"抽出脂質を生成する方法であって、i1つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含み、前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する生物またはその一部と比較したときに、増加したレベルの1つ以上の非極性脂質を有する、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部を得るステップと、ii前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部から前記脂質を抽出し、それによって、前記抽出脂質を生成するステップと、を含む、方法。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記1つ以上の非極性脂質のレベルは、前記対応する非ヒト生物またはその一部よりも、重量基準で少なくとも0.5w/w大きい、請求項1に記載の方法。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記1つ以上の非極性脂質のレベルは、前記対応する非ヒト生物またはその一部よりも、相対基準で少なくとも1w/w大きい、請求項1または請求項2に記載の方法。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の総非極性脂質含量は、前記対応する生物またはその一部と比較して増加する、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記総非極性脂質含量は、前記対応する非ヒト生物またはその一部よりも、重量基準で少なくとも0.5w/w大きい、請求項4に記載の方法。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記総非極性脂質含量は、前記対応する非ヒト生物またはその一部よりも、相対基準で少なくとも1w/w大きい、請求項4または請求項5に記載の方法。前記トランスジェニック非ヒト生物は、植物、藻類、または酵母もしくは真菌類等の発酵に好適な生物である、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。前記植物は、ブラッシカ種、ゴシピウムヒルスツム、リナムウシタチシマム、ヘリアンサス種、カルタムスティンクトリウス、グリシネマクズ、ゼアマイス、アラビドプシスサリアナ、ソルガムバイカラー、ソルガムブルガレ、アベナサティバ、トリフォリウム種、カメリナサティバ、ミスカンサスギガンテウス、またはミスカンサスシネンシスである、請求項7に記載の方法。前記一部は、植物の種子、果実、または栄養部である、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。前記一部は、植物種子であり、前記抽出脂質は、種子油である、請求項9に記載の方法。前記種子の総含油量または総脂肪酸含量は、前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する種子よりも、重量基準で少なくとも0.5w/w~25w/w大きい、請求項10に記載の方法。前記種子は、iカノーラ植物、iiトウモロコシ植物、iiiダイズ植物、ivルピナス植物、vピーナッツ植物、viヒマワリ植物、vii綿植物、viiiベニバナ植物、またはixアマ植物、に由来する、請求項10または請求項11に記載の方法。前記カノーラ種子は、i重量基準で少なくとも45の種子油、ii対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対種子油含量、iii対応する種子よりも少なくとも10w/w大きい相対DAG含量、iv対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対TAG含量、のうちの1つ以上を含む、請求項12に記載の方法。前記トウモロコシ種子は、i重量基準で少なくとも5の種子油、ii対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対種子油含量、iii対応する種子よりも少なくとも10w/w大きい相対DAG含量、およびiv対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対TAG含量、のうちの1つ以上を含む、請求項12に記載の方法。前記ダイズ種子は、i重量基準で少なくとも20の種子油、ii対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対種子油含量、iii対応する種子よりも少なくとも10w/w大きい相対DAG含量、およびiv対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対TAG含量のうちの1つ以上を含む、請求項12に記載の方法。前記ルピナス種子は、i重量基準で少なくとも10の種子油、ii対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対種子油含量、iii対応する種子よりも少なくとも10w/w大きい相対DAG含量および、iv対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対TAG含量、のうちの1つ以上を含む、請求項12に記載の方法。前記ピーナッツ種子は、i重量基準で少なくとも50の種子油、ii対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対種子油含量、iii対応する種子よりも少なくとも10w/w大きい相対DAG含量、およびiv対応する種子よりも少なくとも5w/w大きい相対TAG含量のうちの1つ以上を含む、請求項12に記載の方法。前記植物の前記栄養部は、葉もしくは茎等の気中植物部または緑色部である、請求項9に記載の方法。前記植物の栄養部のTAG、DAG、TAGおよびDAG、またはMAG含量は、前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する植物の栄養部のTAG、DAG、TAGおよびDAG、またはMAG含量よりも、相対基準で少なくとも10w/w大きい、請求項18に記載の方法。前記抽出脂質の脂肪酸含量の少なくとも60molは、オレイン酸である、請求項1~19のいずれか1項に記載の方法。前記抽出脂質の多価不飽和脂肪酸含量は、前記対応する生物またはその一部から抽出した脂質と比較して増加する、請求項1~20のいずれか1項に記載の方法。前記抽出脂質中の多価不飽和脂肪酸のレベルは、前記対応する生物またはその一部から抽出した脂質と比較して増加し、前記多価不飽和脂肪酸は、エイコサジエン酸、アラキドン酸ARA、アルファリノレン酸ALA、ステアリドン酸SDA、エイコサトリエン酸ETE、エイコサテトラエン酸ETA、エイコサペンタエン酸EPA、ドコサペンタエン酸DPA、ドコサヘキサエン酸DHA、またはこれらの2つ以上の組み合わせである、請求項1~21のいずれか1項に記載の方法。前記1つ以上の脂質のレベルおよび/または前記総非極性脂質含量は、前記抽出脂質から得られる脂肪酸メチルエステルのガスクロマトグラフィを使用した分析によって決定可能である、請求項1~22のいずれか1項に記載の方法。前記方法は、前記トランスジェニック植物から前記種子を採取すること、前記種子から前記種子油を圧搾すること、および/または前記種子油を精製することをさらに含む、請求項10~17のいずれか1項に記載の方法。前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドは、iモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼMGAT、iiジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ2DGAT2、iiiMGATおよびグリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼGPAT、ivMGATおよびDGAT、またはvMGAT、GPAT、およびDGATをコードする、請求項1~24のいずれか1項に記載の方法。前記GPATはまた、アラビドプシスGPAT4またはGPAT6等のMAGを生成するホスファターゼ活性を有する、請求項25に記載の方法。前記DGATは、DGAT2である、請求項25または請求項26に記載の方法。MGATをコードする前記外因性ポリヌクレオチドは、i配列番号1~44のいずれか1つから選択される、ヌクレオチドの配列、ii配列番号45~82のいずれか1つで提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードする、ヌクレオチドの配列、iiiiまたはiiと少なくとも50同一である、ヌクレオチドの配列、およびiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成する、ヌクレオチドの配列、のうちの1つ以上を含む、請求項25~27のいずれか1項に記載の方法。GPATをコードする前記外因性ポリヌクレオチドは、i配列番号84~141のいずれか1つから選択される、ヌクレオチドの配列、ii配列番号144~201のいずれか1つで提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードする、ヌクレオチドの配列、iiiiまたはiiと少なくとも50同一である、ヌクレオチドの配列、およびiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成する、ヌクレオチドの配列、のうちの1つ以上を含む、請求項25~28のいずれか1項に記載の方法。DGAT2をコードする前記外因性ポリヌクレオチドは、i配列番号204のヌクレオチドの配列、ii配列番号212で提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードする、ヌクレオチドの配列、iiiiまたはiiと少なくとも50同一である、ヌクレオチドの配列、およびiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成する、ヌクレオチドの配列、のうちの1つ以上を含む、請求項25~29のいずれか1項に記載の方法。前記トランスジェニック生物もしくはその一部の前記1つ以上の非極性脂質のレベルおよび/または前記総非極性脂質含量は、前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが欠如しているが、アラビドプシスサリアナDGAT1をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む、対応する生物またはその一部よりも、重量基準で少なくとも0.5w/w大きい、および/または相対基準で少なくとも1w/w大きい、請求項25~30のいずれか1項に記載の方法。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部は、1つ以上の導入された変異体をさらに含み、および/またはDGAT、sn-1-グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼsn-1-GPAT、1-アシル-グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼLPAAT、アシルCoA:リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼLPCAT、ホスファチジン酸ホスファターゼPAP、もしくはこれらの2つ以上の組み合わせから選択される、前記トランスジェニック非ヒト生物の内因性酵素またはその一部の生成および/もしくは活性を下方制御する、外因性ポリヌクレオチドをさらに含む、請求項1~31のいずれか1項に記載の方法。前記外因性ポリヌクレオチドは、アンチセンスポリヌクレオチド、センスポリヌクレオチド、触媒ポリヌクレオチド、マイクロRNA、内因性酵素に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および2本鎖RNAから選択される、請求項32に記載の方法。前記非極性脂質は、TAG、DAG、TAGおよびDAG、MAG、総PUFAもしくはエイコサジエン酸EDAである特異的PUFA、アラキドン酸ARA、アルファリノレン酸ALA、ステアリドン酸SDA、エイコサトリエン酸ETE、エイコサテトラエン酸ETA、エイコサペンタエン酸EPA、ドコサペンタエン酸DPA、ドコサヘキサエン酸DHA、またはこれらの2つ以上の組み合わせである、請求項1~33のいずれか1項に記載の方法。1つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含み、前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する生物またはその一部と比較したときに、増加したレベルの1つ以上の非極性脂質を有する、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記1つ以上の非極性脂質のレベルは、前記対応する生物またはその一部よりも、重量基準で少なくとも0.5w/w大きく、および/または相対基準で少なくとも1w/w大きい、請求項35に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記総非極性脂質含量は、前記対応する生物またはその一部と比較して増加する、請求項35または請求項36に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記総非極性脂質含量は、前記対応する生物またはその一部よりも、重量基準で少なくとも0.5w/w大きい、および/または相対基準で少なくとも1大きい、請求項37に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部。前記トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の前記抽出脂質中の前記多価不飽和脂肪酸含量は、前記対応する生物またはその一部の前記抽出脂質と比較して増加する、請求項35~38のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部。前記抽出脂質中の多価不飽和脂肪酸の含量は、前記対応する生物またはその一部から抽出した脂質と比較して増加し、前記多価不飽和脂肪酸は、エイコサジエン酸EDA、アラキドン酸ARA、アルファリノレン酸ALA、ステアリドン酸SDA、エイコサトリエン酸ETE、エイコサテトラエン酸ETA、エイコサペンタエン酸EPA、ドコサペンタエン酸DPA、ドコサヘキサエン酸DHA、またはこれらの2つ以上の組み合わせを含む、請求項35~39のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部。前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドは、iMGAT、iiDGAT2、iiiMGATおよびGPAT、ivMGATおよびDGAT、またはvMGAT、GPATおよびDGAT、をコードする、請求項35~40のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部。前記GPATはまた、アラビドプシスGPAT4またはGPAT6等のMAGを生成するホスファターゼ活性を有する、請求項41に記載のトランスジェニック非ヒト生物。前記DGATは、DGAT2である、請求項41または請求項42に記載のトランスジェニック非ヒト生物。MGATをコードする前記外因性ポリヌクレオチドは、i配列番号1~44のいずれか1つから選択される、ヌクレオチドの配列、ii配列番号45~82のいずれか1つで提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードする、ヌクレオチドの配列、iiiiまたはiiと少なくとも50同一である、ヌクレオチドの配列、およびiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成する、ヌクレオチドの配列、のうちの1つ以上を含む、請求項41~43のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物。GPATをコードする前記外因性ポリヌクレオチドは、i配列番号84~141のいずれか1つから選択される、ヌクレオチドの配列、ii配列番号144~201のいずれか1つで提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードする、ヌクレオチドの配列、iiiiまたはiiと少なくとも50同一である、ヌクレオチドの配列、およびiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成する、ヌクレオチドの配列、のうちの1つ以上を含む、請求項41~44のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物。DGAT2をコードする前記外因性ポリヌクレオチドは、i配列番号204のヌクレオチドの配列、ii配列番号212で提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードする、ヌクレオチドの配列、iiiiまたはiiと少なくとも50同一である、ヌクレオチドの配列、およびiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成する、ヌクレオチドの配列、のうちの1つ以上を含む、請求項41~45のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物。前記1つ以上の非極性脂質のレベルおよび/または前記トランスジェニック生物もしくはその一部の総脂質含量は、前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが欠如しているが、アラビドプシスサリアナDGAT1をコードする外因性ポリヌクレオチドを含む、対応する生物またはその一部よりも、重量基準で少なくとも0.5w/w大きい、および/または相対基準で少なくとも1w/w大きい、請求項44~46のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物。植物、藻類、または酵母もしくは真菌類等の発酵に好適な生物である、請求項35~47のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物。iMGAT、iiDGAT2、iiiMGATおよびGPAT、ivMGATおよびDGAT、またはvMGAT、GPAT、およびDGAT、をコードする1つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む、トランスジェニック非ヒト生物。請求項35~48のいずれか1項に記載の1つ以上の特徴を特徴とする、請求項49に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部。1つ以上の非極性脂質を生成する増強された能力を伴う細胞を得る方法であって、i細胞の中に、aMGAT、bDGAT2cMGATおよびGPATdMGATおよびDGAT、またはeMGAT、GPAT、およびDGAT、をコードする1つ以上の外因性ポリヌクレオチドを導入することであって、前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが、前記細胞における前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドの発現を指令することができる1つ以上のプロモーターに操作可能に連結される、導入することと、ii前記細胞において前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドを発現させることと、iii前記細胞の脂質含量を分析することと、iv前記外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する細胞と比較したときに、増加したレベルの1つ以上の非極性脂質を有する細胞を選択することと、を含む、方法。前記選択した細胞は、請求項36~48のいずれか1項に記載の生物またはその一部の特徴の1つ以上を有する、請求項51に記載の方法。前記第1および第2の外因性ポリヌクレオチドは、前記細胞のゲノムの中に安定的に組み込まれる、請求項51または請求項52に記載の方法。前記ステップiの細胞からトランスジェニック植物を再生するステップをさらに含む、請求項53に記載の方法。請求項51~54のいずれか1項に記載の方法を使用して得られるトランスジェニック細胞または植物、またはそれから得られるトランスジェニック植物。前記1つ以上の外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する生物またはその一部と比較したときに、1つ以上の非極性脂質を生成する増強された能力を伴う、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部を生成するための、iMGAT、iiDGAT2、iiiMGATおよびGPATivMGATおよびDGAT、またはvMGAT、GPAT、およびDGATをコードする、1つ以上の外因性ポリヌクレオチドの使用。1つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含み、前記外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する種子と比較したときに、増加したレベルの1つ以上の非極性脂質を有する、植物のトランスジェニック種子。請求項36~48に記載の特徴の1つ以上を含む、請求項57に記載のトランスジェニック種子。請求項57または請求項58に記載の種子を生成する、トランスジェニック植物。ブラッシカ種、ゴシピウムヒルスツム、リナムウシタチシマム、ヘリアンサス種、カルタムスティンクトリウス、グリシネマク、ゼアマイス、アラビドプシスサリアナ、ソルガムバイカラー、ソルガムブルガレ、アベナサティバ、トリフォリウム種、カメリナサティバ、ミスカンサスギガンテウス、またはミスカンサスシネンシスである、請求項59に記載の方法。種子を生成する方法であって、i請求項59または請求項60に記載のトランスジェニック植物を成長させることと、ii前記種子を収穫することと、を含む、方法。i発酵に好適である請求項48に記載のトランスジェニック非ヒト生物と、発酵および脂肪酸生合成に必要とされる成分と、を含む液体組成物を収容する容器を提供するステップと、ii前記容器に収容された前記液体組成物の発酵に寄与する条件を提供するステップと、を含む、発酵プロセス。請求項1~34のいずれか1項に記載の方法によって得ること、または請求項35~50のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物もしくはその一部から得ること、請求項55に記載のトランスジェニック細胞もしくは植物から得ること、請求項57もしくは請求項58に記載のトランスジェニック種子から得ること、または請求項59もしくは請求項60に記載のトランスジェニック植物から得ることが可能な、抽出脂質。前記抽出脂質の重量基準で少なくとも1w/wであるDAG含量を含む、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部から得ることが可能な、抽出脂質。工業製品を製造するための、請求項35~50のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部、請求項55に記載のトランスジェニック細胞もしくは植物、請求項57もしくは請求項58に記載のトランスジェニック種子、請求項59もしくは請求項60に記載のトランスジェニック植物、または請求項63もしくは請求項64に記載の抽出脂質の使用。前記工業製品は、燃料である、請求項65に記載の使用。i随意に、触媒の存在下で、請求項63または請求項64に記載の脂質をアルコールと反応させて、アルキルエステルを生成することと、ii随意に、アルキルエステルを石油に基づく燃料と混ぜ合わせることと、を含む、燃料を生成する方法。前記アルキルエステルは、メチルエステルである、請求項67に記載の方法。請求項35~50のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物もしくはその一部、請求項55に記載のトランスジェニック細胞もしくは植物、請求項57もしくは請求項58に記載のトランスジェニック種子、請求項59もしくは請求項60に記載のトランスジェニック植物、請求項63もしくは請求項64に記載の抽出脂質、またはその抽出物もしくは一部分を、少なくとも1つの他の食物成分と混合することを含む、飼料を生成する方法。請求項35~50のいずれか1項に記載のトランスジェニック非ヒト生物もしくはその一部、請求項55に記載のトランスジェニック細胞もしくは植物、請求項57もしくは請求項58に記載のトランスジェニック種子、請求項59もしくは請求項60に記載のトランスジェニック植物、請求項63もしくは請求項64に記載の抽出脂質、またはその抽出物もしくは一部分を含む、飼料、化粧品、または化学薬品。細胞においてMAG、DAG、および/またはTAGを生成する増加した能力を有するアシルトランスフェラーゼをコードする核酸分子を特定するための方法であって、i前記細胞において活性であるプロモーターに操作可能に連結される核酸分子を含み、前記核酸分子は、請求項27、28、もしくは29のいずれか1項以上で定義されるヌクレオチドの配列、および/もしくは配列番号220、221、222、223、224、225、226、および227で提供される1つ以上のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチドの配列、または少なくとも50、好ましくは少なくとも60、より好ましくは少なくとも65それらに同一であるアミノ酸の配列を含む、細胞を得ることと、ii前記細胞において生成されるMAG、DAG、および/またはTAGのレベルが、前記核酸が欠如している対応する細胞と比較して増加したかどうかを判定することと、iii前記細胞においてMAG、DAG、および/またはTAGを生成する増加した能力を有するアシルトランスフェラーゼをコードする核酸分子を特定することと、を含む、方法。前記アシルトランスフェラーゼは、MGAT経路において酵素反応を触媒する、請求項71に記載の方法。前記アシルトランスフェラーゼは、MGAT、GPAT、および/またはDGATである、請求項71または請求項72に記載の方法。前記GPATはまた、アラビドプシスGPAT4またはGPAT6等のMAGを生成するホスファターゼ活性を有する、請求項73に記載の方法。前記DGATは、DGAT2である、請求項73または請求項74に記載の方法。ステップiの前に、前記核酸分子を細胞の中に導入することをさらに含む、請求項71~75のいずれか1項に記載の方法。前記細胞は、植物細胞である、請求項71~76のいずれか1項に記載の方法。前記アシルトランスフェラーゼは、アラビドプシスサリアナDGAT1よりも多い量だけ、前記細胞におけるTAGの生成を増加させる、請求項71~77のいずれか1項に記載の方法。i配列番号1~6のいずれか1つから選択される、ヌクレオチドの配列、またはiiiと少なくとも80同一である、ヌクレオチドの配列、を含む、単離されたおよび/または組み換えポリヌクレオチド。請求項79に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。請求項79に記載のポリヌクレオチドまたは請求項80に記載のベクターを含む、トランスジェニック細胞。請求項79に記載のポリヌクレオチド、請求項80に記載のベクター、または請求項81に記載のトランスジェニック細胞を含む、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部。配列リストの見出し配列番号1:マスマスクルスのコドンを最適化したMGAT1配列番号2:マスマスクルスのコドンを最適化したMGAT2配列番号3:シオナインテスチナリスのコドンを最適化した予測MGAT1配列番号4:トリボリウムカスタネウムのコドンを最適化した予測MGAT1配列番号5:ダニオレリオのコドンを最適化したMGAT1配列番号6:ダニオレリオのコドンを最適化したMGAT2配列番号7:マスマスクルスのMGAT1ポリヌクレオチドAF384162配列番号8:ホモサピエンスのMGAT1ポリヌクレオチドAF384163配列番号9:パントログロデュテスの予測MGAT1ポリヌクレオチド転写物変異形XM_001166055配列番号10:パントログロデュテスの予測MGAT1ポリヌクレオチド転写物変異形2XM_0526044.2配列番号11:カニスファミリアリスの予測MGAT1ポリヌクレオチドXM_545667.2配列番号12:ボスタウルスのMGAT1ポリヌクレオチドNM_001001153.2配列番号13:ラッタスノルベギカスのMGAT1ポリヌクレオチドNM_001108803.1配列番号14:ダニオレリオのMGAT1ポリヌクレオチドNM_001122623.1配列番号15:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリヌクレオチドNM_073012.4配列番号16:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリヌクレオチドNM_182380.5配列番号17:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリヌクレオチドNM_065258.3配列番号18:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリヌクレオチドNM_075068.3配列番号19:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリヌクレオチドNM_072248.3配列番号20:クライベロマイセスラクティスの予測MGAT1ポリヌクレオチドXM_455588.1配列番号21:アシビアゴシピイの予測MGAT1ポリヌクレオチドNM_208895.1配列番号22:マグナポルテオリザエの予測MGAT1ポリヌクレオチドXM_368741.1配列番号23:シオナインテスチナリスの予測MGAT1ポリヌクレオチドXM_002120843.1配列番号24:マスマスクルスのMGAT2ポリヌクレオチドAY157609配列番号25:ホモサピエンスのMGAT2ポリヌクレオチドAY157608配列番号26:パントログロデュテスの予測MGAT2ポリヌクレオチドXM_522112.2配列番号27:カニスファミリアリスの予測MGAT2ポリヌクレオチドXM_542304.1配列番号28:ボスタウルスのMGAT2ポリヌクレオチドNM_001099136.1配列番号29:ラッタスノルベギカスのMGAT2ポリヌクレオチドNM_001109436.2配列番号30:ガッルスガッルスの予測MGAT2ポリヌクレオチドXM_424082.2配列番号31:ダニオレリオのMGAT2ポリヌクレオチドNM_001006083.1配列番号32:ドロソフィラメラノガスターのMGAT2ポリヌクレオチドNM_136474.2配列番号33:ドロソフィラメラノガスターのMGAT2ポリヌクレオチドNM_136473.2配列番号34ドロソフィラメラノガスターのMGAT2ポリヌクレオチドNM_136475.2配列番号35:アノフェレスガンビェのMGAT2ポリヌクレオチドXM_001688709.1配列番号36:アノフェレスガンビェのMGAT2ポリヌクレオチドXM_315985配列番号37:トリボリウムカスタネウムの予測MGAT2ポリヌクレオチドXM_970053.1配列番号38:ホモサピエンスのMGAT3ポリヌクレオチドAY229854配列番号39:パントログロデュテスの予測MGAT3ポリヌクレオチド転写物変異形1XM_001154107.1配列番号40:パントログロデュテスの予測MGAT3ポリヌクレオチド転写物変異形2XM_001154171.1配列番号41:パントログロデュテスの予測MGAT3ポリヌクレオチド転写物変異形3XM_527842.2配列番号42:カニスファミリアリスの予測MGAT3ポリヌクレオチドXM_845212.1配列番号43:ボスタウルスの予測MGAT3ポリヌクレオチドXM_870406.4配列番号44:ダニオレリオの予測MGAT3ポリヌクレオチドXM_688413.4配列番号45:マスマスクルスのMGAT1ポリペプチドAAK84177.1配列番号46:ホモサピエンスのMGAT1ポリペプチドAAK84178.1配列番号47:パントログロデュテスの予測MGAT1ポリペプチドアイソフォーム1XP_001166055.1配列番号48:パントログロデュテスの予測MGAT1ポリペプチドアイソフォーム2XP_526044.2配列番号49:カニスファミリアリスの予測MGAT1ポリペプチドXP_545667.2配列番号50:ボスタウルスのMGAT1ポリペプチドNP_001001153.1配列番号51:ラッタスノルベギカスのMGAT1ポリペプチドNP_001102273.1配列番号52:ダニオレリオのMGAT1ポリペプチドNP_001116095.1配列番号53:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリペプチドNP_505413.1配列番号54:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリペプチドNP_872180.1配列番号55:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリペプチドNP_497659.1配列番号56:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリペプチドNP_507469.1配列番号57:カエノラブディティスエレガンスの予測MGAT1ポリペプチドNP_504649.1配列番号58:クライベロマイセスラクティスの予測MGAT1ポリペプチドXP_455588.1配列番号59:アシビアゴシピイの予測MGAT1ポリペプチドNP_983542.1配列番号60:マグナポルテオリザエの予測MGAT1ポリペプチドXP_368741.1配列番号61:シオナインテスチナリスの予測MGAT1ポリペプチドXP_002120879配列番号62:マスマスクルスのMGAT2ポリペプチドAA023673.1配列番号63:ホモサピエンスのMGAT2ポリペプチドAA023672.1配列番号64:パントログロデュテスの予測MGAT2ポリペプチドXP_522112.2配列番号65:カニスファミリアリスの予測MGAT2ポリペプチドXP_542304.1配列番号66:ボスタウルスのMGAT2ポリペプチドNP_001092606.1配列番号67:ラッタスノルベギカスのMGAT2ポリペプチドNP_001102906.2配列番号68:ガッルスガッルスの予測MGAT2ポリペプチドXP_424082.2配列番号69:ダニオレリオのMGAT2ポリペプチドNP_001006083.1配列番号70:ドロソフィラメラノガスターのMGAT2ポリペプチドNP_610318.1配列番号71:ドロソフィラメラノガスターのMGAT2ポリペプチドNP_610317.1配列番号72:ドロソフィラメラノガスターのMGAT2ポリペプチドNP_610319.2配列番号73:アノフェレスガンビェのMGAT2ポリペプチドXP_001688761配列番号74:アノフェレスガンビェのMGAT2ポリペプチドXP_315985.3配列番号75:トリボリウムカスタネウムの予測MGAT2ポリペプチドXP_975146配列番号76:ホモサピエンスのMGAT3ポリペプチドAA063579.1配列番号77:パントログロデュテスの予測MGAT3ポリペプチドアイソフォーム1XP_001154107.1配列番号78:パントログロデュテスの予測MGAT3ポリペプチドアイソフォーム2XP_001154171.1配列番号79:パントログロデュテスの予測MGAT3アイソフォーム3XP_527842.2配列番号80:カニスファミリアリスの予測MGAT3ポリペプチドXP_850305.1配列番号81:ボスタウルスの予測MGAT3ポリペプチドXP_875499.3配列番号82:ダニオレリオの予測MGAT3ポリペプチドXP_693505.1配列番号83:アラビドプシスサリアナのDGAT1ポリペプチドCAB44774.1配列番号84:アラビドプシスサリアナのGPAT4ポリヌクレオチドNM_100043.4配列番号85:アラビドプシスサリアナのGPAT6ポリヌクレオチドNM_129367.3配列番号86:アラビドプシスサリアナのBACF5I10ポリヌクレオチドAF195115.1配列番号87:アラビドプシスサリアナの未知タンパク質ポリヌクレオチドAY062466.1配列番号88:オリザサティバの第3染色体ポリヌクレオチドAC118133.4配列番号89:ピセアシトケンシスのクローンWS0276_F13ポリヌクレオチドEF086095.1配列番号90:ゼアマイスのクローンZM_BFc0110A1ポリヌクレオチドBT067649.1配列番号91:アラビドプシスサリアナのクローンRAFL16-19-H05ポリヌクレオチドAK228870.1配列番号92オリザサティバのクローンJ065058J01ポリヌクレオチドAK241033.1配列番号93:オリザサティバの第2染色体ポリヌクレオチドCM000127.1配列番号94:オリザサティバの第5染色体ポリヌクレオチドCM000130.1配列番号95:オリザサティバの第2染色体ポリヌクレオチドCM000139.1配列番号96:オリザサティバの第1染色体ポリヌクレオチドCM000126.1配列番号97:オリザサティバの第3染色体ポリヌクレオチドCM000128.1配列番号98:オリザサティバの第3染色体ポリヌクレオチドCM000140.1配列番号99:セラギネラmoellendorffiiのSELMOscaffold_102ポリヌクレオチドGL377667.1配列番号100:セラギネラmoellendorffiiのSELMOscaffold_102ポリヌクレオチドGL377667.1配列番号101:セラギネラmoellendorffiiのSELMOscaffold_83ポリヌクレオチドGL377648.1配列番号102:セラギネラmoellendorffiiのSELMOscaffold_57ポリヌクレオチドGL377622.1配列番号103:セラギネラmoellendorffiiのSELMOscaffold_25ポリヌクレオチドGL377590.1配列番号104:セラギネラmoellendorffiiのSELMOscaffold_11ポリヌクレオチドGL377576.1配列番号105:セラギネラmoellendorffiiのSELMOscaffold_11ポリヌクレオチドGL377576.1配列番号106:オリザサティバのOs01g0855000ポリヌクレオチドNM_001051374.2配列番号107:オリザサティバのOs02g0114400ポリヌクレオチドNM_001052203.1配列番号108:ゼアマイスのGPAT8ポリヌクレオチドNM_001153970.1配列番号109:ゼアマイスのLOC100282930ポリヌクレオチドNM_001155835.1配列番号110:ゼアマイスのLOC100382119ポリヌクレオチドNM_001174880.1配列番号111:アラビドプシスサリアナのGPAT6ポリヌクレオチドNM_129367.3配列番号112:アラビドプシスサリアナのGPAT8ポリヌクレオチドNM_116264.5配列番号113:フィスコミトレラパテンスの予測タンパク質PHYPADRAFT_128739ポリヌクレオチドXM_001764949.1配列番号114:フィスコミトレラパテンスの予測タンパク質PHYPADRAFT_83824ポリヌクレオチドXM_001769619.1配列番号115:フィスコミトレラパテンスの予測タンパク質PHYPADRAFT_188308ポリヌクレオチドXM_001769672.1配列番号116:フィスコミトレラパテンスの予測タンパク質PHYPADRAFT_189499ポリヌクレオチドXM_001771134.1配列番号117:フィスコミトレラパテンスの予測タンパク質PHYPADRAFT_95487ポリヌクレオチドXM_001780481.1配列番号118:ヴィティスヴィニフェラの予測タンパク質LOC100243321ポリヌクレオチドXM_002268477.1配列番号119:ヴィティスヴィニフェラの予測タンパク質LOC100243093ポリヌクレオチドXM_002275312.1配列番号120:ヴィティスヴィニフェラの予測タンパク質LOC100259433ポリヌクレオチドXM_002275996.1配列番号121:ヴィティスヴィニフェラの予測タンパク質LOC100264832ポリヌクレオチドXM_002279055.1配列番号122:ポピュラストリコカルパの予測タンパク質ポリヌクレオチドXM_002309088.1配列番号123:ポピュラストリコカルパの予測タンパク質ポリヌクレオチドXM_002309240.1配列番号124:ポピュラストリコカルパの予測タンパク質ポリヌクレオチドXM_002322716.1配列番号125:ポピュラストリコカルパの予測タンパク質ポリヌクレオチドXM_002323527.1配列番号126:ソルガムバイカラーのタンパク質ポリヌクレオチドXM_002439842.1配列番号127:ソルガムバイカラーのタンパク質ポリヌクレオチドXM_002458741.1配列番号128:ソルガムバイカラーのタンパク質ポリヌクレオチドXM_002463871.1配列番号129:ソルガムバイカラーのタンパク質ポリヌクレオチドXM_002464585.1配列番号130:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリヌクレオチドXM_002511827.1配列番号131:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリヌクレオチドXM_002517392.1配列番号132:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリヌクレオチドXM_002520125.1配列番号133:アラビドプシスlyrataのリン脂質/グリセロールアシルトランスフェラーゼファミリータンパク質ポリヌクレオチドXM_002872909.1配列番号134:アラビドプシスlyrataのGPAT6ポリヌクレオチドXM_002881518.1配列番号135:ベルニシアフォルジイの推定GPAT8ポリヌクレオチドFJ479753.1配列番号136:オリザサティバのOs03g0735900ポリヌクレオチドNM_001057724.1配列番号137:アラビドプシスサリアナのGPAT4ポリヌクレオチドNM_100043.4配列番号138:ポピュラストリコカルパの予測タンパク質ポリヌクレオチドXM_002320102.1配列番号139:ソルガムバイカラーのタンパク質ポリヌクレオチドXM_002451332.1配列番号140:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリヌクレオチドXM_002531304.1配列番号141:アラビドプシスlyrataのGPAT4ポリヌクレオチドXM_002889315.1配列番号142:アラビドプシスサリアナのGPAT1ポリヌクレオチドNM_100531.2配列番号143:アラビドプシスサリアナのGPAT3ポリヌクレオチドNM_116426.2配列番号144:アラビドプシスサリアナのGPAT4ポリペプチドNP_171667.1配列番号145:アラビドプシスサリアナのGPAT6ポリペプチドNP_181346.1配列番号146:アラビドプシスサリアナのF5I10.4遺伝子産物ポリペプチドAAF02784.1配列番号147:アラビドプシスサリアナの未知タンパク質ポリペプチドAAL32544.1配列番号148:オリザサティバのタンパク質ポリペプチドAAP03413.1配列番号149:ピセアシトケンシスの未知ポリペプチドABK25381.1配列番号150:ゼアマイスの未知ポリペプチドACN34546.1配列番号151:アラビドプシスサリアナの予測タンパク質ポリペプチドBAF00762.1配列番号152:オリザサティバの無名タンパク質産物ポリペプチドBAH00933.1配列番号153:オリザサティバの予測タンパク質Osl_05566ポリペプチドEAY84189.1配列番号154:オリザサティバの予測タンパク質Osl_20155ポリペプチドEAY98245.1配列番号155:オリザサティバの予測タンパク質OsJ_05094ポリペプチドEAZ21484.1配列番号156:オリザサティバの予測タンパク質Osl_04478ポリペプチドEEC71826.1配列番号157:オリザサティバの予測タンパク質Osl_13423ポリペプチドEEC76137.1配列番号158:オリザサティバの予測タンパク質OsJ_12482ポリペプチドEEE59882.1配列番号159:セラギネラmoellendorffiiの予測タンパク質SELMODRAFT_269600ポリペプチドEFJ08963.1配列番号160:セラギネラmoellendorffiiの予測タンパク質SELMODRAFT_184962ポリペプチドEFJ08964.1配列番号161:セラギネラmoellendorffiiの予測タンパク質SELMODRAFT_235331ポリペプチドEFJ11200.1配列番号162:セラギネラmoellendorffiiの予測タンパク質SELMODRAFT_118155ポリペプチドEFJ15664.1配列番号163:セラギネラmoellendorffiiの予測タンパク質SELMODRAFT_102257ポリペプチドEFJ24086.1配列番号164:セラギネラmoellendorffiiの予測タンパク質SELMODRAFT_170164ポリペプチドEFJ29816.1配列番号165:セラギネラmoellendorffiiの予測タンパク質SELMODRAFT_170165ポリペプチドEFJ29817.1配列番号166:オリザサティバのOs01g0855000ポリペプチドNP_001044839.1配列番号167:オリザサティバのOs02g0114400ポリペプチドNP_001045668.1配列番号168:ゼアマイスのGPAT8ポリペプチドNP_001147442.1配列番号169:ゼアマイスのLOC100282930ポリペプチドNP_001149307.1配列番号170:ゼアマイスのタンパク質LOC100382119ポリペプチドNP_001168351.1配列番号171:アラビドプシスサリアナのGPAT6ポリペプチドNP_181346.1配列番号172:アラビドプシスサリアナのGPAT8ポリペプチドNP_191950.2配列番号173:フィスコミトレラパテンスのタンパク質ポリペプチドXP_001765001.1配列番号174:フィスコミトレラパテンスのタンパク質ポリペプチドXP_001769671.1配列番号175:フィスコミトレラパテンスのタンパク質ポリペプチドXP_001769724.1配列番号176:フィスコミトレラパテンスのタンパク質ポリペプチドXP_001771186.1配列番号177:フィスコミトレラパテンスのタンパク質ポリペプチドXP_001780533.1配列番号178:ヴィティスヴィニフェラのタンパク質ポリペプチドXP_002268513.1配列番号179:ヴィティスヴィニフェラのタンパク質ポリペプチドXP_002275348.1配列番号180:ヴィティスヴィニフェラのタンパク質ポリペプチドXP_002276032.1配列番号181:ヴィティスヴィニフェラのタンパク質ポリペプチドXP_002279091.1配列番号182:ポピュラストリコカルパのタンパク質ポリペプチドXP_002309124.1配列番号183:ポピュラストリコカルパのタンパク質ポリペプチドXP_002309276.1配列番号184:ポピュラストリコカルパのタンパク質ポリペプチドXP_002322752.1配列番号185:ポピュラストリコカルパのタンパク質ポリペプチドXP_002323563.1配列番号186:ソルガムバイカラーのタンパク質SORBIDRAFT_09g022020ポリペプチドXP_002439887.1配列番号187:ソルガムバイカラーのタンパク質SORBIDRAFT_03g040260ポリペプチドXP_002458786.1配列番号188:ソルガムバイカラーのタンパク質SORBIDRAFT_01g008880ポリペプチドXP_002463916.1配列番号189:ソルガムバイカラーのタンパク質SORBIDRAFT_01g022140ポリペプチドXP_002464630.1配列番号190:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリペプチドXP_002511873.1配列番号191:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリペプチドXP_002517438.1配列番号192:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリペプチドXP_002520171.1配列番号193:アラビドプシスlyrataのリン脂質/グリセロールアシルトランスフェラーゼファミリータンパク質ポリペプチドXP_002872955.1配列番号194:アラビドプシスlyrataのGPAT6ポリペプチドXP_002881564.1配列番号195:ベルニシアフォルジイの推定GPATポリペプチドACT32032.1配列番号196:オリザサティバのOs03g0735900ポリペプチドNP_001051189.1配列番号197:アラビドプシスサリアナのGPAT4ポリペプチドNP_171667.1配列番号198:ポピュラストリコカルパのタンパク質ポリペプチドXP_002320138.1配列番号199:ソルガムバイカラーのタンパク質SORBIDRAFT_04g001060ポリペプチドXP_002451377.1配列番号200:リシナスコムニスのERグリセリンリン酸アシルトランスフェラーゼポリペプチドXP_002531350.1配列番号201:アラビドプシスlyrataのGPAT4ポリペプチドXP_002889361.1配列番号202:アラビドプシスサリアナのGPAT1ポリペプチドNP_563768.1配列番号203:アラビドプシスサリアナのGPAT3ポリペプチドNP_192104.1配列番号204:アラビドプシスサリアナのDGAT2ポリヌクレオチドNM_115011.3配列番号205:リシナスコムニスのDGAT2ポリヌクレオチドAY916129.1配列番号206:ベルニシアフォルジイのDGAT2ポリヌクレオチドDQ356682.1配列番号207:モルティエレララマニアナのDGAT2ポリヌクレオチドAF391089.1配列番号208:ホモサピエンスのDGAT2ポリヌクレオチドNM_032564.1配列番号209:ホモサピエンスのDGAT2ポリヌクレオチドNM_001013579.2配列番号210:ボスタウルスのDGAT2ポリヌクレオチドNM_205793.2配列番号211:マスマスクルスのDGAT2ポリヌクレオチドAF384160.1配列番号212:アラビドプシスサリアナのDGAT2ポリペプチドNP_566952.1配列番号213:リシナスコムニスのDGAT2ポリペプチドAAY16324.1配列番号214:ベルニシアフォルジイのDGAT2ポリペプチドABC94474.1配列番号215:モルティエレララマニアナのDGAT2ポリペプチドAAK84179.1配列番号216:ホモサピエンスのDGAT2ポリペプチドQ96PD7.2配列番号217:ホモサピエンスのDGAT2ポリペプチドQ58HT5.1配列番号218:ボスタウルスのDGAT2ポリペプチドQ70VZ8.1配列番号219:マスマスクルスのDGAT2ポリペプチドAAK84175.1配列番号220:YFPトリペプチド-保存DGAT2および/またはMGAT1/2配列モチーフ配列番号221:HPHGテトラペプチド-保存DGAT2またはMGAT1/2配列モチーフ配列番号222:EPHテトラペプチド-保存植物DGAT2配列モチーフ配列番号223:RXGFXK/RXAXXXGXXXL/VVPXXXFGE/Q-推定グリセロールリン脂質ドメインの一部であるDGAT2の長い保存配列モチーフ配列番号224:FLXLXXXN-マウスDGAT2の保存配列モチーフおよび推定中性脂質結合ドメインであるMGAT1/2配列番号225:GPATのplsCアシルトランスフェラーゼドメインPF01553配列番号226:GPATのHAD様ヒドロラーゼPF12710スーパーファミリードメイン配列番号227ホスホセリンホスファターゼドメインPF00702。GPAT4~8は、このドメインに相同のN末端領域を含む。配列番号228:保存GPATアミノ酸配列GDLVICPEGTTCREP配列番号229:保存GPAT/ホスファターゼアミノ酸配列モチーフI配列番号230:保存GPAT/ホスファターゼアミノ酸配列モチーフIII一般的な手法および定義別途具体的に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、脂質および脂肪酸化学、バイオ燃料生成、ならびに生化学において当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有するものと解釈されるものとする。別途指示されていない限り、本発明で利用される組み換えタンパク質、細胞培養、および免疫学的手法は、標準的な手順であり、当業者によく知られている。そのような手法は、J.Perbal,APracticalGuidetoMolecularCloning,JohnWileyandSons1984、J.Sambrooketal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbourLaboratoryPress1989、T.A.Brown編,EssentialMolecularBiology:APracticalApproach,Volumes1および2,IRLPress1991、D.M.GloverandB.D.Hames編,DNACloning:APracticalApproach,Volumes1-4,IRLPress1995および1996、F.M.Ausubeletal.編,CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePub.AssociatesandWiley-Interscience1988,現在までの全ての最新版を含む、EdHarlowandDavidLane編Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbourLaboratory,1988、およびJ.E.Coliganetal.編CurrentProtocolsinImmunology,JohnWileySons現在までの全ての最新版を含む等の出展の文献全体を通して記載および説明されている。選択された定義トランスジェニック非ヒト生物という用語は、例えば、外因性ポリヌクレオチド導入遺伝子または外因性ポリペプチドを含む、植物、藻類、非ヒト動物、または酵母もしくは真菌等の発酵に好適な生物全体を指す。ある実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物は、動物またはその一部ではない。一実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物は、日光からエネルギーを得て、栄養のための有機化合物を合成することができる、光合成生物例えば、植物または藻類である。別の実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物は、光合成細菌である。外因性という用語は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとの関連において、その自然な状態と比較して変化した量で細胞に存在するときの、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドを指す。一実施形態において、細胞は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドを自然に含まない細胞である。別の実施形態において、外因性ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、異なる属に由来する。別の実施形態において、外因性ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、異なる種に由来する。一実施形態において、外因性ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、宿主植物または植物細胞において発現し、外因性ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、異なる種または属に由来する。一実施形態において、外因性ポリペプチドは、外因性MGATである。本明細書で使用される抽出脂質という用語は、少なくとも60w/wの脂質を含む、トランスジェニック生物またはその一部から抽出される組成物を指す。本明細書で使用される非極性脂質という用語は、有機溶媒には溶解するが、水には溶解しない、脂肪酸およびその誘導体を指す。脂肪酸は、遊離脂肪酸および/またはエステル化形態であってもよい。エステル化形態の例としては、トリアシルグリセロールTAG、ジアシルグリセロールDAG、モノアシルグリセロールMAGが挙げられるが、これらに限定されない。非極性脂質としては、ステロール、ステロールエステル、および蝋エステルも挙げられる。非極性脂質は、中性脂質としても知られている。非極性脂質は、典型的に、室温で液体である。好ましくは、非極性脂質は、主に>50、少なくとも16個の炭素長である、脂肪酸を含む。より好ましくは、非極性脂質中の総脂肪酸の少なくとも50は、C18脂肪酸、例えばオレイン酸である。一実施形態において、本発明の非極性脂質中の脂肪酸の少なくとも50、より好ましくは少なくとも70、より好ましくは少なくとも80、より好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも91、より好ましくは少なくとも92、より好ましくは少なくとも93、より好ましくは少なくとも94、より好ましくは少なくとも95、より好ましくは少なくとも96、より好ましくは少なくとも97、より好ましくは少なくとも98、より好ましくは少なくとも99を、TAGとして見出すことができる。非極性脂質は、例えば、強塩基で加水分解して遊離脂肪酸を放出させることによって、または分画、蒸留等によって、さらに精製または処理してもよい。本発明の非極性脂質は、種子から得られた場合に、種子油の一部を形成し得る。非極性脂質は、葉もしくは果実を含む他の植物部の中に存在し得、もしくはそこから得てもよく、または組み換え細胞もしくは非ヒト生物から得てもよいが、その場合、脂質は、本明細書で定義されるような種子油ではない。遊離ステロールおよびエステル化ステロール例えば、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラジカステロール、D5-アベナステロール、シトスタノール、カンペスタノール、およびコレステロールの抽出脂質中の濃度は、Phillips他,2002で説明されるようになり得る。本明細書で使用される種子油という用語は、少なくとも60w/wの脂質を含む植物の種子/穀粒から得られる、または種子/穀粒中に種子油がさらに存在する場合に、種子/穀粒から得ることが可能な組成物を指す。すなわち、本発明の種子油は、種子/穀粒中またはその一部分に存在する種子油、ならびに種子/穀粒から抽出した種子油を含む。種子油は、好ましくは、抽出した種子油である。種子油は、典型的に、室温で液体である。好ましくは、種子油における総脂肪酸TFA含量は、主に>50、少なくとも16個の炭素長である、脂肪酸を含む。より好ましくは、種子油中の総脂肪酸の少なくとも50は、C18脂肪酸、例えばオレイン酸である。脂肪酸は、典型的に、例えば、TAG、DAG、アシルCoA、またはリン脂質等の、エステル化形態である。脂肪酸は、遊離脂肪酸および/またはエステル化形態であってもよい。一実施形態において、本発明の種子油中の脂肪酸の少なくとも50、より好ましくは少なくとも70、より好ましくは少なくとも80、より好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも91、より好ましくは少なくとも92、より好ましくは少なくとも93、より好ましくは少なくとも94、より好ましくは少なくとも95、より好ましくは少なくとも96、より好ましくは少なくとも97、より好ましくは少なくとも98、より好ましくは少なくとも99を、TAGとして見出すことができる。一実施形態において、本発明の種子油は、1つ以上の他の脂質、核酸、ポリペプチド、または種子もしくは粗抽出物に伴う他の汚染分子から分離された、実質的に精製したまたは精製した油である。実質的に精製した種子油は、種子もしくは抽出物に伴う他の成分を、少なくとも60含まない、より好ましくは少なくとも75含まない、より好ましくは少なくとも90含まないことが好ましい。本発明の種子油は、ステロール等が挙げられるが、これに限定されない、非脂肪酸分子をさらに含んでもよい。一実施形態において、種子油は、カノーラ油ブラシカナパス、ブラッシカラパ亜種、カラシ油ブラシカユンセア、他のアブラナ油例えば、ブラシカナポブラシカ、ブラシカカメリナ、ヒマワリ油ヘリアンサスアンヌス、アマニ油リナムウシタチシマム、ダイズ油グリシネマク、サフラワー油カルタムスティンクトリウス、トウモロコシ油ゼアマイス、タバコ油ニコチアナタバカム、ピーナッツ油アラキスヒポゲア、パーム油エラエイスギネエンシス、綿実油ゴシピウムヒルスツム、ヤシ油ココスヌシフェラ、アボカド油パーシーアメリカーナ、オリーブ油オレアユーロピア、カシュー油アナカルジウムオクシデンタレ、マカダミア油マカダミアインテルグリフォリア、アーモンド油プルナスアミグダラス、オートムギ種子油アベナサティバ、米油オリザサティバまたはオリザグラベリマ、またはアラビドプシス種子油アラビドプシスサリアナである。種子油は、当技術分野で知られている任意の方法によって、種子/穀粒から抽出されてもよい。これは、典型的に、ジエチルエーテル、石油エーテル、クロロホルム/メタノール、またはブタノール混合物等の非極性溶媒による抽出を伴い、一般に、最初に種子を粉砕することが含まれる。穀粒のデンプンに伴う脂質は、水飽和したブタノールで抽出され得る。種子油は、当技術分野で知られている方法によって脱ガムして多糖類を除去してもよく、または汚染物質を除去するための、または他の方法で処理して、純度、安定性、もしくは色を改善してもよい。種子油中のTAGおよび他のエステルは、遊離脂肪酸を放出するように加水分解してもよく、または種子油を水素化してもよく、または当技術分野で知られているように化学的もしくは酵素的に処理されてもよい。本明細書で使用される脂肪酸という用語は、少なくとも8個の炭素原子長の飽和または不飽和の長脂肪族末端を伴う、カルボン酸を指す。典型的に、脂肪酸は、少なくとも12個の炭素長の炭素-炭素結合鎖を有する。大部分の自然の脂肪酸は、それらの生合成が2個の炭素原子を有する酢酸塩を伴うので、偶数個の炭素原子を有する。脂肪酸は、遊離状態非エステル化であってもよく、またはTAG、DAG、MAG、アシルCoAチオエステル結合の一部、もしくは他の共有的に結合した形態等のエステル化形態であってもよい。本明細書では、エステル化形態で共有的に結合したときの脂肪酸をアシル基と称する。脂肪酸は、ホスファチジルコリンPC、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、またはジホスファチジルグリセロール等のリン脂質としてエステル化されてもよい。飽和脂肪酸は、鎖に沿っていかなる二重結合または他の官能基も含まない。飽和という用語は、全ての炭素カルボン酸-COOH基は除くが可能な限り多くの水素を含むという点で、水素を指す。換言すれば、オメガω末端は、3つの水素CH3-を含み、鎖の範囲内の各炭素は、2つの水素-CH2-を含む。不飽和脂肪酸は、飽和脂肪酸に類似した形態のものであるが、1つ以上のアルケン官能基が鎖に沿って存在し、各アルケンが、鎖の単結合-CH2-CH2-部が、二重結合-CH=CH-部分すなわち、別の炭素に二重結合した炭素と置換されていることが異なる。二重結合のどちらかの側に結合した、鎖の中の2個の隣の炭素原子は、シスまたはトランス配置で起こり得る。本明細書で使用される、多価不飽和脂肪酸またはPUFAという用語は、その炭素鎖の中に少なくとも12個の炭素原子を含み、少なくとも2個のアルケン基炭素-炭素二重結合を含む、脂肪酸を指す。モノアシルグリセリドまたはMAGは、グリセロールが1つの脂肪酸でエステル化された、グリセリドである。本明細書で使用されるMAGは、sn-1/3位に水酸基を含み本明細書では、sn-1-MAG、1-MAG、または1/3-MAGとも称される、またはsn-2位に水酸基を含み本明細書では、2-MAGとも称される、したがって、MAGは、PAまたはPC等のリン酸化分子を含まない。したがって、MAGは、細胞中の中性脂質の成分である。ジアシルグリセリドまたはDAGは、グリセロールが2つの脂肪酸でエステル化された、グリセリドである。本明細書で使用されるDAGは、sn-1,3位またはsn-1,2/2,3位に水酸基を含み、したがって、DAGは、PAまたはPC等のリン酸化分子を含まない。したがって、DAGは、細胞中の中性脂質の成分である。DAG合成のケネディ経路図1では、前駆体sn-グリセロール-3-リン酸G-3-Pが、LysoPAを形成するためにsn-1位においてグリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼGPATによって触媒する第1の反応、続いて、ホスファチジン酸PAを形成するためにsn-2位においてリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼLPAATによって触媒する第2のアシル化で、それぞれが脂肪酸コエンザイムAエステルに由来する、2つのアシル基にエステル化される。次いで、この中間体は脱リン酸化されて、DAGを形成する。代替同化経路図1において、DAGは、MGATによって触媒されて、sn-1-MAG、または好ましくは、sn-2-MAGのいずれかのアシル化によって形成され得る。DAGはまた、リパーゼによるアシル基の除去によってTAGから形成してもよく、または本質的に、酵素CPT、PDCT、またはPLCのいずれかによるコリン頭部基の除去によってPCから形成してもよい図1。トリアシルグリセリドまたはTAGは、グリセロールが3個の脂肪酸でエステル化された、グリセリドである。TAG合成のケネディ経路では、DAGが前述のように形成され、次いで、第3のアシル基がエステル化されて、DGATの活性によってグリセロール骨格にエステル化される。TAGの形成のための代替経路は、本明細書で説明される酵素PDATおよびMGAT経路によって触媒されるものを含む。本明細書で使用されるアシルトランスフェラーゼという用語は、アシルCoAから基質上にアシル基を転移させることができるタンパク質を指し、MGAT、GPAT、およびDGATを含む。本明細書で使用されるモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼまたはMGATという用語は、アシルCoAからMAG基質に脂肪アシル基を転移させてDAGを生成する、タンパク質を指す。したがって、モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ活性という用語は、少なくとも、アシルCoAからMAGにアシル基を転移させてDAGを生成することを指す。MGATは、哺乳類の腸における脂肪吸収でのその役割で最も知られており、そこでは食餌脂肪の消化から生成される脂肪酸およびsn-2-MAGは、カイロミクロン合成および分泌のために、腸細胞においてTAGに再合成される。MGATは、このプロセスの第1のステップを触媒し、そのプロセスでは、脂肪酸およびCoAから形成される脂肪アシルCoA由来のアシル基、およびsn-2-MAGが共有的に結合される。本明細書で使用されるMGATという用語は、sn-1/3-MAGおよび/またはsn-2-MAG基質に作用して、それぞれ、sn-1,3-DAGおよび/またはsn-1,2/2,3-DAGを形成する、酵素を含む。好ましい実施形態において、MGATは、sn-1-MAGと比べてsn-2-MAG基質に対する選好を有するか、または基質として実質的にsn-2-MAGだけを使用する例としては、Cao他,2003sn-1/3-18:1-MAGよりも大きい、sn-2-18:1-MAGに対するマウスMGAT1の特異性図5、YenおよびFarese,2003マウスMGAT1およびヒトMGAT2の一般的な活性は、1-MAGアシル-受容体基質に対するよりも2-MAGに対する方が高い図5、およびCheng他,20032-MAGに対するヒトMGAT3の活性は、1/3-MAG基質に対する活性よりもはるかに高い図2Dが挙げられる。本明細書で使用されるMGATは、MAGと比較して、アシル基を先行的にLysoPAに転送する酵素を含まず、そのような酵素は、LPAATとして知られている。すなわち、MGATは、非リン酸化モノアシル基質がLysoPAに対して低い触媒活性を有し得るが、選好的に非リン酸化モノアシル基質を使用する。好ましいMGATは、LysoPAをアシル化する際に検出可能な活性を有しない。示されるように、MGATすなわち、ハツカネズミMGAT2はまた、DGAT機能を有し得るが、主に、MGATとして機能する。すなわち、酵素活性を、産物-nmole/分/mg-タンパク質で表したときに、DGATとしての触媒活性よりも高い、MGATとしての触媒活性を有するYen他,2002も参照されたい。MGATには、それぞれ、MGAT1、MGAT2、およびMGAT3と称される、3つの既知のクラスがある。ヒトMGAT1遺伝子AF384163の相同体は、少なくとも、チンパンジー、イヌ、ウシ、マウス、ラット、ゼブラフィッシュ、カエノラブディティスエレガンス、シゾサッカロミセスポンベ、サッカロミセスセレビシエ、クライベロマイセスラクティス、エレモテシウムゴシピイ、マグナポルテグリセア、およびニューロスポラクラッサに存在するすなわち、配列が分かっている。ヒトMGAT2遺伝子AY157608の相同体は、少なくとも、チンパンジー、イヌ、ウシ、マウス、ラット、ニワトリ、ゼブラフィッシュ、ミバエ、および蚊に存在する。ヒトMGAT3遺伝子AY229854の相同体は、少なくとも、チンパンジー、イヌ、ウシ、およびゼブラフィッシュに存在する。しかしながら、他の生物由来の相同体は、当技術分野で知られている相同的配列を識別するための方法によって容易に特定することができる。MGAT1ポリペプチドの例としては、ホモサピエンスAF384163、マスマスクルスAF384162、パントログロデュテスXM_001166055、XM_0526044.2、カニスファミリアリスXM_545667.2、ボスタウルスNM_001001153.2、ラッタスノルベギカスNM_001108803.1、ダニオレリオMGAT1NM_001122623.1、カエノラブディティスエレガンスNM_073012.4、NM_182380.5、NM_065258.3、NM_075068.3、NM_072248.3、クライベロマイセスラクティスXM_455588.1、アシビアゴシピイNM_208895.1、マグナポルテオリザエXM_368741.1、シオナインテスチナリスの予測XM_002120843.1由来のMGAT1遺伝子によってコードされるタンパク質が挙げられる。MGAT2ポリペプチドの例としては、ホモサピエンスAY157608、マスマスクルスAY157609、パントログロデュテスXM_522112.2、カニスファミリアリスXM_542304.1、ボスタウルスNM_001099136.1、ラッタスノルベギカス、ガッルスガッルスXM_424082.2、ダニオレリオNM_001006083.1、ドロソフィラメラノガスターNM_136474.2、NM_136473.2、NM_136475.2、アノフェレスガンビェXM_001688709.1、XM_315985、トリボリウムカスタネウムXM_970053.1由来のMGAT2遺伝子によってコードされるタンパク質が挙げられる。MGAT3ポリペプチドの例としては、ホモサピエンスAY229854、パントログロデュテスXM_001154107.1、XM_001154171.1、XM_527842.2、カニスファミリアリスXM_845212.1、ボスタウルスXM_870406.4、ダニオレリオXM_688413.4由来のMGAT3遺伝子によってコードされるタンパク質が挙げられる。本明細書で使用されるMGAT経路は、TAGの形成のためのケネディ経路とは異なる同化経路を指し、そこにおいて、DAGは、MGATによって触媒された、sn-1-MAG、または好ましくは、sn-2-MAGのいずれかのアシル化によって形成される。DAGは、その後、TAGまたは他の脂質を形成するために使用してもよい。MGAT経路を図1で例示する。本明細書で使用されるジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼDGATという用語は、アシルCoAからDAG基質に脂肪アシル基を転移させてTAGを生成する、タンパク質を指す。したがって、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ活性という用語は、アシルCoAからDAGにアシル基を転移させてTAGを生成することを指す。DGATはまた、MGAT機能も有し得るが、主にDGATとして機能する。すなわち、酵素活性を、産物-nmole/分/mg-タンパク質で表したときに、MGATとしての触媒活性よりも高い、DGATとしての触媒活性を有する例えば、Yen他,2005を参照されたい。DGATには、それぞれ、DGAT1、DGAT2、およびDGAT3と呼ばれる、3つの既知のクラスがある。DGAT1ポリペプチドは、典型的に、10個の膜貫通ドメインを有し、DGAT2ポリペプチドは、典型的に、2個の膜貫通ドメインを有するのに対して、DGAT3ポリペプチドは、典型的に、いずれも有しておらず、細胞質に溶解するが、膜には組み込まれないと考えられている。DGAT1ポリペプチドの例としては、アスペルギルスフミガタス受入番号XP_755172、アラビドプシスサリアナCAB44774、リシナスコムニスAAR11479、ベルニシアフォルジイABC94472、ベルノニアガラメンシスABV21945、ABV21946、エウオニムスアラツスAAV31083、カエノラブディティスエレガンスAAF82410、ラッタスノルベギカスNP_445889、ホモサピエンスNP_036211、由来のDGAT1遺伝子によってコードされるタンパク質、ならびにその変異形および/または変異体が挙げられる。DGAT2ポリペプチドの例としては、アラビドプシスサリアナNP_566952.1;配列番号212、リシナスコムニスAAY16324.1;配列番号213、ベルニシアフォルジイABC94474.1;配列番号214、モルティエレララマニアナAAK84179.1;配列番号215、ホモサピエンスQ96PD7.2;配列番号216Q58HT5.1;配列番号217、ボスタウルスQ70VZ8.1;配列番号218、マスマスクルスAAK84175.1;配列番号219由来のDGAT2遺伝子によってコードされるタンパク質、ならびにその変異形および/または変異体が挙げられる。DGAT3ポリペプチドの例としては、ピーナッツアラキスヒポゲア、Saha他,2006、ならびに変異形および/またはその変異体由来のDGAT3遺伝子によってコードされるタンパク質が挙げられる。DGATは、検出可能なMGAT活性をほとんどまたは全く有さず、例えば、300pmol/分/mg-タンパク質、好ましくは、200pmol/分/mg-タンパク質、より好ましくは、100pmol/分/mg-タンパク質である。DGAT1ではなくDGAT2は、MGAT酵素と高い配列相同性を共有し、これは、DGAT2およびMGAT遺伝子が、共通の遺伝的起源を共有している可能性があることを示唆している。触媒する際には、複数のアイソフォームがTAG合成の際と同じステップを伴うが、これらのアイソフォームは、酵素のDGAT/MGATファミリーの差次的な組織分配および細胞内局在化によって示唆されるように、異なった機能的役割を果たし得る。哺乳類では、MGAT1が、主に胃、腎臓、脂肪組織で発現するのに対して、MGAT2およびMGAT3は、小腸において最も高い発現を示す。哺乳類では、DGAT1が、数多くの組織で偏在して発現し、小腸で最も高い発現を伴うのに対して、DGAT2は、肝臓において最大である。MGAT3は、生物情報科学分析から、齧歯動物にはなく、哺乳類およびヒトにだけより高く存在する。MGAT3は、MGAT1およびMGAT3よりもDGAT2に対して高い配列相同性を共有する。MGAT3は、MAGまたはDAGを基質として使用したときに、MGAT1およびMGAT2酵素よりも大幅に高い活性を呈するがMGAT3>MGAT1>MGAT2、これは、MGAT3が、推定TAGシンターゼとして機能することを示唆している。MGAT1およびMGAT2は、どちらも、DGAT2と同じアシルトランスフェラーゼのクラスに属する。いくつかのDGAT2において、DGAT2の触媒活性に重要であることが示されたモチーフのいくつかも、MGATアシルトランスフェラーゼに保存される。特に関心があるのは、コンセンサス配列FLXLXXXN配列番号224を伴う推定中性脂肪結合ドメインであり、配列中、各Xは独立に、プロリン以外の任意のアミノ酸であり、Nは、N末端膜貫通領域内に位置する任意の非極性アミノ酸であり、その後に推定グリセロール/リン脂質アシルトランスフェラーゼドメインが続く。FLXLXXXNモチーフは、マウスDGAT2アミノ酸81~88およびMGAT1/2で見られるが、酵母または植物DGAT2では見られない。これは、マウスDGAT2の活性に重要である。他のDGAT2および/またはMGAT1/2配列のモチーフは、以下を含む。1.YFPトリペプチド配列番号220。大部分のDGAT2ポリペプチドに、およびMGAT1およびMGAT2にも高度に保存され、例えば、マウスDGAT2においてアミノ酸139~141として存在する。酵素が機能しないようにした非保存的置換体で、酵母DGAT2内でこのモチーフを変異させる。2.HPHGテトラペプチド配列番号221。MGATに、ならびに動物および菌類由来のDGAT2配列に高度に保存され、例えばマウスDGAT2においてアミノ酸161~164として存在し、少なくとも酵母およびマウスDGAT2の触媒活性に重要である。植物DGAT2アシルトランスフェラーゼは、代わりに、EPHS配列番号222保存配列を有するので、第1および第4のアミノ酸に対する保存的変化を許容することができる。3.推定グリセロールリン脂質ドメインの一部である、より長い保存されたモチーフ。このモチーフの例は、RXGFXK/RXAXXXGXXXL/VVPXXXFGE/Q配列番号223であり、マウスDGAT2においてアミノ酸304~327として存在する。このモチーフは、その長さから予想されるように、他の配列よりもアミノ酸配列に保存されないが、相同体は、モチーフ検索によって認識することができる。間隔は、より保存されたアミノ酸の間で様々であり得る。すなわち、前述の配列と比較して、モチーフ内には、Xアミノ酸がより多い場合、またはXアミノ酸がより少ない場合がある。本明細書で使用されるグリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼまたはGPATという用語は、グリセロール-3-リン酸G-3-Pをアシル化してLysoPAおよび/またはMAGを形成するタンパク質を指し、後者の産物は、GAPTがLysoPAに対してホスファターゼ活性も有する場合に形成する。転移させるアシル基は、典型的に、アシルCoAに由来する。したがって、グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼ活性という用語は、G-3-Pをアシル化してLysoPAおよび/またはMAGを形成することを指す。GPATという用語は、G-3-Pをアシル化してsn-1-LPAおよび/またはsn-2-LPA、好ましくは、sn-2-LPAを形成する、酵素を包含する。好ましい実施形態において、GPATは、ホスファターゼ活性を有する。最も好ましい実施形態において、GPATは、sn-2-MAGを生成するsn-2-GPATを有する、ホスファターゼ活性である。本明細書で使用される、sn-1-グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼsn-1-GPATという用語は、sn-グリセロール-3-リン酸G-3-Pをアシル化して選好的に1-アシル-sn-グリセロール-3-リン酸sn-1-LPAを形成する、タンパク質を指す。したがって、sn-1-グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼ活性という用語は、sn-グリセロール-3-リン酸をアシル化して1-アシル-sn-グリセロール-3-リン酸sn-1-LPAを形成することを指す。本明細書で使用される、sn-2グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼsn-2-GPATという用語は、sn-グリセロール-3-リン酸G-3-Pをアシル化して選好的に2-アシル-sn-グリセロール-3-リン酸sn-2-LPAを形成する、タンパク質を指す。したがって、sn-2グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼ活性という用語は、sn-グリセロール-3-リン酸をアシル化して2-アシル-sn-グリセロール-3-リン酸sn-2-LPAを形成することを指す。GPATファミリーは大きく、全ての既知のメンバーは、2つの保存されたドメイン、すなわち、plsCアシルトランスフェラーゼドメインPF01553、配列番号225およびHAD様ヒドロラーゼPF12710、配列番号226スーパーファミリードメインを含む。これに加えて、アラビドプシスサリアナにおいて、GPAT4~8は全て、ホスホセリンホスファターゼドメインPF00702、配列番号227に相同的なN末端領域を含む。GPAT4およびGPAT6は、どちらも、ホスファターゼ活性に不可欠であることが知られている保存された残基、特に、N末端に位置するモチーフIDXDX[T/V][L/V]、配列番号229およびモチーフIIIK-[G/S][D/S]XXX[D/N]、配列番号330において特異的に保存されたアミノ酸太字で示すを含むYang他,2010。好ましくは、GPATは、グリセロール-3-リン酸G-3-Pから、例えばアラビドプシス由来のGPAT4NP_171667.1およびGPAT6NP_181346.1から、sn-2-MAG本明細書で、2-MAGとも称される図1を生成する選好およびホスファターゼ活性を有する。より好ましくは、GPATは、脂肪酸基質としてアシルCoAを使用する。GPAT4NP_171667およびGPAT6NP_181346の相同体としては、AAF02784、AAL32544、AAP03413、ABK25381、ACN34546、BAF00762、BAH00933、EAY84189、EAY98245、EAZ21484、EEC71826、EEC76137、EEE59882、EFJ08963、EFJ08964、EFJ11200、EFJ15664、EFJ24086、EFJ29816、EFJ29817、NP_001044839、NP_001045668、NP_001147442、NP_001149307、NP_001168351、NP_181346、NP_191950、XP_001765001、XP_001769671、XP_001769724、XP_001771186、XP_001780533、XP_002268513、XP_002275348、XP_002276032、XP_002279091、XP_002309124、XP_002309276、XP_002322752、XP_002323563、XP_002439887、XP_002458786、XP_002463916、XP_002464630、XP_002511873、XP_002517438、XP_002520171、XP_002872955、XP_002881564、ACT32032、ACT32032、NP_001051189、NP_171667、XP_002320138、XP_002451377、XP_002451377、XP_002531350、XP_002872955、およびXP_002889361が挙げられる。保存されたモチーフまたは残基は、二機能性GPAT/ホスファターゼ酵素を同定するための、配列に基づく診断として使用することができる。あるいは、より緊縮な機能に基づくアッセイを利用することが可能である。そのようなアッセイは、例えば、標識したグリセロール-3-リン酸を細胞またはミクロソームに供給することと、薄層クロマトグラフィまたは類似した手法によって、標識した産物のレベルを定量化することとを含む。GPAT活性は、標識したLPAの生成をもたらす一方で、GPAT/ホスファターゼ活性は、標識したMAGの生成をもたらす。本明細書で使用される野生型という用語またはその変形は、遺伝的に修飾されていない細胞または非ヒト生物もしくはその一部を指す。対応するという用語は、本発明の細胞または非ヒト生物もしくはその一部と同一または同様の遺伝的背景を有するが、本明細書で説明されるように修飾されていない、細胞または非ヒト生物もしくはその一部例えば、MGATをコードする外因性ポリヌクレオチドまたは外因性MGATが欠如している、細胞または非ヒト生物もしくはその一部を指す。対応する細胞または非ヒト生物もしくはその一部は、核酸またはタンパク質発現のレベル、または、例えば非極性脂質産物および/または含量の、または本明細書で説明されるように修飾された細胞または非ヒト生物もしくはその一部による形質修飾の程度または性質を比較するための対照として使用することができる。本明細書で使用される~と比較するは、1つ以上の外因性ポリヌクレオチドまたは外因性ポリペプチドを発現する、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部の非極性脂質のレベルまたは総非極性脂質含量を、1つ以上の外因性ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが欠如しているトランスジェニック非ヒト生物またはその一部と比較することを指す。本明細書で使用される非極性脂質を生成する増強された能力は、対応する細胞または非ヒト生物もしくはその一部と比較して、本発明の細胞または非ヒト生物もしくはその一部によって生成される非極性脂質の総量が増加することを指す、相対語である。一実施形態では、非極性脂質のTAGまたは多価不飽和脂肪酸含量が増加する。本明細書で使用される内因性酵素の生成および/または活性を下方制御する単離または組み換えポリヌクレオチドという用語またはその変形は、内因性酵素、例えば、DGAT、sn-1グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼGPAT、1-アシル-グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼLPAAT、アシルCoA:リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼLPCAT、ホスファチジン酸ホスファターゼPAP、またはこれらの2つ以上の組み合わせの、生成および/または活性を下方制御するRNA分子をコードする例えば、siRNAをコードするポリヌクレオチド、またはその生成および/または活性をそれ自体が下方制御する例えば、細胞に直接送達することができるsiRNAであるポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用される、重量基準でという用語は、物質を含む組成物例えば、種子、葉の重量のパーセンテージとしての、物質例えば、TAG、DAG、脂肪酸の重量を指す。例えば、トランスジェニック種子が120μgの種子重量あたり25μgの総脂肪酸を有する場合、総脂肪酸のパーセンテージは、重量基準で20.8である。本明細書で使用される相対基準でという用語は、対応する組成物と比較したときの、パーセンテージとしての、物質を含む組成物中の物質の量を指す。本明細書で使用される相対非脂質含量という用語は、対応する細胞、生物、もしくはその一部、または細胞、生物、もしくはその一部から抽出した脂質と比較したときの、パーセンテージとしての、細胞、生物、もしくはその一部、またはそこから抽出した脂質の非極性脂質含量の表現を指す。例えば、トランスジェニック種子が25μgの総脂肪酸を有するのに対して、対応する種子が20μgの総脂肪酸を有する場合、相対基準での非極性脂質含量の増加は、25に相当する。ジアシルグリセロールおよびトリアシルグリセロールの生成一実施形態において、本発明のトランスジェニック非ヒト生物またはその一部は、対応する非ヒト生物またはその一部よりも高いレベルの、DAGまたはTAG等の、好ましくは双方の非極性脂質を生成する。一実施例において、本発明のトランスジェニック植物は、対応する種子および/または葉と比較したときに、DAGまたはTAG等の、好ましくは双方の増加した非極性脂質含量を有する種子および/または葉を生成する。非ヒト生物またはその一部の非極性脂質含量は、対応する非ヒト生物またはその一部と比較したときに、重量基準で0.5大きい。別の実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部、好ましくは、植物または種子は、1つ以上の特定の脂肪酸について富化された、DAGおよび/またはTAGを生成する。飽和および不飽和脂肪酸、ならびに短鎖および長鎖脂肪酸を含む、広範囲の脂肪酸をDAGおよび/またはTAGに組み込むことができる。DAGおよび/またはTAGに組み込むことができる脂肪酸のいくつかの限定的でない例としては、カプリン脂肪酸10:0、ラウリン脂肪酸12:0、ミリスチン脂肪酸14:0、パルミチン脂肪酸16:0、パルミトレイン脂肪酸16:1、ステアリン脂肪酸18:0、オレイン脂肪酸18:1、バクセン脂肪酸18:1、リノール脂肪酸18:2、エレオステアリン脂肪酸18:3、γリノレン脂肪酸18:3、αリノレン脂肪酸18:3ω3、ステアリドン脂肪酸18:4ω3、アラキン脂肪酸20:0、エイコサジエン脂肪酸20:2、ジホモ-γリノール脂肪酸20:3、エイコサトリエン脂肪酸20:3、アラキドン脂肪酸20:4、エイコサテトラエン脂肪酸20:4、エイコサペンタエン脂肪酸20:5ω3、ベヘン脂肪酸22:0、ドコサペンタエン脂肪酸22:5ω、ドコサヘキサエン脂肪酸22:6ω3、リグノセリン脂肪酸24:0、ネルボン脂肪酸24:1、セロチン脂肪酸26:0、およびモンタン脂肪酸28:0が挙げられる。本発明の1つの実施形態において、トランスジェニック生物またはその一部は、多価不飽和脂肪酸を含むDAGおよび/またはTAGについて富化される。本発明の一実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部、好ましくは、植物または種子は、DGAT活性を有してもよく、または有しなくてもよい、本明細書に定義されるようにMGATをコードするキメラDNAで形質転換される。MGATの発現は、好ましくは、該トランスジェニック非ヒト生物またはその一部において、より高いレベルのDAGまたはTAG等の非極性脂質、および/または増加した非極性脂質の収量をもたらす。好ましい実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物は、植物である。さらなる実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部は、GPATまたはDGATをコードするキメラDNAで形質転換される。好ましくは、生物は、双方のキメラDNAで形質転換され、好ましくは、例えば単一のT-DNA分子等の、1つのDNA分子に共有的に結合する。Yang他2010は、グリセロール-3-リン酸G-3-Pからsn-2-MAGを生成することができる図1、sn-2選好およびホスファターゼ活性を有するアラビドプシス由来の、2つのグリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼGPAT4およびGPAT6を説明している。これらの酵素は、クチン合成経路の一部であることが提唱されている。アラビドプシスGPAT4およびGPAT6は、脂肪酸基質としてアシルCoAを使用することが示されているZheng他,2003。二機能性GPAT/ホスファターゼをMGATと組み合わせることで、一方の基質としてG-3-Pを使用し、もう一方の基質としてアシルCoAに由来する2つのアシル基を使用する、新しいDAG合成経路を生ずる。同様に、そのような二機能性GPAT/ホスファターゼを、DGAT活性を有するMGATと組み合わせることで、一方の基質としてグリセロール-3-リン酸を使用し、もう一方の基質としてアシルCoAに由来する3つのアシル基を使用する、新しいTAG合成経路を生ずる。故に、本発明の一実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部は、二機能性GPAT/ホスファターゼで、およびDGAT活性を有しないMGATで共形質転換される。これは、二機能性GPAT/ホスファターゼによるMAGの生成をもたらし、次いで、MGATによってDAGに変換され、次いで、DGATまたは他の活性によってTAGに変換される。新しいDAGの生成は、例えば、Benghezal他2007、図2によって説明されるような、致死SLC1SLC4ノックアウトを含む酵母株においてそのような共形質転換を行うことによって、確認および選択することが可能である。Benghezal他2007の図2は、2つの酵母LPATSLC1およびSLC4をノックアウトすることが致死的であることを示す。トランス中のslc遺伝子それらの場合、SLC1の1つを提供する補足プラスミドのため、SLC1SLC4二重酵母変異を維持することだけしかできない。FOAを培地に添加することによる陰性選択は、この補足プラスミドの損失Ura選択マーカーの対抗選択をもたらし、細胞を生存できないようにする。本発明の別の実施形態において、トランスジェニック非ヒト生物またはその一部、好ましくは、植物または種子は、二機能性GPAT/ホスファターゼおよびDGAT活性を有するMGATをコードするキメラDNAで共形質転換される。これは、二機能性GPAT/ホスファターゼによるMAGの生成をもたらし、MGATによってDAGに変換され、次いで、TAGに変換される。さらなる実施形態では、いかなる検出可能なホスファターゼ活性も伴わない1つ以上の内因性GPATがサイレンシングされる。すなわち、例えば、ケネディ経路においてグリセロール-3-リン酸をアシル化してLPAを形成するGPAT例えば、アラビドプシスGPAT1をコードする、1つ以上の遺伝子がサイレンシングされる。基質選好は、例えば、野生型MGAT遺伝子による相補を防止する濃度の特定の遊離脂肪酸例えば、DHAをMGAT変異形を発現するトランスジェニックH1246酵母株に供給することによって、新しいDAGおよびTAG合成経路に操作することが可能である。供給された遊離脂肪酸を使用することができる変異形だけが成長するであろう。数サイクルのMGATの操作により、特定の脂肪酸に対する増加した選好を伴うMGATが生成されるであろう。上で説明した種々のケネディ経路の相補および補充は、初期の基質であるグリセロール-3-リン酸の遍在的な性質のため、任意の細胞型で行うことが可能である。一実施形態において、導入遺伝子の使用は、増加した油収量をもたらす。ポリヌクレオチドポリヌクレオチドおよび核酸という用語は、同じ意味で使用される。それらは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはその類似体である、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。本発明のポリヌクレオチドは、ゲノム、cDNA、半合成もしくは合成起源、2本鎖もしくは1本鎖のものであってもよく、また、その起源または操作によって、1自然界で伴うポリヌクレオチドの全部または一部を伴わない、2自然界で連結されるもの以外のポリヌクレオチドに連結する、または3自然界で生じない。ポリヌクレオチドの限定的でない例としては、遺伝子または遺伝子断片のコードもしくは非コード領域、連結分析から定義される座単数または複数、エキソン、イントロン、メッセンジャーRNAmRNA、転移RNAtRNA、リボソームRNArRNA、リボザイム、cDNA、組み換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたDNA、任意の配列の単離されたRNA、任意の配列のキメラDNA、核酸プローブ、およびプライマーが挙げられる。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体等の修飾ヌクレオチドを含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーの集合前または集合後に与えられてもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、標識化成分との複合体化等によって、ポリメリゼーション後にさらに修飾することができる。単離されたポリヌクレオチドとは、一般に、その自然状態において会合または連結されるポリヌクレオチド配列から分離された、ポリヌクレオチドを意味する。好ましくは、単離されたポリヌクレオチドは、自然に会合または連結されるポリヌクレオチド配列を、少なくとも60含まない、より好ましくは少なくとも75含まない、より好ましくは少なくとも90含まない。本明細書で使用される遺伝子という用語は、その最も広い文脈において解釈すべきであり、構造遺伝子の転写された領域、および翻訳された場合は、タンパク質コード領域を含み、かつ、5’および3’のいずれの末端においても少なくとも約2kbの距離にわたって両末端上のコード領域に隣接して位置し、遺伝子の発現に関与する配列を含む、デオキシリボヌクレオチドを含む。この点に関して、遺伝子は、所与の遺伝子と自然に関連するプロモーター、エンハンサー、終結および/またはポリアデニル化シグナル等の制御シグナル、または異種制御シグナルを含み、その場合、遺伝子は、キメラ遺伝子と称される。タンパク質コード領域の5’に位置し、mRNA上に存在する配列は、5’非翻訳配列と称される。タンパク質コード領域の3’または下流に位置し、mRNA上に存在する配列は、3’非翻訳配列と称される。遺伝子という用語は、cDNA形態およびゲノム形態の双方の遺伝子を包含する。遺伝子のゲノム形態またはクローンは、イントロン、介在領域、または介在配列と称される非コード配列で中断され得る、コード領域を含む。イントロンは、核RNAnRNAの中に転写される、遺伝子のセグメントである。イントロンは、エンハンサー等の調節要素を含んでもよい。イントロンは、核転写物または一次転写物から除去またはスプライスされ、したがって、イントロンは、mRNA転写物中には存在しない。mRNAは、翻訳中に、新生ポリペプチドにおけるアミノ酸の配列または順序を規定するように機能する。遺伝子という用語は、本明細書で説明される本発明のタンパク質の全部または一部をコードする合成分子または融合分子、および前述のいずれか1つに対する相補的ヌクレオチド配列を含む。本明細書で使用されるキメラDNAは、自然界では自然に見出されないあらゆるDNA分子を指し、本明細書ではDNA構築体とも称される。典型的には、キメラDNAは、自然界では一緒に自然に見出されない調節配列および転写配列またはタンパク質コード配列を含む。故に、キメラDNAは、異なる供給源に由来する調節配列およびコード配列、または同じ供給源に由来するが、自然界で見出されるものとは異なる様式で配置される調節配列およびコード配列を含むことができる。オープンリーディングフレームは、その自然の上流および下流の調節要素に連結されてもよく、または連結されなくてもよい。オープンリーディングフレームは、例えば、植物ゲノムの中、非自然的な場所、または細菌プラスミドもしくはウイルスベクター等の自然に見出されないレプリコンもしくはベクターに組み込まれ得る。キメラDNAという用語は、宿主において複製可能であるDAN分子に限定されず、例えば特異的アダプター配列によってレプリコンの中に連結することができるDNAを含む。導入遺伝子とは、形質転換手順によってゲノムの中に導入された遺伝子である。遺伝的に修飾された、トランスジェニックという用語、およびその変形は、形質転換または形質導入によって遺伝子を細胞の中に導入することと、細胞中の遺伝子を変異させることと、細胞中の遺伝子もしくは上で説明したように修飾される任意の細胞の子孫の調節を遺伝子的に変化または調節させることとを含む。本明細書で使用されるゲノム領域という用語は、導入遺伝子または導入遺伝子群本明細書では、塊とも称されるが細胞またはその祖先の中に挿入された、ゲノム内の位置を指す。そのような領域は、本明細書で説明される方法等により、人の介入によって組み込まれたヌクレオチドのみを含む。本発明の組み換えポリヌクレオチドは、人工組み換え方法によって構成または修飾された、核酸分子を指す。組み換えポリヌクレオチドは、その自然状態と比較して、例えば、mRNAの場合変化した量で細胞中に存在し得るか、または変化した速度で発現し得る。一実施形態において、ポリヌクレオチドは、自然にはそのポリヌクレオチドを含まない細胞の中に導入される。典型的に、外因性DNAは、mRNAの転写のためのテンプレートとして使用され、次いで、形質転換した細胞内に本発明のポリペプチドをコードするアミノ酸残基の連続配列に翻訳される。別の実施形態において、ポリヌクレオチドは、細胞に対して内因性であり、その発現は、組み換え手段によって変化させられる。例えば、外因性制御配列が、関心の内因性遺伝子の上流に導入されて、形質転換された細胞が、遺伝子によってコードしたポリペプチドを発現することを可能にする。本発明の組み換えポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが存在する、細胞に基づく、または細胞を含まない発現系の他の成分から分離されていないポリヌクレオチド、および該細胞に基づく、または細胞を含まない発現系において生成され、その後に、少なくとも他のいくつかの成分から精製されるポリヌクレオチドを含む。ポリヌクレオチドは、自然界に存在する隣接する一続きのヌクレオチドとすることができ、または単一のポリヌクレオチドを形成するように接合した異なる源自然発生的および/または合成的なものに由来する2つ以上の隣接する一続きのヌクレオチドを含むことができる。典型的に、そのようなキメラポリヌクレオチドは、関心の細胞中のオープンリーディングフレームの転写を駆動するのに好適なプロモーターに操作可能に連結される本発明のポリペプチドをコードする、少なくとも1つのオープンリーディングフレームを含む。定義されたポリペプチドまたは酵素に関して、本明細書で提供されるものよりも高い同一性の値が、好ましい実施形態を包含することを理解されるであろう。したがって、該当する場合、最小の同一性の値に照らして、ポリヌクレオチドは、少なくとも60、より好ましくは少なくとも65、より好ましくは少なくとも70、より好ましくは少なくとも75、より好ましくは少なくとも80、より好ましく少なくとも85、より好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも91、より好ましくは少なくとも92、より好ましくは少なくとも93、より好ましくは少なくとも94、より好ましくは少なくとも95、より好ましくは少なくとも96、より好ましくは少なくとも97、より好ましくは少なくとも98、より好ましくは少なくとも99、より好ましくは少なくとも99.1、より好ましくは少なくとも99.2、より好ましくは少なくとも99.3、より好ましくは少なくとも99.4、より好ましくは少なくとも99.5、より好ましくは少なくとも99.6、より好ましくは少なくとも99.7、より好ましくは少なくとも99.8、およびさらにより好ましくは少なくとも99.9、関連する指定された配列番号と同一である、ポリヌクレオチド配列を含むことが好ましい。本発明の、または本発明に有用なポリヌクレオチドは、緊縮条件下で、本明細書で定義されるポリヌクレオチドに選択的にハイブリッド形成させてもよい。本明細書で使用される緊縮条件とは1ハイブリッド形成中に、ホルムアミド等の変性剤を用いること、例えば、42°Cで、0.1w/vのウシ血清アルブミン、0.1のフィコール、0.1のポリビニルピロリドン、750mMのNaClを有するpH6.5の50mMのリン酸ナトリウム緩衝剤、75mMのクエン酸クエン酸ナトリウムを伴う50v/vのホルムアミドを用いること、または20.2xSSCおよび0.1SDS中に、42°Cで、50のホルムアミド、5xSSC0.75MのNacl、0.075Mのクエン酸ナトリウム、50mMのリン酸ナトリウムpH6.8、0.1のピロリン酸ナトリウム、5xデンハルト溶液、超音波振動処理したサケ精子DNA50g/ml、0.1のSDS、および10の硫酸デキストランを用いること、および/または3洗浄のために低イオン強度で高温を用いること、例えば、50°Cで0.015MのNaCl/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1のSDSを用いること、である。本発明のポリヌクレオチドは、自然発生的な分子と比較したときに、ヌクレオチド残基の欠失、挿入、または置換である、1つ以上の変異を保有し得る。参照配列に対して変異を有するポリヌクレオチドは、自然に発生するものすなわち、天然源から単離したもの、または例えば、上で説明したように、部位特異的変異誘発またはDNAシャフリングを行うことによって合成したものとすることができる。組み換えベクター本発明の一実施形態は、組み換えベクターを含み、該組み換えベクターは、本明細書で定義される少なくとも1つのポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドを宿主細胞に送達することができる。組み換えベクターとしては、発現ベクターが挙げられる。組み換えベクターは、異種ポリヌクレオチド配列、すなわち、自然には見出されず、本明細書で定義されるポリヌクレオチドに隣接し、好ましくは、異なる種に由来する、ポリヌクレオチド配列を含む。ベクターは、RNAまたはDNAのいずれか、原核生物または真核生物のいずれかとすることができ、典型的に、ウイルスに由来するウイルスベクター、またはプラスミドである。プラスミドベクターは、典型的に、原核生物細胞、例えば、pUC由来のベクター、pSK由来のベクター、pGEM由来のベクター、pSP由来のベクター、pBS由来のベクター、または1つ以上のT-DNA領域を含むバイナリーベクターにおける容易な発現カセットの選択、増幅、および形質転換を提供する、付加的な核酸配列を含む。付加的な核酸配列は、ベクターの自律複製を提供する複製の起源、好ましくは、抗生物質または除草剤耐性をコードする選択マーカー遺伝子、核酸配列または核酸構築体にコードされる遺伝子を挿入するための複数の部位を提供する一意の多重クローニング部位、ならびに原核生物および真核生物特に植物細胞の形質転換を増強する配列を含む。本明細書で使用される操作可能に連結するとは、2つ以上の核酸例えば、DNAセグメント間の機能的関係を指す。典型的に、転写配列に対する転写調節要素プロモーターの機能的関係を指す。例えば、プロモーターは、適切な細胞においてコード配列の転写を刺激または調節する場合に、本明細書で定義されるポリヌクレオチドのコード配列に操作可能に連結されている。一般に、転写配列に操作可能に連結されるプロモーター転写調節要素は、転写配列に物理的に隣接する。すなわち、それらは、シス作用性である。しかしながら、エンハンサー等のいくつかの転写調節要素は、それらが転写を増強するコード配列に物理的に隣接する、または極めて近接して位置する必要がない。複数のプロモーターが存在するときに、各プロモーターは、独立して同一であるかまたは異なっていてもよい。組み換えベクターはまた、a本明細書で定義される発現されるポリペプチドが、ポリペプチドを生成する細胞から分泌されることを可能にするように、シグナルペプチド配列をコードする、または発現したポリペプチドの局在化例えば、細胞中の小胞体ERにおけるポリペプチドの保持、もしくはプラスチドの中への転移を提供する、1つ以上の分泌シグナル、および/またはb融合タンパク質としての核酸分子の発現を誘導する、融合配列を含む。好適なシグナルセグメントの例としては、本明細書で定義されるポリペプチドの分泌または局在化を指令することが可能な、あらゆるシグナルセグメントが挙げられる。好ましいシグナルセグメントとしては、ニコチアナネクタリンシグナルペプチド米国特許第US5,939,288号、タバコエクステンシンシグナル、またはダイズオレオシン油体結合タンパク質シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。組み換えベクターはまた、本明細書で定義されるポリヌクレオチドの核酸配列を囲んで、および/またはその中に、介在配列および/または非翻訳配列を含んでもよい。形質転換体の特定を容易にするために、組み換えベクターは、望ましくは、本明細書で定義されるポリヌクレオチドの核酸配列として、またはこれに加えて、選択可能な、もしくはスクリーニング可能なマーカー遺伝子を含む。マーカー遺伝子とは、そのマーカー遺伝子を発現する細胞に異なる表現型を与えて、したがって、該マーカーを有しない細胞からそのような形質転換された細胞を区別することを可能にする、遺伝子を意味する。選択可能マーカー遺伝子は、選択剤例えば、除草剤、抗生物質、放射線、熱、または非形質転換細胞に損傷を与える他の処理に対する耐性に基づいて選択することができる形質を与える。スクリーニング可能なマーカー遺伝子またはレポーター遺伝子は、観察または試験を通して、すなわちスクリーニングによって特定することができる形質例えば、非形質転換細胞中に存在しない、β-グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、GFP、または他の酵素活性を与える。例えば米国特許第US4,399,216号で説明されるように、連結されていない遺伝子の共形質転換が、例えば植物の形質転換における効率的なプロセスでもあるので、関心のマーカー遺伝子およびヌクレオチド配列を連結させる必要はない。マーカーの実際の選択は、植物細胞等の細胞の選択との組み合せにおいてそれが機能的すなわち、選択的である限り、重要ではない。細菌性選択可能マーカーの例は、アンピシリン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、またはテトラサイクリン耐性、好ましくはカナマイシン耐性等の、抗生物質耐性を与えるマーカーである。植物の形質転換体の選択のための例示的な選択可能なマーカーとしては、ハイグロマイシンB耐性をコードするhyg遺伝子;カナマイシン、パロモマイシン、G418に対する耐性を与える、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼnptII遺伝子;例えば欧州特許第EP256223号で説明されるような、グルタチオン由来の除草剤に対する耐性を与える、ラット肝臓由来のグルタチオン-S-トランスフェラーゼ遺伝子;例えば国際特許公開第WO87/05327号で説明されるような、過剰発現に応じてホスフィノトリシン等のグルタミンシンテターゼ阻害剤に対する耐性を付与する、グルタミンシンテターゼ遺伝子;例えば欧州特許第EP275957号で説明されるような、選択剤ホスフィノトリシンに対する耐性を与える、ストレプトマイセスヴィリドクロモゲネス由来のアセチルトランスフェラーゼ遺伝子;例えばHinchee他1988によって説明されているようなN-ホスホノメチルグリシンに対する耐性を与える、5-エノルシキメート-3-リン酸シンターゼEPSPSをコードする遺伝子;例えば国際特許公開WO91/02071で説明されるような、ビアラホスに対する耐性を与えるbar遺伝子、ブロモキシニルに対する耐性を与える、クレブシーラオザエナエ由来のbxn等Stalker他,1988のニトリラーゼ遺伝子;メトトレキサートに対する耐性を与える、ジヒドロ葉酸レダクターゼDHFR遺伝子Thillet他,1988;イミダゾリノン、スルホニル尿素、または他のALS阻害化学薬品に対する耐性を与える、変異アセトラクテートシンターゼ遺伝子ALS欧州特許第EP154,204号;5-メチルトリプトファンに対する耐性を与える、変異アントラニル酸シンターゼ遺伝子;または除草剤に対する耐性を与える、ダラポンデハロゲナーゼ遺伝子、が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいスクリーニング可能なマーカーとしては、種々の発色基質が知られているβ-グルクロニダーゼGUS酵素をコードする、uidA遺伝子;発色基質が知られている酵素をコードする、β-ガラクトシダーゼ遺伝子;カルシウム感受性生物発光検出において用いられ得る、エクオリン遺伝子Prasher他,1985;緑色蛍光タンパク質遺伝子Niedz他,1995もしくその誘導体;または、生物発光検出を可能にする、ルシフェラーゼluc遺伝子Ow他,1986が挙げられるが、これらに限定されない。リポーター分子とは、その化学的性質によって、タンパク質産物を参照することによりプロモーター活性の決定を容易にする分析的に特定可能なシグナルを提供する分子を意味する。好ましくは、組み換えベクターは、植物細胞等の細胞のゲノムの中に安定的に組み込まれる。故に、組み換えベクターは、ベクターをゲノムに組み込むこと、または細胞の染色体に組み込むことを可能にする、適切な要素を含んでもよい。発現ベクター本明細書で使用される発現ベクターは、宿主細胞を形質転換すること、および1個以上の特定のポリヌクレオチドの発現を生じさせることができる、DNAまたはRNAベクターである。好ましくは、発現ベクターはまた、宿主細胞内で複製することもできる。発現ベクターは、原核性または真核性とすることができ、典型的に、ウイルスまたはプラスミドである。本発明の発現ベクターとしては、細菌、真菌、内寄生性生物、節足動物、動物、藻類、および植物細胞を含む、本発明の宿主細胞において機能するすなわち、遺伝子発現を指令する、あらゆるベクターが挙げられる。本発明の特に好ましい発現ベクターは、酵母、藻類、および/または植物細胞の遺伝子発現を指令することができる。本発明の発現ベクターは、転写制御配列、翻訳制御配列、複製の起源等の調節配列、および宿主細胞と適合性があり、かつ本発明のポリヌクレオチドの発現を制御する他の調節配列を含む。特に、本発明の発現ベクターは、転写制御配列を含む。転写制御配列は、転写開始、伸長、および終結を制御する配列である。特に重要な転写制御配列は、プロモーター、エンハンサー、オペレーターおよびリプレッサー配列等の、転写開始を制御するものである。好適な転写制御配列としては、本発明の組み換え細胞の少なくとも1つにおいて機能することができる、あらゆる転写制御配列が挙げられる。使用する調節配列の選択は、関心の植物および/または標的器官もしくは組織等の標的生物に依存する。そのような調節配列は、植物もしくは植物ウイルス等の任意の真核生物から得てもよく、または化学的に合成してもよい。種々のそのような転写制御配列は、当業者に知られている。特に好ましい転写制御配列は、植物またはその一部の使用に応じて、構成的に、または段階特異的および/もしくは組織特異的に植物における転写を指令する際に活性なプロモーターである。植物細胞の安定した形質移入またはトランスジェニック植物の確立に好適な数多くのベクターは、例えば、Pouwelsetal.,CloningVectors:ALaboratoryManual,1985,supp.1987、WeissbachandWeissbach,MethodsforPlantMolecularBiology,AcademicPress,1989、およびGelvinetal.,PlantMolecularBiologyManual,KluwerAcademicPublishers,1990で説明される。典型的には、植物発現ベクターは、例えば、5’および3’調節配列の転写制御下の1つ以上のクローン化した植物遺伝子、ならびに優性選択可能マーカーを含む。そのような植物発現ベクターはまた、プロモーター調節領域例えば、誘発もしくは構成的、環境的もしくは発生的調節、または細胞もしくは組織特異的発現を制御する調節領域、転写開始出発部位、リボソーム結合部位、RNAプロセッシングシグナル、転写終結部位、および/またはポリアデニル化シグナルをも含むことができる。植物細胞において活性である、多くの構成的プロモーターが説明されている。植物における構成的発現に好適なプロモーターとしては、カリフラワーモザイクウイルスCaMV35Sプロモーター、ゴマノハグサモザイクウイルスFMV35S、サトウキビ桿状ウイルスプロモーター、コメリナ黄色斑点ウイルスプロモーター、リブロース-1,5-ビス-リン酸カルボキシラーゼの小サブユニット由来の光誘発性プロモーター、イネサイトゾルトリオースリン酸イソメラーゼプロモーター、アラビドプシスのアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼプロモーター、イネアクチン1遺伝子プロモーター、マンノピンシンターゼおよびオクトピンシンターゼプロモーター、Adhプロモーター、スクロースシンターゼプロモーター、R遺伝子複合体プロモーター、ならびにクロロフィルα/β結合タンパク質遺伝子プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。これらのプロモーターは、植物において発現されるDNAベクターを作成するために使用されている例えば、国際特許公開第WO84/02913号を参照されたい。これらのプロモーターの全ては、種々の型の植物発現可能な組み換えDNAベクターを作成するために使用されている。植物の源組織例えば、葉、種子、根または茎における発現の目的で、本発明で利用されるプロモーターは、これらの特異的組織において比較的高い発現を有することが好ましい。この目的のために、組織もしくは細胞に特異的な発現、または組織もしくは細胞で増強された発現を伴う遺伝子に対する数多くのプロモーターから選択してもよい。文献で報告されているそのようなプロモーターの例としては、エンドウ由来のクロロプラストグルタミンシンテターゼGS2プロモーター、コムギ由来のクロロプラストフルクトース-1,6-ビスホスファターゼプロモーター、ジャガイモ由来の核光合成ST-LS1プロモーター、セリン/トレオニンキナーゼプロモーター、およびアラビドプシスサリアナ由来のグルコアミラーゼCHSプロモーターが挙げられる。また、イースタンカラマツラリクスラリキナ由来のリブロース-1,5-ビスホスフェートカルボキシラーゼプロモーター、マツ由来のCab遺伝子Cab6に対するプロモーター、コムギ由来のCab-1遺伝子に対するプロモーター、ホウレンソウ由来のCab-1遺伝子に対するプロモーター、イネ由来のCab1R遺伝子に対するプロモーター、ゼアマイス由来のピルビン酸オルトリン酸ジキナーゼPPDKプロモーター、タバコLhcb12遺伝子に対するプロモーター、アラビドプシスサリアナSuc2スクロース-H30共輸送体プロモーター、およびホウレンソウ由来のチラコイド膜タンパク質遺伝子PsaD、PsaF、PsaE、PC、FNR、AtpC、AtpD、Cab、RbcSに対するプロモーターも、光合成活性組織において活性であることが報告されている。また、シロガラシシナピスアルバ由来のLhcB遺伝子およびPsbP遺伝子に対するプロモーター等の、クロロフィルα/β結合タンパク質に対する他のプロモーターを、本発明で利用してもよい。植物細胞におけるRNA結合タンパク質遺伝子の発現には、1熱、2光例えば、エンドウRbcS-3Aプロモーター、メイズRbcSプロモーター、3ホルモンアブシジン酸等、4損傷例えば、WunI、または5化学薬品ジャスモン酸メチル、サリチル酸、ステロイドホルモン、アルコール、Safeners国際特許公開第WO97/06269号によって調節されるプロモーターを含む、環境、ホルモン、化学、および/または発育シグナルに応答して調節される、種々の植物遺伝子プロモーターも使用することができ、または6器官特異的プロモーターを使用することも有益であり得る。本明細書で使用される植物貯蔵器官特異的プロモーターという用語は、他の植物組織と比較したときに、植物の貯蔵器官における遺伝子転写を選好的に指令するプロモーターを指す。好ましくは、プロモーターは、貯蔵器官における関心の遺伝子の発現を指令するだけであり、ならびに/または葉等の植物の他の部分における関心の遺伝子の発現は、ノーザンブロット分析および/もしくはRT-PCRによって検出できない。典型的に、プロモーターは、貯蔵器官の成長および発育中の、特に貯蔵器官における貯蔵化合物の合成および蓄積段階中の、遺伝子の発現を駆動する。そのようなプロモーターは、双子葉植物の種子における種皮、胚、もしくは子葉、または単子葉植物の種子の胚乳もしくはアリューロン層等の、植物貯蔵器官全体またはその一部だけにおいて遺伝子発現を駆動することができる。ジャガイモ植物の塊茎、トマトの実、またはダイズ、キャノーラ、綿、ゼアマイス、コムギ、イネ、およびオオムギの種子等の植物のシンク組織における発現の目的で、本発明で利用されるプロモーターは、これらの特異的組織において比較的高い発現を有することが好ましい。塊茎特異的または塊茎で増強された発現を伴う遺伝子に対する多くのプロモーターが知られており、クラスIパタチンプロモーター、ジャガイモ塊茎ADPGPP遺伝子に対するプロモーター、大サブユニットおよび小サブユニットの双方、スクロースシンターゼプロモーター、22kDタンパク質複合体およびプロテイナーゼ阻害剤を含む大塊茎タンパク質に対するプロモーター、顆粒結合デンプンシンターゼ遺伝子GBSSに対するプロモーター、ならびに他のクラスIおよびIIパタチンプロモーターが挙げられる。また、他のプロモーターを使用して、種子または果実等の特異的組織においてタンパク質を発現させることもできる。β-コングリシニンに対するプロモーター、またはナピン、ゼイン、リニン、およびファゼオリンプロモーター等の他の種子特異的プロモーターを使用することができる。根特異的プロモーターを使用してもよい。そのようなプロモーターの一例は、酸キチナーゼ遺伝子に対するプロモーターである。根組織における発現は、特定されたCaMV35Sプロモーターの根特異的サブドメインを利用することによって達成することも可能である。特に好ましい実施形態において、プロモーターは、脂質生合成が行われる組織および器官における発現を指令する。そのようなプロモーターは、種子における脂質組成物を修飾するのに好適な時点で種子の発育時に作用する。さらなる特に好ましい実施形態において、プロモーターは、植物貯蔵器官特異的プロモーターである。一実施形態において、植物貯蔵器官特異的プロモーターは、種子特異的プロモーターである。より好ましい実施形態において、プロモーターは、種子の胚における発現と比較して、または葉等の植物における他の器官と比較して、双子葉植物の子葉における、または単子葉植物の胚乳における発現を選好的に指令する。種子特異的発現のための好ましいプロモーターとしては、1デサチュラーゼおよびエロンガーゼ等の、種子における脂質生合成および蓄積に関与する酵素をコードする遺伝子に由来するプロモーター、2種子貯蔵タンパク質をコードする遺伝子に由来するプロモーター、ならびに3種子における炭水化物生合成および蓄積に関与する酵素をコードする遺伝子に由来するプロモーターが挙げられる。好適である種子特異的プロモーターは、アブラナナピン遺伝子プロモーター米国特許第US5,608,152号、ビキアファバUSPプロモーターBaumlein他,1991、アラビドプシスオレオシンプロモーター国際特許公開第WO98/45461号、ファセオルスウルガリスファゼオリンプロモーター米国特許第US5,504,200号、ブラッシカBce4プロモーター国際特許公開第WO91/13980号、またはレグミンB4プロモーターBaumlein他,1992、およびトウモロコシ、オオムギ、コムギ、ライムギ、イネ等の単子葉植物において種子特異的発現を誘導するプロモーターである。好適である顕著なプロモーターは、オオムギlpt2もしくはlpt1遺伝子プロモーター国際特許公開第WO95/15389号および国際特許公開第WO95/23230号または国際特許公開第WO99/16890号で説明されるプロモーターオオムギホルデイン遺伝子、イネグルテリン遺伝子、イネオリジン遺伝子、イネプロラミン遺伝子、コムギグリアジン遺伝子、コムギグルテリン遺伝子、トウモロコシゼイン遺伝子、オートムギグルテリン遺伝子、モロコシカジリン遺伝子、ライムギセカリン遺伝子に由来するプロモーターである。他のプロモーターとしては、Broun他1998、Potenza他2004、米国特許公開第US20070192902号および米国特許公開第US20030159173号で説明されるものが挙げられる。一実施形態において、種子特異的プロモーターは、子葉または胚乳等の種子の規定の部分において選好的に発現する。子葉特異的プロモーターの例としては、FP1プロモーターEllerstrom他,1996、エンドウレグミンプロモーターPerrin他,2000、およびビーンフィトヘマグルトニンプロモーターPerrin他,2000が挙げられるが、これらに限定されない。胚乳特異的プロモーターの例としては、メイズゼイン-1プロモーターChikwamba他,2003、イネグルテリン-1プロモーターYang他,2003、オオムギD-ホルデインプロモーターHorvath他,2000、およびコムギHMWグルテニンプロモーターAlvarez他,2000が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる実施形態において、種子特異的プロモーターは、胚において、および/または種子の発芽後に、発現しないか、または低レベルでしか発現しない。別の実施形態において、植物貯蔵器官特異的プロモーターは、塊茎特異的プロモーターである。例としては、ジャガイモパタチンB33、PAT21、およびGBSSプロモーター、ならびにサツマイモスポラミンプロモーター概説について、Potenza他,2004を参照されたいが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、プロモーターは、塊茎の外層表皮、樹皮または胚と比較して、選好的に塊茎の髄中における発現を指令する。別の実施形態において、植物貯蔵器官特性プロモーターは、果実特異的プロモーターである。例としては、トマトポリガラクツロナーゼ、E8およびPdsプロモーター、ならびにリンゴACCオキシダーゼプロモーター概要について、Potenza他,2004を参照されたいが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、プロモーターは、果実の表皮または果実内の種子と比較して、果実の可食部、例えば果実の髄における発現を選好的に指令する。5’非翻訳リーダー配列は、本発明のポリヌクレオチドの異種遺伝子配列を発現するように選択されるプロモーターに由来することができ、または生成すべき酵素のコード領域に対して異種であってもよく、および所望であれば、mRNAの翻訳を増加させるように特異的に修飾することができる。導入遺伝子の発現を最適化する概説については、Koziel他1996を参照されたい。また、5’非翻訳領域は、植物ウイルスRNAとりわけ、タバコモザイクウイルス、タバコエッチウイルス、メイズ萎縮モザイクウイルス、アルファルファモザイクウイルスから、好適な真核細胞遺伝子、植物遺伝子コムギおよびトウモロコシクロロフィルa/b結合タンパク質遺伝子リーダーから、または合成遺伝子配列から得ることもできる。本発明は、非翻訳領域がプロモーター配列を伴う5’非翻訳配列に由来する構築体に限定されない。リーダー配列はまた、無関係なプロモーターまたはコード配列に由来することもできる。本発明の状況において有用なリーダー配列は、メイズHsp70リーダー米国特許第US5,362,865号および米国特許第US5,859,347号、およびTMVオメガエレメントを含む。転写の終結は、発現ベクターにおいて関心のポリヌクレオチドに操作可能に連結される3’非翻訳DNA配列によって達成される。組み換えDNA分子の3’非翻訳領域は、植物においてアデニレートヌクレオチドをRNAの3’末端に付加させるように機能する、ポリアデニル化シグナルを含む。3’非翻訳領域は、植物細胞において発現される種々の遺伝子から得ることができる。一般に、この能力において、ノパリンシンターゼ3’非翻訳領域、エンドウ小サブユニットルビスコ遺伝子由来の3’非翻訳領域、ダイズ7S種子貯蔵タンパク質遺伝子由来の3’非翻訳領域を使用することができる。また、アグロバクテリウム腫瘍誘導性Tiプラスミド遺伝子のポリアデニル化シグナルを含む、3’転写非翻訳領域も好適である。組み換えDNA技術は、例えば、宿主細胞内のポリヌクレオチドのコピー数、それらのポリヌクレオチドを転写する効率、結果として生じた転写物を翻訳する効率、および翻訳後修飾の効率を操作することによって、形質転換ポリヌクレオチドの発現を改善するために使用することができる。本明細書で定義されるポリヌクレオチドの発現を増加させるのに有用な組み換え手法としては、ポリヌクレオチドの高コピー数プラスミドへの操作可能な連結、ポリヌクレオチド分子の1つ以上の宿主細胞染色体への組み込み、ベクター安定配列のプラスミドへの追加、転写制御シグナル例えば、プロモーター、オペレーター、エンハンサーの置換または修飾、転写制御シグナル例えば、リボソーム結合部位、シャイン-ダルガルノ配列の置換または修飾、宿主細胞のコドン使用に対応するポリヌクレオチドの修飾、および転写物を不安定にする配列の欠失が挙げられるが、これらに限定されない。転移核酸転移核酸は、外因性ポリヌクレオチドを細胞に送達するために使用することができ、1つ、好ましくは2つの境界配列と、関心のポリヌクレオチドとを含む。転移核酸は、選択可能なマーカーをコードしてもよく、またはコードしなくてもよい。好ましくは、転移核酸は、細菌におけるバイナリーベクターの一部を形成し、バイナリーベクターは、細菌におけるベクターの複製を可能にするか、またはベクターを含む細菌細胞の選択もしくは維持を可能にする要素をさらに含む。真核細胞へ転移すると、バイナリーベクターの転移核酸成分は、真核細胞をゲノムに組み込むことができる。本明細書において使用される染色体外転移核酸という用語は、アグロバクテリウム種等の細菌から植物の葉細胞等の真核細胞に転移させることが可能な、核酸分子を指す。染色体外転移核酸は、転移させることが可能であり、その後に、その境界内に含まれるヌクレオチド配列をレシピエント細胞のゲノムに組み込むことを伴う要素としてよく知られている、遺伝的要素である。この点で、転移核酸は、典型的に、2つの境界配列が側面に位置するが、いくつかの事例において、一方の末端の単一の境界を使用することができ、転移させた核酸の第2の末端が、転移プロセスでランダムに生成される。関心のポリヌクレオチドは、典型的に、転移核酸の左境界様配列と右境界様配列との間に位置する。転移核酸内に含まれるポリヌクレオチドは、その発現、すなわち、ポリヌクレオチドの転写および/または翻訳を容易にする様々な異なるプロモーターおよびターミネーター調節要素に操作可能に連結されてもよい。アグロバクテリウムツメファシエンスまたはアグロバクテリウムリゾゲネス等のアグロバクテリウム種に由来する転移DNAT-DNAおよびその人工の変異形/変異体は、おそらく、転移核酸の最高に特徴付けられている例である。別の例は、植物に由来するT-DNA境界様配列を含む、P-DNA植物DNAである。本明細書で使用されるT-DNAは、例えば、アグロバクテリウムツメファシエンスTiプラスミドのT-DNAを指すか、またはアグロバクテリウムリゾゲネスRiプラスミドもしくはT-DNA転移DNAとして機能するその人工の変異形に由来するT-DNAを指す。T-DNAは、右境界配列および左境界配列の両方を含むT-DNA全体を含み得るが、転移のためには、シスにおいて必要とされる最小の配列、すなわち、右境界配列およびT-DNA境界配列を含むことだけしか必要としない。本発明のT-DNAは、存在する場合右境界配列および左境界配列の間のどこかで、部位特異的リコンビナーゼに対する標的部位が側面に並ぶ関心のポリヌクレオチドをそれらに挿入している。vir遺伝子等の、植物細胞の中にT-DNAを転移させるためにトランスにおいて必要とされる因子をコードする配列は、T-DNAの中に挿入さてもよく、またはT-DNAと同じレプリコン上に存在してもよく、または、好ましくは、アグロバクテリウム宿主の適合性レプリコン上のトランスに存在する。そのようなバイナリーベクター系は、当技術分野でよく知られている。本明細書において使用されるP-DNAは、植物ゲノムから単離された転移核酸またはその人工の変異形/変異体を指し、各末端または一方の末端だけにT-DNA境界様配列を含む。境界様配列は、好ましくは、アグロバクテリウムツメファシエンスまたはアグロバクテリウムリゾゲネス等のアグロバクテリウム種由来のT-DNA境界配列と、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも90、または少なくとも95であるが、100未満の配列同一性を共有する。したがって、P-DNAは、P-DNA内に含まれるヌクレオチド配列を、例えばアグロバクテリウムから別の細胞に転移させるために、T-DNAの代わりに使用することができる。P-DNAは、転移させる外因性ポリヌクレオチドの挿入前に、クローニングを容易にするために修飾してもよく、好ましくは、いかなるタンパク質もコードするべきでない。P-DNAは、少なくとも右境界配列を含み、好ましくは左境界配列も含むことを特徴とする。本明細書で使用される転移核酸の境界配列は、植物もしくは細菌等の選択した生物から単離することができ、またはその人工の変異形/変異体とすることができる。境界配列は、それが連結するポリヌクレオチドの転移を促進し、かつ容易にし、また、レシピエント細胞ゲノムにおけるその組込みを容易にし得る。一実施形態において、境界配列は、長さが5~100塩基対bp、長さが10~80bp、長さが15~75bp、長さが15~60bp、長さが15~50bp、長さが15~40bp、長さが15~30bp、長さが16~30bp、長さが20~30bp、長さが21~30bp、長さが22~30bp、長さが23~30bp、長さが24~30bp、長さが25~30bp、または長さが26~30bpの間である。アグロバクテリウム種に由来するT-DNAに由来する境界配列は、当技術分野でよく知られており、Lacroix他2008、TzfiraおよびCitovsky2006、ならびにGlevin2003で説明されるものが挙げられる。従来、遺伝子を植物細胞に転移させるためにアグロバクテリウム種だけが使用されてきたが、現在、アグロバクテリウム種と類似の方法で作用する、特定/開発された数多くの系が存在する。近年、いくつかの非アグロバクテリウム種が、遺伝子転移に適切になるように遺伝的に修飾されているChung他,2006、Broothaerts他,2005。これらには、リゾビウム種NGR234、シノリゾビウムメリロティおよびメゾリゾビウムロティが挙げられる。細菌は、形質転換プロセスに必要とされる機構を伴う細菌、すなわち、アグロバクテリウムTiプラスミドおよび別々の小さいバイナリープラスミド上に存在するT-DNAセグメントによってコードされる一組の病原性遺伝子を提供することによって、遺伝子転移に対して適切なものとされる。このようにして操作される細菌は、異なる植物組織葉片、カルス、および楕円形組織、単子葉植物または双子葉植物、ならびに種々の異なる植物種例えば、タバコ、イネを形質転換することが可能である。細菌から真核生物宿主への真核生物発現プラスミドの直接転移は、最初に、哺乳類細胞およびプラスミド担持大腸菌のプロトプラストの融合によって、数十年前に達成されたSchaffner,1980。それ以後、4つのグループSizemore他,1995、Courvalin他,1995、Powell他,1996、Darji他,1997によって独立して発見され、遺伝子を哺乳類細胞中に送達することが可能な細菌の数は、着実に増加しているWeiss,2003。シゲラフレクスネリの病原性プラスミドpWR100によって侵襲性とされた弱毒化S.フレクスネリ、サルモネラチフィムリウム、または大腸菌は、宿主細胞の侵襲、および代謝の減衰による細胞内死の後に、発現プラスミドを転移させることができることを示している。そのような組み換えシゲラまたはサルモネラの経鼻的または経口的のいずれかによる粘膜塗布は、発現プラスミドによってコードした抗原に対する免疫応答を誘発した。その間に、インビトロおよびインビボで発現プラスミドを哺乳類宿主細胞に転移させることができることを示した細菌のリストは、2倍を超え、S.チフィ、S.コレラスイス、リステリアモノサイトゲネス、エルシニアシュードツベルクローシス、およびY.エンテロコリチカについて文書化されているFennelly他,1999、Shiau他,2001、Dietrich他,1998、Hense他,2001、Al-Mariri他,2002。一般に、S.フレクスネリまたはL.モノサイトゲネスのような宿主細胞のサイトゾルに入り、この細胞区画内で溶解することができる全ての細菌は、DNAを転移させることができるはずであると考えられ得る。これは、DNAの転移を起こすために細菌を溶解させなければならないので、不全性または自殺的侵襲として知られているGrillot-Courvalin他,1999。加えて、さらに多くのS.チフィムリウムのような食胞のままである細菌も溶解させることができ得る。したがって、侵襲的であるが、ファゴソーム回避ができないように操作した大腸菌の組み換え実験室株は、それらのプラスミドロードを、感染した哺乳類細胞の核に送達することができ得るGrillot-Courvalin他,1998。さらに、近年、アグロバクテリウムツメファシエンスはまた、導入遺伝子を哺乳類細胞の中に導入することも示されているKunik他,2001。本明細書で使用される形質移入、形質転換という用語およびそれらの変形は、全般的に、同じ意味で使用される。形質移入されたまたは形質転換された細胞は、関心のポリヌクレオチドを導入するように操作されていてもよく、またはそれに由来する子孫細胞であってもよい。組み換え細胞本発明はまた、本明細書で定義される1つ以上のポリヌクレオチドもしくはベクター、またはその組み合わせで形質転換される宿主細胞である、組み換え細胞、例えば、組み換え植物細胞も提供する。本明細書では、組み換え細胞という用語は、トランスジェニック細胞という用語と同じ意味で使用される。本発明の好適な細胞としては、例えば本明細書で説明されるポリペプチドまたは酵素をコードする本発明のポリヌクレオチドまたは組み換えベクターで形質転換することができる、あらゆる細胞が挙げられる。細胞は、好ましくは、それによって、脂質を生成するために使用することができる細胞である。組み換え細胞は、培養物中の細胞、インビトロの細胞、または例えば植物等の生物中の細胞、または例えば種子もしくは葉等の器官中の細胞であってもよい。好ましくは、細胞は、植物中にあり、より好ましくは、植物の種子中にある。ポリヌクレオチドが導入される宿主細胞は、非形質転換細胞か、または少なくとも1個の核酸で既に形質転換された細胞のいずれかとすることができる。そのような核酸は、脂質合成に関連していてもよく、または関連していなくてもよい。本発明の宿主細胞は、本明細書において定義されるポリペプチドを内因的にすなわち、自然に生成することができ得るかその場合、それに由来する組み換え細胞は、ポリペプチドを生成する増強された能力を有する、または本発明の少なくとも1つのポリヌクレオチドで形質転換された後にだけ該タンパク質を生成することができ得る。一実施形態において、本発明の組み換え細胞は、非極性脂質を生成する増強された能力を有する。本発明の宿主細胞は、本明細書で説明される少なくとも1つのタンパク質を生成することができるあらゆる細胞とすることができ、細菌、真菌酵母を含む、寄生生物、節足動物、動物、藻類、および植物細胞が挙げられる。細胞は、原核生物であってもよく、または真核生物であってもよい。好ましい宿主細胞は、酵母、藻類、および植物細胞である。好ましい実施形態において、植物細胞は、種子細胞であり、具体的には、種子の子葉または胚乳における細胞である。一実施形態において、細胞は、動物細胞である。動物細胞は、例えば、非ヒト動物細胞、非ヒト脊椎動物細胞、非ヒト哺乳類細胞、または魚類もしくは甲殻類等の水生動物、無脊椎動物、昆虫等の細胞等、あらゆる種類の動物のものであってもよい。節足動物細胞の非限定的な例としては、スポドプテラフルギペルダSf細胞、例えば、Sf9、Sf21、トリコプルシアニ細胞、およびドロソフィラS2細胞等の、昆虫細胞が挙げられる。本発明の宿主細胞として有用な細菌細胞の例は、シネココッカス種シネコシスティス種としても知られる、例えば、シネココッカスエロンガタスである。本発明の宿主細胞として有用な藻細胞の例としては、例えば、クラミドモナス種例えば、クラミドモナスラインハーディ、ドナリエラ種、ヘマトコッカス種、クロレラ種、スラウストキトリウム種、シゾキトリウム種、およびボルボックス種が挙げられる。ここで記載する核酸の発現のための宿主細胞は、広範囲の温度およびpH値にわたる単炭水化物もしくは複合炭水化物、有機酸、およびアルコール、ならびに/または炭化水素を含む、種々の原料上で成長する微生物宿主を含んでもよい。好ましい微生物宿主は、非極性脂質の合成が自然にできる、油脂性生物である。宿主細胞は、例えば、ヤロウィアリポリティカまたは他の酵母等の、発酵プロセスに好適な生物であってもよい。トランスジェニック植物本発明はまた、本発明の外因性ポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、本発明の細胞、本発明のベクター、またはこれらの組み合わせを含む植物も提供する。植物という用語は、全植物を指すが、その一部という用語は、植物器官例えば、葉、茎、根、花、果実、単一の細胞例えば、花粉、種子、胚、胚乳、胚盤、または種皮等の種子部、脈管組織等の植物組織、植物細胞、およびその子孫を指す。本明細書で使用される植物部は、植物細胞を含む。本明細書で使用される植物という用語は、最も広い意味で使用される。草の種、観賞用もしくは装飾用植物、作物もしくは穀粒例えば、油料種子、メイズ、ダイズ、飼料もしくは馬草、果実もしくは野菜植物、ハーブ植物、木本植物、観花植物、または樹木が挙げられるが、これらに限定されない。植物を任意の特定の構造に限定することを意味するものではない。また、単細胞植物例えば、微細藻類も指す。植物を参照してのその一部という用語は、植物細胞およびその子孫、大部分が群体に分化される複数の植物細胞例えば、ボルボックス、植物の成長の任意の段階で存在する構造体、または植物組織を指す。そのような構造としては、葉、茎、花、果実、木の実、根、種子、種皮、胚が挙げられるが、これらに限定されない。植物組織という用語は、葉、茎、花、果実、木の実、根、種子に存在する、例えば、胚組織、胚乳、真皮組織例えば、表皮、周皮、脈管組織例えば、木質部、篩部、または基本組織柔組織、厚角組織、および/または厚膜組織細胞を含む、ならびに培養物中の細胞例えば、単細胞、プロトプラスト、カルス、胚等といった、分化したおよび分化していない植物の組織を含む。植物組織は、植物体、器官培養物、組織培養物、または細胞培養物中にあってもよい。トランスジェニック植物、遺伝的に修飾された植物、またはそれらの変形は、同じ種、変種、または栽培品種の野生型植物では見出されない導入遺伝子を含む植物を指す。本発明の文脈において定義されるトランスジェニック植物としては、所望の植物またはその一部において本明細書で定義される少なくとも1つのポリペプチドを生成させるように組み換え技術を使用して遺伝的に修飾された植物およびそれらの子孫が挙げられる。トランスジェニック植物部は、対応する意味を有する。本明細書において、種子および穀粒という用語は、同じ意味で使用される。穀粒は、成熟した穀粒、例えば、収穫した穀粒または依然として植物上にあるが収穫される状態にある穀粒を指すが、文脈に応じて、吸水または発芽後の穀粒を指すこともできる。成熟した穀粒は、一般的に、約18~20未満の含水率を有する。本明細書で使用される発育中の種子は、典型的に、受精または開花後の植物の生殖構造において見出される成熟前の種子を指すが、植物から単離された成熟期前のそのような種子も指すことができる。本明細書で使用される植物貯蔵器官という用語は、例えば、タンパク質、炭水化物、脂質の形態でエネルギーを貯蔵するように特殊化された、植物の一部を指す。植物貯蔵器官の実施例は、種子、果実、塊状根、および塊茎である。本発明の好ましい植物貯蔵器官は、種子である。本明細書において使用される表現型的に正常という用語は、未修飾の植物またはその一部と比較したときに、成長し、繁殖する能力が大幅に低下していない、遺伝的に修飾された植物またはその一部、特に、本発明の種子、塊茎、または果実等の貯蔵器官を指す。一実施形態において、表現型的に正常な遺伝的に修飾された植物またはその一部は、植物貯蔵器官特異的プロモーターに操作可能に連結されるサイレンシングサプレッサーをコードする組み換えポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドを含まない対応する植物またはその一部と基本的に同じである成長または繁殖する能力を有する。好ましくは、バイオマス、成長速度、発芽率、貯蔵器官のサイズ、種子のサイズ、および/または生成された生存可能な種子の数は、同一の条件下で成長させたときに、該組み換えポリヌクレオチドが欠如している植物のバイオマス、成長速度、発芽率、貯蔵器官のサイズ、種子のサイズ、および/または生成された生存可能な種子の数の90を下回ることがない。この用語は、野生型植物と異なり得るが、例えば葉の芽のバレリーナ表現型等の、商業的目的のための植物の有用性をもたらさない植物の特徴を包含しない。本発明の実践に際して提供されるか、または使用が企図される植物には、単子葉植物および双子葉植物の双方が含まれる。好ましい実施形態において、本発明の植物は、作物植物例えば、穀類および豆類、メイズ、コムギ、ジャガイモ、タピオカ、イネ、ソルガム、キビ、カッサバ、オオムギ、またはエンドウまたは他のマメ類である。植物は、食用の根、塊茎、葉、茎、花、または果実の生成のために成長させられ得る。植物は、野菜または観賞植物であってもよい。本発明の植物は、トウモロコシゼアマイス、カノーラブラシカナパス、ブラッシカラパ亜種、他のブラッシカ例えば、ルタバガブラシカナポブラシカまたはブラシカカメリナ、サトウダイコンベータバルガリスクローバートリフォリウム種、アマリナムウシタチシマム、アルファルファメディカゴサティバ、イネオリザサティバ、ライムギセカレケラレ、モロコシソルガムバイカラー、ソルガムブルガレ、ヒマワリヘリアンサスアンヌス、コムギトリチウムアエスチブム、ダイズグリシネマク、タバコニコチアナタバカム、ジャガイモソラナムチュベロスム、ピーナッツアラキスヒポゲア、綿ゴシピウムヒルスツム、サツマイモロプモエアバタツス、カッサバマニホトエスクレンタ、コーヒーコフェア種、ココナッツココスヌシフェラ、パイナップルアナナコモスス、柑橘類の樹木シトラス種、ココアテオブロマカカオ、茶カメリアセネンシス、バナナムサ種、アボカドパーシーアメリカーナ、イチジクフィクスカシカ、グァバプシディウムグアジャバ、マンゴーマンギフェラインディカ、オリーブオレアユーロピア、パパイアカリカパパヤ、カシューアナカルジウムオクシデンタレ、マカダミアマカダミアインテルグリフォリア、アーモンドプルナスアミグダラス、サトウダイコンベータバルガリス、オートムギ、またはオオムギであってもよい。他の好ましい植物としては、C4草アンドロポゴンゲラルディイ、ボウテロアクルチペンデュラ、B.グラシリス、ブークロエダクティルオイディーズ、パニクムビルガツム、スキザクリウムスコパリウム、ミスカンサス種例えば、ミスカンサスギガンテウスおよびミスカンサスシネンシス、ソルガストラムヌタンス、スポロボルスクリプタンサス、スイッチグラスパニクムビルガツム等、C3草エリムスカナデンシス、マメ科植物のレスペデザカピタータおよびペタロステマムビロスム、広葉草本のアスターアズレウス等、および木質の植物クエルクスエリプソイダリスおよびQ.マクロカルパ等が挙げられる。好ましい実施形態において、植物は、被子植物である。一実施形態において、植物は、油料種子植物、好ましくは油料種子作物植物である。本明細書で使用される油料種子植物とは、植物の種子からの脂質の商業的生成に使用される、植物種である。油料種子植物は、アブラナ例えば、カノーラ、メイズ、ヒマワリ、ベニバナ、ダイズ、モロコシ、アマアマニ、またはサトウダイコンであってもよい。さらに、油料種子植物は、他のブラッシカ、綿、ピーナッツ、ケシ、マスタード、トウゴマ、ゴマ、ベニバナ、または木の実を生成する植物であってもよい。植物は、その果実例えば、オリーブ、アブラヤシ、またはココナッツにおいて高レベルの脂質を生成し得る。本発明が適用され得る園芸植物は、レタス、エンダイブ、またはキャベツ、ブロッコリもしくはカリフラワーを含む野菜のブラッシカである。本発明は、タバコ、ククルビット、ニンジン、イチゴ、トマト、またはコショウに適用され得る。好ましい実施形態において、トランスジェニック植物は、その子孫が所望の表現型を分離しないように導入されたどの遺伝子導入遺伝子に対してもホモ接合性である。トランスジェニック植物はまた、例えばハイブリッド種子から成長したF1子孫等に導入された導入遺伝子に対してヘテロ接合性、好ましくは導入遺伝子に対して一様にヘテロ接合性であってもよい。そのような植物は、当技術分野でよく知られているハイブリッド強勢等の利点を提供し得る。適切な場合、トランスジェニック植物はまた、LPAAT、LPCAT、PAP、もしくはリン脂質:ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼPDAT1、PDAT2、またはPDAT3、例えば、Ghosal他,2007を参照されたい、またはこれらの2つ以上の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない、非極性脂質の生成に関与する酵素をコードする、付加的な導入遺伝子を含んでもよい。本発明のトランスジェニック植物はまた、外因性ポリヌクレオチドからオレオシンを発現し得る。植物の形質転換トランスジェニック植物は、Slateretal.,PlantBiotechnology-TheGeneticManipulationofPlants,OxfordUniversityPress2003、およびP.ChristouandH.Klee、HandbookofPlantBiotechnology,JohnWileyandSons2004で一般に説明されているもの等の、当技術分野で知られている手法を使用して生成することができる。本明細書で使用される安定的に形質転換する、安定的に形質転換されたという用語、およびそれらの変形は、ポリヌクレオチドが、それらの存在を積極的に選択することを必要とせずに、細胞分裂中に、子孫細胞に転移されるように、ポリヌクレオチドを細胞のゲノムに組み込むことを指す。安定した形質転換体またはその子孫は、染色体DNAに対するサザンブロットまたはゲノムDNAのinsituハイブリダイゼーション等の、当技術分野で知られているあらゆる手段によって選択することができる。一過性発現のために、または植物細胞ゲノムにおけるDNAの安定的な組み込みのために、植物組織全体もしくは植物器官の細胞、または組織培養物中の外植体にDNAを導入することができるので、アグロバクテリウム媒介転移は、遺伝子を植物細胞の中に導入するための広く適用可能な系である。DNAを植物細胞の中に導入するためのアグロバクテリウム媒介植物組み込みベクターの使用は、当技術分野でよく知られている例えば、米国特許第US5177010号、米国特許第US5104310号、米国特許第US5004863号、または米国特許第US5159135号を参照されたい。転移されるDNAの領域は、境界配列によって定義され、介在DNAT-DNAは、通常、植物ゲノムの中に挿入される。さらに、T-DNAの組み込みは、比較的精密なプロセスであり、再配列をほとんどもたらさない。アグロバクテリウム媒介形質転換が効率的である植物品種では、遺伝子転移の容易かつ定義された性質のため、それが最適な方法である。好ましいアグロバクテリウム形質転換ベクターは、大腸菌ならびにアグロバクテリウムにおける複製が可能であり、Klee他が、PlantDNAInfectiousAgents,HohnandSchell,eds.,Springer-Verlag,NewYork,pp.179-2031985で説明しているように、好都合な操作を可能にする。使用され得る加速法としては、例えば、マイクロプロジェクタイルボンバードメント等が挙げられる。形質転換核酸分子を植物細胞に送達するための方法の1つの例は、マイクロプロジェクタイルボンバードメントである。この方法は、Yangetal.,ParticleBombardmentTechnologyforGeneTransfer,OxfordPress,Oxford,England1994によって概説されている。非生物学的粒子マイクロプロジェクタイルを核酸で被覆して、推進力によって細胞の中に送達してもよい。例示的な粒子としては、タングステン、金、白金等から成るものが挙げられる。マイクロプロジェクタイルボンバードメントの特別の利点は、単子葉植物を再現的に形質転換する有効な手段であることに加えて、原形質体の単離も、アグロバクテリウム感染に対する感受性も必要としないことである。加速によってDNAをゼアマイス細胞に送達するための方法の例示的実施形態は、DNAで被覆した粒子を、ステンレス鋼またはNytexスクリーン等のスクリーンを通して、懸濁液中で培養したトウモロコシ細胞で覆ったフィルタ表面上に推進するために使用することができる、Biolisticsα粒子送達システムである。本発明とともに使用するのに適切な粒子送達システムは、Bio-RadLaboratoriesから入手可能なヘリウム加速PDS-1000/He銃である。ボンバードメントのために、懸濁液中の細胞は、フィルタ上で濃縮させてもよい。衝突される細胞を含むフィルタは、マイクロプロジェクタイルストッピングプレートの下側に適切な距離で位置付けられる。所望により、銃と衝突される細胞との間に1つ以上のスクリーンも配置される。代替として、未成熟胚または他の標的細胞を固体培養培地上に配置してもよい。衝突される細胞は、マイクロプロジェクタイルストッピングプレートの下側に適切な距離で配置される。所望により、加速デバイスと衝突される細胞との間に1つ以上のスクリーンも配置される。本明細書で説明される手法の使用により、マーカー遺伝子を一過性に発現する細胞の最高1000個以上の増殖巣が得られ得る。ボンバードメントの48時間後に遺伝子産物を発現する増殖巣中の細胞数は、多くの場合1~10個の範囲であり、平均1~3個の範囲である。ボンバードメント形質転換では、最大数の安定した形質転換体を生ずるように、ボンバードメント前培養条件およびボンバードメントパラメータを最適化してもよい。この技術では、ボンバードメントに関する物理的パラメータおよび生物学的パラメータの双方が重要である。物理的因子は、DNA/マイクロプロジェクタイルの沈殿物の操作に関与するもの、または、マクロプロジェクタイルもしくはマイクロプロジェクタイルのいずれかの飛行および速度に影響を及ぼすものである。生物学的因子としては、ボンバードメント前および直後の細胞の操作に関与する全てのステップ、ボンバードメントと関連する外傷の軽減を補助するための標的細胞の浸透圧調整、また、線形化DNAまたは無損傷超螺旋プラスミド等の形質転換DNAの性質が挙げられる。ボンバードメント前操作は、未成熟胚の効を奏する形質転換のために特に重要であると考えられる。別の代替的実施形態では、プラスチドを安定的に形質転換させることができる。高等植物におけるプラスチド形質転換について開示されている方法としては、選択可能なマーカーを含むDNAの粒子銃送達、および相同的組み換えを通してのプラスチドゲノムへのDNAの標的化が挙げられる米国特許第US5,451,513号、米国特許第US5,545,818号、米国特許第US5,877,402号、米国特許第US5,932,479号、および国際特許公開第WO99/05265号。故に、条件を十分に最適化するために、小規模な研究でボンバードメントパラメータの種々の側面を調整することが望ましくなり得ると考えられる。特に、間隙距離、飛行距離、組織距離、およびヘリウム圧力等の物理的パラメータの調整が特に望まれる場合がある。また、レシピエント細胞の生理学的状態に影響を及ぼし、したがって、形質転換および組み込みの効率に影響を及ぼし得る条件を修正することによって、外傷低減因子を最小にする場合もある。例えば、浸透圧状態、組織水和、および継代培養状態、またはレシピエント細胞の細胞周期を、最適な形質転換のために調整してもよい。他の日常的な調整の実行は、本開示に照らして当業者に知られるであろう。植物プロトプラストの形質転換は、リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレングリコール処理、電気穿孔、およびこれらの処理の組み合せに基づいた方法を使用して達成することができる。異なる植物の種類に対するこれらの系の適用は、プロトプラストからその特定の植物株を再生する能力に依存する。プロトプラストから穀類を再生するための例示的な方法が説明されているFujimura他,1985、Toriyama他,1986、Abdullah他,1986。細胞形質転換の他の方法を使用することもでき、そのような方法としては、花粉の中への直接のDNA転移によって、植物の生殖器官の中へのDNAの直接注入によって、または未成熟胚の細胞の中へのDNAの直接注入、その後の乾燥させた胚の再水和によって、植物の中にDNAを導入することが挙げられるが、これらに限定されない。単一植物プロトプラストの形質転換体からの、または種々の形質転換された外植体からの、植物の再生、発育、および栽培は、当技術分野でよく知られているWeissbachetal.,MethodsforPlantMolecularBiology,AcademicPress,SanDiego,Calif.,1988。この再生および成長プロセスは、典型的に、形質転換細胞を選択するステップ、個別化した細胞を、発根した苗木段階を経て、通常の胚の発育段階を通して培養するステップを含む。トランスジェニック胚および種子は、同様に再生される。その後に、結果として生じたトランスジェニック発根芽を、土壌等の適切な植物成長培地に植え付ける。外来の外因性遺伝子を含む植物の発育または再生は、当技術分野でよく知られている。好ましくは、再生植物を自家授粉させて、ホモ接合性トランスジェニック植物を提供する。それ以外の場合、再生植物から得られた花粉を、農学的に重要な系列の種子から成長させた植物に交配する。逆に、これらの重要な系列の植物からの花粉を使用して、再生植物に授粉する。所望のポリヌクレオチドを含む本発明のトランスジェニック植物は、当業者によく知られている方法を使用して栽培される。主としてアグロバクテリウムツメファシエンスの使用による、双子葉植物を形質転換するための方法、およびトランスジェニック植物を得るための方法が、綿米国特許第US5,004,863号、米国特許第US5,159,135号、米国特許第US5,518,908号、ダイズ米国特許第US5,569,834号、米国特許第US5,416,011号、ブラッシカ米国特許第US5,463,174号、落花生Cheng他,1996、およびエンドウGrant他,1995について公開されている。外因性核酸の導入によって遺伝的変種を植物の中に導入するために、ならびにプロトプラストまたは未成熟植物胚から植物を再生するために、コムギおよびオオムギ等の穀物植物を形質転換するための方法は、当技術分野においてよく知られており、例えば、カナダ特許第CA2,092,588号、豪州特許第AU61781/94号、豪州特許第AU667939号、米国特許第US6,100,447号、国際特許公開第PCT/US97/10621号、米国特許第US5,589,617号、米国特許第US6,541,257号を参照されたく、また、他の方法は、国際特許公開第WO99/14314号に記載されている。好ましくは、トランスジェニックコムギまたはオオムギ植物は、アグロバクテリウムツメファシエンス媒介形質転換手順によって生成される。所望のポリヌクレオチドを担持するベクターは、組織培養した植物もしくは外植体の再生可能なコムギ細胞、またはプロトプラスト等の適切な植物系の中に導入されてもよい。再生可能なコムギ細胞は、好ましくは、未成熟胚の胚盤、成熟胚の胚盤、これらに由来するカルス、または分裂組織に由来する。トランスジェニック細胞およびトランスジェニック植物における導入遺伝子の存在を確認するために、当業者に知られている方法を使用して、ポリメラーゼ連鎖反応PCR増幅またはサザンブロット分析を行うことができる。導入遺伝子の発現産物は、その産物の性質に依存して、種々の方法のいずれかで検出することができ、そのような方法としては、ウエスタンブロット法および酵素アッセイが挙げられる。タンパク質発現を数量化するための、および異なる植物組織における複製を検出するための1つの特に有用な方法は、GUS等のレポーター遺伝子を使用することである。トランスジェニック植物が得られると、それらを成長させて、所望の表現型を有する植物組織または一部が生成され得る。植物組織または植物部は、収穫してもよく、および/または種子を採集してもよい。この種子は、所望の特徴を有する組織または一部を伴う付加的な植物を成長させるための源としての役割を果たし得る。アグロバクテリウムまたは他の形質転換方法を使用して形成されたトランスジェニック植物は、典型的には、1つの染色体上に単一の遺伝子座を含む。そのようなトランスジェニック植物は、付加遺伝子に対してヘミ接合性であると称することができる。付加遺伝子に対してホモ接合性であるトランスジェニック植物、すなわち、2つの付加遺伝子染色体対の各染色体上の同じ遺伝子座に1つの遺伝子を含むトランスジェニック植物が、より好ましい。ホモ接合性トランスジェニック植物は、ヘミ接合性トランスジェニック植物を自家受精させ、生成した種子の一部を発芽させ、そして、結果として生じた植物を関心の遺伝子について分析することによって得ることができる。2つの独立して隔離した外因性遺伝子または遺伝子座を含む2つの異なるトランスジェニック植物を交配させて掛け合わせて、両組の遺伝子または遺伝子座を含む子孫を生成することができることも理解されたい。適切なF1子孫の自殖は、双方の外因性遺伝子または遺伝子座に対してホモ接合性である植物を生成することができる。栄養繁殖と同じように、親植物への戻し交配および非トランスジェニック植物との異系交配も企図される。異なる形質および作物に一般的に使用される他の増殖方法の説明は、FehrのBreedingMethodsforCultivarDevelopment,WilcoxJ.ed.,AmericanSocietyofAgronomy,MadisonWis.1987に見出すことができる。TILLING法一実施形態において、TILLING法TargetingInducedLocalLesionsINGenomesは、内因性遺伝子、例えば、DGAT、sn-1-グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼGPAT、1-アシル-グリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼLPAAT、アシルCoA:リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼLPCAT、ホスファチジン酸ホスファターゼPAP、またはその二つ以上の組み合わせをコードする遺伝子がノックアウトされる植物を生成するために使用することができる。第1のステップでは、化学的変異原で種子または花粉を処理することによって新しい単一塩基対変化等の導入変異を、植物の集団において誘発させ、次いで、植物を変異が安定的に継承される世代まで成長させる。DNAを抽出し、種子を、集団の全てのメンバーから貯蔵して、経時的に繰り返して利用することができる供給源を作成する。TILLINGアッセイのために、PCRプライマーは、関心の単一の遺伝子標的を特異的に増幅するように設計される。標的が遺伝子ファミリーのメンバーまたは倍数体ゲノムの一部である場合は、特異性が特に重要である。次に、色素標識したプライマーを使用して、複数の固体のプールしたDNAから、PCR産物を増幅することができる。これらのPCR産物は、ミスマッチ塩基対の形成を可能にするように、変性させ、再アニールする。ミスマッチまたはヘテロ2本鎖は、自然発生的な一塩基多型SNPすなわち、集団からのいくつかの植物が、同じ多型性を持つ可能性がある、および誘発されたSNPすなわち、ごく稀に、個々の植物が変異を示す可能性があるの双方を表す。ヘテロ2本鎖の形成後、ミスマッチDNAを認識して切断する、CelI等のエンドヌクレアーゼの使用は、TILLING集団内で新しいSNPを発見するための鍵である。この手法を使用することで、何千もの植物をスクリーニングして、ゲノムの任意の遺伝子または特定の領域における単一塩基変化、ならびに小挿入もしくは欠失1~30bpを伴うあらゆる個体を特定することができる。アッセイされるゲノム断片は、0.3~1.6kbのサイズの範囲のいずれかになり得る。8重プーリング、1.4kbの断片ノイズのためSNPの検出が問題を含む断片の末端を除く、および1アッセイあたり96レーンで、この組み合わせは、単一のアッセイあたり、ゲノムDNAの最高100万の塩基対をスクリーニングすることを可能にし、TILLINGを高スループットの手法にする。TILLINGは、SladeおよびKnauf2005、ならびにHenikoff他2004でさらに説明されている。変異の効率的な検出を可能にすること加えて、高スループットのTILLING技術は、自然多型性の検出に理想的である。したがって、既知の配列に対してヘテロ2本鎖を形成することによって未知の相同的DNAを確認することは、多型性部位の数および位置を明らかにする。少なくともいくつかの反復数多型性を含む、ヌクレオチドの変化、ならびに小挿入および欠失の双方が特定される。これは、Ecotillingと呼ばれているComai他,2004。各SNPは、2、3個のヌクレオチド内のそのおよその位置に記録される。したがって、各ハプロタイプを、その運動性に基づいて保管することができる。配列データは、ミスマッチ切断アッセイに使用される同じ増幅DNAのアリコートを使用して、比較的小さい漸増作業で入手することができる。単一の反応に対する左側または右側配列決定プライマーは、多型性に対するその近接度によって選択される。Sequencherソフトウエアは、複数のアラインメントを行って、塩基変化を発見し、それぞれの場合において、ゲルバンドを確認する。EcoTILLING法は、完全配列決定よりも安価に行うことができ、現在、この方法が大部分のSNP発見に使用されている。変異させた植物由来のDNAのプールではなく、整列させた生態型DNAを含むプレートをスクリーニングすることができる。検出は、塩基対に近い分解能を伴うゲル上であり、背景パターンは、レーン全体にわたって均一であるので、サイズが同一であるバンドをマッチさせることができ、したがって、単一のステップでSNPを発見して遺伝子型決定することができる。このように、SNPの最終的な配列決定は、簡単かつ効率的であるが、スクリーニングに使用される同じPCR産物のアリコートをDNA配列決定に供することができるという事実によって、さらに簡単かつ効率的になる。外因性RNAレベルおよび安定化した発現の増強転写後遺伝子サイレンシングPTGSは、分解のために細胞mRNAおよびウイルスmRNAの双方を標的とすることができる、ヌクレオチド配列特異的防御機構である。PTGSは、組み換えポリヌクレオチドで安定的または一過性に形質転換された植物または菌類において起こり、導入されたポリヌクレオチドに対する配列類似性を伴うRNA分子の減少した蓄積をもたらす。植物またはその一部の貯蔵器官におけるサイレンシングサプレッサーの発現を制限することによって、RNA分子レベルを増加させることができ、および/または、RNA分子レベルを多くの世代にわたって安定化させることができる。本明細書で使用されるサイレンシングサプレッサーは、特に最初に形質転換された植物からの世代の繰り返しを通じて、植物細胞における異なる導入遺伝子に由来する発現産物のレベルを増強する植物細胞において発現させることができる、いかなるポリヌクレオチドまたはポリペプチドでもある。一実施形態において、サイレンシングサプレッサーは、ウイルスサイレンシングサプレッサーまたはその変異体である。数多くのウイルスサイレンシングサプレッサーが当技術分野で知られており、P19、V2、P38、Pe-Po、およびRPV-P0が挙げられるが、これらに限定されない。好適なウイルスサイレンシングサプレッサーの例としては、国際特許公開第WO2010/057246号で説明されるものが挙げられる。サイレンシングサプレッサーは、本発明の植物またはその一部において安定的に発現し得る。本明細書で使用される安定的に発現されるまたはその変形は、サイレンシングサプレッサーをコードする外因性ポリヌクレオチドが欠如している対応する植物と比較したときに、RNA分子のレベルが、世代の繰り返しを通じて、例えば少なくとも3世代、少なくとも5世代、または少なくとも10世代にわたって、子孫植物において基本的に同じであるか、またはより高いことを指す。しかしながら、この用語は、世代の繰り返しを通じて、前世代と比較したときに、RNA分子のレベルの多少の低下、例えば1世代あたり10以上の低下があるという可能性を排除しない。サプレッサーは、任意の源、例えば、植物、ウイルス、哺乳類等から選択することができる。サプレッサーは、例えば、フロックハウスウイルスB2、ポソスラテントウイルスP14、ポソスラテントウイルスAC2、アフリカカッサバモザイクウイルスAC4、ベンディ黄色葉脈モザイク病C2、ベンディ黄色葉脈モザイク病C4、ベンディ黄色葉脈モザイク病βC1、トマトクロロシスウイルスp22、トマトクロロシスウイルスCP、トマトクロロシスウイルスCPm、トマトゴールデンモザイクウイルスAL2、トマト葉巻病ジャワウイルスβC1、トマト黄化葉巻ジャワウイルスV2、トマト黄化巻葉ウイルス-ChinaC2、トマト黄化葉巻ChinaウイルスY10分離菌βC1、トマト黄化葉巻イスラエル系分離菌V2、リョクトウ黄色モザイクウイルス-VignaAC2、ハイビスカスクロロティックリングスポットウイルスCP、カブクリンクルウイルスP38、カブクリンクルウイルスCP、カリフラワーモザイクウイルスP6、ビート黄色ウイルスp21、シトラストリステイザウイルスp20、シトラストリステイザウイルスp23、シトラストリステイザウイルスCP、ササゲモザイクウイルスSCP、サツマイモクロロティックスタントウイルスp22、キュウリモザイクウイルス2b、トマトアスパーミーウイルスHC-Pro、ビートカーリートップウイルスL2、土壌感染性ムギ類萎縮ウイルス19K、オオムギストライプモザイクウイルスGammab、ポア半潜伏ウイルスGammab、ピーナッツクランプペクルウイルスP15、イネ萎縮ウイルスPns10、ククルビットアブラムシ媒介黄色ウイルスP0、ビートウェスタン黄色ウイルスP0、ジャガイモウイルスXP25、キュウリ葉脈黄変ウイルスP1b、プラムポックスウイルスHC-Pro、サトウキビモザイクウイルスHC-Pro、ジャガイモウイルスY株HC-Pro、タバコエッチウイルスP1/HC-Pro、カブモザイクウイルスP1/HC-Pro、コックスフットモットルウイルスP1、コックスフットモットルウイルス-ノルウェー系分離菌P1、イネ黄色モットルウイルスP1、イネ黄色モットルウイルス-ナイジェリア系分離菌P1、イネオーハブランカウイルスNS3、イネストライプウイルスNS3、アブラナ感染性タバコモザイクウイルス126K、アブラナ感染性タバコモザイクウイルスp122、タバコモザイクウイルスp122、タバコモザイクウイルス126、タバコモザイクウイルス130K、タバコラットルウイルス16K、トマトブッシースタントウイルスP19、トマトスポッテッドウイルトウイルスNS、リンゴクロロティックリーフスポットウイルスP50、グレープバインウイルスAp10、BYVp21のブドウ葉巻随伴ウイルス-2相同体、ならびに、その変異形/変異体であってもよい。前述のリストは、サプレッサーを得ることができるウイルス、および各特定のウイルスに由来するサプレッサーのためのタンパク質例えば、B2、P14等またはコード領域の呼称を提供する。サプレッサーの複数のコピーが、使用されてもよい。異なるサプレッサーが、ともに例えば、相前後して使用されてもよい。基本的に、植物貯蔵器官において発現することが望ましいいかなるRNA分子も、サイレンシングサプレッサーと共発現させることができる。RNA分子は、農業形質、耐虫性、耐病性、除草剤耐性、不稔性、穀粒特性等に影響を与え得る。コードされたポリペプチドは、脂質、デンプン、炭水化物、栄養素等の代謝に関与し得、またはタンパク質、ペプチド、脂質、蝋、デンプン、糖、炭水化物、香料、臭気、毒素、カロテノイド、ホルモン、ポリマー、フラボノイド、貯蔵タンパク質、フェノール酸、アルカロイド、リグニン、タンニン、セルロース、糖タンパク質、糖脂質等の合成を担い得る。特定の例において、植物は、ブラッシカ類例えば、アブラナもしくはヒマワリ、ベニバナ、アマ、綿、ダイズ、またはメイズ等の植物における脂質生成のための増加したレベルの酵素を生成した。非極性脂質の生成当技術分野で日常的に行われている手法を使用して、本発明の細胞、生物、またはその一部によって生成される非極性脂質を抽出、処理、精製、および分析することができる。そのような手法は、FereidoonShahidi,CurrentProtocolsinFoodAnalyticalChemistry,JohnWileySons,Inc.2001D1.1.1-D1.1.11、およびPerez-Vich他1998等の出展の文献全体を通して記載および説明されている。種子油の生成典型的に、植物種子は、粗製種子油を生成するために調理、圧搾、および/または抽出され、次いで、脱ガムされ、精製され、消色され、そして、消臭される。一般に、種子を破砕するための手法は、当技術分野で知られている。例えば、油料種子は、水を噴霧することによって、例えば8.5まで含水量を増加させることによって柔らかくし、そして、滑らかなローラーを使用して0.23~0.27mmの間隙設定でフレーク状にすることができる。種子の種類によっては、破砕する前に水を加えなくてもよい。熱の適用は、酵素を不活性化し、さらなる細胞の破裂を促進し、脂質液滴を癒合させ、タンパク質粒子を塊にし、これらの全てが、抽出プロセスを容易にする。大部分の種子油は、スクリュー圧搾機を通過させることによって放出される。次いで、スクリュー圧搾機から排出されたケーキを、ヒートトレースカラムを使用して、例えばヘキサンで溶媒抽出される。代替として、圧搾動作によって生成した粗製種子油に、スロット付きワイヤ排液頂部を伴う沈殿槽を通過させて、圧搾動作中に種子油とともに現れる固形物を除去することができる。浄化した種子油は、プレートおよびフレームフィルタを通過させて、あらゆる残りの微細な固形粒子を除去することができる。所望であれば、抽出プロセスから回収した種子油を、浄化した種子油と組み合わせて、混合粗製種子油を生成することができる。溶媒が粗製種子油から取り除かれると、圧搾されて抽出された部分が組み合わせられて、標準的な脂質処理手順すなわち、脱ガム、苛性精製、消色、および脱臭に供される。脱ガムは、濃縮したリン酸を粗製種子油に添加して非水和性リン脂質を水和可能な形態に変換し、存在する少量の金属をキレート化することによって行うことができる。ガムは、遠心分離によって種子油から分離される。種子油は、十分な量の水酸化ナトリウム溶液を添加して全ての脂肪酸を滴定し、そのように形成された石鹸を除去することによって精製することができる。脱臭は、真空下で種子油を260°Cに加熱し、種子油100mLあたり約0.1mL/分の速度で蒸気を種子油の中に緩やかに導入することによって行うことができる。約30分スパージした後に、種子油を真空下で冷却させる。種子油は、典型的に、ガラス容器に移され、アルゴンでフラッシングされ、その後に、冷凍下で貯蔵される。種子油の量が限られている場合、種子油は、真空下で、例えばParr反応器中に置いて、脱臭にかかったとされる時間と同じ長さで260°Cに加熱することができる。この処理は、種子油の色を改善し、大半の揮発性物質を除去する。脂質の生成のための植物バイオマス光合成に関与する植物の一部例えば、より高度な植物の茎および葉、ならびに藻類等の水生植物も、脂質を生成するために使用することができる。植物の種類とは関係なく、グリーンバイオマスから脂質を抽出するためのいくつかの方法がある。1つの方法は、物理的抽出であるが、これは、しばしば、溶媒抽出を使用しない。これは、いくつかの異なる種類の機械的抽出を使用した従来の方法である。搾油機で圧搾する抽出は一般的な種類であり、スクリュー圧搾機およびラム圧搾機による抽出方法も同様である。これらの方法を使用して抽出される脂質の量は、用いた植物材料および機械的プロセスによって大幅に変動する。機械的抽出は、典型的に、下記で説明される溶媒抽出よりも非効率的である。溶媒抽出では、有機溶媒例えば、ヘキサンを、少なくとも遺伝的に修飾された植物のグリーンバイオマスと好ましくは、グリーンバイオマスを乾燥させてすりつぶした後に混合する。当然、グリーンバイオマス以外の、植物の他の部分例えば、脂質含有種子も同様に、すりつぶして混合することができる。溶媒は、バイオマス中の脂質等を溶解し、次いで、この溶液を、機械的作用によって例えば、前述の圧搾プロセスで、バイオマスから分離する。この分離ステップはまた、濾過によって例えば、圧搾濾過機または類似したデバイスで、または遠心分離等によって行うこともできる。次いで、有機溶媒を、非極性脂質から例えば、蒸留によって分離することができる。この第2の分離ステップは、植物からの非極性脂質を生じ、従来の蒸気再生を用いれば、再使用可能な溶媒を生ずることができる。藻類燃料の生成藻類養殖は、藻類微細藻類を含む。また、植物プランクトン、微細植物、またはプランクトン藻類とも称され、一般的に海藻として知られるの種の養殖を伴う水産養殖の1つの形態である。本発明において有用な藻類の種としては、例えば、クラミドモナス種例えば、クラミドモナスラインハーディ、ドナリエラ種、ヘマトコッカス種、クロレラ種、スラウストキトリウム種、シゾキトリウム種、およびボルボックス種が挙げられる。商業的および産業的な藻類栽培は、食物成分、食物、および藻類燃料の生成を含む、数多くの用途を有する。単一または混合した藻類培養物は、開口池水路型池および湖等または光バイオ反応器において培養することができる。藻類は、マイクロスクリーンを使用して、遠心分離によって、凝集例えば、キトサン、ミョウバン、および塩化鉄を使用したものによって、およびフロス浮選によって収穫することができる。二酸化炭素の供給を中断することで、藻類を自然に凝集させることができ、これは、自己凝集と呼ばれる。フロス浮選では、カルチベーターが水に通気して泡立たせ、次いで、頂部から藻類をすくい取る。超音波および他の収穫方法が、現在開発されている。脂質は、機械的に破砕することによって藻類から分離され得る。藻類は、乾燥させたときに、その脂質含量を保持し、よって、搾油機で圧搾することができる。藻類の株が異なれば、それらの物理的性状も大幅に変動するので、特定の藻類の型について、様々な圧搾構成スクリュー、搾油機、ピストン等がより良好に機能する。藻類から脂質等の細胞成分を放出させるために、浸透圧衝撃が使用されることもある。浸透圧衝撃は、浸透圧力を突然減少させるもので、溶液中の細胞を破裂させることができる。超音波抽出は、抽出プロセス、特に、藻類から脂質を取り出すために用いられる酵素抽出プロセスを加速することができる。超音波は、キャビテーション気泡を溶媒材料中に作成するために使用される。これらの気泡が細胞壁の近くで崩壊すると、結果として生じる衝撃波および液体ジェットが細胞壁の破壊を生じさせ、細胞の内容物を溶媒中に放出させる。藻類からの脂質の抽出には、しばしば、化学溶媒例えば、ヘキサン、ベンゼン、石油エーテルが使用される。ソックスレー抽出は、特殊ガラス器具中で有機溶媒を還流させて、洗浄の繰り返しまたはパーコレーションを通して、藻類から脂質を抽出するために使用することができる。藻類から脂質を抽出するために、酵素抽出を使用してもよい。酵素抽出は、酵素を使用して、水を溶媒として作用させて細胞壁を分解する。酵素抽出は、超音波処理によって支援することができる。超臨界のCO2を溶媒として使用することもできる。この方法では、CO2を加圧下で液化し、超臨界になる液体およびガスの双方の性質を有するまで加熱することで、溶媒として作用することを可能にする。脂質生成のための発酵プロセス本明細書で使用される発酵プロセスという用語は、いかなる発酵プロセス、または発酵ステップをむいかなるプロセスをも指す。発酵プロセスとしては、アルコール例えば、エタノール、メタノール、ブタノール、有機酸例えば、クエン酸、酢酸、イタコン酸、乳酸、グルコン酸、ケトン例えば、アセトン、アミノ酸例えば、グルタミン酸、ガス例えば、H2およびCO2、抗生物質例えば、ペニシリンおよびテトラサイクリン、酵素類、ビタミン類例えば、リボフラビン、ベータカロテンおよびホルモン類を生成するために使用される発酵プロセスが挙げられるが、これらに限定されない。発酵プロセスはまた、消費アルコール業界例えば、ビールおよびワイン、酪農業界例えば、発酵酪農製品、革製品業界、およびタバコ業界で使用される発酵プロセスも含む。好ましい発酵プロセスとしては、当技術分野でよく知られているようなアルコール発酵プロセスが挙げられる。好ましい発酵プロセスは、当技術分野でよく知られているような嫌気性発酵プロセスである。好適な発酵性細胞は、典型的に、発酵させることが可能である、すなわち、グルコースまたはマルトース等の糖を所望の発酵産物に直接的または間接的に変換することが可能である微生物である。発酵性微生物の例としては、酵母等の真菌性生物、好ましくは、油脂性生物が挙げられる。本明細書で使用される油脂性生物は、その乾燥重量の少なくとも25がトリグリセリドとして蓄積するものである。本明細書で使用される酵母としては、サッカロミセス種、サッカロミセスセレビジエ、サッカロミセスカールベルゲンシス、カンジダ種、クルヴェロマイシス種、ピキア種、ハンゼヌラ種、トリコデルマ種、リポミセススターケイ、およびヤロウィアリポリティカが挙げられる。好ましい酵母としては、ヤロウィアリポリティカ、または他の油脂性酵母、およびサッカロミセス種、特に、サッカロミセスセレビジエの株が挙げられる。トランスジェニック微生物は、好ましくは、脂肪酸生合成遺伝子およびアシルトランスフェラーゼ遺伝子の活性を最適化する条件下で成長させる。これは、脂質の最大で最も経済的な収量の生成をもたらす。概して、最適化され得る培地の条件としては、炭素源の種類および量、窒素源の種類および量、炭素対窒素の比率、酸素レベル、成長温度、pH、バイオマス生成段階の長さ、脂質蓄積段階の長さ、および細胞収穫時期が挙げられる。発酵培地は、好適な炭素源を含まなければならない。好適な炭素源としては、単糖類例えば、グルコース、フルクトース、二糖類例えば、ラクトース、スクロース、オリゴ糖、多糖類例えば、デンプン、セルロース、またはこれらの混合物、糖アルコール類例えば、グリセロール、または再生可能な原料例えば、チーズホエー透過物、コーンスティープリーカー、サトウダイコンモラセス、オオムギモルト由来の混合物が挙げられ得るが、これらに限定されない。加えて、炭素源としては、アルカン、脂肪酸、脂肪酸エステル、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質、ならびに植物油例えば、ダイズ油および動物脂肪を含む脂肪酸の種々の商業的供給源が挙げられ得る。加えて、炭素基質としては、鍵となる生化学的中間体への代謝的変換が実証されている、1炭素基質例えば、二酸化炭素、メタノール、ホルムアルデヒド、ギ酸塩、炭素含有アミンが挙げられ得る。したがって、本発明で利用される炭素の供給源は、様々な炭素含有基質を包含し得、宿主微生物の選択によってだけ限定されることが想定される。上述の炭素基質の全ておよびそれらの混合物は、本発明において好適であると考えられるが、好ましい炭素基質は、糖類および/または脂肪酸である。10~22個の炭素を含むグルコースまたは脂肪酸が最も好ましい。窒素は、無機源例えば、NH42SO4または有機源例えば、尿素、グルタミン酸塩から供給されてもよい。適切な炭素源および窒素源に加えて、発酵培地はまた、好適な無機質、塩、共同因子、緩衝剤、ビタミン類、および脂質の生成に必要な微生物の成長および酵素的経路の促進に好適な、当業者に知られている他の成分を含んでもよい。発酵に好適なpHの範囲は、典型的に、約pH4.0~pH8.0であり、初期成長条件の範囲としては、pH5.5~pH7.0が好ましい。発酵は、好気性または嫌気性条件下で行われてもよいが、ここでは、微好気性条件が好ましい。典型的に、代謝の状態は、脂肪の成長と合成/貯蔵との間でバランスを取らなければならないので、油脂性微生物の細胞における高レベルの脂質の蓄積は、2段階プロセスを必要とする。したがって、最も好ましくは、2段階発酵プロセスが微生物における脂質の生成に必要である。この手法において、発酵の第1段階は、細胞塊の生成および蓄積専用であり、迅速な細胞成長および細胞分裂を特徴とする。発酵の第2段階では、高レベルの脂質の蓄積を促進するために、培養物中に窒素欠乏状態を確立することが好ましい。この窒素欠乏の効果は、細胞中のAMPの有効濃度を低減させることであり、それによって、ミトコンドリアのNAD依存性イソクエン酸デヒドロゲナーゼの活性が低減する。これが起こると、クエン酸が蓄積し、したがって、アセチルCoAの大量のプールを細胞質中に形成し、脂肪酸の合成に備える。したがって、この段階は、細胞分裂の停止、それに続く、脂肪酸の合成およびTAGの蓄積を特徴とする。細胞は、典型的に、約30°Cで成長するが、いくつかの研究は、より低い温度での増加した不飽和脂肪酸の合成を示している。プロセスの経済的な側面に基づいて、この温度シフトは、大量の微生物の成長が起こったときに、2段階発酵の第1段階の後に起こる可能性が高い。インスタントな核酸を使用した脂質の商業的生成が所望される場合に、種々の発酵プロセス設計が適用され得ることが想定される。例えば、組み換え微生物宿主由来の脂質の商業的生成は、バッチ、フェドバッチ、または連続発酵プロセスによって生成されてもよい。バッチ発酵プロセスは、閉じた系であり、該系において、培地組成は、プロセスの開始時にセットされ、プロセス中のpHおよび酸素レベルの維持に必要なもの以外は、さらなる添加を受けない。したがって、培養プロセスの開始時に、所望の生物が培地に接種され、培地への付加的な基質すなわち、炭素源および窒素源の追加を伴わずに、成長活性または代謝活性が可能となる。バッチプロセスにおいて、系の代謝物質およびバイオマス組成物は、培養が終了するまで常に変化する。典型的なバッチプロセスにおいて、細胞は、静止遅滞期から高成長対数期までを通して、そして最終的に静止期まで加減し、成長速度は、低下または停止される。静止段階において、未処理のままの細胞は、最終的に死滅する。標準的なバッチプロセスの変形例は、フェドバッチプロセスであり、該プロセスでは、発酵プロセスの間、基質が発酵槽に継続的に添加される。フェドバッチプロセスも、本発明において好適である。フェドバッチプロセスは、カタボライト抑制が細胞の代謝を阻害する傾向があるとき、またはどの時点においても培地中の基質の量を制限することが望ましい場合に有用である。フェドバッチ系における基質濃度の測定は困難であり、したがって、pH、溶解した酸素、および廃ガス例えば、CO2の分圧等の測定可能な因子の変化に基づいて推定され得る。バッチ培養法およびフェドバッチ培養法は、一般的であり、当技術分野でよく知られており、BrockのBiotechnology:ATextbookofIndustrialMicrobiology,2.sup.nded.,SinauerAssociates,Sunderland,Mass.,1989、またはDeshpandeおよびMukund1992で見出され得る。ここで記載する細胞を使用した脂質の商業的生成はまた、発酵プロセスによっても達成され得、該発酵プロセスでは、合成培地が生物反応器に連続的に添加されると同時に、産物回収のために等量の培地体積が同時に除去される。連続培養法は、一般に、細胞を、一定の細胞密度で成長の対数期に維持する。連続培養法または半連続培養法は、細胞成長または最終産物濃度に影響を及ぼす1つの因子もしくは任意の数の因子の調節を可能にする。例えば、1つの手法は、炭素源を制限して、全ての他のパラメータが代謝を加減することを可能にする。他の系では、成長に影響を及ぼすいくつかのの因子が連続的に変化させ得る一方で、培地濁度で測定される細胞濃度は、一定に保たれる。連続系は、恒常的成長を維持することを目指し、したがって、細胞成長速度は、培養物から取り除かれている媒体による細胞の損失に対してバランスを取らなければならない。連続培養プロセスの栄養および成長因子を調節する方法、ならびに産物形成の速度を最大化するための手法は、産業微生物学の技術分野でよく知られており、前掲のBrockによって種々の方法が詳述されている。PUFAを含む脂肪酸は、遊離脂肪酸として、またはアシルグリセロール、リン脂質、スルホリピド、または糖脂質等のエステル化形態で、宿主微生物中に見出され得、当技術分野でよく知られている種々の手段を通して宿主細胞から抽出され得る。概して、PUFAを含む脂肪酸を精製するための手段としては、有機溶媒による抽出、超音波処理、超臨界流体抽出例えば、二酸化炭素を使用する、鹸化および圧搾等の物理的手段、またはそれらの組み合わせが挙げられ得る。特に関心があるのは、水の存在下でのメタノールおよびクロロホルムによる抽出であるBlighおよびDyer,1959。所望により、負に帯電した部分をプロトン化し、それによって、所望の産物の有機層中への分配を増加させるために、水層を酸性化することができる。抽出後、窒素流の下での蒸発によって有機溶媒を除去することができる。複合体の形態で単離したときに、遊離脂肪酸またはそれほど複雑でない関心の複合体を放出するように、産物を酵素的または化学的に切断してもよく、次いで、所望の最終産物を得るために更なる操作に供することができる。望ましくは、脂肪酸の複合体の形態は、水酸化カリウムで切断する。さらなる精製が必要である場合は、標準的な方法を用いることができる。そのような方法としては、抽出、尿素での処理、分別結晶、HPLC、分別蒸留、シリカゲルクロマトグラフィ、高速遠心分離もしくは蒸留、またはこれらの手法の組合せが挙げられる。酸またはアルケニル基等の反応基の保護は、既知の技術例えば、アルキル化またはヨウ素化を通して、任意のステップで行なってもよい。使用される方法としては、メチルエステルを生成するための脂肪酸のメチル化が挙げられる。同様に、保護基は、任意のステップで除去されてもよい。望ましくは、GLA、STA、ARA、DHA、およびEPA含有する画分の精製は、尿素での処理および/または分別蒸留による処理によって達成されてもよい。脂質の用途説明される方法によって生成される脂質は、種々の用途を有する。いくつかの実施形態において、脂質は、食物油として使用される。他の実施形態において、脂質は、精製されて、潤滑剤として、またはプラスチックの合成等の他の工業的用途に使用される。いくつかの好適な実施形態において、脂質は、バイオディーゼルを生成するために精製される。バイオディーゼルバイオディーゼルまたはアルキルエステルの生成は、よく知られている。脂質からのエステル生成には、次の3つの基本的な経路がある。すなわち、1アルコールによる、脂質の塩基触媒エステル交換、2メタノールによる脂質の直接的な酸触媒エステル化、および3脂質の脂肪酸への変換、その後の、酸触媒によるアルキルエステルへの変換、である。いくつかの好ましい実施形態では、脂質をエステル交換して、メチルエステルおよびグリセロールを生成する。いくつかの好ましい実施形態では、触媒カリウムまたは水酸化ナトリウムの存在下で、脂質をアルコールメタノールまたはエタノール等と反応させて、アルキルエステルを生成する。アルキルエステルは、バイオディーゼルに使用すること、または石油に基づく燃料と混合することができる。飼料本発明は、飼料として使用することができる組成物を含む。本発明の目的について、飼料としては、体内に取り込んだときに、1組織に栄養分を与える、もしくは組織を作り上げる、またはエネルギーを供給する役目をする、および/または2十分な栄養状態もしくは代謝機能を維持する、回復させる、もしくは支援する、経腸および/もしくは腸管外摂取を含むヒトまたは動物の摂取のためのあらゆる食品または調製物が挙げられる。本発明の飼料は、乳児および/または幼児のための栄養組成物を含む。本発明の飼料は、例えば、本発明の細胞、本発明の植物、本発明の植物部、本発明の種子、本発明の抽出物、本発明の方法の産物、本発明の発酵プロセスの産物、または適切な担体を伴う組成物を含む。担体という用語は、栄養価を有してもよい、または有しなくてもよいあらゆる成分を包含するように、その最も広い意味で使用される。当業者が理解するように、担体は、飼料を摂取する生物に対して悪影響を有しないように、該飼料における使用に対して好適なものでなければならないまたは十分に低い濃度で使用されなければならない。本発明の飼料は、本明細書で開示される方法、細胞、または生物を使用することによって直接的または間接的に生成される脂質を含む。組成物は、固体または液体形態のいずれかであってもよい。加えて、組成物は、特定の用途に所望される量の食用の多量栄養素、ビタミン、および/または鉱物を含んでもよい。これらの成分の量は、組成物が、正常な個体による使用を意図しているのか、または代謝障害等を罹患している個体等の特別な必要性を有する個体による使用を意図しているのかに応じて変動する。栄養価を有する好適な担体の例としては、食用脂肪、炭水化物、およびタンパク質等の多量栄養素が挙げられるが、これらに限定されない。そのような食用脂肪の例としては、ヤシ油、ルリヂサ油、真菌油、ブラックカラント油、ダイズ油、ならびにモノグリセリドおよびジグリセリドが挙げられるが、これらに限定されない。そのような炭水化物の例としては、グルコース、食用のラクトース、および加水分解されたデンプンが挙げられるが、これらに限定されない。加えて、本発明の栄養組成物において利用され得るタンパク質の例としては、ダイズタンパク質、電気透析されたホエー、電気透析された脱脂乳、ミルクホエー、またはこれらのタンパク質の加水分解物が挙げられるが、これらに限定されない。ビタミンおよび鉱物に関して、カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、塩化物、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、セレニウム、ヨウ素、ならびにビタミンA、E、D、C、およびB複合体が、本発明の飼料組成物に添加されてもよい。また、他のそのようなビタミンおよび無機質が添加されてもよい。本発明の飼料組成物において利用される成分は、半精製起源または精製起源のものとすることができる。半精製または精製とは、天然材料の精製によって、またはデノボ合成によって調製された材料を意味する。本発明の飼料組成物はまた、食餌による補充が必要とされないときであっても、食物に添加されてもよい。例えば、組成物は、あらゆる種類の食物に添加されてもよく、該食物としては、マーガリン、改質バター、チーズ、乳、ヨーグルト、チョコレート、キャンディ、スナック、サラダ油、料理油、料理脂肪、肉、魚、および飲料が挙げられるが、これらに限定されない。サッカロミセス種は、ビールの醸造およびワイン製造の双方で使用され、特にパンを焼く際の薬剤としても使用される。酵母は、野菜抽出物の主成分である。酵母はまた、動物飼料における添加剤としても使用される。本明細書で説明されるように脂質を合成するように適合させた、遺伝的に修飾された酵母株を提供できることが明らかになるであろう。次いで、これらの酵母株を、食品に、ならびにワインおよびビールの製造において使用して、増強した脂肪酸含量を有する産物を提供することができる。加えて、本発明に従って生成される脂肪酸、または対象遺伝子を含み発現するように形質転換された宿主細胞はまた、動物の組織または乳脂肪酸組成をヒトまたは動物の摂取に対してより望ましいものに変化させる、動物の食物サプリメントとしても使用され得る。そのような動物の例としては、ヒツジ、ウシ、ウマ等が挙げられる。さらに、本発明の飼料は、水産養殖で使用して、ヒトまたは動物が摂取する魚における脂肪酸のレベルを増加させることができる。本発明の好ましい飼料は、ヒトまたは他の動物の食物または餌として直接使用され得る、葉、果実、および茎等の植物、種子および他の植物部である。例えば、動物は、野外で成長したそのような植物を直接食べてもよく、または制御された給餌でより多くの計量した量を動物に給餌してもよい。本発明は、ヒトおよび他の動物における多価不飽和脂肪酸レベルを増加させるための餌としての、そのような植物および植物部の使用を含む。組成物本発明はまた、本発明の方法を使用して生成される1つ以上の脂質を含む、組成物、特に医薬組成物も包含する。医薬組成物は、リン酸緩衝食塩水、水、エタノール、ポリオール、植物油、湿潤剤、または乳剤油中水型乳剤等等の、標準的な、よく知られている、無毒の薬学的に許容可能な担体、アジュバント、またはビヒクルと組み合わせた、脂質の1つ以上を含んでもよい。本組成物は、液体形態または固体形態のいずれかであってもよい。例えば、本組成物は、錠剤、カプセル、摂取可能な液体、粉末、局所用軟膏、またはクリームの形態であってもよい。適切な流動性は、例えば、分散液の場合に必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。また、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム等を含むことも望ましくなり得る。そのような不活性希釈剤の他に、本組成物は、湿潤剤等のアジュバント、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、着香剤、および芳香剤を含むこともできる。懸濁液は、活性化合物に加えて、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカントゴム、またはこれらの物質の混合物等の懸濁化剤を含んでもよい。錠剤およびカプセル等の固体剤形は、当技術分野でよく知られている手法を使用して調製することができる。例えば、本発明に従って生成される脂質は、結合剤アカシア、コーンスターチ、またはゼラチン等、崩壊剤ジャガイモデンプンまたはアルギン酸等、および滑沢剤ステアリン酸またはステアリン酸マグネシウム等と組み合わせて、従来の錠剤基剤ラクトース、スクロース、およびコーンスターチ等とともに錠剤成形することができる。カプセル剤は、抗酸化剤および関連の脂質とともにこれらの賦形剤をゼラチンカプセルに組み込むことによって調製することができる。静脈内投与のために、本発明に従って生成される脂質またはその誘導体を、商業的配合物に組み込むことができる。特定の脂肪酸の典型的な投与量は、0.1mg~20gで、1日あたり1回~5回1日最高100g服用され、好ましくは、1日あたり約10mg~約1、2、5または10gの範囲1回または複数回投与で服用である。当技術分野で知られているように、最低で約300mg/日の脂肪酸特に、多価不飽和脂肪酸が望ましい。しかしながら、あらゆる量の脂肪酸が対象にとって有益であることが認識されるであろう。本発明の医薬組成物の可能な投与経路としては、例えば、腸内および腸管外が挙げられる。例えば、液体調製物を経口的に投与してもよい。加えて、均質の混合物を水中に完全に分散させ、生理学的に許容される希釈剤、保存剤、緩衝剤、または噴射剤と無菌条件下で混合して、噴霧剤または吸入剤を形成することができる。対象に投与される組成物の投与量は、当業者によって決定されてもよく、様々な因子、対象の体重、年齢、全体的な健康、既往歴、免疫状態等の種々の要因に依存する。さらに、本発明の組成物は、化粧品の目的で利用されてもよい。この組成物は、混合物が形成されるように、先在の化粧品組成物に添加されてもよく、または本発明に従って生成される脂肪酸を、化粧品組成物中の唯一の活性成分として使用してもよい。ポリペプチドポリペプチドおよびタンパク質という用語は、一般に、同じ意味で使用される。ポリペプチドまたはポリペプチド類は、参照アミノ酸配列に対するそのアミノ酸配列の同一性の程度同一性によって、または一方の参照アミノ酸配列が他方よりも大きい同一性を有することによって定義され得る。参照アミノ酸配列に対するポリペプチドの同一性は、典型的に、ギャップ作成ペナルティ=5およびギャップ伸長ペナルティ=0.3のパラメータで、GAP分析NeedlemanおよびWunsch,1970、GCGプログラムによって決定される。問い合わせ配列は、長さが少なくとも100個のアミノ酸であり、GAP分析は、少なくとも100個のアミノ酸の領域にわたって2つの配列を整合させる。より好ましくは、問い合わせ配列は、長さが少なくとも250個のアミノ酸であり、GAP分析は、少なくとも250個のアミノ酸の領域にわたって2つの配列を整合させる。さらにより好ましくは、GAP分析は、それらの全ての長さにわたって2つの配列を整合させる。ポリペプチドまたはポリペプチド類は、参照ポリペプチドと同じ酵素活性もしくは異なる活性を有してもよく、または参照ポリペプチドの活性が欠如していてもよい。好ましくは、ポリペプチドは、参照ポリペプチドの活性の少なくとも10の酵素活性を有する。本明細書で使用される生物活性断片は、完全長参照ポリペプチドの定義された活性、例えばMGAT活性を維持する、本発明のポリペプチドの一部分である。本明細書で使用される生物活性断片は、完全長ポリペプチドを除外する。生物活性断片は、定義された活性を維持する限り、あらゆるサイズの部分とすることができる。好ましくは、生物活性断片は、完全長ポリペプチドの活性の少なくとも10を維持する。定義されたポリペプチドまたは酵素に関して、本明細書で提供されるものよりも高い同一性の値が、好ましい実施形態を包含することを理解されるであろう。したがって、該当する場合、最小の同一性の値に照らして、ポリヌクレオチド/酵素は、少なくとも60、より好ましくは少なくとも65、より好ましくは少なくとも70、より好ましくは少なくとも75、より好ましくは少なくとも80、より好ましく少なくとも85、より好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも91、より好ましくは少なくとも92、より好ましくは少なくとも93、より好ましくは少なくとも94、より好ましくは少なくとも95、より好ましくは少なくとも96、より好ましくは少なくとも97、より好ましくは少なくとも98、より好ましくは少なくとも99、より好ましくは少なくとも99.1、より好ましくは少なくとも99.2、より好ましくは少なくとも99.3、より好ましくは少なくとも99.4、より好ましくは少なくとも99.5、より好ましくは少なくとも99.6、より好ましくは少なくとも99.7、より好ましくは少なくとも99.8、およびさらにより好ましくは少なくとも99.9、関連する指定された配列番号と同一である、アミノ酸配列を含むことが好ましい。本明細書で定義されるポリペプチドのアミノ酸配列変異体は、適切なヌクレオチド変化を本明細書で定義される核酸の中に導入することによって、または所望のポリペプチドのインビトロ合成によって調製することができる。そのような変異体は、例えば、アミノ酸配列内の残基の欠失、挿入、または置換を含む。最終ペプチド産物が所望の特徴を保有するならば、欠失、挿入、および置換の組み合せを行って、最終的な構築体に到達させることができる。変異改変ポリペプチドは、当技術分野で知られている手法、例えば、指向性進化または合理的な設計方策下記参照のことを使用して調製することができる。変異/改変DNA由来の産物は、本明細書で説明される手法を使用して容易にスクリーニングして、それらがアシルトランスフェラーゼ活性、例えばMGAT、DGAT、GPAT/ホスファターゼ活性を保有するかどうかを判定することができる。アミノ酸配列変異体を設計する際に、変異部位の場所および変異の性質は、修飾される特徴に依存する。変異の部位は、例えば、1最初に選択した保存的アミノ酸と置換し、次いで達成する結果に応じてより異なる選択したアミノ酸と置換することによって、2標的残基を欠失させることによって、または3位置する部位に隣接して他の残基を挿入することによって、個別にまたは連続的に修飾することができる。アミノ酸配列欠失は、一般に、約1個~15個の残基、より好ましくは約1~10個の残基、および典型的に、約1~5個の連続した残基の範囲に及ぶ。置換変異体は、除去されたポリペプチド分子中の少なくとも1つのアミノ酸残基と、その場所に挿入された異なる残基とを有する。置換変異誘発について最も大きい関心の部位としては、活性部位として特定される部位が挙げられる。他の関心の部位は、種々の株または種から得られる特定の残基が同一である部位である。これらの位置は、生物活性にとって重要であり得る。これらの部位、とりわけ、少なくとも3つの他の同様に保存された部位の配列内に含まれる部位は、好ましくは、比較的に保存的な様式で置換される。そのような保存的置換を、例示的置換という見出しで表1に示す。好ましい実施形態において、突然変異体/変異形ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチドと比較したときに、1つ、もしくは2つ、もしくは3つ、もしくは4つだけ、またはそれを超えない保存的アミノ酸変化を有する。保存的アミノ酸変化の詳細を表1で提供する。当業者が認識するように、そのようなわずかな変化は、組み換え細胞において発現したときに、ポリペプチドの活性を変化させないように合理的に予測され得る。指向性進化指向性進化では、ランダムな変異誘発がタンパク質に適用され、所望の品質、例えば増加したアシルトランスフェラーゼ活性を有する変異形を選択するために、選択レジームが使用される。次いで、さらなる一連の変異および選択が適用される。典型的な指向性進化方策は、次の3つのステップを伴う。すなわち、1多様化:関心のタンパク質をコードする遺伝子は、ランダムに変異させて、および/または組み換えて、遺伝子変異形の大きいライブラリを作成する。変異形遺伝子ライブラリは、エラープローンPCR例えば、Leung,1989、CadwellおよびJoyce,1992を参照されたいを通して、親テンプレートから調整されるDNaseI消化断片のプールからStemmer,1994a、Stemmer,1994b、Crameri他,1998、Coco他,2001、縮重オリゴヌクレオチドからNess他,2002、Coco,2002、もしくは双方の混合物から、さらには未消化の親テンプレートからZhao他,1998、Eggert他,2005、Jezequek他,2008構成することができ、通常は、PCRを通して組み立てられる。ライブラリはまた、相同的または非相同的組み換えによって、インビボまたはインビトロで再結合させた親配列から作製することもできるOstermeier他,1999、Volkov他,1999、Sieber他,2001。変異遺伝子ライブラリはまた、関心の遺伝子を好適なベクターにサブクローン化し、該ベクターを大腸菌XL-1redStratagene等のミューテーター株に形質転換し、そして、該形質転換した細菌を好適な数の世代にわたって繁殖させることによって構成することもできる。変異遺伝子ライブラリはまた、Harayama1998によって概略的に説明されるように、関心の遺伝子をDNAシャフリングに供するすなわち、インビトロで、ランダムな断片化および再組み立てによって、選択された変異遺伝子のプールを相同的に組み換えることによって構成することもできる。2選択:ライブラリは、スクリーニングまたは選択を使用して、所望の性質を有する変異体変異形の存在について試験される。スクリーニングは、手動による高機能性変異体の特定および単離を可能にする一方で、選択は、全ての機能しない変異体を自動的に排除する。スクリーニングは、既知の保存されたアミノ酸モチーフの存在に対するスクリーニングを伴ってもよい。代替として、または加えて、スクリーニングは、変異したポリヌクレオチドを宿主生物またはその一部において発現させることと、例えば生物またはその一部から抽出された脂質中の結果として生じた産物のレベルを定量化することによって、アシルトランスフェラーゼ活性のレベルを分析することと、変異したポリヌクレオチドが欠如している対応する生物またはその一部と比較して、生物またはその一部から抽出した脂質中の産物のレベルを判定することと、随意に、親変異していないポリヌクレオチドを発現させることとを伴ってもよい。代替として、スクリーニングは、標識基質を生物またはその一部に供給することと、変異したポリヌクレオチドが欠如している対応する生物またはその一部と比較して、生物またはその一部における基質または産物のレベルを判定することと、随意に、親変異していないポリヌクレオチドを発現させることとを伴ってもよい。3増幅:選択またはスクリーニングで同定される変異形は、何度も複製され、どのような変異が起こったのかを研究者が理解するためにそれらのDNAを配列決定することを可能にする。合わせて、これらの3つのステップは、1回の指向性進化と称される。大部分の実験は、2回以上必要になる。これらの実験において、以前の回の勝者は、新しいライブラリを作成するために次の回において多様化される。実験終了後、全ての進化したタンパク質またはポリヌクレオチド変異体は、生化学的方法を使用して特徴付けられる。合理的設計タンパク質は、タンパク質構造および折り畳みに関する既知の情報に基づいて、合理的に設計することができる。これは、ゼロからの設計デノボ設計によって、または天然の足場に基づく再設計例えば、Hallinga,1997、およびLuandBerry,ProteinStructureDesignandEngineering,HandbookofProteins2,1153-11572007を参照されたいによって達成することができる。タンパク質設計は、典型的に、所与または標的の構造に折り畳む配列を特定することを伴い、コンピュータモデルを使用して達成することができる。コンピュータによるタンパク質設計アルゴリズムは、標的構造に折り畳んだときにエネルギーが低い配列について配列-配座空間を検索する。コンピュータによるタンパク質設計アルゴリズムは、どのくらいの変異がタンパク質の構造および機能に影響を及ぼすのかを評価するために、タンパク質エネルギー学のモデルを使用する。これらのエネルギー関数は、典型的に、分子力学、統計学すなわち知識に基づくもの、および他の経験項を含む。好適な、入手可能なソフトウェアとしては、IPROInterativeProteinRedesignandOptimization、EGADAGeneticAlgorithmforProteinDesign、RosettaDesign、Sharpen、およびAbalone.が挙げられる。また、本発明の範囲内には、例えばビオチン化、ベンジル化、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護基/遮断基による誘導体化、タンパク質切断、抗体分子への結合、または他の細胞リガンド等によって、合成中または合成後に個別に修飾される、本明細書で定義されるポリペプチドが含まれる。これらの修飾体は、本発明のポリペプチドの安定性および/または生物活性を増加させる役目をし得る。アシルトランスフェラーゼの同定一態様において、本発明は、細胞においてMAG、DAG、および/またはTAGを生成する増加した能力を有するアシルトランスフェラーゼをコードする核酸分子を特定するための方法を提供する。本方法は、細胞において活性であるプロモーターに操作可能に連結されるアシルトランスフェラーゼをコードする核酸分子を含む細胞を得ることを含む。核酸分子は、MGAT、GPAT、および/もしくはDGAT、またはその変異体等の自然発生的なアシルトランスフェラーゼをコードし得る。変異体は、関心の既知の遺伝子に対するランダムな変異誘発、標的変異誘発、もしくは飽和変異誘発による、または異なる遺伝子をDNAシャフリングに供する等による、当技術分野において標準的な手順上記を参照されたいを使用して操作されてもよい。例えば、MGATをコードする配列番号1~44のいずれか1つから選択される配列を含むポリヌクレオチドは、ランダムに変異させて、および/または組み換えて、例えばエラープローンPCRおよび/またはDNAシャフリングを使用して、遺伝子変異形変異体の大きいライブラリを作成してもよい。変異体は、それらが保存されたアミノ酸モチーフを含むことに基づいて、さらなる調査のために選択されてもよい。例えば、MGATをコードする候補核酸の場合、当業者は、例えば、本明細書で説明されるような、植物細胞等の宿主細胞への形質移入、およびアシルトランスフェラーゼすなわち、MGATに対するアッセイによって核酸が機能的MGAT変異体をコードするかどうかを試験する前に、配列番号220、221、222、223、および/または224で提供される配列を含むかどうかを判定してもよい。核酸またはその断片の直接PCR配列決定は、正確なヌクレオチド配列を決定し、対応するアミノ酸配列を推測し、それによって、保存されたアミノ酸配列を特定するために使用されてもよい。保存されたアミノ酸配列に基づく縮重プライマーを、直接PCR増幅に使用してもよい。縮重プライマーはまた、DNAハイブダイゼーションアッセイのプローブとして使用することもできる。代替として、保存されたアミノ酸配列は、タンパク質ハイブリダイゼーションアッセイで検出され得る。該アッセイは、例えば、保存されたアミノ酸配列に特異的に結合する抗体、または例えば、FLXLXXXN推定中性脂質結合ドメイン、配列番号224に結合する脂質等の、保存されたアミノ酸配列に特異的に結合する基質を利用する。一実施形態において、核酸分子は、MGATをコードする、ヌクレオチドの配列を含む。ヌクレオチドの配列は、i配列番号1~44のいずれか1つから選択される配列を含むか、ii配列番号45~82のいずれか1つで提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードするか、iiiiまたはiiと少なくとも50同一であるか、またはiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成してもよい。別のまたは付加的な実施形態において、核酸分子は、配列番号220、221、222、223、および224で提供される1つ以上の保存されたDGAT2および/またはMGAT1/2つのアミノ酸配列をコードする、ヌクレオチドの配列を含む。好ましい実施形態において、核酸分子は、配列番号220および/または配列番号224で提供される保存されたアミノ酸配列をコードする、ヌクレオチドの配列を含む。別の実施形態において、核酸分子は、GPAT、好ましくは、ホスファターゼ活性を有するGPATをコードする、ヌクレオチドの配列を含む。ヌクレオチドの配列は、i配列番号84~141のいずれか1つから選択される配列を含むか、ii配列番号144~201のいずれか1つで提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードするか、iiiiもしくはiiと少なくとも50同一であるか、またはiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成してもよい。別のまたは付加的な実施形態において、核酸分子は、配列番号225、226、および227で提供される1つ以上の保存されたGPATアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの配列、またはそれらと少なくとも50、好ましくは少なくとも60、より好ましくは少なくとも65同一であるアミノ酸の配列を含む。別の実施形態において、核酸分子は、DGAT2をコードする、ヌクレオチドの配列を含む。ヌクレオチドの配列は、i配列番号204~211のいずれか1つから選択されるヌクレオチドの配列を含むか、ii配列番号212~219のいずれか1つで提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチド、またはその生物活性断片をコードするか、iiiiもしくはiiと少なくとも50同一であるか、またはiv緊縮条件下で、i~iiiのいずれか1つにハイブリッド形成してもよい。好ましい実施形態において、DGAT2は、配列番号204のヌクレオチドの配列、および/または配列番号212で提供される配列を有するアミノ酸を含むポリペプチドをコードするヌクレオチドの配列を含む。細胞において活性であるプロモーターに操作可能に連結されるアシルトランスフェラーゼをコードする核酸分子を含む細胞は、例えば、リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレングリコール処理、電気穿孔、およびこれらの処理の組み合せによって、核酸分子を細胞の中に導入すること等による当技術分野において標準的な手順を使用して得てもよい。細胞形質転換の他の方法を使用することもでき、直接的なDNA転移または注入によるDNAの植物への導入が挙げられるが、これに限定されない。形質転換された植物細胞は、本明細書で説明されるアグロバクテリウム媒介転移および加速法を使用して得てもよい。本方法は、実施例1で例示されるような当技術分野で知られている手法を使用して、細胞中で生成されたMAG、DAG、および/またはTAGのレベルが、核酸が欠如している対応する細胞と比較して増加したかどうかを判定することをさらに含む。例えば、脂質は、クロロホルム/メタノール溶液中で抽出し、乾燥し、薄層クロマトグラフィTLCによって分離することができる。TAG、DAG、MAG、遊離脂肪酸、および他の脂質がなにであるかは、ヨウ素蒸気で染色した後に、内部脂質標準で検証することができる。結果として生じたクロマトグラムは、PhosphorImager、および既知の量の内部標準に基づいて定量化されたMAG、DAG、およびTAGの量を使用して分析することができ、細胞は、sn-2-モノオレオイルグリセロール[14C]または[14C]グリセロール-3-リン酸が供給され、液体シンチレーション計数によって数量化される放射活性が関連付けられてもよいすなわち標識したMAG、DAG、およびTAGの量が定量化される。本方法は、細胞のMAG、DAG、および/またはTAGを生成する増加した能力を有するアシルトランスフェラーゼをコードする核酸分子を特定することをさらに含む。好ましい実施形態において、アシルトランスフェラーゼは、MGAT経路における酵素反応を触媒する。さらなる好ましい実施形態において、DAGは、MGAT経路を介して増加するすなわち、脂肪アシルCoAによるMAGのアシル化は、MGATによって触媒されて、DAGを形成する。別のまたは付加的な実施形態において、基質MAGは、ホスファターゼ活性も有するGPATによって生成され、および/またはDAGは、DGATおよび/またはDGAT活性を有するMGATによって脂肪アシルCoAでアシル化されて、TAGを形成する。実施例1.一般的な材料および方法一過性発現系での植物細胞における遺伝子の発現遺伝子は、基本的に、Voinnet他2003およびWood他2009によって説明されるような一過性発現系を使用して発現させた。複製したエンハンサー領域を含む強力な構成的e35Sプロモーターによって発現するコード領域を含むバイナリベクターを、アグロバクテリウムツメファシエンス株AGL1に導入した。p19ウイルスサイレンシングサプレッサーを発現するためのキメラバイナリベクター35S:p19を、国際特許公開第WO2010/057246号で説明されるように、AGL1に別々に導入した。組み換え細胞を、50mg/Lのカナマイシンおよび50mg/Lのリファンビシンを補充したLBブロスにおいて、28°Cで静止期まで成長させた。次いで、細菌を、5000gで、室温における5分間の遠心分離によってペレット化し、その後に、10mMのMES、pH5.7、10mMのMgCl2、および100μMのアセトシリンゴンを含む浸潤緩衝液中に、OD600=1.0になるように再懸濁した。次いで、細胞を、28°Cで3時間振盪しながらインキュベートし、その後に、OD600を測定し、OD600=0.125という最終濃度に到達させるために必要とされる量の、35S:p19を含む各培養物を新鮮な管に加えた。最終的な体積は、前述の緩衝剤で補った。次いで、培養物混合物を葉に浸潤させ、浸潤後さらに3~5日間植物を成長させ、その後、精製した細胞溶解物調製物または総脂質単離のために葉片を回収した。対照浸潤物は、35s:p19株だけとした。精製した葉溶解物アッセイ上で説明したように事前に浸潤させたニコチアナベンサミアナの葉組織を、ガラスホモジナイザを使用して、0.1Mのリン酸カリウム緩衝液pH7.2および0.33Mのスクロースを含む溶液中ですりつぶした。葉ホモジェネートを、4°C、20,000gで45分間遠心分離し、その後に、各上清を採集した。各上清中のタンパク含有量を、Wallac1420マルチレベルカウンタおよびBio-RadProteinAssay色素試薬Bio-RadLaboratories,Hercules,CAUSAを使用して、Bradford1976に従って測定した。アシルトランスフェラーゼアッセイでは、いくつかの改良を伴って、Cao他2007に従って、100μgのタンパク質を使用した。反応培地は、100mMのHClpH7.0、5mMのMgCl2、1mg/mLのBSA脂肪酸含まず、200mMのスクロース、40mMの低温オレオイル-CoA、16.4μMのsn-2-モノオレオイルグリセロール[14C]55mCi/mmol、AmericanRadiochemicals,SaintLouis,MOUSA、または6.0μMの[14C]グリセロール-3-リン酸G-3-Pジナトリウム塩150mCi/mmol、AmericanRadiochemicalsを含めた。アッセイは、7.5分、15分、または30分にわたって行った。脂質分析葉溶解物アッセイからの脂質の分析溶解物アッセイによる脂質を、クロロホルム:メタノール:0.1MのKCl2:1:1を使用して抽出して、回収した。試料中の異なる脂質クラスを、10のホウ酸を含浸させたSilicaGel60薄層クロマトグラフィTLCプレートMerck,Dermstadt,Germany上で分離した。脂質抽出物からTAGを分画するために使用した溶媒系は、クロロホルム/アセトン90/10v/vで構成した。個々の脂質クラスを、プレートをヨウ素蒸気に露出することによって視覚化し、同じTLCプレート上で真正標準を並列に実行することによって特定した。プレートを、蛍光体撮像スクリーンに一晩露出し、DPMで定量化するために、液体シンチレーション計数の前にFujifilmFLA-5000Phosphorimagerによって分析した。総脂質の単離および分画組織を、BlighおよびDyer1959によって説明されるように冷凍乾燥させて、総脂質を抽出した。各試料中の異なる脂質クラスを、SilicaGel60TLCプレート上で分離した。中性脂質NLおよび極性脂質PLを分画するために使用した溶媒系は、ヘキサン/ジエチルエーテル/酢酸70/30/1v/v/vで構成した。個々の脂質クラスを、プレートをヨウ素蒸気に露出することによって視覚化し、同じTLCプレート上で並列真正標準を実行することによって同定した。脂質試料中の脂肪酸組成を決定するために、TAG、DAGおよび/もしくはMAG、またはPL画分を含むNLの脂肪酸メチルエステルFAMEを、TLCプレートから対応するバンドを除去し、内部標準としての既知の量のヘキサデカン酸とともに、メタノール/HCl/ジクロロメタン10/1/1v/v/v溶液中で、80°Cで2時間インキュベートすることによって生成した。FAMEを、ヘキサン/DCM中で抽出し、ヘキサン中で小体積に濃縮し、ガスクロマトグラフに注入した。脂質画分中に存在する個々の脂肪酸および総脂肪酸TFAの量を、各ピーク面積を決定することによって定量化し、既知の量の内部標準に対するピーク面積と比較することによって計算した。毛細管気液クロマトグラフィGCEquity商標-1溶融シリカ毛細管カラム15m×0.1mmのi.d.、0.1μmの膜厚、FID、スプリット/スプリットレス注射器、ならびにAgilentTechnologies7683シリーズ自動試料採取器および注射器を備える、AgilentTechnologies6890NガスクロマトグラフPaloAlto,California,USAを使用して、ガスクロマトグラフィGCによってFAMEを分析した。ヘリウムを担体ガスとして使用した。試料を、120°Cのオーブン温度で、スプリットレスモードで注入した。注入後、オーブン温度を、1分あたり10°Cで270°Cまで上昇させ、最後に1分あたり5°Cで310°Cまで上昇させた。AgilentTechnologiesChemStationソフトウエアRevB.03.01317、PaloAlto、California、USAを用いてピークを定量化した。サッカロミセスセレビシエH1246のDGATアッセイサッカロミセスセレビシエ株H1246は、DGAT活性が全くなく、かつ4つの遺伝子DGA1、LRO1、ARE1、ARE2におけるノックアウト変異の結果として、TAGおよびステロールエステルが欠如している。H1246成長媒体への遊離脂肪酸の添加例えば、1mM、18:1Δ9は、DGAT活性がない場合に有毒である。したがって、そのような培地での成長は、この酵母株におけるDGAT活性の存在についての指標または選択肢として使用することができる。S.セレビシエH1246を、pYES2構築体陰性対照、pYES2においてアラビドプシスサリアナDGAT1をコードする構築体、またはpYES2においてマスマスクルスMGAT2をコードする構築体で形質転換した。形質転換体には、[14C]18:1Δ9遊離脂肪酸を供給した。別々の実験では、S.セレビシエH1246を、pYES2構築体陰性対照、pYES2においてBernadiapulchellaDGAT1をコードする構築体、またはpYES2においてM.マスクルスMGAT1をコードする構築体で形質転換し、18:1Δ9遊離脂肪酸をそれに供給した。pYES2で形質転換したS.セレビシエS288C野生型株を、陽性対照として提供した。酵母形質転換体を、滅菌mQ水中に再懸濁して、OD600=1に希釈した。試料は、4つの連続する希釈物に、それぞれ1/10にさらに希釈した。2μLの各希釈物を、2μLのmQ水および2μLの非形質転換H1246細胞懸濁液OD600=1とともに、プレートYNBD、YNBG、YNBGFAのそれぞれにスポットした。プレートを、30°Cで6日間インキュベートし、その後に、成長を記録した。プレート培地、プレートあたり40mLの培地YNBD:ウラシルを含まず、2のグルコース、0.01のNP40、および100μLのエタノールを含む、最小限のドロップアウト培地。YNBG:ウラシルを含まず、2のガラクトース、1のラフィノース、0.01のNP40、および100μLのエタノールを含む、最小限のドロップアウト培地。YNBGFA:ウラシルを含まず、2のガラクトース、1のラフィノース、0.01のNP40、および100μLのエタノールに溶解させた1mMC18:1Δ9を含む、最小限のドロップアウト培地。実施例2.植物細胞のモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼの構成的発現MGAT1M.マスクルス由来の遺伝子によってコードしたモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ1MGAT1Yen他,2002、およびここでMGAT1との比較として使用した、A.サリアナのジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼDGAT1Bouvier-Nave他,2000の酵素活性を、実施例1で説明されるように一過性発現系を使用して、N.ベンサミアナの葉組織において実証した。末端を鈍化させるためにT4DNAポリメラーゼを処理した後に、35Sプロモーターを含むPstIをベクターpORE04mpのSfoI部位に挿入することによって、35S-pORE04と命名したベクターを作製したCoutu他,2007。ブラシカナパスのためにコドン最適化したM.マスクルスMGAT1をコードするキメラDNAを、Geneartによって合成し、0954364_MGAT_pMAと命名した。EcoRI断片内に含まれる0954364_MGAT_pMAのコード領域全体をEcoRI部位の35S-pORE04に挿入することによって、35S:MGAT1と命名した、植物細胞における発現のためのM.マスクルスMGAT1GenBank登録番号Q91ZV4をコードするキメラDNAを作製した。35S:MGAT1構築体を含むベクターを、pJP3184と命名した。同様に、BamHI-EcoRV断片内に含まれるpXZP513Eのコード領域全体をBamHI-EcoRV部位の35S-pORE04に挿入することによって、植物細胞における発現のためのA.サリアナDGAT1GenBank登録番号AAF19262をコードするキメラDNA35S:DGAT1を作製した。35S:DGAT1構築体を含むベクターを、pJP2078と命名した。キメラベクターを、24°Cの成長室において、N.ベンサミアナ植物の組織に浸潤させた培養物からのA.ツメファシエンス株AGL1および細胞に導入した。試料間の直接的な比較を可能にし、葉の間での変動を低減するために、比較する試料を、同じ葉の両側に浸潤させた。実験は、3つ組で行った。浸潤に続いて、植物をさらに3日間成長させ、その後に、葉片を取り、凍結乾燥し、試料から抽出した脂質を、実施例1で説明されるように分画して、定量化した。この分析は、MGAT1およびDGAT1遺伝子がN.ベンサミアナにおける葉油レベルを増加させるように機能していることを明らかにした。35S:p19構築体だけで形質転換した葉組織陰性対照は、平均4μgのDAG/mg乾燥葉重量由来の遊離脂肪酸FFA、および5μgのTAG/mg乾燥葉重量由来のFFAを含んでいた。35S:p19構築体および35S:DGAT1構築体DGAT1の発現のための対照で形質転換した葉組織は、平均4μgのDAG/mg乾燥葉重量由来のFFA、および22μgのTAG/mg乾燥葉重量由来のFFAを含んでいた。35S:p19構築体および35S:MGAT1構築体で形質転換した葉組織は、平均8μgのDAG/mg乾燥葉重量由来のFFA、および44μgのTAG/mg乾燥葉重量由来のFFAを含んでいた。35S:p19構築体、35S:DGAT1構築体、および35S:MGAT1構築体で形質転換した葉組織は、35S:p19および35S:MGAT1浸潤体において観察したものよりも高いDAGまたはTAGを含有しなかった図2。また、種子中の飽和成分のレベルの減少は、p19対照またはDGAT1試料と比較したときに、MGATの発現後に顕著であった表2。上で説明したデータは、MGAT1酵素が、葉組織におけるDAGおよびTAG双方の蓄積を促進する際に、DGAT1よりもはるかに活性であったことを示した。MGAT1遺伝子の発現は、DGAT1が発現したときと比較して、2倍もの葉組織におけるDAGおよびTAGの蓄積をもたらした。この結果は、MGATが、マウス腸植物葉とは大幅に異なる生物系において発現する酵素であることを考えれば、非常に意外であり、また予想外であった。この研究は、植物細胞におけるMGATの異所性発現を最初に示した。M.マスクルスMGAT1を浸潤させた葉試料は、A.サリアナDGAT1だけを浸潤させた葉組織と比較して、2倍のDAGおよびTAGを蓄積した。マウスMGATがDGATとして非常に低い活性しか有しないことを考えれば、TAGの生成効率も意外であり、また予想外であった。MGAT1およびDGAT1の双方をコードする遺伝子を浸潤させた葉組織は、MGAT1だけの葉試料よりも有意に蓄積しなかった。図1は、種々のTAGの蓄積経路を表す図であり、その大部分は、DAG脂質合成における中心的な分子に集束している。例えば、MAG、DAG、およびTAGは、アシル基転移、リパーゼ、MGAT、DGAT、およびPDATを含む種々の酵素活性を介して、相互変換することができる。MGATの発現後に、飽和レベルの減少も見られた。MGAT2EcoRI断片内に含まれるMGAT2コード領域全体をEcoRI部位の35S-pORE04に挿入することによって、35S:MGAT2と命名した、植物細胞における発現のためのM.マスクルMGAT2をコードするキメラDNAを作製した。M.マスクルス由来の遺伝子によってコードしたモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ2MGAT2Yen,2003GenBank登録番号Q80W94、およびMGAT2との比較として使用したA.サリアナのDGAT1の酵素活性は、実施例1で説明した一過性発現系を使用した、N.ベンサミアナの葉組織においても示された。対照と比較して、DGAT1の発現は、葉TAGで5.9倍、MGAT2で7.3倍、MGAT2DGAT1の組み合わせで9.8倍増加した図3。TAGにおけるそのような有意な増加を生ずる、MGAT2単独の能力は、いくつかの理由により、予想外であった。第1に、葉組織に存在する基質MAGの量は、低いことが分かっており、この基質からのTAGの蓄積の増加は予想されない。第2に、MGAT活性単独の添加すなわち、DGAT活性を有しないMGAT2の添加は、特に天然の活性DGATが通常ほとんど存在しない葉環境において、TAGではなく、DAGを生ずることが予想されるものであった。考察本発明者らは、驚くべきことに、MGAT遺伝子のトランスジェニック発現が、植物細胞における脂質収量のかなりの増加をもたらすことを実証した。本発明者らは、Tumaney他が、一部のMGAT活性によってDGATを単離したこと、およびTumaney他が、本明細書で定義されるように、MGATをコードする遺伝子のクローン化する試みに成功しなかったことを理解している。Tumaney他2001は、ピーナッツにおけるMGAT活性を報告し、この活性の原因となる酵素を単離した。しかしながら、Tumaney他は、DGAT活性についての試験結果を公表せず、したがって、報告した酵素は、いくつかのMGAT活性を伴うDGATであったと考えられる。実際に、以前の研究では、他の種においていかなるMGAT活性も特定できなかったStobart他,1997。さらに、意外なことに、Tumaney他が単離した酵素は、膜結合酵素ではなく、可溶性のサイトゾル酵素であった。最後に、Tumaney他は、後に、彼らがピーナッツRajasekharan他,2006およびアラビドプシスGhosh他,2006からMGATを単離したこと公表したが、これらの遺伝子の単離を説明しているいかなる論文もこれまでに公開されていない。実施例3.葉抽出物におけるトランスジェニックMGAT活性の生化学的実証実施例1で説明されるように、35S:MGAT1、35S:MGAT2、35S:DGAT1を浸潤させたN.ベンサミアナの葉組織から細胞溶解物を作製した。35S:p19構築体だけしか含まない株陰性対照、35S:p19株を伴う35S:MGAT2株、ならびに35S:p19株を伴う35S:MGAT2株および35S:DGAT1アグロバクテリウム株の混合物について、それぞれ3つ組で、別々の葉浸潤を行った。3日後に3つ組の試料を採取し、精製した細胞溶解物を、機械的組織溶解および遠心分離によって調製した。実施例1で説明されるように[14C]MAGを溶解物に供給することによって、精製した細胞溶解物のMGAT活性を比較した。データを図4に示す。35S:p19対照試料では、アッセイの全体を通して大部分の放射活性がMAGに留まったので、MGAT活性がほとんど観察されなかった。対照的に、35S:MGAT2試料中の大部分の標識したMAGは、迅速にDAGに変換された図4中央パネル。これは、35S:MGAT2構築体から強力なMGAT活性が発現したことを示している。さらに、かなり多くのTAGも生成された。35S:MGAT2試料で観察されたTAGの生成は、天然のN.ベンサミアナDGAT活性によるもの、または別のTAG合成経路によって生成されたものと考えられる。TAGの生成量は、35S:DGAT1のさらなる添加によって大幅に増加した図4右側パネル。これは、MGAT2酵素が、植物栄養組織中のDGAT1によるTAGへの変換を利用できるDAGを生成したことを示している。実施例4.葉抽出物のMGATが利用できるMAGの生成の生化学的実証葉溶解物を使用した実施例3で説明されるインビトロのアッセイでは、基質sn-2-MAGおよびオレオイル-CoAを外因的に供給したのに対して、無傷の植物組織におけるインビボのMGAT活性では、これらの基質が天然に存在することを必要とするであろう。種々の植物組織における低レベルのMAGの存在は、既に報告されているHirayamaおよびHujii,1965、Panekina他,1978、Lakshminarayana他,1984、PerryおよびHarwood,1993。MGAT2が天然の植物経路によって生成されたMAGを利用できるかどうかを試験するために、前述の実験を繰り返すが、ここでは、[14C]G-3-Pを溶解物に供給した。結果として生じたデータを図5に概略的に示す。標識したMAGの生成が、全ての試料において観察され、これは植物葉溶解物中のG-3-PからのMAGのデノボ生成を示す。35S:p19対照試料においては比較的に低かったが、標識したDAGおよびTAG産物も、全ての試料において観察された。これは、この試料において、内因性ケネディ経路によるこれらの中性脂質の生成が比較的に低かったことを示している。対照的に、MGAT2試料およびMGAT2DGAT1試料中の大部分の標識が、DAGおよびTAGプールに現れた。これは、外因的に添加したMGATが、天然の植物経路によって、標識したG-3-Pから生成されたMAGの変換を触媒したことを示している。実施例2~4は、いくつかの要点を実証する。すなわち、1葉組織は、G-3-PからMAGを合成することができ、よって、MAGは、葉組織において発現する外因性MGATを利用することができる、2哺乳類の腸に由来するMGATであっても、内因性MGATを保有していないと思われている植物組織において機能することができ、脂質合成に関与する他の植物因子との首尾よい相互作用を必要とする、3外因性MGAT活性によって生成されるDAGは、TAGを生成するために、植物DGATまたは外因性DGATを利用することができる、および4外因性MGATの発現は、大幅に増加したTAGレベルを生ずることができ、そのレベルは、少なくとも外因性A.サリアナDGAT1の発現によって生ずるレベルと同じくらい大きい。実施例5.酵母におけるDGAT1、MGAT1、およびMGAT2の発現pYES2:DGAT1、pYES2:MGAT1、およびpYES2:MGAT2を生ずるように、A.サリアナDGAT1、M.マスクルスMGAT1、およびM.マスクルスMGAT2をコードする遺伝子をpYES2ベクターに挿入することによって、キメラ酵母発現ベクターを構成した。これらの構成体を、DGAT活性が全くなく、かつ4つの遺伝子DGA1、LRO1、ARE1、ARE2におけるノックアウト変異の結果として、TAGおよびステロールエステルが欠如している、サッカロミセスセレビシエ株H1246において形質転換した。酵母株H1246は、外因的に添加した脂肪酸からDAGを合成することができるが、ノックアウト変異のため、DAGをTAGに変換することができない。形質転換した酵母培養物に、[14C]18:1Δ9を供給し、その後に、実施例1で説明されるように全ての脂質を抽出して、TLCによって分画した。代表的なTLCプレートのオートラジオグラムを図6に示す。DGAT活性の存在を示すTAGの形成は、DGAT1陽性対照を含む酵母細胞および哺乳類のMGAT1を含む酵母細胞のどちらでも観察されたが、MGAT2を含む細胞では観察されなかった。マウス由来のMGAT1はまた、酵母細胞においてもDGAT活性を有し、したがって、二重機能MGAT/DGAT酵素として機能するのに対して、MGAT2は、検出可能なDGAT活性を有さず、したがって、単にMGATだけであった、と結論付けられた。アラビドプシスサリアナ種子におけるMGAT1の発現実施例6.植物、種子、および菌類におけるモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼの発現M.マスクルスMGAT1をコードし、種子特異的プロモーターFP1、切断したブラシカナパスナピンプロモーターの制御下にある遺伝子を使用して、安定的に形質転換したA.サリアナおよび子孫種子を生成した。FP1プロモーターおよびグリシネマクのレクチンポリアデニル化シグナルが側面に並ぶEcoRI部位を含むSalI断片をベクターpCW141のSalI-XhoI部位に挿入することによって、pJP3174と命名したベクターを作製した。pCW141ベクターはまた、スクリーニング可能なマーカー遺伝子としてFP1駆動、イントロン中断、種子分泌のGFPも含んだ。EcoRI断片内に含まれる構築体0954364_MGAT_pMAのコード領域全体を、pJP3179を生成するEcoRI部位のpJP3174に挿入することによって、FP1:MGAT1-GFPと命名したキメラ遺伝子を作製した。このキメラベクターを、A.ツメファシエンス株AGL1に導入し、形質転換したアグロバクテリウムの培養物由来の細胞を使用して、形質転換のためのフローラルディップ法CloughおよびBent,1998を使用してA.サリアナ生態型コロンビア植物を処理した。成熟後に、処理した植物に由来する種子を、LeicaMZFLIII解剖顕微鏡およびebq100水銀ランプの下で観察した。15個のトランスジェニック種子強いGFP陽性および15個の非トランスジェニックGFP陰性種子を、単離して、それぞれプールした。GFP陽性プールおよびGFP陰性プールを、実施例1で説明されるように、総脂肪酸含量について分析した。この分析は、MGAT構築体で形質転換した種子について平均的な脂肪酸含量および組成物を提供したが、ヘミ接合性およびホモ接合性双方の形質転換された種子を含んだかもしれない集団におけるものであった。この分析では、MGAT1遺伝子が、A.サリアナ種子における種子油レベルを増加させるように機能し、15個の非トランスジェニック種子対照、野生型と同じが平均69.4μgの総脂肪酸を含む一方で、GFP遺伝子で形質転換した15個のトランスジェニック種子したがって、FP1:MGAT1遺伝的構築体を含む可能性があるが平均71.9μgの総脂肪酸を含むことを明らかにした。これは、対照野生型と比較して、3.5の含油量の増加であった。この分析はまた、MGAT遺伝子が、種子から得た総抽出脂質の脂肪酸組成から見たときに、種子における多価不飽和脂肪酸を富化するように機能していることも明らかにした。特に、種子から抽出した総脂肪酸の割合として、存在するALAの量が、16.0から19.6まで増加した。同様に、脂肪酸20:2n6の割合は、1.25から1.90に増加し、脂肪酸20:3n3は、0.26から0.51に増加した表2。FP1:MGAT1-GFPキメラDNAを修飾してGFP遺伝子を除去する、さらなる実験を行った。FP1:MGAT1と命名したこの遺伝的構築体を、FAD2についての変異体であるA.サリアナ系統に形質転換した。抗生物質耐性のT1植物由来のT2種子、ならびにこれらの植物と一緒に成長させた親系統の総脂肪酸含量を、実施例1に従って決定した。データを表3に示す。対照系統由来の種子の平均総脂肪酸は、種子100個あたり347.9μgであったのに対して、トランスジェニック種子の平均は、種子100個あたり381.0μgであった。平均を決定するために対照系統C6についてのデータを除外すると、対照の平均は、種子100個あたり370μgであった。トランスジェニック種子の含油量は、非形質転換種子の含油量と比較して、相対的に約3の増加を示した。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、アラビドプシスに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の種子は、含油量が増加する。ブラシカナパス種子におけるMGAT1の発現アラビドプシスサリアナ種子のM.マスクルスMGAT1の発現に使用されるベクターFP1:MGAT1を使用して、形質転換されたB.ナパス植物を生成した。標準的な電気穿孔手順を介して、ベクターをA.ツメファシエンス株AGL1に導入した。培養物を、150rpmで攪拌しながら、LB培地中で、28°Cで一晩成長させた。細菌細胞を、4000rpmで5分間の遠心分離によって採集し、WinansのABWinans、1988で洗浄し、10mLのWinansのAB培地pH5.2中に再懸濁し、そして100μMのアセトシリンゴンを添加しながら、カナマイシン50mg/Lおよびリファンビシン25mg/Lで一晩成長させた。ブラッシカ細胞を感染させる2時間前に、スペルミジン120mg/Lを添加し、細菌の最終的な密度を、新鮮なAB媒体で0.3~0.4のOD600nmに調整した。1/2MSMurashige-Skoog,1962上で成長させた8日目のB.ナパス苗木由来の新鮮に単離した子葉柄、またはMS培地上で3~4日目までに1mg/LチジアズロンTDZ0.1mg/Lのアルファ-ナフタレン酢酸NAAで予め調整した胚軸セグメントを、10mLのアグロバクテリウム培養物で5分間感染させた。次いで、アグロバクテリウムを感染させた外植体子葉柄および胚軸を、滅菌濾紙で吸い取って余分なアグロバクテリウムを除去し、異なる抗酸化剤50mg/LのL-システインおよび15mg/Lのアスコルビンを補充した、または補充しない、共培養媒体1mg/LTDZ0.1mg/LNAA100μMアセトシリンゴンを伴うMS媒体に移した。全てのプレートを、パラフィルムで密閉し、暗所において23~24°Cで48時間インキュベートした。次いで、共培養した外植体子葉柄および胚軸を、滅菌蒸留水500mg/Lのセフォタキシム50mg/Lのチメンチンで10分間洗浄し、滅菌蒸留水で10分間すすぎ、滅菌濾紙で吸い取り、事前に選択した培地MS1mg/LのTDZ0.1mg/LのNAA20mg/Lのアデニン硫酸ADS1.5mg/LのAgNO3250mg/Lのセフォタキシム、および50mg/Lのチメンチンに移し、16時間/8時間の光周期で、24°Cで5日間培養した。次いで、それらを、1.5mg/Lのグルフォシネートアンモニウムを伴う選択培地MS1mg/LのTDZ0.1mg/LのNAA20mg/LのADS1.5mg/LのAgNO3250mg/Lのセフォタキシム、および50mg/Lのチメンチンに移し、隔週で同じ培地に継代培養しながら、16時間/8時間の光周期で、24°Cで4週間培養した。緑色カルスを伴う外植体を、芽形成開始培地MS1mg/Lのカイネチン20mg/LのADS1.5mg/LのAgNO3250mg/Lのセフォタキシム50mg/Lのチメンチン1.5mg/Lのグルフォシネートアンモニウムに移して、さらに2~3週間培養した。耐性を示す外植体から発生する芽を、芽伸長培地0.1mg/Lのジベレリン酸20mg/LのADS1.5mg/LのAgNO3250mg/Lのセフロキシム1.5mg/Lのグルホシネートアンモニウムを伴うMS培地に移して、さらに2週間培養した。長さ2~3cmの健康な芽を選択し、発根培地1mg/LのNAA20mg/LのADS1.5mg/LのAgNO3250mg/Lのセフォタキシムを伴う1/2のMSに移して、2~3週間培養した。十分に定着した根付きの芽を、ポット苗木栽培混合物に移し、成長キャビネット中で2週間成長させ、その後に、温室に移した。16個の個々の形質転換体が、FP1:MGAT1構築体に対してトランスジェニックであること、および温室条件下で正常に成長したことを確認した。植物の成長は正常であると思われ、植物は、稔性であり、正常に開花し、結実した。植物は、成熟期まで成長させ、形質転換された植物から得られた種子を採取して、種子の含油量および脂肪酸組成について分析する。MGAT1の種子特異的発現は、含油量を増加させ、ブラッシカ種子油における多価不飽和脂肪酸の割合を増加させる。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、ブラッシカに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の種子は、含油量が増加する。ゴシピウムヒルスツム種子におけるMGAT1の発現アラビドプシスサリアナ種子のM.マスクルスMGAT1の発現に使用したものと同じ種子特異的キメラ遺伝子を使用して、形質転換されたゴシピウムヒルスツム植物を生成した。FP1:MGAT1と命名したベクターを、標準的な電気穿孔手順を介してA.ツメファシエンス株AGL1に導入し、アグロバクテリウム培養物由来の細胞を使用して、キメラDNAをゴシピウムヒルスツム変種Coker315の細胞に導入した。10日目の綿苗木から切除した子葉を外植体として使用し、A.ツメファシエンスに感染させて2日間にわたって共培養した。この後に、0.1mg/Lの2,4-D、0.1mg/Lのカイネチン、50mg/Lの硫酸カナマイシン、および25mg/Lのセフォタキシムを含むMS培地MurashigeおよびSkoog,1962に対する6週間選択が続いた。子葉外植体由来の健康なカルスを、28°Cで第2の6週間にわたって、5mg/Lの6-γ、γ-ジメチルアリルアミノ-プリン2ip、0.1mg/Lのナフタレン酢酸NAA、25mg/Lのカナマイシン、および250mg/Lのセフォタキシムを含むMS媒体に移した。インキュベーションの約6~10週後に形成される体細胞胚を、同じ培地であるが植物ホルモンまたは抗生物質を添加していない培地上で発芽させて維持した。体細胞胚から発育した小植物を、土壌に移し、葉および根が発育した時点で、28°C/20°C昼/夜の成長温度で、温室において維持した。FP1-MGAT1構築体を含むトランスジェニック植物を、温室において成長させ、開花させ、種子を含む莢を生成させた。種子は、成熟期に採取する。MGAT1の種子特異的発現は、含油量を増加させ、綿種子油における多価不飽和脂肪酸の割合を増加させる。安定的な形質転換後のN.ベンサミアナ植物におけるMGAT1およびのMGAT2遺伝子の発現N.ベンサミアナを、実施例2で説明される35S:MGAT1構築体で安定的に形質転換した。35S:MGAT1を、標準的な電気穿孔手順を介して、A.ツメファシエンス株AGL1に導入した。形質転換された細胞を、カナマイシン50mg/Lおよびリファンビシン25mg/Lを補充した個体LB培地上で成長させ、28°Cで2日間インキュベートした。単一の群体を使用して、新鮮な培養を開始した。48時間の活発な培養に続いて、細胞を2,000xgの遠心分離によって採集し、上清を除去した。OD600=0.5の密度で、50のLBおよび50のMS培地を含む新鮮な溶液中に細胞を再懸濁した。インビトロで成長させたN.ベンサミアナの葉試料を切除し、A.ツメファシエンス溶液に浸した状態で、鋭利な外科用メスで約0.5~1cm2のサイズ正方形の区画に切断した。切断したN.ベンサミアナの葉部分を、A.ツメファシエンスに浸漬し、室温で10分間放置し、その後に、滅菌濾紙で吸い取り乾燥し、補助剤を伴わないMSプレート上に移した。24°Cで2日間の共培養に続いて、外植体を、滅菌液体MS培地で3回洗浄し、次いで、滅菌濾紙で吸い取り乾燥し、1.0mg/LのベンジルアミノプリンBAP、0.25mg/Lのインドール酢酸IAA、50mg/Lのカナマイシン、および250mg/Lのセフォタキシムを補充した選択MS寒天培地上に置いた。プレートを、24°Cで2週間インキュベートして、形質転換されたN.ベンサミアナの葉部分から芽を発育させた。発芽トランスジェニック植物をインビトロで定着させるために、健康な緑色芽を切断して、25μg/LのIAA、50mg/Lのカナマイシン、および250mg/Lのセフォタキシムを補充したMS寒天培地を含む200mLの組織培養ポットに移した。十分に大きい葉片を、トランスジェニック芽から取り出し、実施例1で説明されるように、TAG分画および定量化分析のために凍結乾燥した表4。最良の35S:MGAT1、N.ベンサミアナ植物は、対照系統における乾燥葉組織重量100mgあたり85.02μgの平均TAG含量と比較して、乾燥葉組織重量100mgあたり204.85μgのTAG含量を有し、TAG含量が241増加したことを示している。また、N.ベンサミアナを、実施例2で説明される35S:MGAT2構築体、および対照バイナリベクターpORE4でも安定的に形質転換した表5。最良の35S:MGAT2、N.ベンサミアナ植物は、対照系統における乾燥葉組織重量100mgあたり9.5μgの平均TAG含量と比較して、乾燥葉組織重量100mgあたり79.0μgのTAG含量を有し、TAG含量が731増加したことを表している。TAG画分の脂肪酸プロファイルも、大幅に減少したレベルの飽和脂肪酸16:0および18:0、および増加したレベルの多価不飽和脂肪酸、特に18:3のω3ALAに変化した表5。同じ葉試料由来の極性脂質の脂肪酸プロファイルは、大きく影響を及ぼされなかったが、これは、非極性脂質の脂肪酸組成における変化が実質的であったことを示している。この実験における対照植物は、35S:MGAT1構築体による従来の実験におけるものよりも小さく、また生理学的に異なっており、これは、実験毎に対照植物の含油量が異なることを説明し得る。35S:MGAT1および35S:MGAT2構築体と、対照植物とを直接比較する実験は、同じサイズおよび生理機能の植物を使用して行う。新しい組の構成的バイナリ発現ベクターを、複製エンハンサー領域e35Sを伴う35Sプロモーターを使用して作製した。最初に、pJP3343を生ずるように、BamHI-EcoRI断片内に含まれるe35SプロモーターをBamHI-EcoRIのpORE04の中にクローン化することによって、35S:MGAT12pJP3346、35S:MGAT22pJP3347、および35S:DGAT12pJP3352を作製した。次いで、MGAT1およびMGAT2遺伝子をそれぞれpJP3343のEcoRI部位の中にクローン化することによって、pJP3346およびpJP3347を生成した。XhoI-AsiSI部位内に含まれるA.サリアナDGAT1をpJP3343のXhoI-AsiSI部位の中にクローン化することによって、pJP3352を生成した。上で説明したように、アグロバクテリウム株AGL1中のpJP3346、pJP3347、およびpJP3352を使用して、N.ベンサミアナを形質転換した。確認されたトランスジェニック植物は、pJP3346について14個回収され、pJP3347について22個回収された。複数のカナマイシン耐性の形質転換された芽を、pJP3352で生成した。MGAT1またはMGAT2で形質転換した植物に対して、導入遺伝子の発現分析を行った。高レベルの発現を伴う植物を選択した。A.サリアナDGAT1で形質転換した植物に関する発現分析を行う。植物は、正常に成長し、成熟期まで成長させる。種子は、成熟期に収穫する。高発現子孫由来の種子を、ホモ接合性およびヘテロ接合性植物の双方を含むT2分離集団の脂質分析のために、土壌上に直接蒔く。高レベルのMGAT1またはMGAT2のいずれかを発現する植物の葉の含油量は、A.サリアナDGAT1で形質転換した植物または対照植物と比較して、大幅に増加する。上で説明したようにA.サリアナを形質転換するために、AGL1中のpJP3346、pJP3347、およびの対照ベクターも使用した。25個のトランスジェニックT2植物がpJP3346由来のT-DNAを含むことが確認され、pJP3346について43個のトランスジェニック植物を特定した。トランスジェニック植物に関する発現の分析を行う。高発現子孫由来の種子を採取して、直接土壌上に蒔く。導入遺伝子が欠如している分離体由来のものを含む、T2およびT3子孫由来の葉の含油量を含む脂質分析を行う。最高レベルのTAGは、MGAT導入遺伝子に対してホモ接合性である植物において得られる。安定的に形質転換されたトリフォリウムレペンス植物のMGAT1の発現M.マスクルスMGAT1をコードするキメラ遺伝子を使用して、トリフォリウムレペンス別の双子葉植物を形質転換した。キメラ遺伝子35S:MGAT1および35S:DGAT1を含むベクターを、標準的な電気穿孔手順を介して、A.ツメファシエンスに導入した。双方のベクターはまた、35S:BAR選択可能なマーカー遺伝子も含む。形質転換されたアグロバクテリウム細胞を、カナマイシン50mg/Lおよびリファンビシン25mg/Lを補充した固体LB培地上で成長させ、28°Cで2日間インキュベートした。単一の群体を使用して、各構築体のための新鮮な培養を開始した。48時間の活発な培養に続いて、アグロバクテリウム培養物を使用して、Larkin他1996によって説明されるように、給水種子から解離したT.レペンスcv.Haifa子葉を処理した。3日間の共培養に続いて、外植体を、5mg/LのPPTに露出して、形質転換された芽を選択し、次いで、発根培地に移して根を形成させ、その後に、土壌に移した。MGAT1を含む形質転換された植物を得た。35Sプロモーターは、形質転換された植物の細胞において構成的に発現する。含油量は、少なくとも葉等の栄養組織において増加する。安定的に形質転換したホルデウムブルガレにおけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1を含むキメラベクターを使用して、安定的に形質転換されたホルデウムブルガレ単子葉植物の植物を生成した。キメラ遺伝子Ubi:MGAT1およびUbi:DGAT1を含むベクターを、M.マスクルスMGAT1およびA.サリアナDGAT1コード領域全体を、それぞれ、pWVEC8-Ubiの中にクローン化することによって構成した。キメラ遺伝子Ubi:MGAT1およびUbi:DGAT1を含むベクターを、標準的な電気穿孔手順を介して、A.ツメファシエンス株AGL1に導入した。形質転換されたアグロバクテリウム細胞を、カナマイシン50mg/Lおよびリファンビシン25mg/Lを補充した個体LB培地上で成長させ、プレートを、28°Cで2日間インキュベートした。それぞれの単一の群体を使用して、新鮮な培養を開始した。48時間の活発な培養に続いて、アグロバクテリウム培養物を使用して、いくつかの改良を伴う公開された方法Tingay他,1997、Bartlett他,2008に従って、オオムギcv.ゴールデンプロミスの未成熟胚の細胞に形質転換した。簡潔には、長さが1.5~2.5mmの胚を、未成熟穎花から単離し、胚軸を除去した。結果として生じた外植体を、トランスジェニックアグロバクテリウムで2~3日間共培養し、次いで、チメンチンおよびハイグロマイシンを含む培地上で4~6週間暗所で培養して、胚形成カルスを生成させ、その後に、微光条件下で2週間転移培地に移した。次いで、カルスを再生培地に移して、芽および根を再生させ、その後に、土壌に移した。形質転換された植物を採取して、温室に移した。MGAT1コード領域は、Ubiプロモーターの制御下で、形質転換された植物の細胞において構成的に発現する。含油量は、少なくとも栄養組織において増加する。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、上で説明したようにホルデウムに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の栄養組織は、含油量が増加する。酵母細胞におけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1を含むキメラベクターを使用して、酵母この実施例では、サッカロミセスセレビシエ、すなわち、発酵による油の生成に好適な真菌微生物を形質転換した。遺伝的構築体Gal1:MGAT1は、EcoRI断片内に含まれる0954364_MGAT_pMAと命名した構築体のコード領域全体を、pJP3301を生成するEcoRI部位のpYES2に挿入することによって作製した。同様に、ここでは比較として使用される、酵素A.サリアナDGAT1を別々にコードする遺伝的構築体Gal1:DGAT1を、A.サリアナDGAT1コード領域全体をpYES2に挿入することによって作製した。これらのキメラベクターを、熱衝撃によってS.セレビシエ株S288Cに導入し、形質転換体を、唯一の炭素源として2のラフィノースを含む酵母最小培地YMMプレート上に選択した。クローンの接種原培養物を、唯一の炭素源として2のラフィノースを伴う液体YMMにおいて確立した。この培養物からの実験培養物を、初期のOD600が約0.3になるように、1のNP-40を含むYMM培地中に接種した。培養物を、OD600が約1.0になるまで、振盪約100rpmしながら28°Cで成長させた。この時点で、2w/vの最終濃度になるように、ガラクトースを添加した。遠心分離によって収穫する前に、培養物を、振盪しながらさらに25°Cで48時間インキュベートした。細胞ペレットを水で洗浄し、その後に、実施例1で説明されるように、脂質クラス分画および定量化分析のために凍結乾燥した。Galプロモーターは、形質転換された酵母細胞において誘導的に発現し、細胞における含油量が増加する。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、酵母細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、酵母に導入する。結果として生じたトランスジェニック細胞は、含油量が増加する。遺伝子はまた、含油量を増加させるために、油脂性酵母ヤロウィアリポリティカにも導入される。藻類細胞クラミドモナスラインハーディにおけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1を含むキメラベクターを使用して、安定的に藻類細胞を形質転換する。MGAT1コード領域を、カリフラワーモザイクウイルス35SプロモーターカセットおよびC.ラインハーディRBCS2プロモーターによって発現するパロモマイシン耐性遺伝子アミノグリコシド-O-ホスホトランスフェラーゼVIIIを含むクローニングベクターの中にクローン化することによって、35S:MGAT1と命名した遺伝的構築体を作製する。35S:MGAT1を、改良したガラスビーズ法Kindle,1990によって、5×107の対数的培養物cc503クラミドモナスラインハーディの細胞壁欠損株の中に別々に導入する。双方のベクターはまた、選択可能なマーカー遺伝子としてBLE耐性遺伝子も含む。簡潔には、非形質転換細胞の群体を、TAP寒天培地プレート上で4日間にわたって約24°Cに保ち、1mLあたり約5×106個の細胞まで成長させ、結果として生じた細胞を、室温で3分間、3000gでペレット化し、再懸濁して300μLのTAP培地中に5×107個の細胞を生成する。300μLの直径0.6mmのガラスビーズ、5L中0.6μgのプラスミド、および100μLの20のPEGMW8000を添加し、混合物を、最高速度で30秒間ボルテックスし、次いで、10mLのTAPに移し、暗所で振盪しながら16時間インキュベートする。細胞をペレット化し、200μLのTAP中に再懸濁し、次いで、5mg/Lのゼオシンを含むTAPプレート上で平板培養し、暗所で3週間インキュベートする。形質転換された群体を、新鮮なTAP5mg/Lのゼオシンプレートに二次培養し、その後に、ゼオシン選択を伴う標準的な培地条件下で成長させる。遠心分離による収穫の後に、細胞ペレットを水で洗浄し、その後に、実施例1で説明されるように、脂質クラス分画および定量化分析のために凍結乾燥する。35S:MGAT1プロモーターは、形質転換された藻細胞において構成的に発現する。細胞の含油量は、大幅に増加する。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、クラミドモナスに導入する。結果として生じたトランスジェニック細胞の含油量は、大幅に増加する。安定的に形質転換したルピナスアングスティフォリウスにおけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1を含むキメラベクターを使用して、ルピナスアングスティフォリウスマメ科の植物を形質転換する。アグロバクテリウム中のキメラベクター35S:MGAT1および35S:DGAT1を使用して、Pigeaire他1997によって説明されるようにL.アングスティフォリウスを形質転換する。簡潔には、茎頂外植体をトランスジェニックアグロバクテリウムとともに共培養し、その後に、PPT溶液2mg/mLで完全に湿潤し、PPTを含まない再生培地上に移す。茎頂から発育した複数の腋芽を、20mg/LのPPTを含む培地上に摘出し、生存している芽を、20mg/LのPPTを含む新鮮な培地上に移す。次いで、健康な芽を土壌に移す。35Sプロモーターは、形質転換された植物の細胞において構成的に発現し、栄養組織および種子における含油量が増加する。種子特異的プロモーターは、トランスジェニックルピナス種子の含油量をさらに増加させるために使用される。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、ルピナスに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の種子および栄養組織は、含油量が増加する。ソルガムバイカラーの安定的に形質転換した細胞におけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1を含むキメラベクターを使用して、安定的にソルガムバイカラーを形質転換する。A.ツメファシエンス株AGL1中のUbi:MGAT1およびUbi:DGAT1を使用して、Gurel他2009によって説明されるように、ソルガムバイカラーを形質転換する。最初に、アグロバクテリウムを、4°Cで5分間、5,000rpmで遠心分離し、液体共培養培地でOD550=0.4に希釈する。次いで、事前に単離した未成熟胚を、15分間アグロバクテリウム懸濁液に完全に浸し、次いで、24°Cで2日間、暗所の共培養培地上で、胚盤側を上にして培養する。次いで、未成熟胚を、100mg/Lカルベニシリンを伴うカルス誘導培地CIMに移してアグロバクテリウムの成長を阻害し、4週間そのままにする。次いで、組織を、再生培地に移して、発芽および発根させる。Ubiプロモーターは、形質転換された植物の細胞において構成的に発現し、少なくとも栄養組織における含油量が増加する。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、ソルガムに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の栄養組織は、含油量が増加する。グリシネマクの安定的に形質転換された植物におけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1をコードするキメラ遺伝子を使用して、グリシネマク油の生成に使用され得る別のマメ科植物を安定的に形質転換する。アグロバクテリウム中の35S:MGAT1を使用して、Zhang他1999によって説明されるように、G.マクを形質転換する。アグロバクテリウムを、5日目の苗木由来の子葉外植体とともに3日間共培養する。次いで、外植体を、1.67mg/LのBAPおよび5.0mg/Lのグルホシネートを補充したGamborgのB5培地上で4週間培養し、その後に、外植体を、MS主要塩および副次塩、ならびに1.0mg/Lのゼアチンリボシド、0.5mg/LのGA3、および1.7mg/Lまたは2.0mg/Lのグルホシネートで修正した0.1mg/LのIAAを補充したB5ビタミンMS/B5を含む培地に二次培養する。延びた芽を、さらなるグルホシネート選択を伴わずに、0.5mg/LのNAAを補充したMS/B5発根培地上で発根させる。35Sプロモーターは、形質転換された植物の細胞において構成的に発現し、栄養組織および種子における含油量が増加する。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、グリシンに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の栄養組織および種子は、含油量が増加する。安定的に形質転換したゼアマイスにおけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1をコードするキメラ遺伝子を使用して、ゼアマイスを安定的に形質転換する。35S:MGAT1および35S:DGAT1を構成するベクターを使用して、Gould他1991によって説明されるように、ゼアマイスを形質転換する。簡潔には、茎頂外植体を2日間トランスジェニックアグロバクテリウムとともに共培養し、その後に、カナマイシンおよびカルベニシリンを含むMS塩培地上に移す。数回の継代培養の後に、形質転換された芽および根を自発的に形成させて、土壌に移植する。35Sプロモーターは、形質転換された植物の細胞において発現し、栄養組織および種子における含油量が増加する。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、ゼアマイスに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の栄養組織および種子は、含油量が増加する。代替として、種子における増加した発現および増加した含油量のために、ゼインプロモーター等の胚乳特異的プロモーターまたは単子葉植物の植物から得られる胚の特異的プロモーターの制御下で、MGATコード領域を発現させる。A.サリアナGPAT4またはGPAT6等の、ホスファターゼ活性を伴うGPATをコードするさらなるキメラ遺伝子を、MGATと組み合わせてゼアマイスに導入すると、トウモロコシ種子における含油量がさらに増加する。安定的に形質転換したエラエイスギネエンシスパーム油におけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1をコードするキメラ遺伝子を使用して、エラエイスギネエンシスを安定的に形質転換する。アグロバクテリウム中のUbi:MGAT1およびUbi:DGAT1と命名したキメラベクターを使用する。48時間の活発な培養に続いて、細胞を使用してIzawati他2009によって説明されるようにエラエイスギネエンシスを形質転換する。Ubiプロモーターは、形質転換された植物の細胞において構成的に発現し、少なくとも果実および種子における含油量が増加し、油を得るために使用してもよい。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、エラエイスに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の種子は、含油量が増加する。安定的に形質転換されたアベナサティバオートムギにおけるMGATの発現M.マスクルスMGAT1をコードするキメラ遺伝子を使用して、アベナサティバ別の単子葉植物を安定的に形質転換する。上で説明したように、どちらもUbi:BAR選択可能なマーカーを含むUbi:MGAT1およびUbi:DGAT1と命名したキメラベクターを使用して、Zhang1999によって説明されるように、アベナサティバを形質転換する。マウスMGAT2遺伝子のコード領域、植物細胞における発現を最適化したコドンを、前述した構築体のMGAT1と置換し、アベナに導入する。結果として生じたトランスジェニック植物由来の種子は、含油量が増加する。実施例7.DGAT活性を伴うMGATの操作同等のDGAT活性を伴うMGATを、関心のMGAT遺伝子に対してランダムな変異誘発、標的変異誘発、もしくは飽和変異誘発を行うことによって、または異なるMGATおよび/もしくはDGAT遺伝子をDNAシャフリングに供することによって操作してもよい。DGAT機能は、例えば、4つの遺伝子DGA1、LRO1、ARE1、ARE2における変異を含むH1246等の遊離脂肪酸を供給したときのTAG合成の相補に対する絶対要件を有する酵母株を使用することによって、積極的にスクリーニングすることができる。そのような株におけるMGAT変異形を形質転換し、次いで、野生型MGAT遺伝子によって相補を防止する遊離脂肪酸の濃度で、形質転換された酵母を供給することで、改善されたDGAT活性により増加したTAG合成能力を伴う変異形の成長だけを可能にする。これらの変異した遺伝子のMGAT活性は、標識したsn-1またはsn-2-MAGを供給し、標識したDAGの生成を定量化することによって判定することができる。合理的なタンパク質設計と組み合わせた数回の指向性進化は、類似したMGATおよびDGAT活性を伴う新しいMGAT遺伝子の生成をもたらすであろう。実施例8.植物におけるA.サリアナジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ2の構成的発現酵母Weselake,2009、および昆虫細胞Lardizabal,2001におけるA.サリアナDGAT2の発現は、DGAT活性を示さなかった。同様に、DGAT2は、A.サリアナDGAT1ノックアウトWeselake他,2009を相補することができなかった。葉組織におけるA.サリアナDGAT2の酵素活性は、実施例1において説明されるように、N.ベンサミアナ一過性発現系を使用して決定した。A.サリアナDGAT2登録番号Q9ASU1を、ゲノムPCRによって得て、35Sプロモーターの制御下で、バイナリ発現ベクターの中にクローン化して、35S:DGAT2を生成した。このキメラベクターを、A.ツメファシエンス株AGL1の中に導入し、これらの培養物由来の細胞を、対照として35S:DGAT1を使用して、24°Cの成長室においてN.ベンサミアナ植物の葉組織に浸潤させた。いくつかの直接比較物に、比較する試料を浸潤させて、同じ葉の両側に置いた。実験は、3つ組で行った。浸潤の後、植物をさらに5日間成長させ、葉片を取り出し、その後に、実施例1で説明されるように、脂質クラス分画および定量化分析のために凍結乾燥した。この分析は、DGAT1およびDGAT2がどちらも、ニコチアナベンサミアナにおける葉油レベルを増加させるように機能していることを明らかにした表6。35S:p19構築体陰性対照で形質転換した葉組織は、乾燥葉重量100mgあたり平均34.9μgのTAG由来の遊離脂肪酸を含んでいた。35S:p19および35S:DGAT1構築体陽性対照で形質転換した葉組織は、乾燥葉重量100mgあたり平均126.7μgのTAG由来の遊離脂肪酸を含んでいた。35S:p19および35S:DGAT2構築体で形質転換した葉組織は、乾燥葉重量100mgあたり平均310.0μgのTAG由来の遊離脂肪酸を含んでいた。上で説明したデータは、A.サリアナDGAT2酵素が、葉組織におけるTAGの蓄積の促進において、A.サリアナDGAT1酵素よりも活性であることを示す。DGAT2遺伝子の発現は、DGAT1が発現したときと比較して、245も多い葉組織におけるTAGの蓄積をもたらした。実施例9.トランスジェニック種子におけるMGATおよびGPATの共発現Yang他2010は、A.サリアナ由来の2つのグリセロール-3-リン酸アシルトランスフェラーゼGPAT4およびGPAT6がどちらも、G-3-Pからsn-2-MAGを生成することができる、sn-2選好すなわち、sn-1/3-MAGよりも選好的にsn-2-MAGを形成するおよびホスファターゼ活性を有することを説明した図1。これらの酵素は、クチン合成経路の一部であることが提案された。GPAT4およびGPAT6は、種子組織において高度に発現しなかった。そのような二機能性GPAT/ホスファターゼをMGATと組み合わせることで、植物特に油料種子または他の細胞におけるDAG合成のための典型的なケネディ経路を置換または補充することができる基質としてG-3-Pを使用して、新しいDAG合成経路を生み出し、その結果、増加した含油量、特にTAGレベルをもたらす。植物種子における発現のためのM.マスクルスMGAT2とともに、A.サリアナGPAT4およびGPAT6をコードする、それぞれ、pJP3382およびpJP3383と命名したキメラDNAを、pJP3378を生ずるように、最初に、SwaI断片内に含まれるMGAT2コード領域全体をSmaI部位のpJP3362の中に挿入することによって作製した。pJP3362は、選択可能なマーカーとして空のFAE1およびFP1発現カセットならびにカナマイシン耐性遺伝子を含む、バイナリ発現ベクターであった。A.サリアナGPAT4を、cDNAから増幅し、NotI部位のpJP3378の中にクローン化して、短縮したナピンプロモーターFP1によってGPAT4が発現し、A.サリアナFAE1プロモーターによってMGAT2が発現する、pJP3382を生じさせた。同様に、A.サリアナGPAT6を、cDNAから増幅し、NotI部位のpJP3378の中にクローン化して、GPAT6が短縮したナピンプロモーターFP1に操作可能に連結され、A.サリアナFAE1プロモーターによってMGAT2が発現する、pJP3384を生じさせた。pJP3382およびpJP3383を、フローラルディップ法によって、A.サリアナ生態型コロンビアに形質転換した。処理済みの植物由来の種子を、抗生物質カナマイシンを含む媒体上で平板培養して、形質転換された子孫植物T1植物を選択した。トランスジェニック苗木を、土壌に移して、温室で成長させた。発育胚における導入遺伝子の発現を判定した。最高レベルの発現を伴い、系統あたりのトランスジェニック:非トランスジェニックの比率が3:1を示し、単一座の導入遺伝子の挿入を示すトランスジェニック植物を選択し、成熟期まで成長させる。これらの植物T2から、一部が導入遺伝子に対してホモ接合性である種子を得る。各系統由来の50個の子孫植物T2植物を、土壌中で成長させ、結果として生じた種子の脂質含量、TAG含量、および脂肪酸組成を判定する。MGATおよびGPAT4またはGPAT6の双方を含む種子の中性脂質含量、特にTAG含量が、対照を超えて、またMGATだけまたはA.サリアナDGAT1だけを含む種子を超えて、大幅に増加する。MAGおよびDAG含量も増加する。種子から抽出した脂質の脂肪酸組成が改良され、特に、ALA等の多価不飽和脂肪酸の含量が大幅に増加する。実施例10.PATサイレンシングおよび変異によるMGAT媒介TAGの増加に対するGPAT4およびGPAT6の効果の試験GPATファミリーは大きく、全ての既知のメンバーは、2つの保存されたドメイン、すなわち、plsCアシルトランスフェラーゼドメインおよびHAD様ヒドロラーゼスーパーファミリードメインを含む。これに加えて、A.サリアナGPAT4~8は全て、ホスホセリンホスファターゼドメインに相同的なN末端領域を含む。A.サリアナGPAT4およびGPAT6はどちらも、ホスファターゼ活性に重要であることが知られている保存された残基を含むYang他,2010。保存されたアミノ酸配列GDLVICPEGTTCREP配列番号228に基づく縮重プライマーを、葉組織において発現するN.ベンサミアナGPAT上の断片を増幅するように設計した。3’のRACEを、これらのプライマー、およびN.ベンサミアナの葉組織から単離されるRNA上のオリゴ-dTリバースプライマーを使用して行う。ホスファターゼ活性を伴うGPATすなわち、GPAT4/6様を、上で説明したN末端ホスホセリンホスファターゼのドメイン領域との相同性によって特定する。これらの遺伝子を標的とする35S駆動RNAi構築体を、A.ツメファシエンス株AGL1において生成させ、形質転換する。同様に、V2ウイルスサイレンシングサプレッサータンパク質を含む35S:V2構築体を、A.ツメファシエンス株AGL1において形質転換する。V2は、天然の植物サイレンシング機構を抑制して、有効な一過性発現を可能にするだけでなく、RNAiに基づく遺伝子サイレンシングも機能させることが知られている。次いで、TAGの蓄積を、以下の株混合物で浸潤した一過性に形質転換された葉の試料間で比較する。135S:V2陰性対照、235S:V235S:MGAT2陽性対照、335S:V2GPAT-RNAi、435S:V2GPAT-RNAi35S:MGAT2。35S:V2GPAT-RNAi35S:MGAT2混合物は、GPATサイレンシングに起因して遮断されたsn-2-MAG合成のため、35S:V235S:MGAT2試料よりもTAGの蓄積が少なくなると予想される。類似した実験を、ホスファターゼ活性に重要であることが知られている保存された残基Yang他,2010を除去するように変異させた、A.サリアナおよびN.ベンサミアナGPAT4/6様配列を使用して行う。次いで、これらの変異させた遺伝子集合的にGPAT4/6-デルタとして知られるを、35S駆動発現バイナリベクターの中にクローン化し、A.ツメファシエンスにおいて形質転換させる。次いで、TAGの蓄積を、以下の株混合物で浸潤した一過性に形質転換された葉の試料間で比較する。135S:p19陰性対照、235S:p1935S:MGAT2陽性対照、335S:p19GPAT4/6-デルタ、435S:p19GPAT4/6-デルタ35S:MGAT2。35S:p19GPAT4/6-デルタ35S:MGAT2混合物は、GPAT変異に起因して遮断されたsn-2-MAG合成のため、35S:p1935S:MGAT2試料よりもTAGの蓄積が少なくなると予想される。天然のN.ベンサミアナGPAT4/6様遺伝子が存在することになるが、この実験では、GPAT4/6-デルタ構築体の高レベルの発現が、G-3-P基質を利用する内因性遺伝子に勝ることが予想される。広く説明される本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、数多くの変形および/または修正が、特定の実施形態で示される本発明に行われ得ることを当業者は理解するであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる点において例示的なものに過ぎず、限定的なものではないとみなされる。本明細書で論じられるおよび/または参照されるすべての刊行物は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれている文献、行為、材料、機器、物品等の考察は、いずれも単に本発明の背景を提供するためのものである。これらの事項のいずれかまたは全てが、先行技術の基礎の一部を形成するものであること、または本出願の各請求項の優先日以前に存在していたので本発明に関連する分野における共通の一般知識であったことを承認するものとして解釈されるべきではない。参照文献AbdullahetalBiotech41087AlvarezetalTheorApplGenet100319327AlMaririetalInfectImmun7019151923BaoandOhlroggePlantPhysiol120105762BartlettetalPlantMethods422BaumleinetalMolGenGenet225459467BaumleinetalPlantJ2233239BenghezaletalJournalofBiologicalChemistry2823084530855BlighandDyerCanadianJournalofBiochemistryandPhysiology379117BouvierNaveetalEuropeanJournalofBiochemistryFEBS2678596BradfordAnalBiochem72248BroothaertsetalNature433629633BrounetalPlantJ13201210CadwellandJoycePCRMethodsAppl22833CaoetalJBiolChem2781386013866CaoetalJLipidRes48583ChengetalPlantCellRep15653657ChengetalJBiolChem2781361113614ChikwambaetalProcNatlAcadSciUSA1001112711132ChungetalBMCGenomics7120CloughandBentPlantJ16735743CocoetalNatureBiotechnology19354359CocoetalNatureBiotechnology2012461250ComaietalPlantJ37778786CourvalinetalLifeSci31812091212CoutuetalTransgenicRes16771781CramerietalNature391288291DarjietalCell91765775DeshpandeandMukundApplBiochemBiotechnol36227DietrichetalNatureBiotech18181185EggertetalChembiochem610621067EllerstrometalPlantMolBiol3210191027FennellyetalJImmunol16216031610FujimuraetalPlantTissueCultureLett274GhosaletalBiochimicaetBiophysicaActa177114571463GhoshetalInternationalSymposiumonPlantLipidsAbstractGlevinetalMicrobiolMolBiolRev671637GrantetalPlantCellRep15254258GrillotCourvalinetalNatureBiotech16862866GrillotCourvalinCurrOpinBiotech10477481GouldetalPlantPhysiol95426434GureletalPlantCellRep28429444HarayamaTrendsBiotechnol167682HellingaProcNatlAcadSci941001510017HenikoffetalPlantPhysiol135630636HenseetalCellMicrobiol3599609HincheeetalBiotechnology6915922HirayamaandHujiiKAgriculturalandBiologicalChemistry2916HorvathetalProcNatlAcadSciUSA9719141919IzawatietalJOilPalmRes21643652JakoetalPlantPhysiol126861874JezequeletalBiotechniques45523532LacroixetalProcNatlAcadSciUSA1051542915434LeungetalTechnique11115KindleProcNatAcadSciUSA8712281232KozieletalPlantMolBiol32393405KuniketalProcNatlAcadSciUSA9818711876USA1051542915434LakshminarayanaetalJournaloftheAmericanOilChemistsSociety6112491253LardizabaletalJBiolChem2763886238869LarkinetalTransgenicRes5325335MurashigeandSkoogPhysiologiaPlantarum15473497NessetalNatureBiotechnology2012511255NiedzetalPlantCellReports14403OstermeieretalNatureBiotechnology1712051209OwetalScience234856859PanekinaChemistryofNaturalCompounds143336PerezVichetalJAOCS75547555PerrinetalMolBreed6345352PerryandHarwoodPhytochemistry33329333PhillipsetalJournalofFoodCompositionandAnalysis12123142PigeaireetalMolBreed3341349PotenzaetalInVitroCellDevBiolPlant40122PowelletalVaccines183AbstractPrasheretalBiochemBiophysResCommun1273136RajasekharanetalInternationalSymposiumonPlantLipidsAbstractSahaetalPlantPhysiol14115331543SchaffneretalProcNatlAcadSciUSA7721632167ShiauetalVaccine1939473956SieberetalNatureBiotechnology19456460SizemoreetalScience270299302SladeandKnaufTransgenicRes14109115StobartetalPlanta2035866Stalkeretal1988Science242419423StemmerProcNatlAcadSciUSA911074710751StemmerNature370389391ThilletetalJBiolChem2631250012508TingayetalPlantJ1113691376ToriyamaetalTheorApplGenet20534TumaneyetalJBiolChem2761084710852TzfiraandCitovskyCurrOpinBiotech17147154WeissetalIntJMedMicrobiol29395106WeselakeetalBiotechnologyAdvances27866878WinansetalJournalofBacteriology17040474054WoodetalPlantBiotechJ7914924YangetalPlanta216597603YangetalPNAS1071204012045YenandFareseJBiolChem2781853218537YenetalProcNatlAcadSciUSA9985128517YenetalJLipidRes4615021511VoinnetetalPlantJ33949956VolkovetalNucleicacidsresearch27e18ZhangetalPlantCellReports18959966ZhangetalPlantCellTissueandOrganCulture5646ZhengetalThePlantCell1518721887ZhaoetalNatureBiotechnology16258261"