"オオムギ植物もしくはその一部を使用するかまたは該オオムギ植物もしくはその一部またはこれらの混合物から調製された麦芽組成物を使用して調製される、麦芽汁組成物であって、該オオムギ植物は、完全機能喪失を生じるLOX-1遺伝子の変異を有し、該オオムギ植物のLOX-1をコードする遺伝子が、配列番号2の塩基番号3572-3574に対応するナンセンスコドン、または、配列番号6の塩基番号2311に対応するスプライス変異を含むが、但し、該オオムギ植物はイントロン5のスプライス供与部位にGの変異を保有しない、麦芽汁組成物。前記植物の一部が穀粒である、請求項1に記載の麦芽汁組成物。前記組成物が酵素組成物または酵素混合組成物を使用して調製される、請求項1~2のいずれか1項に記載の麦芽汁組成物。前記オオムギ植物がアメリカンタイプカルチャーコレクションATCC寄託の受託番号PTA-5487を有するD112と命名された植物およびその後代植物からなる群より選択される、請求項1~3のいずれか1項に記載の麦芽汁組成物。前記オオムギ植物がATCC寄託の受託番号PTA-5584を有するA618と命名された植物およびその後代植物からなる群より選択される、請求項1~3のいずれか1項に記載の麦芽汁組成物。安定な感覚刺激品質を有する飲料であって、該飲料は、オオムギ植物もしくはその一部またはこれらの混合物を製造することによって得られ、該オオムギ植物は、完全機能喪失を生じるLOX-1遺伝子の変異を有し、該オオムギ植物のLOX-1をコードする遺伝子が、配列番号2の塩基番号3572-3574に対応するナンセンスコドン、または、配列番号6の塩基番号2311に対応するスプライス変異を含むが、但し、該オオムギ植物はイントロン5のスプライス供与部位にGの変異を保有しない、飲料。前記飲料がビールである、請求項6に記載の飲料。前記飲料が前記オオムギ植物の穀粒から調製された麦芽を使用して調製される、請求項6~7のいずれか1項に記載の飲料。前記飲料が、前記オオムギ植物もしくはその一部から調製された麦芽汁組成物から調製されるか、または該オオムギ植物もしくはその一部から調製された麦芽組成物から調製される、請求項6~8のいずれか1項に記載の飲料。前記飲料が麦芽化されていないオオムギ植物またはその一部から調製される、請求項6に記載の飲料。前記飲料が非発酵飲料である、請求項6および8~10のいずれか1項に記載の飲料。前記オオムギ植物がアメリカンタイプカルチャーコレクションATCC寄託の受託番号PTA-5487を有するD112と命名された植物およびその後代植物からなる群より選択される、請求項6~11のいずれか1項に記載の飲料。前記オオムギ植物がATCC寄託の受託番号PTA-5584を有するA618と命名された植物およびその後代植物からなる群より選択される、請求項6~11のいずれか1項に記載の飲料。前記飲料は、安定な感覚刺激品質を有し、そして、該飲料内の9,10,13-トリヒドロキシオクタデセン酸に対する9,12,13-トリヒドロキシオクタデセン酸の比率が多くても1.8である、請求項6~13のいずれか1項に記載の飲料。前記飲料は、4~6ppmの範囲内の亜硫酸塩の存在下で37°Cにて4週間のインキュベーションの後に、多くても0.05ppbの遊離トランス-2-ノネナールT2Nを含有する、請求項6~14のいずれか1項に記載の飲料。オオムギ植物もしくはまたはその一部から製造される、植物製品であって、該オオムギ植物は、完全機能喪失を生じるLOX-1遺伝子の変異を有し、該オオムギ植物のLOX-1をコードする遺伝子が、配列番号2の塩基番号3572-3574に対応するナンセンスコドン、または、配列番号6の塩基番号2311に対応するスプライス変異を含むが、但し、該オオムギ植物はイントロン5のスプライス供与部位にGの変異を保有しない、植物製品。明細書中に記載の発明。3.発明の要旨従って、LOX-1活性を本質的に有していないオオムギ植物に対する未だ満たされていない要求が存在する。なぜならば、このような植物から調製される飲料は非常に低いレベルのT2Nを有するからである。さらに、本発明は、このような植物から調製される飲料が非常に低いレベルの9,12,13-THOEを有することを開示する。さらに、このような植物は他の目的に有用であり得る。驚くべきことに、本発明は、LOX-1活性を全く有していないかまたは非常に少量しか有していないオオムギ植物を作製するための方法を開示する。特に、本発明はLOX-1の遺伝子におけるヌル変異を開示する。本発明の予期される利点としては、LOX経路の対応する分岐からのT2Nの完全な排除が挙げられ、従って本発明はオオムギ穀粒のT2Nレベルを制御するための優れた方法を提供し;またこれらの穀粒から製造されるビールは、例え高温であっても長期間貯蔵後に優れた香味安定性を示す。興味深いことに、本発明はまた早期に変異を検出するための方法を提供し、従って最近の変異体特徴づけの不都合が本発明によって解決されている。これは、変異体群における標的遺伝子の表現型特徴付けおよびDNA配列決定の連続的な使用を育種プロセスの早い時点で導入して、改良された麦芽用オオムギ品種を作り出すための新しい魅力的な手順を使用する。単離された植物は、種々の植物育種法を使用してさらに改良され得る。本発明は、オオムギ中の活性なLOX-1酵素の存在に関連した現在の問題、制限および不都合を解決する。第1に、本発明は、化学的に変異を誘発させたオオムギをスクリーニングするための時間および労力を著しく軽減する新規で効率的なスクリーニング方法を提供する。第2に、本発明は、例えば香味の安定なビールの製造に有用である新規のヌル-LOX-1オオムギを包含する。上記のように植物LOX変異体に関する理論的背景は、LOX活性レベルの減少した植物に関する。これに対して、本発明は、ヌル-LOX-1オオムギ植物を効率的に作り出す方法を提供することによって低いLOX活性または残存LOX活性に関連した制限および不都合を克服する。具体的な相違としては、以下が挙げられる:iDoumaらのWO02/053721A1号として公開されたPCT出願PCT/IB01/00207号に開示されたオオムギ植物に対して、本発明の植物はLOX-1活性を本質的に有さず、好ましくは本発明の植物は真のヌル-LOX-1植物である、すなわち本発明の植物はLOX-1タンパク質の完全な機能喪失を示す;ii本明細書に記載の真のヌル-LOX-1の形質は、対応する遺伝子中のナンセンス変異の存在についてスクリーニングすることによって確認され得る。従って、この形質について同型接合オオムギ植物は、成長条件または環境効果に関係なく活性酵素の合成において完全にブロックされる。これは、植物育種の分野における理想的な性質でありかつ背景技術のダイズLOX変異体における可能な分子シナリオの結果とコントロール的であり、生物的条件または非生物的条件は、細胞の生理学的状態の変化に影響を及ぼし、LOXのその後の翻訳によりmRNA安定化を与え得る;iiiダイズおよびイネのLOX変異体に関連する形質が、主要食品中の低減されたレベルの臭いの強い化合物ヘキサナールを含む場合には、本発明は飲料中のより低いレベルの香味特異的化合物T2Nおよび飲料中のより低いレベルの9,12,13-THOEに関する;ivダイズおよびイネのLOX変異体は13-HPODEの下流のLOX経路の分子に影響を及ぼし、これに対しヌル-LOX-1形質は9-HPODEの下流の分子を含むLOX経路の分岐に関する;vダイズ変異体がLOXに関する遺伝子の放射線照射によって誘発された変異を含み、かつDawDamおよびCl-115がイネ育種系統の選択された天然に存在する品種にを表すのに対して、ヌル-LOX-1形質を有するオオムギ植物における変異は化学薬品NaN3によって誘発された。従って、本発明の目的は、野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満、好ましくは1未満を有するオオムギ植物またはその一部もしくは断片を提供することである。本発明の第2の目的は、野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満、好ましくは1未満を有するオオムギ植物由来の穀粒を提供することである。本発明の第3の目的は、野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満、好ましくは1未満を有するオオムギ植物またはその一部もしくは断片を有する組成物を提供することである。本発明のさらなる目的は、野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満、好ましくは1未満を有する加工されたオオムギ植物を含有する麦芽組成物を提供することである。麦芽組成物は好ましくは純粋な麦芽組成物であってもよい。しかし、麦芽組成物はまた、例えば、オオムギと麦芽との混合物であってもよい。本発明の目的はまた、安定な感覚刺激品質を有する飲料であって、本発明のオオムギ植物またはその一部を使用して製造される飲料を提供することである。特に、上記飲料は、上記の麦芽組成物例えば純粋な麦芽組成物またはオオムギと麦芽との混合物を使用して製造されることが好ましい。本発明の好ましい実施形態では、上記飲料はビールからなる。本発明のさらなる目的は、安定な感覚刺激品質を有する飲料を提供することであり、この飲料は、オオムギ植物を使用して製造されかつこの飲料中の9,10,13-トリヒドロキシオクタデセン酸本明細書では、9,10,13-THOEまたは単に9,10,13-THAと略記するに対する9,12,13-トリヒドロキシオクタデセン酸本明細書では、9,12,13-THOEまたは単に9,12,13-THAと略記するの比率が多くても1.8である。上記飲料はビールであることが好ましい。さらに、本発明の目的は、本発明のオオムギ植物またはその一部を含有する組成物例えば食品組成物、飼料組成物、または芳香原料組成物を提供することである。さらに、本発明の目的は、本発明のオオムギ植物中で組換えタンパク質を発現するための方法を提供することであり、この方法は、作動可能に連結された要素としてオオムギ植物またはその一部中で発現可能なプロモーター、上記組換えタンパク質をコードするDNA配列、および転写終結領域を有する核酸配列を用いてこの植物を形質転換させ、それによってこのオオムギ植物中でこの組換えタンパク質を発現させる工程を包含する。さらに、本発明の目的は、本発明のオオムギ植物中のタンパク質のレベルを低下させるための方法を提供することであり、この方法は、作動可能に連結された要素としてオオムギ植物またはその一部中で発現可能なプロモーター、DNA配列、および転写終結領域を有する核酸配列を用いてこの植物を形質転換させる工程を包含し、このDNA配列の発現がこのタンパク質をコードする遺伝子の発現をアンチセンス、またはコサプレッションまたはRNA干渉によって低下させる。本発明のさらなる目的は、野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満、好ましくは1未満を有するオオムギ植物を調製する方法を提供することでありこの方法は、以下:i野生型オオムギ穀粒またはその一部におけるLOX-1活性を測定する工程;およびiiオオムギ植物および/またはオオムギ穀粒および/またはオオムギ胚に変異を誘発させ、それによってM0世代のオオムギを得る工程;およびiii上記の変異を誘発させたオオムギ植物、穀粒および/または胚を少なくとも2世代栽培し、それによってMxここで、xは≧2の整数である世代のオオムギ植物を得る工程;およびiv上記Mx世代のオオムギ植物から穀粒またはその一部を得る工程;およびv上記穀粒またはその一部においてLOX-1活性を測定する工程;およびvi変異を誘発させた穀粒またはその一部のLOX-1活性が野生型穀粒またはその一部のLOX-1活性の5未満である植物を選択する工程を包含し、それによって野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を有するオオムギ植物を得る。さらにまた、本発明の目的は、安定な感覚刺激品質を有する飲料を製造する方法を提供することであり、この方法は、以下:i本発明の麦芽組成物を提供する工程;ii上記麦芽組成物を飲料に加工する工程を包含し、それによって安定な感覚刺激品質を有する飲料を得る。本発明のさらなる目的は、低いLOX-1活性を有する麦芽組成物を製造する方法を提供することであり、この方法は、以下:i本発明の穀粒を提供する工程;ii上記穀粒を浸漬する工程;iii上記浸漬した穀粒を所定の条件下で発芽させる工程;iv発芽させた穀粒を熱で処理する工程;を包含し、それによって低いLOX-1活性を有するかまたはLOX-1活性を全く有していない麦芽組成物を製造する。1つの好ましい実施形態において、本発明は、主要な9-HPODE生成酵素LOX-1に関して完全な機能喪失を示したオオムギ変異体D112本明細書中では、変異体D112またはオオムギD112ともいうの機能研究の予測されなかった成果に基づく。リノール酸のLOXに触媒された変換後の生成物プロフィールを決定するために設計された生化学アッセイにおいて、10:90の分布の9-HPODE:13-HPODEを検出することは意外な発見であった。T2Nの極めて低い香味閾値を考えると、変異体D112の穀粒中の残存9-HPODEなどの分解は、上記穀粒の麦芽から製造されたビール製品の熟成中に、T2Nの非常に少ない遊離香味閾値レベルよりも十分に低いを生じただけであることは、さらに意外なことであった。野生型およびヌル-LOX-1の穀粒を使用する分析から得られた結果の調査は、高いLOX-1活性がT2Nの古いボール紙臭を強め、従ってアルケナールの生成の制御におけるLOX経路の重要な役割を確認することができるという明らかな証拠を提供する。この結論を、LOX活性のみが一部のT2N前駆物質分子に寄与することを示唆したLiegeoisら前出の概念と対比する。ヌル-LOX-1形質は、任意の他のオオムギ植物例えば確立されたオオムギ品種、例えば確立された麦芽用オオムギ品種に導入され得、従って長期貯蔵寿命を有する香味安定飲料の製造を可能にする。このことは、例えば、当業者に周知の従来の育種法によって達成され得る。このアプローチは、変異体D112由来のオオムギが栽培される地理的領域と無関係であるばかりではなく、変異体D112由来のビールが製造され、顧客に販売される場所とも無関係である。変異体D112のオオムギ植物またはその誘導される植物は、潜在的に、作物を栽培する農家にとっておよびそれをビール製造用またはオオムギに基づく他の飲料の製造用の原料として使用する醸造所にとって重要な経済的要因である。9-HPODE/9-HPOTE形成活性を有さない原料に依存する他の適用もまた、オオムギ変異体D112の性質から利益を得ることが予測される。本発明の1つの実施形態に従って、いくつかの新規な麦芽用オオムギ変異体、例えばオオムギ変異体D112またはオオムギ変異体A618本明細書では変異体A618またはオオムギA618ともいうが提供される。従って、本発明は、オオムギ変異体D112またはA618の穀粒、オオムギD112またはA618の植物、およびオオムギ変異体D112またはA618をそれ自体または別のオオムギ系統と交配させることにより誘導されるオオムギ植物の作成方法に関する。さらに、本発明は、オオムギ変異体D112またはA618の変異誘発または形質転換によって作製されるヌル-LOX-1改変体を包含する。従って、オオムギ変異体D112もしくはA618またはこれらの誘導体を親植物として使用して作り出される全ての植物は、本発明の範囲内である。別の局面において、本発明は、オオムギ変異体植物D112またはA618の組織培養に使用するための再生可能な細胞を提供する。組織培養は、前述のオオムギ植物の特徴形態学的特徴および遺伝的特徴を含むを有する植物の再生に使用されることが好ましい。このような組織培養で再生された細胞は、胚、プロトプラスト、分裂組織細胞、カルス、花粉、葯などである。本発明は本発明の組織培養により再生されたオオムギ植物を提供することが理解される。好ましい実施形態において、本発明は、ヌル-LOX-1オオムギ穀粒から誘導される麦芽を包含する。本発明はまた、ヌル-LOX-1オオムギ植物またはその一部から調製される麦芽汁組成物またはこのようなオオムギ植物から調製された麦芽組成物から調製される麦芽汁組成物に関する。本発明は、さらに本発明のヌル-LOX-1オオムギ穀粒を使用するかまたはこの穀粒から誘導される麦芽のいずれかを使用して製造される飲料例えばビールを包含する。さらに、本発明は、ヌルLOX-1オオムギ植物またはその一部から製造される植物製品に関する。上記植物製品は、上記オオムギ植物またはその一部の処理から生じる任意の製品であり得る。好ましくは、上記植物製品は、麦芽、麦芽汁、発酵飲料例えばビール、非発酵飲料、食品例えばオオムギ粗びき粉および飼料製品からなる群より選択される。本発明の目的はまた、野生型オオムギ植物と区別がつかないかまたはさらに向上した耐病性を有するようなレベルの耐病性を示すヌル-LOX-1オオムギ穀粒を提供することである。なおさらに、本発明はヌル-LOX-1オオムギ穀粒、およびこの穀粒から誘導される麦芽を包含し、ここで、穀粒および麦芽は両方とも低下したレベルのマイトコトキシンを示す。また、本発明は、野生型植物と比べて増強された耐病性を有するヌル-LOX-1オオムギ品種を包含する。さらに、野生型植物と比べて低下した耐病性を有するヌル-LOX-1オオムギが開示されるが、但し、この植物の他の特性は、低減された耐病性の性質よりも重要である利点を提供する。さらに、本発明は、LOX経路由来の芳香グリーンノート化合物が挙げられるの製造に有用なヌル-LOX-1オオムギ穀粒を提供する。さらに、本発明は、導入された遺伝子が除草剤抵抗性、昆虫抵抗性、細菌、真菌もしくはウイルスによる病気に対する抵抗性のような形質、増強された栄養価、および工業用の用法を与えるヌル-LOX-1オオムギ変異体D112もしくはA618、またはそれに由来する植物のトランスジェニック植物を提供する。この遺伝子は、内因性オオムギ遺伝子であってもよいし、あるいはまた遺伝子工学技術によって導入された導入遺伝子であってもよい。最後に、本発明は、LOX-1インヒビターを使用することによってLOX-1活性を低下させる方法を提供する。上記の方法によって得られる植物製品、植物から誘導される製品飲料およびビールが挙げられるは、原料としてヌル-LOX-1オオムギから製造される製品と同様の特性を有し得る。本発明は例えば、以下の項目を提供する。項目1野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を有する、オオムギ植物またはその一部。項目2前記オオムギ植物の一部が穀粒である、項目1に記載のオオムギ植物またはその一部。項目3前記植物の胚が野生型オオムギ植物の胚のLOX-1活性の5未満を有する、項目1に記載のオオムギ植物またはその一部。項目4前記植物またはその一部が野生型オオムギ植物と比べて1未満のLOX-1タンパク質を含む、項目1~3のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部。項目5項目1~4のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部であって、該植物が、以下:i野生型オオムギ穀粒またはその一部においてLOX-1活性を測定する工程;およびiiオオムギ植物、および/またはオオムギ穀粒、および/またはオオムギ胚、および/またはオオムギ細胞、および/またはオオムギ組織に変異を誘発させ、それによってM0世代のオオムギを得る工程;およびiii該変異を誘発させたオオムギ植物、穀粒、細胞、組織および/または胚を、少なくとも2世代栽培し、それによってMxここで、xは≧2の整数である世代のオオムギ植物を得る工程;およびiv該Mx世代のオオムギ植物から穀粒またはその一部を得る工程;およびv該穀粒またはその一部においてLOX-1活性を測定する工程;およびvi変異を誘発させた穀粒またはその一部のLOX-1活性が野生型穀粒またはその一部のLOX-1活性の5未満である植物を選択する工程;を包含する方法により作り出されているか、または該植物が、該工程を包含する方法により作り出された植物の後代である、オオムギ植物またはその一部。項目6前記植物のLOX-1をコードする遺伝子が中途ナンセンスコドンを含む、項目1~5のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部。項目7前記植物のLOX-1をコードする遺伝子がナンセンスコドンを含み、該コドンが配列番号2の塩基番号3572-3574に対応する、項目6に記載のオオムギ植物またはその一部。項目8前記植物がアメリカンタイプカルチャーコレクションATCC寄託の受託番号PTA-5487を有するD112と命名された植物およびその後代植物からなる群より選択される、項目6に記載のオオムギ植物またはその一部。項目9前記植物のLOX-1をコードする遺伝子がスプライス部位内に少なくとも1つの変異を含む、項目1~5のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部。項目10前記植物のLOX-1をコードする遺伝子がスプライス部位変異を含み、該変異が配列番号6の塩基番号2311に対応する、項目9に記載のオオムギ植物またはその一部。項目11前記植物がATCC寄託の受託番号PTA-5584を有するA618と命名された植物およびその後代植物からなる群より選択される、項目9に記載のオオムギ植物またはその一部。項目12前記植物が、以下:i増強された耐病性を有すること;またはiiマイコトキシン類の産生について低減した可能性を有すること;またはiii組織培養に使用するための再生可能な細胞を含むこと;またはivi~iiiの特性の任意の組み合わせ;によって特徴付けられる、項目1~11のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部。項目13さらにLOX-1をコードする遺伝子の存在によって特徴付けられる項目12に記載のオオムギ植物またはその一部であって、該遺伝子が、以下:i中途ナンセンスコドン;またはiiスプライス部位変異を含む、オオムギ植物またはその一部。項目14さらにLOX-1をコードする遺伝子の存在によって特徴付けられる項目13に記載のオオムギ植物であって、該遺伝子が、以下:i配列番号2の塩基番号3572-3574に対応するナンセンスコドン;またはii配列番号6の塩基番号2311に対応するスプライス部位変異を含む、オオムギ植物。項目15項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部を含有する、組成物。項目16処理されたオオムギ植物またはその一部を含有する麦芽組成物であって、該オオムギ植物が項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物である、麦芽組成物。項目17前記オオムギ植物の一部が穀粒である、項目16に記載の麦芽組成物。項目18項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物もしくはその一部を使用するかまたは該オオムギ植物もしくはその一部またはこれらの混合物から調製される麦芽組成物を使用して調製される、麦芽汁組成物。項目19前記植物の一部が穀粒である、項目18に記載の麦芽汁組成物。項目20前記麦芽組成物が項目16および17のいずれかに記載の麦芽組成物である、項目18に記載の麦芽汁組成物。項目21前記組成物が酵素組成物または酵素混合組成物を使用して調製される、項目18~20のいずれかに記載の麦芽汁組成物。項目22i項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部を含有する組成物と、ii項目16および17のいずれかに記載の麦芽組成物との混合物から調製される、組成物。項目23項目22に記載の組成物から調製される、麦芽汁組成物または飲料。項目24安定な感覚刺激品質を有する飲料であって、項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部を製造することによって得られる、飲料。項目25前記飲料がビールである、項目24に記載の飲料。項目26前記飲料が前記オオムギ植物の穀粒から調製される麦芽を使用して調製される、項目24に記載の飲料。項目27前記飲料が、オオムギ植物もしくはその一部から調製される麦芽汁組成物から調製されるか、または該オオムギ植物もしくはその一部から調製される麦芽組成物から調製され、該オオムギ植物が野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を含む、項目24~26のいずれかに記載の飲料。項目28前記飲料が麦芽化されていないオオムギ植物またはその一部から調製される、項目24に記載の飲料。項目29前記飲料が非発酵飲料である、項目24~28のいずれかに記載の飲料。項目30前記オオムギ植物またはその一部がLOX-1をコードする遺伝子を含み、該遺伝子が、以下:iナンセンスコドン;またはiiスプライス部位変異を含む、項目24~29のいずれかに記載の飲料。項目31前記LOX-1をコードする遺伝子が、以下:i配列番号2の塩基番号3572-3574に対応するナンセンスコドン;またはii配列番号6の塩基番号2311に対応するスプライス部位変異;を含む、項目30に記載の飲料。項目32安定な感覚刺激品質を有する飲料であって、該飲料は、オオムギ植物を使用することによって製造され、該飲料内の9,10,13-トリヒドロキシオクタデセン酸に対する9,12,13-トリヒドロキシオクタデセン酸の比率が多くても1.8である、安定な感覚刺激品質を有する飲料。項目33前記飲料がオオムギ植物もしくはその一部、またはこれらの抽出物の発酵によって調製され、かつ該オオムギ植物が野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を有する、項目32に記載の飲料。項目34前記飲料がビールである項目32~33のいずれかに記載の飲料。項目35安定な感覚刺激品質を有する飲料であって、該飲料は、オオムギ植物を使用して製造され、かつ該飲料は、4~6ppmの範囲内の亜硫酸塩の存在下で37°Cにて4週間のインキュベーションの後に多くても0.05ppbの遊離トランス2-ノネナールT2Nを含有する、飲料。項目36前記飲料は、オオムギ植物もしくはその一部、またはこれらの抽出物の発酵によって製造され、かつ該オオムギ植物が野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を含む、項目35に記載の飲料。項目37前記飲料内の9,10,13-トリヒドロキシオクタデセン酸に対する9,12,13-トリヒドロキシオクタデセン酸の比率が多くても1.8である、項目35~36のいずれかに記載の飲料。項目38前記飲料がビールである、項目35~37のいずれに記載の飲料。項目39項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部から製造される、植物製品。項目40前記植物製品が飲料である、項目39に記載の植物製品。項目41項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部を使用して、以下:i食品組成物;もしくはii飼料組成物;もしくはiii芳香原料組成物;もしくはivi~iiiの任意の組み合わせを製造する、方法。項目42項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物またはその一部を含有する、食品組成物、飼料組成物、または芳香原料組成物。項目43項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物を得るためのオオムギ中での組換えタンパク質の発現方法であって、該方法は、作動可能に連結された構成要素としてオオムギ植物またはその一部中で発現可能なプロモーター、該組換えタンパク質をコードするDNA配列および転写終結領域を含む核酸配列を用いて該植物を安定的に形質転換させる工程を包含する、方法。項目44項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物を得るためのオオムギ中のタンパク質のレベルを調節する方法であって、該方法は、作動可能に連結された要素としてオオムギ植物で発現可能なプロモーター、DNA配列および転写終結領域を含む核酸配列を用いて該植物を安定的に形質転換させる工程を包含し、ここで、該DNA配列の発現が該タンパク質をコードする遺伝子の発現を、以下:iアンチセンスサイレンシング;またはiiコサプレッションサイレンシング;またはiiiRNA干渉によって低下させる、方法。項目45項目1~14のいずれかに記載のオオムギ植物を調製する方法であって、該方法は、作動可能に連結された要素として、オオムギ植物で発現可能なプロモーター、DNA配列および転写終結領域を含む核酸配列を用いてオオムギ植物を安定的に形質転換させる工程を包含し、ここで、該DNA配列の発現がLOX-1をコードする遺伝子の発現を、以下:iアンチセンスサイレンシング;またはiiコサプレッションサイレンシング;またはiiiRNA干渉によって低下させる、方法。項目46安定な感覚刺激品質を有する飲料を製造する方法であって、該方法は、以下:i項目1に記載のオオムギ植物またはその一部を含有する組成物を調製する工程;iiiの組成物を飲料に加工する工程;を包含し、それによって安定な感覚刺激品質を有する飲料を得る、方法。項目47工程iが麦芽組成物を前記オオムギ植物またはその一部の穀粒から調製する工程を包含する、項目46に記載の方法。項目48前記方法がさらにLOXインヒビターを用いたインキュベーションを包含する、項目46および47のいずれかに記載の方法。項目49前記組成物の飲料への加工がマッシング工程を包含する、項目46に記載の方法。項目50LOXインヒビターが、前記マッシング工程中に添加される、項目46に記載の方法。項目51低いLOX-1活性を有するかまたはLOX-1活性を有さない麦芽組成物を製造する方法であって、該方法は、以下:i項目2に記載の穀粒を提供する工程;ii該穀粒を浸漬する工程;iii該浸漬した穀粒を所定の条件下で発芽させる工程;iv発芽させた穀粒を熱で処理する工程;を包含し、それによって低いLOX-1活性を有するかまたはLOX-1活性を有さない麦芽組成物を製造する、方法。項目52野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を有するオオムギ植物を調製する方法であって、該方法は、以下:i野生型オオムギ穀粒またはその一部のLOX-1活性を測定する工程;およびiiオオムギ植物および/またはオオムギ穀粒および/またはオオムギ胚および/またはオオムギ細胞および/またはオオムギ組織に変異を誘発させ、それによってM0世代のオオムギを得る工程;およびiii該変異を誘発させたオオムギ植物、穀粒、細胞、組織および/または胚を少なくとも2世代栽培し、それによってMx世代のオオムギ植物ここで、xは≧2の整数であるを得る工程;およびiv穀粒またはその一部を該Mx世代のオオムギ植物から得る工程;およびv該穀粒またはその一部におけるLOX-1活性を測定する工程;およびvi変異を誘発させた穀粒またはその一部のLOX-1活性が野生型穀粒またはその一部のLOX-1活性の5未満である植物を選択する工程;を包含し、それによって野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を有するオオムギ植物を得る、方法。項目53野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を有するオオムギ植物を調製する方法であって、該方法は、以下:iオオムギ植物、および/またはオオムギ穀粒および/またはオオムギ胚に変異を誘発させる工程;およびii必要に応じて、該変異を誘発させたオオムギ植物/オオムギ穀粒/オオムギ胚を栽培する工程;およびiiiLOX-1をコードするオオムギ遺伝子中の変異の有無を決定する工程であって、該変異が、配列番号3に示す配列の700個未満の連続アミノ酸を含むLOX-1のポリペプチド形態をコードする遺伝子を生じる工程;およびiviiで提供された変異を有する植物を選択する工程;を包含する、方法。項目54オオムギLOXの活性を低下させる方法であって、該方法は、以下:iオオムギ植物もしくはその一部またはオオムギから調製される植物製品を提供する工程;iiLOXインヒビターを提供する工程であって、該LOXインヒビターが没食子酸塩である、工程;iii該オオムギ植物もしくはその一部またはオオムギから調製される植物製品を該LOXインヒビターと共にインキュベートし、それによってオオムギLOX好ましくはLOX-1の活性を低下させる工程;を包含する、方法。項目55前記インヒビターが没食子酸オクチルである、項目54に記載の方法。本発明のこれらの特徴および他の特徴、局面、ならびに利点は、以下の定義、記載、実施例、添付の特許請求の範囲ならびに添付の配列表および図面に関連付けた場合によりよく理解される。3.1定義以下の記載、図および表において、多数の用語が使用される。明細書および特許請求の範囲を提供するために、このような用語に与えられるべき範囲を含む以下の定義が提供される。本明細書で使用される場合、aは、それが使用される文脈に応じて1つ以上を意味し得る。用語作物学的形質は、植物の性能または経済価値に寄与する植物の表現型形質を説明する。このような形質としては、耐病性、昆虫抵抗性、ウイルス抵抗性、線虫抵抗性、耐乾燥性、耐高塩性、収量、草高、成熟までの日数、穀粒粒度すなわち穀粒サイズ分別、穀粒窒素含有量などが挙げられる。アンチセンスヌクレオチド配列とは、ヌクレオチド配列の標準的な5’から3’への向きのコーディングに対して逆の向きである配列を意図する。植物細胞中に存在する場合、アンチセンスDNA配列は、好ましくは内因性遺伝子に関するヌクレオチド配列の正常な発現を抑制し、対応する天然タンパク質の産生を破壊させ得る。ビールの製造プロセスに関連して、用語オオムギは、特に麦芽製造プロセスを説明するために使用される場合、オオムギ穀粒を意味する。他の全ての場合において、特に明記しない限り、オオムギとは、任意の品種を含むオオムギ植物Hordeumvulgare,Lを意味する。耐病性とは、植物が植物-病原体の相互作用の結果である病徴を回避することを意図する。このようにして、病原体が植物病害および関連する病徴、あるいはまた病徴を引き起こすことが防止される。また、病原体によって引き起こされる病徴は最小限抑えられるかまたは軽減される。本出願明細書で定義される穀物植物は、主としてデンプン含有種子用に栽培されるイネ科植物群の一員である。穀物植物としては、オオムギ、コムギパンコムギ、イネ、トウモロコシ、ライムギ、カラスムギ、モロコシおよびライコムギTriticale、すなわちライムギ-コムギハイブリッドが挙げられるが、これらに限定されない。特定の核酸との関連でコードするまたはコードされるとは、特定のタンパク質への翻訳に関する情報を包含することを意味する。タンパク質をコードする核酸は、核酸の翻訳された領域内に非翻訳配列例えば、イントロンを含んでいてもよいし、またはこのような介在非翻訳配列を欠いていてもよい例えば、cDNAにおいて。タンパク質がコードされる情報は、コドンの使用により特定される。本明細書で使用される場合、核酸との関連で発現とは、核酸断片から誘導されるセンスmRNAまたはアンチセンスRNAの転写および蓄積として理解されるべきである。タンパク質との関連で使用される発現とは、mRNAのポリペプチドへの翻訳をいう。香味分子とは、植物中で生成され、臭気および/または香味の構成成分であるアルデヒドおよび/またはアルコールを意図する。特に、香味分子としては、特定の揮発性のアルコールおよびアルデヒドが挙げられる。揮発性の香味分子の例としては、ヘキサナール、3Z-ヘキセナール、2E-ヘキセナール、2E-ヘキセノール、3Z-ノネナール、2E-ノネナールが挙げられるが、これらに限定されない。本発明は、植物中の香味分子のレベルを調節するために使用され得る。用語遺伝子は、ポリペプチド鎖の生成に関わるDNAのセグメントを意味する;セグメントとしては、コード領域の前および後の領域プロモーターおよびターミネーターが挙げられる。真核生物遺伝子は、それによってコードされるタンパク質に関して非連続的であり、イントロンによって中断されたエキソンからなる。RNAへの転写後に、イントロンはスプライシングによって除去されて成熟メッセンジャーRNAmRNAを生じる。エキソン間のスプライス部位は、代表的には一次RNA転写産物からのイントロンの欠失および切除されたイントロンのいずれかの側に残っているRNAの両端の結合または融合からなるスプライシングプロセスのためのスプライスシグナルとして作用する共通配列によって決定される。いくつかの場合には、交互または異なるパターンのスプライシングは、同じ単一の長さのDNAから種々のタンパク質を生じ得る。ネイティブの遺伝子は、内因性遺伝子と呼ばれ得る。遺伝子サイレンシングは、遺伝子の発現を変えるための方法である。それは、種々の生物間で保存される転写後遺伝子サイレンシング機構であるRNAサイレンシングをいう。この方法としては、転写後遺伝子サイレンシングPTGSおよびRNA干渉RNAiが挙げられる。PTGSは、内因性および外因性の相同性遺伝子の遺伝子サイレンシング現象である。PTGSに関する大部分の例は、コサプレッション構築物またはアンチセンス配向の導入遺伝子の発現によって生じる効果に関するものであるが、従来の育種プログラム例えばイネでのLgc1変異の植物でも認められているKusabaら、2003。この変異は、RNAサイレンシングによってグルテリン発現を抑制することが見出され、これはおそらくは二本鎖RNA分子、従ってRNAサイレンシングの強力な誘発物質を生成し得る尾部対尾部tail-to-tailの逆方向反復を形成するグルテリンに対する2つの高度に類似する遺伝子の間の3.5kbpの欠失に起因する。RNAサイレンシングの第2の型は、RNA干渉RNAiとして知られており、根本的な前提は、細胞中に注入されるかまたは取り込まれた場合に、二本鎖のRNAがその相同な遺伝子の発現を特異的にブロックし得ることであるGoenczyら、2000。本明細書で使用される場合、核酸との関連で異種とは、外来種が起源である核酸であるか、または同種から生じる場合には組成および/またはゲノム遺伝子座におけるそのネイティブの形態から意図的なヒトの介入によって実質的に修飾される核酸である。本明細書で使用される場合、用語発芽とは、種々の組成物例えば天然に見出される標準的な土壌でのオオムギ穀粒による成長の開始または続行を意味する。発芽はまた、グロースチャンバなどに置かれた鉢の土壌で行なうこともできるし、あるいは例えば、標準的な実験用ペトリ皿に置かれた湿潤濾紙上で行なうこともできる。発芽は、一般に穀粒の水和、穀粒の膨張および胚の成長の誘導を包含すると理解される。発芽に影響を及ぼす環境要因としては、湿度、温度および酸素レベルが挙げられる。根および苗条の発育が観察される。グリーンノートとは、多数の植物中に存在する揮発性の香味および芳香分子を説明する用語であり、感応用語においてフレッシュグリーンおよびグラッシーfreshgreenandgrassyとして特徴付けられる。これらの分子は、植物によって脂質および遊離脂肪酸例えばリノール酸およびリノレン酸の分解から生成される。本明細書で使用される場合、用語単離されたとは、物質がその本来の環境から取り出されることを意味する。例えば、生物中に存在する天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されないが、自然系に共存する物質のいくつかまたは全てから分離される同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離される。このようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部分であり得るか、そして/またはこのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の一部であり得、さらにこのようなベクターまたは組成物はその天然環境の部分ではないので、単離することができる。用語穀粒とは、穀物穎果を包含することが定義され、内部種子、外花穎および内花穎も表す。大部分のオオムギ品種において、外花穎および内花穎は、穎果に付着し、また脱穀の後の穀粒の一部である。しかし、ハダカムギ品種も存在する。これらにおいて、穎果は外花穎および内花穎がなく、コムギのように自由に脱穀される。用語穀粒および穀類は、本明細書では交換可能に使用される。穀粒熟成または穀類発育とは、受精によって開始し、代謝蓄積物例えば糖、オリゴ糖、デンプン、フェノール、アミノ酸およびタンパク質が液胞を標的するかまたは標的せずに穀粒穀類の種々の組織例えば胚乳、種皮、糊粉および胚盤に蓄積し、穀粒穀類の拡大、穀粒穀類の充填をもたらし、そして穀粒穀類の乾燥により終結する期間をいう。用語LOX-1活性とは、オオムギLOX-1酵素の酵素活性をいう。特に、本発明との関連で、LOX-1活性とは、リノール酸の9-HPODEへの酵素触媒二原子酸素添加である。LOX-1酵素が他の反応を触媒することができるとしても、本発明のLOX-1の活性を測定するためには、9-HPODE形成活性のみが考慮されるべきである。図1Bは、リノール酸がT2Nに変換される生化学的経路を概説する。用語低LOXとは、好ましくは酵素活性これに限定されないに関して、部分的機能喪失型の特定のLOX酵素を生じる1個または数個の内因性遺伝子における1つまたは数個の変異の存在をいう。例えば、DoumaらのWO02/053721A1号として公開されたPCT出願PCT/IB01/00207号に開示されたオオムギ植物は、対応する野生型酵素と比べて10の残留活性を有する変異LOX-1酵素を生成する。植物との関連で低LOXとは、部分的機能喪失型の特定のLOX酵素を有する植物をいう。麦芽製造とは、制御された環境条件例えば麦芽浸漬タンクおよび発芽箱が挙げられるが、これらに限定されないの下で行うオオムギ穀粒の特殊な形態の発芽である。本発明のプロセスに従って、麦芽製造はオオムギ穀粒が浸漬されている間および/またはその後に生じ始める。麦芽製造プロセスは、オオムギ穀粒の乾燥によって停止させ得る。ヌル-LOX-1オオムギから調製された麦芽組成物は、ヌル-LOX-1麦芽例えば純粋なヌル-LOX-1麦芽またはヌル-LOX-1麦芽を含有する任意の麦芽混合物を含有すると理解される。マッシングは、粉砕した麦芽の水中でのインキュベーションである。マッシングは、特定の温度および特定の体積の水で行うことが好ましい。上記温度および水の体積は、麦芽由来の酵素活性の低下の度合い、従って特に、生じ得るデンプン加水分解の量に影響及ぼすので重要である。マッシングは、添加物の存在下で行い得る。これは、主に抽出物のさらなる供給源として使用される麦芽以外の任意の炭水化物源例えばオオムギヌル-LOX-1オオムギが挙げられる、トウモロコシまたはイネの添加物を含むと理解される。醸造所における添加物の処理についての要件は、使用される添加物の状態および種類、特にデンプン糊化または液化温度に依存する。糊化温度が標準麦芽糖化温度よりも高い場合、デンプンはマッシュに添加する前に糊化され、液状化される。変異は、遺伝子のコード領域および非コード領域の欠失、挿入、トランスバージョンおよび点変異を包含する。欠失は、遺伝子全体についてまたは遺伝子の一部だけについてのものであり得る。点変異は、終止コドン、フレームシフト変異またはアミノ酸置換を生じ得る。体細胞変異は、植物の特定の細胞または組織においてのみ生じる変異であり、次の世代には遺伝しない。生殖細胞系統の変異は、任意の植物の細胞において見出され得、遺伝する。用語ヌル-LOXとは、完全機能喪失型のコードされたLOX酵素を生じるLOXコード遺伝子中の変異の存在をいう。LOXをコードする遺伝子において未成熟終止ナンセンスコドンを生じる変異は、完全機能喪失型を得ることができる唯1つのメカニズムに相当する。完全機能喪失型のLOX酵素を得るための分子アプローチは、上記酵素について転写産物の完全欠損を生じる変異、またはコードされた酵素を完全に不活性化する変異の発生を含む。植物との関連で、ヌル-LOXとは、完全機能喪失型の特定のLOX酵素を有する植物をいう。作動可能に連結されたとは、一方の機能が他方の機能によって影響されるように1つのポリヌクレオチドに対する2個以上の核酸断片の会合を示すために使用される用語である。例えば、プロモーターは、それがコード配列の発現に影響を及ぼし得る場合にはコード化配列と作動可能に連結されるすなわちコード配列はプロモーターの転写調節下にある。コード配列は、センスまたはアンチセンスの配向で調節配列に作動可能に連結させることができる。PCRまたはポリメラーゼ連鎖反応は、特異的DNAセグメントの増幅に使用される技術として当業者には周知であるMullisらの米国特許第4,683,195号および同第4,800,159号。植物または植物材料としては、植物細胞、植物プロトプラスト、オオムギ植物を再生することができる植物細胞組織培養物、植物カルス、および植物細胞であって植物または植物部分例えば胚、花粉、胚珠、花、穀粒、葉、根、根端、葯内のインタクトな植物細胞あるいは植物の任意の部分または製品が挙げられる。用語植物製品とは、植物または植物部分の加工により得られる製品を意味する。従って、上記植物製品は、例えば、麦芽、麦芽汁、発酵または非発酵の飲料、食品あるいは飼料製品であり得る。本明細書で使用される場合、タンパク質との関連で組換え体とは、外来種が起源であるタンパク質であるか、または同じ種から生じる場合には、組成においてその固有の形から意図的なヒトの介入によって実質的に修飾されているタンパク質である。RNA転写産物とは、DNA配列のRNAポリメラーゼ触媒転写により生じる生成物をいう。RNA転写産物がDNA配列の完全な相補的コピーである場合、RNA転写産物は一次転写産物と呼ばれる。RNA配列が一次転写産物の翻訳後処理により誘導される場合には、それは成熟RNAと呼ばれる。メッセンジャーRNAまたはmRNAとは、イントロンが存在せずかつ細胞によってタンパク質に翻訳され得るRNAをいう。cDNAとは、mRNAテンプレートに相補的でありかつmRNAテンプレートから得られるDNAをいう。cDNAは、一本鎖の形であり得るか、または例えばDNAポリメラーゼIのクレノウ断片を使用して二本鎖の形に転換され得る。センスRNAとは、mRNAを含み、従って細胞によってポリペプチドに転写され得るRNA転写産物をいう。アンチセンスRNAとは、標的一次転写産物またはmRNAの全体または一部に相補的でありかつ標的遺伝子の発現を遮断するRNA転写産物をいう。アンチセンスRNAの相補性は、特定のヌクレオチド配列すなわち5’非コード配列、3’非コード配列、イントロン、またはタンパク質コード配列の任意の部分に対するものであり得る。機能的RNAとは、タンパク質へ翻訳され得ないが細胞プロセスに対してはなお影響を及ぼすセンスRNA、アンチセンスRNAまたはその他のRNAをいう。他に明記しない限りは、T2Nとは、遊離の形態のT2Nを意味する。T2Nポテンシャルという用語は、T2Nを放出する能力を有するか、または1つ以上の反応においてT2Nに変換され得る化学物質を説明する。T2Nポテンシャルは、高温例えば100°Cおよび低い酸性度例えばpH4.0でインキュベーション例えば2時間の後の溶液例えば麦芽汁またはビール中のT2Nの濃度として測定することができる。この試料処理は、T2Nポテンシャルから、例えばT2N付加物1種以上の物質例えばタンパク質、亜硫酸塩、細胞砕片、細胞壁などが挙げられるが、これらに限定されないに結合体化したT2Nを説明するのに使用される用語からT2Nの遊離を生じる。一般的に、T2N付加物それ自体は、ヒトによって異臭として感じられない。しかし、上記T2N付加物から、例えば熱または酸によって放出されるT2Nは、異臭を生じ得る。組織培養物とは、同じ種類または異なる種類の単離細胞、あるいは植物の部分例えばプロトプラスト、カルス、胚、花粉、葯などに組織化された細胞の集合を含有する組成物を示す。形質転換とは、DNAが染色体外要素組み込みおよび安定な遺伝なしにとしてまたは染色体組込み体遺伝学的に安定な遺伝のどちらかとして維持されるように生物内にDNAを導入することを意味する。他に明記しない限りは、E.coliの形質転換について本明細書で使用した方法はCaCl2法であったSambrookおよびRussel、前出。オオムギの形質転換については、アグロバクテリウム介在形質転換は、品種GoldenPromiseなどの別の品種を宿主として使用し得ることを除いて、Tingayら1997年およびWangら2001年によって記載されているようにして基本的に行われ得る。導入遺伝子とは、形質転換手順によってゲノムに導入されている遺伝子である。本明細書で使用される場合、トランスジェニックとは、異種核酸の導入によって改変されている細胞についての言及または細胞がそのように改変された細胞から誘導されることについての言及を包含する。従って、例えば、トランスジェニック細胞は、天然型の細胞内で同じ型で見出されない遺伝子を発現するか、または、意図的なヒトの介入の結果として別の方法で異常に発現されるか、過少発現されるか、または全く発現されない天然の遺伝子を発現する。本明細書で使用される場合、植物、特にオオムギ植物との関連でトランスジェニックという用語は、伝統的な植物育種法例えばNaN3で誘導される変異誘発による細胞の変性、および自然に生じる事象例えば意図的なヒトの介入なしで生じる事象による細胞の変性を包含しない。用語野生型オオムギ植物とは従来のオオムギ植物をいい、好ましくは、この用語は本発明のオオムギ植物が誘導されるオオムギ植物、すなわち親植物をいう。本発明の1つの好ましい実施形態においては、野生型オオムギ植物は、品種Celeste、Lux、Prestige、SaloonおよびNerudaからなる群より選択される。より好ましくは、野生型オオムギ植物は品種Barkeである。野生型オオムギ品種またはその種子は、一般的には例えば一般の種子会社から入手可能である。4.配列表の簡単な説明本発明は、以下の詳細な説明および本出願の一部を構成する添付の配列表表9に要約するからさらに十分に理解され得る。上記表は、本明細書に記載の核酸およびポリペプチド、これらのポリペプチドの全部またはかなりの部分に相当するポリペプチドをコードする核酸断片を含むcDNAクローンの指定、および対応する識別子配列番号を列挙する。配列の説明およびそれに添付された配列表は、特許出願のヌクレオチドおよび/またはアミノ酸配列の開示を規定する規則に従う。配列表は、標準化された勧告Cornish-Bowden,1985;IUPAC-IUBJointCommissiononBiochemicalNomenclature,1984これらは本明細書中に参考として援用されるに準拠して定義されるヌクレオチドおよびアミノ酸配列文字に関する一文字コードを含む。ヌクレオチドおよびアミノ酸の配列データについて使用される記号および書式は、特許出願の配列の開示を規定する規則に従う。6.発明の詳細な説明記載を明確にするためにおよび限定しないために、発明の詳細な説明を以下の小節に分ける:iオオムギ植物;iiヌル-LOX-1オオムギの調製;iii組成物;iv化学的変異誘発;vオオムギ変異体の選択;vi植物育種;viiオオムギの交配;viiiLOX酵素;ixLOX経路生成物;xT2Nポテンシャル;xi耐病性;xiiマイコトキシン類;xiii芳香;xivLOXをコードする遺伝子の異種発現;xvLOXインヒビター。6.1オオムギ植物野生型オオムギ、Hordeumvulgaressp.spontaneoumは、現在の栽培型のオオムギの祖先と考えられる。この穀物の開発は肥沃な三日月帯で穀類栽培の開始を説明するための手がかりを提供すると長い間認められている。ヒトが長い夏季を通じて穀類を集めることができたという事実は、穀類を栽培化に予め適応させた候補とした。初期の栽培化は、おそらくは遺伝学的に非常に多様性があり、これは、イスラエル、トルコおよびイランの野生型オオムギの研究によって支持された概念であったNevo,1992。野生型オオムギ群はこれらの対立遺伝子含有量において相当に異なることが見出された。27個の共有遺伝子座での127個の対立遺伝子の中から、65個の対立遺伝子が固有であることが見出された、すなわちこれらは一つの国のみで生じた。オオムギの野生状態から栽培状態への移行は、多数の遺伝子座での対立遺伝子頻度の急激な変化と一致すると考えられる。希少な対立遺伝子および新しい変異事象が、栽培化植物群オオムギ在来種を意味するにおいて新しい形質を早く確認した農業者によって積極的に選択された。これらは、遺伝学的に野生型オオムギよりも現在の品種により密接に関連し、さらなる育種努力のための有用な対立遺伝子源に相当するEllisら、1998。19世紀後半まで、オオムギ在来種は、近交系とハイブリッド分離物との高度に異質の混合物初期世代においてランダム交配により誘導された数種の植物が挙げられるとして存在した。在来種の大部分は、先進的農業において純系品種によって置き換えられた。中間レベルまたは高レベルの遺伝子多様性が、残りの在来種を特徴付けている。最初に、現在のオオムギ品種は、在来種から選ばれた品種に相当した。これらの品種は、その後、確立された純系例えば多様な地理的起源の純系の間での交配の連続サイクルに由来した。最終的には、これは、多くの、おそらくは全ての先進的農業において遺伝な基盤の著しい狭さをもたらした。在来種と比較すると、現在のオオムギ品種は、多数の改良された性質を有するNevo,1992およびvonBothmerら、2003。これらとしては、例えば以下:i殻付きおよび裸の穀粒ii種子休眠iii耐病性ivリシンおよび他のアミノ酸の割合vタンパク質含有量vi窒素含有量vii炭水化物組成viiiホルデインパターンが挙げられるが、これらに限定されない。従って、本発明の1つの実施形態において、オオムギ植物は、対応する野生型オオムギ植物のLOX-1活性の1未満を含有するように改変された最新のオオムギ品種である。従って、この実施形態においては、オオムギ植物はオオムギ在来種でないことが好ましい。本発明は、野生型オオムギ植物のLOX-1活性を5未満、好ましくは4未満、より好ましくは3未満、さらにより好ましくは2未満、なおより好ましくは1未満有するオオムギ植物およびその一部に関する。1未満のLOX-1活性を有する本発明のオオムギ植物は、本明細書ではヌル-LOX-1オオムギ植物とも呼ばれる。オオムギ植物は、任意の適当な形態であり得る。例えば、本発明のオオムギ植物は、生存オオムギ植物、乾燥植物、均質化された植物例えば粉砕オオムギ穀粒であり得る。この植物は成熟植物、胚、発芽穀粒、麦芽穀粒などであり得る。オオムギ植物の一部は、植物の任意の適切な部分例えば穀粒、胚、葉、茎、根、花またはこれらの部分であり得る。部分は、例えば、穀粒、胚、葉、茎、根または花の切片であり得る。オオムギ植物の部分はまた、ホモジネートもしくは粉砕オオムギ植物または穀粒の部分であり得る。本発明の1つの実施形態において、オオムギ植物の一部は、このオオムギ植物の細胞、好ましくはインビトロ組織培養で増殖させ得る生存細胞であり得る。本発明の好ましい1つの実施形態において、ヌル-LOX-1オオムギ植物は、野生型オオムギ植物の活性の5未満、好ましくは3未満、より好ましくは1未満、好ましくは0.5未満、さらにより好ましくは0.1未満を有する。この活性は、任意の適切な方法で測定され得るが、活性は以下の実施例1の方法を使用して測定することが好ましい。本発明の非常に好ましい実施形態において、ヌル-LOX-1オオムギ植物は、本質的にLOX-1活性を有さず、より好ましくは全くLOX-1活性を有さない。本質的にLOX-1活性を有さないとは、以下に記載のようなLOX-1活性のアッセイを使用してLOX-1活性が検出できないことを意味する。ヌル-LOX-1オオムギのLOX-1活性がほとんどないことは、例えば、上記オオムギが正常に機能しないLOX-1タンパク質例えば変異体LOX-1タンパク質を含むという結果であり得る。しかし、ヌル-LOX-1オオムギは、野生型オオムギ植物に比べて、LOX-1タンパク質をごく少量しか有さないかまたはより好ましくはLOX-1タンパク質を有さない例えばLOX-1タンパク質を5未満、好ましくは3未満、より好ましくは1未満、好ましくは0.5未満、より好ましくは0.1未満有する。より好ましくは、ヌル-LOX-1オオムギは、本質的にLOX-1タンパク質を有さず、最も好ましくは全くLOX-1タンパク質を有していない。本質的にLOX-1タンパク質がないとは、検出可能なLOX-1タンパク質がないことを包含することを意味する。LOX-1タンパク質は当業者に知られている任意の適切な手段で検出され得るが、上記タンパク質はLOX-1タンパク質をLOX-1に特異的な抗体で検出する技術により検出することが好ましい。上記技術は、例えば、ウエスタンブロッティング法またはELISA法であり得る。上記特異的抗体は、モノクロナールまたはポリクロナールであり得るが、上記抗体はLOX-1タンパク質内の数種の異なるエピトープを認識するポリクロナールであることが好ましい。LOX-1タンパク質はまた、例えばLOX-1活性を測定する方法、LOX-1をコードする遺伝子中の変異を検出する方法、またはLOX-1遺伝子の発現を検出する方法によって間接的に検出され得る。LOX-1をコードする遺伝子の変異は、例えばこの遺伝子を配列決定することによって検出し得る。LOX-1に対する遺伝子の発現は、例えばノーザンブロッティングまたはRT-PCRにより検出され得る。本発明の1つの好ましい実施形態では、LOX-1タンパク質は、本明細書の実施例4に概説した方法を使用して検出される。用語LOX-1タンパク質とは、配列番号3または配列番号7に示すようなオオムギの全長LOX-1タンパク質またはその機能的ホモログを包含することを意味する。LOX-1の活性部位は、LOX-1のC末端部分に位置する。具体的にはアミノ酸残基520-862またはLOX-1活性に関係のあるその部分に及ぶ領域である。従って、1つの実施形態では、ヌル-LOX-1オオムギは、好ましくはLOX-1のアミノ酸520-862のいくつかまたは全てを欠いているLOX-1の変異体型をコードする遺伝子を含む。上記変異体LOX-1はまた、野生型LOX-1に存在する他のアミノ酸残基を欠いていてもよい。従って、ヌル-LOX-1オオムギは、LOX-1の短縮型これは機能的でない、例えばN末端短縮型またはC末端短縮型を含み得る。好ましくは、この短縮型は、LOX-1の800個以下、より好ましくは750個以下、さらにより好ましくは700個以下、なおより好ましくは690個以下、さらにより好ましくは680個以下、なおより好ましくは670個以下の連続するアミノ酸例えば配列番号3のLOX-1の665個以下、例えば650個以下、例えば600個以下、例えば550個以下、例えば500個以下、例えば450個以下、例えば425個以下、例えば399個以下の連続するアミノ酸を有する。好ましくは、上記短縮型は、LOX-1のN末端断片のみを有。従って、好ましくは、上記短縮型は、配列番号3の多くて800個、より好ましくは多くて750個、なおより好ましくは多くて700個、なおより好ましくは多くて690個、なおより好ましくは多くて680個、なおより好ましくは多くて670個、なおより好ましくは多くて665個のN末端アミノ酸例えば配列番号3の665個以下、例えば650個以下、例えば600個以下、例えば多くとも550個、例えば多くとも500個、例えば多くとも450個、例えば多くとも425個、例えば多くとも399個のN末端アミノ酸を有する。1つの非常に好ましい実施形態では、上記短縮型は配列番号3のアミノ酸1-665からなり得る。本発明の好ましい実施形態では、オオムギ植物は、LOX-1をコードするmRNA中に転写される遺伝子を有し、このmRNAは野生型LOX-1mRNAの終止コドンの上流にナンセンスコドンまたは終止コドンを有する。このようなナンセンスコドンは、本明細書では中途ナンセンスコドンと呼ぶ。好ましくは、上記植物のLOX-1をコードするmRNA中に転写される全ての遺伝子は、中途ナンセンスコドンまたは終止コドンを有する。上記ナンセンスコドンまたは終止コドンは、開始コドンの下流に多くて800個、より好ましくは多くて750個、さらにより好ましくは多くて700個、なおより好ましくは多くて690個、さらにより好ましくは多くて680個、なおより好ましくは多くて670個、さらによりさらに好ましくは多くて665個のコドンで配置される。LOX-1をコードする野生型ゲノムDNA配列を、配列番号1または配列番号5に示す。1つの好ましい実施形態では、オオムギ植物は、LOX-1をコードする遺伝子を有し、この遺伝子から転写されたmRNA前駆体は配列番号2に対応するリボ核酸配列を有する。本発明の別の好ましい実施形態では、オオムギ植物は、変異体LOX-1をコードする遺伝子を有し、この遺伝子は、少なくとも1個、例えば1個、例えば2個、例えば3個のスプライス部位に少なくとも1個、例えば1個、例えば2個、例えば3個、例えば4個、例えば5個の変異を有する。好ましくは、この変異1個または複数は、上記少なくとも1個のスプライス部位が非機能的であることをもたらす。従って、このような遺伝子から転写されたmRNAは、異常なスプライシングに起因して異常である。従って、本発明のヌル-LOX-1オオムギ植物のLOX-1遺伝子から転写されたmRNAは、タンパク質をコードしないかまたはLOX-1のN-末端のみを有するタンパク質をコードすることが好ましい。上記タンパク質は、異常mRNAによってコードされる他の配列であって、LOX-1の遺伝子から誘導されていない配列を有し得る。これに関して、LOX-1のN-末端は、アミノ酸1~アミノ酸Nを有し、Nは、2~800の範囲、より好ましくは2~750の範囲、なおより好ましくは2~700の範囲、さらにより好ましくは2~650の範囲、なおより好ましくは2~600の範囲、なおより好ましくは2~550の範囲、なおより好ましくは2~500の範囲、なおより好ましくは2~450の範囲、さらにより好ましくは2~400の範囲、なおより好ましくは2~378の範囲内の整数である。本発明の1つの実施形態では、オオムギ植物は、変異体LOX-1をコードする遺伝子を有し、上記遺伝子は、配列番号3のアミノ酸1~378およびLOX-1から誘導されていないさらなるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするmRNAを生じるスプライス部位中に変異を有する。好ましくは、上記変異体LOX-1は配列番号8に概要を示した配列からなる。本発明の非常に好ましい実施形態では、ヌル-LOX-1オオムギ植物の変異体LOX-1をコードする遺伝子はナンセンス変異を有し、この変異は配列番号1の3574位のG→A置換に対応する。より好ましくは、ヌル-LOX-1オオムギ植物は、アメリカンタイプカルチャーコレクションATCC寄託の受託番号PTA-5487を有するD112と命名される植物である。本発明の別の非常に好ましい実施形態では、ヌル-LOX-1オオムギ植物のLOX-1をコードする遺伝子は、非機能的イントロン3供与スプライス部位を有する。従って、上記植物のLOX-1mRNAは、配列番号8に含まれる、LOX-1のアミノ酸1-378およびイントロン3由来のさらなるアミノ酸を有するタンパク質をコードする。より好ましくは、ヌル-LOX-1オオムギ植物は、アメリカンタイプカルチャーコレクションATCC寄託の受託番号PTA-5584を有するA618と命名される植物である。本発明のオオムギ植物はまた、ヌル-LOXオオムギ植物の後代であり得る。従って、本発明のオオムギ植物は、ATCC寄託の受託番号PTA-5487を有するD112と命名される植物またはATCC寄託の受託番号PTA-5584を有するA618と命名される植物の後代であり得る。本発明のオオムギ植物は、当業者に公知の任意の適当な方法で、好ましくは本明細書の以下に概説する方法の1つ例えば、6.2節ヌル-LOX-1オオムギの調製を参照で調製され得る。本発明の1つの実施形態では、本発明のヌル-LOX-1オオムギ植物は、野生型オオムギに匹敵する植物成長生理機能および種子発生を有することが好ましい。従って、ヌル-LOX-1オオムギ植物は、草高、植物当たりの分げつの個数、開花の開始および/または穂状花序当たりの種子の数について野生型オオムギと同様であることが好ましい。本発明の局面はまた、ヌル-LOX-1オオムギ植物を提供することであり、この植物は、以下:、i増強された耐病性を有すること;またはiiマイコトキシンの産生について低下した潜在能力を有すること;またはiii組織培養に使用される再生可能な細胞を有すること;またはiv上記の特性i~iiiの任意の組み合わせを特徴とする。本発明の1つの実施形態では、オオムギ植物は、ヌル-LOX-1オオムギ植物である但し、このオオムギ植物はイントロン5のスプライス供与部位にGの変異を保有しない。この実施形態では、本発明はまた、ヌル-LOX-1オオムギ植物またはその一部から調製される植物製品例えば麦芽、麦芽汁、発酵飲料もしくは非発酵飲料、ビール、食品または飼料製品に関する但し、このオオムギ植物はイントロン5のスプライス供与部位にGの変異を保有しない。上記Gは、例えば、配列番号1の位置2968のGに対応する。植物製品が所定の変異を有するオオムギ植物から調製されるか否かは、上記植物製品からDNAを単離し、上記変異の有無を当業者に公知の従来の方法により同定することによって決定し得る。DNAは、例えば、麦芽汁、ビールまたは別の飲料から凍結乾燥、水性緩衝液への再懸濁、クロロホルム/イソアミルアルコールを用いた抽出、次いでアルコール沈殿によって単離され得る。例えば、イントロン5のスプライス供与部位のGの変異は、HirotaらのWO2004/085652に記載の方法と同様の方法で同定され得る。6.2ヌル-LOX-1オオムギの調製本発明のオオムギ植物は、当業者に公知の任意の適切な方法で調製され得る。好ましくは、本発明のオオムギ植物は、オオムギ植物またはその一部例えばオオムギ穀粒に変異を誘発させ、次いでオオムギ植物を5未満のLOX-1活性を有する植物についてスクリーニングし、選択する工程を包含する方法によって作製される。興味深いことに、1つの局面の本発明は、例えばDoumaらのWO02/053721に記載のスクリーニング方法よりも著しく優れた新規かつ極めて効率的なスクリーニング方法に関する。上記の新規スクリーニング方法は、LOX-1活性を全くまたはほとんど有さないオオムギ植物を再現可能に同定すること可能にさせる。この新規スクリーニング方法は、変異を誘発させたオオムギから穀粒またはその一部例えば胚を得、この穀粒またはその一部のLOX-1活性を測定する工程を包含する。従って、本発明の目的は、野生型オオムギ植物のLOX-1活性を5未満有するオオムギ植物を作製する方法を提供することであって、この方法は、以下:i野生型オオムギ穀粒またはその一部のLOX-1活性を測定する工程;およびiiオオムギ植物および/またはオオムギ細胞および/またはオオムギ組織および/またはオオムギ穀粒および/またはオオムギ胚に変異を誘発させ、それによってM0世代のオオムギを得る工程;およびiii上記変異を誘発させたオオムギ植物、穀粒および/または胚を、少なくとも2世代栽培し、それによってMxここで、xは≧2の整数である世代のオオムギ植物を得る工程;およびiv上記Mx世代のオオムギ植物から穀粒またはその一部を得る工程;およびv上記穀粒またはその一部においてLOX-1活性を測定する工程;およびvi変異を誘発させた穀粒またはその一部のLOX-1活性が野生型穀粒またはその一部のLOX-1活性の5未満である植物を選択する工程、を包含し、それによって野生型オオムギ植物のLOX-1活性の5未満を有するオオムギ植物を得る。上記の工程iiは、オオムギ植物、オオムギ細胞、オオムギ組織、オオムギ穀粒およびオオムギ胚からなる群より選択される生体物質、好ましくはオオムギ植物、オオムギ穀粒およびオオムギ胚からなる群より選択される生体物質、より好ましくはオオムギ穀粒である生体物質に変異を誘発させることを包含し得る。変異を誘発させた穀粒のLOX-1活性は、野生型オオムギ穀粒のLOX-1活性の測定に使用される物質と同じ種類の物質を使用して測定することが好ましい、すなわち、工程iのオオムギ穀粒またはその一部は、工程ivに述べたものと同じ種類のオオムギ穀粒またはその一部であることが好ましい。例として、野生型オオムギのLOX-1活性が野生型オオムギの胚で測定される場合には、工程ivは変異を誘発させたオオムギ植物の胚のLOX-1活性を測定することを包含することが好ましい。変異誘発は、任意の適切な方法で行い得る。1つの実施形態では、変異誘発は、オオムギ植物またはその一部例えばオオムギ穀粒またはオオムギ由来の個々の細胞を変異誘発剤と共にインキュベートすることによって行われる。上記変異誘発剤は当業者には公知であり、例えばアジ化ナトリウムNaN3、エチルメタンスルホネートEMS、アジドグリセロールAG、3-アジド-1,2-プロパンジオール、メチルニトロソ尿素MNU、およびマレイン酸ヒドラジドMHであるが、これらに限定されない。別の実施形態では、変異誘発は、オオムギ植物またはその一部例えば穀粒に照射例えばUVをすることによって行われる。本発明の好ましい実施形態では、変異誘発は、以下の6.4節化学的変異誘発に概説した方法のいずれかに従って行われる。適切な変異誘発プロトコールの非限定的な例を、実施例1に示す。変異誘発は、M3オオムギをスクリーニングする場合には、所望の変異体の期待される頻度が種子10,000個当たり少なくとも0.5、例えば0.5~5の範囲、例えば0.9~2.3の範囲内にあるような方法で行われることが好ましい。好ましい実施形態では、変異誘発は、オオムギ穀粒に対して行われる。変異を誘発させた穀粒は、M0世代と呼ばれる図1Aも参照。変異誘発の後で、LOX-1活性を5未満、好ましくは1未満有するオオムギ植物またはその一部が選択される。選択は、当業者に公知の任意の適当な方法に従って行われ得る。好ましくは、選択は、試料をオオムギ植物例えばオオムギ穀粒から得、この試料中のLOX-1の活性を測定し、そして植物を選択する工程を包含し、この試料は野生型オオムギ植物のLOX-1活性を5未満、好ましくは1未満有する。試料は上記植物の任意の適切な部分から採取され得る。しかし、好ましくは、試料は穀粒から採取され、より好ましくは試料は穀粒の胚組織から採取され、なおより好ましくは試料は穀粒の胚組織からなる。一般的に、試料は、LOX-1活性を測定する前に任意の適切な方法を使用してホモジナイズしなければならない。好ましい実施形態では、試料はMx世代の穀粒から採取され、ここで、xは≧2の整数であり、好ましくはxは2~10の範囲内の整数であり、より好ましくは3~8の範囲内の整数である。非常に好ましい実施形態では、LOX-1活性は、M3穀粒または穀粒から誘導される試料について測定される。この実施形態では、変異誘発されたオオムギ穀粒M0世代を育ててオオムギ植物を得、これを交配させてM1穀粒を得ることが好ましい。この手順は、M3穀粒が入手できるまで反復される図1Aも参照。LOX-1活性の測定は、任意の適切なアッセイを使用して、好ましくは以下に概説する方法の1つで実施され得る。特に、上記アッセイは、LOX-1によるリノール酸の9-HPODEへの二原子酸素添加をモニタリングすることが好ましい。従って、一般的に、アッセイは、以下:iオオムギ穀粒またはその一部から調製した試料を提供する工程;およびiiリノール酸を提供する工程;およびiii上記試料を上記リノール酸と共にインキュベートする工程;およびivリノール酸の9-HPODEへの二原子酸素添加を検出する工程;を包含する。検出は、直接的または間接的に行い得る。任意の適切な検出方法を本発明について使用し得る。本発明の1つの実施形態では、リノール酸ヒドロペルオキシドが検出される。リノール酸ヒドロペルオキシドは、例えば、上記リノール酸ヒドロペルオキシドの分解を検出可能な化合物を生じる酸化反応と結びつけることによって検出され得る。例えば、これは実施例1に記載のようにして行われ得る。別の実施形態では、9-HPODEは、例えば、分光光度法例えば実施例9に記載されるHPLCで直接的に検出される。本発明の1つの実施形態では、LOX-1活性は、オオムギ穀粒由来の試料中の9-HPODEの量を測定することによって簡単に決定される。これは、例えば、実施例9に概説したような当業者に公知の任意の適切な方法で行われ得る。どのようなpHでLOX-1活性の測定を行うかが重要である。好ましくは、上記測定は、LOX-1の高い活性を可能にするが、LOX-2の低い活性のみを可能にするpHで行われる。従って、LOX活性の測定は、好ましくは3~6.5の範囲内、例えば3~4の範囲内、例えば4~5の範囲内、例えば5~6の範囲内、例えば6~6.5の範囲内のpHで行うことが好ましい。好ましくは、pHは、約3、例えば約3.5、例えば約4、例えば約4.5、例えば約5、例えば約5.5、例えば約6、例えば約6.5、例えば約7である。また、上記試料は適当なpHで、例えば3~6.5の範囲内、例えば3~4の範囲内、例えば4~5の範囲内、例えば5~6の範囲内、例えば6~6.5の範囲内のpHで調製されることが好ましい。好ましくは、pHは約3、例えば約3.5、例えば約4、例えば約4.5、例えば約5、例えば約5.5、例えば約6、例えば約6.5、例えば約7である。本発明のオオムギ植物を選択するために好ましい方法は、以下の6.5節オオムギ変異体の選択で記載する。LOX-1活性を測定するための方法の好ましい例を、実施例1に示す。上記選択手順は、マイクロタイタープレートアッセイ手順または他の公知の多数の試料の迅速なスクリーニングを可能にする反復高速処理アッセイフォーマットに適合させ得る。少なくとも5,000個、例えば少なくとも7,500個、例えば少なくとも10,000個、例えば少なくとも15,000個の変異誘発オオムギ植物をLOX-1活性について分析することが好ましい。5未満のLOX-1活性を有する有用なオオムギ植物の選択の後に、必要に応じて1回以上のさらなるスクリーニングを行ってもよい。例えば、選択された変異体を、さらに繁殖させてもよいし、またその後の世代をLOX-1活性について再度スクリーニングしてもよい。有用なオオムギ植物の選択の後に、これらの植物を育種例えば従来の育種に供し得る。育種の方法は、以下に記載する6.6節植物育種および6.7節オオムギの交配。しかし、本発明のオオムギ植物は、他の方法、例えば、LOX-1の減少した転写および/または翻訳を生じる方法により調製してもよい。従って、ヌル-LOX-1オオムギ植物は、作動可能に連結された要素として、オオムギ植物の中で発現可能なプロモーター、DNA配列、および転写終結領域を有する核酸配列を用いてオオムギ植物を形質転換させることによって調製してもよい。ここで、このDNA配列の発現は、LOX-1をコードする遺伝子の発現を、以下:iアンチセンスサイレンシング;またはiiコサプレッションサイレンシング;またはiiiRNA干渉によって減少させる。1つの実施形態では、オオムギ植物は、オオムギ植物を、LOX-1をコードする遺伝子の転写または翻訳を減少することができる核酸配列例えばアンチセンスLOX-1配列を有する核酸配列を用いて形質転換させる工程を包含する方法によって調製される。上記アンチセンス配列は、例えば、配列番号1のアンチセンス配列、またはその断片であり得る。上記アンチセンス配列は、オオムギ植物中で発現される遺伝子由来のプロモーター配列に作動可能に連結されるべきである。このような方法の非限定的な例を以下の実施例16に概説する。オオムギ植物は、任意の有用な方法例えば、Agrobacteriumtumefaciens媒介移入法または微粒子銃媒介DNA取り込み法によって形質転換され得る。ヌル-LOX-1オオムギ植物が、以下:iオオムギ植物および/またはオオムギ穀粒および/またはオオムギ胚に変異を誘発させる工程;およびiiLOX-1に関する遺伝子内の変異の有無を測定する工程であって、ここで、上記変異は、配列番号3に示した配列の700未満の連続するアミノ酸を含むLOX-1のポリペプチド形態をコードするLOX-1の遺伝子を生じ、好ましくは上記ポリペプチドは配列番号3の多くとも700個のN末端アミノ酸を含むLOX-1のN末端断片である、工程;iii上記変異を有する植物を選択し、それによって野生型オオムギ植物の5未満のLOX-1活性を有するオオムギ植物を得る工程;を包含する方法により調製されることもまた、本発明の範囲である。より好ましくは、上記変異は、上記のN末端LOX-1断片のいずれかをコードするLOX-1の遺伝子を生じ得る。上記変異は、任意の適切な方法例えばLOX-1遺伝子の配列決定法または一塩基多型SNP分析を使用して検出され得る。どのようにSNP分析を行うかについての一例を、以下の実施例13および実施例14に記載する。一旦、LOX-1遺伝子中に特定の変異例えば、上記変異のいずれかを有するヌル-LOX-1オオムギ植物が作製されると、同じ変異を有するさらなるオオムギ植物は、当業者に周知の従来の育種法で生じさせ得る。例えば、上記ヌル-LOX-1オオムギ植物は、別のオオムギ品種バックグラウンドに戻し交配され得る。図9に、このような戻し交配のスキームの例を開示する。6.3組成物本発明はまた、上記のオオムギ植物もしくはその一部を含有する組成物、または上記オオムギ植物もしくはその一部から調製される組成物に関する。上記オオムギ植物は5未満、好ましくは1未満のLOX-1活性を有するので、上記オオムギ植物もしくはその一部を含有する組成物、または上記オオムギ植物もしくはその一部から調製された組成物は、一般的に、非常に低いレベルのT2NおよびT2Nポテンシャルを含有する。ヌル-LOX-1オオムギを含有するかまたはそれから調製される有用な組成物の例を、以下に記載する。上記組成物は、野生型オオムギ植物を含有するか野生型オオムギ植物から調製される同様の組成物と比べて、i30未満、好ましくは20未満、より好ましくは10未満、さらにより好ましくは5未満、例えば2未満、例えば1未満のT2N;および/またはii30未満、好ましくは20未満、より好ましくは10未満、さらにより好ましくは5未満、例えば2未満、例えば1未満のT2Nポテンシャル;を有することが好ましい。本発明は、1つの局面において、野生型穀粒と比べて1未満のLOX-1活性を有するオオムギ穀粒に関する。上記穀粒はLOX-1活性を有していないことが好ましい。本発明はまた、上記穀粒を含有する組成物および上記穀粒から調製される組成物に関する。1つの局面では、本発明は、ヌル-LOX-1穀粒から麦芽製造によって調製される麦芽組成物に関する。用語麦芽製造は、例えば、図11、工程2および3に例示するような制御された環境条件下で行う浸漬されたオオムギ穀粒の発芽であると理解されるべきである。麦芽製造は、オオムギ種子の制御された浸漬および発芽、その後の乾燥のプロセスである。この事象の順序は、種子の改変、すなわち主に死滅した胚乳細胞壁を脱重合させ、穀類栄養素を移動させるプロセスを生じる多数の酵素の合成に重要である。その後の乾燥プロセスにおいて、化学的褐変反応により香味および着色が生じる。麦芽の主な用途は飲料製造であるが、麦芽は他の工業プロセス例えば、製パン産業において酵素源として、または食品産業において着香剤および着色剤として、例えば麦芽としてまたは麦芽粉として、あるいは間接的に麦芽シロップなどとしてにおいて利用することもできる。1つの局面では、本発明は、上記麦芽組成物の製造方法に関する。この方法は、好ましくは、以下:iヌル-LOX-1オオムギ穀粒を提供する工程;ii上記穀粒を浸漬する工程;iii浸漬した穀粒を所定の条件下で発芽させる工程;iv上記の発芽させた穀粒を乾燥する工程;を包含し、それによって低いLOX-1活性を有するかまたはLOX-1活性を全く有していない麦芽組成物を製造する。例えば、麦芽は、Hoseney1994に記載の方法のいずれかで製造し得る。しかし、任意の他の適切な麦芽製造方法、例えば特殊な麦芽の製造方法例えば麦芽を焙煎する方法が挙げられるが、これに限定されないも本発明と共に使用してもよい。1つの非限定的な例を実施例6に記載する。別の局面では、本発明は、ヌル-LOX-1穀粒から調製された麦芽組成物から調製される麦芽汁組成物に関する。上記麦芽は、ヌル-LOX-1穀粒のみから調製されていてもよいしまたは他の穀粒を含む混合物から調製されていてもよい。本発明はまた、ヌル-LOX-1オオムギまたはその一部を単独であるいは他の成分と混合して使用して調製された麦芽汁組成物に関する。上記麦芽汁は、一次麦芽汁および/または二次麦芽汁および/またはさらなる麦芽汁であってもよい。一般的に、麦芽汁組成物は、高含有量のアミノ窒素および発酵可能な炭化水素主としてマルトースを有する。図11において、工程4および6は、麦芽からの麦芽汁の一般的な製造方法を説明する。一般的に、麦芽汁は、麦芽を水と共にインキュベートすることによって、すなわちマッシングによって調製される。マッシングの間に、麦芽/水の組成物は、さらなる炭水化物に富む組成物例えばオオムギ添加物、トウモロコシ添加物またはコメ添加物を補充されてもよい。麦芽化されていない穀物添加物は、通常は活性酵素を含有しておらず、従って麦芽または外因性酵素に応じて糖の変換に必要な酵素を提供する。一般的に、麦芽汁製造プロセスの最初の工程は、水を、マッシングの間に穀類の粒に接近させ得ることを目的とした麦芽の粉砕であり、これは基本的には基質の酵素解重合を伴った麦芽製造プロセスの拡張である。マッシングの間に、粉砕された麦芽は、液体部分例えば水と共にインキュベートされる。その温度は、一定に保たれる等温でのマッシングかまたは徐々に上げられる。いずれの場合にも、麦芽製造およびマッシング工程で製造された可溶性物質は、上記液体画分に抽出され、その後に濾過により麦芽汁と、使用済み種子と呼ばれる残留固体粒子とに分離される。この麦芽汁はまた、一次麦芽汁とも呼ばれる。濾過後に、二次麦芽汁が得られる。さらなる麦芽汁は、上記手順を反復することによって調製してもよい。麦芽汁を調製するのに適当な手順の非限定的な例は、Hoseney前出に記載されている。麦芽汁組成物はまた、ヌル-LOX-1オオムギ植物またはその一部例えば麦芽化されていないヌル-LOX-1植物またはその一部を、1種以上の適当な酵素、例えば酵素組成物または酵素混合組成物例えばUltrafloまたはCerefloNovozymesと共にインキュベートすることによって調製され得る。麦芽汁組成物はまた、麦芽および麦芽化されていないオオムギ植物またはその一部の混合物を使用して、必要に応じて上記調製中に1種以上の適当な酵素を加えて調製され得る。本発明はまた、ヌル-LOX-1オオムギ植物またはその一部を含有する食品組成物、飼料組成物、および芳香原料組成物に関する。食品組成物は、例えば、麦芽化されたオオムギ穀粒および麦芽化されていないオオムギ穀粒、オオムギ粗びき粉、パン、ポリッジ、オオムギを含有する穀物混合物、健康製品例えばオオムギ、オオムギシロップを含有する飲料、およびフレーク化、粉砕化または押出し成形したオオムギ組成物であり得るが、これらに限定されない。飼料組成物はとしては、例えば、オオムギ穀粒および/または粗びき粉を含有する組成物が挙げられる。芳香原料組成物を、以下に記載する。本発明はまた本発明の組成物の混合物に関する。例えば、本発明は、1つの局面では、iオオムギ植物またはその一部を含有し、野生型オオムギ植物のLOX-1活性を5未満有する組成物と、iiヌル-LOX-1穀粒から調製される麦芽組成物との混合物によって調製される組成物に関する。好ましい局面では、本発明は、飲料、より好ましくは麦芽から誘導される飲料、さらにより好ましくはアルコール飲料、例えば安定な感覚刺激品質を有するビールに関し、この飲料はヌル-LOX-1オオムギまたはその一部を使用して調製される。従って、発明の1つの好ましい実施形態では、飲料は好ましくはヌル-LOX-1オオムギまたはその一部あるいはこれらの抽出物の発酵によって例えばヌル-LOX-1オオムギ単独、または他の成分との組み合わせから製造される麦芽を使用して製造される麦芽汁の発酵によって調製される。しかし、本発明の他の実施形態では、上記飲料は非発酵飲料例えば麦芽汁である。上記飲料が麦芽化されていないオオムギ植物またはその一部から調製され得ることも、本発明の範囲内に包含される。しかし、好ましくは、上記飲料は、ヌル-LOX-1オオムギ穀粒から調製される麦芽組成物から調製される。より好ましくは、上記飲料はビールである。これは、当業者に公知の任意の種類のビールであり得る。1つの実施形態では、上記ビールは、例えばラガービールである。上記ビールは、好ましくは発芽ヌル-LOX-1オオムギを含有する麦芽組成物を使用して醸造される。しかし、麦芽組成物はまた、他の成分、例えば他の発芽穀類または未発芽穀類例えば野生型オオムギ、ヌル-LOX-1オオムギ、コムギおよび/またはライムギ、あるいは糖類または麦芽化されているかもしくは麦芽化されていない原料から誘導される組成物例えばシロップ組成物を含有する未発芽原料を含有し得る。感覚刺激品質とは、嗅覚および味覚に訴える特性を意味する。この特性は、例えば、訓練された味覚感応評価集団によって分析される。好ましくは、上記の訓練された味覚感応評価集団は、アルデヒド異臭、例えばT2Nの認識について特別に訓練される。一般的に、上記味覚感応評価集団は、3~30名の範囲内、例えば5~15名の範囲内からなる。上記味覚感応評価集団は、種々の香味、例えば異臭、例えば紙臭paperyflavor、酸化臭、熟成臭およびパン臭の存在を評価し得る。飲料の感覚刺激品質を調べる方法は、以下の実施例6に記載される。好ましい実施形態では、安定な感覚刺激品質は、少なくとも部分的にはT2NまたはT2Nポテンシャルの生成が少ないという結果である。従って、本発明の目的は、オオムギ植物を使用して製造され、少なくとも1週間、好ましくは少なくとも2週間、さらに好ましくは少なくとも3週間、さらにより好ましくは少なくとも4週間、例えば1~3ヶ月の範囲、例えば3~6ヶ月の範囲、例えば6~12ヶ月の範囲、例えば1年を越える貯蔵の後に、野生型オオムギから調製される飲料と比べて、T2Nおよび/またはT2Nポテンシャルを50未満、好ましくは40未満、さらに好ましくは35未満、例えば30未満、例えば20未満、例えば10未満、例えば好ましくは5未満、例えば2未満、例えば1未満含有することが好ましい飲料例えばビールを提供することにある。貯蔵は、15°C~40°Cの範囲の温度、好ましくは30°C~37°Cの範囲の温度、さらに好ましくは37°Cで行われる。本発明の飲料は、15°C~40°Cの範囲内の温度、好ましくは30°C~37°Cの範囲内の温度、さらに好ましくは37°Cで、少なくとも1週間、好ましくは少なくとも2週間、さらに好ましくは少なくとも3週間、さらにより好ましくは少なくとも4週間、例えば1~3ヶ月の範囲、例えば3~6ヶ月の範囲、例えば6~12ヶ月の範囲、例えば1年を越えて貯蔵した後に、遊離T2Nを多くて0.07ppbパーツパービリオン、好ましくは多くて0.06ppb、さらに好ましくは多くて0.05ppb、さらにより好ましくは多くて0.04ppb、例えば多くて0.03ppb含有することが好ましい。好ましくは、上記飲料はまた、1~10ppmパーツパーミリオンの範囲内の亜硫酸塩、さらに好ましくは2~8ppmの範囲内、さらに好ましくは3~7ppmの範囲、さらにより好ましくは4~6ppmの範囲内の亜硫酸塩を含有する。1つの好ましい実施形態では、本発明の飲料は、37°Cで2週間貯蔵した後に、遊離T2Nを多くて0.04ppb、さらに好ましくは多くて0.03ppb、例えば多くて0.025ppb含有する。本発明の別の好ましい実施形態では、本発明の飲料は、4~6ppmの範囲の亜硫酸塩の存在下に37°Cで4週間貯蔵した後に、遊離T2Nを多くて0.07ppbパーツパービリオン、好ましくは多くて0.06ppb、さらに好ましくは多くて0.05ppb、さらにより好ましくは多くて0.04ppb、例えば多くて0.03ppb含有する。本発明の飲料は、15~25°Cの範囲内で、例えば約20°Cで少なくとも10ヶ月間貯蔵した後に、ヌル-LOX-1オオムギ以外の異なるオオムギから調製された類似の飲料と比べて紙臭が少ない。好ましくは、上記の紙臭は、訓練された香味感応評価集団によって評価されるように、90未満、さらに好ましくは80未満、例えば70未満である。1つの実施形態では、本発明は、低レベルのある種のトリヒドロキシオクタデセン酸を有する飲料例えばビール、特に低レベルの9,12,13-THOEを有する飲料に関する。トリヒドロキシオクタデセン酸は、苦味を有するBaurおよびGrosch,1977ならびにBaurら,1977ので好ましくない。従って、9,12,13-THOEのレベルはできる限り低い、好ましくは1.3ppmよりも低い、例えば1ppmよりも低いことが望ましい。しかし、麦芽から誘導される飲料例えばビール中の9,12,13-THOEの全濃度はまた、上記の特定の飲料の調製に使用される麦芽の量に依存する。従って、一般的に、強いビールは、より軽いビールよりも多い9,12,13-THOEを含有し、そして9,12,13-THOEのさらに高い全体レベルは、強いビールでは受容可能である。従って本発明の飲料は、同じ種類の標準的ビールよりも少ないレベルの9,12,13-THOEを含有することが好ましい。このような飲料は、上記飲料の調製にヌル-LOX-1オオムギを使用することによって得られ得る。従って、本発明の好ましい飲料は、上記飲料の調製に使用される麦芽の量を補正する内部標準に比べて低い割合の9,12,13-THOEを含有する。上記標準は、例えば、別のトリヒドロキシオクタデセン酸であり得る。従って、種々のトリヒドロキシオクタデセン酸THAの割合が特定の範囲内で保たれることが、飲料例えば、ビールの質にとって重要である。意外にも、低レベルのT2NであるLOX-1経路の生成物図1Bを参照のことに加えて、本発明のヌル-LOX-1オオムギから調製される飲料はまた、極めて少ないレベルの9,12,13-THOE図1Cを参照のことを有し、従って、9,10,13-THAに対して極めて低い比率の9,12,13-THAを有する。従って、1つの局面では、本発明は、安定な感覚刺激品質を有する飲料例えば、ビールに関し、この場合の上記飲料はオオムギ植物またはその一部、好ましくはヌル-LOX-1オオムギを使用して製造され、そして上記飲料中の9,10,13-THAに対する9,12,13-THAの比率は多くて1.8、好ましくは多くて1.7、さらに好ましくは多くて1.6、さらにより好ましくは多くて1.5、さらにより好ましくは多くて1.4である。従って、上記の比率は0~1.8の範囲好ましくは、0~1.6の範囲、例えば0~1.4の範囲内にあることが極めて好ましい。1つの実施形態では、上記比率は約1.3である。飲料中の9,12,13-THOEと9,10,13-THOEの量は、標準法例えば、Hamber,1991に記載のように例えばガスクロマトグラフィー-質量分析で測定され得る。好ましくは、上記THAは、リノール酸転化のオキシリピンoxylipinである。興味深いことには、このようなTHA比率を有する飲料は、本発明のオオムギ植物を使用して調製され得る。好ましくは、上記飲料は、ヌル-LOX-1オオムギ以外のオオムギを使用せずに、例えばヌル-LOX-1オオムギから調製される麦芽以外の他の麦芽を使用せずに調製される。本発明の1つの好ましい実施形態では、飲料は、i上記の9,10,13-THAに対する9,12,13-THAの比率;およびii上記の貯蔵後の遊離T2Nのレベルを含む。1つの実施形態では、本発明は、同様の従来の飲料と比べて改良された泡安定性を有する飲料例えば、ビールに関する。このような飲料は、例えばヌル-LOX-1オオムギまたはその部分、例えば麦芽から調製される。泡安定性は、例えば、BrautechnischeAnalysenmetoden,2002に記載のようにして測定され得る。本発明はまた、上記飲料の製造方法に関する。この方法は、好ましくは、i発芽ヌル-LOX-1穀粒を含有する麦芽組成物を提供する工程;ii上記麦芽組成物を飲料に加工する工程;を包含し、それによって安定な感覚刺激品質を有する飲料を得る工程からなる。1つの好ましい実施形態では、飲料はビールである。この場合に、加工工程は、好ましくは、上記麦芽組成物から麦芽汁を、例えば上記の方法のいずれかによって製造し調製する工程、および上記麦芽汁を発酵させる工程を包含する。一般論として、アルコール飲料、例えばビールは、麦芽化されたおよび/または麦芽化されていないオオムギ穀類から製造され得る。麦芽は、ホップおよび酵母に加えて、ビールの香味または色に寄与する。さらに、麦芽は、醗酵性の糖および酵素の供給源として機能する。ビール製造の一般的なプロセスの概略図を図11に示す。一方、麦芽製造および醸造に適した方法の例の詳細な説明は、例えばHoseney前出による最近の刊行物に見出され得る。オオムギ、麦芽およびビール製品の多数の規則的に更新される分析方法が利用できる例えば、以下に限定されないがAmericanAssociationofCerealChemist1995;AmericanSocietyofBrewingChemists1992;EuropeanBreweryConvention1998;InstituteofBrewing1997。最も重要な変化は、地元の顧客の嗜好に関する点を除けば、多数の具体的手順が所定のビール醸造に用いられることが認められる。このようなビールの製造方法が本発明について使用され得る。1つの非限定的な例が実施例6に記載される。上記飲料、例えばビール、麦芽飲料または非発酵麦芽汁用の麦芽組成物は、例えば上記の方法のいずれかの方法で得ることが可能である。麦芽汁は、上記の上記麦芽組成物から調製され得る。麦芽汁からビールを製造する最初の工程は、好ましくは上記麦芽汁を煮沸する工程を伴う。煮沸中に、その他の成分例えば、典型的な苦味と芳香性ビール特性とを提供するホップが、添加され得る。麦芽汁の煮沸はまた、ポリフェノールと変性タンパク質との間で凝集を生じ、これは主としてその後の麦芽汁冷却の工程の間に沈殿する。冷却された後に、麦芽汁は、酵母を入れた醗酵タンクに移される。好ましくは、上記酵母は、ビール醸造酵母、Saccharomycescarlsbergensisである。麦芽汁は、任意の適当な期間一般的に、1日~100日の範囲内の期間醗酵される。数日の長さの醗酵中に、糖が、ある種の香味物質の発生と同時にアルコールとCO2とに転化される。その後に、ビールはさらに処理され得る。一般的に、ビールは冷却される。ビールはまた、濾過されてもよいし、そして/または熟成lager心地よい香りと酵母の少ない香味を発生するプロセスさせてもよい。最後に、ビールは包装例えば、瓶詰めまたは缶詰めされる前に低温殺菌されてもよいし、または濾過されていてもよい。ビール製造の分野でなされている進歩にもかかわらず、ビール中のT2N、その前駆物質、およびT2Nポテンシャルのレベルを減らすことは有益である。従って、少ない異臭により完成ビールに寄与する新規な原料、特にオオムギおよび麦芽に対する要求が未だに存在する。従って、本発明の目的は、このようなオオムギおよび麦芽を提供することにある。6.4化学的変異誘発1つの局面では、本発明は、少なくとも部分的に、オオムギ穀粒の化学的変異誘発ランダムに変異を誘発させることが知られている方法の使用に基づいている。オオムギの変異誘発は、いずれの変異誘発化学物質を使用して行ってもよいが、好ましくは穀粒をNaN3で処理し、生存している穀粒を発芽させ、次いで子孫植物を分析することによって行われる。変異を誘発させた穀粒から成長する植物世代M0と呼ばれるは、任意の所定の変異について異型接合キメラを含有する。自家受粉後に収集された後代は、M1世代と呼ばれ、所定の変異について異型接合体と同型接合体の両方を分離する図1Aおよび図9を参照のこと。穀粒をNaN3で処理することは、単一の細胞を処理することと等しくはない。なぜならば、処理後の穀粒がある種の非変異体細胞およびDNA変異を有する種々の細胞を含有するからである。生殖細胞系をもたらさない細胞系の変異が消滅するから、目的は、M1世代の発生に寄与する再生組織に成長する数個の細胞に対する変異原を標的とすることである。全体的変異効率を評価するために、アルビノキメラおよびアルビノ植物の数が、世代M0およびM1それぞれにおいて数えられた。変異体の数を生存植物の関数として記録すると、変異効率について評価が得られ、一方、変異体の数を処理した種子の関数として記録して変異効率と穀粒の死滅の両方の組み合わせを評価する。細胞は、おそらくは損傷を与える変異の効果を抑えるために、遺伝子発現の実質的に全ての段階で品質保証メカニズムを有することが注意されるべきである。真核生物において1つのよく研究された例は、ナンセンス介在mRNA崩壊NMDと表されるであり、これは潜在的に有害な早期に切断されたタンパク質の合成を抑制するMaquatおよびCarmichael、2001。NMDにおいては、終止コドンは下流の不安定要素に対するその位置により未成熟と同定される。Saccharomycescerevisiaeにおいて、これらは大まかに規定されたmRNA配列であり、そして哺乳動物細胞では、これらはプレmRNAスプライシング中にエキソン-エキソン接合部に置かれるタンパク質複合体である。これらが生成するナンセンスmRNAおよびタンパク質の分解がどのように調整されるかは、将来の研究の領域である。未成熟終止ナンセンスコドンPTCを生じる変異は、ある場合には、原因となる変異をスキップする交互にスプライスされた転写産物のレベルを増やし、それによって潜在的にタンパク質機能を確保するMendellおよびDietz、2001。翻訳およびRNAスプライシングは種々の細胞内コンパートメントで生じると考えられることから、哺乳動物細胞においてスプライシングエンハンサーの破壊に関係なく機能するナンセンスコドン特異的mRNA上方調節メカニズムを見出すことは逆説的であったWangら,2002。しかし、このようなメカニズムは、本発明のオオムギ植物でも、その他の植物でも認められなかった。このような現象が目的の新しい形質を同定するためにスクリーニングされる選択すべき穀粒または穀類の数を高めることから、NMD、PCTなどは植物育種との関連で特に興味深い。6.5オオムギの変異体の選択本発明の1つの局面は、LOX-2由来の活性を弱めるLOX-1活性のスクリーニング条件を提供することである。この方法は、スクリーニングすべきオオムギ組織の性質および反応条件が酵素LOX-1由来のLOX活性を高めかつ酵素LOX-2由来のLOX活性を弱めることができるという驚くべき知見に基づいている。Doumaらの国際公開第WO02/053721A1号として公開されたPCT出願第PCT/IB01/00207号に詳述されているような低LOX変異体のスクリーニングは、pH7.5での酵素活性の測定についてオオムギ葉頂のタンパク質様抽出物を利用したが、本明細書では再現可能にヌル-LOXオオムギ変異体を同定することを可能にする都合のよいスクリーニングパラメーターを詳述する。第1に、LOX-1活性をスクリーニングする場合には、オオムギ植物の特異組織を使用することが重要である。好ましくは、上記組織は、オオムギ穀粒、さらに好ましくはオオムギ穀粒の胚を含む。一般的に、このスクリーニングは、上記組織の抽出物、すなわちオオムギの穀粒またはオオムギ胚の抽出物について行われる。さらに好ましくは、LOX-1活性測定用の抽出物は、乾燥オオムギ穀粒のホモジナイズ胚組織を含むか、または最も好ましくはそれのみからなる。このようにして、LOX-2由来の限界活性marginalactivityのみが活性測定に寄与する。第2に、LOX-1活性のアッセイは、アレンオキシドシンターゼ酵素を不活性化することが好ましいpH、従ってHPODEを良好な収率で生成するpHで行われる。6.6植物育種本発明の1つの実施形態では、その目的はヌル-LOX-1形質を含有する作物学的に有用なオオムギ植物を提供することにある。作物の発育は、新しい特性の導入で開始するだけである長期にわたるプロセスとしてみなされ得る。植物育種家の見方から、この工程は、ほとんどの場合、現在市販の品種よりも農業形質についてあまり望ましくない全体的プロフィールを有する植物をもたらす。ヌル-LOX-1形質に加えて、市販の麦芽用オオムギ品種を生成する技術で考慮されるべき他の重要な因子、例えば穀粒収量、穀粒サイズおよび麦芽製造性能に関連するその他のパラメーターが存在する。多数の全部ではないがこのような特性は遺伝子制御下にあることが明らかにされていることから、本明細書に開示されるヌル-LOX-1オオムギ植物との交配から得られる最新の同型接合の高収量麦芽製造用品種を提供することが極めて望ましい。このようなオオムギ植物の穀粒は、リノール酸の9-HPODEへの転化について限界容量を全くもたないかまたは僅かしかもたない新規な優れた原料を提供する。従って、オオムギ栽培者は、LOX-1機能喪失型を有する優れた品種をもたらす形質を有するオオムギ植物を選択し、育てなければならない。あるいは、オオムギ栽培者は、更なる変異誘発がヌル-LOX-1オオムギから誘導される新規品種を作り出すために本発明の植物を利用し得る。本発明のオオムギ植物は、任意の適当なスキームに従って育てられ得る。6.7オオムギの交配本発明の別の目的は、ヌル-LOX-1形質を含有する作物学的に選りすぐりのオオムギ植物を提供することにある。従って、本発明はまた、第一の親オオムギ植物を第二の親オオムギ植物と交配するこの場合に、第一の植物または第二の植物はヌル-LOX-1オオムギであることによる新規ヌル-LOX-1オオムギ植物の製造方法に関する。さらに、第一の親オオムギ植物および第二の親オオムギ植物は、両方共にヌル-LOX-1オオムギ品種から生じ得る。従って、ヌル-LOX-1オオムギ品種を使用する任意のこのような方法:自家受粉、戻し交配、母集団に対する交配などは本発明の一部である。ヌル-LOX-1オオムギ品種を親として使用して作り出される全ての植物、例えばヌル-LOX-1オオムギ品種から誘導される品種から育てられる植物は、本発明の範囲内にある。ヌル-LOX-1オオムギはまた、外因性DNAがヌル-LOX-1植物または植物組織内に導入され、発現されるような場合において遺伝子形質転換に使用され得る。戻し交配法は、変異したオオムギ植物のヌル-LOX特性を別の品種、例えば品種Scarlettまたは品種Jerseyこれらは両方共に、同時期に存在する高収量の麦芽用オオムギ品種であるに導入するために本発明と共に使用され得る。標準戻し交配プロトコールにおいては、目的の元の品種反復親が、移入されるべき目的の単一遺伝子を有する二次品種非反復親に交配される。この交配から得られるヌル-LOX-1後代は、次いで反復親に再度交配される。但し、このプロセスはオオムギ植物が得られるまで反復され、非反復親のヌル-LOX-1形質に関する移入遺伝子構成に加えて、反復親によって特定される特徴の本質的に全部が転換植物において回復される。次いで、最後の戻し交配世代が、ヌル-LOX-1形質について純粋育種後代を得るために自家受粉される図9を参照のこと。適当な反復親を持つことは、首尾よい戻し交配手順に重要であり、その目的はヌル-LOX-1形質を元の品種に導入することにある。これを達成するために、上記反復品種の遺伝子構成が、元の品種由来の形質の残りの本質的に全部を保持有しながら、非反復親由来の低LOX-1形質に関する遺伝子構成を用いて改変される。戻し交配法は、移入される特性が優性対立遺伝子である場合には簡略化されるが、劣性ヌル-LOX-1形質の特性を戻し交配することが可能であった。しかし、この場合には、所望の特性が移入されたか否かを評価するために生化学分析を導入することが必要であった。植物育種のプロセスを促進する方法は、組織培養および再生技術を適用することによる生成変異体の初期増殖を包含する。従って、本発明の別の局面は、成長および分化するとヌル-LOX-1形質を有するオオムギ植物を生成する細胞を提供することにある。例えば、育種は、伝統的な交配、稔性葯fertileanther由来の植物を調製することまたは小胞子培養を使用することを含み得る。6.8LOX酵素本発明の重要な目的は、活性LOX-1酵素を合成する能力を欠くオオムギ植物を提供することにある。LOXは、単一の非ヘム鉄因子を有する大きなモノマータンパク質である。http://www.rcsb.org/pdbでのタンパク質データバンクの調査により、数種のLOX酵素の構造がX線結晶学によって解明されていることが明らかにされた。上記タンパク質は、全体的な折りたたみおよびドメイン組織を共有し、タンパク質それぞれは小さなN末端8本鎖β-バレルドメインと、主として長いα-ヘリックスからなる大きなC末端ドメインを有する。鉄原子がC末端ドメインに配置されており、そこでは鉄原子がヒスチジン残基に、そして独特にはポリペプチドのカルボキシル末端これはイソロイシンに起こるに配位する。数個のチャンネルがタンパク質の表面から鉄部位の近くに通じ、これらのチャンネルはおそらくは基質、ポリ不飽和脂肪酸および分子状酸素が活性部位に接近することを与える。キュウリ脂質体LOXのリポソームおよび脂質体結合がN末端β-バレルの存在に依存しMayら,2000かつダイズLOX-1がカルシウムイオンによって高められるプロセスにおいて二層膜に結合するTatulianおよびSteczko,1998ことから、LOX酵素が脂質二重層膜に結合すること、およびこれはおそらくはN末端ドメインの機能であることを推測することができる。LOX活性の決定方法、ならびにLOX触媒作用の直接生成物および下流生成物の単離、特徴付けおよび定量のための方法は、当業者には容易に利用可能である。6.9LOX経路生成物種々の実施形態において、本発明は、アルケナールalkenalT2Nを形成する能力においてブロックされたオオムギ植物、またはその産物に関する。LOX酵素は、シス-1,シス-4ペンタジエン系を有するポリ不飽和脂肪酸の二原子酸素添加を触媒する。植物では、C18ポリ不飽和脂肪酸であるリノール酸18:3Δ9,12およびα-リノレン酸18:3Δ9,12,15が主要なLOX基質である。脂肪酸代謝のリポキシゲナーゼ経路は、対応する9-リノールおよび13-リノールまたはリノレン酸ヒドロペルオキシドを生成するアシル鎖のC-9位またはC-13位での分子状酸素の添加によって開始される。リノール酸を基質として用いると、9-ヒドロペルオキシオクタデカジエン酸または13-ヒドロペルオキシオクタデカジエン酸HPODEを形成し得、これに対して9-ヒドロペルオキシオクダデカトリエン酸または13-ヒドロペルオキシオクダデカトリエン酸HPOTEは基質がα-リノレン酸である場合の生成物である。LOX経路のヒドロペルオキシドリアーゼ分岐では、9-ヒドロペルオキシドと13-ヒドロペルオキシドの両方は、その後に短鎖オキソ酸およびアルデヒドに切断され得る図1Bを参照のこと。9-HPODEが9,12,13-THOEにさらに代謝され得ることは注目に値する図1Cを参照のこと。THOEは苦味を有するBaurら,1977;BaurおよびGrosch,1977。従って、不活性化されたLOX-1を有する植物は、野生型植物で観察された比率と異なる比率でTHOEを形成する。本発明は、LOX-1触媒作用の下流代謝産物の生成に影響を及ぼすことを包含することが認められる。上記下流代謝産物は、LOX-1-触媒反応の直接生成物としてではなく、その後の一連の反応物の反応の結果として生じ、LOX-1触媒作用の生成物を含む。これらの反応としては、自然発生の因子誘導または酵素触媒異性化が挙げられる。従って、これらの下流代謝産物の生成は、ヒドロペルオキシドリアーゼHPLの発現を調節することによって影響され得る。リノール酸の自動酸化はT2Nの形成に関連する前駆体分子を生成し得ると仮定すると、アルケナールのレベルをさらに減らすことが可能であり得る。具体的には、Δ9-デサチュラーゼステアリン酸をオレイン酸に転化させるまたはΔ12-デサチュラーゼオレイン酸をリノール酸に転化させるをコードする遺伝子のダウンレギュレーションは、関連酵素の下流の脂肪酸のレベルを減少させかつ中間体脂肪酸基質のレベルを増大させることによって、C18脂肪酸ステアリン酸、オレイン酸およびリノール酸の相対割合を変化させることが予想される。天然改変体または誘発した変異を利用する選択的育種を使用してナタネ作物中の改良された油の範囲を作り出す例としては、高ステアリン酸HSダイズGraefら,1985、高オレイン酸HOアブラナAuldら,1992、ならびにOsorioら1995およびSoldatov1976によるHSおよびHOヒマワリそれぞれが挙げられるが、これらに限定されない。本発明がLOX-1作用の直接生成物ではないが、LOX経路の酵素の作用によって製造されるかまたは図1Bに示されるようなアルデヒドの異性化例えば、3Z-ノネナールの2E-ノネナールへの異性化によって製造されるアルデヒド製造を包含することは、特に重要である。本発明が、LOX経路の酵素によって製造されるアルデヒドに対応するおよび/または上記異性化の結果として製造されるアルデヒドに対応するこのようなアルコールの製造を包含することも認められる。上記アルコールは、典型的にはアルド-ケトレダクターゼスーパーファミリーの酵素メンバーの作用によって例えば2E-ノネナールの2E-ノネノールへの酵素的転化製造されるSrivastavaら,1999によって製造される。6.10T2Nポテンシャル本発明のさらに別の目的は、T2Nの形成、例えばT2N前駆物質およびアルデヒド付加物の形成に関連する分子を減らすかまたは排除することにある。ビールの香味熟成stalingに関連したいくつかの化学反応は相変わらずつかみどころがないが、酸化プロセスはビール製品の熟成香味の発生の主原因として認められるNarziss、1986;Ohtsuら,1986。2節発明の背景で詳しく説明したように、熟成香味に寄与する主な分子がT2Nであることは周知である。このアルデヒドがビールの製造プロセスにおいて醗酵前の製造段階で生じると、このアルデヒドは、例えばアミノ酸およびタンパク質への結合による付加物の形成に関与し得NoelおよびCollin、1995しかし、おそらくは核酸、グルタチオンなども、その後に酵母を醗酵させることによる還元または酸化から保護され得るLermusieauら,1999。しかし、T2N付加物もまた、醗酵中に亜硫酸塩と共に形成され得、アルデヒド臭を不活性化することができるNyborgら,前出。T2N付加物の大部分が完成ビールに移り、その中で遊離のT2Nが放出されLiegeoisら,2002、酸性および温度の条件がこのプロセスで重要な因子である。T2N付加物は、T2Nポテンシャル、すなわち規定された反応条件下例えば、100°C、pH4.0で2時間のインキュベーション下でT2N付加物の遊離T2Nへの分解についての尺度の一部を含有する。当業者は、例えば、Drostら前出によって記載されているように、どのようにビールが貯蔵中にT2Nを放出するかについての指標としてT2Nポテンシャルがどのように関連するかを知っている。本発明のオオムギ穀粒は、9-HPODET2Nを生成するLOX経路分岐において前駆物質として正常に機能する分子のLOX-1触媒による形成において制約される。従って、ヌル-LOXオオムギ穀粒を使用して製造されるビールは、極めて少ないレベルのT2Nを有するばかりではなく、極めて低いレベルのT2Nポテンシャルも有する。本発明の範囲には、T2Nを全く欠いているか、またはほんの僅かなレベルのT2NポテンシャルT2N付加物を含むを含有するビールを生成するヌル-LOX-1オオムギ穀粒がある。その結果、ヌル-LOX-1オオムギを使用して製造されたビールの貯蔵中には、T2Nに特異的な異臭の発生は本質的にないか、またはごく僅かしかない。6.11耐病性本発明はさらにまた、耐病性オオムギに関する。植物LOXは、まとめて、過敏性反応HRとして知られている活性な耐病性メカニズムの発達、プログラムされた細胞死の形態の進行に関与すると考えられるRusterucciら,1999。HRでは、感染事象の後に感染部位の周囲に局在する植物細胞の急速な細胞死が続き、これが壊死病斑の形成を招く。このようにして、病原体の蔓延が制限され、植物器官の残りに対するさらなる被害を防止する。いくつかの植物-病原体系では、HRは9-HPODEおよび9-HPOTEの生成について特異性を有するLOXの発現に関係するRusterucciら,前述;Jalloulら,2002。なぜならば、おそらくはヒドロペルオキシ脂肪酸の大量生成が組織の壊死を与えるからである。LOX-1をコードする遺伝子は主としてオオムギ穀粒で発現され、これに対して多数の別のLOX酵素は植物の葉で発現される。従って、9-HPODE、13-HPODE、9-HPOTEおよび13-HPODEの形成をもたらすLOX経路分岐は、オオムギの葉で機能し、オキシリピンの種々の組が別々の感染および損傷事象を反映する。同様の分子シナリオがジャガイモの葉について記載されているWeberら,1999。天然に存在する揮発性アルデヒドは、植物のある種の病原体の成長を阻害し、また特定の病原体に対するある種の植物の自然抵抗性は揮発性アルデヒドの生成に起因すると考えられ得るCroftら,1993;BleeおよびJoyard,1996;Vancanneytら,2001。従って、野生型植物に比べて、本発明のヌル-LOX-1オオムギ植物の変性されたオキシリピンプロフィールは、病原体の存在、病原体の産物、または植物-病原体相互作用の産物を抑制、低減、改善または排除し得る。病原体の1つの非限定的な例は、アスペルギルス属である以下を参照のこと。従って、1つの実施形態においては、本発明は、高められた耐病性を示すヌル-LOX-1オオムギ植物に関する。6.12マイコトキシン本発明はまた、アスペルギルス属の定着に対して低下した感受性を有するオオムギの植物の使用を開示する。アスペルギルス属は、発癌性マイコトキシンであるアフラトキシンおよびステリグマトシスチンによる混入を生じる場合があるオオムギの穀粒の厄介なコロナイザーcolonizerである。真菌によるアフラトキシン産生は高レベルの9-HPODE、9-HPOTE、13-HPODEおよび13-HPOTEによって影響を受けることから、Kellerの米国特許第5,942,661号は、真菌性マイコトキシンの産生を阻害するのに十分な量の上記ヒドロペルオキシ脂肪酸を産生するトランスジェニック作物植物を特許請求している。さらに、上記米国特許およびBurowらによるデータ2000年は、13-HPODEがアフラトキシンの産生を阻害し、これに対して9-HPODEはアフラトキシンの産生を促進することを明記している。ヌル-LOX-1穀粒は活性LOX-1酵素がないことから、上記穀粒は野生型植物よりも幾分多いレベルの13-HPODEを含有するが、その遺伝的に改変されていない親植物の組織に比べてそれよりも少ないレベルの9-HPODEを含有する。従って、野生型穀粒と比べて、ヌル-LOX-1穀粒はアスペルギルス属が定着することを防ぐことができるか、またはアスペルギルス属による混入の後に低下したマイコトキシンレベルを示し得る。従って、本発明は、野生型オオムギ植物と比べて低下したレベルのマイコトキシンを有するオオムギ植物に関する。6.13芳香本発明の局面はまた、芳香剤およびグリーンノートgreennote化合物を製造するためのヌル-LOX-1オオムギの使用に関する。現在まで、オオムギにおけるLOX経路の種々の分岐に関連する大部分の研究努力は、13-HPOTEからジャスモン酸生成の局面Turnerら,2002、および上記の耐病性に集中している。別の商業目的のオオムギヒドロペルオキシ脂肪酸にはあまり注意が払われていない。しかし、ヌル-LOX-1オオムギ穀粒における活性LOX-1の完全な欠損が上記穀粒において13-HPODEおよび13-HPOTEを富ませることが予期されることは注目に値する。この新規な性質に基づいて、新規用途が、オオムギ作物の工業使用に関して、例えば短鎖脂肪族アルデヒドおよびアルコール例えば、グリーンノート化合物ヘキサナール/ヘキセナールおよびヘキサノール/ヘキセノールの製造にあるように思われる。グリーンノートの製造に関連するいくつかの局面は、論じられている特許明細書、例えば米国特許第6,008,034号、同第6,150,145号および同第6,274,358号これらに限定されないに開示されている。Haeuslerらの米国特許第6,008,034号には、グリーンノート化合物の製造用の特異的ヒドロペルオキシドリアーゼの使用が開示され、Haeuslerらの米国特許第6,150,145号およびHoltzらの米国特許第6,274,358号には、このようなプロセスのための標準植物物質の使用が記載されている。グリーンノート化合物の製造にヌル-LOX-1穀粒を使用することは、上記製造用の新規原料の使用を含む。本発明のヌル-LOX-1オオムギ穀粒由来の新規な原料は、本明細書の6.4~6.7節に詳述したような変異誘発プロトコールの後に選択されている穀粒から誘導されることから、標準的な植物物質とみなすことはできない。ヌル-LOX-1オオムギ穀粒の工業使用は、上記のパラグラフに記載の特許明細書に列挙されている特許請求の範囲の範囲外であると考えられる。なぜならば、主として本発明のヌル-LOX-1穀粒から製造された新規な原料は、9-HPODEおよび9-HPOTEすなわち、グリーンノートであるシス-3-ヘキセナールおよびシス-3-ヘキセノールの酵素的生成のための前駆体分子として機能することができない2種類のヒドロペルオキシ脂肪酸のLOX-1によって触媒される生成によって課される正常限界normallimitationsを大きく改善するという理由からである。6.14LOXをコードする遺伝子の異種発現種々の実施形態において、本発明は、ヌル-LOX-1形質を有するトランスジェニックオオムギ植物に関する。植物の遺伝子工学の将来の進歩が、LOX-1の合成が抑制されたオオムギの植物の生成をもたらすと想像される。この概念は、異臭の生成を制御するための手段として提案されているが、このようなアプローチの結果は報告されていないMcElroyおよびJacobsen,1995。本明細書に記載の発明は、このような今後の改良と共に使用して、組立てられることができるLOX-1配列に対するメッセンジャーRNAmRNAの少なくとも一部に相補的なアンチセンス構築物を有するアンチセンスLOX-1植物を生成させ得る。アンチセンスヌクレオチドは、例えば、トランスジェニックオオムギにおいてアンチセンスSnRK1プロテインキナーゼ配列の発現について記載されているアンチセンスヌクレオチドZhangら,2001と同様に、対応するmRNAとハイブリダイズさせるために組立てられる。アンチセンス配列の改変は、該配列が対応するmRNAの発現にハイブリダイズしかつ対応するmRNAの発現を干渉する限りは、行い得る。このようにして、対応するアンチセンス配列に対して70、好ましくは80、さらに好ましくは85の配列同一性を有するアンチセンス構築物を使用し得る。また、アンチセンスヌクレオチドの一部分は、標的遺伝子の発現を破壊させるのに使用し得る。一般に、少なくとも50個のヌクレオチド、100個のヌクレオチド、200個のヌクレオチドまたはそれ以上を有する配列を使用し得る。従って、本発明の適用は、従来の変異誘発法によって産生される植物だけに限定されない。相同的組換えによる標的遺伝子置換は酵母では極めて容易であるが、大部分の多細胞真核生物でのその効率は未だ限定されており、かつこのようなオオムギ植物の生成、および一組のゲノム幅の遺伝子崩壊の発生を未だ考慮に入れていないParinovおよびSundaresan、2000。遺伝子サイレンシングが、近年、いくつかの発生プロセスにおけるCaenorhabditiselegansゲノムの予測遺伝子の約86の役割を研究するのに使用されているAshrafiら,2003;Kamathら,2003。完全機能喪失型の特異的遺伝子例えば、LOX-1をコードする遺伝子を用いたオオムギの植物の生成については、RNA干渉RNAi法の使用は、いくつかの欠点を有する。これらの欠点としては、表現型の安定な遺伝率を欠くこと、可変レベルの残存遺伝子活性Hannon,2002;Bargman,2001;Wesleyら,2001、およびいくつかの非関連遺伝子を同時に沈黙させることができないことKamathら,2000が挙げられる。本発明のヌクレオチド配列はまた、植物においてLOX酵素をコードする内因性遺伝子の発現を抑制するためにセンス配向で使用し得る。ヌクレオチド配列をセンス配向で使用して植物において遺伝子発現を抑制するための方法は、当該技術では公知である例えば、JorgensenおよびNapoliに対する米国特許第5,283,184号を参照のこと。この方法は、一般に、内因性遺伝子の転写産物に対応するヌクレオチド配列の少なくとも一部分に作動可能に連結された植物において発現を駆動するプロモーターを含有するDNA構築物を用いて植物を形質転換する工程を包含する。典型的には、このようなヌクレオチド配列は、内因性遺伝子の転写産物の配列と実質的な配列同一性、好ましくは約65を越える配列同一性、さらに好ましくは約85を越える配列同一性、最も好ましくは約95を越える配列同一性を有する。LOX酵素をコードする遺伝子の異種発現に関連する種々の局面がCahoonらの米国特許出願公開第2003/0074693A1号に記載および開示されていることは、注目に値する。上記特許出願明細書は、オオムギLOX酵素に関して従来技術を挙げ、多数のLOXをコードする遺伝子配列を開示しているが、LOX-1、LOX-2およびLOX-3をコードするオオムギ遺伝子のいずれも、Cahoonらの米国特許出願公開第2003/0074693A1号に挙げられた特許請求の範囲に含まれるのに十分な程度の同一性を示していない。本発明は上記の記載に詳述されているが、本発明は例示でありかつその性質において限定されないと考えられ、本発明の精神の範囲に入る全ての変化および改変が保護されることが望ましいことが理解される。従って、ある種の変化および改変、例えば単一遺伝子の修飾および変異、体細胞繁殖系変異体、この品種の植物の大集団から選択される個々の改変体などは、添付の特許請求の範囲の範囲によってのみ限定されるような本発明の範囲内で実施され得ることは明らかである。本発明は、以下の具体的な実施例を参照してさらに説明される;これらの実施例は、本発明をさらに例証するために提供されるが、本発明の範囲を限定するとは解釈されない。6.15LOXインヒビター本発明はまた、オオムギLOX-1の活性を低下または抑制する方法に関する。いくつかのLOXインヒビターは、酸化還元インヒビターおよび非酸化還元インヒビター、酸化防止剤、鉄キレート剤、イミダゾール含有化合物、ベンゾピラン誘導体などの分類から選択され得る。従って、本発明は、1つの実施形態において、オオムギLOX好ましくは、LOX-1の活性を低下させる方法に関し、この方法は、iオオムギ植物またはその一部あるいはオオムギから調製される植物製品を提供する工程、iiLOXインヒビターを提供する工程、iii上記オオムギ植物またはその一部あるいはオオムギから調製される植物製品を上記LOXインヒビターと共にインキュベートし、それによってオオムギLOX好ましくは、LOX-1の活性を低下させる工程を包含する。1つの実施形態では、上記植物製品は麦芽であり、そして上記LOXインヒビターはマッシングプロセス中に上記麦芽に加えられる。これは、好ましくは、上記マッシングプロセスで生成した麦芽汁中により少ないレベルのT2Nをもたらす。上記オオムギ植物またはその一部、あるいはオオムギから調製される植物製品は、ヌル-LOX-1オオムギまたはその部分、あるいはヌル-LOX-1オオムギから調製される植物製品であり得る。しかし、他のオオムギは、好ましくは上記方法で使用され得る。種々のLOXインヒビターの中で、酸化還元LOXインヒビターは、カテコールブタン誘導体、例えばJordanらの米国特許第5,008,294号、Allenの米国特許第4,708,964号およびJordanの米国特許第4,880,637号に記載のカテコールブタン誘導体のいずれか、例えばノルジヒドログアイアレチン酸NDGAまたはその鏡像異性体の1つから選択され得る。酸化防止剤LOXインヒビターは、フェノール、フラボノイドなどの中から都合よく選択される。酸化防止剤LOXインヒビターはまた、没食子酸塩没食子酸オクチルが挙げられるから選択され得る。化合物は、実際LOXインヒビターであることが、以下の実施例18に記載のアッセイによって確認され得る。工業用には、没食子酸オクチルは、ダイズリポキシゲナーゼの公知のインヒビターでありHaら,2004、現在、食品において酸化防止添加剤として使用が認められているように、特に重要であるAruomaら,1993。この性質は、推定されるインヒビターの没食子酸オクチルの存在下での活性について精製オオムギLOX-1を試験することを興味深いものにする。興味深いことには、マッシングの間に没食子酸オクチルが存在することは、より少ないレベルのT2Nをもたらす。従って、本発明の実施形態は、マッシュに加えた後に低減されたレベルのT2Nを与えるLOX-1のインヒビターおよびその使用を提供することである。7実施例本明細書の実施例は、本発明の好ましい実施形態を例証し、かつ本発明に関する限定と考えられるべきではない。特に示さない限りは、基本的な分子生物学技術をSambrookら,1989ならびにSambrookおよびRussell2001に記載のようにして核酸および細菌を操作するために行った。記載を明確にするためにおよび限定を目的とせずに、この実施例の節を、以下の見出しに分けた:iスクリーニングおよび変異体の選択iiオオムギ変異体D112およびA618iiiオオムギの変異体D112およびA618の生理学的性質iv変異体D112およびA618はヌル-LOX-1植物であるvマッシングvi麦芽製造ならびに野生型オオムギおよび変異体オオムギの麦芽を使用するビール製造viiヌル-LOX-1麦芽のビール中のトリヒドロキシオクタデセン酸viiiビール中のトリヒドロキシオクタデセン酸ixオオムギにおけるLOX作用による酵素生成物の生化学的特徴xオオムギ変異体D112のLOX-1の遺伝子を変異させるxiオオムギ変異体A618のLOX-1の遺伝子を変異させるxiiLOX-1についての転写産物のRT-PCR検出xiiiD112変異を有するオオムギ変異体の遺伝子検出xiv試料混合物中の変異体の検出xv変異体D112の組換えLOX-1は不活性であるxviトランスジェニックオオムギ植物xviiグリーンノート化合物xviiiLOX-1インヒビターxix没食子酸オクチルを用いてマッシングする。実施例1スクリーニングおよび変異体選択オオムギ変異誘発:品種Barke、Celeste、Lux、Prestige、SaloonおよびNerudaのオオムギ植物から採取した穀粒を、Kleinhofsら1978年によって提供された詳細に従って変異原NaN3と共に別々にインキュベートした。この手順は、オオムギゲノムDNAにおいて点変異を誘発させかつ変異を誘発したDNAによってコードされるこれらのタンパク質においてアミノ酸の置換または切断を与えることが知られていることから選択された。本明細書の変異誘発実験では、上記方法は、M1世代の変異穀類を野外区画中で2つのその後の世代を経て繁殖させ、最終的にスクリーニングを目的とした高い割合の同型接合植物を得るために選択された図1A。得られたM3世代の変異体穀類は、穀類10,000個当たり0.9~2.3の頻度で生じることが予想されたKleinhofsら,前出。M2穀類が、主としてこれらが比較的高い割合の異型接合点変異を含むという理由で選択されなかったことは、注目に値する。スクリーニング:LOX-1活性を欠くM3変異体オオムギ穀類を検出するための迅速高性能スクリーニング手順を開発し、いくつかのLOX活性を含むことが知られている葉頂を使用する厄介なスクリーニング手順Doumaらの国際公開第WO02/053721A1号として公開されたPCT出願第PCT/IB01/00207号に開示されているを回避することが、目的であった。中心は、成熟オオムギ穀粒の胚例えば、胚盤組織など胚におけるLOX活性の測定に関するものであった。一般的に、アッセイ条件は、AnthonおよびBarrett2001年によって記載された条件と同様であった。アッセイは、リノール酸ヒドロペルオキシドこれは、ヘモグロビン触媒反応において3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンを3-ジメチルアミノ安息香酸と酸化的に結合し、分光光度法で測定することができる青色の形成をもたらすのLOX触媒生成に基づいていた。実際面で、1つのアッセイシリーズを、96個のオオムギ胚組織例えば、胚盤の微細粉末組成物への別個のホモジナイゼーションによって開始した。これら微細粉末組成物を氷冷保存プレートABgeneに移した。その1.2mlの96ウェルのそれぞれには円形5mmガラスビーズと200μlのH2Oを入れておいた。次いで、プレートを、27sec-1の振動数で振盪するために電気的に調節したMM300laboratorymillRetsch中で35秒間インキュベートした。その後に、プレートをAllegra6RCentrifugeBeckman-Coulterで、4,000rpmで4°Cで15分間遠心分離して不溶物を沈降させ、その後にさらに処理するまで氷上で最大120分間保持した。上記96ウェルプレートをBiomek2000LaboratoryAutomaationWorkstationBeckman-Coulterに移した。これは、AnthonおよびBarrett前出によって記載されているようなLOXアッセイに従って分注するためにプログラムされたものである。最終的に、96×26μl胚抽出物を標準96ウェルマイクロタイタープレートNuncに移し、次いで90μlの試薬A[12.5mM3-ジメチルアミノ安息香酸、0.625mMリノール酸実施例9に詳述したようにして調製した]と、90μlの試薬B0.25mM3-メチル-2-ベンゾチアゾリンヒドラゾン、0.125mg/mlヘモグロビンを加えた;試薬Aは、134mgの遊離酸に相当する155μlのリノール酸Sigma、L-1376と257μlのTween-20とを最初に混合し、次いでH2Oを加えて5mlの容量を得、次いで600μlの1MNaOHを加えることによって調製し、得られた溶液が透明になる場合にはさらにH2Oで20mlに調整した。プレートの96ウェルのそれぞれにおいてA595を、FlourostarGalaxyspectrophotometerBMGLabtechnologiesを使用して測定した。この場合、ヒドロペルオキシド生成物の色の生成が、存在する全LOX活性の尺度である[従って、活性はA595単位A595Uで示される]。可能な変異体の同定:オオムギの品種Barke合計2,160株に由来、品種Celeste2,867株、品種Lux2,625株、品種Prestige1,379株、品種Saloon1,743株、および品種Neruda3,780株の穀類を、LOX活性について、野生型穀類と比べた場合に上記活性が大きく低下した穀類を同定することを目的としてスクリーニングした。全体で90個の可能な未精製raw変異体をM3世代において同定した[品種Barke12株、品種Celeste38株、品種Lux9株、品種Prestige16株、品種Saloon12株、および品種Neruda3株]。これらの変異体のそれぞれからの穀類を、M4世代まで繁殖させ、収穫し、次いできわめて低いLOX活性に関連した形質について再度スクリーニングした。最終的に、品種Barkeのわずか1つの株変異体D112と表すおよび品種Nerudaの1つの株変異体A618と表すが、上記の極めて低い全LOX活性を示すことを示した。LOX活性の詳細な測定は、LOX活性がLOX-1によってほぼ例外なく付与されている成熟した休止穀類の抽出物を用いて行ったSchmittおよびvanMechelen,1997。変異体D112の乾燥成熟M3穀類の胚について、全LOX活性は、上記のように比色定量LOXアッセイによって測定した図2;表1参照ように、0.407±5.8A595U/胚であり、これに対して品種Barkeの全LOX活性は1.245±7.6A595U/胚であった。第2の組の実験では、変異体A618のM3世代の成熟乾燥穀類の胚抽出物のLOX活性は、0.221±2.6A595U/胚であると認められ、これに対して野生型品種Nerudaの抽出物では0.721±3.6A595U/胚が認められた図3;表1。実施例2オオムギ変異体D112およびA618M4世代およびM5世代のヌル-LOX-1植物が対応する変異体表現型について同型接合性であるか否かを確認するために分析を行った。この種の分析は、M3世代の目的の変異の劣性性質または優性性質の決定に有用である。すなわち、M3世代の植物が優性変異について異種接合性であった場合には、その後の世代はその表現型について分離する。全LOX活性をオオムギ変異体D112およびA618のM3、M4およびM5世代の胚で測定し、得られた活性を品種Barkeおよび品種Nerudaそれぞれから得られた胚の活性と比較した。LOX活性の測定は、本明細書の実施例1に記載の通りであった。実験の全てにおいて、品種Barkeの胚から得られた標準抽出物および品種Barkeの胚から得られた熱不活性化標準抽出物をコントロール試料として使用した。変異体D112のM4世代の穀類の胚については、平均全LOX活性は0.334±1.5A595Un=12であり、変異体D112のM5世代の穀類の胚の平均全LOX活性は0.294±4.1A595Un=90であった。比較のために、M4世代およびM5世代の野生型品種Barkeの胚は、0.738±3.2A595Un=2および0.963±7.5A595Un=90それぞれを生じた図4;図5;表1、実験1を参照のこと。オオムギ変異体A618のM4世代の胚は、0.222±2.1A595Un=4の平均LOX活性を生じた。この実験の他の結果から、品種Nerudaの胚のLOX活性が0.684±5.8A595Un=90であることが明らかにされた。結果を図6および表1、実験2に要約する。要約すれば、実験データにより、変異体D112のM4世代およびM5世代の穀類が、極めて低い全LOX活性に特異的な遺伝形質について同型接合性であることが確認された。同じ性質は、変異体A618のM4世代の穀類について示された。実施例3オオムギの変異体D112およびA618の生理学的性質温室での植物の繁殖:品種BarkeおよびD112変異体の穀類M4世代およびM5世代を発芽させ、相対湿度65で12°Cで20時間照明下の温室で育てた。変異体D112および野生型品種Barke植物の成育特性は、草丈、植物当たりの分げつの数、開花の開始および穂状花序当たりの穀類の数について同様であった。従って、変異体D112は野生型植物の生育生理機能を有すると結論付けることが可能なばかりではなく、正常な穀類発育も有すると結論付けることも可能である。世代M4の変異体A618穀類および品種Nerudaの穀類を発芽させ、12°Cおよび相対湿度65で20時間/4時間の明/暗条件下の温室で育てた。変異体A618と品種Nerudaとを比較することによって、草丈、植物当たりの分げつの数、開花の開始および穂状花序当たりの穀類の数について差は認められなかった。しかし、変異体A618の背面側穀類は、異常穴様構造によって母品種Nerudaと異なっていた。要約すると、変異体A618は野生型様植物成育生理機能を示すが、異常な穀類生育を示すと結論付けることができる。圃場条件下の変異体D112の作物学的性能:変異体D112と品種Barke植物とを、草高、出穂日、耐病性、倒伏、穂破損、成熟時間および収量に関して可能な相違を確認するために圃場試験で比較した表2を参照のこと。試験は、圃場試験に関する標準手順に従って行った。従って、変異体D112および品種Barkeの等量の穀粒を、2箇所の7.88m2の区画に植えた。それぞれは3反復試験からなる。上記の特性に重点をおいた作物学的データの特徴を、成育期全体を通じて注意深く観察した。作物学的特性に関する相違は、変異体D112についても、品種Barkeについても観察されなかった。実施例4変異体D112およびA618はヌル-LOX-1植物であるタンパク質の分析:変異体D112およびA618の変異体表現型を特定するために以下の分析を行った。休眠オオムギ穀類から取り出した胚の抽出物のウェスタンブロット分析を行った。1つの胚を、乳鉢matar中で300μlの氷冷水に抽出し、抽出物を微小遠心管に移し、10,000×gで遠心分離した。10μlの粗製抽出物を含有する試料アリコートを、Laemmli1970年によって提供された記載に従ってドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGEで分離した。その後に、分離したタンパク質を、Towbinら1979年によって詳述されたような半乾燥ブロッテイングによりニトロセルロース膜に移した。得られたブロットを、LOX-1-特異的モノクロナール抗体5D2の1:500希釈物を用いてプローブしHoltmanら,1996、次いでアルカリ性ホスファターゼに連結されたヤギ抗マウス抗体と共にインキュベートし、Holtmanら前出によって記載されたようにしてアルカリ性ホスファターゼ基質ニトロブルーテトラゾリウムおよび5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-ホスフェートを用いて検出した。LOX-1は、品種Barkeの胚に抽出物中で5D2抗体によって認識され、上記タンパク質は品種Vintage由来のLOX-1のタンパク質と同様にSDS-PAGEで移動した。免疫検出可能なLOX-1は、変異体D112の試料中に存在しなかったが、上記タンパク質は品種Barke、変異体株Gおよび品種Vintageの抽出物中に確認することができた。M4世代の品種Barkeおよび変異体D112後代株のウェスタン分析により、LOX-1タンパク質は品種Barkeの胚由来の穀類に存在したが、変異体D112の後代穀類のいずれにも存在しなかったことが明らかにされ図7、従ってヌル-LOX-1形質が遺伝学的に安定であることが確認された。得られたデータは、カイ二乗試験で測定されるように統計学的に有意であったp<3.84。変異体A618および品種Nerudaを、上記のM3世代およびM4世代の胚中のLOX-1タンパク質について分析した。LOX-1タンパク質は、両方の世代の品種Nerudaの胚抽出物では検出できなかった。しかし、非常に弱いLOX-1タンパク質バンドが未精製変異体A618で観察され、後代株の胚でも観察された図8。これはおそらくは他のLOX酵素との交差反応のためであると思われる。戻し交配:反復戻し交配を使用して、本明細書の品種Prestigeにおいて、ヌル-LOX-1表現型を変異体D112から反復親に移入した図9参照。戻し交配プログラムは、目的の形質に関する選択と組み合わせて、図9に例示するように計画した。その目的は、変異体D112のゲノムを反復親のゲノムと徐々に置換することにあった。このようにして、NaN3変異誘発処理中に変異体D112のゲノムに導入された他の可能な不都合な変異を排除し得る。同型接合ヌル-LOX-1変異体D112遺伝子型nnと表されるの品種Prestige遺伝子型NNと表されるに対する一次戻し交配において、後代株は異型接合遺伝子型遺伝子型Nnと表されるを含むことが予想された。低LOX表現型が、その劣性性質により、変異について異型接合性である株において検出を免れることは注目に値する。自家受粉後代植物は、標準メンデルパターンで、すなわち1NN:2Nn:1nnの比率で分離する植物の集団を生じることが予想された。ヌル-LOX-1遺伝子型を含みかつ一次戻し交配から得られる同型接合nn遺伝子型は、品種Prestigeの遺伝的背景の50を含むことが期待された。10回の戻し交配の後に、反復親背のバックグラウンドは約99.9に達することが予想された。品種Prestigeおよびヌル-LOX-1変異体D112のオオムギ植物は、戻し交配プログラム全体を通して温室で繁殖させた。戻し交配後代穀類を、実施例1に記載のようにして、胚の抽出物中のLOX-1タンパク質の存在について分析した。一次および二次戻し交配世代の分離後代におけるヌル-LOX-1表現型の期待される頻度は、劣性変異について25であった図10。LOX-1タンパク質バンドを欠くオオムギ変異体株の検出の基礎としてウェスタンブロット分析を使用すると、一次戻し交配世代の頻度は、12の戻し交配株の全体の中からの3株に対応していた。二次戻し交配世代では、28の戻し交配株の全体中からの9株がウェスタンブロット分析においてLOX-1タンパク質バンドを欠いていた図10。反復親バックグラウンドは二次戻し交配後代において約75に達することから、LOX-1に関する変異遺伝子および対応するヌル-LOX-1表現型の同時遺伝は、これらの遺伝子連鎖について確認を与えた。カイ二乗試験により、観察データは統計学的に有意であると分類できることが明らかにされた。p値は低く<3.84、一次、二次、三次および四次の戻し交配世代について有意性を示す特性であった。戻し交配プログラムにより、ヌル-LOX-1表現型を与える変異対立遺伝子が代替的な遺伝的バックグラウンドに移入することができることおよびメンデル型分離の後の劣性モノ階乗monofactorial様式で遺伝することが実証された。実施例5マッシング麦芽汁の調製:新規オオムギ品種の性質を試験するために、麦芽試料25~225gを製造した図11を参照のこと。外部攪拌機と、温度を十分に規定された勾配で温度勾配をつけることができるサーモスタットを備えた水浴とから構成される実験室用マッシュシステムmashingsystemを使用して、マッシング工程を小規模で行った。最終マッシュを、濾紙を使用して濾過した。麦芽汁煮沸を、実験室規模で加熱マントルおよび還流冷却管に接続した丸底フラスコを使用して行った。実施例6麦芽製造ならびに野生型オオムギおよび変異体オオムギの麦芽を使用するビール製造品種Barkeおよび変異体D112のオオムギを、麦芽製造および醸造用の十分な穀類材料を得るために圃場で数シーズン繁殖させた。完成ビールのT2Nについての分析および感覚刺激分析により、変異体D112の麦芽を用いて醸造したビールの改善された香味安定性を実証した。変異体D112および品種Barkeから得られた穀粒の麦芽製造:麦芽製造は20kg規模で麦芽製造室で次の通りに行った:変異体D112オオムギ穀類2003年に収穫したもの、品種Barke穀類2002年に収穫したもの。浸漬条件は:浸漬水中で16°Cで8時間湿潤;14時間乾燥;8時間湿潤;10時間乾燥;4時間湿潤であった。麦芽製造条件は:18°Cで12時間;16°Cで24時間;14°Cで24時間;12°Cで60時間であった。乾燥条件は:60°Cで12時間;68°Cで3時間;74°Cで4時間;80°Cで3時間であった。変異体D112および品種Barke麦芽から誘導された麦芽試料を使用する麦芽製造分析データを表3で比較する。結果は、変異体D112および品種Barkeの麦芽が麦芽規格を満たすことを実証しかつ麦芽が醸造に適していることを確認した。変異体D112から得られた麦芽において、品種Barkeの麦芽と比べると、約64の低下に相当するT2Nレベルの著しい低下を観察した表4。変異体D112および品種Barkeの麦芽を用いた醸造:醸造は、50リットル規模で行い、次の工程を包含した:i麦芽汁調製;ii麦芽汁分離;iii麦芽汁煮沸;iv醗酵;v貯酒lagering;viブライトビール濾過;およびv瓶詰め。麦芽汁を、変異体D112の麦芽、または品種Barkeの麦芽を使用して調製し、後者を比較試料として使用した。それぞれの醸造について、全体で13.5kgの麦芽を使用した。マッシング工程は、47°Cで20分間、次いで18分の加熱であり、この温度を48°Cから67°Cに上げ;67°Cで30分休止し;次いで72°Cで5分間加熱し;72°Cで15分休止し;78°Cまで6分間加熱し;78°Cで5分休止した。麦芽汁濾過および煮沸、ワールプール分離、醗酵、貯酒および緑色ガラス瓶への包装の醸造工程は、標準醸造実施の仕様に従った。全部で33リットルのビールを瓶詰めした。香味安定性およびT2N分析:ビールを、上記の変異体D112および品種Barkeの麦芽を使用して製造した。新たに瓶詰めしたビールを5°Cで貯蔵し、製造の2ヵ月以内に分析した。製造したてのビールと貯蔵ビールの香味安定性を、2種類異なる型のビール貯蔵条件の後に評価した。1つの実験系では、ビールを37°Cで1~4週間の強制熟成プロセスに供した。ビール試料のT2Nレベルを、基本的にはGroenqvistら1993年によって記載されたように、O-2,3,4,5,6-ペンタフルオロベンジル-ヒドロキシルアミンを用いたカルボニルの誘導体化の後に、質量分光分析検出器を備えるガスクロマトグラフィーで調べた。訓練されたビール香味官能評価集団は、ビールの総合香味成績を評価した。試験は、ビール中の遊離T2Nを示すボール紙臭の検出を含んでいた。変異体D112および品種Barkeそれぞれの麦芽から誘導されたビールについて両方の種類の製造したてのビールが、同様のレベルの亜硫酸塩すなわち、4ppmおよび5ppmの亜硫酸塩を含有していたことは、注目に値する。強制熟成:品種Barkeの麦芽から製造された瓶詰めビールと、変異体D112由来の麦芽から製造された瓶詰めビールとを調べ、図12Aおよび表5に示すように強制熟成中の遊離T2Nの発生に関する具体的なデータについて調べて比較した。両方のビールは、T2N発生の速度論の著しい相違によって区別し得ることが認められる。参照ビールは予期したように性能を発揮したが、変異体D112由来のビールでは予期しない、37°Cで4週間にわたった0.01ppbに対応する著しく少ないT2Nの発生を認めた。強制熟成実験は、上記2種類のビールの間の相違を強調した。すでに2.5週間後に、参照ビールのT2Nレベルは香味閾値レベルを越えており、これに対して変異体D112の麦芽を使用して製造したビールは、2~3週間のインキュベーション後に0.025ppbのT2N濃度で横ばい状態であった。風味および香味安定性に関して、香味専門家の評価集団は、ヌル-LOX-1オオムギ変異体D112の麦芽を使用して製造したビールを評価した。中心は37°Cで強制熟成を行ったビール試料についてであった。香味評価集団は、製造したてのビールと強制熟成させたビール37°Cで1週間の両方の種類について満足する香味プロフィールを認めた。しかし、紙臭についての評点は、ヌル-LOX変異体D112の麦芽を使用して製造したビールよりも参照ビールの方が高かった表5。すなわち参照ビールは上記の異臭についてより強い風味を有していた。一般に、香味官能評価集団は、ヌル-LOX-1変異体D112の麦芽から製造したビールの方を好んだ香味許容評点、表5。20°Cで12ヶ月間インキュベーションすると、専門家でありかつビールの異臭を味わうために訓練された10人のビールテイスターからなる官能評価集団は、ヌル-LOX-1変異体D112の麦芽から製造したビールとコントロール麦芽から製造したビールとを比較した。例えば紙臭、酸化臭、熟成臭、パン臭、カラメル臭、焦げ臭および甘味臭などのような風味特徴を含む全ての評価により、ヌル-LOX-1麦芽から作られたビールよりもコントロールビールにおいてより高いレベルの熟成特異的異臭が明らかにされた図12B。また、0~5の尺度での評価を使用することによってこの場合、高い値が好ましい、一般的な香味許容評点は、コントロールビールおよびオオムギヌル-LOX-1変異体D112の麦芽を用いて製造したビールそれぞれについて1.0および2.0と判断された。要約すれば、オオムギ変異体D112の麦芽から醸造したビールの改良された香味安定性は、主として37°Cで貯蔵の後のビール中のT2Nのレベルが低いことに起因して、著しい。ヌル-LOX-1オオムギ麦芽の使用に焦点を合わせた醸造試験は、麦芽製造および醸造プロセス中のオオムギLOX-1作用が、T2Nの発生という熟成したビール中の主な異臭化合物について重要な決定因子を構成するという証拠を提供した。実施例7ヌル-LOX-1麦芽のビール中のトリヒドロキシオクタデセン酸リノール酸から誘導されるビール特異的トリヒドロキシオクタデセン酸THA;THOEとも略記し得るは、30年前に記載されたDrostら,1974。この時以来、種々のレポートがビール中のTHAの全含有量は5.7~11.4μg/mlの範囲に及ぶことを確かめているHamberg,1991;およびそこに記載される参考文献。9,12,13-THAは標準的にビール中のTHAの75~85を構成するが、9,10,13-THAの割合は標準的にはわずか15~25である。他の異性体は、微量で見出される。オオムギ変異体D112の麦芽すなわち、ヌル-LOX-1麦芽から製造されたビールでは、9,12,13-THAの濃度は、品種Barkeの麦芽から製造された参照ビールに比べて20すなわち、ほぼ5分の1にまで低下した表6。すなわち異性体9,12,13-THAおよび9,10,13-THAは、ヌル-LOX変異体D112の麦芽を使用して製造したビール中にほぼ等量で存在する。これらの測定は、標準的なHPLC-質量分光分析を使用して行った。実施例8ビール中のトリヒドロキシオクタデセン酸種々様々な市販ビール試料中のTHAの濃度を表7に示す。表7に示すように、ビール試料中のTHAに関する結果の精査により、9,12,13-THA:9,10,13-THAの比率は常に3.5を越えることが明らかになった。対照的に、D112から製造されたビールでは、9,12,13-THA:9,10,13-THAの比率は1.3である。従って、ヌル-LOX-1オオムギから製造されたビールは、9,12,13-THA:9,10,13-THAについて著しく低い比率を有し、9,12,13-THA:9,10,13-THAの比率の測定は、ビールがヌル-LOXオオムギ変異体の麦芽例えば、オオムギ変異体D112の麦芽を使用して製造されるか否かを調べるためのツールを提供する。ヌル-LOX-1変異体D112のオオムギから誘導される麦芽から製造されたビールは、標準的な麦芽から製造されたビールと比べて著しく低いレベルの全9,12,13-THAを有することは、注目に値する。実施例9オオムギ中のLOX作用による酵素生成物の生化学的特徴成熟野生型オオムギ穀類は、酵素LOX-1およびLOX-2由来の2つの主要なLOX活性を含む。これらの酵素は、リノール酸のヒドロペルオキシオクタデカジエン酸HPODEへの二原子酸素添加を触媒し、酵素LOX-1は9-HPODEの形成を触媒し、酵素LOX-2は13-HPODEの形成を触媒する。成熟穀類では、LOX由来の活性は胚に限定される。どのようにLOX-1の遺伝子の変異がHPODE形成に影響を及ぼすかを調べるために、品種Barkeからの胚抽出物およびオオムギ株G低LOX穀粒、Doumaらの国際公開第WO02/053721A1号として公開されたPCT出願第PCT/IB01/00207号からの同様の抽出物、ならびにヌル-LOX変異体D112の胚抽出物を、高圧液体クロマトグラフィーHPLC分析で調べた。オオムギの胚:胚からの粗製タンパク質抽出物の調製を、胚盤と胚乳の間で切断するために外科用メスを使用して成熟オオムギ穀類から器官を最初に切り裂くことによって行った。次いで、4個の胚からなるそれぞれの試料を、2枚の秤量用紙の間に置き、穏やかにハンマーでたたいて均質な粉末を作った。これを1.5ml微小遠心管に移し、600μlの200mM乳酸緩衝液pH4.5を加え、この微小遠心管を氷の上に10分間置き、その後にプラスチック乳棒Kontesを使用してさらに均質化した。その後に、600μlの水をそれぞれの管に加え、試料を20,000×gで2分間遠心分離した。得られた上清のアリコート100μlを15ml遠心分離管[GreinerBio-Oneから購入したCellstarカタログ番号188271]に移し、LOX作用の後の反応生成物の分析用に、260μMリノール酸を含有する2mlの100mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5を調製した[基質は、10mlの100mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5を、100μlの24mMリノール酸原液と混合することによって調製した。後者は、最初に155μlのリノール酸134mgの遊離酸に対応する;L-1376、Sigmaと257μlのTween-20とを混合し、次いで5mlの容量までH2Oを加え、次いで600μlの1MNaOHを加え、溶液が透明になった際に、最終容量をH2Oで20mlに調整した]。回転振盪機で15分インキュベートした後に、2mlの酢酸エチルを加え、9-HPODEおよび13-HPODEを抽出するために試料内容物を5秒間激しく振盪することによって混合した。次いで、試料を800×gで10分間遠心分離し、1ml酢酸エチルを1.5ml微小遠心管に移し、その中で酢酸エチルを窒素ガスの気流下で蒸発させた。その後に、HPODEを300μlのメタノールに再懸濁し、0.45μm膜Millex-HNフィルター、Milliporeに通して濾過したHPODE含有量の分析は、HPLCで行った。各試料から合計15μlを、4.6×250mmのSymmetryC18カラムWatersを備えたHPLC装置HP1100Series、HewlettPackardに注入した。使用した移動相は、水:メタノール:アセトニトリル:テトラヒドロフラン:トリフルオロ酢酸の16:12:12:10:0.5v:v:v:v:v混合物であった。移動相の流量は1分当たり1mlであり、そしてカラムの前で測定した圧力は140バールであった。分離は30°Cで行った。共役二重結合を有するヒドロペルオキシドの検出は234nmで行った。標準試料は、図13Aに詳述するように、9S-ヒドロペルオキシ-10E,12Z-オクタデカジエン酸[9S-HPODE]と13S-ヒドロペルオキシ-9Z,11E-オクタデカジエン酸[13S-HPODE]との混合物からなっていた。クロマトグラムの分析により、主として9-HPODEは品種Barkeの成熟オオムギ胚から抽出されたLOX酵素によって形成され図13B、これに対して9-HPODEおよび13-HPODEの両方は低LOX株Gの成熟胚の抽出物中で形成された図13Cことが明らかにされた。変異体D112胚の抽出物は、極めて少ない量の9-HPODEを形成したが、多量の13-HPODEを形成し、従ってLOX-1活性が存在しないことを立証した図13D。従って、変異体D112の胚抽出物は、野生型オオムギ株の胚抽出物よりもはるかに少ない9-HPODEを形成した。オオムギ麦芽:オオムギ麦芽は、LOX-1およびLOX-2から誘導される2つの主要なLOX活性を含む。LOX-1が9-HPODEの形成を触媒する場合には、LOX-2作用は13-HPODEを生成する。LOXをコードする遺伝子の変異の麦芽抽出物中のHPODEの生成に対する効果を調べるために、品種Barke、オオムギ低LOX株Gおよび変異体D112由来の麦芽から調製した抽出物を用いてHPLC分析を行った。麦芽からの粗製タンパク質抽出物の試料を次のようにして調製した。1つの麦芽化されるオオムギ穀類を2枚の秤量用紙の間に置き、穏やかにハンマーでたたいて均質な粉末を製造した。その後の処理の全て、インキュベーション混合物およびHPLC分析方法は、胚抽出物中のLOX産物の測定に関する本実施例の上記の節に記載したものと同じであった。HPLC分析には、図14Aに例示するように、9S-ヒドロペルオキシ-10E,12Z-オクタデカジエン酸[9S-HPODE]と13S-ヒドロペルオキシ-9Z,11E-オクタデカジエン酸[13S-HPODE]との標準混合物を使用した。麦芽化されたBarke、低LOXおよびD112の抽出物中のHPODE生成活性の分析により、品種Barkeの麦芽における9-HPODEおよび13-HPODEの生成活性の60:40分布図14B、低LOXオオムギ由来の麦芽におけるいくつかの9-HPODE生成活性図14C、および変異体D112の麦芽における極めて低いレベルの9-HPODE生成図14Dが実証された。これらのデータは、他のオオムギ株由来の麦芽抽出物よりも変異体D112の麦芽抽出物において著しく低い9-HPODEの形成を実証している。実施例10オオムギ変異体D112中のLOX-1の遺伝子を変異させる変異体D112中のLOX-1の遺伝子のヌクレオチド配列配列番号2および品種Barke中のLOX-1の遺伝子のヌクレオチド配列配列番号1を得、変異体D112これは穀類中に対応するLOX-1酵素が存在しないことに特徴があることが認められているのヌル-LOX-1表現型について分子的基礎を調べるために比較した。変異体D112および野生型品種Barke由来のゲノムオオムギDNAを、植物DNA単離キットRocheAppliedScienceを使用して、製造業者の推奨に従って苗の葉組織から単離した。変異体D112および品種BarkeのゲノムDNA中のLOX-1のタンパク質コード領域の側面に位置する4,224bpの配列を、プライマーを使用してPCRで増幅した。プライマー配列の基礎は、LOX-1の遺伝子のゲノム配列であったvanMechelenら,1995;Rousterら,1997;LOX-1をコードする領域の開始コドンおよび終止コドンに及ぶゲノム配列の概略図を図15に示す。PCR反応は、5pmolの各プライマーおよび3.5UのExpandHighFidelityポリメラーゼRocheAppliedScienceを含有する20μl容量中の100ngのゲノムDNAからなる。PCR増幅は、MJサイクラー中で次のサイクリングパラメーターを使用して行った:96°Cで2分を1サイクル;95°Cで1分、69°Cで1分、および72°Cで5分を30サイクル;72°Cで10分を1サイクル。PCR産物を、1.0アガロースゲル上で分離した。増幅した領域の長さに相当するDNA断片を、QiaexIIgelextractionkitQiagenを使用して精製し、プラスミドベクターpCR2.1-TOPOInvitrogenに挿入した。コード領域の両方の鎖のヌクレオチド配列を、特異的オリゴヌクレオチドプライマーとのジデオキシヌクレオチド鎖終結反応を使用して調べ、MegaBACE1000DNA配列決定装置Amershamで分析した。配列の比較を、Lasergene配列分析ソフトウエアパッケージver.5DNASTARを使用して行った。野生型品種BarkeのLOX-1の配列配列番号1と変異体D112のLOX-1の配列配列番号2との間の直接比較において、変異体のヌクレオチド配列は、エキソン7において位置3574でG→A置換の形の1つの点変異を明らかにした図15;図16。LOX-1の野生型配列は、96.4kDaの予測質量を有する862残基の長さのタンパク質配列番号3をコードする。対照的に、変異体D112の対応する配列の位置3574での変異は、未成熟終止コドンの導入をもたらす。変異体D112の遺伝子をコードするLOX-1中の終止コドンは、対応するタンパク質の197個のアミノ酸のC末端切断をもたらすことが予想され、従って74.2kDaのタンパク質をコードすると予測される。その配列を配列番号4に示す。実施例11オオムギ変異体A618のLOX-1の遺伝子を変異させるオオムギ変異体A618および野生型品種NerudaのゲノムDNAの調製、PCR反応およびDNA配列決定ならびにゲノムDNAの分析は、変異体D112および品種Barkeについて実施例10に記載のものと同じであった。オオムギ変異体A618のLOX-1のヌクレオチド配列番号6と親品種NerudaのLOX-1のヌクレオチド配列番号5の比較により、変異体配列がゲノム配列の位置2311でG→A置換に対応する1つの点変異を有することが示された図15;図16。品種NerudaのLOX-1についての野生型配列は、96.4kDaの予測質量を有する862残基の長さのタンパク質配列番号7をコードする。対照的に、変異体A618の対応する配列の位置2311での変異は、イントロン3供与部位を変異させる。これは、イントロン3においてスプライスエラーを引き起こし、理論的に、399個のアミノ酸の翻訳後にイントロン3の未成熟終止コドンをもたらす。変異体A618のLOX-1に関する遺伝子中の枠内終止コドンは、44.5kDaの切断された翻訳されたタンパク質配列番号8をもたらす。実施例12LOX-1の転写産物のRT-PCR検出品種Vintage、変異体株G低LOX、Doumaらの国際公開第WO02/053721A1号として公開されたPCT出願第PCT/IB01/00207号、品種Barke、および変異体D112のオオムギ植物を、デンマーク国コペンハーゲンで2002年の春の間に温室で育てた。穂を開花の当日に標識し、穂状花序を開花後DAF20日目、40日目および60日目に収穫した。穂状花序を、全ての試料を同時に処理できるまで-80°Cで保持した。時間点当たり合計10個の胚を成長する穎果から切り裂き、RNAをFastRNA、GreenRNA単離キットQbiogeneを使用し、製造業者の推奨を使用して抽出した。RT-PCR反応のテンプレートは、上記の胚のRNA100ngからなっていた。20μlのRT-PCR反応物は50pmolの各プライマーと5UのRT-PCR酵素混合物Promegaを含有していた。RT-PCR増幅は、MJサイクラー中で、以下のように行った:48°Cで45分を1サイクル;95°Cで1分を1サイクル;94°Cで1分、65°Cで1分および72°Cで1分を30サイクル;最後に72°Cで10分間を1サイクル。正方向プライマーを使用して、292bpのRT-PCR断片を生成した。RT-PCR産物を1.0アガロースゲル上で分離した。増幅された領域に長さが相当するDNA断片を、QiaexIIgelextractionkitQiagenを使用して精製し、プラスミドベクターpCR2.1-TOPOInvitrogenに挿入した。プラスミド挿入物のヌクレオチド配列を、ABIPrism310GeneticAnalyzerABIを使用して配列決定した。DNA配列の比較を、Lasergene配列分析ソフトウエアパッケージver.5DNASTARを使用して行った。得られたPCR産物は、ゲノムクローンのヌクレオチド位置3283~3659に対応する領域に及んだ配列番号1。この領域は、83bpの長さをもつイントロン5を含み、これはDNA-遊離RNA調製物のRT-PCRテンプレートには存在しなかった図17A。DNA配列分析により、単離断片はLOX-1の遺伝子の不可欠な部分であることが確認され、そしてイントロン5配列の不存在が実証されたことから、誤った増幅が酵素LOX-2のオオムギ遺伝子から断片を生じることを除外することができた図17D。従って、増幅された断片は、RNA転写産物の増幅の生成物に相当した。品種Vintageおよび変異体株Gの20DAF、40DAFおよび60DAFのオオムギ胚から精製したRNAの比較RT-PCR分析により、LOX-1の転写産物のレベルは同様の成長段階で上記2つの品種について同様であることを明らかにした。LOX-1の転写産物のレベルは20DAFから60DAFまでの時間内で徐々に増加する図17B。しかし、対照的に、一組の同様のデータを品種Barkeおよび変異体D112について調べると、著しい相違が認められた。ここで、RT-PCR実験により、変異体D112におけるLOX-1転写産物が、品種BarkeのLOX-1転写産物と比較した場合にその量において実質的に少ないことを明らかにした図17C。要約すると、上記観察は、変異体D112のLOX-1の遺伝子のプロモーター領域における可能な変異によって説明することが可能である。他のまだ知られていない要因が、変異体D112のLOX-1の遺伝子の転写調節に関与し得る。この点において、変異体D112のLOX-1の転写産物における終止コドンがナンセンス介在mRNA崩壊を与えるということは除外され得ないlsshikiら,2001。実施例13D112変異を有するオオムギ変異体の遺伝子検出最新のオオムギ育種の戦略は、変異誘発から商業化までのプロセスを促進するためにバイオテクノロジー技術をしばしば包含する。従って、目的の遺伝子内の一塩基多型の検出について植物材料の早期スクリーニングを実施することが有用であり得る。この技術をゲノムDNAと共におよび高速処理システムと組み合わせて使用すると、育種株の数を播種期で50に狭めることが可能であり得る。CAPSアッセイ:変異体D112後代株のLOX-1の遺伝子のクローニングおよび配列決定は、変異が次世代まで伝えられることを示した。この技術は、労力を要し、実用的なオオムギ育種には有用ではない。低LOX株Gに特異的な変異は、育種材料において切断増幅多型配列アッセイcleavedamplifiedpolymorphicsequenceassayCAPSアッセイを使用してDoumaらの国際公開第WO02/053721A1号として公開されたPCT出願第PCT/IB01/00207号の実施例4の開示のようにして、同定することができる。しかし、変異体D112のLOX-1の遺伝子における変異の性質は、変異を含む60bpの領域中で改変された制限地図を作成するのに使用することはできない。SNPアッセイ:このことに対する代替的な解決法は、一塩基多型SNPを包含する分析を行うことである。SNPは、1つの遺伝子座で表される少なくとも2種類のヌクレオチドを有する変異点である。この分析は、2組のゲノムPCR反応の組み合わせに基づく。両方の反応物は、遺伝子座特異的プライマーと、2個のSNPプライマーのうちの1つ配列のそれぞれの対立遺伝子について1つを含む。2組のPCR反応は、植物株当たりにつき行われ、PCR反応の結果はいずれもSNPプライマーが変異体または野生型対立遺伝子の配列に結合するということである図18A。いくつかの方法の1つにおいて、SNP分析は、PCR産物の電気泳動の後のバンドパターンを評価することによる変異体株の同定に基づき得る。17の育種株由来のゲノムオオムギDNAおよび野生型品種Barke由来のゲノムオオムギDNAを、苗の葉の組織から、PlantDNAisolationkitRocheAppliedScienceを使用して製造業者の推奨に従って単離した。野生型LOX-1の遺伝子のSNPを増幅するのに使用したオリゴヌクレオチドプライマーは、であった。変異体D112の対応する遺伝子については、プライマーは、であった。これらのプライマー組み合わせをPCR反応に使用して、変異体D112または品種BarkeのLOX-1のコード領域の一部を含む166bpのDNA断片を増幅した図18A。25pmolのプライマーおよび2.5UのFastStartTaqDNAポリメラーゼRocheを含有する20μl容量での100ngのゲノムDNAからなるPCR反応物を、製造業者者の指示書に従って使用した。PCR増幅は、MJサイクラー中で、以下のように行った:96°Cで5分を1サイクル;95°Cで1分、70°Cで1分、72°Cで1分を20サイクル;最後に72°Cで10分を1サイクル。PCR産物を1.0アガロースゲル上で分離した。増幅した領域に長さが相当するDNA断片を、QiaexIIgelextractionkitQiagenを使用して精製した。PCR産物をABIPrism310GeneticAnalyzerでジデオキシヌクレオチド連鎖終結反応を使用して直接的に配列決定した。配列の比較を、Lasergene配列分析ソフトウエアパッケージver.5DNASTARを使用して行った。SNP分析による合計で17の育種株のスクリーニングから得られたデータおよびPCR産物の直接的な配列決定から得られた実験データをまとめると、同じ結果が得られた。これらの実験に基づいて、SNP技術を使用して、原料がオオムギ変異体D112のLOX-1の遺伝子の配列と同じ遺伝子配列を含むことを確認し得るということが、結論付けられ得る図18B。実施例14試料混合物中の変異体の検出醸造業は、ビールの製造にオオムギと麦芽との混合物、特定の麦芽品種の望まれていない化学特性を遮蔽し得る性質を使用し得る。特定の種子材料の使用に関する簡単な確認は、PCR分析による変異体遺伝子の増幅を包含し得る。混合麦芽試料のSNP分析は、変異体D112と品種Barkeとの試料混合物、および変異体株GDoumaらの国際公開第WO02/053721A1号として公開されたPCT出願第PCT/IB01/00207号と品種Barkeとの試料混合物を使用して行った。変異体D112の穀類を0、20、40、60、80および100含有する6種類のオオムギ試料を分析した。別のシリーズでは、変異体株Gの穀類を0、20、40、60、80および100含有する6種類のオオムギ試料を分析した。粉砕穀類からNucleonPhytopureDNAisolationkitAmershamを使用して、製造業者の推奨に従ってDNAを単離した。変異体D112のLOX-1の遺伝子の166bpのSNPを増幅するのに使用したオリゴヌクレオチドプライマーは、であった。変異体株GのLOX-1の遺伝子の370bpのSNPを増幅するのに使用したオリゴヌクレオチドプライマーは、であった。4種類のプライマーを同時に使用する多重反応として、PCRを行った図19A。各反応物は、酵素の供給業者によって提供された指示に従って、50pmolの各プライマーおよび10μlのRedTaqポリメラーゼ溶液Sigmaを含有する20μl容量に100ngのゲノムDNAを含有していた。PCR増幅は、MJサイクラー中で以下のように行った:95°Cで1分を1サイクル;94°Cで1分、66°Cで1分、72°Cで30秒を25サイクル;最後に72°Cで10分を1サイクル。PCR産物を1.0アガロースゲル上で分離した。増幅した領域に長さが相当するDNA断片を、QiaexIIgelextractionkitQiagenを使用して精製し、プラスミドベクターpCR2.1-TOPOInvitrogenに挿入した。プラスミド挿入物の両方の鎖のヌクレオチド配列を、特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用いたジデオキシヌクレオチド鎖終結反応を使用して決定し、MegaBACE1000DNAsequencerAmershamで分析した。配列の比較を、Lasergene配列分析ソフトウエアパッケージver.5DNASTARを使用して行った。図19Bに示したゲル分析により、変異体D112の穀類を含有する混合物に由来する試料の全部について陽性SNP分析を明らかにした。同様に、変異体系列G由来の物質を含有する試料を確認することができた。要するに、遺伝子分析は、変異体株Gまたは変異体D112いずれかの変異体LOX植物を含有するオオムギ混合物の使用を容易に確認することができる。実施例15変異体D112の組換えLOX-1は不活性である変異体D112のLOX-1の遺伝子は、未成熟終止コドンを含むことを示した実施例10を参照のこと。従って、遺伝子の植物内での発現は、野生型LOX-1に認められる最初の665個のアミノ酸残基のみを含む対応するLOX酵素の切断バージョンの合成を生じることが予期された。LOX-1の切断バージョンを特定するヌクレオチド配列をE.coli細胞中で発現させて、それが酵素的に不活性であり、そしてオオムギ変異体D112の細胞中でHPODEの形成を触媒することができないことを確認した。E.coli中で野生型および変異体のLOX-1を発現させるためのプラスミド:LOX-1をコードするオープンリーディングフレーム全体を、標準PCRプロトコールを使用することによって増幅させた。テンプレートは、オオムギcDNAvanMechelen,1999であり、使用したプライマーは、であった。2,597bpの増幅DNA断片を得、精製した。PCR断片をNdeI-EcoRIで消化し、ベクターpET19bNovagenの大きなNdeI-EcoRI断片に結合し、LOX-1の遺伝子が、10残基の長さのHis末端の配列の枠内で、下流でクローン化される発現プラスミドpETL1を得た。DNA配列決定分析により、プラスミド挿入物が正しい配列を含むことを確認した。次の実験は、LOX-1の切断バージョンの発現のためのプラスミドの構築を包含する。その目的は、E.coli細胞でのタンパク質合成がLOX-1の切断バージョンを生じるように、pETL1のLOX-1のオープンリーディングフレームのコドン番号666を終止コドンに変化させることにある。E.coliにおけるリボソームによって終止コドンの中の読み通しを完全に抑制するために、pETL1中のLOX-1の番号665のコドンの下流の全てのコドンが除去され、終止コドンTGAで置換されている発現プラスミドを構築した。以下のプロトコールを使用した。129bpの断片を、pETL1からプライマーの存在下でのPCRを使用して増幅した。この増幅は、上記断片に終止コドンおよびEcoRI部位を導入した。これをその後にBsiWI-EcoRIで消化し、プラスミドpETL1の大きなBsiWI-EcoRI断片に結合した。得られた発現プラスミドをpETL2と命名し、挿入物の正しい配列をDNA配列決定によって確認した。形質転換E.coli細胞は、組換えLOXタンパク質を合成する:E.coliBL21細胞Novagenから購入したを、ベクターpET19bならびに発現プラスミドpETL1およびpETL2上記のものを用いて別々に形質転換した。プラスミドを有する細菌細胞を、標準ルリアブロスLB培地に接種し、37°Cで2時間増殖させた。その後に、1mMIPTGを加えて異種遺伝子の発現を誘導し、その培養物を20°Cで一夜増殖させた。細胞を14,000×gで1分間遠心分離することにより回収し、次いで得られた細胞ペレットを、6M塩酸グアニジン、0.3MNaClおよび10mMイミダゾールを補足した50mMリン酸Na緩衝液からなる変性溶液に再懸濁した。氷上で超音波粉砕した後に、溶解細胞を14,000×gで1分間遠心分離し、上清をNi樹脂Novagenと混合し、次いで4°Cで30分間インキュベートした。Ni樹脂を遠心分離することにより沈殿させ、上記の変性溶液で2回洗浄した。最後に、His標識タンパク質を、上記樹脂から0.3MNaClおよび0.5Mイミダゾールを補足した50mMリン酸Na緩衝液を使用して2回溶出した。分画し、溶出した試料のアリコートをSDS-PAGEで分離した図20。約100kDaの明瞭なバンドLOX-1対応する、および約66kDaの明瞭なバンド切断LOX-1の計算質量に対応するが、pETL1およびpETL2それぞれを有する細胞から得られた。pET19bを有する細胞は、溶出した画分にバンドを生じなかった。LOX-1の切断バージョンは不活性である:pET19b、pETL1およびpETL2を有するE.coliBL21を、標準LB培地に接種し、37°Cで2時間増殖させた。その後に、1mMIPTGを加えて異種遺伝子の発現を誘導し、培養物を20°Cで一夜増殖させた。この細胞を14,000×gで1分間遠心分離することにより回収した。得られた細胞ペレットをBugBusterとBenzonaseとの混合物Novagenに再懸濁することによって、細胞溶解液を得た。LOX活性を、上記溶解液中で、6.25mM3-ジメチルアミノ安息香酸、0.3125mMリノール酸、0.1mM3-メチル-2-ベンゾチアゾリンヒドラゾンおよび0.05mg/mlヘモグロビンを含有するリポキシゲナーゼアッセイ試薬を使用して測定した。180μlの上記試薬を10μlのそれぞれの細胞溶解液と混合し、室温で10分間インキュベートした。インキュベーション中に生成したインダミンの量595nmでの吸光度として分光光度分析により決定されたは、細胞溶解液のリポキシゲナーゼ活性に対応する。pETL1を用いて形質転換した細胞His標識LOX-1を生成するが大きなLOX-1活性を示したのに対し、変異体D112特異的切断LOX-1を生成する細胞は、ベクターのみを用いて形質転換したコントロール細胞と同じLOX活性を有していた表8。これは、オオムギ変異体D112の切断LOX-1が不活性であることを実証している。実施例16トランスジェニックオオムギ植物プラスミド構築:遺伝子配列を、標準プラスミドベクター例えば、pUC18のポリリンカー領域に挿入する。この挿入断片を図21に列挙する。1つの構築物図21Aでは、トウモロコシユビキチン-1プロモーターChristensenら,1992;Jensenら,1996同じ遺伝子のイントロン1を含むは、選択可能なマーカーのホスフィノトリシンphoshinothricinアセチルトランスフェラーゼPATをコードするbar遺伝子Whiteら,1990の転写を導く。LOX-1の遺伝子のセンス抑制sensesuppressionのために設計した第2の構築物DoughertyおよびParks,1995において、オオムギLOX-1のオープンリーディングフレームを、トウモロコシユビキチン-1プロモーターおよびイントロン1の下流に直接に挿入した図21B。LOX-1のオオムギ遺伝子の発現をサイレンシングするための構築物を図21Cに示す。オオムギ細胞中のこの構築物の発現は、イントロンがスプライスされたヘアピンRNAの形成によって上記遺伝子の完全なサイレンシングを与え、この構築体をSmithら2000年による刊行物の図1aに詳述されたデータに従って設計する。具体的には、図21Cで構築物のイントロン1と表される配列は、Smithら前出による刊行物の図1aに示されるイントロン配列と同じである。図21Cにおける構築物のセンスおよびアンチセンスアームは、オオムギLOX-1をコードするオープンリーディングフレームのセグメントを含む同じ約200bpの長さの断片の反対方向を表し、上記のリーディングフレームのセグメントは、LOX-1のオープンリーディングフレームのどこかに配置される。あるいは、200bpの長さの配列を、LOX-1をコードするオオムギ遺伝子の終止コドンの下流の配列から選択する。トランスジェニック植物の形質転換および再生:品種GoldenPromiseの温室で育てた供与体オオムギ植物由来の成熟オオムギ胚を、LOX-1をコードするオオムギ遺伝子を共抑制するための図21A、Bに示される挿入断片を含むプラスミドの混合物、および上記遺伝子をサイレンシングするための図21A、Cに示されるプラスミドの混合物と衝突させた。形質転換、形質転換細胞の選択、およびトランスジェニック植物の繁殖を、WanおよびLemaux1994およびJensenら前出によって詳述されたようにして行った。トランスジェニック植物を、数世代にわたって育てるか、または異なるオオムギ品種を用いて受粉させ、次いで所望の表現型を有する子孫植物を同定した。2世代またはそれ以上の世代は、所望の表現型特性の発現が安定的に維持され、遺伝することを確実にするために生育させてもよい。種子を収穫して、所望の表現型特性が達成されていることを調べた。LOX-1をコードするオオムギ遺伝子の共抑制またはサイレンシングの効果を調べるために、トランスジェニック穀粒を、本明細書の実施例1に詳述したように、最初にLOX-1由来の酵素活性について分析した。その後に、LOX-1活性を有していないかまたはほとんど有していないトランスジェニック穀粒を、本明細書の実施例5および実施例6でヌル-LOX-1穀粒について詳述したように麦芽製造および醸造実験で調べた。さらに、トランスジェニック穀粒の抽出物を、アスペルギルス属真菌の増殖に対する負の効果を有する穀粒を同定するために、Kellerの米国特許第5,942,661号に記載の方法を使用して分析した。実施例17グリーンノート化合物グリーンノート化合物の製造プロセスは、iヌル-LOX-1オオムギ穀粒を微粉末に変える工程;ii得られた粉末を水または特定の緩衝液に懸濁する工程;iii得られた懸濁物をインキュベートする工程。あるいは、得られた粉末懸濁物を、a脂肪酸リノール酸またはリノレン酸あるいはこれらの混合物;またはb13-HPODEまたは13-HPOTEあるいはこの両方に特異性を有するヒドロペルオキシドリアーゼ酵素;またはc上記脂肪酸と上記酵素とを含有する混合物と反応させる工程;iv得られるアルデヒドをアルコールデヒドロゲナーゼと反応させる工程;vアルデヒドまたはアルコールを精製し、そして芳香剤または香味組成物の有用な調製物を調製する工程を包含する。実施例18LOX-1インヒビター組換えLOX-1の新たに調製した溶液を分析のために使用した。この実験では、100mlのAB3増殖培地100μg/mlのアンピシリンを補足したを供給業者Remelによる推奨を使用して調製し、次いでプラスミドpETL1Hisタグ付きLOX-1をコードする;実施例15を参照のことを用いて形質転換したE.coliBL21DE3pLysS細胞の一夜培養物5mlを接種した。得られた細菌培養物を、細胞密度がOD600=0.8に達するまで37°Cで増殖させた。培養物を20°Cで30分間インキュベートし、次いで0.4mMIPTGを補足して異種遺伝子の発現を誘導し、20°Cで一夜インキュベートした。培養物の細胞を、15分間遠心分離することによってペレット化し、5mlのBugBusterHTNovagenに再懸濁し、穏やかに振盪しながら20分間インキュベートして核酸をハイブリダイズさせた。その後に、細胞砕片を遠心分離により取り除き、その上清を0.45μm濾紙に通して濾過することによりきれいにし、同容量の結合用緩衝液0.3MNaCl、10mMイミダゾールを補足した50mMリン酸Na緩衝液、pH7.5に加えた。得られた抽出物を、製造業者の推奨に従ってHisTrapHPカラムAmershamBiosciencesに加え、洗浄用緩衝液[イミダゾール]=150mMである以外は上記の結合用緩衝液と同じで1回洗浄し、結合されたタンパク質を溶出用緩衝液[イミダゾール]=500mMである以外は上記の結合用緩衝液と同じを用いて溶出した。洗浄液および溶出液のタンパク質を含有する画分1mlのアリコート3μlを、SDS-PAGEで分析し図22A、溶出液2の画分1mlが約0.7mgの組換えLOX-1を含有することを示した。次いで、精製LOX-1をアッセイに使用して、選択したLOXインヒビターが酵素活性を低減するか否かを決定した。最初に、リノール酸の原液実施例9に詳述したように調製したを、その初期濃度の1/10まで希釈し、2.4mMリノール酸の溶液を得た。そのアリコート45μlに、0mM、5mM、12mMおよび24mMの没食子酸オクチル、またはNDGA推定されるLOX-1インヒビターを含有するエタノール溶液5μlを補足した。リノール酸-インヒビター混合物のアリコート10μlを、100mMNa-リン酸緩衝液pH6.0990μlに加え、20°Cで1分間インキュベートし、その後に5μlの組換えLOX-1溶出液2、上記を参照のことを加えた。LOX-1の添加の後に、A254を3分間にわたって記録した。LOX-1酵素活性を、時間に対してプロットしたA254の傾きのグラフとして測定した。結果を図22Bに要約する。この結果は、インヒビターのマイクロモル濃度でのLOX-1の著しい阻害を示す。実施例19没食子酸オクチルLOX-1インヒビターを用いるマッシング工程オオムギ品種Barkeの麦芽25gを含有するか、またはヌル-LOX-1変異体D112の麦芽25gを含有する100mlの小規模のマッシング工程を実施例5に記載の装置と同様の装置を使用して行った。マッシング工程の開始mashing-inは37°Cで15分間であり、糖化は68°Cで30分間であり、マッシング工程の終了mashing-offは77°Cで10分間であり、次いで麦芽汁の最終煮沸は60分間であり;温度シフトは1分当たり1°Cに調節した。LOX-1インヒビターの存在下でのマッシング工程の効果を試験するために、オオムギ品種Barkeの麦芽を用いたマッシュに、マッシング工程の開始時に0.5mM没食子酸オクチルを補足した。平行操作のマッシング工程は、没食子酸オクチルを添加せずにオオムギ品種Barkeの麦芽を用いた実験、および0.5mM没食子酸オクチルの存在下または非存在下でのヌル-LOX-1オオムギ変異体D112の麦芽を用いたマッシング工程を包含する。4回のマッシング工程の全ての試料アリコートを、15分のマッシング工程の開始工程後の麦芽汁煮沸工程の後に回収し、次いで実施例6に記載のようにしてT2Nレベルを決定した。結果を図23に要約する。T2Nに著しい減少が、没食子酸オクチルの存在下でオオムギ品種Barkeの麦芽を用いたマッシング工程の麦芽汁試料で、マッシング工程開始後に分析した試料および煮沸麦芽汁の試料の両方で観察した。両方の種類の麦芽の煮沸麦芽汁中のT2Nの濃度が同様のレベルに達したことは注目に値する。要するに、マッシュにマッシングする工程中にLOX-1インヒビターの没食子酸オクチルを補足すると、T2Nのレベルの減少を特徴とする麦芽汁の新規の製造法が提供される。表1.原料変異体M3世代および後代M4世代およびM5世代の胚抽出物中の全LOX活性表2.作物学的性能の比較a0~9の尺度但し、0は感染または倒伏無しを表し、そして9は極端な感染または倒伏を表すb2つの異なる場所での3回反復の相対平均収量表3.パイロット麦芽製造試験後の分析表4.変異体D112の生成物中のT2Nの減少レベル表5.香味に対するビール貯蔵の効果a評価の尺度-0:存在しない;1:弱い;2:目立つ程度;3:中程度;4:強い;5:極端。低い値が好ましいb評価の尺度は1~5である;高い値が好ましいnd=測定されなかった。表6.標準オオムギおよび変異体D112の麦芽から製造したビール中のTHA表7.市販ビール中のTHA表8.LBおよびIPTG中で一晩増殖させた下記に示したベクターを有する細胞からの粗製細胞抽出物由来のリポキシゲナーゼ活性a結果は示した変数を有する4つの個々の測定の平均値として示す。表9.配列表8.寄託情報CarlsbergA/S所有のオオムギ変異体D112上記に開示しかつ添付の特許請求の範囲に列記したの寄託は、アメリカンタイプカルチャーコレクションATCC、10801UniversityBoulevard、Manassas、Va.20110、USAになされた。変異体D112の寄託の日は、2003年9月11日であり、本出願の出願日の前から、CarlsbergA/Sでの寄託から採取された2,500穀粒からなる。変異体A618の寄託の日は、2003年10月13日であり、本出願の出願日の前から、CarlsbergA/Sでの寄託から採取された2,500穀粒からなる。これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタベスト条約およびその規則ブダベスト条約の規定の下になされた。これは、寄託の日から30年間の寄託物の生存培養物の保管を保障する。寄託は試料の生存の表示の提供を含む連邦法施行規則第37巻1.801-1.809の要件の全てを満たすことが意図される。変異体D112については、ATCC受託番号はPTA-5487である。変異体A618については、ATCC受託番号はPTA-5584である。寄託材料のアリコートは、ATCCから、受託番号を特定することによって、そしてATCCによって課され標準的な制限を受け入れることによって得ることができる。しかし、寄託の利用可能性は、政府の行為によって許可された特許権の減損において対象発明を実施するためのライセンスという性質ではないことが理解されるべきである。本出願全体を通じて、種々の刊行物、特許および特許出願が参照される。これらの刊行物の開示は全体として、本発明が関係する技術の状態をより詳しく述べることを目的として、本出願明細書に参考として援用される。本発明の上記の説明は、例示および説明のための模範である。種々の改変が本発明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解されるべきである。従って、以下の特許請求の範囲は、このような改変を包含すると解釈されることが意図される。参考文献特許文献他の刊行物[配列表]"