"糖尿病に関連する網膜細胞における機能を改善するための方法であって、該方法は:細胞をベータ-アドレナリン受容体アゴニストと接触させる工程含み、前記ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、インスリンシグナル伝達を増加させ、TNFαに誘発されたアポトーシスを減少させ、それにより網膜細胞における機能を改善する、ことを特徴とする方法。前記ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、以下の化学構造式を有し:ここで、R1はCH2nCH32又は以下の式であり、ここで、nは1乃至4であり;R2はH又はXがハライドであるHHXであり;R3は1以上のC2-C6にて、mが0乃至4であるOCH2mCH3である、ことを特徴とする、請求項1に記載の方法。R1はCH2nCH32であり、R2はHであることを特徴とする、請求項2に記載の方法。前記ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、イソプロテレノールであることを特徴とする、請求項3に記載の方法。R1はCH22-フェニルであり、R2はH又はHHClであり、R3はC3、C4及びC5にてOCH2mCH3であることを特徴とする、請求項2に記載の方法。前記ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、4-[1-ヒドロキシ-2-[3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,2-ジオール、4-[1-ヒドロキシ-2-[3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,2-ジオール塩酸塩、5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシ-フェニルエチルアミノ]エチル-ベンゼン-1,3-ジオール、5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,3-ジオール塩酸塩又はそのR異性体であることを特徴とする、請求項5に記載の方法。網膜細胞は、インビトロ又はインビボで接触されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。糖尿病は、糖尿病網膜症、増殖前糖尿病網膜症又は他の高血糖の疾病であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。被験体における糖尿病による網膜症の疾病を処置する方法であって、該方法は:被験体に薬理学的に効果的な量の1以上のベータ-アドレナリン受容体アゴニストを1回以上投与する工程を含み、ここで、前記アゴニストは網膜細胞機能を改善し、それにより糖尿病網膜症を処置することを特徴とする、方法。ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、以下の構造式を有し:ここで、R1はCH2nCH32又は以下の式であり、ここで、nは1乃至4であり;R2はH又はXがハライドであるHHXであり;及びR3は1つ以上のC2-C6にて、mが0乃至4であるOCH2mCH3であることを特徴とする、請求項9に記載の方法。R1はCH2nCH32であり、R2はHであることを特徴とする、請求項10に記載の方法。前記ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、イソプロテレノールであることを特徴とする、請求項11に記載の方法。R1はCH22-フェニルであり、R2はH又はHHClであり、R3はC3、C4及びC5にてOCH2mCH3であることを特徴とする、請求項10に記載の方法。ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、4-[1-ヒドロキシ-2-[3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,2-ジオール、4-[1-ヒドロキシ-2-[3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,2-ジオール塩酸塩、5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシ-フェニルエチルアミノ]エチル-ベンゼン-1,3-ジオール、又は5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,3-ジオール塩酸塩あるいはそのR異性体であることを特徴とする、請求項13に記載の方法。被験体に1以上の他の糖尿病又は網膜症の薬物を投与する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項9に記載の方法。前記他の薬物は、ベータ-アドレナリン受容体アゴニストにより同時に又は連続して投与されることを特徴とする、請求項15に記載の方法。前記ベータ-アドレナリン受容体アゴニストは、薬学的に許容可能な担体を有する医薬組成物を含むことを特徴とする、請求項9に記載の方法。前記医薬組成物は、局所、結膜又は静脈内投与に適していることを特徴とする、請求項17に記載の方法。前記糖尿による病網膜症は、増殖前網膜症であることを特徴とする、請求項9に記載の方法。以下の化学構造式を有するベータアドレナリン受容体アゴニストであって:ここで、nは1乃至4であり;R2はH又はXがハライドであるHHXであり;及びR3は1つ以上のC2-C6にて、mが0乃至4であるOCH2mCH3であることを特徴とする、ベータアドレナリン受容体アゴニスト。以下の化学構造式を有することを特徴とする、請求項20に記載のベータアドレナリン受容体アゴニスト。前記構造はR-異性体の形態であることを特徴とする、請求項20に記載のアゴニスト。請求項21に記載のベータ-アドレナリン受容体アゴニストと薬学的に許容可能な担体を含むことを特徴とする、医薬組成物。本発明は、糖尿病に関連する網膜細胞における機能を改善する方法に向けられる。該方法は、細胞をβ-アドレナリン受容体BARアゴニストに接触させる工程を含み、ここで、BARアゴニストは、インスリンシグナル伝達及びインスリン様成長因子結合タンパク質-3IGFBP-3を増加させ、TNFαに誘発されたアポトーシスを減少させて、それにより網膜細胞における機能を改善する。BARアゴニストは、一般的な以下の化学構造を有し:ここで、R1はCH2nCH32又は以下の式でありnは1乃至4であり、R2はH又はXがハライドであるHHXであり、R3は1以上のC2-C6にて、mが0乃至4であるOCH2mCH3である。本発明はまた、被験体の糖尿病による網膜症diabeticretinopathicconditionを処置する方法に向けられる。該方法は、被験体に、薬理学的に効果的な量の1以上のβ-アドレナリン受容体BARアゴニスト又はその医薬組成物を1回以上投与する工程を含み、ここで、アゴニストは網膜細胞機能を改善し、それにより糖尿病網膜症を処置する。本発明は、被験体に、1以上の他の糖尿病又は網膜症の薬物を投与する工程をさらに含む関連方法に向けられる。BARアゴニストは、本明細書に記載の一般的な化学構造を有し得る。本発明は、さらに以下の化学構造式を有するβ-アドレナリン受容体アゴニスト又はその医薬組成物に向けられる:ここで、nは1乃至4であり、R2はH又はXがハライドであるHHXであり、R3は1以上のC2-C6にて、mが0乃至4であるOCH2mCH3である。他の及びさらなる本発明の態様、特徴及び利点は、開示の目的のために与えられた本発明の現在好ましい実施形態の、以下の記載から明らかになるであろう。本明細書で使用されるように、用語a又はanは、請求項及び/又は明細書において用語含むcomprisingと組み合わせて使用される時、1oneを示すが、1以上oneormore、少なくとも1atleastone及び1又は1より多くのoneormorethanoneの意味とも一致する。本発明の幾つかの実施形態は、本発明の1以上の要素、方法の工程、及び/又は方法から成り、又は本質的に成り得る。本明細書に記載の任意の方法又は組成物は、本明細書に記載の任意の他の方法又は組成物に関して実施されることができることが熟慮される。本明細書で使用されるように、請求項における用語又はorは、代替物のみを指すよう明確に示されない限り、又は代替物が相互に排他的でない限り、及び/又はand/orを指すが、本開示は代替物及び及び/又はのみを指す定義を支持する。本明細書で使用されるように、用語接触させることcontactingは、1以上の本明細書に記載のβ-アドレナリン受容体BARアゴニスト、又は網膜細胞或いは網膜細胞と接触する網膜の維管束組織機能及び/又は構造、又は糖尿病網膜症又は増殖前網膜症などの糖尿病に関連した、同じ物を含む組織を改善する、他の抑制的又は刺激的な薬剤をもたらす任意の適切な方法を指す。インビトロ又はエクスビボで、これは、適切な培地におけるBARアゴニストに網膜細胞又は組織をさらすことにより達成される。インビボでの適用に関して、投与の任意の既知の方法は、本明細書に記載されるように適切である。本明細書で使用されるように、用語効果的な量effectiveamount、薬理学的に効果的な量pharmacologicallyeffectiveamountは互換性があり、糖尿病に関連した網膜症の状態の発症の遅延又は予防をもたらすか、又は同じものの症状の改善又は治療をもたらす量を指す。当業者は、効果的な量が、患者又は被験体の疾病を改善するが、疾病の完全な治療ではないと理解する。本明細書に使用されるように、用語被験体subjectは、処置の任意の標的を指す。本発明の1つの実施形態において、糖尿病に関連した網膜細胞における機能を改善する方法が提供され、該方法は、細胞をβ-アドレナリン受容体BARアゴニストと接触させる工程を含み、ここで、BARアゴニストは、インスリンシグナル伝達を増加させ、TNFαに誘発されたアポトーシスを減少させ、それにより網膜細胞における機能を改善する。この実施形態において、BARアゴニストは以下の化学構造式を有し:ここで、R1はCH2nCH32又は以下の式であり、ここで、nは1乃至4であり;R2はH又はXがハライドであるHHXであり;R3は1以上のC2-C6にて、mが0乃至4OであるCH2mCH3である。この実施形態の1つの態様において、R1はCH2nCH32であり、R2はHであり得る。この態様において、BARアゴニストは化合物2であり得る。別の態様において、R1はCH22-フェニルであり、R2はH又はHHClであり、R3はC3、C4及びC5にてOCH2mCH3であり得る。この他の態様において、BARアゴニストは、4-[1-ヒドロキシ-2-[3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,2-ジオール、4-[1-ヒドロキシ-2-[3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,2-ジオール塩酸塩、5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシtrimethosy-フェニルエチルアミノ]エチルベンゼン-1,3-ジオール、又は5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,3-ジオール塩酸塩であり得る。すべての態様及び実施形態において、網膜細胞は、インビトロ又はインビボで接触され得る。また、糖尿病は、糖尿病網膜症、増殖前糖尿病網膜症又は他の高血糖の疾病であり得る。本発明の別の実施形態において、被験体の糖尿病による網膜症を処置する方法が提供され、該方法は、被験体に薬理学的に効果的な量の1以上のβ-アドレナリン受容体BARアゴニストを1回以上投与する工程を含み、ここで、アゴニストは網膜細胞機能を改善し、それにより糖尿病網膜症を処置する。この実施形態に加えて、前記方法は、被験体に1以上の他の糖尿病又は網膜症の薬物を投与する工程を含む。このさらなる実施形態において、他の薬物は、β-アドレナリン受容体アゴニストにより同時に又は連続して投与され得る。両方の実施形態において、ベータアドレナリン受容体アゴニストは、上述されたようなものであってもよい。また、両方の実施形態において、糖尿病による網膜症は、増殖前網膜症であり得る。加えて、ベータアドレナリン受容体アゴニストは、薬学的に許容可能な担体を有する医薬組成物を含み、それは、局所、結膜又は静脈内投与に適している。本発明の別の実施形態において、以下の化学構造式を有するベータアドレナリン受容体アゴニストが提供され:ここで、nは1乃至4であり、R2は1つ以上のC2-C6にて、mが0乃至4であるOCH2mCH3である。BARアゴニストの特定の化学構造の例は、以下のとおりである:関連する実施形態において、本発明は、上述されるようなβ-アドレナリン受容体アゴニスト及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。インスリン受容体及びβ-アドレナリン受容体シグナル伝達の間に、予期しない重複がある。重要なことに、増加したβ-アドレナリン受容体シグナル伝達は、β-アドレナリン受容体アゴニストでの処置の後の糖尿病のラットにおけるアポトーシスの細胞死の減少によって実証されるように、糖尿病のインスリンシグナル伝達の損失を補い得る。関係する細胞の機構は、細胞死、又は代わりに、TNFαなど炎症性メディエーターに関係する経路によるインスリン受容体の阻害防止への、β-アドレナリン受容体シグナル伝達の直接の補足的な効果を含み得る。それはまた、網膜の内皮細胞死を阻害するIGFBP-3のアップレギュレーションを含み得る。本発明は、化合物2の誘導体及びアナログ化合物を提供する。化合物2及び誘導体/アナログ化合物の両方は、β-アドレナリン受容体アゴニストである。これらの化合物は、カテコールアミン作動性の特性を有し、またβ-1-及びβ-2-アドレナリン受容体の両方を活性化する。これらの化合物は、いくつかの実施形態におけるイソプロテレノールと比較される。イソプロテロノール及び本発明の化合物の両方が、β-アドレナリン受容体活性を有する一方で、イソプロテレノールは非選択的アゴニストであるが、本発明のベータアドレナリン受容体アゴニストがイソプロテレノールより強力で特異的な効果を有することが実証される。本明細書で提供される本発明のベータアドレナリン受容体アゴニストは、既知の標準の化学合成方法によって合成され得る。一般に、既知のイソプロテレノールを含むこれらのベータアドレナリン受容体アゴニストは、以下の化学構造を有し得る:R1置換基は、nが1乃至4であるCH2nCH32、例えば、イソプロテレノール1におけるようにイソプロピル部分CH2CH32を含み、又は置換されたフェニル部分を含み得る:ここで、nは1乃至4である。R2は、水素、又は薬理学的に許容可能な塩、又はXがハライドであるHHXなどの水和物部分、例えば限定されないが塩化物のいずれかである。R3は1つ以上のC2-C6フェニル炭素にて置換され、ここで、R3は独立して-OCH2mCH3であり、mは0乃至4である。一般に、本明細書で提供される新しいベータアドレナリン受容体アゴニストは、ベンゼンジオール部分を含む。例えば、β-アドレナリン受容体アゴニストは、以下の化学構造を有し得る:ベンゼン1,2-ジオール部分を有する好ましいBARアゴニストは、4-[1-ヒドロキシ-2-1-エチルアミノ-3-,4-,5-トリメトキシフェニルエチル]ベンゼン-1,2-ジオール塩酸塩化合物2であり、以下の化学構造を有し:以下の化学構造を有する4-[1-ヒドロキシ-2-1-エチルアミノ-3-,4-,5-トリメトキシフェニルエチル]ベンゼン-1,2-ジオール塩酸塩化合物3を有する:また、β-アドレナリン受容体アゴニストは以下の化学構造を有する:ベンゼン1,3-ジオール部分を有するより好ましいベータアドレナリン受容体アゴニストは、以下の化学構造を有する5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシtrimethosy-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,3-ジオール塩酸塩化合物4:以下の化学構造を有する5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,3-ジオール化合物5である:本明細書に記載の化合物2及び他のベータアドレナリン受容体アゴニストの作用の潜在的な機構が、TNFα及びMueller細胞のための増加したインスリンシグナル伝達の減少を介し、及び網膜の内皮細胞中の増加したIGFBP-3レベルを介することが決定される。これらの作用が、ヒト糖尿病網膜症のためのバイオマーカーを表わし得ることが熟考される。本発明は、β-アドレナリン受容体アゴニストが、複数の網膜細胞型を損傷させる糖尿病又は高血糖の疾病によって引き起こされた損傷を予防することを実証する。本明細書で提示されたベータアドレナリン受容体アゴニストでの処置の重大な特徴は、選択的な特異性であり、即ち、その一方でそれらは網膜損傷を減少させ、それらは血圧を下げず、眼内圧を変え、現在のアンギオテンシン変換酵素薬剤よりもかなり効果的である。したがって、本発明はまた、インスリン受容体シグナル伝達のための補足又はその維持を通じて糖尿病網膜症を予防する及び/又は逆転することによるなど、網膜細胞の機能及び構造、及び網膜の組織毛細管に対する、糖尿病に関連する網膜損傷を減少させる又は予防する方法を提供する。これらの方法はインビトロ又はインビボで実行され得る。例えば、b-アドレナリン受容体アゴニストを有する糖尿病に関連する網膜細胞を接触させることは、とりわけインスリンシグナル伝達を特に増加し、及びTNFαに誘発されたアポトーシスを減少することにより、細胞の網膜の機能を改善する。特に、本明細書で提供されるインビボでの処置方法は、臨床的に顕著な症状が明白でない時、及び細胞死並びに結果として生じる失明が起こる前に、糖尿病網膜症の増殖前期を標的とする。処置は、本明細書に記載のβ-アドレナリン受容体アゴニスト又はその薬理学的に効果的で許容可能な塩又は水和物の1つ以上の投与によって影響を受ける。当該技術分野において既知及び標準であるような、β-アドレナリン受容体アゴニスト及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物も投与され得る。1つ以上の他の糖尿病又は網膜症の薬物又は治療薬が、β-アドレナリン受容体アゴニストにより同時に又は連続して投与され得ることが熟慮される。β-アドレナリン受容体アゴニスト化合物又はその薬理学的に許容可能な塩又は水和物の投薬製剤は、投与の方法に適した従来の無毒で、生理学的に又は薬学的に許容可能な担体又はビヒクルを含み得る。投与の方法は、当該技術分野では既知であり、好ましくは、結膜送達及び局所送達であるが、該方法は静脈内送達を含み得る。これらの化合物又はその医薬組成物は、これらの化合物又は他の抗糖尿病薬物又は薬剤に由来する薬理学又は治療効果を達成する、維持する、又は改善するために独立して1回以上投与され得る。それは、投薬を決定し、又は適切な投薬が単一で投与される投与量又は複数で投与される投与量を含むかどうかを決定する技能者の技術内に十分にある。適切な投薬は、被験体の健康状態、糖尿病及び/又は網膜症の進行又は段階、投与経路及び使用される製剤に依存する。以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を示す目的で挙げられ、任意の様式で本発明を限定することを目的としない。動物の調製CharlesRiverから購入されたオスのルイスラットを使用した。糖尿病のラットは、60mg/kgのストレプトゾトシンFisher,Pittsburgh,PAの単独注入を受けた。対照のラットは、シトラート緩衝液の注入を受けた。すべてのラットの重量を毎週量り、非絶食の血液グルコースレベル>250mg/dlを有するマウスのみを、糖尿病であると考えた。糖尿病の指定を、実験の初めに行った。グルコースを隔月で測定した。インスリンを、いかなる時にもラットに投与しなかった。化合物2の局所適用が網膜に達し、反応を誘発するかどうかを決定するために、投与量と時間経過の研究を行った。それらの研究のため、動物を、STZを使用して2か月の間糖尿病にした。4日間、ラットは、毎日1回又は2回、化合物21mM乃至20mM又はPBSのいずれかの様々な投与量を受けた。両眼に対する点眼薬処置の4日後に、糖尿病及び対照の動物を安楽死させた。β-アドレナリン受容体刺激が環式のアデノシンモノホスファーゼmonophosphase生成を増加し、タンパク質キナーゼAを活性化するべきであるため、網膜の溶解産物を、PKAELISAMesaCupPKAELISA,Upstate,Temecula,CAのために処理した。化合物2のための点眼薬処置用の適量及び時間経過の決定後、ラットの3つのグループを、研究のこの部分のために使用した対照、糖尿病Diabetic、及び糖尿病点眼薬Diab2。STZ-注入の1週以内に、12のラットに点眼薬治療を行った。点眼薬治療中のラットは、各々の目に1mMの化合物2の4滴の毎日の適用を受けた。インスリンレベルが糖尿病の動物で失われたことを確認するために、インスリンELISARat/MouseInsulinELISAkit,Linco,St.Charles,MOを、2か月齢でのすべてのラットからサンプリングされた血液上で行った。ラットを、2又は8か月齢で犠牲にした。2又は8か月で、網膜を、網膜細胞数及び網膜の厚さの糖尿病に誘発された悪化のために2か月、及び退化した毛細管のために8か月評価した。TNF活性、切断されたカスパーゼ3、及びインスリン受容体ベータ及びAktのリン酸化を、両方の時点で評価した。網膜電位図実験の各月に、網膜電位図ERG分析を、3つのグループからのラット上で行った。網膜電位図分析を、網膜の電気活性における変化を評価するために、及び薬物効果の基準として評価するために行った。網膜電位図分析のため、ラットを一晩暗闇に適応させた。翌朝、ラットに、ケタミン0.6ml/kgの体重及びキシラジン0.375ml/kgの体重カクテルの腹膜腔内注入を使用して麻酔をかけた。各々の目の瞳を、1のトロピカミド溶液Alconを使用して十分に拡大した。目を保護し、良い電気的な結合を維持するのを支援するために、1滴のメチルセルロース溶液を、各々の目に加えたCelluvisc;Allergan,Irvine,CA。体温を、水性の熱パッドで37°Cに維持した。網膜電位図反応を、白金線の角膜電極、前頭照合電極、及び尾の外側電極を同時に使用して、両眼から記録した。網膜電位図刺激をDiagnosysLLCシステムによって送達した。検査されたすべての動物は、網膜電位図記録セッションtheelectroretinogramrecordingsessionsの後に麻酔から回復した。肉眼的白内障grosscataractを有する動物は、網膜電位図分析に使用しなかった。網膜電位図反応を、簡潔な4ms白色のLEDに応じて、次に、暗い刺激用の2.1秒の間隔及びより明るい刺激のための35秒の間隔で送達されたキセノンアークランプから報告した。刺激強度の範囲は、b波の振幅の分析に関して-4.0から1.0logcds/m2までに及んだ。網膜電位図波形を、0.3-500Hzの帯域幅により記録し、デジタル収集システムDiagnosysによって2kHzでサンプリングし、MatLabMathWorks,Natick,MAを使用して分析した。a-波及びb-波のための強度反応関数のプロットを、形態RI/Rmax=Ik/Ikknの双曲線の誇張したNaka-Rushton機能に適合し、ここで、Rはフラッシュ強度Iの反応幅であり、Rmaxは誘発されることができる最大の反応の幅であり;及びKは、最大の半分の反応を喚起する強度であった。振動電位の評価のため、刺激を3logcds/m2で投与した。振動電位のためのデータ分析を、60-300Hzで設定されたデジタルバンドパスフィルターを有するMatLabソフトウェアを使用して得て、4つの小波のピーク小波を、トラフからピークまで測定した。3-4。統計学を、2、6、及び8か月での各々の処置グループのa-及びb-波の平均SD振幅上で行った。トリプシンにより消化された網膜の血管の調製無細胞の毛細管の計算のため、対照、糖尿病、及び糖尿病2の目からの網膜を使用した。目を摘出し、5日間、10の緩衝ホルマリンに入れた。網膜を、2時間、37°Cで0.2Mのフッ化ナトリウムを含む、3の未精製のトリプシン溶液DifcoBactoTrypsin250,Detroit,MIにおいて解剖した5。神経の網膜をそっと払いのけ、残存する網膜の血管ツリーvasculartreeを、スライドガラス上で乾燥した。無細胞の毛細管の定量化一旦分離された網膜の血管ツリーをスライドガラス上で乾燥して、スライドをヘマトキシリン-過ヨウ素酸-Schiffで染色した。退化した無細胞の毛細管を、網膜のまわりで均一に間隔を置いた6乃至7の領域における中央の網膜において数えた。退化した毛細管を、それらの長さに沿っていかなる場所にも核を有さない毛細管サイズの管であると同定した。それらの平均直径が、周りを囲む健康な毛細管で見出された直径の少なくとも20であった場合のみ、退化した毛細管を数えた6-7。網膜の菲薄化及び神経細胞層のホルマリン固定パラフィン切片の細胞の欠失を評価し、網膜の厚さの光顕微鏡検査及び地形測定用のトルイジンブルーで染色した8。写真を、400xにて網膜における4つの部位視神経及び中央の網膜の両側にて撮った。網膜の神経細胞層GCL中の核を、各々の写真の100mのセクションにおいて数え、内部の網膜内部の核層の上部から内部の制限膜までの厚さを、QcaptureソフトウェアQImaging,Burbay,BC,カナダを有するNikonBiophot光学顕微鏡に付けられたRetigaカメラを使用して評価した。神経細胞層中の細胞の網膜の厚さ及び数を、OpenLabソフトウェアImprovision,Lexington,MAを使用して測定した。タンパク質分析各々の動物からの他の目を、炎症性のマーカー及びインスリン受容体シグナル伝達のためのタンパク質分析に使用した。ウェスタンブロッティングを記載されるように行った9。使用される抗体は、合計のインスリン受容体ベータ1:500,CellularSignaling,Danvers,MA、リン酸化されたインスリン受容体ベータTyr1150/1151,1:500,CellularSignaling,Danvers、MA、合計のAkt1:500,CellularSignaling,Danvers,MA及びリン酸化されたAktSer473,1:500,CellularSignaling,Danvers,MAであった。データの分析のため、平均デンシトメトリー値をKodak2.0ソフトウェアを使用して得た。リン酸化されたタンパク質の比率を、合計のタンパク質のレベルと比較した。ELISA分析TNF濃度Pierce,RockfordIL及び切断されたカスパーゼ3のレベルCellularSignaling,Danvers,MAを測定するために、ELISA分析を、光電密度番号を使用することができるように、等しいタンパク質を切断されたカスパーゼ3ELISAに充填することを除き、製造業者の指示に従って行った。細胞ヒト網膜の内皮細胞HRECをCellSystemsKirkland,WAから購入し、基本培地5mMのグルコース又は成長培地25mMのグルコースのいずれかで成長させた。両方の培地を、10のFBS及び抗生物質で補う。実験の前日、細胞を18-24時間、血清不足にする。ラットMueller細胞rMC-1を、5mMのグルコース又は25mMグルコースによりDMEM培地で育てた。培地を10のFBS及び抗生物質で補った。細胞を18-24時間、すべての実験前に血清不足にした。統計学統計学を、事後分析post-hocanalysesのためのDunn’stestと共に、Kruskal-Wallis分析を使用して、対照、糖尿病、及び糖尿病処置Diab化合物2を比較するために行った。P<0.05を、有意なものとして得た。化合物2のインビボでの効果化合物2は、体重又はグルコースレベルに影響を及ぼさなかった1mMの化合物2の毎日の投与は、体重又は血中グルコースレベルに影響を与えなかった表1。化合物2の血漿濃度は、45分にわたり、約100ng/mlから約6ng/mlまで減少した。体重と血中グルコースレベルは、2及び8か月の時点の間の変化をほとんど示さなかった。また、化合物2での処置後に、血圧又は眼内圧への観察された効果はなかった表1。正常なインスリンレベルを、対照網膜で測定し、一方、糖尿病及び糖尿病の化合物2の動物は、全くかほとんどインスリンを有さなかった。化合物2はPKA活性を増加させた薬物投与のための適量及び時間枠を測定するために、2か月間STZで処置されたラットを使用し、各々の目に対する化合物2の4滴の異なる投与量により、4日間処置した。最初の研究において、調べられた適量範囲は、1mM乃至20mMの間にあり、1日につき1回与えられた図1。β-アドレナリン受容体が通常PKAを活性化するため、化合物2が網膜に達し、正常な細胞の反応を誘発していたバイオマーカーとして、PKAの測定を使用した。毎日1回与えられる1mMの局所投薬量は、他の投与される投与量と比較して、PKA活性の最も高い増加を示した図1AP<0.05vs.Ctrl,N=6。1mMの濃度での処置を、すべての後の実験で使用した。化合物2は、8か月にわたり網膜電位図におけるB-波及び振動電位の振幅の損失を阻害した図2A-2B。視覚機能の網膜電位図分析を、対照、糖尿病、及び糖尿病点眼薬で処置された動物に毎月行った。a-波図2C、b-波図2D及び振動電位図2Eの振幅を、糖尿病の2か月以内に糖尿病の動物で実質的に減少させ、それを8か月の期間にわたり維持した。対照ラットと化合物2の処置を受ける糖尿病のラットとの間のERG振幅において、違いはほとんど観察されなかった。これらの結果は、点眼薬が、ラットの糖尿病にもかかわらず、網膜の電気活性を維持することに効果的であったことを示唆する。内部の網膜の厚さ及び中央の網膜の神経細胞層における細胞数を、点眼薬で処置した糖尿病のラットにおいて維持した視神経中央の網膜の近くの網膜の厚さを、対照と比較される糖尿病のラットにおいて著しく減少した図3A-3B。内部の網膜の厚さのこの損失を、点眼薬処置を受ける糖尿病のラットにおいて予防した。同様に、糖尿病のラットは、中央の網膜の領域で指摘された細胞をあまり有さず図3B、それを化合物2で処置された動物において予防した。神経細胞層中の減少した細胞数は、おそらく網膜の神経節細胞及び置換されたアマクリン細胞の両方である。網膜の厚さ又は細胞数の変化は、周辺の網膜視神経から離れたで示されなかった。化合物2での治療は、網膜の毛細管の退化を予防した退化した毛細管の数は、糖尿病のラットの網膜における血管の変化の重要な発見である6-7。1mMの化合物2での処置は、糖尿病の動物において退化した毛細管の数を、糖尿病の8か月後の対照動物に類似しているレベルにまで著しく減らした図4A-4B,P<0.05vs.ctrlanddiab2。TNFαレベルは、化合物2で処置した動物において著しく減少したインビトロで観察されたTNFαレベルにおける著しい減少のため、レベルを、化合物2が糖尿病のラットにおける炎症性のマーカーレベルを減少させることができたことを確実にするためにも評価した。データは、TNFαの処置タンパク質レベルの2カ月後、糖尿病のラットのみで著しく上昇したことを示す。一方、化合物2で処置されたラットにおける同じレベルは、対照のレベルに類似した図5A,P<0.05vs.CtrlandDiab2,N=6。同様に、TNFαレベルを、糖尿病のラットのみで著しく上昇した一方で、処置されたラットが、化合物2での処置の8か月後にCtrlラットに類似するレベルを示した図5B,P<0.05vs.Ctrl,N=6。これらの結果は、β-アドレナリン受容体アゴニストが、培養及び生理学的に関連するモデルにおける炎症性マーカーレベルを減少できることを示唆する。化合物2は、糖尿病のラットのインスリン受容体チロシンリン酸化の損失を阻害したインスリン受容体ベータの刺激が、主にラットにおけるチロシン1150/1151残基に生じPetrozellietal,1984、インスリン受容体シグナル伝達が、網膜に生じるReiteretal,2006;Jiangetal,2010ことが報告されてきた。化合物2での処置は、糖尿病のラットのみと比べて、糖尿病の2カ月後図6A,P<0.05vs,control、対照動物に類似するレベルで、インスリン受容体ベータチロシンリン酸化を維持した。インスリン受容体ベータチロシンリン酸化も、成分2で処置されたラットにおける糖尿病の8か月後に維持した図6B,P<0.05vs.control。Aktリン酸化が細胞生存を示すため、合計のAkt及びリン酸化されたAktの両方のタンパク質レベルを、各々の処置グループからラットの網膜の溶解産物において分析した。1mMの化合物2での毎日の処置は、対照のレベルに類似するレベルでリン酸化されたAktの比率を維持し、一方で糖尿病は、Aktリン酸化を著しく減少した図6C,P<0.05vs.control。8か月後に対照のラットと比較した時、タンパク質レベルは、糖尿病のラットのみで著しく減少した図6D,P<0.05vs.controlandDiab2,N=5。同様に、図6E-6Hは、ホスホ-AKT対合計のAKTの比率での化合物2の効果を示す。点眼薬で処置された動物における、減少した切断されたカスパーゼ3のレベル中央の網膜において、処置された動物における糖尿病により誘発された細胞損失における減少が生じたため、アポトーシスは、おそらく処置後に減少した。Aktリン酸化を、糖尿病のラットに対する点眼薬処置により維持し、アポトーシスが減少させることを再び示唆する。実際、糖尿病は、網膜の溶解産物における切断されたカスパーゼ3のレベルの著しい増加をもたらし図7A-7B,P<0.05vs.control、糖尿病は、化合物2の点眼での処置後に減少した図7A-7B。これらの結果は、糖尿病が、カスパーゼ3経路を介していくつかの細胞においてアポトーシスをもたらすことを示唆し、それはβ-アドレナリン受容体アゴニストによって阻害され得る。上述の化合物2を伴う細胞培養作業に基づいて、糖尿病性非増殖性網膜症に関する、インビボでのβ-アドレナリン受容体アゴニストを検査するための強い証拠が存在する。それ故、8か月間毎日1回与えられる50mMの化合物49bの点眼の試験を始めた。化合物2での糖尿病のラットの処置が、疾患に対する急性反応として糖尿病のげっ歯類に生じることができる、網膜の厚さ及び神経細胞層の細胞のアポトーシスの損失を予防するのに効果的であったことが見出された。糖尿病網膜症に共通の重要な血管の結果のうちの1つは、糖尿病の約6カ月目に生じる、退化した毛細管の形成である[23、24]。1mMの化合物2での処置は、退化した毛細管の数を対照に類似するレベルにまで著しく減少することができた。糖尿病の減少後の中央の網膜における細胞の損失に加えて、点眼薬治療はまた、処置レジメンの全体にわたってTNFα濃度を減少させるのに効果的であったが、それは疾患の初期の時間枠において最も効果的である。糖尿病は、インスリン受容体リン酸化の著しい減少をもたらし、それはインビボでの化合物2の点眼によって増加された。これらの実験のため、1mMの化合物2での処置後の2及び8か月での糖尿病のラットからの網膜溶解産物を使用した。化合物2の点眼の研究において、3つのグループすべての合計の振幅は8か月の期間の間減退したが、ERGを全時間枠上の点眼薬処置により改善した。糖尿病のラットにおける網膜の厚さ及び細胞数の損失の予防に関する研究と同様、化合物2は、網膜における糖尿病様変化diabetic-likechangesを逆転することができる。図2D-2Fで言及されるように、2か月間化合物2での治療を受ける6か月の糖尿病のラットが、網膜の機能を改善した。これは、糖尿病のラットのみに対する網膜の厚さのおよそ50の増加に関連し、及び神経細胞層の細胞の損失が無かったことに関連した。本発明は、BARアゴニストが糖尿病から損傷を機能的にまた組織学的に逆転できることを示唆する。イソプロテレノールは、高血糖の疾病で培養された網膜の内皮細胞REC及びMueller細胞で切断されたカスパーゼ3レベルを減少させSteinle,2005;WalkerandSteinle,2007、心臓血管の変化を誘発することができる。それ故、β-アドレナリン受容体アゴニスト化合物2が発達した。カスパーゼ3は、そのアポトーシス促進性のタンパク質開裂であり、活性化は細胞死を示すSalvesen,2002。50nMの濃度での化合物2による処置は、24時間の時点でのMueller細胞図12A-12B,P<0.05vs.NT-HGにおいて、及び30分の時点でのRECにおいて図13A-13B,P<0.05vs.Nt-HG、カスパーゼ3レベルを著しく減少させた。これらの結果は、化合物2がインビトロでの細胞アポトーシスの重要なマーカーを減少できることを示す。化合物2のインビトロ及びインビボでの効果化合物2は、高血糖症で培養されたRECとMueller細胞におけるアポトーシス及びTNFα活性化を予防するβ-アドレナリン受容体様特性を有する化合物が発達し、それは本明細書では化合物2と称され、その化学名は、4-[1-ヒドロキシ-2-1-エチルアミノ-3-,4-,5-トリメトキシフェニルエチル]ベンゼン-1,2-ジオール塩酸塩であり、その化学構造は図8において示され、イソプロテレノールと比較される。化合物2がカスパーゼ3の増加した開裂及びTNFα活性を予防する能力を、高いグルコースで培養された細胞において調べた。アポトーシスの阻害及び炎症性メディエーターの活性化は、糖尿病網膜症に関連する神経細胞及び血管の病状の両方を著しく予防する7、11-13。Mueller細胞において、アポトーシスの遮断は24時間かかり、一方で細胞が10μMのイソプロテレノールで処置された時、TNFα活性の阻害が1時間以内に、非常に速く生じた。化合物2で処置されたMueller細胞のアポトーシス及びTNFα活性の遮断のための非常に類似した時間的経過を見出したが、それは、著しくより低い投与量50nMの化合物2対10μMのイソプロテレノールで見出された。化合物2は、処置されていない細胞と比較して、TNFαレベルを19減少し、カスパーゼ3を55減少した図9A-9B。Mueller細胞における結果と同様、化合物2は、25mMのグルコースで培養された網膜の内皮細胞REC中のカスパーゼ3の開裂及びTNFα活性を著しく減少させた。50nMの化合物2での処置は、処置されていない対照に対して、カスパーゼ3レベルを54著しく減少し、及びTNFαレベルを23著しく減少した図10A-10B。イソプロテレノールは、インビトロで10μMでの網膜の内皮細胞においてTNFαを著しく減少させなかった。図11は、1mMの化合物2で毎日処置されたI型糖尿病のラットにおける効果を示す。未処置の糖尿病のラットと比較して、左心室に違いはなかった。染色は、糖尿病において増加されるコラーゲン強度のためのものである。化合物2は、10μM未満の投与量でTNFαレベル及びカスパーゼ3の開裂を減少した両方のグルコース状態のヒト網膜の内皮細胞HREC及びラットMueller細胞rMC-1を、化合物2の10nM、50nM、100nM、1μM、及び10μMの投与量で、化合物2により処置した。各々の型の細胞を、モル浸透圧濃度における変化のために制御するL-グルコースを含む培地で成長させた。10μMのイソプロテレノールも、陽性対照として各々の状態のために使用した。Mueller細胞を1時間及び24時間処置し、一方でHRECを30及び60分間処置した。処置の後、細胞を、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を含む溶解緩衝液に収集した。TNFα、切断されたカスパーゼ3、及びPKAのためのELISA分析を、製造業者の指示に従って行った。データを、非処置の細胞及び様々な投与量での細胞に対して比較する。Kruskal-Wallis試験を、二次的な分析のためのDunn’stestを用いて行う。化合物2は、10μM未満の投与量イソプロテレノールに必要とされるでのTNFαレベル及びカスパーゼ3の開裂を著しく減少するはずである。TNFα及びカスパーゼ3のレベルを減少させる投与量はまた、PKA活性を増加させる。化合物2は、PKA活性化によってTNFα及びカスパーゼ3のレベルを減少させるHREC及びMueller細胞を、実施例1に記載されるように、培養した。血清不足の後、細胞を1μMのKT5720で処置し、30分間PKA活性を阻害した。その後細胞を、Mueller細胞に関して1及び24時間、及びHRECに関して30及び60分間、適量の化合物2で処置した。刺激の後の適切な時間に、細胞を収集し、製造業者の指示に従って、TNFα及びカスパーゼ3のELISA分析のために処理した。PKAELISAをまた、PKAが適切に阻害されたことを確実にするために行った。処置された細胞に加えて、いくつかの細胞は血清不足となり、対照として処置を受けなかった。追加の培養皿dishesに入った各々の細胞型を、KT5720単独で処置し、PKAインヒビターだけが細胞に効果がなかったことを確実にし、それはデータを混乱する。データを、非処置の細胞と様々な投与量での細胞に対して比較した。Kruskal-Wallis試験を、二次的な分析のためのDunn’stestを用いて行った。P<0.05を、有意なものとして許容した。糖尿病のラットにおける網膜の損傷に対してインビボで効果的な化合物2ラットを、STZ注入により糖尿病にした。STZ注入の1週間後、毎日の局所用の化合物2を1mMで与えた。ERGを6週間後に測定した。1mMで、化合物2は、糖尿病において生じたB-波の振幅の損失を阻害した。化合物2の投与後の網膜における活性化されたPKAレベル化合物2のその局所送達は:1網膜に達し、結膜送達又は全身静脈内送達よりも低い投与量でPKAを活性化し、2増加した心臓血管の肥大及び生理的な血圧などの、より少ない負側効果を作り出すことが予期された。B/PKを、ラットへの静脈内投与によって特徴づけた。薬物投与の後、血液サンプル2-300μLを、K3-EDTA抗凝結試料採取管anti-coagulatedsamplingtubesへ投薬した後に一定間隔で5、15、30、45分及び1、2、4、8、16及び24時間、頚静脈カテーテルから引き抜いた。血漿を遠心分離によって得て、分析まで-80°Cで保管した。心臓、肺及び脾臓を、化合物2の組織分布を測定するために採取した。蓄積した尿のサンプルを24時間後の投薬にわたって収集し、分析まで-80°Cで保管した。B/PKを、ラットへの局所投与によって特徴付けた。薬物投与の後、目を摘出し、生理食塩水、及び18ゲージの注射針を使用して硝子体腔の内部の領域から吸引された硝子体液により潅漑した。血液サンプルを、局所投与後の全身的な曝露の程度を測定するために同時に得た。硝子体液と血液サンプルを、投薬の後に一定間隔で得た。時点を、化合物2の静脈内投与の後に得られる濃縮時間特性に基づいて測定した。データ分析のため、B/PKパラメータを、標準の仕切られていない分析によって得られた血漿、硝子体液、尿及び糞便濃度のデータから導き出した。末端の半減期を、λzで割られたln2の比率、終末期中の自然対数濃度対時間プロファイルの線形回帰の勾配の負数として測定した。全身的及び眼の曝露を、台形法を使用して、血漿又は眼の血中濃度曲線下面積AUCとして測定した。化合物2の濃度の測定及び代謝物のプロファイリングを、記載された方法論に基づき、有効になったLC/MS/MSアッセイを使用して実行する14-15。LC-MS/MSのシステムは、ShimadzuHPLCシステムKyoto,Japan、ターボイオンスプレーを装備したAPI-4000QTrapタンデム質量分析計FosterCity,CA,USA、及びHTC-PALオートサンプラーLeapTechnologies,Carrboro,NC,USAを含む。化合物2はインスリン受容体シグナル伝達阻害を減少したラットMueller細胞rMC-1を、正常なグルコース低度、5mM、糖尿病レベルのグルコース中度、15mM及び非常に高いグルコース高度、25mMの状態で育てられたDMEM培地において培養した。培地を、10のFBS及び抗生物質で補った。5枚の培養皿に入った各々の型の細胞を、低度、中度及び高度のグルコースのみにおいて培養し、非処置の対照として機能する。各々のグルコースレベル及び各々の処置での5枚の皿を、モル浸透圧濃度に関する対照としてL-グルコースを使用して、各々の時点で使用した。各々のグルコース状態の5枚の培養皿もまた、陽性対照として機能する10nMのインスリンで処置した。以下の処置を、rMC-1細胞及びすべての3つのグルコース状態の調整培地において評価する。化合物2はβ-アドレナリン受容体を刺激する。化合物2が単独で、インスリン受容体チロシンのみのリン酸化を増加するかどうかを測定した。5枚の培養皿に入った各々の細胞型を、30分、1、2、6及び12時間にて、50nMの化合物2又は異なる場合は適量を使用して評価した。細胞を適切な時間に化合物2で処置した後、細胞を、ホスファターゼ及びプロテアーゼのインヒビターを含む溶解緩衝液で処置した。タンパク質アッセイの後、サンプルを、リン酸化したインスリン受容体Tyr1150/1151、リン酸化したERK/12Tyr44/42、AktSer473、及びリン酸化したPI3Kp85Tyr458、p55Tyr199に関するウェスタンブロッティングによって検査した。各々のタンパク質の合計のタンパク質レベルのウェスタンブロット解析を、リン酸化されたタンパク質の合計のタンパクに対する比率を測定するために使用した。インスリン受容体及び下流の中間物の増加したチロシンリン酸化を誘発するために、化合物2がPKAを活性化するかどうかも測定した。rMC-1細胞を、上述の3つのグルコース状態で培養した。血清不足の後、細胞を、1μMのKT5720、特異的なPKAインヒビターにより30分間処置した。KT5720での処置の30分後、50nMの化合物2を、さらに60分又は180分間加えた。いくつかの細胞は、KT5720での処置のみを受け、このインヒビターでの処置がインスリン受容体リン酸化に効果がなかったことを確実にした。L-グルコース及び非処置の対照も使用した。加えて、上述の部位特異的変異誘発を処置前に行った。一旦収集されると、分析を上述のように行った。加えて、PKAELISAを行い、PKA活性が存在しなかったことを確実にした。TNFαは、インスリン受容体リン酸化の化合物2の調整における主要な中間体であったラットMueller細胞rMC-1をこれらの実験のために使用し、上述の3つのグルコース状態で培養した。すべての処置のため、各々の細胞型の5枚の培養皿を、モル浸透圧濃度に関してL-グルコース対照を使用する適切な投薬及び時点にて使用した。各々の実験に関して5枚の培養皿を、非処置の対照として使用した。血清不足の後、多くの処置を培地に適用した。TNFα刺激のみと化合物2によるTNFα刺激との比較TNFαがIRS-1によってインスリンシグナル伝達を阻害するかどうか評価し、TNFα活性におけるPKAの役割を決定するために、IRS-1上のSer307リン酸化、インスリン受容体チロシンリン酸化、及びセリン473上のAktリン酸化を測定した。rMC-1細胞を、上述のようなグルコース状態のための同じプロトコルに従って成長させた。一旦細胞が不足すると、5枚の培養皿を30分間、5ng/mlでTNFαのみで処置した;5枚の皿を30分間TNFαで処置し、その後60分間50nMの化合物2で処置し、及び5枚の皿を30分間TNFα及びKT5720で処置し、その後60分間化合物2で処置した。処置の後、インスリン受容体基質1IRS-1の評価については除き、細胞を上述のように処理し、これがインスリンシグナル伝達のTNFα遮断のための重要な部位であるように、セリン307上に焦点を当てた16。セリン307をIRS-1上でアラニンに転換し、TNFαが網膜のMueller細胞のこの部位を通じてインスリン受容体反応性を調節するかどうか測定するために、部位特異的変異誘発を行った。ELISA分析を、TNFα活性及び切断されたカスパーゼ3を測定するために行った。TUNEL標識化を、アポトーシスの細胞を局在化するために行った。インスリンレベルを細胞及び培地で測定し、TNFα刺激がインスリン生成又は分泌を調節するかどうかを測定した。すべての処置のため、平均デンシトメトリー値を、Kodak2.0ソフトウェアを使用して得た。リン酸化されたタンパク質の比率を、合計のタンパク質のレベルと比較した。最低4つの独立した実験を、各々の処置グループに関して行った。ELISAデータの分析を、アッセイにおいて生成された標準曲線に基づいた製造業者の推奨を使用して行った。統計分析を、Kruskal-Wallis分析を使用して行い、その後プリズムソフトウェアを使用してすべてのカラムに関するDunn’spost-hoctestを行った。分析を、処置グループと非処置のグループを比較するために行った。P<0.05を、有意なものとして許容した。化合物2は、糖尿病網膜症に共通の長期的な神経細胞及び血管の変化を予防及び/又は逆転したげっ歯類の増殖前糖尿病網膜症において生じる網膜の変化を予防して逆転する、化合物2の能力が示された。30の対照ラット、30の糖尿病ラット、及び化合物2に関する30のラットを使用した。0日目に、60のラット30の糖尿病、30の化合物2に60mg/kgのストレプトゾトシンを注入し、それらの膵臓のβ細胞によってインスリン生成を除去した。ストレプトゾトシン注入の2日後に、グルコース測定を、250mg/dlより高いグルコースレベルとして許容されている糖尿病を伴う、すべてのラット上で得た。最初のグルコーススクリーニングの日の始めに、1mMの化合物2の点眼薬治療を30のラット上で始める。ストレプトゾトシンを受けなかった30のラットは、対照のラットとして機能する。グルコースレベルを隔週で測定した。ラットに関する分析を、急性の変化糖尿病の8週間、45のラット及び慢性の変化糖尿病の8か月、45のラットに関して行った。網膜に関するすべての測定に加えて、心臓の組織切片を8週目及び8か月目に得て、薬物による心室の肥大がないことを確実にした。ミオシンL鎖に関するウェスタンブロット、心臓血管の肥大の代用マーカーも行った。毎月、すべてのラットは、光学式干渉局所解剖学OpticalCoherenceTopographyOCTを使用して、視覚機能、網膜電位図ERG及び生網膜liveretinalの画像化の2つの分析を受ける。網膜の厚さ及び生網膜の画像化を、げっ歯類OCTを使用して評価した。この技術は、同じ動物の複数の試験のための網膜の各々の層の非侵襲性の視覚化を可能にする。上記で測定された化合物2の適量及び時間経過を使用した。30の対照ラット、30の糖尿病のラット、及び化合物2に関する30のラット。0日目に、60のラット30の糖尿病、30の化合物2に60mg/kgのストレプトゾトシンを注入し、それらの膵臓のβ細胞によってインスリン生成を除去した。ストレプトゾトシン注入の2日後に、グルコース測定を、250mg/dlより高いグルコースレベルとして許容されている糖尿病を伴う、すべてのラット上で得た。最初のグルコーススクリーニングの日の始めに、1mMの化合物2の点眼薬治療を30のラット上で始める。ストレプトゾトシンを受けなかった30のラットは、対照のラットとして機能する。グルコースレベルを隔週で測定した。ラットに関する分析を、急性の変化糖尿病の8週間、45のラット及び慢性の変化糖尿病の8か月、45のラットに関して行った。網膜に関するすべての測定に加えて、心臓の組織切片を8週目及び8か月目に得て、薬物による心室の肥大が無かったことを確実にした。心臓血管の肥大の代用マーカーとしてのミオシンL鎖を、ウェスタンブロットを使用して検査した。毎月、全てのラットを視覚機能に関して試験した:網膜電位図ERG及び生網膜の画像化を、光学式干渉局所解剖学OpticalCoherenceTopographyOCTを使用して行った。ERG分析のため、実験を上記方法2に従って行った。動物がERG分析のため眠っていた間、血圧と脈を監視し、潜在的な負の心血管系事象を検出した。イソプロテレノールの50mMの局所用投与量では、これらの事象は観察されず、そのため、それらは化合物2を使用するときには恐らく起こらなかった。網膜の厚さ及び生網膜の画像化を、げっ歯類OCTを使用して評価した。網膜の各々の層を、非侵襲性の方法で、同じ動物上で複数回検査し、実験の間にわたり特定範囲で変化することを測定した。このデータを、網膜の厚さの組織学の測定と組み合わせた。光学顕微鏡検査を、急性期にしばしば生じる神経細胞の変化の組織学的検査に使用した。ホルマリンにより固定されたパラフィン切片を、網膜の厚さの光学顕微鏡検査及び形態測定学用のトルイジンブルーで染色した。写真を、400xで、網膜における4つの位置視神経及び中央の網膜の両側で撮った。網膜の神経細胞層GCLにおける核を、各々の写真の100μmの切片で数えた。内顆粒層の上部から内境界膜までの内部の網膜の厚さを、QcaptureソフトウェアQImaging,Burbay,BC,Canadaを備えるNikonBiophot光学顕微鏡に付けられたRetigaカメラを使用して評価した。網膜の厚さ及び網膜の神経細胞層中の細胞の数を、OpenLabソフトウェアImprovision,Lexington,MAを使用して測定した。対応の無いt検定を、有意なものとして許容されるP<0.05を伴う、対照、糖尿病及び糖尿病点眼薬処置された動物からのデータを比較するために使用した。網膜の血管の分析は、公表された方法に基づいた6-7。炎症性の分析のため、全体の網膜の溶解産物を、プロテアーゼ及びホスファターゼのインヒビターを含む溶解緩衝液へ収集した。BCAタンパク質アッセイを、溶解産物のタンパク質含有量を測定するために行った。Luminex多重サイトカイン分析を、化合物2がインビボでの主要な炎症性メディエーターのタンパク質活性を著しく減少できるかどうか評価するために行った。インスリン受容体シグナル経路を分析するため、対照、糖尿病、及び糖尿病化合物2の動物からの網膜の溶解産物を収集して評価した。化合物2は、6か月齢の未処置の誘発された糖尿病による網膜の損傷を逆転した90のラットを使用した糖尿病のない30の点眼薬、糖尿病のみを有する30、6か月の未処置の糖尿病の後の局所用の化合物2の30。ストレプトゾトシンを、ラットにおける糖尿病を誘発するために、0日目及び60日目に60mg/kgの投与量において使用した。実験的糖尿病の進行のための基準criteriumは、ストレプトゾトシンでの処置の2日後に250mg/dlより高い血液グルコースレベルであった。動物の最後のグループを、1mMで化合物2を使用する局所用の点眼薬治療にさらした。残りの30のラットは、純粋な糖尿病の対照として機能した。記載されるような同じ測定を使用する、急性点眼の開始の8週後、45のラット、及び慢性の変化点眼薬治療の開始の8カ月後、45のラット。化合物4は、高血糖症において培養されたREC及びMueller細胞内のアポトーシス及びTNFα活性化を予防した図8は、化合物4、5-1-ヒドロキシ-2-[2-3,4,5-トリメトキシ-フェニル-エチルアミノ]-エチル-ベンゼン-1,3-ジオール塩酸塩の化学構造を表わす。Mueller細胞及び網膜の内皮細胞REC細胞を、実施例3における化合物2に関するプロトコルにより、50nMの化合物4で培養及び処置した。ELISAデータは、化合物4がMueller細胞及びREC細胞の中により多くのベータ-2-アドレナリン受容体活性を有することを示し、それは、恐らく心臓にあまり影響がないことを意味し、TNFαレベル及びカスパーゼ3の開裂を減少させるためにインビトロにて50nMで作用する。おそらくMueller細胞の優性のβ-アドレナリン受容体がベータ-2-アドレナリン様の受容体亜型であるため、化合物4は、Mueller細胞の化合物2より効果的であり、より速く作用する。おそらく、網膜の内皮細胞における優性受容体である、ベータ-1-アドレナリン様受容体活性があまりないため、網膜の内皮細胞において、化合物4の投与量は、網膜の内皮細胞の反応を活性化するのにより長くかかる。化合物2の異性体図14A-14Bは、処置の1時間又は24時間での、化合物2のR異性体、化合物2のS異性体及びラセミ化合物2の、Mueller及び網膜の内皮細胞におけるTNFアルファ濃度への効果を示す。図15A-15Bは、処置の1時間又は24時間での、化合物2のR異性体、化合物2のS異性体及びラセミ化合物2の、切断されたカスパーゼ3への効果を示す。このデータは、化合物2のR異性体が化合物2のS異性体及びラセミ化合物2より優れていることを明確に示す。以下の引用文が本明細書で引用される。1.Phippsetal.,InvestOphthalmolVisSci,2007,482:927-34.2.Jiang,Y.andJ.J.Steinle,InvestOphthalmolVisSci,2009.3.Forteetal.JNeurosciMethods,2007;169:191-200.4.Weymouth,A.E.andVingrys,A.J.,ProgRetinEyeRes,2008,27:1-44.5.Kern,T.S.andEngerman,R.L.,CurrEyeRes,1994,13:863-867.6.Kowluruetal.Diabetes,2001,56:373-379.7.Mizutanietal.JClinInvest,1996,97:2883-2890.8.Steinleetal.ExpEyeRes,2009,88:1014-1019.9.Steinleetal.ExpEyeRes,2008,87:30-34.10.Reiteretal.Diabetes,2006,55:1148-1156.11.Walkeretal.InvestOphthalmolVisSci,2007,4811:5276-81.12.Joussenetal.FasebJ,2004,1812:1450-1452.13.Williams,K.P.andSteinle,J.J.,ExpEyeRes,2009,894:448-455.14.Trester-Zedlitzetal.Biochemistry,2005,4416:6133-4613.15.Guetal.AnalChimActa,2008,6092:192-200.16.Boura-Halfonetal.AmJPhysiolEndocrinolMetab,2009,2964:E581-91.この明細書で言及された任意の特許又は公報は、当業者のレベルを示す。さらに、これらの特許及び公報は、各々の公報が具体的で引用文によって組込まれたかのような、同じ程度で本明細書における引用文により組み込まれる。当業者は、本発明が対象を実行し、それらの対象と同様に、言及された目的及び本明細書に固有の利点を得るのにかなり適していることを認識するであろう。その中の変化及び請求項の範囲によって定義されるような本発明の精神内に包含される他の使用は、当業者に生じるであろう。"