"1以下の構造的ドメインを含んだ融合タンパク質であって、該ドメインは、TACI受容体のBAFFを結合するCRD2ドメインと、Br3受容体のBAFFを結合するCRDドメインとを融合することで得られる、融合タンパク質、又は2該融合タンパク質のアミノ酸配列内の少なくとも1つのアミノ酸を置換及び/若しくは削除及び/若しくは追加することで得られ、該融合タンパク質と同一若しくは類似の機能を有するタンパク質である、B細胞活性化因子の拮抗物質。前記B細胞活性化因子の拮抗物質は、SEQIDNo.1のアミノ酸配列のタンパク質、又はSEQIDNo.1のタンパク質のアミノ酸配列内の少なくとも1つのアミノ酸を置換及び/若しくは削除及び/若しくは追加することで得られ、SEQIDNo.1のタンパク質と同一若しくは類似の機能を有するタンパク質である、請求項1記載の拮抗物質。前記B細胞活性化因子の拮抗物質は、1SEQIDNo.1のアミノ酸配列のC-末端のヒト免疫グロブリンのFc断片のアミノ酸配列と接続するアミノ酸配列を有するタンパク質、又は2該タンパク質のアミノ酸配列内の少なくとも1つのアミノ酸を置換及び/若しくは削除及び/又は追加することで得られ、該タンパク質と同一若しくは類似の機能を有するタンパク質である、請求項1記載の拮抗物質。前記B細胞活性化因子の拮抗物質は、SEQIDNo.2のアミノ酸配列のタンパク質、又はSEQIDNo.2のタンパク質のアミノ酸配列内の少なくとも1つのアミノ酸を置換及び/若しくは削除及び/若しくは追加することで得られ、SEQIDNo.2のタンパク質と同一若しくは類似の機能を有するタンパク質である、請求項3記載の拮抗物質。前記B細胞活性化因子の拮抗物質は、N-末端のシグナルペプチドと接続するタンパク質である、請求項1~4のいずれか1項に記載の拮抗物質。前記B細胞活性化因子の拮抗物質は、SEQIDNo.3のアミノ酸配列のタンパク質、又はSEQIDNo.3のタンパク質のアミノ酸配列内の少なくとも1つのアミノ酸を置換及び/若しくは削除及び/若しくは追加することで得られ、SEQIDNo.2のタンパク質と同一若しくは類似の機能を有するタンパク質である、請求項5記載の拮抗物質。前記B細胞活性化因子拮抗物質は、ヒト免疫グロブリンのFc断片による二量体タンパク質の形態である、請求項3~6のいずれか1項に記載の拮抗物質。請求項1~6のいずれか1項に記載のB細胞活性化因子拮抗物質をコードするヌクレオチド配列。前記ヌクレオチド配列は、1SEQIDNo.10のヌクレオチド配列若しくはその変性配列、又は2該1として示されるアミノ酸配列内の少なくとも1つのヌクレオチドを置換、削除若しくは追加することで誘導され、SEQIDNo.10のヌクレオチド配列と同一若しくは類似の機能を有するヌクレオチド配列である、請求項8記載のヌクレオチド配列。前記ヌクレオチド配列は、1SEQIDNo.4のヌクレオチド配列若しくはその変性配列、又は2該1として示されるアミノ酸配列内の少なくとも1つのヌクレオチドを置換、削除若しくは追加することで誘導され、SEQIDNo.4のヌクレオチド配列と同一若しくは類似の機能を有するヌクレオチド配列である、請求項9記載のヌクレオチド配列。前記ヌクレオチド配列は、1SEQIDNo.5のヌクレオチド配列若しくはその変性配列、又は2該1として示されるアミノ酸配列内の少なくとも1つのヌクレオチドを置換、削除若しくは追加することで誘導され、SEQIDNo.5のヌクレオチド配列と同一若しくは類似の機能を有するヌクレオチド配列である、請求項10記載のヌクレオチド配列。請求項8~11のいずれか1項に記載のヌクレオチド配列を含む遺伝子ベクター。請求項12記載の遺伝子ベクターを含む宿主細胞。自己免疫疾患の治療薬を製造するための、請求項1~7のいずれか1項に記載のB細胞活性化因子拮抗物質、請求項8~11のいずれか1項に記載のヌクレオチド配列、請求項12記載の遺伝子ベクター、又は請求項13記載の宿主細胞の利用。前記自己免疫疾患は、リューマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、又はシーグレン症候群である、請求項14記載の利用。請求項1~7のいずれか1項に記載のB細胞活性化因子拮抗物質、請求項8~11のいずれか1項に記載のヌクレオチド配列、又は請求項12記載の遺伝子ベクターが主要な活性成分である自己免疫疾患の治療薬。前記自己免疫疾患は、リューマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、又はシーグレン症候群である、請求項16記載の自己免疫疾患の治療薬。B細胞活性化因子拮抗物質をコードする遺伝子を発現ベクターにローディングするステップと、該発現ベクターを宿主に移行させるステップと、該宿主を培養して増殖させるステップと、該宿主及び/又はその培養上澄液の単離及び純化によってB細胞活性化因子拮抗物質を得るステップと、を含む、請求項1~7のいずれか1項に記載のB細胞活性化因子拮抗物質の調製方法。前記発現ベクターは、真核プラスミド発現ベクター、アデノウイルスベクター、又はアデノ関連ウイルスベクターである請求項18記載の調製方法。前記宿主は真核細胞である、請求項19記載の調製方法。前記単離および純化するステップは、米国GE社により製造されるMab-Selectゲルカラム及びSPカラムクロマトグラフィーによる宿主の大規模培養上澄液の純化であり、その後にB細胞活性化因子の拮抗物質を得る、請求項20記載の調製方法。発明の開示本発明によって解決される技術的問題は、自己免疫疾患の予防および治療のための新規で効果的な選択肢を発見することである。特に、BAFFに拮抗させることで自己免疫疾患の予防および治療する新規で効果的な選択肢を発見することである。この技術的問題を解決するため、本発明の技術的解決策は、新規なB細胞活性化因子の拮抗物質を提供することである。このB細胞活性化因子の拮抗物質は一種のタンパク質である。当該B細胞活性化因子の拮抗物質の構造1次の構造ドメインを含んだ融合タンパク質:このドメインは、TACI受容体のBAFFに結合するCDR2ドメインと、Br3受容体のBAFFに結合するCDRドメインの融合によって得られる。または、21で定義される融合タンパク質のアミノ酸配列における少なくとも1個のアミノ酸を置換及び/又は削除及び/又は追加することにより得られ、1で定義される融合タンパク質と同一または類似した機能を備えたタンパク質。B細胞活性化因子の拮抗物質の構造ドメインはB細胞活性化因子の結合において重要な役割を果たす。当該B細胞活性化因子の拮抗物質1SEQIDNo.1として示されるアミノ酸配列を有したタンパク質。または、2SEQIDNo.1として示されるタンパク質と同一または類似する機能を有したSEQIDNo.1として示されるタンパク質のアミノ酸配列における少なくとも1個のアミノ酸を置換及び/又は削除及び/又は追加することにより得られるタンパク質。当該B細胞活性化因子の拮抗物質追加定義1SEQIDNo.1として示されるアミノ酸配列のC末端のヒト免疫グロブリンのFc断片のアミノ酸配列と接続するアミノ酸配列を有したタンパク質。または、21で定義されるタンパク質と同一または類似した機能を有し、1で定義されるタンパク質のアミノ酸配列における少なくとも1個のアミノ酸を置換及び/又は削除及び/又は追加することで得られるタンパク質。さらに、当該B細胞活性化因子の拮抗物質は、自身のアミノ酸配列がSEQIDNo.2として示されるタンパク質である。または、SEQIDNo.2として示されるタンパク質と同一または類似する機能を有したSEQIDNo.2として示されるタンパク質のアミノ酸配列における少なくとも1個のアミノ酸を置換及び/又は削除及び/又は追加することにより得られるタンパク質。ヒト免疫グロブリンのFc断片を加えることにより、遺伝子工学的手法で調製された融合タンパク質は二量体の形態で存在する。好適には、当該B細胞活性化因子の拮抗物質は、N末端でシグナルペプチドと接続するタンパク質である。さらに好適には、当該B細胞活性化因子の拮抗物質は、アミノ酸配列がSEQIDNo.3として示されるタンパク質である。または、SEQIDNo.2として示されるものと同一または類似する機能を有したSEQIDNo.3として示されるタンパク質のアミノ酸配列における少なくとも1個のアミノ酸を置換及び/又は削除及び/又は追加することにより得られるタンパク質。本発明は、本質的にはタンパク質である当該B細胞活性化因子の拮抗物質を提供するだけではなく、当該B細胞活性化因子の拮抗物質をエンコードコード化するヌクレオチド配列をも提供する。B細胞活性化因子の拮抗物質をエンコードする当該ヌクレオチド配列1SEQIDNo.10として示されるヌクレオチド配列またはその変性配列。または、2SEQIDNo.10として示されるものをエンコードするヌクレオチド配列と同一または類似する機能を有した1として示されるアミノ酸配列における少なくとも1個のヌクレオチドを置換、削除または追加することで得られるヌクレオチド配列。当該B細胞活性化因子の拮抗物質をエンコードする当該ヌクレオチド配列1SEQIDNo.4として示されるヌクレオチド配列またはその変性配列。または、2SEQIDNo.4として示されるものをエンコードするヌクレオチド配列と同一または類似する機能を有した1として示されるアミノ酸配列における少なくとも1個のヌクレオチドを置換、削除または追加することで得られるヌクレオチド配列。当該B細胞活性化因子の拮抗物質をエンコードする当該ヌクレオチド配列1SEQIDNo.5として示されるヌクレオチド配列またはその変性配列。または、2SEQIDNo.5として示されるものをエンコードするヌクレオチド配列と同一または類似する機能を有した1として示されるアミノ酸配列における少なくとも1個のヌクレオチドを置換、削除または追加することで得られるヌクレオチド配列。本発明は当該ヌクレオチド配列を含んだ遺伝子ベクターも提供する。好適には、当該遺伝子ベクターは、当該ヌクレオチド配列を発現することができる発現ベクターである。本発明は当該遺伝子ベクターを含んだ宿主細胞も提供する。さらに、本発明は、自己免疫疾患の治療のための薬剤の製造のための当該B細胞活性化因子の拮抗物質、当該ヌクレオチド配列あるいは当該遺伝子ベクターの利用法も提供する。さらに、本発明は、当該B細胞活性化因子の拮抗物質、当該ヌクレオチド配列または当該遺伝子ベクターが主要活性成分である、自己免疫疾患の予防用または治療用の薬剤も提供する。当該自己免疫疾患とは、主としてリューマチ性関節炎、全身性エリテマトーデスおよびシーグレン症候群のことである。本発明のさらに好適な実施形態では、当該B細胞活性化因子の拮抗物質の調製方法も提供される。この調製方法は次のステップを含む。B細胞活性化因子の拮抗物質をエンコードする遺伝子を実施可能に発現ベクターにローディングするステップと、発現ベクターを宿主に移すステップと、宿主を増殖させるステップと、宿主及び/又はその培養上澄液を単離および純化するステップとを含み、B細胞活性化因子の拮抗物質を得る。当該B細胞活性化因子の拮抗物質の調製方法における当該発現ベクターは、真核性プラスミド発現ベクター、アデノウィルスベクターまたはアデノ関連ウィルスベクターである。当該B細胞活性化因子の拮抗物質の調製方法における当該宿主は真核細胞である。当該B細胞活性化因子の拮抗物質の調製方法における当該単離および純化方法は、GE社が製造するMab-SelectゲルカラムおよびSPカラムクロマトグラフィーによる宿主の大規模培養上澄液の純化であり、その後にB細胞活性化因子の拮抗物質を得る。当該方法における発現ベクターは一般的な真核発現ベクターであり、遺伝子工学で通常に使用される種々な宿主細胞である。単離および純化方法は、本発明の比較的に純粋なB細胞活性化因子の拮抗物質を得る現存通常方法でよい。B細胞活性化因子の拮抗物質をエンコードする遺伝子を発現ベクターに実施可能に負荷し、発現ベクターを宿主に移す方法は、ベクターと宿主細胞の様々な遺伝子工学マニュアルおよび特殊インストラクションに沿ったものでよい。本発明は、TACI受容体のBAFFを結合するドメイン2CRD2と、Br受容体のBAFFを結合するドメインCRDおよびSEQIDNo.10として示されるヌクレオチド配列によってコード化するSEQIDNo.1として示されるアミノ酸配列の融合によって得られるBAFF拮抗断片を設計および構築する。生体内での安定性を増強し、活性半減期を延長するために、当該断片を、新融合タンパク質を得るように免疫グロブリンのFc断片と融合させることができる。例えば、それはIgG1、IgG2またはIgG4のFc断片と融合できる。本発明の当該実施例では、それをIgG1のFc断片と融合し、BAFFトラップSEQIDNo.4として示されるヌクレオチド配列によってコード化されたSEQIDNo.2として示されるアミノ酸配列と称される新融合タンパク質を得る。実験では、それがB細胞活性化因子の拮抗物質の機能を有することを示した。もちろん、本発明におけるB細胞活性化因子の拮抗物質は一種のタンパク質であり、従って主な調製方法は、発酵の従来技術の遺伝子工学的方法を利用することである。遺伝子工学的に発酵を続けながら、生成物を便利に回収するために、一般的には、BAFFトラップのコード化配列のN末端は、種々な一般的に使用されるエンコードする分泌シグナルペプチドのヌクレオチド配列と接続される。これらは、例えば、ヌクレオチド配列をエンコードするヒトIL-2シグナルペプチドであるヒトIL-シグナルペプチドの追加後、SEQIDNo.3として示されるそのアミノ酸配列はSEQIDNo.5として示されるヌクレオチド配列によってコード化できる。本発明では、遺伝子配列の、少なくとも1つのヌクレオチド誘導配列を置換、削除または追加したSEQIDNO:1におけるヌクレオチド配列と類似した発現とは、一般的に、SEQIDNO:1およびその変性配列によってコードされたタンパク質活性ポリペプチドによってコードされたヌクレオチド配列のことである。変性配列とは、1以上のコドンが、同じアミノ酸によってコードされた変性コドンと置換されている配列のことである。コドンの変性によって、SEQIDNO:1の同属物がせいぜい約89程度である変性配列もSEQIDNO:1として示されるものと同じ配列をコードできる。さらに、少なくとも1つのヌクレオチド誘導配列を置換、削除または追加したSEQIDNO:1として示されるヌクレオチド配列の意味は、少々過酷な条件下、好適には、非常に過酷な条件下でSEQIDNO:1のヌクレオチド配列と雑種化したヌクレオチド配列も含む。この用語は、ヌクレオチド配列SEQIDNo:1の同属性が少なくとも80、好適には少なくとも89、さらに好適には少なくとも90、最も好適には少なくとも95であることも含む。本発明において同一機能を有するとは、BAFFと結合する機能を有し、BAFFの生物活性を拮抗するということである。少なくとも1つのヌクレオチド誘導配列を置換、削除または追加したSEQIDNO:1におけるヌクレオチド配列は、SEQIDNO:1によってエンコードされたタンパク質と同じタンパク質機能を有するタンパク質をエンコードできるSEQIDNO:1におけるオープンリーディングフレーム配列の変形も含む。これら別種の形態は、限定はしないがいくつかのヌクレオチド典型的には1から90、好適には1から60、さらに好適には1から20、最も好適には1から10の削除、挿入及び/又は置換を含み、いくつかのヌクレオチド典型的には60未満、好適には30未満、さらに好適には10未満、最も好適には5未満を5’及び/又は3’末端に追加する。本発明における用語当該アミノ酸配列における少なくとも1個のアミノ酸を置換及び/又は削除及び/又は追加により得られるアミノ酸配列とは限定はしないが、いくつかのアミノ酸通常は1から50、好適には1から30、さらに好適には1から20、最も好適には1から10の削除、挿入及び/又は置換し、1個以上のアミノ酸通常は20未満、好適には10未満、さらに好適には5未満をC-末端及び/又はN―末端に追加することである。例えば、同様機能のアミノ酸によって置換されると、当該タンパク質の機能は変化できない。別例は、1個以上のアミノ酸をC―末端及び/又はN―末端に追加すると、タンパク質の機能は変化しない。この用語は、そのタンパク質の活性断片および活性誘導体も含む。本発明における同一機能とは、BAFFと結合し、BAFFの生物活性を拮抗する機能のことである。用語当該アミノ酸配列における少なくとも1個のアミノ酸を置換及び/又は削除及び/又は追加することで得られるアミノ酸配列とは限定はしないが、10まですなわち1以上のアミノ酸、好適には8までのアミノ酸、さらに好適には5までのアミノ酸を、類似特性のアミノ酸により置換し、ポリペプチド、すなわち、コンサーバティブな変異ポリペプチドを形成することを含む。好適には、これらコンサーバティブ変異ポリペプチドは表1に従って置換される。本発明は請求項記載のタンパク質またはポリペプチド類似体も含む。これら類似体とプロタンパク質の違いはアミノ酸配列における相違であったり、配列に影響を及ぼさない修正形態における相違であったりする。これら両方の場合もある。これらタンパク質には天然または誘導された遺伝子変異体が含まれる。誘導された変異体は、突然変異物質に照射または曝露されることで発生するランダム変異形成のごとき種々な技術によって得られる。また、部位指定特全変異形成または他の知られた分子生物学技術によっても得られる。また類似体には、異なる天然L-アミノ酸残分例:D-アミノ酸および非天然または合成アミノ酸例:β、γ-アミノ酸を含んだ類似体も含まれる。本発明におけるタンパク質またはペプチドは、上例の代表的なタンパク質またはポリペプチドに限定されることはない。修正通常は主要構造を変更しない形態には、アセチレン化またはカルボキシル化のごとき生体内または生体外の化学誘導形態が含まれる。また修正には、ポリペプチド合成とプロセス、あるいは、さらなるプロセスステップにおけるグリコシル化修正によって得られるポリペプチドのごときグリコシル化も含まれる。当該修正は、ポリペプチドを一種のグリコシル化酵素哺乳類のグリコシル化酵素または脱グリコシル化酵素、等々に曝露することにより実行できる。この修正形態はさらに、リン酸化アミノ酸残分例:ホスホチロシン、ホスホセリン、ホスフォトレオニンを有する配列も含む。さらに、抗タンパク質分解特性を改善できるか、溶解特性を最良化できる修正ポリペプチドも含むことができる。本明細書で使用される用語実施可能に接続とは、線状DNA配列の一部が同じ線状DNA配列の他の部分の活性に影響を及ぼすことができることを意味する。例えば、もしシグナルペプチドDNAが前駆物質として発現され、ポリペプチドの分泌に関与するなら、そのシグナルペプチド分泌リーダ配列DNAは実施可能にポリペプチドDNAに接続する。もしプロモータ制御配列の転写が開始したら、それはエンコード配列に実施可能に接続される。もしリボソーム結合部位が翻訳可能な位置に配置されると、それはエンコード配列に実施可能に接続される。一般的に実施可能に接続とは、隣接するが、分泌リーダ配列のためにはリーディングフレームに隣接することを意味する。本発明の利点は次のようなものである。すなわち、本発明は、生体内でその安定性を増強し、活性半減期を延長するために、TACI受容体のBAFFを結合するドメイン2CRD2と、Br3受容体のBAFFを結合するドメインCRDとを融合することで得られる断片を設計および構築することである。そのことは免疫グロブリンのFc断片と融合できる。例えば、それは、IgG1、IgG2またはIgG4のFc断片と融合できる。さらに改善された分泌発現を実行するために、シグナルペプチドをN-末端に結合することができ、よって一連の融合タンパク質分子を得ることができる。この新タイプのB細胞活性化因子の拮抗物質である本発明のBAFFトラップは、BAFFとの組み合わせ効果を大きく改善し、治療投薬量を減少させ、自己免疫疾患の治療効果を高めることができる。それは自己免疫疾患の予防および治療の新規で効果的な選択肢を提供する。実施例の説明本発明を添付図面に沿って以下の実施例によりさらに詳細に解説する。以下の実施例では、特に言及がない実験条件は、従来からよく知られているものである例:サムブルックJ、ラッセルDW、2001年、分子クローン技術、実験マニュアル第3版、スプリングハーバーラボラトリプレス社、または製造業者推奨条件。実施例1:BAFFトラップエンコード遺伝子の構造及び発現1.BAFFトラップエンコード遺伝子の調製方法遺伝子全体合成法を使用し、TACIドメイン2とBr3ドメインCRDによって融合されたcDNA断片を得るものであり、当該断片の5’末端にヒトIL-2シグナルペプチド配列を含むcDNA断片を得る。以下のプライマーを設計し、IgG1Fe断片cDNAを増幅する。5’プライマーSEQIDNo.6:5’CGGGATCCGACAAAACTCACACATGCC3’3’プライマーSEQIDNo.7:5’AGGTTTGTTTAAACTCATTTACCCGGA、GACAGG3’PCR生成物をクローン化ベクターに挿入するため、BamHI部位は5’プライマーに設計され、PmeI部位は3’プライマーに設計された。テンプレートとしてヒトリンパ球の全RNAであるRT-PCRはIgG1Fc断片を増幅した。反応条件は以下のごとくであった。50°Cでの30分間のRT-PCR反応混合変性処理後に、反応は以下の条件下で実行された。逆転写反応:94°Cでの30秒間の変性、55°Cでの30秒間のアニーリング、68°Cでの1分間の延展。10サイクルの反応。PCR反応:94°Cでの30秒間の変性、60度での30秒間のアニーリング、68°Cでの1分間の延展。25サイクルの反応。続いて68°Cでの12分間の追加延展。反応終了後、RT-PCR生成物を1アガロースゲル電気泳動により検出。図3で示すように、予期したサイズ~700bpのDNA断片が得られた。全長BAFFトラップのヌクレオチドとタンパク質配列はSEQIDNo.5とSEQIDNo.3としてそれぞれ示された。Fc断片が追加されたため、融合タンパク質は二硫化結合によって二量体の形態で存在する。BAFFトラップ構造図は図2で示されている。2.BAFFトラップエンコード遺伝子を含んだ組み換えプラスミドの構築上述したように、遺伝子全体合成断片TACI-Br3においては、KpnI規制部位は5’プライマーに設計され、BamHI規制部位は3’プライマーに設計された。よって、TACI-Br3のcDNA断片は、真核生物発現ベクターpEE1/V5-HisA米国のインビトロゲン社から購入、図5のマップ参照の多重クローン化部位Kpn1/BamHに直接的に挿入でき、IgG1Fc断片は多重クローン化部位BamHI/PmeIに挿入でき、よって、BAFFトラップの融合断片が入手できた。構築プロセスは図4で示されている。2.1組み換えプラスミドpEF-TACI-Br3の構築遺伝子全体合成断片TACI-Br3をpEFI/V5-HisAのKpnI/BamHI部位に挿入し、結さく生成物pEF-TACI-Br3をE.coliJM109に変態させ、ランダムに28個のクローンを選択し、スクリーニングした。番号が11、15、16、26および27のクローンをKpnI/BamHIによってバックカットし、標的断片を得た。組み替えプラスミドpEF-TACI-Brの酵素消化結果を図6で示す。配列分析のために番号26のクローンを選択し、もし配列が正しければ、IgG1Feとの融合遺伝子をさらに構築する。2.2組み換えプラスミドpEG-BTの構築PEF-TACI-Br3No.26クローンに基づき、IgG1Fc断片をBamHI/PmeI部位に挿入した。結さく生成物pEF-BTをE.coliJM109に変態させ、スクリーニングのために12個のクローンをランダムに選択した。組み換えプラスミドpEF-BTの酵素消化結果を図7で示す。KpnI/PmeIによる番号1、2、6、7および10のクローンをバックカットして標的断片を得て、番号10のクローンをDNA配列のために送り出した。DNA配列結果は、組み換えプラスミドの標的遺伝子の配列と、設計TACI-Br3-IgG1Fcすなわち、SEQIDNo.5のBAFFトラップ遺伝子は一貫していることを示した。4.標的タンパク質の安定発現株-CHO-BTのスクリーニングおよび特定5μgの組み換えプラスミドpEF-BTを大量調製によって取得し、リポソームであるリポフェクタミン2000を使用してCHO-K1細胞米国のATCCから購入を移入し、2日後に1:5の割合で培養し、0.4mg/mlG418米国のインビトロゲン社から購入をスクリーニングに加えたところ、10日後にコロニー形成が観察できた。明確に分離された縁部と良好な細胞状態を有する96個のモノクローンをランダムに消化し、6枚の24ウェルプレートに接種し、培養した第1ラウンドスクリーニング。2日後に、培養上澄液を採取し、融合タンパク質発現をELISAによって検出し、24個のポジティブ発現クローンを選択し、24ウェルプレートにそれぞれ接種した第2ラウンドスクリーニング。2日間の培養後に、ELISAによって上澄液の融合タンパク質発現を検出し、相対的に高い発現性を有した6個のクローン1-B2、1-B8、1-D7、1-E1、2-D1、2-F6をさらに限界希釈法によってスクリーニングのために選択した。96ウェルプレートにそれぞれ接種し1細胞/ウェル/200μL第3ラウンドスクリーニング、細胞合流後約8日後にELISAによって培養上澄液の融合タンパク質発現を検出し、相対的に高い発現性を有する6個のクローンを選択し、24ウェルプレートに接種した。細胞合流まで、6ウェルプレートに接種され、ELISAによってそれぞれのクローンの発現が検出された。結果を表2に示す。培養をスケールアップするために1-B8-1、1-B7-7および1-E1-7の選択された相対的に高い発現は、T75の方形ボトル内に膨張され、上澄液は4日後に回収され、Pr.Aセファロースにより吸収させ、融合タンパク質の発現を検出した。結果は、純化タンパク質と予想タンパク質の分子量が同じであり、ウエスタンブロット法によって確認された。1-B8-1、1-D7-7、1-E1-7を採取し、それぞれ96ウェルプレートに接種した1細胞/ウェル/200μL第4ラウンドスクリーニング。細胞合流後約10日後、培養上澄液の融合タンパク質発現をELISAで検出した。3クローンは同種であり、最も高い発現は増幅されて保存され、CHO-BT1-B8-1、CHO-BT1-D7-7、CHO-BT1-E1-7と命名された。次の発現および純化実験にCHO-BT1-E1-7が選択された。5.融合タンパク質BAFFとラップBTの増大した発現および純化当該スクリーニングされたCHO-BT1-E1-7の細胞の大スケール培養後、上澄液は、MAB-Selectゲル米国のGE社から購入によって純化され、SPカラムクロマトグラフィーを通過した。2段階のカラムクロマトグラフィー後のタンパク質電気泳動パターンが図8で示される。結果は、還元条件下での純化された標的タンパク質の分子量は38kDaであり、非還元条件下では76kDaであった。これは二量体の形態で存在し、予想通りであった。純化されたタンパク質の純度は95以上が可能であった。実施例2融合タンパクBAFFトラップBTの特定および効力実験1.融合タンパク質BAFFトラップBTおよびBAFFの結合定数の決定生体外条件下でBAFFトラップとBAFFの結合能を検出するためにBIAcoreT100を使用し、その結合定数がBIAcoreT100評価ソフトによって分析された。また、BAFFR-FcおよびTACI-Fcの基準が対照物質として使用された。実験ステップは以下のごとくであった。1カップリング:当初にHEPES標準溶液を使用してBAFFトラップタンパク質を希釈し、続いて10mM酢酸ナトリウム溶液pH=5.0、2μg/ml、200μlに希釈し、カップリングのために4回の注入を実行した。流量と時間は従来通りであった。量的標準のTACI-FeおよびBr3-Fcを酢酸ナトリウム溶液に加え、この最終濃度も2μg/ml、200μlに希釈し、同方法を使用してカップリングさせ、チップ上に固定した。2結合アッセイ:1800nm、600nm、200nm、66nm、および22nmの120μl以上のHEPES溶液を使用してBAFF標準物を段々と希釈したサイクル荷重、接触時間60秒、分離時間900秒、流量30μl/分。3動的分析:BIAcoreT100評価ソフトを使用して、カップリング率Kaおよび分離率Kdを分析結合定数KD=Kd/Ka結果:TACI-FcおよびBr3-Fcと比べて、BAFFトラップは強力なBAFF結合能を有しており、KD値は約12.7nMであり、TACI-FcとBr3-FcのBAFFとの結合定数はそれぞれ14.8nMと34nMであった表3。2.生体外の融合タンパク質BAFFトラップBTの細胞結合の同定ラージ細胞米国のATCCから購入は高発現BAFF受容体TACIおよびBr3のためのヒトB細胞ラインであり、BT競合的拮抗BAFFの組み合わせを検出するのに使用される。ラージ細胞は対数増殖期で採取され、異なる濃度のBTタンパク質と抗TACI抗体/抗Br3抗体が加えられ、室温で1時間培養され、洗浄後にFITC標識の第2抗体が加えられ、暗所内で30分間室温にて培養され、洗浄後に上昇流細胞数測定された。結果は表4にて示される。hIgGは、タンパク質群としてヒトIgG1Fc断片を含有した。結果は、BTが、抗体とBAFF受容体ラージ細胞上のTACIおよびBr3の組み合わせを競合的に抑制することを示した。さらにその効果が投与量に依存することを示した。すなわち、生体外の実験では、BTはBAFFと、その細胞表面受容体の結合を抑制する拮抗剤として使用できることを示している。3.ラットのリューマチ性関節炎モデルの融合タンパク質BAFFトラップBTの治療効果ラットのアジュバント誘導関節炎モデルAIAによる生体内におけるBTの治療効果の研究実験方法:生後6週間から8週間の雌Lewisラットに、5mg/mlの不活性化BCGを含んだ100μLの不完全フロイントアジュバントを尻尾の根元から皮下注射した。対照群のラットは無処理であった。開始時ラットは無作為に3治療群サリン群、hIgG群、融合タンパク質BT群n=10に分割され、100μg/100μl/一匹が腹腔内投与された。毎週2度投与されただけであったヒトIgG1Fc断片を含んだhIgG群、無関係治療群として利用。毎日体重を計測し、二重ブラインド法を使用して四肢の臨床スコアをモニターした。毎週一回、軌道静脈から血液を採取し、血清を分離し、-80°Cの冷蔵庫で保管した。45日目間治療した後にラットを処分し、その踝を採取し、HE染色した。リンパ球を脾臓から分離し、脾臓のB細胞の内容をフローサイトメトリーB220抗体検出によって検出した。実験結果:それぞれの群のラットの体重の変化と、臨床スコアの変化は図9として示されている。結果:第2日目からラットの体重は減少し始め、17日目から治療し、短期の継続的体重減少後、約25日目に最低体重に到達し、その後に体重上昇が開始した。BAFFトラップ群の上昇率は、hIgG群やAIA群よりも大きく、43日目から統計的に意味のあるものになったP<0.05。やがて、モデルラットのリューマチ性関節炎が徐々に発現し、重症化した。その臨床スコアも上昇し、17日目に14±2になった。その後に、臨床スコアは徐々に減少し、BAFFトラップ群の減少率は他の2つの群のものより大幅に大きかったがP<0.05、37日目に通常に戻った。このときのAIA群のスコアは10±1であり、hIgG群のスコアは6±1であった。全ての群のHE染色結果は図10Aとして示されている。AIA群およびhIgG群では、リンパ球浸透、骨破壊、および関節滑膜炎AIA群では、骨の線維化とパンヌスも見られたが確認され、BT群では滑膜統合、リンパ球償還および損傷骨補修が確認された。これは正常ラットの関節の場合と類似していた。病理スコア結果は図10Bとして示されている。AIA群とhIgG群の病理スコアは4ポイントまでであり、BT群では病理スコアは大きく減少しP<0.05、正常化した。フローサイトメトリーによるB220B細胞の検出結果は図11で示されている。BT群では、ラット脾臓細胞のB220B細胞の割合は17.6であり、サリン群合や32.6hIgG治療群27.1の場合よりも大幅に小さかった。結果は大きな差P<0.01を示し、正常ラットのもの21.4と調和していた。上記の実施例は、本発明がBAFF受容体の拮抗物質として利用可能な融合タンパク質BAFFトラップBTを成功裏に製造したことを示している。それはラットAIAモデルに対して優れた治療効果を有し、自己免疫疾患の治療のための新規で効果的な選択肢を提供する。参照1.MoorePA,Belvedere0,OrrA,etalBLySmemberofthetumornecrosisfactorfamilyandBlymphocytestimulatorScience19992852602632.MackayFAmbroseCTheTNFfamilymembersBAFFandAPRILthegrowingcomplexityCytokineGrowthFactorRev2003143113243.SchneiderPMacKayFSteinerVHofmannKBodmerJLHollerNAmbroseCLawtonPBixlerSAchaOrbeaHetalBAFFanovelligandofthetumornecrosisfactorfamilystimulatesBcellgrowthJExpMed1999189174717564.SutherlandAPMackayFMackayCRTargetingBAFFimmunomodulationforautoimmunediseasesandlymphomasPharmacolTher20061127747865.ScapiniP,NardelliB,NadaliG,etalGCSFstimulatedneutrophilsareaprominentsourceoffunctionalBLySJExpMed20031972973026.HymowitzSG,PatelDR,WallweberHJ,etalStructuresofAPRILreceptorcomplexeslikeBCMA,TACIemploysonlyasinglecysteinerichdomainforhighaffinityligandbindingJBiolChem,2005280721872277.KimHM,YuKS,LeeME,etalCrystalstructureoftheBAFFBAFFRcomplexanditsimplicationsforreceptoractivationNatStructBiol,200310342348"