"哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合し、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズするヒト化抗体であって、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、および配列番号69からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体可変重鎖領域を含むヒト化抗体。前記抗体が、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質の1つ以上の他のカドヘリン-11タンパク質への結合、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞の凝集、酵素発現の誘導、サイトカイン発現の誘導、成長因子発現の誘導、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞の遊走、および軟骨の破壊からなる群から選択される、1つ以上のカドヘリン-11媒介性活性を阻害する、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号69を含む、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体が、配列番号71、配列番号73、および配列番号75からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体可変軽鎖領域を含む、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号61を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号71を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号61を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号73を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号61を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号75を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号63を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号71を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号63を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号73を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号63を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号75を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号65を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号71を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号65を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号73を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号65を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号75を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号67を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号71を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号67を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号73を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号67を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号75を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変軽鎖領域が配列番号71を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号69を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号73を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体可変重鎖領域が配列番号69を含み、前記抗体可変軽鎖領域が配列番号75を含む、請求項4に記載のヒト化抗体。前記抗体が、配列番号3に存在するエピトープに結合する、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体が、配列番号10に存在するエピトープに結合する、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体が、配列番号11を含むエピトープに結合する、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体が抗体全体である、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体が抗体断片である、請求項1に記載のヒト化抗体。前記抗体断片が、Fab、Fab’、Fab’2、およびscFvからなる群から選択される、請求項24に記載のヒト化抗体。哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合し、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズするヒト化抗体であって、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域および配列番号71を含む抗体可変軽鎖領域を含むヒト化抗体。前記抗体が、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質の1つ以上の他のカドヘリン-11タンパク質への結合、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞の凝集、酵素発現の誘導、サイトカイン発現の誘導、成長因子発現の誘導、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞の遊走、および軟骨の破壊からなる群から選択される、1つ以上のカドヘリン-11媒介性活性を阻害する、請求項26に記載のヒト化抗体。前記抗体が抗体全体である、請求項26に記載のヒト化抗体。前記抗体が抗体断片である、請求項26に記載のヒト化抗体。前記抗体断片が、Fab、Fab’、Fab’2、およびscFvからなる群から選択される、請求項29に記載のヒト化抗体。哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合し、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズするヒト化抗体および薬学的に許容されうる担体を含む医薬組成物であって、前記抗体が、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域を含み、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズする医薬組成物。前記抗体が、配列番号71を含む抗体可変軽鎖領域を含む、請求項31に記載の医薬組成物。前記抗体が、前記哺乳動物カドヘリン-11を発現する細胞の凝集を阻害する、請求項31に記載の医薬組成物。前記抗体が抗体全体である、請求項31に記載の医薬組成物。前記抗体が抗体断片である、請求項31に記載の医薬組成物。疾患改善抗リウマチ薬をさらに含む、請求項31に記載の医薬組成物。前記疾患改善抗リウマチ薬がメトトレキサートである、請求項36に記載の医薬組成物。抗炎症剤をさらに含む、請求項31に記載の医薬組成物。前記抗炎症剤がNSAIDまたはステロイドである、請求項38に記載の医薬組成物。請求項1に記載のヒト化抗体をコードする単離核酸。前記核酸がベクター中に存在する、請求項40に記載の単離核酸。請求項1に記載のヒト化抗体を発現する単離細胞。治療を必要とする哺乳動物被験体のカドヘリン-11媒介性障害を治療する方法であって、前記被験体に、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合する治療有効量のヒト化抗体を投与するステップを含み、前記抗体が、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域を含み、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズする方法。前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞の凝集が、前記被験体の1つ以上の関節において阻害される、請求項43に記載の方法。前記抗体が、配列番号71を含む抗体可変軽鎖領域を含む、請求項43に記載の方法。前記抗体が抗体全体である、請求項43に記載の方法。前記抗体が抗体断片である、請求項43に記載の方法。前記カドヘリン-11媒介性障害が、炎症性障害、線維症、および癌からなる群から選択される、請求項43に記載の方法。前記カドヘリン-11媒介性障害が、リウマチ様関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、若年性慢性関節炎、慢性ライム病、および全身性紅斑性狼瘡に関連した関節炎からなる群から選択される炎症性関節障害である、請求項43に記載の方法。前記哺乳動物被験体がヒトである、請求項43に記載の方法。前記抗体が全身投与される、請求項43に記載の方法。前記抗体が静脈内投与される、請求項43に記載の方法。前記抗体が、関節の中への直接注射により投与される、請求項43に記載の方法。前記抗体が、前記被験体の1つ以上の関節において、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞の遊走、接着、軟骨への浸潤、または細胞間シグナル伝達を阻害する、請求項43に記載の方法。前記抗体が、前記被験体の1つ以上の関節において、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞内での、コラゲナーゼ、セリンプロテアーゼ、およびマトリックスメタロプロテイナーゼからなる群から選択される酵素の発現または活性の誘導を阻害する、請求項43に記載の方法。前記抗体が、前記被験体の1つ以上の関節において、前記哺乳動物カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞内での、IL-6、IL-8、RANKL、およびTRANCEからなる群から選択されるサイトカインまたは成長因子の発現または活性の誘導を阻害する、請求項43に記載の方法。前記抗体が、疾患改善抗リウマチ薬および抗炎症剤からなる群から選択される少なくとも1つの作用物質と併用投与される、請求項43に記載の方法。治療を必要とする哺乳動物被験体におけるカドヘリン-11媒介性障害の治療のためのヒト化抗体の使用であって、前記抗体が哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合し、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域を含む使用。前記カドヘリン-11媒介性障害が炎症性障害である、請求項58に記載の使用。前記炎症性障害が炎症性関節障害である、請求項59に記載の使用。前記炎症性関節障害がリウマチ様関節炎である、請求項60に記載の使用。前記カドヘリン-11媒介性障害が線維症である、請求項58に記載の使用。前記カドヘリン-11媒介性障害が癌である、請求項58に記載の使用。したがって、RAおよび他の炎症性症状を原因とする線維症および慢性関節炎症は、国際的な健康問題である。これらおよび他の障害の予防および治療のための新しい作用物質を開発する必要性がある。本発明は、一実施形態では、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合するヒト化抗体であって、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、および配列番号69からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体可変重鎖領域を含むヒト化抗体に関する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズする。さらなる実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域を含む。別の実施形態では、本発明は、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合するヒト化抗体であって、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域および配列番号71を含む抗体可変軽鎖領域を含むヒト化抗体に関する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズする。さらなる実施形態では、本発明は、治療を必要とする哺乳動物被験体例えばヒトのカドヘリン-11媒介性障害例えば炎症性関節障害を治療する方法を提供する。本方法は、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合し、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質をアンタゴナイズする治療有効量のヒト化抗体を被験体に投与し、それによって被験体に所望の治療効果をもたらすステップを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域を含む。好ましい実施形態では、カドヘリン-11媒介性障害はリウマチ様関節炎である。さらに別の実施形態では、本発明は、哺乳動物カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合するヒト化抗体および薬学的に許容されうる担体を含む医薬組成物に関する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号69を含む抗体可変重鎖領域を含む。さらなる実施形態では、医薬組成物は、第2の作用物質、例えば疾患改善抗リウマチ薬または抗炎症剤をさらに含む。本発明は、ヒトにおいて、カドヘリン-11によって媒介される炎症および他の症状の治療効果を改善する新しい作用物質および治療法を提供する。特許または出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも1つの図面を含む。カラー図面を有する本特許または公開特許公報のコピーは、要求および必要手数料の支払時に特許局によって提供されることになる。定義本明細書で使用される用語カドヘリン-11、Cad-11およびOB-カドヘリンは、天然または内因性カドヘリン-11例えば哺乳類、例えばヒトタンパク質、ならびに天然または内因性カドヘリン-11タンパク質の場合と同じアミノ酸配列を有するタンパク質例えば、組換えタンパク質、合成タンパク質を示す。したがって、用語カドヘリン-11、Cad-11およびOB-カドヘリンは、本明細書中で同義的に使用され、例えば、哺乳動物例えば、ヒト、非ヒト霊長類において天然に生じる選択的スプライシングまたは他の細胞プロセスによって生成されるカドヘリン-11タンパク質例えば、哺乳類、ヒトの多形性または対立遺伝子変異体および他のアイソフォームを含む。好ましくは、カドヘリン-11タンパク質は、配列番号2のアミノ酸配列を有するヒトタンパク質であるGenbank登録番号NP001788および図15を参照。本明細書で定義されるカドヘリン-11アンタゴニストは、カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合し、かつ細胞内での1つ以上のカドヘリン-11媒介性活性を阻害する例えば、低下させる、阻止する作用物質例えば、抗体、融合タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣体、小分子、核酸である。カドヘリン-11媒介性活性は、限定はされないが、カドヘリン-11タンパク質と1つ以上の他のカドヘリン-11タンパク質との同型的な結合、カドヘリン-11を発現する細胞の凝集、酵素例えば、コラゲナーゼ、セリンプロテアーゼ、MMP1、MMP3、MMP13の発現または活性の誘導、およびサイトカイン例えば炎症性サイトカインまたは成長因子例えば、IL-6、IL-8、またはRANKLもしくはTRANCEの誘導、カドヘリン-11発現細胞の遊走、およびカドヘリン-11発現細胞による軟骨の破壊を含む。一実施形態では、カドヘリン-11アンタゴニストは、カドヘリン-11タンパク質と1つ以上の他のカドヘリン-11タンパク質との結合を、例えば、Cad-11タンパク質例えば、細胞の表面上に発現されるCad-11タンパク質のEC1ドメイン内のドナー配列と1つ以上の他のCad-11タンパク質例えば、別の細胞の表面上に発現される1つ以上のCad-11タンパク質のEC1ドメイン内のポケット配列の間での相互作用を遮断することによって阻害しうる。本明細書で使用される、カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合するカドヘリン-11アンタゴニストは、例えば生理的条件下でカドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに、カドヘリン-11アンタゴニストが別のカドヘリンタンパク質例えば、MN-カドヘリン、カドヘリン-8のEC1ドメインに結合する親和性より高い、少なくとも約5倍、好ましくは少なくとも約10倍の親和性例えば結合親和性で結合するカドヘリン-11アンタゴニストを示す。特定の実施形態では、カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合するカドヘリン-11アンタゴニストは、ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインのN末端部分の配列番号3中に存在するエピトープに、カドヘリン-11アンタゴニストがヒトMN-カドヘリンのEC1ドメインのN末端部分の配列番号4中に存在するエピトープに結合する親和性、およびカドヘリン-11アンタゴニストがヒトカドヘリン-8のEC1ドメインのN末端部分の配列番号5中に存在するエピトープに結合する親和性より高い、少なくとも約5倍、好ましくは少なくとも約10倍の親和性で結合する。本明細書で使用される用語抗体は、全抗体および抗体断片例えば、抗体の抗原結合断片、例えば、Fv、Fc、Fd、Fab、Fab’、Fab’、およびdAb断片の双方を包含することが意図される。抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の双方を示し、天然および改変抗体を含む。したがって、用語抗体は、例えば、ヒト、キメラ、ヒト化、霊長類化、ベニア化veneered、一本鎖、およびドメイン抗体dAbを含む例えば、Harlowら、AntibodiesALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratory、1988年。用語エピトープは、免疫グロブリンVH/VL対によって従来の方法で結合される構造の単位を示す。エピトープは、抗体に対する最小結合部位を規定し、故に抗体の特異性の標的を示す。用語融合タンパク質は、2つ以上の異種ポリペプチドの全部または一部を含む、天然、合成、半合成または組換えの単一のタンパク質分子を示す。用語ポリペプチドは、アミノ酸のポリマーを示し、特定の長さを示さず、それ故、ペプチド、オリゴペプチドおよびタンパク質はポリペプチドの定義の範囲内に含まれる。本明細書で使用される用語ペプチドは、1つのアミノ酸のアミノ基がペプチド結合によって別のアミノ酸のカルボキシル基に連結される、約2~約100個のアミノ酸残基からなる化合物を示す。かかるペプチドは、典型的には約100アミノ酸残基長未満であり、好ましくは約10個、約20個、約30個、約40個または約50個の残基である。本明細書で使用される用語ペプチド模倣体は、ペプチドまたはタンパク質でないが、それらの構造の局面を模倣する分子を示す。ペプチド模倣アンタゴニストは、従来の化学的方法によって調製されうる例えば、DamewoodJ.R.、PeptideMimeticDesignwiththeAidofComputationalChemistry、ReviewsinComputationalBiology、2007年、第9巻、1-80頁、JohnWileyandSons,Inc.NewYork、1996年;KazmierskiW.K.、MethodsofMolecularMedicine:PeptidomimeticProtocols、HumanaPressNewJersey、1999年を参照。本明細書で定義される治療は、被験体例えば、哺乳動物、ヒトへの特定の治療剤または予防剤の投与であり、被験体に所望の治療的または予防的利益をもたらす。本明細書で定義される処置レジメンは、1つ以上の治療剤または予防剤が、哺乳動物被験体に特定の用量例えば、レベル、量amount、量quantityおよび特定のスケジュールまたは特定の間隔例えば、分、日、週、月で投与されるレジメンである。本明細書で定義される治療有効量は、投与の条件下での所望される治療または予防効果を得るのに十分な量、例えば、限定はされないが、関節における炎症例えば、カドヘリン-11を発現する細胞、例えば滑膜細胞の凝集を阻害することによって、または腫瘍の形成、増殖、もしくは転移を阻害するすなわち、低下させる、阻止するのに十分な量である。治療の有効性例えば、関節における炎症の低下および/または関節における炎症の阻止は、適切な方法例えば、イメージング法、例えばMRI、NMR、CTによって判定されうる。カドヘリンカドヘリンは、他のカドヘリンに同型的に結合することによって細胞接着を媒介するCa2-依存性接着分子の大ファミリーに属するM.J.WheelockおよびK.R.Johnson、Ann.Rev.CellDev.Biol.19:207-235頁2003年。古典的なカドヘリンは、5つの細胞外カドヘリンECドメイン各々、約110アミノ酸長、膜透過領域および保存された細胞質ドメインを有する1回膜貫通タンパク質である。カドヘリンは、ECドメイン間の相同度に基づき、I型またはII型カドヘリンのいずれかに分かれる。II型カドヘリンは、ヒトカドヘリン-5、-6、-8、-11、および-12、ならびにMN-カドヘリンを含む。細胞間結合の媒介における細胞外ドメインの各々の役割の相対的重要性は不明確である。滑膜細胞内でのカドヘリン-11活性カドヘリン-11は、関節接合部articulatedjointsの滑膜表層内での滑膜細胞と滑膜細胞との結合を媒介するValenciaら、J.Exp.Med.20012:1673-1679頁2004年;KienerおよびBrenner、ArthritisResTher.72:49-54頁2005年。ヒトIgG2のヒンジ-CH2-CH3ドメインに融合された、ヒトカドヘリン-11の全部で5つの細胞外カドヘリンドメインからなる融合タンパク質は、インビトロで滑膜細胞表層の形成を阻害したKienerら、Am.J.Pathol.168頁2006年。さらに、マウスIgG2aのヒンジ-CH2-CH3ドメインに融合された、アンタゴニスト抗カドヘリン-11抗体およびマウスカドヘリン-11のEC1-5からなる融合タンパク質は、リウマチ様関節炎のマウスモデルにおける炎症および関節腫脹を阻害したLeeら、Science315:1006-1010頁2007年。カドヘリン-11アンタゴニスト本発明のカドヘリン-11アンタゴニストは、カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに特異的に結合する任意の作用物質でありえ、細胞内での1つ以上のカドヘリン-11媒介性活性を阻害する例えば、低下させる、阻止する。カドヘリン-11媒介性活性は、限定はされないが、細胞表面上でのカドヘリン-11を発現する細胞の凝集、および例えば、コラゲナーゼ、セリンプロテアーゼ、MMP1、MMP3、IL-6、IL-8またはRANKL/TRANCEなどの要素の発現または分泌を含む。作用物質は、特に、抗体、融合タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣体、小分子、または核酸でありうる。カドヘリン-11抗体本明細書中に記載されるように、Cad-11例えば配列番号3のドナー配列およびカドヘリン結合ポケットを含む、ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインのN末端部分内のエピトープに結合する抗体は、このタンパク質の他の領域内のエピトープに結合する抗体より有効にインビトロでのカドヘリン-11活性を遮断する実施例1および2を参照。したがって、一実施形態では、本発明は、Cad-11のドナー配列およびカドヘリン結合ポケットを含むカドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインのN末端部分内に存在するエピトープに結合する例えば特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。用語抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体のすべてのタイプ例えば、ヒト、キメラ、ヒト化、霊長類化、ベニア化、一本鎖、ドメイン抗体dAbおよび抗体の抗原結合断片例えば、Fv、Fc、Fd、Fab、Fab’、Fab’、dAbを包含することが意図される例えば、Harlowら、AntibodiesALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratory、1988年を参照。特定の実施形態では、Cad-11EC1ドメイン-特異抗体はヒト抗体またはヒト化抗体である。Cad-11EC1ドメイン-特異抗体はまた、細胞毒性剤に直接的または間接的に連結されうる。Cad-11タンパク質のEC1ドメインのN末端部分に特異的に結合し、かつCad-11タンパク質の活性を阻害する他の抗体または抗体断片はまた、従来の方法または他の適切な技術により、産生され、作成され、改変され、および/または単離されうる。例えば、カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに対して特異的な抗体は、適切な免疫原、例えば組換え哺乳動物例えばヒトカドヘリン-11のEC1ドメインペプチド例えば配列番号3またはその一部合成分子、例えば、合成ペプチドを含むに対して産生されうる。種々の方法についての記載がなされている例えば、Kohlerら、Nature256:495497頁1975年およびEur.J.Immunol.6:511-519頁1976年;Milsteinら、Nature266:550-552頁1977年;Koprowskiら、米国特許第4,172,124号明細書;HarlowE.およびD.Lane、1988年、Antibodies:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratory:ColdSpringHarborNY;CurrentProtocolsInMolecularBiology、第2巻付録27、1994年夏、AusubelF.M.ら編JohnWileySonsNewYork,NY、第11章1991年を参照。抗体はまた、適切な宿主例えばマウスを、カドヘリン-11のEC1ドメインを発現する細胞例えば癌細胞/細胞系またはカドヘリン-11のEC1ドメインを発現するように改変された細胞例えば形質移入細胞で免疫することによって産生されうる例えば、Chuntharapaiら、J.Immunol.、152:1783-1789頁1994年;Chuntharapaiら、米国特許第5,440,021号明細書を参照。モノクローナル抗体の産生においては、ハイブリドーマが、適切な不死化細胞系例えばSP2/0またはP3X63Ag8.653などの骨髄腫細胞系を抗体産生細胞と融合することによって生成されうる。抗体産生細胞は、目的の抗原で免疫されたヒトまたは他の適切な動物の末梢血、または好ましくは脾臓またはリンパ節から得られうる。融合細胞ハイブリドーマは、選択的培養条件を用いて単離され、限界希釈によってクローン化されうる。所望の特異性を有する抗体を産生する細胞は、適切なアッセイ例えばELISAによって選択されうる。抗体断片は、酵素切断または組換え技術によって産生されうる。例えば、パパインまたはペプシン切断は、それぞれFabまたはFab2断片を産生しうる。また、必須の基質特異性を有する他のプロテアーゼを使用し、FabまたはFab2断片が産生されうる。抗体はまた、1つ以上の停止コドンが天然停止部位の上流に導入されている抗体遺伝子を使用し、種々の切断形態で産生されうる。例えば、Fab2重鎖部分をコードするキメラ遺伝子は、CH1ドメインおよび重鎖のヒンジ領域をコードするDNA配列を含むように設計されうる。一本鎖抗体、およびヒト、キメラ、ヒト化または霊長類化CDR移植化、またはベニア化抗体、ならびにキメラ、CDR移植化またはベニア化一本鎖抗体異なる種由来の一部を含むなどもまた、本発明および用語抗体によって包含される。これら抗体の様々な部分は、従来の技術によって化学的に共に連結されうるか、または遺伝子工学技術を用いて隣接タンパク質として調製されうる。例えば、キメラまたはヒト化鎖をコードする核酸は、発現により、隣接タンパク質が生成されうる。例えば、Cabillyら、米国特許第4,816,567号明細書;Cabillyら、欧州特許第0,125,023B1号明細書;Bossら、米国特許第4,816,397号明細書;Bossら、欧州特許第0,120,694B1号明細書;NeubergerM.S.ら、国際公開第86/01533号パンフレット;NeubergerM.S.ら、欧州特許第0,194,276B1号明細書;Winter、米国特許第5,225,539号明細書;Winter、欧州特許第0,239,400B1号明細書;Queenら、欧州特許第0451216B1号明細書;およびPadlanE.A.ら、欧州特許第0519596A1号明細書を参照のこと。また、霊長類化抗体に関するNewmanR.ら、Biotechnology、10:1455-1460頁1992年、ならびに一本鎖抗体に関するLadnerら、米国特許第4,946,778号明細書およびBirdR.E.ら、Science、242:423-426頁1988年を参照のこと。ヒト化抗体は、標準的方法または他の適切な技術を用いる合成または組換えDNA技術を用いて産生されうる。また、ヒト化可変領域をコードする核酸例えばcDNA配列を、PCR突然変異誘発法を用いて作成し、ヒトまたはヒト化鎖をコードするDNA配列、例えば予めヒト化された可変領域由来のDNA鋳型が改変されうる例えば、KammanM.ら、Nucl.AcidRes.、17:5404頁1989年;SatoK.、ら、CancerResearch、53:851-856頁1993年;DaughertyB.L.ら、NucleicAcidsRes.、199:2471-2476頁1991年;ならびにLewisA.P.およびJ.S.Crowe、Gene、101:297-302頁1991年。変異体はまた、これらまたは他の適切な方法を用いて容易に生成されうる。一実施形態では、クローン化可変領域例えばdAbが突然変異され、所望の特異性を有する変異体をコードする配列が選択されうる例えば、ファージライブラリから;例えば、Krebberら、米国特許第5,514,548号明細書;Hoogenboomら、1993年4月1日に公開された国際公開第93/06213号パンフレットを参照。例えば、ライブラリ例えばファージディスプレイライブラリから組み換え抗体または抗体結合断片例えばdAbを選択するか、あるいはトランスジェニック動物例えばマウスの免疫に依存する方法を含む、必須の特異性を有する抗体を産生または単離する他の適切な方法が使用されうる。ヒト抗体のレパートリーを産生可能なトランスジェニック動物は、当該技術分野で周知であり例えば、Xenomouse登録商標AbgenixFremont,CA、適切な方法を用いて産生されうる例えば、Jakobovitsら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、90:2551-2555頁1993年;Jakobovitsら、Nature、362:255-258頁1993年;Lonbergら、米国特許第5,545,806号明細書;Suraniら、米国特許第5,545,807号明細書;Lonbergら、国際公開第97/13852号パンフレットを参照。本発明は、一実施形態では、ヒトCad-11のEC1ドメイン配列番号13の最初の約37個のアミノ酸中に存在するエピトープに結合するCad-11抗体を包含する。特定の実施形態では、本発明は、配列番号10内に存在するエピトープに結合するCad-11抗体に関する。さらなる実施形態では、本発明は、配列番号11を含むエピトープに結合するCad-11抗体に関する。別の実施形態では、本発明は、配列番号12内に存在するエピトープに結合するCad-11抗体に関する。一実施形態では、本発明は、AmericanTypeCultureCollectionATCC私書箱1549,Manassas,Virginia20108,UnitedStatesofAmericaで2009年1月8日に寄託されているハイブリドーマH1M1ATCC特許寄託番号PatentDepositDesignationPTA-9699によって産生されるCad-11抗体に関する。別の実施形態では、本発明は、AmericanTypeCultureCollectionATCC私書箱1549,Manassas,Virginia20108,UnitedStatesofAmericaで2009年1月9日に寄託されているハイブリドーマH14ATCC特許寄託番号PTA-9701によって産生されるCad-11抗体を提供する。本発明はまた、ハイブリドーマH1M1によって産生されるCad-11抗体および/またはハイブリドーマH14によって産生されるCad-11抗体と、ヒトCad-11タンパク質またはEC1-ドメインを有するその一部例えば配列番号3、10、12、13に対する結合に対して特異的に競合する抗体を包含する。特定の実施形態では、ハイブリドーマH1M1および/またはハイブリドーマH14によって産生されるCad-11抗体と特異的に競合する抗体は、ハイブリドーマH1M1および/またはハイブリドーマH14によって産生されるCad-11抗体の、ヒトCad-11タンパク質またはEC1-ドメインを有するその一部例えば、配列番号3、10、12、13に対する結合を遮断する例えば、阻害する、低減させる、阻止する。さらに、本発明は、ハイブリドーマH1M1によって産生されるCad-11抗体および/またはハイブリドーマH14によって産生されるCad-11抗体の、ヒトCad-11タンパク質またはEC1-ドメインを有するその一部に対する結合親和性と少なくとも同程度に大きい、ヒトCad-11タンパク質またはEC1-ドメインを有するその一部例えば、配列番号3、10、12、13に対する結合親和性を有する抗体を包含する。カドヘリン-11融合タンパク質さらに、ヒトCad-11のEC1ドメイン例えば、ヒトIgGの一部に融合されるヒトCad-11のEC1ドメインのみを有する免疫グロブリン融合タンパク質は、すべての5ECドメインを有する、Cad-11のEC領域のより大きい部分を含む融合タンパク質より有効にインビトロでのCad-11活性を阻害した。カドヘリン-11アンタゴニストはまた、異種タンパク質の全部または一部に作動可能に連結されるヒトCad-11のEC1ドメイン配列番号2の少なくともN末端の約35個のアミノ酸を含むキメラまたは融合タンパク質を包含する。作動可能に連結されるは、Cad-11EC1ドメインの一部および異種タンパク質がインフレームで融合されることを示す。異種タンパク質は、タンパク質のN末端またはC末端に融合されうる。例えば、融合タンパク質は、タンパク質配列がGST配列のC末端に融合されたGST融合タンパク質でありうる。融合タンパク質の他のタイプは、限定はされないが、酵素融合タンパク質、例えば、β-ガラクトシダーゼ融合タンパク質、酵母ツーハイブリッドGAL融合タンパク質、ポリ-His融合体、FLAG-タグ化融合タンパク質、GFP融合タンパク質、および免疫グロブリンIg融合タンパク質を含む。かかる融合タンパク質は例えば組換え融合タンパク質の精製を促進しうる。特定の宿主細胞例えば哺乳動物宿主細胞では、タンパク質の発現および/または分泌が異種シグナル配列に使用によって増強されうる。したがって、別の実施形態では、融合タンパク質は異種シグナル配列をそのN末端に有する。欧州特許出願公開第0464533A号明細書は、免疫グロブリン定常領域の様々な部分を含む融合タンパク質を開示する。Fcは、治療および診断において有用であり、それ故、例えば改善された薬物動態学的特性をもたらす例えば、欧州特許出願公開第0232262A号明細書を参照。薬剤発見では、例えばヒトタンパク質は、ハイスループットスクリーニングアッセイのためにFc部分と融合され、アンタゴニストが同定されているBennettら、JournalofMolecularRecognition8:52-58頁1995年;Johansonら、J.Biol.Chem.、27016:9459-9471頁1995年。したがって、本発明はまた、本発明のタンパク質Cad-11アンタゴニストおよび免疫グロブリンの様々なサブクラス例えば、IgG、IgM、IgA、IgEの重鎖および/または軽鎖の定常領域の様々な部分を有する可溶性融合タンパク質を包含する。本発明の免疫グロブリン融合タンパク質の利点は、次のもの、すなわち、1得られる二量体融合タンパク質の二価性に起因する、多価リガンドにおける結合活性の増大、2より長い血清半減期、3Fcドメインを介したエフェクター細胞に対する活性化能、4精製の容易性例えばプロテインAクロマトグラフィーによる、5Cad-11に対する親和性、および6Cad-11媒介性活性に対する遮断能のうち1つ以上を含む。したがって、特定の実施形態では、Cad-11アンタゴニストは、哺乳動物免疫グロブリンタンパク質の全部または一部に作動可能に連結された、EC1ドメインのN末端部分配列番号2のアミノ酸54~90を含む、カドヘリン-11タンパク質の細胞外領域の一部を含む融合タンパク質である。特定の実施形態では、本発明の免疫グロブリン融合タンパク質は、配列番号2のアミノ酸1~609内部に含まれる5つすべてのECドメインを含むカドヘリン-11の細胞外領域の一部を含まない。特定の実施形態では、ヒトカドヘリン-11細胞外領域の一部は、例えば、配列番号2のアミノ酸1~160、アミノ酸1~259もしくはアミノ酸1~269を含みうる。特定の実施形態では、融合タンパク質は、ヒトカドヘリン-11のリーダーおよびプロ領域配列番号2のアミノ酸1~53が欠如し、異種リーダー配列を使用する。免疫グロブリン部分は、任意の脊椎動物供給源、例えばマウス由来でありうるが、好ましくはヒト免疫グロブリンタンパク質である。一実施形態では、哺乳動物免疫グロブリンタンパク質は、ヒトIgG2タンパク質またはその一部、例えばヒトIgG2のヒンジ-CH2-CH3部分である。本発明のキメラまたは融合タンパク質は、標準の組換えDNA技術によって生成されうる。例えば、異なるタンパク質配列例えば、Cad-11EC1ドメインペプチドおよび哺乳動物免疫グロブリンをコードするDNA断片は共に、従来の技術に従い、インフレームでライゲートされる。別の実施形態では、融合遺伝子は、自動化DNAシンセサイザーを含む従来の技術によって合成されうる。あるいは、核酸断片のPCR増幅は、2つの保存核酸断片の間で相補的なオーバーハングを生じさせるそれらはその後にアニール、再増幅され、キメラ核酸配列を生成しうるアンカープライマーを使用して行われうるAusubelら、CurrentProtocolsinMolecularBiology、1992年。さらに、融合部分例えば、GST部分、Fc部分を既にコードする多数の発現ベクターが市販されている。タンパク質Cad-11アンタゴニストをコードする核酸分子は、融合部分例えば免疫グロブリンがタンパク質にインフレームで連結された、かかる発現ベクターにクローン化されうる。本発明の免疫グロブリン融合タンパク質は、単量体、二量体、四量体または他の多量体例えばポリマーとして提供されうる。例えば、融合タンパク質の免疫グロブリン部分の可変ドメインが共に連結され、例えば、各VドメインのC末端へのヒンジ領域およびヒンジ領域内のシステイン間でのジスルフィド結合の提供;または重鎖それぞれドメインのC末端にシステインを伴うの提供ここでシステインは共にジスルフィド結合される;またはV-CHおよびV-CLの生成によるFab形式の生成;またはペプチドリンカー例えばGly4Serリンカーの使用による二量体、三量体およびさらなる多量体の生成により、多価リガンドが形成されうる。例えば、かかるリガンドは、CH2およびCH3ドメインの一方または双方を含む抗体Fc領域、および場合によってヒンジ領域に連結されうる。例えば、単一のヌクレオチド配列としてFc領域に連結されたリガンドをコードするベクターを使用し、かかるリガンドが例えば発現によって調製されうる。本発明の免疫グロブリン融合タンパク質は、限定はされないが、ポリエチレングリコールPEGの多量体またはその誘導体例えばポリメチルエチレングリコール、放射性核種、細胞毒性剤および細胞毒性薬を含む他の部分に複合され、その後にインビボ治療において使用されうる。放射性核種の例として、特に212Bi、131I、186Re、および90Yが挙げられる。放射性核種は、放射線療法の技術分野で公知のように、細胞を局所的に照射し、様々な細胞内病変をもたらすことにより、その細胞毒性効果を発揮する。融合タンパク質に複合しうる細胞毒性薬は、限定はされないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、およびマイトマイシンCを含む。細胞毒性薬は、DNA、RNA、およびタンパク質合成を含む重要な細胞プロセスに干渉する。薬剤のこれらクラス当該技術分野で公知、およびそれらの作用機序のより完全な提示については、GoodmanA.G.ら、GoodmanandGilmansThePharmacologicalBasisofTherapeutics、第8版、MacmillanPublishingCol、1990年、Katzung編、BasicandClinicalPharmacology、第5版、768-769頁、808-809頁、896頁、AppletonandLangeNorwalk,Conn.を参照のこと。本明細書で使用される用語免疫グロブリン融合タンパク質は、本発明の免疫グロブリン融合タンパク質の断片を含む。かかる断片は、本発明の範囲内に含まれるように意図される。例えば、一旦分子が単離されると、それらはプロテアーゼで切断され、ヒトCad-11のEC1ドメインに結合可能な状態を保持する断片が生成されうる。ペプチドアンタゴニスト本発明のカドヘリン-11アンタゴニストはまた、カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインに結合するペプチドでありうる。ペプチドは、任意の適切なL-および/またはD-アミノ酸、例えば一般的なα-アミノ酸例えば、アラニン、グリシン、バリン、非α-アミノ酸例えば、β-アラニン、4-アミノ酪酸、6-アミノカプロン酸、サルコシン、スタチン、および異常アミノ酸例えば、シトルリン、ホモシトルリン、ホモセリン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチンを含みうる。ペプチド上のアミノ、カルボキシルおよび/または他の官能基は、遊離例えば未修飾状態でありうるかまたは適切な保護基で保護されうる。アミノおよびカルボキシル基における適切な保護基、および保護基を付加または除去するための方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、GreenおよびWuts、ProtectingGroupsinOrganicSynthesis、JohnWileyandSons、1991年において開示されている。ペプチドの官能基はまた、当該技術分野で公知の方法を用いて誘導体化例えばアルキル化されうる。ペプチドCad-11アンタゴニストは、必要に応じて、1つ以上の修飾例えば、アミノ酸リンカー、アシル化、アセチル化、アミド化、メチル化、末端修飾因子例えば循環修飾を含みうる。ペプチドはまた、化学修飾例えば、N-メチル-α-アミノ基置換を含みうる。さらに、ペプチドアンタゴニストは、公知および/または天然ペプチド類似体、例えば、保存的アミノ酸残基置換を有するペプチド類似体でありうる。これらの修飾は、そのカドヘリン-11アンタゴニスト活性を含むペプチドの様々な特性例えば、溶解度、結合性を改善しうる。Cad-11アンタゴニストは、線状の分岐または環状でありうるペプチド、例えばいくつかのアミド結合を含むヘテロ原子環構造を有するペプチドである。特定の実施形態では、ペプチドは環状ペプチドである。かかるペプチドは、標準的技術を用い、当業者によって生成されうる。例えば、ペプチドは、酵素的または化学的切断によって天然タンパク質から誘導または除去されうるか、あるいは適切な方法、例えば、固相ペプチド合成例えばメリフィールド型合成によって合成されうる例えば、Bodanszkyら、PeptideSynthesis、JohnWileySons、第2版、1976年を参照。カドヘリン-11アンタゴニストであるペプチドもまた、例えば組換えDNA法または他の適切な方法を用いて生成されうる例えば、SambrookJ.およびRussellD.W.、MolecularCloning:ALaboratoryManual、第3版、ColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYork、2001年を参照。ペプチドは、数種から多種の別々の分子種を含むライブラリに合成され、構築されうる。かかるライブラリは、コンビナトリアル化学の方法を用いて調製され、任意の適切な方法を用いてスクリーニングされ、ライブラリが所望の生物学的活性を有するペプチドを含むか否かが判定されうる。次いで、かかるペプチドアンタゴニストは適切な方法を用いて単離されうる。ペプチド模倣アンタゴニストカドヘリン-11アンタゴニストはまた、ペプチド模倣体でありうる。例えば、多糖類はペプチドと同じ官能基を有するように調製されうる。ペプチド模倣体は、例えば、ペプチド剤の三次元構造を、それが結合されるかまたは標的分子に結合することになる環境内で確立することによって設計されうる。ペプチド模倣体は、少なくとも2つの成分、1つ以上の結合部分および骨格または支持構造を含む。結合部分は、標的分子、例えばCad-11のEC1ドメイン内のアミノ酸と例えば疎水性またはイオン性相互作用を通じて反応するかまたは複合体を形成することになる化学原子または基である。例えば、ペプチド模倣体中の結合部分は、ペプチドまたはタンパク質アンタゴニスト中のものと同じでありうる。結合部分は、ペプチドアンタゴニスト中の結合部分と同一または類似の方法で受容体と反応する原子または化学基でありうる。例えば、コンピュータ化学を用い、例えばCad-11タンパク質のEC1ドメイン内のポケット配列に結合しうる、カドヘリン-11タンパク質のEC1ドメインのドナー配列のペプチド模倣体が設計されうる。ペプチド中の塩基性アミノ酸に対するペプチド模倣体の設計における使用に適した結合部分の例として、アミン、アンモニウム、グアニジンおよびアミドまたはホスホニウムなどの窒素を含有する基が挙げられる。酸性アミノ酸に対するペプチド模倣体の設計における使用に適した結合部分の例として、例えば、カルボキシル、低級アルキルカルボン酸エステル、スルホン酸、低級アルキルスルホン酸エステルまたは亜リン酸またはそのエステルが挙げられる。支持構造は、1つ以上の結合部分に結合される場合に、ペプチド模倣体の三次元配置を提供する化学的実体である。支持構造は有機または無機でありうる。有機支持構造の例として、有機合成高分子の多糖類、ポリマーまたはオリゴマー例えば、ポリビニルアルコールまたはポリラクチドが挙げられる。支持構造がペプチド骨格または支持構造と実質的に同じサイズおよび次元を有することは好ましい。これは、ペプチドおよびペプチド模倣体の原子および結合のサイズを計算または測定することによって決定されうる。一実施形態では、ペプチド結合の窒素が酸素または硫黄と置換され、例えばポリエステル骨格を形成しうる。別の実施形態では、カルボニルがスルホニル基またはスルフィニル基と置換され、それによりポリアミド例えばポリスルホンアミドを形成しうる。ペプチドの逆アミドが作製されうる例えば1つ以上の-CONH-基を-NHCO-基と置換する。さらに別の実施形態では、ペプチド骨格はポリシラン骨格と置換されうる。これらの化合物は、公知の方法によって作製されうる。例えば、ポリエステルペプチド模倣体は、水酸基をアミノ酸上の対応するα-アミノ基と置換し、それにより、ヒドロキシ酸を調製し、ヒドロキシ酸を連続的にエステル化し、場合により塩基性および酸性側鎖を遮断し、副反応を最小化することによって調製されうる。適切な化学合成経路の決定は、一般に化学構造の決定時に容易に同定されうる。ペプチド模倣体は、合成され、数種から多種の別々の分子種を含むライブラリに構築されうる。かかるライブラリは、コンビナトリアル化学の周知の方法を用いて調製され、スクリーニングされ、ライブラリが所望の活性を有する1つ以上のペプチド模倣体を含むか否かが判定されうる。次いで、かかるペプチド模倣アンタゴニストは適切な方法によって単離されうる。小分子アンタゴニストカドヘリン-11アンタゴニストはまた、小分子でありうる。小分子の例として、有機化合物、有機金属化合物、無機化合物、および有機、有機金属または無機化合物の塩が挙げられる。小分子中の原子は、典型的には共有および/またはイオン結合を介して共に連結される。小有機分子中の原子の配列は、鎖例えば、炭素-炭素鎖または炭素-ヘテロ原子鎖を示しうるか、あるいは炭素原子を有する環、例えばベンゼンまたは多環系、または炭素およびヘテロ原子の組み合わせ、すなわちピリミジンまたはキナゾリンなどのヘテロ環を示しうる。小分子は任意の分子量を有しうるが、一般に約5,000ダルトン未満の分子を含む。例えば、かかる小分子は、約1000ダルトン未満でありえ、好ましくは約750ダルトン未満であるか、またはより好ましくは約500ダルトン未満である。小分子および他の非ペプチドカドヘリン-11アンタゴニストは、天然に見出され例えば、同定され、単離され、精製され、および/あるいは例えば、従来の有機合成、生物媒介性bio-mediated合成、またはそれらの組み合わせによって合成的に生成されうる。例えば、Ganesan、DrugDiscov.Today、71:47-55頁2002年1月;Lou、DrugDiscov.Today、624:1288-1294頁2001年12月を参照のこと。天然小分子の例として、限定はされないが、ホルモン、神経伝達物質、ヌクレオチド、アミノ酸、糖類、脂質、およびそれらの誘導体が挙げられる。本発明に記載の小分子カドヘリン-11アンタゴニストおよびその生理学的に許容されうる塩は、例えば、Cad-11タンパク質のEC1ドメイン内のドナー配列と、別のカドヘリン-11の結合ポケットへの結合に対して直接競合し、Cad-11タンパク質のEC1ドメイン内の結合ポケットと、別のカドヘリン-11のドナー配列への結合に対して直接競合することによりカドヘリン-11タンパク質の同型結合を阻害しうる。核酸アンタゴニスト本発明のCad-11アンタゴニストはまた、ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインに結合する核酸分子例えばオリゴヌクレオチドでありうる。適切な核酸Cad-11アンタゴニストは、特定の目的の分子例えばヒトカドヘリン-11のEC1ドメインに、古典的なワトソン-クリック塩基対合以外の相互作用を通じた高い親和性および特異性で結合可能なアプタマーを含むTuerkおよびGold、Science249:505頁1990年;EllingtonおよびSzostak、Nature346:818頁1990年。ファージディスプレイまたはモノクローナル抗体MAbによって作成されるペプチドのようなアプタマーは、選択される標的に特異的に結合可能であり、結合を通じ、それらの標的が機能する能力を遮断する。ランダム配列オリゴヌクレオチドのプールからのインビトロ選択プロセスによって生成されるアプタマーは、成長因子、転写因子、酵素、免疫グロブリン、および受容体を含む100を超えるタンパク質に対して作成されている。典型的なアプタマーは、サイズが10~15kDa30~45ヌクレオチドであり、その標的にnM以下の親和性で結合し、また密接に関連した標的に対して識別する例えば典型的には同じ遺伝子ファミリー由来の他のタンパク質に結合することがない。一連の構造試験によると、アプタマーが、抗体-抗原複合体における親和性および特異性を駆動する同じタイプの結合相互作用水素結合、静電的相補性、疎水性接触、立体的排除などを使用可能であることが示されている。目的の標的例えばヒトCad-11タンパク質のEC1ドメインに結合するアプタマーは、例えば米国特許第5,475,096号明細書および米国特許第5,270,163号明細書に記載の指数的濃縮によるリガンドの系統的進化SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichmentSELEXとして公知の標準的プロセスを使用し、作成され、同定されうる。カドヘリン-11アンタゴニストの同定小分子を含む、カドヘリン-11結合特異性を有する作用物質は、スクリーニング、例えば、化合物および/またはライブラリ例えば、化学物質、ペプチド、核酸ライブラリのハイスループットスクリーニングにおいて同定されうる。ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインに特異的に結合する抗体は、例えば市販のコンビナトリアル抗体ライブラリDyaxCorp.、MorphoSysAGのスクリーニングによって同定されうる。適切なコンビナトリアル抗体ライブラリおよびこれらのライブラリをスクリーニングする標準的方法は、Hoetら、NatureBiotechnology233:344-348頁2005年およびRauchenbergerら、J.Biol.Chem.27840:38194-38205頁2003年これらの内容は参照により本明細書中に援用されるに記載されている。分子のかかるライブラリまたは集合体はまた、周知の化学的方法を用いて調製されうる。あるいは、ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインに特異的に結合するマウス抗体は、例えば、マウスを、アジュバントを伴うEC1タンパク質ドメインまたはEC1ペプチドで免疫し、抗原に対する耐性を破壊することによって同定されうる。これらの抗体は、所望の特異性および活性についてスクリーニングされ、次いで公知の技術を用いてヒト化され、ヒト疾患の治療に適した作用物質が作成されうる。化合物または小分子は、例えば、ChemicalRepositoryoftheNationalCancerInstituteおよびMolecularLibrariesSmallMoleculesRepositoryPubChemから入手可能な極めて多数の化合物のライブラリ、ならびにHarvardUniversityのInstituteofChemistryandCellBiologyのライブラリおよび商業的供給源から入手可能な他のライブラリ例えば、Chembridge、Peakdale、CEREP、MayBridge、Bionetから同定されうる。分子のかかるライブラリまたは集合体はまた、周知の化学的方法、例えばコンビナトリアル化学の周知の方法を用いて調製されうる。ライブラリはスクリーニングされ、カドヘリン-11に結合し、それを阻害する化合物が同定されうる。同定された化合物は、周知の医薬品化学の方法を用い、さらなる多様性におけるリード化合物としての役割を果たしうる。例えば、リードの構造変異体である化合物の集合体は、調製され、カドヘリン-11結合および/または阻害活性についてスクリーニングされうる。これは、生物学的活性に対する化合物の構造に関連する構造活性相関の開発をもたらしうる。適切な結合および阻害活性を有する化合物が、インビボ使用のためにさらに開発されうる。カドヘリン-11に結合する作用物質は、カドヘリン-11のアンタゴニスト活性についてさらに評価されうる。例えば、カドヘリン-11タンパク質を含有する組成物をスクリーニングまたは結合アッセイに使用し、カドヘリン-11タンパク質に結合し、拮抗する作用物質が検出および/または同定されうる。使用に適した組成物として、例えば、カドヘリン-11タンパク質を天然に発現する細胞例えば滑膜細胞、かかる細胞の抽出物、および組換えカドヘリン-11タンパク質が挙げられる。カドヘリン-11タンパク質に結合する作用物質は競合的結合アッセイにおいて同定可能であり、例えばそこでは、カドヘリン-11の参照作用物質referenceagentへの結合に対する試験作用物質の阻害能が評価される。参照作用物質は、EC1ドメインを含む完全長Cad-11タンパク質またはその一部でありうる。参照作用物質は、適切な標識例えば、ラジオアイソトープ、エピトープ標識、親和性標識例えば、ビオチンおよびアビジンまたはストレプトアビジン、スピン標識、酵素、蛍光基、化学発光基、染料、金属例えば、金、銀、磁気ビーズで標識され、アッセイにおいてカドヘリン-11タンパク質を飽和させるのに必要とされる標識参照作用物質の量が測定されうる。カドヘリン-11タンパク質と試験作用物質の間での複合体の形成の特異性は、適切な対照例えば、未標識作用物質、標識単独を使用して測定されうる。参照作用物質とカドヘリン-11タンパク質の間での複合体の形成に対する試験作用物質の阻害能は、標識参照作用物質の特異的結合の50阻害IC50値に必要とされる試験作用物質の濃度として測定されうる。特異的結合は、好ましくは全結合例えば複合体中の全標識-非特異的結合として規定される。非特異的結合は、好ましくは過剰な未標識参照作用物質の存在下で形成される複合体中でさらに検出される標識の量として定義される。本方法における使用に適する参照作用物質は、カドヘリン-11に特異的に結合する分子および化合物、例えばカドヘリン-11に結合する抗体を含む。カドヘリン-11タンパク質に拮抗する作用物質は、カドヘリン-11の1つ以上の活性、例えば結合活性など例えば同型Cad-11への結合に対して拮抗する低下させる、阻止する、阻害する能力を有する作用物質のスクリーニングによって同定されうる。かかる活性は、適切なインビトロまたはインビボアッセイを使用して評価されうる。カドヘリン-11活性に対する典型的なアッセイについては、先行的に記載がなされているPatelSDら、Cell124:1255-1268頁2006年;Leeら、Science315:1006-1010頁2007年。一旦カドヘリン-11アンタゴニストが同定されると、カドヘリン-11アンタゴニストが、細胞内でのカドヘリン-11活性に関連した1つ以上の生物学的機能または特性に対して干渉する例えば、低下させる、阻害する、阻止する能力は、例えば、カドヘリン-11に関連した特定の生物学的機能または特性を測定するように設計された細胞に基づくアッセイを使用し、評価されうる。カドヘリン-11の発現および/または活性に関連することが公知である生物学的機能および特性は、限定はされないが、細胞接着、細胞遊走、細胞浸潤、細胞分取、細胞凝集、細胞再編成、組織の完全性および構造の維持、細胞増殖の接触阻害、ならびに癌例えば腫瘍細胞の悪性形質転換を含むKienerおよびBrenner、ArthritisResTher.72:49-54頁2005年。さらに、Cad-11アンタゴニストは、本明細書中で、滑膜細胞による活性MMPの生成を阻害することが示されている。カドヘリンの1つ以上の生物学的機能の評価に適したアッセイは当業者に公知であり例えば、PatelSDら、Cell124:1255-1268頁2006年、例えば本明細書中に記載の細胞凝集アッセイを含む実施例、材料および方法の項を参照。治療の方法いかなる1つの理論に制約されるものではないが、Cad-11のEC1ドメインの最初の約35個のアミノ酸例えば約33~約37個のアミノ酸が同型カドヘリン結合にとって必要とされ、Cad-11のこの領域に特異的に結合する作用物質がCad-11分子間の結合を有効に阻害しうると考えられる。したがって、かかる作用物質は、細胞例えば滑膜細胞におけるCad-11の発現または活性に関連した障害例えば、炎症性障害、線維症、癌の治療および予防において有用である。したがって、本発明の一態様は、哺乳動物被験体におけるカドヘリン-11媒介性障害を治療するための方法であって、ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインペプチド配列番号3に結合する治療有効量のカドヘリン-11アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む方法に関する。本明細書で使用されるカドヘリン-11媒介性障害は、カドヘリン-11タンパク質を発現する細胞が関与するか、またはそれによって媒介される例えば、引き起こされる疾患、障害、または症状を示す。本発明の方法により治療されうるカドヘリン-11媒介性障害として、限定はされないが、炎症性障害例えば炎症性関節障害、線維症障害例えば、真皮線維症、肺線維症、および癌が挙げられる。本発明の方法を用い、哺乳動物例えばヒトにおけるカドヘリン-11媒介性障害は、本発明のカドヘリン-11アンタゴニスト例えば、抗体、融合タンパク質、小分子、核酸、ペプチド、ペプチド模倣体を、治療効果を提供するのに十分な量で投与し、例えば、カドヘリン-11を発現する細胞例えば、滑膜細胞、線維芽細胞、腫瘍細胞の凝集を阻害するか、またはその細胞の遊走を阻害するか、またはその細胞による活性プロテアーゼもしくは炎症性分子の発現を阻害することによって治療されうる。したがって、本発明の一態様は、哺乳動物被験体における炎症性障害を治療するための方法であって、治療有効量の本発明のカドヘリン-11アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む方法に関する。炎症性障害は、一般に、炎症促進性分子例えば、炎症性サイトカインおよび成長因子の発現および免疫細胞例えば、マクロファージ、単球、リンパ球、形質細胞、白血球、線維芽細胞、好中球、T細胞の活性化を特徴とする。炎症性障害として、例えば、炎症性関節障害、炎症性腸疾患例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、皮膚炎例えば湿疹、アミロイド腎症、糸球体腎炎、血管炎、骨盤内炎症性疾患、慢性前立腺炎、グレーブス眼症が挙げられる。特定の実施形態では、炎症性障害は自己免疫障害である。特定の実施形態では、本発明は、哺乳動物被験体における炎症性関節障害を治療するための方法であって、治療有効量の本発明のカドヘリン-11アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む方法に関する。炎症性関節障害は、関節接合部の細胞例えば滑膜細胞におけるカドヘリン-11の発現に関連するかまたはそれによって特徴づけられる任意の疾患でありうる。本発明によって治療されうる炎症性関節障害の例として、限定はされないが、リウマチ様関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、若年性慢性関節炎、慢性ライム病、および全身性紅斑性狼瘡に関連した関節炎が挙げられる。特定の実施形態では、炎症性関節障害はリウマチ様関節炎である。別の態様では、本発明は、哺乳動物被験体における線維症を治療するための方法であって、治療有効量の本発明のカドヘリン-11アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む方法に関する。本明細書で使用される用語線維症は、器官または組織における、修復または反応過程としての過剰線維性結合組織の形成または発達を示す。線維症の例として、限定はされないが、血管線維症例えば、肺高血圧症に関連した血管線維症、腎線維症、肝線維症例えば肝硬変、皮膚/真皮線維症例えば強皮症、肺lung/肺pulmonary線維症例えば特発性肺線維症、骨髄繊維症、心内膜心筋線維症、関節線維症、中皮線維症、眼線維症、消化管線維症、および間質性線維症が挙げられる。特定の実施形態では、線維症は肺pulmonaryまたは肺lung線維症である。別の実施形態では、線維症は真皮または皮膚線維症である。いかなる特定の理論にも拘束されたくはないが、特定のタイプの腫瘍細胞は、カドヘリン-11を発現すると信じられており、カドヘリン-11は腫瘍転移を促進しうる。したがって、本発明のCad-11アンタゴニストは、被験体における腫瘍形成、増殖、および/または転移を阻害するために使用しうる。したがって、別の態様では、本発明は、哺乳動物被験体における癌例えば、Cad-11を発現する細胞によって特徴づけられる癌を治療する方法であって、治療有効量の本発明のカドヘリン-11アンタゴニストを被験体に投与するステップを含む方法に関する。Cad-11タンパク質を発現する細胞を含む癌として、例えば、白血病例えば、AML、CLL、前リンパ性白血病、肺癌例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、脳腫瘍例えば、星状細胞腫、神経膠腫、膠芽腫、髄芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、上皮癌、鼻咽腔癌例えば、口腔または喉頭扁平上皮癌、リンパ腫例えば濾胞性リンパ腫、子宮癌例えば悪性線維性組織球腫、肝癌例えば肝細胞癌、頭頸部癌例えば頭頸部扁平上皮癌、腎癌、雄性胚細胞腫瘍、悪性中皮腫、骨髄異形成症候群、卵巣癌、膵臓または胆汁癌、前立腺癌、甲状腺癌例えば散発性濾胞甲状腺腫瘍、および尿路上皮癌が挙げられる。一態様では、治療有効量のカドヘリン-11アンタゴニストがそれを必要とする患者に投与される。投与されるべきカドヘリン-11アンタゴニストの量例えば治療有効量は、本明細書中で提供される指針を用いて臨床医によって決定可能であり、当該技術分野で公知の他の方法は、例えば、選択される特定の作用物質、被験体の年齢、感受性、薬剤に対する耐性および全体的な健康状態overallwell-beingを含むいくつかの要素に依存している。例えば、抗体であるCad-11アンタゴニストに適した用量は、約0.01mg/kg~約300mg/kg体重/処置および好ましくは約0.01mg/kg~約100mg/kg、約0.01mg/kg~約10mg/kg、約1mg/kg~約10mg/kg体重/処置でありうる。小分子Cad-11アンタゴニストに適した用量は、約0.001mg/kg~約100mg/kg、約0.01mg/kg~約100mg/kg、約0.01mg/kg~約10mg/kg、約0.01mg/kg~約1mg/kg体重/処置でありうる。タンパク質またはペプチド線状、環状、模倣体であるカドヘリン-11アンタゴニストに適した用量は、約0.1μg/mL~約200μg/mLのペプチドの血漿濃度をもたらすことになる。特定の作用物質、患者および癌における用量を決定することは、十分に当業者の能力の範囲内にある。好ましくは、同用量は、有害な副作用例えば、免疫原性応答、悪心、目まい、胃の不快感、過粘稠度症候群、鬱血性心不全、脳卒中、肺水腫を引き起こさないか、または最低限のそれらをもたらす。治療有効量のカドヘリン-11アンタゴニストは、単独でかまたは1つ以上の他の治療剤例えば抗炎症剤、化学療法剤と組み合わせて投与されうる。炎症性関節障害、特にRAの治療にとって有用な適切な抗炎症剤は、本発明のCad-11アンタゴニストと組み合わせて投与可能であり、限定はされないが、i非ステロイド抗炎症薬NSAID;例えば、デトプロフェンdetoprofen、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、アスピリン、サリチル酸コリン、サルサラート、ならびにサリチル酸ナトリウムおよびサリチル酸マグネシウム;iiステロイド例えば、コルチソン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン;iiiDMARD、すなわち、疾患修飾性抗リウマチ薬例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、レフルノミド、シクロホスファミド、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、D-ペニシラミン、ミノサイクリン、および金;またはiv組換えタンパク質例えばENBREL登録商標エタネルセプト、可溶性TNF受容体、REMICADE登録商標インフリキシマブ、キメラモノクローナル抗TNF抗体、ORENCIA登録商標アバタセプト、可溶性CTLA4受容体、ACTEMRA登録商標トシリズマブ、IL-6受容体に対するモノクローナル抗体、およびRITUXAN登録商標リツキシマブ、CD20に対するモノクローナル抗体を含む。したがって、カドヘリン-11アンタゴニストは、併用療法例えば1つ以上の他の治療剤を伴うの一部として投与されうる。Cad-11アンタゴニストは、1つ以上の他の治療剤の前、後またはそれと併用的に投与されうる。一部の実施形態では、カドヘリン-11アンタゴニストおよび他の治療剤は、別々の製剤または関節製剤のいずれかとして同時に例えば併用的に同時投与されうる。あるいは、作用物質は、熟練した臨床医が定めた適切な期間内で例えば治療の薬学的効果の重複overlapを可能にするための十分な時間、別々の組成物として連続的に投与されうる。カドヘリン-11アンタゴニストおよび1つ以上の他の治療剤は、所望の治療効果例えば関節炎症の低減および/または阻害を得るのに適した順序およびスケジュールで、単回用量または複数回用量で投与されうる。投与の適した用量およびレジメンは、臨床医によって決定可能であり、選択される作用物質、薬学的調合物および投与の経路、様々な患者因子ならびに他の検討事項に依存する。治療の有効性例えば、関節炎症の低減もしくは除去および/または関節炎症の阻止もしくは阻害は、任意の適切な方法例えばイメージングMRI、NMRによって判定されうる。本発明の方法によると、治療有効量のCad-11アンタゴニストが哺乳動物被験体に投与され、炎症性関節障害が治療される。用語哺乳動物被験体は、霊長類例えばヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、ラット、マウス、または他のウシ、ヒツジ、ウマ、イヌ、ネコ、齧歯類およびマウス種などの哺乳動物を含むように本明細書中で定義される。Cad-11アンタゴニストである作用物質は、種々の経路により、哺乳動物被験体に投与されうる。例えば、作用物質は、例えば、局所例えば、クリーム、軟膏、または経鼻例えば、溶液、懸濁液を含む、任意の適切な非経口または非経口でないnonparenteral経路によって投与されうる。非経口投与は、例えば、関節内、筋肉内、静脈内、脳室内、動脈内、髄腔内、皮下、または腹腔内投与を含みうる。作用物質はまた、経口的例えば、カプセル、懸濁液、錠剤または食事の中に、経皮的、皮内的、局所的、吸入例えば、気管支内、鼻腔内、経口吸入または点鼻intranasaldropにより、経粘膜的、または経直腸的に投与されうる。投与は、必要に応じて局所性または全身性でありえ、2つ以上の経路が必要に応じて併用されうる。Cad-11アンタゴニストの局所的投与は、関節内注射によって行われうる例えば、作用物質の関節への直接注射。好ましい投与の形式は、選択される特定の作用物質に依存して変化しうる。しかし、全身性静脈内または皮下投与は、一般に抗体にとって好ましい。送達はまた、患者の脳もしくは体腔への注射または時限放出または持続放出のマトリックス送達システムの使用、またはミセル、ゲルおよびリポソームを使用するオンサイト送達によるものでありうる。噴霧デバイスNebulizingdevice、粉末吸入器、およびエアロゾル化溶液aerosolizedsolutionは、かかる製剤を気道に投与するのに用いられうる方法を代表する。送達は、インビトロ、インビボ、またはエクスビボでありうる。タンパク質例えば融合タンパク質である作用物質は、組換えタンパク質のインビボ発現を介して投与されうる。インビボ発現は、適切な方法に従う体細胞発現によってなされうる例えば米国特許第5,399,346号明細書を参照。さらに、タンパク質をコードする核酸はまた、送達のためにレトロウイルス、アデノウイルスまたは他の適切なベクター好ましくは複製欠損型感染性ベクターに組み込まれうるか、あるいは送達のため、タンパク質を発現可能な形質移入または形質転換宿主細胞に導入されうる。後者の実施形態では、細胞は、治療有効量のタンパク質を発現するのに有効な量で、移植単独またはバリアデバイスbarrierdeviceで、注射、または別の方法での導入がなされうる。核酸に基づくカドヘリン-11アンタゴニスト例えばアプタマーは、いくつかの方法で目的の哺乳動物被験体に導入されうる。例えば、核酸は、宿主細胞内で発現ベクターまたはPCR産物から内因性に発現されうるか、あるいは合成または改変組成物例えば、リポソーム、ポリマー、ナノ粒子に封入され、それは次いで哺乳動物被験体の血流に例えば、注射、注入により直接導入されうる。抗カドヘリン-11核酸または核酸発現ベクター例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴および単純ヘルペスウイルスベクター、改変ベクター、非ウイルス媒介ベクターはまた、確立された遺伝子治療の方法およびプロトコルを用いて哺乳動物被験体に直接導入されうる例えば、TochilinV.P.AnnuRevBiomedEng8:343-375頁、2006年;RecombinantDNAandGeneTransfer、OfficeofBiotechnologyActivities、NationalInstitutesofHealthGuidelinesを参照。カドヘリン-11アンタゴニスト例えば小分子である作用物質は、薬学的または生理学的組成物の一部として、例えば、カドヘリン-11アンタゴニストおよび薬学的に許容されうる担体を含む医薬組成物の一部として哺乳動物被験体に投与されうる。カドヘリン-11アンタゴニストを含む調合物または組成物あるいはカドヘリン-11アンタゴニストおよび1つ以上の他の治療剤例えば抗炎症剤を含む組成物は、選択される投与の経路例えば、溶液、エマルジョンまたはカプセルに応じて変化することになる。適切な薬学的担体は、カドヘリン-11アンタゴニストと相互作用しない不活性成分を含有しうる。例えばRemington’sPharmaceuticalSciences、MackPublishingCompanyEaston,PAに記載される標準の薬学的調合技術が用いられうる。非経口投与に適した薬学的担体として、例えば、滅菌水、生理学的食塩水、静菌性生理食塩水bacteriostaticsaline約0.9mg/mlのベンジルアルコールを含有する生理食塩水、リン酸塩緩衝生理食塩水、ハンクス溶液、リンガー乳酸塩などが挙げられる。調合物はまた、活性成分の有効性を高める少量の物質例えば、乳化剤、可溶化剤、pH緩衝剤、浸潤剤を含みうる。組成物の封入硬質ゼラチンまたはシクロデキストランのコーティング中などの方法は、当該技術分野で公知である。吸入においては、作用物質は、投与のため、可溶化され、適切なディスペンサー例えば、アトマイザーまたはネブライザーまたは加圧エアロゾルディスペンサーに装填されうる。薬学的作用物質は、中性化合物または塩もしくはエステルとして投与されうる。薬学的に許容されうる塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸または酒石酸などに由来する遊離アミノ基で形成される塩、ならびにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する遊離カルボキシル基で形成される塩を含む。アミンまたは他の塩基性基を有する化合物の塩は、例えば、適切な有機または無機酸、例えば塩化水素、臭化水素、酢酸、過塩素酸などとの反応によって得られうる。第四級アンモニウム基を有する化合物はまた、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、過塩素酸塩などの対アニオンを有する。カルボン酸または他の酸性官能基を有する化合物の塩は、適切な塩基、例えばヒドロキシド塩基との反応によって調製されうる。酸性官能基の塩は、ナトリウムまたはカリウムなどの対カチオンを有する。本発明は、ここでは次の実施例によって例示されることになり、それらは決して限定するように意図されていない。実施例1:ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインのN末端の35個のアミノ酸中のエピトープに対する結合特異性を有するFabの同定材料および方法ウエスタンブロッティングタンパク質を、標準的方法を用い、SDS-PAGEによって分離し、ニトロセルロースNC膜に移した。つまり、NC膜をトリス緩衝生理食塩水-TweenTBST8.8g/LのNaCl、0.2g/LのKCl、3g/Lのトリス塩基、500ul/LのTween-20、pHを7.4ですすいだ。膜を、TBST中に溶解した4BSAで、22°Cで1時間ブロッキングした。NC膜をそれぞれTBSTで5分間にわたって3回すすいだ。マウス抗ヒトCad-11抗体をTBST中で0.5μg/mlに希釈し、NCを22°Cで1時間インキュベートした。NC膜をそれぞれTBSTで5分間にわたって3回すすいだ。西洋わさびペルオキシダーゼHRPと複合したヤギ抗マウスIg抗体をTBST中で1μg/mlに希釈し、NC膜を、二次溶液中、22°Cの室温RTで最低時間の1時間インキュベートした。NC膜をそれぞれTBSTで5分間にわたって3回すすいだ。シグナルを、標準のHRP方法を用いて発生させた。ELISA抗原5μg/mlもしくは50μgのCad-11-EC-1-Fcまたは5μg/mlのカドヘリンペプチドのいずれかを緩衝液中で希釈し、使用し、プレートを4°Cで一晩コーティングした。プレートを洗浄し、次いで、PBS希釈緩衝液中、1.5BSA、5低脂肪乳粉末PBS中、1.5BSA、2.5低脂肪乳粉末、0.1Tween-20でブロッキングした。次いで、プレートを、抗Cad-11ヒトfAbを有する細菌溶解物と共にインキュベートするか、または抗Cad-11ヒトfAbで1時間精製した。洗浄後、二次抗体Cy5複合hu-Fab1/100に希釈を25分間適用した。次いで、プレートを洗浄し、得られた蛍光を読み取った。結果先行的に報告されたカドヘリン-11に特異的な3つの抗体セットを、ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインに対する結合能について試験した。これらの抗体は、カドヘリン-11ノックアウトまたは欠損マウスにおいてマウスカドヘリン-11-Fc融合タンパク質免疫原に対して産生された抗体Leeら、Science315:1006-1010頁2007年、CHO細胞内で既に生成されたヒトカドヘリン-11-Fc融合タンパク質免疫原に対する、カドヘリン-11野生型マウスにおいて産生された抗体Valenciaら、J.Exp.Med.20012:1673-1679頁2004年、および、ヒトカドヘリン-11のEC1-3ドメインを有する細菌によって生成されたタンパク質に対する、カドヘリン-11野生型マウスにおいて産生された抗体を含んだ。これらの抗体を、ウエスタン分析により、ヒトCad-11のEC1ドメインのみカドヘリン-11-EC1-Fc、Cad-11のEC1およびEC2ドメインCad11-EC1/2-FcまたはCad-11の全部で5つのECドメインカドヘリン-11-EC1-5-Fcを有する融合タンパク質に対する結合能について試験した。ウエスタンブロットに対し、試験した抗体の中で、EC1-FcまたはEC1-2-Fc融合タンパク質を認識するものは全くなかった図1A。しかし、3つの試験セットの各々に由来する抗体は、細胞外ドメイン1~5を含むヒトCad-11-Fc融合タンパク質を認識した図1B。これらの結果は、試験抗体がヒトCad-11のEC1またはEC2ドメインに結合しなかったが、このタンパク質の細胞外領域内の他の部分のエピトープを認識したことを示す。Cad-11発現細胞に結合する入手可能な公表された抗Cad-11抗体13C2、23C6、5F82LifespanScienceおよび283416RDSystems、ならびにCad-11EC1結合抗体H1M1、および対照抗体MOPCを、ELISAにより、ヒトCad-11のEC1ドメインのみカドヘリン-11-EC1-FcまたはCad-11の全部で5つのECドメインカドヘリン-11-EC1-5-Fcを有する融合タンパク質に対する結合能について試験した。入手可能な公表された、試験した抗Cad-11抗体の中で、EC1-Fcを認識するものは全くなかった図1B、白棒283416についてのデータはここでは示されない。しかし、Cad-11EC1結合H1M1抗体は、カドヘリン-11-EC1-Fcおよびカドヘリン-11-EC1-5-Fcの双方に結合した図1B、黒棒。対照MOPC抗体は、いずれの融合タンパク質にも結合しなかった。これらの結果は、入手可能な公表された抗Cad-11抗体はヒトCad-11のEC1ドメインに結合しないが、このタンパク質の細胞外領域内の他の部分のエピトープを認識したことを示す。ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインのN末端の35個のアミノ酸中のエピトープに特異的な抗体を産生するため、ヒトFabをコードするファージディスプレイライブラリMorphoSysAGをスクリーニングした。候補Fabを、2つの選択基準-ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインの最初の35個のアミノ酸を含むペプチドに結合するための陽性選択、および2つの密接に関連し、高度に相同なカドヘリン、カドヘリン-8およびMN-カドヘリンのEC1ドメイン由来の対応するペプチドに結合するための陰性選択を使用して同定した図2。ELISAを使用し、結合を評価した。2つのスクリーニングを実施した。第1のスクリーニングでは、カドヘリン-11のEC1ペプチドに結合する96個のFabクローンをELISAによって同定した。7つの候補FabがCad-11のEC-1ペプチドに結合したが、これらのうち2つだけがEC-1ペプチドおよびEC1-2-Fc融合タンパク質の双方に結合した。これら2つのFabの一方はまたMN-Cadペプチドに結合した。したがって、7つのFabクローンのうち1つだけがEC1-Fc融合タンパク質に特異的に結合したが、MN-Cadおよびカドヘリン-8の双方のEC1ドメインペプチドに結合しなかった。第2のスクリーニングでは、カドヘリン-11のEC1ペプチドおよびEC1-2-Fc融合タンパク質に対して特異性を示す、96Fabのうち1つだけクローンF9が、MN-Cadおよびカドヘリン-8のEC1ドメインペプチドに結合できなかったことから、同様の結果が認められた図3。試験するCad-11のEC1ドメインに結合するFabの大部分が、Cad-11のEEYCAR配列と重なるEEYCAR配列を有するMN-Cadペプチドとの交差反応を示した。実施例2:インビトロアッセイにおいてカドヘリン-11のEC1ドメインに結合するFabがCad-11媒介性細胞凝集を阻害する材料および方法インビトロカドヘリン-11凝集アッセイ431-D細胞は、懸濁液中で成長し、通常はカドヘリンを全く発現せず、凝集しない。431-D-11細胞は、遺伝子組み換えにより、Cad-11が発現されている。431-D-11細胞を40分間にわたって培地中で単独でインキュベートし、それらが凝集し始める場合、ウェルの底に沈んだ細胞塊および懸濁液中の残りの非凝集細胞が測定され、凝集431-D-11の百分率が計算されうる。凝集アッセイにおいては、431-D-11細胞D-11細胞を、フラスコ内でサブコンフルエンスまで成長させ、次いで0.05トリプシン0.53mMEDTAを使用し、フラスコから除去した。約2×106個の431-D-11細胞を、2mlのSME培地ダルベッコ改良イーグル培地Dulbecco’sModifiedEagle’sMedium-高グルコース、0.1Mヘペス、pH7.4および5U/mlのDNAseに添加し、試験作用物質例えば、抗体、Fab、融合タンパク質の不在下または存在下のいずれかで、氷上で15分間プレインキュベートした。試験作用物質とのプレインキュベーション後、細胞を24ウェルプレート上の丸底ウェルに移し、ロータリーシェーカー上、30rpmで回転させながら、37°Cでインキュベートした。細胞は、凝集するにつれて、ウェルの底に沈む。0分後および40分後、試料の中央から200μlをウェルから除去し、25μlの8グルタルアルデヒドと混合し、細胞を固定した。200μlの固定した細胞の試料を9.8mlのCoulterCounter等張生理食塩溶液に添加し、CoulterCounterセットを使用し、8μm~24μmの閾値でカウントした。3の細胞カウント/試料を記録した。40分後の細胞の減少または凝集した細胞の0分時点での百分率に対する百分率を計算した。結果カドヘリン-11のEC1ドメインのN末端の35個のアミノ酸中のエピトープに対して結合特異性を有する候補FabクローンF9は、MN-CadまたはCad-8のEC1ドメインに結合しないものであり、インビトロでのカドヘリン-11細胞凝集アッセイを使用し、Cad-11媒介性細胞凝集に対する阻害能について試験した。候補Fabは、細胞のカドヘリン-11媒介性凝集を1μg/ml以下の濃度で有意に阻害した図4および5。それに対し、EC1/2ドメイン外部のCad-11の細胞外領域内のエピトープに結合する13C2抗体から作製したFabは、10μg/mlの濃度のみでカドヘリン-11の凝集を阻害し、これは、F9FabがCad-11の細胞外ドメインの他の部分に結合する抗体より低い濃度でCad-11活性をより効果的に阻害することを示唆する。Cad-11媒介性細胞凝集はまた、Cad-11単独、Cad-11およびCad-8、Cad-11およびMN-Cad、またはCad-11、Cad-8およびMN-Cadのいずれかに対して特異的な様々な抗カドヘリン-11-EC1ドメインFabによって阻害された図6および7。試験したすべてのカドヘリン-EC1-ドメインに特異的なFabは、対照試料例えばSME培地図6、GFPに特異的なFab図7に対し、インビトロで細胞凝集を阻害した。実施例3:ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインを有するカドヘリン-11/免疫グロブリン融合タンパク質の生成次のオリゴヌクレオチドプライマーを使用する、標準条件下で実施されるポリメラーゼ連鎖反応PCRを使用し、カドヘリン-11のEC1領域を、完全長ヒトカドヘリン-11cDNAをコードするベクターから調製しヒトCad-11をInvitrogenpCEP4登録商標ベクターのNot1およびKpn-1部位にクローン化し、EcoR1およびBglII部位それぞれフォワードおよびリバースプライマー内の下線の配列を参照を増幅産物に導入した。フォワードプライマー:リバースプライマー:増幅産物を制限酵素EcoR1およびBglIIで消化し、消化産物を、単離し、対応するEcoR1およびBglII部位を使用したpFUSE-hIgG2e1-Fc1ベクターInvivoGenにライゲートした。TOP10コンピテント細菌Invitrogenを、製造業者による説明に従い、ライゲーション産物で形質転換し、カドヘリン-11-EC1-Fcプラスミドを伴う細菌をゼオマイシンzeomycinで選択した。カドヘリン-11-EC1-Fcプラスミドを単離し、配列決定し、次いで使用し、293F細胞に一時的に形質移入した。条件培地を回収し、カドヘリン-11-EC1-Fc融合タンパク質配列番号9を、タンジェンシャルフローフィルトレーションを使用して精製後、20mMヘペスpH7.4、137mMNaCl、3mMKClおよび1mMCaCl2の中で平衡化された50/50混合のプロテインA/プロテインGカラムで単離した。精製カドヘリン-11-EC1-Fc融合タンパク質を、0.1MグリシンpH3および1mMCaCl2を使用し、カラムから溶出し、200μlの1MトリスpH7.4および1mMCaCl2を有するチューブに入れた。次いで、Cad-11融合タンパク質を有する溶出液を、20mMヘペスpH7.4、137mMNaCl、3mMKClおよび1mMCaCl2に対して透析した。タンパク質のサイズをSDSPAGEによって確認し図10、ヒトFc領域を認識する抗体を使用するウエスタン分析図11およびN末端の配列決定図示しないによって同一性を確認した。Cad-11-EC1-2-Fcを、上記の場合に類似の技術および条件を用いて生成した。実施例4:Cad-11-EC1-Fc免疫グロブリン融合タンパク質はインビトロアッセイにおいてCad-11媒介性細胞凝集を阻害する材料および方法マトリゲルプラグへの細胞浸潤/遊走線維芽細胞様滑膜細胞FLS遊走活性を、マトリゲルECMでコーティングされたトランスウェル内、FLS培地ダルベッコ改良イーグル培地-高グルコース[SigmaD7777]、10ウシ胎仔血清[Benchmark100-106]、1ペニシリン-ストレプトマイシン[Gibco315140-122]、1L-グルタミン[Gibco25030]、0.5ゲンタマイシン[Gibco15710-064]中で評価した。1×104個の細胞を有するFLS培地中のヒトFLS細胞懸濁液を、0.750mLのFLS培地を有する24ウェルプレートのウェル内にセットした対照インサートまたはマトリゲルコーティングされたインサートに添加した。次いで、プレートを、37°C、5の大気中CO2で加湿された組織培養インキュベーター内で22時間インキュベートした。遊走した細胞の数を計算するため、非浸潤細胞を、対照インサートの膜の上部表面から綿棒で拭き取ることによって除去した。2回目の拭き取りを、FLS培地で湿らせた綿棒を使用して繰り返す。次いで、対照インサートを固定し、分別染色キットを使用して染色した[Fisher122-911]。インサートを乾燥状態にしておき、細胞を、10倍対物レンズでの顕微鏡を使用し、4分割した対照インサート内でカウントする。3つのインサートをカウントし、合計を平均する。マトリゲルインサートに浸潤した細胞の数を計算するため、非浸潤細胞を、マトリゲルインサートの表面から綿棒で拭き取ることによって慎重に除去した。2回目の拭き取りを、FLS培地で湿らせた綿棒を使用して繰り返す。次いで、インサートを固定し、分別染色キットを使用して染色した[Fisher122-911]。インサートを乾燥状態にしておき、細胞を、10倍対物レンズでの顕微鏡を使用し、4分割した対照インサート内でカウントする。3つのインサートをカウントし、合計を平均する。結果Cad-11-EC1-Fcは、3μg/mlの濃度で細胞凝集を有意に阻害した一方、ヒトCad-11の全部で5つのECドメインを有する完全長Cad-11-EC1-5-Fcタンパク質は、100μg/mlの濃度でCad-11媒介性凝集を阻害した図13。これらのデータは、Cad-11-EC1-Fc免疫グロブリン融合タンパク質がインビトロアッセイにおいてCad-11媒介性細胞凝集を有効に阻害することを示す。さらに、Cad-11-EC1-Fc免疫グロブリン融合タンパク質の、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞FLSのマトリゲルプラグへの浸潤に対する阻害能をインビトロで試験した。FLSのマトリゲルへの浸潤は、マトリゲルを分解するための、FLSによるMMP1、MMP-3、MMP-13、セリンプロテアーゼ、および他のタンパク質の発現、ならびにFLSのマトリゲルへの遊走を伴う複合プロセスである。別々のアッセイにおいて、発明者は、正常な線維インサートを通るFLSの遊走が全く阻害されないことを見出した。これは、EC-Fcまたは13C2mAbの影響として、マトリゲル関節軟骨に対する代理の分解が阻害されることを示唆している。Cad-11-EC1-Fcとマウス抗Cad-11mAb13C2の双方が、2つの独立実験において、FLSのマトリゲルプラグへの浸潤を阻害した。実施例5:ヒトカドヘリン-11のEC1ドメインペプチドに対する抗体の作製材料および方法Balb/cマウスを、BSAに共有結合した、ヒトCad-11EC1ドメインの最初の33個のアミノ酸GWVWNQFFVIEEYTGPDPVLVGRLHSDIDSGDG配列番号10に対応する0.01mgのペプチドで、1か月にわたり週2回、脚パッドに9回免疫した。このペプチドは本明細書中でペプチド4と称される。免疫マウス由来の脾臓を採取し、マウス融合パートナーP3X63-Ag8.653と融合し、抗体産生ハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマを増殖させ、10、3または0.5細胞/ウェルのいずれかでサブクローン化し、ハイブリドーマ由来の抗Cad-11抗体含有培地を、細菌内で生成されるCad-11EC1-2ドメインを含むタンパク質に対する特異的結合能について、ELISAでスクリーニングした。これらのペプチド4ハイブリドーマ由来の抗Cad-11抗体含有培地を、ヒトCad-8およびMN-カドヘリンのEC1-2ドメインを含むタンパク質への結合の不在について同時スクリーニングした。96ウェルEIAプレートを、各EC1-2Cadタンパク質につき0.05mlの0.0~0.3mg/mlで、4°Cで一晩コーティングし、次いで生理食塩緩衝液で数回洗浄した。次いで、プレートを0.25mlのカゼイン-PBS緩衝液でブロッキングし、生理食塩緩衝液で数回洗浄した。抗Cad-11抗体を含有するハイブリドーマ培地を、各ウェル内で、22°Cで1時間正確にインキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。ヤギ抗マウスIgG二次抗体の1/1000希釈物100μlを各ウェルに添加し、22°Cで30分間インキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。100μl/ウェルの室温TMB3,3’,5,5’-テトラメチルベンジジン試薬を各ウェルに添加し、22°Cで5分間着色させておいた。反応を100μlの室温2N硫酸で停止し、プレートを、Wallac1420マイクロプレートリーダー上、450nmで読み取った。H1M1およびH14抗Cad-11抗体の特異性を、Cad-11、Cad-7、Cad-8、Cad-20、Cad-24、Cad-9、Cad-18、およびMN-CadのEC1ドメインの最初の33個のアミノ酸に対し、ELISAを使用してさらに試験した。Cad-11EC1ドメインのG1~G33領域と重なるCad-7、Cad-8、Cad-20、Cad-24、Cad-9、Cad-18、MN-Cadの領域に対応するペプチドを合成し、ビオチンに複合した。PBS-Tween0.05中の、これらの各ペプチドにつき30ng/mlの溶液100μlを、96ウェルNeutravidinプレートの各ウェル内で、4°Cで2~3時間インキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。様々な濃度の抗Cad-11抗体を、各ウェル内、22°Cで1時間インキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。ヤギ抗マウスIgG二次抗体の1/1000希釈物100μlを各ウェルに添加し、22°Cで30分間インキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。100μl/ウェルの室温TMB3,3’,5,5’-テトラメチルベンジジン試薬を各ウェルに添加し、22°Cで5分間着色させておいた。反応を100μlの室温2N硫酸で停止し、プレートを、Wallac1420マイクロプレートリーダー上、450nmで読み取った。陽性抗Cad-11抗体ハイブリドーマを含有するウェル由来の培地を、Cad-11発現細胞に対する結合能について試験した。凍結Cad-11発現431D細胞を解凍し、Ca2を含有するハンクス緩衝生理食塩液HBSS0.137MNaCl、5.4mMKCl、0.25mMNa2HPO4、0.44mMKH2PO4、1.3mMCaCl2、1.0mMMgSO4および4.2mMNaHCOで2回洗浄し、次いでCa2を含有するHBSSに、106細胞/mlで再懸濁した。105細胞/ウェルを、50または16のいずれかの抗Cad-11抗体培地で、氷上で45分間染色し、Ca2を含有するHBSSで2回洗浄し、1の濃度でのフィコエリトリンと複合された二次ヤギ抗マウスIgG抗体JacksonImmunoResearchWestGrove,PAで、氷上で45分間染色し、次いでCa2を含有するHBSSで2回、再洗浄した。次いで、細胞をCa2および1ホルムアルデヒドを含有するHBSS400μlに再懸濁し、次いでPE陽性細胞について、FACScaliburBectonDickensonFranklinLakes,NJで分析した。結果ペプチド4ハイブリドーマ由来の抗Cad-11抗体含有培地は、Cad-11EC1-2タンパク質図16、HL対CAD-11に結合したが、Cad-8およびMN-CadのEC1-2ドメインを含むタンパク質図16、それぞれHL対CAD-8およびHL対MNCadに結合しなかった。対照ハイブリドーマ培地は、試験したカドヘリンタンパク質のいずれにも結合しなかった図16、Media対CAD-11、Media対Cad8、およびMedia対MNCad。これらのデータは、ハイブリドーマにおいてペプチド4に対するCad-11特異抗体が存在することを示す。本明細書中でH1M1およびH14と称される2つのペプチド4ハイブリドーマは、ヒトCad-11タンパク質を発現する細胞に結合したが図17A~Cおよび17G~I、非Cad-11対照431-D細胞に結合しなかった図17D~17F。H1M1と称されるハイブリドーマ細胞系は、2009年1月8日に寄託されている、A.T.C.C.特許寄託番号PTA-9699を有する。H14と称されるハイブリドーマ細胞系は、2009年1月9日に寄託されている、A.T.C.C.特許寄託番号PTA-9701を有する。これらのハイブリドーマは、ペプチド4およびCad-11発現細胞の双方をインビトロで認識する抗Cad-11抗体を有する。これら抗体のCad-11発現細胞への結合は、H1M1図18AおよびH14図18Bの力価測定に対する平均蛍光強度MFIからの細胞染色の強度のプロットで示されるように、使用されるペプチド4抗体の量で力価測定することで示された。H1M1およびH14ペプチド4抗Cad-11抗体は、Cad-11に対し、Cad-7、Cad-8、Cad-20、Cad-24、Cad-9、Cad-18、およびMN-Cadを含む試験した他のカドヘリンのいずれよりも100倍を超える結合性を示した。ほとんどの場合、H1M1およびH14抗Cad-11抗体の他のカドヘリンに対する結合は全く認められなかった。抗Cad-11抗体H14は、Cad-11に対しては強い結合図19A、Cad-8に対しては468分の1の結合図19Aを示し、また、Cad-7、MN-Cad、Cad-9、Cad-18、Cad-20、またはCad-24に対しては事実上全く結合しなかった図19B。同様に、抗Cad-11抗体H1M1は、Cad-11に対しては強い結合図20、Cad-8に対しては1500分の1の結合図20を示し、また、Cad-7、MN-Cad、Cad-9、Cad-18、Cad-20、またはCad-24に対しては実質上結合しなかった図20。実施例6:抗Cad-11EC1ドメイン抗体H1M1およびH14は、アミノ酸配列GPDPを含む、Cad-11EC1ドメイン内のエピトープに結合する材料および方法ペプチド4Cad-11EC1抗体H1M1およびH14が結合するCad-11EC1ドメイン内のエピトープを判定するため、EC1領域の最初の37個のアミノ酸を範囲とする4つの異なるペプチド図22を参照をELISAフォーマットで固定化し、4つのペプチドの各々に対するH1M1およびH14抗体の結合能を測定した。96ウェルReactibindプレートを、0.3ng/ウェルのペプチド1Cad-11EC1ドメインのアミノ酸G1~P18、0.3ng/ウェルのペプチド2Cad-11EC1ドメインのアミノ酸G15~N34、0.3ng/ウェルのペプチド3Cad-11EC1ドメインのアミノ酸V19~Y37、0.3ng/ウェルの免疫原ペプチド4Cad-11EC1ドメインのアミノ酸G1~G33、全EC1ドメインEFLを含む20ngの融合タンパク質、または20ngの対照ヒトIgFc-ブロックで、4°Cで一晩コーティングした。ウェルを、PBS-Tween0.05で2回洗浄し、dH2O中のカゼインで、22°Cで3時間ブロッキングし、次いでPBS-Tween0.05で2回、再洗浄した。異なるペプチド4Cad-11EC1ドメイン抗体の様々な希釈物を、ペプチド-またはタンパク質-コーティングウェルに移し、22°Cで45分間インキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。ヤギ抗マウスIgG二次抗体JacksonImmunoResearchWestGrove,PAの1/1000希釈物100μlを各ウェルに添加し、22°Cで30分間インキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。100μl/ウェルの室温TMB試薬を各ウェルに添加し、22°Cで5分間着色させておいた。反応を100μlの室温2N硫酸で停止し、プレートを、Wallac1420マイクロプレートリーダー上、450nmの波長で読み取った。結果1:11でのペプチド4抗Cad-11抗体H1M1図21Aおよび1:23でのH14図21Bの双方は、ELISAにおいてOD450プレート読み取り値の対照に対する増加によって示されるように、ペプチド4PEP4免疫原およびEC1ドメイン融合タンパク質EFLに結合した。これらの抗体のいずれも、ヒトIgG対照Fcブロックに結合しなかった。さらに、両抗体は、ELISAにおいて、ペプチド2PEP2に結合したが、ペプチド1PEP1またはペプチド3PEP3に結合しなかった図21Aおよび21B。これらの結果は、抗Cad-11EC1ドメイン抗体H1M1およびH14が、重複するペプチド3中に存在しない、ペプチド2および4中の共通のエピトープに結合することを示唆する。ペプチド3の上流にあるペプチド2および4によって共有されるアミノ酸が、図22中に示されるボックス領域内で強調される。Cad-11EC1ドメインのG15から始まるこれら4つのアミノ酸GPDP配列番号11は、H1M1およびH14抗体によって認識されるエピトープの一部である可能性が高い。実施例7:抗Cad-11EC1ドメイン抗体H1M1およびH14はインビトロでCad-11発現細胞の凝集を阻害する材料および方法Cad-11抗体の、Cad-11媒介性細胞凝集に対する阻害能を評価するため、30μg/mlのH1M1ペプチド4抗体を、24ウェル丸底ポリプロピレンプレート内、0.5mlのDMEM-高グルコース、20mMヘペスpH7.4、10FCSおよび10U/mlDNAse中で、75,000個のCad-11発現A-431-D類表皮癌細胞と共に培養した。24ウェルプレートを、約60rpmでの回転プラットフォーム上に配置し、5CO2と共に37°Cで一晩インキュベートした。翌日、細胞凝集を、H1M1実験における100倍またはH14実験における40倍の倍率でプレートを撮影後、評価した。結果対照アイソタイプ抗体30μg/mlの存在下で、Cad-11発現細胞は大きな塊を形成した一方図23A、親Cad-11陰性細胞は単一または2つの細胞集団として残存する図23C。H1M1で処置されたCad-11細胞は小さな細胞塊として残存し図23B、それは対照抗体を使用して得られる大きな塊を形成するまで至らなかった。同じアッセイを使用し、抗Cad-11抗体H14はまた、Cad-11媒介性凝集を阻害することが示された。親Cad-11発現細胞が大きい凝集細胞塊を形成した一方図24A、H14抗体図24Bは、細胞塊が小さく低頻度であったことから30μg/mlの濃度で凝集を阻害した。これらの結果は、抗Cad-11抗体H1M1およびH14がインビトロでCad-11媒介性細胞凝集を阻害することを示す。実施例8:抗Cad-11EC1ドメイン抗体H1M1およびH14は、リウマチ様関節炎のマウスモデルにおいて、インビボで関節炎に随伴する関節腫脹を阻害する材料および方法試験1-0日目および2日目、6週齢雄C57/Bl6マウスに150μlのKBN血清を注射した。KBN血清で処置したマウスは、生理食塩水の注射を受けたか図25、白三角形または異なる用量のH1M1抗Cad-11EC1抗体で処置された。処置レジメンは、0日目での0.5mgの抗体/マウスと、その後、1日おきq2dでの0.1mgの抗体/マウス0.5mg0.1mgの投与図25、黒三角形;0日目での0.5mgの抗体/マウス0.5mgの投与図25、菱形;1日おきq2dでの0.1mgの抗体/マウス0.1mg0.1mgの投与図25、四角形;または1日おきq2dでの0.3mgの抗体/マウス0.3mg0.3mgの投与図25、円形を含んだ。対照群はマウス5匹からなり、処置群はマウス7匹からなった。関節炎に随伴する関節腫脹を、キャリパー測定値を1日おきにとることによって測定した。試験2-0日目および2日目、6週齢雄C57/Bl6マウスに150μlのKBN血清を注射し、次いでそれらを、1日おきq2dに生理食塩水図26、三角形、または、0.3mg/用量q2dで、抗Cad-11抗体H1M1図26、四角形もしくはH14図26、円形の一方のいずれかで処置した。対照群はマウス5匹からなり、処置群はマウス7匹からなった。関節炎に随伴する関節腫脹を、キャリパー測定値を1日おきにとることによって測定した。結果試験1-H1M1抗Cad-11抗体は、対照マウスに対して関節腫脹を阻害した。KBNで処置されたマウスに0.3mgのH1M1抗体を1日おきに投与することにより、関節炎に随伴する関節腫脹の最大の阻害を認めた図25、円形。試験2-抗Cad-11抗体の双方が、対照に対し、関節腫脹を阻害した。本試験では、H14抗体は、対照動物に対し、関節炎の発症を有意に遅延させた図27。対照群におけるすべてのマウスが3日目までに関節炎を発症する一方、H14で処置されたマウスは、すべての動物が関節炎を発症するまで6日を要した。これら試験は、ヒトCad-11のEC1ドメインに対する抗体がインビボで関節炎の発症および重症度を阻害しうることを示す。実施例9:ヒトカドヘリン-11の別のEC1ドメインペプチドに対する抗体の作製材料および方法Balb/cマウスを、BSAに共有結合した、ヒトCad-11EC1ドメインの最初の19個のアミノ酸に対応する0.01mgのペプチドV19~Y37VLVGRLHSDIDSGDGNIKY配列番号12で、1か月にわたり週2回、脚パッドに9回免疫した。このペプチドは本明細書中でペプチド3と称される。免疫マウス由来の脾臓を採取し、マウス融合パートナーP3X63-Ag8.653と融合し、抗体産生ハイブリドーマを作製した。これらのハイブリドーマを増殖させ、ハイブリドーマ由来の抗Cad-11抗体含有培地を、細菌内で生成されるCad-11のEC1-2ドメインに対応するタンパク質に対する結合能についてスクリーニングした。これらのペプチド3ハイブリドーマ由来の抗Cad-11抗体含有培地を、Cad-8およびMN-カドヘリンのEC1-2ドメインを含むタンパク質への結合の不在について同時スクリーニングした。96ウェルEIAプレートを、EC1-2Cadタンパク質またはCHO細胞で生成されるEC1-Fc融合タンパク質の各々の1つにつき0.05mlの0~300mg/mlで、4°Cで一晩コーティングし、次いで生理食塩緩衝液で数回洗浄した。次いで、プレートを0.25mlのカゼイン-PBS緩衝液を使用してブロッキングし、次いで生理食塩緩衝液で数回洗浄した。ペプチド3の抗Cad-11抗体を含有するハイブリドーマ培地を、各ウェル内で、22°Cで1時間そのままでインキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。ヤギ抗マウスIgG二次抗体の1/1000希釈物100μlを各ウェルに添加し、22°Cで30分間インキュベートし、次いでPBS-Tween0.05で2回洗浄した。100μl/ウェルの室温TMB3,3’,5,5’-テトラメチルベンジジン試薬を各ウェルに添加し、22°Cで5分間着色させておいた。反応を100μlの室温2N硫酸で停止し、プレートを、Wallac1420マイクロプレートリーダー上、450nmで読み取った。また、ペプチド3ハイブリドーマ由来の培地を、細胞上に発現されるヒトCad-11タンパク質に対する結合能について試験した。凍結Cad-11発現431D細胞を解凍し、Ca2を有するHBSSで2回洗浄し、次いでCa2を含有するHBSSに106細胞/mlで再懸濁した。105細胞/ウェルを、50または16のいずれかの抗Cad-11抗体培地で、氷上で45分間染色し、Ca2を含有するHBSSで2回洗浄し、次いで1の濃度でのフィコエリトリンと複合された二次ヤギ抗マウスIgG抗体で、氷上で45分間染色し、次いでCa2を含有するHBSSで2回、再洗浄した。次いで、細胞をCa2を含有するHBSS400μlおよび1ホルムアルデヒドに再懸濁し、次いでPE陽性細胞について、FACScaliburで分析した。結果ペプチド3ハイブリドーマ由来の抗Cad-11抗体含有培地は、Cad-11EC1-2タンパク質およびEC1-Fc融合タンパク質図28、それぞれHL対Cad-11およびHL対Cad-11-EC1に結合したが、Cad-8およびMN-CadのEC1-2ドメインを含むタンパク質図28、それぞれHL対Cad8およびHL対MNCadに結合しなかった。対照ハイブリドーマ培地は、カドヘリンタンパク質のいずれにも結合しなかった図28、Media対Cad-11、Media対Cad8、およびMedia対MNCad。ペプチド3ハイブリドーマ由来の抗Cad-11抗体はまた、ヒトCad-11タンパク質を発現する細胞に結合したが図29、矢印を参照、Neoを発現する非Cad-11発現対照細胞に結合しなかった。この結果により、インビトロでペプチド3およびCad-11発現細胞の双方を認識するハイブリドーマにおける抗Cad-11抗体の存在が確認された。実施例10:抗Cad-11EC1ドメイン特異抗体であるH1M1は、滑膜細胞のようなヒト初代線維芽細胞の凝集をインビトロで阻止する。材料および方法凝集アッセイこのアッセイでは、ヒト線維芽細胞様滑膜細胞FLS系を、FLS培地DMEM、10FCS、1ペニシリン-ストレプトマイシン、1L-グルタミン、0.05ゲンタマイシン、1HEPES中で、90~100コンフルエントになるまで培養した。アッセイの日に、FLSから培地を除去し、0.05トリプシン-EDTAを使用して、フラスコから細胞を取り出し、MM培地DMEM、10FCS、1ペニシリン-ストレプトマイシン、1L-グルタミン、0.05ゲンタマイシン、1HEPESで洗浄し、次いで、カルシウム含有HBS0.137MNaCl、5.4mM、KCl0.25mMNa2HPO4、0.44mMKH2PO4、1.3mMCaCl2、1.0mMMgSO4、および4.2mMNaHCOで2回洗浄した。トリプシン処理されたFLSを、4×104細胞/mlでMM培地に再懸濁し、ウェル当たり2×104の細胞を、培地のみ、30μg/mlのアイソタイプ対照抗体、または種々の抗Cad-11抗体のいずれかを含有する24ウェルディッシュに入れた。プレートを、5CO2インキュベーター中で24時間インキュベートし、翌日光学顕微鏡を用いてウェルを観察し撮影した。FLS浸潤アッセイ種々の細胞外マトリックスタンパク質からなるマトリゲルへのFLS浸潤を阻害するH1M1抗体の能力を試験するために、マトリゲルスプリットウェルシステムmatrigelsplitwellsystemを用いる浸潤アッセイを使用した。FLS生物学のこのインビトロモデルは、関節接合部のヒト軟骨を分解し、その中に穴を開けるFLSの能力を模倣する。このアッセイでは、ヒトFLS系を、90~100コンフルエントになるまで、FLSMM培地中で培養する。アッセイ開始の前日に、無血清FLS培地中で24時間、FLSから血清を枯渇させた。アッセイの日に、血清枯渇FLSから培地を除去し、0.05トリプシン-EDTAを使用して、フラスコから細胞を取り出し、MM培地で洗浄し、次いでカルシウム含有HBSで2回洗浄した。トリプシン処理されたFLSを、4×105細胞/mlでMM培地に再懸濁した。調製したマトリゲルコーティングインサートを、FLSに対して有系分裂促進物質として作用するFCSを含むMM培地を含有する24ウェルプレートに配置した。チャンバーの反対側では、抗体を含有しないかまたは作用濃度の2倍の処理抗体を含有するMM培地50μlを各ウェルの中に導入し、それに4×105細胞/mlの細胞懸濁液50μlを加えた。FLSおよび抗体を含有するチャンバーを、37°Cインキュベーター中で18時間インキュベートした。24時間後、細胞含有インサートをメタノール中で固定し、マトリゲルコーティングされた膜の外側に固着したFLSを、綿棒を使用して除去し、膜を乾燥した後、暗所にて室温で30分間ヨウ化プロピジウムPIを用いて染色した。PI染色剤を除去し、インサートをD-グルコース1mg/mlで洗浄した後、暗所で乾燥した。膜を切除し、螢光顕微鏡を使用してスライド上で画像化し、膜の中に遊走したFLSの数を定量した。結果培地または対照抗体のいずれかと共にインキュベートされたFLSは、細胞凝集物、および細胞突起を介して結合する細胞の広範なネットワークを形成した図30AおよびB。これに対し、抗Cad-11抗体であるH1M1で処置された細胞は、細胞凝集物および結合をほとんど形成しなかった図30C。種々の初代ヒトFLSを用いた一連のFLS浸潤アッセイでは、30μg/mlのH1M1抗体が、膜の中へのFLSの浸潤を一貫して阻害した。具体的には、H1M1は30μg/mlの用量で、対照抗体と比較してFLS浸潤を80阻害した。この活性は、13C2抗体を含む、EC1領域外に結合する他のCad-11抗体で観察された活性より大きかった図31。実施例11:H1M1抗体は、KBN関節炎マウスモデルにおける関節腫脹を阻害する材料および方法抗Cad-11抗体であるH1M1を、関節炎のKBNモデルで試験した。この疾患は、0日目および2日目にKBN血清75μlを2回投与することにより誘導した。7匹の雄性C57BL/6マウス群に、0日目に開始して1日おきに10mg/kgのH1M1を腹腔内投与し、マウスの関節腫脹を毎日モニターした。関節腫脹すなわち足首の厚さを、ばね式ダイヤルキャリパーLongIslandIndicatorService,Hauppauge,NYを使用して、足首を完全に屈曲した状態にして踵で測定した。結果H1M1抗体は、対照群と比較して、関節腫脹を53p<0.001抑制した図32。実施例12:H1M1可変ドメインおよび相補性決定領域の配列決定材料および方法3クローンのH1M1産生ハイブリドーマ細胞H1、H17、およびH27からRNAを抽出した。IgGVH、IgMVH、IgκVL、およびIGλVLそれぞれに対する定常領域プライマーに加え、マウスシグナル配列に対する縮重プライマープールを使用してRT-PCRを実施した。重鎖可変V領域RNAを、6つの縮重プライマープールHA~HF1組を使用して増幅し、軽鎖V領域mRNAを、κクラスターκA~κGに対する7つの縮重プライマープール1組およびλクラスターに対する1つの縮重プライマーを使用して増幅した表1を参照のこと。すべてのRNA試料について、重鎖からの増幅産物は、重鎖プライマープールBおよびEと組み合わせたIgGVH逆転写プライマーを用いて逆転写されたRNAから得られた。増幅産物は、IgκVL逆転写プライマーおよびκ軽鎖プライマープールB、C、およびGを用いて得られた。上記プールのそれぞれに由来するPCR産物を精製してクローニングし、各産物につき少なくとも4つのクローンを配列決定した。H1M1産生クローンH1、H17、およびH27について、単一機能性重鎖および軽鎖V領域配列を各試料に対して同定し、その3つの抗体は同一であることが判明した表2。重鎖および軽鎖V領域配列をそれぞれ、それらのCDR配列と共に、図33および34に示す。3つのH1M1ハイブリドーマクローンからの重鎖および軽鎖V領域は、それらの最近接ヒト生殖細胞系配列と良好な相同性それぞれ64および82を示し、個々のフレームワーク配列は、ヒト生殖細胞系データベースの中に類似したホモログがある表2。この高度な相同性により、ヒト化抗体の産生に成功するために広範な工学を必要とする可能性は低い。実施例13:ヒト化抗Cad-11抗体の生成ヒト化抗Cad-11抗体可変領域配列の設計SYN0012抗体とも称される、本明細書に記載のマウスH1M1モノクローナル抗体の抗体可変V領域の構造モデルを、スイスタンパク質データベースを使用して作製し、SYN0012/H1M1抗体の結合特性にとって必須であると予測される、V領域の重要な拘束アミノ酸を同定するために分析した。CDRKabatおよびChothiaの両定義を使用内に含有される残基は、いくつかのフレームワーク残基と共に、重要であると考えられた。SYN0012/H1M1抗体のVHおよびVκ配列は両方とも、典型的なフレームワーク残基を含有し、そのCDR1、2、および3のモチーフは多くのマウス抗体と比較可能である。上記の分析から、CDR配列内の可能な代替残基は狭い選択幅しかないが、CDRの外側の自由度の高い代替配列を用いることにより、SYN0012/H1M1抗体の複合ヒト配列を作製することができると考えられた。予備分析から、いくつかのヒト抗体からの対応する配列セグメントを組み合わせて、マウスSYN0012/H1M1抗体配列に類似または同一のCDRの作製が可能であることが示された。CDRの外側および隣接領域については、ヒト化抗Cad-11抗体V領域の可能な構成要素としてヒト配列セグメントの幅広い選択が確認された。変異体の設計上記の分析に基づいて、SYN0012ヒト化抗Cad-11抗体変異体の作製のために使用することができる配列セグメントの大きな予備セットを選択し、ヒトMHCクラスII対立遺伝子Perryら2009に結合するペプチドのインシリコ分析に関し、公知の抗体配列に関連するT細胞エピトープBrysonC,JonesTDandBakerMP.Predictionofimmunogenicityoftherapeuticproteins:validityofcomputationaltools.Biodrugs2010,241:1-8のTCEDTMTCellEpitopeDatabaseofAntitopeLLC,CambridgeUKを使用して分析した。ヒトMHCクラスIIに対する顕著な非ヒト生殖細胞系バインダーと同定されたか、またはTCEDTMに対して顕著なヒット得点を得た配列セグメントは廃棄された。これにより、縮小したセグメントセットが得られ、これらの組合せを、上記のように再度分析し、セグメント間の接合部に潜在的なT細胞エピトープが確実に含有されないようにした。次いで、選択されたセグメントを組み合わせて、合成のための重鎖および軽鎖V領域配列を作製した。SYN0012ヒト化抗Cad-11抗体変異体のために、図35A~35Hに詳述されている配列を有する5つのVH鎖VH1~VH5;配列番号61、63、65、67、69および3つのVκ鎖Vκ1~Vκ3;配列番号71、73、75を設計した。複合ヒト抗体変異体の構築SYN0012/H1M1のための複合ヒト抗体VHおよびVκ領域の変異遺伝子をすべて、アニールされ、連結され、PCR増幅されて、完全長の合成V領域を与える一連の重複オリゴヌクレオチドを使用して合成した。IgG4S241PVH鎖およびVκ鎖のためのpANT発現ベクターシステムAntitope,CambridgeUKの中に直接、構築されたVH変異体をMluIおよびHindIII部位を使用してクローニングし、構築されたVκ変異体をBssHIIおよびBamH1制限部位を使用してクローニングした図36。構築物はすべて配列決定により確認された。抗体の構築、発現、および精製複合ヒト化IgG4S241PVHおよびVκ鎖の15の組合せをすべて、電気穿孔法によってNS0細胞の中に安定的に形質移入し、200nMメトトレキサートSigmaCat.No.M8407,SigmaAldrich,UKを使用して選択した。各構築物のメトトレキサート耐性コロニーを、IgG4のELISAを使用してIgG発現レベルについて試験し、最良の発現系を選択し、増殖させ、液体窒素中に凍結した。15のヒト化抗体変異体のそれぞれを発現する細胞を生成するのに成功した。SDP011Vκ1/VH1、SDP021Vκ1/VH2、SDP031Vκ1/VH3、SDP041Vκ1/VH4、SDP051Vκ1/VH5、SDP061Vκ2/VH1、SDP071Vκ2/VH2、SDP081Vκ2/VH3、SDP091Vκ2/VH4、SDP101Vκ2/VH5、SDP111Vκ3/VH1、SDP121Vκ3/VH2、SDP131Vκ3/VH3、SDP141Vκ3/VH4、およびSDP151Vκ3/VH5と命名された、SYN0012の15のヒト化IgG4S241P複合変異体を、NS0細胞培養上清からプロテインAセファロースカラムGEHealthcareCat.No.110034-93で精製し、予測アミノ酸配列に基づいた吸光係数Ec0.1=1.51を使用して、OD280nmにより抗体を定量した。マウスIgG1抗Cad-11EC1抗体SYN0011の精製中に、この抗体が約7.5のpHで塊として沈殿することが分かった。したがって、抗体はすべて、酸溶出後に約6.5のpHに中和し、緩衝液を10mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.51.4mM酢酸、8.6mM酢酸ナトリウムに交換した。各ヒト化抗Cad-11抗体変異体を精製し、還元SDS-PAGEにより分析した。NuPage4~12ビス-トリスゲルInvitrogenCat.No.NP0322BOXに試料をロードして、200Vで30分間泳動させた。VHおよびVκ鎖の予測サイズに対応するバンドが観察され、混入タンパク質の証拠は認められなかった図37。実施例14:ヒト化抗Cad-11抗体のCad-11タンパク質への結合の特徴づけ材料および方法精製抗体の組換えヒトCad-11EC1への結合精製されたヒト化複合変異抗体SDP011~SDP151の組換えCad-11EC1ヒトIgG1融合タンパク質への結合を、競合結合ELISAで評価した。5μg/ml~0.0022μg/mlの希釈系列のヒト化抗体または対照抗体SYN0012/H1M1を、一定濃度のビオチン化マウス抗Cad-11抗体のSYN0012/H1M10.1μg/ml、最終濃度と前混合した後、PBSで希釈された0.25μg/mlの組換えヒトCad-11EC1RDSystemsCat.No.1790-CA-050で前コーティングされたNuncImmunoMaxiSorp96ウェル平底マイクロタイタープレートFisherCat.No.DIS-971-030J上で室温にて1時間インキュベートした。ビオチン化mAbの結合は、ストレプトアビジン-HRPSigmaCat.No.S5512およびテトラメチルベンジジンTMB基質InvitrogenCat.No.00-2023を用いて検出した。カドヘリン-ペプチド交差反応性ELISAヒト化抗Cad-11抗体のいずれがCad-11に対して最大の特異性を示すかを評価するために、Cad-11免疫原、またはカドヘリン-7、-8、-9、-18、-20、および-24から取り出した、Cad-11免疫原に最も関連した6つの配列に対応する配列を包含した、BSAに連結された37-merのアミノ酸長のペプチドに対する結合能について、ヒト化抗体をELISAフォーマットで試験した。ReactibindプレートThermoScientificを、カドヘリン-7、-8、-9、-11、-18、-20、および-24に対応する、500ng/mlのBSA結合カドヘリン37-merのアミノ酸長ペプチドNEペプチドを用いて、PBSpH7.2GibcoInvitrogen,20012中0.05TweenEMD,productcode9480の中で、100μl容量/ウェルにて4°Cで一晩コーティングした。ペプチド含有溶液をウェルから除去し、プレートを、PBS中2ウシ血清アルブミンBSAを用いて、200μl容量/ウェルにて22°Cで2時間ブロッキングした。次いで、プレートを、200μl/ウェルのPBS-Tween0.05を用いて、22°Cで2回洗浄し、ブロットを乾燥させた。ヒト化抗Cad-11抗体それぞれの5μg/ml~8ng/mlの希釈系列100μl/ウェルを、ペチドpetideコーティングされたウェル中でインキュベートし、22°Cで1時間インキュベートした。抗体溶液をウェルから除去し、プレートを、200μl/ウェルの0.05Tween-PBSを用いて22°Cで2回洗浄し、ブロットを乾燥させた。ヤギ抗マウスIgGPierce31432を、1:1000希釈、100μl/ウェルでプレートの各ウェルに加え、22°Cで30分間インキュベートした。二次抗体溶液を除去し、プレートを、200μl/ウェルの0.05Tween-PBSを用いて22°Cで2回洗浄し、ブロットを乾燥させた。100μl/ウェルのテトラメチルベンジジンTMB試薬IgGPierce34022,1ステップTurboTMB-ELISAをプレートに加えて、反応を促し、22°Cで5分間進行させた。100μlの室温2N硫酸を使用して反応を停止し、マイクロプレートリーダーWallac1420上で450nmにてプレートを読み取った。表面プラズモン共鳴SPRにおけるCad-11への結合組換えhisタグ付きヒトCad-11に対するSDP051の親和性を決定するために、rhCad-11RDSystemsを単一濃度でチップに固定化し、SDP051について高解像度カイネティックスを測定し、2状態反応結合モデルをカイネティックデータに適合させるのに成功した。カイネティックデータを40μL/分の流速で得ることにより、いかなる潜在的な質量移動効果も最小化した。12.5nM~0.195nMの範囲の分析物濃度系列を段階希釈により調製した。カイネティックサイクルを通して、表面および分析物の両方の安定性を確認するために、ブランクmAbを含まずおよび3.125nM最初のサイクルおよび最後のサイクル濃度の分析物の2回反復のカイネティック実験をプログラムした。結合段階の湾曲を観察するのに十分長い360秒間、SDP051をFcs上に注入した。Cad-11細胞結合アッセイ凍結されたCad-11発現431D細胞K.Johnson,U.Nebraska,Omahaまたは非Cad-11発現親431D細胞K.Johnson,U.Nebraska,Omahaを解凍して洗浄し、2×106細胞/mlで再懸濁して、各ウェルに50μlずつ加えた。次いで、1ng/ml~30μg/mlに濃度を増加させたヒト化SDP051またはSDP071抗体を用いて、氷上で45分間細胞を染色した。染色後、細胞を、1ウシ胎児溶液FBS含有ハンクス緩衝生理食塩液HBSSで2回洗浄し、再懸濁し、マウス抗ヒトIgG4-PE100倍希釈で、光遮断下、氷上で45分間染色した。二次試薬で染色後、細胞を1FBS含有HBSSで2回洗浄し、1FBS含有HBSS中の2ホルムアルデヒド200μlに再懸濁した後、BDFACSCaliburを用いて分析した。カドヘリン-ペプチド交差反応性FACSアッセイ凍結されたCad-11発現431D細胞または非Cad-11発現親431D細胞を解凍して洗浄し、2×106細胞/mlで再懸濁して、各ウェルに100,000細胞ずつ加えた。次いで、濃度を増加させた37-merのアミノ酸長のCad-11ペプチドまたはCad-7、Cad-8、Cad-9、Cad-18、Cad-20、もしくはCad-24ペプチドのいずれかと共に、氷上で45分間、0.5μg/mlSDP051を用いて細胞を染色した。染色後、細胞を、1ウシ胎児溶液FBS含有ハンクス緩衝生理食塩液HBSSで2回洗浄し、再懸濁した後、100μlのヤギ抗マウスIgG-PE100倍希釈で、光遮断下、氷上で30分間染色した。二次試薬で染色後、細胞を1FBS含有HBSSで2回洗浄し、再懸濁し、1FBS含有HBSS中の2ホルムアルデヒド200μl中で固定した後、BDFACSCaliburを用いて分析した。結果ヒト化抗Cad-11抗体はすべて、Cad-11融合タンパク質への結合に対して、SYN0012と有効に競合した図38A~C。これにより、それらの抗体がSYN0012と同じエピトープまたはCad-11上の重複エピトープに結合すること、およびそれらの抗体が、組換えヒトCad-11に対して、SYN012と少なくとも同様にまたはそれよりも良好に結合することが示された。曲線を使用して各抗体に対するIC50値を計算し、それらの値をSYN0012のIC50に対して規準化した。SYN0012は、プレート間の比較がなされうるように各ELISAプレートに含まれた表3。各細胞系の発現レベルおよび各抗体の計算等電点pIも示される表3。Vκ1/VH5抗体であるSDP051は、最大の特異性でCad-11に結合し、Cad-11抗原に対して、他のカドヘリンからの関連抗原よりも100倍を超える結合性を示した図39A~O。最大の交差反応性はCad-8に対して観察された。SDP031、SDP061、およびSDP071もまた、Cad-11に対して顕著な特異性を示し、Cad-11抗原に対して、他のカドヘリンからの関連抗原よりも20倍を超える結合性を示した。SDP031、SDP051、SDP061、およびSDP071の軽鎖および重鎖アミノ酸配列を、図40A~40Dに示す。500ng/mlでコーティングされたCad-11抗原およびCad-7、-8、-9、-11、-18、-20、-24抗原に対するヒト化抗Cad-11抗体の初期スクリーニングでは図41A、SDP051は、Cad-11に対して、他のいずれのカドヘリンよりもはるかに高い結合性を示した。最大の交差反応性はCad-8抗原で観察された。このアッセイを、50ng/mlのより低い抗原コーティング濃度のCad-11、Cad-8、およびCad-18抗原およびより広範な希釈系列のSDP051抗体を用いて繰り返した図41B。このアッセイでは、SDP051は、Cad-11に対して6.8ng/mlのEC50を示し、Cad-8に対して1421ng/mlのEC50を示し、結合に200倍を超える相違があった。Cad-18に対するEC50は、観察された結合が低レベルであったため、確定することができなかった。これらの結果から、SDP051がCad-11に対して高度に特異的であることが確認された。Cad-11EC1ドメイン配列に関するBLAST検索により、Cad-7、-8、-9、-11、-18、-20、および-24抗原の間に最近接マッチがあることが示された。Cad-11EC1ドメイン中の解明されたヘキサペプチドSDP051結合エピトープに関するBLAST検索により、他の公知のヒトタンパク質の中にこの配列を有するものはないことが示された。SDP051は、rhCad-11タンパク質に対してサブナノモルの親和性を有し、その平衡解離定数KDは0.37nMであった表4。チップ表面に関する特徴づけおよび対照実験により、単一密度に固定化されたrhCad-11が、抗Cad-11抗体相互作用のカイネティック値を測定するのに適していることが示唆された。カイネティック分析については、一旦抗原が抗体に結合すると、さらなる時間依存的事象が生じることを示す連結反応制御結果に基づいて、2状態反応モデルを使用した式1、図42。rhCad-11はホモダイマーであり、したがって、2つの同一の結合エピトープを含有しているので、個々のmAb分子が、第1の結合部位、次いで両方の結合部位を介して連続して結合するようになると考えられる。細胞結合アッセイでは、SDP051およびSDP071が、Cad-11発現細胞には用量依存的に結合し、Cad-11陰性親細胞系には結合しないことが示された図43。Cad-11に対するSDP051の特異性を決定するための代替法として、SDP051のCad-11発現細胞への結合を遮断する、様々なカドヘリンの能力の測定がある。これを、カドヘリン-7、-8、-9、-18、-20、-24、または-MNのそれぞれについて実施した。Cad-11ペプチドのみが、Cad-11細胞に結合するSDP051を顕著に遮断した。分析結果を図44A~Cに示す。実施例15:ヒト化抗Cad-11EC1抗体であるSDP051は、ヒト細胞を使用するアッセイにおいて低い免疫原性を示す材料および方法抗体の精製飽和するまで増殖した抗体発現細胞の5L培養物からSDP051を精製した。上清を細胞およびデブリから分離して、pH7.4に調整し、濾過滅菌し、0.5MNaOHであらかじめ衛生化した5mlのHi-TrapMabSelectSureプロテインAアフィニティカラムGEHealthcare,Amersham,UKに、5ml/分の流速で流した。カラムを100mlのPBSpH7.4で洗浄した。抗体を0.1Mクエン酸ナトリウムpH3.0を用いて5ml分画で溶出し、各分画を直ちに0.25mlの1Mトリス-HClで中和した。各分画のタンパク質含量を280nmのUV吸収でモニターして、タンパク質含有分画をプールし、緩衝液を10mM酢酸ナトリウムpH5.5に交換して濃縮した。16/60SephacrylS200カラムGEHealthcare,Amersham,UKを使用するサイズ排除クロマトグラフィーにより、抗体をさらに精製した。主要ピーク分画を集めてプールし、濾過滅菌して、エンドトキシンレベルについて、Endosafe登録商標-PTSTMCharlesRiver,Margate,UKを使用して試験した。精製された抗体は、4°Cに保存した。最終濃度は、計算モル吸光係数、A2801.0=1.51mg/mlを使用して、UV吸収により決定した。次いで、抗体をそれぞれ、AIMV培地Invitrogen,Paisley,UK中、100μg/mlに希釈した。免疫原性アッセイPBMCは、NationalBloodTransfusionServiceAddenbrooke’sHospital,Cambridge,UKから入手した健常ドナーバフィーコート24時間以内に採血された血液に由来から単離した。PBMCを、Lymphoprep登録商標Axis-Shield,Dundee,UKおよび密度遠心分離によりバフィーコートから単離し、CD8RosetteSep登録商標StemCellTechnologiesInc.,London,UKを使用して、CD8T細胞を枯渇させた。BiotestSSP-PCRに基づいた組織適合試験キットBiotest,Landsteinerstrasse,Denmarkを使用して、HLA-DRハプロタイプを同定すること、および再現性対照抗原KLH:Pierce,Cramlington,UKに対するT細胞応答を測定することにより、ドナーを特徴づけた。次いで、PBMCを凍結して、必要になるまで液体窒素に保存した。各ドナーからのPBMCを解凍して、カウントし、生存率を評価した。細胞を室温AIMV培地Invitrogen,Paisley,UK中で復活させ、AIMV中に4~6×106PBMC/mlで再懸濁した。各ドナーについて、大量培養物を確保して、合計1mlの増殖細胞ストックを24ウェルプレートに加えた。合計1mlの各希釈試験試料を、試料あたり最終濃度50μg/mlになるように、PBMCに加えた。各ドナーについて、陽性対照100μg/mlKLHと共にインキュベートされた細胞および陰性対照培地のみとインキュベートされた細胞も含めた。最初の4ドナーについては、試験試料によるT細胞応答の調節を試験するために、試験試料およびKLHの両方をPBMCに加える、さらなる対照を含めた。これらの試料とKLH単独との比較を用いて、増殖に対する試験試料の効果を評価することができる。培養物を5CO2、37°Cで合計8日間インキュベートした。5、6、7、および8日目に、各ウェルの細胞を穏やかに再懸濁し、3×100μlアリコートを丸底96ウェルプレートの個々のウェルに移した。培養物に、AIMV培地100μl中の1μCi[3H]チミジンPerkinElmer登録商標,Waltham,Massachusetts,USAをパルスし、さらに18時間インキュベートした後、TomTec登録商標MachIIIセルハーベスターを使用して、フィルターマットPerkinElmer登録商標,Waltham,Massachusetts,USA上に収集した。各ウェルのcpmを、視差低バックグラウンド計数モードにおける、MicroplateBetaCounter上のMeltilex商標PerkinElmer登録商標,Waltham,Massachusetts,USAシンチレーション計数測定により決定した。細胞増殖アッセイ増殖アッセイについては、SIが2以上SI≧2.0の経験的閾値が以前から確立されており、それによって、この閾値を上回る増殖応答を誘導する試料が陽性と見なされる含まれる場合、境界線SI≧1.90が強調表示される。広範なアッセイの展開および以前の研究により、これが、多数の偽陽性応答を検出することなく、最大の感度を可能にする最小の信号対雑音閾値であることが示されている。増殖データセットn=3については、陽性応答は統計的かつ経験的な閾値により以下のように定義された。1.培地対照に対する試験ウェルのcpmを比較し、独立2試料スチューデントt検定を使用することによる応答の有意性p<0.052.2以上のSISI≧2.0。結果さらに潜在的な免疫原性を評価するために、ヒト化抗Cad-11EC1抗体SDP051を、8日アッセイにおいて、25の異なるヒトT細胞ドナーからのCD8枯渇PBMCCD4T細胞の増殖を誘導するその能力について試験した。マウスH1M1/SYN0012親抗体のマウス-ヒトIgG4Fcキメラ型であるキメラSYN0014抗体は、ドナーの28に増殖を誘導したが、SDP051抗体は、いずれのT細胞ドナーの増殖も誘導しなかった。これらの結果は、SDP051が低い免疫原性プロフィールを有するという以前のインシリコでの発見を支持する。対照キメラSYN0014抗体およびヒト化SDP051抗体に関する、免疫原性タイムコース増殖アッセイからの結果を、それぞれ図45AおよびBに示す。マウス-ヒトキメラSYN0014抗体は、25ドナーのうち7ドナードナーの28に応答を刺激し、ドナー応答の1つは境界線上ドナー16に対して1.98であるがバックグラウンドからはなお有意に異なるものであったp<0.05、図45A。ヒト化抗体SDP051は、いずれのドナーの応答もまったく刺激せず25のうち0、すなわちドナーの0、潜在的な免疫原性が低いことが示された。実施例16:ヒト化抗Cad-11EC1抗体であるSDP051は、滑膜細胞の浸潤およびMMP3の発現を阻害する材料および方法FLS浸潤アッセイ初代ヒトFLS系を、FLSMM培地DMEM、10FCS、1ペニシリン-ストレプトマイシン、1L-グルタミン、0.05ゲンタマイシン、1HEPES中で、90~100コンフルエントになるまで培養した。アッセイの開始前日に、無血清FLS培地中で24時間、FLSから血清を枯渇させた。アッセイの日に、血清枯渇FLSから培地を除去し、0.05トリプシン-EDTAを使用してフラスコから細胞を取り出した後、カルシウム含有HBSで2回洗浄した。トリプシン処理されたFLSを、4×105細胞/mlでMM培地に再懸濁した。調製したマトリゲルコーティングインサートを、FLSに対して走化性因子として作用する5胎児ウシ血清FCSを含むMM培地を含有する24ウェルプレートに配置した。チャンバーの反対側に、6μg/mlもしくは0.6μg/mlのSDP051作用濃度の2倍または6μg/mlの対照AC1-P抗体のいずれかを含有するMM培地50μlを入れ、次いで、4×105細胞/mlの細胞懸濁液50μlを各ウェルに加えた。FLSおよび抗体を含有するチャンバーを、37Cインキュベーター中で18時間インキュベートした。24時間後、細胞含有インサートを、100メタノール中で、-20°Cにて30分間固定し、マトリゲルコーティングされた膜の内部に固着した非浸潤FLSを、綿棒を使用して除去した。膜を乾燥した後、暗所にて室温で30分間ヨウ化プロピジウムPIを用いて染色した。PI染色剤を除去し、インサートをD-グルコース1mg/mlで洗浄した後、暗所で乾燥した。膜を切除し、螢光顕微鏡を使用してスライド上で画像化し、膜に中に遊走していたFLSの数を定量した。結果Cad-11は、FLS生物学にとって必要とされる重要なカドヘリンである。その結果、Cad-11アンタゴニストは、2つのウェルを分離するマトリゲル層を分解し、その中に浸潤するヒト初代FLSの能力を阻害すると期待される。マトリゲルは種々の細胞外マトリックスタンパク質からなる。FLS生物学のこのインビトロモデルは、軟骨を分解し、その中に穴を空けるFLSの能力を含むFLS生物学の態様を再現する。SDP051は、マトリゲルへのFLSの浸潤を顕著に阻害した。0.3μg/mlのSDP051抗体は、アイソタイプ対照抗体と比較して、マトリゲル膜への初代ヒトFLSの浸潤を50阻害するのに十分であった図46。FLSはMMP3を発現するが、このMMP3は、インビボにおける軟骨の分解およびインビトロ浸潤アッセイにおけるマトリゲルの分解に関与する酵素の1つであると考えられている。細胞の固定前に浸潤アッセイから上清を採取し、-80°Cで凍結した。これらの上清を解凍し、培地中のMMP3の存在について試験した。MMP3レベルは、FCSで遊走するように刺激された対照抗体AC1-P処理FLSを含有するウェル中で顕著に増加した図47。MMP3レベルは、FCSで刺激されたSDP051処理FLSでは顕著に低下した。対照抗体処理細胞と比較して、レベルの低下は約50であった。実施例17:ヒト化抗Cad-11EC1抗体であるSDP051は、関節炎の動物モデルにおける関節炎症を阻害する関節炎の動物モデルにおいてSDP051抗体を試験するために、D.MathisおよびC.Benoistにより開発された関節炎のK/BxN血清移入モデルが選ばれたKorganowAS,JiH,MangialaioS,DuchatelleV,PelandaR,MartinT,etal.FromsystemicTcellself-reactivitytoorgan-specificautoimmunediseaseviaimmunoglobulins.Immunity1999;10:451-61。このモデルは広範な関節滑膜炎を提供し、したがって、SDP051抗体の抗炎症および関節保護特性に対する良好な試験となった。6~8週齢C57Bl/6マウスに、KBN血清JacksonLabs,BarHarbor,MEを75μl、0日目および2日目の両日に、腹腔内にIP注射した。-1、0、1、2、4、および6日目に、10mg/kgのSDP051または対照AC1-PのいずれかをマウスにIP投与した。関節腫脹、すなわち足首の厚さを、試験の0、2、4、6、8、および10日目に、ばね式ダイヤルキャリパーMitutoyothicknessgagemodel7308,LongIslandIndicatorService,Hauppauge,NYを使用して、完全に屈曲した位置に足首を保持しながら各マウスの両足首後部の踝で測定した。0日目と測定日との間の関節の厚さの差を決定した。試験期間中の足首の厚さの変化を図48に図示する。足首の厚さの測定値における差は、6、8、および10日目に顕著であった。10日目において、SDP051群の足首の腫脹は、対照群の腫脹よりも47低下していた。10日目に、各試験マウスの終末出血から血清を集めた。血清をドライアイス上で凍結して、-80°Cに保存した。SDP051の血清レベルは、捕獲試薬としてCad-11ペプチドを使用し、次いで抗ヒトIgGでSDP051を検出するELISAによる血清試験により決定した。SDP051は、マウスの血清中に容易に検出することができた図49。足首を10日目に摘出し、病理組織を評価した。軟骨侵食、骨侵食および炎症細胞の浸潤の重症度は、試験群に対して盲検化された有資格技術者により、0~5のスコアで評価された。10日目における病理組織の結果を、表5にまとめた。SDP051処置動物は、軟骨侵食のスコアで35の低下、骨侵食のスコアで27の低下、炎症のスコアで25の低下を示した。実施例18:KBN関節炎モデルにおけるSDP051の用量応答0および2日目に、KBN血清をマウスに投与した。0、2、4、および6日目に、10、3、もしくは1mg/kgのSDP051または対照AC3-1-PをマウスにIP投与した。足首の厚さの変化を図50に示す。足首の厚さの低下傾向が、3または10mg/kgのSDP051で処置されたマウスに観察された。10mg/kg群における足首の腫脹は、6、8、および10日目に有意に低下した。10日目では、この群の足首の腫脹は、対照群の腫脹よりも44低下した。一連の試験を通して、10mg/kgのSDP051は、足首の腫脹を有意に低下させた。3mg/kgでは、足首の腫脹は低下傾向にあった。実施例19.SDP051は、リウマチ様関節炎の病態に関係するサイトカインを低下させる1、2、4、および6日目に、10mg/kgのSDP051またはAC3-1-P対照抗体を尾静脈IVによりマウスに投与した。6日目において、SDP051群では、対照群よりも足関節腫脹が33低下することが示された表6。これらのマウスから7日目に摘出した足首について、サイトカイン分析を以下のように実施した。足首関節を摘出して、皮膚および毛皮を除去し、関節を液体窒素中で即座に凍結した。次いで、ホモジナイゼーション緩衝液2mMPMSFSigmapartP7626および1Xプロテアーゼ阻害剤カクテルSigmapartP8340、0.1Mインドメタシンを添加されたAffymetrix組織ホモジナイゼーション緩衝液partPC6002中に関節を溶解して、遠心分離し、得られた上清を、複数アッセイ系OceanRidgeBiosciencesにおいて、種々のサイトカインおよびケモカインのレベルについてアッセイした。SDP051処置群では、破骨細胞分化因子、可溶性核因子カッパーB活性化受容体リガンドsRANKL、破骨細胞性/リンパ性ケモカイン、マクロファージ炎症性タンパク質-1MIP1α、単球ケモカインの単球走化性タンパク質-1MCP1、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSF、および白血球ケモカインのRegulateduponActivation,NormalT-cellExpressedandSecretedRANTESのレベルが29~51低下することが示された表6。IL-6またはTNFαのレベルには、ほとんどまたはまったく効果が観察されなかった。試験群では、血管内皮細胞増殖因子VEGFで中程度の増加が観察されたが、IL-23は検出することができなかった。SDP051の提案される作用機序は、この抗体がマウス関節の線維芽細胞様滑膜細胞上のCad-11に結合し、炎症促進性サイトカインおよびケモカインの発現の低下をもたらすというものである。実際、SDP051処置マウスでは、MCP-1、RANTES、およびMIP1αを含む、FLS生物学に関与すると示唆される数種の白血球ケモカインGarcia-VicunaR,Gomez-GaviroM,Dominguez-LuisM,PecM,Gonzalez-AlvaroM,Alvaro-GraciaMandDiaz-GonzalezF,2004ArthRheum,50,pp3866-3877が、RA患者の関節において低下していた表6。さらに、sRANKLは、骨芽細胞分化の重要なメディエーターであり、RANKLの発現は、種々の炎症性サイトカインによりFLS上に誘導されるHashizumeM,HayakawaNandMiharaM,2008,Rheumatology47pp.1635-1640。SDP051処置マウスでは、関節におけるsRANKLレベルの低下が示された表6。これらの効果は中程度であったが、これらの変化の局所領域効果は増幅されうるものであった。本明細書中に引用されるすべての特許、公開された出願および参考文献の関連の教示は、それら全体が参照により援用される。本発明は、特にその例示的な実施形態を参照して示され、説明されている一方、形式および詳細における様々な変更が、添付の特許請求の範囲によって包含される本発明の範囲から逸脱することなく本明細書中でなされうることが当業者によって理解されるであろう。"