グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質又は薬学的に許容されるその塩を有効成分として含有する、腹膜癒着抑制用医薬組成物。グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質が、心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPである、請求項1に記載の組成物。心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPが、ヒト由来である、請求項2に記載の組成物。腹膜に局所投与するための、請求項1~3のいずれか一項に記載の組成物。ブドウ糖液、電解質液若しくは腹膜透析液により腹膜に局所投与するため、又は、シート状若しくは噴霧状の材質を用いて腹膜に局所投与するための、請求項4に記載の組成物。全身投与するための、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。血中に投与するための、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。皮下投与するための、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。以上のような状況に鑑み、本発明は、腹膜癒着を軽減し、術後の腹膜癒着および腹膜透析に関連した腹膜癒着を予防および治療するための技術を提供することを課題とする。腹膜癒着の動物モデルを作製し、腹膜癒着を抑制する作用を有する物質の候補としてグアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質を投与して、その効果を検討したところ、腹膜癒着を抑制する効果を見出し、発明を完成するに至った。即ち、本発明は以下の事項に関する。1グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質又は薬学的に許容されるその塩を有効成分として含有する、腹膜癒着抑制用医薬組成物。2グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質が、心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPである、上記1に記載の組成物。3心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPが、ヒト由来である、上記2に記載の組成物。4腹膜に局所投与するための、上記1~3のいずれか一項に記載の組成物。5ブドウ糖液、電解質液若しくは腹膜透析液により腹膜に局所投与するため、又は、シート状若しくは噴霧状の材質を用いて腹膜に局所投与するための、上記4に記載の組成物。6手術による操作を加えた部位又は腹膜透析液の接触する部位に局所投与するための、上記5に記載の組成物。7全身投与するための、上記1~3のいずれか1項に記載の組成物。8血中に投与するための、上記1~3のいずれか1項に記載の組成物。9皮下投与するための、上記1~3のいずれか1項に記載の組成物。10心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPを有効成分として1日あたり01μgkg~100mgkg投与するための、上記2又は3に記載の組成物。11グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質又は薬学的に許容されるその塩を個体に投与することを含む、腹膜癒着を抑制する方法。12グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質が、心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPである、上記11に記載の方法。13心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPが、ヒト由来である、上記12に記載の方法。14腹膜に局所投与することを含む、上記11~13のいずれか一項に記載の方法。15ブドウ糖液、電解質液若しくは腹膜透析液により腹膜に局所投与すること又はシート状若しくは噴霧状の材質を用いて腹膜に局所投与することを含む、上記14に記載の方法。16手術による操作を加えた部位又は腹膜透析液の接触する部位に局所投与することを含む、上記15に記載の方法。17全身投与することを含む、上記11~13のいずれか1項に記載の方法。18血中に投与することを含む、上記11~13のいずれか1項に記載の方法。19皮下投与することを含む、上記11~13のいずれか1項に記載の方法。20心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPを有効成分として1日あたり01μgkg~100mgkg投与する、上記12または13に記載の方法。21グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質又は薬学的に許容されるその塩の、腹膜癒着抑制用医薬組成物の製造のための使用。22グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質が、心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPである、上記21に記載の使用。23心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPが、ヒト由来である、上記22に記載の使用。24腹膜に局所投与するための、上記21~23のいずれか一項に記載の使用。25前記医薬組成物が、ブドウ糖液、電解質液若しくは腹膜透析液により腹膜に局所投与される、又は、シート状若しくは噴霧状の材質を用いて腹膜に局所投与される、上記24に記載の使用。26手術による操作を加えた部位又は腹膜透析液の接触する部位に局所投与される、上記25に記載の使用。27前記医薬組成物が全身投与される、上記21~23のいずれか1項に記載の使用。28前記医薬組成物が血中に投与される、上記21~23のいずれか1項に記載の使用。29前記医薬組成物が皮下投与される、上記21~23のいずれか1項に記載の使用。30前記医薬組成物が、心房性ナトリウム利尿ペプチドANP又は脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPを1日あたり01μgkg~100mgkg投与するための組成物である、上記22または23に記載の使用。本発明の有効成分は、点滴などの皮下投与などにより全身性に投与することで簡便に適用することができる。また、腹腔内投与でも有効であることから、全身性の血圧低下の副作用を起こすことなく、腹膜癒着を抑制することが期待される。ANPまたはBNPのようなペプチド性化合物を有効成分とする場合、コンドロイチン硫酸ナトリウムのような高分子物質と異なり、粘性が低いため、容易に腹腔内の広範な部位や腸管内腔側にも適用できる。本発明によれば腹膜癒着を抑制することができ、本発明は、例えば術後または腹膜透析中の腹膜に作用してその癒着を抑制するという格別な効果を奏するものである。腹膜癒着の抑制により、腹膜透析だけによる長期治療を可能として年増加の一途をたどっている透析患者のQOLを改善し、また、外科手術後の癒着性イレウスの減少、疼痛軽減が可能となる。腹膜癒着の動物モデルを作製し、腹膜癒着を抑制する作用を有する物質の候補としてANPを腹腔内持続投与してその効果を検討したところ、ANPが腹膜癒着を抑制する効果を有することを初めて見出した。また、慢性的にBNPを過剰発現した動物、及びナトリウム利尿ペプチド受容体であるGCAを欠損した動物に腹膜癒着を惹起したところ、それぞれ野生型マウスに比べて腹膜癒着の抑制、及び悪化を見出した。用いた腹膜癒着モデルは、01ヒビテン溶液を週に3回、4週間、合計12回腹腔内投与することにより、慢性的に腹膜に炎症性の傷害が進展し、腹膜癒着を生じるものであり、腹膜透析時の慢性腹膜炎により惹起される癒着に対する動物モデルである。本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質は、グアニリルシクラーゼA受容体GCAを活性化する物質であればよいが、ペプチド性化合物が好ましい。具体的には、ナトリウム利尿ペプチドなどが挙げられ、例えば、心房性ナトリウム利尿ペプチドANP及び脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPが好ましく、なかでも心房性ナトリウム利尿ペプチドANPが好ましい。本発明におけるANPとしては、28個のアミノ酸よりなるヒト由来ANPSLRRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY:SEQIDNO1、ラット由来ANPSLRRSSCFGGRIDRIGAQSGLGCNSFRY:SEQIDNO3など、ナトリウム利尿ペプチド受容体であるGCAを介してcGMP産生を亢進し得る特性を有するものを用いることができる。本発明に係る有効成分のこれらのペプチドは、GCAを介してcGMP産生を亢進し得る特性を発揮するため、少なくとも当該ANPのリング構造例えば、ヒトANPのアミノ酸配列の場合には、SEQIDNO1の7位Cysと23位Cysとに基づくジスルフィド結合の形成に基づくリング構造とリング構造に続くC末端部とを有するペプチドすなわち、ヒトANPの場合にはSEQIDNO1の728位に相当するSEQIDNO2であればよい。その様な構造的特徴を有するペプチドとしては、例えば、SEQIDNO1に記載するANPそのもの、またはその部分アミノ酸配列を有するペプチドであって上記ヒトANPの728位のアミノ酸からなるペプチドを内包するペプチド、例えば上記ヒトANPの728位のアミノ酸からなるペプチドSEQIDNO2そのもの、を挙げることができる。本発明におけるBNPとしては、32個のアミノ酸よりなるヒト由来BNPSPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGLGCKVLRRH:SEQIDNO4、ブタ由来BNPSPKTMRDSGCFGRRLDRIGSLSGLGCNVLRRY:SEQIDNO6、ラット由来BNPSQDSAFRIQERLRNSKMAHSSSCFGQKIDRIGAVSRLGCDGLRLF:SEQIDNO7など、ナトリウム利尿ペプチド受容体であるGCAを介してcGMP産生を亢進し得る特性を有するものを用いることができる。本発明に係る有効成分のこれらのペプチドは、GCAを介してcGMP産生を亢進し得る特性を発揮するため、少なくとも当該BNPのリング構造例えば、ヒトBNPのアミノ酸配列の場合には、SEQIDNO4の10位Cysと26位Cysとに基づくジスルフィド結合の形成に基づくリング構造とリング構造に続くC末端部とを有するペプチドすなわち、ヒトBNPの場合にはSEQIDNO4の1032位に相当するSEQIDNO5であればよい。その様な構造的特徴を有するペプチドとしては、例えば、SEQIDNO4に記載するBNPそのもの、またはその部分アミノ酸配列を有するペプチドであって上記ヒトBNPの1032位のアミノ酸からなるペプチドを内包するペプチド、例えば上記ヒトBNPの1032位のアミノ酸からなるペプチドSEQIDNO5そのもの、を挙げることができる。更に、本発明に係るナトリウム利尿ペプチドとしては、天然から純粋に単離精製されたもの、または化学合成法もしくは遺伝子組換え法により製造されたものであってもよく、例えば上記物質ANP等に係るアミノ酸配列に基づき、当業者であれば適宜公知の方法により、当該配列中のアミノ酸残基を少なくとも一つ以上、例えば一つ又は数個のアミノ酸を欠失、置換、付加及び/又は挿入等の修飾を施すことにより得ることができ、何れかの方法により得られた物質がGCAに作用してcGMP産生を亢進し得る物質であれば何れも用いることができる。得られた物質がGCAに作用してcGMP産生を亢進し得るか否かについては、当業者であれば従来の方法により容易に測定を実施することができる。具体的には、GCAChinkersMetalNature33878831989を強制発現させた培養細胞に物質を添加し、cGMP産生能を評価することで可能である。本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質は、上述したナトリウム利尿ペプチド受容体であるGCAを介してcGMP産生を亢進し得る特性を有する物質の薬学的に許容される塩例えば、ナトリウム利尿ペプチドの薬学的に許容される塩が好ましい。であってもよい。すなわち、本発明においては、上述した物質の、無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、または有機酸、例えばギ酸、酢酸、酪酸、コハク酸、クエン酸等の酸付加塩を、有効成分として使用することもできる。あるいは、本発明においては、上述した物質の、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム等の金属塩、有機塩基による塩の形態を有効成分として使用することもできる。また、本発明に係る医薬組成物は、その有効成分に係る物質の遊離形としても、またはその医薬的に許容し得る塩であってもよい。本発明の上述した組成物を個体患者に投与することにより、腹膜へのT細胞の浸潤、炎症性サイトカイン遺伝子の発現を、いずれも有意に抑制し、その結果、腹膜癒着を抑制することができる。このことから、腹膜透析により惹起される腹膜癒着や、開腹手術後の腹膜癒着を治療又は予防することも可能になる。本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質またはその薬理学的に許容し得る塩は、公知の薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤などと混合して医薬に一般に使用されている投与方法、即ち経口投与方法、または静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、若しくは腹腔内投与等の非経口投与方法によって個体患者に投与するのが好ましい。さらに、治療対象となる部位が腹膜であることから、腹膜透析液に混合して腹膜内に投与することや、シート状または噴霧状の材質を用いて、腹膜局所に投与することもできる。有効成分がペプチド性物質の場合、消化管内で分解を受けにくい製剤、例えば活性成分であるペプチドをリボゾーム中に包容したマイクロカプセル剤として経口投与することも可能である。また、直腸、鼻内、舌下などの消化管以外の粘膜から吸収せしめる投与方法も可能である。この場合は坐剤、点鼻スプレー、舌下錠、といった形態で個体患者に投与することができる。本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質の投与量は、疾患の種類、個体患者の年齢、体重、症状の程度および投与経路などによっても異なるが、一般的に1日当り01μgkg~100mgkgの範囲で投与することができ、05μgkg~50mgkgで投与するのが好ましく、更に1μgkg~1mgkgで投与するのが好ましい。本発明に係る医薬組成物の投与頻度は、使用する有効成分、投与経路、および処置する特定の疾患に依存しても変動する。例えばナトリウム利尿ペプチドを経口投与する場合、一日当たり4回以下の投与回数で処方することが好ましく、また非経口投与、例えば静脈内や腹腔内投与する場合にはインフュージョンポンプを利用して持続的に投与することが好ましい。更に、本発明において好ましい投与形態の例としては、例えば、静脈内投与により持続的に投与する場合、開腹手術後、または腹膜透析時において腹膜炎等が生じた時から数日間例えば3~7日間に0001~05μgkgmin例えば、0025μgkgminで投与することがあげられ、この場合の1日当りの投与量の範囲は144~720μgkg例えば、36μgkgとなる。ナトリウム利尿ペプチドを同様の投与量で腹腔内に持続投与することや、ブドウ糖液、電解質液または腹膜透析液に混合して投与することも好ましい。以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるものではない。本実施例においては、定量的PCR法および免疫組織化学法を以下の手順によりおこなった。<定量的PCR法>本発明において、RNA発現の解析は以下の工程により実施した。マウスの壁側腹膜を含む前腹直筋を約30mgの重量となるように切離し、2mlチューブに入れすばやく液体窒素中で凍結した。凍結したサンプルはRNeasyFibrousTissueMiniKitを用いて、製造者のプロトコールに従って、全RNAを抽出した。全RNAの濃度は吸光度計を用いて測定し、全RNA1μgをHighCapacitycDNAReverseTranscriptionKitを用いて、製造者のプロトコールに従って、相補的DNAを作製した。5ngの相補的DNAを用いて、製造者のプロトコールに従って、RealtimePCR7300およびStepOnePlusシステムを用いて定量的PCRを行った。下記のフォワードプライマーFおよびリバースプライマーR、ならびに蛍光色素FAMおよびクエンチャーTAMRAを有するプローブPを用いた。GAPDHのプライマー、プローブセットはTaqManRodentGAPDHControlReagentsを用いた。マウスinterleukin1β遺伝子FSEQIDNO8:5’TAACCTGCTGGTGTGTGACGTT3’RSEQIDNO9:5’GACAGCACGAGGCTTTTTTGT3’PSEQIDNO10:5’FAMAGACAACTGCACTACAGGCTCCGAGATGATAMRA3’マウスtumornecrosisfactorα遺伝子FSEQIDNO11:5’AAGGCTGCCCCGACTACG3’RSEQIDNO12:5’AGGTTGACTTTCTCCTGGTATGAG3’PSEQIDNO13:5’FAMCTCCTCACCCACACCGTCAGCCGATAMRA3’マウスplasminogenactivatorinhibitor1PAI1遺伝子FSEQIDNO14:5’AAGGTCAGGATCGAGGTAAACG3’RSEQIDNO15:5’GCCGAACCACAAAGAGAAAGG3’PSEQIDNO16:5’FAMAGCGGCACAGTGGCGTCTTCCTCCTAMRA3’マウスtissueplasminogenactivator遺伝子FSEQIDNO17:5’CTGACTGGACAGAGTGTGAGC3’RSEQIDNO18:5’GACGTGAGCCTCCTTCAGC3’PSEQIDNO19:5’FAMCGGCAAGCATGAGGCATCGTCTCCTAMRA3’マウスtransforminggrowthfactorβ1遺伝子FSEQIDNO20:5’GACGTCACTGGAGTTGTACGG3’RSEQIDNO21:5’GCTGAATCGAAAGCCCTGT3’PSEQIDNO22:5’FAMAGTGGCTGAACCAAGGAGACGGAATAMRA3’マウスfibronectin遺伝子FSEQIDNO23:5’ATCATTTCATGCCAACCAGTT3RSEQIDNO24:5TCGCACTGGTAGAAGTTCCA3PSEQIDNO25:5FAMCCGACGAAGAGCCCTTACAGTTCCATAMRA3<免疫組織化学法>本発明において、免疫組織化学法は以下の工程により実施した。マウスの壁側腹膜を含む前腹直筋を1mm厚に薄切し4度の4パラフォルムアルデヒド溶液で24時間固定し、パラフィン包埋を行った。4μm厚のパラフィン切片をスーパーフロストスライドガラス松浪硝子工業株式会社、大阪、日本上に貼付し、脱パラフィン化した後、15H2O2溶液で15分処理した。抗原賦活化として、マイクロウェーブ処理を5分3回行い、PBSにて洗浄した後、10正常ヤギ血清を30分反応させ、ウサギ抗ヒトCD3抗体DAKO社、東京、日本を1100の希釈倍率で反応させた。PBSで洗浄した後、ペルオキシダーゼヤギ抗ウサギ抗体JacksonImmunoResearch社を1100の希釈倍率で反応させた後、33’diaminobenzidinetetrahydrochlorideにて発色させた。ヘマトキシリン染色を行い、封入した。<実験材料および方法>1.腹膜癒着モデルの作製と薬物の投与実験には、平均体重2368gの27匹のC57BL6Jマウス日本クレア、東京、日本を用いた。85の001Mリン酸緩衝バッファーPBSと15のエタノールナカライテスク、京都、日本の混合液に、5ヒビテン液5グルコン酸クロルヘキシジン:大日本住友製薬株式会社、大阪、日本を50倍希釈となるように添加し、01ヒビテン溶液を作製した。01ヒビテン溶液03mlを27Gy針と1mlの注射筒を用いて週に3回、4週間、合計12回腹腔内投与することにより、腹膜癒着を惹起したIshiiYetalNephrolDialTransplant16126212662001。10匹は投与開始と同時にヒト心房性ナトリウム利尿ペプチドhumanANP:アスビオファーマ株式会社、東京、日本を持続腹腔内投与した。具体的には、humanANP84mgを5ブドウ糖液1mlに溶解し、浸透圧ミニポンプ2004モデル、ALZETOsmoticPumpsIncCupertinoCAUSAに充填し、ポンプを腹腔内に留置することにより、15gkgmin025lhrの濃度で28日間持続腹腔内投与したヒビテン-ANPマウス群。10匹は対照群として、01ヒビテン溶液03mlを週に3回、4週間、合計12回腹腔内投与し、5ブドウ糖液のみを浸透圧ミニポンプ2004モデルにて投与したヒビテン-ブドウ糖マウス群。他の7匹は正常コントロールとして、03mLのPBSを週3回、4週間、合計12回腹腔内投与し、浸透圧ミニポンプで5ブドウ糖液を投与したPBS-ブドウ糖マウス群。血漿hANP濃度は、アプロチニン含有EDTA採血により血漿を分離し、発光酵素免疫測定法CLEIA:chemiluminesentenzymeimmunoassayを用いて測定した。評価は、株式会社エスアールエルにておこなった。2.癒着の評価方法01ヒビテン液もしくはPBS投与28日後に、腹膜の癒着および臓器間の癒着をスコア化して評価した。スコア化は、非特許文献4の記載にしたがい、以下の基準によりおこなった。0:全く癒着を認めない1:1カ所の薄い癒着2:2カ所以上の薄い癒着3:部分的な厚い癒着4:2カ所以上の厚い癒着5:非常に厚い癒着<実験結果>本実施例において、ヒビテン-ANPマウス群の血漿中hANP濃度は785±266pgmlで、内因性レベルの数倍程度に上昇した一方、対照のヒビテン-ブドウ糖マウス群とPBS-ブドウ糖マウス群では、血漿hANP濃度はアッセイの感度以下10pgml以下であった。図1から明らかなように、ヒビテン-ブドウ糖液マウス群癒着スコア:34±040は、PBS―ブドウ糖液マウス群癒着スコア:00±000に比して、腹膜の癒着が高度であった。また、ヒビテン-ANPマウス群癒着スコア:16±068は、ヒビテン-ブドウ糖液マウス群に比して、癒着の軽減が認められた。さらに、各群の腹膜組織標本を用いて、炎症性サイトカインであるinterleukin1βIL1β遺伝子、tumornecrosisfactorαTNFα遺伝子のmRNA発現をglyceraldehyde3phosphatedehydrogenaseGAPDH遺伝子を内因性コントロールとしてリアルタイムPCR法にて検討したAppliedBiosystems、東京、日本。図2に示すように、ヒビテン-ブドウ糖液マウス群のIL1β遺伝子/GAPDH遺伝子発現比は、PBS-ブドウ糖液群に比して100倍に亢進しており、ヒビテン-ANPマウス群では、その発現亢進が74抑制された。また、TNFα遺伝子/GAPDH遺伝子発現比は、ヒビテン-ブドウ糖マウス群においてPBS―ブドウ糖マウス群に比して250倍発現亢進を認め、ヒビテン-ANP投与群でその発現亢進が70抑制された。次に、線溶系に関連するplasminogenactivatorinhibitor1PAI1、tissueplasminogenactivatortPAの遺伝子発現をリアルタイムPCR法で検討した。図3に示すように、ヒビテン-ブドウ糖液マウス群のPAI1/GAPDH遺伝子発現比は、PBS-ブドウ糖液群に比して38倍に亢進した。ヒビテン-ANPマウス群とヒビテン-ブドウ糖液群のPAI1/GAPDH遺伝子発現比に有意差は認められなかった。また、ヒビテン-ブドウ糖液マウス群のtPA/GAPDH遺伝子発現比は、PBS-ブドウ糖液群に比して17倍に亢進した。ヒビテン-ANPマウス群とヒビテン-ブドウ糖液マウス群のtPA/GAPDH遺伝子発現比に有意差は認められなかった。この結果は、PAI1、tPA遺伝子発現以外の腹膜癒着に関連する因子がヒビテン-BNPTgマウスの癒着抑制作用に寄与する可能性を示している。次に、T細胞の腹膜組織への浸潤をCD3免疫染色法により検討した。明らかな血管内の細胞を除いた腹膜中皮下組織におけるCD3陽性細胞数と全細胞数を計測し、CD3陽性細胞率を計算した。図4に示すように、PBS-ブドウ糖マウス群においては、CD3陽性細胞を認めなかった。CD3陽性細胞率は、ヒビテン-ブドウ糖液マウス群50±051に対し、ヒビテン-ANPマウス群35±04では有意にCD3陽性細胞浸潤が抑制された。この結果によりANP投与はヒビテン刺激による腹膜癒着において、CD3陽性細胞であるT細胞の浸潤を抑制したことを示唆している。<実験材料および方法>SerumamyloidcomponentPSAPプロモーターを用いて肝臓でマウス脳性ナトリウム利尿ペプチドBNPを過剰発現するマウスBNPトランスジェニックマウス:非特許文献7に基づいて作製と野生型マウスとの間でのヒビテンによる腹膜癒着に及ぼす差について検討した。BNPはANPと同様にグアニリルシクラーゼAに結合し、cGMPを介して生理活性を発揮する。BNPトランスジェニックマウスは野生型マウスに比べて、BNPの血中濃度が1367倍に上昇しているとの報告があるChushoHetalEndocrinology141380738132000。平均体重272gの16匹のBNPトランスジェニックマウスに01ヒビテン溶液03mlを週3回、4週間腹腔内投与し、腹膜癒着を惹起したヒビテン-BNPTgマウス群。対照としては、平均体重278gの17匹の同腹の野生型マウスに01ヒビテン溶液を同量投与したヒビテン-野生型マウス群。正常コントロールとして、平均体重275gの7匹のBNP-TgマウスPBS-BNPTgマウス群と平均体重269gの7匹の同腹の野生型マウスPBS-野生型マウス群にPBS03mlを週3回4週間腹腔内投与した。<実験結果>図5に示すように、ヒビテン-野生型マウス群癒着スコア:36±016では、PBS―野生型マウス群癒着スコア:00±000に比して腹膜の癒着が高度であった。一方、ヒビテン-BNPTgマウス群癒着スコア:23±013は、ヒビテン-野生型マウス群に比して癒着の軽減が認められた。IL1β、TNFα、PAI1、tPA、GAPDH遺伝子のmRNA発現をリアルタイムPCR法で検討した。図6に示すように、IL1β/GAPDH遺伝子発現比は、ヒビテン-野生型マウス群ではPBS-野生型マウス群に比して59倍に発現が亢進しており、ヒビテン-BNPTgマウス群では発現が65抑制された。同様に、TNFα/GAPDH遺伝子発現比は、ヒビテン-野生型マウス群ではPBS-野生型マウス群に比して82倍に発現が亢進しており、ヒビテン-BNPTgマウス群では50抑制されていた。また、図7に示すように、PAI1/GAPDH遺伝子発現比とtPA/GAPDH遺伝子発現比は、野生型マウス群、BNPTgマウス群ともヒビテン投与群で発現が亢進したがそれぞれ67±22倍、33±092倍、ヒビテン野生型マウス群とヒビテンーBNPTgマウス群で差を認めなかった。この結果は、PAI1tPA遺伝子発現以外の腹膜癒着に関連する因子がヒビテン-BNPTgマウスにおいて存在する可能性を示している。次に、T細胞の腹膜への浸潤をCD3免疫染色法で検討した。明らかな血管内の細胞を除いた腹膜中皮下組織におけるCD3陽性細胞数と全細胞数を計測し、CD3陽性細胞率を計算した。図8に示すように、PBS投与マウスにおいては、野生型群、BNPTgマウス群の両者において、CD3陽性細胞を認めなかった。CD3陽性細胞率は、ヒビテン-野生型マウス群においては、79±14であるのに対し、ヒビテン-BNPTgマウス群では、34±11であり、有意にCD3陽性細胞浸潤が抑制された。この結果により血中BNPの慢性過剰状態はヒビテン刺激による腹膜癒着において、CD3陽性細胞であるT細胞の浸潤を抑制し、癒着を抑制した可能性が示唆された。<実験材料および方法>ANPおよびBNPの受容体であるグアニリルシクラーゼAの遺伝子を欠損させたマウスGCAノックアウトマウス:LopezMJetalNature37865681995に基づいて作製と野生型マウスにおけるヒビテンによる腹膜癒着に及ぼす差について検討した。GCAノックアウトマウスではANPおよびBNPのGCAを介する生理活性が欠損している。平均体重280gの9匹のGCAノックアウトマウスに01ヒビテン溶液03mlを週3回4週間投与し、腹膜癒着を惹起したヒビテン-GCA-KOマウス群。対照としては平均体重276gの8匹の同腹の野生型マウスにヒビテンを同量投与したヒビテン野生型マウス群。癒着非惹起群として、平均体重282gの5匹のGCA-KOマウスPBSGCA-KOマウス群と平均体重286gの6匹の同腹の野生型マウスPBS野生型マウス群にPBS03mlを週3回4週間腹腔内投与した。<実験結果>図9に示すように、ヒビテン-野生型マウス群癒着スコア:28±020は、PBS―野生型マウス群癒着スコア:00±000に比して腹膜の癒着が高度であった。一方、ヒビテン-GCA―KOマウス群癒着スコア:38±040では、ヒビテン-野生型マウス群に比して癒着の増悪が認められた。IL1β、TNFα、tPA、PAI1、GAPDH遺伝子のmRNA発現をリアルタイムPCR法で検討した。図10に示すように、IL1β/GAPDH遺伝子発現比は、ヒビテン-GCA-KOマウス群101±32ではヒビテン-野生型マウス群51±21に比べて上昇した。TNFα/GAPDH遺伝子比も同様に、ヒビテン-GCA-KOマウス群353±91ではヒビテン-野生型マウス群138±45に比して増加した。また、図11に示すように、PAI1/GAPDH遺伝子とtPA/GAPDH遺伝子は、いずれもヒビテン投与群で発現が亢進していたが、ヒビテン-野生型マウス群とヒビテン-GCA-KOマウス群で差を認めなかった。次に、T細胞の腹膜への浸潤をCD3免疫染色を用いて検討した。図12に示すように、PBS投与マウスにおいては、野生型マウス群、BNPTgマウス群の両者において、CD3陽性細胞を認めなかった。CD3陽性細胞率は、ヒビテン-野生型マウス群では13±0068であるのに対し、ヒビテン-GCAKOマウス群では36±12であり、有意にCD3陽性細胞浸潤が増加していた。この結果によりナトリウム利尿ペプチドANPとBNPの受容体であるGCA-KOマウス群ではGCAの欠損はヒビテン刺激による腹膜癒着において、CD3陽性細胞であるT細胞の浸潤を増強している可能性が示唆された。<実験材料および方法>ANPの皮下投与による癒着軽減効果について検討した。平均体重235gの7匹の野生型マウスに、浸透圧ミニポンプを用いてヒト心房性ナトリウム利尿ペプチドhumanANPを持続皮下投与15μgkgminし、その1日後より01ヒビテン溶液03mlを週3回4週間合計11回投与し、腹膜癒着を惹起したヒビテン-ANPSC群。対照としては平均体重235gの7匹の野生型マウスに、5ブドウ糖液を含有した浸透圧ミニポンプを皮下に埋没し、ヒビテンを同量投与したヒビテン-ブドウ糖SC群。癒着非惹起群として、平均体重237gの5匹の野生型マウスに5ブドウ糖液を含有した浸透圧ミニポンプを皮下に埋没し、PBS03mlを週3回4週間腹腔内投与した。<実験結果>ANP皮下投与マウスの平均血漿ANP濃度は172±106pgmlであった。ANP非投与群では、感度以下5pgml以下であった。図13に示すように、ヒビテン-ブドウ糖SC群癒着スコア:21±014は、PBS―ブドウ糖SC群癒着スコア:00±000に比して腹膜の癒着が高度であった。一方、ヒビテン-ANPSC群癒着スコア:13±019では、ヒビテン-ブドウ糖SC群に比して癒着の軽減が認められた。IL1β、TNFα、tPA、PAI1、GAPDH遺伝子のmRNA発現をリアルタイムPCR法で検討した。図14に示すように、IL1β/GAPDH遺伝子発現比は、ヒビテン-ANPSC群103±43ではヒビテン-ブドウ糖SC群253±25に比べて低下した。TNFα/GAPDH遺伝子比も同様に、ヒビテン-ANPSC群131±31ではヒビテン-ANPSC群286±41に比して低下した。また、図15に示すように、PAI1/GAPDH遺伝子とtPA/GAPDH遺伝子は、いずれもヒビテン投与群で発現が亢進していたが、ヒビテン-ブドウ糖SC群とヒビテン-ANPSC群で差を認めなかった。次に、T細胞の腹膜への浸潤をCD3免疫染色を用いて検討した。図16に示すように、PBS―ブドウ糖SCマウスにおいては、CD3陽性細胞を認めなかった。CD3陽性細胞率は、ヒビテン-ブドウ糖SC群では347±41であるのに対し、ヒビテン-ANPSCでは199±41であり、有意にCD3陽性細胞浸潤が減少していた。この結果によりナトリウム利尿ペプチドANPの皮下投与はヒビテン刺激による腹膜癒着において、CD3陽性細胞であるT細胞の浸潤を抑制している可能性が示唆された。