ラクトバチルスプランタラムCECT7481およびラクトバチルスブレビスCECT7480を含む組成物。プロバイオティックとしての使用のための、請求項1に記載の組成物。医薬としての使用のための、請求項1-2のいずれかに記載の組成物。ヒトを含む動物において口腔病原体により引き起こされる口腔における障害の予防および/または処置における使用のための、請求項1-3のいずれかに記載の組成物。口腔の障害が歯垢関連障害である、請求項4に記載の組成物。歯垢関連障害が、歯肉炎、歯周炎、齲蝕および知覚過敏からなる群から選択される、請求項5に記載の組成物。口腔の障害が口臭である、請求項4に記載の組成物。口腔の障害がカンジダ症である、請求項4に記載の組成物。薬学的に許容される賦形剤と共に、請求項1に記載の組成物を含む医薬組成物。他の食用成分と共に、請求項1に記載の組成物を含む食用組成物。栄養補助食品である、請求項10に記載の食用組成物または請求項9に記載の医薬組成物。美容上許容される賦形剤と共に、請求項1に記載の組成物を含む美容用組成物。有効量の、請求項9に記載の医薬組成物、または請求項10に記載の食用製品、または請求項12に記載の美容用組成物を含む、口腔ケア製品。チューインガム、練り歯磨き、マウススプレー、ロゼンジまたは口腔分散性錠剤である、請求項13に記載の口腔ケア製品。ラクトバチルスプランタラムCECT7481。ラクトバチルスブレビスCECT7480。実施例以下の部は、本発明の株の特性および口腔衛生適用に関する特定のプロバイオティック特徴を記載する。1.微生物の単離新規株F2096およびI2141は、熱帯の南アメリカの開発地域の0-5歳の子供由来の唾液から単離された。唾液をPBSバッファーpH7.4に溶解させ、アリコートし、10μg/mlのバンコマイシンSIGMAを補ったMRSManRogosaSharpSigmaAldrichChemSpain寒天上に置いた。株を37°Cで微好気的条件5CO2下で培養した。増殖させた後、単離された株を、15のスキムミルク粉末を有するPBS0.1X中で凍結乾燥により保存した。株F2096およびI3141は、それぞれラクトバチルスプランタラムおよびラクトバチルスブレビスとして同定された以下の2の部参照。両方の株は、スペインタイプカルチャーコレクションに寄託されたUniversitatdeValisnciaCampusdeBurjassotEdifdeInvestigacion46100BurjassotValisnciaSpain。ラクトバチルスプランタラム株F2096は、21.01.2009にて寄託され、受入番号7481と与えられた。ラクトバチルスブレビス株I3141は、18.02.2009にて寄託され、受入番号7480と与えられた。両方の寄託された株は、生存可能であり、寄託に関連する全ての特徴を維持している。以下において使用されるとおり、株F2096は、ラクトバチルスプランタラムCETC7481に、株I3141は、ラクトバチルスブレビスCECT7480に対応する。ペデイオコッカスアシディラクティシィF2019本明細書において以下ペデイオコッカスアシディラクティシィと称する、ラクトバチルスパラカゼイI3152本明細書において以下ラクトバチルスパラカゼイと称するおよびペデイオコッカスペントサセウスI54本明細書において以下ペデイオコッカスペントサセウスと称するは、上記説明のとおりヒト唾液から単離された。ストレプトコッカスサリバリウスK12は、TBSトリプシン分解ダイズ培養液中の市販のBLISK12登録商標から単離され、37°Cで好気状態下で培養した。ラクトバチルスロイテリATCC55730株は、市販のReuteriDrops登録商標から、ラクトバチルスプランタラム299vはPoviva登録商標から、ラクトバチルスブレビスCD2はInersan登録商標から、ラクトバチルスプランタラムVSL3およびラクトバチルスカゼイVSL3はVSL3登録商標から、ラクトバチルスカゼイDN114.001はActimel登録商標から単離された。後者の株の全てはMRS上で単離し、37°Cで5CO2下で培養した。潜在的に病原性の株ポルフィロモナスジンジバリスCIP103683、フゾバクテリウムヌクレアタムCIP104988、トレポネーマデンティコラCIP103917およびプレボテラデンティコラCIP104478Tは、パスツール研究所から得、提供者の指示にしたがって培養した。臨床的起源のストレプトコッカスミュータンスは、37°Cで5CO2下でブレインハートBrainHeart寒天上で培養した。株の同定は、シーケンシングにより行った。2.株の分類学的特性2.1.属および種の遺伝的同定A方法本発明の株を、37°Cで5CO2を含む雰囲気下でMRS培地pH6.4上で一晩培養した。さらに、細菌を回収し、洗浄し、前溶解バッファー480μlのEDTA50mMpH8.0;120μlのリゾチーム10mg/mlに再懸濁し、さらに37°Cで60分インキュベートした。DNAを、WizardゲノムDNA精製キットPromegaを使用して抽出した。14000gで2分間、前処理された細菌を遠心分離し、上清を除去した後、Promegaのプロトコールを続けた。簡潔には、細菌を核溶解溶液に再懸濁し、80°Cで5分間インキュベートし、次に室温に冷やした。細胞溶解物をRNase溶液中で37°Cで60分間インキュベートし、タンパク質にタンパク質沈殿溶液を加え、高速で回転させることにより、沈殿させた。サンプルを冷やし、15000gで3分間遠心した。DNAを含む上清をきれいな1.5ml微量遠心チューブに移し、反転により600μlのイソプロパノールと混合した。DNAを15000gで2分間遠心分離により回収し、注意深く上清を捨てた。DNAサンプルを、穏やかにチューブを数回反転させることにより、600μlの70エタノールで洗浄した。エタノールを、15000gで2分間遠心分離後に、吸引により除去した。最後に、DNAペレットは、65°Cで1時間インキュベートすることにより、100μlのRehydration溶液に再懸濁した。サンプルを2-8°Cで貯蔵した。16SrRNAを、16Sのほぼ全配列のフラグメント1000個以上のヌクレオチドを生産するユニバーサルプライマーEub27fおよびEub1492rを使用して、PCRにより増幅した表1。次に、上記説明のとおりに得られたDNAを、キットQuiaquickQuiageneを使用して洗浄した。4連続シーケンシング反応を、表1において示されるプライマーを使用するBigDyeキットv.3.1を使用して、GeneticAnalyzer3130AppliedBiosystemsにおいてそれぞれのサンプルに対して行った。データ回収およびクロマトグラムを、DNASequenceAnalysisv.5.2ソフトウェアAppliedBiosystemsを使用して作り、ChromasTechnelysiumPtyLtdおよびBioEditIbisBiosciencesでの視覚分析により確認した。属同定は、RibosomalDatabaseProjectツールを使用して行ったWangQらNaiveBayesianClassifierforRapidAssignmentofrRNASequencesintotheNewBacteialTaxonomyApplEnvironMicrobiol2007vol73p52615267。種同定は、BLASTNの手段によるRefSeqデータベースhttpwwwncbinlmnihgovRefSeq、およびRibosomalDatabaseProjecthttprdpcmemsueduJRColeetalTheRibosomalDatabaseProjectintroducingmyRDPspaceandqualitycontrolledpublicdataNuclAcidsRes2007vol35p169172の両方から、既知の生物体の16S配列での得られた配列の比較により行った。表1.16S遺伝子を増幅し、シーケンシングするために使用されるプライマーB結果RDPRibosimalDatabaseProjectツールによって、株F2096がラクトバチルスプランタラム種に属し、株I3141がラクトバチルスプランタラム種に属すると同定された。2.2.株の遺伝子型決定A方法特性評価は、ゲノム消化およびパルスフィールドゲル電気泳動により行った。F2096およびI3141株を、以前に記載されたプロトコールRodasAMらPolyphasicstudyofwineLactobacillusstrainstaxonomicimplicationsIntJSystEvolMicrobiol2005vol55p197207に付した。市販の株、ラクトバチルスプランタラム299V、ラクトバチルスプランタラムVSL3、ラクトバチルスカゼイVSL3およびラクトバチルスカゼイDN114.001はまた、コントロール株としてアッセイに含んだ。全ての株をMRS寒天プレート上で増殖させ、37°Cで5CO2下で18時間インキュベートした。細胞を回収し、8mlのPET10mMTrispH7.6、1MNaCl中で3回洗浄し、次に、6000rpmで10分間遠心した。ペレットを700μlの溶解バッファー6mMTris、1MNaCl、0.1MEDTA、0.5SLS、0.2デオキシコール酸;1mg/mlリゾチーム;40U/mlムタノリシン;20g/mlRNaseに再懸濁した。同等の容量の1.6低融点アガロースFMCBioProductsRocklandMEUSAを再懸濁された細胞に加え、4°Cで1時間で凝固させた。挿入物を2ml溶解バッファーII0.5MEDTApH9.2、1N-ラウロイルサルコシンおよび1mg/mlプロナーゼに移し、50°Cで48時間インキュベートした。次に、挿入物を室温でTEバッファー10mMTris、1mMEDTApH8.0で洗浄した。全DNA消化をSfi-IおよびSma-I制限酵素RocheDiagnosticsにより行った。パルスフィールド電気泳動を、CHEFDRIII装置BioRadLaboratoriesを使用して行った。挿入物を1アガロースゲルSeaKemMEagaroseFMCBioProductsMEUSAに負荷した。表2は、それぞれの酵素に対する電気泳動状態を記載している。DNA分子量マーカーは、LambdaladderPFGMarkerおよびLowRangePFGMarkerNewEnglandBiolabsであった。電気泳動後、GelDocSystemBioRadを使用して、ゲルを臭化エチジウムおよびUVで染色した。表2.F2096およびI3141株由来のSfi-IおよびSma-I制限ゲノムDNAに対する電気泳動状態B結果図1に示されるとおり、F2096株に対するパルスフィールド電気泳動Sfi-IおよびSma-I制限パターンは、市販のラクトバチルスプランタラム299vおよびラクトバチルスプランタラムVSL3株のものと異なり、I3141に対する制限パターンは、非常に関連した市販のラクトバチルスカゼイ株のものと異なる。したがって、F2096およびI3141株が新規株であると結論づけることができる。3.病原体をアンタゴナイズする能力A方法株F2096およびI3141がアンタゴニスト活性を示すか否かを評価するために、Campbellプロトコールを、Oxoid培地中に細菌性病原体で播種された寒天プレートを使用して行った。試験において使用される病原体は、ヒトの口腔において一般的に存在するものの中から選択された表1参照。簡潔には、F2096、I3141およびペデイオコッカスアシディラクティシィ、ヒトの唾液から単離された別の株を、それぞれ上記特定の状態下で一晩培養した。インキュベーション後、培養物を108cfu/mlに標準化し、以下の混合培養物を調製した:F2096I3141、F2096ペデイオコッカスアシディラクティシィ、およびI3141ペデイオコッカスアシディラクティシィ。該混合培養物は、等量のそれぞれのこれらの構成株および単一株の培養物として同じ全細菌濃度、すなわち108cfu/mlを含んだ。固定された容量のそれぞれの単一株の培養物および混合培養物を一様に播種し、適当な温度で5CO2インキュベーターでコンフルエンスにまで増殖させた。次に、コンフルエンス寒天プレートの一様なサイズのシリンダー部を、病原体プレート上にローントゥローンで置き、37°Cで一晩インキュベートした。次の日、阻害部を、平らな物差しの上に寒天プレートを置くことにより測定した。株のアンタゴニスト特性を、阻害部直径IZDからシリンダー直径CDを引き、この差を2で割ること、以下の式GIA=IZD-CD/2により計算される、増殖阻害活性GIAとして測定した。本発明の株の阻害能力を、市販の口腔プロバイオティック株ストレプトコッカスサリバリウスK12およびラクトバチルスロイテリATCC55730のものと比較した。B結果株F2096およびI3141の増殖阻害活性は、表3において示される。結果は、トリプリケート実験の平均である。表3.口腔病原体に対する増殖阻害活性NI、阻害なし該結果により分かるとおり、P2096およびI3141の両方は、口腔病原体に対する広範な阻害パターンを有する。これは、予備試験がポルフィロモナスジンジバリスに対するアンタゴニスト活性がまれである結果は示されていないことを示したため、ポルフィロモナスジンジバリスととりわけ関連している。さらに、混合培養物中のF2096およびI3141の組合せが、単一の培養物として別々に使用される個々の株の活性と比較して、口腔病原体に対するより高いアンタゴニスト活性を示すことに注目すべきである。混合培養物中のそれぞれの株の濃度が単一の培養物中の濃度の半分であり、したがって、組合せのアンタゴニスト効果が、これらの株に対する個々の効果の合計よりも高いことに注意すること。この相乗効果は、それぞれの株が口腔の別の生息動物であるペデイオコッカスアシディラクティシィと混合されるとき、起こらない。したがって、本発明の株は、口腔病原体に対する相乗活性を示し、単一の処方物において使用されるとき、とりわけ有用である。市販のプロバイオティックストレプトコッカスサリバリウスK12およびラクトバチルスロイテリATCC55730と比較した場合、本発明の株は、有意に高いアンタゴニスト能力を有する。最後に、F2096およびI3141は、互いに、またはヒトの口腔細菌叢の一般的な共生株に対して、最小のアンタゴニスト作用を示した。4.凝集物の形成A方法凝集物を形成する能力を、凝集物および沈殿物の形成による、一晩培養物の620nmでの光学濃度の減少をモニタリングすることにより評価した。凝集能力パーセントAC値を、以下の式:AC=1-ODtf/ODt0/100式中、ODtfおよびODt0はそれぞれ最後および最初の光学濃度であるを使用して得た。最初のODは、全ての培養物が等量のcfu/mlを含むことができるように、調節した。混合された培養物は、50のそれぞれの株を含む所望の全cfu/mlを得るように、適当な量の単一の株を混合することにより調製された。B結果凝集物を形成する能力は、該株が、病原体生物膜形成に干渉することにより歯垢を阻害または減少させることができるため、口腔衛生適用でのプロバイオティック株に重要である。新規株およびそれらの組合せまたはペデイオコッカスアシディラクティシィもしくはラクトバチルスブレビスCD2との組合せに対する平均凝集能力値は、コントロール株と比較されて表4に示される。これらの結果は、新規単離物が、市販のコントロールストレプトコッカスサリバリウスK12およびラクトバチルスロイテリATTC55730の両方よりも、有意に高い非常に良い凝集活性を示したことを明確に証明する。さらに、本発明の株による凝集物形成が、両方の株が混合培養物において混合されるとき増加され、該株が、単一の組成物に混合されるとき、病原体細菌の置換においてさらに有効であることを意味する。しかしながら、この協力は、本発明の株が、良い凝集能力を有する他の株、例えば、ペデイオコッカスアシディラクティシィおよびラクトバチルスブレビスCD2と別々に混合されたとき、存在しない。さらに、本発明の株とラクトバチルスブレビスCD2とを混合するとき、アンタゴニスト効果が観察され、本発明の株が、ラクトバチルスブレビスCD2と混合されたとき、病原体細菌の置換においてあまり有効でないことを意味する。表4.凝集能力5.酸の生産A方法ヒト食物に存在する種々の糖を補った培養培地において増殖させるときの、新規株が酸を生産する能力を評価した。該株を、以下の培地中で5CO2下で37°Cで18時間増殖した:MRSおよび4グルコース、4フルクトース、4ラクトースまたは4スクロースを補った最小培地。最小培地は、2g/Lペプトン水、2g/L酵母抽出物、0.1g/LNaCl、0.04g/LK2HPO4、0.04g/LKH2PO4、0.01g/LMgSO47H2O、0.01g/LCaCl26H2O、2g/LNaHCO3、0.05g/Lヘルミナ少数の1mol/LNaOH滴に溶解させた、0.5g/LシステインHCl、0.5g/L胆汁塩、2g/LTween80、および10μlビタミンK1Sigma-AldrichChem、Spainから全ての成分を得たを含んだ。培養物をHClでpH7に調節した。pHおよび生存細胞の数cfu/mlを、インキュベーション時間の最後に測定した。それぞれの培養培地に対する酸価の生産は、以下の式:PA値=pHlogcfu/mlにより得た。B結果上記式にしたがって、低い値は、高い酸産生性の株に対応する。高い酸生産は、齲蝕形成を促進するため、口腔プロバイオティックに対する望ましくない副次的作用である。種々の糖において増殖されるF2096およびI3141ならびにいくつかのプロバイオティックコントロール株に対する酸生産値は、市販の株に対して得られた値と共に、表5に示すことができる。MMは最小培地を表す。表5.酸の生産これらの結果は、種々の糖における株F2096およびI3141の増殖が、口腔から単離されている他の細菌株、すなわち、ラクトバチルスパラカゼイ、ペデイオコッカスペントサセウスおよびペデイオコッカスアシディラクティシィと比較して、有意に乏しい酸生産をもたらすことを証明する。本発明の株はまた、市販の口腔プロバイオティックのストレプトコッカスサリバリウスK12よりも少ない酸産生である。さらに、株I3141は、特に低い酸産生であることが知られており、抗齲蝕原性プロバイオティックとして売買されているラクトバチルスロイテリATTC55730と比較したとき、より低い酸性化プロフィールを有する。本発明I3141のラクトバチルスブレビス株が、市販のラクトバチルスブレビスCD2と比較して、有意に低い酸性化プロフィールを有することも注目すべきである。したがって、株F2096およびI3141は低酸性化プロフィールを有し、したがって口腔衛生適用に対して適当である。6.悪臭揮発性化合物の生産A方法新規株による悪臭揮発性化合物の生産を、ヒトの食物に類似している培養培地において培養したとき、感覚評価の手段により決定した。簡潔には、株を、5CO2下で37°Cで48時間、グルコース0.5w/v、フルクトース0.5w/v、酵母抽出物1w/v、肉抽出物1w/v、真核細胞200細胞/mlおよびペクチン0.5w/vを含む培地において培養した。株は、1が臭気がなく、5が非常に不快な臭気である1から5の悪臭値の生産をもたらす。B結果悪臭化合物の生産は、口腔プロバイオティックに対して非常に望ましくない。しかしながら、本発明の株は、ヒトの食物に類似している培養培地において培養されている間、一切不快な臭気を生産しなかった。表6.不快な臭気の生産7.口腔状態に対する生存A方法口腔における株の生存は、それらを口腔ストレス状態に置くことにより試験した。5107cfuのそれぞれの細菌株を、F2096、I3141およびラクトバチルスロイテリATCC55730の場合、200μlのMRS培地の、またはストレプトコッカスサリバリウスK12の場合、トリプシン分解ダイズ培養液TSBOxoidの96ウェル培養プレートに播種した。培養物に、生理学的濃度のリゾチームSigmaAldrichChemSpainまたは過酸化水素SigmaAldrichChemSpainを補った。プレートを、5CO2下で37°Cで6時間インキュベートした。細菌増殖を、620nmで光学濃度を測定することにより定量した。細菌増殖値を、補足なしの標準MRS培地中で同じ株によりなし遂げられる増殖と比較することにより得た。B結果全生存パーセント値SVを以下のとおりに計算した:SV=[ODtf-ODt0補足あり/ODtf-ODt0補足なし]100式中、ODは光学濃度であり、tfおよびt0はそれぞれ最後および最初の時間である。以下の値は、トリプリケート結果の平均である:表7.口腔状態に対する生存新規株F2096およびI3141は、市販の株ストレプトコッカスサリバリウスK12およびラクトバチルスロイテリATCC55730よりも口腔ストレスに対して良い耐性を示した。8.口腔組織に付着する能力A方法腸のブタの舌、Caco-2細胞歯肉を刺激するためおよびヒドロキシアパタイトHAビーズ歯を刺激するためへのF2096、I3141および市販のコントロール株のインビトロでの付着アッセイを行った。それぞれの株を10μl/mlの5-[3H]チミジン1.0μCi/ml、AmershamBiosciencesUKで一晩インキュベートした。調製物を遠心し、ペレットを108cfu/mlの濃度にPBSバッファーで再懸濁した。微生物に取り込まれたトリチウムシグナルは、シンチレーションリーダーWallac1410において最初のトリチウムシグナルおよび上清シグナルから計算した。この数バイオマスに取り込まれたシグナルと培養物中の微生物の数の比は、cpm/cfuシグナル/細菌をもたらす。付着測定は、ELISAプレート中の1.050.5cm-フラグメントのブタの舌または前インキュベートされたCaco-2細胞または50mgのHAビーズ80μmの直径のいずれかへの、3.3mlの放射標識された108cfuのそれぞれの株の添加により行った。45分後、上清を注意深く除去した。HAビーズ付着された細菌と共にを遠心分離により回収した。付着している細菌と共に舌またはCaco-2細胞を、ELISAウェルから廃棄した。最後に、回収した細菌を溶解し、特定の放射能cpm/cfuを計算した。全てのアッセイをトリプリケートにおいて行い、結果を1cm2あたりの付着した細菌の数として示した。ストレプトコッカスサリバリウスが多数の試験された特性上記結果参照に対して良い結果を示したため、該株を付着アッセイのためのコントロール株として使用した。B結果表8.口腔組織への付着これらの結果は、株F2096およびI3141が、口腔プロバイオティック株のストレプトコッカスサリバリウスK12と比較したとき、口腔組織への全体的な良い付着能力を有することを証明する。口腔組織へ付着するする能力は、病原体に対する付着部位を競合し、口腔における耐久性を助けるとき、これらの細菌に競合的利点を与えるため、プロバイオティックとして使用される株のための関連する特徴である。結果として、口腔組織への良い付着を示す株は、口腔からの病原体の置換に寄与し、より健康的な口腔細菌叢を促進する。9.抗生物質感受性A方法株F2096およびI2141に対する抗生物質感受性を、欧州食品安全機関EFSAによる技術的ガイドラインにしたがって試験したUpdateofthecriteriausedintheassessmentofbacterialresistancetoantibioticsofhumanorveterinaryimportanceTheEFSAJournal2008vol732p115。株に対する培養条件は以下のとおりであった:37°Cで5CO2下でEFSA推奨抗生物質濃度を含むMRS寒天プレートの表面上の増殖。B結果抗生物質含有培地上での株の増殖は、表9に示される。EFSAにより推奨されるアッセイのそれぞれの抗生物質の濃度は、mg/mlにおいて与えられる。抗生物質濃度に対して示されていない値は、ラクトバチルスブレビス種に対するEFSAにより記載されており、したがって、ラクトバチルスブレビス株I3141における抗生物質耐性は、この種が属するグループの偏性ヘテロ型発酵性のラクトバチルスに対して推奨される濃度を使用してアッセイした。結果は、F2096およびI2141が抗生物質耐性を有しないことを示す。したがって、それらはヒトの消費のために適当である。表9.株F2096およびI3141の抗生物質耐性n.r.、EFSAにより推奨されていない書誌参照