"樹脂表面を有する微粒子に金層が直接又は有機バインダの層を介して付着した金層被覆微粒子と、該金層に連結され且つ生物学的物質と特異的に結合し得るリガンドとからなることを特徴とする生物学的物質の捕獲又は分離用複合微粒子。前記金層被覆微粒子が、前記樹脂表面を有する微粒子を、有機バインダを含むか又は含まない金ナノ粒子分散液中に混合して該樹脂表面に金ナノ粒子が固定された微粒子を得、得られた微粒子を金イオン又は金錯体イオン含有溶液中、還元剤の存在下に混合することにより得られる請求項1に記載の複合微粒子。前記リガンドが、抗体、抗原、核酸プローブ、アプタマー、レクチン、グルタチオン、アビジン、ストレプトアビジン、ビオチン、金属イオンからなる群より選択される請求項1又は2に記載の複合微粒子。前記樹脂表面を有する微粒子が樹脂微粒子である請求項1~3のいずれか1項に記載の複合微粒子。前記樹脂表面を有する微粒子が磁性微粒子である請求項1~3のいずれか1項に記載の複合微粒子。試料中の生物学的物質を請求項1~5のいずれか1項に記載の複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子を前記試料から遠心分離により分離することを特徴とする試料中の生物学的物質の分離方法。試料中の生物学的物質を請求項5に記載の複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子を前記試料から磁気分離により分離することを特徴とする試料中の生物学的物質の分離方法。試料中の生物学的物質を請求項1~5のいずれか1項に記載の複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子に捕獲された生物学的物質の存在を、該生物学的物質に特異的に結合する別のリガンドを用いて検知することを特徴とする試料中の生物学的物質の検出方法。試料中の生物学的物質を請求項5に記載の複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子を磁力により作用極上に集積させ、該複合微粒子に捕獲された生物学的物質の存在を電気化学的に検知することを特徴とする試料中の生物学的物質の検出方法。電気化学的検知がサイクリックボルタンメトリーにより行われる請求項9に記載の方法。したがって、安価で、遠心分離などに対する機械的耐性が向上した分析分離に使用可能な捕獲又は分離用マイクロビーズの開発が求められていた。本発明によれば、樹脂表面を有する微粒子に金層が直接又は有機バインダの層を介して付着した金層被覆微粒子と、該金層に連結され且つ生物学的物質と特異的に結合し得るリガンドとからなることを特徴とする生物学的物質の捕獲又は分離用複合微粒子が提供される。また、本発明によれば、試料中の生物学的物質を上記複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子を前記試料から遠心分離又は磁性分離により分離することを特徴とする試料中の生物学的物質の分離方法が提供される。更に、本発明によれば、試料中の生物学的物質を上記複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子に捕獲された生物学的物質の存在を、該生物学的物質に特異的に結合する別のリガンドを用いて検知することを特徴とする試料中の生物学的物質の検出方法が提供される。本発明によれば、試料中の生物学的物質を上記複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子を磁力により作用極上に集積させ、該複合微粒子に捕獲された生物学的物質の存在を電気化学的に検知することを特徴とする試料中の生物学的物質の検出方法が提供される。本発明の捕獲又は分離用複合微粒子によれば、リガンド導入の大幅な単純化、高効率化、高密度化、低コスト化が図れる。また、本発明の捕獲又は分離用複合微粒子は、従来の金メッキ樹脂粒子より機械的耐性が向上し、金微粒子と同等に使用できる一方、金微粒子より極めて安価に製造できる。<本発明の複合微粒子>本発明に従う捕獲又は分離用複合微粒子は、樹脂表面を有する微粒子に金層が直接又は有機バインダの層を介して付着した金層被覆微粒子と、該金層に連結され且つ捕獲又は分離対象物と特異的に結合し得るリガンドとからなることを特徴とする。金被覆微粒子は、換言すれば、樹脂表面を有する微粒子と、該樹脂表面を直接又は有機バインダの層を介して覆う金層とからなる。樹脂表面は、樹脂を微粒子化した樹脂微粒子の表面であってもよいし、コア微粒子が樹脂層で被覆されてなる樹脂被覆微粒子の該樹脂層の表面であってもよい。樹脂表面を構成する樹脂としては、当該分野で樹脂粒子又は樹脂被覆粒子に使用し得ることが公知のいずれの樹脂も使用できる。例として、スチレン、アクリル酸、オレフィン、アミド、イミド及びこれらの誘導体の重合体並びにその架橋処理物が挙げられる。より具体的な例としては、ポリスチレン、ポリペプチドメチルメタクリレート、ポリペンタエリスリトールテトラアクリレート、ポリトリメチロールプロパントリアクリレート、ナイロン、ポリオレフィン及びこれらの共重合体及び架橋処理物、アクリル樹脂、フェノール樹脂などが挙げられる。また、後述する金と相互作用し得る部位を含む樹脂の例としては、ポリリジン、ポリアリルアミン、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミン、ポリアミド、ポリイミド、ポリビニルピリジン、尿素樹脂、ポリウレタン、ポリスルフィドなどが挙げられる。樹脂を微粒子化する方法としては、モノマーキャスティング、懸濁重合、溶融スピンコート、超遠心、超音波など当該分野において使用され得るいずれの方法も使用でき、樹脂の種類に応じて適宜選択される。コア微粒子には、当該分野で樹脂被覆粒子のコア粒子として使用し得ることが公知のいずれのものを使用できる。例として、磁性材料からなるものが挙げられる。コア微粒子上の樹脂層は、公知の方法により形成することができる。例えば、樹脂を適切な溶媒に溶解し又は分散させた塗液をコア微粒子表面に塗布した後、乾燥硬化させることにより形成することができる。樹脂微粒子又は樹脂層には、上記のような磁性材料が、好ましくは一様に分布するように、含まれていてもよい。樹脂表面を有する微粒子の平均粒径は、ナノオーダー~マイクロオーダーであり得、例えば1nm~100μm、好ましくは10nm~100μm、より好ましくは1μm~10μmであり得る。金層は樹脂表面を直接覆って設けられている。したがって、樹脂表面と金層との間には、後述する有機バインダの層を除き、他の層は存在しない。樹脂表面を覆う金層は、樹脂表面上に、好ましくは、先ず金ナノ粒子を固定し、次いで金を析出させることにより形成する。樹脂表面上への金ナノ粒子の固定は、該樹脂表面を有する微粒子を金ナノ粒子分散液中に混合し、撹拌又は静置することにより行うことができる。金ナノ粒子分散液は任意に有機バインダを含んでいてもよい。固定反応温度は、反応期間中に分散液が完全に凍結又は蒸発しない温度であれば任意の温度であり得るが、室温付近が好ましい。固定反応時間は、温度にも依存するが、例えば室温にて2時間~48時間であり得る。金ナノ粒子の数平均粒径は、サブナノオーダー~ナノオーダーであり、例えば01~500nm、好ましくは01~100nm、より好ましくは1~100nm、より好ましくは5~50nmであり得る。金ナノ粒子の平均粒径は、例えば、樹脂表面を有する微粒子の平均粒径の1/1000000~1/10、好ましくは5/100000~110、より好ましくは5/10000~5/100であり得る。金ナノ粒子分散液は、市販品を用いてもよいが、金イオン含有溶液及び還元剤を用いて溶液内還元反応により容易に製造できる。例えば、塩化金酸溶液にクエン酸を加えて加熱して得られる。樹脂表面上への金ナノ粒子の固定に静電的相互作用を利用する場合、金ナノ粒子は、正電荷又は負電荷を有するように製造される。この場合、金イオン含有溶液に、樹脂表面と静電的に相互作用し得る基を有する後述の有機バインダを加えて撹拌し、次いで還元剤を加え更に撹拌することにより正電荷又は負電荷を有する金ナノ粒子の分散液が得られる。正電荷又は負電荷を有する金ナノ粒子のゼータ電位は、任意であるが、例えば-5~-50mVであり得る。樹脂表面上への金ナノ粒子の固定は、樹脂表面に存在する金と相互作用し得る部位を介し得る。ここで、相互作用とは、化学結合、ファンデルワールス力、静電的相互作用、疎水性相互作用、吸着力などをいう。金と相互作用し得る部位としては、例えば、チオール基、スルフィド基、ジスルフィド基、アミノ基、イミノ基、カルボキシル基、カルボニル基、スルホニル基、ホスホリル基が挙げられる。中でも、チオール基、ジスルフィド基、アミノ基、イミノ基が好ましく、チオール基、ジスルフィド基がより好ましい。金と相互作用し得る部位は、樹脂の一部として樹脂表面に存在していてもよいし、有機バインダが有していてもよい。ここで、有機バインダとは、金と相互作用し得る部位を、樹脂表面を構成する樹脂と相互作用し得る部位と共に有する有機化合物である。樹脂と相互作用し得る部位としては、例えば、アルキル基、芳香環若しくは複素環又はそれらの誘導体、アミノ基、カルボキシル基、スルホ基、ヒドロキシル基が挙げられる。アルキル基及びその誘導体の具体例は、nCH3、mnCH3、nCOOH、nOHである。芳香環及びその誘導体の具体例は、ベンゼン環、5~7員の複素芳香環及びそれらの2又は3の縮合環である。有機バインダにおいて、金と相互作用し得る部位と、樹脂表面を構成する樹脂と相互作用し得る部位とは、直接結合していてもよいし、飽和炭化水素鎖p;pは整数、例えば0~20、より好ましくは2~10のようなスペーサを介して結合していてもよい。すなわち、Xがチオール基に代表される一価基である場合、有機バインダは、一般式XZqYとして表し得る。有機バインダは、例えば、アルカンチオールnSH、カルボキシアルカンチオールn1SH、ヒドロキシアルカンチオールn1SH、アミノアルカンチオールn1SHであり得る。有機バインダはまた、例えば、Y1pSHであり得る。有機バインダはまた、例えば、mOH2、mCOOH2である。有機バインダはまた、例えば、ジチアシクロアルカンnCH3、ジチアシクロアルカンn1COOH、ジチアシクロアルカンn1OH、ジチアシクロアルカンn1NH2、ジチアシクロアルカンqY1であり得る。有機バインダの具体例としては、チオクト酸、アミノフェニルジスルフィド、アリルメルカプタン、プロパンチオール、ブタンチオール、p-アミノチオフェノール、アミルメルカプタン、2アミノエタンチオールなどが挙げられる。有機バインダは、固定反応に際して、金ナノ粒子分散液中に遊離状態で存在していてもよいし、金と相互作用し得る基を介して予め金ナノ粒子に付着していてもよい。樹脂表面は、固定反応の前に、例えばカルボキシル基、アミノ基、エポキシ基、トシル基で活性化されていてもよい。金ナノ粒子が固定された微粒子の電気抵抗は、例えば、103~109Ω、より好ましくは103~105Ωであり得る。本発明において、微粒子の電気抵抗は、1×1cmの白金板とタングステン針の間に微粒子を挟み、約20圧縮した状態で、デジタルマルチメータで電気抵抗を測定する。電気抵抗値は、微粒子10個の測定値の平均値として得る。金ナノ粒子が固定された微粒子上への金の析出は、金化合物又は金錯体化合物の溶液中に該微粒子及び還元剤を加えて撹拌又は静置することにより行うことができる。析出反応温度は、反応期間中に分散液が完全に凍結又は蒸発しない温度であれば任意の温度であり得、例えば10~80°Cであり得る。析出反応時間は、得ようとする金層の厚さや温度にも依存するが、例えば30分間~24時間であり得る。金化合物又は金錯体化合物としては、例えば、塩化金酸、塩化金酸ナトリウム、三塩化ジエチルアミン金酸、臭化金、水酸化金、酸化金などが挙げられる。還元剤としては、金イオン又は金錯体イオンを金単体に還元することができる物質であれば特に限定されない。例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、メタノール、過酸化水素水などを用いることができる。微粒子同士の凝集を防ぐために、金化合物又は金錯体化合物の溶液には分散剤を添加することが好ましい。分散剤としては、例えば、メタノール、エタノール、ポリビニルアルコールなどのアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。金層の厚さは、任意の厚さであり得るが、例えば、用いた金ナノ粒子の平均粒径程度からその3倍程度であり得る。得られた金層被覆微粒子の電気抵抗は、例えば、001~100Ω、好ましくは001~10Ωであり得る。リガンドとは、少なくとも特定の条件下に、互いに特異的に結合する一対の物質の一方をいい、特異結合パートナーともいう。特異結合対としては、抗体と抗原、互いに相補的な核酸分子、酵素と基質、アプタマーとその標的タンパク質又はポリペプチド、レクチンと糖鎖、ビオチンとアビジン、金属イオンとタンパク質又はペプチド6のようなヒスチジンタグを有する融合タンパク質の精製に利用される。などが知られている。本発明に使用するリガンドは、公知の特異結合対の中から、該複合微粒子を用いて捕獲又は分離しようとする対象物に応じて適宜選択することができ、例えば、抗体、抗原、核酸プローブ、アプタマー、レクチン、グルタチオン、アビジン、ストレプトアビジン、ビオチンであり得る。リガンドは、複合微粒子の被覆金層への吸着反応あるいはリガンドのチオール化を通じて金層被覆微粒子に固定することが可能である。捕獲又は分離対象物は、例えば、生物学的物質からなり得る。生物学的物質には、タンパク質、核酸、脂質、糖質が含まれる。なお、核酸には、DNA及びRNAに加え、相補的な塩基配列を有するDNA又はRNAへの特異結合性を有する人工核酸も含まれるものとする。金属イオンはチオール化した金属配位子により金層被覆微粒子の表面に固定され、この金属と試料タンパク質又はペプチドの結合を通じてその分離精製に利用することもできる。一方、捕獲物質はさらに他の特異的反応を利用して,異なる捕獲機能を獲得することも含まれる。一例として、DNA及びRNAはビオチン化されてアビジン/チオール化ビオチン修飾複合微粒子に捕捉され、DNAやRNA結合タンパク質の精製などの用途に使用されることも含まれる。同様に、抗原又は抗体はビオチン化されて複合微粒子に捕獲され、菌類などの微生物分離、細胞分離、タンパク質精製、イムノアッセイ、免疫沈降などの用途に使用されることも含まれる。例えば、捕獲又は分離対象物がタンパク質又はポリペプチドである場合、本発明の複合微粒子に使用するリガンドは、抗体又はアプタマーであり得る。また、捕獲又は分離対象物が核酸である場合、リガンドは核酸プローブであり得、捕獲又は分離対象物が糖である場合には、リガンドはレクチンであり得る。更に、捕獲又は分離対象物がグルタチオンSトランスフェラーゼ、ビオチン又はアビジンに結合している場合、リガンドはそれぞれグルタチオン、アビジン又はビオチンであり得る。本発明においては、抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体及び特異結合活性を保持したそれらの断片2、Fab、Fab又はFvが含まれるものとする。抗体又はその断片はモノクローナルであることが好ましい。本発明においては、核酸プローブは、相補鎖と特異的にハイブリダイズし得る一本鎖領域が存在しさえすれば形態は問わず、一部が二本鎖であってもよい。金層の表面にリガンドを連結する方法には、当該分野で使用され得る公知の方法のいずれもを使用することができる。例えば、リガンドを含む溶液中に金層被覆微粒子を浸漬することにより両者を連結させることができる。また、例えば、チオール基、スルフィド基又はジスルフィド基を有する分子が金表面に自己組織化単分子膜を形成する性質を利用して連結する方法を用いてもよい。この方法では、上記の基を予め導入したリガンドを含む溶液中に金層被覆微粒子を浸漬することにより容易に行うことができる。ポリペプチドやタンパク質又は核酸プローブにチオール基、スルフィド基又はジスルフィド基を導入する方法は当該分野において公知であり、例えばアルカンチオールや市販の試薬を使用することができる。本発明の複合微粒子は、リガンドの連結後に、ウシ血清アルブミンや脱脂粉乳のような非特異結合をブロックし得る任意のブロッキング剤で処理されてもよい。ブロッキング剤で非特異結合領域をマスクする方法は当該分野において公知である。例えば、ブロッキング剤を含有する緩衝液中で本発明の複合微粒子をインキュベートすることにより行うことができる。<本発明の分離方法>本発明に従う試料中の対象物の分離方法は、試料中の対象物を上記で説明した本発明に係る複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子を試料から遠心分離又は磁気分離により分離することを特徴とする。本発明の分離方法に使用し得る試料は、分離対象物を含む可能性のある試料である限り、特に限定されない。試料は、例えば、ヒト及びウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ニワトリ、ラット、マウスのような家畜動物を含む動物からの生物学的試料であり得る。生物学的試料としては、例えば、血液、リンパ液、髄液、腹水、組織滲出液又は分泌液、痰及び尿などの体液;脳、脊髄、心臓、肝臓、粘膜などの組織;細胞;細胞又は組織の培養上清などを挙げることができる。なお、本発明において、試料にはその希釈物が含まれるものとする。試料は、必要に応じて、対象物以外の成分の除去又は対象物の増幅のために、前処理を行なってもよい。前処理としては、例えば、濾過、酵素処理、PCR増幅などが挙げられる。本発明の分離方法に使用し得る複合微粒子には、分離対象物と特異的に結合する物質をリガンドとして有するものが選択される。試料中に存在し得る対象物の複合微粒子での捕獲は、該複合微粒子中のリガンドと該対象物とが特異的に結合し得る条件下で、該複合微粒子と該試料又はその希釈物とを混合することにより、容易に達成し得る。特異的結合条件の決定方法は当該分野において公知である。試料からの複合微粒子の分離は、例えば遠心分離により、行うことができる。複合微粒子中に磁性材料が用いられている場合には、磁力によっても分離を行うことができる。本発明の分離方法は、対象物の精製に使用することができる。例えば、組換えポリペプチド又はタンパク質をGST融合体として発現させる場合、リガンドとしてグルタチオンを含む複合微粒子を用いて、培養上清又は細胞破砕物から組換え発現物を精製することができる。また、例えば、目的の核酸を、ビオチン又はアビジンが結合したプライマーを用いてPCR増幅させる場合、リガンドとしてアビジン又はビオチンを含む複合微粒子を用いて、目的の核酸を精製することができる。本発明の分離方法はまた、対象物を検出又は測定する方法の一部として実施することもできる。<本発明の第1の検出方法>本発明に従う試料中の対象物の検出方法は、試料中の対象物を上記で説明した本発明に係る複合微粒子に捕獲し、該複合微粒子に捕獲された対象物の存在を、該対象物に特異的に結合する別のリガンドを用いて検知することを特徴とする。本発明の検出方法に使用し得る試料は、検出対象物を含む可能性のある試料である限り、特に限定されず、本発明の分離方法について記載したものと同様である。本発明の検出方法において、複合微粒子には、検出対象物と特異的に結合する物質をリガンドとして有するものが適宜選択される。好ましくは、第1のリガンドは、抗体、抗原、核酸プローブ、アプタマーであり得る。試料中に存在し得る検出対象物の複合微粒子による捕獲は、例えば、試料と複合微粒子とを、試料中に存在し得る検出対象物が複合微粒子により捕獲されるに十分な条件下で接触させることにより行うことができる。このような条件の設定法は当該分野において公知であり、例えば予備反応試験により行うことができる。この接触は静置状態で行っても振盪状態で行なってもよい。接触後、必要に応じて、複合微粒子を、上記で説明した本発明に係る分離方法により試料から分離してもよく、更に或いは洗浄してもよい。分離若しくは濃縮及び又は洗浄を行うことにより、検知時のSN比が高くなり検出精度が向上し得る。別のリガンドは、検出対象物と特異的に結合する限り、本発明に係る複合微粒子中の第1のリガンドと同種のリガンドであっても、異種のリガンドであってもよい。すなわち、第1のリガンドが抗体であるとき、第2のリガンドは抗体であっても、アプタマーであってもよい。ただし、第1のリガンドと第2のリガンドは、検出対象物への結合に関して競合してはならない。第2のリガンドは、公知の特異結合対の中から、検出対象物及び第1のリガンドに応じて適宜選択することができる。このような1つの検出対象物について2つのリガンドを用いる方法は、サンドイッチ法として当該分野において公知である。サンドイッチ法では、好ましくは、第2のリガンドは、検知のための標識を有する。標識は、当該分野で公知であり、使用する検知の方法に応じて適宜選択される。標識は、光学的、化学的、放射能、磁気的又は電気的に検知され得る。標識は、例えば、蛍光色素、酵素、吸収色素、化学発光団、放射性同位体、スピン標識及び電気化学的標識からなる群より選択される。第2のリガンドを用いる複合、微粒子に捕獲された対象物の存在の検知は、例えば、-第2のリガンドと複合微粒子とを、第2のリガンドが検出対象物に捕獲されていると結合するに十分な条件下で接触させ、-未結合の第2のリガンドを、例えば洗浄により、除去し、-第2のリガンドの存在を検知することにより行うことができる。接触条件設定法は当該分野において公知であり、例えば予備試験により行うことができる。接触は、静置状態で行っても、振盪状態で行ってもよい。第2のリガンドの存在の検知は、例えば標識からのシグナルを検知することにより、行うことができる。検知に際しては、標識からのシグナルを定量的に測定してもよい。本発明の検出方法は、免疫測定法法、蛍光イムノアッセイ法、ラジオイムノアッセイ法などと組み合せて使用することができる。<本発明の第2の検出方法>本発の第2の検出方法は、試料中の検出対象物を上記で説明した本発明に係る複合微粒子のうち磁性を有するもので捕獲し、該複合微粒子を磁力により作用電極上に集積させ、該集積された複合微粒子に捕獲された対象物の存在を電気化学的に検知することを特徴とする。本発明の第2の検出方法に使用し得る試料、複合微粒子及びリガンドについては本発明の分離方法及び本発明の第1の検出方法の項に記載したとおりである。また、試料中に存在し得る検出対象物の複合微粒子による捕獲も上記のとおりである。ただし、複合微粒子は磁性を有するものを用いる。複合微粒子による捕獲後、外部磁力により複合微粒子を電極上に集積させる。集積に利用する磁力は、複合微粒子の集積状態を維持するに十分である一方、電気化学的測定中に得られる酸化還元電流に影響を及ぼさないように適宜決定できる。本発明に係る複合微粒子は、導電性であるので、作用電極自体の電極面積に制限されることなく、集積させてもよい。集積の前に、試料中に存在し得かつ電気化学的検出に意図しない影響を及ぼし得る物質を確実に排除するために、好ましくは、複合微粒子を、上記で説明した本発明に係る分離方法により試料から分離回収する。用いた試料がそのような物質を含まないことが明らかなときは、分離回収工程を省略し得る。作用極としては、外部磁力の印加により、その表面に磁性粒子を集積させることができる磁性電極を用いる。磁性電極本体は、例えば棒状の磁性導電性材料からなるが、電極としての有効面積を規定するため所定領域を残して非磁性非導電性材料やPEEK樹脂、エポキシのような樹脂で覆ってもよい。当該被覆層は、外部磁力に影響を及ぼさない程度の厚さで形成され得る。また、電極面では、腐食及び電解液中への金属イオンの溶出を抑えるため、貴金属で覆ってもよい。電極面を貴金属で被覆した磁性電極は、使用した貴金属からなる電極電極と、電気化学的特性が同等であることが好ましい。外部磁力の供給源は、永久磁石や電磁石のような磁石であり得る。作用極への外部磁力の印加は、作用極上に磁性粒子を集積させるに必要な磁力を付与し得る任意の手段及び態様で行うことができ、例えば磁石を磁性電極本体に接触させることにより行い得る。対極には、電気化学的検出で通常用いられる電極を使用し得、例えば白金や白金黒のような貴金属電極、酸化チタンや酸化マンガンのような酸化物電極、銀塩化銀電極、炭素電極が挙げられる。好ましくは、対極として白金電極を用い、参照極として銀塩化銀電極を用いる。検出対象物自体が電気化学的検出に適する物質である場合には、検出対象物自体の存在を電気化学的に検知できる。検出対象物自体が電気化学的検出に適さない場合、該検出対象物と特異的に結合する別のリガンドであって、電気化学的検出に適切な標識を有するリガンドを用いるサンドイッチ法で、電極上に捕獲された検出対象物に電気化学的標識を付与することによって、検出対象物の存在を電気化学的に検知可能とすることができる。第2のリガンドは、標識が電気化学的検出に適切なものであること以外は、第1の検出方法について記載したとおりである。電気化学的検出に適切な標識としては、オキシダーゼやデヒドロゲナーゼなどの酸化還元酵素、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダーゼなど又は酸化性還元性の化合物が挙げられる。電気化学的検知の具体的手法は、検出対象物又は第2のリガンドに応じて、公知の手法を使用し得る。電気化学的検出に利用する酸化還元反応は、検出対象物又は使用する標識に応じて適切に選択できる。例えば、標識がHRPである場合、H2O22e2H→2H2Oの酸化反応を利用できる。この場合には過酸化水素を基質として使用できる。電気化学的検出に際して、フェロシアン化カリウムフェリシアン化カリウムのようなメディエーターを使用してもよい。本発明の第2の方法には、当該分野において公知のいずれの電気化学的検出法も使用することができる。電気化学的検出は、サイクリックボルタンメトリー、ポテンシャルステップクロノアンペロメトリー、クーロメトリー、対流ボルタンメトリーや微分パルスボルタンメトリー、矩形波ボルタンメトリー、交流インピーダンス測定により行ってもよい。電気化学的測定系は、作用極、対極、参照極及びポテンショスタットから構成される。本発明の第2の検出方法によれば、複合微粒子を介して検出対象物を電極上に集積させるので、検出対象物が試料中で低濃度である場合や試料自体が少量である場合にも、高感度での検出が可能である。金層被覆樹脂微粒子の作製超純水156mLにテトラクロロ金酸四水和物の1水溶液24mL及びクエン酸ナトリウムの3水溶液20mLを添加し、80°Cにて20分間スターラーを用いて撹拌することにより、金ナノ粒子の分散液を得た。得られた金ナノ粒子分散液17mLに、アクリル系樹脂粒子30mg及び10mMチオクト酸エタノール溶液240μLを加え、室温にて4時間スターラーを用いて撹拌した。次いで、オムニポアメンブレンフィルターで濾過し、超純水で洗浄することにより、金ナノ粒子被覆樹脂粒子を得た。次に、超純水20mLに、得られた金ナノ粒子被覆樹脂粒子を加え、更に05ポリビニルアルコール300μL、1テトラクロロ金酸四水和物水溶液4mL及び30過酸化水素水270μLを加え、60°Cにて3時間スターラーを用いて撹拌した。次いで、オムニポアメンブレンフィルターで濾過し、超純水で洗浄することにより、金層被覆樹脂微粒子を得た。得られた金層被覆樹脂微粒子及びニッケルの下地メッキ層を有する金メッキマイクロビーズをそれぞれ遠心分離に付し、遠心分離後の状態を観察した。下地ニッケルメッキ層を有する金メッキマイクロビーズは、遠心分離後、メッキ層の剥離が観察された。一方、金被覆樹脂微粒子では、遠心分離による金層の剥離は観察されなかった。金層被覆磁性樹脂微粒子の作製上記と同様にして得られた金ナノ粒子の分散液18mLに、高分子ポリマー磁性ビーズM270CarboxylicAcid750μL及び100mMアミノフェニルジスルフィドエタノール溶液27μLを加え、室温にて4時間スターラーを用いて撹拌した。次いで、オムニポアメンブレンフィルターで濾過し、超純水で洗浄することにより、金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子を得た。次いで、超純水60mLに、得られた金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子を加え、更に05ポリビニルアルコール960μL、1テトラクロロ金酸四水和物水溶液13mL及び30過酸化水素水880μLを加え、60°Cにて3時間スターラーを用いて撹拌した。次いで、オムニポアメンブレンフィルターで濾過し、超純水で洗浄することにより、金層被覆磁性樹脂微粒子を得た。本発明の複合微粒子を用いたDNAの捕獲の確認12塩基のチオール化DNAプローブ12;又はプローブB:12SH5の溶液中に、上記のように作製した金層被覆樹脂微粒子を分散させて1時間室温にて撹拌した。金層被覆樹脂微粒子を遠心により沈澱させ、上澄み液を除去して新たなTE緩衝液を加えた。遠心分離及び再懸濁を更に2回繰り返し、過剰なDNAを除去した。標的DNA24の溶液中に、リガンドとしてプローブAを含む複合微粒子及びリガンドとしてプローブBを含む複合微粒子を加え、1時間室温にて撹拌した。複合微粒子を遠心により沈澱させ、上澄み液のUV測定を行った。UV測定は、複合微粒子を加える前にも行った。結果を図11に示す。なお、遠心分離による複合微粒子の破壊は観察されなかった。図11より明らかなように、本発明の複合微粒子の添加により、260nmでの吸光度が低下している。この吸光度の低下は約8pmolの核酸の減少に対応する。このことより,金層被覆微粒子上のDNA密度は51pmolcm2と算出され、この値は12nm径金ナノ粒子へのDNA修飾密度17pmolcm2とは粒子径の違いによる空間障害を考慮すると比較しうる値であった。すなわち、図11は、溶液中の核酸の一部が本発明の複合微粒子に捕獲されたことを明確に示している。本発明の複合微粒子を用いたストレプトアビジンの捕獲リガンドとしてビオチンを有する本発明の複合微粒子の作製正電荷金ナノ粒子の作製超純水3766mLに、テトラクロロ金酸四水和物の1重量水溶液234mL及び2アミノエタンチオール塩酸塩の450mM水溶液189μLを添加し、25°Cにて20分間撹拌した。水素化ホウ酸ナトリウムの10mM水溶液10μLを加え、暗室中で室温にて10分間激しく攪拌することで、金ナノ粒子の懸濁液を得た。得られた懸濁液20μLをTEMグリッドに滴下し、室温で24時間真空乾燥させた後、透過型電子顕微鏡で観察した。粒径40nm程度の金ナノ粒子の生成が確認された。金ナノ粒子のゼータ電位及び粒度分布をゼータ電位粒径測定システムにより測定した。平均粒径は425±68nmであった。ゼータ電位は3647mVであり、正電荷を帯びていることが確認された。この正電荷は、アミノエタンチオールが持つアミノ基によるものと考えられる。金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子の作製磁性ビーズとして、DynabeadsM270CarboxylicAcidを用いた。この磁性ビーズは表面にカルボン酸基を有する。市販品を吸引ろ過して100mLの超純水で十分に洗浄後、室温で24時間真空乾燥して使用した。乾燥後の磁性ビーズ30mgを、上記で得られた正電荷金ナノ粒子懸濁液18mLに加え、3分間の超音波処理により分散させた後、ミックスローターを用いて室温で2時間攪拌した。次いで、ビーズを外部磁力により回収し、500μLの超純水に分散させ、再度外部磁力により回収した。この精製操作を3回行った後、室温で24時間真空乾燥させ、金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子を得た。ここで、磁性ビーズと金ナノ粒子との吸着は、磁性ビーズ表面に存在するカルボン酸基の負電荷と金ナノ粒子上のアミノエタンチオールのアミノ基の正電荷による静電的相互作用:MagneticbeadAuNP→MagneticbeadAuNPによると考えられる。金層被覆磁性樹脂微粒子の作製金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子30mgを超純水60mLに加え、3分間超音波処理することで分散させた。得られた分散液に、ポリビニルアルコールの05wt水溶液105mL、1テトラクロロ金酸四水和物の水溶液128mL及び30wt過酸化水素水088mLを加え、ミックスローターを用いて室温で12時間攪拌した。次いで、ビーズを外部磁力により回収し、500μLの超純水に分散させ、再度外部磁力により回収した。この精製操作を3回行った後、室温で24時間真空乾燥させ、金層被覆磁性樹脂微粒子を得た。金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子及び金層被覆磁性樹脂微粒子をそれぞれ、エポキシ樹脂中に分散させ、60°Cで一晩静置し硬化させた。硬化した樹脂の表面を研磨フィルムで研磨した後、ダイヤモンドナイフで薄く切り出し、TEMグリッドに載せ、透過型電子顕微鏡で観察した。金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子及び金層被覆磁性樹脂微粒子の膜厚は、それぞれ約50nm及び100nmと見積もられた。金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子及び金層被覆磁性樹脂微粒子の電気抵抗は、それぞれ80MΩ及び13Ωであり、金層被覆磁性樹脂微粒子の導電性は飛躍的に向上した。これは、断面TEM像から明らかなように、金ナノ粒子被覆磁性樹脂粒子で見られる金ナノ粒子間の空隙に金が析出した結果として、連続する金層が形成されたためである。金層被覆磁性樹脂微粒子表面へのビオチンの導入1mMビオチンethyl13Dithiopropionate水溶液に金層被覆磁性樹脂微粒子4mgを混合し、3分間の超音波処理により分散させ、ロータリーミキサーを用いて室温で1時間攪拌した。次いで、微粒子を外部磁力により回収し、1mLのPBSbufferに分散させ、再度外部磁力により回収した。この精製操作を3回行った後、1mLPBSbuffer中に再分散させてビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子の分散液を得た。ストレプトアビジンの捕獲ビオチン導入金層被覆磁性樹脂粒子分散液1mLに、ターゲット物質として、4mgmLフルオレセイン標識化ストレプトアビジン水溶液5μLを加え、ロータリーミキサーを用いて室温で1時間攪拌した。その後、微粒子を外部磁力により回収し、1mLのPBSbufferに分散させ、再度外部磁力により回収した。この精製操作を3回行った後、500μLPBSbuffer中に再分散させた。ビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子分散液単独及びフルオレセイン標識ストレプトアビジンを添加したビオチン導入金層被覆磁性樹脂粒子分散液をそれぞれスライドガラス上に3μL滴下し、カバーガラスを被せ、蛍光顕微鏡により観察した。画像の取り込みは、デジタルカメラで行った。ビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子分散液中では、明視野で樹脂微粒子像が観察されるが、蛍光視野では像は観察されなかった。一方、フルオレセイン標識化ストレプトアビジンを添加したビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子分散液中では、明視野で観察された樹脂微粒子像に対応する場所に、フルオレセインによる蛍光像が観察された。このことにより、ビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子は、ターゲットであるアビジンを選択的に捕獲できることが明らかになった。磁性電極を用いる電気化学的検出磁性電極磁性電極の作製長さ5cmのテフロン棒の中心に直径1mmの穴を空け、テフロン棒の片方の端にエポキシ樹脂を塗布した。そこに長さ7cm程度の鉄線を挿入し、エポキシ樹脂を60°Cで一晩静置することで硬化させ、鉄線をテフロン棒に固定した。その後、電極面となる一端を精密仕上げ用研磨フィルムで研磨し、電極面側に付着したエポキシ樹脂を削り取った。電極面の反対側から鉄線を2mm程度引き抜き、電極面側に深さ2mmの空隙を形成した。この空隙に隙間なく金箔を詰め込んだ。金箔を埋め込んだ電極表面を、精密仕上げ用研磨フィルム、精密仕上げ用研磨フィルム、液体コンパウンドの順に使用して鏡面に仕上げた。こうして、磁性導電性材料を用いて外部からの磁力に応答する構造を持つ電極を作製した。磁性電極の特性評価作用極として上記で作製した磁性電極又は金電極を、対極として白金電極を、参照極としてAgAgCl電極を用い、01M硫酸溶液中、掃引速度100mVs1、掃引範囲-025~15Vでサイクリックボルタンメトリーを行い両者を比較した。いずれの作用極を用いても、アノード側15V、カソード側09V付近に金の酸化被膜生成還元に伴うピークが見られた。よって、上記で作製した金被覆磁性電極は金電極と同様の電気化学特性を持つことが確認された。リン酸緩衝生理食塩水調製塩化ナトリウム80g、塩化カリウム2g、リン酸水素二ナトリウム十二水和物363g、リン酸二水素ナトリウム24gを超純水約900mLに溶解させ、35塩酸でpH74に調製し、さらに超純水を加えて1Lにメスアップした。フェロシアン化カリウムの電気化学測定作用極として上記の磁性電極、対極として白金電極、参照極としてAgAgCl電極を用い、5mMフェロシアン化カリウム63H2O;和光純薬工業PBSbuffer溶液中、掃引速度10mVs1、掃引範囲0~05Vでサイクリックボルタンメトリーを行った。032Vと025V付近に一対の酸化還元ピークが得られた。これは電解溶液中のフェロシアン化物イオンの酸化還元に起因するピークであり、金電極で得られる典型的な曲線が得られた。磁性電極への金層被覆磁性樹脂微粒子の集積と電気化学測定で作製した金層被覆磁性樹脂微粒子は、磁力による集積が可能であり、また金層により被覆されているため高い導電性を持つ。これらの性質を利用して、磁性電極表面に金層被覆磁性樹脂粒子を外部磁力で集積することにより、電極面積を増大させて電気化学応答の高感度化を図った。金層被覆磁性樹脂粒子4mgをPBSbuffer1mL中に分散させ、そこから4~32μLまで4μLずつ取って磁性電極上に滴下し、外部磁石により磁性樹脂粒子を電極表面に集積、固定しこれを作用極とした。対極には白金電極、参照極にはAgAgClを用い、5mMフェロシアン化カリウムPBSbuffer溶液中、掃引速度10mVs1、掃引範囲0~05Vでサイクリックボルタンメトリーを行った。サイクリックボルタンメトリーの結果、磁性電極表面の金層被覆磁性樹脂粒子固定量が増加するにつれ、フェロシアンの酸化還元に伴う電流応答は大きくなった。酸化ピーク電流値とベース電流値の差をプロットした。ビーズ分散液滴下量が24μL以下の場合、ΔIpeakは比例増加したが、24μL以上になるとΔIpeakが飽和に達した。これは、磁性電極の電極面積に対して固定可能な金層被覆磁性樹脂粒子量が飽和したためであると考えられる。今回の実験条件下ではΔIpeakは滴下量0μLの場合と比べて3倍程度まで増加した。電流値は電極面積に比例するため、電極面積が3倍程度増大したことが示唆された。フルオレセインの電気化学測定顕微鏡観察などに用いられる蛍光色素の一種であるフルオレセインのサイクリックボルタンメトリーを行った。フルオレセインの電離平衡におけるpKaは64であり、pH5~9の範囲でpH依存性の吸収と蛍光放出を示す。また、フルオレセインは溶液のpHによって次式で表わされるような構造をとると考えられる。PBSbuffer中に溶解させるとフルオレセインはの構造をとり、溶液は黄緑色を呈し、01M硫酸溶液中ではの構造をとり、溶液は橙色を呈する。作用極に磁性電極および金層被覆磁性樹脂粒子を外部磁力により集積した磁性電極、対極には白金電極、参照極にはAgAgClを用い、1mMフルオレセインPBSbuffer溶液中、掃引速度10mVs1、掃引範囲0~08Vでサイクリックボルタンメトリーを行った。その結果、PBSbuffer中で電位07V付近に酸化ピークが見られた。これは下式で表わされる酸化反応によるピークであると考えられる。金層被覆磁性樹脂粒子を集積することでΔIpeakが11倍になり、電気化学信号が高感度化された。磁性電極によるHRP標識化ストレプトアビジンの電気化学測定で作製したビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子を用いて、ストレプトアビジンの電気化学的検出を行った。HRPは、過酸化水素の還元反応に対する高い触媒機能を示し、電子メディエーターなしでも、高い電気応答性を示すことが知られている。そのため、免疫染色や、ELIZAなどの分析化学実験での標識物質として頻繁に使用される。HRPの酵素触媒反応は下式~のように表される。HRPH2O2→CompoundIH2OCompoundIeH→CompoundIICompoundIIeH→HRPH2Oまず過酸化水素によるHRPの補欠因子ヘムの2電子酸化が起こり、この結果、oxyferrylironとポルフィリンπカチオンラジカルからなる酸化数5の反応中間体CompoundIが生成する。次にCompoundIが電極から電子を受け取り、ポルフィリンπカチオンラジカルが1電子還元され、酸化数4の反応中間体CompoundIIになる。最後に、CompoundIIが電子を受け取り、もとの状態に戻る。従って、本反応系は全体として以下の式、図23で示される。H2O22e2H→2H2Oで作製した磁性電極の表面に1mMビオチン溶液3μLを滴下し、4°Cで30分間静置することで、リガンドとしてビオチンを電極表面に修飾した。ビオチン修飾した磁性電極に1mgmLHRP標識化ストレプトアビジン溶液を3μL滴下し、4°Cで暗室に30分間静置した。超純水ですすいだ後、これを作用極とし、対極には白金電極、参照極はAgAgClとして、250μMH2O2PBSbuffer溶液中、掃引速度10mVs1、掃引範囲02~03Vでサイクリックボルタンメトリーを行った。アノードとカソードではそれぞれ019Vと010Vにピークが見られた。これは、HRPによる過酸化水素の酵素触媒反応内における電極表面との直接電子移動反応によるピークであると考えられる。このことから、HRP標識化ストレプトアビジンは電気化学活性を示すことが示唆された。金層被覆磁性樹脂粒子を用いたHRP標識化ストレプトアビジンの電気化学測定で作製したビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子により試料溶液中のHRP標識化ストレプトアビジンを捕捉して、外部磁力により電極上に金層被覆磁性樹脂粒子を集積して、過酸化水素を含むPBSbuffer中でサイクリックボルタンメトリーを行った。アノードとカソードではそれぞれ0Vと006Vにピークが見られた。これは、HRPによる過酸化水素の酵素触媒反応内における、電極表面との直接電子移動反応によるピークであると考えられる。しかし、磁性電極を用いた場合と金層被覆磁性樹脂粒子を用いた場合とを比較すると、カソードでのピーク電流値ΔIpcはそれぞれ20nAと27μAであり、130倍以上のピーク電流の増幅が達成された。このことから、金層被覆磁性樹脂粒子を用いることにより、高感度な電気化学計測が可能になった。ビオチン導入金層被覆磁性樹脂微粒子を用いたターゲット分子の検出それぞれ標識化されたターゲットに分散させたビオチン修飾金層被覆磁性樹脂粒子を電極上に20μLずつ滴下し、外部磁力により電極表面に金層被覆磁性樹脂粒子を集積した。金層被覆磁性樹脂粒子を集積した電極を作用極として用い、対極には白金電極、参照極はAgAgClとした。HRP標識化ストレプトアビジンの場合は、250μMH2O2PBSbuffer溶液中、掃引速度10mVs1、掃引範囲-02~03Vでサイクリックボルタンメトリーを行った。HRP標識ストレプトアビジンを回収した金層被覆磁性樹脂粒子を測定した場合のみ、一対の顕著な酸化還元ピークが見られた。これは、HRPによる過酸化水素の酸化還元ピークであると考えられ、この電位走査範囲では、HRP標識ストレプトアビジンのみを検出することが可能である。よってこの結果から、標識化された複数種類の抗原を一括測定し、ある特定の抗原のみを検出するといったマルチアレイ方式での測定も可能であるということが示唆された。以上の結果から、外部磁力により金層被覆磁性樹脂微粒子を磁性電極上に集積させることによって、検出対象物の高感度高精度検出が可能になると理解できる。上記の実施形態および実施例は、本発明の理解を容易にするために例示として記載されたものであって、本発明は本明細書または添付図面に記載された具体的な構成のみに限定されるものではないことに留意すべきである。本明細書に記載した具体的構成、手段、方法は、本明細書に基づいて理解される本発明の基本思想を逸脱することなく、当該分野において公知の他の多くのものと置換可能であることを、理解すべきであり、当業者であれば容易に認識することができる。"