"体外受精を受けている女性の妊娠の結果を予想する方法であって、前記女性、及び前記女性の子宮内に着床させる少なくとも1個の胚を形成するために、体外で少なくとも1個の卵子を受精させる精子を提供している男性のうちの少なくとも1人から得た身体試料中又は前記少なくとも1個の卵子のうちの卵子から得た試料中のヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRGのイソ型を決定すること、並びにHRGの前記決定されたイソ型に基づいて前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の結果を予想すること、を含む、上記方法。妊娠の結果を予想することが、前記身体試料又は前記卵子から得た前記試料中の、HRGの75kDaイソ型の存在に基づいて、HRGの77kDaイソ型の存在に基づいて、又はHRGの前記75kDa及び前記77kDa両方のイソ型の存在に基づいて、前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の結果を予想することを含む、請求項1に記載の方法。妊娠の結果を予想することが、前記身体試料中又は前記卵子から得た前記試料中の、HRGの前記77kDaイソ型の存在に基づいて前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の成功が低いことを予想することを含む、請求項2に記載の方法。妊娠の結果を予想することが、前記身体試料中又は前記卵子から得た前記試料中の、HRGの前記75kDaイソ型及び前記77kDaイソ型両方の存在に基づいて前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の成功が低いことを予想すること、並び前記身体試料中又は前記卵子から得た前記試料中の、HRGの前記77kDaイソ型のみの存在に基づいて前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の成功が非常に低いことを予想することを含む、請求項2又は3に記載の方法。女性の受胎状態を予想する方法であって、前記女性から得た身体試料中の、ヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRGのイソ型を決定することと、HRGの前記決定されたイソ型に基づいて前記女性の受胎状態を予想することと、を含む、上記方法。受胎状態を予想することが、前記身体試料中の、HRGの75kDaイソ型の存在に基づいて、HRGの77kDaイソ型の存在に基づいて、又はHRGの前記75kDa及び前記77kDaイソ型両方の存在に基づいて、前記女性の受胎状態を予想することを含む、請求項5に記載の方法。前記女性の受胎状態を予想することが、前記身体試料中のHRGの前記77kDaイソ型の存在に基づいて前記女性が受胎状態の異常/障害を有することを予想すること、並びに前記身体試料中のHRGの前記77kDaイソ型が非存在であるがHRGの前記75kDaイソ型が存在することに基づいて前記女性が正常の受胎状態を有することを予想することを含む、請求項6に記載の方法。前記イソ型を決定することが、前記身体試料中のHRGの分子量を推定することを含む、請求項1から7までのいずれか一項に記載の方法。前記分子量を推定することが、ウエスタンブロットでのHRGの前記分子量を推定することを含む、請求項8に記載の方法。前記イソ型を決定することが、HRGにおけるアミノ酸番号204としてプロリンを有するHRGのイソ型、及びHRGにおけるアミノ酸番号204としてセリンを有するHRGのイソ型のうちの少なくとも1つの存在を決定することを含む、請求項1から9までのいずれか一項に記載の方法。体外受精を受けている女性の妊娠の結果を予想する方法であって、前記女性、及び前記女性の子宮内に着床させる少なくとも1個の胚を形成するために、体外で少なくとも1個の卵子を受精させる精子を提供している男性のうちの少なくとも1人から得た身体試料のDNA、又は前記少なくとも1個の卵子のうちの卵子から得た試料中のDNAを抽出すること、前記抽出したDNAについて、ヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRG、遺伝子のエキソン5の少なくとも一部分の一塩基多形、SNP、遺伝子型解析を行うこと、並びに前記SNP遺伝子型解析に基づいて前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の結果を予想すること、を含む上記方法。妊娠の結果を予想することが、前記エキソン5の少なくとも一部分のヌクレオチド配列がC/Trs9898多型のT対立遺伝子を有する場合に、前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の成功が低いことを予想することを含む、請求項11に記載の方法。妊娠の結果を予想することが、前記女性及び前記男性のうちの少なくとも1人が前記C/Trs9898多型の前記T対立遺伝子についてヘテロ接合体であると決定される場合に、前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の成功が低いことを予想すること、及び前記女性及び前記男性のうちの少なくとも1人が前記C/Trs9898多型の前記T対立遺伝子についてホモ接合体であると決定される場合に、前記体外受精を受けている前記女性の妊娠の成功が非常に低いことを予想することを含む、請求項12に記載の方法。女性の受胎状態を予想する方法であって、前記女性から得た身体試料のDNAを抽出すること、前記抽出したDNAについてヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRG、遺伝子のエキソン5の少なくとも一部分の一塩基多形、SNP、遺伝子型解析を行うこと、及び前記SNP遺伝子型解析に基づいて前記女性の受胎状態を予想すること、を含む上記方法。受胎状態を予想することが、前記エキソン5の少なくとも一部分のヌクレオチド配列がC/Trs9898多型のT対立遺伝子を有する場合に、前記女性の受胎状態の異常/障害を予想することを含む、請求項14に記載の方法。前記SNP遺伝子型解析を行うことが、C/Trs9898多型を含む前記HRG遺伝子の前記エキソン5の少なくとも一部分のヌクレオチド配列を決定することを含む、請求項11から15までのいずれか一項に記載の方法。前記身体試料が体液試料である、請求項1から16までのいずれか一項に記載の方法。前記体液試料が、卵胞液試料、血漿試料、又は血液試料である、請求項17に記載の方法。体外受精を受けている女性の妊娠の成功を増大させる方法であって、前記女性の子宮内に着床させる少なくとも1個の胚を形成するための、体外における前記少なくとも1個の卵子の、男性からの精子による受精の前、間、又は後に、配列番号9によって規定されるアミノ酸配列を含む分子を、前記女性からの少なくとも1個の卵子を含む培養培地に投与することを含む上記方法。前記分子を投与することが、配列番号7によって規定されるアミノ酸配列、好ましくはヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRGのプロリンイソ型を含む分子を前記培養培地に投与することを含む、請求項19に記載の方法。前記女性及び前記男性のうちの少なくとも1人がHRGのセリンイソ型についてヘテロ接合体又はホモ接合体である、請求項19又は20に記載の方法。受胎促進薬の製造において用いるための、配列番号9によって規定されるアミノ酸配列を含む分子。前記分子が、配列番号7によって規定されるアミノ酸配列、好ましくはヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRGのプロリンイソ型を含む、請求項22に記載の分子。配列番号9によって規定されるアミノ酸配列を含む分子、及び少なくとも1つの薬学的に許容される担体を含む膣用組成物。前記分子が、配列番号7によって規定されるアミノ酸配列、好ましくはヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRGのプロリンイソ型を含む、請求項24に記載の膣用組成物。女性の妊娠の成功を増大させる方法であって、配列番号9によって規定されるアミノ酸配列を含む分子を前記女性に投与することを含む上記方法。前記分子を投与することが、配列番号7によって規定されるアミノ酸配列を含む分子、好ましくはヒスチジンリッチ糖タンパク質、HRGのプロリンイソ型を前記女性に投与することを含む、請求項26に記載の方法。前記女性が体外受精を受けており、前記分子を投与することが、前記女性の子宮内への胚の着床の前、間、及び/又は後に前記女性に前記分子を投与することを含む、請求項26又は27に記載の方法。前記女性、及び前記胚を形成するために体外で前記女性の少なくとも1個の卵子を受精させるために精子を提供している男性のうちの少なくとも1人が、HRGのセリンイソ型についてヘテロ接合体又はホモ接合体である、請求項28に記載の方法。前記分子を投与することが、前記女性の子宮内膜中に前記分子を注射することを含む、請求項26から29までのいずれか一項に記載の方法。前記分子を投与することが、前記女性の子宮の腔中に前記分子を注射することを含む、請求項26から29までのいずれか一項に記載の方法。目的は、上首尾な妊娠の確率が高い、又は低い対象の同定を可能にする技術を提供することである。本発明の別の目的は、女性の上首尾な妊娠の確率を増大させるのに用いることができる技術を提供することである。これら及び他の目的は、本明細書に開示する実施形態によって応じられる。簡潔に述べると、一態様は、IVFの結果を予想する方法に関する。方法は、体液試料、組織試料、又は卵子試料などの、対象から得られた試料中のヒスチジンリッチ糖タンパク質HRGのイソ型単数若しくは複数を決定することを含む。女性が妊娠する確率に関して対象に関与するIVFの結果を、次いで、身体試料中に見出されるHRGタンパク質のイソ型単数又は複数の決定に基づいて予想する。別の一実施形態において、対象のDNAを試料から抽出する。次いで、HRGのエキソン5の少なくとも一部分に対して一塩基多型遺伝子型解析を行う。IVFの結果を、遺伝子型解析からの結果に基づいて予想する。より詳しくは、対象が、HRG遺伝子のエキソン5におけるSNP多型についてSer/Serホモ接合体であると決定された場合、上首尾な妊娠に関するIVFの結果は非常に低いと予想される。Pro/Serヘテロ接合体の対象はIVFの上首尾な妊娠の確率が低いと予想され、Pro/Proホモ接合体の対象はIVFでの上首尾な妊娠の確率が比較的増大し、又はより高いと予想される。他の態様は、女性の受胎状態を予想する方法に関する。方法は、次いで、女性から得られた身体試料中のHRGのイソ型を決定すること、又は身体試料から抽出したDNAに対してHRG遺伝子のエキソン5の少なくとも一部分に対してSNP遺伝子型解析を行うことを伴う。方法は、次いで、決定したHRGイソ型単数若しくは複数に基づいて、又はSNP遺伝子型解析に基づいて、女性の受胎状態を予想する。他の態様は、IVFを受けている女性の妊娠の成功を増大させることに関する。方法は、HRGのプロリンイソ型、又は全長のHRGタンパク質のアミノ酸204位のプロリン残基を含むそのアミノ酸フラグメントを、体液に、又は体外で受精される、若しくは受精された卵子を含む培養培地に投与することを伴う。HRGのプロリンイソ型、又は全長のHRGタンパク質のアミノ酸204位のプロリン残基を含むそのアミノ酸フラグメントを、受胎促進薬として本明細書において用い、また膣用組成物において用いることもできる。さらなる態様は、IVFを受けている女性など、女性の妊娠の成功を増大させる方法に関する。方法は、HRGのプロリンイソ型、又は全長のHRGタンパク質のアミノ酸204位のプロリン残基を含むそのアミノ酸フラグメントを女性に投与することを含む。本発明は、そのさらなる目的及び利点とともに、添付の図面と一緒に以下の記載を参照することによって最もよく理解され得る。本発明は概ね、受精能の予想及び受精の促進に関する。本発明の一態様は、体外受精IVF、特にIVFの間の胚の上首尾な着床を予想し、IVFでの上首尾な妊娠の確率を増大させるための技術に関する。他の態様は、女性の受胎状態を予想すること、及び妊娠の成功を増大させるための技術に関する。本明細書に開示する実施形態は、受胎状態を予想し、IVFの成功を予想のために用いることができるプレディクターの発見に基づく。このプレディクターは、ヒスチジンリッチ糖タンパク質HRG及びHRGをコードする遺伝子である。HRGは、フィブリノゲン、ヘパリン、及びトロンボスポンジンを含めた広範囲のリガンドに対して結合することが知られている豊富な多ドメインの血漿タンパク質である。HRGは、血管新生性及び抗血管新生性両方の性質を有する血管新生に関与する。HRGはトロンボスポンジンの抗血管新生効果を阻止することによって、且つ/又はプラスミノーゲン若しくはプラスミンに結合することによって、細胞の遊走及び浸潤の促進を助けることによって、前血管新生性であると考えられている。しかし、HRGの抗血管新生性の効果は、接着斑を標的とするシグナル伝達によって媒介され、それによって血管内皮成長因子VEGF誘導性の内皮細胞の運動性を中断することが示唆されている。別の抗血管新生性の性質は、線維芽細胞成長因子FGFが細胞外マトリックスに対して、及び内皮細胞表面上に結合するのを防ぐことによって媒介されると考えられている。これは、それによって、血管新生性の成長因子が細胞外マトリックスから放出されるのを防ぎ、また抗血管新生シグナルを内皮細胞に送る。HRGは、繊維素溶解及び血液凝固、補体の活性化、並びに免疫複合体のクリアランスにも関与する。HRGは肝実質細胞中で生成され、血清中の遊離タンパク質として、及び血小板中の顆粒としての両方で輸送されることが示されている。HRG遺伝子は、ヒトにおける染色体3q27に局在する。HRG遺伝子は、7個のエキソンと6個のイントロンを含んでいる。エキソン5は、当技術分野においてC/Trs9898と表され、プロリンPro及びセリンSerの多型を引き起こす一塩基多型SNPを含んでいる。この位置のセリンは、コンセンサスのN-グリコシル化部位Asn-X-Ser/Thrを導入する。N-グリコシル化部位の導入により、アスパラギンAsn残基に追加の炭水化物基の付加がもたらされる。グリコシル化の結果、分子量は、HRGのSerイソ型では、Proイソ型に比べてわずかに大きい。これは、対象からのHRGの特定のイソ型はHRGの分子量を分析することによって決定することができることを意味する。例えば、ウエスタンブロット分析を行う場合、それぞれ75kDaProイソ型及び77kDaSerイソ型バンドとして現れる異なるHRGイソ型間を区別することが可能である。以下の配列配列番号1及び配列番号2は、HRG遺伝子のエキソン5のヌクレオチド配列の一部分、及び対応するアミノ酸配列を示すものである。C/Trs9898多型は配列より明らかであり、関連した部位のプロリンコドンCCCを有する又はセリンコドンTCCを有するのいずれかをもたらす。GTGCGGAACTGC[C/T]CCAGACACCATTTCValArgAsnCysPro/SerArgHisHisPheHermannらが著した文献において、ヒスチジンリッチ糖タンパク質のPro186Ser多型は、ECTIMstudy、ThrombHaemost、1998年、79巻2、359~361頁において心筋梗塞に関係なく、HRGのこの多型は、関連するアミノ酸残基がHRGタンパク質のアミノ酸番号186であることを示すPro186Serと一般的に表される。しかし、UniProt及びNCBIなどのタンパク質のデータベースは、多型に関連する位置として、代わりにHRGのアミノ酸番号204、即ち、Pro204Serに言及している。このような違いの理由は、HRGタンパク質が、タンパク質から切断され得るシグナルペプチドを含んでいることである。シグナルペプチドを有するHRGは、多型に関連する位置としてアミノ酸番号204を有し、シグナルペプチドのないHRGにおける多型の位置はアミノ酸番号186である。しかし、これら全ての場合において、関連するPro/Serアミノ酸及びCCC/TCCコドンは、それぞれ、上記に示した状況内に、又はHRGタンパク質及びHRG遺伝子の遺伝子座に存在する。ヒトの女性の妊娠の成功及び体外受精の成功と、HRGイソ型及びHRGの上記に示した位置のPro又はSerいずれかをコードするHRGの遺伝子変異体との間には重要な関係が存在することを検証する研究が行われている。以下において、Serイソ型の表現は、上記に提供するHRGのアミノ酸配列の部分において示す位置のアミノ酸としてセリンを有するHRGのイソ型を表すのに用いられ、Proイソ型は、この位置のアミノ酸番号として代わりにプロリンを有するHRGイソ型を表す。図2を参照すると、一態様はしたがって、上首尾又は上首尾でない妊娠の点から、女性の体外受精の成功を予想し、又は女性の体外受精の結果を予想する方法に関する。この方法は、ステップS1においてIVFを受けているカップルにおける女性及び男性のうちの少なくとも1人からのHRGタンパク質を含む身体試料を採取することを、任意選択によって含む。少なくとも検出できる量のHRGを含むあらゆる身体試料を、この態様にしたがって用いることができる。これは、身体組織試料及び体液試料の両方とも用いることができることを意味する。体液試料は、典型的には身体組織試料よりも採取及び取扱いが容易であるので、一般的に好ましい。本態様にしたがって用いることができる、非限定的であるが好ましい体液試料は、卵胞液試料、血漿試料、及び血液試料である。この態様によると、女性及び/又は男性から得た身体試料中に存在するHRGのイソ型又はイソ型複数をステップS2において決定する。代替的に、又はIFVを受けている女性及び女性の子宮内に着床させる少なくとも1個の胚を形成するために、体外で少なくとも1個の卵子を受精させる精子を提供している男性のうちの少なくとも1人から得た身体試料からのHRGのイソ型を決定することに加えて、少なくとも1個の卵子のうちの卵子から得た試料をHRGイソ型単数又は複数に関して調査することができる。このように、女性から身体試料を採取する代わりに、又は採取することに対する補足として、女性からの卵子の1個から得た試料を用いてもよく、又は得られる胚から試料を実際に得てもよい。卵子試料からのHRGのイソ型の決定は、卵子が卵子の提供者に由来するものであり、少なくとも1個の受精卵即ち、胚が着床される女性に由来しない場合、特に適切である。女性の体外受精の成功の推定、又は女性の体外受精の結果を、次いで、身体試料及び/又は卵子/胚試料中のHRGのイソ型又はイソ型複数の決定に基づいて、ステップS3において予想する。体外受精の成功は、本明細書において、妊娠をもたらす体外受精としてみなされる。試料を少なくとも女性又は卵子から採取する場合が好ましいが、女性又は卵子、及び男性の両方から採取するのが好ましい。或いは、試料を、IVFに関与し、体外で女性の卵子を受精するのに用いる精子を提供しているカップルの男性からのみ採取してもよい。本明細書においてより詳しく論じる通り、Serイソ型についてホモ接合体である女性は、体外授精での上首尾の妊娠の確率が、非常に低く、ゼロに近い確率を有する。Serイソ型及びProイソ型の両方を有する女性は、受胎及び妊娠をもたらす上首尾な体外受精のわずかに良好な確率を有するが、両者とも成功率は依然として低い。これは、Serイソ型を有する女性に比べて上首尾な体外受精の確率が著しく高い、Proイソ型についてホモ接合体である女性と比べるべきである。女性が妊娠するという点でIVFの成功は、体外で卵子を受精させるのに用いられる精子を表す男性のHRGイソ型にもよると予想されている。本明細書でさらに論じる通り、胚もHRGを生成し、胚からのHRGは上首尾な妊娠の確率にとって重要であり得ると考えられている。上首尾な妊娠の確率はそれゆえ、胚のHRGイソ型単数又は複数によるものであり、さらに卵子を提供する女性と精子を提供する男性との遺伝子的な構成によるものである。好ましい一実施形態において、身体試料におけるイソ型の決定を、身体試料中のHRGの分子量を推定することによって行う。2つのHRGイソ型の間には、Serイソ型を有するN-グリコシル化部位の導入により、検出可能な分子量の違いが存在する。その結果、体液試料に適用することができ、HRGイソ型間即ち、ウエスタンブロット分析から決定される分子量75kDa対77kDaを識別することができる分子量を決定するあらゆる技術を、本実施形態にしたがって用いることができる。簡単で、対費用効果が高く、迅速なこのような技術は、数時間以内の身体試料中のHRGイソ型の決定を可能にするウエスタンブロットである。しかし、ウエスタンブロットは、用いることができる分子量決定技術の説明的な一例としてのみみなすべきである。2つのHRGイソ型は、分子量測定に基づいて、必ずしも決定し、同定しなくてもよい。代替の取組みにおいて、身体試料中の1つ又は両方のHRGイソ型の存在を検出するのにELISA試験を用いることができる。次に、ELISA試験は、Serイソ型に対して特異的に結合するがProイソ型に対して結合しない抗体、Proイソ型に対して特異的に結合するがSerイソ型に対して結合しない抗体、又は好ましくはSerイソ型に対して特異的に結合するがProイソ型に結合しない抗体及びProイソ型に対して特異的に結合するがSerイソ型に対して結合しない抗体に基づく。前二者の場合、単一のELISA試験だけを用いる必要がある。このように、ELISA試験がSerイソ型の存在を検証する場合、予想されるIVFの成功は低く設定され、即ち、Serイソ型についてのホモ接合体又はヘテロ接合体いずれかに設定される。ELISA試験が抗体を用いてSerイソ型の存在を検出することができない場合、女性はPro/Proホモ接合体であり、したがって、予想されるIVFの成功は比較的高い。抗体が代わりにProイソ型に対して特異的に結合し、ELISAがいかなるHRGの存在も検出しない場合、女性はSer/Serホモ接合体であると決定され、したがってIVFの成功に対して予想される確率は非常に低い。Proイソ型の検出は、女性が上首尾なIVFの確率が高くPro/Proホモ接合体、又は上首尾なIVFの確率が低いが非常に低くはないPro/Serヘテロ接合体ことを含意する。しかし、女性が、Ser/Serホモ接合体であるか、Pro/Proホモ接合体であるか、又はPro/Serヘテロ接合体であるかを検証するのに2つの異なるELISA試験を行うのが好ましい。ELISA試験において用いられる2つの異なるHRGイソ型に対するモノクローナル抗体は、例えば、当技術分野においてよく知られている技術にしたがって製造することができる。簡潔に述べると、モノクローナル抗体は、ミエローマ細胞を所望の抗原で免疫化したマウスからの脾臓細胞と融合することによって作成されるのが典型的である。しかし、最近の進歩によりウサギB細胞の使用が可能になっている。当技術分野において知られている抗体を生成するための他の技術も代替的に用いることができる。実際、特定のHRGイソ型の存在を検証するためにタンパク質診断において用いることができるあらゆる分析を、本発明にしたがって用いることができる。身体試料中のHRGイソ型を決定するための分子量決定方法を利用する場合、方法は、好ましくは、HRGの75kDa及び77kDaイソ型の少なくとも1つの存在を決定することを伴う。以下において、75kDaイソ型は、ウエスタンブロットによって決定して分子量75kDaを有し、Proイソ型に対応するHRGイソ型を表す。同様に、77kDaイソ型は、ウエスタンブロットによって決定して分子量77kDaを有し、Serイソ型に対応するHRGイソ型を表す。次いで、IVFの成功の予想を、75kDaイソ型の存在、77kDaイソ型の存在に基づいて、又は75kDa及び77kDaイソ型両方の存在に基づいて行う。身体試料がHRGの77kDaイソ型を含むことが決定したら、予想はIVFの成功が低いことを予想することを伴う。さらに、身体試料が75kDa及び77kDaイソ型の両方を含む場合、IVFの成功の確率は低いと決定され、身体試料が77kDaイソ型のみを含む場合、IVFの成功の確率は非常に低いと予想される。HRGの75kDaイソ型のみのそれぞれの身体試料を有する対象は、IVF成功の確率が比較的高いと予想される。IVFの成功に関して本明細書で用いられる、発現が低い、非常に低い、及び高いという表現は、女性の3つの異なるカテゴリー、即ち、Ser/Serホモ接合体、Pro/Serヘテロ接合体、及びPro/Proホモ接合体について、成功の確率がどのようであるかを規定する相対的な語として与えられるにすぎない。実験結果は2つの異なる試験において行われている。これら両方の試験において、Ser/Serホモ接合体の女性は誰もIVFから妊娠せず、それによってIVF成功の確率は非常に低いとみなされる。2つの試験においてIVFを受けているPro/Serヘテロ接合体の女性の17及び33が妊娠し、Pro/Proホモ接合体の女性の57及び70が妊娠した。成功の確率が低いということはIVFから妊娠する確率が平均より低いことをそれによってほのめかしており、成功の確率が高いということは、ヒト集団の平均よりも妊娠の確率が高いことをそれによって含意する。IVFの成功の予想は、必ずしもタンパク質レベルに対するHRGイソ型分析に基づいて行われなくてもよい。明らかに対照的に、DNAベースで分析を行う代わりにSNP遺伝子型解析をそれによって用いることができる。図3を参照すると、別の一態様は、それによって、ステップS11においてIVFを受けている女性及び/又は男性の対象から任意選択によって身体試料を採取することによって、女性のIVFの成功を予想し、又は女性に対するIVFの結果を予想する方法に関する。身体試料は、身体組織試料、又は体液試料であってよい。実際に、対象のDNAを含む対象からのあらゆる身体試料を本方法において用いることができる。身体試料は、血漿試料又は血液試料など、体液の試料が好ましい。或いは、又は更に、体外で受精させた1個又は複数の卵子から得た試料を用いることができる。対象のDNAを、当技術分野においてよく知られている技術を用いて身体試料から、ステップS11において抽出する。身体試料からDNAを抽出する非限定的な例は、Qiagenが提供するDNA抽出キットを用いることである。次いで、SNP遺伝子型解析を、ステップ12において、ステップS11において抽出したDNAを用いて、HRGのエキソン5の少なくとも一部分に対して行う。SNP遺伝子型解析は、特に、HRG遺伝子のエキソン5に存在するC/Trs9898多型に関してHRGの特定のヌクレオチド配列を検証する。IVFを受けている女性に対する、IVFの成功及びIVFの結果、即ち、妊娠する確率を、ステップS13におけるSNP遺伝子型解析に基づいて予想する。図2に関連して上記で論じ、タンパク質レベルに対して行った方法と同様に、上記に開示したヌクレオチドベースの分析を、女性、男性、又はIVFに関してカップルとなった女性及び男性の両方に対して行うことができる。更に、又は或いは、ヌクレオチドベースの分析を、卵子、又は受精後に得られた胚について行うことができる。当技術分野においてよく知られている通り、SNP遺伝子型解析は、特定の遺伝子座の単一の塩基対の変異を決定することができる技術に関する。対象が、HRGの関連する位置でプロリン又はセリンについてヘテロ接合体であるか、又はホモ接合体であるかを決定するために、様々な技術を用いてSNP遺伝子型解析を行うことができる。用いることができる非限定的な技術は以下のものを含むことができる。動的対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーションDASH及び分子ビーコンは、特異的に構築された一本鎖オリゴヌクレオチドプローブによって、SNP検出において用いられる。分子ビーコンが野生型対立遺伝子に適合するようにデザインされ...AACTGCCCCAGACAC...、別のものが対立遺伝子の変異体に適合するようにデザインされる場合...AACTGCTCCAGACAC...、この2つを個体の遺伝子型を同定するのに用いることができる。アッセイの間に第1のプローブのフルオロフォアの波長のみが検出された場合、対象は野生型についてホモ接合体である。第2のプローブの波長のみが検出された場合、対象は変異体の対立遺伝子についてホモ接合体である。最後に、両方の波長が検出された場合、対象はSer/Proヘテロ接合体である。用いることができるさらなる技術には、小型のチップ上にプローブが配列されているSNPマイクロアレイが含まれる。制限断片長多型RFLP、PCRベースの方法、例えば、テトラ-プライマーARMS-PCR、フラップエンドヌクレアーゼFENベースの方法、プライマー伸長法、SNP遺伝子型解析のためのTaqmanアッセイ、オリゴヌクレオチドリガーゼアッセイを含めた、酵素ベースの方法も用いることができる。さらなる技術には、一本鎖立体配座多型、温度勾配ゲル電気泳動TGGE、変性高速液体クロマトグラフィーDHPLC、高分解能融解分析、及びAppliedBiosystemsによって販売されているSNPlexが含まれる。SNP遺伝子型解析は、対象のHRG対立遺伝子を決定するために行われる。これは、対象が、ヌクレオチドシトシンCとの対立遺伝子を有してプロリンをコードするコドンCCCを形成するか、又はCの代わりにヌクレオチドチミンTとの対立遺伝子を有してプロリンの代わりにセリンをコードするコドンTCCを形成するかを検証するために、SNP遺伝子型解析を行うことを意味する。上記で徹底的に論じた通り、T対立遺伝子についてホモ接合体である女性は、上首尾なIVFの確率は非常に低く、C/Tへテロ接合体の女性は上首尾なIVFの確率は低く、C/Cホモ接合体の女性は上首尾なIVFの確率は比較的高い。HRGのエキソン5、又はHRG遺伝子における関連の対立遺伝子の遺伝子座を含むエキソン5の少なくとも部分の配列決定を行うことも可能である。次いで、決定したヌクレオチド配列を用いて、対象がT対立遺伝子についてホモ接合体であるか、C対立遺伝子についてホモ接合体であるか、又はヘテロ接合体であるか、即ち、染色体3の1つに対する遺伝子座上にT対立遺伝子を含み、他の染色体3の遺伝子座上にC対立遺伝子を含むか否かを結論づける。HRGは、IVFにおける妊娠の結果のマーカー又はプレディクターだけではない。本明細書に提示する実験データは、HRGを、一般的な女性の受胎状態を予想するために用いるマーカー又はプレディクターとして用いることができることを更に支持している。次いで、方法は、一態様において、女性から得た身体試料中のHRGのイソ型を決定することを伴う。身体試料は、先に論じたあらゆる身体試料であってよい。女性の受胎状態を、次いで、決定したHRGイソ型に基づいて予想する。次いで、HRGイソ型を利用して、女性に流産の確率の増大をもたらす受胎状態の異常又は障害を有する危険性があるか否かを予想することができる。例えば、HRGの77kDaイソ型のみの存在は、妊娠初期において、反復性の流産又は反復性の妊娠損失RPLとも呼ばれる習慣性流産を有する群においてより一般的である。次いで、受胎状態の予想を、上記に記載した身体試料中のHRGの75kDa及び/又は77kDaイソ型の存在に基づいて行うのが好ましい。特に、女性から得た身体試料中のHRGの77kDaイソ型の存在に基づいて、好ましくは、HRGの77kDaイソ型が存在するがHRGの75kDaイソ型が非存在であることに基づいて、習慣性流産の危険性の増大を有するなど、女性が受胎状態の異常又は障害を有することを予想する。同様に、身体試料中のHRGの77kDaイソ型が非存在であるがHRGの75kDaイソ型が存在することに基づいて、女性が正常の受胎状態を有することを予想する。本態様によるHRGイソ型単数又は複数の決定を、先に記載したIVFを受けている女性の妊娠の結果を予想するのと同じ方法において行うことができる。女性の受胎状態の予想は、必ずしもHRGのイソ型に基づいて行われなくてもよいが、代わりに女性から得た身体試料のDNAを抽出することによって行うことができる。次いで、先に論じたSNP遺伝子型解析を、抽出したDNA上のHRG遺伝子のエキソン5の少なくとも一部分で行い、女性の受胎状態をSNP遺伝子型解析に基づいて予想する。一実施形態において、エキソン5の少なくとも一部分のヌクレオチド配列がC/Trs9898多型のT対立遺伝子を有し、特にT対立遺伝子についてホモ接合体である場合、女性は、習慣性流産の危険性の増大を有するなど、受胎状態の異常又は障害を有すると予想される。同様に、エキソン5の少なくとも一部分のヌクレオチド配列がC対立遺伝子を有し、好ましくはC/Trs9898多型のC対立遺伝子についてホモ接合体である場合、女性は、好ましくは、正常の受胎状態を有すると予想される。身体試料のDNAの抽出、及びSNP遺伝子型解析の実施は、本明細書の先に記載した通りに行うことができる。本明細書に提示する実験データは、HRGのProイソ型の存在は、IVFによる上首尾な妊娠にとって不可欠であり、又は少なくとも非常に重要であると思われる。したがって、一態様は、IVFを受けている女性の妊娠の成功を増大させる方法に関する。次いで、方法は、HRGのProイソ型又はそのアミノ酸フラグメントペプチドを、1個又は複数の胚を得るために体外受精されている卵子又は卵子複数を含む培養培地に投与することを伴う。本明細書にさらに記載するアミノ酸フラグメントは、全長のHRGタンパク質におけるアミノ酸番号204のプロリン残基を含んでいる。これは、培養培地へのProイソ型の添加によって、体外授精の前、間、又は後に、卵子がそれによってHRGのProイソ型又はPro含有アミノ酸フラグメントに曝露されることを意味する。好ましい一実施形態において、HRGのProイソ型又はアミノ酸フラグメントを、卵子の体外受精の前及び/又は間に体液又は培養培地に添加するのが好ましい。この態様の特定の一実施形態において、それに卵子が由来する少なくとも1人の女性、及び精子を提供している男性が、Pro/Serヘテロ接合体、又はSer/Serホモ接合体であることが確認される。HRGのProイソ型、又はアミノ酸番号204のアミノ酸Proを含むHRGタンパク質のフラグメントに対応するペプチドは、本発明の一実施形態において、受胎促進物質として用いられる。ペプチドが少なくとも10個のアミノ酸を含んでいるのが好ましく、少なくとも14個のアミノ酸を含んでいるのが好ましい。HRGの14個のアミノ酸フラグメントを構成する、好ましいこのようなペプチド又はPro含有アミノ酸フラグメントの一実施形態は、Phe-Ser-Val-Arg-Asn-Cys-Pro-Arg-His-His-Phe-Pro-Arg-His配列番号9である。このペプチド配列において、HRGにおけるアミノ酸番号204のプロリンに対応する関連のプロリン残基を太字で印す。さらなる実施形態において、ペプチドは好ましくは少なくとも15個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも20個のアミノ酸、例えば、少なくとも25個のアミノ酸、少なくとも30個のアミノ酸、又はより好ましくは少なくとも35個のアミノ酸を含んでいる。ペプチドは、好ましくは、HRGタンパク質のフラグメントと同じアミノ酸配列を有し、204位にアミノ酸Proを含んでいる。プロリン残基がペプチドの中央にあるのが好ましい。ペプチドは、必ずしもHRGタンパク質の対応する部分に100の相同性を有していなくてよい。本実施形態は、HRGタンパク質に、少なくとも80、好ましくは少なくとも85、より好ましくは少なくとも90、又は少なくとも95の相同性を有するペプチドも含んでいる。しかし、ペプチドは、1個又は数個の他のアミノ酸がHRGタンパク質のアミノ酸配列と異なることがあっても、好ましくはペプチド配列の中央付近にプロリンを含んでいる。アミノ酸配列Arg-Gly-Gly-Glu-Gly-Thr-Gly-Tyr-Phe-Val-Asp-Phe-Ser-Val-Arg-Asn-Cys-Pro-Arg-His-His-Phe-Pro-Arg-His-Pro-Asn-Val-Phe-Gly-Phe-Cys配列番号7を有するペプチドは試験されており、本実施形態にしたがって受胎促進薬として用いられ得る。一態様は、受胎促進薬の製造において用いるための、上記で規定したペプチドを含む分子に関する。分子は、好ましくは、配列番号9若しくは配列番号7において規定したペプチドであり、又は配列番号9若しくは配列番号7のアミノ酸配列を含んでいる。特定の一実施形態において、分子は、上記で言及したシグナルペプチドを含むHRGのプロリンイソ型、又はシグナルペプチドのないHRGのプロリンイソ型のいずれかの、HRGのプロリンイソ型である。さらなる関連の一態様は、上記で言及した分子を女性に投与することを含む、女性の妊娠の成功を増大し、又は受精能を促進する方法である。方法が、配列番号9若しくは配列番号7において規定した、又は配列番号9若しくは配列番号7のアミノ酸配列を含む分子を女性に投与することを含むのが好ましい。特定の一実施形態において、分子はHRGのプロリンイソ型であるシグナルペプチド有、又はなしのいずれか。女性がIFVを受けている場合は女性の子宮内に胚を着床させる前、間、及び/又は後に、分子を投与することができる。特定の一実施形態において、女性の子宮内に受精した接合体を着床させる少なくとも前に、女性に分子を投与するように意図するのが好ましい。投与が、HRGのProイソ型などの分子を、胚の着床前に女性の子宮内膜中に注射することによって行われるのが好ましい。代替の、又は更なる投与部位は、頸部によって子宮腔中であってよい。この態様は、HRGのProイソ型などの分子の、卵子/胚を含む培地への投与と組み合わせることもできる。特定の一実施形態において、Proイソ型などの分子の投与は、上記に記載した通り、女性及び体外で女性の少なくとも1個の卵子を受精させるために精子を提供している男性のうちの少なくとも1人が、HRGのセリンイソ型に対して、ヘテロ接合体又は好ましくはホモ接合体である場合、特に有効である。分子、即ち、ペプチド又はHRGのProイソ型が、ペプチド又はHRGのProイソ型、及び薬学的に許容される担体又は膣内投与に適用できる賦形剤の少なくとも1つを含む膣用組成物として提供されるのが好ましい。膣用の錠剤、硬及び軟ゼラチンカプセル剤、クリーム剤、ゲル剤、坐剤、膣坐剤、泡沫剤、軟膏剤、フィルム剤、タンポン、膣リング、洗浄剤、及び液剤を含めた数種の製剤が、一般に、膣内投与に利用可能である。製剤は、膣用カプセル剤、錠剤、若しくは挿入剤、膣用ゲル若しくはクリーム剤の形態であるか、膣用溶液の形態であることが有利である。適切な薬学的に許容される担体又は賦形剤の例は、Gargら、膣用製剤のための医薬品賦形剤大要CompendiumofPharmaceuticalExcipientsforVaginalFormulations、PharmaceuticalTechnologyDrugDelivery、2001年、14~24頁において列挙された賦形剤から選択することができる。HRGを生成するための胚をスクリーニングすることもまた、又は代替として可能であってよい。胚によって生成される特定のイソ型単数又は複数を、次いで、HRGのProイソ型などの分子が、胚を含む体液若しくは培養培地中に投与し、且つ/又は胚を着床させる女性に投与するべきかを規定する。このように、胚が、HRGのSerイソ型を単独で生成するか、Proイソ型と一緒に生成するかのいずれかの場合、HRGのProイソ型などの分子の、培養培地及び/又は女性に対する投与を開始しなければならない。これらの態様において用いられるHRGのProイソ型が、ヒトHRGのProイソ型であるのが好ましく、組換えヒトHRGのProイソ型であるのがより好ましい。培地に加えられ、又は女性に投与される、HRGのProイソ型などの分子の濃度は、ヒト女性集団における天然のHRGの濃度範囲であると選択することができる。この濃度範囲は、当技術分野においてよく知られている技術を用いて、当業者が無作為的に決定することができる。更なる一態様は、医薬又は薬物として、治療において用いるための、HRGのProイソ型などの分子にも関する。特定の一態様は、特に体外受精を受けている女性の、特に女性及び/又は精子を提供している男性がHRGのPro/Serヘテロ接合体又はSer/Serホモ接合体である場合、女性の妊娠の成功の増大において用いるための、HRGのProイソ型などの分子に関する。更なる特定の一実施形態は、このような女性の妊娠の成功を増大させるための薬物を製造するための、HRGのProイソ型などの分子の使用に関する。受精能/不妊におけるHRGの重要性を分析するために、CentreofReproduction、Akademiskasjukhuset、Uppsalaに通所していた女性24人に、試験に加入するよう求めた。卵巣及び血漿から卵胞液を収集し、凍結させた。ウエスタンブロットを行い、本発明者らは、分子量75kDa及び77kDaに対応する全長のHRGの2つのイソ型を見出した。分析した試料から、4人の女性が、ゲル上の分子量77kDaに1本のバンドのみを有するSer/Serのホモ接合体キャリアであると思われた。6人の女性が、ゲル上に2本のバンドプロリン/セリンを有するヘテロ接合体キャリアであり、14人の女性は少量のタンパク質を有するにすぎず、彼女たちはプロリン/プロリンについてのホモ接合体であることを示していた。試験は、RegionalEthicsCommitteeoftheMedicalFacultyofUppsalaによって認可されており、試験に加入した各患者からインフォームドコンセントを得た。参加した患者に支払いはなされなかった。試験患者は全て、DepartmentofWomen’sandChildren’sHealth,UppsalaUniversityHospital、ウプサラ、スウェーデンに含まれていた。十分に制御された血管新生は、適切な胚の着床、胚形成、及び妊娠の発達にとって決定的である。メスの生殖器官及び初期胚における血管新生調節物質の存在及び分布のモニタリングは、受精能、胚形成、及び妊娠の分子的局面を広く理解するのに重要である。HRGは血管新生に関与する糖タンパク質である。メスの生殖器官又は胚におけるHRGの存在は、以前には研究されていなかった。卵胞液、培養培地、及び胚は、IVFを受けている患者から入手した。生殖器内部及び胎盤からの生検は外科手術時に収集した。HRGの存在は免疫組織化学及びウエスタンブロットによって調査した。PCRを用いて、組織中の、又は胚によるHRG発現を決定した。本発明者らは、卵胞液、メスの生殖器官、及び胎盤における、並びに胚におけるHRGを同定した。さらに、HRGの発現は胚盤胞において観察した。このように、HGFの血管新生性の性質は受精能に影響を及ぼすと思われる。卵胞液、培養培地、及び胚の収集卵胞液、培養培地、及び胚を、IVFのために制御された卵巣の過剰刺激を受けているカップルから収集した。血漿試料を、卵母細胞の収集と同じ日に採取した。卵母細胞の収集時、卵胞液を50ml遠心管Falcon、NJ、米国中に収集し、各患者から別々にプールした。血液のコンタミネーションを避けるよう、注意を払った。試料を-20°Cで一時的に凍結し、-70°Cのフリーザーに毎週移動した。胚の培養に用いた培地CCM、Vitrolife、Kungsbacka、スウェーデンを、試料4本中にプールした。試料3本は、それぞれ5日目、6日目、又は7日目まで培養した胚からの培地を含んでいた。これらの試料には、発生が遅い胚でさえも増殖した培地が含まれていた。第4の試料は、もっぱら胚盤胞からプールした培地であった。各試料において、6組から10組のカップルに由来する胚から培地をプールした。培地を1週間、-20°Cで凍結した。ヒト着床前胚は、2日目又は3日目には胚移植又は凍結保存に十分な量ではなかったが、ルーチンのプロトコールにしたがって培地中G-1商標PLUS/G-2商標PLUS、VitrolifeAB、Kungsbacka、スウェーデンで培養した。これらを、2細胞期から胚盤胞の孵化までの様々な段階で回収し、免疫組織化学に用いた。子宮からのファロピウス管、子宮内膜、胎盤、及び子宮筋層からの生検の収集腹腔鏡による不妊手術時、掻爬術によって収集したファロピウス管及び子宮内膜の生検を、健常メス志願者から集めた。用いたファロピウス管は、卵胞中、排卵後、及び月経周期の黄体期におけるものであった。子宮内膜試料は、排卵6日後に採取した。子宮筋層の生検及び胎盤の試料は、正常な、健常の妊娠時に行われた帝王切開直後に収集した。組織試料を生理学的食塩水溶液NaCl9mg/ml中ですすぎ、4パラホルムアルデヒド中で最高24時間固定し、ルーチン手順にしたがってパラフィンワックス中に包埋するまで数週間70エタノール中に貯蔵した。卵胞液のウエスタンブロット試料を、4~12勾配のBis-TrisNuPAGENP0321、Invitrogen、CA、米国を用いて分離し、還元条件に対して市販の還元剤NP0004、LI-COR、Invitrogen、CA、米国を加えた。分離したタンパク質試料を、低バックグラウンドの蛍光に対して最適化したImmobilon-FLメンブレンIPFL00010、MilliporeCorp、米国に移し、ブロッキングバッファー927-40000、Li-CorBiosciences、英国とインキュベートした。ウエスタンブロットを、HRGのHis/Proドメインに対する抗HRG抗体HRG-0119、LenaClaesson-Welsh、DepartmentofMedicalGeneticsandPathology、UppsalaUniversity、Uppsala、スウェーデンで行った。免疫反応性の部位を、Odyssey赤外画像化システムWestburgを用いて、蛍光標識した抗ウサギIRDye800抗体611-732-127/Rockland、米国によって検出した。分子量75kDa及び77kDaを有するバンドに対応する、全長のHRGの2つのイソ型を、ウエスタンブロット分析において検出した、図1を参照されたい。女性24人からの卵胞液試料中、4人が単一Ser/Serホモ接合体の77kDaのバンドを有し、6人が二重Pro/Serヘテロ接合体のバンドを有し、14人が単一Pro/Proホモ接合体の75kDaバンドを有した。この集団の合計のSer対立遺伝子の頻度は、したがって0.29である。IVFを受けている女性24人中、9人が妊娠した。Ser対立遺伝子の頻度は、これら妊婦の中で著しく低かった。女性1人だけがPro/Serヘテロ接合体であり、他の8人の妊婦はPro/Proホモ接合体であった。これは、Ser対立遺伝子の頻度が0.06にすぎないことを含意する。さらに、単一のPro/Serヘテロ接合体女性の妊娠は、胎児が致死的な奇形を有していたため中止された。IVF処置をし、妊娠しなかった女性15人中4人はSer/Serホモ接合体であり、6人がPro/Serヘテロ接合体であり、5人だけがPro/Proホモ接合体であった。これによりSer対立遺伝子の頻度は0.43となる。妊娠した群と妊娠しなかった群との間の差は著しい。また、Ser/Serホモ接合体及びPro/Serヘテロ接合体の群と、Pro/Proホモ接合体の群との間の差も著しい。以下の表1は、IVFを受けている女性24人からの卵胞液からのHRGにおける遺伝的変異に対するウエスタンブロットデータの概要である。培養培地及び血漿に対するELISAPVC製マイクロタイタープレートのウエルを、重炭酸塩バッファー、pH9.6中ポリクローナルHRG捕捉抗体H00003273-B01P、AbNova、米国で37°Cで1時間コーティングし、Tris緩衝食塩水TBSを用いて洗浄ステップを2回続けた。5BSAを含むブロッキングバッファーを37°Cで1時間加え、TBSを用いて洗浄ステップを更に2回続けた。試料を、37°Cで45分間インキュベートし、次いで4回洗浄した。検出用に、第2の抗体HRG-0119、LenaClaesson-Welsh、DepartmentofMedicalGeneticsandPathology、UppsalaUniversity、Uppsala、スウェーデンを37°Cで1時間加え、次いで、洗浄ステップを4回続けた。ビオチン化抗ウサギIgG抗体BA-1000、VectorLabolatoriesとのインキュベートを行い、洗浄し、次いで、TBS/0.1Tween中ストレプトアビジンコンジュゲートしたHRPを加えた。HRGのレベルを、TMB3,3’,5,5’-テトラメチルベンチジン含有基質及び停止溶液2MH2SO4を加えた後、光学密度450nmで分析した。各試験は純粋HRGでの検量線を含んでいた。ELISAを培養培地に対して行って、HRGがヒト胚によって分泌されるか否かを分析した。この培養培地は胚盤胞を増殖させるのに用いた。各試料中にHRGが検出された、表2を参照されたい。胚の培養に用いなかった培地は陰性対照として用い、検出できるレベルのHRGを含んでいなかった。胚の免疫組織化学染色胚を培養培地から速やかに移し、ポリビニルピロリドンPVP3mg/mlを含むリン酸緩衝食塩水PBS中で簡単に洗浄し、次いで、室温で15分間、PBS中2.5パラホルムアルデヒドで固定した。固定後、胚を、30分間、0.25TritonX100を含むPBS/PVPバッファー中透過処理した。その後、胚を、0.1ウシ血清アルブミンBSA及び0.01Tween20を含むPBSブロッキングバッファー中に15分間配置した。1次抗体HRG-0119、LenaClaesson-Welsh、DepartmentofMedicalGeneticsandPathology、UppsalaUniversity、Uppsala、スウェーデンをブロッキングバッファー中に加えた。胚を4°Cで一夜インキュベートし、次いで、ブロッキングバッファー中3回各15分間洗浄してあらゆる非結合の1次抗体を除去した。2次抗体である、ヤギ抗ウサギにコンジュゲートしたAlexa568A11079、InvitrogenCorporation、Stockholm、スウェーデンをブロッキングバッファー中で希釈し、室温の暗所で60分間、胚に適用した。陰性対照には、ブロッキングバッファー中の1次抗体又は2次抗体を省略した。インキュベート後、胚を、一連の25、50、75、及び100citifluorDAPI有によって簡単に洗浄し、次いで、スライドガラス上、カバーガラス下のアンチフェードantifade媒体中に搭載した。染色された胚が、蛍光レンズ及び好適なフィルタを装備した共焦点顕微鏡Zeiss、ドイツで見られた。免疫組織化学的染色を、着床前胚におけるHRGの存在、局在、及び強度を試験するために行った、図4を参照されたい。HRGは、4細胞期から胚盤胞孵化期を通した発生の全段階に存在した。HRGは、発生段階に関係なく、全ての着床前胚における全細胞における細胞質中に検出された。しかし、HRGに対する染色では、卵割初期の胚の数個の核において同定されたにすぎなかったが4~8細胞期の胚の25、後期には、HRGは核中により一般的であった胚盤胞の94。どの胚も全ての細胞の核中にHRGを表さなかった、以下の表3を参照されたい。試験時、HRGは自己蛍光性であったが、その内在性のシグナルはバックグラウンドの蛍光より強力であることが発見され、明らかに区別できる差があったことを意味していた。胚に対するPCR以下の修飾を有するCTKitAmbionINC、Austin、TX、米国に対するTaqmanPreAmpCellsを用いて8個の胚盤胞に対するPCRを行った:増幅前ステップ及び増幅ステップを、組織に対するものと同じ増幅配列を用いて行った以下を参照されたい。増幅ステップにおいてSYBRグリーンを用いた。蛍光データを全ての伸長ステップ時に測定することによって獲得し、蛍光強度対サイクル数のプロットとして表した。サイクルの閾値Ctを用いてHRGの存在を決定した。HRGが胚によって生成されるか否かを試験するために、リアルタイムPCR分析を行った。HRGに対するCTの平均値は35.85±1.89であり、GAPDHに対して26.26±0.76であり、これはHRGmRNAに対する検出限界に近い。組織の免疫組織化学的染色パラホルムアルデヒド固定し、パラフィン包埋した組織の切片5μmファロピウス管、子宮内膜、胎盤、又は子宮筋層をキシレン中で脱パラフィンし、段階的なエタノール99.5、1×3分、952×3分、702×3分によって脱水し、脱イオン水中、その後TBS、pH7.4中洗浄した。これらのスライドをクエン酸バッファー中でインキュベートし、650Wのマイクロウエーブオーブン中10分間加熱した。非特異的な結合を、TBS中5BSAで1時間インキュベートすることによってブロックした。次いで、切片を、アフィニティー精製したウサギ抗HRG抗体HRG-0119、LenaClaesson-Welsh、DepartmentofMedicalGeneticsandPathology、UppsalaUniversity、Uppsala、スウェーデンと、加湿チャンバー中4°Cで一夜インキュベートした。切片を0.01Tween-20/TBSバッファー中洗浄した。ビオチン化抗ウサギ抗体ZymedLaboratories,Inc.、CA、米国を、室温で1時間加えた。切片を洗浄し、ストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体VectorLaboratories、CA、米国を加えた。すすいだ後、切片を、液体DAB基質キットDAKO、スウェーデンを用いてクロモゲン溶液に曝露し、Mayerのヘマトキシリンで対比染色した。褐色の反応生成物の出現が光学顕微鏡によって観察された。陰性対照染色を、1次抗体又は2次抗体いずれかを省略することによって行った。非特異的な染色は検出されなかった。メス生殖器官中のHRGの存在を、免疫組織化学染色によって決定した。HRGは、殆んどの細胞型においてヒト子宮内膜からの生検において図5Aを参照されたい、及びファロピウス管において図5Bを参照されたい検出された。HRGはさらに、子宮筋細胞において図5Cを参照されたい、並びに胎盤組織における内皮、間質、及びトロポブラストにおいて図5Dを参照されたい見出された。RNAの調製及びcDNAの合成子宮内膜、ファロピウス管、子宮筋層、及び胎盤の生検からの試料を、リアルタイムPCR分析に用いた。リアルタイムRTPCR用の凍結試料を溶解バッファー中ホモジナイズした。RNeasyMini-kitQiagen、Venlo、オランダを用いてRNAを抽出した。RNAの濃度及び純度を、Aguillentbioanalyzer2100Agillent、SantaClara、CA、米国を用いて測定した。この試験に含まれた全ての試料に対して<7のRIN値が得られた。子宮内膜組織試料からのcDNAの合成を、SuperscriptIIIFirstStrandSynthesisforRT-PCRInvitrogen、Carlsbad、CA、米国を用いて行った。1反応あたり組織試料からの全RNA2マイクログラムを、プライマーとしてランダムヘキサマーを用いて逆転写した。逆転写は製造元の指示にしたがって行った。リアルタイムPCRStep-OneReal-TimePCRSystemAppliedBiosystems、FosterCity、CA、米国を用いてRT-PCR反応を行った。増幅を検出するのにSYBRグリーンを用いた。反応混合物は、cDNA4ngに相当する、1×SYBRグリーンPCRマスターミックスのRT反応混合物4μLからなっており、プライマー濃度は250nMであった。最終の反応体積は15μLであった。cDNAを50°Cで2分間加熱し、95°Cで10分間変性させた。この後に95°Cで15秒間の変性、及び65°Cで1分間のプライマーのアニーリング/伸長の組合せが45サイクル続いた。全ての伸長ステップ時に取った測定値によって蛍光データを獲得し、蛍光強度対サイクル数のプロットとして表した。各試料を2回ずつ測定し、標的の遺伝子を、内部対照としてグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼGAPDHに対して標準化した。HRGに対するフォワードプライマー及びリバースプライマーはそれぞれ5’-GCAGGGCGGGTCACAAGGTCCATAGTC配列番号3及び3’-CACAAGTTCTGTCTCTTCAG配列番号4であり、GAPDHに対して5’-GAAGGTGGTCGGAGTCAAC配列番号5及び3’-CAGAGTTAAAAGCAGCCCTGGT配列番号6であった。増幅した生成物のサイズは、HRGでは916bp、GAPDHでは80bpであった。PCRを行って、HRGがメス生殖器官及び胎盤において発現されるか否かを決定した。ファロピウス管、子宮内膜、胎盤、又は子宮筋層からの組織中にHRGの発現は検出されなかった。肝臓のmRNAを陽性対照として用いて、上首尾であった。本発明者らは、HRGが着床前胚中に存在し、胚が発生すると核中により頻繁に検出されることを免疫組織化学によって示している。さらに、本発明者らのELISA及びPCRのデータは、胚がHRGを生成し、分泌することを指摘している。本発明者らは、HRGが、胚が成長している培地中に、卵胞液中に、メスの生殖器官を通して、及び胎盤中に存在することも見出した。卵胞液中に見出されるHRGは、卵胞及び卵母細胞の発達における血管新生のプロセスを反映し得る。ヘパリン結合性の血管新生因子であるFGF及びVEGFは、排卵前卵胞によって生成されることが知られている。FGF及びVEGFは、卵胞における血管新生のバランスの主要な調節因子であると仮定されている。HRGは、血管新生因子、抗血管新生因子、及びヘパリンと直接的及び間接的に相互作用し、卵胞の発達においておそらく重要であり得る。卵胞液中のVEGFが高レベルであることは、卵母細胞の質が劣ることに関連する。HRGがVEGF又は他の血管新生因子に結合する場合、卵胞液中にHRGが存在することは卵母細胞の発達においてやはり重要であり得る。卵胞液中にHRGを見出したことの他に、本発明者らは、免疫組織化学を用いることによって、HRGが胚中に見出されることを示している。HRGは、発達段階にかかわらず、全ての胚における全細胞質中に検出された。しかし、HRGは、4~8細胞期の間の胚中よりも、胚の遺伝子が活性化される時期である胚盤胞の核中により一般的に見出された。更に、HRGは、同じ胚の全ての核中には決して見出されず、ある細胞によってのみHRGがあり得ることを示唆している。HRGは、胚盤胞に比べて卵割初期の胚においておそらく異なる機能を有する。検出できるレベルのHRGは、胚を培養するのに用いなかった培地中には存在しなかったので、免疫組織化学を用いて核中に見られたタンパク質は胚によって生成されたと示唆することができる。これは、胚がHRGを生成することを示す最初の試験である。このように、本発明者らは、HRGが、胚盤胞を増殖させた毎日交換される培養培地中の、胚盤胞におけるいくつかの細胞の核中に位置し、それが胚盤胞中のmRNAであることを示していることから、胚に対するCT値が低いにもかかわらず胚はHRGを生成すると、本発明者らは結論付ける。胚によって分泌される血管新生因子は、子宮内膜に対して着床に備えるようシグナルを送ることが示唆されている。胚によるHRGの発現が胚と子宮内膜との間のこの複雑な情報伝達に関与するか否かを決定するために更なる研究が必要とされる。VEGF及びアンジオポエチンは、十分に機能性である胎盤の発達に関連している。本発明者らが観察していることがこのプロセスの開始に関連する可能性があり得る。これは、HRGが、胎盤中のHRGのレベルが不十分である結果として早期発症の子癇前症の病理に関与することを示す本発明者らの初期の結果によって支持されるものでもあり、Karehedら、早発性子癇前症におけるフィブリノゲン及びヒスチジンリッチ糖タンパク質Fibrinogenandhistidine-richglycoproteininearly-onsetpreeclampsia、ActaObstetGynecolScand、89巻1、131~139頁を参照されたい。本発明者らは、HRGが、ファロピウス管、子宮内膜、子宮筋層などのメス生殖器官の構造中に存在し、胎盤中にも存在することを示している。HRGは血漿中に存在するので、生殖器官に浸透することがあり、したがってこれらの組織中にHRGが存在することは単なる偶然である可能性がある。しかし、他の血管新生因子が生殖器官内に存在し、受精及び着床において重要な役割を果たすことが知られているので、HRGが同様の役割を有すると考えてもよい。ファロピウス管分泌物中に存在する数々の異なる血管新生因子は卵母細胞の受精を助ける上で重要である。HRGは血管新生の制御において不可欠であることが知られているので、ファロピウス管及び子宮内膜中のHRGの存在は、胚の成熟及び輸送に、並びに子宮内膜の着床の準備に必要とされ得る。ウエスタンブロット試験からの結果を検証するために、HRG遺伝子におけるSer/Pro多型rs9898のSNP遺伝子型解析を、IVFを受けている更なる37人の女性からの血漿試料に対して行った。TaqMan登録商標SNPGenotypingAssayゲノムDNAを、HuddingeHospitalSwedenでIVF処置を受けている37人の女性から採取した血液試料から調製した。女性を、Taqman登録商標SNPGenotypingAssayを用いて、HRGエキソン5におけるC/Trs9898に対して遺伝子型解析した。簡潔に述べると、PCR反応を、96ウエルプレート中、各反応に対して全体積25μlにおいて行った。各反応は、1×TaqManUniversalPCRMasterMixPCRバッファー、ROX受動的基準色素、dNTP、及びAmpliTaqGoldポリメラーゼ、1×SNPGenotypingAssay対象の多型の配列を増幅するための配列特異的なフォワードプライマー及びリバースプライマー、即ち、HRGエキソン5、対立遺伝子1の配列を検出するためのVIC登録商標色素、及び対立遺伝子2の配列を検出するためのFAM商標で標識されているTaqMan登録商標MGBプローブ、並びにゲノムDNA10ngから構成されていた。サイクル条件は、95°C10分間で開始し、その後、92°Cで15秒、及び60°Cで1分を40サイクルであった。リアルタイムの蛍光検出を行った。SequenceDetectionSystemSDSSoftwareAppliedbiosystemsを用いて、各ウエルからのシグナルに基づいた蛍光Rnの値をプロットした。プロットした蛍光シグナルは、どの対立遺伝子が各試料中に存在したかを示していた。IVF処置1回又は2回後、19人の女性が妊娠したが、37人中18人は妊娠しなかった。妊娠した女性19人中5人がPro/Serヘテロ接合体であり、14人がPro/Proホモ接合体であった。ウエスタンブロット試験からの結果と一致して、Ser/Serホモ接合体の女性は一人も妊娠しなかった。非妊娠の女性18人中2人がSer/Serホモ接合体であり、10人がPro/Serヘテロ接合体であり、6人がPro/Proホモ接合体であった。HRGタンパク質中の、Proの代わりにSerのキャリアに関する群間の差は統計学的に有意である。以下の表4は、IVFを受けている女性37人からのDNA試料からのHRGrs9898のSNP分析からの結果を概要するものである。遊走及び増殖増殖及び遊走走化性のアッセイを用いることによって、HRG及びHRGペプチドの重要性を分析した。用いたペプチドは、タンパク質における204位をカバーする35個のアミノ酸を含む全長のHRGのフラグメントに対応しており、この特定の位置における天然HRGのプロリンはセリンに変更されている。アミノ酸配列は:RGGEGTGYFVDFSVRNCPRHHFPRHPNVFGFCRAD配列番号7、本明細書においてHRGProと命名、及びRGGEGTGYFVDFSVRNCSRHHFPRHPNVFGFCRAD配列番号8、本明細書においてHRGSerと命名であり、ペプチドは、Innovagen、Lund、スウェーデンから生成及び購入したものである。走化性アッセイアッセイを、100μg/mlの1型コラーゲン溶液Vitrogen100、CollagenCorp.でコーティングしたミクロポアニトロセルロースフィルター厚さ8μm、孔8μmを用いて改変ボイデンチャンバー中で行った。細胞G10及びHEEC細胞をトリプシン処理し、0.25ウシ胎児血清FCSを含む無血清培養培地中5.5×105細胞/mlの濃度に再懸濁した。細胞懸濁液を上チャンバーに配置し、0.25FCS及びFGF-2又はVEGF、HRG又はHRGPro又はHRGSerペプチドを含む無血清培地を下チャンバー中のフィルタの下に配置した。陽性対照として、10FCSを含む培地を下チャンバーに加えた。37°Cで4~6時間後、培地を除去し、フィルタに粘着している細胞を純粋メタノール中で固定し、ギムザ染色で染色した。フィルタを通して遊走した細胞を計数した。HRG、HRGPro、及びHRGSerの、G10細胞及びHEE細胞の遊走に対する効果を、ボイデンチャンバーを用いることによって試験した。FGF20ng/mlはG10細胞の遊走を誘発し、VEGF10ng/mlはHEE細胞の遊走を誘発した。HRG100ng/ml及びHRGPro100ng/mlがG10細胞及びHEE細胞のVEGF誘発性の遊走を阻害する傾向が検出された。HRGSer100ng/mlは、VEGF誘発性の内皮細胞の遊走を有意にp<0.05阻害した。細胞増殖アッセイ10FCSを補った培養培地中の細胞G10及びHEECを24ウエルディッシュ中に接種した。2時間後、培地を飢餓培地0.25FCSを含む培養培地に交換し、インキュベートを更なる24時間継続した。2日目及び4日目に培地を再び交換し飢餓培地、同時に、FGF-2又はVEGF、HRG又はHRGPro又はSer含有ペプチドを加えた。対照として、細胞を、10FCSを補った基本培養培地中で培養した。5日後、細胞数を記録した。G10細胞ブタ大動脈内皮細胞を、0.25FCSを補った培養培地ハムF12を含む飢餓培地中で培養した。HRG100ng/mlは、飢餓培地中の培養に比べて、G10細胞の増殖を著しく阻害した24の低減。プロリン含有ペプチドであるHRGPro100ng/ml及びセリン含有ペプチドであるHRGSer100ng/mlは両方とも増殖を阻害し、それぞれ29及び35低減した。HRG、HRGPro、及びHRGSerでの処置の効果は全て、飢餓培地中の培養に比べてp<0.05で有意であった。HRGProと比べてHRGの効果は有意ではなかったが、HRG又はHRGProの処置と比べてHRGSerの効果はp<0.05で有意であった。ヒト子宮内膜内皮HEE細胞を、0.25FCEを補った飢餓培地含有培養培地3H中で培養した。HRG100ng/mlを加えた場合、HEE細胞の数は、飢餓培地中の培養に比べて6増大し、HRGPro100ng/mlでは数は13増大し、HRGSer100ng/mlの処置では細胞数は86増大した。HRG、HRGPro、及びHRGSerの効果は、飢餓培地中の培養に比べて有意p<0.05であったが、HRG又はHRGProでの処置の間に有意差はなかった。本発明者らは、HRG、HRGPro、及びHRGSerは、内皮細胞の増殖及び遊走に影響を及ぼすと結論付ける。HRGProの効果は、全長の天然HRGと同じパターンにしたがうと思われ、HRGSerの効果は異なる。種間ヒトとブタに差はあるが、どの種類の組織から内皮細胞が調製されているかが更に重要であり、子宮内膜の内皮細胞の増殖に対する効果は、他の出所の内皮細胞と比べて独特であると思われる。子宮内膜の受容性及び内皮細胞の機能は、胚の上首尾な着床に重要であり、本発明者らの結果は、子宮内膜の内皮細胞はHRG及びその誘導体又はフラグメントに対して感受性であり、これは受精能に対して更に関係がある。内皮細胞の遊走及び増殖は、血管新生、血液凝固、免疫の制御などの生理学的経路が十分に機能する必要のある、胚の着床の前、間、及び後に協調する必要がある根源的なメカニズムの部分である。このように、ペプチドHRGProは、基本的に、全長のタンパク質HRGとして、遊走及び増殖に対して同じ効果があった。しかし、204位のアミノ酸にプロリンの代わりにセリンを有するペプチドHRGSerは著しく異なる効果を有した。したがって、アミノ酸番号204位にプロリン残基を含むHRGのアミノ酸フラグメントは、全長のタンパク質HRGと同様の治療効果を達成するのに用いることができると結論付けられる。習慣性流産反復性の流産の症例対照研究を行った。合計730人の女性が、簡単な健康診査の後に含まれた。妊娠、流産、及び子供の数、並びに喫煙習慣、現在の健康上の問題、及び薬物療法を記録した。静脈血試料を収集し、バフィーコートを準備した。QIAamp登録商標DNABloodMaxiキットQiagen、Venlo、オランダを用いてDNAを抽出し、次いで、TaqMan登録商標SNPGenotypingAssayAppliedBiosystems、FosterCity、CA、米国を用いて、HRGにおけるC/Trs9898SNPについて試料を遺伝子型解析した。SNP分析は、Ser/Ser含有遺伝子型が反復性流産を有する女性のコホート全体の14の女性において検出され、Ser/Pro遺伝子型が44において検出され、Pro/Pro遺伝子型が42において検出されたことを示していた。妊娠12週以前に反復性流産を有した女性においてSer/Ser含有遺伝子型は22に見られ、妊娠12週以後に反復性流産を有した女性において11に見られた。Ser/Ser遺伝子型を保有する女性は、妊娠後期に流産を有する女性に比べて妊娠早期における反復性流産を有する群において著しくより一般的であることから、Ser/Ser遺伝子型は、それゆえ、着床/胎盤形成の制御において重要である。上記に記載した実施形態は、本発明の少数の説明的な例と理解されたい。当業者であれば、本発明の範囲から逸脱せずに、本実施形態に対して様々な改変、組合せ、及び変更を行うことができることが理解されよう。特に、様々な実施形態における様々な部分の解決を、技術的に可能である場合には、他の形状と組み合わせることができる。しかし、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって規定される。"