"アミノ酸配列LCLRP配列番号1を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体。前記ペプチドまたはその機能的に同等な変異体が、そのN末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸1~15に連続的に相当する1個または複数のアミノ酸、および/またはそのC末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸21~35に連続的に相当する1個または複数のアミノ酸をさらに含む、請求項1に記載のペプチド。アミノ酸配列LCLRPVG配列番号2を含む請求項2に記載のペプチドまたはその機能的に同等な変異体。アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号3を含む請求項2に記載のペプチドまたはその機能的に同等な変異体。アミノ酸配列LCLRPVG配列番号2、LCLRPVGAE配列番号4、LCLRPVGAESR配列番号5、LCLRPVGAESRGRPV配列番号90またはLCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6からなる請求項4に記載のペプチド。アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号3からなるアミノ酸配列からなる請求項4に記載のペプチド。アミノ酸配列MAARLCCQ配列番号7を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体。前記ペプチドまたはその機能的に同等な変異体が、そのC末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸9~35に連続的に相当する1個または複数のアミノ酸をさらに含む、請求項7に記載のペプチド。アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDV配列番号8を含む請求項8に記載のペプチドまたはその機能的に同等な変異体。アミノ酸配列MAARLCCQ配列番号7またはMAARLCCQLDPARDV配列番号8からなる請求項7から9のいずれか一項に記載のペプチド。請求項1から10のいずれか一項に記載のペプチドまたは機能的に同等な変異体をコードする核酸。請求項11に記載の核酸を含む核酸ベクター。化合物のための細胞膜透過性担体としての、請求項1から10のいずれか一項に記載のペプチドまたは機能的に同等な変異体の使用。請求項1から10のいずれか一項に記載のペプチドまたは機能的に同等な変異体と、細胞に送達することが望まれる少なくとも1種の化合物とを含む構造体。前記化合物が、核酸、ペプチド核酸、ポリペプチド、炭化水素、ペプチド模倣体、低分子阻害剤、プロテオグリカン、脂質、リポタンパク質、糖脂質、天然生成物または糖模倣体である、請求項14に記載の構造体。前記化合物が、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9もしくはその機能的に同等な変異体、KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10もしくはその機能的に同等な変異体、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11もしくはその機能的に同等な変異体、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはその機能的に同等な変異体、またはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91もしくはその機能的に同等な変異体を含むペプチドである、請求項15に記載の構造体。前記化合物が、HIF1αのODDMLAPYIPM配列番号13またはその機能的に同等な変異体である、請求項15に記載の構造体。請求項14から17のいずれか一項に記載の構造体をコードする核酸。請求項18に記載の核酸を含むベクター。請求項1から10のいずれか一項に記載のペプチドまたは機能的に同等な変異体を化合物に結合するステップを含む、化合物の細胞膜透過性を増加させる方法。化合物と請求項1から10のいずれか一項に記載のペプチドまたは機能的に同等な変異体とを含む構造体を、細胞または前記細胞を含む組成物に接触させるステップを含む、化合物を細胞中に送達する方法。化合物と請求項1から10のいずれか一項に記載のペプチドまたは機能的に同等な変異体とを含む構造体を被験体に投与するステップを含む、化合物を細胞中に送達する方法。前記化合物が、細胞の細胞質に送達される、請求項22に記載の方法。前記化合物が、細胞の核に送達される、請求項22に記載の方法。Xタンパク質の機能の拮抗薬としての、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体の使用。前記ペプチドが、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含む、請求項25に記載の使用。アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を、Xタンパク質またはXタンパク質を含む組成物に接触させるステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法。前記ペプチドが、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含む、請求項27に記載の方法。アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法。前記ペプチドが、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含む、請求項29に記載の方法。アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、B型肝炎ウイルス感染症を治療する方法。前記ペプチドが、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含む、請求項31に記載の方法。アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、肝細胞癌の発生を治療または阻害する方法。前記ペプチドが、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含む、請求項33に記載の方法。分解分子とアミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体。前記ペプチドが、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含む、請求項35に記載の構造体。前記分解分子が、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である、請求項35または36に記載の構造体。前記分解分子が、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10またはその機能的に同等な変異体、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11またはその機能的に同等な変異体、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12またはその機能的に同等な変異体、GGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91またはその機能的に同等な変異体を含むペプチドである、請求項37に記載の構造体。前記分解分子が、アミノ酸配列MLAPYIPM配列番号13を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である、請求項35または36に記載の構造体。核酸ベクターを含む請求項35から39のいずれか一項に記載の構造体をコードする核酸。請求項35から39のいずれか一項に記載の構造体を被験体に投与するステップを含む、HBV感染症を治療する方法。請求項35から39のいずれか一項に記載の構造体を被験体に投与するステップを含む、肝細胞癌の発生を治療または阻害する方法。請求項35から39のいずれか一項に記載の構造体を、Xタンパク質またはXタンパク質を含む組成物に接触させるステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法。請求項14から17のいずれか一項に記載の構造体を、細胞の混合集団または細胞の混合集団を含む組成物に接触させるステップを含む、接着細胞および非接着細胞の混合集団中の接着細胞への化合物の送達を標的化する方法。請求項14から17のいずれか一項に記載の構造体を被験体に投与するステップを含む、被験体中の接着細胞への化合物の送達を標的化する方法。少なくとも1種の標的化分子とアミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体。アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10もしくはその機能的に同等な変異体、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11もしくはその機能的に同等な変異体、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはその機能的に同等な変異体、またはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91もしくはその機能的に同等な変異体を含むペプチドを含む、請求項46に記載の構造体。前記標的化分子が、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90もしくはその機能的に同等な変異体、またはアミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6もしくはその機能的に同等な変異体を含む、請求項46または47に記載の構造体。前記標的化分子が、B-raf、N-rasおよびPDGF受容体の1種または複数を標的化する、請求項46から48のいずれか一項に記載の構造体。B-rafを標的化する前記標的化分子が、B-rafのオリゴマー形成ドメインまたはその一部を含む、請求項49に記載の構造体。B-rafの前記ペプチドが、アミノ酸配列LNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号89もしくはその機能的に同等な変異体、TTHNFVRKTFFTLAFCDFCRKLL配列番号92もしくはその機能的に同等な変異体、またはSLPGSLTNVKALQKSPGPQRERK配列番号93もしくはその機能的に同等な変異体を含む、請求項50に記載の構造体。B-rafを標的化し、アミノ酸配列RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号19またはその機能的に同等な変異体を含む、請求項51に記載の構造体。前記標的化分子が、N-Rasを標的化し、アミノ酸配列RKTFLKLA配列番号94もしくはその機能的に同等な変異体、またはCCAVFRL配列番号95もしくはいずれかの機能的に同等な変異体を含む、請求項49に記載の構造体。前記標的化分子が、PDGF受容体を標的化し、アミノ酸配列MPNLWFLLFLGLVAAMQLLLLLFLLLFFLVYWDHFECSCTGLPF配列番号96またはその機能的に同等な変異体を含む、請求項49に記載の構造体。核酸ベクターを含む、請求項46から54のいずれか一項に記載の構造体をコードする核酸。分解するためのタンパク質を標的化するための、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体の使用。前記ペプチドが、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10もしくはその機能的に同等な変異体、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11もしくはその機能的に同等な変異体、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはその機能的に同等な変異体、またはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91もしくはその機能的に同等な変異体を含む、請求項56に記載の使用。請求項46から54のいずれか一項に記載の構造体または請求項55に記載の核酸を、タンパク質を含む組成物に提供するステップを含む、タンパク質を分解する方法。前記タンパク質を含む前記組成物が、細胞を含む、請求項58に記載の方法。前記構造体または核酸を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、請求項58に記載の方法。1種または複数のタンパク質の望ましくない濃度または活性に関連する疾患を治療するための薬剤の製造への請求項46から54のいずれか一項に記載の構造体または請求項55に記載の核酸の使用。請求項49から54のいずれか一項に記載の構造体または前記構造体をコードする核酸を被験体に投与するステップを含む、黒色腫を治療する方法。請求項49から54のいずれか一項に記載の構造体をコードする核酸または前記構造体をコードする核酸を被験体に投与するステップを含む、黒色腫を治療する方法。黒色腫を治療するための薬剤の製造への、請求項49から54のいずれか一項に記載の構造体または前記構造体をコードする核酸の使用。請求項11、12、18、19、40または55のいずれか一項に記載の核酸を含む宿主細胞。新規なペプチド、同ペプチドを含む抱合体および/またはその使用を提供すること、あるいは少なくとも公衆に有用な選択を提供することが本発明の目的である。本発明の一実施形態では、アミノ酸配列LCLRP配列番号1を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体が提供される。本発明の一実施形態では、アミノ酸配列LCLRPVG配列番号2を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体が提供される。本発明の一実施形態では、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号3を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体が提供される。一実施形態では、ペプチドまたは機能的に同等な変異体は、そのN末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸1~15に連続的に相当する1個または複数のアミノ酸、および/またはそのC末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸21~35に連続的に相当する1個または複数のアミノ酸をさらに含む。一実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVG配列番号2からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAE配列番号4からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESR配列番号5からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号3からなる。第2の広い態様では、本発明は、アミノ酸配列MAARLCCQ配列番号7を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を提供する。一実施形態では、ペプチドまたは機能的に同等な変異体は、そのC末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸9~15に連続的に相当する1個または複数のアミノ酸をさらに含む。一実施形態では、ペプチドまたは機能的に同等な変異体は、そのC末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸9~35に連続的に相当する1個または複数のアミノ酸をさらに含む。一実施形態では、本発明は、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDV配列番号8を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を提供する。一実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQ配列番号7からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDV配列番号8からなる。第3の広い態様では、本発明は、第1または第2の広い態様のペプチドまたは機能的に同等な変異体をコードする核酸を提供する。第4の広い態様では、本発明は、第3の広い態様の核酸を含む核酸ベクターを提供する。第5の広い態様では、本発明は、化合物のための細胞膜透過性担体としての、第1または第2の広い態様のペプチドまたは機能的に同等な変異体の使用を提供する。第6の広い態様では、本発明は、少なくとも1種の第1または第2の広い態様のペプチドまたは機能的に同等な変異体と、細胞に送達することが望まれる少なくとも1種の化合物とを含む構造体を提供する。一実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRP配列番号1からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVG配列番号2からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAE配列番号4、LCLRPVGAESR配列番号5、LCLRPVGAESRGRPV配列番号90、LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6またはMAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号3からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQ配列番号7からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDV配列番号8からなる。一実施形態では、化合物は、核酸、ペプチド核酸、ポリペプチド、炭化水素、ペプチド模倣体、低分子阻害剤、プロテオグリカン、脂質、リポタンパク質、糖脂質、天然生成物または糖模倣体である。一実施形態では、化合物は、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。他の実施形態では、化合物は、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91を含むペプチド、またはその機能的に同等な変異体である。別の実施形態では、化合物は、HIF1αの酸素依存的分解ODDMLAPYIPM配列番号13またはその機能的に同等な変異体である。第7の広い態様では、本発明は、第6の広い態様の構造体をコードする核酸を提供する。第8の広い態様では、本発明は、第7の広い態様の核酸を含むベクターを提供する。第9の広い態様では、本発明は、本発明の第1または第2の広い態様のペプチドまたは機能的に同等な変異体を化合物に結合するステップを含む、化合物の細胞膜透過性を増加させる方法を提供する。第10の広い態様では、本発明は、化合物と本発明の第1または第2の広い態様のペプチドまたは機能的に同等な変異体とを含む構造体を、細胞または細胞を含む組成物に接触させるステップを含む、化合物を細胞中に送達する方法を提供する。関連する広い態様では、本発明は、化合物と本発明の第1または第2の広い態様のペプチドまたは機能的に同等な変異体とを含む構造体を被験体に投与するステップを含む、化合物を細胞中に送達する方法を提供する。一実施形態では、化合物は、細胞の細胞質に送達される。別の実施形態では、化合物は、細胞の核に送達される。第13の広い態様では、本発明は、Xタンパク質の機能の拮抗薬としての、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、Xタンパク質の機能の拮抗薬としての、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体の使用を提供する。第14の広い態様では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を、Xタンパク質またはXタンパク質を含む組成物に接触させるステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を、Xタンパク質またはXタンパク質を含む組成物に接触させるステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法を提供する。関連する広い態様では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法を提供する。第15の広い態様では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、B型肝炎ウイルス感染症を治療する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、B型肝炎ウイルス感染症を治療する方法を提供する。第16の広い態様では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、肝細胞癌の発生を治療または阻害する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体を被験体に投与するステップを含む、肝細胞癌の発生を治療または阻害する方法を提供する。第17の広い態様では、本発明は、少なくとも1種の分解分子とアミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体を提供する。一実施形態では、本発明は、少なくとも1種の分解分子とアミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体を提供する。一実施形態では、分解分子は、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。他の実施形態では、分解分子は、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91を含むペプチド、またはその機能的に同等な変異体である。別の実施形態では、分解分子は、アミノ酸配列MLAPYIPM配列番号13を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。第18の広い態様では、本発明は、本発明の第17の広い態様の構造体を被験体に投与するステップを含む、HBV感染症を治療する方法を提供する。第19の広い態様では、本発明は、本発明の第17の広い態様の構造体を被験体に投与するステップを含む、肝細胞癌の発生を治療または阻害する方法を提供する。第20の広い態様では、本発明は、本発明の第17の広い態様の構造体を、Xタンパク質またはXタンパク質を含む組成物に接触させるステップを含む、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法を提供する。第21の広い態様では、本発明は、第6の広い態様の構造体を、細胞の混合集団または細胞の混合集団を含む組成物に接触させるステップを含む、接着細胞および非接着細胞の混合集団中の接着細胞への化合物の送達を標的化する方法を提供する。関連する広い態様では、本発明は、第6の広い態様の構造体を被験体に投与するステップを含む、被験体中の接着細胞への化合物の送達を標的化する方法を提供する。第27の広い態様では、本発明は、少なくとも1種の標的化分子とアミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体を提供する。他の実施形態では、構造体は、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91を含むペプチド、またはその機能的に同等な変異体を含む。一実施形態では、標的化分子は、Xタンパク質を標的化する。特定の一実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90またはその機能的に同等な変異体を含む。別の実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6またはその機能的に同等な変異体を含む。別の実施形態では、標的化分子は、B-rafを標的化する。特定の一実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列LNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号89またはその機能的に同等な変異体を含む。他の実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列TTHNFVRKTFFTLAFCDFCRKLL配列番号92もしくはSLPGSLTNVKALQKSPGPQRERK配列番号93またはいずれかの機能的に同等な変異体を含む。特定の一実施形態では、構造体は、B-rafを標的化し、アミノ酸配列RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号19またはその機能的に同等な変異体を含む。別の実施形態では、標的化分子は、タンパク質N-Rasを標的化する。一実施形態では、標的化分子は、Raf-1からのペプチドを含む。一実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列RKTFLKLA配列番号94もしくはCCAVFRL配列番号95またはいずれかの機能的に同等な変異体を含む。別の実施形態では、標的化分子は、PDGF受容体を標的化する。一実施形態では、標的化分子は、ウシパピローマウイルスE5タンパク質からのペプチドを含む。一実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列MPNLWFLLFLGLVAAMQLLLLLFLLLFFLVYWDHFECSCTGLPF配列番号96またはその機能的に同等な変異体を含む。特定の一実施形態では、構造体は、少なくとも2個の標的化分子を含む。第28の広い態様では、本発明は、第27の広い態様の構造体をコードする核酸を提供する。本発明はまた、前記核酸を含むベクターも提供する。第29の広い態様では、本発明は、分解するためのタンパク質を標的化するための、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体の使用を提供する。他の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91、またはその機能的に同等な変異体を含む。第30の広い態様では、本発明は、第27の広い態様の構造体または第28の広い態様の核酸を、タンパク質を含む組成物に提供するステップを含む、タンパク質を分解する方法を提供する。一実施形態では、タンパク質を含む組成物は、細胞を含む。関連する実施形態では、本方法は、構造体または核酸を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む。別の広い態様では、本発明は、1種または複数のタンパク質の望ましくない濃度または活性に関連する疾患を治療するための薬剤の製造への第27の広い態様の構造体または第28の広い態様の核酸の使用を提供する。別の広い態様では、本発明は、B-raf、N-rasおよびPDGF受容体の1種または複数を標的化する標的化分子とアミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体を被験体に投与するステップを含む、黒色腫を治療する方法を提供する。関連する態様では、本発明は、B-raf、N-rasおよびPDGF受容体の1種または複数を標的化する標的化分子とアミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体をコードする核酸を被験体に投与するステップを含む、黒色腫を治療する方法を提供する。別の態様では、本発明は、黒色腫を治療するための薬剤の製造への、B-raf、N-rasおよびPDGF受容体の1種または複数を標的化する標的化分子とアミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体の使用を提供する。関連する態様では、本発明は、黒色腫を治療するための薬剤の製造への、B-raf、N-rasおよびPDGF受容体の1種または複数を標的化する標的化分子とアミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体をコードする核酸の使用を提供する。一実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列LNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号89またはその機能的に同等な変異体を含む。他の実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列TTHNFVRKTFFTLAFCDFCRKLL配列番号92もしくはSLPGSLTNVKALQKSPGPQRERK配列番号93またはいずれかの機能的に同等な変異体を含む。特定の一実施形態では、構造体は、アミノ酸配列RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号19またはその機能的に同等な変異体を含む。一実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列RKTFLKLA配列番号94もしくはCCAVFRL配列番号95またはいずれかの機能的に同等な変異体を含む。一実施形態では、標的化分子は、アミノ酸配列MPNLWFLLFLGLVAAMQLLLLLFLLLFFLVYWDHFECSCTGLPF配列番号96またはその機能的に同等な変異体を含む。別の態様では、本発明は、第17の態様の構造体をコードする核酸を提供する。別の態様では、本発明は、前記核酸を含むベクターを提供する。別の態様では、本発明は、本発明の核酸またはベクターを含む宿主細胞を提供する。別の態様では、本発明は、本明細書前記の任意の目的のための、本発明のペプチドもしくは構造体をコードする核酸、または前記核酸を含む核酸ベクターの使用を提供する。さらに、本発明は、本発明のペプチドもしくは構造体をコードする核酸、または前記核酸を含む核酸ベクターを利用する、本明細書前記の方法を提供する。本発明はまた、大まかに、本出願の明細書中に言及するもしくは示す部分、要素または特徴の2つ以上の任意のまたは全ての組み合わせで、個別にまたは全体として、前記部分、要素および特徴に存すると言うこともでき、本発明が関する技術分野で既知の同等物を有する特定の整数が本明細書に言及されている場合、前記既知の同等物は、あたかも個別に示されているかのように本明細書に組み込まれるとみなされる。新規な態様全てで考慮すべきである、本発明のこれらのおよび他の態様は、添付の図面を参照して、以下の説明から明らかになるだろうが、この説明は例示のために与えられるに過ぎない。いくつかの図面は、異なる色で標識もしくは染色された細胞または核を説明している。特に明言しない限り、黒および白で複製する場合、これらの図面中目に見える全ての点は、使用した標識または染色により、細胞または核を表している。さらに、これらの図面中、合併結果は、核染色の発生と一致する細胞染色を説明している。一般的に、中心領域は核を表し、ハローは全体として細胞細胞質を含むを表している。以下は、一般用語で示される、その好ましい実施形態を含む本発明の説明である。本発明は、本発明を裏付ける実験データ、本発明の種々の態様の特定の例および本発明を実施する手段を提供する、本明細書中以下の見出し実施例の下に与えられる開示からさらに明らかにされる。本発明者らは、驚くべきことに、細胞透過性のB型肝炎ウイルスHBVのXタンパク質由来のペプチドモチーフを同定した。これらのペプチドは、化合物を細胞細胞の細胞質および核を含むに送達するための細胞透過性担体として使用することができる。これらのペプチドは、以下を含むいくつかの利点を有する:これらのペプチドは、サイズが小さく、これらを製造するのに比較的経済的にしている;これらのペプチドは、接着細胞を標的化し、そのため、血液細胞などの非接着細胞により取り込まれないので、接着細胞への化合物の送達の効率を増加させることができる。本発明者らは、治療用化合物を被験体に送達するため、ならびに研究目的のためのペプチドの使用を意図している。本発明者らはまた、驚くべきことに、Xタンパク質の二量体形成に必要とされるペプチドモチーフを同定した。これらのペプチドは、Xタンパク質の機能に拮抗し、本発明者らは、HBV感染症の治療および/または管理、HCCの治療および/または予防、ならびに研究目的のためのその使用を意図している。さらに、これらのペプチドは、Xタンパク質を標的化および破壊するために、分解分子例えば、Xタンパク質の不安定性ドメイン、または低酸素誘導因子1αHIF-1αの酸素依存的分解ODDドメインに抱合させることができる。このような構造体はまた、HBV感染症の治療および/または管理、HCCの治療および/または予防に利点を有し、ならびに研究目的に有用となり得る。さらに、本発明者らは、Xタンパク質の不安定性ドメインをタンパク質の分解を誘発するために使用することができることを示した。したがって、不安定性ドメインを、特定のタンパク質を標的化する分子に連結させて、分解するためのタンパク質を標的化または標識する構造体を形成することができる。このような構造体は、研究目的および治療上のいくつかの応用への用途を有することができる。例えば、このような構造体を、細胞中の望ましくないタンパク質活性もしくはタンパク質濃度を阻害または減少させるために使用することができるだろう。本明細書で使用する場合、用語治療とは、最も広義の文脈で考慮されるべきである。この用語は、完全に回復するまで被験体を治療することを必ずしも意味しない。したがって、治療には、例えば、1つまたは複数の障害の症状、1つまたは複数の症状の重症度の予防、寛解または管理、ならびに二次合併症の発生を予防するまたはそうでなくてもそのリスクを低下させることが広く含まれる。例えば、HBV感染症の場合、治療には、ウイルス量の減少、もしくはウイルス量の進行中の管理、およびHBV感染症から生じる二次合併症の発生、特にHCCの発生を予防するもしくはそうでなくてもそのリスクを低下させることが含まれる。疾患の予防は、疾患発生を完全に防ぐことを意味するよう解釈すべきではなく、これには疾患発生を遅らせることも含まれる。ペプチドおよび機能的に同等な変異体一実施形態では、本発明は、アミノ酸配列LCLRP配列番号1を含むペプチドまたは前記ペプチドの機能的に同等な変異体を提供する。この中心アミノ酸配列は、HBVの成熟Xタンパク質のアミノ酸位置16~20に対応するGenBank受入番号Y18857;単離体HBV-C6。本発明のこの実施形態のペプチドは、N末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸1~15に相当する1個または複数のアミノ酸、および/またはC末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸21~35に相当する1個または複数のアミノ酸をさらに含むことができるので、ペプチド配列は、天然タンパク質からの連続したアミノ酸の領域に相当する。これらのペプチドはまた、NまたはC末端に異種性アミノ酸を含んでもよい。別の実施形態では、本発明は、アミノ酸配列MAARLCCQ配列番号7を含むペプチドまたは前記ペプチドの機能的に同等な変異体を提供する。この中心アミノ酸配列は、HBVの成熟Xタンパク質のN末端アミノ酸1~8に対応するGenBank受入番号Y18857。本発明のこの実施形態のペプチドは、C末端に、天然Xタンパク質のアミノ酸9~35に相当する1個または複数のアミノ酸をさらに含むことができるので、ペプチド配列は、天然タンパク質からの連続したアミノ酸の領域に相当する。これらのペプチドはまた、NまたはC末端に異種性アミノ酸を含んでもよい。一実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDV配列番号8を含む。当業者は、本明細書の情報および他の公開された配列情報に鑑みて、天然Xタンパク質の位置1~35のアミノ酸を容易に認識するだろう。例として、GenBank受入番号Y18857もまた代表的な配列情報を提供していることを参照。さらに、GuntherS、FischerL、PultI、SterneckM、WillH.NaturallyoccurringvariantsofhepatitisBvirus.AdvVirusRes.1999;52:25~137は、いくつかのXタンパク質についての配列情報を提供している。さらに、有用な配列情報の例を以下の表1に提供する。例として、一実施形態では、本発明のペプチドは、アミノ酸配列LCLRP配列番号1からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVG配列番号2からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAE配列番号4からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESR配列番号5からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6からなる。さらに別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQ配列番号7からなる。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDV配列番号8からなる。さらに別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列MAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号3からなる。他の実施形態では、本発明のペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPF配列番号71、LCLRPVGAESRGRPVSGP配列番号70、LCLRPVGAESRGRPVSG配列番号69、LCLRPVGAESRGRPVS配列番号68、LCLRPVGAESRGRPV配列番号67、LCLRPVGAESRGRP配列番号66、LCLRPVGAESRG配列番号65、LCLRPVGAESR配列番号64、LCLRPVGAE配列番号4またはLCLRPVGA配列番号63からなる。本明細書で先に述べたように、本発明は、本発明のペプチドの機能的に同等な変異体を含む。本明細書で使用する句機能的に同等な変異体は、ペプチドの所望の機能を実質的に保持しながら、1個または複数の保存的アミノ酸置換がなされたペプチドを含む。例として、化合物を細胞に送達するために使用されるペプチドの場合、ペプチドおよびその機能的に同等な変異体は、細胞膜を横切り、好ましくは化合物を、細胞膜を横切って輸送する、細胞に入る能力を有するだろう。さらなる例として、Xタンパク質の拮抗薬として使用されるペプチドの場合、ペプチドおよびその機能的に同等な変異体は、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する能力を有するだろう。さらなる例として、分解するためのタンパク質を標的化するために使用されるペプチドの場合、ペプチドおよびその機能的に同等な変異体は、その後の分解の標的となるようにタンパク質を標識化する能力を有するだろう。本発明のペプチドおよびその機能的に同等な変異体は、本明細書中で総括してペプチドと呼ぶことができる。したがって、特に言及しない場合、本明細書中の本発明のペプチドまたはペプチド複数への言及は、その機能的に同等な変異体への言及を含むと解されるべきである。本明細書で使用する場合、句細胞膜を横切る、化合物を、細胞膜を横切って輸送する、細胞膜移行などは、細胞まで送達されるペプチド、化合物ならびに/あるいはこのようなペプチドおよび化合物を含む抱合体の、細胞の外側から細胞の内側までの輸送を包含するよう広義に解されるべきである。これは、細胞膜を横切るもしくは通る輸送の特定の様式または機構を意味するよう解されるべきではない。同様に、句化合物の細胞膜透過性を増加させるとは、化合物が細胞膜を横切る能力の少なくともいくらかの増加または改善があったことを意味するよう広義に解されるべきである。機能的に同等な変異体は、変異体であるペプチドよりも高いまたは低い活性レベルを有してよい。本発明の種々の実施形態では、機能的に同等な変異体は、変異体であるペプチドの活性レベルの少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95または少なくとも99を有する。当業者は、本明細書に含まれる情報に基づいて、および当技術分野で既知の技術を使用して、所望の機能を容易に認識し、機能を評価して、本明細書のペプチドまたはその機能的に同等な変異体ペプチドの活性レベルを決定することができるだろう。しかしながら、例として、化合物を細胞に送達するためのペプチドの使用の場合、ペプチドまたは変異体は、細胞膜を横切り、好ましくは化合物を、細胞膜を横切って輸送し、細胞に入る能力を有するだろう、そしてこの機能および活性レベルは、例えば、後に本明細書の実施例の節に記載する技術を使用して、変異体好ましくは、変異体を含む構造体の細胞への取り込みに基づいて評価することができる。本明細書の他の実施形態本明細書の他で記載するでは、本発明のペプチドが、Xタンパク質の拮抗薬として作用することが望ましい。このような場合、ペプチドまたはその機能的に同等な変異体は、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する能力を有するだろう、そして、その機能およびその活性レベルは、例えば、後に本明細書の実施例の節に記載する技術を使用して、評価することができる。他の実施形態本明細書の他で記載するでは、本発明のペプチドが、分解するためのタンパク質を標識し、好ましくはタンパク質分解を誘発することが望ましい。このような場合、ペプチドまたはその機能的に同等な変異体は、その後の分解のためにタンパク質を標識化する能力を有するだろう、そして、その機能およびその活性レベルは、標的タンパク質の性質に鑑みて標準的な技術を使用して評価することができる。一実施形態では、後に本明細書の実施例の節に記載する技術を使用することができる。本明細書で使用する場合、保存的アミノ酸置換は、類似の生化学的特性を有するアミノ酸の置換を意味するよう広義に解されるべきである。当業者は、アミノ酸側鎖置換基の類似性例えば、そのサイズ、電荷、親水性、疎水性などを含む、異なるアミノ酸間の相対的類似性に基づいて、適当な保存的アミノ酸置換を認識するだろう。例として、保存的置換には、ある脂肪族アミノ酸の別の脂肪族アミノ酸への置換、ヒドロキシルもしくは硫黄含有側鎖を有するアミノ酸のヒドロキシルもしくは硫黄含有側鎖を有する別のアミノ酸による置換、芳香族アミノ酸の別の芳香族アミノ酸による置換、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸による置換、または酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸による置換が含まれる。例として、保存的アミノ酸置換には、-グリシン、アラニン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンの別のものへの置換、-セリン、システイン、スレオニンまたはメチオニンの別のものへの置換、-フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンの1又は別の置換、-ヒスチジン、リジンまたはアルギニンの別のものへの置換、-アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギンまたはグルタミンの別のものへの置換が含まれる。本発明のこの態様によるアミノ酸置換を含む機能的に同等な変異体は、好ましくは、少なくとも70、80、90、95または99の本来のペプチドとのアミノ酸配列類似性を保持するだろう。一実施形態では、機能的に同等な変異体は、少なくとも70、80、90、95または99の本来のペプチドとの配列同一性を有する。本発明のペプチド機能的に同等な変異体を含むは、L-アミノ酸、D-アミノ酸またはこれらの混合物から構成されていてよく、非天然型アミノ酸を含んでよい。本発明のペプチド機能的に同等な変異体を含むは、単離型または精製型ペプチドであることを理解すべきである。単離型または精製型ペプチドは、それが天然に存在する環境から同定および分離された、または人工的に合成されたものである。これらの用語は、ペプチドが天然に存在する環境から精製または分離された程度を反映しないことを認識すべきである。本発明のペプチドは、天然の供給源から単離することができる、または好ましくはその方法が、本発明が関連する技術分野で容易に知られる化学合成例えば、FieldsGB、Lauer-FieldsJL、LiuRQおよびBaranyG2002PrinciplesandPracticeofSolid-PhasepeptideSynthesis;GrantG2002EvaluationoftheSyntheticProduct.SyntheticPeptides、AUser’sGuide、GrantGA、第2版、93~219;220~291、OxfordUniversityPress、ニューヨークもしくは遺伝子発現技術により得ることができる。標準的な組換えDNAおよび分子クローニング技術は、例えば、SambrookおよびManiatis、MolecularCloning:ALaboratoryManual、第2版、ColdSpringHarborLaboratoryPress、ColdSpringHarbor、N.Y.1989;Silhavy等、ExperimentswithGeneFusions、ColdSpringHarborLaboratoryPress、ColdSpringHarbor、N.Y.1984;ならびにGreenePublishingAssoc.およびWiley-Interscienceにより出版されたAusubel等、CurrentProtocolsinMolecularBiology1987に記載されている。本発明者らはまた、適当なトランスジェニック動物、微生物または植物による本発明のペプチドの製造を意図している。核酸本発明のペプチドを組換え技術により製造することができる限り、本発明は、ペプチドのクローニングおよび発現を促進することができる、本発明のペプチドをコードする核酸および本発明のペプチドをコードする核酸を含むベクターを提供する。特定の核酸およびベクターはまた、本明細書の後で詳述するように治療目的にも有用であり得る。本発明による核酸は単離型または精製型核酸であることを理解すべきである。単離型または精製型核酸は、それが天然に存在する環境から同定および分離された、または人工的に合成されたものである。これらの用語は、核酸が天然に存在する環境から精製または分離された程度を反映しないことを認識すべきである。本発明による核酸は、天然の供給源から単離することができる、または好ましくは当業者に容易に知られる化学合成もしくは組換え技術により得ることができる。本発明が関連する技術分野の当業者は、本明細書で提供するアミノ酸配列、その遺伝暗号および理解された縮重度、ならびに公開されたXタンパク質核酸配列例えば、Guo,Y.およびHou,J.中国本土で流行のB型肝炎ウイルスのコンセンサス配列の確立。ZhonghuaMinGuoWeiShengWuJiMianYiXueZaZhi19:189~2000、1999参照に基づいて、本発明のペプチドおよび機能的に同等な変異体をコードする種々の核酸を容易に同定することができるだろう。しかしながら、例として、以下の核酸が適当である:ctttgtctacgtcccXタンパク質の領域16~20を含むペプチド配列番号72ctttgtctacgtcccgtcggcXタンパク質の領域16~22を含むペプチド配列番号73ctttgtctacgtcccgtcggcgctgaaXタンパク質の領域16~24を含むペプチド配列番号74ctttgtctacgtcccgtcggcgctgaatcccgcXタンパク質の領域16~26を含むペプチド配列番号75ctttgtctacgtcccgtcggcgctgaatcccgcggacgacccgtctcggggccgtttgggXタンパク質の領域16~35を含むペプチド配列番号76atggctgctaggctgtgctgccaactggatcctgcgcgggacgtcctttgtctacgtcccXタンパク質の領域1~20を含むペプチド配列番号77核酸ベクターは、一般的に、異種性核酸配列を含むだろう。これは、本発明の核酸配列に隣接する自然では見られない核酸配列である。構造体またはベクターは、RNAでもDNAでもよく、原核生物のものでも真核生物のものでもよく、典型的にはウイルスまたはプラスミドである。適当な構造体は、好ましくは、本発明の核酸を宿主細胞中に送達するよう適合しており、このような細胞中で複製することができるまたはできない。本発明の核酸を含む組換え構造体は、例えば、本発明の核酸配列のクローニング、配列決定および発現に使用することができる。さらに、本発明の組換え構造体またはベクターは、治療目的に使用することができる。本発明が関連する技術分野の当業者は、本発明に使用するのに適した多くの構造体を認識するだろう。しかしながら、本発明者らは、pUCおよびpBluescriptなどのクローニングベクターならびにpCDM8、アデノ随伴ウイルスAAVまたはレンチウイルスなどの発現ベクターの使用が特に有用であることを意図している。構造体は、プロモーター、オペレーター、リプレッサー、エンハンサー、終結配列、複製起点および当技術分野で既知の他の適当な制御配列などの制御配列を含んでよい。さらに、構造体は、発現したタンパク質がその宿主細胞から分泌されるのを可能にするための分泌配列を含んでよい。さらに、発現構造体は、融合タンパク質またはペプチドとして挿入された本発明の核酸配列の発現をもたらす融合配列異種性アミノ酸配列をコードするものなどを含んでよい。有用な異種性アミノ酸配列には、例えば、その後のペプチドの単離および精製を助けることができるもの例えば、ユビキチン、his-タグ、c-mycタグ、GSTタグもしくはビオチンまたはペプチドの活性を補助するもの例えば、細胞膜を通る輸送を助ける追加の配列、例えば、ポリアルギニン配列、tatもしくはペネトラチンが含まれ得る。異種性アミノ酸配列はまた、ペプチドを別の化合物に連結させて本発明の構造体を形成するのを助けるペプチドリンカーを含んでもよい。本発明によると、宿主細胞への核酸ベクターの形質転換は、核酸配列を細胞に挿入することができる任意の方法により達成することができる。例えば、形質転換技術には、形質移入、電気穿孔、微量注入、リポフェクション、吸着および微粒子銃が含まれる。認識されるように、本発明の形質転換核酸配列は、発現される能力が保持されるように染色体外のままであっても、宿主細胞の染色体内の1箇所または複数箇所に組み込まれてもよい。本発明の核酸配列のクローニングおよび発現に、当技術分野で既知の任意の数の宿主細胞を利用してよい。例えば、これらの宿主細胞には、それだけに限らないが、微生物、例えば、組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNAもしくはコスミドDNA発現ベクターにより形質転換された細菌;組換え酵母発現ベクターにより形質転換された酵母;組換えウイルス発現ベクター例えば、バキュロウイルスに感染した昆虫細胞系;pEE14プラスミド系を使用したCHOチャイニーズハムスター卵巣細胞などの動物細胞系;組換えウイルス発現ベクター例えば、カリフラワーモザイクウイルス、CaMV;タバコモザイクウイルス、TMVに感染したもしくは組換えプラスミド発現ベクター例えば、Tiプラスミドにより形質転換された植物細胞系が含まれる。本明細書の実施例で後に詳述する宿主細胞が特に有用であることが分かる。本発明による組換えペプチドは、当技術分野で標準的な種々の技術を使用したその発現の後に、形質転換宿主細胞または培地から回収することができる。例えば、界面活性剤抽出、超音波処理、溶解、浸透圧ショック処理および封入体精製がある。タンパク質は、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、濾過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーおよび等電点電気泳動などの技術を使用してさらに精製することができる。本発明のペプチドの組換え発現のための追加のまたは代替の方法論は、例えば、SambrookおよびManiatis、MolecularCloning:ALaboratoryManual、第2版、ColdSpringHarborLaboratoryPress、ColdSpringHarbor、N.Y.1989から得ることができる。担体本発明の一実施形態では、本発明のペプチドは、化合物を、細胞膜を横切って細胞中に輸送するための担体として使用することができる。したがって、本発明は、化合物を細胞に送達する方法、ならびに細胞に送達すべき化合物を本発明のペプチドに結合することにより、この化合物の細胞膜透過性を増加させる方法を提供する。本発明はまた、担体ペプチドと、細胞に送達することが望まれる少なくとも1種の化合物とを含む構造体を提供する。少なくとも1種の化合物は、細胞に送達することが望まれる任意の化合物であってよい。このような化合物には、治療上のもしくは診断上の利点をもたらすことができる化合物、または研究目的に有用な化合物が含まれる。特定の実施形態では、化合物は、核酸、ペプチド核酸、ポリペプチド例えば、融合タンパク質を含む、炭化水素、ペプチド模倣体、低分子阻害剤、化学療法剤、抗炎症薬、抗体、単鎖FvフラグメントSCFV、脂質、プロテオグリカン、糖脂質、リポタンパク質、糖模倣体、天然産物または融合タンパク質である。化合物が核酸である場合、これは例えば、DNAザイム、iRNA、siRNA、miRNA、piRNA、lcRNAおよびリボザイム、ファージミド、アプタマーを含むDNA、RNA、cDNA、二本鎖、一本鎖、センス、アンチセンスまたは環状であり得る。当業者は、本発明のこの実施形態による化合物のさらなる例を容易に認識することができる。特定の一実施形態では、化合物は、Xタンパク質を分解するまたは分解するためのXタンパク質を標的化するよう適合したペプチドである。例として、化合物は、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。他の実施形態では、化合物は、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91を含むペプチド、またはその機能的に同等な変異体である。これらの配列の機能的に同等な変異体にはここでまたは本明細書の他で言及する場合、例えば、本明細書の表1に記載するものを含む既知のHBV変異体のいずれかに由来するペプチドが含まれる。代表的な配列には以下が含まれる:別の実施形態では、化合物は、HIF1αの酸素依存的分解ドメインODDの配列MLAPYIPM配列番号13を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。本明細書で後にさらに記載するように、本発明のこの実施形態の構造体は、Xタンパク質の機能の拮抗薬として、したがって、肝細胞癌などのHBV感染症から生じる合併症を含むHBV感染症の治療に有用である。別の実施形態では、化合物は、B-rafの少なくとも一部を形成するペプチドを含むペプチドである。特定の一実施形態では、B-rafの一部を形成するペプチドは、アミノ酸配列LNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号89を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。特定の一実施形態では、構造体は、ペプチドLCLRPVGAESRGRPV配列番号90およびペプチドRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12を含む。別の特定の実施形態では、構造体は、ペプチドLCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6およびペプチドRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12を含む。別の特定の実施形態では、構造体は、ペプチドLCLRPVGAESRGRPV配列番号90およびペプチドMLAPYIPM配列番号13を含む。別の特定の実施形態では、構造体は、ペプチドLCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6およびペプチドMLAPYIPM配列番号13を含む。担体ペプチドおよび細胞に送達すべき少なくとも1種の化合物を、任意の手段により互いに結合して、化合物の少なくとも一定レベルの機能および構造を保持しながら、ペプチドが化合物を、細胞膜を横切って細胞中に輸送することを可能にすることができる。単語結合などは、担体ペプチドと少なくとも1種の化合物との間の任意の形態の付着、結合、融合または会合例えば、それだけに限らないが、共有結合、イオン結合、水素結合、芳香族スタッキング相互作用、アミド結合、ジスルフィド結合、キレート化を包含すると広義に解されるべきであり、特定の強度の結合を意味すると解されるべきではない。担体ペプチドおよび少なくとも1種の化合物は、不可逆的または可逆的様式で結合することができ、細胞に侵入すると、化合物は担体ペプチドから放出される。少なくとも1種の化合物は、そのN末端、そのC末端または任意の他の位置で担体ペプチドに結合することができる。特定の一実施形態では、化合物は、そのN末端で担体ペプチドに結合される。別の特定の実施形態では、化合物は、そのC末端で担体ペプチドに結合される。当業者は、構造体に含ませる少なくとも1種の化合物の性質に鑑みて、本発明の構造体を製造するための方法論を容易に認識するだろう。このような方法は、ペプチドおよび化合物を別々に製造し、次いでこれらを結合すること、構造体の化学合成、構造体の組換え発現などを含む。例として、少なくとも1種の化合物がペプチドである本発明の実施形態では、構造体は、既知の組換え発現または化学合成技術本明細書で前に記載したようなを使用して融合タンパク質の形態で製造してよい。担体ペプチドおよび細胞に送達すべきペプチド化合物はまた、別々に製造して後で互いに結合させてもよい。さらなる例として、細胞に送達すべき化合物が核酸の場合、担体ペプチドおよび核酸を例えば、化学合成または組換え技術を使用して別々に製造して、その後、いくつかの既知の技術の1つによって結合してもよい。さらなる例として、少なくとも1種の化合物が炭化水素である本発明の実施形態では、担体ペプチドおよび炭化水素を別々に製造して、その後、いくつかの既知の技術の1つによって結合してもよい。さらなる例として、少なくとも1種の化合物が脂質である本発明の実施形態では、担体ペプチドおよび脂質を別々に製造して、その後、いくつかの既知の技術の1つによって結合してもよい。単なる例として、WO91/09958、WO03/064459、WO00/29427、WO01/13957に記載されている方法論を使用して本発明の種々の構造体を製造してもよい。担体ペプチドおよび細胞に送達すべき少なくとも1種の化合物が直接互いに結合されていてもよいが、本発明の構造体はまた、少なくとも1種の化合物を担体ペプチドに結合するリンカー分子を利用してもよいことを認識すべきである。当業者は、本発明で有用な適当なリンカー分子を認識するだろう。しかしながら、例として、リンカー分子は、ペプチドであってよい。適当なリンカー分子の例はまた、WO91/09958、WO03/064459、WO00/29427およびWO01/13957に提供されている。本発明の実施に必ずしも必要ではないが、一実施形態では、構造体は、少なくとも1種の追加の異種性分子をさらに含んでよい。単なる例として、異種性分子は、構造体の活性例えば、担体ペプチドもしくは細胞に送達すべき化合物、または両者の活性を補助する、構造体を分解から保護するまたはそうでなくても構造体の半減期を増加させる、あるいは製造中に構造体の単離および精製を助けることができる分子であってもよい。一実施形態では、異種性分子は、細胞膜透過性を補助することができる分子例えば、ポリアルギニン、Tatまたはペネトラチンなどである。別の実施形態では、分子は、組換えで発現する構造体の単離を助けることができるhis-タグ、c-mycタグ、GSTタグまたはビオチンであってもよい。別の実施形態では、異種性分子は、構造体を特定の細胞型に標的化するのを補助することができる分子である。本明細書で使用する場合、構造体を特定の細胞型に標的化する、所望の細胞を特異的に標的化するなどの句は、100の特異性が好ましいが、100の特異性を要すると解されるべきではない。別の実施形態では、異種性分子は、構造体を特定の分子標的に標的化するのを補助することができる分子である。本明細書で使用する場合、構造体を特定の分子標的に標的化する、所望の分子を特異的に標的化するなどの句は、100の特異性が好ましいが、100の特異性を要すると解されるべきではない。異なる異種性分子の組み合わせを本発明の構造体に使用してもよいことを認識すべきである。異種性分子は、異種性分子の化学的性質に鑑みて、本発明の構造体の製造/ペプチド担体の少なくとも1種の化合物への結合に関して本明細書で前に記載したような任意の適当な手段を使用して、担体ペプチドおよび/または細胞に送達すべき化合物に結合してもよいし、構造体の一部として合成してもよい。一実施形態では、異種性分子はペプチドベースである。しかしながら、本発明が関連する技術分野の当業者は、本発明の構造体に結合するまたは組み込むことができる代替性質の分子を容易に認識するだろう。代替分子の例は、例えば、WO91/09958、WO03/064459、WO00/29427およびWO01/13957に提供されている。特定の実施形態では、本発明のこの態様の構造体は、アミノ酸配列:RRRRRRRRMLAPYIPMGGLCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号78;RRRRRRRRLCLRPVGAESRGRPVSGPFGGMLAPYIPM配列番号79;RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号80;またはRRRRRRRRLCLRPVGAESRGRPVSGPFGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号81を含む。Xタンパク質の機能の拮抗薬一実施形態では、本発明の特定のペプチドその機能的に同等な変異体を含むおよび同ペプチドを含む構造体を、Xタンパク質の機能の拮抗薬として使用することができる。したがって、前記ペプチドおよび構造体を使用して、例えば、研究または治療目的のために、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱することができる。特定の一実施形態では、本発明者らは、HBV感染症の治療および管理、ならびにHCCの治療本明細書で前に定義した予防を含むへのペプチドまたはペプチドを含む構造体の使用を意図している。本明細書で使用する場合、拮抗薬、拮抗する、Xタンパク質の機能を攪乱するなどの用語は、Xタンパク質の機能または活性の低下を指すと広義に解されるべきである。これらの用語は、機能または活性の完全な阻害を意味すると解されるべきではない。当業者は、Xタンパク質の機能および活性を評価するために使用することができる方法を容易に認識するだろう。しかしながら、例として、本明細書の実施例の節に記載する方法論を使用することができる。一実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90または本明細書に記載するその機能的に同等な変異体を含む。別の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6または本明細書に記載するその機能的に同等な変異体を含む。一実施形態では、本発明は、分解分子と、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体を提供する。一実施形態では、本発明は、分解分子と、アミノ酸配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体を提供する。分解分子は、Xタンパク質を分解するまたは分解するためのXタンパク質を標的化するよう適合した任意の分子であってよい。一実施形態では、分解分子は、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。他の実施形態では、分解分子は、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12もしくはGGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91を含むペプチド、またはその機能的に同等な変異体である。別の実施形態では、分解分子は、アミノ酸配列MLAPYIPM配列番号13を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。当業者は、使用することができる他の適当な分解分子を容易に認識するだろう。しかしながら、例として、ポリユビキチン化を受ける任意のペプチドを使用することができる。この節で使用する句機能的に同等な変異体は、本明細書で前に記載したのと同じ一般的意味を有すると解されるべきである。さらに、特定のペプチド分解分子の機能的に同等な変異体は、少なくともいくらかのXタンパク質を分解するまたは分解するためのXタンパク質を標的化する能力を保持するだろう。ペプチド分解分子の変異体の機能および活性は、本明細書の実施例の節または当技術分野で既知の任意の他の適当な方法論に記載されている方法論を使用して決定することができる。本発明のこの実施形態のペプチドおよび構造体は、本発明の他のペプチドおよび構造体について本明細書で前に記載した技術を使用して製造することができる。構造体は、本発明の1種または複数のペプチドと1種または複数の分解分子の任意の組み合わせを含んでよい。これらはまた、例えば、本明細書で前に記載したものを含む追加の異種性分子およびリンカーを含んでもよい。これらはまた、本発明の他の構造体について前に記載したように、構造体が特定の細胞型もしくは特定の分子標的を標的化するのを可能にすることができる追加のモチーフまたは分子、ならびに/あるいは細胞透過性を補助することができるモチーフまたは分子を含んでもよい。特定の一実施形態では、構造体は、ポリアルギニンペプチド例えば、R4~Rn、一例ではR9を含み、アミノ酸配列:RRRRRRRRLCLRPVGAESRGRPVSGPFGGCRHKLVRSPAPCKFFTSAR8-代表的なオリゴマー形成ドメイン-不安定性ドメイン配列番号82;またはRRRRRRRRLCLRPVGAESRGRPVSGPFGGMLAPYIPMR8-代表的なオリゴマー形成ドメイン-HIFのODD配列番号83を含む。分解するためのタンパク質の標的化一実施形態では、本発明のペプチドは、その後に分解するためのタンパク質を標的化または標識する能力を有する。これらのペプチドには、配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体が含まれる。特定の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12、GGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91またはその機能的に同等な変異体を含む。本実施形態によると、本発明はまた、少なくとも1種の標的化分子と、アミノ酸配列LVRSPAPCKFFTSA配列番号9を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体とを含む構造体を含む。特定の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列KLVRSPAPCKFFTSA配列番号10、HKLVRSPAPCKFFTSA配列番号11、RHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号12、GGCRHKLVRSPAPCKFFTSA配列番号91またはその機能的に同等な変異体を含む。この節で使用する句機能的に同等な変異体は、本明細書で前に記載したのと同じ一般的意味を有すると解されるべきである。さらに、前の段落で言及したペプチドの機能的に同等な変異体は、少なくともいくらかのXタンパク質もしくは別の標的タンパク質を分解するまたは分解するためのXタンパク質を標的化する能力を保持するだろう。ペプチド分解分子の変異体の機能および活性は、本明細書の実施例の節に記載する方法論または当技術分野で既知の任意の他の適当な方法論に記載されている方法論を使用していてもよい。さらに、句分解するためのタンパク質を標的化するなどは、細胞または組成物中に存在する全てのタンパク質を標的化すること、または全てのこのような標的化もしくは標識化タンパク質をその後分解することを意味することを意図していない。標的化分子は、構造体がその後に分解するための対象とする特定のタンパク質を標的化することを可能にする任意の分子であってよい。例えば、標的化分子は、疾患に関係するタンパク質であってよい。好ましくは、標的化は特異的である。例として、この分子は、ペプチド、ペプチド模倣体、タンパク質、抗体、単鎖FvフラグメントSCFV、アプタマー、ファージミドファージディスプレイまたは低分子であってよい。2種以上の標的タンパク質が分解のために標識され得るように、2種以上の標的化分子を構造体に組み込んでもよい。一実施形態では、ペプチドである標的化分子は、その標的の二量体形成ドメインまたは標的タンパク質との相互作用の部位を表すことができる。一実施形態では、標的化分子は、本発明のペプチド、好ましくは、LCLRPVGAESRGRPV配列番号90を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。別の実施形態では、標的化分子は、配列LCLRPVGAESRGRPVSGPFG配列番号6を含むペプチドまたはその機能的に同等な変異体である。これらの実施形態では、標的化分子は、その後に分解するためのXタンパク質を標的化するだろう。別の実施形態では、標的化分子は、タンパク質B-rafの一部を形成するペプチドである。特定の一実施形態では、B-rafのペプチドは、B-rafのオリゴマー形成ドメインまたはその一部を含む。一実施形態では、B-rafのペプチドは、アミノ酸配列LNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号89もしくはその機能的に同等な変異体を含む、またはからなる。別の実施形態では、B-rafのペプチドは、それぞれB-rafのアミノ酸233~255および405~427を表すアミノ酸配列TTHNFVRKTFFTLAFCDFCRKLL配列番号92およびSLPGSLTNVKALQKSPGPQRERK配列番号93、またはその機能的に同等な変異体を含む。これらの実施形態では、標的化分子は、その後に分解するためのB-rafを標的化するだろう。B-rafは、黒色腫に関係し、例えば、本発明のこの実施形態の構造体をその治療に使用することができる。他の実施形態では、標的化分子は、タンパク質N-RasまたはPDGF受容体を標的化する。例えば、それぞれRaf1のN-Ras結合配列のアミノ酸143~150または95~101を表すアミノ酸配列RKTFLKLA配列番号94およびCCAVFRL配列番号95を含むペプチド、またはその機能的に同等な変異体である。さらなる例として、PDGF受容体と相互作用する44aa残基ウシパピローマウイルスE5タンパク質MPNLWFLLFLGLVAAMQLLLLLFLLLFFLVYWDHFECSCTGLPF配列番号96のペプチドもしくはペプチドフラグメント、またはその機能的に同等な変異体を使用することができる。これらの実施形態では、標的化分子は、その後に分解するためのN-RasまたはPDGF受容体を標的化するだろう。N-RasおよびPDGF受容体は、黒色腫に関係し、例えば、B-rafに基づく治療に対する耐性および本発明のこの実施形態の構造体をその治療に使用することができる。一実施形態では、構造体は、N-RasおよびB-rafの両方を標的化する1種または複数のペプチドを含んでよい。別の実施形態では、構造体は、PDGF受容体およびB-rafの両方を標的化する1種または複数のペプチドを含んでよい。別の実施形態では、構造体は、PDGF受容体、N-RasおよびB-rafを標的化する1種または複数のペプチドを含んでよい。N-Ras、B-raf、Raf1、ウシパピローマウイルスE5タンパク質およびPDGF受容体のペプチドに関して使用する場合の句機能的に同等な変異体は、本明細書のこの態様のペプチドの機能、すなわち、その後に分解するためのタンパク質を標的化する能力に鑑みても、本明細書で前に記載したのと同じ一般的意味を有すると解されるべきである。N-Ras、B-rafおよびPDGF受容体についての代表的なアミノ酸および核酸配列は、GenBank中に見出すことができ、例えば、NM_002524N-Ras、NM_004333B-rafならびにNM_002609およびNM_006206PDGF受容体を参照されたい。Raf-1およびウシパピローマウイルスE5タンパク質についての代表的なアミノ酸および核酸配列は、GenBank中に見出すことができ、例えば、NM_002880Raf-1およびNP_056742E5タンパク質を参照されたい。当業者は、いくつかの代替標的化分子および本発明により有用に標的化され得る分子を容易に認識するはずである。しかしながら、例として、これらに限定されないが、以下の分子が有用な標的となり得る:がんに関しては、CD20、HER2ErbB-2、ホスホリパーゼC-γ、c-Met、c-myc、インスリン様増殖因子、ras、raf、マイトジェン活性化プロテインキナーゼMEK、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼPI-3キナーゼ、3-ホスホイノシチド依存性プロテインキナーゼPDK、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質mTOR、aktキナーゼ、src、ヒストン脱アセチル化酵素HDAC、Bcl-2、XIAP、hsp90、Flt3、c-kit、サイクリン依存性キナーゼ、リゾホスファチジン酸LPA受容体、オータキシン、CD33、CD52、EGFR、VEGF、VEGF受容体、低酸素誘導因子、デルタ様4、サバイビン、LMTK3、RANKリガンド、インドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼIDO、O-GlcNAcトランスフェラーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、Bcr-Abl、未分化リンパ腫キナーゼ、エストロゲン受容体、アロマターゼ、アンドロゲン受容体、ポリADPリボースポリメラーゼ、インテグリン、CTLA-4および後者分子全てが相互作用する分子を使用することができる。また、炎症性疾患に関しては、例として、これらに限定されないが、標的化され得る分子には、白血球インテグリンα4、β2およびβ7インテグリンおよびその相互作用パートナー、セレクチンおよびそのパートナー、TNFおよびその受容体、プロスタグランジンD2受容体DP1およびCRTH2、ロイコトリエン受容体、ケモカインおよびその受容体、炎症性サイトカインおよびその受容体、シクロフィリン、デオキシハイプシン合成酵素およびデオキシハイプシン水酸化酵素、シクロオキシゲナーゼ、リポキシゲナーゼ、ホスホリパーゼA2、ホスホジエステラーゼ、NF-κB、インフラマソーム、エラスターゼ、プロテアーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、T細胞受容体、CD3複合体、Toll様受容体、Gタンパク質共役型受容体、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ受容体、T細胞共刺激分子、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ、補体成分およびその受容体、インターロイキン-1β変換酵素ICE、TNF-α変換酵素TACE、MAPキナーゼ例えば、p38ならびにc-JunN末端キナーゼJNKが含まれ得る。二量体形成する上記代表的な分子のいずれかを使用して、それ自体を標的化することができ、そうでなければ相互作用分子およびリガンド、ならびにその由来ペプチドが適当な標的化分子として働くだろう。このような分子および他の分子は、例えば、DanceyJE、ChenHXの分子的に標的化された抗がん剤の組み合わせを最適化するための戦略。NatRevDrugDiscov.2006年8月;58:649~59;PengX、PentassugliaL、SawyerDBの出現した抗がん治療標的および心血管系:懸念材料は存在するかCircRes.2010年4月2日;1066:1022~34;BensonJD、ChenYN、Cornell-KennonSA、DorschM、KimS、LeszczynieckaM、SellersWR、LengauerCの制癌剤標的の検証。Nature2006年5月25日;4417092:451~6;KleinS、LevitzkiAの標的化がん療法:将来性および現実。AdvCancerRes.2007;97:295~319;Wu等。JournalofCancerMolecules2:57~66、2006;SimmonsDLの優れた抗炎症薬標的を作り出すのは何かDrugDiscovToday.2006年3月;115~6:210~9.;BucklelDR、HedgecockCJRの炎症および免疫調節の薬物標的。DrugDiscoveryToday2:325~332、1997;およびKulkarniRG、AchaiahG、SastryGNの抗炎症および抗関節炎薬の新規標的。CurrPharmDes.2006;1219:2437~54に記載されている。本発明のこの態様の構造体は、本発明の1種または複数のペプチドと1種または複数の標的化分子の任意の組み合わせを含んでよい。本発明のこの実施形態のペプチドおよび構造体は、例えば、本発明の他の構造体について本明細書の他で記載した要素を含む、技術を使用して作ることができ、追加の成分を含み得る。例えば、これらは、例えば、本明細書で前に記載したものを含む、追加の異種性分子およびリンカーを含んでよい。これらはまた、構造体が所望の細胞を特異的に標的化するのを可能にする分子を含んでもよい。例えば、黒色腫細胞を標的化することを望む場合、YIGSRラミニンペンタペプチド配列番号97もしくはAc-Nle-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-NH2α-メラニン形成細胞刺激ホルモン類似体配列番号98を含むまたはからなるペプチドを使用してよい。さらなる例として、構造体はまた、本発明の他の構造体について前に記載した、細胞透過性を補助することができる追加のモチーフまたは分子を含んでもよい。特定の一実施形態では、構造体は、ポリアルギニンペプチド例えば、R4~Rnを含む。例として、一実施形態B-rafの標的化に関連するでは、構造体は、R8を含み、アミノ酸配列:RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号19を含む。構造体をコードする核酸および核酸ベクター本発明の構造体は、組換えクローニングおよび発現技術を使用して製造することができ、したがって、本発明は、構造体をコードする核酸およびこのような核酸を含むベクターを含むと解されるべきである。さらに、本発明のペプチド/構造体をコードする核酸は、治療上または試験管内で使用することができるということを認識すべきである。例えば、本発明のペプチドまたは構造体を、HBV感染症もしくはHCCの治療に、または任意の他の障害の治療のために、またはXタンパク質もしくは分解するための任意の他のタンパク質を標的化するために使用する本発明の実施形態では、構造体をコードする核酸/発現ベクターを投与することができ、ペプチド/構造体がその後発現する。さらなる例として、本発明のペプチドが担体として使用される実施形態では、核酸/発現ベクターを被験体に投与することができ、ペプチド/構造体はその後発現し、関連細胞または組織に送達される。したがって、本発明は、これらの目的に適した核酸および核酸ベクターを含む。当業者は、本明細書で前に記載した担体ペプチドの核酸およびペプチド配列、ならびに細胞に送達すべきペプチド化合物の性質に鑑みて、本発明の構造体をコードする核酸の配列を容易に認識するだろう。同様に、当業者は、構造体をクローニングおよび発現するための適当なベクターを容易に認識するだろう。しかしながら、例として、核酸ベクター例えば、pUCベクター、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルスおよび本明細書の他で詳述した技術例えば、WO91/09958、WO03/064459、WO00/29427およびWO01/13957を含むを使用することができる。組成物本発明はまた、1種または複数の希釈剤、担体および/または賦形剤および/または追加の成分と共に本発明のペプチドおよび/または構造体またはペプチドおよび/または構造体をコードする核酸を含む組成物を提供する。この程度まで、本発明のペプチド、構造体または核酸の送達または投与への本明細書での言及は、本発明のペプチド、構造体および/または核酸を含む組成物の送達または投与への言及を含むことを認識すべきである。一実施形態では、1種または複数の希釈剤、担体および/または賦形剤は、試験管内での使用に適している。別の実施形態では、1種または複数の希釈剤、担体および/または賦形剤は、生体内での使用に適しているこの例では、これらは薬学的に許容されると呼ぶことができる。薬学的に許容される希釈剤、担体および/または賦形剤は、医薬組成物を調製するのに有用な物質を含むことを意図しており、本発明のペプチド、構造体またはペプチドもしくは構造体をコードする核酸がその所期の機能を行うのを可能にしながらこれらと共に投与することができ、一般的に安全で、非毒性であり、生物学的にも他の点でも望ましくないものでない。薬学的に許容される希釈剤、担体および/または賦形剤には、獣医学用途ならびにヒト製薬用途に適したものが含まれる。薬学的に許容される希釈剤、担体および/または賦形剤の例としては、溶液、溶媒、分散媒体、遅延剤、乳剤などが挙げられる。標準的な希釈剤、担体および/または賦形剤に加えて、本発明による組成物は、1種または複数の追加の成分と共に、あるいは例えば、ペプチド、構造体、ペプチドもしくは構造体をコードする核酸、および/または細胞に送達すべき化合物の活性を高める、完全性を保護するまたはこのような薬剤の半減期もしくは貯蔵寿命を増加させるのを助ける、または他の所望の利点を提供するような様式で製剤化してもよい。例として、組成物は、タンパク質分解から保護する、生物学的利用能を高める、抗原性を減少させるまたは被験体に投与した場合の遅延放出を可能にする成分をさらに含んでよい。例えば、遅延放出媒体には、マクロマ、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、ポリビニルピロリドンまたはヒドロゲルが含まれる。さらなる例として、組成物は、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、コーティング剤、緩衝剤などを含んでもよい。本発明が関連する技術分野の当業者は、特定の目的のために望ましいさらなる添加剤を容易に同定するだろう。さらに、本発明の性能に必要ではないが、本発明のペプチド、構造体、ペプチドもしくは構造体をコードする核酸、および/または化合物の細胞透過性を、組成物の製剤化を通して増加または促進させてもよい。例えば、本発明のペプチド、構造体、ペプチドもしくは構造体をコードする核酸、および/または化合物を、リポソームに製剤化してもよい。さらなる例は、WO91/09958、WO03/064459、WO00/29427およびWO01/13957に提供されている。さらに、本発明による医薬組成物を、特定の例で細胞または被験体の利益になり得る追加の有効成分と共に製剤化してよいことが意図される。本発明が関連する技術分野の当業者は、本明細書中の本発明の記載、ならびに例えば、治療すべき任意の疾患の性質および進行を含む、ペプチド、化合物および/または構造体の送達が必要とされる目的に鑑みて、適当な追加の有効成分を容易に認識するだろう。一般的な例として、HBV感染症を治療するために使用する薬剤インターフェロンα、ラミブジン、アデホビルジピボキシルヘプセラ、バラクルードエンテカビル、またはHCCの発生を予防もしくは阻害するために使用する薬剤ソラフェニブ、オーロラキナーゼ阻害薬PHA-739358、ラクトフェリン、ω3脂肪酸、ゲフィチニブ、EGFR阻害剤、ウロコルチン、血管新生阻害薬例えば、TNP-470、フェニルN-tert-ブチルニトロン、免疫賦活薬を使用してよい。本発明の組成物は、例えば、液剤、経口投与用液剤、注射用液剤、錠剤、コーティング錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、坐剤、経皮吸収パッチ、懸濁剤、乳剤、徐放製剤、ゲル剤、エアロゾルおよび散剤などの任意の慣用的形態に製剤化してよい。さらに、徐放製剤を利用してよい。選択する形態は、組成物を意図する目的および試料もしくは被験体への送達もしくは投与の様式を反映するだろう。単なる例として、被験体への投与のため、例えば、疾患HBV感染症およびHCCを含むがこれらに限らないの治療のために組成物を製剤化する場合、WO91/09958、WO03/064459、WO00/29427およびWO01/13957に例示される剤形を使用することができる。当業者は、適当な製剤化方法を容易に認識するだろう。しかしながら、例として、組成物を製剤化する特定の方法を、GennaroAR:Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy、第20版、Lippincott,WilliamsWilkins、2000中に見出すことができる。方法本明細書で前に述べたように、一実施形態では、本発明は、本発明の担体ペプチドまたは構造体を使用して、1種または複数の化合物を細胞に送達する方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、接着細胞および非接着細胞の混合集団中の接着細胞への化合物の送達を標的化する方法を提供する。接着細胞とはreferstoare、基質、マトリックス、他の細胞または表面に付着している細胞を指す。非接着細胞とは、基質、マトリックス、他の細胞または表面に付着していない細胞例えば、血液中の循環細胞を指す。別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載する特定のペプチドその機能的に同等な変異体を含むまたは前記ペプチドもしくは機能的に同等な変異体を含む構造体を使用して、Xタンパク質の機能を拮抗または攪乱する方法を提供する。特定の一実施形態では、本発明は、前記ペプチドその機能的に同等な変異体を含むまたは前記ペプチドもしくは機能的に同等な変異体を含む構造体を被験体に投与するステップを含む、HBV感染症を治療する方法を提供する。別の特定の実施形態では、本発明は、前記ペプチドその機能的に同等な変異体を含むまたは前記ペプチドもしくは機能的に同等な変異体を含む構造体を被験体に投与するステップを含む、HCCを治療予防を含むする方法を提供する。前記方法はまた、本発明の関連するペプチドもしくは構造体をコードする核酸および/または前記核酸を含むベクターを被験体に投与するステップを含んでもよいことを認識すべきである。別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載する特定のペプチド機能的に同等な変異体を含むまたは前記ペプチドもしくは機能的に同等な変異体を含む構造体を使用して、その後に分解するためのタンパク質を標的化する方法を提供する。前記方法はまた、本発明の関連するペプチドもしくは構造体をコードする核酸および/または前記核酸を含むベクターの使用を含んでもよいことを認識すべきである。前記方法は、研究目的のためまたは疾患、例えば、1種もしくは複数のタンパク質の望ましくない濃度もしくは活性に関連する疾患の治療に、または例えば、研究目的のための細胞および組織中のタンパク質のノックダウンのために使用することができる。例として、1種または複数の特定のタンパク質を標的化することにより、がんを治療するためにこの方法を使用することができる本明細書に例示するように。特定の一実施形態では、この方法は、分解するためのB-raf、N-rasおよびPDGF受容体の1つまたは複数を標的化することにより、黒色腫を治療するためのものである。がんおよび炎症性障害を治療するための適当な標的のさらなる例は、本明細書で前に提供されている。しかしながら、特定の例として、この方法は、タンパク質C20、HER2ErbB-2、ホスホリパーゼC-γ、c-Met、c-myc、インスリン様増殖因子、ras、raf、マイトジェン活性化プロテインキナーゼMEK、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼPI-3キナーゼ、3-ホスホイノシチド依存性プロテインキナーゼPDK、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質mTOR、aktキナーゼ、src、ヒストン脱アセチル化酵素HDAC、Bcl-2、XIAP、hsp90、Flt3、c-kit、サイクリン依存性キナーゼ、リゾホスファチジン酸LPA受容体、オータキシン、CD33、CD52、EGFR、VEGF、VEGF受容体、低酸素誘導因子、デルタ様4、サバイビン、LMTK3、RANKリガンド、インドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼIDO、O-GlcNAcトランスフェラーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ、Bcr-Abl、未分化リンパ腫キナーゼ、エストロゲン受容体、アロマターゼ、アンドロゲン受容体、ポリADPリボースポリメラーゼ、インテグリン、CTLA-4および後者分子全てが相互作用する分子の1種または複数を標的化することによりがんを治療するためのものである。本発明のペプチドおよび/または構造体または同物をコードする核酸の送達は、送達を必要とする目的に応じて、生体内または試験管内で起こり得る。ペプチドおよび/または構造体または同物をコードする核酸は、当業者により容易に認識されるようないくつかの異なる手段により、細胞に送達してよい。しかしながら、例として、試験管内法は、構造体および/またはペプチドまたは同物をコードする核酸またはベクターを、1種もしくは複数の細胞または対象となる1種もしくは複数の細胞もしくはタンパク質を含む組成物と接触される例えば、Xタンパク質の機能を拮抗することに関連する実施形態では、1種もしくは複数の細胞および/または1種もしくは複数のXタンパク質あるいは1種もしくは複数の細胞および/または1種もしくは複数のXタンパク質を含む組成物に接触させる;例えば、構造体またはペプチドまたは同物をコードする核酸またはベクターを、1種または複数の細胞または特定の実施形態では対象となるタンパク質が含まれる試料、組成物または媒体に接触させる例えば、本発明の組成物を、1種または複数の細胞またはタンパク質を含む液体試料と混合するステップを含んでよい。別の実施形態では、本発明の方法は、構造体および/またはペプチドまたは同物をコードする核酸またはベクターを被験体に投与するステップを含む。本発明は種々の異なる同物に適用可能であることが、本発明の性質および本明細書に報告する結果に鑑みて、本発明が関連する技術分野の当業者に認識されるだろう。したがって、被験体には、対象となる任意の動物が含まれる。しかしながら、特定の一実施形態では、被験体は、哺乳動物、より具体的にはヒトである。本明細書の他で述べるように、本発明者らは、担体ペプチドおよび担体ペプチドを含む本発明の関連する構造体が非接着細胞に取り込まれないことを確認した。本発明者らは、投与される用量は薬剤の非特異的取り込みによって循環血液細胞中に希釈されるべきではないので、このことが前記ペプチドおよび構造体を、他の既知のペプチドおよび構造体よりも全身投与に適したものにしていると考えている。しかしながら、被験体への投与は、本発明の薬剤ペプチド、化合物、構造体または同物をコードする核酸もしくはベクターを被験体の体内の標的細胞に送達することができる任意の手段により起こり得る。例として、本発明の薬剤は、以下の経路の1つにより投与することができる:経口、局所、全身例えば、経皮、鼻腔内もしくは坐剤により、非経口例えば、筋肉内、皮下もしくは静脈内注射により、CNSへの投与により例えば、髄腔内もしくは嚢内注射により、肝臓への投与により例えば、門脈内注射により、埋め込みにより、および浸透ポンプ、経皮吸収パッチなどの装置を通した注入により。当業者は、他の適当な投与経路を同定することができる。代表的な投与経路はまた、例えばWO91/09958、WO03/064459、WO00/29427およびWO01/13957にも概説されている。認識されるように、投与する薬剤の用量、投与期間および一般的な投与体制は、薬剤を送達する理由、薬剤を送達すべき標的細胞、および治療する被験体の任意の症状の重症度、治療する障害の種類、選択する投与の様式、ならびに被験体の年齢、性別および/または全身健康状態などの変数に応じて、被験体間で異なってよい。投与には、必要に応じて1日1回投与、いくつかの別々に分けた投与、または連続的な投与が含まれ得ることを認識すべきである。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータを、ヒトに使用するための一定範囲の用量を処方するのに使用することができる。用量は、使用する剤形および利用する投与経路に応じてこの範囲内で変化し得る。本発明の方法で使用する任意の薬剤のために、治療上有効用量は細胞培養アッセイから最初に推定することができる。細胞培養で決定したIC50すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度を含む細胞濃度範囲を達成するよう用量を細胞培養液または動物モデルで処方することができる。このような情報を使用して、ヒトで有用な用量をより正確に決定することができる。正確な処方、投与経路および用量は、患者の状態に照らして個々の医師が選択することができる例えば、Fingl等、1975、In:ThepharmacologicalBasisofTherapeutics、第1章、1頁参照。HBV感染症の進行中、または感染が疑われた時からを含めた、HCCの発生前もしくは後の任意の時に投与が起こり得る。一実施形態では、本発明の薬剤は、ウイルス量および症状の進行中の管理を補助するために長期間、1日基準で投与される。別の実施形態では、本発明の薬剤は、HCCの発生を予防または遅延するために長期間または生涯、1日基準で投与される。投与体制の追加の例は、WO91/09958、WO03/064459、WO00/29427およびWO01/13957に提供されている。本発明の方法が、試料、細胞または被験体への追加の薬剤または組成物の送達などの追加のステップをさらに含んでもよいことを認識すべきである。実施例実施例1材料および方法ペプチドペプチドは、Peptide2.0、14100SullyfieldCircle、Suite200、Chantilly、VA20151、USAに注文した。哺乳動物細胞株HepG細胞株は、肝細胞癌のヒト男性患者由来の肝がん細胞株である。細胞株は、ATCCカタログ番号HB-8065から得た。この細胞株にB型肝炎ウイルスゲノムの証拠は存在しない。完全MEMおよび5DMSOを含む凍結溶液中で凍結させた細胞から、完全MEM培地中37°Cおよび5CO2で細胞を増殖した。プラスミドDNAの精製DH5α大腸菌細胞中で増殖した3種のプラスミドを使用した。プラスミドpCDNA3.1-HBXは、不安定性ドメインaa141~153を欠くXタンパク質の切断型をコードする。これは、一連の8個のオーバーラップオリゴヌクレオチドおよび以下のようにDNA配列決定により確認された配列からインハウスで調製した:pCDNA3.1-HBXによりコードされる隣接制限部位を有する切断型Xタンパク質配列。5’末端のHindIIIおよびKpn1ならびに3’末端のXbaI制限部位。逆相補プラスミドpCDNA3-GFPは、緑色蛍光タンパク質を発現する。プラスミドpCDNA3-HBXMycは、全長Xタンパク質をコードし、ProfessorMassimoLevrero、DepartmentofInternalMedicine、UniversitadiCagliariにより親切にも寄付された。凍結ストックからの各々の形質転換体5μlを100μg/mlのアンピシリンを含むLB10ml中に添加することにより、上記3種のプラスミドの各々で形質転換した細菌を含むスタータ培養液を作った。培養液を37°Cの震盪機に一晩入れた。次いで、スタータ培養液を使用して、より大きな回分培養液を作った。10mlのスタータ培養液を、100μg/mlのアンピシリンを含むLB400mlと合わせた。この培養液を37°Cの震盪機に一晩入れた。次いで、maxiprepプラスミド精製キットQiagen、Invitrogenを使用して、培養液からプラスミドDNAを精製した。培養液を6000gでまたは10分間遠心分離し、製造業者の指示にしたがってQiagenmaxiprepキットを使用して、プラスミドDNAを細菌ペレットから抽出した。抽出したDNA試料を20000gで30分間遠心分離し、上清を回収して18000gで15分間再遠心分離した。得られた上清を、陰イオン交換樹脂を含む溶出チューブに流してDNAを捕捉した。次いで、DNAを溶出緩衝液で溶出し、次いで回収したDNAを、イソプロパノール10.5mlをDNA試料15mlに添加し、引き続いて20000gで30分間遠心分離することにより沈殿させた。次いで、DNAペレットをdH20に再懸濁した。試料中のDNAの濃度をナノドロップ分光計NanodropND-1000で測定した。形質移入前のプラスミドDNAの前処理プラスミドDNAを形質移入に使用する前に、HepG2細胞の混入を防ぐために滅菌した。dH20に懸濁したDNAに、NaOAcを0.3Mおよび100ETOHを30容積添加し、この溶液を氷上に10分間置いた。DNAを、13000rpmで10分間遠心分離することにより沈殿させ、70v/v冷EtOHで洗浄した。EtOHの残りをspeed-vacで除去し、DNAを滅菌dH20に再懸濁した。全試料を再懸濁して、1μg/μlのDNA最終濃度にした。DNA収率をナノドロップ分光計NanodropND-1000で測定した。Xタンパク質分解ドメイン融合ペプチドによるHepG2形質移入体の処理HepG2細胞を、10FCSを補充したMEM培地中1ウェル当たり1×106個の細胞で6ウェルプレート中に播種し、37°Cおよび5CO2で一晩培養した。形質移入効率に干渉し得るのでPSG抗生物質は培地に添加しなかった。次いで、培地を取り出し、10FCSを含まないMEM培地に交換した。形質移入に使用したDNAの量は4μgであった。最初に、DNA4μgをOpti-MEM培地250μlと混合し、次いで、polymagトランスフェクション試薬4μlを添加した。混合物を20分間インキュベートし、次いで、細胞に添加した。プレートを旋回台上の磁気プレート上に20分間置いた。細胞透過性Xタンパク質分解ドメイン融合ペプチドを、10FCSを含まないMEM中細胞に10μMの濃度で添加し、細胞を45時間インキュベートした。血清が低分子ペプチドを急速に分解し得るので、ペプチドを、FCSを含まないMEMに添加した。追加のペプチド10μMをインキュベーションの3時間後に添加し、さらにペプチド10μMをインキュベーションの21時間後に添加した。追加の一定分量のペプチドを添加する際、細胞を、FCSを含まないMEM中で洗浄し、ペプチドを添加し、細胞を3時間インキュベートした後、培地を、10FCSおよびPSGを含むMEMに変えた。細胞を溶解し、ウエスタンブロット解析によりXタンパク質の発現を解析した。オリゴマー形成ドメインペプチドによるHepG2形質移入体の処理HepG2細胞を、10FCSを補充したMEM培地中1ウェル当たり1×105個の細胞で8ウェルチャンバースライド中に播種し、37°Cおよび5CO2で24時間培養した。形質移入効率に干渉し得るのでPSG抗生物質は培地に添加しなかった。次いで、培地を取り出し、10FCSを含まないopti-MEM培地に交換した。形質移入に使用したプラスミドDNAの量は0.1μgであった。最初に、pcDNA3.1-HBXまたはpcDNA3-HBXMycプラスミドDNAのいずれか0.2μgをOpti-MEM培地25μlと混合し、次いで、polymagトランスフェクション試薬0.2μlを添加したこれらの溶液は、マスターミックスとして調製し、言及した量は1つのウェルについて示している。混合物を20分間インキュベートし、次いで、25μlを細胞に添加した。プレートを旋回台上の磁気プレート上に20分間置き、その後、細胞を3時間インキュベートした。細胞に上記のようにXタンパク質プラスミドベクターを形質移入した。磁気プレート上の形質移入の3時間後、オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35または対照Xタンパク質ペプチドaa140~153を、10μMの最終濃度で、10FCSを含まないMEM中細胞に添加し、細胞を3時間、21時間または45時間インキュベートした。21時間インキュベートした細胞については、インキュベーションの3時間後に追加のペプチド10μMを添加した。ペプチドと共に45時間インキュベートした細胞については、インキュベーションの3時間後に追加のペプチド10μMを添加し、インキュベーションの21時間後にさらにペプチド10μMを添加した。追加の一定分量のペプチドを添加する際、細胞を、FCSを含まないMEM中で洗浄し、ペプチドを添加し、細胞を3時間インキュベートした後、培地を、10FCSおよびPSGを含むMEMに変えた。要約すると、形質移入3時間、3および24時間、3、24および48時間後にペプチドを細胞に添加し、細胞を合計で51時間培養した。アネキシンV標識化試薬20μlおよびヨウ化プロピジウム10μlをインキュベーション緩衝液1mlに添加することにより、アネキシンV標識化溶液を調製した。細胞をインキュベーション緩衝液で洗浄し、アネキシンV標識化溶液100μlを各ウェルに添加し、引き続いて暗中室温で15分間インキュベートした。細胞をインキュベーション緩衝液で洗浄し、PBS中2ホルムアルデヒドで30分間固定し、PBSで洗浄し、スライドチャンバーを除去した。DAPIを含む封入液1滴を細胞に添加し、カバーガラスで覆った。NikonE600蛍光顕微鏡を使用することにより、蛍光顕微鏡検査でスライドを調査し、NikonACT-1ソフトウェアを使用して写真を撮った。細胞溶解細胞をPBSで洗浄し、PBSに希釈したトリプシンとのインキュベーションによりプレートから分離した。細胞を、FCSを含むMEMで洗浄してトリプシンを不活性化し、175gで5分間の遠心分離によりペレット化した。次いで、これらをPBS1mlに再懸濁し、試料10μlを取り出し、トリパンブルーで染色し、血球計算器で細胞数を数えた。次いで、細胞を4000gで5分間の遠心分離でペレット化し、PBS中で3回洗浄した。全ての液体の残りを除去し、細胞を細胞溶解に備えた。CompleteLysisBufferを、1×106個の細胞当たり20μlで細胞に添加した。溶解を助けるために細胞を非常に良く再懸濁し、次いで、氷上に10分間放置した。これらを15000gで10分間遠心分離し、上清を回収して保存した。溶解緩衝液13μl、2SDS2μl、デオキシコール酸Na2μl、DNAse緩衝液2μlおよびDNAseI1μlを添加することにより、核の沈殿を処理した。各試薬を添加した後、粘着性の細胞可溶化物を激しく再懸濁し、次いで、37°Cで10分間インキュベートした。ペプチド結合アッセイオリゴマー形成ペプチドを、粉末形態で受け取り、秤量し、滅菌10DMSO溶液に希釈して10mg/mlストック溶液を作った。Reactibindニュートラアビジンコーティングした96ウェルプレートThermoscientificカタログ番号15507のウェルをプレート洗浄緩衝液200μlで3回洗浄した。ビオチンタグを含むペプチド1~50を洗浄緩衝液中10μg/mlに希釈し、溶液100μlを、使用している各ウェルに入れた。プレートを室温で2時間インキュベートし、ウェルを、洗浄緩衝液200μlで3回洗浄した。40μg/ml、20μg/mlおよび10μg/mlのペプチド1~50の切断型蛍光変異体を三つ組でウェルに添加し、プレートを室温で30分間インキュベートした。次いで、ウェルを、低光条件下、洗浄緩衝液200μlで3回洗浄し、490nmの励起波長および520nmの発光波長でBiotek蛍光プレートリーダーによりプレートを読み取った。Xタンパク質オリゴマー形成ペプチドの細胞透過性についてのアッセイ細胞を、10FCSおよびPSGを含むMEM中1ウェル当たり1×105個の細胞で8ウェルチャンバースライド中に播種した。次いで、細胞を37°Cおよび5CO2で一晩インキュベートし、次いで、FCSを含まない培地で3回洗浄した。FCSを含まない適当な培地250μl中のXタンパク質ペプチドを、10μMの最終濃度で細胞に添加し、スライドを37°Cおよび5CO2で3時間インキュベートした。細胞をPBSで洗浄し、PBS中4ホルムアルデヒドで30分間固定し、PBSで3回洗浄した。スライドからプラスチック枠を取り出し、DAPIを含むProlongGold褪色防止試薬Invitrogenカタログ番号P369311滴を各試料に添加した。スライドを暗中で一晩乾燥させ、NikonE600蛍光顕微鏡を使用することにより、顕微鏡検査で調査した。NikonACT-1ソフトウェアを使用して写真を撮った。次いで、さらなる調査のために、LeicaTCS-SP2共焦点顕微鏡を使用して、共焦点顕微鏡検査でスライドを調査した。細胞透過性Xタンパク質ペプチドが細胞に入る経路の解明細胞を、10FCSを含む完全MEM培地中8つのチャンバースライドに、1ウェル当たり1×105個の細胞で、一晩蒔いた。細胞をMEM培地で3回洗浄し、37°Cで、10μmサイトカラシンDまたはMEM中2μg/mlのヘパリンのいずれかで30分間前処置した。次いで、ペプチドを10μMの濃度で添加し、細胞を37°Cおよび5CO2で3時間インキュベートした。細胞をPBSで洗浄し、4ホルムアルデヒドおよびPBSで30分間固定し、DAPIを含むProlongGold褪色防止試薬Invitrogenカタログ番号P369311滴を各ウェルに添加した。スライドを暗中で一晩乾燥させ、NikonE600蛍光顕微鏡を使用することにより、顕微鏡検査で調査した。NikonACT-1ソフトウェアを使用して写真を撮った。Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22による外来性ペプチドのTK-1細胞中への輸送8ウェルガラスチャンバースライドを、4°Cで一晩、MAdCAM-1-Fcでコーティングした。これらを、室温で2時間、FCSでブロックした。TK-1T細胞をHBSS緩衝液中2mMMn2/Ca2で活性化し、MAdCAM-1コーティングしたガラススライドに添加し、引き続いて、15分間インキュベートした。ペプチドLCLRPVGGYDRREY配列番号15およびR9YDRREY配列番号14を50μMで添加し、引き続いて、30分間インキュベートした。細胞を4PFA中で一晩固定し、PBS0.1Tween20で15分間透過処理し、PBS中3BSAで1時間ブロックし、ペプチドの存在をFITC-ストレプトアビジンPBS中3BSA中に1:200希釈1時間で検出した。スライドを、DAPIを含むProlongGoldと共にマウントした。結果HepG2細胞中のXタンパク質の操作した発現HepG2細胞に、Xタンパク質プラスミドpCDNA3.1-HBX、pCDNA3-HBXMyc4μgまたはpCDNA3-GFP4μgを形質移入し、48時間培養した。予備的実験により、より多い量はより高レベルのXタンパク質を製造しないので、プラスミドDNA4μgが最適プラスミド量であることが示された。Xタンパク質ベクターはマーカーを保有していなかったので、細胞にpCDNA3-GFPベクターを形質移入して、形質移入効率を視覚化した。形質移入24時間後の形質移入効率は20~30データは図示せずであると決定された。各細胞により発せられる蛍光レベルは、目に見えて高く、各細胞によるGFPタンパク質の高い発現を示しているが、この形質移入レベルは、形質移入48時間後に見られるものと類似であった。Xタンパク質は形質移入の48時間後のウエスタンブロット解析によって検出されただけであったので、48時間の細胞の形質移入を、研究の残りで使用した。形質移入体をウエスタンブロット解析に供し、Xタンパク質を発現したかどうかを決定した。さらに、形質移入しなかった正常HepG2細胞を追加の対照として使用して、Xタンパク質がHepG2細胞株で内因的に発現しないことを確認した。細胞を溶解し、細胞可溶化物を、界面活性剤可溶性タンパク質を含む上清と、細胞核および界面活性剤不溶性物質を含む沈殿に細分画した。上清および核細分画をSDS-PAGEで分離し、タンパク質をPVDF膜上に移動させた。膜をマウス抗ヒトXタンパク質一次抗体、引き続いて、二次ヤギ抗マウスHRP抱合型抗体でプローブした。抗Xタンパク質抗体は、pCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMycプラスミドを形質移入したHepG2細胞の核抽出物を含むレーンに2種の異なるバンドを認識した図1。バンドは、HepG2細胞の界面活性剤可溶性分画中には存在しなかった。バンドのサイズは、プラスミドにコードされるタンパク質の予想サイズと相関していた。pCDNA3.1-HBXプラスミドによりコードされるタンパク質は、aa141~153を含む不安定性ドメインを欠損しているXタンパク質の切断型約17kDaバージョンである。対照的に、pCDNA3-HBX-Mycによりコードされるタンパク質は、mycタグが付加した全長Xタンパク質であり、約21kDaの合計サイズを与える。形質移入しなかったHepG2細胞またはpCDNA3-GFPのみを形質移入したHepG2細胞ではXタンパク質は発現しなかった。Xタンパク質のオリゴマー形成に必要とされる最小ペプチドモチーフの定義Xタンパク質の二量体形成に必要とされる最小ペプチドモチーフを定義するために、ストレプトアビジンコーティングしたプレートを使用して、リガンド結合アッセイを行った。この筋書きでは、Xタンパク質モノマーはそれ自体のリガンドとして働く。Xタンパク質のためのオリゴマー形成ドメインは、N末端50aa残基内に含まれることが前に示された。aa1~50をコードする領域からの一連の短鎖ペプチドを合成した。N末端でビオチンタグに抱合したaa1~50を含む親ペプチドをストレプトアビジンコーティングしたプレートに添加した。ストレプトアビジンは、ビオチンとの高い親和性結合を示すので、ペプチドを捕捉し、プレートに固定することができた。aa1~20、16~35、21~40および34~53をコードする非ビオチン化ペプチドを、10、20および40μg/mlで、ペプチドaa1~50でコーティングしたウェルに添加した。蛍光プレートリーダーを使用して検出するために、より小さいペプチドを各々FITCタグに抱合した。ペプチド16~35は、ペプチド1~20、21~40および34~53よりも有意に強く20および40μg/mlでペプチド1~50に結合した表3;図2。より低濃度のペプチドで行った結合は有意ではなかった。その領域16~35を含むさらに小さいペプチドを作り、aa16~35がXタンパク質二量体形成に必要とされる最小ペプチドモチーフであるかどうか決定した。これらの合成ペプチド、すなわちaa16~26、16~24および16~22を、同じペプチド結合アッセイを使用して解析した。ペプチドは、ペプチド1~50と結合する能力において差を示さず、親ペプチド16~35が示した強力な結合に匹敵することができなかった図3。したがって、調査したペプチドの中で、Xタンパク質の二量体形成に必要とされる最小ペプチドモチーフは、30aaペプチド16~35である。HIF-1のODDに基づきXタンパク質を分解することができる新規なペプチドの作製上記結果は、Xタンパク質オリゴマー形成ドメインがaa16~35を含むことを証明した。HIF-1αの酸素依存的分解ODDドメインが付着する標的化ペプチドとしてペプチド16~35を利用するアプローチを考案した。ペプチド16~35を、合成中にNおよびC末端で8aaODDドメインに融合し、R8配列をN末端に付加してペプチドを細胞透過性にした。標的化Xタンパク質-ODD融合ペプチドは、Xタンパク質発現細胞に入り、Xタンパク質のオリゴマー形成ドメインに結合し、pVHLに認識され、ペプチドのユビキン化および付着したXタンパク質と一緒の分解がもたらされるだろうという理解であった。最初にXタンパク質-ODD融合ペプチドを試験して、これらがオリゴマー形成ペプチド1~50に結合することができるかどうかを決定した。これらは、ペプチド16~35が標的化ペプチドの前に位置しているのか端に位置しているのかにかかわりなく、ペプチド1~50に結合することができた図4。驚くべきことに、これらは、親ペプチド16~35よりも良くペプチド1~50に結合した。非結合ペプチド21~40を陰性対照として使用したが、明らかにペプチド1~50に結合できなかった。Xタンパク質-ODD融合ペプチドはXタンパク質発現を減少させる2種のXタンパク質-ODD融合ペプチドを、Xタンパク質発現レベルを減少させる能力について試験した。HepG2細胞にXタンパク質プラスミドpCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMyc4μg、またはpCDNA3-GFPベクター4μgのいずれかを形質移入した。Xタンパク質-ODD融合ペプチドを、形質移入3時間、24時間および48時間後に細胞に反復して添加した。対照形質移入体はペプチドで処理しなかったが、それ以外は同じ条件下で培養した。形質移入体をウエスタンブロット法に供してXタンパク質が発現しているかどうかを決定した。細胞を溶解し、可溶化物を遠心分離して、界面活性剤可溶性タンパク質を含む上清分画と、細胞核および界面活性剤不溶性物質を含む沈殿を得た。上清および核細分画をSDS-PAGEで分離し、タンパク質をPVDF膜上に移動させた。膜をマウス抗ヒトXタンパク質一次抗体、引き続いて、二次ヤギ抗マウスHRP抱合型抗体でプローブした。上記のように、Xタンパク質は、HepG2形質移入体の界面活性剤可溶性分画中には存在しなかった図5。対照的に、Xタンパク質は、それぞれ約17kDaの切断型タンパク質および約21kDaの全長タンパク質として、pCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMycを形質移入した細胞の核分画中に存在していた。前にODDタグを有するXタンパク質-ODD融合ペプチドは、pCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMycにより産生されたXタンパク質の完全な分解を引き起こした図5。末端にODDタグを有するXタンパク質-ODD融合ペプチドは、Xタンパク質のほぼ完全な分解を引き起こした図5。pCDNA3.1-GFPを形質移入した対照細胞および形質移入していないHepG2細胞は、マウス抗ヒトXタンパク質一次抗体が特異的にXタンパク質を認識したことを示すバンドを与えなかった。β-アクチンに対する抗体でブロットをプローブし、これによって各レーンが等量の可溶化物を含むことを保証した。Xタンパク質の不安定性ドメインに基づきXタンパク質を分解することができる新規なペプチドの作製Xタンパク質は、タンパク質の安定性の原因であるaa140~153に対応する領域を含んでいるLi等、200625。Xタンパク質オリゴマー形成ドメインaa16~35に融合した不安定性ドメインaa140~153を含む細胞透過性ペプチドを使用して、不安定性ドメインのXタンパク質発現への影響を調査した。Xタンパク質オリゴマー形成ドメインの前または端のいずれかで付着している不安定性ドメインを用いて2種の融合ペプチドを作製した。これらを、N末端R8タグ担体ペプチドにより細胞透過性にした。ペプチドを、Xタンパク質プラスミドの形質移入3時間、24時間および48時間後にHepG2細胞に反復して添加した。対照形質移入体はペプチドで処理しなかったが、それ以外は同じ条件下で培養した。形質移入体の各分画をウエスタンブロット法に供してXタンパク質が発現しているかどうかを決定した。抗Xタンパク質抗体は、それぞれpCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMycを形質移入した細胞中で、切断約17kDa型および全長約21kDa型のXタンパク質を認識した図6。前に不安定性ドメインを有するXタンパク質オリゴマー形成-不安定性ドメイン融合ペプチドは、pCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMycにより産生されたXタンパク質の完全な分解を引き起こした。末端に不安定性ドメインを有するXタンパク質オリゴマー形成-不安定性ドメイン融合ペプチドは、Xタンパク質のほぼ完全な分解を引き起こし、わずかに全長タンパク質を好んだ図7。形質移入していない親HepG2細胞およびpCDNA3.1-GFPを形質移入した細胞は、Xタンパク質バンドを示さなかった。Xタンパク質のオリゴマー形成ドメインのスタンドアローン型stand-aloneformはXタンパク質のアポトーシス促進機能を阻害するオリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35を、Xタンパク質のアポトーシス促進機能を阻害する能力について試験した。仮説は、ペプチドが、機能のための必要条件であるXタンパク質の二量体形成を阻害するだろうというものであったMurakami等、199426。HepG2細胞を操作してpCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMycプラスミドを形質移入することによりXタンパク質を発現させた。Xタンパク質オリゴマー形成ペプチドaa16~35を、形質移入3時間、3および24時間、または3、24および48時間後のいずれかで細胞に添加し、細胞を合計で51時間培養した。対照細胞にpCDNA3.1-HBXまたはpCDNA3-HBXMycのいずれかを形質移入し、Xタンパク質に結合しないXタンパク質ペプチドaa140~153の細胞透過型で処理した。細胞をアネキシンVで染色してアポトーシスの初期段階を視覚化し、ヨウ化プロピジウムPIで対比染色して壊死を検出した。DAPIを添加して細胞核を染色した。切断図7型または全長図8型のXタンパク質を発現するよう形質移入した細胞の約80~90が、アポトーシスを起こした。調査した時間経過にわたって細胞壊死は見られなかった。オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35の添加により、用量依存性様式でXタンパク質媒介性アポトーシスが有意に減少した図7および8。対照的に、形質移入体のアポトーシスは、Xタンパク質に結合しないXタンパク質ペプチドaa140~153に影響されなかった図9および図10。したがって、Xタンパク質媒介性アポトーシスを阻害する能力は、オリゴマー形成ドメインペプチドの固有の性質である。全長Xタンパク質が切断型Xタンパク質よりも高いレベルのアポトーシス細胞アポトーシスで20~30増加を引き起こすことが分かった。オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35はXタンパク質の三次構造を破壊する本発明者らは、オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35がどのようにXタンパク質媒介性機能に拮抗するのかを調査した。目的は、ペプチドがXタンパク質の三次構造を破壊するかどうかを決定することであった。HepG2細胞にpCDNA3.1-HBX、pCDNA3-HBXMycまたはpCDNA3-GFPプラスミドのいずれかを形質移入し、オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35で48時間にわたって3回処理した。対照形質移入体はペプチドで処理しなかった。非還元的ローディングバッファーを使用してSDS-PAGEにより核細分画を分離して、Xタンパク質のジスルフィド結合を無傷に保った。タンパク質をPVDF膜上に移動させ、マウス抗ヒトXタンパク質一次抗体、引き続いて、二次ヤギ抗マウスHRP抱合型抗体でプローブした。オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35は、Xタンパク質の全体的レベルを減少させず、アポトーシスの攪乱のための機構としてのXタンパク質発現の減少を除外した図11。ペプチドで処理していない形質移入体は、約34kDaの二量体型を含むより高次型、および明らかにさらに高次構造のXタンパク質を発現した図11。対照的に、pCDNA3.1-HBXおよびpCDNA3-HBXMycを形質移入し、オリゴマー形成ドメインペプチドで処理した細胞は、それぞれ約17kDaおよび約21kDaの単量体型を発現した。これらは、約34kDaのXタンパク質の二量体型も発現したが、より高次型は発現しなかった。結果は、オリゴマー形成ドメインペプチドがXタンパク質の三次構造を破壊し、二量体形成およびより高次構造の形成を防ぐことを示している。Xタンパク質が、二量体として機能すると仮定すると、その二量体形成の破壊は、オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35がXタンパク質のアポトーシス促進機能に拮抗する機構となり得る。オリゴマー形成ドメインペプチドの細胞透過性オリゴマー形成ドメインペプチドaa16~35が、8アルギニン担体ペプチドに融合することなくHepG2細胞に自発的に入ることができることが思いがけなく分かった。これは、Xタンパク質のオリゴマー形成ドメインがHIVにより発現されるTATタンパク質中に見出されるタンパク質形質導入ドメインを含むことを示唆している。Xタンパク質のN末端領域からのaa1~20、16~35、21~40および34~53を含む4種のFITC標識化ペプチドを、HepG2細胞と共にインキュベートし、NikonE600蛍光顕微鏡を使用して細胞によるその取り込みを記録した。ペプチドaa1~20およびaa16~35は、試験した4種のペプチドの中で、細胞により容易に取り込まれた唯一のペプチドであった図12。残りの2種のペプチドで処理した細胞による蛍光が低いのは、おそらくペプチドの細胞表面への非特異的結合に起因するだろう図12。ペプチドで処理しなかった対照細胞は、蛍光を発しなかった。上記細胞を共焦点顕微鏡検査により調査して、ペプチドの分布のよりよい構想を得た。細胞の横断面解析により、ペプチドaa1~20およびaa16~35が細胞の細胞質ならびに核中に取り込まれることが確認された図13および14。ペプチドaa21~40および34~53は細胞透過性でなかった図13。ペプチドaa16~35をより小さいフルオレセイン化ペプチドaa16~26、16~24および16~22に分割し、これらをHepG2細胞に入る能力について試験した。3種のペプチド全てが細胞透過性で、親ペプチドaa16~35と同等レベルで細胞に取り込まれた図15。共焦点顕微鏡検査により、3種のペプチド全てが細胞により取り込まれることが確認された図16。細胞から取った共焦点スライス像は、ペプチドaa16~22が細胞質および細胞核の両方に取り込まれることを証明した図17。細胞透過性ペプチドのHepG2細胞中への侵入はヘパリン結合に依存する正確にどのように細胞透過性ペプチドが細胞の形質膜を通過するのかはまだ十分に理解されていない。いくつかのペプチドが、アクチンにより駆動されるエンドサイトーシスプロセスであるマクロピノサイトーシスを介して入り込むことが示唆されてきた。細胞表面上のアクチン伸長は、形質膜の細胞外環境中への拡張をもたらす。形質膜が戻って自身と融合すると、マクロピノソームを形成し、そうする際に大量の細胞外液をカプセル化および内部移行する。別の機構は、エンドサイトーシスプロセスを通したペプチドの内部移行をもたらすペプチドの細胞表面ヘパラン硫酸プロテオグリカンへの結合を介する。HepG2細胞を、サイトカラシンDおよびヘパリンで前処理し、次いで、FITC標識化細胞透過性ペプチドaa16~22およびaa16~35と共に3時間インキュベートして、上記2つの機構のいずれかがXタンパク質ペプチドの細胞取り込みを媒介するかどうかを決定した。対照細胞はXタンパク質ペプチドで処理したが、いずれの化学物質でも処理しなかった。サイトカラシンDは、形質膜の拡張を阻害することによりマクロピノサイトーシスを阻害するF-アクチン伸長阻害剤である。ヘパリンは、ペプチドの細胞表面ヘパラン硫酸プロテオグリカンへの結合に拮抗すると予想されるだろう。図18に示すように、サイトカラシンDによる細胞の前処理は、ペプチドの細胞内への侵入に影響を及ぼさず、マクロピノサイトーシスがペプチド内部移行に関与していないことを示した。対照的に、ヘパリンによる前処理は、ペプチドの細胞内への侵入を遮断し、ペプチドの細胞表面とのヘパリン結合が、Xタンパク質ペプチドによる細胞侵入に重要な役割を果たしていることを示した図18。短鎖N末端ペプチドaa1~8、1~15および16~20は細胞透過性であるフルオレセイン化ペプチドaa1~15、16~20および16~22をHepG2細胞と共にインキュベートし、NikonE600蛍光顕微鏡を使用して細胞によるその取り込みを記録した。3種のペプチド全てが細胞に取り込まれた図19。ペプチドaa16~20とペプチドaa16~22の取り込みの効率には差がないように見えた。共焦点顕微鏡検査により、ペプチドaa1~15および16~20が細胞透過性であることが確認される。LeicaTCS-SP2共焦点顕微鏡を使用してペプチドの取り込みを確認した図20、上のパネル。細胞の共焦点型スライシングにより、ペプチドaa1~15および16~22が細胞質および核に取り込まれることが明らかになった図20、下の2つのパネル。N末端ペプチドaa1~15を2つに分割し、各フルオレセイン化ペプチドをHepG2細胞中への取り込みについて試験した。ペプチドaa1~8のみが細胞透過性であると分かった図21。Xタンパク質細胞透過性ペプチド16~22は、いくつかの異なる接着細胞株に入ることができるが、非接着細胞株TK1に入ることはできないXタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22を、ヒトC32黒色腫、DU145前立腺癌、TK1T細胞リンパ種、H441肺癌、Rin-m5fラット膵島腫瘍およびCos-1/7ミドリザル腎細胞株を含む他の哺乳動物細胞株により取り込まれる能力について試験した。TK1細胞は、懸濁細胞であるが、他の全細胞は接着細胞である。細胞を、FCSの非存在下、細胞株に適した培地中で3時間、フルオレセイン化Xタンパク質細胞透過性ペプチド16~22と共にインキュベートした。HepG2細胞を陽性対照として使用した。Xタンパク質ペプチドは、細胞の型または供給源にかかわらず全ての接着細胞株に入ることができた図22および23。HepG2、C32およびDU145細胞株は、ペプチドの効率的90超細胞陽性取り込みを示し、ペプチドが細胞透過性であることを確認した図22。対照的に、ペプチドは、H441、Cos-7、Cos-1およびRin-m5f細胞株中にはあまり効率的に取り込まれなかった60~70細胞陽性図23。ペプチドは、懸濁細胞株TK1に入ることが完全にできなかった図22。Xタンパク質細胞透過性ペプチド16~22は非接着性単球およびリンパ球に入ることができない前の実験は、ペプチドaa16~22が懸濁細胞株TK1に入ることができないことを示した。これが非接着細胞の一般的特徴であるかどうかを決定するために、ペプチドが非接着性ヒト末梢血単核細胞に入る能力を調査した。単球、リンパ球および血小板を含むバフィーコートをヒト血液10mlから単離し、FCSを含まないRPMI培地中細胞透過性ペプチドaa16~22と共に8チャンバースライド中で3時間インキュベートした。非接着性バフィーコート細胞は、蛍光を発せず、これらがペプチドを取り込まないことを示した図24。対照的に、8チャンバースライドの底に接着した単球および血小板は蛍光を発し、これらがペプチドを取り込んだことを示した図25。Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22は非接着性赤血球および血小板に入らない全血をフルオレセイン化Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22と共に3時間インキュベートして、赤血球および血小板がペプチドを取り込むことができるかどうかを決定した。血液をフィンガープリックで採取し、10mMクエン酸緩衝液に懸濁して、血液凝固を防止した。ペプチドとのインキュベーション後、細胞をPBS中で洗浄し、血液塗抹をガラススライド上に調製した。細胞をDiff-Quikで染色した。大部分が赤血球大細胞の大部分はドーナッツ形をしていたおよび血小板である、存在する細胞型のいずれも細胞透過性ペプチドを取り込むことができなかった図26。Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22は接着性TK1細胞に入ることができる上記のように、懸濁したリンパ球細胞株TK1は、Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22を取り込むことができなかった。いったん活性化すると、循環性リンパ球は、血管内皮に接着する、抗原提示細胞に接着するおよび細胞外基質に接着し移動する能力を有する。接着性単球がペプチドを取り込んだという事実は、表面に接着したTK1T細胞もXタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22を取り込むことができる可能性をもたらした。TK1細胞を、MAdCAM-1コーティングしたガラススライドに接着させた、またはガラススライドの表面に直接結合させた。スライドに接着した細胞を、FCSを含まないRPMI中でXタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22と共に3時間インキュベートした。α4β7を介してMAdCAM-1に接着した実質的に全てのTK1細胞がペプチドを取り込んだ一方で、ガラススライドに直接接着した細胞のわずか50~60がペプチドを取り込んだ図27。Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22は外来性ペプチドを接着性TK-1T細胞中に輸送することができるXタンパク質細胞透過性ペプチドLCLRPVGを、ヒトインテグリンβ7サブユニットの細胞質ドメインからとったヘキサペプチドYDRREY配列番号16に融合した。ペプチドをグリシンリンカーにより分離し、ビオチンタグをN末端に付加した。融合ペプチドを、MAdCAM-1に接着性のTK-1細胞に入る能力について、R9担体ペプチドに融合したYDRREY配列番号16ペプチドと比較した。両ペプチドがTK-1細胞に取り込まれた図28。R9YDRREY配列番号14ペプチドは全細胞に入ったが、細胞の特定の亜集団により、より多くの量が優先的に取り込まれるように見えた。対照的に、LCLRPVGGYDRREY配列番号15ペプチドは、全細胞により同様の量が均一に取り込まれた。実施例2材料および方法材料ペプチドビオチン-LCLRPVGGGRRRQQQQQQRRR配列番号17、ビオチン-RRRRRRRRMAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号20およびビオチン-RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号19をPeptide2.0により合成した。オリゴヌクレオチド5AmMC12-GAGCTGCACGCTGCCGTC-Tex615配列番号18をIntegratedDNATechnologiesにより合成した。FITC抱合型ウサギIgGをSigmaから購入したカタログ番号F9887。C32黒色腫細胞株カタログ番号CRL-1585、Wm266-4黒色腫細胞株カタログ番号CRL-1676およびHepG2肝がん細胞株カタログ番号HB-8065をAmericanTypeCultureCollectionから購入した。方法トランスグルタミナーゼの精製カゼインおよびトランスグルタミナーゼの混合物を含むActiva酪農粉末ACTIVATG-BP-MH、KerryIngredients、Otahuhu、Auckland;Lesnie’s、Tamaki、Aucklandから購入したを、H2O10mlに溶解して20mg/mlの濃度とした。20mMの酢酸ナトリウム緩衝液2mlpH4.0を混合しながら添加し、溶液を13000gで30分間遠心分離した。トランスグルタミナーゼのみを含む上清をPBSpH7.4に対して透析し、Aquacideを使用して酵素を濃縮した。12ポリアクリルアミドSDSゲル上の電気泳動による単離した酵素の解析により、予想されたように32、約37kDaの単一のバンドが明らかになった。トランスグルタミナーゼを使用した積荷のXペプチドとの架橋結合5mMCaCl2、1mMDTTおよび50mMトリスHClからなる反応緩衝液30μlを、200μMXタンパク質細胞透過性ペプチド1.5μl、および100μMウサギIgG-FITC3μlもしくは100μM18merGFPアンチセンスオリゴ3μlのいずれかと混合して、8.7μMの積荷最終濃度を得た。次いで、トランスグルタミナーゼを100μg/mlの濃度で添加した。溶液を37°Cで1時間インキュベートし、次いで、EDTAを100mMまで添加して反応を停止した。Xタンパク質担体ペプチドがウサギIgG-FITCおよび18merGFPアンチセンスオリゴをHepG2細胞中に輸送する能力の試験HepG2細胞を、37°Cおよび5CO2で一晩、8ウェルチャンバースライド中に1ウェル当たり1×105個の細胞で播種した。翌日、細胞を、血清を含まないMEMで3回洗浄し、同媒体500μlに再懸濁し、ウェルに添加した。ウサギIgG-FITCおよびGFPアンチセンスオリゴと架橋結合したXタンパク質担体ペプチドを、0.5μMの最終濃度で細胞に添加し、37°Cで3時間インキュベートした。追加の実験で、抱合体の細胞中への取り込みのタイミングを決定するために、18merオリゴに抱合したXタンパク質担体ペプチドを細胞と共に24時間、3時間および30分間インキュベートした。非抱合型オリゴを対照として3時間細胞に添加した。細胞をPBSで3回洗浄し、4ホルムアルデヒドで固定した。これらをPBSで3回洗浄し、細胞核を視覚化するためにDAPIを添加し、引き続いて、蛍光性積荷の侵入について蛍光顕微鏡検査により調査した。HepG2細胞中への侵入についての異なる比のXタンパク質担体ペプチドおよび18merGFPアンチセンスオリゴの抱合の試験HepG2細胞を、37°Cおよび5CO2で一晩、8ウェルチャンバースライド中に1ウェル当たり1×105個の細胞で播種した。翌日、細胞を、血清を含まないMEMで3回洗浄し、同媒体500μlに再懸濁した。0.75、1.5および3μlの一定分量の18merオリゴの100μM溶液を、200μMのXタンパク質担体8.7μMの最終濃度ペプチド1.5μlと混合して、2.3、4.5および8.7μMのオリゴの最終濃度を得て、引き続いて、トランスグルタミナーゼと架橋結合した。18merオリゴに抱合したXタンパク質担体ペプチドを、0.14、0.3、0.6μMのオリゴの最終濃度で細胞に添加し、37°Cで3時間インキュベートした。上記のように、細胞を固定し、蛍光顕微鏡検査のためにDAPIで染色した。B-raf標的化ペプチドが黒色腫細胞を死滅させる能力の試験黒色腫細胞株WM-266-4およびC32を、8ウェルチャンバースライド中に完全MEM培地中1ウェル当たり1×105個の細胞で播種し、37°Cおよび5CO2で一晩インキュベートした。翌日、細胞を、血清を含まないMEMで3回洗浄し、同媒体500μlに再懸濁し、ウェルに添加した。B-rafXタンパク質融合ペプチドビオチン-RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号19およびアポトーシスを引き起こさない対照細胞透過性ペプチドビオチン-RRRRRRRRMAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号20をC32およびWM-266-4黒色腫細胞に添加して、それぞれ10μMおよび20μMの最終濃度とし、引き続いて、37°Cで3時間インキュベートした。アネキシンV標識化試薬20μlおよびヨウ化プロピジウム10μlをインキュベーション緩衝液1mlに添加することにより、アネキシンV標識化溶液を調製した。細胞をインキュベーション緩衝液で洗浄し、アネキシンV標識化溶液100μlを添加し、引き続いて、暗中で15分間インキュベートした。細胞をインキュベーション緩衝液で洗浄し、PBS中4ホルムアルデヒドで30分間固定し、PBSで洗浄し、スライドチャンバーを除去した。DAPIを含むProlongGold褪色防止試薬1滴を各試料に添加し、スライドを一晩乾燥させ、次いで、蛍光顕微鏡検査により調査した。結果仮の適当な区分後に配置するためのXタンパク質のオリゴマー形成ドメインのサイズの精密化領域16~35を含む2種の小さいペプチドを合成して、aa16~35がXタンパク質二量体形成に必要とされる最小ペプチドモチーフであるかどうかを決定した。これらのペプチドは、NおよびC末端で切断されていた、すなわち、aa20~35および16~30であった。これらを同じペプチド結合アッセイを使用して解析した。ペプチド16~30は、ペプチド16~35よりもさらに強力にペプチド1~50に結合した一方で、ペプチド20~35は、弱い結合を示しただけであった図32。したがって、調査したペプチドの中で、Xタンパク質の二量体形成に必要とされる最小ペプチドモチーフは15aaペプチド16~30配列番号90である。Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22は抱合型ウサギIgGをHepG2細胞中に輸送することができるポリグルタミン伸長ビオチン-LCLRPVGGGRRRQQQQQQRRR配列番号17に融合したXタンパク質細胞透過性ペプチドLCLRPVG配列番号2を、トランスグルタミナーゼを使用して、FITC標識化ウサギIgGに抱合した。ペプチドをグリシンリンカーで分離し、グルタミン伸長をアルギニン残基で囲んで溶解性を補助し、ビオチンタグをN末端に付加した。ウサギIgGに抱合したXタンパク質細胞透過性ペプチドは精製しなかったが、単純にHepG2細胞に添加した。これはHepG2細胞により容易に取り込まれた一方で、非抱合型FITC標識化ウサギIgGは取り込まれなかった図29。Xタンパク質細胞透過性ペプチドaa16~22は18merオリゴヌクレオチドをHepG2細胞中に輸送することができるポリグルタミン伸長ビオチン-LCLRPVGGGRRRQQQQQQRRR配列番号17に融合したXタンパク質細胞透過性ペプチドLCLRPVG配列番号2を、トランスグルタミナーゼを使用して、5’アミノ基を含むTex615標識化18merオリゴヌクレオチド5AmMC12-GAGCTGCACGCTGCCGTC配列番号18に抱合した。18merオリゴヌクレオチドに抱合したXタンパク質細胞透過性ペプチドは精製しなかったが、単純にHepG2細胞に8.7μMの最終濃度で添加した。これはHepG2細胞により30分以内に容易に取り込まれた一方で、8.7μMの非抱合型Tex615標識化18merオリゴヌクレオチドは取り込まれなかった図30A。10μMの担体ペプチドとの4.5~8.7μMオリゴの抱合から得られる細胞取り込みについての最適比で、18merオリゴを異なる比で担体ペプチドに抱合し、0.3および0.6μMの溶液中最終濃度を得た図30B。細胞透過性担体ペプチドは抗がんペプチドをがん細胞中に輸送し、細胞死をもたらすことができるB-raf遺伝子中の突然変異V600→Eにより全黒色腫の約50の増殖が駆動され、野生型B-rafの過剰発現により25が駆動される27~29。突然変異型B-rafに特異的なPLX4032、低分子阻害剤は、患者の80で黒色腫の退行を引き起こしたので、近年騒動をもたらした30。したがって、B-raf腫瘍性タンパク質を標的化するアプローチは、黒色腫の治療の見込みを持っている。ここで、本発明者らは、B-rafの二量体形成界面に結合し、B-rafの破壊を引き起こすことができるペプチドを開発した。ポリargR8細胞透過性ペプチドをXタンパク質の分解ドメインおよびB-rafタンパク質からの二量体形成ドメインLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号89に融合した31。ビオチンタグをN末端に含ませて、ペプチドビオチン-RRRRRRRRHKLVRSPAPCKFFTSAGGLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRK配列番号19を得た。ペプチドは、黒色腫細胞に取り込まれ、ポリユビキチン媒介性破壊のために黒色腫細胞を標的化するB-rafに結合し、細胞死をもたらすだろうと予想された。実際、ペプチドをWM-266-4およびC32黒色腫細胞に添加すると、腫瘍細胞死がもたらされた一方で、対照ペプチドビオチン-RRRRRRRRMAARLCCQLDPARDVLCLRP配列番号20は影響を及ぼさなかった図31。細胞透過性担体ペプチドは抗B-raf抗体を黒色腫細胞中に輸送し、細胞死をもたらすことができるここで、本発明者らは、Xタンパク質aa16~22担体ペプチドLCLRPVGを使用して、ウサギポリクローナル抗ヒトB-raf抗体をWM-266-4黒色腫細胞に送達し、担体ペプチドが抗体を細胞に細胞内送達することができるという前の知見を得た。Xタンパク質担体ペプチドにより送達される抗B-raf抗体は、アネキシンVfluos染色によって検出されるように細胞にアポトーシスを起こさせた一方で、対照的に、非抱合型B-raf抗体および担体ペプチドは検出可能な効果を有さなかった図33。読者が不当な実験を行わずに本発明を実施することができるようにするために、特定の好ましい実施形態を参照して、本発明を本明細書に記載してきた。しかしながら、当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、成分およびパラメータの多くをある程度変更もしくは修正する、または既知の同等物に置換することができることを容易に認識するだろう。このような修正および同等物はあたかも個々に示されているかのように本明細書に組み込まれることを認識すべきである。本発明はまた、個別的にまたは集合的に、本明細書で言及するまたは示すステップ、特徴、組成物および化合物の全て、ならびに前記ステップもしくは特徴の任意の2つ以上の任意のおよび全ての組み合わせも含む。さらに、表題、見出しなどは、読者の本文書の理解を高めるために提供しており、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきでない。上および以下に引用する全出願、特許および刊行物の全開示は、もしあれば、これにより参照により組み込まれる。しかしながら、本明細書中の任意の従来技術への言及は、その従来技術が世界の任意の国において一般知識の一部を形成していることの承認または任意の形の示唆ではなく、またそのように解釈されるべきではない。本明細書および以下の任意の請求項中、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、単語含む、含んでいるなどは、排他的意味と対照的に、包括的意味で、すなわち、~を含むがこれだけに限らないという意味で解釈すべきである。参考文献1.KumarV、JayasuryanN、KumarR。B型肝炎ウイルスXタンパク質の切断型変異体残基58~140は、トランス活性化機能を保持する。ProcNatlAcadSciUSA93:5647~52、1996。2.MisraKP、MukherjiA、KumarV。B型肝炎ウイルスXタンパク質の保存されたアミノ末端領域アミノ酸1~20は、トランス抑制機能を示す。VirusRes105:157~65、2004。3.ZanettiAR、VanDammeP、ShouvalD。B型肝炎に対する予防接種の世界的影響:歴史的概要。Vaccine26:6266~73、2008。4.LodatoF、MazzellaG、FestiD等:肝細胞癌予防:先進国の富裕と発展途上国の経済的制約との間の世界的出現。WorldJGastroenterol12:7239~7249、2006。5.Murakami,S。B型肝炎ウイルスXタンパク質:構造、機能および生物学。Intervirol42:81~99、1999。6.LeeAT、LeeCG。発癌および形質転換ウイルス:B型肝炎ウイルスおよび肝細胞癌-疾病原因の関連。FrontBiosci12:234~45、2007。7.NewellP、VillanuevaA、LlovetJM。肝細胞癌における分子標的療法:前臨床モデルから臨床試験まで。JHepatol49:1~5、2008。8.PangRW、PoonRT。肝細胞癌の分子生物学から標的療法まで:未来は現在である。Oncology72Suppl1:30~44、2007。9.Koike,K.、Moriya,K.、Iino,S.、Yotsuyanagi,H.、Endo,Y.、Miyamura,T.、およびKurokawa,K.トランスジェニックマウスにおけるB型肝炎ウイルスHBX遺伝子の高レベル発現および肝臓癌形成。Hepatol19:810~819、1994。10.Madden,C.R.、Finegold,M.J.およびSlagle,B.L.B型肝炎ウイルスXタンパク質は、ジエチルニトロソアミン誘導性新生物発生前病変の発生における腫瘍促進剤として作用する。JVirol75:3851~3858、2001。11.ZhuH、WangY、ChenJ、ChengG、XueJ。B型肝炎ウイルスXタンパク質を発現しているトランスジェニックマウスは、より発癌物質誘導性肝臓癌形成しやすい。ExpMolPathol76:44~50、2004。12.Luber,B.、Arnold,N.、Sturzl,M.、Hohne,M.、Schirmacher,P.、Lauer,U.、Wienberg,J.、Hofschneider,P.およびKekule,A.ヘパトーマ由来一体型DNAは、試験管内で多段階形質転換を引き起こす。Oncogene12:1597~1608、1996。13.Feitelson,M.A.およびClayton,M.M.B型肝炎ウイルス感染患者の血清中のX抗原ポリペプチド。Virol177:367~371、1990。14.Feitelson,M.A.、Clayton,M.M.およびBlumberg,B.S.ヘパドナウイルス感染症におけるX抗原/抗体マーカー。血清中のヘパダウイルスX遺伝子産物の存在および意義。Gastroenterol98:1071~1078、1990。15.ChenHY、TangNH、LinN、ChenZX、WangXZ。B型肝炎ウイルスXタンパク質は、DNA修復およびチェックポイント応答に干渉することにより、アポトーシスおよび細胞周期調節解除を誘導する。HepatolRes38:174~81、2008。16.PollicinoT、TerradillosO、LecoeurH、GougeonML、BuendiaMA。B型肝炎ウイルスX遺伝子のアポトーシス促進効果。BiomedPharmacother52:363~8、1998。17.ZhangX、DongN、YinL、CaiN、MaH、YouJ、ZhangH、WangH、HeR、YeL。B型肝炎ウイルスXタンパク質は、ヘパトーマ組織中のサバイビン発現を上方制御する。JMedVirol77:374~81、2005。18.PanJ、ClaytonM、FeitelsonMA。B型肝炎ウイルスX抗原は、TGF-β1の上方制御およびα2-マクログロブリンの下方制御によりトランスフォーミング増殖因子β1TGF-β1活性を促進する。JGenVirol85Pt2:275~82、2004。19.LeeSW、LeeYM、BaeSK、MurakamiS、YunY、KimKW。ヒトB型肝炎ウイルスXタンパク質は、肝臓癌形成における低酸素誘導血管新生の可能な媒体である。BiochemBiophysResCommun268:456~61、2000。20.KeaslerVV、LeratH、MaddenCR、FinegoldMJ、McGarveyMJ、MohammedEM、ForbesSJ、LemonSM、HadsellDL、GronaSJ、HollingerFB、SlagleBL。B型肝炎ウイルスXタンパク質を発現しているC型肝炎ウイルストランスジェニックマウス中の肝臓病態の増加。Virol347:466~75、2006。21.ChanDW、NgIO。B型肝炎ウイルスXタンパク質のノックダウンにより、肝細胞癌細胞の腫瘍形成能が低下する。JPathol208:372~80、2006。22.KayhanH、KaratayliE、TurkyilmazAR、SahinF、YurdaydinC、BozdayiAM。安定的にHBVを発現するHEPG22.2.15細胞株におけるshRNAによるB型肝炎ウイルス複製の阻害。ArchVirol152:871~9、2007。23.RenJL、PanJS、ChengT、DongJ、LuYP、HuangSJ、ShiHX、WangL、LianYM。RNA干渉は、B型肝炎ウイルス遺伝子発現およびHepG2-N10細胞の複製を阻害する。ChinJDigDis7:230~6、2006。24.ZhaoZF、YangH、HanDW、ZhaoLF、ZhangGY、ZhangY、LiuMS。HepG2.2.15におけるRNA干渉によるB型肝炎ウイルス発現および複製の阻害。WorldJGastroenterol12:6046~9、2006。25.LiH、ChiCY、LeeS、AndrisaniOM。B型肝炎ウイルスXタンパク質の分裂促進機能は、アミノ酸51~140内に存在し、NおよびC末端制御領域により調節される。JVirol.2006年11月;8021:10554~64。26.MurakamiS、CheongJH、およびKanekoS。ヒト肝炎ウイルスX遺伝子は、Xタンパク質のトランス活性化を抑制する制御ドメインをコードする。JBiolChem269:15118~15123、1994。27.ShaoY、AplinAE。B-RAF標的化黒色腫細胞におけるAkt3-媒介性アポトーシス耐性。CancerRes70:6670~81、2010。28.WellbrockC、HurlstoneA。黒色腫の治療標的としてのBRAF。BiochemPharmacol80:561~7、2010。29.TanamiH、ImotoI、HirasawaA、YukiY、SonodaI、InoueJ、YasuiK、Misawa-FurihataA、KawakamiY、InazawaJ。悪性黒色腫細胞株の増殖への過剰発現野生型BRAFの関与。Oncogene23:8796~804、2004。30.Bollag等。RAF阻害剤の臨床効果は、BRAF突然変異黒色腫の広範な標的遮断を必要とする。Nature467:596~9、2010。31.RushworthLK、HindleyAD、O’NeillE、KolchW。Raf-1/B-Rafヘテロ二量体形成の制御および役割。MolCellBiol26:2262~72、2006。32.YokoyamaK、NioN、KikuchiY。微生物トランスグルタミナーゼの特性および用途。ApplMicrobiolBiotechnol.2004年5月;644:447~54。"