下記の構造式のヘテロ二官能性ポリマー化合物であって、X1X6は独立してO、SまたはNR1であり;R44およびR44’は独立して選択されるポリアルキレンオキシドであり;R1は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、およびアラルキルからなる群より選択され;R4043は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;yおよびy’は、独立して、0または自然数であり;pおよびp’は、独立して、0または1であり;’nおよびn’は、独立して選択される70から80までの間の整数であり;aおよびbは、独立して、0または自然数であって、abは2以上であり;zは自然数であり;D1およびD2は、独立して、B、OH、脱離基、活性化基、および末端基からなる群より選択され;Bは、生物活性成分およびOHからなる群より選択され、前記末端基が、下記の構造式からなる群より選択され、Y16は、独立して、O、SまたはNR1からなる群より選択され;R1’は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、およびアラルキルからなる群より選択され;R28は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;Arは、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式基を形成する成分であり、L12は、独立して二官能性リンカーから選択され;eおよびf’は、独立して選択される自然数であり;c、c’およびe’は、独立して、0または自然数であり;d、fおよびd’は、独立して0または1であり;nおよびn’は、独立して選択される70から80までの間の整数であり;B’は、脱離基、活性化基、OH、および生物活性成分からなる群より選択され;前記活性化基は、マレイミジル、ビニル、ビニルスルホンの残基、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、およびカルバゼートからなる群より選択され、D1およびD2の少なくとも一つは生物活性成分を含む、ことを特徴とする化合物。前記末端基が、下記の構造式からなる群より選択され、D’は、下記の構造式の化合物の一つであり、B’は、脱離基、活性化基、OH、および生物活性成分からなる群より選択される、ことを特徴とする請求項1記載の化合物。X1X4は、独立してOまたはNR1であり;X5X6は、いずれもOであり;R1は、水素、およびC16アルキルからなる群より選択され;yおよびy’は、独立して、0または1から18までの間の整数であり;pおよびp’は、独立して、0または1であり;aおよびbは、独立して選択される1から20までの間の整数である、ことを特徴とする請求項1記載の化合物。X1X4は、独立してNR1であり;X5X6は、いずれもOであり;R44およびR44’は、それぞれであり;R1は、水素またはメチルであり;yおよびy’は、それぞれ0、1または2であり;pおよびp’は、それぞれ1であり;aおよびbは、独立して選択される5から10までの間の整数であり;前記生物活性成分は、独立して、酵素、タンパク質、および治療的活性有機化合物からなる群より選択される、ことを特徴とする請求項1記載の化合物。前記末端基が、下記の構造式の化合物からなる群より選択され、B’は、OH、ハロゲン、ペプチド、タンパク質、酵素、オリゴヌクレオチド、ステロイド、治療的活性有機化合物、および脂質からなる群より選択される、ことを特徴とする請求項1記載の化合物。前記脱離基が、ハロゲン、およびNヒドロキシスクシニミジルからなる群より選択され;前記生物活性成分が、ペプチド、タンパク質、酵素、オリゴヌクレオチド、ステロイド、治療的活性有機化合物、および脂質からなる群より選択されることを特徴とする請求項1記載の化合物。nおよびn’は、独立して選択される自然数であり、重量平均分子量が、4000から270000Daまでであることを特徴とする請求項1記載の化合物。nおよびn’は、独立して選択される自然数であり、重量平均分子量が、6800から130000Daまでであることを特徴とする請求項1記載の化合物。nおよびn’は、独立して選択される自然数であり、重量平均分子量が、6800から38000Daまでであることを特徴とする請求項1記載の化合物。前記脱離基が、ハロゲン、活性化カルボネート、カルボニルイミダゾール、環式イミドチオンthione、イソシアネート、Nヒドロキシスクシニミジル、パラ-ニトロフェノール、Nヒドロキシフタルイミドhydroxyphtalimide、Nヒドロキシベンゾトリアゾリルhydroxybenzotriazolyl、イミダゾール、およびトシレートtosylateから成る群より選択されることを特徴とする請求項1記載の化合物。B’が、マレイミドおよびヒドロキシル含有またはアミン含有化合物の残基からなる群より選択されることを特徴とする請求項1記載の化合物。B’が、アントラサイクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、pヒドロキシアニリンマスタード、シトシン、araC、ゲムシタビンgemcitibine、カンプトテシン、バンコマイシン、パウロンpaullone、パクリタキセル、シスプラチン、ビンクリスチン、ビンブラスチンからなる群より選択されることを特徴とする請求項11記載の化合物。下記の構造式の化合物からなる群より選択される請求項1記載の化合物であって、BおよびB’は、脱離基、活性化剤、OH、および生物活性物質からなる群より選択され;SCAは、一本鎖結合抗原、モノクローナル抗体またはそれらの断片であり;nおよびzは自然数である、ことを特徴とする化合物。下記の構造式の化合物からなる群より選択される請求項1記載の化合物であって、SCAは、一本鎖結合抗原、モノクローナル抗体またはそれらの断片であり;nおよびzは自然数である、ことを特徴とする化合物。下記の構造式の化合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項1記載の化合物。下記の構造式を有する請求項1記載の化合物であって、D10およびD11は、独立して、OH、ハロゲン、酵素、タンパク質、および治療的活性有機化合物からなる群より選択されるか、または一緒になって下記の構造式の末端基を形成し、Y79は、独立して、O、SまたはNR1からなる群より選択され;R1は、水素またはメチルであり;R918は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;L34は、独立して選択される二官能性リンカーであり;Qは、二官能性リンカー成分およびそれらの組合せから選択され;l、k、mおよびoは、独立して自然数であり;jおよびhは、独立して0または自然数であり;g、iおよびqは、独立して0または1であり;B’は、脱離基、活性化基、OH、および生物活性成分からなる群より選択され、D10、D11およびB’の少なくとも一つは生物活性成分を含む、ことを特徴とする化合物。下記の構造式を有することを特徴とする請求項16記載の化合物。下記の構造式の化合物からなる群より選択される請求項17記載の化合物であって、B’は、脱離基、活性化剤、OH、および生物活性物質からなる群より選択されることを特徴とする化合物。B’が、マレイミドおよびヒドロキシル含有またはアミン含有化合物の残基からなる群より選択されることを特徴とする請求項18記載の化合物。B’が、アントラサイクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、pヒドロキシアニリンマスタード、シトシン、araC、ゲムシタビン、カンプトテシン、バンコマイシン、パウロン、パクリタキセル、シスプラチン、ビンクリスチン、ビンブラスチンからなる群より選択されることを特徴とする請求項18記載の化合物。ポリマー複合体を生成する方法であって、構造式の化合物であって、A1は活性化基であり;Tは保護基であり;X1、X3およびX5は、独立して、O、SまたはNR1であり;R44はポリアルキレンオキシドであり;R1は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、およびアラルキルからなる群より選択され;R4041は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;nは独立して選択される70から80までの間の整数であり;yは0または自然数であり;tは自然数であり、pは0または1である;ことを特徴とする化合物を、構造式の化合物であって、X2、X4およびX6は、独立して、O、S、NR1であり;R44’は、ポリアルキレンオキシドであり;R1は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、およびアラルキルからなる群より選択され;R4243は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;n’は独立して選択される70から80までの間の整数であり;y’は0または自然数であり;t’は自然数であり;p’は0または1であり;前記活性化基は、マレイミジル、ビニル、ビニルスルホンの残基、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、およびカルバゼートからなる群より選択され;ことを特徴とする化合物と反応させ、適切な条件下で、構造式の化合物を形成する工程を含むことを特徴とする方法。構造式の化合物を脱保護deprotectingする工程をさらに含むことを特徴とする請求項21記載の方法。構造式の化合物を、適切な条件下で活性化剤と反応させ、構造式の化合物であって、A2は、マレイミジル、ビニル、ビニルスルホンの残基、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、およびカルバゼートからなる群より選択される活性化基であり、全ての他の変数は上記のように定められる化合物を形成する工程をさらに含むことを特徴とする請求項21記載の方法。tおよびt’は、独立して選択される1から30までの整数であることを特徴とする請求項21記載の方法。構造式の保護基を、適切な条件下で活性化基に転換させ、構造式の化合物であって、A3は、マレイミジル、ビニル、ビニルスルホンの残基、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、およびカルバゼートからなる群より選択される活性化基である化合物を形成する工程をさらに含むことを特徴とする請求項23記載の方法。構造式の化合物を、適切な条件下で生物活性成分、または末端基と反応させ、構造式の化合物であって、D2は、生物活性成分、または末端基であり、該末端基は下記の構造式からなる群より選択され、Y16は、独立して、O、SまたはNR1からなる群より選択され;R1’は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、およびアラルキルからなる群より選択され;R28は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;Arは、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式基を形成する成分であり、L12は、独立して二官能性リンカーから選択され;eおよびf’は、独立して選択される自然数であり;c、c’およびe’は、独立して、0または自然数であり;d、fおよびd’は、独立して0または1であり;B’は、脱離基、活性化基、OH、および生物活性成分からなる群より選択され;前記活性化基は、マレイミジル、ビニル、ビニルスルホンの残基、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、およびカルバゼートからなる群より選択され、全ての他の変数は上記のように定められる化合物を形成する工程をさらに含むことを特徴とする請求項25記載の方法。D2が末端基であり、該末端基をさらに活性化し、生物活性成分と反応させることを特徴とする請求項26記載の方法。前記活性化基A3を、生物活性成分、または末端基とさらに反応させることを特徴とする請求項26記載の方法。前記生物活性成分が、ペプチド、タンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、ステロイド、脂質、治療的活性有機化合物、および酵素からなる群より選択されることを特徴とする請求項27記載の方法。前記生物活性成分が、ペプチド、タンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、ステロイド、脂質、治療的活性有機化合物、および酵素からなる群より選択されることを特徴とする請求項28記載の方法。薬剤の調製における請求項1の化合物の使用方法。X3およびX4はいずれもNHであり;X5およびX6はいずれも0であり;R44およびR44’はそれぞれポリエチレングリコールであり;p、p’、yおよびy’は全て0である、ことを特徴とする請求項1記載の化合物。X3およびX4はいずれもNHであり;X1、X2、X5およびX6はそれぞれ0であり;R44およびR44’はそれぞれポリエチレングリコールであり;R40-R43はHであり;yおよびy’はそれぞれ2であり;pおよびp’は独立して0または1である、ことを特徴とする請求項1記載の化合物。現在の方法の不十分さのために、高収率および高純度の基質を生成し、同時に低ポリマー分散性を保持する、高分子量へテロ二官能性ポリマー基質を生成する改良された方法が必要とされる。治療的活性化合物をターゲティングおよび供給する手段としてヘテロ二官能性ポリマー複合体を含む化合物を提供することもまた所望である。発明の概要本発明のある態様において、構造式の化合物が提供される。X1X6は独立してO、SまたはNR1であり;R44およびR44’は独立して選択されるポリアルキレンオキシドであり;R1は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、アラルキル、およびC38置換シクロアルキルからなる群より選択され;R4043は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、C38置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、置換C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;y、およびy’は、独立して、0または自然数であり;pおよびp’は、独立して、0または自然数であり;nおよびn’は、独立して、0または自然数であり;aおよびbは、独立して、0または自然数であって、abは2以上であり;zは1または自然数であり;D1およびD2は、独立して、B、脱離基、活性化基、OH、および末端基からなる群より選択され;Bは、生物活性成分、診断用薬およびOHからなる群より選択される。好ましい実施の形態において、X1X6は独立してOまたはNR1であり、R1は水素であり、aおよびbは独立して選択される1から約20までの整数であり、yおよびy’は独立して0、1または2であり、pおよびp’はそれぞれ1であり、D1およびD2は脱離基および末端基およびBから独立して選択され、ここでBは、薬、アミノまたはヒドロキシル含有残基、色素のような診断用薬、キレート剤または同位体標識化合物、脱離基または活性化基のような生物活性成分である。本発明の目的のために、残基という用語は、プロドラッグキャリアが結合される置換反応を受けた後に残る生物活性化合物の一部を意味すると解されるべきである。本発明の目的のために、アルキルという用語は、直鎖、分枝、置換C112アルキル、C38シクロアルキルまたは置換シクロアルキル等を含むと解されるべきである。本発明の主な利点のいくつかは、循環半減期および天然または未修飾の分子の可溶性を高めることのできる新しい高分子量へテロに機能性ポリマー複合体、並びに高純度を維持しながらクロマトグラフィー工程を必要としないでそのような複合体を形成する方法を含む。本発明の方法の別の利点は、ポリマー複合体の分子量を増加させながら低いポリマー分散を保持することである。本発明のさらなる利点は、当業者が、ポリマー部分のどちらの側にも同じまたは異なる基を有することができる薬複合体を設計できるということである。この利点により、当業者は、供給またはターゲティング機能性および特定の必要性に依存して同じ複合体内で治療機能性を含有する化合物を調整することができる。ここに記載される化合物および複合体を生成および使用する方法もまた提供される。発明の詳細な説明A式本発明のある態様において、構造式の化合物が提供される。ここで、X1X6は独立してO、SまたはNR1であり;R44およびR44’は独立して選択されるポリアルキレンオキシドであり;R1は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、アラルキル、およびC38置換シクロアルキルからなる群より選択され;R4043は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、C38置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、置換C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;y、およびy’は、独立して、0または自然数であり;pおよびp’は、独立して、0または自然数であり;nおよびn’は、独立して、0または自然数であり;aおよびbは、独立して、0または自然数であって、abは2以上であり;zは1または自然数であり;D1およびD2は、独立して、B、脱離基、活性化基、OH、および末端基からなる群より選択され;Bは、生物活性成分、診断用薬およびOHからなる群より選択される。構造式の化合物の好ましい実施の形態において、X1X6は独立してOまたはNR1であり、R1は水素、C16アルキル、C16ヘテロアルキル、アラルキル、およびC16置換アルキルから選択され、yおよびy’は独立して0または1から18までの整数であり、pおよびp’は独立して0または1であり、nおよびn’は独立して選択される0から100までの整数であり、aおよびbは独立して選択される1から20までの整数であり、zは自然数である。より好ましくは、X1X4は、独立してNR1であり;X5X6は、それぞれOであり;R44およびR44’は、それぞれであり;R1は、水素またはメチルであり;yおよびy’は、それぞれ0、1または2であり;pおよびp’は、それぞれ1であり;nおよびn’は、独立して、70から80までの間の整数から選択され;aおよびbは、独立して、5から10までの間の整数から選択され;zは自然数であり;D1およびD2は、独立して、OH、ハロゲン、ターゲティング物質、薬、酵素、タンパク質、治療的活性化合物、色素、キレート剤および同位体標識化合物からなる群より選択される。構造式の化合物のさらに別の好ましい実施の形態において、D1およびD2は、独立して選択される下記のような末端基である。ここで、Y16は、独立して、OまたはNR1’であり;R1’は、水素またはメチルであり;R28は、独立して、水素およびC16アルキルから選択され;Arは、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式基を形成する成分であり;L12は、独立して選択される二官能性リンカーであり;eおよびf’は、それぞれ1であり;c、c’およびe’は、独立して、0または1であり;d、fおよびd’は、独立して0または1であり;B’は、脱離基、活性化基、OH、生物活性成分および診断用薬からなる群より選択される。本発明の別の好ましい態様において、構造式のポリマー複合体が提供される。ここで、Y79は、独立してOまたはNR1であり;R1は、水素またはメチルであり;R918は、独立して、水素またはC16アルキルであり;L34は、独立して選択される二官能性リンカーであり;Qは、標的細胞中に能動輸送される成分、疎水性成分、二官能性リンカー成分およびそれらの組合せから選択され;l、k、mおよびoは、独立して自然数であり;jおよびhは、独立して0または1であり;gおよびiは、それぞれ1であり;qは、0または1であり;B’は、脱離基、活性化基、OH、生物活性成分および診断用薬から選択され;D10およびD11は、D1を定める同じ群から選択されるか、または一緒になって下記の構造式の末端基を形成する。本発明の別の好ましい態様において、D1およびD2は、独立して選択される下記のような末端基である。ここで、D’は、下記の構造式の化合物の一つであり、B’は、脱離基、活性化基、OH、生物活性成分および診断用薬から選択される。Bリンカー成分L14上記に示すように、本発明は、二官能性リンカー成分L1L4を含んでもよい。好ましくは、L1L4は、下記の限定されないリストから独立して選択される。ここで、R3438は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、C38置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、置換C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシから選択され;R39は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、C38置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、置換C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシ、NO2、ハロアルキルおよびハロゲンから選択され;a’およびb’は、独立して選択される自然数である。CAr成分の説明本発明のある態様において、Ar成分は、構造式に含まれる場合に多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式基を形成する成分であることが分かる。重要な特徴は、Ar成分は、天然で芳香性であるということである。通常、n電子は、環式分子の平面の上および下の両方で雲cloud内で共有されなければならない。さらに、π電子の数は、ヒュッケル則Huckelruleを満たさなければならない。当業者は、無数の成分が、構造式についての成分の芳香性の必要性を満たし、したがって、ここで用いるのに適切であるということを理解するであろう。いくつかの特定の好ましい芳香族基は、以下のものを含む。ここで、R6267は、独立して、R2を定めるのと同じ群から選択される。他の好ましい芳香族炭化水素成分は、以下を含んでもよいがこれに限定されない。ここで、ZおよびEは、独立してCR68またはNR69であり;JはO、SまたはNR70であって、R6870はR2を定めるのと同じ群、またはシアノ、ニトロ、カルボキシル、アシル、置換アシルまたはカルボキシアルキルからなる群より選択される。5および6員環の異性体も考えられ、ベンゾ-およびジベンゾ-系およびそれらの関連する同属種も検討される。芳香族環は、必要に応じて、ヒュッケル則に従う限りO、S、NR1等のようなヘテロ原子で置換できるということも、当業者によって明らかとなるであろう。さらに、芳香族または複素環式の構造は、必要に応じて、ハロゲンおよび/または当該技術において通常理解される用語としての側鎖で置換されてもよい。Dポリアルキレンオキシド構造式を参照すると、R44はポリアルキレンオキシドのようなポリマー成分であることが分かるであろう。そのようなポリマーの適切な例には、実質的に非抗原性であるポリエチレングリコールが含まれる。同一出願人による米国特許第5643575号に記載されるようなポリプロピレングリコールもまた有用である。本発明の方法において有用な他のPEGは、ShearwaterPolymersInccatalogPolyethyleneGlycolandDerivatives2001に記載される。それぞれの開示は、ここに言及することにより引用される。PAOおよびPEGは、両平均分子量において実質的に変化できるが、好ましくは、R44は、本発明の多くの態様において約2000から約136000Daまでの重量平均分子量を有する。より好ましくは、R44は、約3400から約65000Daまでの重量平均分子量を有し、最も好ましくは約3400から約20000Daまでの重量平均分子量を有する。ここに含まれるポリマー物質は、好ましくは室温で水溶性である。そのようなポリマーの限定されないリストには、ポリエチレングリコールPEGまたはポリプロピレングリコールのようなポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマーおよびブロックコポリマーの水溶性が維持される場合にはそれらのブロックコポリマーが含まれる。E構造式D1、D2BおよびB’基1.脱離基D1、D2が、独立して選択される脱離基である構造式の態様において、適切な成分は、ハロゲン、ヒドロキシスクシニミジルカーボネートのような活性化カーボネート、カルボニルイミダゾール、環式イミドチオン、イソシアネート、Nパラニトロフェノール、Nヒドロキシフタルイミド、Nヒドロキシベンゾトリアゾリル、イミダゾール、およびトシレート、下記の化合物のような基を含むがこれに限定されない。他の適切な脱離基は当業者に明らかであろう。本発明の目的のために、脱離基は、所望の標的、すなわち生物活性成分、二官能性スペーサー、中間体等上に見られる求核剤と反応できる基であると理解されるべきである。したがって、標的は、タンパク質、ペプチド、酵素、天然のまたはドキソルビシンのような化学合成された治療分子上に見られるNH2のような、置換のための基を含む。2.活性化基D1、D2、BおよびB’が、独立して活性化基である構造式の態様において、そのような官能基の限定されない例には、マレイミジル、ビニル、ビニルスルホンの残基、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、メルカプト、ヒドラジド、カルバゼートcarbazate等が含まれる。ポリマー複合体に結合されると、官能基例えばマレイミドを使用して、ポリペプチド、アミノ酸またはペプチドスペーサー等のシステイン残基のような標的にポリマー複合体を結合できる。3.生物活性成分D1、D2、BまたはB’が、アミンまたはヒドロキシル含有化合物の残基である構造式の態様において、そのような適切な化合物の限定されない例には、有機化合物、酵素、タンパク質、ポリペプチド等の残基が含まれる。有機化合物は、ダウノルビシン、ドキソルビシンを含むアントラサイクリン化合物のような成分;pアミノアニリンマスタード、メルファラン、AraCシトシンアラビノシドおよび関連する代謝拮抗化合物、例えばゲムシタビンを含むがこれに限定されない。あるいは、この成分は、アミンまたはヒドロキシルを含有する心血管作動薬、カンプトテシンおよびパクリタキセルのような抗悪性腫瘍薬、抗感染薬、ニスタチン、フルコナゾールおよびアンホテリシンBのような抗真菌薬、抗不安薬、胃腸薬、中枢神経系活性化剤、鎮痛薬、不妊薬fertilityagent、避妊薬、抗炎症薬、ステロイド剤、作用薬等の残基でもよい。上記のものに加えて、生物活性成分は、酵素、タンパク質、ポリペプチド、一本鎖抗原結合タンパク質、CC49のようなSCAのモノクローナル抗体、その断片等の残基でもよい。SCAのモノクローナル抗体もまた考慮される。適切なタンパク質は、ポリマー結合のため少なくとも一つの利用可能な基、例えばεアミノ、シスチニルチオ、N末端アミノ、を有するポリペプチド、酵素、ペプチド等を含むがこれに限定されず、生理的または薬理的活性を有する物質並びに有機溶媒中で反応を触媒できる物質を含む。所定のタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドは、ヘモグロビン、因子VII、VIII、およびIXを含む血液因子のような血清タンパク質;免疫グロブリン、インターロイキン、すなわちIL1からIL13までのようなサイトカイン等、α、βおよびγインターフェロン、顆粒球コロニー刺激因子を含むコロニー刺激因子、血小板由来成長因子およびホスホリパーゼ活性化タンパク質PLAPを含むがこれに限定されない。一般的な生物学的または治療上興味のある他のタンパク質は、インスリン、レクチンおよびリシンのような植物タンパク質、腫瘍壊死因子および関連タンパク質、例えばTGFαまたはTGFβの形質転換増殖因子および上皮成長因子のような成長因子、ホルモン、ソマトメジン、エリスロポイエチン、色素性ホルモン、視床下部放出因子、抗利尿ホルモン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノゲンアクチベーター等を含む。所定の免疫グロブリンは、IgG、IgE、IgM、IgA、IgDおよびそれらの断片を含む。インターロイキン、インターフェロンおよびコロニー刺激因子のようないくつかのタンパク質は、通常は組換え技術を使用する結果として、非グリコシル化形態でも存在する。非グリコシル化形態も本発明のタンパク質に含まれる。所定の酵素は、炭水化物特異的酵素、タンパク質分解酵素、酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、脱離酵素、イソメラーゼおよびリガーゼを含む。特定の酵素に限定されずに、所定の酵素の例は、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドトキシナーゼ、カタラーゼ、キモトリプシン、リパーゼ、ウリカーゼ、アデノシンジホスファターゼ、チロシナーゼおよびビリルビンオキシダーゼを含む。所定の炭水化物特異的酵素は、グルコースオキシダーゼ、グルコダーゼglucodase、ガラクトシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、グルクロニダーゼguludouronidase等を含む。生体内生物活性を示す生物ポリマーの任意の部分もここに含まれる。これには、アミノ酸配列、核酸DNA、RNA、ペプチド核酸PNA、抗体断片、一本鎖結合タンパク質、例えばここに言及することにより引用される米国特許第4946778号参照、抗体または断片、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体および触媒抗体の融合を含む結合分子が含まれる。タンパク質またはそれらの一部は、組織培養のような当業者に知られる技術、動物供給源からの抽出、または組換えDNA技術を使用することにより調製または単離できる。タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸配列等の形質転換供給源も考慮される。そのような物質は、形質転換動物、すなわちマウス、ブタ、ウシ等から得られ、タンパク質は、ミルク、血液または組織中で発現される。形質転換昆虫およびバキュロウィルス発現系もまた、供給源として考慮される。さらに、突然変異インターフェロンのような、タンパク質の突然変異バージョンもまた、本発明の範囲内である。所定の他のタンパク質は、ブタクサragweed、抗原E、ミツバチ毒、ダニアレルゲン等のようなアレルゲンタンパク質である。上記のものは本発明に適切なタンパク質の例示である。ここで定められるように、特別に説明されていないが利用可能なアミノ基を有するこれらのタンパク質もまた考慮され、本発明の範囲内であることを理解すべきである。本発明の好ましい態様において、アミノまたはヒドロキシル含有化合物は、そのような治療が所望である条件について、動物、例えばヒトを含む哺乳類の治療における医薬または診断用途に適切な生物活性化合物である。上記のリストは、例示であり修飾可能な化合物について制限するものではない。当業者は、他のそのような化合物/組成物を過度の実験をしないで同様に修飾できることが分かるであろう。特別に説明されていないが適切な結合基を有するそれらの生物活性物質もまた考慮され、本発明の範囲内であることを理解すべきである。ここに含めるのに適切なアミノまたはヒドロキシル含有分子の種類についての唯一の限定は、ポリマー複合体と反応し結合できる利用可能な少なくとも一つの一次または二次アミンまたはヒドロキシルが存在すること、およびプロドラッグシステム放出および親化合物の再生後に生物活性の実質的損失がないことである。4.診断用薬D1、D2、BおよびB’が診断用薬である構造式の態様において、適切な薬の限定されないリストには、色素、キレート剤、および同位体標識化合物および緑色蛍光タンパク質GFPのような他の標識化合物が含まれる。FQ成分およびその機能本発明のある態様において、QはL5CY10であり、L5は、L1、L2、L3、およびL4を定める群より選択される二官能性リンカーであり、Y10は、Y19を定めるのと同じ群から選択される。本発明のこの態様において、Q基は、B’基とポリマー複合体の残りとの間のつながりとして作用する。本発明の他の態様において、Qは、標的細胞中に能動輸送される成分、疎水性成分、およびそれらの組合せである。Qは好ましくは一価であるが、Qは必要に応じて、ポリマー複合体へ1つ以上のB’基を結合させるために二価または多価でもよい。能動輸送を達成するために、Qは、アミノ酸またはペプチド残基、糖残基、脂肪酸残基、C618アルキル、置換アリール、ヘテロアリール、C、CまたはCを含んでもよく、ここでR28はH、低アルキル等である。本発明のこの態様は、ポリマー複合体中への組み込みに適切な生物活性物質はそれ自体、ポリマー基質からの加水分解放出後は活性でないがさらに化学的工程/反応を受けた後に活性となる物質/化合物でもよいという原理に広く基づく。この実施の形態と共に、ポリマー系により血流中に供給される治療剤または診断用薬、ペプチド、ポリペプチド等は、所定の標的細胞中に入るまたは能動輸送されるまで不活性のままであり、細胞内化学により、例えば組織または細胞中に存在する酵素または酵素系により、すぐに活性化される。本発明のこの態様の化合物を調製して、Q成分に結合したまま、細胞外液中に活性生物物質ここでB’と指定されるを放出するように、ポリマーに基づく複合体の生体内の加水分解により複合体を切断する。本発明のこの態様における生物活性物質は好ましくは、小分子の治療剤および/または診断用薬であるが、これに限定されない。例えば、一つの可能なQB’の組合せは、ロイシン-ドキサルバシンdoxarubacinであり、別の組合せは、アミノ酸-結合カンプトセシンまたはパクリタキセルであり、治療される組織は腫瘍組織である。本発明がどのように作用するかに関して任意の理論または仮説により拘束されることを意図せず、輸送エンハンサーとして選択される追加の成分に依存して、腫瘍細胞中への生物活性物質の輸送の速度は、保護されたおよび/または輸送が増強された形態で、例えばEPR効果を示す組織の、細胞外組織スペース中に生物活性物質を供給することによると考えられる。さらに必要に応じて、輸送エンハンサーQは、細胞膜輸送系についての既知の基質から選択される。単に実施例として、細胞は特定の栄養分および内分泌因子等を能動輸送することが知られており、そのような栄養分、またはその類似物は、標的細胞中への生物学的に有効な物質の能動輸送を増強するために容易に利用される。これらの栄養分の例には、アミノ酸残基、ペプチド、例えば約2から10残基かそれ以上のサイズの短いペプチド、単糖および脂肪酸、内分泌因子等が含まれる。短いペプチドは、上記のように、例えば、2から約10までかそれ以上のアミノ酸残基のペプチドである。本発明のこの実施の形態において、そのようなペプチド輸送エンハンサーは、疎水性である必要はないが、他の経路により取り込みを増強するおよび/または通常の血流中の成熟前加水分解から結合した小分子物質を保護する作用をすると考えられる。例えば、ペプチド輸送エンハンサー、および同様の分子量範囲の他の輸送エンハンサーは、血漿に基づく加水分解酵素による生物活性物質からの切断を立体的に障害するが、その後、カプテシンcapthesinのような様々のペプチドおよび/またはプロテアーゼにより標的細胞内で切断されると考えられる。ある好ましい態様において、Qは疎水性成分である。疎水性が効果にどのように寄与するかに関して任意の理論または仮説に拘束されることを意図せず、疎水性成分は、細胞外組織スペース中、例えば血漿中に存在する疎水性酵素等の攻撃を抑制することにより、活性生物物質からの輸送エンハンサーの細胞外切断を抑制すると考えられる。したがって、いくつかの好ましい輸送エンハンサーには、上記のように、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンのような疎水性アミノ酸、並びに非天然発生誘導体およびそれらの類似物が含まれる。さらに必要に応じて、輸送エンハンサーは、疎水性有機成分である。単に例として、有機成分は、C618、またはより大きいアルキル、アリールまたはヘテロアリールの置換または非置換である。有機成分輸送エンハンサーは、例えばCおよび/またはCを含む有機官能基を含むことが考えられる。G二官能性ポリマー複合体の合成特定のヘテロ二官能性ポリマー化合物の合成は、実施例に示される。説明のために図1を参照すると、ある好ましい方法は、以下の工程を含む:1基本的なカップリング条件下で、アミン保護され、活性化されたヘテロ二官能性PEGポリマーを、ヘテロ二官能性PEGポリマーと反応させ、第一の中間体を得る工程、2第一の中間体を、NHS活性化エステルのような適切な活性化基と反応させる工程、3工程1の反応を反復して第二の中間体を得る工程、4第二の中間体を脱保護する工程、および5カップリング条件下で、活性化された第一の中間体を、脱保護された第二の中間体と反応させ、高分子量のヘテロ二官能性PEG複合体を完成する工程。本発明によるポリマー複合体を生成するさらなる方法は、適切な条件下で、構造式の化合物を、A1は、活性化基であり;Tは、保護基であり;X1、X3およびX5は、独立して、O、SまたはNR1であり;R44は、ポリアルキレンオキシドであり;R1は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、アラルキル、およびC38置換シクロアルキルから選択され;R4041は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、C38置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、置換C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;nは1または自然数であり;yは0または自然数であり;tは自然数であり、pは0または1である;構造式の化合物と反応させ、X2、X4およびX6は、独立して、O、S、NR1であり;R44’は、ポリアルキレンオキシドであり;R1は、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、アラルキル、およびC38置換シクロアルキルから選択され;R4243は、独立して、水素、C16アルキル、C312分枝アルキル、C38シクロアルキル、C16置換アルキル、C38置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、C16ヘテロアルキル、置換C16ヘテロアルキル、C16アルコキシ、フェノキシおよびC16ヘテロアルコキシからなる群より選択され;n’は自然数であり;y’は0または自然数であり;t’は自然数であり;p’は0または1である;構造式の化合物を形成する工程を含む。この方法はまた、必要に応じてさらに、構造式の化合物を脱保護して、さらなる合成、活性化および/または薬への接合等において使用できる有用な中間体を提供する工程を含んでもよい。あるいは、この方法はさらに、適切な条件下で、構造式の化合物を活性化剤と反応させて、構造式の化合物を生成する工程を含んでもよい。ここでA2は活性化基であり、全ての他の変数は上記のように定められる。さらなる態様において、本発明の方法は、適切な条件下で構造式のアミノ保護基を活性化基に転換して、構造式の化合物を生成する工程を含んでもよい。ここでA3は活性化基である。構造式の化合物が生成されると、適切な条件下で、生物活性成分、診断用薬または末端基と反応させ、構造式の化合物を生成してもよい。ここでD2は生物活性成分、診断用薬または末端基であり、全ての他の変数は上記のように定められる。適切なカップリング剤の限定されないリストには、13ジイソプロピルカルボジイミドDIPC、任意の適切なジアルキルカルボジイミド、2ハロ1アルキルピリジニウムハライドMukaiyama試薬、13エチルカルボジイミドEDC、プロパンホスホン酸環式無水物PPACAおよびフェニルジクロロホスフェート等が含まれ、これらは、SigmaAldrichChemicalのような商業供給源から入手され、または既知の技術を使用して合成される。好ましくは、置換基は、テトラヒドロフランTHF、アセトニトリルCH3CN、塩化メチレンDCM、クロロホルムCH3Cl、ジメチルホルムアミドDMFまたはそれらの混合物のような不活性溶媒中で反応させる。適切な塩基には、ジメチルアミノピリジンDMAP、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、KOH、カリウムtブトキシドおよびNaOH等が含まれる。反応は通常、約0°Cから約22°Cまでの温度室温で行われる。より具体的には、高分子量ポリマー複合体を生成する一つの方法は、以下の工程を含む:1下記の構造式のアミン保護活性化ポリマー残基を、ここで、nは自然数である、下記の構造式のヘテロ二官能性ポリマー残基と反応させ、ここで、nは自然数である、下記の構造式の化合物を生成する工程:2工程1からの中間体を、活性化基、生物活性成分、診断用薬または末端基と反応させて、下記の構造式の化合物を生成する工程:ここで、D2は、活性化基、生物活性成分、診断用薬または末端基であり、例えば下記のalaカンプトテシンである、3アミン部分を脱保護し、マレイミドのような成分と共に活性化し、下記の構造式の化合物を生成する工程:4その後、マレイミド中間体を、モノクローナル抗体CC49TAG72に結合するの一本鎖抗原結合タンパク質または上記のいずれか、以下便宜上全てSCAと示す、の他の断片のような生物活性成分と反応させ、以下の構造式のSCA免疫複合体を産出する工程:ここで、nは自然数である。上記は、カルバメート結合を有するヘテロ二官能性を産出する活性化カーボネートを示す。当業者によって理解されるように、活性化エステルを工程の初めに使用して、アミド結合を生成できる。当業者は、本発明の方法により調製される複合体は、単一または複数のポリマーユニット中で増加し、それにより所望の複合体を達成するために選択される方法に依存して同じまたは無作為のポリマーサブユニットを反復することができるということを理解するであろう。選択される経路に関係なく、ここに記載される合成技術から生じる好ましい化合物のいくつかは、以下のものを含む:ここで、BおよびB’は、脱離基、活性化剤、生物活性物質、診断用薬等であり、SCAは一本鎖抗体である。いくつかの他の化合物は、以下のものを含む:H治療の方法本発明の別の態様は、哺乳類中で様々の病状を治療する方法を提供する。この方法は、そのような治療を必要とする哺乳類に、ここに記載されるようにして調製された本発明のヘテロ二官能性ポリマー組成物の有効な量を投与する工程を含む。この組成物は、特に、腫瘍性疾患の治療、全身腫瘍組織量の減少、腫瘍の転移の防止および哺乳類における腫瘍/新生物の成長の再発の防止に有用である。投与される化合物の量は、そこに含まれる親分子parentmolecule、例えばペプチド、ポリペプチド、タンパク質、酵素、小分子の薬等に依存する。通常、治療方法に使用される化合物の量は、哺乳類中で所望の治療結果を有効に達成する量である。もちろん、様々の化合物の投薬量は、親化合物、生体内加水分解の速度、ポリマーの分子量等にいくらか依存して変化する。当業者は、臨床的経験および治療指示に基づいて選択された化合物の最適な投薬量を特定するであろう。実際の投薬量は、過度の実験をせずに当業者に明らかであろう。本発明の化合物は、哺乳類への投与のための一つ以上の適切な薬剤組成物中に含まれてもよい。薬剤組成物は、当該技術においてよく知られる方法により調製される、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル等の形態でもよい。そのような組成物の投与は、医師の必要性に依存して経口および/または非経口の経路によってもよい。組成物の溶液および/または懸濁液は、例えば、任意の既知の方法により、例えば静脈、筋肉、皮下注射等による、組成物の注射または浸潤のための運搬媒介物として利用してもよい。そのような投与は、体の空間または腔への注入、並びに吸入および/または鼻腔内経路によってもよい。しかしながら、本発明の好ましい態様において、化合物は、それを必要とする哺乳類に非経口で投与される。以下の実施例は、本発明のさらなる認識を提供するために役立つものであり、決して本発明の有効な範囲を制限することを意味するものではない。実施例に記載される数は、図1から9に示されるものと対応する。基本手順全ての反応は、乾燥した窒素またはアルゴン雰囲気下で行った。市販の試薬をさらに精製せずに使用した。全てのPEG化合物を、使用前に、真空下でトルエンからの共沸蒸留により乾燥させた。VarianMercury300NMRスペクトロメーターおよび特に定めがない限り溶媒として重水素化クロロホルムを使用して、NMRスペクトルを得た。テトラメチルシランTMSからダウンフィールドdownfieldの100万ppmごとに分けて化学シフトδを報告した。HPLC方法。1mL分の流速で05トリフルオロ酢酸中3090のアセトニトリルの勾配を使用して、多波長UV検出器と共にZOBAX300SBC8逆相カラム150×46mmまたはPhenomenexJupiter300AC18逆相カラム150×46mmを使用するBeckmanCoulterSystemGoldHPLC器具により、中間体および最終産物の反応混合物および純度を観察した。化合物3.ジクロロメタンDCM、20mL中の10623g、0180mmol、20623g、0180mmol、およびNNジメチルアミノピリジンDMAP、0110g、090mmolの溶液を、12時間室温で攪拌した。溶液を01NHCl2×20mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、イソプロピルアルコールIPA25mLから結晶化して30910g0134mmol743を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17191、15579、15530、6615、6332、4034、3991、3426、2802。化合物4.DCMトリフルオロ酢酸TFA8mL4mL中の30707g0104mmolの溶液を、室温で35時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、生じた固体をエーテルで洗浄して40707g0104mmol~100を産出した。13CNMR678MHz、CDCL3δ17218、15594、6662、6632、6349、4049、3971、3446。化合物5.DCM15mL中の30910g0134mmol、2メカプトチアゾリンmecaptothiazoline2MT00319g0268mmol、およびDMAP00327g0268mmolを、15分間0°Cで冷却し、13ジメチルアミノプロピル3エチルカルボジイミドハイドロクロライドEDC00513g0268mmolを加え、反応溶液を室温まで徐々に温め、12時間攪拌した。PEG誘導体をエチルエーテルで沈殿させ、濾過により採集し、IPA19mLから結晶化し50820g0121mmol900を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ20094、17173、15585、15536、6575、6337、5554、4037、3994、3873、2808。化合物6.DCM15mL中の40668g0098mmolの溶液にDMAPを加え、pHを70に調整した。化合物50677g0098mmolを加え、反応混合物を12時間室温で攪拌した。溶液を01NHCl2×20mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、イソプロピルアルコールIPA25mLから結晶化して61053g0077mmol790を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17197、17072、15587、15536、6683、6624、6339、4040、3999、3874、3650、3434、2808。化合物8.DCM10mL中の60616g0045mmol、20カンプトテシンアラニネートalaninateトリフルオロ酢酸塩00706g0136mmol、およびDMAP0111g0906mmolの溶液を、15分間0°Cで冷却し、EDC0026g0136mmolを加え、反応用液を室温まで温めた。12時間攪拌した後、溶液を01NHCl2×20mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、イソプロピルアルコールIPA13mLから結晶化して80536g0038mmol850を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17109、17083、17063、16648、15682、15599、15182、14846、14601、14498、13077、13012、12940、12806、12777、12758、11972、9558、6697、6677、6357、4974、4756、4055、4014、3890、3670、3641、3148、2822、1758、740。化合物9.DCMTFA8mL4mL中の80536g0038mmolの溶液を、室温で2時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をエチルエーテルで洗浄して90536g0038mmol~100を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17099、17081、17060、16625、15658、15579、15156、14819、14579、14479、13071、12992、12912、12791、12763、12737、11946、9544、6671、6654、6334、4959、4745、4034、3959、3878、3634、3608、3124、1724、720。化合物11.DCM15mL中の90818g0059mmolの溶液にDMAPを加え、pHを70に調整し、10を加え、溶液を0°Cに冷却した。13ジイソプロピルカルボジイミドDIPC00554μL0354mmolを反応に加え、混合物を12時間攪拌しながら室温に温めた。溶液を01NHCl2×20mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、イソプロピルアルコールIPA16mLから結晶化して11065g0046mmol78を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17222、17110、17084、17060、17032、16648、15683、15599、15182、14848、14604、14498、13370、13076、13013、12943、12806、12778、12760、11975、9556、6699、6677、6358、4974、4756、4057、3892、3739、3672、3643、3605、3148、2808、2617、2518、2486、1730、740。化合物12.Aタンパク質CC49の減少:100mMのリン酸ナトリウム中のCC49の28mg279mgmlの溶液に、pH78、37°Cで、2mMDTTと共に2mMEDTAを加え、2時間反応を進行させた。100mMのリン酸ナトリウム、pH65、および2mMEDTAの溶液で平衡化した脱塩カラムによりDTTを除去した。減少したタンパク質の最終濃度は、039mgml~23mg、~60ml、83。Bペグ化:CC49および11を、100mMのリン酸ナトリウムの溶液、pH65、2mMEDTA中110のモル比で混合し、25°Cで2時間反応させた。CCC49PEGCPTの精製:反応溶液のpH値を、HOAcで5に調整し、水~200mLを加えて溶液の導電率を2mS未満に減少し、混合物を5mL分でPorosHSカラム上に充填した。10mMリン酸ナトリウム溶液中1MNaClにより産物を溶出し、タンパク質の画分のピークを組み合わせ、30kCentriplus遠心分離管を使用して濃縮した。濃縮されたサンプルを生理食塩水に対して透析し、活性成分について分析した。ヨード染色によって、産物中に非タンパク質接合PEG種は発見されなかった。化合物13.DCMTFA30mL15mL中の6450g0335mmolの溶液を、室温で35時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、生じた固体をエーテルで洗浄して13430g0320mmol956を産出した。13CNMR678MHz、CDCL3δ17159、15558、6636、6589、6302、4005、3936、3861、3585、3396。化合物14.DCM50mL中の13430g0320mmolの溶液にDMAPを加え、pHを70に調整した。次に、化合物5220g0320mmolを加え、反応混合物を12時間室温で攪拌した。溶液を01NHCl2×30mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、残留物をイソプロピルアルコールIPA25mLから結晶化して14530g0260mmol812を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17177、17060、15575、6673、6612、6328、4029、3986、3866、3641、3419、2799。化合物15.DCMTFA30mL15mL中の14530g0260mmolの溶液を、室温で35時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、生じた固体をエーテルで洗浄して15530g0260mmol~100を産出した。13CNMR678MHz、CDCL3δ17177、17060、15575、6673、6612、6328、4029、3986、3866、3641、3419。化合物18.DCM30mL中のローダミンB塩基100g209mmol、グリシンtブチルエステルハイドロクロライド塩0670g40mmolおよびDMAP0767g80mmolの溶液を15分間0°Cに冷却し、EDC0767g40mmolを加えた。反応混合物を室温に温め、12時間攪拌した。溶液を01NHCl2×30mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、溶出溶媒としてヘキサンおよび酢酸エチル32vvを使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製し、180937g158mmol76を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ16730、16673、15306、15301、14836、13205、13060、12931、12763、12346、12267、10764、10469、9721、8080、6474、4410、4203、2763、1241。化合物19.DCMTFA16mL8mL中の180937g158mmolの溶液を、室温で2時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をエチルエーテルで洗浄して190930g157mmol~100を産出した。13CNMR678MHz、CDCL3δ16930、16783、15272、15215、14414、13309、13028、12883、12364、12341、11232、10389、6469、4847、4149、1144。化合物20.DCM15mL中の190421g0785mmol、2MT0140g118mmolおよびDMAP0287g230mmolの溶液を15分間0°Cに冷却し、EDC0226g118mmolを加え、反応溶液を室温まで徐々に温め、12時間攪拌した。溶液を01NHCl2×20mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、200450g0706mmol90を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ20068、16890、16773、15327、15207、14810、13966、13247、13020、12939、12794、12363、12285、10819、9814、6511、5577、5131、4568、4468、3367、2909、1253。化合物21.DCM中の1527g0134mmolの溶液にDMAPを加え、pHを7に調整した。化合物20171mg0268mmolを加え、反応溶液を12時間室温で攪拌した。反応混合物を01NHClで洗浄し、溶媒を減圧下で蒸発させ、固体をIPAから結晶化させて2123g0112mmol84を産出した。13CNMR678MHz、CDCL3δ20100、17078、16773、15588、15286、14880、13251、12986、12806、12787、12359、12253、10814、9809、6686、6345、5557、4437、4399、4043、3880、3854、3657、3432、2810、1218。化合物22.DCM15mL中の2123g0112mmol、2MT0027g0224mmolおよびDMAP0027g0224mmolの溶液を0°Cに冷却し、EDC0043g0224mmolを加えた。反応溶液を室温まで徐々に温め、12時間攪拌した。PEG誘導体をエチルエーテルで沈殿させ、濾過し、IPAから結晶化させて2220g0097mmol86を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ20000、17170、17064、16796、16768、15579、15286、14824、13238、12986、12784、12772、12355、12238、10412、9747、6680、6337、5551、4491、4037、3872、3844、3650、2808、1226。化合物23.DCM10mL中の2220g0097mmol、35ジメチル4ヒドロキシベンジルアルコール0059g0388mmolおよびDMAP0048g0388mmolの溶液を12時間還流させた。PEG誘導体をエチルエーテルで沈殿させ、濾過紙、IPAから結晶化させて2319g0096mmol99を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17040、16840、16764、16738、15559、15265、14801、13213、12966、12911、12766、12616、12331、12214、10748、10399、9726、6688、6334、4370、4015、3852、3825、3626、3437、1576、1207。化合物24.DCM20mL中の2319g0097mmolおよびNN’ジスクシニミジルカーボネート0199g0775mmolおよびDMF2mLを0°Cに冷却し、ピリジン0063μL、0775mmolを加えた。反応溶液を徐々に室温まで温め、12時間攪拌した。PEG誘導体をエチルエーテルで沈殿させ、濾過し、IPAから結晶化させて24158g0075mmol77を得た。13CNMR678MHz、CDCL3δ17122、17049、16835、16805、16773、16747、15565、15271、14807、13224、12969、12809、12772、12339、12223、10753、10402、9730、6665、6319、4377、4022、3857、3831、3622、3443、2489、1579、1213。化合物25.活性化PEGリンカー24を、005MHEPES中、pH78、モル比301PEGGFPのGFP2mgmlの溶液に加えた。溶液を、N2下で45分間25°Cで攪拌し、pH64のリン酸ナトリウム緩衝液を加えることにより溶液のpHを低くし、最終濃度を50mMにした。BiocadPerfusionChromatographyWorkstationを使用して、Superdex200Hiload1660カラムAmershamPharmaciaBiotechPiscatawayNJ上で遊離PEGを除去した。溶出緩衝液は、10mMリン酸ナトリウム、pH68および150mMNaClから成った。280nmにおける吸光度および蛍光を示した画分を集め、30kNMWL膜MilliporeCorpBedfordMAと共にウルトラフリー15遠心濾過装置を使用して濃縮した。55000cm1M1の減衰係数を使用して、489nmにおけるUVによりPEGGFP25を特定した。化合物27.DCM中の6、26、およびDMAPの溶液にEDCを加え、溶液を12時間室温で攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、固体をIPAから結晶化して27を得た。27の構造を13CNMRにより確かめた。化合物28.DCMTFA中の27の溶液を、12時間室温で攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、固体をIPAから結晶化して28を得た。28の構造を13CNMRにより確かめた。化合物29.DCM中の10、2MT、およびDMAPの溶液を0°Cで15分間冷却し、EDCを加え、反応溶液を徐々に室温まで温めて2時間攪拌した。次に溶液を01NHClで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去して29を得た。29の構造を13CNMRにより確かめた。化合物30.DCM中の28、29およびDMAPの溶液を、室温で12時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、固体をIPAから結晶化させて30を得た。30の構造を13CNMRにより確かめた。化合物31.DCM中の30、7、およびDMAPの溶液を15分間0°Cで冷却し、EDCを加え、反応溶液を室温に温めた。12時間の攪拌後、溶液を01NHClで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、残留物をIPAから結晶化して31を得た。31の構造を13CNMRにより確かめた。