"標的核酸を検出するための方法であって、a標的核酸に検出体を組み込むことと、b反応物にオリゴヌクレオチドプローブを添加することと、c前記反応物に阻害剤を添加することと、d前記標的核酸の存在の指標として前記オリゴヌクレオチドプローブの前記阻害剤との干渉を検出することと、を含む、方法。前記標的核酸が一本鎖核酸である、請求項1に記載の方法。前記標的核酸内の単一ヌクレオチドが検出される、請求項1に記載の方法。前記標的核酸内のヌクレオチドの短配列が検出される、請求項1に記載の方法。前記標的核酸全体が検出される、請求項1に記載の方法。前記標的核酸内の変異が検出される、請求項1に記載の方法。前記標的核酸内の突然変異が検出される、請求項1に記載の方法。前記標的核酸内の多型が検出される、請求項1に記載の方法。前記検出体がフルオロフォアに共役される、請求項1に記載の方法。前記阻害剤が消光剤に共役される、請求項1に記載の方法。前記検出体が消光剤に共役される、請求項1に記載の方法。前記阻害剤がフルオロフォアに共役される、請求項1に記載の方法。前記検出体がエピトープに共役される、請求項1に記載の方法。前記阻害剤がエピトープに共役される、請求項1に記載の方法。1つを超える標的核酸が検出される、請求項1に記載の方法。前記方法が乳剤内で行われる、請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。前記乳剤がマイクロ流体デバイス内にある、請求項16に記載の方法。請求項1~17のいずれか一項に記載の方法を実施するためのキット。本発明は、一般に、本明細書中では標的核酸と称される、特定の核酸配列の存在または不在を検出するための方法に関する。標的核酸は、ヒトまたは動物から得られた後、クエリーされる核酸試料であり、これには、ゲノムDNA、PCRアンプリコン、cDNA等が含まれるが、これらに限定されない。標的核酸は、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。一例では、一本鎖標的核酸はDNAである。一実施形態では、二本鎖標的核酸は、まず、一本鎖標的核酸に変換される。なお別の実施形態では、PCRは、検出前に標的核酸上で実施される。本実施形態の一態様では、PCR産物は、続いて、一本鎖形態に変換される。二本鎖核酸を一本鎖核酸に変換するための方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Mitsisetal.,CharacterizationoftheinteractionoflambdaexonucleasewiththeendsofDNA,NucleicAcidsRes1999vol.27,no.15,pp.3057-3063、Sanchez,etal.,Linear-After-The-ExponentialLATE-PCR:AnadvancedmethodofasymmetricPCRanditsusesinquantitativereal-timeanalysis,PNAS2004vol.101,no.7,pp.1933-1938、Chen,etal.,AsynchronousPCR,In:D.Park,ed.2011.PCRProtocolsMethodsinMolecularBiology,vol.687.NewJersey:HumanaPressInc.,pp.231-243に記載されている。本発明の方法は、標的核酸内の核酸配列の存在または不在を検出するために使用され得る。一実施形態では、標的核酸配列内の単一ヌクレオチドが検出される。本実施形態の一態様では、特定の遺伝子座が、特定の核酸配列変異の存在または不在を検出するためにクエリーされ得る。変異は、関連したポリヌクレオチドの間でのヌクレオチド配列の差異である。差異は、関連したポリヌクレオチドの配列と比較して、1つのポリヌクレオチドの配列からの1つ以上のヌクレオチドの欠失、1つ以上のヌクレオチドの付加、または別のヌクレオチドに代わる1つのヌクレオチドの置換であり得る。突然変異、多型、および変異という用語は、本明細書では交換可能に使用される。本明細書で使用される、単数形変異という用語は、複数の変異、即ち、同じポリヌクレオチド中の2つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含むと解釈されるものとする。点突然変異とは、別のヌクレオチドに代わる1つのヌクレオチドの単一置換を指す。例えば、特定の遺伝子座は、単一ヌクレオチド多型の存在または不在を検出するためにクエリーされ得る。単一ヌクレオチド多型またはSNPとは、単一ヌクレオチドの差異により別のポリヌクレオチドとは異なるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列の変異を指す。SNPには、例えば、ポリヌクレオチドの全配列中で、1つのAを1つのC、G、もしくはTに置換、1つのCを1つのG、T、もしくはCに置換することが含まれるが、これらに限定されない。さらに、特定の核酸配列中で、1つを超えるSNPを有することが可能である。例えば、核酸配列中で、1つの位置で、Gは、Aで置換することができ、別の位置では、CはT等で置換することができる。別例では、特定の遺伝子座は、単一ヌクレオチド突然変異の存在または不在を検出するためにクエリーされ得る。別の実施形態では、複数のヌクレオチド標的例えば、2つ以上のヌクレオチドが、同じ反応内で検出される。本実施形態の一態様では、標的核酸配列内の短核酸配列が検出される。一例では、核酸プローブは、約6~8ヌクレオチド長と同じくらい短い。本実施形態の別の態様では、短い核酸プローブの完全相補体は、標的核酸の全配列を決定するために連続して使用することができる。例えば、短い核酸プローブの完全相補体は、一連の全ての4096の可能な六量体であり得る。したがって、標的核酸は、特定の標的長さの制限のない、本発明の方法を用いて検出され得る。本発明の方法は、標的核酸に組み込まれる検出体の使用をさらに含み得る。検出体は、この反応の阻害剤のための結合部位として機能する標的核酸に組み込まれるオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、検出体は、アダプターライゲーションによって標的核酸に組み込まれる。本実施形態の一例では、アダプターは、互いに類似している2つのオリゴヌクレオチドである。本例では、アダプターは、標的核酸に検出体を付着する。別の実施形態では、検出体は、PCRプライマーを用いて核酸試料に組み込まれる。本実施形態の一例では、PCRプライマーには、標的特異的配列プライマーの3’末端上、下流ステップにおいて阻害剤をハイブリダイズするように設計される普遍的核酸配列プライマーの5’末端上、および検出体が含まれる。任意の実施形態では、検出体は、標的核酸配列に組み込まれ、標的核酸配列の5’に配向される。一実施形態では、検出体が、フルオロフォアに共役される。フルオロフォアは、特定の波長の光からのエネルギーを吸収し、次いで、特定のフルオロフォアに対して別の特定の波長特性の蛍光発光としてこのエネルギーを発する能力を有する分子である。この様式では、フルオロフォアは、標的核酸の存在または不在を示す最終アッセイ読み出しを促進する。特定のフルオロフォアの使用は、本発明では重要ではない。フルオロフォアは、当該技術分野で公知であり、例えば、Marras,SelectionofFluorophoreandQuencherPairsforFluorescentNucleicAcidHybridizationProbes,In:V.Didenko,ed.2006.FluorescentEnergyTransferNucleicAcidProbes:DesignsandProtocolsMethodsinMolecularBiology,vol.335.NewJersey:HumanaPressInc.,pp.3-16によって記載されている。本発明で使用することができるフルオロフォアの例としては、Marras2006によって記載されるものおよび本明細書で以下にさらに記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。検出体に関連するフルオロフォアの特定の位置は、本発明では重要ではない。フルオロフォアは、検出体の5’末端、3’末端、またはその内部のいずれかの場所を含む、検出体に沿っていかなる場所に付着させてもよい。本発明の方法は、阻害剤の使用をさらに含んでよい。この阻害剤は、検出体に類似しているオリゴヌクレオチドであり、検出体とハイブリダイズする。阻害剤は、オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸に適合する場合のみ、信号が検出可能であるように機能する。検出体への阻害剤のハイブリダイゼーションは、標準反応緩衝液、例えば、DNAポリメラーゼ反応緩衝液中で生じ、それによって、検出体および阻害剤は、適切な温度で、緩衝液中で混合される。一例では、反応物は、30秒間95°Cまで加熱され、次いで、阻害剤のアニール温度を下回る5°Cまで冷却され得る。一実施形態では、阻害剤が、消光剤に共役される。消光剤は、第1のフルオロフォアから第2のフルオロフォアまたは非蛍光発光分子にエネルギーを移動させることによって蛍光発光の強度を減少させる、即ち、消光させるように機能する分子である。特定の消光剤の使用は、本発明では重要ではない。消光剤は、当該技術分野で公知であり、例えば、Marras2006によって記載されている。本発明で使用することができる消光剤の例としては、Marras2006によって記載されるものおよび本明細書で以下にさらに記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。阻害剤に関連する消光剤の特定の位置は、本発明では重要ではない。消光剤は、阻害剤の5’末端、3’末端、または阻害剤の内部のいずれかの場所を含む、阻害剤に沿っていかなる場所に付着させてもよい。代替的な実施形態では、検出体が、消光剤に共役される。特定の消光剤の使用は、本発明では重要ではない。本発明で使用することができる消光剤の例としては、Marras2006によって記載されるものおよび本明細書で以下にさらに記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。検出体に関連する消光剤の特定の位置は、本発明では重要ではない。消光剤は、検出体の5’末端、3’末端、検出体の内部のいずれかの場所を含む、検出体に沿っていかなる場所に付着させてもよい。代替的な実施形態では、阻害剤が、フルオロフォアに共役される。特定のフルオロフォアの使用は、本発明では重要ではない。本発明で使用することができるフルオロフォアの例としては、Marras2006によって記載されるものおよび本明細書で以下にさらに記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。阻害剤に関連するフルオロフォアの位置は、本発明では重要ではない。フルオロフォアは、阻害剤の5’末端、3’末端、または阻害剤の内部のいずれかの場所を含む、阻害剤に沿っていかなる場所に付着させてもよい。本発明の方法の別の実施形態では、阻害剤が、ビオチンに共役される阻害剤-ビオチン共役体。阻害剤-ビオチン共役体は、様々な製造供給元例えば、IntegratedDNATechnologies,Inc.,EurofinsMWGOperon,Eurogentec,TriLinkBioTechnologies,Inc.から商業的に得ることができる。市販の精製キットの例には、Agencourt登録商標-AMPure登録商標XPBeckmanCoulter,Inc.およびQIAquick96PCR精製キットQiagenが含まれる。阻害剤に関連するビオチンの特定の位置は、本発明では重要ではない。ビオチンは、阻害剤の5’末端、3’末端、または阻害剤の内部のいずれかの場所を含む、阻害剤に沿っていかなる場所に付着させてもよい。本発明の方法の別の実施形態では、検出体または阻害剤がそれぞれ、反応物からの検出体または阻害剤の単離を促進する分子に共役される。この単離を促進する分子は、例えば、エピトープであり得、これは抗体と反応させることが可能なもの全てである。このエピトープは、例えば、抗原、ペプチド、またはタンパク質であり得る。一例では、このエピトープはビオチンである。本発明の方法の別の実施形態では、検出体または阻害剤がそれぞれ、反応物内の検出体または阻害剤の検出を促進する分子に共役される。この検出を促進する分子は、例えば、エピトープであり得る。このエピトープは、例えば、抗原、ペプチド、またはタンパク質であり得る。一例では、このエピトープはビオチンである。別例では、エピトープは、化学発光アッセイを用いて、例えば、HRP酵素に共役させた第2の抗体を用いることによって検出することができるペプチドである。検出体または阻害剤をビオチンに共役させた上記の実施形態では、この共役は、ビオチン共役プライマーIntegratedDNATechnologies,Inc.,Operon,EurogentecおよびTriLinkBioTechnologies,Inc.から市販を用いる検出体または阻害剤のPCR増幅によって達成することができる。HRP酵素に共役させた抗体を用いてエピトープが検出される上記の実施形態では、共役キットは、Solulinkから商業的に入手してもよいし、または抗体-HRP酵素共役体は、製造供給元、例えばEurogentecから直接注文してもよい。本発明の方法の一実施形態では、検出体がフルオロフォアに共役されるとき、阻害剤が消光剤に共役される。本発明の方法の別の実施形態では、検出体が消光剤に共役されるとき、阻害剤がフルオロフォアに共役される。検出体と阻害剤または阻害剤と検出体との間でのエネルギー移動効率はそれぞれ、選択されたフルオロフォア-消光剤対に特異的であり、したがって、Marras2006および本明細書で以下に記載されている公知の製造供給元によって提供される文献の製品によって記載されるように、最適化されるべきである。本発明の方法の別の実施形態では、検出体が第1のフルオロフォアに共役され、阻害剤が第2のフルオロフォアに共役され、したがって、第1のフルオロフォアからの放射は、エネルギー移動によって第2のフルオロフォアを励起し、移動エネルギーが、第2のフルオロフォアの蛍光発光特性として放射される。この消光現象は、当該技術分野で公知であり、例えば、Marras2006によって記載されている。フルオロフォア-フルオロフォア対はまた、当該技術分野で公知であり、例えば、Marras2006によって記載されている。本発明で使用することができるフルオロフォア-フルオロフォア対の例としては、Marras2006によって記載されるものおよび本明細書で以下にさらに記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。検出体に関連する第1のフルオロフォアの特定の位置および阻害剤に関連する第2のフルオロフォアの特定の位置は、本発明では重要ではない。第1のフルオロフォアは、検出体の5’末端、3’末端、または検出体の内部のいずれかの場所を含む、検出体に沿っていかなる場所に付着させてもよい。第2のフルオロフォアは、阻害剤の5’末端、3’末端、または阻害剤に沿って内部のいずれかの場所を含む、阻害剤のいかなる場所に付着させてもよい。検出体と阻害剤との間のエネルギー移動効率は、選択されたフルオロフォア-フルオロフォア対に特異的であり、したがって、最適化されるべきである。フルオロフォアおよび消光剤のフルオロフォア-消光剤対または第1のフルオロフォアおよび第2のフルオロフォアのフルオロフォア-フルオロフォア対単独かつ集合的にFRET対複数可と称するは、その距離FRET距離が特定のFRET対の効率の良いエネルギー移動距離を超えて減少しない限り、互いに関連していかなる場所でも設置され得る。FRET距離の重要性は、当該技術分野で公知であり、例えば、Marras2006によって記載されている。検出体と阻害剤との間のエネルギー移動効率は、選択されたFRET対に特異的であり、したがって、最適化されるべきである。図3で示されるように、互いのFRET距離内である限り、フルオロフォアは、検出体上のいかなる場所でも設置することができ、消光剤は、阻害剤上のいかなる場所でも設置することができる。あるいは、図4で示されるように、互いのFRET距離内である限り、消光剤は、検出体上のいかなる場所でも設置することができ、フルオロフォアは、阻害剤上のいかなる場所でも設置することができる。したがって、このフルオロフォアおよび消光剤は、反応を生じさせる互いに許容されるFRET距離内でなければならない。このFRET距離は、選択されたフルオロフォア-消光剤対に対して特定され、それぞれのフルオロフォアおよび消光剤は、隣接ヌクレオチド上、10個の別個のヌクレオチド、または数百個の別個のヌクレオチドであり得、これは選択された特定のFRET対によって異なる。一例では、フルオロフォアは、検出体の5’末端上にあり、消光剤は、阻害剤の3’末端上にある。別例では、消光剤は、検出体の5’末端上にあり、フルオロフォアは、阻害剤の3’末端上にある。図5で示されるように、互いのFRET距離内である限り、第1のフルオロフォアは、検出体上のいかなる場所でも設置することができ、第2のフルオロフォアは、阻害剤上のいかなる場所でも設置することができる。したがって、第1のフルオロフォアおよび第2のフルオロフォアは、反応を生じさせる互いに許容される距離内でなければならない。このFRET距離は、フルオロフォア-フルオロフォア対に対して特定され、それぞれのフルオロフォアは、隣接ヌクレオチド上、10個の別個のヌクレオチド、または数百個の別個のヌクレオチドであり得、これは選択された特定のFRET対によって異なる。一例では、検出体が、その5’末端上のFAMフルオロフォアに共役され、阻害剤が、FAMフルオロフォアから約15nt離れて位置付けられたTAMRAフルオロフォアに共役される。特定のフルオロフォア-消光剤対またはフルオロフォア-フルオロフォア対の選択は重要ではない。本発明に使用することができるフルオロフォアの種類の例としては、隣接プローブ例えば、Sigma-Aldrich登録商標から入手可能なLightCycler登録商標ハイブリダイゼーションプローブ、5’-ヌクレアーゼプローブまたはPREMIERBiosoftから入手可能なTaqMan登録商標プローブ、副溝結合AppliedBiosystems登録商標から入手可能なTaqman登録商標MGBプローブプローブ、分子指標プローブ、Scorpions登録商標プライマーPREMIERBiosoftおよびBiosearchTechnologiesから入手可能、ならびに鎖置換プローブまたは陰陽プローブが挙げられるが、これらに限定されない。本発明に使用され得る特定のフルオロフォアの例としては、フルオレセインおよびその誘導体例えば、フルオレセインイソチアネートFITC、カルボキシフルオレセインFAM、テトラクロロフルオレセインTET、2’,7’-ジフルオロフルオレセインOregonGreen登録商標488、OregonGreen登録商標514カルボン酸、およびクロロおよびメトキシ置換によるフルオレセインJOEおよび6-JOE;ローダミン誘導体例えば、テトラメチルローダミンTAMRA、テトラメチルローダミンイソチオシアネートTRITC、テトラメチルローダミンTMR、カルボキシ-X-ローダミンROX、TexasRedスルホニルクロリドおよびスルホローダミンの異性体混合物;Invitrogen商標およびTexasRed-Xフルオロフォアとその反応基との間でさらに7個の原子のアミノヘキサノイルスペーサーXを含む、TexasRedスクシンイミジルエステル;Invitrogen商標、およびローダミンX;シアニンCy染料例えば、Cy3、Cy5、およびCy5.5およびシアニン誘導体例えば、インドカルボシアニンQuasar登録商標570、Quasar登録商標670、およびQuasar登録商標705、OregonGreen登録商標イソチオシアネート、およびエオシンイソチオシアネートEITC;N-ヒドロキシスクシンイミジル1-ピレンブチレートPYB;N-ヒドロキシスクシンイミジル1-ピレンスルホネートPYS;5-2’-アミノエチルアミノナフタレンEDANS;CALFluor登録商標Gold540、CALFluor登録商標Orange560、Fluor登録商標Red590、CALFluor登録商標Red610、およびCALFluor登録商標Red635BiosearchTechnologies,Inc.から入手可能な特許フルオロフォア;VIC登録商標;HEX登録商標6-異性体ホスホラミジド;ならびにNED登録商標が挙げられるが、これらに限定されない。本発明に使用され得る特定の消光剤の例としては、BlackHoleQuencher登録商標染料BHQ登録商標-1、BHQ登録商標-2、BHQ登録商標-3;p-ジメチルアミノフェニルアゾ安息香酸DABCYL;DeepDarkQuencherDDQ-IEurogentec;エオシン2’,4’,5’,7’-テトラブロモフルオレセイン;Eclipse登録商標DarkQuencherEurogentec;IowaBlack登録商標Quenchers、例えばIowaBlack登録商標FQおよびIowaBlack登録商標RQIntegratedDNATechnologies,Inc.;QSY-7、QSY-9、およびQSY-21MolecularProbes登録商標が挙げられるが、これらに限定されない。本発明に使用され得る特定のフルオロフォア-消光剤対の例としては、フルオレセイン/DABCYL、EDANS/DABCYL、CALFluor登録商標Gold540/BHQ登録商標-1、Cy3/BHQ-1、FAM/BHQ登録商標-1、TET/BHQ登録商標-1、JOE/BHQ登録商標-1、HEX/BHQ登録商標-1、OregonGreen登録商標/BHQ-1、Cy3/BHQ登録商標-2、Cy5/BHQ-2、ROX/BHQ登録商標-2、TAMRA/BHQ-2、Cy5/BHQ登録商標-3、およびCy5.5/BHQ登録商標-3が挙げられるが、これらに限定されない。本発明に使用され得る特定のフルオロフォア-フルオロフォア対の例としては、FAM/TAMRA、FITC/TAMRA、FITC/ローダミンX、PYS/FITC、FITC/EITC、FITC/PYB、FITC/TexasRed、およびFITC/TRITCが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法は、標的核酸中の配列クエリー配列に対する適合を探すクエリー分子として機能するオリゴヌクレオチドプローブの使用をさらに含んでよい。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸に適合する場合、それにハイブリダイズし、核酸ポリメラーゼ鎖伸長のためのプライマーとしての機能を果たす。伸長が進行すると、検出体から阻害剤を移動させる。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸に適合しない場合、標的核酸にハイブリダイズせず、鎖伸長は生じず、阻害剤が検出体に付着したままである。本発明の方法は、ポリメラーゼ酵素の使用をさらに含んでよい。これは、鎖置換能力を有する任意の酵素であり得る。市販のポリメラーゼ酵素の例としては、Klenow断片NewEnglandBiolabs登録商標Inc.、TaqDNAポリメラーゼQIAGEN、9°N商標DNAポリメラーゼNewEnglandBiolabs登録商標Inc.、DeepVent商標DNAポリメラーゼNewEnglandBiolabs登録商標Inc.、MantaDNAポリメラーゼEnzymatics登録商標、BstDNAポリメラーゼNewEnglandBiolabs登録商標Inc.、およびphi29DNAポリメラーゼNewEnglandBiolabs登録商標Inc.が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法の一実施形態では、検出体が、フルオロフォアに共役され、阻害剤が、消光剤に共役される。この例では、検出体は、標的核酸に組み込まれ、続いて、オリゴヌクレオチドプローブ、ポリメラーゼ、および阻害剤を反応物に添加する。フルオロフォアは、阻害剤が検出体と結合し、消光剤によって蛍光信号を消光するまで蛍光発光を放射する。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出す場合図1Aで示される、ポリメラーゼは、阻害剤に達し、検出体から阻害剤を移動させるまでプローブを伸長する。結果として、消光剤は、もはやフルオロフォアによって放射された蛍光発光を消光せず、比較的強い蛍光信号が放射される。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出さない場合図1Bで示される、阻害剤は、定位置にとどまり、消光剤は、フルオロフォアによって放射された蛍光発光を消光し続け、連続した比較的低い蛍光信号を得る。本発明の方法の別の実施形態では、検出体が、消光剤に共役され、阻害剤が、フルオロフォアに共役される。この例では、検出体は、標的核酸に組み込まれ、続いて、オリゴヌクレオチドプローブ、ポリメラーゼ、および阻害剤を反応物に添加する。阻害剤は検出体と結合し、フルオロフォアによって放射された蛍光発光は、検出体の消光剤によって消光される。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出す場合、ポリメラーゼは、阻害剤に達し、検出体から阻害剤を移動させるまでプローブを伸長する図2Aで示される。結果として、消光剤は、もはやフルオロフォアによって放射された蛍光発光を消光せず、比較的強い蛍光信号が放射される。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中の適合を見出さない場合図2Bで示される、阻害剤は、定位置にとどまり、消光剤は、フルオロフォアによって放射された蛍光発光を消光し続け、連続した比較的低い蛍光信号を得る。本実施形態の別の態様では、検出体が、第1のフルオロフォアに共役され、阻害剤が、第2のフルオロフォアに共役される。この例では、検出体は、標的核酸に組み込まれ、続いて、反応物にオリゴヌクレオチドプローブ、ポリメラーゼ、および阻害剤を添加する。阻害剤は検出体と結合し、第1のフルオロフォアによって放射された蛍光発光として放射されたエネルギーは、第2のフルオロフォアに移動され、第2のフルオロフォアの蛍光発光特性として放射される。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出す場合、ポリメラーゼは、阻害剤に達し、検出体から阻害剤を移動させるまでプローブを伸長する。結果として、第2のフルオロフォアは、もはや第1のフルオロフォアから移動したエネルギーを有さず、したがって、もはや蛍光発光を放射しない。したがって、放射された蛍光発光は、もはや第2のフルオロフォアの特性を示さず、再び、第1のフルオロフォアの特性を示す。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出さない場合、阻害剤は、定位置にとどまり、放射された蛍光発光は、第2のフルオロフォアの特性を示し続ける。本発明の方法の別の実施形態では、図7で示されるように、検出体をフルオロフォアに共役し、阻害剤をビオチンに共役する阻害剤-ビオチン共役体。この例では、検出体は、標的核酸に組み込まれ、続いて、反応物にオリゴヌクレオチドプローブ、ポリメラーゼ、および阻害剤-ビオチン共役体を添加する。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出す場合、ポリメラーゼは、阻害剤-ビオチン共役体に達し、検出体から阻害剤-ビオチン共役体を移動させるまでプローブを伸長する。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出さない場合、阻害剤-ビオチン共役体は、定位置にとどまる。反応が完了した後、阻害剤-ビオチン共役体は、ストレプトアビジン基質、例えばストレプトアビジンビーズ例えば、Invitrogen、Solulink、ThermoScientific等の様々な製造供給元から容易に入手可能を用いて反応物から抽出することができ、これは阻害剤-ビオチン共役体のビオチンと結合する。プローブ不適合の場合、阻害剤-ビオチン共役体は、プローブによって検出体から移動されず、ストレプトアビジンビーズは、反応物から検出体-阻害剤-ビオチン共役体対を抽出する。プローブ適合の場合、阻害剤-ビオチン共役体は、プローブによって移動され、ストレプトアビジンビーズは、非結合阻害剤-ビオチン共役体を抽出する。抽出された試料から放射された蛍光信号は、検出体-阻害剤-ビオチン共役体対の存在を示し、したがって、プローブ不適合、即ち、標的核酸配列の不在を示す。抽出された試料から放射された比較的低い蛍光信号は、検出体の不在を示し、したがって、プローブ適合、即ち、標的核酸配列の存在を示す。本発明の方法の別の実施形態では、阻害剤は、エピトープ、例えば抗原、ペプチド、またはタンパク質に共役され得る阻害剤-エピトープ共役体。この例では、検出体は、前述のように標的核酸に組み込まれ、続いて、反応物にオリゴヌクレオチドプローブ、ポリメラーゼ、および阻害剤-エピトープ共役体を添加する。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出す場合、ポリメラーゼは、阻害剤-エピトープ共役体に達し、検出体から阻害剤-エピトープ共役体を移動させるまでプローブを伸長する。オリゴヌクレオチドプローブが標的核酸中での適合を見出さない場合、阻害剤-エピトープ共役体は、検出体上の定位置にとどまる。反応が完了した後、標的核酸は、反応物から任意の非適合プローブおよび任意の非結合阻害剤-エピトープ共役体を除去するために精製することができる。精製後、標的核酸は、エピトープに対して特異的な抗体と反応させる。抗体が、検出システム、例えば、蛍光標識されたタンパク質に共役されるか、または西洋ワサビペルオキシダーゼHRPアッセイHRP化学発光アッセイは、例えば、Sigma-Aldrich,Invitrogen商標、ThermoScientific、Bio-RadLaboratories,Inc.、CellSignalingTechnology,Inc.、Invitrogen商標、およびBiologicalIndustries等の様々な製造供給元から市販されているを用いて検出される。エピトープ信号の検出は、検出体に結合された阻害剤-エピトープ共役体の存在を示し、したがって、プローブ不適合、即ち、標的核酸配列を示す。比較的低いエピトープ信号は、阻害剤-エピトープ共役体が検出体に結合されないことを示し、したがって、プローブ適合、即ち、標的核酸配列の存在を示す。図6は、阻害剤をエピトープに共役し、阻害剤-エピトープ共役体がエピトープとしてビオチンを含み得る一例を示す。この例では、上述のように反応を進行させ、精製後、標的核酸は、アッセイ中に残留するビオチンの量を定量化することによって、標的核酸に結合された阻害剤の存在について試験される。例えば、残留するビオチンは、前述のように、化学発光アッセイにおいて、抗ビオチンのHRP結合抗体を用いることによって検出され得る。次いで、特定の標的核酸配列と関連する、本明細書ではデータと称される本発明の検出方法の結果は、アクセス可能なデータベース中に保存されてもよく、標的核酸配列と関連する特定のヒトもしくは動物からの他のデータ、または他のヒトもしくは動物からのデータと関連しても、関連しなくてもよい。得られたデータは、他のデータベースと統合されるもしくは関連する、および/または交差適合することができるデータベース中に保存してもよい。本発明の方法およびキットは、ネットワークインターフェースとさらに関連させてもよい。ネットワークインターフェースという用語は、データにアクセスする、データを預ける、データを合わせる、データを分析する、データを検索する、データを送信する、またはデータを保存することができる任意の人物またはコンピュータシステムを含むように本明細書に定義される。この用語は、データを分析する人物、分析に使用される電子機器およびソフトウェアシステム、データ分析を保存するデータベース、およびデータを保存することができる任意の記憶媒体であるように広範囲に定義される。ネットワークインターフェースの限定されない例としては、人、自動化実験装置、コンピュータおよびコンピュータネットワーク、ならびにディスク、ハードドライブ、またはメモリチップ等であるが、これらに限定されないデータ記憶装置が挙げられる。本発明の方法およびキットは、乳剤内の核酸試料中の標的核酸配列を検出するためにさらに提供され得る。本明細書で使用される乳剤は、少なくとも2つの非混和性、または部分的に非混和性の液体の安定した混合物である。一般に、非混和性液体は、2つの異なる相に分離される傾向がある。したがって、界面活性剤は、少なくとも2つの非混和性、または部分的に非混和性の液体間の表面張力を低下させることによって乳剤を安定させる、および/あるいはインターフェースを安定させるために添加してもよい。例えば、本発明の方法およびキットに従って乳剤は、フッ化炭素油、シリコン油、または炭化水素油等の非混和性油中の複数の水性液滴を含み得、この液滴粒度は、直径約0.5~5000ミクロンに及ぶ。本明細書で使用される液滴は、例えば、円筒状、球状、および楕円、ならびに扁平、延伸、または不規則な形状等であるが、これらに限定されない、あらゆる形状を有する連続相内の単離された水性または脂溶性相を意味する。本発明およびその利点は詳細に記載されているが、添付の特許請求の範囲に定義されるように、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更、置換、および変形が行われ得ることが理解されよう。本発明は、例証目的のためにのみ提示されるもので、多少なりとも本発明を限定することは意図されない、以下の実施例においてさらに説明されよう。実施例実施例1本実施例では、FAMフルオロフォアで共役され、標的核酸に組み込まれる検出体が、IowaBlackFQ消光剤IntegratedDNATechnologies,Inc.、MantaDNAポリメラーゼEnzymatics登録商標、dNTP、適切な緩衝液Enzymatics登録商標からのDNAポリメラーゼと共に供給される、ならびに図8に示される、8ヌクレオチド長プローブに沿って標的核酸への完全適合または6つの異なる位置のうちの1つの位置で単一の位置不適合のいずれかを有する短いオリゴヌクレオチドプローブと共役される阻害剤の存在下で、34°Cで10分間、アッセイが行われた。蛍光発光が、7つの反応物に対してマイクロプレートリーダーを用いて測定された。図9に示されるように、適合プローブを含む試料中の蛍光発光は、不適合プローブを含む試料中のものよりも2~5倍高かった。実施例2本実施例では、一連のオリゴヌクレオチドプローブが患者試料中の2つの異なる対立遺伝子間で区別するために使用された、アッセイが行われた。TNNT2遺伝子は、まず、A/GSNPに対してヘテロ接合体であった1人の患者およびホモ接合体Gであった別の患者からのゲノムDNAを用いて、PCR増幅したエクソン4~5、477bp。PCRプライマー前向きのうちの1つが、FAMフルオロフォアIntegratedDNATechnologies,Inc.で標識された。PCR試料を、一本鎖DNAに変換し、IowaBlack登録商標FQ消光剤IntegratedDNATechnologies,Inc.、MantaDNAポリメラーゼEnzymatics登録商標、dNTP、適切な緩衝液Enzymatics登録商標からの酵素と共に供給される、ならびにSNP対立遺伝子対立遺伝子1に適合、WT対立遺伝子対立遺伝子2に適合した、あるいは標的即ち、六量体プローブのライブラリーからランダムに選択されたに適合しなかった短いプローブに共役させた阻害剤と混合した。それぞれの試料の蛍光発光は、34°Cで30分間インキュベーションした後、測定された。図10で示されるように、比較的高い蛍光発光が、ヘテロ接合体患者については対立遺伝子1および2の両方に適合するプローブで見られるが、ホモ接合体患者については対立遺伝子2のみで見られ、比較的に低い蛍光発光はまた、全ての不適合プローブに見られる。実施例3本実施例では、FAMフルオロフォアIntegratedDNATechnologies,Inc.に共役させた検出体を含む191bpの一本鎖DNAアンプリコンを、34°Cで30分間インキュベートし、次いで、IowaBlack登録商標FQ消光剤IntegratedDNATechnologies,Inc.、MantaDNAポリメラーゼEnzymatics登録商標、dNTP、適切な緩衝液Enzymatics登録商標からの酵素と共に供給される、ならびに標的18個のプローブを完全に適合するか、または不適合6個のプローブのいずれかであった24個の短いプローブ6~8ヌクレオチド長に共役させた阻害剤と混合した。24個の混合物のそれぞれが、ピコリットルサイズの液滴に乳化され、その後、蛍光発光は、乳化された数千の滴において検出された1700滴が、平均してそれぞれのプローブにおいて測定された。それぞれのプローブタイプの平均蛍光発光および標準偏差を図11に示す。不適合プローブ陰性は全て、低い蛍光発光を有し、全ての適合プローブ陽性は、高い蛍光発光を有する棒=標準偏差。したがって、本発明の好ましい実施形態を詳細に説明してきたが、上記の段落によって定義される本発明が、本発明の精神または範囲から逸脱することなく、それらの多くの明らかな変形が可能である場合に、上の説明に記載される特定の詳細を限定するものではないことが理解されよう。"