"哺乳動物の肝細胞保護の方法であって、哺乳動物の肝細胞を有効濃度のガルシノールと接触させるステップを含む、上記方法。ガルシノールの有効濃度が、約0.78μg/mlから約6.25μg/mlである、請求項1に記載の方法。肝障害肝毒性の哺乳動物モデルにおけるサイトカインの発現レベルの増加を小さくする方法であって、有効量のガルシノールを前記モデルに投与するステップを含む、上記方法。サイトカインがトランスフォーミング増殖因子G-β1TGF-β1である、請求項3に記載の方法。サイトカインが腫瘍壊死因子-αである、請求項3に記載の方法。サイトカインがインターロイキン-2IL-2である、請求項3に記載の方法。サイトカインがインターロイキン-4IL-4である、請求項3に記載の方法。サイトカインがインターロイキン-12IL-12である、請求項3に記載の方法。肝毒性が毒素によって引き起こされる、請求項3に記載の方法。肝毒性が薬物によって引き起こされる、請求項3に記載の方法。肝毒性がエチルアルコールによって引き起こされる、請求項3に記載の方法。肝障害肝毒性の哺乳動物モデルにおける接着分子の発現レベルの増加を小さくする方法であって、有効量のガルシノールを前記モデルに投与するステップを含む、上記方法。接着分子が細胞内接着分子-1ICAM-1、またはCD52である、請求項12に記載の方法。肝毒性が毒素によって引き起こされる、請求項12に記載の方法。肝毒性が薬物によって引き起こされる、請求項12に記載の方法。肝障害肝毒性の哺乳動物モデルにおける肝酵素および/または胆汁色素のレベルの増加を小さくする方法であって、有効量のガルシノールを前記モデルに投与するステップを含む、上記方法。肝毒性が毒素によって引き起こされる、請求項16に記載の方法。肝毒性が薬物によって引き起こされる、請求項16に記載の方法。肝毒性がエチルアルコールによって引き起こされる、請求項16に記載の方法。肝酵素が、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、およびアルカリホスファターゼを含む群から選択される、請求項16に記載の方法。胆汁色素がビリルビンである、請求項16に記載の方法。肝臓保護を提供する方法であって、治療に有効な量のガルシノールを、それを必要としている対象に投与するステップを含む、上記方法。最も好ましい実施形態において、本発明は、哺乳動物の肝細胞保護の方法に関し、この方法は、哺乳動物の肝細胞を、有効濃度のガルシノールと接触させるステップを含む。より詳細には、有効濃度のガルシノールは、約0.78μg/mlから約6.25μg/mlである図12および13。別の最も好ましい実施形態において、本発明は、肝臓保護を提供する方法に関し、この方法は、治療に有効な量のガルシノールを、それを必要としている対象に投与するステップを含む。より詳細には、対象は哺乳動物である。別の好ましい実施形態において、本発明は、肝障害肝毒性の哺乳動物モデルにおける、サイトカイン発現レベルの増加を小さくする方法に関し、この方法は、有効量のガルシノールを、前記モデルに投与するステップを含む図1、4、5、6、7、9、10および11。特定の実施形態において、サイトカインは、トランスフォーミング増殖因子G-β1TGF-β1、腫瘍壊死因子-α、インターロイキン-2IL-2、インターロイキン-4IL-4、およびインターロイキン-12IL-12である。さらなる特定の実施形態において、哺乳動物モデルにおける肝毒性は、毒素、薬物またはエチルアルコールによって誘発され得る。別の特定の実施形態において、肝障害は、毒素、薬物およびエチルアルコールの組合せによって誘発される。さらに別の好ましい実施形態において、本発明は、毒素および/または薬物によって誘発される肝障害肝毒性の哺乳動物モデルにおける、接着分子の発現レベルの増加を小さくする方法に関し、この方法は、有効量のガルシノールを、前記モデルに投与ステップを含む図2および8。特定の実施形態において、接着分子は、細胞内接着分子-1ICAM-1またはCD52である。さらに別の好ましい実施形態において、本発明は、肝障害肝毒性の哺乳動物モデルにおける、肝酵素および/または胆汁色素のレベルの上昇を小さくする方法に関し、この方法は、有効量のガルシノールを、前記モデルに投与するステップを含む。特定の実施形態において、肝酵素は、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、およびアルカリホスファターゼである表3、4および5。別の特定の実施形態において、胆汁色素はビリルビンである。さらなる特定の実施形態において、哺乳動物モデルにおける肝障害は、毒素、薬物またはエチルアルコールによって誘発され得る。別の特定の実施形態において、肝障害は、毒素、薬物およびエチルアルコールの組合せによって誘発される。肝臓保護剤としてのガルシノールの治療上の潜在的価値は、本明細書において以下に説明される例によって理解され得る。例1ガルシノールの急性経口安全性:マウスにおいて、2週間までの観察で、2000mg/kg.p.oまでで、死亡は観察されなかった。調査されたパラメータおよび記録された観察は、表1に含まれるOECDGuidelinesforTestingofChemicalsGuideline423AcuteOralToxicityAcuteToxicClassMethodAdoptedOrganizationforEconomicCooperationandDevelopment。例2ラットでの四塩化炭素誘発肝障害の肝臓ホモジェネートにおける、TGF-β1、ICAM-1、およびCRPの発現への様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究に用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:肝臓損傷は、液体パラフィンと混合5倍希釈した四塩化炭素CCl4の投与によって誘発した。動物には、1ml/kg,p.o.で、CCl4を単回投与し、その後、様々な時間間隔でガルシノールを投与した表2。[iBramantiGMurmannWPieriniPandComportiMEffectofcicloxilicacidonCCl4inducedliverinjuryDrugResearch2811121217。iiBSinghAKSaxenaBKChandanKKAnandHepatoprotectiveactivityofVerbenalinonexperimentalliverdamageinrodentsFitoterapiaLXIX2135140。iiiBKChandanAKSharmaKKAnandBoerhaaviadiffusaAstudyofitshepatoprotectiveactivityJournalofEthnopharmacologyVolume31Issue3March1991Pages299307]。肝臓組織を、氷冷しながらポリトロンホモジェナイザーで処理し、ホモジェネートを、5000gで15分間遠心した。上澄みのアリコートを分離し、生化学的分析に用いた。上澄みは、サイトカイン分析まで、-80°Cで保存した。TGFβ、ICAM-1、C反応性タンパク質CRPは、サンドイッチおよび競合ELISA法に基づく市販のキットを用い、製造業者の教示に従って、評価した。全てのサイトカイン濃度は、ELISAプレートリーダーで、450nmでの比色測定によって、標準曲線からの補間法により求めた。[iMagariKMiyataSOhkuboYMutohSInflammatorycytokinelevelsinpawtissuesduringdevelopmentofratcollageninducedarthritisEffectofFK506aninhibitorofTcellactivationInflammationResearch53469474、およびiiModulationofTh1Th2cytokinesandinflammatorymediatorsbyhydroxychavicolinadjuvantinducedarthritictissuesAnjaliPandeySarangBaniPrabhuDuttKrishnaAvtarSuriCytokine49114121]結果:ガルシノールは、ラットにおける四塩化炭素誘発肝障害から生じる急性肝炎に付随する、TGFβ図1、ICAM-1図2、C反応性タンパク質CRP図3のレベルの増加を抑制した。例3ラットでの四塩化炭素誘発肝障害の血液におけるTNF-α、IL-2、およびIL-4への様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究で用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:肝臓損傷は、液体パラフィンと混合5倍希釈した四塩化炭素CCl4の投与によって誘発した。動物には、1ml/kg,p.o.で、CCl4を単回投与し、その後、ガルシノールを投与した前記の表2を参照。[iBramantiGMurmannWPieriniPandComportiMEffectofcicloxilicacidonCCl4inducedliverinjuryDrugResearch2811121217。iiBSinghAKSaxenaBKChandanKKAnandHepatoprotectiveactivityofVerbenalinonexperimentalliverdamageinrodentsFitoterapiaLXIX2135140。iiiBKChandanAKSharmaKKAnandBoerhaaviadiffusaAstudyofitshepatoprotectiveactivityJournalofEthnopharmacologyVolume31Issue3March1991Pages299307]。動物は、後眼窩から血液を抜き取り、血液は、PE-標識された坑ラットTNF-アルファ、IL-2およびIL-4モノクローナル抗体発現評価のために、EDTA被覆管に採集した。分析は、フローサイトメーターBD-FACSCANTOIIで行った。これらの蛍光色素-標識モノクローナル抗体は、100μlの全血に直接加え、次いで、これを、全血溶解試薬を用い、溶解した。最後の遠心の後、試料を、リン酸緩衝生理食塩水pH、7.4に再懸濁し、フローサイトメーターで直接分析した。蛍光トリガーは、PEFL2パラメータに設定して、事象を集めた。[iBaniSKaulAKhanBAhmadSFSuriKAGuptaBDSattiNKQaziGNSuppressionofTlymphocyteactivitybylupeolisolatedfromCrataevareligiosaPhytotherapyResearch20279287。およびiiBaniSKaulAKhanBAhmadSFSuriKASattiNKImmunosuppressivepropertiesofanethylacetatefractionfromEuphorbiaroyleanaJournalofEthnopharmacology99185192]。結果:ガルシノールGCは、ラットにおける四塩化炭素誘発肝障害の血液に発現されるTNF-α図4、IL-2図5、およびIL-4図6の阻害によって特徴付けられる、T細胞免疫応答の用量に依存する阻害を引き起こした。例4ラットでの四塩化炭素誘発肝障害における、ビリルビン、ならびに血清酵素のアラニントランスアミナーゼALT、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼASTおよびアルカリホスファターゼALPへの様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究で用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:肝臓損傷は、液体パラフィンと混合5倍希釈した四塩化炭素CCl4の投与によって誘発した。動物には、1ml/kg,p.o.で、CCl4を単回投与し、その後、ガルシノールを投与した表2。[iBramantiGMurmannWPieriniPandComportiMEffectofcicloxilicacidonCCl4inducedliverinjuryDrugResearch2811121217。iiBSinghAKSaxenaBKChandanKKAnandHepatoprotectiveactivityofVerbenalinonexperimentalliverdamageinrodentsFitoterapiaLXIX2135140。iiiBKChandanAKSharmaKKAnandBoerhaaviadiffusaAstudyofitshepatoprotectiveactivityJournalofEthnopharmacologyVolume31Issue3March1991Pages299307]血液は、実験動物の後眼窩集網叢から採集し、抗凝固剤は添加しなかった。血液を、室温で1時間放置した。次いで、それを、遠心し、透明な血清を分離した。次に、血清を、分析のために保存した。参考文献:Magarietal2004。血清生化学Iアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ、参考文献:RitmanSFrankelSAcolorimetericmethodforthedeterminationofserumglutamicoxaloaceticandglutamicpyruvictransaminasesAmericanJournalofClinicalPathology285663。手順:試験およびコントロール試料から採集した0.2mlの血清を、1.0mlの緩衝液と混合し、水浴中、37°Cで60分間インキュベートした。1.0mlのクロモゲン溶液を添加後、反応が進行するように、試料を室温に20分間保ち、10mlのNaOHを加えた。5分後に、546nmで、光学濃度を読み取った。ブランクには、クロモゲン溶液の添加後に、血清を加えた。血清生化学IIアルカリホスファターゼ、参考文献:KlausWalterandSchuttCAcidandalkalinephosphataseinserum。MethodsofEnzymaticAnalysisEdsHansUlrichBergmeyer2ndEditionVol2pp85564中。手順:アルカリホスファターゼ活性測定は、アルカリ条件下にp-ニトロフェノールホスフェートを加水分解する、この酵素の能力に基づく。開裂した生成物のp-ニトロフェノールは、アルカリ溶液中で黄色であり、400~420nmで測定されるKlausandSchutt1974。2.0mlの緩衝化された基質を、試験、コントロール、およびブランクの管に入れ、その後、血清および蒸留水0.1mlを、試験、およびブランクにそれぞれ加え、水浴中、25°Cで30分間インキュベートした。インキュベートした後、水酸化ナトリウム0.25N、2mlを全ての管に加え、その後、コントロールと印された管に、血清0.1mlを加えた。発生する黄色を、410nmで、ブランクと比較して、分光光度計により測定した。血清生化学III[ビリルビンBRBN]、参考文献:MalloyHTandEvelynKAThedeterminationofbilirubinwithphotoelectriccolorimeterJournalofBiologicalChemistry119481490。手順:血清ビリルビンを、MalloyandEvelynの方法によって評価した。試験、およびコントロールと印した2組の試験管に、血清0.2mlおよび蒸留水1.8mlを加えた。試験および標準と印した試験管に、ジアゾ試薬0.5mlを加えた。コントロールおよびブランクと印した試験管に、ジアゾブランク0.5mlを加えた。最後に、メタノール2.5mlを各試験管に加えた。試験管は、混合し、暗所に30分間放置した。10分後に、540nmで、試験管を読み取った。結果:ガルシノールは、ラットでの四塩化炭素誘発肝障害における、ビリルビン、ならびに血清酵素のアラニントランスアミナーゼALT、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼASTおよびアルカリホスファターゼALPのレベルの増加を小さくした表3。例5ラットでのパラセタモール誘発肝障害の肝臓ホモジェネートにおける、TGF-ベータ1、およびICAM-1の発現への様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究に用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:実験動物には、7日間、パラセタモール400mg/体重1kgを経口投与した。薬物処置グループからの動物に、水に溶かしたパラセタモール400mg/体重1kgを、段階的な用量の試験薬物ガルシノールと共に、7日間、経口投与した。標準グループの動物には、50mg/体重1kgの標準薬物シリマリン、および400mg/体重1kgのパラセタモールを、7日間投与し、標準コントロールとして用いた。[NKanchanaandAMohamedSadiqHepatoprotectiveeffectofPlumbagozeylanicaonparacetamolinducedlivertoxicityinratsIntJPharmPharmSciVol3Issue1151154]。実験動物からの肝臓組織を、氷冷しながらポリトロンホモジェナイザーで処理し、ホモジェネートを、5000gで15分間遠心した。上澄みのアリコートを分離し、生化学的分析に用いた。上澄みは、サイトカイン分析まで、-80°Cで保存した。TGFβ、ICAM-1は、サンドイッチおよび競合ELISA法に基づく市販のキットを用い、製造業者の教示に従って、評価した。全てのサイトカイン濃度は、ELISAプレートリーダーで、450nmでの比色測定によって、標準曲線からの補間法により求めた。[iMagariKMiyataSOhkuboYMutohSInflammatorycytokinelevelsinpawtissuesduringdevelopmentofratcollageninducedarthritisEffectofFK506aninhibitorofTcellactivationInflammationResearch53469474、およびiiModulationofTh1Th2cytokinesandinflammatorymediatorsbyhydroxychavicolinadjuvantinducedarthritictissuesAnjaliPandeySarangBaniPrabhuDuttKrishnaAvtarSuriCytokine49114121]。結果:ガルシノールは、パラセタモール誘発急性肝炎に関連する肝臓における、TGF-ベータ、およびICAM-1の発現レベルの増加を、用量に応じて抑制した図7および図8。例6ラットでのパラセタモールアセチル-パラ-アミノフェノール-APAP誘発肝障害における、血清酵素のアラニントランスアミナーゼALT、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼASTおよびアルカリホスファターゼALPへの様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究に用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:実験動物には、7日間、パラセタモール400mg/体重1kgを経口投与した。薬物処置グループからの動物に、水に溶かしたパラセタモール400mg/体重1kgを、段階的な用量の試験薬物ガルシノールと共に、7日間、経口投与した。標準グループの動物には、50mg/体重1kgの標準薬物シリマリン、および400mg/体重1kgのパラセタモールを、7日間投与し、標準コントロールとして用いた。[NKanchanaandAMohamedSadiqHepatoprotectiveeffectofPlumbagozeylanicaonparacetamolinducedlivertoxicityinratsIntJPharmPharmSciVol3Issue1151154]。血液は、実験動物の後眼窩集網叢から採集し、抗凝固剤は添加しなかった。血液を、室温で1時間放置した。次いで、それを、遠心し、透明な血清を分離した。次に、血清を、分析のために保存した。参考文献:Magarietal2004。血清生化学Iアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ、参考文献:RitmanSFrankelSAcolorimetericmethodforthedeterminationofserumglutamicoxaloaceticandglutamicpyruvictransaminasesAmericanJournalofClinicalPathology285663。手順:試験およびコントロール試料から採集した0.2mlの血清を、1.0mlの緩衝液と混合し、水浴中、37°Cで60分間インキュベートした。1.0mlのクロモゲン溶液を添加後、反応が進行するように、試料を室温に20分間保ち、10mlのNaOHを加えた。5分後に、546nmで、光学濃度を読み取った。ブランクには、クロモゲン溶液の添加後に、血清を加えた。血清生化学IIアルカリホスファターゼ、参考文献:KlausWalterandSchuttCAcidandalkalinephosphataseinserum。MethodsofEnzymaticAnalysisEdsHansUlrichBergmeyer2ndEditionVol2pp85564中。手順:アルカリホスファターゼ活性測定は、アルカリ条件下にp-ニトロフェノールホスフェートを加水分解する、この酵素の能力に基づく。開裂した生成物のp-ニトロフェノールは、アルカリ溶液中で黄色であり、400~420nmで測定されるKlausandSchutt1974。2.0mlの緩衝化された基質を、試験、コントロール、およびブランクの管に入れ、その後、血清および蒸留水0.1mlを、試験、およびブランクにそれぞれ加え、水浴中、25°Cで30分間インキュベートした。インキュベートした後、水酸化ナトリウム0.25N、2mlを全ての管に加え、その後、コントロールと印された管に、血清0.1mlを加えた。発生する黄色を、410nmで、ブランクと比較して、分光光度計により測定した。血清生化学III[ビリルビンBRBN]、参考文献:MalloyHTandEvelynKAThedeterminationofbilirubinwithphotoelectriccolorimeterJournalofBiologicalChemistry119481490。手順:血清ビリルビンを、MalloyandEvelynの方法によって評価した。試験、およびコントロールと印した2組の試験管に、血清0.2mlおよび蒸留水1.8mlを加えた。試験および標準と印した試験管に、ジアゾ試薬0.5mlを加えた。コントトールおよびブランクと印した試験管に、ジアゾブランク0.5mlを加えた。最後に、メタノール2.5mlを、各試験管に加えた。試験管は、混合し、暗所に30分間放置した。10分後に、540nmで、試験管を読み取った。結果:ガルシノールは、ラットでのパラセタモール誘発肝障害における、ビリルビン、ならびに血清酵素のアラニントランスアミナーゼALT、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼASTおよびアルカリホスファターゼALPのレベルの増加を小さくした表4。例7ラットでのパラセタモール誘発肝障害の血液におけるTNF-αへの様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究に用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:実験動物には、7日間、パラセタモール400mg/体重1kgを経口投与した。薬物処置グループからの動物に、水に溶かしたパラセタモール400mg/体重1kgを、段階的な用量の試験薬物ガルシノールと共に、7日間、経口投与した。標準グループの動物には、50mg/体重1kgの標準薬物シリマリン、および400mg/体重1kgのパラセタモールを、7日間投与し、標準コントロールとして用いた。[NKanchanaandAMohamedSadiqHepatoprotectiveeffectofPlumbagozeylanicaonparacetamolinducedlivertoxicityinratsIntJPharmPharmSciVol3Issue1151154]。動物は、後眼窩から血液を抜き取り、血液は、PE-標識された坑ラットTNF-アルファモノクローナル抗体発現評価のために、EDTA被覆管に採集した。分析は、フローサイトメーターBD-FACSCANTOIIで行った。これらの蛍光色素-標識モノクローナル抗体は、100μlの全血に直接加え、次いで、これを、全血溶解試薬を用い、溶解した。最後の遠心の後、試料を、リン酸緩衝生理食塩水pH、7.4に再懸濁し、フローサイトメーターで直接分析した。蛍光トリガーは、PEFL2パラメータに設定して、事象を集めた。[iBaniSKaulAKhanBAhmadSFSuriKAGuptaBDSattiNKQaziGNSuppressionofTlymphocyteactivitybylupeolisolatedfromCrataevareligiosaPhytotherapyResearch20279287。およびiiBaniSKaulAKhanBAhmadSFSuriKASattiNKImmunosuppressivepropertiesofanethylacetatefractionfromEuphorbiaroyleanaJournalofEthnopharmacology99185192]。結果:図9は、ガルシノールが、薬物パラセタモール誘発肝障害によって引き起こされる急性肝炎において見出される、肝臓におけるTNF-αのレベルの増加を、用量に応じて抑制することを示す。例8アルコールエチルアルコール-EtOH誘発肝毒性動物モデルの血清における腫瘍壊死因子-αTNF-α、インターロイキン-1βIL-1βおよびIL-12への様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究に用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:体重180~200gの雄ウイスターラットに、0.5~0.6mlのエタノールを経口投与した。エタノールの初期用量は、6g/kg/日最大で56のアルコールを含む溶液であり、用量は、第1週の間に、8g/kg/日の維持用量まで段階的に増やし、これをさらに5週間続けた。全てのラットに、入手可能な標準的ラット用食餌を、6週間の間中、定期的に与えた。ラットは、1週間当たり3回、秤量した。[GuangjinYuanZuojiongGongXiaorongZhouPinZhangXiaomeiSunandXiLiEpigallocatechin3GallateAmelioratesAlcoholInducedLiverInjuryinRatsIntJMolSci20067204219]。血液は、アルコール処置実験動物の後眼窩集網叢から採集し、サイトカイン評価のためにEDTAと混合した。血清を採集するために、血液に抗凝固剤は添加せず、血液を、室温で1時間放置した。次いで、血液を、遠心し、透明な血清を分離し、分析のために保存した。TNF-α、IL-1β、およびIL-12は、サンドイッチおよび競合ELISA法に基づく市販のキットを用い、製造業者の教示に従って、評価した。全てのサイトカイン濃度は、ELISAプレートリーダーで、450nmでの比色測定によって、標準曲線からの補間法により求めた。結果:ガルシノールGCは、消化管におけるグラム陰性菌活性化および過度の増加は、エチルアルコールの摂取に起因するのLPSによる、クッパーKupffer細胞のTLR-4の活性化によって誘発される、TNF-アルファ、インターロイキン-1ベータ、およびインターロイキン-12図10および図11のレベルの増加を抑制した。例9アルコールエチルアルコール誘発肝毒性動物モデルの血清における、血清酵素のアラニントランスアミナーゼALT、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼASTおよびアルカリホスファターゼALPへの様々な用量のガルシノールGCの作用実験で用いた動物:雄ウイスターラット動物の体重:140~160グラム研究に用いたガルシノールGCの用量:1.25、2.5、5、10mg/kgp.o.標準薬物:シリマリン50mg/kgp.o.手順:体重180~200gの雄ウイスターラットに、0.5~0.6mlのエタノールを経口投与した。エタノールの初期用量は、6g/kg/日最大で56のアルコールを含む溶液であり、用量は、第1週の間に、8g/kg/日の維持用量まで段階的に増やし、これをさらに5週間続けた。全てのラットに、入手可能な標準的ラット用食餌を、6週間の間中、定期的に与えた。ラットは、1週間当たり3回、秤量した。[GuangjinYuanZuojiongGongXiaorongZhouPinZhangXiaomeiSunandXiLiEpigallocatechin3GallateAmelioratesAlcoholInducedLiverInjuryinRatsIntJMolSci20067204219]。血液は、実験動物の後眼窩集網叢から採集し、抗凝固剤は添加しなかった。血液を、室温で1時間放置した。次いで、それを、遠心し、透明な血清を分離した。次に、血清を、分析のために保存した。参考文献:Magarietal2004。血清生化学Iアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンALANINAアミノトランスフェラーゼ、参考文献:RitmanSFrankelSAcolorimetericmethodforthedeterminationofserumglutamicoxaloaceticandglutamicpyruvictransaminasesAmericanJournalofClinicalPathology285663。手順:試験およびコントロール試料から採集した0.2mlの血清を、1.0mlの緩衝液と混合し、水浴中、37°Cで60分間インキュベートした。1.0mlのクロモゲン溶液を添加後、反応が進行するように、試料を室温に20分間保ち、10mlのNaOHを加えた。5分後に、546nmで、光学濃度を読み取った。ブランクには、クロモゲン溶液の添加後に、血清を加えた。血清生化学IIアルカリホスファターゼ、参考文献:KlausWalterandSchuttCAcidandalkalinephosphataseinserum。MethodsofEnzymaticAnalysisEdsHansUlrichBergmeyer2ndEditionVol2pp85564中。手順:アルカリホスファターゼ活性測定は、アルカリ条件下にp-ニトロフェノールホスフェートを加水分解する、この酵素の能力に基づく。開裂した生成物のp-ニトロフェノールは、アルカリ溶液中で黄色であり、400~420nmで測定されるKlausandSchutt1974。2.0mlの緩衝化された基質を、試験、コントロール、およびブランクの管に入れ、その後、血清および蒸留水0.1mlを、試験、およびブランクにそれぞれ加え、水浴中、25°Cで30分間インキュベートした。インキュベートした後、水酸化ナトリウム0.25N、2mlを全ての管に加え、その後、コントロールと印された管に、血清0.1mlを加えた。発生する黄色を、410nmで、ブランクと比較して、分光光度計により測定した。血清生化学III[ビリルビンBRBN]、参考文献:MalloyHTandEvelynKAThedeterminationofbilirubinwithphotoelectriccolorimeterJournalofBiologicalChemistry119481490。手順:血清ビリルビンを、MalloyandEvelynの方法によって評価した。試験、およびコントロールと印した2組の試験管に、血清0.2mlおよび蒸留水1.8mlを加えた。試験および標準と印した試験管に、ジアゾ試薬0.5mlを加えた。コントトールおよびブランクと印した試験管に、ジアゾブランク0.5mlを加えた。最後に、メタノール2.5mlを、各試験管に加えた。試験管は、混合し、暗所に30分間放置した。10分後に、540nmで、試験管を読み取った。結果:ガルシノールGCは、エチルアルコール誘発肝毒性実験動物における、AST、ALT、ALPおよびビリルビンのレベルの増加を小さくした。例10知られている肝臓保護剤であるシリマリンと比較した、HepG2肝臓癌細胞系におけるガルシノールの細胞毒性の可能性細胞毒性ガルシノールvsシリマリンの全体的な肝臓保護作用-表6および7、図12および図13手順:細胞毒性について調べられようとする様々な濃度の物質中でHEPG2細胞を成長させる。次いで、穏やかに媒質を取り除き、各ウェルに100mlのMTT150mg/ウェル作業溶液を加える。次に、プレートをアルミニウム箔にさらに包み、37°CのCO2インキュベータ中で4時間インキュベートする。次いで、プレートを、ウェル当たり100mlのPBSで穏やかに洗う。洗浄は、洗浄の間の細胞の乾燥、薄片化剥離flakingおよび損失を避けるために、媒質を取り出した後、すぐに行われなければならない。ウェル当たり100mlのDMSOに染料を溶かす。プレートを、5分間振盪し、FluostaroptimaBMGマイクロプレートリーダーを用い、492nmで吸光度を読み取る。吸光度は細胞生存率に正比例する。620nmで読み取る選択肢もまた選ぶことができ、これは、試料中の細胞残屑の干渉を差し引き得る。データは、細胞増殖における変化が定量化されるように、細胞数vs.吸光度をプロットすることによって分析される。テトラゾリウムの還元速度は、細胞増殖速度に比例する。計算試料の細胞毒性は、細胞増加の50を抑制する濃度であるIC50値として表される。細胞毒性=E-T/E×100ここで、E=試料の存在しない場合の細胞生存率T=試料の存在下での細胞生存率HEPG2細胞におけるガルシノールの肝臓保護活性IC50=13.33μg/ml95CL=11.84~15.02μg/mlHEPG2細胞におけるシリマリンの肝臓保護活性IC50=36.51μg/ml95CL=32.18~41.42μg/mlIC50値が小さいほど、効能は良好である。結果:ガルシノールは、低濃度6.25μg/ml未満の値で、シリマリンのようなかなりの肝臓保護作用を示す。本発明が、好ましい実施形態を参照して説明されたが、本発明はこれらに限定されないことを、当業者は明瞭に理解するべきである。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲との関連でのみ、解釈されるべきである。"