"スフィンゴミエリナーゼの製造方法であって、以下の工程a及びb:a以下のi又はiiのアミノ酸配列:i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得る工程;及びb工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程;を含む方法。工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、請求項1に記載の製造方法。前記工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、iのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む、請求項1又は2に記載の製造方法。以下の工程a~c:a以下のi又はiiのアミノ酸配列:i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得る工程;b工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程;及びc工程bで得た培養物から形質転換体を分離してスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を得る工程;を含む方法により得られる、スフィンゴミエリナーゼ含有組成物。工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、請求項4に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物。前記スフィンゴミエリナーゼ含有組成物に水又は緩衝液を添加してスフィンゴミエリナーゼ濃度が4mg/mLの中性又は酸性の水溶液を調製し、30°Cで96時間静置保存した場合、保存前と比較して50以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する、請求項4又は5に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物。i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子を含有する組換えベクター。i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子を含有する組換えベクター。i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子を有し、スフィンゴミエリナーゼを培養物中に分泌することを特徴とする、ロドコッカス属細菌形質転換体。前記遺伝子が、i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、請求項9に記載の形質転換体。特許文献2に記載の方法により得られるスフィンゴミエリナーゼ含有培養物は、純度が低く安定性が悪いという問題がある。特許文献3に記載の方法により得られるスフィンゴミエリナーゼ含有培養物は、特異性が低いという問題がある。非特許文献1に記載の方法により得られるスフィンゴミエリナーゼ含有培養物は、フォスフォリパーゼphospholipaseC活性を併せ持ち特異性が低いという問題がある。非特許文献5に開示された方法で得られるスフィンゴミエリナーゼ含有培養物は、リゾ血小板活性化因子を加水分解する活性を併せ持ち特異性が低いという問題があり、また、非特許文献5はスフィンゴミエリナーゼ含有培養物中のスフィンゴミエリナーゼの純度に関する記載はない。非特許文献6に開示された方法は、工業的生産に適していないという問題があり、また、非特許文献6はスフィンゴミエリナーゼ含有培養物中のスフィンゴミエリナーゼの純度を開示していない。非特許文献7に開示された方法で得られるスフィンゴミエリナーゼ含有培養物は、フォスフォリパーゼC活性を併せ持ち、特異性が低いという問題がある。このように従来知られているスフィンゴミエリナーゼの製造法はいずれも実用性が低く、また、微生物の培養によりスフィンゴミエリナーゼ含有培養物を得る場合、得られる培養物中のスフィンゴミエリナーゼの純度が低いという問題があり、満足のいくものではないという現状を本発明者らは問題点として強く認識した。このような背景のもと、本発明が解決しようとする課題は、スフィンゴミエリナーゼの製造方法、並びに純度が高く安定性の高いスフィンゴミエリナーゼ含有組成物及びその製造方法を提供することにある。本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、驚くべきことにロドコッカスRhodococcus属細菌を宿主として、当該宿主とは属が異なるストレストマイセスエスピーStreptomycessp.由来のスフィンゴミエリナーゼをコードする遺伝子を導入し、得られた形質転換体を培養することで、スフィンゴミエリナーゼを容易に製造することができ、また、得られた培養物は純度が高く安定性の高いスフィンゴミエリナーゼ含有組成物であることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のものに関する。1スフィンゴミエリナーゼの製造方法であって、以下の工程a及びb:a以下のi又はiiのアミノ酸配列:i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得る工程;及びb工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程;を含む方法。1-2さらに以下の工程c:c工程bで得られた培養物から形質転換体を分離してスフィンゴミエリナーゼを得る工程を含む、前記1に記載の製造方法。1-3ロドコッカス属細菌が、ロドコッカスエリスロポリスである、前記1又は1-2に記載の製造方法。1-4ロドコッカスエリスロポリスが、ロドコッカスエリスロポリスL88株である、前記1-3に記載の製造方法。2工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記1~1-4のいずれかに記載の製造方法。2-2工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、i又はiiのアミノ酸配列のN末端と、iii又はivのアミノ酸配列のC末端とが、直接結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記2に記載の製造方法。2-3工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、iiiのアミノ酸配列コードする塩基配列を含む遺伝子である、前記2又は2-2に記載の製造方法。3前記工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、iのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む、前記1~2-3のいずれかに記載の製造方法。4以下の工程a~c:a以下のi又はiiのアミノ酸配列:i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得る工程;b工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程;及びc工程bで得た培養物から形質転換体を分離してスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を得る工程;を含む方法により得られる、スフィンゴミエリナーゼ含有組成物。4-2以下の工程a及びb:a以下のi又はiiのアミノ酸配列:i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得る工程;及びb工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程;を含む方法により得られる、形質転換体及びスフィンゴミエリナーゼ含有培養物。4-3以下の工程a及びb:a以下のi又はiiのアミノ酸配列:i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得る工程;及びb工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程;を含む方法により得られる培養物の培養上清であって、スフィンゴミエリナーゼを含有する培養上清。4-4ロドコッカス属細菌が、ロドコッカスエリスロポリスである、前記4~4-3のいずれかに記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。4-5ロドコッカスエリスロポリスが、ロドコッカスエリスロポリスL88株である、前記4-4に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。5工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記4~4-5のいずれかに記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。5-2工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、i又はiiのアミノ酸配列のN末端と、iii又はivのアミノ酸配列のC末端とが、直接結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記5に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。5-3工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子が、iiiのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記5又は5-2に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。6前記スフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清に水又は緩衝液を添加してスフィンゴミエリナーゼ濃度が4mg/mLの中性又は酸性の水溶液を調製し、30°Cで96時間静置保存した場合、保存前と比較して50以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する、前記4~5-3のいずれかに記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。6-2前記水溶液を30°Cで96時間静置保存した場合、保存前と比較して65以上好ましくは70以上、より好ましくは75以上、さらに好ましくは78以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する、前記6に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。6-3前記スフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清に水又は緩衝液を添加してスフィンゴミエリナーゼ濃度が4mg/mLのpH6.8の水溶液を調製し、30°Cで96時間静置保存した場合、保存前と比較して50以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する、前記4~5-3のいずれかに記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。6-4前記水溶液を30°Cで96時間静置保存した場合、保存前と比較して65以上好ましくは70以上、より好ましくは75以上、さらに好ましくは78以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する、前記6-3に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。6-5前記スフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清に水又は緩衝液を添加してスフィンゴミエリナーゼ濃度が4mg/mLのpH5.5の水溶液を調製し、30°Cで96時間静置保存した場合、保存前と比較して50以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する、前記4~5-3のいずれかに記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。6-6前記水溶液を30°Cで96時間静置保存した場合、保存前と比較して75以上好ましくは78以上、より好ましくは90以上、さらに好ましくは97以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する、前記6-5に記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清。6-7得られるスフィンゴミエリナーゼが、ストレプトマイセス由来のスフィンゴミエリナーゼと同一のアミノ酸配列及び/又は特徴を有する、前記1~3のいずれかに記載の製造方法。なお、上記1~3のように引用する項番号が範囲で示され、その範囲内に2-2等の枝番号を有する項が配置されている場合には、2-2等の枝番号を有する項も引用されることを意味する。以下においても同様である。6-8得られるスフィンゴミエリナーゼが、ストレプトマイセスエスピー由来のスフィンゴミエリナーゼと同一のアミノ酸配列及び/又は特徴を有する、前記1~3のいずれかに記載の製造方法。6-9得られるスフィンゴミエリナーゼが、ストレプトマイセスエスピーA9107株由来のスフィンゴミエリナーゼと同一のアミノ酸配列及び/又は特徴を有する、前記1~3のいずれかに記載の製造方法。6-10前記製造方法で得られるスフィンゴミエリナーゼあるいは前記組成物、培養物又は培養上清に含まれるスフィンゴミエリナーゼが、以下の1の作用を有し、さらに以下の2~5のいずれか1つ以上の特徴を有するスフィンゴミエリナーゼである、前記1~6-9のいずれかに記載の製造方法、組成物、培養物又は培養上清:1作用1分子の水の存在下、スフィンゴミエリン1分子を分解してセラミド1分子とフォスフォリルコリン1分子を生成する。2基質特異性スフィンゴミエリンに作用し、かつ、レシチン、リゾレシチン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルセリン及びフォスファチジルイノシトールのいずれにも実質的に作用しない。3Kmスフィンゴミエリンに対するKm値が約0.45mMである。4至適pHpH7.0~8.0。5分子量ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法による分子量が約38kDaである。6-11前記1~3のいずれかに記載の製造方法により得られるスフィンゴミエリナーゼ。7i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子を含有する組換えベクター。7-2前記遺伝子を、以下の群:pTipQC1、pTipQC2、pTipQT1、pTipQT2、pTipRC1、pTipRC2、pTipRT1、pTipRT2、pNitQC1、pNitQC2、pNitQT1、pNitQT2、pNitRC1、pNitRC2、pNitRT1及びpNitRT2;から選択される発現ベクターに挿入して得られる、前記7に記載の組換えベクター。7-3前記遺伝子が、iのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む、前記7又は7-2に記載の組換えベクター。8i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子を含有する組換えベクター。8-2前記遺伝子を、以下の群:pTipQC1、pTipQC2、pTipQT1、pTipQT2、pTipRC1、pTipRC2、pTipRT1、pTipRT2、pNitQC1、pNitQC2、pNitQT1、pNitQT2、pNitRC1、pNitRC2、pNitRT1及びpNitRT2;から選択される発現ベクターに挿入して得られる、前記8に記載の組換えベクター。8-3前記遺伝子が、i又はiiのアミノ酸配列のN末端と、iii又はivのアミノ酸配列のC末端とが、直接結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記8又は8-2に記載の組換えベクター。8-4前記遺伝子が、iのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む、前記8~8-3のいずれかに記載の組換えベクター。8-5前記遺伝子が、iiiのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む、前記8~8-4のいずれかに記載の組換えベクター。9i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子を有し、スフィンゴミエリナーゼを培養物中に分泌することを特徴とする、ロドコッカス属細菌形質転換体。9-2ロドコッカス属細菌が、ロドコッカスエリスロポリスである、前記9に記載の形質転換体。9-3ロドコッカスエリスロポリスが、ロドコッカスエリスロポリスL88株である、前記9-2に記載の製造方法。10前記遺伝子が、i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記9~9-3のいずれかに記載の形質転換体。10-2前記遺伝子が、i又はiiのアミノ酸配列のN末端と、iii又はivのアミノ酸配列のC末端とが、直接結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である、前記10に記載の形質転換体。10-3前記遺伝子が、iのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む、前記9~10-2のいずれかに記載の形質転換体。10-4前記遺伝子が、iiiのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む、前記10~10-3のいずれかに記載の形質転換体。11前記7~8-5のいずれかに記載の組換えベクターでトランスフェクトされたロドコッカス属細菌。11-2ロドコッカスエリスロポリスである、前記11に記載のロドコッカス属細菌。11-3ロドコッカスエリスロポリスL88株である前記11-2に記載のロドコッカス属細菌。12前記1~3のいずれかに記載の製造方法で得られるスフィンゴミエリナーゼ、あるいは前記4~6-10のいずれかに記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清を用いたスフィンゴミエリナーゼの基質の測定方法。13前記1~3のいずれかに記載の製造方法で得られるスフィンゴミエリナーゼ、あるいは前記4~6-10のいずれかに記載のスフィンゴミエリナーゼ含有組成物、培養物又は培養上清を用いたスフィンゴミエリナーゼの基質の消去方法。14スフィンゴミエリナーゼ又はスフィンゴミエリナーゼ含有組成物の製造における前記7~8-5のいずれかに記載の組換えベクターの使用。15スフィンゴミエリナーゼ又はスフィンゴミエリナーゼ含有組成物の製造における前記11~11-3に記載のロドコッカス属細菌の使用。本発明により、スフィンゴミエリナーゼ、及び純度が高く、安定性の高いスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を効率的に製造することができる。したがって、純度が高く、安定性の高いスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を取得することができ、この組成物から容易にスフィンゴミエリナーゼを取得することもできる。以下、本発明を実施するための形態以下、本実施の形態と略すことがあるについて具体的に説明する。本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼの製造方法は、以下の工程a及びbを含む。a以下のi又はiiのアミノ酸配列:i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得る工程;及びb工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程。工程a工程aは、ロドコッカス属細菌に遺伝子をトランスフェクトして形質転換体を得る工程である。トランスフェクトする遺伝子は、得られた形質転換体を培養した場合にスフィンゴミエリナーゼを含む培養物が得られる限り特に限定されないが、好ましくは以下のi又はiiのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子である。i配列番号1に記載のアミノ酸配列上記工程aにおけるiのアミノ酸配列からなるタンパク質は、ストレプトマイセスエスピーA9107に由来するスフィンゴミエリナーゼである。ii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列上記工程aにおけるiiのアミノ酸配列としては、例えば、配列番号1に記載のアミノ酸配列において、酵素作用に関与しない一部のアミノ酸を変異させたアミノ酸配列が例示される。配列番号3に記載のアミノ酸配列配列番号1に記載のアミノ酸配列の50~56番目の配列に対応及び配列番号4に記載のアミノ酸配列配列番号1に記載のアミノ酸配列の199~204番目の配列に対応但し、配列番号3及び4中、Xaaは任意のアミノ酸を示すは、いずれもスフィンゴミエリナーゼ活性に必須の配列として知られるAmyE.A.O.ら、J.Biol.Chem.,280,35011-350172005、AgoH.ら、J.Biol.Chem.,281,16157-161672006等。したがって、上記工程aにおけるiiのアミノ酸配列としては、例えば、配列番号1に記載のアミノ酸配列において、配列番号3及び4に対応する配列以外の部分のアミノ酸を変異させたアミノ酸配列が例示される。性質の似たアミノ酸への置換等であれば、変異後のアミノ酸配列からなるタンパク質のスフィンゴミエリナーゼ活性に影響しないであろう。例えば、上記工程aにおけるiiのアミノ酸配列としては、DVVX1X2X3E式中、X1はV又はIを、X2はL又はFを、X3はD、N、Q又はEを、それぞれ表す、及びX4X5GDX6N式中、X4はV、I又はLを、X5はA、C又はGを、X6はF、M又はLを、それぞれ表すの配列を含むアミノ酸配列が好ましい。上記工程aにおけるiiのアミノ酸配列としては、また、配列番号1に記載のアミノ酸配列に各種のアミノ酸残基が付加したアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列も例示される。そのようなアミノ酸配列又は該アミノ酸配列からなるタンパク質としては、例えば、配列番号1に記載のアミノ酸配列のC末端側にチオレドキシンタンパク質等機能性タンパク質を付加した融合タンパク質、配列番号1に記載のアミノ酸配列に、タンパク質の精製や確認等をせしめることのできるタグと呼ばれる部分を付加した融合タンパク質等が挙げられる。タグの付加は、その全部又は一部であってもよい。例えば、本実施の形態における製造方法において、培養物からスフィンゴミエリナーゼを効率的に精製するために、配列番号1に記載のアミノ酸配列に5~10個のHisを付加してもよい。また、配列番号1に記載のアミノ酸配列と、付加アミノ酸配列との間等に、数個のプロテアーゼ認識アミノ酸配列を配置して付加することもできる。更に、配列番号1のアミノ酸配列のC末端側に付加していてもよいアミノ酸残基又はポリペプチド残基としては、TEE配列、Sタグ、Hisタグ等が挙げられる。上記工程aにおけるiiのアミノ酸配列としては、また、配列番号1に記載のアミノ酸配列において、各種のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列も例示される。そのような欠失の例としては、例えば:スフィンゴミエリナーゼの本質的な機能とは無関係の数個のアミノ酸からなるドメインの欠失;配列番号1に記載のアミノ酸配列中の複数個のアミノ酸からなるギャップの欠失;配列番号1に記載のアミノ酸配列のC末端側のArgから順に削除する欠失;配列番号1のアミノ酸配列のN末端側のAlaの欠失;それらの欠失の組み合わせ等が挙げられる。変異後に得られるアミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有する限り、上記の欠失、置換又は付加等の変異は、適宜組み合わせることも可能である。任意のアミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するか否かは、当業者に公知の手法により確認することができる。例えば、該アミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をトランスフェクトして得た形質転換体を培養し、培養物のスフィンゴミエリナーゼ活性を測定することで確認することができる。培養物が、後述する理化学的性質<1>~<5>を有するスフィンゴミエリナーゼを含むことが好ましい。一態様において、工程aにおいて、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトする遺伝子は、上記i及びiiのアミノ酸配列のうち、iのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むことが好ましい。別の態様としてiiのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むことが好ましい場合もある。上記i又はiiのアミノ酸配列をコードする塩基配列は、目的とするアミノ酸配列をもとに、容易に得ることができる。配列番号1のアミノ酸配列をコードする塩基配列としては、特に限定されないが、例えば、配列番号5の塩基配列や、配列番号5の塩基配列を宿主のコドン使用頻度に合わせて変更した塩基配列が例示されるが、ロドコッカス属細菌のコドン使用頻度に合わせて変更した塩基配列が好ましく、ロドコッカスエリスロポリスのコドン使用頻度に合わせて変更した塩基配列がより好ましい。そのようなコドン使用頻度は、httpwwwkazusaorjpcodonなどで容易に検索することができる。塩基配列の調製には、通常用いられる公知の遺伝子操作を利用することができる。塩基配列が所望のアミノ酸配列をコードする限り、例えば、部位特異的変異法や、目的遺伝子の特定塩基の断片を人工変異塩基で置換する等の種々の方法を用いて塩基配列に変異を加えてもよい。微生物等を用いて酵素等のタンパク質を製造する場合、生産性を高めること等を目的として、シグナルペプチドと呼ばれるアミノ酸配列を、目的とする酵素等のタンパク質に付加することがある。本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼの製造方法においても、スフィンゴミエリナーゼのアミノ酸配列のN末端側にシグナルペプチドを付加することができる。そのようなシグナルペプチドは、本実施の形態における製造方法においてシグナルペプチドとして機能するものであれば特に限定されない。本実施の形態において、あるペプチドが、シグナルペプチドとして機能するとは、該ペプチドと、上記i又はiiに記載のアミノ酸配列とが直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして得られた形質転換体を培養した場合に、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得ることができることを言う。純度が高く、安定性の高いスフィンゴミエリナーゼを含む培養物を効率的に得ることができるシグナルペプチドが好ましい。例えば、上記培養した場合に、スフィンゴミエリナーゼが培養液中に形成される形質転換体内で生産されたスフィンゴミエリナーゼがシグナルペプチドにより培養液中に輸送されるシグナルペプチドアミノ酸配列が好ましい。また、シグナルペプチドとしては、得られるスフィンゴミエリナーゼの活性を低下させないものが好ましい。特に、純度が高く、安定性の高いスフィンゴミエリナーゼを含む培養物を効率的に得るという観点からは、シグナルペプチドとしてはストレプトマイセスエスピーA9107株由来のシグナルペプチド配列番号2が好ましい。また、シグナルペプチドとしては、上記シグナルペプチドのアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、シグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列を用いることもできる。具体的には、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼの製造方法の工程aにおいて、i配列番号1に記載のアミノ酸配列、又はii配列番号1に記載のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつ該アミノ酸配列からなるタンパク質がスフィンゴミエリナーゼ活性を有するアミノ酸配列のN末端と、iii配列番号2に記載のアミノ酸配列シグナルペプチド、又はiv配列番号2のアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列であって、かつシグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子を、ロドコッカス属細菌にトランスフェクトすることで、シグナルペプチドをスフィンゴミエリナーゼに付加することができる。上記ivのアミノ酸配列としては、例えば、配列番号2に記載のアミノ酸配列のN末端側にチオレドキシンタンパク質等機能性タンパク質やHisタグ等のその他のアミノ酸配列からなる部分を付加したアミノ酸配列が例示され、融合タンパク質とすることも好ましい。場合によっては、上記の付加アミノ酸配列は、その全部又は一部であってもよい。上述の付加の例と同様に、シグナルペプチドとして機能するアミノ酸配列が得られる限り、常法によってアミノ酸の欠失又は置換を行うことができ、例えば、該アミノ酸配列中に複数個のアミノ酸からなるギャップが存在する場合、それらの欠失を組み合わせることもできる。また、上記の欠失、置換又は付加を適宜組み合わせることも可能である。上記iii又はivのアミノ酸配列をコードする塩基配列は、目的とするアミノ酸配列をもとに、容易に得ることができる。配列番号2のアミノ酸配列をコードする塩基配列としては、特に限定されないが、例えば、配列番号6の塩基配列が挙げられる。このような塩基配列は上述のように宿主のコドン使用頻度にあわせて変更することができる。上記遺伝子に含まれる塩基配列は、上記i又はiiのアミノ酸配列のN末端と、上記iii又はivのアミノ酸配列のC末端とが、直接又は1若しくは数個のアミノ酸を介して結合したアミノ酸配列をコードする。ここで、上記i又はiiのアミノ酸配列のN末端と、上記iii又はivのアミノ酸配列のC末端とが、1若しくは数個のアミノ酸を介して結合する場合、該結合は、結合したアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む遺伝子をロドコッカス属細菌にトランスフェクトして得られた形質転換体を培養した場合に、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得ることができる限り特に限定されない。該結合は、プロテアーゼの切断部位であることが望ましく、代表的なプロテアーゼとそれに対応する配列としては、例えば、以下の配列が挙げられる配列中、↓が切断部位を表す。トロンビン:LVPR↓GSエンテロキナーゼ:DDDDK↓第X因子FactorXa:IEGR↓好ましい態様において、上記遺伝子に含まれる塩基配列は、上記i又はiiのアミノ酸配列のN末端と、上記iii又はivのアミノ酸配列のC末端とが、直接結合したアミノ酸配列をコードする。塩基配列の調製には、通常用いられる公知の遺伝子操作を利用することができる。DNA合成により調製してもよい。塩基配列が所望のアミノ酸配列をコードする限り、例えば、部位特異的変異法や、目的遺伝子の特定塩基の断片を人工変異塩基で置換する等の種々の方法を用いて塩基配列に変異を加えてもよい。上記の塩基配列を含む遺伝子を、常法を用いてロドコッカス属細菌にトランスフェクトして形質転換体を得ることができる。より詳細には、形質転換体において導入遺伝子を発現させるための発現ベクターに、上記の塩基配列を含む遺伝子を挿入して得られる組換えベクターを使用することが出来る。このような発現ベクターとしては、ロドコッカス属細菌を宿主としてトランスフェクトし、得られた形質転換体を培養した場合に、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物が得られるベクターであれば特に限定されないが、純度が高く、安定性の高いスフィンゴミエリナーゼを含む培養物を効率的に得られる発現ベクターが好ましく、宿主微生物体内で自律的に増殖し得るファージ又はプラスミドのうち、遺伝子組換え用として構築されたものが好ましい。そのような発現ベクターとしては、例えば、λgtλC、λgtλB、pET-3a、pET-11a、pET-32aなどのpETベクターNovagen社製並びにpBR322、pBR325、pACYC184、pUC12、pUC13、pUC18、pUC19、pUC118、pINI、BluescriptKS、pWH1520、pUB110、pKH300PLK、pIJ680、pIJ702、YRp7、pYC1、YEp13、pTipQC1、pTipQC2、pTipQT1、pTipQT2、pTipRC1、pTipRC2、pTipRT1、pTipRT2、pNitQC1、pNitQC2、pNitQT1、pNitQT2、pNitRC1、pNitRC2、pNitRT1及びpNitRT2などが使用できる。好ましいベクターとしては、pTipQC1、pTipQC2、pTipQT1、pTipQT2、pTipRC1、pTipRC2、pTipRT1、pTipRT2、pNitQC1、pNitQC2、pNitQT1、pNitQT2、pNitRC1、pNitRC2、pNitRT1及びpNitRT2が挙げられ、pTipQC1及びpTipQC2がより好ましい。本実施の形態においては、ロドコッカス属細菌を宿主とする発現ベクターが好ましい。より好ましくは大腸菌とのシャトルベクターとして機能する発現ベクターが挙げられる。プロモーターは宿主中で発現出来るものであれば特に限定されないが、好ましくはpTipQC1、pTipQC2、pTipQT1、pTipQT2、pTipRC1、pTipRC2、pTipRT1、pTipRT2、pNitQC1、pNitQC2、pNitQT1、pNitQT2、pNitRC1、pNitRC2、pNitRT1及びpNitRT2のプロモーターが挙げられ、さらに好ましくはpTipQC1、pTipQC2、pTipQT1及びpTipQT2のプロモーターが挙げられる。発現ベクターへの遺伝子の挿入は、常法により行うことができる。まず、挿入しようとする塩基配列を制限酵素により切断して生成する塩基配列の末端と同じ末端を生成する制限酵素により上記発現ベクターを切断し、発現ベクター断片を作製する。挿入しようとする塩基配列を該制限酵素で切断することにより作製した塩基配列の断片と、発現ベクター断片とを、DNAリガーゼにより常法に従って結合し、遺伝子を発現ベクターに挿入することができる。得られたベクターに目的の遺伝子が挿入されていることは、例えばDNAシーケンスにより確認することができる。得られた組換えベクターは、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼの製造等に有用である。本実施の形態において、トランスフェクト形質転換とは、遺伝子を細胞菌体に導入し、形質転換体を得ることを意味し、その方法は当業者が一般に行うことができるものであれば特に限定されない。例えばコンピテントセルを用いる方法、マイクロインジェクション法、リポフェクション法が例示される。好ましくは、ロドコッカス属細菌に効率的に遺伝子を導入することができる方法であり、形質転換効率がよいという観点から、より好ましくはエレクトロポレーション法である。工程aにおいて、遺伝子をトランスフェクトする微生物は、ロドコッカス属細菌であれば特に限定されないが、ロドコッカスエリスロポリスRhodococcuserythropolisであることが好ましい。ロドコッカスエリスロポリスとしては、得られた形質転換体を培養して、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物が得られる限り特に限定されないが、純度が高く、安定性の高いスフィンゴミエリナーゼを含む培養物が効率的に得られるものが好ましい。例えば、ロドコッカスエリスロポリスATCC15591、ロドコッカスエリスロポリスATCC25544、ロドコッカスエリスロポリスATCC17041、ロドコッカスエリスロポリスNCIB8147、ロドコッカスエリスロポリスJCM3201、ロドコッカスエリスロポリスJCM3201の変異株及びロドコッカスエリスロポリスL88株FERMBP-08444が例示される。好ましくはロドコッカスエリスロポリスJCM3201が挙げられ、より好ましくは特開2004-073116号公報で開示されたロドコッカスエリスロポリスJCM3201の変異株が挙げられ、さらに好ましくはロドコッカスエリスロポリスL88株が挙げられる。任意の微生物が、ロドコッカス属細菌又はロドコッカスエリスロポリスであるかの判断は、バージーズマニュアルオブシステマティックバクテリオロジーBergeysManualofSystematicBacteriologyに従って行うことができる。rRNA塩基配列解析によって行ってもよい。また、微生物同定検査会社に依頼して判別してもよい。目的の遺伝子がトランスフェクトされた形質転換体を選択する際には、導入した発現ベクターに存在する抗生物質耐性遺伝子などの選択マーカーを利用すればよい。例えば、pTipQC1、pTipQC2、pTipRC1、pTipRC2、pNitQC1、pNitQC2、pNitRC1及びpNitRC2を発現ベクターとして用いる場合には、クロラムフェニコールに対する耐性により選択する方法が例示される。また、pTipQT1、pTipQT2、pTipRT1、pTipRT2、pNitQT1、pNitQT2、pNitRT1及びpNitRT2を発現ベクターとして用いる場合にはテトラサイクリンに対する耐性により選択する方法が例示される。得られた形質転換体は、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼの製造等に有用である。工程b工程bは、上記工程aで得た形質転換体を培養し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物を得る工程である。形質転換体の培養条件は、ロドコッカス属細菌の生理学的性質を考慮して選択すればよい。培養は、通常液体培養で行うが、工業的には深部通気撹拌培養を行うことが有利である。培養に用いる培地は、通常ロドコッカス属細菌の培養に用いられるものであれば特に限定されず、例えば、肉汁培地、肉汁ゼラチン培地、牛乳培地、コーンミール培地、トマトジュース培地、TSI培地、SIM培地、グルコースブイヨン培地、YM培地、Lennox培地、LB培地、Davis培地、トリスグルコース培地、EMB糖指示培地、Spizizen最少培地、YPAD培地、Vogel培地、ツァペックドッグス培地等を用いることができる。さらに、例えばhttpwwwdsmzde等を参考にして、適切な培地を選択することもできる。培養温度はロドコッカス属細菌が発育し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物が得られる範囲で適宜変更し得る。例えば、通常は下限が4°C以上、好ましくは10°C以上、より好ましくは20°C以上、上限が50°C以下、好ましくは42°C以下、より好ましくは37°C以下が例示される。培養時間は、選択する培養条件によって多少異なるが、得られる培養物中のスフィンゴミエリナーゼが最大量に達する時期を見計らって適当な時期に培養を終了すればよい。例えば、後述の実施例1に記載の培養条件で培養した場合、通常は下限が10時間以上、好ましくは12時間以上、より好ましくは17時間以上、上限が100時間以下、好ましくは90時間以下、より好ましくは80時間以下が例示される。培地pHはロドコッカス属細菌が発育し、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物が得られる範囲で適宜変更し得る。例えば、下限としてpH5.8以上、好ましくはpH6.2以上、上限としてpH8.5以下、好ましくはpH7.5以下が例示される。上記の手法で形質転換体を培養して得られる、スフィンゴミエリナーゼを含む培養物は、形質転換体内、培養液中又はその両方にスフィンゴミエリナーゼを含むことができるが、精製の容易性等の観点から、好ましくは、培養液中にスフィンゴミエリナーゼを含む。本実施の形態は、上記工程a及びbを含む方法により得られる、形質転換体及びスフィンゴミエリナーゼ含有培養物並びに該培養物の培養上清であって、スフィンゴミエリナーゼを含有する培養上清にも関する。本実施の形態は、また、上記工程a及びbに続いて、以下の工程cを行うことにより得られる、スフィンゴミエリナーゼ含有組成物にも関する。工程c工程cは、工程bで得た培養物から形質転換体を分離してスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を得る工程である。工程bで得た培養物は、上述の通り、好ましくは培養液中にスフィンゴミエリナーゼを含む培養物である。この場合、工程bで得られた培養物から、濾過又は遠心分離などの通常の手段により形質転換体を分離し、培養上清としてスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を得ることができる。形質転換体の分離後、さらに、マイクローザ旭化成ケミカルズ社製やフィルトロン富士フィルター社製などを用いた限外濾過濃縮法などにより濃縮した形で、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を得ることもできる。本実施の形態において、上記工程cで得られたスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、純度が高く、保存安定性が高いため、さらなる精製を行うことなく保存が可能であるという利点を有するが、所望により、安定剤として各種の塩類、糖類、タンパク質、脂質、界面活性剤等を加え、あるいは加えることなく、限外濾過濃縮、凍結乾燥等の方法により、液状又は固形のものとすることができる。例えば凍結乾燥を行う場合、安定剤としてサッカロース、マンニトール、食塩、アルブミン等を0.5~10程度添加してもよい。このようにして得られた濃縮物や凍結乾燥物も、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ含有組成物に含まれる。本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、水又は緩衝液を添加してスフィンゴミエリナーゼ濃度が4mg/mLの中性又は酸性の水溶液を調製し、30°Cで96時間静置保存して保存試験を行った場合、保存前と比較して50以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持することが好ましい。上記の保存試験における中性又は酸性とは、pHが中性から酸性であることを意味し、pHの下限は4.0であり、好ましくは5.0であり、より好ましくは5.5である。pHの上限は7.5であり、好ましくは7.0であり、より好ましくは6.8である。上記の保存試験における緩衝液は、スフィンゴミエリナーゼ溶液として中性又は酸性の水溶液が得られる限り特に限定されないが、例えば、弱酸の酢酸、クエン酸、リン酸、ホウ酸、又は酒石酸と、これらのナトリウム塩等を用いて調製される緩衝液であり、好ましくは酢酸緩衝液酢酸酢酸ナトリウムである。上記の保存試験における温度の上限は、スフィンゴミエリナーゼ活性が残存する温度であればよく、例えば50°Cであり、好ましくは40°Cであり、より好ましくは30°Cである。静置保存する場合の温度の下限は、例えば4°Cであり、好ましくは10°Cであり、より好ましくは20°Cである。特に好ましい温度は30°C以下である。上記の保存試験におけるスフィンゴミエリナーゼの水溶液の濃度は、特に制限されないが、下限は、例えば1mg/mLであり、好ましくは2mg/mLであり、より好ましくは3mg/mLである。上限は、例えば30mg/mLであり、好ましくは20mg/mLであり、より好ましくは10mg/mLである。例えば、4mg/mLのスフィンゴミエリナーゼ水溶液を作成して、上記の30°Cで96時間の静置保存をすることができる。上記の条件で保存した本実施の形態の組成物中のスフィンゴミエリナーゼ活性は、保存前と比較して、少なくとも40より高い、例えば50以上、好ましくは65以上、より好ましくは70以上、さらに好ましくは75以上、さらにより好ましくは78以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持し、特に好ましくは80以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する。特に、上記の水溶液のpHが酸性例えばpH5.5の場合、上記の条件で保存した本実施の形態の組成物中のスフィンゴミエリナーゼ活性は、保存前と比較して、例えば75以上、好ましくは78以上、より好ましくは90以上、さらに好ましくは97以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する。本実施の形態において、上記工程cで得られたスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、高い純度タンパク質量あたりのスフィンゴミエリナーゼ活性を有する。例えば、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、タンパク質量あたりのスフィンゴミエリナーゼ活性として少なくとも10U/mg以上、好ましくは50U/mg以上、より好ましくは100U/mg以上の純度を有する。純度は、後述のスフィンゴミエリナーゼ活性測定法と共に、タンパク質濃度の測定法を用いて決定することができる。タンパク質濃度の測定法としては、当該業者に公知の測定方法を用いればよく、特に限定されるものではない。例えば、280nmの吸光度を測定する方法紫外吸収法、クーマシーブルーを用いる方法Bradford法、フェノール試薬を用いる方法Lowry法、ビシンコニン酸を用いる方法BCA法が例示される。標準試料として用いるタンパク質も、当該業者が一般的に用いるタンパク質を用いればよく、例えばウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ガンマグロブリン、ヒト血清アルブミン及びクリスタリンが例示され、ウシ血清アルブミン及びオボアルブミンが汎用される。本実施の形態において、上記工程cで得られたスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、高い保存安定性を有し、例えば70時間以上、好ましくは80時間以上、より好ましくは90時間以上、例えば96時間程度、静置保存しても、保存前と比較して、例えば50以上、好ましくは65以上、より好ましくは70以上、さらに好ましくは75以上、特に好ましくは78以上のスフィンゴミエリナーゼ活性を保持する。保存時の温度は、上記の保存試験に関する記載も参照して適宜決定することができるが、保存温度は低いことが好ましい。本実施の形態において、上記工程cで得られたスフィンゴミエリナーゼ含有組成物の高い保存安定性は、例えば保存前後のサンプルの電気泳動によっても確認することができる。例えば、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、水又は緩衝液を添加してスフィンゴミエリナーゼ濃度が4mg/mLである中性又は酸性の水溶液を調製し、30°C又は-30°Cで96時間静置保存後、ドデシル硫酸ナトリウム―ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で、電気泳動させた場合、例えばデンシトメーターで測定した場合、保存前と比較して、スフィンゴミエリナーゼのポリペプチドを示す帯が少なくとも70以上、好ましくは80以上、より好ましくは90以上残存する。上記の工程bで得た培養物又は上記の工程cで得た組成物から、以下に記載の通り、常法によりスフィンゴミエリナーゼ精製物を得ることができる。上記の工程bで得た培養物において、スフィンゴミエリナーゼが形質転換体内に含まれる場合、例えば、まず培養物を固液分離し、得られた湿潤菌体形質転換体をリン酸緩衝液やトリス-塩酸緩衝液などの溶液に分散し、リゾチーム処理、超音波処理、フレンチプレス処理、ダイノミル処理などの菌体破砕手段を適宜選択し組み合わせて、形質転換体内のスフィンゴミエリナーゼを抽出することができる。このようにして得た抽出物や、上記の工程cで得た組成物から、さらに純度の高いスフィンゴミエリナーゼ精製物を得る工程としては、例えば、上記抽出物や組成物に、アセトン、メタノール、エタノールなどの有機溶媒を添加することによる分別沈殿法、硫酸アンモニウム、食塩などによる塩析法などを適用してスフィンゴミエリナーゼを沈殿させ回収する工程が挙げられる。さらに、この沈殿物に対し、必要に応じて透析、等電点沈殿を行った後、電気泳動法などで単一の帯を示すまで、イオン交換体、ゲル濾過剤、吸着体などを用いるカラムクロマトグラフィーなどにより精製し、スフィンゴミエリナーゼ精製物を得ることができる。これらの工程を組み合わせることにより目的酵素の精製度が上がる場合は適宜組み合わせて行うことができる。上記の工程cで得た組成物は、純度が高いため、非常に簡便な精製法によりスフィンゴミエリナーゼ精製物を得ることができるという利点を有する。本実施の形態における製造方法で得られるスフィンゴミエリナーゼSphingomyelinaseまたは本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ含有組成物培養物、培養上清であってもよいに含まれるスフィンゴミエリナーゼ単に本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼともいうとは、EC3.1.4.12に分類されるタンパク質であり、好ましくはストレプトマイセス由来、より好ましくはストレプトマイセスエスピー由来、さらに好ましくはストレプトマイセスエスピーA9107株スフィンゴミエリナーゼと同一のアミノ酸配列及び/又は特徴を有する。該アミノ酸配列としては、配列番号1に記載のアミノ酸配列が例示される。また、該特徴としては、以下の2~5に記載の特徴が例示される。本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼは、少なくとも以下の1に記載の作用を有するものであれば特に限定されないが、さらに以下の2~5のいずれかに記載の1つ以上の性質を有することが好ましい。例えば、一態様において、スフィンゴミエリナーゼは、以下の1に記載の作用に加えて以下の2に記載の基質特異性を有することが好ましい。また、スフィンゴミエリナーゼは、以下の1に記載の作用に加えて以下の2~5に記載の性質のうち、任意の2つ以上を備えていることも好ましい。特に好ましいスフィンゴミエリナーゼとしては、以下の1に記載の作用に加えて以下の2~5の全てに記載の性質を有するものが挙げられる。1作用本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼの作用の一例は以下の式1に示す通りであり、1分子の水の存在下、スフィンゴミエリンShingomyelin1分子を分解加水分解してセラミドN-アシルスフィンゴシンN-acylsphingosin1分子とフォスフォリルコリンPhosphorylcholine1分子を生成する。該スフィンゴミエリンの作用は、少なくとも2価の陽イオンの存在下で行われることが好ましく、マグネシウムイオン及び/又はマンガンイオンの存在下で行われることがより好ましい。スフィンゴミエリンH2O―>N-アシルスフィンゴシンフォスフォリルコリン式1本実施の形態において、上記のスフィンゴミエリンSphingomyelinとは、以下の一般式:で表されるスフィンゴ脂質の一種であれば、由来や純度は限定されず、その塩、誘導体等であってもよい。上記一般式中、Rは飽和または不飽和炭化水素を表し、Xはコリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール等を表し、好ましくは生体中に多く存在するコリンを表す。本実施の形態において、スフィンゴミエリンは、好ましくは生体内に存在するスフィンゴミエリンであり、特に好ましくは本実施の形態の製造方法で得られるスフィンゴミエリナーゼにより加水分解されるスフィンゴミエリンであり、例えば、N-ヘキサデカノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-hexadecanoyl-sphing-4-enine-1-phosphorylcholine、N-アセチル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-acetyl-sphing-4-enine-1-phosphorylcholine、N-ヘキサノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-hexanoyl-sphing-4-enine-1-phosphorylcholine、N-ドデカノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-dodecanoyl-sphing-4-enine-1-phosphocholine、N-ドデカノイル-スフィンガニン-1-フォスフォリルコリンN-dodecanoyl-sphinganine-1-phosphocholine、N-ヘプタデカノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-heptadecanoyl-sphing-4-enine-1-phosphorylcholine、N-オクタデカノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-octadecanoyl-sphing-4-enine-1-phosphorylcholine、N-オクタデカノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-9Z-octadecenoyl-sphing-4-enine-1-phosphorylcholine、N-テトラコサノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-tetracosanoyl-sphing-4-enine-1-phosphorylcholine、N-テトラコセノイル-スフィンゲニン-1-フォスフォリルコリンN-15Z-tetracosenoyl-sphing-4-enine-1-phosphocholineなどが例示される。本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼは、複数のスフィンゴミエリンに同時に作用するものであってもよい。本実施の形態において、上記スフィンゴミエリナーゼの作用はスフィンゴミエリナーゼ活性として測定できる。スフィンゴミエリナーゼ活性とは、上記の式1の反応を触媒する活性であり、スフィンゴミエリナーゼ活性1単位ユニットは、37°Cで1分間に1マイクロモルのスフィンゴミエリンを分解する酵素量とする。スフィンゴミエリナーゼ活性の測定方法を以下に例示するが、測定方法はこれに限定されるものではない。<スフィンゴミエリナーゼ活性測定法>反応試薬混合液組成1MTris/HClpH8.0150μL10mMスフィンゴミエリン溶液300μL0.34-アミノアンチピリン溶液300μL0.2TODB溶液300μL1M塩化マグネシウム水溶液6μL1M塩化ナトリウム水溶液30μL10トリトンX-100溶液30μL500U/mLアルカリフォスファターゼ溶液60μL600U/mLコリンオキシダーゼ溶液50μL500U/mLペルオキシダーゼ溶液120μL精製水1654μL小試験管に上記組成の反応試薬混合液を0.8mLとり、37°Cで予備加温する。5分後、適当に希釈したスフィンゴミエリナーゼ溶液被験液を0.03mL加えて混和し、37°Cで反応を開始し、5分間インキュベートして反応を行う。続いてこの反応液に1ドデシル硫酸ナトリウム溶液を1.6mL加えて反応を停止する。反応停止後546nmにおける吸光度を測定し、これをAsとする。スフィンゴミエリナーゼ溶液の代わりに精製水を用いた盲検をAbとする。スフィンゴミエリナーゼ活性1単位を、37°Cで1分間に1マイクロモルのスフィンゴミエリンを分解する酵素量として、上記反応液中におけるTODBのミリモル吸光係数を16として、得られたAs及びAbの値に基づき以下の式2を用いて算出する。スフィンゴミエリナーゼ活性単位=[{As-Ab/16}/5]×2430/30式22基質特異性本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼ及びスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、上記のスフィンゴミエリンに対する作用を有するものであれば特に限定されないが、好ましくはスフィンゴミエリンに作用し、かつ、レシチン、リゾレシチン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルセリン及びフォスファチジルイノシトール以下、レシチン等ともいうのいずれにも実質的に作用しない。ここで、実質的に作用しないとは、通常、上記のスフィンゴミエリナーゼの活性測定法における条件下でレシチン等に反応しないことをいう。スフィンゴミエリナーゼ活性測定法における条件酵素の希釈の程度、反応試薬混合液中の各組成物の濃度等を変更してもレシチン等に反応しないことが好ましい。3至適pH本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼの至適pHは、上記スフィンゴミエリナーゼ活性が測定できるpHであれば特に限定されないが、上記スフィンゴミエリナーゼ活性が最大となるpHが好ましい。pHの下限としては、例えばpH4.0以上であり、好ましくはpH5.0以上であり、より好ましくはpH7.0以上である。またpHの上限としては、例えばpH10.0以下であり、好ましくはpH9.0以下であり、より好ましくはpH8.0以下である。4Km本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼのスフィンゴミエリンに対するKmは、温度や気圧などの測定の条件や使用機器の精度等によりその値は変化し得るが、例えば2mM以下であり、好ましくは1mM以下であり、より好ましくは約0.45mMである。5分子量本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼの分子量は、温度や気圧などの測定の条件や使用機器の精度等によりその値は変化し得るが、例えば30kDa~50kDaの範囲にあり、好ましくは35kDa~40kDaの範囲にあり、より好ましくはドデシル硫酸ナトリウム―ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で約38kDaである。なお、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼの分子量は、工程aにおいてトランスフェクトする遺伝子の変異や、工程bにおける培養時の翻訳後修飾、工程bやcの後の化学修飾等によって変化する場合があり、例えば、トランスフェクトする際のベクターとしてpTipQC1やpTipQC2特許第3793812号公報、特開2004-321013号公報、特開2004-073116号公報参照を利用してC末端にHisタグを付加する場合には、上記の分子量が約1,000程度大きくなることがある。このように、翻訳後修飾N末端側がアシル基やアルキル基等による修飾を受ける等、化学修飾無水コハク酸やPEG等等を受けたスフィンゴミエリナーゼも、本実施の形態のスフィンゴミエリナーゼに含まれる。化学修飾等により、スフィンゴミエリナーゼの至適pHや安定性等の性質を、利用しやすいように変化させることが可能である。本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ又はスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を用いれば、スフィンゴミエリナーゼを定性的、半定量的又は定量的に測定することができる。その方法としては、例えばスフィンゴミエリンに対するスフィンゴミエリナーゼの作用で生成したフォスフォリルコリンにさらにグリセロホスフォコリンホスフォジエステラーゼEC3.1.4.2を作用させて生成したコリンをコリンオキシダーゼEC1.1.3.17で酸化し、生成した過酸化水素を4-アミノアンチピリンとフェノールなどと縮合して発色させる方法など、公知の方法が挙げられる。また、本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ又はスフィンゴミエリナーゼ含有組成物を用いれば、上記式1の反応により、スフィンゴミエリナーゼの基質を消去することもできる。本実施の形態におけるスフィンゴミエリナーゼ又はスフィンゴミエリナーゼ含有組成物は、そのまま、あるいは精製、濃縮、凍結乾燥等の後、各種製品、試薬、キット、センサー、原薬、製剤、化粧品、食品等に利用することができる。以下、本発明を実施例等に基づいて説明するが、本発明の範囲は以下の実施例等に限定して解釈されるものではない。尚、記述した技術は、市販の各種酵素、キット類に添付された手順書等に従えば実施できるものである。常法に従いと記述した技術は、例えばマニアティスらの方法Maniatis,T.,etal.MolecularCloning.ColdSpringHarborLaboratory1982年、1989年や蛋白質酵素の基礎実験法改訂第2版、堀尾武一、1994年、南光堂、等に従えば実施できるものである。又、以下に示した測定値等は測定の条件や使用機器の精度等によりその値は変化し得る。なお、以下の実施例で使用する試薬類は、特に断らない限り、和光純薬工業株式会社製、シグマアルドリッチ社製、タカラバイオ株式会社製等であり、市販で容易に入手できるものを使用することができる。試薬のメーカーや純度等は特に限定されない。実施例11.DNAの抽出配列番号1のアミノ酸配列スフィンゴミエリナーゼを含むタンパク質を発現するStreptomycessp.A9107FERMP-22058の菌体を50mMTris/HClpH8.0、50mMEDTA、15シュークロースを含む1mg/mLリゾチーム溶液で37°C、10分処理した後、SDSを最終濃度0.25になるように添加して菌体を溶解した。さらに等量のフェノール/クロロホルムの1:1混合液を加え、30分撹拌した後、遠心分離12,000rpm、15分間して水層を回収した。回収した水層に10分の1量の3Mの酢酸ナトリウムpH5.5を混合後、2倍量のエタノールを静かに重層し、ゲノムDNAをガラス棒に巻き付かせて分離した。分離したゲノムDNAを、10mMTris/HClpH8.0、1mMEDTA水溶液以下TEと記載する場合もあるに溶解し、適量のRNaseAを加え、37°Cで1時間保温し、混在しているRNAを分解した。次いで、等量のフェノール/クロロホルムの1:1混合液を加え、前記と同様に処理して、水層を分取した。分取した水層に10分の1量の3Mの酢酸ナトリウムpH5.5と2倍量のエタノールを加えて前記の方法でもう一度ゲノムDNAを分離した。このゲノムDNA染色体をTEに溶解し、TE飽和のフェノールとクロロホルムの1:1混合液を加え、全体を懸濁した後、同様の遠心分離を繰り返し、上層を再び別の容器に移した。この分離した上層に3Mの酢酸ナトリウムpH5.5とエタノールを加え、撹拌後、-70°Cで5分間冷却した後、遠心分離2,000G、4°C、15分し、沈殿したゲノムDNAを75エタノールで洗い、減圧乾燥した。以上の操作によりStreptomycessp.のDNA標品を得た。2.精製酵素の取得容量500mLの三角フラスコに、前培養用培地として培地A3脱脂大豆ニッカミルキー日華油脂社製、2コーンスターチ、0.3塩化カリウム、0.4炭酸カルシウム、pH7.0100mLを入れて、蒸気加圧滅菌した後、Streptomycessp.A9107の菌体を白金耳で植菌した。次いで25°Cで72時間振とう培養することにより、前培養液を得た。容量30Lのジャーに、培地Aを20L入れ、121°Cで20分間蒸気加圧滅菌した後、上記の前培養液を20mL植菌し、25°C、125rpmで96時間通気培養を行った。培養後、遠心分離して培養上清を得た。この培養上清を20mM酢酸ナトリウム緩衝液を用いてpH5.0に調製し、20mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.0で平衡化したGEヘルスケア社製のCMSepharoseFastFlowを用いたカラムに吸着させた。20mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5で充分に洗浄した後、20mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5と100mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5を用いてベッド体積の10倍量のリニアグラジエントで溶出を行った。活性画分を回収し、100倍量の10mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5で透析し、スフィンゴミエリナーゼSPCの精製酵素を得た。3.酵素の部分アミノ酸配列決定実施例12.で取得した精製酵素の一部を、Laemmliの方法で5~20のポリアクリルアミドグラジエントゲルを用いてドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミド電気泳動SDS-PAGEを行った後、ポリフッ化ビニリデンPVDF膜に転写した。これを用いてN末端アミノ酸配列解析を行った結果、配列番号7のアミノ酸配列を得た。また、実施例12.で取得した精製酵素の一部を消化酵素トリプシンにより処理し、上記と同様に操作を行い、N末端アミノ酸配列解析を行った結果、配列番号8のアミノ酸配列を得た。4.酵素遺伝子の部分塩基配列決定実施例13.で得られた配列番号7及び8のアミノ酸配列を元に配列番号9及び10の塩基配列を有するPCR用DNAプライマーを設計した。このDNAプライマーを用い、実施例11.で調製したStreptomycessp.のDNA標品を鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、約450bpのDNA断片を取得した。このDNA断片をDNAシーケンスして部分塩基配列を決定した。5.酵素遺伝子の塩基配列決定実施例14.で決定した部分塩基配列を元に、配列番号11及び12の塩基配列を有するPCR用DNAプライマーを設計した。実施例11.で調製したStreptomycessp.のDNA標品の一部をSalIにより制限酵素処理した。制限酵素処理したDNA断片を常法に従ってライゲーションし、環状DNAを得た。配列番号9及び10の塩基配列を有するDNAプライマーを用いてSalI切断環状DNAを鋳型としてPCR反応を行い、約850bpのDNA断片を取得した。このDNA断片をDNAシーケンスして塩基配列を決定した。実施例11.で調製したStreptomycessp.のDNA標品の一部をBamHIにより制限酵素処理した。制限酵素処理したDNA断片をライゲーションし、環状DNAを得た。配列番号11及び12の塩基配列を有するDNAプライマーを用いてBamHI切断環状DNAを鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、約800bpのDNA断片を取得した。このDNA断片を常法に従ってDNAシーケンスして塩基配列を決定した。決定した塩基配列は、配列番号6配列番号2のアミノ酸配列をコードする遺伝子配列と、配列番号5配列番号1のアミノ酸配列をコードする遺伝子配列とが順に結合した塩基配列を含む塩基配列であった。6.PCR法による酵素遺伝子の増幅実施例15.で決定した塩基配列を元に、配列番号13及び14の塩基配列を有するPCR用DNAプライマーを設計した。このDNAプライマーを用い、実施例11.で調製したStreptomycessp.のDNA標品を鋳型として常法に従ってPCR反応を行った。得られた約1200bpのPCR産物は、例えばQIAGENQIAquickPCRPurificationKitを用い精製した。7.発現ベクターとのライゲーション実施例16.で取得したPCR産物を、NdeI及びHindIIIにより制限酵素処理した。このDNA断片は、例えばQIAGENQIAquickPCRPurificationKitを用いる等、常法に従って精製した。精製したDNA断片は、NdeI及びHindIIIにより制限酵素処理し精製したpTipQC2と常法に従ってライゲーションし、配列番号15の塩基配列を有するpTipQC2/SPCを作製した。作製したpTipQC2/SPCはDNAシーケンスして挿入した塩基配列が正しいことを確認した。8.RhodococcuserythropolisL88株の形質転換RhodococcuserythropolisL88株FERMBP-08444の菌体を、実施例17.で作製したpTipQC2/SPCと混合し、氷上で30分静置した後、バイオラッド社のGenePulserIIを用いてエレクトロポレーション法2.5kV、25μF、400Ωにより形質転換した。形質転換したRhodococcuserythropolisL88株をSOC培地2トリプトン、0.5酵母エキス、10mM塩化ナトリウム、25mM塩化カリウム、10mM塩化マグネシウム、10mM硫酸マグネシウム、20mMグルコースに懸濁した後、30°Cで1時間培養し、34μg/mLのクロラムフェニコールを含むLB寒天培地1トリプトン、0.5酵母エキス、1塩化ナトリウム、1.5アガーに塗布して30°Cで72時間培養し、pTipQC2/SPCにより形質転換したRhodococcuserythropolisL88株L88/SPCを得た。9.L88/SPCの培養容量500mLの三角フラスコに、前培養用培地としてLB液体培地1トリプトン、0.5酵母エキス、1塩化ナトリウム100mLを入れて、蒸気加圧滅菌した後、実施例18.で形質転換したRhodococcuserythropolisL88株L88/SPCを白金耳で植菌した。次いで30°Cで72時間振とう培養することにより、前培養液を得た。容量2Lのジャーに、LB液体培地を1.6L入れ、121°Cで20分間蒸気加圧滅菌した後、34mg/mLのクロラムフェニコールを1.6mL、40mg/mLのチオストレプトンを80μL添加し、上記の前培養液を1.6mL植菌し、30°C、300rpmで72時間通気培養を行った。培養後、遠心分離して培養上清を得た。3基培養を行ったところ、スフィンゴミエリナーゼの培養力価は50~52U/mLであった。培養力価は、上述の<スフィンゴミエリナーゼ活性測定法>に記載の方法を用いて、培養上清を被験液として式2を用いて算出した。10.精製実施例19.で得られた培養上清の一部を20mM酢酸ナトリウム緩衝液を用いてpH5.0に調製し、20mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.0で平衡化したGEヘルスケア社製のCMSepharoseFastFlowを用いたカラムに吸着させた。20mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5で充分に洗浄した後、20mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5と100mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5を用いてベッド体積の10倍量のリニアグラジエントで溶出を行った。活性画分を回収し、100倍量の10mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5で透析した後、凍結乾燥して粉末状の精製酵素スフィンゴミエリナーゼ約80mgを得た。比較例11.Streptomycessp.の培養容量500mLの三角フラスコに、前培養用培地として培地A実施例1と同様100mLを入れて、蒸気加圧滅菌した後、実施例11.に記載のStreptomycessp.の菌体を白金耳で植菌した。次いで25°Cで72時間振とう培養することにより、前培養液を得た。容量30Lのジャーに、培地Aを20L入れ、121°Cで20分間蒸気加圧滅菌した後、上記の前培養液を20mL植菌し、25°C、125rpmで96時間通気培養を行った。培養後、遠心分離して培養上清を得た。2基培養を行ったところ、スフィンゴミエリナーゼの培養力価は62~67U/mLであった。2.精製比較例11.で取得した培養上清を20mM酢酸ナトリウム緩衝液を用いてpH5.0に調製し、20mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.0で平衡化したGEヘルスケア社製のCMSepharoseFastFlowを用いたカラムに吸着させた。100mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5を用いて溶出し、活性画分を回収した。活性画分をゲル濾過により脱塩し、その一部にマンニトールを重量パーセント濃度で1となるように添加した後、凍結乾燥して粉末状の比較試験用酵素野生型スフィンゴミエリナーゼ約950mgを得た。比較例21.挿入遺伝子の調製配列番号16の塩基配列を有するDNAプライマーを設計した。このDNAプライマーと配列番号13の塩基配列を有するDNAプライマーとを用いてpTipQC2/SPCを鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、DNA断片A配列番号6の塩基配列配列番号2のアミノ酸配列をコードする遺伝子配列を含むを得た。また、配列番号17及び18の塩基配列を有するDNAプライマーを設計した。このDNAプライマーを用いて配列番号19の塩基配列を有するDNAカンジダシリンドラセCandidacylindraceaATCC14830由来のコレステロールエステラーゼCEBPをコードする塩基配列を鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、DNA断片Bを得た。配列番号13及び18の塩基配列を有するDNAプライマーを用いてDNA断片AとDNA断片Bを混合したものを鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、配列番号20の塩基配列を有するDNA断片Cを得た。DNA断片Cを得るまでのPCR反応の模式図を図1に示す。得られたPCR産物は、例えばQIAGENQIAquickPCRPurificationKitを用い精製した。2.発現ベクターとのライゲーション比較例11.で取得したPCR産物をNdeI及びHindIIIにより制限酵素処理した。このDNA断片は、例えばQIAGENQIAquickPCRPurificationKitを用いて精製した。精製したDNA断片は、NdeI及びHindIIIにより制限酵素処理し精製したpTipQC2とライゲーションし、配列番号21の塩基配列を有するpTipQC2/CEBPを作製した。作製したpTipQC2/CEBPは常法に従ってDNAシーケンスして挿入した塩基配列が正しいことを確認した。3.RhodococcuserythropolisL88株の形質転換実施例17.と同様の方法で、比較例22.で作製したpTipQC2/CEBPによりRhodococcuserythropolisL88株を形質転換し、pTipQC2/CEBPにより形質転換したRhodococcuserythropolisL88株L88/CEBPを得た。4.L88/CEBPの培養容量500mLの三角フラスコに、前培養用培地としてLB液体培地100mLを入れて、蒸気加圧滅菌した後、比較例23.で形質転換したRhodococcuserythropolisL88株L88/CEBPを白金耳で植菌した。次いで30°Cで72時間振とう培養することにより、前培養液を得た。容量2Lのジャーに、LB液体培地を1.6L入れ、121°Cで20分間蒸気加圧滅菌した後、34mg/mLのクロラムフェニコールを1.6mL、40mg/mLのチオストレプトンを80μL添加し、上記の前培養液を1.6mL植菌し、30°C、300rpmで72時間通気培養を行った。培養後、遠心分離して培養上清を得た。しかしながら、配列番号19にコードされるCandidacylindracea由来のコレステロールエステラーゼの発現は確認できなかった。なお、コレステロールエステラーゼの発現は、コレステロールエステラーゼの活性として、ASAHIKASEIDiagnosticEnzymes旭化成ファーマ株式会社2008年7月131ページの方法に従い確認した。比較例31.挿入遺伝子の調製配列番号22の塩基配列を有するDNAプライマーを設計した。このDNAプライマーと配列番号13の塩基配列を有するDNAプライマーとを用いてpTipQC2/SPCを鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、DNA断片A’配列番号6の塩基配列配列番号2のアミノ酸配列をコードする遺伝子配列を含むを得た。また、配列番号23及び24の塩基配列を有するDNAプライマーを設計した。このDNAプライマーを用いて配列番号25の塩基配列を有するDNAバークホルデリアスタビリスBurkholderiastabilisFERMP-21014特開2008-086277由来のコレステロールエステラーゼCEN及びその補助タンパク質をコードする塩基配列を鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、DNA断片B’を得た。配列番号13及び24の塩基配列を有するDNAプライマーを用いてDNA断片A’とDNA断片B’を混合したものを鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、配列番号26の塩基配列を有するDNA断片C’を得た。得られたPCR産物は、例えばQIAGENQIAquickPCRPurificationKitを用い精製した。2.発現ベクターとのライゲーション比較例31.で取得したPCR産物に対して比較例22.と同様の操作を行い、配列番号27の塩基配列を有するpTipQC2/CENを作製した。作製したpTipQC2/CENは常法に従ってDNAシーケンスして挿入した塩基配列が正しいことを確認した。3.RhodococcuserythropolisL88株の形質転換実施例17.と同様の方法で、比較例32.で作製したpTipQC2/CENによりRhodococcuserythropolisL88株を形質転換し、pTipQC2/CENにより形質転換したRhodococcuserythropolisL88株L88/CENを得た。4.L88/CEBPの培養比較例33.で得たL88/CENに対して比較例24.と同様の操作を行い、培養上清を得た。しかしながら、配列番号25にコードされるBurkholderiastabilis由来のコレステロールエステラーゼの発現は確認できなかった。なお、コレステロールエステラーゼの発現は、コレステロールエステラーゼの活性として、ASAHIKASEIDiagnosticEnzymes旭化成ファーマ株式会社2008年7月48ページの方法に従い確認した。比較例41.挿入遺伝子の調製配列番号28の塩基配列を有するDNAプライマーを設計した。このDNAプライマーと配列番号13の塩基配列を有するDNAプライマーとを用いてpTipQC2/SPCを鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、DNA断片A配列番号6の塩基配列配列番号2のアミノ酸配列をコードする遺伝子配列を含むを得た。また、配列番号29及び30の塩基配列を有するDNAプライマーを設計した。このDNAプライマーを用いて配列番号31の塩基配列を有するDNAクロモバクテリウムビスコスムChromobacteriumviscosum工発研菌寄第137号特公昭46-29787由来のリパーゼLP及びその補助タンパク質をコードする塩基配列を鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、DNA断片Bを得た。配列番号13及び30の塩基配列を有するDNAプライマーを用いてDNA断片AとDNA断片Bを混合したものを鋳型として常法に従ってPCR反応を行い、配列番号32の塩基配列を有するDNA断片Cを得た。得られたPCR産物は、例えばQIAGENQIAquickPCRPurificationKitを用い精製した。2.発現ベクターとのライゲーション比較例41.で取得したPCR産物に対して比較例22.と同様の操作を行い、配列番号33の塩基配列を有するpTipQC2/LPを作製した。作製したpTipQC2/LPは常法に従ってDNAシーケンスして挿入した塩基配列が正しいことを確認した。3.RhodococcuserythropolisL88株の形質転換実施例17.と同様の方法で、比較例42.で作製したpTipQC2/LPによりRhodococcuserythropolisL88株を形質転換し、pTipQC2/LPにより形質転換したRhodococcuserythropolisL88株L88/LPを得た。4.L88/LPの培養比較例43.で得たL88/LPに対して比較例24.と同様の操作を行い、培養上清を得た。しかしながら、配列番号30にコードされるChromobacteriumviscosum由来のリパーゼの発現は確認できなかった。なお、リパーゼの発現は、リパーゼの活性として、ASAHIKASEIDiagnosticEnzymes旭化成ファーマ株式会社2008年7月15ページに記載の方法に従い確認した。試験例1<比活性試験>実施例19.で得た培養上清と、比較例11.で得た培養上清のタンパク質量あたりのスフィンゴミエリナーゼ活性を計算したところ、実施例19.で得た培養上清は142.7U/mg、比較例11.で得た培養上清は2.1U/mgであり、実施例19.で得た培養上清は、比較例11.で得た培養上清よりも比活性が70倍以上高かった。なお、培養上清中のタンパク質量は、ビシンコニン酸を用いる方法BCA法により測定した。スフィンゴミエリナーゼ活性は、上述の<スフィンゴミエリナーゼ活性測定法>に記載の方法を用いて、培養上清を被験液として式2を用いて算出した。これらの測定から、タンパク質量あたりのスフィンゴミエリナーゼ活性を計算した。試験例2<安定性試験1>実施例110.で得た精製酵素、及び比較例12.で得た比較試験用酵素を、4mg/mLになるように純水pH6.8又は50mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5に溶解し、それぞれ-30°C又は30°Cで静置保存した。保存した酵素溶液について、保存開始から72時間後及び96時間後に残存活性を測定した保存前の活性を100とする。その結果、図2に示すように、30°Cで静置保存した場合、比較例12.で得た比較試験用酵素は、72時間後及び96時間後の残存活性がいずれも40以下であるのに対して、実施例110.で得られた精製酵素は、72時間後及び96時間後のいずれにおいても78以上の活性を保持しており、高い保存安定性を示した。特に、pH5.5の緩衝液に溶解した場合、72時間後及び96時間後のいずれにおいても97.6以上の活性を保持しており、非常に高い保存安定性を示した。なお、-30°Cで静置保存した場合も同様に、実施例110.で得られた精製酵素は高い保存安定性を示した図示せず。試験例3<安定性試験2>試験例2で得られた、-30°C又は30°Cで96時間保存した酵素溶液の一部を、Laemmliの方法で5~20のポリアクリルアミドグラジエントゲルを用いてSDS-PAGEを行った後、常法に従ってクーマシーブルーCBBで染色した。結果を図3に示す。図3中A~Hのバンドは、それぞれ以下の処理を行った酵素溶液に対応する。A比較例1の酵素を純水pH6.8に溶解し、-30°Cで保存。B比較例1の酵素を純水pH6.8に溶解し、30°Cで保存。C比較例1の酵素を酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5に溶解し、-30°Cで保存。D比較例1の酵素を酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5に溶解し、30°Cで保存。E実施例1の酵素を純水pH6.8に溶解し、-30°Cで保存。F実施例1の酵素を純水pH6.8に溶解し、30°Cで保存。G実施例1の酵素を酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5に溶解し、-30°Cで保存。H実施例1の酵素を酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5に溶解し、30°Cで保存。図3に示すように、比較例1で得た比較試験用酵素は、30°Cで96時間保存した場合B及びDには、-30°Cで保存した場合A及びCと比較して明らかにスフィンゴミエリナーゼを示すバンドが薄くなり、分解されていた。一方、実施例110.で得た精製酵素は、30°Cで96時間保存した場合F及びHも、-30°Cで保存した場合E及びGと同程度のバンドが確認され、分解されていなかった。"