"肺サンプル中のプロリルエンドペプチダーゼPE活性を検出する方法であって、a前記サンプルを、-P-X-または-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターbioisostereであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるを含むプローブと、前記サンプルのPE活性が前記認識部位のアミド結合を特異的に加水分解して、光学的シグナルを生じさせる条件のもとで接触させること;およびb前記シグナルを検出することを含む方法。前記プローブが-P-X-P-X-のPE認識部位を含む、請求項1に記載の方法。Xが、N、F、Y、S、HまたはGである、請求項1に記載のプローブ。Xが、N、F、Y、S、HまたはGがその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターである、請求項1に記載のプローブ。前記プロリルバイオアイソスターが、置換されていてもよいプロリン、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、デヒドロプロリン、アミノプロリン、5,6-ベンゾホモプロリン、アルキルプロリン、N-メチルアミノ酸およびデカヒドロイソキノリンカルボキシラートから選択される、請求項1に記載のプローブ。Xがアミノルシフェリンである、請求項1に記載の方法。前記プローブがさらに親水性成分を含み、かつ、前記プローブが水溶性である、請求項1に記載の方法。前記プローブが内部で消光される、請求項1に記載の方法。前記認識部位の一方の末端が第1の発色団に機能的に連結され、かつ、前記認識部位の反対側の末端が、前記第1の発色団を消光する第2の発色団に機能的に連結される、請求項1に記載の方法。前記認識部位の一方の末端がFRETドナーに機能的に連結され、かつ、前記認識部位の反対側の末端がFRETアクセプターに機能的に連結され、かつ、前記ドナーおよびアクセプターが、グリシン、セリン、セリンおよび/またはグリシンのペプチド、ミニPEG8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸または11-アミノ-3,6,9-トリオキサウンデカン酸、あるいは、線状脂肪族アルファ-アミノ酸であるリンカーを介して独立して機能的に連結される、請求項1に記載の方法。前記プローブのタンパク質分解により、基質が生じ、かつ、前記サンプルをさらに、前記基質と反応して前記シグナルを生じさせる酵素と接触させる、請求項1に記載の方法。前記サンプルが、肺疾患を有する患者の気管支肺胞洗浄液である、請求項1に記載の方法。前記肺が、真菌感染症、細菌感染症、寄生虫感染症またはウイルス感染症である肺感染症である疾患を有する、請求項1に記載の方法。前記肺が、非感染性の炎症性疾患である疾患を有する、請求項1に記載の方法。前記肺が、浸襲性アスペルギスル症である疾患を有する、請求項1に記載の方法。前記接触させる工程および検出する工程が、異なるPEプローブを用いて繰り返される、請求項1に記載の方法。前記接触させる工程および検出する工程が、肺サンプル毎に異なるPEプローブを用いて繰り返され、前記サンプルの間でのPE活性における1つまたはそれ以上の違いが検出される、請求項1に記載の方法。複数の生物学的サンプルまたは生理学的サンプルのそれぞれにおけるプロリルエンドペプチダーゼPE活性を検出する方法であって、aそれぞれのサンプルを、-P-X-または-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターbioisostereであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるをそれぞれのプローブが含む一連の異なるプローブと、前記サンプルのPE活性が前記認識部位のアミド結合を特異的に加水分解して、光学的シグナルを生じさせる条件のもとで接触させること;およびbそれぞれのサンプルから生じたシグナルを検出し、比較して、前記サンプルの間でのPE活性における違いを検出することを含む方法。-P-X-または-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターbioisostereであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるを含み、前記認識部位の一方の末端が第1の発色団に機能的に連結され、かつ、前記認識部位の反対側の末端が第2の発色団に機能的に連結され、前記認識のアミド結合がPEにより加水分解されることにより、光学的シグナルが生じる、プロリルエンドペプチダーゼPE活性のための内部消光型蛍光発生プローブIQFP。前記発色団が、グリシン、セリン、セリンおよび/またはグリシンのペプチド、ミニPEG8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸または11-アミノ-3,6,9-トリオキサウンデカン酸、あるいは、線状の脂肪族アルファ-アミノ酸例えば、6-アミノキセキサノン酸aminoxexanoicacidであるリンカーを介して前記認識部位に独立して機能的に連結される、請求項19に記載のプローブ。本発明は、プロリルエンドペプチダーゼPE活性を肺サンプルにおいて検出する方法を提供する。1つの実施形態において、本方法は下記の工程を含む:aサンプルと、-P-X-または-X-P-または-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターbioisostereであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるを含むプローブとを、サンプルのPE活性が認識部位のアミド結合を特異的に加水分解して、光学的シグナルを生じさせる条件のもとで接触させる工程;およびbシグナルを検出する工程。特定の実施形態において:プローブは、-P-X-P-X-または-P-X-P-X-P-のPE認識部位を含み、特にこの場合、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基である;Xが、キラルなG以外のアミノ酸である;Xが、N、F、Y、S、HまたはGである。Xが天然型または非天然型のL型またはD型のアミノ酸好ましくは、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、RまたはHである;Xが、N、F、Y、S、HまたはGがその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターである;Xが、天然型または非天然型のL型またはD型のアミノ酸好ましくは、G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、RまたはHがその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターである;プロリルバイオアイソスターが、プロリン、デヒドロプロリン、ホモプロリン、N-メチルアミノ酸およびデカヒドロイソキノリンカルボキシラートただし、これらのそれぞれが置換されていてもよいから選択される;Xがアミノルシフェリンである;プローブはさらに親水性成分を含み、かつ、プローブは水溶性である:プローブは内部で消光される;認識部位の一方の末端が第1の発色団例えば、FRETドナーまたは蛍光団などに機能的に連結され、かつ、認識部位の反対側の末端が第2の異なる発色団例えば、FRETアクセプターまたは消光成分などに機能的に連結され、特にこの場合、これらの発色団は、グリシン、セリン、セリンおよび/またはグリシンのペプチド、ミニPEG8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸または11-アミノ-3,6,9-トリオキサウンデカン酸、あるいは、線状脂肪族アルファ-アミノ酸であるリンカーを介して認識部位に独立して機能的に連結される;プローブのタンパク質分解により、基質が生じ、かつ、サンプルがさらに、この基質と反応して上記シグナルを生じさせる酵素と接触させられる;サンプルが、肺疾患具体的には、真菌感染症、細菌感染症、寄生虫感染症またはウイルス感染症を有する患者の気管支肺胞洗浄液である;肺が、慢性または急性の炎症性疾患を含めて、非感染性の炎症性疾患である疾患を有する;および/または接触させる工程および検出する工程が、異なるPEプローブを用いて、具体的には、肺サンプル毎に異なるPEプローブを用いて繰り返され、ただし、この場合、本方法により、サンプルの間でのPE活性における1つまたはそれ以上の違いが求められる;本発明はまた、プロリルエンドペプチダーゼPE活性を複数のサンプルのそれぞれにおいて検出する方法を提供する。1つの実施形態において、本方法は下記の工程を含む:aそれぞれのサンプルと、-P-X-または-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるをそれぞれのプローブが含む一連の異なるプローブとを、サンプルのPE活性が認識部位のアミド結合を特異的に加水分解して、光学的シグナルを生じさせる条件のもとで接触させる工程;およびbそれぞれのサンプルから生じたシグナルを検出し、比較して、サンプルの間でのPE活性における違いを求める工程。本発明はまた、上記方法に適合化されるプローブを提供する。1つの実施形態において、本発明は、-P-Xまたは-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるを含み、認識部位の一方の末端がFRETドナーに機能的に連結され、かつ、認識部位の反対側の末端がFRETアクセプターに機能的に連結され、認識のアミド結合がPEにより加水分解されることにより、光学的シグナルが生じる、プロリルエンドペプチダーゼPE活性のための内部消光型蛍光発生プローブIQFPを提供する。特定の実施形態において、ドナーおよびアクセプターは、グリシン、セリン、セリンおよび/またはグリシンのペプチド、ミニPEG8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸または11-アミノ-3,6,9-トリオキサウンデカン酸、あるいは、線状脂肪族アルファ-アミノ酸であるリンカーを介して独立して機能的に連結される。本発明はまた、上記プローブを作製し、開示された方法診断方法、特徴づけ方法およびスクリーニング方法を含むにおいて使用する方法を提供する。本発明は、列挙された特定の実施形態のすべての組合せおよび部分的組合せを、それぞれの組合せおよび部分的組合せが具体的かつ別個に列挙されていたかのように提供する。1つの実施形態において、本発明は、特異的な配列を有し、かつ、3個~10個のアミノ酸からなるプロテアーゼ基質を含むペプチド型プローブを提供する。このペプチド配列のどちら側にも、発色団および/または蛍光団が位置する。このプローブは、健康な患者の生物学的流体に加えられたときには光学的に沈黙したままであり、しかし、感染患者の生物学的流体に加えられたときには、典型的には300nm~800nmの範囲における放射を伴う蛍光シグナルを放射する。アッセイ可能な生物学的流体には、血清および気管支肺胞洗浄液、同様にまた、尿、血液、血漿および唾液が含まれる。肺由来のサンプルを、生検サンプル、BALFなどから得ることができる。本発明のプローブは、真菌性疾患例えば、浸襲性アスペルギスル症など、同様にまた、細菌性疾患例えば、結核、MRSAなど、寄生虫性疾患例えば、リーシュマニア症、シャーガス病およびウイルス性疾患例えば、H1N1、SARSを検出するために使用することができる。本発明は一般には、インビトロ診断産業において適用可能である。具体的には、一連の複数の蛍光発生プローブを、様々な病原性状態を並行して検出するために使用することができる。これらのプローブはまた、感染のレベル例えば、侵入対局在化、抗菌剤に対する応答例えば、回復を検出するために、また、個体の一般的健康状態を診断するために使用することができる。特定の実施形態において、本発明は、プロテアーゼ活性をルミネセンスによって検出することを、感染の診断または他の使用のために、例えば、感染患者の生物学的流体に加えられ、その後、組換え酵素例えば、ルシフェラーゼなどが連続して加えられたときにはルミネセンスの生成をもたらすペプチド型プローブを使用する感染の診断または他の使用のために提供する。このペプチド型プローブは、特異的な配列を有し、かつ、3個~10個のアミノ酸からなるプロテアーゼ基質からなる。本プローブは、発光性基質例えば、アミノルシフェリンなどを基質配列内に、あるいは、N末端またはC末端での隣接領域においてそのどちらかで含有する。基質が1つまたは複数のプロテアーゼによって切断されることにより、発光性基質の遊離が生じ、この場合、この発光性基質は組換え酵素によって化学修飾され、これにより、光の生成をもたらす。このプローブは、健康な患者の生物学的流体に加えられたときには光学的に沈黙したままであり、しかし、感染患者の生物学的流体に加えられたときには、300nm~800nmの範囲のどこかで放射を伴う発光シグナルを放射する。本発明のプローブは、真菌性疾患例えば、浸襲性アスペルギスル症など、同様にまた、細菌性疾患例えば、結核、MRSAなど、寄生虫性疾患例えば、リーシュマニア症、シャーガス病およびウイルス性疾患例えば、H1N1、SARSを検出するために有用である。この態様の具体的な一例がプローブ配列GGGPAlucPGGKKである式中、Alucはアミノルシフェリンに対応し、すべての他の文字は一文字コードによる天然型アミノ酸に対応する。この配列がエンドペプチダーゼによって切断されることにより、ペプチドフラグメントAlucPGGKKが生じる。プロテアーゼによるその後の切断により、Aluc成分が遊離し、この場合、このAluc成分はルシフェラーゼ酵素の添加によってアミノオキシルシフェリンに変換され、これにより、光の生成をもたらす。特定の実施形態において、本発明は、肺の感染または炎症を、標的化された治療または手術を容易にするために、例えば、肺内の感染または炎症の具体的領域をインビボで特定するための画像化技術を使用して、プロテアーゼ基質プローブにより画像化することを提供する。本発明は、レポーター成分に結合されるプロテアーゼ基質配列を含む造影剤を提供する。基質配列は、特定の感染例えば、浸襲性アスペルギスル症などまたは炎症状態例えば、嚢胞性線維症などの期間中に存在するプロテアーゼに対応する。造影剤は肺経路または静脈内経路によって投与される。基質配列が特異的プロテアーゼの存在下で切断されることにより、結合しているレポーターの活性化がもたらされる。レポーター様式の例としては、とりわけ、蛍光、ルミネセンス、PET、MRIおよびSPECTが挙げられる。この態様は、肺内の感染または炎症の具体的な局在化部位を、肺炎、気管支拡張症、肺気腫、結核、線維症、慢性閉塞性肺疾患および喘息を含めて多くの疾患について明らかにするために有用である。特定の実施形態において、本発明は、配列X-P-X-P-Xのペプチドを感染または炎症のためのバイオマーカーとして提供する。本発明者らは、プロリン-グリシン-プロリンの配列を有するペプチドを生じさせるプロテアーゼが肺の炎症状態例えば、浸襲性アスペルギスル症および嚢胞性線維症などにおいて上昇することを見出している。これらのプロテアーゼによって生じる短いペプチドフラグメントの存在により、疾患の存在または程度についての有用なバイオマーカーが提供される。有用なペプチドは、X-P-X-P-Xを含む配列を含む式中、Pはプロリンに対応し、Xは天然型アミノ酸または非天然型アミノ酸の任意の配列に対応する。1つの態様において、本発明は、下記の工程を含む、プロリルエンドペプチダーゼPE活性を肺サンプルにおいて検出する方法を提供する:aサンプルと、-P-X-または-X-P-または-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるを含むプローブとを、サンプルのPE活性が認識部位のアミド結合を特異的に加水分解して、光学的シグナルを生じさせる条件のもとで接触させる工程;およびbシグナルを検出する工程。特定の実施形態において、プローブは、-P-X-、-X-P-、-P-X-P-、-P-X-P-X-または-P-X-P-X-P-の認識部位を含み、ただし、式中、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であり、好ましくは、プロリン以外の天然型アミノ酸特に、N、F、Y、S、HまたはGである。Xはまた、隣接するアミド結合を介してペプチドに組み込まれ得る残基が可能である。そのようなアミノ酸代替物は、その安定性、溶解性または他の機能性を調節するために使用することができる。特定の実施形態において、上記残基はシグナルに寄与し、例えば、シグナル生成酵素基質を提供するなどし、例えば、アミノルシフェリンである。プロリルバイオアイソスターは、プロリンの十分に確立された構造的かつ機能的なアナログであり例えば、Sampognaro他、BioorgMedChemLett.、2010年9月1日;2017:5027~30、本明細書中で使用されるプロリルバイオアイソスターは、プロリルエンドペプチダーゼのためのペプチドプローブにおいてプロリンの代わりに使用され得る。プロリルバイオアイソスターは、代替となり得る足場から作製することができ、例えば、プロリン、シクロペンテン、シクロヘキサン、ピロリジン、ピロリジノン、炭素環式基、非環式基および4-フェニル-2-カルボキシ-ピペラジンなどから作製することができる例えば、Nilsson他、JCombChem、2001年11月/12月、36:546~53;Thorstensson、2005、LinkoepingStudiesinScienceandTechnology、学位論文第990号。特定の実施形態において、プロリルバイオアイソスターは、プロリン、ホモプロリン、ヒドロキシプロリン、デヒドロプロリン、アミノプロリン、5,6-ベンゾホモプロリンShuman他、JOrgChem、1990、55、738~41、アルキルプロリン、N-メチルアミノ酸およびデカヒドロイソキノリンカルボキシラートから選択され、ただし、これらのそれぞれが、ヒドロキシ、ハロゲン、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のアリールアルキル、置換または非置換のアミン、置換または非置換のアルキルアミン、置換または非置換のジアルキルアミン、置換または非置換のアルコキシ、置換または非置換のアリール、置換または非置換のヘテロアリール、置換または非置換のアリールオキシ、置換または非置換のアルコキシ、置換または非置換のハロアルキル、ベンゾ、NO2、CF3、アリール、カルボキシル、シアノ、イソシアナートあるいはアルコキシカルボニルにより置換され得ることがある。好適なプロリルバイオアイソスターの例としては、下記のものが挙げられる:特定の実施形態において、プローブはさらに、その安定性、溶解性または他の機能性を調節するために、1つまたは複数のさらなる隣接配列を含む。特定の実施形態において、プローブは、水溶性を増大させるために、親水性成分例えば、ポリリシン例えば、KKKなどを含む。特定の実施形態において、プローブは内部で消光され、ただし、特にこの場合、認識部位の一方の末端が蛍光共鳴エネルギー転移FRETドナーまたは蛍光団に機能的に連結され、かつ、認識部位の反対側の末端がFRETアクセプターまたは消光成分に機能的に連結される。他の実施形態において、認識部位の一方の末端が第1の発色団に機能的に連結され、かつ、認識部位の反対側の末端が第2の発色団に機能的に連結され、この場合、一方の発色団の蛍光放射がもう一方の発色団によって消光され、ただし、この消光は、FRET、凝集、あるいは、接触または非接触の消光の他の機構によるものであり得る。特定の実施形態において、ドナーおよびアクセプターまたは、蛍光団および消光成分、または、第1および第2の発色団は、グリシン、セリン、セリンおよび/またはグリシンのペプチド、ミニPEG8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸または11-アミノ-3,6,9-トリオキサウンデカン酸、あるいは、線状脂肪族アルファ-アミノ酸例えば、6-アミノキセキサノン酸aminoxexanoicacidであるリンカーを介して独立して機能的に連結される。様々な代替となり得るFRET構造を、プローブのシグナル変換または他の機能性を調節するために組み込むことができる;例えば、特定の実施形態において、プローブは複数のドナーおよび/または複数のアクセプターを含む。特定の実施形態において、サンプルは、肺疾患を有する患者の気管支肺胞洗浄液であり、例えば、肺の感染症または肺の炎症特に、急性または慢性の健康状態、自己免疫疾患あるいは外傷の結果としての肺の炎症などを有する患者の気管支肺胞洗浄液であり、また、特に、免疫が損なわれた患者におけるものである。特定の実施形態において、肺および/または患者は、真菌感染症例えば、浸襲性アスペルギスル症、細菌感染症例えば、結核、MRSA、寄生虫感染症例えば、リーシュマニア症、シャーガス病またはウイルス感染症H1N1、SARSを有する。他の実施形態において、肺および/または患者は、慢性の炎症性疾患例えば、慢性閉塞性肺障害、慢性喘息、気管支拡張症、慢性気管支炎、肺気腫、肺線維症または急性の炎症性疾患外傷、急性喘息、過敏症を含めて、非感染性の炎症性疾患である疾患を有する。プローブのシグナルが、選択されたプローブ構造に依存して、好都合な手段によって検出され、そのような手段には、光学的シグナル検出例えば、比色アッセイ、発光アッセイまたは蛍光に基づくアッセイ、質量検出例えば、質量分析法または核検出例えば、NMR、ラジオグラフィーが含まれる。様々なアッセイ形式を用いることができ、これらに、ELISA、RIA、クロマトグラフィー、顕微鏡法などが含まれる。本発明はまた、疾患の特徴づけおよび/または診断を行うためにプローブのライブラリーまたはパネルを使用する方法を提供し、特にこの場合、接触させる工程および検出する工程が、異なるPEプローブを用いて、具体的には、肺サンプル毎に異なるPEプローブを用いて繰り返され、本方法により、サンプルの間でのPE活性における1つまたはそれ以上の違いが求められる。したがって、本発明は、疾患状態のバイオマーカーとしてのPE活性を特に肺サンプルにおいて特異的に検出するプローブを特定する方法、および、2つ以上の異なったプロリルエンドペプチダーゼ酵素を区別するプローブを特定する方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、プロリルエンドペプチダーゼPE活性を複数のサンプルのそれぞれにおいて検出する方法を提供する。1つの実施形態において、本方法は下記の工程を含む:aそれぞれのサンプルと、-P-X-または-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるをそれぞれのプローブが含む一連の異なるプローブとを、サンプルのPE活性が認識部位のアミド結合を特異的に加水分解して、光学的シグナルを生じさせる条件のもとで接触させる工程;およびbそれぞれのサンプルから生じたシグナルを検出し、比較して、サンプルの間でのPE活性における違いを求める工程。本発明はまた、上記方法に適合化されるプローブを提供する。1つの実施形態において、本発明は、-P-Xまたは-P-X-P-のPE認識部位式中、Pはプロリルバイオアイソスターであり、Xは、プロリルバイオアイソスターでない残基であるか、または、プロリルバイオアイソスターでない残基がその両側のそれぞれの側に配置されるプロリルバイオアイソスターであり、かつ、-はアミド結合であるを含み、認識部位の一方の末端がFRETドナーに機能的に連結され、かつ、認識部位の反対側の末端がFRETアクセプターに機能的に連結され、認識のアミド結合がPEにより加水分解されることにより、光学的シグナルが生じる、プロリルエンドペプチダーゼPE活性のための内部消光型蛍光発生プローブIQFPを提供する。特定の実施形態において、ドナーおよびアクセプターは、グリシン、ポリグリシンまたはミニPEG8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸または11-アミノ-3,6,9-トリオキサウンデカン酸、あるいは、線状脂肪族アルファ-アミノ酸例えば、6-アミノキセキサノン酸であるリンカーを介して独立して機能的に連結される。本発明はまた、上記プローブを作製し、開示された方法診断方法、特徴づけ方法およびスクリーニング方法を含むにおいて使用する方法を提供する。実施例1.浸襲性アスペルギスル症を検出するための独特の蛍光発生プローブの具体的な例浸襲性アスペルギスル症を検出するための独特の蛍光発生プローブの具体的な例としては、図1に示されるようなMeOCGly-G-G-Xl-X2-X3-G-G-DapDnp-K-Kの形式での下記の配列が挙げられ、ただし、式において、MeOCGlyは7-メチルクマリン-4-アセチルグリシンに対応し、DapDnpはジアミノプロプリオニルジニトロフェニルdiaminoproprionyldinitrophenylに対応し、Xl~X3は可変の天然型アミノ酸に対応する。すべての他の文字は、標準的な一文字コードによる天然型アミノ酸に対応する:1MeOCGly-G-G-S/T-I/L-F/Y-G-G-DapDnp-K-K2MeOCGly-G-G-S/T-I/L-N/Q-G-G-DapDnp-K-K3MeOCGly-G-G-I/L-F/Y-F/Y-G-G-DapDnp-K-K4MeOCGly-G-G-A/V-I/L-I/L-G-G-DapDnp-K-K5MeOCGly-G-G-P-A/V-N/Q-G-G-DapDnp-K-K6MeOCGly-G-G-P-A/V-P-G-G-DapDnp-K-K7MeOCGly-G-G-P-K/R-P-G-G-DapDnp-K-K8MeOCGly-G-G-P-D/E-K/R-G-G-DapDnp-K-K9MeOCGly-G-G-P-D/E-P-G-G-DapDnp-K-K10MeOCGly-G-G-P-N/Q-A/V-G-G-DapDnp-K-K11MeOCGly-G-G-P-N/Q-P-G-G-DapDnp-K-K12MeOCGly-G-G-P-I/L-P-G-G-DapDnp-K-K13MeOCGly-G-G-P-S/T-A/V-G-G-DapDnp-K-K14MeOCGly-G-G-P-S/T-P-G-G-DapDnp-K-K15MeOCGly-G-G-P-S/T-F/Y-G-G-DapDnp-K-K16MeOCGly-G-G-P-F/Y-A/V-G-G-DapDnp-K-K17MeOCGly-G-G-P-F/Y-K/R-G-G-DapDnp-K-K18MeOCGly-G-G-P-F/Y-N/Q-G-G-DapDnp-K-K19MeOCGly-G-G-P-F/Y-P-G-G-DapDnp-K-K浸襲性アスペルギスル症を検出するための独特の蛍光発生プローブのさらなる具体的な例としては、MeOCGly-X-DapDnp-K-Kの形式での下記の配列が挙げられ、ただし、式において、MeOCGlyは7-メチルクマリン-4-アセチルグリシンに対応し、DapDnpはジアミノプロプリオニルジニトロフェニルに対応し、Xは、標準的な一文字コードに従って指定されるような天然型アミノ酸の配列に対応する:1MeOCGly-GGPGPGGDapDNPKK-NH22MeOCGly-GGPFPGGDapDNPKK-NH23MeOCGly-GGPYPGGDapDNPKK-NH24MeOCGly-GGPNPGGDapDNPKK-NH25MeOCGly-GGPQPGGDapDNPKK-NH26MeOCGly-GGPHPGGDapDNPKK-NH27MeOCGly-GGPSPGGDapDNPKK-NH28MeOCGly-GGPDPGGDapDNPKK-NH29MeOCGly-GGPPPGGDapDNPKK-NH210MeOCGly-GGPPFGGDapDNPKK-NH211MeOCGly-GGPNPNPGGDapDNPKK-NH212MeOCGly-GGPNPGPNPGGDapDNPKK-NH213MeOCGly-GGPYPYPGGDapDNPKK-NH214MeOCGly-GGPYPGPYPGGDapDNPKK-NH215MeOCGly-GGNFAGGDapDNPKK-NH216MeOCGly-GGNFVGGDapDNPKK-NH217MeOCGly-GGNYAGGDapDNPKK-NH218MeOCGly-GGNYVGGDapDNPKK-NH219MeOCGly-GGQFAGGDapDNPKK-NH220MeOCGly-GGQFVGGDapDNPKK-NH221MeOCGly-GGQYAGGDapDNPKK-NH222MeOCGly-GGQYVGGDapDNPKK-NH2浸襲性アスペルギスル症を検出するための独特の蛍光発生プローブのさらなる具体的な例としては、56FAM-X-Lys56TMR-K-Kの形式での下記の配列が挙げられ、ただし、式において、56FAMは56-カルボキシフルオレセインに対応し、Lys56TMRはリシン56-テトラメチルローダミンに対応し、Xは、標準的な一文字コードに従って指定されるような天然型アミノ酸の配列に対応する:156FAM-GGGPGPGGLys56TMRKK-NH2256FAM-GGGPFPGGLys56TMRKK-NH2356FAM-GGGPQPGGLys56TMRKK-NH2456FAM-GGGPNPGGLys56TMRKK-NH2556FAM-GGGPYPGGLys56TMRKK-NH2656FAM-GGGPNPNPGGLys56TMRKK-NH2756FAM-GGGPNPGPNPGGLys56TMRKK-NH2浸襲性アスペルギスル症を検出するための独特の蛍光発生プローブのさらなる具体的な例としては、1,5EDANS-X-LysDABCYL-K-Kの形式での下記の配列が挙げられ、ただし、式において、1,5EDANSは5-2-アミノエチルアミノ-1-ナフタレンスルホン酸に対応し、LysDABCYLはLys4-ジメチルアミノアゾベンゼン-4-カルボン酸に対応し、Xは、標準的な一文字コードに従って指定されるような天然型アミノ酸の配列に対応する:11,5EDANS-GGPNPGGLysDABCYLKK-NH221,5EDANS-GGPYPGGLysDABCYLKK-NH231,5EDANS-GGPNPNPGGLysDABCYLKK-NH241,5EDANS-GGPNPGPNPGGLysDABCYLKK-NH2浸襲性アスペルギスル症を検出するための独特の蛍光発生プローブのさらなる具体的な例としては、Abz-X-DapDnp-K-Kの形式での下記の配列が挙げられ、ただし、式において、Abzはo-アミノ安息香酸に対応し、DapDnpはジアミノプロプリオニルジニトロフェニルに対応し、Xは、標準的な一文字コードに従って指定されるような天然型アミノ酸の配列に対応する:1Abz-GGGPNPGGDapDnpKK-NH22Abz-GGGPYPGGDapDnpKK-NH23Abz-GGGPNPNPGGDapDnpKK-NH24Abz-GGGPNPGPNPGGDapDnpKK-NH2浸襲性アスペルギスル症を検出するための独特の蛍光発生プローブのさらなる具体的な例としては、DANSYL-X-Lys56FAM-K-Kの形式での下記の配列が挙げられ、ただし、式において、DANSYLは5-ジメチルアミノ-1-ナフタレンスルホン酸に対応し、Lys56FAMはリシン56-カルボキシルフルオレセインに対応し、Xは、標準的な一文字コードに従って指定されるような天然型アミノ酸の配列に対応する:1DANSYL-GGGPNPGGLys56FAMKK-NH22DANSYL-GGGPYPGGLys56FAMKK-NH23DANSYL-GGGPNPNPGGLys56FAMKK-NH24DANSYL-GGGPNPGPNPGGLys56FAMKK-NH2実施例2.浸襲性アスペルギスル症IAを診断するための標的としてのアスペルギルスフミガツスAspergillusfumigatusAFの分泌型プロテアーゼ背景:本発明の手法が、IAの迅速かつ正確な診断のために必要とされる。本発明者らは、AFの分泌型プロテアーゼを新規な診断標的として研究中である。AFのゲノムには、最大で100までの分泌型プロテアーゼがコードされ、それらの多くが感染期間中にインビボで発現される。本発明者らは、真菌プロテアーゼ基質に由来する内部消光型蛍光発生プローブIQFPが、AFプロテアーゼを宿主プロテアーゼと区別するためにAF酵素の特有の耐熱性を利用して、AFプロテアーゼの酵素活性を感染患者の血清および気管支肺胞洗浄液BALFにおいて検出するために使用され得ると仮定する。方法:AFのインビトロ培養上清の基質特異性のプロファイリングを、真菌特異的な基質を特定するためにヒト血清との比較で、コンビナトリアルIQFPライブラリーを用いて行った。IAの確立されたモルモットモデルを使用して、疾患進行期間中のBALFをインビボプロテアーゼ基質プロファイリングのために集めた。結果:インビトロプロテアーゼ基質プロファイリングにより、AF培養上清によって強く切断され4倍を超える蛍光増強、しかし、ヒト血清によって切断されなかった約75個のIQFPが特定された。さらなる分析のために選択されたIQFPのサブセットは、タンパク質分解活性を50°Cまで保持したセリンプロテアーゼに対応した。AF感染モルモットから得られたBALFのプロテアーゼ基質プロファイリングにより、感染期間中に優先的に切断されるプローブで、有望な診断用候補物であるプローブがいくつか明らかにされた。結論:様々なIQFPが、プロテアーゼ活性を腫瘍学および炎症においてインビボで画像化するために長く使用されているが、今回は、感染のインビトロ診断のためのプロテアーゼプロファイリングを初めて実証するものであり得る。この技術は、IAおよび他の血液媒介の肺病原体を診断するための有望な代替法を表す。実施例3.浸襲性アスペルギスル症IAの早期診断方法:モルモット吸入モデルは、酢酸コルチゾンおよびシクロホスファミド2日前および3日目による好中球減少、吸入チャンバーにおける1.2×108個/mlの分生子での噴霧AF、ならびに、所定の時点で得られる血清およびBALFを含むVallor他、Antimicrob.Ag.Chemother.、2008、52。結果:プロリン含有標的;PXPプローブは感染BALFの診断に著しく役立ち2.0を超える倍数比、次いで、P-F/Y-X、P-S/T-XおよびP-X-A/Vである。図1~図5。結論:感染後7日目における感染モルモットのBALFによるP-X-P基質の切断は再現可能であり、かつ、非常に有意である。7日目における感度および特異性が既存のアッセイと同等以上である81、90。また、切断が、主にP-XPおよびPX-Pにおいて生じるヒトおよび真菌のプロリルエンドペプチダーゼはP-XPにおいて切断する。実施例4.肺液および血清における鑑別診断バイオマーカーとしてのプロテアーゼ基質の特定方法:モルモット吸入モデルは、酢酸コルチゾンおよびシクロホスファミド2日前および3日目による好中球減少、吸入チャンバーにおける1.2×108個/mlの分生子での噴霧AF、ならびに、所定の時点で得られる血清およびBALFを含むVallor他、Antimicrob.Ag.Chemother.、2008、52。結果:モルモットから得られる血清およびBALFのプロテアーゼ基質特異性を求めた。これら2つの体液のタンパク質分解フィンガープリントにおける違いは驚くほどであった。すなわち、血清プロテアーゼは、カチオン性残基およびプロリンを含有する基質を切断し、これに対して、BALFプロテアーゼは、脂肪族残基および芳香族残基を含有する基質を切断した。とりわけ、プロリン含有基質の切断が、健康な非感染モルモットに由来するBALFには事実上存在しなかった。図5~図7。結論:基質特異性プロファイリングは、複雑なサンプルの間でのプロテアーゼ特異性における違いを評価することにおいて既存のプロテオミクス技術を補完することができる。存在量の測定はそれだけでは、診断標的または治療標的を特定するためには十分でない可能性がある。これは、特定されたプロテアーゼが不活性であり得るか、または、タンパク質分解により分解され得るからである。対象のタンパク質分解特異性が特定されると、関わるプロテアーゼを、活性部位に向けられたプローブで、公知の基質特異性から設計されるプローブを使用することにより特定することができる。本実施例は、複雑な生物学的流体のタンパク質分解特異性をマッピングするための、簡便であるが、ロバストな方法を表す。本方法を使用して特定される基質は、診断目的および画像化目的のためのセンサー、基質および阻害剤の集中した合成のための足場、阻害剤のためのロバストなアッセイの設計におけるプローブ、ならびに、制御された薬物送達のためのトリガーとして役立ち得る。表2の凡例。上位6個のペプチドプローブの可変領域Xaa-Yaa-Zaaがすべて、一アミノ酸コードで列挙される;AF293およびCEA10は、BALFサンプルが本研究においてスクリーニングされた感染モルモットにおけるアスペルギルスフミガツスの2つの菌株である。Nは、所与のペプチドプローブに対してスクリーニングされるモルモットBALFサンプルの数を表す。非常に低いバックグラウンド値t=0時間および終点値t=6時間を有するモルモットの感染サンプルおよび非感染サンプルすなわち、t=0時間と、t=6時間との間で最大でも100単位の差を有するサンプルは統計学的計算のために選択されなかった。平均倍数変化の値は、様々なそれぞれのペプチドプローブに対してスクリーニングされたそれぞれのモルモットサンプルについて計算される蛍光倍数変化の平均である。蛍光倍数変化の値が下記の式に従って計算される:倍数変化=t=6時間の時間で測定される蛍光/t=0時間の時間で測定される蛍光これらのペプチドプローブについての倍数変化の値は終点の値としてt=3時間の時間で計算された。SDは、それぞれのBALFサンプルに対してスクリーニングされた所与のプローブについて計算される標準偏差に対応する。パーセント蛍光効率FEが下記のようにそれぞれのプローブについて計算される:FE=100[倍数変化感染BALF-倍数変化非感染BALF/倍数変化非感染BALF]倍数変化の値はすべて、平均倍数変化の値である。P値が、様々なそれぞれの感染BALFサンプルおよび非感染BALFサンプルに対してスクリーニングされたそれぞれのペプチドプローブについて2つのサンプルの不等分散による両側スチューデントt検定により計算される。それぞれのペプチドプローブについてのアッセイの感度および特異性が、下記に示されるように計算された。感度=真の陽性/真の陽性偽陰性特異性=真の陰性/真の陰性偽陽性真の陽性=感染モルモットサンプルにおける3以上の倍数変化真の陰性=非感染モルモットサンプルにおける3未満の倍数変化偽陽性=非感染モルモットサンプルにおける3以上の倍数変化偽陰性=感染モルモットサンプルにおける3未満の倍数変化特定の実施形態および実施例の記載が、限定としてではなく、例示として提供される。本明細書において引用されるすべての刊行物および特許出願、ならびに、それらにおいて引用されるすべての参考文献は、それぞれの個々の刊行物または特許出願あるいは参考文献が参照により組み込まれることが具体的かつ個々に示されていたかのように、参照により本明細書中に組み込まれる。上記発明が理解の明快さのために例示および実例として多少詳しく記載されているが、いくらかの変更および改変が、添付された請求項の精神または範囲から逸脱することなく、それらに対して行われ得ることが、本発明の教示に照らして当業者には容易に明らかであろう。"