Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有するヒトC型肝炎ウイルスRNA複製抑制剤。Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有するヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤。ヒトC型肝炎ウイルスRNA複製抑制剤又はヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤のスクリーニング方法であって、Nアセチルグルコサミンをリード化合物としたNアセチルグルコサミン誘導体のHCVRNAの複製能を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法。ヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤のスクリーニング方法であって、Nアセチルグルコサミンをリード化合物としたNアセチルグルコサミン誘導体を、HCV感染動物に投与する工程と、Nアセチルグルコサミン誘導体の投与により、HCV感染症の発症を予防できるか、あるいは、HCV感染症を改善できるかを評価する工程と、を含むことを特徴とするスクリーニング方法。細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの生合成経路の活性化剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する活性化剤。細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの生合成経路の抑制剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する抑制剤。細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの合成促進剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する合成促進剤。細胞内におけるsnLc4Cerシアリルネオラクトテトラオシルセラミドの合成促進剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する合成促進剤。細胞内におけるsnLc6Cerシアリルネオラクトノルヘキサオシルセラミドの合成促進剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する合成促進剤。細胞内におけるNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerの合成促進剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する合成促進剤。細胞内におけるsnLc8Cerシアリルネオラクトノルオクタオシルセラミドの合成促進剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する合成促進剤。細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの合成抑制剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する合成抑制剤。細胞内におけるGb4Cerグロボテトラオシルセラミドの合成抑制剤であって、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する合成抑制剤。本発明は、ヒトC型肝炎ウイルスRNAの複製抑制剤又はヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤として有用な化合物の利用、及びその化合物のスクリーニング方法を提供することを目的とする。本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、HCVRNA持続複製細胞であるSGRLuc細胞のHCVRNAの複製をNアセチルグルコサミンが抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有するヒトC型肝炎ウイルスRNA複製抑制剤;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有するヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤;Nアセチルグルコサミンをリード化合物としたNアセチルグルコサミン誘導体のHCVRNAの複製能を測定する工程を含む、ヒトC型肝炎ウイルスRNA複製抑制剤又はヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤のスクリーニング方法;Nアセチルグルコサミンをリード化合物としたNアセチルグルコサミン誘導体を、HCV感染動物に投与する工程と、Nアセチルグルコサミン誘導体の投与により、HCV感染症の発症を予防できるか、あるいは、HCV感染症を改善できるかを評価する工程と、を含む、ヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤のスクリーニング方法;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの生合成経路の活性化剤Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの生合成経路の抑制剤Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの合成促進剤;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるsnLc4Cerシアリルネオラクトテトラオシルセラミドの合成促進剤;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるsnLc6Cerシアリルネオラクトノルヘキサオシルセラミドの合成促進剤;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerの合成促進剤;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるsnLc8Cerシアリルネオラクトノルオクタオシルセラミドの合成促進剤;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの合成抑制剤;Nアセチルグルコサミンを有効成分として含有する、細胞内におけるGb4Cerグロボテトラオシルセラミドの合成抑制剤;ヒトC型肝炎ウイルスRNA複製抑制剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;ヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの生合成経路の活性化剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの生合成経路の抑制剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの合成促進剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるsnLc4Cerシアリルネオラクトテトラオシルセラミドの合成促進剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるsnLc6Cerシアリルネオラクトノルヘキサオシルセラミドの合成促進剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerの合成促進剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるsnLc8Cerシアリルネオラクトノルオクタオシルセラミドの合成促進剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの合成抑制剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;細胞内におけるGb4Cerグロボテトラオシルセラミドの合成抑制剤を製造するためのNアセチルグルコサミンの使用;ヒトC型肝炎ウイルスのRNA複製を抑制するためのNアセチルグルコサミン;ヒトC型肝炎ウイルスの感染症を治療するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの生合成経路を活性化するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの生合成経路を抑制するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの合成を促進するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるsnLc4Cerシアリルネオラクトテトラオシルセラミドの合成を促進するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるsnLc6Cerシアリルネオラクトノルヘキサオシルセラミドの合成を促進するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerの合成を促進するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるsnLc8Cerシアリルネオラクトノルオクタオシルセラミドの合成を促進するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの合成を抑制するためのNアセチルグルコサミン;細胞内におけるGb4Cerグロボテトラオシルセラミドの合成を抑制するためのNアセチルグルコサミン;NアセチルグルコサミンをヒトC型肝炎ウイルスに感染した細胞に作用させる工程を含む、ヒトC型肝炎ウイルスのRNA複製を抑制する方法;Nアセチルグルコサミンを投与する工程を含む、ヒトC型肝炎ウイルス感染症の治療方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの生合成経路の活性化方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの生合成経路の抑制方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシド合成の促進方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるsnLc4Cerシアリルネオラクトテトラオシルセラミド合成の促進方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるsnLc6Cerシアリルネオラクトノルヘキサオシルセラミド合成の促進方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cer合成の促進方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるsnLc8Cerシアリルネオラクトノルオクタオシルセラミド合成の促進方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミド合成の抑制方法;Nアセチルグルコサミンを細胞に作用させる工程を含む、細胞内におけるGb4Cerグロボテトラオシルセラミド合成の抑制方法などである。なお、本発明において作用させるとは、Nアセチルグルコサミンを、添加又は投与することにより、ヒトC型肝炎ウイルスのRNA複製を抑制する作用、細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの生合成経路の活性化、細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミドの生合成経路の抑制、細胞内におけるアミノCTHアミノセラミドトリヘキソシド合成の促進、細胞内におけるsnLc4Cerシアリルネオラクトテトラオシルセラミド合成の促進、細胞内におけるsnLc6Cerシアリルネオラクトノルヘキサオシルセラミド合成の促進、細胞内におけるNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cer合成の促進、細胞内におけるsnLc8Cerシアリルネオラクトノルオクタオシルセラミド合成の促進、細胞内におけるGb3Cerグロボトリオシルセラミド合成の抑制、あるいは細胞内におけるGb4Cerグロボテトラオシルセラミド合成の抑制を発揮させることをいい、培養細胞を対象としてもよいし、個体内の細胞を対象としてもよい。前記個体は、例えば、ヒトであってもよいし、それ以外の哺乳動物であってもよい。本発明によれば、ヒトC型肝炎ウイルスRNAの複製抑制剤又はヒトC型肝炎ウイルス感染症治療剤として有用な化合物の利用、及びその化合物のスクリーニング方法を提供することができる。以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。実施例において特に説明がない場合には、市販の試薬キットや測定装置はそれらに添付のプロトコールを用いる。なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。NアセチルグルコサミンαNアセチルグルコサミン、βNアセチルグルコサミン、及びそれらの混合物の総称を意味する。本願明細書において、GlcNAcと称する場合もある。は、HCVRNAの複製を抑制する作用を有することから、GlcNAcは、HCVRNA複製抑制剤、あるいは、抗HCV剤などとして有用であり、それによって、HCVRNA複製抑制、HCV増殖抑制、あるいは、肝機能異常、C型肝炎、肝硬変や肝細胞がんなどの肝不全などのHCV感染症の治療に有用である。なお、HCV無症候性持続感染は、肝炎などHCV感染症を発症する可能性が高い。従って、HCVRNAの複製抑制作用を有するGlcNAcは、HCV無症候性キャリアからのHCV感染症の発症予防にも有用である。一方、細胞にGlcNAcを投与すると、細胞内で、アミノCTHアミノセラミドトリヘキソシドの生合成経路の活性化、特にアミノCTH[アミノセラミドトリヘキソシドLc3Cerラクトトリアオシルセラミドとも表記される]、snLc4Cerシアリルネオラクトテトラオシルセラミド、snLc6Cerシアリルネオラクトノルヘキサオシルセラミド、NeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cer、及びsnLc8Cerシアリルネオラクトノルオクタオシルセラミド等のネオラクト/ラクト系列の糖脂質の合成が増強され、あるいはGb3Cerグロボトリオシルセラミドの生合成経路の抑制、特にGb3Cerグロボトリオシルセラミド及びGb4Cerグロボテトラオシルセラミド等のグロボ/イソグロボ系列の糖脂質の合成が抑制され、HCVRNAの複製抑制に繋がる。従って、GlcNAcは、細胞内のアミノCTH、snLc4Cer、snLc6Cer、NeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cer、及びsnLc8Cerの合成促進剤として有用である。また、GlcNAcは、細胞内のGb3Cer及びGb4Cerの合成抑制剤として有用である。==GlcNAcの利用==GlcNAcは、HCVRNAの複製の抑制、又はHCVの治療や発症予防を目的とするものであれば、医薬、実験用試薬の他、どのようなものに用いてもよい。GlcNAcの剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、注射剤、坐剤、液剤など特に問わず、また、固形、液状、ゲル状、粉末状、ゼリー状、油状、ペースト状、泡状、クリーム状などの形状にしてもよい。例えば、本発明のHCVRNA複製抑制剤や抗HCV剤を医薬として用いる場合、その製剤化は、従来使用されている製剤添加物を用いて、常法で行うことができる。前記製剤添加物としては、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、矯味矯臭剤、溶剤、安定剤、基剤、湿潤剤、保存剤などの既存の添加物を用いることができる。また、GlcNAcの投与方法としてはHCVに感染する又は感染したヒトやチンパンジーなどの動物に、経口投与してもよいし、腹腔内や静脈内への注射や点滴により非経口投与してもよい。また、上記HCVRNA複製抑制剤や抗HCV剤をinvivoでの実験用試薬として用いる場合は、HCVに感染する又は感染したヒト以外の動物に、経口投与してもよいし、腹腔内や静脈内への注射や点滴により非経口投与してもよい。また、HCVに感染する又は感染したヒト以外の上記動物としては、例えば、チンパンジー、ヒト肝細胞キメラマウス、HCV感染に感受性のあるキメラ動物モデル、HCVトランスジェニックマウス、ヒトCD81トランスジェニック非ヒト動物などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。==HCVRNA複製抑制剤又は抗HCV剤のスクリーニング方法==HCVRNA複製抑制剤のスクリーニング方法は、GlcNAcの誘導体がHCVRNAの複製能を減少できるかどうかを測定する工程を含む。例えば、GlcNAcの誘導体の存在下非存在下においてHCVRNA持続複製細胞を培養し、HCVRNAの複製能が減少されたかどうかを調べたり、上記誘導体の投与により、HCVに感染した上記動物においてHCVRNAの複製が抑制されたかどうかを調べたりすることにより、HCVRNA複製抑制剤のスクリーニングを行うことができる。また、抗HCV剤のスクリーニング方法は、HCVRNA複製抑制剤のスクリーニングと同様の上記工程を含んでもよいし、GlcNAcの誘導体が、HCVに感染した動物においてHCV感染症を予防できるかどうか、HCV感染症を改善できるかどうかを測定する工程を含んでもよい。例えば、上述のようにHCVRNA複製抑制剤のスクリーニングを行うことにより、抗HCV剤のスクリーニングを行ってもよいし、上記誘導体の投与により、HCVに感染した上記動物において、HCV感染症を予防できたかどうか、あるいは、HCV感染症を改善できたかどうかなどを測定することにより、抗HCV剤のスクリーニングを行ってもよい。なお、HCV感染症の予防や改善の評価は、既存の方法により行うことができる。より具体的には、血清中のHCVRNA濃度を定量することにより行ってもよいし、HCV抗体検査、HCV抗原検査、HCV遺伝子定性検査等により行ってもよい。なお、上記評価は、必要に応じて、セロタイプ、ジェノタイプなどのHCVの型の同定;ASTGOT値の測定;ALTGPT値の測定;例えば、タンパク質合成の能力低下、解毒の能力低下などの肝臓機能低下の測定;血小板数の測定;例えば、超音波検査、CTスキャン、MRI、血管造影などによる肝臓組織の生体検査などを適宜組み合わせて行ってもよい。GlcNAcの誘導体としては、例えば、下式~のいずれかで表される化合物をリード化合物として式中のいずれか1又は2以上のOH基を修飾した誘導体などを挙げることができる。なお、GlcNAcの誘導体としては、既知の化合物を用いてもよいが、公知の方法により、あるいは公知の方法を適宜組み合わせて、製造してもよい。以下、本発明を実施例及び図を用いてより具体的に説明する。<実施例1>HCVRNA持続複製細胞SGRLuc細胞と、その親株であるヒト肝がん細胞株Huh7細胞において、糖鎖プライマー伸長生成物に違いがあるかどうかをLCMSMSによって調べた。SGRLuc細胞又はHuh7細胞を2×106cellsディッシュで播種し、37°C、5CO2の条件下で18時間インキュベートし、各細胞をディッシュに接着させた。なお、Huh7細胞は、Dulbecco’sModifiedEagle’sMediumに非働化したウシ胎児血清FetalBovineSerumを10添加し、さらにMinimumEssentialMediumNonEssentialAminoAcidを1添加した培地で培養した。また、SGRLuc細胞は、DMEMにFBSを10添加し、さらにG418disulfatesaltpowdercellculturetestedを1mgmLの濃度で添加した培地で培養した。接着後、PBSで洗浄し、50μMのドデシルβDガラクトピラノシルβDグルコピラノシドプライマーを含有したDMEMF12を5mL加えて、48時間インキュベートして糖鎖伸長反応を行った。その後、各ディッシュを氷上に置いて反応を停止させ、PBS3mLを加えた。セルスクレイパーで細胞を剥がし、懸濁液を回収した。得られた細胞懸濁液を4°Cで1000rpm×5分間遠心分離し、上清を培地画分として回収した。一方、沈殿した細胞をPBS500μLに懸濁し、Lowry法のstandardassayによりタンパク質定量を行った。得られた培地画分中の糖鎖伸長生成物を、SepPakC18カラムを用いてメタノールにより抽出し、遠心エバポレーターによって溶媒を減圧留去した。その後、糖鎖伸長生成物を、アミノプロピルカラムDSCNH2を用いて中性画分と酸性画分に分離し、中性画分をメタノールにより抽出し、酸性画分をメタノール/酢酸/トリエチルアミン=9334により抽出した。各抽出溶媒を遠心エバポレーターにより減圧留去し、LCMSMSを用いて質量分析を行った。各生成物のHPLCのクロマトグラムのピーク面積を、1ディッシュ当りのタンパク質量で補正してSGRLuc細胞とHuh7細胞における各糖鎖を比較した。各生成物の構造はMSMSフラグメントおよび各種加水分解酵素処理によって決定した。その結果を図1に示す。なお、図1中のN1はGalα14LacC12を、N2はGlcNAcβ13LacC12を、N3はGalNAcβ13Galα14LacC12を、N4はGalβ14GlcNAcβ13LacC12を、A1はHSO3LacC12を、A2はHSO3Galα14LacC12を、A3はHSO3GlcNAcβ13LacC12を、A4は2AcNeuAcα23LacC12を、A5はAcNeuAcα23LacC12を、A6はNeuAcα23LacC12を、A7はNeuGcα23LacC12を、A8はGalNAcβ14LacC12を、A9はGalNAcβ14LacC12を、A10aはGalβ13GalNAcβ14LacC12を、A10bはNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13LacC12を、A11はHexNAcGalβ13GalNAcβ14LacC12を、A12はNeuAcGalβ14GlcNAcLacC12を、A13はNeuAcGalβ14GlcNAcLacC12を、A14はNeuAcGalβ14GlcNAcGalβ14GlcNAcβ13LacC12をそれぞれ意味する。図1に示すように、N1やN3は、SGRLuc細胞とHuh7細胞で、生成量に有意差がないのに対し、N2やN4ではSGRLuc細胞において発現量の減少が確認できた。この結果は、HCVRNAの複製がラクト/ネオラクト系列の糖脂質の生成に影響があることを示す一例である。<実施例2>ラクト系列ネオラクト系列の糖脂質の糖鎖が、HCVRNAの複製を抑制することを確認するため、各種糖単糖及びアミノ糖により、SGRLuc細胞におけるHCVRNAの複製能が減少するかどうかを、SGRLuc細胞のルシフェラーゼ活性を指標として調べた。SGRLuc細胞を24wellplateの各ウェルに4×104cellsウェルで播種し、一晩培養した後、最終濃度で1510mMとなるように糖又はアミノ酸Dガラクトース:Gal、GlcNAc、NアセチルDマンノサミン:ManNAcを添加した培地に交換した。なお、コントロールとして、糖及びアミノ酸を添加していない培地に交換したものも準備した。24、48又は72時間インキュベートした後、ルミノメーターでルシフェラーゼ活性を測定した。その後、細胞溶解液中のタンパク量を測定し、ルシフェラーゼ活性をタンパク量で補正した。その結果、図2に示すように、GlcNAcで72時間処理した場合においてルシフェラーゼ活性がGlcNAcの濃度依存的に減少した。一方、GalやManNAcを添加した場合では大きな変化は見られなかった。本実施例における、GlcNAcが、SGRLuc細胞におけるHCVRNAの複製能を低下させる結果は、ラクト系列ネオラクト系列の糖脂質の糖鎖がHCVRNAの複製を抑制する効果を有することを示す一例である。<実施例3>GlcNAcによりSGRLuc細胞におけるHCVRNAの複製が減少することを半定量RTPCRにより確認した。SGRLuc細胞4×104cellsを24時間培養した後、最終濃度で10mMとなるように糖又はアミノ酸Gal、GlcNAc、又はManNAcを添加した培地に交換した。なお、コントロールとして、糖及びアミノ酸を添加していない培地に交換したものも準備した。3日間インキュベートした後、細胞を回収した。RNeasyMiniKitを用いてTotalRNAを抽出し、ReverTraAceqPCRRTkitを用いてcDNAを合成した。その後、以下のプライマーとTaKaRaExTaqを用いてPCRを行い、増幅したHCV及びβアクチン[コントロールCtrlとして使用]をアガロースゲル電気泳動で分離した。ゲルをエチジウムブロマイド溶液により染色した後、MolecularImagerFXで解析し、βアクチンのRNA量で補正してHCVRNAの定量を行った。その結果、図3に示すように、GlcNAcの処理によりSGRLuc細胞におけるHCVRNAの複製は減少したが、Gal又はManNAcにおいては、その減少がみられなかった。本実施例で、GlcNAcがHCVRNAの複製を抑制することを半定量RTPCRでも確認できたが、この結果は、実施例2と同様に、ラクト系列ネオラクト系列の糖脂質の糖鎖がHCVRNAの複製を抑制する効果を有することを示すものである。5’CGGGAGAGCCATAGTGG3’HCVforwardprimer:配列番号15’AGTACCACAAGGCCTTTCG3’HCVreverseprimer:配列番号25’CAAGAGATGGCCACGGCTGCT3’betaactinforwardprimer:配列番号35’TCCTTCTGCATCCTGTCGGCA3’betaactinreverseprimer:配列番号4<実施例4>細胞内の代謝系に対する、GlcNAcの効果SGRLuc細胞において、GlcNAcが糖鎖生合成経路に影響を及ぼすことを、LCMSMSによって内在性糖脂質の発現量を測定することにより確認した。SGRLuc細胞を各ディッシュに播種し、一晩培養した後、最終濃度で10mMとなるようにGlcNAcを添加した培地に交換した。なお、コントロールとして、糖及びアミノ酸を添加していない培地に交換したものも準備した。72時間インキュベートした後、PBS3mLを加えてセルスクレイパーで細胞を剥がし、細胞懸濁液を回収した。得られた細胞懸濁液を4°Cで1000rpm×5分間遠心分離し、上清を除去した。一部の沈殿細胞にPBS500μLを加えて懸濁し、一部をLowry法のstandardassayによりタンパク質定量を行った。残りの沈殿細胞にクロロホルムメタノール=21を15mL加えて30分間超音波照射した。これを4°Cで15000rpm×20分間遠心分離し、上清に含まれる糖脂質成分を回収した。続いてクロロホルム2プロパノールMilliQ水=7112を15mL加えて同様に超音波処理および遠心分離を行い、上清に含まれるリン脂質成分を回収した。回収後、ヒートブロックによって溶媒を揮発させた。得られた生成物をまずアミノプロピルカラムDSCNH2によって酸性成分と中性成分に分離した。減圧留去して得られた中性成分に、アルカリ分解処理を施してリン脂質の除去を図った。分離後の中性成分にクロロホルムメタノール=211mLを加えて溶解させた。ここに、2M水酸化カリウムメタノール200mLを加え、37°Cで3時間振盪させた。白い沈殿が生成されていることを確認し、4°Cで1000rpm×15分間遠心分離した。分離後、上清を遠心エバポレーターで減圧留去した。その後SepPakC18カラムを用いて、酸性成分およびアルカリ分解後の中性成分から糖脂質を抽出し、LCMSMS解析を行った。その結果を図4に示す。なお、図4中、GlcCerはGlcβ11’Cerを、LacCerはGalβ14Glcβ11’Cerを、Gb3CerはGalα14Galβ14Glcβ11’Cerを、Gb4CerはGalNAcβ13Galα14Galβ14Glcβ11’Cerを、Lc3CerはGlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerを、GM3はNeuAcα23Galβ14Glcβ11’Cerを、GM2はGalNAcβ14Galβ14Glcβ11’Cerを、GM1はGalβ13GalNAcβ14Galβ14Glcβ11’Cerを、GD1aはNeuAcα23Galβ13GalNAcβ14Galβ14Glcβ11’Cerを、snLc4CerはNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerを、snLc6CerはNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerを、GlcNAcsnLc6CerはNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerを、snLc8CerはNeuAcα23Galβ14GlcNAcβ13Galβ14GlcNAcβ13Galβ14Glcβ11’Cerをそれぞれ意味する。図4に示すように、LacCerから伸長される糖脂質、Lc3Cer、GM2、GM1、GD1a、snLc4Cer、snLc6Cer、GlcNAcsnLc6Cer、及びsnLc8Cerの生成量は顕著に増加し、Gb3Cer、Gb4Cer、及びGM3の生成量は減少した。このうち、Lc3Cer、snLc4Cer、snLc6Cer、及びsnLc8Cerの生成量は顕著に増加し、Gb3Cer及びGb4Cerの生成量は顕著に減少した。このように、GlcNAcにより、Lc3Cerの生合成経路が活性化され、ネオラクト/ラクト系列の糖脂質snLc4Cer、snLc6Cer、GlcNAcsnLc6Cer、及びsnLc8Cerの生成が促進される。一方、GlcNAcによりGb3Cerの生合成経路が相対的に抑制され、グロボ/イソグロボ系列の糖脂質Gb4Cerの生成が抑制される。HCVRNAは、脂質ラフトを含む細胞内膜構造の中で複製すると推定されるためShiSTetalJVirol77416041682003、及びAizakiHetalVirology324450461、GlcNAcによるネオラクト/ラクト系列の糖脂質の生成によるラフト構造の変化が、HCVRNAの複製抑制に関与していると考えられる図5参照。