"名称は組み替え大腸菌DALAであって、以下のような方法で製造されることを特徴とする組み替え大腸菌。hemAMとhemL遺伝子を含む共発現ベクターphemAMhemLを構築し、またrhtAを含む発現ベクターprhtAを構築する。そして、構築した組み替えプラスミドplasmidphemAMhemLとprhtAを共に大腸菌の中に変換して、hemAM、hemLとrhtA遺伝子を同時過剰発現する組み換え大腸菌DALAを獲得する。前記hemAMは大腸菌或いはサルモネラ菌からのhemA遺伝子の突然変異体で、前記hemL遺伝子は大腸菌或いはサルモネラ菌からで、前記rthA遺伝子は大腸菌からであることを特徴とする請求項1に記載の組み換え大腸菌。前記hemAMはアリゾナサルモネラ菌からのhemA遺伝子の突然変異体で、前記hemL遺伝子はサルモネラ菌からであることを特徴とする請求項2に記載の組み換え大腸菌。前記hemAM、hemL或いはrhtA遺伝子を発現するベクターはpBluescriptSK、pUC19、pUC18、pCL1920或いはpTrc99Aであることを特徴とする請求項1に記載の組み換え大腸菌。前記hemAMとhemL遺伝子を発現するベクターはpUC19を選び、前記rhtA遺伝子を発現するベクターはpCL1920を選ぶことを特徴とする請求項4に記載の組み換え大腸菌。前記大腸菌は大腸菌MG1655、大腸菌DH5α、大腸菌JM109、大腸菌W3110或いは大腸菌XL1Blueを選ぶことを特徴とする請求項1に記載の組み換え大腸菌。前記大腸菌は大腸菌DH5αを選ぶことを特徴とする請求項6に記載の組み換え大腸菌。前記大腸菌DALAはDH5αpUChemAMhemLpCL1920rhtAであることを特徴とする請求項1に記載の組み換え大腸菌。前記組み換え大腸菌は改良の無機塩培養基の中で、ブドウ糖を発酵することによって5アミノレブリン酸を生産し、前記改良の無機塩培養基の調剤は次の通りであることを特徴とする5アミノレブリン酸の生産における前記組み換え大腸菌の応用。ブドウ糖550gL、2SO41030gL、KH2PO418gL、Na2HPO412H2O1030gL、MgSO47H2O0115gL、MnSO47H2O000101gL、酵母粉末053gL、イソプロピルβDチオガラクトシドIPTG、isopropylβDthiogalactoside0051mM;前記発酵培養基に濃度が50100μgmLであるアンピシリンAmpicillinと濃度が3050μgmLであるスペクチノマイシンを添加する。前記組み換え大腸菌が改良の無機塩培養基の中でブドウ糖を発酵する条件は次の通りであることを特徴とする5アミノレブリン酸の生産における前記組み換え大腸菌の応用。菌種の接種量は体積パーセントが2~5で、発酵温度が35°C38°Cで、pHが6070で、溶存酸素を50以上にコントロールし、発酵時間は3660時間である。[発明を実施するための形態]一般的な説明:実施例に関係する酵素はすべてTaKaRa会社から購入する。プラスミドを抽出する試薬箱は天根会社から購入する。アガロースゲルagarosegel回収DNAフラグメントの試薬箱は申能博彩会社から購入する。操作は完全に相応の説明書に従う。プラスミドの構築における遺伝子の配列の測定は華大遺伝子会社によって完成する。ALAの標準サンプル及びその他の試薬はすべてSigma会社から購入する。DH5αコンピテント細胞は全式金生物技術有限会社から購入する。LB液体培養基1L:酵母粉末5,ペプトンpeptone10,NaCl10,pH70。LBアンピシリン耐性固定培養基1L:酵母粉末5,ペプトン10,NaCl10,アンピシリン100μgmL。ALAの測定方法:サンプルを2mLまでに希釈して、1mLのアセテート緩衝液と05mLのアセチルアセトンを入れて、15分間煮る。室温まで冷却させてから、2mLの反応液を新しい管に入れて、2mLの改良のEhrlich’s試薬を加入する。20分間反応して、分光の光度計554nmで測定する。前記アセテート緩衝液の配分1L:57mL氷酢酸、82g無水酢酸ナトリウム。前記改良のEhrlich’s試薬:50mLのメスシリンダーに30mLの氷酢酸、1gのp‐ジメチルアミノベンズアルデヒド及び8mLの70過塩素酸を入れてから、50mLに定容する。実施例1、gltX遺伝子発現ベクターの構築NCBIが発表した大腸菌遺伝子の配列に基づいて、プライマーのgltXF:5′TCCCTGCAGAAAGGAGGATATACATATGAAAATCAAAACTCGCTTCGCGC3′とgltXR:5′GGCGTCGACTTACTGCTGATTTTCGCGTTCAGCAATAAAATCC3′を利用して、大腸菌遺伝子グループ又は直接的に菌落PCRを採用して、gltXの遺伝子をクローンする。エンドヌクレアーゼのPstIとSalIをそれぞれ利用して、クローンしたgltXフラグメントを消化処理する。同時に、エンドヌクレアーゼのPstIとSalIをそれぞれ利用して、プラスミドベクターpUC19をも消化処理する。アガロースゲル試薬箱を利用して消化処理したgltXフラグメントとpUC19プラスミドベクターを回収し、T4リガーゼで結合させる。結合体系は10μLである:gltXフラグメント:6μLpUC19ベクター:2μL10×Buffer:1μLT4リガーゼ:1μL16°Cの温度で12時間結合してから、10μLの結合液を大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換する。変換過程:10μLの結合液を100μLのDH5αコンピテント細胞に加入して、均一にかき混ぜる。30分間に氷浴し、42°Cの温度で90秒間に熱衝撃してから、2分間に氷浴し、900μLのLB培養基を加入する。温度を37°Cに、速度を100転分にして、1時間孵化する。アンピシリン耐性プレートを塗装し、16時間培養し、変換子を選別し、プラスミドを抽出して検証する。それから、配列の測定でgltX遺伝子の正確さをさらに検証して、組み換えプラスミドpUCgltXを獲得する。実施例2、hemL遺伝子発現ベクターの構築NCBIが発表した大腸菌遺伝子の配列に基づいて、プライマーのhemLF:5′ACAGGATCCAAAGGAGGATATACATATGAGTAAGTCTGAAAATCTTTACAGCG3′とhemLR:5′AATGAGCTCTCACAACTTCGCAAACACCCGACGTGCAGCA3′を利用して、大腸菌遺伝子グループ又は直接的に菌落PCRを採用して、hemL遺伝子をクローンする。エンドヌクレアーゼのBamIとSacIをそれぞれ利用して、クローンしたhemLフラグメントを消化処理する。同時に、エンドヌクレアーゼのPstIとSalIをそれぞれ利用して、プラスミドベクターpUC19をも消化処理する。アガロースゲル試薬箱を利用して消化処理したhemLフラグメントとpUC19プラスミドベクターを回収してから、T4リガーゼで結合させる。結合体系は10μLである:hemLフラグメント:6μLpUC19ベクター:2μL10×Buffer:1μLT4リガーゼ:1μL16°Cの温度で12時間結合してから、10μLの結合液を大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換する。変換過程:10μLの結合液を100μLのDH5αコンピテント細胞に加入して、均一にかき混ぜる。30分間氷浴し、42°Cの温度で90秒間熱衝撃してから、2分間に氷浴して、900μLのLB培養基を加入する。温度を37°Cに、速度を100転分にして、1時間孵化する。アンピシリン耐性プレートを塗装し、16時間培養し、変換子を選別し、プラスミドを抽出して検証する。それから、配列の測定でhemL遺伝子の正確さをさらに検証して、組み換えプラスミドpUChemLを獲得する。実施例3、hemA遺伝子の突然変異及び発現ベクターの構築NCBIが発表したサルモネラ菌の配列に基づいて、プライマーのhemAMF:5′CCCGTCGACAAAGGAGGATATACATATGACCAAGAAGCTTTTAGCACTCGGTATCAAC3′とhemAMR:5′AAATCTAGACTACTCCAGCCCGAGGCTGTCGCGCAGA3′を利用して、大腸菌遺伝子グループ又は直接的に菌落PCRを採用して、hemAMをクローンする。エンドヌクレアーゼのSalIとXbaIをそれぞれ利用して、クローンしたhemLフラグメントを消化処理する。同時に、エンドヌクレアーゼのPstIとSalIをそれぞれ利用して、プラスミドベクターpUC19をも消化処理する。アガロースゲル試薬箱を利用して消化処理したhemAMフラグメントとpUC19プラスミドベクターを回収してから、T4リガーゼで結合させる。結合体系は10μLである:hemAMフラグメント:6μLpUC19ベクター:2μL10×Buffer:1μLT4リガーゼ:1μL16°Cの温度で12時間結合してから、10μLの結合液を大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換する。変換過程:10μLの結合液を100μLのDH5αコンピテント細胞に加入して、均一にかき混ぜる。30分間氷浴し、42°Cの温度で90秒間熱衝撃し、2分間氷浴して、900μLのLB培養基を加入する。温度を37°Cに、速度を100転分にして、1時間孵化する。アンピシリン耐性プレートを塗装し、16時間培養し、変換子を選別し、プラスミドを抽出して検証する。それから、配列の測定でhemAM遺伝子の正確さをさらに検証して、組み換えプラスミドpUChemAMを獲得する。実施例4、hemAMとhemL遺伝子共発現ベクターの構築エンドヌクレアーゼのBamIとSacIによって、プラスミドのpUChemLを消化処理して、フラグメントのBamIhemLSacIを獲得する。それから、エンドヌクレアーゼのBamIとSacIによって、プラスミドのpUChemAMを消化処理する。T4リガーゼでフラグメントのBamIhemLSacIをpUChemAMに結合させる。結合体系は10μLである:hemAMフラグメント:6μLpUChemAMベクター:2μL10×Buffer:1μLT4リガーゼ:1μL16°Cの温度で12h結合してから、10μLの結合液を大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換する。変換過程:10μLの結合液を100μLのDH5αコンピテント細胞に加入して、均一にかき混ぜる。30分間氷浴し、42°Cの温度で90秒間熱衝撃し、2分間氷浴して、900μLのLB培養基を加入する。温度を37°Cに、速度を100転分にして、1時間孵化する。アンピシリン耐性プレートを塗装し、16時間培養して、変換子を選別し、プラスミドを抽出して検証する。それから、配列の測定でhemAMとhemL遺伝子の正確さをさらに検証して、組み換えプラスミドpUChemAMhemLを獲得する。実施例6、gltX、hemAMとhemL遺伝子共発現ベクターの構築エンドヌクレアーゼのPstIとSalIによって、プラスミドのpUCgltXを消化処理して、フラグメントのPstIgltXSalIを獲得する。それから、エンドヌクレアーゼのPstIとSalIによって、プラスミドのpUChemAMhemLを消化処理する。T4リガーゼでフラグメントのPstIgltXSalIをpUChemAMhemLに結合させる。結合体系は10μLである:gltXフラグメント:6μLpUChemAMhemLベクター:2μL10×Buffer:1μLT4リガーゼ:1μL16°Cの温度で12時間結合してから、10μLの結合液を大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換する。変換過程:10μLの結合液を100μLのDH5αコンピテント細胞に加入して、均一にかき混ぜる。30分間氷浴し、42°Cの温度で90秒間熱衝撃し、2分間氷浴し、900μLのLB培養基を加入する。温度を37°Cに、速度を100転分にして、1時間孵化する。アンピシリン耐性プレートを塗装し、16時間培養し、変換子を選別し、プラスミドを抽出して検証する。このようにして、組み換えプラスミドpUCgltXhemAMhemLを獲得する。実施例7、rhtA発現ベクターの構築NCBIが発表した大腸菌の配列に基づいて、プライマーのrhtAF:5′CCGAAGCTTTTAATAAGGAGGATATACATATGCCTGGTTCATTACGTAAAATGCCGG3′とrhtAR:5′GCCCTGCAGTTAATTAATGTCTAATTCTTTTATTTTGCTCTC3′を利用して、大腸菌遺伝子グループ又は直接的に菌落PCRを採用して、rhtAをクローンする。エンドヌクレアーゼのHindIIIとPstIをそれぞれ利用して、クローンしたrhtAフラグメントを消化処理する。同時に、エンドヌクレアーゼのHindIIIとPstIをそれぞれ利用して、プラスミドベクターのpCL1920をも消化処理する。アガロースゲル試薬箱を利用して消化処理したrhtAフラグメントとpCL1920プラスミドベクターを回収してから、T4リガーゼで結合させる。結合体系は10μLである:rhtAフラグメント:6μLpCL1920ベクター:2μL10×Buffer:1μLT4リガーゼ:1μL16°Cの温度で12時間結合してから、10μLの結合液を大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換する。変換過程:10μLの結合液を100μLのDH5αコンピテント細胞に加入して、均一にかき混ぜる。30分間氷浴し、42°Cの温度で90秒間熱衝撃し、2分間氷浴し、900μLのLB培養基を加入する。温度を37°Cに、速度を100転分にして、1時間孵化する。アンピシリン耐性プレートを塗装し、16時間培養し、変換子を選別し、プラスミドを抽出して検証する。それから、配列の測定でrhta遺伝子の正確さをさらに検証して、過剰発現するrhtAの組み換えプラスミドpCL1920rhtAを獲得する。実施例8、組み換え菌株の構築及びALA産生量の比較組み替え菌株の構築:上で構築したプラスミドpUCgltX、pUChemL、pUChemAM、pUChemAMhemL及びpUCgltXhemAMhemLをそれぞれ大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換して、組み替え菌株のDH5αpUCgltX、DH5αpUChemL、DH5αpUChemAM、DH5αpUChemAMhemL及びDH5αpUCgltXhemAMhemLを獲得する。組み替えプラスミドpUChemAMhemLと組み替えプラスミドpCL1920rhtAを共に大腸菌DH5αコンピテント細胞に変換して、組み替え菌株DH5αpUChemAMhemLpCL1920rhtAを獲得する。各組み換え菌株の発酵の比較:構築した組み換え菌株のDEX、DEL、DA、DAL、DXAL及びDALAの単集落を選んで、20mLの発酵培養基を入れている250mLの三角瓶に入れる。温度を37°Cに、速度を225転分にして、12時間培養する。培養液を体積比1の接種量で50mLの発酵培養基を入れている300mLの三角瓶に入れる。温度を37°Cに、速度を225転分にして、4時間サンプリングする。発酵の時間は36時間である。そのうち、DEX、DEL、DA、DAL、DXALの発酵培養基グループの配分:2SO416gL、KH2PO43gL、Na2HPO412H2O16gL、MgSO47H2O1gL、MnSO47H2O001gL、酵母粉末2gL,100μgmLアンピシリン、IPTG01mM、ブドウ糖35gL。その中で、アンピシリンの添加はプラスミドの安定を保つためである。それに対して、組み換え菌株DALAの発酵培養基グループの配分:2SO416gL、KH2PO43gL、Na2HPO412H2O16gL、MgSO47H2O1gL、MnSO47H2O001gL、酵母粉末2gL、100μgmLアンピシリン、50μgmLスペクチノマイシン、IPTG01mM、ブドウ糖35gL。その中、アンピシリンとスペクチノマイシンの添加はプラスミドの安定を保つためである。ALAを測定する具体的な方法:サンプルを2mLまで希釈して、1mLのアセテートと05mLのアセチルアセトンを入れる。それから、15分間煮る。室温まで冷却してから、2mLの反応液を新しい管に入れて、2mLの改良のEhrlich’s試薬を加入する。20分間反応して、分光の光度計554nmで測定する。各組み換え菌株ALAの産生量の統計は図3の通りである。そのうち、組み換え菌株DEX、DEL、DA、DALとDXALのALA産生量はそれぞれ0016gL、0024gL、0176gL、205gLと132gLである。それに対して、組み替え菌株DALAのALAの産生量は286gLに達し、最高であり、菌株DEXのALAの産生量の179倍である。実施例9、組み替え菌株EcoliDALAによる組別のALAの発酵生産種液の調製:構築した組み換え大腸菌の単集落を選んで、4mLの発酵培養基を入れている25mLの三角瓶に入れる。温度を37°Cに、速度を225転分にして、12時間培養する。培養の菌液を1vvの接種量で50mLの発酵培養基を入れている300mLの三角瓶に入れる。温度を37°Cに、速度を225転分にして、8時間培養する。それで、種液が出来上がる。発酵缶培養:調製した種液を2vvの接種量で3Lの発酵培養基をいれている5Lの発酵缶に入れて培養する。発酵の温度は37°Cで、pHは62で、溶存酸素は50以上にコントロールする。発酵の時間は56hである。4hごとにサンプリングする。それから、色度分析によってALAの濃度を測定する。ALAの測定方法は色度分析である。詳しいことについては、実施例の一般的な説明を参照する。上述した組み換え菌株DALAの発酵培養基グループの配分:2SO416gL、KH2PO43gL、Na2HPO412H2O16gL、MgSO47H2O1gL、MnSO47H2O001gL、酵母粉末2gL、100μgmLアンピシリン、50μgmLスペクチノマイシン、IPTG01mM、ブドウ糖35gL。発酵の結果は図4に示した通りである。組み換え大腸菌DALAのALAの産生量は413gLに達し、ブドウ糖の変換率は0168gALAgブドウ糖に達する。組み換え大腸菌によってブドウ糖を発酵してALAを生産するルートを示す図である。プラスミド発現ベクター図録の構造を示す図である。各組み換え菌株ALAの産生量を比較した結果を示す図である。発酵缶培養の組み換え菌株でALAを生産することを示す図である。"