ケモカイン受容体CXCR2を指向するか、またはケモカイン受容体CXCR2に結合する、少なくとも2つの免疫グロブリン抗原結合ドメインを含むポリペプチドであって、CXCR2上の第1エピトープを認識する第1抗原結合ドメインと、CXCR2上の第2エピトープを認識する第2抗原結合ドメインとを含むポリペプチド。該第1抗原結合ドメインが、配列番号7に示すアミノ酸の配列からなる線状ペプチドに結合する能力を有し、該第2抗原結合ドメインが、該線状ペプチドに結合する能力を有さないか、または該線状ペプチドに低いアフィニティで結合する、請求項1に記載のポリペプチド。該第1抗原結合ドメインが第1免疫グロブリン単一可変ドメイン内に含まれ、該第2抗原結合ドメインが抗体の第2免疫グロブリン単一可変ドメイン内に含まれている、請求項1または請求項2に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインの少なくとも一方が、抗体VLドメインまたはそのフラグメント内に含まれている、請求項3に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインの少なくとも一方が、抗体VHドメインまたはそのフラグメント内に含まれている、請求項3に記載のポリペプチド。該第1抗原結合ドメインが、VLドメインまたはそのフラグメントに含まれ、該第2抗原結合ドメインが、VHドメインまたはそのフラグメントに含まれている、請求項4または5に記載のポリペプチド。該第1抗原結合ドメインが、VHドメインまたはそのフラグメントに含まれ、該第2抗体結合ドメインがVLドメインまたはそのフラグメントに含まれている、請求項4または5に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインが第1および第2ドメイン抗体dAb内に含まれている、請求項3~7のいずれか一項に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインの少なくとも一方が、ラクダ科動物から得ることができる重鎖抗体の単一重鎖からのVHHドメインもしくはそのフラグメント内に含まれているか、またはヒト化を含むその配列最適化変異体である、請求項3または請求項5に記載のポリペプチド。該抗原結合ドメインのそれぞれが、ラクダ科動物に由来する重鎖抗体の単一重鎖からのVHHドメインまたはそのフラグメント内に含まれているか、またはヒト化を含むその配列最適化変異体である、請求項9に記載のポリペプチド。各VHH配列またはそのフラグメントが、1つ、2つまたは3つのCDRを含む、請求項9または10に記載のポリペプチド。各VHH配列が構造:FRCDRFRCDRFRCDRFRを有する、請求項9~11のいずれか一項に記載のポリペプチド。該少なくとも2つの抗原結合ドメインがリンカーによって接合されている、上記請求項のいずれか一項に記載のポリペプチド。次に挙げる構造の一つを有する、請求項3~13のいずれか一項に記載のポリペプチド:ivFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8vFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8リンカーHLEviFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーHLEリンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4が第1抗原結合ドメインを含むのであれば、FR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8は第2抗原ドメインを含み、FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4が第2抗原ドメインを含むのであれば、FR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8は第1抗原結合ドメインを含み、HLEは増加したインビボ半減期を与える結合ユニットである]。該第1および第2抗原結合ドメインのそれぞれが重鎖抗体内に含まれている、請求項1または2に記載のポリペプチド。該第1抗原結合ドメインが第1重鎖抗体の単一鎖内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインが第2重鎖抗体の単一鎖内に含まれていて、該第1および第2単一重鎖抗体がリンカーによって接合されている、請求項1または2に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインのそれぞれが、2本の重鎖と2本の軽鎖とからなる抗体内に含まれている、請求項1または2に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインが、それぞれ2本の重鎖と2本の軽鎖とを含む第1および第2抗体に、それぞれ含まれ、該第1および第2抗体がリンカーによって接合されている、請求項1または2に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインが、それぞれ、第1および第2抗体FabまたはF2フラグメント内に含まれ、該第1および第2FabまたはF2フラグメントがリンカーによって接合されている、請求項1または2に記載のポリペプチド。該第1抗原結合ドメインが抗体Fabフラグメント内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインがF2フラグメント内に含まれているか、またはその逆である、請求項19に記載のポリペプチド。該第1および第2抗原結合ドメインが、それぞれ、第1および第2抗体単鎖FvscFvまたはそのフラグメント内に含まれ、該第1および第2scFvがリンカーによって接合されている、請求項1または2に記載のポリペプチド。リンカーが、抗原結合ドメインを含む1つの免疫グロブリンのC末端を、抗原結合ドメインを含む第2免疫グロブリンのN末端に接合している、請求項13、14、16、18、19、20、または21のいずれか一項に記載のポリペプチド。リンカーが、免疫グロブリン由来でないアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項13、14、16、または18~22のいずれか一項に記載のポリペプチド。ペプチドリンカーが3~50アミノ酸長である、請求項23に記載のポリペプチド。リンカー中のアミノ酸の数が、3~9、10~15、16~20、21~25、26~35、36~40、41~45または46~50から選択される、請求項24に記載のポリペプチド。リンカーが35アミノ酸長である、請求項24に記載のポリペプチド。リンカーがもっぱら2つの異なるアミノ酸だけから構成される、請求項24に記載のポリペプチド。リンカーがアミノ酸グリシンおよびセリンから構成される、請求項27に記載のポリペプチド。リンカーがアミノ酸プロリンおよびセリンならびに場合によってはアラニンから構成される、請求項27に記載のポリペプチド。リンカーがもっぱらアラニンだけで構成される、請求項23~26のいずれか一項に記載のポリペプチド。ペプチドリンカーが配列番号220に示すアミノ酸配列からなる、請求項26に記載のポリペプチド。ラクダ科動物単一重鎖抗体に由来するまたはラクダ科動物単一重鎖抗体に特有のCDRアミノ酸配列を含む、上記請求項のいずれか一項に記載のポリペプチド。フレームワーク領域のアミノ酸配列が、ラクダ科動物単一重鎖抗体に由来するか、またはラクダ科動物単一重鎖抗体に特有である、請求項9~14のいずれか一項に記載のポリペプチド。フレームワーク領域のアミノ酸配列が、ヒト化を含むその配列最適化変異体である、請求項9~14のいずれか一項に記載のポリペプチド。請求項14に記載の構造を含む請求項1~34に記載のポリペプチドであって、第1抗原結合ドメインが、配列番号213、214、216および219またはこれらの一つに対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択され、第2抗原結合ドメインが、配列番号215、217および218またはこれらの一つに対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択されるポリペプチド。請求項14に記載の構造を含む請求項1~34に記載のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号236に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号181に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号237に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号186に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、236、181、146、237または186に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する請求項36に記載のポリペプチド。配列番号141、236、181、146、237または186に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、請求項36に記載のポリペプチド。第1抗原結合ドメインが、配列番号216または配列番号216に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択され、第2抗原結合ドメインが、配列番号217または配列番号217に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択される、請求項36に記載のポリペプチド。配列番号221を含む、請求項1~34のいずれか一項に記載のポリペプチド。請求項14に記載の構造を含む請求項1~34に記載のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号236に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号181に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号185に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、236、181、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、請求項41に記載のポリペプチド。配列番号141、236、181、145、165または185に示すものとのアミノ酸配列の相違が、保存的アミノ酸変化だけである、請求項41に記載のポリペプチド。第1抗原結合ドメインが、配列番号216または配列番号216に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択され、第2抗原結合ドメインが、配列番号218または配列番号218に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択される、請求項41~43のいずれか一項に記載のポリペプチド。配列番号222を含む、請求項1~34のいずれか一項に記載のポリペプチド。請求項14に記載の構造を含む請求項1~34に記載のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号236に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号181に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号235に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号183に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、236、181、143、235または183に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、請求項46に記載のポリペプチド。配列番号141、236、181、143、235または183に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、請求項46に記載のポリペプチド。第1抗原結合ドメインが、配列番号216または配列番号216に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択され、第2抗原結合ドメインが、配列番号215または配列番号215に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択される、請求項46~48のいずれか一項に記載のポリペプチド。配列番号220を有するリンカーによって分離された配列番号216と配列番号215とを含む、請求項1~34のいずれかに記載のポリペプチド。請求項14に記載の構造を含む請求項1~34に記載のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号191に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号237に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号186に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、146、237または186に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、請求項51に記載のポリペプチド。配列番号151、171、191、146、237または186に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、請求項51に記載のポリペプチド。第1抗原結合ドメインが、配列番号219または配列番号219に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択され、第2抗原結合ドメインが、配列番号217または配列番号217に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択される、請求項51~53に記載のポリペプチド。配列番号223を含む、請求項1~34のいずれか一項に記載のポリペプチド。請求項14に記載の構造を含む請求項1~34に記載のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号191に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号185に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、請求項56に記載のポリペプチド。配列番号151、171、191、145、165または185に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、請求項56に記載のポリペプチド。第1抗原結合ドメインが、配列番号219または配列番号219に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択され、第2抗原結合ドメインが、配列番号218または配列番号218に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択される、請求項56~58のいずれか一項に記載のポリペプチド。配列番号224を含む、請求項1~34のいずれか一項に記載のポリペプチド。請求項14に記載の構造を含む請求項1~34に記載のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号191に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号235に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号183に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、143、235または183に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、請求項61に記載のポリペプチド。配列番号151、171、191、143、235または183に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、請求項61に記載のポリペプチド。第1抗原結合ドメインが、配列番号219または配列番号219に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択され、第2抗原結合ドメインが、配列番号215または配列番号215に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドから選択される、請求項61~63のいずれか一項に記載のポリペプチド。配列番号220を有するリンカーによって分離された配列番号219と配列番号215とを含む、請求項1~34のいずれか一項に記載のポリペプチド。部分的にまたは完全にヒト化されたフレームワーク領域を含む配列最適化されたフレームワーク領域を含む、請求項1~65のいずれか一項に記載のポリペプチド。非ヒト霊長類CXCR2と交差反応する、請求項1~66のいずれか一項に記載のポリペプチド。霊長類がカニクイザルである、請求項67に記載のポリペプチド。非霊長類種からのCXCR2とは交差反応しない、請求項1~68のいずれか一項に記載のポリペプチド。CXCケモカインファミリーの他の受容体とは交差反応しない、請求項1~69のいずれか一項に記載のポリペプチド。該第1抗原結合ドメインが、配列番号1のアミノ酸F11、F14およびW15を含むエピトープに結合する、請求項1~70に記載のポリペプチド。該エピトープが線状である、請求項1~71に記載のポリペプチド。該第2抗原結合ドメインがヒトCXCR2の外部ループ内のエピトープ配列番号1のアミノ酸残基106~120、184~208および274~294に結合する、請求項1~72に記載のポリペプチド。該エピトープが配列番号1のアミノ酸残基106~120内にある、請求項1~73に記載のポリペプチド。該エピトープがコンフォメーショナルである、請求項1~74に記載のポリペプチド。該第2抗原結合ドメインが、配列番号1のアミノ酸残基W112、G115、I282およびT285を含むCXCR2のエピトープに結合する、請求項1~75に記載のポリペプチド。ヒトCXCR2に、105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDで、特異的に結合することができる、請求項1~76のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヒトCXCR2に、102M1s1~約107M1s1、好ましくは103M1s1~107M1s1、より好ましくは104M1s1~107M1s1、例えば105M1s1~107M1s1の会合速度kon速度で、特異的に結合することができる、請求項1~77のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヒトCXCR2に、1s1~106s1、好ましくは102s1~106s1、より好ましくは103s1~106s1、例えば104s1~106s1の解離速度koff速度で、特異的に結合することができる、請求項1~78のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヒトCXCR2に、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで、特異的に結合することができる、請求項1~79のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害する能力を有する、請求項1~80のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヒトCXCR2を発現するRBL細胞からのGroα誘導性カルシウム放出を100nM未満のIC50で阻害する能力を有する、請求項1~81のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヒトCHOCXCR2膜における35SGTPγSのGroα誘導性蓄積を50nM未満のIC50で阻害する能力を有する、請求項1~82のいずれか一項に記載のポリペプチド。実質的に単離された形態にある、請求項1~83のいずれか一項に記載のポリペプチド。多パラトープ性コンストラクトである、請求項1~84のいずれか一項に記載のポリペプチド。対応する無修飾のアミノ酸配列と比較して増加したインビボ半減期を有するように修飾されている、請求項1~85のいずれか一項に記載のポリペプチド。該増加した半減期が、血清タンパク質またはそのフラグメント、血清タンパク質に結合することができる結合ユニット、Fc部分、および血清タンパク質に結合することができる小さなタンパク質またはペプチドからなる群より選ばれる1つ以上の結合ユニットによってもたらされる、請求項86に記載のポリペプチド。ポリペプチドに増加した半減期を与える該1つ以上の他の結合ユニットが、ヒト血清アルブミンまたはそのフラグメントからなる群より選ばれる、請求項86に記載のポリペプチド。ポリペプチドに増加した半減期を与える該1つ以上の他の結合ユニットが、血清アルブミンヒト血清アルブミンなどまたは血清免疫グロブリンIgGなどに結合することができる結合ユニットからなる群より選ばれる、86に記載のポリペプチド。該増加した半減期が、血清アルブミンヒト血清アルブミンなどもしくは血清免疫グロブリンIgGなどに結合することができる、ドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、dAb、dAbとしての使用に適したアミノ酸配列、またはナノボディからなる群より選ばれる1つ以上の他の結合ユニットによってもたらされる、請求項86に記載のポリペプチド。血清アルブミンヒト血清アルブミンなどまたは血清免疫グロブリンIgGなどに結合することができる免疫グロブリン単一可変ドメインである、請求項88に記載のポリペプチド。血清タンパク質がヒト血清アルブミンである、請求項88に記載のポリペプチド。さらなる抗原結合ドメインが配列番号228Alb8を含む、請求項92に記載のポリペプチド。対応する無修飾ポリペプチドの半減期より少なくとも15倍、好ましくは少なくとも2倍、例えば少なくとも5倍、例えば少なくとも10倍または20倍以上長い血清中半減期を有する、請求項86~93のいずれか一項に記載のポリペプチド。対応する無修飾ポリペプチドと比較して、1時間以上、好ましくは2時間以上、より好ましくは6時間以上、例えば12時間以上、さらには24、48または72時間以上増加した血清中半減期を有する、請求項86~94のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヒトにおいて少なくとも約12時間、好ましくは少なくとも24時間、より好ましくは少なくとも48時間、さらに好ましくは少なくとも72時間またはそれ以上;例えば少なくとも5日例えば約5~10日、好ましくは少なくとも9日例えば約9~14日、より好ましくは少なくとも約10日例えば約10~15日、または少なくとも約11日例えば約11~16日、より好ましくは少なくとも約12日例えば約12~18日またはそれ以上、または14日以上例えば約14~19日の血清中半減期を有する、請求項86~95のいずれか一項に記載のポリペプチド。PEG化されている、請求項1~96のいずれか一項に記載のポリペプチド。PAS化されている、請求項1~96のいずれか一項に記載のポリペプチド。HES化されている、請求項1~96のいずれか一項に記載のポリペプチド。該さらなる抗原結合ドメインが血清タンパク質に、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで結合する、請求項87~96に記載のポリペプチド。請求項40、45、50、55、60または65のいずれか一項に記載のポリペプチドによるCXCR2への結合を交差ブロックする能力を有する、請求項1~100のいずれか一項に記載のポリペプチド。CXCR2を指向するまたはCXCR2に結合する少なくとも1つの免疫グロブリン単一可変ドメインを含む、請求項101に記載のポリペプチド。配列番号225、226または227から選択される配列からなる、請求項1~50または66~102に記載のポリペプチド。請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸分子。配列番号25~43、90、213~219および221~245に示すアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン単一可変ドメインをコードする核酸分子。配列番号192~211に示す核酸配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項105に記載の核酸分子。配列番号44~69に示すアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子。請求項104~107のいずれか一項に記載の核酸分子を含む発現ベクター。請求項104~107のいずれか一項に記載の核酸配列から請求項1~100のいずれか一項に記載のポリペプチドを発現する能力を有する宿主細胞。請求項109に記載の宿主細胞を培養することによって得ることができる一価、二価、多価、二パラトープ性または多パラトープ性ナノボディ。請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチドと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。医薬品として使用するための、請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチド。慢性閉塞性肺疾患COPDおよびCOPDの増悪の処置に使用するための、請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチド。嚢胞性線維症、喘息、重症喘息、喘息の増悪、アレルギー性喘息、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、気道リモデリング、閉塞性細気管支炎症候群または気管支肺異形成の処置に使用するための、請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチド。アテローム性動脈硬化、糸球体腎炎、炎症性腸疾患クローン病、血管新生ならびに黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害を含む新しい血管の発達を特徴とする疾患、多発性硬化症、乾癬、加齢性黄斑変性疾患、眼ベーチェット病、ぶどう膜炎、特発性PAH、家族性PAHおよび随伴性PAHを含む肺動脈高血圧PAH、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、非小細胞癌、大腸がん、膵がん、食道がん、卵巣がん、乳がん、固形腫瘍および転移、黒色腫、肝細胞癌、虚血再灌流傷害、鎌形血球症における溶血性輸血誘発性血流閉塞発作、虚血再灌流傷害、急性脳卒中心筋梗塞、閉鎖性頭部外傷、外傷後炎症またはインスリン抵抗性糖尿病の処置に使用するための、請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチド。請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量を対象に投与することを含む、慢性閉塞性肺疾患COPDまたはCOPDの増悪を処置する方法。請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量を対象に投与することを含む、嚢胞性線維症、喘息、重症喘息、喘息の増悪、アレルギー性喘息、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、気道リモデリング、閉塞性細気管支炎症候群または気管支肺異形成からなる群より選択される状態を処置する方法。アテローム性動脈硬化、糸球体腎炎、炎症性腸疾患クローン病、血管新生ならびに黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害を含む新しい血管の発達を特徴とする疾患、多発性硬化症、乾癬、加齢性黄斑変性疾患、眼ベーチェット病、ぶどう膜炎、特発性PAH、家族性PAHおよび随伴性PAHを含む肺動脈高血圧PAH、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、非小細胞癌、大腸がん、膵がん、食道がん、卵巣がん、乳がん、固形腫瘍および転移、黒色腫、肝細胞癌、虚血灌流傷害、鎌形血球症における溶血性輸血誘発性血流閉塞発作、虚血再灌流傷害、急性脳卒中心筋梗塞、閉鎖性頭部外傷、外傷後炎症およびインスリン抵抗性糖尿病からなる群より選択される状態を、請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量を対象に投与することによって処置する方法。慢性閉塞性肺疾患COPDまたはCOPDの増悪を処置するための医薬品の製造における、請求項~103のいずれか一項に記載のポリペプチドの使用。喘息、重症喘息、喘息の増悪、アレルギー性喘息、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、気道リモデリング、閉塞性細気管支炎症候群または気管支肺異形成を処置するための医薬品の製造における請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチドの使用。アテローム性動脈硬化、糸球体腎炎、炎症性腸疾患クローン病、血管新生ならびに黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害を含む新しい血管の発達を特徴とする疾患、多発性硬化症、乾癬、加齢性黄斑変性疾患、眼ベーチェット病、ぶどう膜炎、特発性PAH、家族性PAHおよび随伴性PAHを含む肺動脈高血圧PAH、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、非小細胞癌、大腸がん、膵がん、食道がん、卵巣がん、乳がん、固形腫瘍および転移、黒色腫、肝細胞癌、虚血再灌流傷害、鎌形血球症における溶血性輸血誘発性血流閉塞発作、虚血再灌流傷害、急性脳卒中心筋梗塞、閉鎖性頭部外傷、外傷後炎症またはインスリン抵抗性糖尿病を処置するための医薬品の製造における、請求項1~103のいずれか一項に記載のポリペプチドの使用。定義本明細書、実施例および特許請求の範囲においては、a別段の表示または定義がある場合を除き、使用される用語は全て、当技術分野におけるその通常の意味を有し、それらは当業者には明白であるだろう。例えば次に挙げるような標準的参考書を参照されたい。SambrookらMolecularCloningALaboratoryManual第2版第1~3巻、ColdSpringHarborLaboratoryPress;FAusubelら編CurrentprotocolsinprotocolsGreenPublishingandWileyInterscience、ニューヨーク1987;LewinGenesIIJohnWileySons、ニューヨーク州ニューヨーク1985;OldらPrinciplesofGeneManipulationAnIntroductiontoGeneticEngineering第2版、UniversityofCaliforniaPress、カリフォルニア州バークレー1981;RoittらImmunology第6版MosbyElsevier、エディンバラ2001;RoittらRoittsEssentialImmunology第10版、BlackwellPublishing、英国2001;およびJanewayらImmunobiology第6版GarlandSciencePublishingChurchillLivingstone、ニューヨーク2005。b別段の表示がある場合を除き、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン配列という用語は-それが、本明細書において、重鎖抗体を指すために使用されているか、従来の4本鎖抗体を指すために使用されているかとはかかわりなく-フルサイズの抗体、その個々の鎖、ならびにその全てのパーツ、ドメインまたはフラグメント限定するわけではないが、それぞれVHHドメインまたはVHVLドメインなどの、抗原結合ドメインまたは抗原結合フラグメントを含むをどちらも包含する一般用語として使用される。加えて、本明細書において例えば免疫グロブリン配列、抗体配列、可変ドメイン配列、VHH配列またはタンパク質配列のような用語において使用する配列という用語は、文脈上、もっと限定的な解釈が必要な場合を除き、一般的には、関連するアミノ酸配列と、それをコードする核酸配列またはヌクレオチド配列とを、どちらも包含すると理解すべきである。c別段の表示がある場合を除き、免疫グロブリン単一可変ドメインという用語は、限定するわけではないが、抗原結合ドメインまたは抗原結合フラグメント例えば、それぞれ、VHHドメインまたはVHもしくはVLドメインを包含する一般用語として使用される。抗原結合分子または抗原結合タンパク質という用語は可換的に使用され、ナノボディという用語も包含する。免疫グロブリン単一可変ドメインはさらに、軽鎖可変ドメイン配列例えばVL配列または重鎖可変ドメイン配列例えばVH配列であり;より具体的に述べると、それらは、従来の四本鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列、または重鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列であることができる。したがって、免疫グロブリン単一可変ドメインは、ドメイン抗体、もしくはドメイン抗体としての使用に適した免疫グロブリン配列、単一ドメイン抗体、もしくは単一ドメイン抗体としての使用に適した免疫グロブリン配列、dAb、もしくはdAbとしての使用に適した免疫グロブリン配列、またはナノボディVHH配列を含むが、これに限るわけではないであることができる。本発明は、マウス、ラット、ウサギ、ロバ、ヒトおよびラクダ科動物免疫グロブリン配列を含む、異なる起源の免疫グロブリン配列を包含する。免疫グロブリン単一可変ドメインには、完全ヒト免疫グロブリン配列、ヒト化免疫グロブリン配列、他の方法で配列が最適化された免疫グロブリン配列、またはキメラ免疫グロブリン配列が包含される。免疫グロブリン単一可変ドメインおよび免疫グロブリン単一可変ドメインの構造は、4つのフレームワーク領域またはFRこれらは、当技術分野および本明細書において、フレームワーク領域1またはFR1;フレームワーク領域2またはFR2;フレームワーク領域3またはFR3;およびフレームワーク領域4またはFR4と、それぞれ呼ばれているから構成され、これらのフレームワーク領域の間に3つの相補性決定領域またはCDRこれらは、当技術分野において、相補性決定領域1またはCDR1;相補性決定領域2またはCDR2;および相補性決定領域3またはCDR3と、それぞれ呼ばれているが介在しているとみなすことができるただし、これに限定されるわけではない。d別段の表示がある場合を除き、具体的に詳述されていない方法、ステップ、技法および操作は全て、当業者には明白であるだろうとおり、自体公知の方法で行うことができ、自体公知の方法で行われた。例えばここでも、本明細書において言及する標準的参考書と一般的背景技術およびそこに言及されているさらなる参考文献、ならびに例えば次に挙げるような総説を参照されたい:PrestaAdvDrugDelivRev20065864056;LevinandWeissMolBiosyst200624957;IrvingらJImmunolMethods20012483145;SchmitzらPlacenta200021SupplA、S10612、GonzalesらTumourBiol2005263143これらには、タンパク質工学の技法、例えば親和性成熟ならびに免疫グロブリンなどのタンパク質の特異性および他の望ましい性質を改善するための他の技法が記述されている。eアミノ酸残基は、標準的な三文字または一文字アミノ酸コードに従って示す。f2つ以上のヌクレオチド配列の比較を目的とする場合、第1ヌクレオチド配列と第2ヌクレオチド配列の間の配列同一性のパーセンテージは、第2ヌクレオチド配列中の対応する位置にあるヌクレオチドと同一な第1ヌクレオチド配列中のヌクレオチドの数]を[第1ヌクレオチド配列中のヌクレオチドの総数]で割り、[100]を掛けることによってこの場合、第2ヌクレオチド配列における-第1ヌクレオチド配列と比較した-ヌクレオチドの欠失、挿入、置換または付加はそれぞれ、単一ヌクレオチド位置における相違とみなされる、または適切なコンピュータアルゴリズムもしくは技法を使って、計算または決定することができる。2つ以上のヌクレオチド配列の配列同一性の程度は、NCBIBlastv20などの既知の配列アラインメント用コンピュータアルゴリズムを標準的設定で使用することによって、計算することができる。配列同一性の程度を決定するための技法、コンピュータアルゴリズムおよび設定は、例えばWO04037999、EP0967284、EP1085089、WO0055318、WO0078972、WO9849185およびGB2357768Aなどに、他にもいくつか記載されている。通常、上に概説した計算方法に従って2つのヌクレオチド配列間の配列同一性のパーセンテージを決定するという目的には、ヌクレオチド数が最も多いヌクレオチド配列を第1ヌクレオチド配列とし、他方のヌクレオチド配列が第2ヌクレオチド配列とされるであろう。g2つ以上のアミノ酸配列の比較を目的とする場合、第1アミノ酸配列と第2アミノ酸配列の間の配列同一性本明細書ではアミノ酸同一性ともいうのパーセンテージは、第2アミノ酸配列中の対応する位置にあるアミノ酸残基と同一な第1アミノ酸配列中のアミノ酸残基の数]を[第1アミノ酸配列中のアミノ酸残基の総数]で割り、[100]を掛けることによってこの場合、第2アミノ酸配列における-第1アミノ酸配列と比較した-アミノ酸残基の欠失、挿入、置換または付加はそれぞれ、単一アミノ酸残基位置における相違、すなわち本明細書に定義するアミノ酸相違とみなされる、または適切なコンピュータアルゴリズムもしくは技法を使って、計算または決定することができる。上に概説した計算方法に従って2つのアミノ酸配列間の配列同一性のパーセンテージを決定するという目的には、アミノ酸数が最も多いアミノ酸配列を第1アミノ酸配列とし、他方のアミノ酸配列が第2アミノ酸配列とされるであろう。また、2つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度を決定する際に、当業者は、下記vにおいて述べるように、保存的アミノ酸置換を考慮することもできる。本明細書に記載するポリペプチドに適用される任意のアミノ酸置換は、種が異なる相同タンパク質間のアミノ酸変異の頻度の解析SchulzらPrinciplesofProteinStructureSpringerVerlag1978が開発したもの、構造形成能の解析ChouandFasmanBiochemistry132111974およびAdvEnzymol47451491978が開発したもの、およびタンパク質中の疎水性パターンの解析EisenbergらProcNadAcadSciUSA811401441984;KyteDoolittleJMolecBiol1571051321981、およびGoldmanらAnnRevBiophysChem153213531986が開発したものに基づくこともできるこれらの文献は全て、引用により、そのまま本明細書に組み込まれる。ナノボディの一次構造および二次構造については、ラマ由来のVHHドメインの結晶構造が、例えばDesmyterらNatureStructuralBiologyVol39803;SpinelliらNaturalStructuralBiology;3752757;およびDecanniereらStructureVol74361に記載されている。h2つのアミノ酸配列を比較する場合、アミノ酸相違という用語は、第2配列と比較した第1配列のある位置における単一アミノ酸残基の挿入、欠失または置換を指し、2つのアミノ酸配列は、1つ、2つまたはそれ以上のそのようなアミノ酸相違を含有することができると理解される。iあるヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が、それぞれ、別のヌクレオチド配列もしくはアミノ酸配列を含む、または別のヌクレオチド配列もしくはアミノ酸配列から本質的になるという場合、これは、後者のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が、それぞれ、最初に述べたヌクレオチド配列またはアミノ酸配列中に組み込まれたことを意味しうるが、これは一般に、最初に述べた配列が実際にどのようにして生成または取得されたかこれは、例えば本明細書に記載する任意の適切な方法によることができるとは無関係に、最初に述べたヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が、その配列内に、それぞれ、後者の配列と同じヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を有するヌクレオチドまたはアミノ酸残基のストレッチを含むことを意味することの方が普通である。限定するわけではないが、一例として、本発明の二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメイン、例えばナノボディが、CDR配列を含むという場合、これは、該CDR配列が本発明の二パラトープ性ナノボディ中に組み込まれたことを意味しうるが、これは一般に、該二パラトープ性ナノボディがどのようにして生成または取得されたかとは無関係に、本発明の二パラトープ性ナノボディが、その配列内に、該CDR配列と同じアミノ酸配列を有するアミノ酸残基のストレッチを含有することを意味することの方が普通である。後者のアミノ酸配列が特別な生物学的または構造的機能を有する場合、それは、好ましくは、最初に述べたアミノ酸配列中でも、本質的に同じ、類似のまたは等価な生物学的または構造的機能を有する言い換えると、最初に述べたアミノ酸配列は、好ましくは、後者の配列が本質的に同じ、類似のまたは等価な生物学的または構造的機能を果たす能力を有するものであることにも留意すべきである。例えば、本発明の二パラトープ性ナノボディが、CDR配列またはフレームワーク配列を、それぞれ含むという場合、そのCDR配列およびフレームワークは、好ましくは、該二パラトープ性ナノボディにおいて、それぞれCDR配列またはフレームワーク配列として機能する能力を有する。また、あるヌクレオチド配列が別のヌクレオチド配列を含むという場合、最初に述べたヌクレオチド配列は、好ましくは、それが発現産物例えばポリペプチドへと発現した時に、後者のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列が、該発現産物の一部を形成する言い換えると、後者のヌクレオチド配列が、最初に述べた、より大きなヌクレオチド配列と同じ読み枠にあるものである。j核酸配列またはアミノ酸配列は、例えばそれを取得した自然の生物学的供給源およびまたは反応媒質もしくは培養培地と比較して、それが、該供給源または媒質培地において通常それに付随する少なくとも1つの他の構成要素、例えば他の核酸、他のタンパク質ポリペプチド、他の生物学的構成要素もしくは高分子または少なくとも一つの夾雑物、不純物もしくは微量構成要素から分離された場合に、本質的に単離された形態にあるとみなされる。特に、核酸配列またはアミノ酸配列は、それが、少なくとも2倍、特に少なくとも10倍、より具体的には少なくとも100倍、そして1000倍またはそれ以上まで精製された場合に、本質的に単離されたとみなされる。本質的に単離された形態にある核酸配列またはアミノ酸配列は、好ましくは、適切な技法、例えばポリアルキルアミドゲル電気泳動などの適切なクロマトグラフィー技法を使って決定した場合に、本質的に均一である。k本明細書において使用する抗原結合ドメインという用語は、少なくとも1つのCDRを含み、ターゲット抗原性決定基またはターゲットエピトープを認識するようなコンフォメーションをとっている、免疫グロブリン中のアミノ酸の配列を指す。l抗原性決定基およびエピトープという用語は、本明細書においては可換的にも使用することができ、線状コンフォメーションであるか、非線状コンフォメーションであるかを問わず、抗原結合ドメインによって認識されるターゲットCXCR2内のアミノ酸配列を指す。m特異的抗原性決定基、エピトープ、抗原またはタンパク質または少なくともその一部、フラグメントまたはエピトープに、特異的に結合することができ、それらに対するアフィニティを有し、かつまたはそれらに対する特異性を有する、例えば本明細書に記載する二パラトープ性ナノボディまたはそのフラグメントなどといった本発明のポリペプチドは、該抗原性決定基、エピトープ、抗原もしくはタンパク質に対するagainst、または抗原性決定基、エピトープ、抗原もしくはタンパク質を指向するdirectedagainstという。n特異性という用語は、本発明のポリペプチドの特定抗原結合ドメインが結合することのできる、異なるタイプの抗原または抗原性決定基の数を指す。任意の特定抗原エピトープに対する抗原結合タンパク質の特異性は、WO08020079引用により本明細書に組み込まれるの53~56頁に記載されているように、アフィニティおよびまたはアビディティに基づいて決定することができ、この文献には、ポリペプチドと当該抗原またはエピトープの間の結合を測定するための好ましい技法も、いくつか記載されている。典型的には、各抗原結合タンパク質本発明のポリペプチドなどにおいて、各抗原結合ドメインは、それぞれ独立して、それらの抗原エピトープに、105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDですなわち105~1012リットルモル以上、好ましくは107~1012リットルモル以上、より好ましくは108~1012リットルモルの会合定数KAで、結合しうる。104モルリットルより大きい任意のKD値または104M1より低い任意のKA値は、一般に、非特異的結合を示すとみなされる。好ましくは、本発明の二パラトープ性ポリペプチドは、所望の抗原に、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで結合するであろう。CXCR2への本発明のポリペプチドの特異的結合は、自体公知の任意の適切な方法、例えばスキャッチャード分析およびまたは競合結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイRIA、酵素イムノアッセイEIAおよびサンドイッチ競合アッセイ、ならびに自体公知のその変法;ならびに本明細書において言及する他の技法で決定することができる。当業者には明らかであるだろうとおり、またWO08020079の53~56頁に記載されているとおり、解離定数は、真の解離定数または見掛けの解離定数であることができる。解離定数を決定するための方法は当業者には明らかであるだろうし、これには、例えばWO08020079の53~56頁で述べられている技法が含まれる。o本発明のポリペプチド、特に本発明の二パラトープ性ナノボディの半減期は、一般に、本発明のポリペプチドの血清中濃度が、例えばそのポリペプチドの分解およびまたはそのポリペプチドの天然の機序によるクリアランスまたは隔離などによって、インビボで50低下するのに要する時間と定義することができる。本発明のポリペプチドのインビボ半減期は、自体公知の任意の方法で、例えば薬物動態分析によって、決定することができる。適切な技法は当業者には明らかであるだろうし、例えば一般に、WO08020079の57頁のパラグラフoに記載されているとおりであることができる。また、WO08020079の57頁のそのパラグラフで言及されているように、半減期は、t12α、t12βおよび曲線下面積AUCなどのパラメータを使って表現することができる。例えば、下記の実験項と、KennethAらChemicalStabilityofPharmaceuticalsAHandbookforPharmacistsおよびPetersらPharamacokineticanalysisAPracticalApproach1996などの標準的参考書を参照されたい。また、MGibaldiおよびDPerronPharmacokineticsMarcelDekker刊、第2改訂版1982も参照されたい。半減期の増加または増加した半減期という用語は、t12βの増加を指し、t12αおよびまたはAUCまたはその両者の増加を伴う場合も、伴わない場合もある。p本発明に関して、適切なインビトロアッセイ、細胞アッセイまたはインビボアッセイを使って測定されるCXCR2の活性をブロックし、低下させまたは阻害するとは、CXCR2の関連するまたは意図する生物学的活性の活性を、本発明のポリペプチドが存在しない点以外は同じ条件下での同じアッセイにおけるCXCR2の活性と比較して、少なくとも1、好ましくは少なくとも5、例えば少なくとも10または少なくとも25、例えば少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、または90以上、ブロックし、低下させ、または阻害することを意味しうる。当業者には明らかであるだろうとおり、阻害には、本発明のポリペプチドが存在しない点以外は同じ条件と比較して、CXCR2の、そのリガンドまたは結合パートナーの1つ以上に対するアフィニティ、アビディティ、特異性およびまたは選択性の減少をもたらすこと、およびまたはCXCR2が存在する培地または環境における1つ以上の条件例えばpH、イオン強度、補因子の存在などに対するCXCR2の感受性の減少をもたらすことも伴いうる。当業者には明らかであるだろうとおり、これもまた、関与するターゲットまたは抗原に応じて、任意の適切な方法で、かつまたは任意の適切な自体公知のアッセイを使って、決定することができる。q本明細書にいう調整は、CXCR2のアロステリック調整、およびまたはCXCR2の、そのリガンドの一つへの結合を低下させもしくは阻害することを、およびまたはCXCR2への結合に関して天然リガンドと競合することを意味しうる。調整は、例えば、CXCR2のフォールディングまたはコンフォメーションに関して、またはそのコンフォメーションを例えばリガンドの結合時に変化させるその能力、他のサブユニットと会合する能力、もしくは解離する能力に関して、変化をもたらすことも伴いうる。調整は、例えば、他の化合物を輸送するCXCR2の能力または他の化合物例えばイオンのチャネルとして機能する能力に変化をもたらすことも伴いうる。本発明のポリペプチド、特に本発明の二パラトープ性ナノボディによる、CXCR2活性の調整、特に阻害または低下は、可逆的であることも、不可逆的であることもありうるが、医薬的および薬理学的目的には、通常は、可逆的であるだろう。r本発明のポリペプチドは、それが第2のターゲットまたはポリペプチドに結合する際のアフィニティの少なくとも10倍、例えば少なくとも100倍、好ましくは少なくとも1000倍、最大10000倍以上であるアフィニティ上述のとおりであって、KD値、KA値、Koff速度およびまたはKon速度として適切に表現されたものでCXCR2に結合する場合に、第2のターゲットまたは抗原と比較して、CXCR2に対して特異的であるという。例えば本発明のポリペプチドは、それが別のターゲットまたはポリペプチドもしくはそのエピトープに結合する際のKDの10分の1以下、例えば100分の1以下、好ましくは1000分の1以下、例えば10000分の1以下、さらにはそれより低いKD値で、CXCR2に結合しうる。s交差ブロックするcrossblock、交差ブロックされたcrossblockedおよび交差ブロッキングcrossblockingという用語は、本明細書においては可換的に使用され、ある免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの、所与のターゲットに対する本発明の他の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの結合を妨害する能力を意味する。本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドが、別のターゲットの結合を妨害することができる程度、そしてそれゆえに、それが本発明に従って交差ブロックするということができる程度は、競合結合アッセイを使って決定することができる。特に適切な定量的交差ブロッキングアッセイの一つでは、FACSまたはELISAに基づくアプローチを使って、本発明の標識例えばHisタグ付き、放射標識または蛍光標識免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドと、当該他の結合剤との間の、ターゲットへのそれらの結合に関する競合を測定する。実験項では、ある結合分子が本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドを交差ブロックするかどうか、または交差ブロックする能力を有するかどうかを決定するための適切なFACSおよびELISA置換アッセイdisplacementbasedassayを概説する。このアッセイが、本明細書に記載する免疫グロブリン単一可変ドメインまたは他の結合剤のどれにでも使用できることは理解されるであろう。したがって一般に、本発明の交差ブロッキングアミノ酸配列または他の結合剤は、上記交差ブロッキングアッセイにおいて、アッセイ中に、本発明の第2のアミノ酸配列または他の結合剤の存在下で、記録される本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの置換displacementが、試験対象である潜在的交差ブロッキング剤例えば他の抗体フラグメント、VHH、dAbまたは類似のVHVL変異体による最大理論置換の50~100であるような形で、ターゲットに結合するであろうものである。t本発明のポリペプチドは、2つの異なる抗原または抗原性決定基例えば、2つの異なる哺乳動物種、例えばヒトとカニクイザルとに由来する、血清アルブミンまたはCXCR2に関して、それが、これら異なる抗原または抗原性決定基の両方に対して特異的上に定義したものであるならば、交差反応性であるという。u本明細書に定義する保存的アミノ酸変化とは、あるアミノ酸残基が類似する化学構造の別のアミノ酸残基で置き換えられているアミノ酸置換であって、ポリペプチドの機能、活性または他の生物学的性質にはほとんど影響を有さないか、本質的に影響を有さないアミノ置換を指す。そのような保存的アミノ酸置換は当技術分野では、例えばWO04037999、GBA3357768、WO9849185、WO0046383およびWO0109300などから、よく知られており;そのような置換の好ましいタイプおよびまたは組合せは、WO04037999およびWO9849185ならびにそこで言及されているさらなる文献からの該当する教示に基づいて選択することができる。そのような保存的置換は、好ましくは、次に挙げるグループa~e内のアミノ酸の一つが同じグループ内の別のアミノ酸残基で置換されている置換である:aAla、Ser、Thr、ProおよびGlyを含む、小さい脂肪族非極性または低極性残基;bAsp、Asn、GluおよびGlnを含む、極性陰性荷電残基およびそれらの非荷電アミド;cHis、ArgおよびLysを含む、極性陽性荷電残基;dMet、Leu、He、ValおよびCysを含む、大きい脂肪族非極性残基;およびePhe、TyrおよびTrpを含む、芳香族残基。特に好ましい保存的置換は次のとおりである:AlaのGlyまたはSerへの置換;ArgのLysへの置換;AsnのGlnまたはHisへの置換;AspのGluへの置換;CysのSerへの置換;GlnのAsnへの置換;GluのAspへの置換;GlyのAlaまたはProへの置換;HisのAsnまたはGlnへの置換;IleのLeuまたはValへの置換;LeuのIleまたはValへの置換;LysのArg、GlnまたはGluへの置換;MetのLeu、TyrまたはIleへの置換;PheのMet、LeuまたはTyrへの置換;SerのThrへの置換;ThrのSerへの置換;TrpのTyrへの置換;TyrのTrpへの置換;およびまたはPheのVal、IleまたはLeuへの置換。v本明細書にいうCDRは、本発明のポリペプチドの相補性決定領域である。CDRは、単独で、または他の1つ以上のCDRとの組合せで、本発明のポリペプチドが認識する抗原またはエピトープとの相補性を確立するアミノ酸のストレッチである。CDRは、一定のナンバリング規約numberingconventionによって、アミノ酸配列中に同定される。請求項および本明細書の具体的説明については、Kabatナンバリングを使用する。w本明細書にいうFRは、フレームワーク領域FWと呼ぶ場合もあるである。フレームワーク領域は、1つ以上のCDRに隣接するアミノ酸のストレッチであり、それらを、抗原認識またはエピトープ認識にとって正しい三次元コンフォメーションで支えている。FRは、ターゲット抗原またはターゲットエピトープに特異的ではないが、それらが内在している免疫グロブリン分子の種起源またはタイプに特異的である。本明細書で詳しく議論するとおり、本発明のポリペプチドにおいて、フレームワーク領域のアミノ酸配列は、免疫グロブリンの供給源例えばラクダ科動物によって適用されるフレームワーク配列とは異なるように工学的に操作する余地がある。x本明細書にいうCXCR2は、少なくとも白血球の表面に存在するサイトカイン受容体であって、天然に存在するそのリガンドが、Groα、β、γ、IL8、ENA78またはGCP2でありうるものを指す。CXCR2は、一般に、本明細書においては、起源の種とは無関係に、CXCR2機能を示す任意のタンパク質を指す。ただし、本明細書にいうヒトCXCR2は、配列番号1に示すアミノ酸配列を含むタンパク質またはその任意のアレル変異体もしくはオルソログを指し、カニクイザルCXCR2は、配列番号3に示すアミノ酸配列を含むタンパク質またはその任意のアレル変異体もしくはオルソログを指す。y本明細書にいう配列最適化は、自然の配列中には存在しないであろう特定の性質または構造的特徴を確保する目的で、アミノ酸配列中の置換、挿入または欠失を促進することを指す。そのような置換、挿入または欠失は、例えば、化学的安定性のために、製造可能性を改善するために、ピログルタミン酸形成または酸化もしくは異性化を避けるために、行うことができる。本発明の二パラトープ性ポリペプチド、特に二パラトープ性ナノボディに使用することができる、そのような性質の最適化を達成するための方法は、引用により本明細書に組み込まれるWO2009095235に記載されている。配列最適化技法は、本発明の二パラトープ性ポリペプチドを本明細書に記載する方法でヒト化するためにも行うことができる。したがって、本明細書において配列最適化、配列最適化する、または配列最適化されたという場合、これは常に、ヒト化置換または挿入への具体的言及、および部分的または完全にヒト化された二パラトープ性ポリペプチド、好ましくは二パラトープ性ナノボディへの具体的言及を包含する。発明の詳細な説明上述のように、本発明は、その第1の態様において、ケモカイン受容体CXCR2を指向するか、またはケモカイン受容体CXCR2に結合する、少なくとも2つの免疫グロブリン抗原結合ドメインを含むポリペプチドであって、CXCR2上の第1エピトープを認識する第1抗原結合ドメインと、CXCR2上の第2エピトープを認識する第2抗原結合ドメインとを含むポリペプチドを提供する。本発明の好ましいポリペプチドは、配列番号7に示すアミノ酸の配列からなる線状ペプチドに結合する能力を有する第1抗原結合ドメインと、該線状ペプチドに結合する能力を有さないかまたは該線状ペプチドに低いアフィニティで結合する第2抗原結合ドメインとを含む。配列番号7はヒトCXCR2の最初の19個のN末端アミノ酸である。ある実施形態において、第1抗原結合ドメインは、CXCR2のアミノ酸1~19を含むまたはCXCR2のアミノ酸1~19内にある第1エピトープを認識し、該第2抗原結合ドメインは、アミノ酸1~19外にあるCXCR2上の第2のエピトープを認識する。第1および第2抗原結合ドメインは、免疫グロブリンクラスの分子に特有な1つ以上のアミノ酸配列中に含まれうる。例えば、これらのペプチドまたはポリペプチドは、それぞれ、リンカーによって接合された従来の四本鎖抗体を含みうる。特に本発明のポリペプチドは、該第1および第2抗原結合ドメインが、それぞれ第1および第2抗体それぞれ、2本の重鎖と2本の軽鎖とを含むものに含まれ、該第1および第2抗体がリンカーで接合されているものであることができる。あるいは、該第1および第2抗原結合ドメインが、2本の重鎖および2本の軽鎖を含む単一抗体内に含まれていてもよい。本発明の代替的一実施形態において、第1および第2抗原結合ドメインは、重鎖抗体であるアミノ配列内に含まれ、特に本発明のポリペプチドは、該第1抗原結合ドメインが第1重鎖抗体内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインが第2重鎖抗体内に含まれていて、該第1および第2重鎖抗体がリンカーによって接合されているものであることができる。そのような重鎖抗体はラクダ科から得ることができ、それらは本質的に、それぞれが定常領域と可変領域とを有する2本の重鎖だけを含む。該第1および第2結合ドメインが2本の重鎖を含む単一重鎖抗体内に含まれているポリペプチドも、本発明では考えられる。もう一つの代替的実施形態において、第1および第2結合ドメインを含むペプチドまたはポリペプチドは単鎖FvscFvであることができる。これらはVLドメインとVHドメインの線状融合物を含む。したがって本発明のポリペプチドは、該第1および第2抗原結合ドメインがそれぞれ第1および第2抗体単鎖FvscFvフラグメント内に含まれ、該第1および第2scFvフラグメントがリンカーによって接合されているものであることができる。さらにもう一つの代替的実施形態では、第1および第2抗原結合ドメインが、従来の四本鎖抗体の1つ以上のFabまたはF2フラグメントに含まれていてもよい。Fabフラグメントは、従来の抗体の1本の重鎖および1本の軽鎖のそれぞれからの、1つの定常ドメインと1つの可変ドメインとを含む。F2フラグメントは、従来の抗体のヒンジ領域の一部によって接合された2つのFabフラグメントを含む。特に、本発明のポリペプチドは、該第1および第2抗原結合ドメインがそれぞれ第1および第2抗体FabまたはF2フラグメント内に含まれ、該第1および第2FabまたはF2フラグメントがリンカーによって接合されているものであることができる。そのような実施形態では、該第1抗原結合ドメインが抗体Fabフラグメント内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインがF2フラグメント内に含まれていてもよく、その逆でもよい。本発明の好ましい一実施形態では、第1抗原結合ドメインが第1免疫グロブリン単一可変ドメイン内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインが第2免疫グロブリン単一可変ドメイン内に含まれる。本発明のこの実施形態のある特定例は、第1および第2抗原結合ドメインがdと呼ばれるドメイン抗体に含まれているものである。dは、従来の抗体からの単一VLまたはVHドメインを含む。したがって本発明のポリペプチドは、該第1および第2抗原結合ドメインが第1および第2ドメイン抗体dAb内に含まれ、該第1および第2dAbがリンカーによって接合されているものであることができる。該第1および第2dAbは、抗体VLフラグメントまたは抗体VHフラグメントであることができる。そのような実施形態では、該第1抗原結合ドメインがVLフラグメントに含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインがVHフラグメントに含まれるか、またはその逆であることができる。単一ドメイン抗体の一般的説明については、EP0368684も参照されたい。dAbという用語については、例えばWardらNature1989Oct12;3415446、HoltらTrendsBiotechnol200321484490;ならびに例えばWO06030220、WO06003388およびDomantisLtdの他の特許出願公開を参照されたい。また、それらが哺乳動物由来でないという理由で本発明においてはそれほど好ましくはないものの、単一ドメイン抗体または単一可変ドメインが、サメの一定の種に由来しうること例えばいわゆるIgNARドメイン、例えばWO0518629参照にも留意すべきである。上述の重鎖抗体の単鎖の可変領域はVHHドメインとして知られており、ナノボディとして知られている抗体フラグメントを含む。ナノボディはVHHドメイン全体またはそのフラグメントを含みうる。重鎖抗体およびその可変ドメインの一般的説明については、WO08020079の59頁に挙げられている従来技術、および国際出願WO06040153の41~43頁に挙げられている参考文献一覧を参照されたい。VHHドメインは、ユニークな構造的特徴と機能的性質をいくつか有し、それらが、単離されたVHHドメインならびに、それに基づくナノボディであって、天然に存在するVHHドメインと同じ構造的および機能的特徴を有するものおよびそれを含有するポリペプチドを、機能的な抗原結合ドメインまたはポリペプチドとして、著しく有利にしている。特に、VHHドメインこれは、軽鎖可変ドメインが存在しなくても、または軽鎖可変ドメインとの相互作用が何もなくても、抗原に機能的に結合するように、自然が設計したものであるおよびナノボディは、単一の比較的小さな機能的抗原結合構造単位、ドメインまたはタンパク質として機能することができる。本明細書において使用するナノボディという用語は、天然に存在するVHHドメインおよびそのフラグメントだけでなく、本明細書に詳述するその変異体および誘導体も包含する。本発明の最も好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ポリペプチドが、該第1抗原結合ドメインが第1ナノボディ内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインが第2ナノボディ内に含まれていて、該第1および第2ナノボディがリンカーによって接合されているものである。VHHドメインの構造はFRCDRFRCDRFRCDRFRと表すことができ、本発明の二パラトープ性ポリペプチドは、次に挙げる構造の一つを有しうる:iFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8iiFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8リンカーHLEiiiFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーHLEリンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4が第1抗原結合ドメイン線状配列番号7結合剤を含むのであれば、FR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8は、第2抗原ドメイン線状配列番号7非結合剤を含み、FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4が第2抗原ドメイン線状配列番号7非結合剤を含むのであれば、FR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8は第1抗原結合ドメイン線状配列番号7結合剤を含み、HLEは増加したインビボ半減期を与える結合ユニットである]。したがって、本明細書にいう本発明の二パラトープ性ナノボディは、リンカーによって接合された2つの単一ナノボディを含むポリペプチドを指す。しかし、本発明の二パラトープ性ナノボディは、各ナノボディ中にCDRを1つだけ含んでいてもよい。その場合、好ましいCDRは、CDR3およびまたはCDR6である。しかし、本発明の二パラトープ性ナノボディは、N末端ナノボディにCDR1もしくはCDR2もしくはCDR3、またはCDR1およびCDR2、もしくはCDR1およびCDR、もしくはCDR2およびCDR3、またはCDR1およびCDR2およびCDR3を含み、C末端ナノボディには次に挙げる組合せのいずれか一つを含みうる:CDR4もしくはCDR5もしくはCDR6、またはCDR4およびCDR5もしくはCDR4およびCDR6もしくはCDR5およびCDR6、またはCDR4およびCDR5およびCDR6。上記のように、本発明の二パラトープ性ナノボディは、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5およびCDR6の全てを含んでいて、各CDRにFRが隣接していてもよい。FRは、ラクダ科供給源と合致するアミノ酸配列を有しうる。しかし、好ましい実施形態では、FRの1つ以上が、少なくとも1つの配列最適化ミノ酸置換を有し、好ましくは、FRの1つ以上、より好ましくは全てが、部分的または完全にヒト化されている。配列最適化のための置換については、以下に、さらに詳しく議論する。第1および第2抗原結合ドメインが、ナノボディではなく、上で述べた従来の抗体のドメインまたはフラグメント、例えばヒト抗体、ドメインまたはフラグメント中の、第1および第2免疫グロブリン単一可変ドメインに含まれている本発明の実施形態では、その中のCDRを少なくとも1つのラクダ化置換で修飾すること、また場合によっては、完全にラクダ化されたCDRを生成させることが可能であるということも、本明細書では言及しておく。本明細書においてさらに説明するとおり、単一のナノボディ中のアミノ酸残基の総数は、110~120の範囲にあることができ、好ましくは112~115であり、最も好ましくは113である。しかし、ナノボディのパーツ、フラグメント、類似体または誘導体本明細書においてさらに説明するものは、そのパーツ、フラグメント、類似体または誘導体が本明細書に概説するさらなる要件を満たし、好ましくは本明細書に記載する目的に同様に適している限り、その長さおよびまたはサイズに関して、特に制限されないことに留意すべきである。本明細書においてさらに説明するとおり、ナノボディのアミノ酸残基は、RiechmannおよびMuyldermansJImmunolMethods2000Jun23;240185195の論文においてラクダ科動物からのVHHドメインに応用されているように例えばこの刊行物の図2を参照されたい、KabatらSequenceofproteinsofimmunologicalinterestUSPublicHealthServices、NIH、メリーランド州ベセスダ、刊行物番号91に記載されているVHドメインについての一般的ナンバリングに従ってナンバリングされ、したがってナノボディのFR1は1~30番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのCDR1は31~35番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのFR2は36~49番目のアミノ酸を含むことができ、ナノボディのCDR2は50~65番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのFR3は66~94番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのCDR3は95~102番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのFR4は103~113番目のアミノ酸残基を含むことができる。本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディでは、N末端ナノボディが上に挙げた位置にFRおよびCDRを有することができ、C末端ナノボディでは、ナノボディのFR5が1~30番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのCDR4が31~35番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのFR6が36~49番目のアミノ酸を含むことができ、ナノボディのCDR5が50~65番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのFR7が66~94番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのCDR6が95~102番目のアミノ酸残基を含むことができ、ナノボディのFR8が103~113番目のアミノ酸残基を含むことができる。しかし抗体特にナノボディ中のCDRおよびFRを、Kabatに代わるナンバリングシステムで同定しうることも、理解されるであろう。これらには、Chothia、IMGTおよびAHoシステムなどがある。これらの代替的ナンバリングシステムによる、表9、13、19、32、33および34において同定するアミノ酸配列のいずれか一つのCDRまたはFRの位置の同定は、配列の解析によって達成することができる。この目的には、次に挙げるウェブサイトが関連しうる:httpwwwbiochemuclacukmartinChothia;httpimgtcinesfrIMGTおよびhttpwwwbiouzhchantibodyindexhtmlAHo。具体的には、本明細書に記載する本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディでは、CDR1、2、3、4、5または6が、Kabatに代わるこれらのナンバリングシステムの一つによって定義されうるが、それでもなお、本発明の範囲内にあるだろう。本発明のナノボディのいくつかについて、ChotiaCDRを表35に示す。ナノボディは、いわゆるVH3クラスすなわちDP47、DP51またはDP29などのVH3クラスのヒト生殖細胞系配列に対して高度な配列相同性を有するナノボディであることができ、これらのナノボディは、本発明の二パラトープ性ナノボディの構築にとって好ましい。ただし、CXCR2を指向するナノボディはどのタイプでも、例えばいわゆるVH4クラスに属するナノボディすなわち、DP78などのVH4クラスのヒト生殖細胞系配列に対して高度な配列同一性を有するナノボディ、例えばWO07118670に記載されているものなども、本発明の二パラトープ性ナノボディの構築に使用できることに留意すべきである。本発明に従って第1および第2抗原結合ドメインを含む1つ以上のペプチドまたはポリペプチドを接合するリンカー分子は、免疫グロブリン由来のものであってもよいし、そうでなくてもよい。本発明のポリペプチドが二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメイン、例えばナノボディである場合は、リンカーが、抗原結合ドメインを含む1つの免疫グロブリン単一可変ドメインのC末端を、抗原結合ドメインを含むもう一つの免疫グロブリン単一可変ドメインのN末端に接合する。第1抗原結合ドメインと第2抗原結合ドメインとを一つに連結するために、特に2つのナノボディを一つに連結するために、本発明の二パラトープ性ポリペプチドにおいて使用するのに適したスペーサーまたはリンカーは、当業者には明白であるだろうし、これは、一般的には、アミノ酸配列を連結するために当技術分野で使用される任意のリンカーまたはスペーサーであることができる。好ましくは、該リンカーまたはスペーサーは、医薬としての使用を意図したタンパク質またはポリペプチドの構築における使用に適している。例えばリンカーは、適切なアミノ酸配列、特にアミノ酸残基数が1~50、好ましくは1~30、例えば1~10個のアミノ酸配列であることができる。そのようなアミノ酸配列の好ましい例としては、glyserリンカー、例えばWO9942077に記載されている3または3などのzタイプ、本明細書において言及するAblynxの出願に記載されているGS30、GS15、GS9およびGS7リンカー例えばWO06040153およびWO06122825参照、ならびにヒンジ様領域、例えば天然に存在する重鎖抗体のヒンジ領域または類似する配列例えばWO9404678に記載されているものなどが挙げられる。考えうるリンカーには、他にも、ポリアラニンAAAなど、ならびにリンカーGS30WO06122825の配列番号85およびGS9WO06122825の配列番号84などがある。本発明において好ましいリンカーは、3~50アミノ酸長のペプチドリンカー、例えばアミノ酸長が3~9、10~15、16~20、21~25、26~35、36~40、41~45または46~50のリンカーである。本発明の一実施形態では、ペプチドリンカーが35アミノ酸長である。リンカーは2種類のアミノ酸だけからなることができる。上述のように、これらはグリシンとセリンであることができる。あるいは、それらはプロリンとセリンであってもよい。本発明のいくつかの実施形態、特に本発明の二パラトープ性ナノボディでは、ペプチドリンカーが、アミノ酸配列:GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS配列番号220からなる。他の適切なリンカーは、一般に、有機化合物またはポリマー、特に医薬用のタンパク質における使用に適したものを含む。例えば、ポリ部分を使って、抗体ドメインを連結することができる。例えばWO04081026を参照されたい。したがって、もう一つの態様において、本発明は、ケモカイン受容体CXCR2を指向するか、またはケモカイン受容体CXCR2に結合する、少なくとも2つのポリペプチドを含む分子であって、第1ポリペプチドが第1免疫グロブリン抗原結合ドメインを含み、第2ポリペプチドが第2免疫グロブリン抗原結合ドメインを含み、該第1および第2抗原結合ドメインがCXCR2上の第1および第2エピトープを認識し、該少なくとも2つのポリペプチドが非ペプチドリンカーによって接合されている分子に関する。好ましくは、本発明の上記態様において、第1抗原結合ドメインは、配列番号7に示すアミノ酸の配列からなる線状ペプチドに結合する能力を有し、該第2抗原結合ドメインは、該線状ペプチドに結合する能力を有さないかまたは該線状ペプチドに低いアフィニティで結合する。好ましくは、第1エピトープは、CXCR2のアミノ酸1~19を含むか、その内部にあり、第2エピトープはCXCR2のアミノ酸1~19外にある。好ましくは、本発明のこの態様では、第1および第2抗原結合ドメインが免疫グロブリン単一可変ドメインに含まれ、ここで、該第1および第2免疫グロブリン単一可変ドメインは、好ましくはナノボディ、特に本明細書に具体的に記載するナノボディのいずれかである。ここに記載する本発明の全ての態様において、リンカーの基本的性質は、それが、第1抗原結合ドメインと第2抗原結合ドメインとがCXCR2上のそれぞれのエピトープに結合することを可能にするような長さおよびコンフォメーションを有することである。使用されるリンカーは、例えば本発明の二パラトープ性ナノボディの誘導体に関して本明細書に記載するように、本発明のポリペプチドに1つ以上の他の好ましい性質または機能性を付与し、かつまたは誘導体を形成するためのおよびまたは官能基を取り付けるための1つ以上の部位を与えることもできる。例えば、1つ以上の荷電アミノ酸残基を含有するリンカー国際出願WO08020079の48頁の表A2参照は改善された親水性を与えることができ、一方、小さなエピトープまたはタグを形成または含有するリンカーは、検出、同定およびまたは精製という目的に使用することができる。ここでも、本明細書における開示に基づいて、当業者は、具体的な本発明ポリペプチドにおける使用に最適なリンカーを、場合によってはいくつかの限られた日常的実験後に、決定することができるであろう。最後に、本発明のポリペプチドに2つ以上のリンカーを使用する場合、これらのリンカーは同じであっても異なってもよい。ここでも、本明細書における開示に基づいて、当業者は具体的な本発明ポリペプチドにおける使用に最適なリンカーを、場合によってはいくつかの限られた日常的実験後に、決定することができるであろう。通常、発現および生産を容易にするために、本発明のポリペプチドは線状ポリペプチドであるだろう。しかし本発明は、その最も広義においては、それに限定されない。例えば本発明のポリペプチドが3つ以上のナノボディを含む場合、3つ以上のアームを有するリンカーを使ってそれらを連結することができ、この場合は、星形コンストラクトが得られるように、各アームがナノボディに連結される。また、通常はそれほど好ましくはないものの、環状のコンストラクトを使用することもできる。特に、2つ以上のナノボディと上述の1つ以上のリンカーとは、任意の配置で調製することができる。例えば、CXCR2を指向するまたはCXCR2に結合する2つの免疫グロブリン結合ドメインと、ヒト血清アルブミンHSAを指向するまたはHSAに結合する1つ以上の免疫グロブリン結合ドメインとを含む、二パラトープ性二重特異性ナノボディを構想することができ、該HSA結合ドメインは、CXCR2結合ナノボディに任意の位置で例えば2つのCXCR2結合ナノボディの間に、上で述べたリンカーによって連結されたナノボディで構成させることができる。本発明者らは本発明に従って二パラトープ性ポリペプチドを調製した。多価および二パラトープ性抗CXCR2ナノボディのアミノ酸配列を、本明細書の実施例中の表13に示す。これらのうち、特に好ましい本発明のポリペプチドは、表13において、163D2127D1、163E3127D1、163E354B12、163D254B12、2B2163E3、2B2163D2、97A92B2、97A954B12、127D1163D2、127D1163E3、2B297A9、54B12163D2、54B12163E3、163D22B2および163E32B2、ならびに127D197A9、54B1297A9および97A9127D1と呼ばれる二パラトープ性ナノボディ、およびそれらの配列最適化変異体である。これらの二パラトープ性ナノボディは全て、配列番号7に示すアミノ酸の配列CXCR2のアミノ酸1~19からなる線状ペプチドに結合する能力を有する第1抗原結合ドメインを含む第1ナノボディと、該線状ペプチドに結合する能力を有さないかまたは該線状ペプチドに低いアフィニティで結合する第2抗原結合ドメインを含む第2ナノボディとを含む表8参照。特に好ましいのは、本発明によれば、163D2127D1、163E3127D1、163E354B12、163D254B12、2B2163E3、2B2163D2、97A92B2および97A954B12である。1163D2127D1配列番号58本発明のこの実施形態は、上に定義した該第2ナノボディが、配列番号145、165および185からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号141、161および181からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含む二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号185に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号181に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号145、165、185、141、161または181に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と配列番号145、165、185、141、161または181のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号83、104、124、131、79、100、または120のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号58に示すアミノ酸配列、または配列番号58のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号58に示すアミノ酸配列、または配列番号58と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabutナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を、20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号58に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは163D2ナノボディに関して表28に適切であると同定したものおよび127D1ナノボディに関して表26に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、163D2ナノボディが、配列番号218に示すアミノ酸配列、または配列番号218と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、127D1ナノボディが、配列番号216に示すアミノ酸配列、または配列番号216と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。2163E3127D1配列番号59本発明のこの実施形態は、第2ナノボディが、配列番号146、166および186からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号146、166もしくは186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号141、161および181からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号186に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号181に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号146、166、186、141、161または181に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号146、166、186、141、161または181に示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号84、105、125、131、79、100または120のいずれかに示すアミノ酸配列と、少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号59に示すアミノ酸配列、または配列番号59のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、または少なくとも85、もしくは少なくとも90、もしくは少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列を含む。本発明のこの態様の一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号59に示すアミノ酸配列、または配列番号59と少なくとも80の同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号59に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは163E3ナノボディに関して表24に適切であると同定したものおよび127D1ナノボディに関して表26に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、163E3ナノボディが、配列番号217に示すアミノ酸配列、または配列番号217と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、127D1ナノボディが、配列番号216に示すアミノ酸配列、または配列番号216と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。3163E354B12配列番号62本発明のこの実施形態は、該第2ナノボディが、配列番号146、166および186からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号146、166もしくは186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号151、171および191からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号151、171もしくは191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号186に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号191に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6が、配列番号146、166、186、151、171または191に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも85または少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号146、166、186、151、171、191に示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様によれば、FR1は配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR2は配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR3は配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、FR4は配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5は配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR6は配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR7は配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8は配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号84、105、125、131、89、110または130のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有する。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号62に示すアミノ酸配列、または配列番号62のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90、もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましい一実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが配列番号62に示すアミノ酸配列、または配列番号62に対して少なくとも80のアミノ酸同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号62に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは163E3ナノボディに関して表24に適切であると同定したものおよび51B12ナノボディに関して表30に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、163E3ナノボディが、配列番号217に示すアミノ酸配列、または配列番号217と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、54B12ナノボディが、配列番号219に示すアミノ酸配列、または配列番号219と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号212~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。4163D254B12配列番号63本発明のこの実施形態は、該第2ナノボディが、配列番号145、165および185からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号151、171および191からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号151、171もしくは191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号185に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号191に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6が、配列番号145、165、185、151、171、または191に示すアミノ酸配列のいずれか一つの少なくとも80、好ましくは少なくとも85、または少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号145、165、185、151、171または191に示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様によれば、FR1が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号83、104、124、131、89、110、または130のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。好ましい一実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、配列番号63に示すアミノ酸配列、または配列番号63のアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、配列番号63に示すアミノ酸配列、または配列番号63に対して少なくとも80のアミノ酸同一性もしくはKabatナンバリングによるフレームワーク領域に対して少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を、20E09M未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号63に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは163D2ナノボディに関して表28に適切であると同定したものおよび54B12ナノボディに関して表30に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、163D2ナノボディが、配列番号218に示すアミノ酸配列、または配列番号218と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、54B12ナノボディが、配列番号219に示すアミノ酸配列、または配列番号219と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。52B2163E3配列番号64本発明のこの実施形態は、該第1ナノボディが、配列番号147、167および187からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号146、166および186からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号146、166もしくは186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号187に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号186に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6が、配列番号147、167、187、164、146または186に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、好ましくは少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号147、167、187、146、166または186に示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様によれば、FR1が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号85、106、126、131、84、105、または125のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有する。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。好ましい一実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、配列番号64に示すアミノ酸配列、または配列番号64のアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本発明の二パラトープ性ナノボディの好ましい一実施形態は、配列番号64に示すアミノ酸配列、または配列番号64と少なくとも80のアミノ酸同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を、20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号64に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは2B2ナノボディに関して表20に適切であると同定したものおよび163E2ナノボディに関して表24に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、2B2ナノボディが、配列番号213もしくは214に示すアミノ酸配列または配列番号213もしくは214のどちらか一方と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、163E3ナノボディが、配列番号217に示すアミノ酸配列または配列番号217と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。62B2163D2配列番号65本発明のこの実施形態は、該第1ナノボディが、配列番号147、167および187からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号145、165および185からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号187に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号185に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6が、配列番号147、167、187、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号147、167、187、145、165または185に示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様によれば、FR1が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号85、106、126、131、83、104、または124のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有する。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディは、配列番号65に示すアミノ酸配列または配列番号65のアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。本発明の二パラトープ性ナノボディの好ましい一実施形態は、配列番号65に示すアミノ酸配列または配列番号65と少なくとも80のアミノ酸同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を、20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号65に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは2B2ナノボディに関して表20に適切であると同定したものおよび163D2ナノボディに関して表28に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、2B2ナノボディが、配列番号213または214に示すアミノ酸配列または配列番号213もしくは214と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、163D2ナノボディが、配列番号218に示すアミノ酸配列または配列番号218と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。797A92B2配列番号47本発明のこの実施形態は、該第2ナノボディが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号147、167および187からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号183に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号187に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6が、配列番号143、163、183、147、167、または187に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号143、163、183、147、167または187に示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様によれば、FR1が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号133に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号81、102、122、133、85、106、126または131のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有する。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。好ましい二パラトープ性ナノボディは、配列番号47に示すアミノ酸配列、または配列番号47のアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。特に好ましい一実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、配列番号47に示すアミノ酸配列、または配列番号47と少なくとも80のアミノ酸同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号47に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは97A9ナノボディに関して表22に適切であると同定したものおよび2B2ナノボディに関して表20に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、97A9ナノボディが、配列番号215に示すアミノ酸配列または配列番号215と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、2B2ナノボディが、配列番号213もしくは214に示すアミノ酸配列または配列番号213もしくは配列番号214のどちらか一方と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。897A954B12配列番号61本発明のこの実施形態は、該第2ナノボディが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号151、171および191からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号151、171もしくは191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号183に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号191に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6が、配列番号143、163、183、151、171または191に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号143、163、183、151、271または191に示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様によれば、FR1が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、FR4がアミノ酸配列133を含み、FR5が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号81、102、122、133、89、110、130または131のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有する。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号61に示すアミノ酸配列または配列番号61のアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。特に好ましい一実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、配列番号61に示すアミノ酸配列、または配列番号61のアミノ酸配列と少なくとも80の同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80の同一性を有するアミノ酸配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を、20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号61に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは97A9ナノボディに関して表22に適切であると同定したものおよび54B12ナノボディに関して表30に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、97A9ナノボディが、配列番号215に示すアミノ酸配列または配列番号215と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、54B12ナノボディが、配列番号219に示すアミノ酸配列、または配列番号219と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。9127D1163D2配列番号53本発明のこの実施形態は、上に定義した該第1ナノボディが、配列番号141、161および181からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号145、165および185からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号181に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号185に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、161、181、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号145、165、185、141、161または181のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号79、100、120、131、83、104、または124のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号53に示すアミノ酸配列、または配列番号53のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号53に示すアミノ酸配列または配列番号53もしくはそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号54に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは127D1ナノボディに関して表26に適切であると同定したものおよび163D2ナノボディに関して表28に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、127D1ナノボディが、配列番号216に示すアミノ酸配列または配列番号216と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、163D2ナノボディが、配列番号218に示すアミノ酸配列または配列番号218と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。10127D1163E3配列番号54本発明のこの実施形態は、上に定義した該第1ナノボディが、配列番号141、161および181からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号146、166および186からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号146、166もしくは186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3R4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号181に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号186に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号146、166、186、141、161または181に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号146、166、186、141、161または181のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号79、100、120、131、84、105、または125のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号54に示すアミノ酸配列または配列番号54のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号54に示すアミノ酸配列、または配列番号54と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号54に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは127D1ナノボディに関して表26に適切であると同定したものおよび163E3ナノボディに関して表24に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、127D1ナノボディが、配列番号216に示すアミノ酸配列または配列番号216と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、163E3ナノボディが、配列番号217に示すアミノ酸配列、または配列番号217と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。11127D197A9配列番号37および39本発明のこの実施形態は、上に定義した該第1ナノボディが、配列番号141、161および181からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号181に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号183に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、161、181、143、163または183に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号141、161、181、143、163または183のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号133に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号79、100、120、131、81、102、122、または133のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号37に示すアミノ酸配列を含む第1抗原結合ドメインと、配列番号39に示すアミノ酸配列第2抗原結合ドメインとを含むか、配列番号37および39に示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号37および39に示すアミノ酸配列、または配列番号37および39もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ポリペプチドは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号37および39に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは127D1ナノボディに関して表26に適切であると同定したものおよび97A9ナノボディに関して表22に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、127D1ナノボディが、配列番号216に示すアミノ酸配列、または配列番号216と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、97A9ナノボディが、配列番号215に示すアミノ酸配列または配列番号215と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。122B297A9配列番号46本発明のこの実施形態は、上に定義した該第1ナノボディが、配列番号147、167および187からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号187に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号183に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号147、167、187、143、163または183に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号147、167、187、143、163または183のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号133に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号85、106、126、131、81、102、122または133のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号46に示すアミノ酸配列、または配列番号46のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号46に示すアミノ酸配列、または配列番号46と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域に対して少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号46に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは2B2ナノボディに関して表20に適切であると同定したものおよび97A9ナノボディに関して表22に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、2B2ナノボディが、配列番号213もしくは214に示すアミノ酸配列または配列番号213もしくは214のどちらか一方と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、97A9ナノボディが配列番号215に示すアミノ酸配列または配列番号215と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。1354B12163D2配列番号69本発明のこの実施形態は、上に定義した該第1ナノボディが、配列番号151、171および191からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号151、171もしくは191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号145、165および185からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号191に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号185に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号151、171、191、145、165または185のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8は、配列番号89、110、130、131、83、104、または124のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号69に示すアミノ酸配列または配列番号69のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号69に示すアミノ酸配列、または配列番号69と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号69に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは54B12ナノボディに関して表30に適切であると同定したものおよび163D2ナノボディに関して表28に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、54B12ナノボディが、配列番号219に示すアミノ酸配列、または配列番号219と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、163D2ナノボディが、配列番号218に示すアミノ酸配列、または配列番号218と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。1454B12163E3配列番号68本発明のこの実施形態は、上に定義した該第1ナノボディが、配列番号151、171および191からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号151、171もしくは191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号146、166および186からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号146、166もしくは186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号191に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号186に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、146、166または186に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号151、171、191、146、166または186のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8は、配列番号89、110、130、131、84105、または125のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号68に示すアミノ酸配列、または配列番号68のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号68に示すアミノ酸配列、または配列番号68と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号68に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは54B12ナノボディに関して表30に適切であると同定したものおよび163E3ナノボディに関して表24に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、54B12ナノボディが、配列番号219に示すアミノ酸配列、または配列番号219と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、163E3ナノボディが、配列番号217に示すアミノ酸配列、または配列番号217と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。1554B1297A9配列番号90および39本発明のこの実施形態は、上に定義した該第1ナノボディが、配列番号141、161および181からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2ナノボディが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第1ナノボディでは、CDR1が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号181に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2ナノボディでは、CDR4が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号183に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、161、181、143、163または183に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号141、161、181、143、163または183のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号89、110、130、131、81、102、または122のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号90および39に示すアミノ酸配列、または配列番号90および39のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号90および39に示すアミノ酸配列、または配列番号90および39と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号90および39に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは54B12ナノボディに関して表30に適切であると同定したものおよび97A9ナノボディに関して表22に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、54B12ナノボディが、配列番号90および39に示すアミノ酸配列、または配列番号90およびまたは39と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、97A9ナノボディが、配列番号215に示すアミノ酸配列、または配列番号215と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。1697A9127D1配列番号39および37本発明のこの実施形態は、上に定義した該第2ナノボディが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号141、161および181からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号183に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号181に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号143、163、183、141、161または181に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号143、163、183、141、161または181のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号133に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号81、102、122、133、79、100、120または131のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号39および37に示すアミノ酸配列または配列番号39およびまたは37のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90または少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号39および37に示すアミノ酸配列または配列番号39およびまたは37と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号39および37に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは97A9ナノボディに関して表22に適切であると同定したものおよび97A9ナノボディに関して表26に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、97A9ナノボディが、配列番号39および37に示すアミノ酸配列、または配列番号39および37と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、127D1ナノボディが、配列番号216に示すアミノ酸配列、または配列番号216と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。17163D22B2配列番号67本発明のこの実施形態は、上に定義した該第2ナノボディが、配列番号145、165および185からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号147、167および187からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号185に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号187に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号145、165、185、147、167または187に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号145、165、185、147、167または187のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号83、104、124、131、85、106、または126のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号67に示すアミノ酸配列、または配列番号67のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号67に示すアミノ酸配列、または配列番号67と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号67に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは163D2ナノボディに関して表28に適切であると同定したものおよび2B2ナノボディに関して表20に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、163D2ナノボディが、配列番号218に示すアミノ酸配列、または配列番号218と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、2B2ナノボディが、配列番号213または214に示すアミノ酸配列、または配列番号213もしくは214のどちらか一方と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。18163E32B2配列番号66本発明のこの実施形態は、上に定義した該第2ナノボディが、配列番号146、166および186からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号146、166もしくは186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1ナノボディが、配列番号147、167および187からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも1つのCDRを含む、二パラトープ性ナノボディに関する。好ましくは、本二パラトープ性ナノボディは、構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、該第2ナノボディでは、CDR1が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号186に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1ナノボディでは、CDR4が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号187に示すアミノ酸配列を含むか、またはCDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5もしくはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号146、166、186、147、167または187に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸配列同一性、または少なくとも85もしくは少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する]を含む。本アミノ酸配列と、配列番号146、166、186、147、167または187のいずれかに示すアミノ酸配列との相違は、保存的アミノ酸変化だけでありうる。本アミノ酸配列と上記配列番号のいずれかのアミノ酸配列との相違は、1個、2個または3個のアミノ酸だけでありうる。本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、FR1が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む。あるいは、FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号84、105、125、131、85、106、または126のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を持つアミノ酸配列を有しうる。例えば本発明のこの態様において、FR1およびまたはFR4は、配列番号70~89のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR2およびまたはFR5は、配列番号91~110のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、FR3およびまたはFR6は、配列番号111~130のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができ、かつFR4およびまたはFR8は、配列番号131~133のいずれか一つに示すアミノ酸の配列を含むことができる。本発明のこの態様の特に好ましい一実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号66に示すアミノ酸配列、または配列番号66のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含む。本発明のこの態様のもう一つの実施形態では、二パラトープ性ナノボディが、配列番号66に示すアミノ酸配列、または配列番号66と少なくとも80のアミノ酸配列同一性もしくはKabatナンバリングによるそのフレームワーク領域と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、この二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明のこの態様のもう一つの好ましい実施形態では、本発明の二パラトープ性ナノボディが、実質的に配列番号66に示すCDR配列を含むが、フレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化置換を含むように、好ましくは163E3ナノボディに関して表24に適切であると同定したものおよび2B2ナノボディに関して表20に適切であると同定したものの1つ以上を含むように、修飾されているものを含む。好ましくは、163E3ナノボディが、配列番号217に示すアミノ酸配列、または配列番号217と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含み、2B2ナノボディが、配列番号213または214に示すアミノ酸配列、または配列番号213もしくは214のどちらか一方と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。例えば、これらのナノボディのフレームワーク領域は、表32の配列番号213~219のいずれか一つに示す、Kabatナンバリングによるフレームワーク領域FR1、FR2、FR3またはFR4の配列を有しうる。好ましくは、そのような配列最適化二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害することができる。上で既に述べたように、本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディは、163D2127D1、163E3127D1、163E354B12、163D254B12、2B2163E3、2B2163D2、97A92B2、97A954B12、127D1163D2、127D1163E3、127D197A9、2B297A9、54B12163D2、54B12163E3、54B1297A9、97A9127D1、163D22B2または163E32B2と呼ばれる具体的実施形態およびその変異体を含めて、そのフレームワーク領域内に少なくとも1つの配列最適化アミノ酸置換を有するのであれば望ましく、該フレームワーク領域は、例えば部分的にまたは完全にヒト化されていてもよい。配列最適化の程度は、それが、少なくともフレームワーク領域に関して、配列番号58、59、62、63、64、65、47、61、53、54、46、69、68、67または66と80~90の配列同一性を有する二パラトープ性ナノボディをもたらすものであれば、望ましい。本発明の実施形態は、さらに、第1抗原結合ドメインが、配列番号213、214、216および219、またはこれらの一つに対して、少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択され、かつ第2抗原結合ドメインが、配列番号215、217および218、またはこれらの一つに対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される、ポリペプチドを含む。00790076本発明の一実施形態では、ポリペプチドが、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリン中に、配列番号141に示すアミノ酸配列を含むCDR1と、配列番号236に示すアミノ酸配列を含むCDR2と、配列番号181に示すアミノ酸配列を含むCDR3とを含み、さらに、単一可変ドメインの該第1免疫グロブリン中に、配列番号146に示すアミノ酸配列を含むCDR4と、配列番号237に示すアミノ酸配列を含むCDR5と、配列番号186に示すアミノ酸配列を含むCDR6とを含む。さらなる実施形態では、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、236、181、146、237または186のいずれか一つに示すアミノ酸配列と少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95のアミノ酸同一性を有する。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号141、236、181、146、237または186に示すものとの相違が保存的アミノ酸変化だけであるアミノ酸配列を含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号216または配列番号216に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第1抗原結合ドメインと、配列番号217または配列番号217に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第2抗原結合ドメインとを含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが配列番号221を含む。00790086本発明の一実施形態では、ポリペプチドが、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリン中に、配列番号141に示すアミノ酸配列を含むCDR1と、配列番号236に示すアミノ酸配列を含むCDR2と、配列番号181に示すアミノ酸配列を含むCDR3とを含み、さらに、単一可変ドメインの該第1免疫グロブリン中に、配列番号145に示すアミノ酸配列を含むCDR4と、配列番号165に示すアミノ酸配列を含むCDR5と、配列番号185に示すアミノ酸配列を含むCDR6とを含む。さらなる実施形態では、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、236、181、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95のアミノ酸同一性を有する。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号141、236、181、145、165または185に示すものとの相違が保存的アミノ酸変化だけであるアミノ酸配列を含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号216または配列番号216に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第1抗原結合ドメインと、配列番号218または配列番号218に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第2抗原結合ドメインとを含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが配列番号222を含む。00790061本発明の一実施形態では、ポリペプチドが、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリン中に、配列番号141に示すアミノ酸配列を含むCDR1と、配列番号236に示すアミノ酸配列を含むCDR2と、配列番号181に示すアミノ酸配列を含むCDR3とを含み、さらに、単一可変ドメインの該第1免疫グロブリン中に、配列番号143に示すアミノ酸配列を含むCDR4と、配列番号235に示すアミノ酸配列を含むCDR5と、配列番号183に示すアミノ酸配列を含むCDR6とを含む。さらなる実施形態では、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号141、236、181、143、235または183に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95のアミノ酸同一性を有する。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号141、236、181、143、235または183に示すものとの相違が保存的アミノ酸変化だけであるアミノ酸配列を含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号220を有するリンカーによって分離された、配列番号216または配列番号216に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第1抗原結合ドメインと、配列番号215または配列番号215に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第2抗原結合ドメインとを含む。01040076本発明の一実施形態では、ポリペプチドが、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリン中に、配列番号151に示すアミノ酸配列を含むCDR1と、配列番号171に示すアミノ酸配列を含むCDR2と、配列番号191に示すアミノ酸配列を含むCDR3とを含み、さらに、単一可変ドメインの該第1免疫グロブリン中に、配列番号146に示すアミノ酸配列を含むCDR4と、配列番号237に示すアミノ酸配列を含むCDR5と、配列番号186に示すアミノ酸配列を含むCDR6とを含む。さらなる実施形態では、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、146、237または186に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95のアミノ酸同一性を有する。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号151、171、191、146、237または186に示すものとの相違が保存的アミノ酸変化だけであるアミノ酸配列を含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号219または配列番号219に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第1抗原結合ドメインと、配列番号217または配列番号217に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第2抗原結合ドメインとを含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが配列番号223を含む。01040086本発明の一実施形態では、ポリペプチドが、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリン中に、配列番号151に示すアミノ酸配列を含むCDR1と、配列番号171に示すアミノ酸配列を含むCDR2と、配列番号191に示すアミノ酸配列を含むCDR3とを含み、さらに、単一可変ドメインの該第1免疫グロブリン中に、配列番号145に示すアミノ酸配列を含むCDR4と、配列番号165に示すアミノ酸配列を含むCDR5と、配列番号185に示すアミノ酸配列を含むCDR6とを含む。さらなる実施形態では、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95のアミノ酸同一性を有する。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号151、171、191、145、165または185に示すものとの相違が保存的アミノ酸変化だけであるアミノ酸配列を含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号219または配列番号219に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第1抗原結合ドメインと、配列番号218または配列番号218に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第2抗原結合ドメインとを含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが配列番号224を含む。01040061本発明の一実施形態では、ポリペプチドが、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリン中に、配列番号151に示すアミノ酸配列を含むCDR1と、配列番号171に示すアミノ酸配列を含むCDR2と、配列番号191に示すアミノ酸配列を含むCDR3とを含み、さらに、単一可変ドメインの該第1免疫グロブリン中に、配列番号143に示すアミノ酸配列を含むCDR4と、配列番号235に示すアミノ酸配列を含むCDR5と、配列番号183に示すアミノ酸配列を含むCDR6とを含む。さらなる実施形態では、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号151、171、191、143、235または183に示すアミノ酸配列の少なくとも1つと、少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95のアミノ酸同一性を有する。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号151、171、191、143、235または183に示すものとの相違が保存的アミノ酸変化だけであるアミノ酸配列を含む。さらなる一実施形態では、ポリペプチドが、配列番号220を有するリンカーによって分離された、配列番号219または配列番号219に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第1抗原結合ドメインと、配列番号215または配列番号215に対して少なくとも80、例えば少なくとも90、例えば少なくとも95の同一性を有するポリペプチドから選択される第2抗原結合ドメインとを含む。本発明の好ましい実施形態の上述の議論に関して、これは特に、二パラトープ性ナノボディに関するものであるが、本開示が、CXCR2を指向するまたはCXCR2に結合する二パラトープ性ポリペプチドであって、第1および第2結合ドメインが従来の四本鎖抗体、重鎖抗体、単鎖Fv、FabまたはFabに含まれていて、しかも上述の好ましい実施形態の機能的または構造的特徴の1つ以上を有するポリペプチドにも関係することは、理解されるであろう。第1および第2抗原結合ドメインが、上述の実施形態のそれぞれの1つ以上の機能的または構造的特徴を有する、VLドメイン、VHドメイン、およびVHHドメインなどの免疫グロブリン単一可変ドメインおよびそのフラグメント内に含まれている実施形態も、明示的に開示されている。もう一つの態様において、本発明は、CXCR2結合に関して一価であり、かつ本発明の二パラトープ性ポリペプチドのビルディングブロックであって、その生産プロセスにおける中間体とみなすことができるポリペプチド、特にVHHドメインまたはナノボディなどの免疫グロブリン単一可変ドメインを提供する。好ましい一価免疫グロブリン単一可変ドメインは、表9に示す配列番号25~43および90を有するポリペプチド、または配列番号25~43および90のいずれか一つに対して少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドである。好ましい一価ポリペプチドは、137B7と呼ばれ、配列番号36に示すアミノ酸配列を有するもの、または配列番号36と少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90もしくは少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むものである。好ましい一実施形態では、配列番号36のフレームワーク領域が、1つ以上の配列最適化アミノ酸置換を有する。その他、127D1、2B2、54B12、97A9、163D2および163E3と呼ばれるものフレームワーク領域において配列最適化されているものを含むも、好ましい一価ポリペプチドである。例えば、127D1は、表26で考慮されているような1つ以上の配列最適化アミノ酸置換がなされている配列番号37のアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、ポリペプチドが、配列番号216に示すアミノ酸配列を含む。2B2は、表20で考慮されているような1つ以上の配列最適化置換がなされている配列番号43のアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、ポリペプチドが、配列番号213または214に示すアミノ酸配列を含む。54B12は、表30で考慮されているような1つ以上の配列最適化置換がなされている配列番号90のアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、ポリペプチドが、配列番号219に示すアミノ酸配列を含む。97A9は、表22で考慮されているような1つ以上の配列最適化置換がなされている配列番号39のアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、ポリペプチドが、配列番号215に示すアミノ酸配列を含む。163D2は、表28で考慮されているような配列最適化置換の1つ以上がなされている配列番号41のアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、ポリペプチドが、配列番号218に示すアミノ酸配列を含む。163E3は、表24で考慮されているような1つ以上の配列最適化置換がなされている配列番号42に示すアミノ酸配列を含むことができ、好ましくは、ポリペプチドが、配列番号217に示すアミノ酸配列を含む。配列番号58、59、62、63、64、65、47または61のいずれか一つに示すアミノ酸配列を有するポリペプチドによるCXCR2への結合を交差ブロックする能力を有する一価ポリペプチド、特にナノボディなどの免疫グロブリン単一可変ドメインも、本発明のこの態様に包含される。上述の好ましい一価ナノボディはどれでも、また特に137B7は、本明細書に挙げる応用例に、例えばCOPDの処置に使用することができる。本発明の二パラトープ性ポリペプチド、特に上述の好ましい二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメインは、そのラクダ化およびヒト化型を全て含めて、CXCR2の調整物質であり、特にCXC2シグナル伝達を阻害する。好ましくは、本発明の二パラトープ性ポリペプチド中の、特に二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメイン中の、CDR配列およびFR配列は、CXCR2に、105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDですなわち105~1012リットルモル以上、好ましくは107~1012リットルモル以上、より好ましくは108~1012リットルモルの会合定数KAで結合するものおよびまたは、CXCR2に、102M1s1~約107M1s1、好ましくは103M1s1~107M1s1、より好ましくは104M1s1~107M1s1、例えば105M1s1~107M1s1のkon速度で結合するものおよび/またはCXCR2に、1s1t12=069秒~106s1t12が複数日であるほぼ不可逆的な複合体を与える、好ましくは102s1~106s1、より好ましくは103s1~106s1、例えば104s1~106s1のkoff速度で結合するもの。好ましくは、本発明のポリペプチドおよび二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメイン中に存在するCDR配列およびFR配列は、CXCR2に、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで結合するものである。特に、本明細書の実施例で示すように、本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディは、ヒトCXCR2へのGroαの結合を、20nM未満のIC50で阻害することができる。本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディは、CXCR2を保持するRBL細胞からのアゴニスト誘発性GroαCa放出も、100nM未満のIC50で阻害しうる。本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディは、CXCR2CHO膜におけるアゴニスト誘発性Groα35SGTPγS蓄積も、50nM未満のIC50で阻害しうる。また、本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディは、Groαへのばく露時のヒト白血球の形状変化を<1nm未満のIC50で、またカニクイザル白血球の形状変化を<2nm未満のIC50で、阻害しうる。本発明の最も好ましい態様によれば、本発明の二パラトープ性bioparatopicポリペプチド、例えば二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメイン、例えば本明細書に記載するナノボディは、配列番号1のアミノ酸配列を有するCXCR2ポリペプチドへの、配列番号58、59、62、63、64、65、47または61に示すポリペプチドのいずれかまたは全てによる結合を、交差ブロックするであろう。交差ブロッキングは当業者に周知のどの方法で測定してもよい。医薬的使用には、本発明のポリペプチドが、好ましくは、ヒトCXCR2例えば配列番号1に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドを指向し;一方、獣医学的目的には、本発明のポリペプチドが、好ましくは、処置される種に由来するCXCR2を指向するか、少なくとも、処置される種に由来するCXCR2と交差反応する。さらにまた、本発明の二パラトープ性ポリペプチドは、場合によっては、CXCR2に結合するための少なくとも2つの抗原結合ドメインに加えて、他のエピトープ、抗原、タンパク質またはターゲットに結合するための1つ以上のさらなる結合部位またはドメインを含有する。本発明のポリペプチドおよびそれを含む組成物の効力efficacyは、当該ポリペプチドが、COPDまたは異常なCXCR2シグナル伝達が関与する他の任意の疾患の処置に有用でありうることを示すのに適した、任意の適切な自体公知のインビトロアッセイ、細胞ベースのアッセイ、インビボアッセイおよびまたは動物モデル、またはそれらの任意の組合せを使って試験することができる。適切なアッセイおよび動物モデルは当業者には明白であるだろう。また、本発明によれば、ヒトCXCR2を指向するポリペプチドは、1つ以上の他の温血動物種に由来するCXCR2と交差反応性を示しても示さなくてもよい。しかし好ましくは、ヒトCXCR2を指向する本発明のポリペプチドは、毒性試験のために、1つ以上の他の霊長類種例えば限定するわけではないが、マカク属Macacaのサル例えば特にカニクイザルMacacafascicularisおよびまたはアカゲザルMacacamulattaおよびヒヒPapioursinusに由来するCXCR2との交差反応性を示すであろう。好ましい交差反応性は、カニクイザル由来のCXCR2との交差反応性である。疾患の動物モデルにおいて特にCXCR2と関連する疾患および障害の動物モデルにおいて使用されることが多い1つ以上の動物種例えばマウス、ラット、ウサギ、ブタまたはイヌとの交差反応性は望ましいであろう。この点において、そのような交差反応性が存在する場合、それには、医薬開発の観点から利点あるだろうということは、当業者には明白であるだろう。というのも、ヒトCXCR2に対するアミノ酸配列およびポリペプチドを、そのような疾患モデルで試験することが可能になるからである。より一般的には、複数の哺乳動物種に由来するCXCR2と交差反応する本発明のポリペプチドが、獣医学的応用における使用には、通常、有利であるだろう。というのも、それにより、複数の種にわたって、同じポリペプチドを使用することが可能になるだろうからである。好ましくは、本発明の二パラトープ性ポリペプチドは、CXCR1またはCXCR4とは交差反応しない。本発明の二パラトープ性ポリペプチドでは、少なくとも1つの抗原結合部位が、相互作用部位、すなわちCXCR2が別の分子、例えばその1または複数の天然リガンドと相互作用する部位を指向しうる。本発明の二パラトープ性ポリペプチド、例えば免疫グロブリン単一可変ドメインは、第2抗原結合ドメインが配列番号7の線状ペプチドに結合せず、本明細書に配列番号8、9、10、11または12として示すペプチドを含むエピトープまたはそのペプチド内にあるエピトープを認識するものでありうる。加えて、第1抗原結合ドメインは、配列番号7のペプチドを含むエピトープまたは配列番号7のペプチド内にあるエピトープを認識しうる。カニクイザルCXCR2と交差反応する本発明の実施形態では、第1抗原結合ドメインが、配列番号4のペプチドを含むエピトープまたは配列番号4のペプチド内にあるエピトープも認識する。そのような一実施形態では、第2抗原結合ドメインが、配列番号5または6のペプチドを含むエピトープまたは配列番号5もしくは6のペプチド内にあるエピトープを認識しうる。CXCR2の天然に存在するまたは合成の類似体、変異体、ミュータント、アレル、パーツおよびフラグメントに広く結合するタイプ、または少なくとも、CXCR2例えば配列番号1の野生型CXCR2において本発明のポリペプチドが結合する抗原性決定基またはエピトープと基本的に同じである1つ以上の抗原性決定基またはエピトープを含有するCXCR2の類似体、変異体、ミュータント、アレル、パーツおよびフラグメントに広く結合するタイプの二パラトープ性ポリペプチド、特に二パラトープ性ナノボディも、本発明の範囲内で提供される。そのような場合、本発明のポリペプチドは、上記類似体、変異体、ミュータント、アレル、パーツおよびフラグメントに、本発明のポリペプチドが野生型CXCR2に結合する際の上述のアフィニティおよびまたは特異性で結合しうる。また、当業者には明らかであるだろうとおり、二パラトープ性であるポリペプチドは、対応する単一抗原結合ドメインポリペプチドよりも高いアビディティでCXCR2に結合する。本明細書で論じるさまざまな治療的背景において本発明の二パラトープ性ポリペプチド特に二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメインのパーツ、フラグメント、類似体、ミュータント、変異体、アレルおよびまたは誘導体を使用することも、それらが完全なポリペプチドと等価な関連機能ドメインを含む場合は常に、本発明の範囲に含まれる。そのようなパーツ、フラグメント、類似体、ミュータント、変異体、アレルまたは誘導体は、本発明の二パラトープ性ポリペプチドについて上述した機能的特徴のすべてを有しうる。もう一つの態様において、本発明は、場合によっては1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットをさらに含む、二パラトープ性ポリペプチド、場合によっては、二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメインに関する。そのようなさらなる基、残基、部分、結合ユニットまたはアミノ酸配列は、本発明のポリペプチドにさらなる機能性を与えても与えなくてもよく、その性質を修飾しても修飾しなくてもよい。例えば、そのようなさらなる基、残基、部分または結合ユニットは、本発明が融合タンパク質または融合ポリペプチドになるように、1つ以上の追加アミノ酸配列であることができる。好ましい、ただし非限定的な一態様では、該1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットが免疫グロブリン配列である。さらに好ましくは、該1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットが、ドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、dAb、dAbとしての使用に適したアミノ酸配列、またはナノボディからなる群より選ばれる。あるいは、そのような基、残基、部分または結合ユニットは、例えば、単独では生物学的およびまたは薬理学的に活性であっても活性でなくてもよい化学的な基、残基、部分であることもできる。例えば、本明細書においてさらに説明する本発明のポリペプチドの誘導体が得られるように、そのような基を1つ以上の本発明のポリペプチドに連結することができる。そのようなコンストラクトでは、1つ以上の本発明のポリペプチドと、1つ以上の基、残基、部分または結合ユニットを、互いに直接的に、かつまたは1つ以上の適切なリンカーもしくはスペーサーを介して連結することができる。例えば1つ以上の基、残基、部分または結合ユニットがアミノ酸配列である場合、結果として生じるコンストラクトが融合タンパク質または融合ポリペプチドになるように、リンカーもアミノ酸配列であることができる。上記の、そして本明細書における、さらなる説明から明白であるだろうが、これは、本発明の二パラトープ性ポリペプチドを、さらなる本発明のポリペプチドを形成させるためのビルディングブロックとして、すなわち、多パラトープ性であり、場合によっては多価または多重特異性、二多価および二多重特異性である本明細書に記載のコンストラクトを形成させるために、それらを他の基、残基、部分または結合ユニットと適切に組み合わせることによって、使用できることを意味している。本発明のこの態様のポリペプチドは、一般に、1つ以上の本発明のポリペプチドを、1つ以上のさらなる基、残基、部分または結合ユニットに、場合によっては1つ以上の適切なリンカーを介して適切に連結する少なくとも1つのステップを含む方法によって調製することができる。本発明の具体的一態様では、本発明の二パラトープ性ポリペプチドが、対応する無修飾の本発明ポリペプチドと比較して増加した半減期を有するように修飾される。本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者には、いくつかの好ましいポリペプチドが明確になるであろう。それらは、例えば、その半減期が増加するように例えばPEG化、PAS化またはHES化によって化学修飾された本発明のアミノ酸配列またはポリペプチドを含む。本発明のポリペプチドは、血清タンパク質血清アルブミンなどへの結合のために、少なくとも1つの追加結合部位を含んでもよい。あるいは、本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドの半減期を増加させる少なくとも1つの部分特に少なくとも1つのアミノ酸配列に連結された少なくとも1つのアミノ酸配列を含んでもよい。そのような半減期延長部分または半減期延長アミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドの例としては、1つ以上の血清タンパク質またはそのフラグメント例えばヒト血清アルブミンまたはその適切なフラグメントに適切に連結するポリペプチド、または血清タンパク質に結合することができる1つ以上の結合ユニット例えば、血清アルブミンヒト血清アルブミンなど、IgGなどの血清免疫グロブリン、またはトランスフェリンなどといった血清タンパク質に結合することができるドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、dAb、dAbとしての使用に適したアミノ酸配列、またはナノボディ;Fc部分例えばヒトFcまたはその適切な一部もしくはフラグメントに連結されているポリペプチドが挙げられる。血清タンパク質に結合することができる1つ以上の小さなタンパク質またはペプチド例えば、限定するわけではないが、WO9101743、WO0145746、WO02076489、および2006年12月5日に出願されたAblynxNVの米国仮特許出願発明の名称PpeptidescapableofbindingtoserumproteinsPCTEP2007063348も参照されたいに記載のタンパク質およびペプチドに連結されている本発明のポリペプチドも、本発明に包含される。医薬タンパク質の半減期を増加させかつまたは免疫原性を低下させるための技法であって最も広く使用されているものの一つは、薬理学的に許容される適切なポリマー、例えばポリPEGまたはその誘導体例えばメトキシポリまたはmPEGの取り付けを含む。一般に、任意の適切な形態のPEG化、例えば当技術分野において抗体および抗体フラグメント単一ドメイン抗体およびScFvを含むが、これらに限るわけではないに使用されるPEG化などを、使用することができる。例えばChapmanNatBiotechnol54531545;VeroneseおよびHarrisAdvDrugDelivRev54453456、HarrisおよびChessNatRevDrugDiscov2ならびにWO04060965を参照されたい。タンパク質をPEG化するためのさまざまな試薬も、例えばNektarTherapeutics米国などから市販されている。好ましくは、部位特異的PEG化が、特にシステイン残基を介して使用される例えばYangらProteinEngineering1610761770を参照されたい。例えばこの目的には、本発明の二パラトープ性ナノボディ中に天然に存在するシステイン残基に、PEGを取り付けることができる。いずれも当業者には自体公知のタンパク質工学の技法を使って、PEGを取り付けるための1つ以上のシステイン残基が適切に導入されるように本発明の二パラトープ性ポリペプチドを修飾するか、またはPEGを取り付けるための1つ以上のシステイン残基を含むアミノ酸配列を二パラトープ性ポリペプチドのNおよびまたはC末端に融合することができる。好ましくは、本発明の二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメインおよびポリペプチドには、5000を超える、例えば10000を超えかつ200000未満の、例えば100000未満の、例えば20000~80000の範囲の分子量を有するPEGが使用される。PEG化は、免疫グロブリン可変ドメインの一方もしくは両方およびまたは任意のペプチドリンカー領域に適用することができる。適切なPEG化技法はEP1639011に記載されている。PEGの代わりに、HES化と呼ばれている技法によって半減期を引き延ばすこともでき、この技法では、本発明のポリペプチドにヒドロキシエチルデンプンHES誘導体が取り付けられる。使用されるヒドロキシエチルデンプンは、ワキシーwaxyトウモロコシデンプン由来のアミロペクチンであって、分子量を調節するために酸加水分解によって修飾されており、かつグルコース残基がヒドロキシエチル化されているものである。さらなる詳細は、PavisicRらIntJPharmMarch153871109から得ることができる。一般に、増加した半減期を有する本発明のポリペプチドは、好ましくは、対応する本発明のポリペプチドそのものの半減期より、少なくとも15倍、好ましくは少なくとも2倍、例えば少なくとも5倍、例えば少なくとも10倍または20倍以上大きい半減期を有する。例えば、増加した半減期を有する本発明のポリペプチドは、対応する本発明のポリペプチドそのものと比較して、1時間以上、好ましくは2時間以上、より好ましくは6時間以上、例えば12時間以上、さらには24、48または72時間以上増加した半減期を有しうる。本発明の好ましい一態様では、そのような本発明のポリペプチドは、対応する本発明のポリペプチドそのものと比較して、1時間以上、好ましくは2時間以上、より好ましくは6時間以上、例えば12時間以上、さらには24、48または72時間以上増加した血清中半減期を有する。本発明のもう一つの好ましい態様では、本発明のポリペプチドが、ヒトにおいて、少なくとも約12時間、好ましくは少なくとも24時間、より好ましくは少なくとも48時間、さらに好ましくは少なくとも72時間またはそれ以上の血清中半減期を示す。例えば、本発明のポリペプチドは、少なくとも5日例えば約5~10日、好ましくは少なくとも9日例えば約9~14日、より好ましくは少なくとも約10日例えば約10~15日、または少なくとも約11日例えば約11~16日、より好ましくは少なくとも約12日例えば約12~18日またはそれ以上または14日以上例えば約14~19日の半減期を有しうる。本発明はさらに、本明細書で述べるポリペプチド、核酸、宿主細胞および組成物を調製または作製するための方法に関する。一般に、これらの方法は、aポリペプチドのセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;およびb該ポリペプチドのセット、コレクションまたはライブラリーを、CXCR2に結合することができかつまたはCXCR2に対するアフィニティを有するアミノ酸配列についてスクリーニングするステップ;およびcCXCR2に結合することができかつまたはCXCR2に対するアフィニティを有するアミノ酸配列を単離するステップを含みうる。ポリペプチドのセット、コレクションまたはライブラリーは、免疫グロブリン配列本明細書に記載するもののセット、コレクションまたはライブラリー、例えば免疫グロブリン配列のナイーブセット、コレクションまたはライブラリー;免疫グロブリン配列の合成または半合成セット、コレクションまたはライブラリー;およびまたは親和性成熟に付された免疫グロブリン配列のセット、コレクションまたはライブラリーであることができる。また、そのような方法において、ポリペプチドのセット、コレクションまたはライブラリーは、重鎖可変ドメイン例えばVHドメインまたはVHHドメインまたは軽鎖可変ドメインのセット、コレクションまたはライブラリーであることもできる。例えば、ポリペプチドのセット、コレクションまたはライブラリーは、ドメイン抗体または単一ドメイン抗体のセット、コレクションまたはライブラリーであるか、ドメイン抗体または単一ドメイン抗体として機能する能力を有するアミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーであることができる。この方法の好ましい一態様では、ポリペプチドのセット、コレクションまたはライブラリーが、例えば、CXCR2またはそれに基づくもしくはそれに由来する適切な抗原性決定基、例えばその抗原性のパーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで適切に免疫処置された、哺乳動物、例えばラマに由来する、免疫グロブリン配列の免疫セット、コレクションまたはライブラリーであることができる。上記の方法では、例えばスクリーニングを容易にするなどの目的で、ペプチドまたはポリペプチドのセット、コレクションまたはライブラリーを、ファージ、ファージミド、リボソームまたは適切な微生物例えば酵母上にディスプレイすることができる。アミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーをディスプレイしスクリーニングするための適切な方法、技法および宿主細胞は、例えば本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者には明白であるだろう。HoogenboomによるNatureBiotechnology23911051116の総説も参照されたい。もう一つの態様において、本発明の二パラトープ性ポリペプチドの構築に使用するためのポリペプチドを作製するための方法は、少なくとも、aポリペプチドを発現する細胞のコレクションまたはサンプルを用意するステップ;b該細胞のコレクションまたはサンプルを、CXCR2に結合することができかつまたはCXCR2に対するアフィニティを有するポリペプチドを発現する細胞についてスクリーニングするステップ;およびci該ポリペプチドを単離するか、またはii該細胞から該ポリペプチドをコードする核酸配列を単離した後、該ポリペプチドを発現させるステップを含む。例えば、所望のポリペプチドが免疫グロブリン配列である場合、細胞のコレクションまたはサンプルは、例えばB細胞のコレクションまたはサンプルであることができる。また、この方法では、細胞の試料が、CXCR2またはそれに基づくもしくはそれに由来する適切な抗原性決定基、例えばその抗原性のパーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで適切に免疫処置された哺乳動物、例えばラマに由来しうる。ある特定の一態様では、該抗原性決定基が細胞外のパーツ、領域、ドメイン、ループまたは他の細胞外エピトープでありうる。本明細書において同定する本発明の好ましい二パラトープ性ナノボディの調製では、ラマを、ヒトCXCR2を発現する哺乳動物細胞、カニクイザルCXCR2を発現する哺乳動物細胞、完全長ヒトCXCR2をコードするDNA、Δ117ヒトCXCR2をコードするDNA、カニクイザルCXCR2をコードするDNA、および表5に示すペプチドで免疫処置した。上述のスクリーニング方法は、当業者には明らかであるだろうとおり、任意の適切な方法で行うことができる。例えばEP0542810、WO0519824、WO04051268およびWO04106377を参照されたい。ステップbのスクリーニングは、好ましくは、FACSなどのフローサイトメトリー技法を使って行われる。これについては、例えばLiebyらBloodVol97No123820を参照されたい。もう一つの態様において、本発明のポリペプチドの構築に使用するためのCXCR2を指向するポリペプチドを作製するための方法は、少なくとも、aポリペプチドをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意すること;b該核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを、CXCR2に結合することができ、かつまたはCXCR2に対するアフィニティーを有するアミノ酸配列をコードする核酸配列についてスクリーニングするステップ;c該核酸配列を単離し、次に該ポリペプチドを発現させるステップを含みうる。そのような方法では、ポリペプチドをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーが、例えば免疫グロブリン配列のナイーブセット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリー;免疫グロブリン配列の合成または半合成セット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリー;およびまたは親和性成熟に付された免疫グロブリン配列のセット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーでありうる。また、そのような方法では、核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーが、重鎖可変ドメイン例えばVHドメインまたはVHHドメインまたは軽鎖可変ドメインのセット、コレクションまたはライブラリーをコードしうる。例えば、核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、ドメイン抗体または単一ドメイン抗体のセット、コレクションまたはライブラリー、またはドメイン抗体もしくは単一ドメイン抗体として機能する能力を有するアミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーをコードしうる。この方法の好ましい一態様では、核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーが、例えばCXCR2またはそれに基づくもしくはそれに由来する適切な抗原性決定基、例えばその抗原性のパーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで適切に免疫処置された哺乳動物に由来する核酸配列の免疫セット、コレクションまたはライブラリーでありうる。特定の一態様では、該抗原性決定基は、細胞外のパーツ、領域、ドメイン、ループまたは他の細胞外エピトープでありうる。本発明のポリペプチドの作製では、上で説明したようにラマを抗原で免疫処置した。上記の方法では、例えばスクリーニングを容易にするなどの目的で、ヌクレオチド配列のセット、コレクションまたはライブラリーを、ファージ、ファージミド、リボソームまたは適切な微生物例えば酵母上にディスプレイすることができる。アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列のセット、コレクションまたはライブラリーをディスプレイしスクリーニングするための適切な方法、技法および宿主細胞は、例えば本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者には明白であるだろう。HoogenboomによるNatureBiotechnology23911051116の総説も参照されたい。もう一つの態様において、本発明の二パラトープ性ポリペプチドに使用することができるCXCR2を指向するポリペプチドを作製するための方法は、少なくともaポリペプチドをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;b該核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを、CXCR2に結合することができかつまたはCXCR2に対するアフィニティーを有するアミノ酸配列であって、本発明の二パラトープ性ナノボディ、例えば配列番号58、59、62、63、64、65、47または61によってコードされるものによって交差ブロックされるか、それらを交差ブロックするものについて、スクリーニングするステップ;およびc該核酸配列を単離し、次に該ポリペプチドを発現させるステップを含みうる。本発明は、上記の方法によって、あるいは上記の方法の一つを含むと共に、少なくとも、該免疫グロブリン配列のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を決定するステップと、および該アミノ酸配列を自体公知の方法で例えば適切な宿主細胞または宿主細胞における発現によって、または化学合成によって発現させまたは合成し、そこから二パラトープ性ポリペプチドを構築するステップとを含む方法によって得られる、二パラトープ性ポリペプチドにも関する。上記の方法は、当業者には明らかであるだろうし、以下にも詳述するとおり、任意の適切な方法で行うことができる。例えばEP0542810、WO0519824、WO04051268およびWO04106377を参照されたい。例えば、ステップbのスクリーニングは、好ましくは、FACSなどのフローサイトメトリー技法を使って行われる。これについては、例えばLiebyらBloodVol97No123820を参照されたい。特にAblynxNVによる国際出願WO06079372に記載のいわゆるNanoclone商標技法を参照されたい。CXCR2を指向するVHH配列またはナノボディ配列を得るためのもう一つの技法では、重鎖抗体を発現する能力を有するトランスジェニック哺乳動物を適切にすなわちCXCR2を指向する免疫応答およびまたは重鎖抗体が生じるように免疫処置し、該トランスジェニック哺乳動物から、該VHH配列またはナノボディ配列をコードする核酸配列を含有する適切な生物学的サンプル例えば血液サンプル、血清サンプル、またはB細胞のサンプルを取得し、次に、該サンプルから出発し、任意の適切な自体公知の技法例えば本明細書に記載する方法のいずれか、またはハイブリドーマ技法を使って、CXCR2を指向するVHH配列を作製する。例えば、この目的には、重鎖抗体発現マウスや、WO02085945、WO04049794およびWO06008548およびJanssensらProcNatlAcadSciUSA2006Oct10103151305に記載されているさらなる方法および技法を、使用することができる。例えば、そのような重鎖抗体発現マウスは、任意の適切な単一可変ドメイン、例えば天然源由来の単一可変ドメイン例えばヒト単一可変ドメイン、ラクダ科動物単一可変ドメインまたはサメ単一可変ドメインならびに例えば合成または半合成単一可変ドメインを有する重鎖抗体を発現することができる。天然に存在するVH配列または好ましくはVHH配列から出発して、本発明において使用するためのナノボディおよびまたはそれをコードする核酸を得るための他の適切な方法および技法は、当業者には明白であるだろうが、これには、例えば本明細書において言及するWO0800279Aの64頁で言及されている技法が含まれうる。VHHドメインまたはナノボディは、それらのFR内にある1つ以上のホールマークHallmark残基を特徴としうる。ホールマーク残基とは、FRをラクダ科動物、例えばラマ由来のものと特徴づける残基である。したがってホールマーク残基は、置換、好ましくはヒト化置換の望ましいターゲットである。Kabatナンバリングによれば、ホールマーク残基は、ナノボディ中の11、37、44、45、47、83、84、103、104または108番目に位置しうる。そのようなフレームワーク配列と代替ホールマーク残基の適切な組合せの非限定的な例は、WO2008020079の65~98頁に記載されており、これらのページはそのまま本明細書に組み込まれる。他のヒト化または部分ヒト化配列も考えられ、それらも本発明に包含される。上で既に述べたように、本発明において使用するためのナノボディは、天然に存在するヒトVHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、特にDP47の対応するフレームワーク領域と比較して、フレームワーク領域の少なくとも1つに少なくとも1つのアミノ酸相違本明細書において定義するものを有しうる。より具体的には、本発明の非限定的な一態様によれば、ナノボディは、天然に存在するヒトVHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、特にDP47の対応するフレームワーク領域と比較して、ホールマーク残基108番目、103番目およびまたは45番目にあるものを含むの少なくとも1つに少なくとも1つのアミノ酸相違本明細書において定義するものを有しうる。通常、ナノボディは、そのような天然に存在するVHドメインとのアミノ酸相違を、FR2およびまたはFR4の少なくとも1つに、特にFR2およびまたはFR4中のホールマーク残基ここでも、108番目、103番目およびまたは45番目にあるものを含むの少なくとも1つに、少なくとも1つは有するであろう。また、本発明のヒト化ナノボディは、本明細書において定義するとおりでありうるが、それは、天然に存在するVHHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、フレームワーク領域の少なくとも1つに、少なくとも1つのアミノ酸相違本明細書において定義するものを有するものとする。より具体的には、本発明の非限定的一態様によれば、ヒト化されたまたは他の形で配列最適化されたナノボディは、本明細書に定義するとおりでありうるが、それは、天然に存在するVHHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、ホールマーク残基108番目、103番目およびまたは45番目にあるものを含むの少なくとも1つに、少なくとも1つのアミノ酸相違本明細書において定義するものを有するものとする。通常、ヒト化または他の形で配列最適化されたナノボディは、FR2およびまたはFR4の少なくとも1つに、特にFR2およびまたはFR4中のホールマーク残基ここでも、108番目、103番目およびまたは45番目にあるものを含むの少なくとも1つに、天然に存在するVHHドメインとのそのようなアミノ酸相違を、少なくとも1つは有するであろう。本明細書における開示から明白であるだろうとおり、本明細書において定義する本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインの天然または合成類似体、ミュータント、変異体、アレル、ホモログおよびオルソログ本明細書ではこれらをまとめて類似体という、特に配列番号58、59、62、63、64、65、47、61、53、54、46、69、68、67または66の二パラトープ性ナノボディの類似体を使用することも、本発明の範囲に包含される。一般に、そのような類似体では、本明細書において定義する本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインと比較して、1つ以上のアミノ酸残基が置き換えられ、削除されかつまたは付加されている。そのような置換、挿入または欠失は、フレームワーク領域の1つ以上およびまたはCDRの1つ以上において行うことができる。そのような置換、挿入または欠失をフレームワーク領域の1つ以上において行う場合、それらは、ホールマーク残基の1つ以上およびまたはフレームワーク残基中の他の位置の1つ以上において行いうるが、ホールマーク残基における置換、挿入または欠失は、一般的には、あまり好ましくない上述のようにそれらが適切なヒト化置換である場合を除く。非限定的な例として、置換は例えば保存的置換本明細書において説明するものであることができ、かつまたはアミノ酸残基を、別のVHHドメイン中の同じ位置に天然に存在する別のアミノ酸残基で置き換えることができるそのような置換の非限定的ないくつかの例についてはWO2008020079を参照されたいが、本発明は一般的にはこれらに限るわけではない。したがって、例えば本発明の二パラトープ性ナノボディに使用するためのナノボディなどの性質を改善するか、所望の性質からまたは本発明の望ましい性質のバランスもしくは組合せを、少なくとも大きくはすなわちナノボディまたは二パラトープ性ナノボディがもはやその意図した用途に適さなくなるほどには損ねない任意の1つ以上の置換、欠失もしくは挿入、またはそれらの組合せは、本発明の範囲に包含される。当業者は、一般に、適切な置換、欠失もしくは挿入、またはそれらの適切な組合せを、本明細書における開示に基づいて、また場合によっては限られた日常的実験これは、例えば、限られた数の考えうる置換を導入し、そうして得られたナノボディの性質に及ぼすそれらの影響を決定することを伴いうる後に、決定し、選択することができるであろう。例えば、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドを発現させるために使用する宿主細胞に依存して、そのような欠失およびまたは置換は、当業者の能力で可能であるだろうとおり、翻訳後修飾のための1つ以上の部位例えば1つ以上のグリコシル化部位が除去されるように設計することができる。あるいは、例えば部位特異的PEG化本明細書で説明するものを可能にするために官能基これも本明細書において説明するものを取り付けるための1つ以上の部位が導入されるように、置換または挿入を設計することもできる。一般に本明細書では、天然配列には存在しない特定の性質または構造的特徴を確保するために、アミノ酸配列中の置換、挿入または欠失を促進することを、配列最適化という。これについては、本明細書の定義の項の項目yが関係するであろう。類似体は、好ましくは、本発明の二パラトープ性ナノボディについて本明細書において定義したとおりのアフィニティ本明細書においてさらに説明するように、KD値真または見掛けの値、KA値真または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として適切に測定されかつまたは表現されたもので、CXCR2に結合することができるものである。類似体は、好ましくは、本明細書に記載する二パラトープ性ナノボディの好ましい性質を保持しているものでもある。また、好ましい一態様によれば、類似体は、配列番号58、59、62、63、64、65、47、61、53、54、46、69、68、67または66の二パラトープ性ナノボディの1つに対して、少なくとも70、好ましくは少なくとも80、より好ましくは少なくとも90、例えば少なくとも95もしくは99またはそれ以上の配列同一性を有し;かつまたは、好ましくは多くても20個、好ましくは多くても10個、さらに好ましくは多くても5個、例えば4、3、2またはただ1個のアミノ酸相違本明細書において定義するものを有する。また、類似体のフレームワーク配列およびCDRは、好ましくは、本明細書において定義する好ましい態様に従うものである。より一般的には、本明細書で述べるように、類似体は、a108番目のQ;およびまたはb45番目の荷電アミノ酸またはシステイン残基と好ましくは44番目のE、より好ましくは44番目のEと45番目のR;およびまたはc103番目のP、RまたはSを有するであろう。本発明の二パラトープ性VHHドメインまたはナノボディの類似体の好ましいクラスの一つは、ヒト化すなわち天然に存在するナノボディの配列と比較してされたものである。上述のように、そのようなヒト化では、一般に、天然に存在するVHHの配列中の1つ以上のアミノ酸残基が、ヒトVHドメイン、例えばヒトVH3ドメイン中の同じ位置に存在するアミノ酸残基で置き換えられる。本明細書の表20、22、24、26、28および30に具体的に開示したもの以外の考えうるヒト化置換の例は、本明細書において既に開示したように、ナノボディの配列と天然に存在するヒトVHドメインの配列との比較から、およびWO2008020079の開示から、当業者には明白であるだろう。一般に、ヒト化の結果として、免疫グロブリン単一可変ドメイン、特に本発明のナノボディは、本明細書に記載する本発明のナノボディの好ましい性質を依然として保ったまま、よりヒト様になりうる。結果として、そのようなヒト化ナノボディは、対応する天然に存在するVHHドメインと比較して、低下した免疫原性などといった利点を、いくつか有しうる。ここでも、本明細書における開示に基づいて、また場合によっては、限られた日常的実験後に、当業者は、ヒト化置換によってもたらされる好ましい性質と天然に存在するVHHドメインの好ましい性質との間で、望ましいまたは適切なバランスが最適化または達成されるような、ヒト化置換またはヒト化置換の適切な組合せを行うことができるであろう。本発明の二パラトープ性ナノボディに組み込むためのナノボディは、任意のフレームワーク残基において、例えば1つ以上のホールマーク残基本明細書において定義するものもしくは1つ以上の他のフレームワーク残基すなわち非ホールマーク残基またはそれらの任意の適切な組合せにおいて、適切にヒト化することができる。PRS103グループまたはKEREグループのナノボディの場合、好ましいヒト化置換の一つは、Q108→L108である。GLEWクラスのナノボディも、他のホールマーク残基の少なくとも1つがラクダ科動物ラクダ化置換本明細書において定義するものを含むのであれば、Q108→L108置換によってヒト化することができる。例えば、上述のように、ヒト化ナノボディの特に好ましいクラスは、44~47番目にGLEWまたはGLEW様配列;103番目にP、RまたはS特にR、および108番目にLを有する。ヒト化類似体および他の類似体、ならびにそれをコードする核酸配列は、自体公知の任意の方法で、例えばWO08020079の103頁および104頁に言及されている技法の1つ以上を使って、提供することができる。そこで述べられているように、ヒトVH配列すなわちアミノ酸配列または対応するヌクレオチド配列から出発して、例えばDP47、DP51またはDP29などのヒトVH3配列から出発して、本発明のナノボディの配列が得られるように、かつまたはそうして得られた配列にナノボディの好ましい性質が付与されるように、1つ以上のラクダ化置換を導入することによってすなわち、該ヒトVHドメインのアミノ酸配列中の1つ以上のアミノ酸残基を、VHHドメイン中の対応する位置に存在するアミノ酸残基に変えることによって、本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインそれらの類似体を含むを設計しかつまたは調製できることも、当業者には明白であるだろう。ここでも、これは、一般に、先のパラグラフで言及したさまざまな方法および技法を使用し、出発点としてヒトVHドメインのアミノ酸配列およびまたはヌクレオチド配列を使って行うことができる。いくつかの好ましい、ただし非限定的なラクダ化置換は、WO2008020079から導き出すことができる。ホールマーク残基の1つ以上におけるラクダ化置換が、一般に、他のアミノ酸位置の1つ以上における置換より大きな影響を、望ましい性質に対して有するであろうことは明白であるだろうが、それらはどちらも、またはそれらのどの適切な組合せも、本発明に包含される。例えば、望ましい性質の少なくとも一部を付与する1つ以上のラクダ化置換を導入し、次に、該性質をさらに改善しかつまたはさらなる好ましい性質を付与するさらなるラクダ化置換を導入することができる。ここでも、当業者は、一般に、適切なラクダ化置換またはラクダ化置換の適切な組合せを、本明細書における開示に基づいて、また場合によっては限られた日常的実験これは、例えば、限られた数の考えうるラクダ化置換を導入し、免疫グロブリン単一可変ドメインの好ましい性質が得られるかどうかまたは元のVHドメインと比較して改善されるかどうかを決定することを伴いうる後に、決定し、選択することができるであろう。しかし一般的には、そのようなラクダ化置換は、好ましくは、得られたアミノ酸配列が少なくともa108番目のQ;およびまたはb45番目の荷電アミノ酸またはシステイン残基と好ましくは44番目のE、より好ましくは44番目のEと45番目のR;およびまたはc103番目のP、RまたはSを含み、場合によっては1つ以上のさらなるラクダ化置換を含むものである。より好ましくは、ラクダ化置換は、本発明において使用するための免疫グロブリン単一可変ドメインおよびまたはその類似体本明細書において定義するもの、例えばヒト化類似体およびまたは好ましくは先のパラグラフにおいて定義した類似体をもたらすものである。ナノボディなどの免疫グロブリン単一可変ドメインは、自然界では稀であるがそれでもなおVHドメインフォールドと構造的に適合する置換の組込みによって、VHドメインから導き出すこともできる。例えば、限定するわけではないが、これらの置換は、次の1つ以上を含みうる:35番目のGly、37番目のSer、ValまたはThr、39番目のSer、Thr、Arg、Lys、His、AspまたはGlu、45番目のGluまたはHis、47番目のTrp、Leu、Val、Ala、Thr、またはGlu、50番目のSまたはRBarthelemyらJBiolChem2008Feb8283363954Epub2007Nov28。本発明は本発明の二パラトープ性ポリペプチドの誘導体も含む。そのような誘導体は、一般に、本発明の二パラトープ性ポリペプチドのおよびまたは本発明の二パラトープ性ポリペプチドを形成するアミノ酸残基の1つ以上の修飾によって、特に化学的およびまたは生物学的例えば酵素的修飾によって、得ることができる。そのような修飾の例、ならびにそのような方法ですなわちタンパク質バックボーン上で、好ましくは側鎖上で修飾することができるポリペプチド内のアミノ酸残基、そのような修飾を導入するために使用することができる方法および技法、そのような修飾の潜在的用途および利点の例は、当業者には明らかであるだろう。例えば、そのような修飾は、本発明の二パラトープ性ポリペプチド中または本発明の二パラトープ性ポリペプチド上への1つ以上の官能基、残基または部分の例えば共有結合的連結による、または他の適切な方法でのの導入、特に1つ以上の所望の性質または機能性を本発明の二パラトープ性ポリペプチドに付与する1つ以上の官能基、残基または部分の導入を伴いうる。そのような官能基の例は、当業者には明白であるだろう。例えば、そのような修飾は、本発明のポリペプチドの半減期、溶解度およびまたは吸収を増加させ、本発明のポリペプチドの免疫原性およびまたは毒性を低下させ、本発明のポリペプチドの望ましくないいくつかの副作用を排除または減弱し、かつまたは本発明の二パラトープ性ナノボディおよびまたはポリペプチドの他の有利な性質を付与しかつまたは望ましくない性質を低下させる1つ以上の官能基の例えば共有結合的連結による、または他の適切な方法での導入、または前記のうちの2つ以上の任意の組合せを含みうる。そのような官能基およびそれらを導入するための技法の例は、当業者には明白であるだろうし、これには、一般に、当技術分野において知られている全ての官能基、ならびに医薬タンパク質を修飾するための、特に抗体または抗体フラグメントScFvおよび単一ドメイン抗体を含むを修飾するための、自体公知の官能基および技法が含まれうる。これについては、例えばRemingtonsPharmaceuticalSciences第16版、MackPublishingCo、ペンシルベニア州イーストン1980を参照されたい。当業者にはやはり明らかであるだろうが、そのような官能基は、例えば、本発明の二パラトープ性ポリペプチドに直接例えば共有結合によって連結するか、場合によっては適切なリンカーまたはスペーサーを介して連結することができる。もう一つの、通常はそれほど好ましくない修飾は、N結合型またはO結合型グリコシル化を、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドを発現させるために使用する宿主細胞に依存して、通常は翻訳時およびまたは翻訳後修飾の一部として含む。さらにもう一つの修飾は、標識ポリペプチドまたは標識ナノボディの使用目的に応じて、1つ以上の検出可能なラベルまたは他のシグナル生成基もしくはシグナル生成部分の導入を含みうる。適切なラベルと、それらを取り付け、使用し、検出するための技法は、当業者には明らかであるだろうし、限定するわけではないが、これには、例えば蛍光ラベル、リン光ラベル、化学発光ラベル、生物発光ラベル、放射性同位体、金属、金属キレート化合物、金属カチオン、発色団および酵素、例えばWO08020079の109頁に挙げられているものが含まれる。他の適切なラベルは当業者には明らかであるだろうし、これには、例えばNMRまたはESR分光法を使って検出することができる部分が含まれる。そのような本発明の標識二パラトープ性ナノボディおよびポリペプチドは、具体的なラベルの選択に依存して、例えばインビトロ、インビボまたはインサイチューアッセイELISA、RIA、EIAおよび他のサンドイッチアッセイなどといった自体公知のイムノアッセイを含むならびにインビボ診断およびイメージング目的に使用することができる。当業者には明らかであるだろうとおり、もう一つの修飾は、例えば上述の金属または金属カチオンの一つをキレートするためのキレート基の導入を伴いうる。適切なキレート基には、例えば限定するわけではないが、ジエチレントリアミン五酢酸DTPAまたはエチレンジアミン四酢酸EDTAなどがある。さらにもう一つの修飾は、ビオチンストレプトアビジン結合ペアなどの特異的結合ペアの一方のパーツである官能基の導入を含みうる。そのような官能基は、本発明の二パラトープ性ポリペプチドまたはナノボディを、結合ペアの他方のパーツに結合している別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学的化合物に、結合対の形成によって連結するために使用することができる。例えば、本発明の二パラトープ性ナノボディをビオチンにコンジュゲートし、アビジンまたはストレプトアビジンにコンジュゲートされたもう一つのタンパク質、ポリペプチド、化合物または単体に連結させることができる。例えば、そのようなコンジュゲート二パラトープ性ナノボディは、例えば検出可能シグナル生成剤がアビジンまたはストレプトアビジンにコンジュゲートされている診断系において、レポーターとして使用することができる。そのような結合ペアは、例えば本発明の二パラトープ性ナノボディを担体医薬目的に適した単体を含むに結合するためにも使用することができる。非限定的な一例は、CaoおよびSureshJournalofDrugTargetting84257に記載されているリポソーム製剤である。そのような結合ペアは、本発明のナノボディに治療活性剤を連結するために使用することもできる。いくつかの応用では、特に、本発明の二パラトープ性ポリペプチドまたは免疫グロブリン単一可変ドメインが指向するCXCR2ターゲットを発現する細胞を例えばがんの処置において殺そうとする応用、またはそのような細胞の成長およびまたは増殖を低下させまたは遅くしようとする応用では、本発明の二パラトープ性ポリペプチドを、毒素または毒性残基もしくは毒性部分に連結することもできる。例えば細胞毒性化合物を得るために本発明の二パラトープ性ポリペプチドに連結することができる毒性部分、毒性化合物または毒性残基の例は、当業者には明らかであるだろうし、例えば上述の従来技術およびまたは本発明のさらなる説明に見いだすことができる。その一例は、WO03055527に記載のいわゆるADEPT商標技術である。他の潜在的な化学修飾および酵素修飾は当業者には明らかであるだろう。そのような修飾は、研究目的で例えば機能活性関係を調べるために導入することもできる。例えばLundbladおよびBradshawBiotechnolApplBiochem26143151を参照されたい。好ましくは、誘導体は、本発明の二パラトープ性ナノボディについて本明細書において定義したとおりのアフィニティ本明細書においてさらに説明するように、KD値真または見掛けの値、KA値真または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として適切に測定されかつまたは表現されたもので、CXCR2に結合するものである。上述のように、本発明は、少なくとも1つの本発明の二パラトープ性ポリペプチドから実質的になるまたは少なくとも1つの本発明の二パラトープ性ポリペプチドを含むタンパク質またはポリペプチドにも関する。から実質的になるessentiallyconsistofとは、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列が、本発明の二パラトープ性ポリペプチドのアミノ酸配列と全く同じであるか、限られた数のアミノ酸残基、例えば1~20個のアミノ酸残基、例えば1~10個のアミノ酸残基、好ましくは1~6個のアミノ酸残基、例えば1、2、3、4、5または6個のアミノ酸残基が、二パラトープ性ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端、カルボキシ末端、またはアミノ末端とカルボキシ末端の両方に付加されているそのような本発明のポリペプチドのアミノ酸配列に対応することを意味する。該アミノ酸残基は、ポリペプチドの生物学的性質を変化し、改変し、または他の影響を及ぼしても及ぼさなくてもよく、それにさらなる機能性を付加しても付加しなくてもよい。例えば、そのようなアミノ酸残基は:例えば異種宿主細胞または宿主生物における発現の結果として、N末端Met残基を含むことができる;合成後に宿主細胞からの二パラトープ性ポリペプチドの分泌を指示するシグナル配列またはリーダー配列を形成しうる。適切な分泌リーダーペプチドは、当業者には明らかであるだろうし、本明細書においてさらに説明するとおりでありうる。通常、そのようなリーダー配列は、二パラトープ性ポリペプチドのN末端に連結されるであろう;二パラトープ性ポリペプチドが特定の器官、組織、細胞、または細胞のパーツもしくはコンパートメントを指向し、かつまたはそれらを貫通しもしくはそれらに進入することを可能にする、およびまたは二パラトープ性ポリペプチドが、細胞膜、上皮細胞の層などの細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、または血液脳関門などといった生物学的障壁を貫通し、または横切ることを可能にする、配列またはシグナルを形成しうる。そのようなアミノ酸配列の例は、当業者には明らかであるだろうし、これには、WO08020079の112頁のパラグラフcで言及されているものが含まれる;タグ、例えば、二パラトープ性ナノボディの精製例えば当該配列または残基を指向するアフィニティ技法を用いた精製を可能にするまたは容易にするアミノ酸配列または残基を形成しうる。その後、該配列または残基を例えば化学的または酵素的切断によって除去することで、二パラトープ性ポリペプチド配列を得ることができるこの目的には、場合により、タグを切断可能なリンカー配列を介して二パラトープ性ポリペプチド配列に連結してもよいし、タグが切断可能なモチーフを含んでいてもよい。そのような残基の好ましい、ただし非限定的な例をいくつか挙げると、複数のヒスチジン残基、グルタチオン残基およびmycタグ例えばWO0612282の配列番号31参照である;官能化された、かつまたは官能基を取り付けるための部位として役立ちうる、1つ以上のアミノ酸残基でありうる。適切なアミノ酸残基および官能基は、当業者には明らかであるだろうし、限定するわけではないが、これには、本発明の二パラトープ性ポリペプチドまたはナノボディの誘導体について本明細書で言及したアミノ酸残基および官能基が含まれる。もう一つの態様によれば、本発明の二パラトープ性ポリペプチドは、そのアミノ末端、そのカルボキシ末端、またはそのアミノ末端とカルボキシ末端の両方で、少なくとも1つのさらなるペプチドまたはポリペプチドに融合されている本発明の二パラトープ性ナノボディすなわち、該本発明の二パラトープ性ナノボディと1つ以上のさらなるペプチドまたはポリペプチドとを含む融合タンパク質が得られるように融合されているものを含む。そのような融合物を、本明細書ではナノボディ融合物ともいう。好ましくは、さらなるペプチドまたはポリペプチドは、1つ以上の望ましい性質または機能性を本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドに付与するものである。例えば、さらなるペプチドまたはポリペプチドは、さらなる結合部位を提供してもよく、その結合部位は、所望する任意のタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原性決定基またはエピトープ例えば限定するわけではないが、本発明の二パラトープ性ポリペプチドが指向するものと同じタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原性決定基もしくはエピトープ、または異なるタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原性決定基またはエピトープを指向しうる。そのようなペプチドまたはポリペプチドの例は、当業者には明らかであるだろうし、これには、一般に、従来の抗体およびそのフラグメント限定するわけではないが、ScFvおよび単一ドメイン抗体を含むに基づくペプチド融合物に使用される全てのアミノ酸配列を含めることができる。例えばHolligerおよびHudsonNatureBiotechnology23911261136による総説を参照されたい。例えば、そのようなペプチドまたはポリペプチドは、本発明のポリペプチドそのものと比較して、半減期、溶解度、または吸収を増加させ、免疫原性または毒性を低下させ、望ましくない副作用を排除または減弱し、かつまたは本発明のポリペプチドに他の有利な性質を付与し、かつまたは本発明のポリペプチドの望ましくない性質を低下させるアミノ酸配列であることができる。そのようなペプチドおよびポリペプチドの非限定的な例をいくつか挙げると、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン例えばWO0027435参照またはハプテン分子例えば循環抗体によって認識されるハプテン、例えばWO9822141参照である。特に、血清アルブミンまたはそのフラグメントへの免疫グロブリンのフラグメント例えばVHドメインの連結は、半減期を増加させるために使用できることが、当技術分野では記載されている。WO0027435およびWO01077137を参照されたい。本発明によれば、本発明の二パラトープ性ポリペプチド、好ましくは二パラトープ性ナノボディは、好ましくは、血清アルブミンまたはその適切なフラグメントに直接連結されるか、または適切なリンカーを介して、特に、本発明のポリペプチドを遺伝子融合物タンパク質として発現させることができるように適切なペプチドリンカーを介して連結される。具体的一態様によれば、少なくとも血清アルブミンのドメインIIIまたはその一部を含む血清アルブミンのフラグメントに、本発明の二パラトープ性ナノボディを連結することができる。AblynxNVのWO07112940を参照されたい。あるいは、既に本明細書において議論したように、さらなるペプチドまたはポリペプチドは、増加した血清中半減期がもたらすように、血清タンパク質例えばヒト血清アルブミンまたはIgGなどの他の血清タンパク質を指向するさらなる結合部位または結合ユニットを与えてもよい。そのようなアミノ酸配列には、例えば以下に述べるナノボディ、ならびにWO9101743、WO0145746およびWO02076489に記載の小さなペプチドおよび結合タンパク質、WO03002609およびWO04003019に記載のdAbが含まれる。HarmsenらVaccine23;4926422005、ならびにEP0368684、ならびにAblynxNVによるWO08028977、WO08043821、WO08043822、ならびに2006年12月5日に出願されたAblynxNVの米国仮特許出願発明の名称PeptidescapableofbindingtoserumproteinPCTEP2007063348も参照されたいも参照されたい。そのようなペプチドまたはポリペプチドは、特に、血清アルブミン特にヒト血清アルブミンおよびまたはIgG特にヒトIgGを指向することができる。例えば、そのようなアミノ酸配列は、ヒト血清アルブミンを指向するアミノ酸配列およびFcRnへの血清アルブミンの結合には関与しないヒト血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合することができるアミノ酸配列例えばWO060122787参照およびまたは血清アルブミンのドメインIIIの一部を形成しない血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合する能力を有するアミノ酸配列ここでも例えばWO060122787を参照されたい;増加した半減期を有するまたは与えることができるアミノ酸配列例えばAblynxNVによるWO08028977参照;少なくとも1つの哺乳動物種に由来する血清アルブミン、特に少なくとも1つの霊長類種例えば限定するわけではないが、マカクMacaca属のサル例えば特にカイニクイザルMacacafascicularisおよびまたはアカゲザルMacacamulattaおよびヒヒPapioursinusに由来する血清アルブミンと交差反応する、ヒト血清アルブミンに対するアミノ酸配列ここでもWO08028977を参照されたい;pH非依存的に血清アルブミンに結合することができるアミノ酸配列例えばAblynxNVによるWO08043821発明の名称AminoAcidsequencesthatbindtoserumproteinsinamannerthatisessentiallyindependentofthepHcompoundscomprisingthesameandusesthereof参照およびまたは条件付き結合剤conditionalbinderであるアミノ酸配列例えばAblynxNVによるWO08043822発明の名称Aminoacidsequencesthatbindtoadesiredmoleculeinaconditionalmanner参照でありうる。もう一つの態様によれば、1つ以上のさらなるペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質配列は、従来の四本鎖抗体特にヒト抗体およびまたは重鎖抗体の1つ以上のパーツ、フラグメントまたはドメインを含みうる。例えば、通常はそれほど好ましくないものの、本発明の二パラトープ性ナノボディは、従来の好ましくはヒトVHもしくはVLドメインに、またはVHもしくはVLドメインの天然もしくは合成類似体に、ここでも場合によってはリンカー配列を介して連結することができる限定するわけではないが、他の単一ドメイン抗体、例えばWardらが記載したdAbを含む。二パラトープ性ポリペプチドまたはナノボディは、1つ以上の好ましくはヒトCH1、CH2およびまたはCH3ドメインにも、場合によってはリンカー配列を介して連結することができる。例えば、適切なCH1ドメインに連結された二パラトープ性ナノボディを、例えば適切な軽鎖と一緒に使用することで、従来のFabフラグメントまたはF2フラグメントと類似しているが、従来型VHドメインの1つまたはF2フラグメントの場合には1つもしくは両方が本発明の二パラトープ性ナノボディで置き換えられている、抗体フラグメント構造を作製することができるだろう。また、2つの二パラトープ性ポリペプチドをCH3ドメインに場合によってはリンカーを介して連結することで、インビボで増加した半減期を有するコンストラクトを得ることもできるだろう。本発明のポリペプチドの具体的一態様によれば、1つ以上の本発明の二パラトープ性ポリペプチドまたはナノボディを、1つ以上の定常ドメイン例えばFc部分の一部として使用することができる、またはFc部分を形成させるために使用することができる、2個または3個の定常ドメインに、Fc部分に、およびまたは本発明のポリペプチドに1つ以上のエフェクター機能を付与しかつまたは1つ以上のFc受容体に結合する能力を付与することができる1つ以上の抗体パーツ、フラグメントもしくはドメインに、場合によっては適切なリンカーまたはヒンジ領域を介して連結することができる。例えば、この目的のためには、限定するわけではないが、1つ以上のさらなるペプチドまたはポリペプチドは、例えば重鎖抗体本明細書において説明するものに由来する、より好ましくは従来のヒト四本鎖抗体に由来する、抗体のCH2およびまたはCH3ドメインを、1つ以上含むことができ;かつまたは、例えばIgGに由来する例えばIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4に由来する、IgEに由来する、または他のヒトIg、例えばIgA、IgDまたはIgMに由来する、Fc領域の一部を形成することができる。例えば、WO9404678には、ラクダ科動物VHHドメイン、またはそのヒト化誘導体すなわちナノボディを含む重鎖抗体であって、それぞれがナノボディとヒトCH2およびCH3ドメインとを含むただしCH1ドメインは含まない2本の重鎖からなる免疫グロブリンが得られるように、ラクダ科動物のCH2およびまたはCH3ドメインがヒトCH2およびCH3ドメインで置き換えられていて、その免疫グロブリンは、CH2およびCH3ドメインによって提供されるエフェクター機能を有し、軽鎖が存在しなくても機能することができるものが記載されている。エフェクター機能を与えるために本発明のナノボディに適切に連結することができる他のアミノ酸配列は、当業者には明らかであるだろうし、これは、所望するエフェクター機能に基づいて選択することができる。例えばWO04058820、WO9942077、WO02056910およびWO05017148、ならびにHolligerおよびHudsonによる総説前掲を参照されたい。Fc部分へのポリペプチド、例えば本発明のナノボディのカップリングは、対応する本発明のポリペプチドと比較して増加した半減期ももたらしうる。いくつかの応用には、生物学的に有意なエフェクター機能を何ら伴わずに増加した半減期を付与するFc部分およびまたは定常ドメインすなわちCH2およびまたはCH3ドメインの使用も適切である場合があり、さらにはそれが好ましい場合さえある。1つ以上の二パラトープ性ポリペプチド、例えばナノボディと、インビボで増加した半減期を有する1つ以上の定常ドメインとを含む他の適切なコンストラクトは、当業者には明らかであるだろうし、これは、例えば、CH3ドメインに場合によってはリンカー配列を介して連結された2つのナノボディを含みうる。一般に、増加した半減期を有する融合タンパク質または誘導体はいずれも、好ましくは、腎吸収のカットオフ値である50kDaを上回る分子量を有するであろう。もう一つの具体的な、ただし非限定的な態様では、本発明のポリペプチドを形成させるために、1つ以上の本発明のアミノ酸配列を、二量体へと自己会合する傾向が従来の四本鎖抗体に天然に存在する定常ドメインと比較して低下しているまたは本質的にない天然、合成または半合成定常ドメインまたはその類似体、変異体、ミュータント、パーツまたはそのフラグメントに、場合によっては適切なリンカーまたはヒンジ領域を介して連結することができる。そのような単量体型すなわち自己会合性でないFc鎖変異体、またはそのフラグメントは、当業者には明らかであるだろう。例えば、HelmらJBiolChem19962717494には、本発明のポリペプチド鎖に使用することができる単量体型Fc□鎖変異体が記載されている。また、そのような単量体型Fc鎖変異体は、好ましくは、それが由来するFc部分に依存して補体または関連するFc受容体に結合する能力を依然として有するもの、かつまたはそれらが由来するFc部分のエフェクター機能の一部または全部を依然としてまたはレベルは低下しているが意図した用途には依然として適するレベルで有するものである。あるいは、そのような本発明のポリペプチド鎖では、単量体型Fc鎖を、ポリペプチド鎖に増加した半減期を付与するために使用することができ、その場合、単量体型Fc鎖は、エフェクター機能を有さないか、実質的に有さなくてもよい。さらなるペプチドまたはポリペプチドは、例えば、本発明のポリペプチドを発現させるために使用する宿主細胞に依存して、本発明のポリペプチドのプレ、プロまたはプレプロ型が得られるように合成後に本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドの宿主細胞からの分泌を指示するシグナル配列またはリーダー配列を形成してもよい。さらなるペプチドまたはポリペプチドは、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドが、特定の器官、組織、細胞、または細胞のパーツもしくはコンパートメントを指向し、かつまたはそれらを貫通しもしくはそれらに進入することを可能にする、およびまたは本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドが、細胞膜、上皮細胞の層などの細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、または血液脳関門などといった生物学的障壁を貫通し、または横切ることを可能にする、配列またはシグナルを形成してもよい。そのようなアミノ酸の適切な例は当業者には明らかであるだろうし、限定するわけではないが、これには、例えばWO08020079の118頁で言及されているものが含まれる。いくつかの応用では、特に、本発明の二パラトープ性ポリペプチドが指向するターゲットを発現する細胞を例えばがんの処置において殺そうとする応用、またはそのような細胞の成長およびまたは増殖を低下させまたは遅くしようとする応用では、本発明の二パラトープ性ポリペプチドを、細胞毒性タンパク質またはポリペプチドに連結することもできる。例えば本発明の毒性ポリペプチドなどを得るために本発明のナノボディに連結することができるそのような毒性タンパク質および毒性ポリペプチドの例は、当業者には明らかであるだろうし、例えば上述の従来技術およびまたは本明細書におけるさらなる説明に見いだすことができる。その一例は、WO03055527に記載のいわゆるADEPT商標技術である。ある随意の、ただし非限定的な態様によれば、該1つ以上のさらなるペプチドまたはポリペプチドは、少なくとも3つ、例えば4つ、5つまたはそれ以上のナノボディを含む本発明のポリペプチドが得られるように、少なくとも1つのさらなるナノボディを含み、該ナノボディは、場合によっては、1つ以上のリンカー配列本明細書において定義するものを介して連結されうる。最後に、本発明の二パラトープ性ポリペプチドが2つ以上のナノボディと1つ以上のさらなるペプチドまたはポリペプチド本明細書において言及するものとを含有し得ることも、本発明の範囲内である。2つ以上のVHHドメインを含有する多価および多重特異性ポリペプチドとそれらの調製については、ConrathらJBiolChemVol27610734673502001;MuyldermansReviewsinMolecularBiotechnology74277302;ならびに例えばWO9634103およびWO9923221を参照されたい。本発明の具体的な多重特異性およびまたは多価ポリペプチドの他の例は、本明細書において言及するAblynxNVの出願にいくつか見いだすことができる。本発明の多重特異性ポリペプチドの好ましい例の一つは、少なくとも1つの本発明の二パラトープ性ナノボディと、増加した半減期をもたらす少なくとも1つのナノボディとを含む。そのようなナノボディは、例えば血清タンパク質、特にヒト血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、チロキシン結合タンパク質、ヒトトランスフェリン、フィブリノゲン、IgG、IgEまたはIgMなどの免疫グロブリンを指向するか、WO04003019に列挙されている血清タンパク質の一つを指向するナノボディであることができる。これらのうち、血清アルブミン特にヒト血清アルブミンまたはIgG特にヒトIgG、例えばMuyldermansnによる総説前掲に記載されているナノボディVH1を参照されたいに結合することができるナノボディは、特に好ましいただし、例えばマウスまたは霊長類における実験には、それぞれマウス血清アルブミンMSAまたは該霊長類に由来する血清アルブミンに対するまたはそれらと交差反応するナノボディを使用することができる。ただし、医薬的使用には、ヒト血清アルブミンまたはヒトIgGに対するナノボディが、通常は好ましいであろう。増加した半減期をもたらし、本発明のポリペプチドにおいて使用することができるナノボディには、WO04041865、WO06122787、およびAblynxNVによるさらなる特許出願に記載されている血清アルブミンを指向するナノボディ、例えば上述のものが含まれる。例えば、本発明において使用するための、増加した半減期をもたらす好ましいナノボディには、FcRnへの血清アルブミンの結合には関与しないヒト血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合することができるナノボディ例えばWO060122787参照;血清アルブミンのドメインIIIの一部を形成しない血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合する能力を有するナノボディここでも例えばWO060122787を参照されたい;増加した半減期を有するまたは与えることができるナノボディ例えばAblynxNVによるWO08028977参照;少なくとも1つの哺乳動物種に由来する血清アルブミン、特に少なくとも1つの霊長類種例えば限定するわけではないが、マカクMacaca属のサル例えば特にカイニクイザルMacacafascicularisおよびまたはアカゲザルMacacamulattaおよびヒヒPapioursinusに由来する血清アルブミンと交差反応する、ヒト血清アルブミンに対するナノボディここでもAblynxNVのWO08028977を参照されたい;pH非依存的に血清アルブミンに結合することができるナノボディ例えば本明細書において言及したAblynxNVによるWO2008043821参照およびまたは条件付き結合剤であるナノボディ例えばAblynxNVによるWO08043822参照などがある。増加した半減期をもたらし、本発明のポリペプチドに使用することができる、特に好ましいナノボディには、WO06122787に開示されているナノボディALB1~ALB10表IIおよび表III参照があり、このうち、ALB8WO06122787の配列番号62はとりわけ好ましい。本発明の具体的一態様によれば、本発明のポリペプチドは、2つ以上のナノボディの他に、ヒト血清アルブミンに対するナノボディを少なくとも1つは含有する。本発明の二パラトープ性ポリペプチドに付加しまたは取り付けまたは融合することができるさらなる追加ペプチドまたはポリペプチドとして、プロリン、アラニンおよびセリンで構成されるポリマーPAS配列が挙げられる。PAS配列は200~600残基で構成され、血漿中半減期の延長をもたらす流体力学的体積hydrodynamicvolumeの劇的な増加につながりうる。本発明の二パラトープ性ポリペプチドの血清中半減期は、SchellenbrgerらNatureBiotechnology27No12p11861190に記載されているように、XTENと呼ばれる864アミノ酸ポリペプチドへの融合によって引き延ばすこともできる。一般に、1つ以上の本発明の二パラトープ性ナノボディを含有する、増加した半減期を有する本発明のポリペプチド、および本発明の二パラトープ性ナノボディの誘導体、または増加した半減期を有する前記ポリペプチドの誘導体はいずれも、好ましくは、対応する本発明のナノボディそのものの半減期より、少なくとも15倍、好ましくは少なくとも2倍、例えば少なくとも5倍、例えば少なくとも10倍または20倍以上長い半減期を有する。例えば、増加した半減期を有するそのような誘導体またはポリペプチドは、対応する本発明のナノボディそのものと比較して、1時間以上、好ましくは2時間以上、より好ましくは6時間以上、例えば12時間以上、さらには24、48または72時間以上増加した半減期を有しうる。本発明の好ましい、ただし非限定的な一態様では、そのような誘導体またはポリペプチドは、ヒトにおいて、少なくとも約12時間、好ましくは少なくとも24時間、より好ましくは少なくとも48時間、さらに好ましくは少なくとも72時間またはそれ以上の血清中半減期を示しうる。例えば、そのような誘導体またはポリペプチドは、少なくとも5日例えば約5~10日、好ましくは少なくとも9日例えば約9~14日、より好ましくは少なくとも約10日例えば約10~15日、または少なくとも約11日例えば約11~16日、より好ましくは少なくとも約12日例えば約12~18日またはそれ以上または14日以上例えば約14~19日の半減期を有しうる。本発明の多重特異性ポリペプチドのもう一つの好ましい、ただし非限定的な例は、少なくとも1つの本発明の二パラトープ性ナノボディと、本発明のポリペプチドを、特定の器官、組織、細胞、または細胞のパーツもしくはコンパートメントに向かわせ、かつまたは本発明のポリペプチドがそれらを貫通しもしくはそれらに進入することを可能にする、およびまたはナノボディが、細胞膜、上皮細胞の層などの細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、または血液脳関門などといった生物学的障壁を貫通し、または横切ることを可能にする、少なくとも1つのナノボディとを含む。そのようなナノボディの例には、所望の器官、組織または細胞の特異的細胞表面タンパク質、マーカーまたはエピトープ例えば腫瘍細胞に付随する細胞表面マーカーを指向するナノボディ、およびWO02057445およびWO06040153に記載の単一ドメイン脳ターゲティング抗体フラグメントなどがあり、なかでもFC44WO06040153の配列番号189およびFC5WO06040154の配列番号190は好ましい例である。本発明のポリペプチドでは、2つ以上のナノボディと1つ以上のポリペプチドとが、例えばWO9923221で述べられているように互いに直接連結されていてもよく、かつまたは1つ以上の適切なスペーサーもしくはリンカーまたはその任意の組合せを介して、互いに連結されていてもよい。本発明の一態様によれば、本発明のポリペプチドは、本明細書において定義する本質的に単離された形態にある。本発明のアミノ酸配列、二パラトープ性ナノボディ、ポリペプチドおよび核酸は、本明細書におけるさらなる説明から当業者には明らかであるだろうとおり、自体公知の方法で調製することができる。例えば、本発明の二パラトープ性ナノボディおよびポリペプチドは、抗体を調製するための、特に抗体フラグメント限定するわけではないが単一ドメイン抗体およびScFvフラグメントなどを調製するための、自体公知の方法で、調製することができる。アミノ酸配列、ナノボディ、ポリペプチドおよび核酸を調製するための好ましい、ただし非限定的な方法には、例えば本明細書に記載する方法および技法が含まれる。当業者には明らかであるだろうとおり、本発明の二パラトープ性ナノボディおよびまたはポリペプチドを調製するためのとりわけ有用な方法の一つは、一般に、i適切な宿主細胞もしくは宿主生物本明細書においては本発明の宿主ともいうまたは他の適切な発現系において、該本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドをコードする核酸本明細書では本発明の核酸ともいうを発現させるステップ;および場合によってはそれに続いて、iiそうして得られた該本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドを単離およびまたは精製するステップを含む。特に、そのような方法は、i本発明の宿主を、該本発明の宿主が少なくとも1つの本発明の二パラトープ性ナノボディおよびまたはポリペプチドを発現しかつまたは生産するような条件下で、培養しかつまたは維持するステップ、場合によって、それに続いてiiそうして得られた本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドを単離およびまたは精製するステップを含みうる。もう一つの態様において、本発明は、本発明のポリペプチドまたはその適切なフラグメントをコードする核酸分子に関する。そのような核酸は、本明細書では本発明の核酸ともいい、例えば、本明細書においてさらに説明するとおり、遺伝子コンストラクトの形態をとりうる。好ましい実施形態において、本発明は、表9および表32の個々の具体的ナノボディに関する配列番号25~43、90および配列番号213~219に示すアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列をコードする核酸分子を提供する。あるいは、本発明の核酸分子は、配列番号44~69の多価および二パラトープ性ナノボディコンストラクトをコードする核酸分子を含む。さらに、本発明の核酸分子は、表18において同定するナノボディに関する配列番号192~211の核酸配列を有する分子を含む。本発明の核酸は、一本鎖または二本鎖DNAまたはRNAの形態をとることができ、好ましくは二本鎖DNAの形態にある。例えば、本発明のヌクレオチド配列は、ゲノムDNA、cDNAまたは合成DNA例えば意図する宿主細胞または宿主生物における発現に特に適合させたコドン頻度を有するDNAであることができる。本発明の一態様によれば、本発明の核酸は、本明細書において定義する本質的に単離された形態にある。本発明の核酸は、ベクター、例えばプラスミド、コスミドまたはYACなどの形態にあり、それらの中に存在し、かつまたはそれらの一部であることもでき、これらはまた、本質的に単離された形態にありうる。本発明の核酸は、ここに提供する本発明のポリペプチドのアミノ酸配列に関する情報に基づいて、自体公知の方法で調製または取得することができ、かつまたは適切な天然源から単離することができる。類似体を得るには、該類似体をコードする本発明の核酸が得られるように、天然に存在するVHHドメインをコードするヌクレオチド配列を、例えば部位特異的変異誘発に付すことができる。また、当業者には明らかであるだろうとおり、本発明の核酸を調製するには、いくつかのヌクレオチド配列、例えば本発明のポリペプチドをコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、例えば1つ以上のリンカーをコードする核酸とを、適切な方法で一つに連結することもできる。本発明の核酸を作製するための技法は、当業者には明らかであるだろうし、例えば限定するわけではないが、自動DNA合成;部位特異的変異誘発;2つ以上の天然およびまたは合成配列または2つ以上のそのパーツの組合せ、切断型発現産物の発現をもたらす変異の導入;1つ以上の制限部位の導入例えば、適切な制限酵素を使って容易に消化およびまたはライゲートすることができるカセットおよびまたは領域を作出するため、およびまたは1つ以上のミスマッチプライマーを使用し、例えば天然に存在する形態のCXCR2の配列をテンプレートとして用いる、PCR反応を利用した変異の導入を挙げることができる。これらの技法および他の技法は当業者には明らかであるだろうし、例えばここでも、上で言及したSambrookらやAusubelらなどの標準的参考書、ならびに下記の実施例を参照されたい。本発明の核酸は、遺伝子コンストラクトの形態もとり、遺伝子コンストラクト中に存在し、かつまたは遺伝子コンストラクトの一部であることもできる。そのような遺伝子コンストラクトは、一般的には、少なくとも1つの本発明の核酸を含み、これは、場合によっては、1つ以上の自体公知の遺伝子コンストラクトの要素、例えば1つ以上の適切な調節要素例えば適切なプロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどおよび本明細書において言及する遺伝子コンストラクトのさらなる要素に連結されている。少なくとも1つの本発明の核酸を含むそのような遺伝子コンストラクトを、本明細書では本発明の遺伝子コンストラクトともいう。本発明の遺伝子コンストラクトはDNAまたはRNAであることができ、好ましくは二本鎖DNAである。本発明の遺伝子コンストラクトは、意図した宿主細胞または宿主生物の形質転換に適した形態、意図した宿主細胞のゲノムDNAへの組込みに適した形態、または意図した宿主生物における非依存的複製、維持およびまたは遺伝に適した形態もとりうる。例えば、本発明の遺伝子コンストラクトは、ベクターの形態、例えばプラスミド、コスミド、YAC、ウイルスベクターまたはトランスポゾンなどの形態をとりうる。特に、ベクターは、発現ベクター、すなわちインビトロおよびまたはインビボで例えば適切な宿主細胞、宿主生物およびまたは発現系で発現をもたらすことができるベクターであることができる。好ましい、ただし非限定的な一態様では、本発明の遺伝子コンストラクトがi少なくとも1つの本発明の核酸であって、ii1つ以上の調節要素、例えばプロモーターおよび場合により適切なターミネーターに作動可能に接続されているものと、場合によってはiii1つ以上の自体公知の遺伝子コンストラクトのさらなる要素とを含み、ここで、用語作動可能に接続されているおよび作動可能に連結されているという用語は、WO08020079の131~134頁に記載されている意味を有し、調節要素、プロモーター、ターミネーターおよびさらなる要素は、WO08020079の131~134頁に記述されているとおりであり、遺伝子コンストラクトはさらに、WO08020079の131~134頁に記述されているとおりでありうる。本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドを発現およびまたは生産するために、本発明の核酸およびまたは本発明の遺伝子コンストラクトを使って、宿主細胞または宿主生物を形質転換することができる。適切な宿主または宿主細胞は当業者には明らかであるだろうし、これは、例えば、任意の適切な真菌、原核もしくは真核細胞もしくは細胞株または任意の適切な真菌、原核もしくは真核生物、例えばWO08020079の134頁および135頁に記載されているもの;ならびに当業者には明らかであるだろう、抗体および抗体フラグメント単一ドメイン抗体およびScFvフラグメントを含むが、これらに限るわけではないを発現および生産するための、他の全ての自体公知の宿主または宿主細胞であることができる。上述した一般的背景技術ならびに例えばWO9429457;WO9634103;WO9942077;Frenkenら前掲;RiechmannおよびMuyldermans前掲;vanderLinden前掲;Thomassenら前掲;Joostenら前掲;Joostenら前掲;および本明細書において言及するさらなる参考文献も参照されたい。本発明の二パラトープ性ナノボディおよびポリペプチドは、WO08020079の135頁および136頁ならびにWO08020079において言及されているさらなる文献にさらに記載されているように、例えば予防的およびまたは治療的目的のために例えば遺伝子治療として、多細胞生物の1つ以上の細胞、組織または器官に導入し、そこで発現させることもできる。細胞におけるナノボディの発現については、例えばWO9402610、WO9522618およびUSA7004940;WO03014960;CattaneoAおよびBioccaSIntracellularAntibodiesDevelopmentandApplicationsLandesandSpringerVerlag;ならびにKontermannMethods34163170に記載されているように、それらを、いわゆるイントラボディintrabodyとして発現させることもできる。本発明の二パラトープ性ナノボディおよびポリペプチドは、例えば、トランスジェニック哺乳動物の乳汁、例えばウサギ、ウシ、ヤギまたはヒツジの乳汁導入遺伝子を哺乳動物に導入するための一般技法については例えばUSA6741957、USA6304489およびUSA6849992を参照されたい、植物または植物の一部、例えば限定するわけではないが葉、花、果実、種子、根または塊茎turber例えばタバコ、トウモロコシ、ダイズまたはアルファルファ、または例えばカイコBombixmoriの蛹などにおいて生産させることができる。さらにまた、本発明の二パラトープ性ナノボディおよびポリペプチドを、無細胞発現系で発現させ、かつまたは生産することもでき、そのような系の適切な例は、当業者には明らかであるだろう。好ましい、ただし非限定的な例には、小麦胚芽系、ウサギ網状赤血球溶解物、または大腸菌Zubay系における発現などがある。上述のように、二パラトープ性ポリペプチドおよびナノボディの使用の利点の一つは、それに基づくポリペプチドを、適切な細菌系における発現によって調製できることであり、適切な細菌発現系、ベクター、宿主細胞、調節要素などは、例えば上述の参考文献などから、当業者には明白であるだろう。ただし、本発明はその最も広い意味において、細菌系における発現に限定されないことを留意すべきである。好ましくは、本発明では、医薬的用途に適した形態にある本発明のポリペプチドを与える細菌発現系などのインビボまたはインビトロ発現系が使用され、そのような発現系は、ここでも、当業者には明白であるだろう。同様に当業者には明白であるだろうとおり、医薬的使用に適した本発明のポリペプチドは、ペプチド合成のための技法を使って調製することができる。工業規模で生産する場合、二パラトープ性ナノボディまたはナノボディ含有タンパク質治療薬の工業生産にとって好ましい異種宿主としては、大規模発現生産発酵に適した、特に大規模医薬すなわちGMPグレード発現生産発酵に適した、大腸菌、ピキアパストリスPichiapastoris、サッカロミセスセレビシアScerevisiaeの株が挙げられる。そのような株の適切な例は当業者には明らかであるだろう。また、そのような株および生産発現系は、Biovitrumスウェーデンウプサラなどの会社から入手することもできる。あるいは、大規模発現生産発酵、特に大規模医薬発現生産発酵には、哺乳動物細胞株、特にチャイニーズハムスター卵巣CHO細胞を使用することもできる。ここでも、そのような発現生産系は、上述の会社のいくつかから、同様に入手することができる。具体的発現系の選択は、ひとつには、一定の翻訳後修飾、より具体的にはグリコシル化に関する要件に依存するであろう。グリコシル化が望まれるまたは必要なナノボディ含有組換えタンパク質の生産には、発現したタンパク質をグリコシル化する能力を有する哺乳動物発現宿主の使用が必要になるであろう。この点に関して、得られるグリコシル化パターンすなわち、取り付けられる残基の種類、数および位置が、発現に使用される細胞または細胞株に依存することは、当業者には明白であるだろう。好ましくは、ヒト細胞またはヒト細胞株を使用するかすなわち、本質的にヒトグリコシル化パターンを有するタンパク質につながる、またはヒトグリコシル化と本質的およびまたは機能的に同じグリコシル化パターンを与えるか少なくともヒトグリコシル化を模倣することができる他の哺乳動物細胞株を使用する。一般に、大腸菌などの原核宿主は、タンパク質をグリコシル化する能力を有さず、酵母などの下等真核生物の使用は、通常、ヒトグリコシル化とは異なるグリコシル化パターンをもたらす。それでもなお、得ようとする所望の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドに応じて、本発明においては、上述の宿主細胞および発現系の全てを使用することができると理解すべきである。したがって、本発明の一態様によれば、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドはグリコシル化されている。本発明のもう一つの非限定的態様によれば、本発明のアミノ酸配列、ナノボディまたはポリペプチドは、非グリコシル化体である。本発明の好ましい、ただし非限定的な一態様によれば、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドは、細菌細胞、特に大規模医薬生産に適した細菌細胞、例えば上述した株の細胞において生産される。本発明のもう一つの好ましい、ただし非限定的な態様によれば、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドは、酵母細胞、特に大規模医薬生産に適した酵母細胞、例えば上述した種の細胞において生産される。本発明のさらにもう一つの好ましい、ただし非限定的な態様によれば、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドは、哺乳動物細胞、特にヒト細胞またはヒト細胞株の細胞、より具体的には大規模医薬生産に適したヒト細胞またはヒト細胞株の細胞、例えば上述の細胞株において生産される。WO08020079の138頁および139頁にさらに詳しく述べられているように、宿主細胞における発現を使って本発明の二パラトープ性ナノボディおよびポリペプチドを生産する場合、それらは、細胞内で例えばサイトゾル、ペリプラズム、または封入体において生産させた後、次に宿主細胞から単離し、場合によってはさらに精製することもできるし、細胞外に例えば宿主細胞を培養する培地中に生産させた後、培養培地から単離し、場合によってはさらに精製することもできる。したがって、本発明の非限定的一態様によれば、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドは、細胞内で生産され、かつ宿主細胞から、特に細菌細胞から、または細菌細胞中の封入体から単離された、アミノ酸配列、ナノボディまたはポリペプチドである。本発明のもう一つの非限定的態様によれば、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドは、細胞外に生産され、かつ宿主細胞を培養する培地から単離されたナノボディまたはポリペプチドである。これらの宿主細胞と共に使用するための、好ましい、ただし非限定的なプロモーターとしては、WO08020079の139頁および140頁で言及されているものが挙げられる。これらの宿主細胞と共に使用するための、好ましい、ただし非限定的な分泌配列としては、WO08020079の140頁で言及されているものが挙げられる。本発明の宿主または宿主細胞を形質転換するための適切な技法は、当業者には明らかであるだろうし、それは、意図した宿主細胞宿主生物および使用する遺伝子コンストラクトに依存しうる。ここでも、上述の参考書および特許出願を参照されたい。形質転換後は、本発明のヌクレオチド配列遺伝子コンストラクトでうまく形質転換されている宿主細胞または宿主生物を検出し選択するためのステップを行うことができる。これは、例えば本発明の遺伝子コンストラクト中に存在する選択可能マーカーに基づく選択ステップであるか、例えば特異的抗体を使った本発明のポリペプチドの検出を伴うステップでありうる。形質転換された宿主細胞安定細胞株の形態をとりうるまたは宿主生物安定ミュータント系統または安定ミュータント株の形態をとりうるは、本発明のさらなる態様を形成する。好ましくは、これらの宿主細胞または宿主生物は、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドを宿主生物の場合は、その少なくとも1つの細胞、パーツ、組織または器官において発現するもの、または少なくとも例えば適切な条件下で発現する能力を有するものである。本発明は、例えば細胞分裂によってまたは有性生殖もしくは無性生殖によって得ることができる、本発明の宿主細胞または宿主生物のさらなる世代、後代およびまたは子孫も包含する。本発明のアミノ酸配列を生産するその発現を得るには、一般に、形質転換された宿主細胞または形質転換された宿主生物を、所望する本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドが発現生産されるような条件下で、保持、維持およびまたは培養することができる。適切な条件は当業者には明らかであるだろうし、通常は、使用する宿主細胞宿主生物、ならびに本発明の関連ヌクレオチド配列の発現を制御する調節要素に依存するであろう。ここでも、本発明の遺伝子コンストラクトに関するパラグラフで上に述べた参考書および特許出願を参照されたい。一般に、適切な条件には、適切な培地の使用、適切な食物源およびまたは適切な栄養の存在、適切な温度の使用、そして場合によっては適切な誘導因子または化合物の存在例えば本発明のヌクレオチド配列が誘導性プロモーターの制御下にある場合が含まれ、これらは全て、当業者によって選択されうる。また、そのような条件下で、本発明のポリペプチドは、構成的に、一過性に、または適切に誘導した場合にのみ、発現しうる。使用する宿主細胞宿主生物によっては、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドがまず最初に未成熟型上述したもので生成し、次にそれが翻訳後修飾に付される場合があることも、当業者には明白であるだろう。また、本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドは、ここでもやはり使用する宿主細胞宿主生物に依存して、グリコシル化されうる。本発明の二パラトープ性ナノボディまたはポリペプチドは、次に、宿主細胞宿主生物から、およびまたは該宿主細胞または宿主生物を培養した培地から、自体公知のタンパク質単離およびまたは精製技法、例えば分取用クロマトグラフィーおよびまたは電気泳動技法、分別沈殿技法、アフィニティ技法例えば本発明のアミノ酸配列、ナノボディまたはポリペプチドと融合された特異的切断可能アミノ酸配列を使用するものおよびまたは分取用免疫技法すなわち単離しようとするアミノ酸配列に対する抗体を使用するものなどを使って、単離することができる。一般に、医薬的使用には、本発明のポリペプチドを、少なくとも1つの本発明のポリペプチドと、少なくとも1つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤およびまたは佐剤と、場合によっては1つ以上のさらなる医薬活性ポリペプチドおよびまたは化合物とを含む医薬調製物または医薬組成物として製剤化することができる。非限定的な例として、そのような製剤は、経口投与、非経口投与例えば静脈内、筋肉内もしくは皮下注射または静脈内注入によるもの、局所投与topicaladministration、吸入による投与例えばネブライザー、定量吸入器MDIまたは乾燥粉末吸入器DPIまたは鼻腔経路によるもの、皮膚貼付剤による投与、インプラントによる投与、坐剤による投与、舌下経路による投与などに適した形態をとりうる。そのような適切な投与形態これは、投与の方法に依存して固形、半固形、または液状であることができるならびにその製造に使用するための方法および担体は、当業者には明らかであるだろうし、本明細書においてもさらに説明する。したがって、さらなる一態様において、本発明は、少なくとも1つの本発明の二パラトープ性ポリペプチド、好ましくは少なくとも1つの二パラトープ性免疫グロブリン単一可変ドメイン、より好ましくは少なくとも1つの本発明の二パラトープ性ナノボディと、少なくとも1つの適切な担体、希釈剤または賦形剤すなわち医薬的使用に適したものと、場合によっては1つ以上のさらなる活性物質とを含有する医薬組成物に関する。一般に、本発明の二パラトープ性ポリペプチドは、自体公知の任意の適切な方法で製剤化し、投与することができる。これについては、例えば上に挙げた一般的背景技術特にWO04041862、WO04041863、WO04041865、WO04041867およびWO08020079ならびに標準的参考書、例えばRemingtonsPharmaceuticalSciences第18版、MackPublishingCompany、米国1990、RemingtontheScienceandPracticeofPharmacy第21版、LippincottWilliamsandWilkins2005;またはHandbookofTherapeuticAntibodiesInvitrogen、V79020は、さまざまな哺乳動物細胞株における高レベルな構成的発現用に設計されている。これは、ヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター、ウシ成長ホルモンBGHポリアデニル化シグナル、哺乳動物細胞用のネオマイシン選択マーカー、および大腸菌における選択のためのアンピシリン耐性遺伝子を含有している。pVAX1Invitrogen、V26020は、DNAワクチン用に設計されたプラスミドベクターである。これは、ヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター、ウシ成長ホルモンBGHポリアデニル化シグナルおよび大腸菌における選択のためのカナマイシン耐性遺伝子を含有している。[表2]コンストラクト2.ヒトCXCR2およびカニクイザルCXCR2を発現するCHO、CaKi、RBLおよびHEK293T細胞株の樹立[表3]細胞株CHOK1Δ117ヒトCXCR2N末端3xHAタグAmaxaエレクトロポレーションシステム溶液TsolutionT中、プログラムU23を使って、CHOK1細胞にプラスミドpcDNA313xHAΔ117hCXCR2をトランスフェクトした。トランスフェクト細胞のプールを、トランスフェクション後2日目から、選択圧1000αgmLG418下に保った。8日後に、FMATBlue標識ヒトGROαを使ってヒトCXCR2陽性集団を同定した。ヒトGroαBiosource、PHC1063のFMATBlue標識は、FMATBlueMonofunctionalReactiveDyeKitを製造者の説明に従って使用することによって行ったAppliedBiosystems、4328408。FACSariaBDBiosciencesを使って単一細胞を96ウェル細胞培養プレート中に選別した。成長するクローンを、FACSarrayBDBiosciencesデバイスで、FMATBlue標識ヒトGROαを使って、Δ117ヒトCXCR2発現について試験した。発現量が最も大きいCHOK1クローンを選択したMCF値9000。HEK293TカニクイザルCXCR2FuGeneHDTransfectionReagentRocheを使って、HEK293T細胞にプラスミドpcDNA31cCXCR2をトランスフェクトした。トランスフェクションの2日後に、FACSarrayBDBiosciencesデバイスで、50nMFMATBlue標識GROαを使って、細胞をcCXCR2発現について試験した。以後は、発現量の多い細胞12000前後のMCF値を使用した。RBL2H3カニクイザルCXCR21×非必須アミノ酸、015重炭酸ナトリウム、1mMピルビン酸ナトリウムおよび15ウシ胎児血清Invitrogenを補足したMEMイーグル培地Invitrogen中、37°C5CO2で成長させ、通常どおりに継代したウサギ好塩基球性白血病細胞RBL2H3を、エレクトロポレーションAmaxaBiosystemsによるヌクレオフェクションに、製造者のプロトコールに従って付した。トランスフェクト細胞を37°C5CO2でインキュベートし、トランスフェクションの24時間後に、ジェネティシンを最終濃度が1mgmLになるように加えることによって、抗生物質選択を開始した。トランスフェクト細胞を選択培地中で3~5日間、成長させ、継代してから、96ウェルプレートへの段階希釈による単一細胞選別に付した。約2週間後に、活発に成長するコロニーを拡大培養してから、シノCXCR2転写産物発現について分析した。次に、分析のために、陽性クローンをさらに拡大培養した。CHOTrex3huCXCR2および3huCCR9CXCR2ハイブリッドチャイニーズハムスター卵巣TRexTRex商標CHO、Invitrogen、R71807を、10テトラサイクリン非含有ウシ胎児血清FBSBiosera、1ペニシリンストレプトマイシンおよび10μgmLのブラストサイジンを補足した2mMLグルタミンを含有するハムF12培地中の単層培養物として、37°Cで維持した。このテトラサイクリン調節発現TetracyclineRegulatedExpressionTRex商標細胞株はテトラサイクリンリプレッサーTetRを安定に発現する。次に、ヌクレオフェクション法CelllineNucleofectorKitT、AmaxaBiosystem、プログラムU23を使って、両CXCR2コンストラクトを発現する安定細胞株を作出した。トランスフェクト細胞を37°C5CO2でインキュベートし、トランスフェクションの48時間後に、300μgmLのゼオシンZeocinで処理した。細胞をゼオシンの存在下で2週間培養することで、陽性形質転換体の選択を可能にした後、MoFloFACSソーターを使って、単一細胞選別を行った。2週間後に、活発に成長するコロニーを、ゼオシン濃度が300μgmLである通常培地に維持しながら、拡大培養した。3.ヒトGroa、カニクイザルGroa、ヒトIL8、ヒトENA78[表4]NVTSIL8、ENA78、カニクイザルGroaペプチドヒトおよびカニクイザルCXCR2のさまざまなN末端および細胞外ループELストレッチを表すペプチドを、Bachemに注文した表5。環状と表示し多ペプチドでは、最初のアミノ酸と最後のアミノ酸がシステイン残基で置き換えられていて、野生型配列の天然に存在する内部システインが、ロイシン残基で置き換えられている。これらのペプチドは、両端のシステイン残基を介して環化した。表55.免疫処置3頭のラマを、ヒトCXCR2を発現する哺乳動物細胞で、7~9回免疫処置し、1頭のラマを、カニクイザルCXCR2を発現する哺乳動物細胞で、6回免疫処置した。このレジメンの後、不完全フロイントアジュバントに混合したペプチドキーホールリンペットヘモシアニンKLHコンジュゲートカクテルペプチドがヒトCXCR2とカニクイザルCXCR2の両方の細胞外ループ番号2および3に相当するものを、4回投与した表5参照。8頭の別のラマを、pVAX1から発現されるヒト完全長CXCR2またはΔ117CXCR2をコードするDNAで、4~5回免疫処置した後、ヒト完全長CXCR2を発現する哺乳動物細胞を1回投与した。さらに3頭のラマを、pVAX1から発現されるカニクイザルCXCR2をコードするDNAで、4回免疫処置した後、カニクイザルCXCR2を発現する哺乳動物細胞を1回投与した。免疫血液サンプルおよびリンパ節サンプルを、各抗原の投与の4日後および8日後に採取した。6.ライブラリー構築cDNAサンプルを、免疫血液サンプルおよびリンパ節サンプルの全RNA調製物から作製した。ナノボディをコードするヌクレオチド配列を、ヒトまたはカニクイザルCXCR2で免疫処置した全てのラマのcDNAサンプルから、プライマーABL051、ABL052およびABL003を使った1段階RTPCRで増幅した。プライマー配列を表6に示す。サンプル中のIgG2およびIgG3cDNAから増幅された700bpアンプリコンをゲルから単離し、次に、それらを、SfiI制限酵素部位を含有するABL050プライマーとABL003プライマーとをを用いるネステッドPCR反応におけるテンプレートとして使用した。次に、PCR産物をSfiIおよびBstEIIVHH遺伝子のFR4中に天然に存在するもので消化し、ファージミドベクターpAX50の対応する制限部位にライゲートすることで、大腸菌TG1へのエレクトロポレーション後に、ライブラリーを得た。pAX50は、LacZプロモーター、大腸菌ファージpIIIタンパク質コード配列、アンピシリンまたはカルベニシリン用の耐性遺伝子、マルチクローニング部位およびgen3リーダー配列を含有するpUC119由来の発現ベクターである。このベクターは、ナノボディNanobody登録商標コード配列と同じ読み枠で、C末端cmycタグおよび6タグをコードしていた。このファージミドベクターは、個々のナノボディをgeneIII産物との融合タンパク質として発現するファージ粒子の生産を可能にする。[表6]プライマー配列7.選択バクテリオファージの表面に発現する上記pAX50ナノボディライブラリーを、CXCR2エピトープを提示するペプチド、膜抽出物および全細胞を使って選択した。ペプチドを使った選択では、ニュートラアビジン被覆Pierce、31000MaxisorpマイクロタイタープレートNunc、430341上に捕捉された0~1000nMのビオチン化ペプチド表5参照上で、ファージライブラリーをインキュベートした。あるいは、ファージライブラリーを10nMビオチン化ペプチドと共に溶解状態でインキュベートした後、ストレプトアビジン被覆DynabeadsInvitrogen、11206D上に、ペプチドファージ複合体を補足した。ブロッキングは、1カゼインを補足したPBSを使って行った。ライブラリーから調製されたファージを加え、01カゼインおよび01ツイーン20を補足したPBS中で1時間インキュベートした。結合していないファージを005ツイーン20を補足したPBSで洗い流し、トリプシンPBS中、1mgmlを15分間添加することによって、結合しているファージを溶出させた。2ラウンド目の選択は、基本的に上述のように行った。膜抽出物を使った選択は、イムノチューブimmunotubeNunc、444474を、ヒトCXCR2を発現する細胞から調製された50μgmL総タンパク質膜抽出物PerkinElmer、ES145M400UAおよび6110524400UAでコーティングすることによって行った。陰性対照として、ヒトFPR1を発現するCHO細胞から調製された膜抽出物PerkinElmer、6110527400UAを並行してコーティングした。ブロッキングは、4Marvel脱脂粉乳を補足したPBSを使って行った。ファージを1Marvelを補足したPBS中で2時間インキュベートした。結合していないファージをPBSで洗い流し、トリプシンPBS中、1mgmlを15分間添加することによって、結合しているファージを溶出させた。2ラウンド目の選択は、基本的に上述のように行った。場合によっては、対照膜抽出物でコーティングした一連のチューブまたはウェル上でファージを前もって吸収させることにより、無関係な細胞バックグラウンドエピトープに結合するファージを特異的に枯渇させた。次に、コーティングしたヒトCXCR2膜抽出物でのインキュベーションを、溶解状態にある対照膜抽出物の存在下で行った。他の実験では、ペプチドでの1ラウンドまたは2ラウンドの選択を行った後、膜抽出物での選択を1ラウンド行うか、またはその逆を行った。もう一組の実験では、ヒトまたはカニクイザルCXCR2を発現する100万~500万個の哺乳動物細胞を、10FBSおよび1Marvel脱脂粉乳を補足したPBS中、ファージライブラリーと共にインキュベートした。形質転換していない細胞株を陰性対照として使用した。結合していないファージをPBSで洗い流し、トリプシンPBS中、1mgmlを15分間添加することによって、結合しているファージを溶出させた。2ラウンド目の選択は、基本的に上述のように、ただし1ラウンド目とは異なる細胞株バックグラウンドで行った。他の実験では、溶解状態にある1μMのペプチド表5参照の存在下で、ファージを、CXCR2を発現する膜抽出物または哺乳動物細胞と共にインキュベートすることで、これらのペプチドによって表される領域に結合するナノボディを発現するファージを枯渇させた。8.ペリプラズム抽出物の調製溶出したファージを指数的に成長しているTG1細胞に感染させてから、それをカルベニシリン含有LB寒天プレートにプレーティングした。カルベニシリン耐性クローンを、インサートの存在について分析し、陽性クローンの配列を検証した。目的のクローンを、カルベニシリンを補足したTB培地中で成長させ、IPTGの添加によって発現を誘導した。発現を37°Cで4時間継続させた後、細胞を遠沈した。大腸菌発現培養物からの終夜凍結細胞ペレットを、PBS元の培養体積の10分の1に溶解し、穏やかな振とう条件下、4°Cで1時間インキュベートした。次に細胞をもう一度遠沈し、ペリプラズム間隙に分泌されたタンパク質を含有する上清を保存した。9.スクリーニングペリプラズム抽出物上で説明したものを、ヒトCXCR2への結合におけるGroαとの競合について、FACSで分析した。2×105個の細胞を、FACS緩衝液PBS10ウシ胎児血清Sigma、F7524中のペリプラズム抽出物の12希釈液と共に、4°Cで30分間インキュベートした。次に、等体積のFMATBlue標識ヒトGroαFACS緩衝液中、6nMを加え、インキュベーションを暗所、4°Cで、さらに30分間続けた。次に細胞をFACS緩衝液中で3回洗浄し、最後にFACS緩衝液に再懸濁した。死細胞をヨウ化プロピジウムSigma、P4170で染色した。次にサンプルをFACSarrayBDBiosciencesで分析した。表7に、ペリプラズム抽出物がヒトCXCR2でのGroαとの競合を示したナノボディを列挙する。[表7]ヒトCXCR2でのGroα競合ペリプラズム抽出物もう一つの設定では、ペリプラズム抽出物を、ヒト1~19ペプチドへの結合について、ELISAで分析した。MaxiSorbプレートNunc、430341をニュートラアビジンで2時間コーティングした後、1時間のブロッキングPBS、1カゼインを行った。次に、100nMビオチン化ヒト1~19ペプチドを、これらのプレートに、1時間加えた後PBS、01カゼイン、005ツイーン20、ペリプラズム抽出物の10倍希釈液と共に1時間インキュベートした。結合していないペリプラズム抽出物を洗い流し005ツイーン20を補足したPBS、結合しているナノボディを、マウス抗mycRoche、11667149001と、それに続くウサギ抗マウスHRPコンジュゲートDakocytomation、P0260とを使って検出した。表8に、無関係な対照ナノボディに対する抗CXCR2ナノボディの結合シグナルの比を要約する。[表8]ペリプラズム抽出物のヒトCXCR21~19ペプチドへの結合10.配列[表9]一価抗CXCR2ナノボディの配列リードキャラクタリゼーション一価ナノボディ11.一価ナノボディの構築FwdEVQLMfeIプライマーおよびRevTVSSBstEIIプライマー表1を使った機能的ファージミドクローンでのPCRによって得られるナノボディ含有DNAフラグメントを、MfeIおよびBstEIIで消化し、pAX100ベクターにライゲートし、大腸菌TG1コンピテント細胞に形質転換した。pAX100は、LacZプロモーター、カナマイシン用の耐性遺伝子、マルチクローニング部位およびOmpAリーダー配列を含有するpUC119由来の発現ベクターである。このベクターは、ナノボディコード配列と同じ読み枠で、C末端cmycタグおよびHis6タグをコードしていた。カナマイシン耐性クローンをインサートの存在について分析し、陽性クローンの配列を検証した。12.小スケール発現目的のナノボディをコードする発現ベクターを含有するTG1細胞を、TB培地100μgmlカナマイシンが入っているバッフル付き振とうフラスコ中で成長させ、1mMIPTGの添加によって発現を誘導した。発現を37°Cで4時間継続させた。細胞を収集した後、ペリプラズム抽出物を調製し、His6タグ付きナノボディを、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーHisTrapFFCrude、GEHealthcareによって精製した後、PBS中で脱塩HiPrep2610、GEHealthcareまたはゲル濾過クロマトグラフィーSuperdex75HR1610、GEHealthcareを行った。13.リガンド競合アッセイ精製一価抗CXCR2ナノボディを、ヒトおよびカニクイザルCXCR2でのFACSリガンド競合アッセイにおいて、3nMFMATBlue標識Groαに対してタイトレーションした表10。ヒトCXCR2では、ブロッキング能がnM表示で二桁台~nM未満の範囲にあるが、カニクイザルCXCR2では、nM表示で一桁台~二桁台の範囲にある。[表10]一価抗CXCR2ナノボディのリガンド競合能NA:測定可能な活性はなかった。14.組換え細胞株を使った機能アッセイ1細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出の測定FLIPRヒトまたはカニクイザルCXCR2受容体のどちらか一方を発現するRBL細胞を96ウェルプレートに播種し、37°Cで終夜インキュベートした。実験当日、細胞にFluo4色素を、37°Cで30分間、負荷した後、精製一価抗CXCR2ナノボディと共に30分間インキュベートした。最後に、蛍光イメージングプレートリーダーFLIPRを使って、GROαの添加を行ってから、細胞内カルシウムの放出に対応する蛍光シグナルを検出した。選択性アッセイはヒトCXCR1を発現するL2071細胞を使って行った。アッセイプロトコールは、CXCR2について説明したものと同じとしたが、アゴニストとしてIL8を使用した。平均IC50値の要約を表11に示す。また、試験したナノボディはいずれも、試験した濃度最大濃度1μMでは、CXCR1受容体における細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出の阻害を示さなかった。2アゴニスト刺激による35SGTPγS蓄積の測定精製一価抗CXCR2ナノボディを、GROα、GDP、SPAビーズおよびヒトCXCR2受容体を発現するCHO細胞から調製したCHOCXC2膜と共に、96ウェルプレート中で60分間インキュベートした。次に、35SGTPγSを添加し、さらに60分間インキュベートした。最後にプレートを遠心分離してから、Topcountで読み取った。平均IC50値の要約を表11に示す。[表11]組換え細胞株を使った機能アッセイにおける精製一価抗CXCR2ナノボディNanobodies登録商標のIC50値試験した濃度ではプラトーが得られなかったので曲線を100阻害に固定。NA-測定可能な活性はなかった。ND-未検15.初代好中球を使った機能アッセイ1ヒト好中球全血形状変化アッセイhWBSCドナーは全身性投薬を受けていない健康な正常ボランティアであったNovartisHorshamドナーパネル。52mMEDTA滅菌で抗凝固処理された全血を、EDTA1mLに対して血液9mLの比で収集した。血液は室温で収集し、使用前に37°Cに予温した。ケモカインで刺激する前に、80μLの全血を、CXCR2ナノボディと共に、室温で10分間、プレインキュベートし1つの用量応答試験あたり10点003~1144×107μM、10μLのrhGROα2nM、ほぼEC70濃度を、ゼロ化合物これには10μLの形状変化アッセイ緩衝液を加えたを除く全てのウェルに加えた。サンプルを穏やかに振とうし、37°Cでさらに5分間インキュベートした。次に、チューブを氷上に置き、250μLの氷冷最適化CellFix商標溶液を加え、チューブを穏やかに振とうし、さらに5分間インキュベートしてから、14mLの1×塩化アンモニウム溶解溶液を全てのチューブに加え、氷上にさらに20分間放置した。赤血球溶解後に、サンプルをFACSCaliburフローサイトメーターBectonDickinsonで分析した。前方散乱側方散乱FSCSSCゲーティングと、それに続く、最初のプロットからのゲーティングされた顆粒球を用いるFSCFL2プロットとによって、細胞集団を同定した。好中球はFL2プロットで好酸球と識別された。後者の方が高い自己蛍光を有するからである。1サンプルあたり5000イベントをカウントした。2ヒト好中球走化性アッセイドナーは全身性投薬を受けていない健康な正常ボランティアであったNovartisHorshamドナーパネル。52mMEDTA滅菌で抗凝固処理された全血を、EDTA1mLに対して血液9mLの比で収集した。標準的プロトコールを使って白血球を単離した。すなわち、4デキストランを20mL抗凝固処理血に加え、穏やかに混合した後、赤血球を沈殿させるために、氷上で30分間インキュベートした。次に、末梢血単核球PMNを含有する上清を、FicollPaque登録商標密度勾配に重層し、300×g、18°Cで25分間遠心分離した。PMNリッチ画分を500μLの1×PBSに再懸濁し、低浸透圧ショックを使って赤血球溶解を行った。20mLの氷冷滅菌エンドトキシンフリー蒸留水をペレットに加え、30~40秒間溶解させてから、20mLの2×PBSを加えた。サンプルを穏やかに混合し、300×g、18°Cで、10分間遠心分離することで、顆粒球を得た。顆粒球ペレットを500μLの1×PBSに再懸濁し、50mLの×1PBSで2回洗浄した。顆粒球ペレットをRPMI1640pH7425FBSに再懸濁し、カウントし、最終濃度が2e6mLになるように希釈した。3μmPETメンブレンを有するBectonDickinson製のトランスウェルプレートを使って、遊走を測定した。簡単に述べると、6nMのGROαEC80~EC100をプレートのボトムウェルに加えてから1000μLウェル、マルチウェルインサートを所定の位置に下げ、次に、さまざまな濃度のナノボディ一価については013~1000nM、または二パラトープ性については06pM~30nMと共に室温で30分間プレインキュベートしておいたPMNを、インサートに加えた500μLウェル。次に、プレートを37°Cで90分間インキュベートし、FACSCaliburフローサイトメーターを使って、ボトムチャンバに遊走した細胞をカウントした。フローサイトメーターは、1サンプルあたり20秒の設定時間でFSCFL2プロット上のR2ゲート内のイベントの数をカウントするように設定した。3カニクイザル好中球全血形状変化アッセイCynoWBSC前腕または脚のどちらかから採取した静脈血を、クエン酸ナトリウム1mLに対して血液9mLの比率の38クエン酸ナトリウム滅菌で、抗凝固処理した。血液は室温で収集し、使用前に37°Cに予温した。ケモカインで刺激する前に、80μLの全血を、CXCR2ナノボディと共に、室温で10分間、プレインキュベートし1つの用量応答試験あたり10点003~1144×107μM、10μLのrhGROα30nM、ほぼEC7090濃度を、ゼロ化合物これには10μLの形状変化アッセイ緩衝液を加えたを除く全てのウェルに加えた。サンプルを穏やかに振とうし、37°Cでさらに5分間インキュベートした。次に、チューブを氷上に置き、250μLの氷冷最適化CellFix商標溶液を加え、チューブを穏やかに振とうし、さらに5分間インキュベートしてから、2mLの溶解緩衝液SigmaAldrich、R7757を全てのチューブに加え、氷上にさらに40~60分間放置した。赤血球溶解後に、サンプルをFACSCaliburフローサイトメーターBectonDickinsonで分析した。前方散乱側方散乱FSCSSCゲーティングと、それに続く、最初のプロットからのゲーティングされた顆粒球を用いるFSCFL2プロットとによって、細胞集団を同定した。好中球はFL2プロットで好酸球と識別された。後者の方が高い自己蛍光を有するからである。1サンプルあたり5000イベントをカウントした。[表12]初代好中球およびrhGROαを使った機能アッセイにおける精製一価抗CXCR2ナノボディのIC50値多価ナノボディ16.二価ナノボディの構築二価ナノボディの構築には2つのアプローチを使用した。一価ビルディングブロックをコードするプラスミドDNA上でPCR増幅を行った。N末端ビルディングブロックは、FwdEVQLMfeIと、GlySerリンカーの一部をコードするリバースプライマーとを使って増幅し、一方、C末端ビルディングブロックは、GlySerリンカーの残りの部分をコードするフォワードプライマーと、RevTVSSBstEIIとを使って増幅した表6。N末端フラグメントをMfeIおよびBamHIで消化し、C末端フラグメントをBamHIおよびBstIIで消化し、次にこれらをpAX100ベクターに同時にライゲートし、大腸菌TG1コンピテント細胞に形質転換した。あるいは、一価ビルディングブロックをコードするプラスミドDNA上で異なるPCR増幅を行った。N末端ビルディングブロックは、FwdEVQLMfeIとRevTVSSBspEIとを使って増幅し、一方、C末端ビルディングブロックは、FwdEVQLBamHIとRevTVSSBstEIIとを使って増幅した表6。N末端フラグメントをMfeIおよびBamHIで消化し、C末端フラグメントをBspEIおよびBstIIで消化した。GlySerリンカーのコード情報を含有するpAX100誘導体に、N末端フラグメントをライゲートMfeIBspEIし、大腸菌TG1コンピテント細胞に形質転換した。この形質転換混合物からプラスミドDNAを調製し、BspEIおよびBstEIIで消化した後、C末端フラグメントをpAX100ベクターにライゲートし、大腸菌TG1コンピテント細胞に形質転換した。カナマイシン耐性クローンをインサートの存在について分析し、陽性クローンの配列を検証した。17.多価抗CXCR2ナノボディの配列表1318.リガンド競合アッセイ多価抗CXCR2ナノボディを、ヒトおよびカニクイザルCXCR2でのFACSリガンド競合アッセイにおいて、3nMFMATBlue標識Groαに対してタイトレーションした表14。ヒトCXCR2では、ブロッキング能がnM表示で二桁台~nM未満の範囲にあるが、カニクイザルCXCR2では、nM表示で一桁台~二桁台の範囲にある。[表14]多価抗CXCR2ナノボディのリガンド競合分析ND:未検19.組換え細胞株を使った機能アッセイ1細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出の測定FLIPRヒトまたはカニクイザルCXCR2受容体のどちらか一方を発現するRBL細胞を96ウェルプレートに播種し、37°Cで終夜インキュベートした。実験当日、細胞にFluo4色素を、37°Cで30分間、負荷した後、精製多価抗CXCR2ナノボディと共に30分間インキュベートした。最後に、蛍光イメージングプレートリーダーFLIPRを使って、GROαの添加を行ってから、細胞内カルシウムの放出に対応する蛍光シグナルを検出した。選択性アッセイは、ヒトCXCR1を発現するL2071細胞アゴニストとしてIL8およびヒトCXCR4を内在性に発現するCEM細胞アゴニストとしてSDF1を使って行ったが、アッセイプロトコールは、CXCR2について説明したものと同じとした。平均IC50値の要約を表15に示す。また、試験したナノボディはいずれも、試験した濃度最大濃度1μMでは、CXCR1においても、CXCR4においても、細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出の阻害を示さなかった。2アゴニスト刺激による35SGTPγS蓄積の測定精製多価抗CXCR2ナノボディを、アゴニストGROα、IL8またはENA78、GDP、SPAビーズおよびヒトCXCR2受容体を発現するCHO細胞から調製したCHOCXC2膜と共に、96ウェルプレート中で60分間インキュベートした。次に、35SGTPγSを添加し、さらに60分間インキュベートした。最後にプレートを遠心分離してから、Topcountで読み取った。平均IC50値の要約を表15に示す。[表15]組換え細胞株を使って細胞内カルシウムの放出を測定する機能アッセイにおける精製多価抗CXCR2ナノボディのIC50値試験した濃度ではプラトーが得られなかったので曲線を100阻害に固定。ND-未検[表16]ヒトCHOCXCR2細胞膜での35SGTPγSの蓄積を測定する機能アッセイにおける精製多価抗CXCR2ナノボディのIC50値ND-未検3抗CXCR2ナノボディの作用機序を決定するためのSchild解析IL8およびGROα刺激による35SGTPγS蓄積アッセイを使ってSchild解析を行った。このアッセイフォーマットでは、35SGTPγSの添加に先だってアゴニストとナノボディとを平衡させるので、結果として、機序の誤った解釈につながりうる半平衡の人為産物は回避されるはずである。これを行うために、一連のナノボディ濃度の存在下でアゴニスト濃度応答曲線を決定した。2つの一価ナノボディ54B12および163E3ならびに結果として得られる多価ナノボディに関するデータを例として挙げ、図1に示す。このデータはGROαに関する濃度応答曲線を示しているが、IL8を使用した場合にも同様のデータが観察された。一価ナノボディ54B12および163E3はどちらもアロステリック作用機序を示すが、アゴニストの阻害に対する効果は異なっている。54B12および他の1~19結合剤のアロステリック機序は、アゴニスト濃度応答曲線の右側への平行移動が低いナノボディ濃度で起こり、ナノボディの濃度を増加させてもそれ以上右方向に移動しないことよって例証される図1。最大アゴニスト応答の減少を伴わないこの効果の飽和性は、アゴニストのアフィニティに対するアロステリック効果を示している。対照的に、163E3および他の非1~19結合剤のアロステリック機序は、アゴニスト応答曲線の右側への平行移動と、高いナノボディ濃度における最大アゴニスト応答の低下との組合せによって例証される図1。この効果は飽和を起こしうるが、それは、使用した濃度では観察されなかった。しかし重要な知見は、最大アゴニスト応答の低下であり、これは、アゴニストの効力に対するアロステリック効果を示している。最後に、多価ナノボディ54B12163E3は、両方のアロステリック機序を併せもち、その結果、はるかに低いナノボディ濃度における右側への平行移動と最大アゴニスト応答の著しい減少とによって例証される効果をアゴニスト濃度応答曲線にもたらす図1。アロステリック調整物質の現在の定義は、それがアゴニストオルソステリックリガンド結合部位とは明確に異なる部位に結合すること、およびオルソステリックリガンドとアロステリック調整物質の両方が同時に受容体に結合することである。本発明者らは、今のところ、これを確認するためのデータを持っていないし、理論に束縛されることも望まないが、ナノボディ結合部位はアゴニスト結合部位と明確に異なるのではなく、結合部位はオーバーラップしていると考えている。アゴニストとナノボディの両方が受容体に同時に結合していることを示すデータもないが、Schild解析データは、これらのナノボディがCXCR2のアロステリック調整物質であることを示唆するものであるだろう。20.機能アッセイ-NSCセクション15で説明したものと同じ方法。[表17]初代ヒトまたはカニクイザル好中球を使った機能アッセイにおける精製二パラトープ性抗CXCR2ナノボディのIC50値対rhGROα、平均±SD表18リードパネルCDRFRCXCR2Kabat表1921.配列最適化-CXCR2アンタゴニストポリペプチド熱シフトアッセイTSA:10μlの緩衝液100mMリン酸、100mMホウ酸、100mMクエン酸、115mMNaCl、35~9の範囲の異なるpHで緩衝化したもの中で、5μlの精製一価ナノボディ80mgmlを、5μlの蛍光プローブSyproOrangeInvitrogen、カリフォルニア州カールズバッド、カタログ番号S6551最終濃度10×と混合した。次に、LightCycler480II機器Roche、スイスバーゼルにおいて、サンプルを37°Cから90°Cまで44°C秒で加熱した後、22°C秒で37°Cまで冷却した。熱誘発アンフォールディングが起こると、タンパク質の疎水性パッチが露出し、そこにSyproOrangeが結合して、蛍光強度の増加をもたらす。蛍光強度曲線の一次導関数の変曲点は、融解温度Tmの尺度として役立つ。Ericssonら2006AnnalsofBiochemistry357289298。示差走査熱量測定DSC:実験は、AutoCapVPDSCMicroCal-GEHealthcareで、製造者の説明に従って行った。ナノボディ025mgmLの融解温度決定は、30°Cから95°Cまでの温度範囲にわたって、1°C分の加熱速度で行った。最終的なサーモグラムは、適正なベースライン差引後に得た。ソフトウェアによるOrigin70ピーク検出により、対応する融解温度が得られた。強制酸化:ナノボディサンプル1mgmLを、暗所、室温で4時間、H2O2なしの対照サンプルと並行して、PBS中の10mMH2O2に供した後、Zeba脱塩スピンカラム05mLThermoScientificを使って、PBSに緩衝液交換した。次に、ストレス負荷サンプルと対照サンプルとを、シリーズ1200機器AgilentTechnologiesでZorbax300SBC3カラムAgilentTechnologiesによるRPCを使って、70°Cで分析した。酸化ストレスの結果として生じるプレピークのピーク面積を、主タンパク質ピークと比較して決定することにより、ナノボディの酸化を定量した。2B2配列最適化親2B2のタンパク質配列を、ヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系とアラインメントした後掲の表20。ヒト生殖細胞系配列との比較で、アミノ酸相違を文字によって表し、同一アミノ酸を点によって表す。下線を付したアミノ酸相違をヒト対応物への変換のために選択し、他はそのままにしておいた。精製一価材料を2B2、CXCR20059およびCXCR20063から製造し、次にそれを、ヒトCXCR2とカニクイザルCXCR2の両方に対し、FACSリガンド競合アッセイおよび細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出FLIPRアッセイにおいて特徴づけた。また、変異体の融解温度を、熱シフトアッセイTSAにおいて、または示差走査熱量測定DSCを使って、決定した表21。CXCR20059およびCXCR20063におけるM93L変異は、強制酸化に対する親2B2の感受性を消滅させる。[表21]一価の2B2および配列最適化変異体の機能的特徴づけ97A9配列最適化親97A9のタンパク質配列を、ヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系とアラインメントした後掲の表22。ヒト生殖細胞系配列との比較で、アミノ酸相違を文字によって表し、同一アミノ酸を点によって表す。下線を付したアミノ酸相違をヒト対応物への変換のために選択し、他はそのままにしておいた。精製一価材料を97A9およびCXCR20061から製造し、次にそれを、ヒトCXCR2とカニクイザルCXCR2の両方に対し、FACSリガンド競合アッセイおよび細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出FLIPRアッセイにおいて特徴づけた。また、変異体の融解温度を、熱シフトアッセイTSAにおいて決定した表23。[表23]一価の979A9および配列最適化変異体の機能的特徴づけ163E3配列最適化親163E3のタンパク質配列をヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系とアラインメントした後掲の表24。ヒト生殖細胞系配列との比較で、アミノ酸相違を文字によって表し、同一アミノ酸を点によって表す。下線を付したアミノ酸相違をヒト対応物への変換のために選択し、他はそのままにしておいた。精製一価材料を163E3およびCXCR20076から製造し、次にそれを、ヒトCXCR2とカニクイザルCXCR2の両方に対し、FACSリガンド競合アッセイおよび細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出FLIPRアッセイにおいて特徴づけた。また、変異体の融解温度を、熱シフトアッセイTSAにおいて決定した表25。[表25]一価の163E3および配列最適化変異体の機能的特徴づけ127D1配列最適化親127D1のタンパク質配列を、ヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系とアラインメントした後掲の表26。ヒト生殖細胞系配列との比較で、アミノ酸相違を文字によって表し、同一アミノ酸を点によって表す。下線を付したアミノ酸相違をヒト対応物への変換のために選択し、他はそのままにしておいた。精製一価材料を127D1およびCXCR20079から製造し、次にそれを、ヒトCXCR2とカニクイザルCXCR2の両方に対し、FACSリガンド競合アッセイおよび細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出FLIPRアッセイにおいて特徴づけた。また、変異体の融解温度を、熱シフトアッセイTSAにおいて決定した表27。CXCR20079中のM57R変異は、強制酸化に対する親127D1の感受性を消失させる。[表27]一価の127D1および配列最適化変異体の機能的特徴づけ163D2配列最適化親163D2のタンパク質配列を、ヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系とアラインメントした後掲の表28。ヒト生殖細胞系配列との比較で、アミノ酸相違を文字によって表し、同一アミノ酸を点によって表す。下線を付したアミノ酸相違をヒト対応物への変換のために選択し、他はそのままにしておいた。精製一価材料を163D2およびCXCR20086から製造し、次にそれを、ヒトCXCR2とカニクイザルCXCR2の両方に対し、FACSリガンド競合アッセイおよび細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出FLIPRアッセイにおいて特徴づけた。また、変異体の融解温度を、熱シフトアッセイTSAにおいて決定した表29。[表29]一価の163D2および配列最適化変異体の機能的特徴づけ54B12配列最適化親54B12のタンパク質配列を、ヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系とアラインメントした後掲の表30。ヒト生殖細胞系配列との比較で、アミノ酸相違を文字によって表し、同一アミノ酸を点によって表す。下線を付したアミノ酸相違をヒト対応物への変換のために選択し、他はそのままにしておいた。精製一価材料を、54B12、CXCR20103およびCXCR2104から製造し、次にそれを、ヒトCXCR2とカニクイザルCXCR2の両方に対し、FACSリガンド競合アッセイおよび細胞内カルシウムのアゴニスト誘発性放出FLIPRアッセイにおいて特徴づけた。また、変異体の融解温度を、熱シフトアッセイTSAにおいて決定した表31。[表31]一価の54B12および配列最適化変異体の機能的特徴づけ[表20]2B2と配列最適化変異体とのアラインメント[表22]97A9と配列最適化変異体とのアラインメント[表24]163E3と配列最適化変異体とのアラインメント[表26]127D1と配列最適化変異体とのアラインメント[表28]163D2と配列最適化変異体とのアラインメント[表30]54B12と配列最適化変異体とのアラインメント[表32]配列最適化変異体のアミノ酸配列[表33]配列最適化二パラトープ性のアミノ酸配列Alb8のHLEを含む[表34]配列最適化変異体および親のアミノ酸配列CDRKabatおよびフレームワーク領域のアノテーションを含む[表35]配列最適化変異体のChotiaCDRアノテーション22.エピトープマッピングナノボディのエピトープマッピングは、IntegralMolecularInc米国ペンシルベニア州フィラデルフィア、スイート900、マーケットストリート3711、wwwintegralmolecularcomにより、彼らのショットガン変異誘発技術ShotgunMutagenesisTechnologyを使って行われた。ショットガン変異誘発技術の要約ショットガン変異誘発では、変異型ターゲットタンパク質の大きなライブラリーの真核細胞内での発現および解析を可能にする独自の高スループット細胞発現技術を使用する。機能の変化をアッセイするために、タンパク質中のあらゆる残基を、通常は複数の他のアミノ酸に、個別に変異させる。タンパク質を標準的哺乳動物細胞株内で発現させるので、真核細胞の翻訳または翻訳後プロセシングを必要とする困難なタンパク質であってもマッピングすることができる。エピトープマッピングのための命名は次のとおりである。RDHBC792=CXCR20079RDHBC793=CXCR20061RDHBC792=CXCR20076抗CXCR2抗体RDHBC792CXCR20079、RDHBC793CXCR220061およびRDHBC794CXCR20076のエピトープは、ショットガン変異誘発法を使って、次のように単一アミノ酸解像度でマッピングされた。親コンストラクト:タグなしの親遺伝子を高発現ベクターにクローニングし、配列決定し、免疫検出法によって発現を検証した。ナノボディ最適化:394ウェルマイクロプレートで一連のナノボディ希釈液をアッセイすることによって、ショットガン変異誘発フォーマットにおけるナノボディの検出を最適化した。変異ライブラリーをスクリーニングするために、各ナノボディの至適濃度を選択した。変異ライブラリーを揃え、各アミノ酸位置を変異させて保存的および非保存的に変化させた各残基のAla置換体への変異を含む。ライブラリーを表面発現について試験し、三つ一組にして、免疫検出法により、ナノボディ結合についてスクリーニングした。ナノボディ結合の喪失に関してライブラリーの分析を行い、重要残基criticalresidueを同定し、マッピングした。一過性に発現した野生型親コンストラクトの親コンストラクト発現免疫検出は、免疫ルミネセンス法immunoluminescenceおよび免疫蛍光法により、384ウェルフォーマットで行った。正確さと高い実験再現性を確保するために、どの実験でも、細胞トランスフェクションおよび免疫染色に伴う液体ハンドリングステップは、液体ハンドリングロボットを使って行った。[表36]親プラスミドを試験するために使用した実験パラメータポリクローナル血清を使った全受容体細胞表面発現の検出。総発現量の定量にはポリクローナル血清全ての変異体と反応できるものを使用するので、変異ライブラリー中の各クローンを検出することができる。[表37]ポリクローナル免疫検出のために使用した実験パラメータ結論:野生型親コンストラクトでは、対照MAbとポリクローナル血清を使ってロバストな表面発現と総発現量が検出されるので、この野生型親コンストラクトは、ショットガン変異誘発法に使用することができる。免疫ルミネセンスアッセイは、高いシグナル:バックグラウンドと低い変動性とを示し、マッピング研究に使用されるであろう。マッピングナノボディを使って免疫検出を最適化した。免疫検出は、野生型受容体プラスミドまたはベクターのみのプラスミドを一過性にトランスフェクトした細胞を使って、384ウェルフォーマットで行った。以後のマッピング研究用に選択した濃度は、高いシグナル:バックグラウンドと低い変動性とを有する近最大nearmaximalシグナルに基づいた。変異ライブラリーをスクリーニングするための最終アッセイ条件[表38]ショットガン変異誘発384ウェルフォーマットにおいて最適化されたアッセイ検出のために使用した実験パラメータここに規定した最適化アッセイ条件を使って、384ウェルフォーマットでCXCR2変異ライブラリーをマッピングした。ライブラリー中の各クローンを、一過性トランスフェクションによって細胞中で発現させ、トランスフェクションの約18時間後にナノボディ反応性についてアッセイした。CXCR2ナノボディRDHBC792、RDHBC793およびRDHBC794はFc領域を欠くが、mycタグを含有しているので、中間マウス抗myc抗体9E10を使用した後に、抗マウスHRP抗体による検出を行う多段階検出戦略を使用した。結論:3つのCXCR2ナノボディの免疫検出およびエピトープマッピングのための最終条件を決定した。最適化された条件は、ショットガン変異誘発フォーマットにおいて高いシグナル:バックグラウンドと低い変動性をもたらしたので、信頼度の高いエピトープマッピングに使用することができた。エピトープマッピングでは、ここで決定されたものと同じアッセイ条件を応用したが、受容体変異体の変異ライブラリーを使用した。ナノボディエピトープの重要残基の同定[表39]重要残基の同定クローンのナノボディ反応性を、ポリクローナル反応性表面発現と比較することによって、MAbの重要残基を同定した。抗体エピトープに関与する残基を、ナノボディ結合については陰性であるがポリクローナル結合については陽性であり、Ala残基置換すなわち残基の側鎖の除去を含み、細胞外ループ中に位置するものとして同定した。MAb結合およびポリクローナル抗体結合に関する平均反応性および標準偏差を示す。各MAbについて重要残基に灰色の陰を付けてある。RDHBC792に関するデータをRDHBC793とも比較した。というのも、RDHBC792の結合プロファイルは市販のポリクローナル血清これはヒトCXCR2のN末端細胞外ドメインから誘導されたもので、おそらくF11、F14、およびW15変異に対する血清の反応性が低いことの説明になっているしていることがわかったからである。エピトープ情報のさらなる分析ショットガン変異誘発マッピングによって同定された重要アミノ酸は、3つのCXCR2MAbの結合部位を規定している。MAbRDHBC792はCXCR2のN末端領域にマッピングされ、重要残基が近接していることは、エピトープの性質が線状であることを示唆している。MAbRDHBC793およびRDHBC794は、主としてCXCR2のECL1およびECL3によって形成されるコンフォメーション的に複雑なエピトープに結合するようである。ケモカイン受容体において細胞外ループを所定の位置に保持している2つのジスルフィド橋を形成することが知られている細胞外Cys残基の変異は、MAb793および794の結合も失わせるので、エピトープ相互作用に直接関与するとは考えていない。793と794のエピトープは、かなりオーバーラップしているが、これら2つの間のわずかな相違も明白である。実施形態1.ケモカイン受容体CXCR2を指向するか、またはケモカイン受容体CXCR2に結合する、少なくとも2つの免疫グロブリン抗原結合ドメインを含むポリペプチドであって、CXCR2上の第1エピトープを認識する第1抗原結合ドメインと、CXCR2上の第2エピトープを認識する第2抗原結合ドメインとを含むポリペプチド。2.該第1抗原結合ドメインが、配列番号7に示すアミノ酸の配列からなる線状ペプチドに結合する能力を有し、該第2抗原結合ドメインが、該線状ペプチドに結合する能力を有さないか、または該線状ペプチドに低いアフィニティで結合する、実施形態1のポリペプチド。3.該第1抗原結合ドメインが第1免疫グロブリン単一可変ドメイン内に含まれ、該第2抗原結合ドメインが抗体の第2免疫グロブリン単一可変ドメイン内に含まれている、実施形態1または実施形態2のポリペプチド。4.該第1および第2抗原結合ドメインの少なくとも一方が、抗体VLドメインまたはそのフラグメント内に含まれている、実施形態3のポリペプチド。5.該第1および第2抗原結合ドメインの少なくとも一方が、抗体VHドメインまたはそのフラグメント内に含まれている、実施形態3のポリペプチド。6.該第1抗原結合ドメインが、VLドメインまたはそのフラグメントに含まれ、該第2抗原結合ドメインが、VHドメインまたはそのフラグメントに含まれている、実施形態4または5のポリペプチド。7.該第1抗原結合ドメインが、VHドメインまたはそのフラグメントに含まれ、該第2抗体結合ドメインがVLドメインまたはそのフラグメントに含まれている、実施形態4または5のポリペプチド。8.該第1および第2抗原結合ドメインが第1および第2ドメイン抗体dAb内に含まれている、実施形態3~7のいずれか一つのポリペプチド。9.該第1および第2抗原結合ドメインの少なくとも一方が、ラクダ科動物から得ることができる重鎖抗体の単一重鎖からのVHHドメインもしくはそのフラグメント内に含まれているか、またはその配列最適化ヒト化を含む変異体である、実施形態3または実施形態5のポリペプチド。10.該抗原結合ドメインのそれぞれがラクダ科動物に由来する重鎖抗体の単一重鎖からのVHHドメインまたはそのフラグメント内に含まれているか、またはその配列最適化ヒト化を含む変異体である、実施形態9のポリペプチド。11.各VHH配列またはそのフラグメントが、1つ、2つまたは3つのCDRを含む、実施形態9または10のポリペプチド。12.各VHH配列が構造:FRCDRFRCDRFRCDRFRを有する、実施形態9~11のいずれか一つのポリペプチド。13.該少なくとも2つの抗原結合ドメインがリンカーによって接合されている、上記実施形態のいずれか一つのポリペプチド。14.構造:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4リンカーFR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8[式中、FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4が第1抗原結合ドメインを含むのであれば、FR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8は第2抗原ドメインを含み、FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4が第2抗原ドメインを含むのであれば、FR5CDR4FR6CDR5FR7CDR6FR8は第1抗原結合ドメインを含む]を有する、実施形態3~13のいずれか一つのポリペプチド。15.該第1および第2抗原結合ドメインのそれぞれが重鎖抗体内に含まれている、実施形態1または2のポリペプチド。16.該第1抗原結合ドメインが第1重鎖抗体の単一鎖内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインが第2重鎖抗体の単一鎖内に含まれていて、該第1および第2単一重鎖抗体がリンカーによって接合されている、実施形態1または2のポリペプチド。17.該第1および第2抗原結合ドメインのそれぞれが、2本の重鎖と2本の軽鎖とからなる抗体内に含まれている、実施形態1または2のポリペプチド。18.該第1および第2抗原結合ドメインが、それぞれ2本の重鎖と2本の軽鎖とを含む第1および第2抗体に、それぞれ含まれ、該第1および第2抗体がリンカーによって接合されている、実施形態1または2のポリペプチド。19.該第1および第2抗原結合ドメインが、それぞれ、第1および第2抗体FabまたはF2フラグメント内に含まれ、該第1および第2FabまたはF2フラグメントがリンカーによって接合されている、実施形態1または2のポリペプチド。20.該第1抗原結合ドメインが抗体Fabフラグメント内に含まれ、かつ該第2抗原結合ドメインがF2フラグメント内に含まれているか、またはその逆である、実施形態19のポリペプチド。21.該第1および第2抗原結合ドメインが、それぞれ、第1および第2抗体単鎖FvscFvまたはそのフラグメント内に含まれ、該第1および第2scFvがリンカーによって接合されている、実施形態1または2のポリペプチド。22.リンカーが、抗原結合ドメインを含む1つの免疫グロブリンのC末端を、抗原結合ドメインを含む第2免疫グロブリンのN末端に接合している、実施形態13、14、16、18、19、20、または21のいずれか一つのポリペプチド。23.リンカーが、免疫グロブリン由来でないアミノ酸配列を含むペプチドである、実施形態13、14、16、または18~22のいずれか一つのポリペプチド。24.ペプチドリンカーが3~50アミノ酸長である、実施形態23のポリペプチド。25.リンカー中のアミノ酸の数が、3~9、10~15、16~20、21~25、26~35、36~40、41~45または46~50から選択される、実施形態24のポリペプチド。26.リンカーが35アミノ酸長である、実施形態24のポリペプチド。27.リンカーがもっぱら2つの異なるアミノ酸だけから構成される、実施形態24のポリペプチド。28.リンカーがアミノ酸グリシンおよびセリンから構成される、実施形態27のポリペプチド。29.リンカーがアミノ酸プロリンおよびセリンならびに場合によってはアラニンから構成される、実施形態27のポリペプチド。30.リンカーがもっぱらアラニンだけで構成される、実施形態23~26のいずれか一つのポリペプチド。31.ペプチドリンカーが配列番号220に示すアミノ酸配列からなる、実施形態26のポリペプチド。32.ラクダ科動物単一重鎖抗体に由来するまたはラクダ科動物単一重鎖抗体に特有のCDRアミノ酸配列を含む、上記実施形態のいずれか一つのポリペプチド。33.フレームワーク領域のアミノ酸配列がラクダ科動物単一重鎖抗体に由来するまたはラクダ科動物単一重鎖抗体に特有である、実施形態9~14のいずれか一つのポリペプチド。34.フレームワーク領域のアミノ酸配列が、その配列最適化ヒト化を含む変異体である、実施形態9~14のいずれか一つのポリペプチド。35.CXCR2に特異的に結合する、上記実施形態のいずれか一つのポリペプチド。36.ヒトCXCR2を指向する、またはヒトCXCR2に結合する、任意の上記実施形態のポリペプチド。37.血清タンパク質を指向するまたは血清タンパク質に特異的に結合する少なくとも1つのさらなる抗原結合ドメインを含む、任意の上記実施形態のポリペプチド。38.血清タンパク質がヒト血清アルブミンである、任意の上記実施形態のポリペプチド。39.ケモカイン受容体CXCR2を指向するか、またはケモカイン受容体CXCR2に結合する、少なくとも2つのポリペプチドを含む分子であって、第1ポリペプチドが第1免疫グロブリン抗原結合ドメインを含み、かつ第2ポリペプチドが第2免疫グロブリン抗原結合ドメインを含んでいて、該第1および第2抗原結合ドメインがCXCR2上の第1および第2エピトープを認識し、該少なくとも2つのポリペプチドが非ペプチドリンカーで接合されている分子。40.該第1抗原結合ドメインが配列番号7に示すアミノ酸の配列からなる線状ペプチドに結合する能力を有し、該第2抗原結合ドメインが該線状ペプチドに結合する能力を有さないか該線状ペプチドに低いアフィニティで結合する、実施形態38に記載の分子。41.実施形態3~22および32~38のいずれか一つに記載の特徴を有する、実施形態39または40に記載の分子。42.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号145、165および185からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、単一可変ドメインの該第1免疫グロブリンが、配列番号141、161および181からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号141、161もしくは181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド。163D2127D1。43.実施形態14に記載の構造を含む実施形態42のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号185に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号181に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。44.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号145、165、185、141、161または181に示すアミノ酸配列のいずれか一つと、少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態43のポリペプチド。45.配列番号145、165、185、141、161または181に示すものとのアミノ酸配列の相違が、保存的アミノ酸変化だけである、実施形態43または44のポリペプチド。46.単一可変ドメインの各単量体中のフレームワーク領域が、Kabatナンバリングで11、37、44、46、47、83、84、103、104および108番目のアミノ酸に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態43~45のいずれか一つのポリペプチド。47.FR1が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態43~46のいずれか一つのポリペプチド。48.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号83、104、124、131、79、100、または120のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有するように修飾されている、実施形態47のポリペプチド。49.配列番号58に示すアミノ酸配列、または配列番号58のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態41~48のいずれかのポリペプチド。50.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号218に示すアミノ酸配列、または配列番号218に対して少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号216に示すアミノ酸配列、または配列番号216に対して少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態42~46のいずれか一つのポリペプチド。51.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号146、166および186からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号146、166もしく188のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号141、161および181からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号141、161または181のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド。163E3127D1。52.実施形態14に記載の構造を含む実施形態51のポリペプチドであって、単一可変ドメインの該第2免疫グロブリンにおいて、CDR1が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号186に示すアミノ酸配列を含み、かつ単一可変ドメインの該第1免疫グロブリンにおいて、CDR4が配列番号141に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号161に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号181に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。53.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号176、166、186、141、161または181に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態52のポリペプチド。54.配列番号146、166、186、141、161または181に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、実施形態52または53のポリペプチド。55.単一可変ドメインの各単量体におけるフレームワーク領域が、アミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態52~54のいずれか一つのポリペプチド。56.FR1が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号79に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号100に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号120に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態52~55のいずれか一つのポリペプチド。57.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号84、105、125、131、79、100、または120のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有するように修飾されている、実施形態56のポリペプチド。58.配列番号59に示すアミノ酸配列または配列番号59のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態51~57のいずれかのポリペプチド。59.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号217に示すアミノ酸配列または配列番号217と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号216に示すアミノ酸配列または配列番号216と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態51~58のいずれか一つのポリペプチド。60.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号146、166および186からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号146、166または186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号151、171および191からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号151、171または191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド。163E354B12。61.実施形態14に記載の構造を含む実施形態60のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR1が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号186に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR4が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号191に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。62.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号146、166、186、151、171または191に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態61のポリペプチド。63.配列番号146、166、186、151、171または191に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、実施形態61または62のポリペプチド。64.単一可変ドメインの各単量体中のフレームワーク領域が、Kabatナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態61~63のいずれか一つのポリペプチド。65.FR1が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態61~64のいずれか一つのポリペプチド。66.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号84、105、125、131、89、110、または130のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有する、実施形態65のポリペプチド。67.配列番号62に示すアミノ酸配列または配列番号62のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態60~66のいずれかのポリペプチド。68.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが配列番号217に示すアミノ酸配列または配列番号217と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが配列番号219に示すアミノ酸配列または配列番号219と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態60~64のいずれか一つのポリペプチド。69.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号145、165および185からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号151、171および191からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号151、171もしくは191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド。163D254B12。70.実施形態14に記載の構造を含む実施形態69のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR1が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号185に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR4が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号191に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。71.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号145、165、185、151、171、または191に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態70のポリペプチド。72.配列番号145、165、185、151、171または191に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、実施形態70または71のポリペプチド。73.単一可変ドメインの各単量体中のフレームワーク領域が、Kabatナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態70~72のいずれか一つのポリペプチド。74.FR1が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態70~73のいずれか一つのポリペプチド。75.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号83、104、124、131、89、110または130のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有するように修飾されている、実施形態74のポリペプチド。76.配列番号63に示すアミノ酸配列または配列番号63のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態69~75のいずれかのポリペプチド。77.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号218に示すアミノ酸配列または配列番号218と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号219に示すアミノ酸配列または配列番号219と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態69~73のいずれか一つのポリペプチド。78.該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号147、167および187からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号146、166および186からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号146、166もしくは186のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド。2B2163E3。79.実施形態14に記載の構造を含む実施形態78のポリペプチドであって、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR1が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号187に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR4が配列番号146に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号166に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号186に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。80.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号147、167、187、146、166または186に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態79のポリペプチド。81.配列番号147、167、187、146、166または186に示すものとのアミノ酸配列の相違が、保存的アミノ酸変化だけである、実施形態79または80のポリペプチド。82.単一可変ドメインの各単量体中のフレームワーク領域が、Kabatナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態79~81のいずれか一つのポリペプチド。83.FR1が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号84に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号105に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号125に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態79~82のいずれか一つのポリペプチド。84.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号85、106、126、131、84、105または125のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有するように修飾されている、実施形態83のポリペプチド。85.配列番号64に示すアミノ酸配列または配列番号64のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態78~84のいずれかのポリペプチド。86.該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが配列番号213もしくは214に示すアミノ酸配列または配列番号213もしくは214と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが配列番号217に示すアミノ酸配列または配列番号217と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態78~82のいずれか一つのポリペプチド。87.該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号147、167および187からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第2免疫グロブリン可変ドメインが、配列番号145、165および185からなる群より選択される少なくとも1つのCDRまたは配列番号145、165もしくは185のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド。2B2163D2。88.実施形態14に記載の構造を含む実施形態87のポリペプチドであって、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR1が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号187に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第2免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR4が配列番号145に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号165に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号185に示すアミノ酸配列を含むプリペプチド。89.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号147、167、187、145、165または185に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態88のポリペプチド。90.配列番号147、167、187、145、165または185のものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、実施形態88または89のポリペプチド。91.単一可変ドメインの各単量体中のフレームワーク領域が、Kabatナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態88~90のいずれか一つのポリペプチド。92.FR1が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号131に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号83に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号104に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号124に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態88~91のいずれか一つのポリペプチド。93.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号85、106、126、131、83、104または124のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有するように修飾されている、実施形態94のポリペプチド。94.配列番号65に示すアミノ酸配列、または配列番号65のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態87~93のいずれかのポリペプチド。95.該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが配列番号213もしくは214に示すアミノ酸配列または配列番号213もしくは214と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号218に示すアミノ酸配列または配列番号218と少なくとも80の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態87~91のいずれか一つのポリペプチド。96.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号147、167および187からなる群より選択される少なくとも1つのCDR、または配列番号147、167もしくは187のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド97A92B2。97.実施形態14に記載の構造を含む実施形態96のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR1が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号183に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR4が配列番号147に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号167に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号187に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。98.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号143、163、183、147、167または187に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態97のポリペプチド。99.配列番号143、163、183、147、167または187に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、実施形態97または98のポリペプチド。100.単一可変ドメインの各単量体中のフレームワーク領域が、Kabatナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態97~99のいずれか一つのポリペプチド。101.FR1が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、FR4が配列番号133に示すアミノ酸配列を含み、FR5が配列番号85に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号106に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号126に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態97~100のいずれか一つのポリペプチド。102.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号81、102、122、133、85、106、126または131のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有するように修飾されている、実施形態101のポリペプチド。103.配列番号47に示すアミノ酸配列、または配列番号47のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態96~102のいずれかのポリペプチド。104.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号215に示すアミノ酸の配列または配列番号215と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号213および214に示すアミノ酸の配列または配列番号213もしくは214と少なくとも80の同一性を有するアミノ酸の配列を含む、実施形態96~100のいずれか一つに記載のポリペプチド。105.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号143、163および183からなる群より選択されるアミノ酸配列または配列番号143、163もしくは183のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号151、171および191からなる群より選択される少なくとも1つのCDR、または配列番号151、171もしくは191のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態3~14または実施形態22~39のいずれか一つのポリペプチド。97A954B12。106.実施形態14に記載の構造を含む実施形態105のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR1が配列番号143に示すアミノ酸配列を含み、CDR2が配列番号163に示すアミノ酸配列を含み、CDR3が配列番号183に示すアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインにおいて、CDR4が配列番号151に示すアミノ酸配列を含み、CDR5が配列番号171に示すアミノ酸配列を含み、CDR6が配列番号191に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。107.CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5またはCDR6のアミノ酸配列が、配列番号143、163、183、151、171または191に示すアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも80のアミノ酸同一性を有する、実施形態106のポリペプチド。108.配列番号143、163、183、151、171または191に示すものとのアミノ酸配列の相違が保存的アミノ酸変化だけである、実施形態106または107のポリペプチド。109.単一可変ドメインの各単量体中のフレームワーク領域が、Kabatナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108に、1つ以上のホールマーク残基を含む、実施形態106~108のいずれか一つのポリペプチド。110.FR1が配列番号81に示すアミノ酸配列を含み、FR2が配列番号102に示すアミノ酸配列を含み、FR3が配列番号122に示すアミノ酸配列を含み、FR4がアミノ酸配列133を含み、FR5が配列番号89に示すアミノ酸配列を含み、FR6が配列番号110に示すアミノ酸配列を含み、FR7が配列番号130に示すアミノ酸配列を含み、かつまたはFR8が配列番号131に示すアミノ酸配列を含む、実施形態106~109のいずれか一つのポリペプチド。111.FR1、FR2、FR3、FR4、FR5、FR6、FR7およびFR8が、配列番号81、102、122、133、89、110、130または131のいずれかに示すアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を持つアミノ酸配列を有するように修飾されている、実施形態110のポリペプチド。112.配列番号61に示すアミノ酸配列または配列番号61のアミノ酸配列と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む、実施形態105~111のいずれかのポリペプチド。113.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが配列番号215に示すアミノ酸の配列または配列番号215と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸の配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、配列番号219に示すアミノ酸の配列または配列番号219と少なくとも80のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態105~109のいずれか一つに記載のポリペプチド。114.配列最適化されたフレームワーク領域部分的または完全にヒト化されたフレームワーク領域を含むを含む、実施形態1~38または42~113のいずれか一つのポリペプチド。115.非ヒト霊長類CXCR2と交差反応する、実施形態1~38または42~114のいずれか一つのポリペプチド。116.霊長類がカニクイザルである、実施形態115のポリペプチド。117.非霊長類種からのCXCR2とは交差反応しない、実施形態1~38または42~116のいずれか一つのポリペプチド。118.CXCケモカインファミリーの他の受容体とは交差反応しない、実施形態1~38または42~117のいずれか一つのポリペプチド。119.該第2抗原結合ドメインが、配列番号8、9、10、11および12に示すアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むCXCR2エピトープまたは前記アミノ酸配列内にあるCXCR2エピトープを認識する、実施形態1~38および114~118のいずれか一つのポリペプチド。120.該第1抗原結合ドメインが、配列番号7に示すアミノ酸配列を含むエピトープまたは前記アミノ酸配列内にあるエピトープを認識する、実施形態119のポリペプチド。121.該第1抗原結合ドメインが、配列番号4に示すアミノ酸配列を含むエピトープまたは前記アミノ酸配列内にあるエピトープを認識する、実施形態119または120のポリペプチド。122.該第2抗原結合ドメインが、配列番号5または6に示すアミノ酸配列を含むエピトープまたは前記アミノ酸配列内にあるエピトープを認識する、実施形態119~121のいずれかのポリペプチド。123.105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDでヒトCXCR2に特異的に結合することができる、実施形態1~38または実施形態42~122のいずれか一つのポリペプチド。124.102M1s1~約107M1s1、好ましくは103M1s1~107M1s1、より好ましくは104M1s1~107M1s1、例えば105M1s1~107M1s1の会合速度でkon速度でヒトCXCR2に特異的に結合することができる、実施形態1~38または実施形態42~123のいずれか一つのポリペプチド。125.1s1~106s1、好ましくは102s1~106s1、より好ましくは103s1~106s1、例えば104s1~106s1の解離速度koff速度でヒトCXCR2に特異的に結合することができる、実施形態1~38または実施形態42~124のいずれか一つのポリペプチド。126.500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティでヒトCXCR2に特異的に結合することができる、実施形態1~38または実施形態42~125のいずれか一つのポリペプチド。127.ヒトCXCR2へのGroαの結合を20nM未満のIC50で阻害する能力を有する、実施形態1~38または実施形態42~126のいずれか一つのポリペプチド。128.ヒトCXCR2を発現するRBL細胞からのGroα誘導性カルシウム放出を100nM未満のIC50で阻害する能力を有する、実施形態1~38または42~127のいずれか一つのポリペプチド。129.ヒトCHOCXCR2膜における35SGTPγSのGroα誘導性蓄積を50nM未満のIC50で阻害する能力を有する、実施形態1~38または42~128のいずれか一つのポリペプチド。130.実質的に単離された形態にある、実施形態1~38または42~129のいずれか一つのポリペプチド。131.多パラトープ性コンストラクトである、実施形態1~38および42~130のいずれか一つのポリペプチド。132.対応する無修飾のアミノ酸配列と比較して増加したインビボ半減期を有するように修飾されている、実施形態1~38または42~131のいずれか一つのポリペプチド。133.該増加した半減期が、血清タンパク質またはそのフラグメント、血清タンパク質に結合することができる結合ユニット、Fc部分、および血清タンパク質に結合することができる小さなタンパク質またはペプチドからなる群より選ばれる1つ以上の結合ユニットによってもたらされる、実施形態132のポリペプチド。134.ポリペプチドに増加した半減期を与える該1つ以上の他の結合ユニットが、ヒト血清アルブミンまたはそのフラグメントからなる群より選ばれる、実施形態133のポリペプチド。135.ポリペプチドに増加した半減期を与える該1つ以上の他の結合ユニットが、血清アルブミンヒト血清アルブミンなどまたは血清免疫グロブリンIgGなどに結合することができる結合ユニットからなる群より選ばれる、133のポリペプチド。136.該増加した半減期が、血清アルブミンヒト血清アルブミンなどもしくは血清免疫グロブリンIgGなどに結合することができる、ドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、dAb、dAbとしての使用に適したアミノ酸配列、またはナノボディからなる群より選ばれる1つ以上の他の結合ユニットによってもたらされる、実施形態132のポリペプチド。137.血清アルブミンヒト血清アルブミンなどまたは血清免疫グロブリンIgGなどに結合することができる免疫グロブリン単一可変ドメインである、実施形態134のポリペプチド。138.対応する無修飾ポリペプチドの半減期より少なくとも15倍、好ましくは少なくとも2倍、例えば少なくとも5倍、例えば少なくとも10倍または20倍以上長い血清中半減期を有する、実施形態132~137のいずれかのポリペプチド。139.対応する無修飾ポリペプチドと比較して、1時間以上、好ましくは2時間以上、より好ましくは6時間以上、例えば12時間以上、さらには24、48または72時間以上増加した血清中半減期を有する、実施形態132~138のいずれかのポリペプチド。140.ヒトにおいて少なくとも約12時間、好ましくは少なくとも24時間、より好ましくは少なくとも48時間、さらに好ましくは少なくとも72時間またはそれ以上;例えば少なくとも5日例えば約5~10日、好ましくは少なくとも9日例えば約9~14日、より好ましくは少なくとも約10日例えば約10~15日、または少なくとも約11日例えば約11~16日、より好ましくは少なくとも約12日例えば約12~18日またはそれ以上、または14日以上例えば約14~19日の血清中半減期を有する、実施形態132~139のいずれかのポリペプチド。141.PEG化されている、実施形態1~38または42~140のいずれかのポリペプチド。142.PAS化されている、実施形態1~38または42~140のいずれか一つのポリペプチド。143.HES化されている、実施形態1~38または42~140のいずれか一つのポリペプチド。144.該さらなる抗原結合ドメインが血清タンパク質に、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500nM未満のアフィニティで結合する、実施形態36もしくは37または実施形態42~143のいずれか一つのポリペプチド。145.実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチドをコードする核酸分子。146.配列番号25~43、90および213~219に示すアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン単一可変ドメインをコードする核酸分子。147.配列番号192~211に示す核酸配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態146の核酸分子。148.配列番号44~69に示すアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子。149.実施形態145~148のいずれか一つに記載の核酸分子を含む発現ベクター。150.実施形態145~148のいずれか一つの核酸配列から実施形態1~38または42~149のいずれか一つのポリペプチドを発現する能力を有する宿主細胞。151.実施形態150の宿主細胞を培養することによって得ることができる一価、二価、多価、二パラトープ性または多パラトープ性ナノボディ。152.実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチドと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物。153.医薬品として使用するための、実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチド。154.慢性閉塞性肺疾患COPDおよびCOPDの増悪の処置に使用するための、実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチド。155.嚢胞性線維症、喘息、重症喘息、喘息の増悪、アレルギー性喘息、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、気道リモデリング、閉塞性細気管支炎症候群または気管支肺異形成の処置に使用するための、実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチド。156.アテローム性動脈硬化、糸球体腎炎、炎症性腸疾患クローン病、血管新生および新しい血管の発達を特徴とする疾患黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害を含む、多発性硬化症、乾癬、加齢性黄斑変性疾患、眼ベーチェット病、ぶどう膜炎、肺動脈高血圧PAH特発性PAH、家族性PAHおよび随伴性PAHを含む、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、非小細胞癌、大腸がん、膵がん、食道がん、卵巣がん、乳がん、固形腫瘍および転移、黒色腫、肝細胞癌または虚血再灌流傷害の処置に使用するための、実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチド。157.実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチドの有効量を対象に投与することを含む、慢性閉塞性肺疾患COPDまたはCOPDの増悪を処置する方法。158.実施形態1~37または41~143のいずれか一つのポリペプチドの有効量を対象に投与することを含む、嚢胞性線維症、喘息、重症喘息、喘息の増悪、アレルギー性喘息、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、気道リモデリング、閉塞性細気管支炎症候群または気管支肺異形成からなる群より選択される状態を処置する方法。159.アテローム性動脈硬化、糸球体腎炎、炎症性腸疾患クローン病、血管新生および新しい血管の発達を特徴とする疾患黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害を含む、多発性硬化症、乾癬、加齢性黄斑変性疾患、眼ベーチェット病、ぶどう膜炎、肺動脈高血圧PAH特発性PAH、家族性PAHおよび随伴性PAHを含む、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、非小細胞癌、大腸がん、膵がん、食道がん、卵巣がん、乳がん、固形腫瘍および転移、黒色腫、肝細胞癌および虚血灌流傷害からなる群より選択される状態を、実施形態1~38または42~144のいずれか一つによるポリペプチドの有効量を対象に投与することによって処置する方法。160.慢性閉塞性肺疾患COPDまたはCOPDの増悪を処置するための医薬品の製造における、実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチドの使用。161.喘息、重症喘息、喘息の増悪、アレルギー性喘息、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、特発性肺線維症、気道リモデリング、閉塞性細気管支炎症候群または気管支肺異形成を処置するための医薬品の製造における、実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチドの使用。162.アテローム性動脈硬化、糸球体腎炎、炎症性腸疾患クローン病、血管新生および新しい血管の発達を特徴とする疾患黄斑変性症、糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害を含む、多発性硬化症、乾癬、加齢性黄斑変性疾患、眼ベーチェット病、ぶどう膜炎、肺動脈高血圧PAH特発性PAH、家族性PAHおよび随伴性PAHを含む、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、非小細胞癌、大腸がん、膵がん、食道がん、卵巣がん、乳がん、固形腫瘍および転移、黒色腫、肝細胞癌または虚血再灌流傷害を処置するための医薬品の製造における、実施形態1~38または42~144のいずれか一つのポリペプチドの使用。163.実施形態49、58、67、76、85、94、103または112のいずれか一つのポリペプチドによるCXCR2への結合を交差ブロックする能力を有する、実施形態1~38のいずれか一つのポリペプチド。164.該第1および第2抗原結合ドメインが、実施形態1~22、32~38または42~144のいずれか一つにおける該ドメインについて示した特徴のいずれかを含む、実施形態39~41のいずれか一つの分子。165.実施形態106~135の特徴のいずれかを示す、実施形態164の分子。166.実施形態49、58、67、76、85、94、103または112のいずれか一つのポリペプチドによるCXCR2への結合を交差ブロックする能力を有する、CXCR2を指向するまたはCXCR2に結合する少なくとも1つの免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチド。167.実施形態14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23727がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23726がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むプリペプチド。168.該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23727がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23726がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態167のポリペプチド。169.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態168のポリペプチド。170.実施例14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23725がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23726がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むポリペプチド。171.該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23725がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23726がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態170のポリペプチド。172.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態171のポリペプチド。173.実施形態14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23725がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23728がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むポリペプチド。174.該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23725がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23728がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態173のポリペプチド。175.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態174のポリペプチド。176.実施形態14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23727がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23728がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むポリペプチド。177.該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23727がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23728がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態176のポリペプチド。178.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態177のポリペプチド。179.実施形態14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23723がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23725がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むポリペプチド。180.該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23723がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23725がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態179のポリペプチド。181.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態180のポリペプチド。182.実施形態14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23723がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23727がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むポリペプチド。183.該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23723がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23727がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態182のポリペプチド。184.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態183のポリペプチド。185.実施形態14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23724がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23723がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むポリペプチド。186.該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23724がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23723がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態185のポリペプチド。187.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態186のポリペプチド。188.実施形態14に記載の構造を含む実施形態3~14および22~39のポリペプチドであって、該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23724がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含み、かつ該第1免疫グロブリン単一可変ドメインが、寄託されたプラスミドDSM23728がコードするKabatナンバリングによるCDRアミノ酸配列を含むポリペプチド。189.該第2免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23724がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域と、該第1免疫グロブリン単一可変ドメイン中に、寄託されたプラスミドDSM23728がコードするKabatナンバリングによるアミノ酸配列を有するFR領域とをさらに含む、実施形態188のポリペプチド。190.該第2免疫グロブリン単一可変ドメインが、該第1免疫グロブリン単一可変ドメインに、配列番号220に示すアミノ配列を有するペプチドリンカーによって接合されている、実施形態189のポリペプチド。