"N-アシル化ペプチド又はタンパク質を得るためのペプチド又はタンパク質のアミノ基のアシル化方法であって、以下のステップ:a少なくとも1つの遊離アミノ基をもつペプチド又はタンパク質を以下の一般式I:{式中、nは0~8であり;R1はCOOR4であり;R2は、0.1mg/水100ml~250mg/水100mlの範囲における20°Cの水に対する溶解度を有することによって特徴づけられる親油性部分であり;R3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、カルボン酸基の形態に官能性をもたせたエステルであり、アミノ基のアシル化に用いられる、反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表し;そしてR4は水素、C1-12-アルキル、及びベンジルから選ばれる。}により表されるアシル化剤と、塩基性条件下、非プロトン極性溶媒と水の混合物中で反応させ;及びbR4が水素でない場合、塩基性条件下、上記のアシル化されたペプチドエステル基COOR4をケン化する;を含み、ここで、前記ペプチド又はタンパク質は、Arg26-GLP-17-37;Arg34-GLP-17-37;Lys36-GLP-17-37;Arg26,34Lys36-GLP-17-37;Arg26,34Lys38GLP-17-38;Arg26,34Lys39-GLP-17-39;Arg26,34Lys40-GLP-17-40;Arg26Lys36-GLP-17-37;Arg34Lys36-GLP-17-37;Arg26Lys39-GLP-17-39;Arg34Lys40-GLP-17-40;Arg26,34Lys36,39-GLP-17-39;Arg26,34Lys36,40-GLP-17-40;Gly8Arg26-GLP-17-37;Gly8Arg34-GLP-17-37;Gly8Lys36-GLP-17-37;Gly8Arg26,34Lys36-GLP-17-37;Gly8Arg26,34Lys39-GLP-17-39;Gly8Arg26,34Lys40-GLP-17-40;Gly8Arg26Lys36-GLP-17-37;Gly8Arg34Lys36-GLP-17-37;Gly8Arg26Lys39-GLP-17-39;Gly8Arg34Lys40-GLP-17-40;Gly8Arg26,34Lys36,39-GLP-17-39;Gly8Arg26,34Lys36,40-GLP-17-40;Arg26,34Lys38GLP-17-38;Arg26,34Lys39GLP-17-39;Arg26,34Lys40GLP-17-40;Arg26,34Lys41GLP-17-41;Arg26,34Lys42GLP-17-42;Arg26,34Lys43GLP-17-43;Arg26,34Lys44GLP-17-44;Arg26,34Lys45GLP-17-45;Arg26,34Lys38GLP-11-38;Arg26,34Lys39GLP-11-39;Arg26,34Lys40GLP-11-40;Arg26,34Lys41GLP-11-41;Arg26,34Lys42GLP-11-42;Arg26,34Lys43GLP-11-43;Arg26,34Lys44GLP-11-44;Arg26,34Lys45GLP-11-45;Arg26,34Lys38GLP-12-38;Arg26,34Lys39GLP-12-39;Arg26,34Lys40GLP-12-40;Arg26,34Lys41GLP-12-41;Arg26,34Lys42GLP-12-42;Arg26,34Lys43GLP-12-43;Arg26,34Lys44GLP-12-44;Arg26,34Lys45GLP-12-45;Arg26,34Lys38GLP-13-38;Arg26,34Lys39GLP-13-39;Arg26,34Lys40GLP-13-40;Arg26,34Lys41GLP-13-41;Arg26,34Lys42GLP-13-42;Arg26,34Lys43GLP-13-43;Arg26,34Lys44GLP-13-44;Arg26,34Lys45GLP-13-45;Arg26,34Lys38GLP-14-38;Arg26,34Lys39GLP-14-39;Arg26,34Lys40GLP-14-40;Arg26,34Lys41GLP-14-41;Arg26,34Lys42GLP-14-42;Arg26,34Lys43GLP-14-43;Arg26,34Lys44GLP-14-44;Arg26,34Lys45GLP-14-45;Arg26,34Lys38GLP-15-38;Arg26,34Lys39GLP-15-39;Arg26,34Lys40GLP-15-40;Arg26,34Lys41GLP-15-41;Arg26,34Lys42GLP-15-42;Arg26,34Lys43GLP-15-43;Arg26,34Lys44GLP-15-44;Arg26,34Lys45GLP-15-45;Arg26,34Lys38GLP-16-38;Arg26,34Lys39GLP-16-39;Arg26,34Lys40GLP-16-40;Arg26,34Lys41GLP-16-41;Arg26,34Lys42GLP-16-42;Arg26,34Lys43GLP-16-43;Arg26,34Lys44GLP-16-44;Arg26,34Lys45GLP-16-45;Arg26Lys38GLP-11-38;Arg34Lys38GLP-11-38;Arg26,34Lys36,38GLP-11-38;Arg26Lys38GLP-17-38;Arg34Lys38GLP-17-38;Arg26,34Lys36,38GLP-17-38;Arg26,34Lys38GLP-17-38;Arg26Lys39GLP-11-39;Arg34Lys39GLP-11-39;Arg26,34Lys36,39GLP-11-39;Arg26Lys39GLP-17-39;Arg34Lys39GLP-17-39;Arg26,34Lys36,39GLP-17-39;Arg26-GLP-17-37,Arg34-GLP-17-37,Lys36-GLP-17-37,Arg26,34Lys36-GLP-17-37,Arg26Lys36-GLP-17-37,Arg34Lys36-GLP-17-37,Gly8Arg26-GLP-17-37,Gly8Arg34-GLP-17-37,Gly8Lys36-GLP-17-37,Gly8Arg26,34Lys36-GLP-17-37,Gly8Arg26Lys36-GLP-17-37;Gly8Arg34Lys36-GLP-17-37;Arg26Lys38-GLP-17-38,Arg26,34Lys38-GLP-17-38,Arg26,34Lys36,38-GLP-17-38,Gly8Arg26Lys38-GLP-17-38;Gly8Arg26,34Lys36,38-GLP-17-38;Gly8,Arg26,34,Glu37,Lys38-GLP-17-38,Arg26Lys39-GLP-17-39,Arg26,34Lys36,39-GLP-17-39,Gly8Arg26Lys39-GLP-17-39;Gly8Arg26,34Lys36,39-GLP-17-39;Arg34Lys40-GLP-17-40,Arg26,34Lys36,40-GLP-17-40,Gly8Arg34Lys40-GLP-17-40、及びGly8Arg26,34Lys36,40-GLP-17-40から選ばれる、前記方法。R4が水素である、請求項1に記載の方法。R4がC1-8-アルキル及びベンジルから選ばれる、請求項1に記載の方法。R4が、メチル、エチル、prop-1-イル、prop-2-イル、but-1-イル、but-2-イル、2-メチル-prop-1-イル、2-メチル-prop-2-イルtert-butyl、hex-1-イル、及びベンジルから選ばれる、請求項3に記載の方法。R3が、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、カルボン酸基の形態に一級アミンのアシル化に好適な官能性をもたせたエステルを表す、請求項1~4のいずれかに記載の方法。R3が、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、反応性エステルを表す、請求項1~5のいずれかに記載の方法。前記反応性エステルが、1-ヒドロキシベンゾトリアゾールエステルである、請求項6に記載の方法。R3が、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表す、請求項1~5のいずれかに記載の方法。N-ヒドロキシイミドエステルのイミド部が、サクシンイミドsuccinimide又はフタルイミドphthalimideである、請求項8に記載の方法。非プロトン溶媒と水の混合物が1:5~5:1のN-メチル-2-ピロリドンと水の混合物である、請求項1~9のいずれかに記載の方法。非プロトン極性溶媒が、無水テトラヒドロフランTHF、無水ジメチルホルムアミドDMF、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシドDMSO、ジオキサン、ジメチルアセトアミド、及びN-メチル-2-ピロリドン、並びにそれらの混合物から選ばれる、請求項1~10のいずれかに記載の方法。非プロトン極性溶媒が、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、及びN-メチル-2-ピロリドンから選ばれる、請求項11に記載の方法。非プロトン極性溶媒がN-メチル-2-ピロリドンである、請求項12に記載の方法。ステップaにおける前記反応混合物のpHが9~13の範囲内である、請求項1~13のいずれかに記載の方法。ステップaにおける前記反応混合物のpHが9.5~12.5の範囲内である、請求項1~13のいずれかに記載の方法。ステップaにおける前記反応混合物のpHが10~12の範囲内である、請求項1~13のいずれかに記載の方法。ステップaにおける前記反応混合物の温度が0~50°Cの範囲内である、請求項1~16のいずれかに記載の方法。前記アシル化されたペプチドエステルが10~14の範囲内のpH値においてケン化される、請求項1及び3~17のいずれかに記載の方法。R2が、0.3mg/水100ml~75mg/水100mlの範囲における20°Cの水に対する溶解度を有することによって特徴づけられる、請求項1~18のいずれかに記載の方法。R2がC3-39-アルキル、C3-39-アルケニル、C3-39-アルカジエニル、及びステロイド性残基から選ばれる、請求項1~19のいずれかに記載の方法。R2が、ヘプチル、ノニル、ウンデカニル、トリデカニル、ペンタデカニル、ヘプタデカニル、ノナデカニル、リトコロイル、デオキシコロイル、及びコロイルから選ばれる、請求項20に記載の方法。R2が、ヘプチル、ノニル、ウンデカニル、トリデカニル、ペンタデカニル、ヘプタデカニル、及びノナデカニルから選ばれる、請求項21に記載の方法。R2がC7-25-アルキルから選ばれる、請求項20に記載の方法。本発明はN-アシル化されたペプチドN-アシル化されたタンパク質を得るためのペプチド又はタンパク質の1つ以上のアミノ基のアシル化方法であって、以下のステップ:a少なくとも遊離アミノ基をもつペプチド又はタンパク質を以下の一般式I:{式中、nは0~8であり;R1はCOOR4であり;R2は親油性部分であり、例えばC3-39-アルキル、C3-39-アルケニル、C3-39-アルカジエニル、及びステロイド性残基から選ばれ;R3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表し;そしてR4は水素、C1-12-アルキル、及びベンジルから選ばれる。}により表されるアシル化剤と、塩基性条件下、非プロトン極性溶媒と水の混合物中で反応させ;及びbR4が水素でない場合、塩基性条件下、上記のアシル化したペプチドエステル基COOR4をケン化する;を含む前記方法を提供する。塩基性条件下における前記アシル化されたペプチドエステルここではR4はアルキル基又はベンジル基のケン化は、上記ペプチド及び上記スペーサーのさまざまなα-アミノ酸断片のごくわずかなラセミ化又は無ラセミ化において可能である。本出願には副産物、例えば分解産物の純度及び抑制に関連するあらかじめ用いた酸性的加水分解に関して確かな利点が発見された。塩基性条件下における遊離酸ここではR4は水素としてのアシル化剤を用いたアシル化もまた発見された。前記アシル化は、本質的に副産物なしにそして脱保護のステップによらず、望ましい産物であるアシル化されたペプチドを直接的に誘導する。本発明は前述の方法においてアシル化剤として有効な新規化合物もまた提供し、上記の新規化合物は以下の一般式I:{式中、nは0~8であり;R1はCOOHであり;R2は親油性部分であり、例えばC3-39-アルキル、C3-39-アルケニル、C3-39-アルカジエニル、及びステロイド性残基から選ばれ;そしてR3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表す。}により表される。ペプチド及びタンパク質本発明がインビボにおけるクリアランス速度を低下させるためのいくつかのペプチド又はタンパク質への親油性アシル基の導入にとって有効であることは一般的に理解される。前記ペプチド及びタンパク質の例はACTH、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、アンギオテンシン、カルシトニン、エキセンジン及びそのアナログ、インシュリン及びそのアナログ、グルカゴン及びそのアナログ、グルカゴン様ペプチド-1及びそのアナログ、グルカゴン様ペプチド-2及びそのアナログ、インシュリン様成長因子-1、インシュリン様成長因子-2、ガストリックインヒビトリーペプチド、成長ホルモン放出因子、脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド、セクレチン、エンテロガストリン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、トロンボポエチン、エリスロポエチン、視床下部ホルモン放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンドルフィン、エンケファリン、バソプレッシン、オキシトシン、オピオイド及びそれらのアナログ、スーパーオキサイドディスムターゼ、インターフェロン、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、並びにリボヌクレアーゼである。前記ペプチド又はタンパク質は少なくとも1つの遊離アミノ基、ここで上記アミノ基はN-末端アミノ基又は側鎖のアミノ基をもつであろうことは理解されるであろう。特に興味深いものはリジン及びオルニチンアミノ酸残基のアミノ基である。前記方法は特にリジン残基のε-アミノ基のN-アセチル化に関する。着目の前記ペプチド又はタンパク質が、本発明に従いN-アシル化されうる2つ以上のペンダントアミノ基をもちうることもまた理解されるであろう。本発明がGLP-1及びそのアナログの改変にとって特に好適であることは必然的に理解される。本発明に従いN-アシル化されうるGLP-1及びアナログの例は、GLP-1及び切断型アナログ、例えばである。それらのGLP-1アナログ及び切断型アナログのそれぞれは本発明の他の態様を構成する。本発明はGLP-2及びそのアナログの改変にとっても特に好適であることは必然的に理解される。本発明に従いN-アシル化されうるGLP-2及びアナログの例は、GLP-2アナログ及び切断型アナログ、例えばLys20GLP-21-33;Lys20Arg30GLP-21-33;Arg30Lys34GLP-21-34;Arg30Lys35GLP-21-35;Arg30,35Lys20GLP-21-35;及びArg35GLP-21-35である。それらのGLP-2アナログ及び切断型アナログのそれぞれは本発明の他の態様を構成する。本発明はエキセンジンexendin及びそのアナログの改変にとっても特に好適であることは必然的に理解される。本発明に従いN-アシル化されうるエキセンジン及びアナログの例は、エキセンジンアナログ及び切断型アナログ、例えばエキセンジン-3及びエキセンジン-4である。それらのエキセンジンアナログ及び切断型アナログのそれぞれは本発明の他の態様を構成する。本発明のさらなる態様において前記N-アシル化はリジン残基のε-アミノ基において起こる。GLP-1及びそのアナログの作用はWO98/08871に全て記載されている。GLP-2及びそのアナログの作用はWO98/08872に全て記載されている。エキセンジン及びそのアナログの作用はWO99/43708に全て記載されている。アシル化剤本発明の方法において、少なくとも1つの遊離アミノ基をもつペプチド又はタンパク質は一般式Iのアシル化剤と反応する。一般式I中の整数nは好ましくは0~8、特に0~6であり、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸などに相当する。好ましくはnは0~4、例えば0~2、0アスパラギン酸又は1グルタミン酸である。それらの整数及び範囲のそれぞれは本発明の他の態様を構成する。式I中のR1は遊離の酸性基COOH又はエステル基COOR4を表す。R1がエステル基である場合において、R4は塩基性条件下で加水分解によってアルコールに相当するものとして遊離されうる基から選ばれる。前記の基の例はC1-12-アルキル、例えばメチル、エチル、prop-1-イル、prop-2-イル、but-1-イル、but-2-イル、2-メチル-prop-1-イル、2-メチル-prop-2-イルtert-butyl、hex-1-イルなど、及びベンジルである。それらの基のそれぞれは本発明の他の態様を構成する。式I中のR2は前記ペプチド又はタンパク質中に取り込まれている親油性の部分を表す。前記の親油性の部分はC3-39-アルキル、C3-39-アルケニル、C3-39-アルカジエニル、及びステロイド性残基から典型的に選ばれる。C3-39-アルキルの具体的な例はヘプチル、ノニル、ウンデカニル、トリデカニル、ペンタデカニル、ヘプタデカニル、及びノナデカニルである。それらの親油性の部分のそれぞれは本発明の他の態様を構成する。前記の親油性置換基又は部分は、約0.1mg/水100ml~約250mg/水100mlの範囲、好ましくは約0.3mg/水100ml~約75mg/水100mlの範囲における20°Cの水に対してもっている溶解度によって特徴づけられる。例えば、オクタン酸C8は20°Cの水に対して68mg/100mlの溶解度をもち、デカン酸C10は20°Cの水に対して15mg/100mlの溶解度をもち、そしてオクタデカン酸C18は20°Cの水に対して0.3mg/100mlの溶解度をもつ。それらの親油性置換基の範囲のそれぞれは本発明の他の態様を構成する。前記用語C3-39-アルキルC3-39-alkyl、C3-39-アルケニルC3-39-alkenyl、及びC3-39-アルカジエニルC3-39-alkadienylは直鎖及び分岐鎖、好ましくは直鎖、飽和、モノ-不飽和、ジ-不飽和、3~39炭素原子の炭化水素ラジカルのそれぞれを包含することを意図している。C3-39-アルキルの具体的な例はヘプチル、ノニル、ウンデカニル、トリデカニル、ペンタデカニル、ヘプタデカニル、及びノナデカニルである。本明細書において使用した場合、前記用語ステロイド性残基steroidalresiduesは、ステロイド性カルボン酸から得られるR2が付着されるところのカルボニル基をともなう親油性基を意味することを意図する、例えばトリ-、テトラ-、及びペンタサイクリック、完全飽和又は部分的不飽和C16-36-炭化水素である。前記の基R2-C=O-の例は、リトコロイルlithocholoy、デオキシコロイルdeoxycholoyl、及びコロイルcholoylである。前記親油性基の中で先に挙げた、C7-25-アルキル、C7-25-アルケニル、C7-25-アルカジエニル、及びステロイド性残基は特に関連がある。特に興味深い例はヘプチル、ノニル、ウンデカニル、トリデカニル、ペンタデカニル、ヘプタデカニル、ノナデカニル、リトコロイル、デオキシコロイル、及びコロイルである。それらの親油性基のそれぞれは本発明の他の態様を構成する。式I中のR3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表す。それらのエステルのそれぞれは本発明の他の態様を構成する。反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルは、アミノ、チオ、及びヒドロキシ基のアシル化に用いられる反応基として有機化学の分野特にペプチド化学にて周知である。本発明の文脈中の用語反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルは、カルボン酸基の形態にアミン、好ましくは一級アミンのアシル化に好適な官能性をもたせたエステルを意味することを意図する。よって、一級アミンのアシル化の選択性はヒドロキシ及びチオ基のアシル化までおよぶことが好まれることは理解されるであろう。反応性N-ヒドロキシイミドエステルは特に好まれる。反応性エステルの例は1-ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル及び誘導体である。カルボン酸の前記活性化されたエステル形成のための高い効果をもつ多くの試薬、例えば2-1H-ベンゾトリアゾール-1イル-1,1,3,3-テトラメチルロニウムテトラフルオロボレートが知られている。前記反応性エステルは塩基、例えば有機塩基であるトリアルキルアミンが存在することによりその場で典型的に形成される。N-ヒドロキシイミドエステルの前記イミド部の例は、欧州特許出願第92107035.5号の13ページ3行目から17ページ10行目までに明確に記載されているものであるこれを本明細書に援用する。それらの中で特に興味深いイミド部の例は、サクシンイミドsuccinimide、フタルイミドphthalimideなどである。それらのイミド部のそれぞれは本発明の他の態様を構成する。前記式Iの反応性N-ヒドロキシイミドエステルは、対応する酸すなわちN-アシル化されたα-カルボキシ保護された二酸N-acylatedα-carboxyprotecteddiacidR4は水素ではないと等モル量例えば0.95~1.05モル、好ましくは1.0モルの対応するイミドのN-ヒドロキシ-イミドの縮合によって調製されうる。前記N-アシル化されたα-カルボキシ保護された二酸は一方で対応する親油性の部分のα-カルボキシ保護された、α-アミノジアシド、及びベンゾトリアゾールエステルから典型的には調製される。このベンゾトリアゾールエステルは、例えばWO98/02460実施例1~3に記載のDCC共役によって塩素酸とベンゾトリアゾールから又は遊離酸とベンゾトリアゾールから調製される。前記縮合は塩基性条件下、例えば共役剤、例えばカルボジイミド共役剤例えばジシクロヘキシルカルボジイミドDCCの存在において典型的におこなわれる。この場合、前記共役剤は好ましくは酸に対して等モル量添加される。前記反応は極性非プロトン溶媒、例えば無水テトラヒドロフランTHF、無水ジメチルホルムアミドDMF、無水アセトン、無水ジクロロメタン、無水ジオキサン、無水ジメチルアセトアミド又は無水N-メチル-2-ピロリドンNMP中にて典型的にはおこなわれる。前記反応は0~50°C、例えば5~30°C、例えば室温の範囲の温度にて、1~96時間、例えば4~36時間の期間において典型的にはおこなわれる。試薬と条件の1つの実行可能な組合せは以下の:前記N-ヒドロキシ-イミドサクシンイミド又はフタルイミドと着目の前記酸をおよそ1:1のモル比において無水THF又は無水DMF又はそれらの混合物中に溶解し、そして等モル量のDCCを上記溶液に添加する。N-ヒドロキシ-イミドと酸の間の反応完了の後、上記産物を従来法、例えばろ過DCCを共役剤として使用した場合には沈澱させたジシクロヘキシルウレアDCUのろ過、結晶化、再結晶化、クロマトグラフィーなどにより分離及び精製する。1つの実行可能な精製経路はろ過、減圧下における溶媒の蒸発、前記産物の再溶解、例えばアセトンに再溶解しろ過、非極性溶媒の添加によって結晶化、例えばヘキサンに再溶解し、場合によっては再結晶化及び/又は洗浄により沈澱させた使用した共役剤の除去を含む。前記産物は前記式Iのアシル化剤として本発明の方法に直ちに使用されうる。前記式Iのアシル化剤が遊離αカルボン酸R4=水素として使用される場合には、R4が選択的に除かれる基であるところの上記式Iの化合物はR4が水素であるところの対応する化合物に転化する。前記カルボン酸保護基は接触水素化によって除かれうるベンジル基又は選択的に除かれうるアリル基でありうる。ベンジル保護基は非プロトン極性溶媒中の接触水素化によって、例えばアセトン中で室温にて炭素上パラジウムと水素によって除かれうる。前記反応は激しい撹拌のもとで水素ガス雰囲気の閉ざされた容器典型的には0.1~10atm中でも起こりうる。前記反応はパラジウム触媒の品質に依存して0.5~12時間で典型的には完了する。従来法を応用する。R4が水素であるところの前記式Iの化合物は新規物質として、そしてそれによってそれらの化合物が本発明の特殊な側面から成ることが理解される。よって、本発明は以下の一般式I:{式中、nは0~8であり;R1はCOOHであり;R2は親油性の部分であり、好ましくはC3-39-アルキル、C3-39-アルケニル、C3-39-アルカジエニル、及びステロイド性残基から選ばれ;そしてR3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表す。}により表される新規化合物をも提供する。反応条件前記式Iのアシル化剤と前記ペプチド又はタンパク質の間の反応は、非プロトン極性溶媒と水の混合物において塩基性条件下でおこなわれる。前記式Iのアシル化剤は前記ペプチド又はタンパク質のアミノ基の数に関連してわずかな過剰量にて典型的には使用される。前記割合は典型的には前記ペプチドのアミノ基数の値を考慮して1:1~1:20と余分のアシル化剤、好ましくは1:1.2~1:5である。前記ペプチドが十分なN-アシル化であるか又は一部だけのN-アシル化であるかは使用したアシル化剤の量と前記反応条件に依存しうることは理解されるであろう。前記N-アシル化が実質的に化学量論的であることは好ましい。典型的には、非プロトン極性溶媒は無水テトラヒドロフランTHF、無水ジメチルホルムアミドDMF、アセトン、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシドDMSO、ジオキサン、ジメチルアセトアミド又はN-メチル-2-ピロリドン及びそれらの混合物から選ばれ、中でもジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、及びN-メチル-2-ピロリドンが好まれ、そしてN-メチル-2-ピロリドンが特に好まれる。前記非プロトン極性溶媒と水例えばN-メチル-2-ピロリドンと水の割合は典型的には1:10~10:1、とりわけ1:5~5:1、特に1:1~3:1である。前記温度は典型的には-10~50°Cの範囲、好ましくは0~25°Cの範囲に維持される。前記反応の円滑な進行のために前記溶媒混合物のpH値が7~14の範囲、例えば9~13、好ましくは9.5~12.5であることが重要である。収量及び純度に関する結果は、前記溶媒混合物のpH値が10~12の範囲である場合に一般的に至適である。望ましいpH値はアルカリ金属の水酸化物、例えば水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム、並びに/又は有機塩基、例えばトリアルキルアミントリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミンなどの添加によって得られる。典型的な例として、ステップaの反応は前記タンパク質と前記式Iのアシル化剤の1:1~1:5のモル比における使用によりおこなわれる。前記ペプチドは典型的には-10~30°C、例えば0~25°C、そしてpHをアルカリ金属水酸化物例えば水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムを用いて望ましいレベルに調整した水に事前に溶解されている。前記pH値は酸、例えば酢酸及び塩基、例えばトリアルキルアミンを用いてさらに調整されうるが、前記温度は好ましくは先の範囲内である。前記非プロトン極性溶媒又は溶媒混合物はその後に添加される。前記反応は、水と酸、例えばpH6.5~9.0までの酢酸の添加前、0.2~4時間、例えば0.2~1時間で典型的に得られる縮合HPLCによって観察されるを典型的には進行させる。前記産物は典型的にはHPLC又は等電点のpHにより沈澱させること又は精製の前に加水分解させることステップbによって分離され、そして精製される。R4が水素である前記式Iのアシル化剤を使用した場合、N-アシル化されたペプチド又は親油性の部分及び遊離カルボン酸基をもつタンパク質が直接的に得られる。よって、R4が水素である変異体は本発明の方法の好ましい態様を表す。あるいは、すなわち前記R4がC1-12-アルキル又はベンジルである場合、前記N-アシル化されたペプチドエステル又はタンパク質エステルは、N-アシル化されたペプチド又はN-アシル化されたタンパク質を得るために塩基性条件下にてケン化される。ケン化は典型的にはアルカリ金属水酸化物、例えばナトリウム又は水酸化カリウムの0.01~4.0M溶液中にておこなわれる。前記溶液のpHは典型的には10~14である。前記反応は典型的には0.1~12時間、好ましくは0.5~4時間、0~40°C、例えばおよそ室温にて進行させる。反応後、前記産物は、例えば等電点のpHでの沈澱及び/又は予備的なHPLCによって精製される。よって、R4がC1-12-アルキル又はベンジルである変異体は本発明の方法の他の好ましい態様を表す。本発明は以下の側面にも関する:側面1.N-アシル化ペプチドを得るためのペプチド又はタンパク質のアミノ基のアシル化方法であって、以下のステップ:a少なくとも1つの遊離アミノ基をもつペプチドを以下の一般式I:{式中、nは0~8であり;R1はCOOR4であり;R2は親油性部分であり;R3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表し;そしてR4は水素、C1-12-アルキル、及びベンジルから選ばれる。}により表されるアシル化剤と、塩基性条件下、非プロトン極性溶媒と水の混合物中で反応させ;及びbR4が水素でない場合、塩基性条件下、上記のアシル化されたペプチドエステル基COOR4をケン化する;を含む前記方法。側面2.R4が水素である、側面1に記載の方法。側面3.R4がC1-8-アルキル及びベンジルから選ばれる、側面1に記載の方法。側面4.前記R3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表す、請求項1~3のいずれかに記載の方法。側面5.前記非プロトン極性溶媒と水の混合物が1:5~5:1までのN-メチル-2-ピロリドンと水の混合物である、側面1~4のいずれかに記載の方法。側面6.ステップaにおける前記反応混合物のpHが9~13の範囲内である、側面1~5のいずれかに記載の方法。側面7.ステップaにおける前記反応混合物の温度が0~50°Cの範囲内である、側面1~6のいずれかに記載の方法。側面8.前記アシル化したペプチドエステルが10~14の範囲内のpH値においてケン化される、側面3~7のいずれかに記載の方法。側面9.R2がC3-39-アルキル、C3-39-アルケニル、C3-39-アルカジエニル、及びステロイド性残基から選ばれる、側面1~8のいずれかに記載の方法。側面10.以下の式I:{式中、nは0~8であり;R1はCOOHであり;R2は親油性部分であり;そしてR3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって、反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表す。}により表される化合物。側面11.nは0又は1そしてR3は、R3がそれに付着されているところのカルボキシル基と一緒になって反応性エステル又は反応性N-ヒドロキシイミドエステルを表す、側面10に記載の化合物。側面12.R2がC3-39-アルキル、C3-39-アルケニル、C3-39-アルカジエニル、及びステロイド性残基から選ばれる、側面10又は11に記載の化合物。出発物質の調製実施例1N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-ベンジルエステルの調製グルタミン酸α-ベンジルエステル4.75g、20.0mmolをN-メチル-2-ピロリドン100mlに20~25°Cにて溶解した。トリエチルアミン2.53g、25.0mmolと同時に1-ヘキサデカノイルベンゾトリアゾール7.15g、20.0mmolを加えた。前記反応混合物を20~25°Cにて22時間撹拌した。前記生成物溶液に対し0.2M塩酸250mlを加えた。前記生成物懸濁液を0°Cにて3時間冷却した。前記産物をろ過により分離し、水50ml×4により洗浄し、そして40°Cの減圧下において恒量まで乾燥した。収量:9.15g96の白色物質、90.0°Cピーク値における融解を示差熱分析器DSCによって測定した。実施例2N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-メチルエステルの調製実施例1の記載と類似した反応条件下において8.06g50.0mmolのグルタミン酸α-メチルエステルを使用して、N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-メチルエステルを調製した。収量:17.70g88の白色物質、95.4°Cピーク値における融解をDSCによって測定した。実施例3N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-ベンジルエステルγ-N-ヒドロキシサクシンイミドエステルの調製N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-ベンジルエステル23.78g、50.0mmolをテトラヒドロフラン200mlに20~25°Cにて溶解した。N-ヒドロキシサクシンイミド5.75g、50.0mmolと同時にジシクロヘキシルカルボジイミド10.32g、50.0mmolを加えた。前記反応混合物を20~25°Cにて20時間撹拌した。前記生成物懸濁液をろ過し、そして前記ろ液を減圧下の乾燥により蒸発させた。前記結晶性の残渣を40°Cにてアセトン100mlに溶解し、そしてろ過によって不純物を除いた。ろ液に対しn-ヘプタン300mlを加えた。前記生成物懸濁液を20~25°Cにて4時間撹拌し、その後0°Cにて1/2時間冷却した。前記産物をろ過により分離し、n-ヘプタン50ml×3により洗浄し、そして40°Cの減圧下において恒量まで乾燥した。収量:23.75g83の白色物質、98.6°Cピーク値における融解をDSCによって測定した。実施例4N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-メチルエステルγ-N-ヒドロキシサクシンイミドエステルの調製実施例3の記載と類似した反応条件下において8.00g20mmolのN-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-メチルエステルを使用して、N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-メチルエステルγ-N-ヒドロキシサクシンイミドエステルを調製した。収量:6.45g65の白色物質、106.0°Cピーク値における融解をDSCによって測定した。実施例5N-ヘキサデカノイルグルタミン酸γ-N-ヒドロキシサクシンイミドエステルの調製N-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-ベンジルエステルγ-N-ヒドロキシサクシンイミドエステル5.73g、10.0mmolをアセトン100mlに20~25°Cにて溶解した。10パラジウム含有カーボンペースト乾燥物として約0.25gを加えた。前記懸濁液を水素の消費がなくなるまで水素雰囲気下で撹拌した水素290ml、45分間。前記触媒をろ過によって除き、そして前記ろ液を20~25°Cにて減圧下の乾燥により蒸発させた。前記残渣を20~25°Cにてアセトン25mlに溶解し、そしてろ過によって不純物を除いた。ろ液に対しn-ヘプタン200mlを加えた。前記生成物懸濁液を20~25°Cにて1時間撹拌した。前記産物をろ過により分離し、n-ヘプタン50ml×2により洗浄し、そして40°Cの減圧下において恒量まで乾燥した。収量:4.20g87の白色物質、100.8°Cピーク値における融解をDSCによって測定した。アシル化されたGLP-1アナログの調製実施例6Arg34Lys26-[N-ε-γ-GluN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-37の調製Arg34-GLP-17-37等電点沈澱させたペプチドの凍結物質5.0g、約0.15mmolを水25mlに0~5°Cにて溶解した。前記溶液のpHを1.0M水酸化ナトリウム2.25mlの添加により12.5に調整した。2分後、N-メチル-2-ピロリドン50mlと1.0M酢酸1.25mlを温度を15°Cに保ちながら加えた。トリエチルアミン0.2mlそして同時にN-ヘキサデカノイルグルタミン酸γ-N-ヒドロキシサクシンイミドエステル97.0mg、0.20mmolを加えた。30分後15°Cの水50mlを加え、そしてpHを1.0M酢酸1.70mlの添加により8.0に調整した。収量:分析用RP-HPLCにより前記反応混合物がArg34Lys26-[N-ε-γ-GluN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-37をエリアにおいて77含有することを示した。前記産物の最終精製はカラムクロマトグラフィーによっておこなった。実施例7Arg34Lys26-[N-ε-γ-Glu-OMeN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-37の調製実施例6の記載と類似した反応条件下においてN-ヘキサデカノイルグルタミン酸α-メチルエステルγ-N-ヒドロキシサクシンイミドエステルを使用してArg34-LP-17-37をアシル化した。収量:分析用RP-HPLCにより前記反応混合物がArg34Lys26-[N-ε-γ-Glu-OMeN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-37をエリアにおいて64含有することを示した。前記産物は1M酢酸を用いて前記反応混合物のpHを6.0に調整することによって沈澱として分離できた。あるいは前記反応混合物は次の実施例8に記載のとおり直ちに使用できる。実施例8Arg34Lys26-[N-ε-γ-GluN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-37の調製実施例7において得られた産物を含む反応混合物を、1M水酸化ナトリウムを用いてpHを12~13に調整することによって塩基性加水分解に供した。反応混合物の温度を8~18°Cに維持した。2時間後前記反応を完了し、そして前記反応混合物のpHを1M酢酸の添加により7.45に調整した。収量:分析用RP-HPLCにより前記反応混合物がArg34Lys26-[N-ε-γ-GluN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-37をエリアにおいて65含有することを示した。前記産物の最終精製はカラムクロマトグラフィーによっておこなった。実施例9以下の:Arg26,34,Lys36-[N-ε-γ-GluN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-36、Arg26,Lys34-[N-ε-γ-GluN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-37、及びGly8,Arg26,34,Glu37,Lys38-[N-ε-γ-GluN-ヘキサデカノイル]-GLP-17-38の化合物は調製される実施例6の化合物に対するアナログであり、前記産物の最終精製はカラムクロマトグラフィーによっておこなわれる。"