"本願明細書に記載された発明。本研究において出願人は、t4;11細胞内におけるMLL-AF4遺伝子発現を特異的に阻害するためにRNAiを用いた。出願人は、融合転写MLL-AF4の枯渇がクローン形成能力および増殖を抑制し、t4;11陽性白血病細胞内においてアポトーシスを誘導し、SCIDマウス異種移植モデル内においてかかる細胞の生着を危うくすることを明らかにする。本発明は、対象の、例えばヒトのような哺乳動物の、MLL-AF4レベルを低減するための組成物および方法を提供する。この方法は、MLL-AF4融合遺伝子の発現を例えば、少なくとも2、4、6、10、15、20またはそれ以上低下させる、またはt4;11陽性細胞の増殖率を抑制する、あるいはその両方を行うiRNA剤を、対象に投与することを含む。かかるiRNA剤は、本明細書に記載されているものであり得るか、または、活性配列の1つに基づくdsRNAであってMLL-AF4融合遺伝子の、例えばヒトのMLL-AF4融合遺伝子のような哺乳動物MLL-AF4融合遺伝子の、同一の領域を標的とするdsRNAであり得る。iRNA剤は、鎖当たり30個未満のヌクレオチドを、例えば21~23個のヌクレオチドを含み、表1の薬剤番号1乃至12で提供される薬剤の1つから構成されるか、1つを含むか、または1つから誘導され得る。2本鎖iRNA剤は平滑末端を有するか、または、より好ましくは、同薬剤の3’末端の一方または両方からヌクレオチド1~4個の突出部分を有することができる。これらの好ましいiRNA剤は、対象内のすべての非MLL-AF4遺伝子配列に対して4個以上のヌクレオチドミスマッチを含むことが好ましい。第1の態様において、本発明は特に、センス鎖であってかかるセンス鎖が、表1で提供される薬剤番号1乃至12のセンス鎖配列配列番号5、10、12、14、18、20、22、24、26、30および32からの少なくとも15個の連続したヌクレオチドであるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、アンチセンス鎖であってかかるアンチセンス鎖が、表1で提供される薬剤番号1乃至12のアンチセンス配列配列番号6、7、11、13、15、19、21、23、25、27、31および33からの少なくとも15個の連続したヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含むiRNA剤、例えば、薬剤番号5、センス鎖配列5’-AAGAAAAGCAGACCUACUCCA-3’配列番号14、アンチセンス鎖配列5’-UGGAGUAGGUCUGCUUUUCUUUU-3’配列番号15、を提供する。表1の薬剤番号1乃至12のiRNA剤は、培養ヒトSEM細胞白血病細胞系内に存在するMLL-AF4mRNAの量を、これらの薬剤とのインキュベーション後、かかる薬剤と共にインキュベーションされなかった細胞に比べて40超低減するという有利なかつ驚くべき能力を有する図1参照。第2の態様において本発明は、センス鎖内のヌクレオチド配列とアンチセンス鎖内のヌクレオチド配列とを含むiRNA剤であって、各鎖が少なくとも16、17または18個のヌクレオチドの配列を含み、かかる配列が、培養ヒトSEM細胞内においてMLL-AF4発現を阻害するための能力を本質的に保持しながら鎖当たり1、2または3個以下のヌクレオチドがそれぞれ他のヌクレオチドと置換されている例えばアデノシンがウラシルに置き換えられている点を除いて、表1の薬剤1乃至12の配列センス鎖:配列番号5、10、12、14、18、20、22、24、26、30および32、アンチセンス鎖:配列番号6、7、11、13、15、19、21、23、25、27、31および33の1つと本質的に同一である、iRNA剤を提供する。本発明のiRNA剤は、表1で提供される薬剤1、2、5および9のセンス鎖配列配列番号5、14および24から得られた少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖と、表1で提供される薬剤1、2、5および9のアンチセンス鎖配列配列番号6、7、15および25の少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖とを含むことができ、かかるiRNA剤は、これらの薬剤とのインキュベーション後に培養ヒトSEM細胞内に存在するMLL-AF4mRNAの量を、かかる薬剤と共にインキュベーションされなかった細胞に比べて60超低減する。本発明のiRNA剤のアンチセンス鎖は、30個以下のヌクレオチド長であり得、かかるiRNA剤の2本鎖領域は、15~30対のヌクレオチド対長であり得る。iRNA剤は、少なくとも1つのヌクレオチド突出部分overhangを含むことができ、かかる突出部分は、1~4個の不対ヌクレオチドを、好ましくは2または3個の不対ヌクレオチドを有する。ヌクレオチド突出部分は、iRNA剤のアンチセンス鎖の3’末端に位置することができる。さらに、本発明のiRNA剤は、aセンス鎖配列の配列番号5、10、12、14、18、20、22、24、26、30および32の5’から3’へ向かって1位~19位または1位~21位のヌクレオチド配列の群から選択されるヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、センス鎖が前記センス鎖配列の1位~21位のヌクレオチド配列を有することが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号6、11、13、15、19、21、23、25、27、31および33の5’から3’へ向かって1位~21位または3位~21位のヌクレオチド配列、並びに、センス鎖が前記センス鎖配列の1位~19位のヌクレオチド配列を有することが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号6、11、13、15、19、21、23、25、27、31および33の3位~21位のヌクレオチド配列、の群から選択されるヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖と、により形成される2本鎖構造と、bかかるセンス鎖及び/またはアンチセンス鎖の3’末端に1~4個の不対ヌクレオチドからなる少なくとも1つの1本鎖突出部分であって、同1本鎖突出部分は、センス鎖の3’末端にある場合には、前記センス鎖配列20位および21位のヌクレオチドを各位置に選択的に含み、および/または、アンチセンス鎖の3’末端にある場合には、前記アンチセンス鎖配列の22位および23位のヌクレオチドを各位置に選択的に含む、1本鎖突出部分と、から構成されており、かかる2本鎖構造が、前記センス鎖配列の1位~21位のヌクレオチド配列を有するセンス鎖、および前記アンチセンス鎖配列の1位~21位のヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖により形成される場合には、かかるiRNA剤はセンス鎖の3’末端に1~4個の不対オリゴヌクレオチドの1本鎖突出部分を含んでいない。特に、センス鎖のヌクレオチド配列は、配列番号14のヌクレオチド配列から構成され得、アンチセンス鎖のヌクレオチド配列は、配列番号14のヌクレオチド配列から構成され得る。本発明のiRNA剤は、培養ヒトSEM細胞内に存在するMLL-AF4mRNAの量を、このiRNA剤とのインキュベーション後、かかる薬剤と共にインキュベーションされなかった細胞に比べて40より多く低減するように意図されている。それらのiRNA剤は、生体試料内において同iRNA剤の安定性を増大させる修飾をさらに含むことができ、かかる修飾は、ホスホロチオエートまたは2’修飾ヌクレオチドであり得る。例えば、iRNA剤は、ウリジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-ウリジン-アデニン-3’5’-UA-3’ジヌクレオチド;5’-ウリジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-ウリジン-グアニン-3’5’-UG-3’ジヌクレオチド;5’-シチジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-シチジン-アデニン-3’5’-CA-3’ジヌクレオチド;又は5’-ウリジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-ウリジン-ウリジン-3’5’-UU-3’ジヌクレオチドを更に含むことができる。2’修飾は、2’-デオキシ、2’-デオキシ-2’-フルオロ、2’-O-メチル、2’-O-メトキシエチル2’-O-MOE、2’-O-アミノプロピル2’-O-AP、2’-O-ジメチルアミノエチル2’-O-DMAOE、2’-O-ジメチルアミノプロピル2’-O-DMAP、2’-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル2’-O-DMAEOEおよび2’-O-N-メチルアセトアミド2’-O-NMAの群から選択できる。iRNA剤はさらに、コレステロール部分を含むことができ、かかるコレステロール部分は、iRNA剤のセンス鎖の3’末端に結合することが好ましい。iRNA剤は、肝臓の細胞または消化管の細胞による取り込みに対して標的化され得る。第3の態様において本発明は、医薬組成物であって、a本発明のiRNA剤と、b薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を提供する。この医薬組成物は、ヒト血清またはマウス血清、あるいはヒト血清およびマウス血清内においてiRNA剤の半減期を延長させるかまたは細胞内へのiRNA剤の取り込みを促進する処方化剤を更に含むことができる。処方化剤はポリカチオンを含むことができる。かかる医薬組成物は、増殖性疾患の、例えば癌腫、好ましくは白血病、より好ましくは急性リンパ芽球性白血病の、治療に役立つものであることが好ましい。医薬組成物は、対象、例えばヒトに、医薬組成物が投与されると、対象の細胞または組織内におけるMLL-AF4融合遺伝子発現を例えば、少なくとも2、4、6、10、15、20またはそれ以上低下させる、またはt4;11陽性細胞の増殖率を抑制する、あるいはその両方を行う能力を備えることが好ましい。第4の態様において本発明は、増殖性疾患に罹患しているか、または同疾患を発症する危険性のあるヒト対象を治療する方法であって、かかるヒト対象に本発明のiRNA剤を投与する工程を含む方法を提供する。かかる増殖性疾患は好ましくは癌腫であり、より好ましくは急性リンパ芽球性白血病である。その場合、iRNA剤は、対象の細胞または組織内におけるMLL-AF4の発現を例えば、少なくとも2、4、6、10、15、20またはそれ以上低下させるために、またはt4;11陽性細胞の増殖率を抑制するために、あるいはその両方を行うために十分な量にて投与できる。第5の態様において本発明は、医薬組成物を作成する方法であって、本発明のiRNA剤の1つを医薬担体と共に処方する工程を含む方法を提供し、選択的に、ヒト血清またはマウス血清、あるいはヒト血清およびマウス血清内においてiRNA剤の半減期を延長させるかまたは細胞内へのiRNA剤の取り込みを促進する処方化剤とともにiRNA剤を処方する工程をさらに含む。処方化剤はポリカチオンを含むことができる。本発明の方法の医薬組成物は、増殖性疾患の治療に役立つものであることが好ましく、増殖性疾患は、好ましくは癌腫であり、より好ましくは白血病であり、最も好ましくは急性リンパ芽球性白血病である。ある好ましい実施形態では、本発明の方法の医薬組成物は、対象、例えばヒトに、同医薬組成物が投与されると、対象の細胞または組織内におけるMLL-AF4融合遺伝子発現を例えば、少なくとも2、4、6、10、15、20またはそれ以上低下させること、またはt4;11陽性細胞の増殖率を抑制すること、あるいはその両方を行うことができる。第6の態様において本発明は、細胞内におけるMLL-AF4RNAの量を例えば、少なくとも2、4、6、10、15、20またはそれ以上低減する、またはt4;11陽性細胞の増殖率を抑制する、あるいはその両方を行う方法であって、かかる細胞を本発明のiRNA剤に接触させる工程を含む方法を提供する。一実施形態では、この方法はインビトロにて行われる。代替的に、細胞は対象の細胞であって、対象は増殖性疾患を、好ましくは癌腫を、より好ましくは急性リンパ芽球性白血病を、罹患していると診断されている。細胞は、腫瘍内に位置することができるか、またはマイクロクローン細胞であり得る。第7の態様において本発明は、本発明のiRNA剤を作成する方法であって、かかる方法が、iRNA剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖を合成する工程を含み、かかるセンス鎖及び/またはアンチセンス鎖が少なくとも1つのヌクレオチド修飾を含み、好ましくは前記ヌクレオチド修飾が生体試料内においてiRNA剤の安定性を増大させる修飾である方法を提供する。前記の方法は、対象にiRNA剤を投与する工程をさらに含む。一実施形態では、対象は増殖性疾患を、好ましくは癌腫、より好ましくは急性リンパ芽球性白血病を罹患していると診察される。その場合、対象はヒトであり得る。第8の態様において本発明は、MLL-AF4遺伝子の発現を阻害すると考えられるiRNA剤を評価する方法であって、かかる方法が、aiRNA剤を提供する工程と、同工程において、第1の鎖が、MLL-AF4mRNAのヌクレオチド配列に対して十分な相補性を有し、第2の鎖が、第1の鎖とハイブリダイズするために同第1の鎖に対して十分な相補性を有することと、bMLL-AF4遺伝子を含む細胞にiRNA剤を接触させる工程と、ciRNA剤を細胞に接触させる前のMLL-AF4遺伝子発現または接触していない対照細胞のMLL-AF4遺伝子発現と、iRNA剤を細胞に接触させた後のMLL-AF4遺伝子発現と、を比較する工程と、diRNA剤が、MLL-AF4遺伝子発現を阻害するために有用であるかどうかを判定する工程であって、細胞中に存在するMLL-AF4RNAの量、または細胞により分泌されるタンパク質の量が、iRNA剤を細胞に接触させる前の存在量もしくは分泌量よりも少ないか、またはそのように接触していない細胞による存在量もしくは分泌量よりも少ない場合に、同iRNA剤が有用であると判定する工程とを含む方法、を提供する。本方法の一実施形態では、iRNA剤は、上記の通りの本発明のiRNA剤である。iRNA剤は、天然型のリボヌクレオチドサブユニットのみを含み得るか、または、iRNA剤に含まれる1つ以上のかかるリボヌクレオチドサブユニットの糖もしくは塩基に対する修飾を1つ以上含むように合成され得る。iRNA剤は、かかる薬剤の安定性、分布または細胞への取り込みを改善するために選択されるリガンド、例えばコレステロールに付着するようにさらに修飾され得る。かかる薬剤はさらに、単離形態であり得るか、または、本明細書に記載されている方法に用いられる医薬組成物の一部であり得る。別の実施形態では、本明細書に記載されているように、コレステロール部分例えばセンス鎖の3’末端に、2’修飾例えば2’-O-メチルまたは2’-デオキシ-2’-フルオロ-修飾およびホスホロチオエート例えば、センス鎖およびアンチセンス鎖の3’-端の1個または2個のヌクレオチド上にが、同一iRNA剤内に存在する。iRNA剤、例えば本明細書に記載されているiRNA剤は、MLL-AF4融合遺伝子発現がある種の役割を演じる対象内に存在する疾病または疾患の治療のためのものであることが好ましい。iRNA剤の投与は、MLL-AF4融合により媒介される疾患の予防的治療のためにも実施できる。本発明は、MLL-AF4の調節例えば阻害を行うiRNA剤の調製物であって、かなり純粋な調製物または薬学的に許容可能な調製物を含む調整物を特徴とする。MLL-AF4を標的とするiRNA剤が対象に投与でき、その対象は、MLL-AF4融合遺伝子またはその他のt4;11染色体転座の存在を特徴とする疾患を、発症する危険性があるかまたは罹患している例えば、罹患していると診断されている。iRNA剤は、かかる疾患またはその症状の開始を遅らせるために、かかる疾患と診断されたかもしくはかかる疾患を罹患しているかまたはかかる疾患の危険性のある個人に投与できる。これらの疾患は、急性リンパ芽球性白血病を含む、t4;11関連の白血病のような増殖性疾患を含む。例えば、MLL-AF4を標的とするiRNA剤は、1つ以上の器官骨髄外での血液細胞の形成、例えば脾臓、肝臓またはリンパ節において乳児急性リンパ芽球性白血病、白血球増加症または髄外疾患を罹患している例えば、罹患していると診断された対象に投与できる。また、iRNA剤は、骨髄のような特定の組織を標的とすることもでき、組織例えば組織の腫瘍内のMLL-AF4発現レベルは、MLL-AF4iRNA剤の投与後、低下する。iRNA剤は、iRNA剤が血流内に広がっている時間を最大にするために修飾されることが好ましい。例えばiRNA剤は、ヒト血清アルブミンHSAと結合することができる。本発明の方法および組成物では、iRNA剤は、送達剤、例えば、本明細書に記載されている送達剤で、例えばリポソームで修飾されるか、またはかかる送達剤と結合され得る。かかる修飾は、かかる薬剤の循環時間を増大させるために、血清アルブミンSA、例えばヒト血清アルブミンHSA、またはその断片との結合を媒介し得る。本薬剤、本方法および本組成物は、細胞内においてMLL-AF4融合mRNAを選択的に分解するために、RNA干渉に関与する細胞メカニズムを利用する。従って、本発明の方法は通例、本発明のiRNA剤の1つに細胞を接触させる工程を含む。かかる方法は、細胞に対して直接実施できるか、または、本発明のiRNA剤の1つを対象に投与することにより、哺乳動物対象に対して実施できる。好ましい実施形態では、細胞は少なくとも2回、好ましくは48時間間隔で、iRNA剤に接触させられる。細胞内においてMLL-AF4融合mRNAが減少すると、生成されるMLL-AF4融合タンパク質の量が低減し、生物ではMLL-AF4融合物媒介型疾病の効果を減らすことができる。本発明の特徴である方法および組成物、例えば、本明細書に記載されている増殖性疾患を治療するための方法および組成物は、記載されたiRNA剤のいずれかと共に利用できる。加えて、本発明の特徴である方法および組成物は、本明細書に記載されている疾病または疾患の治療、および対象、例えば動物、ヒトのような哺乳動物の治療に利用できる。本発明の特徴である方法および組成物、例えば、本明細書に記載されている増殖性疾患を治療するための方法およびiRNA組成物は、本明細書に記載されている用量及び/または処方で、そして、本明細書に記載されている投与経路でも利用できる。本発明の特徴である1つ以上の実施形態の詳細は、添付の図面および以下の詳細な説明に記される。本発明のその他の特徴、目的および利点は、この詳細な説明、図面および請求項から明らかになるであろう。本願はすべての目的のために、引用された全ての参照、特許および特許出願を参照により全体として組み込む。例えば、本願は以下の項目を提供する。項目1表1配列番号5、10、12、14、18、20、22、24、26、30及び32に提供された薬剤番号1乃至12のセンス鎖配列からの少なくとも15個の連続したヌクレオチドであるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、表1配列番号6、7、11、13、15、19、21、23、25、27、31及び33に提供された薬剤番号1乃至12のアンチセンス鎖配列からの少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖と、とからなるiRNA剤。項目2各々が、表1センス鎖:配列番号5、10、12、14、18、20、22、24、26、30及び32並びにアンチセンス鎖:配列番号6、7、11、13、15、19、21、23、25、27、31及び33の薬剤番号1乃至12の配列のうちの一つと本質的に同一である少なくとも16、17又は18個のヌクレオチドの配列を含むセンス鎖中のヌクレオチド配列とアンチセンス鎖中のヌクレオチド配列とを含むiRNA剤であって、鎖あたり1、2又は3個以下のヌクレオチドがそれぞれ他のヌクレオチドによって置換されている例えば、アデノシンがウラシルによって置換されているが、培養ヒトSEM細胞中におけるMLL-AF4の発現を阻害する能力をほぼ維持している、iRNA剤。項目3前記センス鎖は、表1に提供された薬剤番号1、2、5及び9のセンス鎖配列配列番号5、14及び24からの少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、前記アンチセンス鎖は表1に提供された薬剤番号1、2、5及び9のアンチセンス鎖配列配列番号6、7、15及び25からの少なくとも15個の連続したヌクレオチドを含み、前記iRNA剤は、同剤とのインキュベーション後に、培養ヒトSEM細胞中のMLL-AF4mRNAの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して60超減少させる、項目1に記載のiRNA剤。項目4前記アンチセンスRNA鎖は長さが30ヌクレオチド以下であり、前記iRNA剤の二重鎖領域の長さが15乃至30ヌクレオチド対である、項目1乃至3のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目51乃至4個の不対ヌクレオチドを有する少なくとも一つのヌクレオチド突出部分を含む、項目1乃至3のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目6前記ヌクレオチド突出部分が2又は3の不対ヌクレオチドを有する、項目5に記載のiRNA剤。項目7前記ヌクレオチド突出部分iRNA剤のアンチセンス鎖の3’末端に存在する、項目5又は6に記載のiRNA剤。項目8項目1に記載のiRNA剤であって、前記iRNA剤は、aセンス鎖配列の配列番号5、10、12、14、18、20、22、24、26、30及び32の5’から3’へ向かって1位~19位又は1位~21位のヌクレオチド配列の群から選択されるヌクレオチド配列から構成されたセンス鎖と、前記センス鎖が同センス鎖配列の1位~21位のヌクレオチドの配列を有することが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号6、7、11、13、15、19、21、23、25、27、31及び33の5’から3’へ向かって1位~21位又は3位~21位のヌクレオチドの配列、並びに前記センス鎖が同センス鎖配列の1位~19位のヌクレオチド配列を有することが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号6、7、11、13、15、19、21、23、25、27、31及び33の3位~21位のヌクレオチドの配列、の群から選択されるヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖と、により形成される2本鎖構造と、b前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖の少なくとも一方の3’-末端に1乃至4個の不対ヌクレオチドからなる少なくとも1つの1本鎖の突出部分であって、前記1本鎖突出部分は、前記センス鎖の3’-末端にある場合には同センス鎖配列の20位及び21位のヌクレオチドを各位置に選択的に含むことと、前記アンチセンス鎖の3’-末端にある場合には同アンチセンス鎖配列の22位及び23位のヌクレオチドを各位置に選択的に含むここと、のうちの少なくとも一方である、1本鎖の突出部分と、から構成されており、前記2本鎖構造が前記センス鎖配列の1位~21位のヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、前記アンチセンス鎖配列の1位~21位のヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖と、により形成されている場合には、前記iRNA剤は、同センス鎖の3’-末端に1乃至4個の不対オリゴヌクレオチドの1本鎖突出部分を含んでいない、iRNA剤。項目9前記センス鎖のヌクレオチド配列は配列番号14のヌクレオチド配列から構成され、かつ前記アンチセンス鎖のヌクレオチド配列は配列番号15のヌクレオチド配列から構成される、項目8に記載のiRNA剤。項目10前記iRNA剤は同剤とのインキュベーション後に、培養ヒトSEM細胞中のMLL-AF4mRNAの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して40超減少させる、項目1乃至9のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目11前記iRNA剤に生物試料中での高い安定性を与える修飾を更に含む、項目1乃至10のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目12ホスホロチオエート又は2’-修飾ヌクレオチドを含む、項目1乃至11のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目13ウリジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-ウリジン-アデニン-3’5’-UA-3’ジヌクレオチド;5’-ウリジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-ウリジン-グアニン-3’5’-UG-3’ジヌクレオチド;5’-シチジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-シチジン-アデニン-3’5’-CA-3’ジヌクレオチド;又は5’-ウリジンが2’-修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの5’-ウリジン-ウリジン-3’5’-UU-3’ジヌクレオチド、を含む、項目1乃至12のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目14前記2’-修飾が、2-デオキシ、2’-デオキシ-2’-フルオロ、2’-O-メチル、2’-O-メトキシエチル2’-O-MOE、2’-O-アミノプロピル2’-O-AP、2’-O-ジメチルアミノエチル2’-O-DMAOE、2’-O-ジメチルアミノプロピル2’-O-DMAP、2’-O-ジメチルアミノエチルオキシエチル2’-O-DMAEOE、及び2’-O-N-メチルアセトアミド2’-O-NMAからなる群より選択される、項目12又は13に記載のiRNA剤。項目15コレステロール部分を含む、項目1乃至14のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目16前記コレステロール部分が前記iRNA剤のセンス鎖の3’-末端に結合している、項目15に記載のiRNA剤。項目17前記iRNA剤は肝臓の細胞により取り込まれるように標的化されている、項目1乃至16のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目18前記iRNA剤は消化管の細胞により取り込まれるように標的化されている、項目1乃至16のいずれか一項に記載のiRNA剤。項目19a項目1乃至18のいずれか一項に記載のiRNA剤と、b製薬的に許容可能な担体と、からなる製薬組成物。項目20前記iRNA剤のヒト及びマウスの少なくとも一方における血漿中での半減期を延長させるか、又は細胞中における同iRNA剤の取り込みを容易にするための処方化剤を更に含む、項目19に記載の製薬組成物。項目21前記処方化剤はポリカチオンを含む、項目20に記載の製薬組成物。項目22前記製薬組成物は増殖性疾患の治療に有用である、項目19乃至21のいずれか一項に記載の製薬組成物。項目23前記増殖性疾患は、癌、好ましくは白血病、より好ましくは急性リンパ芽球性白血病である、項目22に記載の製薬組成物。項目24前記製薬組成物は、例えばヒトのような対象に同製薬組成物を投与することにより、同対象の細胞又は組織中でのMLL-AF4融合遺伝子の発現を低減すること及びt4;11-陽性細胞の増殖率を抑制することのうちの少なくとも一方を可能にする、項目19乃至23のいずれか一項に記載の製薬組成物。項目25増殖性疾患を有するヒト対象または同増殖性疾患の発生する危険性のあるヒト対象を治療するための方法であって、項目1乃至18のいずれか一項に記載のiRNA剤を同ヒト対象に投与する工程を含む、方法。項目26前記増殖性疾患は、癌、好ましくは急性リンパ芽球性白血病である、項目25に記載の方法。項目27前記iRNA剤は対象の細胞又は組織中でのMLL-AF4の発現を低減すること及びt4;11-陽性細胞の増殖率を抑制することのうちの少なくとも一方を可能にするのに十分な量にて投与される、項目25又は26に記載の方法。項目28項目1乃至18のいずれか一項に記載のiRNA剤の一つを製薬的に許容可能な担体と処方化させる工程を含む、製薬組成物を製造するための方法。項目29前記iRNA剤のヒト及びマウスの少なくとも一方における血漿中での半減期を延長させるか、又は細胞中における同iRNA剤の取り込みを容易にするための処方化剤とともに同iRNA剤を処方化する工程を更に含む、項目28に記載の方法。項目30前記処方化剤はポリカチオンである、項目29に記載の方法。項目31前記製薬組成物は増殖性疾患の治療に有用である、項目28乃至30のいずれか一項に記載の方法。項目32前記増殖性疾患は、癌、好ましくは白血病、より好ましくは急性リンパ芽球性白血病である、項目31に記載の方法。項目33前記製薬組成物は、例えばヒトのような対象に同製薬組成物を投与することにより、同対象の細胞又は組織中でのMLL-AF4融合遺伝子の発現を低減すること及びt4;11-陽性細胞の増殖率を抑制することのうちの少なくとも一方を可能にする、項目28乃至32のいずれか一項に記載の方法。項目34細胞中のMLL-AF4RNAの量を低減すること及びt4;11-陽性細胞の増殖率を抑制することのうちの少なくとも一方を実施するための方法であって、前記単数又は複数の細胞を項目1乃至18のいずれか一項に記載のiRNA剤と接触させる工程を含む、方法。項目35前記方法はインビトロにて実施される、項目34に記載の方法。項目36前記細胞が対象の細胞であり、かつ前記対象が増殖性疾患、好ましくは癌、より好ましくは急性リンパ芽球性白血病に罹患していると診断されている、項目34に記載の方法。項目37項目1乃至18のいずれか一項に記載のiRNA剤を製造する方法であって、前記方法は、同iRNA剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖を合成する工程を含み、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖のうちの少なくとも一つは少なくとも一つのヌクレオチド修飾を含む、方法。項目38前記ヌクレオチド修飾は、前記iRNA剤に生物試料中での高い安定性を与える修飾である、項目37に記載の方法。項目39前記iRNA剤を対象に投与する工程を更に含む、項目37に記載の方法。項目40前記対象は増殖性疾患、好ましくは癌に罹患しているものとして診断されている、項目39に記載の方法。項目41前記対象は急性リンパ芽球性白血病に罹患しているものとして診断されている、項目39に記載の方法。項目42前記対象がヒトである、項目39に記載の方法。項目43MLL-AF4遺伝子の発現を阻害すると考えられているiRNA剤を評価するための方法であって、前記方法は、aiRNA剤を提供する工程であって、第一の鎖がMLL-AF4mRNAのヌクレオチド配列と十分に相補的であり、かつ第二の鎖が第一の鎖とハイブリダイズするべく同第一の鎖と十分に相補的である、工程と、b前記iRNA剤をMLL-AF4遺伝子を含む細胞と接触させる工程と、c細胞と前記iRNA剤を接触させる前のMLL-AF4遺伝子の発現又は接触させていない対照細胞のMLL-AF4遺伝子の発現と、細胞と前記iRNA剤を接触させた後のMLL-AF4遺伝子の発現と、を比較する工程と、d前記iRNA剤がMLL-AF4遺伝子の発現を阻害するのに有用であるかどうかを判定する工程であって、細胞中に存在するMLL-AF4RNAの量又は同細胞によって分泌されるタンパク質の量が、細胞とiRNA剤とを接触させる前の存在量若しくは分泌量よりも少ない場合、又はそのような接触を受けていない細胞による存在量若しくは分泌量よりも少ない場合、同iRNA剤は有用であると判定する工程と、からなる方法。項目44前記iRNA剤は項目1乃至18のいずれか一項に記載のiRNA剤である、項目43に記載の方法。解説を容易にするために、本明細書では時として、ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドという用語を、RNA剤の1つまたは複数の単量体サブユニットに関して使用する。本明細書では、リボヌクレオチドまたはヌクレオチドという用語の使用は、修飾RNAまたはヌクレオチド代替物に関する場合、以下でさらに記載するように、1つまたは複数の位置における、修飾ヌクレオチドまたは代替置換部分も指すことがあると理解されよう。本明細書で使用される場合、RNA剤は、無修飾RNA、修飾RNA、またはヌクレオシド代替物であり、これらはすべて本明細書に記載されている。多数の修飾RNAおよびヌクレオチド代替物が記載されているが、好ましいものの例には、ヌクレアーゼ分解に対して、無修飾RNAが有するものより大きな抵抗性を有するものが含まれる。好ましいものの例には、2’糖修飾、単一鎖突出部分内、好ましくは3’単一鎖突出部分内の修飾、あるいは、特に1本鎖の場合、1つもしくは複数のリン酸基または1つもしくは複数のリン酸基類似体を含有する5’修飾を有するものが含まれる。本明細書で使用される場合、iRNA剤干渉RNA剤の略は、標的遺伝子、例えば標的融合遺伝子MLL-AF4の発現を下方制御できるRNA剤である。理論に拘泥するものではないが、iRNA剤は、当技術分野では時にRNAiと呼ばれる標的mRNAの転写後の切断、または転写前もしくは翻訳前の機構を含めた多数の機構のうちの1つまたは複数によって作用し得る。iRNA剤は、2本鎖iRNA剤であり得る。dsiRNA剤2本鎖iRNA剤の略は、本明細書で使用される場合、複数、好ましくは2本の鎖を含み、その中で鎖間ハイブリダイゼーションが2本鎖構造領域を形成できるiRNA剤である。本明細書では、鎖は、連続したヌクレオチド天然には存在しないヌクレオチドおよび修飾ヌクレオチドも含まれるの配列を指す。2本以上の鎖が別々の分子であっても、それらの各鎖が別々の分子の一部を形成してもよく、また、それらが、例えばリンカー、例えばポリエチレングリコールリンカーによって共有結合で相互連結され、1分子のみを形成していてもよい。少なくとも1本の鎖は、標的RNAに十分に相補的な領域を含むものであり得る。そのような鎖はアンチセンス鎖と称される。アンチセンス鎖に相補的な領域を含むdsRNA剤中に含まれている第2の鎖はセンス鎖と称されている。しかしながら、dsiRNA剤は、少なくとも一部が自己相補的であり、2本鎖領域を含む、例えばヘアピンまたはフライパンハンドル構造を形成する単一のRNA分子から形成されていてもよい。そのような場合、鎖という用語は、同一RNA分子の別の領域に相補的なRNA分子の領域の1つを指す。哺乳動物細胞では、長いdsiRNA剤によってインターフェロン応答が誘導されることがあり、それがしばしば有害であるが、短いdsiRNA剤は、インターフェロン応答を、少なくとも細胞および/または宿主に有害となる程度までには誘導しないマンシュエルManche,L.ら、Mol.CellBiol.1992年、第12巻、5238頁;リーエスビーLee,SB、エステバンエムEsteban,M、Virology、1994年、第199巻、491頁;キャステリジェーシーCastelli,JCら、J.Exp.Med.1997年、第186巻、967頁;チェンエックスZheng、X.、ベビラクアピーシーBevilacqua,PC、RNA、2004年、第10巻、1934頁;ハイデルHeidelら、NatureBiotechn.、2004年、第22巻、1579頁。本発明のiRNA剤は、十分に短い分子を含有しており、それらは正常な哺乳動物細胞で有害な非特異的インターフェロン応答を誘発しない。したがって、対象へのiRNA剤組成物例えば本明細書に記載の通り製剤化されたものの投与を用いて、インターフェロン応答を回避しながら、上記対象に含まれているMLL-AF4融合発現細胞におけるMLL-AF4融合遺伝子の発現をサイレンシングすることができる。十分に短くて、有害なインターフェロン応答を誘発しない分子を、本明細書では、siRNA剤またはsiRNAと称する。siRNA剤またはsiRNAは、本明細書で使用される場合、十分に短くて、ヒト細胞で有害なインターフェロン応答を誘導しないiRNA剤、例えばdsiRNA剤を指し、それは例えば60ヌクレオチド対未満、好ましくは50、40、または30ヌクレオチド対未満の2本鎖領域を有する。dsiRNA剤およびsiRNA剤を含めた、本明細書に記載の単離されたiRNA剤は、例えばRNA分解によるMLL-AF4融合遺伝子のサイレンシングを媒介することができる。便宜のために、そのようなRNAは、本明細書では、サイレンシングされるRNAとも称される。そのような遺伝子は、標的遺伝子とも称される。サイレンシングされるRNAは、例えば白血病細胞のような細胞に対して内因性であるMLL-AF4融合遺伝子の遺伝子産物であることが好ましい。本明細書で使用される場合、RNAiを媒介するという用語は、薬剤が標的遺伝子を配列特異的な様式でサイレンシングする能力を指す。標的遺伝子をサイレンシングするとは、それによって、上記薬剤に接触していないときに標的遺伝子の特定の産物を含有および/または分泌する細胞が、上記薬剤に接触しているときに、上記薬剤に接触していない同様な細胞と比較して、そのような遺伝子産物を少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、または90少なく含有および/または分泌するであろう過程を意味する。標的遺伝子のそのような産物は、例えば、メッセンジャーRNAmRNA、タンパク質、または調節エレメントであり得る。本明細書で使用される場合、相補的という用語は、本発明の化合物と標的RNA分子、例えばMLL-AF4mRNA分子との間で安定かつ特異的な結合が生じるのに十分な程度の相補性を示すのに使用される。特異的な結合は、特異的な結合が望ましい条件下で、すなわちインビボ試験または治療処置の場合には生理条件下で、あるいはインビトロ試験の場合では同試験が実施される条件下で、非標的配列へのオリゴマー化合物の非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性を必要とする。非標的配列は、通常、少なくとも4ヌクレオチドの相違を有する。本明細書で使用される場合、iRNA剤が標的RNA、例えば標的mRNA例えば標的MLL-AF4mRNAに十分に相補的であるのは、上記iRNA剤によって、細胞内での、上記標的RNAによってコードされたタンパク質の産生が減少する場合である。上記iRNA剤は、標的RNAに正確に相補的サブユニットを含むSRMSを除くであってもよく、例えば上記標的RNAと上記iRNA剤とがアニールするものでもよい。正確に相補的な領域では、ワトソンクリック塩基対のみでハイブリット形成されていることが好ましい。十分に相補的なiRNA剤は、標的MLL-AF4RNAに正確に相補的な内部領域例えば少なくとも10ヌクレオチドを含み得る。さらに、一部の実施形態では、上記iRNA剤が単一ヌクレオチドの相違を特異的に識別する。この場合、上記iRNA剤は、単一ヌクレオチド相違の例えば7ヌクレオチド以内の領域で正確な相補性が存在する場合にのみRNAiを媒介する。好ましいiRNA剤は、表1に示すセンス配列およびアンチセンス配列に基づいているか、もしくはそれからなるか、もしくはそれを含むであろう。本明細書での使用において、本質的には同一は、第2のヌクレオチド配列と比較して第1のヌクレオチド配列に関して使用される場合、最大1、2、または3ヌクレオチドまでの置換例えばアデノシンがウラシルで置換されているを除いて、第1のヌクレオチド配列が第2のヌクレオチド配列に同一であることを意味する。培養ヒトSEM細胞でMLL-AF4発現を阻害する能力を本質的に保持しているということは、ヌクレオチドの欠失、添加または置換によって、表1のiRNA剤のうちの1つに同一ではないが、それに由来するiRNA剤に関して本明細書で使用される場合、それが由来した表1のiRNA剤との比較における、得られたiRNA剤の阻害活性の低下が20阻害以下であることを意味する。例えば、培養ヒトSEM細胞中に存在するMLL-AF4mRNAの量を40低下させる、表1のiRNA剤に由来するiRNA剤は、培養ヒトSEM細胞中でMLL-AF4発現を阻害する能力を本質的に保持しているものとみなされるためには、それ自体が、培養ヒトSEM細胞中に存在するMLL-AF4mRNAの量を少なくとも40低下させなければならない。選択的に、本発明に特徴的なiRNA剤は、培養ヒトSEM細胞中に存在するMLL-AF4mRNAの量を少なくとも40低下させるものでもよい。本明細書で使用される場合、対象は、MLL-AF4融合タンパク質発現によって媒介された障害の治療を受けている哺乳類生物を指す。対象は、ウシ、ウマ、マウス、ラット、イヌ、ブタ、ヤギ、または霊長類など、いかなる哺乳動物でもよい。好ましい実施形態では、対象はヒトである。本明細書で使用される場合、MLL-AF4融合発現に関連した障害は、1、MLL-AF4融合タンパク質の存在によって一部媒介され、かつ2存在している、MLL-AF4融合タンパク質のレベルを低減することによって結果に影響を与えることができるいかなる生物学的または病理学的状態も指す。MLL-AF4融合発現に関連した特定の障害について以下に述べる。MLL-AF4誤発現に関連した障害MLL-AF4融合産物は、乳児急性リンパ芽球性白血病のような急性リンパ芽球性白血病ALLに関連していた。ALLに罹患した患者は典型的には顕著な白血球の増加と複数の器官における髄外疾患とを呈し、化学療法に対する応答不良であり、予後不良である。iRNA剤の設計および選択本発明は、iRNA剤でインキュベートした後の培養細胞における、インビトロでのMLL-AF4融合遺伝子サイレンシングの実証、およびその結果である増殖抑制効果に基づいている。配列情報と望ましい特徴とに基づいて、iRNA剤を合理的に設計することができる。例えば、候補となる2本鎖の相対的融解温度に従ってiRNA剤を設計することができる。通常、2本鎖は、アンチセンス鎖の3’末端より、アンチセンス鎖の5’末端で、より低い融解温度を有するはずである。また、例えば、標的遺伝子として働くであろう遺伝子の遺伝子歩行分析を行うことによっても、候補となるiRNA剤を設計することができる。転写領域のすべてまたは一部に相当する、オーバーラップ、隣接、または近接した候補薬剤を生成させ、試験することができる。各iRNA剤を、標的遺伝子発現を下方制御する能力に関して試験および評価することができる下記、候補となるiRNA剤の評価を参照。以下に示す実施例1は、遺伝子歩行のアプローチをヒトMLL-AF4mRNAの融合部位を標的とする潜在的なiRNA剤を評価するために使用したことを示す。与えられた結果に基づいて、表1はMLL-AF4を標的とする活性iRNA剤を提供している。以下の実施例に示されるように、表1の薬剤番号1乃至12のiRNA剤は、これらの薬剤と共にインキュベーションした後の培養MLL-AF4融合遺伝子発現細胞中に存在するMLL-AF4融合mRNAの量が、上記薬剤と共にインキュベートされていない細胞と比較して40超低減するという長所および驚くべき能力を有する。これらの結果に基づいて、本発明は、表1に示されている薬剤のセンス鎖配列における少なくとも15の連続したヌクレオチドを有するセンス鎖と、表1に薬剤番号1-12にて示されている薬剤のアンチセンス鎖配列における少なくとも15の連続したヌクレオチドを有するアンチセンス鎖とを含有するiRNA剤を特に提供する。以下の実施例1に示したiRNA剤は、薬剤番号2のものを除いて、長さ21ヌクレオチドのセンス鎖と、長さ23ヌクレオチドのアンチセンス鎖とで構成されている。しかしながら、これらの長さは潜在的に最適であり得るが、上記iRNA剤はこれらの長さに限定されない。長さが特定の範囲内である場合には、有効性は鎖の長さより、むしろヌクレオチド配列の関数であるので、当業者は、より短いiRNA剤またはより長いiRNA剤も同様に有効であり得ることを十分に認識している。例えば、ヤンディYang,D.らPNAS、2002年、第99巻、9942~9947頁は、長さが21塩基対と30塩基対との間にあるiRNA剤が同様な効力を有することを実証した。他では、長さ約15塩基対にまで短くしたiRNA剤による効果的な遺伝子サイレンシングが示されているバイロムダブリュ.エム.Byrom,W.M.ら、InducingRNAiwithsiRNACocktailsGeneratedbyRNaseIII、TechNotes、第101巻、アンビオン社Ambion,Inc.、米国テキサス州オースティンAustin所在。したがって、表1に提示した配列の1つに由来するiRNA剤を産生するために、表1に提示した配列から、15~22ヌクレオチドの間の部分配列を選択することが可能であり、かつ本発明で企図されている。代替的に、表1に提示した配列のうちの1つに1個または数個のヌクレオチドを添加してもよい。この場合、必須ではないが、添加されたヌクレオチドが標的遺伝子、例えばMLL-AF4融合遺伝子のそれぞれの配列に相補的となるような様式が好ましい。このようにして派生するすべてのiRNA剤もそれらが培養ヒトSEM細胞におけるMLL-AF4発現を阻害する能力を本質的に保持するという場合には、本発明のiRNA剤に含まれる。iRNA剤のアンチセンス鎖は、長さが14、15、16、17、18、19、25、29、40または50ヌクレオチド以上であるべきである。上記アンチセンス鎖は、長さが60、50、40、または30ヌクレオチド以下であるべきである。好ましい長さの範囲は、15~30、17~25、19~23、および19~21ヌクレオチドである。iRNA剤のセンス鎖は、長さが14、15、16、17、18、19、25、29、40または50ヌクレオチド以上であるべきである。上記センス鎖は、長さが60、50、40または30ヌクレオチド以下であるべきである。好ましい長さの範囲は、15~30、17~25、19~23、および19~21ヌクレオチドである。iRNA剤の2本鎖部分は、長さが15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、29、40または50ヌクレオチド対以上であるべきである。上記2本鎖部分は、長さが60、50、40または30ヌクレオチド対以下であるべきである。好ましい長さの範囲は、15~30、17~25、19~23、および19~21ヌクレオチド対である。通常、本発明のiRNA剤は、MLL-AF4融合遺伝子と十分な相補性を有する領域を含み、上記iRNA剤またはその断片がMLL-AF4融合遺伝子の下方制御を媒介できる十分なヌクレオチドの長さを有する。表1のiRNA剤のアンチセンス鎖は、ヒトMLL-AF4融合遺伝子のmRNA配列に完全に相補的であり、それらのセンス鎖は、上記アンチセンス鎖上の2つの3’末端ヌクレオチドを除いて、上記アンチセンス鎖に完全に相補的である。しかしながら、上記iRNA剤と上記標的との間に完全な相補性が存在している必要はなく、但し、それらの対応性は、上記iRNA剤またはそれの切断産物が、例えばMLL-AF4mRNAのRNAi切断による配列特異的なサイレンシングを誘導するのを可能にするのに十分でなければならない。したがって、本発明のiRNA剤には、培養ヒトSEM細胞におけるMLL-AF4発現を阻害する能力を本質的に保持しながら、それぞれ、鎖当たり1、2、または3つ以下のヌクレオチドが他のヌクレオチドで置換されている例えばアデノシンがウラシルで置換されていることを除いて、下記に定義する通り、それぞれが、表1の配列の1つに本質的に同一である少なくとも16、17または18ヌクレオチドの配列からなるセンス鎖およびアンチセンス鎖からなる薬剤が含まれる。したがって、これらの薬剤は、表1の配列の1つに同一であるが、標的MLL-AF4mRNA配列に関して、もしくはセンス鎖とアンチセンス鎖との間に、1、2または3塩基のミスマッチが導入されている少なくとも15ヌクレオチドを有するものであろう。標的MLL-AF4mRNA配列とのミスマッチ、特にアンチセンス鎖におけるミスマッチは、末端領域で最もよく許容され、存在する場合には、1箇所または複数の端末領域内、例えば5’および/または3’末端の6、5、4、または3ヌクレオチド以内にあることが好ましく、センス鎖の5’末端またはアンチセンス鎖の3’末端の6、5、4、または3ヌクレオチド以内にあることが最も好ましい。上記センス鎖は、分子の全体的な2本鎖特性を維持するのに十分なだけアンチセンス鎖に相補的であればよい。上記センス鎖およびアンチセンス鎖は、上記iRNA剤が、その分子の一端または両端に単一鎖または不対領域を含有するように選択されることが好ましい。したがって、iRNA剤は、好ましくは突出部分、例えば1または2つの5’または3’突出部分、但し好ましくは2~3ヌクレオチドの3’突出部分1つを含有するように対合したセンス鎖およびアンチセンス鎖を含有する。ほとんどの実施形態は、3’突出部分を有するであろう。好ましいsiRNA剤は、上記iRNA剤の各末端に長さが1~4ヌクレオチド、好ましくは2または3ヌクレオチドの1本鎖の突出部分、好ましくは3’突出部分を有するであろう。上記突出部分は、一方の鎖がもう一方より長い結果、または同じ長さの2本の鎖がずれている結果であり得る。5’末端はリン酸化されていることが好ましい。2本鎖領域の好ましい長さは、15から30ヌクレオチドの間、最も好ましくは18、19、20、21、22および23ヌクレオチドの長さ、例えば上記に論じたsiRNA剤の範囲である。siRNA剤は、長いdsRNAからの天然Dicer調製物に長さおよび構造が類似したものでよい。siRNA剤の2本の鎖が、例えば共有結合によって、連結されている実施形態も含まれる。ヘアピン構造、または必要な2本鎖領域と、好ましくは3’突出部分とを提供する他の1本鎖構造も本発明に包含される。候補となるiRNA剤の評価候補となるiRNA剤を、それが標的遺伝子発現を下方制御する能力に関して評価することができる。例えば、候補となるiRNA剤を用意し、標的遺伝子、例えばMLL-AF4融合遺伝子を内因的に発現するか、あるいはMLL-AF4融合遺伝子をそれから発現することができるコンストラクトでトランスフェクションされていることによって発現する細胞、例えばSEM細胞に接触させることができる。上記候補となるiRNA剤との接触の前および後の標的遺伝子発現のレベルを、例えばmRNAまたはタンパク質レベルで比較することができる。標的遺伝子から発現されたRNAまたはタンパク質の量が、上記iRNA剤と接触した後に低下していると判定された場合、上記iRNA剤が標的遺伝子発現を下方制御すると結論付けることができる。細胞中の標的MLL-AF4RNAまたはMLL-AF4タンパク質のレベルは、いかなる望ましい方法でも測定できる。例えば、標的RNAのレベルは、ノーザンブロット解析、逆転写連結ポリメラーゼ連鎖反応RT-PCR、またはRNアーゼプロテクションアッセイで測定することができる。タンパク質のレベルは、例えば、ウェスタンブロット解析または免疫蛍光によって測定することができる。iRNA剤の安定性試験、修飾、および再試験候補となるiRNA剤を、そのiRNA剤が対象の体内に導入された際などの安定性、例えばエンドヌクレアーゼまたはエクソヌクレアーゼによる切断に対する感受性に関して評価することができる。同方法は、修飾、特に切断、例えば対象の体内に存在する成分による切断の影響を受けやすい部位を同定する方法を利用することができる。切断の影響を受けやすい部位が同定された場合、例えば切断部位への2’修飾、例えば2’-O-メチル基の導入によって、上記潜在的切断部位が切断に抵抗性を有するように作製された、さらなるiRNA剤を設計および/または合成することができる。このさらなるiRNA剤を、安定性に関して再試験することができ、あるiRNA剤が望ましい安定性を示すことが見出されるまで、この工程を繰り返すことができる。インビボ試験MLL-AF4遺伝子発現を阻害できるものとして同定されたiRNA剤を、動物モデル例えばマウスまたはラットなどの哺乳動物中でのインビボでの機能に関して試験することができる。例えば、上記iRNA剤を動物、例えばMLL-AF4融合遺伝子を発現するように作製された動物に投与して、その生体内分布、安定性、およびそれがMLL-AF4遺伝子発現を阻害する能力に関して評価することができる。上記iRNA剤は、注射などによって標的組織に直接投与することができ、あるいは上記iRNA剤を、それがヒトに投与されるのと同じ様に動物モデルに投与することもできる。上記iRNA剤を細胞内分布に関して評価することもできる。この評価には、上記iRNA剤が細胞内に摂取されたかどうかの判定も含めることができる。この評価には、上記iRNA剤の安定性例えば半減期の測定も含めることができる。iRNA剤のインビボ評価は、追跡可能なマーカー例えば、フルオレセインなどの蛍光マーカー:35S、32P、33P、もしくは3Hなどの放射性標識;金粒子;または免疫組織化学用抗原粒子に結合したiRNA剤の使用によって容易に行うことができる。上記iRNA剤を、それがMLL-AF4遺伝子発現を下方制御する能力に関して評価することができる。インビボでのMLL-AF4遺伝子発現のレベルは、例えば、insituハイブリダイゼーション、または上記iRNA剤への組織の曝露の前および後における同組織からのRNAの単離によって測定することができる。組織を採取するために動物を屠殺する必要がある場合、未処置のコントロール動物が比較対象となろう。標的MLL-AF4mRNAは、限定されるものではないが、RT-PCR、ノーザンブロット、分岐DNAアッセイ、またはRNアーゼプロテクションアッセイを含めたいかなる望ましい方法でも検出することができる。代替的又は付随的に、上記iRNA剤で処理された組織抽出物のウェスタンブロット解析を行うことによって、MLL-AF4遺伝子発現をモニタリングすることもできる。iRNA化学ここでは、RNAiを媒介して、MLL-AF4の発現を阻害する単離されたiRNA剤、例えばdsRNA剤について述べる。ここで論じるRNA剤には、他には無修飾のRNAに加えて、例えば効力を向上させるために修飾されたRNA、およびヌクレオチド代替物のポリマーも含まれる。無修飾のRNAは、その中で、核酸成分、すなわち、糖、塩基、およびリン酸部分が天然に存在しているもの、好ましくはヒト体内に生来的に存在しているものと同じであるか、もしくは本質的に同じである分子を指す。当技術分野は、まれであるか、もしくは一般的でないが、天然に存在するRNAを修飾RNAと称することがある。例えば、リンバッハLimbachら1994年、NucleicAcidsRes.第22巻、2183~2196頁を参照されたい。しばしば修飾RNAと称される明らかに、それらが通常は転写後修飾の結果であるため、そのようなまれであるか、もしくは一般的でないRNAは、本明細書で使用される場合、無修飾RNAという用語の範囲内にある。本明細書で使用される場合、修飾RNAは、その中で、1つまたは複数の核酸成分、すなわち、糖、塩基、およびリン酸部分が、天然に存在しているもの、好ましくはヒト体内に生来的に存在しているものと異なる分子を指す。それらは修飾RNAと称されるが、それらには修飾によりRNAではない分子も当然ながら含まれる。ヌクレオチド代替物は、その中で、ハイブリダイゼーションが実質的にリボリン酸骨格で見られるものと類似するように、それらの塩基の正しい空間的関係での提示が可能となっている非リボリン酸骨格構造物、例えばリボリン酸骨格の非荷電模倣体で、リボリン酸骨格が置換されている分子である。上記のすべての例が本明細書に論じられている。本明細書に記載の修飾は、本明細書に記載のいかなる2本鎖RNAおよびRNA様分子、例えばiRNA剤にも組み入れら得る。上記修飾は、iRNA剤のアンチセンス鎖およびセンス鎖の一方または両方を修飾することが望ましい。核酸が重合体のサブユニットまたは単量体である場合には、下記の修飾の多くは核酸中で反復される位置で起こり、例えば、塩基もしくはリン酸部分、またはリン酸部分の非結合性Oの修飾である。一部の場合には、上記修飾が核酸中の対象となる位置のすべてで起こるであろうが、多くの場合、そして実際にはほとんどの場合には、そうならないであろう。一例として、修飾は、3’または5’末端位置でのみ起こることもあり、あるいは末端領域、例えば鎖の末端ヌクレオチドの位置または最終2、3、4、5、または10ヌクレオチドでのみ起こることもある。修飾は、2本領域に起こっても、1本鎖領域に起こっても、あるいはそれら両方に起こってもよい。例えば、非結合性Oの位置でのホスホロチオエート修飾は、一方または両方の末端で起こることも、あるいは末端領域、例えば鎖の末端ヌクレオチドの位置または最終2、3、4、5、または10ヌクレオチドでのみ起こることも、あるいは2本鎖および1本鎖領域、特に末端で起こることもある。同様に、修飾は、センス鎖で起こることも、アンチセンス鎖で起こることも、それら両方で起こることもある。一部の場合には、センス鎖およびアンチセンス鎖が同じ修飾または同じクラスの修飾を有するであろう。しかしながら、他の場合には、センス鎖およびアンチセンス鎖は異なった修飾を有するであろう。例えば、一部の場合には、一方の鎖、例えばセンス鎖のみを修飾することが望ましい場合がある。iRNA剤に修飾を導入する2つの主要な目的は、生物学的環境における分解に対するそれらの安定化、および下記に詳細に論じる薬理学的特性、例えば薬動力学的特性の改良である。iRNA剤の糖、塩基、または骨格への他の適当な修飾は、共有されている2004年1月16日出願の国際出願第PCT/US2004/01193号パンフレットに記載されている。iRNA剤は、共有されている2004年4月16日出願の国際出願第PCT/US2004/011822号パンフレットに記載の塩基のような天然に存在しない塩基を含有することもできる。iRNA剤は、非糖質環状担体分子のような天然に存在しない糖を含むこともできる。iRNA剤で使用する天然に存在しない糖の例示的特性は、共有されている2003年4月16日出願の国際出願第PCT/US2004/11829号パンフレットに記載されている。iRNA剤は、ヌクレアーゼ抵抗性の増強に有用なヌクレオチド間結合例えばキラルホスホロチオエート結合を含有できる。付随的に、又は代替的に、ヌクレアーゼ抵抗性を増強させるために、iRNA剤にリボース摸倣体を含有させることができる。ヌクレアーゼ抵抗性を増強させるための例示的ヌクレオチド間結合およびリボース模倣体は、共有されている2004年3月8日出願の国際出願第PCT/US2004/07070号パンフレットに記載されている。iRNA剤は、リガンド結合単量体サブユニットおよびオリゴヌクレオチド合成用の単量体を含有できる。例示的な単量体は、共有されている2004年8月10日出願の米国特許出願第10/916185号明細書に記載されている。iRNA剤は、共有されている2004年3月8日出願の国際出願第PCT/US2004/07070号パンフレットに記載されているようなZXY構造を有することができる。iRNA剤は、両親媒性部分と複合体形成され得る。iRNA剤と共に使用するための例示的な両親媒性部分は、共有されている2004年3月8日出願の国際出願第PCT/US2004/07070号パンフレットに記載されている。iRNA剤のセンス配列及びアンチセンス配列はパリンドロームであり得る。パリンドロームiRNA剤の例示的な特徴は、共有されている2004年3月8日出願の国際出願第PCT/US2004/07070号パンフレットに記載されている。別の実施形態では、iRNA剤は、モジュール複合体の特性を有する送達薬剤と複合体形成され得る。この複合体は、a濃縮剤例えば、核酸を、例えばイオンまたは静電気相互作用を介して、誘引、例えば結合できる薬剤;b融合誘導剤例えば、細胞膜に融合し、かつ/またはそれを通って輸送される性能を有する薬剤:および、c標的化化学基、例えば細胞または組織標的化剤、例えば特定の細胞型に結合するレクチン、糖タンパク、脂質、またはタンパク質例えば抗体、のうちの1つまたは複数好ましくは2つ以上、より好ましくは3つすべてに結合される担体物質を含み得る。送達物質と複合体形成されるiRNA剤は、共有されている2004年3月8日出願の国際出願第PCT/US2004/07070号パンフレットに記載されている。iRNA剤は、iRNA2本鎖のセンス配列とアンチセンス配列との間などに、非標準的な対合を備え得る。非標準的なiRNA剤の例示的特徴は、共有されている2004年3月8日出願の国際出願第PCT/US2004/07070号パンフレットに記載されている。ヌクレアーゼ抵抗性の強化iRNA剤、例えばMLL-AF4融合体を標的とするiRNA剤は、同薬剤が有するヌクレアーゼ抵抗性を強化することができる。抵抗性を強化する方法の1つは、共有されている2004年5月4日に出願の米国特許仮出願第60/559917号明細書に記載の通り、切断部位を同定し、そのような部位を修飾して、切断を阻害することである。例えば、ジヌクレオチド5’-UA-3’、5’-UG-3’、5’-CA-3’、5’-UU-3’、又は5’-CC-3’を切断部位として利用できる。特定の実施形態では、iRNA剤のすべてのピリミジンが、2’修飾を有し、そのため、そのiRNA剤は、エンドヌクレアーゼに対する抵抗性が強化される。ヌクレアーゼ抵抗性の強化は、例えば、共有されている2004年5月27日出願の米国特許仮出願第60/574744号明細書に記載の通り、ウリジンが2’修飾ヌクレオチドである、少なくとも1つの5’-ウリジン-アデニン-3’5’-UA-3’ジヌクレオチド;5’-ウリジンが2’修飾ヌクレオチドである、少なくとも1つの5’-ウリジン-グアニン-3’5’-UG-3’ジヌクレオチド;5’-シチジンが2’修飾ヌクレオチドである、少なくとも1つの5’-シチジン-アデニン-3’5’-CA-3’ジヌクレオチド;5’-ウリジンが2’修飾ヌクレオチドである、少なくとも1つの5’-ウリジン-ウリジン-3’5’-UU-3’ジヌクレオチド;または5’-シチジンが2’修飾ヌクレオチドである、少なくとも1つの5’-シチジン-シチジン-3’5’-CC-3’ジヌクレオチドをもたらす5’ヌクレオチド修飾を行うことによって実現できる。上記iRNA剤は、少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、または少なくとも5つのそのようなジヌクレオチドを含み得る。2’修飾ヌクレオチドは、例えば2’修飾されたリボース単位を含み、例えば2’ヒドロキシ基OHは、種々の異なったオキシまたはデオキシ置換基で修飾または置換され得る。オキシ-2’ヒドロキシ基修飾の例には、アルコキシもしくはアリールオキシOR、例えばR=H、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、または糖;ポリエチレングリコールPEG、すなわちOCH2CH2OnCH2CH2OR;例えばメチレン架橋によって2’ヒドロキシ基が同じリボース糖の4’炭素に連結されているロックト核酸LNA、O-AMINE、およびアミノアルコキシ、すなわちOCH2nAMINE例えば、AMINE=NH2;アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、またはジへテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノが含まれる。メトキシエチル基MOEOCH2CH2OCH3、PEG誘導体のみを含有するオリゴヌクレオチドは、強固なホスホロチオエート修飾で修飾されたものに匹敵するヌクレアーゼ安定性を示すことは、注目に値する。デオキシ修飾には、水素すなわち、デオキシリボース糖、これらは部分的dsRNAの突出部分に特に重要である;ハロ例えばフルオロ;アミノ例えば、NH2;アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジへテロアリールアミノ、またはアミノ酸;NHCH2CH2NHnCH2CH2-AMINEAMINE=NH2;アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、またはジへテロアリールアミノ、-NHCORR=アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたは糖、シアノ;メルカプト;アルキル-チオ-アルキル:チオアルコキシ;及びアルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、およびアルキニルが含まれ、これらは、選択的に、例えばアミノ官能基で置換することができる。好ましい置換基は、2’-メトキシエチル、2’-OCH3、2’-O-アリル、2’-C-アリル、および2’-フルオロである。オリゴヌクレオチド骨格におけるフラノース糖の包含も、エンドヌクレオチド鎖切断を低減できる。iRNA剤は、さらに3’陽イオン基を包含させることによって、あるいは3’-3’連結を伴う3’末端でのヌクレオシドの反転によって修飾され得る。別の代替法では、アミノアルキル基、例えば、3’C5-アミノアルキルdTで3’末端をブロックすることができる。他の3’結合体も、3’-5’エキソヌクレオチド分解性の切断を阻害できる。理論に拘泥するものではないが、ナプロキセンまたはイブプロフェンなどの3’結合体は、エクソヌクレアーゼがオリゴヌクレオチドの3’末端に結合するのを立体的にブロックすることによって、エキソヌレオチド分解性の切断を阻害し得る。小さなアルキル鎖、アリール基、または複素環式結合もしくは修飾糖D-リボース、デオキシリボース、グルコースなどでさえも、3’-5’エクソヌクレアーゼをブロックすることができる。ヌクレオチド分解性の切断はまた、リン酸リンカーの修飾、例えばフォスフォロチオエート結合を導入することにより阻害され得る。従って、好ましいiRNA剤は、通常は酸素が占めている架橋部以外の位置にヘテロ原子を含有する修飾リン酸基の特定のキラル形に関して豊富または純粋であるヌクレオチド2量体を含有する。ヘテロ原子は、S、Se、Nr2又はBr3であり得る。へテロ原子がSである場合、Sp連結に関して豊富であるか、純粋なキラルであることが好ましい。豊富であるとは、少なくとも70、80、90、95、または99が好ましい形態であることを意味する。修飾リン酸結合は、5’-又は3’-末端、好ましくは、iRNA剤の5’-末端の位置付近に導入された場合エキソヌクレオチド分解性の切断を阻害する上においては特に効果的である。5’-結合は、5’-3’-エキソヌクレオレチド分解性の切断も阻害する。理論に拘泥するものではないが、ナプロキセンまたはイブプロフェンなどの5’結合体は、エクソヌクレアーゼがオリゴヌクレオチドの5’末端に結合するのを立体的にブロックすることによって、エキソヌクレオレチド分解性の切断を阻害し得る。小さなアルキル鎖、アリール基、または複素環式結合もしくは修飾糖D-リボース、デオキシリボース、グルコースなどでさえも、3’-5’-エクソヌクレアーゼをブロックすることができる。iRNA剤は、2本鎖iRNA剤が少なくとも一方の末端に1本鎖ヌクレオチド突出部分を含有している場合に、ヌクレアーゼに対する抵抗性を増大させることができる。好ましい実施形態では、上記ヌクレオチド突出部分は、1乃至4個の、好ましくは2乃至3個の不対ヌクレオチドを含有する。好ましい実施形態では、末端ヌクレオチド対に直接隣接している上記1本鎖の突出部分の不対ヌクレオチドがプリン塩基を含有し、上記末端ヌクレオチド対がG-C対であるか、もしくは相補的な最終4ヌクレオチド対のうち少なくとも2対がG-C対である。さらに別の実施形態では、上記ヌクレオチド突出部分は、1または2つの不対ヌクレオチドを有することがあり、例示的実施形態では、上記ヌクレオチド突出部分が5’-GC-3’である。好ましい実施形態では、上記ヌクレオチド突出部分が、上記アンチセンス鎖の3’端にある。一実施形態では、上記iRNA剤は、2ntの突出部分5’-GC-3’が形成されるように、上記アンチセンス鎖の3’末端に5’-CGC-3’というモチーフを含有する。したがって、iRNA剤は、例えば対象の体内に存在するヌクレアーゼ、例えば、エンドヌクレアーゼまたはエクソヌクレアーゼによる分解を阻害するように修飾された単量体を含有できる。これらの単量体は、本明細書ではNRMすなわちヌクレアーゼ抵抗性促進単量体と称され、対応する修飾は、NRM修飾と称される。多くの場合、これらの修飾は、iRNA剤の他の特性、例えばタンパク質、例えば運搬体タンパク質、例えば血清アルブミンまたはRISCのメンバー、と相互作用する能力、または第1の配列および第2の配列の、お互いと2本鎖を形成する能力、もしくは別の配列、例えば標的分子と2本鎖を形成する能力、も調節するであろう。1つまたは複数の異なったNRM修飾を、iRNA剤の中、または、iRNA剤の配列の中に導入することができる。1つの配列中またはiRNA剤中で1つのNRM修飾を複数回用いることができる。NRM修飾には、末端にのみ配置できる一部のものも、いかなる位置にも配置できる他のものも含めることができる。一部のNRM修飾は、ハイブリダイゼーションを抑制する可能性があり、したがって、それらは末端領域のみで使用するのが好ましく、それらを切断部位、または対象の配列もしくは遺伝子を標的とする配列、特にアンチセンス鎖上の切断領域にて用いないことが好ましい。それらは、上記dsiRNA剤の2つの鎖の間で十分なハイブリダイゼーションが維持される場合に、センス鎖の任意の場所にて使用できる。一部の実施形態では、NRMが標的外のサイレンシングを最小にし得るので、NRMを切断部位またはセンス鎖の切断領域に配置するのが望ましい。ほとんどの場合、NRM修飾は、それらがセンス鎖に含まれるか、もしくはアンチセンス鎖に含まれるかに応じて異なって分配されるであろう。アンチセンス鎖に含まれる場合には、エンドヌクレアーゼ切断を妨害または阻害する修飾は、RISC媒介の切断を受ける領域、例えば切断部位または切断領域に挿入されるべきでない本願明細書に援用する、エルバシルElbashirら、2001年、GenesandDev.第15巻、188頁に記載されている。標的の切断は、20または21ntのアンチセンス鎖のほぼ中央、すなわち上記アンチセンス鎖に相補的な標的mRNAの最初のヌクレオチドの上流のほぼ10または11ヌクレオチドで起こる。本明細書で使用される場合、切断部位は、標的またはそれにハイブリダイズするiRNA剤の鎖における、切断部位のいずれかの側のヌクレオチドを指す。切断領域は、いずれかの方向における、上記切断部位の1、2、または3ヌクレオチド以内にあるヌクレオチドを意味する。そのような修飾は、末端領域、例えばセンス鎖またはアンチセンス鎖の末端位置、または上記末端の2、3、4、もしくは5番目の位置を含めた位置に導入することができる。テザーリガンド薬理学的特性を含めたiRNA剤の特性は、リガンド、例えば、テザーリガンドを導入することによって、影響を受け、調整され得る。多種多様な構成要素、例えば、リガンドを、iRNA剤、例えば、リガンド結合単量体サブユニットの担体に連結することができる。リガンド結合単量体サブユニットの場合について以下にその例を説明するが、これは単に好適な例に過ぎず、同構成要素はiRNA剤のその他の点にも結合することができる。好ましい部分は、干渉テザーtetherを介して直接的または間接的に担体に、好ましくは共有結合するリガンドである。好ましい実施形態では、このリガンドは干渉テザーを介して担体に結合される。リガンド結合単量体が伸長する鎖に取り込まれるとき、リガンドまたはテザーリガンドは、リガンド結合単量体上に存在し得る。いくつかの実施形態では、このリガンドは、前駆体リガンド結合単量体サブユニットが伸長する鎖に取り込まれた後で、同前駆体リガンド結合単量体サブユニットに取り込まれる。例えば、TAP-CH2nNH2などのアミノ末端テザーなどを有する単量体は、伸長するセンスまたはアンチセンス鎖に取り込まれてよい。その後の操作において、すなわち、前駆体単量体サブユニットが鎖に取り込まれた後で、求電子基、例えば、ペンタフルオロフェニルエステルまたはアルデヒド基を有するリガンドは、リガンドの求電子基と前駆体リガンド結合単量体サブユニットテザーの末端求核基との結合によって、その後前駆体リガンド結合単量体に結合され得る。好ましい実施形態では、リガンドは、取り込まれたiRNA剤の分布、標的化または寿命を改変する。好ましい実施形態では、リガンドは、例えば、このようなリガンドを備えていない種と比較して、選択した標的、例えば、分子、細胞または細胞種、細胞区画もしくは器官区画などの区画、組織、器官または身体の領域に対する親和性を増強する。好ましいリガンドは、輸送、ハイブリダイゼーションおよび特異性の特性を改善することができ、得られた天然もしくは修飾オリゴリボヌクレオチド、または本明細書で説明した単量体および/または天然もしくは修飾リボヌクレオチドの任意の組合せを含むポリマー分子のヌクレアーゼ抵抗性も改善することができる。一般的に、リガンドは、例えば、取り込みを高めるための治療調節剤、例えば、分布をモニタリングするための診断用化合物もしくはレポーター群、架橋剤、ヌクレアーゼ抵抗性を付与する部分および天然もしくは通常にはない核塩基を含むことができる。一般的な例には、脂溶性分子、脂質、レクチン、ステロイド例えば、ウバオール、ヘシゲニンhecigenin、ジオスゲニン、テルペン例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質結合剤、インテグリン標的化分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミンおよびペプチド模倣体が含まれる。リガンドは、天然物質または組換えもしくは合成分子、例えば、合成ポリアミノ酸などの合成ポリマーであり得る。ポリアミノ酸の例には、ポリリジンPLL、ポリL-アスパラギン酸、ポリL-グルタミン酸、スチレン-無水マレイン酸コポリマー、ポリL-ラクチド-コ-グリコリドコポリマー、ジビニルエーテル-無水マレイン酸コポリマー、N-2-ヒドロキシプロピルメタクリルアミドコポリマーHMPA、ポリエチレングリコールPEG、ポリビニルアルコールPVA、ポリウレタン、ポリ2-エチルアクリル酸、N-イソプロピルアクリルアミドポリマーまたはポリホスファジンが含まれる。ポリアミンの例には、ポリエチレンイミン、ポリリジンPLL、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、シュードペプチドポリアミン、ペプチド様ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、陽イオン部分、例えば、陽イオン性脂質、陽イオン性ポルフィリン、ポリアミンの4級塩またはアルファヘリックスペプチドが含まれる。リガンドにはまた、標的化化学基、例えば、細胞または組織標的化剤、例えば、甲状腺刺激ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、サーファクタントタンパク質A、ムチン炭水化物、グリコシル化ポリアミノ酸、トランスフェリン、ビスホスホン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、またはRGDペプチドもしくはRGDペプチド模倣体が含まれる。リガンドは、例えば糖タンパク質、例えば低密度リポタンパク質LDLのようなリポタンパク質、ヒト血清アルブミンHSAのようなアルブミン、又はペプチドのようなタンパク質、コ-リガンドに対して特異的な親和性を有する分子、或いは癌細胞、内皮細胞又は骨細胞のような特定のタイプの細胞に結合する抗体のような抗体であり得る。リガンドはまた、ホルモン及びホルモン受容体を含み得る。それらはまた、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、N-アセチル-ガラクトサミン、N-アセチル-グルコサミン、多価マンノース又は多価フコースのような非ペプチド種を含み得る。リガンドは、例えばリポ多糖体、p38MAPキナーゼのアクチベータ又はNF-κBのアクチベータであり得る。リガンドは、例えば、細胞骨格を破壊することによって、例えば、細胞の微小管、微小繊維および/または中間径繊維を破壊することによって、細胞へのiRNA剤の取り込みを増加させることができる物質、例えば、薬剤であり得る。この薬剤は、例えば、タキソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャプラキノリドjaplakinolide、ラトランクリンA、ファロイジン、スウィンホライドA、インダノシンまたはミオセルビンmyoservinであり得る。一態様では、リガンドは脂質または脂質をベースにした分子である。このような脂質または脂質をベースにした分子は、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンHSAに結合することが好ましい。HSA結合リガンドは、標的組織、例えば、肝臓の実質細胞を含めた肝組織との結合体の分布を可能にする。HSAに結合できるその他の分子もリガンドとして使用できる。例えば、ネプロキシンneproxinまたはアスピリンを使用できる。脂質または脂質をベースにしたリガンドは、a結合体の分解に対する抵抗性を増強し、b標的細胞または細胞膜への標的化または輸送を増強し、および/またはc血清タンパク質、例えば、HSAへの結合を調節するために使用することができる。脂質をベースにしたリガンドは、標的組織に対する結合体の結合を調節するために、例えば、制御するために使用され得る。例えば、HSAに一層強力に結合する脂質または脂質をベースにしたリガンドは、腎臓を標的とする傾向が少なく、したがって、身体から排出される傾向が低い。HSAにあまり強く結合しない脂質または脂質をベースにしたリガンドは、結合体を腎臓に対する標的とするために使用することができる。好ましい実施形態では、脂質をベースにしたリガンドはHSAに結合する。これは、結合体が好ましくは腎臓以外の組織に分布するような十分な親和性で同HSAに結合することが好ましい。しかしながら、この親和性はHSAリガンドの結合が離れることできないほど強力ではないことが好ましい。別の態様では、リガンドは、標的細胞によって、例えば増殖細胞によって取り込まれる部分、例えば、ビタミンまたは栄養素である。これらは、例えば、悪性型または非悪性型の、例えば、癌細胞の、望ましくない細胞増殖を特徴とする障害を治療するために特に有用である。ビタミンの例には、ビタミンA、EおよびKが含まれる。その他のビタミンの例は、ビタミンB群、例えば、葉酸、B12、リボフラビン、ビオチン、ピリドキサールまたは癌細胞によって取り込まれるその他のビタミンもしくは栄養素である。別の態様では、リガンドは、細胞透過性薬剤、好ましくはヘリックス細胞透過性薬剤である。この薬剤は両親媒性であることが好ましい。薬剤の例は、tatまたはアンテナペディアなどのペプチドである。この薬剤がペプチドの場合、修飾可能であり、ペプチジル模倣体、反転異性体invertomer、非ペプチドまたは偽ペプチド結合が含まれ、Dアミノ酸も使用できる。ヘリックス剤は、好ましくは親油性相および疎油性相を有するアルファヘリックス剤であることが好ましい。5’-リン酸修飾好ましい実施形態では、iRNA剤は、5’がリン酸化されているか、または5’プライム末端にホスホリル類似体を含む。アンチセンス鎖の5’-リン酸修飾には、RISC媒介遺伝子サイレンシングに適合したものが含まれる。適切な修飾には、5’-モノホスファートHO2OP-O-5’;5’-ジホスファートHO2OP-O-PHOO-O-5’;5’-トリホスファートHO2OP-O-HOOP-O-PHOO-O-5’;5’-グアノシンキャップ7-メチル化または非メチル化7m-G-O-5’-HOOP-O-HOOP-O-PHOO-O-5’;5’-アデノシンキャップAppp、および任意の修飾または非修飾ヌクレオチドキャップ構造N-O-5’-HOOP-O-HOOP-O-PHOO-O-5’;5’-モノチオホスファートホスホロチオエート;HO2SP-O-5’;5’-モノジチオホスファートホスホロジチオエート;HOHSSP-O-5’、5’-ホスホロチオラートHO2OP-S-5’;酸素/硫黄で置換されたモノホスファート、ジホスファートおよびトリホスファート例えば、5’-アルファ-チオトリホスファート、5’-ガンマ-チオトリホスファートなどの任意の更なる組み合わせ、5’-ホスホロアミデートHO2OP-NH-5’、HONH2OP-O-5’、5’-アルキルホスホネートR=アルキル=メチル、エチル、イソプロピル、プロピルなど、例えば、RPOHO-O-5’-、OH2OP-5’-CH2-、5’-アルキルエーテルホスホネートR=アルキルエーテル=メトキシメチルMeOCH2-、エトキシメチル、など、例えば、RPOHO-O-5’-が含まれる。センス鎖は、同センス鎖を不活性化し、活性型RISCの形成を阻止し、それによって標的外効果を潜在的に減少させるために修飾され得る。これは、センス鎖の5’-リン酸化を阻止する修飾によって、例えば、5’-O-メチルリボヌクレオチドで修飾することによって実現することができるニカネンNykaenenら、2001年、ATPrequirementsandsmallinterferingRNAstructureintheRNAinterferencepathway.Cell、第107巻、309~321頁を参照のこと。リン酸化を阻止するその他の修飾、例えば、O-MeよりもHによる5’-OHの簡単な置換も使用され得る。代替的に、大きな嵩高い基を5’-リン酸塩に添加して、ホスホジエステル結合に変更してもよい。iRNA剤の細胞への輸送理論に結びつけることは望まないが、コレステロール結合iRNA剤とリポタンパク質のある種の成分例えば、コレステロール、コレステリルエステル、リン脂質との間の化学的類似性は、iRNA剤と血液中のリポタンパク質例えば、LDL、HDLとの結合および/またはiRNA剤とコレステロールに親和性を有する細胞成分、例えば、コレステロール輸送経路の成分との相互作用を引き起こす可能性がある。リポタンパク質ならびにその成分は、細胞によって、様々な能動的および受動的輸送機構によって、例えば、限定はしないが、LDL受容体結合LDLのエンドサイトーシス、酸化された、もしくはその他の修飾をされたLDLのスカベンジャー受容体Aとの相互作用によるエンドサイトーシス、肝臓におけるHDLコレステロールのスカベンジャー受容体B1の媒介による取り込み、ピノサイトーシスまたはABCATP結合カセット輸送タンパク質、例えば、ABC-A1、ABC-G1もしくはABC-G4によるコレステロールの膜通過輸送によって取り込まれ、処理される。したがって、コレステロール結合iRNA剤は、このような輸送機構を有する細胞、例えば、肝臓の細胞による取り込みの促進を受けることができた。このように、本発明は、このような成分例えば、コレステロールの天然リガンドをiRNA剤に結合させるか、またはこの成分例えば、LDL、HDLの天然リガンドと関連する、もしくは結合するiRNA剤に化学的部分例えば、コレステロールを結合させることによって、ある種の細胞表面成分、例えば、受容体を発現する細胞にiRNA剤を標的化させる証拠および一般的方法を提供する。その他の実施形態RNA、例えば、iRNA剤は、インビボにおいて、例えば、細胞に送達された外来DNA鋳型から細胞内で産生され得る。例えば、このDNA鋳型は、ベクターに挿入され、遺伝子治療ベクターとして使用され得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈注射、局所投与によって米国特許第5328470号、または定位注射によって例えば、チェンChenら、Proc.Natl.Acad.Sci、USA、第91巻、3054~3057頁、1994年対象に送達され得る。遺伝子治療ベクターの医薬調製物は、許容できる希釈剤中に遺伝子治療ベクターを含むことができ、または遺伝子送達担体が包埋された徐放性マトリックスを含み得る。DNA鋳型は、例えば、2個の転写単位を含むことができ、一方はiRNA剤の上鎖を含む転写物を生成し、他方はiRNA剤の下鎖を含む転写物を生成する。この鋳型が転写されたとき、iRNA剤が生成され、遺伝子サイレンシングを媒介するsiRNA剤断片に処理される。製剤本明細書で説明したiRNAは、対象に投与するために製剤化することができる。説明を容易にするために、この項における製剤、組成物および方法は、ほとんどは無修飾iRNA剤に関して論じる。しかしながら、これらの製剤、組成物および方法は、その他のiRNA剤、例えば、修飾iRNA剤で実施することができ、このような実施は本発明の範囲内であることを理解されたい。製剤化されたiRNA剤組成物は、様々な状態をとることができる。いくつかの例では、この組成物は少なくとも部分的な結晶、均一な結晶、および/または無水物例えば、水分が80、50、30、20または10未満である。他の例では、iRNA剤は水相、例えば、水を含む溶液に含まれている。水相または結晶組成物を、例えば、送達媒体、例えば、リポソーム特に水相用または粒子例えば、結晶組成物に適し得る微粒子に取り込むことができる。一般的に、iRNA剤組成物は、企図した投与方法に適合する方法で製剤化される。iRNA剤調製物は、他の薬剤、例えば、他の治療剤またはiRNA剤を安定化する薬剤、例えば、iRNPを形成するためにiRNA剤と複合体化するタンパク質と、組み合わせて、製剤化することができる。さらに他の薬剤には、キレート剤、例えば、EDTA例えば、Mg2などの2価陽イオンを除去するため、塩、RNアーゼ阻害剤例えば、RNAsinなどの特異性の広いRNアーゼ阻害剤などが含まれる。一実施形態では、iRNA剤調製物には、2個以上のiRNA剤類、例えば、第2の遺伝子に関して、又は同一遺伝子に関してRNAiを媒介する第2のiRNA剤を含む。更に他の調製物には、少なくとも3個、5個、10個、20個、50個または100個以上の異なるiRNA剤種を含めることができる。このようなiRNA剤は、同数の異なる遺伝子に関してRNAiを媒介することができる。このような調製物中の2個以上のiRNAが同一遺伝子を標的とする場合、それらは重複も隣接もしていない標的配列を有すること可能で、あるいはこの標的配列は重複していても隣接していてもよい。選択的に、本発明のiRNA剤は、リポソームを用いて製剤化され得る。種々の組成のリポソームが種々の製薬的に活性な成分を部位特異的に送達するために使用され得るヴィッチ,シー.WitschiCら、Pharm.Res.、1999年、第16巻、382-390頁、イェ,エム.ケイ.Yeh,M.K.ら、Pharm.Res.、1996年、1693-1698頁。リポソームとカーゴcargoとの間の相互作用は通常、特にカチオン性脂質送達系では疎水性の相互作用又は電荷の引力に依存するゼルファティ,オー.Zelphati,O.ら、J.Biol.Chem.、2001年、第276巻、35103-35110頁。HIVtatペプチド保持リポソームはまた、エンドサイトーシス経路を迂回して、カーゴを直接細胞質に送達するために構築され、かつ使用されてきたトルチリン,ブイ.ピー.Torchilin、V.P.ら、Biochim.Boiphys.Acta-Biomembranes、2001年、第1511巻、397-411頁、トルチリン,ブイ.ピー.ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、2001年、第98巻、8786-8791頁。糖グラフトリポソームに封入されると、イセチオン酸ペンタミジン及び誘導体は、通常のリポソームに封入された薬物或いはフリーの薬物と比較してより効果的であることが発見されたバネリー,ジー.Banerjee,G.ら、J.Antimicrob.Chemother.、1996年、第381巻、145-150頁。温度感受性のタキソールのリポソーム製剤熱媒介型標的化薬物送達は、局所的な高温療法と組み合わせて腫瘍を有するマウスにインビボで投与したところ、高温療法を組み合わせた、又は組み合わせていない、同用量のフリーのタキソールと比較して、腫瘍体積が有意に低減し、生存時間の増加が観察されたシェルマ,ディー.Sherma,D.ら、MelanomaRes.、1998年、第83巻、240-244頁。インシュリン、IFN-α、IFN-γ、及びプロスタグランジンE1の送達のためにリポソーム製剤を局所に適用することは、ある程度の成功を収めているセビッチジー.CevcG.ら、Biochim.Biophy,Acta、1998年、第1368巻、201-215頁、フォルドバリエム.FoldvariM.ら、J.LiposomeRes.、1997年、第7巻、115-126頁、ショートエス.エム.ShortS.M.ら、Pharm.Res.、1996年、第13巻、1020-1027頁、フォルドバリエム.ら、Urology、1998年、第525巻、838-843頁、米国特許第5853755号明細書。抗体は、リポソームを組織特異的又は細胞特異的に取り込む別の標的装置の代表であるマストロバティスタ,イ-.Mastrobattista,E.ら、Biochim.Biophy,Acta、1999年、第14192巻、353-363頁、マストロバティスタ,イ-.ら、Adv.DrugDeliv.Rev.、1999年、第401-2巻、103-127頁。リポソームのアプローチは、封入された活性成分が徐々に放出されるという能力、免疫系及びタンパク質分解酵素を回避できるという能力、腫瘍を標的化して腫瘍組織への優先的な蓄積及びその漏出しやすい新生血管からの管外遊出による転移を引き起こす能力を含む種々の利点を提供する。例えばポリビニルピロリドンナノ粒子及びマレイレート化ウシ血清アルブミンのようなその他の担体も抗癌剤を新生物細胞に送達するために使用され得るシャルマ,ディ.Sharma、D.ら、Oncl.Res.、1996年、第87-8巻、281-286頁、ムクホパディアイ,エイ.Mukhopadhyay,A.ら、FEBSLett.、1995年、第3761-2巻、95-98頁。従って、非常に多様性かつ合理的な設計及び修飾が容易である標的化及び封入技術を使用して、本発明のiRNA剤の所望とする細胞への送達が容易になる。上記したように、本発明の製薬組成物はリポソーム成分を含み得る。本発明に従って、リポソームは細胞の原形質膜と融合可能な脂質成分からなり、それにより、同リポソームがカーゴ、即ち核酸分子組成物を細胞に送達可能となる。幾らかの好ましいリポソームは、当業者に周知である遺伝子送達法において一般的に使用されるリポソームを含む。幾らかの好ましいリポソーム送達ビヒクルは、多重膜リポソームMLV、脂質及び押出脂質Extrudedlipidを含むが、本発明はそのようなリポソームに限定されるものではない。MLVを調製する方法は当業者には周知である。押出脂質もまた意図される。押出脂質は、MLV脂質と同様に調製される脂質であるが、その全体の内容が本明細書において援用されているテンプレトンTempletonらの文献NatureBiotech.、1997年、第15巻、647-652頁に記載されているように、調製後にサイズの小さいフィルタから押し出されるものである。小さな単層リポソームSUVもまた、本発明の組成物及び方法において使用され得る。その他好ましいリポソーム送達ビヒクルはポリカチオン脂質組成物を有するリポソーム即ち、カチオン性リポソームを含む。例えば、カチオン性リポソーム組成物は、コレステロールと複合体化される任意のカチオン性リポソームを含むが、限定されることなく、DOTMA及びコレステロール、DOTAP及びコレステロール、DOTIM及びコレステロール、及びDDAB及びコレステロールを含む。本発明で使用されるリポソームは、約10乃至1000ナノメートルnmの範囲を含む任意のサイズ又はその間の任意のサイズであり得る。リポソーム送達ビヒクルは、哺乳動物の特定の部位を標的化するために修飾され得、それによりその部位において本発明のiRNA剤を標的化し、かつ使用する。適切な修飾は、送達ビヒクルの脂質部分の化学式を操作することを含む。送達ビヒクルの脂質部分の化学式の操作は、同送達ビヒクルの細胞外及び細胞内標的化を誘導する。例えば、リポソームの脂質二重層の電荷を変える化学物質をリポソームの脂質の化学式に加え、それにより同リポソームは特定の電荷特性を有する特定の細胞と融合する。一実施形態において、外因性の標的分子をリポソームに添加することによる標的化即ち、抗体のようなその他の標的化機構は本発明のリポソームの必要な成分とはならない。その理由は、免疫学的に活性な器官における効果的な免疫活性は、送達経路が静脈内又は腹腔内である場合には、更なる標的化機構の援助がなくても組成物により既に提供され得るからである。しかしながら、幾らかの実施形態において、リポソームは、標的分子が結合し得る特定の細胞又は組織を標的化するために、同リポソームに組み込まれ得る抗体、可溶性レセプター又はリガンドのような標的化剤を使用して、特定の標的細胞又は組織に指向され得る。リポソームの標的化は、例えば、ホHoら、Biochemistry,1986年、第25巻、5500-6頁、ホら、JBiolChem、1987年a、第262巻、13979-84頁、ホら、JBiolChem、1987年b、第262巻、13973-8頁及びハンHuangらの米国特許第4957735号明細書に記載されており、それらの各文献は、本明細書においてその全体が参照により援用される。一実施形態において、血漿タンパク質又はその他の要因によるリポソームのオプソニン化に起因する細網内皮系細胞による注入リポソームの効果的な取り込みを回避することが望ましい場合には、ガングリオシドアレンAllenら、FEBSLett、1987年、第223巻、42-6頁又はポリエチレングリコールPEG由来の脂質クリバノフKlibanovら、FEBSLett、1990年、第268巻、235-7頁のような親水性の脂質が従来のリポソームの二重層内に組み込まれ、いわゆる立体的に安定化した、即ちステルスリポソームが形成されるウッドルWoodleら、Biochim.BiophyActa、1992年、第1113巻、171-99頁。そのようなリポソームの変更例は、例えば、ウンガーUngerらに付与された米国特許第5705187号明細書、チョイChoiらに付与された米国特許第5820873号明細書、チロシュTiroshらに付与された米国特許第5817856号明細書、タガワTagawaらに付与された米国特許第5686101号明細書、ハンらに付与された米国特許第5043164号明細書及びウッドルらに付与された米国特許第5013556号明細書に記載されており、それらの全ては本明細書においてその全体が参照により援用される。治療方法および送達経路iRNA剤、例えば、MLL-AF4を標的とするiRNA剤を含む組成物は、様々な経路によって対象に送達することができる。例示的な経路には、クモ膜下、実質、静脈内、経鼻、経口および眼内送達が含まれる。本発明のiRNA剤を投与する好ましい手段は、非経口投与によるものである。iRNA剤は、投与に適した医薬組成物に取り込むことができる。例えば、組成物は、1種または複数種のiRNA剤および薬学的に許容される担体を含むことができる。本明細書では、薬学的に許容される担体という用語は、医薬品投与に適合した任意の、およびすべての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤及び吸収遅延剤などを含むものとする。薬学的に活性のある物質のためにこのような媒体および作用物質を使用することは、当該技術分野では周知である。従来の媒体または作用物質が活性化合物に不適合である場合を除いて、それらは組成物に使用されるものとする。補充的な活性化合物もこの組成物に組み入れることができる。本発明の医薬品組成物は、局所治療または全身治療が望ましいかどうかに応じて、および治療する部位に応じていくつかの方法で投与することが可能である。投与は、局所投与眼内、経鼻、経皮を含む、経口投与又は非経口投与であり得る。非経口投与には、静脈点滴、皮下、腹腔内もしくは筋肉内注射、またはクモ膜下腔内もしくは心室内投与が含まれる。送達の経路は、患者の障害に応じて変更され得る。一般的に、本発明のiRNAの送達は、対象への全身送達を実現するために実施される。これを実現する好ましい手段は、非経口投与による。非経口投与用製剤には、緩衝剤、希釈剤およびその他の適切な添加物も含有できる滅菌水性溶液が含まれる。静脈内注射は、例えばリザーバに取り付けられた心室内カテーテルにより促進され得る。静脈内での使用では、溶質の総濃度は、調製物を等張にするために制御されるべきである。投与は、対象によって提供され得るか、または例えば治療奉仕者のような別の人によって提供され得る。治療奉仕者は、人に治療を提供することに関与する任意の存在、例えば、病院、ホスピス、診療所、外来患者向け診療所で医療に従事する人、例えば、医者、看護師もしくはその他の専門家などの医療従事者、または配偶者または親などの保護者であり得る。投薬は、測定された用量で、または計測された用量を送達する分配器で提供され得る。治療有効量という用語は、望ましい生理学的応答をもたらすために、治療する対象において所望するレベルの薬剤を提供するのに必要な、組成物中に存在する量のことである。生理学的有効量という用語は、所望とする緩和または治療的効果を与えるために対象に送達される量である。薬学的に許容される担体という用語は、その担体が肺に著しく有害な毒性効果を与えず肺に取り込まれることが可能であることを意味する。共投与という用語は、2種以上の薬剤、特に2種以上のiRNA剤を対象に投与することである。薬剤は、単一の医薬組成物に含有され、同時に投与され得るか、または薬剤は別々の製剤に含有され、順番に対象に投与され得る。2種の薬剤が同時に対象にて検出されることができる限り、2種の薬剤は共投与されたと言える。担体として有用な医薬賦形剤の種類には、ヒト血清アルブミンHSAなどの安定化剤、炭水化物、アミノ酸およびポリペプチドなどの賦形剤、pH調整剤または緩衝剤;塩化ナトリウムなどの塩などがある。これらの担体は、結晶形であっても、アモルファス形であってもよく、2つの混合物であってもよい。特に有用である賦形剤には、適合性のある炭水化物、ポリペプチド、アミノ酸またはそれらの組合せが含まれる。適切な炭水化物には、ガラクトース、D-マンノース、ソルボースなどの単糖類、ラクトース、トレハロースなどの二糖類、2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンなどのシクロデキストリン、およびラフィノース、マルトデキストリン、デキストランなどの多糖類、マンニトール、キシリトールなどのアルジトール類が含まれる。好ましい炭水化物群には、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マルトデキストリンおよびマンニトールが含まれる。適切なポリペプチドには、アスパルテームが含まれる。アミノ酸には、アラニンおよびグリシンが含まれ、グリシンが好ましい。適切なpH調整剤または緩衝剤には、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウムなどの有機酸および塩基から調製された有機塩が含まれ、クエン酸ナトリウムが好ましい。投与量。iRNA剤は、体重1kg当たり約75mg未満、または体重1kg当たり約70、60、50、40、30、20、10、5、2、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001または0.0005mg未満の単位用量で、および体重1kg当たりiRNA剤200nmol未満例えば、約4.4×1016コピーの単位用量で、または体重1kg当たりiRNA剤1500、750、300、150、75、15、7.5、1.5、0.75、0.15、0.075、0.015、0.0075、0.0015、0.00075、0.00015nmol未満の単位用量で投与され得る。例えば、この単位用量は、注射例えば、静脈内もしくは筋肉内注射、クモ膜下注射、または器官への直接注射によって、吸入投与、または局所塗布によって投与され得る。器官へ直接例えば、肝臓に直接iRNA剤を送達することは、器官当たり約0.00001mg~約3mg、または好ましくは器官当たり約0.0001~約0.001mg、器官当たり約0.03~3.0mg、眼当たり約0.1~3.0mgまたは器官当たり約0.3~3.0mgの程度の投与量であり得る。投与量は、疾患または障害を治療または予防するのに有効な量であり得る。一実施形態では、単位用量を1日1回より少ない頻度で、例えば、2日、4日、8日または30日毎に1回より少ない頻度で投与する。他の実施形態では、単位用量は一定頻度例えば、規則正しい頻度では投与されない。例えば、単位用量を1回で投与することが可能である。iRNA剤が媒介するサイレンシングは、iRNA剤組成物を投与した後、数日間維持され得るので、多くの場合、1日1回より少ない頻度で、場合によっては全治量期間中1回のみ組成物を投与することが可能である。一実施形態では、例えば、2本鎖iRNA剤、またはsiRNA剤例えば、前駆体、例えば、siRNA剤中に処理されることができるより大きなiRNA剤、またはiRNA剤、例えば、2本鎖iRNA剤、もしくはsiRNA剤、もしくはそれらの前駆体をコードするDNAの初回量および1回または複数の維持用量が対象に投与される。一回又は複数回の維持用量は、一般的に初回量よりも少なく、例えば、初回量の2分の1少ない。維持治療計画は、1日当たり体重1kgに対して0.01~75mgの範囲、例えば、1日当たり体重1kgに対して70、60、50、40、30、20、10、5、2、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001または0.0005mgの一回又は複数回の用量で対象を治療することを含み得る。維持用量は、5、10または30日毎に1回以下投与することが好ましい。さらに、治療計画は、特定の疾患の性質、重症度および患者の全体的状態に応じて変化し得る期間の間、維持され得る。好ましい実施形態では、投与量は1日1回以下、例えば、24、36、48時間以上に1回以下、例えば、5日または8日毎に1回以下にて送達され得る。処置後、患者の状態の変化および疾患状態の徴候の軽減をモニタリングすることができる。化合物の投与量は、患者が現在の用量レベルに有意に応答しない場合増加させることができ、あるいは疾患状態の徴候の軽減が認められた場合、疾患状態が消失した場合、または望ましくない副作用が認められた場合、用量を減少させることができる。効果的な用量は、特定の環境下で所望するように、または適切だと考えられるように、単回投与で、または2回以上の投与で投与することができる。反復注入又は頻繁な注入を促進することが望ましい場合、送達装置、例えば、ポンプ、半永久的ステント例えば、静脈内、腹腔内、嚢内または関節包内またはリザーバを埋め込むことが適切であり得る。処理が成功した後、疾患状態の再発を防ぐために、本発明の化合物を体重1kg当たり0.001g~100gの範囲の維持用量で投与する維持治療を患者に受けさせることが望ましい米国特許第6107094号。iRNA剤組成物の濃度は、障害を治療もしくは予防するのに有効であるか、またはヒトの生理学的状態を調節するために十分な量である。投与するiRNAの薬剤の濃度または量は、薬剤について測定されたパラメータ、および経鼻、頬側または肺投与などの投与方法に依存される。例えば、経鼻用製剤は、鼻孔の刺激または灼熱感を回避するために、いくつかの成分をはるかに低い濃度にしなければならない傾向がある。適切な経鼻用製剤を提供するために、経口用製剤を10~100倍希釈することが時として望ましい。非限定的ではあるが、疾患もしくは障害の重症度、以前の治療法、対象の一般的健康状態および/または年齢、その他の既存の疾患を含めたある種の因子が、対象を効果的に治療するために必要な投与量に影響を及ぼし得る。治療に使用するsiRNAなどのiRNA剤の効果的投与量は、特定の治療の期間中、増加または減少し得ることも理解されたい。投与量の変化は、本明細書に記載されているように、診断試験法の結果から得られ、明らかとなり得る。例えば、iRNA剤組成物投与後に対象をモニタリングすることができる。モニタリングからの情報に基づいて、iRNA剤組成物の追加量を投与することができる。投薬は、数日から数ヶ月続く治療期間中、または全治するまで、もしくは疾患状態の消失が実現するまで、治療する疾患状態の重症度および応答性に左右される。最適な投薬計画は、患者の身体における薬剤蓄積の測定によって計算することができる。当業者であれば、最適な投与量、投薬方法および反復率を容易に決定することができるだろう。最適な投与量は、個々の化合物の相対的能力に応じて変更可能であり、前述したようにインビトロおよびインビボ動物モデルにおいて効果的であることが発見されたEC50に基づいて一般的に判断することができる。本発明は、以下の実施例によってさらに例示されるが、それらはさらに限定するものではない。試薬の入手先試薬の入手先が本明細書に具体的に挙げられていない場合、このような試薬は、分子生物学用試薬の任意の供給元から、分子生物学での適用に標準的な量/純度で入手することができる。実施例1:siRNA合成1本鎖RNAは、Expedite8909合成機アプライドバイオシステムズ、アプレラドイチュランド社AppliedBiosystems、AppleraDeutschlandGmbH、[ドイツ国、ダルムシュタットDarmstadt所在]および固相担体として微細孔性ガラスCPG、500Å、グレンリサーチ社GlenReserach、[米国バージニア州スターリングStarling所在]を使用して、1μmoleのスケールで固相合成によって作製された。RNAおよび2’-O-メチルヌクレオチドを含有するRNAは、それぞれ対応するホスホラミダイトおよび2’-O-メチルホスホラミダイトを使用して固相合成によって作製されたプロリゴバイオケミ社ProligoBiochemieGmbH、[ドイツ国、ハンブルクHamburg所在]。これらの構成単位を、Currentprotocolsinnucleicacidchemistry、ボカージュエス.エル.Beaucage、S.L.ら編、JohnWileySons、Inc.[アメリカ合衆国ニューヨーク]に記載されたような標準的ヌクレオシドホスホラミダイト化学物質を使用してオリゴリボヌクレオチド鎖の配列内の選択部位に取り込ませた。ホスホロチオエート結合は、ヨウ素酸化剤溶液をアセトニトリル1に溶解したボカージュ試薬クルアケム社ChruachemLtd[英国グラスゴーGlasgow所在]の溶液と置換することによって導入された。他の付随する試薬は、マリンクロットベーカー社MallinckrodtBaker[ドイツ国、グリサイムGriesheim所在]から入手した。粗オリゴリボヌクレオチドの陰イオン交換HPLCによる脱保護および精製は、確立された方法に従って実施された。収率および濃度は、分光光度計DU640B、ベックマンコールター社BeckmanCoulterGmbH、[ドイツ国、アンターシュリースハイムUnterschlieβheim所在]を使用して、波長260nmでそれぞれのRNAの溶液のUV吸収によって測定した。2本鎖RNAは、アニーリング緩衝液20mMのリン酸ナトリウム、pH6.8、100mMの塩化ナトリウム中において相補鎖の等モル溶液を混合し、85~90°Cの水浴中で3分間加熱し、3~4時間かけて室温まで冷却することによって作製した。精製したRNA溶液を使用するまで-20°Cで保存した。実施例2:siRNAのデザイン効率的なMLL-AF4siRNAを同定するために、MLL-AF4融合部位のいずれかの側を含み、かつ側面に位置する配列のsiRNAのスキャンを実施した非特許文献5、非特許文献3、マシャレクMarshalekら、Br.J.Haematology、第90巻、308-320頁1995年。スキャンを実施するために、本願の発明者らは、MLL-AF4融合部位を含む配列と重複し、かつ同配列から1つのヌクレオチドずつ段階的に下流側に移動させた標的部位を有する14個の異なるsiRNAを合成した。siRNA配列及びそれらの融合mRNAの標的部位を表2に示した。表2に示されるsiRNAの2本鎖は、以下においてはsiMAXと参照され、Xは表2において示されるそれぞれの対応する2本鎖を構成するセンス及びアンチセンス鎖の単位における整数を意味する。例えば、siMA5は、MA5s及びMA5asから形成された2本鎖を意味する。しかしながら、siMAxはMA3s及びMAxas表1における薬剤番号2により形成される2本鎖を意味し、siMAmmは、MAmms及びMAmmasにより形成されるミスマッチ2本鎖を意味する。加えて、一つのsiRNAがRS4;11細胞における融合部位変種と相同して合成された本明細書においてはsiMARS。siMARSのセンス鎖の位置1乃至21は、Genbank登録番号L22179の位置4338-4358に対応するバージョン番号.L22179.1GI:347376、非特許文献5。対照として、ミスマッチsiRNAsiMAmm、siRNAsiAGF1及びそのミスマッチ対照siAF6AML/MTG8を標的とするもの並びにsiRNAsiK4及びsiGL2ネオマイシンフォスフォトランスフェラーゼmRNAを標的とするものハイデンライヒHeidenreichら、Blood、第101巻、3157-3163頁2003年を使用した。siAGF1のセンス鎖の1乃至21位は、AML1/MTG8Genbank取得番号D13979の2102乃至2122位に対応する。siAGF6はsiAGF1とは、センス鎖配列の8及び13位におけるAからUへの変更及びアンチセンス配列に対する対応する変化を除いては、同一である。siGL2のセンス鎖の1乃至21位は、P.pyralisluciferaseGenbank取得番号M15077の514乃至533位に対応する。siK4のセンス鎖の1乃至21位は、ネオマイシンフォスフォトランスフェラーゼIIGenbank取得番号L11017の4184乃至4202位に対応する。siMAx、siAGF1、siAGF6及びsiGL2を除くsiRNAは、21のヌクレオチド長のセンス鎖と23のヌクレオチド長のアンチセンス鎖から構成されており、siRNAはアンチセンス鎖により2個のヌクレオチドが一つの3’-突出部分を形成する。siMAx、siAGF1、siAGF6及びsiGL2は、21のヌクレオチド長のセンス鎖及びアンチセンス鎖から構成されており、両端に2個のヌクレオチドの3’-突出部分を形成する。実施例3:細胞培養研究された複数の遺伝子から発現されたmRNAのレベルを低減する種々のsiRNAの効果を細胞株SEMグレイルGreilら、BrJHaematol.、第86巻、275-283頁、1994年、RS4;11ストング,アール.シー.Stong,R.C.ら、Blood、第65巻、21-31頁、1985年ドイツ国、ブラウンシュワイクに所在のDSMZから入手した及びMV4;11ランゲ,ピー.エイチ.Lange,B.H.及びウィンフィールド,エイチ.エヌ.Winfield,H.N.、Cancer、第60巻、464-472頁、1987年ドイツ国ハノーバー医学校のジェイ.クラウターKrauterから入手したで試験した。これらは染色体転座t4;11q21;q23を保持するが、異なる切断点により異なるMLL-AF4変種を発現する。更に、本研究にて使用された白血病細胞株はHL60コリンズ,エス.ジェイ.Collins,S.J.ら、Nature、第270巻、347-349頁、1977年、K562ロツィオ,シー.ビー.Lozzio,C.B.及びロツィオビー.ビー.Lozzio,B.B.、J.NatlCancerInst、第50巻、535-538頁、1973年、Kasumi-1アソウ,エイチ.Asou,H.ら、Blood、第77巻、2031-2036頁、1991年、SKNO-1マトザキ,エス.Matozaki,S.ら、BrJHaematol、第89巻、805-811頁、1995年及びU937サンドストローム,シー.Sundstrom,C.及びニルソン,ケイ.Nilsson,K.、IntJCancer、第17巻、565-577頁、1976年であった。SKNO-1細胞は20FCSSeraPlus、パンバイオテック社PANBoitechGmbH及び7ng/mlのGM-CSFを補充したRIMI1640Glutamax培地インビトローゲンInvitrogen,ドイツ国カールスルーエ所在で維持され、その他の細胞株の全ては、37°C及び5CO2にて10のFCSを補充したRIMI1640Glutamax培地で維持された。健全な患者の骨髄からの初代ヒトCD34細胞は、チュービンゲンTuebingenに所在の大学小児病院から凍結したストックとして入手した。実施例4:siRNA処理SEMのsiRNAエレクトロポレーションを既に述べたように実施したドゥネDunneら、Oligonucleotides、第13巻、375-80頁、2003年及びハイデンライヒら、Blood、第101巻、3157-3163頁、2003年。エレクトロポレーションは、10msで350Vの矩形パルスを使用したFischerのエレクトロポレータフィッシャーFischer、ドイツ国、バイデルベルグ所在にて実施した。室温にて15分間インキュベートした後に、細胞を培地で20倍に希釈して、37°Cの5CO2下にてインキュベートした。実施例5:RT-PCR内因性MLL-AF4、MLL、AF4、HOXA7、HOXA9、OAS1及びSTAT1のレベルをリアルタイムのPCRにて試験した。RNAの全抽出をRNイージーRneasyキットキアーゲンQuiagen、ドイツ国、ヒルデン所在を使用して、製造者により提案されたように実施した。次に、全RNAの1mgを、ポリメーラーゼ連鎖反応と組み合わせられたリアルタイムの逆転写RT-PCRに使用した。逆転写反応は、25mMのランダム6量体、5xRT緩衝液、1mMのdNTPMix、20UのRNase阻害剤MBI及び100UのMMLV-RT、RNaseHプロメガPromega、ドイツ国、ハイデルベルグ所在を使用して実施した。混合物を室温にて10分間、42°Cにて45分間、そして99°Cにて3分間インキュベートした。それぞれの遺伝子のmRNAレベルはGAPDHmRNAレベルに正規化した。リアルタイムのPCR反応は、MLL-AF4、MLL、AF4、HOXA7、HOXA9、OAS1及びSTAT1に対するプライマーを使用して実施した。GAPDHとハイブリダイズするプライマーを対照として使用した。TaqManリアルタイムPCR反応に対するマスターミックスMLL-AF4は、62.5nMのフォワードプライマー及びリバースプライマー、62.5v/vのSybr-GreenMixを含んでいた。GAPDH反応に対するマスターミックスは、375nMのフォワードプライマー及びリバースプライマー及び62.5v/vのSybr-GreenMixを含んでいた。そうでない場合には、RT-PCRは、マルチネスMartinezらのBMCCancer、第4巻、44頁2004年の記載に従って実施した。使用したプライマーの配列を表3に列挙した。プライマーはPRIMER-EXPRESSソフトウェアアプライドバイオシステムズAppliedBiosystems、アメリカ合衆国カリフォルニア州フォスターシティ所在を使用して設計した。実施例6:コロニー形成試験siRNAを用いた細胞エレクトロポレーションの24時間後に10000個の細胞を、24ウェルプレート中にて、20FCS及び0.56メチルセルロースを含む0.5mlのRPMI1640培地中に接種した。RS4;11の場合、細胞数はウェル当り20000個に増加した。接種してから14日後に、20個以上の細胞を含むコロニーを計数した。これらの条件で、モック-トランスフェクト細胞siRNAを使用しないでエレクトロポレーションした場合は、試験した細胞株に応じてウェル当り50乃至100のコロニーを形成した。ヒトコロニー形成細胞試験はMethoCult登録商標メチルセルロースベースの培地セルシステムズCellSystems、ドイツ国、セントカタリーネン所在を使用して実施した。エレクトロポレーションの後、5000個のヒト初代CD34細胞を、1mlのメチルセルロース培地を含む35mmの培養皿中に二つずつ接種した。CFU-GEMMs及びCFU-GMsの数は接種してから10日後に計数した。実施例7:MTT試験細胞は48時間以内に2回エレクトロポレーションして、96ウェルのプレートに、ウェル当り100μlにて0.5×105個の細胞密度にて接種した。各24時間後に10μlのMTT溶液ロッシュRoche、ドイツ国、マンハイム所在を加えた。37°Cにて4時間インキュベーション後、細胞を製造業者の指示に従って可溶化溶液で溶解した。対照波長として、560nm及び650nmにて、ELISAリーダダイネックスDynex、ドイツ国、フランクフルト/M所在を用いてOD測定を実施した。細胞数は細胞希釈系列により計数した。ヒトコロニー形成細胞試験は、MethoCult登録商標メチルセルロースベースの培地セルシステムズ、ドイツ国、セントカタリーネン所在を使用して実施した。ヒト初代細胞をエレクトロポレーションし、続いて、5000個の細胞を、1mlのメチルセルロース培地を含む35mmの培養皿中に接種した。各サンプルは2つずつ接種し、CFU-GEMMs及びCFU-GMsの数は接種してから10日後に計数した。実施例8:細胞周期分析及びアポトーシス試験細胞周期分析は、既に記載したように32実施した。次に、得られたデータを分析し、ModFitプログラムベリティVerity、アメリカ合衆国、トップシャム所在を使用して評価した。アポトーシスは、供給者の指示に従って、ヒトアネキシンAnnexinV/FITCキットベンダーメドシステムズBenderMedSystems、オーストリア国ウィーン所在を使用して試験した。要約すると、2-5×105個の細胞をエレクトロポレーション後、指示された時点にてPBSで洗浄し、室温にて10分間、アネキシンV-FITC溶液の存在下にてインキュベーションした。細胞をPBSで再び洗浄し、ヨウ化プロピジウムで染色した。次にサンプルを、FACSCaliburベクトンディッキンソンBectonDickinson、ドイツ国、バイデルベルク所在を使用したフローサイトメトリーにて直ちに分析した。実施例9:ウェスタンブロッティング細胞の全タンパク質量を得るために、RNイージーRNeasyカラムのフロースルー部分に存在するタンパク質を2容量のアセトンで沈殿させ、尿素緩衝液9Mの尿素、4w/wの3-[3-クロラミドプロピル-ジメチルアンモニオ]-プロパンスルホネートCHAPS、1w/wジチオスレイトール中に溶解した。全溶解物MLL-AF4検出に対しては50μg、その他の全てのイムノブロットに対しては10μgを32に記載したように分析した。イムノブロットの検出に以下の抗体を使用した:切断したカスパーゼ-3Asp1751:1000、CellSignalingTecnology、9661;チューブリンAb-41mg/l、NeoMarkersMS-719-P0、アメリカ合衆国フレモント所在Bcl-XL1:500、BDPharMingen、556499;MLLT21:600、Orbigen、10852;GAPDH1:20,000、HyTest、5G4。実施例10:SCIDマウスの異種移植術4-5週齢の雌のCB-17/lcrCrj-SCID/SCIDマウスをチャールズリバージャーマニーCharlesRiverGermanyから入手した。SEM細胞20×107を1日目にエレクトロポレーションし、3日目に指定されたsiRNAの500nMを使用しないモックか、又は使用した。4日目に細胞をマウスの腹腔内に注射した。動物は、チュービンゲンTuebingenの地方審議会により承認されたプロトコルに従って維持及び処理した。実施例11:組織学器官を除去し、室温にて中性に緩衝化された4のホルマリンにて4-5日固定し、脱水し、パラフィン中に埋め込み、切断した。組織はヘマトキシリンMeyerのヘマルム溶液、メルクMerck、ドイツ国ダルムスタッド所在及びエオシンEosinY、メルク、ドイツ国ダルムスタッド所在を使用して、光学顕微鏡法のために染色した。光学顕微鏡法は、20×Plan-Neofluar又は40×Plan-Neofluar1.3オイルレンズを使用して、ZeissAxioplan顕微鏡ツァイスZeiss、ドイツ国、グッティンゲン所在を使用して実施した。画像は、顕微鏡に備えられたAxioVision4Software及びAdobePhotoshopアドーベシステムズAdobeSystems、アメリカ合衆国、カリフォルニア州、サンホセ所在を使用して捕捉した。実施例12:統計学的分析コロニー形成試験は、対応のないスチューデントt検定により分析した。生存曲線は、ログランク試験により分析した。実施例13:MLL-AF4発現の阻害に対する活性を備えたsiRNAの同定高効率MLL-AF4siRNAを同定するために、MLL-AF4融合部位のsiRNAスキャンを実施した。そのために、本願の発明者らは、各々が一つのヌクレオチドずつ移動している標的部位を備えた14個の異なるsiRNAを合成した。異なるsiRNAの効果は、5歳のALL再発患者から得られたt4;11-陽性白血病細胞株SEMにて試験したグレイルGrail、ジェイ.ら、BrJJaematol、第86巻、275-283頁、1994年。試験した14の全てのsiRNAのうち、二つのsiRNA、即ち、siMA3及びsiMA6は、MLL-AF4mRNAレベルが60超減少した図1A。MLL-AF4転写レベルの低減は用量依存性であり、750nMのsiRNAで70の最大値に達したデータは図示せず。経時変化の実験では、siRNAトランスフェクション後24乃至48時間の間にMLL-AF4mRNAの量がその最小値に達し、4日にて通常にレベルに回復することが示された図1B。更に、siMA6は野生型のAF4にもMLLmRNAレベルにも影響を与えなかった図1C一方で、siMA3はAF4レベルを実質的に低減したデータは図示せず。ミスマッチ対照siRNAであるsiMMはMLL-AF4にも対応する野生型の対立遺伝子転写産物にも影響を与えなかった。MLL-AF4mRNAのレベルの低減は、MLL-AF4タンパク質中の付随物の67の減少により反映されている図1D。MLL-AF4融合部位は、異なるt4;11陽性細胞株の間にて変化する。SEM細胞はMLLエクソン9AF4エクソン4e9-e4融合を含む転写物を発現し、RS4;11はエクソン10-エクソン4e10-e4変種を発現する。67の相同性にも関わらず、siMA6はRS4;11細胞中におけるe10-e4イソ型のレベルを低減しなかった非特許文献5のに対し、完全に相同性であるsiRNA、siMARSは、AF4又はMLLの発現に影響を与えることなく、RS4;11におけるMLL-AF4e10-e4を60低減した。siMA6もsiMMもSTAT1又は2’-5’-オリゴアデニレートシンターゼ1の発現を誘導せず図1F、それは、これらのsiRNAがインターフェロンの応答を誘発しないことを示しているスレッツ、シー.エー.Sledz,C.A.ら、NatCellBiol、第5巻、834-839頁、2003年。polyICでのトランスフェクションはOAS1の転写レベルを50倍以上も増大し、STAT1mRNAのレベルを10倍以上も増大し図1F、これらの白血球細胞においてインターフェロン応答経路を誘導することを示す。それらの高い特異性により、MLL-AF4siRNAであるsiMA6及びミスマッチ対照siRNAであるsiMMは、白血病性表現型のためのMLL-AF4発現の重要性を証明するために選択されている。実施例14:MLL-AF4は白血病性クローン形成能力に影響を与える白血病性クローン形成能力clonogenicityに対するMLL-AF4の適合性を研究するために、本願の発明者らはt4;11-陽性SEM細胞をsiRNAでトランスフェクトし、半固体の培地にてインキュベートした。SiMA6-媒介型のMLL-AF4の枯渇は、コロニーの数を5倍低減した図2A。この影響は特異的である。その理由はt8;21-陽性白血球細胞株Kasumi-1のコロニー形成はsiMA6により影響されなかったからである。逆に、AML1/MTG8特異的siRNAであるsiAGF1でのトランスフェクションは、SEMコロニー形成を干渉することなくKasumi-1のコロニー形成を損ねたマルチネスエヌ.Martinez,N.ら、BMCCancer、第4巻、44頁、2004年。ミスマッチ対照siMM及びsiAGF6はいずれも白血病性クローン形成能力に影響を与えなかった。さらに、t4;11-陰性白血病性細胞株HL60、K562、SKNO-1及びU937も、siMA6により影響を受けないMLL-AF4変種を発現するt4;11-陽性白血病性細胞株RS4;11及びMV4;11も、siRNAトランスフェクションによりコロニー形成が損なうことのなかったことが示されたデータ図示しない。特に、MLL-AF4e10-e4変種のsiMARS媒介型抑制はRS4;11のコロニー形成を2倍も低減し、別のt4;11細胞株に対するMLL-AF4のコロニー形成効率の依存性を示す図2B。初代ヒト造血性CD34細胞のMLL-AF4siRNAのエレクトロポレーションは、GEMMコロニー数にもGMコロニー数にも影響を与えなかった図2C。このように影響を与えないことは、非効率的なsiRNAのトランスフェクションに寄与していない。その理由は、本明細書で使用される細胞株もヒト造血性CD34細胞も機能的なsiRNAで効率的にトランスフェクトされたからであるシェアエム.Sherr,M.ら、Blood、第101巻、1566-1569頁、2003年、ハイデンライヒオー.ら、Blood、第101巻、3157-3163頁、2003年、ドゥネジェイDunne,J.ら、Oligonucleotides、第13巻、375-380頁、2003年。実施例15:MLL-AF4の抑制が、白血病性の増殖及び細胞周期の進行を阻害する次に、懸濁した培地での白血病性の増殖の制御におけるMLL-AF4の役割を調べた。siMA6の単回のエレクトロポレーションはt4;11-陽性SEM細胞の倍加時間に影響を与えなかったデータ図示しないが、2日おきにsiRNAのエレクトロポレーションを繰り返すと、siMA6によるSEM細胞の増殖及びsiMARSによるRS4;11細胞の増殖の阻害が維持された図2D。従って、増殖は、対応するMLL-AF4融合部位に相同性を有するsiRNAにより阻害されるのみであり、これらMLL-AF4siRNAの特異性を示す。モック又はsiRNAでエレクトロポレーションされたSEM又はRS4;11細胞は1.4日の倍加時間で増殖し、エレクトロポレーションの繰り返しがその増殖に重大な影響を与えないことを示す。MLL-AF4の枯渇によるt4;11-陽性細胞の増殖の低減は、細胞周期の分配における変化に匹敵していなかった。MLL-AF4siRNAの反復的なエレクトロポレーションを伴う10日間の経時変化の間、S相細胞のフラクションは、SEM及びRS4;11細胞のいずれにおいても、それぞれ50乃至30及び20減少し、G0/G1相のフラクション細胞における増大を伴っていた図2E。特に、siMA6は、SEM細胞においてのみ細胞周期の分配に影響を与えた一方、siMARSはRS4;11細胞においてのみそれらの変化を引き起こした。従って、MLL-AF4の枯渇は、G1相からS相までt4;11-陽性細胞の進行に否定的に干渉する。G1/Sの遷移を損なうことは、細胞の老化には関係していない。それは、β-ガラクトシダーゼ活性に関連した老化は、MLL-AF4の枯渇により増大しないからであるデータ図示しない。実施例16:MLL-AF4の枯渇は、t4;11-陽性SEM細胞のアポトーシスを誘導するSEM及びRS4;11細胞の細胞周期の分析は、10日間にわたるMLL-AF4の連続的な枯渇が対照と比較してサブsubG1細胞の数を10倍も増大し、アポトーシス細胞の数を増大したことを示した図3A。アネキシンV及びヨウ化プロピジウムでの染色は、MLL-AF4細胞の4日間の抑制がアポトーシス細胞における3倍の増大をSEM細胞にて示し、それにより、同時点にて見られるsubG1細胞の増大と一致した図3B。特に、ほとんど不活性なsiRNAであるsiMA13図1Aを参照は、アポトーシス細胞の数に僅かに影響を与えるのみであり、MLL-AF4の枯渇の程度とアポトーシスの速度との間には直接相関関係のあることを示唆している。この結果は、カスパーゼ-3のタンパク質分解活性及びsiMA6でのトランスフェクションによる抗アポトーシスタンパク質Bcl-XLの量の低減により確証された図3C。実施例17:MLL-AF4の抑制はHox遺伝子の発現を増大するMLL-AF4を含むMLL癌タンパク質の発現はHoxa7及びHoxa9を含む数種類のHox遺伝子並びに別のホメオティック遺伝子であるMeis1の発現の増大と関連している。従って、本願の発明者らは、MLL-AF4レベルに依存するこれら3種類の遺伝子の発現を分析した。MLL-AF4siRNAであるsiMA6でSEM細胞を2回連続してトランスフェクションすると、Hoxa7mRNAのレベルが二倍減少した図4。Hoxa9の僅かの低減も観察された。RS4;11細胞において、Hoxa9はsiMRASのトランスフェクションにより低減したが、Hoxa9は低減しなかった。RS4;11細胞中にてHoxa9が低減しないことは、SEM細胞中と比較して、MLL-AF4の抑制の効果が低いことによるものであろう図1D,E。実施例18:MLL-AF4はt4;11-陽性細胞の白血病性細胞の生着に対して重要であるSCIDマウスにおける白血病性細胞の成長は、高リスクのB-ALLと関係していることが示されてきたウックン,エフ.エム.Uckun,F.M.ら、Blood、第85巻、873-878頁、1995年。従って、本願の発明者らはsiRNAの媒介するMLL-AF4の枯渇が細胞の生着engraftment及びインビボにおける白血病の進行に影響を与えるかどうかを調べるためにt4;11-SCIDマウスのモデルを使用したポークック,シー.エフ.Pocock,C.F.ら、BrJHaematol、第90巻、855-867頁、1995年。モック、或いは対照のsiRNAで処理されたSEM細胞のSCIDマウスへの腹腔内移植は移植後70日以内において白血病に関連して100死亡し、生存日数の中央値はそれぞれ52及び52日であった図5A。MLL-AF4が枯渇したSEM細胞の異種移植術は、生存日数の中央値が82日であり、125日での全体に対する生存率が38pは0.01未満で、あまり深刻でない表現型を引き起こした。疾病にて死亡した動物は、卵巣腫瘍と、脾腫と、骨髄、脾臓及び肝臓における重篤な白血病性芽球浸透と、を示す一方、siMA6群の生存動物の器官は移植後228日において白血病性浸透の兆候を全く示さなかった図5B,C。結論として、siRNA媒介型MLL-AF4の抑制は、異種移植型SCIDマウスにおけるt4;11陽性細胞の白血病性細胞の生着を低減した。実施例19:結論MLL-AF発現の阻害は、培養懸濁液中における白血病性の増殖並びにt4;11細胞株のコロニー形成を減少した。このコロニー形成能力及び増殖の低減は、アポトーシスの増大に付随して起こった。更に、MLL-AF4の枯渇は、Hoxa7、Hoxa9及びMeis-1の発現の低減に付随して起こり、それが同様にアポトーシスに寄与していると思われる。最後に、siRNA媒介型MLL-AF4の抑制は、異種移植SCIDマウスにおける白血病性細胞の生着を重大に損ねるものであった。SCIDマウスにおける効果的な細胞の生着はALL患者における再発の可能性が予測されているのでウックン,エフ.エム.ら、Blood、第85巻、873-878頁、1995年、これらのデータはMLL-AF4機能の干渉が患者の転帰を改善し得ることを示唆している。t4;11白血病細胞においてのみ発現することと、白血病の維持におけるその中心的な役割とにより、MLL-AF4はこの非常に進行性の白血病の治療に対する優れた標的である。しかしながら、この融合タンパク質に特異的な小さな分子の阻害剤は現在のところ利用可能ではない。本願の発明者らは、この融合部位と相同であるsiRNAがMLL-AF4を効果的に抑制することを示している。更に、本願の発明者らは、この融合遺伝子の二つの異なる変種が高効率かつ排他的な特異性にて標的化され得ることを示している。この排他的な特異性はまた、これらのsiRNAの観察された抗白血病性特性が直接的にMLL-AF4の抑制によるものであり、他の遺伝子の意図していない阻害又はインターフェロンの応答の誘導のような標的以外の効果によるものでないことを証明した。本願の発明者らの結果は、MLL-AF4siRNAが特異的ではあるが、柔軟性であり、よってt4;11ALLの治療に対する優れた治療のツールを提供することを示唆している。その他の実施形態本発明の種々の実施形態を記載してきた。しかしながら、本発明の精神及び範囲を逸脱することなく種々の変更がなされることは理解されよう。"