"配列番号2又は配列番号3のアミノ酸配列を含んでなるDCC融合タンパク質。請求項1に記載のDCC融合タンパク質をコードする核酸分子。配列番号1のヌクレオチド配列を含んでなる請求項1に記載の核酸分子。請求項2又は3に記載の核酸を含んでなり、該核酸を真核宿主細胞中において発現可能なベクター。請求項2又は3に記載の核酸分子又は請求項4に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。請求項1に記載のDCC融合タンパク質を生産する方法であって、請求項2又は3に記載の核酸を真核宿主細胞中において発現させる工程と、該細胞又は細胞培養上清からDCC融合タンパク質を回収する工程を含んでなる方法。請求項6に記載の方法により得られるDCC融合タンパク質。請求項1に記載のDCC融合タンパク質、請求項2又は3に記載の核酸分子、請求項4に記載のベクター、又は請求項5に記載の宿主細胞と;場合によっては薬学的に許容可能な担体を含有してなる薬学的組成物。癌の治療に使用される請求項8に記載の薬学的組成物又は請求項1又は7に記載のDCC融合タンパク質。癌の治療のための医薬の製造のための、請求項8に記載の薬学的組成物又は請求項1又は7に記載のDCC融合タンパク質の使用。請求項1又は7に記載のDCC融合タンパク質を、それを必要とする被験者に投与することにより、被験者の癌を治療する方法。実施例1:Fn5Fc融合タンパク質プラスミド構築SambrookJ等MolecularcloningAlaboratorymanualColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYork1989に記載されているような標準的な方法を使用し、DNAを操作した。製造者の使用説明書に従って分子生物学的試薬を使用した。所望の遺伝子セグメントを遺伝子合成により調製した。合成された遺伝子断片を特定の発現ベクターにクローニングした。サブクローニングされた遺伝子断片のDNA配列をDNA配列決定により確認した。発現プラスミド7800ベクター7800は、例えば人工IgFc融合タンパク質の一過性発現用の発現プラスミドであり、ここで、ヒトDCCDeletedinColorectalCancer受容体の第5細胞外フィブロネクチンタイプIIIドメインは、何らの修飾又は人工的リンカー配列を導入することなく、ヒトIgG1抗体のヒンジ領域Fc定常領域;ヒンジCH2CH3に融合される;図2参照。1084bpsのDNAセグメント配列番号1を、化学的遺伝子合成及び所望するDCC融合タンパク質Fn5Fc融合タンパク質配列番号2のオープンリーディングフレームORFをコードするPCR技術により調製した。DCC融合タンパク質Fn5Fc融合タンパク質は、マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列配列番号2のアミノ酸1から19、ヒトDCC受容体第5細胞外フィブロネクチンタイプIIIドメイン配列番号2のアミノ酸22から118;DCCDeletedinColorectalCarcinomaのアミノ酸843から939:UniProtID:P43146配列バージョン2、Fn5ドメインのC末端配列番号2のアミノ酸119から122及びN末端配列番号2のアミノ酸20から21に第5フィブロネクチンタイプIIIドメインFn5ドメインの隣接天然アミノ酸、及びヒトIgG1抗体Fc定常領域配列番号2のアミノ酸123から353からなる。Fn5Fc発現カセットを容易に組み立てるために、化学的に調製されたDNAセグメントは、それぞれ5及び3末端での独特のHindIII及びNheI制限エンドヌクレアーゼ切断部位に隣接している。Fn5Fc構造遺伝子ORF;配列番号1のヌクレオチド16から1074を、ヒトサイトメガロウイルスhCMV及びウシ成長ホルモンbGHポリアデニル化部位からの最初期エンハンサー及びプロモーターにつなげた。DCC融合タンパク質Fn5Fc融合タンパク質のための発現カセットの他に、プラスミドは、-大腸菌中でのこのプラスミドの複製を可能にするベクターpUC18からの複製起点、及び-大腸菌にアンピシリン耐性を付与するβラクタマーゼ遺伝子を含む。TDCC融合タンパク質Fn5Fc融合タンパク質のコード化配列例えば、配列番号1の転写ユニットは、以下のエレメントを含む:-ヒトサイトメガロウイルスからの最初期エンハンサー及びプロモーター、-ヒト抗体生殖遺伝子の5非翻訳領域、-マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、-Fn5Fc融合タンパク質コード配列配列番号1のヌクレオチド16から1074、及び-ウシ成長ホルモンbGHポリアデニル化ポリAシグナル配列。発現プラスミド7800のプラスミドマップを図2に示す。成熟DCC融合タンパク質のすなわち、シグナル配列がないアミノ酸配列を配列番号3に示すFn5変異体1。ベクター7809は、配列番号4に示すように、配列番号3に示される成熟DCC融合タンパク質Fn5Fc融合タンパク質と比較してアミノ酸位置107のCisからAlaへの置換を生じる抗体ヒンジ定常領域内の単一点突然変異による、7800の構築に使用されるDCC融合タンパク質Fn5Fc融合タンパク質;成熟タンパク質に対する配列番号3とは異なるFn5Fc融合タンパク質変異体用の発現プラスミドである。実施例2:一過性形質移入及び発現実施例1に例証される本発明に係る組換えタンパク質は、懸濁液中で増殖するHEK293Freestyle細胞ヒト胚性腎臓細胞株293、Invitrogenの一過性形質移入により得た。形質移入細胞を、ウルトラグルタミンBiowhittakeLonza又はLグルタミンのいずれかである6mMのグルタミンが補填されたF17培地Gibco又はFreestyle293培地Invitrogenにおいて、8のCO2、37°Cで、30mlから250mlの培地スケールで振とうフラスコ内で培養した。形質移入では、フェクチンを、4:3の試薬μl対DNAの比で使用した。細胞培養上清を含むポリペプチドを、形質移入の6~8日後に収集した。例えばHEK293細胞等におけるヒト免疫グロブリンの組換え発現に関する一般的情報は、MeissnerP等BiotechnolBioeng75197203に与えられている。DCC融合タンパク質配列番号3は、HEK293Freestyle細胞中での一過性発現で、少なくとも100mg/Lの比率で高い効率で分泌された。実施例3:SDSPAGEを使用する発現分析4倍濃度のLDS試料バッファー4×LDS:4gのグリセロール、0.682gのTRISトリスアミノメタン、0.666gのTRISHClトリスアミノメタン塩酸塩、0.8gのLDSドデシル硫酸リチウム、0.006gのEDTAエチレンジアミン四酸、0.75mlのServaBlueG250の1重量w/w水溶液、0.75mlのフェノールレッドの1重量w/w水溶液を水に添加して、10mlの全容量にした。分泌タンパク質を含む培養ブロスを遠心分離に供し、細胞と細胞屑を除去した。清澄にされた上清のアリコートを1/4容量v/vの4×LDS試料バッファー及び1/10容量v/vの0.5Mの14ジチオスレイトールDTTと混合した。ついで、試料を75°Cで10分インキュベートし、SDSPAGEによりタンパク質を分離させた。NuPAGE登録商標プレキャストゲル系PreCastgelsystemを、製造者の使用説明書に従って使用した。特に、10のNuPAGENovex登録商標ビス-トリスプレキャストゲルpH6.4及びNuPAGE登録商標MESランニングバッファーを使用した。成熟DCC融合タンパク質Fn5変異体1:配列番号3;及び変異Fn5変異体1:配列番号4を、クーマシーブルーブリリアント染色を用いた染色後にはっきりと検出することができた。培養上清における発現収量は>100mg/Lであった。これに対して、プラスミド7801、7802及び7803に基づき上述した実施例1に記載されているようにして同様に発現されたFn5変異体2配列番号6又はFn4Fn5変異体1及び2それぞれ配列番号5及び配列番号7を含んでなる他のコンストラクトの発現収量は、低い発現収量しか示さなかった。結果を表1に示す。実施例4:アフィニティークロマトグラフィー及びゲル濾過クロマトグラフィーによるタンパク質の精製プロテインAアフィニティークロマトグラフィー発現され、分泌されたポリペプチドを、プロテインA親和性材料Mabセレクトシュアを使用するアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。簡潔に述べると、遠心分離10000g、10分及び0.45μmフィルターによる濾過後、ポリペプチドを含む清澄な培養上清を、PBSバッファー10mMのNa2HPO4、1mMのKH2PO4、137mMのNaCl及び2.7mMのKCl、pH7.4で平衡化されたMabセレクトシュアカラムに適用した。未結合のタンパク質を、平衡バッファーでの洗浄により除去した。ポリペプチドを0.1Mのクエン酸バッファー、pH3.3で溶離させ、生成物を含む画分を1MのTRIS、pH9.0で中和した。その後、溶液を、20mMのヒスチジン、140mMのNaCl、pH6.0のバッファーで、4°Cで透析し、AmiconCentricon濃縮装置で濃縮し、さらなるプロセシングまで、氷水浴中に保存した。サイズ排除クロマトグラフィーポリペプチドを含む溶液を、同じヒスチジンバッファーで平衡にされたスーパーデックスSuperdex200高ロードカラムGEHealthCareに適用した。画分を収集した。全ての画分を分析用SECスーパーデックス200、GEHealthCareにより分析し、純粋な単量体性コンジュゲートを伴う画分をプール化し、-80°Cで凍結保存した。ポリペプチドの完全性は、先の段落に記載されたように、還元剤の存在及び非存在下、クーマシーブリリアントブルーで染色して、SDSPAGEにより分析した。実施例5:表面プラズモン共鳴による結合アッセイ機器:BiacoreT100ソフトウェア:BiacoreT100コントロール、バージョン2.02BiacoreT100エバルエーション、バージョン2.02アッセイフォーマット:チップ:CM5チップDCC融合タンパク質Fn5変異体1;配列番号3を、アミンカップリングされた捕捉分子を介して捕捉した。一連の増加濃度のネトリン1を注射した。アミンカップリング捕捉分子を単独で含むチップ表面を、可能なバッファー効果又はネトリン-1の非特異的結合の修復のために参照コントロール表面として使用した。捕捉分子:Fn5変異体1のために抗ヒトIgG抗体ヤギ由来、JacksonImmunoResearchJIR109005098。捕捉分子のアミンカップリング製造者の使用説明書に従っての標準的なアミンカップリング:ランニングバッファー::HBSNバッファー、EDC/NHSの混合物により活性化、5000RUのリガンド密度用;捕捉抗体をカップリングバッファーNaAc、pH4.5、c=30μg/mLで希釈した;最終的に残存する活性化カルボキシル基を1Mのエタノールアミンの注入によりブロックした。25°CでのDCC融合タンパク質Fn5変異体1;配列番号3に結合するネトリン1の動態特徴付けランニングバッファー:PBS0.05v/vのトゥイーン20フローセル2から4でのFn5変異体1の捕捉:流量5μL/分、接触時間72秒、cFn5変異体1=100nM,、ランニングバッファー1mg/mLのBSAで希釈。検体試料:古典的濃度シリーズを、c=400-1nMの間で5又は6の増加濃度の検体を逐次注入することにより、流量50μL/分で測定した。検体を3分注入し、解離相が20分続いた。異なる製造者からの様々なネトリン1試料を測定に使用したヒトネトリン1、アレキシス5221000000/ヒトメトリン1NetrisPharma/ニワトリネトリン1、アレキシス5221062010。10mMのグリシン、pH1.5、接触時間2分、流量30μL/分を使用し、各サイクル=各濃度後に再生を実施した。図3は、例えば、様々な濃度の注入されたチキンネトリン1での、捕捉検体DCC融合タンパク質Fn5変異体1;配列番号3の典型的な結合及び解離曲線を示す。通常の二重参照コントロール参照:捕捉分子への検体の結合;フローセル:ブランクとしてネトリン1の濃度0と、モデル滴定動態1:1結合を用いた計算を使用して、動態パラメーターを計算した。実施例6:H358細胞を用いたカスパーゼ3活性化アッセイ1日目に細胞を無血清培地に播種したウェル当たり1mlの培地を含む6ウェルプレートにウェル当たり2×105細胞。2日目に培地を、ビヒクルPBSのみ、又は1μg/mlの成熟DCC融合タンパク質Fn5変異体1、配列番号3、又は1μg/mlのFn5変異体1と150ng/mlのネトリン1を含んでいる1mlの新鮮な無血清培地で置き換えた。1条件当たり2ウェルにおいて処理を実施した。3日目、2つの同じようにして処理されたウェルから浮遊及び全付着細胞を、一プールとして収集した。細胞ペレットを55μLの溶解バッファーに再懸濁させ、氷で10分、溶解させた。ついで、ライセートを4°Cで3分、最高速度で遠心分離することにより事前清浄化した。上清を新しいチューブに収集し、タンパク質濃度の測定中、氷上に保持した。白色の96ウェルプレート中において、30μg容量のタンパク質アリコートを、溶解バッファーを使用して最終容量50μlに調節した。54μLの反応バッファーと1μLのDEVDAFCと0.5μLのDTTからなる50μLの反応混合物を各ウェルに添加した。蛍光の発生400nmで励起、510nmで発光を、5分毎に全体で1時間、動態測定によりモニターした。あるいは、それができない場合は、最初の読み取りを混合物の添加直後に実施し、最終的な測定を37°Cでの1時間のインキュベート後に実施した光から保護。全ての値を、ビヒクルコントロール試料に対して正規化した。結果を図4に示す。実施例7:H358及びA549異種移植のインビボ腫瘍増殖阻害H358異種移植:5週齢の雌の胸腺欠損nu/nuマウスに、200μLのPBS中の5.0×106のH358細胞をマウスの左側腹部に皮下注射することにより移植し、マウス当たり1腫瘍を作製した。腫瘍が約100mm3の体積に達したところで、20mg/kgのFn5変異体1融合タンパク質又は等しい容量のバッファーを、4連続週にわたり、週1回、腹腔内注射した。腫瘍サイズをノギスで測定した。腫瘍体積は、式v=0.5ここで、vは体積であり、lは長さであり、wは幅であるで算出した。A549異種移植:5週齢の雌の胸腺欠損nu/nuマウスに、A549細胞をその左側腹部に皮下注射することにより移植した。腫瘍が約100mm3の体積に達したところで、20mg/kg用量のFn5変異体1融合タンパク質又は等しい容量のバッファーを、4連続週にわたり、週1回又は2回、腹腔内注射した。腫瘍サイズをノギスで測定した。腫瘍体積は、式v=0.5ここで、vは体積であり、lは長さであり、wは幅であるで算出した。図5をまた参照のことを意味する。本発明で言及される配列配列番号1DCC融合タンパク質7800をコードするDNA人工配列aagcttgccgccaccatgggatggagctgtatcatcctcttcttggtagcaacagctacaggtgtccactccagcacccccatgctgcctccagtgggcgtccaggccgtggctctcacacacgacgcagtccgcgtgtcctgggccgataactctgttcccaagaatcagaaaacctcagaagtgagactgtacactgtccgctggcggacatccttctccgcttctgcaaagtataagagtgaagacaccactagcctttcctacaccgccacagggctgaaacctaacaccatgtatgagttttctgtgatggtaacaaagaataggagatcaagcacctggtccatgactgctcatgcaacaacctacgaggccgctccaaaatcttgtgacaaaactcacacatgtccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcacgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggcaaatgagctagcg配列番号2DCC融合タンパク質7800のアミノ酸配列人工配列MGWSCIILFLVATATGVHSSTPMLPPVGVQAVALTHDAVRVSWADNSVPKNQKTSEVRLYTVRWRTSFSASAKYKSEDTTSLSYTATGLKPNTMYEFSVMVTKNRRSSTWSMTAHATTYEAAPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK配列番号3成熟DCC融合タンパク質7800のアミノ酸配列人工配列STPMLPPVGVQAVALTHDAVRVSWADNSVPKNQKTSEVRLYTVRWRTSFSASAKYKSEDTTSLSYTATGLKPNTMYEFSVMVTKNRRSSTWSMTAHATTYEAAPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK配列番号4成熟Fn5Fc融合タンパク質7809のアミノ酸配列人工配列STPMLPPVGVQAVALTHDAVRVSWADNSVPKNQKTSEVRLYTVRWRTSFSASAKYKSEDTTSLSYTATGLKPNTMYEFSVMVTKNRRSSTWSMTAHATTYEAAPKSADKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK配列番号5成熟Fn4Fn5Fc融合タンパク質7801のアミノ酸配列人工配列QVPDQPSSLHVRPQTNCIIMSWTPPLNPNIVVRGYIIGYGVGSPYAETVRVDSKQRYYSIERLESSSHYVISLKAFNNAGEGVPLYESATTRSITDPTDPVDYYPLLDDFPTSVPDLSTPMLPPVGVQAVALTHDAVRVSWADNSVPKNQKTSEVRLYTVRWRTSFSASAKYKSEDTTSLSYTATGLKPNTMYEFSVMVTKNRRSSTWSMTAHATTYEAAPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK配列番号6成熟Fn5Fc融合タンパク質7802のアミノ酸配列人工配列STPMLPPVGVQAVALTHDAVRVSWADNSVPKNQKTSEVRLYTVRWRTSFSASAKYKSEDTTSLSYTATGLKPNTMYEFSVMVTKNRRSSTWSGGGGSGGGGSGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK配列番号7成熟Fn4Fn5Fc融合タンパク質7803のアミノ酸配列人工配列QVPDQPSSLHVRPQTNCIIMSWTPPLNPNIVVRGYIIGYGVGSPYAETVRVDSKQRYYSIERLESSSHYVISLKAFNNAGEGVPLYESATTRSITDPTDPVDYYPLLDDFPTSVPDLSTPMLPPVGVQAVALTHDAVRVSWADNSVPKNQKTSEVRLYTVRWRTSFSASAKYKSEDTTSLSYTATGLKPNTMYEFSVMVTKNRRSSTWSGGGGSGGGGSGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK"