生存可能かつ機能的な細胞又は生理活性物質を固定化し封入するための組成物であって、a等張の中性キトサンの液体多糖溶液;及びb生理学的媒体に溶解した二官能性又は多官能性のアルデヒド又はアルデヒドで処理されたヒドロキシル含有ポリマーからなる架橋溶液を含む、組成物。架橋溶液が、ヒドロキシル化ポリマーが溶液中で液体のままであることを許容するような適当な比率及び分子量の二官能性又は多官能性のクロスリンカー及びヒドロキシル化ポリマーからなる、請求項1記載の組成物。架橋溶液が、生理学的媒体に溶解したグリオキサール又はグリオキサールで処理されたヒドロキシエチルセルロースからなる、請求項1記載の組成物。a05~50重量のキトサン又はキトサン誘導体又はポリアミン含有ポリマー;及びb001~50重量のヒドロキシエチルセルロースを含む、請求項1記載の組成物において、溶液が、4°C~42°Cの温度で、細胞の生存可能性を維持するための生理学的環境を提供するゲルを形成する、組成物。c00001~3グリオキサールをさらに含む、請求項4記載の組成物。a及びbを混合した後、数秒~数時間以内にゲルを形成する、請求項4記載の組成物。a、b、及びcを混合した後、数秒~数時間以内にゲルを形成する、請求項5記載の組成物。溶液が20°C~42°Cの温度でゲルを形成する、請求項4記載の組成物。キトサンが希酸に溶解され、10~25重量の一リン酸二塩基塩又は一硫酸塩からなるポリオールの塩と混合されている、請求項1記載の組成物。一リン酸二塩基塩が、グリセロールの一リン酸二塩基塩である、請求項9記載の組成物。グリセロールの一リン酸二塩基塩が、グリセロール2リン酸二塩基塩、snグリセロール3リン酸二塩基塩、及びLグリセロール3リン酸二塩基塩からなる群より選択される、請求項9記載の組成物。キトサンが、リン酸緩衝液及び塩とさらに混合されている、請求項1記載の組成物。生物学的活性因子をさらに含む、請求項1記載の組成物。生物学的活性因子が、細胞、ホルモン、薬、DNA、充填剤、増殖因子、DNA、DNAポリマー複合体、リポソーム、薬理学的薬剤、代謝因子、抗体、栄養因子、血管形成因子、及び放射性同位体からなる群より選択される、請求項13記載の組成物。細胞が生細胞である、請求項14記載の組成物。細胞が、髄核、線維輪、又はそれらの混合物である、請求項14記載の組成物。細胞が、胚性幹細胞、又は骨髄、脂肪、筋肉、脳、皮膚、肝臓、血管平滑筋、内皮、血液、もしくは胎盤からなる群より選択される組織に由来する幹細胞である、請求項14記載の組成物。細胞が、一次細胞、分化細胞、遺伝学的に修飾された細胞、ハイブリドーマ、不死化細胞、形質転換細胞、組織断片細胞、細胞小器官、又はそれらの混合物、有核細胞、除核細胞、胚細胞、血小板細胞、基質小胞、細胞小胞、鉱質除去された骨ペースト、骨チップ、軟骨断片又は細胞断片又は組織断片である、請求項14記載の組成物。細胞が、自己細胞、同種異系細胞、又は異種細胞である、請求項14記載の組成物。生物学的活性因子が、フィブリノーゲン、フィブリン、フィブロネクチン、ヒアルロン酸、ヘパリン、コラーゲン、ポリリジン、ポリオルニチン、受容体結合性環状ペプチド、受容体結合性タンパク質からなる群より選択される細胞接着因子である、請求項14記載の組成物。生物学的活性因子が、酵素、増殖因子、又は増殖因子が固定化された物質である、請求項14記載の組成物。生物学的活性因子が、リポソーム、脂質複合体、キトサン複合体、ポリリジン複合体、DEAEデキストラン複合体の形態のプラスミドDNAである、請求項14記載の組成物。生物学的活性因子がワクチンである、請求項14記載の組成物。ワクチンが感染性ウイルス粒子を含む、請求項23記載の組成物。生物学的活性因子が、栄養因子又は代謝因子である、請求項14記載の組成物。栄養因子又は代謝因子が、脂質、アミノ酸、並びにコレステロール、グルタミン、グルコサミン、アスコルビン酸、ピルビン酸塩、及び乳酸塩からなる群より選択される補因子である、請求項25記載の組成物。生物学的活性因子が、末梢血、骨血液、臍帯血、血液製剤、血液由来細胞、血清、血小板、多血小板血漿、フィブリノーゲン、凝固因子、及び血液由来酵素からなる群より選択される少なくとも一つのエレメントである、請求項14記載の組成物。生物学的活性因子が、骨形成物質である、請求項14記載の組成物。骨形成物質が、TGFβ1、BMP2、BMP6、BMP7、又はそれらの混合物からなる群より選択される骨形成タンパク質ファミリーのメンバーである、請求項28記載の組成物。ヒドロキシル含有ポリマーが、二官能性反応性アルデヒドと連結されたポリビニルアルコール、デキストランである、請求項1記載の組成物。軟組織修復のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。生物学的活性因子の部位特異的送達のための、請求項14又は15記載の組成物の使用。骨修復のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。損傷を受けた軟骨の修復又は表面再建のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。半月板の修復のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。軟組織修復のための薬物の製造のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。生物学的活性因子の部位特異的送達のための薬物の製造のための、請求項14又は15記載の組成物の使用。骨修復のための薬物の製造のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。損傷を受けた軟骨の修復又は表面再建のための薬物の製造のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。半月板の修復のための薬物の製造のための、請求項1~30のいずれか一項記載の組成物の使用。軟組織を修復する方法であって、患者の修復を必要とする軟組織の部位に請求項1記載の組成物を投与する工程を含む、方法。損傷を受けた軟骨を修復又は表面再建する方法であって、患者の修復又は表面再建を必要とする軟骨又はその周辺に請求項1記載の組成物を投与する工程を含む、方法。半月板を修復する方法であって、患者の半月板の部位に請求項1記載の組成物を投与する工程を含む、方法。生理学的媒体が、等張かつ中性pHで、グルコース、アミノ酸、及びビタミン、又はそれらの組み合わせからなる群より選択される細胞栄養素を含む、請求項3記載の組成物。好ましい態様の詳細な記載本発明により、グリセロールリン酸塩により生理学的pHにされ、次いで、二官能性ジアルデヒドグリオキサールにより架橋された酸可溶性キトサンのポリマーマトリックスへの細胞固定化の新たな手法が提供される。二官能性ジアルデヒドは、単独で提示されてもよいし、又はヒドロキシエチルセルロースとコンジュゲートしたヘミ-アセタール中間体として提示されてもよい。キトサン溶液が無菌であり、等張で、かつほぼ中性のpHの液体溶液中にある限り、この組成物は、高レベルの細胞生存可能性を維持する。この目的のためには、酸可溶性キトサンをオートクレーブにより滅菌してもよいし、又は結晶性粉末塩形態のキトサンを、UV光曝露により滅菌した後、水に溶解させてもよい。グリセロールリン酸塩により中性pHへと調整する前に、キトサンの分子量を、粘性の再現可能な損失をもたらすオートクレーブ依存性の加水分解により変動させることができる。もう一つの態様において、キトサンを沈殿させることなく、キトサン溶液のpHを65~68に増加させる他のリン酸緩衝液が使用されてもよい。添加されたグリセロールリン酸塩又はリン酸緩衝液は、生理学的に容認される限度内、又は200~460mOsmの最終浸透圧をもたらす。キトサン架橋のpH依存性は、架橋メカニズムに関与することができる遊離の中性アミン基の割合と厳密に関係している。そのような中性アミン基とプロトン化アミン基との割合は、使用されるキトサンの脱アセチルレベルにより影響を受ける。95脱アセチルされたキトサンは、pH50で架橋され得るが、80脱アセチルされたキトサンは、60超のより高いpHでのみ架橋され得る。キトサンを架橋し、同時に細胞生存可能性を保持するために使用される最も都合のよいpHは、一般に室温でpH65超である。本発明により、生細胞を封入し、細胞培養ペトリ、エクスビボの組織、又はインビボのインプラント、創傷、器官間隙、もしくは欠陥部へと送達する方法が、提供される。さらに、IGF1のような混和されたタンパク質の共ゲル化及び徐放のための方法が、提供される。細胞は、架橋試薬の補助によって中性キトサン液体溶液に固定化される。本態様において、架橋剤は、ヒドロキシエチルエーテルのような反応性ヒドロキシル基を保有しているポリマーと混合されたグリオキサールからなる。グリオキサール-ヒドロキシエチルセルロースの組み合わせは、ヒドロキシエチルセルロースの存在によって、グリオキサールアルデヒド基が細胞表面と反応することが妨害されるため、はるかに縮小された細胞に対する毒性を有している。キトサンアミン基は、グリオキサールの反応性ヒドロキシル基を優先的に攻撃し、ヒドロキシエチルセルロースが全体に散在する、グリオキサールと連結されたキトサンアミン基の格子をもたらすであろう。架橋剤は、生存可能性を維持する効果がグリオキサール-ヒドロキシポリマークロスリンカーよりは低いが、やはり最終的な架橋されたキトサンゲルに合理的なレベルの生存可能細胞を持続させることができる、生理学的媒体と混合されたグリオキサールからなっていてもよい。架橋剤を懸濁させるために使用される好ましい生理学的媒体は、単純な緩衝又は非緩衝の生理食塩水溶液とは対照的に、細胞培養に適した栄養培地である。本発明は、ヒドロキシル含有ポリマーを二官能性反応剤と組み合わせ、ポリアミン含有ポリマーと反応させる、任意の架橋反応を包含するよう拡張され得る。細胞を均質に固定化するため、細胞ペレットが、グリオキサールを保有しているヒドロキシエチルセルロースの水性溶液、又はグリオキサールを含む媒体に完全に再懸濁され、次いで、中性キトサン溶液と混合される。得られた混合物は、適当な欠陥部又は鋳型に注入又は注射され得、その後、凝固が起こる。得られたゲルは、混合物中に存在するキトサン、グリオキサール、及びヒドロキシエチルセルロースの相対量に依って、可変の粘弾性、粘着性、及び剛性を有している。注射可能溶液は、充填剤又は組織密閉剤としても使用され得る。本発明は、初代及び/又は継代軟骨細胞を該混合物と共に関節軟骨欠陥部に送達することにより、細胞生存可能性が持続し、インサイチューでの適切な細胞分化、並びに密な機械的に機能的な関節軟骨細胞外マトリックスの合成及び組み立てが許容されるであろう、関節軟骨修復の例も含むこれに制限はされない。本発明には、架橋されたゲル、又はマトリックス産生細胞が負荷された架橋されたゲルが、損傷を受けた円板に送達される、椎間円板修復が含まれる。注射可能溶液は、増殖因子、DNA、DNAポリマー複合体、リポソーム、薬理学的薬剤、代謝因子、抗体、栄養因子、血管形成因子、又は放射性同位体と予め混合されてもよい。そのためには、これらの因子は、キトサンとクロスリンカーとを組み合わせる前に、中性キトサン溶液、又は架橋ヒドロキシエチルセルロースアルデヒド溶液のいずれかと混合され得る。もう一つの態様において、細胞は、中性キトサン溶液に懸濁され、次いで、キトサン/ヒドロキシエチルセルロース/クロスリンカーの釣り合うproportional容量の範囲で、ヒドロキシエチルセルロース中性溶液と混合され得る。キトサンを架橋するのに必要とされるヒドロキシエチルセルロースは、好ましくは、商業的に入手可能な中粘性の非薬学的等級のヒドロキシエチルセルロースから、いくつかの方法のうちの一つにより得られる。ルーチンの産業的加工において、ヒドロキシエチルセルロースは、架橋を誘導するためグリオキサールにより表面処理される。架橋されたヒドロキシエチルセルロースは水に溶解するのが遅く、従って、縮小された凝集性lumpingを有する。活性キトサンクロスリンカーが入手され得るのは、これらの調製物においてである。グリオキサールを除去するために処理された薬学的等級のヒドロキシエチルセルロースは、活性キトサンクロスリンカーを調製するために使用され得ない。いくつかの方法が、細胞適合性クロスリンカーを調製するために使用され得る。一つの方法によると、ある種の型の中粘性のヒドロキシエチルセルロースFlukaが、生理学的pHの水性溶液中に25mgmlに完全に溶解され得る。一つの方法方法4においては、40グリオキサール876Mの溶液が、生理学的媒体で750μMに希釈される。得られた溶液は、1部を4部の中性キトサンと混合することにより活性クロスリンカーとして使用され得、次いで、022mmフィルターでのろ過により滅菌される方法1、図1C。図1Cは、水和の速度を遅らせ、かつ凝集性を最小限に抑えるため、水への溶解時間が遅いフルカFlukaからの中粘性3400cPaの非薬学的等級のヒドロキシエチルセルロースが、グリオキサールで架橋された方法1を例示している。生理学的媒体中に125mgml~25mgmlで完全に溶解させた場合、得られた溶液は、022μmフィルターで滅菌ろ過され、1部のろ過されたヒドロキシエチルセルロースを4部の15中性キトサンと混合することにより、活性クロスリンカーとして使用され得る。もう一つの方法によると、薬学的等級のヒドロキシエチルセルロースがグリオキサールで表面処理され、乾燥された後、生理学的媒体中に溶解され、濾過滅菌される方法2、図1C。図1Cに例示された方法2においては、中又は低粘性のヒドロキシエチルセルロース薬学的等級:500ppm未満のグリオキサールを含むか又はグリオキサールを含まないが、極性溶媒中で2500ppm~3500ppmのグリオキサールと組み合わせられ、グリオキサールで表面処理されたヒドロキシエチルセルロースを作製するために乾燥される。得られた粉末は、前記の方法1と同様に、生理学的媒体中に25mgmlに溶解され、滅菌ろ過され、活性クロスリンカーとして使用され得る。もう一つの方法によると、粒子が水可溶化に対して抵抗性である場合、ヒドロキシエチルセルロースは、室温で15分間25mgmlでddH20と混合される。図1Cの方法3において、スペクトラムSpectrum又はフルカFlukaからの中粘性の非薬学的等級のヒドロキシエチルセルロースは、両方、水への溶解時間が遅い。水溶性ヒドロキシエチルセルロース画分が回収され、凍結乾燥され、得られた固体が、pH及びモル浸透圧濃度が生理学的である水性溶液に再懸濁される方法3、図1C。ヒドロキシエチルセルロースが水中で15分間混合された場合、不溶物を遠心分離し、022μmフィルターでろ過することにより、低分子量ヒドロキシエチルセルロースを含有しており、さらに反応性グリオキサールを含有している水相が回収され得る。得られた溶液は、濃縮され、1部1mgml~30mgmlの水溶性ヒドロキシエチルセルロースを4部の中性キトサンと混合することにより、中性キトサンを架橋するために使用され得る。又は、グリオキサールが、表面処理されたヒドロキシエチルセルロース中に存在する濃度約0001にまで生理学的媒体で希釈され、濾過滅菌されてもよい方法4、図1D。図1Cの方法4においては、40グリオキサール876Mの溶液が、生理学的媒体で750μMに希釈される。得られた溶液は、1部を4部の中性キトサンと混合することにより活性クロスリンカーとして使用され得る。いくつかの商業的なヒドロキシエチルセルロース粉末は、25mgmlで完全に溶解された場合、ゲルを形成するであろうSpectrumHercules。この場合には、ヒドロキシエチルセルロースがグリオキサール又はもう一つの類似した試薬で架橋され、低分子量の架橋されたヒドロキシエチルセルロースを含有している水溶性材料が、溶解が遅い粒子から抽出され得る場合にのみ、反応性クロスリンカーが入手され得る。ヒドロキシエチルセルロース溶液を調製するために使用される方法にかかわらず、水和後、溶液は、凍結保存により加水分解又はコンフォメーション変化から防御されるべきである。活性クロスリンカーは、スペクトラムSpectrumからの水溶性ヒドロキシエチルセルロースの低分子量画分1000Da未満より精製され得る。しかしながら、クロスリンカーが精製されるほど、それが細胞に対して有する効果は、より毒性となる。従って、細胞生存可能性にとって最適な架橋条件は、クロスリンカーが反応し得るが、キトサン中性アミン基より低いクロスリンカーに対する親和性を有している別のポリマーの存在下で架橋剤を使用するものである。明白な毒性効果が、最初のヒドロキシエチル調製物からの汚染物質の共精製による場合、この毒性は、媒体中に高度に希薄な濃度の純粋なグリオキサールを使用することにより、部分的に回避され得る。キトサン-グリセロールリン酸溶液を架橋するために使用されるヒドロキシエチルセルロース溶液は、好ましくは、液体溶液中に存在するキトサンの容量の05~98である。その溶液は、優先的には、022mmフィルターでのろ過により滅菌される。適当なポリマー担体と共に可逆的な架橋を形成し得る任意の多機能性反応性化合物が、多官能性化合物単独とのインキュベーションに対して感受性の細胞又は生理活性分子を捕捉するため、任意のアミン含有ポリマーのための低毒性の細胞適合性のクロスリンカーとして使用され得ることは、当業者には明白である。調製された後、濃縮された水溶性ヒドロキシエチルセルロースは、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル緩衝乳酸塩のような生理学的緩衝溶液、ダルベッコ改変イーグル培地のような細胞培養培地、無菌09生理食塩水、又は細胞培養において使用される細胞適合性の栄養培地のその他の調製物に懸濁される。いくつかの生理活性物質、化学物質、リポソーム、放射性同位体、又は薬学的薬剤の送達のため、ヒドロキシエチルセルロースは、キトサンとの混合の前に、これらの材料と完全に組み合わせるために水又はその他の条件で懸濁され得る。このような場合、キトサンは必ずしも生理学的pHにされる必要はなく、95脱アセチルされたキトサンが、最小限の量の酸に溶解され、40~55のpHで使用され得る。本発明は、ヒドロキシエチルセルロースクロスリンカーを使用した中性キトサン溶液のゲル化メカニズムが、ヒドロキシエチルセルロース溶液が、ルーチンの大規模な産業的調製における表面処理においてグリオキサールと予め組み合わせられた場合にのみ、起こり得ることを証明する。本発明は、さらに、透析により、又は薬学的等級の生成物を作製するためグリオキサールを除去するために使用される他の特別な処理により、グリオキサールが排除された場合、ヒドロキシエチルセルロースの架橋活性が失われることを証明する。低濃度001未満のグリオキサールが、細胞の生存可能性を維持しつつ、中性キトサン溶液を架橋するために使用され得るが、そのようなグリオキサールで架橋されたゲルに封入された細胞の細胞の生存可能性の指標としての初期細胞代謝は、ヒドロキシエチルセルロース-グリオキサールで封入された細胞のそれより低いことが、本発明において示される。本発明の実施例において示されたゲル化の動力学は、数秒から一時間と、臨床的な使用と適合性であり、細胞及び/又は医学的に活性な薬剤を含む又は含まないゲルのゲル化、及び体腔、ペトリ皿、開放性創傷への保持を許容する。図2A~2Gにおいて、架橋活性は、アルデヒド様の1HNMRピーク83ppmのピーク及びヘミアセタールピーク38ppmを含有しているヒドロキシエチルセルロース画分と相関している。クロスリンカーは、図1Cの方法3に従って調製され、続いて、1000Daより上又は下の画分を収集するため限外ろ過により分画された。各画分がNMR分析に供された上パネル。各画分は、ddH20に75mgmlで懸濁され、ヒドロキシエチルセルロース画分1部、15中性キトサン溶液5部で、中性キトサンと混合された。試料は、プラスチックペトリ上に沈着され、ゲル化を証明するため、ある間隔を置いて傾けられた下パネル。未分画及び低分子量画分1000Da未満は、5分以内にキトサンの迅速なゲル化を誘導した。透析されたヒドロキシエチルセルロースは、キトサンをゲル化させることができず、このことから、ヒドロキシエチルセルロースが試験条件下でキトサンを架橋するのに十分ではないことが示された。活性架橋試料は、いずれも、アルデヒド83ppm及びヘミアセタール38ppmの存在と一致するピークを保有している。図3において、t0は、混合の16分後に起こる。結果は、ゲル化時間とヒドロキシエチルセルロース-グリオキサール濃度との間の用量依存性を示している。図4Aにおいて、グリオキサール又はヒドロキシエチルセルロース-グリオキサールで架橋されたキトサンでの封入の後に、高い生存可能性が維持される。図4Aは、活性ヒドロキシエチルセルロースクロスリンカーが、細胞適合性であることを例示している。活性クロスリンカーの中で最大72時間インキュベートされた細胞は、95超、生存可能なままである。同じ期間03過酸化物の中でインキュベートされた細胞は、100、生存不可である。キトサンと混合し、26ゲージの針を有する注射器で注射した後、固体ゲルに封入された細胞は、95超、生存可能なままである。キトサンと混合し、ペトリへ注入した後、固体ゲルに封入された細胞は、1日の培養後に95超、生存可能なままである。図4Bにおいて、1日目の封入された細胞におけるMTTアッセイにより示されるように、ヒドロキシエチルセルロースは、封入直後に付加的な保護を細胞に提示する。グリオキサール又はヒドロキシエチルセルロース-グリオキサールのいずれかを使用してキトサンゲルに封入された細胞は、封入後に生存可能であり、ゲル中で増殖する。活性クロスリンカーがヒドロキシエチルセルロース-グリオキサールである場合、細胞は、封入後1日目、代謝MTTアッセイにより測定されるように、グリオキサールクロスリンカーと比較して、より大きな生存可能性を示す。図5A~5Cにおいて、緑色は生細胞を示し、赤色は死細胞を示す。認められるように、図5Aは、繊維芽細胞細胞系Rat1、COS、ウシ初代軟骨細胞、及びウシ継代軟骨細胞を含む、ヒドロキシエチルセルロース-グリオキサールで架橋されたキトサンゲルにおいて鋳造された一連の生存可能な細胞型の、鋳造時及び培養後の持続性を示している。図5Bは、グリオキサール架橋キトサンゲルにおけるCOS細胞及び継代ウシ軟骨細胞の生存可能性の持続性を示している。図5Cは、2低融点アガロースにおいて鋳造された初代及び継代ウシ軟骨細胞の比較可能な生存可能性を示している。本発明がその特定の態様に関連して記載されたが、それがさらに修飾され得ること、及び、本願が、一般に本発明の原理に従った本発明の任意の変動、使用、又は適応を内含するものであり、本発明が関係する技術分野において既知又は習慣的な実務の範囲内であるような、そして先に記載されたような必須の特質に適用され得るような、そして添付の特許請求の範囲の範囲内であるような、本開示からの逸脱を含むことが理解されるであろう。