"配列番号1~2のアミノ酸配列を含む、ヒトアストロウイルスコートcoatタンパク質由来の単離、精製されたペプチド。一つまたは複数のアミノ酸置換、修飾、挿入、または欠失を有する配列番号1のアミノ酸配列を含み、補体活性化を調節する、単離、精製された合成ペプチド。一つまたは複数の保存的アミノ酸置換を有する配列番号1のアミノ酸配列を含み、補体活性化を調節する、単離、精製された合成ペプチド。前記アミノ酸のうちの一つまたは複数がアラニンで置換されている配列番号1の配列を含み、補体活性化を調節する、単離、精製された合成ペプチド。アラニンで置換された前記アミノ酸が4、23、25、または27位に存在する、請求項4に記載のペプチド。配列番号1に対し少なくとも約90の同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離、精製された合成ペプチド。前記アミノ酸配列が配列番号1に対し少なくとも約95の同一性を有する、請求項6に記載のペプチド。配列番号3~35のアミノ酸配列のうちのいずれか1つを含む、単離、精製された合成ペプチド。N末端残基のアセチル化により修飾されている、請求項1~8のいずれか1項に記載のペプチド。C1qおよびMBLに結合することにより古典経路およびレクチン経路の活性化を調節する、請求項1~9のいずれか1項に記載のペプチド。古典経路の活性化を調節するが、レクチン経路の活性化は調節しない、請求項1~9のいずれか1項に記載のペプチド。請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチドの治療有効量および少なくとも1つの薬剤的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物。請求項12に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、対象における補体系を調節する方法。請求項12に記載の組成物を対象に投与することを含む、補体により媒介される組織損傷が関連する疾患を治療する方法であって、前記補体により媒介される組織損傷が関連する疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、膜性増殖性糸球体腎炎、血清病、成人呼吸窮迫症候群ASDS、虚血再灌流障害、脳卒中、心筋梗塞、同種または異種移植障害、超急性拒絶、移植片対宿主病GVHD、アルツハイマー病、熱傷、血液透析による損傷、心肺バイパスによる損傷、発作性夜間血色素尿症PNH、および遺伝性血管浮腫HAEからなる群から選択される方法。前記疾患を治療するのに有効な少なくとも1つの他の活性成分を対象に投与することをさらに含み、前記少なくとも1つの他の活性成分が、非ステロイド系抗炎症剤、副腎皮質ステロイド、疾患修飾性抗リウマチ薬、C1阻害剤、およびエクリズマブからなる群から選択される、請求項14に記載の方法。本発明は、補体系の古典経路およびレクチン経路を調節するペプチド化合物、およびこれらの化合物を使用する方法を提供する。具体的には、本発明のペプチド化合物はC1およびMBLと結合し、それらを調節および不活性化することができるため、副経路はそのままに、古典経路およびレクチン経路の活性化をその最も早いポイントで効果的に阻害することができる。これらのペプチド化合物は、副経路alterativepathwayに影響を与えずにC1およびMBLの活性化を選択的に調節および阻害するための治療薬として価値があり、古典経路およびレクチン経路の活性化調節不全を介した疾患を治療するために用いることができる。他の実施形態では、本ペプチド化合物は、古典経路の活性化を調節するが、レクチン経路の活性化は調節しない。本発明は、CP1と称される、ヒトアストロウイルスコートタンパク質由来の30個のアミノ酸からなり、C1qおよびMBLに結合することにより古典経路およびレクチン経路の活性化を調節することができる配列番号1を有する、単離精製されたペプチドの同定に基づいている。他の実施形態では、本発明は、CP1のペプチド模倣薬、ペプチド類似体および/または合成誘導体であり、例えば、内部ペプチドの欠失および置換、N末端およびC末端での欠失および置換を有しており、C1qおよびMBLに結合することにより古典経路およびレクチン経路の活性化を調節することができるペプチド化合物を対象としている。本発明のさらなる実施形態は、ペプチド化合物がN末端残基のアセチル化によって修飾されている、本発明のペプチド化合物のうちのいずれか1つである。一部の実施形態では、ペプチド配列は、配列番号1に対し、少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約91、少なくとも約92、少なくとも約93、少なくとも約94、少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、または少なくとも約99の配列同一性を有する。本発明の別の実施形態はさらに、医薬組成物を提供する。例えば、本発明は、治療有効量の、上記化合物のいずれか1つのペプチドおよび少なくとも1つの薬剤的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本発明の別の実施形態はさらに、対象に上記組成物を投与することを含む、対象における補体系を調節する方法を提供する。本発明のさらなる実施形態は、上記医薬組成物を投与することによって補体により媒介される組織損傷が関連する疾患を治療する方法であり、該補体により媒介される組織損傷が関連する疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、膜性増殖性糸球体腎炎、血清病、成人呼吸窮迫症候群ASDS、虚血再灌流障害、脳卒中、心筋梗塞、同種または異種移植障害、超急性拒絶、移植片対宿主病GVHD、アルツハイマー病、熱傷、血液透析による損傷、心肺バイパスによる損傷、発作性夜間pocturnal血色素尿症PNH、および遺伝性血管浮腫HAEからなる群から選択される。本発明の別の実施形態は、補体により媒介される組織損傷が関連する疾患を治療するのに有効な少なくとも1つの他の活性成分を対象に投与することをさらに含む、該疾患を治療する方法であり、該少なくとも1つの他の活性成分は、非ステロイド系抗炎症剤、副腎皮質ステロイド、疾患修飾性抗リウマチ薬、C1-阻害剤、およびエクリズマブからなる群から選択される。別段の定めがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に用いることができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照によって組み込まれるものとする。さらに、材料、方法、および例は、例示のためだけのものであって、制限することを意図してはいない。本発明の他の特徴および利点は、発明を実施するための方法、図、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。本発明は、具体的にはC1およびMBLに結合および/または不活性化し、したがって副経路に影響を及ぼすことなくその最も早い時点で古典経路およびレクチン経路活性化を調節することにより、補体系の古典経路およびレクチン経路を調節するペプチド化合物を提供する。これらのペプチド化合物は、古典経路およびレクチン経路の無調節な活性化により媒介される病気および状態の治療に治療薬としての価値をもつ。本発明は、ヒトアストロウイルス外被タンパク質CP1とよばれる由来の30のアミノ酸の単離精製されたペプチド、すなわちC1qおよびMBLに結合することにより古典経路およびレクチン経路活性化を調節することができる配列配列番号1をもつペプチドの同定に基づく。他の実施形態では、ペプチド化合物は古典経路の活性化を調節するが、レクチン経路の活性化を調節しない。CP1のアミノ酸構造の修飾が、C1q活性を調節することができるさらなるペプチド化合物の発見を導いてきた。本明細書で使用されるペプチド化合物という用語は、天然由来であってよいアミノ酸配列、またはペプチド模倣薬、ペプチド類似体および/または配列番号1に基づく約30のアミノ酸の合成誘導体であってもよいアミノ酸配列を表す。さらに、ペプチド化合物は約30未満のアミノ酸残基、例えば約20から約30のアミノ酸残基であってよく、また例えば約10から約20のアミノ酸残基のペプチド化合物であってよい。例えば5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、および30のアミノ酸のペプチド残基は、本発明の文脈内でペプチド化合物になる可能性が高い。本開示のペプチド化合物は一般に、約30のアミノ酸残基または約30未満のアミノ酸残基の、束縛されたconstrainedすなわち例えばβターンまたはβプリーツシートを開始するアミノ酸が存在するような構造の要素をいくつか有する、または例えばジスルフィド結合したCys残基の存在により環化された、または束縛されていないunconstrainedアミノ酸配列である。ペプチド配列内のアミノ酸の置換基substituteは、そのアミノ酸が属する分類の他の要員から選択してもよい。例えば非極性疎水性アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、およびメチオニンが挙げられる。芳香環構造を含むアミノ酸としては、フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンが挙げられる。極性的に中性polarneutralであるアミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンが挙げられる。正電荷をもつ塩基性アミノ酸としては、アルギニンおよびリジンが挙げられる。負電荷をもつ酸性アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。例えば、配列内の1つまたは複数のアミノ酸残基は、機能的に同等に作用し静かな変換silentalterationをもたらす同様な極性の別のアミノ酸により置換し得る。保存的変化は一般に、得られるタンパク質の構造および機能に変化をあまりもたらさない。非保存的変化は、得られるタンパク質の構造、活性、または機能に変換をもたらす可能性が高い。例えば本開示のペプチドは、1つまたは複数の次の保存的なアミノ酸置換:脂肪族アミノ酸例えばアラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンなどの別の脂肪族アミノ酸による置き換え;セリンのトレオニンによる置き換え;トレオニンのセリンによる置き換え;酸性残基例えばアスパラギン酸およびグルタミン酸などの別の酸性残基による置き換え;アミド基を有する残基例えばアスパラギンおよびグルタミンなどの、アミド基を有する別の残基による置き換え;塩基性残基例えばリジンおよびアルギニンなどの、別の塩基性残基による交換;ならびに芳香族残基例えばフェニルアラニンおよびチロシンなどの、別の芳香族残基による置き換え、を含む。特に好ましいアミノ酸置換としては次のものが挙げられる:a負電荷を低減し得るようにGluに対するAlaの置換またはその逆;b正電荷を維持し得るようにArgに対するLysの置換またはその逆;c正電荷を低減し得るようにArgに対するAlaの置換またはその逆;d負電荷を維持し得るようにAspに対するGluの置換またはその逆;e遊離-OHを維持することができるようにThrに対するSerの置換またはその逆;f遊離NH2を維持することができるようにAsnに対するGlnの置換またはその逆;gほぼ疎水性アミノ酸に相当するようなLeuもしくはValに対するIleの置換またはその逆;hほぼ芳香族アミノ酸に相当するようなTyrに対するPheの置換またはその逆;およびiジスルフィド結合が影響を受けるようにCysに対するAlaの置換またはその逆。一実施形態では、本発明はヒトアストロウイルス外被タンパク質由来の単離精製されたペプチドを開示し、前記ペプチドは配列番号1のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、本発明は1つまたは複数のアミノ酸の置換、修飾、挿入、または欠失をもつ配列番号1のアミノ酸配列を含む、単離精製された合成ペプチドを開示し、前記ペプチドは補体活性化を調節する。別の実施形態では、本発明は1つまたは複数のアミノ酸の置換をもつ配列番号1のアミノ酸配列を含む、単離精製された合成ペプチドを開示し、前記ペプチドは補体活性化を調節する。ペプチド化合物は、内部ペプチド欠失および置換、ならびに配列番号1に基づくN末端およびC末端での欠失および置換を有してもよい。いくつかの実施形態では、ペプチドは、約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、または20またはそれ以上のアミノ酸置換、修飾、挿入,または欠失を有する。いくつかの実施形態では、ペプチド配列は配列番号1と少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約91、少なくとも約92、少なくとも約93、少なくとも約94、少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、または少なくとも約99の配列同一性を有する。アストロウイルス外被タンパク質ペプチドおよび誘導体HNP-1とWTCPとの間の相同性領域を包含した2種の30残基ペプチド、CP1およびCP2を合成した図2A。CP1が古典経路活性化の一貫した調節を示した一方で、CP2は古典経路活性化の調節を示さなかった。CP1は、図2Aに示すように、そのN末端およびC末端にてHNP-1との限定された相同性を保持する各4残基が;しかし、これらの側面の残基に対してその内部に相同性は存在しない。いかなる理論にも縛られるものではないが、WTCPは、C1およびMBLの両分子のコラーゲン様領域に結合することにより、ならびにC1qおよびMBLからそれらとそれぞれ関連するセリンプロテアーゼ、すなわちC1s-C1r-C1r-C1sおよびMASP2をそれぞれ分離することにより、C1およびMBL活性を調節し得る。本開示でのペプチド化合物は、CP1、すなわち上述のHAstVCPの30アミノ酸ペプチドのペプチド欠失および置換により合成される。さらなるペプチド化合物は、以下の表1に示すように、CP1の修飾に基づき合成されている。CP1はヒトアストロウイルス外被タンパク質由来の単離精製されたペプチドであり、前記ペプチドは配列番号1のアミノ酸配列を含む。CP2はヒトアストロウイルス外被タンパク質由来の単離精製されたペプチドであり、前記ペプチドは配列番号2のアミノ酸配列を含む。親ペプチドとしてCP1を使用して、4種類のアラニン置換C04A、C27A、E23A、E25Aを作製したアラニン置換残基は表1において太字かつ下線で示す。残基8から残基22までの内部欠失をΔ8-22ペプチドのために作製した内部欠失は表1においてダッシュで示す。CP2、CP1、およびCP1誘導体をプレート上に被覆した。ブロッキング後、C1qを増量させつつincreasingamountof室温で1時間添加し、その後C1qに対する抗血清を用いてC1qを検出した。C1qの各種ペプチド誘導体との結合性を図3に示す。データは各ペプチド化合物に関する3連での読み取りを表す。CP1はC1qに用量依存的に結合した図3A。CP2はC1qにCP1ほど結合しなかったが、HNP-1のその結合性と同様のレベルでC1qに結合した図3A。表1に示すように、CP1は2つのシステイン残基を第4位および第27位に含有し、これらのシステイン残基は、個々にC04AおよびC27Aではアラニンに置換される。CP1のシステイン残基を標的化して、CP1でのジスルフィド結合が古典経路活性化のために必要であるどうかを判定した。当技術分野に公知であるように、C3のペプチドレギュレータコンプスタチンおよびC1qペプチド2J共にアミノ酸配列に2つのシステイン残基を含有するは活性のためにジスルフィド結合による環化cyclicalizationを必要とする。システイン置換はC1q結合図3BまたはC4活性化図5に有意な効果を示さない。しかし、両方のシステイン置換は、溶血アッセイでの補体調節活性を減少させることを示した図6B。このことは、システイン残基のジスルフィド結合を介した環化はC1qの結合に重要ではないが、環化が補体系の活性を阻害する能力に対する様々な効果を有すると思われることを示唆する。したがって、いかなる理論にも縛られるものではないが、システイン残基のジスルフィド結合は、E23Aの構造モデルが示唆しているように、適したペプチドの立体配座および安定性に重要であり得る図9B。表1に示すように、第23位および第25位のグルタミン酸残基はまた、アラニンにより置換されていた。これらの負電荷をもつアミノ酸がC1q分子上の非水酸化リジン残基とのCP相互作用に関与し得るため、グルタミン酸残基の置換がなされた。E23AおよびE25Aペプチドは、C1qへの効率的な結合図3Cを示し、また全ての機能分析でCP1と同様のまたはCP1を超える調節活性を示した図5および6。具体的には、E23Aは、試験を行った他の全てのペプチド誘導体と比較して、古典経路活性化に優れた調節を示した。中性のアラニン残基による負電荷をもつグルタミン酸の1つの置換がペプチドの調節活性を増強するようである。表1に示すように、Δ8-22ペプチドはE23Aからの残基8~22の欠失であった。このペプチドは試験を行った全ての機能分析で活性であり、C1qに結合した図3D。このΔ8-22ペプチドは2つのシステインおよび2つのグルタミン酸残基を保持し、またCP1の大きさの半分である15残基対30残基。Δ8-22ペプチド配列番号7は合成中に酸化されて、2つのシステイン残基間にジスルフィド結合を形成したΔ8-22酸化。このペプチドは試験を行った全ての機能分析で活性であった。2つのシステイン残基をΔ8-22ペプチドにてジスルフィド結合を形成していないシステイン誘導体と置き換えると、ペプチドの残留が減少した。Δ8-22ペプチドAbu;配列番号8。このペプチドは、試験を行った全ての機能分析で活性であった。ペプチドの極性取り合わせPolarAssortant配列番号9に関しては、Δ8-22ペプチドからの15アミノ酸残基がスクランブルscrambleされていた。このペプチドもまた、試験を行った全ての機能分析で活性であった。ペプチドの合理的欠失、置換、および修飾以下の表2に示すように、CP1の一連のペプチド欠失、置換、および修飾を開示する。表1および表2に示すように、対象物は、配列番号1~35のアミノ酸配列のいずれか1つを含む単離精製した合成ペプチドを開示する。内部欠失上述のように、CP1は図2Aに示すようにHNP-1の最初の10残基の長さと配列をもつ30アミノ酸残基である。これらの2種類の分子の配列は、CP1の環化のために必要とされるN末端およびC末端でのシステイン残基に基づく。これはHNP-1と相同性である配列を有さないCP1の18残基内部領域をもたらす。CP1の内部欠失が徐々に増加して合成され、C1qおよびMBLの結合性に対して判断される表2、内部欠失。N末端およびC末端欠失表2に示すようにN末端およびC末端欠失、N末端およびC末端アミノ酸は、次第に、CP1の各システイン残基まで個々に欠失される。さらには、CP1およびCP2からのN末端およびC末端の両方の欠失がなされ、15のアミノ酸ペプチドが形成される。これらの修飾ペプチド化合物が合成されて、これらの側面の残基をC1qおよびMBL結合活性に必要とするかを判定するために、C1qおよびMBL結合性について修飾ペプチド化合物を判断する。これらの欠失は、補体活性化を調節するために必要とされるペプチド化合物の最小サイズを決定するのに役立つ。アラニンスキャンScanアラニンスキャンニングを行い、ペプチドの活性に関与する特定のアミノ酸残基を同定する。アラニンスキャンニングでは、アラニンを用いて各残基を連続的に置換する。必須アミノ酸の置換はペプチド活性に変化をもたらし、その活性度が置換されたアミノ酸の重要性の相対的測定値とみなされる。対象物は、ある位置でアラニンにより置換されたペプチド化合物を開示する。対象物は、配列番号1の配列を含む単離精製された合成ペプチドを開示し、前記合成ペプチドでは1つまたは複数のアミノ酸がアラニンで置換され、本ペプチドは補体活性化を調節する。1つまたは複数の実施形態では、アラニンで置換されたアミノ酸は第4、23、25、または27位に存在する。2つのグルタミン酸残基位置は両方とも個々におよび同時にアラニンで置換される表2、太字および下線。いかなる理論にも縛られるものではないが、野生型CP分子は、セリンプロテアーゼC1s-C1r-C1r-C1sおよびMASP2とそれぞれ結合するために必要とされるC1qおよびMBL上の反応性リジン残基と相互に作用し得る。グルタミン酸に関連する負電荷を仮定すると、これらの残基は直接的にCP結合を促進するC1qおよびMBL上の正電荷をもつリジン残基と相互に作用する。2つのシステイン残基位置は、両方とも個々におよび同時にアラニンで置換される表2、太字および下線部。N末端アセチル化対象物は、N末端がアセチル化されたペプチド化合物を開示する。CP1のアセチル化は、ペプチドのN末端での電荷を減少させることにより、効果を高めるすなわち静電効果RicklinおよびLambris、2008NatBiotech25、12651275。この修飾は、Compstationにより示されているように、エクソペプチダーゼに関わるペプチドのinvivo安定性の改良に役立ち得るRicklinおよびLambris、2008NatBiotech25、12651275。N末端アセチル化から合成されたペプチド化合物としては、上述のあらゆるペプチドが含まれるが、前記ペプチドはN末端残基のアセチル化により修飾されている。補体系およびその調節異常に関連する病気補体は細菌やエンベロープをもついくつかのウイルスなどの病原体に対する重要な宿主防御である一方で、その無制限な活性化が破壊的な宿主細胞損傷を引き起こす。補体により媒介される宿主組織の損傷は、自己免疫の病変、例えば:関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、膜性増殖性糸球体腎炎、および血清病などの様々な病気に関与している。前記損傷はまた、以下の病気:成人呼吸窮迫症候群ARDS、虚血再灌流障害脳卒中および心筋梗塞を含む、同種および異種移植術合併症超急性拒絶および移植片対宿主病GVHDを含む、アルツハイマー病、熱傷、血液透析による損傷、心肺バイパスによる損傷、および発作性夜間血色素尿症PNHの原因の一因をもたらすと確認されている。遺伝性血管浮腫HAEは、非機能性C1阻害因子レベルの減少により引き起こされる非常に稀な遺伝性疾患であり、HAEの症状には急性の浮腫が挙げられる。C1阻害剤はC1活性化を天然に調節し、また急性浮腫の治療は、C1阻害剤の実質的な注入または血漿輸血を必要とする。アストロウイルスCPはC1活性化を機能的に遮断するので、HAEを治療するための本開示のペプチド化合物を使用することは治療必要性を満たす。その理由はC1阻害剤は、複数の対象からのヒト血清から精製しなければならないので、ヒト血液由来病原体により汚染され得る。本開示のペプチド化合物の治療的投与は、C1阻害剤を用いた補助療法においてまたは独立した治療法としてのいずれかにてC1を調節する。本開示のペプチド化合物は、副経路活性に影響を与えることなくC1qおよびMBL活性化を選択的に調節し、したがって古典経路およびレクチン経路の無調節な活性化よって媒介される病気を予防および治療するのに最適である。副経路は侵入病原体に対する免疫学的監視に不可欠であり、副経路の欠陥をもつヒトは深刻な細菌感染症を患う。C1qおよびMBLの結合および不活性化により、ペプチド化合物は、古典経路およびレクチン経路の活性化を効率よく調節する一方で、副経路を正常に保ち得る。本明細書に使用される調節するという用語は、i酵素、タンパク質、ペプチド、因子、副生成物、またはその誘導体の生物学的機能を、個々にまたは複合体の状態で、制御、減少、阻害、調節すること;ii生体タンパク質、ペプチド、またはその誘導体の量を、invivoまたはinvitroで減少させること;またはiii関連する一連の生物学的反応または化学的反応を含むことが知られている事象、カスケード、または経路の生物学的連鎖biologicalchainを遮断すること、をさす。調節するという用語は、したがって例えば対照試料と比較した補体カスケードの単一成分量を減少させること、成分もしくは成分複合体の形成率またはその総量を減少させること、または細胞融解、転換酵素の形成、補体由来の細胞膜傷害複合体、炎症、もしくは炎症性疾患の形成のような結果をもたらす複合プロセスまたは一連の生物学的反応の全活性を減少させることを説明するために使用してもよい。invitroのアッセイで、調節するという用語は、いくつかの生物学的事象または化学的事象の測定可能な変化または減少を意味し得るが、当業者が、測定可能な変化または減少が調節の全てである必要がないことは理解されるであろう。製剤処方および投与本開示は補体系の調節が可能な医薬組成物を提供し、前記医薬組成物は、少なくとも1つの上述のペプチド化合物と少なくとも1つの薬剤的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤とを含む。薬剤的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、使用される用量および濃度において受容者に無毒である。これらは固形、半固形または液体であり得る。本発明の医薬組成物は錠剤、丸薬、粉末、トローチ剤、小袋、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、溶液、またはシロップの形状であり得る。薬剤的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤のいくつかの例としては:ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、スターチ、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。本発明の医薬組成物は、当技術分野で公知の手順を用いて処方され、活性成分の迅速な、一般的もしくは持続的なまたは遅延性の放出をもたらす。本開示は、対象に上述の組成物を投与することを含む、対象での補体系を調節する方法に関する。本発明の医薬組成物は、適切な純度のペプチド化合物を薬剤的に許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と混合することにより調製される。処方およびそのような処方の調製方法の例は、当技術分野で周知である。本発明の医薬組成物は、上記に記載した様々な疾患および病気の予防薬および治療薬として有用である。一実施形態では、組成物は、治療有効量のペプチド化合物を含む。別の実施形態では、組成物は補体媒介性組織損傷に関連する少なくとも1つの病気の治療に有効な少なくとも1つの他の活性成分を含む。本明細書に使用される治療有効量という用語は、対象の有意な利点を示すのに十分な活性成分の各々の総量をさす。本明細書に使用される対象という用語は、診断、予後、または治療が望まれるあらゆる対象を意味する。例えば、対象は哺乳類、例えばヒトまたは非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシcattle、またはウシcowであり得る。本明細書に使用される治療する、治療すること、または治療は、疾患例えば本明細書に記載の疾患もしくはその症状を改善する、または疾患例えば本明細書に記載の疾患もしくはその症状の進行を予防または遅延させるのに効果的な量、様式例えば投与スケジュール、および/またはモード例えば投与ルートで治療薬を投与することをさす。これは、例えば疾患またはその症状に関連するパラメータの、例えば、統計的に有意な程度までまたは当業者に検出可能な程度までの改善により明らかであり得る。有効量、様式、またはモードは、対象により変更可能であり、また対象に合わせてもよい。疾患またはその症状を予防または遅延させることにより、治療は罹患したまたは診断された対象において疾患またはその症状を予防またはその結果による悪化を遅延させ得る。ペプチド化合物の治療有効量は、いくつかの因子、例えば治療中の状態、状態の重篤度、投与時間、投与ルート、使用する化合物の排泄速度、治療継続期間、関与する共同療法、ならびに対象の年齢、性別、体重、および状態、等により変化する。当業者は、治療有効量を決定し得る。したがって、当業者は投与量のタイター量titerを必要とし投与経路を変更して、最大の治療効果を得てもよい。効果的な1日投与量は、一般に体重1キログラムあたり約0.001から約100ミリグラムmg/kgの範囲であり、好ましくは約0.01から約50mg/kg、より好ましくは約0.1から約20mg/kgの範囲である。この投与量は、1日1~6回の投与方法により実現される。あるいは、最適な治療は、頻度のより低い投与方法の徐放性製剤により実現され得る。製剤処方は、あらゆる適切な経路、例えば経口の、経鼻の、局所の、または非経口の経路による投与に適応してもよい。ヒトへの投与には、製剤は好ましくは、アメリカ食品医薬品局FoodandAdministrationFDAで定められた無菌性、発熱性、一般的安全性、および純度標準puritystandardを満たす。併用療法本発明のさらなる実施形態は、補体媒介性組織損傷に関連する病気を予防または治療する方法を提供し、前記方法は対象に本発明の医薬組成物を投与することを含む。本発明の医薬組成物を単独で活性な医薬品として投与し得るが、前記医薬組成物はまた病気の予防または治療に効果的な1つまたは複数の治療薬または予防薬と併用して使用し得る。この態様では、本発明の方法は、補体媒介性組織損傷に関連する少なくとも1つの病気を治療するのに効果的な1つまたは複数のさらなる治療薬または予防薬の前に、同時に、及び/又は後に本発明の医薬組成物を投与することを含む。例えば本発明の医薬組成物は、いずれか単独でまたは非ステロイド性抗炎症薬NSAID、コルチコステロイド、もしくは疾患修飾性抗リウマチ剤DMARDを組み合わせて、関節リウマチを治療するために使用し得る。NSAIDの例としては、次の:サリチル酸塩例えばアスピリン、アモキシプリンamoxiprin、ベノリラート、トリサルチル酸コリンマグネシウム、ジフルニサル、ファイスラミンfaislamine、メチルサリチル酸、サリチル酸マグネシウム、およびサリチルサリチラートなど、アリールアルカン酸、2-アリールプロピオン酸例えばイブプロフェン、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ナプロキセン、チアプロフェン酸、およびスプロフェンなど、N‐アリールアントラニル酸例えばメフェナム酸およびメクロフェナム酸など、ピラゾリジン誘導体例えばフェニルブタゾン、アザプロパゾン、メタミゾール、オキシフェンブタゾン、およびスルフィンピラゾンなど、オキシカム例えばピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム、およびテノキシカムなど、COX-2阻害剤例えばエトリコキシブ、ルミラコキシブ、およびパレコキシブなど、スルホンアニリド例えばニメスリドなど、ならびにその他例えばリコフェロンおよびオメガ3脂肪酸など、が挙げられる。コルチコステロイドの例としては、次のトリアムシノロン、コルチゾン、デキサメタゾン、プレドニゾン、およびメチルプレドニゾロンが挙げられる。DMARDの例としては、次の:メトトレキサートリウマトレックス登録商標、レフルノミドアラバ登録商標、エタネルセプトエンブレル登録商標、インフリキシマブレミケード登録商標、アダリムマブヒュミラ登録商標、アナキンラキネレット登録商標、スルファサラジンアザルフィジンEN錠登録商標、抗マラリア剤、金塩、d-ペニシラミン、シクロスポリンA、シクロホスファミドおよびアザチオプリンが挙げられる。Soliris商標エクリズマブは、ヒト化抗C5モノクローナル抗体である。Soliris商標は溶血性貧血のまれな症状、発作性夜間血色素尿症の治療に対し、FDAにより認可を受けている。一実施形態では、本発明の医薬組成物は、発作性夜間血色素尿症、心臓疾患、肺疾患、自己免疫疾患、喘息の治療、ならびに移植物の補助的ケアの際にSoliris商標と併用し得る。本発明の医薬組成物は、追加の薬剤additionalagentと一緒に併用療法にて共同でまたは単独で投与し得、または1つの組成物中に医薬組成物および追加の薬剤を組み合わせて投与し得る。用量は、状態の最大限の管理が実現できるように投与および調整される。例えば医薬組成物および追加の薬剤の両方が、通常、単一治療monotherapy投与方法において通常投与される用量の約10から約150、より好ましくは約10から約80の用量レベルで存在する。本発明は以下の実施例によってさらに説明されるが、実施例は説明のみを目的として提供される。それらがいずれの点においても本発明の範囲および内容を限定していると解釈されるべきではない。材料および方法実施例1:HAstV-1CP、ペプチド、熱凝集IgG、血清、赤血球、および補体緩衝液の調製野生型HAstV-1CPをヨトウガSpodopterafrugiperda細胞IPLB-Sf21株中で組換えバキュロウイルスから発現させ、前述のように精製したBonaparteetal2008JVirol82817827。HNP-1、CP1、およびCP2ペプチドをバイオマティック社Biomatikから入手し、一方、C04A、C27A、E23A、E25Aおよびd8-22はジェンスクリプト社GenScriptから購入した。出荷前に、前記ペプチド化合物はHPLCおよびESI-質量分析で分析された。受領後直ちに、ペプチドを10mMの濃度でジメチルスルホキシドDMSOに溶解させ、-80°Cで貯蔵した。熱凝集ヒトIgGは、当該技術分野において周知の方法Bonaparteetal2008JVirol82817827を用いて調製した。プールされた正常ヒト血清NHSは、治験審査委員会により承認されたプロトコールIRB0206EX0216EasternVirginiaMedicalSchoolに従って健康なヒトの志願者の血液に由来し、当該技術分野において周知の方法Cunnionetal2001InfectImmun6967966803を用いてプールし、分注し、-80°Cで凍結したものである。抗体感作したヒツジ赤血球を、当該技術分野において周知の方法Bonaparteetal2008JVirol82817827を用いて作製した。標準補体緩衝液:GVBSベロナール緩衝食塩水、0.1ゼラチン、0.15mMCaCl2、および1.0mMMgCl2およびGVBS―ーベロナール緩衝食塩水、0.1ゼラチン、0.01MEDTAを使用した。実施例2:WTCPおよびペプチド化合物用C1qELISAのプロトコールC1q結合においてCPがHNP-1と競合するかどうかを解析するために、被膜緩衝液100mMNa2CO3、NaHCO3、[pH9.6]中のHNP-1ペプチド2.5μMを96ウェルMaxisorpプレートヌンク社上に被膜し、プレートを室温で一晩インキュベートした。プレートをPBS/Tで洗浄し、3BSA/PBS、0.05トウィーン-20PBS/Tで室温で2時間ブロッキングした。次に、一定量の精製C1q10μg/ml;コンプリメントテクノロジー社ComplementTechnologiesIncを各ウェルに添加し、その一方で、100μg/mLから開始して減量させていくdecreasingamountsofCPを同時に添加し、室温で1時間インキュベートした。競合の負の対照として、BSAをCPと置き換えた。洗浄後、一次抗体であるヤギ抗C1qポリクローナル抗体コンプリメントテクノロジー社を、3BSA/PBS/Tで1:2,000に希釈し、室温で1時間プレートに加えた。プレートを洗浄し、二次抗体であるロバ抗ヤギHRPサンタクルーズバイオテクノロジー社を3BSA/PBS/Tで1:2,500に希釈し、室温で1時間インキュベートした。プレートをPBS/Tで洗浄し、テトラメチルベンジジンtetramethylbenzindineシグマ社で1分間発色させた。その後、0.1mlの1NH2SO4で反応を停止させ、吸光度を450nmの波長でSynergyHTプレートリーダーバイオテック社BioTekInstrumentsで測定した。CPペプチドであるCP1およびCP2のC1q結合における競合的結合を評価するために、CP1およびCP2をプレート2.5μM上に被膜し、競合における負の対照としてCPと並行してBSAを用いたことを除いて前述と同一の方法で試験を実行した。CPペプチド誘導体のC1qへの結合を測定するため、2.5μMのペプチドをプレート上に被膜し、室温で一晩インキュベートした。洗浄およびブロッキング後、100μg/mLから開始して減量させていくC1qをウェルに添加し、室温で1時間インキュベートした。C1qを検出し、プレートを前述のように発色させた。実施例3:C1sの免疫ブロット1μlの部分精製されたヒトC10.2mg/ml、コンプリメントテクノロジー社を、単独で、または熱凝集ヒト免疫グロブリンG50μg/mlの出発溶液を1:250に希釈した5μlと共に、または増量させていく指示indicatedペプチド250μMストックと共に、37°Cで90分間インキュベートし、PBSで11μlの総体積まで体積を増やした。インキュベーション後、等量のローディングバッファーを全ての試料に添加し、その後煮沸し、8SDS-PAGEを通じて140ボルトで60分間、電気泳動した。その後、ゲルをニトロセルロースに転写し、PBS中の脱脂粉乳NFDMでブロッキングした。ブロットを1:2,000に希釈したC1sに対するヤギポリクローナル抗体クイデル社Quidelでプローブし、PBS/0.1トウィーン-20で洗浄し、その後に1:10,000に希釈したHRP共役ロバ抗ヤギIRDye680抗体Li-corバイオサイエンス社LicorBiosciencesが続いて、PBS/0.1トウィーンで洗浄した。その後、ブロットをバージョン3.0ソフトウェアLi-corバイオサイエンス社を用いるOdysseyimagerでイメージングし、酵素前駆体種に対して活性化C1sの特徴であるC1sの重鎖および軽鎖の量から、C1sの活性化を測定した。実施例4:C4活性化試験C4活性化試験はMalliketal2005JMedChem48274286から適応した。Immulon-2、96ウェルプレートのウェルを被膜緩衝液中の50μlの1.0mg/mlオボアルブミンフィッシャー社Fisherで被膜し、4°Cで一晩インキュベートした。プレートをPBS/Tで洗浄し、3BSA/PBSで室温で2時間ブロッキングした。プレートを再度洗浄した後、3BSA/PBSで1:2,000に希釈したウサギ抗オボアルブミン抗体ミリポア社と共に室温で1時間インキュベートした。このインキュベーションの間、ペプチドを10NHS/GVBSで0.5mMに希釈し、37°Cで15分間インキュベートした。その後プレートを洗浄し、GVBSで1:4に希釈し予めインキュベートした試料をプレートに添加し、室温で30分間インキュベートした。その後、プレートを洗浄し、3BSA/PBSで1:2,000に希釈したヤギ抗C4抗体コンプリメントテクノロジー社を1時間加え、その後再度洗浄し、3BSA/PBSで1:2,000に希釈したロバ抗ヤギIgG-HRP抗体サンタクルーズバイオテクノロジー社を1時間加えた。その後、プレートを発色させ、吸光度値を前述のように測定した。実施例5:溶血試験ペプチドを無希釈のNHSまたはB因子枯渇ヒト血清コンプリメントテクノロジー社で1.4mMまたは0.77mMに希釈し、37°Cで1時間インキュベートした。その後、これらのペプチドをGVBSで希釈して2.5NHSに等しくし、そのうちの0.25mlを0.4mlのGVBSおよび0.1mlの感作ヒツジ赤血球RBCと混合し、再び37°Cで1時間インキュベートした。手順procedureを4.0mlのGVBS--を添加することにより止めて、1,620×gで5分間遠心し、その上清の吸光度を分光光度計において412nmで測定した。各試料の溶解率をNHSのみの対照の溶解率に対し標準化した。実施例6:B因子枯渇血清中の極性取り合わせペプチドの溶血試験滴定極性取り合わせペプチドを図7に示されるように無希釈のB因子枯渇ヒト血清コンプリメントテクノロジー社で段階希釈し、37°Cで1時間インキュベートした。B因子枯渇血清単独、0.77mMのΔ8-22およびDMSOを対照として含む。その後、これらのペプチドをGVBSで希釈して2.5NHSに等しくし、そのうちの0.25mlを0.4mlのGVBSおよび0.1mlの感作ヒツジ赤血球RBCと混合し、再び37°Cで1時間インキュベートした。手順を4.0mlのGVBS--を添加することにより止めて、1,620×gで5分間遠心し、その上清の吸光度を分光光度計において412nmで測定した。各試料の溶解率をNHSのみの対照の溶解率に対し標準化した。実施例7:統計解析実験を再現するため、平均値および平均値の標準誤差SEMを、当該技術分野において周知の技術MicrosoftExcelXPを用いて計算した。実施例8:ペプチドオリゴマー形成の質量分析質量分析前に合成ペプチドを以下の通りにC18ZipTips商標ミリポア社で精製した:10μlの70アセトニトリルACN/0.1トリフルオロ酢酸TFAをZipTipを通して2回ピペッティングし樹脂を濡らし、その後10μlの0.1TFAで2回洗浄して樹脂を平衡化した。酸性化したペプチド試料をZipTipを通し吸引して5回上げ下げし、ペプチドを樹脂に結合させた。混入物を、ZipTipを通して0.1TFAを3回ピペッティングすることにより洗浄し、その後、70ACN/0.1TFAを用いて結合したペプチドを新しいチューブに溶出させた。ペプチドをスピードバックで乾燥させ、10μlの0.1TFAに再懸濁させ、その後、分析前に1:4の比で基質α-シアノ-4ヒドロキシ桂皮酸またはシナピン酸と混合した。BrukerDaltonicsUltraflexII商標MALDI-TOF-TOFを用いて質量分析を行い、データを陽反射モードおよび陽線形モードの両方で得た。実施例9:E23Aペプチドの相同性モデリングE23Aのアミノ酸配列をCPHmodels3.0サーバーhttpwwwcbsdtudkservicesCPHmodelsLundetal2002AbstractattheCASP5conferenceA102にアップロードした。プログラムによりE23Aはリョクトウ植物デフェンシン1VrD1と配列比較され、それにより、構造モデルを作成するための鋳型およびProteinDataBankPDB座標が得られた。その後、E23AのPDB座標をJMolのFirstGlance、バージョン1.45httpfirstglancejmolorgにアップロードして、構造を可視化した。結果実施例10:CPはC1q結合においてHNP-1ペプチドと競合する初期の研究によって、組換えバキュロウイルスにより発現されるタンパク質として発現され、昆虫細胞溶解産物から精製されたCPは、効率的にC1qおよびMBLと結合することができ、その結果、古典補体経路およびレクチン補体経路を阻害できることが明らかにされたBonaparteetal2008Hairetal2010。それ以前に、ヒト好中球デフェンシン-1HNP-1ペプチドは、C1qおよびMBLと結合可能であり、補体の古典経路およびレクチン経路の活性化をそれぞれ調節することが示されたvandenBergetal1998Blood9238983903Groeneveldetal2007MolecImmunol4436083614。CPもこれらの特性を有することを前提として、両タンパク質のアミノ酸配列を分析し、限定的な相同性領域がHNP-1およびWTCPの79~139番目の残基間に発見した。その後、CPがC1qへの結合においてHNP-1と直接競合することができるかどうかを、HNP-1ペプチドをELISAプレート上に被膜する競合ELISA法を用いて分析した。図1は、CPがC1qへの結合において、ヒト好中球デフェンシン1HNP-1と用量依存的に競合することを示すグラフである。一定量の精製C1qおよび増量させていくCPを、同時に加えた。HNP-1に結合した付着C1qを、C1qに対するポリクローナル抗体で検出した。結合C1qのシグナルはCP量が増加するにつれ減少したが、このことは、CPがC1q結合においてHNP-1と用量依存的に競合することを示している図1、丸として表示。対照的に、BSAをCPと置き換えた場合、C1qの結合における競合は検出さず図1、三角として表示、同様の競合の欠如がアルドラーゼおよび卵アルブミンに見られたデータ未記載。さらに、HNP-1の代わりにBSAをプレート上に被膜した場合、結合は見られなかった。いかなる理論にも束縛されるものではないが、このデータは、HNP-1およびCPが同等にC1qと結合し、古典経路の活性化を調節すること矛盾しないHairetal2010JVirol82817827。実施例11:C1qへの結合においてWTCPと競合する、HNP-1に対し相同性を有するCPペプチドの同定CPはC1qへの結合においてHNP-1と効率的に競合するため、CPおよびHNP-1がアミノ酸配列レベルで相同性を共有しているかどうかを分析した。787個のアミノ酸からなるCP分子と30個のアミノ酸からなるHNP-1ペプチドの配列比較をClustalWを用いて行ったLarkinetal2007Bioinformatics2329472948。相同性領域をHNP-1およびCP分子の79~139番目の残基の間に確認した図2A。このCP配列がWTCPの補体調節機能を保持しているかどうかを確認するために、CP分子の79~108番目CP1および109~138番目CP2の残基をコードする、30個の残基からなるペプチドを2つ合成した図2A。CP1はHNP-1の最初の10残基と並べ、一方、CP2は最後の20残基と並べた。CP1およびCP2のペプチドが、C1qと直接結合し、C1qへの結合においてWTCPと競合可能であるかどうかを確認するために、CP1およびCP2がELISAプレート上に被膜される競合ELISA法を行った。一定量の精製C1qおよび増量させていくWTCPを同時に添加し、その後結合したC1qをC1qに対するポリクローナル抗体で検出した。CPが存在しない場合、C1qはCP1ペプチドにより効率的に結合されるが;CPを増量するにつれてC1qのシグナルは減少し、このことは、C1q結合においてCPがCP1と用量依存的に競合することを示している図2B、点線で表示。同じ条件下でBSAをCPと置き換えた場合、CP1はC1qに効率的に結合し、競合は確認されなかった図2B、三角で表示。CP1と対照的に、CP2はC1q結合において競合しなかった図2B、四角で表示。従って、CPの79~108番目までの残基で、WTCPと同程度にC1qと結合するのには十分である。実施例12:CPのペプチド誘導体のC1qへの結合CP1ペプチドのWTCPと同程度にC1qと競合的に結合する能力から、これらの活性に重大な意味を持つペプチド残基が最初に解析されることとなった。上記表1に示すように、親CP1ペプチドを標的アミノ酸置換および大部分欠失させたものを合成した。C04AおよびC27Aを設計し、CP1内の2つのシステイン残基間の推定ジスルフィド結合がC1q結合および補体活性化調節に必要であるかどうかを評価した。E23AおよびE25Aを合成し、これらの負に帯電しているグルタミン酸残基がC1q結合および補体調節に必要であるかどうかを評価した。最後に、8~22番目の内部残基を除去しているペプチドΔ8-22を設計し、HNP-1と相同性を持たないこの領域がC1q結合および補体活性化調節に必要であるかどうかを決定した。このΔ8-22ペプチドは、前記2つのシステインおよび2つのグルタミン酸残基を保持している。これらのペプチドがC1qと結合することができるかどうかを確認するために、種々のペプチド誘導体をELISAプレート上に被膜する結合実験を行った。増量させつつ精製C1qを加え、その後結合したC1qをC1qに対するポリクローナル抗体で検出した。CP1は用量依存的にC1qと結合し図3A、C1q結合においてWTCPと競合するその能力と一貫していた図2B。CP2はHNP-1と同じレベルでC1qと結合し図3A、このことは、このペプチドが、C1q結合においてCPと競合しないが、恐らくHNP-1のC末端の20アミノ酸に対するその相同性の結果として、C1qと結合する能力は保持していることを示している。次に、C04AおよびC27AのC1qへの結合能を分析したところ、両方のペプチドがCP1と同様にC1qと結合した図3B。E23AおよびE25AがCP1およびCP2の間のレベルでC1qと結合することが分かり図3C、この傾向はΔ8-22ペプチドにも観察された図3D。要約すると、全てのCP1誘導体ペプチドはC1qと結合するが、その結合の程度はアミノ酸置換に依存して変化する。いかなる理論にも束縛されるものではないが、システインC04およびC27残基もグルタミン酸E23およびE25残基も、どちらもC1q結合においては決定的な役割を担っているようには思われない。さらに、Δ8-22ペプチドは、CP1の15個の内部アミノ酸残基の欠失を有しているが、C1q結合活性をなお保持している。従って、CP1誘導体によって、C1qへの結合がグルタミン酸残基にもシステイン残基にも依存していないことが個々に明らかされ、このことは、ジスルフィド結合による環化cyclicalizationは必要ないことを示している。実施例13:CP1ペプチドはC1sの活性化を調節する。精製CPは、C1qと結合し酵素前駆体C1sの切断を阻止することによって、C1の位置levelで古典経路の活性化を調節することができるHairetal2010JVirol82817827。CP1ペプチドおよびCP2ペプチドがC1活性化も調節可能であるかどうかを評価するために、部分精製されたC1複合体を、CP1およびCP2の量を増加させつつ熱凝集型IgG古典経路の活性化の強力な刺激物質と共に37°Cで90分間インキュベートした。C1s活性化を評価するために、酵素前駆体C1sの重鎖および軽鎖への切断を検出した。C1単独のインキュベーションはC1sの最小限の自発的活性化を示しただけだが、熱凝集型IgG存在下でのC1は強力なC1sの切断を示した図4A、レーン1および2。C1および熱凝集型IgGを、CP1を増量させつつインキュベーションしたところ、自発的なC1活性化で観察されたレベル図4A、レーン1まで、C1s切断を用量依存的に抑制した図4A、レーン3~6。CP1とは対照的に、CP2は、試験されたどの濃度においても、C1s切断の有意な調節を示さなかった図4B、レーン3~6。CP1およびCP2対して、それぞれのペプチドに対する2つの独立した実験におけるC1s切断調節のOdysseyimagingによる定量化によって、これらの結果は確認された図4C~4D。CP2はC1qに対し僅かな結合しか示さず図3A、C1s切断を調節する能力を示さなかったが図4Bおよび4D、CP1とCP2を組み合わせることによって、CP1単独よりもより大きなC1s切断調節がもたらされるかどうかを試験した。一緒のCP1およびCP2は、CP1単独で観察されたもの以上のC1s切断調節をもたらさなかった。ペプチド誘導体のC1qと結合する能力に一貫して、全てのCP1ペプチド誘導体は、CP1で示されたようにC1s活性化を阻害することも分かったデータ未記載。いかなる理論にも束縛されるものではないが、古典経路の第一成分であるC1で活性化を調節するCP1の能力は、このペプチドが、WTCPと同様に古典経路の活性化を調節することを示している。実施例14:機能分析におけるCPペプチドによる補体活性の調節機能分析においてペプチド化合物の補体活性化調節能を測定するために、C4活性化試験および溶血試験を用いた。C4活性化試験として、当該技術分野において周知の方法Malliketal2005JMedChem48274286を改変して、ELISAプレートをオボアルブミンで被膜し、それに抗オボアルブミン抗体を結合させ、免疫複合体標的を模倣した。その後、種々のペプチド化合物を10NHS/GVBSで0.5mMに希釈し、15分間インキュベートした後、各ウェルに添加した。古典経路の活性化C4を、抗C4ポリクローナル抗体を用いてC4断片の沈着を検出することによって解析した。図5に示すように、NHS単独、NHSBSA、およびNHSDMSOは全て、同様のC4断片の沈着を示したが、一方、WTCPで処理されたNHSはC4活性化を調節した。CP1は35の阻害効果を示したが、一方CP2はC4活性化に対し効果を与えず、このことはC1s活性化で観察された結果と一貫している図4。C04A、C27A、E25A、およびΔ8-22のペプチド化合物は全て、C4の補体活性化を20~45阻害した。E23AはC4活性化を強力に90抑制した。ペプチド化合物による血清中補体活性の調節を、標準的な溶血性補体分析で評価した。ヒツジ赤血球を抗体で感作し、NHSと共にインキュベートし、その際ペプチドのプレインキュベーションはあってもなくてもよく、そして溶血性補体活性を測定した。C4活性化試験とは対照的に、3つの補体経路典型、レクチンおよび副全てが存在し、観察された調節活性に寄与した可能性がある。しかし、初期の補体活性化は、赤血球に対する抗体、従って古典経路によって、最初に惹起される。図6Aに示されるように、NHSは、単独またはDMSO存在下で、予想通りに赤血球を溶解させた。CP2は、CP2ペプチドが調節効果を持たなかったC4活性化試験とは対照的に、CP166阻害と同じようなレベルに溶解を調節した。C04Aは赤血球溶解に対し最小の効果しか持たなかったが、一方C27Aはより阻害的であった85阻害。C4活性化試験で見られた効果と同様に、E23Aは、60の阻害を有したE25Aと比較して赤血球溶解を効率的に阻害85阻害した。Δ8-22ペプチド化合物は赤血球溶解を75阻害した。本ペプチドが副経路の活性化を調節するかどうかを試験するために、最小限の阻害しかNHSで生じないように、プレインキュベーション中に用いる血清の量を増加させて、効率的に試験ペプチドの濃度を0.77mMまで低下させた図6B。次に、古典経路単独に対する本ペプチドの調節活性を、溶血試験においてB因子枯渇血清を用い、同量のペプチドおよび血清を使用することで、評価した図6B。NHSで見られた調節欠如とは対照的に、親ペプチドCP1は、B因子枯渇血清中で補体古典経路の活性化を調節した。さらに、ペプチド化合物E23A、E25A、およびΔ8-22は、補体古典経路の活性化を有意に調節した。いかなる理論にも束縛されるものではないが、より大量の血清においては、副経路がより効率的に活性化され始め、いくつかのペプチドが、補体活性化全体ではないが古典経路の活性化を効率的に調節し続け、このことは、副経路が溶血を媒介していることを示している。図5および6の調節活性の比較は、E23Aが優良な補体調節を及ぼすことを示している。極性取り合わせペプチドは、NHSおよびB因子枯渇血清での溶血試験において古典経路活性の有意な調節を最初に示したデータ未記載。このペプチドの古典経路に対する調節活性をさらに調査するために、極性取り合わせペプチドの希釈をB因子枯渇血清で行った。NHS単独およびDMSOビヒクルで見られた調節欠如とは対照的に、極性取り合わせペプチドは、Δ8-22よりも有意に優って古典経路の活性化を用量依存的に調節した図7、0.77mMのΔ8-22と0.77mMの極性取り合わせを比較せよ。実施例15:CPペプチドは高次構造にオリゴマー形成しないCPペプチドの特性をさらに明らかにするために、これらの化合物が二量体、三量体等の高次構造にオリゴマー形成できるかどうかを評価した。CPペプチドのオリゴマー化を評価するために、線形および反射モードのMALDI-TOF-TOF質量分析で、表1の7種類のCPペプチド全てを分析した。両方のモードにおいて、全てのペプチドが、主要なピークを持たず、試験ペプチドの理論的質量よりも大きな質量電荷比m/zを保有する単量体であることが分かった。図8A~8Bは、線形モードおよび反射モードの両方をそれぞれ示している。線形モードは反射モードよりもより低い分解能であったが、両方のモードによって、E23Aが明らかな高次ピークを他に持たない単量体であることが示された。実施例16:植物デフェンシンVrD1との相同性に基づくE23Aの構造モデルE23Aを古典経路活性化の非常に強力な調節物質とする同定を前提として、E23Aペプチドの構造モデルを作製した。E23Aのアミノ酸配列をCPHmodels-3.0サーバーにアップロードした。このプログラムはタンパク質相同性モデリングの情報源resourceであり、そこで、鋳型認識は二次構造によって導かれるプロファイル‐プロファイル配列比較profileprofilealignmentおよび曝露exposure予測に基づいているLundetal2002AbstractattheCASP5conferenceA102。CPおよびHNP-1間の上述した相同性と一貫して、CPHmodels3.0はE23Aの2~29番目の残基を、植物デフェンシン、リョクトウ植物デフェンシン1VrD1の46残基のうち17~44番目の残基に対し配列比較した図9A。VrD1の核磁気共鳴溶液構造Liuetal2006Proteins63777786に基づいて、E23AのモデルをCPHmodels3.0によって作製し、JMolのFirstGlanceに表示した図9B。図9Aは、11残基のN末端αヘリックスと、それに続く2つの逆平行βストランドを示している。αヘリックスおよびβストランドは、2本の、3~5残基の不規則なループによって連結されている。2つのシステイン残基は、αヘリックスと2つ目のβストランド間でジスルフィド結合を形成していることが示され細い円柱として表示、これは全体構造を安定化させるのに機能し得る。理論的なペプチド化合物設計実施例17:CP1のペプチド類似体の合成CP1のペプチド類似体は商業的に合成されている。その後、これらの改変ペプチドを、当該技術分野において周知の結合実験において、C1qおよびMBLとの相互作用について解析するHairetal2010MolecImmunol47792798。これらの解析について以下に簡潔に説明する。実施例18:C1q結合CPペプチド類似体を種々の濃度でマイクロタイタープレート上に被膜し、それらの精製C1qコンプテック社CompTechとの結合能について解析する。C1q結合を、抗C1qモノクローナル抗体クイデル社Quidelと、続くロバ抗マウスHRPサンタクルーズバイオテック社SantaCruzBiotechで検出する。次に、プレートをテトラメチルベンジジンtetramethylbenzindineで発色させ、反応をH2SO4で終了させ、吸光度を450nmで測定する。C1q結合の正の対照はCP1から成り、一方負の対照はBSAである。各ペプチドの結合の初期条件を決定し、その後ペプチドの連続希釈を3連で行って、以前報告されたようにHairetal2010MolecImmunol47792798、統計的有意性を決定し、最大半量結合値halfmaximalbindingvalueを計算する。最大半量結合値を用いて、各ペプチド類似体の相対結合親和性を評価する。実施例19:MBL結合MBL結合を上述のC1q結合実験と同様に行う。精製ヒトMBLおよびヤギ抗MBL血清、続いてロバ抗ヤギHRPを、MBLの検出のために使用する。再度、最大半量結合値を計算し、ペプチド化合物間で比較する。機能分析において、CPペプチド誘導体のC1およびMBLの活性化を阻害する能力を試験した。機能分析において、C1qおよびMBLに特異的に結合するCPペプチド類似体を、それらの古典経路およびレクチン経路の活性化を阻害する能力について評価する。C1およびMBLの阻害についての特異性試験に加えて、抗体惹起補体活性化試験antibodyinitiatedcomplementactivationassayを使用して、ヒトおよびラット両方の血清中のペプチド類似体のIC50値を決定する。これにより、ペプチドの相対機能活性の直接的な比較が可能となる。実施例20:C1活性化試験ペプチド化合物を、C1s免疫ブロット切断試験において、C1活性化を阻害するそれらの能力について解析する。C1コンプテック社および熱凝集型IgGを、増量させていくペプチドと共にインキュベートする。C1sを、Odyssey赤外線撮像系Li-Corバイオサイエンス社での分析のために、C1sに対するヤギポリクローナル抗体クイデル社と、続く赤外色素標識ロバ抗ヤギ抗体Li-Corバイオサイエンス社で検出する。熱凝集型IgG非存在下または存在下のC1は、それぞれC1s切断の負の対照および正の対照として各ブロット上に含まれる。種々のCPペプチドによるC1s切断の阻害の程度を比較するために、Odyssey3.0ソフトウェアを用いてC1sの重鎖および軽鎖をC1s前駆物質に対して定量化し、C1活性化の百分率を決定する。CP1熱凝集型IgGはC1s切断阻害の正の対照として機能し、必要ならば、実験間の値を標準化するためにも使用することができる。実施例21:MBL活性化試験市販のMBL活性化試験ハイカルト社HyCultを使用しHairetal2010MolecImmunol47792798、CPペプチド類似体を評価した。正常ヒト血清NHSを増量させていく前記ペプチドと共にインキュベートし、市販キットを用いてレクチン経路阻害について評価した。NHS単独はレクチン活性化の正の対照として機能し、一方、熱不活性化NHSは活性化の負の対照として機能する。レクチン経路活性化の阻害を明らかにするためにNHSCPを対照として用いる。あるいは、当該技術分野において周知のレクチン活性化試験Groeneveldetal2007MolecImmunol4436083614を用いて、ペプチド化合物を評価した。実施例22:抗体惹起血清中補体活性化試験CP1の阻害活性とそのペプチド類似体を直接的に比較するために、抗体惹起血清中補体活性化試験を用いた。この試験はJohnLambris博士および共同研究者ペンシルバニア大学がコンプスタチンおよびその類似体のIC50値を算出するために使用したプロトコールを改変したものであるMalliketal2005JMedChem48274286。補体活性化阻害を、NHS中のオボアルブミン‐抗オボアルブミン複合体への血清C4固定の阻害を測定することで評価する。マイクロタイターmicrotiterのウェルwellをオボアルブミン10mg/mlで被膜する。次に、ウェルをBSA10mg/mlで室温で1時間飽和させ、1:2,000希釈のウサギ抗オボアルブミン抗体を加えて免疫複合体を形成させることで、補体を活性化することができる。次に、種々の濃度のペプチドを各ウェルに直接添加し、続いてGVBで1:80に希釈したNHSを添加する。30分インキュベートした後、1:2,000希釈のヤギ抗C4抗体と、続く1:2,500希釈のロバ抗ヤギHRP二次抗体を用いて、結合したC4を検出する。次に、プレートをテトラメチルベンジジンtetramethylbenzindineで発色させ、反応をH2SO4で終了させ、吸光度を450nmで測定する。阻害率を、100の活性化がペプチド非存在下で起こる活性化と等しいと見なして標準化する。活性化の負の対照として熱不活性化NHSを使用する。活性化阻害の対照としてNHSCP1を用いる。ペプチド濃度に対して阻害率をプロットして、選択されたペプチド化合物のIC50値を決定する。CPは古典経路およびレクチン経路を介してC4活性化を阻害し、CPの副経路の活性化に対する効果はごく僅かであったBonaparteetal2008JVirol82817827Hairetal2010MolecImmunol47792798。基準としてCP1を用いることで、全てのペプチド化合物の相対的な阻害活性はこのように直接的に測定される。正常ラット血清NRS中のCPペプチドのIC50値を測定する。野生型CPおよびCP1は、NRS中の抗体惹起補体活性化を抑制することが示されているHairetal2010MolecImmunol47792798。NRS中のペプチド化合物のIC50値の決定は、ラットにおける投与量決定実験に非常に重要である。他の態様、変態、および実施形態は、以下の請求項の範囲内である。参考文献:1BonaparteRSHairPSBanthiaDMarshallDMCunnionKMKrishnaNK2008HumanastroviruscoatproteininhibitsserumcomplementactivationviaC1thefirstcomponentoftheclassicalpathwayJVirol828178272CarvalhoAOGomesVM2009PlantdefensinsprospectsforthebiologicalfunctionsandbiotechnologicalpropertiesPeptides30100710203CastellanoGMelchiorreRLoverreADitonnoPMontinaroVRossiniMDivellaCBattagliaMLucarelliGAnnunziataGPalazzoSSelvaggiFPStaffieriFCrovaceADahaMRMannesseMvanWeteringSSchenaFPGrandalianoG2010TherapeutictargetingofclassicalandlectinpathwaysofcomplementprotectsfromischemiareperfusioninducedrenaldamageAmerJPathol1761124CunnionKMLeeJCFrankMM2001CapsuleproductionandgrowthphaseinfluencebindingofcomplementtoStaphylococcusaureusInfectImmun69679668035FryerJPLeventhalJRPaoWStadlerCJonesMWalshTZhongRZhangZWangHGoodmanDJKurekMdApiceAJBlondinBIvancicDBuckinghamFKaufmanDAbecassisMStuartFAndersonBE2000SyntheticpeptideswhichinhibittheinteractionbetweenC1qandimmunoglobulinandprolongxenograftsurvivalTransplanatation708288366GroeneveldTWLRamwadhdoebeTHTrouwLAvandenHamDLvanderBordenVDrijfhoutJWHiemstraPSDahaMRRoosA2007Humanneutrophilpeptide1inhibitsboththeclassicalandthelectinpathwayofcomplementactivationMolecImmunol44360836147HairPSGronemusJQCrawfordKBSalviVPCunnionKMThielensNMArlaudGJRawalNKrishnaNK2010HumanastroviruscoatproteinbindsC1qandMBLandinhibitstheclassicalandlectinpathwaysofcomplementactivationMolecImmunol477927988HuwilerKGMosherDFVestlingMM2003OptimizingtheMALDITOFMSobservationofpeptidescontainingdisulphidebondsJBiomolecTech142892979KojimaTDelCarpioCATajiriHYoshikawaKSagaSYokoyamaI1999InhibitionofcomplementmediatedimmunehemolysisbypeptidesderivedfromtheconstantdomainofimmunoglobulinTransplantation6763763810LarkinMABlackshieldsGBrownNPChennaRMcGettiganPAMcWilliamHValentinFWallaceIMWilmALopezRThompsonJDGibsonTJHigginsDGClustalWandClustalXversion20Bioinformatics232947294811LauvrakVBrekkeOHIhleoeLindqvistBH1997IdentificationandcharacterizationofC1qbindingphagedisplayedpeptidesBiolChem3781509151912LeeHGreenDJLaiLHouYJJenseniusJCLiuDCheongCParkCGZhangM2010EarlycomplementfactorsinthelocaltissueimmunocomplexgeneratedduringintestinalischemiareperfusioninjuryMolImmunol4797298113LiuYJChengCSLaiSMHsuMPChenCSLyuPC2006SolutionstructureoftheplantdefensinVrD1frommungbeananditspossibleroleininsecticidalactivityagainstbruchidsProteins6377778614LundONielsenMLundegaardCWorningP2002CPHmodels20X3MaComputerProgramtoExtract3DModelsAbstractattheCASP5conferenceA10215MallikBKatragaddaMSpruceLACarafidesCTsokosCGMorikisDLambrisJD2005DesignandNMRcharacterizationofactiveanalogsofCompstatincontainingnonnaturalaminoacidsJMedChem4827428616MessmerBTBenhamCJThalerDS2000SequentialdeterminationofligandsbindingtodiscretecomponentsinheterogeneousmixturesbyiterativepanningandblockingJMolBiol29682183217RicklinDLambrisJD2007ComplementtargetedtherapeuticsNatBiotech251265127518RoosANautaAJBroersDFaberKrolMCTrouwLADrijfhoutJWDahaMR2001SpecificinhibitionoftheclassicalcomplementpathwaybyC1qbindingpeptidesJImmunol1677052705919SahuAKayBKLambrisJD1996InhibitionofcomplementbyaC3bindingpeptideisolatedfromaphagedisplayedrandompeptidelibraryJImmunol15788489120TaylorKBarranPEDorinJR2007Structure‐activityrelationshipsinbetadefensinpeptidesBiopolymers901721TjernbergJEkdahlKNLambrisJDKorsgrenONilssonB2008AcuteantibodymediatedcomplementactivationmediateslysisofpancreaticisletscellsandmaycausetissuelossinclinicalislettransplantationTransplantation851193119922vandenBergRHFaberKrolMCvanWeteringSPHiemstraSDahaMR1998InhibitionofactivationoftheclassicalpathwayofcomplementbyhumanneutrophildefensinsBlood923898390323ZhangMTakahashiKAlicotEMVorupJensenTKesslerBThielSJenseniusJCEzekowitzRAMooreFDCarrollMC2006ActivationofthelectinpathwaybynaturalIgMinamodelofischemiareperfusioninjuryJImmunol1774727473424ZhangXLSelstedMEPardiA1992NMRstudiesofdefensinantimicrobialpeptides1ResonanceassignmentandsecondarystructuredeterminationofrabbitNP2andhumanHNP1Biochemistry311134811356"