下記の一般式又は:式中、R1は下記式:式中、p、q、r、及びsはそれぞれ独立に2又は3の整数を示し、tは0又は1を示し、R11、R12、及びR13はそれぞれ独立に水素原子又は炭素原子数1~6のアルキル基を示すで表される基を示し;R2は水素原子又はベンゼン環上に置換する1個ないし3個の一価の置換基を示し;R3及びR4はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子を示し;R5及びR6はそれぞれ独立に水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示し;R7は水素原子、アルキル基、又はアルコキシアルキル基を示し;R8及びR9はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、又はxNyCOOR16式中、yは1ないし4の整数を示し、R16は水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示すで表される基を示すで表される基を示すで表される化合物又はその塩。ベンゼン環上に存在するR1がキサンテン環の結合部位に対してパラ位に結合しており、p、q、r、及びsが2であり、tが1であり、R11、R12、及びR13が水素原子であり、かつR2が水素原子である請求項1に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩。R3及びR4が水素原子であり、R5及びR6がそれぞれ独立に水素原子、アセチル基、又はアセチルオキシメチル基であり、R7が水素原子、アルキル基、又はメトキシメチル基であり、R8及びR9がともに水素原子である請求項1又は2に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩。下記の一般式又は:式中、R21は下記式:式中、d、e、f、及びgはそれぞれ独立に2又は3の整数を示し、hは0又は1を示し、R31、R32、及びR33はそれぞれ独立に水素原子又は炭素原子数1~6のアルキル基を示すで表される基を示し;R22は水素原子又はベンゼン環上に置換する1個ないし3個の一価の置換基を示し;R23及びR24はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子を示し;R25及びR26はそれぞれ独立に水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示し;R27は水素原子、アルキル基、又はアルコキシアルキル基を示し;R28及びR29はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、又はmNnCOOR36式中、nは1ないし4の整数を示し、R36は水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示すで表される基を示すで表される基を示すで表される化合物又はその塩。ベンゼン環上に存在するR21がキサンテン環の結合部位に対してパラ位に結合しており、d、e、f、及びgが2であり、hが1であり、R31、R32、及びR33が水素原子であり、かつR22が水素原子である請求項4に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩。R23及びR24が水素原子であり、R25及びR26がそれぞれ独立に水素原子、アセチル基、又はアセチルオキシメチル基であり、R27が水素原子、アルキル基、又はメトキシメチル基であり、R28及びR29がともに水素原子である請求項4又は5に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩。請求項1ないし3のいずれか1項に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩を含む硫化水素測定用蛍光プローブ。請求項4ないし6のいずれか1項に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩を含む硫化水素測定用蛍光プローブ。硫化水素の測定方法であって、下記の工程:請求項1ないし3のいずれか1項に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩を硫化水素と接触させる工程;及び上記工程で生成した上記一般式又はで表される化合物又はその塩の蛍光を測定する工程を含む方法。硫化水素の測定方法であって、下記の工程:請求項4ないし6のいずれか1項に記載の一般式又はで表される化合物又はその塩と二価銅イオンとを反応させて上記一般式又はで表される化合物又はその塩を生成させる工程;上記工程で生成した上記一般式又はで表される化合物又はその塩と硫化水素とを接触させる工程;及び上記工程で生成した上記一般式又はで表される化合物又はその塩の蛍光を測定する工程を含む方法。本発明の課題は、生体内の硫化水素を特異的に可視化して高感度な測定を行うことができる蛍光プローブを提供することにある。特に、生体内に大量に存在する還元型グルタチオンの影響を受けることなく高感度かつ特異的に硫化水素を測定することができる蛍光プローブを提供することが本発明の課題である。本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、下記の一般式で表される化合物を硫化水素測定用の蛍光プローブとして用いると、還元型グルタチオンの存在下においても極めて高感度かつ特異的に硫化水素を測定することができることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。すなわち、本発明により、下記の一般式又は:式中、R1は下記式:式中、p、q、r、及びsはそれぞれ独立に2又は3の整数を示し、tは0又は1を示し、R11、R12、及びR13はそれぞれ独立に水素原子又は炭素原子数1~6のアルキル基を示すで表される基を示し;R2は水素原子又はベンゼン環上に置換する1個ないし3個の一価の置換基を示し;R3及びR4はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子を示し;R5及びR6はそれぞれ独立に水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示し;R7は水素原子、アルキル基、又はアルコキシアルキル基を示し;R8及びR9はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、又はxNyCOOR16式中、yは1ないし4の整数を示し、R16は水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示すで表される基を示すで表される基を示すで表される化合物又はその塩が提供される。上記発明の好ましい態様によれば、p、q、r、及びsが2であり、tが1であり、かつR11、R12、及びR13が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;p、q、r、及びsが2であり、tが1であり、R11、R12、及びR13が水素原子であり、かつR2が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;並びに、ベンゼン環上に存在するR1がキサンテン環の結合部位に対してパラ位に結合しており、p、q、r、及びsが2であり、tが1であり、R11、R12、及びR13が水素原子であり、かつR2が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩が提供される。さらに好ましい態様によれば、R3及びR4が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;R5及びR6がそれぞれ独立に水素原子、アセチル基、又はアセチルオキシメチル基である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;R7が水素原子、アルキル基、又はメトキシメチル基である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;並びにR8及びR9がともに水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩が提供される。また、本発明により、下記の一般式又は:式中、R21は下記式:式中、d、e、f、及びgはそれぞれ独立に2又は3の整数を示し、hは0又は1を示し、R31、R32、及びR33はそれぞれ独立に水素原子又は炭素原子数1~6のアルキル基を示すで表される基を示し;R22は水素原子又はベンゼン環上に置換する1個ないし3個の一価の置換基を示し;R23及びR24はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子を示し;R25及びR26はそれぞれ独立に水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示し;R27は水素原子、アルキル基、又はアルコキシアルキル基を示し;R28及びR29はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、又はmNnCOOR36式中、nは1ないし4の整数を示し、R36は水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示すで表される基を示すで表される基を示すで表される化合物又はその塩が提供される。上記発明の好ましい態様によれば、d、e、f、及びgが2であり、hが1であり、かつR31、R32、及びR33が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;d、e、f、及びgが2であり、hが1であり、R31、R32、及びR33が水素原子であり、かつR22が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;並びに、ベンゼン環上に存在するR21がキサンテン環の結合部位に対してパラ位に結合しており、d、e、f、及びgが2であり、hが1であり、R31、R32、及びR33が水素原子であり、かつR22が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩が提供される。さらに好ましい態様によれば、R23及びR24が水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;R25及びR26がそれぞれ独立に水素原子、アセチル基、又はアセチルオキシメチル基である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;R27が水素原子、アルキル基、又はメトキシメチル基である上記一般式又はで表される化合物又はその塩;並びにR28及びR29がともに水素原子である上記一般式又はで表される化合物又はその塩が提供される。別の観点からは、本発明により、上記一般式又はで表される化合物又はその塩を含む硫化水素測定用蛍光プローブ、及び上記一般式又はで表される化合物又はその塩を含む硫化水素測定用試薬が提供される。また、硫化水素測定用蛍光プローブ又は硫化水素測定用試薬の製造のための上記上記一般式又はで表される化合物又はその塩の使用も本発明により提供される。また、本発明により、上記一般式又はで表される化合物又はその塩を含む硫化水素測定用蛍光プローブ、及び上記一般式又はで表される化合物又はその塩を含む硫化水素測定用試薬が提供される。また、硫化水素測定用蛍光プローブ又は硫化水素測定用試薬の製造のための上記上記一般式又はで表される化合物又はその塩の使用も本発明により提供される。この蛍光プローブ及び試薬は、測定系内において二価銅イオンと反応させて上記一般式又はで表される化合物又はその塩を測定系内において生成させるinsitu型の硫化水素測定用蛍光プローブ又は試薬として有用である。さらに別の観点からは、本発明により、硫化水素の測定方法であって、下記の工程:上記一般式又はで表される化合物又はその塩を硫化水素と接触させる工程;及び上記工程で生成した上記一般式又はで表される化合物又はその塩の蛍光を測定する工程を含む方法が提供される。また、本発明により、硫化水素の測定方法であって、下記の工程:上記一般式又はで表される化合物又はその塩と二価銅イオンとを反応させて上記一般式又はで表される化合物又はその塩を生成させる工程;上記工程で生成した上記一般式又はで表される化合物又はその塩と硫化水素とを接触させる工程;及び上記工程で生成した上記一般式又はで表される化合物又はその塩の蛍光を測定する工程を含む方法が提供される。本発明により提供される一般式又はで表される化合物又はその塩は硫化水素に対して高い反応性を有しており、硫化水素の存在下において強蛍光性の一般式又はで表される化合物又はその塩を生成する性質を有している。また、一般式又はで表される化合物又はその塩は還元型グルタチオンに対しては実質的に反応性を有しないことから、還元型グルタチオンの存在下においても高感度に硫化水素を測定することができる。さらに、一般式又はで表される化合物又はその塩は種々のアニオンの存在下においても特異的かつ高感度に硫化水素と反応することができる。従って、一般式又はで表される化合物又はその塩を含む硫化水素測定用蛍光プローブは、生体内に存在する微量の硫化水素を高感度かつ高精度に測定するための蛍光プローブとして有用であり、インビボ環境下において細胞内や組織内における硫化水素をイメージングするための試薬として極めて有用である。一般式又はにおいてR1は式で表される基を示す。式で表される基において、p、q、r、及びsはそれぞれ独立に2又は3の整数を示すが、好ましくはp、q、r、及びsがいずれも2の場合である。tは0又は1を示すが、1であることが好ましい。R11、R12、及びR13はそれぞれ独立に水素原子又は炭素原子数1~6のアルキル基を示すが、R11、R12、及びR13のうちいずれか又は全部が水素原子であることが好ましく、R11、R12、及びR13が全て水素原子であることが好ましい。式で表される基はベンゼン環上の任意の位置に結合することができるが、好ましくはR1とキサンテン環が結合するベンゼン環において、R1とキサンテン環との結合位置がパラ位になることが好ましい。本明細書において、アルキル基の用語は直鎖状、分枝鎖状、環状、及びそれらの組み合わせからなるアルキル基を包含する。アルキル部分を有する他の置換基のアルキル部分についても同様である。R2は水素原子又はベンゼン環上に置換する1個ないし3個の一価の置換基を示し、好ましくは水素原子又はベンゼン環上に置換する1個又は2個の一価の置換基を示し、さらに好ましくは水素原子又はベンゼン環上に置換する1個の一価の置換基を示す。R2が一価の置換基である場合、置換基としては、例えば、ハロゲン原子、水酸基、オキソ基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アシル基、アミノ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アリール基、又はアラルキル基などが挙げられるが、これらに限定されることはない。これらの置換基はさらに別の置換基で置換されていてもよい。このような例として、例えば、フルオロアルキル基、フルオロアセチル基、メトキシベンジル基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。R2は水素原子であることが特に好ましい。R3及びR4はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子を示すが、R3及びR4がともに水素原子であることが好ましい。R5及びR6はそれぞれ独立に水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示す。アルキルカルボニル基としては、炭素数2~7個程度のアルキルカルボニル基が好ましく、例えば、アセチル基などを好ましく用いることができる。アルキルカルボニルオキシアルキル基としては、例えば、炭素数2~7個程度のアルキルカルボニルオキシ基が炭素数1~6個程度のアルキル基に置換したアルキルカルボニルオキシアルキル基が好ましいが、例えば、アセトキシメチル基などを好ましく用いることができる。R7は水素原子、アルキル基、又はアルコキシアルキル基を示す。アルコキシアルキル基としては、炭素数1~6個程度のアルコキシ基が炭素数1~6程度のアルキル基に置換したアルコキシアルキル基が好ましいが、例えば、メトキシメチル基やエトキシメチル基などを好ましく用いることができる。R8及びR9はそれぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、又はxNで表される基を示す。xは1ないし4の整数を示すが、xは1又は2であることが好ましく、xが1であることが特に好ましい。R14及びR15はそれぞれ独立にyCOOR16で表される基を示す。yは1ないし4の整数を示すが、yは1又は2であることが好ましく、yが1であることが特に好ましい。R16は水素原子、アルキルカルボニル基、又はアルキルカルボニルオキシアルキル基を示すが、アルキルカルボニル基及びアルキルカルボニルオキシアルキル基は上記R5について説明したものと同様である。好ましくはR16として水素原子又はアセトキシメチル基などを用いることができる。一般式又はにおける式で表される基、d、e、f、g、h、R31、R32、R33、R22、R23、R24、R25、R26、R27、R28、R29、m、R34、R35、n、R36は、それぞれ、一般式又はにおいて対応する式で表される基、p、q、r、s、t、R11、R12、R13、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、x、R14、R15、n、及びR16と同様である。一般式又は、あるいは一般式又はで表される化合物は酸付加塩又は塩基付加塩を形成する場合がある。酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩などの鉱酸塩、pトルエンスルホン酸塩、シュウ酸塩、リンゴ酸塩などの有機酸塩などを用いることができるが、これらに限定されることはない。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、若しくはカルシウム塩などの金属塩、アンモニウム塩、又はトリエチルアミン塩若しくはエタノールアミン塩などの有機アミン塩などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらの塩のうち、生理学的に許容される塩は本発明の化合物を生体内や細胞又は組織内の硫化水素測定用試薬として用いる場合に好ましい。また、一般式又は、あるいは一般式又はで表される化合物は、置換基の種類に応じて1個又は2個以上の不斉炭素を有する場合があるが、これらの不斉炭素に基づく任意の光学異性体、光学異性体の任意の混合物、ラセミ体、2個以上の不斉炭素に基づくジアステレオ異性体、ジアステレオ異性体の任意の混合物などは、いずれも本発明の範囲に包含される。遊離化合物又は塩の形態の化合物の任意の水和物又は溶媒和物も本発明の範囲に包含される。また、R7が水素原子の場合にはカルボキシ基がラクトンを形成する場合もあるが、本発明の範囲にはこのような構造異性体も包含される。一般式においてR5が水素原子である化合物と一般式においてR7が水素原子である化合物は互変異性体に相当しているが、このような互変異性体の存在は当業者に容易に理解されることであり、いずれの互変異性体も本発明の範囲に包含される。本発明の化合物の代表的化合物の製造方法を本明細書の実施例に詳細かつ具体的に示した。当業者は、本実施例の説明を基にして反応原料、反応条件、及び反応試薬などを適宜選択し、必要に応じてこれらの方法に修飾や改変を加えることによって、上記一般式で表される本発明の化合物をいずれも製造することができる。なお、原料化合物として用いることができる4アミノフルオレセインなどのフルオレセイン誘導体は、例えば、亀谷哲治著、有機合成化学IX、南江堂、215頁等に記載の方法に準じて製造できる。また、環状ポリアミン部分構造に関してはJAmChemSoc118126961996に開示された亜鉛プローブの部分構造の合成を参照することができる。本明細書において用いられる測定という用語は、定量、定性、又は診断などの目的で行われる測定、検査、検出などを含めて、最も広義に解釈しなければならない。本発明による硫化水素の測定方法は、一般的には、一般式又はで表される化合物又はその塩と硫化水素とを反応させる工程、及び上記工程で生成した一般式又はで表される化合物又はその塩に由来する蛍光を測定する工程を含んでいる。上記一般式又はで表される化合物は二価銅イオンの配位により消光されており、それ自体は無蛍光性又は弱蛍光性であるが、硫化水素と接触すると二価銅イオンが硫化水素と反応して不溶性のCuSとなり環状ポリアミン部分から脱落し、強蛍光性の一般式又はで表される化合物又はその塩を生成する。硫化水素測定用の試薬としては、二価銅イオンが配位した状態の一般式又はで表される化合物又はその塩を水などの適宜の水性媒体に溶解して使用することができるが、測定系内で一般式又はで表される化合物又はその塩と二価銅イオンとを反応させてinsituに一般式又はで表される化合物又はその塩を測定系内で生成させ、その一般式又はで表される化合物又はその塩と硫化水素とを反応させてもよい。このような測定方法も本発明の範囲に包含されることは言うまでもない。本発明の硫化水素測定用試薬を用いた蛍光測定手段は特に限定されないが、インビトロで蛍光スペクトルを測定する方法や、バイオイメージングの手法を用いてインビボで蛍光スペクトルを測定する方法などを採用することができる。例えば、定量を行う場合には、常法に従って予め検量線を作成しておくことが望ましい。本発明の試薬をマイクロインジェクション法等により細胞内に取り込ませれば、個々の細胞内に局在する硫化水素をバイオイメージング手法により高感度にリアルタイムで測定することができるほか、細胞培養液又は組織切片等の培養液又は灌流液中に用いることで細胞や生体組織が放出する硫化水素を測定できる。従って、本発明の硫化水素測定用試薬を用いることにより、細胞又は生体組織での硫化水素の挙動をリアルタイムに測定することが可能であり、硫化水素によるシグナル伝達のメカニズムの解明のほか、疾患病態の原因究明や治療薬の開発などに好適に利用することができる。また、例えば、R5、R6、R7、R8、又はR9のいずれか又は2箇所以上にエステラーゼなどにより加水分解可能なエステル基を導入しておくと、分子全体が脂溶性になって細胞膜を容易に透過して細胞質内に到達するが、細胞質内においてエステラーゼにより加水分解を受けて親水性のカルボキシル基が生成すると細胞膜を容易に透過できなくなる。従って、このようなエステル導入型の化合物は、細胞質内における硫化水素の濃度を測定するための試薬として極めて有用である。本発明の試薬は、必要に応じて試薬の調製に通常用いられる添加剤を配合して組成物として用いてもよい。例えば、生理的環境で試薬を用いるための添加剤として、溶解補助剤、pH調節剤、緩衝剤、等張化剤などの添加剤を用いることができ、これらの配合量は当業者に適宜選択可能である。これらの組成物は、粉末形態の混合物、凍結乾燥物、顆粒剤、錠剤、液剤など適宜の形態の組成物として提供される。以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。例1下記合成スキームによりCyclen4AF及びCyclen4AFCuを合成した。クロロアセチルアミド4AF4アミノフルオレセインを脱水テトラヒドロフラン30mLに溶解し、NaHCO3を加えた。脱水THF40mLに溶解したClCH2COClを攪拌しながら10分以上かけて滴下した。その後、室温にてアルゴン下で一晩攪拌し、濾過後に溶媒を除去し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製して目的物を得た。1HNMRδ83478671666766165242413CNMRδ17111678161415411495141213021291128312591164113611131035440HRMSCalcdforMH4240588Found4240578Cyclen4AFクロロアセチルアミド4アミノフルオレセインを脱水アセトニトリル30mLに溶解し、cyclenとジイソプロピルエチルアミンを加え、アルゴン下において70°Cで8時間攪拌した。溶媒を除去した後、HPLCにて精製してCyclen4AFを得た。1HNMRδ83478372872369268636930531613CNMRδ1709167516591558137813171305129212811241120211681163113711341009545483429412407HRMSCalcdforMH5602509Found5602506Cyclen4AFCuCuSO4五水和物を30mMHEPES緩衝液に溶解し、1MCuSO4水溶液を調製した。Cyclen4AFをCuSO4水溶液に溶解し、室温にて一晩攪拌し、HPLCで精製してCyclen4AFCuを得た。HRMSCalcdforMH6211649Found6211690Cyclen4AFCudiacetateCyclen4AFCuを脱水アセトニトリル4mLに溶解し、ピリジンと無水酢酸を加え、アルゴン下、60°Cで6時間攪拌した。溶媒を除去後、HPLCで精製してCyclen4AFCudiacetateを得た。HRMSCalcdforMH7051860Found7051843例2TACN4AFを以下のスキームで合成した。クロロアセチルアミド4アミノフルオレセインを脱水アセトニトリル8mLに溶解し、147トリアザシクロノナン、ヨウ化カリウム及び、K2CO3を加え、アルゴン下において室温で一晩攪拌した。溶媒を除去後、HPLCで精製し、TACN4AFを得た。1HNMRδ83578472773069869338037133631513CNMRδ1714168116541556137513261302129612781239119611631162113311331009551476428415HRMSCalcdforMH5172087Found5172106例3Cyclam4AFを以下のスキームで合成した。クロロアセチルアミド4アミノフルオレセインを脱水アセトニトリル8mLに溶解し、14811テトラアザシクロテトラデカン、ヨウ化カリウム及び、K2CO3を加え、アルゴン下において室温で一晩攪拌した。溶媒を除去後、HPLCで精製し、Cyclam4AFを得た。1HNMRδ85378974973771870935631332528629119419813CNMRδ171116721667156413811307130512861236120411731163114311341009544536527465460457448436420227214HRMSCalcdforMM5882822Found5882794例4TMCyclen4AF及びTMCyclen4AFCuを以下のスキームで合成した。14710テトラアザシクロドデカンを脱水ジクロロメタン15mLに溶解し、ジイソプロピルエチルアミンを加え、0°Cにて攪拌した。そして、脱水ジクロロメタン10mLに溶解したpトルエンスルホン酸クロリドを10分以上かけて滴下した。その後室温にて、アルゴン下で16時間攪拌し、2NNaOH水溶液で液性を塩基性にし、ジクロロメタンで抽出後に脱水し、溶媒を除去した。99ギ酸に溶解し、37ホルムアルデヒド水溶液を加え、110°Cにおいて85時間攪拌した。塩酸を加え、50°Cで35時間攪拌した後、液性を塩基性にし、ジクロロメタンで抽出後脱水し、溶媒を除去した。さらに、HPLCで精製して、液性を塩基性にした後、ジクロロメタンで抽出後に脱水し、溶媒を除去して目的物を得た。1HNMRδ75371431026523223622621120713CNMRδ1428135812941269560553551475435430212HRMSCalcdforMH3692324Found3692298上記工程で得られた化合物を濃硫酸5mLに溶解し、アルゴン下において110°Cで11時間攪拌した。水で希釈後、2NNaOH溶液で液性を塩基性にしてジクロロメタンで抽出し、脱水後、溶媒を除去して目的物を得た。1HNMRδ28026124524823622013CNMRδ556536533470452214LRMSMH215TMCyclen4AFクロロアセチルアミド4アミノフルオレセインを脱水ジメチルホルムアミド40mLに溶解し、工程で得られた化合物とジイソプロピルエチルアミンを加え、アルゴン下で加熱還流下に1晩攪拌した。溶媒を除去後、HPLCで精製してTMCyclen4AFを得た。1HNMRδ84178572771969068537529026236724113CNMRδ1718167416641564137613141307129412861241120611711168114111291010556523520490482405404HRMSCalcdforMH6022979Found6022939TMCyclen4AFCuCuSO4五水和物を30mMHEPES緩衝液に溶解し、1MCuSO4水溶液を調製した。TMCyclen4AFをCuSO4水溶液に溶解し、室温にて4時間攪拌し、HPLCにて精製してTMCyclen4AFCuを得た。HRMSCalcdforMH6632118Found6632106例5Cyclne4AFCuの吸光及び蛍光スペクトルを測定した。吸収及び蛍光スペクトルは30mMHEPES緩衝液中で測定した。蛍光スペクトルの測定ではCyclen4AFCuを491nmで励起した。蛍光量子収率測定では01NNaOH溶液中でフルオレセインを蛍光標準として用いた。結果を図1及び表1に示す。Cyclen4AFCuの蛍光量子収率は低下していることが示された。同様にしてCyclen4AF、TACN4AF、Cyclam4AF、TMCyclen4AF、及びTMCyclen4AFCuの吸光及び蛍光スペクトルを測定した。例6Cyclen4AFCuの反応性の評価を行った。1μMCyclen4AFCuに、300秒後に10μMNa2S10μMNa2Sと10mMGSH10mMGSHを添加し、また、無添加の実験をネガティブコントロールとして反応性を調べた。30mMHEPES緩衝液中において491nmで励起し、516nmの蛍光強度を測定した。結果を図4に示す。Cyclen4AFCuはNa2Sと反応後に蛍光上昇を示し、GSHと比較して選択性を有することが示された。また、Cyclen4AFCuは10mMGSH共存下中においても10μMNa2S添加によって蛍光強度が上昇することが明らかとなった。例7Cyclen4AFCuを用いて生体内の硫化水素の測定が可能であるか否かを評価した。HeLa細胞を37°C、5CO2混合空気中にてダルペッコ改変イーグル培地に10ウシ胎児血清、1ペニシリン、及び1ストレプトマイシンを添加した培地中で培養した。ハンクス平衡塩溶液にて2回洗浄した。HBSS中のHeLa細胞に対して100μMCyclen4AFCuを含むHBSSをマイクロインジェクションした。蛍光顕微鏡にて470490nmで励起し、515550nmの蛍光強度を測定した。測定開始5分後に細胞外液に10mMNa2Sを添加した。この結果、マイクロインジェクションしたHeLa細胞内の領域14で蛍光強度の増大が観察された。図5の上段はNa2S添加前、中段はNa2S添加後、及び下段は蛍光強度の経時変化を示し、領域5及び6はマイクロインジェクションをしていない領域を示す。同様に、Cyclen4AFCudiacetateを用いてHeLa細胞への取り込みによる硫化水素の測定を行った結果を図6に示す。上記と同様にして培養したHela細胞を100μMCyclen4AFCudiacetateを含むHBSSで37°C、2時間インキュベーションした。蛍光顕微鏡にて470490nmで励起し、515550nmの蛍光強度を測定した。測定開始210秒後に細胞外液に10mMNa2Sを添加した。HeLa細胞内外で蛍光強度の増大が観察された。図6の上段はNa2S添加前、中段はNa2S添加後、及び下段は蛍光強度の経時変化を示す。例8TACN4AF単独、及び2当量のCu2を加えたTACN4AFの吸収スペクトルと蛍光スペクトルを測定した。測定は30mMHEPESバッファー中で行い、蛍光スペクトルの測定では491nmで励起した。Cu2の添加により蛍光強度は著しく減少した。また、1μMTACN4AFに2μMCuSO4を加え、300秒後に100μMNa2S、10μMNa2S、又は10mMGSHを添加し、無添加の実験をネガティブコントロールとして反応性を調べた。30mMHEPES緩衝液中において491nmで励起し、516nmの蛍光強度を測定した。この結果、TACN4AFCu2はNa2Sと反応後、大きな蛍光上昇を示し、GSHと比較して硫化水素に対して高い選択性を有することが示された。例9Cyclam4AF単独、及び2当量のCu2を加えたCyclam4AFの吸収スペクトルと蛍光スペクトルを測定した。測定は30mMHEPESバッファー中で行い、蛍光スペクトルの測定では491nmで励起した。Cu2の添加により蛍光強度は著しく減少した。例101μMCyclam4AFに2μMCuSO4を加え、300秒後に100μMNa2S、10μMNa2S、又は10mMGSHを添加し、無添加の実験をネガティブコントロールとして反応性を調べた。30mMHEPES緩衝液中において491nmで励起し、516nmの蛍光強度を測定した。この結果、Cyclam4AFCu2はNa2Sと反応後、蛍光上昇を示し、GSHと比較して選択性を有することが示された。同様にして、1μMTMCyclen4AFCuに対して、300秒後に100μMNa2S、10μMNa2S、又は10mMGSHを添加し、無添加の実験をネガティブコントロールとして反応性を調べたところ、TMCyclen4AFCuもNa2Sと反応後に蛍光上昇を示し、GSHと比較して選択性を有することが示された。