式I:で表される3メチルアミノ1プロパン1オールを調製するための方法であって、aチオフェンを、ルイス酸の存在下で、ハロゲン化βハロプロピオニルまたはハロゲン化アクリロイルと反応させ、その際、同時に、または反応が生じた後であるが反応生成物を単離する前にハロゲン化水素を通過させて、3ハロ1プロパン1オンを得、そしてb工程aで得られたプロパノンを還元し、次いで、適宜に反応生成物を単離することなく、メチルアミンと反応させる、ことを含んでなる、前記方法。工程aに用いられるルイス酸が三塩化アルミニウムである、請求項1に記載の方法。工程aにおける反応が、溶媒であるハロゲン化炭化水素中で実施される、請求項1または2に記載の方法。工程bの還元が、還元剤として、金属水素化物もしくは半金属水素化物を用いて、または遷移金属触媒の存在下で水素を用いて行われる、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。工程bの還元を、3メチルアミノ1プロパン1オールの形成に関して選択性を示すキラル還元剤またはキラル触媒の存在下で行うことを特徴とする、式IS:で表される3メチルアミノ1プロパン1オールを、適当な場合にはそのRエナンチオマーIRとの混合物として、ただし該混合物中には式ISのプロパノールを優勢に存在させて、調製するための請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。工程bに用いられる前記還元剤が、不斉金属水素化物もしくは不斉半金属水素化物、または不斉遷移金属触媒の存在下での水素であるか、あるいは前記還元が、不斉誘導を媒介する化合物の存在下で行われる、請求項5に記載の方法。工程bの還元が、デヒドロゲナーゼの存在下で行われる、請求項5に記載の方法。還元が、デヒドロゲナーゼの存在下、特にアルコールデヒドロゲナーゼの存在下で行われる、請求項7に記載の方法。前記デヒドロゲナーゼが、ゲオトリカムGeotrichum属、ピチアPichia属、カンジダCandida属、ハンセヌラHansenula属またはサッカロマイセスSaccharomyces属の酵母、およびシュードモナスPseudomonas属、ブルクホリデリアBurkholderia属、アグロバクテリウムAgrobacterium属、ロドコッカスRhodococcus属またはラクトバチラスLactobacillus属の細菌に由来するデヒドロゲナーゼのなかから選択される、請求項7または8に記載の方法。前記デヒドロゲナーゼが、ゲオトリカムカンジドウムGeotrichumcandidum、カンジダマグノリアCandidamagnoliaeおよびラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisに由来するデヒドロゲナーゼのなかから選択される、請求項9に記載の方法。N末端領域に、a配列番号1に示される少なくとも10個連続したアミノ酸残基の構成的なアミノ酸配列であって、配列番号1に示されるアミノ酸位置12に対応する位置が好ましくはさらにバリンを表す構成的なアミノ酸配列;またはb配列番号2に示される少なくとも10個連続したアミノ酸残基の構成的なアミノ酸配列;を含むアミノ酸配列を有するアルコールデヒドロゲナーゼ、ならびにそれに由来する機能的に等価であるアルコールデヒドロゲナーゼ。3クロロ1プロパン1オンを3クロロ1プロパン1オールに還元することが可能である、請求項11に記載のアルコールデヒドロゲナーゼ。少なくとも85eeのエナンチオマー純度で前記還元を触媒する、請求項12に記載のアルコールデヒドロゲナーゼ。配列番号3を含む核酸配列によってコードされるか、または配列番号4に示されるアミノ酸配列もしくは少なくとも図3に示される構成的な配列を含んでなり、好ましくはラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisから得ることができる、請求項11~13のいずれか1項に記載のアルコールデヒドロゲナーゼ、ならびにそれに由来する機能的に等価なアルコールデヒドロゲナーゼ。配列番号5を含む核酸配列によってコードされるか、または配列番号6を含むアミノ酸配列を有し、好ましくはカンジダマグノリアCandidamagnoliaeから得ることができる、請求項11~13のいずれか1項に記載のアルコールデヒドロゲナーゼ、ならびにそれに由来する機能的に等価なアルコールデヒドロゲナーゼ。請求項11~15のいずれか1項に記載のデヒドロゲナーゼのコード配列、特に配列番号3および5に示される配列、を含む核酸配列、ならびにそれに由来する誘導体。少なくとも1つの調節核酸配列と機能的に連結された請求項15に記載の核酸配列を含む発現カセット。請求項16に記載の少なくとも1つの発現カセットを含む、組換えベクター。請求項17に記載の少なくとも1つのベクターを用いて形質転換された原核細胞または真核細胞の宿主。3ハロ1プロパン1オールの調製における、請求項11~14のいずれか1項に記載のデヒドロゲナーゼ、またはこのデヒドロゲナーゼを産生する天然もしくは組換え微生物の使用。用いられる前記デヒドロゲナーゼが、請求項11~14のいずれか1項に記載のアルコールデヒドロゲナーゼまたは、このデヒドロゲナーゼを産生する天然もしくは組換え微生物である、請求項7~10のいずれか1項に記載の方法。式ISの3メチルアミノ1プロパン1オールを調製するための方法であって、3ハロ1プロパン1オンをエナンチオ選択的に還元し、この還元をデヒドロゲナーゼの存在下で行う、前記方法。還元において得られる3ハロ1プロパン1オールを、単離することなくメチルアミンと反応させる、請求項21に記載の方法。前記デヒドロゲナーゼが、ゲオトリカムGeotrichum属、ピチアPichia属、カンジダCandida属、ハンセヌラHansenula属またはサッカロマイセスSaccharomyces属の酵母、およびシュードモナスPseudomonas属、ブルクホリデリアBurkholderia属、アグロバクテリウムAgrobacterium属、ロドコッカスRhodococcus属またはラクトバチラスLactobacillus属の細菌に由来するデヒドロゲナーゼのなかから選択される、請求項21または22に記載の方法。前記デヒドロゲナーゼが、ゲオトリカムカンジドウムGeotrichumcandidum、カンジダマグノリアCandidamagnoliaeまたはラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisに由来するデヒドロゲナーゼのなかから選択される、請求項23に記載の方法。前記デヒドロゲナーゼが、請求項11~15のいずれか1項に記載のアルコールデヒドロゲナーゼのなかから選択される、請求項21に記載の方法。従って、本発明の目的は、上記の先行技術の欠点を克服した3メチルアミノ1プロパン1オールIの調製方法を提供することである。さらに、この方法は、全体的に良い収率で化合物Iを供給し、特にまた、エナンチオ選択的にSエナンチオマーISの調製を可能にすべきである。本発明者らは、上記の目的が以下の方法で達成されることを見出した。最初に、チオフェンを、FriedelCrafts反応でルイス酸の存在下に、ハロゲン化βハロプロピオニルまたはハロゲン化アクリロイルと反応させるが、その際、反応生成物を単離する前にハロゲン化水素を通過させる。その後、得られた式III:Hal=ハロゲンで表される3ハロ1プロパン1オンのケト基を還元し、式IV:で表される還元生成物をメチルアミンと反応させる。かくして、本発明は、式I:で表される3メチルアミノ1プロパン1オールの調製方法に関し、この方法では、aチオフェンを、ルイス酸の存在下で、ハロゲン化βハロプロピオニルまたはハロゲン化アクリロイルと反応させ、その際、同時に、または反応が生じた後であるが反応生成物を単離する前にハロゲン化水素を通過させて、3ハロ1プロパン1オンを得、そしてb工程aで得られたプロパノンを還元し、次いで、適宜に反応生成物を単離することなく、メチルアミンと反応させる。本発明による方法は、全体として良い回収率で目的化合物Iを提供する。さらに、このハロプロパノン中間体IIIの調製は、高価な有機スズ試薬の使用を必要としない。取り扱いが困難なハロプロパノールIVを単離する必要もない。さらに、この方法は、3ハロ1プロパン1オールISの形成に関して選択性を示すキラル触媒またはキラル還元剤の存在下にて、ハロプロペノン中間体IIIを還元することによる簡便な方法で、エナンチオ選択的にSエナンチオマーISを調製することを可能とする。本発明において、エナンチオ選択性とは、以下の式:ee=Sエナンチオマー-Rエナンチオマー/×100に従って、公知の方式で算出されるSエナンチオマーのエナンチオマー過剰率eeが、少なくとも50、好ましくは少なくとも80、特に少なくとも90、とりわけ少なくとも95であることを意味する。アシル化の間、または好ましくはアシル化が起こった後であるが反応生成物を単離する前に、ハロゲン化水素を通過させることの結果として、実質的に少しの1チエン2イルプロペノンIIこの化合物は先行技術の方法では副生成物として常に生成し、目的のアシル化生成物IIIの収率を減少させるも、工程aの最終生成物として得られない。1つの電子対空位を有する共有結合の金属ハロゲン化物および半金属ハロゲン化物は、ルイス酸として使用することに適している。一般に、これらは、チタン、スズ、アルミニウム、バナジウム、鉄またはホウ素のハロゲン化合物から選択される。塩化物が好ましいが、アルミニウムの場合には、二塩化モノアルキルアルミニウムおよび塩化ジアルキルアルミニウムも好適である。ホウ素の場合には、フッ化物もまた好ましい。好適なルイス酸の例は、四塩化チタン、三塩化ホウ素、三フッ化ホウ素、四塩化スズ、五塩化バナジウム、三塩化鉄、三塩化アルミニウム、二塩化アルキルアルミニウムおよび塩化ジアルキルアルミニウムである。三塩化アルミニウムを用いるのが特に好ましい。好適なハロゲン化βハロプロピオニルは、塩化3クロロプロピオニルおよび臭化3ブロモプロピオニルまたは塩化3ブロモプロピオニルである。塩化3クロロプロピオニルを用いるのが好ましい。ハロゲン化アクリロイルとしては、塩化アクリロイルを用いるのが好ましい。ハロゲン化βハロプロピオニルは、アシル化剤として工程aに用いるのが好ましい。塩化水素および臭化水素が好適なハロゲン化水素である。ハロゲン化水素を使用するにあたり、そのハロゲン原子が用いるハロゲン化βハロプロピオニルのβハロゲンラジカルに一致しているものが好ましい。従って、塩化3クロロプロピオニルを用いる場合には、塩化水素を用いることが好ましい。FriedelCraftsアシル化反応に通常用いられる溶媒はどれも、工程aの反応で溶媒として用いるのに適している。原則的に、好適な溶媒は、用いる試薬特にルイス酸の反応性を低下させないか、または所定の反応条件下でルイス酸との競合反応に加わらない非プロトン性溶媒である。これら溶媒の例は、それ自体がアシル化される芳香族化合物、チオフェンよりもアシル化することが著しく困難な芳香族炭化水素、例えば、ベンゼン、ニトロベンゼンおよびハロゲン化芳香族炭化水素例:クロロベンゼンおよびジクロロベンゼン、さらに、ハロゲン化脂肪族炭化水素、特にハロアルカン、例えば、クロロメタン、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、クロロエタン、ジクロロエタンおよびトリクロロエタンである。上記溶媒の混合物もまた好適である。ニトロベンゼンまたはハロゲン化炭化水素のような溶媒を使用することも好ましく、この場合にはFriedelCraftsアシル化を本質的に均一に進行させることができる。特に、ハロゲン化芳香族または脂肪族炭化水素を用いるのが好ましく、ハロアルカンが特に好ましいものである。とりわけジクロロエタンまたはクロロベンゼンが用いられる。ルイス酸は、理論上得られるアシル化チオフェンの量に基づいて少なくとも等モル量で用いなければならない。なぜなら、ルイス酸がケトンとの複合体を形成し、この複合体はアシル化の間に形成されて、FriedelCrafts反応の慣用条件下で安定であるからである。ルイス酸は好ましくは、より小さな割合で用いられるアシル化成分1モルに対して、1:1~1:2、好ましくは1:1~1:15、特に1:11~1:15のモル比率で用いられる。チオフェンおよびハロゲン化βハロプロピオニルは、好ましくは1:05~1:2、好ましくは1:07~1:15、特に1:08~1:12のモル比率で用いられる。FriedelCraftsアシル化に関連して一緒に加えられる試薬の順序は、二番目に重要である。従って、例えば、初めにルイス酸を溶媒に導入し、最初にハロゲン化βハロプロピオニルを、次いでチオフェンを加えることができる。あるいはまた、初めにチオフェンとルイス酸を導入し、それらにハロゲン化βハロプロピオニルを加えることも可能である。一般に、ハロゲン化βハロプロピオニルを加える場合には、冷却することが有利である。それはルイス酸と酸ハロゲン化物との反応が一般に、強く発熱するためである。反応温度は、特に溶媒に応じて、選択される。一般には、10°C~40°Cの範囲である。ハロ炭化水素、特にハロアルカンを用いる場合には、反応温度を最高でも50°Cとすることが好適である。それは、そうしなければこの溶媒自体が反応するためである。反応温度は、好ましくは20°C~40°C、特に好ましくは0~30°Cである。原則的に、反応圧は限定的ではない。一般的に、反応は標準圧力下で行うが、しかし、また正の圧力または負の圧力下でも行うことができる。例えば、溶媒が非常に揮発性であるか、または標準条件下で液体でない場合、例えばクロロメタンの場合によくあることだが、正の圧力が用いられる。ハロゲン化水素は好ましくは、アシル化が起こったごに通過させる。先行技術の慣用方法例えば、ガスクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーまたはNMR分光法は、アシル化反応の完了を達成するために用いることができる。ハロゲン化水素の通過にかける時間は、特に、バッチの大きさによって決まり、個々の場合において当業者が決定できる。一般に、ハロゲン化水素を、少なくとも、わずかな1チエン2イルプロペノンも検出することができなくなるまで通過させる。アシル化生成物の後処理のために、反応混合物は一般に、形成されたケトンルイス酸複合体を分解するために、初めに加水分解によって処理する。水または希薄な鉱酸水溶液例えば、希塩酸を加水分解に用いる。さらなる精製および単離は、例えば、Organikum有機化学の実際的な手段VEBDeutscherVerlagderWissenschaften第17版1988第323頁以降に記載されているような、公知の方法を用いて行う。本発明による方法は、工程aにおいて、高い収率で3ハロ1プロパノンIIIを生じる。アシル化反応の過程で形成されうる1チエン2イルプロペノンIIは実質的に完全に3ハロ1プロパノンIIIに変換され、その結果反応混合物は、3ハロ1プロパノンIIIの収量に基づいて、せいぜい1モル、特に好ましくは、せいぜい05モルのプロペノンIIしか含まないようになる。工程bにおけるプロパノンIIIの還元は、例えば、金属水素化物もしくは半金属水素化物を用いるか、または好適な遷移金属触媒の存在下で水素を用いることによって、達成される。好適な金属水素化物または半金属水素化物はいずれも中性で、それぞれ金属および半金属の複合水素化物である。ケトンのアルコールへの還元に有用であることが判明している金属水素化物または半金属水素化物を用いると有利である。上記水素化物は好ましくは、ホウ素またはアルミニウムの水素化物である。好適な中性の水素化物の例は、ボラン、アラン、シラン、モノボランおよびジアルキルボラン、例えば、ビスボランまたは9ボラビシクロ331ノナン、モノアルキルアルミニウムおよびジアルキルアルミニウム化合物、例えば、ジイソブチルアルミニウム水素化物、ならびにトリアルキルシラン、例えば、トリメチルシランまたはトリエチルシランである。好適な複合水素化物の例は、複合ホウ素水素化物、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウムもしくは水素化ホウ素カルシウムCaBH42、複合アルミニウム水素化物、例えば、水素化リチウムアルミニウム、複合アルキルホウ素水素化物もしくはアルコキシホウ素水素化物、例えば、水素化トリエチルホウ素リチウムもしくは水素化トリイソプロポキシホウ素カリウム23H、または複合アルキルアルミニウム水素化物もしくはアルコキシアルミニウム水素化物、例えば、水素化ジエチルアルミニウムナトリウム、水素化ビスアルミニウムリチウム、水素化ビスアルミニウムナトリウムもしくは水素化トリスアルミニウムリチウム33Hなどである。金属水素化物または半金属水素化物を用いた還元に好適な溶媒は、特に、用いる還元剤に左右されるが、反応条件下で還元される基をもともと含むべきではない。従って、上記の水素化物を用いた還元は、好ましくは、所定の反応条件下で還元され得る官能基を有しない非プロトン性溶媒中で行う。これらの溶媒の例は、芳香族ならびに脂肪族炭化水素、例えば、C5C8アルカンおよびC5C8シクロアルカン例:ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロペンタン、シクロヘキサンおよびシクロオクタン、芳香族化合物例:ベンゼン、トルエン、ニトロベンゼン、クロロベンゼンおよびジクロロベンゼン、さらに、4個~8個の炭素原子を有する開放鎖および環状のエーテル例:ジエチルエーテル、メチルtertブチルエーテル、テトラヒドロフランまたはジオキサン、さらにまた、塩素化炭化水素、特にハロアルカン例:クロロメタン、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタンまたはトリクロロエタンである。上記の溶媒の混合物も好適である。上記の芳香族炭化水素、エーテルまたはハロ炭化水素を用いることが好ましい。上記のいくつかの複合水素化物、特に反応性の低い水素化物例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用いた還元はまた、プロトン性溶媒C1C3アルコールなど、例えば、メタノール、エタノール、プロパノールもしくはイソプロパノールの存在下で、または水溶液中でさえも行うことができる。この場合に、少なくとも1種の上記の非プロトン性溶媒と少なくとも1種のアルコールとからなる混合溶媒を用いることが好ましい。水素化物は、塩基性プロトン性溶液中でより安定であるために、プロトン性溶媒を用いる場合には、好適な塩基の存在下で反応を行うことが好ましい。好適な塩基の例は、水酸化アルカリ金属、例えば、水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、または炭酸アルカリ金属、例えば、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウムである。水酸化ナトリウムを用いることが好ましい。多数の上記の金属水素化物または半金属水素化物を用いた場合に、還元はしばしば発熱を伴って進行するので、結果として反応熱を取り除きながら、すなわち冷却しながら、反応を行うことが好適である。この反応温度は、好ましくは50~40°C、特に好ましくは30~30°C、特に20~20°Cである。この還元は、例えば、Organikum有機化学の実際的な手段VEBDeutscherVerlagderWissenschaften第17版1988第492頁以降に記載されているような、先行技術の慣用方法を用いて実施できる。これらの方法においては、概してプロパノンIIIを初めに導入し、そして還元剤を少しずつ加える。しかし、プロパノンIIIと還元剤を少しずつ同時に加えることもできる。プロパノンIIIはまた、例えば、アルミニウムアルコキシド用いて還元することもできる。アルミニウムアルコキシドを用いたケトンの還元は、慣習的にメーヤワインポンドルフヴァーレイ還元とも称される。この還元において、ケトンは対応するアルコールに変換され、そしてアルコキシドは対応するアルデヒドまたはケトンに同時に酸化される。この反応は、例えば、Organikum有機化学の実際的な手段VEBDeutscherVerlagderWissenschaften第17版1988第486頁以降に記載されているような、公知の方法を用いて実施できる。さらに、プロパノンIIIはまた、接触水素化によって、すなわち、好適な遷移金属触媒の存在下にて、水素とプロパノンIIIとを反応させることによっても還元できる。この好適な遷移金属には、VIII族、VI族およびI族の金属、特に白金、ルテニウム、銅、クロムおよびニッケルが含まれる。この触媒は当然のことながら、これらがチオフェン基の水素化を触媒しないように選択すべきである。触媒は不均一系触媒または均一系触媒のいずれかとして用いられる。好適な方法は、原則的に公知であり、例えば、TransitionMetalsinOrganicSynthesisMBellerCBolmWileyVCHWeinheim1998第2巻第1頁以降または第81頁以降に記載されている。工程bにおける還元は、好ましくは、金属水素化物または半金属水素化物を用いて、特に好ましくは上記の複合金属水素化物または半金属水素化物の1種を用いて行われる。特に水素化ホウ素ナトリウムが用いられる。上記の非不斉還元剤を用いる場合には、プロキラルな3ハロ1プロパン1オンIIIが主に、ラセミ体アルコールIVに還元される。これに対応して、メチルアミンを用いた後続の反応は、ラセミ体の3メチルアミノ1プロパン1オールIをもたらす。好ましい実施形態においては、本発明による方法を用いて、式IS:で表される3メチルアミノ1プロパン1オールを調製するか、またはこの化合物と共にそのRエナンチオマーIRを含む混合物エナンチオマーISが優勢であるを調製する。工程bの還元は、3メチルアミノ1プロパン1オールISの形成に関して選択性を示すキラル還元剤またはキラル触媒の存在下で行われる。この方法を行う場合に、プロキラルなハロプロパノンIIIは、工程bにおいて、式IVS:で表されるSハロプロパノールまたはSおよびRエナンチオマーの混合物Sエナンチオマーが優勢であるにエナンチオ選択的に還元される。この目的のために、不斉金属水素化物または不斉半金属水素化物を、例えば、工程bの還元剤として用いるか、そうでなければこの還元を、不斉誘導を媒介する化合物の存在下で行う。不斉金属水素化物または不斉半金属水素化物は好ましくは、不斉アルミニウム水素化物、不斉ホウ素水素化物または不斉ケイ素水素化物である。好適な不斉ホウ素水素化物は、例えば、EJCoreyCJHelalAngewChem199811020922118またはMMMidlandLAMorellMethodenOrgChem有機化学の方法HoubenWeyl第4版volumeE21dpp408240981995に記載されている。好適な不斉ケイ素水素化物は、特に、HBrunnerMethodenOrgChem有機化学の方法HoubenWeyl第4版volumeE21dpp407440811995これはその全体が本明細書中に参考として援用されるに記載されている。本発明において、不斉誘導を媒介する化合物とは、実際の還元剤に影響を及ぼすことによって例えば、結合を形成するか、もしくは還元剤と複合体を形成することによって、または水素原子もしくは別の還元構成成分を還元剤から取ることによって、プロパノンIIIの還元をエナンチオ選択的にする化合物として理解される。一般に、不斉誘導を媒介する化合物は、それら自体還元性ではない。一方で、これらの化合物は、不斉水素化触媒を含む。不斉水素化において、水素は、不斉触媒が生じうるエナンチオマーの1つのエナンチオ選択的な形成を促す間に、実際の還元剤として作用する。水素化は不均一相または均一相のいずれかで行うことができる。不均一相での不斉水素化の好適な触媒は、例えば、ABaikerHUBlaserらによってHandbookofHeterogeneousCatalysis第5巻WileyVCHWeinheim199724222436これはその全体が本明細書中に参考として援用されるに記載されている。しかし、均一相での水素化の触媒は、非常に重要である。VIII族金属例えば、白金またはルテニウム、特にルテニウムと少なくとも1つのリン含有配位子とを含む触媒が、特に好適である。好適な触媒は、例えば、RNoyoriTOhkumaAngewChem20011134075これはその全体が本明細書中に参考として援用されるに記載されている。ルテニウムジアミン複合体ルテニウムが二座配位キラルジホスファン配位子にさらに結合しているが特に好適である。ハロプロパノンIIIをSハロプロパノールIVSに還元するのに好適であるジホスファン配位子の例は、以下の式AのBINAP、式BのDIOPおよび式CのCHIRAPHOSである:Ar=フェニルPh=フェニル4メチルフェニル35ジメチルフェニルさらに、特に好ましい触媒は、ジアミン配位子を含む。好適なジアミン配位子の例は、それらのエナンチオマー形態における12エチレンジアミン、12ジフェニル12エチレンジアミンおよび12シクロヘキサンジアミンである。概して、水素化は、上記の条件下にて実施される。以下の式D:式中、RはC1C4アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、nブチル、secブチル、イソブチルまたはtertブチルであり、特にメチルであるで表されるオキサザボリリジンoxazaborylidineは、特に好ましい不斉誘導媒介化合物である。この試薬を用いて、高度のエナンチオ選択性でプロキラルケトンを第二級アルコールに変換することができる。ボラン例えば、BH3、ジアルキルボラン、ジアルコキシボランまたはジアリールオキシボランが実際の還元剤として用いられる。クロロプロパノンIII1とオキサザボリリジンDおよびBH3とを反応させてSクロロプロパノールIV1Sを得る反応は、WJWheelerおよびFKuoらによってJournalofLabelledCompoundsandRadiopharmaceuticalsvolumeXXXVINo3pp213223に既に記載されている。還元において、概して、オキサザボリリジンは触媒量で用いられる。ボランは、ハロプロパノンIIIに基づいて、少なくとも等モル量で用いられるが、過剰量で用いることが好ましい。この反応は一般に、好適な溶媒中で実施する。好適な溶媒とは、所定の反応条件下にて還元されうる基を有しない非プロトン性溶媒である。これらの溶媒には、特に上記のハロアルカン、芳香族化合物および環状または非環状エーテルが含まれる。エーテルを用いるのが好ましく、テトラヒドロフランを用いるのが特に好ましい。反応温度は、好ましくは80~20°C、特に好ましくは30~10°Cである。この反応は概して、初めにオキサザボリリジンを溶媒に導入し、最初にボラン、次いでハロプロパノンIII、またはこれとは逆に、最初にハロプロパノンIII、次いでボランを所望の反応温度で加えることによって行われる。ただし、前者の添加手順が好ましい。反応の継続時間は、特に、バッチの大きさによって決まり、個々の場合において当業者によって決定されうる。意外にも、プロパノンIIIからSハロプロパノールIVSへのエナンチオ選択的な還元は、酵素によって触媒される場合によく進行し、特にデヒドロゲナーゼが存在する場合に都合よく行われることが見出された。従って、本発明による方法の別の好ましい実施形態では、デヒドロゲナーゼが還元剤として用いられる。本発明による方法で還元が完了した後、用いた還元方法に応じて、触媒または過剰量の還元剤を、適宜に、不活性化させるか、または除去する。金属水素化物または半金属水素化物を用いた場合には、この処理は一般的に加水分解例えば、水性またはアルコール性溶液を用いるによって行う。均一な水素化触媒を用いた場合、またはアルミニウムアルコキシドで還元した場合には、加水分解後処理もしばしば用いられる。還元が不均一相での接触水素化の形態で行われた場合、または還元剤として酵素を用いて行われた場合には、触媒または酵素を物理的な分離例えば、デカントまたは濾過によって取り除くことができる。しかし、均一還元系が用いられた場合、特に、金属水素化物または半金属水素化物を用いて還元を行った場合には、初めに不活性化しないことが好ましい。還元後に得られたハロプロパノールIVを単離することなく、その代わりにメチルアミンと直接的に反応させて、3メチルアミノ1プロパン1オールIを得ることが有利であることが分かった。このために、反応混合物適宜に不活性化してもよいし、不均一還元系から分離してもよいをメチルアミンで処理し、好ましくは、昇温例えば、30~80°C、特に50~70°Cにて反応させる。メチルアミンは気体または水溶液のいずれかとして用いることができるが、水溶液としての使用が好ましい。メチルアミンは、用いるハロプロパノンIIIの量に基づいて、好ましくは1~100モル当量、特に好ましくは5~10モル当量で用いる。この反応は1~250バールの圧力下、特に系自体が発生する固有の圧力下にて行うことが好ましい。メチルアミンとの反応が完了した後、反応混合物を慣用方法で後処理する。そのために、触媒または還元剤を既に述べたように不活性化して分離しこのような処理がメチルアミンを加える前に行われなかった場合、その後溶媒を除去し、純粋なメチルアミノプロパノールIを、例えば、結晶化、温浸、抽出またはクロマトグラフィーによって残渣から単離する。本発明による方法を用いて、良い収率で3メチルアミノ1プロパン1オールIを得ることが可能である。特に、高価で、取り扱いが困難な試薬または溶媒を本方法の工程aにおいて必要とせず、またハロプロパノンIIIが非常に高い収率で生成される。工程bでは、不安定なハロプロパノールIVの単離、ならびにそれに伴う収率の低下および/またはハロプロパノールIVの困難な取り扱いが、回避される。さらに、本発明による方法を用いて、メチルアミノプロパノールISのSエナンチオマーを選択的に得ることができる。このSエナンチオマーは、工程bにおける還元がキラル還元剤を用いて行われる場合に、デュロキセチンへのさらなる変換のために必須である。さらに、本発明はまた、3ハロ1プロパン1オンIIIをエナンチオ選択的に還元することを含む、式ISの3メチルアミノ1プロパン1オールの調製方法に関し、前記方法では、この還元をデヒドロゲナーゼの存在下にて行うことを含む。この方法の好ましい実施形態では、これに関連して得られる3ハロ1プロパン1オールIVSを、単離することなく、メチルアミンと反応させる。好ましいデヒドロゲナーゼに関して、さらにこの方法の実施に関しては、以下の観察を特に参照されたい。生化学的な実施形態:好適なデヒドロゲナーゼは、特に、デヒドロゲナーゼ、特にアルコールデヒドロゲナーゼである。これらは、ハロプロパノンIIIのSハロプロパノールIVSへの選択的な還元をもたらす。このデヒドロゲナーゼは好ましくは、微生物、特に好ましくは細菌または真菌特に酵母から得られる。これは、それぞれ菌株コレクションに寄託されたものか、または土壌試料、バイオマス試料などの天然供給源の分離株から得られる。デヒドロゲナーゼは特に酵母または乳酸菌に由来するものである。デヒドロゲナーゼは、精製されたもしくは部分的に精製された形態、または微生物自体の形態で用いることができる。デヒドロゲナーゼを微生物から単離および精製するための方法は、当業者に周知である例えば、KDrauzおよびHWaldmannのEnzymeCatalysisinOrganicSynthesis2002VolIII9911032WileyVCHWeinheimにおけるKNakamuraTMatsudaらによるReductionofKetons。デヒドロゲナーゼを産生させる組換え法も同じように知られている例えば、WHummelKAbokitseKDrauzCRollmannおよびHGroegerらによるAdvSynthCatal2003345Nos12pp153159。好適な細菌の例は、シュードモナスPseudomonas属、ブルクホリデリアBurkholderia属、アグロバクテリウムAgrobacterium属、ロドコッカスRhodococcus属、ラクトバチラスLactobacillus属、またはラクトコッカスLactococcus属のものである。好適な酵母の例は、ゲオトリカムGeotrichum属、ピチアPichia属、カンジダCandida属、ハンセヌラHansenula属、またはサッカロマイセスSaccharomyces属のものである。酵母および乳酸菌に由来するデヒドロゲナーゼを用いることが特に好ましい。これらのデヒドロゲナーゼのうち、ゲオトリカムGeotrichum属もしくはカンジダCandida属の酵母から得られるか、またはラクトバチラスLactobacillus属、もしくはラクトコッカスLactococcus属の乳酸菌から得られるデヒドロゲナーゼが好ましい。ラクトバチラスLactobacillus属の菌種の例は、Lブレビスbrevis、Lケフィアkefir、Lプランタルムplantarum、Lカセイcasei、Lアシドフィルスacidophilus、LデルブリュッキィdelbrueckiiおよびLサンフランシスコsanfranciscoである。カンジダCandida属の菌種の例は、Cマグノリアmagnoliae、Cルゴサrugosa、Cユチリスutilis、Cボイジニィboidinii、CパラプシローシスparapsilosisおよびCアンタルティカantarcticaである。ゲオトリカムGeotrichum属の菌種の例は、Gカンディダムcandidum、GクラバタムclavatumおよびGフェルメンタンスfermentansである。カンジダマグノリアCandidamagnoliae、ゲオトリカムカンジドウムGeotrichumcandidumまたはラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisに由来するデヒドロゲナーゼを用いることが特に好ましい。デヒドロゲナーゼによる還元は一般に、好適な補酵素の存在下にて行われる。NADHおよび/またはNADPHは一般に、ケトンを還元するための補酵素として用いられる。さらに、デヒドロゲナーゼを細胞系もともと補因子を含むか、細胞系に選択的レドックス媒介物が加えられているとして用いることが可能である。デヒドロゲナーゼによる還元はまた、一般に好適な補基質の存在下にて行われる。この補基質は概して、還元過程の間に酸化される補酵素の還元剤として作用し、その結果この補酵素を再生させる。好適な補基質の例は、糖、特にヘキソース、例えば、グルコース、マンノースまたはフルクトース、および/または被酸化性アルコール、特にエタノール、プロパノール、またはイソプロパノールであり、またギ酸もそうである。第二のデヒドロゲナーゼ例えば、グルコースを補基質として用いる場合には、グルコースデヒドロゲナーゼが補基質を酸化する目的で、またこれに関連して補酵素を再生させるために加えられる。このデヒドロゲナーゼは、遊離もしくは固定化酵素として、または遊離もしくは固定化細胞の形態で用いることができる。それは、デヒドロゲナーゼ株において別々にまたは共発現によって調製することができる。本発明により用いられるデヒドロゲナーゼは、遊離または固定化形態で用いることができる。固定化酵素とは、不活性な支持体に固定された酵素を意味するものとして理解される。好適な支持体材料およびそれらに固定される酵素は、EPA1149849、EPA1069183およびDEOS100193773、またそれらに引用されている参考文献から公知である。これに関して、これら文献における開示内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される。好適な支持体材料としては、例えば、粘土、粘土鉱物例:カオリナイト、ケイ藻土、パーライト、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、セルロース粉末、アニオン交換材料、合成ポリマー例:ポリスチレン、アクリル樹脂、フェノールホルムアルデヒド樹脂、ポリウレタン、およびポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィンが挙げられる。この支持体材料は支持体に担持された酵素を調製するために用いられ、一般に微細な粒子状をしており、多孔形態が好ましい。支持体材料の粒径は一般に、5mmを超えず、特に2mmを超えない。類似の方法において、全細胞体触媒としてデヒドロゲナーゼを用いる場合には、遊離形態または固定化形態を選択することが可能である。支持体材料の例は、アルギン酸Caおよびカラギーナンである。酵素および細胞はグルタルアルデヒドで直接的に架橋することもできる。対応するおよびさらなる固定化方法は、例えば、KDrauzおよびHWaldmannらのEnzymeCatalysisinOrganicSynthesis2002VolIII9911032WileyVCHWeinheimにおける、JLalondeおよびAMargolinらによるImmobilizationofEnzymesに記載されている。還元は、水性または非水性の反応媒体中または2相系もしくはエマルションにて行うことができる。水性反応媒体は、好ましくは緩衝溶液であり、概して、pH5~8、好ましくはpH6~8である。水以外に、水性溶媒は少なくとも1つのアルコール例えば、エタノールまたはイソプロパノールをさらに含むことができる。非水性反応媒体とは、反応媒体の全重量に基づいて、1重量未満、好ましくは05重量未満の水を含む反応媒体を意味するものとして理解される。この反応は好ましくは、有機溶媒中で行われる。好適な溶媒の例は、脂肪族炭化水素、好ましくは5個~8個の炭素原子有する脂肪族炭化水素例:ペンタン、シクロペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタンもしくはシクロオクタン、ハロゲン化脂肪族炭化水素、好ましくは1個~2個の炭素原子を有するハロゲン化脂肪族炭化水素例:ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタンもしくはテトラクロロエタン、芳香族炭化水素例:ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロベンゼンまたはジクロロベンゼン、脂肪族非環状エーテルおよび脂肪族環状エーテル、好ましくは4個~8個の炭素原子を有するもの例:ジエチルエーテル、メチルtertブチルエーテル、エチルtertブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテルもしくはテトラヒドロフラン、またはエステル例:酢酸エチルもしくは酢酸nブチル、またはケトン例:メチルイソブチルケトンもしくはジオキサン、あるいはそれらの混合物である。上記のエーテル、特にテトラヒドロフランを用いることが特に好ましい。例えば、デヒドロゲナーゼによる還元は、水性有機反応溶媒、特に水性反応溶媒中にて行われる。ハロプロパノンIIIは、好ましくは、酵素による還元において、01g/l~500g/l、特に好ましくは、1g/l~50g/lの濃度で用いられ、その後、連続的にまたは断続的に供給することができる。一般に、酵素による還元は、用いるデヒドロゲナーゼが不活性化される温度よりも低い反応温度、好ましくは少なくとも10°Cである反応温度で行われる。例えば0~100°C、好ましくは15~60°C、特に20~40°Cの範囲、例えば約30°Cとすることが特に好ましい。反応を実施するために、例えば、初めに、ハロプロパノンIIIをデヒドロゲナーゼ、溶媒、適宜に補酵素、適宜に補酵素を再生するための補助デヒドロゲナーゼ、および/または他の補基質と一緒に導入し、その混合物を、例えば撹拌または振とうによって、混合することが可能である。しかし、また、反応器例えば、カラムにデヒドロゲナーゼを固定化し、ハロプロパノンIIIと適宜に補酵素および/または補基質を含有する混合物をこの反応器に通過させることも可能である。このために、目的の変換が達成されるまで、循環方式にて混合物を反応器に通すことが可能である。これに関連して、ハロプロパノンIIIのケト基はOH基に還元され、それに伴ってハロプロパノールIVSのSエナンチオマーが本質的に選択的に形成される。一般に、還元は、混合物中に存在するハロプロパノンIIIに基づいて、変換率が少なくとも70、特に好ましくは少なくとも85、特に少なくとも95に達するまで行われる。これに関連して、反応の進行すなわち、ケトンの連続的な還元はガスクロマトグラフィーのような慣用方法によって追跡することができる。本発明による方法に特に好ましく用いられるデヒドロゲナーゼは、以下の特性の少なくとも1つを有するアルコールデヒドロゲナーゼである:N末端領域に、a配列番号1に示される、少なくとも5、6、7または8個、好ましくは少なくとも10個例えば、10、11、12、13、14または15個連続したアミノ酸残基の構成的なアミノ酸配列を含み、配列番号1に示されるアミノ酸位置12に対応する位置が、好ましくはさらにバリンを表す;またはb配列番号2に示される、少なくとも5、6、7または8個、好ましくは少なくとも10個例えば、10、11、12、13、14または15個連続したアミノ酸残基の構成的なアミノ酸配列を含む、アミノ酸配列を有するアルコールデヒドロゲナーゼおよびそれらの機能的等価物。3クロロ1プロパン1オンを3クロロ1プロパン1オールに還元することが可能である、アルコールデヒドロゲナーゼ。少なくとも85eeのエナンチオマー純度にて還元を触媒する、アルコールデヒドロゲナーゼ。配列番号3を含む核酸配列によってコードされるか、または配列番号4に示されるアミノ酸配列もしくは少なくとも図3に示される構成的な配列を含み、好ましくは、ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisから得ることができるアルコールデヒドロゲナーゼ、およびそれらに由来する機能的に等価なアルコールデヒドロゲナーゼ。配列番号5を含む核酸によってコードされるか、または配列番号6を含むアミノ酸配列を有し、好ましくは、カンジダマグノリアCandidamagnoliaeから得ることができるアルコールデヒドロゲナーゼ、およびそれらに由来する機能的に等価であるアルコールデヒドロゲナーゼ。本発明はまた、上に列挙した特性の少なくとも1つを有する3クロロ1プロパン1オールデヒドロゲナーゼに関する。デヒドロゲナーゼが安定である温度範囲は、好ましくは10~80°Cである。その活性が最適である温度は、好ましくは20~60°C、特に好ましくは25~40°Cの範囲である。安定であるpH範囲は好ましくはpH4~10である。脱水素に最適なpHは好ましくはpH5~8の範囲である。さらに、本発明によるデヒドロゲナーゼは好ましくは、NADまたはNADPの存在下にて、3クロロ1プロパン1オールを脱水素して3クロロ1プロパン1オンを生成することが可能なものである。デヒドロゲナーゼの分子量は30±2キロダルトンの範囲にあることが好ましい。本発明はまた、本発明によるデヒドロゲナーゼのコード配列または構成的なコード配列を含む核酸配列に関する。この非限定的な例は、配列番号3または配列番号6に示される配列である。本発明はさらに、少なくとも1つの調節核酸配列と機能的に連結された、本発明による核酸配列を含む発現カセットに関する。本発明はさらに、本発明による発現カセットを少なくとも1つ含む組換えベクターに関する。さらに、本発明は、本発明によるベクターを少なくとも1つ用いて形質転換した原核細胞または真核細胞の宿主に関する。最後に、本発明は、3ハロ1プロパン1オールを調製するための、特にデュロキセチンを調製するための、本発明によるデヒドロゲナーゼまたはこのデヒドロゲナーゼを産生する微生物の使用に関する。本発明によるデヒドロゲナーゼのさらなる改変:本発明はまた、3クロロ1プロパン1オールデヒドロゲナーゼ活性を有する明確に開示された酵素の機能的等価物および本発明の方法におけるそれら等価物の使用を含む。本発明に関して、明確に開示された酵素の機能的等価物または類似体は、これらの酵素とは異なるが、依然として所望の生物学的活性例えば、基質特異性を保有するポリペプチドである。従って、機能的等価物とは、例えば、3クロロ1プロパン1オンを対応するSアルコールに還元し、以下に列挙される配列番号1、2、4もしくは6または図3に示されるアミノ酸配列の1つを含む酵素の少なくとも20、好ましくは50、さらに好ましくは75、特に好ましくは90の活性を有する酵素を意味するものとして理解される。機能的等価物はまた、好ましくはpH4~10の間で安定であり、有利には、最適pHをpH5~8に、最適温度を20°C~80°Cの範囲に有する。本発明によると、機能的等価物とはまた、特に、上記のアミノ酸配列の少なくとも1つの配列位置に、特に挙げたアミノ酸以外のアミノ酸を有するが、それでも上記の生物学的活性の1つを保有する変異体を意味するものとしても理解される。したがって、機能的等価物とは、1個または複数のアミノ酸付加、アミノ酸置換、アミノ酸欠失および/またはアミノ酸転移によって得ることができる変異体を含む。かかる変化は、本発明に従う特性プロファイルを有する変異体をもたらす限り、どのような配列位置にも出現しうる。また、機能的等価物が存在するのは、特に、変異型および非変異型のポリペプチドの反応パターンが質的に一致する場合、すなわち、同一の基質が例えば異なる速度で変換される場合である。好適なアミノ酸置換の例を以下の表に列挙する:上記趣旨での機能的等価物とはまた、記載したポリペプチドの前駆体ならびにそのポリペプチドの機能的誘導体および塩でもある。これに関連して、前駆体とは、ポリペプチドの天然または合成の前駆体であり、この前駆体は所望の生物学的活性を保持しても保持しなくてもよい。語句塩とは、本発明によるタンパク質分子のカルボキシル基の塩とアミノ基の酸付加塩との両方を意味するものとして理解される。カルボキシル基の塩は、それ自体公知の方法で調製することができ、無機塩例えば、ナトリウム、カルシウム、アンモニウム、鉄および亜鉛の塩、ならびに有機塩基例えば、トリエタノールアミン、アルギニン、リジン、ピペリジンなどのアミンとの塩を含む。酸付加塩、例えば鉱酸例:塩酸または硫酸との塩ならびに有機酸例:酢酸およびシュウ酸との塩などは、本発明の一部を構成する。本発明によるポリペプチドの機能的誘導体は同様に、公知の手法を用いて、機能的アミノ酸の側鎖基またはそれらのN末端もしくはC末端に、調製することができる。これらの誘導体は、例えば、カルボン酸基の脂肪族エステル;カルボン酸基のアミドこのアミドは、アンモニアまたは第一級もしくは第二級アミンと反応させることによって得ることができる;遊離アミノ基のNアシル誘導体この誘導体は、アシル基と反応させることによって調製される;または、遊離ヒドロキシル基のOアシル誘導体この誘導体はアシル基と反応させることによって調製されるを含む。タンパク質のグリコシル化が起こると考えられる場合、本発明による機能的等価物とは、上記のタイプのタンパク質の脱グリコシル化またはグリコシル化形態、ならびにグリコシル化パターンを変えることによって得られる改変形態を含む。機能的等価物とは当然に、他の生物体および天然の変異体から得ることができるポリペプチドもまた含む。例えば、相同配列領域の部分は配列比較によって確立することができ、また同等の酵素は本発明の具体的なのガイドラインを用いて同定することができる。機能的等価物とはまた、本発明によるポリペプチドの断片好ましくは、個々のドメインまたは配列モチーフも含み、かかる断片は、例えば、所望の生物学的機能を有する。さらに、機能的等価物とは、上記のポリペプチド配列またはそれらに由来する機能的等価物の1つと、それらと機能的に異なりかつN末端またはC末端で機能的に連結されている少なくとも1つのさらなる異種配列と、を含む融合タンパク質である。このような異種配列の非限定的な例は、シグナルぺプチドまたは酵素である。さらに本発明に含まれる機能的等価物とは、具体的に開示されたタンパク質の相同体である。これらの相同体は、ProcNatlAcadSci85198824442448に記載されるPearsonおよびLipmanのアルゴリズムを用いて算出した場合に、具体的に開示されたアミノ酸配列の1つに対して少なくとも60、好ましくは少なくとも75、特に少なくとも85、例えば、90、95、97または99の相同性を有する。本発明による相同ポリペプチドの相同性パーセントとは、特に、本明細書中に具体的に記載される1つのアミノ酸配列の全長にわたるアミノ酸残基の同一性パーセントを意味する。本発明によるタンパク質またはポリペプチドの相同体は、変異誘発によって例えば、タンパク質の点突然変異またはトランケーションによって作製することが可能である。本発明のタンパク質の相同体は、トランケーション変異体のような変異体のコンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって同定することができる。例えば、タンパク質変異体の多様なライブラリーは、核酸レベルでのコンビナトリアル変異誘発によって、例えば合成オリゴヌクレオチドの混合物を酵素的にライゲートすることによって、作製することができる。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜在的相同体のライブラリーを調製するために用いることができる方法は多数存在する。縮重遺伝子配列を自動DNA合成装置で化学的に合成して、この合成遺伝子を好適な発現ベクターにライゲートすることができる。縮重遺伝子セットを用いると、所望の潜在的タンパク質配列のセットをコードするすべての配列を混合物として調製することが可能となる。縮重オリゴヌクレオチドを合成するための方法は、当業者に公知であるTetrahedron39:3;ItakuraらAnnuRevBiochem53:323;ItakuraらScience198:1056;IkeらNucleicAcidsRes11:477。点突然変異またはトランケーションによって作製されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするための手法、および所定の性質を有する遺伝子産物についてcDNAライブラリーをスクリーニングするための手法は、先行技術において公知である。これらの手法は、本発明の相同体のコンビナトリアル変異誘発によって生じた遺伝子ライブラリーを迅速にスクリーニングするために適合させることができる。ハイスループット分析にかけられる大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングするために最も頻繁に用いられる手法は、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクターにクローニングし、得られたベクターライブラリーを用いて好適な細胞を形質転換し、所望の活性の検出が遺伝子その産物が検出されたをコードするベクターの単離を容易にする条件下にて、コンビナトリアル遺伝子を発現させることを含む。リカーシブアンサンブル変異誘発recursiveensemblemutagenesisは、ライブラリー中の機能的変異体の頻度を高める手法であり、相同体を同定するためにスクリーニング試験と組み合わせて用いることができるPNAS89:78117815;DelgraveらProteinEngineering6:327331。本発明によるコード核酸配列のさらなる実施形態:本発明は、特に、本発明のデヒドロゲナーゼ活性を有する酵素をコードする核酸配列に関する。例えば、配列番号1、2、4、6もしくは図3に示されるアミノ酸配列またはそれらの特徴的な構成配列をコードする核酸配列、あるいは配列番号3もしくは5に示される核酸配列またはそれらの特徴的な構成配列を含む核酸配列が好ましいものである。本明細書中で言及するすべての核酸配列は、それ自体公知の方法で、ヌクレオチド構成単位から化学合成によって、例えば、二重鎖の個々の重複した相補性核酸構成単位の断片縮合によって作製することができる。オリゴヌクレオチドは、例えば、公知の方法にて、ホスホアミダイト法を用いて化学的に合成できる。合成オリゴヌクレオチドの結合およびDNAポリメラーゼKlenow断片によるギャップのフィルインならびにライゲーション反応、さらに一般的なクローニング方法は、SambrookらMolecularCloning:AlaboratorymanualColdSpringHarborLaboratoryPressに記載されている。本発明はまた、上記のポリペプチドおよびそれらの機能的等価物例えば、人工的なヌクレオチド類似体を用いて入手可能の1つをコードする核酸配列に関する。本発明は、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質または生物学的に活性なそれらのセグメントをコードする単離された核酸分子および核酸断片の両方に関し、かかる核酸断片は、例えば本発明によるコード核酸を同定または増幅するためのハイブリダイゼーションプローブまたはプライマーとして用いることができる。本発明による核酸分子はさらに、コード遺伝子領域の3’末端および/または5’末端に由来する非翻訳配列を含むことができる。本発明はまた、具体的に記載されたヌクレオチド配列に相補的である核酸分子またはそれらのセグメントを含む。本発明のヌクレオチド配列は、別の細胞型および生物体に含まれる相同配列を同定および/またはクローニングするために用いることができるプローブおよびプライマーの作製を可能にする。これらのプローブまたはプライマーは一般に、ストリンジェントな条件下記参照下にて、本発明の核酸配列のセンス鎖または対応するアンチセンス鎖中の少なくとも約12個、好ましくは少なくとも約25個例えば、約40個、50個または75個連続したヌクレオチドとハイブリダイズするヌクレオチド配列領域を含む。単離された核酸分子とは、核酸の天然源に存在する他の核酸分子から分離されており、さらに、組換え技術によって調製された場合には、他の細胞性材料もしくは培養培地を実質的に含まず、また化学的に合成された場合には、化学的前駆体もしくは他の化学薬品を実質的に含まないものである。本発明による核酸分子は、標準的な分子生物学的手法および本発明により提供される配列情報を用いて単離することができる。例えば、cDNAは、具体的に開示された完全長配列またはそれらのセグメントをハイブリダイゼーションプローブとして用いて、例えば、SambrookJFritschEFおよびManiatisTらによるMolecularCloning:ALaboratoryManual第2版ColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNY1989に記載されるような、標準的なハイブリダイゼーション手法を用いて、好適なcDNAライブラリーから単離することができる。さらに、ポリメラーゼ連鎖反応を用いて、開示された配列またはそれらのセグメントの1つを含む核酸分子を、この配列に基づいて構築されたオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、単離することができる。この方法で増幅した核酸は、好適なベクターにクローン化し、そしてDNA配列解析によって特徴づけることができる。本発明によるオリゴヌクレオチドはまた、標準的な合成方法によって、例えば、自動DNA合成装置を用いて調製できる。原則的に、本発明による核酸配列は任意の生物体において同定して、該生物体から単離することができる。有利には、本発明による核酸配列またはそれらの相同体は、真菌、酵母または細菌から単離できる。言及できる細菌はグラム陰性細菌およびグラム陽性細菌である。本発明による核酸は好ましくは、グラム陰性細菌、有利にはαプロテオ細菌、βプロテオ細菌またはγプロテオ細菌、好ましくはエンテロバクテリアセアEnterobacteriaceae科、シュードモナダセアPseudomonadaceae科またはリゾビアセアRhizobiaceae科の細菌、特に好ましくはアグロバクテリウムAgrobacterium属、シュードモナスまたはブルクホリデリアBurkholderia属の細菌から、当業者に公知の方法を用いて単離される。本発明による核酸配列は、例えばゲノムライブラリーまたはcDNAライブラリーを用いた、通常のハイブリダイゼーション法またはPCR手法により、例えば他の真菌または細菌から単離できる。これらのDNA配列は本発明による配列と標準条件下でハイブリダイズする。保存領域例えば、活性中心に由来する短いオリゴヌクレオチドをハイブリダイゼーションに用いることが有利であり、これらのオリゴヌクレオチドは、当業者に公知の方法で本発明によるデヒドロゲナーゼと比較することによって、同定することが可能である。しかし、本発明による核酸のより長い断片または完全長配列をハイブリダイゼーションに用いることも可能である。これらの標準条件は、用いた核酸に応じて、またはどの核酸型DNAもしくはRNAをハイブリダイゼーションに用いるかによって、様々に変化する。こうして、DNA:DNAハイブリッドの融解温度は、例えば、同じ長さのDNA:RNAハイブリッドの融解温度よりもおよそ10°C低い。核酸に応じて、標準条件とは、例えば、01~5×SSC1×SSC=015MNaCl15mMクエン酸ナトリウムpH72の濃度を含有する水性緩衝溶液中において、またはさらに50ホルムアミドの存在下にて、42~58°Cの温度例えば、5×SSC、50ホルムアミド中において42°Cであると理解される。有利には、DNA:DNAハイブリッドのハイブリダイゼーション条件は、01×SSC、約20°C~45°C、好ましくは約30°C~45°Cの温度である。DNA:RNAハイブリッドについては、ハイブリダイゼーション条件は有利には、01×SSC、約30°C~55°C、好ましくは約45°C~55°Cの温度である。ハイブリダイゼーションのために特定される温度は融解温度の値であり、この値は、例として、ホルムアミドの非存在下で約100ヌクレオチド長および50GC含有量を有する核酸について計算されたものである。DNAハイブリダイゼーションの実験条件は、遺伝学に関する専門書、例えば、SambrookらによるMolecularCloningColdSpringHarborLaboratory1989に記載されており、当業者に公知の式を用いて、例えば核酸の長さ、ハイブリッドの性質またはGC含有量に応じて、算出することができる。当業者は以下の文献からハイブリダイゼーションに関するさらなる情報を得ることができる:Ausubelら1985CurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySonsNewYork;HamesおよびHiggins1985NucleicsHybridization:APracticalApproachIRLPressatOxfordUniversityPressOxford;Brown1991EssentialMolecularBiology:APracticalApproachIRLPressatOxfordUniversityPressOxford。本発明はまた、具体的に開示されたまたは誘導することができる核酸配列の誘導体に関する。従って、本発明によるさらなる核酸配列は、例えば、配列番号3または5から誘導され、1個または複数のヌクレオチドの付加、置換、挿入または欠失によってそれらとは異なるが、それでも所望の特性プロファイルを有するポリペプチドをコードしている。本発明はまた、サイレント変異と称されるものを含むか、または具体的に挙げた配列と比較した場合に、特定の起源生物または宿主生物のコドン使用頻度に従って改変されている核酸配列、ならびにそれらの天然の変異体例えば、スプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体を含む。本発明は同様に、保存的ヌクレオチド置換例えば、問題のアミノ酸を、同一の電荷、大きさ、極性および/または可溶性を有するアミノ酸で置換するによって得ることができる配列に関する。本発明はまた、具体的に開示された核酸から配列多形の結果として得られる分子に関する。これらの遺伝子多形は、天然の変異の結果として集団内の個体間に存在しうる。これらの天然の変異は通常、遺伝子のヌクレオチド配列に1~5の分散を生じさせる。本発明による核酸配列の誘導体とは、例えば、全長配列領域にわたって、推定アミノ酸レベルで少なくとも40の相同性、好ましくは少なくとも60の相同性、特に好ましくは少なくとも80、85、90、93、95または98の相同性を有する対立遺伝子変異体を意味するものと理解される。相同性は配列の構成的領域にわたって高いことが有利でありうる。さらに、誘導体とは、本発明による核酸配列の相同体、例えば、真菌または細菌の相同体、トランケート型配列、またはコードDNA配列および非コードDNA配列の一本鎖DNAもしくはRNAとしても理解される。従って、これらは、例えば、特定した全DNA領域にわたって、DNAレベルで、少なくとも40、好ましくは少なくとも60、さらに好ましくは少なくとも70、特に好ましくは少なくとも80の相同性を有する。さらに、誘導体とは、例えば、プロモーターとの融合体としても理解される。所与のヌクレオチド配列の上流に配置されるプロモーターは、プロモーターの機能または活性を損なうことなく、1個または複数のヌクレオチドの交換、挿入、逆位および/または欠失によって変化させることができる。さらに、プロモーターの活性はそれらの配列を変えることによって増加させることができるし、あるいはプロモーターをより活性のあるプロモーター他の種に属する生物体に由来するものを含むと完全に置き換えることができる。誘導体とはまた、遺伝子発現および/またはタンパク質発現が変化、好ましくは増加するように、開始コドンの上流1~1000塩基または停止コドンの下流0~1000塩基の領域においてヌクレオチド配列が変化している変異体としても理解される。本発明はまた、ストリンジェントな条件下にて、上記のコード配列とハイブリダイズする核酸配列をさらに含む。この特性は、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドがストリンジェントな条件下で実質的に相補的な配列と結合するが、こうした条件下で非相補的なパートナーとの間には非特異的結合を形成しない能力として理解される。そのために、これらの配列は70~100、好ましくは90~100相補的でなければならない。互いに結合することができる相補的配列の特性は、例えば、ノーザンブロット法もしくはサザンブロット法、またはPCRもしくはRTPCRにおけるプライマー結合に関連して利用される。通常30塩基対またはそれ以上の長さのオリゴヌクレオチドがこの目的のために用いられる。ノーザンブロット法では、例えば、ストリンジェントな条件とは、非特異的にハイブリダイズしたcDNAプローブまたはオリゴヌクレオチドを溶出するために、50~70°C、好ましくは60~65°Cの温度の洗浄液、例えば01SDSを含有する01×SSC緩衝液を用いることと理解される。これに関連して、上述したように、互いに結合し続ける核酸だけが高い相補性を有するものである。ストリンジェントな条件を確立することは、当業者に公知であり、例えば、AusubelらによるCurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySonsNY631636に記載されている。これらのポリヌクレオチドは、ゲノムライブラリーまたはcDNAライブラリーをスクリーニングすることによって見出し、適切な場合には、好適なプライマーを用いてPCRによってそれらから増幅し、次いで、例えば、好適なプローブを用いて単離することができる。さらに、本発明によるポリヌクレオチドは化学的に合成することもできる。本発明による構築物の実施形態さらに、本発明はまた、調節核酸配列の遺伝子制御下に、本発明によるポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現構築物に関し、さらに、これらの発現構築物の少なくとも1つを含むベクターに関する。本発明によるこれらの構築物は、好ましくは、所与のコード配列の5’側上流にプロモーターおよび3’側下流にターミネーター配列を含み、また適切な場合には、コード配列にそれぞれ作用可能に結合されるさらなる調節エレメントを含む。作用可能な結合とは、プロモーター、コード配列、ターミネーター、適切な場合には、さらなる調節エレメントの逐次的な配置の結果として、それぞれの調節エレメントが、必要に応じて、コード配列の発現に関連してその機能を果たすことができるようになることと理解される。作用可能に結合される配列の例は、ターゲッティング配列およびエンハンサー、ポリアデニル化シグナルなどである。他の調節エレメントとしては、選択マーカー、増幅シグナル、複製起点などが挙げられる。好適な調節配列は、例えば、GoeddelによるGeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185AcademicPressSanDiegoCAに記載されている。本発明による核酸構築物とは、特に、本発明によるデヒドロゲナーゼの遺伝子が、その遺伝子発現を調節する、例えば増加させるために、1個または複数の調節シグナルに作用可能にまたは機能的に結合されているものとして理解される。これらの調節配列に加えて、これらの配列の天然の調節要素実際の構造遺伝子の上流にあるがなおも存在していてもよく、適切な場合には、この天然の調節要素がオフに切り替えられて、遺伝子の発現が増加されるように遺伝的に改変されている。しかし、核酸構築物はより単純な構成を有していてもよく、すなわち、さらなる調節シグナルがコード配列の上流に挿入されておらず、天然のプロモーターがその調節要素と共に除かれていない。その代わりに、もはやあらゆる調節が行われず、かつ遺伝子発現が増加されるように、天然の調節配列が突然変異される。好ましい核酸構築物はまた、有利には、1個または複数の上記のエンハンサー配列を含み、このエンハンサー配列はプロモーターに機能的に結合されて、核酸配列の発現を増加させることが可能である。また、DNA配列の3’末端に追加の有利な配列例えば、さらなる調節エレメントまたはターミネーターを挿入すことも可能である。本発明による核酸は1以上のコピー数で構築物中に存在しうる。この構築物はまた、適宜この構築物を選択するために、さらなるマーカー例えば、抗生物質耐性遺伝子または栄養要求性補足遺伝子を含むことができる。本発明による方法に有利な調節配列は、例えば、cos、tac、trp、tet、trptet、lpp、lac、lpplac、acIq、T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaPSP6、λPRまたはλPLプロモーターのようなプロモーターに存在し、これらのプロモーターはグラム陰性細菌に有利に用いられる。他の有利な調節配列は、例えば、グラム陽性プロモーターのamyおよびSPO2、ならびに酵母または真菌プロモーターのADC1、MFα、AC、P60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28およびADHに存在する。ピルビン酸デカルボキシラーゼおよびメタノールオキシダーゼのプロモーター例えば、ハンセヌラHansenula属由来もまた、これに関連して有利である。また、人工プロモーターを調節に使用することも可能である。宿主生物内での発現のために、核酸構築物は宿主内で遺伝子を最適に発現することができるベクター例えば、プラスミドまたはファージに有利に挿入される。プラスミドやファージに加えて、ベクターとは、当業者に公知の他のいずれかのベクター、すなわち、例えば、ウイルス例:SV40、CMV、バキュロウイルスおよびアデノウイルス、トランスポゾン、ISエレメント、ファスミド、コスミドおよび線状または環状DNAとして理解される。これらのベクターは宿主生物内で自律的に複製するかまたは染色体上で複製することができる。これらのベクターは、本発明のさらなる実施形態を構成する。好適なプラスミドの例は、大腸菌のpLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHS1、pKK2233、pDHE192、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pINIII113B1、lgt11およびpBdCI、ストレプトミセスStreptomycesのpIJ101、pIJ364、pIJ702およびpIJ361、バシルスBacillus属のpUB110、pC194およびpBD214、コリネバクテリウムCorynebacterium属のpSA77およびpAJ667、真菌のpALS1、pIL2およびpBB116、酵母の2αM、pAG1、YEp6、YEp13およびpEMBLYe23、ならびに植物のpLGV23、pGHlac、pBIN19、pAK2004およびpDH51である。これらのプラスミドは可能性のあるプラスミドの小さなセレクションを構成する。他のプラスミドが当業者に周知であり、それらに関する情報は、例えば、CloningVectorsから得ることができる。存在する他の遺伝子の発現のために、核酸構築物はまた、発現を増加させるために3’末端および/または5’末端の調節配列を含むことも有利であり、これらの配列は所定の宿主生物および1以上の遺伝子に応じて最適な発現のために選択される。これらの調節配列は遺伝子の選択的発現ならびにタンパク質の発現を可能にすべきである。これは例えば、宿主生物に依存して、当該遺伝子のみが誘導後に発現または過剰発現されるか、あるいは、当該遺伝子がただちに発現および/または過剰発現されることを意味しうる。これに関連して、調節配列または調節因子は好ましくは、ポジティブな影響を及ぼし、それによって導入された遺伝子の発現を増加させることができる。従って、調節エレメントは、プロモーターおよび/またはエンハンサーのような強力な転写シグナルを用いることによって転写レベルで有利に増強させることができる。しかし、これに加えて、例えばmRNAの安定性を向上させることによって、翻訳を高めることも可能である。ベクターの別の実施形態においては、本発明の核酸構築物または本発明の核酸を含むベクターを線状DNAの形態で微生物に挿入し、非相同組換えまたは相同組換えによって宿主生物のゲノムに組み込むことも可能である。この線状DNAは線状化したベクター例えば、プラスミドからなるものであってもよいし、本発明の核酸構築物もしくは核酸からのみなるものであってもよい。生物体による異種遺伝子の最適な発現を可能とするために、その生物体に用いられている特有のコドン使用頻度に従って核酸配列を改変することは有利である。このコドン使用頻度は、対象の生物体に由来する他の既知遺伝子のコンピュータ解析によって容易に決定することができる。本発明の発現カセットは、好適なプロモーターを好適なコードヌクレオチド配列およびターミネーターシグナルまたはポリアデニル化シグナルに融合することによって作製される。このために、例えば、TManiatisEFFritschおよびJSambrookらによるMolecularCloning:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborNY、TJSilhavyMLBermanおよびLWEnquistによるExperimentswithGenenFusionsColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborNY、ならびにAusubelFMらによるCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenePublishingAssocandWileyInterscienceに記載されているような、通常の組換えおよびクローニング技術が用いられる。好適な宿主生物内での発現を達成するためには、組換え核酸構築物または遺伝子構築物を、宿主内での遺伝子の最適な発現を可能にする宿主特異的ベクターに挿入することが有利である。ベクターは当業者に周知であり、それらに関する情報は、例えばCloningVectorsから得ることができる。本発明で用いることができる宿主生物本発明によるベクターまたは構築物は、組換え微生物を調製するために用いることが可能である。これらの組換え微生物は、例えば、本発明による少なくとも1つのベクターで形質転換され、本発明によるポリペプチドの産生のために用いられる。有利には、本発明による上記組換え構築物を好適な宿主系に導入して発現させる。これに関連して、当業者に良く知られているクローニング方法およびトランスフェクション方法、例えば、共沈、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、レトロウイルスによるトランスフェクションなどが、所与の発現系にて核酸を発現させるために好ましく使用される。好適な系は、例えば、CurrentProtocolsinMolecularBiologyFAusubelら編WileyInterscienceNewYork1997またはSambrookらMolecularCloning:ALaboratoryManual第2版ColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNY1989に記載されている。本発明により、相同的に組換えされた微生物を作製することもまた可能である。このために、本発明による遺伝子の少なくとも1つのセグメントを含むベクター、または本発明による配列を改変する例えば、機能的に破壊するために少なくとも1つのアミノ酸の欠失、付加または置換が適宜導入されているコード配列の少なくとも1つのセグメントを含むベクターを作製することが必要である。導入される配列は、例えば、関連する微生物に由来する相同体であってもよいし、哺乳動物、酵母もしくは昆虫源に由来するものであってもよい。あるいはまた、相同組換えに用いられるベクターは、相同組換えに関連する内在性遺伝子が変異されるか、さもなければ改変されるが、機能的タンパク質をなおもコードするように構成することができる。本発明による遺伝子の改変されたセグメントは、相同組換えベクター内にある。相同組換えに好適なベクターの構築は、例えば、ThomasKRおよびCapecchiMRCell51:503に記載されている。原則的に、どのような原核生物または真核生物も、本発明による核酸または核酸構築物の組換え宿主生物として用いるのに適している。有利には、微生物、例えば細菌、真菌または酵母が宿主生物として用いられる。グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌、好ましくはエンテロバクテリアセアEnterobacteriaceae科、シュードモナダセアPseudomonadaceae科、リゾビアセアRhizobiaceae科、ストレプトマイセタセアStreptomycetaceae科もしくはノカルディアセアNocardiaceae科の細菌、特に好ましくはエスケリキアEscherichia属、シュードモナスPseudomonas属、ストレプトマイセスStreptomyces属、ノカルディアNocardia属、ブルクホリデリアBurkholderia属、サルモネラSalmonella属、アグロバクテリウムAgrobacterium属またはロドコッカスRhodococcus属の細菌が有利に用いられる。エスケリキアコリEscherichiacoliの属および種が特に好ましい。これに加えて、他の有利な細菌はαプロトバクテリア、βプロトバクテリアおよびγプロトバクテリアの群に見出すことができる。これに関連して、宿主生物、または本発明による宿主生物は、本発明によるデヒドロゲナーゼ活性を有する酵素をコードする、本発明に記載の核酸配列、核酸構築物またはベクターを少なくとも1つ含むことが好ましい。本発明の方法に用いられる生物は、宿主生物に応じて、当業者に公知の方法で増殖させるかまたは培養する。微生物は一般的に、炭素源通常は糖の形態、窒素源通常は有機窒素源の形態、例えば酵母エキス、または塩例えば、硫酸アンモニウム、微量元素例えば、鉄塩、マンガン塩およびマグネシウム塩、適宜にビタミン類を含有する液体培地中で0°C~100°C、好ましくは10°C~60°Cの温度にて酸素を供給しながら増殖させる。これに関連して、液体栄養培地のpHは一定の値培養の間中調整されるに維持してもしなくてもよい。この培養はバッチ式、半バッチ式、または連続的に行うことができる。栄養分は発酵の開始時にはじめに導入されるか、または続いて半連続的にまたは連続的に供給できる。ケトンはこの培養物に直接的に加えることができるが、培養後に加えることが有利である。酵素は、実施例に記載の方法を用いて生物体から単離するか、そうでなければ、粗抽出物として反応に用いることができる。組換えによる本発明のポリペプチドの調製本発明はさらに、本発明によるポリペプチドまたはそれらの機能的、生物学的に活性な断片を組換えによって調製するための方法に関する。この方法は、ポリペプチド産生微生物を培養し、ポリペプチドの発現を誘導し、適切な場合には、これらのポリペプチドを培養物から単離することを含む。所望であれば、このポリペプチドをこの方法により工業的規模で製造することが可能である。組換え微生物は公知の方法で培養および発酵させることができる。例えば、細菌をTB培地またはLB培地中で20~40°Cの温度、pH6~9にて増殖させる。好適な培養条件は、例えば、TManiatisEFFritschおよびJSambrookらによるMolecularCloning:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborNYに詳細に記載されている。ポリペプチドが培地中に分泌されないときには、細胞を破砕して、その溶解液から公知のタンパク質単離方法により産物を取得する。細胞は、所望により、高周波超音波、高圧例えば、フレンチプレス細胞破砕機、浸透圧、界面活性剤、溶解酵素もしくは有機溶媒の作用、ホモジェナイザーの使用または上記方法のいくつかの組合せによって、破砕することができる。ポリペプチドを精製するには、公知のクロマトグラフィーによる方法、例えば、分子ふるいクロマトグラフィー、例えば、Qセファロースクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび疎水性クロマトグラフィー、さらに他の慣用方法、例えば、限外濾過、結晶化、塩析、透析および未変性ゲル電気泳動を用いることができる。好適な方法は、例えば、CooperFGBiochemischeArbeitsmethoden生化学的操作方法VerlagWalterdeGruyterBerlinNewYorkまたはScopesRProteinPurificationSpringerVerlagNewYorkHeidelbergBerlinに記載されている。組換えタンパク質を単離するためには、特定のヌクレオチド配列によってcDNAを伸長させ、それによって、例えば精製を簡便にするために用いられる、改変されたポリペプチドまたは融合タンパク質をコードするベクター系またはオリゴヌクレオチドを用いることが有利でありうる。このような好適な改変の例には、アンカーとして作用するタグと称されるものがあり、例えば、ヘキサヒスチジンアンカーとして知られる改変、または抗体によって抗原として認識され得るエピトープPressに記載されているがある。これらのアンカーは、タンパク質を固相支持体例えば、クロマトグラフィーカラムに充填されるポリマーマトリックスもしくはマイクロタイタープレートまたは別の支持体に結合させるために用いることができる。同時に、これらのアンカーをタンパク質の認識に用いることも可能である。タンパク質の認識のためには、通常の標識、例えば、蛍光色素、基質との反応後に検出可能な反応生成物を形成する酵素標識または放射性標識を、単独でまたはアンカーと組み合わせて、タンパク質を誘導体化するために用いることが可能である。本発明による酵素的還元方法を実施するための他の実施形態本発明の方法においては、デヒドロゲナーゼを遊離の酵素または固定化酵素として用いることができる。本発明の方法は0°C~95°C、好ましくは10°C~85°C、特に好ましくは15°C~75°Cの温度にて実施することが有利である。本発明の方法においては、pHをpH4~12、好ましくはpH45~9、特に好ましくはpH5~8に維持する。本発明の方法において、エナンチオマー的に純粋なまたはキラルな生成物、例えば3クロロ1プロパン1オールは、エナンチオマー冨化を示すエナンチオマーであるとして理解されるべきである。本方法では、少なくとも70ee、好ましくは少なくとも80ee、さらに好ましくは少なくとも90ee、特に好ましくは少なくとも98eeのエナンチオマー純度を達成することが好ましい。本発明の方法のために、本発明による核酸、核酸構築物またはベクターを含む増殖中の細胞を用いることが可能である。また、休止細胞または破砕細胞を用いることも可能である。破砕細胞とは、例えば、溶媒で処理されたことによって透過性にされた細胞、または酵素で処理されたことによって、機械的に処理されたことによって例えば、フレンチプレスもしくは超音波処理もしくは別の方法によって破壊された細胞として理解される。このようにして得られた粗製抽出物は本発明による方法に適している。また、精製酵素または部分精製酵素を本方法に用いることもできる。本反応に有利に用いることができる固定化した微生物または酵素も同様に好適である。本発明による方法は、バッチ式、半バッチ式または連続的に行うことができる。本方法は、例えば、Biotechnology第3巻第2版Rehmら編、特に第II章に記載されるようなバイオリアクター内で有利に行うことができる。以下の例は、本発明を限定することなく例証することを目的とする。これに関して添付の図面を参照されたい。A化学的実施例実施例1:3クロロ1プロパン1オンIII1の調製33kgのチオフェンを150kgのジクロロエタンにまず導入し、その後627kgの三塩化アルミニウムを加えた。この反応混合物を10°Cまで冷却し、55kgの塩化3クロロプロピオニルを加えた。次いでこの混合物を室温にて12時間撹拌した。GCおよびNMRで調べると、反応混合物は、生成された3クロロ1プロパン1オンおよび3クロロ1プロペノンの合計量に基づいて、約3~4モルの3クロロ1プロペノンをまだ含むことがわかった。その後、少しのプロペノンも検出することができなくなるまで塩化水素を室温にて通過させた。続いて、100kgの脱イオン水を加えることによってこの反応混合物を加水分解した。有機相を分離し、100kgの脱イオン水で洗浄した。真空にて溶媒を取り除いた後、657kgの表題化合物を油状物として得た。実施例2:水素化ホウ素ナトリウムで還元することによる3メチルアミノ1プロパン1オールIの調製実施例1から得られたプロパノンを初めに、0°Cにて、400mlのトルエンと200gのメタノールの混合溶媒中に導入した。30濃度の水酸化ナトリウム水溶液2gを加えた後、214gの水素化ホウ素ナトリウムを25時間かけて少しずつ加えた。0°Cで40分間撹拌した後、この反応混合物を121gの40濃度のメチルアミン水溶液で処理した。この混合物を、その固有の圧力下に60°Cで6時間撹拌した。この混合物を室温まで冷却した後、溶媒を除去し、残留物をトルエンで温浸し、トルエンから濾過した。この濾液を乾燥させると、1758gの表題化合物が淡黄色の固形物として得られた。B生化学的実施例実施例3:補因子再生のためのグルコースデヒドロゲナーゼの調製補因子を再生するために、販売元または本発明者ら自身の供給源から得られるグルコースデヒドロゲナーゼを用いることが可能であった。本発明者ら自身の供給源とは、枯草菌Bacillussubtilisに由来するグルコースデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む大腸菌XL10GoldpUC19クローンであった。以下の培地を大腸菌Lu11293の発酵のために調製した:2本の1Lエルレンマイヤーフラスコにそれぞれ150mlの培地を入れて滅菌し、5mlの滅菌塩溶液を補充した。LBアンピシリン寒天プレートから接種した後、予備培養物を37°C、200rpmで12時間インキュベートして、発酵培地に加えた。発酵は37°C、内圧01バール、pH7020リン酸および25NaOHを用いて調整、空気補給速度75L分、および300rpmで開始した。2時間後、01mMIPTGを誘導のために加え、発酵を全13時間後に終わらせた。細胞を回収して、洗浄した後、使用するまで20°Cにて保存した。実施例4:3クロロ1プロパン1オンを還元するためのデヒドロゲナーゼのスクリーニングa種々の細菌株および真菌株を20mlのLB培地、MRS培地またはGYP培地中で30°Cまたは37°Cにて24~48時間増殖させ、3mMTrisHCl、pH75中で洗浄し、そして2mlの緩衝液に再懸濁させた。アリコートを振動粉砕器中の1容のガラスビーズで破砕した。濁りを遠心分離によって分離した後、透明な粗抽出物を得た。その後、細胞懸濁液および粗抽出物を、実施例3から3クロロ1プロパン1オンを還元するためにそれらの活性について試験した。アッセイには以下を用いた:150μlの細胞/粗抽出物50μlの1Mグルコース溶液50μlのグルコースデヒドロゲナーゼ実施例3から50μlの2mMNADH50μlの2mMNADPH10μlの05M3クロロ1プロパン1オンメタノールに溶解したもの190μlの50mMMESpH60またはTrisHClpH75インキュベーションは30°Cで行った。このサンプルは1時間、2時間または24時間後に3μlの濃HClを用いて停止させた。遠心分離後、上清を3クロロ1プロパン1オンおよび3クロロ1プロパン1オールについてHPLCで分析したおよび260nmにて検出、保持時間Rt=1250分プロパン1オールおよびRt=1500分プロパン1オン;HCl除去から生じうる副生成物、Rt=0971分およびRt=1165分。選択した菌株は、エナンチオマー過剰率を決定するために繰り返し試験したが、その際、サンプルをメチルtertブチルエーテルまたはメチルイソブチルケトンを用いて抽出し、キラルGC分析またはHPLC分析によって特徴づけた。そのために以下の方法を用いた:GC:Hydrodexβ6TBDM、25m、90°C10分5°C分180°C10分、ラン時間:38分、入口:ヒーター:200°C、圧力:1068kPa、全流量:102ml分、スプリット比:125:1、スプリット流量:998ml分、検出器:200°CまたはHPLC:ChiracelODH、25046mm、40°C、流速10ml分、00~10分:975nヘキサン25イソプロパノール;230nmおよび260nmにて検出、Rt950プロパン1オン、Rt1660分プロパン1オールおよびRt1830分プロパン1オール。b種々のラクトバチラスLactobacillus菌株を新たに単離したラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevis株であるLu10288、10290および10291を以下のように単離した。b1用いた培地Kleymann培地:以下の物質を915ml中に溶解した:10glトリプトン7gl酵母エキス2gl牛肉エキス5glフルクトース2glマルトース36gl50グルコン酸19glクエン酸H2O5gl酢酸1glTween8002glMgSO47H2O005glMnSO4001glFeSO404glLシステイン125mlNH4OH寒天プレートについて:2BactoAgarを加える前記溶液のpHをpH54に調整した。前記溶液を121°Cにて15分間オートクレーブ滅菌した。オートクレーブ滅菌した後、50mlの滅菌グルコース溶液および40mlのエタノールを撹拌しながら加え、寒天プレートに注いだ。KMB培地:10glトリプトン7gl酵母エキス2glKH2PO41glTween8005glMgSO47H2O1glMnSO420glCaCO310glグルコース15寒天寒天プレート調製用前記溶液を121°Cにて15分間オートクレーブ滅菌した。グルコースおよびCaCO3を別々に溶解してオートクレーブ滅菌し、プレートに注ぐ前に寒天と混合した。b2微生物の単離:北ドイツ地方産の5~10gのトウモロコシ貯蔵飼料を50mlエルレンマイヤーフラスコ中で20mlの塩水と共に37°Cにて一晩、嫌気的にインキュベートした。得られた液体フラクションを1:100の割合で50mlのKleymann培地に接種し、穏やかに撹拌しながら室温で24時間嫌気的にインキュベートした。その後、この細胞懸濁液を上記のKleymann選択寒天プレートに播種した。このプレートを37°Cで48~72時間嫌気的にインキュベートし、得られたコロニーを、KMB培地上に繰り返しストリークすることによって単離した。この菌株は、20gのフルクトースLを含有する液体KMB培地中で酸発酵パターンを決定することによって特徴づけた。酢酸および乳酸を形成した異種発酵菌株を単離し、そして16sRNAを分析することによって体系的に特徴づけた。cスクリーニング結果表1、2および3は、菌株の例および/または変換率およびee値を示す。実施例5:ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevis由来のデヒドロゲナーゼの精製ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisLu10288の発酵のために以下の培地を調製した:MRS寒天プレートから2つの予備培養物を接種し、この予備培養物を37°Cにて17時間、200rpmでインキュベートして、発酵培地に加えた。この発酵は37°C、内圧01バール、pH58、空気補給速度1L分、および100rpmで開始し、23時間後にOD600が148になった時点で終結させた。洗浄した細胞試料の活性を、MESpH60中の休止細胞を用いて実施例4aと同様に測定した。Lu10288デヒドロゲナーゼは以下のように精製した:均質化:100gのLu10288の湿ったバイオマスを、100mlのMES緩衝液、1mMMgCl2、pH71を用いて、5×20gに小分けして再懸濁させ、10に小分けして20分間、4000rpmにて氷で冷却しながら、ガラスビーズを用いてボールミル内でホモジェナイズした。ガラスビーズをG2ガラス吸引フィルターを通して分離し、20mlの緩衝液で洗浄した。次いで、回収したホモジェネートをGSAローター内で20分間、12000rpmにて清澄化した。aQセファロースイオン交換クロマトグラフィー:直径5cm、容積400mlのQセファロースファーストフローカラムを20mMMES緩衝液、1mMMgCl2、pH68中で平衡化した。610mlのホモジェネートを11錠のCompleteで処理し、Qセファロースカラムに10ml/分の速度でロードした。280nmにて検出した。次いで、このカラムを同じ緩衝液で3倍のカラム容量を用いて洗浄した。溶出のために、20mMMES、1mMMgCl2、1MNaCl、pH68の直線勾配を適用した。10mlフラクションを回収して試験した。フラクション42~62は、HPLC試験において3クロロ1プロパン1オンとの活性を示した。bSuperdex分子ふるいクロマトグラフィー:直径26cm、容積240mlのSuperdex200分子ふるいカラムを20mMMES、1mMMgCl2、緩衝液1Lにつき1錠のComplete、pH71中で平衡化した。Qセファロースから得られた有用なフラクションを合わせて、124gの硫酸アンモニウムを徐々に加えて80飽和に調整した。pHは71に維持した。この溶液を4°Cにて10分間撹拌し、次いで12000rpmにて20分間遠心分離した。得られたペレットを5mlの平衡緩衝液に再懸濁し、この懸濁液を1時間、4°Cにて透析した。透析した溶液を9ml部ずつ2分し、分子ふるいカラムに4ml分の流速でロードした。4mlフラクションを回収して試験した。フラクション48~56は両方の基質に対して再び活性を示した。cMonoQイオン交換クロマトグラフィー:容積20mlの分離用MonoQHRカラムを20mMMES、1mMMgCl2、pH71中で平衡化した。Superdexから得られた有用なフラクションを合わせたもの70mlを4ml分の流速でロードした。カラムを洗浄した後、100分間で100までの20mMMES、1mMMgCl2、05MNaCl、pH71の直線勾配を用いて展開した。4mlフラクションを回収した。活性のあるフラクションを合わせた。dMonoPイオン交換クロマトグラフィー:MonoPカラムを20mMMOPS、1mMMgCl2、pH71中で平衡化した。21mlの有用なMonoQフラクションを075ml分の流速でロードした。基底値になるまで洗浄した後、100分間で100までの20mMMOPS、1mMMgCl2、05MNaCl、pH71の直線勾配を適用した。フラクションを回収した。活性のあるフラクションを合わせた。ゲルでの活性染色:試料を同容量のNovex未変性Trisグリシン試料緩衝液で希釈した。Anamedのtrisグリシンゲルをランニングチャンバーに設置した。InvitrogenのTrisグリシン未変性ランニング緩衝液をランニング緩衝液として希釈後に用いた。試料ウェルにロードし、ゲルを200V、約50mAにて開始した。電気泳動を約15時間継続した。ランニングチャンバーは氷水中に置いた。ゲルを取り外した後、ガラス皿に置き、50mMMES、8mMMgCl2、pH62中で洗浄し、そしてインキュベートした。次いで、035mMNADPおよび035mMNAD、196mgのNBテトラゾリウムならびに21mgのフェナジンエトサルフェートをこの溶液中のゲルに加えた。続いて基質プロパン1オールを加えて最終濃度を1mMとした。このゲルは染色されるまで暗所に保存した。典型的なゲルを図1に示す。本方法で精製したデヒドロゲナーゼのN末端を、SDSPAGEおよびゲルブロッティング後にEdman配列決定により決定した。実施例6:カンジダマグノリアCandidamagnoliae由来のデヒドロゲナーゼの精製カンジダマグノリアCandidamagnoliaeLu8742の発酵のために、2つの予備培養物を150mlの培地8gLの酵母エキス、5gLのペプトン、35gLのグルコース、5gLのKH2PO4、2gLのMgSO47H2Oを含有、pH60中で28°C、200rpmで15時間増殖させ、107gLのグルコースおよび4mlのテゴシポンtegosiponを含有する同様の培地132Lへの接種に用いた。発酵を28°C、内圧01バール、pH60、空気補給速度5L分、および500rpmで開始しpO2を>20に調整、26時間後にOD600が151となった時点で停止させた。均質化:回収した細胞を、10錠のRocheCompleteプロテアーゼ阻害剤を含有する1Lの50mMMES1mMMgCl2、pH65中に懸濁し、Z04ミクロフルイダイザー中1000バールで2回破壊した。遠心分離に続いて、澄んだ上清の半分を下記のとおりに精製した。これを行うとき、試料フラクションは、50mMMES、pH60、02mMNaDH/NaDPH、100mMグルコース、50μlのGDHmlおよび10mMの3クロロ1プロパン1オン中30°Cにて、好適な希釈で、活性について試験した。Qセファロースイオン交換クロマトグラフィー:直径5cm、容積400mlのQセファロースファーストフローカラムを20mMMES緩衝液、1mMMgCl2、pH68中で平衡化した。650mlのホモジェネートを11錠のCompleteで処理し、75ml分の速度にてQセファロースカラムにロードした。280nmにて検出した。次にカラムを700mlの同一緩衝液を用いて洗浄した。溶出のために、20mMMES、1mMMgCl2、075MNaCl、pH68の直線勾配を適用し、その後カラムを200mlの20mMMES、1mMMgCl2、075MNaCl、pH68で洗浄した。10mlフラクションを回収して試験した。フラクション56~96はHPLC試験において3クロロ1プロパン1オンとの活性を示した。硫酸アンモニウム沈降:41mlの有用なQセファロースピークフラクションを2SO4で90飽和にし、4°Cにて30分間撹拌した後、10000gにて10分間遠心分離した。得られたペレットを10mlの20mMMES、1mMMgCl2、1Lにつき1錠のRocheComplete、pH62中に懸濁し、この懸濁液をPierceSlideALyzerにて20mMMES、1mMMgCl2、1Lにつき1錠のRocheCompleteに対して30分間透析した。Superdex分子ふるいクロマトグラフィー:直径26cm、容積240mlのSuperdex200分子ふるいカラムを20mMMES、1mMMgCl2、1Lの緩衝液につき1錠のComplete、pH62中で平衡化した。硫酸アンモニウム沈降から得られた透析物を4ml分の流速で分子ふるいカラムにロードした。4mlフラクションを回収して試験した。フラクション21~24は両基質について再び活性を示した。MonoQイオン交換クロマトグラフィー:容積1mlのMonoQHR5/5カラムを20mMMES、1mMMgCl2、pH68中で平衡化した。Superdexカラムからの有用なフラクションを合わせたもの10mlを1ml分の流速でロードした。カラムを洗浄した後、100分間で100までの20mMMES、1mMMgCl2、075MNaCl、pH68の直線勾配を用いて展開し、続いて20mMMES、1mMMgCl2、pH68を用いて10分間洗浄した。1mlフラクションを回収した。活性を有するフラクションを合わせた。単離の結果を以下の表に要約した。このようにして精製したデヒドロゲナーゼのN末端を、SDSPAGEおよびゲルブロッティング後にEdman配列決定により決定した。実施例7:ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisデヒドロゲナーゼを用いた還元による3メチルアミノ1プロパン1オールISの調製ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisLu10288を実施例4に記載されるように増殖させて回収した。休止細胞を02~2mMNAD、実施例1からの1~100gLのプロパノンおよび18gLのグルコースで処理して、30°Cにて2~8時間インキュベートした。この反応を05MNaOHで滴定することによってpH60~70を維持し、HPLC分析によって追跡した。図2AおよびBはそれぞれ、混合物1および2に対応する典型的な反応経過を示す。続いて、バイオマスを遠心分離および/または濾過によって除去した。MTBE抽出物のNMR分析は60~70の3クロロ1プロパン1オールの含有量を与えた。未反応の3クロロ1プロパン1オンおよび副生成物である1チエン2イルプロペン1オンの含有量は、それぞれ10未満であった。1チエン2イルプロペン1オールは痕跡量で検出できたにすぎなかった。次いで、11gの40メチルアミン水溶液を無細胞水性混合物に加えた。後者を次いで、60°Cで6時間、固有の圧力下にて撹拌した。混合物を室温まで冷却した後、溶媒を除去した。その後残留物をトルエンで温浸し、トルエンから濾過した。別法として、アミノ化反応の後に細胞分離を行うことも可能であった。濾液を乾燥させた後、202mgの表題化合物を淡黄色の固形物として得た。Sエナンチオマーを95eeのエナンチオマー過剰率で得た。ee値は、回転量を測定することよって、またShiftNMRエタノール;溶媒:CDCl3;500MHzによって決定した。実施例8:ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisLu10288由来のデヒドロゲナーゼのクローニングa先行プロトプラスト形成に続くLU10288由来の染色体DNAの調製:必要な溶液溶液1:041Mスクロース001MMgSO47H2O5mlLM12培地1:210mlL10KH2PO4pH6725mgmlリゾチーム溶液1は以下のように調製する:1403gのスクロース、025gのMgSO47H2O、5mlのM12および1mlの10KH2PO4、pH67を一緒にして100mlとなし、濾過滅菌する。プロテイナーゼ:Qiagen製、20mg/mlストック溶液RNase:Qiagen製、100mg/mlストック溶液TE緩衝液:10mMTrisClpH8、1mMEDTApH8培養および破砕:-250mlのバッフル付きエルレンマイヤーフラスコに入れた100mlのMRS培地中で37°C、200rpmにて一晩培養する;-細胞を遠心分離する:4000rpm、10分間、4°C;-上清を捨て、ペレットを5mlの溶液1にとり、よく懸濁させる。インキュベーター内で1~4時間インキュベートする;-プロトプラストを慎重に遠心分離する:3000rpm、10分間;-上清を捨て、ペレットを10mlの溶液1で洗浄する:3000rpm、4°C、8分間;-上清を捨て、ペレットを10mlの001MTrisHCl、pH80で洗浄する:3000rpm、4°C、8分間;-上清を捨て、ペレットを4mlのTE緩衝液に懸濁する;-05mlの10SDSおよび05mlの5MNaClを加え、慎重に混合する;-1mgのプロテイナーゼKを加えて、インキュベーター内で37°Cにて一晩インキュベートする;-この混合物をTE緩衝液を用いて20mlにする。抽出:-フェノールを1:1、すなわち20mlのフェノール20mlの混合物となるように加える。慎重に混合し、4°C、4000rpmで5分間遠心分離する;-上相を取り、それを新しいFalconに移す;-20mlのフェノール:クロロホルム:イソアミルアルコールを加える。慎重に混合し、4°C、4000rpmで5分間遠心分離する;-上相を取り、新しいFalconに移す;-18mlのクロロホルム:イソアミルアルコールを加える。慎重に混合して、4°C、4000rpmで5分間遠心分離する。この工程を上相が透明になるまで繰り返す;-上相を2倍容量のエタノールを用いて沈殿させる。150の3M酢酸ナトリウムを加える。20°Cで少なくとも30分間沈殿させたままにする。その後、4°C、12000rpmで30分間遠心分離する;-上清を捨て、ペレットを1~2mlのTE緩衝液にとる。TE緩衝液1mlに対して20μgのRNaseを加える。インキュベーション:水浴中37°Cにて1時間。透析:RNase処理の後、混合物を透析バッグに移す。3回の透析を行うが、それぞれ15LのTE緩衝液中、4°Cにて1時間行う。最後の透析工程を一晩かけて行うことも可能である。-透析したDNAをFalconに移し、数本のEppendorffチューブに分注する;-2倍容量のエタノールおよび1/3容量の2MLiClを加える;-20°Cにて少なくとも30分間沈殿させる。その後、4°C、12000rpmで30分間遠心分離する;-上清を慎重に流出させる;-ペレットを20mlの70エタノールで洗浄し、4°C、12000rpmで15分間遠心分離する;-上清を慎重に流し出し、ペレットを風乾させ、適量の10mMTrisHCl、pH80にDNAを取る。再解離を改善するために、DNAをEppendorf振とう器中で55~60°C、低振動数で1~2時間インキュベートした。bペプチドのトリプシン消化およびEdmann配列決定の後、さらなるアミノ酸配列を実施例5に記載のタンパク質精製より得た。配列解析の結果を図3Bにまとめた。切断点のために、配列FVVDGGYTAQはおそらくC末端を表す。核酸配列は、Lu10288染色体DNA上で行われるPCR増幅によりデヒドロゲナーゼ遺伝子をクローニングするために用いたものであるが、ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisのコドン使用頻度を考慮して、上記配列およびN末端アミノ酸配列から推定した。PCRは、Pfuポリメラーゼおよび以下の温度プログラムを用いた標準的なStratageneプロトコルに従って行った:95°Cにて5分;95°Cにて45秒、52°Cにて45秒、および72°Cにて1分20秒を30サイクル;72°Cにて10分;使用するまで10°C。PCR産物をアガロースゲル電気泳動およびカラムクロマトグラフィーによって単離し、次いでNdeI/HindIIIを用いて消化して、同様に消化したpDHE192ベクターにクローン化した。ライゲーション混合物を大腸菌XL1Blueに形質転換させた。対応するクローンの配列決定は、得られたプラスミドpDHE10288adh1の挿入物として、配列番号3に示した核酸配列をもたらし、この配列は配列番号4のアミノ酸配列に対応した。実施例5および8で同定されるペプチドはすべて、この配列中に再び見出される。実施例9:ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisLu10288由来の組換えデヒドロゲナーゼの活性の測定プラスミドpDHE10288adh1を大腸菌TG10pAgro4pHSG575に再形質転換した;pAgro4:TakeshitaS;SatoM;TobaM;MasahashiW;HashimotoGotohTGene616374;pHSG575:TTomoyasuらMolMicrobiol40397413。それぞれの場合に6個の形質転換体を、100mlのエルレンマイヤーバッフル付きフラスコに入れた20mlのLBAmpSpecCm、01mMIPTG、05gLのラムノース中で37°Cにて18時間増殖させ、次いで10分間、5000gにて遠心分離し、10mMTris/HClpH70を用いて1回洗浄し、2mlの同一緩衝液に再懸濁させた。100μlの細胞懸濁液を900μlの50mMMES、pH650μlmlのグルコースDH、100mMグルコース、100mMNaCl、1mMNADH、1mMNADPHおよび10mM3クロロ1プロパン1オンを含有する中で振とうしながら20分間インキュベートした。この混合物を実施例4と同様に分析した。平均013mMの3クロロ1プロパン1オールが生成され、これは培養懸濁液1Lあたり66Uの活性に相当した。粗抽出物振動式ミルにて07mlのガラスビーズを用いた細胞破砕によって得られたものを含有する同様のアッセイ試料においても、021mMの3クロロ1プロパン1オールこれは107ULの活性に相当するが測定された。培養物にラムノースを加えなかったコントロール実験においては、わずかな3クロロ1プロパン1オールも検出することはできなかった。実施例10:カンジダマグノリアCandidamagnoliaeLu8472由来のデヒドロゲナーゼのクローニング以下のアミノ酸配列は、Edmann配列決定によってN末端配列を再度決定した後に、実施例6に記載されるタンパク質精製より得られたものである:TSNALVTGGSRGIGAA以下のさらなるアミノ酸配列は、ペプチドのトリプシン消化およびEdmann配列決定の後に得られたものである:IGVNSINPG核酸配列は、Lu8472染色体DNA上で行われるPCR増幅によってデヒドロゲナーゼ遺伝子をクローニングするために以下のように使用したものであるが、カンジダマグノリアCandidamagnoliaeのコドン使用頻度を考慮して、これらのペプチドから推定した。プライマーMke366およびMke367を11の比率で混合した。PCRは、PfuTurboポリメラーゼStratageneおよび以下の温度勾配プログラムを用いた標準的なStratageneプロトコルに従って行った:95°Cにて1分;95°Cにて1分、X°C1にて45秒および72°Cにて2分を30サイクル;72°Cにて10分;使用するまで10°C。PCR産物約05kbをアガロースゲル電気泳動12EGel、Invitrogenおよびカラムクロマトグラフィーによって単離し、次いで配列決定した配列決定プライマー:Mke366およびMke374。得られた配列を配列番号5に示す。それから推定されるアミノ酸配列配列番号6は、カンジダマグノリアCandidamagnoliaeのカルボニル還元酵素WO200140450と53の同一性を示す。タンパク質精製の後に決定したペプチド配列には、ごくわずかな相違が存在する。この相違は、配列決定の誤りによるものか、またはカンジダマグノリアCandidamagnoliaeLu8742に複数のイソ酵素が存在することにより生じたと考えられる。112個のアッセイ試料を異なるアニーリング温度、すなわち25°Cから45°Cまでの温度で実験した。すべてのアッセイ試料において、類似した濃度の05kbバンドが主産物として形成された。