"マウスGlialfibrillaryacidicprotein遺伝子の転写開始点を1として数えて300~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも132~58の領域を含む塩基配列からなるプロモーターまたはヒトGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて286~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも119~57の領域を含む塩基配列からなるプロモーターと、その下流に配置された目的遺伝子を含む、グリア細胞特異的発現ベクター。前記プロモーターがマウスGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて132~14の塩基配列からなるプロモーターまたはヒトGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて119~14の塩基配列からなるプロモーターである、請求項1に記載のベクター。前記プロモーターがマウスGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて300~14の塩基配列からなるプロモーターまたはヒトGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて286~14の塩基配列からなるプロモーターである、請求項1に記載のベクター。アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項1~3のいずれか一項に記載のベクター。目的遺伝子がGFP遺伝子である、請求項1~4のいずれか一項に記載のベクター。目的遺伝子が、アタキシン-1、アタキシン-2、アタキシン-3、アタキシン-7およびhuntingtinからなる群より選ばれるタンパク質をコードする遺伝子である、請求項1~4のいずれか一項に記載のベクター。目的遺伝子がグリア細胞由来神経栄養因子をコードする遺伝子である、請求項1~4のいずれか一項に記載のベクター。請求項1~7のいずれか一項に記載のベクターが小脳に導入され、目的遺伝子をアストロサイトで発現する非ヒト哺乳動物。マウス、ラットまたはマーモセットである、請求項8に記載の非ヒト哺乳動物。小脳障害性疾患のモデル動物である、請求項9に記載の非ヒト哺乳動物。小脳障害性疾患が遺伝性脊髄小脳変性症である、請求項10に記載の非ヒト哺乳動物。請求項1~4のいずれか一項に記載のベクターを含む、小脳障害性疾患治療剤。小脳障害性疾患が遺伝性脊髄小脳変性症である、請求項12に記載の小脳障害性疾患治療剤。本発明は、目的遺伝子をアストロサイト、特に小脳のバーグマングリアで高発現する681bpより短いプロモーターを有するベクターを提供することを課題とする。本発明者は上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、ウイルスベクターを用いた発現系においては、mGfa2プロモーターの132~58の領域およびhGfa2プロモーターの119~57の領域がアストロサイトでの発現に重要であることを見出し、少なくともこの領域をプロモーターとして含むベクターを用いれば目的遺伝子をアストロサイトで効率よく発現させることができることを見出して、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の通りである。1マウスGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて300~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも132~58の領域を含む塩基配列からなるプロモーターまたはヒトGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて286~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも119~57の領域を含む塩基配列からなるプロモーターと、その下流に配置された目的遺伝子を含む、グリア細胞特異的発現ベクター。2前記プロモーターがマウスGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて132~14の塩基配列からなるプロモーターまたはヒトGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて119~14の塩基配列からなるプロモーターである、1に記載のベクター。3前記プロモーターがマウスGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて300~14の塩基配列からなるプロモーターまたはヒトGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて286~14の塩基配列からなるプロモーターである、1に記載のベクター。4アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである、1~3のいずれかに記載のベクター。5目的遺伝子がGFP遺伝子である、1~4のいずれかに記載のベクター。6目的遺伝子が、アタキシン-1、アタキシン-2、アタキシン-3、アタキシン-7およびhuntingtinからなる群より選ばれるタンパク質をコードする遺伝子である、1~4のいずれかに記載のベクター。7目的遺伝子がグリア細胞由来神経栄養因子をコードする遺伝子である、1~4のいずれかに記載のベクター。81~7のいずれかに記載のベクターが小脳に導入され、目的遺伝子をアストロサイトで発現する非ヒト哺乳動物。9マウス、ラットまたはマーモセットである、8に記載の非ヒト哺乳動物。10小脳障害性疾患のモデル動物である、9に記載の非ヒト哺乳動物。11小脳障害性疾患が遺伝性脊髄小脳変性症である、10に記載の非ヒト哺乳動物。121~4のいずれかに記載のベクターを含む、小脳障害性疾患治療剤。13小脳障害性疾患が遺伝性脊髄小脳変性症である、12に記載の小脳障害性疾患治療剤。本発明のベクターは脳内で極めて高いアストロサイト特異性をもって働く。この特性を利用することで、遺伝性脊髄小脳変性症などの患者の病態を反映する優れたモデル動物の作製が可能となる。また、脊髄小脳変性症などの疾患は小脳プルキンエ細胞やバーグマングリアが障害される。このような疾患に対して治療効果のある遺伝子をGfa2プロモーター制御下でバーグマングリアに発現するウイルスベクターは遺伝子治療用ベクターとして有望である。ムコ多糖症やニーマンピック病を含むライソゾーム病においても同様である。また、アストロサイトの増殖を促進させ脳損傷の回復を図る遺伝子治療用ベクターとしても有用である。以下に本発明を詳しく説明する。本発明のベクターは、マウスGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて300~14好ましくは200~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも132~58の領域を含む塩基配列からなるプロモーターまたはヒトGFAP遺伝子の転写開始点を1として数えて286~14好ましくは187~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも119~57の領域を含む塩基配列からなるプロモーターと、その下流に配置された目的遺伝子を含む。Gfa2プロモーターとしては、ヒト、マウス以外にラット等のGFAP遺伝子のプロモーターが挙げられるが、より具体的には、配列番号1マウスや配列番号20ヒトの塩基配列を含むプロモーターが例示される。ただし、アストロサイトにおいてプロモーター活性を発揮する限りにおいて、配列番号1あるいは配列番号20の塩基配列の相補鎖とストリンジェントな条件でハイブリダイズするものであってもよい。ここで、ストリンジェントな条件とは、例えば、相同性が高いDNA同士、好ましくは95以上の相同性を有するDNA同士がハイブリダイズし、それより相同性が低いDNA同士がハイブリダイズしない条件、具体的には、通常のサザンハイブリダイゼーションの洗いの条件である68°C、01×SSC01SDSに相当する塩濃度でハイブリダイズする条件が挙げられる。配列番号1において、300~14の領域としては塩基番号1614~1927が例示され、132~58の領域としては塩基番号1782~1856が例示される。配列番号20において、286~14の領域としては塩基番号1877~2176が例示され、119~57の領域としては塩基番号2044~2106が例示される。mGfa2プロモーターとしては、300~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも132~58の領域を含む塩基配列からなるものであればよいが、例えば、300~14配列番号6、200~14配列番号7や132~14の領域配列番号8からなるプロモーターが例示される。hGfa2プロモーターとしては、286~14の領域内の連続した塩基配列であって少なくとも119~57の領域を含む塩基配列からなるものであればよいが、例えば、286~14配列番号21、187~14配列番号22や119~14の領域配列番号23からなるプロモーターが例示される。mGfa2やhGfa2プロモーターに連結される目的遺伝子の種類は特に制限されないが、GFP遺伝子改変型を含む、Crerecombinase遺伝子、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、lacZなどのマーカー遺伝子、異常伸長したCAGリピートを持つアタキシンataxin-1、アタキシン-2、アタキシン-3、アタキシン-7またはhuntingtinをコードする遺伝子などの小脳障害性疾患の関連遺伝子や毒素遺伝子が例示される。また、GDNFグリア細胞由来神経栄養因子などの栄養因子をコードする遺伝子でもよい。さらに、後述するような、小脳障害性疾患の治療に用いられる遺伝子でもよい。目的遺伝子はGfa2プロモーターに連結されるが、連結の態様は目的遺伝子がGfa2プロモーターによって発現可能な態様であれば特に制限はなく、エンハンサー配列等、高発現に有利な配列を介して連結されてもよい。また、目的遺伝子はタンパク質の部分配列をコードするものであってもよいし、タグ配列との融合タンパク質をコードするものであってもよい。またタンパク質の発現を調節するmicroRNA配列をコードするものであってもよい。Gfa2プロモーターとそれに連結された目的遺伝子を含むベクターとしては、真核生物細胞において複製可能なベクター、ならびにエピソームを維持するベクターあるいは宿主細胞ゲノムに組み込まれるベクターが挙げられるが、ウイルスベクターが好ましく、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクターがより好ましい。レンチウイルスベクターとしては、NeurosciLett2008Sep26443711Epub2008Jul25に記載されたようなベクターが例示されるがこれに限定されない。ベクターは、選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーとは、選択マーカーが導入された細胞に選択可能な表現型を提供する遺伝エレメントをいい、一般には、遺伝子産物が細胞の増殖を阻害するかまたは細胞を殺傷する薬剤に対する耐性を与える遺伝子である。具体的には、例えば、Neo遺伝子、Hyg遺伝子、hisD遺伝子、Gpt遺伝子およびBle遺伝子が挙げられる。選択マーカーの存在を選択するために有用な薬物としては、例えば、Neoに対してはG418、Hygに対してはハイグロマイシン、hisDに対してはヒスチジノール、Gptに対してはキサンチン、そしてBleに対してはブレオマイシンが挙げられる。なお、DNAの切断、連結、その他、染色体DNAの調製、PCR、プラスミドDNAの調製、形質転換、プライマーとして用いるオリゴヌクレオチドの設定等の方法は、当業者によく知られている通常の方法を採用することができる。これらの方法は、SambrookJFritschEFandManiatisTMolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPress等に記載されている。上記のようなベクターを用いて目的遺伝子を非ヒト哺乳動物の小脳に導入することで、目的遺伝子を小脳アストロサイト特異的に発現する非ヒト哺乳動物を得ることができる。ウイルスベクターである場合、パッケージング細胞などを用いてウイルスを産生させ、これを小脳表面のクモ膜下腔に注入することにより、目的遺伝子をアストロサイトに発現させることができる。目的遺伝子が上記のような小脳障害性疾患関連遺伝子であった場合、本発明の非ヒト哺乳動物は、小脳障害性疾患のモデルとして有用である。ここで、小脳障害性疾患としては、遺伝性脊髄小脳変性症1型、2型、7型及びハンチントン病を含むポリグルタミン病、ムコ多糖症やニーマンピック病を含むライソゾーム病、毛細血管拡張性運動失調症、自閉症、アルツハイマー病、胎児アルコール症候群、アルコール中毒、加齢性小脳失調などが挙げられる。本発明の非ヒト哺乳動物は、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ブタ、モルモット、ヒツジ、ウシなどの任意の非ヒト哺乳動物であり得る。また、マーモセットを含む非ヒト霊長類などの他の非ヒト哺乳動物でもあり得る。本発明の非ヒト哺乳動物における目的遺伝子の発現は、例えば、その動物から得た組織サンプルのノーザンブロット分析、インサイチュハイブリダイゼーション分析、およびRT-PCRなどによって解析され得る。また、導入遺伝子がGFP遺伝子であると、蛍光を測定することにより確認することができる。さらに、脳のサンプルを用い、導入遺伝子から発現されたポリペプチドやタグ例えば、ポリヒスチジンやFLAGなどに特異的な抗体を使用して免疫組織学的に評価することもできる。本発明の非ヒト哺乳動物は免疫組織学的解析や遺伝子発現解析だけではなく、表現型解析、電気生理学的解析などにも供されうる。また、本発明の非ヒト哺乳動物は、小脳障害性疾患の治療剤をスクリーニングするためにも使用され得る。すなわち、本発明の非ヒト哺乳動物に化合物を投与し、化合物投与前後の該非ヒト哺乳動物の小脳障害性疾患に関連する表現型を評価することによって小脳障害性疾患の治療剤を選択することができる。ここで、小脳障害性疾患に関連する表現型としては、ポリグルタミン凝集塊の蓄積、封入体の増加、プルキンエ細胞層の配列の乱れ、バーグマングリアの減少、プルキンエ細胞の減少、小脳失調などが挙げられ、これらの表現型を改善する薬剤を小脳障害性疾患を治療するための薬剤として選択することができる。なお、スクリーニングに使用する治療剤候補物質としての化合物は、例えば、合成又は天然の低分子又は高分子化合物、金属含有化合物、糖質、ペプチド、タンパク質、ペプチド模倣物、糖タンパク質、リポタンパク質、核酸、抗体などが使用可能である。多数の天然化合物および合成化合物を含むライブラリーもまた、使用可能である。目的遺伝子が小脳障害性疾患に対して治療効果のある遺伝子であれば、本発明のベクターは小脳障害性疾患に対する遺伝子治療剤として使用することができる。小脳障害性疾患に対して治療効果のある遺伝子は、治療対象となる疾患の種類等に応じ適宜選択することができるが、例えば、遺伝性脊髄小脳変性症7型の場合、アタキシン-7遺伝子の変異による機能異常を相補又は抑制しうる因子又はエレメントをコードする核酸、例えば、変異したアタキシン-7遺伝子の発現を調節するmicroRNAを発現させ得る核酸、細胞質封入体を分解するタンパク質をコードする核酸等が用いられうる。また、核内及び細胞質封入体を分解するタンパク質をコードする核酸、脳由来BDNF又はグリア細胞由来神経栄養因子GDNFをコードする核酸等が挙げられる。ポリグルタミン病の治療を目的とした場合は、GTPaseCRAGQinetal.J.cellBiol.2006Feb13;1724:497504.、ubiquitinchainassemblyfactorE4BUFD2aEMBOJ.2004Feb11;233:65969.、ATPaseVCP/p97CellDeathDiffer.2001Oct;810:97784.、分子シャペロンHDJ2HSDJNatGenet.1998Jun;192:14854.や分子シャペロンBiPNature.1988Mar31;3326163:462-4.、小胞体蛋白質分解を促進する分子:ERdegradationenhancingalpha-mannosidaselikeproteinEDEMScience.2003Feb28;2995611:1394-7.、ERのセンサー分子EndoplasmicreticulumERstresstransducer:CREB/ATFfamilymemberOASISNatCellBiol.2005Feb;72:18694.、IRE1JBiolChem.1996Jul26;27130:18181-7.、PERK,ATF6JBiolChem.1998Dec11;27350:337419.をコードする遺伝子を用いることができる。また、遺伝性脊髄小脳変性症1型、2型、7型の治療を目的とした場合は、アタキシン-1、アタキシン-2、アタキシン-3、アタキシン-7をコードする遺伝子に対するsiRNA、ハンチントン病の治療を目的とした場合は、Huntingtinに対するsiRNAを用いて、これら遺伝子の発現を抑制してもよい。ニーマンピック病の治療を目的とした場合は、スフィンゴミエリナーゼをコードする遺伝子を治療用遺伝子として用いることができる。毛細血管拡張性運動失調症の治療を目的とした場合は、ATmutatedatm、自閉症の治療を目的とした場合は、ReelinやBcl2をコードする遺伝子を治療用遺伝子として用いることができる。アルツハイマー病の治療を目的とした場合は、ネプリライシンをコードする遺伝子を治療用遺伝子として用いることができる。さらに、胎児アルコール症候群FAS、アルコール中毒、及び加齢性小脳失調の治療を目的とした場合は、Bcl2、GDNF、NGFをコードする遺伝子を治療用遺伝子として用いることができる。前記治療剤の薬理評価は、治療対象となる疾患の種類により異なるが、遺伝性脊髄小脳変性症の場合、治療剤を、小脳表面のクモ膜下腔に投与した後、ポリグルタミン凝集体毒性のオリゴマーを含むの減少によって、さらに臨床的動物の場合は行動学的には小脳失調の改善程度により行われうる。遺伝性脊髄小脳変性症の主な病因は、異常伸長したポリグルタミン鎖をもつタンパク質が核内の重要な転写因子とともに凝集体を形成して蓄積、及びこれに伴う細胞内信号伝達の異常であり、このため小脳失調が出現すると考えられることから、細胞内のポリグルタミン凝集体が減少し、小脳失調が改善した場合、治療剤が、薬理作用を示すことの指標となりうる。本発明の治療剤は、小脳表面のクモ膜下腔に注入することにより、投与されうる。本発明の治療剤を小脳表面のクモ膜下腔に注入することにより、注入部位周辺のバーグマングリアに高い親和性で、かつ広範囲に有効成分を送達することができる点で有利である。また、小脳表面のクモ膜下腔への本発明の治療剤の注入は、下オリーブ核や小脳核への注入に比べ、脳実質の損傷を抑制でき、臨床応用に優れる。また、本発明の治療剤の投与には、注入の際、脳圧を安定して維持させる観点から、好ましくは、一定した速度で注入可能な手段、例えば、ハミルトンシリンジとそれを取りつけることができるマイクロマニピュレーター及び注入のためのマイクルインジェクションポンプ等を用いることが望ましい。注入速度は、脳圧を安定して維持できる範囲であれば特に限定されるものではなく、個体の年齢、体重、疾患状態等に応じて、適宜設定され得る。例えば、10nl/分~800nl/分、好ましくは、50nl/分~400nl/分、より好ましくは、100nl/分~200nl/分であることが望ましい。本発明の治療剤の投与量は、治療効果を発揮させるに適した量であれば特に限定されるものではなく、個体の年齢、体重、疾患状態等に応じて、適宜設定され得る。例えば、また、本発明の治療剤の投与回数は、治療効果を発揮させるに十分な回数であればよい。レンチウイルスを基本骨格とする場合、遺伝子が染色体に組み込まれることから、1回の投与でもよく、組み込まれる遺伝子のコピー数を増加させ、より広範囲の細胞に導入させるために、小脳表面の場所を変更して右、正中、左など3回程度であってもよい。また挿入変異による副作用の危険性除去のため、宿主染色体へのプロウイルスの組み込み能力を欠損する非挿入型レンチウイルスベクターを用いる場合、1年以上の期間を空けて複数回、投与してもよい。アデノ随伴ウイルスを基本骨格とする場合、長期にわたる発現が確認されていることから前記レンチウイルスの場合と同様に行い、小脳失調の状態によって追加投与を行なってもよい。以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではなく、様々な改変された態様が含まれることはいうまでもない。<材料と方法>1ゲノムDNA抽出マウスのゲノムDNAを得るために、C57B6マウスの尾部を1mm採取し、100μlのLysisbuffer組成25mMNaOH、02mMEDTAを加え、95°Cで30分煮沸した。ついで、等量のNeutralizationbuffer組成40mMTrisHClを加え、中和し、マウスゲノムDNA溶液とした。ヒトのゲノムDNAはボランティアの静脈血を5ml採血し、ゲノムDNA抽出キットを用いて行った。2PCR反応ゲノムDNA溶液を鋳型としてmGfa2プロモーター配列番号1とhGfa2プロモーター配列番号20のクローニングを行なった。つまり、40μlのddH2O、10μlの5xPSbuffer、1μlのdNTPs、15μlのforwardとreverseプライマーマウスの場合、配列番号10と11、ヒトの場合、配列番号24と25、1μlのゲノムDNA溶液、05μlのPrimeStarPCR酵素を加え、98°C1分1サイクル、98°C10秒、60°C5秒、72°C4分40サイクルにてPCRを行なった。PCR反応物は1agarosegelTAEで電気泳動定電圧100Vを行ない、反応物の確認と精製を行った。mGfa21配列番号1:1927bpForwardccgacgcgtGTCACTGGCAACCTCTCTC配列番号10ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11小文字は制限酵素部位である。各Deletionコンストラクトは下記それぞれのプライマーセットを用いて作成した。mGfa22配列番号2:1679bpForwardccgacgcgtGTCTGTAAGCTGAAGACCTG配列番号12ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11mGfa23配列番号3:1499bpForwardccgacgcgtTACTGCACCCGGGGCTGA配列番号13ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11mGfa24配列番号4:1054bpForwardccgacgcgtTTCAAAACTACTCTGTCAGGG配列番号14ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11mGfa25配列番号5:614bpForwardccgacgcgtTAAGAACTGGAAGCTGATTAC配列番号15ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11mGfa26配列番号6:314bpForwardccgacgcgtGTGGGTCTTCATGCTTGACA配列番号16ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11mGfa27配列番号7:214bpForwardccgacgcgtCGAAGCCAGGCTGGTGTTC配列番号17ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11mGfa28配列番号8:146bpForwardccgacgcgtGTTCTCCCCCTAGCTGGG配列番号18ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11mGfa29配列番号9:71bpForwardccgacgcgtGGGCAGATTTAGTCCAACCC配列番号19ReverseggaattcCCTGCCCTGCCTCTGCTG配列番号11hGfa21配列番号20:2176bpForwardcgacgcgtGAGCTCCCACCTCCCTCTC配列番号25ReverseggaattcCCTGCTCTGGCTCTGCTCG配列番号26hGfa26配列番号21:300bpForwardcgacgcgtTTCTTGACCCACCTTCCTAGAG配列番号27ReverseggaattcCCTGCTCTGGCTCTGCTCG配列番号26hGfa27配列番号22:201bpForwardcgacgcgtTTGGCGTGCCCAGGAAGCTC配列番号28ReverseggaattcCCTGCTCTGGCTCTGCTCG配列番号26hGfa28配列番号23:133bpForwardcgacgcgtAGCTGGGCTGCGGCCCAAC配列番号29ReverseggaattcCCTGCTCTGGCTCTGCTCG配列番号26hGfa29配列番号24:70bpForwardcgacgcgtGGGCATCGCCAGTCTAGCC配列番号30ReverseggaattcCCTGCTCTGGCTCTGCTCG配列番号263pCL20cプラスミドへのサブクローニング精製されたPCR産物は制限酵素MluIとEcoRIで切断した。つまり、90μlの精製DNAに1μlのMluI、1μlのEcoRIを加え、37°Cで15時間インキュベートした。切断後のDNAは1agarosegelTAEで電気泳動定電圧100Vを行ない、精製した。その後、pCL20cプラスミドMolTher5242251Blood10340624069へサブクローニングするために、3μlのpCL20cと1μlの精製DNAに4μlの2xLigationMixTAKARABIOを加え8分静置した。ついで、15μlの大腸菌DH5αCompetentcell、TAKARABIOに4μlの反応液を加え、氷上で10分静置後、42°Cで1分、氷上で2分でヒートショックを行なった。形質転換された大腸菌を100μlのSOC培地TAKARABIOに懸濁後、アンピシリンナトリウム終濃度100μgmlを含んだLBagarplateで16時間静置培養した。4ウイルス産生用プラスミドの作製形質転換された大腸菌のコロニーをイエローチップ先で突き、アンピシリンナトリウム終濃度100μgmlを含んだLB培地で16時間攪拌培養した。培養された大腸菌のDNAがGfa2プロモーターを搭載しているかをPlasmidMiniprep後、制限酵素MluIとEcoRIで確認した後、500μlの大腸菌液を200mlのLB培地ラージスケールに加え、さらに16時間攪拌培養した。得られた大腸菌液をもとに、GenopurePlasmidMaxiKitRoshe社を使用し、ウイルス産生用のプラスミドを精製した図2にhGfa27GFPのマップを示す。ウイルスの産生以下の操作を、P2実験室で行なった。ウイルス産生には、HEK293T細胞を用いた。培養液は通常用いられている、10ウシ血清を加えたDulbeccosmodifiedEaglesmediumを使用した。対数増殖期のHEK293T細胞をリン酸緩衝化生理食塩水PBSに分散させ、ついで、10cmディッシュあたり5×105細胞となるように播種した。播種後の10cmディッシュに、10重量ウシ胎仔血清含有DMEM10m1を添加し、その後、細胞を、5体積C0237°Cで培養した。24時間後、前記ディッシュ中の培養液を、新しい培養液10m1と交換した。その後、細胞を、5体積C0237°Cで05時間培養した。一方、pCAGkGP1R6μgpCAG4RTR22μgpCAGVSVG2μgpCL20cGFAPGFP10μgを450μl滅菌水に溶解させ、プラスミド溶液を得た。pCAGkGP1Rgagとpolを含むパッケージングプラスミド。pCAG4RTR2tatを含むプラスミド。revを削除してあるため、ウイルス粒子は宿主内で複製することができない。pCAGVSVGVSVGはVesicularsomatitisvirusglycoproteinの略。レンチウイルスの本来のエンベロープではCD4陽性細胞にしか感染できない。これをリン脂質をターゲットとするVSVのEnvelopeに置換し、神経を含むさまざまな細胞に感染可能としたエンベローププラスミド。このようにウイルス産生に不可欠な遺伝子を4つのプラスミドに分割し、複製に必要な領域等を削除することにより、産生されたウイルスは感染能を持つ一方、感染後は自己増殖能が欠如するため安全性が増す。得られたプラスミド溶液に25MCaC1250μlを添加して攪拌し、2xHBSS組成50mMHEPES、0mMNaC115mMNa2HP04pH705500μ1を添加し、すばやく攪拌した。前記ディッシュにプラスミド溶液を均等に滴下し、穏やかにディッシュ内の培地と混合した。その後、細胞を、5体積C0235°Cで培養した。以下、バイオハザード対策用安全キャビネットの中で操作を行なった。16時間後、前記ディッシュ中の培地を、新しい培地10m1と交換した。さらに細胞を、5体積C0237°Cで培養しトランスフェクション後から40時間でウイルスを含む培養液を回収した。濃縮前記で回収した培地は、それぞれ50m1遠心管に移し、1000rpm、4分間遠心分離して、上清を得た。得られた上清を、フィルターに通した。得られた濾液を、ベックマン社製ローターSW281を用いた超遠心分離に供してウイルス粒子を沈殿させ、上清を除去した。得られたウイルス粒子沈殿物をKSOMに懸濁し、最終量を90μ1とし、感染用ウイルス液を得た。ウイルス液は作成後、1週間以内に使用した。ウイルス力価の測定対数増殖期のHELA細胞をPBSに分散させ、ついで、12ウェルディッシュに1ウェルあたり5x104細胞となるように播種した。播種後の12ウェルディッシュに、10重量ウシ胎仔血清含有DMEMを、1m1ウェルとなるように添加し、その後、細胞を、5体積C0237°Cで24時間培養した。ウイルス液を103~105倍となるように前記ウェル内の培地に添加した。また、同時に、HexadimethrineBromideを6μgmlとなるように各ウェルに添加した。その後、細胞を5体積C0237°Cで88時間培養した。ウェルの中の緑色蛍光蛋白質発現細胞を蛍光顕微鏡下でセルカウンターを用いて計測し、ウイルスの力価を算出した。10x希釈ウイルス液を添加した中、Y個の細胞のGFP発現細胞が見出された場合、ウイルス力価は、Y×10xTUm1として算出される。8ウイルスの小脳皮質への投与動物へのウイルス接種は、安全キャビネットの中で行った。ネンブタールペントバルビタールナトリウム;40mgkg体重をマウスの腹腔内に投与して麻酔した後、マウス生後25日の両耳にイアーバーを挿入し、口鼻とともに頭部固定装置にしっかりと固定した。後頭部の毛を刈り皮膚を切開して、小脳直上の頭蓋骨を露出し、実体顕微鏡で観察しながら、ブレグマBregma矢状縫合と冠状縫合の交点の尾側5~6mmに穴を開けた。硬膜を除去し、ウルトラマイクロポンプに取り付けたハミルトンシリンジからウイルス液を小脳皮質表面のクモ膜下腔に、毎分500nlの速度で20分かけて10μl、注入した。その後、頭皮を縫い合わせ、麻酔から覚めるまでheatingpadの上に置いた。覚醒後、動物をケージに戻し、感染動物飼育ラックで飼育した。小脳皮質内の遺伝子発現は、ウイルス投与7日後に灌流固定を行い、下記のように小脳スライスを作成した。9組織学的解析と蛍光イメージングマウスをペントバルビタールナトリウムで麻酔した後、01Mリン酸バッファー中に4パラホルムアルデヒドを含む固定液を用いて経心腔的潅流を行った。脳全体と各器官の蛍光像は蛍光実体顕微鏡のついたCCDカメラを用いて撮像した。脳はマイクロスライサーを用いて50μmの矢状切片にスライスした。GFPの蛍光像は蛍光顕微鏡または共焦点レーザー顕微鏡を用いて撮像した。10結果mGfa211927bp、mGfa26314bp、mGfa27214bp、mGfa28146bp、mGfa2971bp、hGfa212176bp、hGfa27201bp、hGfa28133bp、hGfa2970bpの各長さのマウス及びヒト由来Gfa2プロモーター制御下でGFPを発現するレンチウイルスベクターを用いた結果を図3および図4に示す。その結果、mGfa26、mGfa27、mGfa28ではmGfa21と同様にバーグマングリアとアストロサイト特異的に蛍光が見られた。またhGfa26、hGfa27、hGfa28においてもhGfa21と同様にバーグマングリアとアストロサイト特異的に蛍光が見られた。図示しないが、mGfa21、mGfa26、mGfa27、mGfa28におけるGFPの発現はアストロサイトマーカーであるS100と同じ部位に見られた。一方、mGfa29とhGfa29では蛍光が非常に弱く発現も非特異的であった。これらのことから、mGfa2及びhGfa2プロモーターにおいてバーグマングリアを含む小脳アストロサイトでの発現にはそれぞれ、132~58と119~57の領域が重要であることがわかった。"