸を、図3のスキームに従い合成した。化学架橋したBIDBH3ペプチドは、2個または4個の天然のアミノ酸の対応する合成アミノ酸との交換によりデザインされた。置換は、個別の位置、すなわちi、およびi4位またはi、およびi7位で行い、このことは、αヘリックスの同一面上に反応性残基を配置することにより架橋化学を促進する。アポトーシスタンパク質の間で高度に保存されたアミノ酸は、X線結晶解析およびNMR試験を基にタンパク質タンパク質相互作用において重要であることがわかったそれらの配列に加え、ある環境において特異的には置き換えられず、保存されたアミノ酸は、活性を増強するように、他のアミノ酸と置き換えられる。SAHB3BID化合物は、固相ペプチド合成、それに続く合成アミノ酸の、それらのオレフィン含有側鎖を介した、オレフィンメタセシスを用いた架橋により生成された。生成されたSAHB3BID化合物の変種を、図5aに例示している。BID機能を変更することがわかっている特異的変異を組込んでいるSAHB3BID変種も、生物学的実験における陰性対照として利用するために構築された。選択された化合物のアミノ末端は更に、フルオレセインイソチオシアネートまたはビオチン結合したリシンにより誘導体化し、各々、細胞透過性試験および生化学アッセイ法用の標識されたSAHB3BID化合物を生成する。いくつかの合成において、C末端トリプトファンがその配列へ加えられ、精製および濃度決定を目的とするUV標識として役立ち;N末端グルタミン酸は、細胞透過を強力に促進するためにその化合物の全体のpIを増加する目的で、数個のペプチドを排除した。メタセシス法は、SAHB3BADおよびSAHB3BIMを含む代わりのSAHB3類の生成に、容易に適用された。非天然のアミノ酸は、核磁気共鳴スペクトルおよび質量分析により特徴決定された。ペプチド合成は、固相条件リンクアミドAM樹脂、およびFmoc主鎖保護基ケミストリーを用い、手動または自動化されたペプチド合成装置上のいずれかにより行った。天然のFmoc保護されたアミノ酸のカップリングのために、アミノ酸の10当量および112モル比のカップリング試薬HBTUHOBtDIEAを使用した。非天然のアミノ酸を、112モル比のHATUHOBtDIEAでカップリングした。オレフィンメタセシスは、脱気したジクロロメタンに溶解した10mMGrubbs触媒を用い固相において行い、および室温で2時間反応した。選択された化合物のアミノ末端は更に、bアラニンおよびフルオレセインイソチオシアネートSigmaDMFDIEAにより誘導体化され、蛍光的に標識された化合物を生成した。C末端トリプトファンを、精製および濃度決定を目的とした、UV標識として利用するために組込まれ;SAHBA化合物は同じく、C末端トリプトファンおよびN末端グルタミン酸を伴わずに合成し、後者の修飾は、これらの分子の全体のpIを増加するために行った。メタセシスされた化合物の単離は、トリフルオロ酢酸依存性の脱保護および切断により実現され、エーテル沈殿し粗生成物を得、および逆相C18カラム上で高速液体クロマトグラフィーを行い純粋な化合物を得た。純粋な生成物の化学組成は、LCMS質量分析およびアミノ酸分析により確認した。図5bは、オレフィン系アミノ酸の立体化学を含む、図5aのペプチドのサブセットを概略的に表す。SAHB3BID化合物は増強されたαヘリックス性を示す本発明者らは、プロアポトーシスBH3ドメインのヘリックス性の割合を試験し、およびこれらの未修飾のペプチドは、溶液中で主にランダムコイルであり、αヘリックスの含量は全て25未満であることを発見した。簡単に述べると、化合物は、水性50mMリン酸カリウム溶液に溶解し、2550mMに濃縮した。CDスペクトルは、下記の標準測定パラメータを用い、JascoJ710分光偏光計上で20°Cで得た:波長、190260nm;ステップ分解能、05nm;速度、20nm秒;アキュムレーション、10;反応、1秒;バンド幅、1nm;経路長、01cm。各ペプチドのαヘリックスの含量は、平均残基分子楕円率φ222obsをモデルヘリックスであるデカペプチドについて報告されたφ222obsで除算することにより算出した。各場合において、化学架橋は、BIDのBH3ドメインのαヘリックスの割合を増加し、SAHB3BIDAおよびSAHB3BIDBは、5倍を超える増強を実現した。SAHB3BIDAは、SAHB3BIDA陰性対照のGlyのGluへの点変異体であるが、SAHB3BIDAに対する類似のヘリックス含量を示した。従って全ての炭化水素架橋は、水溶液中で本質的にランダムコイルであるアポトーシスペプチドを、構造上主としてαヘリックスであるものへ転換することができる。興味深いことに、BIDBH3ペプチドの安定化における4番目のヘリックスターンの重要性は、SAHB3BIDB23merが16merであるSAHB3BIDBへ切断される場合に観察されたヘリックス性の減少により強調される。全ての炭化水素架橋はSAHB3BAD化合物のプロテアーゼ抵抗性を増加するペプチド骨格のアミド結合は、プロテアーゼによる加水分解を受け易く、これによりペプチド化合物をインビボにおける迅速な分解に対し脆弱とする。しかしペプチドヘリックス形成はアミド骨格を埋め、その結果これをタンパク質分解性切断から保護する。SAHB3BIDAに、インビトロトリプシンタンパク質分解を施し、未修飾のBIDBH3ペプチドと比較して分解速度の何らかの変化について評価した。SAHB3BIDAおよび未修飾のペプチドを、トリプシンアガロースと共にインキュベーションし、かつこの反応を、遠心分離およびそれに続くHPLC注入により、様々な時点で反応停止し、280nmでの紫外線吸収により残存する基質を定量した。簡単に述べると、BIDBH3およびSAHB3BIDA化合物を、トリプシンアガロースと共に、0分間、10分間、20分間、90分間、および180分間インキュベーションした。反応を、卓上遠心分離での高速遠心により停止し;分離された上清中の残存する基質を、HPLCを用いた220nmでのピーク検出により定量した。このタンパク質分解性反応は、一次反応速度論を示し、速度定数kは、lnS対時間のプロットから決定した。実験は3通りで行い、SAHB3BIDAのトリプシン抵抗性の未修飾のペプチドと比べ35倍の増強を明らかにした。従って、αヘリックスのコア部分でそれらを埋めることによる、トリプシン感受性アミド結合の増強された保護は、より安定したペプチド性化合物をもたらし、その結果このような化合物を血清中で特に安定とすることができる。エクスビボにおける血清安定性試験について、FITC結合されたペプチドBIDBH3およびSAHB3BIDAを、新鮮なマウス血清と共に、0時間、1時間、2時間、4時間、8時間、および24時間37°Cでインキュベーションした。血清標本を液体窒素中で新たに凍結し、凍結乾燥し、01トリフルオロ酢酸を含有する5050アセトニトリル水中で抽出し、その後励起放出を495530nmに設定した蛍光検出を用いHPLCを用いて定量することにより、無傷のFITC化合物のレベルを決定した。この分析の結果は、図10bに示した。SAHB3BIDAのインビボ安定性を調べるために、FITC結合したBIDBH3ペプチドおよびSAHB3BIDAの10mgkgを、NODSCIDマウスへ注射し、血液標本を、注射後0時間、1時間、4時間および22時間で採血した。その後新鮮な血清25μL中の無傷のFITC化合物のレベルを測定した。この分析の結果は図10cに表し、これはSAHB3BIDAは、22時間にわたり容易に検出可能であり、投入量の13は、22時間後に依然測定可能であることを示している。対照的に、BIDBH3は、わずかに12が、注射後1時間で検出可能であった。SAHB3BID化合物は高親和性抗アポトーシス結合を維持するマルチドメインアポトーシスタンパク質の結合ポケットとBIDBH3ヘリックスの疎水性残基の間の重大な相互作用による干渉を避けるために、全ての炭化水素架橋は、BIDBH3両親媒性ヘリックスの帯電面上に選択的に配置した。蛍光偏光競合的結合実験を行い、GSTBCL2結合に関するFITC標識した未修飾のBIDBH3ペプチドと競合するSAHB3BIDの効能を評価した。全てのSAHB3BID化合物は、GSTBCL2への高親和性結合を明らかにし、最大のヘリックス割合を伴うふたつの化合物であるSAHB3BIDAおよびBは、最高の親和性結合を同様に示す。注目すべきは、SAHB3BIDAおよびBのGlyのGluへの変異は、先の試験から予想されるように、高親和性結合を排除する。本発明者らは更に、SAHB3BIDAのGlyのSerへの変異は、このアッセイ法においてBCL2結合を除去したことを決定した。23merSAHB3BIDBの16merへの切断は、BCL2結合親和性の喪失を生じ、これは先に説明されたαヘリックスの減少と一致する。FITC標識されたBIDBH3ペプチドは、BCL2へKD220nMで結合し、一旦結合すると、標識されないBIDBH3によるこの相互作用の交換は、IC50838nMで生じる。このことは、BCL2へのBH3結合は、その相互作用にとって好ましい全体の立体構造の変化の引金を引き、過剰量の標識されないペプチドが、予め結合されたFITC標識されたBIDBH3と交換することの必要性を生じるようなモデルを裏付けている。本発明者らは、BADBH3ドメインは、BCL2結合について増強されたKD41nMを有すること、ならびにこれは予め結合したFITCBIDBH3を、IC50173nMで交換できることを更に示した。同様の実験において、SAHB3BIDAは、FITCBIDBH3をBCL2から、IC5062nMで交換することがわかり、これは未修飾のBIDBH3ペプチドと比べ、交換効能の13倍を超える増加を反映している。これらのデータは、SAHB3BIDAは、未修飾のBH3ペプチドと比べ、BCL2へ増強された親和性で結合することを確認し、ならびに化学架橋によるαヘリックス構造の前組織化は、標的結合に関する速度論的利点を提供することを示唆している。蛍光偏光による直接結合アッセイ法は、BIDBH3ペプチドへの架橋の組込みは、未修飾のBIDBH3ペプチドと比べ、SAHB3BIDAの、抗アポトーシスマルチドメインタンパク質BCL2、およびプロアポトーシスマルチドメインタンパク質BAXの両方への、増強された結合親和性を生じたことを明らかにした。直接BCL2蛍光偏光結合アッセイ法は、SAHB3BIDAのBCL2結合親和性の、未修飾のBIDBH3ペプチドと比べて、6倍の増強を明らかにした。GlyのGluへの変異であるSAHBAは、高親和性結合を排除し、有用な対照として使用した。簡単に述べると、C末端欠失されたGSTBCL2をコードしているプラスミドを含む大腸菌BL21を、アンピシリン含有Luriaブロスにおいて培養し、01mMIPTGで誘導した。細菌ペレットを、溶解緩衝液中に再懸濁し、音波処理した。20000xgで20分間遠心後、上清を、グルタチオンアガロースビーズのカラムに負荷した。これらのビーズを、PBSで洗浄し、50mMグルタチオン、50mMTrisHClで処理し、このタンパク質を溶離し、その後結合アッセイ緩衝液に対して透析した。蛍光化した化合物を、GSTBCL2と共に、結合緩衝液中で室温でインキュベーションした。結合活性を、PerkinElmerLS50Bルミネセンス分光光度計上で、蛍光偏光により測定した。KD値は、Prismソフトウェアを使用する、非線形回帰分析により決定した。完全長BAXタンパク質は、先に説明されたように調製し、蛍光偏光アッセイ法を先に説明したように行った。SAHB3BIDAはBCLXLに結合するSAHB3BIDAが、抗アポトーシスマルチドメインタンパク質の指定された結合溝と特異的に相互作用するかどうかを決定するために、SAHB3BIDAの添加前および添加後の15N標識されたBCLXLの二次元15N1H異種核一量子相関スペクトルを記録し、対応するBIDBH315NBCLXLスペクトルと比較した。簡単に述べると、C末端欠失されたBCLXLをコードしているプラスミドを含む大腸菌BL21は、15NH4Clを含有するM9最小培地において培養し、均質な15N標識されたタンパク質を生成した。組換えタンパク質を、細菌から分離した。標識されないSAHB3BIDAおよびBIDBH3ペプチドを生成し、先に説明したように精製した。以下の11複合体を、D2OまたはH2OD2Oを溶媒とする50mMリン酸カリウム、50mM塩化ナトリウム、5DMSO中に01mMで調製した。15NBCLXL未標識BIDBH3、15NBCLXL未標識SAHB3BIDA。二次元15N1H異種核一量子相関スペクトルを、これらふたつの複合体について記録し、リガンド結合の場合の共鳴の変化を分析した。HSQCスペクトルの全般的類似性は、SAHB3BIDAの添加後にBCLXLに生じた構造の変化は、BIDBH3ペプチドにより認められたものとほぼ同一であることを示している。SAHB3BID化合物はミトコンドリアシトクロムCの迅速かつ特異的放出を引き起こすインビトロにおけるSAHB3BID化合物の生物学的活性を評価するために、シトクロムc放出アッセイ法を、精製されたマウス肝臓ミトコンドリアを用いて行った。ミトコンドリアを、SAHB3BID化合物1μMおよび100nMと共に40分間インキュベーションし、その後上清およびミトコンドリア画分を分離し、シトクロムcELISA法を施した。バックグラウンドシトクロムc放出を、各試料の総放出から減算し、実際のシトクロムc放出の割合を決定した。同じ実験を、BIDBH3活性化に反応してミトコンドリアシトクロムcを放出しない、Bakマウスから単離されたマウス肝臓ミトコンドリアについても同時に行い;その結果BAKミトコンドリアからのデータを、SAHB3BID処理に反応したBAK依存性シトクロムc放出の陰性対照として利用した。各々の場合において、二重架橋したSAHB3BIDEを除き、未修飾のペプチドと比べ、SAHB3BID化合物1μMに反応したシトクロムc放出はほぼ倍加した。BAK非依存型のシトクロムc放出が、SAHB3BIDA、SAHB3BIDB、および特にSAHB3BIDDによりこの用量で観察される。このシトクロムc放出は、αヘリックスの非特異的膜攪乱作用を示すことがあるのに対し、SAHB3BID誘導したBAK非依存型のシトクロムc放出の成分の役割は、更に調べる価値がある。興味深いことに、BAK非依存型シトクロムc放出を最も顕著なレベル誘導するSAHB3BID化合物であるSAHB3BIDDは同じく、最も疎水性のSAHB3BID化合物であり;SAHB3BIDDは、逆相C18カラムから、95アセトニトリル5水で溶離するのに対し、他のSAHB3BID化合物は5075アセトニトリルで溶離する。欠失したBH3ドメインを伴うBID変異体は、BAK非依存型シトクロムc動員を促進することができ、高度に疎水性のBIDヘリックス6が、この活性に関与している。SAHB3BIDDは、BIDヘリックス3および6の特徴を模倣することにより、BAK依存型および非依存型の両シトクロムc放出を示すことはもっともらしく見える。110の用量のSAHB3BIDAおよびBは、選択的BAK依存型シトクロムc放出活性を維持している。特にSAHB3BIDBの効能は、最大活性化されたミリストイル化されたBIDタンパク質と比べ好ましく、これは用量30nMで、これらの条件下で、約65のシトクロムcを放出する。ヘリックスの前組織化は、未修飾のペプチドと比べより迅速なシトクロムc放出の引金を引くことができるかどうかを決定するために、最も活性のあるSAHB3BID化合物AおよびBに、更なる速度論試験を施した。前記実験と同様に、野生型およびBakマウス由来のマウス肝臓ミトコンドリアを、様々な濃度で、これらの化合物に曝露し、10分および40分間隔でシトクロムc放出についてアッセイした。未修飾のペプチドは、試験した最高用量で、10分で10未満の放出を引き起こしたのに対し、SAHB3BIDBは、この時点で400nMをわずかに下回る放出のEC50を有し、ほぼ最大のシトクロム放出は1μMであった。同様にSAHB3BIDAは、10分間隔で著しいシトクロムc放出の引金を引く。40分でのシトクロムc放出のEC50は、未修飾のペプチドについて29μMであり、SAHB3BIDAおよびBについて、各々、310nMおよび110nMであった。従ってSAHB3BIDAおよびBは、40分の時点でのシトクロムc放出活性の10~25倍の増強を示す。BAK依存型シトクロムc放出は経時的に増加するのに対し、BAK非依存型放出は、10分および40分の時点の間では変化せず、このことはこの独特な放出は早期に生じ、および10分以内に最大に到達することを示唆している。注目すべきことに、陰性対照であるSAHB3BIDAのGlyのGluへの点変異体SAHB3BIDAは、Bak非依存型シトクロムc放出のみを生じ、これはSAHB3BIDAは、Bak依存型ミトコンドリアアポトーシス経路を介してのみ機能することを確認している。まとめると、これらのシトクロムc放出データは、SAHB3BIDAおよびBは、BAK依存型シトクロムc放出を特異的に誘導することが可能であり、未修飾のペプチドと比べ顕著に増強された効能および速度論を伴うことを示している。SAHB3BID化合物は無傷の細胞に浸透するフルオレセイン誘導体化されたSAHB3BID化合物、BIDBH3ペプチド、およびBIDヘリックス6ペプチドを、ジャーカットT細胞系白血病細胞と共に4~24時間インキュベーションし、引き続きFACS選別し、白血病細胞の標識の割合を決定した。細胞表面に結合した化合物による混乱を招く結果を避けるために、ジャーカット細胞は完全に洗浄し、最近の報告に従いトリプシンによる過剰切断を施した。試験した各化合物について、トリプシン消化後、FITCシグナルプロファイルに著しい変化は無く、このことはこれらのペプチドの場合、FITC標識された化合物のほとんどまたは全てが表面に結合されていないことを示唆している。BIDBH3処理した細胞はFITC陰性であるのに対し、FITCSAHB3BIDA処理およびFITCSAHB3BIDA処理した両細胞は、FITCシグナルの右側シフトにより示されるように、FITC陽性であった。これらの細胞透過性試験におけるFITCSAHB3BIDAおよびFITCSAHB3BIDAの同様のプロファイルは、生物学的実験における陰性対照としての点変異体化合物を使用する場合に特に重要である。BIDヘリックス6は細胞透過性および膜攪乱性ペプチドであるが、これをこの実験のFITC標識に関する陽性対照として使用した。驚くべきことに、FITCSAHB3BIDAは、エンドサイトーシス、温度依存型およびエネルギー依存型輸送経路を介し細胞へ侵入するように見えることが発見された。FITCSAHB3BIDAの細胞移入は、時間依存様式で生じる。細胞エンドサイトーシスが4°Cでの実験遂行またはエネルギー毒アジ化ナトリウムおよび2デオキシグルコース処理により阻害される場合、細胞標識は、各々、阻害されるか、または著しく減弱された。注目すべきは、FITCSAHB3BIDAで標識されたジャーカット細胞は37°Cで、ヨウ化プロピジウム陰性であることであり、これはこの架橋されたペプチドは単なる透過性向上物質としては機能しないが;対照的に、FITCBIDヘリックス6は、容易に両方の温度で浸透し、PI陽性の程度により証明されるように、細胞を効果的に透過性向上することを確認している。これらのデータは、SAHB3BID化合物に関する侵入のエンドサイトーシス式の機序を裏付けており、転写のHIVトランス活性化因子のような、他の細胞透過性ペプチドに関する侵入の機序として細胞表面接着、それに続くエンドサイトーシスに言及している最近の報告と一致している。TATおよびアンテナペディアのような高塩基性のCPPは、細胞表面で負帯電したグリコサミノグリカンへの接着により濃縮されると考えられるのに対し、SAHB3BIDA移入は、ヘパリンにより用量反応様式で阻害されない。SAHB3BID両親媒性αヘリックスの生物物理特性は、静電気および/または脂質膜の相互作用を介した個別の細胞接触を促進することができる。SAHB3BIDAの細胞内局在を決定するために、共焦点顕微鏡実験を用いた。ジャーカットT細胞系白血病細胞を、先に説明されたFITC標識された化合物と共に、または血清代替品と共に、4時間インキュベーションし、引き続き37°Cで更に16時間インキュベーションし、PBSで2回洗浄した後、スーパープロストプラスガラススライド上で600RPMで5分間サイトスピンした。その後細胞を、4パラホルムアルデヒド中で固定し、PBSで洗浄し、核を対比染色するためにTOPRO3ヨウ素と共にインキュベーションし、Vectashieldmounting培地で処理し、その後共焦点顕微鏡により撮像した。二重標識実験について、固定した細胞を更に、TOM20に対する一次抗体と共に、TOPRO3対比染色前に、ローダミン結合した二次抗体と共にインキュベーションした。ライブ共焦点顕微鏡については、ジャーカット細胞の二重標識は、FITCSAHBAおよびMitoTracker、テトラメチルローダミンイソチオシアネートデキストラン44kDもしくは70kD、またはAlexaFluor594トランスフェリンと共に、4時間または24時間行った。光退色の制限のために、BCL2を過剰発現しているジャーカット細胞を、ライブ共焦点顕微鏡に使用し、FITC造影を最適化した。ミトコンドリアのFITCSAHBA標識は、BCL2を過剰発現しているジャーカットよりもより明るく、その結果これらの細胞を用い、画像捕獲が促進された。処理されたジャーカットは、2回洗浄し、その後PBS中に再懸濁し、および湿った搭載調製物を、BioRad1024またはZeissLSM510レーザー走査型共焦点顕微鏡により分析した。固定された切片において、SAHB3BIDA化合物は、白血球細胞の細胞質周辺に局在化し、形質膜または表面に蛍光の証拠はなく;蛍光の小胞パターンは、オルガネラに特異的な局在を示している。FACSデータと一致し、FITCBIDBH3で処理したジャーカット細胞は、蛍光標識を示さなかった。FITCSAHB3BIDA処理した細胞は、選択的細胞内蛍光を示しかつそれらの細胞構造を維持するのに対し、FITCBIDヘリックス6処理した細胞は、散在性に標識され、破壊された細胞形態を明らかにしている。FITCSAHB3BIDAおよびミトコンドリア膜タンパク質Tom20に対する抗体を使用する同時局在化試験は、SAHB3BIDA蛍光の、SAHB3BIDの分子標的の予想された部位であるミトコンドリアとの広範な重複を明らかにした。SAHB処理の4時間後に行った生存細胞の撮像は、FITCSAHBAのデキストラン標識したエンドソームとの最初の同時局在、しかしトランスフェリン標識したエンドソームとの非局在を明らかにし、これは液相ピノサイトーシスによる細胞取込みと一致し、エンドサイトーシス経路が、TATおよびAntpペプチドについて決定された。24時間の時点で、細胞内FITCSAHBAは、生存細胞におけるMitoTracker標識されたミトコンドリアとの増大された同時局在を示し、これはミトコンドリア外膜タンパク質であるTom20に対する抗体を用い、固定された細胞において観察されたミトコンドリアの同時局在と一致する。まとめると、FACSデータおよび共焦点画像は、全ての炭化水素架橋は、SAHB3BIDA化合物を、無傷の細胞により移入されるようになることを明らかにしている。SAHB3BID化合物はB細胞、T細胞および混合型白血病細胞においてアポトーシスの引金を引くSAHB3BID化合物が培養物中で増殖する白血病細胞の増殖を停止することができるかどうかを評価するために、325ジフェニルテトラゾリウムブロミド、MTTアッセイ法を、連続希釈したSAHB3BIDAを用い、培養物中のT細胞、B細胞および混合型白血病細胞について行った。SAHB3BIDAは、白血病細胞を、IC50が22μM、102μM、47μM、16μM、および27μMで阻害した。BIDBH3ペプチドもSAHB3A点変異体も、この用量範囲では作用を有さなかった。この代謝停止はアポトーシス誘導を表しているかどうかを評価するために、ジャーカット白血病細胞を、血清非含有培地において、10μMのSAHB3BIDAおよびSAHB3BIDB、SAHB3BIDAおよびSAHB3BIDにおいて16時間インキュベーションし、次にアネキシンV処理した細胞のフローサイトメトリー検出によりアポトーシスをアッセイした。SAHB3BIDAおよびBは、処理後20時間で40~60のアネキシンV陽性を示したのに対し、未修飾のペプチドおよびSAHB3BID点変異体は作用がなかった。担体試薬を伴う未修飾のBH3ペプチドまたは非特異的ミトコンドリア攪乱作用を伴う操作したヘリックスのいずれかを使用する同様の試験は、アポトーシスを活性化するためには200~300μMの用量が必要であった。BCL2を過剰発現するように操作されたジャーカット細胞を使用する追加の対照実験を引き続き行い、SAHB3BID誘導したアポトーシスは、過剰なBCL2により減少されるかどうかを評価し、このことはこれらの化合物が、細胞内で、ミトコンドリアアポトーシス経路を通じ特異的に機能することを示唆すると考えられる。実際、10μMのSAHB3BIDAおよびBの野生型ジャーカット細胞に対するプロアポトーシス作用は、BCL2を過剰発現している細胞においては除去された。しかしこの保護的作用は、SAHB3BIDAの用量漸増により克服することができるが、SAHB3BIDAによっては克服されず;加えて、BCL2結合親和性を示さないSAHB3BIDAのglyからserへの点変異体Aは、プロアポトーシスとして野生型およびBCL2過剰発現しているジャーカット細胞において同等に有効である。SAHB3BIDAおよびSAHB3BIDAを使用するアポトーシス誘導アッセイ法を更に、REH、MV411、およびSEMK2細胞株において行い、同様の結果を得た。まとめると、これらのデータは、SAHB3BID化合物は、増殖している白血病細胞に浸透しおよび殺傷することができることを示している。観察されたプロアポトーシス作用は、SAHB3BIDAのglyのgluへの変異およびBCL2の細胞過剰発現により選択的に除去され、この知見は、SAHB3BID化合物は、指定されたミトコンドリアアポトーシス経路を介して機能することを強調している。SAHB3BIDAおよびSAHB3BIDAはインビボにおける白血病抑制を示すNODSCDIマウスに、300cGyの全身照射を施し、その後安定したルシフェラーゼ発現を示している4x106個SEMK2M1白血病細胞を静脈内注射した。このマウスに、Dルシフェリンの腹腔内注射後の全身のルミネセンスを定量する、InVivoImagingSystemを用い、白血病細胞生着について毎週モニタリングした。0日目に、白血病マウスを撮像し、その後1日目、2日目、3日目、5日目、6日目に、10mgkgのSAHB3BIDA、SAHB3BIDAの静脈内注射または無注射により処置した。全身のルミネセンスを、4および7日目に測定した。図26aを参照した、群間の腫瘍負荷の分析は、SAHB3BIDAおよびSAHB3BIDA化合物は、未処置の対照マウスと比べ、白血病を抑制することを明らかにしている。図26bを参照した、全身のルミネセンス画像は、7日目までのより低レベルのより局在化された疾患を示しているSAHB3BIDA処置したマウスと比べ、未処置群におけるより進行した白血病を明らかにしている。興味深いことに、BCL2により隔絶されないG→S変異体は、白血球増殖の抑制において、親化合物SAHB3BIDAよりも、より強力であるように見える。更なる動物実験において、白血病マウスを0日目に造影し、その後1日目、2日目、3日目、6日目、および7日目に、10mgkgのSAHB3BIDA、5mgmlのSAHB3BIDA、またはビヒクル対照により、静脈内処置した。全身のルミネセンスを、4日目および8日目に測定した。図27aを参照した、群間の腫瘍負荷の分析は、未処置の対照マウスと比べ、SAHB3BIDAは用量依存式に白血病を抑制することを明らかにしている。図27bを参照した、全身のルミネセンス画像は、8日目までの白血行進行が顕著に鈍化しているSAHB3BIDA処置したマウスと比べ、未処置群におけるより進行した白血病を明らかにしている。SCIDベージュマウスおよびRS411白血病細胞を代わりに使用した追加の動物実験において、SAHB3BIDA処置は、インビボにおける白血病細胞増殖を一貫して抑制した。インビボ白血病画像撮影のために、マウスを、イソフラン吸入により麻酔をかけ、Dルシフェリンの腹腔内注射により同時に処置した。光子放出を、InVivoImagingSystemを用いて撮像し、全身の生物発光を、光子フラックスの積分により定量した。実験1日目に開始し、マウスには、SAHB3BIDAまたはビヒクルの毎日の尾静脈注射を7日間投与した。マウスは、1日目、3日目および5日目に撮像し、実験期間中は毎日生存をモニタリングした。SAHB3BIDAおよびビヒクル処置したマウスの生存分布は、KaplanMeier法を用いて決定し、およびログランク検定を用いて比較した。Fisherの正確確率検定を使用し、3~5日目に治療に失敗したマウスの割合を比較し、ここで治療の失敗は進行または死亡として、成功は安定した疾患または退縮として定義した。満了したマウスには、屍検を施した。対照マウスは、1~5日目の増加した生物発光フラックスにより定量した場合、白血病細胞増殖の進行の加速を明らかにした。SAHB3A処置は、3日目以降の白血病拡大を抑制し、腫瘍退縮が5日目までに認められた。代表的マウス画像は、マウスの脾臓および肝臓の進行性白血病細胞浸潤を示しているが、SAHB3A処置マウスにおいては、処置の5日目までに、これらの解剖学的部位で疾患が退縮した。このコホートにおける死へ至る時間の中央値は、対照動物について5日であるのに対し、SAHBA処置マウスで、7日間の処置期間に死亡例はなく、代わりに生存の中央値は11日であった。SAHBA処置したマウスの組織学的試験は、この化合物の正常組織に対する明らかな毒性を示さなかった。SAHB3BIDA処置およびSAHB3BIDA処置したマウスを比較する追加の試験において、点変異体SAHBを受け取った動物は、腫瘍退縮を示さず、SAHB3BIDAの抗白血病活性のインビボ特異性を強調している。ポリペプチド場合によっては、本明細書に説明された炭化水素テザーは更に操作することができる。一例として、炭化水素アルケニルテザーの二重結合を用いて合成されたは、酸化され、以下の化合物のひとつを提供する。エポキシド部分またはひとつの遊離ヒドロキシル部分のいずれかは、更に官能基化することができる。例えばエポキシドは、求核試薬により処理され、これは例えばタグの結合に使用することができる追加の官能性を提供する。このタグは、化合物の体内の所望の位置への指示、または体内の化合物の位置の追跡を補助するために使用することができる。あるいは、追加の治療的物質を、官能基化されたテザーへ化学的に付着することができる。このような誘導体化は、代わりに、ポリペプチドのアミノもしくはカルボキシ末端の合成操作によるか、またはアミノ酸側鎖を介して実現することができる。炭化水素テザーが説明される一方で、他のテザーも想起される。例えば、このテザーは、エーテル、チオエーテル、エステル、アミンまたはアミド部分の1種または複数を含むことができる。場合によっては、天然のアミノ酸側鎖を、このテザーへ組込むことができる。例えば、テザーは、セリンのヒドロキシル、システインのチオール、リシンの第1級アミン、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸の酸、またはアスパラギンもしくはグルタミンのアミドなどの官能基とカップリングすることができる。従って、2個の非天然のアミノ酸のカップリングにより作製されたテザーを使用するよりもむしろ、天然のアミノ酸を用いテザーを作製することが可能である。天然のアミノ酸と共に1個の非天然のアミノ酸を使用することも可能である。更にテザーの長さは変動することが想起される。例えばαヘリックス二次構造上に比較的高度の拘束を提供することが望ましい場合には、より短い長さのテザーを使用することができるのに対し、αヘリックス二次構造上により少ない拘束を提供することが望ましい場合には、従って比較的長いテザーが望ましい。加えて、アミノ酸iからi3、iからi4;および、iからi7に広がるテザーの例が、主としてαヘリックスの単一面上にあるテザーを提供するために説明されているが、これらのテザーは、多くのアミノ酸の任意の組合せに広がるように合成することができる。場合によっては、αヘリックス二次構造の安定性を改善するために、α二置換されたアミノ酸がこのポリペプチドにおいて使用される。しかしモノα置換基の使用も想起される場合は、α二置換されたアミノ酸は不要である。当業者に理解されるように、本明細書に説明された化合物の合成法は、当業者には明らかであると思われる。加えて所望の化合物を得るために、様々な合成工程を、別の手順または順番で行うことができる。本明細書に説明された化合物の合成において有用な合成化学の転換および保護基の方法論は、当該技術分野において公知であり、ならびに例えばRLarock、ComprehensiveOrganicTransformations、VCHPublishers;TWGreeneandPGMWuts、ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis、2dEd、JohnWileyandSons;LFieserandMFieser、FieserandFiesersReagentsforOrganicSynthesis、JohnWileyandSons;および、LPaquette編集、EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis、JohnWileyandSonsおよびそれらの続版に説明されたものを含む。本発明のペプチドは、化学合成法により生成することができ、これは当業者に周知である。例えば、Fieldsetal、Chapter3、SyntheticPeptidesAUsersGuide、GrantWH編集FreemanCo、NewYork、NY、1992、p77を参照のこと。ここでペプチドは、例えばAppliedBiosystemsPeptideSynthesizerModel430Aまたは431上で、側鎖が保護されたアミノ酸を使用する、tBocまたはFmocケミストリーのいずれかにより保護されたαNH2による固相合成の自動Merrifield技術を用いて合成することができる。本明細書に説明されたペプチドを作製するひとつの方法は、固相ペプチド合成を使用する。C末端アミノ酸は、リンカー分子との、酸に不安定な結合を介して、架橋したポリスチレン樹脂に付着される。この樹脂は、合成に使用される溶媒中に不溶性であり、このことは、過剰な試薬および副産物の洗浄除去を、比較的単純かつ迅速なものとしている。N末端は、Fmoc基により保護され、これは酸の中で安定しているが、塩基により除去することができる。任意の側鎖の官能基は、塩基に安定し、酸に不安定な基により保護される。比較的長いペプチドは、未変性ケミカル連結を使用し、個々の合成ペプチドの結合により作製される。あるいは、比較的長い合成ペプチドは、周知の組換えDNA技術を用い合成することができる。このような技術は、詳述されたプロトコールを伴う周知の標準マニュアルにおいて提供される。本発明のペプチドをコードしている遺伝子を構築するために、そのアミノ酸配列は、逆に翻訳され、アミノ酸配列をコードしている核酸配列、好ましくはそこで遺伝子が発現される生物に最適であるコドンを伴う核酸配列を得ることができる。次に、典型的にはこのペプチドおよび必要ならば任意の調節エレメントをコードしているオリゴヌクレオチドの合成により、合成遺伝子が作製される。合成遺伝子は、適当なクローニングベクターへ挿入され、および宿主細胞へ形質移入される。その後このペプチドは、選択された発現システムおよび宿主に適した適当な条件下で発現される。このペプチドは、常法により精製および特徴決定される。これらのペプチドは、例えば、AdvancedChemtechから入手可能なハイスループット多チャネルコンビナトリアル合成装置の使用のように、ハイスループット、コンビナトリアル様式で作製することができる。図28a28fは、架橋したペプチドを作製するために有用なドメインを含む様々なペプチドを表す。治療法本発明は、異常なBCL2ファミリーメンバー発現もしくは活性に関連した障害のリスクのある被験者または障害を有する被験者を治療する、予防的および治療的の両方法を提供する。本明細書において使用される治療という用語とは、疾患、疾患の症状もしくは疾患への素因の治癒、回復、軽減、緩和、変更、救済、改善、改良、もしくは影響することを目的として、疾患、疾患の症状もしくは疾患への素因を有する患者への治療的物質の適用もしくは投与、または患者から単離された組織もしくは細胞株への治療的物質の適用もしくは投与と定義される。治療的物質は、小型分子、ペプチド、抗体、リボザイムおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むが、これらに限定されるものではない。一部のBCL2型の障害は、少なくとも一部は、異常なレベルの1種または複数のBCL2ファミリーメンバー、または異常な活性を示す1種または複数のBCL2ファミリーメンバーの存在により引き起こされることが可能である。従って、BCL2ファミリーメンバーのレベルおよび/もしくは活性の減少またはBCL2ファミリーメンバーのレベルおよび/もしくは活性の増強は、障害症状の改善をもたらすと考えられる。本発明のポリペプチドは、癌および新生物性状態を治療、予防、および/または診断するために使用することができる。本明細書において使用される癌、過増殖物および新生物という用語は、自律増殖能、すなわち迅速に繁殖する細胞増殖により特徴付けられる異常な状態または条件を有する細胞を意味する。過増殖性および新生物性の病態は、病原性として、すなわち病態の特徴もしくは構成として分類することができるか、または非病原性として、すなわち正常からは逸脱しているが病態には関連していないとして分類することができる。この用語は、組織病理学的型または侵襲の段階に関わりなく、全ての種類の癌性増殖または腫瘍形成性プロセス、転移性組織または悪性転換された細胞、組織もしくは臓器を含むことを意味する。病原性過増殖性細胞は、悪性腫瘍増殖を特徴とする病態において生じる。非病原性過増殖性細胞の例は、創傷修復に関連した細胞の増殖を含む。細胞の増殖および/または分化の障害の例は、癌、例えば癌腫、肉腫、または転移性障害を含む。本化合物は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、このような癌の転移などの管理のための新規治療的物質として作用することができる。転移性腫瘍は、乳房、肺、肝臓、結腸および卵巣起源のものを含むが、これらに限定されるものではない、多数の原発性腫瘍型から生じる。癌または新生物の状態の例は、線維肉腫、筋肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、胃癌、食道癌、直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮癌、頭部および頸部の癌、皮膚癌、脳腫瘍、扁平上皮癌、皮脂腺癌腫、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、直腸細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、線毛上皮癌、精上皮腫、胎生期癌、ウイルムス腫瘍、頚癌、精巣癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭癌、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、稀突起神経膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、またはカポジ肉腫を含むが、これらに限定されるものではない。増殖性障害の例は、造血系新生物性障害を含む。本明細書において使用される造血系新生物性障害という用語は、例えば、骨髄系、リンパ系もしくは赤血球系統、またはそれらの細胞の前駆体から生じる、造血起源の過形成細胞および/または新形成細胞が関連した疾患を含む。好ましくはこれらの疾患は、分化不良の急性白血病、例えば赤芽球性白血病および急性巨核芽球性白血病から生じる。骨髄系障害の追加例は、急性前骨髄性白血病、急性骨髄性白血病および慢性骨髄性白血病を含むが、これらに限定されるものではなくCritRevinOncolHemotol1126797において検証;リンパ系悪性疾患転移は、B細胞系ALLおよびT細胞系ALLを含む急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、前リンパ球性白血病、毛様細胞性白血病およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症を含むが、これらに限定されるものではない。悪性リンパ腫の追加例は、非ホジキンリンパ腫およびそれらの変種、末梢T細胞リンパ腫、成人T細胞白血病リンパ腫、皮膚T細胞リンパ腫、大型顆粒リンパ球性白血病、ホジキン疾患およびリードスターンバーグ疾患を含むが、これらに限定されるものではない。乳房の細胞増殖性および/または分化性の障害の例は、例えば上皮過形成、硬化性腺疾患、および小管乳頭腫などを含む、増殖性乳房疾患;例えば、線維腺腫などの間質性腫瘍、葉状腫瘍、および肉腫、ならびに大管乳頭腫のような上皮腫瘍などの、腫瘍;原位置の腺管癌および原位置の小葉癌を含む原位置癌腫、ならびに侵襲性腺管癌、侵襲性小葉癌、髄様癌、膠様癌、管状腺癌、および侵襲性乳頭状癌を含むが、これに限定されない侵襲性癌腫、ならびにその他の悪性新生物を含む、乳房の癌腫を含むが、これらに限定されるものではない。男性乳房の障害は、女性化乳房および癌腫を含むが、これらに限定されるものではない。肺の細胞増殖性および/または分化性の障害の例は、新生物随伴症状を含む気管支原性癌、気管支肺胞癌、気管支類癌腫などの腫瘍、その他の腫瘍、および転移性腫瘍;炎症性胸膜滲出、非炎症性胸膜滲出、気胸を含む胸膜の病理、ならびに単発性線維性腫瘍および悪性中皮腫を含む胸膜腫瘍を含むが、これらに限定されるものではない。結腸の細胞増殖性および/または分化性の障害の例は、非新生物性ポリープ、腺癌、家族性症候群、結腸直腸の発癌、結腸直腸癌、および類癌腫を含むが、これらに限定されるものではない。肝臓の細胞増殖性および/または分化性の障害の例は、結節過形成、腺腫、および肝臓の原発性癌および転移性腫瘍を含む悪性腫瘍を含むが、これらに限定されるものではない。卵巣の細胞増殖性および/または分化性の障害の例は、体腔上皮腫瘍、漿液性腫瘍、粘液性腫瘍、内膜性腫瘍、透明細胞腺癌、嚢胞腺癌、ブレンナー腫瘍、表面上皮腫瘍などの、卵巣腫瘍;成熟奇形腫、単皮膚性奇形腫、未熟な悪性奇形腫、未分化胚細胞腫、内胚葉洞腫瘍、絨毛癌などの、生殖細胞腫瘍;顆粒卵胞膜細胞腫、胸膜線維腫、アンドロブラストーマ、hill細胞腫瘍、および性腺芽種などの、性索間質性腫瘍;ならびに、クルーケンベルグ腫瘍などの転移性腫瘍を含むが、これらに限定されるものではない。本明細書に説明されたポリペプチドは、過活性細胞死または生理的発作などに起因した細胞死により特徴付けられる状態を、治療、予防または診断するために使用することもできる。早期のまたは望ましくない細胞死、あるいは望ましくないもしくは過剰な細胞増殖により特徴付けられる状態のいくつかの例は、低細胞低形成状態、無細胞無形成状態、または高細胞高形成状態を含むが、これらに限定されるものではない。例の一部は、ファンコーニ貧血、再生不良性貧血、サラセミア、先天性好中球減少症、骨髄形成異常を含むが、これらに限定されるものではない血液疾患を含む。アポトーシスの減少に作用する本発明のポリペプチドを使用し、望ましくないレベルの細胞死を伴う障害を治療することができる。従って、本発明の抗アポトーシスペプチドを使用し、ウイルス感染症に随伴した細胞死につながるもののような障害、例えばヒト免疫不全ウイルス感染に随伴した感染症を治療することができる。多種多様な神経疾患は、神経の特異的セットの段階的喪失により特徴付けられ、ならびにこの感染の抗アポトーシスペプチドを、これらの障害の治療に使用することができる。このような障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性軸索硬化症、色素性網膜炎、脊髄性筋萎縮症、および脳変性の様々な形を含む。これらの疾患における細胞喪失は、炎症反応を引き起こさず、アポトーシスは、細胞死の機序であるように見える。加えて、多くの血液疾患が、減少した血液細胞の生成に関連している。これらの障害は、慢性疾患に関連した貧血、再生不良性貧血、慢性好中球減少症、および骨髄異形成症候群を含む。骨髄異形成症候群および再生不良性貧血の一部などの血液細胞生成の障害は、骨髄内の増加したアポトーシス細胞死に関連している。これらの障害は、アポトーシスを促進する遺伝子の活性化、間質細胞もしくは造血系生存因子の後天性欠乏、または毒素および免疫応答メディエーターの直接作用の結果である。細胞死に関連したふたつの一般的障害は、心筋梗塞および心臓発作である。両障害において、虚血の中心部分の細胞は、血流の急激な喪失事象において引き起こされるが、これは壊死の結果迅速に死滅するように見える。しかし中央の虚血帯の外側の細胞は、より長期にわたり死滅し、形態学的にはアポトーシスにより死滅するように見える。本発明の抗アポトーシスペプチドを使用し、望ましくない細胞死に関連したこのような障害を全て治療することができる。本明細書に説明されたポリペプチドにより治療することができる免疫障害のいくつかの例は、臓器移植時の拒絶反応、関節炎、狼瘡、IBD、クローン病、喘息、多発性硬化症、糖尿病などを含むが、これらに限定されるものではない。本明細書に説明されたポリペプチドにより治療することができる神経障害のいくつかの例は、アルツハイマー病、ダウン症、オランダ型遺伝性脳出血性アミロイド症、反応性アミロイドーシス、家族性アミロイドーシス、蕁麻疹および難聴を伴うネフロパシー、マックルウェルズ症候群、特発性骨髄腫;マクログロブリン血症随伴性骨髄腫、家族性アミロイド型多発性ニューロパシー、家族性アミロイド性心筋症、弧発性心アミロイド、全身老人性アミロイドーシス、成人発症型糖尿病、インスリノーマ、弧発性心房性アミロイド、甲状腺の髄様癌、家族性アミロイドーシス、アミロイドーシスによる遺伝性脳出血、家族性アミロイド型多発性ニューロパシー、スクレーピー、クロイツフェルトヤコブ病、ゲルストマンシュトロイスラーシャインカー症候群、ウシ海綿脳症、プリオン依存型疾患、およびハンチントン病を含むが、これらに限定されるものではない。本明細書に説明されたポリペプチドにより治療することができる内分泌障害のいくつかの例は、糖尿病、甲状腺機能低下症、下垂体機能低下症、副甲状腺機能低下症、性腺機能低下症などを含むが、これらに限定されるものではない。本発明の化合物および方法で治療または予防することができる心臓血管系障害の例は、アテローム動脈硬化症、心筋梗塞、心臓発作、血栓症、動脈瘤、心不全、虚血性心疾患、狭心症、心臓突然死、高血圧性心疾患;細動脈硬化症、小血管疾患、ネフロパシー、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高脂血症、黄色腫症、喘息、高血圧、気腫および慢性肺疾患などの、非冠状動脈疾患;または、介入的手技に関連した心臓血管系の状態、例えば血管形成術、シャント、ステント、合成もしくは天然の切除移植片、留置カテーテル、バルブもしくは他の埋込み可能な用具の留置後の再狭窄を含むが、これらに限定されるものではない。好ましい心臓血管系障害は、アテローム動脈硬化症、心筋梗塞、動脈瘤、および心臓発作を含む。薬学的組成物および投与経路本明細書において使用される、本明細書に説明した式の化合物を含む本発明の化合物は、それらの薬学的に許容される誘導体またはプロドラッグを含むように定義される。薬学的に許容される誘導体またはプロドラッグは、レシピエントへの投与の場合に、本発明の化合物を提供することが可能であるような、本発明の化合物の任意の薬学的に許容される塩、エステル、エステルの塩、または他の誘導体を意味する。特に好ましい誘導体およびプロドラッグは、このような化合物が哺乳類に投与された場合に、本発明の化合物のバイオアベイラビリティを増大するか、または親種と比べ親化合物の生物学的区画への送達を増強するものである。好ましいプロドラッグは、水への溶解度または消化管膜を通る能動輸送を増強する基が、本明細書に説明された式の構造に付加されている誘導体を含む。本発明の化合物は、選択的生物学的特性を増強する適当な官能性を付加することにより修飾されてもよい。このような修飾は、当該技術分野において公知であり、かつ所定の生物学的区画への生物学的透過を増大し、経口のアベイラビリティを増加し、注射による投与を可能にするために溶解度を増加し、代謝を変更しおよび排泄率を変更するものを含む。本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機および有機の酸および塩基に由来するものを含む。適当な酸塩の例は、酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、パモ酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩およびウンデカン酸塩を含む。適当な塩基に由来する塩は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよびN4塩を含む。本発明は、本明細書に明らかにされた化合物の塩基性窒素含有基の四級化も想起している。水または油へ溶解性または分散性の生成物は、このような四級化により得ることができる。本明細書に説明された式の化合物は、例えば、注射により、静脈内、動脈内、皮内、腹腔内、筋肉内もしくは皮下に;または、経口、口腔内、鼻腔内、経粘膜、局所的、眼用調製物、もしくは吸入により、用量約0001~約100mgkg体重の範囲で、もしくは具体的薬物の必要要件に従い、投与することができる。本明細書の方法は、所望のまたは言及された作用を実現するのに有効な量の化合物または化合物組成物を投与することを企図している。典型的には、本発明の薬学的組成物は、1日に約1~約6回で、あるいは連続注入として投与される。このような投与は、慢性または急性の療法として使用することができる。単位剤形を製造するために担体物質と一緒にすることができる活性成分の量は、治療される宿主および投与の具体的様式に応じて変動すると考えられる。典型的調製物は、約5~約95の活性化合物を含有すると考えられる。あるいは、このような調製物は、約20~約80の活性化合物を含有する。先に言及したものよりもより低いまたはより高い投与量が、必要なこともある。任意の特定の患者に関する具体的用量および治療方式は、使用される具体的化合物の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、併用薬、疾患、状態または症状の重症度および経過、患者の疾患、状態または症状に対する素因、および治療担当医の判断を含む、様々な要因によって決まると考えられる。患者の状態の改善時には、必要ならば、本発明の化合物、組成物または組合せの維持量が投与されてよい。その後改善された状態が維持されるレベルへ、用量または投与頻度、または両方が、症状の関数として減量される。しかし患者は、疾患症状の何らかの再発を基に、長期にわたり断続的治療を必要とすることができる。本発明の薬学的組成物は、本明細書に説明された式の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩;例えば、モルヒネまたはコデインを含む、追加の物質;ならびに、任意の薬学的に許容される担体、補助剤またはビヒクルを含有する。本発明の別の組成物は、本明細書に説明された式の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩;および、薬学的に許容される担体、補助剤またはビヒクルを含有する。本明細書に描かれた組成物は、本明細書に描かれた式の化合物に加え、存在するならば追加の治療的物質を、BCL2ファミリーメンバー依存性の障害またはそれらの症状を含む、疾患または疾患症状の変調を実現するための有効量含有する。薬学的に許容される担体または補助剤という用語は、患者へ本発明の化合物と一緒に投与することができ、ならびに化合物の治療量を送達するのに十分な用量で投与した場合にそれらの薬理学的活性を破壊せずおよび無毒であるような、担体または補助剤を意味する。本発明の薬学的組成物中で使用することができる薬学的に許容される担体、補助剤およびビヒクルは、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化型ドラッグデリバリーシステム、例えばdαトコフェロールポリエチレングリコール1000スクシネートなど、薬学的剤形で使用される界面活性剤、例えばTweensまたは他の同様の高分子送達マトリックス、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和した植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、マグネシウムトリシリケート、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂を含むが、これらに限定されるものではない。αシクロデキストリン、βシクロデキストリンおよびγシクロデキストリンのようなシクロデキストリン類も、本明細書に説明された式の化合物の送達を増強するために、有利に使用することができる。本発明の薬学的組成物は、経口、非経口、吸入スプレー、局所的、直腸、鼻腔内、口腔内、膣内または埋込み式貯蔵庫を介して投与してもよく、好ましくは経口投与または注射による投与である。本発明の薬学的組成物は、任意の通常の無毒の薬学的に許容される担体、補助剤またはビヒクルを含んでもよい。場合によってはこの製剤のpHは、薬学的に許容される酸、塩基または緩衝液により、製剤された化合物またはその送達型の安定性を増強するように調節される。本明細書において使用される非経口という用語とは、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液包内、陰嚢内、鞘内、病巣内および頭蓋内の注射または注入技術を含む。この薬学的組成物は、無菌の注射可能な調製物の形、例えば、無菌の注射可能な水性または油性の懸濁液であることができる。この懸濁液は、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用し、当該技術分野において公知の技術に従い製剤することができる。無菌の注射可能な調製物は、例えば、13ブタンジオール溶液のような、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、無菌の注射可能な液体または懸濁液であってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒の中で使用されるものは、マンニトール、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液である。加えて無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒として、通常利用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性の不揮発油を使用することができる。オリーブ油またはひまし油、特にそれらのポリオキシエチレン型のような、天然の薬学的に許容される油分である、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体のような脂肪酸は、注射可能な調製物において有用である。これらの油性溶液または懸濁液は、乳剤および/または懸濁剤のような、薬学的に許容される剤形の製剤において通常使用される、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、またはカルボキシメチルセルロースもしくは同様の分散剤を含むこともできる。薬学的に許容される固形、液体、または他の剤形の製造において通常使用される、他の通常使用される界面活性剤、例えばTweensまたはSpansおよび/または他の同様の乳化剤またはバイオアベイラビリティ増加剤も、製剤目的で使用することができる。本発明の薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、乳剤および水性懸濁剤、分散剤および液剤を含むが、これらに限定されるものではない任意の経口的に許容される剤形で、経口投与することができる。経口使用するための錠剤の場合、通常使用される担体は、乳糖およびコーンスターチを含む。ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤も、典型的には添加される。カプセル剤での経口投与のためには、有用な希釈剤は、乳糖および無水コーンスターチである。水性懸濁剤および/または乳剤が経口的に投与される場合は、活性成分は、油相中に懸濁または溶解され、乳化剤および/または懸濁化剤と組合わせられる。望ましいならばある甘味剤および/または矯味矯臭剤および/または着色剤を添加することができる。本発明の薬学的組成物は、直腸投与のために、坐剤の形で投与することもできる。これらの組成物は、本発明の化合物を、室温では固形であるが直腸温度で液体であり、その結果直腸中で溶融し活性成分を放出するような、適当な非刺激性の賦形剤と混合することにより調製することができる。このような物質は、ココアバター、ビーズワックスおよびポリエチレングリコールを含むが、これらに限定されるものではない。本発明の薬学的組成物は、鼻腔用エアゾールまたは吸入により投与することができる。このような組成物は、薬学的製剤の技術分野において周知の技術に従い調製され、ならびにベンジルアルコールまたは他の適当な保存剤、バイオアベイラビリティを促進するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および/または他の当該技術分野において公知の溶解剤もしくは分散剤を使用し、生理食塩水中の溶液として調製されてよい。本発明の組成物が、本明細書に説明された式の化合物と1種または複数の追加の治療的または予防的物質の組合せを含有する場合、化合物および追加の物質の両方は、単剤療法様式で通常投与される用量の約1~100、より好ましくは約5~95の間の用量レベルで存在しなければならない。追加の物質は、反復投与様式の一部として、本発明の化合物とは個別に投与されてもよい。あるいはこれらの物質は、単独の組成物中に本発明の化合物と一緒に混合された、単位剤形の一部であってもよい。スクリーニングアッセイ法本発明は、1種または複数のBCL2ファミリータンパク質の活性を変調するポリペプチド、または1種または複数のBCL2ファミリータンパク質に結合するポリペプチドを同定する方法を提供する。本明細書に説明されたポリペプチドの結合親和性は、例えば滴定結合アッセイ法を用いて決定することができる。BCL2ファミリーポリペプチドまたはBHドメインを含むポリペプチドは、ポリペプチドまたはそれらの断片を含む蛍光標識されたBH3のような基質の存在下で、変動する濃度の候補化合物に曝露することができる。その後候補化合物の各濃度での作用が分析され、様々な濃度での候補化合物のBCL2ファミリー結合活性に対する作用が決定され、これには候補化合物のKiを算出するために使用することができる。この候補化合物は、競合的または非競合的様式で、BCL2型活性を変調することができる。直接結合アッセイ法も、BCL2ファミリータンパク質と蛍光標識された候補化合物の間で行い、結合相互作用に関するKdを決定することができる。候補化合物は、例えば、精製されたミトコンドリアからのシトクロムcの引金を引くことにおけるそれらの用量反応を測定することにより、インビトロにおける生物学的活性についてスクリーニングすることもできる。細胞透過性スクリーニングアッセイ法も想起され、これは蛍光標識された候補化合物が、無傷の細胞に適用され、その後細胞の蛍光について顕微鏡またはハイスループット細胞蛍光検出により、アッセイされる。本明細書に説明されたアッセイ法は、個々の候補化合物と共に行うか、または複数の候補化合物と共に行うことができる。アッセイ法が複数の候補化合物で行われる場合、このアッセイ法は、候補化合物の混合物を使用し行うか、または単独の候補化合物を有する各反応と平行反応で試行することができる。被験化合物または物質は、当該技術分野において公知であるコンビナトリアルライブラリー法の多くの手法を用いて得ることができる。ひとつの態様において、アッセイ法は、BCL2ファミリータンパク質またはそれらの生物学的活性部分を発現している細胞を、候補ポリペプチドと接触し、および被験化合物のBCL2型活性を変調する能力を決定する細胞を用いたアッセイ法である。細胞内で被験化合物のBCL2型活性を変調する能力を決定することは、例えばミトコンドリアからのシトクロムc放出のモニタリング、または他の関連のある物理的読値により実現することができる。ひとつの態様において、アッセイ法は、生化学アッセイ法であり、これによりアポトーシス経路における新規または公知の相互作用のパートナーを精製または同定するために、架橋したポリペプチドは、アフィニティー樹脂へ連結される。本明細書に引用された全ての参考文献は、印刷物、電子的、コンピュータで読取り可能な保存媒体または他の形にかかわらず、事実上それらの全体が本明細書に参照として組入れられており、これは要約、記事、雑誌、刊行物、テキスト、学術論文、インターネットのウェブサイト、データベース、特許および特許公報を含む。その他の適用本明細書に説明されたペプチドの生物学的関連のある適用は多数であり、以下の細胞コンパートメントベースの例により示されるように、容易に明らかであると思われる。細胞表面-HIV1タンパク質gp41の重要なヘリックス領域を示す天然のペプチドは、ウイルス融合を防止し、その結果HIV感染性を妨げることを示している。ヘリックスペプチドは、多くのウイルス宿主細胞感染症のパラダイムに必須である融合機序に参加し、その結果これらの重要なヘリックス領域の炭化水素ステープル式アナログは、ウイルス融合を阻害することにより、有効な抗生物質として機能することができる。全般的に、シグナル伝達経路を活性化または阻害するためにヘリックス境界面を用い、細胞表面と相互作用するリガンドは、本明細書に説明したポリペプチドの追加の適用を表している。膜内-受容体二量体およびオリゴマー形成は、リガンド誘導した受容体活性化およびシグナル伝達の主要な特徴である。膜貫通ヘリックスドメインは、このような必須のオリゴマー形成反応に広く参加し、およびこれらの密な膜内のヘリックスの会合を促進する特異的ペプチド配列が、定義されている。オリゴマー形成を介したこのような受容体の異常な活性化は、疾患病理に関与している。従って適当な状況において、膜貫通ヘリックス間相互作用の活性化または阻害は、治療上の恩恵があると考えられる。細胞質ゾル-細胞質ゾルの標的は、可溶性タンパク質標的、ならびにミトコンドリア、小胞体、ゴルジ網、リソソーム、およびペルオキシソームを含む特異的細胞質ゾル内オルガネラに会合したものを含む。アポトーシスの分野において、炭化水素ステープル式のBCL2ファミリードメインに関して、複数の細胞質ゾルおよびミトコンドリアアポトーシスタンパク質標的が存在する。プロアポトーシスタンパク質のBH3オンリーサブグループ内で、BH3ドメインの2種の主要なサブセットが同定された。BID様BH3、これはアポトーシスアクチベーターであり、ミトコンドリアにおけるBAKオリゴマー形成およびシトクロムc放出を誘導する;ならびに、BAD様BH3、これは抗アポトーシスマルチドメインタンパク質を選択的に標的化するアポトーシス増感剤であり、閾値下のレベルで活性化するドメインが最大有効であるようにすることができる。BH3オンリータンパク質のプロアポトーシス、対、抗アポトーシスマルチドメインファミリーメンバーに対する識別できる結合に加え、BH3ドメインは、抗アポトーシスタンパク質間の示差的結合を示す。例えば、BADは、抗アポトーシスBCL2へ優先的に結合するのに対し、BIMは、抗アポトーシスMCL1を標的化することが明らかにされている。これらの選択的相互作用の同定および探索は、異なるBCL2ファミリーメンバーは、異なる種類の癌に関与しているので、決定的に重要である。例えば、BCL2過剰発現は、濾胞性リンパ腫および概して化学療法抵抗性の発達の原因であるのに対し、MCL1は、多発性骨髄腫の病理進行において重要な役割を果たすと考えられている。多くのBH3ドメインを構造的に安定しおよび細胞透過性亢進物質に転換する能力は、癌細胞におけるアポトーシス経路を探索しかつ示差的に操作する重要な機会を提供すると考えられる。細胞質ゾルまたは細胞質ゾルオルガネラ内のヘリックス依存型相互作用の更なる標的化が想起されている。核-核転写因子およびそれらの修飾タンパク質は、核タンパク質および核酸とのペプチドのヘリックス相互作用を基に生理的プロセスの宿主を駆動する。核相互作用に携わる炭化水素ステープル式ペプチドの生成の実現可能性が、本発明者らの、ピコモルの親和性でMDM2と相互作用する炭化水素ステープル式p53ペプチドのパネルの合成により、最近明らかにされている。核内のタンパク質タンパク質相互作用の変調に加え、タンパク質核酸相互作用も、明らかな標的である。ホメオドメイン、基本的ヘリックスループヘリックス、核受容体、およびジンクフィンガー含有タンパク質などの複数の転写因子ファミリーは、それらのペプチドヘリックスを介して、DNAと直接相互作用し、遺伝子転写を活性化または阻害する。例として、ホメオドメインタンパク質は、全ての多細胞生物における増殖および分化の遺伝子プログラムを調節する必須の転写因子のファミリーである。これらのタンパク質は、ホメオドメインと称される、保存されたDNA結合モチーフを共有しており、これは60個のアミノ酸長のペプチドを含み、これは3個のαヘリックスを形成し、その3番目は、DNAの主要溝との直接接触を形成している。アポトーシスタンパク質のBH3ドメインのように、このホメオドメインは、示差的結合特異性および生理的活性を促進するために、ホモログ間で十分な変動を伴う、決定的なエフェクターモチーフである。タンパク質DNA相互作用は、複雑かつ広範であることができ、これにより転写事象の試験および選択的修飾を目的として、小型分子の開発に対するチャレンジを示す。高等生物において、ホメオドメインタンパク質は、発達時に高度に発現され、ボディプランを特定し、かつ組織分化を指示する。特異的ホメオタンパク質の過剰発現は、組織特異的分化プログラムを活性化し、例えば、マウス胚性幹細胞からの血液形成を生じる。典型的には未分化の細胞において発現されたホメオドメインタンパク質の異常なアップレギュレーション、または通常分化細胞において発現されるこのようなタンパク質の不適切なダウンレギュレーションのような、ホメオティック遺伝子発現の脱制御は、癌の発達および維持に貢献し得る。例えば、小児肺胞横紋筋肉腫において、PAX3またはPAX7DNA結合ドメインのフォークヘッドのトランス活性化ドメインへの融合は、細胞の形質転換に関与し;いくつかのHOX遺伝子のDNA結合ドメインに関与している転位は、白血病の病理進行に連結している。従って細胞送達のために、ホメオドメインペプチドのような、転写因子ヘリックスを化学的に安定化する能力は、健常および疾患の生物学的プロセスの大きさに寄与する多様な転写プログラムの研究および変更のためのケミカルツールボックスを得る可能性を有する。多くの本発明の態様が説明されている。しかし、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、様々な修飾を行うことができることは理解されると思われる。従って他の態様も、特許請求の範囲内である。