"抗体又はその抗原結合フラグメントが補体依存性細胞傷害CDCを誘導することができる、CD37に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体が又、アポトーシスを誘導することもできる、請求項1記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体が又、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを誘導することもできる、請求項1又は2記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。下記:a配列番号55のポリペプチド及び配列番号72のポリペプチドを含む抗体;b配列番号59のポリペプチド及び配列番号75のポリペプチドを含む抗体;c配列番号61のポリペプチド及び配列番号77のポリペプチドを含む抗体;d配列番号64のポリペプチド及び配列番号80のポリペプチドを含む抗体;e配列番号66のポリペプチド及び配列番号82のポリペプチドを含む抗体;f配列番号68のポリペプチド及び配列番号84のポリペプチドを含む抗体;及び、g配列番号70のポリペプチド及び配列番号86のポリペプチドを含む抗体;よりなる群から選択される抗体と同じCD37エピトープに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。CD37に特異的に結合し、そして配列番号180のポリペプチドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体又はそのフラグメントが配列番号184のポリペプチドに結合しない、請求項5記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。CD37に特異的に結合し、そして配列番号184のポリペプチドに特異的に結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント。抗体又はその抗原結合フラグメントが下記:a配列番号55のポリペプチド及び配列番号72のポリペプチドを含む抗体;b配列番号59のポリペプチド及び配列番号75のポリペプチドを含む抗体;c配列番号61のポリペプチド及び配列番号77のポリペプチドを含む抗体;d配列番号64のポリペプチド及び配列番号80のポリペプチドを含む抗体;e配列番号66のポリペプチド及び配列番号82のポリペプチドを含む抗体;f配列番号68のポリペプチド及び配列番号84のポリペプチドを含む抗体;及び、g配列番号70のポリペプチド及び配列番号86のポリペプチドを含む抗体;よりなる群から選択される抗体を競合的に阻害するCD37に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10664、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10665、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10666、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10667、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10668、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10669、及び、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10670よりなる群から選択されるハイブリドーマにより生産される抗体又はその抗原結合フラグメント。抗体が下記:a配列番号4、5及び6及び配列番号28、29及び30;b配列番号7、8及び9及び配列番号31、32及び33;c配列番号10、11及び12及び配列番号34、35及び36;d配列番号13、14及び15及び配列番号37、38及び39;e配列番号13、14及び15及び配列番号37、40及び39;f配列番号16、17及び18及び配列番号41、42及び43;g配列番号19、20及び21及び配列番号44、45及び46;h配列番号19、20及び21及び配列番号44、47及び46;i配列番号22、23及び24及び配列番号48、49及び50;j配列番号22、23及び24及び配列番号48、51及び50;k配列番号25、26及び27及び配列番号52、53及び54;及び、l保存的アミノ酸置換1、2、3又は4つを含むa~kの変異体;よりなる群から選択されるポリペプチド配列を含むCD37に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。抗体が下記:a配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択されるポリペプチド配列に少なくとも90同一であるポリペプチド配列を含む請求項10記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。ポリペプチド配列が下記:a配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択されるポリペプチド配列に少なくとも95同一である請求項11記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。ポリペプチド配列が下記:a配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択されるポリペプチド配列に少なくとも99同一である請求項12記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体又はその抗原結合フラグメントがネズミ、非ヒト、ヒト化、キメラ、リサーフィシング化又はヒトのものである請求項1~13の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体又は抗体フラグメントが架橋剤の非存在下にインビトロでCD37を発現する細胞のアポトーシスを誘導することができる請求項4~14の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体又は抗原結合フラグメントが補体依存性細胞傷害CDCを誘導することができる請求項4~14の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体が抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを誘導することができる請求項4~14の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントが架橋剤の非存在下にインビトロでCD37を発現する細胞のアポトーシスを誘導することができる、CD37に特異的に結合するヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。該ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントが又、補体依存性細胞傷害CDCを誘導することもできる請求項18記載のヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。該ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントが又、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを誘導することもできる請求項18又は請求項19記載のヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体がヒトCD37又はマカクCD37に結合する請求項1~20の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。完全長抗体である請求項1~21の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。抗原結合フラグメントである請求項1~21の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。該抗体又はその抗原結合フラグメントがFab、Fab’、Fab’2、Fd、単鎖Fv即ちscFv、ジスルフィド連結Fv、V-NARドメイン、IgNar、イントラボディー、IgGΔCH2、ミニボディー、Fab3、テトラボディー、トリアボディー、ダイアボディー、単ドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、scFv2、又はscFv-Fcを含む請求項1~21の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。該ポリペプチドが下記:a配列番号4、5及び6及び配列番号28、29及び30;b配列番号7、8及び9及び配列番号31、32及び33;c配列番号10、11及び12及び配列番号34、35及び36;d配列番号13、14及び15及び配列番号37、38及び39;e配列番号13、14及び15及び配列番号37、40及び39;f配列番号16、17及び18及び配列番号41、42及び43;g配列番号19、20及び21及び配列番号44、45及び46;h配列番号19、20及び21及び配列番号44、47及び46;i配列番号22、23及び24及び配列番号48、49及び50;j配列番号22、23及び24及び配列番号48、51及び50;k配列番号25、26及び27及び配列番号52、53及び54;及び、l保存的アミノ酸置換1、2、3又は4つを含むa~kの変異体;よりなる群から選択される配列を含むCD37に特異的に結合するポリペプチド。該ポリペプチドが下記:a配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択される配列に少なくとも90同一である配列を含む請求項25記載のポリペプチド。配列が下記:a配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択される配列に少なくとも95同一である請求項26記載のポリペプチド。配列が下記:a配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択される配列に少なくとも99同一である請求項27記載のポリペプチド。請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント又は請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチドを生産する単離された細胞。a請求項29記載の細胞を培養すること;及びb該培養された細胞から抗体、その抗原結合フラグメント、又はポリペプチドを単離することを含む、請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント又は請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチドを作成する方法。式A-L-Cを有し、式中:Aは請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント又は請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチドであり;Lはリンカーであり;そして、Cは細胞傷害剤であり;そして、ここで該リンカーLはAをCに連結させる、イムノコンジュゲート。式A-L-Cを有し、式中:AはCD37に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントであり;Lは切断不可能なリンカーであり;そして、Cは細胞傷害剤であり;そして、ここで該リンカーLはAをCに連結させる、イムノコンジュゲート。式A-L-Cを有し、式中:AはCD37に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントであり;Lはリンカーであり;そして、Cはマイタンシノイドであり;そして、ここで該リンカーLはAをCに連結させる、イムノコンジュゲート。該リンカーが切断不可能なリンカーである請求項33記載のイムノコンジュゲート。第2のCを更に含む請求項31~34の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート。第3のCを更に含む請求項35記載のイムノコンジュゲート。第4のCを更に含む請求項36記載のイムノコンジュゲート。2~6個のCを含む請求項31~34の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート。3~4個のCを含む請求項31~34の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート。該リンカーが切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸系リンカーよりなる群から選択される請求項31~39の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート。該リンカーがN-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオペンタノエートSPP;N-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオブタノエートSPDB又はN-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオ-2-スルホブタノエートスルホ-SPDB;N-スクシンイミジル4-マレイミドメチルシクロヘキサンカルボキシレートSMCC;N-スルホスクシンイミジル4-マレイミドメチルシクロヘキサンカルボキシレートスルホSMCC;N-スクシンイミジル4-ヨードアセチル-アミノベンゾエートSIAB;及びN-スクシンイミジル-[N-マレイミドプロピオンアミド-テトラエチレングリコール]エステルNHS-PEG4-マレイミドよりなる群から選択される請求項40記載のイムノコンジュゲート。該リンカーがN-スクシンイミジル-[N-マレイミドプロピオンアミド-テトラエチレングリコール]エステルNHS-PEG4-マレイミドである請求項41記載のイムノコンジュゲート。該細胞傷害剤がマイタンシノイド、マイタンシノイド類縁体、ドキソルビシン、修飾されたドキソルビシン、ベンゾジアゼピン、タキソイド、CC-1065、CC-1065類縁体、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類縁体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類縁体、アリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体又は該剤のプロドラッグよりなる群から選択される請求項31~32及び35~42の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート。該細胞傷害剤がマイタンシノイドである請求項43記載のイムノコンジュゲート。該細胞傷害剤がN2’-デアセチル-N2’-3-メルカプト-1-オキソプロピル-マイタンシンDM1又はN2’-デアセチル-N2-4-メルカプト-4-メチル-1-オキソペンチル-マイタンシンDM4である請求項44記載のイムノコンジュゲート。請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチド、又は請求項31~45の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート及び製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。イムノコンジュゲートがA当たりCを平均で約3~約4個有する請求項31~45の何れか1項に記載のイムノコンジュゲートを含む医薬組成物。イムノコンジュゲートがA当たりCを平均で約3.5個有する請求項41記載の医薬組成物。イムノコンジュゲートがA当たりCを平均で約3.5±0.5個有する請求項41記載の医薬組成物。第2の抗癌剤を更に含む請求項46~49の何れか1項に記載の医薬組成物。標識された請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチド、又は請求項31~45の何れか1項に記載のイムノコンジュゲートを含む診断試薬。該標識が放射標識、蛍光団、発色団、画像化剤及び金属イオンよりなる群から選択される請求項51記載の診断試薬。請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチド、請求項31~45の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート、又は請求項46~50の何れか1項に記載の医薬組成物を含むキット。対象に対して請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチド、請求項31~45の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート、又は請求項46~50の何れか1項に記載の医薬組成物に細胞を接触させることを含むCD37を発現する細胞の成育を阻害するための方法。対象に対して請求項1~24の何れか1項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、請求項25~28の何れか1項に記載のポリペプチド、請求項31~45の何れか1項に記載のイムノコンジュゲート、又は請求項46~50の何れか1項に記載の医薬組成物の治療有効量を癌を有する患者に投与することを含む該患者を治療するための方法。対象に対して第2の抗癌剤を投与することを更に含む請求項55記載の方法。該第2の抗癌剤が化学療法剤である請求項56記載の方法。該癌がB細胞リンパ腫、NHL、前駆性B細胞リンパ芽球性白血病/リンパ腫及び成熟B細胞新生物、B細胞慢性リンパ性白血病CLL/小リンパ球性リンパ腫SLL、B細胞前リンパ球性白血病、リンパプラズマ細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫MCL、濾胞性リンパ腫FL、低悪性度、中悪性度及び高悪性度FL、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯B細胞リンパ腫、MALT型辺縁帯B細胞リンパ腫、結節性辺縁帯B細胞リンパ腫、脾臓型辺縁帯B細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、ブルキットリンパ腫、プラズマ細胞腫、プラズマ細胞骨髄腫、移植後のリンパ増殖性障害、バルデンストレームマクログロブリン血症、及び未分化大細胞リンパ腫ALCLよりなる群から選択される請求項55~57の何れか1項に記載の方法。配列番号55~87よりなる群から選択される配列に少なくとも90同一であるポリペプチドをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド。該配列が配列番号55~87よりなる群から選択される配列に少なくとも95同一である請求項59記載の単離されたポリヌクレオチド。該配列が配列番号55~87よりなる群から選択される配列に少なくとも99同一である請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。ポリヌクレオチドが配列番号121~151に少なくとも90同一である配列を含む請求項59~61の何れか1項に記載の単離されたポリヌクレオチド。ポリヌクレオチドが配列番号121~151に少なくとも95同一である配列を含む請求項62記載の単離されたポリヌクレオチド。ポリヌクレオチドが配列番号121~151に少なくとも99同一である配列を含む請求項63記載の単離されたポリヌクレオチド。請求項59~64の何れか1項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。請求項65記載のベクターを含む宿主細胞。ヒトCD37に結合する新しい抗体、これらの抗体を含むイムノコンジュゲート、及びそれらの使用方法を本明細書に記載する。新しいポリペプチド、例えばヒトCD37に結合する抗体、そのような抗体のフラグメント、及びそのような抗体に関連する他のポリペプチドも提供される。ポリペプチドをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド、並びにポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。本発明のポリペプチド及び/又はポリヌクレオチドを含む細胞も更に提供される。新規なCD37抗体又はイムノコンジュゲートを含む組成物例えば医薬組成物も提供される。更に又、新規なCD37抗体又はイムノコンジュゲートを作成及び使用する方法、例えば腫瘍生育を抑制及び/又は癌を治療するために新規なCD37抗体又はイムノコンジュゲートを使用する方法も提供される。CD37に特異的に結合し、そして補体依存性細胞傷害CDCを誘導することができる抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態においては、抗体は又アポトーシス及び/又は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを誘発することもできる。抗体又はその抗原結合フラグメントは、a配列番号55のポリペプチド及び配列番号72のポリペプチドを含む抗体;b配列番号59のポリペプチド及び配列番号75のポリペプチドを含む抗体;c配列番号61のポリペプチド及び配列番号77のポリペプチドを含む抗体;d配列番号64のポリペプチド及び配列番号80のポリペプチドを含む抗体;e配列番号66のポリペプチド及び配列番号82のポリペプチドを含む抗体;f配列番号68のポリペプチド及び配列番号84のポリペプチドを含む抗体;及び、g配列番号70のポリペプチド及び配列番号86のポリペプチドを含む抗体;よりなる群から選択される抗体と同じCD37エピトープに特異的に結合するものであることができる。一部の実施形態においては、抗体又はその抗原結合フラグメントはCD37に特異的に結合し、そして配列番号180のポリペプチドに特異的に結合する。特定の実施形態においては、抗体又はその抗原結合フラグメントは配列番号184のポリペプチドに結合しない。一部の実施形態においては、抗体又はその抗原結合フラグメントはCD37に特異的に結合し、そして抗体又はそのフラグメントは、a配列番号55のポリペプチド及び配列番号72のポリペプチドを含む抗体;b配列番号59のポリペプチド及び配列番号75のポリペプチドを含む抗体;c配列番号61のポリペプチド及び配列番号77のポリペプチドを含む抗体;d配列番号64のポリペプチド及び配列番号80のポリペプチドを含む抗体;e配列番号66のポリペプチド及び配列番号82のポリペプチドを含む抗体;f配列番号68のポリペプチド及び配列番号84のポリペプチドを含む抗体;及び、g配列番号70のポリペプチド及び配列番号86のポリペプチドを含む抗体;よりなる群から選択される抗体を競合的に阻害する。特定の実施形態においては、抗体又はその抗原結合フラグメントは2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10664、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10665、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10666、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10667、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10668、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10669、及び、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10670よりなる群から選択されるハイブリドーマにより生産される。一部の実施形態においては、抗体又はその抗原結合フラグメントはCD37に特異的に結合し、そして抗体はa配列番号4、5及び6及び配列番号28、29及び30;b配列番号7、8及び9及び配列番号31、32及び33;c配列番号10、11及び12及び配列番号34、35及び36;d配列番号13、14及び15及び配列番号37、38及び39;e配列番号13、14及び15及び配列番号37、40及び39;f配列番号16、17及び18及び配列番号41、42及び43;g配列番号19、20及び21及び配列番号44、45及び46;h配列番号19、20及び21及び配列番号44、47及び46;i配列番号22、23及び24及び配列番号48、49及び50;j配列番号22、23及び24及び配列番号48、51及び50;k配列番号25、26及び27及び配列番号52、53及び54;及び、l保存的アミノ酸置換1、2、3又は4つを含むa~kの変異体;よりなる群から選択されるポリペプチド配列を含む。その他の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントはa配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択されるポリペプチド配列に少なくとも90同一であるか、少なくとも95同一であるか、少なくとも99同一であるか、又は同一であるポリペプチド配列を含む。一部の実施形態においては、抗体又はその抗原結合フラグメントはネズミ、非ヒト、ヒト化、キメラ、リサーフィシング化又はヒトのものである。一部の実施形態においては、抗体又は抗体フラグメントは架橋剤の非存在下にインビトロでCD37を発現する細胞のアポトーシスを誘導することができる。一部の実施形態においては、抗体又は抗原結合フラグメントは補体依存性細胞傷害CDCを誘導できる。更にその他の実施形態において、抗体又は抗原結合フラグメントは抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを誘導できる。他の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト又はヒト化のものであり、CD37に特異的に結合し、そして架橋剤の非存在下にインビトロでCD37を発現する細胞のアポトーシスを誘導することができる。その他の実施形態において、ヒト又はヒト化抗体又はその抗原結合フラグメントは又、補体依存性細胞傷害CDCを誘導でき、及び/又は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを誘導できる。更に他の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントはヒトCD37及びマカクCD37に結合する。一部の実施形態においては抗体又はその抗原結合フラグメントは完全長抗体又は抗原結合フラグメントである。抗体又はその抗原結合フラグメントはFab、Fab’、Fab’2、Fd、単鎖Fv即ちscFv、ジスルフィド連結Fv、V-NARドメイン、IgNar、イントラボディー、IgGΔCH2、ミニボディー、Fab3、テトラボディー、トリアボディー、ダイアボディー、単ドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、scFv2、又はscFv-Fcを含むことができる。他の実施形態において、CD37結合剤はCD37に特異的に結合するポリペプチドであり、そしてポリペプチドはa配列番号4、5及び6及び配列番号28、29及び30;b配列番号7、8及び9及び配列番号31、32及び33;c配列番号10、11及び12及び配列番号34、35及び36;d配列番号13、14及び15及び配列番号37、38及び39;e配列番号13、14及び15及び配列番号37、40及び39;f配列番号16、17及び18及び配列番号41、42及び43;g配列番号19、20及び21及び配列番号44、45及び46;h配列番号19、20及び21及び配列番号44、47及び46;i配列番号22、23及び24及び配列番号48、49及び50;j配列番号22、23及び24及び配列番号48、51及び50;k配列番号25、26及び27及び配列番号52、53及び54;及び、l保存的アミノ酸置換1、2、3又は4つを含むa~kの変異体;よりなる群から選択される配列を含む。他の実施形態において、CD37結合剤はCD37に特異的に結合するポリペプチドであり、そしてポリペプチドはa配列番号55及び配列番号72;b配列番号56及び配列番号73;c配列番号57及び配列番号74;d配列番号58及び配列番号74;e配列番号59及び配列番号75;f配列番号60及び配列番号76;g配列番号61及び配列番号77;h配列番号62及び配列番号78;i配列番号63及び配列番号79;j配列番号64及び配列番号80;k配列番号65及び配列番号81;l配列番号66及び配列番号82;m配列番号67及び配列番号83;n配列番号68及び配列番号84;o配列番号69及び配列番号85;p配列番号70及び配列番号86;及びq配列番号71及び配列番号87;よりなる群から選択される配列に少なくとも90同一であるか、少なくとも95同一であるか、少なくとも99同一であるか、又は同一である配列を含む。抗体又はその抗原結合フラグメント又はポリペプチドを生産する細胞もまた本明細書に記載した方法に従って作成及び使用することができる。方法はaそのようなCD37結合剤を生産する細胞を培養すること;及びb培養細胞から抗体、その抗原結合フラグメント、又はポリペプチドを単離することを含む抗体又はその抗原結合フラグメント又はポリペプチドの作成方法を提供する。一部の実施形態においては、CD37結合剤は式A-L-Cを有するイムノコンジュゲートであり、式中:AはCD37結合剤であり;Lはリンカーであり;そして、Cは細胞傷害剤であり;そして、リンカーLはAをCに連結させる。一部の実施形態においては、CD37結合剤は式A-L-Cを有するイムノコンジュゲートであり、式中:AはCD37に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであり;Lは切断不可能なリンカーであり;そして、Cは細胞傷害剤であり;そして、リンカーLはAをCに連結させる。一部の実施形態においては、CD37結合剤は式A-L-Cを有するイムノコンジュゲートであり、式中:AはCD37に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであり;Lはリンカーであり;そして、Cはマイタンシノイドであり;そして、リンカーLはAをCに連結させる。イムノコンジュゲートリンカーは切断不可能なリンカーであることができる。リンカーは切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、及びジカルボン酸系リンカーよりなる群から選択することができる。リンカーはN-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオペンタノエートSPP;N-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオブタノエートSPDB又はN-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオ-2-スルホブタノエートスルホ-SPDB;N-スクシンイミジル4-マレイミドメチルシクロヘキサンカルボキシレートSMCC;N-スルホスクシンイミジル4-マレイミドメチルシクロヘキサンカルボキシレートスルホSMCC;N-スクシンイミジル4-ヨードアセチル-アミノベンゾエートSIAB;及びN-スクシンイミジル-[N-マレイミドプロピオンアミド-テトラエチレングリコール]エステルNHS-PEG4-マレイミドよりなる群から選択することができる。リンカーはN-スクシンイミジル-[N-マレイミドプロピオンアミド-テトラエチレングリコール]エステルNHS-PEG4-マレイミドであることができる。細胞傷害剤はマイタンシノイド、マイタンシノイド類縁体、ドキソルビシン、修飾されたドキソルビシン、ベンゾジアゼピン、タキソイド、CC-1065、CC-1065類縁体、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類縁体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類縁体、アリスタチン、トマイマイシン誘導体、及びレプトマイシン誘導体又は剤のプロドラッグよりなる群から選択することができる。細胞傷害剤はマイタンシノイドであることができる。該細胞傷害剤はN2’-デアセチル-N2’-3-メルカプト-1-オキソプロピル-マイタンシンDM1又はN2’-デアセチル-N2-4-メルカプト-4-メチル-1-オキソペンチル-マイタンシンDM4であることができる。本明細書において同様に提供されるものは、CD37結合剤及び製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物である。医薬組成物は第2の抗癌剤を含むことができる。標識されたCD37結合剤を含む診断試薬も本明細書において提供される。標識は放射標識、蛍光団、発色団、画像化剤及び金属イオンよりなる群から選択される。更に提供されるものはCD37結合剤を含むキットである。本明細書に記載する方法はCD37結合剤又はそれを含む医薬組成物に細胞を接触させることを含むCD37を発現する細胞の成育を阻害するための方法を包含する。方法は又、CD37結合剤又はそれを含む医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む癌を有する患者を治療するための方法を提供する。方法は対象に第2の抗癌剤を投与することを含むことができる。第2の抗癌剤は化学療法剤であることができる。癌はB細胞リンパ腫、NHL、前駆性B細胞リンパ芽球性白血病/リンパ腫及び成熟B細胞新生物、B細胞慢性リンパ性白血病CLL/小リンパ球性リンパ腫SLL、B細胞前リンパ球性白血病、リンパプラズマ細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫MCL、濾胞性リンパ腫FL、低悪性度、中悪性度及び高悪性度FL、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯B細胞リンパ腫、MALT型辺縁帯B細胞リンパ腫、結節性辺縁帯B細胞リンパ腫、脾臓型辺縁帯B細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、ブルキットリンパ腫、プラズマ細胞腫、プラズマ細胞骨髄腫、移植後のリンパ増殖性障害、バルデンストレームマクログロブリン血症、及び未分化大細胞リンパ腫ALCLよりなる群から選択される癌であることができる。配列番号55~87よりなる群から選択される配列に少なくとも90同一であるか、少なくとも95同一であるか、少なくとも99同一であるか、又は同一であるポリペプチドをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドもまた本明細書において提供される。ポリヌクレオチドは配列番号121~151に少なくとも90、少なくとも95同一であるか、少なくとも99同一であるか、又は同一である配列を含むことができる。ベクター及びこのようなポリヌクレオチド及びベクターを含む宿主細胞もまた本明細書において提供される。本発明はCD37発現例えば陽性細胞に対抗する以下の3つの細胞傷害活性:アポトーシスの誘導、ADCC及びCDCにおいて高い力価を有するCD37結合分子の新しいクラスを提供する。更に又、インビボの腫瘍モデルを用いて明らかにされる通り、抗CD37抗体のイムノコンジュゲートは意外にも良好にCD37発現細胞を殺傷する。1.定義本発明の理解を容易にするために、多くの用語及びフレーズを以下に定義する。CD37という用語は、本明細書において使用する場合、特段の記載が無い限り、何れかのネイティブのCD37を指す。CD37は又GP52-40、白血球抗原CD37、及びテトラスパニン-26とも称される。CD37という用語は完全長の未プロセシングのCD37並びに細胞中でのプロセシングの結果として生じるCD37の何れかの形態を包含する。用語は又CD37の天然に存在する変異体、例えばスプライス変異体、対立遺伝子変異体及びアイソフォームを包含する。本明細書に記載するCD37ポリペプチドは種々の原料、例えばヒト組織型から、又は、他の原料から単離することができ、或いは、組み換え又は合成の方法により調製できる。抗体という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内部の抗原認識部位少なくとも1つを介して、蛋白、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質又はこれらの組み合わせのような標的を認識して特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書において使用する場合、抗体という用語は未損傷のポリクローナル抗体、未損傷のモノクローナル抗体、抗体フラグメント例えばFab、Fab’、Fab’2、及びFvフラグメント、単鎖FvscFv突然変異体、少なくとも2つの未損傷抗体から形成された二重特異性抗体のような多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合蛋白、及び、抗体が所望の生物学的活性を呈する限りにおいて、抗原認識部位を含むいずれかの他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ及びミューと称される自身の重鎖定常ドメインのアイデンティティーに基づいて、免疫グロブリンの5主要クラス:IgA、IgD、IgE、IgG及びIgM、又はそのサブクラスアイソタイプ例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2の何れかであることができる。異なるクラスの免疫グロブリンは異なる良く知られたサブユニット構造及び三次元配置を有する。抗体はネイキッドであるか、毒素、放射性同位体等のような他の分子にコンジュゲートされていることができる。ブロッキング抗体又は拮抗剤抗体とはCD37のような自身が結合する抗原の生物学的活性を阻害又は低減するものである。一部の実施形態においてはブロッキング抗体又は拮抗剤抗体は抗原の生物学的活性を実質的に、又は完全に阻害する。生物学的活性は10、20、30、50、70、80、90、95、又は100までも低減することができる。抗CD37抗体又はCD37に結合する抗体という用語はCD37をターゲティングする場合において診断薬及び/又は治療剤として抗体が有用であるように、十分な親和性を持ってCD37に結合することができる抗体を指す。未関連の非CD37への抗CD37抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイRIAにより計測した場合にCD37への抗体の結合の約10未満であることができる。特定の実施形態においてはCD37に結合する抗体は≦1μM、≦100nM、≦10nM、≦1nM、又は≦0.1nMの解離定数Kdを有する。抗体フラグメントという用語は未損傷の抗体の一部分を指し、そして未損傷の抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体フラグメントの例は、Fab、Fab’、Fab’2、及びFvフラグメント、線状抗体、単鎖抗体、及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体を包含するがこれらに限定されない。モノクローナル抗体とは単一の抗原決定基、即ちエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均質な抗体集団を指す。これは種々異なる抗原決定基に対して指向された種々異なる抗体を典型的には包含しているポリクローナル抗体とは対照的である。モノクローナル抗体という用語は未損傷及び完全長のモノクローナル抗体、並びに抗体フラグメントFab、Fab’、Fab’2、Fv、単鎖scFv突然変異体、抗体部分を含む融合蛋白、及び抗原認識部位を含む何れかの他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。更に又、モノクローナル抗体とはハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、及びトランスジェニック動物による方法を包含するがこれらに限定されない態様の何れかにより作成された抗体を指す。ヒト化抗体という用語は最小限の非ヒト例えばネズミ配列を含有する特異的な免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、又はそのフラグメントである非ヒト例えばネズミ抗体の形態を指す。典型的にはヒト化抗体は所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種例えばマウス、ラット、ウサギ、ハムスターのCDRに由来する残基により、相補性決定領域CDR由来の残基が置き換えられているヒト免疫グロブリンである。一部の例においては、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク領域FR残基が所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種由来抗体中の相当する残基で置き換えられている。ヒト化抗体は更に抗体の特異性、親和性及び/又は能力を精鋭化及び最適化するためにFvフレームワーク内及び/又は置き換えられた非ヒト残基内部における追加的残基の置換により修飾できる。一般的にヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに相当するCDR領域の全て又は実質的に全てを含有する可変ドメイン少なくとも1つ、そして典型的には2つ又は3つの実質的に全てを含むことになり、一方FR領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は又、免疫グロブリン定常領域又はドメインFcの少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むこともできる。ヒト化抗体を形成するために使用される方法の例は米国特許5,225,539に記載されている。抗体の可変領域とは単独又は組み合わせにおいて、抗体軽鎖の可変領域又は抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖及び軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られている3つの相補性決定領域CDRにより連結された4つのフレームワーク領域FRよりなる。各鎖におけるCDRはFRにより近接して共に保持されており、そして他の鎖のCDRと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。CDRを決定するためには少なくとも2つの手法、即ち:1種間の配列変動性に基づくアプローチ即ちKabat等、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest;及び2抗原-抗体複合体の結晶学的研究に基づいたアプローチAllazikanietalJMolecBiol273927948が存在する。更に又、これらの2つのアプローチの組み合わせがCDRを決定するために当該分野で使用される場合もある。Kabatナンバリングシステムは一般的に可変ドメイン内の残基概ね、軽鎖の残基1~107及び重鎖の残基1~113を指す場合に使用される例えばKabat等、SequencesofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMd。Kabatの場合のアミノ酸位置のナンバリングはKabat等、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMdにおける抗体のコンピレーションの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに対して使用されるナンバリングシステムである。このナンバリングシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は可変ドメインのFR又はCDRの短鎖化、又はそれへの挿入に相当する、より少数又は追加のアミノ酸を含有する場合がある。例えば、重鎖可変ドメインはH2の残基52の後の単一のアミノ酸の挿入Kabatによる残基52a及び重鎖FR残基82の後の挿入残基例えばKabatによる残基82a、82b及び82c等を包含する場合がある。残基のKabatナンバリングは標準的Kabatナンバリングされた配列との、抗体の配列の相同性の領域におけるアライメントにより所定の抗体について決定することができる。Chothiaは代わりに構造ループの箇所を指しているChothiaandLeskJMolBiol196901917。Kabatのナンバリング法を用いてナンバリングした場合のChothiaのCDR-H1ループの終点はループの長さによりH32とH34の間で変動するその理由はKabatのナンバリング法はH35AとH35Bに挿入を置いており;35Aと35Bの何れも存在しない場合はループは32で終点となり;35Aのみが存在する場合は、ループは33で終点隣;35Aと35Bの両方が存在する場合は、ループは34で終点となる。AbM超可変領域はKabatのCDRとChothiaの構造ループの間の妥協点を示しており、OxfordMolecular’sAbM抗体モデリングソフトウエアにより使用されている。ヒト抗体という用語は、ヒトにより作成された抗体、又は当該分野で知られている何れかの手法を用いて人工的に生成された抗体に相当するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義は、未損傷又は完全長の抗体、そのフラグメント、及び/又は少なくとも1つのヒト重鎖及び/又は軽鎖のポリペプチドを含む抗体、例えばネズミ軽鎖及びヒト重鎖のポリペプチドを含む抗体を包含する。キメラ抗体という用語は免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が2つ以上の種から誘導されている抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性及び能力を有する哺乳類の1種例えばマウス、ラット、ウサギ等から誘導された抗体の可変領域に相当し、そして、定常領域はその種における免疫応答を誘発することを回避するために別のもの通常はヒトから誘導された抗体中の配列に相同である。エピトープ又は抗原決定基という用語は、本明細書においては互換的に使用され、そして特定の抗体により認識され、そして特異的に結合されることができる抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは蛋白の3次折り畳みにより並置された連続アミノ酸及び非連続アミノ酸の両方から形成できる。連続アミノ酸から形成されたエピトープは典型的には蛋白変性時に保持されるのに対し、3次折り畳みにより形成されるエピトープは典型的には蛋白変性時に消失する。エピトープは典型的には少なくとも3つ、そしてより普通には少なくとも5又は8~10個のアミノ酸をユニークな空間的コンホーメーションにおいて包含している。結合親和性とは一般的に、分子例えば抗体の単一の結合部位とその結合相手例えば抗原との間の非共有結合的な相互作用の総計の強度を指す。特段の記載が無い限り、本明細書において使用する場合、結合親和性とは結合対のメンバー例えば抗体と抗原の間の1:1相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子Xのその相手Yに対する親和性は一般的に解離定数Kdにより表すことができる。親和性は本明細書に記載する者を含めて当該分野で知られている一般的方法により計測できる。低親和性の抗体は一般的に緩徐に抗原に結合し、そして容易に解離する傾向があるのに対し、高親和性の抗体は一般的に急速に抗原に結合し、そしてより長時間結合したままとなる傾向を有する。結合親和性を計測するための種々の方法が当該分野で知られており、それらのいずれも本発明の目的のために使用できる。特定の例示される実施形態は後述するとおりである。より良好とは本明細書において使用する場合、分子とその結合相手との間のより強い結合を指す。より良好とは本明細書において使用する場合、より小さい数のKd値により表されるより強い結合を指す。例えば、0.6nMより良好な抗原に対する親和性を有する抗体について、その抗原に対する抗体の親和性は<0.6nM、即ち0.59nM、0.58nM、0.57nM、等、又は0.6nM未満の何れかの値である。特異的に結合するとは、一般的に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び、結合が抗原結合ドメインとエピトープの間の何らかの相補性を必要とすることを意味する。この定義によれば、抗体は、それがランダムの未関連エピトープに結合するよりも更に容易にその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する場合にそのエピトープに特異的に結合すると言うことができる。特異的にという用語は本明細書においては、特定の抗体を特定のエピトープに結合させている相対的な親和性を評定するために使用する。例えば抗体Aはあるエピトープに対して抗体Bよりも高値の特異性を有すると考えてよく、或いは、抗体Aはそれが関連するエピトープDに対して有するよりも高値の特異性でエピトープC部に結合すると考えてよい。優先的に結合するとは、抗体があるエピトープに対し、関連する同様の相同又は類縁のエピトープに結合するよりも、より容易に特異的に結合することを意味する。即ち、あるエピトープに優先的に結合する抗体は、そのような抗体が関連エピトープに交差反応してもよいが、関連エピトープよりもそのエピトープにより結合しやすい。抗体は、レファレンス抗体のあるエピトープへの結合をある程度までブロックする域にまでそのエピトープに優先的に結合する場合に、そのエピトープへのレファレンス抗体の結合を競合的に阻害すると言える。競合的阻害は当該分野で知られている何れかの方法、例えば競合的ELISAアッセイにより測定してよい。抗体は、レファレンス抗体のあるエピトープへの結合を少なくとも90、少なくとも80、少なくとも70、少なくとも60、又は少なくとも50競合的に阻害すると言ってよい。実質的に同様又は実質的に同じというフレーズは、本明細書において使用する場合、当業者が2つの値の間の差が、その値例えばKd値により計測される生物学的特性の範囲内において生物学的及び/又は統計学的な有意性を殆ど又は全く有さないと考えるような、2つの数値一般的に1つは本発明の抗体に関連するものであり、もう1つはレファレンス/コンパレーター抗体に関連するものの間の十分高度な同様性を意味する。該2つの値の間の差は、レファレンス/コンパレーター抗体の値の関数として、約50未満、約40未満、約30未満、約20未満、約10未満であることができる。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物は、自然界で観察されない形態となっているポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物はそれらが自然界で観察される形態にはそれらがもはやなりえない程度にまで精製されているものを包含する。一部の実施形態においては、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は実質的に純粋である。本明細書において使用する場合、実質的に純粋とは少なくとも50純粋即ち夾雑物が存在しない、少なくとも90純粋、少なくとも95純粋、少なくとも98純粋、少なくとも99純粋である物質を指す。イムノコンジュゲート又はコンジュゲートという用語は本明細書において使用する場合、細胞結合剤即ち抗CD37抗体又はそのフラグメントに連結された化合物又はその誘導体を指し、そして包括的な式:C-L-Aにより定義され、式中、C=細胞傷害物質、L=リンカー、そしてA=細胞結合剤又は抗CD37抗体又は抗体フラグメントである。イムノコンジュゲートは又、逆順序の包括的な式:A-L-Cによっても定義できる。リンカーとは安定な共有結合の態様において抗CD37抗体又はそのフラグメントのような細胞結合剤に、通常はマイタンシノイドのような薬物を連結することができる何れかの化学的部分である。リンカーは化合物又は抗体が活性であり続けられる条件において、酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断、及びジスルフィド結合切断に対して感受性であるか、又は実質的に抵抗性であることができる。適当なリンカーは当該分野で良く知られており、そして例えばジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基及びエステラーゼ不安定基を包含する。リンカーは又本明細書に記載する、そして当該分野で知られている荷電リンカー、及びその親水性形態を包含する。癌及び癌性のという用語は細胞集団が制御不可能な細胞生育を特徴とする哺乳類における生理学的状態を指すか、これを説明するものである。癌の例は癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、及び白血病を包含するが、これらに限定されない。腫瘍及び新生物は前癌患部を包含する良性非癌性又は悪性癌性の何れかの過剰な細胞の生育又は増殖に起因する1つ以上の細胞を指す。治療及び/又は防止することができる癌又は腫瘍形成性疾患の例は、B細胞リンパ腫、例えばNHL、前駆性B細胞リンパ芽球性白血病/リンパ腫及び成熟B細胞新生物、例えばB細胞慢性リンパ性白血病CLL/小リンパ球性リンパ腫SLL、B細胞前リンパ球性白血病、リンパプラズマ細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫MCL、濾胞性リンパ腫FL、例えば低悪性度、中悪性度及び高悪性度FL、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯B細胞リンパ腫MALT型、結節型性及び脾臓型、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、ブルキットリンパ腫、プラズマ細胞腫、プラズマ細胞骨髄腫、移植後のリンパ増殖性障害、バルデンストレームマクログロブリン血症、及び未分化大細胞リンパ腫ALCLを包含する。癌細胞、腫瘍細胞という用語及び文法的等価表現は、腫瘍細胞集団の塊状物を含む非腫瘍形成性細胞及び腫瘍形成性幹細胞癌幹細胞の両方を包含する腫瘍又は前癌性の患部から誘導された細胞の総集団を指す。本明細書において使用する場合、腫瘍細胞という用語は、癌幹細胞からそれらの腫瘍細胞を区別できるように更新及び分化する能力を欠いている腫瘍細胞のみを指す場合には、非腫瘍形成性という用語により修飾されることになる。対象という用語は、特定の治療のレシピエントとなるべきヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類等を包含するがこれらに限定されない何れかの動物例えば哺乳類を指す。典型的には、対象及び患者という用語は、ヒト対象に言及する場合には本明細書においては互換的に使用される。1つ以上の他の治療剤と組み合わせた投与とは、同時並行及び何れかの順序における連続投与を包含する。医薬品製剤という用語は活性成分の生物学的活性を有効とする形態にあり、そして、製剤を投与する対象に対して許容できない程度毒性である追加的成分を含有しない調製物を指す。製剤は滅菌されることができる。本明細書に開示する抗体の有効量とは特に記載された目的を実施するために十分な量である。有効量は記載された目的に関連して、実験的に、そして定型的な態様において決定できる。治療有効量という用語は対象又は哺乳類における疾患又は障害を治療するために有効な抗体又は他の薬物の量を指す。癌の場合は、薬物の治療有効量はがん細胞の数を低減し;腫瘍の大きさを低減し;周辺臓器内部への癌細胞の浸潤を阻害し即ちある程度まで緩徐化するか停止させ;腫瘍の転移を阻害し即ちある程度まで緩徐化するか停止させ;腫瘍の生育をある程度まで阻害し;及び/又は癌に関連する症状の1つ以上をある程度まで緩和することができる。本明細書における治療することの定義を参照できる。薬物が既存の癌細胞を生育を防止できる限り、それらは細胞増殖抑制性及び/又は細胞傷害性であることができる。予防有効量とは所望の予防結果を達成するために、必要な投薬量において必要な期間に渡り、有効な量を指す。必然的にではないが典型的には、予防用量は疾患の前、又は早期の段階において対象において使用されるため、予防有効量は治療有効量より低値となる。標識という用語は本明細書において使用する場合、標識された抗体を形成するべく抗体に直接又は間接的にコンジュゲートされる検出可能な化合物又は組成物を指す。標識はそれ自体検出されることができる例えば放射性同位体標識又は蛍光標識か、又は、酵素標識の場合は、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的改変を触媒することができる。化学療法剤とは作用機序に関わらず、癌の治療において有用な化学的化合物である。化学療法剤は例えば、CD20の拮抗剤、例えばリツキシマブ及びシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニソン、フルダラビン、エトポシド、メトトレキセート、レナリドミド、クロラムブシル、ベンタムスチン、及び/又はこのような化学療法剤の修飾されたバージョンを包含する。治療すること又は治療又は治療するため又は軽減すること又は軽減するため等の用語は、1診断された病理学的状態又は障害の症状の治癒、緩徐化、減少、及び/又は進行の停止を行う治療手段、及び2ターゲティングされた病理学的状態又は障害の発症を防止及び/又は緩徐化する予防的又は防止的な手段の両方を指す。即ち、治療を必要とするものは、障害を既に有する者;障害を有し易い者;及び障害を防止すべき者を包含する。特定の実施形態においては、対象は患者が以下:癌細胞の数の減少又は完全な非存在;腫瘍の大きさの低減;例えば軟組織及び骨内部への癌の拡張を包含する周辺臓器内部への癌細胞の浸潤の阻害又は非存在;腫瘍転移の阻害又は非存在;腫瘍生育の阻害又は非存在;特定の癌に関連する症状1つ以上の緩解;罹患率及び死亡率の低減;クオリティーオブライフの向上;腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、又は腫瘍形成能力の低減;腫瘍中の癌幹細胞の数又は頻度の低減;腫瘍形成性細胞の非腫瘍形成性状態への分化;又は作用の何らかの組み合わせの1つ以上を呈する場合に本発明の方法に従って癌に関して良好に治療される。本明細書において互換的に使用されるポリヌクレオチド又は核酸とは、何れかの長さのヌクレオチドの重合体を指し、そしてDNA及びRNAを包含する。ヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド又は塩基、及び/又はそれらの類縁体、又はDNA又はRNAポリメラーゼにより重合体内に取り込まれることができる何れかの基質であることができる。ポリヌクレオチドは修飾されたヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びそれらの類縁体を含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造の修飾は重合体の組み立ての前又は後に行うことができる。ヌクレオチドの配列は非ヌクレオチド成分により中断されていることができる。ポリヌクレオチドは重合の後に、例えば標識成分とのコンジュゲーションにより更に修飾されることができる。他の型の修飾は、例えばキャップ、天然に存在するヌクレオチド1つ以上の類縁体による置換、ヌクレオチド間修飾、例えば未荷電連結部例えばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カーバメート等及び荷電連結部例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等を有するもの、例えば蛋白のような懸垂部分を含有するもの例えばヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ-L-リジン等、インターカレーターを有する者例えばアクリジン、ソラレン等、キレート形成剤を含有するもの例えば金属、放射活性金属、ホウ素、酸化性金属等、アルキル化剤を含有するもの、修飾された連結部を有するもの例えばアルファアノマー核酸等並びにポリヌクレオチドの未修飾の形態を包含する。更に又、糖に元から存在するヒドロキシル基の何れかを例えばホスホネート基、ホスフェート基で置き換えるか、標準的な保護基で保護するか、又は活性化して別のヌクレオチドへの別の連結部を調製することができ、又は固体支持体にコンジュゲートすることができる。5’及び3’末端のOHはホスホリル化するか、又は、アミン又は炭素原子1~20個の有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化することができる。ポリヌクレオチドは又、当該分野で一般的に知られているリボース又はデオキシリボースの糖の類縁体型、例えば2’-O-メチル-、2’-O-アリル、2’-フルオロ-又は2’-アジド-リボース、カルボキシル糖類縁体、アルファアノマー型糖、エピマー型糖、例えばアラビノース、キシロース又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類縁体及び無塩基のヌクレオシド類縁体、例えばメチルリボーシドを含有できる。1つ以上のホスホジエステル連結部を代替の連結基で置き換えることができる。このような代替の連結基はホスフェートがPOSチオエート、PSSジチオエート、ONR2アミデート、POR、POOR’、CO又はCH2ホルムアセタールである実施形態を包含するがこれらに限定されず、式中各々のR又はR’は独立してH又は置換又は未置換の場合によりエーテル-O-連結部を含有するアルキル1-20C、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル又はアラルキルである。ポリヌクレオチド中の全ての連結部が必ずしも同一である必要はない。以上の記載はRNA及びDNAを包含する本明細書において言及する全てのポリヌクレオチドに適用される。ベクターという用語は宿主細胞中に1つ以上の遺伝子又は配列を送達及び場合により発現することができるコンストラクトを意味する。ベクターの例はウィルスベクター、ネイキッドDNA又はRNA発現ベクター、プラスミド、コスミド又はファージベクター、カチオン性縮合剤に会合したDNA又はRNA発現ベクター、リポソーム内にカプセル化されたDNA又はRNA発現ベクター、及び特定の真核生物の細胞、例えばプロデューサー細胞を包含するがこれらに限定されない。ポリペプチド、ペプチド及び蛋白という用語は本明細書においては何れかの長さのアミノ酸の重合体を指すために互換的に使用される。重合体は直鎖又は分枝鎖であることができ、修飾されたアミノ酸を含むことができ、そして非アミノ酸により中断されることができる。用語は又、天然に、又は介入、例えばジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、ホスホリル化、又は他の何れかの操作又は修飾、例えば標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されているアミノ酸重合体を包含する。同様に包含されるものは、例えばアミノ酸の類縁体1つ以上例えば非天然のアミノ酸等を包含並びに他の当該分野で知られている修飾を含有するポリペプチドである。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているため、特定の実施形態においては、ポリペプチドは単鎖又は会合している鎖として存在することができる。2つ以上の核酸又はポリペプチドの文脈における同一又はパーセント同一性という用語は、配列同一性の部分として如何なる保存的アミノ酸置換も考慮しない場合に、最大相応が得られるように比較してアライン必要に応じてギャップを導入した場合に、同じであるか、又は同じであるヌクレオチド又はアミノ酸残基の特定のパーセンテージを有する2つ以上の配列又はサブ配列を指す。パーセント同一性は配列比較ソフトウエア又はアルゴリズムを用いながら、又は目視による検査により計測できる。アミノ酸又はヌクレオチド配列のアライメントを得るために使用できる種々のアルゴリズム及びソフトウエアが当該分野で知られている。そのような配列アライメントアルゴリズムの非限定的な例は、Karlin等、1993ProcNatlAcadSci9058735877により変更され、NBLAST及びXBLASTプログラムに組み込まれたKarlinetal1990ProcNatlAcadSci8722642268に記載されているアルゴリズムである。特定の実施形態においてはGappedBLASTをAltschul等、1997NucleicAcidsRes2533893402に記載の通り使用できる。BLAST-2、WU-BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2又はMegalignDNASTARは配列をアラインするために使用できる別の好適に入手できるソフトウエアプログラムである。特定の実施形態においては、2つのヌクレオチド配列の間のパーセント同一性は、GCGソフトウエアにおけるGAPプログラムを用いながら例えばNWSgapdna.CMPマトリックス及びギャップウエイト40、50、60、70又は90及びレングスウエイト1、2、3、4、5及び6を用いながら求められる。特定の代替の実施形態においては、NeedlemanandWunsch444453のアルゴリズムを組み込んだGCGソフトウエアパッケージにおけるGAPプログラムを用いることにより2つのアミノ酸配列の間のパーセント同一性を求めることができる例えばBlossum62マトリックス又はPAM250マトリックス及びギャップウエイト16、14、12、10、8、6又は4及びレングスウエイト1、2、3、4、5を用いる。あるいは特定の実施形態においては、ヌクレオチド又はアミノ酸配列の間のパーセント同一性はMyersandMillerのアルゴリズムを用いながら求める。例えばパーセント同一性はALIGNプログラムバージョン2.0を用いながら、そして、残基表を伴ったPAM120、ギャップレングスペナルティー12及びギャップペナルティー4を用いながら、求めることができる。特定のアライメントソフトウエアによる最大のアライメントのための適切なパラメーターは当業者が決定できる。特定の実施形態においては、アライメントソフトウエアのデフォルトパラメーターを使用する。特定の実施形態においては、第1のアミノ酸配列の第2の配列に対するパーセンテージ同一性Xは100×Y/Zとして計算され、式中、Yは第1及び第2の配列のアライメント目視検査によるか特定の配列アライメントプログラムによりアラインした場合における同一マッチとして採点されたアミノ酸残基の数であり、そしてZは第2の配列中の残基の総数である。第1の配列の長さが第2の配列より長い場合、第2の配列に対する第1の配列のパーセント同一性は第1の配列に対する第2の配列のパーセント同一性より長くなることになる。非限定的な例として、何れかの特定のポリヌクレオチドが、レファレンス配列に対して特定のパーセント配列同一性を有する例えば少なくとも80同一、少なくとも85同一、少なくとも90同一、そして一部の実施形態においては少なくとも95、96、97、98、又は99同一かは、特定の実施形態においては、Bestfitプログラムを用いて測定できるWisconsinSequenceAnalysisPackageVersion8forUnix登録商標GeneticsComputerGroupUniversityResearchPark575ScienceDriveMadisonWI53711。Festfitは2つの配列の間の相同性の最良セグメントを見つけるためにSmithandWatermanAdvancesinAppliedMathematics2482489のローカルホモロジーアルゴリズムを使用している。Bestfit及び何れかの他の配列アライメントプログラムを用いることにより本発明に従って特定の配列がレファレンス配列に対して例えば95同一であるかどうかを調べる場合、パラメーターは、同一性のパーセンテージがレファレンスヌクレオチド配列の完全長に渡って計算されるように、そしてレファレンス配列におけるヌクレオチドの総数の5までの相同性におけるギャップが許容されるように設定する。一部の実施形態においては、本発明の2つの核酸又はポリペプチドは、配列比較アルゴリズムを用いるか、又は目視検査により計測した場合に最大相応が得られるように比較してアラインした場合に、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、そして一部の実施形態においては少なくとも95、96、97、98、又は99のヌクレオチド又はアミノ酸残基の同一性を有することを意味するべく、実質的に同一という。同一性は少なくとも約10、約20、約40~60残基長の、又はその間の何れかの整数値である配列の領域に渡って存在することができ、そして60~80残基より長い領域、例えば少なくとも約90~100残基に渡ることもでき、そして一部の実施形態においては、配列は例えばヌクレオチド配列のコドン領域のように、比較される配列の完全長に渡って実質的に同一である。保存的アミノ酸置換とは1つのアミノ酸残基が同様の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられているものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該分野で定義されており、例えば、塩基性側鎖例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン、酸性側鎖例えばアスパラギン酸、グルタミン酸、未荷電極性側鎖例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、非極性側鎖例えばアラニン、バアリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、ベータ分枝側鎖例えばスレオニン、バリン、イソロイシン及び芳香族側鎖例えばチロシン、ゲニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジンを包含する。例えば、チロシンに対するフェニルアラニンの置換は保存的置換である。一部の実施形態においては、本発明のポリペプチド及び抗体の配列における保存的置換は、そのアミノ酸配列を含有するポリペプチド又は抗体の、ポリペプチド又は抗体が結合する抗原、即ちCD37への結合を消失させない。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を識別するための方法は当該分野で良く知られている例えばBrummell等、Biochem3211801187Kobayashi等、ProteinEng12879884;及びBurks等、ProcNatlAcadSciUSA94412417を参照。本開示及び請求項において使用する場合、ある~、そしてその~という単数標記は、特段の記載が無い限り複数標記も包含するものとする。含むという表現で実施形態を本明細書に記載する場合は常時、よりなる及び/又はより本質的になると言う用語において説明する別様の類似の実施形態も提供されるものと理解しなければならない。本明細書においてA及び/又はB等のフレーズにおいて使用する場合の及び/又はという用語はA及びB、A又はB、A及びBの何れをも包含することを意図している。同様にA、B及び/又はCというフレーズにおいて使用する場合の及び/又はという用語は、以下の実施形態:A、B及びC;A、B又はC;A又はC;A又はB;B又はC;A及びC;AoyobiB;B及びC;A単独;B単独;及びC単独の各々を包含することを意図している。II.CD37結合剤本発明はCD37に特異的に結合する剤を提供する。これらの剤は本明細書においては、CD37結合剤と称する。ヒト、マカカ、及びネズミCD37に関する完全長アミノ酸配列は当該分野で知られており、そしてそれぞれ配列番号1~3で示されるとおり、本明細書において提供される。ヒトCD37:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLAYRマカカCD37:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVILGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGVFTMGLALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLQDIVEKTIQRYHTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHSPQDWFQVLTLRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGQLARSRHSTDICAVPANSHIYREGCARSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLRYRネズミCD37NP_031671MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGGLIFCFGTWILIDKTSFVSFVGLSFVPLQTWSKVLAVSGVLTMALALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPFVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGPRAKLRQTADICALPAKAHIYREGCAQSLQKWLHNNIISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYDRLARYR一部の実施形態においては、CD37結合剤は抗体、イムノコンジュゲート又はポリペプチドである。一部の実施形態においては、CD37結合剤はヒト化抗体である。特定の実施形態においては、CD37結合剤は以下の作用、即ち:腫瘍細胞の増殖の阻害、腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低減することにより腫瘍の腫瘍形成性の低減、腫瘍生育の阻害、生存率の増大、腫瘍細胞の細胞死のトリガー、腫瘍形成性細胞から非腫瘍形成性状態への分化、又は腫瘍細胞の転移の防止、の1つ以上を有する。特定の実施形態においては、CD37結合剤は補体依存性細胞傷害を誘導することができる。例えば、CD37結合剤の細胞への投与は未投与細胞の細胞生存性の約80未満、約70未満、約60未満、約50未満、約40未満又は約35未満まで細胞生存性を低減させるCDC活性をもたらすことができる。CD37結合剤の細胞への投与は又、未投与細胞の細胞生存性の約70~80、約60~70、約50~60、約40~50、又は約30~40まで細胞生存性を低減させるCDC活性をもたらすことができる。一部の特定の実施形態においては、CD37結合剤はRamos細胞において補体依存性細胞傷害を誘発することが可能である。特定の実施形態においては、CD37結合剤は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを誘導することができる。例えば、CD37結合剤の細胞への投与は少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25、少なくとも約30、少なくとも約35、少なくとも約40、少なくとも約45、少なくとも約50、又は少なくとも約60の細胞溶解を生じさせるADCC活性をもたらすことができる。CD37結合剤の細胞への投与は約10~20、約20~30、約30~40、又は約40~50の細胞溶解を生じさせるADCC活性をもたらすことができる。CD37結合剤の細胞への投与は又、約10~50、約20~50、約30~50、又は約40~50の細胞溶解を生じさせるADCC活性をもたらすことができる。一部の特定の実施形態においては、CD37結合剤はDaudi、Ramos及び/又はGranta-519細胞においてADCCを誘導することができる。一部の実施形態においては、CD37結合剤はアポトーシスを誘導することができる。例えば、CD37結合剤の細胞への投与は少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25、少なくとも約30、少なくとも約35、少なくとも約40、少なくとも約45、少なくとも約50、又は少なくとも約55の細胞においてアポトーシスを誘導できる。一部の実施形態においては、CD37結合剤は腫瘍の体積を低減することができる。腫瘍の体積を低減するCD37結合剤の能力は、例えば、対照対象のメジアン腫瘍体積で投与対象のメジアン腫瘍体積を割った値であるT/C値を計測することにより評価できる。一部の実施形態においてはCD37結合剤の投与は約55未満、約50未満、約45未満、約40未満、約35未満、約30未満、約25未満、約20未満、約15未満、約10未満又は約5未満であるT/C値をもたらす。一部の特定の実施形態においては、CD37結合剤はBJAB異種移植片モデル及び/又はSU-DHL-4異種移植片モデルにおいて腫瘍の大きさを低減することができる。特定の実施形態においては、非とCD37に特異的に結合するイムノコンジュゲート又は他の剤は細胞傷害剤を介して細胞死をトリガーする。例えば、特定の実施形態においては、ヒトCD37抗体に対する抗体は、蛋白内在化によりCD37を発現している腫瘍細胞において活性化されるマイタンシノイドにコンジュゲートされる。特定の代替の実施形態においては、剤又は抗体はコンジュゲートされない。特定の実施形態においては、CD37結合剤は腫瘍生育を阻害することができる。特定の実施形態においては、CD37結合剤はインビボで例えば異種移植片マウスモデル及び/又は癌を有するヒトにおいて腫瘍生育を阻害することができる。CD37結合剤はCD37抗体であるCD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57及びそのフラグメント、変異体及び誘導体を包含する。CD37結合剤は又CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57よりなる群から選択される抗体と同じCD37エピトープに特異的に結合するCD37結合剤を包含する。CD37結合剤は又CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57よりなる群から選択される抗体を競合的に阻害するCD37結合剤を包含する。一部の特定の実施形態においてはCD37へのCD37結合剤の結合はヒトCD37アミノ酸109~138を必要としない。即ち、CD37結合剤は配列番号180のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合する。他の実施形態において、CD37へのCD37結合剤の結合はヒトCD37アミノ酸202~243の突然変異により途絶される。即ち、一部のCD37結合剤は配列番号184のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合しない。一部の実施形態においては、CD37結合剤は配列番号180のポリペプチド及び配列番号183のポリペプチドには結合するが、配列番号184のポリペプチドには結合しない。一部の実施形態においては、CD37結合剤は配列番号190のポリペプチドに結合する。一部の実施形態においては、CD37結合剤は配列番号190のポリペプチド及び配列番号189のポリペプチドに結合する。一部の実施形態においては、CD37結合剤は配列番号190のポリペプチド及び配列番号188のポリペプチドに結合する。一部の実施形態においては、CD37結合剤は配列番号192のポリペプチドに結合するが、配列番号194のポリペプチドには結合しない。一部の実施形態においては、CD37結合剤は配列番号193のポリペプチドに結合するが、配列番号194のポリペプチドには結合しない。特定のCD37結合剤が結合するCD37ペプチドフラグメントは、配列番号1のアミノ酸200~243、配列番号1のアミノ酸202~220、又は配列番号1のアミノ酸221~243を含むか、本質的にこれよりなるか、これよりなるCD37フラグメントを包含するがこれらに限定されない。一部の実施形態においては、CD37結合剤は配列番号1のアミノ酸202~243を含むヒトCD37エピトープに特異的に結合する。一部の実施形態においては、CD37へのCD37結合剤の結合は配列番号1のアミノ酸202~243を必要とする。一部の実施形態においては、CD37へのCD37結合剤の結合は配列番号1のアミノ酸200~220を必要とする。一部の実施形態においては、CD37へのCD37結合剤の結合は配列番号1のアミノ酸221~243を必要とする。CD37結合剤は又、CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56又はCD37-57の重鎖及び軽鎖CDR配列を含むCD37結合剤を包含する。CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57の重鎖及び軽鎖CDRは関連する配列を含有する。従ってCD37結合剤は又、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57のアライメントにより得られるコンセンサス配列を含む重鎖及び軽鎖のCDR配列も含むことができる。CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57のCDR配列並びにCD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57のコンセンサス配列を以下の表1及び2に示す。CD37結合分子はCDR当たり4つまで即ち0、1、2、3又は4つの保存的アミノ酸置換を有するCD37-3、CD37-12、CD37-50、CD37-51、CD37-56又はCD37-57を含むCD37に特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントであることができる。ポリペプチドは本明細書に記載する個々の可変軽鎖又は可変重鎖の1つを含むことができる。抗体及びポリペプチドは又、可変軽鎖及び可変重鎖の両方を含むこともできる。ネズミ、キメラ、及びヒト化CD37-3、CD37-12、CD37-50、CD37-51、CD37-56又はCD37-57抗体の可変軽鎖及び可変重鎖を以下の表3及び4に示す。同様に提供されるものはa配列番号55~71と少なくとも約90の配列同一性を有するポリペプチド;及び/又はb配列番号72~87と少なくとも約90の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。特定の実施形態においては、ポリペプチドは配列番号55~71と少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98又は少なくとも約99の配列同一性を有するポリペプチドを含む。即ち、特定の実施形態においては、ポリペプチドはa配列番号55~71と少なくとも約95の配列同一性を有するポリペプチド;及び/又はb配列番号72~87と少なくとも約95の配列同一性を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においてはポリペプチドはa配列番号55~71のアミノ酸配列を有するポリペプチド;及び/又はb配列番号72~87のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリペプチドは抗体であり、及び/又は、ポリペプチドはCD37に特異的に結合する。特定の実施形態においては、ポリペプチドはCD37に特異的に結合するネズミ、キメラ、又はヒト化抗体である。特定の実施形態においては、配列番号55~87と配列同一性の特定のパーセンテージを有するポリペプチドは、保存的アミノ酸置換のみにより、配列番号55~87と異なっている。ポリペプチドは本明細書に記載する個々の軽鎖又は重鎖の1つを含むことができる。抗体及びポリペプチドは軽鎖及び重鎖の両方を含むこともできる。ネズミ、キメラ及びヒト化CD37-3、CD37-12、CD37-50、CD37-51、CD37-56及びCD37-57抗体の軽鎖及び可変鎖の配列を以下の表5及び6に示す。同様に提供されるものはa配列番号88~104と少なくとも約90の配列同一性を有するポリペプチド;及び/又はb配列番号105~120と少なくとも約90の配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチドである。特定の実施形態においては、ポリペプチドは配列番号88~104と少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98又は少なくとも約99の配列同一性を有するポリペプチドを含む。即ち、特定の実施形態においては、ポリペプチドはa配列番号88~104と少なくとも約95の配列同一性を有するポリペプチド;及び/又はb配列番号105~120と少なくとも約95の配列同一性を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においてはポリペプチドはa配列番号88~104のアミノ酸配列を有するポリペプチド;及び/又はb配列番号105~120のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリペプチドは抗体であり、及び/又は、ポリペプチドはCD37に特異的に結合する。特定の実施形態においては、ポリペプチドはCD37に特異的に結合するネズミ、キメラ、又はヒト化抗体である。特定の実施形態においては、配列番号88~120と配列同一性の特定のパーセンテージを有するポリペプチドは、保存的アミノ酸置換のみにより、配列番号88~120と異なっている。特定の実施形態においては、CD37抗体は2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10664、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10665、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10666、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10667、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10668、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10669、及び、2010年2月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10670よりなる群から選択されるハイブリドーマにより生産される抗体であることができるATCC、10801UniversityBoulevardManassasVirginia20110。特定の実施形態においては、抗体はPTA-10665、PTA-10666、PTA-10667、PTA-10668、PTA-10669及びPTA-10679よりなる群から選択されるハイブリドーマから生産された抗体のVH-CDR及びVL-CDRを含む。特定の実施形態においては、CD37抗体は組み換えプラスミドDNAphuCD37-3LC2010年3月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10722によりコードされる軽鎖を含むことができる。特定の実施形態においては、CD37抗体は組み換えプラスミドDNAphuCD37-3HCv.1.0.2010年3月18日にATCCに寄託されたATCC受託番号PTA-10723によりコードされる重鎖を含むことができる。特定の実施形態においては、CD37抗体は組み換えプラスミドDNAphuCD37-3LCPTA-10722によりコードされる軽鎖及び組み換えプラスミドDNAphuCD37-3HCv.1.0.PTA-10723によりコードされる重鎖を含むことができる。特定の実施形態においては、CD37抗体は組み換えプラスミドDNAphuCD37-3LCPTA-10722によりコードされるVL-CDR及び組み換えプラスミドDNAphuCD37-3HCv.1.0.PTA-10723によりコードされるVH-CDRを含むことができる。モノクローナル抗体はハイブリドーマ法、例えばKohlerandMilsteinNature256495に記載のものを用いながら調製できる。ハイブリドーマ法を用いながら、マウス、ハムスター又は他の適切な宿主動物を上記した通り免疫化することにより免疫化抗原に特異的に結合するすることになる抗体のリンパ球による生産を誘発する。リンパ球はインビトロで免疫化することもできる。免疫化の後、リンパ球を単離し、そして例えばポリエチレングリコールを用いながら適当なミエローマ細胞系統と融合することによりハイブリドーマを形成し、これを次に未融合のリンパ球及びミエローマ細胞から選別する。免疫沈降、イムノブロッティングによるか、又はインビトロの結合試験例えばラジオイムノアッセイRIA;酵素結合免疫吸着試験ELISAにより決定される選択された抗原に対して特異的に指向されたモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマは、その後、インビトロの培養で標準的な方法を用いながらGodingMonoclonalAntibodiesPrinciplesandPracticeAcademicPress1986又はインビボで動物中の腹水腫瘍として増殖され得る。次にモノクローナル抗体は、上記においてポリクローナル抗体に関して説明したとおり、培地又は腹水から精製されえる。或いは、モノクローナル抗体は又、米国特許4,816,567に記載の通り組み換えDNA法を用いて作成することもできる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドを、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたRT-PCR等により成熟B細胞又はハイブリドーマから単離し、そしてその配列を従来の操作法を用いながら決定する。次に重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを適当な発現ベクター内にクローニングし、そしてこれが、別様には免疫グロブリン蛋白を生産しないEコリ細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、又はミエローマ細胞のような宿主細胞内にトランスフェクトされた場合に、モノクローナル抗体が宿主細胞により形成される。更に又、所望の種の組み換えモノクローナル抗体又はそのフラグメントは記載された所望の種のCDRを発現するファージディスプレイライブラリから単離で切るMcCafferty等、1990Nature348552554Clackson等、1991Nature352624628;及びMarks等、1991JMolBiol222581597。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは更に、組み換えDNA技術を用いながら多くの種々異なる態様において修飾することにより代替の抗体を形成することができる。一部の実施形態においては、例えばマウスモノクローナル抗体の軽鎖及び重鎖の定常ドメインを、1キメラ抗体を形成するために例えばヒト抗体のこれらの領域に対して、又は2融合抗体を形成するために非免疫グロブリンポリペプチドに対して、置換することができる。一部の実施形態においては、定常領域をトランケーションするか除去することにより、モノクローナル抗体の所望の抗体フラグメントを形成する。可変領域の部位指向性又は高密度の突然変異誘発を用いることによりモノクローナル抗体の特異性、親和性等を最適化することができる。一部の実施形態においては、ヒトCD37ン意対するモノクローナル抗体はヒト化抗体である。特定の実施形態においては、そのような抗体を治療上使用することにより、ヒト対象への投与時の抗原性及びHAMAヒト抗マウス抗体応答を低減する。ヒト化抗体は当該分野で知られている種々の手法を用いながら生産することができる。特定の代替実施形態においては、CD37に対する抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は当該分野で知られている種々の手法を用いながら直接調製することができる。インビトロで免疫化された、又は標的抗原に対して指向された抗体を生産する免疫化個体から単離された不朽化ヒトBリンパ球を形成できる例えばCole等、MonoclonalAntibodiesandCancerTherapyAlanRLissp77Boemer等、1991JImmunol1478695及び米国特許5,750,373参照。更に又、ヒト抗体は例えばVaughan等、1996NatBiotech14309314Sheets等、1998ProcNat’lAcadSci9561576162HoogenboomandWinter1991JMolBiol227381andMarks等、1991JMolBiol222581に記載のように、ファージライブラリがヒト抗体を発現するそのファージライブラリから選択できる。抗体ファージライブラリの形成及び使用のための手法は又、米国特許5,969,108,6,172,197,5,885,793,6,521,404;6,544,731;6,555,313;6,582,915;6,593,081;6,300,064;6,653,068;6,706,484;及び7,264,963及びRothe等、2007JMolBiodoi101016jjmb200712018にも記載されているこれらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。アフィニティー成熟法及び鎖シャフリング法Marks等、1992BioTechnology10779783;参照により全体が本明細書に組み込まれるが当該分野で知られ手織り、そして高親和性のヒト抗体を形成するために使用できる。ヒト化抗体は又、内因性免疫グロブリン生産の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを生産することが免疫化により可能であるヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスにおいて作成することができる。このアプローチは米国特許5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;及び5,661,016に記載されている。本発明は又CD37を特異的に認識する二重特異性抗体も包含する。二重特異性抗体は少なくとも2つの異なるエピトープを特異的に認識して結合することができる抗体である。異なるエピトープは同じ分子例えば同じCD37内、又は、例えば抗体がCD37、並びに1T細胞受容体例えばCD3又はFc受容体例えばCD64、CD32又はCD16のような白血球上のエフェクター分子、又は2後に詳述する細胞傷害剤を特異的に認識して結合する両方の場合のように、異なる分子上にあることができる。例示される二重特異性抗体は2つの異なるエピトープに結合することができ、その少なくとも1つは本発明のポリペプチド中で生じる。或いは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームは、T細胞受容体分子例えばCD2、CD3、CD28又はB7又はIgGに対するFc受容体のような白血球上のトリガリング分子に結合するアームと組み合わせることにより特定の抗原を発現する細胞に細胞防御機序を集中させることができる。二重特異性抗体は又特定の抗原を発現する細胞に細胞傷害剤を指向させるために使用できる。これらの抗体は抗原結合アーム及び細胞傷害剤又はEOTUBE、DPTA、DOTA又はTETAのような放射性各種キレート形成剤に結合するアームを保有している。二重特異性抗体を作成するための手法は当該分野で一般的であるMillstein等、1983Nature305537539Brennan等、1985Science22981Sureshetal1986MethodsinEnzymol121120Traunecker等、1991EMBOJ1036553659Shalaby等、1992JExpMed175217225Kostelny等、1992JImmunol14815471553Gruber等、1994JImmunol1525368及び米国特許5,731,168。2価より高価の抗体もまた意図される。例えば3重特異性抗体を調製できるTutt等、JImmunol14760。即ち、特定の実施形態においては、CD37に対する抗体は多重特異性である。特定の実施形態においては、例えば腫瘍貫通性を増大させるための抗体フラグメントが提供される。抗体フラグメントの生産のための種々の手法が知られている。伝統的にはこれらのフラグメントは未損傷の抗体の蛋白分解性の消化を介して誘導される例えばMorimoto等、1993JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24107117Brennan等、1985Science22981。特定の実施形態においては、抗体フラグメントは組み換えにより生産される。Fab、Fv及びscFv抗体フラグメントは全てEコリ又は他の宿主細胞中で発現され、これらより分泌されることができ、これによりこれらのフラグメントの大量の生産が可能となる。そのような抗体フラグメントは上記考察した抗体ファージライブラリから単離することもできる。抗体フラグメントは又例えば米国特許5,641,870に記載の通り線状抗体であることもでき、そして単一特異性又は二重特異性であることができる。抗体フラグメントの生産のための他の手法は当業者の知る通りである。本発明によればCD37に特異的な単鎖抗体の生産のために手法を適合させることができる米国特許4,946,778参照。更に又、方法をFab発現ライブラリの構築Huse等、Science24612751281のために適合させることによりCD37に対して所望の特異性を有するモノクローナルFabフラグメント、その誘導体、フラグメント、類縁体又は相同体の迅速で効果的な識別が可能となる。抗体フラグメントは当該分野の手法により生産でき、例えば限定しないがa抗体分子のペプシン消化により生産されるFab’2フラグメント;bFab’2フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより形成されるFabフラグメント、cパパイン及び還元剤による抗体分子の処理により形成されるFabフラグメント、及びdFvフラグメントが包含されるがこれらに限定されない。特に抗体フラグメントの場合は、その血清中半減期を増大させるために抗体を修飾することが更に望ましい場合がある。これは例えば抗体フラグメントにおける適切な領域の突然変異による抗体フラグメント内へのサルベージ受容体結合エピトープの取り込みにより、又は、エピトープをペプチドタグ内に取り込み、次にこれを末端又は中央の何れかにおいて抗体フラグメントに融合させること例えばDNA又はペプチド合成によるにより達成できる。ヘテロコンジュゲート抗体も又、本発明の範囲に包含される。ヘテロコンジュゲート抗体は2つの共有結合的に連結された抗体より成る。そのような抗体は例えば望ましくない細胞に免疫細胞をターゲティングするために提案されている米国特許4,676,980。合成蛋白化学における知られた方法、例えば架橋剤を使用するものを用いながらインビトロで抗体を調整することが可能であることも意図している。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて、又はチオエーテル結合を形成することにより、免疫毒素を構築することができる。この目的のための適当な試薬の例は、イミノチオレート及びメチル-4-メルカプトブチルイミデートを包含する。本発明の目的のためには、修飾された抗体はヒトCD37のポリペプチドとの抗体の会合をもたらす可変領域の何れかの型を含むことができることは当然である。この点に関し、可変領域は、体液性応答を生じさせ、そして所望の腫瘍会合抗原に対する免疫グロブリンを発生させるように誘導することができる哺乳類の何れかの型を含むか、これから誘導することができる。即ち、修飾された抗体の可変領域は例えば、ヒト、ネズミ、非ヒト霊長類例えばカニクイザル、マカク等又はオオカミ起源のものであることができる。一部の実施形態においては、修飾された免疫グロブリンの可変領域及び定常領域の両方がヒトのものである。他の実施形態において、適合性抗体通常は非ヒト原料から誘導の可変領域を、操作又は特別調整することにより結合特性を向上させるか、又は分子の免疫原性を低減することができる。この点に関し、本発明において有用な可変領域はヒト化されるか、又は別様にインポートされたアミノ酸配列の包含を介して改変することができる。特定の実施形態においては、重鎖及び軽鎖の両方における可変ドメインはCDR1つ以上の少なくとも部分的な置き換えにより、そして必要に応じて部分的なフレームワーク領域の置き換え及び配列変化により、改変される。CDRはフレームワーク領域の誘導元の抗体と同じクラス、更にはサブクラスの抗体から誘導できるが、異なるクラスの抗体から、そして恐らくは異なる種に由来する抗体から、CDRを誘導することも意図される。ある可変ドメインの抗原結合能力を別のものに転移させるためにドナーの可変領域由来の完全なCDRでCDRの全てを置き換えることが常時必要なわけではない。寧ろ、一部の場合においては、抗原結合部位の活性を維持するために必要な残基を転移させる必要があるのみである。米国特許5,585,089、5,693,761及び5,693,762に記載されている説明によれば、これは、定型的な実験を実施することによるか、又は、低減された免疫原性を有する機能的抗体を得るための試行錯誤の試験を行うことにより、当業者の能力の範囲内で十分行える。可変領域の改変にも関わらず、当業者の知る通り、本発明の修飾された抗体は、ネイティブ又は未改変の定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の抗体と比較した場合に増強された腫瘍局在化又は低減された血清中半減期のような所望の生化学的特性を提供できるように、定常領域ドメインの1つ以上の少なくとも部分が欠失又は別様に改変されている抗体例えば完全長抗体又はその免疫反応性フラグメントを含むことになる。一部の実施形態においては、修飾された抗体の定常領域はヒト定常領域を含むことになる。本発明と適合する定常領域への修飾は、1つ以上のドメインにおける1つ以上アミノ酸の付加、欠失又は置換を含む。即ち、本明細書に開示された修飾された抗体は3つの重鎖定常ドメインCH1、CH2又はCH3の1つ以上に対する、及び/又は軽鎖定常ドメインCLに対する改変又は修飾を含むことができる。一部の実施形態においては、1つ以上のドメインが部分的又は全体的に欠失している修飾された定常領域が意図される。一部の実施形態においては、修飾された抗体は全CH2ドメインが除去されているドメイン欠失のコンストラクト又は変異体を含むことになるΔCH2コンストラクト。一部の実施形態においては、省かれた定常領域ドメインは、非存在定常領域により典型的には付与される分子柔軟性の一部を与える短いアミノ酸スペーサー例えば10残基により置き換えられることになる。それらの配置の他に、定常領域は数種のエフェクター機能を媒介することも当該分野で知られている。例えば抗体への補体のC1成分の結合は補体系を活性化させる。補体の活性化は細胞病原体のオプソニン作用及び溶解において重要である。補体の活性化は又、炎症応答を刺激し、そして自己免疫過敏症に関与する場合もある。更に又、抗体はFc領域を介して細胞に結合し、その際、細胞上のFc受容体FcRに結合する抗体Fc領域上にFc受容体部位がある。IgGガンマ受容体、IgEイータ受容体、IgAアルファ受容体及びIgMミュウ受容体を包含する抗体の種々異なるクラスに対して特異的な多くのFc受容体が存在する。細胞表面上のFc受容体への抗体の結合は多くの重要で多様な生物学的応答、例えば抗体被覆粒子の囲い込みと破壊、免疫複合体のクリアランス、抗体被覆標的細胞のキラー細胞による溶解抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、即ちADCCと称される、炎症メディエーターの放出、胎盤転移及び免疫グロブリン生産の制御をトリガーする。特定の実施形態においては、CD37結合抗体は改変されたエフェクター機能をもたらし、次にこれが投与された抗体の生物学的プロファイルに影響する。例えば定常領域ドメインの欠失又は不活性化点突然変異又は他の手段を介するは循環中の修飾された抗体のFc受容体結合を低減し、これにより腫瘍の局在化を増強することができる。他の例においては、本発明と矛盾しない定常領域の修飾は補体結合を緩和し、そしてこれにより血清中半減期及びコンジュゲートした細胞毒の非特異的会合を低減する。定常領域の更に別の修飾は、増大した抗原特異性又は抗体柔軟性に起因する増強された局在化をもたらすジスルフィド連結部又はオリゴ糖部分を排除するために使用できる。同様に、本発明に従った定常領域の修飾は、当業者の知見の範囲内に十分含まれる良く知られた生化学的又は分子操作の手法を用いながら容易に作成できる。特定の実施形態においては、抗体であるCD37結合剤は1つ以上のエフェクター機能を有さない。例えば、一部の実施形態においては、抗体は抗体依存性細胞性細胞傷害ADCC活性を有さず、及び/又は、補体依存性細胞傷害CDC活性を有さない。特定の実施形態においては、抗体はFc受容体及び/又は補体因子に結合しない。特定の実施形態においては、抗体はエフェクター機能を有さない。特定の実施形態においては、修飾された抗体は、それぞれの修飾された抗体のヒンジ領域に直接CH3ドメインを融合するように操作されることができることになる。別のコンストラクトにおいては、ヒンジ領域及び修飾されたCH2及び/又はCH3ドメインの間にペプチドスペーサーを与えることが望ましい場合がある。例えば、適合性のあるコンストラクトはCH2ドメインが欠失しており、そして残りのCH3ドメイン修飾又は未修飾が5~20アミノ酸スペーサーでヒンジ領域に連結されているように発現させることができる。そのようなスペーサーは例えば定常ドメインの調節エレメントが使用可能な状態のままであること、又は、ヒンジ領域が柔軟性を維持していることを確保するために、付加させることができる。しかしながら、アミノ酸スペーサーは一部の場合においては免疫原性であることがわかっており、そしてコンストラクトに対する望ましくない免疫応答を誘発することに留意しなければならない。したがって、特定の実施形態においては、コンストラクトに付加された何れのスペーサーも、修飾された抗体の所望の生化学的品質を維持するために比較的非免疫原性となるか、又は全体が省略されることになる。全定常領域ドメインの欠失のほかに、当然ながら、本発明の抗体は数個、更には単一のアミノ酸の部分的欠失又は置換により与えられる場合もある。例えば、CH2ドメインの選択された区域内の単一のアミノ酸の突然変異がFc結合を実質的に低減し、そしてこれにより腫瘍局在化を増強するために十分であることができる。同様に修飾すべきエフェクター機能例えば補体CLQ結合を制御する定常領域ドメイン1つ以上の部分を単に欠失させることが望ましい場合がある。そのような定常領域の部分的欠失は抗体の選択された特性血清中半減期を向上させつつ、対象の定常領域ドメインに関連する他の所望の機能は未損傷のままとすることができる。更に又、前述の通り、開示された抗体の定常領域は結果として生じるコンストラクトのプロファイルを増強させる突然変異又はアミノ酸1つ以上の置換を介して修飾できる。この点に関し、保存された結合部位により与えられる活性例えばFc結合を途絶しつつ、修飾された抗体の配置及び免疫原性プロファイルを実質的に維持することが可能となる。特定の実施形態は、エフェクター機能の低下又は上昇のような所望の特性を増強するか、又はより多くの細胞毒又は炭水化物の結合を可能とするために、定常領域へのアミノ酸1つ以上の付加を含むことができる。そのような実施形態において、選択された定常領域ドメインから誘導される特定の配列を挿入又は複製することが望ましい場合がある。本発明は更に本明細書に記載したキメラ、ヒト化及びヒトの抗体又はその抗体フラグメントに実質的に相同である変異体及び等価物を包含する。これらは例えば、保存的置換突然変異、即ち、アミノ酸1つ以上の同様のアミノ酸による置換を含むことができる。例えば保存的置換はあるアミノ酸の同じ一般的クラス内の別のものによる、例えばある酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸による、ある塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸による、又は、ある中性アミノ酸の別の中性アミノ酸による置換を指す。保存的アミノ酸置換が意図するものは当該分野で良く知られている。本発明のポリペプチドはヒトCD37に対する抗体又はそのフラグメントを含む組み換えポリペプチド、天然ポリペプチド、又は合成のポリペプチドであることができる。当該分野で知られるとおり、本発明の一部のアミノ酸配列は蛋白の構造又は機能に大きく影響することなく変動させることができる。即ち、本発明は更にCD37蛋白に対する抗体又はそのフラグメントの実質的な活性を示すか、又はその領域を含む、ポリペプチドの変形例も包含する。そのような突然変異体は欠失、挿入、反転、反復及び型置換を包含する。ポリペプチド及び類縁体は更に、通常では蛋白の部分ではない追加的な化学部分を含有するように修飾できる。これらの誘導体化された部分は蛋白の溶解性、生物学的半減期、又は吸収を向上させることができる。部分は又、蛋白の何らかの望ましくない副作用等を低減又は排除することもできる。これらの部分の概説はREMINGTONSPHARMACEUTICALSCIENCES20thedMackPublishingCoEastonPAに記載されている。本明細書に記載する単離されたポリペプチドは当該分野で知られている何れかの適当な方法により生産できる。そのような方法は直接の蛋白合成の方法から、単離されたポリペプチド配列をコードし、これらの配列を適当な形質転換宿主中で発現するDNA配列を構築することまで様々である。一部の実施形態においてはDNA配列は目的の野生型蛋白をコードするDNA配列を単離又は合成することにより組み換え技術を用いながら構築される。場合により、配列を部位特異的突然変異誘発により突然変異誘発することによりその機能的類縁体を得ることができる。例えばZoeller等、ProcNat’lAcadSciUSA8156625066及び米国特許4,588,585を参照できる。一部の実施形態においては目的のポリペプチドをコードするDNA配列はオリゴヌクレオチド合成器を用いた化学合成により構築される。そのようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列に基づいて、そして目的の組み換えポリペプチドが生産されることになる宿主細胞にとって好都合なコドンを選択しながら、設計することができる。標準的な方法は目的の単離されたポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド配列を合成するために適用できる。例えば完全なアミノ酸配列を用いて戻し翻訳された遺伝子を構築できる。更に又、特定の単離されたポリペプチドに関してコードしているヌクレオチド配列を含有するDNAオリゴマーを合成できる。例えば、所望のポリペプチドの部分に関してコードしている数種の小型のオリゴヌクレオチドを合成し、次にライゲーションすることができる。個々のオリゴヌクレオチドは典型的には相補的組み立てのための5’又は3’オーバーハングを含有する。組み立て合成、部位指向性突然変異誘発又は他の方法によるの後、目的の特定の単離されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を発現ベクター内に挿入し、そして所望の宿主中での蛋白の発現のために適切である発現制御配列に作動可能に連結することになる。適当な組み立ては、ヌクレオチド配列決定、制限マッピング、及び適当な宿主における生物学的に活性なポリペプチドの発現により確認できる。当該分野で良く知られている通り、宿主中でのトランスフェクトされた遺伝子の高い発現レベルを得るためには、遺伝子は選択された発現宿主中で機能的である転写及び翻訳発現制御配列に作動可能に連結していなければならない。特定の実施形態においては、組み換え発現ベクターはヒトCD37に対する抗体又はそのフラグメントをコードするDNAを増幅して発現させるために使用される。組み換え発現ベクターは哺乳類、微生物、ウィルス又は昆虫の遺伝子から誘導された適当な転写又は翻訳調節エレメントに作動可能に連結した抗CD37抗体又はそのフラグメントのポリペプチド鎖をコードする合成又はcDNA誘導のDNAフラグメントを有する複製可能なDNAコンストラクトである。転写ユニットは一般的に、1遺伝子エレメント又は遺伝子発現において調節的役割を有するエレメント、例えば転写プロモーター又はエンハンサー、2mRNAに転写され、そして蛋白に翻訳される構造又はコーディング配列、及び3以下に詳述する適切な転写及び翻訳の開始および終止配列の組み立て物を含む。そのような調節エレメントは転写を制御するためのオペレーター配列を包含できる。複製起点により通常は付与される宿主において複製するための能力、及び形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子もまた組み込まれる。DNA領域はそれらが相互に機能的に関連している場合に作動可能に連結されている。例えばシグナルペプチド分泌リーダーに関するDNAはそれがポリペプチドの分泌に参画する前駆体としてそれが発現される場合はポリペプチドに関するDNAに作動可能に連結しており;プロモーターはそれが配列の転写を制御する場合はコーディング配列に作動可能に連結しており;或いは、リボソーム結合部位はそれが翻訳を可能とするように位置づけられていればコーディング配列に作動可能に連結している。コウボ発現系において使用するために意図された構造エレメントは宿主細胞による翻訳蛋白の細胞外分泌を可能にするリーダー配列を包含する。或いは、リーダー又はトランスポート配列の非存在下で組み換え蛋白が発現される場合、それはN末端メチオニン残基を包含できる。この残基は場合により後に、発現された組み換え蛋白から切断されて、最終産物を与える。発現制御配列及び発現ベクターの選択は宿主の選択に依存することになる。広範な種類の発現宿主/ベクターの組み合わせを使用できる。真核生物宿主のための有用な発現ベクターは、例えばSV40、ウシパピローマウィルス、アデノウィルス及びサイトメガロウィルスに由来する発現制御配列を含むベクターを包含する。細菌宿主のための有用な発現ベクターは、知られた細菌プラスミド、例えばエシェリシアコリ由来のプラスミド、例えばpCR1、pBR322、pMB9及びそれらの誘導体、広範宿主範囲のプラスミド、例えばM13及びフィラメント様1本鎖DNAファージを包含するCD37結合ポリペプチド又は抗体又は抗原として使用するためのCD37蛋白の発現のための適当な宿主細胞は、適切なプロモーターの制御下の、原核生物、コウボ、昆虫及びより高等な真核生物の細胞を包含する。原核生物はグラム陰性又はグラム陽性の生物、例えばEコリ又はバチルスを包含する。より高等な真核生物の細胞は後述するような哺乳類起源の樹立された細胞系統を包含する。無細胞翻訳系もまた使用される。細菌、カビ、コウボ、及び哺乳類細胞の宿主を用いた適切なクローニング及び発現ベクターはPouwels等、により記載されており、その該当開示は参照により本明細書に組み込まれる。抗体生産を包含する蛋白生産の方法に関する別の情報は、例えば米国特許出願公開2008/0187954、米国特許6,413,746及び6,660,501及び国際特許公開WO04009823に記載されており、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。種々の哺乳類及び昆虫細胞の培養系も又、組み換え蛋白を発現させるために好都合に使用される。哺乳類細胞中の組み換え蛋白の発現は、そのような蛋白が一般的に正しく折り畳まれ、適切に修飾され、そして完全に機能することから、実施することができる。適当な哺乳類宿主細胞系統の例は、Gluzmanにより記載されているサル腎臓細胞のCOS-7系統、及び適切なベクターを発現することができる他の細胞系統、例えばL細胞、C127,3T3、チャイニーズハムスター卵巣CHO、HeLa及びBHK細胞系統を包含する。哺乳類発現ベクターは非転写エレメント、例えば複製起点、発現すべき遺伝子に連結された適当なプロモーター及びエンハンサー、及び5’又は3’フランキング非転写配列、及び5’又は3’非翻訳配列、例えば必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、及び転写終止配列を含むことができる。昆虫細胞中の非相同蛋白の生産のためのバキュロウィルス系はLuckowandSummersBioTechnology647において考察されている。形質転換された宿主により生産される蛋白は何れかの適当な方法に従って精製できる。そのような標準的な方法はクロマトグラフィー例えばイオン交換、アフィニティー及びサイジングカラムクロマトグラフィー、遠心分離、溶解度差、又は何れかの他の標準的な蛋白精製手法を包含する。アフィニティータグ、例えばヘキサヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザ被膜配列及びグルタチオン-S-トランスフェラーゼを蛋白に結合することにより、適切なアフィニティーカラム上を通過させることによる容易な精製が可能となる。単離された蛋白は又、蛋白分解、核磁気共鳴及びX線結晶分析のような手法を用いながら物理的に特性化することができる。例えば、培地中に組み換え蛋白を分泌する系からの上澄みを先ず、市販の蛋白濃縮フィルター、例えばAmicon又はMilliporePelliconの限外濾過ユニットを用いながら濃縮することができる。濃縮工程の後、濃縮液を適当な精製マトリックスに適用することができる。或いは、アニオン交換樹脂、例えば懸垂ジエチルアミノエチルDEAE基を有するマトリックス又は基材を使用できる。マトリックスはアクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース又は蛋白精製において一般的に使用されている他の型であることができる。或いは、カチオン交換皇帝を使用できる。適当なカチオン交換剤はスルホプロピル又はカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスを包含する。最後に、疎水性RP-HPLC媒体、例えば懸垂メチル又は他の脂肪族基を有するシリカゲルを用いた1つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィーRP-HPLC工程を用いてCD37-結合剤を更に精製することができる。種々の組み合わせににおける上記した精製工程の一部又は全てを用いて均質な組み換え蛋白を得ることもできる。細菌培養物中に生産された組み換え蛋白は、例えば細胞ペレットからの初期抽出、その後の1回以上の濃縮、塩析、水性イオン交換又はサイズエクスクルージョンクロマトグラフィーの工程により単離できる。高速液体クロマトグラフィーHPLCを最終精製工程のために使用できる。組み換え蛋白の発現において使用した微生物細胞は、何れかの好都合な方法、例えば凍結解凍のサイクリング、超音波処理、機械的破壊又は細胞溶解剤の使用により破壊できる。抗体及び他の蛋白を精製するために当該分野で知られている方法は又、例えば米国特許出願公開2008/0312425、2008/0177048及び2009/0187005に記載されているものを包含し、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態においては、CD37結合剤は抗体ではないポリペプチドである。蛋白標的に高親和性で結合する非抗体ポリペプチドを識別して生産するための種々の方法が当該分野で知られている。例えばSkerraCurrOpinBiotechnol18295304Hosse等、ProteinScience151427Gill等、CurrOpinBiotechnol17653658NygrenFEBSJ275266876andSkerraFEBSJ275267783に記載されており、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態においては、CD37結合ポリペプチドを識別/生産するためにファージディスプレイ技術が用いられている。特定の実施形態においては、ポリペプチドはプロテインA、リポカリン、フィブロネクチンドメイン、アンキリンコンセンサスリピートドメイン及びチオレドキシンよりなる群から選択される型の蛋白スカホールドを含む。一部の実施形態においては、剤は非蛋白分子である。特定の実施形態においては、剤は小分子である。非蛋白CD37結合剤の識別において有用なコンビナトリアル化学ライブラリ及び手法は当該分野で知られている。例えばKennedy等、JCombChem10345354DolleetalJCombChem9855902andBhattacharyyaCurrMedChem81383404を参照でき、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。特定の別の実施形態においては、剤は炭水化物、グリコサミノグリカン、糖蛋白、又はプロテオグリカンである。特定の実施形態においては、剤は核酸アプタマーである。アプタマーは別の分子に結合する自身の能力に基づいて例えばランダム又は突然変異誘発物質化プールから選択されているポリヌクレオチド分子である。一部の実施形態においては、アプタマーはDNAポリヌクレオチドを含む。特定の大体の実施形態においては、アプタマーはRNAポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態においては、アプタマーは1つ以上の修飾された核酸残基を含む。蛋白への結合に関して核酸アプタマーを作成及びスクリーニングする方法は当該分野で良く知られている。例えば米国特許5,270,163、米国特許5,683,867、米国特許5,763,595、米国特許6,344,321、米国特許7,368,236、米国特許5,582,981、米国特許5,756,291、米国特許5,840,867、米国特許7,312,325、米国特許7,329,742、国際特許公開WO02/077262、国際特許公開WO03/070984、米国特許出願公開2005/0239134、米国特許出願公開2005/0124565及び米国特許出願公開2008/0227735を参照でき、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。III.イムノコンジュゲート本発明は又、薬物又はプロドラッグに連結又はコンジュゲートされた本明細書に開示された抗CD37抗体、抗体フラグメント、及びそれらの機能的等価物を含むコンジュゲート本明細書においてはイムノコンジュゲートとも称するに関する。適当な薬物又はプロドラッグは当該分野で知られている。薬物又はプロドラッグは細胞傷害剤であることができる。本発明の細胞傷害コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、細胞死をもたらすか、又は細胞死を誘導するか、又は一部の態様においては細胞の生存性を低下させる何れかの化合物であることができ、そして例えばマイタンシノイド及びマイタンシノイド類縁体を包含する。他の適当な細胞傷害剤は例えばベンゾジアゼピン、タキソイド、CC-1065及びCC-1065類縁体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類縁体、エネジイン、例えばカリケアマイシン、ドラスタチン及びドラスタチン類縁体、例えばオーリスタチン、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキセート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンC、クロラムブシル及びモルホリノドキソルビシンである。そのようなコンジュゲートは抗体又は機能的等価物に薬物又はプロドラッグを連結するために連結基を用いることにより調製できる。適当な連結基は当該分野で良く知られており、そして、例えばジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基及びエステラーゼ不安定基を包含する。薬物又はプロドラッグは例えばジスルフィド結合を介して抗CD37抗体又はそのフラグメントに連結できる。リンカー分子又は架橋剤は抗CD37抗体又はそのフラグメントと反応することができる反応性の化学基を含む。細胞結合剤との反応のための反応性化学基はN-スクシンイミジルエステル及びN-スルホスクシンイミジルエステルであることができる。更に又、リンカー分子は薬物と反応してジスルフィド結合を形成できるジチオピリジル基であることができる反応性の化学基を含む。リンカー分子は、例えば-スクシンイミジル3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDP例えばCarlsson等、Biochem.J.、173:723-7371978参照、N-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオブタノエートSPDB例えば米国特許4,563,304参照、N-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオ2-スルホブタノエートスルホ-SPDB米国特許公開20090274713参照、N-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオペンタノエートSPP例えばCAS登録番号341498-08-6参照、2-イミノチオラン又は無水アセチルコハク酸を包含する。例えば、抗体又は細胞結合剤は架橋試薬で修飾することができ、そしてこのようにして誘導された遊離又は保護されたチオール基を含有する抗体又は細胞結合剤を次に、ジスルフィド又はチオール含有マイタンシノイドと反応させることによりコンジュゲートを生成する。コンジュゲートはクロマトグラフィー、例えば限定しないがHPLC、サイズエクスクルージョン、吸着、イオン交換及びアフィニティーキャプチャー、透析又はタンジェンシャルフロー濾過により精製できる。本発明の別の側面において、抗CD37抗体は、イムノコンジュゲートの力価、溶解性又は薬効を増強する場合に、ジスルフィド結合及びポリエチレングリコールを介して細胞傷害薬に連結される。そのような切断可能な親水性のリンカーはWO2009/0134976に記載されている。このリンカー設計の追加的な利点は、所望の高い単量体比及び最小限の抗体薬物コンジュゲート凝集である。この側面において得に意図されるものは、細胞結合剤のコンジュゲートであり、そして2~8の薬物負荷の狭小な範囲を有するポリエチレングリコールスペーサーCH2CH2On=1-14を担持するジスルフィド結合-S-S-を介して連結した薬物は、癌細胞に対して比較的高い強力な生物学的活性を示し、そして高いコンジュゲート州立及び高い単量体比と最小限の蛋白凝集という望ましい生化学的特性を有すると記載されている。この側面において特に意図されるものは式Iの抗CD37抗体薬物コンジュゲート又は式I’のコンジュゲート:CB-[Xl--CH2-CH2O-n-Y-D]mI[D-Y--CH2-CH2O-n-Xl]m-CBI’であり、式中:CBは抗CD37抗体又はフラグメントを示し;Dは薬物を示し;Xはチオエーテル結合、アミド結合、カーバメート結合、又はエーテル結合を介して細胞結合剤に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し;Yはジスルフィド結合を介して薬物に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し;lは0又は1であり;mは2~8の整数であり;そして、nは1~24の整数である。一部の実施形態においては、mは2~6の整数である。一部の実施形態においては、mは3~5の整数である。一部の実施形態においては、nは2~8の整数である。或いは、例えば米国特許6,441,163及び7,368,565に開示されている通り、細胞結合剤との反応に適する反応性エステルを導入するために先ず薬物を修飾することができる。活性化されたリンカー部分を含有するこれらの薬物の細胞結合剤との反応は、細胞結合剤薬物コンジュゲートを生成する別の方法を提供する。マイタンシノイドは例えば米国特許6,716,821に記載のPEG連結基を用いながら抗CD37抗体又はフラグメントに連結することもできる。これらのPEG切断不可能な連結基は水及び非水性の溶媒の両方に可溶であり、そして1つ以上の細胞傷害剤を細胞結合剤に連結するために使用できる。例示されるPEG連結基は、一端において官能性のスルヒドリル又はジスルフィド基、及び、他端において活性エステルを介してリンカーの両側末端で細胞傷害剤及び細胞結合剤と反応するヘテロ2官能性PEGリンカーを包含する。PEG連結基を用いる細胞傷害コンジュゲートの合成の一般的例として、ここでも米国特許6,716,821を参照でき、これは参照により全体が本明細書に組み込まれる。合成の開始は反応性のPEG部分を担持している細胞傷害剤1つ以上の細胞結合剤との反応であり、これにより細胞結合剤のアミノ酸残基による各反応性PEG部分の末端活性エステルの置き換えが起こり、これによりPEG連結基を介して細胞結合剤に共有結合下細胞傷害剤1つ以上を含む細胞傷害コンジュゲートが生じる。或いは、細胞結合剤を2官能性PEG架橋剤で修飾することにより反応性のジスルフィド部分例えばピリジルジスルフィドを導入することができ、これを次にチオール含有マイタンシノイドで処理することによりコンジュゲートを得ることができる。別の方法においては、細胞結合を2官能性のPEG架橋剤で修飾することによりチオール部分を導入することができ、次にこれを反応性ジスルフィド含有マイタンシノイド例えばピリジルジスルフィドで処理することによりコンジュゲートを得ることができる。切断不可能なの連結を有する抗体-マイタンシノイドコンジュゲートもまた調製できる。そのような架橋剤は当該分野で報告されており米国特許公開20050169933参照、そして、N-スクシンイミジル4-マレイミドメチルシクロヘキサンカルボキシレートSMCCを包含するがこれに限定されない。一部の実施形態においては、抗体は、1~10個の反応性の基を導入するために文献記載の通り、スクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートSMCC、スルホ-SMCC、マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステルMBS、スルホ-MBS又はスクシンイミジル-ヨードアセテートのような架橋剤で修飾されるYoshitakeetalEurJBiochem101395399HashidaetalJAppliedBiochem5663;及びLiuetalBiochem18690697。次に修飾された抗体をチオール含有マイタンシノイド誘導体と反応させることによりコンジュゲートを生成する。コンジュゲートはSephadexG25カラムを通したゲル濾過により、又は、透析又はタンジェンシャルフロー濾過により精製できる。修飾された抗体をチオール含有マイタンシノイド1~2モル等量/マレイミド基で処理し、そして、抗体-マイタンシノイドコンジュゲートをSephadexG25カラムを通したゲル濾過、セラミックヒドロキシアパタイトカラム上のクロマトグラフィー、透析又はタンジェンシャルフロー濾過又はこれらの方法の組み合わせにより精製する。典型的には、抗体当たり平均で1~10個のマイタンシノイドを連結する。1つの方法はスクシンイミジル4-N-マレイミドメチル-シクロヘキサン-1-カルボキシレートSMCCで抗体を修飾することによりマレイミド基を導入し、その後、修飾された抗体をチオール含有マイタンシノイドと反応させることによりチオエーテル連結コンジュゲートとする。ここでも抗体分子当たり1~10薬物分子を有するコンジュゲートが生じる。抗体、抗体フラグメント及び他の蛋白のマイタンシノイドコンジュゲートを同じ態様において製造する。本発明の別の側面においては、PEGスペーサーを間においた切断不可能な結合を介して薬物にCD37抗体を連結させる。薬物と抗CD37抗体又はフラグメントの間のリンカーを形成する親水性PEG鎖を含む適当な架橋試薬は、当該分野で良く知られており、或いは、市販されている例えばQuantaBiodesignPowellOhio。適当なPEG含有架橋剤は又、当該分野で知られている標準的合成化学手法を用いながら市販のPEG自体から合成することもできる。薬物を米国特許出願公開20090274713及びWO2009/0134976に詳述されている方法により2官能性PEG含有架橋剤と反応させることにより次の式、即ちZ-Xl--CH2-CH2-O-n-Yp-Dの化合物とし、次にこれを細胞結合剤と反応させることによりコンジュゲートとすることができる。或いは、細胞結合を2官能性PEG架橋剤で修飾することによりチオール反応性基例えばマレイミド又はハロアセトアミドを導入し、次にこれをチオール含有マイタンシノイドで処理することによりコンジュゲートとすることができる。別の方法においては、細胞結合を2官能性PEG架橋剤で修飾することによりチオール部分を導入し、次にこれをチオール反応性マイタンシノイド例えばマレイミド又はハロアセトアミドを担持したマイタンシノイドで処理することによりコンジュゲートとすることができる。従って本発明の別の側面は式II又は式II’の抗CD37抗体薬物コンジュゲート:CB-[Xl--CH2-CH2-O-n-Yp-D]mII[D-Yp--CH2-CH2-O-n-Xl]m-CBII’であり、式中、CBは抗CD37抗体又はフラグメントを示し;Dは薬物を示し;Xはチオエーテル結合、アミド結合、カーバメート結合、又はエーテル結合を介して細胞結合剤に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し;Yはチオエーテル結合、アミド結合、カーバメート結合、エーテル結合、アミン結合、炭素-炭素結合及びヒドラゾン結合よりなる群から選択される共有結合を介して薬物に結合された脂肪族、芳香族又はヘテロ環の単位を示し;lは0又は1であり;pは0又は1であり;mは2~15の整数であり;そして、nは1~2000の整数である。一部の実施形態においては、mは2~8の整数であり;そして、一部の実施形態においては、nは1~24の整数である。一部の実施形態においては、mは2~6の整数である。一部の実施形態においては、mは3~5の整数である。一部の実施形態においては、nは2~8の整数である。適当なPEG含有リンカーの例は、抗CD37抗体又はそのフラグメントとの反応のためのN-スクシンイミジルエステル又はN-スルホスクシンイミジルエステル、並びに化合物との反応のためのマレイミド-又はハロアセチル系の部分を有するリンカーを包含する。PEGスペーサーは本明細書に記載する方法により当該分野で知られている何れかの架橋剤内に取り込むことができる。本明細書に開示するリンカーの多くは米国特許特許公開20050169933及び20090274713、及びWO2009/0134976に詳述されており;その内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。本発明は、約2~約8個の薬物分子薬物負荷、例えばマイタンシノイドが抗CD37抗体又はそのフラグメントに連結しており、コンジュゲートの抗腫瘍採用が同じ細胞結合剤に連結した薬物の数が低値又は高値である薬物負荷と比較して遥かに効果的である側面を包含する。薬物負荷とは本明細書において使用する場合、細胞結合剤例えば抗CD37抗体又はそのフラグメントに結合できる薬物分子例えばマイタンシノイドの数を指す。1つの側面において、細胞結合剤に結合することができる薬物分子の数は平均で約2~約8個例えば1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1個であることができる。N2’-デアセチル-N2’-3-メルカプト-1-オキソプロピル-マイタンシンDM1及びN2’-デアセチル-N2’-4-メルカプト-4-メチル-1-オキソペンチルマイタンシンDM4を使用できる。即ち、1つの側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり1個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり2個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり3個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり4個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり5個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり6個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり7個のマイタンシノイドを含む。別の側面においてイムノコンジュゲートは抗体当たり8個のマイタンシノイドを含む。1つの側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約1~約8個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約2~約7個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約2~約6個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約2~約5個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約3~約5個のマイタンシノイドを含む。別の側面において、イムノコンジュゲートは抗体あたり約3~約4個のマイタンシノイドを含む。1つの特徴において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体当たり結合した薬物分子例えばマイタンシノイドを平均で約2~約8個例えば1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1個有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約1~約8個の薬物分子例えばマイタンシノイドを有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約2~約7個の薬物分子例えばマイタンシノイドを有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約2~約6個の薬物分子例えばマイタンシノイドを有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約2~約5個の薬物分子例えばマイタンシノイドを有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約3~約5個の薬物分子例えばマイタンシノイドを有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体あたり平均で約3~約4個の薬物分子例えばマイタンシノイドを有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体当たり結合した薬物分子例えばマイタンシノイドを平均で約2±0.5個、約3±0.5個、約4±0.5個、約5±0.5個、約6±0.5個、約7±0.5個、又は約8±0.5個有する。1つの側面において、イムノコンジュゲートを含む組成物は抗体当たり平均で約3.5±0.5個の薬物分子例えばマイタンシノイド有する。抗CD37抗体又はそのフラグメントは2官能性架橋試薬を抗CD37抗体又はそのフラグメントに反応させ、これにより抗CD37抗体又はそのフラグメントへのリンカー分子の共有結合を起こすことにより修飾できる。本明細書において使用する場合、2官能性架橋試薬とは本明細書に記載する薬物のような薬物に細胞結合剤を共有結合させる何れかの化学部分である。別の方法においては、連結部分の一部分は薬物により与えられる。この点に関し、薬物は薬物に細胞結合剤を連結するために使用されるより大きいリンカー分子の部分である連結部分を含む。例えば、マイタンシノイドDM1を形成するためには、マイタンシンのC-3ヒドロキシル基における側鎖を遊離のスルヒドリル基SHを有するように修飾する。マイタンシンのこのチオール化された型は修飾された細胞結合剤と反応してコンジュゲートを形成できる。従って、再修理かは2つの成分から組み立てられ、その1つは架橋試薬から与えられ、もう1つはDM1に由来する側鎖により与えられる。薬物分子は血清アルブミンのような中間的担体分子を介して抗体分子に連結することができる。本明細書において使用する場合、細胞結合剤に連結した又は抗CD37抗体又はフラグメントに連結したという表現は適当な連結基を介して細胞結合剤抗CD37抗体又はフラグメントに結合した少なくとも1つの薬剤誘導体を含むコンジュゲート又はその前駆体を指す。1つの連結基はSMCCである。特定の実施形態においては、本発明において有用な細胞傷害剤はマイタンシノイド及びマイタンシノイド類縁体である。適当なマイタンシノイドの例はマイタンシノールのエステル及びマイタンシノール類縁体を包含する。マイタンシノール及びマイタンシノール類縁体のように微小管形成を阻害し、そして哺乳類細胞に対して高度に毒性である如何なる薬物も包含される。適当なマイタンシノールエステルの例は修飾された芳香族環を有するもの、及び他の位置における修飾を有するものを包含する。このような適当なマイタンシノイドは米国特許4,424,219;4,256,746;4,294,757;4,307,016;4,313,946;4,315,929;4,331,598;4,361,650;4,362,663;4,364,866;4,450,254;4,322,348;4,371,533;5,208,020;5,416,064;5,475,092;5,585,499;5,846,545;6,333,410;7,276,497及び7,473,796に開示されている。特定の実施形態においては、本発明のイムノコンジュゲートは細胞傷害剤として、正式名称はN2’-デアセチル-N2’-3-メルカプト-1-オキソプロピル-マイタンシンであるチオール含有マイタンシノイドDM1を利用する。DM1は下記構造式IIIにより表わされる。別の実施形態においては、本発明のコンジュゲートは細胞傷害剤として、チオール含有マイタンシノイドN2’-デアセチル-N2’-4-メチル-4-メルカプト-1-オキソプロピル-マイタンシン例えばDM4を利用する。DM4は下記構造式IVにより表わされる。立体障害チオール結合を含有する側鎖を含む別のマイタンシノイドは下記構造式Vで表わされるN2’-デアセチル-N2’-4-メルカプト-1-オキソペンチル-マイタンシンDM3と称するである。米国特許5,208,020及び7,276,497において教示されているマイタンシノイドの各々もまた、本発明におけるコンジュゲートにおいて使用できる。この点に関し、5,208,020及び7,276,697の全開示は参照により本明細書に組み込まれる。マイタンシノイドの多くの位置が連結部分を化学的に連結するための位置として機能する。例えばヒドロキシル基を有するC-3位、ヒドロキシメチルで修飾されたC-14位、ヒドロキシルで修飾されたC-15位及びヒドロキシ基を有するC-20位が全て有用であると期待される。一部の実施形態においては、C-3位は連結部分を化学的に連結するための位置として機能し、そして一部の実施形態においては、マイタンシノールのC-3位が連結部分を化学的に連結するための位置として機能する。一部のコンジュゲートの構造図を以下に示す。このような抗体マイタンシノイドコンジュゲートを生成するための幾つかの説明が米国特許6,333,410、6,441,163、6,716,821及び7,368,565に記載されており、これらの各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。一般的に、水性緩衝液中の抗体の溶液を、反応性の基を担持したジスルフィド部分を有するマイタンシノイドのモル過剰量と共にインキュベートすることができる。過剰なアミン例えばエタノールアミン、タウリン等を添加することにより反応混合物をクエンチングできる。次にマイタンシノイド-抗体コンジュゲートをゲル濾過により精製できる。抗体分子当たりに結合しているマイタンシノイド分子の数は、252nm及び280nmの吸光度の比を分光光学的に計測することにより求めることができる。マイタンシノイド分子/抗体の平均数は、例えば1~10、2~5、3~4、又は約3.5であることができる。1つの側面において、マイタンシノイド分子の平均数は約3.5±0.5である。アントラサイクリン化合物、並びにその誘導体、中間体及び修飾されたバージョンもまた抗CD37イムノコンジュゲートを調製するために使用できる。例えば、ドキソルビシン、ドキソルビシン誘導体、ドキソルビシン中間体、及び修飾されたドキソルビシンを抗CD37コンジュゲートに使用できる。例示される化合物はWO2010/009124に記載されており、これらは参照により全体が本明細書に組み込まれる。このような化合物は例えば下記式:[式中R1は水素原子、ヒドロキシ又はメトキシ基であり、そしてR2はC1-Csアルコキシ基である]の化合物又は製薬上許容しうるその塩を包含する。マイタンシノイド又は他の薬物との抗体のコンジュゲートがインビトロで種々の望ましくない細胞系統の増殖を抑制する能力を評価することができる。例えば、ヒトリンパ腫細胞系統Daudi及びヒトリンパ腫細胞系統Ramosのような細胞系統が、これらの化合物の細胞傷害性を評価するために容易に使用できる。評価すべき細胞を4~5日間化合物に曝露し、そして細胞の生存割合を知られた方法により直接アッセイにおいて計測できる。次にIC50値をアッセイ結果から計算できる。本明細書に記載する一部の実施形態によればイムノコンジュゲートは細胞内に内在化できる。従って、イムノコンジュゲートはCD37発現細胞により取り込まれるか、内在化される際に、治療作用を呈することができる。一部の特定の実施形態において、イムノコンジュゲートは切断可能なリンカーにより細胞傷害剤に連結された抗体、抗体フラグメント又はポリペプチドを含み、そして細胞傷害剤は、それがCD37発現細胞により内在化される場合に抗体、抗体フラグメント又はポリペプチドから切断される。一部の実施形態においては、イムノコンジュゲートは腫瘍体積を低減することができる。例えば、一部の実施形態においては、イムノコンジュゲートの投与により、約50未満、約45未満、約40未満、約35未満、約30未満、約25未満、約20未満、約15未満、約10未満、又は約5未満であるT/C値がもたらされる。一部の特定の実施形態においては、イムノコンジュゲートはBJAB異種移植片もdる及び/又はSU-DHL-4異種移植片モデルにおいて腫瘍の大きさを低減できる。本発明の別の側面においてsiRNA分子を薬物の代わりに本発明の抗体に連結できる。siRNAはオリゴヌクレオチドの修飾に一般的に使用されている方法により本発明の抗体に連結できる例えば米国特許出願公開20050107325及び20070213292を参照。即ち、3’又は5’-ホスホロミダイト型のsiRNAをヒドロキシル官能性を担持している架橋剤の一方の末端と反応させ、siRNAと架橋剤との間にエステル結合を形成することができる。同様に末端アミノ基を担持する架橋剤とsiRNAホスホロアミダイトを反応させることによりアミンを介したsiRNAへの架橋剤の連結が起こる。或いは、siRNAを標準的な科学的方法により誘導体化することによりチオール基を導入することができる。このチオール含有siRNAを、予め活性ジスルフィド又はマレイミド部分を導入するように修飾されている抗体と反応させれば、切断可能な、又は切断不可能なコンジュゲートが得られる。この方法で1~20個のsiRNA分子を抗体に連結できる。III.ポリヌクレオチド特定の実施形態においては、本発明はCD37に特異的に結合するポリペプチド、又はそのようなポリペプチドのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包含する。例えば、本発明はヒトCD37に対する抗体をコードする、又はそのような抗体のフラグメントをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明のポリヌクレオチドはRNAの形態又はDNAの形態であることができる。DNAはcDNA、ゲノムDNA、及び合成DNAを包含し;そして2本鎖又は1本鎖であることができ、そして1本鎖である場合はコーディング鎖又は非コーディングアンチセンス鎖であることができる。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは単離されている。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。本発明は配列番号4~120よりなる群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は更に、以下の表7~10に示すものから選択される配列を含むポリヌクレオチドを提供する。同様に提供されるものは、配列番号121~170に少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、又は少なくとも約99の配列同一性を有するポリヌクレオチドである。即ち、特定の実施形態においては、ポリペプチドはa配列番号121~135又は152~161に少なくとも約95の配列同一性を有するポリペプチド、及び/又はb配列番号136~151又は162~170に少なくとも約95の配列同一性を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリペプチドはa配列番号121~135又は152~161のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び/又はb配列番号136~151又は162~170のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは組み換えプラスミドDNAphuCD37-3LCATCC受託番号PTA-10722、2010年3月18日にATCCに寄託によりコードされる軽鎖、又は、phuCD37-3LCPTA-10722によりコードされる軽鎖に少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、又は少なくとも約99である軽鎖をコードする。一部の実施形態においては、ポリヌクレオチドは組み換えプラスミドDNAphuCD37-3HCv.1.0.ATCC受託番号PTA-10723、2010年3月18日にATCCに寄託によりコードされる重鎖、又はphuCD37-3HCv.1.0.PTA-10723によりコードされる重鎖に少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、又は少なくとも約99同一である重鎖をコードする。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは組み換えプラスミドDNAphuCD37-3LCPTA-10722又は組み換えプラスミドphuCD37-3HCv.1.0.PTA-10723である。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは、例えば宿主細胞からのポリペプチドの発現及び分泌を支援する、ポリヌクレオチドに同じ読み枠で融合した成熟ポリペプチドに関するコーディング配列を含む例えば細胞からのポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列。リーダー配列を有するポリペプチドは、プレ蛋白であり、そして宿主細胞により切断されてポリペプチドの成熟型を形成するリーダー配列を有することができる。ポリヌクレオチドは又、成熟蛋白プラス追加5’アミノ酸残基であるプロ蛋白に対してもコードできる。プロ配列を有する成熟蛋白はプロ蛋白であり、そして蛋白の不活性型である。プロ配列が切断されると活性な成熟蛋白が残存する。特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは例えばコードされたポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列に同じ読み枠で融合した成熟ポリペプチドに関するコーディング配列を含む。例えば、マーカー配列は、細菌宿主の場合はマーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を可能にするpQE-9ベクターにより与えられるヘキサヒスチジンタグであることができ、又は、哺乳類宿主例えばCOS-7細胞を使用する場合は、インフルエンザヘマグルチニン蛋白から誘導されたヘマグルチニンHAタグであることができる。本発明は更に例えばフラグメント、類縁体及び誘導体をコードする上記下ポリヌクレオチドの変異体に関する。ポリヌクレオチド変異体はコーディング領域、非コーディング領域、又は両方において改変を含有できる。一部の実施形態においては、ポリヌクレオチド変異体はサイレントな置換、負荷、又は欠失をもたらすが、コードされたポリペプチドの特性又は活性を改変しない改変を含有する。一部の実施形態においては、ヌクレオチド変異体は遺伝子コードの縮重によるサイレントな置換により生成される。ポリヌクレオチド変異体は種々の理由のため、例えば特定の宿主に対してコドンの発現を最適化するヒトmRNA中のコドンをEコリのような細菌宿主により好まれるものに変えるために生産することもできる。本明細書に記載するポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞も提供される。IV.使用方法及び医薬組成物本発明のCD37結合剤抗体、イムノコンジュゲート及びポリペプチドを包含はB細胞悪性疾患のような癌の治療のような施療的治療方法を包含するがこれに限定されない種々の用途において有用である。特定の実施形態においては、剤は腫瘍生育を阻害し、分化を誘導し、腫瘍体積を低減し、及び/又は腫瘍の腫瘍形成性を低減するために有用である。使用方法はインビトロ、エクスビボ、又はインビボの方法であることができる。特定の実施形態においては、CD37結合剤又は抗体又はイムノコンジュゲート又はポリペプチドはそれが結合するヒトCD37の拮抗剤である。1つの側面において、本発明の抗CD37抗体及びイムノコンジュゲートは生物学的試料中のCD37の存在を検出するために有用である。検出するという用語は本明細書において使用する場合、定量的又は定性的な検出を包含する。特定の実施形態においては、生物学的試料は細胞又は組織を含む。特定の実施形態においては、そのような組織は、他の組織と相対比較してより高値のレベルでCD37を発現する正常及び/又は癌性の組織、例えばB細胞及び/又はB細胞関連組織を包含する。1つの側面において、本発明は生物学的試料中のCD37の存在を検出する方法を提供する、特定の実施形態においては、方法は、CD37への抗CD37抗体の結合を可能にする条件下で抗CD37抗体に生物学的試料を接触させること、及び、抗CD37抗体とCD37との間に複合体が形成されているかどうか検出することを含む。1つの側面において、本発明はCD37の増大した発現に関連する障害を診断する方法を提供する。特定の実施形態においては、方法は、抗CD37抗体に被験細胞を接触させること;CD37への抗CD37抗体の結合を検出することにより被験細胞によるCD37の発現のレベルを定量的又は定性的に測定すること;及び被験細胞によるCD37の発現のレベルを対照細胞例えば被験細胞と同じ組織起源の正常細胞、又は、そのような正常細胞に匹敵するレベルでCD37を発現している細胞によるCD37の発現のレベルと比較することを含み、ここで対照細胞と比較した場合に被験細胞によるより高レベルのCD37の発現は、CD37の増大した発現に関連する障害の存在を示している。特定の実施形態においては、被験細胞はCD37の増大した発現に関連する障害を有すると疑われる個体から得られる。特定の実施形態においては、障害は細胞増殖障害、例えば癌又は腫瘍である。特定の実施形態においては、上記した者のような診断又は検出の方法は、細胞の表面上に発現されているか、又は自身の表面上にCD37を発現している細胞から得られた膜調製物中の、CD37への抗CD37抗体の結合を検出することを含む。特定の実施形態においては、方法は、CD37への抗CD37抗体の結合を可能にする条件下で抗CD37抗体に細胞を接触させること、及び細胞表面上の抗CD37抗体とCD37との間に複合体が形成されているかどうか検出することを含む。細胞表面に発現されたCD37への抗CD37抗体の結合を検出するための例示されるアッセイはFACSアッセイである。特定の別の方法を用いてCD37への抗CD37抗体の結合を検出することができる。そのような方法は、当該分野で良く知られている抗原結合試験、例えばウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ELISA酵素連結免疫吸着試験。サンドイッチイムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインAイムノアッセイ及び免疫組織化学IHCを包含するがこれらに限定されない。特定の実施形態においては、抗CD37抗体を標識する。標識は、直接検出される標識又は部分例えば蛍光、発色団、電子稠密、化学ルミネセント、及び放射活性の標識並びに例えば酵素的反応又は分子相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分を包含するがこれらに限定されない。特定の実施形態においては、抗CD37抗体は不溶性マトリックス上に固定化される。固定化とは溶液中に遊離で残存する如何なるCD37からも抗CD37抗体を分離することを意味する。これは従来より、水不溶性マトリックス又は表面に吸着することによるBennich等、米国特許3,720,760か、又は共有結合カップリング例えばグルタルアルデヒド架橋を用いるによる等して、アッセイ操作の前に抗CD37抗体を不溶化することによるか、又は例えば免疫沈降により抗CD37抗体と架橋との間の複合体の形成の後に抗CD37抗体を不溶化することによるかの、いずれかにより達成される。診断又は検出の上記した実施形態の何れも、抗CD37抗体の代わりに、又はそれに追加して、本発明のイムノコンジュゲートを使用しながら実施できる。特定の実施形態においては、CD37結合剤又は拮抗剤例えば抗CD37抗体で治療される疾患は癌である。特定の実施形態においては、癌はCD37結合剤例えば抗体が結合する相手であるCD37発現細胞により特徴付けられる。本発明は対象例えば治療を要する対象にCD37結合剤の治療有効量を投与することを含む癌の治療の方法を提供する。特定の実施形態においては、癌はB細胞悪性疾患である。特定の実施形態においては、癌はB細胞リンパ腫、NHL、前駆性B細胞リンパ芽球性白血病/リンパ腫及び成熟B細胞新生物、B細胞慢性リンパ性白血病CLL/小リンパ球性リンパ腫SLL、B細胞前リンパ球性白血病、リンパプラズマ細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫MCL、濾胞性リンパ腫FL、低悪性度、中悪性度及び高悪性度FL、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯B細胞リンパ腫、MALT型辺縁帯B細胞リンパ腫、結節性辺縁帯B細胞リンパ腫、脾臓型辺縁帯B細胞リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、ブルキットリンパ腫、プラズマ細胞腫、プラズマ細胞骨髄腫、移植後のリンパ増殖性障害、バルデンストレームマクログロブリン血症、及び未分化大細胞リンパ腫ALCLよりなる群から選択される。特定の実施形態においては、対象はヒトである。本発明は更に本明細書に記載する抗体又は他の剤を用いた腫瘍生育を阻害するための方法を提供する。特定の実施形態においては、腫瘍生育を阻害する方法はインビトロでCD37結合剤例えば抗体に細胞を接触させることを含む。例えば、CD37を発現する不朽化細胞系統又は癌細胞を培地中で培養し、これに抗体又は他の剤を添加して腫瘍生育を阻害する。一部の実施形態においては、患者試料、例えば生検組織、胸水又は血液試料から腫瘍細胞を単離し、培地中で培養し、これにCD37結合剤を添加して腫瘍生育を阻害する。一部の実施形態においては、腫瘍生育を阻害する方法はインビボでCD37結合剤例えば抗体に腫瘍又は腫瘍細胞を接触させることを含む。特定の実施形態においては、CD37結合剤に腫瘍又は腫瘍細胞を接触させることは動物モデルにおいて行われる。例えば免疫無防備状態のマウス例えばNOD/SCIDマウス中で成育させておいた1つ以上のCD37を発現する異種移植片にCD37結合剤を投与することにより腫瘍生育を阻害することができる。一部の実施形態においては癌幹細胞を患者試料、例えば生検組織、胸水又は血液試料から単離し、免疫無防備状態のマウスに注射し、次にCD37結合剤を投与することにより腫瘍細胞生育を阻害する。一部の実施形態においては、CD37結合剤は動物内への腫瘍形成性細胞の導入と同時かその直後に投与することにより腫瘍生育を防止する。一部の実施形態においては、CD37結合剤は腫瘍形成性細胞が特定の大きさまで成育した後に治療薬として投与される。特定の実施形態においては、腫瘍生育を阻害する方法はCD37結合剤の治療有効量を対象に投与することを含む。特定の実施形態においては、対象はヒトである。特定の実施形態においては、対象は腫瘍を有するか、腫瘍を除去している。特定の実施形態においては腫瘍はCD37結合剤又は抗体が結合するCD37を発現する。特定の実施形態においては、腫瘍はヒトCD37を過剰発現する。更に又、本発明は対象にCD37結合剤の治療有効量を投与することを含む対象中の腫瘍の腫瘍形成性を低減する方法を提供する。特定の実施形態においては、腫瘍は癌幹細胞を含む。特定の実施形態においては、腫瘍中の癌幹細胞の発生頻度は剤の投与により低減される。本発明は更にCD37結合剤に腫瘍形成性細胞を接触することを含む非腫瘍形成性細胞への腫瘍形成性細胞の文化の方法を提供する例えば腫瘍形成性細胞を含む腫瘍を有するか、又はそのような腫瘍を除去している対象にCD37結合剤を投与することによる。腫瘍細胞を包含するがこれに限定されない細胞の分化を誘導するための本明細書に記載したCD37結合剤、ポリペプチド、又は抗体の使用もまた提供される。例えば、本明細書に記載したCD37結合剤例えば抗CD37抗体の有効量に細胞を接触させることを含む細胞を分化するように誘導する方法が想定される。対象にCD37結合剤、ポリペプチド又は抗体の治療有効量を投与することを含む対象中の腫瘍中の細胞を分化するように誘導する方法もまた提供される。特定の実施形態においては、腫瘍は膵臓腫瘍である。特定の実施形態においては、腫瘍は結腸腫瘍である。一部の実施形態においては、治療方法は対象にCD37結合剤、ポリペプチド又は抗体の治療有効量を投与することを含む。本発明は更に、本明細書に記載したCD37結合剤の1つ以上を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態においては、医薬組成物は更に製薬上許容しうるベヒクルを含む。これらの医薬組成物はヒト患者において腫瘍生育を阻害し、そして癌を治療する場合に使用できる。特定の実施形態においては、製剤は、製薬上許容しうるベヒクル例えば担体、賦形剤に本発明の精製された抗体又は剤を混合することにより保存及び使用のために調製されるRemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy20thEditionMackPublishing2000。適当な製薬上許容しうるベヒクルは非毒性緩衝物質、例えばリン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸塩類、例えば塩化ナトリウム;抗酸化剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン;保存料例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム;塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチル又はベンジルアルコール;アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;及びm-クレゾール;低分子量ポリペプチド例えば約10アミノ酸残基未満;蛋白、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン;親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン;アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン;炭水化物、例えば単糖類、2糖類、グルコース、マンノース、デキストリン;キレート形成剤、例えばEDTA;糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール;塩形成対イオン、例えばナトリウム;金属複合体例えばZn-蛋白複合体;及びノニオン性界面活性剤、例えばTWEEN又はポリエチレングリコールPEGを包含するがこれらに限定されない。本発明の医薬組成物は局所又は全身投与の何れかのために如何なる数の方法においても投与できる。投与は局所例えば経膣及び肛門送達を包含する経粘膜、例えば経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、座剤、スプレー、液体及び粉末;肺例えば粉末又はエアロゾルの吸入又は吸収、例えばネブライザーによるもの;気管内、鼻内、表皮及び経皮;経口又は非経腸、例えば静脈内、動脈内、皮下、腹腔内又は筋肉内の注射又は輸液;又は頭蓋内例えば髄腔内又は脳室内投与であることができる。本発明のイムノコンジュゲートの抗体は、医薬複合製剤又は複合療法としての投薬法において、抗癌特性を有する第2の化合物と組み合わせることができる。医薬複合製剤又は投薬法の第2の化合物はそれらが相互に悪影響を及ぼさないように複合物のADCに対して補完的活性を有することができる。CD37結合剤及び第2の抗癌剤を含む医薬組成物も提供される。例えば、CD37結合剤はリツキシマブのようなCD20拮抗剤と組み合わせて投与できる。疾患の治療のためには、本発明の抗体又は剤の適切な用量は、治療すべき疾患の型、疾患の重症度及び経過、疾患の応答性、抗体又は剤が治療又は予防目的の何れで投与されるか、以前の治療、患者の病歴等に応じたものとなり、全て担当医の判断による。抗体又は剤は、1回、又は数日から数か月まで継続する一連の治療に渡り、或いは、治癒が成功するか、又は疾患の縮小例えば腫瘍の大きさの減少が達成されるまで投与することができる。最適な投薬計画は患者の身体における薬物の蓄積の計測から計算でき、そして個々の抗体又は剤の相対的力価に応じて変動することになる。投薬医師は最適な用量、投薬法および反復率を容易に決定できる。特定の実施形態においては、用量はkg体重当たり0.01μg~100mgであり、そして毎日、毎週、毎月又は毎年1回以上投与できる。特定の実施形態においては、抗体又は他のCD37結合剤を2週間に1回、又は3週間に1回投与する。特定の実施形態においては、抗体又は他のCD37結合剤の用量はkg体重当たり約0.1mg~約20mgである。担当医は体液又は組織中の薬物の滞留時間及び濃度の計測値に基づいて投薬の反復率を推定できる。複合療法は相乗作用をもたらすことができ、相乗作用的であることがわかっており、即ち、活性成分を共に使用した場合に達成される作用が、化合物を別個に使用した場合に得られる作用の総和より大きい。相乗作用は、活性成分が1共同製剤され、そして複合単位剤型において同時に投与又は送達されるか;2別個の製剤として交互又は並行して送達されるか;又は3何らかの他の投薬法による場合に、達成できる。交互治療において送達される場合、相乗作用は、化合物が逐次的に、例えば別個のシリンジにおける異なる注射により投与又は送達される場合に達成できる。一般的に、交互治療中は、各活性成分の有効用量を逐次的、即ち連続して投与するが、複合療法の場合は、2つ以上の活性成分の有効用量を共に投与する。VI.CD37結合剤を含むキット本発明は本明細書に記載した抗体、イムノコンジュゲート又は他の剤を含み、そして本明細書に記載した方法を実施するために使用できるキットを提供する。特定の実施形態においては、キットは容器1つ以上の中にCD37に対する精製された抗体少なくとも1つを含む。一部の実施形態においては、キットは対照、アッセイ実施のための説明書、及び結果の分析及び表示のための何れかの必要なソフトウエアの全てを含む検出アッセイを実施するために必要及び/又は十分な成分の全てを含有する。本発明の開示した抗体、イムノコンジュゲート及び他の剤は当該分野で良く知られている確立されたキットフォーマットの1つに容易に組み込むことができることが当業者の知る通りである。更に提供されるものはCD37結合剤例えばCD37結合抗体並びに第2の抗癌剤を含むキットである。特定の実施形態においては、第2の抗癌剤は化学療法剤例えばリツキシマブである。本発明の実施形態は以下の非限定的な例を参照することにより更に明確化でき、これらは本開示の特定の抗体の調製及び本開示の抗体を用いるための方法を詳細に説明している。物質及び方法の両方に対する多くの変更が本開示の範囲から逸脱することなく実施できることは当業者の知る通りである。本明細書に記載した実施例及び実施形態は説明を目的としているのみであり、そしてそれに基づく種々の改変または変更が当業者に示唆されることになり、そして本出願の精神及び範囲に包含されるべきであると理解しなければならない。全ての細胞系統は湿潤5CO2インキュベーター中37°Cで10ウシ胎児血清、2mMグルタミン及び1ペニシリン-ストレプトマイシン全試薬Invitrogenより入手を添加したRPMI-1640培地中で生育させた。細胞は週2回振せん培地中に希釈することにより継代し、そして0.2~1x106細胞/mlに維持した。実施例1ネズミCD37抗体の生産ヒトCD37の発現を可能とするXbaI及びBamHI制限部位によりフランキングされた全CD37CD配列CDSを含有する発現プラスミドpSRa-CD37を構築した。Balb/cマウスから誘導した前B細胞である300-19細胞MGReth等、1985Nature317353355をこの発現プラスミドでトランスフェクトすることにより細胞表面上に高レベルのヒトCD37のを安定に発現させ、そしてBalb/cVAFマウスの免疫化のために使用した。マウスはImmunoGen,Incにおいて使用されている標準的免疫化プロトコルにより2~3週毎マウス当たり約4x106個のCD37発現300-19細胞により皮下免疫した。免疫化したマウスは、ハイブリドーマ形成のために屠殺する3日前に抗原の別の用量によりブーストした。マウスの脾臓を標準的動物プロトコルに従って採集し、そして2枚の滅菌フロスト処理顕微鏡用スライドの間で磨砕することによりRPMI-1640培地中の単細胞懸濁液を得た。脾細胞をペレット化し、洗浄し、ポリエチレングリコール-1500Roche783641を用いることによりネズミミエローマP3X63Ag8.653細胞JFKearney等、1979JImmunol12315481550と融合させた。ヒポキサンチン-アミノプテリン-チミジンHATSigmaH-0262を含有するRPMI-1640選択培地に融合細胞を再懸濁し、そして37°C5CO2下に96穴平底培養プレートCorning-Costar3596、ウェル当たり細胞懸濁液200μL中における生育に関して選択した。5日間インキュベートしたの地、培養上澄み100μLを各ウェルから取り出し、ヒポキサンチン-チミジンHT補給物SigmaH-0137を含有するRPMI-1640培地100μLと置き換えた。ハイブリドーマクローンが抗体スクリーニングに使用できるようになるまで、37°C5CO2下にインキュベーションを継続した。JLangoneandHVunakis及びEHarlowandDLaneに記載されているものを含むその他の免疫化およびハイブリドーマ生産の手法もまた使用できる。ハイブリドーマのスクリーニング及び選択CD37発現300-19細胞には結合するが非トランスフェクトの300-19細胞には結合しないマウスモノクローナル抗体の分泌に関してフローサイトメトリーによりハイブリドーマの培養上澄みをスクリーニングした。ハイブリドーマ上澄み100μLを100μLのFACS緩衝液2正常ヤギ血清を添加したRPMI-1640培地中CD37発現300-19細胞又は非トランスフェクトの300-19細胞試料当たり1x105個の何れかと共に3時間インキュベートした。次に細胞をペレット化し、洗浄し、PEコンジュゲートヤギ抗マウスIgG抗体JacksonLaboratory,FACS緩衝液中6μg/mlと共に1時間インキュベートした。細胞を再度ペレット化し、FACS緩衝液で洗浄し、1ホルムアルデヒド含有PBS200μL中に再懸濁した。試料はHTSマルチウェルサンプラーを用いたFACSCaliburフローサイトメトリー又はFACSアレイフローサイトメトリーを用いながら獲得し、そしてCellQuestPro全ての入手元はBDBiosciences,Sandiego,USを用いて分析した。陽性所見のハイブリドーマクローンを限界希釈によりサブクローニングした。フローサイトメトリーにより親細胞と同じCD37に対する反応性を示した各ハイブリドーマから1つのサブクローンを選択して後の分析に付した。安定なサブクローンを培養し、各分泌抗CD37抗体のアイソタイプを市販のアイソタイピング試薬Roche1493027を用いて識別した。合計45回の別個の融合実験を本検討過程に渡って実施した。単一の融合実験は定型的には約200~1000個のハイブリドーマクローンをもたらした。得られたハイブリドーマクローンの全てをフローサイトメトリーによりCD37結合に関してスクリーニングしたところ、合計で184個のハイブリドーマクローンがCD37への特異的結合を示した。抗体精製抗体を例えばプロテインA又はGクロマトグラフィーHiTrapプロテインA又はGHP、1mL、AmershamBiosciencesのような標準的方法を用いながらハイブリドーマサブクローン上澄みから精製した。要すれば、1/10容量の1MTris/HCl緩衝液、pH8.0を添加することにより上澄みをクロマトグラフィー用に調製した。pH調節上澄みを0.22μmのメンブレンフィルターで濾過し、そして結合緩衝液PBS、pH7.3で平衡化したカラムにロードした。カラムは280nmにおける吸光度が無く安定なベースラインが得られるまで結合緩衝液で洗浄した。0.5mL/分の流量を用いながら、0.15MNaClを含有する0.1M酢酸緩衝液、pH2.8で抗体を溶離した。約0.25mLの画分を採取し、1/10容量の1MTris/HCl、pH8.0を添加することにより中和した。ピーク画分を1xPBSに対して2回一夜透析し、0.2μmのメンブレンフィルターを通して濾過することにより滅菌した。精製された抗体はA280の吸光度により定量した。プロテインA精製画分は、更にネズミ抗体に対する第4アンモニウムQクロマトグラフィーを用いたイオン交換クロマトグラフィーIEXを用いて最終精製した。要すれば、プロテインA精製からの試料を結合緩衝液10mMTris、10mM塩化ナトリウム、pH8.0に緩衝液交換し、そして0.22μmのフィルターを通して濾過した。調製した試料を次に、120cm/hrの流量で結合緩衝液で平衡化されたQファーストフロー樹脂GELifesciences上にロードした。カラムのサイズは試料中の全てのMAbに結合するために十分な容量を有するように選択した。次にカラムを280nmにおける吸光度が無く安定なベースラインが得られるまで結合緩衝液で洗浄した。20カラム容量CV中10mMから500mMの塩化ナトリウムの勾配を開始することにより抗体を溶離した。ピーク画分は280nmの吸光度測定A280に基づいて収集した。単量体のパーセンテージはAgilentHPLC1100システムAgilent,SantaClala,CAを用いながら、SWXLガードカラム、6.0x40mmTosohBioscience,Montgomeryville,PAを用いたTSKgelG3000SWXL,7.8x300mm上のサイズエクスクルージョンクロマトグラフィーSECで評価した。95超の単量体含有量を有する画分をプールし、TFFシステムを用いてPBSpH7.4に緩衝液交換し、そして0.2μmのメンブレンフィルターを通して濾過することにより滅菌した。精製された抗体のIgG濃度は1.47の消衰係数を用いながらA280により求めた。セラミックヒドロキシアパタイトCHTのような代替の方法もまた良好な選択性で抗体を最終精製するために使用した。I粒径40μmのII型CHT樹脂BioRadLaboratoriesもEXクロマトグラフィーに関して記載したものと同様のプロトコルで使用した。CHTの結合緩衝液は20mMリン酸ナトリウム、pH7.0に相当し、そして抗体は20CVに渡って20~160mMリン酸ナトリウムの勾配により溶離した。実施例2フローサイトメトリーによる結合の特性化精製された抗体を用いながらフローサイトメトリーにより結合特異性を試験した。CD37発現300-19細胞へのmuCD37-3、muCD37-12、muCD37-38、muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56及びmuCD37-57の結合及び親300-19細胞への結合が無いことを示すFACSヒストグラムを図1及び図2に示す。100μLのFACS緩衝液2正常ヤギ血清を添加したRPMI-1640培地中のCD37発現300-19細胞又は非トランスフェクト300-19細胞試料当たり細胞1x105個の何れかと共に3時間、全てのネズミ抗体をインキュベートした。次に、細胞をペレット化し、洗浄し、100μLのFITC-コンジュゲートヤギ抗マウスIgG抗体JacksonLaboratory,FACS緩衝液中6μg/mlと共に1時間インキュベートした。細胞を再度ペレット化し、FACS緩衝液で洗浄し、1ホルムアルデヒド含有PBS200μL中に再懸濁した。試料はHTSマルチウェルサンプラーを用いたFACSCaliburフローサイトメトリー又はFACSアレイフローサイトメトリーを用いながら獲得し、そしてCellQuestPro全ての入手元はBDBiosciences,Sandiego,USを用いて分析した。muCD37-3、muCD37-12、muCD37-38、muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56及びmuCD37-57と共にインキュベートしたCD37発現300-19細胞のFACSヒストグラムは蛍光シフトを示したのに対し、親300-19細胞は示さなかった。更に又、何れの細胞系統もFITC-コンジュゲートヤギ抗マウスIgG抗体のみと共にインキュベートした場合は有意な蛍光シフトは検出されなかった図1下。内因性に発現されたCD37にも抗体が結合するかどうかを確認するために、CD37陽性WSU-DLCL-2リンパ腫細胞及びmuCD37-3、muCD37-12、muCD37-8、muCD37-10又はmuCD37-14抗体を用いて結合実験を行った。WSU-DLCL-2細胞を種々の濃度のネズミ抗体と共にインキュベートし、そして上記した通りフローサイトメトリー分析用に処理した。データ分析はCellQuestProBDBiosciences,Sandiego,USを用いて実施し、そして各試料についてFL1MF1に関する平均の蛍光強度をエキスポートし、そして片対数プロットにおいて抗体濃度に対してプロットした図3。用量応答曲線を非直線回帰により作成し、そして各抗体の見かけの解離定数Kdに相当する各曲線のEC50値をGraphPadPrismv4GraphPadsoftware,SanDiego,CAを用いながら計算した。試験した全ての抗体に関して蛍光における強いシフトが観察され、Kd値はmuCD37-3、muCD37-8、muCD37-10、muCD37-12又はmuCD37-14抗体に関してそれぞれ、0.52nM、1.7nM、2.7nM、1.1nM、又は0.92nMに相当している。同様に、CD37陽性BJABリンパ腫細胞を上記したものと同じフローサイトメトリーアッセイに関して使用した場合にも強力な結合が観察された。Kd値を上記した通り計算した所、muCD37-3、muCD37-38、muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56及びmuCD37-57抗体に関してそれぞれ、0.2nM、0.4nM、0.6nM、0.4nM、及び1nMに相当している。実施例3ネズミ抗体の前アポトーシス活性ネズミ抗CD37抗体はRamos及びRajiリンパ腫細胞系統のアポトーシスを誘導している。アポトーシスの程度はアネキシン-VInvitrogenのFITCコンジュゲートによる、及びTO-PRO-3Invitrogenによる染色の後のフローサイトメトリー分析により計測した。健康正常細胞においては、ホスファチジルセリンは膜2層の内部上で発現され、そして原形質膜の内側から外側のリーフレットへのホスファチジルセリンの通過はアポトーシスの最も早期の検出可能なシグナルの1つである。アネキシン-Vは未損傷の細胞の細胞膜2層の外側上のホスファチジルセリンと結合するが内側上では結合しない。したがってアネキシン-V結合の程度はアポトーシスの誘導のインジケーターとなる。TO-PRO-3はアポトーシスの後期の段階起こるような膜の一体性が損なわれた場合にのみ、原形質膜を通過できる単量体シアニン核酸染色物である。細胞の3集団、即ち:非アポトーシス細胞アネキシン-V陰性及びTO-PRO-3陰性、早期アポトーシス細胞アネキシン-V陽性及びTO-PRO-3陰性及び壊死細胞又は後期アポトーシス細胞アネキシン-V陽性及びTO-PRO-3陽性が2色フローサイトメトリーにおいて識別可能である。指数的に生育している細胞を、10ウシ胎児血清FBS、2mML-グルタミン、及び50μg/mlゲンタマイシンを添加したRMPI-1640培地以下、完全RMPI-1640培地と称する中24穴プレート中に約2x10-5細胞/mLでプレーティングした。細胞は一般的に、特段の記載が無い限り、完全RMPI-1640培地中で生育する。細胞を湿潤5CO2インキュベーター中37°Cで20~24時間、抗CD37抗体10nMと共にインキュベートした。次に細胞をペレット化し、500μLのPBSで2回洗浄し、100μLの結合緩衝液10mMHepes-NaOH、pH7.4、140mMNaCl、2.5mMCaCl2中に再懸濁し、氷上15分間、アネキシン-V-FITC5μLで染色した。次に1μMのTO-PRO-3を含有する結合緩衝液400μLを混合物に添加し、そしてFITC及びTO-PRO-3の細胞会合蛍光をフローサイトメトリーにより迅速に計測した。各試料に関して5000のイベントを収集した。TO-PRO-3の蛍光FL4-H;y軸及びアネキシン-V-FITCの蛍光FL1-H:x軸のドットプロットをBDCellQuestソフトウエアを用いて作成した。これらのプロットから各試料に関してアネキシン-V陽性細胞TO-PRO-3陽性及び陰性細胞の両方を包含するのパーセントを求め、そして、Ramos細胞に関するものを図4に示した。本発明者等の抗体スクリーンから単離された数種の抗体をリツキシマブとの比較において前アポトーシス活性について試験した。意外にも、単離されたネズミ抗CD37抗体の一部、例えばmuCD37-3及びmuCD37-12は極めて強力な前アポトーシス活性を示した。muCD37-3に曝露されたRamos細胞の約38及びmuCD37-12に曝露されたRamos細胞の46がアネキシン-V陽性であった。一方、抗CD37抗体リツキシマブの投与は僅か13のアネキシン-V陽性をもたらし、未投与対照試料は5のアネキシン-V陽性細胞を含有していた。単離されたネズミ抗CD37抗体の数種は前アポトーシス活性を示さなかった。例えば、muCD37-8、muCD37-10又はmuCD37-14のRamos細胞への投与は未投与細胞と比較してアネキシン-V陽性のパーセントを殆ど、又は全く増大させなかった。これは図3に示す通りそれらのCD37への結合親和性が同等程度であったことと矛盾している。追加の抗体を単離し、Ramos細胞においてアポトーシスを誘導するそれらの能力についてスクリーニングした。高い親和性でCD37に結合した多くの単離された抗体のうち、僅か一部のみが前アポトーシス活性を有していた。アネキシン-Vアッセイの結果を図4Bに示す。ネズミ抗体muCD37-38、muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56及びmuCD37-57はアポトーシスを誘導することができ、そして未投与対照試料における5と比較して、38~45のアネキシン-V陽性Ramos細胞をもたらした。前のアッセイと同様に、抗CD37抗体リツキシマブの投与は僅か18のみのアネキシン-V陽性細胞をもたらした。更に又、ネズミ抗体をそれらがRajiリンパ腫細胞においてアポトーシスを湯どうする能力に関して試験した。Ramos細胞において観察されたとおり、高い親和性でCD37に結合した多くの単離された抗体のうち、僅か一部のみが前アポトーシス活性を有していた。muCD37-3又はmuCD37-12の投与はそれぞれ36又は49のアネキシン-V陽性細胞をもたらした。一方、抗CD37抗体リツキシマブは僅か20のアネキシン-V陽性細胞をもたらし、未投与対照試料は4のアネキシン-V陽性細胞を含有していた。同様に、muCD37-3、muCD37-38、muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56又はmuCD37-57を投与したRaji細胞の約60がアネキシン-V陽性細胞であったのに対し、未投与細胞では15であった。実施例4増殖アッセイ抗CD37抗体が細胞の成育を阻害する能力をインビトロの細胞傷害アッセイを用いて計測した。完全RPMI培地RPMI-1640、10ウシ胎児血清、2mMグルタミン、1ペニシリン-ストレプトマイシン、全試薬入手元Invitrogen100μL中ウェル当たり5000細胞で標的細胞をプレーティングした。3倍連続希釈により完全RPMI培地中に抗体を添加し、そして100μLをウェル当たり添加した。最終濃度は典型的には3x10-8M~4.6x10-12Mとなった。細胞を4~5日間、湿潤5CO2インキュベーター中37°Cにおいてインキュベートした。残存細胞の生存性は比色WST-8アッセイDojindoMolecularTechnologiesIncRockvilleMDUSにより測定した。WST-8は生細胞中デヒドロゲナーゼにより還元されて組織培養基中可溶なオレンジ色のホルマザン生成物となる。生成されたホルマザンの量は生細胞数に直接比例する。WST-8を更に2~4時間、湿潤5CO2インキュベーター中37°Cにおいてインキュベートした。マルチウェルプレートリーダー中450nmにおける吸光度A450を計測することによりプレートを分析した。培地及びWST-8のみを有するウェルのバックグラウンドA450を全ての数値から差し引いた。未投与細胞の入ったウェルの平均値で各投与試料値を割ることによりパーセント生存性を計算した。パーセント生存性=100A450投与試料-A450バックグラウンド/A450未投与試料-A450バックグラウンド。各投与に関し片対数プロットにおいて抗体濃度に対してパーセント生存性値をプロットした。ネズミCD37抗体及びSU-DHL-4リンパ腫細胞を用いた典型的な増殖アッセイの結果を図5に示す。数種のネズミ抗体が実質的に、そして用量依存性の態様においてSU-DHL-4細胞の増殖を阻害することができたのに対し、他のものはこのような作用を有していなかった。例えばmuCD37-3の投与は試験した最高抗体濃度において34まで細胞生存性を低減し、EC50は0.17nMであった。同様にmuCD37-38の投与は試験した最高抗体濃度において25まで細胞生存性を低減し、EC50は0.19nMであった。同様にmuCD37-50及びmuCD37-51の投与は試験した最高抗体濃度において38まで細胞生存性を低減し、EC50はそれぞれ0.25nM又は0.5nMであった。一方例えばCD37-16の投与は用量依存的態様において細胞生存性を低減しなかった。実施例5CD37-3抗体のVL及びVH領域のクローニング及び配列決定製造元のプロトコルに従ってRNeasyキットQIAgenを用いながらCD37-3ハイブリドーマ5x106細胞から全細胞RNAを調製した。その後SuperScriptIIcDNA合成キットInvitrogenを用いて全RNAからcDNAを合成した。ハイブリドーマ細胞から誘導したcDNA上の第1ラウンドの変性PCR反応のための操作法はWang等、JImmunolMethods23316777andCo等、1992JImmunol.148:1149-54に記載の方法に基づいた。VH配列は以下の変性プライマー:EcoMH1CTTCCGGAATTCSARGTNMAGCTGSAGSAGTC配列番号171,EcoMH2CTTCCGGAATTCSARGTNMAGCTGSAGSAGTCWGG配列番号172及びBamIgG1GGAGGATCCATAGACAGATGGGGGTGTCGTTTTGGC配列番号173を用いたPCRにより増幅した。VL配列は以下の変性プライマー:SacIMKGGAGCTCGAYATTGTGMTSACMCARWCTMCA配列番号174及びHindKLTATAGAGCTCAAGCTTGGATGGTGGGAAGATGGATACAGTTGGTGC配列番号175を用いたPCRにより増幅した。混合塩基は以下の通り、即ち:N=GATC,S=GC,Y=CT,M=AC,R=AG,W=ATと定義した。次にPCR反応混合物を1低融点アガロースゲル上で泳動させ、300~400bpバンドを切り出し、ZymoDNA未にカラムを用いて精製し、そしてAgencourtBiosciencesforsequencingに送付した。それぞれの5’及び3’PCRプライマーを配列決定プライマーとして使用することにより両方の方向から可変領域cDNAを形成した。VH及びVL領域のアミノ酸配列はDNA配列決定の結果から予測した。VL及びVHcDNA配列をクローニングするために使用した変性プライマーは5’末端の配列を改変するため、完全な配列を確認するためには追加的な配列決定作業が必要であった。予備cDNA配列を使用しながら、抗体配列の誘導元のネズミ生殖細胞系統の配列に関してNCBIのIgBlastサイトhttpwwwncbinlmnihgovigblastを検索した。次にPCRプライマーにより改変されない完全な可変領域句DNA配列を新しいPCR反応がもたらすように、ネズミ抗体の生殖細胞系統連結リーダー配列にアニーリングするようにそのPCRプライマーを設計した。PCR反応、バンドの精製及び配列決定は上記したとおり実施した。配列確認のための質量測定完全長抗体cDNA配列を得るために、可変領域に関するcDNA配列情報を生殖細胞系統定常領域配列に組み合わせた。次に重鎖及び軽鎖の分子量を計算し、ネズミCD37-3抗体のLC/MS分析で得られた分子量と比較した。分子量計測はCD37-3の軽鎖及び重鎖の両方に関するcDNA配列と合致している。キメラ化軽鎖可変領域の可変配列をpchCD37-3LCZプラスミド中のEcoRI及びBsiWI部位にクローニングする。重鎖可変領域はpchCD37-3HCNプラスミドのHindIII及びApa1部位にクローニングする。等価なプラスミドをchCD37-12に関して構築した。これらのプラスミドを用いて、標準的なリン酸カルシウム法BDBiosciencesCalPhosMammalianTransfectionKitCat631312によりHEK293T細胞中でキメラ抗体を発現した。上澄みは上記した標準的プロテインAクロマトグラフィー操作法を用いて精製したが、カルボキシメチルCMファーストフローイオン交換IEX樹脂GELifesciences及び10mMリン酸カリウム、10mM塩化ナトリウム結合緩衝液pH7.5又は上記した代替のCHT法の何れかを用いた最終精製クロマトグラフィー工程を実施した。実施例6抗体のヒト化例えば参照により全体が本明細書に組み込まれるRoguska等、ProcNatlAcadSciUSA91969973及びRoguska等、ProteinEng9895904に記載のリサーフィシング方法に従ってCD37-3及びhuCD37-50抗体をヒト化した。リサーフィシングでは一般的に軽鎖及び重鎖の両方における可変領域フレームワーク表面残基の識別及びそれらをヒト等価物で置き換えることを行う。ネズミCDRはリサーフィシングされた抗体において温存される。CD37-3及びCD37-50の例示されるCDRは表1に示す通りに定義される。リサーフィシングのために使用される重鎖CDR2の定義に加えて、表にはネズミ及びヒトのCD37-3及びCD37-50の両方に関する例示されるKabat定義重鎖CDR2が示されている。下線を付した配列はリサーフィシングのためのCDRとは考えられないKabatの重鎖CDR2の部分をマークしている。リサーフィシングに関して定義されたCD37-3及びCD7-50の軽鎖及び重鎖のCDRを表11に例示として示す。ネズミCD37-50軽鎖CDR2におけるリジン53はLCCDR2の両方のバージョンが得られるようにヒト化CD37-50においてアスパラギンで置き換えた。重鎖CDR2に関するKabatの定義は、ネズミ及びヒトのCD37-3の両方に関しても与えられる。下線を付した配列はリサーフィシングのためのCDRとは考えられないKabatの重鎖CDR2の部分をマークしている。表面残基部分はその相対的アクセス性が30以上の何れかの位置として定義されるPedersenJTetAlJMolBiol1994235959973。次に表面残基をヒト生殖細胞系統表面配列とアラインすることにより最も相同なヒト表面配列を識別する。CD37-3に関しては、置き換え表面として使用したヒト生殖細胞系統配列はVL及びVHに関してそれぞれIGKV1/OR2-001及びIGHV4-3009とした。CD37-50に関しては、置き換え表面として使用したヒト生殖細胞系統配列はVL及びVHに関してそれぞれIGKV3/OR2-26801及びIGHV4-3103とした。図6から明らかな通り、合計で、軽鎖で7個の表面残基及び重鎖で7個がCD37-3におけるヒト対応物で置き換えられた。CD37-50に関する図7においてわかるとおり、ヒト対応物で置き換えられた全表面残基はVH及びVHにおいてそれぞれ7個及び5個であった。CD37-3においては、重鎖残基61はCDR-H2に近接しており、そしてヒト残基プロリンへのその置換は低減した結合親和性をもたらす場合があるため、保持されているネズミセリン残基を用いて第1のリサーフィシングされたバージョンを形成した。これらの抗体は細胞傷害コンジュゲートとして試験中であるため、CD37-50軽鎖CDR2リジン53をアスパラギンで置き換えることによりリジンコンジュゲートが結合親和性に影響するという懸念を回避した。図8は軽鎖及び重鎖の両方のCD37-3及びCD37-50可変ドメインに関するリサーフィシングされた配列の、それらのネズミ対応物とのアライメントを示す。huCD37-3抗体の組み換え発現huCD37-3及びCD37-50に関する可変領域配列をコドン最適化し、BlueHeronBiotechnologyにより合成した。配列は単鎖哺乳類発現プラスミドにおける該当する定常配列とインフレームにクローニングするための制限酵素部位によりフランキングされている。軽鎖可変領域をpAbKZeoプラスミド中のEcoRI及びBsiWI部位にクローニングする。重鎖可変領域はpAbG1NeoプラスミドのHindIII及びApa1部位にクローニングする。これらのプラスミドを用いて、一過性又は安定な哺乳類細胞トランスフェクションにおいて組み換え抗体を発現させることができる。HEK293T細胞において組み換え抗体を発現するための一過性のトランスフェクションは変更されたPEI操作法DurocherY等、NucleicAcidsRes30E9を用いて実施した。上澄みはキメラ化抗体に関して上記した通り標準的操作法を用いながらプロテインA及び最終精製クロマトグラフィー工程により精製した。TRU-016の発現単離された抗CD37抗体の活性を比較するために、以前に識別されている抗CD37抗体をクローニングして発現させた。抗CD37SMIPのDNA配列は配列番号51を用いてUS2007/0059306から引き出した。pAbG1Neo哺乳類発現プラスミド中へのクローニングのため、配列はHindIII及びXho1制限酵素部位によりフランキングされている。発現及び精製はhuCD37-3に関して上記した通り実施した。実施例7キメラ抗体の結合親和性キメラ抗体chCD37-3及びchCD37-12を、それらのネズミ対応物との比較においてRamos細胞へのそれらの結合親和性についてアッセイした。実施例2に記載した通り、2次FITCコンジュゲートヤギ抗ネズミ及び抗ヒト抗体を用いながら、Ramos細胞及びmuCD37-3、chCD37-3、muCD37-12及びchCD37-12抗体を用いたフローサイトメトリー結合アッセイを実施し、そして分析した。図9Aは各抗体に関する非直線回帰により作成した用量応答曲線を示す。各抗体の見かけの解離定数Kdの値はGraphPadPrismv4GraphPadsoftware,SanDiego,CAを用いながら計算した。muCD37-3、chCD37-3、muCD37-12及びchCD37-12のKdはそれぞれ0.4nM、0.8nM、0.8nM及び1.2nMに相当しているため、何れの抗体の結合親和性にもキメラ化が大きく影響しなかったことがわかった。huCD37-3v1.0及びhuCD37-3v1.01の結合親和性BJAB細胞を及び競合的結合フォーマット用いたフローサイトメトリー結合アッセイを用いてキメラ及びヒト化バージョンのCD37-3の結合親和性を評価した。BJAB細胞を1nM濃度のPE標識muCD37-3抗体と共にインキュベートし、種々の量のmuCD37-3、chCD37-3、huCD37-3v1.0又はhuCD37-3v1.01を添加することにより競合を計測した。試料を4°Cで3時間インキュベートした。次に、細胞をペレット化し、FACS緩衝液で洗浄し、1ホルムアルデヒド含有PBS200μL中に再懸濁した。試料はHTSマルチウェルサンプラーを用いたFACSCaliburフローサイトメトリーを用いながら獲得し、そしてCellQuestPro全ての入手元はBDBiosciences,Sandiego,USを用いて分析した。得られた平均PE蛍光を片対数プロットで使用した競合抗体の量に対してプロットした。図9Bは各抗体の非直線回帰により形成した用量応答曲線を示す。各抗体の見かけの解離定数Kdの値はGraphPadPrismv4GraphPadsoftware,SanDiego,CAを用いながら計算した。全てのバージョンがネズミ親抗体との結合に関して等しく良好に競合しているため、CD37-3の結合親和性にはキメラ化又はヒト化が影響しないと観察された。muCD37-3、chCD37-3、huCD37-3v1.0又はhuCD37-3v1.01の競合的結合のEC50はそれぞれ0.8nM、0.7nM、1nM及び0.6nMに相当している。ヒト化抗体の結合親和性ヒト化抗体huCD37-38、huCD37-50、huCD37-51、huCD37-56及びchCD37-58を、それらのネズミ対応物との比較においてBJAB細胞へのそれらの結合親和性についてアッセイした。フローサイトメトリー結合試験を2次FITCコンジュゲートヤギ抗ネズミ及び抗ヒト抗体を用いながら実施し、実施例2に記載の通り分析し、そして各抗体に関する非直線回帰により用量応答曲線を作成した。各抗体の見かけの解離定数Kdの値はGraphPadPrismv4GraphPadsoftware,SanDiego,CAを用いながら計算した。ヒト化は何れの抗体の結合親和性にも大きく影響しなかったと観察された。muCD37-3及びhuCD37-3のKdは0.2nMに相当し、muCD37-38及びhuCD37-38のKdはそれぞれ0.4nM及び0.3nMに相当した。同様に、muCD37-50及びhuCD37-50のKdはそれぞれ0.6nM及び0.2nMに相当し、muCD37-51及びhuCD37-51のKdはそれぞれ0.6nM及び0.8nMに相当した。最後にmuCD37-56及びhuCD37-56のKdはそれぞれ0.4nM及び0.2nMに相当し、muCD37-57及びhuCD37-57のKdはそれぞれ1.0nM及び0.3nMに相当した。実施例8マカクCD37の発現マカクCD37のCD37AA配列をGenbankから入手したGI:718718。配列をコドン最適化し、BlueHeronBiotechnologyにより合成した。マカクCD37の発現を可能にするXbaI及びBamHI制限部位によりフランキングされたマカク由来の全CD37コーディング配列CDSを含有する発現プラスミドpSRa-CD37macを構築した。300-19細胞、即ちBalb/cマウスから誘導した前B細胞系統MGReth等、1985Nature317353355をこの発現プラスミドでトランスフェクトすることにより、細胞表面上にマカクCD37を安定に発現させた。マカクCD37へのネズミ抗体の結合親和性ネズミmuCD37-3、muCD37-12、muCD37-38、muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56及びmuCD37-57を、マカクCD37を発現する300-19/CD37mac細胞に結合するそれらの能力に関してアッセイした。フローサイトメトリー結合試験を2次FITCコンジュゲートヤギ抗ネズミ又はヤギ抗ヒト抗体を用いながら実施し、実施例2に記載の通り分析した。結合を以前に記載した抗CD37抗体WR17及び抗CD37SMIPTRU-016と比較した。図10Aから明らかな通り、数種の単離された抗CD37抗体、muCD37-38、huCD37-50、muCD37-51、muCD37-56及びmuCD37-57はマカク誘導CD37抗原に結合することができる。一方、muCD37-3、muCD37-12、以前に記載した抗CD37抗体WR17及び抗CD37SMIPTRU-016はマカク誘導CD37抗原に結合することが不可能である。マカクCD37へのヒト化抗体の結合親和性ヒト化抗体huCD37-38、huCD37-50、huCD37-51、huCD37-56及びhuCD37-57を、マカクCD37を発現する300-19/CD37mac細胞に結合するそれらの能力に関してアッセイした。フローサイトメトリー結合試験を2次FITCコンジュゲートヤギ抗ヒト抗体を用いながら実施し、実施例2に記載の通り分析し、そして各抗体に関する非直線回帰により用量応答曲線を作成した。各抗体の見かけの解離定数Kdの値はGraphPadPrismv4GraphPadsoftware,SanDiego,CAを用いながら計算した。図10Bから明らかな通り、数種の単離されたヒト化抗体はマカクCD37に結合するが、huCD37-3は結合しない。huCD37-38、huCD37-50、huCD37-51、huCD37-56及びhuCD37-57に関するKd値はそれぞれ、1.1nM、1.8nM、14nM、5nM、及び2nMに相当する。従って、ヒト化は単離された抗体の結合特異性には影響しない。実施例9キメラ及びヒト化抗体の前アポトーシス活性キメラ及びヒト化抗体の前アポトーシス活性をRamos細胞において評価した。細胞を10nM濃度の抗体又はhuIgGアイソタイプ対照抗体と共に20時間インキュベートした後に、アネキシン-V-FITCおよびTO-PRO-3染色及びフローサイトメトリー分析を行った。ChCD37-12はmuCD37-12の強力な前アポトーシス活性を保持していた。約40のRamos細胞がmuCD37-12又はchCD37-12の何れかの投与後アネキシン-V陽性だったのに対し未投与対照細胞では4であった。同様に約40のRamos細胞がhuCD37-3、huCD37-38、huCD37-50、huCD37-51、huCD37-56及びhuCD37-57抗体の投与後アネキシン-V陽性だったのに対し、アイソタイプ対照投与又は未投与の細胞では4であった。一方、抗CD37抗体リツキシマブの投与は僅か13のアネキシン陽性細胞をもたらした。この結果は本発明において単離したネズミ抗CD37抗体の強力な前アポトーシス活性は、それらから誘導されたキメラ又はヒト化抗体により保持されていることを示している。従って、抗CD37抗体のこのグループのユニークな機能的特性、即ち架橋剤非存在下の強力な前アポトーシス活性はキメラ化又はヒト化により不の影響を受けない。huCD37-3及びTRU-016の前アポトーシス活性Ramos及びRajiリンパ腫細胞に対するhuCD37-3の前アポトーシス活性を抗CD37SMIPTRU-016と比較した。TRU-016は二次抗体に交差結合しない限り前アポトーシス活性を有さない化合物として報告されている。例示される抗CD37抗体huCD37-3及びchCD37-38は両方のリンパ腫細胞系統に対して遥かに強力な前アポトーシス活性を有することが明らかになっている。huCD37-3又はchCD37-38の投与は40又は49のアネキシン-V陽性Ramos細胞をもたらしたのに対し、未投与対照細胞では3であった。リツキシマブ投与は僅か15のみのアネキシン-V陽性Ramos細胞をもたらした。一方TRU-016投与はアネキシン陽性Ramos細胞のパーセンテージを増大させなかった。同様にhuCD37-3又はchCD37-38の投与は34又は30のアネキシン-V陽性Raji細胞をもたらしたが、未投与対照細胞では7であった。リツキシマブ投与は僅か19のアネキシン-V陽性Raji細胞をもたらした。一方TRU-016投与はアネキシン陽性Ramos細胞のパーセンテージを増大させなかった。ヒト化抗体の前アポトーシス活性の用量応答種々の量の各抗体を20時間Ramos細胞と共にインキュベートした後にアネキシン-V-FITCおよびTO-PRO-3染色及びフローサイトメトリー分析を行った。アネキシン-V陽性細胞のパーセンテージを片対数プロットで抗体濃度に対してプロットし、そして非直線回帰分析を用いながらフィットした曲線からEC50値を計算した。全てのヒト化抗体は強力な前アポトーシス活性を有することが観察され、アネキシン-V陽性細胞の最大パーセントは少なくとも40であった。図11。この活性に関するEC50は、huCD37-3、huCD37-38及びhuCD37-50についてそれぞれ0.08.0.08及び0.11nMに相当する。更に、この活性に関するEC50は、huCD37-51、huCD37-56及びhuCD37-57についてそれぞれ0.41、0.57及び1.01nMに相当する。一方、抗CD20抗体リツキシマブの投与は僅か15のアネキシン-V陽性細胞の最大パーセンテージをもたらし、これに対し、アイソタイプ対照抗体を投与された細胞では4であった。実施例10キメラ及びヒト化抗CD37抗体の増殖アッセイキメラ及びヒト化抗CD37抗体が細胞生育を阻害する能力を実施例4に記載した通りインビトロの細胞傷害アッセイを用いて計測した。SU-DHL-4及びDOHH-2リンパ腫細胞を用いた典型的な増殖アッセイの結果を図12に示す。全ての抗体が実質的に、そして用量依存性の態様においてSU-DHL-4細胞の増殖を阻害できたことがわかる。例えばmuCD37-3の投与はSU-DHL-4細胞の生存性を35まで低減し、EC50は0.07nMであった。同様にchCD37-3、huCD37-3v1.0又はhuCD37-3v1.01の投与は試験した最高抗体濃度において約30までSU-DHL-4細胞の生存性を低減し、EC50はそれぞれ0.03nM、0.06nM、又は0.03nMであった。同様に全ての抗体が実質的に、そして用量依存性の態様においてDOHH-2濾胞性リンパ腫の増殖を阻害することができた。例えば、CD37-3投与は45までDOHH-2細胞の生存性を低減し、EC50は0.05nMであった。同様にchCD37-3、huCD37-3v1.0又はhuCD37-3v1.01の投与は試験した約35までDOHH-2細胞の生存性を低減し、EC50はそれぞれ0.06nM、0.07nM、又は0.05nMであった。この結果は種々のバージョンのCD37-3抗体がキメラ化又はヒト化により影響されない同様の抗増殖活性を有することを示している。別のヒト化抗CD37抗体を同様のインビトロの細胞傷害アッセイにおいて試験した。試験した全てのヒト化抗体が実質的に、そして用量依存性の態様においてSU-DHL-4細胞の増殖を阻害できた。例えばhuCD37-38の投与はSU-DHL-4細胞の生存性を24まで低減し、EC50は0.42nMであり、huCD37-50の投与はSU-DHL-4細胞の生存性を31まで低減し、EC50は0.39nMであった。一方抗CD37抗体リツキシマブの投与はSU-DHL-4細胞の生存性を35まで低減し、EC50は1.6nMであった。更に、huCD37-51及びhuCD37-56の投与はSU-DHL-4細胞の生存性を24まで低減し、EC50はそれぞれ0.60nM及び0.68nMであった。更にhuCD37-57の投与は31までSU-DHL-4細胞の生存性を低減し、EC50は0.42nMであった。アイソタイプ対照抗体の投与はSU-DHL-4細胞の生存性に影響しなかった。他の抗体と比較した場合のhuCD37-3の抗増殖活性抗CD37抗体の抗増殖活性を更に特性化するために、本発明者等は例示されるhuCD37-3抗体の作用を抗CD37SMIPTRU-016化合物のものと比較した。腫瘍マイクロアレイを用いた免疫化学によれば、NHLのサブタイプにおいてCD37及びCD20は同様の発現パターン及びを示したことが確認された。以下の表12を参照できる。即ち抗CD37抗体リツキシマブとも比較した。細胞系統のパネルはGranta-519、SU-DHL-4、Namalwa及びDaudiリンパ腫細胞を包含している。図13.全ての細胞においてhuCD37-3投与は用量依存的な態様において細胞生存性の低減をもたらした。例えばhuCD37-3の投与は約37までGanta-519の生存性を低減し、EC50は0.062nMであった。リツキシマブの投与は約47までGanta-519の生存性を低減し、EC50は0.36nMであった。huCD37-3の投与は約17までSU-DHL-4の生存性を低減し、EC50は0.053nMであった。リツキシマブの投与は約20までSU-DHL-4細胞の生存性を低減し、EC50は0.2nMであった。これとは対照的に、TRU-016の投与は有意な程度にまでは、そして用量依存的な態様においても、Granta-519及びSU-DHL-4細胞の生存性を低減しなかった。別の例においては、huCD37-3の投与は約47までNamalwa細胞の生存性を低減し、EC50は0.1nMであり、そして約68までDaudi細胞の生存性を低減し、EC50は0.25nMであった。リツキシマブの投与はNamalwa細胞に対しては作用を有さなかったが、Daudi細胞の生存性は約69まで低減し、EC50は2.6nMであった。これとは対照的に、TRU-016の投与は有意な程度にまでは、そして用量依存的な態様においても、Namala及びDaudi細胞の生存性を低減しなかった。最後にhuCD37-3の投与は約53までRamos細胞の生存性を低減し、EC50は0.08nMであり、そしてTRU-016及びリツキシマブの何れもRamos細胞の生存性には全く作用しなかった。この結果は単離された抗CD37抗体の抗増殖活性のユニークさを過小評価している。実施例11CD37抗体のCDC活性キメラ及びヒト化抗CD37抗体の補体依存性細胞傷害CDC活性を評価するために、公開されている方法GazzanoSantoroHJImmunolMethods199720216371に従って細胞系試験を実施した。抗体をRHBPRPMI-1640、20mMHEPES、0.1BSA、1ペニシリン-ストレプトマイシン培地中典型的には5μg/mL=3.3x10-8Mから2.3ng/mL=1.5x10-11Mの範囲の種々の濃度において平底96穴組織培養プレートに50μL/ウェルで2連に分注した。標的細胞をウェル当たり100μLのRHBP中、5x104細胞で抗体に添加した。凍結乾燥したヒト補体Sigma-Aldrich、St.Louis、USをバイアル当たり滅菌精製水1mLを用いて再建し、そして使用直前にRHBP培地で20保存液となるように5倍希釈した。補体溶液50μL/ウェルを終濃度5となるように各ウェルに添加した。プレートを5CO2湿潤インキュベーター中37°Cで2時間インキュベートすることにより補体媒介溶解を可能とした。このインキュベーション時間の後、残存細胞の生存性を計測するためにAlamarBlue試薬Invitrogenを終濃度10となるように各ウェルに添加した。プレートを37°Cで16~20時間インキュベートした後、EX540/EM590nmにおいて蛍光相対蛍光単位、RFUによるを計測した。対照には、培地と補体を有するが細胞を有さない3連のウェル培地のみ、0生存性及び細胞と補体を有するが抗体を有さないウェル細胞のみ、100生存性を使用した。各試料に関する特異的細胞生存性のパーセンテージを以下の式、即ち:パーセント生存性=試料-培地のみ/細胞のみ-培地のみにより求めた。Ramos細胞を使用した例示されるCDCアッセイの結果を図14に示す。意外にもchCD37-12はRamos細胞に対して強力なCDC活性を有していた。これは試験した最高抗体濃度で2までRamos細胞の生存性を低減し、EC50は0.037μg/mlであった。更に幾つかの単離された抗体は種々の程度にまでRamos細胞に対してCDC活性を示した。huCD37-3、huCD37-38、huCD37-50の投与はそれぞれ5950及び45まで細胞生存性の低減をもたらした。huCD37-51、huCD37-56又はhuCD37-56の投与は試験した最高抗体濃度で約70~80までRamos細胞の生存性を中程度に低減した。実施例12CD37抗体のADCC活性ラクテートデヒドロゲナーゼLDHはエフェクター細胞としての新しく単離されたヒトナチュラルキラーNK細胞を用いた腫瘍細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCを計測するために使用されているShieldsRLJBiolChem20012766591604。NK単離キットIIMiltenyiBiotech,130-091-152に関する修正プロトコルを用いながら正常者ドナー由来のヒト血液ResearchBloodComponentsIncBrightonMAから最初に単離した。血液を1xPBSで2倍希釈した。希釈血液25mLを50mL三角試験管中の25mLのFicollPaque上に慎重に重層し、RTで45分間400Gで遠心分離した。末梢血単核球PBMCを界面から収集し、新しい50mL三角試験管に移し、そして1xPBSで1回洗浄した。PBMCをNK単離緩衝液1xPBS、0.5BSA、2mMEDTA2mL中に再懸濁し、次にビオチン抗体カクテル500μLを細胞懸濁液に添加した。ビオチン抗体カクテルは、NK細胞以外のリンパ球に結合してNK細胞の負の選択をもたらすビオチニル化抗体を含有する。混合物を10分間4°Cでインキュベートし、次にNK単離緩衝液1.5mL及び抗ビオチンマイクロビーズ1mLを添加した。細胞-抗体混合物を4°Cで更に15分インキュベートした。次に、細胞を1回50mLのNK単離緩衝液で洗浄し、3mLのNK単離緩衝液に再懸濁した。次にMACSLCカラムを自動MACS分離機MiltenyiBiotech上に搭載し、NK単離緩衝液3mLで予備洗浄した。細胞懸濁液を自動的にカラムにアプライし、洗浄し、そして未標識NK細胞を有する溶出画分を新しい50mL容量の三角試験管に収集した。得られたNK細胞を、一夜、完全RPMI培地5ウシ胎児血清、1ペニシリン-ストレプトマイシン、1mMHEPES、1mMピルビン酸ナトリウム、1100XMEM非必須アミノ酸溶液を添加したRPMI-164030mL中にプレーティングした。その後のアッセイ及び全ての希釈はRHBP培地20mMHEPES、pH7.4、0.1BSA及び1ペニシリン-ストレプトマイシンを添加したRPMI-1640培地中で実施した。RHBP培地中の種々の濃度の抗体を丸底96穴プレート中50μL/ウェルで2連に分注した。標的細胞をRHBP培地中106細胞/mLで再懸濁し、抗体希釈物を含有する各ウェルに10μL/ウェルで添加した。標的細胞及び抗体希釈物を含有するプレートを37°Cで30分間インキュベートした。次に50μL/ウェルで標的細胞を含有するウェルにNK細胞を添加した。典型的な比は3~4NK細胞に対して1標的細胞とした。以下の対照、即ち:NK細胞単独、標的細胞単独自発的LDH放出、標的細胞とNK細胞抗体非依存性LDH放出、標的細胞と10TritonX-100最大LDH放出を各実験に対して設定した。混合物を4時間3°Cでインキュベートすることにより細胞溶解を可能とした。プレートを1200rpmで20分間遠心分離し、上澄み100μLを慎重に新しい平底96穴プレートに移した。細胞傷害検出キットRoche1644793から入手したLDH反応混合物100μL/ウェルを各ウェルに添加し、5~30分間室温でインキュベートした。試料の光学密度を490nmで計測したOD490。各試料のパーセント特異的溶解は、以下の式、即ち:パーセント特異的溶解=試料の値-自発的放出/最大放出-自発的放出100を用いて求めた。ヒト化抗体とのインキュベーションは、ヒトNKエフェクター細胞の存在下でDaudi、Ramos及びGranta-519リンパ腫細胞に対して良好なADCC活性をもたらす。Daudiリンパ腫細胞に対するそれらのADCC活性をTRU-016に対するADCC活性と比較した図15。huCD37-3、huCD37-38又はhuCD37-50の投与はそれぞれ約41、39又は40のDaudi細胞溶解をもたらし、EC50値は0.42ng/mL、1.13ng/mL、又は2.42ng/mLであった。この活性はTRU-016投与で得られたものと同様であり、42のDaudi細胞溶解が観察され、EC50値は0.93ng/mLであった。更に又、huCD37-51、huCD37-56及びCD37-57の投与はそれぞれ約39、36又は36のDaudi細胞溶解をもたらし、EC50値は5.7ng/mL、4.3ng/mL、又は7.9ng/mLであった。Ramosリンパ腫細胞に対する単離された抗体のADCC活性をTRU-016のADCC活性と比較した。huCD37-3、huCD37-38又はhuCD37-50の投与はそれぞれ約43、42又は46のRamos細胞溶解をもたらし、EC50値は0.95ng/mL、2.0ng/mL、又は3.0ng/mLであった。この活性はTRU-016投与で得られたものと同様であり、59のRamos細胞溶解が観察され、EC50値は1.53ng/mLであった。更に又、huCD37-51、huCD37-56及びCD37-57の投与はそれぞれ約53、43又は44のRamos細胞溶解をもたらし、EC50値は5.7ng/mL、4.3ng/mL、又は7.9ng/mLであった。追加的な実験において、Granta-519細胞に対するhuCD37-3及びhuCD37-38のADCC活性をTRU-016のADCC活性と比較した。huCD37-3又はhuCD37-38抗体の投与はそれぞれ約19又は18のGranta-519細胞溶解をもたらし、EC50値は0.13ng/mL又は0.73ng/mLであった。TRU-016投与は16のGranta-519細胞溶解をもたらし、EC50値は0.83ng/mLであった。実施例13エピトープマッピング種々異なるCD37抗体にのエピトープに関するアミノ酸の要件の位置決めは共通又はユニークな機能的特性を特定の分子相互作用に結びつける場合の材料となりえる。CD37の細胞外ドメインは2つの細胞外ループ、約18残基の小型ループ及び約135アミノ酸よりなるより大型のものを含有する。エピトープの要件は以前に公開されているCD37抗体に関しては説明されていない。本発明の単離されたCD37抗体を更に特性化するために、本発明者等はより大きい細胞外ループにおけるAA置換を有する数種のCD37抗原変異体を構築した。CD37変異体のクローニング及び発現全ヒト又はマカカのCD37cDNA配列、BlueHeronBiotechnologiesにより最適化及び合成され、pSRaベクターのマルチクローニング部位へのクローニングを容易にするためにXbaI及びBamHI制限部位にフランキングされたコドンを含む哺乳類発現プラスミドを構築した。ヒト及びマカカのCD37配列は高度に相同であるため図16、これらのコンストラクトの発現は、実施例8に説明するとおりこれら2つの種の間の11細胞外CD37アミノ酸の相違の少なくとも1つを必要とするエピトープを認識するものから、ヒト及びマカカの交差反応性の抗体を区別可能とするはずである。CD37抗体エピトープを更に特性化するために、一連のネズミオヨビヒトのキメラCD37コンストラクトを構築した。小型CD37細胞外ループの大きさ及び高度な相同性のため、エピトープの位置決めの作業は大型の細胞外ループに制限された。ヒト、ネズミ、及びマカカのCD37配列の間で保存されているはずである4つのユニークな制限部位を取り込むことにより更に5セクションにセグメント化されるように大型細胞外ループの残基I108~Q235をコードするEcoRVからPst1までのカセットを再設計した図17。以下のヒト及びマウスのキメラCD37コンストラクトを作成した。huCD37-M1MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhuCD37-M2MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhuCD37-M3MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhuCD37-M45MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGPRAKLRQTADICALPAKAHIYREGCAQSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRmuCD37-R176ISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPRVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGPRAKLRQTADICALPAKAHIYREGCAQSLQ1つのそのような制限部位Kpn1を温存するために、ヒトR176をネズミ/ヒトキメラコンストラクトの全てに包含させた。ネズミ及びヒトCD37カセットはBlueHeronに注文し、そして元のマカカCD37コンストラクトから得たEcoRV部位及び3’末端のPst1~Xbal制限フラグメントを取り込むためにPCRにより形成された元のヒトCD37コンストラクトの5’末端フラグメントと共にpSRaベクター内にクローニングした。次に共通のユニークな制限部位を利用しながら標準的な制限消化及びライゲーションを用いてネズミ及びヒトのキメラCD37カセットを構築した。huCD37-M1変異体は、類縁のネズミCD37配列のAAS109~A138をコードするEcoRV-SacII制限フラグメントを挿入することにより作成した。同様にhuCD37-M3変異体は、類縁のネズミCD37配列のAAV177~L201をコードするKpnI-Bil1制限フラグメントを挿入することにより作成した。huCD37-M45変異体は、類縁のネズミCD37配列のAAS202~I243をコードするBlp1-PstI制限フラグメントを挿入することにより作成した。得られたクローンを制限酵素消化により確認し、その後DNA配列決定した。標準的なエレクトロポレーション操作法を用いながら300-19細胞内へのネズミ及びヒトのキメラCD37変異体発現プラスミドのトランスフェクションにより安定な細胞系統を得た。要すれば、260V及び960μFにセットしたBioRadGenePulserを用いながら冷RPMI-1640培地中で5x106個の300-19細胞のエレクトロポレーションを行った。その後、10FBS及び50μMのβ-メルカプトエタノールを添加したRPMI-1640培地中、細胞を希釈して96穴プレートにプレーティングした。24時間後、G418Invitrogenを終濃度2mg/mlで添加することによりトランスフェクトされた細胞を選択した。2週間後、単コロニーを単離し、フローサイトメトリーによりCD37表面発現を分析し、そして増殖させた。CD37変異体への抗体の結合ヒトCD37の野生型及び変異体を発現する細胞への種々のCD37抗体の結合を各抗体1.5μg/mlを用いながらフローサイトメトリーにより分析した。本発明の単離された抗体を市販のCD37抗体WR17、並びにTRU-016SMIPと比較した。図18Aより解るとおり、全ての抗体が野生型CD37発現細胞に結合した。同様に試験した全ての抗体がhCD37-M3変異体に結合した図18B。一方、本発明の単離された抗体はhCD37-M1変異体に結合したが、TRU-016およびWR17はhCD37-M1変異体に結合できなかった図19A。CD37-50及びCD37-51抗体及びTRU-016はhCD37-M45変異体にも結合することができた。WR17はhCD37-M45変異体への部分的結合を示し、他の抗体であるCD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-56及びCD37-57は結合できなかった図19B。これは、本発明の単離された抗体の全てはがCD37-抗原への結合のために相当するネズミAA残基に変化したhCD37-M1変異体中の12AA残基を必要としないことを示唆している。一方CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-56及びCD37-57抗体はCD37-抗原への結合のために相当するネズミAAに片かしらhCD37-M45変異体中の10AA残基の少なくとも1つを必要とする。この予想外の結果は、本発明の単離された抗体が機能的特性のユニークな組み合わせを有するCD37-抗体の新しいクラスとなることを示している。更に又、同様のコンストラクトを同じ設計に従って構築する。コンストラクトはCD37の大型細胞外ループをコードするネズミ、ヒト及び/又はマカカの配列の種々の組み合わせを含有する図17参照。ネズミ大型細胞外ループ配列内に挿入された単一のヒトセクションを有するコンストラクトの例は以下の通り、即ち:hCD37mECD-H1:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPRVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGPRAKLRQTADICALPAKAHIYREGCAQSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYhCD37mECD-H2:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGPRAKLRQTADICALPAKAHIYREGCAQSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhCD37mECD-H3:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGPRAKLRQTADICALPAKAHIYREGCAQSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhCD37mECD-H4:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPRVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGHLARSRHSADICALPAKAHIYREGCAQSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhCD37mECD-H5:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPRVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGPRAKLRQTADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYR及びhCD37mECD-H45:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPRVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRである。更に例示されるものはヒト大型細胞外ループ配列に挿入された単一のマカカセクションを有するコンストラクト、例えば以下のもの:hCD37-Mac12:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLQDIVEKTIQRYHTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHSPQDWFQVLTLRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhCD37-Mac4:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGQLARSRHSTDICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYRhCD37-Mac5:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPANSHIYREGCARSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYR及びhCD37-Mac45:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGQLARSRHSTDICAVPANSHIYREGCARSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYである。更に、抗体結合のために重要な残基を識別するために、ヒト大型細胞外ループ中に1点突然変異が形成される。配列番号185~194を発現する細胞へのCD37結合剤の結合は、上記した通りフローサイトメトリーで分析される。実施例14huCD37-3-SPP-DM1の調製N-スクシンイミジル4-2-ピリジルジチオペンタノエートSPPリンカーをエタノールに溶解した。50mMNaCl、2mMEDTA及び5エタノールを含有する50mMリン酸カリウム緩衝液pH6.5中室温で約100分、7倍モル過剰のSPPと共に5mg/mlでhuCD37-3抗体をインキュベートした。上記したリン酸カリウム緩衝液で平衡化させたHADEXTMG25Fカラムを用いて反応混合物を精製した。抗体含有画分をプールし、その後の工程に使用した。マイタンシノイドDM1をジメチルアセトアミドDMA、終濃度は3に溶解し、リンカーに対して1.7倍モル過剰量をSPP修飾抗体に滴下した。室温で一夜インキュベートした後、コンジュゲートした抗体をリン酸塩緩衝食塩水PBS,pH6.5中で平衡化させたHADEXTMG25Fカラム上のクロマトグラフィーにより精製した。次にhuCD37-3-SPP-DM1コンジュゲートを10mMヒスチジン、250mMグリシン、1スクロースを含有する緩衝液、pH5.5中に透析した。抗体及びDM1に関する以前に報告されている消衰係数を用いながら抗体分子当たりに連結したDM1分子の数を求めたLiu等、ProcNatlAcadSciUSA9386188623。コンジュゲート反応の後に存在する遊離のマイタンシノイドのパーセンテージは、100mM酢酸アンモニウム緩衝液、pH7.0中の25アセトニトリル中で平行化されたHiSepカラム上に20~50μgのコンジュゲートを注入し、そしてアセトニトリル中に溶離することにより求めた。252nmの波長にセットした吸光度検知器を用いて総遊離マイタンシノイド分子種勾配溶離し、そして既知標準物質との溶離時間の比較により同定のピーク面積を計測し、そして結合マイタンシノイドカラムのフロースルー画分中コンジュゲートピーク中に溶離に関連するピーク面積と比較することにより総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージを計算した。huCD37-3抗体当たり3.5~4個のDM1分子を有するコンジュゲートが得られ、<1が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。huCD37-3SMCC-DM1の調製スクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1カルボキシレートSMCC、PierceBiotechnology,IncリンカーをDMA中に溶解した。10モル過剰量のSMCCと共に50mMリン酸カリウム、50mMNaCl、2mMEDTA、pH6.5中、5mg/mlで抗体をインキュベートすることにより、huCD37-3抗体をSMCCで修飾してマレイミドを抗体内に導入した。周囲温度で約100分間の後、同じリン酸化リ緩衝液で平行化したHADEXTMG25Fカラムを用いて反応混合物を精製した。抗体含有画分をプールし、その後の工程のために使用した。マレイミドリンカーに対して1.7モル過剰量のDM1の10mM溶液とSMCC-修飾抗体を反応させた。反応物を約18時間周囲温度で攪拌した。pH6.5の1xPBSで平衡化させたHADEXTMG25ゲル濾過カラムを通しながらコンジュゲーション反応混合物を濾過した。次にhuCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートを10mMヒスチジン、250mMグリシン、1スクロースを含有する緩衝液、pH5.5中に透析した。抗体分子当たり連結しているDM1分子の数及び総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージは上記した通り求めた。huCD37-3抗体当たり3.5~4個のDM1分子を有するコンジュゲートが得られ、<1が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。huCD37-3スルホ-mal-DM4の調製DM4チオール及びヘテロ2官能性リンカー1-2.5-ジオキソ-2.5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-4-2,5-ジオキシピロリジン-1-イルオキシ-4-オキソブタンー2-スルホン酸3-スルホ-malの溶液を30~60mMの濃度でN,N-ジメチルアセトアミドDMA中に作成した。200mMスクシネート緩衝液、2mMEDTA、pH5.0の40v/vまでを含有するDMA中でリンカーとDM4を混合してリンカーに対するDM4の比を1.6とし、DM4の終濃度を15mMとした。混合の後、反応を2時間放置し、4mg/mlAb、90リン酸緩衝液/10DMA、pH7.5の最終コンジュゲーション条件下にリン酸塩緩衝液pH7.5中のhuCD37-3抗体の混合物に添加した。コンジュゲーション反応を2時間周囲温度において進行させた。huCD37-3-スルホ-mal-DM4コンジュゲートを過剰の未反応のDM4及び未コンジュゲートのリンカー産物から精製し、PBS中の透析、ついで10mMヒスチジン、250mMグリシン、1スクロース含有する緩衝液、pH5.5中に最終透析した。コンジュゲートを0.22μmのフィルターを通して濾過し、最終保存用とした。最終コンジュゲートにおけるhuCD37-3抗体分子当たりのDM4分子の数平均、総遊離マイタンシノイド物質種のパーセンテージは上記した通り求めた。huCD37-3抗体当たり3.5~4個のDM4分子を有するコンジュゲートが得られ、<1が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。huCD37-3PEG4-mal-DM1の調製N-ヒドロキシスクシンイミジル-ポリエチレングリコール4-N-マレイミドメチルDM1NHS-PEG4-mal-DM1試薬をDMA中に溶解した。huCD37-3抗体を7倍モル過剰量のNHS-PEG4-mal-DM1合計10DMAと共に、50mMリン酸カリウム、150mMNaCl、2mMEDTA、pH7.5中、5mg/mlでインキュベートした。周囲温度で約2時間の後、1xPBS、pH7.4で平衡化させたHADEXTMG25カラムを用いて反応混合物を精製した。抗体含有画分をプールし、10mMヒスチジン、250mMグリシン、1スクロースを含有する緩衝液、pH5.5中に透析した。抗体当たり連結したDM1分子の数及び総遊離マイタンシノイド分子種のパーセンテージを上記した通り求めた。huCD37-3抗体当たり3.5~4個のDM4分子を有するコンジュゲートが得られ、<1が未コンジュゲートのマイタンシノイドとして存在していた。実施例15マイタンシノイドコンジュゲートの結合親和性SMCC-DM1、SPP-DM1又はスルホ-mal-DM4へのコンジュゲーションの後の例示されるhuCD37-3の結合親和性を上記実施例において記載したとおりフローサイトメトリーによりアッセイした。図20Aに示す結合曲線から見かけの解離定数Kdの値を計算したところ、huCD37-3については0.26nM、huCD37-3-SMCC-DM1については0.46nM、huCD37-3-SPP-DM1については0.56nM、そしてhuCD37-3-スルホ-mal-DM4については0.89nMに相当した。この結果はSMCC-DM1、SPP-DM1又はスルホ-mal-DM4コンジュゲーションが例示されるhuCD37-3抗体の親和性を顕著には改変しないことを示している。SMCC-DM1へのhuCD37-38の結合親和性を上記実施例において記載したとおりフローサイトメトリーによりアッセイした。図20Bに示す結合曲線から見かけの解離定数Kdの値を計算したところ、huCD37-38については1.04nM、そしてhuCD37-38-SMCC-DM1コンジュゲートについては1.2nMに相当した。この結果はSMCC-DM1コンジュゲーションがhuCD38抗体の親和性を顕著には改変しないことを示している。同様にSMCC-DM1へのコンジュゲーションの後のhuCD37-50、huCD37-51、huCD37-56及びhuCD37-57の結合親和性をフローサイトメトリーによりアッセイした。結合曲線から見かけの解離定数Kdの値を計算したところ、huCD37-50については0.43nM、huCD37-50-SMCC-DM1については0.70nM、huCD37-51については2.0nM、huCD37-51-SMCC-DM1については1.6nM、huCD37-56については0.37nM、huCD37-56-SMCC-DM1については0.34nM、huCD37-57については0.30、そしてhuCD37-57-SMCC-DM1については0.34であった。この結果はSMCC-DM1コンジュゲーションもまたhuCD37-50、huCD37-51、huCD37-56又はhuCD37-57抗体の親和性を顕著には改変しないことを示している。PEG4-mal-DM1コンジュゲートの結合親和性PEG4-mal-DM1へのコンジュゲーションの後の例示されるhuCD37-3及びhuCD37-50の結合親和性を上記実施例において記載したとおりフローサイトメトリーによりアッセイした。結合曲線から見かけの解離定数Kdの値を計算したところ、huCD37-については0.28nM、huCD37-3-PEG4-mal-DM1については0.35nM、huCD37-50については0.68nMそしてhuCD37-50-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについては1.1nMに相当した。この結果はPEG4-mal-DM1コンジュゲーションが例示されるhuCD37-3又はhuCD50抗体の親和性を顕著には改変しないことを示している。huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートの前アポトーシス活性SMCC-DM1へのコンジュゲーションの後のhuCD37-3の前アポトーシス活性を上記したRamos細胞上のアネキシン-V染色により評価した。huCD37-3抗体又はhuCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートの何れかの投与は約40のアネキシン-V陽性Ramos細胞をもたらし、EC50値は約0.09nMであった図21A。非結合紺個抗体又は非結合SMCC-DM1対照コンジュゲートを投与したRamos細胞は僅か4までのアネキシン-V陽性細胞を含有していた。これと比較して、抗CD20抗体リツキシマブの投与は僅か16のアネキシン-V陽性細胞をもたらし、EC50値は約2nMであった。一方、TRU-016投与はアネキシン-V陽性Ramos細胞のパーセンテージを増大させなかった。これはヒト抗CD37抗体huCD37-3の強力な前アポトーシス活性がSMCC-DM1へのコンジュゲーションの後にも維持されていることを示している。huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートのCDC活性SMCC-DM1へのコンジュゲーションの後のhuCD37-3のCDC活性を5ヒト補体存在下Ramos細胞において評価した。huCD37-3又はhuCD37-3-SMCC-DM1の投与はそれぞれ53及び73までの細胞生存性の低下をもたらした図21B。従って、例示されるhuCD37-3抗体のCDC活性はマイタンシノイドコンジュゲーションの後も維持されている。コンジュゲートのADCC活性SMCC-DM1又はPEG4-mal-DM1へのコンジュゲーションの後のhuCD37-3のADCC活性を、上記した通りLDH放出によりヒトNKエフェクター相棒の存在下のDaudi及びRamos細胞において評価した。図22Aより明らかな通り、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートはDaudi細胞に対する未コンジュゲートのhuCD37-3抗体と同様のADCC活性を有している。huCD37-3、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1の投与はそれぞれ約41、39又は36のDaudi細胞溶解をもたらし、EC50値は0.42ng/mL、1.13ng/mL又は0.91ng/mLであった。同様の結果が標的細胞としてRamos細胞を用いた場合にも得られた。前と同様、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートはRamos細胞に対して未コンジュゲートのhuCD37-3抗体に匹敵するADCC活性を有している図22B。huCD37-3、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1の投与はそれぞれ約43、41又は42のRamos細胞溶解をもたらし、EC50値は0.95ng/mL、1.33ng/mL又は1.57ng/mLであった。従って、例示されるhuCD37-3抗体の強力なADCC活性はマイタンシノイドコンジュゲーションの後も維持されている。huCD37-3-SMCC-DM1による細胞周期停止の導入細胞系統において細胞周期の停止を誘導する抗CD37抗体及びコンジュゲートの能力をヨウ化プロピジウムPI染色とその後のフローサイトメトリー分析により評価した。指数的に生育している細胞をRTで5分間1300rpmで遠心分離することにより採取し、そして完全RPMI培地中、0.5x106細胞/mlに懸濁した。細胞を0.5x106細胞/アッセイとなるように24穴プレートFalcon3077にウェル当たり1mLで移した。被験化合物を終濃度10nMで各ウェルに添加した。完全RPMI培地を未投与対照ウェルに添加した。細胞を湿潤5CO2インキュベーター中37°Cで16~20時間一夜インキュベートした。翌日、5mLポリスチレン試験管に移すことにより細胞を採取し、3mLのPBSで1回洗浄し、そして氷り上30分間0エタノール1mL中に固定した。次に試料を再度3mLのPBSで1回洗浄し、0.5mLPBS中に再懸濁した。RNaseを5μg/mlで試料に添加し、そして30分間37°Cでインキュベートした。次に試料を終濃度50μg/mlでヨウ化プロピジウムで染色した。試料はPI染色の24時間以内に獲得した。試料をFACSCaliburBDBiosciences,SanDiego上で泳動させた。FL2-Aパラメーターは直線スケールにセットし、そしてFL2PTMは200近傍にG1ピークが位置するように調節した。試料は低流量で獲得し、試料当たり10,000イベントを収集した。細胞周期の種々異なる期における細胞の分布をModFitソフトウエアバージョン5.11、VrietySoftwareHouseInc.,USAを用いて求めた。このプログラムはPIデータを自動的にモデル化するためのピークフィッティング手法を利用しており、所望の定量的データを与える。データは標準的なプログラム設定で分析した。huCD37-3及びhuCD37-3-SMCC-DM1のBJAB及びRLリンパ腫細胞に対する作用は、10nM濃度の何れかの化合物と共に16~20時間インキュベーションし、ついでヨウ化プロピジウムPI染色及びフローサイトメトリー分析した後に評価した。huCD37-3-SMCC-DM1とのインキュベーションは、未投与のBJABリンパ腫細胞の13からhuCD37-3-SMCC-DM1投与細胞の95までG2/M期における細胞のパーセンテージを増大させた図23A。同様にhuCD37-3-SMCC-DM1とのインキュベーションは、未投与のRLリンパ腫細胞の12からhuCD37-3-SMCC-DM1投与細胞の33までG2/M期における細胞のパーセンテージを増大させた図23B。一方huCD37-3抗体はBJAB及びRL細胞の何れの細胞周期に対しても作用を有していなかった。更に又、同じ濃度で試験した非結合SMCC-DM1コンジュゲートもまた何れの細胞型の細胞周期に対しても作用を有していなかった。これは単離された抗CD37抗体で作成されたマイタンシノイドコンジュゲートがCD37-陽性リンパ腫細胞系統の特異的細胞周期停止をもたらしたことを示している。実施例16インビトロ細胞傷害アッセイ細胞生育を阻害する抗CD37抗体コンジュゲートの能力を抗体に関して実施例10で記載したとおりインビトロの細胞傷害アッセイにおいて計測した。要すれば、完全RPMI培地RPMI-1640、10ウシ胎児血清、2mMグルタミン、1ペニシリン-ストレプトマイシン、全試薬入手元Invitrogen100μL中ウェル当たり5000細胞で標的細胞をプレーティングした。3倍連続希釈により完全RPMI培地中にコンジュゲートを添加し、そして100μLをウェル当たり添加した。最終濃度は典型的には3x10-8M~4.6x10-12Mとなった。細胞を4~5日間、湿潤5CO2インキュベーター中37°Cにおいてインキュベートした。残存細胞の生存性は比色WST-8アッセイにより抗体アッセイに関して記載した通り測定し、マルチウェルプレートリーダーDojindoMolecularTechnologiesIncRockvilleMDUS中450nmにおける吸光度A450を計測した。パーセント生存性は未投与細胞の入ったウェルの平均値で各投与試料の値を割ることにより計算した。各投与に関し片対数プロットにおいて抗体濃度に対してパーセント生存性値をプロットした。種々の抗体のSMCC-DM1コンジュゲートのインビトロ細胞毒性種々の抗CD37抗体で作成したSMCC-DM1コンジュゲートのインビトロの細胞毒性を非特異的huIgG-SMCC-DM1コンジュゲートの活性と比較した。huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-38-SMCC-DM1、huCD37-50-SMCC-DM1、huCD37-51-SMCC-DM1、huCD37-56-SMCC-DM1、huCD37-57-SMCC-DM1、又は未結合huIgG1-SMCC-DM1対照コンジュゲートとともにインキュベートしたDaudi細胞について典型的な細胞傷害アッセイの結果を図24Aに示す。全ての特異的コンジュゲートが対照コンジュゲートと比較して特異的細胞殺傷をもたらしており、そして試験した最高濃度において細胞の生存性を完全に低減した。EC50はhuCD37-3、huCD37-38、huCD37-50、huCD37-51、huCD37-56及びhuCD37-57のSMCC-DM1コンジュゲートに関してそれぞれ0.067nM、0.098nM、0.13nM、0.20nM、0.31nM及び0.35nMに相当している。一方、非結合アイソタイプ対照抗体のSMCC-DM1コンジュゲートは僅か20nMのEC50値の細胞殺傷をもたらした。同様に、図24Bは5日間huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-38-SMCC-DM1、huCD37-50-SMCC-DM1、huCD37-51-SMCC-DM1、又は未結合huIgG1-SMCC-DM1対照コンジュゲートとともにインキュベートしたGranta-519細胞を用いた典型的な細胞傷害アッセイの結果を示す。全ての特異的SMCC-DM1の投与は試験した最高濃度において生存性を完全に低減しており、EC50値はhuCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-38-SMCC-DM1、huCD37-50-SMCC-DM1、及びhuCD37-51-SMCC-DM1のSMCC-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.47nM、0.074nM、0.12nM及び0.25nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照抗体のSMCC-DM1コンジュゲートは僅か20nMのEC50値の細胞殺傷をもたらした。huCD37-3-SMCC-DM1、-SPP-DM1及びスルホ-mal-DM4コンジュゲートのインビトロの細胞傷害性Daudi、Granta-519及びBJAB細胞に対するhuCD37-3-SMCC-DM1、-SPP-DM1、及びスルホ-mal-DM4コンジュゲートのインビトロの細胞傷害を非特異的huIgG1-SMCC-DM1コンジュゲートの活性と比較した。試験した全コンジュゲートが試験した最高濃度において完全にDaudi細胞の生存性を低減しており、EC50値はhuCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-3-SPP-DM1、及びhuCD37-3-スルホ-mal-DM4について、それぞれ0.065nM、0.12nM及び0.14nM、であった。一方、非特異的huIgG1-SMCC-DM1コンジュゲートは19nMのEC50を有していた。同様に、試験した全コンジュゲートが試験した最高濃度において完全にGranta-519細胞の生存性を低減しており、EC50値はhuCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-3-SPP-DM1、及びhuCD37-3-スルホ-mal-DM4について、それぞれ0.047nM、0.13nM及び0.088nMであった。一方、非特異的huIgG1-SMCC-DM1コンジュゲートは19nMのEC50を有していた。最後に、試験した全コンジュゲートが試験した最高濃度において完全にBJAB細胞の生存性を低減しており、EC50値はhuCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-3-SPP-DM1、及びhuCD37-3-スルホ-mal-DM4について、それぞれ0.041nM、0.11nM及び0.11nMであった。一方、非特異的huIgG1-SMCC-DM1コンジュゲートは16nMのEC50を有していた。huCD37-3-SMCC-DM1及びhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートのインビトロ細胞傷害リンパ腫細胞系統のパネルに対するhuCD37-3-SMCC-DM1及びhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートのインビトロ細胞毒性を非特異的huIgG1-SMCC-DM1コンジュゲートの活性と比較した。huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてDaudi細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.036nM又は0.018nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ16nM又は30nM超のEC50で生存性を低減した。同様に、huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてGranta-519細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.014nM又は0.012nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ6.0nM又は12nM超のEC50で生存性を低減した。リンパ腫細胞系統のパネルに対するhuCD37-3-SMCC-DM1及びhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートのインビトロ細胞毒性を非特異的huIgG1-SMCC-DM1コンジュゲートの活性と比較した。huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてBJAB細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.019nM又は0.010nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ13nM又は17nMのEC50で生存性を低減した。同様に、huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてSU-DHL-4細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.031nM又は0.024nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1の両方について30nM超のEC50で生存性を低減した。huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートは又、FL細胞系統DOHH-2並びにCLL細胞系統、例えばJVM-2及びJVM-3に対して力価を示した図32B。huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてRaji細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.071nM又は0.045nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ24nM又は47nMのEC50で生存性を低減した。次に同じコンジュゲートを、Raji-VCRと称されるビンクリスチン耐性Rajiクローンにおいて試験した。親Raji細胞に関して観察されたとおり、両方のコンジュゲートは特異的細胞殺傷を示した。huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてRaji-VCR細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.11nM又は0.037nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ46nM又は100nMのEC50で生存性を低減した。huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてNamalwa細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.033nM又は0.024nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ20nM又は30nM超のEC50で生存性を低減した。同様に、huCD37-3コンジュゲートの投与は試験した最高濃度においてRamos細胞の生存性を完全に低減し、EC50はhuCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1コンジュゲートについてそれぞれ0.16nM又は0.069nMであった。一方、非結合アイソタイプ対照コンジュゲートは、huCD37-3-SMCC-DM1については20nM、そしてhuCD37-3-PEG4-mal-DM1については30nM超のEC50で生存性を低減した。抗原陰性Molt-4細胞に対するhuCD37-3-SMCC-DM1のインビトロ細胞傷害huCD37-3-SMCC-DM1の細胞傷害の特異性を更に確認するために、その活性を、非CD37発現Molt-4T細胞急性リンパ芽球性白血病細胞系統に対する非特異的huIgG-MCC-DM1コンジュゲートと比較した。比較的乏しい非特異的細胞傷害を捕らえるために両方のコンジュゲートを高濃度で本実験では使用した。huCD37-3-SMCC-DM1及び非特異的コンジュゲートはそれぞれ38nM及び42nMのEC50で同じ細胞傷害を示した。抗CD37抗体マイタンシノイドコンジュゲートのインビトロ細胞傷害のまとめこれらの細胞傷害の結果を総括すれば、単離された抗CD37抗体を用いて作成したコンジュゲートはCD37陽性リンパ腫細胞系統のパネルに対して特異的な細胞傷害性を示したことは明らかである図32B。試験した各々の場合において、各CD37発現細胞系統について良好な特異性のウインドウが観察され、細胞傷害性が標的細胞への特異的抗CD37抗体結合の結果であることを示唆している。更に又、huCD37-3-SMCC-DM1及び非特異的コンジュゲートは抗原陰性Molt-4細胞に対して同じく乏しい細胞傷害性を示した。これは、この例示されるコンジュゲートで観察される細胞傷害がCD37発現依存性であることを示している。huCD37-3抗体は又、DOHH-2、Granta-519、SU-DHL-4、JVM-2及びJVM-3を包含する多くの細胞系統に対しても活性であった。一方、抗CD37SMIPTRU-016化合物はこれらの細胞系統の何れの生存に対しても直接の作用を有さなかった。抗CD20抗体は、定量的フローサイトメトリーにおいて計測される通りしばしばより高値のCD20発現レベルにも関わらずこれらの細胞系統の大部分においてhuCD37-3よりも低値の直接的活性を示していた図32A。実施例17BJAB異種移植片モデルにおける抗CD37抗体及びそのSMCC-DM1コンジュゲートのインビボの薬効抗CD37抗体及びそのSMCC-DM1コンジュゲートを、SCIDマウスに皮下移植されたBJABリンパ腫を用いながら樹立された異種移植片モデルにおいて試験した。平均腫瘍体積約120mm3に腫瘍が達した時点で動物を腫瘍体積により投与群に無作為に割り付け、そして、AhuCD373Ab、huCD373-SMCC-DM1、huCD3750Ab、huCD3750-SMCC-DM1又はBhuCD3738Ab、huCD3738-SMCC-DM1、huCD3756Ab、huCD3756-SMCC-DM1の何れか10mg/kgを、細胞接種後第12日に1回投与した。種々異なる投与群の平均腫瘍体積を図25において腫瘍細胞接種後の時間に対してプロットする。何れの抗体の投与も、平均腫瘍体積の中程度の低減をもたらしたのに対し、SMCC-DM1コンジュゲートの何れかの投与は平均腫瘍体積のより顕著な低減をもたらした。更に又、各投与につき、ベヒクル投与群のメジアン腫瘍体積で割った各投与群のメジアン腫瘍体積に相当するT/C値を計算した。42より低値のT/C値を有する投与を活性とみなし、12未満のT/Cを有する投与を高度に活性と見なす。試験した全てのSMCC-DM1コンジュゲートの投与はメジアン腫瘍体積の顕著な低減をもたらした。細胞接種後第29日のT/CはhuCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-50-SMCC-DM1、huCD37-38-SMCC-DM1、又はhuCD37-56-SMCC-DM1についてそれぞれ20、20、9又は4に相当した。BJAB異種移植片モデルにおけるhuCD37-3抗体、スルホ-mal-DM4、-SPP-DM1及びSMCC-DM1コンジュゲートのインビボの薬効例示されるhuCD37-3抗体のスルホ-mal-DM4及びSPP-DM1コンジュゲートを、SCIDマウスに静脈内移植したBJABリンパ腫細胞を用いた異種移植片モデルにおいてSMCC-DM1コンジュゲートと比較した。平均腫瘍体積約120mm3に腫瘍が達した時点で動物を腫瘍体積により投与群に無作為に割り付け、そして、huCD37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-3-スルホ-mal-DM4の10mg/kg又はhuCD37-3-SPP-DM1の5mg/kgの何れかを、細胞接種後第9日に1回投与した。種々異なる投与群の平均腫瘍体積を図26において腫瘍細胞接種後の時間に対してプロットする。何れのコンジュゲートの投与も、平均腫瘍体積の顕著な低減をもたらした。各投与群のメジアン腫瘍体積を用いながら各投与につき上記したとおりT/C値を計算した。細胞接種後第21日のT/CはhuCD37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-3-スルホ-mal-DM4又はhuCD37-3-SPP-DM1について、それぞれ49、5、7又は4であった。第121日の試験終了時に、huCD37-3-スルホ-mal-DM4投与は8匹中3匹の無腫瘍生存動物TFSをもたらしたのに対し、huCD37-3-SPP-DM1投与は8匹中1匹のTFSであった。huCD37-3抗体、huCD37-3-SMCC-DM1又はPBSベヒクル対照群ではTFSは観察されなかった。これはhuCD37-3抗体のマイタンシノイドコンジュゲート、例えばSMCC-DM1、スルホ-mal-DM4又はSPP-DM1コンジュゲートがBJABモデルにおいて高度に活性であったことを示している。SU-DHL-4異種移植片モデルにおけるhuCD37-3抗体、スルホ-mal-DM4、-SPP-DM1及びSMCC-DM1コンジュゲートのインビボの薬効SCIDマウスに皮下移植されたSU-DHL-4びまん性大細胞型B細胞リンパ腫細胞を用いた第2の異種移植片モデルを利用して、例示されるhuCD37-3抗体のスルホ-mal-DM4及びSPP-DM1コンジュゲートのインビボ薬効をSMCC-DM1コンジュゲートと比較しながら評価した。腫瘍樹立時に動物を体重により投与群に無作為に割り付け、そして、huCD37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-3-スルホ-mal-DM4の10mg/kg又はhuCD37-3-SPP-DM1の5mg/kgの何れかを細胞接種後第17日に1回投与した。種々異なる投与群のメジアン腫瘍体積を図27において腫瘍細胞接種後の時間に対してプロットする。huCD37-3抗体の投与はメジアン腫瘍体積の低減をもたらし、コンジュゲートの何れの投与も、メジアン腫瘍体積のより顕著な低減をもたらした。各投与につき上記したとおりT/C値を計算した。細胞接種後第37日のT/CはhuCD37-3、huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-3-スルホ-mal-DM4又はhuCD37-3-SPP-DM1について、それぞれ32、1、1又は3であった。第125日の試験終了時、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-スルホ-mal-DM4投与は10匹中8匹の無腫瘍生存動物TFSをもたらし、huCD37-3-SPP-DM1投与は10匹中9匹のTFSであった。huCD37-3抗体又はPBSベヒクル対照群ではTFSは観察されなかった。これはhuCD37-3抗体そのものがSU-DHL-4モデルにおいて単回10mg/kg用量で活性であったことを示している。更に又、マイタンシノイドコンジュゲート、例えばSMCC-DM1、スルホ-mal-DM4又はSPP-DM1コンジュゲートは抗体に薬効を追加し、そしてこのモデルにおいて更に高値の力価をもたらしている。BJAB異種移植片モデルにおけるhuCD37-3抗体、PEG4-mal-DM4及びSMCC-DM1コンジュゲートのインビボの薬効huCD37-抗体及びそのPEG4-mal-DM1及びSMCC-DM1コンジュゲートを、SCIDマウスに皮下移植されたBJABリンパ腫細胞を用いて樹立された異種移植片モデルにおいて試験した。平均腫瘍体積約120mm3に腫瘍が達した時点で動物を腫瘍体積により投与群に無作為に割り付け、そして、huCD37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DM1、又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1の何れか10mg/kgを細胞移植後第9日に1回投与した。図28から解るとおり、何れのコンジュゲートの投与も平均腫瘍体積の顕著な低減をもたらした。各投与群のメジアン腫瘍体積を用いながら各投与につき上記したとおりT/C値を計算した。細胞接種後第24日のT/CはhuCD37-3、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ48、16又は5であった。細胞接種後第74日において、huCD37-3-SMCC-DM1投与は9匹中1匹の無腫瘍生存動物TFSをもたらし、huCD37-3-PEG4-mal-DM1投与は9匹中1匹のTFSであった。huCD37-3抗体又はPBSベヒクル対照群ではTFSは観察されなかった。更に又、huCD37-3-SMCC-DM1はこのモデルにおいて5mg/kgの単回用量でも活性であり、細胞接種後第24日のT/C値は34であった。これはhuCD37-3抗体のマイタンシノイドコンジュゲート、例えばSMCC-DM1又はPEG4-mal-DM1コンジュゲートはBJABモデルにおいて高度に活性であったことを示している。SU-DHL-4異種移植片モデルにおけるhuCD37-3抗体、PEG4-mal-DM4及びSMCC-DM1コンジュゲートのインビボの薬効huCD37-抗体及びそのPEG4-mal-DM1及びSMCC-DM1コンジュゲートを、SCIDマウスに皮下移植されたSU-DHL-4びまん性大細胞型B細胞リンパ腫細胞を用いて樹立された異種移植片モデルにおいて試験した。動物を体重により投与群に無作為に割り付け、そして、huCD37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DM1、又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1の何れか10mg/kgを細胞移植後第15日に1回投与した。種々異なる投与群の平均腫瘍体積を図29において腫瘍細胞接種後の時間に対してプロットする。huCD37-3抗体の投与は平均腫瘍体積の低減をもたらし、何れのコンジュゲートの投与も平均腫瘍体積のより顕著な低減をもたらしたことがわかる。各投与群のメジアン腫瘍体積を用いながら各投与につき上記したとおりT/C値を計算した。細胞接種後第38日のT/CはhuCD37-3、huCD37-3-SMCC-DM1又はhuCD37-3-PEG4-mal-DM1についてそれぞれ34、4又は2であった。細胞接種後第74日において、huCD37-3-SMCC-DM1投与は10匹中8匹の無腫瘍生存動物TFSをもたらし、huCD37-3-PEG4-mal-DM1投与は10匹中10匹のTFSであった。huCD37-3抗体又はPBSベヒクル対照群ではTFSは観察されなかった。これはhuCD37-3抗体そのものがSU-DHL-4モデルにおいて単回10mg/kg用量で活性であったことを示している。更に又、マイタンシノイドコンジュゲート、例えばSMCC-DM1、PEG4-mal-DM4又はSPP-DM1コンジュゲートは抗体への未コンジュゲート抗体薬効と比較して増強した薬効を示し、そしてこのモデルにおいて更に高値の力価をもたらしている。huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートもまた、このモデルにおいて2.5又は5mg/kgの単回用量において強力な薬効を示しており、細胞接種後第37日のT/C値はそれぞれ18及び6であった。DoHH2異種移植片モデルにおけるhuCD37-3抗体、huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲート、リツキシマブ抗体及びシクロホスファミド、ビンクリスチン及びプレドニソンCVPの投薬法のインビボの薬効huCD37-3抗体及びそのSMCC-DM1コンジュゲートを、SCIDマウスに皮下移植されたDoHH2濾胞性リンパ腫を用いて樹立された異種移植片モデルにおいて試験した。動物は腫瘍体積により投与群に無作為に割り付け、そして10mg/kgのhuCD37-3抗体又はhuCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートの単回投与;3週間週当たり2回リツキシマブ2mg/kgの6回投薬;又は単回4mg/kg用量のシクロホスファミド及び0.5mg/kgのビンクリスチンと共に5回毎日0.2mg/kg用量のプレドニソンCVPの投薬法の何れかを用いて接種後第12日に投与を開始した。種々異なる投与群のメジアン腫瘍体積を、図30において腫瘍細胞接種後の時間に対してプロットした。huCD37-3抗体の投与はメジアン腫瘍体積の低減をもたらし、huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートの投与はリツキシマブ投与と同様のメジアン腫瘍低減及びCVP投与と比較した場合により持続性のあるメジアン腫瘍低減をもたらした。所定の大きさに到達するまでの投与群T及び対照群Cの腫瘍にとって必要なメジアン時間日数として腫瘍生育遅延T-C値を定義し、そして、無腫瘍生存動物を除く各投与群について計算した。800mm3に到達するためのメジアン投与腫瘍のT-C値は、huCD37-3、huCD37-3-SMCC-DM1、リツキシマブ及びCVPについて、それぞれ8、25、24及び13日に相当した。細胞接種後第130日の試験終了時、huCD37-3-SMCC-DM1投与は9匹中1匹の無腫瘍生存動物TFSをもたらした。huCD37-抗体、リツキシマブ、CVP又はPBSベヒクル対照群ではTFSは観察されなかった。SMCC-DM1コンジュゲートはDoHH2モデルにおいて、リツキシマブに匹敵する腫瘍生育遅延及び未コンジュゲート抗体及びCVP投与と比較して増強された腫瘍生育遅延を示した。JVM-3異種移植片モデルにおけるhuCD37-3抗体、huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲート、オファツムマブ抗体及びベンダムスチンのインビボの薬効huCD37-3抗体及びそのSMCC-DM1コンジュゲートを、SCIDマウスに皮下移植されたJVM-3慢性リンパ性白血病細胞を用いて樹立された異種移植片モデルにおいて試験した。動物は腫瘍体積により投与群に無作為に割り付け、そして単回投薬の10mg/kgのhuCD37-3抗体、5又は10mg/kg用量のhuCD37-3SMCC-DM1コンジュゲート、3週間週当たり2階のオファツムマブ5mg/kgの6回投薬、又は、単回50mg/kg投薬のベンダムスチンの何れかを用いて接種後第7日に投与を開始した。種々異なる投与群のメジアン腫瘍体積を、図31において腫瘍細胞接種後の時間に対してプロットした。huCD37-3抗体の投与はメジアン腫瘍体積の低減をもたらし、huCD37-3-SMCC-DM1コンジュゲートの投与はメジアン腫瘍体積のより顕著な低減をもたらした。各投与群のメジアン腫瘍体積を用いながら各投与につき上記したとおりT/C値を計算した。細胞接種後第20日のT/CはhuCD37-3、5mg/kgのhuCD37-3-SMCC-DM1、10mg/kgのhuCD37-3-SMCC-DM1、オファツムマブ及びベンダムスチンについてそれぞれ31、19、10、35及び38に相当した。細胞接種後第76日の試験終了時に、huCD37およびオファツムマブ抗体投与は共に10匹中1匹の無腫瘍生存動物TFSをもたらし、5及び10mg/kgにおけるhuCD37-3-SMCC-DM1はそれぞれ10匹中1匹及び2匹のTFSであった。ベンダムスチン又はPBSベヒクル対照群ではTFSは観察されなかった。これはhuCD37-3抗体そのものがJVM-3モデルにおいて単回10mg/kg用量で活性であったことを示している。マイタンシノイドコンジュゲート、huCD37-3-SMCC-DM1は未コンジュゲート抗体と比較して増強された薬効を示した。更に又、huCD37-3-SMCC-DM1マイタンシノイドコンジュゲートの投与はこのモデルにおいてオファツムマブやベンダムスチン投与よりも寧ろ高値の力価をもたらした。抗CD37抗体コンジュゲートのインビボ薬効のまとめCD37はマイタンシノイドイムノコンジュゲートの標的として評価されてこなかったが、CD20は評価されてきた。CD37とCD20は、両方の抗原とも4つの膜貫通ドメインと1つは小型、そして1つは大型の細胞外ループを含有する細胞表面蛋白であるため、構造的には東洋である。何れかの抗原に対する抗体は緩徐に内在化し、そして緩徐~中程度の速度の細胞内代謝を有することがわかっているPress等、1989CancerRes49490612andPress等、1994Blood8313907。CD抗体のイムノコンジュゲートが以前より評価されている。1つの例においては、抗CD20抗体の切断不可能なMCC-DM1コンジュゲートが未コンジュゲートの抗体と同じ薬効を示し、そして同じ抗体の切断可能なSPP-DM1コンジュゲートがSCIDマウスにおけるGranta-519異種移植片モデルにおいて向上した薬効を示しているPolsonAGCancerRes200969235864。同様に、酸安定性アミドリンカーを用いて作成されたリツキシマブのカリケアマイシンコンジュゲートはヌードマウスにおけるRamos異種移植片モデルにおいては向上したインビボの薬効を示していない。酸不安定性のジメチルヒドラジドAc-Butリンカーを用いて作成されたリツキシマブのカリケアマイシンコンジュゲートのみがこの試験において向上したインビボの薬効を示しているDiJosephJFCancerImmunolImmunotherapy20075611071117。これとは対照的に、本発明の幾つかの単離された抗CD37抗体の切断不可能なSMCC-DM1コンジュゲートは未コンジュゲートの抗体と比較してBJAB、SU-DHL-4、DoHH2及びJVM-3異種移植片モデルにおいて劇的に向上したインビボの薬効を示す。このことは、単離された抗体が、それらをマイタンシノイドコンジュゲート、例えばSMCC-DM1コンジュゲートのようにインビボでより有効とするユニークな特性を有することを示唆している。当然ながら、概要や要約のセクションではなく詳細な説明のセクションが請求項の解釈のために使用されることを意図している。概要及び要約のセクションは本発明者等の意図する本発明の例示される実施形態の1つ以上であって全てではないものを記載しており、そして即ち、如何なる態様においても本発明及び添付請求項を限定する意図はない。本発明は特定の機能及びその関連事項の実施を説明する機能的ビルディングブロックを用いながら上記説明してきた。これらの機能的ビルディングブロックの境界は説明の簡便化のために本明細書において任意に定義されている。代替の境界は、特定の機能及びその関連事項が適切に実施される限り、定義されることができる。特定の実施形態の上記説明は、他者が、当該分野の知識の適用により、予定外の実験を行うことなく、本発明の一般的概念を逸脱することなくそのような特定の実施形態を容易に変更及び/又は種々の用途のために適合させることができるように、本発明の一般的性質を完全に顕示することになる。従って、そのような適合及び変更は、本明細書に示した教示及び指針に基づいて開示された実施形態の等価物の意味及び範囲に含まれることを意図している。本明細書の表現や用語は限定ではなく説明を目的としており、本明細書の用語又は表現は教示及び指針に鑑みて当業者により解釈されるべきである。本発明の広範さは上記した例示される実施形態の何れによっても制限されるべきではなく、以下の請求項及びその等価物に従ってのみ定義されなければならない。"