単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号19のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR3;配列番号13のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR3;を含有し、当該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号2のアミノ酸配列を有するLRP6細胞外領域内で1つのエピトープに特異的に結合することを特徴とする、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、さらに、配列番号15のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR1;配列番号17のアミノ酸配列を軽鎖可変領域CDR2;配列番号9のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR1;および配列番号11のアミノ酸配列を重鎖可変領域CDR2;を有することを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体または抗原結合フラグメントが、、配列番号5と少なくとも90の同一性を示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域;および配列番号7と少なくとも90の同一性を示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域:を有することを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体または抗原結合フラグメントが、全長免疫グロブリン分子、scFv、Fabフラグメント、Fabフラグメント、F2フラグメント、Fv、ジスルフィド結合Fv、およびこれらの任意の組合わせから構成されることを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体または抗原結合フラグメントが、ヒト化されていることを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体または抗原結合フラグメントが、107M以下の解離定数をもって、LRP6細胞外領域と結合することを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体または抗原結合フラグメントが、ATCC受託番号PTA10663を有するハイブリドーマが産生する抗体と同じエピト-プに結合することを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体または抗原結合フラグメントが、LRP6に対するWnt1およびWnt3aの双方の結合を阻害するものであることを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項1に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に許容される担体から構成されることを特徴とする薬学的組成物。請求項9に記載の薬学的組成物であって、前記抗体または抗原結合フラグメントと相乗効果を有している第2の薬剤をさらに含むことを特徴とする薬学的組成物。請求項10に記載の薬学的組成物であって、前記第2の薬剤が、抗脈管形成剤であることを特徴とする薬学的組成物。請求項10に記載の薬学的組成物であって、前記第2の薬剤が、抗VEGF試薬であることを特徴とする薬学的組成物。ATCC受託番号PTA10663を有するハイブリドーマ。請求項13に記載のハイブリドーマによって産生される単離モノクローナル抗体。配列番号13のCDR3を有する重鎖可変領域をコード化する単離核酸分子。請求項15に記載の単離核酸分子であって、前記重鎖可変領域は、配列番号9のCDR1および配列番号11のCDR2を有していることを特徴とする単離核酸分子。配列番号19のCDR3を有する軽鎖可変領域をコード化する単離核酸分子。請求項17に記載の単離核酸分子であって、前記軽鎖可変領域は、配列番号15のCDR1および配列番号17のCDR2を有していることを特徴とする単離核酸分子。請求項15に記載の核酸で構成されることを特徴とするベクター。請求項15に記載の核酸分子で構成されることを特徴とする宿主細胞。請求項20に記載の宿主細胞であって、さらに配列番号19のCDR3を有する軽鎖可変領域をコード化する核酸分子を有することを特徴とする宿主細胞。請求項17に記載の核酸で構成されることを特徴とするベクター。単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号9のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR1;配列番号11のアミノ酸配列を重鎖可変領域CDR2;配列番号13のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR3;を含有し、当該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号2のアミノ酸配列を有するLRP6細胞外領域内で1つのエピトープに特異的に結合することを特徴とする、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。請求項23に記載の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントがNANOBODY登録商標であることを特徴とする単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号15のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR1;配列番号17のアミノ酸配列を軽鎖可変領域CDR2;配列番号19のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR3;を含有し、当該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号2のアミノ酸配列を有するLRP6細胞外領域内で1つのエピトープに特異的に結合することを特徴とする、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。抗体またはその抗原結合フラグメントの製造方法であって、請求項1~8、14、および23~25のいずれかひとつに記載のモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントを産生する細胞を与え、当該モノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントの産生が許容される条件下で当該細胞を培養することを特徴とする抗体またはその抗原結合フラグメントの製造方法。請求項26に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの製造方法であって、前記細胞はさらにATCC受託番号PTA10663を有するハイブリドーマとしてさらに定義されるものであることを特徴とする抗体またはその抗原結合フラグメントの製造方法。Wntシグナル伝達経路の活性化を阻害する方法であって、請求項1~8、14、および23~25のいずれかひとつに記載のモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントを投与する工程を含むことを特徴とするWntシグナル伝達経路の活性化を阻害する方法。請求項28に記載の方法であって、前記抗体または抗原結合フラグメントと相乗効果を有している第2の薬剤を投与する工程をさらに含むことを特徴とするWntシグナル伝達経路の活性化を阻害する方法。請求項29に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗脈管形成剤であることを特徴とするWntシグナル伝達経路の活性化を阻害する方法。請求項29に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗VEGF試薬であることを特徴とするWntシグナル伝達経路の活性化を阻害する方法。糖尿病性網膜症の少なくとも1つの脈管形成性、炎症性および/または線維形成性の因子の酵素活性および/または酵素生産を阻害する方法であって、DRを病んでいるまたはこれにかかりやすい患者に対して、請求項1~8、14、および23~25のいずれかひとつに記載のモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントおよび薬学的に許容される担体からなる薬学組成物を投与する工程をすることを特徴とする方法。請求項32に記載の方法であって、前記DRの因子がVEGF、ICAM1、TNFαおよびCTGFからなる群から選択されたものであることを特徴とする方法。請求項32に記載の方法であって、前記抗体または抗原結合フラグメントと相乗効果を有している第2の薬剤を投与する工程をさらに含むことを特徴とする方法。請求項34に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗脈管形成剤であることを特徴とする方法。請求項34に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗VEGF試薬であることを特徴とする方法。請求項32に記載の方法であって、前記投与する工程が、前記組成物を患者の目の硝子体内へ注射することでなることを特徴とする方法。網膜の白血球うっ滞、炎症、血管漏出、繊維症、異常な新生血管形成および、網膜における発癌からなる群から選択されてなる少なくとも1つの網膜の症状を仲裁するやわらげる方法であって、少なくとも1つの網膜の症状を病んでいるまたはこれにかかりやすい患者に対して、請求項1~8、14、および23~25のいずれかひとつに記載のモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントおよび薬学的に許容される担体を投与する工程をすることを特徴とする方法。請求項37に記載の方法であって、前記抗体または抗原結合フラグメントと相乗効果を有している第2の薬剤を投与する工程をさらに含むことを特徴とする方法。請求項39に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗脈管形成剤であることを特徴とする方法。請求項39に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗VEGF試薬であることを特徴とする方法。請求項38に記載の方法であって、前記投与する工程が、前記組成物を患者の目の硝子体内へ注射することでなることを特徴とする方法。請求項38に記載の方法であって、前記異常な新生血管形成が、網膜新生血管形成および慢性新生血管形成の少なくともいずれかであることを特徴とする方法。糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、黄斑変性、癌、およびその他の目の炎症性および新生血管関連障害からなる群から選択されてなる少なくとも1つの症状の発症および/または重篤度を阻害および/または緩和する方法であって、少なくとも1つの上記症状を病んでいるまたはこれにかかりやすい患者に対して、Wntシグナル伝達経路の活性化を阻害し、当該症状/障害の発症および/または重篤度を阻害および/または緩和する薬学的組成物を投与することでなり、当該薬学的組成物は、請求項1~8、14、および23~25のいずれかひとつに記載のモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメントおよび薬学的に許容される担体からなるものであることを特徴とする方法。請求項44に記載の方法であって、前記抗体または抗原結合フラグメントと相乗効果を有している第2の薬剤を投与する工程をさらに含むことを特徴とする方法。請求項45に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗脈管形成剤であることを特徴とする方法。請求項45に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、抗VEGF試薬であることを特徴とする方法。請求項44に記載の方法であって、前記投与する工程が、前記組成物を患者の目の硝子体内へ注射することでなることを特徴とする方法。したがって、Wntシグナル伝達経路を阻害するための新規なおよび改良された組成物および方法に関して、大きな必要性が存在する。そのような組成物および方法は、特に限定されるわけではないが、例えば、炎症、繊維症、脈管形成およびまたは腫瘍形成を包含する、新生血管形成に関連した、およびまたはWntシグナル伝達経路に関連した疾患の治療および予防に有用であろう。ここに開示されそして請求される発明的な概念は、先行技術の不利点および欠点を解消してなる、前記組成物および方法に関するものである。ここに開示され、請求の範囲に要求された発明概念の少なくとも1つの実施形態について、代表的な図面、実験、結果、および実験手順によって、説明する前に、本発明の概念は、本出願において、以下に記載されるあるいは、図面、実験および/または結果に示される、成分の構成およびアレンジメントの詳細に何ら限定されるものではないことが理解されるべきである。発明概念は、他の実施形態においても可能であり、また種々の方法において実施することが可能である。そういうものとして、それゆえ、本明細書において用いられる言葉は、最も広い可能な範囲と意味を意図するものであり、また実施形態は代表的なものであることを意味し、網羅的なものを意味するものではない。また、本明細書において用いられた表現法および用語は、記述の目的のためにあって、限定的に見なされるべきでないことが理解されるべきである。本明細書において別途、特に定義しない場合、ここに開示され、請求の範囲に要求された発明概念に関して使用された科学的および専門的用語は、当業者に一般的に理解されている意味を持っているものである。さらに、文脈によって特に要求されない場合、単数形の用語は、複数形および複数の用語を含んでいるものとする。概して、本明細書において述べられる、細胞および組織培養、分子生物学、並びにタンパク質およびオリゴ-またはポリ-ヌクレオチド化学およびハイブリダイゼーション、に関連して用いられる標準名称、およびこれらの技術は、当分野においてよく知られており、一般的に使用されるものである。標準的技術は、組み換えDNA、オリゴヌクレオチド合成、並びに、組織培養法および形質転換に用いられる。酵素反応と純化技術は、製造者の仕様書に従って、あるいは当分野において一般的になされるように、あるいは本明細書中において記載するように、行なわれる。前述の技術と手順は、当分野でよく知られている周知の方法に従って、並びに、本明細書中で引用され、記述された、多くの一般的なおよびより詳細な文献において記載されるように、一般的に実施される。例えばサムブルックら、モレキュラークローニング:アラボラトリーマニュアル第2版、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、子^ルドスプリングハーバー、ニューヨーク1989年[SambrooketalMolecularCloningALaboratoryManual]、およびコーリガンら、カレントプロトコルズインイムノロジーカレントプロトコルズ、ウィーレイインターサイエンス1994年[ColiganetalCurrentProtocolsinImmunology]を参照のこと。これらの文献はその関連により、本明細書中に組込まれる。本明細書において記載される分析化学、有機合成化学、並びに、医薬および薬化学に関する専門的用語、これらの実験手順およびおよびこれらの技術は、当分野において、よく知られているものであり、また一般的に使用されるものである。標準的技術は、化学合成、化学分析、薬剤調製、処方、供給、および患者の治療に使用される。本明細書で参照されたすべての刊行物と特許出願は、本願において開示され、そして請求の範囲に要求された発明概念に関係する当業者の技能のレベルを暗示するものである。これらすべての刊行物と特許出願は、個々の刊行物または特許出願が、関連により本明細書中に組込まれるものであると、明確にかつ個々に示したものと同一の程度をもって、関連により本明細書中に組込まれるものである。本願において開示され、そして請求の範囲に要求されたすべての組成物およびまたは方法は、本明細書の開示に照らして、過度の実験を行なうことなく、製造することおよび実施することができるものである。本願において開示され、そして請求の範囲に要求された発明概念の組成物および方法は、好ましい実施形態に照らして記載されているが、発明概念のその概念、本質および範疇を逸脱することなく、当該組成物および/または方法に対して、および本明細書において述べられた方法の各段階の順序において、種々の変更が適用可能であることは、当業者にとって明らかであろう。当業者にとって明らかであるそのような全ての置換および変更は、添付の請求の範囲によって定義されるような発明概念の本質、範疇およびその概念の範囲内のものであると考えられるものである。本開示に従って利用される場合、特に別途示されない限り、以下の用語は、以下の意味を持ってると、理解されているものであろう請求の範囲および/または明細書において~から構成される[comprisingという用語と共に用いられる単語aまたはanの使用は、1つを意味するかもしれませんが、また、それも1つまたはそれ以上、少なくとも1つ、および1つまたは1以上の意味と一致するものである。開示は、代替手段およびおよび/または[andor]である定義を支持するが、請求の範囲における用語または[or]の使用は、代替手段のみに関することを明示的に示すまたは代替手段が相互に排他的である場合以外には、および/または[andor]を意味するために使用される。本出願全般を通じて、用語約[about]は、装置、値を決定するのに使われる方法に関する固有の変動、または研究対象群の中に存在する変動、を含む値を示すために用いられる。少なくとも1つ[atleastoneという用語の使用は、1つ並びに、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100などを含むがこれらに何ら限定されるわけではない、1つ以上の任意の量を包含するものであると理解されるべきである。少なくとも1つという用語は、それが付されている用語に応じて、100あるいは1000ないしそれ以上まで広がり得、さらに、100または1000の量は、より高い限度もまた満足な結果を生じ得るゆえに、これらが限度であると考慮されるべきではない。用語約[about]は、装置、値を決定するのに使われる方法に関する固有の変動、および/または研究対象群の中に存在する変動、を含む値を示すために用いられる。請求の範囲および明細書において用いられる場合、~から構成される[comprisingおよびcompriseおよびcomprisesのような、~から構成される[comprisingの任意の形態、~を有するhavingおよびhaveおよびhasのような、~を有するhavingの任意の形態、~を含むincludingおよびincludesおよびincludeのような、~を含むincludingの任意の形態、または~を包含するcontainingおよびcontainsおよびcontainのような、~を包含するcontainingの任意の形態の語群は、非排他的ないし解放端的なものであり、付加的な、言及されていない要素または方法工程を排除するものではない。本願において用いられるまたはそれらの組合わせorcombinationthereofの用語は、この用語に先行する列挙された項目の全ての順列組合わせを示すものである。例えば、A、B、C、またはそれらの組み合わせは、Aか、Bか、Cか、ABか、ACか、BCか、またはABCかの、少なくとも1つを含むことを意図するものであり、そしてある特定の文脈において順序が重要である場合には、さらにまたBA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC、またはCABも含まれる。この例で続けると、明白に含まれているのは、1ないしそれ以上の項目ないし用語の反復を含む組合わせ、例えば、BB、AAA、MB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABBなど、である。当業者は、文脈から明らかである場合以外では、どんな組み合わせにも項目ないし用語の数に何ら制限が通常ないことを理解するであろう。ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質の用語は、アミノ酸残基の重合体について言及するために本願において用いられる。本願において使用されるポリペプチドという用語は、天然タンパク質、タンパク質フラグメント、またはポリペプチド配列の類似体を示す総称である。したがって、天然タンパク質、タンパク質フラグメント、および類似体はポリペプチド類の種群である。本願において用いられる単離ペプチドポリペプチドタンパク質isolatedpeptidepolypeptideproteinという用語は、cDNA、組換え型RNA、合成起源またはこれらのいくつかの組合せを意味するものであり、その起源、または由来の源によって、単離ペプチドポリペプチドタンパク質は、自然界に見出されるペプチドポリペプチドタンパク質に関連しているものではない、同じ源からの他のペプチドポリペプチドタンパク質から遊離されたものである、例えば、マウスタンパク質群がない、異なる種からの細胞によって発現される、および/または、自然界において発生するものではない、というものである。本願において使用される場合、アミノ酸という用語は、天然であるかまたは合成であるかにかかわらず、アミノ官能基と酸官能基の双方を含み、そして天然に発生するアミノ酸の重合体中に含まれることのできる、すべての分子を包含するものである。代表的なアミノ酸は、天然に発生するアミノ酸;その類似体群、誘導体群および同属体群異形側鎖を有するアミノ酸類似体群ならびに、前記したいずれかのものの任意の全ての立体異性体群を含むものである。ポリヌクレオチドおよび核酸という用語は、互換性を持って使用される。これらは、任意の長さのヌクレオチド群デオキシリボヌクレオチドか、リボヌクレオチドのいずれでもよいの重合形態、またはその類似体を意味するものである。以下は、ポリヌクレオチドの非制限的な例である遺伝子または遺伝子フラグメントのコード化または非コード化領域群、連鎖解析から定義された遺伝子座群、エキソン群、イントロン群、メッセンジャーRNA群、転移RNA群、リボソームRNA群、リボザイム群、cDNA群、組換え型ポリヌクレオチド群、分枝ポリヌクレオチド群、プラスミド群、ベクター群、任意の配列の単離DNA群、任意の配列の単離RNA群、核酸プローブ群、およびプライマー群。ポリヌクレオチドはメチル化ヌクレオチドやヌクレオチド類似体のような、修飾ヌクレオチドから構成され得る。もし存在しているなら、ヌクレオチド構造への修飾は、重合体の組み立ての前または後に行われ得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識成分との結合によることのごとき、さらなる修飾をなされ得る。単離核酸および単離ポリヌクレオチドという用語は、互換性を持って使用される。核酸またはポリヌクレオチドは、単離ポリヌクレオチドが自然界に見出されるポリヌクレオチドの全体または一部に関連しているものではない、自然界において結合しないポリヌクレオチドに結合している、またはより大きな配列の一部として自然界において発生しない、場合には、単離されたと考慮されるものである。本願において用いられるベクターという用語は、それが結合された別の核酸を輸送することができる核酸分子を意味することを意図するものである。ベクターの1つのタイプは、プラスミドであり、これは付加的DNAセグメントがその内部に結合されているものであってもよい円形の二本鎖DNAループを意味するものである。ベクターの別のタイプは、ウイルス性ベクターであり、ここにおいて付加的DNAセグメントがウイルスゲノムに結合されているものであってもよいものである。あるベクター群は、それらが導入される宿主細胞の中で自律複製ができるものである例えば、複製の細菌性開始点を有する細菌性ベクター群およびエピゾーム性哺乳類ベクター群。他のベクター群は、宿主細胞の中への導入において、宿主細胞のゲノムと組み込まれることができ、その結果、宿主ゲノムと共に複製される。さらにまた、あるベクター群は、遺伝子の発現を引き起こすことができるものである。そのようなベクター群は、本願において、組換え型発現ベクターと呼称される。本願において使用される場合、ある物に付される自然に発生する~naturallyoccurringという用語は、その物が自然界において見出され得るという事実を意味するものである。例えば、有機体中に存在しかつ自然界において起源から単離されることができ、また研究所ないしその他の所において人兼によって作為的に修飾されたものでない、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、自然に発生するものである。自然に発生する~という用語は、本願において天然の~という用語と、互換性を持って使用され得るものである。本願において示した選択的に交雑形成するselectivelyhybridizeという用語は、検出可能でかつ特異的な結合を意味するものである。本発明の概念に係るポリヌクレオチド群、オリゴヌクレオチド群、およびペプチドポリペプチドタンパク質をコード化するそれらのフラグメントは、非特異的核酸への検出可能な結合のかなりの量を最小化するハイブリダイゼーションおよび洗浄条件下で、核酸鎖と選択的に交雑形成する。高度に厳密な条件群が、当分野において公知であるおよび本願において述べられるような選択的ハイブリダイゼーション条件群を達成するために用いられることができる。一般に、本発明概念の、ポリヌクレオチド群、オリゴヌクレオチド群およびフラグメント群と、興味対象の核酸配列との間の核酸配列相同性は、少なくとも80であり、より典型的には、少なくとも85、90、95、99、および100のより高い相同性となるであろう。2つのアミノ酸配列は、これらの配列間に、部分的または完全な同一性があれば、相同である。例えば、85の相同性は、2つの配列が最大の一致をもって位置合わせされた際に、アミノ酸群の85が同一であることを意味する。ギャップは、一致を最大とする際に許容されるものであり;5ないし以下のギャップ長が好ましく、さらに、2ないしそれ以下のギャップ長がより好ましいものである。本願において、代替的に、そして望ましく用いられる用語である、2つのタンパク質配列が相同であるとは、変異データマトリックスおよび6ないしそれ以上のギャップペナルティを有するプログラムALIGNを用いて、5以上のアライメントスコアを有する場合である。デイホッフ、エム、オー、アトラスオブプロテインシーケンスアンドストラクチャー中、101~110頁第5巻、ナショナルバイオメディカルリサーチファウンデーション1972年DayhoffMOinAtlasofProteinSequenceandStructurepp101110およびその巻の補遺2の1~10頁Supplement2tothisvolumepp110を参照のこと。当該2つの配列またはその部分は、それらのアミノ酸群が、ALIGNプログラムを用いて最適に位置合わせした際に50同一性より高いかあるいはそれに等しい同一性である場合に、より好ましい相同性である。~に対応しているcorreespondingtoという用語は、あるポリヌクレオチド配列が、参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部分に相同である、またはあるポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列と同一であることを意味するために、本願において用いられる。これと対比して、~と相補的であるcomplementarytoという用語は、相補的な配列が、参照ポリヌクレオチド配列の全部または一部分に相同である相同であることを意味するために、本願において用いられる。例えば、ヌクレオチド配列TATACは、参照配列TATACに対応しており、参照配列GTATAと相補的である。次の用語は2つまたはそれ以上のポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の配列関係を説明するのに使用される参照配列referencesequence、比較ウィンドウcomparisonwindow、配列同一性sequenceidentity、配列同一性の割合percentageofsequenceidentity、および実質的同一性substantialidentity。参照配列は、配列比較に関する基礎として使用される定義された配列であり参照配列は、例えば、全長cDNAまたは配列表で与えられる遺伝子配列のセグメントとして、または完全なcDNAまたは遺伝子配列から構成され得るものである、比較的長い配列のサブセットであり得る。一般に、参照配列は、長さが少なくとも18のヌクレオチドまたは少なくとも6つのアミノ酸であり、頻繁に、長さが少なくとも24のヌクレオチドまたは少なくとも8つのアミノ酸であり、さらに、しばしば、長さが少なくとも48のヌクレオチドまたは少なくとも16つのアミノ酸である。2つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、それぞれ当該2つの分子間で類似する、1つの配列すなわち、完全ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の一部で構成され得、そしてさらに当該2つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間で異なる配列で構成され得るものであるので、2つの分子間での配列比較は、典型的には、配列類似性の局地的領域を特定し、そして比較するための比較ウィンドウ上で、2つの分子の配列をと比較することによって行われる。本願において使用される比較ウィンドウは、少なくとも18個の連続したヌクレオチド位置または6つのアミノ酸配列の構想的セグメントを指すものであり、ここにおいて、1つのポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が、少なくとも18個の連続したヌクレオチドまたは6つのアミノ酸配列である参照配列と比較され、そして比較ウィンドウにおけるポリヌクレオチド配列の部分が、参照配列付加または欠失を有していないと、これら2つの配列の最適な位置合わせにおいて比較された際に、この比較ウィンドウにおけるポリヌクレオチド配列の部分が、20ないしそれ以下の付加、欠失、置換、およびその他すなわち、ギャップを有し得るものである。比較ウィンドウを位置合わせするための配列の最適の位置合わせは、スミスとウォーターマンSmithandWatermanの局地的相同性アルゴリズムによって、ニードルマンとウィンシュNeedlemanandWunschの局地的相同性アルゴリズムによって、ピアーソンとリップマンPearsonandLipman852444の相似法に関する研究によって、種々の方法で生成されたこれらのアルゴリズム群の自動計算機化された実施GeneworksorMacVectorsoftwarepackagesによって、あるいは検査によって、実施されることができ、そしてこれらの種々の方法によって得られた最高の位置合わせすなわち、比較ウインドウにおける相同性の最高パーセンテージとなる。が選択される。配列同一性という用語は、比較ウィンドウの上で、2つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列が同一であるすなわち、ヌクレオチド単位での、あるいは残基単位においてことを意味する。配列同一性の割合という用語は、2つの最適に位置合わせされた配列を比較ウィンドウ上で比較し、同じ核酸塩基または同じ残基が両方の配列で起こる位置の数を一致した位置の数を得るために計測し、この一致した位置の数を比較ウィンドウにおける位置の全数すなわち、ウィンドウのサイズで割り、その結果に100を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって、計算されるものである。本願において用いられる実質的同一性は、少なくとも18ヌクレオチド位置の比較ウィンドウにおいて、頻繁には少なくとも2448ヌクレオチド位置の比較ウィンドウにおいて、参照配列と比較した際に、例えば、少なくとも90~95の配列同一性、または少なくとも99の配列同一性などのように、少なくとも85の配列同一性を有する配列により、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸が構成されている、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の特性を指す用語であり、ここにおいて、配列同一性の割合は、比較ウィンドウ上で参照配列の合計20ないしそれ以下の欠失または付加を含み得る配列に、参照配列を比較することによって計算されたものである。なお、参照配列は、より大きな配列のサブセットであり得る。本願において用いているように、20個の通常のアミノ酸とそれらの略語は慣例的用法に従うものである。イムノロジー--アシンセシス第2版、イーエスゴラブおよびディーアールグレン編集、シナウアーアソシエートス、マサチューセッツ州サンダーランド1991年ImmunologyASynthesisを参照のこと。なお、本書はその関連により本明細書中に取り込まれる。20個の通常のアミノ酸の立体異性体群、または、α-α-二置換型アミノ酸群、N-アルキルアミノ酸群、乳酸、その他の特殊なアミノ酸などの非天然アミノ酸もまた、本願において開示され、そして請求の範囲に要求された発明概念のポリペプチド類のための好ましい成分であり得る。特殊なアミノ酸の例は、4ヒドロキシプロリン、αカルボキシグルタメート、εNNNトリメチルリジン、εNアセチルリジン、Oフォスフォセリン、Nアセチルセリン、Nフォルミルメチオニン、3メチルヒスチジン、5ヒドロキシリジン、σNメチルアルギニン、並びにその他の同様のアミノ酸およびイミノ酸を含むものである。本願において用いられるポリペプチド表記法においては、標準的な用法と規則に従い、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシ末端方向である。ポリペプチドに適用される場合、実質的同一性という用語は、2つのペプチド配列が、例えば、規定値ギャップ重量を用いるプログラムGAPやBESTFITなどによって、最適に位置合わせされた際に、例えば、少なくとも90パーセントの配列同一性、少なくとも95パーセントの配列同一性、または少なくとも99パーセントの配列同一性などのように、少なくとも80パーセントの配列同一性を共有することを意味する。望ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なるものとされている。保存的アミノ酸置換は、同様の側鎖を有する残基同士の相互置換性を意味するものである。例えば、脂肪族側鎖を有しているアミノ酸のグループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり脂肪族水酸基側鎖を有するアミノ酸のグループは、セリンとトレオニンでありアミド含有側鎖を有するアミノ酸のグループは、アスパラギンとグルタミンであり芳香族側鎖を有するアミノ酸のグループは、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり塩基性側鎖を有するアミノ酸のグループは、リジン、アルギニンおよびヒスチジンでありそして、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸のグループは、システインとメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換のグループは、バリン-ロイシン-イソロイシン、フェニルアラニン-チロシン、リジン-アルギニン、アラニン-バリン、グルタミン酸-アスパラギン酸、およびアスパラギン-グルタミンである。参照ポリペプチドの異形variantという用語は、参照ポリペプチドと較べて1つないしそれ以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有するポリペプチドを意味する。アミノ酸置換は、保存的conservativeあるいは非保存的nonconservativeであり得る。保存的アミノ酸置換は、特に限定されるわけではないが例えば、大きさおよび電荷などのような、特性の同じものを有する他のアミノ酸での、ポリペプチド中のアミノ酸の置換を意味するものである。保存的置換は、それらの側鎖において関係づけられるアミノ酸のファミリーの中で行われるものである。一般に、遺伝学的にコード化されたアミノ酸は、一般に、酸性であるアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩塩基性であるリジン、アルギニン、ヒスチジン非極性であるアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンおよび非荷電極性であるグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンというファミリーに分類される。より特別なファミリーは以下の通りである:セリンとトレオニンは脂肪族水酸基ファミリーでありアスパラギンとグルタミンはアミド含有ファミリーでありアラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンは脂肪族ファミリーでありそして、フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは芳香族ファミリーである。例えば、ロイシンのイソロイシンかバリンでの単独置換、アスパラギン酸塩のグルタミン酸塩での単独置換、トレオニンのセリンでの単独置換、またはあるアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸での同様の置換が、結果として生じる分子の結合または特性において大きな影響を与えないこと期待することは妥当であり、特に置換がフレームワーク部位の範囲内のアミノ酸に関わらない場合にはなおさらである。アミノ酸交換が官能性ペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性を検査することによって容易に決定することができる。抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたは類似体は、当業者によって容易に調製することができる。フラグメントまたは類似体の好ましいアミノ-およびカルボキシ-末端は、官能性ドメインの境界の近くに生じる。構造的で官能性のドメイン群は、当該ヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列データを、公共のまたは専有の配列データベースと比較することによって同定することが可能である。望ましくは、自動計算機化された比較法が、配列モチーフを同定するため、あるいは公知の構造および/または官能性を有する他のタンパク質に生じる予測されたタンパク質配座ドメインを同定するために使用される。公知の三次元構造に折りたたまれたタンパク質配列を同定するための方法は公知であるボウイら、サイエンス、253164。したがって、前述した例は、当業者が、本願において開示され、そして請求の範囲に要求された本発明概念に係る官能的ドメイン群を定義するために用いられ得る配列モチーフおよび構造的配座を認識することができることを、実証するものである。好ましいアミノ酸置換は、タンパク質分解に対する感受性を減ずる、酸化に対する感受性を減ずる、タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変容する、結合親和性を変容する、およびこのような類似体のその他の物理化学的または官能的特性を授けるまたは修飾する、類似体は、自然に発生するぺプチド配列以外の、配列の様々な変異を含むことが可能である。例えば、単一または複数のアミノ酸置換は、自然に発生する配列において行われ得るものである。当分野で認識されたポリペプチド二次的および三次的構造の例は、プロテインズ、ストラクチャーズアンドモレキュラープリンシプルズクレートン編、ダブリュエッチフリーマンアンドカンパニー、ニューヨーク州ProteinsStructuresandMolecularPrinciplesイントロダクションツゥプロテインストラクチャーブランデンおよびジェイトゥーズ編、ガーランドパブリッシング、ニューヨーク州ニューヨークIntroductiontoProteinStructureおよび、ソーントンらThorntonetalにおいて記載されており、これらの文献はその関連によりそれぞれ本明細書中に取り込まれる。本願において用いられるポリペプチドフラグメントという用語は、アミノ末端欠失およびまたはカルボキシ末端欠失を有するが、残存するアミノ酸配列が、自然に発生する配列における対応している位置群と同一であるポリペプチドを意味する。ポリペプチドフラグメントは、参照ポリペプチドの長さよりも短い任意の長さであり得る。抗体という用語は、最も広い意味で使用され、そして特に、モノクローナル抗体群、ポリクローナル抗体、多特異性抗体、および所望の生物学的活性を発揮する限りにおいての抗体フラグメントを包含するものである。したがって、抗体あるいは抗体ペプチド抗体ペプチド群という用語は、全長免疫グロブリン分子、または、特異的抗原結合に関して当該完全抗体と競合するそれの結合フラグメントを指すものである。結合フラグメントは、組み換えDNAの技術によって、または完全抗体の酵素的または化学的開裂によって、調製され得る。結合フラグメントは、Fab、Fab、F2、Fv、scFv、ジスルフィド結合Fv、Fd、二特異性抗体群diabodies、一本鎖抗体群、単一ドメイン抗体群、NANOBODIES登録商標名、および、少なくとも完全抗体の可変領域の一部を保有するその他の抗体フラグメントを含むものである。例えば、ハドソンらHudsonetalを参照のこと。本願において用いられる抗体の抗原結合フラグメントまたは抗原結合部位という用語は、抗原に対して結合する能力を保持する、抗体の1個ないしそれ以上のフラグメントを指すものである。抗体の抗原結合機能は、完全抗体のフラグメント群によって発揮され得る。抗体の抗原結合フラグメントという用語に包含される結合フラグメントの例としては、特に限定されるわけではないが、Fab、Fab、F2、Fv、scFv、ジスルフィド結合Fv、Fd、二特異性抗体群diabodies、一本鎖抗体群、NANOBODIES登録商標名、単離CDRH3、および、少なくとも完全抗体の可変領域の一部を保有するその他の抗体フラグメントがある。これらの抗体フラグメント群は、従来の組換えおよびまたは酵素的技術を使用することで得られ、完全抗体群と同じ方法において抗原結合に関してスクリーニングされる。CDRおよびその複数形のCDRsという用語は、抗体または抗体フラグメントの結合特性を決定する、抗体または抗体フラグメントの相補性決定領域を指すものである。多くの例において、3つのCDRsが、1つの軽鎖可変領域に存在しており、また3つのCDRsが重鎖可変領域に存在している。CDRsは、抗体分子の官能的活性に貢献しており、そして足場ないしフレームワーク領域を構成するアミノ酸配列群によって分離される。様々なCDRsの中で、CDR3配列群、および特にCDRH3は、最も多様なものであり、したがって、抗体の特異性に最も強い貢献を有している。CDRsを決定するための少なくとも2つの技術異種間配列可変性に基づくアプローチすなわち、カバットら、シーケンシズオブプロテインズオブイムノロジカルインタレストナショナルインスティテュートオブヘルス、メリーランド州ベセスダ、KabatetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest、関連により本明細書中に本文献全体が取り込まれる。、および抗原-抗体複合体の結晶写真的研究に基づくアプローチコチアら、ネイチャー、、342877ChothiaetalNature342877、関連により本明細書中に本文献全体が取り込まれる。が、存在する。エピトープという用語は、免疫グロブリンまたはT細胞レセプターに対して特異的に結合し得る任意のタンパク質決定基を含むものである。いくつかの実施形態においては、1つのエピトープは、1つ抗体によって特異的に結合される1つの抗原の1つの領域である。通常、エピトープ性決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基などのような分子の、化学的に活性な表面配列を含んでいる。いくつかの実施形態においては、エピトープは、特異的な三次元構造的な特徴に特異的に結合する場合、それは当該レセプターのリガンドに対する接着を実質的に抑制し得る。本願において用いられるように、抗体の過剰が、リガンドに結合するレセプターの量を少なくとも約20、少なくとも約40、少なくとも約60、少なくとも約80、少なくとも約85、または、少なくとも約90減少させる場合、当該抗体は、当該レセプターの当該リガンドに対する接着を実質的に抑制する。単離抗体は、これが産生された環境の成分から、分離されたおよびまたは回収されたものである。その産生環境の汚染成分群は、当該抗体の診断的または治療的な用途を妨害するものであり、そして、酵素群、ホルモン群、その他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質群を含み得るものである。いくつかの実施形態においては、抗体は、少なくとも3つの異なった方法で、計測可能なものとして純化され得る1ロウリー法theLowrymethodで測定した際に、例えば、75質量以上、85質量以上、95質量以上、または99質量以上というような、50質量より大きなものとする2回転カップシークエンテーターspinningcupsequentatorの使用により、例えば、配列の少なくとも15残基というように、N端末の、または、内部のアミノ酸配列の少なくとも10残基を得るのに十分な程度とするまたは3、クーマシーブルー、または、好ましくはシルバー染色を用いて還元または非還元条件下におけるSDSPAGEにより均質化する。抗体が産生される環境における少なくとも1つの成分が存在しないため、単離抗体は、組換え型細胞中の元の位置の抗体を含んでいる。しかしながら、通常、単離抗体は少なくとも1回の純化工程によって調製されるであろう。さらに、単離抗体は、異なった抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まないものである。しかしながら、単離抗体は、他の、関連する抗原群に何らかの交叉反応性を持っている可能性がある。抗体変異体という用語は、アミノ酸残基の1つまたはそれ以上が変更された、抗体のアミノ酸配列抗体のアミノ酸配列変異体を指す。そのような変異体は、抗体の重鎖または軽鎖可変領域のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも75のアミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列と、100未満の配列同一性または類似性、例えば、少なくとも85、または少なくとも90、または少なくとも95などというような、同一性または類似性を必然的に有するものである。本願において用いられるモノクローナル抗体という用語は、同一エピトープに特異的に結合する実質的に均質な抗体の個体群から得られる抗体を意味する。すなわち、少量で存在するかもしれない起こり得る自然発生的な突然変異を除いて、前記個体群を構成する個々の抗体は同一である。異なる決定基群に対して指向する異なる抗体群を典型的に含む旧来の抗体ポリクローナル抗体とは異なり、各モノクローナル抗体は抗原の上にただ一つの決定基に対して指向する。それらの特異性に加えて、1つの産生方法においてモノクローナル抗体は1つのハイブリドーマ培地によって合成され、そして、それゆえこれらは他の免疫グロブリン群により汚染されないといった利点を、モノクローナル抗体は有している。モノクローナルという修飾語は、実質的に均質な抗体の個体群から得られるという、抗体の特性を示すものであり、そして、ある特定の方法による抗体の産生を必要とするものであるといった意味に解釈されるべきではない。例えば、1つの実施形態では、本願において開示され、そして請求の範囲に要求された本発明概念に従い産生されるモノクローナル抗体は、コーラーとミルスタインによって最初に開示されたハイブリドーマ法によって得られ得るものである。本願において開示され、そして請求の範囲に要求された本発明概念に係るモノクローナル抗体は、特に限定されるわけではないが、例えば、周密免疫処理要綱deliberateimmunizationprotocolの結果疾患または癌の経過の間に自然に抗体の産生をもたらす免疫反応の結果ファージ由来抗体などといったものを含む、当分野において公知の任意の方法によって産生され得る。上に列挙したハイブリドーマ産生法に加えて、本願において開示され、そして請求の範囲に要求された本発明概念に係るモノクローナル抗体は、特に限定されるわけではないが、例えば、組換えDNA法例えば、米国特許第4816567号を参照のこと。ファージディスプレイライブラリーからの抗体フラグメントの単離例えば、クラックソンら、ネイチャー、352624628ClacksonetalNature352624628およびマークスら、ジェィモルバイオル、222581597MarksetalJMolBiol222581597を参照のこと。ならびの種々のその他のモノクローナル抗体産生技術例えば、ハーローとレインアンチボディ:アラボラトリマニュアルコールドスプリングハーバーラボラトリー、ニューヨーク州コールドスプリングハーバーHarlowandLaneAntibodiesALaboratoryManualDNAまたはcDNAが、代わりに配列決定される。ハイブリドーマ細胞系統または単離B細胞から抗体が誘導される場合には、可変領域をコード化するcDNAsは、例えば、バブクックらBabcooketalプロクナトル.アカドサイユーエスエイ9378437848ProcNatlAcadSciUSA9378437848および国際公開公報WO9202551。によって述べられた方法によって、PCRを用いて増幅され得る。これら双方の文献の内容は、関連により、それらの全体が本明細書中に明確に取り入れられる。キメラ抗体は、少なくとも2つの異なった源からの成分群から作製された抗体を指すものである。いくつかの実施形態においては、キメラ抗体は、別の分子、例えば、第2の種由来の抗体の一部に融合された、第1の種由来の抗体の一部から構成されるものである。あるこのような実施形態では、キメラ抗体は、ヒト由来抗体の一部に融合された、非ヒト動物由来の抗体の一部から構成される。また、あるそのような実施形態では、キメラ抗体は、第2の動物からの抗体の一部に融合された、第1の動物由来の抗体の可変領域の全部または一部から構成される。特に限定されるわけではないが、例えば、キメラ抗体は、ヒト由来の抗体の定常領域に融合された非ヒト動物由来の抗体の可変領域の全部または一部から構成される。本願において開示され、そして請求の範囲に要求された本発明概念に係るモノクローナル抗体の利用は、特に限定されるわけではないが、例えばヒトなどのような、対象への当該モノクローナル抗体の投与を必要とするかもしれない。しかしながら、モノクローナル抗体が、齧歯動物などの非ヒト動物で産生される場合には、このような抗体のヒト患者への投与は、一般に、免疫反応を惹起するであろう。ここで、当該免疫反応は、抗体の前記配列に対して向けられる。免疫反応が抗体の配列に向けられるところで。このような反応は、その治療法の持続時間と有効性を制限する。そのような問題を解決するために、本願において開示され、そして請求の範囲に要求された本発明概念に係るモノクローナル抗体は、ヒト化humanizedされる。すなわち、当該抗体は、所望のエピトープに関する抗体親和性は維持しつつ、当該抗体の1つないしそれ以上の抗原部位を除去し、あるヒト抗体の類似部位をこれらと置換するように工学処理される。この工学処理は、少数のアミノ酸を包含するのみであっても、または完全な抗体の相補性決定領域だけを残して、抗体の完全フレームワーク領域を含むものであってもよい。抗体をヒト化するいくつかの方法が、当分野において公知であり、そして、2001年1月30日にクィーンらQueenetalに対して発せられた米国特許第6180370号、2000年4月25日にブリッケルBrickellに対して発せられた米国特許第6054927号、1999年2月9日にスチュディニカStudnickaに対して発せられた米国特許第5869619号、1999年1月19日にリンLinに対して発せられた米国特許第5861155号、1998年1月27日にロドリクェズらRodriquezetalに対して発せられた米国特許第5712120号、1989年3月28日にカビリーらCabillyetalに対して発せられた米国特許第4816567号において開示されている。これらの特許の明細書は、関連により、それらの全体が本明細書中に明確に取り入れられる。上述したように、ヒト化抗体は、ヒト抗体により近く合致アミノ酸配列においてするように変更された非ヒト抗体を指すものである。これゆえ、ヒト化抗体は一種のキメラ抗体である。上述したように、抗体は、主に、重鎖および軽鎖相補性決定領域に位置しているアミノ酸残基を介して、目標抗原と相互作用する。これゆえ、個々の抗体の相互間では、CDRs内のアミノ酸配列は、CDRs外の配列よりも多様なものである。CDR配列は、ほとんどの抗体-抗原相互作用の原因となるゆえ、特異的な自然に発生した抗体の特性を模倣する組換え型抗体を発現させることが可能であり、これは、当該自然に発生した抗体からのCDR配列を、例えば、ヒト抗体フレームワーク領域のような、異なった特性を有する異なった抗体からのフレームワーク領域にグラフト化する発現ベクターを構築することによって行われる。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む公共のDNAデータベースまたは公開された文献から入手可能である。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子に係る生殖細胞系DNA配列は、VBaseヒト生殖細胞系配列データベース、並びに、カバットイーエイら、シーケンシズオブプロテインズオブイムノロジカルインタレスト、第5版、ユーエスデパートメントオブヘルスアンドヒューマンサービシズ、エヌアイエッチパブリケーション、No913242KabatEAetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterestFifthEditionUSDepartmentofHealthandHumanServicesNIHPublicationNo913242トムリンソンアイエムら、ザレペトリエオブヒューマンジャームラインブイエッチシーケンシズリビールズアバウトフィフティグループスオブブイエッチセグメントスウィズディファレントハイパーバリアブルループス、ジェイモル.バイオル.227776798TomlinsonIMetalTheRepertoireofHumanGermlineVHSequencesRevealsaboutFiftyGroupsofVHSegmentswithDifferentHypervariableLoopsJMolBiol227776798およびコックスジェイ.ピー.エルら、、アディレクトリィオブヒューマンジャーム-ラインブイエッチセグメントスリビールズアストロングバイアスインゼェアユーゼイジ、ユル.ジェイ.イムノル.、24827836CoxJPLetalADirectoryofHumanGermlineVHSegmentsRevealsaStrongBiasintheirUsageEurJImmunol24827836において、見ることが可能である。これらのそれぞれの内容は、関連により、本明細書中に明確に取り入れられる。抗体群のヒト化形態群は、キメラ免疫グロブリン群、それの免疫グロブリン鎖群またはフラグメント群2、または抗体群のその他の抗原結合配列群であり、これらは基本的に、ヒト免疫グロブリンの配列から成り、そして非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含むものである。ヒト化処理は、ウィンターおよびその協力者ジョーンズら、1986年;リッチマンら、1988年ヴァーホイェンら、1988年Winterandcoworkersの方法に従い、齧歯動物のCDRsまたはCDR配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによって行うことができる米国特許5225539号も参照のこと。。いくつかの例においては、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク残基群が、相応する非ヒト残基群によって置き換えられる。また、ヒト化抗体群は、受入抗体側と移入CDRまたはフレームワーク配列群側のいずれにも見出すことのできない残基群を有することが可能である。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも1つ、および通常2つの、可変領域の実質的に全てを有しているであろうここでCDR領域群の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのそれらと対応しており、かつ、フレームワーク領域群の全てまたは実質的全てはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域群である。また、ヒト化抗体は、好ましくは、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを有しているであろうジョーンズら、1986年;リッチマンら、1988年およびプレスタ、1992年Jonesetal1986Riechmannetal1988andPresta1992。従来技術としては、ヒト化抗体の生成または使用に関連する公開文献が多数存在する。これらの研究の多くは、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念と共に利用することができる実施要綱群の有用な例群を教示している。特に限定されるものではないが、例えば、サンドボーンら、ガトレントロジィ、1201330SandbornetalGatroenterology1201330ミハラら、クリン.イムノル、98319MiharaetalClinImmunol98319エナリら、ニューロルレス、2372YenarietalNeurolRes2372モラレスら、ナクルメドバイオル、27199MoralesetalNuclMedBiol27199リチャーズら、キャンサーレス、592096RichardsetalCancerRes592096エナリら、エクスプニューロル、153223YenarietalExpNeurol153223および、シンクラら、アンチキャンサーレス、181217ShinkuraetalAnticancerRes181217などである。これら全て文献は、関連により、それらの全体が本明細書中に明確に取り入れられる。しかしながら、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、上記に示した処理実施要綱群に何ら限定されるものではなく、そして当業者に公知のその他の処理実施要綱群も、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念に係る方法において利用可能であることが、理解されるべきである。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、さらに完全ヒトモノクローナル抗体群の使用を含むものである。完全ヒト抗体群は、本質的には、CDRsを含む、軽鎖と重鎖の双方の全配列がヒト遺伝子群から生じる抗体分子群に関連するものである。そのような抗体群は、ここにおいてヒト抗体群humanantibodiesまたは完全ヒト抗体群fullyhumanantibodiesと称呼される。ヒト抗体群は、ヒト抗体配列群を含んでおり、非ヒト動物からの抗体配列群は含んでない。いくつかの実施形態においては、1つのヒト抗体は、天然抗体群には見られない合成の配列群を含み得る。この用語は、当該抗体群が産生される方法によっては何ら限定されない。ヒトモノクローナル抗体群は、トリオーマtrioma法ヒトB細胞ハイブリドーマ法コズボアら、ハイブリドーマ、27KozboretalHybridoma27を参照のこと。および、ヒトモノクローナル抗体群を産生するためのEBVハイブリドーマ法コールら、ピーエヌエイエス、82859ColeetalPNAS82859を参照のこと。によって、調製することが可能である。ヒトモノクローナル抗体群は、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念の実施において利用され得、そして、ヒトハイブリドーマ群を用いることによってコールら、ピーエヌエイエス、82859ColeetalPNAS82859を参照のこと。、または生体外インビトロでヒトB細胞群をエプスタイン‐バールウイルスEpsteinBarrVirusを用いて形質転換することによってコレーら、1985年Coleetal1985を参照のこと。、で産生され得る。さらに、ヒト抗体群は、遺伝子導入動物例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子群が部分的にまたは完全に不活性化されたマウスにヒト免疫グロブリン遺伝子座群を導入することによって、製造することが可能である。誘発において、ヒト抗体産生が観測され、これは、遺伝子再配列、組み立て、および抗体レパートリーを含む全ての観点においてヒトにおいて見られるものと非常に似通っている。このアプローチは、特に限定されるわけではないが、例えば、米国特許第5545807号第5545806号第5569825号第5625126号第5633425号第5661016号、並びに、マークスら、ジェイバイオル.ケム.、26716007MarksetalJBiolChem26716007ロンバーグら、ネイチャー、368856LonbergetalNature368856モリソン、1994年Morrison1994フィッシュワイルドら、ネイチャーバイオテクノル、14845FishwildetalNatureBiotechnol14845ニュウバーガー、ナットバイオテクノル、14826NeubergerNatBiotechnol14826および、ロンバーグとヒューザー、イント.レブ.イムノル、1365LonbergandHuszarIntRevImmunol1365において、記載されている。ヒト抗体群はまた、抗原による誘発に対して、非ヒト動物の内在性抗体群よりもむしろ完全ヒト抗体群を産生するように修飾された、遺伝子導入非ヒト動物を使用することで、産生され得る国際公開公報WO9402602を参照のこと。。非ヒト宿主における免疫グロブリン重鎖群および軽鎖群をコード化する内在性遺伝子が無能力化され、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン群をコード化する活性な遺伝子座群が、当該宿主のゲノムに挿入された。ヒト遺伝子群は、例えば、必要なヒトDNAセグメント群を含有する酵母人工染色体を使用することで、取り込まれる。次いで、全ての所望される修飾群を与える動物が、当該修飾群の総数よりも少ない数を有する中間遺伝子導入動物を異種交配することによって、得られる。このような非ヒト動物の1つの実施形態は、マウスであり、国際公開公報WO9633735およびWO9634096において開示されるように、XENOMOUSE商標名と呼ばれている。この動物は、完全ヒト免疫グロブリン群を分泌するB細胞を生産する。抗体群は、興味対象の免疫原での感作後に当該動物から直接得ることができ例えば、ポリクローナル抗体の調製として、または、これに代えて、モノクローナル抗体群を産生するハイブリドーマのような、当該該動物由来の不死化B細胞から得ることができる。さらに、ヒト可変領域群を有する免疫グロブリン群をコード化する遺伝子群は、回収され、当該抗体群を直接得るために発現されることができ、あるいはまた、単鎖Fv分子群などの抗体類似体を得るためにされに修飾さることができる。1つの内在性免疫グロブリン重鎖の発現を欠くマウスとして例示される、非ヒト宿主を生産する方法の一例が、1999年8月17日にクッチャーラパティらKucherlapatietalに発せられた米国特許第5939598号において開示されており、関連により本明細書中に取り込まれる。これは、1つの胚性幹細胞中の少なくとも1つの内在性重鎖遺伝子座からJセグメント連結部分遺伝子群を欠失させる当該欠失は選択マーカーをコード化する遺伝子を含む標的ベクターによって果たされる。ことによって、当該遺伝子座の再配列を阻害し、また再配列された免疫グロブリン重鎖遺伝子座の転写物の形成を阻害することそして、この胚性幹細胞から遺伝子導入マウス当該マウスの体細胞群および生殖細胞群は選択マーカーをコード化する遺伝子を含むものである。を産することを含む、方法によって得ることが可能である。1つのヒト抗体などのような、興味対象の1つの抗体を産生するための方法が、ホリらに1999年6月29日に発せられた米国特許第5916771号において開示されており、関連により本明細書中に取り込まれる。それは、1つの重鎖をコード化する1つのヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、培地中の1つの哺乳類宿主細胞に組み入れること1つの軽鎖をコード化する1つのヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、別の哺乳類宿主細胞に組み入れることおよび、これらの2つの細胞を融合しハイブリッド細胞を形成すること、を含んでいる。、当該ハイブリッド細胞は、当該重鎖と当該軽鎖を含む抗体を発現する。中和抗体neutralizingantibodyまたは~を中和する抗体antibodythatneutralizesという用語は、抗体が特異的に結合するエピトープを含むポリペプチドの少なくとも1つの活性を抑制する抗体を指すものである。いくつかの実施形態においては、中和抗体は、生体外インビトロおよび/または生体内インビボで活性を抑制する。抗原結合部位という用語は、特異的に抗原を結合し得る抗体の部位を指す。いくつかの実施形態においては、1つの抗原結合部位は、1つないしそれ以上の抗体可変領域群によって提供される。本願において用いられる場合、実質的に純粋は、ある目的の種が、存在する支配的な種すなわち、モル基準で、組成中のいかなる他の個々の種よりも、それが豊富であるであることを意味する。一般に、実質的に純粋な組成は、例えば、約55超、約60超、約65超、約70超、約75超、約80超、約85超、約90超、約95超、および約99超などというように、組成中に素材する全ての高分子種の約50超を構成するものである。1つの実施形態では、ある目的の種が、本質的な均質性のために純化され汚染種群が、周知の検出方法では組成中に検出できない。、ここにおいては当該組成は本質的にただ一つの高分子種から成ることとなる。薬剤という用語は、化学化合物、化学化合物の混合物、生物学的高分子、または生物学的高分子群から得られる抽出物を指す。いくつかの実施形態においては、薬剤は、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念に係るモノクローナル抗体であり得る。拮抗物質という用語は、あるタンパク質酵素の活性を減少させる薬剤を指す。。アゴニストという用語は、あるタンパク質酵素の活性を増加させる薬剤を指す。患者という用語は、ヒトおよび獣医学的被験体群を包むものである。いくつかの実施形態においては、患者は哺乳動物である。他のいくつかの実施形態においては、患者は人間である。処置は、治療的処置と予防的または防止的手段の双方に関するものである。処置を必要とするものは、特に限定されるわけではないが、例えば、既に特定の状態または障害disorderなっている個体群、ならびに、特定の状態または不全となる危険性を負っている個体群例えば、予防的/防止的手段を必要としている者を含むものである。処置するという用語は、ある薬剤を治療および/または予防/防止の目的のために患者に投与することを指す。治療薬は、治療および/または予防/防止の効果を生じさせるために、生体内インビボに投与され得る薬剤を指す。治療抗体は、治療および/または予防/防止の効果を生じさせるために生体内インビボに投与され得る抗体を指す。障害は、ポリペプチドを用いた処置からの恩恵を受け得るあらゆる状態そ指す。これは慢性および急性の障害、または問題の障害へと哺乳動物を罹患させやすくする病理学的な状態を含む疾患を含むものである。癌および癌性の~という用語は、典型的には異常細胞成長によって特徴づけられる哺乳動物における病理的状態を指すまたは述べるものである。特に限定されないが、その例としては、癌腫、リンパ腫、真性腫瘍、肉腫、および白血病が含まれる。そのような癌の、より特定の例としては、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、膵癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎癌、前立腺癌、外陰腺癌、甲状腺癌、肝癌および様々なタイプの頭頸部癌が含まれる。処置の目的のための哺乳動物は、ヒト、家畜および農耕用動物、非ヒト霊長類、および、犬、馬、猫、牛などのような動物園用、スポーツ用またはペット用動物などをふくむ、哺乳動物として分類されるいかなる動物をも指すものである。有効量という用語は、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念の方法で使用された場合に、妥当な利益/リスク比率に対応して、過度の有害な副作用例えば、毒性、炎症およびアレルギー反応などを起こすことなしに検知可能な治療的効果を示すのに十分である、生物学的活性な分子、またはその抱合体コンジュケートもしくは誘導体の量を指す。治療的効果は、特に限定されるものではないが、例えば、LRP6の少なくとも1つの活性を阻害する、およびまたは中和することを含み得る。患者にとっての有効量は、患者の種類、患者の大きさおよび健康状態、処置すべき状態の種類および重篤度、投与の方法、処置の期間、同時療法の種類、用いられた特定の処方などに依存するものである。これゆえ、あらかじめ正確な有効量を特定することは不可能である。しかしながら、当業者であれば、本願において与えられる情報に基づき、慣用的な実験をおこなうことによって、与えられた状況に関しての有効量を決定することは可能であろう。本願において用いられる場合、同時療法という用語は、組合わせ療法および付加療法という用語群と、互換性を持って使用されるものであり、処置を必要とする患者を、請求の範囲に要求された本発明概念の組成物と共に、疾患/障害のための他の薬剤で治療するないしはこれを与えることを意味するものであると理解されるべきである。この同時療法は、患者が最初に一方の薬剤で治療され、次いで他方の薬剤で治療されるといった連続的治療であっても、あるいは2つの薬剤が同時に与えられるものであってもよい。薬学的に許容される~という用語は、妥当な利益/リスク比率に対応して、例えば、毒性、炎症およびアレルギー反応などの過度の有害な副作用を起こすことなしに、ヒトおよび/または動物に投与するのに適した化合物群および組成物群を指すものである。生物学的に活性な~は、有機体の生理学的なシステムを変更することのできる能力を意味するものである。ある分子は、それ自身の機能性を通して生物学的に活性であり得る、または生物学的活性を自ら持っている分子群を活性化するまたは阻害する能力に基づいて、生物学的に活性となり得る。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念に係る組成物群は、特に限定されるわけではないが、例えば、経口、局所、経皮、非経口、皮下、鼻腔内、筋肉内、腹腔内、硝子体内、および静脈内を含む、当分野で公知の任意の方法によって患者へと投与されることができ、また局部的および全身的適用の双方を含むものである。さらに、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念に係る化合物群は、当分野で公知の処方技術を用いて、遅延、制御または持続的放出をもたらすように設計され得る。ここにおいて用いられるWntまたはその複数形であるWntsという用語は、Frizzledレセプター群と低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質5または6とのコレセプター複合体に結合し、そして細胞内シグナル伝達経路、すなわち、Wntシグナル伝達経路を介していくつかの標的遺伝子群の発現を規制する分泌された、システインリッチな、糖タンパク質の一属を指す。ヒトにおいては、Wntsは、WNT1、WNT2、WNT2B、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、およびWNT9Bを含んでいる。Wntリガンド群が不在のとき、古典的Wnt経路の下流エフェクターである、βカテニンは、グリコーゲンシンターゼキナーゼ3βを含むタンパク質複合体によってリン酸化される。このリン酸化βカテニンは、その蓄積を防ぐために絶えず分解される。FzLRP56コレセプターへのあるWntsの結合においては、βカテニンのリン酸化は阻害され、これによりβカテニンの分解が抑制され、結果としてその蓄積がなされる。次に、βカテニンは、核内へと移行し、ここにおいてβカテニンは、DNA結合に関するT細胞因子と会合し、そしてこれゆえ、特に限定されるわけではないが例えばVEGFを含む、標的遺伝子群の発現を規制する。LRPという用語は、低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質群lowdensitylipoproteinreceptorrelatedproteinを指すものであることが理解されるであろう。ヒトLRP6は、配列番号1SEQIDNO1によって表される。LRP56が、Wntβカテニンシグナル伝達における重要な役割を果たすことが知られている。Wntリガンド群との結合において、LRP6はFzレセプターで二量化されるが、これは、Wnt経路の活性化における最初でかつ必須の段階である。LRP6の細胞質領域は、複数のモジュールのリン酸化部位群を有しており、そして、LRP6のリン酸化は、古典的Wnt経路の活性化に必須な事象である。これは、LRP6のリン酸化は、骨格タンパク質Axinの加入を促進して、その結果、古典的Wnt経路を活性化するゆえである。本願において開示されたモノクローナル抗体群は、抗体の機能的およびまたは構造的な特徴によって、一部特徴付けられる。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、LRP6タンパク質、並びに同様の構成を有する化合物群を特異的に結合するモノクローナル抗体、並びに同様の構成を有する化合物群に関するものである。1つの実施形態では、当該モノクローナル抗体はヒトLRP6タンパク質を特異的に結合するさらに別の実施形態では、当該モノクローナル抗体は、配列番号1のアミノ酸における1つのエピトープを特異的に結合する。さらに別の実施形態では、当該モノクローナル抗体はLRP6の細胞外領域を特異的に結合するまた、さらなる別の実施形態では、当該モノクローナル抗体は配列番号2のアミノ酸における1つのエピトープを特異的に結合する。別の実施形態では、当該モノクローナル抗体は、LRP6のリガンド結合領域を特異的に結合する。さらに別の実施形態では、当該モノクローナル抗体はLRP6の第1および第2ベータプロペラ領域群E1およびE2ドメインの少なくとも一方における1つのエピトープを特異的に結合する。さらに、別の実施形態では、当該モノクローナル抗体は、LRP6の2Eドメインの少なくとも一部位において1つのエピトープを特異的に結合するさらに別の実施形態では、当該モノクローナル抗体は配列番号3のアミノ酸における1つのエピトープを特異的に結合する。抗体の結合能を評価する標準的検定法は、当分野において公知であり、例えば、ELISA、ウェスタンブロッド法、RIAなどがあり、そして、適当な検定法は実施例において詳述する。抗体の結合反応速度論例えば、結合親和性もまた、当分野で公知の標準的検定法によって、例えば、Biacore分析によって、評価することができる。いくつかの実施形態では、本願において開示される抗体群は、配列番号1、配列番号2、および/または配列番号3に対して、106M以下、107M以下、108M以下、または109M以下の解離定数をもって、結合するものである。1つの実施形態においては、当該抗体は、LRP6の細胞外領域に、約107M以下の解離定数をもって、結合するものである。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、ATCC受託番号PTA10663を付された、ハイブリドーマHLS2F1、並びに同様の構成を有する化合物群に関するものである。このハイブリドーマは、2010年2月18日に、ザアメリカンタイプカルチャーコレクションパテントデポジトリィヴァージニア州201102209、マナッサス、ユニヴァーシティブルーバード10801theAmericanTypeCultureCollectionPatentDepositoryに、ブダペスト条約における諸条件下に寄託された。寄託物質の公衆に対する入手可能性の全ての制限は、前述のモノクローナル抗体mAbに対する特許が許可された際に撤回不能に取り除かれるであろう。そして寄託は、30年間または、最新の要求後の5年間いずれか遅い方まで維持されるであろう。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念はまた、前述ハイブリドーマによって産生された単離モノクローナル抗体に関するものである。前述の寄託されたハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体は、マウスIgG2抗体であり、本願において以下、抗LRP61AntiLRP61と称呼される。加えて、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、受託番号PTA10663のハイブリドーマHLS2F1の細胞、並びに同様の構成を有する化合物群に関するものである。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、上述したモノクローナル抗体群のいずれかが結合するエピトープと同一のものに結合する単離モノクローナル抗体または、それの抗原結合フラグメント、並びに同様の構成を有する化合物群に関するものである。1つの実施形態では、当該モノクローナル抗体は、抗LRP61と同じエピトープに結合する。別の実施形態では、当該モノクローナル抗体は、ATCC受託番号PTA10663のハイブリドーマHLS2F1によって産生された抗体と同じエピトープに結合する。このような抗体群は、標準的LRP6細胞外領域結合検定法において、抗LRP61と交差競合するこれらの能力に基づいて同定することが可能である。被験抗体がLRP6細胞外領域への抗LRP61の結合を抑制する能力は、当該被験抗体が、LRP6細胞外領域への結合に関して、抗LRP61と競合することができることを示し、それゆえ、抗LRP61と同じLRP6細胞外領域のエピトープに結合する。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号群1~3のいずれかと少なくとも85の同一性を有する配列、配列番号群1~3のいずれかと少なくとも90の同一性を有する配列、および配列番号群1~3のいずれかと少なくとも95の同一性を有する配列を含む、配列番号群1~3のいずれかと少なくとも80の同一性を有する配列に対し、特異的に結合する単離モノクローナル抗体、並びに当該単離モノクローナル抗体を有する組成物群に関するものである。また、さらに、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、上記の詳述したATCCに寄託されたハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体のアミノ酸配列と、少なくとも80の同一性例えば、少なくとも85の同一性、少なくとも90の同一性、または少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列を有する単離モノクローナル抗体に関するものである。抗LRP61上記に詳述した寄託されたハイブリドーマによって産生された抗体であり、互換的にmAb2F1とも称呼される。は、配列番号4のヌクレオチド配列によってコード化された、そして配列番号5に示されるアミノ酸配列を有する1つの重鎖可変領域を有している。抗LRP61は、配列番号6のヌクレオチド配列によってコード化された、そして配列番号7に示されるアミノ酸配列を有する1つの軽鎖可変領域を有している。重鎖は、それぞれCDRH1、CDRH2、およびCDRH3と呼ばれる、3つの相補性領域から構成される。また、軽鎖はそれぞれCDRL1、CDRL2、およびCDRL3とよばれる3つの相補性領域から構成される。CDRsのアミノ酸配列群、および当該アミノ酸配列群をコード化するヌクレオチド配列を表1に示す。さらに、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号4のヌクレオチド配列によってコード化されたアミノ酸配列、および/または、配列番号5に示されるアミノ酸配列から構成される1つの重鎖可変領域を有している、抗体または抗原結合フラグメント、並びにそれらと同様の構成を有する組成物群に関するものである。さらに、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号6のヌクレオチド配列によってコード化されたアミノ酸配列、および/または、配列番号7に示されるアミノ酸配列から構成される1つの軽鎖可変領域を有している、抗体または抗原結合フラグメント、並びにそれらと同様の構成を有する組成物群に関するものである。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号8、10、および12の少なくとも1つによってコード化されたアミノ酸配列を有する、および/または、配列番号9、11、13の少なくとも1つによって示されるアミノ酸配列を有する、少なくとも1つのCDRを有する1つの重鎖可変領域を有している、抗体または抗原結合フラグメント、並びにそれらと同様の構成を有する組成物群に関するものである。さらに、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号14、16、および18の少なくとも1つによってコード化されたアミノ酸配列を有する、および/または、配列番号15、17、19の少なくとも1つによって示されるアミノ酸配列を有する、少なくとも1つのCDRを有する1つの軽鎖可変領域を有している、抗体または抗原結合フラグメント、並びにそれらと同様の構成を有する組成物群に関するものである。1つの好ましい実施形態においては、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号19のアミノ酸配列を有する1つの軽鎖可変領域CDR3本願において互換的にCDRL3とも称呼される。および配列番号13のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR3本願において互換的にCDRH3とも称呼される。を有している単離モノクローナル抗体に関するものである。当該抗体は、LRP6細胞外領域内で1つのエピトープに特異的に結合する。ここで、LRP6細胞外領域は、配列番号2のアミノ酸配列を有している。当該抗体は、さらに、配列番号15および17のアミノ酸配列をそれぞれ有する、軽鎖可変領域CDR1およびCDR2本願において互換的に、それぞれCDRL1、CDRL2とも称呼される。を含む得、またさらに、当該抗体は、配列番号9および11のアミノ酸配列をそれぞれ有する、重鎖可変領域CDR1およびCDR2本願において互換的に、それぞれCDRH1、CDRH2とも称呼される。を含む得る。さらに、当該抗体は、配列番号5と少なくとも90の同一性を示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号7と少なくとも90の同一性を示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有し得る。いくつかの実施形態においては、抗体群とそれらの抗原結合フラグメント群は、抗LRP61の対応するCDRと同じアミノ酸配列を持っている1ないしそれ以上のCDRCDRsを含んでいるが、いくつかの実施形態では、抗体群とそれらの抗原結合フラグメント群のいくつかのCDRsは、抗LRP61の対応するCDRと実質的に同様であるが、同一ではないアミノ酸配列を有している。また、いくつかの実施形態では、抗体群とそれらの抗原結合フラグメント群は、6、5、4、3、2または1のCDRアミノ酸における変異群以外は、抗LRP61の対応するCDR配列群と同一のCDR配列群を有している。いくつかの実施形態では、当該アミノ酸変異群はCRDL1、CDRL2、CDRH1またはCDRH2にのみ存在している。いくつかの実施形態では、当該変異群はCDRL1、CDRL2またはCDRH1にのみ存在している。いくつかの実施形態では、当該変異群は、保存的配列変更群である。いくつかの実施形態においては、抗体群とそれらの抗体フラグメント群は、CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む1つの重鎖可変領域、およびCDR1、CDR2およびCDR3配列を含む1つの軽鎖可変領域を有しており、ここで当該軽鎖可変領域CDR3は、配列番号19のアミノ酸配列またはその保存的修飾されたアミノ酸配列を有しており、また当該重鎖可変領域CDR3は、配列番号13のアミノ酸配列またはその保存的修飾されたアミノ酸配列を有している。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域CDR2は、配列番号11のアミノ酸配列またはその保存的修飾されたアミノ酸配列を有している。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域CDR2は、配列番号17のアミノ酸配列またはその保存的修飾されたアミノ酸配列を有している。いくつかの実施形態では、重鎖CDR1は、配列番号9のアミノ酸配列またはその保存的修飾されたアミノ酸配列を有している。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号15のアミノ酸配列またはその保存的修飾されたアミノ酸配列を有している。。いくつかの実施形態においては、抗体群とそれら抗体フラグメント群は、配列番号5のアミノ酸配列と少なくとも80、85、90、95、96、97、98、99または100同一であるアミノ酸配列を有する1つの重鎖可変領域を有している。いくつかの実施形態においては、抗体群とそれらの抗体フラグメント群は、配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも80、85、90、95、96、97、98、99または100同一であるアミノ酸配列を有する1つの軽鎖可変領域を有している。いくつかの実施形態においては、抗体群とそれらの抗体フラグメント群は、配列番号13のアミノ酸配列を有する1つの重鎖可変領域CDR3、および配列番号11のアミノ酸配列を有する1つの重鎖可変領域CDR2を有している。また、いくつかの実施形態では、抗体群とそれら抗体フラグメント群は、配列番号9のアミノ酸配列を有する1つの重鎖可変領域CDR1をも有している。いくつかの実施形態においては、抗原結合性抗体フラグメント群は、軽鎖可変領域を有していない。例えば、例えば、いくつかの実施形態では、抗体結合性フラグメント群はNANOBODIES登録商標名である。いくつかの実施形態では、抗体群とそれらの抗体フラグメント群は、配列番号19のアミノ酸配列を有する1つの軽鎖可変領域CDR3、および配列番号17のアミノ酸配列を有する1つの軽鎖可変領域CDR2を有している。また、いくつかの実施形態では、抗体群とそれら抗体フラグメント群は、配列番号15のアミノ酸配列を有する1つの重鎖可変領域CDR1をも有している。いくつかの実施形態においては、抗原結合性抗体フラグメント群は、重鎖可変領域を有していない。抗体群とそれらの抗体フラグメント群は、ある修飾抗体を工学するために、出発物質として抗LRP61のVHおよびまたはVL配列を有している抗体を用いることによって調製され得る。当該修飾抗体は、抗LRP61から変容された特性群を有する一方で、抗LRP61のエピトープ特異性は保持するもの、となり得る。ある抗体とその抗体フラグメントは、一方または双方の可変領域内で、例えば、1つまたはそれ以上のCDR領域群内でおよび/または1つまたはそれ以上のフレームワーク領域群内で、1つないしそれ以上の残基群を修飾することによって工学されることができる。それに加えてまたはそれに代えて、抗体は、例えば、抗体のエフェクター機能群およびまたは免疫原性を変容するために、定常領域群内で残基群を修飾することによって、工学されることもできる。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念はさらに、少なくとも、抗LRP61の1つの可変領域の一部と、ヒト由来のある抗体の1つの定常領域とから構成される、キメラ抗体群を含むものである。このような抗体群は、抗LRP61の有していた抗原特異性およびWntシグナル伝達経路を阻害する能力を保持する一方で、抗LRP61と比べて低減されたヒトでの免疫原性を有している。いくつかの実施形態では、抗体群と抗体フラグメント群はヒト化される。これゆえ、いくつかの実施形態では、当該抗体群と当該それらの抗体フラグメント群は、あるヒト抗体または抗体フラグメントの配列を主として有するが、抗LRP61からの1ないしそれ以上のCDRCDRsを含む、抗体群またはそれらの抗体フラグメント群2、または抗体群のその他の抗原結合配列群のヒト化形態である。このようなヒト化抗体群またはヒト化抗体フラグメント群は、あるヒト抗体またはヒト抗体フラグメントの対応する配列を、抗LRP61の1ないしそれ以上のCDRCDRsで置換することによって、作製することができる。いくつかの実施形態においては、ヒト化抗体は、あるヒト抗体のCDRsの1、2、3、4、5または6を、抗LRP61からCDRsに交換することによって構築される。いくつかの実施形態においては、当該ヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントは、CDRsのすべてが抗LRP61のCDRsに対応し、そして、フレームワーク領域のすべてがあるヒト抗体のFRsに対応してなる可変領域群から構成される。いくつかの実施形態では、当該ヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントは、抗LRP61のCDRL3とCDRH3を持っているが、CDRL1、CDRL2、CDRH1またはCDRH2のうちの1ないしそれ以上に関してはヒト配列群を保持してなる。いくつかの実施形態では、ヒトCDR配列群が、対応する抗LRP61CDRと配列において同様であるように選択されている。そのような実施形態では、ヒトCDRsは、それらの対応する抗LRP61CDRと比較して、5、4、3、2または1の変異を、集合的にまたは個別的に有し得る。。いくつかの実施形態では、当該変異群は、保存的配列修飾である。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はさらに、あるヒト抗体の定常領域を有している。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのいくつかのFvフレームワーク残基群は、対応する非ヒトの残基と置換される。また、いくつかの実施形態では、ヒト化抗体群は、受入抗体側と移入CDRまたはフレームワーク配列群側のいずれにも見出すことのできない残基群をさらに有することが可能である。ヒト化モノクローナル抗体群の作製およびまたは使用方法は、例えば、例えば、サンドボーンら、ガトレントロジィ、1201330SandbornetalGatroenterology1201330ミハラら、クリン.イムノル、98319MiharaetalClinImmunol98319エナリら、ニューロルレス、2372YenarietalNeurolRes2372モラレスら、ナクルメドバイオル、27199MoralesetalNuclMedBiol27199リチャーズら、キャンサーレス、592096RichardsetalCancerRes592096エナリら、エクスプニューロル、153223YenarietalExpNeurol153223および、シンクラら、アンチキャンサーレス、181217ShinkuraetalAnticancerRes181217において見出すことができ、これら全て文献は、関連により、それらの全体が本明細書中に明確に取り入れられる。いくつかの実施形態では、抗体群のCH1のヒンジ領域が修飾され、当該ヒンジ領域のシステイン残基群の数が変えられる、例えば、増加するまたは減少される、ようにされている。このアプローチは、ボドマーらBodmeretalによる米国特許第5677425号においてさらに詳しく説明されており、関連により、この特許文献の全体が本明細書中に明確に取り入れられる。CH1の当該ヒンジ領域のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖と重鎖の組立てを容易とするか、または当該抗体の安定性を高めるかまたは低減させるために、変更される。いくつかの実施形態では、当該抗体またはその抗原結合フラグメントのグリコシル化糖鎖形成が変更される。例えば、非グリコシル化抗体すなわち、抗体はグリコシル化を欠くを作製することが可能である。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体または抗体フラグメントの親和性を増加させるために、変更されることができる。このような糖質修飾は、例えば、抗体配列中のグリコシル化の1またはそれ以上の部位を変容することによって行い得る。例えば、1ないしそれ以上のアミノ酸置換が行なわれ、その結果1ないしそれ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位群が消失し、これによって、これらの部位におけるグリコシル化が排除される。このような非グリコシル化は、抗原に対する当該抗体の親和性を増加させ得る。このようなアプローチは、コゥらCoetalによる米国特許第5714350号および第6350861号においてさらに詳しく説明されており、関連により、これら特許文献の全体が本明細書中に明確に取り入れられる。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、フルコシル残基の低減された量を有する低フルコシル化抗体、または増加したバイセクティングGlcNac構造群バイセクティングNアセチルグルコサミン構造群bisectingGlcNacstructuresを有する抗体などのように、グリコシル化の変容されたタイプを有するように作製される。そのような変容されたグルコシル化パターン群は、当該抗体群のADCC能力を増加させることで示された。このような糖質修飾は、例えば、変容されたグルコシル化機構を有する宿主細胞中において抗体を発現させることによって行い得る。変容されたグルコシル化機構を有する細胞群は、当分野において開示されており、そしてこれらは本発明の組替え抗体群を発現し、変容されたグルコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞群として使用すること可能である。例えば、ハンアイらHanaietalによる欧州特許公報第1176195号は、フルコシルトランスフェラーゼをコード化する機能的に破壊されたFUT8遺伝子を有する細胞系統を開示しており、このような細胞系統において発現された抗体群は、低フルコシル化を示すものとなる。プレスタPrestaによる国際公開公報WO03035835は、Asn結合糖質類へフルクトースが付着する能力が減じられた、異形CHO細胞系統、Lec13細胞群を開示しており、同様に、この宿主細胞に発現された抗体群の低フルコシル化という結果がもたらされるシールドアール.エル.ら、ジェイ.バイオル.ケム.、2772673326740ShieldsRLetalJBiolChem2772673326740も参照のこと。。ウマナらUmanaetalによる国際公開公報WO9954342は、糖タンパク質を修飾するグリコシルトランスフェラーゼNアセチルグルコサミニルトランスフェナーゼIIIbetaNacetylglucosaminyltransferaseIIIGnTIIIを発現するように工学された細胞系統を開示しており、この工学された細胞系統中で発現された抗体群は、増加したバイセクティングGlcNac構造群を示し、当該抗体群のADCC能力を増加させるという結果がもたらされるウマナら、ナット.バイオテック.、17176180UmanaetalNatBiotech17176180も参照のこと。。いくつかの実施形態では、抗体群またはその抗原結合フラグメント群のぺグ化pegylationポリエチレングリコール化が修飾される。ある抗体は、例えば、当該抗体の生物学的な半減期を増加させるように、ぺグ化され得る。抗体をぺグ化するためには、典型的には、当該抗体またはそのフラグメントを、例えば、ポリエチレングリコールの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体のような、ポリエチレングリコールと、1ないしそれ以上のPEG基アルコキシまたはアリルオキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールマレイミドなどのような、PEGのいずれの形態をも包含することを意図している。いくつかの実施形態においては、ぺグ化されるべき抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質群をぺグ化する方法は当分野において公知であり、本発明の抗体群に適用することが可能である。例えば、ニシムラらによる欧州特許公開公報第0154316号およびイシカワらによる欧州特許公開公報第0401384号を参照のこと。いくつかの実施形態では、抗体群および抗体フラグメント群は、元のアミノ酸配列の、例えば、少なくとも80、90、95、または99などのように、少なくとも75を維持し、かつ抗体群/抗体フラメント群がLRP6の細胞外領域を特異的に結合する能力を維持しているという条件下に、上記に述べたような抗体群またはそれらの抗原結合フラグメント群のアミノ酸配列群においてわずかな変更を有している。いくつかの実施形態では、この修飾は保存的配列修飾である。いくつかの実施形態では、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念のモノクローナル抗体は、LRP6の活性を中和する。したがって、前述のモノクローナル抗体は、中和抗体、およびまたは、治療的抗体とも称呼され得るものである。1つの実施形態では、モノクローナル抗体は特異的にWntシグナル伝達経路の活性化を阻害する。さらに別の実施形態では、モノクローナル抗体はWntシグナル伝達経路の1つのレセプターに対する1つのWntリガンドの結合を阻害し、それによって、WntリガンドによるWntシグナル伝達経路の活性化を抑制する。別の実施形態では、モノクローナル抗体は、LRP6のリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態においては、抗体群および抗体フラグメント群は、LRP6に対するWnt1とWnt3aの双方の結合を阻害する。さらなる別の実施形態では、モノクローナル抗体は、糖尿病の状態によって引き起こされた、少なくとも1つの炎症誘発性因子および/または少なくとも1つの血管新生促進性因子の過剰な発現を防止する。このような因子としては、特に限定されるものではいが、例えば、VEGF、ICAM1、TNFα、CTGF、およびそれらの組合わせ、などが含まれる。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念はまた、本願において開示されたモノクローナル抗体群またはそれらの抗原フラグメント群のうちの少なくとも1つの治療学的に有効な量で構成される薬学的組成物、およびこれと同じものを薬学的に許容される担体と組合わせて構成される薬学的組成物を含むものである。本願において使用される場合、薬学的に許容される担体とは、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念の化合物群を、ヒトまたは動物へと送達するための、薬学的に許容される、溶剤、懸濁剤または賦形剤である。当該担体は、液状でも、固体状でもよく、そして、意図される投与の計画された方法によって選択される。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念に従い利用され得る、薬学的に許容される担体としては、特に限定されるものではないが、例えば、PEG、リポソーム類、エタノール、DMSO、水性緩衝液類、油類などが含まれる。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念に係る組成物群特に限定されるわけではないが直上で述べた薬学的組成物を含むは、さらに、前記モノクローナル抗体と相乗効果を有している第2の薬剤をさらに含み得る。当該第2の薬剤としては、特に限定されるわけではないが例えば、抗脈管形成剤、抗VEGF試薬、VEGFTrap、AVASTIN登録商標名などが含まれる。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、上記で述べたモノクローナル抗体を製造する方法を含むものである。ここにおいて開示されたモノクローナル抗体群および抗体フラグメント群は、当分野で知られているいかなる適切な方法論によっても製造され得るものである。例えば、モノクローナル抗体の調製は、適当な被験体例えば、マウスをポリペプチド免疫原で免疫感作することによって生じるポリクローナル抗体の産生に開始することができる。免疫感作後の適当な時間において、例えば、抗体力価が最も高い時に、抗体産生細胞群が当該被験体から得られることができ、そして当該抗体産生細胞群は、例えば、コーラーとミルスタインによって最初に開示されたハイブリドーマ技術ブラウンら、ジェイ.イムノル.12753946BrownetalJImmunol12753946ブラウンら、ジェイ.バイオル.ケム.255498083BrownetalJBiolChem255498083イェら、プロクナトル.アカドサイ6292731YehetalProcNatlAcadSci76292731およびイェら、イント.ジェイ.キャンサー、2926975YehetalIntJCancer2926975も参照のこと。、より最近のヒトB細胞ハイブリドーマ技術コズボアら、イムノル.トゥデイ、472KozboretalImmunolToday472、EBVハイブリドーマ法コールら、モノクローナルアンティボディズアンドキャンサーセラピー、アランアール.リス、インコーポレーテッド、77頁~96頁ColeetalMonoclonalAntibodiesandCancerTherapyAlanRLissIncpp7796、またはトリオーマ技術などの、標準的技術を用いて、モノクローナル抗体群を調製するのに用いられる。モノクローナル抗体ハイブリドーマを製造するための技術は、公知であるKennethRHinMonoclonalAntibodiesANewDimensionInBiologicalAnalysesPlenumPublishingCorpNewYorkNewYorkラーナー、イー.エイ.エールジェイ.バイオル.メド.54387402LernerEAYaleJBiolMed54387402ゲフテル、エム.エル.ら、ソマティックセルジャネット.323136GefterMLetalSomaticCellGenet323136を一般に参照のこと。簡潔には、不死細胞系統が、上記で述べたような免疫原で免疫感作された哺乳動物からリンパ球に融合され、そして、結果として得られるハイブリドーマ細胞群の培地上澄液が、ポリペプチド抗原に結合する、好ましくは特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを同定するためにスクリーニングされる。一旦、抗体群が得られると、例えば、一旦、個々B細胞が同定され、および/またはモノクローナル抗体が産生されると、これらの抗体群の可変領域群をコード化する配列群を得ることができる。可変領域配列群は、例えば、最初に当該ハイブリドーマ、B細胞またはファージによって産生された抗体タンパク質を配列決定にかけ、そしてコード化核酸配列を決定する、1つの実施形態では、免疫グロブリン可変領域のDNAまたはcDNAが代わりに配列決定にかけられ得る。ハイブリドーマ細胞系統または単離B細胞から抗体が誘導される場合には、可変領域をコード化するcDNAsは、例えば、バブクックらBabcooketalプロクナトル.アカドサイユーエスエイ9378437848ProcNatlAcadSciUSA9378437848および国際公開公報WO9202551。によって述べられた方法によって、PCRを用いて増幅され得る。これら双方の文献の内容は、関連により、それらの全体が本明細書中に明確に取り入れられる。したがって、ここにおいて開示された抗体群および抗原結合フラグメント群は、ここにおいて開示されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する細胞を供給し、当該モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントの産生を可能とする条件下で細胞を培養する工程を含むモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントを製造する方法により、作り出すことが可能である。いくつかの実施形態では、当該細胞は、ATCC受託番号PTA10663を有するハイブリドーマでである。モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを調製することに代わる手段として、適切なポリペプチドで組換え結合型免疫グロブリンライブラリーClacksonetalNature352624628および、マークら、ジェイ.モル.バイオル.、222581597MarksetalJMolBiol222581597を参照のこと。これらのいずれも関連により本明細書中に取り込まれる。。さらに、ここにおいて提供されたおよび当分野において公知である、抗体および抗原結合フラグメント配列群を用いることによって、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体群を含む、モノクローナル抗体群および抗原結合フラグメント群は、標準的組み換えDNA技術を使用することで調製され得る。このようなモノクローナル抗体群および抗体フラグメント群は、例えば、米国特許第4816567号米国特許第5565332号ベターら、サイエンス24010411043BetteretalScience24010411043リュウら、プロクナトル.アカドサイユーエスエイ8434393443LiuetalProcNatlAcadSciUSA8434393443リュウら、ジェイ.イムノル.13935213526LiuetalJImmunol13935213526サンらプロクナトル.アカドサイ84214218SunetalProcNatlAcadSci84214218ニシムラらキャンサーレス.479991005NishimuraetalCancerRes479991005ウッドらネイチャー314446449WoodetalNature314446449ショウらジェイ.ナトル.キャンサーインスト.8015531559ShawetalJNatlCancerInst8015531559モリソンエス.エル.サイエンス22912021207MorrisonSLScience22912021207オイらバイオテクニックス4214OietalBiotechniques4214ウィンターWinter米国特許第5225539号ジョーンズらネイチャー321552525JonesetalNature321552525ヴァフォーイェンらサイエンス2391534VerhoeyanetalScience2391534およびベイドラーらジェイ.イムノル.14140534060BeidleretalJImmunol14140534060、もしくは米国特許第5916771号において述べられる方法を用いることによって、製造することが可能である。なお、これらの文献のいずれもが、関連により、それらの全体が本明細書中に明確に取り入れられる。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、また、ここにおいて上述したモノクローナル抗体群またはそれらのフラグメント群のいずれかのアミノ酸配列特に限定されるわけではないが、例えば、当該モノクローナル抗体群の重鎖および/または軽鎖可変領域群、ならびに前記重鎖および/または軽鎖可変領域群の1ないしそれ以上のCDRが含まれる。をコード化する単離核酸分子群を含むものである。1つの実施形態では、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、少なくとも配列番号9の1つのCDR1を持っている重鎖可変領域、配列番号11の1つのCDR2を持っている重鎖可変領域、配列番号13の1つのCDR3を持っている重鎖可変領域、配列番号15の1つのCDR1を持っている軽鎖可変領域、配列番号17の1つのCDR2を持っている軽鎖可変領域、および配列番号19の1つのCDR3を持っている軽鎖可変領域のうちの、少なくとも1つをコード化する単離核酸分子群からなるものである。別の実施形態では、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号4、6、8、10、12、14、16、および18の少なくとも1つで構成される単離核酸分子群からなるものである。1つの好ましい実施形態では、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号13の1つのCDR3を持っている重鎖可変領域をコード化する単離核酸分子からなるものである。当該核酸分子の重鎖可変領域は、さらに配列番号9のCDR1および配列番号11のCDR2を含み得る。別の好ましいの実施形態では、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、配列番号19の1つのCDR3を持っている軽鎖可変領域をコード化する単離核酸分子からなるものである。当該核酸分子の軽鎖可変領域は、さらに配列番号15のCDR1および配列番号17のCDR2を含み得る。本発明の核酸群は、標準的な分子生物学的技術を用いて得ることができる。ハイブリドーマ群例えば、上述したように調製されたハイブリドーマ群によって発現された抗体群に関して、当該ハイブリドーマにより作られた抗体の重鎖および軽鎖をコード化するcDNA群は、標準的PCR増幅またはcDNAクローン技術を使用することで得ることが可能である。免疫グロブリン遺伝子ライブラリー例えば、ファージディスプレイ技術を用いるから得られた抗体群に関しては、抗体をコード化する核酸は、当該ライブラリから回収することが可能である。いくつかの実施形態では、単離核酸分子群は、上述した核酸分子群と少なくとも80、85、90、95または100の配列同一性を有している。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、ここにおいて上述された単離核酸分子群のいずれかを有するベクターを含むものである。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、さらに前記核酸分子群、およびまたは、前記ベクターを含む宿主細胞を含むものである。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、さらに、ここにおいて上述されたモノクローナル抗体群特に限定されるわけではないが、例えば、抗LRP61を含むを発現する細胞または細胞系統を含むものである。1つの実施形態では、細胞系統はハイブリドーマ細胞系統である。さらに別の実施形態では、細胞系統は、ここにおいて上述したように寄託されたハイブリドーマ細胞系統である。ここにおいて記載される、モノクローナル抗体群、抗体フラグメント群、および核酸組成物は、Wnt経路関連障害群またはLRP6活性を包含する障害群の治療のための多くの治療方法を有している。これらの分子群およびまたは組成物は、ヒト患者を含む患者に対し、特に限定されるわけではないが、例えば、炎症、血管漏出、繊維症、異常な新生血管形成、および癌を含む、種々の障害群を治療するまたは予防するために投与されることができる。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、さらに、ここにおいて上記で詳述したモノクローナル抗体群のいずれかを有して構成される組成物を投与することでなる、Wntシグナル伝達経路の活性化を阻害する方法に関するものである。前記組成物が第2の薬剤を含有していない場合、この方法はさらに、特に限定されるわけではないが、例えば、抗脈管形成剤、抗VEGF試薬、VEGFTrap、AVASTIN登録商標名などのような、当該モノクローナル抗体と相乗効果を有する第2の薬剤の投与を含み得るものである。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、さらに、DRの少なくとも1つの脈管形成性、炎症性および/または線維形成性の因子の酵素活性および/または酵素生産を阻害する方法に関するものである。このような因子は、特に限定されるわけではないが、例えば、VEGF、ICAM1、TNFαおよびCTGFを含むものである。当該方法は、DRを病んでいるまたはこれにかかりやすい患者に対して、ここにおいて上記に詳述した薬学的組成物のいずれかを投与することでなる。当該組成物が第2の薬剤を含有していない場合、この方法はさらに、特に限定されるわけではないが、例えば、抗脈管形成剤、抗VEGF試薬、VEGFTrap、AVASTIN登録商標名などのような、当該モノクローナル抗体と相乗効果を有する第2の薬剤の投与を含み得るものである。また、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、さらに、網膜の白血球うっ滞、炎症、血管漏出、繊維症、異常な新生血管形成特に限定されるわけではないが、例えば、網膜新生血管形成およびまたは慢性新生血管形成などの、および、網膜における発癌からなる群から選択されてなる少なくとも1つの網膜の症状を仲裁するやわらげる方法に関するものである。当該方法は、ここにおいて上記に詳述した薬学的組成物のいずれかを投与することでなる。当該組成物が第2の薬剤を含有していない場合、この方法はさらに、特に限定されるわけではないが、例えば、抗脈管形成剤、抗VEGF試薬、VEGFTrap、AVASTIN登録商標名などのような、当該モノクローナル抗体と相乗効果を有する第2の薬剤の投与を含み得るものである。ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念はさらに、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、黄斑変性特に限定されるわけではないが、例えば、加齢随伴黄斑変性を含む、癌、およびその他の目の炎症性および新生血管関連障害からなる群から選択されてなる少なくとも1つの症状の発症および/または重篤度を阻害および/または緩和する方法に関するものである。当該方法は、上記の少なくともいずれか1つの症状を病んでいるまたはこれにかかりやすい患者に対して、ここにおいて上記に詳述した薬学的組成物のいずれかの有効量を投与し、これによって、当該薬学的組成物がWntシグナル伝達経路の活性化を阻害し、当該症状/障害の発症および/または重篤度を阻害および/または緩和する。患者に投与される当該組成物が第2の薬剤を含有していない場合、この方法はさらに、特に限定されるわけではないが、例えば、抗脈管形成剤、抗VEGF試薬、VEGFTrap、AVASTIN登録商標名などのような、当該モノクローナル抗体と相乗効果を有する第2の薬剤の投与を含み得るものである。ここにおいて上記に述べた方法のいずれにおいても、投与の方法は、目の硝子体への当該組成物の注射を含み得るものである。以下において実施例が示される。しかしながら、本発明の概念は、これらの特定の実験、結果、および実験手順に何らその適用を限定されるものではないことが理解されるべきである。これらの実施例は、様々な実施形態群の一例として単に示されたのみであって、代表的なものであり、非限定的なものであることを意味する。就業年齢人口における盲目の主な原因である、糖尿病性網膜症は、タイプ1および2の糖尿病において共通の懸念を表す。蓄積された証拠は、DRが慢性の炎症性障害であることを示唆する。網膜の炎症は、血管漏出これは糖尿病性黄斑浮腫を招く。および網膜血管新生における使役的な役割を果たすと信じられている。可溶性の細胞間接着分子1と血管細胞接着分子1のレベルが、非糖尿病患者の硝子体におけるものと比べて、増殖性糖尿病性網膜症の患者からの硝子体において、顕著に高いものであることが示された。増加したICAM1、血管細胞接着分子1、およびeセレクチンレベルが、糖尿病性細小血管症の患者からの血清中で見出された。糖尿病の動物モデル群においては、増加した網膜のICAM1の発現は、白血球接着または白血球うっ滞および増加した血管透過性を原因とするものであると信じられています。白血球うっ滞は、毛細血管の非潅流および局部乏血をもたらし、このことが次に、血管内皮増殖因子の過剰発現を引き起こすと、信じられている。増加したVEGFレベルは、網膜の血管漏出と網膜のNVの原因となる。最近の研究は、高血糖症によって引き起こされた、酸化ストレスが、糖尿病における網膜の炎症の一因となることを示している。しかしながら、糖尿病および酸化ストレスが炎症を引き起こす病原性のメカニズムは、未だ明らかではない。Wntsは、Frizzledレセプター群と低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質5または6とのコレセプター複合体に結合し、そして細胞内シグナル伝達経路、すなわち、Wnt経路を介していくつかの標的遺伝子群の発現を規制する、分泌された、システインリッチな、糖タンパク質の一属である。Wntリガンド群が不在のとき、古典的Wnt経路の下流エフェクターである、βカテニンは、グリコーゲンシンターゼキナーゼ3βを含むタンパク質複合体によってリン酸化される。このリン酸化βカテニンは、その蓄積を防ぐために絶えず分解される。FzLRP56コレセプターへのあるWntsの結合においては、βカテニンのリン酸化は阻害され、これによりβカテニンの分解が抑制され、結果としてその蓄積がなされる。次に、βカテニンは、核内へと移行し、ここにおいてβカテニンは、DNA結合に関するT細胞因子と会合し、そしてこれゆえ、VEGFを含む標的遺伝子群の発現を規制する。LRP56が、Wntβカテニンシグナル伝達における重要な役割を果たすことが知られている。Wntリガンド群との結合において、LRP6はFzレセプターで二量化されるが、これは、Wnt経路の活性化における最初でかつ必須の段階である。LRP6の細胞質領域は、複数のモジュールのリン酸化部位群を有しており、そして、LRP6のリン酸化は、古典的Wnt経路の活性化に必須な事象である。これは、LRP6のリン酸化は、骨格タンパク質Axinの加入を促進して、その結果、古典的Wnt経路を活性化するゆえである。最近の証拠は、古典的Wnt経路が脈管形成におけるある役割を果たすのことを示している。多くの研究は、Wnt経路が、核因子κB、シグナル伝達性転写因子3、およびいくつかの炎症性因子を、発現増加させること、そして、それゆえ、炎症に関して重要な役割を果たすのを示している。本実施例は、ヒトのドナーの目、糖尿病動物モデル、および培養細胞を使用することによって、Wntシグナル伝達経路の可能な役割を調査したものである。実施例1の材料と方法人体組織研究における使用への完全な倫理的承認の下にナショナルディジィーズリサーチインターチェンジフィラデルフィア州フィラデルフィアNationalDiseasesResearchInterchangeから入手され、検死解剖から12時間以内で、正常な目および糖尿病の目が、10中性緩衝化ホルマリン中で固定化された。糖尿病の目は、標準化されたプロトコルクァリクら、ラボインベスト、78109116KhaliqetalLabInvest78109116に従い分類された。動物秋田マウス群は、ジャクソンラボラトリーメーン州バーハーバーJacksonLaboratoryから購入し、ブラウンノルウェーラット群は、チャールズリバーマサチューセッツ州ウィルミントンCharlesRiverから購入した。本研究における全ての動物の飼育、使用および処理は、視力および眼科学における研究に関する協会からの眼科学的および視力研究における動物の使用に関する声名での合意theStatementfortheUseofAnimalsinOphthalmicandVisionResearchfromtheAssociationforResearchinVisionandOphthalmologyに厳密に従った。ウシ網膜毛細血管の内皮細胞と周皮細胞の単離および培養ウシ網膜毛細血管内皮細胞と周皮細胞は、グラントとグアイインベストオプサルモルヴィスサイ、325364GrantandGuayに述べられた方法に若干の修正を加えたものに従い、ウシの目から単離された。3または4の通過で、培地中の細胞群純度は測定された。RCECの同一性は、特徴的な玉石状形態cobblestonemorphologyで、および、蛍光標識、DiI11ジオクタデシル333′3′テトラメチルインドカルボシアニンパークロレートバイオテックテクノロジーズインコーポレーテッド、マサチューセッツ州スタウトンDiIで標識されたアセチル化低密度リポタンパク質の取り込みによって確認された。周皮細胞培地の純度は、α平滑筋アクチンに対して特異的な、フルオレセインイソチオシアナート抱合抗体シグマ、ミズーリー州セントルイスSigmaStLouisMOで免疫染色することによって測定した。ラットにおける糖尿病誘発実験的糖尿病は、1晩の断食の後の麻痺したブラウンノルウェーラット群に対し、ストレプトゾトシンの腹腔内注射を行なうことによって、引き起こされた。周齢が同じ比較対照ラット群は、クエン酸塩バッファのみの注射を受け、非糖尿病比較対照とされた。血糖値は、STZ注射の48時間後に測定され、その後、毎週観測された。350mgdlを超えるグルコース値を有する動物のみが、糖尿病であると考えられた。酸素誘導網膜症モデルおよび網膜NVの分析酸素誘導網膜症モデルは、以前に説明されるように、ブラウンノルウェーラットにおいて誘発された。網膜前血管細胞の定量化は、スミスらインバストオプタルモルヴィスサイ、35101111Smithetalによって述べられている。簡潔には、出生後18日目に、各グループからの8匹のラットの目が摘出され、10のホルムアルデヒドで固定され、薄片に切断され、HEで染色された。網膜の硝子体側面の上の血管細胞の核が、二重盲検試験における光学顕微鏡の下で計数された。それぞれの目からの10個の矢状切断が調べられ、そして、細胞数は動物の各グループで平均された。網膜前血管の核の平均数は、比較対照グループのそれと、スチューデントのt検定を使用することによって、比較された。高分子量フルオレセインを用いた網膜の血管造影P18のラット群が、スミスらインバストオプタルモルヴィスサイ、35101111Smithetalによって述べられるように、10mgkgのキシラジンと75mgkgのケタミンの腹腔内投与で麻痺され、50mgmlの高分子量フルオレセインイソチオシアナート-デキストラン分子量2×106、シグマが脳室内注射によって潅流された。動物はすぐに、安楽死させられた。目が摘出され、PBS中の4パラホルムアルデヒドで10分間固定された。網膜は、次に、眼杯から分離され、4のパラホルムで3時間固定された。いくつかの切込みを網膜に入れ、これは、ゼラチンでコーティングされたスライド上に平坦に載せられた。そして、脈管構造が、蛍光顕微鏡の下で調べられた。免疫組織化学免疫組織化学は、文献記載に従い行なわれたチェンら、インバストオプタルモルヴィスサイ、4711771184ChenetalInvestOpthalmolVisSci4711771184。LRP56に特異的な一次抗体群および低酸素誘導因子1αが1200の希釈で用いられ、そして、βカテニンに対する抗体セルシグナリングテクノロジー、マサチューセッツ州ダンバースCellSignalingTechnologyDanversMAが1300の希釈で用いられた。二次抗体群としては、フルオレセインイソチオシアナート抱合型ヤギ抗マウスIgGおよびテキサスレッド抱合型ヤギ抗ウサギIgG発生を測定することによって決定されたデグリ、メソッズ、26335340DegliMethods26335340およびアメールら、ユウルジェイハエマトル708490AmeretalEurJHaematol708490。簡潔には、2×106細胞mlの密度の処理細胞群および非処理細胞群が、新たに調製された5クロロメチル2′7′ジクロロジハイドロフルオレセインジアセテート、アセチルエステルと、暗室において37°Cでインキュベートされた。このCMH2DCFDAを負荷された細胞群は、PBS中で二度洗浄され、直ちに蛍光光度計によって488nmの励起および530nmの放出にて分析された。データは3つの別々の実験の平均から任意単位における蛍光強度として表された。DickkopfHomolog1の硝子体内注射簡潔には、動物はケタミンとキシラジンの5050混合物で麻痺させられた、そして、それらの瞳孔群はフェニレフリンとトロピカミドの局所適用で散大された。強膜切開は、ブレードで角膜輪部より約05mm後部で作成され、そして、3μlの特定の濃度群のDickkopfHomolog1またはウシ血清アルブミンで満たされたシリンジに接続されたガラスインジェクタが、強膜切開を介して硝子体腔内へと導入された。可溶性ICAM1酵素結合免疫吸着測定法市販の可溶性ICAM1酵素結合免疫吸着測定法キットChenetalInvestOpthalmolVisSci4711771184。シグナルは、化学発光検出キットとHIF1αに1500の希釈で特異的であり、また抗β-カテニン抗体に13000の希釈で特異的である。血管透過性分析評価血管透過性は、エヴァンスブルーEvansblueを追跡子として用い、先に述べられたところガオら、ディアベトロジカ、46689698GaoetalDiabetologica46689698に従って定量化された。実施例1の結果Wnt経路は、DRに罹患したヒト患者の網膜で活性化される糖尿病患者の網膜でのWnt経路の活性化状態を評価するために、古典的Wnt経路の必須のエフェクタである、βカテニンの総量の網膜レベルが測定された。非増殖性糖尿病性網膜症の6人の糖尿病のドナーと、5人の非糖尿病ドナーからの、眼切片が、免疫組織化学を用いて、βカテニンに関して染色された。同じ展開強度の下において、NPDRのドナー群からの網膜内方においてβカテニン染色強度における統計学的に顕著な増加が見られた一方、非糖尿病ドナー群からの網膜におけるβカテニンシグナルは基礎的なレベルでしかなかった図1、AE。さらに、免疫組織化学は、NPDRのドナー群が、非糖尿病ドナー群と比較して、網膜細胞の核においてより強烈なβカテニンシグナルを有しており図1、NPDRのドナー群からの網膜でのβカテニンの増大した核内移行を示していた。秋田マウス、STZ誘発糖尿病ラット、およびOIRラットでのWnt経路の活性化DR動物モデルの網膜でのWnt経路の活性化を確認するために、βカテニンレベルが、タイプ1の糖尿病の遺伝モデルである秋田マウス、STZ誘発糖尿病ラットおよび乏血で誘発された網膜NVのモデルであるOIRラットからの網膜において測定された。ウェスタンブロット分析によって示されるように、βカテニンレベルは、16週齢での秋田マウス群からの網膜において、それらの非糖尿病同腹子群に比べて、上昇した。また、同様に、網膜のβカテニンレベルは、糖尿病誘発16週目のSTZ誘発糖尿病ラット群で、齢が一致する非糖尿病のラット群と比べて、上昇した。。定常的酸素正常状態下の出生後16日齢のラット群では、低レベルのβカテニンが網膜に検出されたが、同じ日齢のOIRラット群は網膜において劇的に増加したβカテニンレベルを示した。βカテニンが蓄積される細胞の位置を特定するために、秋田マウス群、STZ糖尿病ラット群、OIRラット群、およびこれらのそれぞれの比較対照群からの目の眼切片が、免疫組織化学を用いて、βカテニンに特異的な抗体で染色された。それぞれ比較対照と比較した際に、より強烈なβカテニンシグナルが、秋田マウス群、STZ糖尿病ラット群、およびOIRラット群の網膜内方に検出された。また、網膜細胞の核内における増加したβカテニンシグナルが、糖尿病の動物群とOIRラット群で観察されたで観察されました。糖尿病患者およびOIRラットにおけるLRP56の増加した網膜におけるレベルさらにWnt経路の活性化状態を評価するために、Wnt経路におけるコレセプターである、LRP56の網膜におけるレベルを、ウェスタンブロット分析によって測定した。結果は、LRP6の網膜のレベルは、糖尿病誘発16週目のSTZ誘発糖尿病ラット群からの網膜において、齢が一致する非糖尿病の比較対照群における網膜と比較して、より高いものとなったことを示した図3A。また、同様に、網膜のLRP6レベルは、P16齢のOIRラット群において、齢が一致する酸素正常状態の比較対照群と比較して、より高いものとなったことを示した図3B。目の断面における免疫組織化学は、非糖尿病比較対照群におけるものと比較して、STZ誘発糖尿病ラットの網膜内方に増加したLRP56シグナルを示した。OIRラット群では、より強烈なLRP56シグナルが、主として網膜の脈管構造において検出された。酸欠と酸化ストレスは糖尿病でWnt経路活性化の一因となる糖尿病でWnt経路活性化の原因を特定するために、DRの公知の病原性の要因である、酸欠と多糖症、のWntシグナル伝達への効果が生体外にインビトロにおいて評価された。ウェスタンブロット分析によって示されるように、14時間の酸欠への第一のRCECの曝露は、総βカテニンレベルを増加させ、酸欠が糖尿病患者とOIRモデルの網膜でのWnt経路活性化のための原因因子であること賀示された。また、RCECは、10μmolLアミノグアニジンの存在下と不在下で、30mmolLグルコースに24時間曝露された。RCECにおけるβカテニンの細胞内分布は、免疫細胞化学を使用することによって、決定した。低グルコース媒体下で培養された細胞群中では、βカテニンは主として細胞質ゾルと膜の中に分布され、核では検知されなかった。高グルコース媒体は、βカテニンの核内移行を引き起こし、高グルコースだけがWnt経路を活性化するために十分であることを示した。同じ条件のもとで、アミノグアニジンは、高グルコースによって引き起こされたβカテニンの核内移行を阻害した。一貫して、単離核タンパク質を使用するウェスタンブロット分析は、βカテニンの核レベルが、高グルコース媒体に曝露されたRCECにおいて、低グルコース媒体のそれらと比べて、上昇することを示した。アミノグアニジンは、高グルコースで誘発された核におけるβカテニンレベルの増加を防止し、酸化ストレスが、Wnt経路の高グルコースで誘発された活性化の一因となると示唆した。Wnt経路の遮断は、DRモデルの網膜炎症、血管漏出、およびNVを改善するさらにDRにおけるWnt経路活性化の使役的な役割を証明するために、Wnt経路活性化は、DRモデル群の網膜において、Wnt経路の特異的阻害剤であるDKK1を使用することによって、妨げられた。STZ糖尿病ラットへの精製DKK1の種々異なった投与量の硝子体内注射は、反対側の目へのBSAの同量が注射されたものと比較して、投与量依存性をもって、網膜における可溶性ICAM1レベルを減少させ、Wntシグナル伝達が糖尿病のラット群で網膜の炎症の一因となることを示した。糖尿病のラット群での網膜の血管漏出におけるWntシグナル伝達の役割を評価するために、精製DKK1が、糖尿病誘発16週目のSTZ誘発糖尿病ラット群の右目の硝子体に注射され、一方、比較対照として反対側の目に等量のBSAが注射された。網膜の血管漏出は、注射の48時間後に追跡子としてエヴァンスブルーを使用することによって測定されて、総網膜タンパク質濃度で標準化された。一貫して、血管透過性分析は、糖尿病のマウスにおいて、反対側の目へのBSAの同量が注射されたものと比較して、DKK1が注入された目において網膜の血管漏出が顕著に低下したことを示した。また、Wnt経路は、P16齢のOIRラット群へのDKK1の注射によっても妨げられた。注射の2日後に、COX2などの炎症促進性因子および透過性因子VEGFの発現は、顕著に発現低下された。一貫して、血管透過性分析評価は、反対側の目へのBSAの同量が注射されたものと比較して、1μg目のDKK1が注入された目において網膜の血管漏出が顕著に低下したことを示した図5E。乏血で誘発された網膜NVにおけるWntシグナル伝達の役割を評価するために、P14齢のOIRラットの硝子体にDKK1が注射された。P18齢で、網膜の脈管構造は蛍光眼底血管造影によって、全ての装着された網膜において可視化された。DKK1注射は、BSAが注射された反対側の目と比べて、新生血管領域とふさ状分岐の見かけの減少を引き起こしたαの1μgと共に、曝露された。抗HIF1α抗体を使用した免疫細胞化学によって示されるように、DKK1は、高グルコース媒体によって誘発された、活性化における重要な段階である、HIF1αの核内移行を、阻害した図6、A-Dにおける緑色。酸化ストレスが、DRにおける主要な病原性因子であると信じられているゆえに、高グルコースおよびTNFαによって誘発されたROS発生におけるWntシグナル伝達の効果が評価された。ROS測定で示されるように、低グルコース媒体と比べて、TNFαと高グルコース媒体の双方が、RCECにおけるROS生産を顕著に増加させた。DKK1は、TNFαと高グルコースによって誘発されたROS発生の投与量依存性低減化を示した。高濃度のときに、DKK1は、アミノグアニジンの10μmolLのものと同程度にROS発生を減少させた図6E。実施例1の検討Wntシグナル伝達経路は、複数の生物学的および病理学的プロセス群を規制することが示されている。しかしながら、Wnt経路のDRとの関係は、以前に報告されてない。本実施例は、初めて、ヒトおよび動物モデルで、Wnt経路がDRにおける酸化ストレスと酸欠によって活性化されることを示した。さらに、ここにおいて、Wnt経路の特異的抑制剤でのWntシグナル伝達の遮断は、DRモデル群における網膜炎症、血管漏出、NVを改善することが示され、Wnt経路がDRにおける使役的な役割を果たすことが示された。したがって、これらの観測は、Wnt経路に関する新しい病原性の役割を確立した。βカテニンは、古典的Wnt経路における必須の下流エフェクタである。人間の目の断片を使用することで得られた今回の結果は、非糖尿病ドナーにおけるものと比較して、DRの患者における網膜内方細胞中での、βカテニンの活性化における主要な段階として、βカテニンの増加した網膜レベルおよび高められた核内移行を明らかにした。網膜内方でのβカテニン活性化の位置は、DRにおける病理学的な変化と互いに関連する。炎症と血管漏出を顕在化させるがNVを欠くものである、NPDRに罹った網膜でのWntシグナル伝達の活性化は、Wnt活性化が、増殖期の前で、DRの初期段階に起こり得ることを示した。DRに罹患した網膜でのWnt経路の活性化を確認するために、網膜のβカテニンレベルが、DRの3つの動物モデルで調べられた。STZ誘発糖尿病は、共通して使用されたタイプ1糖尿病患者のモデルである。秋田マウスはタイプ1糖尿病の遺伝的モデルである。これらのモデルの両方が、網膜の炎症と血管漏出を発生させたが網膜NVなく、そして、それゆえ、NPDRモデルである。ウエスタンブロット分析と免疫組織化学の両方が、STZ糖尿病ラットの網膜では、βカテニンの総量が、齢が同じ非糖尿病比較対照群におけるものより高いことを示した。同様に、非糖尿病同腹子と比べて、秋田マウスも増加したβカテニンレベルを有していた。これらの糖尿病モデルからの結果は、活性化Wnt経路が、網膜の炎症および血管漏出と互いに関連するのを示している。OIRは乏血誘発網膜NVの一般的に使用されるモデルである。それは糖尿病モデルではないが、網膜前NV、血管漏出、網膜におけるHIF1とVEGFの過剰発現などのこのモデルの病理学的な特徴は、増殖性糖尿病性網膜症のものに類似している。したがって、OIRは一般的に増殖性糖尿病性網膜症モデルとして受け入れられている。OIRラットにおいて、βカテニンレベルはまた網膜内方で増加した。これらの結果は乏血誘発網膜NVにおけるWnt経路の潜在的役割を示す。LRP56は、Wntリガンドの密接に関連のあるコレセプターである。DRでのWnt経路の活性化を確認するために、LRP56の網膜でのレベルが、DRモデルで測定された。ウエスタンブロット分析と免疫組織化学の両方が、LRP56の網膜レベルが、STZ誘発糖尿病患者とOIRモデルで上昇したことを示した。対照的に、Fzレセプターレベルの著しい変化は、双方のモデルの網膜において検出されなかった。これらのモデルにおけるβカテニン蓄積と共に、これらの結果は、Wnt経路がDRにおいて過剰活性化されることを示す。DRは複合的な多因子性疾患である。酸欠と多糖症が主要な病原性因子であることが示されている。糖尿病でのWnt経路活性化の原因を特定するために、Wntシグナル伝達への酸欠と高グルコースの影響が評価された。培養された網膜の内皮細胞の中では、酸欠と高グルコース媒体はβカテニンの蓄積とその核内移行を引き起こした。これらの実験は、酸欠と多糖症が糖尿病におけるWnt経路活性化のための原因因子であることを示す。多糖症によって引き起こされた酸化ストレスは、網膜炎症と血管外傷に関する主要な病原性因子であることが示されている。高グルコースによって引き起こされたWnt経路の活性化における酸化ストレスの役割を試験するのに、アミノグアニジンが、それに抗酸化活性があるゆえに、使用された。免疫細胞化学とウェスタンブロット分析の双方が、アミノグアニジンのみで、高グルコース媒体によって引き起こされたβカテニンの核内移行を減衰させることができるのを示し、これによって、アミノグアニジンは高グルコースによって引き起こされた酸化ストレスがDRでのWnt経路活性化の直接の原因であることを示した。多くの病理学的な条件のもとで、Wnt経路活性化されることが知られている。DRにおける活性化Wntシグナル伝達の使役的な役割を証明するために、DRモデルにおけるWnt経路が、Wnt経路の特異的ペプチド抑制剤であるDKK1を使用することによって、遮断された。DKK1が、高い特異性と親和性をもってコレセプターLRP56に結合し、Wnt経路活性化における不可欠な段階である、FzレセプターでのLRP56の二量化、を防止することが知られています。DRモデルにおいて、DKK1のみの硝子体内注射は、これがICAM1やCOX2などの炎症促進性因子の過剰発現を妨げるゆえ、網膜の炎症を緩和するために十分である。同様に、DKK1はまた、網膜の血管漏出を減少させて、乏血で誘発された網膜NVを改善した。これらの結果は、Wnt経路の遮断のみでDRを改善するために十分であることを示した。さらに、培養細胞における、高グルコースなしでのWnt経路だけの活性化は、VEGF発現を引き起こすために十分であった。これらの結果は、Wnt経路活性化がDRにおける使役的な役割を果たすことを示す。この結論は、Wnt経路が炎症と脈管形成を仲介するという他の組織で先の観測と一致する。Wntシグナル伝達がDRを仲介するメカニズムを解明するために、酸化ストレスにおけるWnt経路の効果が評価された。培養された内皮細胞中では、ROS発生は、高グルコースによって、および炎症性因子であるTNFαによって、顕著に上昇した。DKK1でのWnt経路の遮断は、高グルコース媒体およびTNFαによって引き起こされたROS発生を阻害した。これらの結果は、DRにおけるWnt経路の病原性の役割が、酸化ストレスの誘導とそれに続く網膜における炎症の誘導を介するものであるかもしれないことを示すものである。概して、本実施例はWnt経路活性化が、ヒト患者と動物モデルの双方における、DRに関する目新しい病原性のメカニズムであることを示す最初の証拠を提供する。したがって、Wnt経路は、DRの薬学的介入のための新しい標的を表し、したがって、DRの治療における治療学的可能性を有している。網膜NVは、DRにおける視覚喪失をまねく、主要な病理学的な特徴である。VEGFは、DRにおける網膜NVの形成を刺激することにおいて、よく知られている主要因である。上記した実施例1は、Wnt経路が、糖尿病の動物および乏血誘発動物モデルの網膜において発現増加されることを示している。さらに、実施例1は、LRP6の結合を介してのWnt経路抑制剤である、Dkk1を使用する、先端におけるWnt経路の抑制が、STZ誘発糖尿病モデルおよびOIRモデルの網膜において、網膜のVEGF発現、網膜の炎症および網膜の透過性を低減することを示している。Dkk1がDRにおける網膜NVの治療で素晴らしい潜在能力を持っているのことを示す上記の事実にもかかわらず、網膜のDkk1の予防効果が、その短い半減期ゆえに一時的時であるだけであることは、注目に値する。このことは、目に複数回の硝子体内注射を必要として、その結果、目に深刻な傷害を与える。可溶性のタンパク質として、エシェリキアコリEcoliからDkk1を発現させることができず、従って、その合成は費用がかさむものである。したがって、抗脈管形成活性を有し、かつより長い半減期を有する他のWntの阻害剤が所望まれる。Dkk1の本質的抗脈管形成活性は、LRP6に結合することを介してLRP6活性を阻害するものであることから、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念は、直接LRP6活性を阻害し、これによってWnt経路を阻害し、その結果、網膜の炎症と網膜NVを防止する、抗体を提供するものである。ペプチド阻害剤を超えるこの抗体の1つの利点は、抗体の効果が4週間より長い間生体内インビボで続くということである。そのうえ、抗原-抗体結合は、より特異的、そして、より高い親和性であるので、このモノクローナル抗体抗LRP61は、DRにおいて、Dkk1のものと同じであるかより強力な抗脈管形成活性を有するであろう。実施例2の結果LRP6を中和するマウスmAbsの形成マウスモノクローナル抗体のいくつかのクローンが、LRP6の組換え型のエクトドメインを用いた標準的ハイブリドーマ技術を使用することで形成された。mAbのいくつかの陽性のクローン、mAb抗LRP61が、この方法によって同定された。抗LRP61は、様々な細胞系統で内在性LRP6に関する特異性に基づいて選択された。抗LRP6抗体は、ヒトのLRP6によって仲介された細胞活性を中和する抗LRP6mAbはLRP6活性を抑制する次に、抗LRP6抗体によるLRP6リン酸化の抑制が測定された。正常な状況では、LRP6は活性ではない。WntはそのPPPSPモチーフでのリン酸化でLRP6活性化を刺激する。それは、LRP6の細胞質ドメインで5回繰り返されるしたがって、Wnt3aを含む培地が、リガンド仲介レセプター活性化に使用された。データは、抗LRP61が、細胞群への添加の前にWnt3a含有媒体に取り入れられたとき、LRP6リン酸化が、投与量依存性の様式図7でIC50値が021-044μmolLの範囲にある状態で抑制されたことを示している。抗LRP61mAbは、Wntシグナル伝達経路活性化を抑制するLRP6活性化が、コアエフェクタβカテニン蓄積を引き起こして、Wntシグナル伝達経路のための主要な段階となるゆえ、βカテニン蓄積から下流に向かうWntシグナル伝達を阻害する抗LRP61の能力が評価された。RCEC細胞群は、抗LRP61でまたはこれなしで10分間前処理され、次に、Wnt3a含有媒体、酸欠、または高グルコースに曝露されたものの3つの異なったグループにそれぞれ別々に分配された。図8に示したデータは、抗LRP61が本質的に前述の刺激を完全に抑制したことを示す。抗LRP61mAbは内皮細胞の増殖を阻害するWntシグナル伝達経路は脈管形成に関係するしたがって、RCECDNAへの14Cチミジン取込みが、内皮性細胞増殖と生存の抑制のためのモデルとして測定された。シンチレーション近接アッセイが、RCECsへの14Cチミジン取込みを測定するのに使用された。RCECsが96-穴シンチレーションプレート上にプレート付けされ、48時間後、14Cチミジンが、当該細胞に加えられ、そして異なった濃度の抗LRP61またはDKK1と混合された。次に、RCECsは3日間1のO2に曝され、そして、細胞単層に取り込まれた放射能が測定され、最大限度のシグナルの抑制割合が計算された。結果は、チミジン取込みが抗LRP61によって抑制されたことを示したIC50値は、広範囲にわたるもとなった。しかしながら、Dkk1と比べて、抗LRP61は内皮細胞の増殖により強力な抑制影響を与えた。抗LRP61mAbはVEGF過剰発現を減少させるVEGF過剰発現への抗LRP61の生物学的効果はさらに測定された。RCECsは10分間、抗LRP61で前処理され、次に、24時間酸欠に曝された。培地のVEGFレベルは、製造業者のプロトコルに従って、ELISAキットを使用することで測定された。結果は、抗LRP61が酸欠状態に曝された内皮細胞の中で過剰発現VEGFを顕著に減少させたことを示した。いくつかの追加実験で同様の結果が得られた。抗LRP61は高グルコースによって引き起こされた反応性酵素種の発生を減衰させるRCECが抗LRP61またはDKK1の様々な濃度の不在または存在下で30mMグルコースに2時間曝された。細胞内ROS発生検定法によって示されるように、高グルコースはROSの発生を引き起こした。抗LRP61とDKK1の双方がROS発生を阻害した。しかしながら、抗LRP61は、Dkk1のものより強力な抑制効果を有しており、また濃度依存性の様式を示した。抗LRP61mAbは糖尿病ラットにおける網膜血管の白血球うっ滞を減衰させる糖尿病誘発2週目のSTZ糖尿病ラットが、処理グループにおいては抗LRP61の5μg目の硝子体内注射を、比較対照グループにおいては、前記と同じ投与量の比較対照マウスIgGおよびDkk1の硝子体内注射を受けた。注射の4週間後に、動物は、循環白血球を取り除くため潅流された。FITC抱合コンカナバリンAよって網膜の脈管構造と接着白血球は染色された図12。抗LRP61mAbは、網膜における乏血誘発VEGF過剰発現を減衰させと網膜の血管漏出を減少させる酸素誘発網膜障害は、網膜の血管漏出とNVの両方を発生するゆえ、DRの一般的に使用されるモデルである。新しい生まれたブラウンノルウェーラットは出生後の7~12日齢のときに75の酸素に曝された。抗LRP61をP12において硝子体に注射し、比較対照は同じ量の非特異的マウスIgGを硝子体に注射された。網膜の血管透過性は、エヴァンスブルーアルブミン漏出法を使用することで測定された。網膜に漏れたエヴァンスブルーアルブミン複合体は、分光光度計を使用することで定量化されて、網膜の総タンパク質濃度で正規化された。IgG比較対照と比べて、結果は、抗LRP61が網膜の血管漏出をかなり減少させたこと示した。VEGFはNVと血管漏出のための重要な要因として知られているゆえ、網膜のVEGFレベルも測定された。ウェスタンブロット分析によって示されるように、IgGを注射されたOIRラットと比べて、抗LRP61はOIRラットで網膜のVEGFレベルをかなり減少させた。。抗LRP61モノクローナル抗体は、糖尿病ラットでの網膜の血管漏出を減少させる実施例1は、また、Wnt経路がSTZ誘発糖尿病ラットの網膜でも活性化されるのを示した。抗LRP61の効力を評価するために、前述のモノクローナル抗体は糖尿病誘発の2週間後にSTZ糖尿病ラットの硝子体に注射された。網膜の血管漏出は、モノクローナル抗体注射の3週間後にエヴァンスブルー法を使用することで測定された。非特異的IgG比較対照が注入されたそれらと比べて、結果は、モノクローナル抗体が注入されたラットが網膜の血管漏出を顕著に低下させたことを示した。抗LRP61が糖尿病によって引き起こされた網膜の血管漏出を減少させて、したがって、抗LRP61がDMEにおける治療的効果を有している。抗LRP61はAMDモデルにおける網膜の血管漏出を減少させる網膜内NV、網膜の血管漏出、および炎症を発症するので、Vldlrマウスは、網膜内NV、網膜の血管漏出、および炎症を発症するのでウェットAMDの遺伝モデルとして十分に受け入れられている。AMDにおける抗LRP61の効力を評価するために、当該モノクローナル抗体は、アダルトVldlrマウスの硝子体に注射され、比較対照として非特異的IgGを硝子体に注射された。注射の2週間後における、透過率分析評価は、IgG比較対照と比較して、抗LRP61が注入された目が網膜の血管漏出を顕著に低下させたことを示した。持っていたのを示したル。この結果は、抗LRP61がAMD治療的効果を有していることをさらに示す。盲目の主な原因である、糖尿病性網膜症は、タイプ1およびタイプ2の糖尿病の双方において、進行性の網膜の血管漏出、新生血管形成、および網膜剥離を含む重篤な眼性合併症である。血管の内皮性増殖因子などの複数の増殖因子が糖尿病性網膜症で網膜血管の異常における重要な役割を果たしている。酸化ストレスがある多糖症状態における網膜の炎症が、糖尿病性網膜症の開発における極めて重要な役割を担うと信じられている。内皮に白血球付着を仲介する、可溶性接着分子1と血管細胞接着分子1のレベルが糖尿病患者の硝子体と血清で顕著に増加したのが示された。糖尿病性網膜症における炎症と多糖症の関連は、数多くの観察において確証が強まったが、糖尿病性網膜症で慢性炎症に通じる病原性のメカニズムは不明瞭であった。最近、網膜の炎症で糖尿病性網膜症での古典的Wntシグナル伝達の病原性の役割は確立された。Frizzledレセプターと低比重リポ蛋白のレセプター関連タンパク質56から成るレセプター複合体に結合することで、分泌されたシステインリッチな糖蛋白質のグループであるWntsはシグナル伝達のカスケードを開始する。Wntリガンド結合が結合する際、LRP6のC終点の保存されたモチーフは、スキャフォールドタンパク質Axinを介して膜に補充されるCK1とGSK3βによって規則的な方法でリン酸化される。PPPSTPモチーフの連続したリン酸化は細胞質ゾルキナーゼプールを減じ、および細胞質ゾルβカテニン安定化と蓄積という結果をもたらす。次に、βカテニンは、VEGF、ICAM1、および腫瘍壊死因子αを含む目標遺伝子発現を活性化するために、核内移入し、TCFLEFと会合する。実施例1は、βカテニンの網膜レベルが糖尿病性網膜症のヒトおよび糖尿病性網膜症動物モデルで増加するのを示した。また、LRP6の網膜のレベルは糖尿病性網膜症モデル群の網膜で増加した。さらに、事実上、WntアンタゴニストDickkopfhomolog1の硝子体内注射は、動物モデルにおける糖尿病性網膜症を改善し、糖尿病性網膜症の病気の発生におけるWnt経路の異常調節の重要な役割を示した。さらに、正常なラットの網膜でのWnt経路の単独活性化は、網膜の炎症や血管漏出などの病理学的な変化を引き起こすために十分である。また、最近の証拠は、Wntシグナル伝達が直接、炎症性反応に一般に関連すること示した。これはWntシグナル伝達が、核因子κBを活性化させ、トランスクリプション33のシグナル転写因子およびシグナル活性化因子を含むいくつかの炎症性因発現の増加させることが記録されているからである。これらの以前の発見は、Wnt経路の過剰活性化が糖尿病性網膜症で病原性の役割を果たし、糖尿病性網膜症の治療のために有望な薬剤標的となることを示すものである。WntコレセプターLRP6は、Wntシグナル伝達活性化における重要な役割を果たす。これは、そのエクトドメイン外部ドメインでWntリガンドとアンタゴニストDKK1の両方に結合部位を供給する。そのうえ、保存された細胞内PPPSTPモチーフは、Wntリガンドから細胞内カスケードへとシグナルを伝えるために十分なシグナル増幅のための、タンパク質複合体AxinGSK3βの接合部位に必須のものである。これらの事実は、LRP6がWnt経路を妨げるための理想的な標的を表すものであることを示している。。多数の薬学的抗体が、上皮増殖因子レセプターなどの特異的発癌性レセプターを標的とするのみならず、多重疾患モデルにおけるVEGFなどの可溶性のタンパク質を中和するために報告されている。糖尿病性網膜症におけるWntシグナル伝達経路活性と網膜の炎症における、LRP6の封鎖の効果を評価するために、第1および第2プロペラドメインを含むLRP6の細胞外ドメインに特異的なモノクローナル抗体を発生させた。その古典的Wnt経路における抑制効果と糖尿病性網膜症へのその有益な効果は、糖尿病モデルを使用することでさらに評価された。実施例3の材料と方法プラスミド、抗体、および試薬全長LRP6、LRP6のエクトドメイン、LRP5のエクトドメイン、および低密度リポタンパク質レセプターのエクトドメインを発現するプラスミドは、ハーバード大学のエクスへ博士DrXHeより寄贈された。LRP6の欠失変異体のヒトcDNAであるLRP6E1E2とLRP6E3E4は、ポリメラーゼ連鎖反応で増幅されて、BL21発現のためにpET28bプラスミドに形質移入された。ひと全長LRP5とVLDLRNは、哺乳類細胞における発現のためにそれぞれ、pGEMTeasyベクター、次いで、pcDNA31およびpcDNA6プラスミドにサブクローニングされた。ヒトWnt1cDNAはPCR増幅され、発現のためにpcDNA6プラスミドにクローンニングされた。マウス抗βアクチン抗体、ウサギ抗TNFα抗体、マウス抗VEGF抗体、ヤギ抗ICAM1抗体、ウサギ抗βカルチニン抗体、ウサギ抗pLRP6抗体、ウサギ抗pβカテニン抗体はウェスタンブロット分析に使用された。モノクローナル抗体抗LRP61は、タンパク質Gカラムを用い、製造業者の指示に従い、純化された。シグマオルドリッチ株式会社からDグルコース、塩化リチウム、塩化ナトリウムを購入した。ベクターラボラトリーVectorlaboratoriesからh非特異的マウス免疫IgGを購入した。細胞培養、移入、および抗体処理hTERTRPE、ラットミューラーMuller、およびウシ網膜毛細血管内皮細胞は、10のFBSが補われたダルベッコ変性イーグル培地中で維持された。マウスL細胞を安定的に発現するWnt3Aは、10のウシFBSが補われたDMEMでそして、Wnt3Aコンディション培地はWntリガンドの源として使用された。製造業者によって推薦されたプロトコルに従って、Lipofectamine2000、mycタグを有するLDLRN、LRP5Nmyc、およびLRP6mycを以下の手順で入手した。60培養密度のHEK293T細胞が、lipofectamine2000を使用し、発現プラスミドを用いて遷移的に形質移入された、そして、培養培地は48時間のインキュベーション後に集められた。培地は濾過され、コンディション培地CMとして使用された。抗原調製、モノクローナル抗体選択、および純化LRP6E1E2とLRP6E3E4をヒトの起源cDNAからのポリメラーゼ連鎖反応でpGEMTeasyベクターにサブクローニングし、pET28bプラスミドに形質移入した。そして、LRP6E1E2を含むpET28bおよびLRP6E3E4配列は発現のためにBL21に移された。封入体は、純化され、6Mのグアニジン塩酸塩を含むバッファの中に溶解された。変性タンパク質は、NiNTA樹脂を用い、製造業者の指示に従って、純化された。純化抗原がクマーシーブルー染色およびウェスタンブロット分析によって確認された。カラム上の再折畳Oncolumnrefoldingは連続のバッファ交換によって実行された。10カラム容量CVのバッファA、10CVのバッファB、および10CVの洗浄バッファは、順次、再折畳に使用された。リン酸緩衝生理食塩水PBS中の300mMイミダゾールで溶出された。そして溶出液は、PBS中で透析され、そして、タンパク質濃度はブラッドフォードの分析評価で測定された。LRP6エクトドメインに対するモノクローナル抗体は、プロテインリッチグループProteintechGroupによって構築されたサービスで純化抗原を用いて産生した。ELISAから別々にスクリーニングされた種々の陽性のクローンの中は、抗LRP61が特異的でかつ遮断活性を有するものと、ELISAおよびウェスタンブロット分析を用いて、同定された。周知の方法に従って、細胞培養と硝子体内注射に使用される抗LRP61が産生されそして純化された。簡潔には、6週齢メスBALBCマウス腹腔は、ハイブリドーマ細胞を注入され、そして、腹水は注射7日後に集められた。製造業者のプロトコルに従って、集められたマウス腹水はタンパク質Gカラムに適用された。カラムからのモノクローナル抗体溶出液は夜通し、PBSに対して透析された。ルシフェラーゼレポーター分析評価24穴プレート中に2×104細胞/ウェルでプレート付けされた、hTERTRPE細胞が、lipofectamine2000を用いて、025μgTOPFlashおよび005μgpRLTK構造物に移された。移入の4時間後、培地を新鮮な培地に取り替え、そして、細胞が、抗LRP61および各ウェルにおける総IgGの濃度が同じとなるように補われた補充量の比較対照IgGで、0.5時間予め処理し、次にWnt3ACMが16時間加えられた。Wnt1を使用する分析において、Wnt1の発現プラスミドは、プロモーター構造物で移入されて、おなじ手順でその後処理された。ルシフェラーゼ活性は、製造業者のプロトコルに従って、デュアルルシフェラーゼアッセイキットを使用することで実行された。レニラルシフェラーゼ活性は、移入効率を正規化するために測定された。すべての実験が少なくとも三重で行なわれた。ウェスタンブロット法培養細胞は、冷たいリン酸緩衝生理食塩水で洗われて、セル溶解バッファの中で溶解された。PBSで洗浄した後に、細胞はプロテアーゼ阻害剤カクテルを含むPBSに懸濁された。そして、2回の凍結融解サイクルが、細胞質ゾル分画を単離させるように実行された。各動物からの同じ量の網膜のタンパク質が、溶解バッファ上記と同じ中で続いての超音波処理で得られ、そしてブラッドフォードの分析評価による総タンパク質濃度測定の後にウェスタンブロット分析に用いられた。さらに、各タンパク質のための特異的一次抗体は一夜インキュベートされ、そして、HRP抱合二次抗体が検出に使用された。シグナルは、化学イムノルミネッセンス検出キットで展開された。ブロットは次いで、剥がされ、比較対照を負荷するために、βアクチンに対して特異性の抗体で再ブロットされた。画像は、ChemiGeniusImageStationによって取り込まれた。個々のタンパク質バンドは、密度計測によってGENETOOLSプログラムを使用することで予備定量化された。免疫組織化学免疫染色が以前に説明されるように実行された。簡潔には、目は角膜と視神経頭の中央を通る十字で外科的に区分された。そして、中央が下を向いるように眼球の両方の半分は埋め込まれました。連続の凍結切片はPBS中の1BSAでブロックされ、FITC抱合抗LRP61と共に、比較対照としてのFITCIgGとともにインキュベートされた。負の比較対照に関して、FITC抗LRP61は抗原、LRP6E1E2ペプチド、によって予備吸着され、抗体染色に特異性を示した。PBS01tween20での洗浄の後に、スライドは、次に、PBSでリンスされ、蛍光顕微鏡の下で観察された。OIRとSTZ誘発糖尿病ラットモデル:動物実験のすべてが、ARVOStatementfortheUseofAnimalsinOphthalmicandVisionResearchの合意に従って行なわれた。ブラウンノルウェーラットはOIRモデルに使用された。糖尿病が以前に説明されるようにアダルトブラウンノルウェーラットで、STZの腹腔内注射で引き起こされて、モニターされた。糖尿病誘発2週間後の糖尿病のマウスは、比較対照IgGまたは抗LRP61の硝子体内注射を受けた。硝子体内注射動物はケタミンとキシラジンの5050混合物で麻痺させられました、そして、それらの瞳孔群はフェニレフリンとトロピカミドの局所適用で散大された。強膜切開は、針で角膜輪部より約1mm後部で作成され、そして、2μlの特定の濃度群のLRP6mAbまたは純化マウスIgGで満たされたシリンジに接続されたガラスインジェクタが、強膜切開を介して硝子体腔内へと導入された。網膜の血管透過性分析評価網膜の血管透過性が確立したプロトコルに従って、エヴァンスブルーEvansblueを追跡子として用い、先に述べられた確立したプロトコルに従って定量化された。白血球うっ滞検定分析評価は以前に説明されるように実行された。簡潔には、マウスは、麻痺させられて、血管の循環白血球を取り除くために左室を通してPBSで灌流された。脈管構造中の接着白血球を、FITC抱合コンカナバリンAを灌流することで染色した。目は除去され、4のパラホルムで固定化された。網膜は、解剖されて平らに載せられた。網膜の脈管構造における接着白血球は蛍光顕微鏡の下で数えられた。統計分析量的なデータは、ススチューデントのt検定を使用することによって分析されて、比較された。統計的な意味はp005で設定された。実施例3の結果LRP6LRP6E1E2ドメインのための抗LRP61の特異性モノクローナル抗体のいくつかのクローンが、LRP6の組換え型のエクトドメインを使用することで上昇した。モノクローナル抗体のいくつかの陽性のクローンから、内在性LRP6に関する特異性に基づいて抗LRP61は様々な細胞系統で選択された。抗LRP61は、LRP6を単一のバンドとして認識するが、ヒトのLRP6への71のアミノ酸配列の同一性がある他のWntコレセプターである、LRP5は認識しなかった。さらに、抗LRP61はヒト、マウス、マウス、およびウシを含む異なった種類から様々な細胞系統で内在性LRP6を認識した図15AおよびB。LRP6が低密度リポタンパク質レセプターファミリーのものであるので、LDLRや非常に低密度のリポタンパク質レセプターのようなLDLRファミリーの他のメンバーへの抗LRP61結合が評価されたに。ウエスタンブロット分析は、抗LRP61がLDLRやVLDLRを認識しなかったことを示し、このためLRP6に特異的であると同定された。さらに、抗LRP61がLRP6の全長エクトドメイン、および1E2Eフラグメントを認識するが、3E4Eドメインは認識しないことが確かめられ、抗LRP61のエピトープがLRP6の1E2Eのドメインで存在していることが示された。次に、ラットとマウスの網膜断面は、網膜のLRP6の空間的な発現を決定するためにFITC標識化抗LRP61で免疫染色された。FITC抗LRP61を使用する免疫組織化学は、LRP6がラットで網膜内方で主として発現されるのを示した。しかしながら、マウス網膜では、強烈なLRP6シグナルは網膜内方とRPEで観察された。アイソトープ比較対照と抗原で予め吸着させたFITC抗LRP61と共に同じ条件のもとでの免疫染色では、特異的なシグナルを示さず、LRP6シグナルが特異的であることが示された。抗LRP61は効率的にレセプターレベルでWntのリガンドによって誘発されたWntシグナル伝達を阻害した。抗LRP61が古典的Wnt経路に抑制影響を与えるかどうかを明らかにするため、hTERTRPEセルから誘導され、内在性LRP6を発現する細胞系統は、Wnt3Aの条件培地に露出されたか、または古典的Wnt経路を動かすためにWnt1と共に移入された。抗LRP61は効率的に、Wnt経路活性化における早めの段階である、セリン1490残基におけるLRP6のWnt3A仲介リン酸化を抑制し、一方、総LRP6レベル上には何らの効果もしめさなかった。また、抗LRP61はβカテニン蓄積の減衰を示して、細胞質ゾルβカテニンレベルのWntのリガンドによって誘発された増加を減衰させました。対照的に、負の制御免疫グロブリンはpLRP6と細胞質ゾルβカテニンレベルで効き目がなかった。βTCFカテニンの転移活性への抗LRP61の効果は、βカテニンTCF結合サイトを含むプロモーターによって誘導されたルスフェラーゼ活性を測定するTOPFLASH活性検定を使用することで評価された。Wnt3Aは40倍でルスフェラーゼ活性を引き起こした、そして、抗LRP61はEC50およそ20μgmlで投与量依存性をもってWnt3Aによって誘発されたルスフェラーゼ活性を抑圧した。また、同様に、抗LRP61はEC50およそ20μgmlがあるWnt1によって誘発されたTOPFLASH活性を抑制した。塩化リチウムはリン酸化βカテニンを構成するGSK3βの知られている抑制剤であり、βカテニンのプロテアソーム分解を仲介する。したがって、リチウムはWntリガンド、Wntレセプター、およびコレセプターの如何にかかわらず、古典的Wntシグナル伝達を活性化する。TOPFLASH検定によって示されるように、25mmolLLiClはβTCFカテニン活性を著しく引き起こした。抗LRP61はリチウムで誘発されたTOPFLASH活性化を抑制せず、抗LRP61による抑制がレセプターリガンド相互作用のレベルにあるのを示した。抗LRP61は高グルコース活性化古典的Wntシグナル伝達を阻害した。古典的Wnt経路が糖尿病患者と動物モデルの網膜で活性化し、また、高グルコース培地は培養細胞の中でWnt経路を活性化することが記載されている。RPE、ミュラーMullerおよび内皮細胞を含む糖尿病性網膜症の病気の発生に関連している網膜細胞はWnt経路を動かすために高グルコース培地に露出され、比較対照としては低グルコース媒体が用いられた。抗LRP61は、高グルコースで誘発されたWntシグナル伝達への抑制効果を決定するために培地に添加された。ウエスタンブロット分析は、6時間の高グルコース露出がRPEセルの中でpLRP6とβカテニンレベルを増加させたのを示した。抗LRP61は高グルコースで誘発されたpLRP6の増加とβカテニン蓄積に対し濃度依存性をもって、その増加を十分減衰させた。さらにWntシグナル伝達の活性化を確認するために、cyclinD1やcmycなどのWnt標的遺伝子の発現レベルが測定された。ウェスタンブロット分析によりcyclinD1とcmycの高グルコース培地で発現増加された発現が見られたが、抗LRP61はcyclinD1とcmycのレベルを減衰させた。網膜のミュラー細胞が網膜の炎症で糖尿病性網膜症で重要な役割を果たすのが知られています。抗LRP61はまた、ミュラー細胞の中で、細胞質ゾルβカテニンレベルの高グルコースで誘発された増加を減衰させました。網膜の内皮細胞は、糖尿病性網膜症で網膜の血管漏出、白血球うっ滞および新生血管形成の主要な役割体であるので、ウシ網膜毛細血管内皮細胞が、Wntシグナル伝達を活性化するために、30mMDグルコースに露出された。低グルコース比較対照と比べて、30mMDグルコースは細胞質ゾルβカテニンを増加させた。一方、抗LRP61は、BRCECで高グルコースによって引き起こされた増加を抑制した。GSK3βによるβカテニンのリン酸化はβカテニンの分解につながるので、測定リン酸化βカテニンレベルがまた測定された。結果は、高グルコースがpβカテニンレベルをかなり減少させたのを示したが、抗LRP61は高いグルコースによって引き起こされた変化を逆にした。概して、これらの結果は高グルコースが網膜細胞の中でWntシグナル伝達経路と、RPE、ミュラー細胞、およびBRCECを含むその標的遺伝子発現を活性化したのを示した一方、抗LRP61は濃度依存性をもって、高グルコースで誘発されたWntシグナル伝達を減衰させました。抗LRP61は、網膜の炎症性および脈管形成性因子群の高グルコース誘発発現を抑圧した。網膜の炎症性および脈管形成性因子群の過剰発現が糖尿病性網膜症で網膜新生血管と炎症における病原性の役割を果たすのが知られている。これらの炎症性お因子の多くがWntシグナル伝達で規制される。以前に、VEGFが古典的Wntシグナル伝達で規制された直接標的であると述べられている。培養されたRPE、ミュラー細胞、およびBRCECでは、高グルコース媒体はVEGFの過剰発現を引き起こしたが、抗LRP61は、この過剰発現を濃度依存性をもって阻害する。また、同様に、高グルコースは炎症性因子のICAM1とTNFαの過剰発現を引き起こした。抗LRP61は網膜細胞におけるこれらの因子の過剰発現を抑圧した。同じ細胞の中では、非特異的IgGはこれらの因子のレベルを減少させなかった。高い濃度における抗LRP61はVEGF、ICAM1、およびTNFαのレベルを低グルコース比較対照のレベルまでに減少させた。これらの結果は、高グルコースがWntシグナル伝達を介してのこれらの因子の過剰発現を引き起こすのを示します。抗LRP61は内皮性細胞移動を抑制した。内皮性移動への抗LRP61の効果は、一次BRCECを使用しながら、かすり傷治癒分析評価とチューブ形成分析評価で評価された。内皮性細胞移動が網膜新生血管で重要なステップであるゆえである。かすり傷創傷治癒分析評価は、高グルコース培地がかすり傷の48時間後にBRCEC創傷治癒を高めたのを示した。抗LRP61の存在下で、高グルコース誘発されたBRCEC創傷治癒は実質的に減少した。BRCECチューブ構成分析評価では、BRCECは12時間でチューブ状パターンを形成し、これは抗LRP61によって減衰されてるが、免疫グロブリンによっては減衰させられなかった。これらの結果は、抗LRP61が内皮性細胞移動を抑制したことを示した。抗LRP61はOIRモデルの網膜で血管漏出を減少させて、炎症を抑制した。血液網膜バリアの故障のために糖尿病性網膜症の品質証明の1つは漏れやすい血管である。OIRラットはVEGFなどの血管新生性因子の乏血で仲介された過剰発現のため増加する網膜の血管透過性を表します。血管漏出への抗LRP61の抑制効果はOIRモデルで評価された。抗LRP61は反対側のの目への時代P12と同じ量の比較対照免疫グロブリンで硝子体内lyに右眼に注がれました。網膜の血管漏出は、P16が注入されたそれと比べて、抗LRP61が注入された目が低い網膜の血管透過性をかなり持っていたのを示したでエヴァンスブルーいアルブミン漏出方法を使用することで測定された。血管漏出と炎症に貢献する因子の次の、そして、網膜のレベルは測定された。免疫グロブリンを制御するために比べて、抗LRP61はOIRラットの網膜でICAM1、TNFα、およびVEGFの表現を抑圧した。また、抗LRP61はLRP6とβカテニンの網膜のレベルを下に規制した、Wntシグナル伝達活性化を抑制するを通して抗LRP61がOIRの網膜で脈管形成性であるか扇動的の活性化を減衰させたのを示して。抗LRP61はSTZ誘発糖尿病ラットで網膜の血管漏出と白血球うっ滞を減少させました。糖尿病性網膜症への抗LRP61の有益な効果を評価するために、抗LRP61は硝子体内lyにSTZ誘発糖尿病ラットに注がれました、比較対照のための同じ投与量の非特異的IgGで。網膜の血管透過性は、エヴァンスブルーいアルブミン漏出方法を使用することで抗LRP61注射に続いて、2週間測定されて、免疫グロブリン比較対照にたとえられました。結果は、それよりかなり低い血管透過性は抗LRP61が注入された目で、免疫グロブリンを注入したのを示した。白血球うっ滞などの網膜の炎症は糖尿病性網膜症の別の品質証明です。網膜の炎症への抗LRP61の効果を決定するために、STZ糖尿病患者網膜でモノクローナル抗体注射に続いて、白血球うっ滞分析評価は2週間実行された。非糖尿病患者比較対照と比べて、未処置のSTZ糖尿病の、そして、免疫グロブリンで扱われたSTZ糖尿病患者retinaeは網膜の脈管構造でかなり増加する数の緊切な白血球を見せました。白血球の数は抗LRP61が注入されたSTZ糖尿病患者グループでかなり減少した、抗LRP61が網膜の炎症に抑制影響を与えるのを示して。ICAM1とTNFαが糖尿病の下で網膜の炎症における重要な役割を果たすとき、ICAM1とTNFαの網膜のレベルは、ウェスタンブロット分析を使用することでさらに測定された。非糖尿病患者マウスでそれと比べて、STZ誘発糖尿病の網膜はICAM1とTNFαの過剰発現を示した。非特異的IgGではなく、抗LRP61、糖尿病の網膜でICAM1とTNFαの過剰発現を抑圧した。さらに、非糖尿病患者マウスでそれと比べて、LRP6の網膜のレベルはSTZ誘発糖尿病の網膜で増加した。しかしながら、レベルは、糖尿病の抗LRP61が注入されたマウスで減少したが、非特異的IgGが注入されたそれで減少したというわけではない。これらのデータは、糖尿病の網膜でのWnt経路の活性化が一部LRP6の過剰発現のためであったのを示します、そして、抗LRP61はLRP6の下がっている規則を通してICAM1とTNFαの過剰発現を抑圧します。一緒に取って、結果は、それが糖尿病の網膜の血管漏出と炎症を減衰させて抗LRP61が糖尿病性網膜症に有益な影響を与えるのを示した。実施例3の議論前の実施例群は、糖尿病性網膜症で、網膜でWntシグナル伝達の異常調節するのを示して、その結果、Wntシグナル伝達経路が糖尿病性網膜症で主要な病原性であることを示している。DKK1が糖尿病性網膜症モデルにおける網膜の炎症、血管漏出、および炎症を改善することができるという観測で糖尿病性網膜症で合図するWntの病原性の役割は支持されます。これらの調査結果は、Wntシグナル伝達が糖尿病性網膜症の潜在的治療法の目標を表すのを示します。Wntシグナル伝達のよく研究された分子滝にもかかわらず、Wnt経路を妨げる効果的な戦略は糖尿病性網膜症の治療法のアプリケーションのために確立されていません。Wntシグナル伝達のDKK親族や、SERPINA3KやIGF1BPなどの自然な抑制剤は特定されたが、治療法として彼らのアプリケーションで生産の低い安定性と高いコストを含むこれらの自然な抑制剤を使用すると化合する制限があります。現在のExampleは、初めて、反LRP6モノクローナル抗体が糖尿病性網膜症でβWntカテニン合図の抑制で網膜の血管漏出と網膜の炎症を減衰させると報告します。さらに、これらの結果は糖尿病性網膜症の開発とLRP6の不可欠でさらなるサポートをこのような関係においてはWnt経路活性化の使役的な役割に提供します。治療法の可能性を示して、これらの観測は、まず第一に、抗LRP61でLRP6を妨げると糖尿病性網膜症を改善することができるのを確証した。そのうえ、このExampleはWntシグナル伝達経路を妨げるための十分な目標としてそのLRP6を明らかにします。ここに、LRP6の1番目と2番目のプロペラドメインに、特定の抗LRP61が様々な網膜細胞における脈管形成性であって炎症性因子のその後の表現と同様に合図するWntを阻害したのが示されます。Wntシグナル伝達と炎症性因子への抑制効果に基づいて、生体外に、糖尿病性網膜症への潜在的有益な効果は動物モデルで決定した。まず最初に、OIRと糖尿病のマウスの両方では、モノクローナル抗体は糖尿病の黄斑浮腫の根本原因である網膜の血管漏出を減少させました。2番目に、抗LRP61は網膜の白血球うっ滞を抑圧した、次に局部乏血をもたらす毛細血管の損なわれた内皮、血管漏出、および閉鎖に通じることができる主要な扇動的の変化。網膜の血管漏出と白血球うっ滞への効果のためのメカニズムに向かって、これらの生体外の、そして、生体内の結果は、抗LRP61が網膜の炎症で重要な役割を糖尿病でプレーするために見せられたVEGF、ICAM1、およびTNFαの表現を下に規制するのをともに示した。VEGFはWntシグナル伝達の標的遺伝子として確固とします。ICAM1とTNFαのプロモータ領域の期間分析は、TCFLEFの拘束力があるサイトが、ICAM1とTNFαの表現がWnt経路によって直接規制されるかもしれなことを示して、これらのプロモーターの末端の領域にあるのを明らかにした。古典的Wnt経路は、単一のエフェクタを利用する保存されたシグナル経路、多くの目標の遺伝子の表現を規制するためには多機能転写活性剤βカテニンです。しかしながら、Wnt経路のさまざまのspatiotemporal活性化は20人のWntリガンド、10のFrizzledレセプター、および2つのコレセプターの中の複数の組み合わせから起こります、多数のdiversitiesを提供して。これらのdiversitiesはWntリガンドかFrizzledレセプターの封鎖でWnt経路を阻害する治療法のアプローチを湿らせます。しかしながら、以下の事実に基づいて、LRP6はWntシグナル伝達を妨げるための理想的な目標であると信じられています。1古典的Wnt経路は2つのコレセプター、LRP5またはLRP6の1つを必要とします。2LRP6のノックアウトはLRP5のノックアウトより厳しい表現型を表します、LRP6がWntシグナル伝達でLRP5より重要な役割を果たすのを示して。3LRP6には、抗体でセルにアクセスしやすい大きい超携帯電話ドメインがあります。さらに、Example1で糖尿病患者と動物モデルから特異的に概説された研究は、DKK1でLRP6を妨げると動物モデルにおける糖尿病性網膜症を改善することができるのを示した。糖尿病で活性化に合図するWntのための正確なメカニズムは不鮮明ですが、現在で前の研究は、脂質酸化製品でLRP6のそのリン酸化を示して、高いグルコースでWntシグナル伝達活性化に十分でした。Wntのリガンドによって調停された合図はこの特定の状態における副次的効果であるように思えます。これらの調査結果は、LRP6を妨げると少なくとも正準な小道を阻害するより効果的な手段がWntリガンドかFrizzledレセプターよりむしろ糖尿病の状態で提供されるのを強く示します。LRP6は1つのシングルのタイプ筋肉膜レセプターです。そのより大きいectodomainはYWTDプロペラドメインで4つの同様のEGFのような反復から構成されます。1番目と2番目のベータプロペラ領域を含んでいるのが協力するLRP6E1E2ドメインがWntFzと対話するのが示されたが、LRP6E3E4は拘束力があるサイトをアンタゴニストDKK1に供給します。しかしながら、最近の生体外の再構成研究は、Wnt3Aが相互作用の協力的なパターンで3Eの4Eのドメインに特異的に、そして、両方への21EEのDKK1、および43EE付くのを示した。また、Wnt1が優先的に1Eのドメインに付くのも、さらに決定していて、3EがWnt3A結合に十分です。LRP6に関するそれらの異なった拘束力があるサイトにもかかわらず、Wnt1とWnt3Aによって誘発されたTOPFLASH活性化の両方が抗LRP61によって抑制されます、抗LRP61が1EのドメインにWnt1リガンド結合を妨げるだけではなく、Wnt3A相互作用に3Eのドメインに抑制影響を与えもするのを示して。Wnt3Aによって誘発されたWntシグナル伝達の抗LRP61の抑制は二価抗LRP61がLRP6に付いて、Wnt3Aの近づきにくさを引き起こすLRP6ectodomainの三次元構造を変える可能なメカニズムによって説明されるかもしれません。また、抗LRP61がWntリガンド結合に利用可能なLRP6の下がっている規則を引き起こすLRP6を動揺させるのも、ありそうです。OIRとSTZ誘発糖尿病ラットモデルを使用する生体内の研究は、抗LRP61が古典的Wnt経路の活性化を抑制するだけではなく、LRP6レベルを下に規制しもするのを示した、総LRP6の網膜のレベルが比較対照免疫グロブリンが注入されたそれより抗LRP61が注入されたマウスで低いときに。しかしながら、細胞培養結果は、抗LRP61がLRP6の活性化を妨げますが、6時間の処理の後に総LRP6レベルを減少させないのを示した。生体外の、そして、生体内の結果の間のこの不一致はいろいろな処理時間によって抗LRP61によって説明されるかもしれなくて、1週間、糖尿病患者では、網膜は治療されたが、培養細胞が6のために抗LRP61と共に治療されたので、hはマウスを捕ります。抗LRP61がOIRと糖尿病の動物モデルのLRP6の総レベルを下に規制するメカニズムは不明瞭です。しかしながら、LRP6のectodomainとの抗体結合がLRP6を動揺させるか、内面化を引き起こして、またはその結果、LRP6の総レベルを減少させるのが、ありそうです。糖尿病性網膜症にかかわる複数の病原性のメカニズムの規則のWntシグナル伝達の見かけのかかわり合いは対象とされた療法の好奇心をそそる候補にWnt経路を作ります。VEGFは糖尿病性網膜症の網膜で言い表され過ぎて、βカテニンによって整えられたWnt目標の遺伝子です。このExampleは、抗LRP61が高いグルコースに露出された網膜細胞におけるOIRラットの網膜のVEGFの過剰発現を抑圧したのを示した。さらに、Wnt経路がNFκBのダイレクト活性化による網膜の炎症か転写調節因子がSTAT3を含んでいる漏話を規制するのが知られています。また、結果は、ICAM1とTNFαの時の表現がWntシグナル伝達活性化のVEGF表現と平行していたのを示した、彼らの表現がWntシグナル伝達のコントロールの下にあるという補っている証拠を提供して。したがって、これらの調査結果は糖尿病性網膜症における重要な病原性の役割を果たすのが知られている重複因子の表現がWnt経路のそばで下にによって規制されているという可能な証拠を提供します。最近の臨床実験は、反VEGF化合物がAMDに有望な影響を与えるのを示した。しかしながら、糖尿病性網膜症では、反VEGF化合物はAMDほど有効ではない。可能な理由は糖尿病性網膜症が複合体と、多因子疾患であるということです。VEGFに加えて、複数の増殖因子が糖尿病性網膜症における役割を果たすのが知られています。したがって、単独でVEGFを妨げるのは糖尿病性網膜症を改善するのに十分でないかもしれません。Wnt経路が糖尿病性網膜症で巻き込まれるICAM1や、PDGFや、VEGFや、TNFαや、MMPやCOX2などの扇動的の、そして、脈管形成性な複数の因子を規制するので、糖尿病性網膜症では、抗LRP6抗体は反VEGF化合物より強力な効力を持っているかもしれません。治療法の目的に人間化されたモノクローナル抗体を使用する利点がそれらの高い特異性と安定性であり、安値は、immunogenecityと毒性です、内在性Wnt抑制剤と比べて。現在の研究が単に概念研究の証拠であることは注目に値します。抗体は、人間化される必要があります。効力、毒性、および免疫原性は、断固とする必要があるでしょう。結論として、これらの調査結果は、まず第一に、反LRP6モノクローナル抗体が糖尿病性網膜症で治療法の可能性を持っているのを示した。また、データは網膜の血管漏出と網膜の炎症の主要な原因としてLRP6活性化を含意します、その結果、同様の病原性のメカニズムで続いたAMDのLRP6と対象とされた療法のかかわり合いを広げます。その上、これらの結果は、抗LRP61がLRP6の総レベルを減少させるのを示します、異なったwntリガンドにかかわらず対立の効果を示して。細胞生存、安定性問題、および効力における副作用のための問題は残っていましたが、それはまず第一に、糖尿病性網膜症における、LRP6ターゲッティング療法の治療法の可能性を示した。さらに、この研究はLRP6の活性化、そしてまたは、過剰発現に合図するWntに関連している病気で強い原理を抗体ベースの、そして、LRP6によって対象とされた療法を調査するのに提供します。CTGFへの抗LRP61の効果抗LRP6モノクローナル抗体はICAM1とCTGFの低酸素で誘発された過剰発現を減衰させる。ICAM1は糖尿病で内皮における主要な接着分子であり、そして、白血球うっ滞と内皮損害に原因となる。CTGFは繊維形成性因子であり、DRで基底膜を肥大化させる一因である。これゆえ、ICAM1とCTGFの発現への抗LRP61の効果は測定された。酸欠はCoCl2を使用してARPE19細胞中引き起こされ、ウェスタンブロット分析によって示されるように、これはICAM1とCTGFの重要な過剰発現を引き起こした。濃度依存する方法で抗LRP61はICAM1とCTGFの過剰発現を減衰させた。脈絡新生血管形成への抗LRP61の効果Wnt経路はレーザで誘発されたCNVを病む眼杯の中に活性化される。抗LRP61はこのCNVを減衰させる。CNVはBNマウスのレーザー光凝固術によって引き起こされた。レーザと同じ日に、CNVマウスのグループは抗LRP61の硝子体内注射を受けた、そして、別のグループは同じ量の非特異性マウスIgGを受けまた。レーザの7日目後に、マウスは灌流され、そして、眼杯は、βカテニンに抗体を使用するウェスタンブロット分析のために隔離された。レーザなしで目と比べて、結果は、βカテニンがレーザCNVの目で上昇することを示した。免疫グロブリン比較対照と比べて、抗LRP61の注射はβカテニンレベルをかなり減少させました。βカテニンの蓄積がWntシグナル伝達の活性化で主要なステップであるので、これらの結果は、レーザで誘発されたCNVがWnt経路を活性化することを示し、抗LRP61はCNV目でWntシグナル伝達活性化を減衰させることを示した。抗LRP61はレーザで誘発されたCNVを改善します。レーザの誘発されたCNVへの抗LRP61注射の効果は蛍光眼底血管造影によって調べられました、そして、CNVの重篤度は、基底部イメージにおけるGrade4傷害を定量化することによって、評価された。結果は、非特異性マウス免疫グロブリンが注入された比較対照の目と比べて、抗LRP61がGrade4傷害の数をかなり減少させたのを示し、網膜下の血管漏出とCNVへの有益な効果を示した。抗LRP61はレーザで誘発されたCNVの領域を減少させる。抗LRP61はレーザで誘発されたCNVがある目の硝子体内に、レーザ処理と同じ日に注射された。比較対照としては同じ量の免疫グロブリンが用いられた。注射の2週間後に、CNV傷害は網膜脈絡膜複合体の蛍光眼底血管造影によって可視化された。CNVの領域は、コンピュータ利用画像解析で測定されて、平均された。結果は、免疫グロブリンが注入されたものおよび注射なしのもの比べて、抗LRP61の注入されたグループがCNV領域をかなり減少させたのを示した。これらの結果は、抗LRP61がマウスモデルでレーザで誘発されたCNVを阻害するのを示します。したがって、ここに開示され、請求の範囲に要求された本発明概念によると、Wntシグナル伝達経路を妨げるモノクローナル抗体ならびにその製造方法および使用が開示された。ここに開示され、明らかにされた発明的な概念は上に詳しく説明された特定の図面と言語に関連して説明されますが、多くの代替手段、変更、および変化が当業者に明らかにであることが理解されよう。従って、発明的な概念の精神と広い範囲の中に包含されるそのようなすべての代替手段、変更、および変化は、本発明に含まれるものである。