"iFcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、標的細胞の細胞表面抗原と特異的に結合する抗体分子と、組み合わせてiiFcγRIIbが前記抗体分子の前記Fcドメインに結合することを妨げるか、または低減させる薬剤を含む組成物であって、FcγRIIb発現の上昇したレベルを有する標的細胞を有する患者の処置において使用されるためのものであることを特徴とする組成物。抗体分子のFcドメインと、標的細胞上のFcγRIIbとの間における結合を妨げるか、または低減させる薬剤の使用であって、前記抗体分子は前記標的細胞の表面抗原と特異的に結合し、FcγRIIb発現の上昇したレベルを有する標的細胞を有する患者の処置において使用されるための医薬品の製造においてであることを特徴とする使用。FcγRIIbを発現する標的細胞を有する患者を処置する方法であって、iFcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、前記標的細胞の表面抗原と特異的に結合する抗体分子と、組み合わせてii前記抗体分子の前記Fcドメインと、FcγRIIbとの間における結合を妨げるか、または低減させる薬剤を投与することを含み、かつ、前記患者が、それらの標的細胞が上昇したレベルのFcγRIIbを発現することに基づいて選択されることを特徴とする方法。標的細胞におけるFcγRIIb発現の使用であって、FcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、前記標的細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体分子による処置に対する前記標的細胞の応答についての予後マーカーとしての使用であり、それにより、FcγRIIbの上昇したレベルが前記抗体分子による処置に対する応答における低下または前記抗体分子による処置に対する応答の非存在を示すものである、使用。標的細胞表面抗原と特異的に結合し、かつ、FcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する抗体分子による処置に対する患者の標的細胞の応答を予測するための方法であって、前記標的細胞におけるFcγRIIbの発現レベルを求めることを含み、それにより、FcγRIIbの上昇したレベルが前記抗体分子による処置に対する応答における低下または前記抗体分子による処置に対する応答の非存在を予測するものであることを特徴とする方法。前記薬剤は、前記標的細胞上に存在するFcγRIIbが前記抗体分子の前記Fcドメインに結合することを妨げるか、または低下させる、請求項1~3のいずれかに記載の組成物、使用または方法。FcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、標的細胞の細胞表面抗原と特異的に結合する前記抗体分子はFcγRIIb依存的様式で前記標的細胞内に内部移行されることが可能である、請求項1~6のいずれかに記載の組成物、使用または方法。FcγRIIbが前記抗体分子の前記Fcドメインに結合することを妨げるか、または低減させる前記薬剤はさらに、前記抗体分子の前記標的細胞内への内部移行を妨げるか、または低減させる、請求項1~3および6~7のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記標的細胞がガン細胞である、請求項1~8のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記標的細胞がB細胞である、請求項1~9のいずれかに記載の組成物、使用または方法。処置される前記患者がガン患者であり、かつ、前記処置がガン処置である、請求項1~10のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記ガンが、非ホジキンリンパ腫、例えば、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫または慢性リンパ性白血病などから選択される、請求項9~11のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、ポリペプチド;アンチカリン;ペプチド;抗体;キメラ抗体;単鎖抗体;アプタマー;ダルピン;Fab抗体フラグメント、Fab’2抗体フラグメント、Fv抗体フラグメント、ScFv抗体フラグメントまたはdAb抗体フラグメント;小分子;天然産物;アフィボディー;ペプチド模倣体;核酸;ペプチド核酸分子;脂質;炭水化物;アンキリン反復タンパク質、アルマジロ反復タンパク質、ロイシンリッチタンパク質、テトラリオペプチド反復タンパク質または設計されたアンキリン反復タンパク質DARPinを含むモジュール構成に基づくタンパク質のいずれかである、請求項1~12のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、FcγRIIbと特異的に結合する1つまたは複数の抗体分子である、請求項1~13のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記1つまたは複数の抗体分子は、エフェクター細胞を動員することができるドメインを含まない、請求項14に記載の組成物、使用または方法。前記1つまたは複数の抗体分子がモノクローナル抗体分子である、請求項15に記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、下記のCDRを含む可変性重鎖VH:i配列番号29および配列番号30および配列番号31;またはii配列番号35および配列番号36および配列番号37;またはiii配列番号41および配列番号42および配列番号43;またはiv配列番号47および配列番号48および配列番号49;またはv配列番号53および配列番号54および配列番号55;またはvi配列番号59および配列番号60および配列番号61;またはvii配列番号65および配列番号66および配列番号67;またはviii配列番号71および配列番号72および配列番号73;またはix配列番号77および配列番号78および配列番号79;またはx配列番号83および配列番号84および配列番号85;またはxi配列番号89および配列番号90および配列番号91;またはxii配列番号95および配列番号96および配列番号97;またはxiii配列番号101および配列番号102および配列番号103を含む、請求項1~3および6~16のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、下記のCDRを含む可変性軽鎖VL:i配列番号32および配列番号33および配列番号34;またはii配列番号38および配列番号39および配列番号40;またはiii配列番号44および配列番号45および配列番号46;またはiv配列番号50および配列番号51および配列番号52;またはv配列番号56および配列番号57および配列番号58;またはvi配列番号62および配列番号63および配列番号64;またはvii配列番号68および配列番号69および配列番号70;またはviii配列番号74および配列番号75および配列番号76;またはix配列番号80および配列番号81および配列番号82;またはx配列番号86および配列番号87および配列番号88;またはxi配列番号92および配列番号93および配列番号94;またはxii配列番号98および配列番号99および配列番号100;またはxiii配列番号104および配列番号105および配列番号106を含む、請求項1~3および6~17のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14および配列番号15からなる群から選択される可変性重鎖VHアミノ酸配列を含む、請求項1~3および6~18のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27および配列番号28からなる群から選択される可変性軽鎖VLアミノ酸配列を含む、請求項1~3および6~19のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、下記のCDRアミノ酸配列:i配列番号29および配列番号30および配列番号31および配列番号32および配列番号33および配列番号34;またはii配列番号35および配列番号36および配列番号37および配列番号38および配列番号39および配列番号40;またはiii配列番号41および配列番号42および配列番号43および配列番号44および配列番号45および配列番号46;またはiv配列番号47および配列番号48および配列番号49および配列番号50および配列番号51および配列番号52;またはv配列番号53および配列番号54および配列番号55および配列番号56および配列番号57および配列番号58;またはvi配列番号59および配列番号60および配列番号61および配列番号62および配列番号63および配列番号64;またはvii配列番号65および配列番号66および配列番号67および配列番号68および配列番号69および配列番号70;またはviii配列番号71および配列番号72および配列番号73および配列番号74および配列番号75および配列番号76;またはix配列番号77および配列番号78および配列番号79および配列番号80および配列番号81および配列番号82;またはx配列番号83および配列番号84および配列番号85および配列番号86および配列番号87および配列番号88;またはxi配列番号89および配列番号90および配列番号91および配列番号92および配列番号93および配列番号94;またはxii配列番号95および配列番号96および配列番号97および配列番号98および配列番号99および配列番号100;またはxiii配列番号101および配列番号102および配列番号103および配列番号104および配列番号105および配列番号106を含む、請求項1~3および6~20のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、下記のアミノ酸配列:i配列番号3および配列番号16;またはii配列番号4および配列番号17;またはiii配列番号5および配列番号18;またはiv配列番号6および配列番号19;またはv配列番号7および配列番号20;またはvi配列番号8および配列番号21;またはvii配列番号9および配列番号22;またはviii配列番号10および配列番号23;またはix配列番号11および配列番号24;またはx配列番号12および配列番号25;またはxi配列番号13および配列番号26;またはxii配列番号14および配列番号27;またはxiii配列番号15および配列番号28を含む、請求項1~3および6~21のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は、FcγRIIbが前記抗体の前記Fcドメインに結合することを妨げるか、または低減させるために請求項17~22において定義されるような薬剤と競合することができる、請求項1~3および6~16のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤はFcγRIIbのシグナル伝達を妨げるか、または低減させる、請求項1~3および6~23のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記薬剤は前記標的細胞による前記抗体分子の内部移行を妨げるか、または低減させる、請求項1~3および6~24のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記細胞表面抗原が、CD19、CD20またはCD40から選択される、請求項1~25のいずれかに記載の組成物、使用または方法。細胞表面抗原と特異的に結合する前記抗体分子がCD20抗体である、請求項1~26のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記CD20抗体がI型CD20抗体である、請求項27に記載の組成物、使用または方法。前記細胞表面抗原がCD20であり、かつ、細胞表面抗原に特異的に結合する前記抗体分子がI型抗体である、請求項1~28のいずれかに記載の組成物、使用または方法。前記標的細胞における上昇したFcγRIIb発現がコントロールに対して求められ、かつ、好ましくは、前記コントロールは前記標的細胞と同じタイプの細胞におけるFcγRIIb発現の正常なレベルである、請求項1~29のいずれかに記載の組成物、使用または方法。明細書および添付図面を参照して実質的に本明細書中に記載される組成物。明細書および添付図面を参照して実質的に本明細書中に記載される使用。明細書および添付図面を参照して実質的に本明細書中に記載される方法。予想外であったが、本発明者らは今回、モジュレーションが、細胞サブタイプにもかかわらず、FcγRIIbの表面発現と強く相関し、過剰発現により、Ramos細胞が、遅いモジュレート体から迅速なモジュレート体に変換され得ることを示す。FcγRIIbの内部移行がCD20と一緒に起こり、また、それに先立って、その活性化が生じた。まとめると、これらのデータは、種々のNHLサブタイプのサブタイプ内およびサブタイプ間の両方におけるモジュレーション速度の以前に認められた不均一性についての明確な分子的根拠をもたらす。すなわち、本発明者らは今回、驚くべきことに、抗原、例えば、CD20などに対する抗体の有効性を決定する重要な要因が、同じ細胞の表面における阻害性FcγRIIbこれは、CD32、CD32B、CD32B1、CD32B2、FcRII、FcγRIIbまたはFcRIIBとしてもまた知られており、CD32、CD32B、CD32B1、CD32B2、FcRII、FcγRIIbまたはFcRIIBを包含するとの相互作用であることを示す。この相互作用は標的細胞による抗体の内部移行を引き起こし、したがって、この内部移行により、抗体はエフェクター細胞のFc受容体と相互作用することができなくなる。本発明者らはさらに、薬剤、例えば、抗CD32mAbなどがこの内部移行を阻止し得ることを明らかにする。本発明者らはまた、そのような薬剤が、細胞表面抗原を標的化するために様々な抗体例えば、リツキシマブなどとの組合せで使用され得ること、また、それらの活性を、正常なB細胞または腫瘍細胞を除くためにインビボにおいて改善し得ることを明らかにする。本発明によると、iFcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、標的細胞の細胞表面抗原と特異的に結合する抗体分子と、組み合わせてiiFcγRIIbが前記抗体分子の前記Fcドメインに結合することを妨げるか、または低減させる薬剤を含む組成物であって、FcγRIIb発現の上昇したレベルを有する標的細胞を有する患者の処置において使用されるためのものであることを特徴とする組成物を提供する。別の側面によると、本発明は、抗体分子のFcドメインと、標的細胞上のFcγRIIbとの間における結合を妨げるか、または低減させる薬剤の使用であって、前記抗体分子は前記標的細胞の表面抗原と特異的に結合し、FcγRIIb発現の上昇したレベルを有する標的細胞を有する患者の処置において使用されるための医薬品の製造においてであることを特徴とする使用を提供する。別の側面によると、本発明は、FcγRIIbを発現する標的細胞を有する患者を処置する方法であって、iFcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、前記標的細胞の表面抗原と特異的に結合する抗体分子と、組み合わせてii前記抗体分子の前記Fcドメインと、FcγRIIbとの間における結合を妨げるか、または低減させる薬剤を投与することを含み、かつ、前記患者が、それらの標的細胞が上昇したレベルのFcγRIIbを発現することに基づいて選択されることを特徴とする方法を提供する。本発明の前記組成物、使用または方法の特定の実施形態において、前記薬剤は、前記標的細胞上に存在するFcγRIIbが前記抗体分子の前記Fcドメインに結合することを妨げるか、または低下させる。別の側面によると、本発明は、標的細胞におけるFcγRIIb発現の使用であって、FcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、前記標的細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体分子による処置に対する前記標的細胞の応答についての予後マーカーとしての使用であり、それにより、FcγRIIbの上昇したレベルが前記抗体分子による処置に対する応答における低下または前記抗体分子による処置に対する応答の非存在を示すものである、使用を提供する。1つの実施形態において、標的細胞におけるFcγRIIb発現の予後マーカーとしての使用は、標的細胞におけるFcγRIIc発現の予後マーカーとしての使用を必要としない。別の側面によると、本発明は、標的細胞表面抗原と特異的に結合し、かつ、FcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する抗体分子による処置に対する患者の標的細胞の応答を予測するための方法であって、前記標的細胞におけるFcγRIIbの発現レベルを求めることを含み、それにより、FcγRIIbの上昇したレベルが前記抗体分子による処置に対する応答における低下または前記抗体分子による処置に対する応答の非存在を予測するものであることを特徴とする方法を提供する。1つの実施形態において、患者の標的細胞の応答を予測するための方法は、標的細胞上のFcγRIIbの発現レベルを求めることを含み、かつ、標的細胞上のFcγRIIcの発現レベルを求めることをさらに含まない。必ずしもすべての抗体が、それらの共通するFc結合抗体定常ドメインおよび知られているFcガンマ受容体結合能にもかかわらず、FcγRIIb依存的様式で内部移行されず、このことにより、FcγRIIb機能調節試薬を含む併用治療による治療的成功のために、また、逆に、患者に利益をもたらさないことになる処置を回避するために非常に重要である好適な抗体の特定が行われることが明らかにされている。本発明の前記組成物、使用または方法の特定の実施形態において、FcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する、標的細胞の細胞表面抗原と特異的に結合する前記抗体分子はFcγRIIb依存的様式で前記標的細胞内に内部移行されることが可能である。本発明の組成物、使用または方法のある特定の実施形態において、FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを妨げるか、または低減させる薬剤はさらに、その後での抗体分子の細胞内への内部移行を妨げるか、または低減させる。本発明の組成物、使用または方法のある特定の実施形態において、標的細胞はガン細胞である。好都合には、標的細胞はB細胞である。好都合なことではあるが、本発明によれば、標的細胞における上昇したFcγRIIb発現がコントロールまたは参照物に対して求められる。好ましくは、コントロールは、標的細胞と同じタイプの細胞におけるFcγRIIb発現の正常なレベルである。FcγRIIb発現の上昇したレベルは下記において定義のもとで定義される。FcγRIIb発現レベルは、イソタイプコントロールに対するFcγRIIbの幾何平均蛍光強度GeoMFIの比率として測定することができる。代替において、FcγRIIb発現レベルは腫瘍生検物の免疫組織化学によって測定することができる。当業者は、FcγRIIb発現レベルを求めるための多数の技術および方法論が存在することを理解するであろう。本発明はまた、FcγRIIb抗体との併用処置のために好適である抗体、すなわち、標的細胞表面からFcγRIIb依存的様式で内部移行されるそのような抗体をどのようにして特定するかを教示する。本発明はさらに、FcγRIIb抗体との併用処置のために好適である患者サブセットを特定するための手段を提供する。別の局面において、本発明は、標的細胞表面抗原に対する抗体のFcドメインと、標的細胞上のFcγRIIbとの間における結合を低減させるか、または妨げる薬剤を特定するためのアッセイであって、Fcドメインと、FcγRIIbとの間における結合の程度を試験剤の存在下および非存在下で求めることを含むアッセイを提供する。試験剤が、FcドメインがFcγRIIbに結合することを低減させるか、または妨げるならば、有用な薬剤が特定される。そのようなアッセイはまた、どの薬剤例えば、抗体分子が抗FcγRIIb抗体との併用治療のために好適であるかを特定するためにも有用である。別の好ましい実施形態において、本発明の使用および方法の実施において有用である薬剤を特定するためのアッセイは、ウエスタンブロッティングによって検出されるような細胞内ITIMモチーフにおけるチロシン-293のリン酸化によって示されるように、FcγRIIbの刺激/シグナル伝達を阻止する薬剤についてスクリーニングすることを伴う。例えば、Raji細胞が、リン酸化FcγRIIbについての免疫ブロッティングの前に抗FcγRIIb試験剤の存在下または非存在下で細胞表面抗原に対する抗体、例えば、抗CD20mAbのリツキシマブとともに培養される。リン酸化FcγRIIbの量が、リツキシマブによって刺激された細胞では上昇するが、AT10を阻止剤として使用する図4Aに示されるのと同様な試験剤の添加によって阻害されるはずである。加えて、これらの薬剤は好ましくは、図1Aに示されるクエンチングアッセイによるリツキシマブの内部移行もまた阻止するはずである。図2Bは、抗FcγRIIb阻止実体、この場合にはAT10による阻止の典型的な一例を示す。そのようなアッセイはまた、どの薬剤例えば、抗体分子が抗FcγRIIb抗体との併用治療のために好適であるかを特定するためにも有用である。好ましい実施形態実施において、FcγRIIb抗体との併用治療のために好適である薬剤を特定するために使用されるアッセイは、薬剤例えば、抗体分子のFcγRIIb発現細胞内への内部移行の割合を測定する。このアッセイは、この方法が、薬剤例えば、抗体分子標的発現細胞およびFcγRIIb発現細胞とのインキュベーションの後で細胞表面に保持される薬剤例えば、抗体分子の割合を求めることを含み、それにより、細胞表面で利用可能な薬剤例えば、抗体分子の低下する割合これは、増大する抗体分子の内部移行に相当するが抗体分子による処置に対する応答を予測するものであるという点で特徴づけられる。NeubigetalPharmacolRev55597606これは参照によって本明細書中に組み込まれるは、FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを妨げるか、または低減させる薬剤を本発明に従って特定するためにスクリーニングされ得るリガンドの様々なクラスを記載する。上述のリガンドは小さい有機実体または無機実体であってもよく、しかし、好ましくはペプチドまたはポリペプチドである。典型的には、リガンドが小さい有機実体または有機実体であるとき、リガンドはMrが50~2000であり、例えば、100~1000であり、例えば、100~500である。典型的には、リガンドは、mM~pMのKdにより、例えば、μMマイクロモル濃度~nMの範囲におけるKdによりFcγRIIbに結合する。一般には、最も低いKdを有するリガンドが好ましい。リガンドは、ペプチド模倣体、核酸、ペプチド核酸PNAまたはアプタマーであってもよい。リガンドはまた、脂質または炭水化物であってもよい。リガンドは、FcγRIIbに結合するポリペプチドであってもよい。そのようなポリペプチドポリペプチドよって、オリゴペプチドが包含されるは典型的には、500のMrから50,000のMrまでであり、しかし、より大きくてもよい。ポリペプチドはまた、モジュール構成に基づく結合性タンパク質、例えば、アンキリン反復タンパク質、アルマジロ反復タンパク質、ロイシンリッチタンパク質、テトラトリオペプチド反復タンパク質または設計されたアンキリン反復タンパク質DARPin、あるいは、リポカリンまたはフィブロネクチンドメインまたはアフィリン足場に基づくタンパク質などあってもよい。好都合には、試験剤は試験化合物のライブラリーであり、好ましくは、ライブラリーは、ペプチドライブラリー、タンパク質ライブラリー、抗体ライブラリー、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー、あるいは、scFVファージディスプレーライブラリーまたはFabファージディスプレーライブラリーのいずれかである。好ましくは、本発明による組成物、使用または方法において、薬剤iiは、FcγRIIbと特異的に結合する1つまたは複数の抗体分子である。好都合には、そのような1つまたは複数の抗体分子は、エフェクター細胞を動員することができるドメインを含まない。エフェクター細胞を動員すること。好都合なことではあるが、そのような1つまたは複数の抗体分子は1つまたは複数のモノクローナル抗体である。好ましくは、薬剤はFcγRIIbのシグナル伝達を妨げるか、または低減させる。一層より好ましくは、薬剤は、標的細胞による抗体分子の内部移行を妨げるか、または低減させる。下記の実施形態において、配列番号は、下記のクローン1~13において示される配列を示す。当業者は気づいているであろうように、3つの相補性決定領域CDRが免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインには存在する。本明細書中に記載されるそれぞれのCDRに対するアミノ酸の帰属は、KabatEAetal1991InSequencesofProteinsofImmulogicalInterestFifthEditionNIHPublicationNo913242ppxvxviiによる定義に従っている。当業者は気づいているかもしれないように、他の方法もまた、アミノ酸をそれぞれのCDRに帰属するために存在する。例えば、InternationalImMunoGeneTics情報システム。1つの実施形態において、前記薬剤は、下記のCDRを含む可変性重鎖VH:i配列番号29および配列番号30および配列番号31;またはii配列番号35および配列番号36および配列番号37;またはiii配列番号41および配列番号42および配列番号43;またはiv配列番号47および配列番号48および配列番号49;またはv配列番号53および配列番号54および配列番号55;またはvi配列番号59および配列番号60および配列番号61;またはvii配列番号65および配列番号66および配列番号67;またはviii配列番号71および配列番号72および配列番号73;またはix配列番号77および配列番号78および配列番号79;またはx配列番号83および配列番号84および配列番号85;またはxi配列番号89および配列番号90および配列番号91;またはxii配列番号95および配列番号96および配列番号97;またはxiii配列番号101および配列番号102および配列番号103を含む。好ましくは、前記薬剤は、下記のCDRを含む可変性軽鎖VL:i配列番号32および配列番号33および配列番号34;またはii配列番号38および配列番号39および配列番号40;またはiii配列番号44および配列番号45および配列番号46;またはiv配列番号50および配列番号51および配列番号52;またはv配列番号56および配列番号57および配列番号58;またはvi配列番号62および配列番号63および配列番号64;またはvii配列番号68および配列番号69および配列番号70;またはviii配列番号74および配列番号75および配列番号76;またはix配列番号80および配列番号81および配列番号82;またはx配列番号86および配列番号87および配列番号88;またはxi配列番号92および配列番号93および配列番号94;またはxii配列番号98および配列番号99および配列番号100;またはxiii配列番号104および配列番号105および配列番号106を含む。選択的に、前記薬剤は、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14および配列番号15からなる群から選択される可変性重鎖VHアミノ酸配列を含む。選択的に、前記薬剤は、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27および配列番号28からなる群から選択される可変性軽鎖VLアミノ酸配列を含む。好ましくは、前記薬剤は、下記のCDRアミノ酸配列:i配列番号29および配列番号30および配列番号31および配列番号32および配列番号33および配列番号34;またはii配列番号35および配列番号36および配列番号37および配列番号38および配列番号39および配列番号40;またはiii配列番号41および配列番号42および配列番号43および配列番号44および配列番号45および配列番号46;またはiv配列番号47および配列番号48および配列番号49および配列番号50および配列番号51および配列番号52;またはv配列番号53および配列番号54および配列番号55および配列番号56および配列番号57および配列番号58;またはvi配列番号59および配列番号60および配列番号61および配列番号62および配列番号63および配列番号64;またはvii配列番号65および配列番号66および配列番号67および配列番号68および配列番号69および配列番号70;またはviii配列番号71および配列番号72および配列番号73および配列番号74および配列番号75および配列番号76;またはix配列番号77および配列番号78および配列番号79および配列番号80および配列番号81および配列番号82;またはx配列番号83および配列番号84および配列番号85および配列番号86および配列番号87および配列番号88;またはxi配列番号89および配列番号90および配列番号91および配列番号92および配列番号93および配列番号94;またはxii配列番号95および配列番号96および配列番号97および配列番号98および配列番号99および配列番号100;またはxiii配列番号101および配列番号102および配列番号103および配列番号104および配列番号105および配列番号106を含む。よりさらに好ましくは、前記薬剤は、下記のアミノ酸配列:i配列番号3および配列番号16;またはii配列番号4および配列番号17;またはiii配列番号5および配列番号18;またはiv配列番号6および配列番号19;またはv配列番号7および配列番号20;またはvi配列番号8および配列番号21;またはvii配列番号9および配列番号22;またはviii配列番号10および配列番号23;またはix配列番号11および配列番号24;またはx配列番号12および配列番号25;またはxi配列番号13および配列番号26;またはxii配列番号14および配列番号27;またはxiii配列番号15および配列番号28を含む。本発明の薬剤はまた、配列番号1および配列番号2の定常領域CHおよびCLを含む場合がある。さらなる実施形態において、薬剤は、FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを妨げるか、または低減させるために、本明細書中に記載される本発明の薬剤と競合することができ、例えば、上記実施形態において述べられるアミノ酸配列例えば、配列番号1~配列番号106を含む薬剤と競合することができる。FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを妨げるか、または低減させるために、本明細書中で定義されるような薬剤例えば、抗原分子などと競合することができるによって、試験された薬剤が、少なくとも部分的には、本明細書中に定義されるような薬剤のFcγRIIbへの結合を阻害するか、または、そうでない場合には妨害し、FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを妨げることができること、または低減させることができることが意味される。例えば、薬剤は、本明細書中に記載される薬剤の結合を少なくとも10、例えば、少なくとも20、30、40、50、60、70、80、90、95阻害するか、または、100さえ阻害すること、および/あるいは、FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを妨げるか、または低減させる薬剤の能力を少なくとも10、例えば、少なくとも20、30、40、50、60、70、80、90、95阻害するか、または、100させ阻害することが可能であるかもしれない。競合的結合が、当業者には広く知られている方法によって、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイELISAなどによって求められ得る。ELISAアッセイを、エピトープ改変抗体または阻止抗体を評価するために使用することができる。競合性抗体を特定するために好適なさらなる方法が、AntibodiesALaboratoryManualHarlowLaneこれは参照によって本明細書中に組み込まれるに開示される例えば、567頁~569頁、574頁~576頁、583頁および590頁~612頁、1988、CSHL、NY、ISBN0-87969-314-2を参照のこと。本発明の薬剤は下記の定常領域CHおよびCLを含むことができる:IgG1CH配列番号1ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKλCL配列番号2QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS本発明の薬剤はクローン1~14の1つまたは複数の配列を含むことができる:クローン1VH配列番号3VL配列番号16CDR領域CDRH1NYGMH配列番号29CDRH2VISYDGSNKYYADSVKG配列番号30CDRH3EWRDAFDI配列番号31CDRL1TGSSSNIGAGYDVH配列番号32CDRL2SDNQRPS配列番号33CDRL3AAWDDSLSGSWV配列番号34クローン2VH配列番号4VL配列番号17CDR領域CDRH1TYGMH配列番号35CDRH2VIAYDGSKKDYADSVKG配列番号36CDRH3EYRDAFDI配列番号37CDRL1TGSSSNIGAGYDVH配列番号38CDRL2GNSNRPS配列番号39CDRL3AAWDDSVSGWM配列番号40クローン3VH配列番号5VL配列番号18CDR領域CDRH1NYGMH配列番号41CDRH2VISYDGSNRYYADSVKGSEQIDNO42CDRH3DRWNGMDV配列番号43CDRL1SGSSSNIGAGYDVH配列番号44CDRL2ANNQRPS配列番号45CDRL3AAWDDSLNGPWV配列番号46クローン4VH配列番号6VL配列番号19CDR領域CDRH1SYGMH配列番号47CDRH2VISYDGSDTAYADSVKG配列番号48CDRH3DHSVIGAFDI配列番号49CDRL1SGSSSNIGSNTVN配列番号50CDRL2DNNKRPS配列番号51CDRL3SSYAGSNNVV配列番号52クローン5VH配列番号7VL配列番号20CDR領域CDRH1NYGMH配列番号53CDRH2VISYDGSNKYYADSVKG配列番号54CDRH3DQLGEAFDI配列番号55CDRL1TGSSSNIGAGYDVH配列番号56CDRL2DNNKRPS配列番号57CDRL3ATWDDSLSGPV配列番号58クローン6VH配列番号8VL配列番号21CDR領域CDRH1DYGMS配列番号59CDRH2AISGSGSSTYYADSVKG配列番号60CDRH3GDIDYFDY配列番号61CDRL1TGSSSNFGAGYDVH配列番号62CDRL2ENNKRPS配列番号63CDRL3AAWDDSLNGPV配列番号64クローン7VH配列番号9VL配列番号22CDR領域CDRH1SYGMH配列番号65CDRH2VISYDGSNKYYADSVKG配列番号66CDRH3ERRDAFDI配列番号67CDRL1TGSSSNIGAGYDVH配列番号68CDRL2SDNQRPS配列番号69CDRL3ATWDSDTPV配列番号70クローン8VH配列番号10VL配列番号23CDR領域CDRH1SYGMH配列番号71CDRH2VISYDGSNKYYADSVKG配列番号72CDRH3DHSAAGYFDY配列番号73CDRL1SGSSSNIGSNTVN配列番号74CDRL2GNSIRPS配列番号75CDRL3ASWDDSLSSPV配列番号76クローン9VH配列番号11VL配列番号24CDR領域CDRH1SYGMH配列番号77CDRH2GISWDSAIIDYAGSVKG配列番号78CDRH3DEAAAGAFDI配列番号79CDRL1TGSSSNIGAGYDVH配列番号80CDRL2GNTDRPS配列番号81CDRL3AAWDDSLSGPVV配列番号82クローン13VH配列番号15VL配列番号28CDR領域CDRH1SYGIS配列番号101CDRH2GISGSGGNTYYADSVKG配列番号102CDRH3SVGAYANDAFDI配列番号103CDRL1TGSSSNIGAGYDVH配列番号104CDRL2GDTNRPS配列番号105CDRL3AAWDDSLNGPV配列番号106クローン10VH配列番号12VL配列番号25CDR領域CDRH1SYGMH配列番号83CDRH2VISYDGSNKYYADSVKG配列番号84CDRH3ELYDAFDI配列番号85CDRL1TGSSSNIGAGYDVH配列番号86CDRL2ADDHRPS配列番号87CDRL3ASWDDSQRAVI配列番号88クローン11VH配列番号13VL配列番号26CDR領域CDRH1SYGMH配列番号89CDRH2VISYDGSNKYYADSVKG配列番号90CDRH3EFGYIILDY配列番号91CDRL1SGSSSNIGSNTVN配列番号92CDRL2RDYERPS配列番号93CDRL3MAWDDSLSGVV配列番号94クローン12VH配列番号14VL配列番号27CDR領域CDRH1NHGMH配列番号95CDRH2VISYDGTNKYYADSVRG配列番号96CDRH3ETWDAFDV配列番号97CDRL1SGSSSNIGSNNAN配列番号98CDRL2DNNKRPS配列番号99CDRL3QAWDSSTVV配列番号100好ましい標的細胞表面抗原を下記から選択することができる:CD20Thy125865Ly6697703CD597381FasEGFR3018Her2392401CXCR495263CD1936881CD408792HLA分子203GM127318CD22NEJM35961326CD23CD80CD74DRD好ましくは、本発明による組成物、使用または方法において、表面抗原は、CD19、CD20またはCD40から選択され、より好ましくは、それらのヒト形態から選択される。CD20、とりわけ、ヒトCD20が最も好ましい。好都合なことではあるが、細胞表面抗原と特異的に結合する抗体分子はモノクローナル抗体であり、好ましくは、標的細胞に結合したとき、細胞表面から除かれ、FcγRIIb依存的様式で標的細胞内に内部移行されるモノクローナル抗体である。好ましくは、そのようなモノクローナル抗体は、抗CD19抗体、抗CD20抗体または抗CD40抗体である。最も好ましくは、そのようなモノクローナル抗体は抗CD20モノクローナル抗体である。好ましい実施形態実施において、細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子はI型抗CD20抗体である。別の好ましい実施形態実施において、細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子はII型抗CD20抗体ではない。1つの実施形態において、細胞表面抗原はCD20であり、かつ、細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子はI型抗体である。上述のように、2つのタイプの抗CD20モノクローナル抗体mAbが存在する。抗CD20mAbは、最初、2003年に種々のグループ分けに分類されるとして本発明者らによって定義され43および25、その後、2004年にI型mAbおよびII型mAbとして定義された26。当初、このことについての根拠は、抗CD20mAbが、リンパ腫の異種移植片を根絶するそれらの能力に基づく2つの異なったタイプの試薬に分類されることであった:すなわち、I型例えば、リツキシマブおよび1F5は補体を利用し、II型例えば、B1は補体を利用しない。両方のタイプのmAbは生存の優れた延長をもたらし、しかし、補体活性を枯渇させることは、CVFを投与することによる場合、リツキシマブおよび1F5の効力をかなり損なったが、B1の活性に対する影響は何らなかった。これらの結果から、種々のCD20mAbが、異なるエフェクター機構をインビボにおいて作動させることが明瞭に示された。そのうえ、これらの結果は、リツキシマブおよび1F5が、CD20を標的細胞膜における脂質ラフトに転位置させることの結果として、補体を効率的に活性化し得ることを示す以前の研究、すなわち、B1型mAbは補体を活性化することができないことを示す何かの研究43と完全に一致している。補体と会合し、かつ、CD20を脂質ラフト内に移動するように誘導するmAbの能力との優れた相関が認められる43、26。したがって、I型およびII型の性質は、CD20を脂質ラフト内に移動させるそれらの能力によって定義することができる。このことが、下記に示されるように決定され得る。II型mAbはより強力なホモタイプ接着を誘発することができ、かつ、細胞死を導くことができることとの相関もまた認められる。しかし、これらは、Tx-100ラフトアッセイ下記参照とは異なりI型またはII型のmAbを定義するために単独で使用することができなかった。したがって、様々な抗CD20mAbが、CD20を原形質膜において再分布するそれらの能力および様々なエフェクターアッセイにおけるそれらの活性に従ってI型例えば、リツキシマブ、オファツムマブまたはII型例えば、トシツモマブB1、GA101、11B8として分類され得る25~27。I型例えば、リツキシマブ、オファツムマブの抗CD20モノクローナル抗体は、CD20を大きい界面活性剤抵抗性のミクロドメインラフトの中に再分布するように誘導し、これに対して、II型トシツモマブ様の抗CD20モノクローナル抗体は誘導しない50。上記で議論されたように、抗CD20mAbは、CD20を脂質ラフト内に再分布させるかどうかによってI型またはII型と呼ぶことができる。これは、Tx-100不溶性アッセイによって、または、スクロース密度勾配分離およびウエスタンブロッティングによって行われる。両方の方法が、下記のように、Cragg他、Blood、200343に記載される:1.TritonX-100不溶性によるラフト会合抗原の評価ラフトミクロドメインにおける抗原存在の迅速評価として、本発明者らは、低温におけるTritonX-100不溶性に基づくフローサイトメトリー法を利用した。簡単に記載すると、細胞をRPMI/1BSAにおいて洗浄し、2.5×106個/mlで再懸濁した。その後、細胞を10μg/mlのFITCコンジュゲート化mAbと37°Cで15分間インキュベーションし、冷PBS/1BSA/20mMアジ化ナトリウムにおいて洗浄し、その後、サンプルを二分した。一方を、100の表面抗原レベルの計算を可能にするために氷上で維持し、一方で、もう一方を、不溶性ラフト画分に残留する抗原の割合を求めるために氷上で15分間、0.5のTritonX-100により処理した。その後、細胞を、アッセイの残り部分を通して4°Cで維持し、PBS/BSA/アジ化物において1回洗浄し、上記で詳述されるように再懸濁し、フローサイトメトリーによって評価した。類似した結果が、間接的な検出方法を使用して得られた。標的抗原のラフト会合の構成的レベルを求めるために、細胞を最初、FITC標識されたmAbの結合に先立って、氷上で15分間、0.5のTritonX-100により処理し、PBS/BSA/アジ化物において洗浄した。より多くの抗原が、さらなる架橋によって、TritonX-100不溶性画分に移動し得るかを評価するために、細胞をFITC-mAbと以前のようにインキュベーションし、洗浄し、その後、4つに分けた。これらのサンプルのうちの2つをヤギ抗マウスIgFab’2フラグメントと氷上で15分間インキュベーションした。洗浄後、架橋サンプルの1つと、非架橋サンプルの1つとを、フローサイトメトリーに先立って、上記で詳述されるようにTritonX-100において溶解し、洗浄した。2.スクロース密度勾配分離およびウエスタンブロッティング-脂質ラフト画分の調製およびウエスタンブロッティングモノクローナルAb1μg/106細胞を37°Cで細胞に加えた。20分間インキュベーションした後、細胞をペレット化し、MES緩衝化生理的食塩水25mMMESpH6.5、150mMNaCl、1mMフェニルメチルスルホニルフッ化物、5μg/mlのアプロチニン、5μg/mlのロイペプチン、10mMEDTAにおける氷冷1.0TritonX-100において溶解した。その後、脂質ラフト画分をスクロース密度勾配遠心分離によって調製した。簡単に記載すると、溶解物を等体積の80スクロース/溶解緩衝液と混合し、不連続な5~30のスクロース密度勾配を重層し、その後、遠心分離を200,000xgで16時間行った。分画物0.5mlを集め、ウエスタンブロッティングによって分析した。それぞれの分画物の15mlアリコートを2×負荷緩衝液において1:1で希釈し、95°Cに5分間加熱し、15SDS-PAGEゲルで分離し、その後、PVDFメンブランに転写し、一次抗体例えば、CD20を検出するためのマウス抗CD20であるクローン7D1、または、ラフト画分を特定するための抗Lynウサギポリ血清Serotec、英国とインキュベーションし、その後、HRPコンジュゲート化二次抗体とインキュベーションした。ブロットを、ECLplusを使用して可視化した。抗CD20mAbはCD20のラージループにおけるAxPモチーフを要求し得るオファツムマブおよび他のGenmab抗体は要求しない。しかしながら、Niederfelner他51は、II型mAbが、I型と比較して、CD20ループのわずかに異なる領域に結合することを示す。好ましくは、本発明による組成物、使用または方法において、標的細胞はガン細胞である。より好ましくは、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫または慢性リンパ性白血病これらに限定されないを含む非ホジキンリンパ腫から選択されるガン。1つの実施形態において、本発明は、ガンを処置するための組成物、使用および方法を提供し、具体的には、リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病および非ホジキン病、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫の領域を伴う濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ならびに、びまん性小切り込み型細胞リンパ腫、または、それらの組合せから好ましくは選択されるB細胞悪性腫瘍を処置するための組成物、使用および方法を提供する。ある特定の実施形態において、B細胞悪性腫瘍はリンパ腫であり、例えば、非ホジキンリンパ腫NHLなどである。別の実施形態において、本発明は、炎症性疾患を処置するための組成物、使用および方法を提供する。これは自己免疫性疾患であってもよく、例えば、橋本甲状腺炎、悪性貧血、アジソン病、I型糖尿病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、皮膚筋炎、エリテマトーデス、多発性硬化症、自己免疫性内耳疾患、重症筋無力症、ライター症候群、グレーブス病、自己免疫性肝炎、家族性腺腫性ポリポーシスおよび潰瘍性大腸炎またはそれらの組合せなどであり得る。具体的な実施形態において、自己免疫性疾患は関節リウマチまたは全身性エリテマトーデスである。好ましい実施形態において、処置は、慢性リンパ球性白血病CLL、非ホジキンリンパ腫NHL、B細胞悪性腫瘍、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、全身性硬化症および自己免疫性水疱性疾患を含む疾患の処置である。好ましい実施形態において、本発明の使用によって強化される処置は、抗CD20mAb例えば、リツキシマブなどによる処置である。定義上昇したによって、問題としている細胞が、低いレベルまたは中程度のレベルのFcγRIIbをその表面に発現するコントロール細胞または参照細胞よりも高いレベルのFcγRIIbをその表面に発現するという意味が包含される。例えば、問題としている細胞がB細胞のタイプである場合、発現レベルが、同じ細胞タイプのB細胞によるFcγRIIbの発現の正常なレベル好ましくはメジアンレベルよりも大きかったならば、FcγRIIb発現の上昇したレベルが認識されるであろう。代替において、問題としている細胞が、FcγRIIbを低いレベルまたは中程度のレベルで発現する異なる細胞タイプよりも高いレベルでFcγRIIbを発現したならば、上昇したレベルが認識されるであろう。本発明によれば、標的細胞のFcγRIIb発現における上昇の程度が大きいほど、標的細胞の表面抗原に特異的に結合する抗体分子で、FcγRIIbと結合することができるFcドメインを有する抗体分子による処置に対するそのような細胞の予測された応答が悪くなる。したがって、FcγRIIb発現における上昇が大きいほど、FcドメインのFcγRIIbへの結合を妨げるか、または低減させる本発明による薬剤の使用から得られることになる利益が、図2Dおよび図3Aにおいて明らかにされるように大きくなる。FcγRIIbレベルをIHCによって測定し図10b、MCLサンプルをFcγRIIbについて陽性および陰性に分けた後において、応答における明確な臨床的差異が、リツキシマブに基づく治療の後で認められた図10cおよび図10d。当業者は、細胞表面におけるFcγRIIbの発現レベルを、様々な知られている方法によって、例えば、添付された図面および実施例において記載されるフローサイトメトリー法および免疫組織化学的染色法などによって容易に求めることができる。当業者は、FcγRIIbの正常な発現レベルおよび上昇した発現レベルが種々の細胞タイプの間および種々の疾患状態の間で変化するはずであることを理解するであろうし、また、所与の標的細胞または疾患状態についてのFcγRIIbの正常な発現レベルおよび上昇した発現レベルを、この技術分野で広く知られている方法および本明細書中に記載される方法を使用して特定することができるであろう。ある種の細胞タイプにおけるFcγRIIb発現の正常なレベルまたはメジアンレベルおよび上昇したレベルの例示的レベルが図2Cに提供される。これらの特定の例において、濾胞性リンパ腫FLでは、正常なレベルがおよそ50イソタイプコントロールに対するGeoMFIFcγRIIbの比率であり、上昇したレベルがおよそ125または400またはそれ以上であり、一方で、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫DLBCLでは、正常なレベルがおよそ20であり、上昇したレベルがおよそ80またはそれ以上であり、一方で、マントル細胞リンパ腫MCLでは、正常なレベルがおよそ60であり、上昇したレベルがおよそ110または190またはそれ以上であり、慢性リンパ性白血病CLLでは、正常なレベルがおよそ100であり、上昇したレベルがおよそ300またはそれ以上である。好ましくは、上昇したFcγRIIb発現レベルは、同じ細胞タイプの細胞または異なる細胞タイプの細胞の正常な発現レベル好ましくはメジアン発現レベルと比較して少なくとも1.1倍増大するか、あるいは、同じ細胞タイプの細胞または異なる細胞タイプの細胞の正常な発現レベルまたはメジアン発現レベルと比較して少なくとも1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍、4.1倍、4.2倍、4.3倍、4.4倍、4.5倍、4.6倍、4.7倍、4.8倍、4.9倍、5.0倍、5.1倍、5.2倍、5.3倍、5.4倍、5.5倍、5.6倍、5.7倍、5.8倍、5.9倍、6.0倍、6.1倍、6.2倍、6.3倍、6.4倍、6.5倍、6.6倍、6.7倍、6.8倍、6.9倍、7.0倍、7.1倍、7.2倍、7.3倍、7.4倍、7.5倍、7.6倍、7.7倍、7.8倍、7.9倍、8.0倍、8.1倍、8.2倍、8.3倍、8.4倍、8.5倍、8.6倍、8.7倍、8.8倍、8.9倍、9.0倍、9.1倍、9.2倍、9.3倍、9.4倍、9.5倍、9.6倍、9.7倍、9.8倍、9.9倍、10.0倍、10.5倍、11.0倍、11.5倍、12.0倍、12.5倍、13.0倍、13.5倍、14.0倍、14.5倍、15.0倍、15.5倍、16.0倍、16.5倍、17.0倍、17.5倍、18.0倍、18.5倍、19.0倍、19.5倍、20.0倍、21.0倍、22.0倍、23.0倍、24.0倍または25.0倍またはそれ以上増大する。好ましくは、上昇したFcγRIIb発現レベルは、同じ細胞タイプの細胞または異なる細胞タイプの細胞の正常な発現レベルまたはメジアン発現レベルと比較して少なくとも1.8倍増大する。添付された実施例において示されるように、本発明者らは、FcγRIIb発現のレベルが細胞表面からのmAbの増大したモジュレーションと相関することを明らかにしている。FcγRIIb発現の一層より高いレベルは一層より大きいモジュレーションを与える。すなわち、図2Dおよび図3Aに示されるような、発現の上昇の程度と、モジュレーションとの間における相関が認められる。図2Dにおいて、FcγRIIbの発現レベルが、観測されたモジュレーションのレベルに対してプロットされる。相関は、FcγRIIbの最も高いレベル例えば、400を超えるレベルが表面のCD20の最も低いレベル20未満のレベルをもたらし、すなわち、細胞表面からのmAbをモジュレートすることに対する最も大きい影響をもたらすような相関である。図3Aにおいては、FcγRIIbの低いレベル18、中程度のレベル70および高いレベル124がFcγRIIb陰性細胞株Ramosに導入され、このことが、FcγRIIbの発現に比例して細胞表面のCD20の低下するレベルと直接に相関した低、中程度および高について、60、40、30。FcγRIIb発現レベルが、イソタイプコントロールに対するFcγRIIbの幾何平均蛍光強度GeoMFIの比率として与えられる。モジュレーションは、細胞表面に残るmAbの量を低下させる。mAbは、標的細胞を除去するための免疫エフェクター機構ADCC、ADCP、CDCと関わるためにFcを要求する。したがって、モジュレーションをFcγRIIb阻止mAbにより低下させることは、Fc依存的なエフェクター機能を改善することになる。このことが、図8においてADCP食作用について示される。リツキシマブ単独による食作用は40であったが、FcγRIIbがAT10によって阻止されたときには55に上がった。抗体分子によって、モノクローナル抗体、合成抗体、組換え産生された抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体、単鎖FvscFv、単鎖抗体、Fabフラグメント、Fab’フラグメント、ジスルフィド連結されたFvsdFv、細胞内抗体、または、上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントが包含される。好ましくは、本発明の抗体はモノクローナル抗体であり、より好ましくはヒト化抗体またはヒト抗体である。本発明の組成物、使用および方法において有用である抗体分子の調製および特徴づけのための様々な方法が当業者には広く知られている。例えば、国際公開WO2008/002933は、5.3節~5.3.1節、74頁~91頁において、標的細胞表面抗原、例えば、CD20またはFcγRIIbなどに特異的に結合するモノクローナル抗体の調製および特徴づけを記載する。FcγRIIbおよびCD20と特異的に結合する有用な抗体がまた、ブダペスト条約に従って寄託されるハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体を含めて、国際公開WO2008/002933の15頁~21頁に開示されるその開示は参照によって本明細書中に組み込まれる。特異的に結合するによって、標的抗原に結合するが、他の抗原には結合交差反応しないか、または、そのような抗原とはより弱く、すなわち、標的抗原よりも低い親和性により結合する薬剤、例えば、抗体分子などが包含される。例えば、FcγRIIBに特異的に結合する抗体は、他のペプチドまたはポリペプチドに対しては、例えば、この技術分野で知られている免疫アッセイ、BIAcoreまたは他のアッセイによって求められる場合、より低い親和性により結合し得る。好ましくは、FcγRIIBまたはそのフラグメントに特異的に結合する抗体は他の抗原と交差反応しない。FcγRIIBに特異的に結合する抗体は、例えば、当業者に知られている免疫アッセイ、BIAcoreまたは他の技術によって特定することができる。抗体またはそのフラグメントは、この抗体またはそのフラグメントが、様々な実験技術、例えば、ウエスタンブロット、放射免疫アッセイRIAおよび酵素結合免疫吸着アッセイELISAなどを使用して求められるように、どのような交差反応性抗原に対するよりも大きい親和性によりFcγRIIBに結合するとき、FcγRIIBに特異的に結合し抗体特異性に関する議論については、FundamentalImmunologySecondEditionRavenPressNewYork332336頁を参照のこと、また、前記抗体またはそのフラグメントがFcγRIIA、具体的にはヒトFcγRIIA、より具体的には天然型ヒトFcγRIIAと結合するよりも大きい親和性によりFcγRIIB、具体的にはヒトFcγRIIB、より具体的には天然型ヒトFcγRIIBと結合する。代表的な抗体が、米国特許出願公開第2004-0185045号、同第2005-0260213号および同第2006-0013810号に開示されるこれらはすべてが、それらの全体において参照によって本明細書中に特に組み込まれる。好ましくは、本発明の組成物および方法においてCD20抗体との組合せで使用されるある種のFcγRIIB抗体は天然型ヒトFcγRIIBの細胞外ドメインと結合する。いくつかの実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、前記抗体またはそのフラグメントがFcγRIIAと結合するよりも少なくとも2倍大きい親和性によりFcγRIIBと結合する。別の実施形態において、前記抗体またはそのフラグメントは、前記抗体またはそのフラグメントがFcγRIIAと結合するよりも少なくとも4倍、少なくとも6倍、少なくとも8倍、少なくとも10倍、少なくとも100倍、少なくとも1000倍、少なくとも104倍、少なくとも105倍、少なくとも106倍、少なくとも107倍、少なくとも108倍大きい親和性によりFcγRIIBと結合する。好ましい実施形態において、前記抗体またはそのフラグメントは、前記抗体またはそのフラグメントがFcγRIIAと結合するよりも少なくとも100倍、少なくとも1000倍、少なくとも104倍、少なくとも105倍、少なくとも106倍、少なくとも107倍、少なくとも108倍大きい親和性によりFcγRIIBと結合する。本発明の局面を具体化する実施例が次に、添付された図面を参照して記載される。実施例1:原発性CLLサンプルおよび他のNHLサンプルにおけるCD20モジュレーション。本発明者らは以前に、CLLサンプルのコホートにおけるリツキシマブのモジュレーションの速度および程度における不均一性を認めた28。これらの発見を立証し、拡張するために、本発明者らはこのコホートを合計で48例のCLLサンプルに増やしている図1A。以前のように、本発明者らは、表面の利用可能なCD20の量を低下させるリツキシマブおよびトシツモマブそれぞれ、I型mAbおよびII型mAbの臨床的に関連のあるプロトタイプの能力を、2時間、6時間および24時間にわたって比較した図1A、および、データは示されず。加えて、本発明者らはまた、再発したCLLにおける使用について先ごろFDA承認されている研究室作製のオファツムマブofatum;I型、および、様々なNHLのために現在、臨床開発中であるGA101の糖非改変体GA101gly;II型19を試験した。本発明者らの以前の観測結果と一致して、かなりの不均一性が、II型mAbよりも有意に多いモジュレーションをもたらすI型mAbとの場合を除くサンプル間に認められた。6時間において、リツキシマブの存在下におけるモジュレーションは最大に近く、mAbの18~65メジアンで37がクエンチングアッセイにおいて利用可能なままであった図1A。そのI型性質と一致して、オファツムマブもまた、大きい程度のモジュレーションをもたらした6時間において26メジアン利用可能。対照的に、トシツモマブおよびGA101glyははるかに少ないモジュレーションを示し、メジアンで、結合したmAbの8061~89の範囲および7057~81の範囲がをそれぞれ6時間において利用可能であった。このCLLコホートの範囲内において、本発明者らは、CLLの予後において重要であることが知られているいくつかの要因を調べた。そのような要因には、ZAP-70発現29、30、CD38陽性31、32およびIgVH遺伝子の変異状態31、33、34が含まれた。結果追加の図1Aは、これらの疾患マーカーのいずれとも相関がないことを示した。本発明者らは以前に、異なったモジュレーションパターンを有するそれぞれのNHLサブタイプにもかかわらず、それらがかなりのCD20モジュレーション不均一性を呈したことを明らかにした28。このことをさらに詳しく調べるために、本発明者らは、分析される原発性サンプルの数を、8名の健康な志願者を含むように拡大した7例のSLL、7例のMCL、11例のFLおよび7例のDLBCL図1B。I型およびII型のmAbがモジュレーションを誘導し得ることにおける差が、すべての組織学的サブタイプにわたって持続した。本発明者らはまた、健康な志願者に由来するB細胞におけるCD20がリツキシマブの存在下で迅速にモジュレートし、しかも、悪性B細胞の場合よりも均一にモジュレートしたことを認めた。このことは、悪性に関連する要因が、認められた不均一性の一因であることを示唆する。SLL細胞およびMCL細胞に関するリツキシマブ誘導モジュレーションの速度はCLLの場合と類似し図1A、一方で、DLBCLおよびFLについては、速度が幾分か遅くなっていた図1AからのCLLと比較したとき、それぞれ、p<0.0001および0.0027。しかしながら、FLにおいて、本発明者らは、11例中2例の患者サンプルがリツキシマブを非常に迅速にモジュレートし、これにより、かろうじて検出可能なレベルのmAbまたはCD20が6時間の培養の後で残ったことを認めた。実施例2:B-NHLにおけるCD20のモジュレーションはFc依存的プロセスである。本発明者らおよび他の研究者は、インビボにおける抗CD20mAbの効力がFc依存的であることを以前に示している28。本発明者らは、モジュレーションが、エフェクター細胞の非存在下でさえ、同様にFc依存的であるかもしれないと仮定し、このことを、リツキシマブのFab’フラグメントおよびFab’2フラグメントを用いた内部移行アッセイを繰り返すことによって検証した図2A。リツキシマブFab’は、細胞結合アッセイデータは示されずによって確認されるように、CD20の二価架橋を必要とすることによって、または、その低親和性の一価結合によって、そのどちらかで説明され得るであろうほんの低いレベルのモジュレーションを示した。対照的に、Fab’2およびIgGは類似した結合プロフィルを示し結果は示されず、しかし、6時間の培養の後において、Fab’2フラグメントは、無傷のIgG20の表面利用可能CD20よりも有意に少ないモジュレーションを有していた40の表面利用可能CD20。アッセイが、高度に濃縮されたB細胞95超の純度を用いて行われたので、多量に存在する唯一のFcRは阻害性FcγRIIbであろう。阻止する抗FcγRIImAbであるAT10の存在下では、リツキシマブによるモジュレーションが低下し、ヒトIgG1を有するリツキシマブよりも低い親和性によりFcγRIIbに結合するリツキシマブFab’2フラグメントまたはRitm2aと同程度であった図2B。予想されるように、AT10との共インキュベーションは、Ritm2aのモジュレーションに対する影響をほとんどもたらさなかった。実施例3:正常なB細胞およびB細胞腫瘍におけるFcγRIIbの発現。FcγRIIb:Fcの相互作用がCD20モジュレーションの速度に影響を与え得るであろうという可能性を仮定して、本発明者らは、正常なB細胞および本発明者らの一群の原発性B細胞腫瘍におけるFcγRIIbの発現を調べた。図2Cに示されるように、FcγRIIb発現の顕著な不均一性がそれぞれの群の中において認められた。CLL細胞における発現は比較的高く、イソタイプコントロールと比較して20倍から300倍に及んだ。DLBCLと、FLの大部分とは、低いFcγRIIb発現を呈した。2つのFL事例は非常に高いFcγRIIb発現を呈し、驚くべきことに、これらは、極めて迅速にモジュレートすることを本発明者らが以前に認めていた同じ2つの事例であった。MCLおよびSLLは、不均一にもかかわらず、中間レベルのFcγRIIbを発現した図2C。再度ではあるが、これは以前の発見21と一致している。実施例4:FcγRIIb発現はCD20モジュレーションを調節する。まとめると、これらの発見により、FcγRIIb発現が、B細胞標的からのCD20モジュレーションの主要な決定要因であるかもしれないことが示唆された。この仮説を検証するために、本発明者らは、本発明者らの利用可能な健康なB細胞サンプルおよび原発性NHLサンプルのすべてのFcγRIIb発現およびCD20モジュレーション速度を比較した図2D。スピアマンの相関分析により、これらのパラメーターの間における強い関係が明らかにされたスピアマンr値:-0.74、95信頼区間:-0.83~-0.61、および、p<0.0001。データは、FLおよびDLBCLの事例の大部分が、広範な分布を示すCLLサンプルおよびMCLサンプルとともに上部に位置する逆指数関数的な曲線を示した。このグラフはまた、低い発現レベルでは、FcγRIIb発現における小さい差がCD20モジュレーションにおける比較的大きい変化の原因であり得るであろうことを明らかにしており、それにより、抗CD20:CD20複合体の細胞表面からのクリアランスを調節することにおけるこの受容体の能力を強調する。CD20モジュレーションにおけるFcγRIIbの役割を直接に検討するために、FcγRIIb-veのRamos細胞を、FcγRIIbをコードするプラスミドによりトランスフェクションした。得られたFcγRIIbve細胞は一定しないFcγRIIb発現レベルを呈したので、続いて、これらのFcγRIIbve細胞を、低いFcγRIIb、中程度のFcγRIIbおよび高いFcγRIIbを発現する各サブクローンに分けた。その後、元のFcγRIIb-のRamos細胞と一緒に、これらの細胞を内部移行アッセイにおいて評価した。リツキシマブの存在下において、6時間でのCD20モジュレーション速度がFcγRIIb発現と相関し、モジュレーションが下記の順で増大した:FcγRIIb-ve>FcγRIIbve低>FcγRIIbve中程度>FcγRIIbve高図3A。同様に、野生型マウス、および、遺伝子組換えヒトCD20を発現するFcγRIIノックアウトKOマウスから得られるB細胞を使用した場合、FcγRIIb-/-のマウスの細胞におけるモジュレーションが野生型対応体よりも少なかったデータは示されず。だが、感知できるほどのモジュレーションがFcγRIIの非存在下において認められたことには留意しなければならない。このことは、この遺伝子組換えモデルでは、FcγRII以外の要因もまた、CD20モジュレーションを調節することに関与することを示している。FcγRIIbはB細胞上のBCR活性化の負の調節因子でありこれは35において総説される、また、CD20はCD20mAbによる会合の後でBCRと物理的に会合する36、37ので、本発明者らは、BCRの発現またはシグナル伝達活性がモジュレーションに影響し得るであろうと仮定した。したがって、これらの発見の原因としてのBCR発現における差を除外するために、BCR欠損Ramos細胞Rx3をFcγRIIbによりトランスフェクションし、CD20のモジュレーションを非操作のRamos細胞および模擬のRx3トランスフェクション細胞と比較した図3B。これらのデータは、BCR発現を欠くRx3細胞がRamos細胞よりも遅くモジュレートすること、しかし、この欠陥が、高レベルのFcγRIIbを発現することFcγRIIbveのRx3細胞によって克服され得ることを明瞭に示している。CD20モジュレーションを調節することにおけるBCRに対するFcγRIIbのこの支配的役割が下記によって裏付けられる:1本発明者らは、高いレベルのモジュレーションを、低いレベルのBCRを特徴的に発現するCLL細胞において認めていること38;および2本発明者らは、何らかの相関を、CLL細胞における表面免疫グロブリンsIg発現と、CD20モジュレーションとの間において示すことができなかったこと追加図1。実施例5:CD20およびFcγRIIbのモジュレーションに先立って、FcγRIIbの活性化が生じる。抗CD20mAbと、FcγRIIbとの間における相互作用をさらに探るために、本発明者らは、細胞内ITIMモチーフにおけるチロシン-293のリン酸化によって示されるようなFcγRIIbの抗体媒介される刺激を調べた。Raji細胞を、リン酸化FcγRIIbについての免疫ブロッティングの前に、抗FcγRIIb阻止mAbAT10の存在下または非存在下においてトシツモマブまたはリツキシマブとともに培養した。リン酸化FcγRIIbを、トシツモマブではなく、リツキシマブによって刺激された細胞において評価し、リン酸化FcγRIIbがAT10の添加によって阻害された図4A。類似した結果がDaudi細胞に関して認められたデータは示されず。実施例6:CD20およびFcγRIIbの架橋が主にシス様式で生じる。リツキシマブは、同じ細胞シスまたは隣接細胞トランスのどちらかの表面においてCD20およびFcγRIIbによって共結合され得る。このことを調べるために、本発明者らは、PHK26標識されたFcγRIIb-のRamos細胞を高FcγRIIb発現Ramosトランスフェクタント図4Bとともに共培養し、その後、それぞれの細胞タイプにおけるモジュレーションのレベルを比較した単独で培養された両方の細胞タイプをコントロールとした。以前に示されたように、単独で培養されたとき、FcγRIIbve細胞は、FcγRIIbを欠く細胞よりも大きいモジュレーションを示した図4B。共培養では、FcγRIIb-veにおけるモジュレーションのレベルがわずかに増大し、しかし、FcγRIIbve細胞において見られるレベルには達しなかった。この結果は、トランス相互作用が生じているかもしれないが、FcγRIIbによるCD20mAbのモジュレーションが主にシス様式で行われることを示唆する。この発見がRamos細胞株に特異的でなかったことを明らかにするために、本発明者らは、低いFcγRIIbを発現するCLLサンプルこれは、PKH26標識することによって区別されるを、高レベルのFcγRIIbを発現する3つの異なるCLL事例に由来する細胞とともに共培養した図4C。Ramos細胞を用いた以前のアッセイにおいて認められるように、混合集団において、FcγRIIbが低いB細胞におけるモジュレーションは、FcγRIIbが高い集団において見られるモジュレーションに達しなかった。このことは、再度ではあるが、FcγRIIbによるCD20mAbのモジュレーションが主にシス様式で行われることを示唆する。しかしながら、最も早くモジュレートするCLL細胞との共培養が、低FcγRIIb発現CLLのモジュレーションにおける最も大きい増大をもたらし、しかし、その増大はほどほどにすぎなかったおよそ18;データは示されずことに留意することは興味深いことである。このタイプのさらなる実験において、CLL細胞を、細胞:細胞相互作用の可能性を低下させるために、低下する濃度で培養し、その結果、細胞濃度を低下させることにより、モジュレーションが少なくなるという弱い傾向が得られた図4D。同じ実験を、種々の濃度のRaji細胞を用いて繰り返した。再度ではあるが、モジュレーションの程度または範囲における変化がほとんど認められなかったデータは示されず。重要なことに、この実験の期間中に撮影された明視野顕微鏡法画像は、細胞間トランス相互作用の可能性が、2×106細胞/mlと比較して、1×105細胞/mlでははるかに少なかったことを明らかにする。そのうえ、本発明者らは、リン酸化FcγRIIbのレベルにおける顕著な差が種々の細胞密度で全く存在しなかったことを認めた図4E。まとめると、これらのデータは、FcγRIIbが、CD20mAbのモジュレーションに対するその影響を、隣り合うFcγRIIb発現細胞からのほんの小さい寄与を伴って、主には同じ細胞上での事象を介して媒介することを示している。実施例7:FcγRIIbはエンドサイトーシスによりリポソームにCD20とともに取り込まれる。細胞表面でのリツキシマブの会合の後におけるFcγRIIbの運命を突き止めるために、本発明者らはその発現および場所をフローサイトメトリーおよび共焦点顕微鏡法によってモニターした。フローサイトメトリーを使用して、本発明者らは、CLLの6つの異なる事例に由来するB細胞におけるFcγRIIbの表面発現を評価し、FcγRIIbの表面発現が、トシツモマブではなく、リツキシマブとの2時間のインキュベーションのうちに低下したことを見出した図5A。これらの発見は、FcγRIIbが三成分複合体の一部としてCD20およびリツキシマブトシツモマブではないと一緒に内部移行されるかもしれないことを示唆する。本発明者らおよび他の研究者は、初期エンドソームへのその輸送をもたらすリツキシマブのエンドサイトーシスと、リソソームにおけるその後の分解とを以前に報告している9、28。同じプロセスがCLL細胞において抗CD20:CD20:FcγRIIb複合体の一部としてのFcγRIIbに関して生じたかどうかを検討するために、本発明者らはCLL細胞をTosit-488またはRitux-488とともに培養し、その後、固定処理し、AT10に由来するAlexa647標識のFab’2を使用するFcγRIIbについての染色およびリソソームマーカーLAMP-1についての染色を行った。mAbによる刺激の前では、FcγRIIb染色が原形質膜において拡散しており、非局在化していた図5B。抗CD20mAbとの30分間のインキュベーションの後において、本発明者らは、染色における明確な差を、Ritux-488と、Tosit-488との間において認めた。それによれば、Tosit-488は表面にもっぱら留まり、Ritux-488は細胞内の点状染色を明らかにし、このことは本発明者らの以前の観測結果と一致していた図5C、データは示されず。および28。6時間の刺激の後では、Tosit-488は細胞表面全域にわたって一様に分布したままであり、一方、AT10-647は30分においてそのベースライン外観から変化しておらず、LAMP-1との共局在化が全く認められなかった図5D。対照的に、同じ時間経過にわたって、Ritux-488は異なった点状パターンを示し、細胞の大部分58がAT10-647およびRitux-488の間での共局在化を明らかにした図5E。LAMP1およびAT10-647の両方とのRitux-488の共局在化もまた、33の細胞において認められた。推定では、3つすべての染色の間において認められたこのより低い程度の共局在化は、Ritux-488およびFcγRIIbが一緒に内部移行し、そして、リソソームにおけるそれらの出現の前に、おそらくは他の細胞内区画を占めるという事実を反映する。実施例8:FcγRIIbはI型抗CD20mAbをインビボにおいて阻害する。FcγRIIbがI型抗CD20mAbの効力をインビボにおいて阻害しているかもしれないかどうかを検討するために、本発明者らは、B細胞枯渇化実験を、hCD20Tg野生型マウスにおいて、また、FcγRIIbを欠くhCD20TgマウスCD32KOにおいても行った。これらの実験において、マウスを、マウスIgG1を有するリツキシマブ変化体m1またはマウスIgG2aを有するリツキシマブ変化体m2aにより処理し250μg、iv、その後、B細胞の枯渇を、マウスの連続した採血により90日間にわたるフローサイトメトリー、ならびに、B220mAbおよびCD19mAbによる染色によってモニターした図6。これらの変化体はCD32bに強く結合しm1、または、弱く結合するm2a。データは、m1イソタイプが使用されたとき、枯渇がm2aと比較して最適でないこと、および、CD32の喪失が枯渇効力における実質的な改善をもたらすことを明瞭に示す。対照的に、m2aはCD32の存在下または非存在下において概ね類似している。実施例9:FcγRIIbはヒト腫瘍に対する抗CD20mAbの活性をインビボにおいて高め、増強する。ヒト腫瘍細胞に対するCD32の影響、および、現行の治療用mAb、例えば、リツキシマブなどを増強する可能性を調べるために、本発明者らは異種移植片システムを用いた。このシステムでは、ヒト腫瘍細胞のみがhCD32を発現し、したがって、どのような治療効果であれ、治療効果は、宿主エフェクター細胞に対する何らかの影響を介してではなく、モジュレーションを阻止することによってであると最も考えられる腫瘍細胞に対する影響に由来する。これらの実験において、CD20陽性かつCD32陽性のヒト腫瘍細胞DaudiまたはRajiをSCIDマウスに接種し、その後、リツキシマブ、AT10または両方のいずれかにより処理し、マウスの生存または腫瘍成長をモニターした図7。使用されたmAbの用量が図の凡例に示される。Aでは、Daudi細胞が皮下に接種され、腫瘍が3日~5日毎にカリパス測定によってモニターされた。BおよびCでは、Raji腫瘍細胞が静脈内に注入され、動物が生存についてモニターされた。両方のモデルにおいて、AT10は、リツキシマブの活性を高め、増強することが示された。このことはインビボにおけるこの組合せの可能性を明らかにする。実施例10:FcγRIIbレベルはリツキシマブ処置のMCL患者における臨床結果を予測する。本発明者らのインビトロ知見の概念実証として、本発明者らは、リツキシマブを受けていたMCLのコホートのFcγRIIb発現を遡及的に調べた。診断用のパラフィン包埋組織を、FcγRIIb特異的mAbを使用して免疫組織化学によって染色した図11。強い膜染色がFcγRIIbveのリンパ腫サンプルにおいて認められたが、FcγRIIb-veのリンパ腫サンプルでは認められなかった。これらの結果は、フローサイトメトリーによって得られる対応するDMSO凍結サンプルのFcγRIIb発現と相関した。IHCによって図10aおよび図10bに示されるFcγRIIb染色は、図2Dに示されるようなフローサイトメトリーによって示されるFcγRIIb発現と相関した2Dにおけるフローサイトメトリーによって求められる値が図10aおよび図10bにおいて数字の挿入として示される。16名のMCL患者からなるほんの小さいコホートを研究したにもかかわらず、FcγRIIb-veのリンパ腫の患者は、FcγRIIbveの細胞を有する患者よりも有意に良好なメジアン無進行生存を有したメジアンがそれぞれ、852日および189日であった。図10cは、FcγRIIbサブセットおよびFcγRIIb-サブセットにおける生存差を示す。これらの群は臨床的特徴の点で同程度でありMCL国際予後指標、データは示されず、しかし、使用された化学療法タイプにおいて不均一性があった。このことを検討するために、本発明者らは、最初の治療についてリツキシマブまたはフルダラビンのどちらかの単剤、シクロホスファミドおよびリツキシマブFCRにより処置されたそのような患者における結果を調べ、類似した結果が認められた。図10dは、患者コホートが議論されるようにさらに管理された後のFcγRIIbサブセットおよびFcγRIIb-サブセットにおける生存差を示す。実施例10および実施例11における実験のための理論的根拠は下記の通りである。細胞が高レベルのCD32bFcγRIIbを発現するならば、そのような細胞はリツキシマブをより迅速に内部移行することになるこれは、低下した表面利用可能CD20として示される。リツキシマブが細胞表面にほとんど存在しないならば、Fc依存的なエフェクター活性例えば、食作用またはADCCなどがより少なくなることになり、したがって、腫瘍細胞殺傷がより小さくなり、したがって、それほど広範囲でない治療結果が生じることになる。したがって、本発明者らは、MCLを有する処置患者のコホートにおけるFcγRIIb発現を調べ、患者がCD32bの高発現者または低発現者であったかどうかを求めた。臨床データがこのコホートについては既に入手可能であり、したがって、その後、臨床結果を、患者が高FcγRIIb発現腫瘍または低FcγRIIb発現腫瘍であったかどうかに従って階層化した。仮説は、低レベルのFcγRIIbを発現する腫瘍がリツキシマブにより首尾よく処置されると考えられ、高レベルのFcγRIIbを発現する腫瘍はそれほど十分には処置されないと考えられるということであった。このことはまさに、臨床データにおいて示されたことである。図11は、FcγRIIb染色のために使用されたmAbの特異性を示す。使用されたmAbは、近縁のFcγRIIaではなく、FcγRIIbを発現する細胞のみを染色する。FcγRIIbレベルをIHCによって測定し図10b、MCLサンプルをFcγRIIbについて陽性および陰性に分けた後、本発明者らは、リツキシマブに基づく治療の後での応答における明確な臨床差を認めた図10cおよび図10d。実施例11-抗CD32bモノクローナル抗体の選択。14個の抗体クローンの可変領域VHおよびVLのアミノ酸配列ならびにCDR領域のアミノ酸配列が図37~図50に示される。それぞれの場合において、定常領域CHおよびCLは同じである。定常領域が図36に示される。CD32BFcγRIIbに対する選択を、n-CoDeR登録商標scFvファージディスプレーライブラリーを使用して行った。ヒトCD32Aを非標的として使用した。mIgG3-Fcに融合されたCD32AおよびCD32Bの細胞外ドメインをHEK293Eにおいて産生させ、プロテインAで精製した。3回の連続するタンパク質選択を行った。非標的をすべての選択において競合剤として使用した。得られたファージを個々のクローンのスクリーニングのためにscFv/Fab産生形式に変換し、E.coliTop10細菌に形質転換した。スクリーニングでは、ヒトのCD32BおよびCD32Aに対する特異性が決定され、また、スクリーニングを、コーティングされたタンパク質をELISAで使用して分析し、同様にまた、トランスフェクションされたCHO細胞によりFMATで分析した。IC阻害特性を求めるために、IgGをCD32BトランスフェクションCHO細胞と結合させ、その後、ICをIgG1コーティングのウシ血清アルブミンの形態で加えた。その後、結合したICを検出した。IgGの阻害特性が評価され得るでろう。実施例12-抗CD32bmAbはリツキシマブのモジュレーションを阻止することができる。リツキシマブ-alexa488を、異なるCD32b阻止mAbWTまたは297Q変異型の存在下または非存在下、CD32BによりトランスフェクションされたRamos細胞に加え、モジュレーションを、1時間後、2時間後、6時間後および24時間後に評価した。CD32mAbの阻止能についてのコントロールとして、本発明者らはまた、二重CD32a/b特異性mAbのAT10IgGフラグメントおよびFab2フラグメントFabを陰性コントロールイソタイプが一致した無関係なmAbisowtまたはnqとともに含めた。図12におけるデータは、3つすべてのnCodermAbC1、C11およびC13がwt形式または297q形式のどちらにおいてでもリツキシマブのモジュレーションを阻止し得ることを明瞭に示している。図13は、抗CD32bmAbがリツキシマブのモジュレーションを阻止し得ることを、13個すべてのmAbを使用して示す。加えて、コントロールのCD32陰性Ramos細胞が、CD32阻止mAbの最大影響を推定することを可能にするために含められた。図12におけるデータは、nCodermAbのすべてがリツキシマブのモジュレーションを阻止できたことを明瞭に示している。前記一組の実験は、FcγRIIbがリツキシマブの内部移行を調節することを明らかにしていた。したがって、これらの実験は、抗FcγRIIbmAbによりFcγRIIbを阻止することによって、リツキシマブが内部移行される量が低下するであろうかどうかを調べようとするものであった。実施例13。抗CD32阻止mAbの親和性と、リツキシマブ結合後のCD32bのリン酸化を妨げる能力、および、リツキシマブのモジュレーションを妨げる能力との間における相関。mAbの相対的親和性を、CD32BによりトランスフェクションされたCHO細胞に対するmAb結合を測定する用量滴定実験によって求めた。簡単に記載すると、CD32Bによりトランスフェクションされた接着性CHOK1細胞をFMATプレートに播種した。IgGを30nMからおよそ0.015nMまで1:2の希釈で力価測定し、室温で1時間にわたって結合させた。洗浄後、結合したIgGを抗ヒトIgG-APCにより検出した。最後に、プレートを洗浄し、FMATAppliedBiosystemsで読み取った。これは、標的発現細胞に対するmAb結合についてのEC50値を与え、相対的親和性に変換することができる。その後、この相対的親和性を、リツキシマブ結合後のCD32bのリン酸化を妨げる抗CD32b阻止mAbの能力と相関させた。これを、細胞を、抗CD32bmAbの存在下または非存在下においてリツキシマブにより刺激し、その後、ウエスタンブロッティングをホスホCD32bについて行うことによって求めた。その後、CD32bmAbを、CD32のリン酸化を阻止するその能力に従ってランク付けした1が最も効果的である。図14Aは、密接な相関が、mAbの親和性と、CD32bのリン酸化を阻止する能力との間において明白に認められたことを示す。図14Bは、強い相関が、mAbの親和性と、リツキシマブのモジュレーションを阻止する能力との間において明白に認められたことを示す。このデータから、標的細胞表面からのリツキシマブのモジュレーションを促進させることにおけるCD32Bの中心的役割が確認される。理論的根拠が、mAbのより大きい親和性により、FcγRIIbがより良好に阻止されるであろうということであった。続いて、mAbがFcγRIIbをより良好に阻止するほど、mAbはリツキシマブのモジュレーション/内部移行をより良好に阻止するであろう。このことはまさに、図14に示されたことである。親和性が大きいほど、mAbは、リツキシマブが結合することによって誘導されるFcγRIIb活性化これは、ウエスタンブロッティングによるホスホFcγRIIb染色の量に測定されたをより良好に阻止し、また、同様に、モジュレーションをより良好に阻止した。実施例14。hCD32Bトランスフェクション細胞に対する用量依存的結合、ならびに、hCD32Bトランスフェクション細胞に対する免疫複合体の用量依存的な結合および阻害。細胞をFMATプレートに播種した。免疫複合体を、FITCをBSAにコーティングし、その後、これをFITC特異的hIgG1抗体と10:1のモル比で混合することによって調製した。図15~図27は、hCD32Bトランスフェクション細胞に対する用量依存的結合、ならびに、クローン1~13によってそれぞれ媒介されるhCD32Bトランスフェクション細胞に対する免疫複合体の用量依存的な結合および阻害を示す。○円、サークルは、hCD32AによりトランスフェクションされたCHOK1細胞に対する用量依存的結合を示し、◆黒菱形は、hCD32BによりトランスフェクションされたCHOK1細胞に対する依存的結合を示す。×クロスは、hCD32BによりトランスフェクションされたCHOK1細胞に対する免疫複合体の用量依存的阻害を示す。これらの実験は、1mAbの特異性を求めるために設計される。CD32BおよびCD32Aは非常に近縁の分子である。しかしながら、CD32Bは阻害シグナルを伝えるが、CD32Aは正のシグナルを伝え、したがって、所望される効果のためには、抗体がCD32Bと結合するだけであることが不可欠である。2さらには、CD32Bを介するシグナルを効果的に阻止するために、抗体はCD32Bと結合しなければならないだけでなく、その天然リガンドの結合、すなわち、免疫複合体ICを阻止しなければならない。したがって、図は、CD32A、CD32Bに対する結合、および、IC結合の阻害を示す。図は、すべてのmAbがCD32について特異的であり、かつ、CD32Aと結合しないこと、および、すべてのmAbがIC結合を阻害することを明らかにする。実施例15。抗CD32B抗体の細胞特異性。抹消血から単離されたPBMCを、Ficoll密度勾配を使用して調製した。細胞を細胞特異的マーカーにより染色し、CD32B特異的抗体の結合について評価した。図28に示されるように、B細胞CD19細胞のみがクローン1~13により陽性に染まった。休止PBMCでは、CD32BがB細胞の表面に発現されるだけであり、一方、密接に関連するCD32Aが単球および好中球の表面に発現される。前図は、トランスフェクションされたCHO細胞における特異性を示す。図28は、抗体がまた、CD32BをB細胞上にその真に天然型の形態で発現するB細胞と結合し、一方で、抗体は、CD32Aを発現する好中球または単球を染色しないことを示す。したがって、この図は、正常な非トランスフェクションPBMCにおいて抗原が発現されるときの抗体特異性を明らかにするものである。実施例16。抗FcγRIIbmAbクローン1~13によるB細胞の用量依存的染色。抹消血から単離されたPBMCを、Ficoll密度勾配を使用して調製した。細胞をCD19により染色し、その後で、10mg/ml、1mg/mlまたは0.1mg/mlの示されるようなCD32B特異的抗体により染色した。図29は、それぞれのクローンによるB細胞の細胞染色がどのように用量依存的であるかを示す。図29では、B細胞これは、CD32Bを発現することが知られているが、CD19特異的mAbを使用してゲートアウトされている。このゲートはM1と呼ばれる。CD32BmAbの濃度が低下するとき、染色されたB細胞の数が、ほぼ100から、はるかにより低い値にまで低下する。このことは、CD32B特異的mAbから予想されるように、B細胞の特異的かつ用量依存的な染色を示す。このことは、再度ではあるが、抗体の特異性を明らかにするものである。既に述べられたように、CD32AおよびCD32Bは極めて近い関係にあり、特異的な抗体を得ることは些末なことではない。特異的な抗体はどれも用量依存的な結合を示すはずであり、このことが、図29において明らかにされることであり、すなわち、抗体用量を減らすと、染色されたB細胞の量が、最大用量において認められるようなほぼ100から低下する。したがって、この図は、正常な非トランスフェクションB細胞において抗原が発現されるときの抗体特異性を明らかにするもうひとつのものである。実施例17。Fc媒介のCD32Bリン酸化を阻害するそれぞれのmAbの能力。Raji細胞CD32B陽性をリツキシマブにより処理し、これにより、CD32Bのリン酸化を生じさせた。これをCD32B特異的mAb1~13の非存在下または存在下で行った。図30は、Fc媒介のCD32Bリン酸化を阻害するそれぞれのmAbの能力を明らかにする。実施例17および実施例18の背後にある仮説は、リツキシマブのFc領域がFcγRIIbと結合すること、および、これにより、FcγRIIbの活性化が引き起こされることである。このことがFcγRIIbのITIM領域のリン酸化によって測定される。この反応を抗FcγRIIbmAbにより阻止することは、リン酸化の阻止図30およびモジュレーションの阻止図31および図32を生じさせるにちがいない。wt型FcγRIIbIgG1は、そのFc領域を介してFcγRIIbと結合することもできるので、本発明者らは、N297Q変異体これは、FcγRIIbと結合しないFcを有するもまた、類似する活性を有したかどうかを調べた。N297Q変異体は同一の活性を有した。実施例18。I型抗CD20mAbのモジュレーションの速度に対するCD32bの影響。CD32bが他のI型抗CD20mAbの内部移行に関与し得ることが図31に示される。それぞれのmAbのAlexa-488標識されたものをpCDNA3によりトランスフェクションされたRamos細胞またはCD32BによりトランスフェクションされたRamos細胞と1時間または6時間インキュベーションし、モジュレーションの程度を以前のように求めた。使用されたmAbは、リツキシマブRTX、研究室で作製されたオファツムマブOFAおよびトシツムモマブTosであった。データは、OFAの内部移行速度がRTXの内部移行速度と類似しており、CD32bの存在によって促進されることを明瞭に示す。これらのモジュレーション影響がリツキシマブI型抗CD20に関して認められ、しかし、トシツモマブII型抗CD20mAbに関してはそれほど明白でなかった。したがって、本発明者らは、このことが他の抗CD20mAbにまで及んだかどうかを検討することを望み、そこで、オファツムマブ、すなわち、別の臨床的に関連のあるI型mAbTeeling、200452を調べた。オファツムマブは、リツキシマブと同様に、予想された通り迅速に内部移行された。実施例19。抗CD19mAbもまた、部分的にはCD32Bに依存する様式で、悪性のヒトB細胞の細胞表面から内部移行する。RamoshuCD32bトランスフェクタント。他の表面抗原との内部移行もまたCD32b発現によって達成され得る。モジュレーションアッセイを、AT10によるCD32阻止の存在下または非存在下-、異なるmAbを用いて以前のように行った。RamosCD32Bトランスフェクタントをこの6時間アッセイにおいて使用した。p<0.05。f3.3=MHCクラスII;RFBP=CD19;RTX=リツキシマブ。図32は、CD32阻止とのインキュベーションの後、RTXおよびRFB9のmAbについては表面モジュレーションにおける有意な低下を、また、F3.3については低下がほとんどないことを明瞭に示す。これらのデータは、標的抗原、例えば、CD19などもまた、部分的にはCD32Bに依存し、かつ、抗CD32bmAbによって阻止され得る様式で、悪性のヒトB細胞の細胞表面から内部移行し得ることを示している。本発明者らは、CD20以外の標的抗原もまたFcγRIIb発現によって影響されるかどうかを明らかにすることを望んだ。したがって、本発明者らは、他の標的抗原CD19およびMHCIIに向けられたmAbを調べ、また、FcγRIIbを阻止するmAbがそれらの内部移行を低下させるであろうかどうかを調べた。データは、CD19mAbのモジュレーションもまた、FcγRIIbを阻止することによって低下することを示す。実施例20。他の表面抗原との内部移行もまたCD32b発現によって達成され得る。Ramos細胞はCD32bを全く有しておらず、したがって、CD32Bの非存在下における内部移行のレベルを明らかにする。抗原がCD32bによって内部移行され得るならば、Ramos-CD32B細胞上でのその発現は内部移行のレベルを増大させることになる。それぞれのmAbのAlexa-488標識されたものをpCDNA3によりトランスフェクションされたRamos細胞またはCD32BによりトランスフェクションされたRamos細胞と24時間インキュベーションし、モジュレーションの程度を以前のように求めた。=p<0.05。図33は、他の抗原との内部移行もまたCD32b発現によって達成されることを示す。材料および方法細胞ヒト細胞株Daudi、Raji、RamosをECACCから得て、10ウシ胎児血清FCSLonza、英国ならびにグルタミンおよびピルビン酸塩ともにInvitrogenが補充されたRPMIInvitrogen、英国において維持し、37°C、5CO2で培養した。BCR発現を欠くRx3Ramos細胞は以前に作製されたものである36。RamosFcγRIIbトランスフェクタント、および、空のベクターによりトランスフェクションされたコントロール細胞FcγRIIb陰性は、以前に記載されたものであり36、ジェネテシンInvitrogen、英国を添加した上記のような補充されたRPMIにおいて維持された。FcγRIIbおよび空のベクターによりトランスフェクションされたRx3細胞が同じように作製され、維持された。FcγRIIbの表面発現を、下記に記載されるPE標識されたAT10を使用してフローサイトメトリーによって求めた。低いレベル、中程度のレベルまたは高いレベルのFcγRIIbを発現するRamosFcγRIIbトランスフェクタントを、FACSAriaフローサイトメーターBDBiosciences、米国を使用して分取した。血液提供者正常なヒトB細胞をインフォームドコンセントとともに健康な志願者から得た。抹消血をK2EまたはLiHのいずれかで採取し、リンパ球を、LymphoprepAxis-Shield、英国を製造者のプロトコルに従って使用して分離し、B細胞をヒトB細胞単離キットIIMiltenyiBiotec、ドイツによる負の選択によって単離した。臨床サンプルCLL/SLL、FL、DLBCLおよびMCLの各サンプルをヘルシンキ宣言に従ってインフォームドコンセントとともに得た。血液サンプルをLymphoprepによりK2EまたはLiHで集め、固体組織を無菌のストレーナーに通してばらばらにし、遠心分離した。細胞を、50ヒトAB血清および10DMSOが補充されたRPMIにおいて凍結保存し、ヒト組織局の許諾のもと、サウサンプトン大学ガン科学部門腫瘍バンクにおいて保存した。臨床サンプルの使用のための倫理承認をサウサンプトンサウスウエストハンプシャー研究倫理委員会からのサウサンプトン大学病院NHSTrustによって得た。CLL細胞については、IgVH遺伝子の変異状態33およびCD38の陽性44を以前に詳述されるように求めた。簡単に記載すると、IgVH分析のために、VHリーダープライマーミックスおよびCμ100プライマーを使用して、重鎖遺伝子をcDNAから増幅した。すべてのヌクレオチド配列をV塩基ディレクトリーに対してアラインメントし、変異状態を、98カットオフを使用して求めた。CD38分析のために、抗CD38PEクローンHB7;BDBiosciencesを使用した。ZAP-70状態の決定をCrespo他30によって記載されるように行った。CLL細胞の表面Ig発現を以前の記載45、46ようにフローサイトメトリーによって求めた。生存性アッセイ細胞を、以前に詳述されるように25、FITC標識アネキシンVおよびPIにより染色した後、フローサイトメトリーによって生存性について評価した。抗体および試薬リツキシマブは、サウサンプトン総合病院、腫瘍薬学科によって譲渡されたものである。Ritm2aマウスIgG2aのFc領域を有するリツキシマブおよびWR17抗CD37すべてがマウスIgG2aを以前の記載18のように作製した。抗FcγRIImAbAT10は、実験室で作製されたものであり、以前に記載されている47。トシツモマブは、TimIllidge教授Manchester、英国によって譲渡されたものである。オファツムマブおよびGA101glyFc領域が改変されていないグリコシル化GA101を、特許公開された配列から実験室で作製した。これらのmAbは、CHO細胞または293F細胞において作製されたものであり、したがって、臨床使用のために製造されるmAbとは例えば、それらの炭水化物構造において異なるかもしれないことに留意すること。Alexa-488および抗Alexa488試薬をInvitrogenから購入した。Fab’2フラグメントの製造は以前に記載されている48。Fab’フラグメントを、20mMの2-メルカプトエタノールとのインキュベーションを25°Cで30分間行い、その後、過剰のヨードアセトアミドを添加することによって作製した。使用されたウエスタンブロッティング抗体は抗アクチンAC74、Sigma、英国および抗ホスホFcγRIIbCellSignalingTechnology、英国であった。フローサイトメトリー蛍光団により標識されたmAbをBDBiosciencesから得たか、または、実験室で作製した。mAbを製造者のプロトコルに従ってAlexa488Invitorgenとコンジュゲートした。フローサイトメトリーは以前に記載されている49。サンプルをFACScanまたはFACSCaliburのどちらかで評価し、データを、CellQuestProすべてが、BDBiosciencesにより、または、FCSExpressDeNovoSoftware、米国により分析した。B細胞をAPC標識された抗ヒトCD19実験室により特定し、FcγRIIb発現を、PE標識されたAT10実験室を使用して求めた。実験間の変動を考慮するために、FcγRIIb発現をFcγRIIb:イソタイプコントロールのGeo平均蛍光強度MFIの比率として表した。内部移行アッセイ内部移行アッセイを以前に詳述されるように行った28。簡単に記載すると、2~4×105細胞/ウエルを5μg/mlの最終濃度でのAlexa-488標識されたmAbとインキュベーションした。サンプルを、1時間後、2時間後、6時間後および/または24時間後に集め、2回洗浄し、再懸濁し、クエンチング抗体の抗Alexa-488Invitrogenの存在下または非存在下、APC標識された抗CD19と4°Cで30分間インキュベーションした。その後、サンプルを1回洗浄し、フローサイトメーターで分析した。細胞と結合した抗CD20mAbのFc領域の、隣接細胞上のFcγRIIbとの相互作用を調べるために、Ramos細胞これはFcγRIIb-veであるを製造者の説明書に従ってPHK26SigmaAldrichにより標識した。その後、PKH26標識された細胞を、FcγRIIbによりトランスフェクションされたRamos細胞の等しい数2.5×105細胞とともに共培養した。両方の細胞タイプをコントロールとして単独で培養した。その後、内部移行アッセイを上記のように行い、モジュレーションをPKH26標識集団およびPKH26非標識集団で比較した。この共培養アッセイのさらなる変形が図の凡例に記載される。ウエスタンブロッティングプロトコルは以前に記載されている36。簡単に記載すると、約2×106細胞/ウエルをmAb5~10μg/mlとインキュベーションした。その後、サンプルをSDS-PAGEによって分離し、タンパク質を直ちにPVDFメンブラン転写した。メンブランを5w/v脱脂乾燥乳によりブロッキング処理し、適切に希釈された一次抗体とインキュベーションし、洗浄し、その後、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートされた抗ウサギIgGまたは抗マウスIgGSigmaAldrichとインキュベーションし、強化化学発光ECL、GEHealthcare、英国、または、PierceBiotechnology、英国、および、感光性フィルムHyperfilmECL、GEHealthcare、英国またはBiospectrumACImagingSystemUVP、英国への露光によって可視化した。光学顕微鏡観察および共焦点顕微鏡観察抗CD20mAbおよびFcγRIIbの細胞内輸送を明らかにするために、CLL細胞を、図の凡例に記載されるような様々な時間にわたって、適切なAlexa488標識されたmAbとインキュベーションし、その後、集め、洗浄し、2パラホルムアルデヒドにより固定処理した。FcγRIIbおよびLAMP-1をそれぞれ検出するために、その後、細胞を0.3サポニンにより透過処理し、Alexa-647標識されたAT10Fab’2標識化が、AlexaFluor-467標識キットInvitrogenを製造者のプロトコルに従って用いて行われた、および/または、ビオチンコンジュゲート化抗ヒトCD107aLAMP-1eBioscience、英国とインキュベーションした。その後、細胞を洗浄し、ストレプトアビジン-AlexaFluor-547Invitrogenを加え、その後、さらに洗浄した。その後、細胞をスライドの上に移し、画像を、TCS-SP5レーザー走査共焦点顕微鏡LeicaMicrosystems、英国10xの接眼レンズ、10xの対物レンズにおいてLAS-AFv2ソフトウエアを使用して取り込んだ。種々の細胞希釈度での細胞近傍を明らかにするために、細胞を1~20×105個/mlで播種し、様々なmAbにより2時間および/または6時間刺激し、その後、それらの比較的近傍を光学顕微鏡観察によって評価した。細胞を、10xまたは20x/0.25のPHレンズを使用するOlympusCKX21倒立型顕微鏡Olympus、英国により調べた。画像を、CCL2デジタル冷却カメラOlympusを使用して取得し、CellBソフトウエアOlympusSoftimagingsolutionsおよびAdobePhotoshopバージョンCS2ソフトウエアAdobe、SanJose、CAにより処理した。統計学的分析統計学的分析を、GraphPadPrismGraphPadSoftware、米国を使用して行った。対になったノンパラメトリックデータを、ウィルコクスンのペアード検定を使用して分析し、一方で、対になっていないデータはマンホィットニー検定を使用して分析した。例示的な組成物、配合物および投与様式本発明は、疾患、障害または感染に伴う1つまたは複数の症状を、効果的な量の本発明の医薬組成物を対象または患者に投与することによって処置、予防または改善する方法を提供する。具体的な実施形態において、対象または患者は動物であり、好ましくは哺乳動物であり、例えば、非霊長類例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなどおよび霊長類例えば、サル例えば、カニクイサルなどおよびヒトである。好ましい実施形態において、対象はヒトである。様々な送達システムが知られており、それらを、本発明の組成物を投与するために使用することができる例えば、リポソームにおける封入、マイクロ粒子、マイクロカプセル、抗体を発現することができる組換え細胞など。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本発明の抗体の標的化された送達のためにリポソームに配合される。リポソームは、水相を包み込む同心状に整列したリン脂質二重層から構成される小胞である。リポソームは典型的には、様々なタイプの脂質、リン脂質および/または表面活性剤を含む。リポソームの構成成分が、生物学的膜の脂質配置と類似する二重層形態で配置される。リポソームは、部分的にはその生体適合性、低い免疫原性および低い毒性のために特に好ましい送達ビヒクルである。リポソームを調製するための様々な方法がこの技術分野では知られており、本発明において包含される。例えば、Epstein他、1985ProcNatlAcadSciUSA823688Hwangetal1980ProcNatlAcadSciUSA7740304米国特許第4,485,045号および同第4,544,545号を参照のことこれらのすべてがそれらの全体において参照によって本明細書中に組み込まれる。本発明の組成物を投与する方法には、非経口投与例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下、硬膜外投与および粘膜投与例えば、鼻腔内経路および経口経路が含まれるが、これらに限定されない。具体的な実施形態において、本発明の組成物は、筋肉内、静脈内または皮下に投与される。組成物は、どのような経路であれ、好都合な経路によって投与することができ、例えば、注入またはボーラス注射によって、あるいは、上皮または粘膜皮膚の内張り例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜などを介した吸収によって投与することができ、また、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身的または局所的であることが可能である。加えて、肺投与もまた、例えば、吸入器またはネブライザーの使用およびエアロゾル化剤との配合によって用いることができる。米国特許第6,019,968号;同第5,985,309号;同第5,934,272号;同第5,874,064号;同第5,855,913号;同第5,290,540号;および同第4,880,078号;およびPCT公開番号WO92/19244号;同WO97/32572号;同WO97/44013号;同WO98/31346号;および同WO99/66903号を参照のことこれらのそれぞれがその全体において参照によって本明細書中に組み込まれる。障害に伴う1つまたは複数の症状の処置、予防または改善において効果的であろう本発明の組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。配合において用いられるための正確な用量はまた、投与経路および状態の重症度に依存することになり、医師の判断および各患者の状況に従って決定されなければならない。効果的な用量は、インビトロ試験システムまたは動物モデル試験システムに由来する用量応答曲線から推定される場合がある。本発明によって包含される抗体について、患者に投与される投薬量は典型的には、組合せにおけるそれぞれの抗体について独立して0.0001mg/kg患者体重~100mg/kg患者体重である。好ましくは、患者に投与されるそれぞれの抗体の投薬量は、0.0001mg/kg患者体重~20mg/kg患者体重、0.0001mg/kg患者体重~10mg/kg患者体重、0.0001mg/kg患者体重~5mg/kg患者体重、0.0001mg/kg患者体重~2mg/kg患者体重、0.0001mg/kh患者体重~1mg/kh患者体重、0.0001mg/kg患者体重~0.75mg/kg患者体重、0.0001mg/kg患者体重~0.5mg/kg患者体重、0.0001mg/kg患者体重~0.25mg/kg患者体重、0.0001mg/kg患者体重~0.15mg/kg患者体重、0.0001mg/kg患者体重~0.10mg/kg患者体重、0.001mg/kg患者体重~0.5mg/kg患者体重~02.5mg/kg患者体重、または、0.01mg/kg患者体重~0.10mg/kg患者体重である。一般に、ヒト抗体は、異物ポリペプチドに対する免疫応答のために、他の生物種に由来する抗体よりも長いヒト体内における半減期を有する。したがって、ヒト抗体のより少ない投薬量およびより少ない投与頻度が多くの場合、可能である。さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントの投薬量および投与頻度は、抗体の取り込みおよび組織浸透を修飾例えば、脂質化などにより高めることによって減らすことができる。1つの実施形態において、患者に投与される本発明の組成物の抗体のそれぞれの投薬量が0.01mg/日~1000mg/日である。本発明の組成物は、予防的または治療的に効果的な量の本明細書中に開示されるような薬剤および抗体と、医薬的に許容されるキャリアとを含む。具体的な実施形態において、用語医薬的に許容されるは、規制当局によって承認されていること、あるいは、動物における使用、より具体的にはヒトにおける使用のために米国薬局方または他の一般に承認された薬局方に収載されていることを意味する。用語キャリアは、治療剤が一緒に投与される希釈剤、アジュバント例えば、フロイントアジュバント完全および不完全、賦形剤またはビヒクルを示す。そのような医薬用キャリアは無菌の液体が可能であり、例えば、水およびオイルなどが可能であり、オイルには、石油起源、動物起源、植物起源または合成起源のものが含まれ、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油およびゴマ油などなどが含まれる。医薬組成物が静脈内投与されるときには、水が、好ましいキャリアである。生理的食塩水溶液ならびにデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液はまた、特に注射可能な溶液のための液体キャリアとして用いることができる。好適な医薬用賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水およびエタノールなどが含まれる。組成物はまた、所望されるならば、少量の湿潤化剤または乳化剤、あるいは、pH緩衝化剤を含有することができる。それらの組成物は、溶液、懸濁物、乳化物、錠剤、ピル、カプセル、粉末および持続放出配合物などの形態を取ることができる。様々な実施形態において、抗体および薬剤は同時に投与することができ、あるいは、1時間未満の間隔を置いて、約1時間の間隔を置いて、約1時間~約2時間の間隔を置いて、約2時間~約3時間の間隔を置いて、約3時間~約4時間の間隔を置いて、約4時間~約5時間の間隔を置いて、約5時間~約6時間の間隔を置いて、約6時間~約7時間の間隔を置いて、約7時間~約8時間の間隔を置いて、約8時間~約9時間の間隔を置いて、約9時間~約10時間の間隔を置いて、約10時間~約100時間の間隔を置いて、約11時間~約12時間の間隔を置いて、24時間を超えない間隔を置いて、または、48時間を超えない間隔を置いて投与することができる。好ましい実施形態において、2つ以上の成分が、同一の患者診療の際に投与される。本明細書中に示される投薬量および投与頻度は、治療効果的および予防効果的の用語によって包含される。投薬量および頻度はさらに、典型的には、投与される具体的な治療剤または予防剤、疾患の重篤度およびタイプ、投与経路、同様にまた、患者の年齢、体重、応答および過去の病歴に依存して、それぞれの患者について特異的な要因に従って変化するであろう。好適な療法が、そのような要因を考慮することによって、また、例えば、文献に報告される投薬量、および、Physicians’sDeskReference第56版、2002において推奨される投薬量に従うことによって当業者により選択され得る。概要近年、本発明者らは、リツキシマブのようなI型mAbが、ヒトCD20TgマウスのB細胞の表面からインビトロおよびインビボで、また、NHL患者に由来するある種の原発性腫瘍細胞からモジュレートし、それにより、エフェクターを動員し、標的細胞を枯渇させるそれらの能力を制約することを見出した28。本発明者らは、リツキシマブおよび他のI型CD20mAbの治療活性の制約を説明するための、また、重要なことであるが、このプロセスの阻止または回避のための可能性を提供し、それにより、より強力な試薬を開発するための起こり得る機構を検討している。本研究は、リツキシマブおよびオファツムマブによって誘導されるCD20モジュレーションについての分子的根拠を提供する。FcγRIIb発現が、I型抗CD20mAbに対する応答についての重要な予後マーカーを提供するにちがいない。原発性CLL/SLL細胞がI型抗CD20mAbとともに培養されたとき、CD20の有意な、しかし、不均一なモジュレーションが認められたが、この不均一性はCLLにおける知られている予後因子に関連づけることができないであろう。他のB-NHLサブタイプの分析では、MCLが、CLLと類似する不均一なモジュレーションを呈したこと、しかし、FLおよび特にDLBCLは有意に少ないモジュレーションを示したことが示された。これらの結果に基づいて、本発明者らは今回、これらの悪性腫瘍におけるFcγRIIb発現のレベルと、これらの悪性腫瘍が6時間の培養においてモジュレートする程度との間における密接な相関を報告する。そのうえ、本発明者らは、このモジュレーションにより、これらの疾患において見られるリツキシマブに対する応答における不均一性のいくらかが説明され得ることを示唆する。リツキシマブは、化学療法との併用でDLBCLおよびFLこれらにおいて、リツキシマブが第一選択の治療として確立しているにおいて最も有効であることが証明されているものである。それに反して、リツキシマブによるCLLにおけるOSでの改善を実証することはより困難であることが判明しており39、MCLおけるその利益は一層ほどほどである5。したがって、一般的な知見として、FcγRIIbを発現するB細胞悪性腫瘍は、CD20をモジュレートし、かつ、リツキシマブ処置からの利益をそれほど受けない可能性がより大きいと考えられた。しかしながら、DLBCLおよびFLの範囲内でさえ、一部の事例はリツキシマブに対して応答しない。一例として、形質転換したFL事例は一般に、治療に対する応答が不良であり、かつ、FcγRIIbを発現する21。これは、高FcγRIIb発現サンプルの1つ図2CがFLとして特定され、それに対応してモジュレーションの大きい速度を明らかにしたという本発明者ら自身の発見と一致する観察結果である。ただ1つだけの事例に基づくが、本発明者らは、このことが潜在的には、リツキシマブに対する抵抗性の重要な手段をもたらし得るであろうと思っている。CD20モジュレーションは、B-NHL疾患サブタイプにもかかわらず、FcγRIIb発現レベルとの強い相関を示した。FcγRIIbが、エフェクター細胞上の活性化Fc受容体と競合し、それにより、細胞毒性のシグナル伝達を阻害することによって治療でのmAbの効力を阻害している可能性があることが以前に示唆された40。本発明者らのインビトロ研究では、リツキシマブが、主に同じ細胞においてCD20およびFcγRIIbを共架橋し、それにより、FcγRIIbの活性化、および、分解のためのリソソーム内への、結合したmAbと一緒での両方の表面抗原の迅速な対になった内部移行を生じさせることが示唆される。FcγRIIbの発現は、低下したエフェクター細胞動員を、標的細胞上のmAbの表面発現をダウンレギュレーションするその能力を介して生じさせるようである。本発明者らはまた、阻止する抗FcγRIIbmAbとの共インキュベーションにより、FcγRIIbの活性化およびリツキシマブの迅速な内部移行の両方を妨げることが可能であったことを示した。まとめると、これらのデータから、FcγRIIbの活性化と、細胞表面からのmAbの迅速な内部移行との間における直接的な連係が確認される。種々のB-NHLサブタイプにわたるI型抗CD20mAbによって誘導されるCD20モジュレーションと、FcγRIIb発現との間における強い相関は、本発明者らのトランスフェクション研究と同様に、FcγRIIbがCD20モジュレーションの重要な調節因子であることを示唆する。他のグループがリンパ腫におけるFcγRIIbの役割を調べている。Camilleri-Broet他20は、R-CHOPに対する応答と、FcγRIIb発現との間における有意な関係をDLBCLにおいて何ら示すことができず、しかしながら、18234事例中42のみが、より早期の系列において免疫組織化学によってFcγRIIb陽性であると思われた21。陽性の頻度が比較的低いことを考慮すると、陽性事例の数が、差を検出するためには不十分であったかもしれないことが考えられる。過剰発現の代わりに、WengおよびLevy24は、FcγRIIbの2つの対立因子232I対立因子、これは自己免疫疾患において232T対立因子よりもBCR媒介のカルシウム調節において効率的である22、23がリツキシマブの効力と関連づけられるかどうかを調べたが、この多型と、単剤リツキシマブ治療に対する応答との間における相関をFL患者において何ら明らかにすることができなかった。主な関心事は、著者ら自身によって提起されたものであるが、17名の患者のみが232T対立因子を有したということであった再度ではあるが、このことが研究の検出力を制限している。加えて、研究された多型は、自己免疫疾患におけるBCR阻害の効率を反映したものであり、これらの多型がリンパ腫において関連があること、または、ヒトIgG1のFc結合に影響することを示す観測結果は何ら発表されていない。FcγRIIb発現は、内部移行の速度を調節するその能力により、I型mAbリツキシマブおよびオファツムマブを含むによる免疫治療の成功に関する重要な予後指標となるであろう。FcγRIIb発現はII型mAb治療に対してはそれほど顕著な影響を有しないかもしれない。そのうえ、2つの異なるインビボモデルにおいて、本発明者らは、CD32がmAbの効力を制約し得ること、および、抗CD32bmAbはこの制約を克服し、かつ、リツキシマブ治療を増強し得ることを明らかにしている。参考文献1FeugierPVanHoofASebbanCSolalCelignyPBouabdallahRFermeCChristianBLepageETillyHMorschhauserFetal2005LongtermresultsoftheRCHOPstudyinthetreatmentofelderlypatientswithdiffuselargeBcelllymphomaastudybytheGroupedEtudedesLymphomesdelAdulteJClinOncol23411741262SehnLHDonaldsonJChhanabhaiMFitzgeraldCGillKKlasaRMacPhersonNOReillySSpinelliJJSutherlandJetal2005IntroductionofcombinedCHOPplusrituximabtherapydramaticallyimprovedoutcomeofdiffuselargeBcelllymphomainBritishColumbiaJClinOncol23502750333MarcusRImrieKBelchACunninghamDFloresECatalanoJSolalCelignyPOffnerFWalewskiJRaposoJetal2005CVPchemotherapyplusrituximabcomparedwithCVPasfirstlinetreatmentforadvancedfollicularlymphomaBlood105141714234MarcusRImrieKSolalCelignyPCatalanoJVDmoszynskaARaposoJCOffnerFCGomezCodinaJBelchACunninghamDetal2008PhaseIIIstudyofRCVPcomparedwithcyclophosphamidevincristineandprednisonealoneinpatientswithpreviouslyuntreatedadvancedfollicularlymphomaJClinOncol26457945865LenzGDreylingMHosterEWormannBDuhrsenUMetznerBEimermacherHNeubauerAWandtHSteinhauerHetal2005ImmunochemotherapywithrituximabandcyclophosphamidedoxorubicinvincristineandprednisonesignificantlyimprovesresponseandtimetotreatmentfailurebutnotlongtermoutcomeinpatientswithpreviouslyuntreatedmantlecelllymphomaresultsofaprospectiverandomizedtrialoftheGermanLowGradeLymphomaStudyGroupJClinOncol23198419926KharfanDabajaMAFahedRHusseinMandSantosES2007EvolvingroleofmonoclonalantibodiesinthetreatmentofchroniclymphocyticleukemiaExpertOpinInvestigDrugs16179918157StolzCandSchulerM2009MolecularmechanismsofresistancetoRituximabandpharmacologicstrategiesforitscircumventionLeukLymphoma508738858DavisTACzerwinskiDKandLevyR1999TherapyofBcelllymphomawithantiCD20antibodiescanresultinthelossofCD20antigenexpressionClinCancerRes56116159MichelRBandMattesMJ2002IntracellularaccumulationoftheantiCD20antibody1F5inBlymphomacellsClinCancerRes82701271310HiragaJTomitaASugimotoTShimadaKItoMNakamuraSKiyoiHKinoshitaTandNaoeT2009DownregulationofCD20expressioninBcelllymphomacellsaftertreatmentwithrituximabcontainingcombinationchemotherapiesitsprevalenceandclinicalsignificanceBlood1134885489311TreonSPMitsiadesCMitsiadesNYoungGDossDSchlossmanRandAndersonKC2001TumorCellExpressionofCD59IsAssociatedWithResistancetoCD20SerotherapyinPatientsWithBCellMalignanciesJImmunother2426327112GolayJLazzariMFacchinettiVBernasconiSBorleriGBarbuiTRambaldiAandIntronaM2001CD20levelsdeterminetheinvitrosusceptibilitytorituximabandcomplementofBcellchroniclymphocyticleukemiafurtherregulationbyCD55andCD59Blood983383338913JazirehiARVegaMIandBonavidaB2007DevelopmentofrituximabresistantlymphomacloneswithalteredcellsignalingandcrossresistancetochemotherapyCancerRes671270128114WengWKandLevyR2003TwoimmunoglobulinGfragmentCreceptorpolymorphismsindependentlypredictresponsetorituximabinpatientswithfollicularlymphomaJClinOncol213940394715ClynesRATowersTLPrestaLGandRavetchJV2000InhibitoryFcreceptorsmodulateinvivocytoxicityagainsttumortargetsNatMed644344616UchidaJHamaguchiYOliverJARavetchJVPoeJCHaasKMandTedderTF2004TheinnatemononuclearphagocytenetworkdepletesBlymphocytesthroughFcreceptordependentmechanismsduringantiCD20antibodyimmunotherapyJExpMed1991659166917NimmerjahnFandRavetchJV2007AntibodiesFcreceptorsandcancerCurrOpinImmunol1923924518BeersSAChanCHJamesSFrenchRRAttfieldKEBrennanCMAhujaAShlomchikMJCraggMSandGlennieMJ2008TypeIIantiCD20monoclonalantibodyoutperformstypeIreagentsinBcelldepletionregardlessofcomplementactivationBlood1124170417719MossnerEBrunkerPMoserSPuntenerUSchmidtCHerterSGrauRGerdesCNoporaAvanPuijenbroekEetalIncreasingtheefficacyofCD20antibodytherapythroughtheengineeringofanewtypeIIantiCD20antibodywithenhanceddirectandimmuneeffectorcellmediatedBcellcytotoxicityBlood20CamilleriBroetSMounierNDelmerABriereJCasasnovasOCassardLGaulardPChristianBCoiffierBandSautesFridmanC2004FcgammaRIIBexpressionindiffuselargeBcelllymphomasdoesnotaltertheresponsetoCHOPrituximabLeukemia182038204021CamilleriBroetSCassardLBroetPDelmerALeTouneauADieboldJFridmanWHMolinaTJandSautesFridmanC2004FcgammaRIIBisdifferentiallyexpressedduringBcellmaturationandinBcelllymphomasBrJHaematol124556222LiXWuJCarterRHEdbergJCSuKCooperGSandKimberlyRP2003AnovelpolymorphismintheFcgammareceptorIIBtransmembraneregionaltersreceptorsignalingArthritisRheum483242325223KonoHKyogokuCSuzukiTTsuchiyaNHondaHYamamotoKTokunagaKandHondaZ2005FcgammaRIIBIle232ThrtransmembranepolymorphismassociatedwithhumansystemiclupuserythematosusdecreasesaffinitytolipidraftsandattenuatesinhibitoryeffectsonBcellreceptorsignalingHumMolGenet142881289224WengWKandLevyR2009GeneticpolymorphismoftheinhibitoryIgGFcreceptorFcgammaRIIbisnotassociatedwithclinicaloutcomeinpatientswithfollicularlymphomatreatedwithrituximabLeukLymphoma5072372725ChanHTHughesDFrenchRRTuttALWalsheCATeelingJLGlennieMJandCraggMS2003CD20inducedlymphomacelldeathisindependentofbothcaspasesanditsredistributionintotritonX100insolublemembraneraftsCancerRes635480548926CraggMSandGlennieMJ2004AntibodyspecificitycontrolsinvivoeffectormechanismsofantiCD20reagentsBlood1032738274327IvanovABeersSAWalsheCAHoneychurchJAlduaijWCoxKLPotterKNMurraySChanCHKlymenkoTetal2009MonoclonalantibodiesdirectedtoCD20andHLADRcanelicithomotypicadhesionfollowedbylysosomemediatedcelldeathinhumanlymphomaandleukemiacellsJClinInvest1192143215928BeersSAFrenchRRChanHTLimSHJarrettJCVidalRMWijayaweeraSSDixonSVKimHJCoxKLetal2010AntigenicmodulationlimitstheefficacyofantiCD20antibodiesBloodInpress29WiestnerARosenwaldABarryTSWrightGDavisREHenricksonSEZhaoHIbbotsonREOrchardJADavisZetal2003ZAP70expressionidentifiesachroniclymphocyticleukemiasubtypewithunmutatedimmunoglobulingenesinferiorclinicaloutcomeanddistinctgeneexpressionprofileBlood1014944495130CrespoMBoschFVillamorNBellosilloBColomerDRozmanMMarceSLopezGuillermoACampoEandMontserratE2003ZAP70expressionasasurrogateforimmunoglobulinvariableregionmutationsinchroniclymphocyticleukemiaNEnglJMed3481764177531DamleRNWasilTFaisFGhiottoFValettoAAllenSLBuchbinderABudmanDDittmarKKolitzJetal1999IgVgenemutationstatusandCD38expressionasnovelprognosticindicatorsinchroniclymphocyticleukemiaBlood941840184732IbrahimSKeatingMDoKAOBrienSHuhYOJilaniILernerSKantarjianHMandAlbitarM2001CD38expressionasanimportantprognosticfactorinBcellchroniclymphocyticleukemiaBlood9818118633HamblinTJDavisZGardinerAOscierDGandStevensonFK1999UnmutatedIgVgenesareassociatedwithamoreaggressiveformofchroniclymphocyticleukemiaBlood941848185434KroberASeilerTBennerABullingerLBruckleELichterPDohnerHandStilgenbauerS2002VmutationstatusCD38expressionlevelgenomicaberrationsandsurvivalinchroniclymphocyticleukemiaBlood1001410141635RavetchJVandBollandS2001IgGFcreceptorsAnnuRevImmunol1927529036WalsheCABeersSAFrenchRRChanCHJohnsonPWPackhamGKGlennieMJandCraggMS2008InductionofcytosoliccalciumfluxbyCD20isdependentuponBCellantigenreceptorsignalingJBiolChem283169711698437PolyakMJLiHShariatNandDeansJP2008CD20homooligomersphysicallyassociatewiththeBcellantigenreceptorDissociationuponreceptorengagementandrecruitmentofphosphoproteinsandcalmodulinbindingproteinsJBiolChem283185451855238TernynckTDighieroGFollezouJandBinetJL1974ComparisonofnormalandCLLlymphocytesurfaceIgdeterminantsusingperoxidaselabeledantibodiesIDetectionandquantitationoflightchaindeterminantsBlood4378979539RobakTDmoszynskaASolalCelignyPWarzochaKLoscertalesJCatalanoJAfanasievBVLarrattLGeislerCHMontilloMetalRituximabPlusFludarabineandCyclophosphamideProlongsProgressionFreeSurvivalComparedWithFludarabineandCyclophosphamideAloneinPreviouslyTreatedChronicLymphocyticLeukemiaJClinOncol40FridmanWHTeillaudJLBouchardCTeillaudCAstierATartourEGalonJMathiotCandSautesC1993SolubleFcgammareceptorsJLeukocBiol5450451241NimmerjahnFandRavetchJV2008FcgammareceptorsasregulatorsofimmuneresponsesNatRevImmunol8344742AmanMJToselloTrampontACandRavichandranK2001FcgammaRIIB1SHIPmediatedinhibitorysignalinginBcellsinvolveslipidraftsJBiolChem276463714637843CraggMSMorganSMChanHTMorganBPFilatovAVJohnsonPWFrenchRRandGlennieMJ2003ComplementmediatedlysisbyantiCD20mAbcorrelateswithsegregationintolipidraftsBlood1011045105244HamblinTJOrchardJAIbbotsonREDavisZThomasPWStevensonFKandOscierDG2002CD38expressionandimmunoglobulinvariableregionmutationsareindependentprognosticvariablesinchroniclymphocyticleukemiabutCD38expressionmayvaryduringthecourseofthediseaseBlood991023102945MockridgeCIPotterKNWheatleyINevilleLAPackhamGandStevensonFK2007ReversibleanergyofsIgMmediatedsignalinginthetwosubsetsofCLLdefinedbyVHgenemutationalstatusBlood1094424443146PotterKNMockridgeCINevilleLWheatleyISchenkMOrchardJDuncombeASPackhamGandStevensonFK2006StructuralandfunctionalfeaturesoftheBcellreceptorinIgGpositivechroniclymphocyticleukemiaClinCancerRes121672167947GreenmanJTuttALGeorgeAJPulfordKAStevensonGTandGlennieMJ1991CharacterizationofanewmonoclonalantiFcgammaRIIantibodyAT10anditsincorporationintoabispecificF2derivativeforrecruitmentofcytotoxiceffectorsMolImmunol281243125448GlennieMJMcBrideHMWorthATandStevensonGT1987PreparationandperformanceofbispecificF2antibodycontainingthioetherlinkedFabgammafragmentsJImmunol1392367237549TuttALFrenchRRIllidgeTMHoneychurchJMcBrideHMPenfoldCAFearonDTParkhouseRMKlausGGandGlennieMJ1998MonoclonalantibodytherapyofBcelllymphomasignalingactivityontumorcellsappearsmoreimportantthanrecruitmentofeffectorsJImmunol1613176318550BeerSAetal2010SeminarsinHaematology47pp10711451NiederfellnerGetal2011Blood11835836752TeelingJL2004Blood10417931800"