標的神経細胞内で機能的ジンクフィンガーホメオボックス3ZFHX3タンパク質を増大又は安定化する化合物を含む、毛細血管拡張性失調症治療薬。前記化合物が、機能的ジンクフィンガーホメオボックス3ZFHX3タンパク質の発現増強作用を示す化合物である、請求項1に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。前記化合物がレチノイン酸である、請求項2に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。前記化合物がプロテインフォスファターゼ2BPP2B阻害剤である、請求項1に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。前記プロテインフォスファターゼ2BPP2B阻害剤がタクロリムスである、請求項4に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。前記化合物がカルパイン阻害剤である、請求項1に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。機能的ジンクフィンガーホメオボックス3ZFHX3タンパク質を増大又は安定化する化合物を毛細血管拡張性失調症患者に対して治療上有効量、投与するステップを含む、毛細血管拡張性失調症の治療法。前記化合物がレチノイン酸又はタクロリムスである、請求項7に記載の治療法。以下のステップ~を含む、毛細血管拡張性失調症に起因又は付随する神経変性或いは神経過興奮に由来した酸化ストレスによる神経変性の予防又は治療に有効な化合物のスクリーニング法:複数匹の同種同系非ヒト哺乳動物を用意し、試験群と対照群に分けるステップ;試験群に対して、カイニン酸を投与するとともに被験物質を投与するステップ;ステップ後の試験群と、被験物質を投与しないこと以外は試験群と同様の処置を施した対照群について、脳内でのオートファジー又は神経変性を検定するステップ;試験群と対照群の間で検定結果を比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップであって、オートファジーの促進ないし誘導を認めること、又は神経変性の抑制を認めること、が被験物質の有効性の指標となる、ステップ。ステップにおいて、小脳でのオートファジー又は神経変性が検定される、請求項9に記載のスクリーニング法。ステップにおいて、小脳深部核でのオートファジー又は神経変性が検定される、請求項9に記載のスクリーニング法。非ヒト哺乳動物が野生型動物である、請求項9~11のいずれか一項に記載のスクリーニング法。非ヒト哺乳動物がATM遺伝子欠損動物である、請求項9~11のいずれか一項に記載のスクリーニング法。非ヒト哺乳動物がマウスである、請求項9~13のいずれか一項に記載のスクリーニング法。ATMというリン酸化酵素をコードしている遺伝子の変異がATの原因であることが解明されたものの、神経変性のメカニズムは不明であり、ATに対する適切な治療法/予防法の確立が切望されている。このような状況下、本発明は、ATの治療又は予防に有効な手段を提供することを目的とする。また、AT等の神経変性疾患の治療法ないし予防法の確立に資するツールを提供することを目的とする。本発明者らはAT患者に特徴的な症状と遺伝子転写調節因子ZFHX3ATBF1の機能の間に深い関係があると考えて研究を進めた。ZFHX3はAFP遺伝子プロモータ上流の発現調節領域にあるAアデニンとTチミンに富むATrichDNA配列に結合するDNA結合タンパク質として1991年にクローニングされた非特許文献6。最初に9kbのATBF1mRNAがクローニングされ、1995年には主要な遺伝子転写産物として全長12kbのATBF1mRNAがATBF1Aと命名された。ATBF1Aについては神経細胞の分化に関連する機能が明らかにされた非特許文献7、8。ごく最近になってATBF1の名称はヒトゲノム国際機構HumanGenomeOrganizationによりZFHX3と改名された。ZFHX3はAFP遺伝子の発現調節領域にあるATに富む領域に結合してその活性を抑制する作用がある非特許文献6、9。最近、p53とTGFβシグナル伝達因子とが複合体を形成してAFP遺伝子の発現を抑制するという新しいメカニズムが明らかになった非特許文献10。p53はZFHX3とタンパク質相互作用する因子であり、p53とZFHX3の複合体がp21waf1cip1のプロモータを活性化する非特許文献11。これらの事実から、AFP遺伝子に関しても、p53、TGFβシグナル伝達因子及びZFHX3が複合体形成しするタンパク質相互作用を通じて転写抑制をしている可能性がある。AT患者以外では、成人の血中AFPが異常上昇する臨床状態は肝細胞癌やAFP産生胃癌の患者に認められる。その背景としてHCCの癌細胞でZFHX3発現量が著しく減少していることが明らかにされた。また、AFP産生胃癌の癌細胞ではZFHX3の発現がほとんど消失していることが示された非特許文献12。AFP産生胃癌は、AFPの異常な発現上昇と同時に、原発巣が小さい段階から高率に遠隔転移を起こす特徴を示し、極めて悪性度の高い癌である非特許文献13、14。癌の転移の問題は細胞接着性と深く関連する問題であり、ZFHX3の機能不全との関連が推察されている。AT患者にとって最も深刻な問題は神経変性であり、神経変性は病態早期から進行する。AT患者に神経変性が起こるメカニズムとしてDNAの二重らせん切断の修復異常が想定されてきた。しかしATと診断された症例の中には、臨床的な観察結果および定量的な神経学的検査結果から神経症状が軽微であるにも関わらず、遺伝子検査結果からはATM遺伝子に重大な中途欠損があって、ATM機能に著しい障害を持つことが予想される例がみつかる。それらの患者から採取された試料を用いた細胞機能テストではDNAの二重らせん切断に対するDNA修復反応の著しい損傷を確認できることから、典型的なATM症状を呈することを期待できる。もしも神経変性がDNA修復障害のみに由来するのであれば、当然著しい神経症状が出ると期待される。しかし、DNA修復反応が障害されていても、必ずしも神経変性の兆候が重篤になるとは限らない。この事実関係はAT患者における神経変性を起こすメカニズムは単純にATMのDNA修復障害では説明できないことを示唆しているものであり、従来から知られているATMのDNA修復シグナル系とは独立した別のメカニズムが神経変性過程に関わっている可能性がある非特許文献15。ATMキナーゼの下流の標的として数百の因子が推定されているが、その一つとしてZFHX3が検出されている非特許文献16。ZFHX3がATMによってリン酸化を受ける機能的な意味は、ATMによってリン酸化されるp53の機能調節と類似している可能性がある。p53はATMによってリン酸化されることでタンパク質が安定化し転写因子としての機能を発揮するようになる。p53のリン酸化は分解を促進する因子であるMDM2とp53の結合を抑制する作用がある非特許文献17、18。ZFHX3もATMによってリン酸化されることでタンパク質として安定化している可能性がある。本発明者らは、AT患者が示す様々な臨床症状の背景としてZFHX3の機能障害が関連していると考えた。最近の論文報告によって、ZFHX3の異常は川崎病の遺伝的背景因子であることが解明された。川崎病は小児急性熱性皮膚粘膜リンパ節症候群として知られる病気であり、心臓冠動脈瘤の合併症を引き起こす非特許文献19。この事実はAT患者の臨床兆候の一つである毛細血管拡張症状と関連して、ZFHX3が血管の保護的役割を持っていることを示唆するものであり、ZFHX3に動脈瘤が発生することを防御する役割があることを示している。以上の考察を踏まえて本発明者らは、ZFHX3の機能とAT患者が持つ多彩な臨床症状との密接な結びつきに着目し、数々の実験を行った。その結果、特に重要な成果として、レチノイン酸刺激がATMの活性化を誘導し、活性化したATMがCREBを活性化し、続いてCREBがZFHX3の遺伝子プロモータ上にあるCREのコンセンサスDNA配列に結合し、標的遺伝子であるZFHX3遺伝子の転写を活性化するという、シグナル伝達経路を明らかにした。また、酸化ストレスに反応して神経細胞の細胞質内でATMが活性化する事実及びこのATMの活性化にPDGFRBの活性化が必須であることを解明した。これらの成果によって、ATの原因遺伝子であるATMの活性化に関するシグナル伝達経路の全体像が明らかになった。その結果、ATMの活性化においてZFHX3が重要な分子であり、ZFHX3が良好に作用する環境を形成することがATの治療に有効であるとの知見がもたらされた。ZFHX3が良好に作用する環境を形成するための具体的な手段は、機能的ZFHX3即ちリン酸化状態のZFHX3の量を増大させること、或いは機能的ZFHX3の安定化維持である。前者は、例えば、本研究で使用したレチノイン酸によって達成可能である。一方、本発明者らの検討の結果、後者に関連して重要かつ興味深い実験結果が得られた。即ち、モデル神経細胞を用いた実験によって、免疫抑制剤として知られるタクロリムスFK506が神経細胞死を抑制できること、酸化ストレス下の神経細胞ではZFHX3の分断化が生ずること、タクロリムスの投与によってこのZFHX3の分断化を抑制できること、及びタクロリムスの投与によってZFHX3の脱リン酸化が抑制できること、が明らかとなった。ここで、タクロリムスがプロテインフォスファターゼ2B略称PP2B。カルシニューリンとも呼ばれるに対する阻害活性を示すことを踏まえて上記結果を考察すれば、酸化ストレス下の神経細胞ではZFHX3がPP2Bによる脱リン酸化を受けて分断化することがわかるとともに、タクロリムスによれば当該分断化の抑制を通して神経細胞死を抑制できるといえる。この知見は、タクロリムス自体が機能的ZFHX3の安定化という作用によってATの治療/予防に有効であることを示すとともに、タクロリムスと同様の作用、即ち、ZFHX3を脱リン酸化する酵素PP2Bに対する阻害活性を示す物質がATの治療/予防に有効であること、更には、シグナル伝達経路においてPP2Bの上流に位置するカルパインの活性を阻害する物質にもATに対する治療/予防効果を期待できることを示唆する。一方、カイニン酸刺激を負荷した動物の小脳深部核等の反応性を検定するという、本研究で使用した実験系は、上記の如き重要且つ有意義な事実の発見に寄与したことからも明らかな通り、小脳の変性を伴う疾患に有効な薬物をスクリーニングするためのツールとしては当然のこと、グルタミン酸作動性ニューロンでの神経過興奮に由来する酸化ストレスがもたらす各種神経変性に有効な薬物をスクリーニングするツールとしても、それ自体が大きな価値を有する。以下に示す本発明は主として上記成果に基づく。[1]標的神経細胞内で機能的ジンクフィンガーホメオボックス3ZFHX3タンパク質を増大又は安定化する化合物を含む、毛細血管拡張性失調症治療薬。[2]前記化合物が、機能的ジンクフィンガーホメオボックス3ZFHX3タンパク質の発現増強作用を示す化合物である、[1]に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。[3]前記化合物がレチノイン酸である、[2]に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。[4]前記化合物がプロテインフォスファターゼ2BPP2B阻害剤である、[1]に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。[5]前記プロテインフォスファターゼ2BPP2B阻害剤がタクロリムスである、[4]に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。[6]前記化合物がカルパイン阻害剤である、[1]に記載の毛細血管拡張性失調症治療薬。[7]機能的ジンクフィンガーホメオボックス3ZFHX3タンパク質を増大又は安定化する化合物を毛細血管拡張性失調症患者に対して治療上有効量、投与するステップを含む、毛細血管拡張性失調症の治療法。[8]前記化合物がレチノイン酸又はタクロリムスである、[7]に記載の治療法。[9]以下のステップ~を含む、毛細血管拡張性失調症に起因又は付随する神経変性或いは神経過興奮に由来した酸化ストレスによる神経変性の予防又は治療に有効な化合物のスクリーニング法:複数匹の同種同系非ヒト哺乳動物を用意し、試験群と対照群に分けるステップ;試験群に対して、カイニン酸を投与するとともに被験物質を投与するステップ;ステップ後の試験群と、被験物質を投与しないこと以外は試験群と同様の処置を施した対照群について、脳内でのオートファジー又は神経変性を検定するステップ;試験群と対照群の間で検定結果を比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップであって、オートファジーの促進ないし誘導を認めること、又は神経変性の抑制を認めること、が被験物質の有効性の指標となる、ステップ。[10]ステップにおいて、小脳でのオートファジー又は神経変性が検定される、[9]に記載のスクリーニング法。[11]ステップにおいて、小脳深部核でのオートファジー又は神経変性が検定される、[9]に記載のスクリーニング法。[12]非ヒト哺乳動物が野生型動物である、[9]~[11]のいずれか一項に記載のスクリーニング法。[13]非ヒト哺乳動物がATM遺伝子欠損動物である、[9]~[11]のいずれか一項に記載のスクリーニング法。[14]非ヒト哺乳動物がマウスである、[9]~[13]のいずれか一項に記載のスクリーニング法。1.毛細血管拡張性失調症用の治療薬本発明の第1の局面は毛細血管拡張性失調症以下、ATを略称するの治療薬に関する。本発明における治療薬とは、標的の疾病ないし病態であるATに対する治療的又は予防的効果を示す医薬のことをいう。治療的効果には、ATに特徴的な症状又は随伴症状を緩和すること軽症化、症状の悪化を阻止ないし遅延すること等が含まれる。後者については、重症化を予防するという点において予防的効果の一つと捉えることができる。このように、治療的効果と予防的効果は一部において重複する概念であることから、明確に区別して捉えることは困難であり、またそうすることの実益は少ない。尚、予防的効果の典型的なものは、ATに特徴的な症状の再発を阻止ないし遅延することである。尚、ATに対して何らかの治療的効果又は予防的効果、或いはこの両者を示す限り、AT治療薬に該当する。本発明の治療薬は有効成分として、標的神経細胞内で機能的ジンクフィンガーホメオボックス3以下、慣例に従いZFHX3と略称するタンパク質を増大又は安定化する化合物を含む。換言すれば、本発明の治療薬における有効成分は、標的細胞内において機能的ZFHX3タンパク質を増大させる効果、或いは標的細胞内において機能的ZFHX3タンパク質を安定化させる効果を発揮する。本発明における用語標的神経細胞とは、本発明の治療薬の標的となる神経細胞である。本発明の治療薬は神経細胞内でその作用を発揮する。典型的には、小脳に存在する神経細胞小脳深部核の神経細胞やプルキンエ細胞などが標的となり、ATに特徴的な小脳神経変性に対する抑制的ないし阻害的治療効果をもたらす。本発明における用語機能的ZFHX3とは、その生理機能を発揮できる状態のZFHX3タンパク質をいう。生理的条件下ではZFHX3タンパク質はリン酸化状態にあり、その機能を発揮する。一方、ZFHX3タンパク質の脱リン酸化はZFHX3タンパク質の分断化分解を引き起こす。そこで本明細書では、用語機能的ZFHX3タンパク質を用語リン酸化状態のZFHX3タンパク質と交換可能に使用する。ZFHX3はAFP遺伝子プロモータ上流の発現調節領域にあるAアデニンとTチミンに富むATrichDNA配列に結合するDNA結合タンパク質であり、ATBF1と呼ばれていた。ATBF1については、異なったプロモータの使用及び選択的スプライシングにより形成される、分子量の異なった2つのアイソフォームATBF1A404kDa、アミノ酸配列を配列番号1に示す。また、ATBF1Aをコードする塩基配列GenBankaccessionnumber:L32832を参照を配列番号2に示す。とATBF1B306kDa、アミノ酸配列を配列番号3に示す。また、ATBF1Bをコードする塩基配列GenBankaccessionnumber:L32833を参照を配列番号4に示す。の存在が知られている。機能的ZFHX3タンパク質を増大させる効果とは、直接又は間接的にZFHX3遺伝子を発現制御し、機能的ZFHX3タンパク質の発現量の増大をもたらす効果をいう。機能的ZFHX3タンパク質を増大させる効果を発揮する化合物として、ZFHX3タンパク質の発現を増強する化合物を用いることができる。該当する化合物の具体例としてレチノイン酸を挙げることができる。レチノイン酸はATM及びCREBを介してZFHX3遺伝子の転写活性を高める。ZFHX3遺伝子に対するこのような作用を示す化合物である限り、この例に限定することなく本発明の治療薬の有効成分として使用可能である。一方、機能的ZFHX3タンパク質を安定化させる効果とは、機能的ZFHX3タンパク質のリン酸化状態を維持する効果をいう。リン酸化状態が維持されることによってZFHX3は分断化分解を回避でき、その本来の生理機能を発揮できる。ZFHX3の脱リン酸化状態の維持には、ZFHX3を標的とした脱リン酸化酵素の活性阻害が有効である。そこで、本発明の治療薬の有効成分としてプロテインフォスファターゼ2B以下、PP2Bと略称する阻害剤を使用するとよい。PP2B阻害剤の具体例としてタクロリムス別名FK506、CAS登録番号104987113、シクロスポリンAを挙げることができる。タクロリムスは土壌細菌より単離された化合物であり、移植時の免疫抑制、アトピー性皮膚炎、重症筋無力症、関節リウマチ、ループス腎炎等に使用されている。プログラフ登録商標タクロリムス水和物、グラセプター登録商標タクロリムス水和物、プロトピック登録商標タクロリムス水和物等の商品名でタクロリムス製剤がアステラス製薬株式会社によって販売されている。また、シクロスポリンはタクロリムスと類似の薬理作用を持ち、免疫拒絶反応の抑制や自己免疫疾患の治療に使用されている。ネオーラル登録商標、サンディミュン登録商標の商品名でシクロスポリン製剤がノバルティスファーマ株式会社によって販売されている。PP2B阻害剤に代えて、シグナル伝達経路においてPP2Bの上流に位置するカルパインに対する阻害剤を用いることにしてもよい。カルパイン阻害剤の例はカルパスタチン、ロイペプチン、E64、E64dE64の誘導体、カルペプチンである。ZFHX3の脱リン酸化を抑制し得る限りにおいて、以上の例に限定することなく本発明の治療薬の有効成分として使用可能である。尚、後述の実施例に示したアッセイ系或いは参考文献に記載されるアッセイ系を利用すれば、公知の化合物群或いは新規に合成又は単離した化合物の中から、機能的ZFHX3タンパク質を増大又は安定化する化合物をルーチン的操作によって同定することが可能である。後述の実施例に示す通り、本発明者らは、神経細胞においてATの原因遺伝子とされるATMとZFHX3が密接な関わりをもつことを見出した。詳しくは、ZFHX3が血小板由来成長因子受容体β以下、PDGFRBと略称するの活性化を介してATMの活性化に関与し、オートファジーの誘導ないし活性化が生ずるという、酸化ストレス下でのシグナル伝達経路の存在を明らかにした。理論に拘泥する訳ではないが、標的神経細胞における機能的ZFHX3タンパク質の増大は、本発明者らが見出したシグナル経路を活性化正に制御し、オートファジーの誘導ないし活性化を引き起こす。機能的ZFHX3タンパク質の安定化も同様にオートファジーの誘導ないし活性化に寄与する。本発明の治療薬の製剤化は常法で行うことができる。製剤化する場合には製剤上許容される他の成分例えば、担体、賦形剤、崩壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、無痛化剤、安定剤、保存剤、防腐剤、生理食塩水などを含有させることができる。賦形剤としては乳糖、デンプン、ソルビトール、Dマンニトール、白糖等を用いることができる。崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム等を用いることができる。緩衝剤としてはリン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等を用いることができる。乳化剤としてはアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。懸濁剤としてはモノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。無痛化剤としてはベンジルアルコール、クロロブタノール、ソルビトール等を用いることができる。安定剤としてはプロピレングリコール、アスコルビン酸等を用いることができる。保存剤としてはフェノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルパラベン等を用いることができる。防腐剤としては塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等と用いることができる。製剤化する場合の剤形も特に限定されない。剤形の例は錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、注射剤及び吸入剤である。本発明の治療薬には、期待される治療効果又は予防効果を得るために必要な量即ち治療上有効量の有効成分が含有される。本発明の治療薬中の有効成分量は一般に剤形によって異なるが、所望の投与量を達成できるように有効成分量を例えば約01重量~約95重量の範囲内で設定する。本発明の治療薬はその剤形に応じて経口投与又は非経口投与静脈内、動脈内、皮下、皮内、筋肉内、又は腹腔内注射などによって患者に適用される。これらの投与経路は互いに排他的なものではなく、任意に選択される二つ以上を併用することもできる例えば、経口投与と同時に又は所定時間経過後に静脈注射等を行う等。全身投与によらず、局所投与することにしてもよい。局所投与として、目的の組織への直接注入又は塗布を例示することができる。本発明の治療薬の投与量及び投与スケジュールは、期待される治療効果が得られるように設定される。治療上有効な投与量の設定においては一般に患者の症状、年齢、性別、及び体重などが考慮される。尚、当業者であればこれらの事項を考慮して適当な投与量を設定することが可能である。例えば、成人体重約60kgを対象として一日当たりの有効成分量が約001mg~約100mg、好ましくは約02mg~約10mgとなるよう投与量を設定することができる。投与スケジュールとしては例えば1日1回~数回、2日に1回、或いは3日に1回などを採用できる。投与スケジュールの作成においては、患者の症状や有効成分の効果持続時間などを考慮することができる。以上の記述から明らかな通り、本出願は、機能的ZFHX3タンパク質を増大又は安定化する化合物をAT患者に対して治療上有効量、投与するステップを含む、ATの治療法も提供する。本発明の治療法によれば、AT患者の小脳神経細胞内における機能的ZFHX3タンパク質が増大及び/又は安定化し、小脳での神経変性が抑制される。機能的ZFHX3タンパク質を増大する化合物としては例えばレチノイン酸が採用される。また、機能的ZFHX3タンパク質を安定化する化合物としては、PP2B阻害剤やカルパイン阻害剤等を使用できる。PP2B阻害剤の具体例はタクロリムスである。2.神経変性の予防又は治療に有効な化合物のスクリーニング法本発明の第2の局面は、ATに起因又は付随する神経変性、或いは神経過興奮に由来した酸化ストレスによる神経変性の予防又は治療に有効な化合物をスクリーニングする方法に関する。本発明のスクリーニング法で選抜される化合物は、それ自体又は必要な改変を加えた上で、AT等の神経変性疾患に対する治療薬の有効成分として、或いはAT等の神経変性疾患に対する治療薬を開発するためのリード化合物等として使用される。ATに起因又は付随するものであるか、又は神経過興奮に由来した酸化ストレスによるものである限り、本発明のスクリーニング法が標的とする神経変性に該当する。好ましい一態様では、ATの治療に有効な化合物を見出す手段として本発明のスクリーニング法は構成される。本発明のスクリーニング法では以下の~のステップを行う。複数匹の同種同系非ヒト哺乳動物を用意し、試験群と対照群に分けるステップ;試験群に対して、カイニン酸を投与するとともに被験物質を投与するステップ;ステップ後の試験群と、被験物質を投与しないこと以外は試験群と同様の処置を施した対照群について、脳内でのオートファジー又は神経変性を検定するステップ;試験群と対照群の間で検定結果を比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップであって、オートファジーの促進ないし誘導を認めること、又は神経変性の抑制を認めること、が被験物質の有効性の指標となる、ステップ。ステップでは複数匹の同種同系非ヒト哺乳動物を用意し、試験群と対照群に分ける。同種同系非ヒト哺乳動物としてマウス、ラット、モルモット、ハムスターを例示することができる。好ましくは、入手及び取り扱いが比較的容易なマウス又はラットを使用する。試験群及び対照群に含まれる個体数は特に限定されない。一般に使用する個体数が多くなるほど信頼性の高い結果が得られるが、多数の個体を同時に取り扱うことは使用する個体の確保や操作飼育を含むの面で困難を伴う。そこで例えば各群に含まれる個体数を1~50、好ましくは2~30、さらに好ましくは3~20とする。通常は試験群と対照群の個体数を等しくする。本発明の一態様では、野生型動物を用いて本発明のスクリーニング法を実施する。ここでの野生型とはATM遺伝子に関して野生型であること、即ち、正常なATM遺伝子を保有していることを意味する。慣例に従い、当該野生型動物をATMと表現することができる。他の態様として、ATM遺伝子欠損動物ATMノックアウト動物を用いたスクリーニング法が提供される。この態様はATの原因病態を反映させた動物を用いたものであり、ATに対する有効性や特異性が一層高い化合物の同定に有利である。ATM遺伝子欠損動物はホモ型でもヘテロ型でもよい。ATに対する特異性が高い化合物を同定するという目的の下では、ホモ型のATM遺伝子欠損動物を採用することが特に好ましい。尚、慣例に従い、ホモ型ATM遺伝子欠損動物及びヘテロ型ATM遺伝子欠損動物はそれぞれATM及びATMと表現することができる。ATM遺伝子欠損動物は、例えば、ジーンターゲティングを利用してATM遺伝子に点変異を導入すること又は点変異を含む変異型ATM遺伝子を導入することによって作製できる。ジーンターゲティングは遺伝子の相同組換えを利用してゲノムに改変を加える技術である。ジーンターゲティングを利用すれば、特定の遺伝子が欠損した動物ノックアウト動物を作製することができる。ジーンターゲティングを利用したノックアウト動物の作製法は、マウスの場合を例にとれば、大別してターゲティングベクターの構築、ES細胞へのターゲティングベクターの導入及び相同組換え体の同定、ブラストシストへの相同組み換え体の注入、仮親の子宮内への胚移植及び出産キメラ仔マウス、キメラ仔マウスと野生型マウスの交配F1世代であるヘテロ接合体マウスの産出、及びF1世代同士の交配F2世代であるホモ接合体マウスの産出からなる。ラットなど、他の齧歯類を用いた場合も同様の手順で遺伝子改変動物を得ることができる。尚、ジーンターゲティングによる遺伝子改変動物の作製法については例えばJoynerALGeneTargeting、CapeccchiMRScience24412881292、HuaGuetalScience265103106、McHughTJetalCell8713391349、ShibataHetalScience278120123等が参考になる。ステップでは試験群に対してカイニン酸を投与し、併せて被験物質を投与する。カイニン酸及び被験物質の投与態様は特に限定されないが、カイニン酸については例えば腹腔内注射、静脈内注射、脳質内投与等によって投与するとよい。操作の簡便性と安全性の点から、腹腔内注射による投与が特に好ましい。神経興奮に由来する神経障害ストレスを生じさせるためにカイニン酸が投与される。当該目的を達成できる限りにおいて、カイニン酸の投与量や投与回数は特に問わない。カイニン酸の投与回数及び投与量は使用する動物の種、体重等を考慮して設定することができる。投与回数の例は1~5回である。また、投与量の一例を示せば、マウスを使用した場合において短期間投与で30mgkg、1回/1日で3日まで、長期間投与で30mgkg、2日ごと2ヶ月間まで、である。尚、適切な投与回数、投与量は予備実験を通して決定することができる。試験群全体に同量のカイニン酸を投与するのではなく、投与量の異なる動物個体を用意することにしてもよい例えばカイニン酸の投与量が基準量の個体、2倍量の個体、5倍量の個体を用意する。この態様の場合、カイニン酸の投与量即ちカイニン酸刺激のレベルを考慮しつつ、後述のステップの検定及びステップの判定が行われる。被験物質の投与にあたっては、例えば被験物質を含む餌又は飲料水を用意し、これを摂取させる。或いは、被験物質又は被験物質を含む溶液を用意し、これを経口、経鼻、経気管、注射静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、腹腔内等によって投与する。被験物質を複数回投与することにしてもよい。その場合には各回の投与量は同一であっても異なっていても良い。継続的に投与することにしてもよい。被験物質は、カイニン酸の投与の前、カイニン酸の投与と同時、又はカイニン酸の投与の後に投与される。被験物質を複数回投与する場合についても、各回の投与の時期とカイニン酸の投与の時期との関係に特段の制約はない。例えば、カイニン酸の投与後、被験物質を所定の間隔をおいて複数回投与する。尚、対照群については被験物質を投与しないこと以外は同一の条件下で処理飼育する。被験物質としては様々な分子サイズの有機化合物又は無機化合物を用いることができる。有機化合物の例として、核酸、ペプチド、タンパク質、脂質単純脂質、複合脂質ホスホグリセリド、スフィンゴ脂質、グリコシルグリセリド、セレブロシド等、プロスタグランジン、イソプレノイド、テルペン、ステロイド、ポリフェノール、カテキン、ビタミンB1、B2、B3、B5、B6、B7、B9、B12、C、A、D、E等を例示できる。被験物質は天然物由来であっても、或いは合成によるものであってもよい。後者の場合には例えばコンビナトリアル合成の手法を利用して効率的なスクリーニング系を構築することができる。尚、植物抽出液、細胞抽出液、培養上清などを被験物質として用いてもよい。また、既存の薬剤を被験物質としてもよい。2種類以上の被験物質を同時に添加することにより、被験物質間の相互作用、相乗作用などを調べることにしてもよい。ステップでは、ステップ後の試験群と、被験物質を投与しないこと以外は試験群と同様の処置を施した対照群について、脳内でのオートファジー又は神経変性を検定する。このように本発明では、脳内でのオートファジー又は神経変性例えば小脳におけるプルキンエ細胞や小脳深部核神経細胞等の変性脱落が検定される。オートファジーと神経変性の両者を検定することにしてもよい。検定に供される脳部位の具体例は、小脳、大脳皮質、海馬である。好ましい一態様では小脳を検定に供する。また、カイニン酸による刺激に対して小脳深部核が顕著な反応性を示したという知見を考慮し後述の実施例を参照、好ましくは、小脳深部核に関してオートファジー又は神経変性の検定を行う。ここでオートファジーとは、プロテアソーム系と並ぶ主要な細胞内分解機構である。オートファジーは生体の恒常性維持に関与する。また、感染防御や細胞死、老化、癌化、神経変性などにもオートファジーが関与していることが明らかになってきている。一方、神経変性は、神経細胞の変性脱落と同義である。オートファジーを検定するためには、例えばオートファジー関連因子の量、ATMの活性化量又は空胞形成の程度を検出すればよい。これらの検出対象はいずれもオートファジーのマーカーとなり、オートファジーの促進ないし誘導を反映してその量ないし程度が増大する。オートファジー関連因子として微小管関連タンパク質軽鎖3LC3、GABAA受容体結合タンパク質GABARAP及びはゴルジ関連ATPアーゼエンハンサーGATE16を例示することができる。検出対象に応じて、免疫組織化学、ウエスタンブロット解析が利用される。尚、ホモ型のATM遺伝子欠損動物を用いて本発明のスクリーニング法を構築した場合には、ATM遺伝子の発現が見られないことから、オートファジー関連因子の量又は空胞形成の程度を検出することになる。神経変性の検定には、例えばTUNEL染色や活性型カスペース3Caspase染色等の免疫組織化学を利用できる。TUNEL染色及び活性型カスペース3Caspase染色については専用のキットが市販されている。当該キットを利用すれば神経変性を定量的に検定評価することも可能である。ステップでは、試験群と対照群の間で検定結果を比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定する。本発明では、判定の際、オートファジーの促進ないし誘導を認めること指標1、又は神経変性の抑制を認めること指標2を、被験物質の有効性の指標とする。換言すれば、オートファジーの促進ないし誘導の程度が対照群よりも試験群で高いとき指標1に基づく判定又は神経変性の抑制の程度が対象群よりも試験群で高いとき指標2に基づく判定、被験物質が有効であると判定する。ステップにおいて、脳内でのオートファジーを検定することにした場合には指標1が採用される。他方、ステップにおいて、脳内での神経変性を検定することにした場合には指標2が採用される。有効性を認めた複数の被験化合物を用いて再度ステップ~を行い、有効性の高い物質の絞り込みを行うことにしてもよい。本発明のスクリーニング法によって選択された物質が十分な薬効を有する場合には、当該物質をそのまま治療薬等の有効成分として使用することができる。一方で十分な薬効を有しない場合には化学的修飾などの改変を施してその薬効を高めた上で、治療薬等の有効成分として使用することができる。勿論、十分な薬効を有する場合であっても、更なる薬効の増大を目的として同様の改変を施してもよい。ところで、これまでにもATM遺伝子欠損マウスATMマウスを用いて神経変性を誘導する実験研究が行われている。但し、従来の方法では、X線照射によってDNA損傷刺激を与え、神経変性を誘導している。このような誘導法は、神経興奮という神経本来の機能に付随する神経変性メカニズムとは無関係な刺激であり、治療薬の開発には結びつかない。換言すれば、ATM遺伝子欠損マウスを用いた従来のアッセイ系は治療薬の開発に有用とはいえない。対照的に、本発明で採用するカイニン酸刺激は、DNA損傷と独立した即ち、DNA損傷とは関係のない本来の神経興奮に由来する神経障害ストレスであるといえることから、神経変性の評価系として、治療薬の開発などに有用である。特に、小脳機能に特化した神経変性の評価系として、小脳での神経変性を伴う疾病に対する治療薬の開発などにおいて有用である。このように本発明のスクリーニング法は有用性及び実用性の点で従来の技術とは比較にならないほど優れたものである。尚、カイニン酸刺激が海馬神経に神経障害を与えることは既知でありScience2626896951993、それ自体は新しいことではない。本発明において重要なことは、カイニン酸が小脳深部核DCNに存在するニューロンの過剰興奮を引き起こすという、カイニン酸刺激に対する小脳の反応を明らかにしたことであり、当該成果があったからこそ、有用性及び実用性に優れた本発明のスクリーニング法を完成することができた。小脳の出力系のニューロンに着目することで完成し得た本発明のスクリーニング法は、小脳機能に特化した神経変性の定性的或いは定量的な評価に特に有用であり、小脳での神経変性の抑制ないし阻害に有効な物質の探索同定を可能とする。ZFHX3の機能とAT患者が持つ多彩な臨床症状との密接な結びつきに着目し、ZFHX3の発現制御及びその標的遺伝子群に焦点をあてた網羅的な解析を行った。1.方法1細胞培養P19マウス胎児性癌細胞株をαMEMで維持したRudnickiandMcBurney1987。神経細胞への分化を誘導するために、P19細胞を凝集体の状態で、05μMのオールトランス型レチノイン酸RASigma社及び10ウシ胎仔血清FBSを添加した培養液で4日間培養した。続いて、1のFBS含有αMEMRAは含まないを培養液として、001ポリLリジンP8920Sigma社をコートしたスライドガラス上で3時間、そして1μgmlウシ胎仔血漿フィブロネクチンInvitrogen社をコートしたスライドガラス上で終夜、室温にて細胞を培養した。必要な場合には、ATMキナーゼ阻害剤のKU559332morpholin4yl6thianthren1ylpyran4one2morpholino6thianthren1yl4Hpyran4oneCalbiochem社10μMを毎日培養液に添加し、そして、PDGFRB及びVEGFR2の特異的阻害剤であるAG1433234dihydroxyphenyl67dimethylquinoxalineCalbiochem社を過酸化水素水の添加30分前に所定の濃度005051050μMで添加した。2マウス野生型及びATMノックアウトマウスハーバードメディカルスクールのPLeder氏より供与を周囲条件下23°C、湿度55、所定の明暗サイクルで飼育した。ゲノムDNAを尾先端より採取し、PCRによってAtm遺伝子を増幅させた。PCRには以下のプライマーを使用した。KO1F:5TGGTCAGTGTAACAGTCATTGTGC3配列番号5KO1R:5AAGGTTGTAGATAGGTCAGCATTG3配列番号6KO2R:5AACGAGATCAGCAGCCTCTGTTCC3配列番号7プライマーKO1Fはエクソン34の220bp上流イントロン34に位置し、プライマーKO1Rはエクソン34内の123bpに位置し、プライマーKO2RはPGKneoのポリA領域内の87bpに位置する。これらのプライマーを使用した場合のPCR産物の長さは、野生型マウスの場合は342bpであり、Atmマウスの場合は406bpとなる。カイニン酸2carboxy3carboxymethyl4isopropenylpyrrolidineEnzoLifeScience社をオスDDYマウスに投与した30mgkg、腹腔内投与ip。4パラホルムアルデヒドを使用した灌流固定後に3月齢のマウスから脳全体を摘出した。妊娠ラットStdWisterSTにBrdU5bromo2deoxyuridine50mgkgを3時間投与し、E145の胚を標識化した。続いて胚を摘出し、その脳を4パラホルムアルデヒドで固定した後、パラフィン包埋した。3X線照射X線装置CAX210株式会社中部メディカルを用い、細胞、マウスにX線10Gyを照射した210kV、10mA、4分45秒、銅シールド。4トランスフェクション及びプラスミド一連のルシフェラーゼリポータープラスミドを構築するため、SalI及びBamHIを使用し、様々な長さのヒトZFHX3プロモータ領域をpBluescriptIIKSAgilentTechnologies社、Stratagene社製品にクローニングした。ZFHX3プロモータ領域を含むBssHIIBamHI断片をpGVB基本ベクター東洋ビーネット株式会社のMluIサイトとBglIIサイトの間、ルシフェラーゼ遺伝子の5プライム位置にサブクローニングした。以下のプライマーセットを用いたPCRによる部位特異的変異導入法により、10kbpのZFHX3プロモータ内のCREサイトに変異を導入した。pGVFpGVB内ルシフェラーゼ遺伝子の5隣接配列を含むフォワードプライマー5CAATGTATCTTATGGTACTG3配列番号8mCRERCREサイトへの変異導入用のリバースプライマー5CGGAAATGACCACAGCAAAG3配列番号9mCREFCREサイトへの変異導入用のフォワードプライマー5CTTTGCTGTGGTCATTTCCG3配列番号10pGVR1pGVB内ルシフェラーゼ遺伝子の最初のATGコドンを含むリバースプライマー5CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCC3配列番号11pGVR2pGVB内ルシフェラーゼ遺伝子のpGVR1プライマーよりさらに35bp下流に位置するリバースプライマー5CCATCCTCTAGAGGATAGAATG3配列番号12pGVF及びmCRERを使用したPCR産物とmCREF及びpVGR2を使用したPCR産物を得た。一部で重複する、これら一次産物を一緒に変性させ、pGVF及びpGVR1を用いて再び増幅させた。その結果得られたPCR産物をMluI及びHindIIIで処理した後、pGVB基本ベクターの同一クローニングサイトにサブクローニングした。CREBドミナントネガティブ発現ベクターpCMVCREB133はClontech社カタログ番号631925から購入した。5免疫組織化学4パラホルムアルデヒドPFA固定パラフィン包埋組織から切り出した4μm断片を使用した。組織断片を脱パラフィン及び再水和処理した後、クエン酸バッファー001M、pH60内で加熱処理したZFHX3免疫染色用では圧力釜使用、110°C。ATM免疫染色用では電子レンジ使用、98°C。PDFGRBの免疫染色については、熱賦活処理を行わなかった。染色は室温で行った。内在性ペルオキシダーゼ活性を阻害するため、全ての組織断片を03過酸化水素及び10アジ化ナトリウムを含むメタノールでインキュベートした。続いて、一部の組織断片について、マウス抗ATMSer1981リン酸部位pSATMモノクローナル抗体1200倍希釈、7C10D8Rockland社とともにインキュベートした後、ホースラディッシュペルオキシダーゼHRP標識抗マウスIgG抗体EnvisionlabeledpolymerDakoCytomation社とともにインキュベートした。同様に、一部の組織断片については、ウサギ抗ZFHX3ポリクローナル抗体50倍希釈、D1120株式会社医学生物学研究所とともにインキュベートした後、HRP標識抗ウサギIgG抗体EnvisionlabeledpolymerDakoCytomation社とともにインキュベートした。また、一部の組織断片については、ヤギ抗マウスPDGFRBポリクローナル抗体100倍希釈、RDSystems社とともにインキュベートした後、HRP結合抗ヤギIgG抗体MAXPOG株式会社ニチレイとともにインキュベートした。インキュベート条件は、一次抗体及び二次抗体いずれについても、室温、1時間とした。免疫反応産物をジアミノベンジジンで可視化した。BrdU標識及び検出にはロッシュ社のキットを用いた。組織断片をヘマトキシリンで対比染色した。6免疫細胞化学4PFAを含むPBSに細胞を室温にて20分間浸漬し、固定した。その後、025TritonXを含むPBSで洗浄し、10正常ヤギ血清でブロッキングした。続いて、細胞を室温にて1時間、一次抗体ウサギ抗ZFHX3ポリクローナル抗体100倍希釈、マウス抗βチューブリンアイソタイプIIIモノクローナル抗体500倍希釈、3D10Sigma社、抗ATMSer1981リン酸化サイトpSATMモノクローナル抗体1100希釈、10H11E12Rockland社、ウサギ抗γH2AXポリクローナル抗体1100希釈、BETHYL社と反応させた。025TritonXを含むPBSで3回洗浄した後、二次抗体マウスモノクローナル抗体用にAlexaFluor488標識ヤギ抗マウス抗体、ウサギポリクローナル抗体用にAlexaFluor546標識ヤギ抗ウサギ抗体を1時間反応させ、細胞を可視化した。その後、PBSで2回洗浄した後、20μgmlDAPI1mgml溶液を500倍希釈、和光純薬株式会社で5分間、核染色した。7ウエスタンブロット細胞を洗浄バッファー10mM01Mリン酸バッファー、250mMシュークロース及び50mMNaFを含むで洗浄し、TNEバッファー20mMTrisHClpH74150mMNaCl2mMEDTA1NonidentP4050mMNaFを用いて全細胞ライセートを調製した。タンパク質を15分間氷上でインキュベートした後、15000g、4°Cで30分間、遠心処理した。上清を回収し、80°Cで保存した。ブラッドフォード法BioRad社にて全タンパク質を定量した。タンパク質の検出のため、サンプル中のタンパク質を5~20の濃度勾配を有するポリアクリルアミドゲルで分離し、PVDF膜Millipore社に転写した。次に、転写後の膜を3BSAを含むトリス緩衝液005Tween20含有:TBSTで1時間ブロッキングした後、TBSTで洗浄した。続いて、室温にて1時間、一次抗体マウス抗αチューブリンモノクローナル抗体8000倍希釈、B512Sigma社、ウサギ抗ZFHX3抗体2000倍希釈、AT6株式会社医学生物学研究所、マウス抗HAタグモノクローナル抗体500倍希釈、5D8株式会社医学生物学研究所、マウス抗ATMモノクローナル抗体200倍希釈、5C2SantaCruz社、マウス抗pSATMモノクローナル抗体1000倍希釈、10H11E12Rockland社、ヤギ抗PDGFRBポリクローナル抗体1000倍希釈、RDSystems社、ウサギ抗カスパーゼ3ポリクローナル抗体1000倍希釈、AAP113AssayDesigns社と反応させた。TBSTで洗浄した後、ペルオキシダーゼ標識二次抗体マウスモノクローナル抗体用に抗マウスIgG抗体10000倍希釈、抗マウスIgGHLchainHRP株式会社医学生物学研究所、ウサギポリクローナル抗体用に抗ウサギIgG抗体5000倍希釈、抗ウサギIgGHLchainHRP株式会社医学生物学研究所、ヤギポリクローナル抗体用に抗ヤギIgG抗体5000倍希釈、抗ヤギIgGHLchainHRP株式会社医学生物学研究所を室温にて1時間、反応させた。TBSTで洗浄後、免疫反応をAmershamECLPluswesternblottingdetectionreagentsGEHealthcare社で可視化した。8RNA抽出及びRTPCR分析Trizol試薬Invitrogen社を用いて全RNAを細胞から単離した。ReadyToGoYouPrimeFirstStrandBeadskitGEHealthcare社を用い、1μgの全RNAからcDNAを調製した。qPCRMasterMixPlusforSYBRGreenEurogentec社を用いてリアルタイムPCRを行った。操作方法は添付の説明書に従い、95°Cで10分間のインキュベーションの後、40サイクルの増幅95°Cで15秒間、60°Cで1分間、72°Cで45秒間、80°Cで15秒間とし、SYBRGreenを検出した。使用したプライマーは以下の通りである。Gapdh:5TGTGTCCGTCGTGGATCTGA3配列番号13及び5CCTGCTTCACCACCTTCTTGA3配列番号14Zfhx3:5TTCTTTTCCTCCTCTCTCCTCATC3配列番号15及び5CGGTCCGTCGGACTTTTG3配列番号16Col3a1:5GCACAGCAGTCCAACGTAGA3配列番号17及び5TCTCCAAATGGGATCTCTGG3配列番号18Itga8:5AGTGGGAGGACCTGGAAGTT3配列番号19及び5AGTGGGAGGACCTGGAAGTT3配列番号20Pdfgrb:5AACCCCCTTACAGCTGTCCT3配列番号21及び5TAATCCCGTCAGCATCTTCC3配列番号22GapdhmRNAの発現量を用いて各遺伝子の発現量を補正した。ABIPrism7500fastSequenceDetectionSystemAppliedBiosystemsa社のユーザーガイドUserBulletin2を用い、比較CT2ΔΔCT法で各増幅産物の相対量を求めた。9統計ルシフェラーゼアッセイ及びウエスタンブロットの結果については、ボンフェローニ補正マンホイットニー検定によって統計解析した。少なくとも3回の独立した実験を行い、平均±sem標準誤差で全ての数値を表した。P値が001未満の場合に有意差ありとした。RTPCRの結果は、Gapdhの発現レベルで補正し、コントロールの発現レベルと比較した。スチューデントのt検定で統計的有意差P0001を評価した。10Thapsigargin処理による神経過興奮モデル神経細胞への分化を誘導したP19細胞をThapsigargin2μM、1時間で処理し、Ca2濃度を上昇させるストレス神経過興奮を与えた。この神経過興奮モデルを用い、FK506タクロリムスの効果を検討した。FK506による処理の方法は次の通りとした。即ち、P19細胞の培養中の7日間にわたって毎日、培地交換時に最終濃度20nMとなるようにFK506を培地に添加した。2.結果<ZFHX3プロモータはATMの活性化に反応してCREBにより活性化される>レチノイン酸RAはHoxホメオティック遺伝子の発現に影響する。マウス胚の後脳及び鰓部の神経幹細胞におけるHox遺伝子の発現は特にRAに感受性が高いMarshalletal1996。ヒト細胞やマウス胎仔性癌細胞を用いた、RAによる神経への分化誘導法が確立されているAndrewsetal。RA処理による遺伝子発現制御には、標的遺伝子内の特定の配列モチーフレチノイン酸応答エレメントRAREsと呼ばれるを認識する核内レチノイン酸レセプターRARs又はRXRと呼ばれるが関与するMarshalletal1996。ZFHX3遺伝子は、胎児脳における分裂後ニューロンで発現される非クラスターホメオティック因子であるJungetal2005。重要なことは、プロモータがRAREsを含まないにも拘わらず、ZFHX3遺伝子の発現はRAで誘導されることであるMiuraetal1995。最近になって、神経分化に関与する新たなRA経路、即ちATM及びcAMP応答エレメント結合タンパク質CREBに依存する経路が同定されたFernandesetal2007。注目すべきことに、本発明者らの検討の結果、ヒトZFHX3遺伝子プロモータの5隣接配列内にCREB結合エレメントCREがあることが明らかとなった。この事実から、ATM及びCREBの活性化を介したRAからのシグナルが、ZFHX3遺伝子の発現開始に重要な役割を果たしていると予想される。本発明者らは様々な長さのヒトZFHX3遺伝子プロモータをリポーター遺伝子ルシフェラーゼ遺伝子の上流にクローニングした図1B。そして、これらのコンストラクトでマウス胎仔性癌細胞株P19を一過性にトランスフェクトし、RAによる刺激の存在下及び非存在下でレポーター活性を測定した。その結果、RAは濃度依存的にニューロン特異的56kbプロモータを活性化した図1Bの56。一方、5側16kbを欠失させると基礎レベルRAに反応しない042kbのプロモータの場合の活性レベル。図1Bの042までプロモータ活性が低下した図1の40。CREコンセンサス配列を含む16kb配列を042kbプロモータ配列の5側に付加するとRAへの反応が顕著に増加した図1Bの56Δ。ATM特異的キナーゼ阻害剤KU55933で前処理すると、この反応は認められない図1C。ニューロンの分化に関して重要な生存因子であるCREBの関与を確認するために、133番セリンがアラニンに変異された変異CREBタンパク質を発現するpCMVCREB133ベクターを用い、ドミナントネガティブCREBdnCREBを過剰発現させた。CREBの当該変異はプロテインキナーゼAによるCREBのリン酸化を阻害し、cAMPの活性化を抑制する。dnCREBを発現する細胞ではRA処理後のRA応答プロモータコンストラクトのトランス活性化が有意に抑制された図1Dの56Δ。また、プロモータ内のCREB結合サイトの変異によって、dnCREBの発現の有無に関係なく、RAに反応したプロモータの活性化が阻害された図1Dの56Δmut。これらの結果は、ATM及びCREB経路の活性化が、RAによるニューロン特異的ZFHX3遺伝子プロモータのトランス活性化のメカニズムであることを示唆する。CREに加え、活性因子のマルチプルコンセンサスエレメントを含むことから、56kbプロモータ配列に最大のプロモータ活性が認められるものと予想された。しかしながら、56kbプロモータの活性は、短いCRE含有フラグメント56Δの活性よりも低かった。この事実は負の調節エレメントがプロモータ内に存在することを示唆する。<酸化ストレス応答性のATM活性化には膜受容体が必要である>Pdgfrb遺伝子変異マウスは、明らかな解剖学的異常を示すことなく成長するが、その脳はNメチルDアスパラギン酸NMDA又は凍傷に対して脆弱であるIshiietal2006。このことはグルタミン酸作動性興奮毒性からニューロンを保護するためにPDGFRBの発現が重要であることを示唆する。PDGF受容体とインテグリンによって受容体のクラスタリングが生じ、PDGFの結合量が増加し、PDGF受容体が活性化するZemskovetal2009。インテグリン及びPDGFRBの発現誘導において、ZFHX3が重要な役割を果たすかもしれない。酸化ストレスは、いくつかの成人神経変性疾患や脳卒中、トラウマ、発作などの原因因子或いは少なくとも補助的因子であるCoyleandPuttfarcken1993。また、酸化ストレスはAT変異マウスのプルキンエニューロンの不完全な生存の主要原因の一つと考えられているChenetal2003。酸化ストレスは様々な細胞においてPDGFRB介在性のATMキナーゼ活性化を引き起こすChenetal2003。新たに同定されたPDGFRB介在性シグナル経路は興奮毒性のメカニズムを理解する上で重要と考えられる。そこで、過酸化水素による酸化ストレスの存在下でP19由来ニューロン様細胞においてPDGFRBがATMの活性化に関与するか否かを調べることにした。Ser1981のリン酸化を指標に評価した結果、ATMの速やかな活性化を認めた100μMの過酸化水素添加後15分以内図2A。過酸化水素の添加量に応じてATMの活性化量は上昇した図2B。また、酸化ストレスに反応した当該ATMの活性化はPDGFRB及びVEGFR2の特異的阻害剤であるAG1433によって顕著に抑制された。図2CD。対照的に、X線照射に反応したATMの活性化はAG1433の添加によって影響を受けない図2EF。以上の結果は、神経細胞における酸化ストレス下でのATMの活性化にこれらの膜受容体が重要な役割を果たしていることを示す。<神経興奮に反応してATMは細胞質内で活性化される>DNA損傷ストレスに反応して活性化されたATMは核点状構造nuclearfociに局在する。しかしながら、低張刺激やクロロキン処理或いはRA刺激に反応して活性化したATMは、びまん性に広がるパターンを示す。本発明者らの検討したところ、酸化ストレス誘導性DNA二重らせん切断DSBに反応して活性化したATMの核点状構造を認め、それはDNA二重らせん切断のマーカーであるγH2AXとともに局在していた図3。最近になって、酸化ストレスに反応して細胞質内でATMが活性化されることが報告され、この活性化は核での活性化と独立したものであることが示された。本発明者らの検討では、当初、負荷する酸化ストレスの量に問題があり、核でのATMの活性化と細胞質でのATMの活性化を区別することはできなかった図3。そこで、細胞質内でのATMの活性化を検討するため、より生理的条件に近い酸化ストレス条件を設定した。ニューロンでは様々な因子が酸化ストレスを引き起こすが、脳での興奮毒性を誘導する因子としては神経伝達物質のグルタミン酸が最も重要である。カイニン酸KAは、非NMDA型グルタミン酸受容体選択的なグルタミン酸受容体アゴニストである。そこで、マウスニューロンにおける代謝性酸化ストレスを誘導するため、KAによる刺激を使用することにした。KA刺激はマウスに2種類の発作を引き起こす。一つは頭部を繰り返し曲げる動作である。もう一つは異常な筋収縮であり、マウスの大脳皮質、海馬及び小脳深部核DCNでのATMの活性化を引き起こす図4。γH2AXの誘導がないと図5A2、図6活性化ATMは主に細胞質に存在することが明らかとなった図5A1、図6。対照的に、X線照射はDNA損傷ストレスを引き起こし、その場合の活性化ATMはγH2AXの点状構造図5B2、図6を伴い核に局在した図5B1、図6。KA刺激によって、DCN内のニューロンに明確な液胞の形成を認めた。<ATMノックアウトマウスのDCNでのPDGFRBの抑制>神経への分化前及び分化後のP19細胞における、ZFHX3とPDGFRBの発現との関係をより詳細に調べることにした。ニューロンへ終末分化したP19ニューロン様細胞7日目においてZFHX3及びPDGFRBタンパク質の発現が顕著に上昇していた図7A。insituハイブリダイゼーションによるスクリーニング解析の結果、PDGFRBはDCNで高発現していた。免疫組織化学の結果では、成体コントロールマウス脳DCNにおける大型ニューロンにZFHX3図7C4C5及びPDGFRB図7C6C7の明瞭な染色を認めた。一方で、ATMノックアウトマウスではいずれのタンパク質の発現も強力に抑制された図7C11C14。ラット胚において、増殖細胞図7B2iと分裂後細胞図7B2iiを識別するためにBrdU染色を行った。分裂後ニューロンにおける、ZFHX3の発現とPDGFRBの発現の相関性は、神経分化モデルを使用したマイクロアレイ解析の結果に符合した。ATMノックアウトマウスのDCNにおいてPDGFRBが抑制されていた事実は、小脳での特定神経変性のメカニズムを説明する上で重要といえる。<FK506の投与によって神経細胞死を抑制することができる>神経細胞へ分化誘導させたP19細胞をThapsigarginで処理し、Ca2濃度を上昇させるストレス神経過興奮を与えた。FK506を投与すると、当該ストレスによって誘導されるカスパーゼ3の活性化が抑制された図10、レーン4。即ち、FK506の投与によって神経細胞死が抑制された。<FK506の投与によってZFHX3の分断化が抑制できる>Thapsigargin処理によるストレスがZFHX3タンパク質に与える影響を調べるため、抗ATBF1抗体で免疫沈降したタンパク質をAT6抗体でウエスタンブロット解析した。その結果、Thapsigargin処理によって生ずるZFHX3タンパク質の分断化をFK506が有意に抑制した図11、レーン6。<FK506の投与によってZFHX3の脱リン酸化が抑制できる>Thapsigargin処理によるストレスがZFHX3タンパク質のリン酸化に与える影響を調べるため、ProQDiamondphosphoproteinstainkitを用いた検定を行った。その結果、Thapsigargin処理によって生ずるZFHX3タンパク質の脱リン酸化をFK506が抑制した図12、レーン14。以上の結果より、免疫抑制剤として知られるFK506が、神経過興奮による神経細胞死を抑制できることが明らかになるとともに、その作用機序は脱リン酸化の抑制リン酸化状態の維持を通してZFHX3の分断化を防ぐことにあるとの知見が得られた。3.考察ATMが細胞質内で活性化する現象は、神経細胞が酸化ストレスを受けた場合の防御シグナルとして重要な意味を持つことを明らかにした。以前にも神経細胞を含む各種細胞の観察結果として、核ではなく細胞質内でATMが活性化する現象が報告されているKuljisetal1999;Barlowetal1996;Boehrsetal2007;Gorodetskyetal2007。神経細胞で観察された、細胞質内でのATMの活性化はシナプスの機能と関係している可能性が示唆されているLietal2009。シナプスに存在する小胞ではATMがVAM2やシナプシン1と結合した状態で存在する。ATMが核内タンパク質としての機能以外に細胞質タンパク質として機能していることを示す数々の研究論文が出されるようになり、細胞質内で活性化するATMは細胞の防御機構として機能している可能性が予想されるようになった。Alexanderらは細胞が酸化ストレスを受けた際にATMが活性化してmTORの抑制シグナルとして機能することを示したAlexanderetal2010。mRORC1複合体の機能を抑制することによりオートファジー反応が誘導される。この細胞質内のシグナル伝達系は、核で進むDNAの二重鎖切断反応からのシグナルとは関わりのないことが示されている。Alexanderらは酸化ストレスに反応して、どのようにATMが活性化するのか、その未知のメカニズムについて実証的な根拠を与えることができなかったが、強い酸化反応でATMを構成するタンパク質のスルホニル基が修飾を受けることで、ATM自身の高次構造が変化することが、ATM自身の活性化の引き金になっている可能性を提唱した。本発明者らは、P19細胞をレチノン酸刺激で神経分化誘導する実験モデル系を使い、ZFHX3の遺伝子発現誘導されるシグナル伝達系を解明した。RA刺激はATMの活性化を誘導し、そして、活性化したATMがCREBを活性化する。CREBはZFHX3の遺伝子プロモータ上にあるCREのコンセンサスDNA配列に結合して、標的遺伝子であるZFHX3遺伝子の転写を活性化する。本発明者らはZFHX3の標的遺伝子の網羅的検索実験も行い、細胞接着因子の遺伝子群を同定した。ZFHX3の標的遺伝子の中にはPDGFRBも含まれている。PDGFRBは結合組織間の細胞接着因子との相互作用で重要な受容体であるばかりでなく、神経細胞がグルタミン酸刺激による興奮等に由来する酸化ストレスを受けた状況下での神経保護作用のためのシグナル伝達系において重要な役割を演じる受容体であるIshiietal2006。本発明者らはPFGFRBまたはVEGFR2からのシグナルが神経細胞の酸化ストレス反応の際、ATMの活性化の必須因子になることを実験的に証明した。本研究で用いた、P19細胞をレチノン酸刺激で神経分化誘導する実験モデル系において、ZFHX3の発現誘導に同期してPdgfrbとVegfr2のmRNAの発現上昇を確認している。神経細胞中はその中に抗酸化物質が少ないにもかかわらず、神経興奮に由来する酸化ストレスに暴露され続けるBrooksetal2000。従って、十分な防御系を持たなければ酸化ストレスのために長期間生存することが難しい。酸化ストレスが生じた場合に迅速に反応する必要があり、細胞膜上の受容体から細胞内に情報を伝達して防御反応を誘導することは、神経細胞が長期間生存し続けるために非常に大切なメカニズムになっている。本発明者らは酸化ストレスを受けた神経細胞の細胞質内でATMが活性化する事実を明らかにした。神経細胞の興奮に起因する生化学反応産物が必然的に酸化ストレスを引き起こす。繰り返される神経興奮よって引き起こされる酸化ストレスは慢性的に進行する神経変性の主因となり、或いは少なくともその副次的な原因になっているCoyleandPuttfarcken1993。本発明者らは、酸化ストレスが細胞質でATMを活性化するシグナル伝達系において、PDGFRBまたはVEGFR2の活性化が必須であること解明した。神経興奮よって細胞内に酸化ストレスが生じても、ATMノックアウトマウスでは小脳深部核にPDGFRBが発現していないために、細胞内で酸化ストレスに対応するためのシグナル伝達系が作動しない状況にあると考えられる。本発明者らは、マウスを使用したカイニン酸刺激実験で神経細胞に強い酸化ストレスを誘導した結果、小脳深部核のニューロンに顕著な空胞形成が生じることを見出した図4B3。小脳深部核にあるニューロン群にはPDGFRBが強く発現している図5C6C7。小脳深部核のニューロンは主要な小脳の出力系中継場所として重要な役割を担っている。プルキンエ細胞と直接的にシナプスで繋がり、抑制シグナルを受け取っている。もしも小脳深部核ニューロンが障害を受けて消失すると、直結していたプルキンエ細胞との繋がりが障害され、その結果プルキンエ細胞は小脳深部核のニューロンから神経栄養因子を受け取れなくなり、プルキンエ細胞の変性が進む要因になる。プルキンエ細胞と小脳深部核との機能的な繋がりがATの病態に密接に関与すると考えられる。カイニン酸刺激によって生じた、DCNにおける細胞質内のATM活性化は、過剰な神経興奮によってニューロン内に生じた酸化ストレスに対する保護的な応答反応と思われる。DCNに認められた空胞形成は、細胞質でのATMの活性化がmTORの抑制を介してオートファジーを誘導するという事実Alexanderetal2010に関連しているであろう。DCNでは、カイニン酸処理に反応して、オートファジーの指標となる微小管関連タンパク質軽鎖3LC3の顕著な蓄積を認めた図8。オートファジー反応は障害を受けた細胞内小器官などを小胞に包んで酵素分解する反応であるので、かつては急性の神経細胞死の反応であると考えられていたWangetal2008。しかし最近の研究によると、オートファジー反応は神経細胞死を導く反応というよりも、むしろ障害した細胞内小器官をきれいに分解/清掃して、細胞を生存維持するために必要な反応であると考えられるようになった。パーキンソン病の神経細胞では、オートファジー反応が障害され、障害を受けたままのミトコンドリアが蓄積することが神経細胞死を引き起こす原因になっていることが知られているNarendraetal2008。マイクロアレイによる網羅的発現解析によって、ZFHX3の標的遺伝子群としてプロコラーゲン遺伝子群プロコラーゲンII型を除くを同定した。ZFHX3は細胞外マトリックスの産生をコントロールして組織障害修復に関連する転写調節因子である。尚、プロコラーゲンII型は関節軟骨に特異的な因子であるのでCheahetal1985、今回用いた神経分化誘導の実験系モデル系ではプロコラーゲンII型の発現量に全く変化がなかったことは当然といえる。PDGFRBは外科的な損傷を受けた組織周囲にある血管で発現量が顕著に上昇するReuterdahletal1993。PDGFRBは組織修復過程で重要な機能を担っていると考えられている。ZFHX3はプロコラーゲン類とPDGFRBの両方の遺伝子を同時に転写活性化する機能を有し、組織損傷治癒過程できわめて重要な遺伝子調節因子であると言える。ZFHX3が機能障害に陥ると、血管系の疾患が惹起される可能性がある。事実、最近の研究報告によると、ZFHX3の変異は川崎病や心房細動や虚血性心疾患を起こす遺伝的背景になっているBurgneretal2009;Benjaminetal2009;Gudbjartssonetal2009。大規模な疫学調査結果から考察すると、ZFHX3は障害を受けた血管系の治癒過程に必要な重要な転写因子であることが分かる。コントロールマウスの小脳ではPDGFRBが強く発現しているにも関わらずLeinetal2007、ATMノックアウトマウスの小脳ではその発現量が低下していることは、AT患者の小脳では組織損傷治癒反応が起こりにくいために神経変性に陥る危険性が生じていることを示している。以上の知見を図9として纏める。ATMの活性化経路として3種類の異なるシグナル伝達系がある。第一はDNAのDSBsに由来する核内のDNA二重鎖切断が起こす局所のATM活性化である。第二はレチノイン酸刺激Fernandesetal2007に誘導されて、核内にびまん性に広がるATMの活性化BakkenistandKastan2003である。第三は酸化ストレスに誘導されて、細胞質で起こるATMの活性化であるAlexanderetal2010。酸化ストレス反応で起こるATMの活性化は、神経興奮で必然的に誘導される酸化ストレスとの関連において非常に重要である。本発明者らは細胞質で起こるATMの活性化反応にとって膜受容体型のチロシンリン酸化酵素のシグナルが必須であることを発見した。細胞質で起こるATMの活性化シグナルは、従来知られていた核内のDNA損傷ストレスに起因するATMの活性化シグナルとは独立したシグナルである。酸化ストレスに起因するATMの活性化シグナルは、mTORの抑制を介してオートファジー反応を誘導する。オートファジー反応は障害を受けた細胞内小器官を清掃して細胞機能を生理的に維持するために必要な反応である。以上を総合すると、細胞質で活性化するATMのシグナル伝達系は、酸化ストレスを受けた神経細胞を慢性的な神経変性から保護するためのメカニズムを起動するために重要な役割を演じていると言える。<参考論文>AlexanderACaiSLKimJNanezASahinMMacLeanKHInokiKGuanKLShenJPersonMDetalATMsignalstoTSC2inthecytoplasmtoregulatemTORC1inresponsetoROSProcNatlAcadSciUSA10741534158AltermanNFattalValevskiAMoyalLCrawfordTOLedermanHMZivYandShilohYAtaxiatelangiectasiamildneurologicalpresentationdespitenullATMmutationandseverecellularphenotypeAmJMedGenet143A18271834AndrewsPWRetinoicacidinducesneuronaldifferentiationofaclonedhumanembryonalcarcinomacelllineinvitroDevBiol103285293AndrewsPWDamjanovISimonDBantingGSCarlinCDracopoliNCandFoghJPluripotentembryonalcarcinomaclonesderivedfromthehumanteratocarcinomacelllineTera2DifferentiationinvivoandinvitroLabInvest50147162BakkenistCJandKastanMBDNAdamageactivatesATMthroughintermolecularautophosphorylationanddimerdissociationNature421499506BaninSMoyalLShiehSTayaYAndersonCWChessaLSmorodinskyNIPrivesCReissYShilohYetalEnhancedphosphorylationofp53byATMinresponsetoDNAdamageScience28116741677BarlowCHirotsuneSPaylorRLiyanageMEckhausMCollinsFShilohYCrawleyJNRiedTTagleDetalAtmdeficientmiceaparadigmofataxiatelangiectasiaCell86159171BenjaminEJRiceKMArkingDEPfeuferAvanNoordCSmithAVSchnabelRBBisJCBoerwinkleESinnerMFetalVariantsinZFHX3areassociatedwithatrialfibrillationinindividualsofEuropeanancestryNatGenet41879881BoehrsJKHeJHalabyMJandYangDQConstitutiveexpressionandcytoplasmiccompartmentalizationofATMproteinindifferentiatedhumanneuronlikeSHSY5YcellsJNeurochem100337345BrooksPJWiseDSBerryDAKosmoskiJVSmerdonMJSomersRLMackieHSpoondeAYAckermanEJColemanKetalTheoxidativeDNAlesion85cyclo2’deoxyadenosineisrepairedbythenucleotideexcisionrepairpathwayandblocksgeneexpressioninmammaliancellsJBiolChem2752235522362BurgnerDDavilaSBreunisWBNgSBLiYBonnardCLingLWrightVJThalamuthuAOdamMetalAgenomewideassociationstudyidentifiesnovelandfunctionallyrelatedsusceptibilityLociforKawasakidiseasePLoSGenet5e1000319CheahKSStokerNGGriffinJRGrosveldFGandSolomonEIdentificationandcharacterizationofthehumantypeIIcollagengeneProcNatlAcadSciUSA8225552559ChenKAlbanoAHoAandKeaneyJFJrActivationofp53byoxidativestressinvolvesplateletderivedgrowthfactorbetareceptormediatedataxiatelangiectasiamutatedkinaseactivationJBiolChem2783952739533ChenPPengCLuffJSpringKWattersDBottleSFuruyaSandLavinMFOxidativestressisresponsiblefordeficientsurvivalanddendritogenesisinpurkinjeneuronsfromataxiatelangiectasiamutatedmutantmiceJNeurosci231145311460ChoYGSongJHKimCJLeeYSKimSYNamSWLeeJYandParkWSGeneticalterationsoftheATBF1geneingastriccancerClinCancerRes1343554359CoyleJTandPuttfarckenPOxidativestressglutamateandneurodegenerativedisordersScience262689695DupreABoyerChatenetLandGautierJTwostepactivationofATMbyDNAandtheMre11Rad50Nbs1complexNatStructMolBiol13451457FernandesNDSunYandPriceBDActivationofthekinaseactivityofATMbyretinoicacidisrequiredforCREBdependentdifferentiationofneuroblastomacellsJBiolChem2821657716584GorodetskyECalkinsSAhnJandBrooksPJATMtheMre11Rad50Nbs1complexandtopoisomeraseIareconcentratedinthenucleusofPurkinjeneuronsinthejuvenilehumanbrainDNARep616981707GudbjartssonDFHolmHGretarsdottirSThorleifssonGWaltersGBThorgeirssonGGulcherJMathiesenEBNjolstadINyrnesAetalAsequencevariantinZFHX3on16q22associateswithatrialfibrillationandischemicstrokeNatGenet41876878IshiiYOyaTZhengLGaoZKawaguchiMSabitHMatsushimaTTokunagaAIshizawaSHoriEetalMousebrainsdeficientinneuronalPDGFreceptorbetadevelopnormallybutarevulnerabletoinjuryJNeurochem98588600JungCGKimHJKawaguchiMKhannaKKHidaHAsaiKNishinoHandMiuraYHomeoticfactorATBF1inducesthecellcyclearrestassociatedwithneuronaldifferentiationDevelopment13251375145KaoFTHawkinsJWLawMLandDugaiczykAAssignmentofthestructuralgenecodingforalbumintohumanchromosome4HumGenet62337341KataokaHMiuraYJohTSenoKTadaTTamaokiTNakabayashiHKawaguchiMAsaiKKatoTetalAlphafetoproteinproducinggastriccancerlackstranscriptionfactorATBF1Oncogene20869873KhannaKKandJacksonSPDNAdoublestrandbreakssignalingrepairandthecancerconnectionNatGenet27247254KimCJSongJHChoYGCaoZLeeYSNamSWLeeJYandParkWSDownregulationofATBF1isamajorinactivatingmechanisminhepatocellularcarcinomaHistopathology52552559KuljisROChenGLeeEYAguilaMCandXuYATMimmunolocalizationinmouseneuronalendosomesimplicationsforataxiatelangiectasiaBrainRes842351358LeinESHawrylyczMJAoNAyresMBensingerABernardABoeAFBoguskiMSBrockwayKSByrnesEJetalGenomewideatlasofgeneexpressionintheadultmousebrainNature445168176LiJHanYRPlummerMRandHerrupKCytoplasmicATMinneuronsmodulatessynapticfunctionCurrBiol1920912096MarshallHMorrisonAStuderMPopperlHandKrumlaufRRetinoidsandHoxgenesFASEBJ10969978MatsuokaSBallifBASmogorzewskaAMcDonaldER3rdHurovKELuoJBakalarskiCEZhaoZSoliminiNLerenthalYetalATMandATRsubstrateanalysisrevealsextensiveproteinnetworksresponsivetoDNAdamageScience31611601166MiuraYTamTIdoAMorinagaTMikiTHashimotoTandTamaokiTCloningandcharacterizationofanATBF1isoformthatexpressesinaneuronaldifferentiationdependentmannerJBiolChem2702684026848MiuraYKataokaHJohTTadaTAsaiKNakanishiMOkadaNandOkadaHSusceptibilitytokillerTcellsofgastriccancercellsenhancedbyMitomycinCinvolvesinductionofATBF1andactivationofp21promoterMicrobiolImmunol48137145MorinagaTYasudaHHashimotoTHigashioKandTamaokiTAhumanalphafetoproteinenhancerbindingproteinATBF1containsfourhomeodomainsandseventeenzincfingersMolCellBiol1160416049NarendraDTanakaASuenDFandYouleRJParkinisrecruitedselectivelytoimpairedmitochondriaandpromotestheirautophagyJCellBiol183795803OlneyJWRheeVandHoOLKainicacidapowerfulneurotoxicanalogueofglutamateBrainRes77507512ReuterdahlCSundbergCRubinKFunaKandGerdinBTissuelocalizationofbetareceptorsforplateletderivedgrowthfactorandplateletderivedgrowthfactorBchainduringwoundrepairinhumansJClinInvest9120652075RudnickiMAandMcBurneyMWCellculturemethodsandinductionofdifferentiatinofembryonalcarcinomacelllinesInTeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsaPracticalApproachpp1449OxfordWashingtonDCIRLPressSavitskyKBarShiraAGiladSRotmanGZivYVanagaiteLTagleDASmithSUzielTSfezSetalAsingleataxiatelangiectasiagenewithaproductsimilartoPI3kinaseScience26817491753ShiYVenkataramanSLDodsonGEMabbAMLeBlancSandTibbettsRSDirectregulationofCREBtranscriptionalactivitybyATMinresponsetogenotoxicstressProcNatlAcadSciUSA10158985903ShiehSYIkedaMTayaYandPrivesCDNAdamageinducedphosphorylationofp53alleviatesinhibitionbyMDM2Cell91325334ShilohYATMandrelatedproteinkinasessafeguardinggenomeintegrityNatRevCancer3155168SunXFriersonHFChenCLiCRanQOttoKBCantarelBLVessellaRLGaoACPetrosJetalFrequentsomaticmutationsofthetranscriptionfactorATBF1inhumanprostatecancerNatGenet37407412UranoYSakaiMWatanabeKandTamaokiTTandemarrangementofthealbuminandalphafetoproteingenesinthehumangenomeGene32255261WangYHanRLiangZQWuJCZhangXDGuZLandQinZHAnautophagicmechanismisinvolvedinapoptoticdeathofratstriatalneuronsinducedbythenonNmethylDaspartatereceptoragonistkainicacidAutophagy4214226WilkinsonDSTsaiWWSchumacherMAandBartonMCChromatinboundp53anchorsactivatedSmadsandthemSin3AcorepressortoconfertransforminggrowthfactorbetamediatedtranscriptionrepressionMolCellBiol2819881998YasudaHMizunoATamaokiTandMorinagaTATBF1amultiplehomeodomainzincfingerproteinselectivelydownregulatesATrichelementsofthehumanalphafetoproteingeneMolCellBiol1413951401ZemskovEALoukinovaEMikhailenkoIColemanRAStricklandDKandBelkinAMRegulationofplateletderivedgrowthfactorreceptorfunctionbyintegrinassociatedcellsurfacetransglutaminaseJBiolChem2841669316703ZhangJZhangDMcQuadeJSBehbehaniMTsienJZandXuMcfosregulatesneuronalexcitabilityandsurvivalNatGenet30416420