"免疫グロブリンFc領域を含むポリペプチドであって、該Fc領域が、Fc領域の二量体形成を阻害する1つ以上のアミノ酸置換を含む、前記ポリペプチド。標識特異的結合部分をさらに含む、請求項1に記載のポリペプチド。前記標的特異的結合部分が、以下:i結合して、標的特異的結合部分を形成する免疫グロブリン軽鎖可変領域と免疫グロブリン重鎖可変領域;iiドメイン抗体dAb;及びiiiタンパク質スカフォールドからなる群から選択される、請求項2に記載のポリペプチド。前記ポリペプチドが、治療用ポリペプチドに融合した免疫グロブリンFc領域を含む融合タンパク質である、請求項1に記載のポリペプチド。前記ポリペプチドが、モノクローナル抗体である、請求項1~3のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記アミノ酸置換が、Fc領域のCH3界面内又はその近傍にある、請求項1~5のいずれか1項に記載のポリペプチド。CH3界面内又はその近傍にある前記アミノ酸置換が、KabatEU番号付け体系に従う以下のアミノ酸:347、349、350、351、352、354、356、357、360、362、364、366、368、370、390、392、393、394、395、396、397、398、399、400、405、406、407、408、409、411及び439の1つ以上での置換である、請求項6に記載のポリペプチド。1つ以上のアミノ酸が、以下:i陽荷電側鎖を有するアミノ酸;ii陰荷電側鎖を有するアミノ酸;iii親水性側鎖を有するアミノ酸;iv大きな側鎖を有するアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸で置換される、請求項1~7のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、IgG免疫グロブリンに由来する、請求項1~8のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、ヒトIgG免疫グロブリンに由来する、請求項9に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、マウスIgG免疫グロブリンに由来する、請求項10に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4免疫グロブリンに由来する、請求項9又は10に記載のポリペプチド。前記アミノ酸置換が、KabatEU番号付け体系に従う以下のアミノ酸位置:349、351、354、356、357、364、366、368、370、392、394、399、405、407、409及び439の1つ以上での置換である、請求項9~12のいずれか1項に記載のポリペプチド。以下のアミノ酸位置:351、356、357、364、366、368、394、399、405及び407の1つ以上が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。以下のアミノ酸位置:349、351、394、407及び439の1つ以上が、陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項11に記載のポリペプチド。以下のアミノ酸位置:357、364、366、368、及び409の1つ以上が、大きな側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。以下のアミノ酸位置:366、405及び407の1つ以上が、親水性側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置405が、陽荷電側鎖又は親水性側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置351が、陽荷電側鎖又は陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置357が、陽荷電側鎖又は大きな側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置364が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置366が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置368が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置394が、陽荷電側鎖又は陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置399が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置407が、陽荷電側鎖又は陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。アミノ酸位置409が、大きな側鎖を有するアミノ酸で置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。i陽荷電側鎖を有する前記アミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン及びリシンから選択され;ii陰荷電側鎖を有する前記アミノ酸が、アスパラギン酸及びグルタミン酸から選択され;iii親水性側鎖を有する前記アミノ酸が、グルタミン、アスパラギン、セリン及びトレオニンから選択され;及びiv大きな側鎖を有する前記アミノ酸が、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択される、請求項13~27のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、以下のアミノ酸置換:L351R、L351D、E357R、E357W、S364R、T366R、L368R、T394R、T394D、D399R、F405R、F405Q、Y407R、Y407D、K409W及びR409Wの1つ以上を含む、請求項9~13のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、二量体形成を阻害する少なくとも2つのアミノ酸置換を含む、請求項1~29のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、二量体形成を阻害する少なくとも3つのアミノ酸置換を含む、請求項1~30のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記アミノ酸置換が、以下:Y349D、L351D、L351R、S354D、E356R、D356R、S364R、S364W、T366Q、T366R、T366W、L368R、L368W、T394D、T394R、D399R、F405A、F405Q、Y407A、Y407Q、Y407R、K409R、及びK439Dからなる群から選択される、請求項30又は31に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、以下のアミノ酸置換のセット:Y349D/S354D、L351D/T394D、L351D/K409R、L351R/T394R、E356R/D399R、D356R/D399R、S364R/L368R、S364W/L368W、S364W/K409R、T366R/Y407R、T366W/L368W、L368R/K409R、T394D/K409R、D399R/K409R、D399R/K439D、F405A/Y407A、F405Q/Y407Q、及びT366Q/F405Q/Y407Qの1つ以上を含む、請求項9~13のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記ポリペプチドが、欠失したか又は突然変異したヒンジ領域を有する免疫グロブリン重鎖を含む、請求項1~33のいずれか1項に記載のポリペプチド。少なくとも12個のアミノ酸が、ヒンジ領域から欠失している、請求項34に記載のポリペプチド。前記突然変異が、少なくとも1つのシステイン残基での欠失又は置換である、請求項34に記載のポリペプチド。前記ポリペプチドが、非改変ヒンジ領域を有する免疫グロブリン重鎖を含む、請求項1~36のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記免疫グロブリン鎖が、完全にヒトである、請求項5~37のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記免疫グロブリン鎖が、ヒト化されている、請求項5~37のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記Fc領域が、ヒト免疫グロブリン重鎖に由来する、請求項1~39のいずれか1項に記載のポリペプチド。溶液中に存在する前記ポリペプチドの少なくとも70が、モノマーである、請求項1~40のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記ポリペプチドの少なくとも70が、invivo条件下でモノマーである、請求項1~41のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記モノマーポリペプチドの割合が、SEC-MALLS又はAUCによって決定される、請求項41又は42に記載のポリペプチド。請求項1~43のいずれか1項に記載のポリペプチドをコードする核酸分子。請求項44に記載の核酸分子で形質転換した宿主細胞。請求項1~43のいずれか1項に記載のポリペプチドを生産する方法であって、前記ポリペプチドの発現に好適な条件下で、請求項44に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、前記方法。請求項1~43のいずれか1項に記載のポリペプチドと、薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物。前記組成物中の少なくとも70のポリペプチドがモノマーである、請求項47に記載の医薬組成物。前記モノマーポリペプチドの割合が、SEC-MALLS又はAUCによって決定される、請求項48に記載の医薬組成物。医薬剤としての使用を目的とする、請求項48又は49に記載の医薬組成物。5.発明の概要本発明は、Fc領域の二量体形成を阻害する1つ以上のアミノ酸置換を有する変異型Fc領域を含むモノマーポリペプチドに関する。モノマーポリペプチドは、変異型Fc領域に融合した第2ポリペプチド、例えば、治療用タンパク質又は抗体の抗原結合領域をさらに含んでもよい。例示の実施形態において、モノマーポリペプチドは、変異型Fc領域を有する重鎖と軽鎖とを含むモノマー抗体である。本発明は、さらに、本発明のモノマーポリペプチドと担体とを含む製剤を提供する。一実施形態では、上記製剤は、薬学的に許容可能な担体を含む治療製剤である。本発明の製剤は、哺乳動物における疾患/病態を治療する、並びに/又は疾患/病態の1つ以上の症状を予防及び/若しくは軽減する上で有用となりうる。製剤は、こうした治療が必要な患者に投与することができ、ここで、製剤は、本発明の1つ以上のモノマーポリペプチドを含んでもよい。別の実施形態では、製剤は、他の治療薬と組み合わせて、モノマーポリペプチドを含んでもよい。本発明はまた、本発明のモノマーポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。本発明はさらに、本発明の核酸分子を含む発現ベクターと、本発明の核酸分子で形質転換された宿主細胞も提供する。本発明はさらに、本発明のモノマーポリペプチドを製造する方法であって、前記モノマーポリペプチドの発現に適した条件下で本発明の宿主細胞を培養することを含む、方法も提供する。6.図面の簡単な説明7.詳細な説明7.1概論本発明は、変異型Fc領域を含むモノマーポリペプチド及びそれらを使用する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の変異型Fc領域を含むモノマーポリペプチドは、モノマー抗体、モノマー抗体フラグメント又はモノマー融合タンパク質であってよい。本発明の変異型Fc領域を含むモノマーポリペプチドは、本明細書において、本発明のポリペプチドとも称される。抗体は、安定な二量体タンパク質である。免疫グロブリン重鎖同士は、ヒンジでは鎖間ジスルフィド結合によって、また、CH3ドメインでは非共有結合的相互作用によって連結されている。これは、ほとんどの条件下でほとんどのIgGサブタイプが安定な二量体抗体を形成するのに十分である。しかし、IgG4抗体は、鎖内及び鎖間ジスルフィド結合を形成して、アーム交換をもたらすことができるすなわち、重鎖は分離することができ、2つの異なる抗体からの重鎖が対合して、ヘテロ二量体分子を形成することができる。抗体は、治療用途についての主要な注目分野となっており、多数の抗体薬剤が承認されているか、あるいは、治療薬としての使用について承認を得る過程にある。治療用抗体に望まれる特徴は、治療しようとする具体的病態によって変わりうる。ある用途では、二価の完全長抗体又は二価の抗体フラグメントが最も有利であるが、別の用途では、モノマー抗体フラグメントが有利である。抗体は、抗原特異的結合部位を含む可変ドメインと、エフェクター機能に関与する定常ドメインとを有する。いくつかの適応では、抗原結合だけが求められるが、その場合、例えば、抗体の治療効果は、抗原と、ブロックしないと抗原と結合することができる1つ以上の特定の特異的分子との間の相互作用をブロックすることである。他の適応では、さらに別の効果、例えば、補体活性化を誘導する、Fc受容体に結合する、異化作用から保護する、免疫細胞をリクルートする能力などが求められることがある。こうした用途の場合、抗体分子の他の部分、例えば、定常Fc領域が有利になりうる。いくつかの適応では、二量体抗体は、抗体が、Fabフラグメントとして用いられるときアンタゴニストとして作用するにも関わらず、標的抗原に結合すると、望ましくないアゴニスト効果を呈示する可能性がある。場合によっては、この効果は、二価抗体の架橋結合に起因すると考えられるが、架橋結合によって標的二量体化が促進され、これによって、次には、特に標的が受容体である場合、活性化が起こりうる。可溶性抗原の場合には、二量体化は、望ましくない免疫複合体を形成しうる。いくつかの適応では、完全長抗体は大きすぎて、要求される標的身体区画を貫通することができないことがあるため、より小さな抗体フラグメント、例えば、モノマー抗体が必要となりうる。場合によっては、抗原との一価結合例えば、FcαRIの場合がアポトーシスシグナルを誘導しうる。候補タンパク質治療薬は、最適な薬物動力学的特性がなかったり、及び/又はエフェクター機能から利益を得ていたりする可能性がある。これらの問題に対処するために、抗体フラグメントのFc領域をタンパク質治療薬に融合してもよい。Fc領域の付加によって、ポリペプチドのエフェクター機能が増強されると共に、ポリペプチドの薬物動力学的特性例えば、半減期が改変される可能性がある。さらに、Fc領域への融合により、タンパク質治療薬の二量体の形成されるであろう。Fc領域の二量体化を回避することには、抗体について述べたように、タンパク質融合物の場合と同じ利点がある。治療薬としての用途のモノマーポリペプチドの作製を促進する、実質的に又は完全にモノマーである変異型Fcドメインを作製すれば、有利であろう。こうした変異型モノマーFcドメインは、モノマーFc融合タンパク質を製造する目的で、治療用タンパク質に融合させることができる。あるいは、こうした変異型モノマーFcドメインは、一価抗体の作製を可能にし、これによって、前述したように、二量体抗体に関連する望ましくない副作用を回避することができよう。本発明は、これらのユニークかつ有利な特徴を有するモノマー抗体の同定及び特性決定に基づくものである。これらのモノマーポリペプチドについては本明細書で詳しく説明する。7.2用語本発明について詳しく説明する前に、本発明は、特定の組成物又は製造ステップに限定されないことを理解すべきである。というのも、これらは変わりうるからである。本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられているように、単数形1つa、an及びそのtheは、文面が明らかに他の意味を示すのでない限り、複数の指示物を含むことは留意すべきである。別途記載のない限り、本明細書で用いられるすべての技術及び科学用語は、本発明が関連する分野の当業者によって共通に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、ConciseDictionaryofBiomedicineandMolecularBiology,Juo,Pei-Show,2nded.,2002,CRCPress;TheDictionaryofCellandMolecularBiology,3rded.,1999,AcademicPress;及びtheOxfordDictionaryOfBiochemistryAndMolecularBiology,Revised,2000,OxfordUniversityPressは、当業者に、本発明で用いられる用語の多くの一般的辞書を提供する。アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている3文字略号、又はIUPAC-IUBBiochemicalNomenclatureCommissionにより推奨される1文字略号のいずれかによって表記する。ヌクレオチドも同様に、一般に受け入れられている1文字符号によって表記する。抗体の可変ドメイン、相補性決定領域CDR及びフレームワーク領域FRにおけるアミノ酸の番号付けは、別途記載のない限り、Kabatetal.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.1991に記載されているKabat定義に従う。この番号付け体系を用いて、実際の直線状アミノ酸配列は、可変ドメインのFR又はCDRの縮小、又はこれらへの挿入に応じて、より少ない、又は追加のアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインは、H2の残基52の後に単一アミノ酸挿入Kabatに従い、残基52aと、重鎖FR残基82の後に挿入残基例えば、Kabatに従い、残基82a、82b、及び82cなどを含みうる。残基のKabat番号付けは、所与の抗体について、基準Kabat番号付け配列を有する抗体の配列の相同性領域でのアラインメントによって決定することができる。フレームワーク残基の最大アラインメントは、往々にして、Fv領域に用いるために、番号付け体系にスペーサー残基の挿入を必要とする。さらに、所与のKabat部位番号でのいくつかの個々の残基の同一性は、種間又は対立遺伝子多様性のために、抗体鎖同士の間で変動しうる。本明細書で用いるように、Fc領域という用語は、第1定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を指す。従って、Fc領域は、IgA、IgD及びIgGの最後の2つの定常領域と、IgE及びIgMの最後の3つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにこれらドメインに対する可変性ヒンジN-末端を指す。IgA及びIgMについては、Fc領域は、J鎖を含みうる。IgGについては、Fc領域は、免疫グロブリンドメインCガンマ2及びCガンマ3Cγ2及びCγ3、並びにCガンマ1Cγ1とCガンマ2Cγ2との間のヒンジを含む。Fc領域の境界は変動しうるが、ヒンジ領域を含むヒトIgG重鎖Fc領域は、一般に残基E216からそのカルボキシル末端までを含むことが定義されているここで、番号付けは、Kabatに記載されているEUインデックスに従う。本明細書で用いられるように、ヒンジ領域とは、IgG1のE216からP230にわたるFc領域の部分を指すここで、番号付けは、Kabatに記載されているEUインデックスに従う。他のIgGイソタイプのヒンジ領域は、以下の表1に示すのと同じ位置に、重鎖間ジスルフィド結合を形成する最初と最後のシステイン残基を配置することによって、IgG1配列とアラインメントすることができる。本発明で用いるように、抗体また、免疫グロブリンとしても知られると言う用語は、モノクローナル抗体完全長モノクローナル抗体など、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、一本鎖FvsscFv、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Fabフラグメント、Fab’2フラグメント、所望の生物活性を呈示する抗体フラグメント例えば、抗原結合部分、ジスルフィド結合FvsdsFv、及び抗イディオタイプ抗Id抗体例えば、本発明の抗体に対する抗Id抗体など、細胞内抗体、及びこれらのうちいずれかのエピトープ結合フラグメントを包含する。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性のフラグメント、すなわち少なくとも1つの抗原結合部位を含む分子を包含する。免疫グロブリン分子は、どのイソタイプ例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及びIgY、サブイソタイプ例えば、IgG1、IgG2、IgG4、IgA1及びgA2又はアロタイプ例えば、Gm、例えば、G1mf、z、a若しくはx、G2mn、G3mg、b、若しくはc、Am、Em、及びKm1、2若しくは3のものであってもよい。抗体は、任意の哺乳動物、例えば、限定するものではないが、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウスなど、又はその他の動物、例えば、鳥類例:ニワトリに由来するものでよい。本発明で用いるように、モノマータンパク質又はモノマーポリペプチドという用語は、完全に、又は実質的にモノマーである、例えば、少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、97、98、99又は100モノマーである変異型Fc領域を含むタンパク質又はポリペプチドを指す。本明細書で用いられるように、モノマー抗体又はモノクローナル抗体フラグメントという用語は、完全に、又は実質的にモノマーである、例えば、少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、97、98、99又は100モノマーである変異型Fc領域を含む抗体を指す。7.3モノマーポリペプチドいくつかの態様では、本発明は、Fc領域の二量体形成を阻害する1つ以上のアミノ酸改変例えば、置換、欠失又は挿入を有する変異型Fc領域を含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域を含む本発明のポリペプチドは、実質的にモノマーであり、例えば、本発明のポリペプチドの少なくとも70は、溶液中でモノマーである。例示の実施形態では、変異型Fc領域を含む本発明のポリペプチドは、実質的にモノマーであり、例えば、本発明のポリペプチドの少なくとも70は、濃度0.5mg/ml~10.0mg/mlの溶液中でモノマーである。別の例示の実施形態では、変異型Fc領域を含む本発明のポリペプチドは、実質的にモノマーであり、例えば、本発明のポリペプチドの少なくとも70は、濃度0.5mg/ml~1.0mg/mlの溶液中でモノマーである。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドの少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99又は100が、溶液中でモノマーである。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドの少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99又は100が、濃度0.5mg/ml~10.0mg/mlの溶液中でモノマーである。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドの少なくとも70が、invivo条件下でモノマーである。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドの少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99又は100が、invivo条件下でモノマーである。モノマーポリペプチドのパーセントは、当業者には公知の任意の好適な手段、例えば、多角度光散乱検出器SEC-MALLS及び分析用超遠心機AUCと組み合わせたサイズ交換クロマトグラフィーによって決定することができる。変異型Fc領域は、任意の好適な二量体親Fc領域に由来するものでよく、例えば、天然に存在するFc領域、多形性Fc領域配列、改変Fc領域例えば、1つ以上の配列改変の導入を有する、又はキメラFc領域、任意の種由来のFc領域、及び任意の抗体イソタイプのFc領域を含む。様々な実施形態では、変異型Fc領域は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、サル、ネコ、又はイヌ由来の親Fc領域から誘導したものでよい。例示の実施形態では、変異型Fc領域は、ヒト由来の親Fc領域から誘導したものである。様々な実施形態では、変異型Fc領域は、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA又はIgY抗体由来の親Fc領域から誘導したものでよい。例としての変異型Fc領域配列は、IgG免疫グロブリンの親Fc領域、例えば、IgG1、IgG2、IgG3又はIgG4免疫グロブリンのFc領域の配列から誘導したものである。具体的実施形態では、変異型Fc領域は、ヒトIgG1の変異型である。別の具体的実施形態では、変異型Fc領域は、ヒトIgG2の変異型である。別の具体的実施形態では、変異型Fc領域は、ヒトIgG3の変異型である。さらに別の具体的実施形態では、変異型Fc領域は、ヒトIgG4の変異型である。実施形態では、変異型Fc領域は、マウスIgGの変異型である。具体的実施形態では、変異型Fc領域は、マウスIgG1の変異型である。別の実施形態では、変異型Fc領域は、マウスIgG2a又はIgG2bの変異型である。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、Fcホモ二量体との間の界面を形成する残基に1つ以上のアミノ酸改変例えば、置換、欠失又は挿入を含む。例示の実施形態では、変異型Fc領域は、Fcホモ二量体の他方の鎖内でそれ自身と相互作用するアミノ酸自己相互作用残基の1つ以上の改変を含む。例えば、表6に示す自己相互作用残基を参照されたい。様々な実施形態では、変異型Fc領域は、CH3界面内、CH3界面付近に1つ以上のアミノ酸改変を含む。様々な実施形態では、変異型Fc領域は、ヒンジ領域内に1つ以上のアミノ酸改変を含む。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、CH3界面を含むが、これは、ヒトIgG1、IgG2、IgG3又はIgG4抗体由来のCH3界面のアミノ酸配列、又はマウスIgG2a若しくはIgG2b抗体由来のCH3界面のアミノ酸配列の全部又は一部から誘導されたCH3界面を含む。こうしたマウス及びヒト抗体由来のCH3界面の配列を以下の表2に示す。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域のCH3界面は、以下の表2に記載したIgGのいずれか1つの少なくとも16、17、18、19、20又は全21アミノ酸を含む配列から誘導したものである。アロタイプ変異がhIgG1の356位と、hIgG3の397位及び409位に示されている。各免疫グロブリンクラスのアミノ酸をアラインメントし、図6に示すようにKabatEU番号付けに従って番号付けした。この番号付けは、Kabatetal.,In:SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,USDepartmentofHealthandHumanServices,1991に記載されているヒトIgG1Kabat抗体のEUインデックス番号付けを指す。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、Fc領域のCH3界面内又はその近傍に1つ以上のアミノ酸置換を含む。CH3界面内又はその近傍における1つ以上のアミノ酸置換は、例えば、KabatEU番号付け体系に従う以下のアミノ酸:347、349、350、351、352、354、356、357、360、362、364、366、368、370、390、392、393、394、395、396、397、398、399、400、405、406、407、408、409、411及び439の1つ以上での置換であってよい。例示の実施形態では、変異型Fc領域は、KabatEU番号付け体系に従う以下のアミノ酸位置:349、351、354、356、357、364、366、368、370、392、394、399、405、407、409、及び439の1つ以上でのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、2つのFcポリペプチドの間のホモ二量体形成を低減又は排除する親Fc領域配列に関する1つ以上のアミノ酸置換例えば、忌避置換repellingsubstitutionsを含む。例示の実施形態では、こうした忌避置換は、自己相互作用アミノ酸残基で実施してよい。好適な忌避置換の例として、例えば、荷電側鎖、大きな側鎖又はバルキーなbulky側鎖、又は親水性側鎖を有するアミノ酸への置換がある。例えば、親Fc配列に陽荷電側鎖を有していないアミノ酸残基を、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換して、変異型Fc領域を形成することもできる。陽荷電側鎖を有するアミノ酸の例は、アルギニン、ヒスチジン及びリシンから選択することができる。例示の実施形態では、親Fc領域における以下のアミノ酸位置:351、356、357、364、366、368、394、399、405及び407の1つ以上を、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換することにより、変異型Fc領域を形成する。あるいは、親Fc配列に陰荷電側鎖を有していないアミノ酸残基を、陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換して、変異型Fc領域を形成することもできる。陰荷電側鎖を有するアミノ酸の例は、アスパラギン酸及びグルタミン酸から選択することができる。例示の実施形態では、親Fc領域における以下のアミノ酸位置:349、351、394、407、及び439の1つ以上を、陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換することにより、変異型Fc領域を形成している。これ以外にも、親Fc配列に親水性側鎖を有していないアミノ酸残基を、親水性側鎖を有するアミノ酸で置換して、変異型Fc領域を形成してもよい。親水性側鎖を有するアミノ酸の例は、グルタミン、アスパラギン、セリン及びトレオニンから選択することができる。例示の実施形態では、親Fc領域における366位、405位及び407位のアミノ酸を、親水性側鎖を有するアミノ酸で置換することにより、変異型Fc領域を形成している。あるいはまた、親Fc配列に大きな側鎖又はバルキーな側鎖を有していないアミノ酸残基を、大きな側鎖又はバルキーな側鎖を有するアミノ酸で置換して、変異型Fc領域を形成してもよい。大きな側鎖を有するアミノ酸の例は、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンから選択することができる。例示の実施形態では、親Fc領域における以下のアミノ酸位置:357、364、366、368、及び409の1つ以上を、大きな側鎖を有するアミノ酸で置換することにより、変異型Fc領域を形成する。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、親Fc領域に関して以下のアミノ酸置換の1つ以上を含む:i405位のアミノ酸が、陽荷電側鎖又は親水性側鎖を有するアミノ酸で置換されている、ii351位のアミノ酸が、陽荷電側鎖又は陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、iii357位のアミノ酸が、陽荷電側鎖又は大きな側鎖を有するアミノ酸で置換されている、iv364位のアミノ酸が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、v366位のアミノ酸が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、vi368位のアミノ酸が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、vii394位のアミノ酸が、陽荷電側鎖又は陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、viii399位のアミノ酸が、陽荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、ix407位のアミノ酸が、陽荷電側鎖又は陰荷電側鎖を有するアミノ酸で置換されている、x409位のアミノ酸が、大きな側鎖を有するアミノ酸で置換されている。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、親Fc領域に対する以下のアミノ酸置換の1つ以上を含む:L351R、L351D、E357R、E357W、S364R、T366R、L368R、T394R、T394D、D399R、F405R、F405Q、Y407R、Y407D、K409W及びR409W。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、以下のものからなる群から選択されるアミノ酸置換の1つ以上を含む:Y349D、L351D、L351R、S354D、E356R、D356R、S364R、S364W、T366Q、T366R、T366W、L368R、L368W、T394D、T394R、D399R、F405A、F405Q、Y407A、Y407Q、Y407R、K409R、及びK439D。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、二量体形成を阻害する少なくとも2つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、二量体形成を阻害する少なくとも3つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、二量体形成を阻害する少なくとも4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20又は21のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、変異型Fc領域は、親Fc領域に対する1~21、1~15、1~10、1~5、1~3、1~2、2~21、2~15、2~10、2~5、2~3、3~21、3~15、3~10、3~5、3~4、5~15、5~10、5~8、5~6、10~21、10~21、10~15、10~12、12~15、又は15~20のアミノ酸置換を含み、こうして得られる変異型Fc領域は、親Fc領域配列と比較して二量体形成が低減又は排除されている。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、以下のアミノ酸置換のセットの1つ以上を含む:Y349D/S354D、L351D/T394D、L351D/K409R、L351R/T394R、E356R/D399R、D356R/D399R、S364R/L368R、S364W/L368W、S364W/K409R、T366R/Y407R、T366W/L368W、L368R/K409R、T394D/K409R、D399R/K409R、D399R/K439D、F405A/Y407A、F405Q/Y407Q、L351R/S364R/T394R、及びT366Q/F405Q/Y407Q。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、アミノ酸置換の任意の組合せを含む。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、ヒンジ領域を含まないか、又は1つ以上の突然変異アミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入などを有するヒンジ領域を含む。例えば、ヒンジ領域の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、又はそれ以上のアミノ酸が置換されているか、若しくは欠失していてもよいし、又はヒンジ領域の1~15、1~12、1~10、1~5、1~3、2~15、2~12、2~10、2~5、5~12、5~10、又は5~8アミノ酸が置換されているか、若しくは欠失していてもよい。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域における少なくとも1つのシステイン残基が、欠失しているか、又は別のアミノ酸、例えば、アラニン、セリン若しくはグルタミンで置換されている。実施形態の一例では、ヒンジ領域のアミノ酸の全部が欠失している。別の実施形態では、変異型Fc領域は、非改変ヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、二量体化が低減又は排除された変異型Fc領域に、別の望ましい機能又は特性を付与する追加的改変を含んでもよい。例えば、本明細書に記載する変異型Fc領域は、他の公知のFc変異体、例えば、以下の文献に開示されているものと組み合わせてもよい:Ghetieetal.,1997,NatBiotech.15:637-40;Duncanetal,1988,Nature332:563-564;Lundetal.,1991,J.Immunol147:2657-2662;Lundetal,1992,MolImmunol29:53-59;Alegreetal,1994,Transplantation57:1537-1543;Hutchinsetal.,1995,ProcNatl.AcadSciUSA92:11980-11984;Jefferisetal,1995,ImmunolLett.44:111-117;Lundetal.,1995,FasebJ9:115-119;Jefferisetal,1996,ImmunolLett54:101-104;Lundetal,1996,JImmunol157:4963-4969;Armouretal.,1999,EurJImmunol29:2613-2624;Idusogieetal,2000,JImmunol164:4178-4184;Reddyetal,2000,JImmunol164:1925-1933;Xuetal.,2000,CellImmunol200:16-26;Idusogieetal,2001,JImmunol166:2571-2575;Shieldsetal.,2001,JBiolChem276:6591-6604;Jefferisetal,2002,ImmunolLett82:57-65;Prestaetal.,2002,BiochemSocTrans30:487-490;米国特許第5,624,821号明細書;同第5,885,573号明細書;同第5,677,425号明細書;同第6,165,745号明細書;同第6,277,375号明細書;同第5,869,046号明細書;同第6,121,022号明細書;同第5,624,821号明細書;同第5,648,260号明細書;同第6,528,624号明細書;同第6,194,551号明細書;同第6,737,056号明細書;同第7,083,784号明細書;同第7,122,637号明細書;同第7,183,387号明細書;同第7,217,797号明細書;同第7,276,585号明細書;同第7,332,581号明細書;同第7,355,008号明細書;同第7,335,742号明細書;同第7,371,826号明細書;同第6,821,505号明細書;同第6,180,377号明細書;同第7,317,091号明細書;同第7,355,008号明細書;米国特許出願公開第2002/0147311号明細書;同第2004/0002587号明細書;同第2005/0215768号明細書;同第2006/0173170号明細書;同第2006/024298号明細書;同第2006/235208号明細書;同第2007/0135620号明細書;同第2007/0224188号明細書;同第2008/0089892号明細書;並びにPCT公開番号:国際公開第94/29351号パンフレット;及び国際公開第99/58572号パンフレット。Fc受容体FcRは、概して、完全長抗体においてFc領域の両方のコピーに結合することから、本明細書に記載する変異型Fc領域は、一般に、抗体依存性細胞傷害作用ADCCの機能を保持しないようである。このFcR結合の欠如は、Fc受容体刺激が望ましくない場合には、抗体又はFc融合タンパク質には有用となりうる。しかし、IgA抗体由来の変異型Fc領域は、受容体がFc単鎖例えば、Fcモノマー内のCα2/Cα3界面に結合するため、やはりそのFcαRに結合する可能性がある。さらに、新生児型Fc受容体FcRnは1つのFcモノマーにのみ結合するが、これは、本発明の変異型Fc領域が、FcRn結合を十分に保持しうることを示している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、1つ以上のFcRに結合せず、従って、抗体依存性細胞傷害作用ADCC、補体依存性細胞傷害作用CDC、及び/又は抗体依存性細胞性食作用ADCP活性を有していない。別の実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、FcαR結合、FcRn結合、抗体依存性細胞傷害作用ADCC、又は抗体依存性細胞性食作用ADCPの低減又は増大をもたらす追加的修飾を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、FcRnの変異型Fc領域の結合親和性を増大する追加的修飾を含み、これによって、変異型Fc領域を含むポリペプチドの血清半減期が増加する。例えば、半減期が増加した本発明のモノマーポリペプチドは、FcとFcRn受容体同士の相互作用に関与するものとして識別されるアミノ酸残基を修飾することにより、作製することができる例えば、米国特許第6,821,505号明細書及び同第7,083,784号明細書;並びに国際公開第09/058492号パンフレットを参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、M252Y、S254T、T256E、P257N、P257L、M428L、N434S、及びN434Yからなる群から選択される1つ以上のアミノ酸置換をさらに含む。別の実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、以下のアミノ酸置換のセット:M252Y/S254T/T256E、P257L/M434Y、P257N/M434Y、及びM428L/N434Sの1つ以上をさらに含む。具体的実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、アミノ酸置換M252Y/S254T/T256Eをさらに含む。本明細書で用いるポリペプチド半減期という用語は、ポリペプチドの薬物動力学的特性を意味し、投与からのポリペプチド分子の平均存続時間の測度である。ポリペプチド半減期は、患者の身体若しくは他の哺乳動物又は特定のその区画からのタンパク質の既知量の50を排除するのに必要な時間として表すことができ、例えば、血清すなわち循環半減期、又は他の組織において測定されている。半減期は、1つのポリペプチド又はポリペプチドのクラスによって変動しうる。一般に、ポリペプチドの半減期が増加すると、投与したポリペプチドの、循環における平均滞留時間MRTが増加する。半減期の増加は、患者に投与される薬物量の減少、さらには、投与頻度の減少も可能にする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、FcαR及び/又はFcRnに対する親和性の増大又は低減を呈示し、これは、親Fc領域と比較して、少なくとも2倍、又は少なくとも3倍、又は少なくとも5倍、又は少なくとも7倍、又は少なくとも10倍、又は少なくとも20倍、又は少なくとも30倍、又は少なくとも40倍、又は少なくとも50倍、又は少なくとも60倍、又は少なくとも70倍、又は少なくとも80倍、又は少なくとも90倍、又は少なくとも100倍、又は少なくとも200倍、又は2倍~10倍、又は5倍~50倍、又は25倍~100倍、又は75倍~200倍、又は100倍~200倍多いか、又は少ない。別の実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域は、親Fc領域と比較して、少なくとも90、少なくとも80、少なくとも70、少なくとも60、少なくとも50、少なくとも40、少なくとも30、少なくとも20、少なくとも10、又は少なくとも5多いか、又は少ない、FcαR及び/又はFcRnに対する親和性を呈示する。いくつかの実施形態では、本発明の変異型Fc領域は、FcαR及び/又はFcRnに対する親和性が増大している。別の実施形態では、本発明の変異型Fc領域は、FcαR及び/又はFcRnに対する親和性が低減している。いくつかの実施形態では、本発明の変異型Fc領域の配列は、親Fc領域との実質的なアミノ酸置換配列同一性を有する。例えば、本発明の変異型Fc領域のアミノ酸配列は、親Fc領域のアミノ酸配列と少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、又は99の同一性を有しうる。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、タンパク質化学の分野で公知であり、本明細書でさらに詳しく説明するタンパク質の単離/精製方法によって精製することができる。精製モノマーポリペプチドは、好ましくは少なくとも85、さらに好ましくは少なくとも95、また最も好ましくは少なくとも98の純度を有する。純度の正確な数値とは無関係に、ポリペプチドは、医薬品としての使用目的で十分純粋である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する変異型Fc領域を含むポリペプチドは、グリコシル化されていてもよいし、アグリコシルであってもよい。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域を含むポリペプチドの部分がグリコシル化されているか、又はアグリコシルである。変異型Fc領域は、ネイティブグリコシル化パターン又は改変グリコシル化パターンを含んでもよい。改変グリコシル化パターンは、例えば、Fc領域配列内のグリコシル化の1つ以上の部位を改変することにより、達成することができる。例えば、1つ以上のグリコシル化部位の排除をもたらす1つ以上のアミノ酸置換を実施することによって、その部位例えば、IgGのアスパラギン297でのグリコシル化を排除することができる。変異型Fc領域を含むこうしたアグリコシル化ポリペプチドは、必要なグリコシル化装置が欠失した細菌細胞において生産することができる。Fc領域のオリゴ糖にシアル酸を添加することにより、抗炎症活性を増大すると共に、こうした分子の細胞傷害作用を改変することができるKenekoetal.,Science,2006,313:670-673;Scallonetal.,Mol.Immuno.2007Mar;447:1524-34。従って、変異型Fc領域を含むポリペプチドは、特定の治療用途のための適切なシアリル化プロフィールで修飾することができる米国特許出願公開第2009/0004179号明細書及び国際公開第2007/005786号パンフレット。一実施形態では、本明細書に記載の変異型Fc領域は、ネイティブFc領域と比較して改変されたシアリル化プロフィールを含む。一実施形態では、本明細書に記載の変異型Fc領域は、ネイティブFc領域と比較して増加したシアリル化プロフィールを含む。別の実施形態では、本明細書に記載の変異型Fc領域は、ネイティブFc領域と比較して減少したシアリル化プロフィールを含む。7.3.1Fc融合タンパク質いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、Fc融合タンパク質、例えば、1つ以上の異種タンパク質部分に結合した、本明細書に記載の変異型Fc領域を含むポリペプチドである。Fc融合タンパク質を形成するために、任意の所望する異種ポリペプチドを変異型Fc領域に融合して、Fc融合タンパク質を形成することができ、このような異種ポリペプチドとして、例えば、治療用タンパク質、Fc領域が欠失した抗体フラグメント及びタンパク質スカフォールドなどが含まれる。例示の実施形態では、ポリペプチドのサイズ、可溶性、発現率、及び/又は血清半減期を増加させる上で望ましい異種ポリペプチドにFc領域を融合させる。いくつかの実施形態では、Fc領域は、異種ポリペプチドの精製及び/又は検出のためのタグとして異種ポリペプチドに融合させる。例示の実施形態では、本発明のFc融合タンパク質は実質的にモノマーであり、例えば、Fc融合タンパク質の少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、97、98、99又は100が、溶液中でモノマーである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異型Fc領域は、1つ以上の異種ポリペプチドに融合させてもよいし、あるいはN及び/又はC末端でこれらポリペプチドと連結させてもよい。変異型Fc領域は、当該技術分野で公知の任意の好適な手段、例えば、化学結合、化学架橋、又は遺伝子融合によって、直接、又は化学又はアミノ酸リンカーを介して、異種ポリペプチドに連結してもよい。好ましくは、変異型Fc領域は、Fcドメイン及び異種ポリペプチド部分が適正にフォールドされ、異種ポリペプチド部分が、生物活性を保持するように、異種ポリペプチド配列に連結する。本発明のFc融合物は、治療効果を得るために一価性が所望される場合に用いることができる。例えば、本発明のFc融合物は、Fc融合物の二価性が受容体の二量体形成を誘導し、それによってシグナル伝達経路に不要なモジュレーションが起こることが懸念される場合に、用いることができる。本発明のFc融合物はまた、治療用Fc融合物が、免疫系媒介による活性、例えば、エフェクター機能、ADCC、食作用及びCDCを誘導することなく、治療作用を発揮することが好ましい場合にも望ましい。本発明のFc融合物は、疾患の診断及び治療に関わる多くのinvitro及びinvivo診断及び治療有用性を有する。本発明によれば、本明細書に記載の一価ポリペプチドは、どんな異種タンパク質部分でも組み込むことができるため、本発明は、特定の異種タンパク質部分を組み込むFc融合タンパク質に関するものではない。本発明のFc融合タンパク質の具体的有用性は、具体的異種タンパク質部分に応じて異なる。異種タンパク質の選択は、異種タンパク質の一価形態を投与する治療価値及び/又は利点に基づいて行ってよい。このような考慮は、当業者の技能で十分可能である。本発明のFc融合タンパク質は、ある分子の活性を部分的又は完全にブロックするためのアンタゴニスト及び/又はインヒビターとして用いることもできる。具体的実施形態では、本発明のFc融合タンパク質は、受容体に結合して、ネイティブリガンドと受容体との結合をブロック又は妨害することにより、対応するシグナル伝達経路を阻害しうるリガンドの受容体結合部分を含む。別の実施形態では、本発明のFc融合タンパク質は、ネイティブリガンドに結合して、リガンドがネイティブ受容体と結合するのを阻止し、これによって、対応するシグナル伝達経路を阻害しうる受容体のリガンド結合ドメインを含む。また別の実施形態では、本発明の一価ポリペプチドは、より長い半減期が所望される、治療効果を有する異種分子を含む。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、1つ以上の異種ポリペプチドの精製を促進するためのタグとして用いてもよい。本発明のFc融合タンパク質は、Fcドメインを含むポリペプチドを単離するための当該技術分野で公知の任意の好適な方法、例えば、クロマトグラフ技法例えば、イオン交換、サイズ排除、疎水性相互作用クロマトグラフィー、並びにプロテインA及び/又はプロテインG、及び/又は抗Fc抗体、又はこれらの組合せの使用を用いて、精製することができる。一般に、培地又は細胞溶解物からのFcタグ付きタンパク質の精製は、樹脂例えば、アガロース又はセファロースビーズに結合させたプロテインA又はプロテインGを用いることを含む。精製は、例えば、Fcタグ付きタンパク質を含む溶液中でプロテインA又はプロテインG樹脂をインキュベートした後、遠心分離ステップによって可溶性画分から樹脂を分離することにより、又はFcタグ付きタンパク質の溶液を、プロテインA又はプロテインG樹脂を含むカラムに通過させることにより、バッチ形態で実施することができる。プロテインA又はプロテインGからのFcタグ付きタンパク質の溶離は、任意の好適な方法、例えば、様々な等張性及び/又はpHのバッファー中でfc結合樹脂をインキュベートすることによって実施してよい。Fcタグ付きポリペプチドは、様々な技法、例えば、イオン交換、サイズ排除、疎水性相互作用クロマトグラフィー、又はこれらの組合せなどを用いて、さらに精製してもよい。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域は、1つ以上の異種ポリペプチドの検出を容易にするためのタグとして用いてもよい。本発明のFc融合タンパク質は、Fcドメインを含むポリペプチドを識別するために当該技術分野で知られる任意の好適な方法、例えば、プロテインA、プロテインG、及び/又は抗Fc抗体のような標識Fc結合タンパク質の使用によって、検出することができる。こうしたFc結合タンパク質は、任意の好適な検出試薬に結合させてもよく、このような試薬として、例えば、発色団、発蛍光団、蛍光部分、りん光色素、タンデム色素、ハプテン、ビオチン、酵素コンジュゲート、及び/又は放射性同位元素が含まれる例えば、米国特許出願公開第2009/0124511号明細書を参照、尚、その教示内容は、参照として本明細書に組み込むものとする。1つ以上の標識Fc結合タンパク質と一緒にインキュベートした後、本発明の変異型Fc領域でタグ付けしたタンパク質を、当該技術分野で公知の1つ以上の免疫検出技法を用いて、識別することができ、このような技法として、例えば、免疫蛍光顕微鏡検査法、フローサイトメトリー、免疫沈降、ウエスタンブロッティング、ELISA、及び/又はオートラジオグラムがある。いくつかの態様では、本発明のFcタグ付きタンパク質の精製を容易にするために、上記の標識Fc結合タンパク質を用いてもよい。例えば、Fcタグ付きタンパク質を1つ以上の蛍光標識抗Fc抗体に結合させた後、当該技術分野では公知の様々な蛍光活性化細胞自動分離法を用いて分離することができる。異種タンパク質のカテゴリー例として、限定するものではないが、酵素、増殖因子例えば、トランスフォーミング増殖因子、例:TGF-α、TGF-β、TGF-β2、TGF-β3、治療用タンパク質例えば、エリトロポエチンEPO、インターフェロン例えば、IFN-γ、又は腫瘍壊死因子例えば、TNF-α、サイトカイン、膜貫通受容体の細胞外ドメイン、受容体リガンド、完全Fc領域を欠失した抗体フラグメント例えば、抗体の抗原結合フラグメント、又は非免疫グロブリン標的結合スカフォールドがある。いくつかの実施形態では、異種タンパク質は、抗体の抗原結合部分である。抗体の抗原結合部分は、ある抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の1つ以上のフラグメントを含む。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって実施することができることが分かっている。抗体の抗原結合部分という用語に含まれる結合フラグメントの例としては、以下のものがある:iFabフラグメント、すなわち、VL、VH、CL及びCH1ドメインからなる一価フラグメント;iiFab’2フラグメント、すなわち、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント;iiiVH及びCH1ドメインからなるFdフラグメント;iv抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFvフラグメント;vVHドメインからなるドメイン抗体dAbフラグメントWardetal.,1989Nature341:544-546;vi単離された相補性決定領域CDR;vii合成リンカーによって連結されたFvフラグメントの2つのドメインVL及びVHからなる単鎖FvscFvであって、上記リンカーにより、両ドメインを単鎖タンパク質として形成することができ、この単鎖において、VL及びVH領域が対合することによって一価分子を形成する例えば、Birdetal.1988Science242:423-426;及びHustonetal.1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883を参照;viiiワクシボディ米国特許出願公開第2004/0253238号明細書を参照;及びix一対のタンデムFdセグメントVH-CH1-VH-CH1からなる二重特異性又は単一特異性直線状抗体であって、これらのセグメントは、一対の抗原結合領域を形成するZapataetal.,ProteinEng.,810:1057-10621995及び米国特許第5,641,870号明細書参照。抗体フラグメントは、当業者には公知の従来の技法を用いて取得することができ、また、これらのフラグメントは、インタクトな抗体と同様に、有用性のためにスクリーニングしてもよい。伝統的には、抗体フラグメントは、当該技術分野で公知の方法を用いて、インタクトな抗体のタンパク質分解消化によって得られてきた。しかし、今日では、抗体フラグメントを組換え宿主細胞により直接生産することができる。Fab、Fv及びscFv抗体フラグメントはすべて、大腸菌E.coliにおいて発現させ、これから分泌させることができ、このようにして、多量のフラグメントを容易に生産することが可能になった。一実施形態では、抗体フラグメントは、以下に記載する抗体ファージライブラリーから単離することができる。これ以外に、Fab’-SHフラグメントも大腸菌E.coliから直接回収して、化学的に結合させることにより、Fab’2フラグメントを形成することができるCarteretal.,Bio/Technology,10:163-1671992。別の手法によれば、Fab’2フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。また、当該技術分野で公知の方法、例えば、PCT国際公開第92/22324号パンフレット;Mullinaxetal.,BioTechniques126:864-8691992;及びBetteretal.,Science240:1041-10431988に開示されているものなどを用いて、組換えによってFab、Fab’及びFab’2フラグメントを生産する技術を使用することもできる。単鎖Fv及び抗体を生産するのに用いることができる技術の例としては、米国特許第4,946,778号明細書及び同第5,258,498号明細書に記載されているものがある。ドメイン抗体の例としては、限定するものではないが、Domantisから入手可能なものがあり、これらは、治療標的に特異的である例えば、国際公開第04/058821号パンフレット;国際公開第04/081026号パンフレット;国際公開第04/003019号パンフレット;国際公開第03/002609号パンフレット;米国特許第6,291,158号明細書;同第6,582,915号明細書;同第6,696,245号明細書;及び同第6,593,081号明細書を参照。市販されているドメイン抗体のライブラリーを用いて、モノクローナルドメイン抗体を識別定することができる。いくつかの実施形態では、本発明のFc融合タンパク質は、非免疫グロブリン標的結合スカフォールドである異種ポリペプチドに結合した変異型Fc領域を含む。非免疫グロブリン標的結合スカフォールドは、概して突然変異アミノ酸配列を含有させることにより、標準タンパク質から得られる。非免疫グロブリン標的結合スカフォールドは、例えば、以下のものに由来するものでよい:抗体サブストラクチャー、ミニボディ、アドネクチン、アンチカリン、アフィボディ、ノッティン、グルボディ、C型レクチン様ドメインタンパク質、テトラネクチン、クニッツドメインタンパク質、チオレドキシン、サイトクロームb562、ジンクフィンガースカフォールド、ブドウ球菌ヌクレアーゼスカフォールド、フィブロネクチン又はフィブロネクチン二量体、テネイシン、N-カドヘリン、E-カドヘリン、ICAM、タイチン、GCSF-受容体、サイトカイン受容体、グリコシダーゼインヒビター、抗体色素タンパク質、ミエリン膜付着分子P0、CD8、CD4、CD2、クラスIMHC、T細胞抗原受容体、CD1、C2及びVCAM-1のI-セットドメイン、ミオシン結合プロテインCの1-セット免疫グロブリンドメイン、ミオシン結合プロテインHの1-セット免疫グロブリンドメイン、テロキンのI-セット免疫グロブリンドメイン、NCAM、ツイッチンtwitchin、ニューログリアン、成長ホルモン受容体、エリトロポエチン受容体、プロラクチン受容体、インターフェロンγ受容体、β-ガラクトシダーゼ/グルコロニダーゼ、β-グルクロニダーゼ、トランスグルタミナーゼ、T細胞抗原受容体、スーパーオキシドジムスターゼ、組織因子ドメイン、シトクロムF、緑色蛍光タンパク質、GroEL、又はタウマチン。その他の好適なタンパク質スカフォールドは、Wurchetal.2008CurrentPharmaceuticalBiotechnology,9:502本明細書に参照として組み込むに記載されている。Fc融合タンパク質は、任意の好適な立体配置で構築することができる。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域のC末端を異種タンパク質のN末端に連結することができる。あるいは、異種タンパク質のC末端を変異型Fc領域のN末端に連結してもよい。いくつかの実施形態では、異種タンパク質を変異型Fc領域の露出した内部非末端残基に連結するか、又は変異型Fc領域を異種タンパク質の露出した内部非末端残基に連結することができる。別の実施形態では、任意の組合せの変異型Fc-異種タンパク質立体配置を用いることによって、変異型Fc:異種タンパク質の比が1:1より大きくなる例えば、1異種タンパク質に対し2変異型Fc分子ようにすることもできる。変異型Fc領域と異種タンパク質は、互いに直接結合してもよいし、リンカー配列を用いて、間接的に結合してもよい。例示の実施形態では、リンカー配列は、それぞれの部分がその適正な二次及び三次構造に適正にフォールドすることを確実にするのに十分な距離だけ変異型Fc領域と異種タンパク質を隔てる。好適なリンカー配列は、以下に挙げる特性の1つ以上を有しうる:1可変の延長コンホメーションを採用することができる、2変異型Fcポリペプチド又は異種タンパク質の機能性ドメインと相互作用しうる定序二次構造を形成する傾向を呈示しない、及び/又は3機能性タンパク質ドメインとの相互作用を促進しうる、最小限の疎水性又は荷電性を有する。可変タンパク質領域における典型的表面アミノ酸としては、Gly、Asn及びSerがある。Gly、Asn及びSerを含むアミノ酸配列の順列は、リンカー配列の上記基準を満たすことが求められる。その他のほぼ中性のアミノ酸、例えば、Thr及びAlaもリンカー配列に用いることができる。具体的実施形態では、長さが約15アミノ酸のリンカー配列を用いて、機能性タンパク質ドメイン同士を好適に隔てることができるが、これより長い、又は短いリンカー配列を用いてもよい。変異型Fc領域と異種タンパク質を隔てるリンカー配列の長さは、長さ5~500アミノ酸でよく、より好ましくは長さ5~100アミノ酸である。好ましくは、リンカー配列は、長さ約5~30アミノ酸である。好ましい実施形態では、リンカー配列は、約5~約20アミノ酸、又は約10~約20アミノ酸である。いくつかの実施形態では、開裂性リンカーを介して、変異型Fc領域を1つ以上の異種ポリペプチドと融合してもよい。様々な開裂性リンカーが当業者には周知である例えば、米国特許第4,618,492号明細書;同第4,542,225号明細書;同第4,625,014号明細書;同第5,141,648号明細書;及び同第4,671,958号明細書を参照;尚、これら文献の教示内容は参照として本明細書に組み込むものとする。これらのリンカー基からの物質の遊離のため作用機構としては、例えば、感光性結合の照射、酸触媒加水分解、及びタンパク質分解酵素による切断などがある。例示の実施形態では、異種ポリペプチドの精製及び/又は検出を容易にするためのタグとして用いられる本発明の変異型Fc領域を異種ポリペプチドから除去した後、開裂性リンカーの化学的又は酵素的切断により精製及び/又は検出を実施する。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域と異種ポリペプチドとを含む本発明のFc融合タンパク質は、公知の架橋試薬及びプロトコルを用いて、作製することができる。例えば、変異型Fc領域と異種タンパク質を架橋するのに、当業者には公知で、しかも有用な多数の化学架橋試薬がある。例えば、好適な架橋剤は、ヘテロ二機能性クロスリンカーであり、これを用いて、段階的に分子同士を連結することができる。ヘテロ二機能性クロスリンカーは、タンパク質を結合するためのより特異的結合方法を設計する能力を提供し、これによって、ホモタンパク質ポリマーのような不要な副反応物の発生を抑制する。当該技術分野では、非常に多様なヘテロ二機能性クロスリンカーが知られており、例えば、以下のものがある:スクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートSMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステルMBS;N-スクシンイミジル4-ヨードアセチルアミノベンゾエートSIAB、スクシンイミジル4-p-マレイミドフェニルブチレートSMPB、1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩EDC;4-スクシンイミジルオキシカルボニル-a-メチル-a-2-ピリジルジチオ-トルンSMPT、N-スクシンイミジル3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDP、スクシンイミジル6-[3-2-ピリジルジチオプロピオネート]ヘキサノエートLC-SPDP。N-ヒドロキシスクシンイミド部分を有する架橋剤は、N-ヒドロキシスルホスクシンイミド類似体として得ることができ、これは、一般に、より高い水溶性を有する。さらに、結合鎖内にジスルフィド架橋を有する架橋剤は、アルキル誘導体として合成して、invivoでのリンカー切断の量を減らすようにすることもできる。その他の好適な架橋剤として、ホモ二機能性及び光反応性クロスリンカーがある。ジスクシンイミジルスベレートDSS、ビスマレイミドヘキサンBMH及びジメチルピメルイミデート.2HClDMPは、有用なホモ二機能性架橋剤の例であり、ビス-[B-4-アジドサリシルアミドエチル]ジスルフィドBASED及びN-スクシンイミジル-64’-アジド-2’-ニトロフェニルアミノヘキサノエートSANPAHは、有用な光反応性クロスリンカーの例である。近年のタンパク質結合技術の概観については、Meansetal.1990BioconjugateChemistry.1:2-12参照として本明細書に組み込むを参照されたい。いくつかの実施形態では、本発明のFc融合タンパク質は、標準的タンパク質化学技術、例えば、Bodansky,M.PrinciplesofPeptideSynthesis,SpringerVerlag,Berlin1993及びGrantG.A.ed.,SyntheticPeptides:AUser’sGuide,W.H.Freeman及びCompany,NewYork1992に記載されているものを用いて、製造することができる。本明細書に記載のFc融合タンパク質の製造に好適な自動ペプチド合成装置は市販されている例えば、AdvancedChemTechModel396;Milligen/Biosearch9600。変異型Fc領域と異種ポリペプチドの化学的結合のための前述した架橋方法のいずれにおいても、開裂性ドメイン又は開裂性リンカーを用いることができる。切断によって、異種ポリペプチドと変異型Fc領域を分離することが可能になる。例えば、Fc融合タンパク質が細胞を貫通した後、開裂性リンカーの切断によって、変異型Fc領域を異種ポリペプチドから分離することができる。いくつかの実施形態では、本発明のFc融合タンパク質は、1つの連続したポリペプチド鎖として発現される、変異型Fc領域と異種ポリペプチドを含む組換え融合タンパク質として作製することができる。このような融合タンパク質は、本明細書において、組換えにより結合されたものと呼ぶ。こうした融合タンパク質を調製する際には、変異型Fc領域及び異種ポリペプチドをコードする核酸と、任意で、変異型Fc領域と異種ポリペプチドを連結するためのペプチドリンカー配列とを含む融合遺伝子を構築する。融合遺伝子翻訳産物が所望の融合タンパク質であるを作製するための組換えDNA技術の使用は、当該技術分野では公知である。融合タンパク質を作製するための方法の例が、PCT出願、PCT/米国特許第87/02968号明細書、PCT/米国特許第89/03587号明細書及びPCT/米国特許第90/07335号明細書、並びにTrauneckeretal.1989Nature339:68に記載されており、参照として本明細書に組み込まれる。主として、異なるポリペプチド配列をコードする様々なDNA断片の連結は、従来の技術に従い、連結のための平滑末端又はスタッガー末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じた付着末端の充填、不要な連結を防ぐためのアルカリ性ホスファターゼ処理、及び酵素的連結を用いて実施する。あるいは、自動DNA合成装置などの従来の技術により融合遺伝子を合成することもできる。別の方法では、2つの連続した遺伝子断片の間に相補的突出部を発生させるアンカープライマーを用いて、遺伝子断片のPCR増幅を実施することも可能であり、これらを後にアニーリングして、キメラ遺伝子配列を作製することができる例えば、CurrentProtocolsinMolecularBiology,Eds.Ausubeletal.JohnWileySons:1992を参照。融合遺伝子によってコードされるFc融合タンパク質は、当該技術分野では公知の様々な発現系を用いて、組換えにより作製してもよい以下も参照のこと。7.3.2モノマー抗体いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、モノマー抗体、例えば変異型Fc領域を含む抗体又は抗体フラグメントであり、ここで抗体又は抗体フラグメントは、実質的にモノマーであり、免疫特異的に標的に結合する。一例示の実施形態では、モノマー抗体は、本明細書に記載の変異型Fc領域を有する重鎖と、軽鎖とを含み、抗体は実質的にモノマーである。モノマー抗体は、任意のタイプの抗体のモノマー形態であってもよく、例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体、非ヒト抗体、ヒト化抗体、又は完全なヒト抗体、又は変異型Fc領域を含む上記いずれかのフラグメントのモノマー形態を含む。変異型Fc領域を含むモノマー抗体又はそのフラグメントは、任意の供給源、例えば、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス、ニワトリなどに由来するものであってもよく、任意のイソタイプのものでもよい。本明細書に記載の変異型Fc領域を含むモノマー抗体は、任意の好適な手段によって作製することができる。例えば、抗体又は抗体フラグメントのFc領域の配列は、本明細書に記載のFc領域配列変異型を導入するように修飾してもよく、これによって、Fc領域のモノマー形態を増加させる。あるいは、抗体又はフラグメントの親Fc領域の全部又は実質的部分を本明細書に記載の変異型Fc領域の配列で置換してもよい。抗体の親Fc領域を置換して、変異型Fc領域を導入する場合には、置換Fc領域は、同じ種及び/若しくはイソタイプの抗体、又は異なる種及び/若しくはイソタイプの抗体に由来するものでよく、これによってキメラ抗体を形成する。例えば、ヒトIgG4抗体の親Fc領域を変異型ヒトIgG4Fc領域で置換することにより、モノマーヒト抗体を形成することができる。あるいは、マウスIgG抗体の親Fc領域をヒトIgG抗体由来の変異型Fc領域で置換することにより、モノマーキメラ抗体を形成することもできる。こうしたFc修飾は、当該技術分野では公知であり、また以下にさらに詳しく説明する標準組換えDNA技術を用いて実施してよい。治療効果を得るために一価性が望ましい場合、本発明のモノマー抗体を用いてよい。例えば、抗体の二価性によって、標的細胞が誘導されて抗原のモジュレーションを受ける懸念がある場合に、モノマー抗体を用いることができる。また、治療用抗体が、免疫系媒介の活性、例えば、エフェクター機能、ADCC、食作用及びCDCを伴わずに、治療作用を発揮することが好ましい場合に、本発明のモノマー抗体が望ましい。従って、本発明のモノマー抗体は、疾患の診断及び治療に関わる多くのinvitro及びinvivo診断及び治療有用性を有する。本発明によれば、本明細書に記載のモノマー抗体は、どの抗原にでも結合しうるため、本発明は、特定の抗原に向けられるモノマー抗体に関するものではないことは理解されよう。本発明のモノマー抗体の具体的有用性は、具体的標的抗原に応じて異なる。標的抗原の選択は、標的抗原に特異的な抗体の一価形態を投与する治療価値及び/又は利点に基づいて行ってよい。このような考慮は、当業者の技能で十分に可能である。本発明のモノマー抗体は、invitro、exvivo及び/又はinvivoで特定の抗原の活性を部分的又は完全にブロックするためのアンタゴニスト及び/又はインヒビターとして用いることもできる。具体的実施形態では、本発明のモノマー抗体は、リガンド抗原に特異的であり、リガンド抗原に関わるリガンド-受容体の相互作用をブロック又は妨害することにより抗原活性を阻害することによって、対応するシグナル伝達経路及びその他の分子又は細胞事象を阻害する。別の実施形態では、本発明のモノマー抗体は、リガンドとの接触により活性化されうる受容体抗原に特異的であり、リガンド-受容体の相互作用をブロック又は妨害することにより抗原活性を阻害し、これによって、対応するシグナル伝達経路及びその他の分子又は細胞事象を阻害する。本明細書に記載のモノマー抗体は、モノマー抗体の意図する用途に応じて、任意の所望する標的と免疫特異的に相互作用することができる。例えば、モノマー抗体は、標的、例えば、細胞表面受容体、癌抗原、サイトカイン、酵素などに結合しうる。モノマー抗体は、既存の抗体、例えば、市販されている形態の抗体、又は新たに単離した抗体に由来するものでよい。市販の抗体の例として、限定するものではないが、Humira登録商標、Remicade登録商標、Simponi登録商標、Rituxan登録商標、Herceptin登録商標などがある。様々なタイプの抗体を作製する方法は、当該技術分野では公知であり、また、以下に詳しく説明する。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域を含むモノマー抗体又は抗体フラグメントは、250ナノモルより小さいKDで標的に免疫特異的に結合する。いくつかの実施形態では、KDは、100ナノモルより小さい、50ナノモルより小さい、25ナノモルより小さい、又は1ナノモルより小さい。いくつかの実施形態では、上記条件下でのKDは、900ピコモルより小さい、800ピコモルより小さい、700ピコモルより小さい、600ピコモルより小さい、500ピコモルより小さい、400ピコモルより小さい、300ピコモルより小さい、200ピコモルより小さい、又は100ピコモルより小さい。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域を含むモノマー抗体又は抗体フラグメントは、250ナノモルより小さいIC50で、標的を阻害する。いくつかの実施形態では、IC50は、100ナノコモルより小さい、50ナノモルより小さい、25ナノモルより小さい、又は1ナノモルより小さい。いくつかの実施形態では、上記条件下でのIC50は、900ピコモルより小さい、800ピコモルより小さい、700ピコモルより小さい、600ピコモルより小さい、500ピコモルより小さい、400ピコモルより小さい、300ピコモルより小さい、200ピコモルより小さい、又は100ピコモルより小さい。いくつかの実施形態では、モノマー抗体のKD及び/又はIC50は、当該技術分野で公知の任意の方法、例えば、BIACORE商標親和性データ、細胞結合、標準ELISA又は標準フローサイトメトリーアッセイを用いて、測定することができる。いくつかの実施形態では、モノマー抗体の結合親和性は、親抗体の結合親和性と実質的に同じである。例えば、本明細書に記載の変異型Fc領域を作製するためにFc領域に1つ以上の配列変異を導入しても、抗体の結合親和性にほぼ又は全く影響をもたらさない。例えば、モノマー抗体を作製するために抗体のFc領域に配列変異を導入すると、標的に対する抗体の結合親和性に、50、40、30、25、20、15、10、8、6、5、4、3、2、又は1より小さい変化が起こる。あるいは、モノマー抗体を作製するために抗体のFc領域に配列変異を導入すると、標的に対する抗体の結合親和性に、10倍、8倍、5倍、4倍、3倍、又は2倍より小さい変化が起こる。いくつかの実施形態では、モノマー抗体は、標的に対する親抗体の結合親和性の少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、又は99を維持する。いくつかの実施形態では、標的に対するモノマー抗体の結合親和性は、同じ標的の親抗体の結合親和性の10倍、8倍、5倍、4倍、3倍、又は2倍以内である。一実施形態では、本発明のモノマー抗体は、本明細書に記載の変異型Fc領域を含むモノクローナル抗体又はそのフラグメントである。モノクローナル抗体は、当該技術分野で公知の様々な技法を用いて調製することができるが、こうした技法としては、以下のものがある:ハイブリドーマの使用Kohleretal.,Nature,256:4951975;Harlowetal.,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.1988;Hammerling,etal.,in:MonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas563-681Elsevier,N.Y.,1981、組換え及びファージディスプレイ技術、又はこれらの組合せ。本明細書で用いるモノクローナル抗体という用語は、実質的に同種の、又は単離された抗体の集団から得られた抗体を指す。例えば、上記の集団を含む個々の抗体は、わずかな量で存在しうる自然に起こりうる突然変異を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位、又は多重特異的改変抗体の場合には多重抗原部位に対して向けられている。さらに、様々な決定基エピトープに対して向けられる様々な抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の同じ決定基に対して向けられる。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体による混入なしに合成することができる点で有利である。修飾語モノクローナルは、いずれか特定の方法による抗体の生産を必要とするものと解釈すべきではない。ハイブリドーマ技術を用いたモノクローナル抗体の生産又はスクリーニング方法は、当該技術分野において一般的であり、公知である。例えば、Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103AcademicPress,1986;Kozbor,J.Immunol.,133:30011984;及びBrodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987を参照されたい。さらに、抗体ファージライブラリーを用いて、モノクローナル抗体を生産する方法は、当該技術分野において一般的であり、公知である。例えば、McCaffertyetal.,Nature,348:552-5541990;及びClacksonetal.,Nature,352:624-6281991及びMarksetal.,J.Mol.Biol.,222:581-5971991を参照されたい。ファージディスプレイライブラリーを作製するための市販のキット例えば、thePharmaciaRecombinantPhageAntibodySystem,catalogno.27-9400-01;及びtheStratageneSURFZAP商標phagedisplaykit,catalogno.240612の他に、抗体ディスプレイライブラリーを作製及びスクリーニングするのに使用するための方法及び試薬の例は、例えば、米国特許第6,248,516号明細書;同第6,545,142号明細書;同第6,291,158号明細書;同第6,291,1591号明細書;同第6,291,160号明細書;同第6,291,161号明細書;同第6,680,192号明細書;同第5,969,108号明細書;同第6,172,197号明細書;同第6,806,079号明細書;同第5,885,793号明細書;同第6,521,404号明細書;同第6,544,731号明細書;同第6,555,313号明細書;同第6,593,081号明細書;同第6,582,915号明細書;同第7,195,866号明細書に記載されている。一実施形態では、本発明のモノマー抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はそれらのフラグメントであり、これらは、本明細書に記載の変異型Fc領域を含む。ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する、非ヒト種抗体本明細書ではまた、ドナー抗体とも称するに由来する抗体分子である。ヒト化抗体は、ドナー抗体からの1つ以上の相補性決定領域CDRと、ヒト免疫グロブリン分子からの1つ以上のフレームワーク領域本明細書では、アクセプター抗体とも呼ぶとを有する。往々にして、ヒトフレームワーク領域におけるフレームワーク残基を、ドナー抗体からの対応する残基で置換することにより、抗原結合を改変、好ましくは改善し、及び/又は免疫原性を低減する。これらのフレームワーク置換は、当該技術分野で公知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を識別するためのCDRとフレームワーク残基との相互作用のモデル化、及び特定の位置の特異フレームワーク残基を識別するための配列比較によって、識別する。例えば、Riechmannetal.,Nature332:3231988を参照のこと。実際には、また、いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、概してヒト抗体であり、このヒト抗体では、いくつかの超可変領域残基と、恐らくいくつかのFR残基は、ドナー抗体における類似部位からの残基で置換されている。別の実施形態では、FR残基は完全にヒト残基である。ヒト化は、Winter及び共同研究者Jonesetal.,Nature,321:522-5251986;Reichmannetal.,前掲:Verhoeyenetal.,Science,239:1534-15361988の方法に従い、超可変領域配列を、ヒト抗体の対応する配列で置換することによって実施する。具体的には、ヒト化抗体は、当該技術分野で公知の方法によって調製することができ、こうした方法としては以下のものがある:CDRグラフティング手法例えば、米国特許第6,548,640号明細書を参照、ベニアリングveneering又は表面再構成resurfacing米国特許第5,639,641号明細書及び同第6,797,492号明細書;Studnickaetal.,ProteinEngineering76:805-8141994;Roguska.etal.,PNAS91:969-9731994、鎖シャッフリング戦略例えば、米国特許第5,565,332号明細書;Raderetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA199895:8910-8915を参照、分子モデル化戦略米国特許第5,639,641号明細書など。これらの一般的手法を標準突然変異及び組換え合成技術と組み合わせて、所望の特性を備えるモノマーヒト化抗体を作製することもできる。定義により、ヒト化抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体は、重鎖及び/又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する配列、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体において対応する配列と同一であるか、又は相同的であり、この鎖の別の部分は、別の種に由来する配列、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体において対応する配列と同一であるか、又は相同的である抗体、並びに、このような抗体のフラグメントこれらが所望の生物活性を呈示する限りである例えば、Morrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-68551984。本明細書において興味深いキメラ抗体としては、非ヒト霊長類例えば、ヒヒ、アカゲザル又はカニクイザルのような旧世界ザルOldWorldMonkey由来の可変ドメイン抗原結合配列を含む霊長類化抗体及びヒト定常領域配列米国特許第5,693,780号明細書がある。一実施形態では、本発明のモノマー抗体は、本明細書に記載の変異型Fc領域を含むヒト抗体又はそのフラグメントである。ヒト抗体は、マウス又はラット可変及び/又は定常領域配列を有する抗体に関連する問題のいくつかを回避する。こうしたマウス又はラット由来の配列が存在すると、抗体の急速なクリアランスを起こす可能性、又は患者による抗体に対する免疫応答の発生を招く恐れがある。マウス又はラット由来の抗体の使用を避けるために、げっ歯類、その他の哺乳動物又は動物が、完全なヒト抗体を産生するように、機能性ヒト抗体遺伝子座をげっ歯類、その他の哺乳動物又は動物に導入することによって、完全なヒト抗体を作製することができる。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の方法を用いて作製することができる。例えば、今日、免疫すると、内因性免疫グロブリン生産の非存在下で、ヒト抗体の全レパトアを産生することができるトランスジェニック動物例えば、マウスを作製することが可能である。例えば、Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:25511993;Jakobovitsetal.,Nature,362:255-2581993;Bruggemannetal.,YearinImmuno.,7:331993;米国特許第5,545,806号明細書、同第5,569,825号明細書、同第5,591,669号明細書すべてGenPharm;米国特許第5,545,807号明細書;及び国際公開第97/17852号パンフレットを参照。ヒト抗体作製のためのマウスのXENOMOUSE登録商標株の使用が記載されている。Mendezetal.NatureGenetics15:146-1561997及びGreenandJakobovitsJ.Exp.Med.188:483-4951998を参照されたい。XENOMOUSE登録商標株は、Amgen,Inc.Fremont,Calif.から入手可能である。マウスのXENOMOUSE登録商標株の作製及びこれらのマウスで生産された抗体については、以下の文献でさらに詳しく説明されている:米国特許第6,673,986号明細書;同第7,049,426号明細書;同第6,833,268号明細書;同第6,162,963号明細書、同第6,150,584号明細書、同第6,114,598号明細書、同第6,075,181号明細書、同第6,657,103号明細書;同第6,713,610号明細書及び同第5,939,598号明細書;米国特許出願公開第2004/0010810号明細書;同第2003/0229905号明細書;同第2004/0093622号明細書;同第2005/0054055号明細書;同第2005/0076395号明細書;及び同第2006/0040363号明細書。別の手法では、GenPharmInternational,Inc.,を含む他者は、ミニ遺伝子座手法を用いている。この手法は、米国特許第5,545,807号明細書;同第5,545,806号明細書;同第5,625,825号明細書;同第5,625,126号明細書;同第5,633,425号明細書;同第5,661,016号明細書;同第5,770,429号明細書;同第5,789,650号明細書;同第5,814,318号明細書;同第5,877,397号明細書;同第5,874,299号明細書;同第6,255,458号明細書;同第5,591,669号明細書;同第6,023,010号明細書;同第5,612,205号明細書;同第5,721,367号明細書;同第5,789,215号明細書;同第5,643,763号明細書;及び同第5,981,175号明細書に記載されている。また、Kirinも、大きな染色体片又は全染色体を微小核融合によって導入したマウスからのヒト抗体の作製を示している。米国特許第6,632,976号明細書を参照されたい。さらに、Medarexのミニ遺伝子座Hamabを含むKirinのTcマウスの交雑育種によって得られたKM商標マウスも作製されている。これらのマウスは、KirinマウスのヒトIgHトランスクロモソームと、Genpharmマウスのκ鎖トランスジーンとを有するIshidaetal.,CloningStemCells,20024:91-102。ヒト抗体はまた、invitro法によって得ることもできる。好適な例として、限定するものではないが、ファージディスプレイMedImmune旧称CAT,Morphosys,Dyax,Biosite/Medarex,Xoma,Symphogen,Alexion旧称Proliferon,AffimedリボソームディスプレイMedImmune旧称CAT、酵母ディスプレイなどがある。ファージディスプレイ技術例えば、米国特許第5,969,108号明細書を参照を用いて、非免疫ドナー由来の免疫グロブリン可変Vドメイン遺伝子レパトアからヒト抗体及び抗体フラグメントをinvitroで生産することができる。ファージディスプレイは、様々なフォーマットで実施することができ、例えば、Johnson,KevinS.及びChiswell,DavidJ.,CurrentOpinioninStructuralBiology3:564-5711993に概要が記載されている。V-遺伝子セグメントの複数の供給源をファージディスプレイに用いることができる。例えば、Clacksonetal.,Nature,352:624-6281991;Marksetal.,J.Mol.Biol.222:581-5971991;Griffithetal.,EMBOJ.12:725-7341993;及び米国特許第5,565,332号明細書及び同第5,573,905号明細書を参照されたい。前述したように、ヒト抗体は、invitroで活性化したB細胞によって作製してもよい米国特許第5,567,610号明細書及び同第5,229,275号明細書を参照。7.3.3異種タンパク質及び抗原一般に、本発明のモノマーポリペプチドが抗原結合部分を含む場合には、本発明のモノマーポリペプチドは目的の抗原に特異的に結合する。一実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、ポリペプチド抗原に特異的に結合する。別の実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、非ポリペプチド抗原に特異的に結合する。また別の実施形態では、本発明の一価ポリペプチドを疾患又は障害に罹患した哺乳動物に投与することによって、その哺乳動物に治療利益をもたらすことができる。変異型Fc変異体部分を含む本発明の一価ポリペプチド例えば、一価抗体、Fc融合タンパク質により、ほぼあらゆる分子をターゲティングすることができ、及び/又は一価ポリペプチドに組み込むことができるが、このようなポリペプチドとして、限定するものではないが、以下に挙げるタンパク質、並びに以下に挙げるタンパク質に属するサブユニット、ドメイン、モチーフ及びエピトープがある:レニン;成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン;成長ホルモン放出因子;副甲状腺ホルモン;甲状腺刺激ホルモン;リポタンパク質;α-1-抗トリプシン;インスリンA鎖;インスリンB鎖;プロインスリン;濾胞刺激ホルモン;カルシトニン;黄体形成ホルモン;グルカゴン;凝固因子、例えば、VII因子、VIIIC因子、IX因子、組織因子TF、及びフォンビルブラント因子;抗凝固因子、例えば、プロテインC;心房性ナトリウム利尿因子;肺サーファクタント;プラスミノーゲンアクチベーター、例えば、ウロキナーゼ若しくはヒト尿又は組織型プラスミノーゲンアクチベーターt-PA;ボンベシン;トロンビン;造血増殖因子;腫瘍壊死因子α及びβ;エンケファリナーゼ;RANTES血小板やT細胞由来の好酸球走化性物質:regulatedonactivationnormallyT-cellexpressedandsecreted;ヒトマクロファージ炎症性タンパク質MIP-1-α;血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン;ミュラー管抑制物質;リラキシンA鎖;リラキシンB鎖;プロリラキシン;マウスゴナドトロピン関連ペプチド;微生物タンパク質、例えば、βラクタマーゼ;DNase;IgE;細胞傷害性Tリンパ球関連抗原CTLA、例えば、CTLA-4;インヒビン;アクチビン;血管内皮増殖因子VEGF;肝細胞増殖因子HGF;ホルモン又は増殖因子の受容体、例えば、EGFR、VEGFR、HGFRcMETとしても知られる;インターフェロン、例えば、αインターフェロンα-IFN、βインターフェロンβ-IFN及びγインターフェロンγ-IFN;プロテインA又はD:リウマチ因子;神経栄養因子、例えば、骨由来神経栄養因子BDNF、ニューロトロフィン-3、-4、-5、若しくは-6NT-3、NT-4、NT-5、若しくはNT-6、又は神経成長因子;血小板由来増殖因子PDGF;線維芽細胞増殖因子、例えば、αFGF及びβFGF;上皮増殖因子EGF;TGF-α及びTGF-βのようなトランスフォーミング増殖因子TGF、例えば、TGF-1、TGF-2、TGF-3、TGF-4、又はTGF-5など;インスリン様増殖因子-I及び-IIIGF-I及びIGF-II;デス1-3-IGF-I脳IGF-I、インスリン様成長因子結合タンパク質;CDタンパク質、例えば、CD2、CD3、CD4、CD8、CD11a、CD14、CD18、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD33、CD34、CD40、CD40L、CD52、CD63、CD64、CD80及びCD147;TNF-関連アポトーシス誘導リガンドTRAIL受容体、例えば、細胞死受容体TRAIL-R1及びTRAIL-R5並びにデコイ受容体TRAIL-R3及びTRAIL-R5;エリトロポエチン;骨誘導因子;イムノトキシン;骨形成因子BMP;インターフェロン、例えば、インターフェロン-α、-β、及び-γ;コロニー刺激因子CSF、例えば、M-CSF、GM-CSF、及びG-CSF;インターロイキンIL、例えば、IL-1~IL-13;TNFα、スーパーオキシドジムスターゼ;T細胞受容体;表面膜タンパク質;崩壊促進因子;ウイルス抗原、例えば、AIDS包膜の一部、例えば、gp120;輸送タンパク質;ホーミング受容体;アドレシン;調節タンパク質;細胞接着分子、例えば、LEA-1、Mac1、p150.95、VLA-4、ICAM-1、ICAM-3及びVCAM、a4/p7インテグリン、及びXv/p3インテグリンその1以上のサブユニットを含む、インテグリンαサブユニット、例えば、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e、CD49f、α7、α8、α9、αD、CD11a、CD11b、CD51、CD11c、CD41、αIIb、αIELb;インテグリンβサブユニット、例えば、CD29、CD18、CD61、CD104、β5、β6、β7及びβ8;インテグリンサブユニット組合せ、例えば、限定するものではないが、αVβ3、αVβ5、及びα4β7;アミロイドβAβ又はAベータ;アポトーシス経路のメンバー;血液型抗原;flk2/flt3受容体;肥満OB受容体;mpl受容体;CTLA-4;プロテインC;Eph受容体、例えば、EphA2、EphA4、EphB2など;ヒト白血球抗原HLA例えば、HLA-DR;補体タンパク質、例えば補体受容体CR1、C1Rq及びその他の補体因子、例えば、C3及びC5;糖タンパク質受容体、例えば、GpIbα、GPIIb/IIIa及びCD200;並びに以上挙げたいずれかのポリペプチドのフラグメント。癌抗原に特異的に結合する抗原結合部分を含む本発明の一価ポリペプチドも考慮され、限定するものではないが、以下のものを含む:ALK受容体プレイオトロフィン受容体、プレイオトロフィン、KS1/4全癌抗原;卵巣がん抗原CA125;前立腺酸性フォスフェート;前立腺特異的抗原PSA;黒色腫関連抗原p97;黒色腫抗原gp75;高分子量黒色腫抗原HMW-MAA;前立腺特異的膜抗原;癌胎児性抗原CEA;多形上皮ムチン抗原;ヒト乳脂肪球抗原;結腸直腸腫瘍関連抗原、例えば、CEA、TAG-72、CO17-1A、GIGA19-9、CTA-1及びLEA;バーキットリンパ腫抗原-38.13;CD19;ヒトBリンパ腫抗原-CD20;CD33;黒色腫特異的抗原、例えば、ガングリオシドGD2、ガングリオシドGD3、ガングリオシドGM2及びガングリオシドGM3;腫瘍特異的移植型細胞表面抗原TSTA;ウイルス誘導腫瘍抗原、例えば、T抗原、DNA腫瘍ウイルス及びRNA腫瘍ウイルスの外膜抗原;癌胎児性抗原-α-フェトプロテイン、例えば、結腸のCEA、5T4癌胎児性栄養芽層糖タンパク質及び膀胱腫瘍癌胎児性抗原;分化抗原、例えば、ヒト肺癌抗原L6及びL20;線維肉腫の抗原、ヒト白血病T細胞抗原-Gp37;ネオ糖タンパク質;スフィンゴ脂質;乳癌抗原、例えば、EGFR上皮増殖因子受容体;NY-BR-16;HER2抗原p185HER2;多形上皮ムチンPEM;悪性ヒトリンパ球抗原-APO-1;分化抗原、例えば、胎児赤血球に存在するI抗原;成人赤血球に存在する一次内胚葉I抗原;着床前胚;胃腺癌に存在するIMa;乳房上皮に存在するM18、M39;骨髄性細胞に存在するSSEA-1;VEP8;VEP9;Myl;VIM-D5;結腸直腸癌に存在するD156-22;TRA-1-85血液型H;精巣及び卵巣癌に存在するSCP-1;結腸腺癌に存在するC14;肺腺癌に存在するF3;胃癌に存在するAH6;Yハプテン;胚性癌細胞に存在するLey;TL5血液型A;A431細胞に存在するEGF受容体;膵臓癌に存在するE1シリーズ血液型B;胚性癌細胞に存在するFC10.2;胃腺癌抗原;腺癌に存在するCO-514血液型Lea;腺癌に存在するNS-10;CO-43血液型Leb;A431細胞のEGF受容体に存在するG49;結腸腺癌に存在するMH2血液型ALeb/Ley;結腸癌に存在する19.9;胃癌ムチン;骨髄性細胞に存在するT5A7;黒色腫に存在するR24;胚性癌細胞に存在する4.2、GD3、D1.1、OFA-1、GM2、OFA-2、GD2、及びM1:22:25:8並びに4~8期胚に存在するSSEA-3及びSSEA-4;皮膚T細胞リンパ腫抗原;MART-1抗原;SialyTnSTn抗原;結腸癌抗原NY-CO-45;肺癌抗原NY-LU-12変異体A;腺癌抗原ART1;腫瘍随伴性脳-精巣-癌抗原腫瘍と神経細胞の共通抗原MA2;傍腫瘍性神経抗原;神経腫瘍腹側抗原2Neuro-oncologicalventralantigen2NOVA2;肝細胞癌抗原遺伝子520;腫瘍関連抗原CO-029;腫瘍関連抗原MAGE-C1癌/精巣抗原CT7、MAGE-B1MAGE-XP抗原、MAGE-B2DAM6、MAGE-2、MAGE-4a、MAGE-4b及びMAGE-X2;及び癌-精巣抗原NY-EOS-1;並びに上に挙げたポリペプチドのいずれかのフラグメント。いくつかの具体的実施形態では、変異型Fc領域を含む本発明の一価ポリペプチド例えば、一価抗体、Fc融合タンパク質は、cMET若しくはTRAIL-R2若しくはVEGFを含むか、又はこれらに結合する。7.4モノマーポリペプチドコンジュゲートいくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、当該技術分野で公知の方法を用いて、ある物質に結合しているか、又は共有結合している。一実施形態では、結合させる物質は、治療薬、検出可能な標識本明細書では、リポーター分子とも呼ばれる又は固体支持体である。モノマーポリペプチドとの結合に好適な物質としては、限定するものではないが、以下のものがある:アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ハプテン、薬物、ホルモン、脂質、脂質集合体、合成ポリマー、ポリマー微粒子、生物細胞、ウイルス、発蛍光団、発色団、色素、毒素、酵素、放射性同位元素、固体マトリクス、半固体マトリクス及びこれらの組合せ。別の物質をモノマーポリペプチドに結合又は共有結合させる方法は、当該技術分野では公知である。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドを固体支持体に結合する。モノマーポリペプチドは、スクリーニング及び/又は精製及び/又は製造工程の一環として固体支持体に結合させてもよい。あるいは、本発明のモノマーポリペプチドは、診断法又は組成物の一部分として固体支持体に結合させてもよい。本発明での使用に好適な固体支持体は、概して、液相中に実質的に不溶性である。多数の支持体が利用可能であり、当業者には周知である。従って、固体支持体としては、固体及び半固体マトリクス、例えば、エーロゲル及びヒドロゲル、樹脂、ビーズ、バイオチップ薄膜被覆バイオチップなど、マイクロ流体チップ、シリコンチップ、マルチウェルプレートマイクロタイタープレート又はマイクロプレート、膜、導電性及び非導電性金属、ガラス顕微鏡スライドを含む及び磁気支持体などがある。固体支持体のさらに具体的な例としては、以下のものがある:シリカゲル、ポリマー膜、粒子、誘導体化プラスチックフィルム、ガラスビーズ、綿、ブラスチックビーズ、アルミナゲル、Sepharoseのような多糖、ポリアクリレート、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリオール、アガロース、アガー、セルロース、デキストラン、デンプン、FICOLL、ヘパリン、グリコーゲン、アミロペクチン、マンナン、イヌリン、ニトロセルロース、ジアゾセルロース、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレンポリエチレングリコールなど、ナイロン、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、常磁性ビーズ、超常磁性ビーズ、デンプンなど。いくつかの実施形態では、固体支持体は、本発明のモノマーポリペプチドを結合するために、反応性官能基を含んでいてもよく、こうした基として、限定するものではないが、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、チオール、アルデヒド、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、尿素、炭酸塩、カルバミド酸塩、イソシアン酸塩、スルホン、スルホン酸塩、スルホンアミド、スルホキシドなどがある。好適な固相支持体を所望の最終用途及び様々な合成プロトコルについての好適性に基づいて選択することができる。例えば、本発明のモノマーポリペプチドと固体支持体とを結合するのに、アミド結合形成が望ましい場合には、ペプチド合成に一般に用いられる樹脂を用いることができ、こうした樹脂として、例えば、以下のものがある:ポリスチレン例:BachemInc.、PeninsulaLaboratoriesなどから得られるPAM-樹脂、POLYHIPE商標樹脂Aminotech,Canadaから得られる、ポリアミド樹脂PeninsulaLaboratoriesから得られる、ポリエチレングリコールでグラフティングしたポリスチレン樹脂TENTAGEL商標、RappPolymere,Tubingen,Germany、ポリジメチル-アクリルアミド樹脂Milligen/Biosearch,California、又はPEGAビーズPolymerLaboratoriesから得られる。いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチド及び/又はその関連リガンドを検出する診断及びその他のアッセイの目的で、本発明のモノマーポリペプチドを標識に結合する。モノマーポリペプチドに結合して、本明細書に記載する本方法及び組成物で用いる標識は、280nmより大きい波長で最大の吸光を呈示すると共に、モノマーポリペプチドに共有結合したとき、その分光特性を保持する、有機又は無機の任意の化学部分である。標識としては、限定するものではないが、発色団、発蛍光団、蛍光タンパク質、りん光色素、タンデム色素、粒子、ハプテン、酵素及び放射性同位元素がある。いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチドを酵素標識に結合させる。酵素は、検出可能なシグナルの増幅が得られ、これによりアッセイ感度が高くなるため、望ましい標識である。いくつかのアッセイでは、化学発光を発生する酵素及びその適切な脂質が好ましい。これらには、限定するものではないが、ルシフェラーゼ及びエクオリンの天然及び組換え形態が含まれる。別の実施形態では、モノマーポリペプチドをハプテン、例えば、ビオチンに結合させる。ビオチンは、酵素系において、検出可能なシグナルをさらに増幅するように作用することができ、また、単離の目的で、アフィニティークロマトグラフィーに用いられるタグとして作用することができるため、有用である。検出を目的として、ビオチンに対し親和性を有する酵素コンジュゲート、例えば、アビジン-HRPを用いる。次に、ペルオキシダーゼ基質を添加して、検出可能なシグナルを生成する。いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチドを蛍光タンパク質標識に結合させる。蛍光タンパク質の例としては、緑色蛍光タンパク質GFP及びフィコビリンタンパク質及びその誘導体がある。蛍光タンパク質、特にフィコビリンタンパク質は、タンデム色素標識ラベル化剤を作製するのにとくに有用である。いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチドを放射性同位元素に結合させる。好適な放射性材料としては、限定するものではないが、以下のものがある:ヨウ素121I、123I、125I、131I、炭素14C、イオウ35S、トリチウム3H、インジウム111In、112In、113mIn、115mIn、テクネチウム99Tc、99mTc、タリウム201Ti、ガリウム68Ga、67Ga、パラジウム103Pd、モリブデン99Mo、キセノン135Xe、フッ素18F、153SM、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh及び97Ru。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、ポリペプチドの薬物動力学的特性を高める部分、例えば、非タンパク質性ポリマー又は血清アルブミンと結合してもよい。一実施形態では、モノマーポリペプチドをポリマー、例えば、ポリエチレングリコールPEC、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンに、米国特許第4,640,835号明細書;同第4,496,689号明細書;同第4,301,144号明細書;同第4,670,417号明細書;同第4,791,192号明細書又は同第4,179,337号明細書に記載の方法で結合する。PEGという用語は、PEGのサイズ又はその末端での修飾とは無関係に、広範に用いられて、あらゆるポリエチレングリコール分子を包含し、式:X-OCHO2CHO2On-1CHO2CHO2OH1式中、nは、20~2300であり、Xは、H又は末端修飾、例えば、C1-4アルキルであるにより表すことができる。一実施形態では、PEGは、一端においてヒドロキシ又はメトキシで終了してもよく、すなわち、XはH又はCH3であるメトキシPEG。PEGは、さらに別の化学基:反応に結合するのに必要な化学基;分子の化学合成から生じる化学基;又は分子部分の最適距離のためのスペーサーである化学基を含んでもよい。さらに、PEGは、互いに連結された1つ以上のPEG側鎖からなるものであってもよい。2つ以上のPEG鎖を有するPEGは、マルチアーム又は分枝PEGと呼ばれる。分枝PEGは、例えば、様々なポリオール例えば、グリセロール、ペンタエリトリオール、及びソルビトールなどにポリエチレンオキシドを添加することによって調製することができる。例えば、4アーム分子PEGは、ペンタエリトリオールとエチレンオキシドから調製することができる。当業者であれば、どのようにベギル化結合ポリペプチドを治療に用いるのか、所望の投薬量、循環時間、タンパク質分解耐性、免疫原性、及びその他の考慮事項に基づいて、PEGの好適な分子量を選択することができる。タンパク質の特性を高めるためのPEG及びその使用についての論考は、N.V.Katre,AdvancedDrugDeliveryReviews10:91-1141993を参照されたい。当該技術分野で公知の技術を用いて、本発明のモノマーポリペプチドにPEGを結合させることができる。例えば、ペプチド又はタンパク質とPEGの結合は、一般に、PEGの活性化後、活性化PEGを標的タンパク質/ペプチド又はリンカーに直接連結させることを含み、リンカーは、後に活性化させて標的タンパク質/ペプチドに連結させるAbuchowski,A.etal,J.Biol.Chem.,252,35711977及びJ.Biol.Chem.,252,35821977,Zalipsky,etal.,及びHarriset.al.,in:PolyethyleneglycolChemistry:BiotechnicalandBiomedicalApplications;J.M.Harrised.PlenumPress:NewYork,1992;Chap.21及び22を参照のこと。7.5核酸前述したアミノ酸配列に加えて、本発明はさらに、変異型Fc領域を含む本発明のモノマーポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を提供する。従って、本発明はまた、本明細書に記載するモノマーポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、さらには、細胞例えば、哺乳動物細胞におけるその効率的発現のためのポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターも提供する。本発明はまた、こうしたポリヌクレオチド及び発現ベクターを含有する宿主細胞、並びに本明細書に記載のポリヌクレオチドを用いて、モノマーポリペプチドを作製する方法も提供する。上記のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の構造的及び/又は機能的特徴を有するモノマーポリペプチドをコードする。本発明はまた、例えば、本明細書で定義するように、ストリンジェントな、又はより低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で、本発明のモノマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドも包含する。本明細書で用いるストリンジェンシーという用語は、ハイブリダイゼーション実験の実験条件例えば、温度及び塩濃度を指し、プローブとフィルター結合核酸との間の相同性の程度を示すものであり;ストリンジェンシーが高いほど、プローブとフィルター結合核酸との間の相同性は高い。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件としては、限定するものではないが、約45°Cで6X塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウムSSC中のフィルター結合DNAとのハイブリダイゼーションの後、約50~65°Cで0.2XSSC/0.1SDS中で1回以上の洗浄;高度にストリンジェントな条件、例えば、約45°Cで6XSSC中のフィルター結合DNAとのハイブリダイゼーションの後、約65°Cで0.1XSSC/0.2SDS中で1回以上の洗浄;又は当業者には公知のその他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件がある例えば、Ausubel,F.M.etal.,eds.1989CurrentProtocolsinMolecularBiology,vol.1,GreenPublishingAssociates,Inc.及びJohnWileyandSons,Inc.,NY、ページ6.3.1~6.3.6及び2.10.3を参照のこと。当該技術分野では公知の任意の方法によって本発明のポリヌクレオチドを取得し、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。例えば、モノマーポリペプチドの全部又は一部のヌクレオチド配列が既知である場合には、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、化学的に合成したオリゴヌクレオチドから組織化してもよい例えば、Kutmeieretal.,BioTechniques17:2421994に記載のように。手短には、これは、ポリペプチドをコードする配列の一部を含む重複オリゴヌクレオチドを合成し、これらオリゴヌクレオチドをアニーリングして、連結した後、連結したオリゴヌクレオチドをPCRにより増幅することを含む。モノマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、好適な供給源由来の核酸から作製することもできる。特定のポリペプチドをコードする核酸を含むクローンは入手できないが、ポリペプチド分子の配列がわかっている場合には、ポリペプチドをコードする核酸を化学的に合成してもよいし、好適な供給源から取得してもよい例えば、cDNAライブラリー、又は上記配列の3’及び5’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたPCR増幅により、若しくは、例えば、cDNAライブラリーから、ポリペプチドをコードするcDNAクローンを識別するための特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いるクローニングによって、ポリペプチドを発現する任意の組織又は細胞から作製したcDNAライブラリー、又はそれらから単離した核酸、好ましくはポリARNA。次に、PCRにより生産した増幅核酸は、当該技術分野では公知の任意の方法を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローン化することができる。ポリペプチドのヌクレオチド配列、及び対応するアミノ酸配列を決定したら、当該技術分野では公知のヌクレオチド配列の操作方法、例えば、組換えDNA技法、部位指定突然変異誘発、PCRなど例えば、以下の文献に記載の技法を参照されたい:Sambrooketal.,1990,MolecularCloning,ALaboratoryManual,2dEd.,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.及びAusubeletal.,eds.,1998,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons,NYを用いて、ヌクレオチド配列を操作することにより、異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを作製する、例えば、Fc領域におけるアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入を形成することができる。7.6ベクター、宿主細胞、及びポリペプチド生産本明細書では、本発明のモノマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するベクターも提供される。一例示の実施形態では、本明細書に記載のモノマーポリペプチドをコードする核酸を発現ベクターに組み込むことによって、好適な宿主細胞において上記モノマーポリペプチドを発現させることができる。様々な発現ベクターをモノマーポリペプチドの発現に使用してよい。発現ベクターとしては、自己複製の染色体外ベクター又は宿主ゲノムに組み込まれるベクターが挙げられる。発現ベクターは、宿主細胞型と適合するように構築する。従って、本発明で有用となる発現ベクターとしては、限定するものではないが、哺乳動物細胞、細菌、昆虫細胞、酵母、及びinvitro系においてモノマーポリペプチド発現を可能にするものがある。当該技術分野では周知のように、本発明のモノマーポリペプチドを発現するのに有用となりうる様々な発現ベクターが市場又はその他で入手可能である。発現ベクターは、概して、モノマーポリペプチドのコード配列を含むが、この配列は、制御若しくは調節配列、選択マーカー、及び/又は別のエレメントに機能的に連結している。本明細書において、機能的に連結しているとは、モノマーポリペプチドの核酸配列が、別の核酸配列と機能的関係にあるように配置されていることを意味する。一般に、これらの発現ベクターは、モノマーポリペプチドをコードする核酸に機能的に連結されており、概して、タンパク質を発現するのに用いられる宿主細胞に適している。一般に、転写及び翻訳調節配列は、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始及び停止配列、翻訳開始及び停止配列、並びにエンハンサー又はアクチベーター配列を含んでもよい。当該技術分野では周知のように、発現ベクターは、一般に、選択遺伝子又はマーカーを含んでおり、これによって、発現ベクターを含有する形質転換宿主細胞の選択が可能になる。選択遺伝子は、当該技術分野で公知であり、用いる宿主細胞によって異なる。本出願はまた、モノマーポリペプチドをコードする核酸、ベクター又は発現ベクターを含む宿主細胞、及びモノマーポリペプチドの発現のための宿主細胞の使用も提供する。ベクター中のポリヌクレオチドを発現するのに適した宿主細胞としては、原核細胞、酵母、又はより高等な真核細胞がある。この目的に適した原核生物としては、真正細菌、例えば、グラム陰性又はグラム陽性細菌、例えば、大腸菌Escherichiacoliのような腸内細菌科Enterobacteriaceaeがある。真核微生物、例えば、糸状菌又は酵母も好適な宿主細胞であり、例えば、サッカロミセスセレビシエS.cerevisiae、ピキア属Pichia、米国特許第7326681号明細書などがある。グリコシル化ポリペプチドの発現に適した宿主細胞は、多細胞生物、例えば、植物細胞例:米国特許出願公開第20080066200号明細書、無脊椎動物細胞、及び脊椎動物細胞に由来する。グリコシル化モノマーポリペプチドの発現のための無脊椎動物細胞の例としては、昆虫細胞、例えば、Sf21/Sf9、イラクサギンウワバBti-Tn5b1-4がある。有用な脊椎動物細胞の例としては、ニワトリ細胞例:国際公開第2008142124号パンフレット及び哺乳動物細胞、例えば、ヒト、サル、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、又はげっ歯類、例えば、ウサギ、ラット、ミンク若しくはマウス細胞がある。組換えポリペプチドの発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞系は当該技術分野では周知であり、AmericanTypeCultureCollectionATCCから入手可能な多数の不死化細胞系があり、限定するものではないが、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、HeLa細胞、ベビーハムスター腎BHK細胞、サル腎細胞COS、ヒト肝細胞癌細胞例:HepG2、ヒト上皮腎293細胞、及びいくつかの他の細胞系が含まれる。様々な宿主細胞が、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシング及び修飾に固有の、かつ特異的な機構を有している。モノマーポリペプチドの適正な修飾及びプロセシングを確実にするために、適切な細胞系又は宿主系を選択することができる。このため、遺伝子産物の一次転写物、グリコシル化、及びリン酸化の適正なプロセシングのための細胞機構を有する真核宿主細胞を用いることができる。こうした哺乳動物細胞として、限定するものではないが、CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O及びT47D、NS0機能性免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞系、SP20、CRL7O3O及びHsS78Bst細胞がある。一実施形態では、ヒトリンパ球を不死化させることによって作製したヒト細胞系を用いて、モノマーポリペプチドを組換えにより生産することができる。一実施形態では、ヒト細胞系PER.C6.Crucell,Netherlandsを用いて、モノマーポリペプチドを組換えにより生産することができる。また、本発明の核酸及び宿主細胞を用いて、モノマーポリペプチドを生産する方法も提供される。モノマーポリペプチドの組換え発現には、一般に、モノマーポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築が必要である。次に、従来の方法で発現ベクターを宿主細胞に転移させた後、トランスフェクトした細胞を従来の方法で培養することにより、モノマーポリペプチドを生産する。モノマー抗体を発現させる場合には、全重鎖及び軽鎖配列変異型Fc領域を含むを、同じ、又は異なる発現カセットから発現させてもよいし、これらの配列を1つ以上のベクターに含有させてもよい。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、モノマーポリペプチドの安定発現を含む細胞系において発現させる。安定発現は、組換えタンパク質の長期の高収率生産のために用いることができる。例えば、モノマーポリペプチド分子を安定して発現する細胞系を作製してもよい。発現制御エレメント例えば、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など及び選択マーカー遺伝子を含む、適切に作製されたベクターで、宿主細胞を形質転換することができる。外来DNAの導入後、濃縮培地において1~2日にわたり細胞を増殖させてから、選択培地に移す。組換えプラスミド内の選択マーカーは、選択に対する耐性を賦与することから、染色体にプラスミドを安定に組み込んだ細胞を増殖させて、フォーカスを形成し、次に、これらのフォーカスをクローン化し、細胞系へと増殖させることができる。高収率の安定な細胞系を生産する方法は、当該技術分野では公知であり、試薬は一般に市販のものが入手可能である。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、モノマーポリペプチドの一過性発現を含む細胞系において発現させる。一過性トランスフェクションは、細胞に導入した核酸が、その細胞のゲノム又は染色体DNAに組み込まれないプロセスである。これは、実際、細胞内で、染色体外エレメント、例えば、エピソームとして維持される。エピソームの核酸の転写プロセスは影響を受けないため、エピソームの核酸によってコードされたタンパク質が生産される。細胞系は、安定な細胞系又は一過性トランスフェクト細胞系のいずれも、当該技術分野では公知の細胞培地及び条件で維持することにより、モノマーポリペプチドの発現及び生産が達成される。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞培地は、市販の培地調製物、例えば、DMEM又はHam’sF12を基材とする。別の実施形態では、細胞培地は、細胞増殖及び生物学的タンパク質発現の両方の増加を支持するように修飾する。本明細書で用いるように、細胞培地、培養基、及び培地組成物と言う用語は、多細胞生物又は組織外部の人工的invitro環境における細胞の維持、成長、増殖、又は拡大のための栄養溶液を指す。細胞培地は、具体的な細胞培養の用途に合わせて最適化することができ、このような用途として、例えば、細胞の増殖を促進するように調製された細胞培養物増殖培地、又は組換えタンパク質生産を促進するように調製された細胞培養物生産培地などがある。栄養素、構成材料、及び成分という用語は、本明細書では置換え可能に用いられ、いずれも、細胞培地を組成する成分を指す。組換え発現によってモノマーポリペプチド分子を生産したら、ポリペプチドを精製するための当該技術分野では公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー例:イオン交換、アフィニティー、及びサイジングカラムクロマトグラフィー、遠心分離、溶解度差、又はタンパク質の精製のための他の標準的技法によって精製してよい。さらに、本発明のモノマーポリペプチドを異種ポリペプチド配列例えば、タグに融合させて、精製を促進することも可能である。こうしたタグの例として、例えば、ポリヒスチジンタグ、HAタグ、c-mycタグ、又はFLAGタグがある。アフィニティー精製法で用いることができるこのようなタグに結合する抗体は市販されている。組換え技術を用いる場合には、モノマーポリペプチドを細胞内で、すなわち細胞周辺腔内に生産することもできるし、又は培地に直接分泌させることもできる。モノマーポリペプチドを細胞内で生産する場合には、第1ステップとして、粒子状破片宿主細胞又は溶解フラグメントのいずれでもを、例えば、遠心分離又は限外ろ過により除去する。Carteretal.,Bio/Technology,10:163-1671992は、大腸菌E.coliの細胞周辺腔内に分泌されるポリペプチドを単離する方法を記載している。モノマーポリペプチドを培地に分泌させる場合には、一般に、こうした発現系からの上清をまず、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Amicon又はMilliporePellicon限外ろ過ユニットを用いて濃縮させる。タンパク質分解を阻害するために、PMSFのようなプロテアーゼインヒビターを前述のステップのいずれかで含有させてもよいし、また、外来の混入物の増殖を防止するために、抗生物質を含有させてもよい。7.7医薬製剤いくつかの態様では、本発明は、本発明のモノマーポリペプチドと薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物中、変異型Fcドメインを含むポリペプチドの少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、97、98、99又は100がモノマーである。いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチドのパーセントは、SEC-MALLSによって決定される。いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチドのパーセントは、AUCによって決定される。特定の実施形態では、モノマーポリペプチドのパーセントは、以下に記載する実施例で説明するようなSEC-MALLS及び/又はAUCによって決定される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、薬剤として用いられる。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドは、薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は安定剤と一緒に、医薬治療用組成物として製剤化することができ、当該技術分野では公知の様々な方法によって投与することができる。当業者には理解されるように、投与の経路及び/又は方式は、所望する結果に応じて異なる。本明細書で用いられるように、モノマーポリペプチドを含む医薬製剤は、本発明の製剤と呼ぶ。薬学的に許容可能な担体という用語は、活性成分の生物活性の効果を妨害しない1種以上の無毒性材料を意味する。こうした製剤は、一般的に、塩類、緩衝剤、保存料、適合性担体、及び任意でその他の治療薬を含みうる。このような薬学的に許容可能な製剤は、また、一般的に、ヒトへの投与に好適な適合性固体又は液体充填剤、希釈剤又はカプセル化物質も含みうる。本発明の製剤に用いることができる他に考慮される担体、賦形剤、及び/又は添加剤としては、例えば、芳香剤、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、帯電防止剤、脂質、タンパク質賦形剤、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、カゼイン、塩形成カウンターイオン、例えば、ナトリウムなどがある。本発明の製剤での使用に好適な上記及びその他の公知の医薬用担体、賦形剤及び/又は添加剤は当該技術分野では公知であり、例えば、Remington:TheSciencePracticeofPharmacy,21sted.,LippincottWilliamsWilkins,2005,及びPhysician’sDeskReference,60thed.,MedicalEconomics,Montvale,N.J.2005に記載されているものがある。薬学的に許容可能な担体は、当業者には周知のように、また、本明細書でも記載するように、モノマーポリペプチドの投与方式、溶解性及び/又は安定性について好適なものを選択することができる。本発明の製剤は、所望の用量について適切なw/vをもたらす濃度のモノマーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチドは、約1mg/ml~約200mg/ml、約1mg/ml~約100mg/ml、約1mg/ml~約50mg/ml、又は1mg/ml~約25mg/mlの濃度で本発明の製剤中に存在する。いくつかの実施形態では、製剤中のモノマーポリペプチドの濃度は、約0.1~約100重量まで変動しうる。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチドの濃度は、0.003~1.0モルの範囲である。一実施形態では、本発明の製剤は、発熱物質除去製剤であり、内毒素及び/又は関連発熱物質を実質的に含まない。内毒素は、微生物内部に閉じ込められた毒素を含み、この毒素は、微生物が分解されるか、死滅したときにのみ放出される。発熱物質はまた、細菌及びその他の微生物の外膜に由来する熱誘発性の熱安定性物質糖タンパク質も含む。これらの物質のいずれも、ヒトに投与すると、熱、高血圧及びショックを引き起こす。潜在的な有害作用があるため、たとえ少量の内毒素であっても、静脈内投与用医薬剤溶液からは除去しなければならない。TheFoodDrugAdministrationFDAは、静脈内の薬剤適用の場合、1時間に体重1kg当たりの用量につき5内毒素単位EUの上限を設定しているTheUnitedStatesPharmacopeialConvention,PharmacopeialForum261:2232000。いくつかの具体的実施形態では、組成物中の内毒素及び発熱物質レベルは、10EU/mgより低い、又は5EU/mgより低い、又は1EU/mgより低い、又は0.1EU/mgより低い、又は0.01EU/mgより低い、又は0.001EU/mgより低い。invivo投与に用いる場合には、本発明の製剤は滅菌してなければならない。本発明の製剤は、様々な滅菌方法で滅菌してよく、滅菌方法として、滅菌ろ過、照射などがある。一実施形態では、モノマーポリペプチド製剤は、予め滅菌した0.22ミクロンフィルターでフィルター滅菌する。注射用の滅菌組成物は、Remington:TheSciencePracticeofPharmacy,21sted.,LippincottWilliamsWilkins,2005に記載の通常の薬務に従って製剤化することができる。本発明の治療用組成物は、特定の投与経路、例えば、経口、鼻、肺、局所口腔及び舌下など、直腸、膣及び/又は非経口投与のために製剤化することができる。本明細書で用いる非経口投与及び非経口的に投与されるというフレーズは、腸及び局所投与以外の投与様式を指し、通常、注射によるものであり、こうした投与様式として、限定するものではないが、静脈内、筋内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入がある。局所又は経皮投与に好適な本発明の製剤としては、粉末、噴霧、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ及び吸入剤がある。活性化合物を滅菌条件下で、薬学的に許容可能な担体、及び必要に応じて任意の防腐剤、バッファー、又は噴射剤と混合してもよい米国特許第7,378,110号明細書;同第7,258,873号明細書;同第7,135,180号明細書;米国特許出願公開第2004-0042972号明細書;及び同第2004-0042971号明細書。製剤は、単位投薬形態をしているのが便利であり、薬学の分野で公知の任意の方法で調製することができる。本発明の医薬組成物で活性の成分の実際の投薬レベルは、患者に対して毒性にならずに、具体的な患者、組成物、及び投与様式についての所望する治療応答を達成するのに有効な活性成分の量例えば、治療有効量が得られるように、変動しうる。選択される投薬レベルは、様々な薬物動力学的要因、例えば、使用する本発明の具体的組成物の活性、投与経路、投与時間、使用する具体的化合物の排出速度、治療期間、使用する具体的組成物と組み合わせて用いられる他の薬物、化合物及び/又は材料、治療する患者の年齢、性別、体重、病態、健康状態、及び病歴、並びに医学分野で周知の類似要因がある。好適な投薬量は、約0.0001~100mg/kg体重以上、例えば、0.1、1、10、又は50mg/kg体重以上、約1~約10mg/kg体重が好ましい。7.8用途例本明細書に記載のモノマーポリペプチドは、診断及び/又は治療目的に用いることができる。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチド及びその組成物は、細胞及び組織において標的発現を検出する目的で、又は標的発現細胞及び組織をイメージングする目的でinvivo及び/又はinvitroで用いることができる。例えば、いくつかの実施形態では、モノマーポリペプチドは、生きているヒトの患者における標的発現をイメージングするのに用いることができる、変異型Fc領域を含むモノマー抗体である。例として、診断のための使用は、例えば、試験しようとするサンプルを、任意で対照サンプルと一緒に、モノマー抗体と標的同士の複合体の形成を可能にする条件下で、モノマー抗体と接触させることによって達成することができる。次いで、複合体形成を検出する例えば、ELISAを用いて、又はモノマー抗体と結合した部分を検出するためのイメージングにより。試験サンプルと一緒に対照サンプルを用いる場合には、両サンプルにおいて複合体を検出し、サンプル同士の複合体の形成に統計的に有意な差があれば、試験サンプル中の標的の存在を示している。一実施形態では、本発明は、標的を含有することが疑われるサンプル中の標的の存在を決定する方法を提供し、前記方法は、本発明のモノマー抗体にサンプルを暴露するステップと、モノマー抗体とサンプル中の標的との結合を決定するステップを含み、モノマー抗体とサンプル中の標的との結合は、サンプル中の標的の存在を示すものである。一実施形態では、サンプルは生体サンプルである。いくつかの実施形態では、invivo診断アッセイを用いて、標的の過剰発現又は増幅を検出するのに、モノマー抗体を用いることができる。一実施形態では、モノマー抗体をサンプルに添加し、モノマー抗体を、検出しようとする標的に結合させて、検出可能な標識例えば、放射性同位元素又は蛍光標識でタグ付けし、標識の定位のために患者を外部からスキャニングする。これに代わり、又はこれに加えて、FISHアッセイ、例えば、INFORM商標Ventana,Ariz.により販売又はPATHVISION商標Vysis,I11.を、ホルマリン固定したパラフィン包埋組織上で実施して、サンプルにおける標的発現又は過剰発現の程度もしあればを決定する。いくつかの実施形態では、本発明のモノマーポリペプチド及びその組成物は、必要とする被検者に、疾患/障害/病態の予防及び/又は治療を目的として投与することができる。本発明は、標的関連の、又は追発した疾患/障害/病態を予防、治療、維持、軽減、若しくは阻害する、並びに/又は哺乳動物における疾患の1つ以上の症状を予防及び/若しくは軽減する方法であって、哺乳動物に治療有効量のモノマーポリペプチドを投与することを含む、上記方法を含む。モノマーポリペプチド組成物は、医師の指示に従い、短期急性若しくは長期、又は断続的に投与することができる。8.例証以下の実施例により本発明の実施を説明する。これらの実施例は、本発明の全範囲を制限又は限定することを意図するものではない。8.1実施例1:ヒンジ欠失IgG4ベクターの作製野生型ヒトIgG4定常ドメインの12アミノ酸ヒンジ領域を以下のようにして除去した:IgG発現ベクターpEU8.2は、初め参照文献[1]に記載される重鎖発現ベクターから得たものであり、哺乳動物細胞において全IgG重鎖を発現するためのヒト重鎖定常領域及び調節エレメントを含む。このベクターは、単純にOriPエレメントを導入することによって改変した。ヒンジ領域上流の5’イントロンと、ヒンジ領域のすぐ下流の3’イントロン配列とにフランキングするオリゴヌクレオチドプライマーを設計した。次に、参考文献[2]に記載の標準的突然変異誘発技法を用いて、上流のイントロンと12アミノ酸ヒンジ領域を除去した。配列において予想される420bp欠失をDNA配列決定によって確認した。新規のベクターをpEU8.2Δヒンジと称する。8.2実施例2:ヒンジ欠失IgG4分子の作製8.2.1実施例2a:抗細胞表面受容体抗体6のpEU8.2Δヒンジへのサブクローニング抗細胞表面受容体抗体抗体6と称するのVH及びVLドメインをベクターpEU8.2Δヒンジ及びpEU4.4ベクターにそれぞれサブクローン化した。VHドメインを、ヒト重鎖γ4定常ドメイン但し、12アミノ酸ヒンジ領域は除去したと、調節エレメントとを含むベクターpEU8.2Δヒンジにクローン化して、哺乳動物細胞に全IgG重鎖を発現させた。同様に、ヒト軽鎖λ定常ドメイン及び調節エレメントの発現用のベクターpEU4.4にVLドメインをクローン化して、哺乳動物細胞に全IgG軽鎖を発現させた。IgGを得るために、ベクターを発現する重鎖及び軽鎖IgGをEBNA-HEK293哺乳動物細胞にトランスフェクトした。IgGを発現させて、培地に分泌させた。回収物をプールし、ろ過してから精製した後、プロテインAクロマトグラフィーを用いて、IgGを精製した。培養上清をCeramicProteinABioSepraの適切なサイズのカラムにロードし、50mMTris-HClpH8.0、250mMNaClで洗浄した。0.1Mクエン酸ナトリウムpH3.0を用いて、結合IgGをカラムから溶離した後、Tris-HClpH9.0の添加により中和した。溶離した物質を、Nap10カラムAmersham,17-0854-02を用いて、PBSにバッファー交換した後、IgGのアミノ酸配列に基づく吸光係数を用いて、IgGの濃度を分光測光法により決定した。SEC-HPLC及びSDS-PAGEにより、精製IgGを凝集及び分解について分析した。8.2.2実施例2b:MultiAngleLaserLightScatteringSEC-MALLSと組み合わせたサイズ置換クロマトグラフィーによる抗体6IgG4Δヒンジ分子の特性決定MultiAngleLaserLightScatteringSEC-MALLSと組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィーは、バイオポリマーの正確な分子サイズを決定するための非常に高感度の技術である。このシステムを用いて、抗体6IgG4野生型と比較した抗体6IgG4Δヒンジ分子の分子量を決定した。100μlサンプルをまず、BioSep-SEC-S4000カラム300×7.8mm、Phenomenex部品番号00H-2147-K0、通し番号389524-11を用いて分析したが、上記カラムは、AgilentHP1100HPLCにより毎分1.0mLのDulbecco’sPBSで平衡した。DiodeArrayDetectorDADからの220及び280nmシグナルを用いて、ピークを検出した。HP1100DAD検出器からの溶出液をWyattTechnologiesDAWNEOS及びOptilabrEX検出器それぞれ、MultipleAngleLightScattering及びRefractiveIndex検出器に通過させた。これら検出器からの出力をASTRAV5.1.9.1.ソフトウエアを用いて処理した。0.184の屈折率増分dn/dc値を用いたグリコシル化IgGが、約2.5質量のグリカンを有すると想定して計算した。D-PBS平衡カラムからの検出器1190°バックグラウンド光散乱値は、<0.35ボルトであった。国際公開第2007/059782A1号パンフレットによれば、IgG4Δヒンジ変異体は、野生型IgG4分子のサイズのほぼ半分約75kDaであるはずである。しかし、野生型IgG4及びIgG4Δヒンジの両者について算出されたサイズは、いずれも、二価分子について予想されるサイズと大体同じであった表3。これは、12アミノ酸ヒンジ領域のみの欠失が、予想約75kDaサイズの一価モノマーを生成するには十分でないことを示している。8.3実施例3:CH3定常ドメイン突然変異の生成一価抗体の生産をさらに安定化するために、さらなる突然変異をCH3定常ドメイン領域におけるIgG4Δヒンジ分子に導入して、IgG4分子の2つのアーム間のCH3-CH3界面を破壊した。8.3.1実施例3a:CH3-CH3界面の破壊のためのアミノ酸の選択IgG分子のCH3ドメインは、2つのFc鎖の二量体化を促進して、機能性免疫グロブリン分子を形成する表面を含む。二量体化は、2つの会合するCH3ドメイン各々の片面内での相互作用によって媒介されるが、一方のCH3ドメインの面は、他方のCH3ドメインの面のものと同一のアミノ酸残基から構成されており、CH3ドメインの一方は、他方に対し、その縦軸に沿って180°回転することによって、二量体化のために適正な配向を達している。界面は、回転対称によるそれらの関係のために、各CH3ドメインからの約16アミノ酸から構成されており、界面の中心は、各々のタンパク質鎖において同じ位置に位置するアミノ酸から構成されている。ヒトIgGのFcドメインの結晶構造[3]の分析によって、向き合うCH3ドメインのそれぞれの対応物と相互作用する各アミノ酸との界面の中心にあるものとして、両CH3ドメインからの366位のトレオニン及び407位のチロシンを同定することができた。IgG1CH3ドメインのアミノ酸配列とヒトIgG4の配列とのアラインメントにより、IgG4の配列に同じアミノ酸が存在することが明らかになったが、実際に、すべてのヒトIgGイソタイプのCH3ドメインにおけるそれらの位置に同じアミノ酸が存在する。CH3-CH3界面におけるアミノ酸のいずれを置換しても、界面の不安定化がおこり、二量体の形成を防止することができたが、特にアミノ酸の置換を、天然に存在するアミノ酸より大きい側鎖で実施すると、そうであった。これは、こうした置換により、強力な相互作用に必要な密接な接触が破壊されるためであろう。最大限の破壊は、一方の鎖の1つのアミノ酸と、他方の鎖でそれと接触しているアミノ酸を置換することによって達成されると推定される。導入したアミノ酸がその側鎖に同じ実効電荷を帯びている場合には、これによって、電荷に基づく反発作用が生じ、また、パッキングの改変により相互作用表面の破壊が起こる。改変残基の数を最小限にするために、界面中心の2つのアミノ酸、すなわちthr366及びtyr407を選択し、アルギニンいずれも、大きな側鎖を有し、実効陽電荷を帯びているで置換した。8.3.2実施例3b:抗体6IgG4ΔヒンジCH3ドメインの突然変異誘発標準的な部位指定突然変異誘発方法を用いて、pEU8.2Δヒンジの366位のトレオニンをアルギニンに、407位のチロシンをアルギニンに突然変異させた。DNA配列決定を用いて、突然変異誘発を確認した。新規の変異体は、pEU8.2ΔヒンジT366RY407Rと称する。抗体6のVH及びVLドメインを、pEU8.2ΔヒンジT366RY407R及びpEU4.4にそれぞれサブクローン化した。ヒト重鎖γ4定常ドメイン但し、12アミノ酸ヒンジ領域を除去し、366位のトレオニンと407位のチロシンをアルギニンに突然変異させたと、調節エレメントを含むベクターpEU8.2ΔヒンジT366RY407Rに、VHドメインをクローン化して、哺乳動物細胞に全IgG重鎖を発現させた。同様に、ヒト軽鎖λ定常ドメイン及び調節エレメントの発現用のベクターpEU4.4にVLドメインをクローン化して、哺乳動物細胞に全IgG軽鎖を発現させた。IgGを得るために、ベクターを発現する重鎖及び軽鎖IgGをEBNA-HEK293哺乳動物細胞にトランスフェクトした。IgGを発現させて、培地に分泌させた。回収物をプールし、ろ過してから精製した後、プロテインAクロマトグラフィーを用いて、IgGを精製した。培養上清をCeramicProteinABioSepraの適切なサイズのカラムにロードし、50mMTris-HClpH8.0、250mMNaClで洗浄した。0.1Mクエン酸ナトリウムpH3.0を用いて、結合IgGをカラムから溶離した後、Tris-HClpH9.0の添加により中和した。溶離した物質を、Nap10カラムAmersham,17-0854-02を用いて、PBSにバッファー交換した後、IgGのアミノ酸配列に基づく吸光係数を用いて、IgGの濃度を分光測光法により決定した。SEC-HPLCを用いて、またSDS-PAGEにより、精製IgGを凝集及び分解について分析した。8.3.3実施例3c:多角度レーザー光散乱SEC-MALLSと組み合わせたサイズ置換クロマトグラフィーによる抗体6IgG4ΔヒンジT366RY407R分子の特性決定SEC-MALLSを用いて、抗体6IgG4野生型及び抗体6IgG4Δヒンジと比較した抗体6IgG4ΔヒンジT366RY407R分子の分子量を決定した。100μlサンプルをまず、BioSep-SEC-S4000カラム300×7.8mm、Phenomenex部品番号00H-2147-K0、通し番号389524-11を用いて分析したが、上記カラムは、AgilentHP1100HPLCにより毎分1.0mLのDulbecco’sPBSで平衡した。DiodeArrayDetectorDADからの220及び280nmシグナルを用いて、ピークを検出した。HP1100DAD検出器からの溶出液をWyattTechnologiesDAWNEOS及びOptilabrEX検出器それぞれ、多角度レーザー光散乱及び屈折率検出器に通過させた。これら検出器からの出力をASTRAV5.1.9.1.ソフトウエアWyattTechnologyCorporation,SantaBarbara,USAを用いて処理した。0.184の屈折率増分dn/dc値を用いたグリコシル化IgGが約2.5質量のグリカンを有すると想定して計算した。D-PBS平衡カラムからの検出器1190°バックグラウンド光散乱値は<0.35ボルトであった。抗体6IgG4ΔヒンジT366RY407R変異体について算出されたサイズは約68kDaであり、一価分子と一致していたが、野生型IgG4及びIgG4Δヒンジの両者は、いずれも、二価分子について予想されるサイズと同様であった表4。8.3.4実施例3d:HeLa細胞からのリガンド誘導サイトカイン放出の阻害二価抗体6IgG4野生型及び抗体6IgG4Δヒンジと比較した一価抗体6IgG4ΔヒンジT366RY407Rの生物活性を決定するために、これらの活性をHeLaヒト細胞アッセイにおいて、リガンド誘導サイトカイン放出の用量依存的阻害を測定することにより、評価した。手短には、10ウシ胎仔血清及び1非必須アミノ酸を添加したMEM中に維持するHeLa細胞EuropeanCollectionofCellCultures,ECACCカタログ番号93021013を、1.5×104細胞/ウェルで96ウェル組織培養アッセイプレートに接種して、細胞を37°C及び5CO2の加湿雰囲気中で一晩16~18時間培養した。培地中で連続的に希釈した精製IgG変異体を、上記のHeLa細胞に、一晩培養した培地を除去せずに添加し、HeLa細胞と一緒に37°Cで30~60分プレインキュベートした。続いて、濃度EC50のリガンドアッセイにおいて最大応答の半分を達成するリガンドの濃度として定義されるを添加した後、37°C及び5CO2の加湿雰囲気中で4~5時間インキュベートした。上清条件培地を回収し、上清中のサイトカインレベルを、市販のELISAキットを用いて決定した。試験した各構築物のIC50を表5に示す。これらのデータは、一価抗体Ab6IgG4ΔヒンジT366RY407R構築物が生物活性を保持していることを示している。8.4実施例4:CH3-CH3界面の分子モデル化CH3-CH3界面の分析をヒトIgG1Fcドメインの高分解能結晶構造PDBアクセッションナンバー1H3U[3]及び唯一入手可能なIgG4Fcドメイン結晶構造PDBアクセッションナンバー1ADQ[4]で、PyMolソフトウエアワールドワイドウェブpymol.org[5]を用いて実施した。PDBアクセッションナンバーとは、ワールドワイドウェブpdb.orgでアクセス可能なProteinDataBankに関する。分子間接触に関与する残基は、ファンデルワールス半径0.5Åの和[6]より接近した原子団の任意の対を含む残基として定義されている。部位指定突然変異体の崩壊の可能性を、PyMol突然変異誘発ウィザードを用いて分析することにより、様々なアミノ酸鎖で置換した際の理論的衝突を確認した。CH3-CH3界面での分子間相互作用に関与する残基を表6に示す。界面での最も顕著な非ファンデルワールス相互作用は、T366とY407同士の2つの水素結合これは、分析した全ての結晶構造に存在する、及び構造に応じて起こりうる3つ又は4つの塩架橋E356-K439、D399-R409、K392-D399、及びR409-D399であった。T366及びY407は、CH3界面のコアで重要な残基であり、これら残基の両方がアルギニンへと突然変異することによって、Fcドメインの二量体化が阻止される実施例3参照。別の2つの残基L368及びF405は、この領域における有意な相互作用に関与するものとして識別されており、これらの位置での合理的突然変異もまたCH3ドメインの二量体化を阻止しうることを示している。既述したように、構造分析によって、二量体化界面に4つ以下の塩架橋が存在しうることが明らかになり、これらの位置での突然変異は、電荷反発を引き起こすか、又は単純に、Fc二量体形成に影響をもたらすことが推定される静電気相互作用を除去する。4つのコア界面残基T366、L368、F405及びY407並びに5つの塩架橋残基E356、D399、K392、R409及びK439に加えて、5つの残基E351、S364、L368、K370、T394からなる第3のセットが、ホモ二量体の向き合うCH3ドメイン上の同一残基、又は崩壊性突然変異の挿入例えば、互いに反対の同電荷の挿入を可能にする傾向が高いと思われる特定の残基のいずれかと相対するものとして識別された。また、CH3-CH3界面周辺における残基Y349、S354、E357からなる第4のセットも、二量体形成に影響を与える可能性があるものとして決定された。上記の位置での単一又は複数の部位指定突然変異の影響を分析するために、5アミノ酸からなる1セットを側鎖の各タイプを代表するものとして選択した:陽荷電アルギニン;陰荷電アスパラギン酸;大きな芳香族トリプトファン;小さな中性アラニン;及び親水性グルタミン。疎水基の挿入は、タンパク質-タンパク質界面を破壊するようではないと推論したことから、脂肪族側鎖は排除した。表7に記載の、合計65のIgG4CH3ドメイン単一、二重及び三重突然変異体を合理的に設計して、構築物を発現させ、ヒンジなしIgG4Fcドメインと同様に分析した。これら突然変異体のうちの21を、野生型ヒンジを含むIgG4Fcドメインと同様に設計、発現及び分析した。また、37のIgG1及び3つのIgG2ヒンジなしFcドメイン突然変異体も調べた。8.5実施例5:CH3-CH3界面領域におけるアミノ酸の突然変異誘発及びSEC-MALLS及びHPLCによる分析8.5.1実施例5a:突然変異誘発、タンパク質発現及び精製IgG1、2及び4のCH2及びCH3ドメインを既存の抗体構築物からのPCRによって増幅し、pEUベクターにクローン化して、目的とする3つのIgGサブクラスについてヒンジなしFcドメインの発現構築物を作製した。StratageneQuikChangeIISite-DirectedMutagenesisキットAgilentTechnologies,LaJolla,California,USAを用い、製造者の指示に従って、オリゴヌクレオチド指定突然変異誘発を実施した。組換えFcドメインの一過性発現を、EBNA-1遺伝子でトランスフェクトしたCHO細胞で実施した。100μg/mlのペニシリン及びストレプトマイシンを含有する細胞を、細胞1ml当たり1μgのDNAと一緒に、直線状PEIポリエチレンイミンを12:1のPEI:DNA比で用いて、1±0.1×106生存細胞/mlの細胞数でトランスフェクトした。細胞にCHOCDEfficientFeedBInvitrogen,Paisley,UKを2日目及び5日目に供給し、7日後に遠心分離により回収した。上清を0.22μMフィルターでろ過してから、Fcドメインを、VivapuremaxiprepGスピンカラムSartorius,Epsom,Surrey,UKを用いて、プロテインGアフィニティカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶離したサンプルを濃縮し、Nap10カラムGEHealthcare,Uppsala,Swedenを用いてPBSにバッファー交換し、タンパク質純度をSDS-PAGEにより分析した。典型的な収率は、初めの培養物1リットル当たり>95純度のタンパク質約50~100mgであった。8.5.2実施例5b:多角度レーザー光散乱光散乱を分別に即して実施したSEC-MALLSが、これは、実施例3bに記載したのと同じ方法で実施した。DAWN-HELEOS及びOptilabrEX計器WyattTechnologyCorp.,SantaBarbara,California,USAをそれぞれ用いて、光散乱及び示差屈折率を検出した。突然変異体のデータは、取得可能な場合、それらを表7に示す。以前、全抗体として分析された野生型IgG4及びT366R/Y407R二重変異体のFcドメインを光散乱によって分析して、タンパク質の分子量の正確な測定値±3を決定し、このようにしてFcドメインのモノマー又は二量体性を決定する。366位及び407位での単一アルギニン突然変異体も、さらに別の7つの突然変異体と共に分析した。図1は、野生型と比較したT366R/Y407Rサンプルの光散乱データを示す。モノマーFcドメインについてMALDI-TOF質量分析によって決定した分子量は、約25.9kDa2つの等しく集合した糖型からなるであったため、二量体は51.8kDaの質量を有すると推定された。従って、野生型IgG4Fcドメインの光散乱から得られた52kDaの分子量は、推定分子量と十分に一致し、野生型が、上記の条件下では排他的に二量体であることを示している。しかし、T366R、Y407R及びT366R/Y407R突然変異体は、より低い見掛け分子量32~35kDaを有し、モノマー種について予想されるものに近づくものの、完全には一致しない。8.5.3実施例5c:サイズ排除クロマトグラフィーAgilent1100シリーズHPLCで、Superdex7510/300GLカラムGEHealthcare,Uppsala,Swedenを用いたサイズ排除クロマトグラフィーSECにより精製タンパク質サンプルを分析した。濃度0.8mg/mlの各サンプル50μlを、オートサンプラーでカラムにインジェクトして、リン酸緩衝食塩水泳動バッファーにおいて流量0.5ml/分で泳動を実施した。野生型Fcドメインのサンプルを各バッチと一緒にロードし、直接比較した。また、すべてのサンプルは2回繰り返して泳動させた。光散乱データと一致して、図2に示すように、65のIgG4突然変異体のHPLC分析によって、サンプルを、二量体のものと、モノマーのものとにおおまかに分離することはできないことが明らかにされた。表7は、サイズ排除HPLCを用いた65のIgG4突然変異体についてのデータを示す。分析から、IgG4突然変異体には、二量体と一致する分子量で溶離したものもあれば、モノマーの分子量で溶離したものもあったことがわかった。さらに、中間の保持時間で溶離したIgG4突然変異体もあった。これらのサンプルには、2つの種の間の平衡によって、モノマー及び二量体保持時間の間に急速な交換があると考えられる。SEC保持時間と、クロマトグラムの外観例えば、明らかに単分散性のサンプル、又はピークの広がり又は二重ピークから種の明瞭な混合物に基づいて3つの任意の群にさらに分類した結果、19の二量体野生型を除く、18のモノマー-二量体平衡状態のもの、及び優勢にモノマー種を示す有意に小さい分子量を有する28の突然変異体が得られた。疑いのないように言えば、単独で組み込まれると二量体を生成する突然変異体は、モノマー又は平衡状態の種をもたらす他の突然変異と組み合わせると、モノマーを生成しうることは当業者にはあきらかであろう。表にモノマーという表記が用いられている場合、当業者であれば、これらの種の構造をさらに調べるのに利用可能な別の実験方法を認識されるであろう。Fcドメイン相互作用におけるヒンジ領域の役割をさらに詳しく調べるために、17のモノマーヒンジなしIgG4突然変異体及び少数の他の突然変異体を、野生型ヒンジを含むIgG4Fcドメインに転換し、精製したタンパク質をHPLCにより分析した。すべてのサンプルは、R409W突然変異体を除いてヒンジなしドメインについて観察されたものと類似の挙動を示した。R409W突然変異体は、ヒンジなしIgG4Fcドメインのような優勢にモノマー種としての挙動と比較して、モノマー及び二量体のほぼ等分の集団を含んでいた。残る16のモノマー突然変異体はすべて、ピーク積分により測定すると、30を下回る二量体を含んでいた表8。これは、37°Cで2週間のインキュベーションの結果、SDS-PAGE又はHPLCによるはっきりとした変化の兆候を全く示さなかったことから、非還元条件下で静的集団であることがわかった。表9に、表示位置でのモノマーFcIgG4Fcのみを形成する突然変異のタイプをまとめた。8.6実施例6:IgG1及び2のHPLC分析図3のクロマトグラムは、IgG4のサブクラスと比較した、IgGサブクラス1及び2の単一及び二重T366R/Y407R突然変異体についての分析SECデータを示す。3つのサブクラスの突然変異体は、配列アラインメントによるほぼ同じ界面残基を有するにもかかわらず、それぞれ挙動が異なる。IgG1及び2の両方について、Y407R突然変異体は、性質が最もモノマー的に見えるのに対し、T366R及びT366R/Y407R突然変異体は、混合集団の明らかな兆候を示している。これを29のヒンジなしIgG1Fcドメイン突然変異体の作製によってさらに分析した。IgG4サブタイプとしてモノマーであった21の突然変異体を調べると、そのうち11の突然変異体のみがIgG1としてモノマーであった表10。IgGサブクラス、R355Q、Q419E及びP445Lの間で異なる残基のうち3つは、分子間相互作用に関与しておらず、従って、CH3二量体の安定性に大きな影響をもたらさないはずである。しかし、R409Kは、2つのCH3ドメイン間の界面にあり、また、K409は、Fc二量体の安定性に大きく寄与することが以前明らかにされている[7]。IgG4様界面すなわち、K409Rを生成するためのIgG1突然変異体の部位指定突然変異誘発によって、表10から明らかなように、IgG4について観察された状態に逆転した突然変異体のいくつかが得られた。本発明は、安定な半抗体の初めての作製及び特性決定を示すものであり、Fcドメインの有利な特性、例えば、長い半減期は維持しながら、二価抗体による抗原の架橋がもたらしうる、時に不要なアゴニスト作用に解決策を提供する。これは、増大したサイズ及び/又はFcRn再生により半減期を延長するペプチド、タンパク質又はポリマーとの融合なしに、他の非活性化抗体フォーマット又は新規のスカフォールドが有していない独特の特性であり、従って、一価抗体を魅力的な選択肢にする。8.7実施例7:SedimentationVelocityAnalyticalUltraCentrifugation沈降速度分析超遠心分離SV-AUCSedimentationVelocityAnalyticalUltraCentrifugationSV-AUCを複数のヒンジなし構築物に実施して、沈降係数及び見掛け溶解分子量を決定した。実験及び分析をM-ScanLtd.Workingham,UKで実施した。SV-AUCは、20°CでBeckmanCoulterXL-AAUC計器で実施した。濃度28~42μMのサンプルをXL-AAUC細胞のサンプルセクターにロードし、PBSバッファーを細胞の対照セクターにロードした。波長γスキャンを実施して、配列スキャンに用いることができる好適なγを取得した得られたデータが、BeerLambertの法則が依然として有効である、すなわち吸光度≦1.0であるスペクトル領域であるとき。これに基づき、300nmのλを選択した。初期SVスキャンを3,000rpmで開始して、重い凝集体の存在を確認した。界面移動は観察されなかったが、これはサンプル中に大きな沈殿物が存在しないことを意味する。最終ローター速度40,000rpmを、6分間隔での200スキャンと共に選択した。得られたデータを、SEDFITプログラムを用いて評価して、スベドベリ単位Sで記録される沈降係数s値のcsプロフィールを取得した。平均部分比体積0.73ml/g20°CでをSEDFIT分析に用いた。コンピュータープログラムSEDNTERPを用いて、バッファー密度及びPBSのバッファー粘度を計算した。バッファー密度の値1.00534とPBSの粘度ポアズ0.01002を算出した。3つのヒンジなしFcサンプルについて得られた沈降係数をまとめたものを表11に示す。このデータの分布グラフを図4に示す。野生型ヒンジなしIgG4Fcドメインの主要種は、3.7Sのs値を示した。cMへの変換によって、3.7S成分の見掛け溶解分子量は、51.2kDaとなったが、これは、ホモ二量体の予想分子量と一致する。2.4Sのs値と1.2の相対UV吸収率を有する、より小さい成分は、見掛け溶解分子量が27.4kDaであったが、これは、モノマーの予想分子量と近似で一致する図4A。ヒンジなしIgG4Y349DFcドメインの主要種は、3.5Sのs値を示した。cMへの変換によって、3.5S成分の見掛け溶解分子量は、43.3kDaとなったが、これは、ホモ二量体成分の予想分子量より低い。この結果は、HPLCデータと一致しており、これは、上記の特定の突然変異体が、急速モノマー-二量体平衡にあることを示している図4B。ヒンジなしIgG4T394DFcドメインの主要種は、2.4Sのs値を示した。cMへの変換によって、2.4S成分の見掛け分子量は、26.8kDaとなったが、これは、モノマーFcドメインの予想分子量と一致する。ホモ二量体の存在は、この突然変異体については検出されなかった図4C。実施例で使用した試薬は市販のものであってもよいし、又は当該技術分野で公知の市販の計器類、方法、又は試薬を用いて調製してもよい。前述の実施例は、本発明の様々な形態、及び本発明の方法の実施を示すものである。これらの実施例は、本発明の多くの異なる実施形態の網羅的な説明の提供を意図するものではない。従って、前述の発明は、理解を明瞭にするために説明及び例として幾分詳細に記載されているが、当業者であれば、添付の特許請求の範囲を逸脱することなく、多くの変更及び改変をこれらに加えうることは容易に理解されよう。8.8実施例8:マウスにおける薬物動力学的試験BALB/cマウス1グループ当たり5匹に、10mg/kg体重IVボラス用量の野生型IgG4、グリコシル化一価IgG4C226Q/C229Q/T394D突然変異からなる又はアグリコシル化一価IgG4C226Q/C229Q/N297Q/T394D突然変異からなるを投与した。野生型IgG4及びアグリコシル化一価IgG4については、5分、1、2、4、7、10、13及び16日おきに、またグリコシル化一価IgG4については5分、2、4及び7日置きに血漿サンプルを回収した。抗ヒトIgG4Fcポリクローナル抗体を用いた抗体の捕捉と、抗ヒトλ軽鎖モノクローナル抗体を用いた検出とを含むMSD免疫アッセイにより、タンパク質濃縮物をアッセイした図5。各グループについて、WinNoLinソフトウエアを用いて、時間0から最終測定可能時間までの濃度時間曲線下面積AUCINF、クリアランス、β半減期、及び最大濃度Cmaxの薬物動力学的パラメーターを計算したが、その際、非コンパートメント分析又は2コンパートメントモデル化のいずれかを用いた。得られた結果を表12に示す。一価IgG4の半減期は、13日の半減期を有する野生型IgG4と比較すると、約20時間である。血漿半減期は、インタクトなIgG4について観測されたものより短かったが、一価抗体の20時間という血漿半減期は、げっ歯類におけるFab分子の一般的半減期概して、0.5~3.5時間に対して有意な改善を示している例えば、[8]、[9]、[10]、及び[11]参照。血漿半減期が短いのは、より小さい一価抗体の糸球体ろ過の増加及び/又はFcRnの結合活性の減少によると考えられる。8.9:実施例9:マウスIgG1CH3-CH3界面領域におけるアミノ酸の突然変異誘発並びにSEC-MALLS及びHPLCによる分析タンパク質を基材とする治療薬の効果を評価するのに、マウスモデルなどいくつかの動物モデル系が一般に用いられている。これらの試験は、代用分子、例えば、マウス抗体、又はマウスFc領域を組み込んだ融合タンパク質を使用して十分に実施することができる。さらに突然変異誘発スクリーンを実施して、モノマーマウス抗体の作製に有用なFc突然変異を識別した。いくつかの部位指定突然変異を含むヒンジなしマウスIgG1Fcドメインを実施例5のヒト構築物と同様に作製した。突然変異の選択は、主としてヒトモノマーFc操作から得たデータによって決定した。HPLC及びSEC-MALLSを実施して、突然変異型マウスIgG1Fcの特性を決定したが、表13にデータをまとめる。表13に概要を示すように、モノマーヒトFcドメインの形成をもたらす突然変異の大部分は、モノマーマウスFcドメインの形成をもたらさない。しかし、突然変異F405Rは、主にモノマーであるマウスIgG1Fcドメインを生成し、いくつかの突然変異は、モノマー-二量体平衡状態にあるマウスIgG1Fcドメインを生成する。本明細書に記載するすべての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物、特許又は特許出願が、参照として本明細書に組み込まれると明示的かつ個別に表示されているのと同じ程度まで、本明細書に参照として組み込むものとする。参考文献[1]Persic,L.etal.Gene.1871:9-18,1997[2]Clackson,T.andLowman,H.B.PhageDisplay-APracticalApproach,2004.OxfordUniversityPress[3]Krapp,S.,Mimura,Y.,Jefferis,R.,Huber,R.Sondermann,P.StructuralanalysisofhumanIgG-Fcglycoformsrevealsacorrelationbetweenglycosylationandstructuralintegrity.Journalofmolecularbiology325,979-9892003[4]Corper,A.L.etal.StructureofhumanIgMrheumatoidfactorFabboundtoitsautoantigenIgGFcrevealsanoveltopologyofantibody-antigeninteraction.Naturestructuralbiology4,374-3811997.[5]DeLano,W.L.ThePyMOLUser’sManual.DeLanoScientific,PaloAlto,Ca,USA;2002[6]Tsai,C.J.,Lin,S.L.,Wolfson,H.J.Nussinov,R.Adatasetofprotein-proteininterfacesgeneratedwithasequence-order-independentcomparisontechnique.Journalofmolecularbiology260,604-6201996[7]Dall’Acqua,W.,Simon,A.L.,Mulkerrin,M.G.Carter,P.ContributionofdomaininterfaceresiduestothestabilityofantibodyCH3domainhomodimers.Biochemistry37,9266-92731998.[8]Chapmanetal.1999.Therapeuticantibodyfragmentswithprolongedinvivohalf-lives.NatureBiotechnology,17,780-783.[9].Nguyenetal.2006.Thepharmacokineticsofanalbumin-bindingFabAB.Fabcanbemodulatedasafunctionofaffinityforalbumin.ProteinEngineering,DesignandSelection,19,291-297.[10]Pepinskyetal.2011.ProductionofaPEGylatedFab’oftheanti-LINGO-1Li33antibodyandassessmentofitsbiochemicalandfunctionalpropertiesinvitroandinaratmodelofremyelination.BioconjugateChemistry,22,200-210.[11]Valentineetal.1994.Anti-phencyclidinemonoclonalFabfragmentsmarkedlyalterphencyclidinepharmacokineticsinrats.TheJournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics,269,1079-1085."