Fc結合性タンパク質を化学修飾して負電荷を有する解離基を導入することで、化学修飾前と比較し安定性が向上した、前記タンパク質。負電荷を有する解離基がカルボキシル基である請求項1に記載のタンパク質。カルボキシル基の導入が無水コハク酸による処理である、請求項2に記載のタンパク質。Fc結合性タンパク質に対し10等量以上の無水コハク酸で処理した、請求項3に記載のタンパク質。Fc結合性タンパク質が、A配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含むタンパク質、またはB配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含み、かつ前記アミノ酸のうちの一つ以上が他のアミノ酸に置換、挿入または欠失したタンパク質、である、請求項1から4のいずれかに記載のタンパク質。安定性の向上がアルカリ環境下における安定性の向上である、請求項1から5のいずれかに記載のタンパク質。アルカリ環境下が0.1mol/L以下の水酸化ナトリウム水溶液環境下である、請求項6に記載のタンパク質。前述したFcγRIが有する問題点を解消するために、FcγRIを構成するアミノ酸の一部を他のアミノ酸に置換することで、耐熱性、耐酸性、耐アルカリ性を向上させる取組みが行なわれている特許文献6。しかしながら、構成アミノ酸の置換によるタンパク質の安定性向上に関する、一般的な理論は確立されていない。そのため、アミノ酸置換をランダムに導入した変異体のライブラリーの中から効果的なものをスクリーニングし、効果的な変異を組み合わせて安定性を向上させていく必要があり、多大な労力と研究時間を要する問題があった。一方、別のタンパク質の安定化法として化学修飾による方法が知られている。例えば、ポリエチレングリコール等の親水性高分子を結合させタンパク質分子の親水性を向上させることによりプロテアーゼ耐性を向上させる方法非特許文献4や、無水酢酸によりリジン残基をアセチル化し正電荷を中和することで正味の負電荷を増加させ界面活性剤耐性を向上させる方法非特許文献5が知られている。しかしながら、FcγRIをはじめとするFc結合性タンパク質については、化学修飾による安定化方法は知られていなかった。そこで、本発明は、医薬品、臨床検査薬、バイオセンサー、アフィニティーリガンド分離剤などの用途に使用可能なFc結合性タンパク質の、化学修飾による安定化方法を提供することを目的とする。上記課題を鑑みてなされた本発明は、以下の発明を包含する。1Fc結合性タンパク質を化学修飾して負電荷を有する解離基を導入することで、化学修飾前と比較し安定性が向上した、前記タンパク質。2負電荷を有する解離基がカルボキシル基である1に記載のタンパク質。3カルボキシル基の導入が無水コハク酸による処理である、2に記載のタンパク質。4Fc結合性タンパク質に対し10等量以上の無水コハク酸で処理した、3に記載のタンパク質。5Fc結合性タンパク質が、A配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含むタンパク質、またはB配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含み、かつ前記アミノ酸のうちの一つ以上が他のアミノ酸に置換、挿入または欠失したタンパク質、である、1から4のいずれかに記載のタンパク質。6安定性の向上がアルカリ環境下における安定性の向上である、1から5のいずれかに記載のタンパク質。7アルカリ環境下が0.1mol/L以下の水酸化ナトリウム水溶液環境下である、6に記載のタンパク質。以下、本発明について詳細に説明する。本発明のタンパク質を得るのに用いるFc結合性タンパク質は、必ずしもFc結合性タンパク質の全領域でなくてもよく、Fc結合性タンパク質を構成するアミノ酸のうち、少なくとも免疫グロブリンFcγRIの場合はIgGのFc領域に結合する本来の機能を発現し得る領域のアミノ酸を含んでいればよい。本発明におけるFc結合性タンパク質の一例として、A配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含むタンパク質や、B配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含み、かつ前記アミノ酸のうちの一つ以上が他のアミノ酸に置換、挿入または欠失したタンパク質、があげられる。前記Bの具体例として、配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目から289番目までのアミノ酸を含み、かつ以下の1から168のいずれかに記載のアミノ酸置換を1つ以上含むFc結合性タンパク質があげられる特許文献6。1配列番号1の20番目のスレオニンがプロリンに置換2配列番号1の25番目のスレオニンがリジンに置換3配列番号1の38番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換4配列番号1の46番目のロイシンがアルギニンまたはプロリンに置換5配列番号1の62番目のアラニンがバリンに置換6配列番号1の63番目のスレオニンがイソロイシンに置換7配列番号1の69番目のセリンがフェニルアラニンまたはスレオニンに置換8配列番号1の71番目のアルギニンがヒスチジンに置換9配列番号1の77番目のバリンがアラニンまたはグルタミン酸に置換10配列番号1の78番目のアスパラギンがアスパラギン酸に置換11配列番号1の94番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換12配列番号1の100番目のイソロイシンがバリンに置換13配列番号1の110番目のセリンがアスパラギンに置換14配列番号1の114番目のフェニルアラニンがロイシンに置換15配列番号1の125番目のヒスチジンがアルギニンに置換16配列番号1の131番目のロイシンがアルギニンまたはプロリンに置換17配列番号1の149番目のトリプトファンがロイシンに置換18配列番号1の156番目のロイシンがプロリンに置換19配列番号1の160番目のイソロイシンがメチオニンに置換20配列番号1の163番目のアスパラギンがセリンに置換21配列番号1の195番目のアスパラギンがスレオニンに置換22配列番号1の199番目のスレオニンがセリンに置換23配列番号1の206番目のアスパラギンがリジン、セリンまたはスレオニンに置換24配列番号1の207番目のロイシンがプロリンに置換25配列番号1の218番目のロイシンがバリンに置換26配列番号1の240番目のアスパラギンがアスパラギン酸に置換27配列番号1の248番目のロイシンがセリンに置換28配列番号1の283番目のロイシンがヒスチジンに置換29配列番号1の285番目のロイシンがグルタミンに置換30配列番号1の17番目のバリンがグリシンまたはグルタミン酸に置換31配列番号1の19番目のスレオニンがイソロイシンに置換32配列番号1の20番目のスレオニンがイソロイシンに置換33配列番号1の25番目のスレオニンがメチオニンまたはアルギニンに置換34配列番号1の27番目のグルタミンがプロリンまたはリジンに置換35配列番号1の35番目のグルタミンがロイシン、メチオニンまたはアルギニンに置換36配列番号1の36番目のグルタミン酸がグリシンに置換37配列番号1の41番目のロイシンがメチオニンに置換38配列番号1の42番目のヒスチジンがロイシンに置換39配列番号1の44番目のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換40配列番号1の45番目のバリンがアラニンに置換41配列番号1の46番目のロイシンがアラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、セリンまたはトリプトファンに置換42配列番号1の47番目のヒスチジンがグルタミン、ロイシンまたはアスパラギンに置換43配列番号1の49番目のプロリンがセリンまたはアラニンに置換44配列番号1の50番目のグリシンがアルギニンまたはグルタミン酸に置換45配列番号1の51番目のセリンがアラニン、スレオニン、ロイシン、プロリンまたはバリンに置換46配列番号1の52番目のセリンがグリシンに置換47配列番号1の53番目のセリンがロイシン、スレオニンまたはプロリンに置換48配列番号1の55番目のグルタミンがアルギニンに置換49配列番号1の57番目のフェニルアラニンがチロシンに置換50配列番号1の58番目のロイシンがアルギニンに置換51配列番号1の60番目のグリシンがアスパラギン酸に置換52配列番号1の61番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換53配列番号1の62番目のアラニンがグルタミン酸に置換54配列番号1の63番目のスレオニンがロイシン、フェニルアラニンに置換55配列番号1の64番目のグルタミンがプロリン、ヒスチジン、ロイシン、リジンに置換56配列番号1の65番目のスレオニンがアラニンまたはバリンに置換57配列番号1の66番目のセリンがスレオニンに置換58配列番号1の67番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換59配列番号1の69番目のセリンがアラニンに置換60配列番号1の70番目のチロシンがヒスチジンまたはフェニルアラニンに置換61配列番号1の71番目のアルギニンがチロシンに置換62配列番号1の73番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換63配列番号1の74番目のセリンがフェニルアラニンに置換64配列番号1の76番目のセリンがアスパラギンに置換65配列番号1の77番目のバリンがアスパラギン酸またはリジンに置換66配列番号1の78番目のアスパラギンがセリンまたはグリシンに置換67配列番号1の80番目のセリンがアラニンに置換68配列番号1の84番目のアルギニンがセリンに置換69配列番号1の88番目のグリシンがセリンに置換70配列番号1の89番目のロイシンがグルタミンまたはプロリンに置換71配列番号1の90番目のセリンがグリシンに置換72配列番号1の92番目のアルギニンがシステインまたはロイシンに置換73配列番号1の96番目のイソロイシンがバリンまたはリジンに置換74配列番号1の97番目のグルタミンがロイシンまたはリジンに置換75配列番号1の101番目のヒスチジンがロイシンに置換76配列番号1の102番目のアルギニンがセリンまたはロイシンに置換77配列番号1の103番目のグリシンがアスパラギン酸またはセリンに置換78配列番号1の111番目のセリンがアラニンに置換79配列番号1の114番目のフェニルアラニンがアラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、スレオニンまたはバリンに置換80配列番号1の115番目のスレオニンがイソロイシンまたはフェニルアラニンに置換81配列番号1の118番目のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換82配列番号1の121番目のアラニンがスレオニンまたはバリンに置換83配列番号1の128番目のリジンがアルギニンまたはグリシンに置換84配列番号1の129番目のアスパラギン酸がグリシンに置換85配列番号1の131番目のロイシンがグルタミンに置換86配列番号1の133番目のチロシンがヒスチジンまたはアルギニンに置換87配列番号1の134番目のアスパラギンがセリンに置換88配列番号1の137番目のチロシンがフェニルアラニンに置換89配列番号1の138番目のチロシンがヒスチジンに置換90配列番号1の139番目のアルギニンがヒスチジンに置換91配列番号1の140番目のアスパラギンがアスパラギン酸に置換92配列番号1の141番目のグリシンがアスパラギン酸またはバリンに置換93配列番号1の142番目のリジンがグルタミン酸またはアルギニンに置換94配列番号1の144番目のフェニルアラニンがイソロイシンに置換95配列番号1の147番目のフェニルアラニンがセリンに置換96配列番号1の148番目のヒスチジンがアルギニンまたはグルタミンに置換97配列番号1の149番目のトリプトファンがアルギニンに置換98配列番号1の151番目のセリンがスレオニンに置換99配列番号1の152番目のアスパラギンがスレオニン、イソロイシンまたはプロリンに置換100配列番号1の154番目のスレオニンがセリンに置換101配列番号1の156番目のロイシンがヒスチジンに置換102配列番号1の157番目のリジンがアルギニンに置換103配列番号1の159番目のアスパラギンがスレオニンまたはアスパラギン酸に置換104配列番号1の160番目のイソロイシンがスレオニン、バリンまたはロイシンに置換105配列番号1の161番目のセリンがスレオニンに置換106配列番号1の165番目のスレオニンがメチオニンに置換107配列番号1の171番目のメチオニンがスレオニンに置換108配列番号1の173番目のリジンがアルギニンに置換109配列番号1の174番目のヒスチジンがグルタミンに置換110配列番号1の177番目のスレオニンがセリンに置換111配列番号1の181番目のイソロイシンがスレオニンに置換112配列番号1の182番目のセリンがスレオニン、ロイシン、バリンまたはグルタミン酸に置換113配列番号1の184番目のスレオニンがセリンに置換114配列番号1の190番目のプロリンがセリンに置換115配列番号1の193番目のバリンがロイシンに置換116配列番号1の195番目のアスパラギンがアラニンに置換117配列番号1の196番目のアラニンがセリンに置換118配列番号1の198番目のバリンがグリシンまたはメチオニンに置換119配列番号1の199番目のスレオニンがアラニンに置換120配列番号1の200番目のセリンがグリシンまたはアルギニンに置換121配列番号1の202番目のロイシンがメチオニンに置換122配列番号1の203番目のロイシンがヒスチジン、グルタミン、チロシン、アルギニン、プロリンに置換123配列番号1の204番目のグルタミン酸がバリンに置換124配列番号1の207番目のロイシンがグルタミン、ヒスチジンまたはアルギニンに置換125配列番号1の209番目のスレオニンがアラニンに置換126配列番号1の211番目のセリンがアルギニンまたはグリシンに置換127配列番号1の213番目のグルタミン酸がバリンまたはイソロイシンに置換128配列番号1の215番目のリジンがアルギニンまたはグルタミン酸に置換129配列番号1の217番目のロイシンがアルギニンまたはグルタミンに置換130配列番号1の218番目のロイシンがイソロイシン、メチオニンまたはリジンに置換131配列番号1の219番目のグルタミンがプロリンまたはアルギニンに置換132配列番号1の223番目のロイシンがアルギニン、グルタミンまたはメチオニンに置換133配列番号1の224番目のグルタミンがアルギニンに置換134配列番号1の225番目のロイシンがグルタミンに置換135配列番号1の227番目のフェニルアラニンがイソロイシンに置換136配列番号1の230番目のチロシンがヒスチジンまたはフェニルアラニンに置換137配列番号1の231番目のメチオニンがリジンまたはアルギニンに置換138配列番号1の233番目のセリンがグリシンまたはアスパラギンに置換139配列番号1の234番目のリジンがグルタミン酸に置換140配列番号1の240番目のアスパラギンがグリシンに置換141配列番号1の244番目のグルタミン酸がバリンに置換142配列番号1の245番目のチロシンがヒスチジンまたはグルタミン酸に置換143配列番号1の246番目のグルタミンがアルギニンまたはリジンに置換144配列番号1の248番目のロイシンがイソロイシンに置換145配列番号1の249番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換146配列番号1の250番目のアラニンがバリンに置換147配列番号1の251番目のアルギニンがセリンに置換148配列番号1の252番目のアルギニンがヒスチジンに置換149配列番号1の253番目のグルタミン酸がグリシンに置換150配列番号1の257番目のロイシンがアルギニンまたはグルタミンに置換151配列番号1の261番目のグルタミン酸がバリンまたはアラニンに置換152配列番号1の262番目のアラニンがバリンに置換153配列番号1の263番目のアラニンがセリンに置換154配列番号1の264番目のスレオニンがセリンに置換155配列番号1の265番目のグルタミン酸がアラニンまたはグリシンに置換156配列番号1の268番目のアスパラギンがセリン、イソロイシンまたはスレオニンに置換157配列番号1の270番目のロイシンがヒスチジン、アルギニンまたはバリンに置換158配列番号1の271番目のリジンがアルギニンに置換159配列番号1の272番目のアルギニンがグルタミンに置換160配列番号1の277番目のグルタミン酸がバリンに置換161配列番号1の279番目のグルタミンがアルギニンまたはヒスチジンに置換162配列番号1の282番目のグリシンがアスパラギン酸に置換163配列番号1の283番目のロイシンがプロリンに置換164配列番号1の285番目のロイシンがアルギニンまたはヒスチジンに置換165配列番号1の286番目のプロリンがグルタミン、アルギニンまたはグルタミン酸に置換166配列番号1の287番目のスレオニンがイソロイシン、プロリン、アラニンまたはバリンに置換167配列番号1の288番目のプロリンがアラニン、セリンまたはスレオニンに置換168配列番号1の289番目のバリンがアラニン、アスパラギン酸、グリシン、ロイシンまたはイソロイシンに置換本発明のタンパク質は、前述したFc結合性タンパク質を化学修飾して負電荷を有する解離基を導入することで得ることができる。前記化学修飾はFc結合性タンパク質を発現する宿主の培養液の段階で行なってもよいし、Fc結合性タンパク質を高度に精製した段階で行なってもよいし、その中間段階で行なってもよい。なおFc結合性タンパク質の精製は、遠心分離、限外ろ過、硫酸アンモニウム沈殿分画、カラムクロマトグラフィー等様々な方法を組み合わせることで、目的の純度に達するまで行なえばよい。本発明における負電荷を有する解離基は、カルボキシル基、硫酸基、または硝酸基等があげられるが、その中でもカルボキシル基が好ましく用いられる。本発明のタンパク質は前記解離基を有する化合物をFc結合性タンパク質に作用させることで得ることができる。前記化合物のうち、カルボキシル基を有する化合物としてはモノヨード酢酸に代表されるハロアルキル酸や無水コハク酸に代表される複数のカルボキシル基を有する酸の無水物が例示される。前記化合物で処理することにより、Fc結合性タンパク質のうち、リジン残基のアミノ基、ヒスチジン残基のイミダゾール基、システイン残基のチオール基、チロシン残基のフェノール基、セリンまたはスレオニン残基の水酸基等が、各基の反応性に応じてランダムに修飾される。化学修飾を行なうアミノ酸残基の場所については、Fc結合性タンパク質が有する抗体結合活性を失わず、かつ安定性が向上する範囲であれば、特に限定はない。化学修飾を行なう際の温度、pH、塩濃度、Fc結合性タンパク質と前記化合物との比率、反応時間等については、Fc結合性タンパク質、使用する化合物、必要な安定性等を考慮し適宜設定すればよい。無水コハク酸で処理する方法の一例として、Fc結合性タンパク質に対し10等量以上好ましくは10から65等量、さらに好ましくは20から40等量の無水コハク酸で、23°Cで2時間、0.6MHEPES緩衝液pH9.0中で処理する方法があげられ、当該処理によりアルカリ性溶液例えば、100mM以下の水酸化ナトリウム水溶液に対する耐性が向上したFc結合性タンパク質を得ることができる。本発明のタンパク質は、Fc結合性タンパク質を化学修飾して負電荷を有する解離基を導入することで得ることができる。本発明のタンパク質は、化学修飾のないFc結合性タンパク質と比較し、特にアルカリ環境下において、高い安定性を示す。また本発明のタンパク質は、その特徴である免疫グロブリンのFc領域への特異的結合活性は保持している。そのため本発明のタンパク質は、医薬品、臨床検査薬、バイオセンサー、またはアフィニティーリガンド分離剤といった様々な用途に用いることができる。以下に実施例をあげて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではなく、発明の要旨を逸脱しない範囲で、任意に変更が可能であることはいうまでもない。実施例1Fc結合性タンパク質の調製A配列番号2に記載のアミノ酸配列からなるFc結合性タンパク質をコードする、配列番号3に記載のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドを、公知の方法例えば特許文献1の方法により、プラスミドpTrc99aのNcoIサイトとHindIIIサイトの間に挿入することで、発現ベクターpTrcperBFcRm32を作製した。なお、配列番号2のうち、1番目のメチオニンから26番目のアラニンまでがMalEシグナルペプチド、27番目のリジンから33番目のグリシンまでがリンカーペプチド、34番目のグルタミンから307番目のバリンまでがFc結合性タンパク質FcRm32のアミノ酸配列、308番目から313番目のヒスチジンがポリヒスチジンタグである。またFcRm32は、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなるヒト天然型FcγRIのうち、16番目のグルタミンから289番目のバリンまでの領域に相当し、かつ、下記に示すアミノ酸置換を行なったFc結合性タンパク質である。1配列番号1の20番目のスレオニンをプロリンに置換2配列番号1の25番目のスレオニンをリジンに置換3配列番号1の36番目のグルタミン酸をグリシンに置換4配列番号1の38番目のスレオニンをセリンに置換5配列番号1の45番目のバリンをアラニンに置換6配列番号1の46番目のロイシンをプロリンに置換7配列番号1の49番目のプロリンをセリンに置換8配列番号1の60番目のグリシンをアスパラギン酸に置換9配列番号1の63番目のスレオニンをイソロイシンに置換10配列番号1の65番目のスレオニンをアラニンに置換11配列番号1の69番目のセリンをスレオニンに置換12配列番号1の71番目のアルギニンをヒスチジンに置換13配列番号1の77番目のバリンをグルタミン酸に置換14配列番号1の78番目のアスパラギンをアスパラギン酸に置換15配列番号1の100番目のイソロイシンがバリンに置換16配列番号1の114番目のフェニルアラニンがロイシンに置換17配列番号1の133番目のチロシンをヒスチジンに置換18配列番号1の139番目のアルギニンをヒスチジンに置換19配列番号1の149番目のトリプトファンをアルギニンに置換20配列番号1の156番目のロイシンをプロリンに置換21配列番号1の160番目のイソロイシンをスレオニンに置換22配列番号1の163番目のアスパラギンをセリンに置換23配列番号1の173番目のリジンをアルギニンに置換24配列番号1の181番目のイソロイシンをスレオニンに置換25配列番号1の195番目のアスパラギンをスレオニンに置換26配列番号1の203番目のロイシンをヒスチジンに置換27配列番号1の206番目のアスパラギンをスレオニンに置換28配列番号1の207番目のロイシンをグルタミンに置換29配列番号1の231番目のメチオニンをリジンに置換30配列番号1の240番目のアスパラギンをアスパラギン酸に置換31配列番号1の283番目のロイシンをヒスチジンに置換32配列番号1の285番目のロイシンをグルタミンに置換BAで作製した発現ベクターpTrcperBFcRm32を用いて、公知の方法例えば特許文献1の方法により、大腸菌W3110株を形質転換した。C形質転換体を、100mLの2×YT培地バクトトリプトン:16g/L、酵母エキス:10g/L、塩化ナトリウム:5g/L、アンピシリン:0.1mg/Lを入れた、500mL容バッフル付三角フラスコに植菌し、30°Cで16時間、毎分130回の回転速度、回転半径1インチで前培養を行なった。D表1に示す培地組成のうち、酵母エキス、リン酸三ナトリウム十二水和物およびリン酸水素二ナトリウム十二水和物を投入した培地約1.4Lを3Lの発酵槽に入れ、121°Cで20分間滅菌後、表1に示す残りの培地成分を添加し、さらにAの前培養液90mLを添加して、本培養を行なった。培養装置はエイブル社製BMS-03PIを使用し、通気した空気速度は1.8L/分に、培養温度は30°Cに、pHは6.9から7.1にそれぞれ設定し、培養中におけるpHの変動は、14アンモニア水または50リン酸の添加により前記範囲に制御した。培養中はグルコース分析計YSI社製2700を用いて定期的にグルコース濃度を測定した。炭素源の供給には700g/Lのグルコースを、窒素源の供給には400g/Lの酵母エキスオリエンタル酵母工業製を、それぞれ使用した。供給は、炭素源の溶液と窒素源の溶液を容量比1:1で混合して行なった。エイブル社製DO溶存酸素電極による信号を、エイブル社製培養制御プログラムをインストールしたパーソナルコンピューターにより検出することで、本培養初期に投入したグルコース20g/Lが消費されたことを検知し、溶存酸素濃度が40飽和を超えた時点で流加ポンプを起動してグルコース350g/L、酵母エキス200g/Lの混合液を供給した。供給にはワトソンマーロウ社製定量ポンプ101Uの高速型を使用した。微生物の増殖は培養液の600nmの濁度OD600nmにより測定した。EOD600nmが90に達したとき、すなわち培養開始10時間後に培養温度を25°Cに下げ、IPTGを終濃度0.5mMとなるよう培養液に添加することで、Fc結合性タンパク質の生産誘導をかけた。48時間培養を行なったところ、培養液の濁度は160に達した。予め求めた濁度と菌体密度の相関式より、乾燥菌体収量は培養液1Lあたり46gと求められた。なお、グルコース濃度は、グルコースと酵母エキスの供給を開始した、培養開始8時間後から培養終了48時間後までの期間中、0から0.1g/Lに維持された。また、培養終了後の培養液に含まれるFc結合性タンパク質ヒトFcγRIの生産量を特許文献6に記載のELISA法により定量した結果、培養液1Lあたり1100mgであった。実施例2FcRの精製A実施例1の培養液1Lより、日立冷却遠心機CR20GIIおよびローターRPR-9-2を使用し、4°Cにおいて8000rpm、15分間の遠心分離を行ない、湿菌体250gを得た。B得られた湿菌体を1Lの緩衝液A50mMトリス塩酸緩衝液pH8.0-1mMEDTA-0.15MNaClに懸濁した後、0.3gのリゾチーム、TritonX-100の20水溶液10mL、デオキシコール酸ナトリウムの1水溶液10mLを順次添加し、引き続き0.3Mの硫酸マグネシウム水溶液20mLおよび250U/uLのベンゾナーゼ溶液メルク社製1μLを加え、4°Cで一晩放置した。C放置後、硫酸アンモニウム144gを加え、日立冷却遠心機CR20GIIおよびローターRPR-9-2を使用し、4°Cにおいて8000rpm、15分間の遠心分離を行ない、上清を回収した。D回収した上清を、予め緩衝液B50mMトリス塩酸緩衝液pH8.0-1mMEDTA-10w/v硫酸アンモニウムで平衡化した容量50mLのPhenylトヨパール650Mカラム東ソー社製に通過させることで、Fc結合性タンパク質を吸着させた。引き続きカラムに未吸着の不純物を、カラム通過液のUV吸収が十分に低下するまで緩衝液Bで洗浄し、緩衝液C50mMトリス塩酸緩衝液pH8.0-1mMEDTA-20w/vグリセロールでFc結合性タンパク質を溶出した。E溶出画分に純水を加えることで電気伝導度10mS/cmに調整後、さらに尿素を終濃度1Mになるように添加した。この溶液を、予め緩衝液D20mMリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0-1mMEDTA-1M尿素で平衡化した容量20mLのCMトヨパール650Mカラム東ソー社製に通過させることで、Fc結合性タンパク質を吸着させた。引き続きカラムに未吸着の不純物を、カラム通過液のUV吸収が十分に低下するまで緩衝液Dで洗浄し、緩衝液E20mMリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0-1mMEDTA-1M尿素-1MNaClでFc結合性タンパク質を溶出した。F溶出画分を緩衝液F20mMリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0で平衡化した容量20mLのCMトヨパール650Mカラム東ソー社製に通過させることで、Fc結合性タンパク質を吸着させ、0から1MまでのNaClの濃度勾配溶出により溶出することにより、精製Fc結合性タンパク質約300mgタンパク質溶液濃度3.55mg/mLを得た。実施例3Fc結合性タンパク質の無水コハク酸処理A無水コハク酸をDMSOで希釈し、0から50mMの溶液を調製した。B実施例2で調製したFc結合性タンパク質溶液1.08mLに、1MHEPES緩衝液pH9.02.12mLを加えることで、濃度1.2mg/mL4.0×10-5MのFc結合性タンパク質溶液を調製した。C調製したFc結合性タンパク質溶液100μLにAの無水コハク酸溶液5μLFc結合性タンパク質に対し無水コハク酸を1.3から62.5当量加え、ディープウェルプレートマキシマイザータイテック社製により、23°Cで2時間、500rpmで振とうすることで処理を行なった。処理後、1Mトリス塩酸緩衝液pH8.0100μLを加えて23°Cで1時間、500rpmで振とうすることで処理を停止した。反応後の残存活性を、特許文献6に記載のELISA法を用いて測定したところ、約10当量までは活性への影響は認められなかった。しかしながら、10当量を超える領域では、無水コハク酸当量無水コハク酸濃度依存的に活性が低下した。最も高濃度である無水コハク酸62.5当量の条件で修飾反応を行なった場合、Fc結合性タンパク質が有する抗体結合活性は処理前と比較し60から80となった図2の黒丸。各濃度の無水コハク酸溶液で処理した後のFc結合性タンパク質を、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いて分析した結果、いずれの溶液で修飾反応を行なっても同一の分子量を示すことを確認した図3。すなわち、Fc結合性タンパク質への無水コハク酸処理による、前記タンパク質の重合や分解は生じていないことが確認された。一方各濃度の無水コハク酸溶液で処理した後のFc結合性タンパク質を、SDS無添加のNativeポリアクリルアミドゲル電気泳動で分析した結果では、無水コハク酸10当量までは大きな変化はないものの、20から62.5当量では移動度が大きくなる現象が確認された図4。この現象は無水コハク酸処理によりカルボキシル基が付加され、付加されたFc結合性タンパク質の負電荷が増加したため電気泳動における移動度が大きくなったためである。すなわち、無水コハク酸処理によりカルボキシル基が導入されたことが確認された。比較例1Fc結合性タンパク質の無水酢酸処理無水コハク酸の代わりに無水酢酸を用いた他は、実施例3と同様に実験を行なった。無水酢酸処理した場合も、約10当量までは活性への影響は認められず、10当量を超える領域では無水酢酸当量無水酢酸濃度依存的に活性が低下した。最も高濃度である無水酢酸62.5当量の条件で処理を行なった場合、Fc結合性タンパク質が有する抗体結合活性は処理前と比較し30から50となった図2の白丸。各濃度の無水酢酸溶液で処理した後のFc結合性タンパク質を、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いて分析した結果、いずれの溶液で修飾反応を行なっても同一の分子量を示すことを確認した図3。一方各濃度の無水酢酸溶液で処理した後のFc結合性タンパク質を、SDS無添加のNativeポリアクリルアミドゲル電気泳動で分析した結果では、無水酢酸10当量までは大きな変化はないものの、20から62.5当量では移動度が大きくなる現象が確認された図4。しかしながら、その移動度の変化は無水コハク酸処理よりは小さかった。これは無水酢酸処理による正電荷の減少が、カルボキシル基の導入による化学修飾に由来するものではなく、むしろリジン残基のアミノ基等がアセチル化されることに由来するからである。実施例4無水コハク酸処理したFc結合性タンパク質の耐アルカリ性評価A実施例3に記載の方法により、Fc結合性タンパク質を、タンパク質当たり20当量または40当量の無水コハク酸で処理した。処理後、0.15MNaClを含む20mMリン酸ナトリウム緩衝液で透析し、さらに0.15MNaCl水溶液で透析することで脱塩した。B脱塩後の溶液に等量の200mM水酸化ナトリウム水溶液を加え、25°Cで静置保温した水酸化ナトリウム水溶液の終濃度100mM。静置保管中は経時的に20μLずつ回収を行なった。回収液は1Mトリス塩酸緩衝液pH8.0180μLをそれぞれ加えて中和し、4°Cに冷却した。C中和した回収液を、特許文献6に記載のELISA法を用いて残存活性を測定した。結果を図5の白丸20等量の無水コハク酸で処理および黒丸40等量の無水コハク酸で処理に示す。無水コハク酸処理したFc結合性タンパク質は100分処理後も約50の活性を保持した。比較のため未処理のFc結合性タンパク質をBと同様の処理を行ない、残存活性を測定した。結果、水酸化ナトリウム水溶液添加後、直ちに失活することが判明した図5の×。また比較のため、Fc結合性タンパク質を実施例3と同様な方法で、タンパク質当たり20当量または40当量の無水酢酸にて処理したものをBと同様の処理を行ない、残存活性を測定した。結果、図5の白三角20等量の無水酢酸で処理および黒三角40等量の無水酢酸で処理に示すように、未処理のFc結合性タンパク質と同様、水酸化ナトリウム水溶液添加後、直ちに失活することが判明した。すなわち、Fc結合性タンパク質をアセチル化する方法では、耐アルカリ性を改善することができないことがわかる。