"式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、もしくは溶媒和であって、式中、JおよびJ1は、存在するまたは不在であることができ、存在するとき、独立して、低級アルキルC1-C6、アリール、アリールアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ケト、ヒドロキシ、アミノ、アリールアミノ、カルボキシアルキル、カルボキサミドアルキル、ハロ、シアノ、ホルミル、スルホニル、またはスルホンアミドから選択され、Rは、アルキルC1-C10、シクロアルキルC3-C8、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルである、式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、もしくは溶媒和物。請求項1に記載の化合物であって、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、溶媒和は、個々の鏡像異性体、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ラセミ体、またはそれらの混合物の形態であることができる、請求項1に記載の化合物。HCV感染を治療もしくは防止する、またはHCVの生物学的活性を減少させるための方法であって、治療有効量または予防有効量の請求項1の化合物をその治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、方法。前記化合物は、別の抗HCV剤と組み合わせて投与される、請求項3に記載の方法。セリンプロテアーゼ活性を阻害するための方法であって、請求項1による化合物を上述した患者に投与する工程を含む、方法。前記化合物は、患者に投与され、薬学的に好適な担体と一緒に薬学的に許容される組成物に製剤化される、請求項3~5のいずれか1項に記載の方法。HCV感染を治療もしくは防止する、またはHCVの生物学的活性を減少させるための薬剤の調製における請求項1に記載の化合物の使用。前記薬剤は、別の抗HCV剤をさらに含む、請求項7に記載の使用。セリンプロテアーゼ活性を阻害するための薬剤の調製における請求項1に記載の化合物の使用。前記薬剤は、薬学的に好適な担体をさらに含む、請求項7~9のいずれか1項に記載の使用。[実施例1]P2ヒドロキシプロリン誘導体の合成:[実施例2]10の合成:JおよびJ1が存在する化合物10の類似体は、例えば、開始材料:の置換された形態を使用することにより調製され、式中、JおよびJ1は、本願に定義される通りであるか、またはこれらの部分がスキームIに記載されるカップリング化学法に干渉する場合、カップリング化学法が完了した後、または全体的な合成における後の工程で、所望のJおよびJ1部分に変換されることができる保護基である。この式の化合物は公知であり、通常の日常的な実験を使用して調製されることができる。置換基のアリール環上への組み込みは、コア構造が調製される前、またはその後即ち、置換基が主要なカップリング工程中に存在することができるか、または非置換された化合物即ち、Jおよび/またはJ1部分を含まないが調製された後に添加されることができるのいずれかに容易に実現されることができることを当業者は容易に理解するであろう。そのような置換基は、それ自体におよびそれ自体の有用な特性を提供することができるか、またはさらなる合成精錬の手段として機能することができる。1つの条件は、そのような置換が合成条件に耐えられるか、または合成がさもなければ完了した後に添加されるべきかのいずれかである。例えば、アリール環は、特定のハロゲンにより変化する、様々な公知の手順を使用してハロゲン化されることができる。好適な試薬の例としては、濃縮されたHBr、塩化チオニル、pyr-ICl、フッ素、およびアンバーリスト-A中の臭素/水を含む。アリール環のジアゾ化位置に置換基を有するいくつかの他の類似体は、ジアゾニウム塩中間体を介して、対応するアニリン化合物から合成されることができる。ジアゾニウム塩中間体は、公知の化学法を使用して、例えば、鉱酸の存在下でアニリン等の芳香族アミンを亜硝酸ナトリウムで処理することにより調製されることができる。ジアゾニウム塩は、アニリンから形成されることができ、これは、同時にニトロベンゼンから調製されることができるおよび類似性アミン置換されたヘテロアリール環は、ニトロ置換されたヘテロアリール環から調製されることができる。ニトロ誘導体は、典型的には酸の存在下で亜硝酸塩との反応により、アミン化合物に還元されることができる。他の置換された類似体は、当業者に公知の一般技法を使用して、ジアゾニウム塩中間体から生成されることができ、ヒドロキシ、アルコキシ、フルオロ、クロロ、ヨード、シアノ、およびメルカプトが含まれるがこれらに限定されない。同様に、アルコキシ類似体は、ジアゾニウム塩をアルコールと反応させることにより作製されることができる。ジアゾニウム塩は、当業者に公知であるように、シアノまたはハロ化合物を合成するためにも使用されることができる。メルカプト置換体は、Hoffmanetal.,J.Med.Chem.36:9531993に記載される技法を使用して得られることができる。そのように生成されたメルカプタンは、同時に、水素化ナトリウムおよび適切な臭化アルキルとの反応により、アルキルチオ置換基に変換されることができる。後続の酸化は、次いでスルホンを提供するであろう。上述の化合物のアシルアミド類似体は、有機合成の当業者に公知の技法を使用して、対応するアミノ化合物を適切な酸無水物または酸塩化物と反応させることにより調製されることができる。ヒドロキシ置換された類似体は、適切な酸、酸塩化物、または酸無水物との反応によって対応するアルカノイルオキシ置換された化合物を調製するために使用されることができる。同様に、ヒドロキシ化合物は、電子不足芳香族環での求核芳香族置換を介したアリールオキシおよびヘテロアリールオキシの両方の前駆体である。そのような化学法は、有機合成の当業者に周知である。エーテル誘導体は、アルキルハロゲン化物および好適な塩基とのアルキル化、または典型的にトリアキル-もしくはトリアリールホスフィンおよびアゾジカルボン酸ジエチルが使用される光延化学法を介して、ヒドロキシ化合物からも調製されることができる。光延条件に関しては、Hughes,Org.React.N.Y.42:3351992およびHughes,Org.Prep.Proced.Int.28:1271996を参照。シアノ置換された類似体は、加水分解されて、対応するカルボキサミド置換された化合物を得ることができる。さらなる加水分解により、対応するカルボン酸置換された類似体が形成される。シアノ置換された類似体を水素化リチウムアルミニウムと還元させて、対応するアミノメチル類似物を生成する。アシル置換された類似体は、有機合成の当業者に公知の技法を使用して、適切なアルキルリチウムとの反応によって対応するカルボン酸置換された類似体から調製されることができる。カルボン酸置換された類似体は、適切なアルコールおよび酸触媒との反応によって対応するエステルに変換されることができる。エステル基を伴う化合物は、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化リチウムアルミニウムで還元されて、対応するヒドロキシメチル置換された類似体を生成することができる。これらの類似体は同時に、従来の技法を使用して、水素化ナトリウムおよび適切なアルキルハロゲン化物との反応によって、エーテル部分を有する化合物に変換されることができる。代替的に、ヒドロキシメチル置換された類似体は、塩化トシルと反応させて、対応するトシルオキシメチル類似体を提供することができ、対応するトシルオキシメチル類似体は塩化チオニルおよび適切なアルキルアミンで遂次処理することにより対応するアルキルアミノアシル類似体に変換されることができる。これらのアミドのいくつかは、容易に求核アシル置換を受け、ケトンを生成することが知られている。ヒドロキシ置換された類似体は、N-アルキル-またはN-アリールイソシアネートとの反応により、N-アルキルまたはN-アリールカルバモイルオキシ置換された化合物を調製するために使用されることができる。アミノ置換された類似体は、有機合成の当業者に公知の技法を使用して、それぞれ、アルキルクロロホルメートエステルおよびN-アルキル-またはN-アリールイソシアネートとの反応により、アルコキシカルボキサミド置換された化合物および尿素誘導体を調製するために使用されることができる。同様に、ベンジン環は、上述の反応を含む公知の化学法を使用して置換されることができる。例えば、ニトロベンゼン上の,ニトロ基は、亜硝酸ナトリウムと反応させて、ジアゾニウム塩を形成することができ、ジアゾニウム塩は上述のように操作されて、ベンゼン環上に様々な置換基を形成することができる。したがって、上述の置換基は、開始ベンゼン環に加えられることができ、本願に記載される最終化合物に組み込まれることができる。[実施例3]HepG2細胞におけるミトコンドリア毒性アッセイ:i細胞成長および乳酸生成に対する化合物の作用:0μM、0.1μM、1μM、10μM、および100μMの薬物の存在下で細胞をインキュベートすることにより、HepG2細胞の成長に対する作用を判定した。10のウシ胎児血清、1のピルビン酸ナトリウム、および1のペニシリン/ストレプトマイシンで補てんされた非必須アミノ酸を含む最小必須培地で、細胞ウェル当り5×104を12ウェル細胞培養クラスター中で平板培養し、37°Cで4日間インキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、血球計数器を使用して、細胞数を判定した。Pan-ZhouX-R,CuiL,ZhouX-J,SommadossiJ-P,Darley-UsmerVM.DifferentialeffectsofantiretroviralnucleosideanalogsonmitochondrialfunctioninHepG2cellsAntimicrob.AgentsChemother.2000;44:496-503にも教示されている。乳酸生成に対する化合物の作用を測定するために、保存培養からのHepG2細胞を希釈し、ウェル当り2.5×104細胞で、12ウェル培養プレートで平板培養した。様々な濃度0μM、0.1μM、1μM、10μM、および100μMの試験化合物を加え、加湿した5CO2雰囲気で4日間、培養物を37°Cでインキュベートした。4日目にそれぞれのウェルの細胞数を判定し、培養培地を回収した。培養培地を濾過し、比色分析乳酸アッセイシグマ-アルドリッチSigma-Aldrichを使用して、培地中の乳酸含量を判定した。乳酸の生成物は、ミトコンドリア機能の障害に関するマーカーと考えられることができるため、試験化合物の存在下の細胞成長で検出された乳酸生成のレベル上昇は、薬物誘発された細胞毒性作用を示す。iiミトコンドリアDNA合成に対する化合物の作用:ミトコンドリアDNA含量を正確に定量化するためのリアルタイムPCRアッセイが開発されたStuyverLJ,LostiaS,AdamsM,MathewJS,PaiBS,GrierJ,TharnishPM,ChoiY,ChongY,ChooH,ChuCK,OttoMJ,SchinaziRF.Antiviralactivitiesandcellulartoxicitiesofmodified2’,3’-dideoxy-2’,3’-didehydrocytidineanalogs.Antimicrob.AgentsChemother.2002;46:3854-60を参照。このアッセイは、ミトコンドリアDNA含量に対する試験化合物の作用を判定する本願に記載される全研究において使用された。このアッセイにおいて、低継代数のHepG2細胞を、コラーゲンコーティングされた96ウェルプレートに5,000細胞/ウェルで播種した。化合物を培地に加えて、0μM、0.1μM、10μM、および100μMの最終濃度を得た。培養7日目に、商業的に入手可能なカラムRNeasy96キット;キアジェンQiagenを使用して、細胞核酸を調製した。これらのキットはRNAおよびDNAを共精製し、よって、全核酸がカラムから溶出された。標的および参照増幅の両方に好適なプライマーおよびプローブを用いた多重Q-PCRプロトコルを使用して、ミトコンドリアシトクロームcオキシダーゼサブユニットIICOXII遺伝子およびβ-アクチンまたはrRNA遺伝子を5μlの溶出した核酸から増幅した。COXIIにおいて、以下のセンス、プローブ、およびアンチセンスプライマーがそれぞれ使用された:5’-TGCCCGCCATCATCCTA-3’、5’-テトラクロロ-6-カルボキシフルオレスセイン-TCCTCATCGCCCTCCCATCCC-TAMRA-3’、および5’-CGTCTGTTATGTAAAGGATGCGT-3’。β-アクチン遺伝子ジェンバンクGenBank受入番号E01094のエクソン3において、センス、プローブ、およびアンチセンスプライマーは、それぞれ、5’-GCGCGGCTACAGCTTCA-3’、5’-6-FAMCACCACGGCCGAGCGGGATAMRA-3’、および5’-TCTCCTTAATGTCACGCACGAT-3’である。rRNA遺伝子のプライマーおよびプローブは、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystemsから商業的に入手可能である。等しい増幅効率が全ての遺伝子に関して得られたため、ミトコンドリアDNA合成の阻害の可能性を調査するために、比較CT法が使用された。比較CT法は、標的COXII遺伝子の量が内因性参照β-アクチンまたはrRNA遺伝子の量に基準化され、標準物質7日目に薬物を含まない対照に対してである、算術的な式を使用する。このアプローチに関する算術的な式は、2-ΔΔCTにより与えられ、式中、ΔΔCTは、平均標的試験サンプルに関するCT-標的対照に関するCT-平均参照試験に関するCT-参照対照に関するCTであるJohnsonMR,KWang,JBSmith,MJHeslin,RBDiasio.Quantitationofdihydropyrimidinedehydrogenaseexpressionbyreal-timereversetranscriptionpolymerasechainreaction.Anal.Biochem.2000;278:175-184を参照。薬物の存在下での細胞成長のミトコンドリアDNA含量の減少は、ミトコンドリア毒性を示すであろう。ii電子顕微鏡形態的評価:NRTI誘発された毒性は、透過型電子顕微鏡検査を使用した超微細構造分析により観察されることができるミトコンドリアにおける形態的変化例えば、クリステ、マトリックス溶解、および膨潤の消失、ならびに脂質滴形成を生じることが示されてきたCuiL,SchinaziRF,GosselinG,ImbachJL.ChuCK,RandoRF,RevankarGR,SommadossiJP.EffectofenantiomericandracemicnucleosideanalogsonmitochondrialfunctionsinHepG2cells.Biochem.Pharmacol.1996,52,1577-1584、LewisW,LevineES,GriniuvieneB,TankersleyKO,ColacinoJM,SommadossiJP,WatanabeKA,PerrinoFW.FialuridineanditsmetabolitesinhibitDNApolymerasegammaatsitesofmultipleadjacentanalogincorporation,decreasemtDNAabundance,andcausemitochondrialstructuraldefectsinculturedhepatoblasts.ProcNatlAcadSciUSA.1996;93:3592-7、Pan-ZhouXR,LCui,XJZhou,JPSommadossi,VMDarley-Usmar.DifferentialeffectsofantiretroviralnucleosideanalogsonmitochondrialfunctioninHepG2cells.Antimicrob.AgentsChemother.2000,44,496-503を参照。例えば、10μMのフィアルリジンFIAU;1,2’-デオキシ-2’-フルオロ-1-D-アラビノフラノシル-5-ヨード-ウラシルと共にインキュベートされたHepG2細胞の電子顕微鏡図は、ミトコンドリア機能不全と一致する形態的変化を伴う拡大したミトコンドリアの存在を示した。化合物がミトコンドリアにおける形態的な変化を促進したかを判定するために、0μM、0.1μM、1μM、10μM、および100μMの試験化合物の存在下で、HepG2細胞2.5×104細胞/mLを組織培養皿35×10mm中に播種した。8日目に、細胞を固定し、脱水し、前述のEponasに埋め込んだ。薄片を調製し、酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛で染色し、次いで透過型電子顕微鏡検査を使用して検査した。[実施例4]骨髄細胞毒性に関するアッセイ原発性ヒト骨髄単核細胞をカムブレックスバイオサイエンスCambrexBioscienceウォーカーズビレWalkersville,MDから商業的に得た。CFU-GMアッセイは、50単位/mLのヒト組み換え顆粒球/マクロファージコロニー刺激因子の存在下で二層軟寒天を使用して行われ、一方、BFU-Eアッセイは、1単位/mLのエリスロポエチンを含有するメチルセルロースマトリックスを使用したSommadossiJP,CarlisleR.Toxicityof3’-azido-3’-deoxythymidineand9-1,3-dihydroxy-2-propoxymethylguaninefornormalhumanhepatopoieticprogenitorcellsinvitro.Antimicrob.AgentsChemother.1987;31:452-454、Sommadossi,JP,Schinazi,RF,Chu,CK,andXie,MY.ComparisonofCytotoxicityofthe-andenantiomerof2’,3’-dideoxy-3’-thiacytidineinnormalhumanbonemarrowprogenitorcells.Biochem.Pharmacol.1992;44:1921-1925を参照。それぞれの実験は、3人の異なるドナーからの細胞において、2つ組で実施された。AZTは、陽性対照として使用された。化合物の存在下で、細胞を5のCO2で14~18日間、37°Cでインキュベートし、IC50を判定するために倒立顕微鏡を使用して、50の細胞を超えるコロニーが計数される。薬物濃度対BFU-E生存率の対数の最小二乗線形回帰分析により、50阻害濃度IC50を得た。統計分析は、独立非対合サンプルに関して、スチューデントStudentのt検定により実施された。[実施例5]細胞毒性アッセイ前述のように、化合物の毒性は、ベロVero、ヒトPBM、CEMヒトリンパ芽球様、MT-2、およびHepG2細胞において評価されたSchinaziR.F.,SommadossiJ.-P.,SaalmannV.,CannonD.L.,XieM.-Y.,HartG.C.,SmithG.A.HahnE.F.Antimicrob.AgentsChemother.1990,34,1061-67を参照。シクロヘキシミドは、陽性の細胞毒性対照として含まれ、溶媒に曝露された未処理の細胞は、陰性対照として含まれた。前述の半有効法を使用して濃度応答曲線から細胞毒性IC50を得たChouT.-C.TalalayP.Adv.EnzymeRegul.1984,22,27-55、Belen’kiiM.S.SchinaziR.F.AntiviralRes.1994,25,1-11を参照。10のデータは、PBM>100μM100μMで17阻害CEM>100μM100μMで11阻害VERO>100100μMで-0.8阻害である。[実施例6]HCVレプリコンアッセイ1HCVレプリコンRNAを含有するHuh7クローンCloneB細胞を5000細胞/ウェルで96ウェルプレートに播種し、播種直後、3つ組で、10μMで化合物を試験した。5日間のインキュベーション37°C、5のCO2後、ジェントラGentraのベルサジーンversaGeneRNA精製キットを使用して、全細胞RNAを単離した。レプリコンRNAおよび内部対照タックマンTaqManrRNA対照試薬、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystemsを単一工程多重リアルタイムRT-PCRアッセイで増幅した。試験化合物の閾値RT-PCRサイクルを、薬物を含まない対照ΔCtHCVの閾値RT-PCRから減算することにより、化合物の抗ウイルスの有効性を計算した。3.3のΔCtは、レプリコンRNAレベルにおいて、1log減少に等しい90少ない開始材料に等しい。化合物の細胞毒性も、ΔCtrRNA値を使用して計算された。2’-Me-Cは対照として使用された。EC90およびIC50値2を判定するために、ΔCt:値を最初に開始材料3の分数に変換し、その後阻害を計算するために使用した。参照文献:1.StuyverLetal.,RibonucleosideanaloguethatblocksreplicationorbovineviraldiarrheaandhepatitisCvirusesinculture.Antimicrob.AgentsChemother.2003,47,244-254。2.ReedIJMuenchH,Asimplemethodorestimatingfiftypercentendpoints.Am.J.Hyg.27:497,1938。3.AppliedBiosystemsHandbook結果を下の表1に示す。[実施例7]カニクイザルにおける生物学的利用能アッセイ以下の手順は、化合物が生物利用可能であるか否かを判定するために使用されることができる。研究開始前の1週間以内に、カニクイザルは、血液採取を容易にするために慢性静脈カテーテルおよび皮下静脈アクセスポートVAPを外科的に移植され、血液学および血清化学評価ならびに体重記録を含む身体検査を受けることができる。それぞれのサル合計6匹は、静脈内ボーラス3匹のサル、IVまたは経口胃管栄養法3匹のサル、POのいずれかを介して、2~20mg/kgの用量レベルで化合物を受けた。投与される製剤の量を重力測定法で判定するために、それぞれの投与シリンジを投与前に量る。指定された間隔投与約18~0時間前、投与0~4、4~8、および8~12時間後で、尿サンプルを皿受けにより採取し、処理する。慢性静脈カテーテルおよびVAPを介して、または慢性静脈カテーテル手順が可能ではない場合、末梢血管から血液サンプルも回収する投与前、投与0.25、0.5、1、2、3、6、8、12、および24時間後。最大濃度Cmax、最大濃度が達成されるときの時間Tmax、曲線下面積AUC、用量濃度の半減期TV,、クリアランスCL、定常状態容量および分布Vss、ならびに生物学的利用能Fに関して、血液および尿サンプルを分析する。[実施例8]選択されたヒトプロテアーゼに対するHCVプロテアーゼ阻害剤の作用HCVプロテアーゼ阻害剤は、宿主プロテアーゼに関連する興味深い毒性に加えて、強い抗ウイルス能を示した。類似する毒性を解決するために、重要なヒトプロテアーゼのパネルの阻害に関して、新しいプロテアーゼ阻害剤が評価された。試験された酵素は、エラスターゼ好中球、プラスミン、トロンビン、およびカテプシンSである。ELA2エラスターゼ2としても知られる好中球エラスターゼまたは白血球エラスターゼは、キモトリプシンと同じファミリーのセリンプロテアーゼであり、広範な基質特異性を有する。炎症中に好中球により分泌され、その主要な役割の1つは、宿主組織中の細菌を破壊することであるBelaaouajetal,Science2895482:1185-8。プラスミンは、プラスミノーゲン活性化因子による血漿中のプラスミノーゲンの変換に由来するセリンプロテアーゼであるCollen,D.Circulation,93,8571996。この酵素EC3.4.21.7は、多くの血漿タンパク質、最も顕著にはフィブリン塊を分解する。プラスミンは、炎症、新生組織形成、転移、創傷治癒、血管新生、胚形成、および排卵等のいくつかの病理学的および生理学的プロセスにも関与するVassalli,J.D.etal,J.Clin.Invest.88,10671991。トロンビンは、凝固カスケードにおいて多くの作用を有する、血流中の凝固タンパク質であり、凝塊カスケードの最後の酵素である。可溶性フィブリノーゲンを不溶性のフィブリンの鎖に変換するのはセリンプロテアーゼであり、また多くの他の凝固関連反応を触媒する。ペプチダーゼC1ファミリーのメンバーであるカテプシンSは、MHCクラスII分子上に存在するための抗原タンパク質のペプチドへの分解に関与し得るリソソームシステインプロテアーゼであり、したがって、免疫応答への鍵である。コードされるタンパク質は、広範なpH範囲にわたってエラスターゼとして機能することができる。材料:■ビクターVictor3プレートリーダーパーキンエルマーPerkinElmer■透明の96ウェルプレートフェニックスリサーチPhenixResearch■黒色の96ウェルプレートパーキンエルマーPerkinElmer■RNaseおよびDnase純水方法:エラスターゼヒト好中球カタログ16-14-051200アセンズリサーチアンドテクノロジーAthensResearchandTechnology,アセンズAthensGA:反応は、透明な96ウェルプレートで、ウェル当り100μLのサンプル容量で行われた。200mMのTris-HClpH7.5、150mMのNaCl、および50のグリセロールを含有する2Xアッセイ緩衝液を作製した。それぞれのサンプルにおいて、50μLの2Xアッセイ緩衝液を各ウェルに加えた。1mMの最終濃度に基質MeOSuc-AAPV-pNA,発色基質、カタログP-213、エンドライフサイエンシズEnzoLifeSciences,プリマウスミーティングPlymouthMeeting,PA;DMSO中の50mMのストックを加えた。水に4×濃度で薬物希釈液を加えた25μL。最後に、混合液は、それぞれのサンプルにおいて1μLのエラスターゼおよび22μLの水から作製され、23μLが各ウェルに加えられた。室温で30分間、サンプルをインキュベートした。405nMでの吸光度をビクターVictor3プレートリーダー上で読み取った。全てのサンプルは重複して試験された。結果は、阻害剤を含まない対照によって与えられる、ブランク調整されたエラスターゼなし最大吸光度のパーセンテージとして示される。プラスミンおよびトロンビンSensolyteRH110プラスミン活性アッセイキットおよびSensolyteトロンビン活性アッセイキットアナスペックAnaspec:反応は、黒色の96ウェルプレートで、ウェル当り100μLのサンプル容量で行われた。2Xアッセイ緩衝液が脱イオン水で1:1に希釈されるキット添付文書のプロトコルAに従った。それぞれのアッセイには、陽性対照希釈した酵素および試験化合物なし、阻害剤対照希釈した酵素およびプラスミン阻害剤、キットの構成要素Eまたはトロンビン阻害剤、N-α-NAPAP合成阻害剤を含有する、および基質対照アッセイ緩衝液および基質が含まれた。ビヒクルおよび自己蛍光対照も行われた。アッセイ緩衝液に10×濃度で薬物希釈液を加えた10μL。0.25μg/mLプラスミンの濃度および1μg/mLトロンビンの濃度で、40μL/ウェルで、基質対照を除く全てのウェルに酵素を加えた。最後に、基質を含有する50μLのアッセイ緩衝液を各ウェルに加えた。50nMプラスミンまたは20nMトロンビンの最終濃度に基質を加えた。サンプルを室温で30分間インキュベートした。Ex/Em=490nm/520nmで蛍光強度をビクターVictor3プレートリーダー上で読み取った。全てのサンプルは重複して試験された。結果は、陽性対照によって与えられる、基質対照調整された最大吸光度のパーセンテージとして示される。カテプシンSSensolyteカテプシンS活性アッセイキットアナスペックAnaspec:反応は、黒色の96ウェルプレートで、ウェル当り100μLのサンプル容量で行われた。DTTをアッセイ緩衝液に加えて5μM濃度を得るキット添付文書のプロトコルAに従った。それぞれのアッセイには、陽性対照希釈した酵素および試験化合物なし、阻害剤対照希釈した酵素およびプラスミン阻害剤、構成成分Eまたはトロンビン阻害剤、N-a-NAPAP合成阻害剤を含有する、および基質対照アッセイ緩衝液および基質が含まれた。ビヒクルおよび自己蛍光対照も行われた。アッセイ緩衝液に10×濃度で薬物希釈液を加えた10μL。2.5μg/mLの濃度で、40μL/ウェルで、基質対照を除く全てのウェルにカテプシンSを加えた。最後に、基質を含有する50μLのアッセイ緩衝液を各ウェルに加えた。基質を16nMの最終濃度に加えた。サンプルを室温で30分間インキュベートした。Ex/Em=490nm/520nmで蛍光強度をビクターVictor3プレートリーダー上で読み取った。全てのサンプルは重複して試験された。結果は、陽性対照によって与えられる、基質対照調整された最大吸光度のパーセンテージとして示される。結果を下の表2に示す。[実施例9]化合物対C型肝炎ウイルスNS3/4AWTおよび突然変異プロテアーゼの活性蛍光共鳴エネルギー転移FRETペプチドアナスペックAnaSpecを使用して、SensoLyte登録商標490HCVプロテアーゼアッセイキットを用いて、HCVNS3/4Aプロテアーゼアッセイを行った。結果を下の表3および4に示す。前述の明細書は、図示の目的のため提供される実施例と共に本発明の原理を教示するが、本発明の実践は、以下の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内に入る通常の変形、適合、および/または修正の全てを包含することを理解されるであろう。"