"VEGFアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療から利益を得る可能性のある患者を同定するための方法であって、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFの発現レベルを決定することを含み、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFのレベルが基準レベルかそれを上回ることが、患者が抗癌治療法による治療から利益を得る可能性があることを示す方法。VEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療に対する癌に罹患した患者の応答性を予測する方法であって、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFの発現レベルを決定することを含み、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFのレベルが基準レベルかそれを上回ることが、患者が抗癌治療法による治療に応答する可能性が高いことを示す方法。癌患者がVEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療からの利益を示す可能性を決定するための方法であって、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFの発現レベルを決定することを含み、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFのレベルが基準レベルかそれを上回ることが、患者が抗癌治療法からの利益の可能性が増加していることを示す方法。VEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法の治療的有効性を最適化するための方法であって、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFの発現レベルを決定することを含み、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFのレベルが基準レベルかそれを上回ることが、患者が抗癌治療法からの利益の可能性が増加していることを示す方法。患者の癌を治療するための方法であって、患者から得られたサンプルが、基準サンプル中の無修飾のVEGFレベルのレベルかそれを上回るレベルの無修飾のVEGFレベルのレベルを有することを決定し、前記患者にVEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法の有効量を投与し、それによって癌が治療されることを含む方法。癌が、結腸直腸癌、神経膠芽腫、腎癌、卵巣癌、乳癌、膵臓癌、胃癌及び肺癌からなる群から選択される請求項1から5の何れか一項に記載の方法。患者から得られたサンプルが、全血、血漿、血清、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されたメンバーである、請求項1から5の何れか一項に記載の方法。無修飾のVEGFのレベルがタンパク質レベルである、請求項1から5の何れか一項に記載の方法。タンパク質レベルが血漿タンパク質レベルを測定することにより決定される、請求項8に記載の方法。患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFの血漿レベルが、基準サンプル中の無修飾のVEGFのレベルかそれを上回ることが、患者が抗癌治療により利益を受ける可能性があり、抗癌治療法により応答する可能性がより高いか、又は抗癌治療法の利益を受ける可能性が増加していることを示す、請求項9に記載の方法。前記患者に対してVEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法の有効量を投与することを更に含む、請求項1から4の何れか一項に記載の方法。VEGF-Aアンタゴニストが抗体である、請求項11に記載の方法。抗体がベバシズマブである、請求項12に記載の方法。細胞毒性剤、化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される第二の抗癌治療法の有効量を投与することを更に含む、請求項11に記載の方法。第二の抗癌治療法とVEGF-Aアンタゴニストが同時に投与される、請求項14に記載の方法。第二の抗癌治療法とVEGF-Aアンタゴニストが逐次的に投与される、請求項14に記載の方法。細胞毒性剤、化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される第三の抗癌治療法の有効量を投与することを更に含む、請求項14に記載の方法。第三の抗癌治療法、第二の抗癌治療法及びVEGF-Aアンタゴニストが同時に投与される、請求項17に記載の方法。第三の抗癌治療法、第二の抗癌治療法及びVEGF-Aアンタゴニストが逐次的に投与される、請求項17に記載の方法。VEGF-Aアンタゴニストが抗体である、請求項5に記載の方法。抗体がベバシズマブである、請求項20に記載の方法。抗癌治療法が、細胞毒性剤、化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される第二の抗癌治療法の有効量を投与することを更に含む、請求項5に記載の方法。第二の抗癌治療法とVEGF-Aアンタゴニストが同時に投与される、請求項19に記載の方法。第二の抗癌治療法とVEGF-Aアンタゴニストが逐次的に投与される、請求項19に記載の方法。抗癌治療法が、細胞毒性剤、化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される第三の抗癌治療法の有効量を投与することを更に含む、請求項19に記載の方法。第三の抗癌治療法、第二の抗癌治療法及びVEGF-Aアンタゴニストが同時に投与される、請求項25に記載の方法。第三の抗癌治療法、第二の抗癌治療法及びVEGF-Aアンタゴニストが逐次的に投与される、請求項25に記載の方法。VEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療から利益を得る可能性のある患者を決定するためのキットであって、無修飾のVEGFに特異的に結合することができる一組の化合物、及びVEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療に対する患者の応答性を予測するための無修飾のVEGFのレベルを決定するための前記化合物を使用するための使用説明書を含み、無修飾のVEGFのレベルのレベルが基準サンプル中の無修飾のVEGFのレベルのレベルかそれ以上のレベルであることが、患者が、VEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療から利益を受け得ることを示すキット。化合物がタンパク質である、請求項28に記載のキット。タンパク質が抗体である、請求項29に記載のキット。無修飾のVEGFのレベルを検出するための一組の化合物であって、無修飾のVEGFに特異的に結合することができる少なくとも一化合物を含む一組の化合物。化合物がタンパク質である、請求項31に記載の一組の化合物。タンパク質が抗体である、請求項32に記載の一組の化合物。好適な実施態様の詳細な説明I.序論本発明は、VEGFアンタゴニストを含む抗癌治療法への応答可能性の増大を有する患者を同定するための方法を提供する。II.定義ある実施態様では、用語増加又は上回るは、ここに記述された方法によって検出される無修飾のVEGFのレベルにおいて、基準サンプルからの無修飾のVEGFのレベルに比べて、基準レベルでのレベル又は5、10、20、25、30、40、50、60、70、80、85、90、95、100又はそれ以上の全体的増加を指す。ある実施態様にて、用語増加したレベルは、基準レベルの値か又はそれを超えた値を指す。ある実施態様では、用語減少は、ここに記述された方法によって検出される血漿の無修飾のVEGFのレベルにおいて、基準サンプルからの無修飾のVEGFのレベルに比べて、基準レベルを下回るレベル又は5、10、20、25、30、40、50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99又はそれ以上の全体的減少を指す。ある実施態様において、用語減少は、無修飾のVEGFのレベルの減少を指し、ここでその減少レベルは、基準サンプルからの無修飾のVEGFのレベルのたかだか約0.9倍、0.8倍、0.7倍、0.6倍、0.5倍、0.4倍、0.3倍、0.2倍、0.1倍、0.05倍である。ある実施態様では、用語基準レベルでとは、基準サンプルから、ここで記載の方法で検出された無修飾のVEGFのレベルと同じである無修飾のVEGFのレベルを指す。ある実施態様では、用語基準レベルはここでは予め決められた値を指す。当業者には理解されるように、基準レベルは予め決められており、例えば特異性及び/又は感受性の観点からその要件を満たすように設定される。これらの要件は、例えば規制機関から規制機関へと変化させることができる。アッセイの感度又は特異性が、それぞれ所定の限界、例えば、80、90又は95に設定されねばならないかもしれない。これらの要件は、正又は負の予測値を単位として定義することができる。にもかかわらず、本発明に与えられた教えに基づいて、これらの要件を満たす基準レベルに到達することが常に可能となる。一実施態様にて、基準レベルは健常な個体にて決定される。一実施態様における基準レベルは、患者の属する疾患実体にて予め決められている。ある実施態様では、基準レベルは、調査される疾患実体における値の全体的分布の25から75の間の任意の割合に設定されることができる。他の実施態様では、基準レベルは、調査される疾患実体における値の全体的分布から決定される、中央値、三分位数又は四分位数に例えば設定されることができる。一実施態様では、基準レベルは、調査される疾患実体における値の全体的分布から決定される、中央値に設定される。本発明の文脈において、VEGFA又はVEGF-A、又はVEGFは、図8SwissProtアクセッション番号P15692,GeneIDNCBI:7422に示される配列番号1に例示される血管内皮増殖因子タンパク質Aを指す。用語VEGFAは、配列番号1のアミノ酸配列を有するタンパク質並びにそのホモログ及びアイソフォームを包含する。用語VEGF-Aはまた、既知のアイソフォーム例えばVEGF-Aのスプライスアイソフォーム、例えば、VEGF111,VEGF121,VEGF145,VEGF165,VEGF189及びVEGF206、併せて天然に生じる対立遺伝子やそのプロセスされた形態をも包含し、FerraraMolBiolCell21687及びLeungetalScience2461306及びHoucketalMolEndocrin51806に記載されるように、VEGF165のプラスミン開裂により生成する110アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子を含む。本発明の文脈において、用語VEGF-Aはまた、変異体タンパク質アイソフォームを含む、ホモログタンパク質、及び/又は断片が、一以上のVEGF-A特異的抗体、例えば、BenderReliaTech及びRDSystemsから入手できる抗体クローン3C5及び26503、及びKimetalGrowthFactors75364、及びVEGFに対するリボザイム、ストリンジェントな条件下で、VEGF又はVEGFレセプターをコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸例えばRNAi、イムノアドヘシン、抗VEGFレセプター抗体及びVEGFRチロシンキナーゼの小分子阻害剤などのVEGFレセプターアンタゴニストを含む。一つの好ましい実施態様において、VEGFアンタゴニストはVEGFに結合し、インビトロでのVEGF誘導性内皮細胞増殖を阻害する。一つの好ましい実施態様において、VEGFアンタゴニストはVEGF又はVEGFレセプターに非VEGF又は非VEGFレセプターよりも高親和性で結合する。一つの好ましい実施態様において、VEGFアンタゴニストはVEGF又はVEGFレセプターに、Kdが1uM及び1pMの間で結合する。その他の好ましい実施態様において、VEGFアンタゴニストはVEGF又はVEGFレセプターに、500nM及び1pMの間で結合する。VEGF特異的アンタゴニストには、VEGFと結合して、VEGF生物学的活性を遮断、阻害、抑制、低減又は干渉することができる非ペプチド小分子も含まれる。ゆえに、VEGF活性なる用語は、特にVEGFのVEGF媒介性生物学的活性を含む。ある実施態様では、VEGFアンタゴニストは、VEGFの発現レベル又は生物学的活性を少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90又はそれ以上低減又は阻害する。好ましい実施態様において、VEGFアンタゴニストは、抗体、ペプチボディ、イムノアドヘシン、小分子またはアプタマーなどのポリペプチドから選択される。好ましい実施態様において、抗体は、ベバシズマブアバスチン登録商標または抗VEGFR2または抗VEGFR3抗体などの抗VEGF受容体抗体などの抗VEGF抗体である。VEGFアンタゴニストの他の例は次のとおりである:VEGF-Trap,Mucagen,PTK787,SU11248,AG-013736,Bay439006sorafenib,ZD-6474,CP632,CP-547632,AZD-2171,CDP-171,SU-14813,CHIR-258,AEE-788,SB786034,BAY579352,CDP-791,EG-3306,GW-786034,RWJ-417975/CT6758及びKRN-633.抗VEGF抗体は、十分な親和性及び特異性でVEGFに結合する抗体である。ある実施態様において、選択される抗体は通常VEGFに十分な結合親和性を有し、例えば、抗体はhVEGFにKd値が100nMから1pMの間で結合しうる。抗体の親和性は、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ例えばPCT出願公開番号第2005/012359号に記載されてビアコアアッセイなど;酵素結合免疫吸着検定法ELISA;及び競合アッセイ例えばRIAにより決定することができる。好ましくは、本発明の抗VEGF抗体は、VEGF活性が関与している疾患又は症状を標的とすること及び妨げることにおける治療剤として使用することができる。抗VEGF抗体は通常、VEGF-B又はVEGF-Cなどの他のVEGFホモログにも、PIGF、PDGF又はbFGFなどの他の増殖因子にも結合しないであろう。好ましい抗VEGF抗体は、ハイブリドーマATCCHB10709によって産生されるモノクローナル抗VEGF抗体A461と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。より好ましくは、抗VEGF抗体は、ベバシズマブとして知られる抗体を含むがこれに限定されない、PrestaetalCancerRes5745934599に従って生成される組換えヒト化抗VEGFモノクローナル抗体である。その他の実施態様において、使用可能な抗VEGF抗体は、限定されないが、国際公開第2005/012359号に開示された抗体を含む。一実施態様において、抗VEGF抗体は、国際公開第2005/012359号の図24、25、26、27、29に開示された抗体例えば、G6G6-23、G6-31、G6-23.1、G6-23.2、B20、B20-4及びB20.4.1のいずれか1つの可変重鎖および可変軽領域を含む。その他の好ましい実施態様において、ラニビズマブとして知られている抗VEGF抗体は、糖尿病性神経障害及びAMDなどの眼疾患のために投与するVEGFのアンタゴニストである。ある実施態様において、本発明の抗VEGF抗体は、VEGF活性が関与している疾患又は症状を標的とすること及び妨げることにおける治療剤として使用することができる。また、抗体は、例えば治療としての有効性を評価するために、他の生物学的活性アッセイを施してもよい。このようなアッセイは、当技術分野で公知であり、標的抗原に依存し、抗体としての使用を意図している。例として、HUVEC阻害アッセイ、腫瘍細胞増殖阻害アッセイ例えば、国際公開第89/06692号に記載;抗体依存性細胞傷害ADCCおよび補体媒介性細胞傷害CDCアッセイ米国特許第5500362号;及びアゴニスト活性又は造血アッセイ国際公開第95/27062号を参照。抗VEGF抗体は通常、VEGF-B又はVEGF-Cなどの他のVEGFホモログにも、PIGF、PDGF又はbFGFなどの他の増殖因子にも結合しないであろう。一実施態様において、抗VEGF抗体は、ハイブリドーマATCCHB10709によって産生されるモノクローナル抗VEGF抗体A461と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。その他の実施態様において、抗VEGF抗体は、ベバシズマブBV;AVASTIN登録商標として知られる抗体を含むがこれに限定されない、PrestaetalCancerRes5745934599に従って生成される組換えヒト化抗VEGFモノクローナル抗体である。rhuMAbVEGF又はアバスチンとしても知られる抗VEGF抗体ベバシズマブは、PrestaetalCancerRes5745934599に従って生成される組換えヒト化抗VEGFモノクローナル抗体である。これは、ヒトVEGFのそのレセプターへの結合をブロックするマウス抗hVEGFモノクローナル抗体A4.6.1由来の抗原結合相補性決定領域と変異したヒトIgG1フレームワーク領域を含有する。ほとんどのフレームワーク領域を含む、ベバシズマブのおよそ93のアミノ酸配列はヒトIgG1由来のものであり、配列のおよそ7はマウス抗体A461由来である。ベバシズマブは、およそ149000ダルトンの分子質量であり、グリコシル化される。ベバシズマブ及び他のヒト化抗VEGF抗体は米国特許第6884879号及び国際公開第2005/044853号に更に記載されている。抗VEGF抗体ラニビズマブ又はルセンティス登録商標抗体またはrhuFabV2は、ヒト化、親和性成熟抗ヒトVEGFFab断片である。ラニビズマブは、大腸菌発現ベクター及び細菌発酵における標準的な組換え技術法によって製造される。ラニビズマブはグリコシル化されておらず、~48000ダルトンの分子量を有する。国際公開第98/45331号及び米国特許出願公開第2003/0190317号を参照。2つの最も良好に特徴付けられたVEGFレセプターは、VEGFR1およびVEGFR2である。各々のVEGFファミリメンバーの各々のレセプターの特異性は変化するが、VEGF-AはFlt-1およびKDRに結合する。完全長Flt-1レセプターは、7つのIgドメインを有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびチロシンキナーゼ活性を有する細胞内ドメインを含む。細胞外ドメインはVEGFの結合に関与しており、細胞内ドメインはシグナル伝達に関与している。VEGFに特異的に結合するVEGFレセプター分子又はその断片は、VEGFタンパク質に結合して隔離し、それによってシグナル伝達を妨げるVEGFインヒビターとして用いられうる。ある実施態様では、VEGFレセプター分子又はそのVEGF結合断片は、可溶型、例えばsFlt-1である。レセプターの可溶型は、VEGFに結合して標的細胞の表面上に存在する天然のレセプターへのその結合を妨げることによって、VEGFタンパク質の生物活性に対して阻害作用を及ぼす。また、VEGFレセプター融合タンパク質も包含され、その例を後述する。キメラVEGFレセプタータンパク質は、少なくとも2つの異なるタンパク質由来のアミノ酸配列を有するレセプター分子であり、そのうちの少なくとも1はVEGFレセプタータンパク質であり、VEGFに結合してVEGFの生物活性を阻害することができる。ある実施態様では、本発明のキメラVEGFレセプタータンパク質は、2つの異なるVEGFレセプター分子だけから得られるアミノ酸配列からなるが、flt-1及び/又はKDRレセプターの細胞外リガンド結合領域の1、2、3、4、5、6又は7つすべてのIg様ドメインを含むアミノ酸配列は、他の無関係なタンパク質、例えば免疫グロブリン配列のアミノ酸配列に連結されうる。Ig様ドメインが結合される他のアミノ酸配列は、当業者に容易に明らかであろう。キメラVEGFレセプタータンパク質の例には、限定するものではないが、可溶性Flt-1/Fc、KDR/Fc又はFLt-1/KDR/Fcが含まれる。。可溶性VEGFレセプタータンパク質又はキメラVEGFレセプタータンパク質には、膜貫通ドメインを介して細胞の表面に固定されていないVEGFレセプタータンパク質が含まれる。また、キメラレセプタータンパク質を含むVEGFレセプターの可溶型は、VEGFに結合してVEGFを不活性化することができるが、膜貫通領域を含んでおらず、したがって一般に、この分子が発現される細胞の細胞膜に結合したものとならない。他のVEGFインヒビターは、例えば国際公開第99/24440、PCT国際出願PCT/IB99/00797号、国際公開第95/21613号、国際公開第99/61422号、米国特許第6534524号、米国特許第5834504号、国際公開第98/50356号、米国特許第5883113号、米国特許第5886020号、米国特許第5792783号、米国特許第6653308号、国際公開第99/10349号、国際公開第97/32856号、国際公開第97/22596号、国際公開第98/54093号、国際公開第98/02438号、国際公開第99/16755号、及び国際公開第98/02437号に記載されており、これらすべては出典明記によってその全体がここに援用される。ここで使用されるB20シリーズポリペプチドなる用語は、VEGFに結合する抗体を含むポリペプチドを意味する。B20シリーズポリペプチドには、限定するものではないが、米国特許出願公開第2006/0280747号、米国特許出願公開第2007/0141065号及び/又は米国特許出願公開第2007/0020267号に記載されたB20抗体又はB20誘導抗体の配列に由来する抗体が含まれ、これらの特許出願の内容は出典明示により明示的にここに援用される。一実施態様では、B20シリーズポリペプチドは、米国特許出願公開第2006/0280747号、米国特許出願公開第2007/0141065号及び/又は米国特許出願公開第2007/0020267号に記載されたB204.1である。他の実施態様において、B20シリーズポリペプチドは米国特許出願番号60/991302号に記載されたB20411であり、この開示内容の全体は出典明示により明示的にここに援用される。ここで使用されるG6シリーズポリペプチドなる用語は、VEGFに結合する抗体を含むポリペプチドを指す。G6シリーズポリペプチドには、限定するものではないが、米国特許公開第2006/0280747号、米国特許公開第2007/0141065号及び/又は米国特許公開第2007/0020267号に記載されたG6抗体又はG6由来の抗体の配列から由来する抗体が含まれる。米国特許公開第2006/0280747号、米国特許公開第2007/0141065号及び/又は米国特許公開第2007/0020267号に記載されたG6シリーズポリペプチドには、限定するものではないが、G68、G623及びG631が含まれる。更なる抗体については、米国特許第7060269号、同第6582959号、同第6703020号;同第6054297号;国際公開98/45332;国際公開96/30046;国際公開94/10202;欧州特許第0666868号B1;米国特許公開2006/009360、2005/0186208、2003/0206899、2003/0190317、2003/0203409及び2005/0112126;及びPopkovetalJournalofImmunologicalMethods288149164を参照のこと。ある実施態様では、他の抗体には、残基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、I91、K101、E103およびC104を含むか、あるいは残基F17、Y21、Q22、Y25、D63、I83およびQ89を含むヒトVEGF上の機能的エピトープに結合するものを含む。他の抗VEGF抗体もまた知られており、例えば、LiangetalJBiolChem281951961に記載される。抗癌剤による治療に対する、患者の有効な応答又は患者の応答性又は感受性は、抗VEGF抗体などの抗癌剤による治療の結果、又は治療により、癌のリスクがあるか、又は癌に罹患している患者に付与された臨床的又は治療上の利益を言う。このような利点は、細胞性応答又は生物学的応答、完全寛解、部分寛解、安定した疾患進行又は再発なし、又はアンタゴニストによる治療により、又は治療の結果、患者の後に再発した応答を含む。例えば、有効な応答は、腫瘍の大きさ、無増悪生存、又は全生存を縮小することができる。本明細書中で使用されるアンタゴニストは、それらが結合する分子の生物学的活性を阻害又は低下させる化合物又は薬剤を言う。アンタゴニストは、VEGFに結合し、場合によっては他の分子に結合し又は融合した、合成によるペプチド又は天然配列のペプチド、イムノアドヘシン、及び小分子アンタゴニストを含む。ブロッキング抗体又はアンタゴニスト抗体は阻害又はそれが結合する抗原の生物学的活性を減少させるものである。本明細書中で用いるアゴニスト抗体は、対象のポリペプチドの機能的な活性の少なくとも一つを部分的に又は完全に模倣する抗体である。本明細書中の抗体は最も広義に用いられ、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つのインタクトな抗体から形成される多特異性抗体例えば二重特異性抗体、及び所望の生物学的活性を表す限りにおける抗体断片を包含する。ある実施態様において、本明細書で与えられた方法中でVEGFアンタゴニストとして使用される抗体は、例えば2重特異性抗体などの多重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある実施態様において、結合特異性の一つはVEGFに対してであり、他は任意の他の抗原に対してである。ある実施態様において、二重特異性抗体は、VEGFの2つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまたVEGFを発現する細胞に細胞傷害性薬物を局在化するために用いることができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する2つの免疫グロブリン重鎖軽鎖対の組換え共発現537540国際公開第93/08829号、及びTrauneckerAetalEMBOJ1036553659を参照及びknob-in-holeエンジニアリング例えば、米国特許第5731168号を参照を含む。多重特異抗体はまた、抗体のFc-ヘテロ2量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること国際公開第2009/089004号;2つ以上の抗体又は断片を架橋すること例えば米国特許第4676980号、及びBrennanMetalScience2298183を参照;2重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること15471553を参照;二重特異性抗体フラグメントを作製するため、ダイアボディ技術を使用すること64446448を参照;及び単鎖FvsFvダイマーを使用すること53685374を参照;及び、例えばTuttAetalJImmunol1476069に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。オクトパス抗体を含む、3つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる例えば、米国特許出願公開第2006/0025576号を参照。本明細書中の抗体又は断片はまた、VEGF並びにその他の異なる抗原例えば米国特許出願公開第2008/0069820号参照に結合する抗原結合部位を含む、2重作用DualActingFAb又はDAFを含む。本明細書に与えられる方法においてVEGFアンタゴニストとして使用される抗体又は抗体断片はまた、国際公開第2009/080251号、国際公開第2009/080252号、国際公開第2009/080253号、国際公開第2009/080254号、国際公開第2010/112193号、国際公開第2010/115589号、国際公開第2010/136172号、国際公開第2010/145792、及び国際公開第2010/145793に記述される多重特異性抗体を含む。二重特異性VEGF抗体の例は、例えば国際公開第2010/040508VEGF-ANG2号、PCT/EP2011/054504VEGF-ANG2号、国際公開第2005/087812VEGF-PDGF号、国際公開第2009120922VEGF-PDGFRベータ号、国際公開第2011/039370VEGF-DII4に記述されている。単離された抗体とは、その自然環境の成分から同定され分離され及び/又は回収されたものである。その自然環境の汚染成分とは、抗体の研究、診断又は治療的な使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。幾つかの実施態様では、抗体は、例えばローリー法で測定した場合、抗体の95重量を超えるまて、及び幾つかの実施態様では99重量を超えるまで、例えばスピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも15のN末端あるいは内部アミノ酸配列の残基を得るのに十分なほどに、又は、例えばクーマシーブルー又は銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのSDSPAGEにより均一になるまで十分なほど精製される。その自然環境の少なくとも一の成分が存在しないため、単離された抗体には、組換え細胞内のインサイツでの抗体が含まれる。しかしながら、通常は、単離された抗体又は他のポリペプチドは少なくとも一の精製工程により調製される。天然抗体は、通常、2つの同一の軽L鎖及び2つの同一の重H鎖からなる、約150000ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は一つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合しており、ジスルフィド結合の数は、異なった免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の中で変化する。また各重鎖と軽鎖は、規則的に離間した鎖間ジスルフィド結合を有している。各重鎖は、多くの定常ドメインが続く可変ドメインVHを一端に有する。各軽鎖は、一端に可変ドメインVLを、他端に定常ドメインを有する;軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間のインターフェイスを形成すると考えられている。抗体の可変領域又は可変ドメインとは、抗体の重鎖又は軽鎖のアミノ末端ドメインを意味する。重鎖の可変ドメインはVHと称されうる。軽鎖の可変ドメインはVLと称されうる。これらのドメインは一般に抗体の最も可変の部分であり、抗原結合部位を含む。可変という用語は、可変ドメインのある部位が、抗体の中で配列が広範囲に異なっており、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合性及び特異性に使用されているという事実を意味する。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメインにわたって一様には分布していない。それは、軽鎖及び重鎖の可変ドメインの両方の高頻度可変領域と呼ばれる3つのセグメントに集中される。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインの各々は、主としてβシート立体構造をとり、3つの高頻度可変領域によって連結され、βシート構造を連結し、場合によってはその一部を形成することもある4つのFRを含む。各鎖のHVRはFRによって極く近傍に一緒に保持され、他の鎖からのHVRとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与するを参照。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接は関係しないが、例えば抗体依存性細胞傷害への抗体の関与のような様々なエフェクター機能を示す。任意の脊椎動物種からの抗体免疫グロブリンの軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパκ及びラムダλと呼ばれる明確に区別される2つのタイプのタイプを割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、抗体免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。抗体の5つの主要なクラスがあり:IgA、IgD、IgE、IgG及びIgM、及びこれらのいくつかは、さらにサブクラスアイソタイプ、例えば、IgG1、IgG2に、IgG3、IgG4、IGA1、及びIgA2に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配位はよく知られており、例えば、Abbas等.CellularandMolImmunology第4版に記述されている。抗体は、抗体と一以上の他のタンパク質又はペプチドとの共有結合性又は非共有結合性の会合により形成されたより大きな融合分子の一部であり得る。完全長抗体、インタクトな抗体及び全抗体という用語は、本明細書では交換可能に使用され、実質的にインタクトな形態の抗体を指し、以下に定義される抗体断片ではない。この用語は、特にFc領域を含む重鎖を有する抗体を指す。本明細書中のネイキッド抗体は、細胞障害性部分にコンジュゲートしていないか又は放射性標識されていない抗体である。抗体断片は、好ましくは抗原結合領域を含む、インタクトな抗体の一部を含む。抗体断片の例には、Fab、Fab、F2及びFv断片;ダイアボディ;線形抗体;単鎖抗体分子;及び抗体断片から形成される多特異性抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、Fab断片と呼ばれる2つの同一の抗体結合断片を生成し、その各々は単一の抗原結合部位を持ち、残りは容易に結晶化する能力を反映してFc断片と命名される。ペプシン処理はF2断片を生じ、それは2つの抗原結合部位を持ち、抗原を交差結合することができる。Fvは、完全な抗原結合部位を含む最小抗体断片である。一実施態様において、二本鎖Fv種は、堅固な非共有結合をなした一つの重鎖及び一つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Fv種では、柔軟なペプチドリンカーによって1の重鎖及び1の軽鎖可変ドメインは共有結合性に連結することができ、よって軽鎖及び重鎖は、二本鎖Fv種におけるものと類似の二量体構造に結合することができる。この配置において、各可変ドメインの3つのHVRは相互作用し、VHVL二量体の表面に抗原結合部位を形成する。集合的に、6つのHVRが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメインでさえ、全結合部位よりも親和性が低くなるが、抗原を認識して結合する能力を有している。Fab断片は、重鎖及び軽鎖の可変ドメインを含み、また軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第一定常ドメインを有する。Fab断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含む重鎖CH1ドメインのカルボキシ末端に数個の残基が付加している点でFab断片とは異なる。FabSHは、定常ドメインのシステイン残基が一つの遊離チオール基を担持しているFabに対するここでの命名である。F2抗体断片は、間にヒンジシステインを有するFab断片の対として生産された。また、抗体断片の他の化学結合も知られている。抗体断片の他の化学結合も知られている。一本鎖Fv又はscFv抗体断片は、抗体のVH及びVLドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。通常、scFvポリペプチドはVH及びVLドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはscFvが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。scFvの概説については、ThePharmacologyofMonoclonalAntibodiesvol113Rosenburg及びMoore編SpringerVerlagNewYork頁269315のPlueckthunを参照のこと。ダイアボディなる用語は、2つの抗原結合部位を持つ抗体断片を指し、その断片は同一のポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメインに重鎖可変ドメインが結合してなる。非常に短いために同一鎖上で2つのドメインの対形成ができないリンカーを使用して、ドメインを他の鎖の相補ドメインと強制的に対形成させ、2つの抗原結合部位を創製する。ダイアボディは二価でも二特異性であってもよい。ダイアボディは、例えば、欧州特許第404097号;国際公開第1993/11161号;HudsonetalNatMed9129134;及びHolligeretalPNASUSA9064446448に更に詳細に記載されている。トリアボディ及びテトラボディもまたHudsonetalNatMed9129134に記載されている。ここで使用されるモノクローナル抗体なる用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団に含まれる個々の抗体は、少量で存在しうる可能性がある突然変異、例えば自然に生じる突然変異を除いて同一である。従って、モノクローナルとの形容は、別々の抗体の混合物ではないという抗体の性質を示す。ある実施態様では、このようなモノクローナル抗体は、通常、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、この場合、標的に結合するポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から単一の標的結合ポリペプチド配列を選択することを含むプロセスにより得られる。例えば、この選択プロセスは、雑種細胞クローン、ファージクローン又は組換えDNAクローンのプールのような複数のクローンからの、唯一のクローンの選択とすることができる。選択された標的結合配列は、例えば標的への親和性の向上、標的結合配列のヒト化、細胞培養液中におけるその産生の向上、インビボでの免疫原性の低減、多選択性抗体の生成等のために更に変化させることができ、変化させた標的結合配列を含む抗体もまた、本発明のモノクローナル抗体である。異なる決定基に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体の調製物とは異なり、モノクローナル抗体の調製物の各モノクローナル抗体は、抗原の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体の調製物は、それらが他の免疫グロブリンで通常汚染されていないという点で有利である。モノクローナルとの形容は、抗体の、実質的に均一な抗体の集団から得られたものであるという特性を示し、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないと解釈されるべきものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は様々な技術によって作製することができ、それらの技術には、例えば、ハイブリドーマ法;Hongo等Hybridoma14253260;Harlow等AntibodiesALaboratoryManual;Hammerling等MonoclonalAntibodiesandTCellhybridomas563681、組換えDNA法、ファージディスプレイ技術;Marks等JMolBiol222581597;Sidhu等JMolBiol338299310;Lee等JMolBiol34010731093;FellouseProcNatlAcadSciUSA1011246712472;及びLee等JImmounolMethods284119132、並びに、ヒト免疫グロブリン座位の一部又は全部、又はヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子を有する動物にヒト又はヒト様抗体を生成する技術;Jakobovits等Nature362255258;Bruggemann等YearinImmunol733;米国特許第5545807号;同第5545806号;同第5569825号;同第5625126号;同第5633425号;同第5661016号Marks等BioTechnology10779783;Lonberg等Nature368856859;MorrisonNature368812813;Fishwild等NatureBiotechnol14845851;NeubergerNatureBiotechnol14826及びLonberg及びHuszarInternRevImmunol136593参照が含まれる。本発明のモノクローナル抗体は、具体的にはキメラ抗体を含み、重鎖及び/又は軽鎖の一部は、特定の種由来又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体において、対応する配列と同一又は相同であり、残りの鎖は、所望の生物学的活性を表す限り、他の種由来又は他の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体、並びにそのような抗体の断片において、対応する配列と同一又は相同である。キメラ抗体には、抗体の抗原結合領域が例えば対象の抗原をマカクザルに免疫投与することによって作製される抗体に由来する、PRIMATIZED抗体が含まれる。非ヒトの抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。一実施態様において、ヒト化抗体は、レシピエントのHVRからの残基が、望まれる特異性、親和性、及び/又は能力を有するマウス、ラット又はウサギのようなヒト以外の種ドナー抗体のHVRからの残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリンレシピエント抗体である。幾つかの例においては、ヒト免疫グロブリンのFR残基は、対応する非-ヒト残基によって置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体にも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能を更に精密化するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、FRの全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グリブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、任意で、免疫グロブリンの定常領域Fcの少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。更なる詳細については、JonesetalNature321522525ReichmannetalNature332323329及びPrestaCurrOpStructBiol2593596を参照。また、例えば、VaswaniandHamiltonAnnAllergyAsthmaImmunol1105115HarrisBiochemSocTransactions2310351038HurleandGrossCurrOpBiotech5428433及び米国特許第6982321号及び第7087409号も参照。ヒト抗体は、ヒトによって生産される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するもので、及び/又はここで開示されたヒト抗体を製造するための何れかの技術を使用して製造されたものである。ヒト抗体のこの定義は、特に非ヒト抗原結合残基を含んでなるヒト化抗体を除く。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む、当該分野で知られている様々な技術を使用して生産することが可能である。HoogenboomandWinterJMolBiol227381;MarksetalJMolBiol222581。また、ColeetalMonoclonalAntibodiesandCancerTherapyAlanRLiss頁77;BoerneretalJImmunol1478695において記述される方法は、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用できる。vanDijkandvandeWinkelCurrOpinPharmacol536874も参照のこと。ヒト化抗体は、抗原刺激に応答して抗体を産生するように修飾されているが、その内在性遺伝子座が無効になっているトランスジェニック動物、例えば免疫化ゼノマウスに抗原を投与することによって調製することができる。例えば、ヒトのB細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体に関するLietalProcNatlAcadSciUSA10335573562も参照のこと。本明細書で使用される用語超可変領域、HVR又はHVは、配列が超可変であるか、及び/又は構造的に定まったループを形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般に、抗体は6つのHVRを含み;VHに3つ、VLに3つである。天然の抗体では、H3及びL3は6つのHVRのうちで最も高い多様性を示し、特にH3は抗体に良好な特異性を与える際に特有の役割を果たすと考えられている。例としてXu等Immunity133745;MethodsinMolecularBiology248125のJohnsonandWuを参照。実際、重鎖のみからなる天然に生じるラクダ科の抗体は機能的であり、軽鎖が無い状態で安定である。例えば、HamersCastermanetalNature363446448及びSheriffetalNatureStructBiol3733736を参照。多数のHVRの描写が使用され、ここに含まれる。Kabat相補性決定領域であるHVRは配列変化に基づいており、最も一般的に使用されている。Chothiaは、代わりに構造的ループの位置に言及している。AbMHVRは、KabatのCDR及びChothiaの構造的ループの間の折衷を表し、OxfordMolecularのAbM抗体モデリングソフトウェアにより使用される。接触HVRは、利用できる複合体結晶構造の分析に基づく。これらのHVRのそれぞれに由来する残基を以下に示す。HVRは、次のような拡大HVRを含むことができる、即ち、VLの24-36又は24-34、46-56又は50-56及び89-97又は89-96と、VHの26-35、50-65又は49-65及び93-102、94-102、又は95-102である。可変ドメイン残基には、これら拡大HVRの各々を規定するために、上掲のKabat等に従って番号を付した。フレームワーク又はFR残基は、ここで定義する高頻度可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。Kabatによる可変ドメイン残基番号付け又はKabatに記載のアミノ酸位番号付けなる表現及びその異なる言い回しは、上掲のKabat等の抗体の編集の軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインに用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを用いると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのFR又はHVRの短縮又はFR又はHVRへの挿入に対応する2、3のアミノ酸又は付加的なアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインには、H2の残基52の後に単一アミノ酸の挿入Kabatによる残基52a、及び重鎖FR残基82の後に挿入された残基を含んでもよい。残基のKabat番号付けは、標準のカバット番号付け配列による抗体の配列の相同領域でアライメントすることによって与えられる抗体について決定してもよい。親和性成熟抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数のHVRにおいて一又は複数の改変を持つものである。一実施態様では、親和成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル又はさらにピコモルの親和性を有する。親和成熟抗体は、当該分野において知られているある手順を用いて生産される。例えば、Marks等BioTechnology10:779783は、VH及びVLドメインシャッフリングによる親和成熟について記載している。HVR及び/又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘導は、例としてBarbas等ProcNatAcadSciUSA91:38093813;Schier等Gene169:147155;Yelton等JImmunol155:19942004;Jackson等JImmunol154:33109;及びHawkins等JMolBiol226:889896に記載されている。増殖阻害性抗体は、抗体が結合する抗原を発現している細胞の増殖を妨げるか又は低減するものである。アポトーシスを誘導する抗体とは、アネキシンVの結合、DNAの断片化、細胞の縮み、小胞体の拡張、細胞断片化、及び/又は膜小胞の形成といった、標準的なアポトーシスアッセイにより決定される、プログラムされた細胞死を誘導するものである。抗体のエフェクター機能とは、抗体のFc領域に帰する生物学的活性を意味し、抗体のアイソタイプにより変わる。抗体のエフェクター機能の例には、C1q結合及び補体依存性細胞障害;Fcレセプター結合;抗体依存性細胞媒介性細胞障害;貪食作用;細胞表面レセプターのダウンレギュレーション;及びB細胞活性化が含まれる。本明細書のFc領域なる用語は、天然配列Fc領域及び変異体Fc領域を含む、免疫グロブリン重鎖のC末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のFc領域の境界は変化し得るが、通常、ヒトIgG重鎖Fc領域はCys226の位置のアミノ酸残基又はPro230から、Fc領域のカルボキシル末端まで伸長すると定義される。Fc領域のC末端リジンは、例えば、抗体の産生又は精製中に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え遺伝子操作することによって取り除かれてもよい。従って、インタクトな抗体の組成物は、すべてのK447残基が除去された抗体群、K447残基が除去されていない抗体群、及びK447残基を有する抗体及び有さない抗体の混合を含む抗体群を含みうる。本明細書中で特に明記しない限り、免疫グロブリン重鎖の残基の番号付けは、上掲のKabatらによるEUインデックスのそれである。KabatによるEUインデックスはヒトIgG1のEU抗体の残基番号付けを指す。機能的Fc領域は、天然配列Fc領域のエフェクター機能を有する。例示的なエフェクター機能には、C1q結合、補体依存性細胞障害作用、Fcレセプター結合、ADCC、食作用、細胞表面レセプターの下方制御などが含まれる。そのようなエフェクター機能は、通常、Fc領域が結合ドメインと組み合わさることを必要とし、例えば本明細書中の定義に開示される様々なアッセイを使用して評価される。天然配列のFc領域は、天然に見出されるFc領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を包含する。天然配列のヒトFc領域は、天然配列のヒトIgG1Fc領域;天然配列のヒトIgG2Fc領域;天然配列のヒトIgG3Fc領域;及び天然配列のヒトIgG4Fc領域;並びに、これらの自然に生じる変異体が含まれる。変異体Fc領域は、少なくとも1つのアミノ酸修飾、好ましくは一又は複数のアミノ酸置換により、天然配列のFc領域とは異なるアミノ酸配列を包含するものである。好ましくは、変異体Fc領域は、天然配列のFc領域もしくは親ポリペプチドのFc領域と比較した場合、少なくとも1つのアミノ酸置換、例えば、天然配列のFc領域又は親のポリペプチドのFC領域におよそ1からおよそ10のアミノ酸置換、好ましくはおよそ1からおよそ5のアミノ酸置換を有する。本明細書中の変異体Fc領域は、好ましくは、天然配列のFc領域及び/又は親ポリペプチドのFc領域と、少なくともおよそ80の同一性を有するか、最も好ましくは少なくともおよそ90の配列同一性を、より好ましくは少なくともおよそ95の配列又はそれ以上の同一性を有するものであろう。Fc領域含有抗体なる用語は、Fc領域を含む抗体を指す。Fc領域のC末端リジンは、例えば、抗体の精製中又は抗体をコードする核酸を組み換え操作することによって除去してもよい。従って、本発明のFc領域を有する抗体を含んでなる組成物は、K447を有する抗体、すべてのK447が除去された抗体、又はK447残基を有する抗体とK447残基を有さない抗体の混合を包含しうる。Fcレセプター又はFcRは、抗体のFc領域に結合するレセプターを記載するものである。ある実施態様では、FcRは天然のヒトFcRである。ある実施態様では、FcRはIgG抗体と結合するもので、FcγRI、FcγRII及びFcγRIIIサブクラスのレセプターを含み、これらのレセプターの対立遺伝子変異体、選択的にスプライシングされた形態のものも含まれる。FcγRIIレセプターには、FcγRIIA及びFcγRIIBが含まれ、主としてその細胞質ドメインは異なるが、類似のアミノ酸配列を有するものである。活性型レセプターFcγRIIAは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター活性化モチーフを含んでいる。阻害型レセプターFcγRIIBは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター阻害性モチーフを含んでいるを参照。FcRに関しては、例としてRavetchandKinetAnnuRevImmunol9457492;Capel等Immunomethods42534;及びdeHaas等JLabClinMed12633041に概説されている。将来的に同定されるものも含む他のFcRはここでのFcRという言葉によって包含される。Fcレセプター又はFcRなる用語もまた、母性IgGの胎児への移送Kim等JImmunol24249、及び免疫グロブリンのホメオスタシスの調節を担う新生児性レセプターFcRnも含まれる。FcRnへの結合の測定方法は公知である592598;GhetieetalNatureBiotechnology15637640;HintonetalJBiolChem27962136216:国際公開第2004/92219号を参照。インビボでのヒトFcRnへの結合とヒトFcRn高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えばヒトFcRnを発現するトランスジェニックマウス又は形質転換されたヒト細胞株、又は変異体Fc領域を有するポリペプチドを投与された霊長類動物においてアッセイすることができる。国際公開公報00/42072にFcRへの結合を向上又は減弱させた抗体変異型が述べられている。例としてShields等JBiolChem965916604も参照のこと。一般的に結合親和性は、分子の単一結合部位とその結合パートナーとの間の非共有結合的な相互作用の総合的な強度を意味する。特に明記しない限り、結合親和性は、結合対のメンバー間の1:1相互作用を反映する内因性結合親和性を意味する。一般的に、分子XのそのパートナーYに対する親和性は、解離定数として表される。親和性は、本明細書中に記載のものを含む当業者に公知の共通した方法によって測定することができる。低親和性抗体は抗原にゆっくり結合して素早く解離する傾向があるのに対し、高親和性抗体は抗原により密接により長く結合したままとなる。結合親和性の様々な測定方法が当分野で公知であり、それらの何れかを本発明のために用いることができる。以下に結合親和性を測定するための具体的な例示的実施態様を記載する。一実施態様では、本発明のKd又はKd値は、以下のアッセイにより説明される目的の抗体のFab型バージョンで実施される放射性標識した抗原結合アッセイで測定される。抗原に対するFabの溶液結合親和性は、段階的な力価の非標識抗原の存在下で、最小濃度の標識抗原にてFabを均衡化して、抗Fab抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって測定される例えば、ChenetalJMolBiol293865881を参照。アッセイの条件を決めるために、ミクロタイタープレートDynexを5μg/mlの捕獲抗Fab抗体CappelLabsを含む50mM炭酸ナトリウムにて一晩コートして、その後2のウシ血清アルブミンを含むPBSにて室温で2~5時間、ブロックする。非吸着プレートNunc269620に、100pM又は26pMの[125I]抗原を段階希釈した目的のFabと混合するCancerRes5745934599の抗VEGF抗体、Fab12の評価と一致する。ついで目的のFabを一晩インキュベートする;しかし、インキュベーションは確実に平衡状態に達するまでに長時間かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温でインキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを0.1のTween20TM界面活性剤を含むPBSにて8回洗浄する。プレートが乾燥したら、150μl/ウェルの閃光物質MicroScint-20TM;Packardを加え、プレートをTopcountγ計測器Packardにて10分間計測する。最大結合の20か又はそれ以下濃度のFabを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。他の実施態様によると、Kd又はKd値は、~10反応単位の固定した抗原CM5チップを用いて25°CのBIAcore登録商標-2000又はBIAcore登録商標-3000BIAcore,Inc.,Piscataway,NJを用いて表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップCM5,BIAcoreInc.を、提供者の指示書に従ってNエチルNカルボジイミド塩酸塩及びNヒドロキシスクシニミドで活性化した。抗原を10mMの酢酸ナトリウムで5μg/mlに希釈し、結合したタンパク質の反応単位がおよそ10になるように5μl/分の流速で注入した。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、2倍の段階希釈したFabを25°C、およそ25μl/分の流速で0.05TWEEN20TM界面活性剤を含むPBSに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデルsimpleone-to-oneLangmuirbindingmodelBIAcoreEvaluationソフトウェアバージョン3.2を用いて、会合速度及び解離速度を算出した。平衡解離定数をkoff/kon比として算出した。例えば、ChenetalJMolBiol293865881を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が106M-1s-1を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計stop-flowequippedspectrophometerAvivInstruments又は撹拌キュベットを備えた8000シリーズSLM-AMINCOTM分光光度計ThermoSpectronicで測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、PBSpH7.2、25°Cの、20nMの抗抗原抗体Fab型の蛍光放出強度における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。また、本発明の結合速度又は会合の速度又は会合速度又はkonは、BIACORE登録商標-2000又はBIACORE登録商標-3000システムBIAcore,Inc.,PiscatawayNJを用いて上記のように表面プラズモン共鳴アッセイにて測定される。本明細書で用いる実質的に類似、実質的に同じなる用語は、当業者が2つの数値の差異に、該値によって測定される生物学的性質上わずかに又は全く生物学的及び/又は統計学的有意差がないと認められるほど、2つの数値が有意に類似していることを意味する。前記2つの値間の差異は、参照/比較抗体についての値の好ましくは約50以下、好ましくは約40以下、好ましくは約30以下、好ましくは約20以下、及び/又は好ましくは約10以下である。本明細書で用いる実質的に減少、又は実質的に異なるという句は、当業者が2つの数値の差異に、該値によって測定される生物学的性質上統計学的に有意であると認められるほど、2つの数値が有意に異なっていることを意味する。前記2つの値間の差異は、例えば、参照/比較抗体に対する値に応じて、約10より大きく、約20より大きく、約30より大きく、約40より大きく、及び/又は約50より大きい。所定の実施態様において、本明細書にて有用なヒト化抗体はさらにIgGのFcにアミノ酸改変を含み、ヒト化FcRnに対して、更に野生型IgGのFcを有する抗体に対して、少なくとも60倍、少なくとも70倍、少なくとも80倍、更に好ましくは少なくとも100倍、好ましくは少なくとも125倍、更により好ましくは少なくとも150倍から約170倍増加した結合親和性を示す。疾病又は疾患は、本発明の物質/分子又は方法を用いた治療によって恩恵を得る任意の症状である。これには、問題とする疾患に哺乳動物がかかりやすくなる病理学的症状を含む慢性及び急性の疾病又は疾患を含む。ここで治療されるべき疾患の限定されない例として、癌悪性及び良性の腫瘍;非白血病及びリンパ系悪性腫瘍;神経、グリア、アストロサイト、視床下部、及び他の腺、マクロファージ、上皮、間質と割腔、疾患、及び炎症、免疫学的及び他の血管新生関連の疾患を含む。細胞増殖性疾患及び増殖性疾患なる用語は、ある程度の異常な細胞増殖と関係している疾患を指す。一実施態様では、細胞増殖性疾患は癌である。一実施態様では、細胞増殖性疾患は血管形成である。本明細書中の腫瘍とは、悪性か良性かにかかわらず、すべての腫瘍性細胞成長及び増殖と、すべての前癌性及び癌性細胞及び組織を指す。癌、癌性細胞増殖性疾患、増殖性疾患及び腫瘍なる用語は、本明細書に参照される場合互いに排他的でない。癌及び癌性なる用語は、一般的に調節不可能な細胞増殖に特徴がある哺乳動物の生理学的状態を指すか又は表す。癌の例には、上皮癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病が含まれる。このような癌のより具体的な例には、扁平細胞癌、肺癌を含む、腹膜癌、肝細胞癌、胃又は腹部癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、肝癌、乳癌局所的進行型、再発性又は転移性HER-2陰性乳癌を含む、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓又は腎癌、肝臓癌、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、肝細胞癌、及び様々なタイプの頭頸部癌、並びにB細胞リンパ腫;小リンパ球NHL;中悪性度/濾胞性NHL;中悪性度びまん性NHL;高悪性度免疫芽細胞性NHL;高悪性度リンパ芽球性NHL;高悪性度小非分割細胞NHL;バルキー疾患NHL;マントル細胞リンパ腫;エイズ関連リンパ腫;及びワルデンストロームのマクログロブリン病を含む;慢性リンパ性白血病;急性リンパ芽球白血病;ヘアリー細胞白血病;慢性骨髄芽球性白血病;及び移植後リンパ増殖性疾患、並びに、母斑症と関係する異常な血管性増殖、浮腫、メイグス症候群が含まれる。抗新生物性組成物、抗癌組成物、又は抗癌剤なる用語は、少なくとも一の活性な治療剤、例えば抗癌剤を含む癌の治療に有用な組成物を指す。治療剤の例には、限定するものではないが、例えば化学療法剤、増殖阻害剤、細胞障害性剤、放射線療法において使用する薬剤、抗血管新生剤、抗リンパ脈管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、毒素、及び癌を治療するための他の薬剤、例えば抗HER2抗体、抗CD20抗体、上皮性増殖因子レセプターアンタゴニスト、HER1/EGFRインヒビター例えば、エルロチニブ、血小板由来増殖因子インヒビター例えば、GleevecTMCOX2インヒビター、インターフェロン、サイトカイン、ErbB2、ErbB3、ErbB4又はVEGFレセプターの一又は複数に結合するアンタゴニストを含み、それらは以下のターゲット、ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-beta、BlyS、APRIL、BCMAVEGF、又はVEGFレセプター、TRAIL/Apo2、及び他のバイオ活性がある有機化学的薬剤の一以上に結合する。それらの組合せも本発明に包含される。ここで使用される治療とは、治療される個体又は細胞の自然の経過を変化させる試みにおける臨床的介入を意味し、予防のため、又は臨床病理経過中に実施することができる。治療の所望する効果には、疾患の発症又は再発の予防、症状の緩和、疾病の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾病の進行速度の低減、病状の回復又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。ある実施態様では、本発明の抗体は、疾患又は疾病の進行を遅らせるために用いられる。有効量とは、所望される治療的又は予防的結果を達成するのに必要な期間、必要な用量での有効量を意味する。個体に所望する反応を引き出すために、本発明の物質/分子、アゴニスト又はアンタゴニストの治療的有効量は、病状、年齢、性別、個体の体重、及び、物質/分子、アゴニスト又はアンタゴニストの能力等の要因に応じて変わり得る。また、治療的有効量とは、物質/分子、アゴニスト又はアンタゴニストの任意の毒性又は有害な影響を、治療的に有益な効果が上回る量である。治療的有効量なる用語は、哺乳動物別名患者における疾患又は障害を治療するために有効な、本発明の抗体、ポリペプチド又はアンタゴニストの量を指す。癌の場合には、薬剤の治療的有効量は、癌細胞の数を減らし、腫瘍の大きさや重量を減少させ、末梢器官へのの癌細胞の浸潤を阻害しすなわち、ある程度ゆっくりと好ましくは停止させ、腫瘍転移を阻害しすなわち、ある程度ゆっくりと、好ましくは停止させ、ある程度、腫瘍の成長を阻害し、及び又は、ある程度癌に伴う症状の一又は複数の症状を緩和する。薬が既存の癌細胞の成長を防ぐか及び/又は死滅させることができる程度に、それは細胞増殖抑制性及び/又は細胞傷害性であり得る。一実施態様では、治療上有効な量は、増殖阻害量である。別の実施態様では、治療的有効量は患者の生存期間を延長させるする量である。別の実施態様では、治療的有効量は患者の無増悪生存を改善する量である。本明細書で使用される無増悪生存PFSとは、治療の間及びその後に、治療担当医師または治験責任医師の評価によると、患者の病気は悪化しない、すなわち進行しない時間の長さを指す。予防的有効量は、所望する予防的結果を達成するのに必要な期間、用量で有効な量を意味する。典型的には、しかし必ずではないが、予防的用量は、疾病の前又は初期の段階に患者に使用されるので、予防的有効量は治療的有効量よりも少ない。ここで用いられる細胞障害性剤という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び/又は細胞死又は破壊を生ずる物質を意味する。この用語は、放射性同位元素、化学治療薬、例えばメトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド類、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンC、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素、抗生物質、及び毒素、例えばその断片及び/又は変異体を含む小分子毒素又は細菌、糸状菌、植物又は動物起源の酵素的に活性な毒素、そして下記に開示する種々の抗腫瘍又は抗癌剤を含むように意図されている。他の細胞毒性剤を以下に記載する。殺腫瘍性剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。化学療法剤は、癌の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロホスファミドCYTOXAN商標登録のようなアルキル化剤;ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類;ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパのようなアジリジン類;アルトレートアミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチローロメラミンを含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類;アセトゲニン;デルタ-9-テトラヒドロカンナビノール;β-ラパコン;ラパコール;コルヒチン;ベツリン酸;カンプトテシン、CPT-11、アセチルカンプトテシン、スコポレチン、及び9-アミノカンプトテシンを含む;ブリオスタチン;カリスタチン;CC1065;ポドフィロトキシン;ポドフィリン酸;テニポシド;クリプトフィシン;ドラスタチン;ドゥオカルマイシン;エリュテロビン;パンクラチスタチン;サルコジクチン;スポンジスタチン;クロランブシル、クロルナファジン、チョロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード;カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロスレアス;抗生物質、例えばエネジイン抗生物質、特にカリケアマイシンγ1I及びカリケアマイシンωI1参照;ダイネマイシンAを含むダイネマイシン;エスペラマイシン;並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、6ジアゾ5オキソLノルロイシン、ドキソルビシンADRIAMYCIN登録商標モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、2ピロリノドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン、マイトマイシンCのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン;代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、及び5フルオロウラシル;葉酸アナログ、例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート;プリンアナログ、例えばフルダラビン、6メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン;ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン、6アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン;アンドロゲン類、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン;抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン;葉酸リプレニッシャー、例えばフロリン酸;アセグラトン;アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;エニルウラシル;アムサクリン;ベストラブシル;ビサントレン;エダトラキセート;デフォファミン;デメコルシン;ジアジコン;エルフォルニチン;酢酸エリプチニウム;エポチロン;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダミン;メイタンシノイド類、例えばメイタンシン及びアンサミトシン;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダモール;ニトラクリン;ペントスタチン;フェナメット;ピラルビシン;ロソキサントロン;2エチルヒドラジド;プロカルバジン;PSK多糖複合体;ラゾキサン;リゾキシン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テニュアゾン酸;トリアジコン;222トリクロロトリエチルアミン;トリコテセン類A、ロリジンA及びアングイジン;ウレタン;ビンデシン、FILDESIN;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン;アラビノシド;チオテパ;タキソイド、例えばパクリタキセル、BristolMyersSquibbOncologyPrincetonNJ、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤及びドセタキセル、RhomePouleneRorerAntonyFrance;クロランブシル;6チオグアニン;メルカプトプリン;メトトレキセート;プラチナアナログ、例えばシスプラチン、及びカルボプラチン;ビンブラスチン;エトポシド;イホスファミド;マイトキサントロン;ビンクリスチンONCOVIN登録商標、オキサリプラチン、ロイコボビン、ビノレルビンNAVELBINE登録商標;ノバントロンnovantrone;エダトレキセート;ダウノマイシン;アミノプテリン;イバンドロナート;トポイソメラーゼ阻害剤RFS2000;ジフルオロメチルオルニチン;レチノイン酸などのレチノイド;カペシタビンXELODA登録商標;上述したものの薬学的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体、並びに、上記のうちの2つ以上の組み合わせ、例えば、CHOP、及びFOLFOXを用いる治療計画の略称が含まれる。追加の化学療法剤は、メイタンシノイドDM1など、例えばアウリスタチンauristatinsMMAE及びMMAF、などの抗体薬物結合体として有用な細胞傷害性薬剤が含まれる。本明細書中に定義される化学療法剤には、癌の成長を促しうるホルモンの作用を調節、低減、遮断又は阻害するように働く、抗ホルモン剤が含まれ、しばしば全身性の、又は全身治療の形態であってもよい。それらはそれ自体がホルモンであってよい。例として、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレータを含み、例えば、タモキシフェンNOLVADEX登録商標タモキシフェンを含む、EVISTA登録商標ラロキシフェン、ドロロキシフェン、4ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストーン、及びFARESTON登録商標トレミフェン;抗プロゲステロン、エストロゲン受容体ダウンレギュレーターERD;卵巣を抑制又は活動停止することに機能する薬剤、例えば、LUPRON登録商標及びELIGARD登録商標酢酸ロイプロリド、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン及びトリプトレリンtripterelinなどの黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、フルタミドflutamide、ニルタミドnilutamide、ビカルタミドbicalutamideなどの他の抗アンドロゲン;及び副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば4イミダゾール、アミノグルテチミド、MEGASE登録商標酢酸メゲストロール、AROMASIN登録商標エキセメスタン、フォルメスタニー、ファドロゾール、RIVISOR登録商標ボロゾール、FEMARA登録商標レトロゾール、及びARIMIDEX登録商標アナストロゾールを含む。更に、化学療法剤のその定義では、ビスフォスフォネートを含み、例えば、クロドロネート例えば、BONEFOS登録商標又はOSTAC登録商標、DIDROCAL登録商標エチドロネート、NE-58095、ZOMETA登録商標ゾレドロン酸/ゾレドロネート、FOSAMAX登録商標アレンドロネート、AREDIA登録商標パミドロネート、SKELID登録商標チルドロネート、又はACTONEL登録商標リセドロネート、並びにトロキサシタビン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に接着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばPKC-α、Raf、H-Ras、及び上皮成長因子レセプターEGF-R、THERATOPE登録商標ワクチン及び遺伝子治療ワクチン、例えばALLOVECTIN登録商標、LEUVECTIN登録商標及びVAXID登録商標などのワクチン、LURTOTECAN登録商標トポイソメラーゼ1インヒビター、ABARELIX登録商標rmRH、ラパチニブジトシラートまたGW572016として知られているのErbB-2及びEGFR二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤、及び上記何れかの薬学的に許容可能な塩類、酸類及び誘導体類を含む。ここで用いられる際の増殖阻害剤は、細胞の成長及び/又は増殖を阻害する化合物又は組成物を意味する。増殖阻害剤の例は、細胞周期の進行を阻害する薬剤、例えばG1停止又はM期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なM期ブロッカーは、ビンカス、タキサン類、及びトポイソメラーゼII阻害剤、例えばアントラサイクリン系抗生物質ドキソルビシン10オキシ78910テトラヒドロ6811トリヒドロキシル81メトキシ512ナフタセンジオン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンを含む。またG1停止させるこれらの薬剤は、S期停止にも波及し、例えば、DNAアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、5フルオロウラシル、及びアラCである。更なる情報は、TheMolecularBasisofCancerMendelsohn及びIsrael編第一章表題CellcycleregulationoncogeneandantineoplasticdrugsMurakamietal、特に13頁に見出すことができる。タキサン類は、共にイチイに由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセルTAXOTERE登録商標、ローンプーランローラーは、パクリタキセルTAXOL登録商標、ブリストル-マイヤースクウィブの半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。本明細書において使用される用語患者は、任意の一動物、より好ましくは哺乳動物例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウサギ、動物園の動物、ウシ、ブタ、ヒツジ、及びヒト以外の霊長類いった非ヒト哺乳動物を含むを意味する。最も好ましくは、本明細書の患者はヒトである。本明細書中における被験体は、血管新生疾患の1つ以上の徴候、症状又は他の指標を経験しているか又は経験した治療の資格のある患者を含む、任意の単一のヒト被験体である。被験体として含まれると意図されるのは、疾患の臨床的兆候を見せていない臨床研究臨床試験に関与している任意の被験体、又は、疫学研究に関与している被験体、又はコントロールとして一度使用された被験体である。被験体は、以前は抗癌剤で治療されたか、又はそのように治療されていない場合があり得る。被験体は、本明細書の治療が開始されるとき、使用されている追加の薬剤に対してナイーブである可能性があり、すなわち、ベースラインですなわち、本明細書中の治療における抗癌剤の最初の用量の投与前の設定時点において、例えば、治療が開始される前に被験体を検診する日に、被験体は、例えば、抗腫瘍剤、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害性薬剤で以前に治療されていない可能性がある。このようなナイーブな被験者は、一般的に、追加の薬剤による治療の候補と見なされる。薬学的製剤なる用語は、医薬の生物学的活性を有効にする形態で存在し、製剤を投与する被験体にとって許容できない毒性がある他の成分を含まない無菌の調製物を指す。無菌の製剤は、防腐性であるか、又は生きているすべての微生物及びそれらの胞子を含まない。パッケージ挿入物という用語は、効能、用法、用量、投与、禁忌、そのパッケージ製品と組み合わされる他の治療製品、及び/又は治療製品又は医薬の使用に関する警告についての情報を含む、治療製品又は医薬の商業的包装に慣習的に含まれた指示書を指す。キットは、少なくとも一の試薬、例えば、血管新生障害の治療のための医薬、又は本発明のバイオマーカー遺伝子又はタンパク質を特異的に検出するためのプローブを含む任意の製造品である。製造品は、本発明の方法を行うためのユニットとして宣伝され、流通され、又は市販されることが好ましい。薬剤に対する非応答のために、一又は複数の医薬による以前又は現在の治療から毒性の臨床的に容認できないほど高いレベルを経験した患者は、経験豊かな臨床医により重大であると見なされたそれに関連する負の副作用又は有害事象、例えば、重篤な感染症、うっ血性心不全、脱髄多発性硬化症につながる、重要な過敏症、神経病理学的事象、高度の自己免疫、子宮内膜癌、非ホジキンリンパ腫、乳癌、前立腺癌、肺癌、卵巣癌などの癌、又は黒色腫、結核TBなどを経験する。負の副作用のリスクを軽減するにより、以前に投与した薬剤により同じ患者又は他の患者の治療に起因する観察されたリスクよりも低い程度で、本明細書のアンタゴニストによる治療に起因する副作用のリスクを減らすことを意味する。そのような副作用は、毒性に関する上述したものを含み、好ましくは感染症、癌、心不全、又は脱髄である。相関又は相関するは、任意の方法で、第一の分析又はプロトコルの成績及び/又は結果を、第二の分析又はプロトコルの成績及び/又は結果と比較することを意味する。例えば、第二のプロトコルを行う際に第一の分析又はプロトコルの結果を用いてもよいし、及び/又は第一の分析又はプロトコルの結果を用いて、第二の分析又はプロトコルを行うかどうかを決定してもよい。遺伝子発現分析又はプロトコルの実施態様に関し、遺伝子発現分析又はプロトコルの結果を用いて、特定の治療投薬計画を実行するかどうかを決定してもよい。本明細書の様々な実施態様に関して、抗VEGF抗体などの抗癌剤を使用して、特定の治療計画を実行すべきかどうかを判断するために、分析アッセイの結果を用いても良い。III.方法本発明は、VEGFアンタゴニストを含む抗癌療法による治療の利益を受ける可能性のある患者を同定するための方法であって、VEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療に対して、癌に罹患した患者の反応を予測する方法、癌患者が、VEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法からの利益を示すであろう可能性を決定するための方法、及びVEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法の治療的有効性を最適化するための方法を提供する。その方法は患者由来のサンプル中の無修飾のVEGFの発現レベルを決定することを含み、患者由来のサンプル中の無修飾のVEGFのレベルが基準レベルかそれを上回るレベルは、患者がVEGFアンタゴニストを含む抗癌治療による治療からの利益を受ける可能性があり、患者が抗癌治療法から利益を受ける可能性が増大していること、又は患者が抗癌治療法による治療に応答する可能性が高くなること示す。幾つかの実施態様にて、本方法はVEGF-Aアンタゴニストを含む抗癌治療法を患者に投与することを更に含む。本発明は、患者の癌を治療するための方法を更に提供する。本方法は、患者から得られたサンプルが、基準レベルかそれを上回るレベルの無修飾のVEGFレベルを有することを決定し、前記患者にVEGFアンタゴニストを含む抗癌治療法の有効量を投与し、それによって癌が治療されることを含む。幾つかの実施態様において、本方法は、患者に追加の薬剤例えば、第二、第三、又は第四の薬剤を投与することを更に含む。A.検出方法開示された方法及びアッセイは、患者の治療のために適切又は効果的な治療法を評価する上で有用なデータ及び情報を入手ための便利で効率的で潜在的に費用対効果の高い手段を提供する。例えば、本発明の方法によれば、患者は、VEGFアンタゴニストを含む抗癌療法による治療前に血液サンプルを提供することができ、サンプル中の無修飾のVEGFのレベルが決定され、それぞれ基準サンプルにおける無修飾のVEGFのレベルに対して、又は所定の基準値に対して比較することができる。無修飾のVEGFのレベルが増大した患者が、抗VEGF抗体などのVEGFアンタゴニストを含む抗癌治療法に応答する可能性がある患者として同定される。本方法は、タンパク質発現を検出するアッセイ例えば、酵素免疫測定法及び適切な活性を検出する生化学的アッセイを含む様々なアッセイ形態で行うことができる。サンプル中のそのようなバイオマーカーの発現の定量又はその存在は、サンプルを提供する患者がVEGFアンタゴニストの生物学的影響に感受性であることを予測する。典型的には、患者から得られたサンプル中の無修飾のVEGFの発現レベルが基準レベルかそれを上回ることは、患者がVEGFアンタゴニストによる治療に応答するか又は感受性であることを示す。特に診断検査及び治療薬による治療の適用に関する医学分野の当業者は、生物学的システムには若干の多様性があり、常に完全に予想可能ではなく、従って、多くの優れた診断検査又は治療薬が時には効果が無いということを理解するであろう。従って、個々の患者の治療の最も適切な方針を、検査結果、患者の病態及び既往歴、及び彼又は彼女自身の経験に基づいて決定するのは、最終的には主治医の判断次第である。例えば、診断検査からのデータ、又は他の判断基準からのデータに基づいて、特に、他の自明な治療選択肢の全て又は大半が失敗した場合に、又は別の治療とともに与えられたときにかなりの相乗効果が予想される場合には、患者がVEGFアンタゴニストに特に感受性であると予測されないときでさえ、VEGFアンタゴニストで患者を治療することを選択するであろう場面さえあり得る。更なる実施態様において、本発明は、サンプル中の無修飾のVEGFのレベルを評価すること;及びVEGFアンタゴニストによる阻害に対する患者の感受性を予測することを含む、VEGFアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療に対する患者の感受性を予測する方法、又はVEGFアンタゴニストを含む抗癌治療法による治療に対して有効に応答するであろうかを予測する方法を提供し、ここで無修飾のVEGFの発現レベルが基準レベルか又はそれを上回ることは、VEGFアンタゴニストによる治療に対する有効な応答に対する患者の高度な感受性と相関している。サンプルは、結腸直腸癌、神経膠芽腫、腎癌、卵巣癌、乳癌例えば、局所進行、再発または転移性HER-2陰性乳癌を含む、膵臓癌例えば、転移性膵臓癌を含む、胃癌、肺癌を含む癌に罹患していることが疑われるか又は癌に罹患していると診断され、従って治療を必要とする可能性がある患者から、又は任意の疾患を有していると疑われない正常個体から採取され得る。マーカー発現の評価のために、患者のサンプル、例えば細胞を含むもの、又はこれらの細胞により産生されるタンパク質又は核酸などが本発明の方法で使用され得る。この発明の方法において、バイオマーカーのレベルは、サンプル中のマーカーの量例えば絶対量又は濃度を評価することにより決定され、好ましくは検出可能なレベルのバイオマーカーを含む体液又は排泄物中で評価することができる。本発明における試料として有用な体液又は分泌液は、例えば、血液、リンパ液、喀痰、腹水、又は任意の他の分泌液又はその誘導体を含む。血液という単語は、全血、血漿、血清、又は血液の任意の誘導体を含むことを意味する。そうした体液又は排泄物中のバイオマーカーの評価は、時には侵襲的サンプリング法が不適当又は不便である状況では好ましい場合がある。しかし、本明細書で検査されるサンプルは、好ましくは血液、最も好ましくは血漿である。一実施態様では、サンプルは、クエン酸塩-血漿である。一実施態様では、サンプルは、EDTA-血漿である。サンプルは凍結され、新鮮であり、固定され例えば、ホルマリン固定、遠心分離され、及び/又は包埋され例えば、パラフィン包埋るなどであり得る。細胞試料は、サンプル中のマーカーの量を評価する前に、もちろん、よく知られている回収後の調製及び保存技術例えば、核酸及び/又はタンパク質抽出、固定、保存、凍結、限外ろ過、濃縮、蒸発、遠心分離等に供することができる。同様に、生検は、回収後の調製及び保存技術、例えば、固定化を施してもよい。A.無修飾のVEGFの検出無修飾のVEGFタンパク質は当該技術分野で公知の任意の適切な方法を用いて検出することができる。好ましくは、抗体が、RELIATechGmbH,Wolfenbuettel,Germanyから商業的に入手可能なMAB3C5のような修飾型VEGFに比べて、無修飾のVEGFに対して少なくとも優先的な結合特性を有するものが使用されるであろう。例えば、哺乳動物由来の組織又は細胞サンプルは、例えば、ウエスタンブロット、ELISA法等を用いて、無修飾のVEGFタンパク質について都合良くアッセイすることができる。上掲技術の適用における指針を与える多くの参考文献が利用可能であるTijssenPracticeandTheoryofEnzymeImmunoassaysCampbellMonoclonalAntibodyTechnologyHurrellMonoclonalHybridomaAntibodiesTechniquesandApplications及びZolaMonoclonalAntibodiesAManualofTechniques頁147158。無修飾のVEGFの検出又はレベルに対して申し述べる場合、これは例えばMAB3C5が結合した無修飾のVEGF分子アイソフォーム又は開裂産物が測定されることを意味する。無修飾のVEGFタンパク質の検出に関して、様々なアッセイが利用可能である。例えば、サンプルは、例えば患者のサンプルに天然に生じるような修飾型VEGFと比較して、無修飾のVEGFに優先的又は特異的に結合する抗体又は抗体の組み合わせと接触され得る。好ましくは無修飾のVEGFは、無修飾のVEGFに特異的に結合する抗体、すなわち、修飾型VEGF165に比較して無修飾のVEGF165に対して少なくとも3倍高い感受性を有する抗体を用いて検出される。無修飾のVEGFに関するそうした少なくとも3倍高い感受性は、大腸菌で組換えにより生成されたVEGF165と、HEK細胞で組換えにより生成されたVEGF165をSDS-PAGEにより少なくとも90の純度及びOD280nmにより決定した濃度同じ試薬を用いて比較することにより評価される。この比較において、HEKが生成した物質について得られたシグナルが、大腸菌に由来する物質で得られたシグナルのレベルのほんの三分の一又はそれ未満である場合、無修飾のVEGFが少なくとも3倍高い感受性で検出される。当業者は理解するように、シグナルは最大シグナルの約50で好ましくは読み取られる。この評価において好ましくは、実施例3のアッセイが用いられる。また好ましいのは、無修飾のVEGF大腸菌からのVEGF165に特異的に結合する抗体は、修飾型VEGFの物質HEK細胞からのVEGF165と比較して、無修飾のVEGFを少なくとも4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、又は10倍高い感受性で検出する抗体である。好ましい実施態様において、無修飾のVEGFは、MAK<VEGF-A>M-3C5-18のような修飾型VEGFと比較した場合、無修飾のVEGFに対して少なくとも同じ結合優先度を有する抗体を使用して特異的に検出される。本発明に係る好ましいハイブリドーマ細胞株、ハイブリドーマ細胞株MAK<VEGF-A>M-3C5-18は、DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHDSMZ,Germanyで、特許手続の目的のために、微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約に基づき寄託された:本発明は2011年6月29日にDSMに受託番号...割り当て予定の下寄託されたハイブリドーマ細胞株MAK<VEGF-A>M-3C5-18に関する。本発明は2011年6月29日にDSMに受託番号...割り当て予定の下寄託されたハイブリドーマ細胞株MAK<VEGF-A>M-3C5-18により産生したモノクローナル抗体に関する。一実施態様において、抗体の無修飾のVEGFに対する優先的結合に対する相対的な感受性がサンドイッチイムノアッセイで評価され、ここで無修飾のVEGFに対する抗体が捕捉抗体として使用され、かつ全ての主要VEGFアイソフォーム又は開裂生成物に存在するエピトープに結合する検出抗体が使用される。一実施態様において、検出抗体がMAB3C5に対するエピトープ以外のエピトープに結合する、すなわちそれはVEGFのアミノ酸33から43にまたがる合成ペプチドに含まれるエピトープには結合しないであろう。好ましくは、検出抗体は1から32、44から105にわたるアミノ酸に含まれるエピトープに結合するか、又はMAB3C5に結合されたエピトープと重複していない構造的エピトープに結合するであろう。一実施態様において、修飾型VEGFと比較した場合に無修飾のVEGFに特異的に結合する抗体は、VEGFのアミノ酸33から43にまたがる合成ペプチドに含まれるエピトープに結合する特性を有する。無修飾のVEGFに特異的に結合する適切な特異的抗体は、標準的な手順に従って得ることができる。通常、大腸菌で組換えにより産生したか又は合成的に、例えば固相ポリペプチド合成により得られたVEGFのアイソフォーム、又は大腸菌で組換えにより産生したか又は合成的に、例えば固相ポリペプチド合成により得られたVEFGのエピトープを含むか又は代表するペプチドが免疫原として使用される。モノクローナル抗体は標準的プロトコルに従い容易に生成され、無修飾のVEGFとの反応性及び無修飾のVEGFとの適切な低い交差反応性についてスクリーニングできる。一つの便利で好ましいスクリーニング法は、大腸菌で組換えにより生成されたVEGF165SDS-PAGEにより少なくとも90の純度及びOD280nmにより決定した濃度、及びHEK細胞で組換えにより生成されたVEGF165をSDS-PAGEにより少なくとも90の純度及びOD280nmにより決定した濃度にそれぞれ基づいている。無修飾のVEGFに対する様々な測定方法は議論すべきであり、例えば、サンプルは、抗体-無修飾のVEGFの複合体が形成されるのに十分な条件下で、無修飾のVEGFに特異的に結合する抗体と接触され得、次いでこの複合体が検出される。無修飾のVEGFタンパク質の存在は、例えば、血漿または血清を含む広範囲の組織および試料をアッセイするための、ウェスタンブロッティング法免疫沈降の有無にかかわらず、2次元SDS-PAGE法、免疫沈降法、蛍光活性化細胞選別法FACS、フローサイトメトリー法、およびELISA法などの多くの方法で検出することができる。様々な測定方法が問題となっており、例えば、抗体-無修飾の複合体が形成されるのに十分な条件下で、サンプルが無修飾のVEGFに特異的に結合する抗体と接触され得、その後この複合体が検出される。無修飾のVEGFタンパク質の存在は、例えば、血漿または血清を含む広範囲の組織および試料をアッセイするための、ウェスタンブロッティング法免疫沈降の有無にかかわらず、2次元SDS-PAGE法、免疫沈降法、蛍光活性化細胞選別法FACS、フローサイトメトリー法、およびELISA法などの多くの方法で検出することができる。このようなアッセイ形式を使用する広範囲のイムノアッセイ技術が利用可能であり、例えば、米国特許第4016043号、第4424279号及び第4018653号を参照。これらは、非競合型の単一部位及び二部位又はサンドイッチアッセイ、並びに従来の競合結合アッセイの両方が含まれる。これらのアッセイはまた、標的バイオマーカーに対する標識抗体の直接結合を含む。サンドイッチアッセイは最も便利で一般的に使用されるアッセイの一つである。サンドイッチアッセイ技術の多くの変法が存在し、全てが本発明に包含されることが意図される。簡潔には、典型的なフォワードアッセイforwardassayにて、非標識抗体が固体基板上に固定化され、試験されるサンプルを結合分子と接触させる。この捕捉抗体の固定化は、固相への直接吸着によるか、又は例えば特異的結合対、例えばストレプトアビジン-ビオチン結合対を介して間接的であって良い。好ましくは、固定された抗体は、無修飾のVEGFに結合するであろう。抗体抗原複合体の形成を可能にするのに十分な時間のインキュベーションの適切な時間後、次いでVEGFに対する第二抗体を添加しインキュベートし、抗体-抗原第二抗体の別の複合体の形成に十分な時間をかけた。第二又は検出抗体は、検出可能なシグナルを生成することができるレポーター分子と直接標識され得るか又は標識化検出試薬により特異的に結合され得るかの何れかかである。一実施態様において、検出抗体は、レポーター分子で標識される。あらゆる未反応物質が洗い流され、無修飾のVEGFの存在が、レポーター分子によって生成されたシグナルを観察することにより決定される。結果は、可視信号の単純な観察により定性的であって良く、又はバイオマーカーの既知量を含む対照サンプルと比較することにより定量され得る。代替のセットアップでは、無修飾の並びに修飾型VEGFの両方に結合する抗体が固定化され、無修飾のVEGFに特異的に結合し、任意でレポーター分子を担持する抗体が標的分子の検出に用いられ得る。フォワードアッセイにおける変法には、サンプル及び標識抗体の両方が結合抗体に同時に添加される同時アッセイが含まれる。これらの技術は、任意の少数の変法を含めて、当業者に良く知られている。典型的なフォワードサンドイッチアッセイにおいて、無修飾のVEGFに特異的に結合する少なくとも一抗体が、第一抗体として又は第二抗体としての何れかで、又は場合によっては、第一抗体及び第二抗体として用いられる。第1の抗体は固体表面に共有結合的又は受動的に結合している。固体表面は、典型的にはガラス又はポリマーであり、最も一般的に使用されるポリマーであるセルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、又はポリプロピレンである。固体支持体は、チューブ、ビーズ、マイクロプレートのディスク、又はイムノアッセイを行うのに適した任意の他の表面の形態であってもよい。結合プロセスは、当技術分野でよく知られており、一般に架橋共有結合または物理的吸着からなり、ポリマー抗体複合体は、試験サンプルの調製のために洗浄される。一実施態様において、捕捉抗体はビオチン化され、アビジン及び/又はストレプトアビジンとビオチンの相互作用を介して固相に結合されている。次いで試験すべきサンプルのアリコートが固相複合体に添加され、第一又は捕獲抗体とその対応する抗原の間の結合を可能にするために、十分な期間例えば、2~40分間又はより都合良い場合一晩かつ適切な条件下例えば25°Cから32°Cの間を含むなど例えば室温から40°Cでインキュベートされる。インキュベーション期間に続いて、第一抗体又は捕獲抗体及びそこに結合した抗原が洗浄され、抗原上の他のエピトープに結合する第二抗体又は標識化抗体とともにインキュベートした。第二の抗体はレポーター分子に連結され、それは第一抗体と目的の抗原の複合体に対する第二抗体の結合を示すために用いられる例えば無修飾のVEGF。代わりの競合法は、無修飾のVEGFを固相に固定化し、その後、固定化した標的分子をサンプルと一緒に、レポーター分子で標識されたか又はされていなくても良い無修飾のVEGFに対して特異的な抗体に曝露することを含む。標的の量とレポーター分子シグナルの強さに応じて、標的分子による競合は、このような標識抗体を介して直接検出することができる。あるいは、一次抗体に特異的な二次標識抗体が、標的-一次抗体複合体にさらされ、標的-一次抗体-二次抗体の三次複合体を形成する。複合体は、レポーター分子によって放出されるシグナルにより検出される。本明細書中で用いられるレポーター分子は、その化学的性質によって、抗原と結合した抗体の検出を可能とし分析的に同定可能なシグナルを提供する分子を意味する。この種のアッセイにおいて最も一般的に用いられるレポーター分子は、酵素、蛍光体又は分子を含有する放射性核種すなわち放射性同位体および化学発光分子である。酵素イムノアッセイの場合、一般にグルタールアルデヒド又は過ヨウ素酸塩によって、酵素を二次抗体にコンジュゲートさせる。しかしながら、容易に認識されるように、当業者に容易に利用可能である多種多様な異なるコンジュゲート技術が存在する。一般的に用いられる酵素には、とりわけ、西洋わさびペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ガラクトシダーゼおよびアルカリホスファターゼを含む。特定の酵素と共に用いられる基質は、一般的に、対応する酵素による加水分解の際の検出可能な色の変化の産生で選択する。適切な酵素の例として、アルカリホスファターゼ及びペルオキシダーゼを含む。また、上記の発色性基質よりむしろ蛍光性産物を産生する蛍光性基質を用いることができる。すべての例において、酵素標識抗体を一次抗体分子マーカー複合体に加えて、結合させ、次いで過剰な試薬を洗い流す。次いで、適当な基質を含有する溶液を抗体抗原抗体の複合体に加える。基質は二次抗体と結合した酵素と反応して、通常は分光測定法により更に定量化され得る定性的な可視化シグナルを生じ、サンプル中に存在する無修飾のVEGFの量の指標を与える。あるいは、フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光性化合物を、抗体の結合能を変化させることなく抗体に化学的に結合させてもよい。特定の波長の光を照射することにより活性化されると、蛍光色素標識抗体はその光エネルギーを吸収し、それによリその分子において励起状態が誘発され、続いて光学顕微鏡を用いて目視で検出可能な特徴的な色で光が放射される。EIAでは、蛍光標識抗体は、一次抗体-分子マーカー複合体に結合できる。結合していない試薬を洗い落とした後に、残りの三次複合体を適当な波長の光に曝すと、無修飾のVEGFの存在を示す蛍光発光が観察される。免疫蛍光法およびEIA技術は何れも、当該技術分野で良く確立されたものである。しかしながら、放射性同位体、化学発光性分子または生物発光性分子などの他のレポーター分子も用いられてもよい。VEGFを検出するための免疫アッセイは、例えば、米国特許第6855508号、及び第7541160号、及び米国特許出願公開第2010/0255515号に記載されている。VEGFを検出するための適切なプラットフォームは、例えば欧州特許第0939319号及び欧州特許第1610129号に記載されている。B.キット無修飾のVEGFの検出に使用のため、キット又は製造品もまた本発明により与えられる。そのようなキットは、被験体が、VEGFアンタゴニストを含む抗癌治療に効果的に応答するかどうかを決定するために使用できる。これらのキットは、バイアル、チューブ等の一又は複数の容器手段を閉じ込めて収容するように区画化された運搬手段を含み、各容器手段は本方法で使用される別個の要素の一つを含む。例えば、容器手段の一つは、検出可能に標識された又は標識が可能なプローブを含みうる。そのようなプローブは、無修飾のVEGFタンパク質に特異的な抗体でありうる。そのようなキットは、上述の容器、及びバッファー、希釈液、フィルター、針、シリンジ、及び使用説明書と共にパッケージ挿入物を含む、商業用及び使用者の観点から望ましい物質を含む、一又は複数の他の容器を典型的には含むであろう。ラベルは、組成物が特定の用途に使用されることを示すように容器に存在し、またインビボ又はインビトロ使用のための指示、例えば上述したものを示しうる。本発明のキットは多くの実施態様を有する。典型的な実施態様は、容器、該容器上のラベル、及び該容器に収容された組成物を含むキットであり、ここで組成物は、無修飾のVEFGに優先的に結合する抗体を含み、該容器上のラベルは、組成物がサンプル中の無修飾のVEGFの存在を評価するために使用可能であることを示し、キットは、特定の試料タイプ中における無修飾のVEGFの存在を評価するために抗体を使用することについての使用説明書を含む。本キットは、サンプルを調製し、サンプルに抗体を適用するための使用説明書と材料のセットを更に含みうる。本キットは、一次及び二次抗体の両方を含み、ここでは該二次抗体はラベル、例えば酵素的標識にコンジュゲートしている。キットの他の任意の成分には、一又は複数のバッファー例えば、ブロッキングバッファー、洗浄バッファー、基質バッファー等、他の試薬、例えば酵素標識により化学的に改変される基質例えば色素原、エピトープ回収液、コントロール試料正及び/又は負のコントロール、コントロールスライド等が含まれる。またキットには、キットを使用して得られる結果を解釈するための説明書を含めることもできる。抗体ベースキットについての更なる特定の実施態様では、キットは、例えば、1VEGFに結合する第一の抗体例えば、固体支持体に結合する又は固体支持体に結合することが可能;2無修飾のVEGFに優先的に結合する第二の異なる抗体をそれぞれ含みうる。好ましくは、後者の抗体はレポーター分子で標識される。もちろん、そうしたアッセイをデザインする場合に、第一を第二抗体に交換することも可能であり逆も可能である。更なる具体的な実施態様において、抗体ベースキットについて、例えば:1無修飾のVEGFに結合する第一抗体例えば、固体支持体に結合する又は固体支持体に結合することが可能;2VEGFに結合する第二の異なる抗体及び3第二抗体に特異的に結合し標識されている第三の異なる抗体を含み得る。B.治療の方法本発明の幾つかの方法は、基準サンプルと比較して、無修飾のVEGFのレベルが増加した患者にVEGFアンタゴニストを投与することを含む。本発明の他の実施形態では、VEGFアンタゴニストを含む抗癌治療法で患者を治療する方法を提供する。投与計画は、最適な所望の反応例えば、治療応答を提供するように調整することができる。例えば、一用量を投与することができ、幾つかの分割用量を時間をかけて投与してもよいし、又は治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して減少させ又は増加させることができる。当該技術分野における通常の技術を有する医師は、抗癌剤の特定のタイプのような要因に依存して、必要な薬学的組成物の有効量を容易に決定し処方することができる。例えば、医師は、薬学的組成物で用いられる抗VEGF-A抗体などの抗癌剤の投与量を、望ましい治療効果を達成するために必要な用量よりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に用量を増加させることができる。与えられた用量の有効性又はアンタゴニストの治療計画は、例えば、有効性の標準的な指標を用いて、患者の兆候又は症状を評価することによって、決定することができる。更に別の実施態様では、被験体は、少なくとも二回、抗VEGF-A抗体等の同一の抗癌剤で治療される。従って、初回及び第二回目のアンタゴニストの曝露は、同じアンタゴニストによるのが好ましく、及びより好ましくはアンタゴニストの曝露の全ては、同じアンタゴニストにより、すなわち、最初の2回の曝露、及び好ましくは全ての曝露に対する治療は、一種類の型の抗癌剤により、例えば、抗VEGF抗体などのVEGFに結合するアンタゴニストにより、例えば全てはベバシズマブによる。本明細書に記載の全ての発明方法においては、抗癌剤例えばVEGFに結合する抗体などは、ネイキッド抗体など非結合型であって良く、又は更なる有効性のため、例えば半減期を向上するために、別の分子に結合されても良い。本明細書における一つの好ましい抗癌剤は、キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体、例えば、抗VEGF抗体であり、好ましくはベバシズマブである。別の実施態様では、VEGFアンタゴニスト例えば、抗VEGF抗体は被験体に投与する唯一の医薬である。一実施態様では、アンタゴニストは抗VEGF抗体であり、約100mg又は400mgの投与量を毎週、2週間ごと、3週間ごと、又は4週間ごとに投与され、もしくは1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、又は20mg/kgの投与量を毎週、2週間ごと、3週間ごと、又は4週間ごとに投与される。投与量は注入などによる単回投与又は複数回の投与例えば、2回又は3回の投与で投与され得る。更に別の態様において、本発明は、診断ステップの後に、癌と診断された被検体に抗癌剤例えば、抗VEGF抗体の投与を続けるかどうかを決定する方法を提供し、該方法は、最初にアンタゴニストを投与した後に、X線及び/又はMRIなどのイメージング技術を用いて、腫瘍の大きさの縮小を測定することを含み、2回目にアンタゴニストを投与した後に、X線及び/又はMRIなどのイメージング技術を用いて、腫瘍の大きさの縮小を測定することを含み、初回及び2回目の被検体における画像上の知見を比較し、もしそのスコアが初回よりも2回目で小さい場合には、アンタゴニストの投与を続行することを含む。更に別の実施態様では、投与段階後に治療に対する患者の応答を試験し、その応答のレベルが血管新生疾患の治療に有効であることを決定するために、一段階が治療方法に含まれる。例えば、一段階は投与後のイメージングX線及び/又はMRIスコアを試験し、それを投与前に得た基準のイメージング結果と比較し、それが変化しているか、及びどの程度変化しているかを測定することにより、治療が効果的であるかを決定することを含む。この試験は、部分的又は完全な寛解の維持を確定するため、投与後に、定期に又は不定期に様々な時間間隔で繰り返され得る。本発明の一実施態様では、VEGFアンタゴニスト、例えば抗VEGF抗体以外の医薬は、癌を治療するために被験体に投与されない。本明細書のいずれかの方法では、抗癌剤は、付加的薬剤の有効量と組み合わせて投与され得る。適切な付加的薬剤は、例えば、抗リンパ管新生剤、抗血管新生剤、抗新生物剤、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞毒性剤、又はそれらの組み合わせを含む。これらのすべての付加的薬剤は、第一の医薬とともにお互いに組み合わせるか又は単独で使用され得、本明細書で使用される付加的薬剤なる表現は、それがVEGFアンタゴニストに加えて唯一の医薬であることを意味しない。従って、付加的薬剤は単一薬剤である必要はなく、複数のそうした薬物を構成するか又は含み得る。本明細書に記載のこれらの付加的薬剤は、一般的には本明細書の以上で使用されるのと同じ用量でかつ同じ投与経路によるか、又は従来用いられる投与量の約1から99で使用される。仮にそうした付加的薬剤が使用される場合、好ましくは、第一の医薬が存在していなかった場合、それによって引き起こされる副作用を除去又は減少させるように、特に第一の医薬の初回投薬後の続く投薬におけるよりも低量で使用される。付加的薬剤がアンタゴニストの曝露とともに効果的な量で投与される、本明細書に記載の再治療法において、付加的薬剤は例えば一回の曝露によるのみか又は複数の曝露によるかなど、任意の曝露で投与され得る。一実施態様において、付加的薬剤は、初回の曝露で投与される。その他の実施態様において、付加的薬剤は、初回及び2回目の曝露で投与される。更に他の実施態様では、付加的薬剤、全ての曝露で投与される。ステロイド等の初回曝露後に、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、及びシクロホスファミド等の副作用を持つ薬剤に対する被検体の曝露を減少させるように、そうした付加的薬剤の量は減少され又は除去されるのが望ましい。付加的薬剤の併用投与は共投与同時投与を含み、別々の製剤か又は単一の薬学的製剤、及び何れかの順番による連続投与を用い、好ましくは両方又は全ての活性薬剤医薬が同時にその生物学的活性を発揮する期間がある。抗癌治療法は、非経口、局所、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、及び又は病巣内投与を含む任意の適当な手段によって投与される。非経口注入は、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。髄腔内投与もまた考慮される。更に、抗癌剤は、例えば抗癌剤の用量を減少させつつ、パルス注入により、適切に投与することができる。好ましくは、投薬は、静脈内又は皮下に与えられ、より好ましくは静脈内注入で与えられる。抗癌剤の複数の曝露が与えられる場合は、それぞれの曝露は同一か又は異なる投与手段を用いて与えられ得る。一実施態様では、各曝露は、静脈内投与によるものである。別の実施態様では、各暴露は皮下投与で与えられる。更に別の実施態様では、曝露は静脈内及び皮下投与の両方で与えられる。一実施態様では、抗VEGF抗体などの抗癌剤は静脈内プッシュ又はボーラス投与よりも遅い静脈内注入として投与される。例えば、プレドニゾロン又はメチルプレドニゾロン等のステロイド例えば、約80-120mgの静脈内投与、より好ましくは約100mgの静脈内投与が、抗VEGF抗体の任意の注入前の約30分に投与される。抗VEGF抗体は、例えば、専用ラインを介して注入される。抗VEGF抗体に対する複数投与量暴露の初回投与において、又は曝露は一投与量のみを含む場合の単回投与において、そうした注入は、好ましくは約50mg/時間の速度で開始される。これは例えば約30分ごとに約50mg/時間の増分速度で最大で約400mg/時間まで増大させることができる。しかしながら、もし被検体が注入に関連した反応を経験している場合には、注入速度は好ましくは、例えば現在の速度の半分に、例えば100mg/時間から50mg/時間に減少される。好ましくは抗VEGF抗体のそうした投与量の注入は例えば、約1000mgの総投与量、約255分4時間15分で完結する。場合によっては、被検体はアセトアミノフェン/パラセタモール例えば約1gの予防的治療及びジフェンヒドラミン塩酸例えば、約50mg又は類似薬の等価な投与量を注入開始前の約30分から60分に口から受ける。抗VEGF抗体の複数の注入投与量が、総曝露量を達成するために与えられる場合は、この注入の実施態様の2回目又はそれに続く抗VEGF抗体注入は、好ましくは、最初の注入よりも速い速度で、例えば約100mg/時間で開始される。この速度は、例えば約30分ごとに約100mg/時間の増分で、最大400mg/時間まで増大させることができる。注入に関連した反応を経験している被検体は、注入速度を好ましくは、例えば100mg/時間から50mg/時間に減少させる。好ましくは抗VEGF抗体のそうした第2回目又はそれに続く投与量の注入は例えば、約1000mgの総投与量、約195分3時間15分で完結する。好ましい実施態様では、抗癌剤は、抗VEGF抗体であり、約0.4から4グラムの用量で投与され、より好ましくは、抗体は、約一ヶ月の期間内に1回からに4回までの頻度で、0.4から1.3グラムの用量で投与される。更により好ましくは、投与量は約500mgから1.2mgであり、他の実施態様では約750mgから1.1グラムである。そのようなの態様では、アンタゴニストは、好ましくは2回から3回投与され、及び/又は約2週間から3週間の期間内に投与される。1つの態様において、被検体は、癌を治療するために、以前に任意の薬剤複数を投与されていない。別の実施態様では、被験体又は患者は以前に癌を治療する1つ又は複数の医薬を投与されている。更なる実施態様では、被験体又は患者は以前に投与された医薬の1つ又は複数に対して応答はなかった。被験体が応答しないかもしれない薬剤としては、例えば、抗悪性腫瘍薬、化学療法剤、細胞傷害性剤、及び/又は増殖阻害剤が含まれる。より具体的には、被検体には応答しないような薬は抗VEGF抗体などのVEGFアンタゴニストが含まれ得る。更なる態様では、そうした抗癌剤は、抗体又はイムノアドヘシンを含み、被検体が以前には非応答性であった本発明による一つ又は複数の抗体又はイムノアドヘシンによる再治療が熟考される。IV.抗癌剤による治療VEGFアンタゴニストによる治療に最も応答し又は感受性のある患者集団が同定されると、単独で又は他の医薬との併用したVEGFアンタゴニストによる治療は、癌に罹患した患者に改善をもたらす。例えば、そのような治療は、腫瘍の大きさ又は無増悪生存期間の減少を結果としてもたらし得る。更に、抗癌剤及び少なくとも一つの付加的薬剤の組み合わせによる治療は、好ましくは相加的、より好ましくは相乗的なあるいは相加的より大きい患者への治療効果を得る結果となる。好ましくは、この組み合わせ法において、付加的薬剤の少なくとも一回の投与及び抗癌剤の少なくとも一回の投与の間のタイミングは約1ヶ月以内、より好ましくは約2週間以内である。抗癌剤に対する患者の応答可能性の診断後に、前記患者に抗癌剤の治療的有効量を投与する正確な方法は、主治医の裁量であることが医療分野における当業者によって理解されるであろう。投与量、他の薬剤との併用、タイミング及び投与の頻度などを含む投与方式は、このような抗癌剤に対する患者の応答可能性の診断、並びに患者の状態や病歴によって影響を受ける可能性がある。従って、障害と診断され、抗癌剤に対して比較的無反応であることが予測される患者でさえもなお、特に、抗癌剤に対する患者の応答を変えうる薬剤を含む他の薬剤と組み合わせて、それによる治療の恩恵を受ける可能性がある。抗癌剤を含む組成物が調剤され、投薬され、良好な医療行為と一致した方式で投与されるであろう。この文脈において考慮すべき要因は、治療される疾患の特定の型、治療される疾患の哺乳動物、薬の送達部位、可能性のある副作用、アンタゴニストの型、投与方法、投与のスケジュール、及び医療従事者に知られている他の要因を含む。投与されるべき抗癌剤の有効量はそのような考え方に支配され得る。一般的な提案として、投与量あたり非経口で投与される抗癌剤の有効量は、1回又は複数の投薬により、約20mgから約5000mgの範囲であろう。抗VEGF抗体などの抗体における例示的な投薬レジメンは、毎週、2週間ごと、3週間ごと又は4週間ごとに100mg又は400mgを含み、あるいは、毎週、2週間ごと、3週間ごと又は4週間ごとに約1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、又は20mg/kgの投与量が投与される。投与量は、注入などによる単回投与として、又は複数回投与例えば、2回又は3回投与として投与され得る。上述したように、しかしながら、抗癌剤のこれらの提案された量は、治療の裁量に大きく依存する。適切な投与量及びスケジューリングを選択する上で重要な要因が、上に示されるように、得られた結果である。いくつかの実施態様において、抗癌剤はできるだけ最初の徴候、診断、所見、又は障害の発生に忠実に投与される。抗癌剤は、非経口、局所、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、及び又は病巣内投与を含む任意の適当な手段によって投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、腹腔、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。髄腔内投与もまた考慮される。更に、アンタゴニストは、例えばアンタゴニストの用量を減少させるパルス注入により、適切に投与され得る。最も好ましくは、投薬は静脈注射で与えられる。上記のように、本明細書に記載の抗癌剤と共に、付加的薬剤を投与することができる。併用投与は、別々の調剤又は単一の薬学的製剤、及び何れかの順番の連続投与を用いた共投与を含み、好ましくは両方又は全ての活性剤が同時にその生物学的活性を発揮する期間がある。上記のような従来の経路による抗癌剤の患者への投与の他に、本発明は遺伝子治療による投与を考察する。抗癌剤をコードする核酸のそのような投与は抗癌剤の有効量を投与するという表現に含まれる。細胞内抗体を産生する遺伝子治療の使用に関しては、例えば国際公開第1996/07321号を参照。核酸を患者の細胞に入れるために、インビボ及びエキソビボという2つの主要な方法がある。インビボ送達では、核酸は患者に直接、通常はアンタゴニストが必要とされている部位に注入される。エキソビボ処置では、患者の細胞を取り出し、核酸がこれらの単離された細胞に導入され、修飾された細胞が患者に直接に、又は例えば患者に埋め込まれる多孔性膜にカプセル化して投与される。核酸を生細胞に導入するために利用可能な種々の技術がある。これらの技術は、核酸が培養された細胞にインビトロで移入されるか、又は対象とする宿主にインビボで移入されるかによって異なる。哺乳動物細胞にインビトロで核酸を移入するのに適した技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、DEAEデキストラン、リン酸カルシウム沈降法などの使用を含む。遺伝子のエキソビボ送達に通常用いられるベクターはレトロウイルスである。現在好適なインビボでの核酸移入技術には、ウイルスベクター及び脂質ベースのシステムによるトランスフェクションが含まれる。場合によっては、標的細胞に特異的な薬剤、例えば標的細胞上の細胞表面膜タンパク質に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンドなどにより核酸供給源を提供するのが好ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスに関係する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の種類の細胞に対するキャプシドタンパク質ないしはその断片、循環への内部移行を起こすタンパク質に対する抗体、並びに、細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を上げるタンパク質は、ターゲティングのため及び/又は取込を促すために用いられてもよい。レセプターが媒介するエンドサイトーシスの技術は、例えば、Wu等JBiolChem26244294432、及びWagner等ProcNatlAcadSciUSA8734103414に記載されている。遺伝子マーキング及び遺伝子治療プロトコールは、例えばAnderson等Science256808813及び国際公開第1993/25673号に記載されている。抗癌剤は、医薬の組み合わせ製剤で、又は抗癌特性を有する少なくとも1つの追加の化合物とともに、併用療法としての投与計画において組み合わせることができる。薬学的組合せ製剤又は投与計画の少なくとも一つの追加の化合物は、好ましくは互いに悪影響を及ぼさないようなVEGFアンタゴニスト組成物に対する相補的な活性を有する。少なくとも一つの追加の化合物は、化学療法剤、細胞傷害剤、サイトカイン、増殖阻害剤、抗ホルモン剤、抗血管新生剤、抗リンパ管新生剤、及びそれらの組み合わせであり得る。このような分子は、意図する目的のために有効である量で組み合わせて適切に存在している。VEGFアンタゴニストを含有する薬学的組成物例えば、抗VEGF抗体は、抗腫瘍剤、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞毒性剤、又はそれらの組み合わせの治療的有効量を含み得る。一態様では、第一の化合物は、抗VEGF抗体であり、少なくとも1つの追加の化合物は、抗VEGF抗体以外の治療用抗体である。一実施態様では、少なくとも1つの追加の化合物は癌細胞表面マーカーを結合する抗体である。一実施態様では、少なくとも一つの追加の化合物は、抗HER2抗体のトラスツズマブハーセプチン登録商標、ジェネンテックインク、カリフォルニア州サウスサンフランシスコである。一実施態様では、少なくとも一つの追加の化合物は、抗HER2抗体のペルツズマブオムニターグTM、ジェネンテックインク、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ、米国特許第6949245号参照である。一実施態様では、少なくとも一つの追加の化合物は抗体でありネイキッド抗体ないしはADC、追加の抗体は、第2、第3、第4、第5、第6、又はそれ以上の抗体であり、第2、第3、第4、第5、第6、又はそれ以上の追加の抗体ネイキッド抗体ないしはADCを組み合わせることが、血管形成性疾患の治療に効果的である。本発明に従った他の治療的投薬計画は、限定されないが放射線療法及び/又は骨髄及び末しょう血液移植、及び/又は細胞障害剤、化学療法剤又は増殖阻害剤を含む、VEGFアンタゴニスト抗癌剤の投与を含み得る。そうした実施態様の一つにおいて、化学療法剤は、例えば、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、アドリアマイシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾロン、CHOP、CVPないしはCOP、又は抗PSCA、抗HER2、オムニターグTMなどの薬剤又は薬剤の組合せである。併用療法は同時又は連続的な投薬計画として投与されてもよい。逐次的に投与される場合、組合せは2以上の投与で投与されてもよい。組合せ投与には、別々の製剤又は単一の製薬的製剤を用いての同時投与や、いずれかの順序での連続投与が含まれ、このとき、両方の活性剤が同時にその生物学的活性を及ぼす一定時間があるのが好ましい。一実施態様では、抗VEGFによる治療は、本明細書において同定される抗癌剤、及び異なる化学療法剤の混合物の同時投与を含む一又は複数の化学療法剤又は増殖阻害性剤の併用投与を伴う。化学療法剤には、タキサン及び/又はアントラサイクリン抗生物質が含まれる。このような化学療法剤のための調製や投薬計画は、製造業者の指示従って使われてもよいし、又は熟練した専門家によって経験的に決定されうる。このような化学療法の調製や投薬計画は、ChemotherapyServiceEdMCPerryWilliamsWilkinsBaltimoreMdにも記載される。上記いずれかの同時に投与される薬剤の適切な用量は現在用いられている通りでもよいし、新規に同定される薬剤及び他の化学療法剤ないしは治療の組み合わされる作用に応じて低くしてもよい。併用療法により相乗効果を与えることがあり、相乗的、すなわち、一緒に用いた活性成分が別々に該化合物を用いて生じる作用の和よりも多い場合に得られる効果を証明し得る。活性成分が、1組み合わせた単位用量製剤において同時に処方され、投与されるか、又は同時に送達される場合、2別々の製剤として交互に又は同時に送達される場合、又は、3他の投薬計画による場合に、相乗効果が達成されうる。交互療法で送達される場合、例えば別々の注射器での異なる注入によって、化合物が順次投与されるか又は送達される場合に、相乗効果が達成されてもよい。一般に、交互療法の間、各々の活性成分の有効用量は順次、すなわち連続的に投与されるのに対して、併用療法では、2つ以上の活性成分の有効用量が一緒に投与される。病気の予防又は治療のため、追加の治療剤の適切な投与量は、治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、VEGFアンタゴニスト及び追加の薬剤が予防又は治療の目的で投与されるのかどうか、以前の治療、患者の病歴及びVEGFアンタゴニスト及びその他の薬剤への応答、及び主治医の裁量に依存する。VEGFアンタゴニスト及びその他の薬剤が一度に、又は一連の治療において患者に適切に投与される。VEGFアンタゴニストは、通常、上記のように投与される。疾患の種類や重症度に応じて、追加剤の約20mg/m2から600mg/m2が、例えば、1回又は複数の別々の投与によるか、又は連続注入によるに関わらず、患者への投与における初回候補投与量である。上記の因子に依存して、典型的な毎日の投与量は、約20mg/m2、85mg/m2、90mg/m2、125mg/m2、200mg/m2、400mg/m2、500mg/m2かそれ以上かの範囲である可能性がある。数日間か又はより長きにわたる反復投与については、状況に応じて、病気の症状の所望の抑制がおきるまで、その治療が継続される。約20mg/m2、85mg/m2、90mg/m2、125mg/m2、200mg/m2、400mg/m2、500mg/m2、600mg/m2又はその組合わせの一回又は複数の投与量が患者に投与され得る。そうした投与量は断続的に投与される場合があり、例えば、毎週、又は2週間ごとに、3週間ごとに、4回,5回,又は6回例えば、患者が追加の薬剤を約2回から約20回まで、例えば約6回の投与量を受けるように。最初の高い負荷投与量の後に1回又は複数の低投与量が投与されても良い。しかし、他の投与計画が有用である場合もある。この治療の進捗は従来の技術及びアッセイにより容易にモニタリングされる。V.薬学的製剤本発明にしたがって使用されるアンタゴニストの治療用製剤は、所望の純度を持つアンタゴニストを、任意で薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定化剤を混合することにより、凍結乾燥又は水溶液の形態で保存のために調製される。製剤に関する一般的な情報については、GilmanetalThePharmacologicalBasesofTherapeutics8thEdPergamonPress;AGennaroRemingtonsPharmaceuticalSciences18thEditionMackPublishingCoEastoriPennsylvania;AvisetalPharmaceuticalDosageFormsParenteralMedicationsDekkerNewYork;LiebermanetalPharmaceuticalDosageFormsTabletsDekkerNewYork;及びLiebermanetalPharmaceuticalDosageFormsDisperseSystemsDekkerNewYork、KennethAWaltersDermatologicalandTransdermalFormulationsVol119MarcelDekkerを参照のこと。許容される担体、賦形剤又は安定化剤は、用いられる用量と濃度においてレシピエントに非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸等のバッファー;アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤;保存料;低分子量のポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質;ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸;グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物;EDTA等のキレート化剤;スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖;ナトリウム等の塩形成対イオン;金属錯体;及び/又はTWEENTM、PLURONICSTM又はポリエチレングリコール等の非イオン性界面活性剤が含まれる。例示的な抗VEGF抗体製剤は、米国特許第6884879号に記載されている。ある実施態様において、抗VEGF抗体は、単回使用バイアル25mg/mLにて処方される。ある実施態様において、100mgの抗VEGF抗体が、米国薬局方による、140mgのα,α-トレハロース二水和物、23.2mgリン酸ナトリウム一塩基性、一水和物、4.8mgリン酸ナトリウム二塩基性で無水、1.6mgポリソルベート20、及び注射用の水に処方される。ある実施態様においては、400mgの抗VEGF抗体が、米国薬局方による、960mgのα,α-トレハロース二水和物、92.8mgリン酸ナトリウム一塩基性、一水和物、19.2mgリン酸ナトリウム二塩基性で無水、6.4mgポリソルベート20、及び注射用の水に処方される。皮下投与に適した凍結乾燥製剤は、例えば、米国特許第6267958において記述される。このような凍結乾燥製剤は適切な希釈液により高タンパク濃度に再編成され得、再構成された製剤は本明細書中において治療されるべき哺乳動物の皮下に投与され得る。アンタゴニストの結晶化形態もまた考えられる。例えば米国特許公開公報第2002/0136719A1号を参照。本明細書に記載の製剤はまた、二以上の活性化合物、好適には互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含み得る。このような医薬の種類及び有効量は、例えば製剤中に存在するVEGFアンタゴニストの量及びタイプ、及び被検体の臨床上のパラメーターに依存する。このような付加的薬剤の好適なものは上述したとおりである。また、活性成分は、例えばコアセルベーション技術又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばコロイド薬剤送達システム又はマクロエマルジョンにおいて、それぞれ、ヒドリキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル、及びポリマイクロカプセルに封入されうる。このような技術は、例えばRemingtonsPharmaceuticalSciences16theditionOsolAEdに開示されている。持続放出調製物が調製され得る。適切な持続放出調製物の例は、アンタゴニストを含む固体疎水性ポリマーの半透明マトリックスを含み、該マトリックスは、形成品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル、又はポリ、ポリラクチド、Lグルタミン酸とγエチルLグルタメートのコポリマー、非分解性エチレンビニル酢酸塩、非分解性乳酸グリコール酸コポリマー、例えばLUPRONDEPOTTM、及びポリD3ヒドロキシブチル酸が含まれる。インビボ投与に使用される製剤は無菌でなくてはならない。これは滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。VI.キット無修飾のVEGFの検出に使用のため、キット又は製造品もまた本発明により与えられる。そのようなキットは、癌に罹患した被験体が、VEGFアンタゴニスト例えば、ベバシズマブなどの抗VEGF抗体を含む抗癌剤治療に効果的に応答するかどうかを決定するために使用できる。これらのキットは、バイアル、チューブ等の一又は複数の容器手段を閉じ込めて収容するように区画化された運搬手段を含み、各容器手段は本方法で使用される別個の要素の一つを含む。例えば、容器手段の一つは無修飾のVEGFに特異的に結合する化合物を含み、他の容器手段は、第一の化合物の結合と干渉しないか又は重複しないエピトープでVEGFに特異的に結合する化合物を含み得る。そのようなキットは、上述の容器、及びバッファー、希釈液、フィルター、針、シリンジ、及び使用説明書と共にパッケージ挿入物を含む、商業用及び使用者の観点から望ましい物質を含む、一又は複数の他の容器を典型的には含むであろう。ラベルは、組成物が特定の用途に使用されることを示すように容器に存在し、またインビボ又はインビトロ使用のための指示、例えば上述したものを示しうる。本発明のキットは多くの実施態様を有する。典型的な実施態様は、容器、前記容器上のラベル、及び前記容器内に収容される組成物を具備するキットであり、組成物は無修飾のVEGFに特異的に結合する化合物を含み、そして該容器のラベルは、組成物が無修飾のVEGFの検出に使用可能であることを示しており、そしてそのキットは無修飾のVEGFの検出のための化合物を使用するための使用説明書を含んでいる。本キットは、化合物を調製し使用するための使用説明書と材料のセットを更に含みうる。キットの他の任意の組成物は一以上のバッファー例えば、希釈バッファー、担体例えば、デキストラン、アルブミンなどの他の薬剤を含む。キットはまたキットを用いて得られた結果を解釈するための説明書を含めることができる。以下の実施例は、説明するために提供されるが、本請求項に記載の発明を限定するものではない。実施例1:AVADO試験BO17708において、未治療、局所的に進行、再発性又は転移性のHER-2陰性乳癌に罹患した患者を、ドセタキセル100mg/m2とベバシズマブ7.5mg/kgを3週間ごとにn=248、ベバシズマブ15mg/kgを3週間ごとにn=247又はプラセボn=241に無作為に割り付けられた。MilesJClinOncol24May2010電子出版を参照。血漿ベースラインのサンプルはこの試験で396人の患者から入手可能であった。血管新生及び腫瘍形成に関連するバイオマーカーの状況の調査が、全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて3つのバイオマーカーの発現レベルが、治療パラメーターの改善に相関することが明らかになった。特に、全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、VEGFAの高発現レベルを示す患者は、ドセタキセル療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の無増悪生存を示した。全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、VEGFR2の高発現レベルを示す患者は、ドセタキセル療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の無増悪生存を示した。また、全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、VEGFA及びVEGFR2の高い複合発現レベルを示す患者は、ドセタキセル療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の無増悪生存を示した。更に、全患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、VEGFA及びPLGFの高い複合発現レベルを示す患者は、ドセタキセル療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の無増悪生存を示した。患者及び免疫化学的方法総計736人の患者が、BO17708試験に参加し、参加者の396人からの血漿サンプルが、バイオマーカー分析に利用することができた。バイオマーカー分析における396患者及びバイオマーカー分析が可能でなかった残りの患者のベースライン特性を表1A及び表1Bに記載する。血漿の分析血漿サンプルは無作為化後、研究治療が投与される前に採取された。全サンプルは、疾患が進行するまて、ドセタキセル100mg/m2とベバシズマブ7.5mg/kgを3週間ごとに、ベバシズマブ15mg/kgを3週間ごとに又はプラセボでその後処置された患者から得られた。総計4.9mLの血液がS-monovette登録商標チューブ及び抗凝固療法を受けている16人の患者のためのクエン酸血漿チューブに引き込まれた。それらはその後直ちにチューブを穏やかに反転させ、30分以内に遠心機で約1500gで遠心分離した10分間室温で。この後直ちに、上清血漿を透明ポリプロピレン製5mLの移送管に分注した。その後、血漿を2本のプラスチック製のストレージ管に約1.25ミリリットルずつ分注した。サンプルは立てた状態で-70°Cで保存した。幾つかのケースでは、サンプルは、最大1ヶ月は-20°Cで保存し、その後-70°Cに移した。サンプルは、ロシュダイアグノスティックス社RocheDiagnosticsGmbHからの免疫学的マルチパラメータチップ技術インパクトImmunologicalMultiParameterChipTechnologyIMPACTを用いて、VEGFA、VEGF受容体-1VEGFR1、VEGFR2、PLGF及びE-セレクチンのレベルの測定に使用した。インパクトマルチプレックスアッセイ技術IMPACTMultiplexAssayTechnologyロシュプロフェッショナルダイアグノスティックスRocheProfessionalDiagnosticsロシュダイアグノスティックス社RocheDiagnosticsGmbHは、実施名称インパクトIMPACT免疫学的マルチパラメータチップテクノロジーの下で、マルチマーカプラットフォームを開発した。この技術は、血漿の分析の項で上述したタンパク質マーカーの測定に使用した。本技術は、欧州特許第0939319号及び欧州特許第1610129号に開示された手順により製造された小さいポリスチレンチップに基づいている。チップ表面をストレプトアビジン層で被覆し、次いでその上にビオチン化抗体が全てのアッセイでスポットされた。各マーカーについて、抗体のスポットがチップ上に縦線でロードされた。アッセイ中に、アレイは特定の分析物を含む検体試料で探索した。一つのチップ上の全マーカーを測定するために検体あたり必要な血漿容積は8μLであり、それはインキュベーションバッファー50mMのHEPESpH7.2、150mMのNaCl、0.1のThesit、0.5ウシ血清アルブミン、及び防腐剤として0.1のオキシピリオンOxypyrionと一緒に適用された。12分のインキュベーション及び洗浄バッファー5mMのTrispH7.9,0.01Thesit及び0.001のオキシピリオンOxypyrionを用いてチップを洗浄後に、ジゴキシゲニン化モノクローナル抗体混合物を追加しジゴキシゲニンで標識した分析物に特異的な抗体の混合物を含むインキュベーション緩衝液40μL、捕獲した分析物に結合させるために、更に6分間インキュベートした。第二抗体が、蛍光ラテックスに結合した抗ジゴキシゲニン抗体複合体を含む試薬バッファー62.5mMのTAPSpH8.7、1.25MのNaCl、0.5ウシ血清アルブミン、0.063のTween20、0.1オキシピリオンOxypyrion40μLで最終的に検出された。この標識を使用して、単一スポットで10の独立した結合事象を検出することができ、nmol/Lの濃度に至るまで非常に高感度を与えた。チップは、検出部に運ばれ、電荷結合素子CCDカメラが、専用のソフトウェアを使用して信号強度に変換された画像を生成した。個々のスポットは、自動的に所定の位置に配置され、画像解析によって定量化された。各マーカーについて、10~12スポットの線がチップにロードされ、5つのスポットの最小値がサンプルの平均濃度を決定するために必要であった。本技術の利点は、サンドイッチ形式又は競合形式において、最大10までパラメーターを多重化する能力である。検量用試料及び患者検体は二重に測定した。一回の実行は、実行コントロールとして2つのマルチコントロールを含む計100の判定を含むように設計した。選択された分析物の一部はお互いに反応するためすなわち、VEGFA及びPLGFはVEGFR1又はVEGRF2と、又はVEGFAはPLGFとヘテロダイマーを形成する、5つの分析物が以下の3つの異なるチップ上に分けられた。チップ1:VEGFAチップ2:VEGFR1、VEGFR2、E-セレクチンチップ3:PLGF以下の抗体が異なるアッセイで使用された。統計的分析サンプルの中央値は、バイオマーカーの値を低中央値未満又は高中央値以上として二分するために使用された。高または低バイオマーカーレベルの患者のサブグループにおける治療効果のハザード比は、比例ハザードコックス回帰分析を用いて推定された。更に、コックス比例ハザード回帰が、バイオマーカーレベルと治療効果との関連を評価するために使用された。本方法は以下の共変量を含んだ:試用版治療、バイオマーカーレベル、層別因子ER/PgRの状態、ベースライン時に測定可能な疾患、事前アジュバントタキサン療法、バイオマーカーのレベルによる治療の相互作用項。相互作用項のためのWald検定は、バイオマーカーレベルと治療効果との間の関連性を決定するために使用された。0.05未満のP値は有意であると考えられた。結果血漿マーカーバイオマーカーのベースラインの記述統計が表2に示される。表3は、無増悪生存における治療効果とVEGFA又はVEGFR2との関連性を解析した結果を示す。この解析において、VEGFAについて、低VEGFA<125pg/ml及び高VEGFA≧125pg/ml,及びVEGFR2について、低VEGFR2<11ng/ml及び高VEGFR2≧11ng/mlが使用された。これらの結果は、治療効果のハザード比は、低VEGFAを持つ患者に比べて高VEGFAを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。またこれらの結果は、治療効果のハザード比は、低VEGFR2を持つ患者に比べて高VEGFR2を持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。同じ傾向が低及び高用量のベバシズマブをプラセボに対して比較した場合に観察され、高及び低バイオマーカーサブグループ間の相違の統計的証拠は、低用量のベバシズマブで治療された患者においてより強い。従って、VEGFA及びVEGFR2は各々が、無増悪生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。表4は、低用量7.5mg/kgを3週間ごとベバシズマブ及び高用量15mg/kgを3週間ごとベバシズマブについて、無増悪生存における治療効果とバイオマーカー組み合わせの関連性の解析を示す。この解析において、ここではlog2変換を使用し、ここでmadは係数14826で調整された絶対偏差中央値である。この解析において、VEGFAとVEGFR2の高混合発現レベルは式1≧-0.132であり、VEGFAとVEGFR2の低混合発現レベルは式1<-0.132であり、VEGFAとPLGFの高混合発現レベルは式2≧-0.006であり、VEGFAとPLGFの低混合発現レベルは式2<-0.006である。これらの結果は、治療効果のハザード比は、低いVEGFAVEGFR2の組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAVEGFR2の組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。またこれらの結果は、治療効果のハザード比は、低いVEGFAPLGFの組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAPLGFの組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。同じ傾向が低及び高用量のベバシズマブをプラセボに対して比較した場合に観察され、高及び低バイオマーカーサブグループ間の相違の統計的証拠は、低用量のベバシズマブで治療された患者においてより強い。従って、VEGFAVEGFR2の組み合わせ及びVEGFAPLGFの組み合わせは各々が、無増悪生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。ベバシズマブ15mg/kgの効力におけるVEGF-Aの予測値は、VEGF-Aのレベルに従ってコホートを四分位数に細分化することで更に検討された。全ての四分位数の95信頼区間が重なった。第一四分位数<64pg/mlでは、非常に限定された治療効果が観察されたハザード比0.86。最高四分位数では>240pg/ml、PFSのハザード比は0.3995CI:0.19-0.77で、無増悪生存の中央値の差は、他の群に比べてより顕著であった。全体として、四分位数の推定値は、VEGF-Aレベルの増加に伴い、ハザード比において一貫性のある改善を示している。これらの結果を下の図5に示す。実施例2:この例では、インパクトプラットフォーム上におけるVEGF-Aの検出のために使用される抗体に基づいて、VEGF-Aの短いアイソフォームがVEGF-Aの長いアイソフォームに比べて優先的に測定されることを示している。統計解析のセクション前の表に一覧された抗体を用いるインパクト技術を言及するセクションで上述されるように実行された。4つの異なるVEGF-A型、すなわち、VEGF111,VEGF121,VEGF165及びVEGF189が利用可能であって本解析で使用された。VEGF111及びVEGF121両方は大腸菌中での発現から由来及びVEGF165昆虫細胞株中で組換えにより得られたは、RDSystems,Minneapolis,USAから購入し;VEGF189大腸菌で生成は、RELIATechGmbH,Wolfenbuettel,Germanyから得た。VEGF189はやや不安定なように見え、その材料で得られたデータを当てにできないことが後で判明した。図11から明らかなように、大腸菌で産生され、二次的修飾、例えばグリコシル化されていないVEGFアイソフォームの111又は121のそれぞれは、165アミノ酸を持つVEGFの長いアイソフォームに対して比較した場合、より良好に検出される。VEGF165は昆虫細胞株で得られ、少なくとも部分的にグリコシル化されている。理論に縛られたくはないが、MAB3C5の特異的結合特性に基づく、このアッセイの無修飾のVEGFの優先的結合は、以前のVEGF-Aの測定では矛盾する結果を導いた一方で、なぜ統計的に有意な予測値が観測されたのかを説明することができる。実施例3:Elecsysアナライザーのおける無修飾及び修飾型VEGF165の比較計測この実施例では、Elecsys登録商標Analyzer及び対応するアッセイはヒト血漿中の無修飾のVEGFを検出するために使用することができることを実証する実験を説明する。VEGF-AアッセイはインパクトIMPACTから自動化されたインビトロ診断システムのElecsys登録商標ロシュダイアグノスティックス社、マンハイムRocheDiagnosticsGmbH,Mannheimへと移された。インパクトアッセイと同一の捕獲抗体,<hVEGF-A>-m3C5RELIATechGmbH,Wolfenbuettelが用いられたが、一方、インパクトシステム上で使用された検出抗体<hVEGF-A>-m25603RDSystems,ミネアポリスは<hVEGF-A>-mA4.6.1ジェネンテック、サウスサンフランシスコで置き換えられた。自動化Elecsys登録商標システム上で実行されるイムノアッセイは信号生成技術として、電気化学発光ECLIAを用いるイムノアッセイである。本サンドイッチアッセイでは、ビオチン化捕獲抗体がストレプトアビジン被覆、磁性微粒子に結合し、及びルテニルruthenylated検出抗体は、信号生成を可能とする。反応バッファー50mMのトリスpH7.4,2mMのEDTA,0.1のthesit,0.2のウシIgG、1.0ウシ血清アルブミン中にある1.5μg/mlのビオチン化<VEGF-A>-m3C5を75μl及び2μg/mlのルテニル<VEGF-A>M-A.4.6.1を75μlは両方とも20μlのサンプルとともに9分間インキュベートした。30μlの微粒子懸濁がインキュベーションの最初の9分後に添加され、次いで、全混合物を更に9分間インキュベートした。これらのインキュベーション工程のあいだに、微粒子に結合する抗体検体の抗体サンドイッチが形成される。最後に、微粒子は、信号生成及び読み出し用Elecsysシステムの検出チャンバーに移された。ElecsysVEGF-Aアッセイの優先度を、精製された組換えタンパク質:VEGF165PeproTechGmbH,Hamburgにより大腸菌中で組換えにより生成、及びVEGF165RocheDiagnostics,GermanyでHEK細胞中で組換えにより生成で評価した。インパクトIMPACTアッセイで見られた無修飾のVEGF165の優先的結合はElecsysアッセイにて確認された。図12に明らかなように、Elecsysアッセイにおいて、無修飾のVEGF165は修飾型VEGF165よりも約5倍高感度で検出された。実施例4:化学療法と併用したベバシズマブの、一次の切除不能、局所進行性、転移性胃癌における第III相無作為化試験この例は、AVAGAST臨床試験における一次の転移性胃癌患者から得られた結果の分析に関する。研究の主な目的は、全生存OSによって測定され、胃癌を治療するための化学療法にベバシズマブを加えることの臨床的有用性を決定することであった。二次エンドポイントは無増悪生存PFS、全奏効率及び奏効期間が含まれていた。この試験で用いられた化学療法は、カペシタビンとの組み合わせ又は5-フルオロウラシル5-FU及びシスプラチンであった。研究設計774人の患者がAVAGAST試験に登録され、次の両群に無作為に1:1に割り付けられた:群A387:経口カペシタビン1000mg/m2を2週間1日2回とその後1週間の安静を3週間ごとに、疾患の進行又は管理不能な毒性に至るまで、ないしは、経口カペシタビンを取ることが適切であると考えられない患者例えば、嚥下障害、吸収不良又は経口カペシタビン薬の摂取に影響を及ぼす可能性がある他の状態のためにに対しては、代わりに5-フルオロウラシルが持続静脈注射として800mg/m2/日の用量で3週間ごとに5日間にわたり各サイクルの1から5日;及びシスプラチン80mg/m2を水分過剰で2時間の静脈注射として、及び前投薬ステロイドと制吐薬を3週間ごとに最大6サイクルが、疾患の進行又は管理不能な毒性に至るまで投与され得る。群B387:経口カペシタビン1000mg/m2を2週間1日2回とその後1週間の安静を3週間ごとに、疾患の進行又は管理不能な毒性に至るまで、ないしは、経口カペシタビンを取ることが適切であると考えられない患者例えば、嚥下障害、吸収不良又は経口カペシタビン薬の摂取に影響を及ぼす可能性がある他の状態のためにに対しては、代わりに5-フルオロウラシルが持続静脈注射として800mg/m2/日の用量で3週間ごとに5日間にわたり各サイクルの1から5日;及びシスプラチン80mg/m2を水分過剰で2時間の静脈注射として、及び前投薬ステロイドと制吐薬を3週間ごとに、疾患の進行又は管理不能な毒性に至るまで最大6サイクル:及びベバシズマブ7.5mg/kgを3週間ごとに、疾患の進行又は管理不能な毒性に至るまで投与され得る。治療群は、進行性疾患を例外として、層別変数のためにバランスをとった2対5。患者の約95は転移性で、3分の2は男性、49はアジア/太平洋地域、32がヨーロッパ、19がアメリカであった。ベバシズマブはアバスチン登録商標は、非経口投与される状態で透明からわずかに乳白色な無菌液体として、2つのバイアルサイズで提供された:ベバシズマブをリン酸、トレハロース、ポリソルベート20及び米国薬局方注射用滅菌水とともに含んだ各100mg25mg/ml-4ml容量のガラスバイアル、及びベバシズマブをリン酸、トレハロース、ポリソルベート20及び米国薬局方注射用滅菌水とともに含んだ各400mg25mg/ml-16ml容量のガラスバイアル。アバスチン登録商標は、5mg/kgの用量に必要な量を吸引し、米国薬局方の0.9塩化ナトリウム注射剤で総容量100mlに希釈して投与された。方法適格な被験体/患者は、次の鍵となる適格基準を持っていた:年齢>18歳、ECOG、0,1又は2ECOGパフォーマンスステータススケール。全ての被験体は、手術不能な局所進行または転移性疾患で、根治療法を受け入れない、胃又は胃食道接合部の腺癌を組織学的に確認した。被検体は、計測可能か又は計測不可能であるが、評価可能な疾患固形がんの治療効果判定のためのガイドラインRECISTに罹患していても良い。抗凝固薬を受けていない被検体は、無作為化の前に、7日間以内に、1.5未満のINR及び1.5×ULN未満のPTTを有していた。除外基準は以下を含んでいた:局所進行性又は転移性胃癌について以前の化学療法無作為化前の少なくとも6ヶ月前に無作為に完了している限り、患者は以前にネオアジュバント又はアジュバント化学療法を受けている可能性がある;以前の白金又は抗血管新生療法すなわち、抗VEGF又はVEGFRチロシンキナーゼ阻害剤など;治癒的療法手術及び/又は化学療法及び/又は放射線療法を含むについて候補であった局所進行性疾患を有する患者;無作為化から28日以内に放射線治療:無作為化の前に28日以内に大手術、切開生検又は重大な外傷、又は試験治療予定された待機手術の経過中に大手術の必要性の予想;無作為化の前に2日以内での簡単な外科的処置;ベースラインでのCNS転移の証拠;標準的な医学療法で十分に治療されない限り、癌とは無関係のCNS疾患の物理的/神経学的検査時での病歴又は証拠、例えば制御不能な発作;不十分な骨髄機能、肝機能又は腎機能;制御不能な高血圧症又は臨床的に重大なつまり活動性心血管疾患;無作為化で静脈内抗生物質投与を必要とする活動性感染症:出血リスクを伴う遺伝性の出血性素因又は凝固障害の病歴又は証拠;深刻な又は非治癒傷、消化性潰瘍、又は不完全に治癒した骨折;活動性消化管出血:無作為の6ヶ月以内での腹瘻、消化管穿孔、又は腹腔内膿瘍の病歴;神経障害例えば、聴覚及びバランスの障害CTCAEv3.0によるグレードII;アスピリン又はクロピドグレルによる慢性的な日々の治療;経口コルチコステロイド薬抗嘔吐用又は食欲刺激としての吸入ステロイドと経口ステロイドの短期コースが許容されたによる慢性的な日々の治療;既知のジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼDPD欠損症;及びHBV又はHCVによる既知の急性又は慢性活動性感染。研究の主要エンドポイントは、無作為化から任意の原因による死亡までの時間として定義された全生存OSであった。事象に至る時間を、層別ログランク検定を用いて処置群の間で比較する。カプランマイヤー法が、事象までの時間の期間の推定に用いられた。事象までの時間の中央値の95信頼区間は、ブルックマイヤークロウリー法を用いて計算した。事象までの時間のデータのHRは、層別コックス回帰モデルを用いて推定した。二次エンドポイントは無増悪生存PFS、客観的奏効率RR、奏効期間、及び安全性を含んでいた。無増悪生存PFSは、治験責任医師の評価に基づいて、無作為化から疾患の進行又は死亡までの時間として定義される。カプランマイヤーの方法論は、各治療群についてのPFS中央値の推定に用いられた。ある実施態様において、PFSのハザード比は、層別ログランク検定で使用したのと同じ層別因子による層別コックス回帰モデルを用いて推定した。各コホートにおけるPFSの解析は、両側α=0.05のレベルで実施された。事象に至る時間を、層別ログランク検定を用いて処置群の間で比較した。カプランマイヤー法が、事象までの時間の期間の推定に用いられた。事象までの時間の中央値の95信頼区間は、ブルックマイヤークロウリー法を用いて計算した。事象までの時間のデータのHRは、層別コックス回帰モデルを用いて推定した。RRは、応答の最初の文書化後28日以上確認される完全又は部分応答を達成した患者のパーセンテージとして定義される。ベースラインで計測可能な疾患を持つ患者におけるRRは、層別マンテルヘンツェルMantel-Haenszelχ2検定を用いて比較した。無作為化の層別因子は全て層別解析に含めた。血液血漿サンプルは、手術不可能な局所進行性/転移性の胃/胃食道腺癌の治療のためのカペシタビン/シスプラチン療法にベバシズマブを追加した結果を比較する無作為化第III相研究に参加した患者から採取したBO20904研究,KangetalJClinOncol201028LBA4007を参照。血管新生及び腫瘍形成に関連するバイオマーカーの状況の調査が、全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて一血漿バイオマーカーの発現レベルが治療パラメーターの改善に相関することが明らかになった。特に、全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、VEGFAの高発現レベルを示す患者は、カペシタビン/シスプラチン療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の全生存及び無増悪生存を示した。患者、サンプル及び免疫化学的方法総計774人の患者が、BO20904研究に参加し、血漿VEGF-Aの分析用に血液中の血漿サンプリングが本プロトコールで前もって指定された。全てのサンプルは、カペシタビン/シスプラチンとベバシズマブ又はプラセボによる治療を受けた患者から得られた。合計.4.9mlが、4.9mLのEDTA-Monovette登録商標採血管に回収された。血液回収の30~60分以内に、採血管を遠心分離機に入れ、細胞および血漿が分離されるまで、15分間、4°Cで1500gで回転させた。遠心分離後直ちに、血漿を、慎重に管の底に血小板を含む界面を吸引しないように注意しながら、プラスチックのピペットを用いてプロピレン製の移送管に移した。血漿は、その後、ピペットを用いて2本の貯蔵管に等しく半量が各々約1.25mL分注した。一旦血漿を分離した後、サンプルはまっすぐ立てた状態で-70°Cで保存された。-20°Cで保存することしかできないサンプルは、採血後一ヶ月以内にロシュ中央サンプルオフィスCSOに発送された。全てのサンプルは、ロシュダイアグノスティックス社、ペンツベルク、ドイツで分析した。全てのサンプルが解凍され、72のバッチで384ウェルREMPマイクロプレートに40μlのアリコートに分配された。管はアルミ膜で密閉し、分析するまで-85から-55°Cの温度を維持するように設定した冷凍庫に保存された。サンプルはVEGFA濃度を分析した。参加者の712人からの血漿サンプルを、バイオマーカー分析に利用することができた。バイオマーカー解析における712人の患者のベースライン特性を表6に記載する。血漿の分析血漿サンプルは無作為化後、患者に研究治療が投与される前に採取された。VEGFAを、実施例1に記載の多重IMPACTELISAアッセイを用いて測定した。統計解析サンプルの中央値は、バイオマーカーの値を低中央値未満又は高中央値以上として二分するために使用された。高または低バイオマーカーレベルの患者のサブグループにおける治療効果のハザード比は、比例ハザードコックス回帰分析を用いて推定された。更に、比例ハザードコックス回帰が、バイオマーカーレベルと治療効果との関連を評価するために使用された。モデルは、以下の共変量を含んだ:試験治療、バイオマーカーレベル、バイオマーカーレベルによる治療の相互作用項。相互作用項のためのWald検定は、バイオマーカーレベルと治療効果との間の関連性を決定するために使用された。0.05未満のP値は有意であると考えられた。定量下限値以下BLQか又は定量上限を超えるALQとして報告された値は、定量下限値LLQ値及び定量上限ULQ値で帰属された。濃度レベルの対数変換を分析に用いた。カットオフを分析のために必要とされた場合は、サンプルの中央値を用いた。結果血漿マーカーバイオマーカーのベースラインの記述統計が表7に示される。表8は、全生存における治療効果と選択されたバイオマーカーの関連性の単変量解析を示す。この分析において、VEGFAについて、低VEGFA≦111pg/ml及び高VEGFA>111pg/mlを使用した。VEGFAについて、カットオフレベルは、所定の解析計画に従って、患者の50が高発現し、50の患者が低い発現を有するを有するように、サンプルデータ中央値として決定した。この結果の表は、治療効果のハザード比は、低VEGFAを持つ患者に比べて高VEGFAを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFAは、全生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。表9は、無増悪生存における治療効果と選択されたバイオマーカーの関連性の単変量解析を示す。この分析において、VEGFAについて、低VEGFA≦111pg/ml及び高VEGFA>111pg/mlを使用した。VEGFAについて、カットオフレベルは、所定の解析計画に従って、患者の50が高発現し、50の患者が低い発現を有するを有するように、サンプルデータ中央値として決定した。この結果の表は、治療効果のハザード比は、低VEGFAを持つ患者に比べて高VEGFAを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFAは、無増悪生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。実施例5:化学療法と併用したベバシズマブの、転移性膵癌における第III相無作為化試験転移性膵臓癌患者は、ゲムシタビンgemicitamibe-エルロチニブとベバシズマブn=306又はプラセボn=301に無作為に割り付けられた。血液血漿サンプルは、転移性膵癌の治療のためのゲムシタビンgemicitamibe-エルロチニブ療法にベバシズマブを追加した結果を比較する無作為化第III相研究に参加した患者から採取したBO17706研究VanCutsemJClinOncol20092722312237を参照。転移性膵臓癌患者は、ゲムシタビンgemicitamibe-エルロチニブとベバシズマブn=306又はプラセボn=301に無作為に割り付けられた。転移性膵臓癌患者は、ゲムシタビン1,000mg/m2/週、エルロチニブ100mg/日及びベバシズマブ5mg/kgを2週間毎又はゲムシタビン、エルロチニブ、及びプラセボを無作為に割りあてられた。血管新生及び腫瘍形成に関連するバイオマーカーの状況の調査が、全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて3つのバイオマーカーの発現レベルが、治療パラメーターの改善に相関することが明らかになった。特に、全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、VEGFAの高発現レベルを示す患者は、ゲムシタビンgemicitamibe-エルロチニブ療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の全生存及び無増悪生存を示した。全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、VEGFR2の高発現レベルを示す患者は、ゲムシタビンgemicitamibe-エルロチニブ療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の全生存を示した。全バイオマーカー患者集団で測定されたコントロールレベルに比べて、PLGFの高発現レベルを示す患者は、ゲムシタビンgemicitamibe-エルロチニブ療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の無増悪生存を示した。また、全バイオマーカー患者集団で決定されたコントロールレベルに比べて、VEGFA及びVEGFR2の高混合発現レベルを示す患者は、ゲムシタビンgemicitamibe-エルロチニブ療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の全生存及び無増悪生存を示した。更に、全患者集団で決定されたコントロールレベルに比べて、VEGFA及びPLGFの高混合発現レベルを示す患者は、ゲムシタビンgemcitamibe-エルロチニブ療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の全生存及び無増悪生存を示した。全患者集団で決定されたコントロールレベルに比べて、VEGFA、VEGFR2及びPLGFの高混合発現レベルを示す患者は、ゲムシタビンgemcitamibe-エルロチニブ療法に対するベバシズマブの追加に応答して長期の全生存及び無増悪生存を示した。患者及び免疫化学的方法総計607人の患者が、BO17706試験に参加し、参加者の224人からの血漿サンプルが、バイオマーカー分析に利用することができた。バイオマーカー解析における224人の患者のベースライン特性を表10に記載する。血漿の分析無作為化後及び任意の研究治療前に収集された血漿が患者に与えられ、上の実施例1に記載されるIMPACTアッセイを用いて、VEGFA、血管内皮増殖因子受容体1VEGFR1、VEGFR2、PLGF及びE-セレクチンを測定した。統計解析サンプルの中央値は、バイオマーカーの値を低中央値未満又は高中央値以上として二分するために使用された。高または低バイオマーカーレベルの患者のサブグループにおける治療効果のハザード比は、比例ハザードコックス回帰分析を用いて推定された。更に、コックス比例ハザード回帰が、バイオマーカーレベルと治療効果との関連を評価するために使用された。モデルは以下の共変量が含まれていた:試験治療、バイオマーカーレベル、バイオマーカーレベルによる治療の相互作用項。相互作用項のためのWald検定は、バイオマーカーレベルと治療効果との間の関連性を決定するために使用された。0.05未満のP値は有意であると考えられた。結果血漿マーカーバイオマーカーのベースラインの記述統計が表11に示される。表12は、全生存における治療効果と選択されたバイオマーカーの関連性の単変量解析を示す。この解析において、VEGFAについて、低VEGFA<152.9pg/ml及び高VEGFA≧152.9ng/ml、VEGFR2について、低VEGFR2<9.9ng/ml及び高VEGFRA≧9.9ng/ml、及びPLGFについて、低PLGF<36.5pg/ml及び高PLGF≧36.5pg/mlが使用された。VEGFA及びVEGFR2について、カットオフレベルは、所定の解析計画に従って、患者の50が高発現し、50の患者が低い発現を有するを有するように、サンプルデータ中央値として決定した。PLGFカットオフレベルはデータの42パーセンタイル値として決定した。従って、患者の58がPLGFの高発現を有し、42が低発現を有している。カットオフは、高レベルサブグループにける治療効果と低レベルサブグループにおける治療効果の間に統計的な違いを大きくするために決定した。この結果の表は、治療効果のハザード比は、低VEGFAを持つ患者に比べて高VEGFAを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。またこの結果の表は、治療効果のハザード比は、低VEGFR2を持つ患者に比べて高VEGFR2を持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFA及びVEGFR2は各々が、無増悪生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。表13は、無増悪生存における治療効果と選択されたバイオマーカーの関連性の単変量解析を示す。この解析において、VEGFAについて、低VEGFA<152.9pg/ml及び高VEGFA≧152.9ng/ml、VEGFR2について、低VEGFR2<9.9ng/ml及び高VEGFRA≧9.9ng/ml、及びPLGFについて、低PLGF<36.5pg/ml及び高PLGF≧36.5pg/mlが使用された。VEGFA及びVEGFR2について、カットオフレベルは、所定の解析計画に従って、患者の50が高発現し、50の患者が低い発現を有するを有するように、サンプルデータ中央値として決定した。PLGFカットオフレベルはデータの42パーセンタイル値として決定した。従って、患者の58がPLGFの高発現を有し、42が低発現を有している。カットオフは、高レベルサブグループにける治療効果と低レベルサブグループにおける治療効果の間に統計的な違いを大きくするために決定した。この結果の表は、治療効果のハザード比は、低VEGFAを持つ患者に比べて高VEGFAを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。またこの結果の表は、治療効果のハザード比は、低PLGFを持つ患者に比べて高PLGFを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFA及びPLGFは各々が、無増悪生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。表14は、全生存における治療効果とバイオマーカーの組み合わせの関連の分析を示す。この解析では以下の式を用いた:ここではlog2変換を使用し、この解析において、VEGFAとVEGFR2の高混合発現レベルは式1≧-0.10であり、VEGFAとVEGFR2の低混合発現レベルは式1<-0.10であり、VEGFAとPLGFの高混合発現レベルは式2≧-0.042であり、VEGFAとPLGFの低混合発現レベルは式2<-0.042である。この結果の表は、治療効果のハザード比は、低いVEGFAVEGFR2の組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAVEGFR2の組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。またこの結果の表は、治療効果のハザード比は、低いVEGFAPLGFの組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAPLGFの組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFAVEGFR2の組み合わせ及びVEGFAPLGFの組み合わせは各々が、全生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。表15は、無増悪生存における治療効果とバイオマーカーの組み合わせの関連の分析を示す。この解析では以下の式を用いた:ここではlog2変換を使用し、この解析において、VEGFAとVEGFR2の高混合発現レベルは式1≧-0.10であり、VEGFAとVEGFR2の低混合発現レベルは式1<-0.10であり、VEGFAとPLGFの高混合発現レベルは式2≧-0.042であり、VEGFAとPLGFの低混合発現レベルは式2<-0.042である。この結果の表は、治療効果のハザード比は、低いVEGFAVEGFR2の組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAVEGFR2の組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。またこの結果の表は、治療効果のハザード比は、低いVEGFAPLGFの組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAPLGFの組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFAVEGFR2の組み合わせ及びVEGFAPLGFの組み合わせは各々が、無増悪生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。表16及び表17は、それぞれ全生存及び無増悪生存において、治療効果と、VEGFA、VEGFR2及びPLGFのバイオマーカー組み合わせの関連の解析を示す。この解析において、以下の式を用いた:ここでln=logbasiseこの解析において、全生存について、VEGFA、VEGFR2及びPLGFの高混合発現レベル式3≧-0.837、VEGFA、VEGFR2及びPLGFの低混合発現レベルは式3<-0.837であり、無増悪生存について、VEGFA、VEGFR2及びPLGFの高混合発現レベルは式3≧-0.837であり、VEGFA、VEGFR2及びPLGFの低混合発現レベルは式3<-0.837である。この結果の表は、治療効果のハザード比は、低いVEGFAVEGFR2PLGFの組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAVEGFR2PLGFの組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFAVEGFR2PLGFの組み合わせは、無増悪生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。またこの結果の表は、全生存について、治療効果のハザード比は、低いVEGFAVEGFR2PLGFの組み合わせを持つ患者に比べて高いVEGFAVEGFR2PLGFの組み合わせを持つ患者のサブセットで有意に良好であることを示している。従って、VEGFAVEGFR2PLGFの組み合わせは、全生存におけるベバシズマブ治療効果について独立した予測バイオマーカーである。実施例6:VEGFAに対する付加的血漿サンプルの分析AVF2107g転移性結腸直腸癌を有する被験体において標準的な化学療法との組み合わせでrhumabベバシズマブの有効性及び安全性を評価するための第III相、多施設、無作為化、能動的制御臨床試験、AVAiL化学療法を受けていない、進行性又は再発性の非扁平上皮非小細胞肺癌患者における、プラセボ、シスプラチン及びゲミシタビンに対するシスプラチンとゲムシタビンを併用したベバシズマブの無作為化、二重盲検、多施設第III相試験、及びAVOREN転移性腎明細胞癌に罹患した腎摘出された患者に投与される一次治療として、インターフェロンα-2aとプラセボに対するインターフェロンα-2aroferonと併用したベバシズマブの有効性と安全性を評価するための無作為化二重盲検第III相試験もまた実施例1に記載のIMPACTアッセイで分析された。研究AVF2107gでは、47からの380サンプルが再試験のために利用可能であった。新しいVEGF-Aのデータは、VEGFに対する予後値を確認したが、潜在的な予測値を示さなかった。VEGF-Aの高レベルを持つ転移性結腸直腸癌患者は、IMPACTELISAにより測定される場合、PFSついて似たハザード比VEGF-A高に対して0.52対VEGF-A低に対して0.64及びOSについて似たハザード比VEGF-A高に対して0.68対VEGF-A低に対して0.70を有していた。類似の予後値は852AVAILサンプル52の再検査の結果で見られた。しかしながら、7.5mg/kgの群において、VEGF-Aの高いレベルを有する非小細胞肺癌患者もまた、VEGF-Aの高いレベルを有する患者に比べて類似のハザード比を示したPFSについてそれぞれ0.75対0.77及びOSについて0.89対0.92。15mg/kgの用量群もまた、VEGF-Aの低いレベルを有する患者PFSについて0.96及びOSについて0.97と比較して、VEGF-Aの高いレベルを有する患者PFSについて0.76及びOSについて0.98について類似のハザード比を示した。またAVORON試験において、バイオマーカーの予後値が見られたものの、400ベースラインの血漿サンプル62の再試験は、腎細胞癌患者におけるVEGF-Aの潜在的な予測値を明らかにしなかった。VEGF-Aの高いレベルを持つ患者は、PFSについて、VEGF-Aの低レベルを持つ患者の0.49と比較して0.67のハザード比を示した。6つの異なるアバスチンの研究からの臨床転帰とのVEGF-Aバイオマーカーの相関を表18に示す。全ての3つの研究では、以前のVEGF-Aアッセイで以前に示されたように、血漿VEGF-Aの予後因子を確認した。しかしながら、AVADO,AVITA,及びAVAGASTに示されるように、潜在的な予測値は、3つの異なる適応において、追加の試験で確認することができなかった。AVF2107g,AVAiL,及びAVORENの試験で回収されたサンプルは、AVADO,AVAGAST,及びAVITAで回収されたサンプルと比べて若干異なる方法で処理されたことを特記すべきであるすなわち、クエン酸対EDTA、12~16のサンプルでより多くの凍結/融解サイクル、より長い貯蔵時間。下記の実施例7に示すように、血漿のクエン酸塩又はEDTAへの回収は、VEGF-アッセイの感度に影響を与え得る。サンプル間の正確な違いが、以下の表19に示される。従って、これらの3つの研究における予測値の欠如は、VEGF-Aは、MBCにおける予測マーカーとして機能し得るという可能性を否定するものではない。また、発見が適応症特異的であることを排除することはできない。2つのアッセイ間の違いは、VEGFについての第二世代のアッセイの感度の違いを明らかにした。理論に束縛されることなく、異なる適応症において異なる修飾型及び無修飾のVEGFの異なる生物学的効果及び存在量があり得る。要約すると、インパクトIMPACTアッセイは、試験された適応症にわたる血漿VEGF-Aについての一貫した予後値を示している。更に、この試験は、AVADO,AVITA,及びAVAGASTにおいて一貫した結果を生成し、これらの適応症におけるベバシズマブの予測値を示しており、一方AVF2107g,AVAiL,及びAVOREN試験における血漿サンプルの再試験ではそのような相関を示さず、これらの3つの別の適応症では血漿VEGFA-Aの可能性のある予測値が無いことを示す。しかしながら、サンプル中の相違は結果においてこれらの違いに影響を与えている可能性があり;そうした相違の一つが下の実施例7において実証されている。理論に拘束されることなく、インパクトアッセイが無修飾のVEGFの検出を好むとする条件において、異なる適応症において異なる修飾型及び無修飾のVEGFの異なる生物学的影響及び存在量もまたあり得る。実施例7:Naクエン酸及びEDTA中に回収される血漿中の無修飾のVEGFの検出一対の血漿サンプルが、EDTAmonovette5mL-及びクエン酸塩Monovette採血管5mLの両方におけるHER2を局所的に再発したか又は転移性乳癌から回収された。血液回収の30分以内に、採血管を遠心分離機に入れ、細胞および血漿が分離されるまで、10分間室温で1500gで回転させた。遠心分離後直ちに、血漿は注意深くプロピレン移送管に移され、ついでピペットを用いて2本の貯蔵管に半分の容積で各々約1.25mL分注された。サンプル中のVEGFA-Aのレベルが上述のインパクトアッセイを用いて測定された。図21に示されるように、VEGFA濃度は、EDTAクエン酸塩法比較についてスピアマン相関が治療前に回収されたベースラインサンプルにおいて約0.8であり、回収されたクエン酸塩中に保管された血漿サンプルに比べて回収されてEDTA中保管された血漿サンプルにおいて約40高い。前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示および実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書中に引用される全ての特許、特許出願、科学的な文献、及びGenbank受入番号は、各特許、特許出願、科学的な文献、及びGenbank受入番号が具体的かつ個々に参照として援用されるかのように、全ての目的についてその全体が出典明示により明示的に援用される。"