iリンパ腫または白血病に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原、ii前記イディオタイプ抗原と連結したCD40モノクローナル抗体アジュバントまたはそのCD40結合性断片;ならびにiii連結したイディオタイプ抗原およびCD40モノクローナル抗体またはそのCD40結合性断片アジュバントに対する免疫応答を増強する第2のアジュバントを含むワクチン。前記第2のアジュバントが、GMCSF、インターフェロンガンマ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターロイキン12、インターロイキン23、インターロイキン17、インターロイキン2、インターロイキン1、TGF、TNFα、およびTNFβからなる群から選択されるサイトカインからなる群から選択される、請求項1に記載のワクチン。前記アジュバントが、CpGオリゴヌクレオチド、フラジェリン、モノホスホリルリピドA、ポリI:Cおよびそれらの誘導体などのTLRアゴニストである、請求項1に記載のワクチン。前記アジュバントが、ポリI:Cである、請求項3に記載のワクチン。前記アジュバントが、ムラミルジペプチドMDPおよび/またはトレハロースジコリノミコラートTDMおよび/またはモノホスホリルリピドA[MPL]などの細菌細胞壁誘導体である、請求項1に記載のワクチン。前記アジュバントが、MPLである、請求項5に記載のワクチン。前記イディオタイプ抗原が、前記イディオタイプ抗原のFab断片またはFab2’断片を含む、またはそれからなる、請求項1から6までのいずれか一項に記載のワクチン。iリンパ腫または白血病に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原;ii前記イディオタイプ抗原と連結したCD40モノクローナル抗体アジュバントまたはそのCD40結合性断片;ならびにiiiリンパ腫または白血病の治療において使用するための、連結したイディオタイプ抗原およびCD40モノクローナル抗体またはそのCD40結合性断片アジュバントに対する免疫応答を増強する第2のアジュバントを含むワクチン。前記リンパ腫または白血病が、B細胞リンパ腫または白血病である、請求項8に記載の使用。前記B細胞リンパ腫が、慢性リンパ球性白血病、B細胞前リンパ球性白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ球白血病、B細胞前リンパ球性白血病、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、骨髄腫、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病/小リンパ球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫例えば、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症など、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞新生物、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、MALTリンパ腫とも称される節外周辺帯B細胞リンパ腫、節性辺縁帯B細胞リンパ腫NMZL、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、縦隔胸腺大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫/白血病からなる群から選択される、請求項9に記載の使用。前記リンパ腫が、免疫不全関連リンパ腫である、請求項8に記載の使用。前記免疫不全関連リンパ腫がHIV関連である、請求項11に記載の使用。前記免疫不全関連リンパ腫が移植関連である、請求項11に記載の使用。前記免疫不全関連リンパ腫が、メトトレキサート治療の結果である、請求項11に記載の使用。i骨髄腫に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原;ii前記イディオタイプ抗原と連結したCD40モノクローナル抗体アジュバントまたはそのCD40結合性断片;ならびにiii骨髄腫の治療において使用するための、連結したイディオタイプ抗原およびCD40モノクローナル抗体またはそのCD40結合性断片アジュバントに対する免疫応答を増強する第2のアジュバントを含むワクチン。リンパ腫の予防法または治療に適したワクチンを製造する方法であって、iリンパ腫または白血病を有する、またはそれにかかりやすい対象からイディオタイプ抗原を単離するステップ;ii前記イディオタイプ抗原をCD40モノクローナル抗体またはそのCD40結合性断片アジュバントと連結して複合体を形成し、場合によって、連結した複合体を単離するステップ;およびiii少なくとも1種の追加的なアジュバントを伴った、連結した抗原/アジュバント複合体の調製物を形成するステップを含む方法。リンパ腫の予防法または治療に適したワクチンを製造する方法であって、iリンパ腫の細胞を含む単離された生体試料を用意するステップ;iiCD40モノクローナル抗体を産生する単離されたハイブリドーマ細胞を用意するステップ;iiiリンパ腫の細胞と前記ハイブリドーマ細胞系との融合を促進してハイブリッド細胞を形成するのに適した調製物を形成するステップ;iv前記ハイブリッド細胞を、1つの免疫グロブリンがCD40に対して特異的であり、第2の免疫グロブリンがリンパ腫または白血病のイディオタイプである少なくとも2つの免疫グロブリンを含むモノクローナル抗体についてスクリーニングするステップ;およびv連結した抗原/アジュバント複合体と、少なくとも1種の追加的なアジュバントとの調製物を形成するステップを含む方法。前記第2のアジュバントが、GMCSF、インターフェロンガンマ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターロイキン12、インターロイキン23、インターロイキン17、インターロイキン2、インターロイキン1、TGF、TNFα、およびTNFβからなる群から選択されるサイトカインからなる群から選択される、請求項16または17に記載の方法。前記アジュバントが、CpGオリゴヌクレオチド、フラジェリン、モノホスホリルリピドA、ポリI:Cおよびそれらの誘導体などのTLRアゴニストである、請求項16または17に記載の方法。前記アジュバントが、ポリI:Cである、請求項19に記載の方法。前記アジュバントが、ムラミルジペプチドMDPおよび/またはトレハロースジコリノミコラートTDMおよび/またはモノホスホリルリピドA[MPL]などの細菌細胞壁誘導体である、請求項16または17に記載の方法。iリンパ腫に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原;およびiiリンパ腫の治療において使用するための、イディオタイプ抗原に対する免疫応答を増強するアジュバントを含むワクチン。前記アジュバントが、GMCSF、インターフェロンガンマ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターロイキン12、インターロイキン23、インターロイキン17、インターロイキン2、インターロイキン1、TGF、TNFα、およびTNFβからなる群から選択されるサイトカインからなる群から選択される、請求項22に記載のワクチン。前記アジュバントが、CpGオリゴヌクレオチド、フラジェリン、モノホスホリルリピドA、ポリI:Cおよびそれらの誘導体などのTLRアゴニストである、請求項22に記載のワクチン。前記アジュバントがポリI:Cである、請求項22に記載のワクチン。前記アジュバントが、ムラミルジペプチドMDPおよび/またはトレハロースジコリノミコラートTDMおよび/またはモノホスホリルリピドA[MPL]などの細菌細胞壁誘導体である、請求項22に記載のワクチン。前記アジュバントがMPLである、請求項26に記載のワクチン。上記の抗イディオタイプワクチンを含めた、イディオタイプに基づくワクチンが当技術分野で公知である。しかし、これらのワクチンには問題が伴う。第1に、リンパ腫の患者に対して、イディオタイプはその個体の腫瘍に対して独特であると思われるので、ワクチンを個別に作製しなければならず、また、多くの場合、所望のイディオタイプを分泌するハイブリドーマを作製するステップ、免疫グロブリンを精製するステップ、および、次いでKLHなどのタンパク質担体とコンジュゲートするステップを伴うワクチンの製剤化には数ヶ月かかり得る。第2に、ヒト免疫グロブリンは本質的にヒトにおける免疫原性が低く、したがって、イディオタイプに対する免疫応答を増大させるために担体とコンジュゲートさせても、抗Id抗体応答が弱い傾向がある実際、コンジュゲートに対する応答の大部分は、免疫原性の高い担体タンパク質を対象とする。第3に、マウスおよびヒトの両方において、イディオタイプタンパク質に対するCD4T細胞およびCD8CTL応答の両方が、治療反応を媒介することにおいて重要であり得、KLHなどの担体とコンジュゲートすることはCTL応答を生成するための最も効率的な手段ではないことが示されている。本開示は、リンパ腫の予防的な治療および治療的な治療のためのワクチンおよび治療レジメンに関する。本発明の態様によると、iリンパ腫に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原;ii前記イディオタイプ抗原と連結したCD40モノクローナル抗体アジュバント、またはそのCD40結合性断片;ならびにiii連結したイディオタイプ抗原およびCD40モノクローナル抗体アジュバントに対する免疫応答を増強する第2のアジュバントを含むワクチンが提供される。CD40モノクローナル抗体が当技術分野で公知である。例えば、US2009/007471[その内容全体、特に前記抗体の可変領域のアミノ酸配列が参照により組み込まれる]には、本発明による、図12に開示されている配列で表されるワクチンにおいて使用するのに適したヒト化抗ヒトCD40およびキメラ抗ヒトCD40が開示されている。本発明の好ましい実施形態では、前記第2のアジュバントは、GMCSF、インターフェロンガンマ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターロイキン12、インターロイキン23、インターロイキン17、インターロイキン2、インターロイキン1、TGF、TNFα、およびTNFβからなる群から選択されるサイトカインからなる群から選択される。本発明の別の代替的な実施形態では、前記アジュバントは、TLRアゴニスト、例えば、CpGオリゴヌクレオチド、フラジェリン、モノホスホリルリピドA、ポリイノシンポリシチジン酸[ポリI:C]およびそれらの誘導体などである。本発明の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、ポリI:Cである。ポリI:Cは、B細胞および樹状細胞によって発現されるToll様受容体TLR3に結合するアジュバントである。本発明の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、細菌細胞壁誘導体、例えば、ムラミルジペプチドMDPおよび/またはトレハロースジコリノミコラートTDMおよび/またはモノホスホリルリピドA[MPL]などである。本発明の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、MPLである。アジュバントは、免疫細胞の活性を調節することによって抗原に対する特異的な免疫応答を増大させる物質または手順である。アジュバントの例としては、単に例として、同時刺激分子に対するアゴニスト抗体、フロイントアジュバント、ムラミルジペプチド、リポソーム、ミョウバン、QS21が挙げられる。したがって、アジュバントは免疫調節物質である。担体は、第2の分子に結合すると、それに対する免疫応答を増大させる免疫原性分子である。担体という用語は、以下のように解釈される。担体は、第2の分子に結合すると、それに対する免疫応答を増大させる免疫原性分子である。一部の抗原は、本来免疫原性ではないにもかかわらず、キーホールリンペットヘモシアニンまたは破傷風トキソイドなどの外来タンパク質分子と結びつくと抗体応答を生成することができ得る。そのような抗原は、B細胞エピトープを含有するが、T細胞エピトープは含有しない。そのようなコンジュゲートのタンパク質部分担体タンパク質により、ヘルパーT細胞を刺激するT細胞エピトープが提供され、今度は、それによって抗原に特異的なB細胞が刺激されて血漿細胞に分化し、抗原に対する抗体を産生する。ヘルパーT細胞は、細胞傷害性T細胞などの他の免疫細胞も刺激し、担体は、細胞に媒介される免疫ならびに抗体の生成において類似の役割を果たし得る。T細胞エピトープを欠く特定の抗原、例えば、反復B細胞エピトープを有するポリマーなど例えば、細菌性多糖類は、本来、限られた程度に免疫原性である。これらは、Tに依存しない抗原として公知である。そのような抗原は、はるかに強力な抗体応答を引き出す状況の下で、破傷風トキソイドなどの担体と結びつけることが有益である。本発明の好ましい実施形態では、前記イディオタイプ抗原は、前記イディオタイプ免疫グロブリンのFab断片またはFab2’Fd断片を含む、またはそれからなる。イディオタイプ抗原は、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の可変領域、すなわちFab、Fab2’、Fd断片内にあってよい、またはそれどころか、重鎖可変領域および軽鎖可変領域と別の抗体の定常領域との間のキメラであってよい。本発明の態様によると、iリンパ腫に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原;ii前記イディオタイプ抗原と連結したCD40モノクローナル抗体アジュバントまたはそのCD40結合性断片;およびiiiリンパ腫の治療において使用するための、連結したイディオタイプ抗原とCD40モノクローナル抗体アジュバントに対する免疫応答を増強する第2のアジュバントを含むワクチンが提供される。本発明の好ましい実施形態では、前記リンパ腫は、B細胞リンパ腫である。本発明の好ましい実施形態では、前記B細胞リンパ腫は、慢性リンパ球白血病、B細胞前リンパ球性白血病、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、骨髄腫、B細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病/小リンパ球性リンパ腫、B細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫例えば、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症など、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞新生物、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、MALTリンパ腫とも称される節外周辺帯B細胞リンパ腫、節性辺縁帯B細胞リンパ腫NMZL、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、縦隔胸腺大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫/白血病からなる群から選択される。本発明のさらに好ましい実施形態では、前記リンパ腫は、ホジキンリンパ腫である。本発明の代替の好ましい実施形態では、前記リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。本発明のさらに好ましい実施形態では、前記リンパ腫は、免疫不全関連リンパ腫である。本発明の好ましい実施形態では、前記免疫不全関連リンパ腫は、HIV関連である。本発明の好ましい実施形態では、前記免疫不全関連リンパ腫は、移植関連である。本発明のさらに好ましい実施形態では、前記免疫不全関連リンパ腫は、メトトレキサート治療の結果である。本発明の別の態様によると、i骨髄腫に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原;ii前記イディオタイプ抗原と連結したCD40モノクローナル抗体アジュバント、またはそのCD40結合性断片;ならびにiii骨髄腫の治療において使用するための、連結したイディオタイプ抗原およびCD40モノクローナル抗体またはそのCD40結合性断片アジュバントに対する免疫応答を増強する第2のアジュバントを含むワクチンが提供される。本発明のワクチンまたはワクチンを含む医薬組成物を投与する場合、それらは、薬学的に許容される調製物で投与する。そのような調製物は、常套的に、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝剤、保存料、適合性の担体、補足的な免疫増強剤、および場合によって、本発明のワクチンとは別に、または、組み合わせが適合する場合、組み合わせた調製物で投与することができる化学療法剤などの他の治療剤を含有してよい。本発明のワクチンは、注射を含めた任意の従来の経路によって、またはある期間にわたる段階的な注入によって投与することができる。投与は、例えば、経口的、静脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、皮下、または経皮的であってよい。本発明の組成物は、有効量で投与する。有効量は、単独で、または別の用量と一緒に、所望の免疫学的応答を生じさせる組成物の量である。リンパ腫を治療する場合では、所望の応答は、疾患の進行を阻害することである。これは、単に疾患の進行を一時的に遅くすることを含んでよいが、疾患の進行を恒久的に停止することを含むことがより好ましい。これは、常套的な方法によってモニターすることができる。前述の方法において使用するワクチンは、好ましくは、滅菌されており、所望の応答を生じさせるための有効量を患者に投与するのに適した重量または体積の単位で含有する。応答は、例えば、腫瘍の退縮、疾患の症状の減少、アポトーシスの調節などを決定することによって測定することができる。ワクチンを投与するための、投与量、注射のスケジュール、注射する部位、投与形式例えば、腫瘍内などが前述のものと異なる他のプロトコールは当業者に公知になる。例えば、ヒト以外の哺乳動物への、試験目的または獣医学的な治療目的での組成物の投与は、上記と実質的に同じ条件下で行う。対象は、本明細書で使用される場合、哺乳動物、好ましくはヒトであり、非ヒト霊長類、雌ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコまたはげっ歯類を含む。本発明の別の態様によると、リンパ腫の予防法または治療に適したワクチンを製造する方法であって、iリンパ腫を有する、またはそれにかかりやすい対象からイディオタイプ抗原を単離するステップ;ii前記イディオタイプ抗原をCD40モノクローナル抗体アジュバントまたはそのCD40結合性断片と連結して複合体を形成し、場合によって、連結した複合体を単離するステップ;およびiii少なくとも1種の追加的なアジュバントを伴った、連結した抗原/アジュバント複合体の調製物を形成するステップを含む方法が提供される。本発明の別の態様によると、リンパ腫の予防法または治療に適したワクチンを製造する方法であって、iリンパ腫の細胞を含む単離された生体試料を用意するステップ;iiCD40モノクローナル抗体またはそのCD40結合性断片を産生する単離されたハイブリドーマ細胞を用意するステップ;iiiリンパ腫の細胞と前記ハイブリドーマ細胞系との融合を促進してハイブリッド細胞を形成するのに適した調製物を形成するステップ;iv前記ハイブリッド細胞を、1つの免疫グロブリンまたは部分がCD40に対して特異的であり、第2の免疫グロブリンまたは部分がリンパ腫のイディオタイプである少なくとも2つの免疫グロブリンまたはその抗原結合部分を含むモノクローナル抗体についてスクリーニングするステップ;およびv連結した抗原/アジュバント複合体と、少なくとも1種の追加的なアジュバントとの調製物を形成するステップを含む方法が提供される。本発明の好ましい方法では、前記第2のアジュバントは、GMCSF、インターフェロンガンマ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターロイキン12、インターロイキン23、インターロイキン17、インターロイキン2、インターロイキン1、TGF、TNFα、およびTNFβからなる群から選択されるサイトカインからなる群から選択される。本発明の別の代替の方法では、前記アジュバントは、TLRアゴニスト、例えば、CpGオリゴヌクレオチド、フラジェリン、モノホスホリルリピドA、ポリI:Cおよびそれらの誘導体などである。本発明の好ましい方法では、前記アジュバントは、ポリI:Cである。本発明の好ましい方法では、前記アジュバントは、ムラミルジペプチドMDPおよび/またはトレハロースジコリノミコラートTDMおよび/またはモノホスホリルリピドA[MPL]などの細菌細胞壁誘導体である。本発明の好ましい方法では、前記アジュバントは、MPLである。本発明の態様によると、iリンパ腫に罹患している患者から単離されたイディオタイプ抗原;およびiiリンパ腫の治療において使用するための、イディオタイプ抗原に対する免疫応答を増強するアジュバントを含むワクチンが提供される。本発明の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、GMCSF、インターフェロンガンマ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターロイキン12、インターロイキン23、インターロイキン17、インターロイキン2、インターロイキン1、TGF、TNFα、およびTNFβからなる群から選択されるサイトカインからなる群から選択される。本発明の別の代替の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、CpGオリゴヌクレオチド、フラジェリン、モノホスホリルリピドA、ポリI:Cおよびそれらの誘導体などのTLRアゴニストである。本発明の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、ポリI:Cである。本発明の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、ムラミルジペプチドMDPおよび/またはトレハロースジコリノミコラートTDMおよび/またはモノホスホリルリピドA[MPL]などの細菌細胞壁誘導体である。本発明の好ましい実施形態では、前記アジュバントは、MPLである。本明細書の説明および特許請求の範囲全体を通して、含むcompriseおよび含有するcontainという単語、およびその単語の変形、例えば、含むことcomprisingおよび含むcomprisesは、含むが、これに限定されないincludingbutnotlimitedtoを意味し、他の部分、添加物、構成成分、整数またはステップを排除することを意図しないそして、排除しない。本明細書の説明および特許請求の範囲全体を通して、単数形は、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、複数形を包含する。具体的には、不定冠詞が使用されている場合、本明細書は、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、単数だけでなく複数も意図していると理解されるべきである。本発明の特定の態様、実施形態または実施例と併せて記載されている特徴、整数、特性、化合物、化学的部分または化学基は、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態または実施例に、それに適合しない場合を除き、適用可能であると理解されるべきである。ここで、本発明の実施形態を、単に例として、以下の図面を参照しながら説明する。材料および方法コンジュゲートするためのイディオタイプタンパク質の作製リンパ腫ワクチンまたは白血病ワクチンに組み入れるための腫瘍イディオタイプタンパク質は、2つの一般の方法のうちの1つによって得ることができる。どちらの場合でも、腫瘍細胞は、まず生検によって得られる。第1の方法は、腫瘍細胞をヒト/マウスヘテロハイブリドーマまたは骨髄腫株などの同様の不死化細胞株と融合して、別のハイブリドーマを作製し、次いでそれを、腫瘍イディオタイプタンパク質の分泌に基づいて選択する、ハイブリドーマレスキューである。次いで、選択されたハイブリドーマを組織培養物中、通常バイオリアクター内で成長させて上清を得、それからイディオタイプタンパク質を精製する123。第2の方法は、組換えIdの作製である。この方法では、Idを含有し腫瘍に特異的な免疫グロブリンの重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方のcDNA配列を、PCRなどの標準の分子生物学的方法によってクローニングする。次いで、クローニングされた配列の両方を、共有されている免疫グロブリン定常領域の配列を含有するプラスミドに挿入し、最終的に、完全なプラスミドを細菌、哺乳動物の細胞、昆虫細胞、酵母細胞またはタバコ植物体などの種々の生きている宿主に形質導入する。その後、Idタンパク質を培養物の上清またはトランスフェクトされた細胞から精製する4。コンジュゲートの調製A20イディオタイプタンパク質A20を、PEG融合によって調製したA20リンパ腫の細胞とP3X63骨髄腫細胞との間のレスキューハイブリドーマのバイオリアクターの上清から、プロテインGアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。A20イディオタイプタンパク質をまず、スルホスクシンイミジル4-[N-マレイミドメチル]-シクロヘキサン-1-カルボキシラートスルホ-SMCCと反応させて、マレイミド活性化A20を作製した。その間に、マウスのIgG1抗CD40モノクローナル抗体またはIgG2a抗CD40モノクローナル抗体どちらもADX40;IgG1変異体およびIgG2a変異体をS-アセチルチオグリコール酸N-スクシンイミジルSATAで処理して、保護されたスルフヒドリル基を導入した。その後、抗体をヒドロキシルアミンで脱アセチル化することにより、遊離のスルフヒドリル基を生成させ、それをA20のマレイミド基と反応させて安定なコンジュゲートを形成した。アイソタイプを適合させた対照抗体を、同様にA20とコンジュゲートした。SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動およびウエスタンブロット法によって架橋を確認した。マウスの免疫化および攻撃6~8週齢の雌のBALB/cマウスに、免疫原を1回または2回、腹腔内注射し、その後、最後の免疫化の少なくとも2週間後に、A20リンパ腫の細胞105個を用いて皮下に攻撃した。腫瘍の成長を、直径15mmになるまでモニターし、その時点でマウスを選別した。生存曲線は、腫瘍が15mmの閾値に到達したマウスに生存しているマウスがいないことを示している。60日目における生存は、目に見える腫瘍が出現していないマウスの百分率を表す。対照ワクチン接種には、アイソタイプを適合させた対照コンジュゲート、キーホールリンペットヘモシアニンKLHとコンジュゲートしたA20、単独のA20抗原、またはリン酸緩衝生理食塩水PBSを含めた。体液性免疫応答A20のFab断片に対するIgGを、酵素結合免疫吸着検定法ELISAによって、ラット抗マウスIgGFc特異的検出抗体JacksonImmunoResearchLaboratoriesを使用して測定した。2回のワクチン接種の効果免疫試験1ADX40IgG1変異体を用いて2ヶ月隔ててワクチン接種し、2回目のワクチン接種の20日後に攻撃したマウス群当たり5匹の腫瘍の体積および生存データが、それぞれ図1Aおよび1Bに示されている。ADX40-A20コンジュゲート群における腫瘍の増生は、アイソタイプ対照、KLH-A20コンジュゲートまたは単独のA20を用いてワクチン接種した動物よりも有意に低くダンの検定後補正Dunn’spost-testcorrectionを用いたクラスカルワリス検定による、p<0.01、また、同様にPBS群よりも有意に低くかったp<0.05。ADX40-A20コンジュゲートで免疫化した群の60日目の生存は、アイソタイプ対照で免疫化した群よりも有意に良かったp=0.048、フィッシャーの正確確率検定が、KLH-A20コンジュゲート、単独のA20抗原、またはPBSを与えた動物よりも生存が高かったにもかかわらず、これは統計的有意性に達しなかった。図2は、2回目のワクチン接種の14日後に誘導された抗A20抗体応答を示している。アイソタイプ対照コンジュゲートは、抗体誘導の点で免疫原性が高かったが、これは、腫瘍の成長の減少または生存の改善に転換されなかった。ADX40-A20コンジュゲートおよびKLH-A20コンジュゲートに対する抗体応答も観察されたが、アイソタイプ対照に対するよりもレベルが低く、これは、腫瘍の増生の阻止が、抗体応答に部分的にしか反映されないことを示している。1回のワクチン接種の効果免疫試験2ADX40IgG1変異体コンジュゲートを用いて一度ワクチン接種し、14日後に攻撃したマウス群当たり10匹の腫瘍の体積および生存データが図3A~Cに示されている。ADX40-A20コンジュゲート群における腫瘍の増生は、どちらの対照群よりも有意に低く、遅かったPBS、p<0.05;対照コンジュゲート、p<0.001;ダンの後補正Dunn’spostcorrectionを用いたクラスカルワリス検定。しかし、ADX40-A20コンジュゲート処置群における60日目における生存は、初期の時点ではコンジュゲート群において生存が良かったが、PBS対照群よりも、有意に良くなかった。コンジュゲートを用いた単回の免疫化により、ADX40-A20処置群において対照の動物よりもわずかに強力な抗体応答がもたらされた図4。IgG1ADX40アイソタイプとIgG2aADX40アイソタイプの比較免疫試験3それぞれ攻撃の14日前に単回のワクチン接種として与えたADX40IgG1変異体およびADX40IgG2a変異体の腫瘍の増生および60日目における生存データの比較が、それぞれ図5Aおよび5Bに示されている。ADX40コンジュゲート変異体の両方で、PBS対照群と比較して初期の腫瘍の成長の遅延および60日目における生存の増加の傾向があったが、ADX40変異体または対照のいずれとの間にも腫瘍の増生または60日目における生存に統計的有意差はなかったクラスカルワリス検定およびカイ二乗検定。組み合わせアジュバントの評価免疫試験4アジュバントであるMPLまたはポリI:CをADX40IgG1変異体-A20コンジュゲートワクチンと組み合わせることの効果を、マウス群当たり5匹に、2週間隔てて2回ワクチン接種し、2週間後に攻撃する攻撃試験において探究した。腫瘍の増生および生存データがそれぞれ図6Aおよび6Bに示されている。コンジュゲートの1回の投薬または2回の投薬のいずれでも、PBS群またはKLHコンジュゲート群のいずれに対しても腫瘍の成長に有意差は導かれなかった。ADX40プラスMPLにより、KLHコンジュゲートと比較してp<0.01およびPBSと比較してp<0.05腫瘍の成長が有意に遅くなった。ADX40プラスポリI:Cにより、PBS群およびKLH群の両方と比較して腫瘍の成長が有意に遅くなったp<0.01。全ての比較は、ダンの後検定Dunn’spost-testを用いたクラスカルワリス検定によった。単独のADX40を1回または2回与えることによって、60日目における生存は、KLH群またはPBS群と比較して有意に改善されなかった。MPLを用いた実験免疫試験5aおよびポリI:Cを用いた実験免疫試験5bを、マウスのより大きな群群当たり10匹を用いて繰り返し、そのデータがそれぞれ図7および8に示されている。ADX40-A20MPLで免疫化したマウスは、腫瘍の成長が、KLH-A20MPLで免疫化したマウスと比較して有意に遅くなったP<0.01、クラスカルワリス検定。MPLとADX40の相加効果の明らかな傾向があったが、これはこの時に統計的に有意ではなかった。しかし、MPLとは異なり、第2の攻撃ではポリI:CはADX40-A20抗腫瘍の効力を有意に増さなかったが、KLH-A20コンジュゲートと組み合わせると、アジュバントのアジュバント効果の傾向があった。臨床的なレジメンを用いた比較免疫試験6および10aADX40とコンジュゲートしたA20Aの効果を、臨床的なイディオタイプリンパ腫ワクチンすなわち、KLHとコンジュゲートし、GM-CSFでアジュバントしたイディオタイプ抗原と一緒に使用するレジメンと類似したレジメンと比較するために、マウス10匹の群に、ADX40-A20、ADX40GM-CSFおよびKLH-A20GM-CSFを2回注射した14日間隔てて。GM-CSFをマウス1匹当たり55ngの用量で、ワクチン接種日から開始して4日連続で皮下に与えたすなわち、臨床的なレジメンと同様。腫瘍の体積および生存データがそれぞれ図9Aおよび9Bに示されている。ADX40コンジュゲートGM-CSF群21日目までおよびADX40コンジュゲート群31日目まででは、腫瘍の成長が有意に遅延し、これは、ADX40コンジュゲートが臨床的なワクチン類似体よりも優れていることを示している。ADX40コンジュゲートおよびADX40コンジュゲートGM-CSFは、対照PBS群に対して有意な生存優位性を有したそれぞれp=0.001およびp<0.03。対照PBS群の生存期間中央値は17日間であった。これは、KLHコンジュゲートGM-CSFでは19.5日間まで増加し、ADX40コンジュゲートGM-CSFおよびADX40コンジュゲートでは、それぞれ24日および31日に増加した。免疫試験10aからのデータ図9Cおよび9Dは、これらの知見を裏付けている。確認実験のためのコンジュゲートの用量を最適化するために、マウス10匹の群に、10μg、20μgまたは50μgのADX40-A20コンジュゲートまたはKLH-A20コンジュゲートを与えた。腫瘍の体積および生存データが図10に示されている。最低用量10μgのADX40-A20コンジュゲートおよび中間の用量20μgのKLH-A20コンジュゲートが最も有効であることが見いだされた。次いで、もっと低い用量範囲のADX40を用いてさらなる実験を実施し、10、5μgのコンジュゲートおよび2.5μgのコンジュゲートを1回または2回投薬した、5μgのADX40コンジュゲートが、1回だけであろうと、2回であろうと、最も有効な用量であると思われた図10。コンジュゲートを2回投薬すると、用量に関係なく、予想通り、1回の投薬よりも良い転帰が生じた。最終的に、異なるマウスイディオタイプタンパク質とのADX40の対照コンジュゲートによっては保護が誘導されず、これは、ADX40ワクチンによって誘導される保護の特異性を示している。腫瘍を皮下移植した3日後最初の実験または3日後および11日後第2の実験に、ADX40-A20コンジュゲートまたはKLH-A20GM-CSFを与えるという2つの治療的なワクチン接種試験を行った。どのワクチンレジメンも、対照と比較して腫瘍の増生または生存に対する有意な効果を有さなかったデータは示していない。これらのデータは、臨床的な設定ではイディオタイプワクチン接種は、化学療法後に寛解の状態にある、疾患の残留が最小限である患者に一般に使用されるので、驚くべきものではない。種々の攻撃実験からの生存データのメタ分析が表1に示されている。ADX40-A20を与えたマウスは、KLH-A20を与えたマウスと比較して生存が有意に改善されたそれぞれ26、2.8;p=0.007。さらに、ADX40-20を与えたマウスの60日目の生存は、KLH-A20プラスGM-CSFの現行の臨床的なレジメンを与えたマウスと同様であった25が、注射は8回ではなく2回であった。最後に、ADX40-A20プラスMPLを与えた動物の生存が他の群を有意に超えたので、追加的なアジュバントをADX40コンジュゲートと組み合わせると相乗効果が見られるとことを示す証拠がある。実施例10は、潜在的な作用様式を例示している。マウスを、ADX40-A20MPLで免疫化し、攻撃の直前に、CD4T細胞またはCD8T細胞のいずれか、またはその両方を枯渇させた。CD4細胞単独の枯渇では、腫瘍の成長または生存率に対する明白な影響はなかった。CD8T細胞の枯渇により、防御が減少し、これは、ADX40MPL保護を媒介することにおけるCD8T細胞の可能性のある役割を示している。CD4細胞およびCD8細胞両方の枯渇により、防御のさらなる減少がみられた;図11。参考文献1.CarrollWLThielemansKDilleyJLevyRMousexhumanheterohybridomasasfusionpartnerswithhumanBcelltumorsJImmunolMethods19868961722.RodriguezCalvilloMInogesSLopezDiazdeCerioAZabaleguiNVillanuevaHBendandiMVariationsinrescuabilityofim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