"下記のiおよびiiにより3-ヒドロキシアルカノエートをアルケンに変換することを含むことを特徴とする、アルケンの製造方法:i3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素;およびii第1酵素と異なる第2酵素であって、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する酵素。i3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素が、ASEQIDNO:1に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:1に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:1に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;BSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;CSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;およびDSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質、からなる群より選択される、請求項1に記載の方法。ii3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する第2酵素が、aSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;bSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;cSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;dSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;eSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;fSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;gSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;hSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;iSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;jSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;kSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質、からなる群より選択される、請求項1または2に記載の方法。3-ヒドロキシプロピオネートをエチレンに変換する工程を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。3-ヒドロキシブチレートをプロピレンに変換する工程を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。3-ヒドロキシバレレートを1-ブチレンに変換する工程を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。3-ヒドロキシ-3-メチルブチレートをイソブチレンに変換する工程を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。3-ヒドロキシ-3-メチルバレレートをイソアミレンに変換する工程を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。変換工程をインビトロで無細胞系において実施することを特徴とする、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。方法を、請求項1に記載のiおよびiiに定める酵素を産生する微生物の存在下で実施することを特徴とする、請求項1~9のいずれか1項に記載の方法。請求項1に記載のiおよびiiに定める酵素を産生する多細胞生物の使用を特徴とする、請求項1~10のいずれか1項に記載の方法。反応物から排出するガス状アルケンを採集する工程を含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の方法。少なくとも2つの酵素を産生し、1つの酵素がiから選択され、他の酵素がiiから選択され、iおよびiiが下記の通りである、多細胞生物または微生物:i3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素;およびii第1酵素と異なる第2酵素であって、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する酵素。請求項13に記載の微生物、適切な培養培地、および3-ヒドロキシアルカノエート化合物または該微生物により3-ヒドロキシアルカノエート化合物に変換されることができる炭素源を含む、組成物。3-ヒドロキシアルカノエートからアルケン化合物を製造するための、1つの酵素が下記のiから選択されかつ他の酵素が下記のiiから選択される少なくとも2つの酵素の組合わせの使用、または請求項13に記載の微生物の使用、または請求項14に記載の組成物の使用であって、iおよびiiが下記の通りである使用:i3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素;およびii第1酵素と異なる第2酵素であって、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する酵素。i3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素が、ASEQIDNO:1に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:1に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:1に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;BSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;CSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;およびDSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質、からなる群より選択される、請求項14に記載の使用。ii3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する第2酵素が、aSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;bSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;cSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;dSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;eSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;fSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;gSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;hSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;iSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;jSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;およびkSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、該活性がSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質、からなる群より選択される、請求項15または16に記載の使用。脱カルボキシル化および脱リン酸化を介して変換を触媒することができる酵素の使用により、3-ホスホノキシアルカノエートを対応するアルケンに酵素的に変換する工程を含む、アルケンの製造方法。方法を、ATP、dATP、ADP、AMP、ATP以外のNTP、dNTPまたはピロホスフェートを補助基質として用いて実施することを特徴とする、請求項1~12のいずれか1項または請求項18に記載の方法。本明細書中で用いる3-ヒドロキシアルカノエートは、下記の一般式Cn1H2n2O31<n<7に相当し、共通モチーフとしての3-ヒドロキシプロピオネート図1および場合により1または2個のアルキル置換基を炭素3上に含む分子を表わす。そのアルキル残基またはアルキル基は直鎖状または分枝状であってよい。本明細書中で用いる用語アルコイルとアルキルは同じ意味をもち、互換性がある。同様に、用語残基と基は同じ意味をもち、互換性がある。メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル基はそれらのアルキル基の例である。炭素3は、2個のアルキル置換基が異なる場合はキラル中心になる。2形態のうち一方、たとえばR形が自然界で産生する主形態であったとしても、この定義には2つのキラル形態が含まれる。3-ヒドロキシアルカノエートの例を図3に提示する。場合により、アルキル置換基が炭素2上に付加されてもよく、その場合はそれもキラルとなる2個のアルキル置換基が異なる場合。同様に、本発明における3-ヒドロキシアルカノエート基質の立体構造にはすべての立体異性体が含まれる。好ましい態様において、3-ヒドロキシアルカノエートは3-ヒドロキシプロピオネートに相当するか、あるいは3-ヒドロキシプロピオネートのバリアントもしくは誘導体に相当し、その際、炭素3上の2個の水素原子のうち1個もしくは2個が炭素原子と水素原子だけから構成されるモチーフにより置換され、それらの置換基の炭素原子数は1から5まで、好ましくは1から3までであり、たとえばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルまたはイソブチルである。本明細書中で用いる添字オエートoateは、互換性をもってカルボキシレートイオンCOO-またはカルボン酸COOHのいずれかを表わすことができる。それはエステルを表わすためには用いられない。具体的態様において、3-ヒドロキシアルカノエートは次式により示される:HO-CO-CH2-CR1R2-OHまたはO--CO-CH2-CR1R2-OH。用語3-ホスホノキシアルカノエートは、下記の一般式Cn1H2n3O6P1<n<7に相当し、共通モチーフとしての3-ホスホノキシプロピオネートおよび場合により1または2個のアルキル置換基を炭素3上に含む分子を表わす。本明細書中で用いる用語アルケンは、炭素と水素だけから構成され、1つの炭素-炭素二重結合を含み、モノ非置換基炭化水素CnH2nnは少なくとも2に等しいの化学式をもつ分子を表わす。好ましくは、nは少なくとも3、4、5または6に等しい。最も好ましくは、nは最大6である。したがって、一般に用語アルケンは、式CnH2n1<n<7に対応する分子を表わす。好ましい態様において、アルケンは構造式H2C=CR1R2により表わされ、式中のR1およびR2は独立して、アルケン分子中の炭素原子の総数が最大6となるように水素原子および直鎖または分枝アルキル基からなる群から選択される。本発明による好ましいアルケン化合物の例は、特にエチレン、プロピレン、イソブチレンおよびイソアミレン図4、または1-ブチレンおよび1-アミレンである。本明細書中で用いる炭素源は、本発明による生物が基質として利用できるいずれかの炭素化合物を表わす。その用語には、グルコースもしくは他のいずれかのヘキソース、キシロースもしくは他のいずれかのペントース、ポリオール、たとえばグリセロール、ソルビトールもしくはマンニトール、またはポリマー、たとえばデンプン、セルロースもしくはヘミセルロース、またはポリ-3-ヒドロキシアルカノエート、たとえばポリ-3-ヒドロキシブチレートが含まれる。それは、微生物の増殖を可能にするいずれかの基質、たとえばホルメートであってもよい。生物が光合成を行なうことができる場合には、それはCO2であってもよい。本明細書中で用いる組換え体は、染色体遺伝子もしくは染色体外遺伝子または調節モチーフ、たとえばプロモーターの付加、除去または修飾による、あるいは生物の融合による、あるいはいずれかのタイプのベクター、たとえばプラスミドの付加による、生物の人為的な遺伝子修飾を表わす。用語組換え発現は、好ましくは、それの宿主に対して外因性またはヘテロロガスな由来のタンパク質、すなわち産生宿主において自然界では生じないものを産生させるための、あるいは修飾または変異した内因性タンパク質を産生させるための、遺伝子修飾を伴うタンパク質産生を表わす。本明細書中で用いる過剰発現または過剰発現性のは、宿主生物において、好ましくはそれを発現させる生物とは異なる生物に由来するタンパク質を、宿主生物において起きるそのタンパク質の自然発現と比較して少なくとも10、好ましくは20、50、100、500、及びそれ以上増加して組換え発現させることを表わす。この定義は、そのタンパク質の自然発現がない場合も含む。補助基質cosubstrateは、酵素反応にその特定のパラメーター、特にその活性を改善するために添加する化合物または分子であり、その物質と主基質は等しい量で消費される。したがって、補助基質は主基質のものに匹敵する濃度で反応に添加されなければならない。酵素に応じて、補助基質の存在がその酵素反応に要求される場合がある。補因子cofactorは、酵素反応にその特定のパラメーター、特にその活性を改善するために添加する物質であり、その物質は反応中に消費されず、したがって酵素の量に比例して低濃度で添加する必要があるにすぎず、したがってその濃度は触媒量と呼ばれる。アミノ酸配列の一部は、その配列の少なくとも10、好ましくは少なくとも20、30、40または50の連続するアミノ酸残基を含むフラグメントを表わす。本明細書中で用いる相同性は、2配列間の同一性パーセントにより測定した2配列間に類似性があることを表わす。好ましい態様において、用語相同性は、配列同一性を意味する。化合物は、しばしば幾つかの公的または一般的な名称で知られる。本明細書中では、分子の一般名が好ましい。したがって:-エチレンは、エテンを表わすために用いられる;-プロピレンは、プロペンを表わすために用いられる;-ブチレンは、ブテンを表わすために用いられる;-イソブチレンは、2-メチルプロペンまたはイソブテンを表わすために用いられる;-アミレンは、ペンテンを表わすために用いられる;-イソアミレンは、2-メチル-ブタ-1-エンまたはイソペンテンを表わすために用いられる;-プロピオネートは、プロパン酸またはプロパノエートイオンを表わすために用いられる;-ブチレートは、ブタン酸またはブタノエートイオンを表わすために用いられる;-バレレートは、ペンタン酸またはペンタノエートイオンを表わすために用いられる。本発明は、3-ヒドロキシアルカノエートから出発して生物学的プロセス、特に酵素プロセスによりアルケン化合物を製造するための方法を記載し、その際、生産速度の効率を高めるために2種類の酵素を組み合わせる。より具体的には、本発明は下記のものにより3-ヒドロキシアルカノエートをアルケンに変換することを含むことを特徴とする、アルケンの製造方法に関する:i3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素;およびii第1酵素と異なる第2酵素であって、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する酵素。前記のように、WO2010001078には、デカルボキシラーゼ活性をもつ酵素で3-ヒドロキシアルカン酸を酵素変換することによりアルケンを製造するための方法が記載されている。WO2010001078には、全般的に、デカルボキシラーゼ活性をもつ酵素、たとえばメバロン酸二リン酸MDPデカルボキシラーゼE.C.4.1.1.33による3-ヒドロキシアルカノエートからアルケンへの変換は、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換し、次いでこれを脱カルボキシル化して対応するアルケンに導くことにより行なわれると記載されている。種々の3-ヒドロキシアルカノエートを用いてMDPデカルボキシラーゼにより行なわれる全般的反応を図2Bに示す。種々のデカルボキシラーゼ、特にメバロン酸二リン酸デカルボキシラーゼが前記の2段階を種々の効率で触媒すること、すなわち、あるデカルボキシラーゼは第1段階を他のデカルボキシラーゼより高い効率で触媒し、あるデカルボキシラーゼは第2段階、すなわち脱カルボキシル化段階に対して優先性を示し、したがって対応する酵素類を組み合わせることによって、WO2010001078に記載される3-ヒドロキシアルカノエートからアルケンへの変換効率が著しく増大することが今回見出された。したがって本発明は特に、酵素による3-ヒドロキシアルカノエートからのアルケンの産生においてより高い効率を達成する方法、すなわちそのような酵素による産生の効率を改善するための方法に関する。用語3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する酵素は、3-ヒドロキシアルカノエートをリン酸化して対応する3-ホスホノキシアルカノエートにすることができる酵素を意味する。このリン酸基は、好ましくはATP分子に由来する。この活性は、たとえば付随する実施例、特に実施例5の記載に従って測定できる。したがって1つの可能性は、各酵素を3-ヒドロキシアルカノエートおよびATPと共にインキュベートし、ADPの産生それは対応する3-ホスホノキシアルカノエートの産生を反映するを測定することである。ADPの産生を測定するためのアッセイは当業者に既知である。これらの方法のひとつは、実施例5に記載するピルビン酸キナーゼ/乳酸デヒドロゲナーゼアッセイである。この場合、アッセイは、ADP量に比例するNADH吸収低下の速度を340nmで測定する。好ましい態様において、用語3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する酵素は、3-ヒドロキシイソバレレートおよびATPを3-ホスホノキシイソバレレートおよびADPに変換することができる酵素を意味する。よりさらに好ましくは、そのような酵素は、10mM以下のKMで、たとえば5mM以下、好ましくは1mM以下、よりさらに好ましくは0.1mM以下のKMで、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する反応、好ましくは3-ヒドロキシイソバレレートおよびATPを3-ホスホノキシイソバレレートおよびADPに変換する反応を触媒することができる。特に好ましい態様において、そのような酵素は、少なくとも0.2s-1のkcatで、好ましくは少なくとも0.5s-1のkcatで、特に好ましくは少なくとも1.0s-1のkcatで、より好ましくは少なくとも2.0s-1のkcatで、よりさらに好ましくは少なくとも5.0s-1のkcatで、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する反応、好ましくは3-ヒドロキシイソバレレートおよびATPを3-ホスホノキシイソバレレートおよびADPに変換する反応を触媒することができる。特に好ましい態様において、3-ヒドロキシイソバレレートおよびATPを3-ホスホノキシイソバレレートおよびADPに変換する能力は、実施例5に記載するアッセイで測定される。用語3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する酵素は、3-ホスホノキシアルカノエートを脱カルボキシル化および脱リン酸化することにより対応するアルケンに導く反応を触媒することができる酵素を意味する。この活性は、たとえば付随する実施例、特に実施例8の記載に従って測定できる。したがって1つの可能性は、各酵素を対応するホスホノキシアルカノエートと共に、原則として脱カルボキシル化および脱リン酸化が可能な条件下でインキュベートし、対応するアルケンの産生を、好ましくはガスクロマトグラフィーにより検出することである。好ましい態様において、用語3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する酵素は、好ましくは実施例8に記載する条件下で、3-ホスホノキシイソバレレートをイソブテンに変換できる酵素を意味する。よりさらに好ましくは、そのような酵素は、100mM以下のKMで、たとえば75mM以下のKMで、または50mM以下、好ましくは10mM以下、もしくは5mM以下、もしくは1mM以下、よりさらに好ましくは0.1mM以下のKMで、3-ホスホノキシアルカノエートを対応するアルケンに変換する脱カルボキシル化および脱リン酸化により反応を触媒することができる。特に好ましい態様において、そのような酵素は、少なくとも10-6s-1のkcatで、好ましくは少なくとも10-4s-1のkcatで、たとえば少なくとも10-3s-1のkcatで、または少なくとも10-2s-1のkcatで、たとえば少なくとも10-1s-1のkcatで、たとえば少なくとも0.2s-1のkcatで、好ましくは少なくとも0.5s-1のkcatで、特に好ましくは少なくとも1.0s-1のkcatで、より好ましくは少なくとも2.0s-1のkcatで、よりさらに好ましくは少なくとも5.0s-1のkcatで、3-ホスホノキシアルカノエートを対応するアルケンに変換する反応、好ましくは3-ホスホノキシイソバレレートをイソブテンに変換する反応を触媒することができる。特に好ましい態様において、3-ホスホノキシイソバレレートをイソブテンに変換する能力は、実施例8に記載するアッセイで測定される。好ましい1態様において、前記のiおよびiiに述べた酵素は、NCBIまたは同等のエンジンによりCOG3407ドメインをもつとみなされる酵素である。本発明による方法の好ましい態様において、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素iは、下記のものからなる群から選択される:ASEQIDNO:1に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:1に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:1に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;BSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:2に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;CSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:3に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;およびDSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:4に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質。SEQIDNO:1は、ピクロフィルストリダスPicrophilustorridusDSM9790由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号AAT43941SwissprotTrEMBL寄託番号Q6KZB1。SEQIDNO:2は、サーモプラズマアシドフィラムThermoplasmaacidophilum由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号CAC12426SwissprotTrEMBL寄託番号Q9HIN1。SEQIDNO:3は、サーモプラズマボルカニウムThermoplasmavolcanium由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号BAB59465SwissprotTrEMBL寄託番号Q97BY2。SEQIDNO:4は、フェロプラズマアシダルマヌスFerroplasmaacidarmanusfer1由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号ZP05571615。本発明による方法のさらに他の好ましい態様において、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する第2酵素iiは、下記のものからなる群から選択される:aSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:5に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;bSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:6に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;cSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:7に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;dSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:8に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;eSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:9に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;fSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:10に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;gSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:11に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;hSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:12に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;iSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:13に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;jSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:14に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質;およびkSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列を含むタンパク質、またはSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがSEQIDNO:15に示すアミノ酸配列を有するタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質。SEQIDNO:5は、ストレプトコッカスゴルドニイStreptococcusgordoniiからクローニングした酵素のアミノ酸配列を示す。SEQIDNO:6は、ストレプトコッカスゴルドニイ株Challis、亜株CH1由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号AAT43941SwissprotTrEMBL寄託番号A8UU9。SEQIDNO:7は、ストレプトコッカスインファンタリウスStreptococcusinfantarius亜種インファンタリウスATCCBAA-102由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号EDT484201SwissprotTrEMBL寄託番号B1SCG0。SEQIDNO:8は、ヒトHomosapiens由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号AAC504401SwissprotTrEMBL寄託番号P536021。SEQIDNO:9は、ラクトバチルスデルブリュッキイLactobacillusdelbrueckii由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号CAI978001SwissprotTrEMBL寄託番号Q1GAB2。SEQIDNO:10は、ストレプトコッカスミチスStreptococcusmitis株B6由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号CBJ229861。SEQIDNO:11は、ストレプトコッカスガロリティカスStreptococcusgallolyticusUCN34由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号CBI137571。SEQIDNO:12は、ストレプトコッカスサンギニスStreptococcussanguinisSK36由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号ABN437911。SEQIDNO:13は、ストレプトコッカス属の種M143由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号EFA240401。SEQIDNO:14は、ストレプトコッカススイスStreptococcussuis89/1591由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号EEF636721。SEQIDNO:15は、ストレプトコッカスサリバリウスStreptococcussalivariusSK126由来の酵素のアミノ酸配列を示すGenBank寄託番号EEK09252。本発明による方法の好ましい態様において、第1酵素iは前記のAに定めたものであり、第2酵素iiは前記に述べたaまたはbに定めたものであり、よりさらに好ましくは第2酵素は前記のf、g、h、i、jまたはkに定めたものである。実施例に示すように、これらの酵素の組合わせは本発明によるアルケン化合物の製造に特に有効である。本発明による方法の他の好ましい態様において、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する第2酵素iiは、下記の表に挙げるタンパク質のいずれかから、またはそのようなタンパク質のアミノ酸配列と少なくとも15同一であるアミノ酸配列を含み、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を示し、それがそのタンパク質の対応する活性と少なくとも同じ高さであるタンパク質から選択される。前記のように、各SEQIDNOまたは表1に挙げた具体的に述べるアミノ酸配列をもつタンパク質を使用できるだけでなく、NCBIまたは同等のエンジンによりCOG3407ドメインをもつとみなされるタンパク質、より好ましくは、そのアミノ酸配列が具体的に述べたアミノ酸配列と少なくとも15の相同性を示し、かつ具体的に述べたアミノ酸配列をもつタンパク質の活性と少なくとも同じ高さであるそれぞれの酵素活性をもつタンパク質も使用できる。好ましい酵素は、有利には少なくともxの相同性をもち、ここでxは20、25、20、35、40、45、50、55および60からなる群から選択される。さらに好ましい態様において、酵素は、SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14もしくは15に示す配列のうちのいずれかまたは表1に示す配列のうちのいずれかに対して、少なくとも65の配列相同性、好ましくは少なくとも70、より好ましくは75、よりさらに好ましくは少なくとも80、85、90、95、96、97、98または99の配列相同性をもつ。配列相同性パーセントは、種々の方法で、当業者に既知のソフトウェアプログラム、たとえばCLUSTAL法もしくはBLASTおよび派生ソフトウェアにより、または配列比較アルゴリズム、たとえばNeedlemanandWunschJMolBiol197048443もしくはSmithandWatermanJMolBiol1981147195により記載されたものを用いて決定できる。指示した程度の相同性を示すそのようなタンパク質は、自然界に存在するかまたは合成により製造された他の酵素であってもよい。それらには特に、本発明に従ってアルケンを産生する能力により選択できる酵素が含まれる。したがって、選択試験は、精製された酵素またはその酵素を産生する微生物を反応の基質と接触させ、そして各化合物、すなわち3-ホスホノキシアルカノエートまたはアルケンの産生を測定することを含む。そのような試験を実験のセクションに記載する。そのような選択試験は、3-ホスホノキシアルカノエートまたはアルケンに変換すべき基質に対して最適な酵素活性を備えた酵素、すなわち1種類以上の3-ヒドロキシアルカノエートまたは3-ホスホノキシアルカノエートに対して最適な活性をもつ酵素をスクリーニングするためにも使用できる。そのようなスクリーニング方法は当業者に周知であり、たとえばタンパク質工学技術、たとえば遺伝子のランダム変異誘発、多重変異誘発、部位特異的変異誘発、DNAシャッフリング、合成シャッフリング、インビボ進化、または完全合成、続いて目的とする酵素活性のスクリーニングを含む。したがって、本発明に用いる酵素は天然または合成のものであってよく、化学、生物学または遺伝学の手段により作製できる。たとえばそれの活性、抵抗性、特異性の改善、精製、または支持体上へのそれの固定化のために、それを化学修飾することもできる。3-ヒドロキシアルカノエートから3-ホスホノヒドロキシアルカノエートを経てアルケンに変換するための前記反応を触媒することができる酵素は、しばしば、メバロン酸二リン酸MDPデカルボキシラーゼ酵素命名法E.C.4.1.1.33の系統発生スーパーファミリーに分類できる酵素であることが見出された。MDPデカルボキシラーゼは、コレステロールの生合成に関与する酵素である。そのような酵素は、動物、真菌、酵母および若干の細菌を含めた多様な生物から分離されている。それは、ある植物により発現する可能性もあるLalithaetalPhytochemistry2425692571。この酵素をコードする多数の遺伝子がクローニングおよび配列決定されている。これらの酵素は、一般に300~400のアミノ酸から構成され、ATPを補助基質として使い、これが反応中にADPと無機ホスフェートに変換される。このホスフェート基はATP分子からメバロン酸二リン酸の第三級アルコールへ伝達され、ADPが放出される。3-ヒドロキシル基においてリン酸化されたこの反応中間体は、次いでホスフェート基の離脱を受けて、生理的な場合にはイソペンテニル二リン酸を放出する図2。したがって、好ましい態様において、前記のiまたはiiに定めた酵素はMDPデカルボキシラーゼである。本発明に関して、MDPデカルボキシラーゼは、少なくとも5-ジホスホ-3-ホスホメバロネートからイソペンテニル-5-ジホスフェートおよびCO2への変換を触媒することができる酵素、あるいは少なくともメバロネートジホスフェートおよびATPを5-ジホスホ-3-ホスホメバロネートおよびADPに変換する反応を触媒することができる酵素であると定義される。好ましくは、そのような酵素は両反応を触媒することができる。他の好ましい態様において、前記のiに定めた酵素はiBに定めた酵素である。SEQIDNO:2に示すこの配列は、サーモプラズマアシドフィラムにおいて同定された酵素である。Genbankにおいて、この酵素はメバロン酸二リン酸デカルボキシラーゼとして分類される。しかし、ChenandPoulterBiochemistry49207217から、サーモプラズマアシドフィラムには、メバロン酸-5-一リン酸デカルボキシラーゼの作用を伴う別のメバロン酸経路が存在することが知られている。したがって、SEQIDNO:2により表わされる酵素は実際にはメバロン酸-5-一リン酸デカルボキシラーゼである可能性がある。他の古細菌についても同じことが言える可能性がある。したがって、他の好ましい態様において、前記のiまたはiiに定めた酵素はメバロン酸-5-一リン酸デカルボキシラーゼである。そのような酵素は、メバロネート-5-モノホスフェートをイソペンテニルピロホスフェートに変換することができる。好ましい態様において、本発明は:-3-ヒドロキシプロピオネートを、3-ホスホノキシプロピオネートを経てエチレンに変換する;または-3-ヒドロキシブチレートを、3-ホスホノキシブチレートを経てプロピレンに変換する;または-3-ヒドロキシバレレートを、3-ホスホノキシバレレートを経て1-ブチレンに変換する;または3-ヒドロキシ-3-メチルブチレートまたは3-ヒドロキシイソバレレートを、3-ホスホノキシ-3-メチルブチレート3-ホスホノキシイソバレレートを経てイソブチレンに変換する;または3-ヒドロキシ-3-メチルバレレートを、3-ホスホノキシ-3-メチルバレレートを経てイソアミレンに変換する。本発明による方法は、インビトロで、分離された酵素または、さらに1種類以上の補因子を含む酵素系の存在下に実施できる。インビトロは、好ましくは無細胞系を意味する。1態様において、本方法に用いる酵素は、3-ヒドロキシアルカノエートをアルケンに変換するために精製された形態で用いられる。しかし、酵素および基質の調製および精製のコストは高いので、そのような方法はコストがかかる可能性がある。したがって、他の好ましい態様において、タンパク質精製コストを節約するために、本方法に用いる酵素は精製されていない抽出物として、あるいは溶解していない細菌の形態で反応中に存在する。しかし、そのような方法に伴うコストは、基質を調製および精製するコストのためなおかなり高い場合がある。したがって、好ましい1態様において、天然または組換え酵素精製または未精製を用いて、3-ヒドロキシアルカノエートをアルケンに変換する。これを行なうために、基質の存在下に、酵素を活性にする生理化学的条件下で酵素をインキュベートし、十分な期間、インキュベーションを続ける。インキュベーション終了時に、場合により、アルケン生成物もしくは遊離ホスフェートの形成を測定するための、または3-ヒドロキシアルカノエート基質もしくはATPの消失を測定するための、当業者に既知の検出システム、たとえばガスクロマトグラフィーまたは比色試験を用いて、アルケンの存在を測定する。好ましい態様において、補因子は、自然界での反応を最も良く模倣するように、または触媒裂溝catalyticcleftにおける立体的もしくは電子的な補足complementationを提供するように添加される。たとえば、本発明による方法に用いる酵素のひとつが自然界でメバロネートジホスフェートMDPを基質として使う酵素である場合、一般に3-ヒドロキシアルカノエートはMDPのフラグメントに対応するので、3-ヒドロキシアルカノエートの構造には酵素-基質結合に際して触媒裂溝に大きな空間が空の状態で残る。基質が欠けた部分に代わってこの空間を補因子で充填するのは、MDP分子を最も近似した状態で模倣するという目的をもつ。補因子は反応中に修飾されないので、したがってそれは触媒量で添加されるにすぎない。反応の基質が3-ヒドロキシプロピオネートである場合、補足的な補因子はプロピルジホスフェートであろう。基質が3-ヒドロキシブチレートまたは3-ヒドロキシ-3-メチルブチレートである場合、補足的な補因子はエチルジホスフェートであろう。基質が3-ヒドロキシバレレートまたは3-ヒドロキシ-3-メチルバレレートである場合、補足的な補因子はメチルジホスフェートであろう。これらの種々の分子を図5に示す。時には、反応の補足的な補因子が他の基質の反応にプラスの作用をもつ場合がある。一般に、補因子はリン酸無水物phosphoanhydrydeを含むいずれかの分子であっよく、したがって、一般式R-PO2H-O-PO3H2をもち、ここでRは特にH、好ましくは1から10個までもしくは1から5個までの炭素原子をもつ直鎖、分枝もしくは環状のアルキル基、または他のいずれかの一価有機基である。メチレンジホスホネートモノエステルに対応する類似のモチーフであって一般式R-O-PO2H-CH2-PO3H2この場合は、加水分解されないという利点をもつメチレン橋によりリン酸無水物phosphyanhydrydeが置き換えられているをもつものも、本発明の一部である。より一般的には、補因子は前記分子のモノホスフェート類似体、さらにはホスフェートを含まない類似体、あるいは酵素の触媒部位に立体障害または電子補足をもたらすことにより反応収率を改善しうる他のいずれかの分子であってもよい。補因子は、有利にはピロホスフェートイオン、メチルジホスフェート、エチルジホスフェート、またはプロピルジホスフェートからなる群から選択される。好ましい態様において、変換は補助基質の存在下で行なわれ、その補助基質は好ましくはリン酸無水物を含む化合物であり、好ましくはATP、rNTP、dNTP、もしくはこれらの分子のうち幾つかの混合物、ポリホスフェートまたはピロホスフェートである。補助基質は一般に宿主内に存在する。しかし、他の特定の態様において、好ましくはATP、rNTP、dNTP、または幾つかのrNTPもしくはdNTPの混合物、ポリホスフェート、および好ましくはピロホスフェート、またはリン酸無水物図2の一般式X-PO3H2により表わされるを含む化合物からなる群から選択される補助基質を反応に添加することができる。脱カルボキシル化段階、すなわち前記にiiとして定めた反応はATP消費を必要としないが、反応に際してATPの存在が有益な可能性があることが示された。これを実施例7に、3-ホスホノキシイソバレレートを基質として用いて証明した。ATPは、ジホスホメバロン酸デカルボキシラーゼのATP結合部位にATPが結合することにより、タンパク質のフォールディングに対する作用をもつと推測される。事実、これは肉眼で見ることができる:精製した酵素は沈殿する傾向があり、ATPの添加はこの作用を阻止する。ATPだけでなく、他の類似化合物、たとえばdATP、ADP、AMP、または他のNTP類もしくはdNTP類も、この効果をもつと考えられる。したがって、好ましい態様において、本発明による方法は、ATP、dATP、ADP、AMP、またはATP以外のNTP類もしくはdNTPを補助基質として用いて実施される。他の好ましい態様において、本発明による方法は、それらの酵素を産生する生物、好ましくは微生物の存在下での培養により実施される。したがって、そのような本発明の態様において、前記のiおよびiiに特定した酵素を産生する生物、好ましくは微生物を用いる。好ましい態様において、微生物は、その宿主が産生するiおよびiiに特定した酵素がその産生宿主に対してヘテロロガスであるという点で、組換え体である。したがって、この方法は、酵素を分離または精製する必要なしに培養培地中で直接実施できる。特に有利な様式では、溶液中に存在する炭素源からアルケンを直接製造するために、1種類以上の3-ヒドロキシアルカノエートを内在産生する自然または人為的な特性をもち、かつ前記のiおよびiiに特定した酵素をも自然または人為的に発現または過剰発現する微生物を使用する。たとえば、本発明による方法は、1種類以上の3-ヒドロキシアルカノエートを産生する微生物[たとえば、アルカリゲネスユートロファスAlcaligeneseutrophusまたはバチルスメガテリウムBacillusmegaterium、あるいはそれそれらの産物を産生するように遺伝子修飾した大腸菌Ecoli株]であって、前記のiおよびiiに定めた酵素を過剰発現するように遺伝子工学的に操作した微生物を用いて実施でき、それらの酵素は好ましくは宿主微生物とは異なる生物に由来する。遺伝子修飾は、たとえばそれらの酵素をコードする対応遺伝子を染色体に組み込み、その酵素を酵素コード配列の上流にプロモーターを含むプラスミドプロモーターとコード配列は、好ましくは異なる生物に由来するから発現させること、あるいは当業者に既知である他のいずれかの方法にある。あるいは、他の細菌または酵母が特定の利点をもつ場合があり、それらを選択できる。たとえば、酵母、たとえばサッカロミセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、好極限性extremophilic細菌、たとえばサーマスサーモフィルスThermusthermophilus、またはクロストリジウム科Clostridiaeに属する嫌気性細菌、微小藻類、または光合成細菌を使用できる。本発明に用いる生物は、原核生物または真核生物であってもよく、好ましくは、それらは細菌、酵母、真菌もしくは糸状菌などの微生物、または植物細胞もしくは動物細胞である。特定の態様において、微生物は細菌、好ましくはエシェリキア属Escherichia、アルカリゲネス属Alcaligenesまたはバチルス属Bacillusのもの、よりさらに好ましくは大腸菌Escherichiacoli、アルカリゲネスユートロファスAlcaligeneseutrophusまたはバチルスメガテリウムBacillusmegaterium種のものである。他の好ましい態様において、微生物は、1種類以上の3-ヒドロキシアルカノエートを内在産生しかつそれらをアルケンに変換するように修飾されたエシェリキア属、好ましくは大腸菌種の組換え細菌である。さらに他の好ましい態様において、微生物は真菌、より好ましくはサッカロミセス属Saccharomyces、シゾサッカロミセス属Schizosaccharomyces、アスペルギルス属Aspergillusまたはトリコデルマ属Trichodermaの真菌、よりさらに好ましくはサッカロミセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、シゾサッカロミセスポンベSchizosaccharomycespombe、アスペルギルスニガーAspergillusniger種のもの、またはトリコデルマリーゼイTrichodermareesei種のものである。特に好ましい態様において、微生物は組換え酵母であり、3-ヒドロキシアルカノエートを産生し、かつ前記のiおよびiiに特定した酵素を発現するのでそれらをアルケンに変換する。好ましい態様において、本発明による方法は、前記のiおよびiiに特定した酵素を発現する光合成微生物を利用する。好ましくは、微生物は光合成細菌、または微小藻類である。よりさらに好ましくは、そのような微生物は、1種類以上の3-ヒドロキシアルカノエートを内在産生する自然または人為的な特性をもつ。この場合、微生物は溶液中に存在するCO2からアルケンを直接産生することができるであろう。本発明による方法において、前記のiに定めた酵素を産生する1微生物、および前記のiiに定めた酵素を産生する他の微生物を使用することも考慮される。さらに、他の態様において、少なくとも1種類の微生物が1種類以上の3-ヒドロキシアルカノエートを産生することができ、あるいは別態様において、1種類以上の3-ヒドロキシアルカノエートを産生することができる更なる微生物をその方法に使用する。他の好ましい態様において、本発明による方法は、前記のiおよびiiに定めた酵素を発現する多細胞生物を利用する。そのような生物の例は植物または動物である。特定の態様において、本方法は、微生物を標準培養条件30~37°C、1気圧で、その細菌を好気性増殖させることができる発酵槽内においてまたは非標準条件たとえば、好熱生物の培養条件に対応する高温で培養することを伴う。さらに他の好ましい態様において、本発明の方法は、微好気性microaerophilic条件で実施される。これは、アルケン炭化水素を含有する排出気体中の残留酸素濃度を最小限に抑えるように、注入空気の量が制限されることを意味する。他の好ましい態様において、本発明による方法はさらに、反応から排出する気体状アルケンを採集する工程、すなわちたとえば培養物から排出する生成物を回収する工程を含む。したがって、好ましい態様において、本方法は反応中に気体状のアルケンを回収するシステムの存在下で実施される。実際には、短いアルケン、特にエチレン、プロピレンおよびブテン異性体は、室温および大気圧で気体状態をとる。したがって本発明による方法は、液体培養培地からの生成物の抽出、すなわち工業的規模で実施する際には常に著しくコストがかかる工程が必要ない。気体状炭化水素の排出および貯蔵、ならびにその後に行なう可能性があるそれらの物理的分離および化学変換は、当業者に既知であるいずれかの方法に従って実施できる。具体的な態様において、本方法は、気相中に存在するアルケンたとえば、プロピレン、エチレンまたはイソブチレンを検出することも含む。空気その他の気体の環境中に生成する化合物の存在は、少量であっても、多様な手法を用いて、特に紫外もしくはフレームイオン化検出を備えたガスクロマトグラフィーシステムの使用により、または質量分析との連携により検出できる。特定の態様において、より長い鎖のアルケン、またはより長い鎖のアルカンが生成するように、本発明による方法により生成したアルケンを当業者に既知の手法を用いて縮合させ、次いで場合によっては還元する。たとえば、イソブチレンを用いてイソオクタンを合成することができる:この反応の実施に成功するための接触法については既に十分に記載されている。他の態様において、本発明による方法は、炭素源、たとえばグルコースを3-ヒドロキシアルカノエートに変換し、続いてこの3-ヒドロキシアルカノエートを対応するアルケンに変換することを特徴とする。この方法の種々の段階を図6に概説する。特定の態様において、本方法は、酵素または適切な物理化学的方法を用いてポリヒドロキシアルカノエートを3-ヒドロキシアルカノエートに変換し、続いてこの3-ヒドロキシアルカノエートを対応するアルケンに変換することを特徴とする。場合により、ポリヒドロキシアルカノエートは、高収率のポリヒドロキシアルカノエートを産生するようにその代謝経路が改変された微生物または植物により産生されたものである。他の態様において、本発明による方法は、大気CO2から、または培養培地に人為的に添加したCO2から、アルケンを生成することを含む。この場合、本方法は、光合成を行なうことができる生物、たとえば微小藻類において実施される。本発明はまた、脱カルボキシル化および脱リン酸化による変換を触媒することができる酵素の使用により3-ホスホノキシアルカノエートを対応するアルケンに酵素変換する工程を含む、アルケンの製造方法に関する。そのような方法に用いるのに好ましい酵素に関して、前記に述べた本発明による方法のiiに関連して前記に述べたと同じものが適用される。さらに、同様に本発明による方法について前記に述べた他の好ましい態様に関して、アルケンを3-ホスホノキシアルカノエートから製造するための方法に同じものが適用される。本発明はまた、少なくとも2種類の酵素を産生する生物、好ましくは微生物に関するものであり、その際、1種類の酵素は前記に特定したiから選択され、他の酵素は前記に特定したiiから選択される。好ましい態様において、少なくとも1種類の前記酵素をコードする少なくとも1種類の核酸分子の導入により遺伝子修飾されているという意味で、そのような生物は組換え生物である。好ましくは、そのような核酸分子はその生物に関してヘテロロガスであり、これはそれが自然界ではその生物に存在しないことを意味する。したがって、本発明はまた、前記のiに定めた酵素をコードする核酸分子を含み、かつ前記のiiに定めた酵素をコードする核酸分子を含む生物、好ましくは微生物に関する。好ましい態様において、それらの核酸分子のうち少なくとも1種類はその生物に関してヘテロロガスであり、これはそれが自然界ではその生物に存在しないことを意味する。微生物は好ましくは細菌、酵母または真菌である。他の好ましい態様において、生物は植物、またはヒト以外の動物である。他の好ましい態様に関して、本発明による方法に関連して前記に述べたと同じものが適用される。さらに、本発明はまた、本発明による微生物、適切な培養培地、および3-ヒドロキシアルカノエート化合物またはその微生物により3-ヒドロキシアルカノエート化合物に変換できる炭素源を含む組成物に関する。本発明はまた、アルケン化合物を3-ヒドロキシアルカノエートから製造するための、1種類の酵素が下記のiから選択されかつ他の酵素が下記のiiから選択される少なくとも2種類の酵素の組合わせの使用、あるいは本発明による生物、好ましくは微生物の使用、または本発明による組成物の使用に関するものであり、その際、iおよびiiは下記のものである:i3-ヒドロキシアルカノエートを対応する3-ホスホノキシアルカノエートに変換する活性を有する第1酵素;およびii第1酵素と異なる第2酵素であって、3-ホスホノキシアルカノエートをアルケンに変換する活性を有する酵素。記載した種々の構成要素の好ましい態様に関して、本発明による方法に関連して前記に述べたと同じものが適用される。本発明の他の観点および利点を以下の実施例に記載する;それらは説明のために提示され、限定のためのものではない。以下の実施例は、本発明を説明するためのものである。実施例1:MDPデカルボキシラーゼライブラリーのクローニング、発現および精製真核、原核および古細菌にわたるジホスホメバロン酸デカルボキシラーゼMDPデカルボキシラーゼファミリーの代表的なものをコードする55遺伝子のライブラリーを構築し、試験して、イソブテンIBN産生を改善するための最も活性な候補を同定した。クローニング、細菌培養およびタンパク質発現メバロン酸二リン酸MDPデカルボキシラーゼEC4.1.1.33をコードする遺伝子を、真核遺伝子の場合はpET25bベクターNovagen内に、原核遺伝子の場合はpET22bNovagen内にクローニングした。一続きの6ヒスチジンコドンをメチオニン開始コドンの後に挿入して、精製のためのフアィニティータグを付与した。コンピテント大腸菌BL21DE3細胞Novagenを、これらのベクターで熱ショック法に従って形質転換した。これらの形質転換細胞を、振とうしながら160rpm、ZYM-5052自動誘導培地StudierFWProtExpPur41207234において6時間、37°Cで増殖させ、28°Cで一夜約16時間タンパク質発現を続けた。細胞を4°C、10,000rpmで20分間の遠心により採集し、ペレットを-80°Cで凍結した。タンパク質の精製および濃縮200mlの培養細胞からのペレットを氷上で融解し、5mlのNa2HPO4pH8300mMのNaCl、5mMのMgCl2および1mMのDTTを含有に再懸濁した。20μlのリゾナーゼlysonaseNovagenを添加した。細胞を室温で10分間インキュベートし、次いで氷上に戻して20分間おいた。3×15秒間の音波処理により細胞溶解を完了した。細菌抽出物を次いで4°C、10,000rpmで20分間の遠心により澄明にした。澄明にした細菌溶解物をPROTINO-1000Ni-TEDカラムMacherey-Nagelに装填して、6-Hisタグ付きタンパク質を吸着させた。カラムを洗浄し、目的とする酵素を4mlの50mMNa2HPO4pH8300mMのNaCl、5mMのMgCl2、1mMのDTT、250mMのイミダゾールを含有で溶離した。溶出液を次いで濃縮し、AmiconUltra-410kDaフィルターユニットMilliporeで脱塩し、0.25mlの50mMTris-HClpH7.40.5mMのDTTおよび5mMのMgCl2を含有に再懸濁した。タンパク質濃度をブラッドフォードBradford法により定量した。こうして精製したタンパク質の純度は40から90までの範囲であった。実施例2:MDPデカルボキシラーゼライブラリーのスクリーニングMDPデカルボキシラーゼを相補アッセイにより評価した。ピクロフィルストリダスPtorridusMDPデカルボキシラーゼを、ライブラリーからの各被験酵素と一緒にインキュベートした。酵素アッセイを下記の条件下で実施した:50mMTrisHClpH7,010mMMgCl220mMKCl40mMATP50mM3-ヒドロキシイソバレレートHIVpHを7.0に調整した。100μgのピクロフィルストリダス由来MDPデカルボキシラーゼおよび1mgの被験MDPデカルボキシラーゼを、1mlの反応混合物に添加した。100μgのピクロフィルストリダスMDPデカルボキシラーゼのみを含有する反応混合物を基準として用いた。混合物を次いで振とうせずに45°Cで90時間、密閉バイアルInterchim内でインキュベートした。1mlの気相を採集し、FID検出器およびCPSilicaPlotカラムVarianを備えたHP5890ガスクロマトグラフHPに注入した。市販のイソブテンを基準として用いた。このスクリーニング法により、イソブテン産生率を高める幾つかのMDPデカルボキシラーゼ酵素が同定された。図7に示すように、下記のMDPデカルボキシラーゼについて、より高いイソブテン産生がみられた:候補1:寄託番号GenbankCAI97800寄託番号SwissProtTrEMBLQ1GAB2生物ラクトバチルスデルブリュッキイ亜種ブルガリカスLactobacillusdelbrueckiisubspbulgaricusATCC11842候補2:寄託番号GenbankAAC504401寄託番号SwissProtTrEMBLP536021生物ヒトHomosapiens候補3:寄託番号GenbankABV09606寄託番号SwissProtTrEMBLA8AUU9生物ストレプトコッカスゴルドニイStreptococcusgordonii株Challis亜株CH1イソブテンの最高産生は、ストレプトコッカスゴルドニイ由来の精製MDPデカルボキシラーゼでみられた。これは、アッセイに存在した2種類の酵素一方はピクロフィルストリダス由来、他方はストレプトコッカスゴルドニイ由来が相補的に、IBNをHIVから産生する2段階反応を行なったことを指摘する:ATPから末端ホスホリル基を3-ヒドロキシイソバレレートのC3-酸素へ伝達すること、そしてその後に続く中間体3-ホスホノキシイソバレレートの脱リン酸化-脱カルボキシル化の組合わせ。実施例3:イソブテン産生収率に対する酵素濃度の影響ストレプトコッカスゴルドニイMDPデカルボキシラーゼ濃度の影響を下記の条件下で評価した:50mMTrisHClpH7,010mMMgCl220mMKCl40mMATP50mM3-ヒドロキシイソバレレートHIVpHを7.0に調整した。100μgのピクロフィルストリダス由来MDPデカルボキシラーゼおよび種々の量0から1mgまでのストレプトコッカスゴルドニイ由来MDPデカルボキシラーゼを、1mlの反応混合物に添加した。混合物を次いで振とうせずに45°Cで90時間、密閉バイアルInterchim内でインキュベートした。1mlのヘッドスペース相を採集し、FID検出器およびCPSilicaPlotカラムVarianを備えたHP5890ガスクロマトグラフHPに注入した。市販のイソブテンを基準として用いた。ストレプトコッカスゴルドニイMDPデカルボキシラーゼ酵素濃度を増大させると、イソブテン産生量が増加した図8。実施例4:ストレプトコッカスゴルドニイMDPデカルボキシラーゼホモログのライブラリーのスクリーニングNCBIが提供するBLASTオンラインプログラムを用いて、非重複nonredundantタンパク質配列データベースに対比して配列を検索し、ストレプトコッカスゴルドニイ酵素に対する高い配列類似性>40の同一性をもつ酵素のリストを作成した。得られたリストには18の候補が含まれていた。上記の種のゲノムおよびストレプトコッカスゴルドニイのゲノムから推論したMDPデカルボキシラーゼ酵素の配列を、大腸菌のコドン利用に一致するオリゴヌクレオチドコンカテネーションconcatenationにより作製した。一続きの6ヒスチジンコドンをメチオニン開始コドンの後に挿入して、精製のためのアフィニティータグを付与した。こうして合成した遺伝子をpET25b発現ベクターベクターはGENEARTAGにより構築された内へクローニングした。大腸菌株BL21DE3を形質転換した後、実施例1に記載したプロトコルに従ってタンパク質を産生させた。次いで実施例2に記載した方法により、ピクロフィルストリダス酵素の代わりにサーモプラズマアシドフィラムThacidophilumMDPデカルボキシラーゼを用いて、これらの酵素をアッセイした。このスクリーニング操作により、イソブテン産生についてストレプトコッカスゴルドニイ酵素より効率的な酵素が同定された図9;特にストレプトコッカスインファンタリウスSinfantarius、ストレプトコッカスガロイティカスSgallolyticus、ストレプトコッカス属種M143、ストレプトコッカスサリバリウスSsalivarius、ストレプトコッカススイスSsuis、ストレプトコッカスサンギニスSsanguinis、およびストレプトコッカスミチスSmitis由来のMDPデカルボキシラーゼ酵素。実施例5:ホスホトランスフェラーゼ活性の特性分析HIVからのIBN産生に付随するADPの放出を、ピルビン酸キナーゼ/乳酸デヒドロゲナーゼ連結アッセイにより定量した図10。ピクロフィルストリダス、サーモプラズマアシドフィラム、ストレプトコッカスインファンタリウス、ストレプトコッカスミチスに由来するMDPデカルボキシラーゼを、それらがHIVをリン酸化してADPを放出する能力について評価した。被験酵素反応を下記の条件下に40°Cで実施した:50mMTrisHClpH7,010mMMgCl2100mMKCl5mMATP0,2mMNADH0,5mMホスホエノールピルベート3U/ml乳酸デヒドロゲナーゼ1,5U/mlピルビン酸キナーゼ0~50mM3-ヒドロキシイソバレレートHIVpHを7.0に調整した。個々の酵素0.05から1mg/mlまでの濃度のものの添加により各アッセイを開始し、340nMにおける吸収を追跡することによりNADHの消失をモニターした。ピクロフィルストリダス門Ptorridusphylum由来およびストレプトコッカス属由来のMDPデカルボキシラーゼは、HIVの存在下で再現性のあるADP産生増大を生じた。図11は、ピクロフィルストリダス酵素について収集したデータに対応するミカエリス-メンテンMichaelisMentenプロットの例を示す。動力学的パラメーターを次表に示す。ピクロフィルストリダス門由来の酵素は、ストレプトコッカス属由来のものより高いホスホトランスフェラーゼ活性を示した。実施例6:2種類の酵素を組み合わせることによる3-ヒドロキシイソバレレートからのイソブテン産生目的とする酵素反応を下記の条件下で実施した:50mMTrisHClpH7,510mMMgCl220mMKCl40mMATP50mMHIVpHを7.5に調整した。100μgのサーモプラズマアシドフィラム由来MDPデカルボキシラーゼおよび500μgのストレプトコッカスミチス由来MDPデカルボキシラーゼを、1mlの反応混合物に添加した。2種類のうち1種類の酵素のみを含む対照反応を並行して実施した。アッセイ物を振とうせずに37°Cで密閉バイアルInterchim内でインキュベートした。142時間のインキュベーション期間にわたってサンプリングした部分標本を分析することにより、IBNの産生を測定した。1mlの気相を採集し、FID検出器およびCPSilicaPlotカラムVarianを備えたHP5890ガスクロマトグラフHPに注入した。市販のイソブテンを基準として用いた。イソブテン産生の動態を図12に示す。サーモプラズマアシドフィラム由来MDPデカルボキシラーゼは、HIVからのイソブテン産生を触媒した。ストレプトコッカスミチス由来MDPデカルボキシラーゼの添加は、142時間のインキュベーション後のイソブテン産生を3倍増加させた。ストレプトコッカスミチス由来MDPデカルボキシラーゼ単独では6日間のインキュベーション後に少量のイソブテンを産生したにすぎず、ホスホトランスフェラーゼ活性が低いことを指摘する。したがって、2つの反応段階を相補的に行なう2種類の酵素を組み合わせることによって、イソブテン産生を増加させることができる。実施例7:3-ホスホノキシイソバレレートPIVからのイソブテン産生に対するATPの効果化合物3-ホスホノキシイソバレレートPIVを、3-ヒドロキシイソバレレートから図13に示したスキームに従ってSYNTHEVALフランスにより化学合成した。イソブテン産生のアッセイを下記の条件下で実施した:50mMTrisHClpH7,510mMMgCl220mMKCl0mMATPアッセイNo.1およびNo.210mMATPアッセイNo.3およびNo.425mM3-ホスホノキシイソバレレートpHを7.5に調整した。2mgの精製したストレプトコッカスミチス由来MDPデカルボキシラーゼを0.5mlの反応混合物に添加することにより反応を開始した。酵素の不存在下で対照反応を行なったアッセイNo.1およびNo.3。混合物を振とうせずに37°Cで26時間、2mlの密閉バイアルInterchim内でインキュベートした。1mlの気相を採集し、FID検出器およびCPSilicaPlotカラムVarianを備えたVarian430-GCガスクロマトグラフに注入した。市販のイソブテンを基準として用いた。10mMのATPを反応混合物に添加すると、3-ホスホノキシイソバレレートPIVからのイソブテン産生が120倍増大した図14。実施例8:3-ホスホノキシイソバレレートPIVからのイソブテン産生の動力学的パラメーターイソブテン産生の動力学的パラメーターを下記の条件下で測定した:50mMTrisHClpH7,510mMMgCl250mMKCl40mMATP0~100mM3-ホスホノキシイソバレレートpHを7.5に調整した。1mgの精製したストレプトコッカスミチス由来MDPデカルボキシラーゼを0.5mlの反応混合物に添加することにより反応を開始した。次いで混合物を振とうせずに37°Cで44時間、2mlの密閉バイアルInterchim内でインキュベートした。1mlの気相を採集し、FID検出器およびCPSilicaPlotカラムVarianを備えたVarian430-GCガスクロマトグラフに注入した。市販のイソブテンを基準として用いた。精製したストレプトコッカスミチス由来MDPデカルボキシラーゼを用いたアッセイは、補因子としてのATPの存在下で、バックグラウンドレベル3-ホスホノキシイソバレレートの自然分解を160~400倍上回るIBN産生増大を示した次表を参照。ストレプトコッカスミチス由来精製MDPデカルボキシラーゼは、60mMより高いKMおよび少なくとも1.3×10-3sec-1のkcatをもつことが認められた。"