"配列番号1と少なくとも60の配列同一性を有しAmbler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置に親水性アミノ酸残基を有するアミノ酸配列、又はその変異体若しくは断片を含む、β-ラクタマーゼ。Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置にあるβ-ラクタマーゼのアミノ酸が、親水性アミノ酸で置き換えられることを特徴とする、配列番号1と少なくとも60の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むβ-ラクタマーゼを改変する方法。β-ラクタマーゼが、配列番号1と少なくとも68の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、β-ラクタマーゼ活性を有し、Ambler分類に従った276位に対応する位置に、アスパラギン酸D以外の親水性アミノ酸残基を含む、その変異体若しくは断片を含む、請求項1に記載のβ-ラクタマーゼ又は請求項2に記載の方法。β-ラクタマーゼが、配列番号1と少なくとも60の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、Ambler分類に従った276位に対応する位置にある親水性アミノ酸残基がアスパラギン酸D以外である、請求項1に記載のβ-ラクタマーゼ又は請求項2に記載の方法。親水性アミノ酸が、アルギニンR、ヒスチジンH、及びリシンKからなる群からの極性且つ正電荷の親水性アミノ酸から選択されることを特徴とする、請求項1に記載のβ-ラクタマーゼ又は請求項2に記載の方法。親水性アミノ酸が、アスパラギンN、グルタミンQ、セリンS、及びスレオニンTからなる群からの極性且つ中性電荷の親水性アミノ酸から選択されることを特徴とする、請求項1に記載のβ-ラクタマーゼ又は請求項2に記載の方法。276位に対応する配列番号1の位置にあるアミノ酸がアスパラギンであることを特徴とする、請求項6に記載のβ-ラクタマーゼ。276位に対応する配列番号1の位置にあるアミノ酸がアルギニンであることを特徴とする、請求項5に記載のβ-ラクタマーゼ。276位に対応する配列番号1の位置にある親水性アミノ酸がαヘリックス内に位置することを特徴とする、請求項1から8までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼ又は方法。β-ラクタマーゼが、Ambler分類に従ったLeu220及びArg244からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸をさらに含むことを特徴とする、請求項1から9までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼ又は方法。β-ラクタマーゼがペニシリン及び/又はセファロスポリンを加水分解することを特徴とする、請求項1から10までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼ又は方法。β-ラクタマーゼが、野生型β-ラクタマーゼと比較して、セファロスポリンに対する向上した触媒効率を有することを特徴とする、請求項1から11までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼ又は方法。セファロスポリンが、セフォペラゾン、セフトリアキソン、及びセファゾリンからなる群から選択されることを特徴とする、請求項11又は12に記載のβ-ラクタマーゼ又は方法。v請求項1又は3から13までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼをコードする遺伝子を準備するステップ、vi宿主細胞を該遺伝子で形質転換するステップ、viiβ-ラクタマーゼを生産する宿主細胞を得るステップ、viiiβ-ラクタマーゼを回収するステップを含むことを特徴とする、請求項1又は3から13までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼを生産する方法。請求項1又は3から13までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼをβ-ラクタム抗生物質と同時に又は連続的に対象に投与することを特徴とする、胃腸管におけるβ-ラクタム抗生物質誘発性の有害作用を治療又は予防する方法。配列番号2若しくは4又はその縮重配列のいずれか1つの配列を含むか、或いは請求項1又は3から13までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼをコードすることを特徴とするポリヌクレオチド。請求項16に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。請求項1又は3から13までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼを含む医薬組成物。薬剤として用いるための、請求項1又は3から13までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼ。胃腸管におけるβ-ラクタム抗生物質誘発性の有害作用を治療又は予防するための薬剤の製造における、請求項1又は3から13までのいずれか一項に記載のβ-ラクタマーゼの使用。β-ラクタマーゼ単数又は複数が経口的に投与されることを特徴とする、請求項15に記載の方法又は請求項20に記載の使用。β-ラクタマーゼ単数又は複数が患者の胃腸に直接的に投与されることを特徴とする、請求項15に記載の方法又は請求項20に記載の使用。β-ラクタマーゼ単数又は複数及びβ-ラクタム抗生物質が、腸溶コーティングされたペレットの形態で一緒に対象に投与されることを特徴とする、請求項15若しくは21から22までのいずれか一項に記載の方法又は請求項20から22までのいずれか一項に記載の使用。したがって、例えばメタロ-β-ラクタマーゼにおいて見られるような、基質プロフィールが拡張した新規のβ-ラクタマーゼ又はP1A誘導体が不可欠である。本発明は、新規の遺伝子操作されたP1Aβ-ラクタマーゼ誘導体、さらに、β-ラクタマーゼを改変及び生産するための新規の方法を提供する。本発明の新規のP1Aβ-ラクタマーゼ組換え誘導体は、適切なβ-ラクタマーゼの上記の3つの要件を満たしすなわち、酵素活性を保つ能力を有し、β-ラクタムを効率的に加水分解し、且つ医薬組成物の製造における条件に耐える、さらに、拡張した基質プロフィールを有する。本発明のβ-ラクタマーゼはまた、小腸管における胆管から除去されたβ-ラクタムを不活化するための、非経口セファロスポリン療法と組み合わせて用いることができる。本発明は、新規のIpsatP3A薬学的タンパク質D276N置換されたP1A誘導体の予備研究及び前臨床研究を強調し、単一原薬用量を提示する。本発明は、β-ラクタマーゼを改変するため及びβ-ラクタマーゼを生産するための迅速且つ効率的な方法を可能にする。さらに、本発明によって、さらに効果的で特異的な治療が利用可能になる。本発明の酵素は、様々なグループのβ-ラクタム抗生物質によって誘発される有害作用を治療又は予防するための原薬の大規模製造に適している。本発明の目的は、新規のβ-ラクタマーゼ、特にバチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼを提供すること、並びに当該β-ラクタマーゼに関する生成物、方法、及び使用を提供することである。医薬品産業におけるさらなる開発のためのツールもまた、本発明によって提示される。本発明は、配列番号1と少なくとも60の配列同一性を有しAmbler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置に親水性アミノ酸残基を有するアミノ酸配列、又はその変異体若しくは断片を含む、β-ラクタマーゼに関する。本発明はまた、本発明のβ-ラクタマーゼを含む医薬組成物に関する。本発明はまた、配列番号1と少なくとも60の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むβ-ラクタマーゼを改変する方法であって、Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置にあるβ-ラクタマーゼのアミノ酸が、親水性アミノ酸で置き換えられる方法に関する。さらに、本発明は、β-ラクタマーゼを生産する方法に関するものであり、本方法は以下のステップを含む:i本発明のβ-ラクタマーゼをコードする遺伝子を準備するステップ、ii宿主細胞を当該遺伝子で形質転換するステップ、iiiβ-ラクタマーゼを生産する宿主細胞を得るステップ、ivβ-ラクタマーゼを回収するステップ。さらに、本発明は、本発明のβ-ラクタマーゼをβ-ラクタム抗生物質と同時に又は連続的に対象に投与することによって、胃腸管におけるβ-ラクタム抗生物質誘発性の有害作用を治療又は予防する方法に関する。さらに、本発明は、薬剤として用いるためのβ-ラクタマーゼに関する。さらに、本発明は、胃腸管におけるβ-ラクタム抗生物質誘発性の有害作用を治療又は予防するための薬剤の製造におけるβ-ラクタマーゼの使用に関する。さらに、本発明は、配列番号2若しくは4又はその縮重配列のいずれか1つの配列を含むか、或いは本発明のβ-ラクタマーゼをコードするポリヌクレオチドに関するものである。本発明はまた、当該ポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関するものである。β-ラクタマーゼは、腸の正常な微生物叢の変化及びβ-ラクタム耐性細菌の異常増殖を含む、β-ラクタム誘発性の有害作用を予防するために、胃腸管における未吸収のβ-ラクタムを不活化する際に用いられているWO9313795、WO2008065247、WO2007147945。本発明はここで、驚くべき変化した基質プロフィールを示す、バチルスリケニフォルミスの改変型β-ラクタマーゼを提供する。本明細書において用いられる場合、β-ラクタマーゼは、β-ラクタムを加水分解する酵素を言う。β-ラクタム環のアミド結合の加水分解によって、抗微生物剤が生物学的に不活性となる。本明細書において用いられる場合、クラスAのβ-ラクタマーゼAmbler分類はセリンβ-ラクタマーゼを言い、このセリンβ-ラクタマーゼにおいて、β-ラクタムの加水分解は、αヘリックス2におけるアミノ酸位置70に通常存在する、活性部位におけるセリンによって仲介される。クラスAのβ-ラクタマーゼには、限定はしないが、Len-1、SHV-1、TEM-1、PSE-3/PSE-3、ROB-1、セレウス菌Bacilluscereus、例えば5/Bタイプ1、569/Hタイプ1、及び569/Hタイプ3、炭疽菌Bacillusanthrasissp、バチルスリケニフォルミス、例えばPenP、バチルスウェイヘンステファネンシスBacillusweihenstephanensis、バチルスクラウジBacillusclausii、黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureus、PC1、Sme-1、NmcA、IMI-Mタイプ、PER-Mタイプ、VEB-Mタイプ、GES-Mタイプ、KPC-Mタイプ、CME-Mタイプ、並びにCTX-Mタイプのβ-ラクタマーゼが含まれる。ペプチド及びポリヌクレオチドの配列同一性本発明の突然変異β-ラクタマーゼD276X、P1A誘導体のアミノ酸配列は、配列番号1及び配列番号3として示される。対応するヌクレオチド配列は、配列番号2及び配列番号4として示される。配列番号1は、β-ラクタマーゼの二次構造の形成に関与するアミノ酸配列を示す。配列番号3は、31アミノ酸長のシグナル配列を含む、タンパク質の完全長アミノ酸配列を示す。本発明のβ-ラクタマーゼは、配列番号1又は3と少なくとも30、35、40、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.8、99.9、又は100の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。本発明の具体的な実施形態によれば、ペプチドは、配列番号1又は3と少なくとも30、35、40、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.8、99.9、又は100の同一性を有する。本発明の1つの好ましい実施形態において、本発明のβ-ラクタマーゼは、配列番号1と少なくとも60の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。本発明の別の好ましい実施形態において、β-ラクタマーゼは、配列番号1又は3と少なくとも60の配列同一性を有する。本発明の1つの実施形態において、配列番号1との上記の配列同一性のいずれかを有するアミノ酸配列を含むβ-ラクタマーゼは、Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置に、アルギニンR、ヒスチジンH、リシンK、アスパラギンN、グルタミンQ、セリンS、及びスレオニンTからなる群から選択される親水性アミノ酸を有する。本発明の好ましい実施形態において、ペプチドは、配列番号1又は3で示される配列を有する。本発明の1つの実施形態において、β-ラクタマーゼは、配列番号1又は3で示される配列を有し、この配列において、Ambler分類に従った276位に対応する位置にある親水性アミノ酸残基配列番号1又は3においてXaaとして印が付けてあるはアルギニンR、Argである。本発明の別の実施形態において、β-ラクタマーゼは、配列番号1又は3で示される配列を有し、この配列において、Ambler分類に従った276位に対応する位置にある親水性アミノ酸残基配列番号1又は3においてXaaとして印が付けてあるはアスパラギンN、Asnである。任意の配列と本発明の配列との同一性は、本発明の配列全体との同一性を言う。配列同一性は、任意の従来の生物情報学的方法によって、例えば、BLASTBasicLocalAlignmentSearchTools又はFASTAFAST-AIIを用いて決定することができる。本発明はまた、新規のβ-ラクタマーゼの任意の変異体又は断片に関する。本明細書において用いられる場合、β-ラクタマーゼの断片又は変異体は、生物学的機能を有する、すなわち酵素的に活性である、任意の部分又は変異体を言う。変異体は、ペプチド配列におけるわずかな変化、例えば、突然変異、わずかな欠失又は挿入を有するペプチドを言う。断片及び変異体は、Ambler分類に従った276位に対応する位置に親水性アミノ酸を含むべきである。親水性アミノ酸は、典型的には、アスパラギン酸D以外のものである。配列番号3から得ることが可能であり、細胞の外側に分泌される、β-ラクタマーゼの様々な短い形態が存在する。これらは、エキソ形態と呼ばれる。エキソ形態は、細胞壁又は培地におけるプロテアーゼの加水分解活性の結果生じる。D276X、D276N、D276R、突然変異形態、P1A誘導体、又はP3Aは、本明細書において用いられる場合、配列番号3の任意のβ-ラクタマーゼ活性な断片及び/若しくは変異体、又は明示されたアミノ酸配列配列番号1を含む変異体を包含する。特に、本発明のβ-ラクタマーゼはNH2切断型の形態であり、NH2切断型の形態とは、β-ラクタマーゼがアミノ末端で切断されていることを意味する。NH2切断に加えて、β-ラクタマーゼは、β-ラクタマーゼ活性を有する限りにおいて、1つ又は複数のさらなるアミノ酸の欠失、置換、及び/又は挿入を含み得る。前記改変は、天然の変型若しくは突然変異体、又は例えば遺伝子工学によって導入された、人工の改変であり得る。差次的にアミノ末端が切断されたエキソ形態が、バチルスリケニフォルミスの成長培地において見出されている。このようなエキソ形態もまた、本発明に包含される。Matagneらは、天然宿主のバチルスリケニフォルミス749/Cによって生産された細胞外形態における様々な程度の微小不均一性を記載しているMatagneA.ら、1991.BiochemJ.273:503~510。異なるN末端アミノ酸残基を有する以下の5つの異なる分泌型エキソ形態が同定された。最初のアミノ酸残基は太字で表されている。C末端のアミノ酸残基は右側に示されている。セリンSから開始するエキソ形態は、バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼの大型分泌型形態と呼ばれ、リシンKから開始するものは小型分泌型形態と呼ばれる。第1のαヘリックスα1ヘリックスはアスパラギン酸Dイタリック体で表されているから開始し、最後のαヘリックスα11ヘリックスの最後はアスパラギンNイタリック体で表されているで終わる。本発明の1つの実施形態によると、β-ラクタマーゼは、タンパク質の二次構造に関与するKnoxJ.R.ら、1991.J.MolBiol.220:435~455、配列番号1のアミノ酸1~258又は配列番号3のアミノ酸7~264を少なくとも含む。本発明の別の実施形態によると、前記配列番号1のアミノ酸1~258又は配列番号3のアミノ酸7~264の1つ又は複数は、欠失しているか又は置き換えられている。本発明のさらに別の実施形態によると、β-ラクタマーゼのアミノ末端は、NH2-KTEMKDD配列番号3のアミノ酸4~10で開始する。このいわゆるES-βLエキソ形態は、GebhardらGebhardL.G.ら、2006、J.Mol.Biol.21:3581280~288によって記載されているように、最大21個の連続する残基をさらに欠き得る。本発明の別の実施形態によると、アミノ末端は、配列番号3のグルタミン酸Eで開始し、特に、これは、NH2-EMKDD配列番号3のアミノ酸6~10で開始するか、或いは、これは、NH2-MKDD配列番号3のアミノ酸7~10又は配列番号1のアミノ酸1~4で開始する。β-ラクタマーゼのアミノ末端配列における可変領域は、様々なβ-ラクタマーゼ形態の酵素的パラメータの不変性の要因となる厳格な構造を有さない。β-ラクタマーゼのカルボキシル末端の最後4つのアミノ酸MNGK-COOH配列番号3のアミノ酸265~268は、二次構造の一部ではなく、したがってまた、活性を失うことなく欠失し得る。別の実施形態において、最大9個のC末端アミノ酸が欠失し得る。C末端切断型形態のタンパク質は、Santosら、SantosJ.ら、2004.Biochemistry43:1715~1723によって記載されている。上記に説明した、β-ラクタマーゼの異なる形態の全ては、β-ラクタマーゼ活性を有する他の形態のタンパク質と共に、本発明に包含される。本発明のポリヌクレオチドは、配列番号2若しくは4のいずれか1つの配列又はその縮重配列を含み得るか又は有し得る。配列番号2又は4のいずれか1つで示される配列の縮重配列であるポリヌクレオチドは、配列番号2又は4と比較して1つ又は複数の異なるヌクレオチドを有するが同一のアミノ酸をコードするポリヌクレオチドを言う。好ましくは、配列番号2又は4のヌクレオチドトリプレットnnnは、親水性アミノ酸を、最も好ましくはN又はRをコードする。本明細書において用いられるポリヌクレオチドは、DNA配列又はRNA配列などのヌクレオチドの配列であり、一本鎖又は二本鎖のポリ核酸であり得る。ポリヌクレオチドという用語は、ゲノムDNA、cDNA、及びmRNAを包含する。本発明の具体的な実施形態によると、ポリヌクレオチドは、配列番号2又は4のヌクレオチド配列のいずれか1つ又はその断片と少なくとも30、35、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、65、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.8、又は99.9の同一性を有する。本発明の1つの具体的な実施形態において、ポリヌクレオチドは、配列番号2又は4の配列のいずれか1つで示される配列を有する。クラスAβ-ラクタマーゼの276位Amblerにあるアミノ酸アミノ酸位置276にあるアスパラギンAsn、Nは、広範なクラスAβ-ラクタマーゼ内に存在する。Asn276の機能は、TEMβ-ラクタマーゼ及びSHVβ-ラクタマーゼにおいて集中的に研究されており、これらにおいて、Asn276は、アルギニンArg、R244のグアニジウム基と水素結合を形成し、したがって、Arg244の側鎖の可動性を限定する。TEM酵素又はSHV酵素におけるアスパラギンAsn、Nの置換は、クラブラン酸、スルバクタム、又はタゾバクタムなどのセリンβ-ラクタマーゼ阻害剤に対する耐性に大きく寄与する1つであるとして認識されている。TEM-1β-ラクタマーゼのN276DAsp置換変異体は、阻害剤耐性β-ラクタマーゼTEM-35及びTEM-36などのIRT酵素内に存在する。N276D変異体は、野生型TEM-1酵素よりもクラブラン酸及びタゾバクタムに対して耐性であるが、同時に、様々なペニシリンに対するN276D変異体の触媒効率kcat/Kmは、TEM-1野生型酵素における触媒効率の50未満である。セファロスポリンに対するN276D変異体の触媒有効性は、野生型TEM-1の触媒有効性と比較して低減しているSavesIら、1995、JBiolChem.270:18240~18245。TEM-1と同様に、SHV-1β-ラクタマーゼ又はSHV-5β-ラクタマーゼにおけるN276D置換は、セリンβ-ラクタマーゼ阻害剤に対する耐性を増強させるが、ほとんどのβ-ラクタムに対するそれらの加水分解効率を低減させるGiakkoupiP.ら、1999、JAntimicrobiolChemother、43:23~29。さらに、SHV-1酵素又はSHV-5酵素におけるN276D置換は、第4世代のセファロスポリン、セフピロム、及びセフェピムを分解するそれらの能力を適度に向上させる。SHVタイプのβ-ラクタマーゼであるOHIO-1において、N276GGly突然変異体は、クラブラン酸に対して高度に耐性であることが示されており、一方、TEM-1由来のN276G突然変異体は、クラブラン酸に対する中程度の耐性を有しているにすぎないBono-moRAら、1995、BiochimBiophysActa.1247:121~125。CTX-M酵素のファミリーにおいて、アルギニンArg、Rは、典型的には276位に存在しBonnetR.、2004、AntimicrobAgentsChemother、48:1~14、Arg276の突然変異は、酵素活性の拡張に影響する。セフォタキシムに対するCTX-M酵素の相対的加水分解速度は、Arg276の置換によって穏やかに低減する。さらに、Arg276Trp、Arg276Cys、Arg276Ser、及びArg276GlyCTX-M突然変異酵素は、β-ラクタマーゼ阻害剤耐性のレベルに影響しないBonnetR.、2004、AntimicrobAgentsChemother、48:1~14Perez-LlarenaF.J.ら、2008、JAntimicrobiolChemother、61:792~797。ここで、本発明において、配列番号1バチルスリケニフォルミスPenP誘導体、すなわちP1A誘導体と少なくとも60の配列同一性を有しAmbler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置に親水性アミノ酸残基を有するアミノ酸配列を含むβ-ラクタマーゼは、拡張したβ-ラクタムスペクトル及びβ-ラクタムに対する向上した触媒効果を示す。以前は、セリンβ-ラクタマーゼ阻害剤に対する耐性又は様々なβ-ラクタムに対する触媒特性における、276位にあるアスパラギン酸Dのアミノ酸置換の役割は、バチルス種のβ-ラクタマーゼ、具体的にはバチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼの間では研究されていなかった。本明細書において用いられる場合、Ambler分類に従ったアミノ酸残基276は、配列番号1のアミノ酸位置243及び配列番号3のアミノ酸位置249に対応する。典型的には、本発明のβ-ラクタマーゼは、アスパラギン酸D以外の、Ambler分類の276位に対応する位置にある親水性アミノ酸を有する。アミノ酸は、その側鎖の化学的及び/又は構造的特性に基づいて分類される。アミノ酸分類グループには親水性アミノ酸が含まれ、これは、以下の群に分けられる:極性且つ正電荷の親水性アミノ酸、極性且つ中性電荷の親水性アミノ酸、極性且つ負電荷の親水性アミノ酸、芳香族の極性且つ正電荷の親水性アミノ酸。本明細書において用いられる場合、親水性アミノ酸は、上記のグループ全ての親水性アミノ酸を含み、すなわち、極性且つ正電荷の親水性アミノ酸、極性且つ中性電荷の親水性アミノ酸、極性且つ負電荷の親水性アミノ酸、及び/又は芳香族の極性且つ正電荷の親水性アミノ酸を言うhttp://www.biomed.curtin.edu.au/biochem/tutorials/AAs/AA.html。極性且つ正電荷の親水性アミノ酸は、アルギニンR又はリシンKを言う。極性且つ中性電荷の親水性アミノ酸は、アスパラギンN、グルタミンQ、セリンS、又はスレオニンTを言う。極性且つ負電荷の親水性アミノ酸は、アスパルテートD又はグルタメートEを言う。芳香族の極性且つ正電荷の親水性アミノ酸はヒスチジンHを言う。本発明の1つの実施形態において、親水性アミノ酸は、Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置にある、アルギニンR、ヒスチジンH、リシンK、アスパラギンN、グルタミンQ、セリンS、及びスレオニンTからなる群から選択される中性電荷又は正電荷の親水性アミノ酸である。本発明の好ましい実施形態において、Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置にあるβ-ラクタマーゼの親水性アミノ酸は、アルギニンR、ヒスチジンH、及びリシンKからなる群の極性且つ正電荷の親水性アミノ酸から選択される。最も好ましくは、Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置にあるアミノ酸は、アルギニンである。本発明の別の好ましい実施形態において、親水性アミノ酸は、アスパラギンN、グルタミンQ、セリンS、及びスレオニンTからなる群の極性且つ中性電荷の親水性アミノ酸から選択される。最も好ましくは、276位に対応する配列番号1の位置にあるアミノ酸は、アスパラギンである。本発明のさらに好ましい実施形態において、276位に対応する配列番号1の位置にある親水性アミノ酸は、αヘリックス内に位置する。αヘリックスは、タンパク質二次構造のモチーフであり、コイル状の立体構造に類似している。αヘリックスは、DNA結合モチーフにおいて特定の特異性を有し得る例えば、ヘリックス-ターン-ヘリックスモチーフ、ロイシンジッパーモチーフ、及びジンクフィンガーモチーフ。本発明の好ましい実施形態において、アミノ酸残基276は、最後のαヘリックス11に位置する図1。このαヘリックス11は、クラスAβ-ラクタマーゼの間で保存されていない。クラスAβ-ラクタマーゼの特異的な特徴クラスAβ-ラクタマーゼの1つの特異的な特徴は、Arg278のグアニジウム基である。CTX-M酵素は、三次元構造内で等価の位置に存在する、Arg278、Arg244、又はArg220を有する。220位又は244位にあるアルギニンは、TEM-1Leu220及びArg244及びストレプトコッカスアルブスStreptococcusalbusのGβ-ラクタマーゼArg220及びAsn244の触媒特性に必須であることが示されている。アルギニン244又はアルギニン220の塩基性グアニジウム基は、β-ラクタムの結合、又はクラブラン酸などの自殺阻害剤の不活化化学に寄与することが提案されているMatagneら、1998、BiochemJ.330:582~598Perez-Llarenaら、2008、JAntimicrobiolChemother、61:792~797。バチルスリケニフォルミスのPenPにおいて、Arg-244残基は、アスパラギン酸276と塩結合を形成するHerzberg、O.1991、JMolBiol.217:701~719Knox,J.R.、andP.C.Moews、1991、JMolBiol.220:435~555。本発明の好ましい実施形態において、β-ラクタマーゼは、それぞれ配列番号1のLeu189及びArg212に対応する、Ambler分類に従ったLeu220及びArg244からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸をさらに含む。バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼPenP、P1A本発明のβ-ラクタマーゼは、バチルスリケニフォルミス749/C株に由来する。バチルスリケニフォルミス749/Cのβ-ラクタマーゼPenPペニシリンアミド-β-ラクタムヒドロラーゼ、EC3.5.2.6は、クラスAβ-ラクタマーゼの機能的分類においてサブグループ2aに属するBushK.ら、1995、AntimicrobAgentsChemother39:1211~1233。バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼは、例えばペニシリン、アンピシリン、アモキシシリン、又はピペラシリンを分解するための高い加水分解能力を有するペニシリナーゼであると考えることができ、これは通常、クラブラン酸、スルバクタム、又はタゾバクタムなどの活性部位特異的なβ-ラクタマーゼ阻害剤によって阻害されるBushK.ら、1995、AntimicrobAgentsChemother.39:1211~1233。バチルスリケニフォルミス749/Cのβ-ラクタマーゼは、307個のアミノ酸残基からなるプレタンパク質として発現する。転移しその26アミノ酸残基長のシグナル配列が除去された後、これは、アミノ末端のシステインC27がジアチルグリセリドとチオエーテル結合を形成している、膜固定型のリポタンパク質となる。バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼはまた、リポタンパク質形態のタンパク質分解産物である分泌型細胞外形態としても見られるIzuiK.ら、1980、Biochemistry19:1882~1886MatagneA.ら、1991、BiochemJ、273:503~510。アミノ酸残基43~307の小型の分泌型形態小型エキソ形態、P1Aをコードする、バチルスリケニフォルミス749/Cのβ-ラクタマーゼ遺伝子の領域は、宿主ベクターである枯草菌Bacillussubtilisの生産系を仕立てるためのDNA断片として選択されているWO2008065247。機能β-ラクタマーゼは、ペニシリン、セファロスポリン、クラバム又はオキサペナム、セファマイシン、及びカルバペネムなどの、β-ラクタム環を含むβ-ラクタム抗生物質を加水分解する。本発明の好ましい実施形態において、β-ラクタマーゼは、ペニシリン及び/又はセファロスポリンを加水分解する。ペニシリンは、元はペニシリウム属Penicilliumに由来する、いくつかの天然ペニシリン又はペニシリンの半合成変異体を言う。ペニシリンには、限定はしないが、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、ヘタシリン、オキサシリン、メズロシリン、ペニシリンG、ペニシリンV、及びピペラシリンが含まれる。セファロスポリンにおいて、β-ラクタム環は、ペニシリンにおいて見られる5員のチアゾリジン環よりも6員のジヒドロチアジン環に縮合する。それらの生物学的活性に基づいて、セファロスポリンは6つの世代に分けられるが、一部のセファロスポリンは、特定の世代にグループ化されていない。本発明の1つの具体的な実施形態において、β-ラクタマーゼは、野生型β-ラクタマーゼと比較して、セファロスポリンに対する向上した触媒効率を有する。本発明によれば、Ambler分類に従って番号付けされた276位にあるアスパラギン酸Asp、DがアスパラギンN又はアルギニンRなどの親水性アミノ酸残基で置換されている、バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼは、セファロスポリンなどのβ-ラクタム抗生物質に対する拡張した活性を示す。本発明の1つの実施形態において、セファロスポリンは、セフォペラゾン、セフトリアキソン、及びセファゾリンからなる群から選択される。本明細書において用いられる場合、β-ラクタマーゼの触媒効率は、β-ラクタム抗生物質を加水分解する能力を言う。向上した触媒効率は、任意の生体試料又は対象から、任意の従来のインビトロ、エクスビボ、又はインビボでの方法によって測定することができる。β-ラクタマーゼを生産及び改変する方法本発明のβ-ラクタマーゼは、任意の従来の遺伝子操作方法を用いて酵素を改変することによって生産することができる。推論設計rationaldesign、ランダム突然変異生成、DNAシャッフリングランダム組換え、ファージディスプレイ、全ゲノムシャッフリング、ヘテロ二本鎖、設計されたオリゴヌクレオチドの一時的な鋳型集合体に対するランダムキメラ生成、突然変異誘発性及び一方向性の再集合、エキソンシャッフリング、Yライゲーションに基づくブロックシャッフリング、非相同組換え、進化分子工学と、推論設計rationaldesignとの組み合わせなどの方法を、生産において用いることができる。さらに、突然変異酵素は、部位特異的突然変異生成、及びオーバーラップ伸長技術によるスプライシングを用いて得ることができる。本発明の1つの実施形態において、β-ラクタマーゼを改変する方法は、Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置にあるアミノ酸を親水性アミノ酸で置き換えることによる、配列番号1と少なくとも60の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むβ-ラクタマーゼを改変するステップを含む。親水性アミノ酸は、アルギニンR、ヒスチジンH、リシンK、アスパラギンN、グルタミンQ、セリンS、及びスレオニンTからなる群から例えば選択される、任意の親水性アミノ酸であり得る。本発明の1つの実施形態において、非親水性アミノ酸は、Ambler分類に従った276位に対応する配列番号1の位置にある親水性アミノ酸で置き換えられている。本発明のβ-ラクタマーゼはまた、例えば、ペプチド合成などの合成方法によって、又は宿主細胞における組換え生産によって生産することができる。本発明の好ましい実施形態において、酵素は組換え酵素である。本明細書において用いられる場合、組換え遺伝物質は、典型的には様々な由来のDNA鎖などの遺伝物質の組み合わせである遺伝物質を言い、これは、配列の組み合わせ又は挿入によって生産されている。本発明のポリヌクレオチドは、例えば、プロモーターなどの任意の内因性又は外因性の調節因子の制御下で挿入することができる。組換えタンパク質は、組換えDNAに由来する。目的の少なくとも1つのポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド断片は、細胞から単離することができるか、又は合成によって生産することができる。このポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド断片は、宿主細胞に形質転換することができる。本発明の任意のペプチドを生産するための適切な宿主細胞は、任意の真核細胞又は原核細胞、好ましくは細菌、最も好ましくはバチルス種の株、例えば枯草菌、バチルスリケニフォルミス、バチルスプミルスBacilluspumilis、又はバチルスアミロリケファシエンスBacillusamyloliquefaciensであり得る。本明細書において用いられる場合、形質転換は、外来遺伝物質、好ましくはDNAによる、細胞の遺伝的変化であって、この遺伝物質の発現をもたらすものを言う。外来遺伝物質は、そのままで、又はベクター、プラスミドなどの任意の他の遺伝物質内に組み込まれた形で、導入することができる。任意の遺伝子操作方法又は任意の分子クローニング方法を、本発明のポリヌクレオチドでの宿主細胞の形質転換に用いることができる。外来遺伝物質を真核細胞内に導入する様々な方法が存在する。ポリマー例えば、DEAE-デキストラン又はポリエチレンイミン、リポソーム、及びナノ粒子例えば金などの材料が、形質転換のための担体として用いられている。遺伝物質はまた、例えばウイルス又はベクターを担体として用いて細胞内に導入することができる。細胞内に外来遺伝物質を導入するための他の方法には、限定はしないが、ヌクレオフェクション、エレクトロポレーション、コンジュゲーション、トランスフェクション、ソノポレーション、熱ショック、及びマグネトフェクションが含まれる。宿主細胞が本発明のペプチドを適切な条件で生産した後、ペプチドを例えば細胞から精製することができるか、又は分泌型形態のペプチドを例えば培地から回収することができる。本発明の好ましい実施形態において、β-ラクタマーゼは分泌型である。医薬組成物本発明の医薬組成物は、本発明のβ-ラクタマーゼを含む。組成物は、ただ1つのβ-ラクタマーゼ、又はそれ以上の、例えば少なくとも2つ、3つ、4つなどの異なるβ-ラクタマーゼを含み得る。本発明の医薬組成物はまた、本発明のβ-ラクタマーゼ以外の任意の活性成分を含み得る。医薬組成物は、例えば固体、半固体、又は液体形態で、例えば錠剤、ペレット、カプセル、溶液、エマルジョン、又は懸濁液の形態で用いることができる。好ましくは、組成物は、経口投与又は腸内適用のためのものである。本発明の少なくとも1つのβ-ラクタマーゼ、又は本発明のポリヌクレオチド、又は前記ポリヌクレオチドを含む宿主細胞に加えて、医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体単数又は複数、アジュバント単数又は複数、賦形剤単数又は複数、補助賦形剤単数又は複数、消毒剤単数又は複数、安定剤単数又は複数、結合剤単数又は複数、充填剤単数又は複数、潤滑剤単数又は複数、懸濁剤単数又は複数、可塑剤、着色剤、フィルム形成剤、糖、アルコール、流動促進剤、及び希釈剤、並びに/又は対応する生成物において通常見られる構成要素を含み得る。本発明の生成物又は医薬組成物は、所望の効果をもたらすために十分な量でβ-ラクタマーゼを含む。生成物又は医薬組成物は、当技術分野において知られている任意の従来のプロセスによって製造することができる。β-ラクタマーゼは、任意の医薬品生成物に添加することができるか、又は任意の調製ステップの間に任意の作用物質と混合することができる。本発明のβ-ラクタマーゼはまた、例えば、医薬品生成物において、又は医薬品生成物が分解した後の標的組織において、適切な条件でβ-ラクタマーゼ遺伝子を発現させることによって、生産することができる。本発明の1つの好ましい実施形態において、β-ラクタマーゼ単数又は複数及びβ-ラクタム抗生物質は、腸溶コーティングされたペレットの形態で共に対象に投与される。水性ベースのコーティング形態は、親水性P1Aタンパク質のコーティングプロセスに最も有利な材料であると考えられる。腸溶特性を達成するために一般的に用いられ本発明においても有用である水性ポリマーは、Eudragit登録商標などのポリメタクリレート、セルロースベースのポリマー、例えばDuodcell登録商標などのセルロースエーテルなど、又はセルロースエステル、例えばAquateric登録商標、又はポリ酢酸ビニルコポリマー、例えばOpadry登録商標である。本発明のβ-ラクタマーゼ又は本発明の医薬組成物は、β-ラクタム抗生物質と同時に又は連続的に対象に投与することができる。本発明の1つの実施形態において、β-ラクタマーゼ又は医薬組成物は、β-ラクタム抗生物質の前に、例えばβ-ラクタム抗生物質の5から30分前に投与される。β-ラクタマーゼ及びβ-ラクタム抗生物質単数又は複数は、同一の製剤又は異なる製剤内にあってよい。β-ラクタムの有害作用及び治療β-ラクタム抗生物質に対する有害作用、すなわち不都合な薬剤反応には、限定はしないが、下痢、吐き気、発疹、じんましん、重複感染、発熱、嘔吐、紅斑、皮膚炎、血管性浮腫、及び偽膜性大腸炎が含まれ得る。本発明の好ましい実施形態において、治療又は予防すべき有害作用は、胃腸管GIT内で生じる。本明細書において用いられる場合、胃腸管は、口から肛門まで延びている消化構造を言う。胃腸管は、口、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、小腸、結腸、盲腸、直腸、及び肛門を含む。本発明のβ-ラクタマーゼ又は本発明の医薬組成物は、経口的に対象に投与することができるか、又は直接的に胃腸管に投与することができる。酵素の組み合わせの製剤単数又は複数は、GIT又は他の望ましくない身体区画、例えば皮膚若しくは膣腔における未吸収のβ-ラクタムを不活化するためのものである。医薬組成物は、経口的に投与される製剤、皮膚科製剤、又は膣坐剤であり得、液体の、即時放出投与製剤、遅延放出投与製剤、又は持続放出投与製剤を含み得る。本発明の1つの好ましい実施形態において、β-ラクタマーゼ単数又は複数は経口的に投与される。本発明の別の好ましい実施形態において、β-ラクタマーゼ単数又は複数は、患者の胃腸に直接的に投与される。治療される対象は、ヒト又はペット若しくは生産動物などの動物、例えば犬、猫、牛、豚、鶏、若しくは馬であり得る。本発明の好ましい実施形態において、対象はヒトである。本発明は、以下の実施例によって説明されるが、この実施例は、限定的なものでは全くない。例1D276N突然変異酵素及びD276R突然変異酵素の構築バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼのD276N突然変異体及びD276R突然変異体を、以前に公開された手順に従ってHortonR.M.ら、1989、Gene77:61~68、P1Aβ-ラクタマーゼをコードするpRSH10プラスミドを最初のPCR反応の鋳型として用いる、SplicingbyoverlapextensionSOE突然変異生成によるスプライシングによって構築した。プライマーは、配列が共通の領域を有する2つの異なるPCR産物をもたらすように設計した。断片を次に、その後のPCR増幅において、オーバーラップ領域を用いて融合した。所望の突然変異は、最初のPCRにおいて突然変異誘発性プライマーを用いて達成した。D276N突然変異体では、突然変異を野生型遺伝子における所望の位置で生じさせ、GATコドンをAATコドンに変換した。第1のPCR増幅において用いたプライマーを表2に示す。第1のPCRにおける増幅断片のサイズは、21nt長のオーバーラップ領域を有する、800nt及び220ntであった。第2のPCR反応SOE反応において、2つのオーバーラップ断片を、その後の伸長反応において共に融合した。外側のプライマーフォワード-1及びリバース-1を伸長反応に含めると、PCRによる融合生成物が増幅される。精製されたSOE生成物を、WO2008/065247において記載されているように、HindIII制限酵素で消化し、HindIIIで切断したpKTH141分泌ベクターにライゲーションした。枯草菌RS303のコンピテント細胞を、ライゲーション混合物で形質転換した。ルリア-カナマイシンプレート上の陽性クローンを、単一コロニーの細菌塊をニトロセフィン溶液内に懸濁することによってスクリーニングした。陽性クローンは、ニトロセフィンを効果的に加水分解し、ニトロセフィン溶液の色を黄から赤に変化させた。ハイブリッドプラスミドを単一クローンの細胞から精製した。PCR生成された領域の正確な配列を、DNA配列決定によって検証した。D276R突然変異体では、GATコドンをCGCコドンに変換することによって、突然変異を所望の位置に生じさせた。D276R突然変異株の構築は、リバース-D276R-プライマー及びフォワード-D276R-プライマーを最初のPCRで用いたことを除いて、D276N突然変異体の構築と同様に行った表2を参照されたい。例2D276N突然変異β-ラクタマーゼ遺伝子penPのヌクレオチド配列発現構築物を陽性クローンから単離し、挿入部分をDNA配列決定した。D276N突然変異β-ラクタマーゼ遺伝子の完全なヌクレオチド配列及び推定アミノ酸配列によって、Asnに対するAspの置換が所望のコドンで正確に生じたことが明らかになった図2。さらに、D276N突然変異β-ラクタマーゼ遺伝子のDNA配列によって、バチルスアミロリケファシエンスのαアミラーゼの31アミノ酸長のシグナル配列をコードするヌクレオチド配列、HindIIIクローニング部位、及びD276N突然変異遺伝子の完全な配列の間のインフレームでの融合が明らかになった。シグナルペプチダーゼは、-1位のアラニンAと1位のグルタミンQとの間のペプチド結合を切断すると予測される。成熟D276Nβ-ラクタマーゼは、発現構築物におけるHindIIIクローニング部位に由来するNH2-QAS-トリペプチドのNH2末端伸長を有する。したがって、推定アミノ酸配列に基づいて、成熟D276N突然変異β-ラクタマーゼは、268個のアミノ酸残基を含む。例3D276R突然変異β-ラクタマーゼ遺伝子penPのヌクレオチド配列バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼ遺伝子における276位Ambler分類でのアスパラギン酸からアルギニンへの所望の置換を確認するために、発現構築物を陽性クローンから単離し、インサートのヌクレオチド配列を例2と同様に配列決定した。得られたヌクレオチド配列に従うと、推定アミノ酸配列は所望のD276R置換を含み、成熟D276R突然変異酵素は268個のアミノ酸残基を含む図3。例4D276N突然変異β-ラクタマーゼP3Aの生化学的分析酵素標本の純度を、SDS-PAGE分析によって、95パーセントを超えると推定したデータは示していない。野生型P1A及びD276NP3A突然変異体のバチルスリケニフォルミスβ-ラクタマーゼの動態パラメータを、様々なタイプのβ-ラクタムの加水分解について決定し、表3にまとめる。酵素反応は、適切な酵素濃度及び様々な濃度のペニシリン基質又はセファロスポリン基質を用いて、30°Cの20mMのリン酸緩衝液pH7内で行った。kcat値及びKm値を、Hanes線形化方法を利用して得た。主な結果を以下に記載する。iペニシリンペニシリンアンピシリン、アモキシシリン、又はピペラシリンの加水分解に対するD276N置換の効果は、野生型酵素の酵素効率の51~80パーセントの酵素効率であり、大きなものではなかった。その結果、ペニシリンでのD276N突然変異酵素のkcat/Km値は、最大2倍以下低減した。iiセファロスポリン予想した通り、ペニシリンに関して、野生型β-ラクタマーゼは、第1世代カファゾリンcafazoline、第2世代セフロキシム、及び第3世代セフトリアキソン、セフォタキシム、セフタジジム、セフォペラゾン、及びセフェピムのセファロスポリンを含む様々なセファロスポリンに対する酵素効率をほとんど有さなかった表1。驚くべきことに、特定のセファロスポリンに対する、好ましくはセフォペラゾンに対する、さらに好ましくはセフトリアキソンに対する、D276N突然変異酵素の酵素効率は、野生型酵素で得られる酵素効率と比較して本質的に向上した。セフトリアキソン及びセフォペラゾンに対するKm定数は減少し、それに伴って、セフトリアキソン及びセフォペラゾンについての代謝回転数kcatは、野生型酵素P1Aの代謝回転数と比較して増大した。したがって、バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼの276位でのアスパラギン酸-アスパラギン置換は、バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼにおけるβ-ラクタム基質プロフィールの拡張に寄与する。例5D276R突然変異酵素の生化学的特徴付けD276R突然変異酵素を構築して、Asp276が置換に耐えるかどうかを評価し、D276N酵素において観察されるβ-ラクタマーゼ活性の拡張に対するD276R置換の寄与を評価した。培養上清から得られたD276R及びD276Nの粗酵素試料を、試験材料として用いた。酵素試料の純度及び量を、SDS-PAGE分析を行うことによって推定した。様々なβ-ラクタムについてのD276R突然変異酵素及びD276N突然変異酵素の加水分解速度を、Vmax値を決定することによって行った。得られた結果を、表4におけるD276N酵素のものと比較した相対活性として表す。全体として、ペニシリン及びセファロスポリンの両方についてのD276Rβ-ラクタマーゼの触媒効率は、D276N酵素の触媒効率に匹敵する。D276N酵素との比較において、D276R酵素は、セフトリアキソンに対する活性が低減しており、セフォペラゾンに対する活性が向上している。この研究によって、β-ラクタムの拡張型スペクトルが、バチルスリケニフォルミスのβ-ラクタマーゼにおける276位のアスパラギン酸をアルギニン又はアスパラギンなどの親水性アミノ酸残基で置換することによって達成され得ることが示された。これはまた、所望の酵素改変が、276位のアスパラギン酸をグルタミンQ、リシンK、セリンS、又はスレオニンTなどの別の親水性アミノ酸残基で置換することによって達成され得ることを示す。例6D276Nβ-ラクタマーゼのインビボでの研究バチルスリケニフォルミスのD276N突然変異β-ラクタマーゼ酵素が、非経口療法の間に胃腸管内に排出されたセフトリアキソンCROを不活化する能力を、犬モデルにおいて調べた。研究用の実験用ビーグル犬には、幽門よりもおよそ170cm遠位の空腸にニップルバルブを外科的に挿入し、分析のための試料の回収を可能にする。腸の外科手術は、腸の運動性を変化させなかった。5頭のビーグル犬を各実験で用いた。研究は、2回の連続的な治療として行った。第1の治療β-ラクタマーゼ療法を伴わない対照実験において、単回用量のセフトリアキソンヒトにおける約1グラム用量のCROに相当する、体重1kg当たり30mgのセフトリアキソンCROを、犬に最初の給餌を行った20分後に静脈内投与した。空腸試料を10時間の様々な時点で回収した。胆嚢内に蓄積したセフトリアキソンの胆汁中排泄を誘発するために、犬に、セフトリアキソン投与の5時間40分後に再び給餌した。空腸糜粥試料を迅速に凍結し、分析まで-20°Cで保存した。糜粥試料を、干渉物質を沈殿させるために、過塩素酸-クエン酸で前処理した。沈殿物を遠心分離によって除去した。UV検出を伴う逆相高圧クロマトグラフィー法を、上清中のセフトリアキソンの定量に用いた。第2の治療において、D276N突然変異β-ラクタマーゼを、ハードゼラチンカプセル内に充填された腸溶コーティングされたペレットとして、セフトリアキソン注射の10分前に与えた。腸溶コーティング投与形態は、医薬品産業における経口製品の間で一般的である。腸溶コーティング製剤は、無傷形態で胃を通過するように、及び投与形態の内容物を小腸内で放出させるように設計されている。腸溶性の固体製剤を適用する理由は、原薬を酵素の破壊的作用若しくは胃の低pH環境から保護するため、又は原薬誘発性の胃粘膜の刺激、吐き気、若しくは出血を防ぐため、又は原薬を未希釈形態で小腸内の標的部位に送達するためである。これらの基準に基づいて、腸溶コーティングされた製剤を、遅延作用投与形態のタイプであるとみなすことができる。ポリメタクリル酸コポリマーEudragit登録商標L30D-55を、pH依存性の腸溶コーティングされた投与形態を達成するために用いた。体重1kg当たり約0.44mgの活性D276Nβ-ラクタマーゼを含む、単回用量の腸溶コーティングされたペレットを、第2の治療において用いた。両治療から得られた結果を図4に表す。治療1は、高濃度のセフトリアキソンが非経口セフトリアキソン療法の間に小腸管内に排出されることを示した。最も高い空腸濃度空腸糜粥1グラム当たり約1500マイクログラムは、セフトリアキソン注射の60分後に見られた。空腸のセフトリアキソンレベルの増大が、犬の第2の給餌の後に観察され340分の時点、これは、食物刺激された、胆嚢におけるセフトリアキソン含有胆汁排出物の蓄積を示す。治療2は、経口投与されたD276N突然変異β-ラクタマーゼが空腸のセフトリアキソンレベルを定量空腸糜粥1マイクログラム当たり10マイクログラムのセフトリアキソンの限度近くまで低減させ得ることを示した。この所見は、D276N突然変異β-ラクタマーゼが、非経口セフトリアキソンの使用に関連する副作用を低減させるための強力な原薬候補であることを示す。さらに、アンピシリン、アモキシシリン、及びピペラシリンなどのペニシリンに対する高い活性に基づいて、D276N突然変異酵素又はD276R突然変異酵素は、WO2008065247において記載されているβ-ラクタマーゼ療法における代替的な原薬として用いることができる。"