"式Aのカチオン性脂質:式中:R1およびR2は、独立に、H、C1-C6アルキル、ヘテロシクリルおよびポリアミンから選択され、前記アルキル、ヘテロシクリルおよびポリアミンは、R’から選択される1~3個の置換基で置換されていてもよく、または、R1およびR2は、それらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい、4~7員の単環式複素環を形成することができ、前記単環式複素環は、R’から選択される1~3個の置換基で置換されていてもよく;R’は、独立に、ハロゲン、R、OR、SR、CN、CO2RまたはCONR2から選択され;Rは、独立に、HおよびC1-C6アルキルから選択され、前記アルキルは、ハロゲンおよびOHで置換されていてもよく;L1は、C4-C22アルキルおよびC4-C22アルケニルから選択され、前記アルキルおよびアルケニルは、R’から選択される1個以上の置換基で置換されていてもよく;かつL2は、C3-C13アルキルおよびC3-C13アルケニルから選択され、前記アルキルおよびアルケニルは、R’から選択される1個以上の置換基で置換されていてもよい;または、その任意の製薬上許容される塩もしくは立体異性体。R1およびR2が、各々メチルであり;L1が、C4-C22アルキルおよびC4-C22アルケニルから選択され;かつL2が、C3-C13アルキルおよびC3-C13アルケニルから選択される、請求項1に記載の式Aのカチオン性脂質;または、その任意の製薬上許容される塩もしくは立体異性体。以下から選択されるカチオン性脂質:R-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物2;S-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物1;1-{2-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-1-[オクチルオキシメチル]エチル}ピロリジン化合物3;2S-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-[5Z-オクト-5-エン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物4;1-{2-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-1-[オクチルオキシメチル]エチル}アゼチジン化合物5;2S-1-ヘキシルオキシ-N,N-ジメチル-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物6;2S1-ヘプチルオキシ-N,N-ジメチル-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物7;N,N-ジメチル-1-ノニルオキシ-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物8;N,N-ジメチル-1-[9Z-オクタデセ-9-エン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物9;2S-N,N-ジメチル-1-[6Z,9Z,12Z-オクタデカ-6,9,12-トリエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物10;2S-1-[11Z,14Z-イコサ-11,14-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-ペンチルオキシプロパン-2-アミン化合物11;2S-1-ヘキシルオキシ-3-[11Z,14Z-イコサ-11,14-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチルプロパン-2-アミン化合物12;1-[11Z,14Z-イコサ-11,14-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物13;1-[13Z,16Z-ドコサ-13,16-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物14;2S-1-[13Z,16Z-ドコサ-13,16-ジエン-1-イルオキシ]-3-ヘキシルオキシ-N,N-ジメチルプロパン-2-アミン化合物15;2S-1-[13Z-ドコス-13-エン-1-イルオキシ]-3-ヘキシルオキシ-N,N-ジメチルプロパン-2-アミン化合物16;1-[13Z-ドコス-13-エン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物17;1-[9Z-ヘキサデカ-9-エン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物18;2R-N,N-ジメチル-1-[1-メチルオクチルオキシ]-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物19;2R-1-[3,7-ジメチルオクチルオキシ]-N,N-ジメチル-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物20;N,N-ジメチル-1-オクチルオキシ-3-{8-[1S,2S-2-{[1R,2R-2-ペンチルシクロプロピル]メチル}シクロプロピル]オクチル}オキシプロパン-2-アミン化合物21;およびN,N-ジメチル-1-{[8-2-オクチルシクロプロピルオクチル]オキシ}-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物22;またはその任意の製薬上許容される塩もしくは立体異性体。脂質ナノ粒子の調製のための請求項1に記載のカチオン性脂質の使用。オリゴヌクレオチドの送達のための脂質ナノ粒子中の成分としての請求項1に記載のカチオン性脂質の使用。該オリゴヌクレオチドがsiRNAまたはmiRNAである、請求項5に記載の使用。該オリゴヌクレオチドがsiRNAである、請求項5に記載の使用。本発明は、他の脂質成分、例えばコレステロールおよびPEG脂質などと組み合わせて使用して、オリゴヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子を形成することのできる新規なカチオン性脂質を提供する。本発明の目的は、有効性の増加とともに、肝臓中の脂質レベルが低いことの結果として肝臓毒性が低いことを実証するカチオン性脂質足場を提供することである。本発明は、siRNAのインビボ送達の効率および耐容性を強化するために、1つの短い脂質鎖を含む低分子量カチオン性脂質を用いる。本発明の様々な態様および実施形態は、オリゴヌクレオチド、特に、siRNAおよびmiRNAを、任意の目的遺伝子に送達するための脂質ナノ粒子中で有用な新規なカチオン性脂質の有用性に関する。米国特許出願:米国特許出願公開第2006/0083780号、同第2006/0240554号、同第2008/0020058号、同第2009/0263407号および同第2009/0285881号ならびにPCT特許出願:国際公開第2009/086558号、同第2009/127060号、同第2009/132131号、同第2010/042877号、同第2010/054384号、同第2010/054401号、同第2010/054405号および同第2010/054406号参照。また、SempleS.C.etal.,RationaldesignofcationiclipidsforsiRNAdelivery,NatureBiotechnology,publishedonline17January2010;doi:10.1038/nbt.l602も参照されたい。本発明のカチオン性脂質は、オリゴヌクレオチド、特にsiRNAおよびmiRNAの送達に有用な脂質ナノ粒子中の成分である。本発明の第一の実施形態では、カチオン性脂質は、式A:式中:R1およびR2は、独立に、H、C1-C6アルキル、ヘテロシクリルおよびポリアミンから選択され、前記アルキル、ヘテロシクリルおよびポリアミンは、R’から選択される1~3個の置換基で置換されていてもよく、または、R1およびR2は、それらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい、4~7員の単環式複素環を形成することができ、前記単環式複素環は、R’から選択される1~3個の置換基で置換されていてもよく;R’は、独立に、ハロゲン、R、OR、SR、CN、CO2RまたはCONR2から選択され;Rは、独立に、HおよびC1-C6アルキルから選択され、前記アルキルは、ハロゲンおよびOHで置換されていてもよく;L1は、C4-C22アルキルおよびC4-C22アルケニルから選択され、前記アルキルおよびアルケニルは、R’から選択される1個以上の置換基で置換されていてもよく;かつL2は、C3-C13アルキルおよびC3-C13アルケニルから選択され、前記アルキルおよびアルケニルは、R’から選択される1個以上の置換基で置換されていてもよい;あるいはその任意の製薬上許容される塩または立体異性体によって示される。第二の実施形態では、本発明は、R1およびR2が、各々メチルであり;L1が、C4-C22アルキルおよびC4-C22アルケニルから選択され;かつL2が、C3-C13アルキルおよびC3-C13アルケニルから選択される;式Aを有する化合物、あるいはその任意の製薬上許容される塩または立体異性体を特徴とする。具体的なカチオン性脂質は、R-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物2;S-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物1;1-{2-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-1-[オクチルオキシメチル]エチル}ピロリジン化合物3;2S-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-[5Z-オクト-5-エン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物4;1-{2-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-1-[オクチルオキシメチル]エチル}アゼチジン化合物5;2S-1-ヘキシルオキシ-N,N-ジメチル-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物6;2S1-ヘプチルオキシ-N,N-ジメチル-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物7;N,N-ジメチル-1-ノニルオキシ-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物8;N,N-ジメチル-1-[9Z-オクタデセ-9-エン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物9;2S-N,N-ジメチル-1-[6Z,9Z,12Z-オクタデカ-6,9,12-トリエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物10;2S-1-[11Z,14Z-イコサ-11,14-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-ペンチルオキシプロパン-2-アミン化合物11;2S-1-ヘキシルオキシ-3-[11Z,14Z-イコサ-11,14-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチルプロパン-2-アミン化合物12;1-[11Z,14Z-イコサ-11,14-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物13;1-[13Z,16Z-ドコサ-13,16-ジエン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物14;2S-1-[13Z,16Z-ドコサ-13,16-ジエン-1-イルオキシ]-3-ヘキシルオキシ-N,N-ジメチルプロパン-2-アミン化合物15;2S-1-[13Z-ドコス-13-エン-1-イルオキシ]-3-ヘキシルオキシ-N,N-ジメチルプロパン-2-アミン化合物16;1-[13Z-ドコス-13-エン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物17;1-[9Z-ヘキサデカ-9-エン-1-イルオキシ]-N,N-ジメチル-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物18;2R-N,N-ジメチル-1-[1-メチルオクチルオキシ]-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物19;2R-1-[3,7-ジメチルオクチルオキシ]-N,N-ジメチル-3-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]プロパン-2-アミン化合物20;N,N-ジメチル-1-オクチルオキシ-3-{8-[1S,2S-2-{[1R,2R-2-ペンチルシクロプロピル]メチル}シクロプロピル]オクチル}オキシプロパン-2-アミン化合物21;およびN,N-ジメチル-1-{[8-2-オクチルシクロプロピルオクチル]オキシ}-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物22;あるいはその任意の製薬上許容される塩または立体異性体である。もう一つの実施形態では、開示されるカチオン性脂質は、脂質ナノ粒子の調製に有用である。もう一つの実施形態では、開示されるカチオン性脂質は、オリゴヌクレオチドの送達のための脂質ナノ粒子中で有用な成分である。もう一つの実施形態では、開示されるカチオン性脂質は、siRNAおよびmiRNAの送達のための脂質ナノ粒子中で有用な成分である。もう一つの実施形態では、開示されるカチオン性脂質は、siRNAの送達のための脂質ナノ粒子中で有用な成分である。本発明のカチオン性脂質は、不斉中心、キラル軸、およびキラル平面を有しE.L.ElielandS.H,Wilen,StereochemistryofCarbonCompounds,JohnWileySons,NewYork,1994,pages1119-1190に記載される通り、ラセミ化合物、ラセミ混合物、そして個々のジアステレオマーとして生じる可能性があり、光学異性体を含むすべての起こり得るその異性体および混合物が本発明に含まれる。その上、本明細書に開示されるカチオン性脂質は、互変異性体として存在する可能性があり、たとえ1つの互変異性体構造しか示されていないとしても、両方の互変異性型が本発明の範囲に包含されることが意図される。本発明のカチオン性脂質上の置換基および置換パターンは、化学的に安定であり、当技術分野で公知の技法、ならびに下に示す方法によって容易に入手可能な出発物質から容易に合成することのできるカチオン性脂質を提供するために、当業者によって選択され得ることは当然理解される。置換基自体が2個以上の基で置換されている場合、これらの複数の基は、安定した構造が生じる限り、同じ炭素上にあっても異なる炭素上にあってもよいことは当然理解される。化学的に安定であり、かつ容易に入手可能な出発物質から当技術分野で公知の技法によって容易に合成することのできるカチオン性脂質を提供するために、当業者によって1個以上のSi原子を本発明のカチオン性脂質に組み込むことができることは当然理解される。式Aの化合物において、原子は、その天然の同位体存在度を示してもよいし、あるいは1個以上の原子は、同じ原子番号を有するが、天然に優勢に見出される原子量または質量数とは異なる原子量または質量数を有する、特定の同位体で人工的に濃縮されていてもよい。本発明は、式Aの化合物のすべての適した同位体変化を含むことを意図する。例えば、水素Hの異なる同位体形には、プロチウム1Hおよび重水素2Hが含まれる。プロチウムは、天然に見出される優勢な水素同位体である。重水素を濃縮することにより、ある種の治療上の利点、例えばインビボ半減期の増加または必要用量の低下などをもたらすことができるか、または、生体試料の特徴付けに標準物質として有用な化合物を得ることができる。式Aの中の同位体濃縮化合物は、過度の実験を行うことなく、当業者に周知の従来技法によるか、または本明細書のスキームおよび実施例に記載されるものに類似するプロセスにより、適切な同位体濃縮試薬および/または中間体を用いて調製することができる。本明細書において、アルキルは、指定された数の炭素原子を有する直鎖、環状または分枝状の飽和脂肪族炭化水素を意味する。本明細書において、アルケニルは、指定された数の炭素原子を有する直鎖、環状または分枝状の不飽和脂肪族炭化水素を意味し、それには、限定されるものではないが、ジエン、トリエンおよびテトラエン不飽和脂肪族炭化水素が含まれる。環状アルキルまたはアルケニルの例は:である。本明細書において、ヘテロシクリルまたは複素環は、O、NおよびSからなる群から選択される1~4個のヘテロ原子を含有する4~10員の芳香族もしくは非芳香族複素環を意味し、それには二環式基が含まれる。したがってヘテロシクリルには、以下:ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドールアジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ナフトピリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、オキサゾリン、イソキサゾリン、オキセタニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、テトラゾロピリジル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、アゼチジニル、1,4-ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、およびテトラヒドロチエニル、ならびに、そのすべてがRから選択される1~3個の置換基で置換されていてもよい、そのN-酸化物が含まれる。本明細書において、ポリアミンは、2個またはそれ以上のアミノ基を有する化合物を意味する。例としては、プトレッシン、カダベリン、スペルミジン、およびスペルミンが挙げられる。本明細書において、ハロゲンは、Br、Cl、FおよびIを意味する。式Aの一実施形態では、R1およびR2は、独立に、HおよびC1-C6アルキルから選択され、前記アルキルは、R’から選択される1~3個の置換基で置換されているか、または、R1およびR2は、それらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい、4~7員の単環式複素環を形成することができ、前記単環式複素環は、R’から選択される1~3個の置換基で置換されていてもよい。式Aの一実施形態では、R1およびR2は、独立に、H、メチル、エチルおよびプロピルから選択され、前記メチル、エチルおよびプロピルは、R’から選択される1~3個の置換基で置換されていてもよいか、または、R1およびR2は、それらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい、4~7員の単環式複素環を形成することができ、前記単環式複素環は、R’から選択される1~3個の置換基で置換されていてもよい。式Aの一実施形態では、R1およびR2は、独立に、H、メチル、エチルおよびプロピルから選択される。式Aの一実施形態では、R1およびR2は、各々、Hである。式Aの一実施形態では、R’は、Rである。式Aの一実施形態では、Rは、独立に、H、メチル、エチルおよびプロピルから選択され、前記メチル、エチルおよびプロピルは、1個以上のハロゲンおよびOHで置換されていてもよい。式Aの一実施形態では、Rは、独立に、H、メチル、エチルおよびプロピルから選択される。式Aの一実施形態では、L1は、ハロゲンおよびOHで置換されていてもよい、C4-C22アルキルおよびC4-C22アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L1は、C4-C22アルキルおよびC4-C22アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L1は、C4-C22アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L1は、C12-C22アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L1は、C18アルケニルである。式Aの一実施形態では、L1は、である。式Aの一実施形態では、L1は、である。式Aの一実施形態では、L2は、ハロゲンおよびOHで置換されていてもよい、C3-C13アルキルおよびC3-C13アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L2は、ハロゲンおよびOHで置換されていてもよい、C3-C9アルキルおよびC3-C9アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L2は、ハロゲンおよびOHで置換されていてもよい、C3-C8アルキルおよびC3-C8アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L2は、C3-C13アルキルおよびC3-C13アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L2は、C3-C9アルキルおよびC3-C9アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L2は、C3-C8アルキルおよびC3-C8アルケニルから選択される。式Aの一実施形態では、L2は、C3-C13アルキルである。式Aの一実施形態では、L2は、C3-C9アルキルである。式Aの一実施形態では、L2は、C3-C8アルキルである。式Aの一実施形態では、L2は、C8アルキルである。式Aの一実施形態では、ヘテロシクリルは、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、イミダゾールまたはピペラジンである。式Aの一実施形態では、単環式ヘテロシクリルは、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、イミダゾールまたはピペラジンである。式Aの一実施形態では、ポリアミンは、プトレッシン、カダベリン、スペルミジンまたはスペルミンである。一実施形態では、アルキルは、指定された数の炭素原子を有する直鎖飽和脂肪族炭化水素である。一実施形態では、アルケニルは、指定された数の炭素原子を有する直鎖不飽和脂肪族炭化水素である。本発明には、式Aのカチオン性脂質の遊離形態、ならびにその製薬上許容される塩および立体異性体が含まれる。本明細書において例示される一部の単離された具体的なカチオン性脂質は、アミンカチオン性脂質のプロトン化塩である。用語遊離形態とは、非塩形態のアミンカチオン性脂質をさす。包含される製薬上許容される塩には、本明細書に記載される具体的なカチオン性脂質について例示される単離された塩だけでなく、式Aのカチオン性脂質の遊離形態のすべての典型的な製薬上許容される塩も含まれる。記載される具体的な塩カチオン性脂質の遊離形態は、当技術分野で公知の技法によって単離することができる。例えば、遊離形態は、塩を適した希釈塩基水溶液、例えば希釈NaOH水溶液、炭酸カリウム水溶液、アンモニア水および重炭酸ナトリウム水溶液などで処理することにより、再生することができる。遊離形態は、ある種の物理的特性、例えば極性溶媒中の溶解度などにおいてその各々の塩形態とは多少異なる可能性があるが、酸塩および塩基塩は、その他の点で本発明の目的のその各々の遊離形態と製薬上等価である。本発明のカチオン性脂質の製薬上許容される塩は、塩基性または酸性部分を含有する本発明のカチオン性脂質から従来の化学的手法によって合成することができる。一般に、塩基性カチオン性脂質の塩は、イオン交換クロマトグラフィーによるか、あるいは、適した溶媒または様々な組合せの溶媒中、遊離塩基と、化学量論量または過剰量の所望の塩形成無機酸もしくは有機酸を反応させることによって調製される。同様に、酸性化合物の塩は、適切な無機塩基または有機塩基との反応により形成される。よって、本発明のカチオン性脂質の製薬上許容される塩には、塩基性の本発明のカチオン性脂質と無機酸または有機酸を反応させることにより形成されるような本発明のカチオン性脂質の従来型の無毒の塩が含まれる。例えば、従来型の無毒の塩としては、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸および同類のものなどから誘導される塩、ならびに有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、2-アセトキシ-安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸TFAおよび同類のものなどから調製される塩が挙げられる。本発明のカチオン性脂質が酸性である場合、適した製薬上許容される塩とは、無機塩基および有機塩基を含む、製薬上許容される無毒の塩基から調製される塩をさす。無機塩基から誘導される塩としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、第二マンガン塩manganicsalts、第一マンガンmanganous、カリウム、ナトリウム、亜鉛および同類のものが挙げられる。特に好ましいのは、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウムおよびナトリウム塩である。製薬上許容される有機無毒塩基から誘導される塩としては、第一級、第二級および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えば、アルギニン、ベタインカフェイン、コリン、N,N1-ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、2-ジエチルアミノエタノール、2-ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、N-エチルモルホリン、N-エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミントリプロピルアミン、トロメタミンおよび同類のものなどの塩が挙げられる。上記の製薬上許容される塩およびその他の典型的な製薬上許容される塩の調製は、Bergetal.,PharmaceuticalSalts,J.Pharm.Sci.,1977:66:1-19によってより詳細に記載されている。また、本発明のカチオン性脂質は内部塩または双性イオンである可能性があることにも留意されたい。これは、生理的条件下では、化合物中の脱プロトン化酸性部分、例えばカルボキシル基などはアニオン性である場合があり、その結果、この電子電荷はプロトン化またはアルキル化塩基性部分、例えば第四級窒素原子などのカチオン電荷に対して内部的に平衡をとって離れる可能性があるためである。提供される実施例は、本発明のさらなる理解を助けることを目的とする。用いる特定の材料、種および条件は、本発明をさらに例示することを目的とし、その合理的な範囲を制限することを意図しない。カチオン性脂質を合成する際に利用される試薬は、市販のものであるか、または当業者によって容易に調製されるものである。新規なカチオン性脂質の合成は、エピクロロヒドリンiで出発する線形プロセスである。エピクロロヒドリンと脂質アルコールとの反応により、中間体エポキシドiiが得られる。第2の脂質アルコールによるルイス酸エポキシドの開環により、第二級アルコールiiiが得られる。トリフラート形成およびアミン置換により、タイプivの最終生成物が得られる。一般的スキーム1中間体シクロプロピル類似体viの合成は、タイプvのオレフィンのシモンズスミスシクロプロパン化反応により実行した。一般的スキーム2スキーム1S-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物1オクタノール1.5モル、195g、テトラブチルアンモニウムブロマイド75ミリモル、24.1gおよび水酸化ナトリウム2.4モル、96gの溶液を、3°Cに冷却し、R-エピクロロヒドリンを滴下漏斗を介して添加した。混合物を3°Cにて6時間攪拌した後、16時間周囲温度まで暖まらせた。反応物を、ヘキサンと飽和重炭酸ナトリウム水溶液とに分液した。有機物を水2×625mLおよびブライン625mLで洗浄し、真空蒸発させた。粗油状物質を、フラッシュクロマトグラフィーシリカ、0~20酢酸エチル/ヘプタンにより精製して、236g85の2-[オクチルオキシメチル]オキシランの鏡像異性体の1つを透明な油状物質として得た。1HNMR400MHz,CDCl3:δ3.68m,1H、3.45m,2H、3.38m,1H、3.16m,1H、2.78m,1H、2.59m,1H、1.58m,2H、1.30m,10H、0.83m,3H。最初に、この反応の生成物に、不斉炭素中心に変化のない、ハライド原子を有する炭素でのSN2機構によって得られ得る2R立体化学を割り当てた。しかし、記載した条件、すなわちルイス酸条件下での、振動円偏光二色性VCD、すなわちキラル分子の絶対配置を決定するための妥当な分光学的方法R.K.DukorandL.A.Nafie,inEncyclopediaofAnalyticalChemistry:InstrumentationandApplications,Ed.R.A.MeyersWiley,Chichester,2000662-676と併せた、その後の研究リネオリルlineolylアルコールとS-エピクロロヒドリンの反応での実験により、SN2の機構によって生じた反応、すなわちその後の開環をもたらすエポキシドの末端炭素での反応が明らかとなり、その後、不斉炭素での立体化学の反転を導くインサイチュ閉環段階が続いた。これらの研究の結果として、この反応の生成物に、2S立体化学:2S-[オクチルオキシメチル]オキシランを割り当てた。エポキシド3.86g、20.7ミリモルおよびリノレイルアルコール6.6g、24.8ミリモルのジクロロメタン100mL中の溶液を、周囲温度にて四塩化スズ4.44g、2.0ミリモルで処理した。3時間攪拌した後、反応をブラインでクエンチし、ブラインとジクロロメタンとに分液した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空蒸発させた。粗油状物質を、フラッシュクロマトグラフィーシリカ、2~5アセトン/ヘキサンにより精製して5.85g62のR-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-オールを透明な油状物質として得た。1HNMR400MHz,CDCl3:δ5.38m,4H、3.93m,1H、3.49m,8H、2.79m,2H、2.45m,1H、2.06m,4H、1.58m,6H、1.30m,26H、0.89m,6H。化合物iii5.08g、11.2ミリモルを、ジクロロメタン100mlに溶解し、2,6-ルチジン1.44g、13.5ミリモルで処理した。トリフル酸無水物3.8g、13.5ミリモルを0°Cにて反応系に滴下した。2.5時間後、反応物を、ジメチルアミン39.3ミリモルのジクロロメタン85mL中の冷溶液の中にカニューレで挿入した。0°Cで2時間後、反応を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、水/ジクロロメタンに分液した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空蒸発させた。粗油状物質をフラッシュクロマトグラフィーシリカ、0~30酢酸エチル/ヘキサンにより精製して、3.66g65のS-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミンを琥珀色の油状物質として得た。1HNMR400MHz,CDCl3:δ5.38m,4H、3.52m,4H、3.40m,4H、2.79m,3H、2.40s,6H、2.05m,4H、1.58m,4H、1.30m,26H、0.89m,6H。HRMS:計算値480.4775、観察値480.4769。化合物2は、新規なカチオン性脂質であり、S-エピクロロヒドリンで出発する、上の一般的スキーム1およびスキーム1に従って調製した。化合物2R-N,N-ジメチル-1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物21HNMR400MHz,CDCl3:δ5.38m,4H、3.52m,4H、3.40m,4H、2.79m,3H、2.40s,6H、2.05m,4H、1.58m,4H、1.30m,26H、0.89m,6H。化合物3~20を、一般スキーム1に従って化合物1に記載されるものに類似の方法で調製した。スキーム2N,N-ジメチル-1-オクチルオキシ-3-{8-[1S,2S-2-{[1R,2R-2-ペンチルシクロプロピル]メチル}シクロプロピル]オクチル}オキシプロパン-2-アミン化合物211Lフラスコ中の1-[9Z,12Z-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ]-3-オクチルオキシプロパン-2-オールのDCM166ml中の溶液を、窒素下、氷/IPA浴-15°C中で冷却し、次に、ヘキサン中1Mジエチル亜鉛199ml、199ミリモルを添加し、それに続いてジヨードメタン24.05ml、298ミリモルを添加した。混合物を、徐々に室温に達するように冷却浴中で一晩攪拌させた。過剰な飽和塩化アンモニウムの添加により反応をクエンチした。洗浄した反応物をヘキサンおよび水と2L分液漏斗に入れ、過剰なヘキサンを添加し、激しく振盪した。下側の水層を捨て、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて1-オクチルオキシ-3-[8-{2-[2-ペンチルシクロプロピルメチル]シクロプロピル}オクチルオキシ]プロパン-2-オール15.5g、32.2ミリモル、収率97を黄色の油状物質とした。材料はさらなる精製を行わずに使用した。MSESI:481[MH]。アルコールviの最終化合物21への変換は、化合物1について記載されるように達成した。C33H65NO2[MH]、計算値508.5、観察値508.5。N,N-ジメチル-1-{[8-2-オクチルシクロプロピルオクチル]オキシ}-3-オクチルオキシプロパン-2-アミン化合物22は、化合物21について記載されるのと同様の方法で調製した。C32H65NO2[MH]、計算値496.5、観察値496.5。化合物23は、J.ControlledRelease,2005,107,276-287、米国特許出願公開第2006/0083780号、および同第2006/0008910号に記載されるDLinDMAである。化合物24は、NatureBiotechnology,2010,28,172-176、国際公開第2010/042877号、同第2010/048536号、同第2010/088537号、および同第2009/127060号に記載されるDLinKC2DMAである。LNP組成以下の本発明の脂質ナノ粒子組成LNPsは、オリゴヌクレオチド、特にsiRNAおよびmiRNAの送達に有用である:カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG56.6/38/5.4;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG60/38/2;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG67.3/29/3.7;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG49.3/47/3.7;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG50.3/44.3/5.4;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-C-DMA/DSPC40/48/2/10;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC40/48/2/10;およびカチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC58/30/2/10。LNPsの合成および使用は、公知である。米国特許出願:米国特許出願公開第2006/0083780号、同第2006/0240554号、同第2008/0020058号、同第2009/0263407号および同第2009/0285881号ならびにPCT特許出願:国際公開第2009/086558号、同第2009/127060号、同第2009/132131号、同第2010/042877号、同第2010/054384号、同第2010/054401号、同第2010/054405号および同第2010/054406号参照。また、SempleS.C.etal.,RationaldesignofcationiclipidsforsiRNAdelivery,NatureBiotechnology,publishedonline17January2010;doi:10.1038/nbt.l602も参照されたい。LNPプロセスの説明:脂質ナノ粒子LNPは、衝突噴流法により調製される。この粒子は、アルコールに溶解した脂質とクエン酸塩緩衝液に溶解したsiRNAを混合することにより形成される。脂質のsiRNAに対する混合比は、脂質45~55およびsiRNA65~45を目標とする。この脂質溶液は、本発明の新規なカチオン性脂質、ヘルパー脂質コレステロール、PEG例、PEG-C-DMA、PEG-DMG脂質、および5~15mg/mLの濃度のDSPCを、アルコール例えばエタノール中9~12mg/mLの目標で含有する。これらの脂質の比は、カチオン性脂質について25~98モルパーセントの範囲目標は35~65であり、ヘルパー脂質は、0~75モルパーセントの範囲目標は30~50であり、PEG脂質は、1~15モルパーセントの範囲目標は1~6であり、DSPCは、0~15モルパーセントの範囲目標は0~12である。siRNA溶液は、1つ以上のsiRNA配列を0.3~1.0mg/mLの濃度範囲で含有し、目標は、3.5~5の範囲のpHのクエン酸ナトリウム緩衝塩溶液中0.3~0.9mg/mLである。これら2つの液体を、30~40°Cを目標とする、15~40°Cの範囲の温度に加熱した後、衝突噴流ミキサーで混合し、直ちにLNPを形成した。ティー内径teeIDは、0.25~1.0mmの範囲であり、全流速は10~600mL/分の範囲である。流速とチューブ内径tubingIDの組合せは、LNPsの粒径を30~200nmの間に制御する効果がある。次に、溶液を、より高いpHの緩衝液と、1:1~1:3容積:容積の範囲であるが1:2容積:容積を目標とする範囲の混合比で混合する。この緩衝液は、30~40°Cを目標とする、15~40°Cの範囲の温度である。混合したLNPsを、アニオン交換濾過段階の前に30分~2時間保持した。インキュベーション中の温度は、30~40°Cを目標とする、15~40°Cの範囲である。インキュベートした後、溶液を、アニオン交換分離段階を含む0.8umフィルターに通して濾過する。この方法は、1mmID~5mmIDまでのチューブ内径および10~2000mL/分の流速を使用する。LNPsを濃縮し、限外濾過法によって透析濾過し、アルコールを除去し、クエン酸塩緩衝液を最終の緩衝液、例えばリン酸緩衝生理食塩水などに交換する。限外濾過法は、タンジェンシャルフロー濾過方式TFFを使用する。この方法は、公称分子量カットオフが30~500KDの範囲の膜を使用する。膜形式は、中空糸であってもフラットシートカセットであってもよい。適切な分子量カットオフを用いるTFF法は、LNPを保持液中に保持し、濾液または透過液は、アルコール;クエン酸緩衝液;最終の緩衝液廃棄物を含有する。TFF法は、siRNA濃度に対する初期濃度が1~3mg/mLの多段階法である。濃縮した後、アルコールを除去して緩衝液交換を実施するために、LNPs溶液を、10~20容積の最終緩衝液に対して透析濾過する。次に、材料をさらに1~3倍に濃縮する。LNP法の最終段階は、濃縮したLNP溶液を滅菌濾過し、生成物をバイアルに入れることである。分析手順:1siRNA濃度siRNA二本鎖濃度は、2996PDA検出器を備えたWaters2695AlliancesystemWaterCorporation,MilfordMAを用いて、強陰イオン交換高速液体クロマトグラフィーSAX-HPLCにより決定される。LNPsそうでなければRNAi送達ビヒクルRDVsと呼ばれるを、0.5TritonX-100で処理して全siRNAを遊離し、254nmでUV検出するDionexBioLCDNAPacPA2004×250mmカラムを用いるSAX分離により分析した。移動相は、A:25mMNaClO4、10mMトリス、20EtOH、pH7.0およびB;250mMNaClO4、10mMトリス、20EtOH、pH7.0で構成され、0~15分の線形勾配および1ml/分の流速を用いる。siRNA量は、siRNA標準曲線と比較することにより決定される。2カプセル封入率蛍光試薬SYBRGoldをRNA定量化に用いて、RDVsのカプセル封入率をモニターする。TritonX-100を含むまたは含まないRDVsを使用して、遊離siRNAおよび全siRNA量を決定する。このアッセイは、MolecularDevicesSunnyvale,CA製のSpectraMaxM5eマイクロプレート分光光度計を用いて実施される。サンプルは485nmで励起し、530nmで蛍光発光を測定した。siRNA量は、siRNA標準曲線と比較することにより決定される。カプセル封入率=1-遊離siRNA/全siRNA×1003粒径および多分散性1μgのsiRNAを含有するRDVsを、1×PBSで希釈して最終容積3mlとする。サンプルの粒径および多分散性を、ZetaPALS機器BrookhavenInstrumentsCorporation,Holtsviile、NYを用いる動的光散乱法により測定する。散乱強度を、散乱角90°で25°CのHe-Neレーザーによって測定する。4ゼータ電位分析1μgのsiRNAを含有するRDVsを、1mMトリス緩衝液pH7.4で希釈して最終容積2mlとする。サンプルの電気泳動移動度を、電極および光源としてHe-Neレーザーを備えたZetaPALS機器BrookhavenInstrumentsCorporation,Holtsviile,NYを用いて決定する。Smoluchowskiの極限を、ゼータ電位の計算において仮定する。5脂質分析個々の脂質濃度は、コロナ荷電化粒子検出器Coronachargedaerosoldetector:CADESABiosciences,Inc,Chelmsford,MAを備えたWaters2695AlliancesystemWatersCorporation,MilfordMAを用いる逆相高速液体クロマトグラフィーRP-HPLCにより決定する。RDVs中の個々の脂質は、CADを備えたAgilentZorbaxSB-C1850×4.6mm、粒径1.8μmカラムを60°Cで用いて分析する。移動相は、A:H2O中0.1TFAおよびB:IPA中0.1TEAで構成される。勾配は、0時の移動相A60および移動相B40から、1.00分の移動相A40および移動相B60;1.00~5.00分の移動相A40および移動相B60;5.00分の移動相A40および移動相B60から、10.00分の移動相A25および移動相B75;10.00分の移動相A25および移動相B75から、15.00分の移動相A5および移動相B95;そして15.00分の移動相A5および移動相B95から、20.00分の移動相A60および移動相B40に1ml/分の流速で変化する。個々の脂質濃度は、二次曲線の当てはめによって、RDVs中のすべての脂質成分を含む標準曲線と比較することにより決定される。各々の脂質の分子百分率は、その分子量に基づいて計算される。上記のLNPプロセスを利用して、以下の比をもつ具体的なLNPsを特定した:公称組成:カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG60/38/2カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG67.3/29/3.7。LucsiRNA5’-iB-AUAAGGCUAUGAAGAGAUATT-iB3’配列番号:13’-UUUAUUCCGAUACUUCUCUAU-5’配列番号:2AUGC-リボースiB-逆位デオキシ脱塩基UC-2’フルオロAGT-2’デオキシAGU-2’OCH3公称組成カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG60/38/2カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC40/48/2/10カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC58/30/2/10ApoBsiRNA5’-iB-CUUUAACAAUUCCUGAAAUTT-iB配列番号:33’-UUGAAAUUGUUAAGGACUUUA-5’配列番号:4AUGC-リボースiB-逆位デオキシ脱塩基UC-2’フルオロAGT-2’デオキシAGU-2’OCH3公称組成カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG60/38/2カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC40/48/2/10カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC58/30/2/10ApoBsiRNA5’-iB-CUUUAACAAUUCCUGAAAUTsT-i-3’B配列番号:53’-UsUGAAAUUGUUAAGGACUsUsUsA-5’配列番号:6AUGC-リボースiB-逆位デオキシ脱塩基UC-2’フルオロAGT-2’デオキシAGU-2’OCH3UsA-ホスホロチオエートphophorothioate結合オリゴヌクレオチド、特に、siRNAおよびmiRNAの合成および使用は公知である。米国特許出願:米国特許出願公開第2006/0083780号、同第2006/0240554号、同第2008/0020058号、同第2009/0263407号および同第2009/0285881号ならびにPCT特許出願:国際公開第2009/086558号、同第2009/127060号、同第2009/132131号、同第2010/042877号、同第2010/054384号、同第2010/054401号、同第2010/054405号および同第2010/054406号参照。また、SempleS.C.etal.,RationaldesignofcationiclipidsforsiRNAdelivery,NatureBiotechnology,publishedonline17January2010;doi:10.1038/nbt.l602も参照されたい。有効性のマウスインビボ評価直前に記載される公称組成の化合物1~2を利用するLNPsを、ルシフェラーゼマウスモデルにおけるインビボ有効性および炎症性サイトカインの誘導について評価した。siRNAは、ホタルフォチナスピラリスPhotinuspyralisルシフェラーゼ遺伝子受託番号M15077のmRNA転写物を標的にする。ルシフェラーゼsiRNAの一次配列および化学修飾パターンを上に表示する。インビボルシフェラーゼモデルは、ホタルルシフェラーゼコード配列がすべての細胞に存在しているトランスジェニックマウスを用いる。ダナファーバー癌研究所DanaFarberCancerInstituteから認可されたROSA26-LoxP-Stop-LoxP-LucLSL-Lucトランスジェニックマウスを、最初にLSL配列を組換えAd-CreウイルスVectorBiolabsで除去することにより、ルシフェラーゼ遺伝子を発現するように誘導する。ウイルスの臓器親和性に起因して、尾静脈注射により送達される場合には、発現は肝臓に制限される。肝臓におけるルシフェラーゼ発現レベルを、ルシフェリン基質CaliperLifeSciencesの投与の後に、IVIS撮像装置Xenogenを用いて発光を測定することにより定量化する。投薬前pre-dose発光レベルをRDVsの投与の前に測定する。PBS中のルシフェリン15mg/mLを、150μLの量で腹腔内IP注射する。4分のインキュベーション期間の後、マウスをイソフランで麻酔し、IVIS撮像装置に入れる。PBSビヒクル中のRDVssiRNAを含有を、0.2mLの量で尾静脈注射した。最終投与量レベルは、0.3~3mg/kgsiRNAの範囲であった。PBSビヒクル単独は、対照として投与した。投薬の3時間後、マウスを後眼窩から出血させてサイトカイン分析のための血漿を得た。マウスを、投薬の48時間後に上記の方法を用いて撮像した。ルシフェリン光出力の変化は、直接にルシフェラーゼmRNAレベルに相関し、ルシフェラーゼsiRNA活性の間接的な尺度を示す。インビボ有効性の結果は、投薬前発光レベルに対する発光の阻害として表される。血漿中サイトカイン濃度は、SearchLight多重サイトカイン化学発光アレイPierce/Thermoを用いて決定した。ルシフェラーゼsiRNARDVsの全身投与は、ルシフェラーゼ発現を用量依存的に低下させた。オクチル-CLinDMAOCDカチオン性脂質を含有するRDVを投与したマウスよりも、RDVsを含有する化合物1を投与したマウスにおいて、より高い有効性が観察された図1。OCDは公知であり、国際公開第2010/021865号に記載されている。有効性および毒性のラットインビボ評価上記の公称組成において化合物1を利用するLNPsを、スプラーグドーリーCrl:CDSD雌ラットCharlesRiverLabsにおいて、インビボ有効性およびアラニンアミノトランスフェラーゼおよびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの増加について評価した。siRNAは、ApoB遺伝子受託番号NM019287のmRNA転写物を標的にする。ApoBsiRNAの一次配列および化学修飾パターンは上に表示されている。PBSビヒクル中のRDVssiRNAを含有を、1~1.5mLの量で尾静脈注射した。注入速度は、約3ml/分である。各々の投薬群に5匹のラットを使用した。LNPの投与後、ラットを標準的な食餌および水のあるケージに入れる。投薬の6時間後、食物をケージから取り出す。動物の解剖をLNP投薬の24時間後に実施する。ラットを5分間のイソフランで麻酔した後、イソフランの送達を継続しながら全採血が終了するまでラットをノーズコーンに入れることにより麻酔下で維持する。血液は、23ゲージバタフライ型静脈穿刺セットを用いて大静脈から採取し、血清化学分析のために血清分離器バキュテイナに等分する。切除した肝尾状葉のパンチを採取し、mRNA分析のためにRNALaterAmbionに入れる。保存肝組織をホモジナイズし、QiagenビーズミルおよびQiagenmiRNA-EasyRNA単離キットを製造業者の説明書に従って用いて全RNAを単離した。肝臓ApoBmRNAレベルを、定量的RT-PCRにより測定した。ラットApoBの市販のプローブセットAppliedBiosystemsカタログ番号RN01499054_mlを利用して精製RNAからメッセージを増幅させた。PCR反応を、96ウェルFastBlockを備えたABI7500機器で実施した。ApoBmRNAレベルを、ハウスキーピングPPIBNM011149mRNAに正規化する。PPIBmRNAレベルは、RT-PCRにより市販のプローブセットAppliedBiosytemsカタログ番号Mm00478295_mlを用いて測定した。結果を、ApoBmRNA/PPIBmRNAの比として表す。すべてのmRNAデータは、PBS対照投薬量と比較して表される。血清ALTおよびAST分析を、Siemensアラニンアミノトランスフェラーゼカタログ番号03039631およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼカタログ番号03039631試薬を利用して、SiemensAdvia1800ClinicalChemistryAnalyzerで実施した。オクチル-CLinDMAOCDカチオン性脂質を含有するRDVを投与したラットよりも、RDVを含有する化合物1を投与したラットにおいて、より高い有効性が観察された図2。その上、オクチル-CLinDMAカチオン性脂質を含有するRDVを投与したラットよりも、化合物1を含有するRDVを投与したラットにおいて、LFTALT/ASTのより低い上昇が観察された図3。ラット肝臓におけるカチオン性脂質レベルの決定肝組織を秤量して20mlバイアルに入れ、9v/wの水中でGenoGrinder2000OPSDiagnostics、1600ストローク/分、5分を用いてホモジナイズした。各々の組織ホモジネートの50μLアリコートを、300μLの抽出/タンパク質沈殿溶媒500nM内部標準を含有する50/50アセトニトリル/メタノールと混合し、プレートを遠心して沈殿したタンパク質を沈降させた。次に、各々の上清の200μLの量を96ウェルプレートの個々のウェルに移し、10μlの試料を直接、LC/MS-MSにより分析した。標準液は、既知量の化合物1またはOCDのメタノール原液を未処理のラット肝臓ホモジネートに添加することにより調製した肝臓1重量あたり水9容量。各々の標準/肝臓ホモジネートのアリコート50μLを、300μLの抽出/タンパク質沈殿溶媒500nM内部標準を含有する50/50アセトニトリル/メタノールと混合し、プレートを遠心して沈殿したタンパク質を沈降させた。各々の上清の200μLの量を96ウェルプレートの個々のウェルに移し、10μlの各々の標準液を直接、LC/MS-MSにより分析した。ラット肝臓ホモジネートから調製および抽出した標準液に対する絶対定量を、API4000三連四重極質量分析計AppliedBiosystemsに連結したAriaLX-2HPLCシステムThermoScientificを用いて実施した。各々の実験に対して、合計10μLの試料を、BDSHypersilC8HPLCカラムThermo、50×2mm、3μmに周囲温度で注入した図4。移動相A:95H2O/5メタノール/10mMギ酸アンモニウム/0.1ギ酸移動相B:40メタノール/60n-プロパノール/10mMギ酸アンモニウム/0.1ギ酸流速は0.5mL/分であり、勾配溶出プロフィールは次の通りであった:A80を0.25分間保持、1.6分間でB100へ直線勾配、B100を2.5分間保持、次に、A80に戻って1.75分間保持。総実行時間は5.8分であった。API4000ソースパラメータは、CAD:4、CUR:15、GS1:65、GS2:35、IS:4000、TEM:550、CXP:15、DP:60、EP:10であった。"