COL7A1遺伝子におけるナンセンス突然変異を患っている細胞における、全長C7の発現を誘発するための、又は、不完全C7の発現を強化するための方法であって、該細胞を、アミノグリコシドを含有する有効量の組成物と接触させることを含む方法。前記アミノグリコシドが、G418、ゲンタマイシン、及びパロモマイシンからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。前記アミノグリコシドがG418である、請求項2に記載の方法。前記細胞がRDEBケラチノサイトである、請求項1に記載の方法。COL7A1遺伝子におけるナンセンス突然変異を原因とするDEBを患っている対象を治療するための方法であって、前記対象に、有効量のアミノグリコシドを含有する組成物を投与することを含む方法。上記アミノグリコシドがG418、ゲンタマイシン、及びパロモマイシンからなる群から選択される、請求項5に記載の方法。上記アミノグリコシドがG418である、請求項5に記載の方法。上記組成物が更に、C7又はminC7若しくは双方を含有し、上記投与が局所適用である、請求項5に記載の方法。COL7A1遺伝子におけるナンセンス突然変異を原因とするDEBを患っている対象における皮膚創傷治癒を強化するための組成物であって、アミノグリコシドと、C7又はミニC7若しくは双方と、薬学的に許容可能な担体とを含有する組成物。アミノグリコシドがG418、ゲンタマイシン、及びパロモマイシンからなる群から選択される、請求項9に記載の組成物。上記アミノグリコシドがG418である、請求項9に記載の組成物。詳細な説明添付の図面において説明される特定の形態に言及することにより、ここに本発明を詳細に説明する。以下の記載は、典型的な形態および例の観点からのものであるが、ここに記載される形態は例証目的に過ぎず、様々な就職および変形が、添付の特許請求の範囲に記載される通りの本発明の精神および範囲から離れることなしに当業者によりなされ得ることが理解されよう。定義他に言及のない限り、ここで使用されるすべての用語は以下に示される意味を有し、本発明の技術における当業者に対して当該用語が有する同じ意味と通常一致する。実践者は特に、当該技術の定義および用語について、Sambrook等1989、分子クローニング:ALaboratoryManual第2版、ColdSpringHarborPressPlainviewNY、および、AusubelFM等1993、CurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySonsNewYorkNYに向けられる。本発明が、記載された特定の手順、プロトコル、および試薬に限定されるものではなく、これらは変化し得ることが理解されよう。ここで使用される場合の頭字語C7は、COL7A1遺伝子によりコードされるVII型コラーゲンを表す。ここで使用される場合の頭字語C7Mは、Chen等JBiolChem2752442924435、この内容は参照によりここに取り込まれる。により記載されるミニC7を表す。本発明の目的のために、C7M及びミニC7は、互いに代替可能に使用される。つまり、C7Mは、野生型C7から一部を選択的に取り除くことにより形成される。野生型C7は、2944のアミノ酸残基からなるタンパク質である。これは更に、非コラーゲンNC1ドメイン残基1-1253、主要コラーゲン螺旋ドメイン残基1254-2783、及び、カルボキシ末端NC2ドメイン残基2784-2944に分けることができる。C7Mは主要コラーゲンドメイン内の残基1920-2603を取り除くことにより形成される。ここで使用される場合のRDEBは、劣性栄養障害性表皮水疱症を意味し、アロポーシーメンス型RDEBHS-RDEB及び非アロポーシーメンス型RDEB非HSRDEBの双方を包含する。ここで使用される場合の不完全C7は、ナンセンス突然変異を含むCOL7A1遺伝子から発現したタンパク質を表す。ナンセンス突然変異がCOL7A1遺伝子において生じ得る多数の潜在的な場所がある。この突然変異した遺伝子が発現する場合、生じるタンパク質は、突然変異に対応する位置において中途終止する短縮された種類である。したがって、この文脈において、不完全C7は、ナンセンス突然変異による可能な短縮C7のすべての集合を包含するものととらえられる。全長C7の発現を誘発するための、もしくは、不完全C7の発現を強化するための方法本発明は、COL7A1遺伝子におけるナンセンス突然変異を含む細胞における、全長C7の発現を誘発するための、もしくは、不完全C7の発現を強化するための方法を提供する。本発明のこの態様の形態に係る方法は、細胞をアミノグリコシドに接触させる工程を通常含む。アミノグリコシドはアミノ修飾糖である。その多くは、抗生物質として機能が知られている。当業者は商業的な筋から入手することができる。典型的なアミノグリコシドにはゲンタマイシン及びパロモマイシンが含まれ得るが、これらに限定されるものではない。好ましい形態において、アミノグリコシドは、G418、ゲンタマイシン及びパロモマイシンからなる群から選択される。より好ましい形態において、アミノグリコシドはG418である。細胞は好ましくはケラチノサイトであり、より好ましくはDEB又はRDEBケラチノサイトである。COL7A1遺伝子におけるナンセンス突然変異によるDEBを治療するための方法他の態様において、本発明はCOL7A1遺伝子におけるナンセンス突然変異に起因するDEBを患っている対象を治療するための方法を提供する。本発明のこの態様に係る方法は、有効量のアミノグリコシドを含有する組成物を対象に投与する工程を通常含む。典型的なアミノグリコシドには、限定するものではないが、ゲンタマイシン及びパロモマイシンが含まれ得る。好ましい形態において、アミノグリコシドはG418である。組成物は、創傷治癒を更に補強するために、C7又はミニC7もしくは双方を更に含有し得る。投与形態の多くは、限定されるものではないが、特定のアミノグリコシドに最も一般的な方法であることが好ましい。好ましい形態において、組成物はC7又はmin-7、若しくは双方を含有するものであり、投与形態は局所適用である。DEBを治療するための組成物更なる他の態様において、本発明はまた、DEBを治療するための組成物を提供する。本発明のこの態様に係る形態は、通常、アミノグリコシドと、C7又はミニC7若しくは双方と、薬学的に許容可能な担体を含有し得る。好ましい形態において、アミノグリコシドは、G418、ゲンタマイシン及びパロモマイシンから選択され、より好ましくはG418である。本発明を更に説明するために、以下の具体例が提供される。[アミノグリコシドは、COL7A1遺伝子におけるナンセンス突然変異を含む細胞において、全長C7の発現を誘発することができる。]RDEBケラチノサイトが、G4188μg/mL、ゲンタマイシン200μg/mL、パロモマイシン200μg/mL、アミカシン1mg/mL、又はPTC12420μg/mLで48時間処理された。次いで細胞が溶解され、抗NC1抗体又は抗βチューブリン抗体ローディングコントロールを用いてイムノブロット解析された。図1において、G418及びゲンタマイシンを用いた処理は、EB5K及びDG16ケラチノサイトの双方において全長C7の生成を誘発したことに留意すべきである。パロモマイシンはDG16細胞のみにリードスルーを誘発したが、アミカシン及びPTC124はケラチノサイトラインのいずれにもリードスルーを生じなかった。治療薬の単回投与によりリードスルーがもたらされ、正常なヒトケラチノサイトIKCにおいて観察されるC7の10-35のレベルにおいてC7を生成したことに留意すべきである。[ナンセンス突然変異を含む細胞における全長C7の発現を誘発するアミノグリコシドは、用量依存性である。]RDEBケラチノサイトは、G418及びゲンタマイシンの濃度を変えて処理された。細胞が溶解され、抗NC1又は抗βチューブリン抗体ローディングコントロールを用いてイムノブロット解析された。図2において、G418及びゲンタマイシンの双方が、EB5K及びDG16ラインの双方において用量依存性において全長C7生成を誘発したことに留意すべきである。[アミノグリコシドは、ナンセンス突然変異を含む細胞において全長C7の持続的な発現を誘発することができる。]EB5K及びDG16ケラチノサイトが、G4188μg/mL又はゲンタマイシン200μg/mLで処理された。処理後の3日、5日又は8日において細胞が溶解され、抗NC1又は抗βチューブリン抗体を用いてイムノブロット解析された。図3において、ゲンタマイシン及びG418の双方において持続するC7生成が誘発されたことに留意すべきである。[アミノグリコシドは、RDEBケラチノサイトにおいて全長C7の持続的な発現を誘発することができる。]DG16及びEB5Kケラチノサイトが、図4に示されるように、G4188μg/mL又はゲンタマイシン200μg/mLで処理された。免疫蛍光染色が、多クローン性の抗NC1抗体を用いて実施された。正常なヒトケラチノサイトIKCは、同時に染色された。G418又はゲンタマイシン処理されたDG16及びEB5KケラチノサイトにおいてC7染色を示したことに留意すべきである。これとは対照的に、未処理の親ケラチノサイトはC7発現が完全に欠落していた。[アミノグリコシド誘発の全長C7の発現は、ケラチノサイト過移動性を食い止めることもできる。]図5は、アミノグリコシド誘発の全長C7の発現が、ケラチノサイト過移動性を食い止めることができることを示し、これは創傷治癒を強化するのに有効であるという重要な特徴である。図5Aにおいて、ケラチノサイトは未処理であるか、あるいは、G4188μg/mL又はゲンタマイシン200μg/mLで48時間処理され、次いで、マトリクスとしてコラーゲンを用いた金塩コロイド遊走アッセイが施された。典型的なフィールドが、暗視野光学において40×で写真に撮られた。図5Bにおいて、遊走指数は遊走行路により破壊された全フィールド領域の百分率を表す。エラーバー、3つの異なる実験のSD。EB5K及びDG16ケラチノサイトは、正常なヒトケラチノサイトIKCと比べて過移動性を示し、これとは対照的に、アミノグリコシド処理は、その過移動性表現型を正常にリバースしたことに留意すべきである。[部位特異的突然変異誘発法によるCOL7A1ナンセンス変異体の構成]COL7A1遺伝子に異なるナンセンス突然変異を含む細胞を用いた実験に関し、部位特異的突然変異誘発法によりRDEBと関係する30のナンセンス突然変異を導入するためにC7発現ベクターを使用した。図6は、新たに導入された突然変異体各々の位置を示すC7分子の概略である。[アミノグリコシドは、様々なナンセンス突然変異においてナンセンス突然変異のリードスルー及び全長C7の生成を誘発することができる。]図7は、アミノグリコシドがナンセンス突然変異のリードスルーを誘発することができ、全長C7の発現をもたらすことを示す。ナンセンス突然変異構築物でトランスフェクトされたヒトの上皮293細胞が、図7AG4188μg/mL及び図7Bゲンタマイシン200μg/mLで48時間処理され、溶解され、抗NC1抗体又は抗βチューブリン抗体ローディングコントロールを用いてイムノブロット解析された。G418及びゲンタマイシンの双方が、表示された突然変異構築物を含む細胞ラインにおいて、PTCリードスルー及び全長C7生成を誘発したことに留意すべきである。[ナンセンス突然変異を含む多数の細胞が不完全C7を発現することができ、アミノグリコシドがこれらの細胞における不完全C7の発現レベルを強化することができる。]図8は、構築されたすべてのナンセンス変異体が不完全C7を発現するという驚くべき発見を示す。これは、従来の見解では、ナンセンス突然変異は細胞中に発現をもたらし得ないと予測されていたため、予期し得ないものである。図8Aにおいて、表示された変異体構築物でトランスフェクトされた293の細胞が溶解され、抗NC1抗体を用いてイムノブロット解析された。処理なしにおいて、PTC突然変異を抱いている細胞は不完全C7を生成したことに留意すべきである。図8Bにおいて、表示された変異体構築物でトランスフェクトされた293の細胞は、処理されないか、あるいはG4188μg/mLを用いて48時間処理され、溶解され、抗NC1抗体又は抗βチューブリン抗体ローディングコントロールを用いてイムノブロット解析された。アミノグリコシドで処理された細胞は、未処理の細胞と比べて、不完全及び全長C7の生成のレベルが驚異的に高いことに留意すべきである。