"a配列番号6のアミノ酸1-192に対して少なくとも715の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド;bi配列番号5のヌクレオチド574-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド;c1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、延長、及び又は挿入を含んで成る、配列番号6のアミノ酸1-192のアミノ酸配列を有するポリペプチドの変異体;d上記a又はbの対立遺伝子変異体;及びeプロテアーゼ活性を有する、a、b又はdのフラグメント、から成る群から選択された、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。次のプロテアーゼ:a配列番号6のアミノ酸1-192;b配列番号2のアミノ酸1-192;c配列番号4のアミノ酸1-192;又はd配列番号8のアミノ酸1-189;のいずれか1つを含んで成る請求項1記載のポリペプチド。プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、そしてa請求項22又は23記載のポリペプチドをコードし;bi配列番号5のヌクレオチド574-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そして又はc配列番号5のヌクレオチド574-1149に対して少なくとも793の程度の同一性を有する、核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。次のプロテアーゼ-コードの核酸配列:a配列番号3のヌクレオチド574-1149;b配列番号5のヌクレオチド574-1149;c配列番号7のヌクレオチド586-1152;又はd配列番号1のヌクレオチド568-1143;のいずれか1つを含んで成る請求項3記載の核酸配列。aDNAを、i配列番号5のヌクレオチド574-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、又はiii上記i又はiiの相補鎖とを、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズせしめ;そしてb前記核酸配列を単離する;ことにより生成される、単離された核酸配列。適切な発現宿主におけるポリペプチドの生成を方向づける1又は複数の制御配列に作用可能に連結される請求項3~5のいずれか1項記載の核酸配列を含んで成る核酸構造体。請求項6記載の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。請求項6記載の核酸構造体又は請求項7記載のベクターを含んで成る組換え宿主細胞。請求項1又は2記載のポリペプチドを発現できるトランスジェニック植物又は植物部分。請求項1又は2記載のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。請求項1又は2記載のポリペプチドを生成するための方法であって、a前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、請求項8記載の組換え宿主細胞を増殖し;そしてb前記ポリペプチドを回収する;ことを含んで成る方法。請求項1又は2記載のポリペプチドの生成方法であって、a次の株のいずれかを培養し;iノカルジオプシスダソンビレイNocardiopsisdassonvillei亜種ダソンビレイDSM43235、iiノカルジオプシスプラシナNocardiopsisprasinaDSM15649、iiiノカルジオプシスプラシナDSM14010、又はivノカレジオプシスspNocardiopsisspDSM16424;そしてb前記ポリペプチドを回収する;ことを含んで成る方法。i動物飼料;ii動物飼料添加物;iii動物飼料への使用のための組成物の調製;iv動物飼料の栄養価値の改良;v動物飼料における消化でき且つ又は溶解性のタンパク質の増大;vi動物の規定食におけるタンパク質の加水分解の増強;及び又はviiタンパク質の処理;のための少なくとも1つの請求項1又は2記載のプロテアーゼの使用。少なくとも1つの請求項1又は2記載のプロテアーゼが飼料に添加される、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。a少なくとも1つの請求項1又は2記載のプロテアーゼ;並びにb少なくとも1つの脂溶性ビタミン、及び又はc少なくとも1つの水溶性ビタミン、及び又はd少なくとも1つの微量金属;を含んで成る動物飼料添加剤。アミラーゼ;フィターゼ;キシラナーゼ;ガラクタナーゼ;α-ガラクトシダーゼ;プロテアーゼ;ホスホリパーゼ;及び又はβ-グルカナーゼをさらに含んで成る請求項15記載の動物飼料添加剤。50~800gkgの粗タンパク質含有率を有し、そして少なくとも1つの請求項1又は2記載のプロテアーゼを含んで成る動物飼料。少なくとも1つのタンパク質又はタンパク質源に、少なくとも1つの請求項1又は2記載のプロテアーゼを添加する段階を含んで成る、タンパク質の処理方法。少なくとも1つのタンパク質源の中で、大豆が包含される請求項18記載の方法。洗剤への少なくとも1つの請求項1又は2記載のプロテアーゼの使用。発明の特定の記載:プロテアーゼ活性を有するポリペプチド:プロテアーゼ活性を有するポリペプチド、又はプロテアーゼはまた、時々、企画されたペプチダーゼ、プロテイナーゼ、ペプチドヒドロラーゼ又はタンパク質分解酵素でもある。プロテアーゼは、そのいずれかの端で開始するペプチドを加水分解するエキソタイプのものであるか、又はポリペプチド鎖において内部的に作用するエンドタイプエンドペプチダーゼのものである。エンドペプチダーゼは問題のプロテアーゼの特異性のために適切であるN-及びC-末端ブロックされたペプチド基質に対する活性を示す。用語プロテアーゼは、本明細書においては、ペプチド結合を加水分解する酵素として定義される。それは、EC34酵素グループその13種の亜綱の個々を包含するに属するいずれかの酵素を包含する。EC番号は、それぞれ、EurJBiochem199422315EurJBiochem199523216EurJBiochem199623715EurJBiochem199725016andEurJBiochem1999264610650に公開されている付録を包含する、NCIUBMBAcademicPressSanDiegoCaliforniaからの酵素命名法1992を言及する。命名法は定期的に補充され、そして更新されている:httpwwwchemqmwacukiubmbenzymeindexHtmlでのWorldWideWebを参照のこと。プロテアーゼは、それらの触媒機構に基づいて、次のグループに分類される:セリンプロテアーゼS、システインプロテアーゼC、アスパラギン酸プロテアーゼA、金属プロテアーゼM及び未知の又はまだ分類されていないプロテアーゼU。HandbookofProteolyticEnzymesAJBarrettNDRawlingsJFWoessnerAcademicPress、特に一般的な概論部分を参照のこと。特定の態様においては、本発明の及び本発明の使用のためのプロテアーゼは、下記から成る群から選択される:aEC34酵素グループに属するプロテアーゼ;b上記ハンドブックのSグループに属するセリンプロテアーゼ;cペプチダーゼファミリーS2Aのセリンプロテアーゼ;及び又はdBiochemJ290205218andinMEROPSproteasedatabaserelease620March242003に記載されるようなペプチダーゼファミリイーS1Eのセリンプロテアーゼ。データベースは、RawlingsNDOBrienEABarrettAJMEROPSプロテアーゼデータベースNucleicAcidsRes30343346に記載されている。与えられるプロテアーゼがセリンプロテアーゼ及びファミリーS2Aプロテアーゼであるかどうかを決定するためには、上記ハンドブック及びそこに示される原理が言及される。そのような決定は、すべてのタイプのプロテアーゼ、例えば天然に存在するか又は野生型のプロテアーゼ;又は遺伝子的に構築された又は合成のプロテアーゼについて実施され得る。プロテアーゼ活性は、問題のプロテアーゼの特異性のために適切なペプチド結合を包含する基質が使用されるいずれかのアッセイを用いて測定され得る。アッセイ-pH及びアッセイ-温度は、同様に、問題のプロテアーゼに適合されるべきである。アッセイ-pH値の例は、pH234567891011又は12である。アッセイ-温度の例は、303537404550556065708090又は95°Cである。プロテアーゼ基質の例は、カゼイン、例えばAzurineCrosslinkedCaseinである。3種のプロテアーゼアッセイは例4-5に記載されており、いずれにおいても、プロテアーゼ活性を決定するために使用され得る。本発明に関しては、いわゆるpNAアッセイが好ましいアッセイである。本発明のプロテアーゼの起源に対する、及び又は本発明への使用のための制限は存在しない。従って、用語プロテアーゼは、いずれかの属の微生物から得られる天然又は野生型プロテアーゼのみならず、またプロテアーゼ活性を示すいずれかのその変異体、フラグメント、等、及び合成プロテアーゼ、例えばシャフリングされたプロテアーゼ及びコンセンサスプロテアーゼも包含する。そのような遺伝子的に構築されたプロテアーゼは、一般的に当業界において知られているようにして、例えば特定部位の突然変異誘発により、PCRPCR反応におけるプライマーの1つとして所望する突然変異を含むPCRフラグメントを用いてにより、ランダム突然変異誘発により調製され得る。コンセンサスタンパク質の調製は、例えばEP897985号に記載される。遺伝子シャフリングは一般的に、WO9522625号及びWO9800343号に記載されている。プロテアーゼ遺伝子の組換えは、NessJEなどNatureBiotechnologyVol20pp125112552002に記載のようにして、合成シャフリングにより親の特定配列に無関係に製造され得る。親プロテアーゼ組に見出されるすべてのアミノ酸の可能性を提供するためにそれらのDNA配列において変性される合成オリゴヌクレオチドが企画され、そして遺伝子が参照に従ってアセンブリーされる。シャフリングは、十分な長さの配列のために、又は配列の一部のみのために行われ、そして次に、後で、十分な長さの配列を得るために残りの遺伝子と組合され得る。配列番号2、4、6,8、10及び12のプロテアーゼ、及び上記に列挙される従来の記録に記載されるノカルジオプシスプロテアーゼは、本発明の追加のプロテアーゼを提供するために、上記のようにシャフリングにゆだねられ得るそのような親プロテアーゼの特定の例である。用語~から得られるとは、所定の源に関して、本明細書において使用される場合、核酸配列によりコードされるポリペプチドがその源により、又はその源からの核酸配列が存在する細胞により生成されることを意味する。好ましい態様においては、ポリペプチドは細胞外分泌される。特定の態様においては、プロテアーゼは、動物、たとえばヒトに暴露される場合、低い免疫原応答をもたらすよう企画された低アレルギー性変異体である。免疫学的応答は、プロテアーゼに暴露される動物の免疫系によるいずれかの応答として理解されるべきである。1つのタイプの免疫学的応答は、暴露された動物における高められたレベルのIgEを導くアレルギー応答である。低アレルギー性変異体は、当業界において知られている技法を用いて調製され得る。例えば、プロテアーゼは、免疫学的応答に関与するプロテアーゼの一部又はエピトープを保護するポリマー成分により接合され得る。ポリマーによる接合は、WO9617929号、WO9830682号、WO9835026号及び又はWO9900489号に記載のように、プロテアーゼへのポリマーのインビトロ化学的カップリングを包含する。接合は、さらに又は他方では、プロテアーゼへのポリマーのインビボカップリングを包含する。そのような接合は、プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列を遺伝的に構築し、プロテアーゼにおける追加のグリコシル化部位をコードするコンセンサス配列を挿入し、そしてプロテアーゼをグリコシル化できる宿主においてプロテアーゼを発現することによって達成され得る。例えば、WO0026354号を参照のこと。低アレルギー性変異体を供給するもう1つの手段は、プロテアーゼモノマーが他のプロテアーゼモノマーのエピトープを保護し、そしてそれにより、オリゴマーの抗原性を低める、プロテアーゼの自己オリゴマー化を引き起こすために、プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列の遺伝的構築である。そのような生成物及びそれらの調製法は、例えばWO9616177号に記載されている。免疫学的応答に関与するエピトープは、種々の方法、例えばWO0026230号及びWO0183559号に記載されるファージ表示法、又はEP561907号に記載されるランダムアプローチにより同定され得る。エピトープが同定されると、そのアミノ酸配列は、既知の遺伝子操作技法、例えば特定部位の突然変異誘発によりプロテアーゼの変更された免疫学的性質を生成するために変更され得例えば、WO0026230号、WO0026354号及び又はWO0022103号を参照のこと、そして又はポリマーの接合がエピトープを保護するために、ポリマーのためのエピトープに十分に接近して行われ得る。本発明の種々の観点は、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチド短いプロテアーゼのための、並びに特定の配列番号を有する、それぞれアミノ酸配列又は核酸配列の特定フラグメントに対して一定の程度の同一性を有する、それぞれアミノ酸配列又は核酸配列を含んで成る、それぞれ対応する単離された核酸配列、前記ポリペプチド又は核酸に関する。前記特定されるフラグメントは、それぞれ成熟ポリペプチド、又はその核酸配列の一部をコードする成熟ポリペプチドに対応する。本発明に関しては、2種のアミノ酸配列間の同一性の程度、及び2種のヌクレオチド配列間の同一性の程度は、NeedlemanWunsch一列整列すなわち、包括的な一列整列であるプログラムalignにより決定される。このプログラムは、ポリペプチド及びヌクレオチド配列の一列整列のために使用される。デフォールト評点マトリックスBLOSUM50はポリペプチド一列整列のために使用され、そしてデフォールト一致マトリックスはヌクレオチド一列整列のために使用される。ギャップの最初の残基についてのペナルティーは、ポリペプチドに関して、-12及びヌクレオチドに関して、-16である。ギャップの追加の残基についてのペナルティーは、ポリペプチドに関して-2及びヌクレオチドに関して、-4である。Alignは、FASTAパッケージバージョンv20u6の一部であるWRPearsonandDJLipmanImprovedToolsforBiologicalSequenceAnalysisPNAS8524442448及びWRPearsonRapidandSensitiveSequenceComparisonwithFASTPandFASTAMethodsinEnzymology1836398を参照のこと。FASTAタンパク質一列整列は、ギャップサイズに対する制限を有さないSmithWatermanアルゴリズムを使用するSmithWatermanalgorithmTFSmithandMSWatermanJMolBiol147195197を参照のこと。特定の態様においては、本発明のポリペプチドは、配列番号2、4,6、8、10又は12のいずれかの成熟ペプチド部分に対して、少なくとも約7071727374757677787980818283848586878889909192939495969798、又は99の程度の同一性を有する。他の特定の態様においては、本発明の核酸配列は、配列番号1、3,5、7、9又は11のいずれかの成熟ペプチドコード部分に対して、少なくとも787980818283848586878889909192939495969798、又は少なくとも99の程度の同一性を有する。更なる態様において、本発明のプロテアーゼは、配列番号2、4、6、8、10及び12の何れかの成熟部分から、20、19、18、17、16、15、14、13、12又は11以下のアミノ酸;10、9、8、7、6、5、4、3、2又は1以下のアミノ酸;10、9、8、7、6又は5個のアミノ酸;あるいは4、3、2又は1のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を有する。さらなる特定の態様においては、本発明のプロテアーゼは、配列番号2、4,6、8、10又は12のいずれかの成熟ペプチド部分のアミノ酸配列;又はその対立遺伝子変異体;又はプロテアーゼ活性を有するそのフラグメントを含んで成る。さらなる好ましい態様においては、本発明のポリペプチドは、配列番号配列番号2、4,6、8、10又は12のいずれかの成熟ペプチド部分;又はその対立遺伝子変異体;又はプロテアーゼ活性を有するそのフラグメントから成る。配列番号2、4,6、8、10又は12のいずれかの成熟ペプチド部分のフラグメントは、それらのアミノ酸配列のアミノ及び又はカルボキシル末端から欠失された1又は複数のアミノ酸を有するポリペプチドである。1つの態様においては、フラグメントは、少なくとも75個のアミノ酸残基、又は少なくとも100個のアミノ酸残基、又は少なくとも125個のアミノ酸残基、又は少なくとも150個のアミノ酸残基、又は少なくとも160個のアミノ酸残基、又は少なくとも165個のアミノ酸残基、又は少なくとも170個のアミノ酸残基、又は少なくとも175個のアミノ酸残基を含む。対立遺伝子変異体は、同じ染色体遺伝子座を占める遺伝子のいずれか複数の二者択一形を示す。対立遺伝子変動は、天然においては、突然変異を通して生じ、そして集団内の多型現象をもたらす。遺伝子突然変異はサイレンでありコードされたポリペプチドの変化がない、又は変更されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子変異体によりコードされるポリペプチドである。本発明はまた、プロテアーゼ活性を有し、そしてa配列番号1、3、5、7、9又は11、又はその成熟ペプチドコード部分のいずれか;b上記aの副配列、又はc上記a又はbの相補的鎖と、同じ条件下でハイブリダイズする核酸プローブと、非常に低い、又は低い、又は中位の、又は中位の高い、又は高い、又は非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされる単離されたポリペプチドにも関するJSambrookEFFritschandTManiatis1989MolecularCloningALaboratoryManual2ndeditionColdSpringHarborNewYork。特定の態様においては、核酸プローブは、中でも、上記ab又はcの核酸配列から選択される。aの副配列は、少なくとも100個のヌクレオチド、又はもう1つの態様においては、少なくとも200個のヌクレオチドであり得る。さらに、副配列は、プロテアーゼ活性を有するポリペプチドフラグメントをコードすることができる。配列番号1、3、5、7、9又は11、又はその成熟ペプチドコード部分のいずれかの核酸配列、又はその副配列、及び配列番号2、4,6、8、10又は12のいずれかのアミノ酸配列、又はそのフラグメントは、当業界において良く知られている方法に従って、異なった属又は種の株からのプロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを同定し、そしてクローン化するための核酸プローブを企画するために使用され得る。特に、そのようなプローブは、そこにおける対応する遺伝子を同定し、そして単離するために、標準のサザンブロット方法に従って、興味ある属又は種のゲノム又はcDNAとのハイブリダイゼーションのために使用され得る。そのようなプローブは、完全な配列よりも相当に短いが、しかし少なくとも15個、好ましくは少なくとも25個、及びより好ましくは少なくとも35個の長さのヌクレオチドであるべきである。より長いプローブもまた使用され得る。DNA及びRNAの両プローブが使用され得る。プローブは典型的には、対応する遺伝子を検出するためにラベルされるたとえば、32P3H35Sビオチン、アビジン、フルオレセイン又はジゴキシゲニンにより。そのようなプローブは、本発明により包含される。従って、そのような他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、本明細書に記載されるプローブとハイブリダイズし、そしてプロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAについてスクリーンされ得る。そのような生物からのゲノム又は他のDNAは、アガロース又はポリアクリルアミドゲル電気泳動、又は他の分離技法により分離され得る。ライブラリーからのDNA又は分離されたDNAが、ニトロセルロース又は他の適切なキャリヤー材料に移行され、そしてその上に固定され得る。配列番号1、3、5、7、9又は11のいずれかと相同であるクローン又はDNA、又はその副配列を同定するためには、キャリヤー材料がサザンブロットに使用される。本発明のためには、ハイブリダイゼーションは、核酸配列が、非常に低い~非常に高い緊縮条件下で、それらの配列番号のいずれかで示される核酸配列、その相補鎖、又はその副配列に対応するラベルにされた核酸プローブにハイブリダイズすることを示す。核酸プローブがそれらの条件下でハイブリダイズする分子は、X-線フィルムを用いて検出される。特定の態様においては、核酸プローブは、配列番号2、4,6、8、10又は12のいずれかの成熟ペプチド部分、又はその副配列をコードする核酸配列である。もう1つの態様においては、核酸プローブは、成熟ポリペプチドコード領域に対応する、配列番号1、3、5、7、9又は11のいずれかのそれらのヌクレオチドである。少なくとも100個の長さのヌクレオチドの長さのプローブに関して、非常に低い~非常に高い緊縮条件は、標準のサザンブロット方法に従っての、5×SSPE03SDS200μgmlの剪断され、そして変性されたサケ精子DNA、及び25ホルムアミド非常に低い及び低い緊縮に関して、35ホルムアミド中位い及び中位の高い緊縮に関して、又は50ホルムアミド高い及び非常に高い緊縮に関してにおける42°Cでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションとして定義される。少なくとも100個の長さのヌクレオチドの長さプローブに関しては、キャリヤー材料は最終的に、2×SSC02SDS溶液を用いて、好ましくは少なくとも45°C非常に低い緊縮、より好ましくは少なくとも50°C低い緊縮、より好ましくは少なくとも55°C中位の緊縮、より好ましくは少なくとも60°C中位の高い緊縮、さらにより好ましくは少なくとも65°C高い緊縮、および最も好ましくは少なくとも70°C非常に高い緊縮で、それぞれ15分間、3度洗浄される。好ましくは、洗浄は、02×SSC01×SSC又は002×SSCのいずれかを用いて行われ、他の洗浄条件は未修正であるすなわち、それぞれ15分間、3度の洗浄;02SDS、好ましくは少なくとも45°C非常に低い緊縮性、より好ましくは少なくとも50°C低い緊縮、より好ましくは少なくとも55°C中位の緊縮、より好ましくは少なくとも60°C中位の高い緊縮、さらにより好ましくは少なくとも65°C高い緊縮、および最も好ましくは少なくとも70°C非常に高い緊縮での洗浄。約15個~約70個の長さのヌクレオチドである短いプローブに関しては、緊縮条件は、09MのNaCl、009Mのトリス-HClpH76、6mMのEDTA、05のNP401×Denhardt’s溶液、1mMのピロリン酸ナトリウム、1mMの一塩基性リン酸ナトリウム、01mMのATP及び02mgの酵母RNAml当たりにおける、BoltonandMcCarthy1962、ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA481390に従って計算されたTmよりも約5°C~約10°C低い温度での標準のサザンブロット方法に従ってのプレハイブリダイゼーション、ハイブリダイゼーション、及び後-ハイブリダイゼーション洗浄として定義される。約15個~約70個の長さのヌクレオチドである短いプローブに関しては、キャリヤー材料は、6×SSC及び01SDSにより15分間、1度、及び6×SSCを用いて、計算されたTmよりも約5°C~約10°C低い温度でそれぞれ15分間、2度、洗浄される。本発明はまた、アミノ酸配列2、4、6、8、10又は12のいずれかの成熟部分、及び1又は複数のアミノ酸の置換、欠失及び又は挿入を含んで成る、ポリペプチドの変異体に関する。変異体ポリペプチドのアミノ酸配列は、1又は複数のアミノ酸残基の挿入又は欠失、及び又は異なったアミノ酸残基による1又は複数のアミノ酸残基の置換により、配列番号2、4、6、8、10又は12のいずれかの成熟部分のアミノ酸配列と異なることができる。好ましくは、アミノ酸変更は、マイナーな性質のもの、すなわちタンパク質の折りたたみ及び又は活性に有意に影響を及ぼさない保存性アミノ酸置換;典型的には1~約30個のアミノ酸の小さな欠失;小さなアミノ-又はカルボキシ-末端-、たとえばアミノ-末端のメチオニン残基の延長;約20~25個までの残基の小さなリンカーペプチドの延長;又は実効電荷又は他の機能、たとえばポリ-ヒスチジン系、抗原性エピトープ又は結合ドメインを変更することにより精製を促進する小さな延長のものである。保存性置換の例は、塩基性アミノ酸アルギニン、リシン及びヒスチジン、酸性アミノ酸グルタミン酸及びアスパラギン酸、極性アミノ酸グルタミン及びアスパラギン、疎水性アミノ酸ロイシン、イソロイシン及びバリン、芳香族アミノ酸フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン、及び小さなアミノ酸グリシン、アラニン、セリン、トレオニン及びメチオニンのグループ内である。従って、例えば本発明は、配列番号2、4、6、8、10又は12のいずれかに示されるような配列、好ましくはその成熟部分を有するか、又はそれを含んで成るポリペプチドに関し、ここで保存性アミノ酸置換は、塩基性アミノ酸アルギニン、リシン及びヒスチジン、酸性アミノ酸グルタミン酸及びアスパラギン酸、極性アミノ酸グルタミン及びアスパラギン、疎水性アミノ酸ロイシン、イソロイシン及びバリン、芳香族アミノ酸フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン、及び小さなアミノ酸グリシン、アラニン、セリン、トレオニン及びメチオニン間での置換、又はいずれかの組合せ、又はその活性フラグメントを含んで成る。非活性を変更しないアミノ酸置換は当業界において知られており、そしてたとえば、HNeurathandRLHill1979TheProteinsAcademicPressNewYorkにより記載されている。最も通常生じる交換は次のものである:AlaSerValIleAspGluThrSerAlaGlyAlaThrSerAsnAlaValSerGlyTyrPheAlaProLysArgAspAsnLeuIleLeuValAlaGlu及びAspGly並びにそれらの逆。本発明のポリペプチドは、細菌又は菌類ポリペプチドであり得る。菌類ポリペプチドは、糸状菌又は酵母に由来する。特定の態様においては、本発明のポリペプチドは、i細菌プロテアーゼ;ii門アクチノバクテリアのプロテアーゼ、iii綱アクチノバクテリアのプロテアーゼ;iv目アクトノマイセタレスのプロテアーゼ;v科ノカルジオプサセアエプロテアーゼ;vi属ノルカジオプシスのプロテアーゼ;及び又はvii種ノカルジオプシス、例えばNアルバ、Nアルカリフィラ、Nアンタルクチカ、Nプラシナ、Nコムポスタ、Nエクスハランス、Nハロフィラ、Nハロトレランス、Nクンサネンシス、Nリステリ、Nルセンテンシス、Nメタリカス、Nシネマタホルマンス、Nトレハロシ、Nトロピカ、Nウミジスコラエ、Nキシンジアンゲンシス、又はNダソンビレイ、例えばNダソンビレイ亜種ダソンビレイDSM43235、NspDSM16424、ノカルジオプシスプラシナDSM15649、ノカルジオプシスプラシナ以前はアルバDSM14010、ノカレジオプシスspDSM16424、ノカルジオプシスアルカルフィラDSM44657、又はノカルジオプシスルセンテンシスDSM44048由来のプロテアーゼである。特定の態様においては、プロテアーゼは、ノカルジオプシスアルバ、ノカルジオプシスアルカルフィラ、ノカルジオプシスダソンビレイ、ノカルジオプシスルセンテンシス、ノカルジオプシスプラシナ又はノカルジオプシスspに由来する。上記分類は、チャプター:GMGarrityJGHoltinBergeysManualofSystematicBacteriology2001secondeditionvolume1DavidRBoneRichardWCastenholzによる手動へのロードマップに従ってである。上記種に関して、本発明は、知られている種名称にかかわらず、完全及び不完全状態、及び他の分類学的同等物、例えばアナモルフを包含することが理解されるであろう。当業者は、適切な同等物の同一性を容易に理解するであろう。それらの種の株は、多くの培養物収集所、例えばAmericanTypeCultureCollectionDeutscheSammiungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHCentraalbureauVoorSchimmelculturesandAgriculturalResearchServicePatentCultureCollectionNorthernRegionalResearchCenterから公的に容易に入手できる。さらに、そのようなポリペプチドは、上記プローブを用いて、天然から単離された微生物を包含する他の源例えば、土壌、堆肥、水、等から同定され、そして得られる。天然の環境からの微生物を単離するための技法は、当業界において良く知られている。次に、核酸配列は、他の微生物のゲノム又はcDNAライブラリーを同様にスクリーニングすることにより誘導され得る。ポリペプチドをコードする核酸配列がプローブにより検出されると、配列は、当業者に知られている技法を用いることにより、単離されるか又はクローン化され得る例えば、Sambrookなど1989前記を参照のこと。本明細書において定義される場合単離されたポリペプチドとは、他の非-ポリペプチドを実質的に有さず、例えばSDS-PAGEにより測定される場合、少なくとも約20の純度、好ましくは少なくとも約40の純度、より好ましくは約60の純度、さらにより好ましくは約80の純度、最も好ましくは約90の純度、及びさらに最も好ましくは約95の純度であるポリペプチドである。本発明の核酸配列によりコードされるポリペプチドはまた、もう1つのポリペプチドが前記ポリペプチド又はフラグメントのN-末端又はC-末端で融合されている、融合された又は切断可能な融合ポリペプチドも包含することができる。融合されたポリペプチドは、1つのポリペプチドをコードする核酸配列又はその一部を、本発明の核酸配列又はその一部に融合することによって生成される。融合ポリペプチドを生成するための技法は、当業界において知られており、そしてポリペプチドをコードするコード配列を、それらが整合して存在し、そして融合されたポリペプチドの発現が同じプロモーター及びターミネーターの制御下にあるよう、連結することを包含する。特定の態様においては、本発明のポリペプチドは酸安定性である。本発明のためには、用語、酸安定性とは、pH20、pH25又はpH30及び37°Cでの2時間のインキュベーションの後、残留活性が、pH90及び5°Cでの2時間インキュベートされた対応するサンプルの残留活性に比較して、少なくとも50であることを意味する。特定の態様においては、残留活性は、少なくとも55、60、65、70、75、80、85又は少なくとも90である。酸安定性を決定するための適切なアッセイは、例2のpH-安定性アッセイである。もう1つの特定の態様においては、本発明のポリペプチドはアルカリ安定性である。本発明のためには、用語、アルカリ安定性とは、pH120及び37°Cでの2時間のインキュベーションの後、残留活性が、pH90及び5°Cでの2時間インキュベートされた対応するサンプルの残留活性に比較して、少なくとも85であることを意味する。特定の態様においては、残留活性は、少なくとも868788899091又は少なくとも92である。アルカリ定性を決定するための適切なアッセイは、例4のpH-安定性アッセイである。さらなる特定の態様においては、本発明のポリペプチドは、本発明に従っての使用のために、i15°C及びpH9で、少なくとも002、004、006、008、010又は少なくとも011の相対的活性;ii25°C及びpH9で、少なくとも005、010、015又は少なくとも017の相対的活性;及び又はiii37°C及びpH9で、少なくとも005、010、015、020、025又は少なくとも030の相対的活性を有する。例4の温度プロフィール試験が、それらの決定のために使用される。さらなる特定の態様においては、本発明のポリペプチドは、DSCにより決定される場合、少なくとも766°C、又は少なくとも7778又は少なくとも782°CのTmを有する。Tmは、例7に記載されるように、pH70で決定される。追加の特定の態様においては、本発明のプロテアーゼは、pH75及び25°Cでヘモグロビンに対して少なくとも38AUgの比活性を示す。比活性は、例5に記載されるようにして決定され得る。本発明のプロテアーゼは、少なくとも3940414243444546474849498又は少なくとも50AUgの比活性を示すことができる。さらなる特定の態様においては、本発明のプロテアーゼは、ブランクに比較して、単一胃のインビトロ消化モデルにおいてトウモロコシ大豆ミール規定食の消化できるタンパク質のレベルSBM:トウモロコシ=2:3wwを、少なくとも13改良することができる。前記モデルは、胃消化段階pH30及び40°Cで10時間、及び続く腸消化段階pH68及び40°Cで45時間を包含する。モデルはまた、ペプシン3000Ug、胃消化段階において、及びパンクレアチン8mgg、腸消化段階においての添加を包含する。プロテアーゼ用量は、規定食1kg当たり100mgのプロテアーゼ酵素タンパク質EPである。適切なモデルは、例8に記載される。改良性のレベルは、少なくとも14、15又は少なくとも16であり得る。さらなる特定の態様においては、本発明は、iWO9903947号に開示されるノカルジオプシスダソンビレイNRRL18133;iiJP2-255081Aに開示されるノカルジオプシスsp株OPC201FERMP10508;iiiDD20043218号に開示される種ノカルジオプシスダソンビレイの株ZIMET43647由来のプロテアーゼを除外する。核酸配列:本発明はまた、本発明のポリペプチドをコードする単離された核酸配列にも関する。本発明の特定の核酸配列は、i配列番号1のヌクレオチド11143、187、88567及び5681143;ii配列番号3のヌクレオチド11149、187、88573及び5741149;iii配列番号5のヌクレオチド11149、187、88573及び5741149;iv配列番号7のヌクレオチド11152、187、88585及び5861152;v配列番号9のヌクレオチド11149、187、88585及び5861149;及びvi配列番号11のヌクレオチド11152、187、88585及び5861152;及びそれらのいずれかの組合せである。特に好ましいヌクレオチドは、i配列番号1のヌクレオチド5681143;ii配列番号3のヌクレオチド5741149;iii配列番号5のヌクレオチド5741149;iv配列番号7のヌクレオチド5861152;v配列番号9のヌクレオチド5861149;及びvi配列番号11のヌクレオチド5861152であり;成熟ポリペプチドコード部分又は領域に対応する。本発明はまた、遺伝子コードの縮重により、それぞれ配列番号13579及び11のその対応する部分とは異なる、配列番号246810又は12のいずれかの成熟部分を有するポリペプチドをコードする核酸配列を包含する。本発明はまた、それぞれ配列番号246810又は12のフラグメントをコードし、そしてプロテアーゼ活性を有する、配列番号13579及び11のいずれかの副配列にも関する。配列番号13579又は11のいずれかの副配列は、それぞれ配列番号13579又は11より包含される核酸配列であるが、但し5’及び又は3’末端からの1又は複数のヌクレオチドが欠失されている。好ましくは、副配列は、少なくとも100125150175200又は少なくとも225個のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも300個のヌクレオチド、さらにより好ましくは少なくとも325350375400425450475500525550又は少なくとも560個のヌクレオチドを含む。本発明はまた、配列番号13579又は11のいずれかの成熟ポリペプチドコード部分に対して、少なくとも777、好ましくは少なくとも787980818283848586878889909192939495969798又は少なくとも99の程度の同一性を有するヌクレオチド配列にも関する。ヌクレオチド同一性の程度の決定のためには、上記に言及されるプログラムアリゲンが使用される。本発明はまた、上記に列挙される-のヌクレオチドのいずれか、好ましくはその成熟ペプチドコード部分に少なくとも1つの突然変異を含んで成る変異体核酸配列にも関し、ここで前記変異体核酸配列は、配列番号246810又は12のいずれか、好ましくはその成熟ペプチドコード部分のアミノ酸配列から成るか、又は1又は複数のアミノ酸の置換、欠失及び又は挿入を包含する、の配列のいずれかの変異体であるか、又は上記の配列のいずれかの対立遺伝子変異体であるか、又は上記の配列のいずれかのフラグメントであるポリペプチドをコードする。ポリペプチドをコードする核酸配列を単離し、又はクローン化するために使用される技法は、当業界において知られており、そしてゲノムDNAからの単離、cDNAからの調製、又はそれらの組み合わせを包含する。そのようなゲノムDNAからの本発明の核酸配列のクローニングは、例えば良く知られているポリメラーゼ鎖反応PCR、又は共有する構造特徴を有するクローン化されたDNAフラグメントを検出するために発現ライブラリーの抗体スクリーニングを用いることによってもたらされ得る。例えば、Innisなど1990PCRAGuidetoMethodsandApplicationAcademicPressNewYorkを参照のこと。他の核酸増幅方法、例えばリガーゼ鎖反応LCR、連結された活性化転写LAT及び核酸配列に基づく増幅NASBAが使用され得る。核酸配列は、ノカルジオプシス株、又は他の又は関連する生物からクローン化され得、そして従って、核酸配列のポリペプチドコード領域の対立遺伝子又は種変異体であり得る。用語単離された核酸配列とは、本明細書において使用される場合、アガロース電気泳動により決定される場合、他の核酸配列を実質的に有さず、たとえば少なくとも約20純度、好ましくは少なくとも約40の純度、より好ましくは少なくとも約60の純度、さらにより好ましくは少なくとも約80の純度、及び最も好ましくは少なくとも約90の純度である核酸配列を言及する。たとえば、単離された核酸配列は、それが再生されるであろう異なった部位にその天然の位置から核酸配列を再配置するために遺伝子工学に使用される標準のクローニング方法により得られる。クローニング方法は、ポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成る所望する核酸フラグメントの切除及び単離、ベクター分子中へのフラグメントの挿入、及び核酸配列の複数コピー又はクローンが複製されるであろう宿主細胞中への組換えベクターの組み込みを包含する。核酸配列は、ゲノム、cDNARNA半合成、合成起源、又はそれらのいずれかの組み合わせのものであり得る。本発明のポリペプチドをコードする核酸配列の修飾は、そのポリペプチドに実質的に類似するポリペプチドの合成のために必要である。用語、ポリペプチドに実質的に類似するとは、ポリペプチドの天然に存在しない形を言及する。それらのポリペプチドは、その天然源から単離されたポリペプチドとは、いくつかの構築された態様で異なり、たとえば非活性、熱安定性、pH最適性又は同様のものにおいて異なる変異体であり得る。変異体配列は、配列番号13579又は11のいずれかの、ポリペプチドコード部分又は成熟ペプチドコード部分として提供される核酸配列、例えばその副配列に基づいて、及び又は核酸配列によりコードされるポリペプチドのもう1つのアミノ酸配列を生ぜしめないが、しかしプロテアーゼの生成のために意図された宿主生物のコドン使用法に対応するヌクレオチド置換の導入により、又は異なったアミノ酸配列を生ぜしめることができるヌクレオチド置換の導入により構成され得る。ヌクレオチド置換の一般的記載のためには、Fordなど1991ProteinExpressionandPurification295107を参照のこと。低-アレルゲン性ポリペプチドが、上記に記載されるようにして調製され得る。そのような置換は、分子の機能に対して決定的である領域外で行われ、そしてさらに活性ポリペプチドをもたらすことは、当業者に明らかであろう。本発明の単離された核酸配列によりコードされるポリペプチドの活性に必須であり、そして従って、好ましくは置換を受けやすくないアミノ酸残基は、当業界において知られている方法、たとえば特定部位の突然変異誘発又はアラニン-走査突然変異誘発に従って同定され得るたとえば、CunninghamandWells1989Science24410811085を参照のこと。後者の技法においては、突然変異は分子における正に荷電された残基ごとに導入され、そしてその得られる変異体分子は、分子の活性に対して決定的であるアミノ酸残基を同定するためにプロテアーゼ活性について試験される。基質-プロテアーゼ相互作用の部位はまた、核磁気共鳴分析、クリスタログラフィー又は光親和性ラベリングのような技法により決定されるように、立体構造体の分析により決定され得るたとえば、deVosなど1992Science255306312Smithなど1992JournalofMolecularBiology224899904Wlodaverなど1992FEBSLetters3095964を参照のこと。本発明はまた、配列番号13579又は11のいずれかの核酸配列、好ましくは成熟ペプチドコード部分、又はそれらの相補的鎖;又はその対立遺伝子及び副配列と同じ条件下でハイブリダイズする核酸プローブと、非常に低い緊縮条件、好ましくは低い緊縮条件、より好ましくは中位の緊縮条件、より好ましくは中位の高い緊縮条件、さらにより好ましくは高い緊縮条件及び最も好ましくは非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズする本発明のポリペプチドをコードする単離された核酸配列にも関するSambrookなど1989前記。本発明はまた、a非常に低い、低い、中位の、中位の高い、高い又は非常に高い緊縮条件下で、上記iにより、又はmRNAの5’末端で読み取り枠のすぐ上流に位置するATG開始コドン、及びmRNAの3’末端で読み取り枠のすぐ下流に位置する転写ターミネーター配列により決定される。コード配列は、DNA、cDNA及び組み合わせ核酸配列を包含するが、但しそれらだけには限定されない。本発明のポリペプチドをコードする単離された核酸配列は、ポリペプチドの発現を提供するために種々の手段で操作され得る。ベクター中へのその挿入の前、核酸配列の操作は、発現ベクターに依存して、所望されるか又は必要とされる。組換えDNA方法を用いて核酸配列を修飾するための技法は、当業界において良く知られている。用語制御配列とは、本発明のポリペプチドの発現のために必要であるか、又はそのために好都合であるすべての成分を包含するよう定義される。個々の制御配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列に対して生来であっても又は外来性であっても良い。そのような制御配列は、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモーター、シグナルペプチド配列、及び転写ターミネーターを包含するが、但しそれらだけには限定されない。最少で、制御配列は、プロモーター、及び転写及び翻訳停止シグナルを包含する。制御配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列のコード領域と制御配列との連結を促進する特定の制限部位を導入するためにリンカーを提供され得る。用語作用可能に連結されるとは、本明細書においては、制御配列が、それがポリペプチドの生成を方向づけるよう、DNA配列のコード配列に対する位置に適切に配置される形状として定義される。制御配列は、適切なプロモーター配列、すなわち核酸配列の発現のために宿主細胞により認識される核酸配列であり得る。プロモーター配列は、ポリペプチドの発現を仲介する転写制御配列を含む。プロモーターは、宿主細胞において転写活性を示すいずれかの核酸配列、たとえば変異体の、切断された、及びハイブリッドのプロモーターであり得、そして宿主細胞に対して相同であるか又は異種である細胞外又は細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得られる。特に細胞宿主細胞において本発明の核酸構造体の転写を方向づけるための適切なプロモーターの例は、Eコリlacオペロン、ストレプトミセスコエリカラーStreptomycescoelicolorアガラーゼ遺伝子dagA、バチルスサブチリスBacillussubtilisLバンスクラーゼ遺伝子、バチルスリケニホルミスBacilluslicheniformisα-アミラーゼ遺伝子amyL、BチルスステアロサーモフィラスBacillusstearothermophilusマルトゲン性アミラーゼ遺伝子amyM、バチルスアミロリケファシエンスBacillusamyloliguefaciensα-アミラーゼ遺伝子amyQ、バチルスリケニホルミスペニシリナーゼ遺伝子penP、バチルスサブチリスxylA及びzylB遺伝子及び原生動物のβ-ラクタマーゼ遺伝子から得られるプロモーターVilla-Kamaroffなど1978ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA7537273731、及びtacプロモーターDeBoerなど1983ProceedingsoftheNationalAcademyofScienceUSA802125である。さらなるプロモーターは、UsefulproteinsfromrecombinantbacteriainScientificAmerican19802427494及びSambrookなど1989前記に記載される。糸状菌宿主細胞における本発明の核酸構造体の転写を方向づけるための適切なプロモーターの例は、アスペルギラスオリザエTAKAアミラーゼ、リゾムコルミエヘイアスパラギン酸プロテイナーゼ、アスペルギラスニガー中性α-アミラーゼ、アスペルギラスニガー酸安定性α-アミラーゼ、アスペルギラスニガー又はアスペルギラスアワモリグルコアミラーゼglaA、リゾムコルミエヘイリパーゼ、アスペルギラスオリザエアルカリプロテアーゼ、アスペルギラスオリザエトリオースリン酸イソメラーゼ、アスペルギラスニジュランスアセトアミダーゼ、及びフサリウムオキシスポラムトリプシン-様プロテアーゼWO9600787号をコードする遺伝子から得られるプロモーター、並びにアスペルギラスニガー中性α-アミラーゼ及びアスペルギラスオリザエトリオースリン酸イソメラーゼをコードする遺伝子からのプロモーターのハイブリッド、及びそれらの変異体の切断され、及びハイブリッドのプロモーターである。酵母宿主においては、有用なプロモーターは、サッカロミセスセレビシアエSaccharomycescerevisiaeエノラーゼENO-1、サッカロミセスセレビシアエガラクトキナーゼGAL1、サッカロミセスセレビシアエアルコールデヒドロゲナーゼグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼADH2GAP、及びサッカロミセスセレビシアエ3-ホスホグリセレートキナーゼから得られる。酵母宿主細胞のための他の有用なプロモーターは、Romunosなど1992Yeast8:423-488により記載される。制御配列はまた、適切な転写ターミネーター配列、すなわち転写を終結するために宿主細胞により認識される配列でもあり得る。ターミネーター配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の3’側末端に作用可能に連結される。選択の宿主細胞において機能的であるいずれかのターミネーターが本発明において使用され得る。糸状菌宿主細胞のための好ましいターミネーターは、アスペルギラスオリザエTAKAアミラーゼ、アスペルギラスニガーグルコアミラーゼ、アスペルギラスニジュランスアントラニル酸シンターゼ、アスペルギラスニガーα-グルコシダーゼ及びフサリウムオキシスポラムトリプシン-様プロテアーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための好ましいターミネーターは、サッカロミセスセレビシアエエノラーゼ、サッカロミセスセレビシアエチトクロムCCYC1、及びサッカロミセスセレビシアエグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための他の有用なターミネーターは、Romanosなど1992前記により記載される。細菌宿主細胞、例えばバチルス宿主細胞のための好ましいターミネーターは、バチルスリケニホルミスα-アミラーゼ遺伝子amyL、Bチルスステアロサーモフィラスマルトゲン性アミラーゼ遺伝子amyM、又はバチルスアミロリケファシエンスα-アミラーゼ遺伝子amyQからのターミネーターである。制御配列はまた、適切なリーダー配列、すなわち宿主細胞による翻訳のために重要であるmRNAの非翻訳領域でもあり得る。リーダー配列は、ポリペプチドをコードする核酸配列の5’末端に作用可能に連結される。選択の宿主細胞において機能的であるいずれかのリーダー配列が、本発明において使用され得る。糸状菌宿主細胞のための好ましいリーダーは、アスペルギラスオリザエTAKAアミラーゼ、アスペルギラスニジュランストリオースリン酸イソメラーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための適切なリーダーは、サッカロミセスセレビシアエエノラーゼENO-1、サッカロミセルセレビシアエ3-ホスホグリセレートキナーゼ、サッカロミセスセレビシアエα-因子及びサッカロミセスセレビシアエアルコールデヒドロゲナーゼグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼADH2GAPについての遺伝子から得られる。制御配列はまた、ポリアデニル化配列、すなわち核酸配列の3’末端に操作可能に連結され、そして転写される場合、転写されたmRNAにポリアデノシン残基を付加するためにシグナルとして宿主細胞により認識される配列でもあり得る。選択の宿主細胞において機能的であるいずれかのポリアデニル化配列が,本発明において使用される。糸状菌宿主細胞のための好ましいポリアデニル化配列は、アスペルギラスオリザエTAKAアミラーゼ、アスペルギラスニガーグルコアミラーゼ、アスペルギキラスニジュランスアントラニル酸シンターゼ、フサリウムオキシスポラムトリプシン-様プロテアーゼ及びアスペルギラスニガーα-グルコシダーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための有用なポリアデニル化配列は、GuoandSherman1995MolecularCellularBiology1559835990により記載されている。制御配列はまた、ポリペプチドのアミノ末端に連結されるアミノ酸配列をコードし、そしてそのコードされたポリペプチドを細胞の分泌路中に方向づけるシグナルペプチドコード領域でもあり得る。核酸配列のコード配列の5’側末端は、本来、分泌されたポロペプチドをコードするコード領域のセグメントと翻訳読み取り枠を整合して、天然において連結されるシグナルペプチドコード領域を含むことができる。他方では、コード配列の5’側末端は、そのコード配列に対して外来性であるシグナルペプチドコード領域を含むことができる。そのコード配列が天然において、シグナルペプチドコード領域を含まない外来性シグナルペプチドコード領域が必要とされる。他方では、外来性シグナルペプチドコード領域は、ポリペプチドの増強された分泌を得るために、天然のシグナルペプチドコード領域を単純に置換することができる。しかしながら、分泌路中に発現されたポリペプチドを方向づけるいずれかのシグナルペプチドコード領域が、本発明に使用され得る。細菌宿主細胞のための効果的なシグナルペプチドコード領域は、バチルスNCIB11837マルトゲン性アミラーゼ、バチルスステアロサーモフィラスα-アミラーゼ、バチルスリケニホルミススブチリシン、バチルスリケニホルミスβ-ラクタマーゼ、バチルスアステロサーモフィラス中性プロテアーゼnprTnprSnprM、及びバチルススブチリスprsAについての遺伝子から得られるシグナルペプチド領域である。追加のシグナルペプチドは、SinomenandPalva1993MicrobiologicalReviews57109137により記載される。糸状菌宿主細胞のための効果的なシグナルペプチドコード領域は、アスペルギラスオリザエTAKAアミラーゼ、アスペルギラスニガー中性アミラーゼ、アスペルギラスニガーグルコアミラーゼ、リゾムコルミエヘイアスペラギン酸プロテイナーゼ、ヒューミコラインソレンスセルラーゼ及びヒューミコララヌギノサリパーゼについての遺伝子から得られたシグナルペプチドコート領域である。酵母宿主細胞のための有用なシグナルペプチドは、サッカロミセスセレビシアエα-因子及びサッカロミセルセレビシアエインバーターゼについての遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード領域は、Romanosなど1992前記により記載される。制御配列はまた、ポリペプチドのアミノ末端で位置するアミノ酸配列をコードするプロペプチドコード領域であり得る。得られるポリペプチドは、プロ酵素又はプロポリペプチド又は多くの場合、チモーゲンとして知られている。プロポリペプチドは一般的に不活性であり、そしてプロポリペプチドからプロペプチドの触媒又は自己触媒分解により成熟した活性ポリペプチドに転換され得る。プロペプチドコード領域は、バチルスサブチリスアルカリプロテアーゼaprE、バチルスサブチリス中性プロテアーゼnprT、サッカロミセスセレビシアエα-因子、リゾムコルミエヘイアスパラギン酸プロテイナーゼ遺伝子、及びミセリオプソラサーモフィリアラッカーゼについての遺伝子から得られるWO9533836号。好ましい態様においては、シグナルペプチドコード領域は、配列番号13579又は11のいずれかのシグナルペプチドコード領域である。もう1つの好ましい態様においては、プロペプチドコード領域は、配列番号13579又は11のいずれかのプロペプチドコード領域である。シグナルペプチド及びプロペプチド領域の両者がポリペプチドのアミノ末端に存在する場合、そのプロペプチド領域は、ポリペプチドのアミノ末端の次に位置し、そしてシグナルペプチド領域は、プロペプチド領域のアミノ末端の次に位置する。宿主細胞の増殖に関して、ポリペプチドの発現の調節を可能にする調節配列を付加することがまた所望される。調節システムの例は、調節化合物の存在を包含する、化学的又は物理的刺激に応答して、遺伝子の発現の開始又は停止を引き起こすそれらのシステムである。原核生物系における調節システムは、lactac及びtrpオペレーターシステムお包含する。酵母においては、ADH2システム又はGAL1システムが使用され得る。糸状菌においては、TAKAα-アミラーゼプロモーター、アスペルギラスニガーグルコアミラーゼプロモーター及びアスペルギラスオリザエグルコアミラーゼプロモーターが、調節配列として使用さえ得る。調節配列の他の列は、遺伝子増幅を可能にするそれらの配列である。真核システムにおいては、それらはメトトレキセートの存在下で増幅されるジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、及び重金属と共に増幅されるメタロチオネイン遺伝子を包含する。それらの場合、ポリペプチドをコードする核酸配列が、調節配列により作用可能に連結される。発現ベクター:本発明はまた、本発明の核酸配列、プロモーター、及び転写及び翻訳停止シグナルを含んで成る組換え発現ベクターにも関する。上記の種々の核酸及び制御配列は、1又は複数の便利な制限部位でポリペプチドをコードする核酸配列の挿入又は置換を可能にするためにそれらの部位を含むことができる組換え発現ベクターを生成するために一緒に連結され得る。他方では、本発明の核酸配列は、前記配列又は前記配列を含んで成る核酸構造体を、発現のための適切なベクター中に挿入することによって発現され得る。発現ベクターを創造する場合、そのコード配列はベクターに位置し、その結果、コード配列は発現のための適切な制御配列により作用可能に連結される。組換え発現ベクターは、組換えDNA方法に便利にゆだねられ得、そして核酸配列の発現をもたらすことができるいずれかのベクターたとえば、プラスミド又はウィルスであり得る。ベクターの選択は典型的には、ベクターが導入される予定である宿主細胞とベクターとの適合性に依存するであろう。ベクターは、線状又は閉環された環状プラスミドであり得る。ベクターは自律的に複製するベクター、すなわち染色体存在物として存在するベクターその複製は染色体複製には無関係である、たとえばプラスミド、染色体外要素、ミニクロモソーム又は人工染色体であり得る。ベクターは自己複製を確かめるためのいずれかの手段を含むことができる。他方では、ベクターは、糸状菌細胞中に導入される場合、ゲノム中に組み込まれ、そしてそれが組み込まれている染色体と一緒に複製されるベクターであり得る。さらに、宿主細胞のゲノム中に導入される全DNA又はトランスポゾンを一緒に含む、単一のベクター又はプラスミド、又は複数のベクター又はプラスミドが使用され得る。本発明のベクターは好ましくは、形質転換された細胞の容易な選択を可能にする1又は複数の選択マーカーを含む。選択マーカーは、1つの遺伝子であり、その生成物は、殺生物剤又はウィルス耐性、重金属に対する耐性、栄養要求性に対する原栄養要求性、及び同様のものを提供する。細菌選択マーカーの例は、バチルスサブチリス又はバチルスリケニホルミスからのdal遺伝子、又は抗生物質、例えばアンピシリン、カナマイシン、クロラムフェニコール又はテトラサイクリン耐性を付与するマーカーである。酵母宿主細胞のための適切なマーカーは、ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1及びURA3である。糸状菌宿主細胞に使用するための選択マーカーは、次の群から選択されるが、但しそれらだけには限定されない;amdS、argB、bar、hph、niaD、pyrG、sC及びtrpC、並びにそれらの同等物。アスペルギラスニジュランス又はアスペルギラスオリザエのamdS及びpyrG遺伝子及びストレプトミセスヒグロスコピカスのbar遺伝子が、アスペルギラス細胞への使用のために好ましい。本発明のベクターは好ましくは、宿主細胞ゲノム中へのベクターの安定した組み込み、又は細胞のゲノムに無関係に細胞におけるベクターの自律的複製を可能にする要素を含む。宿主細胞のゲノム中への組み込みのためには、ベクターは、相同又は非相同組換えによるゲノム中へのベクターの安定した組み込みのためのベクター中のポリペプチド、又はいずれか他の要素をコードする核酸配列に依存する。他方では、ベクターは、宿主細胞のゲノム中への相同組換えによる組み込みを方向づけるための追加の核酸配列を含むことができる。その追加の核酸配列は、染色体における正確な位置での宿主細胞ゲノム中へのベクターの組み込みを可能にする。正確な位置での組み込みの可能性を高めるために、組み込み要素は好ましくは、相同組換えの可能性を高めるために対応する標的配列と高い相同性を示す十分な数の核酸、たとえば100~1500個の塩基対、好ましくは400~1500個の塩基対、及び最も好ましくは800~1500個の塩基対を含むべきである。組み込み要素は、宿主細胞のゲノムにおける標的配合と相同であるいずれかの配列であり得る。さらに、組み込み要素は、非コード又はコード核酸配列であり得る。他方では、ベクターは非相同組換えにより宿主細胞のゲノム中に組み込まれ得る。自律複製のためには、ベクターはさらに、問題の宿主細胞においてのベクターの自律的な複製を可能にする複製の起点を含んで成る。複製の細菌起点の例は、Eコリにおける複製を可能にするプラスミドpBR322pUC19pACYC177及びpACYC184及びバチルスにおける複製を可能にするpUB110pE194pTA1060及びpAMβ1の複製の起点である。酵母宿主細胞への使用のための複製の起点の例は、複製の2ミクロン起点、すなわちARS1ARS4ARS1及びCEN3の組み合わせ、及びARS4及びCEN6の組み合わせである。複製の起点は、宿主細胞においてその機能を感温性にする突然変異を有する起点である例えば、Ehrlich1978ProcedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA751433を参照のこと。本発明の核酸配列の1以上のコピーが、遺伝子生成物の生成を高めるために宿主細胞中に挿入され得る。核酸配列のコピー数の上昇は、宿主細胞ゲノム中に配列の少なくとも1つの追加のコピーを組み込むことによって、又は核酸配列と共に増幅可能な選択マーカー遺伝子を含むことによって得られ、ここで細胞は選択マーカー遺伝子の増幅されたコピーを含み、そしてそれにより、核酸配列の追加のコピーが、適切な選択剤の存在下で前記細胞を培養することによって選択され得る。本発明の組換え発現ベクターを構成するために上記要素を連結するために使用される方法は、当業者に良く知られている例えば、Sambrookなど1989前記を参照のこと。プロテアーゼはまた、動物飼料のための興味ある少なくとも1つの他の酵素、例えばアミラーゼ;フィターゼキシラナーゼガラクタナーゼα-ガラクトシダーゼプロテアーゼ;ホスホリパーゼ及び又はβグルカナーゼと共に同時発現され得る。酵素は、異なったベクターから、1つのベクターから、又は両技法の混合物を用いて、同時発現され得る。異なったベクターを用いる場合、ベクターは、異なった選択マーカー、及び複数の異なった起点を有することができる。わずか1つのベクターを用いる場合、遺伝子は、1又は複数のプロモーターから発現され得る。1つのプロモーター二又は多-シストロン性の調節下でクローン化される場合、遺伝子がクローン化される順序はタンパク質の発現レベルに影響を及ぼすことができる。プロテアーゼはまた、プロテアーゼをコードする遺伝子がもう1つのタンパク質をコードする遺伝子に整合して融合されている融合タンパク質として発現され得る。このタンパク質は、もう1つの酵素、又はもう1つの酵素からの機能的ドメインであり得る。宿主細胞:本発明はまた、ポリペプチドの組換え生成において都合良く使用される、本発明の核酸配列を含んで成る組換え宿主にも関する。本発明の核酸配列を含んでなるベクターは、そのベクターが染色体組み込み体として、又は前記のような自己複製染色体外ベクターとして維持されるように、宿主細胞中に導入される。用語宿主細胞とは、複製の間に生じる突然変異のために、親細胞と同一ではない親細胞のいずれかの子孫を包含する。宿主細胞の選択は、ポリペプチドをコードする遺伝子及びその源に、かなりの程度依存するであろう。宿主細胞は、単細胞微生物、例えば原核生物、又は単細胞微生物、真核生物であり得る。有用な単細胞は、細菌細胞、例えばグラム陽性細菌、例えばバチルス細胞又はストレプトミセス細胞、又は乳酸菌の細胞;又はグラム陰性細菌、例えばEコリ及びシュードモナスspである。乳酸菌は、ラクトコーカスLactococcus、ラクトバシラスLactobacillus、リュコノストックLeuconostoc、ストレプトコーカスStreptococcus、ペジオコーカスPediococcus及びエンラロコーカスEnterococcusを包含するが、但しそれらだけには限定されない。細菌宿主細胞中へのベクターの導入は例えば、コンピテント細胞たとえば、YoungandSpizizin1961JournalofBacteriology81823829又はDubnauandDavidoffAbelson1971JournalofMolecularBiology56209221を参照のことを用いてプロトプラスト形質転換たとえば、ChangandCohen1979MolecularGeneralGenetics168111115、エレクトロポレーションたとえば、ShigekawaandDower1988Biotechniques6742751を参照のこと又は接合たとえば、KoehlerandThorne1987JournalofBacteriology16957715278を参照のことによりもたらされ得る。宿主細胞は、真核生物、たとえば非-ヒト動物細胞、昆虫、植物、又は菌類細胞であり得る。1つの特定の態様においては、宿主細胞は菌類細胞である菌類とは、本明細書において使用される場合、門アスコミコタAscomycota、バシジオミコタBasidiomycota、キトリジオミコタChytridiomycota及びヅイゴミコタZygomycotaHawksworthなどAinsworthandBisby’sDictionaryoftheFungi8thedition1995CABInternationalUniversityPressCambridgeUKにより定義される、及びオーミコタOomycotaHawksworthなど1995前記、171ページに引用される、並びに栄養胞子菌Hawksworhなど1995前記を包含する。もう1つの特定の態様においては、菌類宿主細胞は酵母細胞である酵母とは、本明細書において使用される場合、子嚢胞子酵母Endomycetals、担子胞子酵母、及び不完全菌類Blastomycetesに属する酵母を包含する。酵母の分類は未来において変化し得るので、本発明のためには、酵母は、BiologyandActivitiesofYeastに記載のようにして定義されるであろう。酵母宿主細胞は、カンジダCandida、ハンセヌラHunsenula、クレベロミセスKluyveromyces、ピチアPichia、サッカロミセスSaccharomyces、シゾサッカロミセスSchizosaccharomyces又はヤロウィアYarrowiaである。菌類宿主細胞は糸状菌細胞である。糸状菌とは、ユーミコタEumycota及びオーミコタOomycotaのすべての糸状形を包含するHawksworthなど1995前記により定義されるような。糸状菌は一般的に、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナン及び他の複合多糖類から構成される菌子体壁により特徴づけられる。成長増殖は、菌子拡張によってであり、そして炭素代謝は絶対好気性である。対照的に、酵母、たとえばサッカロミセスセレビシアエによる成長増殖は、単細胞葉状体の発芽によってであり、そして炭素代謝は発酵性である。糸状菌宿主細胞の例は、アクレモニウムAcremonium、アスペルギラスAspergillus、フサリウムFusarium、ヒューミコラHumicola、ムコルMucor、ミセリオプソラMyceliophthora、ネウロスポラNeurospora、ペニシリウムPenicilium、チエラビアThielavia、トリポクラジウムTolypocladium又はトリコダーマTrichodermaの種の細胞であるが、但しそれらだけには限定されない。菌類細胞は、プロトプラスト形質転換、プロトプラストの形質転換、及びそれ自体知られている態様での細胞壁の再生を包含する工程により形質転換され得る。アスペルギラス宿主細胞の形質転換のための適切な方法は、ヨーロッパ特許第238023号及びYeltonなど1984ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA8114741874に記載される。フラリウム種を形質転換するための適切な方法は、Malardierなど1989Gene78147156及びWO9600787号により記載される。酵母は、BeckerandGuarenteInAbelsonJNandSimonMIeditorsGuidetoYeastGeneticsandMolecularBiologyMethodsinEnzymologyVolume194pp182187AcademicPressIncNewYorkItoなど1983JournalofBacteriology153163及びHinnenなど1978ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA751920により記載される方法を用いて形質転換され得る。生成方法:本発明はまた、aポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、その野生型において、ポリペプチドを生成することができる、菌株を培養し;そしてbポリペプチドを回収することを含んで成る、本発明のポリペプチドを生成するための方法にも関する。好ましい態様においては、前記菌株は、門アクチノバクテリアActinobacteria、好ましくは綱アクチノバクテリア、より好ましくは放線菌目Actinomycetales、さらにより好ましくは科ノカルジオサセアエNocardiopsaceae、及び最も好ましくは属ノカルジオプシスNocardiopsis、例えば種ノカルジオプシスのいずれか、例えば前記に列挙される特定菌株のものである。本発明はまた、aポリペプチドの生成を助ける条件下で宿主細胞を培養し;そしてbポリペプチドを回収することを含んで成る、本発明のポリペプチドを生成するための方法にも関する。本発明はまた、aポリペプチドの生成の助けとなる条件下で宿主細胞を培養し、ここで前記宿主細胞は配列番号13579又は11のいずれかの成熟ペプチドコード部分に少なくとも1つの突然変異を含んで成る変異体核酸配列を含んで成り、ここで前記変異体核酸配列が、iそれぞれ配列番号246810又は12のいずれかの成熟ペプチドから成るか、又はii1又は複数のアミノ酸の置換、欠失及び又は挿入を含んで成る、iの配列のいずれかの変異体であるか、又はiii上記の配列のいずれかの対立遺伝子変異体であるか、又はiv上記の配列のいずれかのフラグメントであるポリペプチドをコードし;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、本発明のポリペプチドの生成方法にも関する。本発明の生成方法においては、細胞は、当業界において知られている方法を用いて、ポリペプチドの生成のために適切な栄養培地において培養される。例えば、細胞は、ポリペプチドの発現及び又は単離を可能にする、適切な培地において、及び条件下で行われる実験室用又は産業用発酵器において、振盪フラスコ培養、小規模又は大規模発酵連続、バッチ、供給バッチ、又は団体状態発酵を包含するにより培養され得る。培養は、炭素及び窒素源及び無機塩を含んで成る適切な栄養培地において、当業界において知られている方法を用いて行われる。適切な培地は、市販されているか、又は公開されている組成例えば、AmericanTypeCultureCollectionのカタログにおけるに従って調製され得る。ポリペプチドが栄養培地に分泌される場合、ポリペプチドは培地から直接的に回収され得る。ポリペプチドが分泌されない場合、それは細胞溶解物から回収され得る。ポリペプチドは、そのポリペプチドに対して特異的である、当業界において知られている方法を用いて検出され得る。それらの検出方法は、特定の抗体、酵素生成物の形成、又は酵素基質の消出の使用を包含する。例えば、プロテアーゼアッセイは、本明細書に記載されるようなポリペプチドの活性を決定するために使用され得る。得られるポリペプチドは、当業界において知られている方法により回収され得る。例えば、ポリペプチドは、従来の方法、例えば遠心分離、濾過、抽出、噴霧-乾燥、蒸発又は沈殿但し、それらだけには限定されないにより、栄養培地から回収され得る。本発明のポリペプチドは、当業界において知られている種々の方法、例えばクロマトグラフィー例えば、イオン交換、親和性、疎水性、クロマトフォーカシング及びサイズ排除、電気泳動方法例えば、分離用等電点電気泳動、示差溶解性例えば、硫酸アンモニウム沈殿、SDS-PAGE又は抽出但し、それらだけには限定されないにより精製され得る例えば、ProteinPurificationJCJansonandLarsRydeneditorsVCHPubllishersNewYork1989を参照のこと。植物:本発明はまた、ポリペプチドを、回収できる量で発現し、そして生成するために、本発明のフィターゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列により形質転換されているトランスジェニック植物、その植物部分又は植物細胞にも関する。ポリペプチドは、植物又は植物部分から回収され得る。他方では、組換えポリペプチドを含む植物又は植物部分は、食物又は飼料の品質を改良し、例えば栄養価値、嗜好性及び流動性質を改良するために、又は抗栄養因子を破壊するために使用され得る。特定の態様においては、ポリペプチドは、種子の内生精子貯蔵液胞にも標的化される。これは、適切なシグナルペプチドにより前駆体としてそれを合成することによって行われる。Horvathなど.、PNASFeb152000vol97no4p19141919を参照のこと。トランスジェニック植物は、双子葉植物又は単子葉植物又は構築されたその変異体であり得る。単子葉植物の例は、草、例えば湿潤地の草本ブルーグラス、イチゴツナギ属、飼草、例えばウシノケグサ、ドクムギ、温帯性草本、例えばヌカボ、及び穀類、例えば小麦、オート麦、ライ麦、イネ、モロコシ、ライコムギ小麦Triticum及びライ麦Secaleの安定化されたハイブリッド及びトウモロコシサトウモロコシである。双子葉植物の例は、タバコ、マメ科植物、ルピナス、ジャガイモ、砂糖大根、エンドウ、インゲン豆及び大豆、及びアブラナ科植物ブラシカセアエ科Brassicaceae、例えばヒマワリHelianthus、綿Gossypium、カリフラワー、ナタネ種子及び密接に関連するモデル生物アラビドプシスタリアナArabidopsisthalianaである。例えば、アメリカ特許第5689054号及び第6111168号に記載されるような低-フィテート植物は、構築された植物の例である。植物部分の例は、茎、カルス、葉、根、果物、種子及び塊茎、並びにそれらの部分を含んで成る個々の組織、例えば表皮、葉肉、柔組織、維管束組織、分裂組織である。また特定の植物細胞区画、例えばクロロプラスト、アポプラスト、ミトコンドリア、液胞、ペルオキシゾーム及び細胞質が、植物部分であると思われる。さらに、組織起源が何であろうと、いずれの植物細胞でも、植物部分であると思われる。同様に、植物部分、例えば本発明の利用を促進するために単離された特定の組織及び細胞はまた、植物部分、例えば胚、内生精子、アリューロン及び被膜であると思われる。そのような植物、植物部分及び植物細胞の子孫はまた、本発明の範囲内に包含される。本発明のポリペプチドを発現するトランスジェニック植物又は植物細胞は、当業界において知られている方法に従って構成され得る。手短には、植物又は植物細胞は、本発明のポリペプチドをコードする、1又は複数の発現構造体を、植物宿主ゲノム中に導入し、そして得られる修飾された植物又は植物細胞をトランスジェニック植物又は植物細胞中に成長せしめることによって構成される。便利には、発現構造体は、選択の植物又は植物における核酸配列の発現のために必要とされる適切な調節配列により作用可能に連結される本発明のポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成る核酸構造体である。さらに、発現構造体は、発現構造体が組み込まれている宿主細胞を同定するために有用な選択マーカー、及び問題の植物中への構造体の導入のために必要なDNA配列を含んで成る後者は、使用されるDBA導入方法に依存する。調節配列、例えばプロモーター及びターミネーター配列、及び任意には、シグナル又はトランスジット配列の選択は、例えばポリペプチドがいつ、どこで及びいかにして発現されることを所望するかに基づかれる。例えば、本発明のポリペプチドをコードする遺伝子の発現は、構成的又は誘発的であり、又は進行的、段階又は組織特異的であり、そして遺伝子生成物は、特定組織又は植物部分、例えば種子又は葉に標的化され得る。調節配列は、Taqueなど1988PlantPhysiology86506により記載される。構成的発現のために、次のプロモーターが使用され得る:35S-CaMVプロモーターFranckなど1980Cell21285294、トウモロコシユビキチン1ChristensenAHSharrockRAandQuail1992Maizepolyubiquitingenesstructurethermalperturbationofexpressionandtranscriptsplicingandpromoteractivityfollowingtransfertoprotoplastsbyelectroporation、又はイネアクチン1プロモーターPlantMoBiol18675689ZhangWMcElroyDandWuR1991AnalysisofriceAct15regionactivityintransgenicriceplantsPlantCell311551165。器官特異的プロモーターは例えば、貯蔵吸込み組織、例えば種子、ジャガイモ塊茎及び果物EdwardsCoruzzi1990AnnRevGenet24275303、又は代謝吸込み組織、例えば分裂組織Itoなど1994PlantMolBiol24863878からのプロモーター、種子特異的プロモーター、例えばイネからのグルテリン、プロラミン、グロブリン又はアルブミンプロモーターWuなど1998PlantandCellPhysiology39885889、ViciafabaからのレグニンB4及び未知の種子タンパク質遺伝子からのViciafabaプロモーターConradなど1998JournalofPlantPhysiology152708711、種子油体タンパク質からのプロモーターChenなど1998PlantandCellPhysiology39935941、ブラシカナパスBrassicanapusからの貯蔵タンパク質napAプロモーター又は当業界において知られている、例えばWO9114772号に記載されるようないずれか他の種子特異的プロモーターであり得る。さらに、プロモーターは、葉特異的プロモーター、例えばイネ又はトマトからのrbcsプロモーターKyozukaなど1993PlantPhysiology1029911000、クロレラウィルスアデニンメチルトランスフェラーゼ遺伝子プロモーターMitraandHiggins1994PlantMolecularBiology268593、又はイネからのaldP遺伝子プロモーターKagayaなど1995MolecularandGeneralGenetics248668674、又は創傷誘発性プロモーター、例えばジャガイモpin2プロモーターXuなど1993PlantMolecularBiology22573588であり得る。同様に、プロモーターは、非生物学的処理、例えば温度、渇水又は塩分の変更により誘発できるか、又はプロモータを活性化する外部的に適用される物質、例えばエタノール、エストロゲン、植物ホルモン様エチレン、アブシジン酸、ジベレリン酸及び又は重金属により誘発できる。プロモーターエンハンサー要素がまた、植物におけるプロテアーゼのより高い発現を達成するために使用され得る。例えば、プロモーターエンハンサー要素は、プロモーターと、本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に位置するイントロンであり得る。例えば、Xuなど1993前記は、発現を増強するためへのイネアクチン1遺伝子の最初のイントロンの使用を開示する。さらに、コドン使用法は、発現を改良するために、問題の植物種のために最適化され得る上記に言及されるHorvathなどを参照のこと。発現構造体の選択マーカー遺伝子及びいずれか他の部分は、当業界において入手できるそれらから選択され得る。核酸構造体は、当業界において知られている従来の技法、例えばアグロバクテリウム介在性形質転換、ウィルス介在性形質転換、マイクロインジェクション、粒子衝撃、バイオリステック形質転換及びエレクトロポレーションに従って、植物ゲノム中に組込まれるGasserなど1990Science2441293Potrykus1990BiolTechnology8535Shimamotoなど1989Nature338274。現在、アグロバクテリウムツメファシエンス介在性遺伝子トランスファーは、トランスジェニック双子葉類を生成するための選択方法であり再考のためには、HooykasandSchilperoort1992PlantMolecularBiology191538を参照のこと、そして、それはまた、単子葉類を形質転換するためにも使用され得るが、しかし他の形質転換方法が一般的にそれらの植物のために好ましい。現在、アグロバクテリウムアプローチを補足する、トランスジェニック単子葉類を生成するための選択方法は、胚細胞又は成長胚の粒子衝撃である形質転換DNAにより被覆された微小金又はタングステン粒子Christou1992PlantJournal2275281Shimamoto1994CurrentOpinionBiotechnology5158162Vasilなど1992BiolTechnology10667674。単子葉類の形質転換のための他の方法は、Omirullehなど1993PlantMolecularBiology21415428により記載されるようにプロトプラスト形質転換に基づかれる。形質転換に続いて、そこに組込まれた発現構造体を有する形質転換体が選択され、そして当業界において良く知られていた方法に従って、完全な植物に再生される。しばすば、形質転換方法は、2種の別々のTDNA構造体による同時形質転換を用いることによる、再生の間又は次の生成において、選択遺伝子の選択的排除、又は特異的組換え酵素による選択遺伝子の部位特異的排除のために企画される。本発明はまた、a本発明のプロテアーゼ活性有するポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成るトランスジェニック植物又は植物細胞を、前記ポリペプチドの生成の助けとなる条件下で栽培し、そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、本発明のポリペプチドを生成するための方法にも関する。動物:本発明はまた、トランスジェニック非ヒト動物及びその生成物又は要素にも関し、その例は体液、例えば乳汁及び血液、器官、肉及び動物細胞である。例えば、哺乳類細胞においてタンパク質を発現するための技法は当業界において知られている。例えば、ハンドブックProteinExpressionAPracticalApproachHigginsandHamesOxfordUniversityPress及びGeneTranscriptionRNAprocessingandPosttranslationalProcessingに関するこのシリーズの他の3種のハンドブックを参照のこと。一般的には、トランスジェニック動物を調製するために、選択された動物の選択された細胞が、本発明のプロテアーゼ活性有するポリペプチドをコードする核酸配列により形質転換され、ポリペプチドが発現され、そして生成される。ポリペプチドが、動物から、例えば雌動物の乳汁から回収され、又はそれは動物自体の有益性のために、例えば動物の消化を助けるために発現され得る。動物の例は、下記の動物飼料及び動物飼料添加物のセクションに言及されている。動物の乳汁からプロテアーゼを回収する観点から、トランスジェニック動物を生成するためには、プロテアーゼをコードする遺伝子が問題の動物の受精卵中に、例えば適切な乳汁タンパク質プロモーター及びプロテアーゼをコードする遺伝子を含んで成るトランスジーン発現ベクターの使用により挿入され得る。トランスジーン発現ベクターは、受精卵中にマイクロインジェクションされ、そして好ましくは、染色体中に永久的に組込まれる。卵が成長し、そして分裂し始めると、可能性ある胚が代理母中に移植され、そしてトランスジーンを担持する動物が同定される。次に、その得られる動物は、従来の飼育により繁殖される。フィターゼ変異体が動物の乳汁から精製される。例えば、MeadeHMなどExpressionofrecombinantproteinsinthemilkoftransgenicanimalsGeneexpressionsystemsUsingnaturefortheartofexpressionJMFernandezandJPHoefflerAcademicPressを参照のこと。他方では、その体細胞及び又は生殖細胞のゲノムに、プロテアーゼをコードするトランスジーンを含む異種トランスジーン構造体を包含する核酸配列を担持するトランスジェニック非ヒト動物を生成するために、トランスジーンが、WO2000064247号に開示されるように、フィターゼ変異体の唾液腺特異的発現のための第1の調節配列に作用可能に連結され得る。組成物:さらなる観点においては、本発明は、本発明のポリペプチドを含んで成る組成物に関する。ポリペプチド組成物は、当業者において知られている方法に従って調製され得、そして液体又は乾燥組成物の形で存在することができる。例えば、ポリペプチド組成物は、粒子又は微粒子の形で存在することができる。組成物に含まれるポリペプチドは、当業界において知られている方法に従って安定化され得る。本発明のポリペプチド又はポリペプチド組成物の好ましい使用の例が下記に与えられる。動物飼料:本発明はまた、動物飼料への本発明のポリペプチドの使用方法、及び本発明のポリペプチドを含んで成る飼料生成物及び飼料添加物にも向けられる。用語、動物とは、ヒトを包含するすべての動物を包含する。動物の例は、非反芻動物、及び反芻動物である。反芻動物は例えば、動物、例えば羊、ヤギ、馬及び蓄牛、例えば肉ウシ、乳牛及び子牛を包含する。特定の態様においては、動物は非反芻動物である。非反芻動物は、単一の胃を有する動物、例えばブタ又はイノシシ子ブタ、成長しているブタ及び雌ブタを包含するが、但しそれらだけには限定されない;家禽類、例えば七面鳥、鴨及び鶏ブロイラー鶏、産卵鶏を包含するが、但しそれらだけには限定されない;子牛;及び魚サケ、マス、ティラピア、ナマズ、及び鯉を包含するが、但しそれだけには限定されない;及び甲殻類小エビ及び車えびを包含するが、但しそれだけには限定されないを包含する。用語、飼料又は飼料組成物とは、動物のために適切な、又は動物による摂取のために意図された、いずれかの化合物、調製物、混合物又は組成物を意味する。本発明従っての使用においては、プロテアーゼは、食事の前、後又は同時に動物に供給され得る。後者が好ましい。特定の態様においては、プロテアーゼは、それが飼料に添加される形において、又は飼料添加物に含まれる場合、良く定義されている。良く定義されたということは、プロテアーゼ調製物がサイズ排除クロマトグラフィーにより決定される場合、少なくとも50の純度であることを意味するWO0158275号の例12を参照のこと。他の特定の態様においては、プロテアーゼ調製物は、この方法により決定される場合、少なくとも60、70、80、85、88、90、92、94又は少なくとも95の純度である。十分に定義されたプロテアーゼ調製物が好都合である。例えば、干渉性又は汚染性の他のプロテアーゼを実質に有さないプロテアーゼを、飼料に正しく適量に分けることがより容易である。用語適量に分けるとは、一貫した及び一定した結果を得ることの目的、及び所望する効果に基づいて用量を最適化する能力を正しくは言及する。しかしながら、動物飼料への使用に関しては、純粋であるプロテアーゼは必要ではなく;それは他の酵素を含むことができ、この場合、それはプロテアーゼ調製物と呼ばれる。プロテアーゼ調製物は、a飼料に直接的に添加され得又はタンパク質の処理工程に直接的に使用され得る、又はb1又は複数の中間体組成物、例えば続いて飼料に添加される又は処理工程に使用される飼料添加物又はプレミックスの生成に使用され得る。上記純度の程度は、上記a又はbのいずれに従って使用されても、元のプロテアーゼ調製物の純度を言及する。この高さの程度の純度を有するプロテアーゼ調製物は特に、組換え生成方法を用いて得ることができ、ところがそれらは、プロテアーゼが従来の発酵方法により生成される場合、得るにはそんなに容易ではなく、そしてより高いバッチからバッチへの変動を受けやすい。そのようなプロテアーゼ調製物はもちろん、他の酵素と共に混合され得る。特定の態様においては、本発明の使用のためのプロテアーゼは、タンパク質を溶解することができる。溶解されたタンパク質を決定するための適切なアッセイは、例5に開示される。前記タンパク質は、動物タンパク質、例えば肉及び骨粉、及び又は魚粉であり得るが;又はそれは植物タンパク質であり得る。用語植物タンパク質とは、本明細書において使用される場合、植物由来の又は植物起源の少なくとも1つのタンパク質、例えば修飾されたタンパク質及びタンパク質誘導体を含む、いずれかの化合物、組成物、調製物又は混合物を言及する。特定の態様においては、植物タンパク質中のタンパク質含有率は、少なくとも10、20、30、40、50、又は60wwである。植物タンパク質は、植物タンパク質源、例えばマメ科植物及び穀物、例えばマメ科Leguminosae、アブラナ科、アカザ科及びイネ科、例えば大豆粉、ルピナス粉及びナタネ種子粉由来のものである。特定の態様においては、植物タンパク質源は、1又は複数のマメ科植物、例えば大豆、ルピナス、エンドウ又はインゲン豆からの材料である。もう1つの特定の態様においては、植物タンパク質源は、1又は複数のアカザ科植物、例えばビート、砂糖大根、ホウレンソウ又はキノアからの材料である。植物タンパク質源の他の例は、ナタネ種子、ヒマワリ種子、綿種子及びキャベツである。大豆は、好ましい植物タンパク質源である。植物タンパク質源の他の例は、穀物、例えば大麦、小麦ライ麦、オート麦、トウモロコシ、イネ、ライコムギ及びモロコシである。少なくとも1つの本発明のプロテアーゼによるタンパク質の本発明に従っての処理が、ブランクに比較して、タンパク質の高められた溶解性をもたらす。少なくとも101、又は102103104105106又は少なくとも107の溶解されたタンパク質が、本明細書における例8のインビトロモデルに関係する、本発明のプロテアーゼを用いて得られる。用語タンパク質の可溶化とは基本的に、タンパク質を溶液にすることを意味する。そのような可溶化は、通常複雑な天然の組成物、例えば飼料の他の成分からのタンパク質のプロテアーゼ介在性開放のためであり得る。溶解性は、プロテアーゼ処理を伴わないサンプルに対しての溶解性タンパク質の量の上昇として測定され得る。少なくとも1つの本発明のプロテアーゼによるタンパク質の本発明に従っての処理が、ブランクに比較して、タンパク質の高められた消化性をもたらす。少なくとも101又は102103104105106107108109110111112113114115又は少なくとも116の消化できるタンパク質が、本明細書における例8のインビトロモデルに関係する、本発明のプロテアーゼを用いて得られる。処理工程の特定の態様においては、問題のプロテアーゼは、タンパク質、例えば植物タンパク質又はタンパク質源に影響を及ぼす又は作用するか、又はその溶解影響を発揮する。これを達成するためには、タンパク質又はタンパク質源は典型的には、溶媒、例えば水性溶媒、例えば水に懸濁され、そしてpH及び温度が調節され、問題の酵素の特徴が考慮される。例えば処理は、実際のプロテアーゼの活性が少なくとも51020304050607080又は少なくとも90であるpH値で生じる。同様に、例えば処理は、実際のプロテアーゼの活性が少なくとも51020304050607080又は少なくとも90である温度で生じる。上記活性の表示は、最大活性に対してである。酵素反応は、所望する結果が達成されるまで続けられ、これに続いて、それは、例えば熱処理段階による酵素の不活性化により停止されても又はされなくても良い。本発明の処理方法のもう1つの特定の態様においては、プロテアーゼ作用が維持され、これは、例えばプロテアーゼがタンパク質又はタンパク質源に添加されるが、しかしその溶解性の影響はいわゆる、適切な溶解条件が確立されると、又はいずれかの酵素インヒビターが不活性化されると、又は他の手段が酵素の作用を延長するために適用されたとしても、所望される場合、後までスイッチオンされない。1つの態様においては、処理は、動物飼料への使用のための動物飼料又はタンパク質の前-処理である。用語、動物飼料の栄養価値を改良するとは、タンパク質の利用性を改良し、それにより、規定食成分からの高められたタンパク質抽出、高いタンパク質収率、高められたタンパク質分解及び又は改良されたタンパク質利用性を導くことを意味する。従って、飼料の栄養価値が高められ、そして動物の能力、例えば動物の成長速度及び又は体重の増加及び又は飼料転換割合すなわち、体重の増加に対する摂取された飼料の重量が改良される。プロテアーゼは、それが比較的純粋なプロテアーゼとして存在する場合、いずれかの形で、又は動物飼料への添加のために意図された他の成分との混合物の形で、すなわち動物飼料添加物、例えばいわゆる動物飼料のためのプレミックスの形で、飼料に添加され得る。さらなる観点においては、本発明は、動物の飼料への使用のための組成物、例えば動物飼料及び動物飼料添加物、例えばプレミックスに関する。本発明のプロテアーゼとは別に、本発明の動物飼料添加物は、少なくとも1つの脂溶性ビタミン、及び又は少なくとも1つの水溶性ビタミン、及び又は少なくとも1つの微量鉱物、及び又は少なくとも1つのマクロ鉱物を含む。さらに、任意の飼料添加物成分は、着色剤、例えばカロテノイド、例えばβ-カロテノイド、アスタキサンチン、及びルテイン;芳香化合物;安定剤;抗菌ペプチド;多不飽和脂肪酸;反応性酵素生成種;及び又は中でも、フィターゼEC3138又は31326;キシラーゼEC3218、ガラクタナーゼEC32189;α-ガラクトシダーゼEC32122;プロテアーゼEC34;ホスホリパーゼA1EC31132;ホスホリパーゼA2EC3114;リソホスホリパーゼEC3115;ホスホリパーゼCEC3143;ホスホリパーゼDEC3144;及び又はβグルカナーゼEC3214又はEC3216から選択された少なくとも1つの他の酵素である。特定の態様においては、それらの他の酵素は、十分に定義されているプロテアーゼ調製物について上記に定義されるように。抗菌ペプチドAMPの例は、CAP18LeucocinATritrpticinProtegrin1ThanatinDefensinLactoferrinLactoferricin及びOvispirin、例えばNovispirin、Plectasins及びStatins例えばWO03044049号及びWO03048148号に開示される化合物及びポリペプチド、及び抗菌活性を保持するそれらの変異体又はフラグメントである。抗真菌ポリペプチドAFPの例は、WO9401459号及びWO02090384号に開示されるように、アスペルギラスギガンテウスAspergillusgiganteus、及びアスペルギラスニガーAspergillusnigerペプチド、並びに抗真菌活性を保持するそれらの変異体及びフラグメントである。多不飽和脂肪酸の例は、C18C20及びC22多不飽和脂肪酸、例えばアラキドン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸及びγ-リノール酸である。反応性酵素生成種の例は、化学物質、例えば過硼酸塩、過硫酸塩又は過炭酸塩;及び酵素、例えばオキシダーゼ、オキシゲナーゼ、又はシンターゼである。通常、脂-及び水-溶性ビタミン、及び微量鉱物は、飼料への添加のために意図された、いわゆるプレミックスの一部を形成し、そしてマクロ鉱物は通常、別々に飼料に添加される。本発明のプロテアーゼにより富化される場合、それらの組成物のいずれかは、本発明の動物飼料添加物の例である。特定の態様においては、本発明の動物飼料添加物は、001~100、より特定には005~50;又は02~10は、100gの飼料当たりの添加物g数を意味するのレベルで、動物規定食又は飼料への包含を意図される又は包含すべきより意図される。これは、特に、プレミックスのためである。次のものは、それらの成分の例の非制限的列挙である:脂溶性ビタミンの例は、ビタミンA、ビタミンD3、ビタミンE及びビタミンK、例えばビタミンK3である。水溶性ビタミンの例は、ビタミンB12、ビオチン及びコリン、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB6、ナイアシン、葉酸及びパントテネート、例えばCa-D-パントテネートである。微量鉱物の例は、マンガン、亜鉛、鉄、銅、ヨウ素、セレン及びコバルトである。マクロ鉱物の例は、カルシウム、リン及びナトリウムである。それらの成分家禽、及び子豚豚により例示されるの栄養必要条件は、WO0158275号の表Aに列挙される。栄養必要条件とは、それらの成分が示される濃度で規定食に供給されるべきであることを意味する。他方では、本発明の動物飼料添加は、WO0158275号の表Aに特定される、少なくとも1つの個々の成分を含んで成る。少なくとも1つとは、1、又は2、又は3、又は4及び等~すべての13個、又はすべての15個の個々の成分の1又は複数の成分のいずれかを意味する。より特定には、この少なくとも1つの個々の成分は、表Aの縦列4、又は5又は6に示される範囲内の飼料中濃度を提供するような量で本発明の添加物に包含される。さらなる態様においては、本発明の動物飼料添加物は、下記表1に特定される範囲内の飼料内濃度を提供するために、少なくとも1つの下記ビタミンを含んで成るそれぞれ、子豚及び鶏用規定食に関する:本発明はまた、動物飼料組成物にも関する。動物飼料組成物又は規定食は、比較的に高いタンパク質含有率を有する。家禽及び豚規定食は、WO0158275号の表B、縦列2-3に示されるように特徴づけられ得る。さらに、そのような魚規定食は通常、200-310gkgの粗脂肪含有率を有する。WO0158275号は、引用により本明細書に組み込まれるアメリカ特許0977334号に対応する。本発明の動物飼料組成物は、50-800gkgの粗タンパク質含有率を有し、そしてさらに、本明細書に請求されるように、少なくとも1つのプロテアーゼを含んで成る。さらに、又は他方では上記に示される粗タンパク質含有率、本発明の動物飼料組成物は、10-30MJkgの代謝可能エネルギー含有率;及び又は01-200gkgのカルシウム含有率;及び又は01-200gkgの利用できるリン含有率;及び又は01-100gkgのメチオニン含有率:及び又は01-150gkgのメチオニン及びシステイン含有率;及び又は05-50gkgのリシン含有率を有する。特定の態様においては、前記代謝エネルギー、粗タンパク質、カルシウム、リン、メチオニン、メチオニンシステイン、及び又はリシン含有率は、WO0158275号R2-5の表Bにおける範囲2,3,4又は5のいずれか1つの範囲内である。粗タンパク質は、係数625により掛け算される窒素N、すなわち粗タンパク質gkg=Ngkg×625として計算される。窒素含有率は、Kjeldahl方法により決定され得る。代謝可能エネルギーは、NRCpublicationNutrientrequirementsinswineninthrevisededition1988subcommitteeonswinenutritioncommitteeonanimalnutritionboardofagriculturenationalresearchcouncilNationalAcademyPressWashingtonDCpp26、及びtheEuropeanTableofEnergyValuesforPoultryFeedstuffsSpelderholtcentreforpoultryresearchandextension7361DABeekbergenTheNetherlandsGrafischbedrijfPonsenlooijenbvWageningenISBN9071463125に基づいて計算され得る。完全な動物規定食におけるカルシウム、利用できるリン及びアミノ酸の含有率は、飼料表、例えばVeevoedertabel1997gegevensoverchemischesamenstellingverteerbaarheidenvoederwaardevanvoedermiddelenCentralVeevoederbureauRunderweg68219pkLelystadISBN9072839137に基づいて計算される。特定の態様においては、本発明の動物飼料組成物は、上記に定義されるような少なくとも1つのタンパク質の又はタンパク質源を含む。それはまた、動物タンパク質、例えば肉及び骨粉、及び又は魚粉を、典型的には0-25のの量で含むことができる。さらなる特定の態様においては、本発明の動物用飼料組成物は、080のトウモロコシ;及び又は080のモロコシ;及び又は0-70の小麦;及び又は070の大麦;及び又は030のオート麦;及び及び040の大豆ミール;及び又は025の魚ミール;025の肉及び骨負ン及び又は020ホエーを含む。動物用規定食は、マッシュ飼料ペレット化されていない又はペレット化された飼料として製造され得る。典型的には、微粉砕された飼料材料が混合され、そして十分な量の必須ビタミン及び鉱物が、問題の種についての規定に従って添加される。酵素は、固体又は液体酵素配合として添加され得る。例えば、固体酵素配合物は典型的には、混合段階の前又はその間に添加され;そして液体酵素調製物は典型的には、ペレット化段階の後に添加される。酵素はまた、飼料添加物又はプレミックスにも組込まれ得る。規定食における最終酵素濃度は、001-200mgの酵素タンパク質kg規定食、例えば05-25mgの酵素タンパク質kg動物規定食の範囲内である。プロテアーゼはもちろん、有効量で、すなわち飼料の溶解性及び又は栄養価値を改良するための適切な量で適用され得る。酵素は次の量用量範囲で投与されることが現在企画される:0012000011000510015051001010000550又は01010-すべてのそれらの範囲はmgプロテアーゼタンパク質kg飼料ppmである。kg飼料当たりmg酵素タンパク質を決定するために、プロテアーゼは飼料組成物から精製され、そして精製されたプロテアーゼの非活性が適切なアッセイプロテアーゼ活性、基質及びアッセイを参照のことを用いて決定される。飼料組成物のプロテアーゼ活性はまた、同じアッセイを用いて決定され、そしてそれらの2種の決定に基づいて、mg酵素タンパク質kg飼料での用量が計算される。同じ原理が、飼料添加物におけるmg酵素タンパク質を決定するために適用される。もちろん、サンプルが飼料添加物又は飼料を調製するために使用されるプロテアーゼのために利用できる場合、比活性はこのサンプルから決定される飼料組成物又は添加物からプロテアーゼを精製するために必要でない。洗剤組成物:本発明のプロテアーゼは、洗剤組成物に添加され得、そして従って、洗剤組成物の成分になることができる。本発明の洗剤組成物は、手動又は機械洗濯用洗剤組成物、例えば染色された布の前処理のために適切な洗濯用添加剤組成物及びすすぎ用布ソフトナー組成物として配合され得、又は一般的な家庭用硬質表面洗浄操作における使用のための洗剤組成物として配合され得、又は手動又は機械皿洗い操作のために配合され得る。特定の観点においては、本発明は、本発明の酵素を含んで成る洗剤添加剤を提供する。前記洗剤添加剤及び洗剤組成物は、1又は複数の他の酵素、例えばもう1つのプロテアーゼ、例えばバチルスからのアルカリプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カーボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、例えばラッカーゼ及び又はポロキシダーゼを含んで成ることができる。一般的に、選択された酵素の性質は、選択された洗剤と適合できるべきでありすなわち、他の酵素及び非酵素の成分、等とのpH-最適適合性、そして酵素は効果的な量で存在すべきである。適切なリパーゼは、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。有用なリパーゼの例は、ヒューミコラ別名、サーモミセス、例えばヨーロッパ特許第258068号及び第305216号に記載のようなヒューミコララウギノサTラウギノサ、又はWO9613580号に記載のようなヒューミコラインソレンス、Pアルカリゲネス又はPプソイドアルカリゲネスヨーロッパ特許第218272号、Pセパシアヨーロッパ特許第331376号、PスツゼリPstutzeri、Pフルオレセンス、プソイドモナスspSD705株WO7506720号及びWO9627002号、PウイスコンシネンシスWO9612012号からのリパーゼ、バチルスリーパーゼ、例えばBスブチリスDartoisなどBiochemicaetBiophysicaActa1131253360、Bステアロサーモフィラス日本特許64744992又はBプミラスWO9116422号からのリーパーゼを包含する。他の例は、リパーゼ変異体、例えばWO9205249号、WO9401541号、ヨーロッパ特許第407225号、ヨーロッパ特許第206105号、WO9535381号、WO9600292号、WO9530744号、WO9425576号、WO9514783号、WO9522615号、WO9704079号及びWO970720号に記載されるものを包含する。好ましい市販のリパーゼ酵素は、LipolaseTM及びLipolaseUltraTMを包含する。適切なアミラーゼα-及び又はβは、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。アミラーゼは、バチルス、例えばイギリス特許第1296839号により詳細に記載される、Bリケニルホルミスの特許株から得られるα-アミラーゼを包含する。有用なアミラーゼの例は、WO9402597号、WO9418314号、WO9623873号及びWO43424号に記載される変異体、特に1又は複数の次の位置での置換を有する変異体である:1523105106124128133154156181188190197202208209243264304305391408及び444。市販のアミラーゼは、DuramylTMTermamaylTMFungamylTM及びBAMTMRapidaseTM及びPurastarTMである。適切なセルラーゼは、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。適切なセルラーゼは、バチルス、ヒューミコラ、フサリウム、チエラビア、アクレモニウム属からのセルラーゼ、例えばアメリカ特許第4435307号、アメリカ特許第5648263号、アメリカ特許第5691178号、アメリカ特許第5776757号及びWO8909259号に開示されるヒューミコラインソレンス、マイセリオプソラサーモフィラオキシスポラムから生成される菌類セルラーゼを包含する。特に適切なセルラーゼは、色彩保護有益性を有するアルカリ又は中性セルラーゼである。そのようなセルラーゼの例は、ヨーロッパ特許第0495257号、ヨーロッパ特許第0531372号、WO9611262号、WO9629397号、WO9808940号に記載されるセルラーゼである。例の例は、WO9407998号、ヨーロッパ特許第0531315号、アメリカ特許第5457046号、アメリカ特許第5685593号、アメリカ特許第5763254号、WO9524471号、WO9812307号及びWO9901544号に記載されるそれらのものである。市販のセルラーゼは、CelluzymeTM及びCarezymeTMClazinaseTM及びPuradexHATM及びKAC-500TMを包含する。適切なペルオキシダーゼオキシダーゼは、植物、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。有用なペルオキシダーゼの例は、コプリナス、例えばコプリナスシネレウス、及びWO9324618号、WO9510602号及びWO9815257号に記載されるそれらのようなそれらの変異体からのペルオキシダーゼを包含する。市販のペルオキシダーゼは、GuardzymeTMを包含する。洗剤酵素は、1又は複数の酵素を含む別々の添加剤を添加することにより、又はそれらの酵素のすべてを含んで成る組合された添加剤を添加することにより洗剤組成物に包含され得る。本発明の洗剤添加剤、すなわち別々の添加剤又は組合された添加剤が、例えば粒質物、液体、スラリー、等として配合され得る。好ましくは洗剤添加剤配合物は、粒質物、特に非-ダスチング粒質物、液体、特に安定された液体又はスラリーである。非-ダスチング粒質物は、アメリカ特許第4106991号及び第4661452号に開示のようにして生成され得、そして任意には、当業界において知られている方法により被覆され得る。蝋被覆材料の例は、1000~20000の平均モル重量を有するポリ酸化エチレン生成物ポリエチレングリコール、PEG;16~50の酸化エチレン単位を有する、エトキシル化されたノニルフェノール;12~20個の炭素原子を有するアルコールを有し、そして15~80の酸化エチレン単位を有する、エトキシ化された脂肪アルコール;脂肪アルコール、脂肪酸;及び脂肪酸のモノ-、ジ-及びトリグリセリドである。流動層技法による適用のために適切なフィルム形成被覆材料の例は、イギリス特許第1483591号に与えられている。例えば、液体酵素調製物は、確立された方法に従って、ポリオール、例えばプロピレングリコール、糖又は糖アルコール、硫酸又は硼酸を添加することによって、安定化される。保護された酵素は、ヨーロッパ特許第238216号に開示される方法に従って調製され得る。本発明の洗剤組成物は、いずれかの便利な形、例えば棒状、錠剤、粉末、顆粒、ペースト又は液体の形で存在することができる。液体洗剤は、水性であり、典型的には、70までの水及び0~30の有機溶媒を含み、又は非水性であり得る。洗剤組成物は、非イオン性、例えば半-極性及び又はアニオン性及び又はカチオン性及び又は両性イオンであり得る1又は複数の界面活性剤を含んで成る。界面活性剤は典型的には、01~60重量のレベルで存在する。そこに含まれる場合、洗剤は通常、約1~約40のアニオン性界面活性剤、例えば線状アルキルベンゼンスルホネート、α-オレフィンスルホネート、アルキルスルフェート脂肪酸スルフェート、アルコールエトキシスルフェート、第二アルカンスルホネート、α-スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル-又はアルケニル琥珀酸又は石鹸を含むであろう。そこに含まれる場合、界面活性剤は通常、約02~約40の非イオン性界面活性剤、例えばアルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシル化された脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、又はグルコサミンのN-アシルN-アルキル誘導体グルコサミドを含むであろう。洗剤は、0~65の洗剤ビルダー又は錯生成剤、例えばゼオライト、ジホスフェート、三リン酸、ホスホネート、カーボネート、シトレート、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン六酢酸、アルキル-又はアルキニル琥珀酸、可溶性シリケート又は層化されたシリケート例えばHoechstからのSKS-6を含むことができる。洗剤は、1又は複数のポリマーを含んで成る。例としては、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピリジン-N-オキシド、ポリビニルイミダゾール、ポリカルボキシレート例えばポリアクリレート、マレイン酸アクリル酸コポリマー及びラウリルメタクリレートアクリル酸コポリマーを含んで成る。洗剤は、H2O2源を含んで成る漂白システム、例えば過酸形成漂白活性化剤、例えばテトラアセチルエチレンジアミン又はノナノイルオキシベンゼンスルホネートと共に組合され得る過硼酸塩又は過炭酸塩を含むことができる。他方では、漂白システムは、例えばアミド、イミド又はスルホン型のペルオキシ酸を含むことができる。本発明の洗剤組成物の酵素は、従来の安定剤、例えばポリオール、例えばプロピレングリコール又はグリセロール、糖又は糖アルコール、乳酸、硼酸又は硼酸誘導体、例えば芳香族硼酸エステル又はフェニル硼素酸誘導体、例えば4-ホルミルフェニル硼素酸を用いて安定化され得、そして前記組成物は、例えばWO9219709号及びWO9219708号に記載のようにして配合され得る。洗剤はまた、他の従来の洗剤組成物、例えば布コンディショナー、例えばクレー、泡増強剤、石鹸泡抑制剤、抗腐蝕剤、土壌懸濁剤、抗-土壌再沈着剤、染料、殺菌剤、蛍光増白剤、ヒドロトロープ、曇りインヒビター、又は香料を含むことができる。洗剤組成物においては、いずれかの酵素、特に本発明の酵素は、洗浄液体1L当たり001-100mgの酵素タンパク質、好ましくは洗浄液体1L当たり005-5mgの酵素タンパク質、特に洗浄液体1L当たり01-1mgの酵素タンパク質に対応する量で添加され得ることが、現在企画される。本発明の酵素はさらに、WO9707202号引例として本明細書組み込まれるに開示される洗剤配合物に導入され得る。特定の態様:本発明はまた、番号1-21及び42-121で表される次の特定の態様にも関する:1.a配列番号4のアミノ酸1-192に対して少なくとも699の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド;bi配列番号3のヌクレオチド574-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、低い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド;c1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、延長、及び又は挿入を含んで成る、配列番号4のアミノ酸1-192のアミノ酸配列を有するポリペプチドの変異体;d上記a又はbの対立遺伝子変異体;及びeプロテアーゼ活性を有する、a、b又はdのフラグメント、から成る群から選択された、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。2.次のプロテアーゼ:a配列番号6のアミノ酸1-192;b配列番号2のアミノ酸1-192;c配列番号4のアミノ酸1-192;又はd配列番号8のアミノ酸1-189のいずれか1つを含んで成る態様1のポリペプチド。3.プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、そしてa態様1又は2のポリペプチドをコードし;bi配列番号3のヌクレオチド574-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そして又はc配列番号3のヌクレオチド574-1149に対して少なくとも777の程度の同一性を有する、核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。4.次のプロテアーゼ-コードの核酸配列:a配列番号3のヌクレオチド574-1149;b配列番号5のヌクレオチド574-1149;c配列番号7のヌクレオチド586-1152;又はd配列番号1のヌクレオチド568-1143のいずれか1つを含んで成る態様3の核酸配列。5.aDNAと、i配列番号5のヌクレオチド574-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、又はiii上記i又はiiの相補鎖とを、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そしてb前記核酸配列を単離することにより生成される、単離された核酸配列。6.適切な発現宿主におけるポリペプチドの生成を方向づける1又は複数の制御配列に作用可能に連結される態様3~5のいずれか1つの核酸配列を含んで成る核酸構造体。7.態様6の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。8.態様6の核酸構造体又は態様7記載のベクターを含んで成る組換え宿主細胞。9.態様1又は2のポリペプチドを発現できるトランスジェニック植物又は植物部分。10.態様1又は2のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。11.a前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、態様8の組換え宿主細胞を増殖し;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様1又は2のポリペプチドを生成するための方法。12.a次の株のいずれかを培養し;iノカルジオプシスダソンビレイNocardiopsisdassonvillei亜種ダソンビレイDSM43235、iiノカルジオプシスプラシナNocardiopsisprasinaDSM15649、iiiノカルジオプシスプラシナDSM14010、又はivノカレジオプシスspNocardiopsisspDSM16424;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様1又は2のポリペプチドの生成方法。13.i動物飼料;ii動物飼料添加物;iii動物飼料への使用のための組成物の調製;iv動物飼料の栄養価値の改良;v動物飼料における消化でき且つ又は溶解性のタンパク質の増大;vi動物の規定食におけるタンパク質の加水分解の増強;及び又はviiタンパク質の処理への少なくとも1つの態様1又は2のプロテアーゼの使用。14少なくとも1つの態様1又は2のプロテアーゼが飼料に添加される、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。15.a少なくとも1つの態様1又は2のプロテアーゼ;及びb少なくとも1つの脂溶性ビタミン、及び又はc少なくとも1つの水溶性ビタミン、及び又はd少なくとも1つの微量金属を含んで成る動物飼料添加剤。16.アミラーゼ;フィターゼ;キシラナーゼ;ガラクタナーゼ;α-ガラクトシダーゼ;プロテアーゼ;ホスホリパーゼ;及び又はβ-グルカナーゼをさらに含んで成る態様15の動物飼料添加剤。1750~800gkgの粗タンパク質含有率を有し、そして少なくとも1つの態様1又は2のプロテアーゼを含んで成る動物飼料。18少なくとも1つのタンパク質又はタンパク質源に、少なくとも1つの態様1又は2のプロテアーゼを添加する段階を含んで成る、タンパク質の処理方法。19少なくとも1つのタンパク質源の中で、大豆が包含される態様18の方法。20洗剤への少なくとも1つの態様1又は2のプロテアーゼの使用。21ノカルジオプシスspDSM16424。42.a配列番号2のアミノ酸1-192に対して少なくとも751の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド;bi配列番号1のヌクレオチド568-1143、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、低い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド;c1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、延長、及び又は挿入を含んで成る、配列番号2のアミノ酸1-192のアミノ酸配列を有するポリペプチドの変異体;d上記a又はbの対立遺伝子変異体;及びeプロテアーゼ活性を有する、a、b又はdのフラグメント、から成る群から選択された、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。43.次のプロテアーゼ:a配列番号6のアミノ酸1-192;b配列番号2のアミノ酸1-192;又はc配列番号4のアミノ酸1-192のいずれか1つを含んで成る態様1のポリペプチド。44.プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、そしてa態様42又は43のポリペプチドをコードし;bi配列番号1のヌクレオチド568-1143、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そして又はc配列番号1のヌクレオチド568-1143に対して少なくとも812の程度の同一性を有する、核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。45.次のプロテアーゼ-コードの核酸配列:a配列番号3のヌクレオチド574-1149;b配列番号5のヌクレオチド574-1149;又はc配列番号1のヌクレオチド568-1143のいずれか1つを含んで成る態様44の核酸配列。46.aDNAと、i配列番号1のヌクレオチド568-1143、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、又はiii上記i又はiiの相補鎖とを、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そしてb前記核酸配列を単離することにより生成される、単離された核酸配列。47.適切な発現宿主におけるポリペプチドの生成を方向づける1又は複数の制御配列に作用可能に連結される態様44~46のいずれか1つの核酸配列を含んで成る核酸構造体。48.態様47の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。49.態様48の核酸構造体又は態様47記載のベクターを含んで成る組換え宿主細胞。50.態様42又は43のポリペプチドを発現できるトランスジェニック植物又は植物部分。51.態様42又は43のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。52.a前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、態様49の組換え宿主細胞を増殖し;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様42又は43のポリペプチドを生成するための方法。53.a次の株のいずれかを培養し;iノカルジオプシスダソンビレイNocardiopsisdassonvillei亜種ダソンビレイDSM43235、iiノカルジオプシスプラシナNocardiopsisprasinaDSM15649、iiiノカルジオプシスプラシナDSM14010、又はivノカレジオプシスspNocardiopsisspDSM16424;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様42又は43のポリペプチドの生成方法。54.i動物飼料;ii動物飼料添加物;iii動物飼料への使用のための組成物の調製;iv動物飼料の栄養価値の改良;v動物飼料における消化でき且つ又は溶解性のタンパク質の増大;vi動物の規定食におけるタンパク質の加水分解の増強;及び又はviiタンパク質の処理への少なくとも1つの態様42又は43のプロテアーゼの使用。55少なくとも1つの態様42又は43のプロテアーゼが飼料に添加される、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。56.a少なくとも1つの態様42又は43のプロテアーゼ;及びb少なくとも1つの脂溶性ビタミン、及び又はc少なくとも1つの水溶性ビタミン、及び又はd少なくとも1つの微量金属を含んで成る動物飼料添加剤。57.アミラーゼ;フィターゼ;キシラナーゼ;ガラクタナーゼ;α-ガラクトシダーゼ;プロテアーゼ;ホスホリパーゼ;及び又はβ-グルカナーゼをさらに含んで成る態様56の動物飼料添加剤。5850~800gkgの粗タンパク質含有率を有し、そして少なくとも1つの態様42又は43のプロテアーゼを含んで成る動物飼料。59少なくとも1つのタンパク質又はタンパク質源に、少なくとも1つの態様42又は43のプロテアーゼを添加する段階を含んで成る、タンパク質の処理方法。60少なくとも1つのタンパク質源の中で、大豆が包含される態様59の方法。61洗剤への少なくとも1つの態様42又は43のプロテアーゼの使用。62.a配列番号8のアミノ酸1-189に対して少なくとも922の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド;bi配列番号7のヌクレオチド586-1152、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、低い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド;c1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、延長、及び又は挿入を含んで成る、配列番号8のアミノ酸1-189のアミノ酸配列を有するポリペプチドの変異体;d上記a又はbの対立遺伝子変異体;及びeプロテアーゼ活性を有する、a、b又はdのフラグメント、から成る群から選択された、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。63.配列番号8のアミノ酸1-189を含んで成る態様1又は62のポリペプチド。64.プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、そしてa態様62又は63のポリペプチドをコードし;bi配列番号7のヌクレオチド586-1152、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そして又はc配列番号7のヌクレオチド586-1152に対して少なくとも936の程度の同一性を有する、核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。65.配列番号7のヌクレオチド586-1152を含んで成る態様64の核酸配列。66.aDNAと、i配列番号7のヌクレオチド586-1152、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、又はiii上記i又はiiの相補鎖とを、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そしてb前記核酸配列を単離することにより生成される、単離された核酸配列。67.適切な発現宿主におけるポリペプチドの生成を方向づける1又は複数の制御配列に作用可能に連結される態様64~66のいずれか1つの核酸配列を含んで成る核酸構造体。68.態様67の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。69.態様68の核酸構造体又は態様67記載のベクターを含んで成る組換え宿主細胞。70.態様62又は63のポリペプチドを発現できるトランスジェニック植物又は植物部分。71.態様62又は63のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。72.a前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、態様69の組換え宿主細胞を増殖し;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様62又は63のポリペプチドを生成するための方法。73.a次の株のいずれかを培養し;iノカルジオプシスダソンビレイNocardiopsisdassonvillei亜種ダソンビレイDSM43235、iiノカルジオプシスプラシナNocardiopsisprasinaDSM15649、iiiノカルジオプシスプラシナDSM14010、又はivノカレジオプシスspNocardiopsisspDSM16424;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様62又は63のポリペプチドの生成方法。74.i動物飼料;ii動物飼料添加物;iii動物飼料への使用のための組成物の調製;iv動物飼料の栄養価値の改良;v動物飼料における消化でき且つ又は溶解性のタンパク質の増大;vi動物の規定食におけるタンパク質の加水分解の増強;及び又はviiタンパク質の処理への少なくとも1つの態様62又は63のプロテアーゼの使用。75少なくとも1つの態様62又は63のプロテアーゼが飼料に添加される、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。76.a少なくとも1つの態様62又は63のプロテアーゼ;及びb少なくとも1つの脂溶性ビタミン、及び又はc少なくとも1つの水溶性ビタミン、及び又はd少なくとも1つの微量金属を含んで成る動物飼料添加剤。77.アミラーゼ;フィターゼ;キシラナーゼ;ガラクタナーゼ;α-ガラクトシダーゼ;プロテアーゼ;ホスホリパーゼ;及び又はβ-グルカナーゼをさらに含んで成る態様76の動物飼料添加剤。7850~800gkgの粗タンパク質含有率を有し、そして少なくとも1つの態様62又は63のプロテアーゼを含んで成る動物飼料。79少なくとも1つのタンパク質又はタンパク質源に、少なくとも1つの態様62又は63のプロテアーゼを添加する段階を含んで成る、タンパク質の処理方法。80少なくとも1つのタンパク質源の中で、大豆が包含される態様79の方法。81洗剤への少なくとも1つの態様62又は63のプロテアーゼの使用。82.a配列番号10のアミノ酸1-189に対して少なくとも932の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド;bi配列番号9のヌクレオチド586-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、低い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド;c1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、延長、及び又は挿入を含んで成る、配列番号10のアミノ酸1-189のアミノ酸配列を有するポリペプチドの変異体;d上記a又はbの対立遺伝子変異体;及びeプロテアーゼ活性を有する、a、b又はdのフラグメント、から成る群から選択された、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。83.配列番号10のアミノ酸1-189を含んで成る態様1又は82のポリペプチド。84.プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、そしてa態様82又は83のポリペプチドをコードし;bi配列番号9のヌクレオチド586-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そして又はc配列番号9のヌクレオチド586-1149に対して少なくとも903の程度の同一性を有する、核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。85.配列番号9のヌクレオチド586-1149を含んで成る態様3又は84の核酸配列。86.aDNAと、i配列番号9のヌクレオチド586-1149、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、又はiii上記i又はiiの相補鎖とを、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そしてb前記核酸配列を単離することにより生成される、単離された核酸配列。87.適切な発現宿主におけるポリペプチドの生成を方向づける1又は複数の制御配列に作用可能に連結される態様84~86のいずれか1つの核酸配列を含んで成る核酸構造体。88.態様87の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。89.態様88の核酸構造体又は態様87記載のベクターを含んで成る組換え宿主細胞。90.態様82又は83のポリペプチドを発現できるトランスジェニック植物又は植物部分。91.態様82又は83のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。92.a前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、態様89の組換え宿主細胞を増殖し;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様82又は83のポリペプチドを生成するための方法。93.a次の株のいずれかを培養し;iノカルジオプシスダソンビレイNocardiopsisdassonvillei亜種ダソンビレイDSM43235、iiノカルジオプシスプラシナNocardiopsisprasinaDSM15649、iiiノカルジオプシスプラシナDSM14010、又はivノカレジオプシスspNocardiopsisspDSM16424;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様82又は83のポリペプチドの生成方法。94.i動物飼料;ii動物飼料添加物;iii動物飼料への使用のための組成物の調製;iv動物飼料の栄養価値の改良;v動物飼料における消化でき且つ又は溶解性のタンパク質の増大;vi動物の規定食におけるタンパク質の加水分解の増強;及び又はviiタンパク質の処理への少なくとも1つの態様82又は83のプロテアーゼの使用。95少なくとも1つの態様82又は83のプロテアーゼが飼料に添加される、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。96.a少なくとも1つの態様82又は83のプロテアーゼ;及びb少なくとも1つの脂溶性ビタミン、及び又はc少なくとも1つの水溶性ビタミン、及び又はd少なくとも1つの微量金属を含んで成る動物飼料添加剤。97.アミラーゼ;フィターゼ;キシラナーゼ;ガラクタナーゼ;α-ガラクトシダーゼ;プロテアーゼ;ホスホリパーゼ;及び又はβ-グルカナーゼをさらに含んで成る態様96の動物飼料添加剤。9850~800gkgの粗タンパク質含有率を有し、そして少なくとも1つの態様82又は83のプロテアーゼを含んで成る動物飼料。99少なくとも1つのタンパク質又はタンパク質源に、少なくとも1つの態様82又は83のプロテアーゼを添加する段階を含んで成る、タンパク質の処理方法。100少なくとも1つのタンパク質源の中で、大豆が包含される態様99の方法。101洗剤への少なくとも1つの態様82又は83のプロテアーゼの使用。102.a配列番号12のアミノ酸1-189に対して少なくとも833の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド;bi配列番号11のヌクレオチド586-1152、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、低い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド;c1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、延長、及び又は挿入を含んで成る、配列番号12のアミノ酸1-189のアミノ酸配列を有するポリペプチドの変異体;d上記a又はbの対立遺伝子変異体;及びeプロテアーゼ活性を有する、a、b又はdのフラグメント、から成る群から選択された、プロテアーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。103.配列番号12のアミノ酸1-189を含んで成る態様1又は102のポリペプチド。104.プロテアーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、そしてa態様102又は103のポリペプチドをコードし;bi配列番号11のヌクレオチド586-1152、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、及び又はiii上記i又はiiの相補鎖と、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そして又はc配列番号11のヌクレオチド586-1152に対して少なくとも839の程度の同一性を有する、核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。105.配列番号11のヌクレオチド586-1152を含んで成る態様104の核酸配列。106.aDNAと、i配列番号11のヌクレオチド586-1152、ii少なくとも100個のヌクレオチドのiの副配列、又はiii上記i又はiiの相補鎖とを、非常に高い緊縮条件下でハイブリダイズし;そしてb前記核酸配列を単離することにより生成される、単離された核酸配列。107.適切な発現宿主におけるポリペプチドの生成を方向づける1又は複数の制御配列に作用可能に連結される態様104~106のいずれか1つの核酸配列を含んで成る核酸構造体。108.態様107の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。109.態様108の核酸構造体又は態様107記載のベクターを含んで成る組換え宿主細胞。110.態様102又は103のポリペプチドを発現できるトランスジェニック植物又は植物部分。111.態様102又は103のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。112.a前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、態様109の組換え宿主細胞を増殖し;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様102又は103のポリペプチドを生成するための方法。113.a次の株のいずれかを培養し;iノカルジオプシスダソンビレイNocardiopsisdassonvillei亜種ダソンビレイDSM43235、iiノカルジオプシスプラシナNocardiopsisprasinaDSM15649、iiiノカルジオプシスプラシナDSM14010、又はivノカレジオプシスspNocardiopsisspDSM16424;そしてb前記ポリペプチドを回収することを含んで成る、態様102又は103のポリペプチドの生成方法。114.i動物飼料;ii動物飼料添加物;iii動物飼料への使用のための組成物の調製;iv動物飼料の栄養価値の改良;v動物飼料における消化でき且つ又は溶解性のタンパク質の増大;vi動物の規定食におけるタンパク質の加水分解の増強;及び又はviiタンパク質の処理への少なくとも1つの態様102又は103のプロテアーゼの使用。115少なくとも1つの態様102又は103のプロテアーゼが飼料に添加される、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。116.a少なくとも1つの態様102又は103のプロテアーゼ;及びb少なくとも1つの脂溶性ビタミン、及び又はc少なくとも1つの水溶性ビタミン、及び又はd少なくとも1つの微量金属を含んで成る動物飼料添加剤。117.アミラーゼ;フィターゼ;キシラナーゼ;ガラクタナーゼ;α-ガラクトシダーゼ;プロテアーゼ;ホスホリパーゼ;及び又はβ-グルカナーゼをさらに含んで成る態様116の動物飼料添加剤。11850~800gkgの粗タンパク質含有率を有し、そして少なくとも1つの態様102又は103のプロテアーゼを含んで成る動物飼料。119少なくとも1つのタンパク質又はタンパク質源に、少なくとも1つの態様102又は103のプロテアーゼを添加する段階を含んで成る、タンパク質の処理方法。120少なくとも1つのタンパク質源の中で、大豆が包含される態様119の方法。121洗剤への少なくとも1つの態様102又は103のプロテアーゼの使用。生物学的材料の寄託:次の生物学的材料を、DSMZに、ブタペスト条件に基づいて寄託し、そして次の受託番号を付与された:寄託物受託番号寄託日ノカレジオプシスspDSM164242004年5月24日ノカレジオプシスプラシナDSM156492003年5月30日ノカレジオプシスプラシナDSM140102001年1月20日以前は、アルバ前記株は、培養物への接近が、37CFR§114及び35USC§122下で特許及び商標局長により決定される本特許出願の係属の間、利用できることを保証する条件下で寄託された。寄託物は、寄託された株の実質的に純粋な培養物を示す。寄託物は、本出願の対応物又はその子孫が出願される国々における外国特許法により要求される場合、利用できる。しかしながら、寄託物の入手可能性は、政府の指令により許される特許権の低下において本発明を実施する許可を構成しないことが理解されるべきである。菌株DSM15649は、デンマークからの土壌サンプルから2001年に単離された。次の株はDSMZから公的に入手できる:ノカルジオプシスダソンビレイ亜種ダソンビレイDSM43235ノカルジオプシスアルカリフィラDSM44657ノカルジオプシスルセンテンシスDSM44048ノカルジオプシスダソンビレイ亜種ダソンビレイDSM43235はまた、次のような他の寄託機関でも寄託される:ATCC23219、IMRU1250NCTC10489。本明細書に記載される発明は、本明細書に開示される特許の態様により範囲を限定されるものではない。何故ならば、それらの態様は本発明のいくつかの観点を例示するものである。いずれかの同等の態様が本発明の範囲内で意図される。実際、本明細書に示され、そして記載されるそれらの修飾の他に、本発明の種々の修飾は、前述の記載から当業者に明らかになるであろう。そのような修飾はまた本発明の範囲内にある。種々の文献が本明細書に引用されており、それらの開示は引用により本明細書に組み込まれている。例1:3種のプロテアーゼL1a1L1b及びL1cのクローニング及び発現:試薬及び培地:LB寒天:AusubelFMなどCurrentprotocolsinMolecularBiologyJohnWileyandSons1995に記載される。LB-PG寒天:05グルコース及び005Mのリン酸カリウムpH70により補充されたLB寒天。PS-1:10スクロース、4大豆粉、1Na3PO412H2O、05CaCO3及び001プルロン酸。TE10mMのトリスHCIpH74、1mMのEDTApH80TEL:TE緩衝液中、50mgmlのLysozym。チオシアネート:5Mのグアニジウムチオシアネート、100mMのEDTA、06wvのN-ラウリルサルコシン、ナトリウム塩、60gのチオシアネート、20mlの05MのEDTA、pH80、20mlの水を65°Cで溶解する。室温RTに冷却し、そして06gのN-ラウリルサルコシンを添加する。水を添加し、100mlにし、そしてそれを、02Mの無菌フィルターを通して濾過する。NH4Ac:75MのCH3COONH4。TER:TE-緩衝液中、1μgmlのRnaseA。CIA:クロロホルムイソアミルアルコール24:1ノカルジオプシス株の発酵:ノカルジオプシスダソンビレイ亜種ダソンビレイDSM43235、ノカレジオプシスプラシナDSM15649、及びノカレジオプシスプラシナ以前は、アルバDSM14010の個々を、収穫の前、次の培地において30°Cで3日間、増殖した:トリプチカーゼ20g酵母抽出物5g塩化鉄6mg硫酸マグネシウム15mg蒸留水1000ml炭酸ナトリウムの添加によりpHを9に調節する。ゲノムDNAの調製:ゲノムDMAを次の方法に従って単離した:115mlの培養物を収穫し、そして100μlのTELに再懸濁する。37°Cで30分間インキュベートする。2500μlのチオシアネート緩衝液を添加し、そして室温で10分間、放置する。3250μlのNH4Acを添加し、そして氷上に10分間、放置する。4500μlのCIAを添加し、そして混合する。5微小遠心分離機に移し、そして十分な速度で10分間、回転する。6上清液を新しいEppendorf管に移し、そして054体積の冷イソプロパノールを添加する。十分に混合する。7回転し、そしてDNAペレットを70エタノールにより洗浄する。8100μlのTERのゲノムDNAを再懸濁する。バチルスサブチリス発現株SavL1aSavL1b及びSavL1cの構成:前-成熟プロテアーゼL1aのためのコード領域配列番号1のヌクレオチド88-1143を、ノカルジオプシスダソンビレイ亜種ダソンビレイDSM43235から単離されたゲノムDNAに基づいて、次のプライマー1424及び1485により増幅した:1485配列番号14:5gcttttagttcatcgatcgcatcggctgcgaccgtaccggccgagccag3;1424配列番号15:5ggagcggattgaacatgcgattactaaccggtcaccagggacagcc3。前-成熟プロテアーゼL1bのためのコード領域配列番号3のヌクレオチド88-1149を、ノカルジオプシスプラシニアDSM15649から単離されたゲノムDNAに基づいて、次のプライマー1751及び1753により増幅した:1751配列番号16:5gttcatcgatcgcatcggctgtcaccgcacccaccgagcc3;1753配列番号17:5ggagcggattgaacatgcgattagctggtgacgaggctgaggttc3。前-成熟プロテアーゼL1cのためのコード領域配列番号5のヌクレオチド88-1149を、ノカルジオプシスプラシニアDSM14010から単離されたゲノムDNAに基づいて、次のプライマー1755及び1756により増幅した:1755配列番号18:5gttcatcgatcgcatcggctgtgaccgcccccgccgag3;1756配列番号19:5ggagcggattgaacatgcgattagctcgtgacgaggctgaggttc3。それらのL1aL1b及びL1cポリヌクレオチドの個々を、Savシグナルペプチド配列番号13をコードする相同DNAフラグメントに、整合して、PCRにより融合した。それぞれSavL1aSavL1b及びSavL1cと命名されたバチルスサブチリス株を、バチルスサブチリスMB1053宿主細胞ゲノムに対する相同組換えによりそれらの遺伝子シグナルペプチドコード部分を含むを組込むことにより構成したWO0395658号。前記遺伝子を、バチルスリケニルホルミスαアミラーゼ遺伝子amyL、バチルスアミロリケファシエンスα-アミラーゼ遺伝子amyQ及び安定化配列を含むバチルススリンジエンシスcryIIIAプロモーターからのプロモーターから成る三元プロモーターシステムWO9943835号に記載のような下で発現した。クロラムフェニコールアセチル-トランスフェラーゼをコードする遺伝子を、マーカーとして使用したDiderichsenBPoulsenGBJoergensenSTAusefulcloningvectorforBacillussubtilisPlasmid30312に記載される。クロラムフェニコール耐性形質転換体を、1脱脂乳LB-PG寒天プレート6μgmlのクロラムフェニコールにより補充された上で、プロテアーゼ活性について調べた。いくつかのプロテアーゼ陽性コロニーを、正しいDNA配列を確認するために挿入体のDNA配列決定により、さらに分析し、そして個々の構造体についての1つの株を選択した。バチルス宿主株の発酵:形質転換されたバチルスサブチリス宿主株の個々を、6μgmlのクロラムフェニコールにより補充されたPS-1培地100mlを含む、500mlのそらせ板付三角フラスコにおいて、回転振盪テーブル250rpm上で、37°Cで16時間、及び26°Cでさらに4日間、発酵した。例2:プロテアーゼL2aのクローニング及び発現:プロテアーゼコード遺伝子配列番号7のヌクレオチド88-1152のプロフォームを、例1に記載される方法但し、次のプライマーを使用するにより、ノカルジオプシスspDSM16424から単離した:17185gttcatcgatcgcatcggctgcgcccggccccgtcccccag3;17205ggagcggattgaacatgcgatcagctggtgcggatgcgaac3。その対応するプロテアーゼ配列番号8を、L2aと命名した。SavL2aと命名されたバチルスサブチリス宿主株を、一般的に例1に記載のようにして構成し、そしてクロラムフェニコール耐性、プロテアーゼ陽性コロニーを選択し、そして挿入体のDNA配列決定により分析した。例3:2種の追加のプロテアーゼのクローニング:2種の追加のプロテアーゼコード遺伝子それぞれ、配列番号9のヌクレオチド88-1149、及び配列番号11のヌクレオチド88-1152のプロフォームを、例1に記載される方法但し、次のプライマーを使用するにより、それぞれノカルジオプシスアルカリフィラDSM44657及びノカルジオプシスルセンテンシスDSM44048から単離した:17285gttcatcgatcgcatcggctgcccccgccccccagtc3;17635ggagcggattgaacatgcgattaggtgcgcagacgcaggcccca317475gttcatcgatcgcatcggctggaaccgtacccaccccccagg3;17495ggagcggattgaacatgcgattagctggtgcgcagtcgcac3。対応するプロテアーゼそれぞれ、配列番号10及び12を、それぞれL2b及びL2cと命名した。それぞれSavL2b、及びSavL2cと命名されたバチルスサブチリス宿主株を、一般的に例1に記載のようにして構成し、そしてクロラムフェニコール耐性、プロテアーゼ陽性コロニーを選択し、そして挿入体のDNA配列決定により分析した。例4:L1aプロテアーゼの精製及び特徴化:プロテアーゼアッセイ:1pNAアッセイ:pNA基質:SucAAPFpNA温度:室温25°Cアッセイ緩衝液:HCl又はNaOHによりpHを20253035405060708090100110及び120に調節された、100mM琥珀酸100mMHEPES100mMCHES100mMCABS1mMCaCl2150mMKCI001TritonX100。20μlのプロテアーゼ001のTritonX-100に希釈されたを、100μlのアッセイ緩衝液と共に混合する。アッセイを、100μlのpNA基質50mg:10mlのDMSOに溶解され、そしてさらに、001TritonX100により45倍に希釈されたの添加により開始する。OD405での上昇を、プロテアーゼ活性の測定としてモニターする。2ProtazymeAKアッセイ:基質:ProtazymeAK錠剤架橋され、そして染色されたカゼイン;Megazymeからの温度:調節されたアッセイ温度アッセイ緩衝液:HCl又はNaOHによりpHを20253035405060708090100110及び120に調節された、100mM琥珀酸100mMHEPES100mMCHES100mMCABS1mMCaCl2150mMKCI001TritonX100。ProtazymeAK錠剤を、20mlの001TritonX100に、軽く攪拌することにより懸濁する。この懸濁液500μl及びアッセイ緩衝液500μlを、Eppendorf管において混合し、そして氷上に置く。20μlのプロテアーゼサンプル001TritonX100に希釈されたを添加する。アッセイを、Eppendorf管を、アッセイ温度に調節されたEppendorfサーもミキサーに移すことにより開始する。管を、Eppendorfサーモミキサー上で15分間、その最高振盪速度1400rpmでインキュベートする。インキュベーションを、管を氷浴に戻すことにより停止する。次に、管を、氷冷却された遠心分離機において数分間、遠心分離し、そして200μlの上清液を、マイクロタイタープレートに移す。OD650をプロテアーゼ活性の測定として読み取る。緩衝液ブラインドがアッセイに包含される酵素の代わり。精製:例1に記載されるL1aプロテアーゼを発現する、形質転換されたバチルス宿主を、例1に記載のようにして、但し26°Cで6日間、発酵した。培養物ブイヨンを、遠心分離し20000xg20分、そして上清液を注意して、沈殿物からデカントした。組合された上清液を、バチルス宿主細胞の残りを除去するために、SeitzEKSプレートを通して濾過した。EKS濾液を、G25Sephadexカラム上の50mMのH3BO3、5mMの琥珀酸、1mMのCaCl2溶液に移した。固体硫酸アンモニウムを、G25セファデックスカラムからの酵素溶液に添加し、酵素溶液における16Mの最終NH42SO4濃度を付与した。酵素溶液を、2SO4添加の間、磁気撹拌機により軽く混合し、そして撹拌を、システムを平衡化するために添加の後、30分間、続けた。次に、酵素溶液を、10mMのH3BO310mMの琥珀酸、2mMのCaCl2、16MのNH42SO4pH7により平衡化されたButylToyopearlカラムに適用した。カラムを平衡化緩衝液により洗浄した後、プロテアーゼを、同じ緩衝液中、線状2SO4グラジエント16~0Mにより溶出した。プロテアーゼ含有画分をプールし、そしてG25セファッテックスカラム上の20mMのHEPESpH8に適用し、そして同じ緩衝液により平衡化されたQセファロースFFカラムに適用した。平衡化緩衝液によりカラムを集中的に洗浄した後、プロテアーゼを、同じ緩衝液中、線状NaClグラジエント0~05Mにより溶出した。カラムからの画分を、プロテアーゼ活性について分析しpH9でのSucAAPFpNAアッセイを用いて、そして活性画分をさらに、SDS-PAGEにより分析した。わずか1つのバンドを有する画分クーマシー染色されたSDS-PAGEゲルにより判断されるをプールし、さらなる特徴化のために使用される、精製された調製物を供給した。L1aプロテアーゼを、WO2004111220号L2プロテアーゼを追跡するに記載のようにして調製された、ノカルジオプシスダソンビレイ亜種ダソンビレイDSM43235由来の他のプロテアーゼに比較して、下記のようにして特徴づけた。pH-活性、pH-安定性及び温度-活性:pNAアッセイを、pH-活性プロフィール及びpH-安定性プロフィールを得るために使用した。pH-安定性プロフィールン関しては、プロテアーゼを、アッセイ緩衝液おいて10倍に希釈し、そして37°Cで2時間インキュベートした。インキュベーションの後、プロテアーゼサンプルを、残留活性についてのアッセイの前、pH9のアッセイ緩衝液における希釈により、同じpHの緩衝液pH9に移した。ProtazymeAKアッセイを、pH9での温度-活性プロフィールを得るために使用した。結果は、下記表2~4に示される。他の特徴:L1aプロテアーゼは、フェニルメチルスルホニルフルオリドPMSF、及びストレプトミセススブチリシンインヒビターSSIにより阻害されることが見出されたα-溶解プロテアーゼ株酵素ペプチダーゼファミリーS1E、これまでS2Aである。SDS-PAGEにより決定される場合、その相対的分子量は、Mr=22kDaであり、そしてN-末端配列は、ADIVGGEAY配列番号26である。例5:L1aプロテアーゼの比活性:例4に記載される精製されたプロテアーゼ調製物を、比活性の決定のために使用した。調製物の純度は、SDS-PAGEにより分析される場合、95以上であったWO0158275号における例2Aに記載のようにして決定された。プロテアーゼサンプルを2つに分割した。1つの部分を、アミノ酸分析によりタンパク質含有率mgmlについて分析し、他の部分をプロテアーゼ活性について分析した。アミノ酸分析AAAmgml:プロテアーゼサンプルのペプチド結合を、酸加水分解し、続いて、BieBerntsenASSandbaekvej57DK2610RoedovreDenmarkから市販されているBiochrom20PlusAminoAcidAnalyser上で、製造業者の説明書に従って、開放されるアミノ酸を分離し、そしてそれを定量化した。酸加水分解のために、タンパク質サンプルを、真空遠心分離機において乾燥し、185vvのHCl01vvのフェノールに溶解し、そして110°Cで16時間インキュベートした。インキュベーションの後、サンプルを再び真空遠心分離機において乾燥し、負荷緩衝液02Mのクエン酸ナトリウム、pH22に溶解し、そしてBiochrom20PlusAminoAcidAnalyser上に負荷した。定量化のために、加水分解されたサンプルを、BieBerntsenASカタログ番号80-2104-15から市販されているカチオン交換樹脂UlterPacNo8Sodiumformのカラム上に負荷した。種々のpHpH1~pH8及びイオン強度の緩衝液を、上記に言及される製造業者の説明者に従って、カラムに通し、種々のアミノ酸を分離した。カラム温度を、必要とされる分離を確保するために、製造業者の説明書に従って、正確に調節した53°C~92°C及び53°Cに戻る。カラム溶離剤を、ニンヒドリン試薬BieBerntsen、カタログ番号80-2038-07と共に混合し、そしてその混合物を、アミノ酸分析器の高温反応コイルに通した。反応コイルにおいては、ニンヒドリンがアミノ酸と反応し、着色された化合物が形成され、その量は、存在するアミノ酸の量と直接的に比例した。プロテアーゼ活性アッセイAUml:変性されたヘモグロビン67mMのKH2PO4NaOH緩衝液pH750中、065wwを、プロテアーゼにより25°Cで10分間、分解し、そして消化されなかったヘモグロビンをトリクロロ酢酸TCAにより沈殿し、そして濾過により除去した。濾液におけるTCA-溶解性ヘモグロビン分解生成物を、FolinCiocalteuのフェノール試薬により決定し、青色がいくつかのアミノ酸を示す。活性単位AUを測定し、そしてALCALASETM標準に参照して定義した。アッセイの詳細な説明、及びALCALASETM標準のサンプルは、NovozymesASKrogshoejvej36DK2880BagsvaerdDenmarkから必要に応じ入手できる。比活性を次の通りにして計算した:比活性AAAx1000。L1aプロテアーゼの比活性は、ノカルジオプシスspNRRL18262由来のプロテアーゼの383AUgの比活性に比較して、498AUgであった。例6:L2aプロテアーゼの精製及び特徴化:例2に記載されるL2aプロテアーゼを発現する、形質転換されたバチルス宿主を、例1に記載のようにして、但し30°Cで5日間、発酵した。培養物ブイヨンを、遠心分離し20000xg20分、そして上清液を注意して、沈殿物からデカントした。組合された上清液を、バチルス宿主細胞の残りを除去するために、SeitzEKSプレートを通して濾過した。EKS濾液を、G25Sephadexカラム上の50mMのH3BO3、5mMの琥珀酸、1mMのCaCl2溶液に移し、そして同じ緩衝液により平衡化されたバシトラシンシリカカラムに適用した。カラムを平衡化緩衝液により集中的に洗浄した後、プロテアーゼを、100mMのH3BO310mMの琥珀酸2mMのCaCl21MのNaCI25のイソプロパノールpH7により段階的に溶出した。バシトラシン溶出物を、G25Sephadexカラム上の50mMのH3BO310mMのCH3COOH1mMのCaCI2pH45に移し、そして同じ緩衝液により平衡化されたSセファデックスカラムに適用した。カラムを平衡化緩衝液により集中的に洗浄した後、プロテアーゼを、同じ緩衝液中、線状NaClグラジエント0→05Mにより溶離した。カラムからの画分を、プロテアーゼ活性について分析し37°C及びpH9でProtazymeAKアッセイを用いて、そして活性画分をさらに、SDS-PAGEにより分析した。わずか1つのバンドがクーマシー染色されたSDS-PAGEゲル上で見出された画分を、精製された調製物としてプールし、そしてさらなる特徴化のために使用した。L2aプロテアーゼを、カルジオプシスspNRRL18262由来の既知のプロテアーゼプロテアーゼ10と称するに比較して、上記例4に記載のようにして特徴づけた。結果は下記表5~7に示される。他の特徴:L2aプロテアーゼは、フェニルメチルスルホニルフルオリドPMSF、及びストレプトミセススブチリシンインヒビターSSIにより阻害されることが見出されたα-溶解プロテアーゼ株酵素ペプチダーゼファミリーS1E、これまでS2Aである。SDS-PAGEにより決定される場合、その相対的分子量は、Mr=20kDaであり、そしてN-末端配列は、ANIIGGLAYT配列番号27である。例7:L2aプロテアーゼの溶解温度:示差走査熱量法DSC:DSCを用いて、ノカルジオプシスspDSM16425由来のL2aプロテアーゼのpH70での温度安定性を決定した。プロテアーゼを、例6に記載のようにして精製し、そして10mMのリン酸ナトリウム、50mMの塩化ナトリウム、pH70に対して4°Cで一晩、透析し、20~100°Cまで15°C分の一定走査速度を伴って、VPDSC装置MicroCal上で実施した。データ-取扱を、MicroCalOriginソフトウェアを用いて行った。得られる変性又は溶融温度Tm又はTdは、782°Cであった。プロテアーゼ10についてのTmは765°Cである。例8:単胃インビトロ消化モデルにおけるL2aプロテアーゼの性能:例6に記載される精製されたL2aプロテアーゼの性能を、ノカルジオプシスspNRRL18262プロテアーゼ10由来の既知のプロテアーゼに比較して、単胃動物において消化を刺激するインビトロモデルにおいて試験した。特に、プロテアーゼを、トウモロコシ-SBMトウモロコシ-大豆粉タンパク質の溶解性及び消化を改良するその能力について試験した。インビトロシステムは、トウモロコシ-SBM基質が最初に、HClペプチン胃消化を刺激する、及び続いて、パンクレアチン腸消化を刺激すると共にインキュベートされる18個のフラスコから成った。8個のフラスコは、胃相の開始でプロテアーゼを添加され、そして残りの10個のフラスコはブランクとして作用した。腸インキュベーション相の最後で、インビトロ消化物のサンプルを除き、そして溶解され、そして消化されたタンパク質について分析した。条件:基質:4gのSBM、6gのトウモロコシ前混合されたpH:30:胃段階68~70:腸段階HCl:15時間0105Mすなわち、30分のHCl-基質前混合ペプシン:1時間3000Ugの規定食パンクレアチン:4時間8mggの規定食温度:40°C反復:n溶液:039MのNaOH0105MのHCl5ml当たり6000Uのペプシンを含む0105MのHCl1ml当たり16mgのパンクレアチンを含む1MのNaHCO3125mMのNaAc-緩衝液、pH60酵素タンパク質決定:プロテアーゼ酵素タンパク質EPの量を、SCGillPHvonHippelAnalyticalBiochemistry182319326に概略される原理を用いて、A280値及びアミノ酸配列アミノ酸組成に基づいて計算する。インビトロモデルのための実験方法:実験方法は、上記概略に従った。pHは、1、25、及び55時間で測定された。インキュベーションを、6時間後に停止し、そして30mlのサンプルを除き、そして遠心分離10000xy10分、4°Cの前、氷上に配置した。上清液を除き、そして-20°Cで貯蔵した。分析:すべてのサンプルを、ゲル濾過を用いて、溶解され、そして消化されたタンパク質の含有率について分析した。溶解され、そして消化されたタンパク質の評価:インビトロ消化されたサンプルからの上清液における溶解されたタンパク質の含有率を、ゲル濾過HPLCを用いて、粗タンパク質CPを定量化することにより評価した。上清液を融解し、045μmのポリカーボネートフィルターを通して濾過し、そして水により稀釈した1:50、vv。稀釈されたサンプルを、SuperdexPeptidePEゲル濾過カラムを用いて、HPLCによりクロマトグラフィー処理した。定組成溶出のために使用される溶解剤は、150mMのNaClを含む、50mMのリン酸ナトリウム緩衝液pH70であった。実験当たりの溶離剤の合計体積は26mlであり、そして流速は04ml分であった。溶出プロフィールを、214nmで記録し、そしてそのプロフィール下の合計領域を積分により決定した。消化された領域からのタンパク質含有率を評価するために、検量線R2=09993を、既知の合計タンパク質含有率のインビトロ消化された対照トウモロコシ-SBMサンプルの一連の稀釈溶液から製造した。その対照サンプルにおけるタンパク質決定を、Kjeldahl方法OfficialMethodsofAnalysis14thedWashingtonDCを用いて行った。消化されたタンパク質の含有率を、1500ドルトン又はそれ以下の分子質量を有するペプチド及びアミノ酸に対応するクロマトグラム領域を積分することにより評価したSavoieLGauthierSFDialysisCellForTheInvitroMeasurementOfProteinDigestibilityJFoodSci198651494498BabinszkyLVanDMJMBoerHDenHLAAnInvitroMethodforPredictionofTheDigestibleCrudeProteinContentinPigFeedsJSciFoodAgr199050173178BoisenSEggumBOCriticalEvaluationofInvitroMethodsforEstimatingDigestibilityinSimpleStomachAnimalsNutritionResearchReviews19914141162。1500ドルトンを区分線を決定するために、ゲル濾過カラムを、チトクロムCBoehringerGermany、アプロチニン、ガストリンI及びサブスタンスPSigmaAldrichUSAを、分子質量標準として用いて、検量した。結果:下記表9に示される結果は、プロテアーゼ10のようなL2aプロテアーゼが、ブランクに対して、可溶性及び消化可能タンパク質のレベルを有意に高めたことを示す。さらに、L2aプロテアーゼは、既知のプロテアーゼ10に比較して、消化可能タンパク質のレベルを少なくとも数値的に改良すると思われる。例9:動物飼料及び動物飼料添加物:ビタミン及び鉱物プレミックスの形で存在する、本発明のプロテアーゼL2aを含んで成る動物飼料添加物を、下記表10に示されるようにして構成する。ビタミン及びカロテノイドは、DSMNutritionalProductsから市販されている。すべての量は、gkgによる。表10のプレミックスは、下記表11に示されるような組成を有する層についての規定食に含まれる。個々の成分の量は、wwで示される。L2aプロテアーゼの規定食中の濃度は、kg規定食当たり100mgのプロテアーゼ酵素タンパク質である。"