"薬剤的に許容可能なキャリアと、化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分と、を含む、脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるための医薬組成物。前記活性成分が、Z-ブチリデンフタリドである、ことを特徴とする請求項1に記載の医薬組成物。前記脳腫瘍細胞が、ヒト悪性神経膠腫である、ことを特徴とする請求項1又は2に記載の医薬組成物。テモゾロミドのテモゾロミド耐性脳腫瘍細胞に対する細胞毒性感受性を亢進させるために用いられる、請求項1乃至3のいずれか1項に記載の医薬組成物。薬剤的に許容可能なキャリアと、化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分と、を含む、脳腫瘍を治療するための医薬組成物。テモゾロミド、テモゾロミドの水和物、テモゾロミドのアイソスター、テモゾロミドの薬剤的に許容可能な塩、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の抗腫瘍成分をさらに含む、請求項5に記載の医薬組成物。前記抗腫瘍成分が、テモゾロミドである、ことを特徴とする請求項6に記載の医薬組成物。テモゾロミドと前記活性成分とが組み合わされて1未満のコンビネーションインデックスcombinationindexをもたらす、ことを特徴とする請求項7に記載の医薬組成物。前記活性成分Z-ブチリデンフタリドとしての用量が1日約30mg/kg-体重から約500mg/kg-体重であり、テモゾロミドの用量が1日約10mg/kg-体重から約100mg/kg-体重である、ことを特徴とする請求項7に記載の医薬組成物。前記活性成分Z-ブチリデンフタリドとしての用量が1日約40mg/kg-体重から約120mg/kg-体重であり、テモゾロミドの用量が1日約40mg/kg-体重から約80mg/kg-体重である、ことを特徴とする請求項9に記載の医薬組成物。前記脳腫瘍が、ヒト悪性神経膠腫である、ことを特徴とする請求項5乃至10のいずれか1項に記載の医薬組成物。前記活性成分及び前記抗腫瘍成分が一緒に、別々に、又は引き続いて投与される、ことを特徴とする請求項6乃至11のいずれか1項に記載の医薬組成物。前記活性成分が、Z-ブチリデンフタリドである、ことを特徴とする請求項5乃至12のいずれか1項に記載の医薬組成物。このように、治療中のテモゾロミドの不必要な過量投与を回避し患者への負担を軽減するために、脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるのに効果的な医薬組成物又は方法がいまだ必要とされている。加えて、脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性が低減される一方でテモゾロミドの効果が向上され得るとしたら、治療中の患者のさらなる一助となり得、患者への負担を軽減することができる。本発明の第一の目的は、対象における脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させる方法を提供することであり、該方法は、化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を前記対象に投与することを含む。好ましくは、前記活性成分は、Z-ブチリデンフタリドである。本発明の他の目的は、対象の脳腫瘍を治療する方法を提供することであり、該方法は、前記化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を前記対象に投与することを含む。好ましくは、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとが前記対象に投与される。本発明のさらなる目的は、脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるための医薬組成物を提供することであり、該医薬組成物は、薬剤的に許容可能なキャリア、並びに化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を含む。好ましくは、前記活性成分は、Z-ブチリデンフタリドである。本発明はまた、脳腫瘍を治療するための医薬組成物を提供し、該医薬組成物は、薬剤的に許容可能なキャリア、並びに化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を含む。好ましくは、前記活性成分は、Z-ブチリデンフタリドであり、より好ましくは、該医薬組成物はさらにテモゾロミドを含む。詳細な技術及び本発明のために実施された好ましい実施態様は、この技術分野における当業者が特許請求の範囲に記載された発明の特徴をよく理解できるように、添付された図とともに後述の段落において記載される。特にことわらない限り、本明細書中で特に後述の特許請求の範囲において用いられる一、該又は同様の用語は、単数形式及び複数形式の両方を包含するように理解されるべきである。脳腫瘍は、グリオーマと非グリオーマとに分けられ得る。最もよくみられる脳腫瘍はグリオーマであり、それには星状細胞腫グリオーマの約70~80を占める、乏突起膠腫、及び上衣腫が含まれる。非グリオーマは、胚芽腫、髄膜腫、頭蓋咽頭腫、神経鞘腫、神経節膠腫、下垂体腺腫、及び脈絡叢の腫瘍を含む。前述の通り、テモゾロミドは高い毒性及び強い副作用を有しており、腫瘍細胞は容易にテモゾロミドへの薬剤耐性を有するようになり得る。そのため、テモゾロミドの臨床適用は極めて限られている。本発明者らは、E-ブチリデンフタリドトランス-ブチリデンフタリドに比してZ-ブチリデンフタリドシス-ブチリデンフタリドはより高いMGMT発現抑制活性を有すること、及びZ-ブチリデンフタリドは脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を効果的に低減させ、テモゾロミドのテモゾロミド耐性の脳腫瘍細胞に対する細胞毒性感受性を亢進させ得ることを見出した。それゆえ、Z-ブチリデンフタリドは、対象へのテモゾロミド投与により引き起こされる問題を低減させ、又は解決さえし得る。したがって、本発明は、脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるための医薬組成物を提供し、該医薬組成物は、薬剤的に許容可能なキャリア、並びに化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を含む。本発明の医薬組成物は好ましくは、ヒトの悪性神経膠腫のテモゾロミド耐性を低減させるために用いられる。好ましくは、該活性成分は、Z-ブチリデンフタリドである。脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるために本発明の医薬組成物を適用する場合、活性成分は、対象の必要に応じて、1日1回、1日複数回、又は数日ごとに1回等で投与され得る。例えば、Z-ブチリデンフタリドは、1日1回、約30mg/kg-体重から約500mg/kg-体重の用量で投与され得る。mg/kg-体重の単位は、対象の体重キログラムあたり必要とされる用量を意味する。しかしながら、テモゾロミドへの深刻な耐性を有する患者においては、用量は実際の状態に依存して数倍又は数十倍に増加され得る。さらに、投与は適切なアプローチにより行われ得、例えば、限定されることなく、経口投与、皮下投与、経鼻投与、又は静脈内投与により行われ得る。薬物放出時間及び用量は注射投与により正確に制御され得るため、皮下投与又は静脈内投与するのが好ましい。また、Z-ブチリデンフタリドは、脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させ得るばかりでなく、抗脳腫瘍効果をも有し、テモゾロミドの脳腫瘍細胞に対する細胞毒性を亢進させ得ることが見出された。Z-ブチリデンフタリドがテモゾロミドと一緒に引き続いて、又は同時に投与される場合、Z-ブチリデンフタリドは、脳腫瘍の治療において著しく高い効果をもたらし、さらにはテモゾロミドの投与量を低減させ得る。それゆえ、本発明はまた、脳腫瘍を治療するための、好ましくはヒトの悪性神経膠腫を治療するための医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、薬剤的に許容可能なキャリア、並びに化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を含む。好ましくは、前記活性成分は、Z-ブチリデンフタリドである。後述の実施例に示されるように、E-ブチリデンフタリド2500μMの高用量でさえも効果的に脳腫瘍細胞を殺傷することができないに比して、Z-ブチリデンフタリドは、約250μMの用量で50の脳腫瘍細胞死亡率IC50を達成し得る。本発明の脳腫瘍を治療するための医薬組成物はさらに、テモゾロミド、テモゾロミドの水和物、テモゾロミドのアイソスター、テモゾロミドの薬剤的に許容可能な塩、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の抗腫瘍成分を含み得る。好ましくは、該抗腫瘍成分はテモゾロミドである。好ましくは、本発明の脳腫瘍を治療するための医薬組成物は、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとを含み、テモゾロミド耐性を有する脳腫瘍を治療するために、特にはテモゾロミド耐性を有するヒトの悪性神経膠腫を治療するために用いられる。本発明の脳腫瘍を治療するためのZ-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとを含む医薬組成物において、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとは、同時に、又は引き続いて投与され得る。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの用量は、任意に調節され得る。本発明の医薬組成物において、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドが用いられる場合、同じZ-ブチリデンフタリドの用量で、テモゾロミドの用量を増加させていくと、コンビネーションインデックスcombinationindexCIはしばしば下がることが見出された。コンビネーションインデックスcombinationindexは、薬物用量の反応曲線を描くことにより、及びCalcuSynソフトウェアChouandTalalay,Quantitativeanalysisofdose-effectrelationships:thecombinedeffectsofmultipledrugsorenzymeinhibitors.Adv.EnzymeRegul.,22:27-55,1984を参照、この内容は参照により本明細書に取り込まれるで計算を行うことにより得られる。コンビネーションインデックスcombinationindexが1未満の場合、異なる薬物は相互に相乗作用を有し、薬物の効果において相乗効果を発揮する。コンビネーションインデックスcombinationindexが1の場合、薬物は相互に影響を与えない。コンビネーションインデックスcombinationindexが1以上の場合、薬物は互いに拮抗する。好ましくは、脳腫瘍を治療するための本発明の医薬組成物において、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとが組み合わせて用いられる場合、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとが組み合わせられて1未満のコンビネーションインデックスcombinationindexをもたらす。本発明の一態様において、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの濃度が各々100μM及び1200μM200μLである場合、コンビネーションインデックスcombinationindexは約0.33である。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの濃度が各々100μM及び3200μM200μLである場合、コンビネーションインデックスcombinationindexは約0.22である。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの濃度が各々50μM及び3200μM200μLである場合、コンビネーションインデックスcombinationindexは約0.20である。Z-ブチリデンフタリドは、効果的に脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させ、テモゾロミド耐性を有する脳腫瘍細胞に対するテモゾロミドの細胞毒性感受性を亢進させ、及びテモゾロミドとの併用時に優れた相乗効果をもたらし得るため、治療に要するテモゾロミド用量を低減することができ、テモゾロミド投与により生じる副作用を軽減させることができる。後述の実施例に示されるように、Z-ブチリデンフタリドの用量が増加するとともに、脳腫瘍細胞の50死亡率IC50値を達成するために必要とされるテモゾロミドの用量は減少する。脳腫瘍を治療するための本発明の医薬組成物において、活性成分は、対象の必要に依存して異なる頻度で投与され得る。例えば、1日1回、1日複数回、又は数日ごとに1回等である。例えば、該医薬組成物が脳腫瘍を治療するためにヒトの身体に用いられる場合、Z-ブチリデンフタリドは、1日1回例えばウエハー又は錠剤の形態で、約30mg/kg-体重から約500mg/kg-体重、好ましくは約40mg/kg-体重から約120mg/kg-体重の用量で投与され得る。mg/kg-体重の単位は、対象の体重キログラムあたり必要とされる用量を意味する。Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドが併用される場合、テモゾロミドは、1日1回例えばウエハー又は錠剤の形態で、約10mg/kg-体重から約100mg/kg-体重、好ましくは約40mg/kg-体重から約80mg/kg-体重の用量で投与され得る。例えば、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとが併用される場合、良好な治療効果がもたらされるように、テモゾロミドは1日1回、約65mg/kg-体重の用量で投与され得、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドは、同じウエハー、又は異なるウエハーに含有され得る。しかしながら、重症の脳腫瘍患者においては、用量は、その状態に依存して数倍又は数十倍に増加され得る。脳腫瘍を治療するための本発明の医薬組成物において、活性成分抗腫瘍成分と組み合わされ得るは、例えば、限定されることなく、経口投与、皮下投与、経鼻投与、又は静脈内投与といった適切なアプローチにより投与され得る。本発明の医薬組成物は、単独で又は薬剤的な補助剤と併用して、獣医学上の及びヒトの薬剤において用いられ得る。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドが本発明の医薬組成物に用いられる場合、それらは同時に又は分けて、同じ又は異なるアプローチで投与され得る。例えば、テモゾロミドは経口投与される一方で、Z-ブチリデンフタリドは静脈内注射により投与され得る。経口投与に適する調剤形態においては、例えば、脳腫瘍を治療し脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるための本発明の医薬組成物は、抗脳腫瘍効果に悪影響を及ぼすことのない補助剤を含み得る。該補助剤としては、例えば、溶媒、油性溶媒、希釈剤、安定化剤、吸収抑制剤、崩壊剤、乳化剤、粘着剤、滑剤、吸湿剤、ポリマー等が挙げられる。例えば、溶媒は水及び生理食塩水から選択され得る;ポリマーはポリ乳酸-グリコール酸供重合体、コラーゲン、ヒドロゲル、無水物重合体等から選択され得る;並びに無水物重合体はビスp-カルボキシフェノキシプロパン、ビスp-カルボキシフェノキシブタン、ビスp-カルボキシフェノキシペンタン、ビスp-カルボキシフェノキシヘキサン、ビスp-カルボキシフェノキシヘプタン、ビスp-カルボキシフェノキシオクタン、イソフタル酸、1,4-フェニレンジプロピオン酸、ドデカン二酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、ペンタン二酸、アジピン酸、グルタル酸、オクタン二酸、アゼライン酸、セバシン酸、フタル酸、テレフタル酸、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された成分から調整され得る。該医薬組成物は、公知の方法により、例えば、ウエハー又は錠剤、カプセル、顆粒、散剤、流エキス剤、液剤、シロップ、懸濁液、エマルション、チンキ剤等といった、適切な経口用剤型に調製され得る。皮下投与又は静脈内投与の形態に関して、脳腫瘍を治療するための又は脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるための本発明の医薬組成物は、可溶化剤、乳化剤、及び他の補助剤といった1又は2以上の成分を含有し得る。それにより、静脈内液体注射、静脈内エマルション注射、溶液注射、乾燥粉末注射、懸濁液注射、乾燥粉末懸濁液注射等をなすことができる。溶媒は、水、生理食塩水、アルコール例えば、エタノール、プロパノール、又はグリセロール等、糖溶液、又はこれらの組み合わせを含み得る。脳腫瘍を治療するための又は脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるための本発明の医薬組成物は、投与中の口腔内及び視覚的な感覚を向上させるために、香味剤、トナー、着色剤等といった添加剤を任意にさらに含有し得る。さらに、薬剤の保存性を向上させるために、合理的な量の防腐剤、抗菌剤、抗かび剤等が加えられ得る。脳腫瘍を治療するための又は脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させるための本発明の医薬組成物は、1又は2以上のさらなる抗脳腫瘍成分を、該抗脳腫瘍成分がZ-ブチリデンフタリド及び/又はテモゾロミドの効果に悪影響を及ぼさない範囲で、任意に含有し得る。それにより、本発明の医薬組成物の効果を増強し、又は製剤の製造の柔軟性を高めることができる。脳腫瘍を治療するための本発明の医薬組成物において、活性成分例えば、Z-ブチリデンフタリド及び抗腫瘍成分例えば、テモゾロミドは、一緒に、分けて、又は引き続いて投与され得る。例えば、まずZ-ブチリデンフタリドを注射により投与し、ある時間の経過後通常1~2時間、テモゾロミドを経口投与する。あるいは、Z-ブチリデンフタリドの注射による投与後すぐに、テモゾロミドを経口投与する。Z-ブチリデンフタリドは、適切なアプローチにより得られ得る。例えば、化学合成により調製され得、又はトウキangelicasinensisから抽出及び精製され得る。例えば、ブチリデンフタリド化合物Z-ブチリデンフタリドとE-ブチリデンフタリドとのラセミ混合物を含むは市場例えば、AlfaAesar社から購入され得、適切な量のシリカゲルに埋め込まれ得るブチリデンフタリド:シリカゲルの重量比=1:3。その後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行う。溶出の移動相としてn-ヘキサンが用いられる。溶出されたZ-ブチリデンフタリドとE-ブチリデンフタリドは、異なる時点で収集され、精製結果はNMRで確認される。その結果、Z-ブチリデンフタリドが得られる。本発明はまた、対象における脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させる方法を提供する。該方法は、化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を前記対象に投与することを含む。好ましくは、該活性成分は、Z-ブチリデンフタリドである。本発明の医薬組成物の前述の記載において、該活性成分の適用形態及び用量が提供される。本発明はまた、対象の脳腫瘍を治療する方法を提供する。該方法は、化学式IのZ-ブチリデンフタリド、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能な塩、Z-ブチリデンフタリドの薬剤的に許容可能なエステル、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された有効量の活性成分を前記対象に投与することを含む。好ましくは、該活性成分は、Z-ブチリデンフタリドであり、より好ましくは、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとが併用される。本発明の医薬組成物の前述の記載において、該活性成分及びZ-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの組み合わせ投与の適用形態及び用量が提供される。本技術分野における当業者が本発明の特徴をよく理解できるように、技術の詳細及び本発明のために実施された好ましい態様が、添付された図とともに後述の段落において、記載される。異なる脳腫瘍細胞株におけるMGMT発現直径10cmのペトリ皿で、脳腫瘍細胞株8401,8901,DBTRG,U87MG,及びG5T/VGHを各々培養した。皿の60の容量まで細胞が増殖した後、リン酸緩衝生理食塩水PBS溶液を用いて細胞を洗浄した。最後に、細胞と細胞内タンパク質を収集した。ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGE及びウェスタンブロッティングを用いて、各々の脳腫瘍細胞株におけるMGMTタンパク質の発現を分析した。結果を図1に示す。図1に示される通り、各々の脳腫瘍細胞株は、異なったレベルのMGMT発現を示し、脳腫瘍細胞株8901,DBTRG,及びG5T/VGHでは高いレベルのMGMT発現を示した。テモゾロミドの種々の脳腫瘍細胞株に対する死亡率効果MTT3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,4-ジフェニルテトラゾリウムブロミド細胞生存試験を用いて、テモゾロミドの種々の脳腫瘍細胞株に対する死亡率効果を検討したPauwelsetal.,J.Virol.Methods,1988,20,309-321を参照、この内容は参照により本明細書に取り込まれる。96-マイクロウェルプレートにおいて、各ウェル3×103cellsで脳腫瘍細胞株8401,8901,DBTRG,U87MG,及びG5T/VGHを各々培養した。翌日、プレートの内壁に沿ってウェルに異なる濃度のテモゾロミド0~3200μM、200μLを滴下した。溶媒をコントロール群として、第一列に置いた。細胞培養2日後、培養液を吸い上げて取り除き、500μg/mLのMTTを含有する培養液200μLを加え、さらに4時間培養した。培養液を吸い上げて取り除き、200μLのDMSOを加え、マイクロウェルプレートスペクトロメーターを用いて570nmの波長で細胞の吸光度を測定した。細胞の生存率、死亡率、及び種々の脳腫瘍細胞株が50死亡率に到達したテモゾロミド濃度IC50を、吸光度に基づき算出した。上述の実験結果を表1及び図2に示す。表1及び図2に示されるように、脳腫瘍細胞株8401に比して、高レベルでMGMTを発現していた脳腫瘍細胞株8901,DBTRG,及びG5T/VGHでは、テモゾロミドのより高いIC50値を示した。このことから、高レベルでMGMTを発現していた脳腫瘍細胞株は、テモゾロミドの薬剤耐性を有し、死亡率効果を得るためにはより高い用量が必要とされることが示唆された。脳腫瘍細胞におけるブチリデンフタリドのMGMT発現抑制この実験では、脳腫瘍細胞におけるZ-ブチリデンフタリド及びE-ブチリデンフタリドのMGMT発現抑制効果を示した。テモゾロミド耐性を有する脳腫瘍細胞株8901及びGBM22-TMZを、直径10cmのペトリ皿で各々培養した。皿の60の容量まで細胞が増殖した後、PBS溶液を用いて細胞を洗浄した。Z-ブチリデンフタリド又はE-ブチリデンフタリドを加え、3~48時間細胞を処理した。その後、細胞を収集した。細胞の全RNAを抽出し、cDNAに逆転写した50マイクロ-モルのオリゴdNTP及び50ピコ-モルのランダムヘキサマープライマーを用いた。1単位のExTaqDNAポリメラーゼ、200nMのdNTP1μL、及び2.5mMのMgCl21μLを加え、その後、20mMのMGMTヌクレオチドプライマー各々1μL及び50μLの水を加えた。サンプルをポリメラーゼ連鎖反応PCRシステムGeneAmpPCRSystem2400、パーキンエルマー社、USAに置いた。条件は、熱変性denaturing、94°C、30s;アニーリングannealing、55°C、30s;伸長extension、94°C、60s;30サイクル;最後に72°C、10分間であった。後に、反応を集結させるためにシステムの温度を4°Cに下げた。PCR産物を1.5ゲル電気泳動で分析した。ゲルをFlouro-Chemイメージングシステムアルファイノテック社で分析し、MGMT遺伝子の発現レベルを見た。結果を図3に示す。これとは別に、前記の脳腫瘍細胞株8901及びGBM22-TMZの細胞内タンパク質を収集した。SDS-PAGE及びウェスタンブロッティングを用いて脳腫瘍細胞株におけるMGMTタンパク質の発現を分析した。結果を図4及び図5に示す。図3~5に示されるように、Z-ブチリデンフタリドの濃度を増加させると、脳腫瘍細胞株におけるMGMTのRNA及びタンパク質の発現は低減した。このことから、Z-ブチリデンフタリドはMGMTの発現を抑制し得ることが示唆された。しかしながら、E-ブチリデンフタリドの濃度を増加させても、脳腫瘍細胞株におけるMGMTのRNA及びタンパク質の発現に著しい変化は見られなかった。Z-ブチリデンフタリドは、テモゾロミドの脳腫瘍細胞株8901に対する細胞毒性感受性を亢進させるZ-ブチリデンフタリドがテモゾロミドの脳腫瘍細胞に対する細胞毒性感受性を亢進させるかについて、MTT細胞生存アッセイを用いて試験した。96-マイクロウェルプレートにおいて、各ウェル3×103cellsでテモゾロミド耐性を有する脳腫瘍細胞株8901を培養した。翌日、プレートの内壁に沿ってウェルに異なる濃度のテモゾロミド0~1200μM、200μL又はテモゾロミドとZ-ブチリデンフタリド0~200μM、200μLとの組み合わせを滴下した。分析ごとに4つのマイクロウェルプレートを用い、種々の薬物濃度の組み合わせごとに4つのウェルを用いた。溶媒をコントロール群として、第一列に置いた。細胞培養2日後、培養液を吸い上げて取り除き、500μg/mLのMTTを含有する培養液200μLを加え、さらに4時間培養した。培養液を吸い上げて取り除き、200μLのDMSOを加え、マイクロウェルプレートスペクトロメーターを用いて570nmの波長で細胞の吸光度を測定した。細胞の生存率、死亡率、及び種々の脳腫瘍細胞株が50死亡率に到達したテモゾロミド濃度IC50を、吸光度に基づき算出した。上述の実験結果を表2及び図6に示す。表2及び図6に示されるように、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの組み合わせを用いた場合、Z-ブチリデンフタリドの用量を増加させると、脳腫瘍細胞株が50死亡率に到達するのに要するテモゾロミドの用量IC50は低くなった。このことから、Z-ブチリデンフタリドは、テモゾロミドの脳腫瘍細胞株に対する細胞毒性感受性を増加させ得ることが示唆された。このように、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの組み合わせを用いる場合、テモゾロミドの用量が低減され得る。Z-ブチリデンフタリドは、テモゾロミドの脳腫瘍細胞株GBM22-TMZに対する細胞毒性感受性を亢進させる実施例4での実験工程を繰り返した。ただし、脳腫瘍細胞株はテモゾロミド耐性を有するGBM22-TMZに変更した。Z-ブチリデンフタリド濃度を0~600μM200μLに変更する一方で、テモゾロミド濃度を0~3200μM200μLに変更した。結果を図7に示す。図7に示されるように、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの組み合わせを用いた場合、Z-ブチリデンフタリドの用量を増加させると、テモゾロミドの脳腫瘍細胞株に対する殺傷効果が向上した。このことから、Z-ブチリデンフタリドはテモゾロミドの脳腫瘍細胞株に対する細胞毒性感受性を亢進させ、その結果、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの組み合わせを用いた場合、テモゾロミドの用量を低減させ得ることが示唆された。脳腫瘍細胞におけるブチリデンフタリドの阻害試験MTT細胞生存アッセイを用いて、Z-ブチリデンフタリド及びE-ブチリデンフタリドの抗脳腫瘍活性を試験した。96-マイクロウェルプレートにおいて、各ウェル3×103cellsで脳腫瘍細胞株DBTRGを培養した。翌日、プレートの内壁に沿ってウェルに異なる濃度のZ-ブチリデンフタリド0~500μM、200μL又はE-ブチリデンフタリド0~2500μM、200μLを滴下した。溶媒をコントロール群として、第一列に置いた。細胞培養2日後、培養液を吸い上げて取り除いた。500μg/mLのMTTを含有する培養液200μLを加え、さらに4時間培養した。培養液を吸い上げて取り除き、200μLのDMSOを加え、マイクロウェルプレートスペクトロメーターを用いて570nmの波長で細胞の吸光度を測定した。細胞の生存率及び死亡率を、吸光度に基づき算出した。上述の実験結果を表3並びに図8及び9に示す。表3並びに図8及び9に示されるように、E-ブチリデンフタリド濃度2500μMの高用量でも脳腫瘍細胞を効果的に殺傷することができないに比して、Z-ブチリデンフタリドは、濃度約250μMの用量で腫瘍細胞の50死亡率に到達することができる。脳腫瘍細胞におけるZ-ブチリデンフタリドの阻害試験実施例6での実験工程を繰り返した。ただし、腫瘍細胞株を腫瘍細胞株DBTRG,8401,8901,及びG5T/VGHに置き換えた。Z-ブチリデンフタリド濃度を0~400μM200μLに変更した。結果を図10に示す。図10に示されるように、Z-ブチリデンフタリドは種々の脳腫瘍細胞株の増殖を効果的に抑制することができる。Z-ブチリデンフタリドの用量が増加するにつれて、脳腫瘍細胞株の抑制効果は向上する。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの組成物の脳腫瘍細胞抑制の相乗効果MTT細胞生存アッセイを用いて、異なる濃度のZ-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの組み合わせの抗脳腫瘍細胞活性について試験した。Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの間で相乗効果があるかについて、コンビネーションインデックスcombinationindexCIを用いて分析した。96-マイクロウェルプレートにおいて、各ウェル3×103cellsでテモゾロミド耐性を有する脳腫瘍細胞株8901又はGBM22-TMZを培養した。翌日、プレートの内壁に沿ってウェルに異なる濃度のZ-ブチリデンフタリド脳腫瘍細胞株8901:25~200μM200μL、脳腫瘍細胞株GBM22-TMZ:50~600μM200μL、テモゾロミド脳腫瘍細胞株8901:100~1200μM200μL、脳腫瘍細胞株GBM22-TMZ:100~3200μM200μLを滴下した。分析ごとに4つのマイクロウェルプレートを用い、種々の薬物濃度の組み合わせごとに4つのウェルを用いた。溶媒をコントロール群として、第一列に置いた。細胞培養2日後、培養液を吸い上げて取り除き、500μg/mLのMTTを含有する培養液200μLを加え、さらに4時間培養した。培養液を吸い上げて取り除き、200μLのDMSOを加えた。その後、マイクロウェルプレートスペクトロメーターを用いて570nmの波長で細胞の吸光度を測定した。種々の薬物濃度の組み合わせのO.D.平均値を用いて、異なる薬物用量の反応曲線を算出及び描出した。溶媒のみを加えた第一列のウェルの数値をネガティブコントロールとして用いる一方で、最も高い薬物用量のウェルの数値をポジティブコントロール生存細胞の増殖は阻害されていなかったとして用いた。このようにして、薬物のIC50値を求めた。加えて、CalcuSynソフトウェアを用いて薬物用量の反応曲線を描出し、コンビネーションインデックスcombinationindexを計算して、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの医薬組成物、及びその相乗効果、相加性、又は拮抗作用を分析したChouandTalalay,Quantitativeanalysisofdose-effectrelationships:thecombinedeffectsofmultipledrugsorenzymeinhibitors.Adv.EnzymeRegul.,22:27-55,1984を参照、この内容は参照により本明細書に取り込まれる。コンビネーションインデックスcombinationindexが1未満の場合、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドは相互に相乗作用を有する。それは、薬物の効果において相乗効果を発揮することを意味する。コンビネーションインデックスcombinationindexが1の場合、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの間では影響がない。コンビネーションインデックスcombinationindexが1以上の場合、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとは互いに拮抗する。結果を表4,5,及び6に示す。表5及び6に示されるように、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドがともに用いられた場合、この組み合わせは1未満のコンビネーションインデックスcombinationindexをもたらすことができた表中、太字の数値で表される。このようなコンディション下では、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドは相互に相乗作用を示した。具体的には、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの濃度が各々100μM及び1200μM200μLの場合、コンビネーションインデックスcombinationindexは約0.33であった。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの濃度が各々100μM及び3200μM200μLの場合、コンビネーションインデックスcombinationindexは約0.22であった。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの濃度が各々50μM及び3200μM200μLの場合、コンビネーションインデックスcombinationindexは約0.20であった。この試験から、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとが組み合わされて用いられる場合、優れた相乗効果がもたらされ得ることが示される。invivo試験皮下腫瘍移植モデルによりinvivo試験を行い、invivoでのZ-ブチリデンフタリド、テモゾロミド、又はそれらの組み合わせの抗腫瘍活性を評価した。まず、2×106cellsのテモゾロミド耐性を有する脳腫瘍細胞株GBM22-TMZを無菌培養し、Balb/cヌードマウスナショナルラボラトリーアニマルセンター台湾より購入に皮下注射し、invivoでの腫瘍移植実験を行った。腫瘍が100mm3長さ×幅×幅/2になった時点で、治療のために皮下投与を行った。5日間連続で1日1回、腫瘍組織の反対側の1.5cm以上の位置にZ-ブチリデンフタリドを注射し、又はテモゾロミドを経口投与した。Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドを併用した治療群においては、まずZ-ブチリデンフタリドを皮下投与しSC、2時間後、テモゾロミドを経口投与したPO。5日目の投与後、マウスの腫瘍サイズ及び体重を28日間連続して観察し、3日ごとに測定した。28日目の腫瘍サイズの測定値を、腫瘍増殖抑制活性の評価結果として用いた。その値が小さいほど、抑制効果は高い。単独で又は組み合わせで薬物治療を行った群とコントロール群溶媒の注射のみとの間の相対的な腫瘍サイズを観察し、有意差があるかについて評価した。P値が0.5未満の場合に有意差があった。結果を表7並びに図11A及び11Bに示す。表7及び図11Aに示されるように、Z-ブチリデンフタリド又はテモゾロミドの単独投与に比して、同じ用量でのZ-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの併用では、より効果的に腫瘍増殖が抑制され得た。このinvivo試験により、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドは相互に相乗効果を示し、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミドとの組み合わせは、脳腫瘍に対してより優れた治療効果をもたらし、治療に必要とされるZ-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの用量を低減させ得ることが示された。invivo試験-ウエハー製剤試験Z-ブチリデンフタリド及びポリ乳酸-グリコール酸供重合体pCPP-co-SAを物理的手法により均一に混合した。得られた混合粉末を直径1~13mmの円形の型に置き、プレスして厚さ1~2mmの円形ウエハー又は錠剤に成型した。ジクロロメタン10w/vを用いてテモゾロミド及びpCPP-co-SAを混合し、その後真空ポンプでジクロロメタンを蒸発させた。最後に、得られた粉末を円形のウエハー又は錠剤を成型するようにプレスして、テモゾロミドのウエハーを調製した。6~8週齢で体重18~22gの雌のBALB/cnu/nuマウスナショナルラボラトリーアニマルセンター台湾より購入を用いてテモゾロミド耐性のヒト脳腫瘍細胞株の移植を行った。Z-ブチリデンフタリド、テモゾロミド、又はそれらの組み合わせの抗腫瘍効果を評価した。2×106cellsの脳腫瘍細胞株GBM22-TMZをマウスの皮下に移植した。腫瘍が形成され100~300mm3になった時点で治療を行った。マウスをランダムに群分けした。コントロール群ウエハーによる治療無しと治療群ウエハーによる治療有りとで各々6~8匹のマウスを用いた。異なる用量での組み合わせのウエハーZ-ブチリデンフタリド:テモゾロミド=1:2又は1:4を腫瘍組織から1cm離して皮下に埋め込み、マウスの腫瘍サイズ及び体重の変化を2日ごとに測定し記録した。実験結果を図12A及び12Bに示す。図12Aに示されるように、Z-ブチリデンフタリドのウエハー及びテモゾロミドのウエハーの組み合わせを用いた場合、腫瘍増殖が効果的に抑制され得た。前述の実験から、Z-ブチリデンフタリドは効果的に脳腫瘍細胞のテモゾロミド耐性を低減させ得、テモゾロミドと併用した場合、優れた相乗効果をもたらし得ることが示される。したがって、治療に必要とされるテモゾロミドの用量を低減し得、テモゾロミド投与により生じる副作用をも軽減し得る。invivo試験-生存分析生存分析を行ってinvivoでのZ-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの組み合わせによる抗グリオーマ効果について評価した。脳腫瘍細胞株GBM22-TMZ由来の膠芽細胞腫の同所性異種移植片が定着しているマウスをランダム化して、示されているテモゾロミド66mg/kg/日;5日間、Z-ブチリデンフタリド50又は100mg/kg/日;5日間、又はこれらの組み合わせでの治療を行った。マウスが瀕死状態に至るまで観察及び記録を行い、生存結果をカプラン-マイヤー生存曲線で示す。生存率を表8に示す。表8に示されるように、コントロール群に比して、テモゾロミド、Z-ブチリデンフタリド、又はこれらの組み合わせで治療したマウスでは、生存率の向上が示された。加えて、Z-ブチリデンフタリドとテモゾロミド50mg/kg又は100mg/kgとを併用したマウスでは、100の生存率を示した。このことから、Z-ブチリデンフタリド及びテモゾロミドの組み合わせを用いた場合、腫瘍を有するマウスの生存率が効果的に向上し得ることが示唆された。この生存分析により、Z-ブチリデンフタリドは、テモゾロミドとの組み合わせで用いた場合、優れた相乗効果をもたらし得ることが示された。したがって、腫瘍の治療に必要とされるテモゾロミドの用量を低減することができ、テモゾロミド投与により生じる副作用をも軽減することができる。前述の開示は、詳細な技術内容及び本発明の特徴に関する。本技術分野における当業者であれば、本発明の特徴を逸脱することなく、本明細書に記載された発明の開示及び示唆に基づき種々の変更及び置換を行い得る。それにもかかわらず、このような変更及び置換は前述の説明には完全には開示されていないものの、それらは下記に添付された特許請求の範囲に実質的に含まれる。関連する出願本出願は、台湾特許出願100100673出願日2011年1月7日に基づく優先権を主張しており、その内容は本明細書に参照として取り込まれる。"