ブドウ品種である甲州種の新鞘から採取した腋芽を表面殺菌し、茎頂を摘出し、1ベンジルアデニンを含むムラシゲスクーグ培地上に置き、カルス形成を誘導することにより作製されたブドウ培養細胞前記ブドウ培養細胞を、BSS培地またはGB培地において、ショ糖濃度10~30gLであり、暗条件で培養することを特徴とするブドウ培養細胞の培養方法前記ブドウ培養細胞に、パーティクルガン法により遺伝子導入を行われることを特徴とする請求項2に記載のブドウ培養細胞の培養方法前記ブドウ培養細胞に、紫外線を照射し、前記ブドウ培養細胞内にリスベラトロールおよびその酸化誘導体、オリゴマー体を合成蓄積することを特徴とする請求項2に記載のブドウ培養細胞の培養方法二次代謝産物を得るなどの所望の能力を持ったブドウ培養細胞を得るためには、適切なブドウ品種から培養細胞を作製し、それにあった培養条件を検討する必要があった。本発明は、二次代謝産物の生合成の能力を維持したまま高い増殖力をもつブドウ培養細胞を作製し、その細胞の安定した培養方法を確立し、提供することを目的とする。白系ブドウ品種よりも赤系ブドウ品種の方が多く機能性成分を含んでいるため、赤系品種でなお且つ樹勢が強い品種甲州種から培養細胞を作製し、新規の本発明による培養条件により、増殖能力を高め、任意の二次代謝産物の生合成能力を付与することによりブドウ培養細胞を作製することができる。植物やその生産物を取得する場合、ある程度の栽培面積が必要で、気候や季節によって生産量が左右される。また、自然環境から植物を奪取することによる自然破壊が懸念される。しかし、植物培養細胞を用いれば、少ない培養面積で安定した生産が得られ、環境へのリスクが少なくなる。また、植物培養細胞は無機塩類を主とする培地で増殖できるので、低コスト化という効果も期待できる。本発明で確立したブドウ培養細胞は、高い増殖力と生存力を持つので、短期間に多くの細胞が得られ、長期間生きたまま細胞を維持できる。また、ブドウの二次代謝産物は医療、農業、食品に広く利用されている。ブドウ培養細胞の二次代謝産物の生合成誘導や蓄積の機能は維持されているので、培養細胞に有効な物質を生産させることによって、少ない時間、労力、コストで大量に取得することが出来る。本ブドウ培養細胞に二次代謝産物の生合成を促進する遺伝子を導入すれば、より多くの物質を取得することが可能である。また、医療用タンパク質生産のための宿主細胞候補として、これまで高い増殖力をもつタバコ由来のBY2が用いられているが、BY2よりも高いバイオマス生産能力をもつ本培養細胞を用いれば、目的タンパク質をより大量に生産することが可能になる。また、ブドウ由来の培養細胞なので、動物由来と違い、医療や食品に安心して利用できる。本発明のブドウ培養細胞およびその培養方法は、最適な培地条件設定により、従来の植物培養細胞よりも高い増殖能を持つ。ブドウの種類は白系ブドウ品種よりも赤系ブドウ品種の方が多く機能性成分を含んでおり好ましく、赤系品種でなお且つ樹勢が強い品種甲州種が、特に好ましい。また遺伝子導入法には、アグロバクテリウム法、パーティクルガン法、エレクトロポーション法などの通常の導入方法を用いることができるが、本発明のブドウ培養細胞では、パーティクルガン法を用いることが好ましい。また導入される遺伝子群ベクターは、有用な二次代謝産物を合成する遺伝子群であれば、導入することができる。さらにブドウ細胞中に合成された二次代謝産物は、例えばジエチルエーテルまたはメタノール等の有機溶媒により抽出することができる。また細胞のまま、利用することができる。例えばブドウ培養細胞はリスベラトロールを合成することができるが、本発明の培養方法により、より高い合成速度を持つことができる。カルス形成および培地の検討樹勢の強い甲州種の新鞘から採集した腋芽を表面殺菌し、茎頂を摘出した。それを、1ベンジルアデニンを含むムラシゲスクーグMS培地上に置き、カルス形成を誘導した。カルス化した細胞を新鮮な培地に移し、培養細胞を作製した。同細胞株は、表1に示した培地で1~2ヶ月毎に継代して培養した。従来のMM培地およびLS培地を基に最適条件の検討を行った。ショ糖濃度が、本細胞の増殖速度に大きな影響を与えることを見出し、最適なショ糖濃度を検討した。ショ糖10glのとき、培地上での増殖速度がもっとも低く、20、30glのショ糖濃度の培地ではほぼ同じ増殖程度を示した。しかし、30glの培地では、培養細胞の変色が観察されたため、ショ糖濃度は、20glが適切であると判断した。また、LS培地上での培養細胞の増殖速度は、MM培地上よりも低かった。次に、光および温度の条件について検討した。結果を図2に示す。低い温度の場合、28°Cでの培養と比べて増殖速度が低くなった。また、明条件の方が暗条件よりもよい増殖が得られた。しかし、蛍光灯の光の種類によって増殖が著しく阻害されることや、明条件下では細胞の緑化や形態変化が見られたので、安定的な増殖のためには暗条件下での培養の方がよいと考えられる。MM培地、GV培地、BSS培地、GB培地上での細胞増殖を比較すると、BSS培地とGB培地で高い増殖を示した。以上より、作製したブドウ培養細胞は、BSS培地およびGB培地上で、28°C、暗条件で培養することを決定した。増殖速度の評価本発明において作製した甲州の培養細胞が、高い増殖力か否かを確かめるために、カベルネソーヴィニヨン由来培養細胞の増殖と比較した。その結果、いずれの培地上でも甲州由来培養細胞の方が、高い増殖であった。また培養細胞の様子を図5に示す。さらに、植物の培養細胞の中でも高い増殖能をもち、植物の細胞生物学的研究のstandardcelllineとなっているタバコ培養細胞と比較したところ、ブドウ培養細胞は、BY2よりもバイオマス生産能力が高かった。また、培養4週目ではBY2の重量は減少し、細胞死が認められたが、ブドウ培養細胞は増殖を続けた。ブドウ培養細胞は、培養5週目では細胞増殖が認められたが、それ以降は停滞した。しかし、培養5週目での細胞死は認められなかった。以上のことから、新たに作製した培養細胞は、我々が決定した培養条件下において高い増殖能を持ち、さらに、BY2よりも生存期間が長いという利点があることが分かった。リスベラトロール合成の確認ポリフェノールの一種であるリスベラトロールは、UV照射されたブドウによって合成蓄積される。そこで、確立したブドウ培養細胞にUVを照射し、細胞内にリスベラトロールが蓄積されるか否か検討し、二次代謝産物の生合成能を確認した。結果を表2に示す。UV照射によって、リスベラトロールおよびその酸化誘導体、オリゴマー体の蓄積が増加した。つまり、本ブドウ培養細胞は、二次代謝生産能を失っておらず、UVに対して植物体と同様な反応を示した。遺伝子導入法の検討液体培養4日目のブドウ細胞液15mlを、空シャーレ上の14にカットした円形ろ紙の上に落とした。この作業はクリーンベンチ内で行った。この時、ブドウ細胞がなるべく水平になるように置いた。シャーレにフタをしてクリーンベンチの外へ出し、パーティクルガンバイオラッド社製を用いて遺伝子導入を行った。パーティクルガンの遺伝子導入条件は、DNA10μg、金粒子量は10μgとした。また発射条件は、発射距離3cm、発射圧力069MPaとした。供試したベクターは、核小体でsyntheticgreenfluorescentproteingeneを発現するように構成した遺伝子群を含む植物形質転換ベクターである。その後、すぐにクリーンベンチ内へ戻し、ろ紙ごとGMホルモン‐固形培地の上に置き27°Cインキュベーター内に静置させた。GMホルモン‐培地の使用は、パーティクルガンで傷ついた細胞の修復促進を期待して選択した。2日後、カナマイシン濃度を10μgml、50μgml、100μgml、200μgml、400μgmlとした各GB固定培地に細胞を移動させた。培地組成は表3に示す。この実験で用いたベクターにはカナマイシン耐性遺伝子が組み込まれている。この培地を用いて形質転換体の選択を行う。この作業はクリーンベンチ内で行った。火炎滅菌したスパチュラで、パーティクルガンが当たった部分およびその周辺を静かにすくい、固定培地に乗せた。この時、どの部分で形質転換体が得られるか不明なため、1つの固定培地に対して細胞を3~4か所に乗せた。その後、27°Cインキュベーター内で静置させた。16日後に細胞を観察したところ、カナマイシン濃度10μgmlと50μgmlへ移動させた細胞では、細胞塊表面は茶色くなっていたが、その内側では白い細胞が増殖していた。白い部分の細胞塊をBSS固定培地へ移動させ、27°Cインキュベーター内で静置させた。BSS固定培地の使用は、細胞の成長促進を期待して選択した。100μgml、200μgml、400μgmlでは、細胞塊全体が茶色くなり、細胞塊の大きさに変化がなかった。30日後、2種類のカナマイシン濃度からBSS固定培地へ移動させた細胞塊に成長が見られ、色も白かった。これらの細胞を採取してサンプルとし、蛍光顕微鏡で観察した。図8、9に示す。その結果、核小体付近でGFP由来の蛍光が観察された。この結果は、本ブドウ細胞を用いて、目的とする細胞内小器官へ、目的のタンパク質を局所的に発現できることを意味する。