"invitroで無蛍光活性化基質に対するサーチュインデアセチラーゼ活性を活性化する化合物を検出する方法であって、サーチュインデアセチラーゼを、候補化合物と、前記サーチュインのアセチル化ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質基質を含んでなる無蛍光活性化基質とで接触させること、前記候補化合物の存在下で前記無蛍光活性化基質に対するサーチュインデアセチラーゼ活性のレベルを検出すること、および前記候補化合物の存在下での前記無蛍光活性化基質に対するサーチュインデアセチラーゼ活性のレベルを、前記候補化合物の非存在下での前記無蛍光活性化基質に対するサーチュインデアセチラーゼ活性のレベルと比較することを含んでなり、前記候補化合物の非存在下での前記無蛍光活性化基質に対するサーチュインデアセチラーゼ活性のレベルと比較して、前記候補化合物の存在下での前記無蛍光活性化基質に対するサーチュインデアセチラーゼ活性のレベルが増加することが、前記化合物がサーチュイン活性化因子であることを示す、方法。前記サーチュインデアセチラーゼがSIRT1である、請求項1に記載の方法。前記サーチュインデアセチラーゼが、SIRT2、SIRT3、SIRT4、およびSIRT5からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。前記候補化合物が、蛍光基を含有するアセチル化ペプチドまたはポリペプチド基質のSIRT1活性化因子である、請求項1に記載の方法。前記蛍光基を含有するペプチド基質が、TAMRAペプチド:Ac-EEKビオチンGQSTSSHSKAcNleSTEGK5-TMREE-NH2である、請求項4に記載の方法。前記サーチュインデアセチラーゼを、NADの存在下で無蛍光活性化基質と候補化合物とで接触する、請求項1に記載の方法。前記サーチュインデアセチラーゼを、加水分解性NAD類似体の存在下で無蛍光活性化基質と候補化合物とで接触する、請求項1に記載の方法。前記無蛍光活性化基質が、ビオチン化ポリペプチドである、請求項1に記載の方法。前記無蛍光活性化基質が、desTAMRAペプチド:Ac-EEKビオチンGQSTSSHSKAcNleSTEGKEE-NH2である、請求項1に記載の方法。前記無蛍光活性化基質が、蛍光基TAMRAテトラメチル-6-カルボキシローダミンおよびAMC7-アミド-4-メチルクマリンを含んでいないアセチル化ペプチドまたはポリペプチドである、請求項1に記載の方法。前記無蛍光活性化基質が、Ac-RHKKAcF-NH2およびAc-RHKKAcW-NH2からなる群から選択されるアセチル化ペプチドである、請求項1に記載の方法。前記無蛍光活性化基質が、前記サーチュインのアセチル化ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質基質および活性化補助因子坦持アクセサリータンパク質を含んでなる、請求項1に記載の方法。前記活性化補助因子坦持アクセサリータンパク質が、DBC1乳癌1では欠失、HIC1癌1では過剰メチル化、AROSSIRT1の活性調節因子、およびCLOCKからなる群から選択される、請求項12に記載の方法。前記アセチル化タンパク質が、ヒストンH1、ヒストンH3、ヒストンH4、p53、p300、FOXO1、FOXO3a、FOXO4、p65、HIVTat、PGC-1α、PCAF、MyoD、PPARγ、およびKu70からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。前記サーチュインデアセチラーゼ活性のレベルが、NAD加水分解の速度を測定することにより検出される、請求項1に記載の方法。サーチュインデアセチラーゼ活性のレベルが、無蛍光活性化基質脱アセチル化の速度を測定することにより検出される、請求項1に記載の方法。前記化合物が、無蛍光活性化基質のSIRT1脱アセチル化の活性化因子である、請求項1に記載の方法。前記化合物が、下記式またはその塩を有し、式中、R1が、-CH23CH3、および-CH2CHCH32から選択され、かつR2が、-ピペリジンおよび-CH22-NH-CH3から選択される、請求項17に記載の方法。前記化合物またはその塩が、からなる群から選択される、請求項18に記載の方法。SIRT1活性化因子である候補化合物を選択すること、および前記SIRT1活性化因子を試験細胞と接触させ、前記試験細胞でのSIRT1活性化特異的変化を検出することを更に含んでなる、請求項1に記載の方法。前記SIRT1活性化特異的変化が、FGF21産生の増加である、請求項20に記載の方法。前記SIRT1活性化特異的変化が、LPS誘導性TNFα産生の減少である、請求項20に記載の方法。SIRT1活性化因子である候補化合物を選択すること、および前記SIRT1活性化因子を試験対象体に投与し、前記試験対象体でのSIRT1活性化特異的変化を検出することを更に含んでなる、請求項1に記載の方法。前記試験対象体が、糖尿病モデルマウスであり、前記SIRT1活性化特異的変化が、血糖の低下である、請求項23に記載の方法。前記試験対象体が、神経変性疾患モデルマウスであり、前記SIRT1活性化特異的変化が、神経変性疾患プロセスまたはマーカーの減少である、請求項23に記載の方法。前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症ALS、パーキンソン病、ハンチントン病、および多発性硬化症MSからなる群から選択される、請求項25に記載の方法。Ac-RHKKAcF-NH2およびAc-RHKKAcW-NH2からなる群から選択される構造式を有する無蛍光サーチュイン基質。式Iの化合物またはその塩。式IIの化合物またはその塩。式IIIの化合物またはその塩。式IVの化合物またはその塩。式Vの化合物またはその塩。式VIの化合物またはその塩。式VIIの化合物またはその塩。式VIIIの化合物またはその塩。式IXの化合物またはその塩。式Xの化合物。請求項28~37のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。追加の活性剤を更に含んでなる、請求項38に記載の医薬組成物。インスリン抵抗性、メタボリック症候群、糖尿病、またはそれら合併症を罹患しているか、または感受性である対象体を治療するための、あるいは対象体のインスリン感受性を増加させるための方法であって、請求項38に記載の組成物をその必要性のある前記対象体に投与にすることを含んでなる方法。式XXXIの化合物またはその塩。式中、XおよびYの一方は、-NH-C=O-R1または-C=O-NH-R1から選択され、XおよびYの他方はHであり、ここでR1は、フェニルまたは融合ヘテロ環から選択され、R1は、-C≡N、C1~C2フルオロ置換アルキル、および-C0~C2アルキル-飽和ヘテロ環から独立して選択される1~2個の置換基で置換されていてもよく、R1がフェニルである場合、R1は、-CH2-O-飽和ヘテロ環で置換されていてもよく、前記飽和ヘテロ環は、ピペリジン、ピロリジン、またはピペラジンから選択され、R1が融合ヘテロ環から選択される場合、前記融合ヘテロ環は、ベンゾ[d]チアゾールから選択され、また、R1は、-OCH3で置換されていてもよく、Z1およびZ2の一方はNであり、他方はCR2であり、ここでR2は、-NHC1~C3アルキル、-NHC1~C3アルキル-NCH32、-C0~C2アルキル-モルホリン、-C0~C2アルキル-ピペラジン、または-NC1~C4アルキル2から選択され、R2が、-C0~C2アルキル-飽和ヘテロ環である場合、前記飽和ヘテロ環は、モルホリンまたはピペラジンから選択される。以下のものからなる群から選択される式XXXIを有する、請求項41に記載の化合物またはその塩。および式XXXIIの化合物またはその塩。式中、R1は、-C0~C2アルキル-ピロリジンまたは-C0~C2アルキル-ピペラジンで置換されていてもよいフェニルであり、かつR2は、-C1~C3アルキルまたは-C1~C3アルキル-NCH32から選択される。以下のものからなる群から選択される式XXXIIを有する、請求項43に記載の化合物またはその塩。および式XXXIIIの化合物またはその塩。式中、R1は、-C0~C2アルキル-ピペラジンで置換されていてもよいフェニルであり、かつR2は、-C1~C3アルキルおよび-C1~C3-NCH32から選択される。以下のものからなる群から選択される式XXXIIIを有する、請求項45に記載の化合物またはその塩。および式XXXIVの化合物またはその塩。式中、Z1およびZ2の一方はNであり、他方はCR2から選択され、ここでR2は、-C0~C2アルキル-モルホリン、-C0~C2アルキル-ピペラジン、および-NC1~C42から選択され、R1は、-OCH3で置換されていてもよいフェニルおよびベンゾ[d]チアゾールから選択され、ここでR1は、-C≡N、C1~C2フルオロ置換アルキルから独立して選択される1~2個の置換基で更に置換されていてもよく、R1がフェニルである場合、R1は、-CH2-O-ピペリジンで更に置換されていてもよい。以下のものからなる群から選択される式XXXIVを有する、請求項58に記載の化合物またはその塩。および請求項41~48のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含んでなる医薬組成物。追加の活性剤を更に含んでなる、請求項49に記載の医薬組成物。インスリン抵抗性、メタボリック症候群、糖尿病、またはそれら合併症を罹患しているか、または感受性である対象体を治療するための、あるいは対象体のインスリン感受性を増加させるための方法であって、請求項50に記載の組成物をその必要性のある前記対象体に投与にすることを含んでなる方法。本発明は、今や一般的に記述されているが、以下の例を参照することによって、より容易に理解されるだろう。以下の例は、本発明のある態様および実施形態を説明する目的のために含まれているに過ぎず、いかなる点においても本発明を制限することは意図されていない。実施例1物質および方法ペプチドは全て、BioPeptide社サンディエゴ、カリフォルニア州が調製し、分析用HPLC分析により、純粋が少なくとも95であることが示された。ウシグルタミン酸デヒドロゲナーゼGDH、α-ケトグルタラート、NADHおよびNADは、SigmaChemicalCompany社製だった。全長ヒトSIRT1および生物物理学的研究に使用される切断型SIRT1183~664は、以前に記述されているように調製し、同等の動力学的特性を有することが示されたMilneetalNature450712716。ニコチンアミダーゼPNC1は、Denuおよび同僚らSmithetalAnalBiochem394101109により記述されるように調製した。実施例2STACの構造および合成図5に関連して使用される化合物1~20の構造は、化合物表に示されており、21~26の構造は、表1ならびに図9および11に示されている。10、11、および12の実験手順および特徴付けデータは、本明細書に見出すことができる。SRT1460、SRT1720、SRT2183は、文献の手順に従って調製しMilneetalNature450712716、3、23、および24も、文献の手順に従って調製したVuetalJMedChem。化合物25は、構造的に類似した化合物用に記載の手順に従って調製したVuetalJMedChem。化合物3Nunesetal。国際公開第2007/019346号、4Bemisetal。国際公開第2008/156866号、26、13、および14Vuetal。国際公開第2010/003048号は、関連特許に記載の手順に従って調製した。7の合成は、本明細書に記載されている。実施例3等温滴定熱量測定実験ITC実験は、137mMNaCl、2.7mMKCl、1mMMgCl2、2mMTCEP、5容積/容積グリセロール、および50mMHEPES-NaOH、pH7.3で構成される緩衝液中で26°Cにて、VP-ITCシステムまたはiTC200システムMicroCal社製のいずれかを使用して実施した。SIRT1183~664を精製し、緩衝液に対して透析し、遠心分離し、実験前に脱気した。ペプチドおよび化合物を、最終透析緩衝液に溶解し、それらのpH値をタンパク質溶液のpHと一致するように調整した。VP-ITCシステムで実施したSTAC/TAMRAペプチド相互作用を特徴付ける典型的な結合実験では、1mMTAMRAペプチドを、8μLの35回等量で最初のインジェクションを除く、最初のインジェクションは2μLだった、100μMSTACを含有する1.47ml試料セルにインジェクトした。iTC200システムを使用してこの相互作用を特徴付けるために、1mMTAMRAペプチドを、2μLの20回等量で最初のインジェクションを除く、最初のインジェクションは0.5μLだった、100μMSTACを含有する0.202mL試料セルにインジェクトした。溶解度が不良なSTACの場合、それに応じて濃度を調整した。SRT1460とTAMRAペプチドとの相互作用を特徴付けるために、5mMTAMRAペプチドおよび0.5μMSRT1460を使用して、より高品質のデータを取得した。VP-ITCシステムでSTACとSIRT1183~664との相互作用を特徴付けるために、100μM酵素を、8μLの35回等量で最初のインジェクションを除く、最初のインジェクションは2μLだった、10μMSTACを含有する1.47mL試料セルにインジェクトした。iTC200システムでの典型的な結合実験では、100μM酵素を、2μLの20回等量で最初のインジェクションを除く、最初のインジェクションは0.5μLだった、100μMSTACを含有する0.202mL試料セルにインジェクトした。全ての場合で、データは、希釈熱を補正し、化学量論n、反応のエンタルピーΔH、および計算した結合定数Kaを用いた単一部位結合モデルを使用して、ITCv7.0383のOriginMicrocal社製で非線形最小二乗法ルーチンを使用してフィッティングした。結果SIRT1活性化に関する本発明者らの研究の課程で、本発明者らは、幾つかのSTACがTAMRAペプチドに結合して、活性化因子:基質複合体を形成することを見出した。この複合体の機械論的重要性を探究するため、TAMRAペプチドに対するSTAC結合のKd値を、効力がEC1.5=0.05から≧100μMの範囲だった20個の活性化因子について、ITCを使用して決定したこれら化合物の構造は、表6を参照。図4には、代表的なITC滴定が示されている。4の滴定が図4Aに示されており、この滴定では、TAMRAペプチドに対する検出可能な結合は示されていない。これら実験条件下では、この化合物は、TAMRAペプチドに結合する場合でも、控えめに見積もって100μMを超える場合があるKd値で結合する。図4Bは、7の滴定であり、36μMのKdでTAMRAペプチドに結合することが示されている。このKd値は、0.5μMのKx値よりも72倍高い7の活性化滴定曲線は、図4Bの挿入図を参照。KdとKxとの間にこのような矛盾があることは、7による活性化が、基質との結合に依存しないことを示唆する。図2Aの機序は、図3のシミュレーションにより示されるように、EC1.5値が、Kd値に依存するはずであることを予測する。これを調査するために、本発明者らは、EC1.5をKdの関数としてプロットした図5。このプロットに見られるように、活性化効力と、TAMRAペプチドに対するSTACの親和性との間には相関性が存在しない。灰色で強調されているのは、2.5から100μMを超える範囲のKd値を有するが、約0.3μMの同じEC1.5値を有する一連の化合物である。これにより、TAMRAペプチドのSIRT1触媒性脱アセチル化を活性化するSTACの能力が、この基質に対するSTACの親和性と無関係であることが明白に示される。恐らくは、ある構造クラスのSTACの場合、EC1.5とKdとの間に相関性が存在する可能性があると推測することができる。そのような相関性は、図5の10と20とを接続する直線を規定することになる。この直線上の特定の化合物の構造を検討することにより、それらが、図5の化合物を含んでなる3つの構造クラス全てを表わすことが明らかにされる。したがって、本発明者らが、STAC構造クラスにより相関性の可能性を解析しようとする場合でもさえも、EC1.5とKdとの間には相関性が存在しない。SIRT1に対する活性化因子の結合は、基質増強と一致しないが、酵素アロステリズムと一致する。試験したおよそ20個の化合物表6を参照の中で、ITCを使用してSIRT1183~664と3個のSTACとの相互作用を検出することができた。本発明者らは、4、13、および14が、それぞれ3.0、0.32、および0.43μMと等しいKx値で結合することを見出した要約および構造については、表1を参照。代表的なものとして、14の実験データが図8Aに示されている。この化合物の場合、本発明者らは、蛍光結合実験も実施することができた。本発明者らは、450nmにおけるこの化合物の発光蛍光が、SIRT1の濃度増加と共に減少したことを観察した図8B。これらデータの定量化により、0.27μMのKx値の計算が可能になり図8C、それはITC測定と一致した。図2Aの機序は、SIRT1と活性化因子との複合体形成の可能性を排除していることに留意されたい。対照的に、図2Bのアロステリック機序は、そのような複合体形成を含んでいるが、必要とするわけではない。試験した20個のSTACうち3個のみがSIRT1に結合することができ、したがって、この機序と一致する。表2には、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-Xに対するSTAC結合のKd値が要約されている。SRT1460を除き、化合物の溶解度は、10DMSOを含有する溶液でこれらITC実験を行なうことを必要としたことに留意されたい。これらSTACと、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-Phe-NH2およびAc-Arg-His-Lys-LysAc-Trp-NH2との相互作用は、C末端アミノ酸のフェニルおよびインドール部分によるものであり、したがって、疎水性効果により主導される可能性が高いことを考慮すると、これらKd値は、活性化アッセイが実行されるDMSO濃度である1DMSOの溶液中でのKd値よりも大きい可能性がある。アミドおよびAMC誘導体の場合、4個のSTACのいずれとも検出可能な相互作用は存在しない。重要なことには、10は、AMC誘導体の脱アセチル化を活性化する。この基質に対する10の結合が存在しないことと合わせると、基質増強による活性化を除外することができる。X=PheNH2の場合、SRT1460に対する結合は存在しないが、基質の脱アセチル化の活性化は存在する。対照的に、10は、この基質に結合するが、その脱アセチル化を活性化しない。最後に、X=TrpNH2の場合、SRT1720は、結合するが活性化せず、10は、結合し、かつ活性化する。TAMRAペプチドの脱アセチル化の活性化と同様に、STACの活性化能力と基質に対するその親和性との間に相関は存在しない。実施例414とSIRT1との相互作用に関する蛍光結合実験SIRT1183~664を、137mMNaCl、2.7mMKCl、1mMMgCl2、2mMTCEP、5容積/容積グリセロール、および50mMHEPES-NaOH、pH7.3で構成される緩衝液に対して透析した。14を、最終透析緩衝液に溶解し、そのpH値をタンパク質溶液のpHと一致するように調整した。様々な濃度の酵素の非存在下または存在下における14の蛍光発光スペクトルを、315nmで励起させてSpectraMaxM5でモニターした。450nmでの蛍光強度変化を、SIRT1183~664の濃度に対してプロットし、標準結合数式を使用してフィッティングした。実施例5desTAMRAペプチドを使用した、Sirtris化合物コレクションのスクリーニング本発明者らのおよそ5,000個のSIRT1活性化因子のコレクションを、BioTrove質量分析システムを使用して、以前に記述されているようにスクリーニングしたMilneetalNature450712716。このスクリーリングでは、[SIRT1]o=5nM、[desTAMRAペプチド]o=1μM=Km/10、および[NAD]o=30μM=Km/10である。化合物は、10μMで存在し、アッセイは、150mMTris、5mMDTT、1DMSO、および0.025BSAを含有するpH7.4緩衝液中で実施した。結果Sirtrisの最初の活性化因子リード構造物を、基質としてTAMRAペプチドを用いた蛍光偏光アッセイを使用したハイスループットスクリーニング戦略で特定したMilneetalNature450712716。この20量体は、SIRT1の天然基質である、p53のLys382付近を中心とする。p53に対するTAMRAペプチド配列の修飾を、特にこのアッセイ用に製作したMilneetalNature450712716;MarcotteetalAnalBiochem3329099。最初のスクリーニングヒットの特徴付けおよびその後の全研究は、TAMRAペプチドおよび質量分光法に基づくアッセイを使用して実施したMilneetalNature450712716。これら最初の活性化因子リード化合物付近で構造活性相関が現れたため、これら化合物が、TAMRA部分を欠如したTAMRAペプチド類似体の脱アセチル化を活性化することができるか否かを確かめることが興味深いものとなった。MilneらNature450712716により報告されたものを含む、本発明者らが最初に試験した幾つかのSTACのうち、desTAMRAペプチドの脱アセチル化を活性化することができたものはなかった。これらの結果は、PacholecらJBiolChem28583408351により最近報告された結果と一致しており、STACによるSIRT1の活性化は、基質の構造的特徴に強く依存することを示す。しかしながら、PacholecらJBiolChem28583408351および他者らKaeberleinetalJBiolChem2801703817045;BeheretalChemBiolDrugDesは、基質構造に対する活性化の依存性を、基質関連アーチファクトおよびSIRT1活性化の間接的機序を反映すると解釈しているが、本発明者らは、これらの結果がSIRT1のアロステリック制御の重要な特徴を明らかにしていると考える。試験した幾つかのSTACの中には、desTAMRAペプチドの脱アセチル化を活性化したものはなかった。この知見の一般性を試験するために、本発明者らは、本発明者らの5,000個を超えるSTACのコレクションを、このペプチドの脱アセチル化を活性化するそれらの能力についてスクリーニングした。このスクリーニングの結果は、3つの構造的に関連するSTAC:10、11、および12の特定だった。3つの化合物の活性化滴定曲線は、図6に示されており、3つ全てが、それぞれ約2μMおよび2.3のEC50およびRVmax値で、desTAMRAペプチドのSIRT1触媒性脱アセチル化を活性化することを理解することができる。これらの結果により、TAMRA部分を欠如するペプチドは、STACによる活性化を依然として支援することができることが示される。desTAMRAペプチドは、活性化を依然として支援するが、LysAcのN末端側にビオチン部分が残留する。これは、ビオチンが単独で活性化を支援することができるか否かに関する疑問に答えていない。この疑問に答えるために、本発明者らは、desビオチン,TAMRAペプチドに対する10、11、および12の効果を検討し、いずれもこの基質の脱アセチル化を活性化しないことを見出した。これは、脱アセチル化がSTACにより活性化されるには、ある程度の立体的大きさを有する化学部分がペプチド基質に存在することが必要であることを示唆する。実施例6STACとSIRT1との相互作用の動力学的研究STACとSIRT1との相互作用を決定するために、2つの動力学的方法を使用した。一方の方法を、TAMRAペプチド、desTAMRAペプチド、desビオチン,TAMRAペプチド、およびp53-20量体について使用し、ペプチド反応産物を検出するためには、以前に記述されている質量分光法使用したMilneetalNature450712716。他方の方法を、基本構造Ac-Arg-His-Lys-LysAc-Xのペプチドで使用し、以前に報告されている連続した酵素結合法を使用したSmithetalAnalBiochem394101109。この方法では、SRT1産物ニコチンアミドが、PNC1の作用により、まずニコチン酸およびアンモニアに変換され、その後アンモニアは、α-ケトグルタラートをグルタメートに変換するためにGDHにより使用される。この反応は、NADHのNADへの酸化と共に生じ、340nmの吸光度の変化Δε340=-6,200M-1cm-1を伴う。活性化因子を特徴付けるために使用される動力学的実験は、25°Cに維持された水ジャケット付の8セルチェンジャーを装備したPerkinElmer社製Lambda25型分光光度計で実行した。典型的な動力学的実験では、SIRT1を除く反応溶液の全成分を、1mLキュベットに添加し、熱平衡に到達させた。結合系成分の終濃度は、以下の通りだった:1μMPNC1、0.23mMNADH、3.4mMα-ケトグルタラート、および20U/mLウシGDH。この溶液も、本文中に示されている濃度のペプチド基質、NAD.0.、および活性化因子を含有していた。最終DMSO濃度を1で一定に維持し、これら試験で使用した緩衝液は、50mMHEPES、150mMNaCl、pH7.5だった。系が熱平衡に到達する間に、吸光度をモニターして、バックグラウンド速度の正確な推定を準備し、それをSIRT1の添加後の反応速度から差し引いた。結果表3には、この研究で使用した基質の定常状態動力学的パラメーターが要約されている。この表に報告されているパラメーターは全て、PNC1-GDH結合アッセイを使用して決定した。また、4つの20量体の動力学的パラメーターを、MilneらNature450712716により最初に記述された質量分光法に基づくアッセイを使用して推定した。それらは、表3に報告されている動力学的パラメーターと一致する。STACがどのようにSIRT1と相互作用するかに対して、基質構造が強い影響を及ぼすことを示す上記の研究により動機付けられ、XがNH2、AMC、PheNH2、およびTrpNH2であるAc-Arg-His-Lys-LysAc-Xの脱アセチル化をSTACがどのように達成するかを調査した。Ac-Arg-His-Lys-LysAc-AMC別名Fluor-de-Lys商標登録、Biomol社製は、レスベラトロールが特定および特徴付けられたアッセイで使用された基質でありHowitzetalNature425191196、SIRT1の活性化因子および阻害剤のスクリーニングに広く使用されている。表4には、単一濃度の22、および5つの基質の脱アセチル化に対する、MilneらNature450712716で発表された3つのSTACの効果が要約されている。本発明者らが4つの20量体で観察したのと同様に、特定のSTACが脱アセチル化に対して示す効果は、基質の構造に依存する。例えば、SRT1460は、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-Phe-NH2およびAc-Arg-His-Lys-LysAc-Trp-NH2の脱アセチル化を活性化するが、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-AMCの脱アセチル化を阻害し、22は、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-AMCおよびAc-Arg-His-Lys-LysAc-Trp-NH2の脱アセチル化を活性化するが、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-NH2の脱アセチル化を阻害する。これら観察の幾つかを、完全な滴定曲線で更に調査した。図10Aから、本発明者らは、22が、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-AMCおよびAc-Arg-His-Lys-LysAc-Trp-NH2の脱アセチル化を用量依存的様式で活性化することを理解する。同様に、図10Bでは、SRT1460は、Ac-Arg-His-Lys-LysAc-Phe-NH2およびAc-Arg-His-Lys-LysAc-Trp-NH2の脱アセチル化を用量依存的に活性化する。これらの結果は、非常に重要であり、STACが、天然アミノ酸のみを含んでなるペプチド基質の脱アセチル化を加速することができることを示している。実施例7活性化データの基本的処理活性化因子滴定を、相対速度つまり、活性化因子の非存在下での速度voに対する活性化因子Xの存在下での速度Vxの比率対活性化因子の初期濃度[X]oとしてプロットし、非線形最小二乗法により、数式1の酵素活性化の機序非依存的数式にフィッティングした:式中、RVmaxは、最大相対速度つまり、無限[X]oにおけるvx/voであり、EC50は、vx/vo=RVmax-1/2である場合の活性化因子濃度である。EC50は、触媒および活性化の両方の動力学的機序および基質の濃度の関数である。その不溶性および効力により、RVmaxおよびEC50を正確に推定するのに十分な程度に高い濃度を達成することが妨げられた活性化因子の場合、活性化因子の効力は、1.5倍の活性化を達成するのに必要とされる活性化因子の濃度であるEC1.5として表わすことができる。EC1.5は、以下の数式と等しいことを示すことができ、したがって、これは、活性化因子の効力を反映し、RVmaxおよびEC50の両方に依存する。RVmaxがほぼ同じである一連の活性化因子の場合、比率EC1.5/EC50は、この一連の活性化因子の全てのメンバーで類似することになり、したがって、EC1.5EC50のいずれかを、活性化因子の効力の指標として使用することができる。EC1.5の逆数は、活性化因子の効力の直接的指標であり、以下の数式と等しい:EC1.5-1は、標準的定常状態酵素動力学のVmax/Kmと類似していることを理解することができる。実施例8活性化因子:基質複合体の形成による酵素活性の動力学的モデル図2Aの機序の速度則は、迅速平衡化を仮定して導き出した数式4の表現から開始して導き出すことができる。基質濃度項は、総基質ではなく、遊離基質に対応することに留意されたい。これは、この機序では、X:Sが、[S]o、[X]o、およびKdに応じて、総基質のかなりの部分を占める場合があるからである。総基質および遊離基質の点で速度則を表現するために、数式4を、数式5に示されているように書き直すことができる。この展開は、本発明者らが、[S]o、[X]o、およびKdの点で[S]を表現することができれば、完成することになる。これは、Kdの定義から開始し、数式6に示されている:無論、数式6は、二次方程式として表現することができ:これは、以下の解を有する。結果SIRT1活性化の間接的機序の中心的特徴は、X:S、活性化因子と基質との複合体である図2Aを参照。この機序を検討すると、活性化はX:S形成により主導されることが示され、それは、より低いKd値を示すX:S複合体が、より強力な活性化をもたらすはずであることを意味する。したがって、本発明者らは、図2Aの機序の場合は、EC50とKdとの間に正の相関性があると予想するべきである。これを試験するため、本発明者らは、数式8の遊離基質の表現、および式の両側を対照速度vo/[E]o=kc[S]o/km[S]oで除算して、相対速度vx/voの表現を得た改良型の数式5を使用して、活性化因子滴定曲線をシミュレートした。これら曲線は図3に示されており、以下のパラメーター指定を用いて生成した:Kmには、数値5μMを割り当て、このKmはTAMRAペプチドのKmであり;STACによる活性化は、主にKm低下の結果であり、kcには変化がほとんどないかまたは全くないことが観察されたため、γには1の値を割り当て;Km,xには、Kmよりも20倍小さい0.25μMの値を割り当て、STACによるSIRT1活性化が主にKmの低下に起因するという実験的観察をここでも重視した。[S]o=Km/10=0.5μMとし、これは、MilneらNature450712716およびPacholecらJBiolChem28583408351の両方の研究で使用された濃度である。最後に、Kdは、3から300μMまで変動させ、この範囲は、STACとTAMRAペプチドとの相互作用について測定された値の範囲を包含する。この機序の場合に予想されるように、シミュレーションは、EC50がKdと正相関することを示す。実施例9アロステリック機序による酵素活性化の動力学的モデル図2Bの機序の速度則は、迅速平衡化を仮定して導き出すことができ、数式9に示されている。式中、である。結果基質susbtrate増強が、10またはSRT1460によるTAMRAペプチドのSIRT1触媒性脱アセチル化の活性化を説明することができるか否かを決定するために、図2Aの間接的機序の妥当性を評価した。化合物10およびSRT1460が、本研究におけるSTACの基質親和性の2つの極値、2.5および140μMのKd値をそれぞれ示すため、化合物10およびSRT1460を選択した。図6は、10によるSIRT1の活性化の滴定曲線を示す。[S]oを0.5μMの実験値に設定し、Kmを5μMに制限して、データセットを数式5にフィッティングすると、残りのパラメーターの最適フィッティング推定が以下のように算出された:Kd=53±8μM、km,x=0.035±0.011μM、およびγ=0.69±0.08。直ちに明らかになることは、Kdの最適フィッティング値が、実験的に測定された2.5μMのKd値よりも20倍高いということである。Kdを2.5μMに制限すると、非線形最小二乗法フィッティングは収束せず、Kd=2.5μMを示すSTACのデータを説明することができるkm,xおよびγの値が存在しないことを示した。本研究におけるSTACのKdの他方の極値は、SRT1460で生じ、140μMのKd値を示す。図2Aの機序がそのような活性化因子を説明することができるか否かを決定するために、本発明者らは、MilneらNature450712716に報告されている活性化滴定曲線を数式5の表現にフィッティングした。この曲線は、図7Aに再現されている。10の滴定曲線とは対照的に、これらのデータは、図2Aの機序の速度則にフィッティングすることができた。このフィッティングでは、以下の制限を使用した:Kd=140μM、実験的に決定された値;[S]o=0.5μM、実験で使用した濃度;およびKm=14.5μM、実験的に決定された値つまり、図7Bからの対照。これら制限を用いて、本発明者らは、Km,x=90nMおよびγ=0.20であることを見出した。図2Aの機序が、SRT1460の場合に、上記の分析が示唆するように実際に機能するか否かを確かめるために、本発明者らは、初速度が、幾つかの一定濃度のSRT1460で、基質濃度の機能として決定された別のタイプの活性化実験のデータを検討した。図2Aの機序がSRT1460の場合に成り立つとすれば、2つのタイプの実験のパラメーター推定は同じでなければならない。本発明者らが検討したデータセットも、MilneらNature450712716に由来するものであり、図7Bに示されている。このデータを数式5にグローバルフィッティングして、以下の結果を得た:Km,x=1.0±0.1μMおよびγ=1.53±0.07。このフィッティングでは、Kdには、実験的に決定された140μMの値を割り当て、KmおよびVmaxには、[SRT1460]=0を用いた曲線からの値を割り当てた表5を参照。2つのタイプの活性化実験には、活性化パラメーターkm,xとγの間に非常に大きな矛盾があることに留意されたい。Km,x=0.090μMおよびγ=0.20が活性化因子滴定曲線の分析から導き出され、km,x=1.0およびγ=1.53が、一定濃度の活性化因子でのミカエリス-メンテンプロット分析から導き出された。したがって、図2Aの機序は、SRT1460による活性化を、内部的に一貫した結果に結び付く様式で説明することができない。酵素アロステリズムは、SRT1460によるTAMRAペプチドのSIRT1触媒性脱アセチル化の活性化を説明することができる。活性化のアロステリック機序の速度則を使用して、図7Bのデータをフィッティングすると、以下の最適フィッティングパラメーターが得られる:Kx=8.7±0.8μM、β=0.26±0.02、およびγ=1.48±0.04。数式9およびこれらパラメーターを使用して引かれた直線は、データに対して優れたフィッティングを示す。これら直線は、個々のフィッティングおよび表5のパラメーター推定から引いた直線と一致する。STACによる活性化が、ペプチド配列に依存し得る可能性、および天然基質に対応する配列を有するペプチドにのみ生じ得る可能性を検討するために、本発明者らは、p53-20量体のSIRT1触媒性脱アセチル化を活性化するそれらの能力について、10、11、および12を試験した。重要なことには、これらの3つの化合物は、この反応を阻害する図9を参照。これらの結果は、非活性部位リガンドが活性化因子または阻害剤として作用するか否かが、比率γ/βにより決定される図2Bのアロステリック機序と一致している。すなわち、活性化は、γ/β>1の場合に観察され、阻害は、γ/β<1の場合に観察される。図2Aの機序には、酵素と調節因子との複合体の形成に対する準備がないため、阻害を説明することができないことに留意されたい。基質枯渇による阻害つまり、X:Sは基質ではなく、基質の捨て場sinkとして作用するに過ぎないが、形式的には可能であるが、PacholecらJBiolChem28583408351が指摘するように、STACが、TAMRAまたは他の大きい基を有していないペプチドには結合しないため、基質枯渇による阻害は除外されることに留意すべきである。実施例10SIRT1の構造モデルSwiss-PdbViewer4.0.1GuexandPeitschElectrophoresis1827142723を使用し、ACS2ペプチドが結合したSIRT3構造PDBid.3GLRJinetalJBiolChem2842439424405をテンプレートとして用いてSIRT1相同性モデルを作成した。Ac-Arg-His-Lys-LysAc-Trp-NH2ペプチドを、A.フルギダスA.FulgidusSIR2構造PDBid.1MA3AvalosetalMolCell10523535と結合したp53ペプチド、およびSIRT3構造PDBid.3GLRJinetalJBiolChem2842439424405に結合したACS2ペプチドに基づいてモデル化した。実施例112-ブチル-6-ピペリジン-4-イルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドXの調製:ステップ12-ブチル-6-ヒドロキシピリミジン-4-カルボキシル酸の合成:21.0g100mmolのオキサロ酢酸ジエチルナトリウム塩に、80mLの水を添加した。この撹拌懸濁液に、16mLの6.25M100mmolNaOHaq.を周囲温度にて1分間にわたって添加した。微量の不溶解オキサロ酢酸エステルしか残らなくなるまで、混合物を10分間撹拌し、オレンジ色の溶液を得た。これに、13.9g100mmoln-ペンタンアミジン塩酸塩の20mL水溶液を添加した。反応をpH計でモニターし、必要に応じて、追加の6.25MNaOHを添加して、pHを10~11に維持した。周囲温度で22時間撹拌した後、混合物を氷浴で冷却し、その後pH=2になるまで12MHClを添加し、白色沈殿を得た。これをろ過し、50mLの水で洗浄し、その後フィルター上で1時間乾燥した。白色固形物を50mLのヘプタンに懸濁し、ディーン-スタークトラップを用いて、水がそれ以上トラップに収集されなくなるまで、1barで蒸留した。懸濁液を冷却し、ろ過し、フィルター上で乾燥して、8.13g41の2-ブチル-6-ヒドロキシピリミジン-4-カルボキシル酸を得た。C9H12N2O3のMSESI計算値:196;測定値:197[MH]。ステップ22-ブチル-6-クロロピリミジン-4-カルボニルクロリドの合成:5.0g25.48mmolの2-ブチル-6-ヒドロキシピリミジン-4-カルボキシル酸に、35mLのオキシ塩化リンを添加した。反応を105°Cで1時間撹拌し、その後減圧下で濃縮した。暗色残渣を50mLヘプタンに懸濁し、その後減圧下で濃縮して、残りのオキシ塩化リンのほとんどを除去した。次に、残渣を100mLのヘプタンに懸濁し、水で3×25mL、その後ブライン1×25mLで抽出した。有機層をMgSO4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して、5.1g86の2-ブチル-6-クロロピリミジン-4-カルボニルクロリドを得た。C9H10Cl2N2OのMSESI計算値:233;測定値:234[MH]。ステップ36-ブロモメチル-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジンの合成:以前に公開されている国際公開第2007/019346の手順に従って調製した。ステップ4tert-ブチル4-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートの合成:2.73g13.56gのtert-ブチル4-ヒドロキシピペリジン-1-カルボキシラート、4.75g13.56mmolの6-ブロモメチル-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン、230mg0.68mmolのテトラブチルアンモニウム重硫酸塩、および5.42g135.6mmolの水酸化ナトリウムの混合物に、15mLのトルエンおよび5.4mLの水を添加した。2つの層をよく混合するのに十分な速度で周囲温度にて反応を撹拌した。15時間後、反応を100mLの1MHClaq.で希釈し、その後酢酸エチル3×25mLで抽出した。混合した酢酸エチル層を、水1×25mLおよびブライン1×25mLに戻して抽出し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮して、オレンジ色油状物にした。これを、中圧シリカゲルクロマトグラフィー240gのプレパックカラムで精製し、50酢酸エチル:ヘプタンの定組成混合物で溶出した。tert-ブチル4-ヒドロキシピペリジン-1-カルボキシラートおよび産物が共溶出した。産物を含有する画分を貯留し、濃縮し、その後粗産物を20mLの高温酢酸エチルに溶解し、等容積のヘプタンで希釈した。tert-ブチル4-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートを結晶化して、3.64gの黄色固形物を得た。509mgの第2の生産物は、第1の生産物と同様に純粋だった。合計4.15g65C23H26N4O5SのMSESI計算値:470;測定値:471[MH]。この基本手順を使用し、適切なヒドロキシル成分を選択することにより、様々な2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン誘導体を合成することができる。ステップ5tert-ブチル4-2-2-アミノフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートの合成:3.64g7.74mmolのtert-ブチル4-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートに、2.13g38.7mmolの鉄粉末、497mg9.23mmolの塩化アンモニウムを添加し、その後20mLのイソプロパノールおよび4mLの水を添加した。反応を還流で1.75時間加熱し、その後4mLの4MNaOHaq.を添加した。混合物を還流で5分間加熱し、その後ろ過した。固形物を50mLのCH2Cl2と共に10分間混合し、その後混合物をろ過した。水性イソプロパノール混合物を減圧下で濃縮して、ほとんどのアルコールを除去し、その後残りの溶液を15mLの水で希釈した。水性懸濁液をCH2Cl2ろ過液と共に震とうし、その後ろ紙でろ過した。その後、CH2Cl2層を、水1×15mL、2MNaOHaq.1×15mL、およびブライン1×15mLで抽出し、その後減圧下で濃縮して泡状物にした。それを、30mL酢酸エチルおよび30mLペンタンの混合物に溶解し、その後2MNaOH3×15mLおよびブライン1×15mLで抽出し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮して黄色固形物にした。粗産物を15mLのCH2Cl2に懸濁し、その後120gのシリカゲルMPLCカラムに負荷し、40-50ペンタン:酢酸エチル勾配で溶出した。産物を含有する画分を濃度した後、65mLの酢酸エチルから再結晶して、795mg23のtert-ブチル4-2-2-アミノフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートを得た。C23H28N4O3SのMSESI計算値:440;測定値:441[MH]。ステップ6tert-ブチル4-2-2-2-ブチル-6-クロロピリミジン-4-カルボキサミドフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートの合成:795mg1.80mmolのtert-ブチル4-2-2-アミノフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートの8mLCH2Cl2溶液に、0.45mL3.2mmolのトリエチルアミンを添加し、その後505mg2.17mmolの2-ブチル-6-クロロピリミジン-4-カルボニルクロリドの2mLCH2Cl2溶液を添加した。1.25時間後、反応を30mLのメタノールで希釈して、結晶性沈澱を得た。沈殿物をろ過し、15mLのメタノールで洗浄し、フィルター上で乾燥して、tert-ブチル4-2-2-2-ブチル-6-クロロピリミジン-4-カルボキサミドフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラート1.04g91を得た。C23H28N4O3SのMSESI計算値:440;測定値:441[MH]。この基本手順を使用し、適切な酸塩化物と結合させることにより、3-2-メチルアミノエチルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルベンズアミドおよび3,4-ジメトキシ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルベンズアミドを調製した。ステップ4でジメチルアミンと結合させることにより、N-2-6-ジメチルアミノメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルキノキサリン-2-カルボキサミドを、同様にこの経路で調製した。ステップ7tert-ブチル4-2-2-6-1-tert-ブトキシカルボニルピペリジン-4-イルアミノ-2-ブチルピリミジン-4-カルボキサミドフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートの合成:709mg1.11mmolのtert-ブチル4-2-2-2-ブチル-6-クロロピリミジン-4-カルボキサミドフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートおよび267mg1.33mmolのtert-ブチル4-アミノピペリジン-1-カルボキシラートの混合物に、7mLのDMSOおよび0.40mL2.24mmolのN,N-ジイソプロピル-N-エチルアミンを添加した。混合物を、N2下で4時間100°Cに加熱した。反応を1HNMRによりモニターした。反応の等量を取り出し、CDCl3に溶解し、その後6ppmのダウンフィールド領域の共鳴を観察した。出発物質が消費された後、反応を35mLの水で希釈して、顆粒状沈殿物を得た。これをろ過し、25mLの水で洗浄して、淡褐色固形物を得た。粗固形物を、30mLのイソプロパノールから再結晶し、その後産物を60mLの冷却イソプロパノールで洗浄して、674mg76のtert-ブチル4-2-2-6-1-tert-ブトキシカルボニルピペリジン-4-イルアミノ-2-ブチルピリミジン-4-カルボキサミドフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートを得た。C42H56N8O6SのMSESI計算値:801;測定値:802[MH]。ステップ82-ブチル-6-ピペリジン-4-イルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドXの合成:600mg0.75mmolのtert-ブチル4-2-2-6-1-tert-ブトキシカルボニルピペリジン-4-イルアミノ-2-ブチルピリミジン-4-カルボキサミドフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-6-イルメトキシピペリジン-1-カルボキシラートに、5mLのトリフルオロ酢酸を、激しい気体発生を制御するためにゆっくりと添加した。溶液を周囲温度で10分間撹拌し、溶媒を50°Cにて減圧下で除去した。残渣を12mLの飽和NaHCO3aq.で希釈し、pH=8の油状懸濁液を得た。これを、80°Cで60分間撹拌および加熱し、その後周囲温度に冷却して、淡黄色沈殿物を得た。沈殿物をろ過し、その後水に懸濁し、再びろ過した3×20mL。湿潤固形物をフィルター上で18時間吸引することにより乾燥して、364mg81の2-ブチル-6-ピペリジン-4-イルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドを得た。C32H40N8O2SのMSESI計算値:600;測定値:601[MH]。実施例122-イソブチル-6-ピペリジン-4-イルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドXIの調製:ステップ6で6-クロロ-2-イソブチルピリミジン-4-カルボニルクロリドを代用することにより、2-ブチルピリミジン類似体の場合と同様の手順で調製した。イソバレリルアミジン塩酸塩から開始し、2-ブチル-6-クロロピリミジン-4-カルボニルクロリドについて記述されているのと同じ2ステップ手順を使用して、酸塩化物を調製した。最終産物を、逆相HPLCで精製し、その後、産物を含有する画分を濃度前にHCl水溶液で処理して、2-イソブチル-6-ピペリジン-4-イルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドの2HCl塩を得た。C32H40N8O2SのMSESI計算値:600;測定値:601[MH]。実施例132-ブチル-6-2-メチルアミノエチルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドXIIの調製:ステップ7でN-Boc-N-メチルエチレンジアミンを代用して、2-ブチル-6-ピペリジン-4-イルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドの場合と同様の手順で調製した。最終産物を、逆相HPLCで精製し、その後産物を含有する画分を濃縮の前にHCl水溶液で処理して、2-ブチル-6-2-メチルアミノエチルアミノ-N-2-6-ピペリジン-4-イルオキシメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニルピリミジン-4-カルボキサミドを2HCl塩として得た。C30H38N8O2SのMSESI計算値:575;測定値:576[MH]。実施例14N-2-6-R-3-フルオロピロリジン-1-イルメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニル-3-キヌクリジン-3-イルオキシベンズアミドVの調製:ステップ13-キヌクリジン-3-イルオキシ安息香酸の合成:HCl塩としてのR-キヌクリジン-3-オール1g、6.11mmolを、5mLH2Oに溶解し、NaHCO30.51g、6.11mmolで中和し、混合物を凍結乾燥した。残渣をEtOHで抽出し、EtOH層を濃縮して、R-キヌクリジン-3-オールを遊離塩基として得、その後それを、DIAD2.4mL、12.22mmol、PPh31.6g、12.22mmol、およびメチル3-ヒドロキシベンゾアート0.93g、7.33mmolと共に30mLのTHFに溶解した。反応混合物を室温で24時間撹拌した。その後それを濃縮し、CH2Cl2および2NHCl間に分配した。水層を分離し、洗浄した1×CH2Cl2。水層をNaHCO3で中和し、CH2Cl2で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥し、濃縮して、メチル3-キヌクリジン-3-イルオキシベンゾアート0.85g、53.2を粗物質として得た。粗物質を、LiOH水溶液を有するエタノール中での標準的塩基性加水分解条件にかけ、還流させた。完了時に、反応を室温に冷却し、5NHClで中和して、3-キヌクリジン-3-イルオキシ安息香酸を得た。ステップ23-キヌクリジン-3-イルオキシベンゾイルクロリドの合成:3-キヌクリジン-3-イルオキシ安息香酸1当量を、CH2Cl2に懸濁し、この溶液に、塩化オキサリル2.35当量および2滴のDMFを添加した。室温で1時間後、溶媒を減圧下で除去し、その結果生じた残渣を30分間高減圧下において、3-キヌクリジン-3-イルオキシベンゾイルクロリドを得た。ステップ3R-6-3-フルオロピロリジン-1-イルメチル-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジンの合成:以前に公開されている国際公開第2007/019346号に類似した手順により調製した。6-ブロモメチル-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジン1当量およびR-3-フルオロピロリジン1当量を、Et3N1当量と共にアセトニトリルに溶解し、50°Cで4時間加熱した。反応を室温に冷却し、更に60時間撹拌した。シリカゲルクロマトグラフィーpetエーテル:EtOAc:Et3Nで精製することにより、R-6-3-フルオロピロリジン-1-イルメチル-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジンを得た。C17H15FN4O2SのMSESI計算値:358;測定値:359[MH]。ステップ4N-2-6-R-3-フルオロピロリジン-1-イルメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニル-3-キヌクリジン-3-イルオキシベンズアミドVの合成:以前に公開されている国際公開第2007/019346号に類似した手順により調製した。R-6-3-フルオロピロリジン-1-イルメチル-2-2-ニトロフェニルチアゾロ[5,4-b]ピリジンを、上述の標準的鉄還元条件にかけて、R-2-6-3-フルオロピロリジン-1-イルメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルアニリンを得た。アニリン1当量をCH2Cl2に溶解し、トリエチルアミン1.8当量を添加した。その後、3-キヌクリジン-3-イルオキシベンゾイルクロリド0.8当量のCH2Cl2溶液を添加した。1.25時間後、反応を30mLのメタノールで希釈して、結晶性沈澱を得た。沈殿物をろ過し、メタノールで洗浄し、フィルター上で乾燥して、N-2-6-R-3-フルオロピロリジン-1-イルメチルチアゾロ[5,4-b]ピリジン-2-イルフェニル-3-キヌクリジン-3-イルオキシベンズアミドを得た。C31H32FN5O2SのMSESI計算値:558;測定値:559[MH]。実施例15N-2-3-ピペラジン-1-イルメチルイミダゾ[2,1-b]チアゾール-6-イルフェニルビフェニル-3-カルボキサミドIの調製:PerniらJMedChem20095212751283;国際公開第2007/019346号により以前に報告されたのと同様の手順で調製した。この基本手順を使用し、適切な酸塩化物およびアミン成分を選択することにより、N-2-3-ピペラジン-1-イルメチルイミダゾ[2,1-b]チアゾール-6-イルフェニルオキサゾロ[4,5-b]ピリジン-2-カルボキサミドおよびN-2-3-2,5-ジアザビシクロ[2.2.1]ヘプタン-2-イルメチルイミダゾ[2,1-b]チアゾール-6-イルフェニル-4-メチル-2-ピリジン-3-イルチアゾール-5-カルボキサミドを調製した。実施例16N-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニル-2-6-ピペラジン-1-イルピリジン-3-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドXXの調製:ステップ12-6-クロロピリジン-3-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキシル酸の合成:以前に公開されている国際公開第2010/003048号の手順により調製した。この基本手順を使用して、類似体2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキシル酸を調製した。ステップ22-6-クロロピリジン-3-イル-N-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドの合成:以前に公開されている国際公開第2010/003048号の経路に類似した経路により調製した。2-6-クロロピリジン-3-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキシル酸250mg、0.91molを、4-アミノ-2-トリフルオロメチルベンゾニトリル170.57mg、0.91mmolおよびHATU695.06mg、1.83mmolと共にDMF5mLに溶解した。DIEA0.32mL、1.83mmolを添加し、反応を室温で一晩撹拌した。反応混合物を水で希釈し、その結果生じた固形物を減圧ろ過により収集した。シリカゲルクロマトグラフィーペンタン/EtOAcで精製して、2-6-クロロピリジン-3-イル-N-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドを得た。C21H11ClF3N5OのMSESI計算値:442;測定値:443[MH]。この基本的アミドカップリングを使用し、適切な酸およびアミン成分を選択することにより、様々な1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミド誘導体を製作することができる。ステップ3tert-ブチル4-5-4-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニルカルバモイル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキシラートの合成:以前に公開されている国際公開第2010/003048号の経路により調製した。2-6-クロロピリジン-3-イル-N-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミド1当量およびtert-ブチルピペラジン-1-カルボキシラート1当量をDMSO中に含有する混合物を、140°C、25分間マイクロ波反応器中で撹拌した。反応を室温に冷却し、水で希釈した。その結果生じた固形物をろ過により収集し、水で洗浄し、減圧下で乾燥して、tert-ブチル4-5-4-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニルカルバモイル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキシラートを得た。C30H28F3N7O3のMSESI計算値:592;測定値:593[MH]。ステップ4N-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニル-2-6-ピペラジン-1-イルピリジン-3-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドXXの合成:以前に公開されている国際公開第2010/003048号の経路により調製した。tert-ブチル4-5-4-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニルカルバモイル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキシラート0.04mmolをメタノールHCL3N、2mL中に含有する混合物を、18時間室温で撹拌した。沈殿した固形物を、ろ過により収集し、メタノールで洗浄し、乾燥して、N-4-シアノ-3-トリフルオロメチルフェニル-2-6-ピペラジン-1-イルピリジン-3-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドを得た。C25H20F3N7OのMSESI計算値:491;測定値:492[MH]。上記の基本手順を、N-6-メトキシベンゾ[d]チアゾール-2-イル-2-6-ピペラジン-1-イルピリジン-3-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドおよび2-2-モルホリノピリジン-4-イル-N-3-ピペリジン-4-イルオキシメチルフェニル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドの調製に使用した。実施例172-2-モルホリノピリジン-4-イル-N-3-ピペリジン-4-イルオキシメチルフェニル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドXVIIの調製:ステップ1tert-ブチル4-3-アミノベンジルオキシピペリジン-1-カルボキシラートの合成:3-ニトロフェニルメタノール1g、6.55mmolおよびピリジン19.59mmolの混合物を、CH2Cl2に溶解し、0°Cに冷却した。4-トルエンスルホニルクロリド1.57g、7.18mmolを、0°Cで滴加し、添加完了後に、反応を加温して室温した。完了時に反応を濃縮し、CH2Cl2に希釈し、反応を停止させ、高減圧下で乾燥し、いかなる更なる精製をせずに次に持ち越した。1-Boc-4-ヒドロキシピペルジンhydroxypiperdine1.5g、6.55mmolのCH2Cl2撹拌溶液に、NaH0.19g、7.73mmolを0°Cにて数回に分けて添加し、その後更に10分間撹拌させ、その時点で3-ニトロベンジル4-メチルベンゼンスルホナートを添加した。その後、以前に上述され、以前に国際公開第2010/003048号で公開された標準的鉄還元および脱保護手順を行った。C17H26N2O3のMSESI計算値:306;測定値:307[MH]。ステップ2tert-ブチル4-3-2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドベンジルオキシピペリジン-1-カルボキシラートの合成:以前に公開された国際公開第2010/003048号と類似の経路により調製した。上記の基本アミド手順を参照されたい。C30H32ClN5O4のMSESI計算値:561;測定値:562[MH]。ステップ32-2-モルホリノピリジン-4-イル-N-3-ピペリジン-4-イルオキシメチルフェニル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキサミドXVIIの合成:以前に公開された国際公開第2010/003048号と類似の経路により調製した。上述の基本アミド手順を参照されたい。C29H32N6O3のMSESI計算値:512;測定値:513[MH]。実施例18N-2-2-3-ジメチルアミノプロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イル-4-ピペラジン-1-イルメチルベンズアミドトリヒドロクロリドXIVの合成:ステップ12-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキシル酸の調製:2,3-ジアミノ安息香酸1.07g、7.06mmol、2-クロロイソニコチンアルデヒド1.0g、7.06mmol、およびNa2S2O51.75g、9.18mmolを、DMF40mLに溶解し、100°Cで18時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、H2O100mLで希釈した。その結果生じた混合物を、室温で1時間撹拌し、ろ過した。収集した固形物を、水で洗浄し、乾燥して、2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキシル酸を固形物として得た1.14g、59収率。C13H8ClN3O2のMSESI計算値:273;測定値:274[MH]。ステップ2ベンジル2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバマートの調製:2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-カルボキシル酸1.14g、4.17mmolおよびトリエチルアミン0.64mL、4.58mmolのトルエン15mL溶液に、DPPA0.9mL、4.17mmolを滴加した。混合物を室温で18時間撹拌し、その後加熱して2時間還流した。ベンジルアルコール0.65mL、6.25mmolを添加し、その結果生じた混合物を加熱して18時間還流し、濃縮して乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー石油エーテル中9~17酢酸エチルで精製して、ベンジル2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバマートを黄色固形物0.69g、44収率として得た。C20H15ClN4O2のMSESI計算値:378;測定値:379[MH]。ステップ32-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミンの調製:ベンジル2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバマート0.69g、1.82mmol、HBr8mL、酢酸中33重量、および酢酸5mLの混合物を、室温で0.5時間撹拌し、固形物をろ過により収集した。固形物をNaHCO3水溶液飽和と共に0.5時間撹拌し、ろ過により収集し、2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミンを黄色固形物0.4g、90収率として得た。C12H9ClN4のMSESI計算値:244;測定値:245[MH]。ステップ4tert-ブチル4-4-2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラートの調製:2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミン250mg、1.02mmol、4-4-tert-ブトキシカルボニルピペラジン-1-イルメチル安息香酸360mg、1.12mmol、およびHATU583mg、1.53mmolのDMF10mL溶液に、N,N’-ジイソプロピルエチルアミン0.5mL、3.06mmolを添加した。混合物を、室温で18時間撹拌し、水40mLで希釈し、CH2Cl210mL×3で抽出した。混合した有機物層をブラインで洗浄し、乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー石油エーテル中17~50酢酸エチルで精製して、tert-ブチル4-4-2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラートを、黄色固形物270mg、48収率として得た。C29H31ClN6O3のMSESI計算値:546;測定値:547[MH]。ステップ5tert-ブチル4-4-2-2-3-ジメチルアミノプロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラートの調製:tert-ブチル4-4-2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラート100mg、0.18mmolN,N-ジメチルプロパン-1,3-ジアミン0.5mLのピリジン2mL溶液をマイクロ波で加熱した160°C×2時間。溶液を濃縮し、調製用TLCで精製して、tert-ブチル4-4-2-2-3-ジメチルアミノプロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラートを黄色固形物40mg、36収率として得た。C34H44N8O3のMSESI計算値:612;測定値:613[MH]。ステップ6N-2-2-3-ジメチルアミノプロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イル-4-ピペラジン-1-イルメチルベンズアミドトリヒドロクロリドXIVの調製:tert-ブチル4-4-2-2-3-ジメチルアミノプロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラート37mg、0.06mmolのメタノール1.0mL溶液を、4MHCl/MeOH2mLに添加した。混合物を1時間撹拌し、沈殿物をろ過により収集して、N-2-2-3-ジメチルアミノプロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イル-4-ピペラジン-1-イルメチルベンズアミドトリヒドロクロリドをHCl塩として得た31mg、83収率。C29H36N8OのMSESI計算値:512;測定値:514[MH]。実施例194-ピペラジン-1-イルメチル-N-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルベンズアミドジヒドロクロリドXVIの調製:ステップ12-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミンの調製:2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミン70mg、0.29mmolおよびプロピルアミン0.11mL、1.43mmolのNMP1mL溶液を、マイクロ波で加熱した250°C×20分間。混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥した。残渣を調製用TLCで精製して、2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミンを黄色固形物48mg、62収率として得た。C15H17N5のMSESI計算値:267;測定値:268[MH]。ステップ2tert-ブチル4-4-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラートの調製:2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミン28mg、0.1mmol、4-4-tert-ブトキシカルボニルピペラジン-1-イルメチル安息香酸20.2mg、0.13mmol、およびHATU60mg、0.16mmolのDMF5mL溶液に、N,N’-ジイソプロピルエチルアミン0.05mL、0.31mmolを添加した。混合物を室温で18時間撹拌し、水で希釈し、その結果生じた沈殿物をろ過より収集し、乾燥した。固形物を調製用TLCCH2Cl2中6.25MeOHで精製して、tert-ブチル4-4-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラートを黄色固形物30mg、53収率として得た。C32H39N7O3のMSESI計算値:569;測定値:570[MH]。ステップ34-ピペラジン-1-イルメチル-N-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルベンズアミドジヒドロクロリドXVIの調製:tert-ブチル4-4-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルベンジルピペラジン-1-カルボキシラート30mg、0.05mmolのHCl/MeOH2mL溶液を、0.5時間撹拌した。形成された沈殿物をろ過により収集し、アセトンで洗浄し、乾燥して、4-ピペラジン-1-イルメチル-N-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルベンズアミドジヒドロクロリドをHCl塩として得た20mg、97収率。C27H31N7OのMSESI計算値:469;測定値:471[MH]。実施例20N-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イル-3-ピロリジン-3-イルベンズアミドヒドロクロリドXVの調製:ステップ1tert-ブチル3-3-2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルフェニルピロリジン-1-カルボキシラートの調製:2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-アミン200mg、0.82mmol、3-1-tert-ブトキシカルボニルピペラジン-3-イル安息香酸262mg、0.9mmol、およびHATU466mg、1.23mmolのDMF5mL溶液に、N,N’-ジイソプロピルエチルアミン0.4mL、2.45mmolを添加した。混合物を室温で18時間撹拌し、水で希釈し、その結果生じた沈殿物をろ過より収集した。固形物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー石油エーテル中25~50酢酸エチルで精製して、tert-ブチル3-3-2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルフェニルピロリジン-1-カルボキシラートを黄色固形物345mg、81収率として得た。C28H28ClN5O3のMSESI計算値:517;測定値:518[MH]。ステップ2tert-ブチル3-3-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルフェニルピロリジン-1-カルボキシラートの調製:tert-ブチル3-3-2-2-クロロピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルフェニルピロリジン-1-カルボキシラート100mg、0.19mmolおよびプロピルアミン0.16mL、1.93mmolのDMSO2mL溶液を、封管中で140°Cにて24時間加熱した。反応混合物を水に注ぎ、CH2Cl2で抽出し、有機相を水で洗浄し、乾燥し、濃縮して乾燥した。残渣を調製用tlcで精製して、tert-ブチル3-3-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルフェニルピロリジン-1-カルボキシラートを褐色固形物31mg、38収率として得た。C31H36N6O3のMSESI計算値:540;測定値:541[MH]。ステップ3N-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イル-3-ピロリジン-3-イルベンズアミドヒドロクロリドXVの調製:tert-ブチル3-3-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イルカルバモイルフェニルピロリジン-1-カルボキシラート39mg、0.07mmolのHCl/MeOH2mL溶液を、0.5時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をアセトンと共に粉砕して、N-2-2-プロピルアミノピリジン-4-イル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-4-イル-3-ピロリジン-3-イルベンズアミドヒドロクロリドをHCl塩として得た30mg、94収率。C26H28N6OのMSESI計算値:440;測定値:442[MH]。実施例21生物活性質量分析法に基づくアッセイを使用して、SIRTI活性の調節因子を特定した。質量分析法に基づくアッセイでは、以下の20個アミノ酸残基を有するペプチドを使用する:Ac-EE-Kビオチン-GQSTSSHSKAcNleSTEG-K5TMR-EE-NH2配列番号1、式中、KAcはアセチル化リジン残基であり、Nleはノルロイシンである。ペプチドのC末端を、フルオロフォア5TMR励起540nm発光580nmで標識した。ペプチド基質の配列は、幾つかの修飾を有するp53に基づく。加えて、メチオニンは、合成中および精製中の酸化に感受性であり得るため、配列中に天然に存在するメチオニン残基をノルロイシンと置換した。質量分析アッセイを以下のように実施する:0.5J-lMペプチド基質および120μMβNADを、25分間25°Cにて、10nMSIRTlと共に、反応緩衝液50mMTris-アセタートpH8、137mMNaCI、2.7mMKCI、1mMMgClz、5mMDTT、0.05BSA中でインキュベートする。試験化合物を、上述の反応に添加してもよい。SirTI遺伝子を、T7プロモーター含有ベクターにクローニングし、BL21DE3に形質転換する。SIRT1と共に25分間インキュベーションした後、10μLの10ギ酸を添加して、反応を停止させる。反応を密閉し、後の質量分析用に凍結する。基質ペプチドの質量を決定することにより、脱アセチル化ペプチド産物と比較したアセチル化度つまり開始物質の正確な決定が可能になる。サーチュイン活性の阻害の対照は、1μLの500mMニコチンアミドを反応開始時に陰性対照として添加することにより実施する例えば、最大サーチュイン阻害の決定を可能にする。サーチュイン活性の活性化の対照は、化合物の代わりに1μLのDMSOと共に10nMのサーチュインタンパク質を使用して実施し、アッセイの線形範囲内の所与の時点における基質の脱アセチル化の量を決定する。この時点は、試験化合物に使用された時点と同じであり、線形範囲内にあり、終点は、速度の変化を表わす。上記のアッセイの場合、SIRTIタンパク質を、以下のように発現および精製した。SirT1遺伝子をT7プロモーター含有ベクターにクローニングし、BL21DE3に形質転換した。タンパク質を、1mMIPTGで誘導し、N末端Hisタグ融合タンパク質として18°Cにて一晩発現させ、30,000×gで回収した。細胞を、溶解緩衝液50mMTris-HCI、2mMTris[2-カルボキシエチル]ホスフィンTCEP、10μMZnCl2、200mMNaCI中でリゾチームを用いて溶解し、完全に溶解させるために超音波処理で10分間更に処理した。タンパク質を、Ni-NTAカラムAmersham社製で精製し、純粋なタンパク質を含有する画分を貯留し、濃縮し、サイズ分離カラムSephadexS20026/60グローバルに流した。可溶性タンパク質を含有するピークを収集し、イオン交換カラムMonoQに流した。勾配溶出200mM-500mMNaCIにより、純粋なタンパク質20を得た。このタンパク質を濃縮し、透析緩衝液20mMTrisHCI、2mMTCEPに対して一晩透析した。タンパク質を等分し、更なる使用まで-80°Cで凍結した。SIRT1を活性化したサーチュイン調節化合物を、上述のアッセイを使用して特定した。それらは下記の表4に示されている。EC1.5値は、SIRT1の150活性化をもたらす試験化合物の濃度を表わす。活性化化合物のEC1.5値は、AEC1.5≦1μM、BEC1.5>1μMにより表わされている。最大活性化倍数パーセントは、A活性化倍数≧200またはB活性化倍数<200により表わされている。等価物本発明は、特にサーチュイン活性化化合物およびその方法を提供する。主題発明の特定の実施形態が考察されているが、上記の明細書は例示であり、限定ではない。本発明の多く変異は、本明細書を検討すれば当業者にとって明白になるだろう。本発明の完全な範囲は、請求項およびそれらの完全な範囲の等価物、ならびに本明細書およびそのような変異を参照することにより決定されるべきである。参照による援用本明細書で言及された出版物および特許は全て、あたかも個々の出版物または特許の各々が、具体的におよび個々に参照により組み込まれたことが示されているかのように、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。矛盾が生じた場合、本明細書におけるあらゆる定義を含む、本出願を優先することになる。ゲノム研究所TIGR、InstituteforGenomicResearchwww.tigr.orgおよび/または国立バイオテクノロジー情報センターNCBI、NationalCenterforBiotechnologyInformationwww.ncbi.nlm.nih.govにより維持されているデータベース等の公開データベース中のエントリーと関連する受入番号を参照する任意のポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列も、参照によりそれらの全体が組み込まれる。"