"配列番号1に示すアミノ酸配列と85以上の配列同一性を有し、かつ、下記のo~u;oLeu-42と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積が100~200Å2であるアミノ酸に置換、pMet-46と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積が100~150Å2である中性アミノ酸、または、側鎖の表面積が100~150Å2である酸性アミノ酸に置換、qAsn-96と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、塩基性アミノ酸に置換、rTyr-172と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積がTyrよりも小さいアミノ酸に置換、sThr-196と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、塩基性アミノ酸に置換、tAla-312と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積がAlaよりも大きいアミノ酸に置換、uPhe-371と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、脂肪族アミノ酸、酸性アミノ酸、または、側鎖にヒドロキシル基を有するアミノ酸に置換、から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなるタンパク質。下記のv~bb;vLeu-42と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Metに置換、wMet-46と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ileに置換、xAsn-96と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Arg、または、Hisに置換、yTyr-172と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ala、または、Serに置換、zThr-196と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Hisに置換、aaAla-312と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ileに置換、bbPhe-371と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ala、Val、Ile、Glu、Ser、Thr、または、Tyrに置換、から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる請求項1に記載のタンパク質。配列番号1に示すアミノ酸配列において、下記のa~g;aLeu-42を、側鎖の表面積が100~200Å2であるアミノ酸に置換、bMet-46を、側鎖の表面積が150Å2以下である中性アミノ酸、または、側鎖の表面積が150Å2以下である酸性アミノ酸に置換、cAsn-96を、塩基性アミノ酸に置換、dTyr-172を、側鎖の表面積がTyrよりも小さいアミノ酸に置換、eThr-196を、塩基性アミノ酸に置換、fAla-312を、側鎖の表面積がAlaよりも大きいアミノ酸に置換、gPhe-371を、脂肪族アミノ酸、酸性アミノ酸、または、側鎖にヒドロキシル基を有するアミノ酸に置換、から選択される少なくとも1つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなるタンパク質。下記のh~n;hLeu-42を、Metに置換、iMet-46を、Ileに置換、jAsn-96を、Arg、または、Hisに置換、kTyr-172を、Ala、または、Serに置換、lThr-196を、Hisに置換、mAla-312を、Ileに置換、nPhe-371を、Ala、Val、Ile、Glu、Ser、Thr、または、Tyrに置換、から選択される少なくとも1つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる請求項3に記載のタンパク質。配列番号2および4~19のいずれかに記載のアミノ酸配列からなる、請求項4に記載のタンパク質。請求項1~5のいずれかに記載のタンパク質をコードするDNA。請求項6に記載のDNAを有するベクター。請求項7に記載のベクターにより形質転換された形質転換体。請求項8に記載の形質転換体の培養物。請求項9に記載の培養物を処理して得た酵素変異体含有物。請求項1~5のいずれかに記載のタンパク質を用いて、NADH/NADPH還元型をNAD/NADP酸化型に変換する方法。NADH/NADPH還元型が、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを補酵素とする酸化還元酵素を用いた反応により生成されたものである、請求項11に記載の方法。請求項8に記載の形質転換体、請求項9に記載の形質転換体の培養物、または請求項10に記載の酵素変異体含有物を利用する、請求項11または12に記載の方法。請求項11~13のいずれかに記載の方法によって製造された化合物。ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを補酵素とする酸化還元酵素を用いた反応が、一方のエナンチオマーを優先的に酸化する反応である、請求項12または13に記載の方法。請求項15に記載の方法を用いて製造されたエナンチオマー過剰率の高い光学活性化合物。ストレプトコッカスミュータンス由来の水生成型NADHオキシダーゼは、工業的生産に実用する上で、安定性の面において更なる改良の余地がある。具体的には、NAD再生反応において、経時的に酵素活性が顕著に低下するという問題点が確認された。本発明の目的は、酸化還元酵素による立体選択的酸化反応時のNAD再生系に有用な水生成型NADHオキシダーゼを、蛋白質工学的な手法による機能改変によってNAD再生反応時に活性が低下することなく長時間の使用に耐え得る酵素、すなわちより安定性に優れた酵素を提供すること、および、効率的な光学活性アルコールアミノ酸などの有用物質を製造する方法を提供することを課題とする。本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ストレプトコッカスミュータンス由来の水生成型NADPHオキシダーゼの安定性を向上させ得る酵素機能改変方法を新たに開発した。結果として、本手段は配列同一性の高いNADPHオキシダーゼの安定性を向上させ得る酵素機能改変方法として応用可能である。すなわち、本発明は、[1]配列番号1に示すアミノ酸配列と85以上の配列同一性を有し、かつ、下記のo~u;oLeu-42と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積が100~200Å2であるアミノ酸に置換、pMet-46と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積が100~150Å2である中性アミノ酸、または、側鎖の表面積が100~150Å2である酸性アミノ酸に置換、qAsn-96と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、塩基性アミノ酸に置換、rTyr-172と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積がTyrよりも小さいアミノ酸に置換、sThr-196と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、塩基性アミノ酸に置換、tAla-312と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、側鎖の表面積がAlaよりも大きいアミノ酸に置換、uPhe-371と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、脂肪族アミノ酸、酸性アミノ酸、または、側鎖にヒドロキシル基を有するアミノ酸に置換、から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなるタンパク質、[2]下記のv~bb;vLeu-42と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Metに置換、wMet-46と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ileに置換、xAsn-96と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Arg、または、Hisに置換、yTyr-172と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ala、または、Serに置換、zThr-196と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Hisに置換、aaAla-312と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ileに置換、bbPhe-371と立体構造上同等な位置のアミノ酸残基を、Ala、Val、Ile、Glu、Ser、Thr、または、Tyrに置換、から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる[1]のタンパク質、[3]配列番号1に示すアミノ酸配列において、下記のa~g;aLeu-42を、側鎖の表面積が100~200Å2であるアミノ酸に置換、bMet-46を、側鎖の表面積が150Å2以下である中性アミノ酸、または、側鎖の表面積が150Å2以下である酸性アミノ酸に置換、cAsn-96を、塩基性アミノ酸に置換、dTyr-172を、側鎖の表面積がTyrよりも小さいアミノ酸に置換、eThr-196を、塩基性アミノ酸に置換、fAla-312を、側鎖の表面積がAlaよりも大きいアミノ酸に置換、gPhe-371を、脂肪族アミノ酸、酸性アミノ酸、または、側鎖にヒドロキシル基を有するアミノ酸に置換、から選択される少なくとも1つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなるタンパク質、[4]下記のh~n;hLeu-42を、Metに置換、iMet-46を、Ileに置換、jAsn-96を、Arg、または、Hisに置換、kTyr-172を、Ala、または、Serに置換、lThr-196を、Hisに置換、mAla-312を、Ileに置換、nPhe-371を、Ala、Val、Ile、Glu、Ser、Thr、または、Tyrに置換、から選択される少なくとも1つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列からなる[3]のタンパク質、[5]配列番号2および4~19のいずれかに記載のアミノ酸配列からなる、[4]に記載のタンパク質、[6][1]~[5]のいずれかに記載のタンパク質をコードするDNA、[7][6]に記載のDNAを有するベクター、[8][7]に記載のベクターにより形質転換された形質転換体、[9][8]に記載の形質転換体の培養物、[10][9]に記載の培養物を処理して得た酵素変異体含有物、[11][1]~[5]のいずれかに記載のタンパク質を用いて、NADH/NADPH還元型をNAD/NADP酸化型に変換する方法、[12]NADH/NADPH還元型が、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを補酵素とする酸化還元酵素を用いた反応により生成されたものである、[11]に記載の方法、[13][8]に記載の形質転換体、[9]に記載の形質転換体の培養物、または[10]に記載の酵素変異体含有物を利用する、[11]または[12]に記載の方法、[14][11]~[13]のいずれかに記載の方法によって製造された化合物、[15]ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを補酵素とする酸化還元酵素を用いた反応が、一方のエナンチオマーを優先的に酸化する反応である、[12]または[13]に記載の方法、[16][15]に記載の方法を用いて製造されたエナンチオマー過剰率の高い光学活性化合物、に関する。本発明における安定性の向上したNADHオキシダーゼまたはNADPHオキシダーゼは、NADまたはNADP再生反応時に活性が低下することなく長時間の使用に耐え得るので、該再生反応が効率良く進む。従って、補酵素再生系を酸化還元酵素による立体選択的酸化反応と共役させれば、エナンチオマー混合物から効率的にエナンチオマー過剰率の高い光学活性化合物を得る事が可能となる。配列番号1で示されるポリペプチドは、ストレプトコッカスミュータンスStreptococcusmutansNCIB11723由来の水生成型NADHオキシダーゼであり、そのアミノ酸配列およびそれをコードするDNAの塩基配列はすでに報告されている特許文献2。水生成型NADHオキシダーゼとは、前述のように、還元型補酵素NADHを酸化型補酵素NADに酸化し分子状酸素を電子受容体として水を生成する酸化還元酵素である。また、水生成型NADHオキシダーゼによるNADHからのNAD生成反応は非可逆的であり、反応産物としてはNAD以外には水が生成するのみである。配列番号1のアミノ酸配列に対して導入する変異の設計コンセプトは、I触媒反応部位のシステイン残基のチオール基への酸素分子の接触を適切に妨げる、IINADH結合部位の立体障害を排除する、III自由エネルギー的に酵素の立体構造を安定化する方向に働かせる、の3種類に基づいており、取得された変異が、単独の、または、複数の効果を有していれば、基本的に本研究の発明の範囲に含まれる。以下に、変異の設計コンセプトについて詳述する。I触媒反応部位のシステイン残基のチオール基への酸素分子の接触を適切に妨げる変異とは、ストレプトコッカスミュータンス由来の水生成型NADHオキシダーゼで触媒反応部位活性中心と考えられるCys-44への酸素分子の接触を適切に防ぐことにより、チオール基の過剰な酸化を抑制し得る変異である。すなわち、酸素分子による過剰な酸化を抑制するためには、酸素分子が結合する触媒反応部位のポケット酸素分子が触媒反応部位に近づけるような空間を狭くして、酸素分子が進入する素過程の反応速度を低下させる変異を設計する。当該酵素のモデリング立体構造を利用することにより、触媒反応部位の周辺の3次元立体構造、特に、ポケット空間について、立体的な把握が可能である。よって、どの部位にどのようなアミノ酸変異を導入すれば、ポケット空間を適度に狭く出来るかを効率的に考案し、有用なアミノ酸変異を設計することができる。IINADH結合部位の立体障害を排除する変異とは、NADHの酵素への結合解離速度の変化が酵素の安定化に有利に働き得る変異である。一方、FADとNADPHを利用する酸化還元酵素flavoproteinは、ニコチンアミド補酵素NADPHが結合するポケットFADのイソアロキサジン環の傍を芳香族アミノ酸がシールドする立体構造を取ることが、NADPHが結合していないアポ酵素の結晶構造解析から解っているCarrillo,N.Ceccarelli,E.A.、Eur.J.Biochem.270、1900-19152003。このような芳香環によるNADPH結合ポケットのシールド機構の機能については、一般的には、このシールドが外れることつまり芳香環が大きく動くことが、他の二次的な反応例えば、他の分子との結合に影響が及ぶと推測されている。しかし、ストレプトコッカスミュータンス由来の水生成型NADHオキシダーゼに関しては、そのような機能に関する詳細は解析されておらず、さらに、工業的な利用目的においては、他の二次的な反応について考慮する必要はない。そこで、このようなシールドの役割を果たす芳香族アミノ酸残基を置換変異することで、NADHの酵素への結合解離速度の変化が酵素の安定化に有利に働くと考えられる。当該酵素のモデリング立体構造を利用することにより、このようなシールドの役割を果たすと推測される芳香族アミノ酸残基はTyr-172であるため、側鎖を小さくする変異が有効と考えられる。III自由エネルギー的に酵素の立体構造を安定化する方向に働く変異とは、野生型と変異体での自由エネルギー差分値の比較を行うことで、酵素の安定性を高く設計し得る変異である。すなわち、分子モデリング構造主鎖のフレームワークを利用すれば、分子力場法を利用した分子シミュレーション計算エネルギー極小化計算によって、denatured状態からnative状態へ移行するときの自由エネルギー差分値を算出することができ、自由エネルギー差がよりnative状態に有利であれば、熱力学的な安定性も高くなる。具体的には、プログラムShrike特開2001-184381を用いた計算機スクリーニングにより、野生型、および、各種変異体の自由エネルギー差分値を算出し、アミノ酸置換変異が自由エネルギー差分値に与える影響を指標に、アミノ酸変異候補を設計し得る。本発明における変異の設計は、立体構造モデリング手法によって得られたストレプトコッカスミュータンス由来の水生成型NADHオキシダーゼのモデリング立体構造を利用することにより達成し得る。なお、配列番号1で示される当該酵素に関して、X線結晶構造解析をはじめとする構造解析等の実験は行われておらず、その立体構造は未知である。すなわち、まず、当該酵素のアミノ酸配列を基に、アミノ酸配列ホモロジーを有し、かつ立体構造がプロテインデータバンクPDBに登録されている酵素との多重アミノ酸配列アラインメントを、プログラムClustalXThompson、J.D.etal.NucleicAcidRes.22、4673-801994により作成する。当該酵素とアミノ酸配列ホモロジーを有するタンパク質は、PDBに登録されたタンパク質のアミノ酸配列を対象に、プログラムBLASTAltschul,StephenF.etal.、NucleicAcidsRes.25、3389-34021997やPSI-BLASTShaffer,A.A.etal.、Bioinfomatics164、88-4892000を用いたアミノ酸配列ホモロジーの検索を行うことで選択し得る。次に、これら立体構造既知のタンパク質の三次元立体構造アラインメントを、Swiss-PDBViewerGuex,N.Peitsch,M.C.、Electrophoresis18、2714-27231997などの三次元グラフィックスプログラムや、VASTSearchGibrat,J.F.,etal.、CurrOpinStructBiol6、3771996などの立体構造比較類似構造検索サーバにより行う。先にアミノ酸配列のみから得られた多重アラインメントを立体構造の類似性に基づいて修正し、得られた配列アラインメントに基づいて、立体構造の類似性が高いと推定されるタンパク質を分子モデリングの雛形タンパク質として選択する。そして、補酵素が結合した複合体の立体構造PDBコードが2NPXを、分子モデリングの雛形タンパク質として選択し、この雛形タンパク質をプログラムSwissPDB-Viewerで表示させ、配列アラインメントに従って、当該酵素のアミノ酸配列配列番号1に適合するようアミノ酸残基の置換を行う。挿入、欠失部位については、PDBから最適な類似部分構造を検索し、その部分構造に置換することにより立体構造モデルを構築し得る。上記のコンセプトを基に、配列番号1のアミノ酸配列について、42位、46位、96位、172位、196位、312位、および、371位の部位から選択される、少なくとも1つ以上のアミノ酸置換を伴う変異を設計した。なお、置換されるアミノ酸は、基本的には、タンパク質を構成する20種類のアミノ酸であるが、非タンパク質構成アミノ酸や非天然アミノ酸であっても、後述の各々のアミノ酸置換と同様の効果が期待できる場合は、これらも含む。また、挿入、欠失、または修飾による当該部位での変異も、後述の各々のアミノ酸置換変異の効果と同様の効果が期待できる場合は、これらも含む。例えば、45位に欠失変異を導入し、47位に挿入変異を導入した場合に、結果的に46位においてMetをAlaに置換する変異が導入されたことになり、後述の46位におけるアミノ酸置換変異と同様の効果が期待できる。配列番号1のアミノ酸配列に対して導入する変異のアミノ酸置換は、具体的には以下1~7に示す変異である。1Leu-42を、触媒反応部位のシステイン残基のチオール基への酸素分子の接触を適切に妨げるアミノ酸に置換する変異である。具体的には、側鎖の表面積が100~200Å2であるアミノ酸に置換する変異であり、好ましくは、Val117Å2、Ile140Å2、Thr102Å2、Met160Å2、Asn113Å2、Gln144Å2、Asp106Å2、または、Glu138Å2に置換する変異であり、自由エネルギー的にも安定化に有利に働くという理由で、より好ましくは、Metに置換する変異である。なお、括弧内の数値は各アミノ酸の側鎖の表面積を表す。2Met-46を、触媒反応部位のシステイン残基のチオール基への酸素分子の接触を適切に妨げるアミノ酸に置換する変異である。具体的には、側鎖の表面積が100~150Å2である中性アミノ酸、または、側鎖の表面積が100~150Å2である酸性アミノ酸に置換する変異であり、好ましくは、Val117Å2、Leu137Å2、Ile140Å2、Thr102Å2、Asp106Å2、または、Glu138Å2に置換する変異であり、自由エネルギー的にも安定化に有利に働くという理由で、より好ましくは、Ileに置換する変異である。3Asn-96を、自由エネルギー的に酵素の立体構造を安定化する方向に働くアミノ酸に置換する変異である。具体的には、塩基性アミノ酸に置換する変異であり、好ましくは、Lys、Arg、または、Hisに置換する変異であり、算出されたエネルギー値が特に優れているという理由で、より好ましくは、Arg、または、Hisに置換する変異である。4Tyr-172を、NADH結合部位の立体障害を排除するアミノ酸に置換する変異である。具体的には、側鎖の表面積がTyr187Å2よりも小さいアミノ酸に置換する変異であり、好ましくは、Gly0Å2、Ala67Å2、Val117Å2、Leu137Å2、Ile140Å2、Ser80Å2、Thr102Å2、Asn113Å2、Gln144Å2、Asp106Å2、Glu138Å2、His151Å2、Lys167Å2、または、Phe175Å2に置換する変異であり、自由エネルギー的にも安定化に働くという理由で、より好ましくは、Ala、または、Serに置換する変異である。5Thr-196を、自由エネルギー的に酵素の立体構造を安定化する方向に働くアミノ酸に置換する変異である。具体的には、塩基性アミノ酸に置換する変異であり、好ましくは、Lys、Arg、または、Hisに置換する変異であり、算出されたエネルギー値が特に優れているという理由で、より好ましくは、Hisに置換する変異である。6Ala-312を、触媒反応部位のシステイン残基のチオール基への酸素分子の接触を適切に妨げるアミノ酸に置換する変異である。具体的には、側鎖の表面積がAla67Å2よりも大きいアミノ酸に置換する変異であり、好ましくは、Val117Å2、Leu137Å2、Ile140Å2、Thr102Å2、Asn113Å2、Gln144Å2、Asp106Å2、Glu138Å2、His151Å2、Lys167Å2、Arg196Å2、Met160Å2、Phe175Å2、Tyr187Å2、または、Trp217Å2に置換する変異であり、自由エネルギー的にも安定化に有利に働くという理由で、より好ましくは、Val、または、Ileに置換する変異である。7Phe-371を、自由エネルギー的に酵素の立体構造を安定化する方向に働くアミノ酸に置換する変異である。具体的には、脂肪族アミノ酸、酸性アミノ酸、または、側鎖にヒドロキシル基を有するアミノ酸に置換する変異であり、好ましくは、Ala、Val、Leu、Ile、Asp、Glu、Ser、Thr、または、Tyrに置換する変異であり、算出されたエネルギー値が特に優れているという理由で、より好ましくは、Ala、Val、Ile、Glu、Ser、Thr、または、Tyrに置換する変異である。なお、酸性側鎖を有するものが酸性アミノ酸であり、塩基性側鎖を有するものが塩基性アミノ酸であり、それ以外を中性アミノ酸とする。等電点pIを基準値とした場合、pIが4.0以下のアミノ酸を酸性アミノ酸、pIが7.0以上のアミノ酸を塩基性アミノ酸とする。各々のアミノ酸の等電点BarrettG.C.著、ChemistryandBiochemistryoftheAminoAcids、ChampmanandHall社、1985年、9頁、Table2.2を基にタンパク質構成アミノ酸について分類すると、酸性アミノ酸は、Asp、Gluであり、塩基性アミノ酸は、His、Lys、Argであり、それら以外が中性アミノ酸である。また、脂肪族アミノ酸とは、側鎖が炭素鎖でつながった構造、かつ、環状構造を含まない構造をしているもので、タンパク質構成アミノ酸では、Ala、Val、Leu、Ileが含まれる。本発明における変異の一部は、側鎖の大きさを変えることによる、タンパク質構造中の空隙を調節する効果を期待した変異であり、側鎖の表面積を規定パラメータとして用いる。側鎖の表面積とは、側鎖の大きさを的確に示す側鎖の表面積接触可能表面積であり、各種アミノ酸側鎖の表面積、および、その数値については、公知の情報Miller,S.著、J.Mol.Biol.、1987年、196号、641-656ページ、側鎖の表面積の数値についてはTable2の値などを利用可能である。本発明のタンパク質は、安定性や活性の面で特に高いポテンシャルを示すという理由で、配列番号2および4~19に示すアミノ酸配列からなるタンパク質であることが最も好ましい。本発明における変異の設計に関しては、前述したように、立体構造モデリング手法によって得られたストレプトコッカスミュータンス由来の水生成型NADHオキシダーゼのモデリング立体構造を利用することにより達成し得る。したがって、配列番号1に示すアミノ酸配列と85以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、更に好ましくは98以上の配列同一性を有するアミノ酸配列に対して、本発明を適応することは容易であるため、該アミノ酸配列に対して本発明の変異を導入したタンパク質も本発明の範囲に含まれる。本発明における配列同一性は、プログラムBLASTAltschul,StephenF.etal.、NucleicAcidsRes.25、3389-34021997を用いたアミノ酸配列相同性解析により決定することができる。なお、BLAST分析には、NationalCenterforBiotechnologyInformationhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/等を通じて入手可能なソフトウェアが利用できる。本発明における立体構造上同等な位置とは、VASTSearchなどの立体構造比較類似構造検索サーバを利用し、立体構造既知のアミノ酸配列例えば、今回の発明に用いたPDBコード:2NPXのアミノ酸配列と、立体構造をベースにしたアミノ酸配列のアラインメントを行うことで容易かつ客観的に同定可能な位置のことである。なお、VASTSearchもNationalCenterforBiotechnologyInformationhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/を通じて入手可能である。なお、配列番号1で示されるストレプトコッカスミュータンス由来の水生成型NADHオキシダーゼと85以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する酵素の中には、NADPHオキシダーゼまたは、NADH/NADPH両用型のオキシダーゼも含まれ得る。なぜなら、酵素において補酵素と結合する部位のわずかなアミノ酸配列の違いによって、補酵素の選択性が変わることおよび、設計できることは、すでに公知の情報であるためPenningT.M.JezJ.M.、Chem.Rev.、101、3027-30462001、NADHオキシダーゼではなく、NADPHオキシダーゼであっても、本発明を適用して得られたタンパク質は、本発明の範囲に含まれる。また、本発明によって得られた水生成型NADPHオキシダーゼ変異体は、酵素としての活性機能は野生型と同様であり、安定性は野生型よりも向上しているという特徴を有する。本発明における、配列番号1において、上記1~7に示すアミノ酸置換変異を、少なくとも1つ以上有するアミノ酸配列からなるタンパク質は、本質的には、配列番号1のアミノ酸配列からなる野生型のNADHオキシダーゼに対して、安定性が向上したことを特徴とするNADHオキシダーゼ変異体である。安定性とは、酵素以後、酵素という表記では、酵素機能を保持した酵素変異体も含むものとするを含む組成物を、ある一定の温度で一定時間処理した後、維持されている酵素の活性残存率が、同一処理を施した比較対象の酵素に比べて、増大することを意味する。上記の処理には、単に一定温度で静置インキュベートする処理や、通気攪拌などの処理が含有されるが、これらに限定されるものではない。本発明では、処理前の酵素活性NADH酸化活性を100として、処理後の酵素活性残存率を求めている。本発明におけるNADHオキシダーゼ変異体の酵素活性残存率が、野生型のNADHオキシダーゼの酵素活性残存率と比較して増大していた場合、安定性が向上したNADHオキシダーゼ変異体が得られたと判断することができる。野生型NADHオキシダーゼの酵素活性が10~40となるような処理条件において、安定性が向上したNADHオキシダーゼ変異体の酵素活性残存率は、野生型NADHオキシダーゼの酵素活性残存率に比べて、10以上、好ましくは20以上、より好ましくは30以上増大する。なお、NADH酸化活性に関しては、1分間に1μmolのNADHをNADに酸化する酵素活性を1Unitと定義処理前と処理後の反応液組成や酵素濃度は同一条件とするして算出するが、これに限定されるものではない。処理条件に関しては、pH4.0~10.0、好ましくは、pH5.0~9.0の中性付近の溶液にて、4°C~80°C、好ましくは、15°C~50°Cの範囲の一定温度下で、一定時間の通気攪拌処理が好適であるが、これらに限定されるものではない。以下のように、組換えDNA技術、PCR法等を用いて、野生型NADHオキシダーゼDNAへ部位特異的な変異を導入することにより、本発明のタンパク質をコードするDNAを取得することができる。すなわち、組換えDNA技術による変異の導入は、例えば、野生型水生成型NADHオキシダーゼ遺伝子中の変異導入を希望する目的の部位の両側に適当な制限酵素認識配列が存在する場合に、そこを前記制限酵素で切断し、変異導入を希望する部位を含む領域を除去した後、化学合成等によって目的の部位のみに変異導入したDNA断片を挿入するカセット変異法によって行うことができる。また、PCRによる部位特異的変異の導入は、野生型水生成型NADHオキシダーゼ遺伝子中の変異導入を希望する目的の部位に目的の変異を導入した変異プライマーと前記遺伝子の一方の末端部位の配列を含む変異を有しない増幅用プライマーとで前記遺伝子の片側を増幅し、前記変異用プライマーに対して相補的な配列を有する変異用プライマーと前記遺伝子のもう一方の末端部位の配列を含む変異を有しない増幅用プライマーでもう片側を増幅し、得られた2つの増幅断片をアニーリング操作後、さらに前記2種類の増幅用プライマーでPCR操作することにより、行うことができる。本発明のベクターは前述した水生成型NADHオキシダーゼ変異体DNAを適当なベクターに連結挿入することにより得ることができる。遺伝子を挿入するためのベクターは、宿主中で自律複製可能なものであれば特に限定されず、プラスミドDNAやファージDNAをベクターとして用いることができる。例えば、大腸菌を宿主として用いる場合には、pBR322、pUC18、pBluescriptII等のプラスミドDNA、EMBL3、M13、λgt11等のファージDNA等を、酵母を宿主として用いる場合は、YEp13、YCp50等を、植物細胞を宿主として用いる場合には、pBI121、pBI101等を、動物細胞を宿主として用いる場合は、pcDNAI、pcDNAI/Amp等をベクターとして用いることができる。本発明の形質転換体は、宿主となる細胞へ前記ベクターを導入することにより得ることができる。細菌への組換え体DNAの導入方法としては、例えばカルシウムイオンを用いる方法やエレクトロポレーション法等が挙げられる。酵母への組換え体DNAの導入方法としては、例えばエレクトロポレーション法、スフェロプラスト法、酢酸リチウム法等が挙げられる。植物細胞への組換え体DNAの導入方法としては、アグロバクテリウム感染法、パーティクルガン法、ポリエチレングリコール法等が挙げられる。動物細胞への組換え体DNAの導入方法としては、例えば、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法等が挙げられる。本発明の酵素変異体は、前記した形質転換体を培地で培養し、培養菌体または培養上清中に本発明の酵素変異体を生成蓄積させ、該培養物から前記酵素変異体を採取することにより製造することができる。したがって、本発明における培養物は、前記した形質転換体を培地で培養して得られる、菌体を含む培養液あるいは培養菌体を意味する。形質転換体を培地で培養する方法は、宿主の培養に用いられる通常の方法に従って行われる。大腸菌等の細菌を宿主として得られた形質転換細胞を培養する培地としては、完全培地又は合成培地、例えばLB培地、M9培地等が挙げられる。また、培養温度20~40°Cで好気的に培養することにより本発明の酵素変異体を菌体内に蓄積させ、回収する。本発明の酵素変異体の精製は、前述した培養法により得られる培養物を遠心して回収し細胞についてはソニケーター等にて破砕する、アフィニティークロマトグラフィー、陽イオンまたは陰イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過等を単独でまたは適宜組み合わせることによって行うことができる。得られた精製物質が目的の酵素であることの確認は、通常の方法、例えばSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動、ウエスタンブロッティング等により行うことができる。したがって、本発明における前記の形質転換体の培養物の精製処理とは、酵素活性を失うことなく、目的の酵素以外の不純物を除くことである。本発明の酵素含有物は、前記の形質転換体の培養物を精製処理したものである。酵素含有物として、例えば、細胞を破砕することで得られる無細胞抽出液や、精製して得られた酵素溶液、あるいは、酵素溶液の凍結乾燥物が挙げられる。上記NADPHオキシダーゼ変異体を用いて、NADPHからNADPを製造する方法も本発明に含まれる。NADPH還元型が生成されるのは、基本的には、NADP系補酵素を認識する酸化還元酵素による化合物の酸化反応において、副反応としてNADPが還元されることによるが、これらに限定されるものではない。例えば、酵素以外の酸化還元触媒によって、NADPが還元されてNADPHが生成される場合も、本発明に含まれる。NADPHオキシダーゼ変異体を用いて、NADPHからNADPを製造する本発明の方法は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを補酵素とする酸化還元酵素脱水素酵素を用いた反応系に適用することができる。これらの反応系で生成したNADH/NADPH還元型を、NADPHオキシダーゼ変異体によってNAD/NADP酸化型に変換して再生することができる。すなわち、本発明は、NADPを補酵素とする酸化還元酵素と組み合わせて使用し得る、水生成型NADHオキシダーゼ変異体を提供する。なお、組み合わせて使用し得るとは、組み合わせて使用するためを意味する。例えば、水生成型NADPHオキシダーゼ変異体の使用の、前、中および/または後に、NADPを補酵素とする酸化還元酵素を使用し得る。好ましくは、NADPを補酵素とする酸化還元酵素および水生成型NADHオキシダーゼ変異体を同時的に、基質と接触させる。酸化還元酵素は、EC第1群に分類される酵素であり、EC.1.X.X.XXは任意で表記される。本発明によって再生されたNAD/NADP酸化型を補酵素として利用する酸化還元酵素は、EC.1.X.1.Xで表記される。したがって、例えば、EC.1.1.1.Xで表記される酸化還元酵素と、本発明のNADP再生系を利用した、アルコール誘導体やヒドロキシ酸誘導体の製造方法は、本発明に包含される。同様に、EC.1.4.1.Xで表記される酸化還元酵素変異体と本発明のNADP再生系を利用した、アミノ酸誘導体や1級アミン誘導体の製造も本発明に包含される。なお、誘導体とは、ある化合物に小部分の構造上の変化があってできる化合物である。化合物中の水素原子あるいは特定の原子団が、他の原子あるいは原子団によって置換された化合物は、該化合物の誘導体であると理解される。ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを補酵素とする酸化還元酵素は、その他にも、炭化水素鎖、含窒素化合物、含硫化合物など、非常に幅広い化合物を基質として利用でき、本発明のNADP再生系を組み合わせて利用する限り、本発明はこれらの酸化還元酵素の種類には限定されるものではない。NADPHオキシダーゼ変異体は、上述の酸化還元酵素による立体選択的酸化による、エナンチオマー混合物からエナンチオマー過剰率の高い光学活性化合物を生成する反応光学分割にも、利用できる。なお、製造するエナンチオマー過剰率の高い光学活性化合物は特に限定されるものではなく、NADPHオキシダーゼ変異体はどのような光学活性化合物の製造にも適用できる。エナンチオマー混合物としては、不斉炭素を有し、その不斉炭素に脱水素酵素で酸化され得る水酸基、アミノ基、ホルミル基の結合した化合物が挙げられる。具体的には、ジオール誘導体などを含めたアルコール誘導体、ヒドロキシ酸誘導体、アミノ酸誘導体などを利用でき、例えば、鎖状1,2-ジオール、β-ヒドロキシカルボン酸、2-アミノアルコール、非天然アミノ酸等が挙げられる。エナンチオマー過剰率の高いとは、目的の対掌体が、もう一方の対掌体との混合物において70モル量以上、好ましくは約90モル量以上、更に好ましくは約95モル量以上の割合で存在するものを意味する。本発明によって得られたNADPHオキシダーゼ変異体を利用する際の反応条件は、用いる基質、組み合わせる酸化還元酵素などにより異なるが、通常、約4~80°C、好ましくは、約10~50°Cの温度で反応を行い、また、pHは、約4.0~10.0、好ましくは、約5.0~9.0で反応を行う。本発明をNADP再生系として利用する場合の、NADPの濃度は、組み合わせる酸化還元酵素が酸化を触媒する基質に対して約0.00001~1モルw/v、好ましくは、約0.00001~0.1モルw/vであるが、これらに限定されるものではない。また、本発明で得られたNADPHオキシダーゼ変異体が反応を触媒するには、酸素が必要であるため、空気または比較的純粋な酸素存在下で行われる事が好ましい。また、酸素の反応液への溶解を促進するため、反応は、振盪あるいは攪拌条件下で行われる事が好ましい。さらに大気圧以上の加圧下で反応する事により、反応液への酸素の溶解度が向上し、反応がより効率に進む場合もある。NADPHオキシダーゼ変異体は、単一にまたは部分的に精製された酵素変異体であってもよいし、これら酵素変異体を産生する微生物の培養物またはその処理物を使用することも可能である。ここで、培養物とは、菌体を含む培養液あるいは培養菌体を意味し、処理物とは、例えば、粗抽出液、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、あるいはそれらの磨砕物、これらの混合物などを意味する。更にそれらは、酵素自体または菌体のまま公知の手段例えば、架橋法、物理的吸着法、包括法などで固定化されて使用できる。また、反応を行う際、NADPHオキシダーゼ変異体と、組み合わせる酸化還元酵素の両者を、同一宿主細胞内に導入した形質転換微生物の培養物、または、その処理物を用いれば、別々に両者を発現する微生物を培養する必要はない。また、両酵素を同一細胞内に発現した形質転換微生物を用いれば、微生物細胞内のNADPを使用し、反応が進行することも可能となり、従って、外部から別途NADPを添加する必要がなく、または添加するNADPの量を大幅に減らす事が可能となる。このような形質転換体は、水生成型NADHオキシダーゼ変異体をコードするDNAおよび組み合わせて使用する酸化還元酵素をコードするDNAを、同一のベクターに組込み、これを宿主に導入することにより製造できるし、また、これら2種類のDNAを不和合性グループの異なる2種のベクターにそれぞれ組込み、それらを同一の宿主に導入することによっても製造できる。以下に、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例になんら限定されるものではない。実施例1ストレプトコッカスミュータンス由来NADHオキシダーゼの立体構造モデリング配列番号1のアミノ酸配列と相同性の高い配列を、プログラムBLASTで検索した。検索に用いたプログラムの種類はblastpで、検索したデータベースはpdbaa_db、ただしredundant配列を一切除いていないデータベースである。配列番号1のアミノ酸配列について、検索によって見つかった相同性の高い各種アミノ酸配列との多重アミノ酸配列アラインメントを、プログラムClustalXにより作成した。次に、これら立体構造既知のタンパク質の三次元立体構造アラインメントを、三次元グラフィックスプログラムSwiss-PDBViewerや、立体構造比較類似構造検索サーバVASTSearchを用いて、先にアミノ酸配列のみから得られた多重アラインメントを立体構造の類似性に基づいて修正した。得られた配列アラインメントに基づいて、類似性が高いと推定される立体構造PDBコードが2NPXを、分子モデリングの雛形タンパク質として選択し、補酵素が結合した複合体のこの雛形タンパク質をプログラムSwissPDB-Viewerで表示させ、配列アラインメントに従って、当該酵素のアミノ酸配列配列番号1に適合するようアミノ酸残基の置換を行った。挿入、欠失部位については、PDBから最適な類似部分構造を検索し、その部分構造に置換することにより立体構造モデルを構築した。以上の手順により、触媒反応部位のシステイン残基のチオール基への酸素分子の接触を適切に妨げることが可能な変異部位としては、His-11、Leu-42、Gly-43、Gly-45、Met-46、Tyr-62、Ala-312であることを同定した。His-11、Tyr-62は触媒残基でもあり、Gly-43、Gly-45への変異は主鎖構造が大きく変わる可能性があったので、それ以外の部位でアミノ酸置換変異を設計した。また、NADH結合部位の立体障害を排除することが可能な変異部位としては、Tyr-172であることを同定し、この部位でアミノ酸置換変異を設計した。さらに、自由エネルギー的に酵素の立体構造を安定化する方向に働く変異部位としては、Asn-96、Thr-196、Phe-371を同定した。プログラムShrike特開2001-184381を用いた計算機スクリーニングにより、野生型、および、各種変異体の自由エネルギー差分値を算出し、アミノ酸置換変異が自由エネルギー差分値に与える影響を指標に、アミノ酸変異を設計した。これら変異を有するタンパク質、すなわち、ストレプトコッカスミュータンス由来水生成型NADHオキシダーゼ変異体については、配列番号2および4~19に示した。配列番号2はL42M、配列番号4はM46I、配列番号5はN96H、配列番号6はN96R、配列番号7はY172A、配列番号8はY172S、配列番号9はT196H、配列番号10はA312I、配列番号11はF371A、配列番号12はF371E、配列番号13はF371V、配列番号14はF371I、配列番号15はF371S、配列番号16はF371T、配列番号17はF371Y、配列番号18はN96R/T196H/F371A、配列番号19はM46I/N96R/T196H/F371Aの各変異体のアミノ酸配列をそれぞれ表す。実施例2NADHオキシダーゼ遺伝子を含む組換えベクターの作製および組換え大腸菌の作製大腸菌においてストレプトコッカスミュータンス由来水生成型NADHオキシダーゼを発現させるために、形質転換に用いる組換えベクターを、特許文献3に記載の方法にて作成した。得られた組換えベクターpNTNXを用いて大腸菌HB101Takara社製を形質転換し、組換え大腸菌HB101pNTNXを得た。野生型NADHオキシダーゼをコードするDNA配列を、配列番号20に示した。実施例3各種NADHオキシダーゼ変異体遺伝子を含む組換えベクターの作製および組換え大腸菌の作製組換えプラスミドpNTNXを鋳型として、NADHオキシダーゼをコードするDNA配列の意図した部位に変異を導入できるよう設計した2種の合成プライマーを用いるクイックチェンジ法にて、各種NADHオキシダーゼ変異体遺伝子を含む組み換えプラスミドを得た。クイックチェンジ法に関しては、QuickChangeSite-DirectedMutagenesisKitStratagene社製を用い、添付のプロトコルに従って行った。用いた2種の合成プライマーおよび得られた変異体の対応について、例を示す。配列番号2で示すL42Mの変異を導入したNADHオキシダーゼ変異体コードDNA配列は配列番号21は、配列番号22~23の2種の合成プライマーを用いたクイックチェンジ法にて、NADHオキシダーゼL42M変異体の組換えベクターpNTNX-L042Mを得た。同様の方法で、適切な2種の合成プライマーを設計利用して、配列番号4~19に示す、NADHオキシダーゼ各種変異体の組換えベクターを調製した。なお、配列番号18~19に示す多重変異体は、鋳型となる組換えプラスミドとして変異が導入されたpNTNXに、さらにクイックチェンジ法にて別の変異を導入することによって調製した。それぞれのNADHオキシダーゼ変異体遺伝子を含む組換えベクターは、実施例1と同様に、大腸菌HB101を形質転換し、組換え大腸菌を得た。実施例4組換え大腸菌によるNADHオキシダーゼの発現実施例2、3で得たそれぞれの組換え大腸菌HB101を、半合成培地グリセリン1.5w/v、イーストエキス0.3w/v、Na2HPO40.6w/v、KH2HPO40.3w/v、NaCl0.2w/v、MgSO47H2O0.5w/v、100μg/mlのアンピシリン、pH7.2に植菌し、37°Cにて38時間培養し、それぞれの培養液を集菌し培養上清を除いた後、培地と等量の緩衝液50mMリン酸カリウム、pH7.0に懸濁し、超音波破砕法により破砕し無細胞抽出液を得た。以下の測定条件により、各種酵素変異体含有無細胞抽出液が、NADHオキシダーゼ活性を有していることを確認した。[NADHオキシダーゼ活性の測定条件]50mMリン酸カリウム緩衝液pH7.0に、NADH0.17mM、EDTA0.2mM、FAD0.02mMを含む反応液0.95mLに、酵素液0.05mLを添加し必要に応じて上記緩衝液にて希釈、一定温度25°Cでの波長340nmの吸光度の減少を測定することにより行った。この反応条件において、1分間に1μmolのNADHをNADに酸化する酵素活性を1Unitと定義した。実施例5酸素存在下での水生成型NADHオキシダーゼ変異体の安定性実施例4で調製したそれぞれの野生型対照群としておよび変異体の水生成型NADHオキシダーゼを含むHB101無細胞抽出液を、1分間に340nmの吸光度の減少が0.1~0.4程度になるように上記リン酸カリウム緩衝液にて希釈し、温度を30°C、または、40°Cに一定に保って、一定時間インキュベートした。インキュベート処理前、および、処理後の残存する酵素活性を測定して、各種酵素の酵素活性残存率を算出した。本測定は、数回に分けて行っており、それぞれの測定において、野生型の水生成型NADHオキシダーゼを対照として利用している。その結果を表1に示す。なお、本測定は、基本的には酸素供給条件下にて実施しており、最後の測定では、スターラーによる攪拌処理による影響も確認した。水生成型NADHオキシダーゼ変異体は、野生型と比較して、30°Cで高い酵素活性残存率を維持しており、40°Cでも優れた酵素活性残存率を有している。また、同一の温度時間のインキュベート処理でも、攪拌処理をすることで酵素活性残存率は下がるが、野生型よりも変異体の方が、酵素活性残存率が相対的に高いという関係は変わらなかった。"