"モノグリコシル化したインフルエンザウイルスの生産方法であって、該方法は:aマンノシダーゼ阻害剤の効果的な量を有する適切な宿主においてインフルエンザウイルス赤血球凝集素HA抗原を増殖させる工程であって、ここで、前記マンノシダーゼ阻害剤の濃度は、N-グリコシル化経路においてα-マンノシダーゼIを阻害するのに充分である、工程;及びbインフルエンザウイルスHA抗原を回収する工程及びエンドグリコシドEndoHと接触させる工程であって、ここで、EndoHの濃度は、高マンノース型グリカンを除去するのに充分である、工程;並びにcモノグリコシル化したインフルエンザウイルスHA抗原を分離する工程を含むことを特徴とする、方法。前記HA抗原は、高い病原性のH5N1インフルエンザウイルスに由来することを特徴とする、請求項1に記載の方法。高い病原性の前記H5N1インフルエンザウイルスは、NIBRG-14であることを特徴とする、請求項2に記載の方法。前記マンノシダーゼ阻害剤はキフネンシンKifであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記マンノシダーゼ阻害剤はデオキシマンノジリマイシンDMJであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記インフルエンザHA抗原は、細胞培地において組み換えることで生産されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記細胞培地は、MDCK細胞、ベロ細胞、又はPER.C6細胞を含むことを特徴とする、請求項7に記載の方法。α-マンノシンIの前記阻害は、Man9GlcNAc2を有する糖タンパク質をもたらすことを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記インフルエンザHA抗原は、全粒子インフルエンザウイルスを含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記全粒子インフルエンザウイルスは、特定病原体除去SPF発育鶏卵の宿主において増殖することを特徴とする、請求項9に記載の方法。前記キフネンシンは、特定病原体除去SPF発育鶏卵の宿主の尿膜腔に加えられることを特徴とする、請求項10に記載の方法。前記キフネンシンは、組み換え型インフルエンザHA抗原を持つ宿主細胞に加えられることを特徴とする、請求項6に記載の方法。前記キフネンシンは、0.005乃至0.5mg/mlの濃度で加えられることを特徴とする、請求項11又は12に記載の方法。前記インフルエンザHA抗原の回収は、組み替えることで生産されたインフルエンザHA抗原を宿主細胞から分離する工程を含むことを特徴とする、請求項6に記載の方法。前記インフルエンザHA抗原の回収は:インフルエンザウイルスを増殖するのに充分な時間、インキュベートする工程;及びその後、インフルエンザウイルスを含む尿膜液を分離する工程を含むことを特徴とする、請求項10に記載の方法。回収された前記インフルエンザHA抗原は、約0.1乃至約100μg/mLのEndoHにより処置されることを特徴とする、請求項14又は15に記載の方法。モノグリコシル化した前記インフルエンザウイルスは、密度勾配超遠心法を含む方法により分離されることを特徴とする、請求項15に記載の方法。請求項1に記載の方法であって、該方法は更に、限外濾過を含む方法によって、モノグリコシル化したインフルエンザウイルスHA抗原を精製する工程を含むことを特徴とする、方法。前記限外濾過は、0.2μmのフィルタの使用を含むことを特徴とする、請求項18に記載の方法。請求項1に記載の方法であって、該方法は更に、電子顕微鏡検査によって、モノグリコシル化したインフルエンザウイルスを分析する工程を含むことを特徴とする、方法。請求項1に記載の方法であって、該方法は更に、PNGaseによる処置を含む方法によって、モノグリコシル化したインフルエンザウイルスを定量化する工程を含むことを特徴とする、方法。請求項1に記載の方法であって、該方法は更に、SDS-PAGE電気クロマトグラフィーを含む方法によって、モノグリコシル化したインフルエンザウイルスを定量化する工程を含むことを特徴とする、方法。請求項1に記載の方法であって、該方法は更に、質量分析方法を含む方法によって、分離されたモノグリコシル化したインフルエンザウイルスのグリカン組成物を分析する工程を含むことを特徴とする、方法。前記インフルエンザウイルスHA抗原は、モノグリコシル化したインフルエンザウイルスHI、H3、及びH5から成る群から選択されることを特徴とする、請求項1乃至23のいずれかに記載の方法。請求項1乃至24のいずれかに記載の方法によって調製される、モノグリコシル化したインフルエンザウイルスHA抗原全粒子ウイルス又は組み換え体。ワクチンの調製のため、請求項1乃至24のいずれかに記載の方法によって調製される、モノグリコシル化したインフルエンザウイルスHA抗原全粒子ウイルス又は組み換え体の使用。単純化したグリカンを有するウイルスの生産方法であって、該方法は:aグリコシル化阻害剤の効果的な量を有する適切な宿主においてウイルスから抗原を増殖させる工程であって、ここで、前記グリコシル化阻害剤の濃度は、N-グリコシル化経路においてグリコシダーゼを阻害するのに充分である、工程;及びbウイルス抗原を回収する工程及びエンドグリコシダーゼと接触させる工程;並びにc単純化したグリカンによりウイルス抗原を分離する工程を含むことを特徴とする、方法。前記ウイルスは、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、及びフラビウイルスから選択されることを特徴とする、請求項27に記載の方法。前記ウイルスは、HIV、HCV、デング熱ウイルス、西ナイル熱ウイルス、及びインフルエンザウイルスから選択されることを特徴とする、請求項27に記載の方法。前記グリコシダーゼ阻害剤は、キネフシン、オーストラリン、カスタノスペルミン、デオキシノジリマイシン、デオキシマンノジリマイシン、スウェインソニン、マノスタチンAから選択されることを特徴とする、請求項27に記載の方法。前記ウイルスHA抗原は、細胞培地において組み換えることで生産されることを特徴とする、請求項27に記載の方法。前記ウイルス抗原は、全粒子ウイルスを含むことを特徴とする、請求項31に記載の方法。前記全粒子ウイルスは、細胞培地において増殖することを特徴とする、請求項32に記載の方法。単純化した前記グリカンは、モノグリコシレートであることを特徴とする、請求項27に記載の方法。本明細書で使用される用語は一般的に、当該技術分野において、本発明の範囲内で、及び各用語が使用される具体的な文脈において、通常の意味を有する。本発明を説明するために使用される特定の用語は、本発明の説明に関する従事者に追加のガイダンスを提供するため、以下に、又は本明細書の他の場所で議論される。利便性のため、特定の用語は、例えばイタリック体及び/又は引用符を使用して強調され得る。強調表示の使用は、用語の範囲及び意味に影響を及ぼさない;用語の範囲と意味は、強調されてもされなくても、同じ文脈において同じである。同じものは、様々な意味で述べられ得ることが認識されるであろう。結果的に、代替の言語及び同義語は、本明細書で議論される用語の任意の1以上のために使用され、又は、用語が本明細書で詳述又は議論されるかに関わらず、その中に置かれる特段の意味は無い。特定の用語に関する同義語が提供される。1以上の同義語の詳述は、他の同義語の使用を除外しない。本明細書で議論される任意の用語の例を含む、本明細書のあらゆる場所にある例の使用は、説明のためだけのものであり、本発明の及び任意の例示の用語の範囲又は意味を全く制限しない。同様に、本発明は、この明細書で与えられる様々な実施形態に対して制限されない。他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する当業者によって共通して理解されるような、同じ意味を有する。矛盾がある場合、定義を含む本書類によって制御されるであろう。以下の言及は、本発明において使用される用語の多くの一般的な定義を、当業者に提供する:Singletonetal.,DictionaryofMicrobiologyandMolecularBiology2ndEd.1993;TheCambridgeDictionaryofScienceandTechnologyWalkered.,CambridgeUniversityPress.1990;TheGlossaryofGenetics,5thed.,R.Riegeretal.eds.,SpringerVerlag1991;及びHaleMargham,TheHarperCollinsDictionaryofBiology1991。一般的に、本明細書に記載される、細胞及び組織培養、分子生物学、並びにタンパク質及びオリゴ-又はポリヌクレオチド化学及びハイブリダイゼーションと組み合わせて利用される命名法、及びそれらの技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用される。標準的な技術は、組換DNA、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養並びに形質転換例えば、エレクトロポレーション、リポフェクションのために使用される。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様に従って、又は当該技術分野において一般的に達成されるように、或いは本明細書に記載の通りに実行される。本発明の実行は、それとは反対に具体的に示されない限り、当業者の考え得る範囲内で、ウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学及び組換えDNA技術の従来の方法、説明目的のため以下に記載される多くのものを利用するであろう。このような技術は、文献において十分に説明される。例えば、Sambrook,etal.MolecularCloning:ALaboratoryManual2ndEdition,1989;Maniatisetal.MolecularCloning:ALaboratoryManual1982;DNACloning:APracticalApproach,vol.IIID.Glover,ed.;OligonucleotideSynthesisN.Gait,ed.,1984;NucleicAcidHybridizationB.HamesS.Higgins,eds.,1985;TranscriptionandTranslationB.HamesS.Higgins,eds.,1984;AnimalCellCultureR.Freshney,ed.,1986;Perbal,APracticalGuidetoMolecularCloning1984を参照。用語インフルエンザAサブタイプ又はインフルエンザAウイルスサブタイプは交換可能に使用され、赤血球凝集素Hウイルスの表面タンパク質によって特徴づけられるインフルエンザAウイルスの変異体を指し、故に、例えばH1、H3、及びH5などのHの数によって標識化される。加えて、サブタイプは、例えばN1及びN2等のNの数によって示される、ノイラミニダーゼNウイルスの表面タンパク質によって更に特徴づけられ得る。そのため、サブタイプは、例えばH1N1、H5N1、及びH5N2など、HとNの数の両方によって称され得る。用語は具体的に、通常は突然変異の結果から生じ、異なる病原性の特性を示す、各サブタイプ内の全ての株消滅した株を含むを含む。このような株はまた、過去、現在、及び将来全ての分離株を含む、ウイルスのサブタイプの様々な分離株として称されるであろう。従って、この文脈において、用語株及び分離株は、交換可能に使用される。サブタイプは、インフルエンザAウイルスに基づく抗原を含有する。抗原は、赤血球凝集素ウイルスの表面タンパク質に基づき、HA抗原として指定され得る。幾つかの例において、このような抗原は、H1抗原及びH5抗原にそれぞれ指定され得る、特定のサブタイプ例えば、H1サブタイプ及びH5サブタイプなどのタンパク質に基づく。本開示において使用されるように、用語脱グリコシル化した又は部分的にグリコシル化したタンパク質は、タンパク質の十分にグリコシル化した事例のグリカン構造から除去される1以上の糖を有し、且つ、タンパク質がその天然構造/フォールディングを十分に保持する、タンパク質を意味する。脱グリコシル化したタンパク質は、脱グリコシル化処理が、糖タンパク質上に存在する1以上のグリコシル化部位にて、モノグリコシル化、ジグリコシル化、又はトリグリコシル化を残す、部分的にグリコシル化したタンパク質を含む。部分的にグリコシル化したタンパク質は、1以上の糖が各グリコシル化部位にて保持される脱グリコシル化したタンパク質を含み、各部分的なグリコシル化部位は、糖タンパク質の十分にグリコシル化した事例における部位と比較して、より小さなグリカン構造より少量の糖ユニットを含むを含有し、部分的にグリコシル化したタンパク質は、その天然構造/フォールディングを十分に保持する。部分的にグリコシル化したタンパク質は、糖タンパク質の十分にグリコシル化した事例の少なくとも1つのグリコシル化部位のグリカン構造の部分的な脱グリコシル化により、生成される。部分的にグリコシル化したタンパク質はまた、タンパク質のグリコシル化していない部位にグリコシル化を導入することによって生成され、その結果、加えられたグリコシル化配列は、糖タンパク質の十分にグリコシル化した事例における部位にあるグリカン構造よりも小さい。部分的にグリコシル化したタンパク質はまた、ウイルスの糖タンパク質の配列、又はその断片を合成し、配列のグリコシル化部位にあるグリコシル化アミノ酸ユニット例えば、GlcNAc-アルギニン部分を導入することによって生成され、その結果、加えられたグリカン構造は、糖タンパク質の十分にグリコシル化した事例における部位にあるグリカン構造よりも小さい。ウイルス伝播は、インフルエンザのウイルス被膜上にある赤血球凝集素HA糖タンパク質と、宿主細胞表面上にあるシアル酸SA含有グリカンとの間の重大な相互作用によって始まる。この重要な相互作用におけるHAグリコシル化の役割を解明するため、様々な定義されたHAグリコフォームが調製され、それらの結合親和性と特異性は、合成のSAマイクロアレイを使用して試験された。N-グリカン構造の短縮化がSA結合親和性を増加した一方で、異なるSAリガンドに対する特異性が減少した。HA結合エネルギーに対する、SAリガンド構造内にある各単糖及び硫酸塩基の寄与は、定量的に細かく調べられた。硫酸塩基は、十分にグリコシル化したHAへの結合エネルギーにおいて100倍近く2.04kcal/molを加え、そして、モノグリコシル化したHAグリコフォームに二分岐のグリカンを加える。各グリコシル化部位にて、単一のN結合GlcNAcのみを有するHAタンパク質に対して作製した抗体は、誘発された十分にグリコシル化したHAよりも優れた結合親和性及びインフルエンザサブタイプに対する中和活性を示した。故に、ウイルスの表面糖タンパク質上の構造的に不必要なグリカンの除去は、インフルエンザウイルス及び他のヒトウイルスに対するワクチン設計に対し、非常に効果的で一般的な手法である。ポリペプチドのグリコシル化は典型的に、N結合又はO結合の何れかである。N結合は、アスパラギン残基の側鎖への、糖質部分の付着を指す。シークオンは、N結合グリカンと呼ばれる多糖類糖への付着部位としての機能を果たし得るタンパク質における、3つの連続したアミノ酸の配列である。これは、アスパラギンAsnの側鎖における窒素原子を介して、タンパク質に結合される多糖類である。シークオンは、Asn-Xaa-Ser又はAsn-Xaa-Thrの何れかであり、Xaaは、プロリンを除く任意のアミノ酸である。故に、ポリペプチド内の3つのトリペプチド配列の何れかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作成する。O結合グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はトレオニンへの、糖、N-アセチルグルコサミン、ガラクトース、又はキシロースの1つの付着を指すが、5-ヒドロキシプロリン又は5-ヒドロキシリジンも使用され得る。シークオンAsn-X-Ser/Thrは、糖タンパク質へのN結合オリゴ糖の付着に完全に必要とされる一方でMarshallRD,BiochemicalSocietySymposia40,17-261974、その存在は常にグリコシル化をもたらさず、糖タンパク質における幾つかのシークオンはグリコシル化されずに残るCurlingEM,etal.,BiochemicalJournal272,333-3371990。本発明の1つの態様は、単純化した糖質構造を有する非天然の糖タンパク質を生産する方法である。従って、方法は、HIVなどのレトロウイルス、C型肝炎、デング熱、及び西ナイル熱などのフラビウイルスに適用可能である。gp120の分子質量のほぼ半分、ヒト免疫不全ウイルスHIVの受容体結合エンベロープタンパク質は、N結合グリカンから成る。これらグリカンの半分近くは、高マンノース型のものである。これら高マンノースグリカンは、免疫システムのマンノース特異性のレクチンとの相互作用のためHIVを主要な目標にするウイルス表面上にあるマンノース残基の豊富な森forestを供給する。C型肝炎ウイルスHCVエンベロープ糖タンパク質は、一般的にE1及びE2のそれぞれの上にある4及び11のN結合グリカンにより、高度にグリコシル化される。様々なグリカンは、HCVccアセンブリ及び/又は感染性において重要な役割を果たす。E2上の少なくとも5つのグリカンE2N1、E2N2、E2N4、E2N6、及びE2N11を表わすは、抗体中和に対するHCVの感度を強く減少するHelleFetal,JVirol.2010Nov;8422:11905-15。大半のフラビウイルスのEタンパク質は、残基153/154での、及び残基67にある第2グリカンによる4つのデング熱ウイルスDENV血清型の場合において、Asn結合グリコシル化により修飾される。デング熱ウイルスにおいて、Eタンパク質上のN結合グリカンは、高マンノースと複雑なグリカンの混合物である。西ナイル熱ウイルスエンベロープEタンパク質は、残基154にて単一のN結合グリコシル化部位を含有する。これら部位でのグリカンの切除が著しく減少したが、除去されていないため、感染力、単純化したグリコシル化において存在する際に保存された部位にて標的とされるワクチンは、ウイルスにおける突然変異の変動にあまり感度が無い効果的な治療に通じ得る。グリコシダーゼ阻害剤グリコシド加水分解酵素グリコシダーゼ又はグリコシル加水分解酵素とも呼ばれるは、より小さな糖を放出するためにグリコシド結合の加水分解を触媒する。それらは、抗細菌の防衛戦略例えば、リゾチームにおける、病因機構例えば、ウイルスのノイラミニダーゼにおける、及び標準の細胞の機能例えば、N結合糖タンパク質の生合成に関与するマンノシダーゼをトリミングするにおける、セルロース及びヘミセルロースなどのバイオマスの分解を含む性質における役割を有する一般的な酵素である。グリコシルトランスフェラーゼと共に、グリコシダーゼは、グリコシド結合の合成及び破壊のための主要な触媒機構を形成する。グリコシル化の阻害剤は、本発明の方法に従った使用について熟慮される。このような阻害剤の例は、キネフシンKinefusine、オーストラリンAustraline、カスタノスペルミン、デオキシノジリマイシン、デオキシマンノジリマイシン、スウェインソニンSwainsoninne、マノスタチンAなどを含む。オーストラリンは、アルファ-グルコシダーゼアミログルコシダーゼ5.8μMで50の阻害の優れた阻害剤であるが、ベータ-グルコシダーゼ、アルファ-又はベータ-マンノシダーゼ、或いは、アルファ-又はベータ-ガラクトシダーゼを阻害しない、ポリヒドロキシル化したピロリジジンアルカロイドである。カスタノスペルミンは、アルファ-グルコシダーゼ活性を阻害し、グリコーゲン分布を変更する、インドリジンアルカロイドである。カスタノスペルミンはデング熱ウイルス感染を阻害するWhitbyKetal.,JVirol.2005July;7914:8698-8706。N結合オリゴ糖構造の様々なタイプの生合成は、2つの一連の反応に関与する:1ドリコール-PへのGlcNAc、マンノース、及びグルコースの段階的な追加による、脂質結合サッカライド前駆体、Glc3Man9GlcNAc2-ピロホスホリル-ドリコールの形成;及び2膜結合グリコシダーゼによるグルコース及びマンノースの除去、及び、異なる複雑なオリゴ糖構造を生産するためゴルジに局在化されたグリコシルトランスフェラーゼによるGlcNAc、ガラクトース、シアル酸、及びフコースの追加。異なる段階で修飾反応を遮断する阻害剤の使用は、細胞に、変更された糖質構造を有する糖タンパク質を生産させる。アルカロイド様化合物の数は、糖タンパク質処理に関与するグルコシダーゼ及びマンノシダーゼの特異的な阻害剤であると識別された。これら化合物は、阻害の部位に依存して、グルコース含有の高マンノース構造、又は様々な高マンノース或いはハイブリッド鎖を有する糖タンパク質の形成を引き起こすElbeinADFASEBJ.1991Dec;515:3055-3063。N結合糖タンパク質の処理において機能する最初の4つの酵素はグリコシダーゼである。GlcNAc-リン酸転移酵素は、マンノース6-ホスファート決定因子の合成における最初の工程を触媒する。適切な糖質構造は、GlcNAc-リン酸転移酵素により効果的なリン酸化を大きく促進する。リン酸化に結合される糖質構造は、GAA分子上でのマンノース-6-ホスファートシグナルの合成に必要であり、高マンノースN-グリカンである。様々なマンノシダーゼ処理阻害剤が知られている。ロコ草から分離されるスウェインソニンは、ゴルジマンノシダーゼIIの有力な阻害剤であるが、マンノシダーゼ1の効果を有していないと示されたJames,L.F.,Elbein,A.D.,Molyneux,R.J.,andWarren,C.D.1989Swainsonineandrelatedglycosidaseinhibitors.IowaStatePress,Ames,Iowa。デオキシマンノジリマイシンは、ラット肝臓マンノシダーゼIのかなり有力な阻害剤である。無傷の細胞において、デオキシマンノジリマイシンdeoxymannojinimycinは、N結合オリゴ糖の複合型の合成を遮断し、Man7-9GlcNAc2構造を有する糖タンパク質の蓄積を引き起こし、Man9GlcNAc2オリゴ糖が優位を占めるElbein,A.D.,etal.1984Arch.Biochem.Biophys.235,579-588。マノスタチンAは、微生物Streptoverticilliumverticillusによって生産される代謝物質であり、この化合物は、ラットの精巣上体のα-マンノシダーゼの有力な阻害剤であると報告された。Aoyagi,T.,etal.1989J.Antibiot.42,883-889。キフネンシンKifは、放線菌、KitasatosporiakifunenseNo.9482から最初に分離されM.Iwami,O.etal.J.Antibiot.,40,612,1987、1-アミノ-マンノジリマイシンの環式オキサミド誘導体である。キフネンシンは、動物のゴルジ酵素、マンノシダーゼIを阻害する。キフネンシンが1μg/ml以上の濃度で培養された哺乳動物細胞に加えられた時、それは、マンノシダーゼIの阻害に沿って、複合鎖からMan9GlcNAc2構造までの、N結合オリゴ糖の構造における完全な変化を引き起こす。一方、デオキシマンノジリマイシンは、50μg/mlであっても、全ての複合鎖の形成を妨げないElbein,A.D.,etal.1990Kifunensine,apotentinhibitoroftheglycoproteinprocessingmannosidaseI.JBiol.Chem.265,15599-15605。故に、キフネンシンは、最も効果的な糖タンパク質処理阻害剤の1つである。キフネンシンはまた、α-マンノシダーゼの阻害において免疫調節活性を約束すると示した。キフネンシンの合成は、FujisawaPharmaceuticalCo.H.Kayakiri,etal,TetrahedronLett.,31,225,1990;H.Kayakiri,etal.,Chem.Pharm.Bull.,39,1392,1991及びHudlickyetal.J.RoudenandT.Hudlicky,J.Chem.Soc.PerkinTrans.1,1095,1993;J.Rouden,T.etal.,J.Am.Chem.Soc,116,5099,1994の両方によって報告された。キフネンシンKifによる細胞の処置は、それら細胞における糖タンパク質処理の阻害をもたらすElbeinetal1991FASEBJ5:3055-3063;andBischoffetal1990J.Biol.Chem.26526:15599-15605。Kifは、修飾したタンパク質への複雑な糖の付着を遮断する。しかし、十分なKifが、リソソームの加水分解酵素上で糖タンパク質処理を完全に阻害するために利用される場合、結果として生じた加水分解酵素は、GlcNAcリン酸転移酵素に最も効果的な基質でない、マンノース-9の構造を有する。本発明に従って、Kifなどのグリコシダーゼ阻害剤は、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.25、9.5、9.75、及びその間にある全ての値を含む、少なくとも0.01μg/ml乃至少なくとも約500μg/mlの量で、細胞に加えられる。キフネンシンは、N-グリコシル化経路における酵素α-マンノシダーゼIの機能を阻害し、及びMan9GlcNAc2組成物を有する糖タンパク質をもたらす。複雑な糖質構造のレベル及び/又はタイプは、既知の方法を使用して測定され得る。例えば、糖タンパク質及びそれに関連するオリゴ糖は、高マンノースと複素数型オリゴ糖との間で区別するために、エンドグリコシダーゼを使用して特徴化され得るMaleyetal1989Anal.Biochem.180:195-204。ペプチド-N4-N-アセチル-β-グルコサミニルアスパラギンアミダーゼPNGaseFは、アンモニア、アスパラギン酸、及び還元末端上に無傷のdi-N-アセチルキトビオースを有するオリゴ糖をもたらすため、B-アスパルチルグリコシラミン結合にて、アスパラギン結合N結合オリゴ糖を加水分解することが出来る。高マンノース型、ハイブリッド型、ジ-、トリ-、及びテトラ分枝性複合体型、硫酸化及びポリシアル化オリゴ糖が基質であるため、PNGaseの特異性は広い。加えて、α-1,6-マンノースの結合の手armが、付着される別のマンノースを有する場合、endo-B-N-アセチルグルコサミニダーゼHEndoHは、3つのマンノース残基にて処理するハイブリッド含有及びマンノース含有のN結合オリゴ糖の保持において、キトビオースユニットを効果的に加水分解する。複雑なオリゴ糖は、EndoHの消化に耐性がある。糖タンパク質に存在するN結合オリゴ糖のタイプを特徴化するため、タンパク質のアリコートは、還元条件下で、PNGaseF0.5のSDS、1のβ-メルカプトエタノール、50mMのNP-40、50mMのリン酸ナトリウム、pH7.5又はEndoH0.5のSDS、1のB-メルカプトエタノール、50mMのクエン酸ナトリウム、pH5.5により消化され得る。天然の及び消化されたタンパク質はその後、還元条件下でSDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により分析され、相対的な移動度を比較する。糖タンパク質が高度なマンノースオリゴ糖のみを含有する場合、PNGaseF及びEndoH処置されたサンプルは、未処置のタンパク質よりも大きな移動度を有するであろう。EndoH処置されたタンパク質は、各N結合グリコシル化部位にて、1つの残りのN-アセチルグルコサミンにより、僅かに高い分子量を有する。糖タンパク質が複雑なオリゴ糖のみを有する場合、EndoH処置されたタンパク質は、未処置のタンパク質と比較される移動における変化を有さない。複雑な及び高度なマンノースオリゴ糖の両方がある場合、その後、EndoH処置されたタンパク質は、非処置の糖タンパク質よりも小さいが、PNGaseF処置されたタンパク質より大きい。違いは、残りのN-アセチルグルコサミンについて説明され得るものよりも大きい。標的糖タンパク質上で単純化したグリカンを生成するため、エンドグリコシダーゼが使用される。エンドグリコシダーゼは、糖タンパク質又は糖脂質からオリゴ糖を放出する酵素である。又は、エンドグリコシダーゼは、末端残基でない残基の間の多糖類の鎖を開裂するだけであるが、糖タンパク質又は脂質分子からのオリゴ糖の放出は、共通する。エンドグリコシダーゼは、ポリマーにおける2つの糖のモノマー間のグリコシドの結合を破壊する。エンドグリコシダーゼの例は、限定されないが、エンドグリコシダーゼD、エンドグリコシダーゼF、エンドグリコシダーゼF1、エンドグリコシダーゼF2、エンドグリコシダーゼH、及びエンドグリコシダーゼSを含む。モノグリコシル化したインフルエンザウイルスの調製高マンノース糖タンパク質を有するタンパク質を生産するため、インフルエンザウイルスを持つ細胞は、糖タンパク質処理を阻害するためにKif及び/又はDMJに曝露される。モノグリコシル化したインフルエンザウイルスを生産するため、ウイルスは、キフネンシンなどのマンノシダーゼ阻害剤と共に、病原体の無い発育鶏卵の尿膜腔に注入される。キフネンシンは、N-グリコシル化経路における酵素α-マンノシダーゼIの機能を阻害し、Man9GlcNAc2組成物を有する糖タンパク質をもたらす。赤血球凝集素のグリコシル化の阻害におけるキフネンシンの濃度は、5、10、25、50、75、100、200、500μg/mLと、500μg/mLまでの間、並びにその間の全ての値に及ぶ。インキュベーションの1乃至3日後、キフネンシン処置された尿膜液が採取され、高マンノース型のグリカン、即ち、Man9GlcNAc2から単一のGlcNAcまで変換できる濃度を除去するため、エンドグリコシダーゼEndoHにより消化される。モノグリコシル化した赤血球凝集素を生産するための尿膜液におけるEndoHの濃度は、尿膜液の少なくとも約0.1、0.5、1、2、5、7、10、20、30、40、50、60、75、100、150、200、500μg/mL以上の範囲である。その後、モノグリコシル化したウイルスは回収し、精製される。モノグリコシル化したインフルエンザウイルスの使用本明細書で開示されたモノグリコシル化したインフルエンザウイルス抗原は、インフルエンザウイルス感染に対して免疫化するために使用され得る。抗原が由来する具体的なウイルスは、保護を提供する具体的なウイルスと同じであるか、又はそれとは相違する。なぜなら、異なる分離株間での交差防御は、インフルエンザウイルスで、特に同じウイルスのサブタイプ内で起きることが既知であるためである。現在使用されているインフルエンザワクチンは、全粒子ウイルスWVワクチン又はサブビリオンSVスプリット又は生成された表面抗原と呼ばれるとして指定される。WVワクチンは、無傷の不活性ウイルスを含むが、SVワクチンは、残留ウイルスの化学的不活性化の後に、脂肪を含有するウイルスエンベロープを可溶化する界面活性剤で破壊された、精製されたウイルスを含む。インフルエンザに対する弱毒化されたウイルスのワクチンもまた、発達途上にある。通常のワクチンを調製する方法に関する議論については、Wright,P.F.Webster,R.G.,FIELDSVIROLOGY,4dEd.Knipe,D.M.etal.Ed.,1464-652001で参照することができる。ワクチンが1を超えるインフルエンザの株を含む場合には、異なる株が典型的に別々に増殖し、ウイルスが収集され、抗原が調製された後に、混合される。あるいは、インフルエンザウイルスの異なる分離株の異なるセグメントが混合され、多能性のワクチンが生成され得る。本発明の過程で使用されるインフルエンザウイルスはリアソータントな株である、及び/又は逆遺伝子操作によって得られたものでもよい。ウイルスは弱毒されてもよい。ウイルスは温度感受性であってもよい。ウイルスは低温に適していてもよい。病原性のある株に由来するHA及び/又はNAウイルスのセグメントを含む、及び非病原性の株由来の残存している6又は7のセグメントを含むリアソータントな菌株が使用されてもよい。本発明による免疫原性成分において使用される、インフルエンザウイルス抗原は、生菌又は、好ましくは不活性化されたウイルスの形態であってもよい。ウイルスの不活性化は、ホルマリン又はβ-プロピオラクトンのような化学薬品を用いる処置を、典型的に含んでいる。不活性化されたウイルスが使用される場合には、抗原は、全粒子ウイルス、スプリットウイルス、又はウイルスサブユニットであってもよい。サブビリオン製剤を生成するための界面活性剤例えば、エチルエーテル、ポリソルベート80、デオキシコレート、tri-N-ブチルリン酸塩、TritonX-100、TritonN101、セチルトリメチルアンモニウムブロミドなどを用いたウイルスの処置により、スプリットウイルスが得られる。サブユニットのワクチンは、インフルエンザ表面抗原の血球凝集素及びノイラミニダーゼの一方又は両方を含んでいる。インフルエンザ抗原もウイロゾームの形態で提供される。抗原がインフルエンザウイルスから調製された場合にはすなわち、インフルエンザウイルスの増殖と関係のない組み換え体又は合成システムにおいて生産されるよりはむしろ、ウイルスは卵又は細胞培地のいずれかの上で増殖し得る。具体的な無菌の発育鶏卵における増殖は、インフルエンザウイルスがワクチン生産のため増殖される伝統的な経路であって、細胞培地はより最近発展している。細胞培地が使用される場合には、インフルエンザウイルスワクチンは、MDCK細胞、ベロ細胞、又はPER.C6細胞のような哺乳細胞上で、典型的に増殖されるであろう。これらの細胞株は、例えば、AmericanTypeCellCultureATCCcollection、又はCoriellCellRepositoriesCamden,NJから、広く利用可能である。例えば、ATCCは、カタログ番号CCL-81、CCL-81.2、CRL-1586及びCRL-1587で様々な異なるベロ細胞を供給しており、また、カタログ番号CCL-34でMDCK細胞を供給する。例えば、ニワトリ胚線維芽細胞CEFなどの雌鳥に由来する細胞株を含む、鳥類細胞株における増殖も可能である。同様に、ウイルスHIV、HCV、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス及びその他同種のものなどは、1又はそれ以上のグリコシダーゼ阻害剤キネフシン、オーストラリン、カスタノスペルミン、デオキシノジリマイシン、デオキシマンノジリマイシン、スウェインソニン、マンノスタチンA、及びその他同種のものなどの存在下の細胞培地で増殖され得る。これらのウイルスの増殖のための細胞培養システムは、当該技術分野において周知である。西ナイル熱ウイルスは、サル腎臓上皮細胞又はニワトリ胚細胞組織培地において増殖され得る。HIVは、末梢血単核球PBMC培地において培養され得る。HCは、ヒト肝癌細胞株Huh-7に由来する細胞において増殖され得る。本発明の免疫原性及び薬の組成物は、患者への投与に適している。これは、限定されないが、皮内注入;経皮投与;及び局所投与を含む、様々な方法によって達成され得る。これらは、例えばエメリーペーパーによる、又は微小研磨剤microabrasivesの使用による、皮膚剥削術と組み合わせて使用される。本発明の免疫原性及び薬の組成物は、好ましくはワクチンとして提示される。本発明の組成物は、アジュバントを含んでいてもよい。インフルエンザワクチンにおいて使用されたアジュバントは、アルミニウム塩、キトサン、CpG7909のようなCpGオリゴデオキシヌクレオチド、MF59のような水中油型エマルジョン、水中油中水型エマルジョン、E.coliの易熱性毒素及びその解毒された突然変異体、モノホスホリルリピドA及びその3-O-脱アシル化誘導体、百日咳毒素の突然変異体、ムラミルジペプチド、などを含む。実施例本発明の範囲を限定する意図なしに、本発明の実施形態に従って、例示的な器具、装置、方法及びそれらに関連する結果を以下に提供する。読者の便宜のために、実施例において表題又は副題が使用され得るが、それらは決して、本発明の範囲を限定するものではないことに注意されたい。さらに、本明細書においては特定の理論が提示され、開示されている;しかしながら、決してそれらは、正しかろうと間違っていようと、いかなる特定の理論又は動作のスキームを考慮することなく、本発明に従って本発明を実施する限りにおいて、本発明の範囲を限定するべきではない。実施例1:十分にグリコシル化した及びモノグリコシル化したウイルスの調製インフルエンザAウイルス、NIBRG-14H5N1NicolsonC,etal.2005Vaccine2322:2943-2952を、孵卵後10日目の特定病原体除去SFP発育鶏卵10-days-oldspecificpathogenfreeSFPembryonatedchickeneggsの尿膜腔に注入し20μlのPBS中の1000TCID5050の組織培養感染量、通常の十分にグリコシル化したウイルスWHO2005WHOmanualonanimalinfluenzadiagnosisandsurveillance.WorldHealthOrganization,Genevaを生産した。モノグリコシル化したウイルスを生産するために、0.2mg/mlのキフネンシンCaymanChemicalを用いて、ウイルスを尿膜腔に注入した。キフネンシンは、N-グリコシル化経路における酵素α-マノシダーゼIの機能を阻害し、その結果、Man9GlcNAc2組成物を有する糖タンパク質をもたらすElbeinAD,etal.1990JBiolChem26526:15599-15605。血球凝集素のグリコシル化を阻害するキフネンシンの濃度依存性を分析した図1A。インキュベーションの3日後、尿膜液を回収し、デブリを除去するために3,000gで10分間、遠心分離した。その後、キフネンシン処置した尿膜液を、4°Cで12時間、エンドグリコシダーゼEndoH20μg/mlの尿膜液で消化し、即ち、Man9GlcNAc2から単独GlcNAcまで、高マンノース型グリカンを除去した。モノグリコシル化した血球凝集素を生産するための、尿膜液におけるEndoHの濃度依存性を分析した図1B。続いて、モノグリコシル化したウイルスを、46,000gで90分間、超遠心分離機によりペレット状にし、PBSで再懸濁し、270,000gで90分間、非連続的なスクロース密度勾配25、40により精製した。勾配中のウイルスを集め、120,000gで90分間、超遠心分離機によりペレット状にした。最後に、そのペレットをPBSで再懸濁し、0.22μmのフィルタにより濾過したCDC1982ConceptsandProceduresforLaboratory-basedInfluenzaSurveillanceU.S.Dept.ofHealthandHumanServices.,Washington,DC;HarveyR,etal.2008Vaccine2651:6550-6554。精製された十分にグリコシル化したウイルスと比較すると、精製されたモノグリコシル化したウイルスは、HA1及びHA2図1Cの両方で、明らかにダウンシフトした。実施例2:十分にグリコシル化した及びモノグリコシル化したウイルスの電子顕微鏡分析ウイルス溶液を、銅グリッドElectronMicroscopyScienceの、コロジオン-炭素で覆われた表面に置いた。余分な液体を濾紙を用いて除去し、2のタングステン酸メチルアミンTedPella,Inc.を加え、30秒間染色した。余分な液体を濾紙を用いて除去し、H2Oで30秒間洗浄した。その後、グリッドを4時間風乾し、ウイルスの粒子を透過型電子顕微鏡HitachiH-7000によって撮影した。十分にグリコシル化した及びモノグリコシル化したインフルエンザNIBRG-14ウイルスは、大きさと形態共に類似している図2。実施例3:ウイルスにおける血球凝集素の定量化ウイルスを変性緩衝液5のSDS及び10のβ-メルカプトエタノールと混合し、10分間煮沸し、その後そのサンプルを10のNP-40に加え、25°Cで一晩にわたりPNGaseFNewEnglandBiolabsで処置した。そのサンプルをSDS-PAGEサンプル緩衝液と混合し、ゲルに充填する前に10分間、95°Cまで加熱した。そのゲルをSYPRORUBY登録商標Invitrogenで染色し、VERSADOC登録商標イメージングシステムBio-radで分析した。SDS-PAGE分析の前のPNGaseFの処置は、十分にグリコシル化したウイルスサンプル中のNPタンパク質からHA1を分離することである。これにより、ウイルス中の血球凝集素の定量化のため、SDS-PAGE上の十分にグリコシル化した及びモノグリコシル化したウイルスの両方からのHA1タンパク質の、直接的な強度の比較が可能となる図3。実施例4:LC-MS-MSを用いたグリコペプチド分析モノグリコシル化したウイルスのグリカンの組成物を、分析するために質量分析を使用した。ウイルス溶液を非還元のサンプル緩衝液と混合し、ゲルに充填する前に10分間、95°Cまで加熱した。そのゲルをクマシーブルーで染色した。HA0バンドを、トリプシンによるゲル内でのトリプシン分解のために、小片に切り分けた。消化の後、サンプルをLC-MS-MSにより分析したWuY,etal.2010RapidCommunMassSpectrom247:965-972AgilentTechnologies,ThermoScientific。インフルエンザNIBRG-14ウイルスの6つのN-グリコシル化部位が存在する。残基295~10Man6GlcNAc2及び残基489~10Man7-9GlcNAc2における高マンノース型グリカンの存在の低い割合を除いて、すべての他のグリカンは、付着される単一のGlcNAcサッカリド残基により、十分にグリコシル化した図4。各個別の刊行物又は特許出願が、具体的及び個別的に参照によって組み込まれることを示されたように、本明細書で引用されたすべての刊行物と特許出願は、参照によって本明細書に組み込まれる。前述の発明は、明確な理解を目的として、図及び実施例を用いて詳細に記載されたが、本発明の教示の観点において、当業者にとって容易に明白であって、添付の特許請求の範囲の精神又は範囲から逸脱することなく、特定の変更及び修正がなされ得る。"