ポリマー骨格と、蛍光活性化部位の酵素的切断によって分離可能な骨格の蛍光発光抑制相互作用許容位置に共有結合する複数の近赤外蛍光色素とを含む分子内発光抑制された蛍光プローブ。骨格がポリペプチドである、請求項1記載のプローブ。ポリペプチドがポリリジンである、請求項2記載のプローブ。骨格に共有結合した複数の保護鎖をさらに含む、請求項1記載のプローブ。保護鎖が、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、メトキシポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコールとメトキシポリプロピレングリコールのコポリマー、デキストラン、およびポリ乳酸ポリグリコール酸からなる群より選択される、請求項4記載のプローブ。骨格がポリリジンであり、保護鎖がメトキシポリエチレングリコールである、請求項4記載のプローブ。蛍光活性化部位が骨格内に配置される、請求項1記載のプローブ。蛍光色素がポリリジンのεアミノ基に結合される、請求項7記載のプローブ。各蛍光色素が、蛍光活性化部位を含有するスペーサーによって骨格に結合される、請求項1記載のプローブ。スペーサーがオリゴペプチドである、請求項9記載のプローブ。オリゴペプチドが、ArgArg、ArgArgGly、GlyProIleCysPhePheArgLeuGly配列番号:1、およびHisSerSerLysLeuGlnGly配列番号:2からなる群より選択される、請求項10記載のプローブ。蛍光色素が、Cy55、Cy5、IRD41、IRD700、NIR1およびLaJollaBlueからなる群より選択される、請求項1記載のプローブ。蛍光色素が、骨格またはスペーサーのアミノ基にアミド結合によって共有結合される、請求項1記載のプローブ。標的部分をさらに含む、請求項1記載のプローブ。標的部分が、抗体、抗体断片、受容体結合ポリペプチドおよび受容体結合ポリサッカライドからなる群より選択される、請求項14記載のプローブ。a主に標的組織に蓄積し、蛍光色素結合部分と蛍光活性化部位における酵素的切断によって分離可能な蛍光色素結合部分の蛍光発光抑制性相互作用許容位置に共有結合した複数の近赤外蛍光色素とを含む分子内発光抑制された蛍光プローブを生きている動物またはヒトに投与する段階と、b標的組織が存在する場合には、1プローブが標的組織に主に蓄積し、2標的組織内の酵素が蛍光活性化部位における酵素的切断によってプローブを活性化する時間を可能にする段階と、c蛍光色素によって吸収可能な波長の近赤外光線で標的組織を照明する段階と、d蛍光色素によって放射される蛍光を検出する段階であって、それによって、存在する場合には標的組織の光学的画像を形成する段階とを含む、インビボにおける光学的画像形成方法。蛍光色素結合部分がポリマー骨格である、請求項16記載の方法。a蛍光色素結合部分と蛍光活性化部位における酵素的切断によって分離可能な蛍光色素結合部分の蛍光発光抑制性相互作用許容位置に共有結合した複数の近赤外蛍光色素とを含み、酵素的な切断が標的組織内で主に生じる分子内発光抑制された蛍光プローブを生きている動物またはヒトに投与する段階と、b標的組織が存在する場合には、標的組織内の酵素が蛍光活性化部位における酵素的切断によってプローブを活性化する時間を可能にする段階と、c蛍光色素によって吸収可能な波長の近赤外光線で標的組織を照明する段階と、d蛍光色素によって放射される蛍光を検出する段階であって、それによって、存在する場合には標的組織の光学的画像を形成する段階とを含む、インビボにおける光学的画像形成方法。蛍光色素結合部分がポリマー骨格である、請求項18記載の方法。詳細な説明プローブのデザインおよび合成プローブの骨格デザインは、生体適合性例えば、毒性および免疫原性、血清中の半減期、有用な官能基蛍光色素、スペーサーおよび保護基を接合するためおよび費用などの考慮点に依存する。有用な種類の骨格にはポリペプチドポリアミノ酸、ポリエチレンアミン、ポリサッカライド、アミノ化ポリサッカライド、アミノ化オリゴサッカライド、ポリアミドアミン、ポリアクリル酸およびポリアルコールが含まれる。好ましい骨格はLアミノ酸から形成されるポリペプチドからなる。ポリリジンを骨格として使用する場合には、ポリリジンの側鎖のεアミノ基が蛍光色素およびスペーサーの共有結合のための便利な反応性基として働くことができる図1Aおよび1B。骨格がポリペプチドである場合には、好ましくは、プローブの分子量は2kD~1000kDである。さらに好ましくは、その分子量は4kd~500kdである。骨格は、本質的に好適に長いインビボ持続時間半減期を有するように選択またはデザインすることができる。従って、保護鎖は本発明のいくつかの態様では必要ない。または、ポリリジンなどの速やかに生物分解されうる骨格を共有結合により結合する保護鎖と併用してもよい。有用な保護鎖の例には、ポリエチレングリコールPEG、メトキシポリエチレングリコールMPEG、メトキシポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール-二酸、ポリエチレングリコールモノアミン、MPEGモノアミン、MPEGヒドラジドおよびMPEGイミダゾールが含まれる。保護鎖は、PEGとポリペプチド、ポリサッカライド、ポリアミドアミン、ポリエチレンアミンまたはポリヌクレオチドなどの異なるポリマーとのブロックコポリマーであってもよい。合成の生体適合性ポリマーは、一般に、ホランドHollandら、1992年、生物分解可能なポリマーBiodegradablePolymers、AdvancesinPharmaceuticalSciences6101164に考察されている。有用な骨格保護鎖の組み合わせはメトキシポリエチレングリコールスクシニルNεポリLリジンPLMPEGである。この物質および保護鎖を有する他のポリリジン骨格の合成は、ボグダノフBogdanovら、米国特許第5593658号およびボグダノフBogdanovら、1995年、AdvancedDrugDeliveryReviews16335348に記載されている。種々の近赤外蛍光色素が市販されておりCy55およびCy5;イリノイ州アーリントンHtsのアマシャムAmersham;IRD41およびIRD700、ネブラスカ州リンカンのLICOR;NIR1、日本、熊本のデジンドDejindo;LaJollaBlue、フロリダ州マイアミのダイアトロンDoatron、本発明に係るプローブを構築するために使用することができる。近赤外スペクトル、すなわち650~1300nmに励起および発光波長を有する蛍光プローブを使用する。電磁スペクトルのこの部分を使用すると、組織透過性が最大になり、ヘモグロビン1200nmなどの生理学的に豊富な吸収物質による吸収が最小になる。インビボにおける使用のための理想的な近赤外蛍光色素は、1狭いスペクトルの特徴、2高い感度量子収率、3生体適合性、および4デカップリング吸収および励起スペクトルを示す。表1は6つの市販の近赤外蛍光色素の特性に関する情報を要約し、それらの構造は図2Aおよび2Bに示す。表1近赤外蛍光色素非活性化プローブによる分子内蛍光発光抑制は種々の発光抑制機序の任意のものによって起こりうる。2つの蛍光色素間の共鳴エネルギー移動を含むいくつかの機序が知られている。この機序では、第1の蛍光色素の発光スペクトルは第2の蛍光色素の励起と非常に類似しているはずであり、第2の蛍光色素の励起は第1の蛍光色素に非常に近接している。エネルギー移動効率はr6ここで、rは、発光抑制されている蛍光色素と励起されている蛍光色素との間の距離であるに逆比例する。蛍光色素の凝集またはエキサイマー形成により自己発光抑制が生ずることもある。この影響は厳密に濃度依存的である。発光抑制はまた、非極性から極性への環境変化によって生ずることもある。分子内発光抑制を達成するために、いくつかの方法を適用することができる。それらには、1第1の蛍光色素から好適な距離の位置に、エネルギーアクセプターとして第2の蛍光色素を結合すること、2自己発光抑制を誘導するために、骨格に高密度に蛍光色素を結合すること、および3骨格およびまたは保護鎖の非極性構造成分に近接して極性蛍光色素を結合することが含まれる。プローブの近接する蛍光色素およびまたは特定の領域、例えば非極性領域から蛍光色素が切断されると、蛍光が部分的または完全に回収される。蛍光色素は、蛍光色素の任意の好適な反応性基および蛍光色素結合部分、骨格またはスペーサーの同等な官能性基を使用して、蛍光色素結合部分、骨格またはスペーサーに共有結合することができる。例えば、蛍光色素のカルボキシル基または活性化されたエステルを使用して、ポリリジンのリジル側鎖のεアミノ基などの一級アミンとアミド結合を形成することができる。本発明のいくつかの態様において、蛍光色素は骨格に直接結合されるか、または生物分解不可能なスペーサーを介して骨格に結合される。このような態様では、蛍光色素活性化部位は骨格内にある。この種のプローブの中には、例えば流動相エンドサイトーシスによって腫瘍細胞間質および腫瘍細胞内に蓄積するものがある。この優先的な蓄積のために、プローブを活性化する酵素が腫瘍特異的でなくても、このようなプローブを使用して、腫瘍組織を画像化することができる。本発明の好ましい態様において、蛍光色素は、蛍光色素活性化部位を含有するスペーサーを介して骨格に結合される。オリゴペプチドスペーサーは、標的組織に関連する特異的なプロテアーゼによって認識されるアミノ酸配列を含有するようにデザインすることができる。前立腺特異的抗原PSAは33kDであり、キモトリプシン様セリンプロテアーゼは主に前立腺上皮細胞によって分泌される。通常、この酵素は主に、主要なヒト精液タンパク質の射精後分解に関与する。通常、PSAの血清濃度は前立腺上皮の容量に比例する。しかし、前立腺腫瘍細胞からのPSAの放出は、正常な前立腺上皮細胞からのものより約30倍多い。基底膜の損傷および組織構造の破壊により、PSAは細胞外空間および血中に直接分泌されることが可能になる。高濃度のPSAを血清中で検出することができるが、血清PSAはa1抗キモトリプシンタンパク質との複合体として存在し、タンパク質分解作用としては不活性である。遊離の複合体を形成していない活性化型PSAは悪性腫瘍化した前立腺組織からの細胞外液中に生じ、PSA活性は前立腺腫瘍組織のマーカーとして使用することができる。前立腺腫瘍組織にはPSAが非常に大量に含有される。従って、PSAによって認識されるアミノ酸配列を含有するスペーサーを使用して、前立腺腫瘍組織内で特異的に蛍光活性化を受ける近赤外プローブを作製することができる。PSA感受性スペーサーの例はHisSerSerLysLeuGlnGly配列番号:2である。他のPSA感受性スペーサーは、PSAの基質特異性に関する当技術分野において公知の情報を使用してデザインすることができる。例えば、1997年、デンメアドDenmeadeら、CancerRes5749244930を参照。カテプシンDは種々の哺乳類組織に大量に分布するリソソームアスパラギン酸プロテアーゼである。ほとんどの乳癌腫瘍において、カテプシンDは線維芽細胞または正常な哺乳類乳腺細胞において見られる濃度より2倍~50倍多い濃度で見られる。従って、カテプシンDは乳癌の有用なマーカーとなりうる。カテプシンDによって認識されるアミノ酸配列を含有するスペーサーを使用して、乳癌組織において特異的に蛍光活性化を受ける近赤外プローブを作製することができる。カテプシンD感受性スペーサーの例はオリゴペプチド:GlyProIleCysPhePheArgLeuGly配列番号:1である。他のカテプシンD感受性スペーサーは、カテプシンDの基質特異性に関する当技術分野において公知の情報を使用してデザインすることができる。例えば、グルニクGulnikら、1997年、FEBSLet413379384を参照。蛍光色素を骨格に直接結合する場合には、プローブの活性化は骨格の切断による。骨格の蛍光色素負荷量が多いと、トリプシンなどの酵素を活性化することによる骨格の切断を妨害することがある。従って、蛍光発光抑制とプローブ活性化酵素による骨格の接近性とのバランス。任意の所定の骨格蛍光色素の組み合わせでは活性化部位が骨格内にあるある範囲の蛍光色素負荷密度であるプローブを作製して、インビトロで試験して、最適な蛍光色素負荷率を決定することができる。蛍光色素が活性化部位を含有するスペーサーを介して骨格に結合される場合には、プローブ活性化酵素による骨格の接近性は必要ない。従って、スペーサーおよび蛍光色素による骨格の高負荷はプローブの活性化を有意に妨害しない。このような系では、ポリリジンの全てのリジン残基はスペーサーおよび蛍光色素を保有することができ、全ての蛍光色素は活性化酵素によって遊離されることができる。標的組織へのプローブの優先的な蓄積は、プローブに組織特異的標的部分標的リガンドを結合することによって達成または増大することができる。結合は共有結合であっても、非共有結合であってもよい。標的部分の例には、標的特異的マーカーに対するモノクローナル抗体または抗原結合性抗体断片、標的特異的受容体に対する受容体結合性ポリペプチドおよび標的特異的受容体に対する受容体結合性ポリサッカライドが含まれる。従来の抗体技術例えば、フォリFolliら、1994年、ヌードマウスにおいてヒト扁平上皮癌を免疫光検出するための抗体インドシアニン結合体AntibodyIndocyaninConjugatesforImmunophotodetectionofHumanSquqmousCellCarcinomainNudeMice、CancerRes5426432649;ネリNeriら、1997年、血管形成に関連するフィブロネクチンアイソフォームの親和性成熟組換え抗体断片による標的化TargetingByAffinityMaturedRecombinantAntibodyFragmentsofanAngiogenesisAssociatedFibronectionIsoform、NatureBiotechnology1512711275を使用して、抗体または抗体断片を作製して、本発明のプローブに結合することができる。同様に、公知の技術を使用して、受容体結合性ポリペプチドおよび受容体結合性ポリサッカライドを作製して、本発明のプローブに接合することができる。インビトロにおけるプローブ試験プローブがデザインされ、合成されたら、活性化前の分子内蛍光発光抑制の必要なレベルを解明するためにプローブをインビトロにおいて日常的に試験することができる。好ましくは、これは、希釈した生理学的緩衝液中で分子内発光抑制された蛍光色素含有プローブの蛍光地を得ることによって実施される。次いで、この値を、同じ緩衝液中で、同じ蛍光測定条件下で等しいモル濃度の遊離の蛍光色素から得られた蛍光値と比較する。好ましくは、測定が、蛍光vs蛍光色素濃度曲線の直線部分で行われていることを明らかにするために、この比較は一連の希釈液中で実施される。プローブ上の分子内発光抑制された蛍光色素のモル量は、任意の好適な技法を使用して、当業者によって求められる。例えば、近赤外吸収測定によってモル量は容易に求めることができる。または、骨格の反応性結合基またはスペーサーの損失、例えば、アミノ基の損失によるニンヒドリン反応性の減少を測定することによってモル量を容易に求めることができる。好適な分子内蛍光発光抑制が明らかにされたら、活性化酵素への暴露の結果、脱発光抑制、すなわち蛍光をインビトロにおいて明らかにすることができる。好ましい手法において、分子内発光抑制されたプローブの蛍光を活性化酵素による処理の前後に測定する。プローブがスペーサー内ではなく骨格内に活性化部位を有する場合には、脱発光抑制は種々の蛍光色素負荷レベルで試験されるべきである。ここで、負荷とは蛍光色素が実際に占めると思われる骨格の蛍光色素結合部位の割合を意味する。また、分子内発光抑制された近赤外蛍光プローブを試験するために培養により増殖させた細胞を日常的に使用することができる。細胞培養培地中に遊離するプローブ分子は蛍光顕微鏡によって検出不可能であるべきである。細胞の取り込みによって、プローブが活性化され、プローブを含有する細胞からの蛍光シグナルが得られる。従って、試験対象のプローブの細胞内取り込みの結果、活性化が生じることを明らかにするために培養細胞の顕微鏡検査を使用することができる。培養細胞の顕微鏡検査はまた、活性化が1カ所以上の細胞内コンパートメント内で生じているかどうかを判定するための便利な手段である。インビボにおける光学的画像形成本発明は新規蛍光プローブを含むが、蛍光の一般原理、光学的画像獲得および画像処理を本発明を実施する際に適用することができる。光学的画像形成技法は、例えば、アルファノAlfanoら、1997年、生物医学的培地の光学的画像形成の進歩AdvancesinOpticalImagingofBiomedicalMedia、AnnNYAcadSci820248270を参照。本発明を実施する際に有用な画像形成システムは3つの基本的な構成要素を含んでもよい。第1はほぼ単色の近赤外光源である。これは、フィルター処理済み白色光によって提供することができる。例えば、オメガオプティカルOmegaOpticalバーモント州ブラトルボロ製の好適な帯域通過フィルターに150ワットのハロゲンランプの光線を通過させることができる。第2の基礎的な構成要素は高域通過フィルター700nmで、励起光線から蛍光発光を分離する。好適な高域通過フィルターもオメガオプティカルOmegaOpticalから購入することができる。第3の基本的な構成要素は、適当なマクロレンズ付属品がついた弱光冷却したcooledCCDカメラである。好適な構成要素の選択および好適な光学的画像作製システムへのそれらの集成は当技術分野の通常の技術範囲内である。本発明をより十分に理解するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は例示的な目的のためだけであって、本発明をいずれにせよ限定すると考えられるべきではないことが理解されるべきである。近赤外蛍光プローブの合成本発明者らは、Cy55として知られる市販の蛍光色素吸収675nm、発光694nm;アマシャムAmersham、イリノイ州アーリントンハイツをPLMPEG平均分子量約450kDに接合することによって、3種の異なる分子内発光抑制された近赤外蛍光プローブを合成した。3種のプローブはポリリジン骨格への蛍光色素の結合が異なっていた。CyPLMPEGと命名されたプローブでは、Cy55は種々の密度でポリリジン側鎖のεアミノ基に直接結合し、εアミノ基の誘導体化率は01~70の範囲であった。CyRRGPLMPEGと命名されたプローブでは、Cy55蛍光色素はArgArgGlyからなるスペーサーによってポリリジンに結合された。CyGPICFFRLGPLMPEGと命名されたプローブでは、Cy55蛍光色素は、GlyProIleCysPhePheArgLeuGly配列番号:1からなるスペーサーによってポリリジンに結合された。トリプシンおよびトリプシン様プロテアーゼは、骨格が部分的にだけ誘導体化されている場合には、CyPLMPEGのポリリジン骨格を切断することができる。プローブCyRRGPLMPEGおよびCyGPICFFRLGPLMPEGはスペーサーの蛍光色素切断を可能にするが、骨格の蛍光色素切断は必ずしも可能ではないようにデザインされた。例えば、トリプシン切断に感受性を示すペプチドスペーサーRRGはPLMPEGを誘導体化するのに使用され、次いでCy55をRRGスペーサーのN末端に結合した。カテプシンD感受性ペプチドスペーサー、GPICFFRLG配列番号:1はPLMPEGを誘導体化するのに同様に使用された。一官能性NHSエステルアマシャムAmersham、イリノイ州アーリントンハイツとして市販されているCy55は、PLMPEGのポリリジン骨格の遊離εアミノ基を標識するために、販売業者の指示に従って使用した。Cy55を予め混合しておいたMPEGPL溶液02mgのPLMPEGを80mM重炭酸ナトリウム水溶液1mlに加えたものに添加し、最終濃度を17μMとした。3時間後、未反応蛍光色素および反応混合物の他の低分子量成分から反応生成物CyPLMPEGを分離するために、反応混合物を登録商標セファデックスSephadexG25ファルマシアPharmaciaカラム12cmに適用した。平均蛍光色素負荷は約20であった。すなわち、PLMPEGの55個の遊離アミノ基のうち11個がCy55で標識されたTNBSアッセイ法および吸光度測定に基づいて。図3Aは、溶液中の遊離Cy55の励起および発光スペクトルを示す。図3Bは、CyPLMPEGのCy55蛍光色素の励起および発光スペクトルを示す。Cy55の励起および発光波長は、それぞれ、648nmおよび694nmである。遊離Cy55およびCyPLMPEGの蛍光レベルには顕著な差があった。CyMPEGPLの蛍光レベルは、未結合Cy55のものより約30倍低かった。その後の検討において、本発明者らは、プローブの光学的特性に対する蛍光色素負荷の影響すなわち、蛍光色素が占めるポリリジン骨格のεアミノ基の割合を求めた。図4は、蛍光色素が占めるポリリジン骨格のεアミノ基の割合の関数として、CynMPEGPL白色の棒の相対的な蛍光シグナルを示す。20の負荷55個の基のうち11個およびそれ以上において、分子内発光抑制が観察され、より低い蛍光色素負荷のプローブと比較すると、蛍光シグナルは低かった。骨格のトリプシン切断後、図4の黒色のバーによって示されるように、蛍光シグナルが回収された。最大の蛍光回収は20負荷において得られた活性化の結果、15倍の蛍光シグナル増加。負荷が20より大きいと、回収は低下した。これは、立体障害と骨格の効率的な切断のために遊離リジン基が必要であることに依るとされている。細胞培養中のプローブ活性化機能的な画像形成用プローブを試験する際の次の段階は細胞培養実験を実施することであった。本発明者らは、取り込まれていないCyPLMPEGは蛍光顕微鏡によって検出不能で、細胞内取り込みによりプローブが活性化され、蛍光シグナルが得られると予測した。メラニン欠乏性B16黒色腫を使用して得られたデータは本発明者らの予測を確認しており、1非活性化プローブは蛍光を発光しない、2プローブはこの細胞株に取り込まれる、および3細胞内取り込みにより、プローブが活性化され、蛍光シグナルが検出されることを示した。この実験において、本発明者らは、B16細胞の輪郭の明視野像を、1時間0時付近のCyMPEGPLを細胞に添加したときの、近赤外蛍光条件下において同じ視野、および2プローブの細胞内取り込みの時間を可能にした後データは示していないと比較した。細胞は時間0時付近では近赤外蛍光によって検出されなかったが、プローブの細胞取り込み後、すなわち約2時間後は細胞内蛍光によってはっきりと見ることができた。この実験は、本発明者らの画像形成用プローブは、標的細胞依存的に光学的特性を検出可能であるように変更したことを実証した。インビボにおける画像形成インビボにおけるマウス画像形成は、3つの主要な部品、光源、台ホルダー、および画像記録装置を備えるシステムを使用して実施した。150Wハロゲンバルブを備えた光ファイバー光束ファイバーライトFiberlite高強度イルミネーターシリーズ180、ドランジェネンインダストリーズDolanJennenIndustriesは広いスペクトルの白色光線を提供した。610nm~650nmの範囲の均一な励起光源を形成するために、シャープなカットオフ帯域通過光フィルターオメガフィルターコーポOmegaFilterCorp、バーモント州ブラトレボロを光ファイバー束の末端に取り付けた。マウス全体を均一に照射するために、光源は画像形成台の約15cm上方に設置した。台自体は、記録装置によって反射されるおよび検出される可能性のある励起光子の数を低下する皮製の黒色面とした。蛍光発光光子は、700nmにシャープなカットオフのある低域通過フィルターOmegaFilterCorpを使用して選択した。Cy55染料は、約670nmに励起ピークを有し、広がったピークの肩が610nmより低い帯域に延在する。ピーク発光は694nmである。フィルターセットの広域スペース周波数と組み合わせた、5より大きいOD減衰のシャープなカットオフフィルターは、蛍光発光シグナルとして記録される入射励起光子の混信を顕著に低下した。光源と記録装置との角度を狭くすることにより、マウスの組織と相互作用した蛍光発光光子または散乱光子だけが低域通過フィルターに確実に到達した。画像の記録のためには、低域通過フィルターを低パワー顕微鏡に取り付けたLeicaStereoZoom6photoLeicamicroscopesystemsHeerbruggSwitzerland。弱光CCDSenSys140012bitcooledCCDPhotometricsTusconAZが蛍光発光画像を記録した。画像をパワーマックPowerMac7600120PCAppleComputerCupertinoCAに転送し、IPLabSpectrum31ソフトウェアSignalAnalyticsCorpVienneVAを使用して処理した。後処理には、不良CCDピクセルを排除するための標準的な操作と、第2の白色光源を使用して得たマウス全体の局所画像に発光画像を重ね合わせる重ね合わせ操作が含まれた。近赤外発光画像では一般的なアクジション時間は30秒で、白色光線非選択的画像では1秒であった。本発明者らは、腫瘍保有マウスにおいて分子内発光抑制された近赤外蛍光プローブCy11PLMPEG;20蛍光色素負荷を試験した。腫瘍株9LまたはLX1を有するヌードマウスに2nmolのCy11PLMPEGを静脈内注射した。直後、およびプローブの静脈内投与の36時間後までに、近赤外光線によってマウスを画像化した。腫瘍内の蛍光シグナルの増加を、プローブが腫瘍細胞内部に取り込まれ、エンドソームによる加水分解によって活性化される時間の関数として観察した。図5Aは、画像形成したマウスの略図で、図5Bおよび5Cに示す腫瘍の位置を表している。図5Bは、Cy11PLMPEGプローブを注射したヌードマウスの側腹部の腫瘍を被覆する皮膚の可視光写真である。図5Cは、対応する近赤外蛍光画像である。腫瘍は、周囲の組織とは対照的に、強烈な蛍光領域として見える。他の態様は特許請求の範囲内である。