"検査水に含まれる亜硝酸イオンの定量方法であって、前記検査水に対し、前記亜硝酸イオンとの反応によりジアゾニウム塩を生成可能なジアゾ化試薬と、アルコール系化合物並びに次亜りん酸およびその塩からなる化合物群から選択された少なくとも1種の化合物とを添加し、酸性下において反応させる工程1と、工程1を経た前記検査水について、前記ジアゾ化試薬による着色の吸光度を測定する工程2とを含み、前記ジアゾ化試薬として、オルト位若しくはパラ位にケトン基若しくはニトロ基を有する芳香族第一級アミン化合物を用いる、亜硝酸イオンの定量方法。前記芳香族第一級アミン化合物は、1-アミノアントラキノン、2-ニトロアニリン、4-ニトロアニリン-2-スルホン酸ナトリウムおよび1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムからなる群から選ばれたものである、請求項1に記載の亜硝酸イオンの定量方法。工程2の前に、工程1を経た前記検査水のpHが7より大きくなるよう調整する、請求項1または2に記載の亜硝酸イオンの定量方法。前記検査水は、全窒素の定量のために、前記検査水に含まれる窒素化合物を酸化分解することで生成した硝酸イオンをさらに還元することで亜硝酸イオンに変換する前処理をしたものである、請求項1から3のいずれかに記載の亜硝酸イオンの定量方法。前記検査水の温度が60°C以上100°C未満である、請求項4に記載の亜硝酸イオンの定量方法。本発明の目的は、検査水に含まれる亜硝酸イオンを簡単な操作で高濃度の領域まで定量できるようにすることにある。本発明は、検査水に含まれる亜硝酸イオンの定量方法に関するものである。この定量方法は、検査水に対し、亜硝酸イオンとの反応によりジアゾニウム塩を生成可能なジアゾ化試薬と、アルコール系化合物並びに次亜りん酸およびその塩からなる化合物群から選択された少なくとも1種の化合物とを添加し、酸性下において反応させる工程1と、工程1を経た検査水について、ジアゾ化試薬による着色の吸光度を測定する工程2とを含んでいる。この定量方法では、ジアゾ化試薬として、オルト位若しくはパラ位にケトン基若しくはニトロ基を有する芳香族第一級アミン化合物を用いる。ここで用いられる芳香族第一級アミン化合物は、例えば、1-アミノアントラキノン、2-ニトロアニリン、4-ニトロアニリン-2-スルホン酸ナトリウムおよび1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムからなる群から選ばれたものである。この定量方法では、通常、工程2の前に、工程1を経た検査水のpHが7より大きくなるよう調整するのが好ましい。本発明の定量方法が適用される検査水は、例えば、全窒素の定量のために、検査水に含まれる窒素化合物を酸化分解することで生成した硝酸イオンをさらに還元することで亜硝酸イオンに変換する前処理をしたものである。この場合、検査水の温度は、通常、60°C以上100°C未満である。本発明に係る亜硝酸イオンの定量方法は、特定のジアゾ化試薬を用いているため、複数の反応工程を必要としない簡単な操作で高濃度の領域まで亜硝酸イオンを定量することができる。本発明の方法により亜硝酸イオンを定量可能な検査水は、特に限定されるものではないが、通常は工場排水や生活排水等の窒素の排出規制が設けられている排水の他、海洋水、湖沼水、河川水および地下水等の天然水である。検査水の亜硝酸イオンを定量する際には、先ず、所定量の検査水を採取し、この検査水に対してジアゾ化試薬と還元剤とを添加して反応させる工程1。ここで、検査水の全窒素を測定する場合は、ジアゾ化試薬を添加する前に検査水に含まれる窒素化合物を分解し、窒素元素を亜硝酸イオンへ変換する前処理を実施する。例えば、検査水にペルオキソ二硫酸カリウム等の酸化剤を添加して加熱することで窒素化合物を酸化分解し、それにより生成する硝酸イオンをさらに還元して亜硝酸イオンへ変換する。このような前処理方法としては、例えば、日本工業規格JISK0102工場排水試験方法2008の45.4に挙げられた銅カドミウムカラム還元-ナフチルエチレンジアミン吸光光度法に記載の前処理方法を採用することができるが、その他の還元法や紫外線を照射する方法を採用することもできる。この工程で用いられるジアゾ化試薬は、亜硝酸イオンとの反応によりジアゾニウム塩を生成可能なもの、特に、検査水への添加によりそれ自体で検査水を着色させることができるものである。本発明では、このようなジアゾ化試薬として、オルト位若しくはパラ位にケトン基若しくはニトロ基を有する芳香族第一級アミン化合物が用いられる。このような芳香族第一級アミン化合物としては、例えば、1-アミノアントラキノン、2-ニトロアニリン、4-ニトロアニリン-2-スルホン酸ナトリウム、1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウム、p-ニトロアニリン、2-アミノ-3-ヒドロキシアントラキノン、2-アミノ-2’-フルオロ-5-ブロモベンゾフェノン、4-アミノベンゾフェノン、4-フルオロ-2-ニトロアニリン、5-アミノ-2-ニトロベンゾトリフルオリド、4-アミノ-3-ニトロベンゾフェノン、2-アミノ-5-ニトロベンゾフェノンおよび4,6-ジニトロ-o-トルイジンなどを含むが、1-アミノアントラキノン、2-ニトロアニリン、4-ニトロアニリン-2-スルホン酸ナトリウムおよび1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムからなる群から選択したものが好ましい。ジアゾ化試薬は、通常、溶媒に溶解した溶液として検査水に添加するのが好ましい。ジアゾ化試薬を溶解するために用いられる溶媒としては、例えば、逆浸透膜等により膜処理することで得られる純水、蒸留水およびイオン交換水等の精製水、ジメチルスルホキシド、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトン並びにメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ポリエチレングリコールおよびグリセリン等のアルコール類などが挙げられる。検査水へのジアゾ化試薬の添加量は、検査水に含まれる亜硝酸イオンの全量との反応によりジアゾニウム塩が生成するのに十分な量に設定する必要があり、検査水に含まれるものと想定される亜硝酸イオンと少なくとも等モルに設定する必要がある。この点に関し、検査水中に含まれる化合物から誘導される亜硝酸イオンを考慮すると、検査水に含まれる亜硝酸イオン濃度は一般的に0~35mg[NO2-]/L程度の範囲と想定されることから、例えば、検査水の量を2.0mLとした場合のジアゾ化試薬の添加量は、通常、1.5μmol以上になるよう設定するのが好ましい。但し、検査水の亜硝酸イオン濃度が35mg[NO2-]/Lよりも大幅に低いことが判明している、または、想定されるような場合は、それを考慮してジアゾ化試薬の添加量を1.5μmol未満に設定することもできる。この工程で用いられる還元剤は、亜硝酸イオンとジアゾ化試薬との反応により生成するジアゾニウム塩について、そのジアゾニウムイオンのジアゾニオ基-N2を水素原子-Hに還元可能なものであり、通常、アルコール系化合物並びに次亜りん酸およびその塩からなる化合物群から選択された少なくとも1種の化合物である。利用可能なアルコール系化合物としては、例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール、ポリエチレングリコールおよびグリセリンなどを挙げることができる。また、次亜りん酸塩としては、次亜りん酸ナトリウム、次亜りん酸カリウムおよび次亜りん酸カルシウム並びにこれら次亜りん酸塩の水和物などを挙げることができる。還元剤は、通常、溶媒に溶解した溶液として検査水に添加するのが好ましい。還元剤を溶解するために用いられる溶媒としては、例えば、逆浸透膜等により膜処理することで得られる純水、蒸留水およびイオン交換水等の精製水並びにジメチルスルホキシドなどが挙げられる。また、還元剤は、後記のように検査水を酸性に設定するために用いられる酸やその水溶液の溶液として検査水へ添加することもできる。検査水への還元剤の添加量は、この工程での反応により生成するジアゾニウム塩のジアゾニウムイオンの全量を還元するのに十分な量に設定する必要があり、通常、検査水へ添加するジアゾ化試薬量と少なくとも等モルになるよう設定するのが好ましい。なお、ジアゾ化試薬をアルコール類に溶解した溶液として検査水へ添加する場合、溶媒として用いるアルコール類を還元剤として用いることができる。この工程において、ジアゾ化試薬と亜硝酸イオンとの反応、すなわちジアゾニウム塩の生成反応は、酸性下で進行させる。具体的には、定量結果に影響する可能性がある窒素元素を含まずかつジアゾ化試薬と亜硝酸イオンとの反応を阻害しない酸を検査水に添加することで検査水を酸性に調整し、その環境下で反応を進行させる。酸としては、例えば、塩酸および硫酸などの無機酸、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸およびコハク酸などの有機酸並びにこれらの水溶液を用いることができるが、通常は塩酸水溶液を用いるのが好ましい。検査水に対する酸の添加時期は、ジアゾ化試薬および還元剤を添加する前であってもよいし、ジアゾ化試薬および還元剤の添加後であってもよい。また、既述のように、酸は、還元剤の溶媒として検査水へ添加することもできる。検査水に対する酸の添加量は、検査水に含まれる亜硝酸イオンとジアゾ化試薬との反応が安定に進行するように検査水を酸性に調整可能なように設定する必要があり、通常、検査水のpHが6.0以下になるように設定するのが好ましく、0~4.0になるよう設定するのが特に好ましい。この工程での反応は、通常、5~40°C程度の室温で進行させることができる。反応に要する時間は、温度により変動するが、通常、1~10分程度である。なお、反応時間を短縮するために、検査水を適宜加熱することもできる。この場合、加熱温度は、40~100°Cに設定するのが好ましい。また、検査水が窒素化合物を亜硝酸イオンへ変換するための前処理が適用されたものである場合、当該前処理工程において、検査水は、通常、60°C以上100°C未満に加熱されていることから、この工程での反応は、その加熱状態を維持しながら実行することもできる。この工程において、検査水は、添加したジアゾ化試薬自体により着色する。また、検査水に含まれる亜硝酸イオンは、酸により調整された酸性下においてジアゾ化試薬と反応し、ジアゾニウム塩を生成する。これにより、ジアゾ化試薬により着色した検査水は、ジアゾ化試薬が亜硝酸イオンとの反応により消費されることでジアゾ化試薬自体による着色が退色するようになる。ここで生成したジアゾニウム塩は、それを形成するジアゾニウムイオンのジアゾニオ基が容易に分解され、その基がヒドロキシル基-OHに変換された化合物以下、変換化合物という場合がある。を生成する傾向にある。例えば、ジアゾ化試薬として1-アミノアントラキノンを用いた場合、そのジアゾニウムイオンのジアゾニオ基がヒドロキシル基に変換され、変換化合物として1-ヒドロキシアントラキノンが生成する。生成した変換化合物のヒドロキシル基は、ジアゾ化試薬のアミノ基-NH2と同様に非共有電子対を有することから、それが結合している芳香族構造部分と共役系を形成する。このため、変換化合物は、ジアゾ化試薬の極大吸収波長の近接波長に極大吸収波長を有する別の色素として検査水を着色し、後記する工程2において測定する吸光度に影響する可能性がある。例えば、1-アミノアントラキノンによる着色の吸光スペクトルでは480nm付近が極大吸収波長になるが、変換化合物である1-ヒドロキシアントラキノンによる着色の吸光スペクトルでは極大吸収波長が400nm付近になる。このため、工程2において、発光ダイオードのような光源を用いて吸光度を測定するとき、当該光源からは波長幅を持った光が照射されることになるため、目的の吸光度の測定において変換化合物による検査水の着色が障害になりやすい。これは、本工程を適用する検査水の温度が高い場合、例えば、検査水が全窒素を定量するための前処理のために高温である場合や本工程での反応を加熱下で実行する場合において、変換化合物の生成が進行しやすいことから顕著である。これに対し、この工程では、検査水に対してジアゾ化試薬とともに還元剤を添加していることから、生成したジアゾニウム塩のジアゾニウムイオンは、ジアゾニオ基が水素原子へ速やかに還元されることで変換化合物とは別の化合物に変換される。例えば、ジアゾ化試薬が1-アミノアントラキノンの場合、この工程では、1-ヒドロキシアントラキノンの生成が抑えられ、代わりにアントラキノンが生成する。この別の化合物は、ジアゾニオ基の還元による水素原子が芳香族構造部分の共役系に関与しないことから検査水を着色しにくく、工程2での吸光度の測定に影響しにくい。次に、ジアゾ化試薬の反応後の検査水の吸光度を測定する工程2。ここで測定する吸光度は、ジアゾ化試薬自体が検査水に付与する着色の吸光度、すなわち、検査水に残留しているジアゾ化試薬が検査水に付与している着色の吸光度である。ジアゾ化試薬による検査水の着色は、ジアゾ化試薬が検査水中の亜硝酸イオンとの反応で消費されるに従って強度が低下する。このため、ここで測定する吸光度と検査水におけるジアゾ化試薬濃度および亜硝酸イオン濃度とは相関性を有する。吸光度の測定波長は、ジアゾ化試薬が検査水に付与する着色の極大吸収波長またはその付近の波長であり、使用するジアゾ化試薬の種類により異なるため特定されるものではないが、通常は250~600nmの範囲にある。なお、検査水は、変換化合物の生成が抑えられることから、ジアゾ化試薬による着色の吸光度を安定に測定することができる。この工程では、吸光度と亜硝酸イオン濃度との関係を予め調べて作成しておいた検量線に基づいて、吸光度の測定値から検査水の亜硝酸イオン量を判定する。ここで作成する検量線は、亜硝酸イオン濃度と吸光度との間の直線関係が比較的高濃度の亜硝酸イオン濃度の範囲まで良好に成立することから、検査水に含まれる亜硝酸イオンの定量可能範囲がJIS法等の従来法で可能な範囲よりも広い0~53mg/[NO2-]/L全窒素換算で0~16mg[N]/Lの範囲になる。このため、この定量方法は、亜硝酸イオンの含有量が多い検査水、例えば、全窒素の定量のために窒素化合物を既述の前処理により亜硝酸イオンへ変換したような検査水について適用する場合に有用である。特に、このような前処理をした検査水は、前処理での加熱により60~100°Cの高温であり、変換化合物が生成しやすい環境であることから、この定量方法の適用に適している。本発明の定量方法では、工程2の前に、工程1を経た検査水のpHが7より大きくなるよう調整するのが好ましい。工程2で測定する吸光度は、検査水のpHが7以下のとき、pH値により数値が異なる場合があることから亜硝酸イオンの定量結果に多少の誤差を生じさせる可能性があるが、このような調整をすると、吸光度はpHの影響による測定誤差が小さくなり、亜硝酸イオン濃度の定量精度をより高めることができる。検査水のpHは、通常、工程1の終了後の検査水へアルカリ金属の水酸化物、炭酸塩若しくは炭酸水素塩などのアルカリ化合物またはその水溶液を添加することで調整することができるが、通常は水酸化ナトリウム水溶液を添加することで調整するのが好ましい。試薬および分光光度計以下の実施例等で用いた試薬および分光光度計は次のものである。亜硝酸性窒素標準液イオンクロマトグラフ用:和光純薬工業株式会社コード147-0634110重量塩酸:和光純薬工業株式会社コード085-075351mol/L塩酸:和光純薬工業株式会社コード083-01095エタノール:和光純薬工業株式会社コード052-00467次亜りん酸ナトリウム一水和物:和光純薬工業株式会社コード193-022251mol/L水酸化ナトリウム溶液:和光純薬工業株式会社コード192-0217510w/v水酸化ナトリウム溶液:和光純薬工業株式会社コード191-115551-プロパノール:和光純薬工業株式会社コード162-04816ジメチルスルホキシド試薬特級:和光純薬工業株式会社コード043-072161-アミノアントラキノン:東京化成工業株式会社コードA05902-ニトロアニリン:東京化成工業株式会社コードN01184-ニトロアニリン-2-スルホン酸ナトリウム:東京化成工業株式会社コードA03751-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウム:東京化成工業株式会社コードA0279p-ニトロアニリン:東京化成工業株式会社コードN0119ナフチルエチレンジアミン窒素酸化物測定用:和光純薬工業株式会社コード147-04141分光光度計:株式会社島津製作所の商品名UV-1600PC実施例1亜硝酸イオン溶液の調製亜硝酸イオン濃度が0.0、4.0、8.0および12.0mg[N]/Lの4種類の亜硝酸イオン溶液を用意した。亜硝酸イオン濃度が0mg[N]/Lの亜硝酸イオン溶液は蒸留水をそのまま用い、また、他の亜硝酸イオン溶液は亜硝酸性窒素標準液を蒸留水で希釈することで亜硝酸イオン濃度を調整した。検量線の作成用意した4種類の亜硝酸イオン溶液のそれぞれ2.5mLに対して1-アミノアントラキノンのエタノール溶液濃度0.5g/L1.0mLを添加し、さらに10重量塩酸1.0mLを添加してpHを0.2に設定した。この亜硝酸イオン溶液を70°Cで15分間放置して反応させた後、反応液の330~600nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図1に示す。次に、測定した吸光スペクトルから1-アミノアントラキノンによる発色波長である480nmの吸光度を抽出し、この吸光度から亜硝酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図2に示す。図2によると、作成した検量線は、少なくとも亜硝酸イオン濃度が0~12.0mg[N]/Lの範囲で高い直線性を示している。実施例2亜硝酸イオン溶液の調製亜硝酸イオン濃度が0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0および12.0mg[N]/Lの7種類の亜硝酸イオン溶液を実施例1と同様の方法で用意した。検量線の作成用意した7種類の亜硝酸イオン溶液のそれぞれ2.0mLに対して1-アミノアントラキノンの1-プロパノール溶液濃度0.2g/L2.0mLを添加し、さらに10重量塩酸0.5mLを添加してpHを0.6に設定した。この亜硝酸イオン溶液を25°Cで15分間放置して反応させた後、反応液の330~600nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図3に示す。次に、測定した吸光スペクトルから1-アミノアントラキノンによる発色波長である480nmの吸光度を抽出し、この吸光度から亜硝酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図4に示す。図4によると、作成した検量線は、少なくとも亜硝酸イオン濃度が0~12.0mg[N]/Lの範囲で高い直線性を示している。実施例3pHを0.6に調整した亜硝酸イオン溶液を25°Cで15分間放置して反応させた後、反応液に10w/v水酸化ナトリウム溶液0.6mLをさらに加えてpHを12.4に調整してから吸光スペクトルを測定した点を除いて実施例2と同様に操作し、検量線を作成した。吸光スペクトルの測定結果を図5に示し、検量線を図6に示す。図6によると、作成した検量線は、少なくとも亜硝酸イオン濃度が0~12.0mg[N]/Lの範囲で高い直線性を示している。実施例4亜硝酸イオン溶液の調製亜硝酸イオン濃度が0.0、2.0、4.0および6.0mg[N]/Lの4種類の亜硝酸イオン溶液を実施例1と同様の方法で用意した。検量線の作成用意した4種類の亜硝酸イオン溶液のそれぞれ2.0mLに対して2-ニトロアニリンのジメチルスルホキシド溶液濃度0.3g/L0.5mLを添加し、さらに1mol/L塩酸水溶液に次亜りん酸ナトリウムを濃度が10g/Lになるよう溶解した溶液0.2mLを添加してpHを1.2に設定した。この亜硝酸イオン溶液を25°Cで10分間放置して反応させた後、反応液の315~530nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図7に示す。次に、測定した吸光スペクトルから2-ニトロアニリンによる発色波長である415nmの吸光度を抽出し、この吸光度から亜硝酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図8に示す。図8によると、作成した検量線は、少なくとも亜硝酸イオン濃度が0~6.0mg[N]/Lの範囲で高い直線性を示している。実施例5亜硝酸イオン溶液の調製亜硝酸イオン濃度が0.0、0.5、1.0、1.5および2.0mg[N]/Lの5種類の亜硝酸イオン溶液を実施例1と同様の方法で用意した。検量線の作成用意した5種類の亜硝酸イオン溶液のそれぞれ2.0mLに対して4-ニトロアニリン-2-スルホン酸ナトリウムの水溶液濃度0.6g/L0.15mLを添加し、さらに1mol/L塩酸水溶液に次亜りん酸ナトリウムを濃度が10g/Lになるよう溶解した溶液0.2mLを添加してpHを1.1に設定した。この亜硝酸イオン溶液を25°Cで10分間放置して反応させた後、反応液の270~440nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図9に示す。次に、測定した吸光スペクトルから4-ニトロアニリン-2-スルホン酸ナトリウムによる発色波長である370nmの吸光度を抽出し、この吸光度から亜硝酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図10に示す。図10によると、作成した検量線は、少なくとも亜硝酸イオン濃度が0~2.0mg[N]/Lの範囲で高い直線性を示している。実施例6亜硝酸イオン溶液の調製亜硝酸イオン濃度が0.0、4.0、8.0および12.0mg[N]/Lの4種類の亜硝酸イオン溶液を実施例1と同様の方法で用意した。検量線の作成用意した4種類の亜硝酸イオン溶液のそれぞれ2.5mLに対して1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムの水溶液濃度1.0g/L1.0mLを添加し、さらに10重量塩酸水溶液に次亜りん酸ナトリウムを濃度が10g/Lになるよう溶解した溶液0.5mLを添加してpHを0.5に設定した。この亜硝酸イオン溶液を60°Cで10分間放置して反応させた後、反応液の330~600nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図11に示す。次に、測定した吸光スペクトルから1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムによる発色波長である480nmの吸光度を抽出し、この吸光度から亜硝酸イオン濃度を判定するための検量線を作成した。結果を図12に示す。図12によると、作成した検量線は、少なくとも亜硝酸イオン濃度が0~12.0mg[N]/Lの範囲で高い直線性を示している。比較例1亜硝酸イオン濃度が0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9および1.0mg[N]/Lの11種類の亜硝酸イオン溶液を実施例1と同様の方法で用意した。そして、各亜硝酸イオン溶液に対して日本工業規格JISK0102、工場排水試験方法200843.1.1非特許文献1に規定されたナフチルエチレンジアミン吸光光度法を適用し、540nmの吸光度と亜硝酸イオン濃度との関係を調べた。結果を図13に示す。図13によると、亜硝酸イオン濃度の定量可能範囲は0~0.3mg[N]/Lの範囲に止まり、本法で高濃度の亜硝酸イオンを定量することはできないことがわかる。実験例1実験例1a実施例1と同様にして亜硝酸イオン濃度が12.0mg[N]/Lの亜硝酸イオン溶液を調製した。調製した亜硝酸イオン溶液を3本の試験管A、BおよびCのそれぞれに2.5mLずつ入れ、各試験管の亜硝酸イオン溶液へ1-アミノアントラキノンのジメチルスルホキシド溶液濃度0.5g/L1.0mLを加えた。また、10重量塩酸を0.5mLずつ添加し、pHを0.5に設定した。そして、ブロックヒーターを用いて各試験管を下記の条件で加熱した後、360~600nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図14に示す。なお、図14には、試験管Aについて、1-アミノアントラキノンのジメチルスルホキシド溶液を添加直後であって加熱前に同様の吸光スペクトルを測定した結果ブランクを併せて示している。試験管A:95°Cで10分間試験管B:95°Cで30分間試験管C:85°Cで10分間図14によると、加熱後の試験管A~Cについての吸光スペクトルは、1-アミノアントラキノンによる発色波長である480nmに近い440~470nm付近において不一致が生じている図14の一点鎖線枠内。これは、480nm付近を中心として発光波長に幅のある発光ダイオードや同様に感度波長に幅のあるフォトトランジスタを用いて1-アミノアントラキノンによる着色の吸光度を測定しようとする場合、加熱温度や加熱時間の変動により吸光度の測定結果が変動することを意味し、亜硝酸イオンの定量結果が不正確になる可能性があることを示している。実験例1b1-アミノアントラキノンのジメチルスルホキシド溶液を1-アミノアントラキノンの1-プロパノール溶液濃度0.5g/Lに変更した点を除いて実験例1aと同様に操作し、360~600nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図15に示す。なお、図15には、試験管Aについて、1-アミノアントラキノンの1-プロパノール溶液を添加直後であって加熱前に同様の吸光スペクトルを測定した結果ブランクを併せて示している。図15によると、加熱後の試験管A~Cについての吸光スペクトルは、1-アミノアントラキノンによる発色波長である480nmに近い440~470nm付近においても略一致している図15の一点鎖線枠内。これは、480nm付近を中心として発光波長に幅のある発光ダイオードや同様に感度波長に幅のあるフォトトランジスタを用いて1-アミノアントラキノンによる着色の吸光度を測定しようとする場合においても、加熱温度や加熱時間の変動により吸光度の測定結果が実質的に変動しないことを意味し、信頼性の高い亜硝酸イオンの定量結果が得られることを示している。実験例1c亜硝酸イオン濃度が0.0、4.0、8.0および12.0mg[N]/Lの4種類の亜硝酸イオン溶液を実施例1と同様の方法で調製した。調製した4種類の亜硝酸イオン溶液2.0mLを個別の試験管に入れ、各試験管を90°Cのブロックヒーターに装着した。そして、各試験管へ1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムの水溶液濃度1.0g/L0.8mL、10重量塩酸水溶液0.5mLおよび蒸留水0.5mLを添加し、pHを0.5に設定した。ブロックヒーターによる亜硝酸イオン溶液の加熱温度を95°Cに変更して15分間反応させた後、反応液の360~600nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図16に示す。図16によると、亜硝酸イオン溶液の濃度が異なることで420~540nmの範囲での極大吸収波長が変動している。これは、測定された吸光スペクトルにおいて、1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムによる着色の吸光スペクトルと、1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムからジアゾニウム塩を経由して生成したヒドロキシ体1-ヒドロキシ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムの吸光スペクトルとが融合した状態で現れているためと考えられる。特に、亜硝酸イオン濃度が高いほど極大吸収波長が低波長側へ移動しているのは、亜硝酸イオン濃度が高いためにヒドロキシ体の生成量が相対的に多くなるためと考えられる。実験例1d蒸留水0.5mLに替えて濃度を10g/Lに設定した次亜りん酸ナトリウム水溶液0.5mLを試験管へ加えた点を除いて実験例1cと同様に操作し、反応液の360~600nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図17に示す。図17によると、亜硝酸イオン濃度が異なる場合であっても、亜硝酸イオン濃度が12.0mg[N]/Lの場合を除いて420~540nmの範囲での極大吸収波長は略一定している。これは、次亜りん酸ナトリウム水溶液を用いることで実験例1cのようなヒドロキシ体の生成が抑制され、1-アミノ-4-ブロモアントラキノン-2-スルホン酸ナトリウムによる着色の吸光スペクトルが安定に得られたためと考えられる。実験例2実験例2a蒸留水2.5mL対してジアゾ化試薬であるp-ニトロアニリンのジメチルスルホキシド溶液濃度0.3g/L0.15mLを添加したジアゾ化試薬水溶液を4つ用意し、このうちの3つのそれぞれに1mol/L塩酸を0.03mL、0.06mLおよび0.09mL添加することで水素イオン濃度を0.011mol/L、0.022mol/Lおよび0.033mol/Lに調整した3種類の溶液を調製した。これらの溶液を25°Cで5分間放置した後、290~480nmの吸光スペクトルを測定した。結果を図18に示す。図18には、1mol/L塩酸を添加していないジアゾ化試薬水溶液のみについて同様の吸光スペクトルを測定した結果を併せて示している。実験例2b実験例2aで用意したものと同様のジアゾ化試薬水溶液を4つ用意し、このうちの3つのそれぞれに1mol/L塩酸に替えて1mol/L水酸化ナトリウム溶液を0.03mL、0.06mLおよび0.09mL添加することでpHを7以上に調整した3種類の溶液を調整した。これらの溶液について、実験例2aと同様の条件で放置した後に吸光スペクトルを測定した。結果を図19に示す。図19には、1mol/L水酸化ナトリウム溶液を添加していないジアゾ化試薬水溶液のみについて同様の吸光スペクトルを測定した結果を併せて示している。実験例2c実験例2aと同様にして水素イオン濃度を調整した3種類の溶液を調製し、これらの溶液を25°Cで5分間放置した。その後、それぞれの溶液に1mol/L水酸化ナトリウム溶液0.15mLを添加し、pHをそれぞれ12.6、12.5および12.3に調整した3種類の溶液を調製した。これらの溶液について、実験例2aと同様に吸光スペクトルを測定した結果を図20に示す。図20には、実験例2aで用意したものと同じジアゾ化試薬水溶液に1mol/L水酸化ナトリウム溶液0.15mLのみを添加することでpHを12.7に調整した溶液について、同様の吸光スペクトルを測定した結果を併せて示している。実験例2a~2cの説明実験例2aに関する図18は、吸光スペクトルを測定した溶液の水素イオン濃度が異なることで、ジアゾ化試薬であるp-ニトロアニリンの濃度が同じであっても極大吸収波長の吸光度が異なることを示している。より具体的には、溶液の水素イオン濃度が0.011mol/L増加する毎に、極大吸収波長の吸光度は約5低下することを示している。これに対し、実験例2bに関する図19は、ジアゾ化試薬水溶液に1mol/L水酸化ナトリウム溶液を添加してpHを7以上に設定すれば、p-ニトロアニリンの濃度が同じ溶液において極大吸収波長の吸光度に大きな変化が生じないことを示している。そして、実験例2cに関する図20は、1mol/L塩酸を添加することで水素イオン濃度を高めた溶液は、1mol/L水酸化ナトリウム溶液の添加によりpHを7以上に調整してから吸収スペクトルを測定すると、極大吸収波長の吸光度に殆ど変化が生じないことを示している。以上の結果より、検査水の亜硝酸イオンを定量するときは、ジアゾ化試薬の反応後の検査水のpHを7以上に調整してから吸光度を測定するのが好ましいものと考えられる。"