インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ阻害の組成物組成から成る式Iの化合物の治療に有効な量。前記AはPOOR5前記RおよびR5は独立して選択いないH、CICIOアルキル、アリール、ルアラルキルおよびXから前記Xアンモニウム、メチルアンモニウム、dimethylammonium、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノールアンモニウム、dicyclohexylammonium、グアニジ、第一鉄エチレンジアミン陽イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、セシウム陽イオン、ベリリウム陽イオン、マグネシウムイオン、カルシウムのカチオンと亜鉛イオンから成る群から選択されるカチオン性対イオンです前記BNHR6NH3YR6はNNH2またはR6NNH2前記R6水素、CICIOアルキル、アリール、又は前記Yは塩化物、臭化、ヨウ化、酢酸、トリフルオロ酢酸、リン酸、二リン酸、硝酸、硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、サリチル酸から成る群から選択されるアニオン性対イオン、ルアラルキルを表すYhydroxynaphthoate、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸、グルコン酸、およびステアリン酸、前記R1CH3またはCF3です。前記HR2であるCICIOアルキルまたは0CNHR7R7前記ビオチン、fluorophore抗炎症剤など機能部位を有する併合リンカーを表すと前記R3およびR4独立して水素、CICIOアルキルまたは0されませんCR8R8CICIOアルキル、アリール基、またはルアラルキルを表す、と製薬上許容される賦形剤。2前記化合物は、から成る群から選択される請求項1の構成:または、治療に有効な塩、エステルまたは並びに当該エステルの塩。3クレーム2、少なくとも1つの化合物から成る構成4クレーム2、少なくとも1つの化合物から成る構成5少なくとも1つの化合物から成る請求項2の組成6請求項1にインフルエンザウイルス組成物を前記バインドの組成は、Hll、H5N1とh3n2型を菌します。7野生型またはH274Y変異インフルエンザウイルスのノイラミニダーゼを前記です組成物によれば請求項6に。8Pg式Iの化合物前記A前記RおよびR5は独立して選択いないH、CICIOアルキル、アリール、ルアラルキルおよびXから、POまたは5は前記Xアンモニウム、メチルアンモニウム、dimethylammonium、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノールアンモニウム、dicyclohexylammonium、グアニジから成る群から選択されるカチオン性対イオンです第一鉄エチレンジアミン陽イオンリチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、セシウム陽イオン、ベリリウム陽イオン、マグネシウムイオン、カルシウムのカチオン、前記BですNHR6H3亜鉛の陽イオンR6NNH2またはR6NNH2前記R6水素、C1~C10アルキル、アリール、又は前記Yでの塩化物から成る群から選択されるアニオン性対イオンルアラルキルを表すY、臭化、ヨウ化、酢酸、トリフルオロ酢酸、リン酸、二リン酸、硝酸、硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸サリチル酸、hydroxynaphthoate、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸、グルコン酸、とステアリン酸、前記R1はCH3またはCF3前記R2H、C1~C10アルキルまたは0で前記R7ビオチン、fluorophore抗炎症剤など機能部位を有する併合リンカーを表す、前記R3およびR4独立して水素、CICIOアルキルまたは0CNHR7CR8ここでR8ClC10アルキル、アリール基、またはルアラルキルを表します、手順から成るプロセスアセチル、キラル前駆体シアルは中間化合物を準備する酸。中間化合物ジエチルトリメチルシリル亜リン酸を扱うフォーム中間化合物。中級Nブロモスクシンイミドとピリジンでどのフォーム5中級、ブロモ置換化合物を与えるために光の照射下での治療:中間化合物トリメチルシリルtrifluorosulfonateで治療フォーム中間化合物。中間化合物トリメチルシリルアジ化と治療フォーム中間化合物。9さらの段階を含んで成る請求項8、プロセス中間化合物とlを反応、化合物3bis2methylthiopseudoureaと中間を形成するEt3N。10のステップをさらに含む、請求項8のプロセス中間化合物7bromotrimethylsilane、ナトリウムメトキシドとフォーム化合物に順番に、hydrogenatingの治療:11のステップをさらに含む、請求項8のプロセス中間化合物ナトリウムエトキシド、フォームに化合物をhydrogenatingと治療:12それ以上の段階を含んで成る請求項9のプロセス中間化合物bromotrimethylsilane、しナトリウムメトキシドフォームに化合物治療。13さらの段階を含んで成る請求項9のプロセス:中間化合物を次にトリフルオロ酢酸ナトリウムエトキシドフォームに化合物を扱います。14請求813のいずれかのプロセスによって製造された製品です。15インフルエンザ感染症の治療方法メソッドを構成します。請求項1の治療に有効な量に件名が必要でその旨を提供します。16、の化合物から成る群から選択です:または、治療に有効な塩、エステルまたは並びに当該エステルの塩。17請求15、前記件名人間または人間以外の哺乳動物であるの方法。18前記件名が疑われるに感染の請求15、の方法、インフルエンザウイルスが野生型又はH274Yノイラミニダーゼ変異体を含みます。19請求18、前記ひずみインフルエンザウイルスの方法は、Hll、H51、h3n2型から選択されます。20オセルタミビル耐性インフルエンザウイルスの存在を決定する方法、手順を構成する方法オセルタミビル耐性インフルエンザウイルスまたはウイルス粒子から成るの疑いのあるサンプルを提供する、インフルエンザから成る結合分子とサンプルを連絡します。ノイラミニダーゼ認識ユニットの存在そして不在のオセルタミビルOCとcの存在そして不在のオセルタミビルのインフルエンザウイルスまたはウイルス粒子に結合分子の結合の違いを決定する、前記レベル認識ユニットによって、オセルタミビル敏感なインフルエンザウイルスコントロールにアクセスしたときにバインディングのレベルの減少に比べてオセルタミビルの存在下でバインディングで削減の不足は、オセルタミビル耐性インフルエンザウイルスのサンプルの存在を示します。21最新の前記オセルタミビル耐性インフルエンザインフルエンザの変異アミノ酸位置274ノイラミニダーゼの蛋白質で請求項20年の方法。22前記インフルエンザ変異ノイラミニダーゼ阻害薬に抵抗力があるが、まだこの発明において記載される認識単位に敏感である請求項20、の方法。23前記サンプルを含むインフルエンザウイルスは、粘液、唾液、呼吸器分泌、喉の洗浄、鼻洗浄、脊髄液、喀痰、尿、ザーメン、汗、糞、プラズマ、血、broncheoalveolar流体、膣分泌液、涙液および組織の生検からなる群から選択されの方法、請求項21。24前記インフルエンザウイルスを認識ユニットのバインディングは同時バインドによってオセルタミビルによる競争力のある抑制される請求20年の方法。25ザナミビル、またはtamiphosphorグアニジンモノエステルまたはphosphazanamivirまたはそのモノエステル、と塩、エステル及びその誘導体からの認識の単位の選択前記請求24、の方法。26請求20、検出されて、センシングユニットSの認識の単位の結合前記の方法。27結合分子構造RLSしていますように前記認識ユニットリンカーを介してセンシングユニットに結合されて請求26、の方法28請求27、前記脂肪族鎖、はトリアゾール、水溶性リンカー、およびエチレングリコールリンカーからリンカーが選択されているの方法。29請求前記センシングユニット選択蛍光ラベル、ゴールドラベル、酵素ラベル、放射性ラベル、ラベルの量子ドットから検出可能な部位は、26の方法ビオチンアビジン生物は、ラベル、および蛋白質のラベルに基づいてください。30請求29、前記蛍光ラベル群から選択されの方法フルオレセインのオレゴンの緑Cy5、Cy3AlexaフルアーBODIPYから成る、tetramethylrhodamine、ローダミンテキサス州赤赤、pyridyloxazole、benzoxadiazoleデリバティブ、NBDハロゲン化物、iodoacetamides、SBDルシファー黄色ヨードアセトアミドスチルベン、クマリン、ナフタリン、アジリジン、dapoxyl、ピレン、bimanes、キサンテン系、シアニン、ピレン、フタロシアニン、phycobiliprotein、squarene染料、エネルギー転送染料組み合わせ、およびその誘導体。31前記RLS分子群から選択され、、請求項20の方法成る。BM1:ザナミビルビオチンフルオレセインBM3ザナミビルビオチン前記x1に4胆4:ザナミビルフルオレセインBM5ビオチン前記x1に4BM6フルオレセインBM7PhosphaZanamivirビオチンBM8PhosphaZanamivirフルオレセインBM9ビオチン前記x1に4と胆10:PhosphaZanamivirモノエステルフルオレセイン前記x1に4。32。前記Rphosphazanamivirまたはその派生物である請求の方法20日。33競争力のあるオセルタミビルを結合する複合R式Iの化合物である前記32請求の方法前記A前記RおよびR5は独立して選択いないH、CICIOアルキル、アリール、ルアラルキルおよびXから、POまたは5は前記Xアンモニウム、メチルアンモニウム、dimethylammonium、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノールアンモニウム、dicyclohexylammonium、グアニジ、第一鉄エチレンジアミン陽イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、セシウム陽イオン、ベリリウム陽イオン、マグネシウムイオン、カルシウムのカチオンから成る群から選択されるカチオン性対イオンです、および前記NHR6NH3YR6であるBカチオン、亜鉛NNH2またはR6NNH2前記R6水素、C1~C10アルキル、アリール、又は前記Yは塩化物、臭化物、ヨウ化、酢酸、トリフルオロ酢酸、リン酸、二リン酸、硝酸、硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸から成る群から選択されるアニオン性対イオンルアラルキルを表すY、サリチル酸、hydroxynaphthoate、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸、グルコン酸、およびステアリン酸、前記R1はCH3またはCF3前記R2H、C1~C10アルキルまたは0で前記R7ビオチン、fluorophore抗炎症剤など機能部位を有する併合リンカーを表す、前記R3およびR4独立して水素、CICIOアルキルまたは0CNHR7CR8R8ClC10アルキル、アリール基、またはルアラルキルを表します。34請求前記競争力のあるオセルタミビルを結合する複合Rから成る群から選択される化合物である32の方法またはその派生物。発明の概要0010世界中のサージ2008年におけるオセルタミビル耐性HlNlインフルエンザウイルスの耐性変異のための調査と開発オセルタミビルに対する感受性の簡単なテストのための必要性を求めています。潜在的流行オセルタミビル耐性HlNlウイルスの真っ只中に、ポイントオブケアテストの治療オプションに関する決定をご利用いただけます、医師のオフィスで患者の標本のオセルタミビルに対する感受性の迅速な評価のための必要性です。0011小説ホスホン酸化合物を説明します。化合物Hll、H5N1の野生型とオセルタミビル耐性株に対するノイラミニダーゼ阻害剤としての活動があるとH3n2型インフルエンザウイルス。いくつかの実施形態においては、オセルタミビル耐性インフルエンザひずみノイラミニダーゼH274Y変異しています。本開示はまた、シアル酸を介して新規ホスホン酸化合物へのエナンチオ選択的合成ルートを提供します。0012本開示、式Iの化合物の特徴によると開示します。前記A前記RおよびR5は独立して選択いないH、CICIOアルキル、アリール、ルアラルキルおよびXから、POは前記Xアンモニウムメチルアンモニウムdimethylammoniumトリメチルアンモニウムから成る群から選択されるカチオン性対イオンですテトラメチルアンモニウム、エタノールアンモニウムdicyclohexylammoniumグアニジ第一鉄エチレンジアミン陽イオンリチウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、セシウム陽イオン、ベリリウム陽イオン、マグネシウムイオン、カルシウムのカチオン、前記NHR6NH3YR6であるB、亜鉛の陽イオンNNH2またはR6NNH2前記R6水素、C1~C10アルキル、アリール、又は前記Yでの塩化物から成る群から選択されるアニオン性対イオンルアラルキルを表すY、臭化、ヨウ化、酢酸、トリフルオロ酢酸、リン酸、二リン酸、硝酸、硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸サリチル酸、hydroxynaphthoate、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、グルタミン酸、グルコン酸、とステアリン酸、前記R1はCH3またはCF3前記HR2であるCICIOアルキルまたは0前記R7ビオチン、fluorophore抗炎症剤など機能部位を有する併合リンカーを表す、前記R3およびR4独立して水素、C1~C10アルキルまたは0CNHR7CR8R8C1~C10アルキル、アリール基、またはルアラルキルを表します。0013A組成式Iと前記組成物がインフルエンザウイルスノイラミニダーゼの活性を阻害する生物を管理する設計されています、製薬上許容される賦形剤の治療に有効な量を含む開示されている0014本発明の特徴によると、組成物の少なくとも1つの治療に有効な量を含む開示されて:または、少なくとも1つのまたは、少なくとも1つの0015本開示の特徴によるとプロセス式の組成を作るため開示されて私の手順から成るプロセス。アセチル、キラル前駆体シアルは中間化合物を準備する酸。中間化合物ジエチルトリメチルシリル亜リン酸を扱うフォーム中間化合物。中級Nブロモスクシンイミドとピリジンでどのフォーム5中級、ブロモ置換化合物を与えるために光の照射下での治療:中間化合物トリメチルシリルtrifluorosulfonateで治療フォーム中間化合物。とフォームの中間化合物にトリメチルシリルアジ化と中間化合物を治療します。0016いくつかの実施形態では、プロセスをさらに致しておりますナトリウムメトキシドとのbromotrimethylsilaneと中間化合物を治療し、その後フォーム化合物に順番に、hydrogenating0017中間化合物を扱ういくつかの実施形態では、プロセスをさらに構成フォームに化合物hydrogenating0018中間化合物hydrogenatingとlを反応プロセスはさらにいくつかの実施形態で構成されて、3bis2methylthiopseudoureaと中間を形成するEt3N化合物。0019中間化合物bromotrimethylsilane、しナトリウムメトキシド治療フォームに化合物いくつかの実施形態では、プロセスをさらに構成します。0020いくつかの実施形態では、プロセスをさらに構成中間comoundを次にトリフルオロ酢酸ナトリウムエトキシドフォームに化合物の治療の手順:発明は式Iによるとの製品0021で1つの側面は、ここに開示されたプロセスによって生成。0022本開示の特徴によると、法の開示はインフルエンザ感染症の治療、する件名が必要でその式Iによると組成の治療に有効な量の提供を含みます。0023本発明の特定の側面によると、少なくとも1つの式Iによると化合物であります。0024とノイラミニダーゼ化合物のいずれかの連絡から成るノイラミニダーゼの活性を阻害する方法を言った、本発明の別の実装を提供します。1つの側面で、ノイラミニダーゼインフルエンザノイラミニダーゼで、アクティビティはinvivoで阻害されます。別の態様では、アクティビティはinvitroで抑制されました。0025本発明は、薬物とその競争の抑制剤の結合を測定することにより、病原菌の薬剤感受性を決定するために関する。0026発明の手順から成るメソッドオセルタミビル耐性インフルエンザウイルスの存在を決定するためのメソッドはオセルタミビル耐性インフルエンザウイルスまたはウイルス粒子から成るの疑いのあるサンプルを提供します。に連絡サンプルインフルエンザノイラミニダーゼ認識ユニットから成る結合分子の存在と不在ostelamivirカルボン酸OCインフルエンザウイルスまたはウイルス粒子に結合分子の結合の違いでの存在そして不在のオセルタミビル、前記レベルostelamivir敏感なインフルエンザウイルスコントロールにアクセスしたときにバインディングのレベルの減少に比べてオセルタミビルの存在下での認識の単位によってバインドで削減の欠如決定、存在ostelamivir耐性インフルエンザウイルスのサンプルを示します。インフルエンザウイルスに対する認識ユニットのバインディングは、競争力のあるオセルタミビルによる同時バインドによって抑制されました。0027いくつかの実施形態においては、オセルタミビル耐性インフルエンザインフルエンザの変異アミノ酸位置274ノイラミニダーゼのタンパク質で構成します。いくつかの実施形態において、突然変異H274Yです。0028いくつかの側面では、サンプルを含むインフルエンザウイルス粘液、唾液、呼吸器分泌、喉の洗浄、鼻洗浄、脊髄液喀痰、尿、ザーメン、汗、糞、プラズマ、血、broncheoalveolar流体、膣分泌液からなる群から選択されると、流体および組織の生検を引き裂きます。いくつかの実施形態では、インフルエンザウイルスは細胞培養から得られます。いくつかの実施形態においては、細胞培養Vero細胞文化です。いくつかの実施形態では、インフルエンザウイルスを含むサンプルインフルエンザウイルス感染細胞です。0029いくつかの側面では、サンプルを含むインフルエンザウイルス固体基板上固定化です。固体基板は、マイクロウェル、マイクロタイタープレート、シリコンチップ、スライドガラス、ビーズ、微粒子、映画、クロマトグラフィー紙、膜、ボトル、料理、スライド、あぶらとり素材、フィルター、繊維、不織布の繊維、形ポリマー、粒子、ディップスティック、試験管、チップ、マイクロチップ、ラングミュアブロジェット膜、ガラス、ゲルマニウム、シリコン、テトラフルオロエチレン、ポリスチレン、ガリウムヒ素、リン化ガリウム、シリコン酸化膜、窒化ケイ素とこれらの組み合わせから成る群から選択可能性があります。いくつかの実施形態では、インフルエンザウイルスまたはウイルス粒子結合性炭水化物受容体を介して固体基板上固定です、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンのコンポーネント。0030いくつかの側面では、インフルエンザウイルスまたはウイルス粒子固体基板への固定化インフルエンザウイルスまたはその粒子のノイラミニダーゼコンポーネントにバインディングの分子またはオセルタミビルのカルボン酸のバインドを変更しません。0031いくつかの実施形態では、認識の単位ザナミビルから選択されているかtamiphosphorグアニジンモノエステル、またはphosphazanamivirまたはそのモノエステルと塩、エステル及びその誘導体。いくつかの実施形態では、認識の単位検出されて、センシングユニットSを結合されています。結合分子構造RLSがあるようにいくつかの実施形態では、認識の単位にセンシングユニットリンカーLを介して結合されていくつかの実施形態では、リンカーインフルエンザウイルス検知センシングユニットSに認識単位の結合の影響を低減します。0032脂肪族鎖はトリアゾール、水溶性リンカー、およびエチレングリコールリンカーからリンカーLを選択可能性があります。0033いくつかの側面でセンシングユニットは直接または間接的に検出可能なです。いくつか実施形態は、センシングユニット、検出可能な部位にストレプトアビジンビオチンの相互作用によって結合されています。0034いくつかの側面でセンシングユニット蛍光ラベル、ゴールドラベル、酵素ラベル、放射性ラベル、量子ドットのラベル、および蛋白質のラベルから選択した検出可能な部位です。いくつかの実施形態では、検出可能な部位、発光、測色、蛍光光度法から選択信号または放射性信号によって検出されます。0035いくつかの実施形態において、蛍光ラベルフルオレセインのオレゴンの緑、tetramethylrhodamine、Cy5、Cy3AlexaフルアーBODIPYから成る群から選択されるローダミン赤、テキサス赤、pyridyloxazole、benzoxadiazole誘導体、NBDハロゲン化物、iodoacetamides、SBDルシファー黄色ヨードアセトアミドスチルベン、クマリン、ナフタリン、アジリジンdapoxylピレンbimanes、キサンテン系、シアニン、ピレン、フタロシアニン、phycobiliprotein、squarene染料、エネルギー転送染料の組み合わせ、およびその誘導体。0036いくつかの実施形態においては、ビオチンセンシングユニットストレプトアビジン標識による蛍光検出可能です。いくつかの実施形態において、蛍光センシングユニットフルオレセイン芥子FITC、Alexaの染料、量子ドットから選択されています。いくつかの実施形態においては、ビオチンのセンシングユニットストレプトアビジン共役酵素alkalianホスファターゼ、βガラクトシダーゼ馬大根ペルオキシダーゼなどによって検出可能です。いくつかの実施形態では、tamiphosphorグアニジンモノエステルはアンモニウム塩並びにです。いくつかの実施形態において、phosphazanamivirはアンモニウム塩並びにです。0037開示関連化合物は、インフルエンザウイルスまたはその粒子のノイラミニダーゼを結合し、前記バインディングには競争力のあるオセルタミビルカルボン酸でOC、前記式RLsを含む化合物抑制するRザナミビル、またはtamiphosphorグアニジンモノエステルまたはphosphazanamivirまたはそのモノエステルと塩、エステル及びその誘導体から選択Lは省略可能であり、トリアゾールリンカー、脂肪族のリンカー、またはエチレングリコールリンカーから選択したS部位から直接検出蛍光、colorimety、発光、放射性検出から選択した方法によって選択されているまたは間接的検出部位ビオチンとストレプトアビジンから共役報告システムを選択します。0038診断キット、包装材、オセルタミビル耐性インフルエンザウイルスの存在を検出するなサンプルを開示の化合物の該組成物を前記組成から成る開示に関する。いくつかの実施形態は、キットはさらに、ラベルを構成またはパッケージから成る兆候を挿入または方向にはサンプルにおけるオセルタミビル耐性インフルエンザウイルスの検出のためのキットを使用します。変形及び修正精神と開示の新概念の範囲から逸脱することがなくそこに影響を受ける可能性がありますがこれらと他の側面0039が次の図面と組み合わせて撮影の好ましい実施形態の以下の説明から明らかになります。0040次の図面は現在の仕様の一部を形成、さらには発明1つ以上のこれらの図面の組み合わせでここに提示された特定の実施形態の詳細な説明への参照をよりよく理解できる本開示の特定の側面を示すために含まれます。特許又は出願ファイルにはカラーで実行される少なくとも一つの図面が含まれています。この色の願書を特許又は特許出願文書のコピーは要リクエスト、必要手数料の支払事務所によって提供されます。発明の詳細な説明0056これで使用される用語仕様が一般的にあるその普通の意味アート、発明のコンテキスト内で、特定のコンテキストで各用語が使用されます。本発明の説明に使用される特定の用語の下に、または他の場所を参照して、仕様は、発明の説明に関する開業医を追加のガイダンスを提供します。便宜上、特定の用語たとえば斜体または引用符を使用して強調する場合があります。強調表示の使用にはスコープと、用語の意味に影響はありません。スコープと、用語の意味は同じ同じコンテキストで強調表示されているかどうか。高く評価されます1つ以上の方法で同じことを言うことができます。その結果、代替言語と同義語本明細書で説明した条件のいずれかを使用することがありますまた、用語です詳述または記載かどうかに応じて配置する任意の特別な意義です。特定の用語の類義語が用意されています。1つ以上の類義語のリサイタルでは、他の同義語の使用は除外されません。例例記載、規約などどこにもこの仕様での使用のみ、例示されスコープと意味の発明またはいずれかの例示条件のない方法で制限されます。同様に、本発明はこの仕様で与えられた様々な実施形態に限定されません。0057別途定義しない限り、記載されているすべての科学的及び技術的な用語として一般的にこの発明に関連する芸術の一般的な技量の1つによって理解同じ意味があります。紛争の場合は、現在のドキュメント定義などを制御します。0058オセルタミビルによる内因性エステラーゼオセルタミビルに変換されます、経口プロドラッグです。ザナミビルはレンダリングできませんその宿主細胞を脱出し、他の人に感染するインフルエンザウイルスノイラミニダーゼ蛋白質の活性部位にバインドによって動作します。CyranoskiD909。また、インフルエンザウイルスの複製invitroおよびinvivoの阻害剤です。ザナミビルのバイオアベイラビリティの2であり、それは通常吸入によって投与されます。0059最近の薬剤耐性の鳥インフルエンザ感染の報告し、副作用でタミフル登録商標治療を受けた子供ノイラミニダーゼ阻害剤NAIsの新しい化学的アイデンティティのパンデミックインフルエンザの脅威との戦いのため必要であることを示唆します。NAの阻害剤oxoniumの遷移状態シアル酸の酵素の卵割における模倣するシクロヘキセン足場に設計されています。肝臓エステラーゼのアクティブなカルボン酸で加水分解オセルタミビル3つのアルギニン残と対話するナの活性部位に公開されます。。抗インフルエンザウイルス活性を持つザナミビルホスホン酸同族体の合成0060本開示小説ホスホン酸ハモザナミビルへの新規合成経路を提供します。Dシアル酸は新規アクティブノイラミニダーゼ阻害剤の合成キラル前駆体として利用されました。小説ホスホン酸ハモは、それらの野生型とH274Y変異の日に、h5n1型ウイルスを抑制することによってオセルタミビルとザナミビルよりもより良いインフルエンザ治療活動を展示します。0061で1つの実装、発明は、新規合成法を提供します。様々なザナミビルホスホン酸同族体と合理的に高収率で誘導体の不斉合成合成経路は図1に示します。試薬、図1に示した手順次のとおりです。0062ステップ1。シアル酸ピリジン化合物3を与える脱炭酸、誘導するために100°Cで加熱されたperacetylationの中間体を買う余裕で無水酢酸と扱われました。ホルン、ejらCarbohydr。研2008343936。0063ステップ2。化合物3トリメチルシリルジエチルリン酸、ホスホン酸化合物4余裕の混合物として適切なの求核剤として扱われたとクロマトグラフィーによって分離、NMRスペクトル解析によって特徴づけられることができるβ対2:3。0064ステップ3。ホスホン4アノマー混合としてNブロモスクシンイミドとinsituβ除去製品5ホスホン酸誘導体のNeu5Ac2enダナ余裕がピリジンと扱われた、ラジカル型臭素化を受けるCH2CI2ソリューションで照射しました。この5の合成法を以前報告そのアナログホスホン酸ジメチル経営責任者ダニエルバセラ、Aのために長い手順よりもはるかに効率的だったワイラー、RHelv。チム。Acta199174451。0065ステップ4。無水酢酸、酢酸および濃硫酸のメディアでは、化合物5オキサゾリン6に変換されました。0066ステップ5。位置および立体選択的開環反応オキサゾリン6azidotrimethylsilaneとのアジドフェニル化合物7を買う余裕つながる化合物ラ、lb膜、lcおよびidに極めて重要な中間体として実施0067ステップ6。化合物7は3つの反作用のシーケンスによってホスホン酸laに変換されました:両方のエチルグループbromotrimethylsilane、ナトリウムメトキシドメタノール及びアジドフェニルグループにアミンの選択的還元のLindlar触媒の存在下での水素化による脱アセチル化と7ホスホン酸からの除去。0068あるいは、1つだけエチルグループナトリウムエトキシドエタノール、による治療に関するホスホン酸ジエステル7のホスホン酸ジエステルlcアジドフェニルグループの次の減少後を与えることから削除されました。0069ステップ7。グアニジノ置換基を導入するには、化合物7アジドフェニルグループはまずl3bis2methylthiopseudourea塩化水銀とグアニジン化合物8余裕トリエチルアミンの存在下で反応したアミンを与えるために減少しました。0070ステップ8。両方のエチルグループホスホン酸8でbromotrimethylsilaneによって削除され、tertbutoxycarbonylBocグループの同時除去とメタノールによるinsitu生成されたHBr精密検査によって実現しました。ザナミビルホスホン酸脱アセチル化によって得られました。0071また、ナトリウムエトキシド、化合物のidを付けますにトリフルオロ酢酸を持つBocグループの除去が続くとモノエステルがホスホン酸ジエステル7に変換されました0072本発明の組成物は、必要に応じて塩化合物の本、特に製薬上許容される非毒性塩のたとえば、Na、李K、Ca、Mgを含む構成します。このような塩は、それらの適切な陽イオンアルカリ及びアルカリ土類金属イオンやアンモニウムと第四紀アミノ酸イオン酸陰イオン部位を有するなどの組み合わせによって派生などがあります。0073金属塩は、本発明の化合物と金属の水酸化反応して準備されます。この方法で調製する金属塩の例ナLiKを含む塩です。0074また、塩特定の有機無機酸、例えば、HC1、HBr、H2S04、または有機スルホン酸の酸の添加から基本的なセンターには、通常アミン形成してもよい。最後に、それは本明細書の組成は彼らのunionized、同様に両性イオンフォームと水和物のように水の化学量論量の組み合わせで発明の化合物を構成することを理解することです。本発明の別の側面のノイラミニダーゼを本発明の化合物を含むの疑いのあるサンプルを治療段階を含んで成るノイラミニダーゼの活性を阻害する方法に関する。0075本発明の化合物は従来船と通常の練習と一致が選択されます賦形剤と配合されています。錠剤は、賦形剤、glidants、フィラー、バインダーなどが含まれます。水性製剤滅菌のフォームでは、用意されてよりも、他の配信によって意図するとき経口投与一般的に等張されます。すべての製剤は、必要に応じて賦形剤、ハンドブックの医薬品は明示的その全体の参照によって組み込まれている賦1986年に定めるなどが含まれます。賦形剤アスコルビン酸とキレート剤EDTAなど、炭水化物デキストリン、hydroxyalkylcellulose、hydroxyalkylmethylcellulose、ステアリン酸などの抗酸化物質があります。製剤のpHpH11についてpH3についてから範囲しますが、通常pH7ph10についてです。0076など。その優先ルートをたとえば、受信者の条件変わる可能性があります高く評価されます。0077単独で投与する有効成分には可能な間、医薬製剤として提示することが望ましいかもしれません。製剤、獣医および人間の使用本発明の両方の少なくとも1つの有効成分は、上記のように、1つまたは複数の許容可能なキャリアとともにしたがって定義と必要に応じて他癒しの素材を構成します。キャリア秒は、許容策定の他の成分と互換性があるという意味で生理的にその旨の受信者は無害でなければなりません。0078、製剤はそれらの前述の管理路線に適してもあります。製剤単位用量フォームで便利に提示される可能性があります、薬局の芸術にでよく知られている方法のいずれかによって準備されることがあります。一般的に技術や製剤レミントンの薬学の研究マックの出版社、イーストン、ペンシルベニア州が見られます。このようなメソッドにはアソシエーションに有効成分を1つまたは複数の副原料を構成するキャリアをもたらすステップが含まれます。配合は密接の均一に積によって準備される一般的に協会に有効成分液体担体または細かく分けられた固体キャリアをもたらし、その後、必要に応じて、製品を形成します。0079製剤の経口投与に適した発明は、カプセル、いたる所など、独立した単位として準備されますや各有効成分の所定量を含む錠剤粉末や顆粒としてソリューションまたは水性液または非水系液体懸濁液として油水液体乳剤または水で油の液体エマルジョンとして。有効成分はボーラス、舐またはペーストとしてまた提示する可能性があります。[0080Aタブレットです作られた圧縮または成形、必要に応じて1つまたは複数のアクセサリー成分と。圧縮錠剤、粉末や顆粒、必要に応じてバインダーと混合など自由に流れるフォームでアクティブな成分、潤滑剤、不活性の希釈剤、防腐剤、表面のアクティブまたは分散エージェントに適したマシンで圧縮によって調製されます。成形錠不活性液体と粉末の有効成分の混合物を湿らに適したマシンで成形による希釈なされるかもしれない。錠剤オプションでコーティングすることがありますまたは得点し必要に応じて遅く提供するために策定されるまたは有効成分の放出制御します。0081局所軟膏またはクリームたとえばする量のアクティブな成分を含む、0075に20ww01と20刻み0106wwなどwwの間の範囲内のアクティブな不活含むとして感染目または他の外部の組織は、口や皮膚など、配合の好ましくは適用されているため、07ww等、好ましくは02~15ww、最も好ましくは05~10ww。軟膏で定式化すると、有効成分、パラフィンまたは水混和性軟膏の基本と採用可能性があります。代わりに、アクティブな成分は、水中油クリームベースとクリームの処方してよい。[0082に応じて、クリームベースの水相、たとえば、少なくとも30ありますwwは、多価アルコール、プロピレングリコール、ブタン13ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールとポリエチレングリコールいわゆる乳化ワックス、ワックス、オイルと共にを作り、脂肪作るいわゆる乳化軟膏を基本フォームクリーム製剤の油性の分散相。0084Emulgentsとエマルジョン安定には、発明の製剤で使用に適した剤には、トゥイーンTM60、スパンTM80、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアリン酸とナトリウムラウリル硫酸があります。0085に適したオイルまたは策定のための脂肪の選択肢は所望の化粧品の特性を達成することに基づいています。クリームは、好ましくは非油っこいべき非汚損および洗濯できます。管またはその他のコンテナーからの漏れを避けるために適切な一貫性を持つ製品。直鎖又は分岐鎖、モノまたは二塩基アルキルエステルディisoadipate、isocetylステアリン酸、プロピレングリコールのジエステルココナッツ脂肪酸、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、2エチルヘキシル、パルミチン酸またはCrodamolキャップとして知られる分岐鎖エステルのブレンドのなど、最後の3つのいるエステルを好んだ。これらは単独または組み合わせに応じて必要なプロパティを使用することがあります。また、白い柔らかいパラフィンおよびまたは液体パラフィンまたは他鉱物油などの高融点脂質が使用されます。0086製剤目に局所投与に適したまた好適なキャリア、特に水溶性有効成分の有効成分の溶解または中断の前記の点眼薬を含めます。有効成分は、好ましくはそのような製剤の05に20、有利05~10特に約15wwの濃度であります。0087製剤口の中に局所投与に適したトローチ、風味基礎、通常ショ糖とアカシアやtragacanthの活性成分を含む含んでいるペーストゼリー有効成分を不活性にゼラチン、グリセリン、またはショ糖アカシアなどで構成される液体の好適なキャリアの有効成分を含む洗口剤。0088直腸投与製剤、坐剤としてたとえばココアバター又はサリチル酸塩の双方を含む適当なベースを提示可能性があります。0089製剤肺内または鼻投与に適したがある粒子サイズたとえば01を500ミクロンの範囲内01~500ミクロンの範囲内の粒子径を含むインクリメント05、1、30ミクロンミクロン、35ミクロン等、鼻の通路を通って急速吸入または肺胞嚢に達するために口から吸入によって投与です。適した製剤の有効成分の水溶性または油性のソリューションがあります。エアロゾルや乾燥粉末管理に適した製剤は、従来の方法によると準備することがありますおよびその他治療薬これまで治療やインフルエンザの予防またはB感染症に使用される化合物などで配信可能性があります。0090製剤に適した膣管理が提示されることがありますのpessaries、タンポン、クリーム、ゲル、として貼り付けます、発泡体またはに加えて有効成分を含むスプレー製剤そのようなキャリアとしての芸術適切なが知られています。0091製剤経口投与に適したされる抗酸化物質、バッファー、bacteriostats、定式化のアイソトニック目的の受信者の血でレンダリング溶質を含む水溶液と非水溶液の無菌性注射ソリューションなどがあります。エージェントと肥厚エージェントを停止するなど水溶液と非水溶液の滅菌サスペンション。0092、製剤単位用量またはたとえばアンプル、バイアル、密封、複数回用量の容器に表示され例水注入、すぐに使用する前に滅菌液体キャリアの追加のみを要する凍結乾燥凍結乾燥状態で格納されることがあります。その場しのぎの注入ソリューションおよび懸濁液は無菌粉末、顆粒、錠剤前述した種類から用意されています。最寄りの単位用量製剤は毎日線量または単位毎日subdose、として本明細書上記読誦、または、適切な分数の有効成分を含むものです。0093特に言及上記の本発明の製剤成分に加えて他のエージェントの従来を考慮してたとえばそれら経口投与に適して香料を含める可能性があります問題の定式化の種類芸術に含むかもしれないことを理解する必要があります。0094さらの発明は、少なくとも1つの有効成分として上記獣医のキャリアと一緒にその定義を含む獣医組成物を提供します。獣医のキャリアは材料の組成の管理目的のために便利です、そうでなければ不活性または獣医のアートで許容ですし、有効成分と互換性のある固体、液体または気体材料があります。これらの獣医組成物は、経口、非経口または他の目的のルートによって管理されるかもしれません。本発明の化合物を使用して放出制御製剤を含む提供として有効成分の1つまたは複数の化合物を発明の有効成分のリリース制御と少ない周波数投与を許可したり特定の有効成分の薬物動態や毒性プロファイルを改善するために規制します。有効成分の実効線量依存少なくとも扱われて条件毒性の性質上、化合物であるかどうか予防的同盟低用量を使われてまたはに対してアクティブなインフルエンザ感染、配信、方法、医薬品の製剤と従来の用量エスカレーション研究を使用して臨床医によって決定されます。について1日あたり100mgkg体重を00001からことが必要に期待できます。通常、約001~約10mgkgから1日あたりの体重します。一般的には、約001~約5mgkgから1日あたりの体重します。通常より、約005~約05mgkgから1日あたりの体重します。たとえば、吸入約70kgの体重の大人の人間のための毎日の候補者の線量は1mgから1000mg、5mg、500mg、好ましくは間に及ぶし、単一又は複数の用量の形をとることがあります。0095で1つの実装、有効成分、本発明の他の成分と組み合わせて使用も。このような組み合わせは、扱われる条件、成分の相互と薬物プロパティの組み合わせに基づいて選択されます。たとえば、呼吸器系ウイルス感染症の治療と、特にインフルエンザ感染、本発明の組成物は結合抗ウイルス剤amantidine、リマンタジンリバビリンなどをmucolytics、去痰、bronchialdilators、抗生物質解熱剤、または鎮痛剤。通常、抗生物質、解熱剤、鎮痛剤は、本発明の化合物と共に用いる投与されています。0096発明の別の実装が含まれています本明細書に記載の化合物の生体内代謝産物には、小説、かつ自明でないに先行技術に程度にこのような製品です。このような製品は、たとえば、酸化、還元、加水分解、無溶媒、エステル化及び投与の化合物は、主に酵素処理のためのようなから可能性があります。したがって、本発明には小説とこの発明は哺乳類との化合物並びに代謝製品をもたらすのに十分な時間の期間のために連絡を含むプロセスによって生成される非自明な化合物が含まれます。このような製品は、通常、radiolabeled準備することによって識別されますそれ非経口的の検出可能な投与ラットマウスモルモットサルのような動物、または発生する代謝の十分な時間を許可する男、通常は約30秒30時間の管理とその変換製品尿から分離する本発明の化合物、血または他の生物のサンプル。ラベルが付いていますので、これらの製品は簡単に分離できる他の抗体のエピトープの代謝物の存続をバインドの能力の使用によって分離されている。代謝物構造従来のファッションでは、例えばMSやNMR分析によって決定されます。一般的に、従来の薬物代謝酵素のよく知られていると同じようにそれら業者には代謝物の分析が行われます。彼らはそれ以外の場合をinvivoで発見されていない限り、コンバージョン製品は独自のノイラミニダーゼ阻害活性を持っているいない場合でも、本発明の化合物の治療的投与の診断アッセイの便利です。0097プロドラッグ小説ホスホン酸同族体の企図されています。極地ホスホン酸とグアニジグループは、必要に応じてさらにかもしれない薬物動態および薬力学的特性を強化する公知技術によって官能基化します。例定式化とプロドラッグの使用については、例えばacyloxymethylアリールホスホン酸エステル、可能性があります利用可能経口バイオアベイラビリティ。0098で1つの側面、発明、ノイラミニダーゼを含むの疑いのあるサンプルの生物などの自然または人造の材料を含んでいるティッシュまたは細胞文化生体試料など生物材料の試料研究室のサンプル食品、水、または空気のサンプルセルのエキスなどのbioproductサンプル、目的糖合成特に組換え細胞ような。通常サンプルの場合は、ノイラミニダーゼ、頻繁に、病原体はウイルスなどを生産する有機体を含むの疑いがあるでしょう。サンプルは、いかなる媒体など水と水有機溶媒混合系で格納できます。サンプルでは、人間などの生物細胞培養などの人工材料があります。0099は、組成物前駆体の追加のサンプルにサンプルまたはそれに本発明の組成物を含む追加発明の治療のステップを含みます。添加ステップは、上記のとおり任意の管理方法を含みます。必要に応じて、ノイラミニダーゼの活性組成物の適用後ノイラミニダーゼの活性を検出する直接的および間接的な方法を含む任意のメソッドによって観察することができます。ノイラミニダーゼの活性測定の定量的、定性的および定量的方法すべて企図されています。通常上記のスクリーニング方法の1つが適用されます、しかし、生物の生理学的特性の観測などの他の方法も適用可能です。ノイラミニダーゼを含む0100生物細菌コレラ、ウェルシュ菌、肺炎球菌、アースロバクターsialophilus、ウイルスがあります。得られるまたはこれらの生物の内で見つかったノイラミニダーゼの活性阻害内の本発明のオブジェクトです。インフルエンザウイルスのウイルスを説明します。基礎的ウイルス学プレス、ニューヨーク、1986年レイヴン、章24。本発明の化合物は、インフルエンザの感染症の予防や既存のインフルエンザ感染アヒルと他の鳥、齧歯動物、豚などの動物や人間の治療に便利です。[0101組成物発明の阻害活性に対しては上映されます。ノイラミニダーゼ酵素活性を評価するため従来の手法のいずれかによって。本発明の文脈通常組成最初抑制ノイラミニダーゼinvitroのため上映するほか、組成物の阻害活性を示す活性のinvivoで上映されています。少ない約5×106M、通常より約1×107M、好ましくは約5×10のinvitro34を有する組成物8Mがinvivoでの使用のために好ましい。0102有用なinvitro画面は詳細に記載されている、ここでは詳述しません。418423Potier、MetalAnalyt。Biochem、94287296チョン、akjetalBiochem理生物物理。Acta、107765711991コールマン、pMetal国際公開いいえヲ9206691J065±00512±0453±2126±11EC50c1324±08235±85122±23WSN274YIC50J05025±005175±075593±68EC50c2726±8290±1530000±1600年パンデミックIC50J09084317EC50c20326526776RG14h5n1型IC50J10084006EC50c9781700年±50016360±2980年1250年±440ウドンタニIC50J645237932EC50c5532±2341±630±18293T細胞CC50AWSN1933H1N1、AWSN1933H1N1、Aカリフォルニア72009パンデミックH1N1、ベトナム1194年2004RG14からH274Yノイラミニダーゼ変異h5n1型、Aウドンタニ3071972ノイラミニダーゼ阻害し抗インフルエンザの試金のためのバイオアッセイ材料として使用されたnM3000050000100000100000はインフルエンザウイルス。人間の293t細胞は化合物の細胞毒性測定に使用されました。b蛍光基質2aDNacetylneuraminic酸化合物濃度50阻害の異なるインフルエンザのノイラミニダーゼ酵素を引き起こしているIC50値を決定するために使用されました。c阻害定数はMUNANAとして基板を用いた速度論的研究によって決定されました。d別インフルエンザ株に対する抗インフルエンザ活動を別のインフルエンザ菌株によって感染による細胞変性効果の50の保護のための化合物の濃度EC50値として測定しました。e293t細胞に対する細胞毒性の試金で顕著な毒性なし使用最高濃度。0104ノイラミニダーゼ阻害アッセイ酵素源として関連付けられたインフルエンザノイラミニダーゼを使用していくつかのインフルエンザ株のノイラミニダーゼに対して測定しました。蛍光基板MUNANAaDNacetylneuraminic酸すべてのウイルスの酵素のためのノイラミニダーゼ活動を測定するために使用されました。表1ノイラミニダーゼ活動の50阻害のための化合物の濃度を測定して相対ノイラミニダーゼ阻害ポーテンシーこれらの化合物を評価するIC50値を示しています。ラとlb5つすべてのそれらに対して0105、IC50値すべて著しくザナミビルよりも強力とオセルタミビル酸と同様です。これら2つのホスホン酸化合物ペアレンタルヒスチジン、ノイラミニダーゼ274位置交換チロシン残基がWSN274Yのオセルタミビル耐性のノイラミニダーゼ変異体を阻害することで大幅によりアクティブになります。0106これらの化合物の抗インフルエンザ活動に対して5のインフルエンザ株インフルエンザを介する感染細胞変性効果を保護する能力を測定しました。50の保護、感染症のための濃度EC50値細胞変性効果を媒介として抗インフルエンザの活動が決定しました。表1は、laとlbHllインフルエンザウイルスなど、WSN2009パンデミックHll系統に対する大きい抗インフルエンザ活動が表示されます。0107ラとlbの抗インフルエンザ活動はオセルタミビル耐性WSNHlNlウイルスに対して特に顕著であります。オセルタミビル耐性のノイラミニダーゼ変異位置に274HlNlインフルエンザウイルス分離株の現行HlNlクリニックMoscona、ANEnglth1th220053532633年されています。ラとlbこの突然変異のノイラミニダーゼの優れた抗インフルエンザ活動この現行のインフルエンザを治療するためのオプションに影響します。HlNlインフルエンザ株に対する抗阻害剤であることに加えて、ラとlbも、RG14に対する抗インフルエンザ剤としてザナミビルに同等であるウドンタニΗ3Ν2インフルエンザの系統。0108バイオアッセイ測定ラとポンドの両方が強力な抗抗インフルエンザの化合物であることを示した。彼らはザナミビルよりも一般的により強力です、オセルタミビル耐性HlNlインフルエンザウイルスに対して非常にアクティブです。さらに強力な抗インフルエンザ剤には、彼らに人間293t細胞試験濃度の高い表1に全く無害です。0109で1つの実装、現在開示ホスホン酸ラの強力なΝΑ阻害剤および抗エージェントic5調べる0とEC50値065~13nMのAWSN1933ウイルスに対するそれぞれです。0110で1つの実装、現在開示ホスホン酸ラの強力なNAの阻害剤および抗エージェントAWSN1933ウイルスIC50にH274Y変異とEC50値05および27nmに対してそれぞれです。これらのic5調べる0とEC50値ザナミビルホスホン酸のタミフル耐性HlNlウイルスは特に印象的です。本開示ホスホン酸ラ0111で1つの実装は、また強力なNAの阻害剤および抗エージェントAカリフォルニア72009パンデミックHlNlに対してです。ベトナム1194年2004RG14h5n1型とAウドンタニ3071972ウイルス。0112で1つの実装、現在開示ホスホン酸lbの強力なNAの阻害剤および抗エージェントAWSN1933IC50とEC50値12~24nMのウイルスに対してそれぞれです。0113で1つの実装、現在開示ホスホン酸lbのためAWSN1933ウイルスIC50にH274Y変異の強力なNA阻害剤とタミフル剤です。EC50値025および26nmそれぞれ。ポンドに対するタミフル耐性の高能H11ウイルスは非常に重要。本開示ホスホン酸lbの0114で1つ実装がまた強力なNAの阻害剤Aカリフォルニア72009パンデミックH1N1インフルエンザ治療剤です。ベトナム11942004RG14h5n1型とAウドンタニ3071972ウイルス。[0115で1つの側面、本発明のノイラミニダーゼホスホン酸複合体のモデル分子の活性部位の3つのアルギニン残基とホスホン酸の適切なバインドモードを示します。既知のNl結晶構造を用いた分子ドッキング実験図2ホスホン酸インヒビターlb強く結合na、トライアルギニン残基を加えてC7C9グリセリル、C4フェニルアセトアミドおよびCsグアニジノグループ、ノイラミニダーゼザナミビル複雑に同様の結合ポケットに加わる他の相互作用を明らかにします。0116発明の一態様では、分子モデリングホスホン酸インヒビターラのノイラミニダーゼの3つのアルギニン残基と強い相互作用またC7C9グリセリル、C4フェニルアセトアミドおよび結合ポケット図2Csアミノグループによって加えられる他の相互作用を示した。タミフル耐性ウイルス分離株の同定0117ここに記載の仕様はデザインと抵抗評価バインド競争による法開発タミフル耐性ウイルス分離株の効果的な診断のための実践開示しています。0118ザナミビルとOCインフルエンザノイラミニダーゼの同じアクティブサイトにバインドします。ただし、オセルタミビル耐性H5N1ウイルスノイラミニダーゼはまだザナミビルへの感受性を保持できます。コリンズPJ、etal。自然4531258年1261年。Arg224より大きいの疎水性ポケットOCPjコリンズetal自然4531258年。Nlグループそれら数百人の疎水性ポケットの形成を防ぐ変異H274Yなどの耐性フォームに進化することができます倍オセルタミビルK値の。疎水性ポケット、ザナミビルKの必要性の不在でH274Yのノイラミニダーゼは変更されません。本発明の機能では、バインディングの違いOC感受性のウイルス分離株の小説の診断は、探検されました。オセルタミビル結合領域のインフルエンザウイルスのノイラミニダーゼとタミフル耐性インフルエンザウイルスの検出のための基礎を発見にオセルタミビル敏感とオセルタミビル耐性インフルエンザウイルスのバージョン間の差分のバインディング驚くほどにした使用がバインドされる認識単位の0119選択します。0120発明の特定の面で認識ユニット、センサーユニットSに結合されています。いくつかの実施形態では、認識の単位センシングユニットに順番に結合されて、リンカーに結合されています。RLS分子は、タミフル耐性タミフル敏感なインフルエンザウイルスから区別するために使用されます。0121されては強力なノイラミニダーゼ阻害剤のオセルタミビルOCタミフル登録商標、非OC分子のための効果的なライバルそのインフルエンザウイルスNA分子にバインドされます。ただし、OCまだ非OC認識ユニット均等に野生型ナだけでなく、バインドバインドOC耐性変異体例えば、H274Yのための貧しいライバルです。0122認識ユニットが通常知られているNA結合部位そのようなザナミビル、tamiphosphorグアニジンモノエステルまたはザナミビルホスホン酸ラまたはその誘導体lb、lcおよびidから選択されます。いくつかの実施形態においては、Rが選択されているオセルタミビルを含むホスホン酸から私たちに明らかにいる野生型とH274Y変異のH1N1とH5N1ウイルスに対するノイラミニダーゼ阻害薬としての活動を持つ化合物特許7888、337B2。0123にバインドするNAですから、センシング信号によって検出部位を観察することができます。このような同種の蛍光及び熱量センシング鎖は当業者に知られています。参照して、例えば:王QMetalペプチドpnitroanilides基板として用いたライノウイルス143Cプロテアーゼの連続熱量アッセイアナル。Biochem第252pp23845とBasakSら基質特異性のinvitro解明とプロタンパク転換酵素の生物検定では蛍光ペプチド急冷4を用いた分子BiochemJ巻380pp505142004年。[0124センサユニット直接的または間接的アビジンストレプトアビジンビオチン、抗体抗原の芸術知られている他のメソッドを介して蛍光ラベル、ゴールドラベル酵素ラベルから成る群から選択される検出可能な部位にリンクされます。さまざまな種類のセンサーは、特に限定されず、目的に応じて適切に選択することができます。例その放射性ラベル、量子ドットのラベル、タンパク質ラベルなどが含まれます[0125いくつかの側面でセンシングユニットを形成する当該バインディングパートナーへの試薬に共役前記結合ペア形成共役結合パートナーと複雑な検出可能なバインディング。バインディングの組み合わせのいずれかに基づいて可能性がありますいずれのstreptavidinbiotinから成る群から選択されるバインディングの組み合わせであります。アビジンビオチン葉酸酸葉酸結合タンパク質シアル酸、炭水化物、または糖タンパク質レクチンオリゴまたはポリdAoligoまたはポリdTオリゴまたはポリdColigoまたはポリdGフェニルボロン酸サリチルヒドロキサム酸アルデヒドとケトン基:hydrazidessh基部位マレイミドアミノ酸の鎖Nヒドロキシスクシンイミドエステル重金属:チオールIgGのFc部分蛋白質A蛋白質Gタンパク質プロティンdigoxigeninantiジゴキシゲニン5bromodeoxyuridineantiブロモデオキシウリジンdinitrophenyhantiジニトロフェニルアミンフルオレセインisothiocyanateantiフルオレセインイソチオシアネートN2acetylaminofluoreneantiN2acetylaminofluorene2acetylamino7iodofluoreneantiN2acetylamino7iodofluorene。0126特定の面でラベルをfluorphoreしています。いくつかの側面で、fluorophoreフルオレセイン、ローダミン、クマリン、resorufin、キサンテン系、シアニンピレンフタロシアニン、phycobiliproteinから成る群から選択されるアレクサ、Cy3、Cy5squarene染料、エネルギー転送染料とその誘導体の結果の組み合わせ。Alexaの蛍光染料は、Alexaフルアー647、Alexaフルアー546Alexaフルアー532から成る群から選択可能性があります。いくつかの実施形態では、fluorophoreから成る群から選択されるBODIPYマレイミド、iodoacetamides、メチルブロマイドAlexaフルアーマレイミドフルオレセイン5と6異性マレイミド類とメチルブロマイドオレゴンの緑イソチオシアネートおよびマレイミドtetramethylrhodamine56異性iodoacetamidesおよびマレイミドローダミン赤マレイミドテキサス赤bromoacetamidesおよびマレイミドpyridyloxazoleマレイミドbenzoxadiazole誘導体NBDハロゲン化iodoacetamidesSBDを含むルシファー黄色ヨードアセトアミドスチルベンiodoacetamidesおよびマレイミドクマリンマレイミドとiodoacetamides、すなわち腫瘍、IDCC、その他ナフタレン誘導体、すなわち、acrylodan、badan、iaans、MIANS、IAEDANS、およびダンシルアジリジンdapoxyl誘導体、すなわちdapoxylスルホンアミドピレンマレイミド類とiodoacetyl誘導体モノーブロムとmonochlorobimanes。0127メソッドまたはセンサユニットSからの信号を検出するための手段特に限定されるものではないと、目的に応じて適切に選択することができます。信号とき発光、焼入れ等、たとえば、検知する光検出器、カメラ、等によって。[0128発光部分と焼入の部分の組み合わせは、特に限定されるものではないと目的に応じて適切に選択することができます。たとえば、これらの蛍光共鳴エネルギー移動技術として知られてなどを適当に採用できます。[0129発光部分それ排出を生成することができ、目的に応じて適切に選択できる限り、特に限定されません。例並びに蛍光物質、化学発光物質電気化学発光物質等を含むものがあります。またはそれらのこれらの物質の形成します。これらは単独で使用することがあります。または2つ以上の組み合わせで使用される可能性があります。なかでも焼入の部分が存在している場合発光部分に隣接して、それらの発光消光の部分のアクションによって焼入れですが望ましい、蛍光物質その視認性が優れているし、検出が簡単だことより好ましいです。蛍光物質は、特に限定されるものではないと目的に応じて適切に選択することができます。その例には、アントラセン、フルオレセイン、フルオレセイン芥子FITCrhodaminesテトラメチルローダミンとsulforhodamine、ダンシル塩化テキサス赤、アル350、indocarbocyanineなどのようながあります。焼入部分発光部分に隣接し、焼入の部分を適切に選択できる発光部分のタイプ等によるととき発光部分の放出を癒すことができる場合[0130焼入の部分は特に制限されません。例及び消光物質を含むものがあります。またはそれらの消光物質形成します。焼入の物質は、特に限定されないし、目的に応じて適切に選択することができます。蛍光体の発光部分が形成されると、例消光物質の光とのような蛍光物質を発するとき放出されるエネルギーを吸収物質があります。適切な例には蛍光共鳴エネルギー移動発光物質間許可する物質が含まれます。具体的な例にはtetramethylrhodamine芥子TRITC、dimethylaminobenzenesulfonylDABSYL、金ナノ粒子ブラックホールクェンチャーのようながあります。0131認識ユニット結合です、その発光部分と焼入の部分には、センサーに共役です。焼入の部分が存在するときに隣接する発光部分焼入れ部分発光el部分認識ユニットバインドターゲットNAに前に、のすなわち、癒すことができます。認識の単位NAターゲットにバインド後、焼入部分標的核酸から切り離されます。この結果、焼入部分焼入れの部分のアクションの損失と排出ガスを生成する発光部分をできるように、発光部分から離れて存在します。[0132リンカーユニットは特に制限はありません、発明の効果を損なわない限り、適切に選択することができます。たとえば、水溶性リンカーエチレングリコールリンカーなどを使用できます。水溶性のリンカーの長さを適切な長さに決定できます。0133の1つの側面、テストするインフルエンザウイルスのサンプルまたはRLS複合固体表面に配列として固定化です。固体の表面は、ラングミュアブロジェット膜、ガラス、ゲルマニウム、シリコン、テトラフルオロエチレン、ポリスチレン、砒化ガリウムリン化ガリウム、シリコン酸化膜、窒化ケイ素とこれらの組み合わせから成る群から選択可能性があります。固体表面はいずれ、マイクロウェルまたはマイクロタイタープレートまたは料理、シリコンチップ、スライドガラス、ビーズ、微粒子、映画または膜、ボトル、料理、スライド、しみが付く素材、フィルター、繊維、不織布の繊維、形ポリマー、粒子、ディップスティック、試験管、チップとマイクロチップから成る群から選択されることがあります。01341つの実施形態では、インフルエンザウイルスおよびまたはウイルス粒子の炭水化物受容体には、共役または糖タンパク質マウスグリコホリンα-酸性糖タンパクa2マクログロブリン、オボムコイド、どの炭水化物受容体結合はウイルスまたはウイルス粒子のヘマグルチニンコンポーネントにそれらの組み合わせのような組成に位置される天然または合成オリゴからなる群から選択された少なくとも1種類が含まれているサポートにバインドされます。特に、インフルエンザウイルスおよびまたはウイルス粒子の既知のすべてを含む鳥インフルエンザAIはタミフル登録商標に通常敏感なサブタイプをできますが検出されました。メソッドは、インフルエンザやタミフルに耐性のある高病原性のバリアントを含むウイルス粒子の検出に適しています。本発明は、特にガスクロマトグラフィーによる紙または膜であるサポートを実行できます。そのような材料は、熟練した人に知られています。本発明によると共有結合を添付または炭水化物受容体支援に物理的に吸着することが可能です。を有する特定の結合分子の結合能を決定するオプションリンカーセンシングユニットS。本発明の結合分子のいくつかの実施形態の[0138例です。BM1:ザナミビルトリアゾールリンカービオチン0139トリアゾールグループを含むリンカークリック化学を使用して、リンカーで接続します。また、その他蛍光エンティティAlexa染料や量子ドットなど使用できます。BM3ザナミビルエチレングリコールリンカービオチン0141エチレングリコールリンカーの長さxからチューニングできます。胆4:ザナミビルエチレングリコールリンカーフルオレセインBM5Tamiphosphorグアニジンリンカービオチン0142Tamiphosphorグアニジンインフルエンザウイルスのタミフル敏感とタミフル耐性の菌株をバインドします。Tamiphosphorグアニジンモノエステルアンモニウム塩などの塩の形ですることができます。脂肪族鎖16炭素を持つことができます、リンカーで。また、脂肪族鎖例3に示すようエチレングリコール鎖によって置き換えることができます。BM6TamiphosphorグアニジンエチレングリコールリンカーフルオレセインBM7PhosphaZanamivirトリアゾールリンカービオチン0143PhosphaZanamivirなど、アンモニウム塩の形ですることができます。BM8:PhosphaZanamivirエチレングリコールリンカーフルオレセイン0144PhosphaZanamivirアンモニウム塩などの塩の形ですることができます。BM9PhosphaZanamivirモノエステルエチレングリコールリンカービオチン0145エチレングリコールリンカーの長さ調整できますからxx14。BM10PhosphaZanamivirモノエステルエチレングリコールリンカーフルオレセイン0146エチレングリコールリンカーの長さxからすることができます。0147インフルエンザNA結合分子のRLSの一般的な構造の他の手本ケールRRetal午前化学工学会誌2008年、130、81698171で開示されているMckimmbreschkinJLetalしているAngewchemint編2003年42、31183121Luは、cpいるAngewのetアル。Chemint編2005年4468886892木村康etal四面体Lett。2009年、50、32053208。0148初めての本の開示は、NAバインディング能力構造RLSの分子のインフルエンザウイルスタミフル耐性のバージョンを検出するために使用できることを明らかにします。競争力のあるバインディングNAのオセルタミビルOCとRLS型結合分子インフルエンザそれらを効果的に結合する0149Aビオチン共役ザナミビルZBを調製しました。オセルタミビルの存在下でザナミビルバインディングのためのライバルとして、OC感受性決定でした。OCバインディング競争の試金はOC耐性h1n1ウイルスの分離株2008年からの劇的な増加とOC耐性のパンデミック2009年の外観確認H11台湾。バインドの競争アッセイによる抵抗評価プロトタイプポイントオブケアテストOC感受性評価のための開発に使用されました。RABC測定原理は、高スループットの調査と病原菌の薬剤感受性のクイック診断に一般的に適用されるかもしれない。0150A共役ビオチンザナミビルZBは、この研究のために図1、例を調製しました。ZBザナミビル多くの削減のノイラミニダーゼ阻害せず誘導体化することができます7OH位置するリンカーを介してビオチンの活用によってなされたTホンダetalBioorg。MedchemLett。12、1925年WHWenetalJMedchem5249032009。ZBノイラミニダーゼに対するIC50の値は77をことが判明したnM、ザナミビルのより高い。ZBバインディングインフルエンザノイラミニダーゼするノイラミニダーゼ導入細胞図4を用いた実証された、インフルエンザ感染、細胞、インフルエンザウイルス274Hインフルエンザウイルスの測定価とよく10の範囲で示されたこと3105PFU。バインドの約3残留ZB高価274HウイルスサンプルのOCの競争に気づいた。対照的に、ZBバインディングによって競合するOCを有意に阻害同じ価でOC耐性274YWSNウイルスでは観察されなかった。0152同じ観測を使用して変換し、インフルエンザ感染細胞図1114を示した。我々はこのアッセイ抵抗評価競争のバインド、またはRABCによって短い名前。またRABCアッセイの混合集団10耐性内容より大きいOC耐274Y突然変異体の検出できることを示した。[0153137台湾季節H11臨床分離株の合計は、2005年2009OC感受率用RABCアッセイによって照会された年で収集。ウイルスのサンプルされた反HlNlコーティングのマイクロプレートウェルで固定化し、いずれか30を使用してバインドをテストnMZBまたは30nMZBプラス150nMOCで重複の試金。5残留ZBバインディングとしてカットオフOC感受性測定用使用されました。すべての季節H1N1菌テストは2008年前に図8aを収集または図8b2008年初頭OC敏感だったRABCのアッセイを示唆しました。2008年半ばまでは、OC耐性h1n1ウイルスは台湾図8b孤立したないです。同様に、季節のH1N12009年に収集された50のうち48OC耐性としてゴールしました。またしたパンデミック2009H1N1菌株台湾でのOC感受性を調べた。図8示しています1を分離1と菌株57は、OCの感受性およびOC耐性ウイルス、それぞれ。RABCアッセイ7系統のブラインドで実施し、結果は後でそのOCの感受性とシーケンスの結果と一致するように示されていた。RABCアッセイを用いた感受性予測を評価するには、彼らノイラミニダーゼシーケンスを分析する60菌株図8ACで記述されている季節のH1N1サンプルがランダムに選ばれました。OC機密としてRABCアッセイによって予測したすべてのサンプルはそれらのOC耐性があるtyrosinesそれらの対応する残留274であると予測しながらのヒスチジンがあります。抵抗性個体群進化の存在の可能性を追求するには、それらのサンプルと35のよく見残留ZBバインディング値取った。いくつかの隔離されたウイルスのプラクこれらのサンプルからの分析は、OC耐性ウイルスによるバインドまたはシーケンス解析を識別できませんでした。0154表2すべての台湾H1N1の臨床分離株本研究ではRABCアッセイでのOC感受性の地位の決定に使用を示します。60ウイルス分離株はアミノ酸274図8の結果によると。いくつかの分離株はAA274の解析による確認のためランダムされたおよび膜200902020R200809020S彼200901051R200811548R200901022R200805866RTyr200900516R200805860RTyr200900513R200805859RTyr200900512R200805858RTyr200901524RTyr200805857RTyr200900521R200811547R200900519R200800286RTyr200900518R200805855RTyr200904512R200802901R200900511R200800279RTyr200903518R200800839R200903019Tyr200800275R200903005RTyr200808451RTyr200990010R200800273R200902530RTyr200809159RTyr200902027RTyr200809042RTyrR200902031R200808949RTyr200901026RTyr200808885S彼200904511RTyr200805853RTyr200901518R200808416S彼200901516R200800258S彼200904017R200810103RTyrR200903522RTyr200806758RTyr200903507R200802885RTyr200903003RTyr200806723S彼200903002RTyr200810099RTyr200902022R200810095S彼200901043R200808319S彼200903006R200802832RTyrR200900024RTyr200800233S彼S200904010RTyr200805506S彼S200900515RTyr200807903S200900514R200807895RR2009:00510R200807860RTyrR200904503RTyr200802808S彼200901514R200805815S彼200901021S彼2008年03293S200902013R200809169S200904007R200804240S200902010RTyr200803135S200901522S彼2008年02612S200803020S彼S200804226S200900009R200804063S200900008RTyr200804169S200811526RTyr200705601S200800846R200702774S200800842R200702578S200809219R200705222S200800843R200704656S200802904R200702820S200809202R200702523S200805878RTyr200702864S200809201R200703700S200806020S彼S200702782S200805879RTyr200605288S200802906R200606542S200808884S彼2006年00061S200809200RTyr200605751S200809199R200600010S200802415RTyr200604130S200800841R200505524S200810128RTyr200510393S200802418R200505515s200805877RTyr200503468s200800302RはCDCのウイルスの名前bOC感受性ケアアッセイのポイント[0155開示本プロトタイプアッセイインフルエンザウイルスのOC感受性状態の視覚的評価用膜です。Fig9Aは、OC耐性274YWSNの染色は同じ競争に耐性であった一方のOCの影響を受けHlNlWSNZBによって染色OC競争によってがブロックされたことを示しています。我々膜の汚損季節のいくつかのOC感受性のステータスを確認するために使用し、パンデミックのHlNl分離株。機密のZBバインディングはHlNl、H3N2、h5n1型、および直接、膜固定化されたインフルエンザBインフルエンザウイルスも示されました。プロトタイプRABCに基づいて染色アッセイはクイックで、楽器に検出を必要ありません。それとしてケアのポイントアッセイは、医師のオフィスで季節のHlNlまたはパンデミックHlNl感染症治療選択肢のタイムリーな決定を使用できます。さらに、テストは他のほとんどの呼吸器感染性病原体はそれらを持たないため、対他の呼吸器感染症のインフルエンザウイルスを区別するために使用できます。0156、RABCのアッセイ、シンプルで堅牢な方法であり、異なるインフルエンザウイルスや感染細胞アッセイプラットフォームのさまざまなを使用して実証されています。測定原理は薬剤感受性評価のための他の病原体のターゲットに適用されることができます。例0157発明、模範的な機器、装置の範囲を制限する意図がなければ、メソッドとその関連の結果、本発明の実施形態に従って以下のとおりです。タイトルまたはサブタイトルの例でない方法発明の範囲を制限する必要があります読者の便宜のために使用する可能性がありますに注意してください。また、特定の理論は提案され、ここに開示されて彼らは正しいか間違っているかどうか、任意の特定の理論や行動の計画に関係なく本発明の発明が実施されている限り、ただし、ない方法で彼らは、発明の範囲を制限する必要があります。0158すべての試薬であった市販なしで使用やさらに精製特記のない限り。すべての溶剤無水グレードは、特に明記しない限りだった。すべての非水溶液反応オーブン乾燥ガラスアルゴンのわずかな肯定的な圧力の下で特記のない限り行った。反応は磁気攪拌し、シリカゲルの薄層クロマトグラフィーによって監視されました。フラッシュクロマトグラフィー60200μιη粒子径のシリカゲル上を行った。利回りを行ないました純粋な化合物が報告されます。融点電熱メルTEMP登録商標1101D融点装置で記録し、訂正ができなかった。lH、13CNMRスペクトル分光器ブルカーアヴァンセ600を記録しました。31PNMRスペクトル分光器ブルカーアヴァンセ500を記録しました。Δ値テトラメチルシラン相対的ケミカルシフトで与えられています。結合定数JHz。内部で与えられている基準いたCDC13、MeOHi4またはD2034NMRスペクトル、CDC13またはMeOHi413CNMRスペクトルとH3P04D2031PNMRスペクトルの。分割パターンはs一重項、d、tトリプレット、qカルテット、mマルチプレット、br広いとddとして報告されます。IRスペクトルサーモニコレット380FTIR分光計で記録されました。光学回転パーキンエルマーモデル341ポラリメータに記録されました。ブルカーダルトニクススペクトロメータを用いた高解像度のESIの質量スペクトルを記録しました。例13Acetamido46diacetoxy2propyl3456tetrahydro2Hpyran。0159窒素雰囲気下では、ピリジン75mLと無水酢酸75mL中のnアセチルノイラミン酸5g、162mモルのサスペンションだった12h間室温で攪拌し、5hは100°Cで加熱します。反応混合物を室温まで冷却し、減圧下にて濃縮します。残留の茶色のガラス質油に溶解したと連続して飽和水溶液aHCC100mL水溶液1MHC1洗浄100mLとブライン。有機層、フィルタリングし、集中MgS04上を乾燥させた。茶色の残渣カラムクロマトグラフィーシリカゲルによって3対の不可分の混合物が含まれて、淡い黄色泡として、余裕がないために精製されたδ626、562、543、529527522、517、511507503、436、431、408398374、217215215213211、210051Hs、209、208、207、204、2017、2013200200198、198196188、187051Hs。例2ジエチルpropyl3456tetrahydro2Hpyran2ylホスホン酸。01603215g、452モルとジエチルトリメチルシリル亜リン酸311mL、1365モル無水でのアノマーの混合物34トリメチルシリルtrifluoromethylsulfonateTMSOTf、123mL、678mモルは0°Cでの扱われました。30分後、混合物だった部屋の温度に暖められたし、24hを攪拌します。混合物は、氷の水20mLに注がれ、水層。抽出されました。複合抽出順次飽和水溶液中のaHC03で洗浄された50mLとブラインMgS04以上、乾燥フィルターし、集中。残渣は、シリカのゲル4の余裕がないのは、およびβ対23混合物が含まれて、無色シロップとして155g62、カラムクロマトグラフィーにより精製したホスホン酸4のアノマーの混合物で使用されていた、次のステップでさらに分離することがなく。純粋な分析試料をおよびβ対シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより得られました。0161アノマーの4aC22H36O13P無色の泡。TLCRf025D2039434のNMRδ530、5241H、d、NHHz99J518、498、440、422409397374、362、227、209、205、20220119819218713513113CNMRδ17091705C、1703、17021701、790、718、716CH、dは、3JCP209Hz、710、679、634、628、622、496、313231CH3、2x、165CH3、d、3Jcp54Hzポックオリオン2CH3、163CH3、d、3JCP54Hzポックオリオン2CH331PNMR51848人事管理システムcalcdC22H35NO13p5521846、発見mz55219210162Βアノマー4βC22H36NO13P無色の泡。TLCRf028D20401δ5451H、d、NHHz101J535、5321H、td、J15048Hz、5215184451H、d、J100Hz433、430、419413235231211、208、2017、2011209203188、134133δ17081706C、1702、17011698、740、697695679、677、630、620、490、295、162CH3207CH3、2x、209CH3210CH3231CH3、dは、3JCP51Hz、POCH2CH3、16331PNMR例3ジエチルpropyl456trihydropyran2ylホスホン酸0163アノマー混合物ホスホン酸4のとNブロモスクシンイミド無水CH2CI2で20mLから100Wタングステンランプ照射下における逆流に熱していた。反応の進行状況を監視します。完了化合物の上に準備ブロモ50°Cで2時間撹拌しました。ソリューションは、減圧下にて濃縮され、茶色の残渣シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる共役ホスホン酸5無色泡として余裕がないために精製されました。C22H34NO13PTLCRf028D20438※HNMRδ574、5541H、d、NHHz82J542540526、439434429417409209、205、204191135131δ17081704C、1703、1698、1697、1478、1130、765、699、684、672632、630、618、464、230CH3、2078CH3、2073CH3、2063CH3、2060CH3、1616CH3、d、3JCP48Hzポックオリオン2CH31612CH3、d、3Jcp48Hzポックオリオン2CH331PNMR例4ジエチルpropyl2methyl3a7adihydroHpyrano白鳥6イルホスホン酸0165ホスホン酸のソリューションには、5酢酸と無水酢酸の混合物でコーンと扱われました。H2だから4。室温、寒さ0°Cに注いだ48h飽和水溶液NaHC03混合物が攪拌されたpH9とEtOAc30mL5xを抽出する前に30分間攪拌。複合の抽出物は、MgS04上を乾燥、フィルターし、減圧下にて濃縮しました。残油シリカゲル上カラムクロマトグラフィーにより精製したとして6を買う余裕。C20H3011PTLCRf030D20116XHNMRδ620、558、538、471、440、419、418407、393、211、204、203、198、134132δ1705、1697、1694、1672、1119、761、712、696、688、631、629、618、616、207CH3、206CH3、205CH3、162、161、140CH3NCCH331PNMRδ6375C20H29NOiiPのための人事管理システムcalcd発見4901478mlz4901374MH例5ジエチルpropyl456trihydropyran2ylホスホン酸0166の溶液オキサゾリン6393mg、08mモルにするBuOHazidotrimethylsilane80°C×24hに扱われました。ソリューションは、飽和水溶液NaHC03に注がれて、EtOAc30mL3xを抽出されました。複合の抽出物は、MgS04上を乾燥、フィルタリングし、アジドフェニル化合物7次のステップで使用することは実質的に純粋された無色のシロップとして支払うことに集中していた。シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより分析試料が得られました。C2ああ34OnPTLC江藤Acアセトン91Rf030D2082734のNMRδ575、573、526453450436、4174085H、m367、134199、202205210132δ17081705C、1701、16971477、1124、759、697、673、635、633、619、578485、16272071CH3、2077CH3208CH3232CH3CH3d、3JCP57Hzポックオリオン2CH3、1623CH3d、3JCP57Hzポックオリオン2CH3例6ジエチル5フェニルアセトアミド4グアニジノ6propyl456trihydropyran2ylホスホン酸。0167Aソリューションアジ化7350mg、071モルエタノール25mLでLindlar触媒の水素雰囲気下で水素化されました。混合物だった5hを攪拌、セライトのパッドを介してフィルタリングおよびエタノールの洗浄します。濾液は減圧下で無色の泡2methylthiopseudourea247mg、085mモルとEtで治療3N230μ■、17mモル。混合物が0°Cに冷却され、HgCl2231mg、085mモルが徐々に追加されました。懸濁液だった部屋の温度に暖め、12hを攪拌します。その後混合物だったEtOAcで希釈し、セライトのパッドを介してフィルタリングします。濾液を濃縮し、フラッシュのカラムクロマトグラフィグアニジン8442mg、83の収率無色泡として支払うことによって浄化します。TLCEtOAcRf=045D20185XHNMRδ11328481H、d、J85Hz6121H、d、J85Hz571、5351H、d、J66Hz523、510506437、425420412405209、206、202、185、146、145、136131δ17101705C、1701、16981627、1572、15261474、1142、701674634、490、481、282、280231CH3、209CH3、208CH3、207CH3、1629CH3、ポックオリオン2CH31625propyl456trihydropyran2ylホスホン酸la。0168Aの溶液ホスホン酸ジエチル780mg、015mモルに無水CH2C124mLを0°Cでbromotrimethylsilane012mL、087モル扱われました。攪拌0°Cで24時間後MeOHを添加し、混合物は、減圧下にて濃縮しました。残渣だった無水メタノール5mLを解散し、ナトリウムメトキシド54MソリューションMeOH、09mL、486モルを施した。室温で1時間攪拌した後、混合物はダウエックス50WX8を通じてフィルターされたと、減圧下にて濃縮します。残渣だったMeOH5mLを解散し、水素化を受ける1atmLindlarの室温触媒の存在下で。3H後、混合物だったセライトのパッドを介してフィルタリングし、メタノールですすぎ。濾液を濃縮し残留固体Et20で洗浄されたホスホン酸ラを買う余裕。例8:5Acetamido4guanidino6propyl456trihydropyran2ylホスホン酸。0169Aソリューションのホスホン酸ジエチル8130mg、017mモルの無水とbromotrimethylsilane0の°Cで扱われた、0°Cで24時間反応混合物を攪拌しました。MeOH活発な攪拌下で追加されました。として無水メタノール5mLのソリューションは54M溶液ナトリウムメトキシドメタノール1mL54mモルを30分後、減圧と残渣の下にソリューションを蒸発させた。室温で1時間攪拌した後、ソリューションを通じてダウエックス50WX8フィルターされたとlyophilisationを受けます。残留の淡い黄色の固体Et20で洗われましたpropyl456trihydropyran2ylホスホン酸エチレングリコールモノエチルエステル。0170アルゴンの雰囲気下では、PMe314mL、THFに14メートルの溶液の溶液アジ化7148mg、028mモルに無水THF5mLは0°Cでは表面に追加されました室温19hEtsで混合物を攪拌したと340を追加し、混合物は、別の30分間攪拌しました。混合物を減圧下にて濃縮し、アミン製品112mg、79の収率を買う余裕シリカゲルのカラムクロマトグラフィMeOHチャンネル2Ci2、6941090にによって浄化します。0171だったアミン製品110mg、022mモルを解散江藤とNaOEtのソリューションとし、真空中でホスホン酸モノエステルlc50mg、60の収率を与えるために集中しました。Ci2H23N208pXHNMR、438133、418417、398393、391386、369364207、126、1043、754、696、676、629、622、499458221158人事管理システムcalcdCi2H22208p3531発見108mlz3531198MHf。例10:5Acetamido4guanidino6propyl456trihydropyran2ylホスホン酸エチレングリコールモノエチルエステル0172化合物852mg、007モルだった溶解江藤とNaOEtのソリューションとし、真空中でホスホン酸モノエステルIdを与えるために集中。dsHWsPHNMR、4421404351H、d、J106Hz421397393、390385、367362201、125、1082、758、d、3JCP86Hz、697、679、629、621、509478、219、158。例11:合成ザナミビルビオチン共役0173ザナミビルビオチン共役9の合成図3に示します。アジ化併合ビオチン誘導体11はビオチン5アジドフェニルlpentylamineトリエチルアミンおよびベンゾトリアゾール1イルの存在下での凝縮によって準備されたoxytripyrrolidinophosphoniumヘキサフルオロリン酸。jwリー、sI淳、金圭2709年四面体Lett42。その一方で、既知の手順に従ってシアル酸から作製した12の炭酸ザナミビルニトロフェニルLYing、JGervayハーグによる6、1857年余裕がpropargylamineと結合されていました、アルキニルヒンジとザナミビル微分13。B祐李etal四面体Lett。47、5105アジ化併合ビオチン誘導体11と、アルキニル間ザナミビルデリバティブ13CH2CI2H2O15dibromopentaneNaN3との置換反応から調製した溶液を5を攪拌した精力的に水溶液HC1EtOAcEt20で室温で24h5アジドフェニルlpentylaminesl160g59を与えるために。jwリー、sI淳金圭、四面体Lett42、2709年ビオチンの0175Aサンプル5アジドフェニルlpentylamineで1186mg069mモルベンゾトリアゾール1イルを攪拌したoxytripyrrolidinophosphoniumヘキサフルオロリン酸を与えること。C15H26N602S無色固体、mp121122°Ca19876c00275、MeOHIRvmax32972924年、2100年、1698年1647cm11HNMR400MHz、CDC1357341H、t、J52Hz、640、634430427412409329310305303298280、2561H、d、J124Hz20316412213C氏51715、1624、610、591、554、506、398、381、352287、283、281、280、254、236ESIHRMS計算Ci5H27602のs3551916が見つかりました:メートル■3551913MH例13:ザナミビルビオチン共役9。0176Aソリューション188mg、028mモルアジ化併合ビオチン誘導体11100mg、028molとアルキニルヒンジザナミビルデリバティブ13のCUSO45H2Oを含むザナミビルビオチン共役を買う余裕。C45H71N11O14STLCCH2Cl2MeOH91Rf029無色固体、mp157158°Ca22D166c05、CH2CI2IRvmaxニート2930年1727年1689年16431612cm1XHNMR400MHz、CDCI351137、820、8041H、d、J92Hz7957767706401時間s、633、5811H、d、J20Hz5171H、d、J56Hz479t、J76Hz1H、4361H、d、J116Hz430421、415410、404397386、371310305m1H、300295280、2561H、d、J124Hz202、180177174164119145、1399Hs、12513CNMRδ1730、1707、1637、1628、1618、1567、1556、1524、1454、1446、1229、1101、1086、836、796、775、772751699、657、619、602、558、535、525、500、495、474、406、389、370、358、296、286、283、281、265、256、255、235、232ESIHRMScalcdC45H72N11O14Sを:発見10224981mz10224986MH0177保護されたザナミビルビオチン共役34mg、0033モルのサンプルを水酸化ナトリウム水溶液とMeOH1mL15分間室温での扱われました。混合物はダウエックス50Wx8を中和した、フィルタリング、および減圧下にて濃縮します。残渣は、トリフルオロ酢酸CH2CI2で攪拌した15h間室温で。混合物は、減圧下蒸発させたし、H20は室温で追加されました。10分間攪拌した後、混合物を減圧下にて濃縮し、セファデックス10列クロマトグラフィーによって精製希望ザナミビルビオチン誘導体9を与えること。C31H49N11O10S無色固体、mp170172°CIRvmax33552937、1675cm134NMR400MHz、CDC13δ7925964981H、d、J84Hz461457m2H、4474394334294164064043651H、d、J96Hz347、331320310298、2771H、d、J132Hz222、197193190I73151、13812213CNMRδ1764、1738、1653、16491629、1570、1565、1241、1165、1091、759、702、690、626、624、605、557、513、508、474、400、392、360、358、294、293282、281、280、255、233、222ESIHRMS計算C3の1H50N11O10s7683463が見つかりました:メートル■7683458MH化合物の例14140178炭酸溶液12に025gだ033mモル、4ジメチルアミノピリジンピリジンで、アミンH2N3CH2CH2N3とEtOAcを抽出します。有機層塩水30mLを洗ったし、飽和NaHC03、MgS04以上を乾燥させ、減圧下にて濃縮します。残渣カラムクロマトグラフィーにより精製したカーバメート系14δ1141845、608、591、545、526、522、441、438、410414381360377、356357341、337、192、150、141I3713CNMRΔ1706、1630、1619、1569、1556、1527、1452、1321、1320、13191285、1284、10981089、836、796、774、745、706、705、702、700、697、660、604、524、506、487、483、410、282、280、266、254、231ESIHRMScalcdC35H59N8015を:発見8314100mz8314134MH例15:ザナミビルFITCconugate15。0179アジ化ソリューションに14江藤1mLのPd29mg、0058モル追加されました。混合物だった15h室温下のH2、雰囲気の中で攪拌し、セライトのパッドを通じてメタノールで溶出によってフィルタリングします。混合物は、アミンの製品δ1136。840604、587517522、432439、3984103753553723312892731H、d、J7Hz、188、145、1361320180N2の雰囲気下では、蛍光チオシアン酸化合物の上に準備アミンのソリューションに追加されました。混合物の室温で4hを攪拌、減圧下にて濃縮およびクロマトグラフィーによって精製共役製品50mg、52を与えるために。C56H71N7O20S34のNMRδ7807567592Hm7481H、t、J8Hz7171H、d、J8Hz7091H、d、J8Hz663、6562H、d、J9Hz6486515861H、d、J8Hz430412423、407410、396406、344358、316324182140142132私は30。0181Aソリューション上記準備FITC共役47mg、0039モルMeOHでのNaOH1M水溶液の扱われました。混合物でダウエックス50wを中和室温で1時間攪拌した8、およびフィルター処理されました。溶存だった濃度後の残渣にCH2CI2及びTFA。混合物の室温で30分間攪拌、減圧下にて濃縮およびセファデックス10列クロマトグラフィーによって精製目的のザナミビルFITC共役17を与えること。C47H5610O13S黄色の固体、mp112°CXHNMRδ8131H、d、J7Hz763767、7557581H、d、J7Hzの689454brs1H431138417、400358368、356、342347170172、118136ESIHRMScalcdC47H57N10O13s10013827見つかりました:mlz10013768MHTamiphosphorビオチン共役の例17合成。0184図4tamiphosphorビオチン共役24の合成です。ヨウ化物化合物の18は、以前に報告された手順に従って準備されました。JJシエetalしているAngewChemint編2008年、47、5788。Di4but3ynlylジアルキル亜リン酸17PCI32つの同等の4but3ynlolとの置換反応によって準備されました。Phosphonylation亜リン酸19と18のPd4ホスホン酸20で64の収率を買う余裕の触媒作用によって達成されました。Bocグループの除去後、アミン中級トリメチルシリルグループKF化合物21を与えるためとの除去に続いてNNdiBocNtrifluoromethanesulfonylguanidineと扱われました。5Azidopentanamine島、治療が続きますと21のクリック反応phophonateモノエステル22を与えられます。20ビオチン大須23とのカップリング反応希望tamiphosphorビオチンの共役保護Boc基で24を除去した後に結実。例1820化合物します。0185ヨウ素1819亜リン酸の混合物85mg、026モルとdiisopropylethylamine100mg、064mモル無水トルエン21mLでいた10分間窒素をバブリングによって脱し、窒素雰囲気下で丸底フラスコ内に置かれたtetrakispalladium10mg、86μιηο■に追加。結果のソリューションでした徐々に90°Cまで加熱し、12hの温度を維持します。反応混合物セライトのパッドを通して濾過し、濾液シリカゲルカラムフラッシュクロマトグラフィーによって精製された黄色の泡を買う余裕。C32H57W9P黄色の油TLCEtOAcヘキサン、11Rf029XHNMR400MHz、CDC13δ6591H、d、J220Hz5851H、d、J92Hz5041H、d、J92Hz3974115H、m389375381、329332、257261259、2001431511399Hs、083088、00702113CNMRδ1702、1556、1421、12721012、870、822、797、760、637、548、493、491、314、286、264、259、237、226、225、101、990531PNMRδ180。化合物の例19210186Aの溶液ホスホン酸2092mg、014mモルに無水CH2CI2~0°Cを氷浴中で冷却された、トリフルオロ酢酸016mL、21mモルを追加しました。混合物を室温で1時間攪拌し減圧下にて濃縮し、無水CH2のC12。有機層だったMgSC上を乾燥、フィルター、濃縮、シリカゲルカラムフラッシュクロマトグラフィーによって精製グアニジン誘導体を生成します。0187グアニジンMeOHHで化合物の溶液は20KFとH20。有機層だったMgS04上を乾燥、フィルター、濃縮、シリカゲルカラムフラッシュクロマトグラフィーによって精製複合21をもたらす。C32H51N4O9P無色の油TLCEtOAcヘキサン、11Rf024aD222747IRvmax34502923年2018年、1925年、1870年、1720年、1626年1342年、1249年、1203XHNMR400MHz、CDC13δ11348561H、d、J80Hz6661H、d、J224Hz6281H、d、J92Hz434440、406416、396404、329333、265271、259261、226240203、19010017808309031PNMRδ180C32H52N4O9p6673472、発見のための人事管理システムcalcdmz6673450MH例20Tamiphosphorビオチン共役2401885アジドフェニルlpentanamineアジ化物46mg、036mモルとBuOHH20の化合物の19120mg、018mモルの溶液にcopperリン六フッ化。混合物の12hを室温で撹拌、減圧下で濃縮し、精製、MeOHH201991の溶出とRP18逆相カラムによって。トリアゾール化合物の原油製品10mL14ジオキサンの溶解し、1MKOHの溶出と精製6391H、d、J196Hz490438429432400377390m2H、340348、3153263002912952H、m、2711H、d、J128Hz253262223190203、12917908609731PNMRδ136HRMS負モードcalcdC33H56N10O7PSを:発見7683723mz7683723MH化合物の例21250189のソリューションにdiアミン012g、049mモルの無水DMF中ビオチン012g、041モルを追加しましたPyBOP025g、049mモルとEt3N023mL、164mモル。混合物を室温下アルゴン、22hの攪拌し、減圧下にて濃縮します。残渣カラムクロマトグラフィーにより精製したδ448dd、J7、5Hz、1H、429、325、320、289dd、J12、5Hz、1H、271、229150167m8H、143144m2H、132138m、4H13CNMRδ比1724、1632、618601553、512、470、462、456、405、325、287、286、283、273、264、251、241。C20H369行なわれたO2SのESIHRMScalcd:発見、4662707mlz4662703MH例22Dizanamivirビオチンconugate260190の溶液ビオチンdiazide2536mg、0075ミリモルにするBuOHとH20CuS045H20アスコルビン酸ナトリウムとTBTAを追加されました。5Minのための混合物を攪拌したし、アルキニルヒンジザナミビルデリバティブ1301g、015mモルを追加しました。混合室で12時間攪拌しました。CH2CI2を抽出温度20mLとMgS04以上、乾燥させ、下したのH2020mL減圧します。残渣カラムクロマトグラフィーにより精製したδ122130、162s4H、179s、2H、189s3H、194s3H、223274、288310316m4H、323375、398406415428443516、523535s1H、570s1H、586、604、654663779s2H、8421138。0191MeOHで上記に準備カップリング製品60mg、0033モル攪拌したNaOH1M水溶液の中和の結果50Wx8と室温で1hをH、およびフィルター処理されました。溶存だった濃度後の残渣にCH2CI2及びTFA。混合物の室温で1時間攪拌、減圧下にて濃縮およびセファデックス10列クロマトグラフィーによって精製dizanamivirビオチン共役26δ129133145、156161m、8H、175brs、1H、184187m1H197204、236273、294、378s4H、400419437145m、11H455brs4H、468、591s2H、757s1H、805s、2HESIHRMScalcdcHNwOisS発見12925800:mlz12925916MH例23細胞、ウイルス、および生物試薬。0192両方のMDCK2つのインフルエンザウイルスおよび293t細胞A愛知268とB李40調製しから、A広報81934H1N1、A台湾34462002インフルエンザB2004台湾7064分離された博士新RuShihラボとはブリスベン102007された博士JiaTsrongから1月のラボゲノミクス研究センター、アカデミアシニカ台湾。オセルタミビル耐性WSN変異株6通路OCオセルタミビル濃度を徐々に増加MDCK細胞で選ばれました。このインフルエンザの変異も1μΜOCの存在下で成長してシーケンス分析によって確認そのNA遺伝子で単一H274Y変異を運ぶ。臨床H11分離株その他台湾インフルエンザコレクションセンターセンター疾病管理台湾台北得られた、表1で説明。7SOIV株もセンターから疾病管理台北、台湾を得られたし、1A台湾T19412009、2、3A台湾T13392009、4A、台湾6662、2009、5としてコード化されました。A台湾66632009、A台湾77172009、6と7A、台湾7855、2009。インフルエンザNP抗体と蛍光標識二次抗体ケミコン株式会社野生型ノイラミニダーゼの表現のために使用します。表明ノイラミニダーゼは、バインディングを許可とラベリングZB図10を使用して主に細胞表面上に位置するが見つかりませんでした。ノイラミニダーゼcDNAOC耐性274Y変異体酵素の発現スクリーニングしました。野生型と人為のcDNAはそれぞれ274Hと274Yそれらの表現のための安定した293tセルラインを生成に使用されました。これら2つのセルに異なる比率の混合物だったZBまたはZBプラス余分なOCの孵化とAPCを装飾共役のストレプトアビジンZB流れcytometry解析によってバインドセルの人口を決定します。図11は、ZB274Hと274Y発現細胞類似のエクステントにバインドすることを示します。過剰のOCの存在下で274Y発現細胞へのZBバインドは事実上変化はなかったに対し274Hノイラミニダーゼを発現する細胞図12ZBバインディングが完全にブロックされました。これらの結果は原理実証そのZBバインディング使用できますOCに敏感なOC耐性のそれらを区別するOC競争によって。例25インフルエンザウイルスを用いたOC感受性の定量細胞を感染。0194OC阻害NA表現する細胞を用いたZBバインディング上の結果私たちのZBおよびOCインフルエンザウイルスのOC感受性を査定する濃度を定義するように求めいた。どちらのOCの影響を受けまたはOC耐性のWSNウイルス感染MDCK細胞は様々なZBおよびOC濃度を用いたOC感受性評価の可能性をテストに使用されました。図13AOC競争のインフルエンザウイルスに感染したMDCK細胞へのZBバインドを示しています。インフルエンザの感染細胞10または50nmZBを分類することによって、OC感受性のウイルスに感染するのOCで競争バインディング0510倍の濃度のラベリングZBから推論できませんでした。たとえば、影響を受けやすいOCの区別をオフにし、OC耐性WSN亜種ZBラベリング処理による治療の感染細胞で観察された30nMと競合するOC150nM図13B。0195MDCK細胞は野生型274HまたはOC耐性WSNウイルスに感染していた。1620Hr感染後に感染した細胞を扱われたどちらかと30nMZBまたは30nMZBプラス150nMのoc。結果として得られる細胞ストレプトアビジン洗浄し、蛍光顕微鏡を用いて観察FITCと、飾られていた。流れのcytometry研究所標識細胞ZBいたさらにtrypsinizedとして扱うPE共役ストレプトアビジンとの抗NP抗体を使用してラベル付けプラスDyLight649抗第2抗体の標識、両方ジャクソン抗体研究所西グローブ、PA、アメリカから購入しました。追加の洗浄後のセルはFACSCantoのBDバイオサイエンスによってサンノゼ、カリフォルニア州、米国を分析しました。多くのサンプルの分析は、感染した細胞の培養に黒96ウェル明確な底マイクロプレートを用いた高スループット法を開発した1620Hr感染後でセル30とラベル付けされたnMZBまたは30nMZBプラス150nMOC、洗浄、およびPEストレプトアビジンと扱われます。プレートはその後、IsocyteTMレーザースキャニング分子デバイス150でngあたりまあし、PBSで3bsaを用いた消されました。インフルエンザのサンプル30と扱われたnMZBまたは30nMZBプラス150nMのOC30分と被覆抗体井戸を追加。30分間インキュベーション後、マイクロウェルの作成と3bsa共役アルカリホスファターゼストレプトアビジン30再びとBSAPBSで洗浄し、発光の基板の製造元とエメラルドIITM指示にしたがって追加分と追加PBSで洗浄しました。RLUスロット吸引によって。以前1hrいずれか30と扱われたインフルエンザウイルスのサンプルnMZBまたは30nMZBプラス150nMOCは隣接スロットに吸引によって導入されました。膜3bsaをPBSを使用して、共役アルカリホスファターゼストレプトアビジンKPLゲイサーズバーグ、MD、アメリカからと、製造元の指示に従ってインキュベート消されました。3のBSA、アルカリホスファターゼ基板、Amrescoエル16PBSを使用して追加の洗浄後ソリューションAmresco株式会社ソロン、オハイオ州、米国のカラー開発を追加しました。目に見える色通常2分で開発、写真で記録されました。安定的組換えの野生型274HとOC耐性それらを表現する293t細胞の例29準備。0200ノイラミニダーゼ遺伝子のcDNAシーケンスインフルエンザからみたAハノイ304082005この遺伝子の合成バージョンを準備するために使用し、インビトロジェンNA遺伝子配列の解析によって検証されました。これらのNA遺伝子野生型とOC耐性のそれらのための過渡NA式使用されていました。彼らはまただったクロンテックマウンテンビュー、カリフォルニア州、米国のpRetroIRESGFPベクトルにpRetroNAIRESGFPとpRetroNAとしてIRESGFPそれぞれクローンします。これら2種のプラスミドとpGagPolとpVSVGを使用した組換えのレトロウイルスは293t細胞と変換に使用されました。安定したセルラインは、蛍光活性化セルソーターの95以上のGFPの表現集団による選択およびOCの感受性や耐性のそれらの合成を検証しました。0201すべての出版物と引用この仕様での特許出願を本明細書にあります。各パブリケーションごと、または特許出願具体的には、個別に参照によって組み込まれることを示されたかのように参考として組み込まれます。0202前述の発明いくつかの詳細図と理解の明快さの目的のための例の方法で記載されているが、特定変更と修正若しくは精神またはアペンドされた請求の範囲から逸脱することがなく行うことができるこの発明の教えを照らして芸術の一般的な技量の人に明らかに容易になります。