"患者において、アルツハイマー病などのアミロイドーシスの処置の経過をモニターするための方法であって、患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼ活性化の程度を測定することを含む方法。アミロイドーシスが、抗βアミロイド抗体により処置される、請求項1に記載の方法。薬剤の神経保護活性を試験するための方法であって、a.神経毒性Aβ1-42オリゴマーおよび抗βアミロイド抗体と共にミクログリア細胞をインキュベートすることと、b.ミクログリア細胞によるβアミロイドペプチドの取り込みを測定することとを含む方法。薬剤の安全性を試験するための方法であって、a.神経毒性Aβ1-42オリゴマーおよび抗βアミロイド抗体と共にミクログリア細胞をインキュベートすることと、b.ミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼ活性化を測定することとを含む方法。薬剤が抗βアミロイド抗体である、請求項3または4に記載の方法。アルツハイマー病などのアミロイドーシスを処置するための方法であって、安全で機能的な量のヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体をその必要性のある患者に投与することを含み、前記安全で機能的な量が、ヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体の非存在下においてp38MAPキナーゼの活性化のレベルを超えるが、ヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体と同じKdでβアミロイドに結合する同じ濃度のIgG1抗βアミロイド抗体の存在下においてp38MAPキナーゼの活性化のレベル未満であるレベルで患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼの活性化をもたらす方法。患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼの活性化が、ヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体の非存在下における患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼ活性化を、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55超える、請求項5に記載の方法。アルツハイマー病などのアミロイドーシスを処置するための方法であって、投薬レジメンにおいて、ヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体をその必要性のある患者に投与することを含み、前記投薬レジメンが、ヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体の非存在下においてp38MAPキナーゼ活性化のレベルを超えるが、ヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体と同じKdでβアミロイドに結合する同じ濃度のIgG1抗βアミロイド抗体の存在下においてp38キナーゼの活性化のレベル未満であるレベルで患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼの活性化をもたらす方法。患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼの活性化が、ヒト化非IgG1抗βアミロイド抗体の非存在下における患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼ活性化を、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55超える、請求項8に記載の方法。安全で機能的なヒト化抗βアミロイド抗体を産生するための方法であって、βアミロイドに機能的に結合する可変領域のアミノ酸配列を有する非IgG4抗体における定常領域を、IgG4抗体に由来する定常領域と置換することを含む方法。抗βアミロイド抗体の神経保護活性を試験するための方法であって、a.初代混合皮質細胞培養物を得ることと、b.神経毒性Aβ1-42オリゴマーおよび抗βアミロイド抗体と共に細胞培養物をインキュベートすることと、c.ニューロンの生存率を測定することとを含む方法。ニューロンの生存率が、MTTのミトコンドリア酸化によって決定される代謝回転によって測定される、請求項6に記載の方法。ニューロンの生存率が、ATP放出によって測定される、請求項11に記載の方法。抗βアミロイド抗体が、a.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の軽鎖可変領域CDR1のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR1と、b.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の軽鎖可変領域CDR2のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR2と、c.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の軽鎖可変領域CDR3のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR3とを含む、請求項2、3、4、6、8、または10のいずれか一項に記載の方法。抗βアミロイド抗体が、a.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の重鎖可変領域CDR1のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR1と、b.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の重鎖可変領域CDR2のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR2と、c.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の重鎖可変領域CDR3のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR3とを含む、請求項2、3、4、6、8、または10のいずれか一項に記載の方法。軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3ならびに重鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3がすべて、表2に列挙される同じ抗βアミロイド抗体に由来する、請求項14に記載の方法。i非IgG4ヒト化抗体に由来する、βアミロイドに結合する可変領域のアミノ酸配列、およびiiIgG4抗体に由来する定常領域のアミノ酸配列を有するヒト化抗βアミロイド抗体。非IgG4ヒト化抗体が、表2に列挙される抗βアミロイド抗体からなる群から選択される、請求項17に記載のヒト化抗βアミロイド抗体。iIgG1ヒト化抗体に由来する、βアミロイドに結合する可変領域のアミノ酸配列、およびiiIgG4抗体に由来する定常領域のアミノ酸配列を有するヒト化抗βアミロイド抗体。請求項17または19に記載の安全で機能的な量のヒト化抗体、および医薬の許容できる担体を含む医薬組成物。抗βアミロイド抗体が、a.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の軽鎖可変領域CDR1のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR1と、b.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の軽鎖可変領域CDR2のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR2と、c.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の軽鎖可変領域CDR3のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域CDR3とを含む、請求項17または19に記載の抗体。抗βアミロイド抗体が、a.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の重鎖可変領域CDR1のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR1と、b.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の重鎖可変領域CDR2のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR2と、c.表2に列挙される抗βアミロイド抗体の重鎖可変領域CDR3のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域CDR3とを含む、請求項17または19に記載の抗体。軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3ならびに重鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3がすべて、表2に列挙される同じ抗βアミロイド抗体に由来する、請求項21に記載の方法。iIgG1ヒト化抗体に由来する、βアミロイドに結合する可変領域のアミノ酸配列、およびii非IgG1抗体に由来する定常領域のアミノ酸配列を有するヒト化抗βアミロイド抗体。非IgG4抗βアミロイド抗体の安全性を改善するための方法であって、前記非IgG4抗体の定常領域を、IgG4抗体に由来する定常領域と置換することを含む方法。非IgG4抗βアミロイド抗体の安全性を改善するための方法であって、前記非IgG4抗体の定常領域を、非IgG1抗体に由来する定常領域と置換することを含む方法。前記非IgG4抗体がIgG1抗体である、請求項25または26に記載の非IgG4抗βアミロイド抗体の安全性を改善するための方法。軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3ならびに重鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3がすべて、表2に列挙される同じ抗βアミロイド抗体に由来する、請求項15に記載の方法。軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3ならびに重鎖可変領域のCDR1、CDR2、およびCDR3がすべて、表2に列挙される同じ抗βアミロイド抗体に由来する、請求項22に記載の方法。4.1配列の説明配列番号1MABTヒト化重鎖可変領域のアミノ酸配列CDR1配列番号2MABTヒト化重鎖可変領域のアミノ酸配列CDR2配列番号3MABTヒト化重鎖可変領域CDR3のアミノ酸配列配列番号4MABTヒト化軽鎖可変領域CDR1のアミノ酸配列配列番号5MABTヒト化軽鎖可変領域CDR2のアミノ酸配列配列番号6MABTヒト化軽鎖可変領域CDR3のアミノ酸配列配列番号7MABTヒト化軽鎖可変領域のアミノ酸配列配列番号8MABTヒト化軽鎖のアミノ酸配列配列番号9ヒト化MABT軽鎖定常領域のアミノ酸配列配列番号10MABTヒト化重鎖可変領域のアミノ酸配列配列番号11MABTヒト化重鎖のアミノ酸配列配列番号12:IGガンマ-4鎖C領域-修飾のアミノ酸配列配列番号13:MABTヒト化重鎖可変領域のCDR2のヌクレオチド配列配列番号14:MABTヒト化重鎖可変領域のCDR3のヌクレオチド配列配列番号15:MABTヒト化軽鎖可変領域のCDR1のヌクレオチド配列配列番号16:MABTヒト化軽鎖可変領域のヌクレオチド配列配列番号17:MABTヒト化軽鎖のヌクレオチド配列配列番号18:MABTヒト化軽鎖定常領域のヌクレオチド配列配列番号19:MABTヒト化重鎖可変領域のヌクレオチド配列配列番号20:MABTヒト化重鎖のヌクレオチド配列配列番号21:MABTヒト化重鎖定常領域のヌクレオチド配列配列番号22:HCDR2に先行する典型的なアミノ酸配列5.詳細な説明抗アミロイドベータ抗体を試験するための細胞ベースのアッセイ系および抗アミロイドベータ抗体による患者の処置をモニターし、調節するための方法が下記に記載される。神経保護薬の安全性または効能を試験するための細胞ベースのアッセイ系および神経保護薬による患者の処置をモニターし、調節するための方法もまた、下記に記載される。さらに、安全で機能的な抗体およびそのような安全で機能的な抗体をアルツハイマー病の処置に使用するための方法もまた、下記に記載される。医薬調製物および投与の形態もまた記載される。5.1細胞ベースのアッセイ系アミロイドーシスの処置のための抗体または他の薬剤の安全性および機能性を試験するためのインビトロにおける細胞ベースのアッセイ系が、本明細書で提供される。ある実施態様において、アミロイドーシス、その病理学的形態をしたアミロイドタンパク質、ならびに免疫エフェクター細胞例えばナチュラルキラー細胞、ミクログリア細胞などのマクロファージ、好中球、および肥満細胞によって影響を及ぼされる細胞標的細胞は、試験抗体の存在下および非存在下においてインキュベートされる。抗体の安全性および機能性を試験するために測定することができるパラメーターは標的細胞の生存率、免疫エフェクター細胞の中へのアミロイドタンパク質の内部移行、および免疫エフェクター細胞におけるp38MAPキナーゼ経路の活性化を含む。ある実施態様において、安全で機能的な抗体は、最大の内部移行およびp38MAPキナーゼ経路の中等度の活性化をもたらす。より特定の実施態様において、アミロイドーシスは、アルツハイマー病であり、アミロイドタンパク質は、βアミロイドであり、免疫エフェクター細胞は、ミクログリア細胞であり、標的細胞は、ニューロンである。特定の実施態様において、細胞は、混合培養物を作り出すために既存の細胞株から得られる。他の実施態様において、混合細胞培養物は、初代皮質培養物であるMebergMiller2003,MethodsCellBiol71:111-127。ある実施態様において、混合細胞培養物は、ラット、マウス、またはチンパンジーからの初代皮質培養物である。ある実施態様において、初代皮質培養物は、皮質生検材料または脊髄生検材料によってヒト患者から得られる。ニューロンおよびミクログリア細胞を含む混合細胞培養物は、βアミロイドタンパク質と共にインキュベートされる。一実施態様において、βアミロイドタンパク質は、βアミロイドオリゴマーとして提供される。次のパラメーターは、このアッセイ系において測定することができる:1ニューロンの生存率は、例えば代謝回転によって決定することができ、この代謝回転は、例えば、3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドMTTのミトコンドリア酸化またはATP放出によって決定することができる:2ミクログリアの中へのβ-アミロイドオリゴマー内部移行は、例えば、βアミロイドタンパク質に対する免疫細胞化学またはβアミロイドタンパク質のタギングならびに直接的な測定および/または視覚化によって決定することができる;ならびに3p38MAPK経路の活性化は、例えば、リン酸化p38MAPKホスホp38に対するELISAによって決定することができる。ある実施態様において、βアミロイドおよび安全で機能的な抗体の存在下におけるニューロンの生存率は、安全で機能的な抗体の非存在下におけるニューロンの生存率と比較して、少なくとも10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、または少なくとも500増加する。ある実施態様において、安全で機能的な抗体の存在下におけるミクログリアの中へのβアミロイドの内部移行は、安全で機能的な抗体の非存在下における内部移行率と比較して、少なくとも10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、または少なくとも500増加する。ある実施態様において、βアミロイドおよび安全で機能的な抗体の存在下におけるミクログリアにおけるp38MAPキナーゼ活性化は、βアミロイドの存在下であるが、安全で機能的な抗体の非存在下におけるp38MAPキナーゼ活性化と比較して、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55増加する。より特定の実施態様において、βアミロイドおよび安全で機能的な抗体の存在下におけるミクログリアにおけるp38MAPキナーゼ活性化は、βアミロイドの存在下であるが、安全で機能的な抗体の非存在下におけるp38MAPキナーゼ活性化と比較して、10~30増加する。さらに、βアミロイドおよび安全で機能的な抗体の存在下におけるミクログリアにおけるp38MAPキナーゼ活性化は、IgG1アイソタイプ抗βアミロイド抗体の存在下において活性化されるp38MAPキナーゼ未満であるが、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55増加する。ある実施態様において、βアミロイドの病理学的形態、例えばオリゴマーβアミロイド、試験抗体、およびミクログリア細胞は、抗体の安全性および機能性を決定するためにインキュベートされる。次のパラメーターは、このアッセイ系において測定することができる:1ミクログリアの中へのβアミロイドオリゴマー内部移行は、例えば、βアミロイドタンパク質に対する免疫細胞化学またはβアミロイドタンパク質のタギングによって決定することができる;および2p38MAPK経路の活性化は、例えば、ホスホp38に対するELISAによって決定することができる。p38MAPキナーゼ活性化を決定するために、当業者に知られている任意の方法を使用することができる。ある実施態様において、リン酸化p38MAPキナーゼに特異的に結合する抗体によるELISA、ウェスタンブロッティング、または免疫細胞化学は、リン酸化、つまり活性化p38MAPキナーゼのレベルを決定するために使用される。ある実施態様において、p38MAPキナーゼ活性化は、p38MAPキナーゼの核局在化の程度を決定するために、p38MAPキナーゼに特異的に結合する抗体を使用する免疫細胞化学によって決定される。p38MAPキナーゼの核局在化の程度が高度であるほど、p38MAPキナーゼ活性化のレベルは高度である。ある実施態様において、p38MAPキナーゼシグナル経路の他の構成要素の活性化は、測定することができる。ある実施態様において、p38MAPキナーゼの下流標的の発現レベルは、患者におけるp38MAPキナーゼ活性化を決定するために測定することができる。そのような下流標的は、90kDaリボソームS6キナーゼpp90rsk;RSKファミリー:RSK1、RSK2、MNK1/2、およびMSK1/2;ならびにElk-1、ATF2、STAT3、およびCREBなどの核翻訳因子を含むが、これらに限定されない。下流標的の発現レベルは、これらに限定されないが、ノーザンブロッティング、ウェスタンブロッティング、またはポリメラーゼ連鎖反応などの当業者に知られている任意の方法によって決定することができる。5.2処置のモニターおよび調節ある実施態様において、p38MAPキナーゼ活性化は、βアミロイドなどのアミロイドタンパク質に特異的に結合する、安全で機能的な抗体により処置されている患者の、ミクログリア細胞などの免疫エフェクター細胞においてモニターされる。免疫エフェクター細胞は、当業者に知られている任意の方法によって患者から得ることができる。特定の実施態様において、ミクログリア細胞は、皮質生検材料または脊髄生検材料によって得られる。免疫エフェクター細胞は、当業者に知られている任意の方法によって培養において維持することができる。ある実施態様において、p38MAPキナーゼ活性化は、神経保護薬などの薬剤により処置されている患者の、ミクログリア細胞などの免疫エフェクター細胞においてモニターされる。ある、より特定の実施態様において、患者は、アルツハイマー病などのアミロイドーシスについて処置されている。ある、さらにより特定の実施態様において、患者は、タクリンCOGNEX、MorrisPlains、NJ、ドネペジルARICEPT、Tokyo、JP、リバスチグミンEXELON、EastHanover、NJ、ガランタミンREMINYL、NewBrunswick、NJ、またはメマンチンNAMENDA、NewYork、NYにより処置されている。ある実施態様において、投与量および/または投与レジメンは、ミクログリア細胞のp38MAPキナーゼ活性化が、βアミロイドオリゴマーの存在下において、中等度レベルとなる、つまり、抗体の非存在下においてよりも高度となり、βアミロイドに特異的に結合するIgG1抗体の存在下においてよりも低度となるように、患者について調節される。p38MAPキナーゼ活性化が中等度レベルを超える場合、投薬量は低減されるおよび/または投与頻度は低減される。p38MAPキナーゼ活性化が中等度レベル未満である場合、投薬量は増加させるおよび/または投与頻度は増加させる。ある実施態様において、p38MAPキナーゼシグナル経路の変調成分は、p38MAPキナーゼ活性化を中等度レベルに調節するために、安全で機能的な抗体と同時投与される。p38MAPキナーゼ活性化が中等度レベルを超える場合、p38MAPキナーゼシグナル経路の阻害剤は、同時投与することができる。p38MAPキナーゼ活性化が中等度レベル未満である場合、p38MAPキナーゼシグナル経路の活性剤は、同時投与することができる。p38MAPキナーゼシグナル経路の例証となる阻害剤は、4-[4-4-フルオロフェニル-5-4-ピリジニル-1H-イミダゾール-2-イル]フェノールSB202190;4-[5-4-フルオロフェニル-2-[4-メチルスルホニルフェニル]1H-イミダゾール-4-イル]ピリジンSB203580;およびトランス-4-[4-4-フルオロフェニル-5-2-メトキシ-4-ピリミジニル-1H-イミダゾール-1-イル]シクロヘキサノールSB239063ならびにその薬学的に好適な誘導体を含む。p38MAPキナーゼシグナル経路の例証となる活性剤は、アニソマイシン、MKK、Rac、Cdc42、およびPAK1、IL-1、IL-1受容体、TNF、LPS、TRAF6、ならびにTAB1/2を含む。ある実施態様において、p38MAPキナーゼの中等度の活性化レベルは、安全で機能的な抗体の非存在下における患者のミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼ活性化を超える、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55である。p38MAPキナーゼ活性化を決定するために、当業者に知られている任意の方法を使用することができる。ある実施態様において、リン酸化p38MAPキナーゼに特異的に結合する抗体によるELISA、ウェスタンブロッティング、または免疫細胞化学は、リン酸化、つまり活性化p38MAPキナーゼのレベルを決定するために使用される。ある実施態様において、p38MAPキナーゼ活性化は、p38MAPキナーゼの核局在化の程度を決定するために、p38MAPキナーゼに特異的に結合する抗体を使用する免疫細胞化学によって決定される。p38MAPキナーゼの核局在化の程度が高度であるほど、p38MAPキナーゼ活性化のレベルは高度である。ある実施態様において、p38MAPキナーゼシグナル経路の他の構成要素の活性化は、測定することができる。ある実施態様において、p38MAPキナーゼの下流標的の発現レベルは、患者におけるp38MAPキナーゼ活性化を決定するために測定することができる。そのような下流標的は、90kDaリボソームS6キナーゼpp90rsk;RSKファミリー:RSK1、RSK2、MNK1/2、およびMSK1/2;ならびにElk-1、ATF2、STAT3、およびCREBなどの核翻訳因子を含むが、これらに限定されない。下流標的の発現レベルは、これらに限定されないが、ノーザンブロッティング、ウェスタンブロッティング、または例えばRT-PCRによる遺伝子転写物の検出などの当業者に知られている任意の方法によって決定することができる。さらに、患者におけるアルツハイマー病の処置のために抗β-アミロイド抗体の安全性および機能性を評価する方法が、本明細書で提供される。ある実施態様において、ミクログリア細胞は、患者から得ることができる。特定の実施態様において、ミクログリア細胞は、抗β-アミロイド抗体による患者の処置が始まる前に、患者から得ることができる。患者からのミクログリア細胞は、標準の当技術分野において知られている技術を使用して、細胞培養において維持することができる。ある実施態様において、患者からのミクログリア細胞は、抗β-アミロイド抗体およびβ-アミロイドオリゴマーと共にインキュベートされる。次のパラメーターを決定することができる:ミクログリア細胞への抗体-βアミロイド複合体の結合;ミクログリア細胞の中への抗体-βアミロイド複合体の内部移行;および/またはミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼ活性化。コントロールは、抗β-アミロイド抗体単独でつまりβ-アミロイドオリゴマーなしで;および/またはβ-アミロイドオリゴマー単独でつまり抗体なしで;および/またはβ-アミロイドオリゴマーの存在下においてIgG1抗β-アミロイド抗体と共に、患者からのミクログリア細胞をインキュベートすることによって実行することができる。ある実施態様において、抗β-アミロイド抗体は、p38MAPキナーゼ活性化が、β-アミロイドオリゴマーの存在下であるが、安全で機能的な抗体の非存在下における患者のコントロールミクログリア細胞におけるp38MAPキナーゼ活性化を超える、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55である場合、安全で機能的である。ある実施態様において、抗β-アミロイド抗体は、ミクログリア細胞の中へのβ-アミロイド内部移行が、モノクローナル抗体MABTを超えるまたはそれ未満の、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55である場合、安全で機能的である6章を参照されたい。5.3安全で機能的な抗体ある実施態様において、処置されることとなるアミロイドーシスのアミロイドタンパク質に特異的に結合する抗体の定常領域は、安全で機能的な抗体を提供するために修飾するまたは置換することができる。ある実施態様において、結果として生じる抗体の定常領域は、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、および肥満細胞などの免疫エフェクター細胞の表面上のFc受容体に中等度の活性で結合する。ある実施態様において、結果として生じる抗体は、中等度レベルで、つまり、抗体の非存在下におけるp38MAPキナーゼ活性化を超えるが、同じ結合特異性を有する同じ濃度のIgG1抗体の存在下におけるp38MAPキナーゼ活性化未満のレベルで、免疫エフェクター細胞におけるp38MAPK経路を活性化する。ある実施態様において、相補性決定領域CDR以外の可変領域もまた、安全で機能的な抗体を提供するために修飾することができる。そのような抗体およびそのような抗体を含む医薬組成物を生成するための方法もまた、本明細書で提供される。抗原結合特異性は、それぞれ抗体の軽鎖および重鎖の可変領域中に埋め込まれている相補性決定領域CDRによって提供される。本明細書で提供される安全で機能的な抗体の構築のために使用することができる抗体定常領域およびCDRを取り囲むフレームワーク領域は、5.3.1章において記載されるものを含む。ある実施態様において、安全で機能的な抗体の構築のために使用することができるCDRまたは可変領域は、表2において記載される抗体に由来し得る。ある実施態様において、ヒトβアミロイドに特異的に結合する、知られている抗体のCDR下記の表2を参照されたいは、ヒトIgG4の定常領域と組み合わされ、抗体のCDRの間のフレームワーク領域は、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4などのヒトIgGのフレームワーク領域と置換される。ある実施態様において、知られているヒト化抗βアミロイド抗体、例えばバピネオズマブまたはソラネズマブSolanezumabの可変領域は、ヒトIgG4の定常領域と組み合わされる。5.3.1定常領域本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のための抗体定常領域は、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMを含む任意のアイソタイプに由来し得る。ある実施態様において、本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のための抗体定常領域は、サブタイプIgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4に由来し得る。同様に、本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のための抗体重鎖領域のフレームワーク領域は、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMを含む任意のアイソタイプに由来し得る。ある実施態様において、本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のための抗体フレームワーク領域は、サブタイプIgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4に由来し得る。特定の実施態様において、本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のための定常領域は、アイソタイプIgGに由来し得る。さらにより特定の実施態様において、本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のための定常領域は、アイソタイプIgG4に由来し得る。特定の実施態様において、本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のためのフレームワーク領域は、アイソタイプIgGに由来し得る。さらにより特定の実施態様において、本明細書で提供される安全で機能的な抗体の生成のためのフレームワーク領域は、アイソタイプIgG4に由来し得る。ある実施態様において、安全で機能的な抗体の重鎖の定常領域は、異なるアイソタイプまたはサブタイプからのキメラ定常領域である。特定の実施態様において、重鎖の定常領域は、IgG4のエフェクター機能に関与するIgG4重鎖定常領域のその部分およびIgGの異なるサブタイプの間のキメラである。特定の実施態様において、重鎖の定常領域は、ヒトIgG4重鎖定常領域のCH2ドメインおよびIgGの異なるサブタイプの間のキメラである。ある実施態様において、キメラ定常領域は、下記に記載されるように、Fcγに対する中等度の結合活性を有する。ある実施態様において、キメラ定常領域は、p38MAPキナーゼ経路活性が、5.1章において記載される細胞ベースのアッセイ系によって決定されるように中等度レベルとなるように、ミクログリアなどの免疫エフェクター細胞の中への内部移行を媒介する。ある実施態様において、定常領域は、突然変異を導入することによって最適化される。突然変異は、組換えDNA技術を使用して、定常領域の中に導入することができる。ある実施態様において、結果として生じる抗体は、高レベルでミクログリア細胞の中へのβアミロイドの内部移行を促進するが、p38MAPキナーゼ経路の活性化は、中等度レベルである。内部移行の率およびp38MAPキナーゼ活性化は、5.1章において記載される細胞ベースのアッセイ系を使用して決定することができる。ある実施態様において、変異した定常領域を有する抗体は、下記に記載されるように、Fc受容体に対する中等度の結合活性を有する。ある実施態様において、定常領域は、グリコシル化パターンを改変することによって最適化される。グリコシル化パターンは、抗体が合成されるおよび/またはグリコシル化されているアミノ酸例えばAsn297を変異させる発現系によって改変することができる。ある実施態様において、結果として生じる抗体は、高レベルでミクログリア細胞の中へのβアミロイドの内部移行を促進するが、p38MAPキナーゼ経路の活性化は、中等度レベルである。内部移行の率およびp38MAPキナーゼ活性化は、5.1章において記載される細胞ベースのアッセイ系を使用して決定することができる。ある実施態様において、改変されたグリコシル化パターンを有する定常領域を有する抗体は、下記に記載されるように、Fc受容体に対する中等度の結合活性を有する。ある実施態様において、定常領域は、そのFc受容体に対する中等度の結合活性を有する。例証となるFc受容体およびそれぞれの主な抗体リガンドは、表1において記載される。抗体リガンドおよびFc受容体の間の結合活性は、当業者に知られている任意の方法を使用して決定することができる。結合親和性を測定する例示的な方法は、ELISAアッセイ法およびBIACORE解析を含むが、これらに限定されない。あるより特定の実施態様において、Fc受容体は、免疫エフェクター細胞の中への抗体抗原複合体の内部移行を媒介するFc受容体である。ある、さらにより特定の実施態様において、Fc受容体は、ミクログリア細胞上に発現されるFcγ受容体である。ある実施態様において、抗体定常領域は、アイソタイプIgGであり、Fc受容体は、Fcγ受容体である。安全で機能的な抗体の生成のための定常領域は、Fcγ受容体に対する結合活性の10~30;20~40、30~50、40~60、50~70、60~80、または70~90のFcγ受容体に対するIgG1の結合活性を有する。特定の実施態様において、アルツハイマー病の処置のための安全で機能的な抗体の生成のための定常領域は、Fcγに対するIgG1の結合活性の15~25またはより具体的には約20である。ある実施態様において、抗Aβ抗体のエフェクター領域は、抗体のエフェクター機能が低減されるまたは除去されるように修飾される。修飾は、アミノ酸置換および/または欠失をもたらす任意の遺伝子変異であり得る。より特定の実施態様において、定常領域は、エフェクター機能が低減されたまたは除去された修飾IgG1定常領域である。そのような修飾は、例えば、ここにその全体が参照により援用される2000年7月20日公開の国際特許出願公開WO00/42072において記載されるように導入することができる。ある実施態様において、そのFc受容体に結合する修飾定常領域を有する抗体の能力は、未修飾定常領域と比べて低減される。他の実施態様において、定常領域およびそのFc受容体の間の結合は、改変されないが、エフェクター細胞の存在下における細胞毒性などのエフェクター機能は、未修飾定常領域と比べて低減される。5.3.2可変領域ある実施態様において、βアミロイドおよび/またはその病理学的形態複数可に特異的に結合することが知られている抗体の可変領域は、安全で機能的な抗体の生成のために使用することができる。あるより特定の実施態様において、βアミロイドおよび/またはその病理学的形態複数可に特異的に結合することが知られているヒト化抗体の可変領域は、安全で機能的な抗体の生成のために使用することができる。ある実施態様において、可変領域は、非IgG4ヒト化抗体から得られる。特定の実施態様において、可変領域は、非IgG4ヒト化抗体から得られ、IgG4定常領域は、定常領域として使用される。興味のあるアミロイドタンパク質に結合することが知られている抗体のCDRは、本明細書で記載される方法において有用な安全で機能的な抗体の生成のために使用することができる。ある実施態様において、βアミロイドおよび/またはその病理学的形態複数可に特異的に結合することが知られている抗体のCDRは、そのような安全で機能的な抗体の生成のために使用することができる。そのCDRまたは可変領域を使用することができる、例証となる抗体は、表2において記載されるものを含むが、これらに限定されない。特定の実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体のCDRは、以下のとおりである:重鎖のCDR1は、配列番号1のアミノ酸配列を有する;重鎖のCDR2は、配列番号2のアミノ酸配列を有する;重鎖のCDR3は、配列番号3のアミノ酸配列を有する;軽鎖のCDR1は、配列番号4のアミノ酸配列を有する;軽鎖のCDR2は、配列番号5のアミノ酸配列を有する;軽鎖のCDR3は、配列番号6のアミノ酸配列を有する。他の特定の実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体の重鎖可変領域は、配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または少なくとも99同一であるアミノ酸配列を有する。より特定の実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体の重鎖可変領域は、配列番号7のアミノ酸配列と100同一であるアミノ酸配列を有する。他の特定の実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体の軽鎖可変領域は、配列番号10のアミノ酸配列と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または少なくとも99同一であるアミノ酸配列を有する。より特定の実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体の軽鎖可変領域は、配列番号10のアミノ酸配列と100同一であるアミノ酸配列を有する。さらにより特定の実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体の重鎖可変領域は、配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または少なくとも99同一であるアミノ酸配列を有し、本発明の安全で機能的な抗体の軽鎖可変領域は、配列番号10のアミノ酸配列と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または少なくとも99同一であるアミノ酸配列を有する。一実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体の重鎖可変領域は、配列番号7のアミノ酸配列と100同一であるアミノ酸配列を有し、本発明の安全で機能的な抗体の軽鎖可変領域は、配列番号10のアミノ酸配列と100同一であるアミノ酸配列を有する。mMABT抗体のCDRL2配列KVSNRFS配列番号5は、抗体活性に悪影響を及ぼすことなく、わずかに修飾されてもよい。保存的置換は、位置50でのKに対するRおよび位置53でのNに対するSの交換を通して行ってもよい。それゆえ、2つの代替のCDRL2配列は、それぞれ、RVSNRFSおよびKVSSRFSである。これらは、それぞれ、mMABTVK-RおよびmMABTVK-Sのように、他の変化を有していないマウスVK配列の中に組み込まれる。5.3.3抗体の構築ある実施態様において、アミロイドタンパク質またはβアミロイドなどのその病理学的形態に特異的に結合する抗体のCDRは、本発明の安全で機能的な抗体と適合する定常領域を有する抗体の中に配置される5.3.1章。ある実施態様において、アミロイドタンパク質またはβアミロイドなどのその病理学的形態に特異的に結合する抗体の可変領域は、本発明の安全で機能的な抗体と適合する定常領域と組み合わされる5.3.1章。ヒト化抗体を構築する方法は、当技術分野において周知である。例えば、ヒト化抗体を生成する方法は、WO2008/011348として公開された国際特許出願PCT/US2007/073504において記載されており、ここにその全体が参照により援用される。5.3.4安全性に対する試験アルツハイマー病の抗βアミロイド抗体による処置中に観察された副作用は、髄膜炎や髄膜脳炎などの炎症性副作用、及び脳における体液の増加脳浮腫を含む。他の副作用は、有害な免疫反応、つまり、投与された抗βアミロイド抗体に対する患者による免疫反応を含む。5.3.4.1有害な免疫反応抗βアミロイド抗体を受けた患者においてモニターすることができる1つの副作用は、抗体に対する抗体応答である。そのような有害な免疫反応の大きさを検出する、モニターする、または定量化するための当業者に知られている任意の技術を使用することができる。そのような抗体応答は、抗体が抗βアミロイド抗体に結合する場合に起こる。可溶性抗原が血管コンパートメントにおける抗体と組み合わさる場合、それらは、様々な臓器の血管床中に非特異的に捕捉される循環免疫複合体を形成し得、血清病、血管炎、血管炎を有する全身性エリテマトーデス腎炎nephritissystemiclupuserythematosus、または糸球体腎炎などのいわゆる免疫複合体病を引き起こす。免疫複合体病は、当技術分野において知られている任意の方法を使用して検出および/またはモニターすることができる。例えば、免疫複合体試験は、免疫複合体病の重症度を推定するために血液中の循環免疫複合体を実証するために使用することができる。免疫複合体試験は、当業者に知られている任意の方法によって実行することができる。特に、免疫複合体試験は、米国特許第4,141,965号、米国特許第4,210,622号、米国特許第4,210,622号、米国特許第4,331,649号、米国特許第4,544,640号、米国特許第4,753,893号、および米国特許第5,888,834号において記載される任意の1つまたは複数の方法を使用して実行することができ、これらのそれぞれは、その全体が参照によって本明細書において組み込まれる。他の方法は、抗体に対する抗イディオタイプ抗体を検出するための、酵素結合免疫吸着アッセイELISAなどのイムノアッセイの使用である。GerostamoulosJetalTheUseOfElisaScreeningInPostmortemBloodTIAFTTheInternationalAssociationofForensicToxicologistsClarkeWandDufourDREditorsContemporaryPracticeinClinicalChemistryAACCPressWashingtonDCHarrisNandWinterWPresta米国特許第6737056号HarlowandLaneAntibodiesALaboratoryManualWO9613590およびWO9629605を参照されたい。5.3.4.2浮腫抗βアミロイド抗体を受けた患者においてモニターすることができる1つの副作用は、例えばMRIスキャン、DCE-MRIスキャン、PETスキャン、および/またはCTスキャンによって評価してもよい浮腫、特に脳浮腫である。浮腫の大きさを検出する、モニターする、または定量化するための当業者に知られている任意の技術を使用することができる。浮腫はまた、浮腫の動物モデルにおいて測定されてもよい。そのような方法において、浮腫体積対側半球体積のうちの同側半球体積の半球体積が、計算される。CTおよびT1強調MRIで、脳浮腫は、低信号または高信号病変として視覚化することができる。脳脊髄液などの高度な水含有量を有する脳浮腫および他の構造は、T2強調MRIで高信号である。脳浮腫が、等信号または高信号バックグラウンドに対して高信号病変として明確に視覚化されるので、液体減衰反転回復MR画像は、付加的な情報を提供する。5.3.4.3髄膜炎抗βアミロイド抗体を受けた患者においてモニターすることができる1つの副作用は、髄膜炎である。髄膜炎の大きさを検出する、モニターする、または定量化するための当業者に知られている任意の技術を使用することができる。運動および感覚機能;神経機能;聴覚および会話;視覚;協調およびバランス;精神状態;ならびに気分または行動における変化を評価するために設計される一連の試験を含む神経学的検査を行ってもよい。神経系の機能は、音叉、小さな光、反射ハンマーreflexhammer、およびピンなどのアイテムの助けを借りて、強さおよび感覚の試験を通して評価してもよい。脳および脊髄を取り囲み、保護する脳脊髄液の分析は、急性および慢性炎症を検出することができる。脊椎穿刺または腰椎穿刺として知られている手順において、少量の脳脊髄液が、下背に挿入される特殊な針によって摘出される。皮膚は、サンプリングに先立って局所麻酔薬により麻痺させる。健康な人々において十分に清澄である体液は、細菌または血液の存在を検出するためにならびにグルコースレベル低グルコースレベルは細菌性または真菌性髄膜炎の徴候であるおよび白血球白血球数の上昇もまた、感染症の徴候であるを測定するために試験される。手順は、通常病院において行われ、約45分かかる。非侵襲性画像処理手順は、髄膜炎診断を得るために日常的に使用される。そのようなコンピューター支援画像処理は、脳炎;内出血または出血;および髄膜炎に関連し得る他の脳異常の徴候を明らかにすることができる。CTスキャンとして知られているコンピューター断層撮影法は、骨、臓器、および組織の急速で明確な二次元画像を産生するために、X線およびコンピューター技術を組み合わせる。時々、脳中の異なる組織を目立たせて、かつ髄膜の炎症を検出するために、造影剤が、血流の中に注射される。磁気共鳴画像法MRIは、組織、臓器、骨、および神経を含む身体構造の詳細な画像を産生するために、コンピューターによって生成される電波および強力な磁石を使用する。造影剤は、より多くの細部を明らかにするために試験に先立って注射されてもよい。髄膜炎診断を支援するために使用される他の画像処理技術は、超音波である。脳波測定法またはEEGは、頭蓋を通して脳中の電気的活性をモニターすることによって、髄膜炎に関連する異常な脳波を同定することができる。EEGは、脳の炎症を診断するのを助けるために使用される。5.3.5機能性に対する試験5.3.5.1神経心理学的試験本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、1つまたは複数の神経心理学的試験を使用して評価することができる。例示的な神経心理学的試験は、下記に記載され、限定を伴うことなく、TheConsortiumtoEstablishaRegistryforAlzheimer’sDiseaseclinicalandneuropsychologicalassessmentofAlzheimer’sdiseasePsychopharmacolBull19882464152MorrisJCHeymanAMohsRCHughesJPvanBelleGFillenbaumGMellitsEDClarkCTheConsortiumtoEstablishaRegistryforAlzheimer’sDiseasePartIClinicalandneuropsychologicalassessmentofAlzheimer’sdiseaseNeurology1989Sep39115965およびWelshKButtersNHughesJMohsRHeymanADetectionofabnormalmemorydeclineinmildcasesofAlzheimer’sdiseaseusingCERADneuropsychologicalmeasuresArchNeurol1991Mar4827881を参照されたいによって確立されたものを含む。一実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、AlzheimerDiseaseAssessmentScale-Cognitivetest135664IhlRBrinkmeyerJJannerMKerdarMSAcomparisonofADASandEEGinthediscriminationofpatientswithdementiaoftheAlzheimertypefromhealthycontrolsNeuropsychobiology2000Jan411027およびWeyerGErzigkeitHKanowskiSIhlRHadlerDAlzheimer’sDiseaseAssessmentScalereliabilityandvalidityinamulticenterclinicaltrialIntPsychogeriatr1997Jun912338を参照されたいを使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、BehavioralPathologyinAlzheimer’sDiseaseRatingScaleを使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、Blessed-DementiaInformation-Memory-ConcentrationTest797811を参照されたいを使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、CambridgeNeuropsychologicalTestAutomatedBattery499504およびRobbinsTWJamesMOwenAMSahakianBJMcInnesLRabbittPCambridgeNeuropsychologicalTestAutomatedBatteryafactoranalyticstudyofalargesampleofnormalelderlyvolunteersDementia1994SepOct526681を参照されたいを使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、ClockDrawTest7259およびLeeHSwanwickGRCoenRFLawlorBAUseoftheclockdrawingtaskinthediagnosisofmildandverymildAlzheimer’sdiseaseIntPsychogeriatr1996Fall846976を参照されたいを使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、CornellScaleforDepressioninDementia27184を使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、GeriatricDepressionScale1738を参照されたいを使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、MiniMentalStateExamPsychopharmBull198824689692を参照されたいを使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、NeuropsychiatricInventory230814CummingsJLTheNeuropsychiatricInventoryassessingpsychopathologyindementiapatientsNeurology1997May48S106を使用して評価することができる。他の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、7MinuteScreen26571andSolomonPRHirschoffAKellyBRelinMBrushMDeVeauxRDPendleburyWWA7minuteneurocognitivescreeningbatteryhighlysensitivetoAlzheimer’sdiseaseArchNeurol1998Mar5534955を参照されたいを使用して評価することができる。5.3.5.2インビボにおける画像処理本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、対象においてインビボにおける画像処理を使用して評価することができる。画像処理試薬は、患者の体内に静脈内注射によってまたは頭蓋内注射によって脳の中に直接または頭蓋を通して穴を空けることによって投与することができる。試薬の投薬量は、処置方法に関しては同じ範囲内にあるべきである。典型的には、試薬は、標識されるが、いくつかの方法において、親和性を有する最初の試薬は非標識であり、第2の標識剤は、最初の試薬に結合するように使用される。標識の選択は、検出の平均値に依存する。例えば、蛍光標識は、光学的検出に好適である。常磁性の標識の使用は、外科的介入を伴わない断層撮影法の検出に好適である。放射性標識もまた、陽電子放射断層法PETまたは単一光子放射型コンピューター断層撮影法SPECTを使用して検出することができる。処置の機能性は、対応するベースライン値に対する標識された位置の数、サイズ、および/または強度を比較することによって評価することができる。ベースライン値は、アルツハイマー病を有していない個体の集団における平均レベルを示すことができる。その代わりに、ベースライン値は、同じ患者において決定された以前のレベルを示すことができる。例えば、ベースライン値は、処置を始める前に患者において決定することができ、測定値は、その後、ベースライン値と比較することができる。ベースラインと比べた値の減少は、処置に対するポジティブな応答を伝えることができる。抗β-アミロイド抗体はまた、Aβの切断型形態が脳脊髄液または他の体内組織もしくは体液中に存在するかどうかを決定するのに有用である。ベースラインと比べた患者における減少したレベルのそのような形態の存在は、処置に対するポジティブな応答を伝えることができる。1陽電子放射断層法一実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、アルツハイマー病の病態生理をモニターするために、陽電子放射断層法PETと共にプローブとして放射性標識トレーサーを使用することによって評価することができる。。例えば、炭素11標識PittsburghcompoundBは、アミロイドプラーク負荷を画像化するためにPETと共に放射性トレーサーとして使用することができる。アミロイドプラーク負荷のPET画像処理のための他のトレーサーは、18F標識スチルベンおよびスチリルピリジン18F標識ベンゾチアゾールBTA-誘導体3’-18FFPIB;コンゴレッド誘導体SB-13の11Cおよび18F標識バージョン;ならびにアミノナフチル誘導体18FFDDNPを含む。2磁気共鳴画像法一実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、磁気共鳴画像法MRIを使用することによって評価することができる。MRIは、中枢神経系における体積変化を評価するためにおよび血管原性浮腫を定量化するために、使用することができる。5.3.5.3動物モデル一部の実施態様において、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、アルツハイマー病のモデルを使用して、インビボにおいて試験することができる。アルツハイマー病のそのような動物モデルは、当技術分野において周知であり、限定を伴うことなく、マウス、ラット、および霊長類を使用するモデルを含む。アルツハイマー病の例示的なマウスモデルは、TgCRND8マウスJanusCetalAβpeptideimmunizationreducesbehaviouralimpairmentandplaquesinamodelofAlzheimer’sdiseaseNature408979982を参照されたいを含む。TgCRND8マウスは、ヒトにおいてアルツハイマー病を引き起こすことが知られている2つのミスセンス突然変異KM670/671NLおよびV717Fを有するヒトアミロイド前駆体タンパク質導入遺伝子APP695を発現する。約3月齢時に、これらのマウスは、脳のAβレベルの上昇および脳の細胞外アミロイドプラークの数の増加が伴う進行性の空間学習欠損を示す。6月齢までに、AβのレベルならびにTgCRND8マウスの脳におけるアミロイドプラークの形態、密度、および分布は、確立されたアルツハイマー病のヒトの脳において見られるものに類似する。アルツハイマー病のヒト患者でのように、マウスモデルの生化学的、行動的、および神経病理学的特徴には、死亡率の加速が伴う。アルツハイマー病の他の例示的なマウスモデルは、当技術分野において知られており、そのようなマウスは、市販されている。アルツハイマー病のための霊長類モデルもまた、当技術分野において知られている117122およびFainmanetal2007AmericanJournalofMedicalGenetics144B818819を参照されたい。動物モデルにおけるそのようなアルツハイマー病の処置後に、処置の機能性は、限定を伴うことなく、下記に記載されるものを含む、技術分野において知られている方法を使用して評価することができる。1生存個体数調査マウスの生存率は、死亡の発生毎に生存率を算出し、したがって、小さなサンプルサイズにとってそれを好適にするKaplan-Meier法を使用して評価することができる。生存の解析のために、マウスは、コントロールグループおよび処置グループにグループ化することができ、グループの間の比較は、例えばTarone-Ware検定を使用して評価することができる。2Morris水迷路試験Morris水迷路試験は、以前に記載されるように実行することができるを参照されたい。この手順において、マウスは、水で満たされた円形のプール中に配置することができ、逃避台は、水の表面直下に浸水している。動物が近位の視覚的な手掛りに向けて進むことによってそれを見つけることができるように、目に見えるマーカーを台上に配置することができるその代わりに、台の位置をマークするための形式的な手掛りがない、より複雑な形態の試験をマウスに与えることができる。この形態において、マウスは、台の遠位の視覚的な手掛りと比べた位置を学習しなければならない。マウスが水中にとどまる時間の長さは、認知能力に反比例する。例示的な試験は以下のとおりである:マウスは、予備訓練なしで1日目に台が隠されたMorris水迷路試験を受ける。マウスは、1日当たり6回のトライアルで3日間試験することができる。4日目に、台をプールから撤去することができ、各マウスは、1回の30秒間の水泳プローブトライアルprobetrialを与えられる。最後の日に、マウスは、それらの水泳能力、視力、および一般的な認知を評価するために手掛り試験を施すことができる。手掛り試験は、試験に使用されるものとは異なる四分円に配置されている台により構成することができ、旗でタグをつけることができる。動物に、60秒間、台を見つけさせることができる。台を見つけない動物は、空間記憶の最終解析において使用されない。行動的なデータは、薬物または遺伝子型および反復尺度因子repeatedmeasurefactorとしての訓練セッションにより、要因分散分析ANOVAの混合モデルを使用して分析することができる。3自発運動活性自発運動活性は、知られているアプローチを使用して、例えばロータロッドSanDiegoInstruments、SanDiego、Calif.を使用して評価することができる。例えば、マウスは、以前に記載されたを参照されたいロータロッドにおいて2日間分析することができる。そのような解析において、最初の日に、マウスは、5回のトライアルのために訓練することができる:第1回は10rpm、第2回は20rpm、および第3~第5は40rpmで。2日目に、マウスは、40rpmで7回のトライアルについてそれぞれ試験することができる。トライアルの間、マウスは、円柱上に個々に配置することができ、回転速度は、ある期間にわたって適切な速度まで増加させる。マウスがロッド上にとどまる時間の長さ落下潜時fallLatencyを記録することができ、運動機能の尺度として使用することができる。4脳のアミロイド負荷脳のアミロイド負荷は、以下のように試験することができる:試験動物からの脳を摘出することができ、一方の半球を、4パラホルムアルデヒド中に固定することができ、正中矢状面midsagittalplaneでパラフィンろう中に包埋することができる。序列性の一様な無作為切片のセットを生成するために、5マイクロメートルの連続切片を、全半球にわたって収集することができる。50マイクロメートルの間隔の切片のセットを、解析のために使用することができる10~14切片/セット。プラークは、ギ酸による抗原回復および一次抗βアミロイド抗体例えばDakoM-0872とのインキュベーション、その後に続く二次抗体例えばDakoStreptABCcomplex/horseradishkit後に、同定することができる。最終産物は、ジアミノベンジジンDABにより視覚化することができ、例えばルクソールファストブルーにより対比染色することができる。アミロイドプラーク負荷は、例えば、Leica顕微鏡およびHitachiKP-M1UCCDビデオカメラと接続したLecoIA-3001画像解析ソフトウェアを使用して評価することができる。Openlab画像処理ソフトウェアImprovision、Lexington、Mass.は、続いて、プラーク数およびプラーク面積決定のために、顕微鏡写真を2値画像に変換するために使用することができる。5血漿および脳のアミロイドベータアミロイドベータのレベルは、血漿および脳において以下のように決定することができる:半分の脳のサンプルは、緩衝スクロース溶液、その後に続く、可溶性アミロイドベータレベルについての0.4ジエチルアミン/100mMNaClか、または総Aβの単離についての冷ギ酸中のいずれかでホモジナイズすることができる。中和後に、サンプルは、希釈し、市販されているキット例えばBIOSOURCEInternationalによって提供されるものを使用して、Aβについて分析することができる。ウェスタンブロット解析は、Aβ種について尿素ゲルを使用してすべての画分について実行できるを参照されたい。アミロイドベータは、例えば6E10BIOSOURCEInternationalおよびEnhancedChemiluminenscenceAmershamを使用して検出することができる。6脳におけるAPPの解析APPは、脳において以下のように検出することができる:マウスの半分の脳のサンプルは、ホモジナイズし、20mMTrispH7.4、0.25Mスクロース、1mMEDTA、および1mMEGTAならびに0.4DEAジエチルアミン/100mMNaClと混合されたプロテアーゼ阻害剤カクテル中で109,000xgで回転させることができる。上清は、モノクローナル抗体を使用して、ウェスタンブロッティングによってAPPレベルについて分析することができ、ペレットは、例えば、以前に記載されるモノクローナル抗体C1/6.1によりAPPホロタンパク質について分析することができるandJanusCetalAbetapeptideimmunizationreducesbehaviouralimpairmentandplaquesinamodelofAlzheimer’sdiseaseNature408979982を参照されたい。7長期増強電場電位は、標準の手順を使用して、マウス海馬のCA1部において記録することができる例えばSarveyJMBurgardECDeckerGLongtermpotentiationstudiesinthehippocampalsliceJNeurosciMethods28109124andStantonPKSarveyJMNorepinephrineregulateslongtermpotentiationofboththepopulationspikeanddendriticEPSPinhippocampaldentategyrusBrainResBull18115119を参照されたい。マウスの脳は、摘出することができ、各半球からの海馬は、単離することができ、これから、切片を調製することができる例えば350μm冠状切片を作製することができる。切片は、NaCl-CSFを含む保持チャンバーに移すことができ、1時間を超える時間、回復させた。一度、チャンバー中に配置されたら、切片は、オリゴマーAβを保存するために、15mlのACSFを含む閉ループによって継続的に灌流することができる。20分間の安定したベースラインの後に、1mlの15×濃縮7PA2条件培地を、灌流ループに添加することができる。双極性刺激電極例えばWorldPrecisionInst.によって提供されるものは、ベースライン刺激およびテタヌスtetanusを伝えるためにSchaffer側枝中に配置することができる。ACSFを含むホウケイ酸ガラス記録用電極は、刺激電極からおよそ75~200μmに位置づけることができる。刺激の強度典型的には10~20μAmpは、最大の電場電位応答の25~40を得るために設定することができる。試験刺激は、0.05Hzで伝えることができる。長期増強を誘導するために、4テタヌス1秒間に100Hzを5分間隔で伝えることができる。電場電位応答は、例えばAxopatch200Bを使用して、10倍増幅させることができる。データは、10kHzでサンプリングし、2kHzでフィルタリングすることができる。トレースは、例えばpClamp9.2を使用して分析することができる。電場電位のスロープは、全応答のおよそ10~60を使用して推定することができる。8シナプトフィジン定量化シナプトフィジン免疫組織化学的染色は、パラホルムアルデヒド固定された処置マウスおよびコントロールマウスの、3つの均一に間隔を置いた矢状切片に対して実行することができる。切片は、例えば抗シナプトフィジンIgG1:40;Roche、Laval、PQによりシナプトフィジンについて免疫標識することができる。デジタル画像を取り込み、分析することができる。各切片内で、海馬のCA1領域の3つの無作為に選ばれた海馬のCA1領域の100μm2面積は、シナプトフィジン反応性の細胞体および終末ボタンについて数えることができる。結果は、100μm2当たりの反応性の体および終末ボタンの数の平均値として表現することができるPhinneyAetalNohippocampalneuronorsynapticboutonlossinlearningimpairedagedβamyloidprecursorproteinnullmiceNeuroscience9012071216を参照されたい。9条件づけ味覚嫌悪条件づけ味覚嫌悪CTAは、処置の実施前後に動物の認知機能を試験するために使用される非常に感度がよく、周知で、標準の試験である。CTAは、味などの新規な刺激と病気を関連させるための学習についての動物の能力を試験するために使用され、動物は、新規な刺激に対する後の再曝露に際して新規な味を避ける。CTAは、様々な皮質および皮質下レベルの脳を含む。ともに嫌悪行動をもたらす上行性および下行性の情報を連結する連合は、相互に連絡するユニットのいずれかに影響を及ぼす変化によって弱化または強化し得る。連合学習の形態として、CTAの強さは、少し例を挙げると、新規な経口刺激例えば非新規な刺激は回避的に条件付けることができない、もたらされる病気の程度毒性、反復訓練の数、反対の欲求口渇などを含む、多くの変数によって決定される。種々様々の化学的および物理的物質は、用量依存的な方式でCTAをもたらすことができるが、塩化リチウムは、倦怠感および食欲不振を確実にもたらす。自然に存在する病気のように、リチウムは、サイトカイン放出を含めて、上記に記載される経路を刺激することによってCTAをもたらす。10Barnes迷路Barnes迷路は、テーブルの周囲に円形の穴を有する円形のテーブルからなる。各穴の下に、落下箱と呼ばれる箱に向けたスロットがある。迷路における動物のゴールは、上部が開いており、テーブルの上部の穴のうちの1つを通って到達することができる箱である落下箱に到達することである。テーブルの表面上への曝露は、負の強化としての役割を果たし、試験対象が避難所を捜し求めるように動機づける。有効な唯一の避難所は、落下箱であり、試験対象はこれに逃げなければならない。試験対象が迷路に慣れるように、対象は、避難の手助けによって落下箱の中に誘導される。4~5回の実行後に、正常な試験対象は、落下穴を直ちに位置づけることができる。台のまわりに設定された固定された視覚的な手掛りは、トライアルの間に齧歯類に方角を知らせる役割を果たす。成績は、対象がする間違いの数、つまり、対象が、その鼻を落下箱を含まない円形の穴の中に突き出すまたはその頭部をその上にとどまらせる回数によって典型的には測定される。間違い/トライアルの数における減少の率は、すべての対象にわたって測定される。他の成績値もまた、測定することができる、例えば、各齧歯類が用いる戦略は、無作為無作為に各穴をチェック、序列性あるパターンで各穴をチェック、または空間的落下箱を有する穴への一直線の移動としてスコア化することができる。11遅延見本合わせ遅延見本合わせDMT手順は、実験動物における空間認識記憶を評価するために一般に使用される。例示的なプロトコールにおいて、対象は、2つの引き込み式のレバーおよび飼料ペレットディスペンサーが装備されたチャンバー中に配置される。ある期間の後に、サンプルレバーが提示され、対象は、飼料を得るためにレバーを押さなければならない。続いて、レバーは引っ込められ、異なる期間の遅延後に、両方のレバーは、再び提示され、対象は、選ぶことを要求される。マッチング条件下で、正確な応答は、以前に提示されているレバーを押すことであり、飼料ペレットの受渡によって報酬を与えられる。不正確な応答は、ハウスのライトが切られる5秒間の中断時間により罰せられる。作動記憶は、対象の正確および不正確な応答の数を分析することによって決定される。12ミクログリア活性化ミクログリアの活性化は、アルツハイマー病の処置において有益な役割を果たすことができる。したがって、本明細書で記載されるアルツハイマー病処置の機能性は、ミクログリア活性化を測定するための知られている方法を使用して評価することができる。そのような方法は、コントロール対象と比較した、処置対象のミクログリア活性化のレベルを決定するために、PET画像処理を含む、上記に記載されるものなどの画像処理技術を利用する。5.4処置の方法安全で機能的な抗体を使用する、アルツハイマー病を含むがこれに限定されない、アミロイドーシスの安全で機能的な処置のための方法が本明細書で提供される。ある実施態様において、方法は、p38MAPキナーゼが免疫エフェクター細胞において中等度レベルで活性化されるように、用量および/または投与レジメンを使用する、アミロイドタンパク質および/または凝集体などのその病理学的形態に特異的に結合する非IgG1抗体の投与を含む。この部において使用される、p38MAPキナーゼ活性化に関する中等度レベルという用語は、同じ結合特異性を有するが、IgG1抗体の定常領域を有する抗体の非存在下においてよりも高度となるが、その抗体の存在下においてよりも低度となるレベルを意味する。p38MAPキナーゼ活性化のレベルは、5.1章において記載されるように決定することができる。ある実施態様において、アミロイドタンパク質および/または凝集体などのその病理学的形態に特異的に結合する非IgG1抗体は、ミクログリア細胞などの免疫エフェクター細胞の中へのアミロイドベータタンパク質などの標的抗原の最大の内部移行および中等度レベルのp38MAPキナーゼ活性化をもたらす用量および/または投与レジメンを使用して投与される。ある実施態様において、抗体は、p38MAPキナーゼが中等度レベルで活性化されるように、p38MAPキナーゼ経路の変調成分と組み合わせて投与される。ある実施態様において、本明細書の方法により使用されることとなる非IgG1抗体は、ヒトIgG4抗体の定常領域を有する抗体である。ある実施態様において、非IgG1抗体は、ヒトIgG4抗体のCH2ドメインと共にIgG抗体の定常領域を有する。ある実施態様において、ヒトβアミロイドに特異的に結合する、知られている非ヒト化抗体のCDR下記の表2を参照されたいは、ヒトIgG4抗体の定常領域と組み合わされ、抗体のCDRの間のフレームワーク領域は、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4などのヒトIgG抗体のフレームワーク領域と置換される。ある実施態様において、知られているヒト化抗βアミロイド抗体、例えばバピネオズマブまたはソラネズマブの可変領域は、ヒトIgG4抗体の定常領域と組み合わされる。ミクログリアの中へのβアミロイド内部移行およびp38MAPキナーゼ活性化は、当業者に知られている任意の技術を使用して測定することができる。ある実施態様において、アルツハイマー病を含むが、これに限定されないアミロイドーシスの処置において使用されることとなる本発明の安全で機能的な抗体の投薬量は、5.1章において記載される細胞ベースのアッセイ系を使用して決定される。特に、投薬量は、ミクログリアの中へのβアミロイドの内部移行が最大となるように調節されるが、p38MAPキナーゼ経路の活性化は、IgG1アイソタイプ抗βアミロイド抗体の存在下において活性化されるp38MAPキナーゼ未満であるが、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55活性化される。ある実施態様において、アルツハイマー病を含むが、これに限定されないアミロイドーシスの処置において使用されることとなる本発明の安全で機能的な抗体の投与プログラムは、5.1章において記載される細胞ベースのアッセイ系を使用して決定される。特に、投薬量は、ミクログリアの中へのβアミロイドの内部移行が最大となるように調節されるが、p38MAPキナーゼ経路の活性化は、IgG1アイソタイプ抗βアミロイド抗体の存在下において活性化されるp38MAPキナーゼ未満であるが、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55活性化される。ある実施態様において、本発明の安全で機能的な抗体の投薬量は、ミクログリアの中へのβアミロイドの内部移行が最大となるように調節されるが、p38MAPキナーゼ経路の活性化は、抗体の非存在下におけるp38MAPキナーゼ活性化レベルを超えて、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55活性化される。ある実施態様において、アルツハイマー病を含むが、これに限定されないアミロイドーシスの処置において使用されることとなる本発明の安全で機能的な抗体の投与レジメは、5.1章において記載される細胞ベースのアッセイ系を使用して決定される。特に、投薬量は、ミクログリアの中へのβアミロイドの内部移行が最大となるように調節されるが、p38MAPキナーゼ経路の活性化は、抗体の非存在下におけるp38MAPキナーゼ活性化レベルを超えて、5~15;10~20;15~25;20~30;35~45;40~50;または45~55活性化される。特定の実施態様において、アミロイドーシスは、アルツハイマー病であり、アミロイドタンパク質は、β-アミロイドであり、免疫エフェクター細胞は、ミクログリア細胞である。方法および組成物は、特にアルツハイマー病についてより詳細に記載されるが、これらの方法および組成物は、例えば軽度認知機能障害MCIなどの認知記憶能力の消失によって特徴付けられる疾患または状態を含むアルツハイマー病AD、レビー小体型認知症、ダウン症候群、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血オランダ型などの神経疾患を含むが、これらに限定されない疾患などの続発性アミロイドーシスおよび加齢性アミロイドーシス;グアムパーキンソン認知症;ならびに進行性核上性麻痺、多発性硬化症などのアミロイド様タンパク質に基づくまたはそれに関連する他の疾患;クロイツフェルトヤコブ病、パーキンソン病、HIV関連認知症、ALS筋萎縮性側索硬化症、封入体筋炎IBM、成人発症型糖尿病、内分泌腫瘍、および老人性心アミロイドーシス;ならびにβ-アミロイド沈着による黄斑変性症、ドルーゼン関連性の視神経症、および白内障を含む様々な眼疾患を含むが、これらに限定されないアミロイドーシスの処置および予防に一般的に適用可能である。特定の実施態様において、アミロイドーシスは、アルツハイマー病であり、患者は、ヒト患者である。ある実施態様において、アルツハイマー病は、本明細書で提供される安全で機能的な抗体ならびにアルツハイマー病の処置に現在使用されている、1つまたは複数の次の薬物、タクリンCOGNEX、MorrisPlains、NJ、ドネペジルARICEPT、Tokyo、JP、リバスチグミンEXELON、EastHanover、NJ、ガランタミンREMINYL、NewBrunswick、NJ、およびメマンチンNAMENDA、NewYork、NYなどの組み合わせを使用して処置される。5.5医薬調製物および投与本明細書で5.2章提供される安全で機能的な抗体は、生理学的に許容できる製剤中で調製することができ、知られている技術を使用して、薬学的に許容できる担体、希釈剤、および/または賦形剤を含んでいてもよい。例えば、本明細書で記載される安全で機能的な抗体は、治療用組成物を形成するために、薬学的に許容できる担体、希釈剤、および/または賦形剤と組み合わされる。好適な医薬担体、希釈剤、および/または賦形剤は、当技術分野において周知であり、例えば、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、油/水エマルションなどのエマルション、様々なタイプの湿潤剤、滅菌溶液などを含む。本明細書で提供される医薬組成物の製剤は、当業者に知られている標準の方法論に従って達成することができる。本明細書で提供される医薬組成物は、好適で、薬学的に機能的な用量で、固体、液体、またはエアロゾルの形態で対象に投与してもよい。固体組成物の例は、丸剤、クリーム剤、および植え込み型の投薬ユニットを含む。丸剤は、経口で投与してもよい。治療用クリーム剤は、局所的に投与してもよい。植え込み型の投薬ユニットは、局部的に、例えば腫瘍部位に投与してもよい、または治療用組成物の規則正しい放出のために、例えば皮下に植え込まれてもよい。液体組成物の例は、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内注射に適した製剤ならびに局所的および眼内投与のための製剤を含む。エアロゾル製剤の例は、肺への投与のための吸入器製剤を含む。組成物は、投与の標準のルートによって投与してもよい。一般に、組成物は、局所的、経口、直腸、経鼻、皮内、腹腔内、非経口例えば静脈内、皮下、または筋肉内ルートによって投与してもよい。さらに、組成物は、生分解性ポリマーなどの徐放性マトリックスの中に組み込まれてもよく、ポリマーは、送達が望まれる付近に、例えば腫瘍の部位に植え込まれる。方法は、単一用量の投与、所定の時間間隔での反復用量の投与、および所定の期間の間の持続投与を含む。本明細書で使用される徐放性マトリックスは、酵素もしくは酸/塩基加水分解によってまたは溶解によって分解できる物質、通常ポリマーから作製されるマトリックスである。一度、体内に挿入されたら、マトリックスは、酵素および体液が作用する。徐放性マトリックスは、リポソーム、ポリラクチドポリラクチド酸、ポリグリコリドグリコール酸のポリマー、ポリラクチドコグリコリド乳酸およびグリコール酸のコポリマー、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリペプチド、ヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、カルボン酸、脂肪酸、リン脂質、多糖、核酸、ポリアミノ酸、フェニルアラニン、チロシン、イソロイシンなどのアミノ酸、ポリヌクレオチド、ポリビニルプロピレン、ポリビニルピロリドン、ならびにシリコーンなどの生体適合性物質によって望ましいように選ばれる。本発明の目的に一般に用いられる生分解性マトリックスは、ポリラクチド、ポリグリコリド、またはポリラクチドコグリコリド乳酸およびグリコール酸のコポリマーのうちのいずれか1つのマトリックスを含むが、これらに限定されない。組成物の投薬量が、例えば処置されている状態、使用される特定の組成物、ならびに患者の体重、サイズ、性別、および健康状態などの他の臨床的因子、体表面積、投与されることとなる特定の化合物または組成物、同時に投与されている他の薬物、ならびに投与のルートなどの様々な因子に依存するであろうということは、当業者に周知である。組成物は、生物活性物質または化合物、特に、本発明による抗体と一緒に、酸化ストレスに対する化合物、抗アポトーシス化合物、金属キレート剤、ピレンゼピンおよび代謝産物などのDNA修復の阻害剤、3-アミノ-1-プロパンスルホン酸3APS、1,3-プロパンジスルフォネート1,3PDS、α-セクレターゼ活性剤、β-およびγ-セクレターゼ阻害剤、タウタンパク質、神経伝達物質、β-シートブレーカー、βアミロイド除去/減少細胞構成要素のための誘引物質、ピログルタミン酸化アミロイドベータ3~42を含むN末端切断型βアミロイドの阻害剤、抗炎症分子、例えばクロザピン、ジプラシドン、リスペリドン、アリピプラゾール、もしくはオランザピンなどの非定型抗精神病薬、またはタクリン、リバスチグミン、ドネペジル、および/もしくはガランタミンなどのコリンエステラーゼ阻害剤ChEI、任意のアミロイドまたはタウ修飾剤を含むM1アゴニストおよび他の薬物、例えばビタミンB12、システイン、アセチルコリンの前駆体、レシチン、コリン、イチョウ、アセチル-L-カルニチン、イデベノン、プロペントフィリン、またはキサンチン誘導体などの栄養補助剤、ならびに任意選択で、薬学的に許容できる担体および/または希釈剤および/または賦形剤からなる群から選択される少なくとも1つの化合物を含む他の組成物ならびに疾患の処置のための手順と組み合わせて投与してもよい。投与は、一般的に、非経口的、例えば静脈内となる。非経口投与のための調製物は、滅菌水性または非水性溶液、懸濁液、およびエマルションを含む。非水性溶媒は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機酸エステルを含むが、これらに限定されない。水性溶媒は、生理食塩水および緩衝媒質を含む水、アルコール/水溶液、エマルション、または懸濁液からなる群から選ばれてもよい。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸リンガー、または不揮発性油を含む。静脈内ビヒクルは、体液および栄養補液、電解質補液リンガーデキストロースに基づくものなど、および他を含む。例えば抗菌薬、酸化防止剤、キレート化剤、不活性ガスなどの保存剤もまた、存在してもよい。医薬組成物は、例えば、特にヒト起源の血清アルブミンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質性の担体をさらに含んでいてもよい。さらなる生理活性物質は、その意図される使用に依存して本発明の医薬組成物中に存在してもよい。結合標的が脳中に位置する場合、本発明のある実施態様は、血液脳関門を横断するための抗体またはその活性断片を提供する。ある神経変性疾患は、血液脳関門の透過性の増加に関連し、その結果、抗体またはその活性断片を脳に容易に導入することができる。血液脳関門が無傷のままである場合、物理的方法、脂質ベースの方法、ならびに受容体およびチャネルベースの方法を含むが、これらに限定されないいくつかの当技術分野において知られているアプローチは、それを介して分子を輸送するために存在する。血液脳関門を介して抗体またはその活性断片を輸送するための物理的方法は、完全に血液脳関門を回避することまたは血液脳関門中に開口部を作り出すことによるものを含むが、これらに限定されない。回避方法は、脳の中への直接的な注射を参照されたいおよび脳中に送達デバイスを植え込むことおよびGliadelWafersGuildfordPharmaceuticalを参照されたいを含むが、これらに限定されない。関門中に開口部を作り出すための方法は、超音波、浸透圧、例えばブラジキニンまたは透過剤permeabilizerA-7による透過処理例えば米国特許第5,112,596号、第5,268,164号、第5,506,206号、および第5,686,416号を参照されたい、ならびに抗体または抗原結合断片をコードする遺伝子を含むベクターによる、血液脳関門にまたがるニューロンのトランスフェクション例えば米国特許公開第2003/0083299号を参照されたいを含むが、これらに限定されない。血液脳関門を介して抗体またはその活性断片を輸送するための脂質ベースの方法は、血液脳関門の血管内皮上の受容体に結合する抗体結合断片につながれているリポソーム中に抗体もしくはその活性断片をカプセル化すること例えば米国特許出願公開第20020025313号を参照されたいおよび低密度リポタンパク質粒子例えば米国特許出願公開第20040204354号を参照されたいまたはアポリポタンパク質E例えば米国特許出願公開第20040131692号を参照されたいにおいて抗体またはその活性断片をコーティングすることを含むが、これらに限定されない。血液脳関門を介して抗体またはその活性断片を輸送するための受容体およびチャネルベースの方法は、血液脳関門の透過性を増加させるためにグルココルチコイド遮断薬を使用すること例えば米国特許出願公開第2002/0065259号、第2003/0162695号、および第2005/0124533号を参照されたい;カリウムチャネルを活性化すること例えば米国特許出願公開第2005/0089473号を参照されたい、ABC薬物トランスポーターを阻害すること例えば米国特許出願公開第2003/0073713号を参照されたい;トランスフェリンにより抗体をコーティングすることおよび1つまたは複数のトランスフェリン受容体の活性を調整すること例えば米国特許出願公開第2003/0129186号を参照されたい、ならびに抗体をカチオン化すること例えば米国特許第5,004,697号を参照されたいを含むが、これらに限定されない。当業者は、それ以上、その日常的な実験作業を使用しないで、本明細書で記載される、本発明の特定の実施態様に対する多くの等価物を認識するまたは確認することができるであろう。そのような等価物は、次の請求項によって包含されるように意図される。あたかも個々の刊行物または特許もしくは特許出願がそれぞれ、すべての目的のためにその全体が参照によって援用されるように具体的にかつ個々に示されるのと同じ程度まで、本明細書で引用される参考文献はすべて、それらの全体がすべての目的のために参照によって本明細書で援用される。本発明は、本明細書で記載される特定の実施態様によって範囲が限定されるものではない。実際、本明細書で記載されるものに加えての本発明の様々な改変形態は、先の記載および添付の図から当業者に明白になるであろう。そのような改変形態は、添付される請求項の範囲内にあることが意図される。6.実施例6.1複数のAβ立体構造に等しく結合するヒト化IgG4抗体の同定マウス抗Aβモノクローナル抗体は、以前に記載されるように、リポソームワクチン製剤を使用してAβペプチド抗原によりマウスを免疫することによって生成した。いくつかの基準は、複数のAβ種に結合するためのおよび小さな細胞毒性ペプチド凝集体へのAβ1-42の集合を阻害するための能力を含めて、候補抗体を選択するために使用した。IgG2b主鎖mMABTを有するモノクローナルマウスmAbは、アルツハイマー病の単一トランスジェニックマウス突然変異体ヒトAPPおよび二重トランスジェニックマウス突然変異体ヒトAPP/PS1モデルの両方を使用するインビボにおける機能性研究のために選択した。mMABTによる処置は、記憶を改善し、プラーク負荷を低減した図7を参照されたい。mMABTは、さらに親和性成熟させ、ヒトIgG4主鎖上にヒト化した結果として生じる抗体もまたMABTと呼ばれる。インビトロにおいてAβへのMABTの結合を試験するために、一連の異なるAβ1-42調製物を作製し、特徴付けた。これらは、サイズ排除クロマトグラフィーSECによって単離された単量体およびオリゴマーAβ1-42画分、成熟Aβ1-42繊維から、サイズが二量体および三量体からより高分子量の多量体にまで及ぶ、非常に神経毒性のAβ1-42オリゴマー集合体のより複雑な混合物にまで及んだ図8を参照されたい。異なるAβ1-42ペプチド調製物へのMABTの結合は、ELISAによって測定し、mABTに類似して、異なるAβ1-42集合体状態の間で非常に類似していることが示された図1A~C。MABTは、続いて、ヒトアミロイド前駆体タンパク質hAPPを発現するトランスジェニックマウスの脳中のAβプラークへのおよびヒトAD脳切片中のアミロイドプラークへの結合について試験した。hAPPトランスジェニックマウス図1D上およびAD脳図1D下の両方におけるアミロイドプラークは、MABTモノクローナル抗体により免疫装飾したimmunodecorate。まとめると、これらのデータは、AD脳中に存在する可溶性神経毒性AβオリゴマーおよびAβ集合体の両方へのMABT結合の強力な証拠を提供する。6.2病理学的Aβ集合の阻害およびあらかじめ形成されたプロトフィブリルAβ1-42ペプチドの脱凝集インビトロにおけるデータは、抗Aβ抗体が、Aβと結合した場合、病理学的高次Aβ集合体の形成を予防し、あらかじめ形成されたAβ凝集体を反転させることができることを実証した。MABTモノクローナル抗体の結合エピトープは、Aβ1-42のアミノ酸14~23にマッピングされ、それゆえ、自己会合、後のオリゴマー化、およびAβ1-42β-シート集合の中心に関与する、Aβ1-42の主な疎水性カチオンセグメントと重複する。インビトロにおけるAβ1-42凝集に対するMABTの効果は、アミロイド集合を妨げないが、β-シートが豊富な小さなアミロイド凝集体への結合に際して蛍光を発する染料であるチオフラビンTThTを使用して試験されたLevineIII1993。Aβ1-42のN末端に対して向けられるしたがって、自己集合ドメインを形成する中心のアミノ酸と重複しないコントロール抗Aβモノクローナル抗体と比較した場合、MABTは、Aβ1-42凝集に対する強力な阻害効果図1E左パネルおよびあらかじめ凝集していたAβ1-42ペプチドの消失図1E右パネルを実証した。AβのN末端に対して向けられるコントロールモノクローナル抗体は、両方のアッセイ法において、抗中央ドメインMABTモノクローナル抗体と比較して、約半分の阻害活性を有した。MABTを抗C末端抗Aβモノクローナル抗体と比較した場合、同様の結果が得られた示さず。これらのインビトロにおけるアッセイ法は、ThTが、Abeta1-42ペプチドの広範囲のβ-シートに結合する能力に基づくLevine,III,1993。それゆえ、これが、β-シートが豊富なAβ1-42へのThT結合の、考えられるモノクローナル抗体媒介性の置換による人為的結果ではなかったことを確証するために、ThT蛍光ではなく、固定された非標識Aβ1-42上に凝集するまたは自己集合する標識Aβ1-42の能力に依存するアッセイ法を実行した。類似の結果が、このアッセイ法において得られた、すなわち、MABTは、用量依存的な方式でAβ1-42の自己集合を予防した図1F。これらのデータは、MABTなど、Aβの中央ドメインに対して向けられる抗体が、このアッセイ法において、Aβの他のドメインを標的にする抗体と比べて、Aβ1-42原線維伸長および/または凝集に対して最も強い阻害効果もたらすことを実証する。可溶性Aβ1-42オリゴマーが、可溶性および膜結合型の両方の他のタンパク質に結合する能力は、その毒性の一因となることが示された。Aβ1-42とのApoE4の相互作用部位には、アミノ酸18~28を必要とする。組換えヒトApoE4へのAβ1-42の結合に対するMABTの効果を、インビトロにおいて試験し、Aβ1-42のNまたはC末端に特異的なモノクローナル抗体と比較した。飽和濃度のApoE4およびAβ1-42を使用した条件下で、MABTは、80を超える、Aβ1-42およびApoE4の相互作用を阻害し、試験した他のモノクローナル抗体のいずれよりも大きかった図9を参照されたい。要約すると、これらのデータは、MABTが、毒性の生物活性集合体状態へのAβ1-42のさらなるオリゴマー化を予防し、既に凝集しているまたはプラーク結合Aβ1-42を消失させることを示す。さらに、中心に位置する結合エピトープにより、MABTは、ApoEなどの他のタンパク質へのAβペプチドの相互作用について競合し、したがって、自己会合を含む、Aβの中央のドメインにおけるアミノ酸を必要とするAβとの相互作用を遮断することができる。6.3インビトロにおけるAβ1-42オリゴマーの神経毒性効果のMABT媒介性の中和MABTモノクローナル抗体についての治療上の機能性を示す生化学的なおよびインビボにおける機能性データにより、初代細胞培養モデルにおけるMABTモノクローナル抗体の効果を、細胞毒性Aβ1-42オリゴマーを使用して試験した。P1ラットからの初代皮質培養物を増殖させ、遊離Aβ1-42オリゴマーまたはMABTと複合体を形成したオリゴマーにより処置した。非特異的IgGモノクローナル抗体は、すべての実験においてコントロールとして使用した。24時間にわたる2.5または5μMAβ1-42オリゴマーによる皮質培養物の処置は、細胞生存度の指標である、MTTのミトコンドリア酸化によって測定される代謝回転の減少をもたらした図2A。毒性からの完全なレスキューは、MABTの存在下において5μMまでのAβ1-42オリゴマー濃度について観察された1:7.5のMABT対Aβ1-42オリゴマーのモル比。これらの結果を確認するために、ATP放出を、ルミネセンスアッセイ法を使用して測定し、これもまた、MABTの同様の細胞保護的な効果を示した図2B。Aβ1-42媒介性のニューロンの細胞死に対するMABTの効果をさらに評価するために、マウス胎児皮質ニューロンを培養で6日間維持し、4日間、MABTありまたはなしでAβ1-42により処置した。コントロール培養物は、健康な形態を示した図2C、左端のパネル。4日間のAβ1-42による処置は、軸索変性をもたらし、軸索の総数の減少を引き起こした図2C、中央のパネル。Aβ1-42およびMABTの組み合わせにより処置した細胞は、コントロール細胞に類似しているように見えた図2C、右端のパネル。これらの結果は、抗AβMABTモノクローナル抗体が、生存度の急性のAβ1-42オリゴマー媒介性の損失からのラット皮質培養物およびAβ1-42誘発変性からの胎児マウス皮質ニューロンの両方を保護することができたことを実証する。6.4細胞膜とのAβ1-42オリゴマーの相互作用は、抗AβMABTmAbによって阻害されるAβペプチド、特に凝集中間体Batemanetal2007は、細胞膜中に存在する様々な脂質およびタンパク質に関連することが知られている。MABTが、ニューロンへのAβ1-42オリゴマーの結合を低減するまたはさらに遮断することによってその神経保護効果を及ぼし得るかどうかを試験した。膜結合型Aβについての蛍光免疫染色を実行した。Aβ1-42オリゴマーを、30分間または18時間、混合皮質培養物に適用し、この後に、培養物は、Aβについておよびニューロン特異的クラスIIIβ-チューブリンに対する抗体、TuJ1により染色した。Aβ1-42オリゴマーによる皮質ニューロンの処置は、ニューロンとの、特に神経炎のプロセスとのAβの強力な関連をもたらした図3A、中央のパネルおよび挿入図。MABTとの同時処置は、ニューロンとのAβ1-42オリゴマーの相互作用、特に神経突起への結合を遮断した。この効果は、早くも30分で即座に明白となり図3Aおよび3B、処置の少なくとも18時間、存続した図3B。N末端抗AβmAbクローン6E10を、Aβ1-42オリゴマーについて染色するために発明者らのアッセイ法において使用し図3A、MABTおよび染色のために使用した検出モノクローナル抗体の間の干渉についての可能性を低減したが、これらの結果は、HiLyteFluor-488蛍光標識Aβ1-42を使用して確認した。この直接標識したAβ1-42ペプチドによる皮質培養物の処置は、MABTが、初代皮質培養物において、神経突起へのAβ1-42の結合を低減したという結論をさらに支持した図3Cおよび3D。ニューロン内のAβ142の蓄積は、著しく、ニューロンの機能障害の一因となることが示された。Aβ1-42の細胞内蓄積は、ELISAアッセイ法を使用してトリプシン処理細胞において決定した。この解析は、MABTがAβ1-42オリゴマーの内部移行を60を超えて低減することを実証した図3E。予想外に、蛍光免疫研究からの観察もまた、MABTの存在下において、神経突起から離れて、ミクログリアに似ていた細胞プロファイルに向かう、Aβ1-42オリゴマーの関連における変化があったことを示した図3F。6.5Aβ1-42オリゴマーのミクログリアの取り込みMABT/Aβ1-42複合体形成およびAβ1-42のミクログリアの取り込みとの間の関係を調査した。MABTと複合体を形成したAβ1-42オリゴマーがミクログリアによって取り込まれることを確証するために、処置した混合ニューロン培養物に対する共焦点画像処理を実行した。Aβ1-42オリゴマーにより単独で処置した細胞と比較した場合、MABTが、ミクログリアである可能性が高い細胞プロファイルの中へのAβ1-42オリゴマーの急速な取り込みを媒介したことが分かった図4A。これは、早くも処置の30分後に即座に明白となった。ミクログリアは、APPマウスにおいて損なわれている機能であるAβの取り込みおよび分解において重大な役割を果たすHickmanetal2008。抗Aβ免疫療法と比べて、Aβプラークが除去される1つの可能性のあるメカニズムが、Aβに結合する抗AβのFcγR結合特性を通してのものであることが提唱された。KoenigsknechtTalbooetal2008。しかしながら、ミクログリアによる抗Aβ/Aβ複合体の取り込みおよびFcγR活性化は、これらの細胞が活性化されるようになるのを引き起こし得る。ニューロンに対するAβ1-42オリゴマーの直接的な細胞毒性の克服に加えて、治療用抗Aβ抗体は、理想的には、そのような炎症誘発性の応答が結果としてもたらす負の効果における著しい減少と共に、著しく低減された炎症誘発性の応答を有するであろう。それゆえ、MABTは、同じ抗原結合配列を持つが、多様なFcγR結合親和性を有する異なるIgG主鎖を含み、それゆえ、異なるミクログリア活性化潜在能力を含む抗体と比較した。これらは、十分なFcγR結合能力を有するヒトIgG1野生型MABT-IgG1およびFcγR結合を劇的に低減するD265A突然変異を持つヒトIgG1主鎖MABT-IgG1-D265AShieldsetal2001を含んだ。試験した主鎖変異体はすべて、表面プラズモン共鳴を使用して確証されるように、Aβ1-42に同様の親和性で結合した。続いて、これらの異なるモノクローナル抗体主鎖がミクログリアの中にAβ1-42オリゴマーを内部移行する能力は、Aβ1-42オリゴマー処置初代皮質ミクログリアに対して共焦点画像処理を使用して比較した。Aβ1-42オリゴマー内部移行が、FcγR結合とかなり関係したことが分かり、MABT-IgG1>MABT>MABT-IgG1-D265Aであった図4Bおよび4C。ミクログリアが、実際、モノクローナル抗体と複合体を形成したAβ1-42を取り込む細胞であることを確証するために、研究は、HiLyteFluor-488タグつきAβ1-42を使用して繰り返し、ミクログリアマーカーIba1について同時染色した。MABTまたはMABT-IgG1モノクローナル抗体への結合に際して、タグつきAβ1-42は、Iba1ミクログリア中で豊富になった図4D。MABT-IgG1モノクローナル抗体と組み合わせてAβ1-42により処置した細胞培養物において、ミクログリアは、より多くの凝縮した核およびより明るいIba1染色の特徴を有し、より大きな抗原/抗体媒介性のミクログリア活性化を示唆した。FcγR結合差異を確証するために、低親和性FcγRIIIa-V158への異なる架橋IgGmAbの結合を測定し、結合の階層を同定し、MABT-IgG>MABT>MABT-IgG1-D265Aであった図4E。FcγRファミリーの他のメンバーへの結合は、図10に示す。異なるIgGモノクローナル抗体主鎖は、混合初代皮質培養物において、Aβ142オリゴマー媒介性毒性を反転させるそれらの能力について試験した。MABTおよびMABT-IgG1モノクローナル抗体の両方について存在する機能的なFcγR結合活性は、Aβ1-42オリゴマー媒介性毒性の完全な反転に必要とされた図4F。FcγR結合機能性を欠くMABT-IgG1-D265Aモノクローナル抗体は、Aβ1-42オリゴマー媒介性細胞性毒性の反転に対して有意でない傾向のみを示した。驚くべきことに、IgG4MABTモノクローナル抗体と比較して、より大きなFcγR結合親和性を有するMABT-IgG1野生型モノクローナル抗体は、MABTと比較した場合、より小さな保護効果の傾向があった。したがって、ミクログリアFcγRへの結合が十分なレスキューに必要とされるが、MABTと比較したFcγRへのMABT-IgG1主鎖の結合の増強は、望まれないミクログリア活性化をもたらし得、これは、結果的に、Aβ1-42オリゴマー媒介性神経毒性に対する全体的な保護の低減になり得る。6.6MABT-IgG1野生型主鎖は、炎症促進性ミクログリア応答につながるその活性化状態が抗Aβモノクローナル抗体によって改変される、Aβ1-42オリゴマー誘発毒性の下流メディエーターを同定するための試みにおいて、いくつかの候補シグナル経路を検査した。神経毒性およびミクログリア活性化の一因となることにおけるp38MAPKの役割は、広く立証されているLietal2004Wangetal2004。p38MAPK活性化は、Aβ1-42オリゴマー単独でまたは抗AβMABT、MABT-IgG1、MABT-IgG1-D265A、もしくはAβ1-42オリゴマーに結合しないコントロールIgG1と組み合わせて、処置した初代混合皮質培養物において検査した。細胞をAβ1-42オリゴマーにより処置した場合、p38MAPKは、15分以内に活性化され示さず、30分で最大に到達した。異なるモノクローナル抗体との組み合わせに際して、IgG1野生型主鎖を持ち、FcγRに対する最も大きな結合親和性を有するMABT-IgG1のみが、ホスホp38MAPK特異的ELISAによってさらに示されるように、Aβ1-42オリゴマー誘発p38MAPK活性を増加させた図5A。様々な抗Aβ抗体が、Aβ1-42に対する同様の親和性により結合するので、MABT-IgG1モノクローナル抗体は、MABTと同じ程度まで毒性Aβ1-42オリゴマーを中和するはずである。しかしながら、IgG1主鎖のより大きなFcγR結合親和性は、ニューロンなどのAβ1-42オリゴマーの作用に対して非常に感受性の細胞に対して有害になり得るミクログリア活性化をもたらし得る。Aβ1-42オリゴマーと複合体を形成したMABTモノクローナル抗体は、Aβ1-42オリゴマー誘発p38MAPK活性を低減せず、むしろ、より高度な活性に対する傾向を示し、この抗体による部分的なFcγR活性化を反映した。これらの最初のアッセイ法がニューロンおよびグリア細胞の両方を含む混合皮質培養物において総p38MAPK活性を測定したように、検出されたp38MAPK活性が、細胞をAβ1-42オリゴマーおよびMABTの組み合わせにより処置した場合、ミクログリアに対して特異的であったかどうかについての疑問について試験した。細胞は先のように処置したが、今回、ホスホp38MAPK活性は、ミクログリアマーカーIba1と共に蛍光免疫染色によって検査した。MABTまたはMABT-IgG1モノクローナル抗体と複合体を形成したAβ1-42オリゴマーによる処置に際して、ホスホp38MAPKについてポジティブに染色される細胞のおよそ93は、Iba1であった図5B。ミクログリアにおいてp38MAPKの活性化を確認するために、精製したミクログリアを、同じ方法で処置した。これらの条件下で、ミクログリアにおけるAβ1-42/IgG複合体媒介性のp38MAPK活性化は、即座に同定された図5C。Aβ1-42オリゴマー媒介性神経毒性に対するp38MAPK活性化の寄与を検討するために、細胞を、第二世代のp38MAPK特異的阻害剤により、続いて、Aβ1-42オリゴマー単独でまたはMABTもしくは低FcγR結合MABT-IgG1-D265Aモノクローナル抗体と組み合わせて処置した。予想外に、MTTシグナルにおけるMABT媒介性の増加は、p38MAPK阻害剤の存在下において、MABT-IgG1-D265Aのものまで低減し、p38MAPK阻害に際してMABT媒介性のレスキュー機能における減少を示した図5D。p38MAPK阻害は、MABT-IgG1-D265Aモノクローナル抗体と複合体を形成したAβ1-42オリゴマーにより処置した細胞に対して効果を有しなかった。これらの結果は、MABTモノクローナル抗体が、Aβ1-42オリゴマー単独で見られるものを超えてp38MAPKレベルを著しく誘導しないが、p38MAPK活性化は、MABT媒介性の神経保護において役割を果たすことを実証する。理論によって拘束されないが、混合培養物系におけるこの活性の細胞標的は、ミクログリア細胞である。ミクログリア活性の増加を、より直接、下流の炎症促進性の読み取りに連結するために、ミクログリアが豊富な初代細胞培養物によるTNFα放出を測定した>61Iba1、示さず。豊富なミクログリアによる炎症促進性TNFαの放出は、Aβ1-42オリゴマーにより処置した場合、試験したすべての抗Aβモノクローナル抗体の存在下において低減された図6。しかしながら、最も大きな効果は、MABTの存在下において観察された。したがって、抗AβIgG4モノクローナル抗体は、抗AβIgG1モノクローナル抗体と比較して、より望ましいプロファイルを有し、ミクログリアによる神経保護効果およびAβ貪食を促進する能力を、限られたミクログリア活性化と組み合わせることができる。6.7材料および方法6.7.1細胞培養調製物ラット初代皮質培養物は、MebergandMillerMebergandMiller2003によって記載されるように、出生後1日目にSprague-DawleyラットCharlesRiverLaboratoriesL’Arbresle、Franceから調製した。小脳および髄膜を摘出し、皮質は、切断して、小さな部分にし、溶解バッファーにおいて37°Cで酵素分解により分離したパパイン、CaCl2、EDTA、およびHEPES;すべてInvitrogen、Carlsbad、CAから。DNアーゼInvitrogenを添加して10分間おいた。溶解後に、分散した皮質ニューロンは、ポリL-リシン0.01;モル重量150,000~300,000;Sigmaコーティング6ウェル、24ウェル、または96ウェル組織培養プレート上で平板培養した。免疫細胞化学については、細胞は、24ウェルプレート中、コーティングガラスカバーガラス上で増殖させた。細胞は、37°Cおよび5CO2で、加湿インキュベーターにおいて、L-グルタミン2mM;Sigma、B27補助剤Invitrogen、およびペニシリン/ストレプトマイシンSigmaを添加したフェノールレッドなしのNeurobasal培地Invitrogen中で維持した。培養の1時間30分後に、培地は、アストロサイト条件培地と置換した。培養のさらに4日後に、細胞増殖は、2.5μMInvitrogenのシトシンアラビノシドAra-Cによる処置によって遮断した。これらの培養条件下で、細胞の20は、NeuN/DAPI染色によってニューロンとして同定された示さず。その他に述べられない限り、混合皮質培養物を使用する実験は、インビトロでの培養日数DIV6で一般的に実行した。皮質および海馬から調製された豊富なミクログリアは、上記の皮質培養物について記載されるように採取した。皮質および海馬は、高度なグルコースを含むDMEM中に置き、10mLピペットによる、続いて注射器によるピペット操作によってホモジナイズした。ホモジネートは、1,000xgで3分間、遠心分離し、続いて、10FCSおよびペニシリン/ストレプトマイシンを含む、高度なグルコースを含む、あらかじめ温められたDMEMミクログリア培地中で再懸濁した。細胞懸濁液は、次に、T75組織培養フラスコに移し、1週間、37°Cおよび5CO2で加湿インキュベーターにおいて維持した。フラスコは、付着細胞からミクログリアを分離するために振盪させ、収集し、DMEM中で洗浄した。結果として生じる細胞は、1mLミクログリア培地中で再懸濁し、数え、5×104細胞/ウェルで平板培養した。ミクログリア濃縮度を確証するために、細胞は、アストログリアマーカーおよびミクログリアマーカーGFAPおよびIba1によりそれぞれ染色した。60を超える細胞は、Iba1についてポジティブに染色され、GFAPおよびIba1の両方について染色される細胞はなかった。純粋なミクログリアは、出生後3日目に、CX3CR1-GFPマウスJacksonLaboratoriesから調製した。皮質および海馬を解剖し、10mLピペットを使用し、続いて18ゲージ針により、高度なグルコースを含むDMEM中で粉砕した。ホモジネートは、1,000gで3分間、遠心分離し、続いて、高度なグルコース、10FBS、およびペニシリン/ストレプトマイシンを含む、あらかじめ温められたDMEMミクログリア培地中で再懸濁した。細胞懸濁液は、次に、T75組織培養フラスコに移し、7~10日間、37°Cおよび5CO2で加湿インキュベーターにおいて維持した。ミクログリアは、振盪によって単離し、収集し、DMEM中で洗浄した。結果として生じる細胞は、1mLミクログリア培地中で再懸濁し、数え、実験で使用するために5×104細胞/ウェルで組織培養処置ガラスチャンバースライド上で平板培養した。6.7.2抗Aβ抗体の生成IgG4抗Aβモノクローナル抗体MABTは、以前に記載されるようにMuhsetal2007調製したワクチンによりマウスを免疫することによって生成されたマウスIgG2bモノクローナル抗体mMABTのヒト化形態である。6.7.3FcγR結合ヒトFcγ受容体FcγRのパネルへの試験抗体の結合は、酵素結合抗体免疫吸着アッセイELISAを使用して測定した。ヒトFcγRGenentech,Inc.、CAは、C末端にGly/6×His/グルタチオンSトランスフェラーゼGSTポリペプチドタグを有する受容体γ鎖の細胞外ドメインを含む融合タンパク質である。ヒトIgG1フレームワークを有するモノクローナル抗体は、この実験においてポジティブコントロールIgG1コントロールとして使用した。プレートは、4°Cで、一晩、0.05M炭酸ナトリウムバッファーpH9.6中でマウスモノクローナル抗GST抗体Genentech,Inc.によりコーティングした。リン酸緩衝生理食塩水PBS、0.5BSA、および0.05Tween-20を含むアッセイバッファーによる遮断後に、プレートは、1時間、室温で、FcγRと共にインキュベートした。ヒトFcγRは、抗GSTコーティングとの相互作用によってプレートに固定した。抗AβMABT、MABT-IgG1、MABT-IgG1-D265A、またはIgG1コントロールモノクローナル抗体の階段希釈は、PBS中10BlockerCaseinPierce;Rockford、ILを含むアッセイバッファー中で調製した。希釈したサンプルは、高親和性受容体FcγRIaについて単量体形態または低親和性受容体FcγRIIa、FcγRIIb、およびFcγRIIIaについて多量体形態として適用した。試験抗体の多量体形態は、およそ3:1のモル比で、試験モノクローナル抗体とヤギ抗ヒトκ鎖MPBiomedicals、Solon、OHのFab’2断片を架橋することによって生成した。プレートは、2時間、室温で、FcγRと共にインキュベートした。プレートは、各インキュベーションステップ後にPBSおよび0.05tween-20を含む洗浄バッファーにより3回洗浄した。FcγRに結合した抗体は、ヤギ抗ヒトFab’2のホースラディッシュペルオキシダーゼHRPコンジュゲートFab’2断片により検出したJacksonImmunoResearchLaboratories;WestGrove、PA。テトラメチルベンジジンTMB;KirkegaardPerryLaboratories、Gaithersburg、MDは、基質としての役割を果たした。プレートは、発色現像を可能にするために15~約20分間、室温でインキュベートした。反応は、1MH3PO4により終わらせ、650nmでの参照と共に450nmでの吸収度を、プレートリーダーMolecularDevices、Sunnyvale、CA上で測定した。結合曲線は、それぞれのサンプル吸収度に対して、二通りのサンプル希釈溶液からの平均吸光度をプロットすることによって生成した。6.7.4インビボにおける機能性研究2つの研究を、インビボにおける機能性評価のために実行した。記憶想起を測定するために、群当たり12匹の突然変異体ヒトAPPマウスは、MABTモノクローナル抗体またはビヒクルコントロールPBSの2回のi.p.注射を受けた。第2の注射の1日後に、記憶想起は、記載されるようにDewachteretal2002、新規な物体認識タスクORTを使用して研究した。認識インデックスRIは、海馬を要する非空間記憶の尺度である、新規なおよび3時間前に観察した物体の両方を探索するのに費やされた時間に対する新規な物体を探索するのに費やされた時間の比として定義した。個別の研究において、二重トランスジェニックアミロイドプラークポジティブ突然変異体ヒトAPP/PS1マウスは、皮質プラーク負荷に対するモノクローナル抗体投与の効果を測定するために使用した。マウスは、16週間にわたって500μgMABTモノクローナル抗体を毎週、i.p.注射し、その後、皮質プラーク負荷を測定した。脳を解剖し、右大脳半球は、PBS中4パラホルムアルデヒド中で一晩、液浸固定し、矢状vibratome切片40μmを、遊離浮遊インキュベーションfreefloatingincubationのために切断し、染色まで0.1アジ化ナトリウムを有するPBS中で4°Cで保存した。異なるレベルの5つの切片を、チオフラビンSにより高密度プラークについて染色した。切片は、染色および盲検法による定量化のために無作為化した。画像は、SonyDXC-9100Pカメラを装備したLeicaDMR顕微鏡により得、LeicaQ-Winソフトウェアを使用してコンピューターにより分析した。顕微鏡についての光強度およびコンデンサー設定は、画像取得プロセスの全体にわたって一定に維持した。海馬台の領域は、チオフラビンS染色においてアミロイド負荷の自動定量化のために選択した。6.7.5毒性Aβ1-42オリゴマーの調製Aβ1-42ペプチドBachemは、HFIP中で溶解し、超音波処理し、室温で一晩、振盪させた。続いて、一定分量を、アルゴンのフロー下で乾燥させ、真空乾燥させ、使用まで単量体Aβ1-42ペプチドフィルムとして-80°Cで保存した。ペプチドフィルムの165μg一定分量を、7μLDMSO、85μLPBS、および9μLの2SDS中に再懸濁し、37°Cで6時間、インキュベートした。続いて、300μLの水を添加し、37°Cでの一晩のインキュベーション後に、Aβ1-42オリゴマーは、4°Cで1時間、900μLの33メタノール4酢酸水溶液により沈殿させ、10分間、16,200gで遠心分離した。上清を除去し、Aβ1-42オリゴマーは、1μg/μLの最終濃度に向けてNa2HPO4/NaCl溶液中に再懸濁する前に乾燥させた。6.7.6Aβ1-42細胞毒性アッセイ法Aβ1-42オリゴマーの細胞毒性を、DIV5で混合皮質培養物に対して試験した。100μg/mLの最終濃度の抗体はすべて、細胞の処置前に、37°Cで、無血清細胞培養培地中で30分間、Aβ1-42オリゴマーと共に共インキュベートした。いくつかの実験については、混合皮質培養物は、Aβ1-42オリゴマーによる処置前に、強力な第二世代のp38阻害剤である、1μMSB239063により1時間、あらかじめ処置した。細胞生存度を評価するために、標準化された3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドMTT還元アッセイ法Promega、Madison、WI、USAを、メーカーの指示に従って実行した。様々な処置に応じる細胞生存度を評価するために、標準化された3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドMTT還元アッセイ法Promega、Madison、WI、USAを実行した。手短に言えば、処置の最後の3時間、96ウェルプレートCostarにおいて増殖させた細胞は、MTT染料溶液と共にインキュベートし、青色ホルマザン産物の生成は、プレートリーダーTecanを使用して570および690nmで吸収度を読み取ることによって測定した。結果は、Aβ1-42オリゴマー処置細胞に対する生存の増加パーセンテージとして提示する。MABTモノクローナル抗体がAβ1-42オリゴマー誘発の変性からニューロンを保護する能力はまた、蛍光免疫を使用するインビトロにおけるアッセイ法においても評価した。胎児の17.5日目マウス皮質ニューロンは、単離し、分離し、B27補助剤ありのNeurobasal培地においてインビトロにおいて培養した。Aβ1-42は、Aβ1-42単量体ペプチドフィルムについて上記に記載されるように調製し、その後、10μLのDMSOを、ペプチドを溶解するために添加した。続いて、78.6μLのHam’s-F12培地を添加し、25μMのAβ1-42ペプチド溶液を、細胞処置前に48時間、4°Cでインキュベートした。細胞は、全体で9日間、増殖させ、3日目および処置の日に栄養を与えた。処置については、50μg/mLのMABTありまたはなしの2μMのAβ1-42を、5日目または6日目に添加し、同じ体積のDMSO-F12のみは、ビヒクルコントロールとして使用した。9日目に、処置の3日または4日後に、ニューロンを固定し、抗βチューブリン抗体であるTuJ1により染色した。FITC標識二次抗体は、蛍光顕微鏡法を使用して微小管を視覚化するために使用した。6.7.7免疫組織化学AD患者および年齢が一致した非ADコントロールTissueSolutions、Clydebank、UKからのパラフィン封入側頭葉脳切片20μmは、免疫組織化学染色のために使用した。脱パラフィン切片は、ギ酸を使用する抗原回復にかけ、続いて、初代抗体として50μg/mLMABTにより標識した。ヤギ抗ヒトビオチン化IgGは、二次抗体として使用した。染色は、ジアミノベンジジンDako、Glostrup、Denmarkにより行い、封入は、Eukitt封入剤を使用して行った。画像は、ZeissからのLSM700倒立顕微鏡上で得た。6.7.8Aβ1-42ELISAELISAによって細胞内Aβ1-42蓄積を測定するために、初代皮質培養物は、6ウェル細胞培養プレートCostar中で処置し、その後、それらは、50mMTris-HClpH8.0、150mMNaCl、5mMEDTA、1mMオルトバナジン酸トリナトリウム、1TritonX-100からなり、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを含む細胞溶解バッファー中での溶解前に洗浄し、トリプシン処理したBatemanetal2007。タンパク質濃度は、BCAアッセイ法Pierceによって決定した。高感度Aβ1-42特異的ELISATheGeneticsCompany,Inc.、Zurich、Switzerlandは、メーカーの指示に従って、細胞溶解産物Aβ1-42を測定するために使用した。6.7.9免疫細胞化学および共焦点画像処理細胞は、ガラス製のカバーガラス上で増殖させた。処置後に、細胞は、PBSにより直ちに洗浄し、続いて、20分間、4パラホルムアルデヒドにより固定した。徹底的な洗浄後に、細胞は、-20°Cで10分間、100メタノール中に浸した。続いて、それらは、再び洗浄し、室温で1時間、10正常ヤギ血清を含むPBSである遮断溶液中でインキュベートした。一次抗体による一晩のインキュベーション後に、細胞は、2時間洗浄し、二次抗体と共にインキュベートし、続いて洗浄し、ProLongゴールド褪色防止剤Invitrogenを使用して、スライドガラス上にマウントした。落射蛍光および共焦点画像は、63×レンズを使用して、ZeissからのLSM700倒立顕微鏡上で得た。蛍光強度は、飽和した落射蛍光像によって描かれた細胞体において測定した。Z-stackは、ImageJ1.42NationalInstitutesofHealth、フリーウェアを使用して、三次元画像にし、これから、標識タンパク質を含む先端から末端の薄片を得た。HyLiteFluor-488タグつきAβ1-42により処置した細胞は、一次または二次抗体をAβ1-42を標識するために使用しなかった以外は、同じ方法で処置した。6.7.10ホスホp38ELISAラット皮質培養物は、ポリL-リシンコーティング6ウェル細胞培養プレートCostar、Cambridge、MA、USA上に接種し、DIV5で使用した。他に示されない限り、細胞は、30分間、100μg/mLのモノクローナル抗体ありまたはなしで、2μMAβ1-42オリゴマーにより処置した。いくつかのアッセイ法において、細胞は、第二世代のp38阻害剤SB239063により1時間あらかじめ処置した。アニソマイシンは、ポジティブコントロールとして使用した。処置は、細胞を氷上に配置し、培地を吸引することによって停止させた。細胞は、冷PBSにより洗浄し、細胞スクレーパーを使用して採取し、50mMTris-HClpH8.0、150mMNaCl、5mMEDTA、1mMオルトバナジン酸トリナトリウム、1TritonX-100からなり、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを含む細胞溶解バッファー中で溶解した。タンパク質濃度は、BCAアッセイ法Pierce、Rockford、IL、USAによって決定した。p38MAPK活性化の半定量的尺度については、ラットホスホp38MAPK比色分析ELISAキットをメーカーの指示に従って使用したCellSignalingTechnology、Beverly、MA、USA。プレートは、370nmで、分光光度マイクロプレートリーダーTecan上で読み取った。いくつかの実験については、ホスホp38は、免疫細胞化学を使用してアッセイした。6.7.11TNFα放出ミクログリアが豊富なラット皮質培養物総DAPI細胞のうち>60Iba1は、6時間および24時間、100μg/mL抗体ありまたはなしで10μMAβ1-42オリゴマーにより処置した。1μg/mLのLPSSigmaは、ポジティブコントロール刺激として使用した。細胞上清は、示す時点で取り出し、0.2μmフィルターを通過させ、メーカーの指示に従って、QuantikineラットTNFα/TNFSF1ARDSystemsによりTNFαについて試験した。さらに、CX3CR1-GFPP3の子からの純粋なミクログリア培養物は、24時間、1μg/mlLPSにより、10μMAβ1-42オリゴマー単独でもしくは100μg/ml抗AβMABT、MABT-IgG1、MABT-IgG1-D265A、コントロールIgG1と組み合わせてまたは抗体単独で処置した。細胞上清は、採取し、0.2μmフィルターを通過させ、Bio-Plexマウス23-plexアッセイ法Bio-Rad、Hercules、CA、USAを実行した。6.7.12統計解析統計解析はすべて、GraphPadPrismバージョン5GraphPadSoftware、SanDiego、CA、USAを使用して行った。データは、示されるように、平均値±標準偏差SDまたは平均値の標準誤差SEMとして提示する。データは、適宜、スチューデントのt検定、Tukeypost-hoc多重比較が後続する一元配置ANOVA、またはウィルコクソン順位和ノンパラメトリック検定法によって分析した。<0.05のP値は、統計的有意差を示すために得た。6.7.13アミロイドプラークのインビボにおける画像処理頭蓋窓cranialwindowは、最初の画像処理セッション2週間前に、以前に記載されるようにTrachtenbergetal2002、Holtmaatetal2009、10月齢APPhAPPV717I/PS1マウスの体性感覚皮質上に植え込んだ。各画像処理セッションの24時間前に、動物に、個々のアミロイドプラークを視覚化するために10mg/kgメトキシ-X04I.P.を注射しKlunketal2002、画像処理の直前に、血管を視覚化するために、AngioSense680VisEnMedicalによりI.V.注射した。各画像処理セッションについて、動物は、イソフルラン-酸素混合物により麻酔をかけ、ヘッドポストheadpostを使用して顕微鏡にマウントした。画像は、40×NA0.8対物レンズOlympusの後焦点面に約30mWを送る820nmに合わせたTi:サファイアレーザーMaiTaiDeepSee;SpectraPhysicsを使用して、二光子レーザー走査顕微鏡Ultimainvivo;PrairieTechnologiesによって収集した。血管系のパターンは、日々、再現性よく、対物レンズに関するマウスの位置を決めるために使用し、個々のアミロイドプラークを数週間にわたって画像化するのを可能にした。個々のプラークの体積は、所与のプラークのまわりに描かれた興味のある領域内のバックグラウンドを超えるピクセルの数の合計によって推定した。バックグラウンドは、アミロイドプラーク付近に描かれた興味のある領域内の平均ピクセル強度および2つの標準偏差として定義される。第4および第8の画像処理セッション後に、動物は、60mg/kgMABTによりI.P.投薬した。参考文献BandyopadhyaySHartleyDMCahillCMLahiriDKChattopadhyayNRogersJTInterleukin1alphastimulatesnonamyloidogenicpathwaybyalphasecretasecleavageofAPPinhumanastrocyticcellsinvolvingp38MAPkinaseJNeurosciRes84106118BatemanDAMcLaurinJChakrabarttyARequirementofaggregationpropensityofAlzheimeramyloidpeptidesforneuronalcellsurfacebindingBMCNeurosci829BitanGKirkitadzeMDLomakinAVollersSSBenedekGBTeplowDBAmyloidbetaproteinassemblyAbeta40andAbeta42oligomerizethroughdistinctpathwaysProcNatlAcadSciUSA100330335CasasCSergeantNItierJMBlanchardVWirthsOvanderKNVingtdeuxVvandeSERetGCantonTDrobecqHClarkABoniciBDelacourteABenavidesJSchmitzCTrempGBayerTABenoitPPradierLMassiveCA12neuronallosswithintraneuronalandNterminaltruncatedAbeta42accumulationinanovelAlzheimertransgenicmodelAmJPathol16512891300ClarkMRIgGeffectormechanismsChemImmunol6588110ClearyJPWalshDMHofmeisterJJShankarGMKuskowskiMASelkoeDJAsheKHNaturaloligomersoftheamyloidbetaproteinspecificallydisruptcognitivefunctionNatNeurosci87984DewachterIReverseDCaluwaertsNRisLKuiperiCVandenHCSpittaelsKUmansLSerneelsLThiryEMoecharsDMerckenMGodauxEVanLFNeuronaldeficiencyofpresenilin1inhibitsamyloidplaqueformationandcorrectshippocampallongtermpotentiationbutnotacognitivedefectofamyloidprecursorproteinV717ItransgenicmiceJNeurosci2234453453DoyleSEOConnellRMMirandaGAVaidyaSAChowEKLiuPTSuzukiSSuzukiNModlinRLYehWCLaneTFChengGTolllikereceptorsinduceaphagocyticgeneprogramthroughp38JExpMed1998190EslerWPStimsonERGhilardiJRLuYAFelixAMVintersHVMantyhPWLeeJPMaggioJEPointsubstitutioninthecentralhydrophobicclusterofahumanbetaamyloidcongenerdisruptspeptidefoldingandabolishesplaquecompetenceBiochemistry351391413921GallagherTFetalRegulationofstressinducedcytokineproductionbypyridinylimidazolesinhibitionofCSBPkinaseBioorgMedChem54964GessnerJEHeikenHTammASchmidtRETheIgGFcreceptorfamilyAnnHematol76231248GourasGKTsaiJNaslundJVincentBEdgarMCheclerFGreenfieldJPHaroutunianVBuxbaumJDXuHGreengardPRelkinNRIntraneuronalAbeta42accumulationinhumanbrainAmJPathol1561520HaassCSelkoeDJSolubleproteinoligomersinneurodegenerationlessonsfromtheAlzheimersamyloidbetapeptidepp101112HickmanSEAllisonEKElKJMicroglialdysfunctionanddefectivebetaamyloidclearancepathwaysinagingAlzheimersdiseasemiceJNeurosci2883548360HolmesCBocheDWilkinsonDYadegarfarGHopkinsVBayerAJonesRWBullockRLoveSNealJWZotovaENicollJALongtermeffectsofAbeta42immunisationinAlzheimersdiseasefollowupofarandomisedplacebocontrolledphaseItrialLancet372216223KayedRHeadEThompsonJLMcIntireTMMiltonSCCotmanCWGlabeCGCommonstructureofsolubleamyloidoligomersimpliescommonmechanismofpathogenesisScience300486489KoenigsknechtTalbooJMeyerLuehmannMParsadanianMGarciaAllozaMFinnMBHymanBTBacskaiBJHoltzmanDMRapidMicroglialResponseAroundAmyloidPathologyafterSystemicAntiAbetaAntibodyAdministrationinPDAPPMiceJNeurosci281415614164LambertMPBarlowAKChromyBAEdwardsCFreedRLiosatosMMorganTERozovskyITrommerBViolaKLWalsPZhangCFinchCEKrafftGAKleinWLDiffusiblenonfibrillarligandsderivedfromAbeta142arepotentcentralnervoussystemneurotoxinsProcNatlAcadSciUSA9564486453LeeEBLengLZLeeVMTrojanowskiJQMeningoencephalitisassociatedwithpassiveimmunizationofatransgenicmurinemodelofAlzheimersamyloidosisFEBSLett57925642568LeeEBLengLZZhangBKwongLTrojanowskiJQAbelTLeeVMTargetingamyloidbetapeptideoligomersbypassiveimmunizationwithaconformationselectivemonoclonalantibodyimproveslearningandmemoryinAbetaprecursorproteintransgenicmiceJBiolChem28142924299LeeJCLaydonJTMcDonnellPCGallagherTFKumarSGreenDMcNultyDBlumenthalMJHeysJRLandvatterSWAproteinkinaseinvolvedintheregulationofinflammatorycytokinebiosynthesisNature372739746LeeYBSchraderJWKimSUp38mapkinaseregulatesTNFalphaproductioninhumanastrocytesandmicrogliabymultiplemechanismsCytokine12874880LegleiterJCzilliDLGitterBDeMattosRBHoltzmanDMKowalewskiTEffectofdifferentantiAbetaantibodiesonAbetafibrillogenesisasassessedbyatomicforcemicroscopyJMolBiol3359971006LevineHIIIThioflavineTinteractionwithsyntheticAlzheimersdiseasebetaamyloidpeptidesdetectionofamyloidaggregationinsolutionProteinSci2404410LiRYangLLindholmKKonishiYYueXHampelHZhangDShenYTumornecrosisfactordeathreceptorsignalingcascadeisrequiredforamyloidbetaproteininducedneurondeathJNeurosci2417601771LingYMorganKKalshekerNAmyloidprecursorproteinandthebiologyofproteolyticprocessingrelevancetoAlzheimersdiseaseIntJBiochemCellBiol3515051535LiuQHuangYXueFSimardADeChonJLiGZhangJLuceroLWangMSierksMHuGChangYLukasRJWuJAnovelnicotinicacetylcholinereceptorsubtypeinbasalforebraincholinergicneuronswithhighsensitivitytoamyloidpeptidesJNeurosci29918929MebergPJMillerMWCulturinghippocampalandcorticalneuronsMethodsCellBiol71111127MuhsAHickmanDTPihlgrenMChuardNGiriensVMeerschmanCVandAIVanLFSugawaraMWeingertnerMCBechingerBGreferathRKolonkoNNagelStegerLRiesnerDBradyROPfeiferANicolauCLiposomalvaccineswithconformationspecificamyloidpeptideantigensdefineimmuneresponseandefficacyinAPPtransgenicmiceProcNatlAcadSciUSA10498109815NimmerjahnFRavetchJVFcgammareceptorsoldfriendsandnewfamilymembersImmunity241928OddoSCaccamoAShepherdJDMurphyMPGoldeTEKayedRMetherateRMattsonMPAkbariYLaferlaFMTripletransgenicmodelofAlzheimersdiseasewithplaquesandtanglesintracellularAbetaandsynapticdysfunctionNeuron39409421OrgogozoJMGilmanSDartiguesJFLaurentBPuelMKirbyLCJouannyPDuboisBEisnerLFlitmanSMichelBFBoadaMFrankAHockCSubacutemeningoencephalitisinasubsetofpatientswithADafterAbeta42immunizationNeurology614654PerryRTCollinsJSWienerHActonRGoRCTheroleofTNFanditsreceptorsinAlzheimersdiseaseNeurobiolAging22873883PikeCJBurdickDWalencewiczAJGlabeCGCotmanCWNeurodegenerationinducedbybetaamyloidpeptidesinvitrotheroleofpeptideassemblystateJNeurosci1316761687PodusloJFGillesEJRamakrishnanMHowellKGWengenackTMCurranGLKandimallaKKHHdomainofAlzheimersdiseaseAbetaprovidesstructuralbasisforneuronalbindinginPC12andmousecorticalhippocampalneuronsPLoSOne5e8813PolingAMorganPaisleyKPanosJJKimEMOHareEClearyJPLesneSAsheKHPorrittMBakerLEOligomersoftheamyloidbetaproteindisruptworkingmemoryconfirmationwithtwobehavioralproceduresBehavBrainRes193230234RansohoffRMPerryVHMicroglialphysiologyuniquestimulispecializedresponsesAnnuRevImmunol27119145SallowaySSperlingRGilmanSFoxNCBlennowKRaskindMSabbaghMHonigLSDoodyRvanDyckCHMulnardRBarakosJGreggKMLiuELieberburgISchenkDBlackRGrundmanMAphase2multipleascendingdosetrialofbapineuzumabinmildtomoderateAlzheimerdiseaseNeurology7320612070SelkoeDJAlzheimersdiseaseisasynapticfailureScience298789791ShankarGMBloodgoodBLTownsendMWalshDMSelkoeDJSabatiniBLNaturaloligomersoftheAlzheimeramyloidbetaproteininducereversiblesynapselossbymodulatinganNMDAtypeglutamatereceptordependentsignalingpathwayJNeurosci2728662875ShieldsRLNamenukAKHongKMengYGRaeJBriggsJXieDLaiJStadlenALiBFoxJAPrestaLGHighresolutionmappingofthebindingsiteonhumanIgG1forFcgammaRIFcgammaRIIFcgammaRIIIandFcRnanddesignofIgG1variantswithimprovedbindingtotheFcgammaRJBiolChem27665916604SimonPLLaydonJTLeeJCAmodifiedassayforinterleukin1JImmunolMethods848594SolomonBKoppelRFrankelDHananAharonEDisaggregationofAlzheimerbetaamyloidbysitedirectedmAbProcNatlAcadSciUSA9441094112SpiresJonesTLMielkeMLRozkalneAMeyerLuehmannMdeCABacskaiBJSchenkDHymanBTPassiveimmunotherapyrapidlyincreasesstructuralplasticityinamousemodelofAlzheimerdiseaseNeurobiolDis33213220StrittmatterWJSaundersAMSchmechelDPericakVanceMEnghildJSalvesenGSRosesADApolipoproteinEhighaviditybindingtobetaamyloidandincreasedfrequencyoftype4alleleinlateonsetfamilialAlzheimerdiseaseProcNatlAcadSciUSA9019771981TheInternationalFederationofAlzheimersDiseaseandRelatedDisordersSocietiesIWorldAlzeheimerReport2009ExecutiveSummarypp121IllinoisUSAAlzheimersDiseaseInternationalTheInternationalFederationofAlzheimersDiseaseandRelatedDisordersSocietiesIncTownsendMShankarGMMehtaTWalshDMSelkoeDJEffectsofsecretedoligomersofamyloidbetaproteinonhippocampalsynapticplasticityapotentrolefortrimersJPhysiol572477492VellasBBlackRThalLJFoxNCDanielsMMcLennanGTompkinsCLeibmanCPomfretMGrundmanMLongtermfollowupofpatientsimmunizedwithAN1792reducedfunctionaldeclineinantibodyrespondersCurrAlzheimerRes6144151WalshDMKlyubinIFadeevaJVCullenWKAnwylRWolfeMSRowanMJSelkoeDJNaturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallongtermpotentiationinvivoNature416535539WalshDMKlyubinIShankarGMTownsendMFadeevaJVBettsVPodlisnyMBClearyJPAsheKHRowanMJSelkoeDJTheroleofcellderivedoligomersofAbetainAlzheimersdiseaseandavenuesfortherapeuticinterventionBiochemSocTrans3310871090WangQWalshDMRowanMJSelkoeDJAnwylRBlockoflongtermpotentiationbynaturallysecretedandsyntheticamyloidbetapeptideinhippocampalslicesismediatedviaactivationofthekinasescJunNterminalkinasecyclindependentkinase5andp38mitogenactivatedproteinkinaseaswellasmetabotropicglutamatereceptortype5JNeurosci2433703378WirthsOMulthaupGCzechCBlanchardVMoussaouiSTrempGPradierLBeyreutherKBayerTAIntraneuronalAbetaaccumulationprecedesplaqueformationinbetaamyloidprecursorproteinandpresenilin1doubletransgenicmiceNeurosciLett306116120BarghornSNimmrichVStriebingerAKrantzCKellerPJansonBBahrMSchmidtMBitnerRSHarlanJBarlowEEbertUHillenHGlobularamyloidbetapeptideoligomerahomogenousandstableneuropathologicalproteininAlzheimersdiseaseJNeurochem95834847BlondandGoldberg1987PNASMarch11987Vol84no511471151CoxJPLTomlinsonIMandWinterGEurJImmunol199424827836AdirectoryofhumangermlineVkappasegmentsrevealsastrongbiasintheirusageHieterPAMaxEESeidmanJGMaizelJVJrLederPClonedhumanandmousekappaimmunoglobulinconstantandJregiongenesconservehomologyinfunctionalsegmentsCell1980Nov22197207KabatEAWuTTPerryHMGottesmanKSFoellerCSequencesofproteinsofImmunologicalInterestUSDepartmentofHealthandHumanServices1991KleinWLAbetatoxicityinAlzheimersdiseaseglobularsolublepolymericamyloidbetaasnewvaccineanddrugtargetsNeurochemInt41345352LangdonSDInaiokiMKelsoeGandTedderTFImmunogenetics200051241245GermlinesequencesofV7183genefamilymembersinC57BL6micedemonstratenaturalselectionofparticularsequencesduringrecentevolutionMulliganRCandBergPScience198020914221427ExpressionofabacterialgeneinmammaliancellsRiechmannLClarkMWaldmannHWinterGNature1988332323327ReshapinghumanantibodiesfortherapySchableKFThiebeRBenschABrensingKueppersJHeimVKirschbaumTLammROhnrichMPourrajabiSRoschenthalerFSchwendingerJWichelhausDZocherIandZachauHGEurJImmunol19992920822086CharacteristicsoftheimmunoglobulinVkappagenespseudogenesrelicsandorphonsinthemousegenomeTomlinsonIMWalterGMarksJDLlewelynMBandWinterGJMolBiol1992227776798TherepertoireofhumangermlineVHsequencesrevealsabout50groupsofVHsegmentswithdifferenthypervariableloops"