"スウェルチアマリン、そのエステル、その生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるA群から選ばれる少なくとも1種以上を有効成分として含有する、胃粘膜保護用組成物。ベルベリン、その生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるB群から選ばれる少なくとも1種以上、並びに、マグノロール、その生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるC群から選ばれる少なくとも1種以上をさらに含み、A群、B群及びC群から選ばれた化合物の混合比が、モル比で1:9~13:11~15であることを特徴とする、請求項1に記載の胃粘膜保護用組成物。オウバク末、ゲンノショウコ末、ビャクジュツ末、センブリ末及びコウボク末からなる群から選ばれる少なくとも2種以上の生薬からの抽出物を含むことを特徴とする、請求項1又は2に記載の胃粘膜保護用組成物。オウバク末、ゲンノショウコ末、ビャクジュツ末、センブリ末及びコウボク末からの各抽出物を含むことを特徴とする、請求項3に記載の胃粘膜保護用組成物。前記組成物中のスウェルチアマリン、その生理学的に許容される塩、及び水和物からなるA群から選ばれる少なくとも1種以上と、ベルベリン、それらの生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるB群から選ばれる少なくとも1種以上と、マグノロールその生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるC群から選ばれる少なくとも1種以上との混合比が、モル比で1:9~13:11~15であることを特徴とする、請求項4に記載の胃粘膜保護用組成物。請求項1~5のいずれかに記載の胃粘膜保護用組成物を含有する医薬製剤。請求項1~5のいずれかに記載の胃粘膜保護用組成物を含有する、ウレアーゼ活性阻害用組成物。請求項7に記載のウレアーゼ活性阻害用組成物を含有する医薬製剤。従来例1の3剤併用療法は、ヘリコバクターピロリの除菌には効果的な方法である。しかし、幾つかの問題点がある。まず、PPIには、胃壁が弱っている場合には胃潰瘍の原因となりかねないことや逆流性食道炎等を起こす場合があるといった副作用があること、及び逆転写酵素阻害剤であるアタザナビル硫酸塩とは併用が禁止されており、テオフィリン、タクロリムス水和物、ジゴキシン、メチルジゴキシン、イトラコナゾール、ゲフィチニブ、フェニトイン、ジアゼパム等とは併用に注意が必要であるとされている。さらに、一次除菌にはアモキシシリンAMPC及びクラシスロマイシンCAMが使用されるが、この組み合わせでうまく除菌ができなかった場合に、二次除菌では、クラシスロマイシンCAMに代えてメトロニダゾールMNZを使用することにも示されるように、耐性菌の出現という問題があり、耐性菌が出現すると除菌率が低下する。このため、副作用が少なく、かつ耐性菌の出現しにくい薬剤に対する社会的な要請は強い。また、従来例2の発明は、抗ヘリコバクターピロリ活性剤の発明が開示されている。この発明は、ヘリコバクターピロリATCC43504株が産生するウレアーゼの活性を、オウゴン、アロエ、シャクヤク、クジン、ケイヒ、ケイヒ、大茴香、ニクズク、リョウキョウ、セキシャク、エンメイソウ、アカメガシワ、ヨウバイヒが阻害することに着目して完成されたものであり、ウレアーゼの阻害活性を有することが開示されている。しかし、実際に製剤として開示されているのは、アカメガシワとシャクヤクとを有効成分とする錠剤/カプセル剤、エンメイソウとヨウバイヒとを有効成分とする顆粒剤、及びリョウキョウとウバイとを有効成分とする内服液である。一方、従来例1には、センブリがヘリコバクターピロリの増殖阻害効果を有することは記載されているが、ウレアーゼを阻害する活性を有することは記載されていない。また、センブリに含まれているスウェルチアマリンには、インスリン様増殖因子-1IGF1の産生を促進することが知られている特許文献2:特開2009-263262、以下従来例3というが、ウレアーゼ阻害活性があることは知られていない。さらに、副作用の面から見れば生薬を候補としてウレアーゼ阻害活性を有するものを探索することが望ましいが、その場合、供給量の点で問題がないものであることも考慮する必要がある。本発明は、上記のような環境の下で完成されたものである。すなわち、本発明は、スウェルチアマリン、そのエステル、その生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるA群から選ばれる少なくとも1種以上を有効成分として含有する、胃粘膜保護用組成物である。スウェルチアマリンは、下記式Iで表わされる化合物である。ここで、スウェルチアマリンのエステルとしては、四酢酸エステルであることが好ましく、生理学的に許容される塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、酢酸塩及びアンモニウム塩からなる群から選ばれるいずれかの塩であることが好ましく、水和物としては、一水和物、二水和物、及び六水和物であることが好ましい。また、上記組成物は、下記式IIで表わされるベルベリン、その生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるB群から選ばれる少なくとも1種以上、並びに、下記式IIIで表わされるマグノロール、その生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物からなるC群から選ばれる少なくとも1種以上をさらに含み、A群、B群及びC群から選ばれた化合物の混合比が、モル比で1:9~13:11~15であることが好ましい。ここで、ベルベリンの生理学的に許容される塩としては、塩酸塩、硫酸塩、二硫酸塩、及びタンニン酸塩からなる群から選ばれるいずれかの塩であることが好ましく、水和物としては、二水和物、三水和物、及び512水和物からなる群から選ばれるいずれかの水和物であることが好ましい。また、マグノロールの生理学的に許容される塩としては、塩酸塩、硫酸塩、及びアンモニウム酸塩からなる群から選ばれるいずれかの塩であることが好ましい。本発明はまた、オウバク末エキス、センブリ末エキス及びコウボク末エキスからなる群から選ばれる少なくとも2種以上の生薬を含むことを特徴とする、ウレアーゼ活性阻害用組成物である。ここで、本発明の組成物は、オウバクエキス、センブリ末エキス及びコウボク末エキスを含み、さらに、ゲンノショウコ末及びビャクジュツ末を含むものであることがさらに好ましい。そして、これらの抽出物を含む組成物中で、上記のA群、B群及びC群から選ばれた化合物の混合比が、モル比で1:9~13:11~15となっていることがさらに好ましい。また、本発明は、上記のいずれかの胃粘膜保護用組成物を含有する医薬製剤である。本発明はさらにまた、上述した胃粘膜保護用組成物を含有する、ウレアーゼ活性阻害用組成物である。また、本発明は、前記ウレアーゼ活性阻害用組成物を含有する医薬製剤である。本発明によれば、スウェルチアマリンを有効成分として含有し、強いウレアーゼ活性阻害作用を有する組成物を得ることができる。また、この組成物を有効成分として含有する、医薬製剤を得ることができる。以下に本発明を更に詳細に説明する。本発明のウレアーゼ活性阻害用組成物は、スウェルチアマリンC16H22O10分子量37434、そのエステル、その生理学的に許容される塩、及び水和物からなるA群から選ばれる少なくとも1種以上を有効成分として含有するものである。スウェルチアマリンは、上記式Iで表わされる通りの配糖体であり、後述するセンブリに含有される化合物である。また、本発明のウレアーゼ活性阻害用組成物は、ベルベリンC20H18NO4、式量33637、その生理学的に許容される塩、及び水和物からなるB群から選ばれる少なくとも1種以上、並びにマグノロールC18H18O2分子量26634その生理学的に許容される塩、及び水和物からなるC群から選ばれる少なくとも1種以上をさらに含むものであることが、ウレアーゼ阻害活性が高いことから好ましい。ベルベリンは、上記式IIで表わされるアルカロイドであり、後述するオウバクに含有される化合物である。また、マグノロールは、上記式IIIで表わされる化合物であり、後述するコウボクに含有されるものである。これらのエステル、生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物については、上述した通りである。さらに、上記のA群、B群及びC群から選ばれた化合物の混合比が、モル比で1:9~13:11~15であることが、ウレアーゼ阻害活性が高いことから好ましく、1:11:13のときに、最も活性が高い。本発明のウレアーゼ活性阻害用組成物は、市販されているナタマメ由来のウレアーゼ、ATCC43504その他のヘリコバクターピロリから得られるウレアーゼのみならず、ヘリコバクターピロリ菌の臨床分離株から得られるものに対しても阻害作用を有するものである。本発明はまた、オウバク末エキス、センブリ末エキス及びコウボク末エキスからなる群から選ばれる少なくとも2種以上の生薬を含む、ウレアーゼ活性阻害用組成物である。生薬エキスの調製ここで、オウバクはキハダPhellodendronBark又はその他同属植物Phellodendronの周皮を除いた樹皮から得られる生薬であり日本薬局方、粉末にしたものをオウバク末日本薬局方という。オウバク末に、所定の溶媒を加えて所定の条件で抽出することにより、有効成分ベルベリンを含有する抽出液が得られる。所定の溶媒としては、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル及び水等を挙げることができ、メタノール又は水を使用することが、有効成分の抽出効率が高いことから好ましい。溶媒の添加量としては、3~7wvとすることが有効成分の抽出効率の点から好ましく、4~6wvとすることがさらに好ましい。抽出の条件としては、振蘯、ソックスレー抽出、超音波抽出等を挙げることができ、抽出効率の点から超音波抽出を行うことが好ましい。抽出時間は約15分~約60分とすることが抽出効率の点から好ましく、約30分とすることがさらに好ましい。また、抽出温度は、20°C~40°Cとすることが抽出効率の点から好ましい。ゲンノショウコは、ゲンノショウコGeraninthunbergiiSieboldetZuccariniの地上部日本薬局方から得られる生薬であり、粉末としたものをゲンノショウコ末という日本薬局方。ゲンノショウコ末からも、上述したオウバク末と同様の条件で抽出液を得ることができる。ビャクジュツは、オケラAtractylodesjaponicaKoidzumiexKitamuraの根茎ワビャクジュツ又はオオバナオケラAtractylodesovateDeCandlleの根茎カラビャクジュツから得られる生薬であり、粉末としたものをビャクジュツ末日本薬局方という。ビャクジュツ末からも、上述したオウバク末と同様の条件で抽出液を得ることができる。センブリは、センブリSwertiajaponicaMakinoの開花期の全草であり、これを粉末としたものをセンブリ末という日本薬局方。センブリ末からも、上述したオウバク末と同様の条件で有効成分を含有する抽出液を得ることができる。この抽出液には、主成分の1つとして下記式Iで表わされる配糖体、スウェルチアマリンが含有されている。コウボクは、ホウノキMagnoliaobovataThunbergMagnoliaofficibalisRehderetalWilson又はMagnoliaofficinalisRehderetWilsonvarbilobaRehderetWilsonの樹皮から得られる生薬であり日本薬局方、粉末にしたものをコウボク末という日本薬局方。コウボク末からも、上述したオウバク末と同様の条件で抽出液を得ることができる。この抽出液には、主成分の1つとして、下記式IIIで表わされるマグノロールが含有されている。上述したスウェルチアマリン、ベルベリン、及びマグノロール、これらのエステル、これらの生理学的に許容される塩、及びそれらの水和物は、常法に従って精製して得ることもでき、市販品を購入して使用することもできる。また、これらの抽出物の混合物として、上述した生薬の抽出液を所定の割合で混合してもよく、またこれらの抽出液を含有する生薬製剤を所定の溶媒で抽出し、これを使用することもできる。具体的には、御岳百草丸登録商標、長野県製薬株に、所定の溶媒、例えば、メタノールを10~20倍wv加えて抽出し、この抽出液を使用することができる。抽出は上述した方法を使用することができるが、ソックスレー抽出を行うことが、ベルベリン抽出効率が良いという理由から好ましい。得られた抽出液以下、百草丸抽出液という。を、約40~60°Cの湯浴を使用しながら減圧濃縮することによって、試料百草丸エキスとすることができる。使用の際には、減圧濃縮した百草丸エキスを、所望の溶媒で適宜希釈して使用する。以下に、スウェルチアマリンを含有する抽出液を得る場合を例に挙げて説明する。上述したセンブリを乾燥させてこれを粉末とするか、市販のセンブリ末を所定量秤量し、これに3~7倍wv、好ましくは4~6wv倍の溶媒、例えば、メタノールを加えて、20~30°Cにて、15~30分間、例えば、超音波抽出を行う。得られた抽出液を濾過し、例えば、ロータリーエバポレータで濃縮した後に、常法に従って凍結乾燥する。以上のようにして、スウェルチアマリンを含有する抽出液を得ることができる。ベルベリン又はマグノロールを含有する抽出液についても、同様にして得ることができる。これらを保存試料として、以下に記載するウレアーゼの阻害活性試験、抗菌試験及びinvivoでの胃粘膜保護試験に供する。ウレアーゼの阻害試験所定の培地を調整し、ウレアーゼの産生菌を植菌し、所定の条件下で培養する。例えば、コロンビアHP培地を調整し、ここにヘリコバクターピロリを植菌して、微好気性条件下に、35~39°Cで培養する。ここで、微好気性条件とは、炭酸ガス濃度の範囲が5~8の範囲にあることをいう。培養温度は、37°Cとすることが、生体内での増殖条件に近いことから好適である。菌の増殖を確認した後に、適当な培地、例えば、5~15の仔ウシ血清を添加したブレインハートインフージョン培地に掻き取った菌を懸濁し、これを処理して菌の産生する酵素を含有する溶液を調製する。具体的には、上記の懸濁液を、約で遠心し、上清を除く。得られた沈渣に適当な還元剤とキレーター、例えば、0.5~2mMのメルカプトエタノールと0.5~2mMのEDTA-2Naとを添加したリン酸緩衝液以下、PBということがある。を加え、氷冷下に、例えば、超音波処理を行って菌を破砕する。遠心によって、破砕物を沈殿させ、上清を濾別してPBで所定倍、例えば、10~20倍に希釈して酵素液を調製する。このようして得られた試験用酵素液に上述したようにして得られた各試料からの抽出液を加えて所定の条件下に静置し、ウレアーゼの基質溶液を加えて混合する。その後、所定の条件の下で一定時間反応させる。具体的には、例えば、酵素液25~200μLに上記の抽出液を10~50μL加え、約37°Cのウォーターバス中に10~20分間置き、次いで200~600mMの尿素を含有するPBを添加する。PBの添加後、ただちに振とうし、再度、約37°Cのウォーターバス中に10~20分間置き、その後、0.5~2Nの硫酸を加えて反応を停止させる。反応を停止させた溶液をインドフェノール法に従って処理し、ウレアーゼの阻害率を630nmの吸光度から求める。以上のようにして、ウレアーゼ阻害効果を確認することができる。抗菌試験凍結保存してある所定のHelicobacterpylori株を、所定の培地に白金耳で植菌し、所定の条件下で培養して菌苔を形成させる。この菌苔を掻き取って懸濁液とし、濁度を、測定し、所望の菌数となるように調整する。この懸濁液を所定の寒天培地上に塗布して、所定の条件下に培養し、所定の濃度の薬液を浸み込ませたディスクを置き、阻止円の形成による抗菌作用を測定することができる。例えば、-80°Cで凍結保存しておいたHpyloriの臨床株を、コロンビアHP寒天培地に白金耳で植菌し、微好気条件下に約37°Cで2~4日間培養して菌苔を形成させ、その一部を掻き取って懸濁液とする。この懸濁液の濁度を、例えば、OD600で測定し、菌数が0.5~2x106個100μLとなるように調製し、コロンビアHP寒天培地に塗布し、薬液50μLを浸み込ませたディスクをこの寒天培地上に置き、約37°Cで3日間、微好気条件下に培養する。このときに形成された阻止円の大きさから、50阻止濃度を求めることにより、抗菌作用の強さを評価することができる。また、阻止円内のHpyloriのコロニー形成能を、阻止円内を白金耳で触れ、HIFBSTTC培地に線を引き、画線培養することによって調べることができる。画線培養は、例えば、約37°Cで2~4日間、微好気条件下に行うことができる。さらに、例えば、01wvデオキシコール酸含有培地等を用いて、菌のコロニー形成能を調べることもできる。例えば、上記のHpyloriをHP寒天培地に塗り広げ、微好気条件下で、約37°Cにて2~4日間培養し、次いで、培養した菌を白金耳にとり、HIFBSDCA培地に線を引き、微好気条件下にて、さらに約37°Cで2~4日間培養して、形成されたコロニー数を計数することによって、こうした培地でのコロニー形成能を調べることができる。また、Hpyloriを所望の数、例えば、2x108CFU05mLマウスで経口接種し、その後、所望の量の御岳百草丸溶液又はベルベリン溶液を所望の期間、経口投与して、胃粘膜の損傷の程度、胃内でのHpyloriの生息数、及びミエロパーオキシダーゼMPO等の酵素活性を測定し、invivoでの胃粘膜に対する効果を検討することができる。胃粘膜の損傷の程度は、例えば、実体顕微鏡下に目視によって確認して評価することができる。また、胃内でのHpyloriの生息数は、例えば、ブルセラ寒天培地に、5~15の馬脱繊維血、1~5μgmLのアンホテリシンB、7~11μgmLのバンコマイシン、0.1~0.64μgmLのポリミキシンB、1~10μgmLのトリメトプリム、10~100μgmLのl235triphenyltetrazoliumchlorideを加えたHpylori選択プレートを用いて、形成されたコロニー数をカウントし、定量することができる。市販のHpylori選択培養プレートを使用してもよい。また、ミエロパーオキシダーゼMPO等の酵素活性は、所定の期間、薬物を投与し、薬物投与の終了後所望の期間、通常は約24時間、絶食させた動物をエーテル麻酔下に開腹して胃を摘出する。薬物としては、例えば、御岳百草丸とベルベリンを、それぞれ、0.5~2粒/kg/日又は0.1~0.6mg/kg/日となるよう調製して、使用することができる。胃粘としては、摘出した胃の所望の部位、例えば、胃体部及び幽門部の境界領域をコルクボーラー等を用いてパンチアウトして試験片とし、重量を測定する。こうして調製した試験片50mgに対して、所望の緩衝液、例えば、05hexadecyltrimethylammoniumbromideを含有する50mMのリン酸緩衝液pH60、以下PBHということがあるを所定の量、例えば、10mL加え、ポリトロン等にて破砕後、この破砕液を2~5回凍結融解し、例えば、2000xgで10分間、4°Cにて遠心分離し、この上清を測定用試料とする。このようにして、得た測定用試料から、2~10μLを取って、所望の濃度、例えば、0167mgmlのodianisidinedihydrochlorideおよび00001~0001のH2O2を含む5~20mMのPBHpH60140~148μLを加えて混和する。この混液を、例えば、吸光度450nmで測定し、MPO活性を測定することができる。以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。[試料抽出液の調製]日局オウバク末ベルベリン濃度121は堀江生薬株から、日局コウボク末マグのロール濃度210、日局センブリ末スウェルチアマリン濃度313、日局ゲンノショウコ末、日局ビャクジュツ末は、長野県生薬株より、それぞれ購入した。日局オウバク末、日局コウボク末、日局センブリ末は、別々の容器にそれぞれ100gを秤量し、50mLのメタノールを加えて30分間超音波抽出を行った。日局ゲンノショウコ末は1675gを秤量し、50mLのメタノールを加えて30分間超音波抽出を行った。日局ビャクジュツ末は050gを秤量し、50mLのメタノールを加えて30分間超音波抽出を行った。百草丸を粉末にし、日本薬局方24号篩を通した後、40gを秤量し、円筒濾紙Whatman、GEヘルスケアジャパン株製にとった。800mLのメタノール和光純薬工業株製を加えて、80°Cのウォーターバス中で20時間、ソックスレー抽出器を用いて抽出を行った。得られた抽出液を濾紙No4、Whatmanで濾過し、ロータリーエバポレータにて、50°Cで減圧濃縮し、百草丸抽出液とした。百草丸抽出液を以下の条件で高速液体クロマトグラフィーに供し、ベルベリン、マグノロール及びスウェルチアマリンの含有量を測定した。ベルベリン、マグノロール及びスウェルチアマリンの標準品は、和光純薬工業株より購入した。<HPLC条件>装置:高速液体クロマトグラフ株日立製作所システムコントローラ:D7000インジェクタ:L7200ポンプ:L7100検出機:L7405溶離液:0~12分、12分~25分、25分~30分で移動相の組成を変えて溶出させた。12分~25分で使用した移動相を除き、9mMのリン酸二水素カリウム及び9mMの1-オクタンスルホン酸ナトリウムを含む水/アセトニトリル混液169を使用した。12分~25分では、197mMのリン酸二水素カリウム及び4mMの1-オクタンスルホン酸ナトリウムを含む水/アセトニトリル混液5669を使用した。カラム:内径46mm×長さ150mm粒子径5μmODS流速:10mLminカラム温度:40°C得られた各抽出液は、下記表1~6に示す量にメタノール和光純薬工業株製で希釈し、ウレアーゼ阻害試験に使用した。[ウレアーゼ活性阻害試験]1酵素溶液の調製コロンビアHP培地日本ベクトンディッキンソン株製を用いて、ヘリコバクターピロリ東京大学医科学研究所より供与を受けた臨床分離菌株を、5日間微好気性条件下アネロパウチキャンピロ,三菱ガス化学株製で培養し、増殖させた。次いで、コロンビアHP培地上で増殖したピロリ菌のコロニーを掻き取り、ここに2~3mLの10子牛血清GeminiBioProducts社製含有ブレインハートインフュージョン培地を加えて攪拌し、この菌液を2000rpmで遠心分離した。沈渣に1mMのメルカプトエタノールと1mMのEDTA2Naとを添加したリン酸バッファー2~3mLを加え、5分間、氷冷下で超音波処理をした。次いで、これを15000rpmで遠心分離し、上清を濾別した。濾別した上清を20mMのリン酸バッファーで15倍に希釈し、酵素溶液ストック溶液とした。2ウレアーゼ活性の測定ウレアーゼの活性はインドフェノール法で測定した。まず、フェノール50g、ニトロプルシドナトリウム25mgを秤量して500mLの水に溶解させ、フェノールニトロプルシッドナトリウム溶液以下、溶液Aという。を調製した。また、22gのリン酸水素ナトリウム及び25gの水酸化ナトリウムを約300mLの水に溶解し、ここに、30mLの有効塩素濃度10以上の次亜塩素酸ナトリウムを添加し、水を加えて500mLとした溶液以下、溶液Bという。を調製した。上記1で得られた各抽出液50μLを試験管に取りn=3、ここに上記酵素液50μLを加えてよく混合し、37°Cで15分間インキュベートし、400mMの尿素を添加した100mMリン酸緩衝液を基質溶液として300μL添加した。この混合液を直ちに振とうし、37°Cで15分間インキュベートした後に、100μLの1N硫酸を加えて反応を停止させた。得られた反応液に、上記の溶液A及び溶液Bを溶解し、有効塩素10以上の次亜塩素酸ナトリウム30mlを添加し、水で500mlとした溶液25mlを加え、65°Cのウォーターバス中で20分間インキュベートした。吸光光度計にて、波長630nmで測定し、下記の式に従ってウレアーゼの阻害率を求めた。ウレアーゼ活性値U=Es-EbEs:酵素液を使用して測定した吸光度Eb:酵素液の代わりに緩衝液を使用して測定した吸光度ウレアーゼ阻害率={Ub-Us/Ub}×100Ub:抽出液の代わりに水を使用して測定したウレアーゼ活性値Us:抽出液を使用して測定したウレアーゼ活性値各試料のウレアーゼ阻害活性を、表1~表6に示す。反応液が黄色となり、吸光度は-で振り切れたため、100とした。上記表6より、ゲンノショウコに高いウレアーゼ阻害活性が見られた。これに対し、センブリ及びビャクジュツには中程度のウレアーゼ阻害活性他見られた表4及び表5が、オウバクのウレアーゼ阻害活性は弱く表2、コウボクにはウレアーゼ阻害活性は見られなかった表3。これに対し、百草丸の抽出物は非常に高いウレアーゼ阻害活性を示した表1。このため、実施例1で得た抽出液中のスウェルチアマリン、ベルベリン及びマグノロールの含有量を測定した。結果を下記表7に示す。以上より、上記の各生薬からの抽出物を、それらに含まれるスウェルチアマリン、ベルベリン及びマグノロールの量比が、上記表7に示す割合となるように混合することによって、これらの抽出物単独では得られない、相乗的な高いウレアーゼ阻害活性を示すことが明らかになった。[抗菌作用の検討]1試料等通常、胃腸薬として市販されている製品で、抗菌作用のある中医和漢生薬を複数含有する製剤百草丸、長野県製薬株を用いて、その製剤及び含有する生薬のHelicobacterpyloriに対する抗菌作用を調べた。コロンビアHP寒天培地は、日本ベクトンディッキンソン株より購入して使用した。ハートインフュージョンHI、トリプティケースソイブロスTBS培地、及びミューラーヒントン培地は、栄研化学株より購入したものを用いた。血清を含むHI培地は、牛胎児血清FBS、GeminiBioProducts社製を10vv加えて調製した。必要に応じて、トリフェニルテトラゾリウムクロライドTTC、東京化成工業株製を5x104vv、またはデオキシコール酸DCA、和光純薬株製を01wv加えた。LB培地は、05gのNaCl、05gのイーストエキストラクト、1gのトリプトンに100mLの蒸留水を加えて調製した。百草丸5gに、メタノール100mLを加えて抽出を行い、そのメタノール抽出液ベルベリン413、マグノロール377、スウェルチアマリン033含有を試験に供した。和漢生薬として、オウバクエキスベルベリン88含有、日本粉末株製の原液と、コウボク乾燥エキスマグノロール0695含有、日本粉末株製を用いた。これらは、それぞれ5gを水50mLに溶かして100mgmLに調整し、原液とした。また、センブリ末エキススウェルチアマリン986含有、日本粉末株製は、66センブリエキス170mgmLの水溶液を調整し、原液とした。ゲンノショウコ末エキスは、66ゲンノショウコエキスを用いて335mgmLの水溶液を調整し、ゲンノショウコ原液とした。ビャクジュツ末エキス日本粉末株製は、736ビャクジュツエキスを用いて82mgmLの水溶液に調整し、原液とした。生薬の有効成分の標準品として、市販のベルベリン、マグノロール、スウェルチアマリンいずれも、和光純薬株製を使用した。塩化ベルベリンは10mgmL、マグノロールとスウェルチアマリンはそれぞれ1mgmLのメタノール溶液に調整し、これらを原液とした。なお、クラリスロマイシン和光純薬製は、2mgmLのメタノール溶液に調整し、原液とした。ヘリコバクターピロリHelicobacterpyloriは、東大医科研より1株、理研より2株株名なし、JCM12095を入手し、使用した。2抗菌効果の測定抗菌効果の測定はディスク法で行い、阻止円の直径を測定して評価した。菌液の調整は、以下のように行った。-80°Cで凍結保存してあるHelicobacterpyloriのHIFBS凍結凝塊を、コロンビアHP寒天培地に白金耳で全面に植菌し、微好気ガスパック三菱ガス化学株を用いて、37°Cで3日間培養した。次いで、この培地上にHIFBSを2mL加えて菌苔を掻き取り懸濁液とした。この懸濁液の濁度をOD600で測定し、菌数が106個100μLとなるように調製した。この菌液100μLをコロンビアHP寒天培地に塗布し、薬液50μLを浸み込ませたディスクペーパーディスク抗生物質検定用、直径8mmADVANTEC東洋株製をこの寒天培地上に置き、37°Cで3日間、微好気条件下に培養した。陰性対照として、10倍希釈した菌液をコロンビアHP寒天培地に塗布した別プレートを作成し、同時に同じ条件下で培養して、コロニー数を計数した。1検体について、同じ条件で3回以上実験を行い、各回の阻止円を測定して平均値と偏差とを求めた。陽性対象として、EscherichiacoliとStaphylococcusaureusH209Pを用い、同様の実験を行い、抗菌効果を測定した。EcoliはLB培地で、SaureusはTSB培地で、それぞれ培養し、各菌液の濁度をOD600で測定し、Helicobacterpyloriのときと同様に、106個100μLに調製し、ミューラーヒントン培地に塗布してディスクを置き、37°Cで一昼夜培養し、阻止円の直径を測定した。結果を表8に示す。オウバク末エキス、コウボク末エキス、ゲンノショウコ末エキスは、いずれも、Saureus、2株のHelicobacterpyloriに対する阻止円が形成され、これらの菌に対して抗菌作用を示した。オウバク及びコウボクでは、標準品とエキスとで阻止円の大きさに違いがあり、エキスの阻止円の方が大きくなっていた。センブリ末エキスの場合、Ecoli、Saureus及び2株のHpyloriに対する阻止円が形成されたが、スウェルチアマリンの標準品では、いずれの濃度でも、阻止円の形成は見られなかった。また、ビャクジュツ末エキスでは、使用したいずれの菌に対しても阻止円を形成しなかった。一方、製剤では、Hpyloriの2株に対し、阻止円の形成が見られた。製剤とほぼ同量のベルベリンを含有するオウバク末エキスでは、製剤より大きな阻止円の形成が観察された。Saureusでは、製剤を用いたときには阻止円が形成されなかった。これに対し、Helicobacterpyloriでは、エキスを使用した場合に形成される阻止円よりも小さかったが、製剤でも阻止円が形成され、抗菌作用があることが確認された。3阻止円内のHelicobacterpyloriのコロニー形成能の検討また、抗菌効果の測定方法の手順に従って、Helicobacterpyloriの培養を行い、クラリスロマイシン、ベルベリン、オウバクエキスのディスクを置いて阻止円を形成させた。その後、阻止円内を白金耳で触れ、HIFBSTTC培地に線を引き、画線培養した。対照として阻止円外の菌苔についても、同様の操作を行った。以上のようにして調製したプレートを、37°Cで3日間、微好気条件下に培養した。また、各プレートに上記の薬液に浸漬したディスクを置いて、同様の条件下に培養を行い、1~4日目まで、経時的に阻止円内外の菌のコロニー形成能の有無を検討した。結果を表9に示す。阻止円内のHpyloriのコロニー形成能を確認した結果、阻止円の菌苔から、画線培養した菌は生育した。しかし、クラリスロマイシン、ベルベリン、オウバク末エキスを含浸させたディスクによって形成された阻止円内から採取し画線培養した菌は、いずれも、生育しなかった。Hpyloriは、周囲の環境がその生存に適さなくなると、球状体cocoidformに変化することが知られていることから、この実験において、阻止円内から得た菌を画線培養しても生育しなかったことが、抗菌薬の抗菌作用によるものであるのか否かは判定できなかった。401wvデオキシコール酸含有培地における菌のコロニー形成能Ecoli、Saureus及びHpyloriを用いた実験で使用した各薬剤の抗菌スペクトルを見ると、Helicobacterpyloriは同じグラム陰性菌のEcoliではなく、グラム陽性菌であるSaureusに類似した抗菌スペクトルを示した。これより、グラム陽性菌の発育を抑制するデオキシコール酸含有培地におけるHelicobacterpyloriの生育の有無を検討した。-80°Cで凍結保存してあるHelicobacterpyloriをHP寒天培地に塗り広げ、微好気条件下で、37°Cにて3日間培養した。次いで、培養した菌を白金耳にとり、HIFBSDCA培地に線を引き、微好気条件下にて、37°Cで3日間培養した。Ecoli及びSaureusは、LB寒天培地上野コロニーを白金耳で釣菌し、HIFBSDCA培地に画線し、37°Cで一昼夜培養を行った。また、対象として、HIFBS培地でも、同様に培養を行った。結果を表10に示す。表10に示されるように、デオキシコール酸含有培地において、Ecoliは発育できたが、Saureus、Helicobacterpyloriは発育しなかった。これに対し、対照であるデオキシコール酸を含んでいない培地では、すべての菌が生育した。このことから、同じグラム陰性菌であっても、HelicobacterpyloriとEcoliとでは、外膜の透過性に違いがある可能性が示唆された。以上より、胃腸薬として常用されている製剤Aに、ピロリ菌に対する抗菌作用が見られ、このことから、除菌治療の補助として使用できる可能性が示唆された。また、各エキスを混合した製剤では、SaureusH209Pに対する抗菌作用は減弱していたが、ピロリ菌に対する特異的な増殖抑制効果は維持されていた。さらに、オウバク末エキス、コウボク末エキスの抗菌作用は各主成分ベルベリン、マグノロールの抗菌効果を上回る相乗効果が認められた。invivoにおけるヘリコバクターピロリに対する効果の検討1動物及び試薬等6週齢の雄性スナネズミ日本SLC株、6週齢、体重40~50gを清水実験材料株より購入した。ヘリコバクターピロリ菌は、TN2GF4株臨床分離株VacAおよびCagA陽性を使用した。試料として、御岳百草丸長野県製薬株製を、また、対照としてベルベリンを使用した。御岳百草丸は、1粒を、第15改正日本薬局方の溶出試験第1液と同組成の溶媒に溶解して1粒10mLの溶液とした。また、ベルベリンは、第15改正日本薬局方の溶出試験第1液と同組成の溶媒に溶解して003mg10mLの溶液とした。2試験方法雄性スナネズミ20匹は、温度22±1°C、明暗サイクル1212時間の条件で、水と飼料を自由に摂取させながら、1週間、馴化飼育した後、1群4~5匹に分けた。陰性対照群図2~5中、正常と示す。を除いて、ヘリコバクターピロリ菌を2x108CFU05mL動物で経口接種し、その後、御岳百草丸溶液1粒kg日又はベルベリン03mgkg日を4週間連続投与した。2-1胃粘膜の損傷薬物投与終了後またはHpylori接種28日後に、動物をエーテル致死させて胃を摘出した。摘出した胃を大弯に沿って切開し、コルク板上にピンで固定後、解剖顕微鏡下×10にて、損傷程度を観察し、損傷面積及び出血面積mm2を測定した。2-2胃内でのヘリコバクターピロリの生息数薬物投与終了後、実施例4の観察を終えた胃を、20mLのPBSpH70中に入れ、ポリトロンにて破砕した。この破砕液を原液とし、これをPBSpH70にて10倍希釈した。原液および10倍希釈液を、それぞれ100μLずつ、Hpylori選択培養プレート日水製薬株に塗布し、微好気性条件下に7~8日間、37°Cで培養した。培養終了後、プレート上のコロニーをHpyloriとしてコロニー数を計測した。Hpylori胃内生菌数はCFU胃で表示した。2-3ミエロパーオキシダーゼMPO活性の変化薬物投与終了後、24時間絶食させた動物をエーテル麻酔下に開腹した。生理食塩水にて全身灌流を行い、その後に胃を摘出し、Krawiszらの方法によりMPO活性を測定した。すなわち、胃を大弯に沿って切開し、コルク板上にピンで固定後、胃体部および幽門部境界領域をコルクボーラー内径9mmにてパンチアウトして試験片とし、各試験片の湿重量mgを測定した。各試験片50mgに対して、05hexadecyltrimethylammoniumbromideSigma社製含有50mMリン酸緩衝液pH60、以下PBということがあるを10mL加え、ポリトロンにて破砕後、この破砕液を3回凍結融解し、2000xgで10分間、4°Cにて遠心分離し、この上清を測定用試料とした。各試料から5μLとって、0167mgmlodianisidinedihydrochlorideSigma社製および00005のH2O2を含む10mMのPBpH60145μLを加えて混和し、450nmにおける吸光度の変化をマイクロプレートリーダーMolecularDevices社製を用いて測定した。MPO活性は、μmolH2O2分mgタンパクで表示した。試料のタンパク量は、BCAプロテインアッセイキットPierce社製を使用して測定した。3結果3-1胃粘膜の損傷損傷面積を図2に、また、出血面積を図3にそれぞれ示す。胃粘膜には、過形成変化、潰瘍及びびらんが認められた。損傷面積はベルベリン投与群でやや低くなる傾向が認められたが、対照群及び御岳百草丸投与群との間に有意差は認められなかった。また、出血面積は、御岳百草丸投与群で有意な低下が見られた、御岳百草丸がヘリコバクターピロリ感染に起因する胃潰瘍の出血を抑制していることが示された。3-2胃内でのヘリコバクターピロリの生息数薬物投与終了後、対照群、御岳百草丸投与群、及びベルベリン投与群のいずれからも、Hpyloriが検出された。菌数は、対照群で約50x104CFU胃、他の2群では約09x102CFU胃であり、対照群と比較して有意に少なくなっていた。以上から、御岳百草丸及びベルベリンはいずれも、ヘリコバクターピロリの生息数を減少させることが示された。3-3MPO活性の変化各群のスナネズミの胃から調製した試料のMPO活性は、御岳百草丸投与群で対照よりやや高く、ベルベリン投与群でやや低い傾向を示したが、いずれの群でも有意差は認められなかった。以上より、invivoでは、御岳百草丸は、粘膜の損傷面積を減少させてはいないものの出血面積を大きく減少させていた。また、ヘリコバクターピロリの胃内の生息数もベルベリンと同程度に減少させることが示された。御岳百草丸は、ヘリコバクターピロリの感染による胃粘膜障害に対して、保護作用を有することが示唆された。"