"多能性幹細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換により内皮細胞をもたらす方法であって、該多能性細胞のフォワードプログラミング又は該体細胞の分化転換を引き起こして内皮細胞にすることができる1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加する条件下で該多能性幹細胞又は該体細胞を培養し、それによって該多能性幹細胞をフォワードプログラミングして又は該体細胞を分化転換して内皮細胞にすることにより該内皮細胞もたらすことを含む方法。内皮細胞が多能性幹細胞のフォワードプログラミングによりもたらされる、請求項1記載の方法。多能性幹細胞が誘導多能性幹細胞である、請求項2記載の方法。内皮細胞が体細胞の分化転換によりもたらされる、請求項1記載の方法。体細胞が不死化体細胞である、請求項4記載の方法。多能性幹細胞又は体細胞が少なくとも1つの外因性発現カセットを含み、該外因性発現カセットが1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む、請求項1記載の方法。多能性幹細胞又は体細胞を、多能性細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換を引き起こして内皮細胞にするのに十分な量で1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の遺伝子産物を含む1つ以上の内皮プログラミング因子と接触させることを含む、請求項1記載の方法。1つ以上の遺伝子産物が1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子のポリペプチドである、請求項7記載の方法。遺伝子産物が1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子のRNA転写物である、請求項7記載の方法。少なくとも1つの内皮プログラミング因子遺伝子がv-ets赤芽球症ウイルスE26腫瘍遺伝子相同体鳥類ERGを含む、請求項1記載の方法。少なくとも1つの内皮プログラミング因子遺伝子がERGアイソフォーム3を含む、請求項10記載の方法。少なくとも1つの内皮プログラミング因子遺伝子がets変種2ETV2を含む、請求項1記載の方法。多能性幹細胞若しくはその子孫細胞又は体細胞若しくはその子孫細胞が、レポーター遺伝子に機能的に結合している内皮細胞特異的転写調節エレメントを含むレポーター発現カセットを更に含む、請求項1記載の方法。内皮細胞が、下記:i1つ以上の内皮細胞マーカーの発現;iiアセチル化低密度リポタンパク質ac-LDLを取り込む能力、三次元マトリックスに管様構造を形成する能力、1つ以上の炎症促進性刺激に反応して1つ以上の細胞接着分子の発現を上方制御する能力又はこれらの能力の2つ以上の組み合わせ;或いはiii内皮細胞の形態的特徴を含む内皮細胞の1つ以上の特徴を含む、請求項1記載の方法。1つ以上の内皮細胞マーカーが、CD144、CD31、CD34、ESAM、CD102、CD143、CD93、CD184、CD105、CD146、フォンウィルブランド因子、ZO-1、CD304及びDLL4からなる群より選択される、請求項14記載の方法。1つ以上の炎症促進性刺激がTNF及びIL-1からなる群より選択され、1つ以上の細胞接着分子がCD54、CD62E及びCD106からなる群より選択される、請求項14記載の方法。もたらされる内皮細胞が成熟内皮細胞である、請求項1記載の方法。内皮細胞を選択又は豊富化することを更に含み、選択又は豊富化された内皮細胞が請求項14記載の内皮細胞の1つ以上の特徴の発現を含む、請求項14記載の方法。多能性幹細胞又はその子孫細胞が1つ以上の増殖因子を含む培地で培養される、請求項1記載の方法。1つ以上の増殖因子が、塩基性線維芽細胞増殖因子FGF、血管内皮増殖因子VEGF又は両方を含む、請求項19記載の方法。もたらされる内皮細胞が発現の増加の最大10日後に得られる、請求項1記載の方法。もたらされる内皮細胞が発現の増加の最大4日後に得られる、請求項1記載の方法。細胞集団を実質的に個別の細胞に分散することを更に含み、分散が発現の増加の少なくとも約24時間後に実施される、請求項1記載の方法。実質的に個別の細胞をマトリックス成分が被覆された表面で平板培養することを更に含む、請求項23記載の方法。a平板培養細胞を少なくとも12時間培養すること;b非結合細胞を除去すること;及びd残った結合細胞を培養することを更に含む、請求項24記載の方法。残った結合細胞が少なくとも2日間培養される、請求項25記載の方法。もたらされた内皮細胞を造血培養培地で培養して、造血細胞を生じることを更に含む、請求項1記載の方法。もたらされた内皮細胞を間葉培養培地で培養して、間葉細胞を生じることを更に含む、請求項1記載の方法。多能性幹細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換により内皮前駆細胞をもたらす方法であって、該多能性細胞のフォワードプログラミング又は該体細胞の分化転換を引き起こして該内皮前駆細胞にすることができる1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加する条件下で該多能性幹細胞又は該体細胞を培養し、それによって該多能性幹細胞をフォワードプログラミングして又は該体細胞を分化転換して内皮前駆細胞にすることにより該内皮前駆細胞もたらすことを含む方法。内皮細胞への効果について化合物を評価する方法であって、a請求項1記載の方法に従う方法によりもたらされる内皮細胞を該化合物と接触させること;及びb該内皮細胞に対する該化合物の効果をアッセイすることを含む方法。効果が薬理学的又は毒性効果である、請求項30記載の方法。請求項1~31のいずれか1項記載の方法によりもたらされる内皮細胞又は内皮前駆細胞。疾患又は損傷を有する又は発生する危険性のある被験者の治療に使用される、請求項1~31のいずれか1項記載の方法によりもたらされる内皮細胞又は内皮前駆細胞。疾患が虚血である、請求項33記載の内皮細胞又は内皮前駆細胞。損傷が、組織損傷又は組織移植片の必要なものである、請求項33記載の内皮細胞又は内皮前駆細胞。疾患又は損傷が、心血管疾患又は心血管損傷である、請求項33記載の内皮細胞又は内皮前駆細胞。疾患又は損傷を有する又は発生する危険性のある被験者の治療のための薬剤の調製における、請求項1~31のいずれか1項記載の方法によりもたらされる内皮細胞又は内皮前駆細胞の使用。疾患が虚血である、請求項37記載の使用。損傷が、組織損傷又は組織移植片の必要なものである、請求項37記載の使用。疾患又は損傷が、心血管疾患又は心血管損傷である、請求項37記載の使用。少なくとも80の内皮細胞が1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む外因性発現カセットを含む、内皮細胞を含む細胞個体群。少なくとも80の内皮前駆細胞が1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む外因性発現カセットを含む、内皮前駆細胞を含む細胞個体群。内皮前駆細胞のフォワードプログラミングにより内皮細胞をもたらす方法であって、該内皮前駆細胞のフォワードプログラミングを引き起こして該内皮細胞にすることができる1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加する条件下で該内皮前駆細胞を培養し、それによって該前駆細胞をフォワードプログラミングして内皮細胞にすることにより該内皮細胞もたらすことを含む方法。本発明は、フォワードプログラミングforwardprogramming又は分化転換により内皮細胞又は内皮細胞の前駆体の無制限の供給をもたらすことによって、内皮細胞又は内皮細胞の前駆体の提供における当該技術の主な欠陥を克服する。この方法は、患者特異的な内皮細胞の無制限の供給をもたらすのに特に有用でありうる。本明細書に開示される方法は、多様な種類の細胞をプログラミングすることにより内皮細胞又は内皮細胞前駆体をもたらす。特定の態様において、プログラミング方法は、単独で又は他のプログラミング因子遺伝子と組み合わせて発現したとき、内皮系列へのプログラミングを促進することができる1つ以上の遺伝子の発現レベルを増加する条件下で、多能性幹細胞又は体細胞を培養することを含む。そのような遺伝子は、内皮プログラミング因子遺伝子と呼ばれる。本発明に有用な内皮プログラミング因子遺伝子は、単独又は組み合わせで非内皮細胞に内皮の運命を直接課す任意の遺伝子を含むことができ、転写因子遺伝子又は内皮細胞分化若しくは機能に重要である他の遺伝子を含むことができる。プログラミングのプロセスは、細胞が産生することができる子孫の種類を変え、フォワードプログラミング及び分化転換の特徴的なプロセスを含む。幾つかの実施態様において、多分化能細胞又は多能性細胞のフォワードプログラミングは、内皮細胞又は内皮前駆体細胞をもたらす。他の実施態様において、非内皮体細胞の分化転換は、内皮細胞又は内皮前駆体細胞をもたらす。特定の態様において、プログラミングは、非内皮細胞のフォワードプログラミング又は分化転換を引き起こして内皮前駆体細胞又は内皮細胞にするのに十分な数の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加することを含むことができる。内皮プログラミングに適した細胞の供給源は、任意の幹細胞又は非内皮細胞体細胞を含むことができる。例えば、幹細胞は、多能性幹細胞又は任意の非多能性幹細胞でありうる。本明細書で使用されるとき、多能性細胞又は多能性幹細胞は、実質的に任意の胎児又は成体細胞型に分化する能力を有する細胞である。多能性幹細胞の例示的な種類には、胚幹細胞及び誘導多能性幹細胞又はiPS細胞が含まれうるが、これらに限定されない。そのような多能性幹細胞は、哺乳類多能性幹細胞でありうる。特定の実施態様において、多能性幹細胞はヒト多能性幹細胞である。分化転換による内皮前駆体又は内皮細胞のプログラミングに適した細胞の供給源は、任意の非内皮体細胞を含むことができる。そのような体細胞は、生物体の身体を形成する任意の細胞でありうる。特定の態様において、体細胞を、例えばテロメラーゼ逆転写酵素TERTのレベルを増加することにより不死化して、細胞の無制限の供給をもたらすことができる。例えば、TERTのレベルを、内皮遺伝子からのTERTの転写の増加により又は任意の遺伝子送達法若しくは系を介する導入遺伝子の導入により増加することができる。本発明に有用な多能性幹細胞は、誘導多能性幹細胞、胚幹細胞又は核移植若しくは核融合により誘導された多能性幹細胞でありうる。幹細胞は、多分化能幹細胞、少分化能oligopotent幹細胞又は単分化能幹細胞を含むこともできる。幹細胞は、造血幹細胞、間葉幹細胞、神経幹細胞、上皮幹細胞又は皮膚幹細胞のような胎児幹細胞又は成体幹細胞を含むこともできる。特定の態様において、幹細胞を、臍帯組織、胎盤、羊水、絨毛膜絨毛、胚盤胞、骨髄、脂肪組織、脳、末梢血、臍帯血、月経血、血管、骨格筋、皮膚又は肝臓から単離することができる。前駆細胞又は前駆体細胞は、多能性幹細胞から誘導される系列関連細胞を意味する。したがって、前駆細胞又は前駆体細胞は、多能性幹細胞よりも分化しているが、依然として、2種類以上の細胞に分化する能力を有している。本明細書に開示されている方法によりもたらされる内皮細胞は、成熟内皮細胞でありうる。他の実施態様において、開示されている方法は、内皮前駆細胞又は内皮前駆体細胞をもたらす。そのような細胞は、多能性幹細胞よりも分化しているが、内皮細胞又は他の種類の細胞に分化することができる。幾つかの態様において、開示されている方法は、血管内皮hematoendothelial又は血管芽前駆細胞をもたらし、これは造血細胞又は内皮細胞に分化することができる。なお他の実施態様において、内皮前駆細胞又は内皮前駆体細胞をフォワードプログラミングにより内皮細胞に分化する方法が提供される。特定の実施態様において、内皮細胞又は内皮前駆体細胞は、多能性幹細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換によりもたらされる。そのような方法は、多能性幹細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換を引き起こして内皮細胞又は内皮前駆体細胞にすることができる1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加する条件下で多能性幹細胞又は体細胞を培養し、それによって多能性幹細胞をフォワードプログラミングして又は体細胞を分化転換して内皮細胞又は内皮前駆体細胞にすることにより、内皮細胞又は内皮前駆体細胞をもたらすことを含むことができる。当業者が理解するように、プログラムされる細胞において内皮プログラミング因子遺伝子の発現を増加する方法は、当該技術において既知の任意の方法を含むことができ、例えば、細胞に予め導入した1つ以上の発現カセットの発現を誘導すること又はDNA若しくはRNAのような核酸、ポリペプチド若しくは小型分子を細胞に導入することである。特定の内在性であるが転写抑制されたプログラミング因子遺伝子の発現を増加することは、上流転写因子発現の制御又は後成的調節により、これらのプログラミング因子遺伝子の発現に対するサイレンシング又は阻害効果を逆転することを含むこともできる。特定の態様において、内皮細胞又は内皮前駆体細胞は、多能性幹細胞のフォワードプログラミングによりもたらされる。そのような多能性幹細胞は、誘導多能性幹細胞でありうる。他の態様において、内皮細胞又は内皮前駆体細胞は、体細胞の分化転換によりもたらされる。幾つかの実施態様において、体細胞は、皮膚線維芽細胞、脂肪組織由来細胞、角化細胞又は血球のようなヒト体細胞である。分化転換に有用な体細胞は、不死化体細胞でありうる。特定の態様において、体細胞を、例えばテロメラーゼ逆転写酵素TERTのレベルを増加することにより不死化して、細胞の無制限の供給をもたらすことができる。例えば、TERTのレベルを、内在性遺伝子からのTERTの転写の増加により又は任意の遺伝子送達法若しくは系を介する導入遺伝子の導入により増加することができる。内皮細胞又は内皮前駆体細胞を、少なくとも1つの外因性発現カセットを含む、多能性幹細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換によりもたらすことができる。発現カセットは、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含むことができる。幾つかの態様において、多能性幹細胞又は体細胞を、多能性細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換を引き起こして内皮細胞又は内皮前駆体細胞にするのに十分な量で1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の遺伝子産物を含む、1つ以上のそのような内皮プログラミング因子と接触させる。幾つかの実施態様において、1つ以上の遺伝子産物は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子のポリペプチド産物である。特定の態様において、1つ以上の内皮プログラミング因子は、内皮プログラミング因子遺伝子のポリペプチドの細胞内進入を促進するタンパク質伝達ドメインを含む。そのようなタンパク質伝達ドメインは当該技術において良く知られており、例えば、HIVTATタンパク質伝達ドメイン、HSVVP22タンパク質伝達ドメイン、ドロフィラアンテナペディアDrosophilaAntennapediaホメオドメイン又はこれらの変種である。幾つかの実施態様において、1つ以上の遺伝子産物は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子のRNA転写物である。本発明に有用な内皮プログラミング因子遺伝子は、単独又は組み合わせで非内皮細胞に内皮の運命を直接課す任意の遺伝子、特に、転写因子遺伝子又は細胞内で発現したときに内皮細胞分化若しくは機能に重要である遺伝子を含むことができる。内皮細胞プログラミング因子遺伝子には、v-ets赤芽球症ウイルスE26癌遺伝子相同体鳥類ERG、v-ets赤芽球症ウイルスE26癌遺伝子相同体1鳥類ETS1、v-ets赤芽球症ウイルスE26癌遺伝子相同体2鳥類ETS2、ELF-1、ELF-4、FLI-1、TEL、ETV2ets変種2、ER71若しくはEtsrp71、TALISCL、GATA2又はフォークヘッドFOX転写因子例えば、FoxC、FoxF、FoxH及びFoxOファミリーが含まれるが、これらに限定されない。例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個又はこれ以上のこれらの例示的な遺伝子、そのような遺伝子のアイソフォーム又はこれらの変種を、本発明の特定の態様に使用することができる。これらの遺伝子の多くは、異なるアイソフォームを有し、これらは同様の機能を有することができ、したがって本発明の特定の態様に使用することが考慮される。特定の態様において、内皮プログラミング因子遺伝子はERGである。特定の態様において、内皮プログラミング因子遺伝子は、ERGアイソフォーム3ERG-3であるが、プログラミング因子遺伝子は、ERGアイソフォーム1ERG-1、ERGアイソフォーム2ERG-2及びERGアイソフォーム4ERG-4を含むERGの任意のアイソフォームでありうる。なお他の特定の実施態様において、内皮プログラミング因子遺伝子はETV2である。フォワードプログラミングは、本明細書で使用されるとき、図1の上側に例示されているように、中間細胞段階を介してそれぞれの段階に適合された培養条件を使用して細胞を培養する要件を実質的に有さない、並びに/又は、場合により、出発細胞供給源と所望の最終細胞産物、例えば内皮細胞若しくは内皮細胞前駆体との間の異なる時点で異なる増殖因子を加える必要がないプロセスを意味する。一方、図1の下側は、段階的分化プロセスに存在する多様な発育段階及びプロセスの異なる時点で異なる増殖因子を加える必要性を示し、このことは本発明の特定の態様に記載されている方法よりも多くの労力、時間及び費用を伴う。したがって、本発明の特定の態様におけるフォワードプログラミングの方法は、効率を改善するためにプログラミング又は分化の異なる段階で異なる増殖因子を加える必要性を回避するので有利である。特定の態様において、例えば多能性幹細胞又は体細胞のような内皮細胞又は内皮前駆体プログラミングのための細胞は、少なくとも1つの外因性発現カセットを含み、ここで発現カセットは、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む。1つ以上の発現カセットは、多能性細胞のフォワードプログラミングを引き起こして内皮細胞にする又は体細胞の分化転換を引き起こして内皮細胞にするのに十分な量で1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現を駆動することができる。特定の実施態様において、1つ以上の発現カセットは、v-ets赤芽球症ウイルスE26癌遺伝子相同体鳥類ERGの発現を駆動する。他の特定の態様において、1つ以上の発現カセットは、ETV2の発現を駆動することができる。あるいは、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現は、発現カセットを使用することなく増加されうる。1つ以上の外因性発現カセットを利用する方法において、そのような発現カセットは、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現を誘導しうる外部誘導性転写調節エレメントを含むことができる。例えば、本発明に有用な外因性発現カセットは、テトラサイクリン応答エレメントを含むプロモーターのような誘導性プロモーターを含有することができる。幾つかの実施態様において、外因性発現カセットは遺伝子送達系に含まれる。例えば、そのような遺伝子送達系は、トランスポゾン系、ウイルス遺伝子送達系又はエピソーム遺伝子送達系でありうる。本発明に有用なウイルス遺伝子送達系は、RNAに基づいた又はDNAに基づいたウイルスベクターである。本発明に有用なエピソーム遺伝子送達系は、プラスミド、エプスタインバーウイルスEBVに基づいたエピソームベクター、酵母に基づいたベクター、アデノウイルルに基づいたベクター、シミアンウイルス40SV40に基づいたエピソームベクター、ウシパピローマウイルスBPVに基づいたベクターなどでありうる。特定の態様において、フォワードプログラミング又は分化転換に使用される発現カセットは、レポーター遺伝子に機能的に結合している内皮特異的転写調節エレメントを含むことができる。特定の態様において、多能性幹細胞のような内皮細胞プログラミングのために細胞は、細胞のフォワードプログラミングを引き起こして内皮細胞にするのに十分な量の1つ以上の内皮プログラミング因子と接触する。内皮プログラミング因子は、内皮プログラミング因子遺伝子、そのような遺伝子の産物又はそのような遺伝子の産物のフラグメントを含む。内皮プログラミング因子は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の遺伝子産物でありうる。例えば、1つ以上の遺伝子産物は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子のポリペプチド又は1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子のポリペプチドのフラグメントでありうる。特定の実施態様において、内皮プログラミング因子は、ERG遺伝子その任意のアイソフォームを含む、ETS1遺伝子、ETS2遺伝子、ELF-1遺伝子、ELF-4遺伝子、FLI-1遺伝子、TEL遺伝子、ETV2ER71若しくはEtsrp71遺伝子、TALISCL遺伝子、GATA2遺伝子又はフォークヘッドFOX転写因子遺伝子例えば、FoxC、FoxF、FoxH若しくはFoxOファミリーのメンバーの産物である。幾つかの実施態様において、多能性幹細胞のフォワードプログラミング又は体細部の分化転換により内皮細胞又は内皮前駆体細胞をもたらす方法が提供され、ここで多能性幹細胞、体細胞又は多能性幹細胞若しくは体細胞の子孫細胞は、レポーター発現カセットを含有する。そのような発現カセットは、内皮プログラミング因子遺伝子を含むことができる。特定の実施態様において、そのような発現カセットは、レポーター遺伝子に機能的に結合している内皮細胞特異的転写調節エレメントを含むことができる。特定の実施態様において、内皮細胞特異的プロモーターはレポーターに機能的に結合することができる。例えば、FLT-1のプロモーターであるフォンウィルブランド因子vWF又はTIE1は、同じ実施態様において発現カセットのレポーターと機能的に結合することができる。本明細書において提供される方法のいずれかにより生じる内皮細胞又は内皮前駆体細胞は、内皮細胞の1つ以上の特徴を有することができる。例えば、そのような内皮細胞は、1つ以上の内皮細胞マーカーを発現することができる。内皮細胞マーカーには、VE-カドヘリンCD144、ACEアンギオテンシン変換酵素CD143、BNH9/BNF13、CD31、CD34、CD54ICAM-1、CD62EE-セレクチン、CD105エンドグリン、CD146、エンドカンESM-1とも呼ばれる、エンドグリクス-1、エンドムチン、エオタキシン-3、EPAS1内皮PASドメインタンパク質1、第VIII因子関連抗原、FLI-1、Flk-1KDR、VEGFR-2、FLT-1VEGFR-1、GATA2、GBP-1グアニル酸結合タンパク質-1、GRO-アルファ、HEX、ICAM-2細胞間接着分子2、LMO2、LYVE-1、MRBマジックラウンドアバウトmagicroundabout、ヌクレオリン、PAL-E病理解剖学的罹患内皮pathologischeanatomieLeidenendothelium、RTKs、sVCAM-1、TAL1、TEM1腫瘍内皮マーカー1、TEM5腫瘍内皮マーカー5、TEM7腫瘍内皮マーカー7、トロンボモジュリンTM、CD141、VCAM-1血管細胞接着分子-1CD106、VEGF血管内皮増殖因子、vWFフォンウィルブランド因子、第VIII因子とも呼ばれる、ZO-1、内皮細胞選択的接着分子ESAM、CD102、CD93、CD184、CD304及びDLL4が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施態様において、本発明に有用な内皮細胞マーカーは、CD144、CD31、CD34、ESAM、CD102、CD143、CD93、CD184、CD105、CD146、フォンウィルブランド因子、ZO-1、CD304及びDLL4の1つ以上である。幾つかの実施態様において、フォワードプログラミング又は分化転換により産生される内皮細胞は、特定のマーカーを発現しないか又は特定のマーカーの減少した発現を示し、例えば、間葉細胞のマーカー例えば、CD140a、CD140b、造血細胞のマーカー例えば、CD43、CD45、CD235a若しくはCD41a又はヒト多能性幹細胞のマーカー例えば、TRA1-60である。本発明に有用な内皮細胞の他の特徴は、内皮細胞の機能的特性である。例えば、そのような機能的特性の1つは、アセチル化低密度リポタンパク質ac-LDLを取り込む能力である。内皮細胞のなお別の機能的特性は、マトリゲルのような三次元マトリックスの管様構造体を形成する能力である。内皮細胞の追加の機能的特性は、バリア機能である。本発明に有用な内皮細胞の別の特徴は、細胞接着分子例えばCD54ICAM-1、CD106及びCD62Eの発現を上方制御することにより、1つ以上の炎症促進性刺激例えば、TNF及びIL-1に反応する能力である。本発明に有用な内皮細胞のなお別の特徴は、密着結合タンパク質例えば、クローディン5及びZO-1の発現である。本発明に有用な内皮細胞の他の追加的な特徴は、平板化又は扁平外観及び大型の中心核のような形態的特徴である。特定の実施態様において、方法は、内皮細胞を選択又は豊富化する1つ以上の工程を更に含むことができる。例えば、選択又は豊富化された内皮細胞は、内皮細胞特異的転写調節エレメントに機能的に結合しているレポーター遺伝子を発現することができる。他の実施態様において、選択又は豊富化された内皮細胞は、1つ以上の内皮細胞の特徴を示すことができる。例えば、選択又は豊富化された内皮細胞は、1つ以上の内皮細胞マーカーを発現することができる、内皮細胞の1つ以上の機能的特性を示すことができる又は内皮細胞の1つ以上の形態的特性を示すことができる。特定の実施態様において、本明細書に開示されている方法に使用される多能性幹細胞は、1つ以上の増殖因子を含有する培地で培養される。例えば、培地は、塩基性FGF、VEGF又はこれらを両方とも含有することができる。そのような培養は、内皮プログラミング因子の発現の増加の前、間又は後でありうる。本明細書に開示されている方法によりもたらされる内皮細胞を、発現の増加の後又は増殖因子の存在下若しくは不在下での培養の後、少なくとも、約又は最大3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20日又はこれらから導かれる任意の範囲でもたらすことができる。幾つかの特定の方法において、もたらされる内皮細胞は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現の増加の最大10日後に得られる。他の実施態様において、もたらされる内皮細胞は、発現の増加の最大4日後に得られる。特定の態様において、方法は、細胞集団が実質的に個別の細胞に分散される1つ以上の追加の工程を含む。分散は、例えば、発現の増加の少なくとも約24時間後に実施することができる。幾つかの実施態様において、分散は、発現の増加の少なくとも1、2、3、4又はそれ以上の日数の後で実施される。方法は、実質的に個別の細胞が、マトリックス成分で被覆された表面に分散される1つ以上の工程を含むこともできる。例えば、表面を、フィブロネクチン、ゼラチン、コラーゲン、ポリ-d-リシン、マトリゲル又はRGDペプチドで被覆することができる。マトリックス成分で被覆された表面において平板培養された細胞を、培養することができる。幾つかの実施態様において、マトリックス成分で被覆された表面において平板培養された細胞を、少なくとも約12時間培養することができる。培養した後、非結合細胞を除去することができ、結合細胞を更に培養することができる。例えば、結合細胞を少なくとも2日間更に培養することができる。細胞集団の分散は、機械的又は酵素的な手段により実施することができる。例えば、細胞を、チロシン若しくはtrypLE又はAccutase登録商標のような酵素の混合物のような1つ以上の酵素の有効量で処理することにより分散することができる。分散された細胞は、1つ以上の増殖因子を含む培地で培養することができる。例えば、分散された細胞は、塩基性FGF、VEGF又はこれらを両方とも含有する培地で培養することができる。また、提供されるものは、多能性幹細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換により内皮前駆細胞をもたらす方法である。そのような方法において、内皮前駆細胞は、多能性細胞のフォワードプログラミング又は体細胞の分化転換を引き起こして内皮前駆細胞にすることができる1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加する条件下で多能性幹細胞又は体細胞を培養し、それによって多能性幹細胞をフォワードプログラミングして内皮前駆細胞にすること又は体細胞を分化転換して内皮前駆細胞にすることによりもたらすことができる。動脈内皮細胞をもたらす方法も提供される。幾つかの態様において、方法は、例えばERG又はETV2のような1つ以上の内皮プログラミング因子の発現を増加することを含む。特定の実施態様において、動脈内皮細胞は、例えばCD304、CD184又はDLL4のような1つ以上の動脈内皮細胞マーカーを発現する。特定の態様において、血液生成内皮細胞をもたらす方法が提供される。幾つかの態様において、血液生成内皮細胞は、例えばETV2のような内皮プログラミング因子の発現を増加することによりもたらされる。そのような血液生成内皮細胞を使用して、造血培養培地で培養されたときに造血細胞を生じることができる。造血培養培地は、造血細胞を生じるのに適した任意の培地でありうる。例えば、造血培養培地は、ESFM、StemLineHSC培地シグマ社、線維芽細胞増殖因子FGF、血管内皮増殖因子VEGF、幹細胞因子SCF、トロンボポエチンTPO、インターロイキン-3IL-3及びインターロイキン-6IL-6からなる群より選択される1つ以上の成分を含むことができる。特定の実施態様において、造血培養培地は、ESFM、StemLineHSC培地シグマ社、FGF、VEGF、SCF、TPO、IL-3及びIL-6を含む。生じた造血細胞は、CD43、CD45、CD235a及びCD41aからなる群より選択される1つ以上の造血細胞マーカーを含むことができる。特定の態様において、造血細胞は、CD43、CD45、CD235a及び/又はCD41aである。他の態様において、間葉生成mesenchymogenic内皮細胞をもたらす方法が提供される。幾つかの態様において、間葉生成内皮細胞は、ERG又はETV2のような内皮プログラミング因子の発現を増加することによりもたらされる。特定の実施態様において、間葉生成内皮細胞は、ERGの発現を増加することによりもたらされる。そのような間葉生成内皮細胞を使用して、間葉培養培地で培養されたときに間葉細胞を生じることができる。間葉培養培地は、間葉細胞を生じるのに適した任意の培地でありうる。例えば、間葉培養培地は、FGF及び例えばA83-01のようなTGF-ベータインヒビターからなる群より選択される1つ以上の成分を含むことができる。特定の実施態様において、間葉培養培地は、FGF及びA83-01を含む。生じた間葉細胞は、CD73及びCD105からなる群より選択される1つ以上の間葉細胞マーカーを含むことができる。幾つかの態様において、生じた間葉細胞はCD31-CD73CD105である。本明細書において提供される内皮細胞、内皮前駆細胞又は内皮細胞の前駆体を、臨床又はスクリーニング用途のような内皮細胞のための当該技術で現在既知の任意の方法及び用途に使用することができる。例えば、本発明は、内皮細胞に対する効果について化合物を評価する方法を提供する。そのような方法において、本明細書に開示されている任意の方法によりもたらすことができる内皮細胞を化合物と接触させることができ、内皮細胞に対する化合物の効果をアッセイすることができる。例えば、内皮細胞に対する薬理学的又は毒物学的効果をアッセイすることができる。特定の実施態様において、本発明の内皮細胞は、薬剤血管毒性又は血管透過性を評価するために使用される。他の実施態様において、本発明の内皮細胞は、抗癌薬の開発に使用される。動脈内皮細胞を使用して、血栓症、アテローム動脈硬化症及び高血圧症のような疾患を研究することができる。幾つかの態様において、被験者を治療する方法が提供される。例えば、被験者は、心血管の疾患又は心血管の損傷を有する場合がある又はその危険性がある。幾つかの実施態様において、被験者は虚血を有する又はその危険性がある。なお他の実施態様において、被験者は組織損傷を有する又は組織移植片の必要性がある。特定の態様において、任意のそのような被験者は、本明細書に開示されている任意の方法によりもたらされる内皮細胞又は内皮前駆細胞の治療有効量を被験者に投与することにより治療される。加えて、幾つかの実施態様において、本発明の方法によりもたらされる内皮細胞を使用して、そのような療法が必要な患者に投与される組織移植片を生物工学により作ることができる。幾つかの実施態様において、動脈内皮細胞は、動脈障害、損傷又は疾患を治療する方法のような治療方法に使用される。特定の実施態様において、本発明は、内皮細胞又は内皮前駆体細胞を対象とする。そのような内皮細胞又は内皮前駆体細胞は、本明細書に開示されている方法のいずかに従うプロセスによりもたらすことができる。他の特定の実施態様において、本発明は、内皮前駆細胞又は内皮前駆体細胞を対象とする。そのような内皮前駆細胞又は前駆体細胞は、本明細書に開示されている方法のいずかに従うプロセスによりもたらすことができる。なお他の実施態様において、細胞個体群が提供される。そのような細胞個体群は、多能性幹細胞、体細胞、内皮細胞、内皮前駆細胞、内皮細胞の他の前駆体、幹細胞又はこれらのいずれかの子孫を含むことができる。例えば、細胞個体群は内皮細胞からなることができ、ここで少なくとも1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、99若しくはそれ以上又はこれらから導かれる任意の範囲の内皮細胞は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む外因性発現カセットを担持する。特定の実施態様において、80の内皮細部は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む外因性発現カセットを担持する。他の態様において、細胞個体群は内皮前駆細胞からなることができ、ここで少なくとも80の内皮前駆細胞は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む外因性発現カセットを担持する。なお他の態様において、多能性幹細胞又は体細胞を含有する細胞個体群が提供され、ここで15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、99若しくはそれ以上又はそれらから導かれる任意の範囲の細胞は、1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む外因性発現カセットを担持する。例えば、内皮プログラミング因子遺伝子は、ERG又はETV2でありうる。また提供されるものは、2つの細胞型、すなわち内皮細胞になるようにプログラムされた細胞及び内皮細胞を含み、他の中間細胞型を実質的に含まない細胞個体群を含む組成物である。例えば、そのような細胞個体群は、幹細胞及び内皮細胞を含む2つの細胞型を有することができるが、内皮細胞分化プロセスの中間発育段階において他の細胞型を実質的に含まない。特に、幹細胞及び内皮細胞からなる細胞個体群を含む組成物を提供することができる。幹細胞は、特に多能性幹細胞、例えば誘導多能性幹細胞でありうる。内皮細胞は、細胞個体群の少なくとも、約又は最大1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、99又はこれらから導かれる任意の範囲でありうる。特定の実施態様において、内皮細部は、内皮前駆細胞のフォワードプログラミングによりもたらされる。例えば、内皮前駆細胞を、内皮前駆細胞のフォワードプログラミングを引き起こして内皮細胞にすることができる、本明細書に記載されているような1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加する条件下で培養し、それにより前駆細胞をフォワードプログラミングして内皮細胞にすることができる。別の実施態様において、内皮細胞は、非内皮不死化体細胞の分化転換によりもたらされる。例えば、非内皮不死化体細胞胞を、体細胞の分化転換を引き起こして内皮細胞にすることができる、本明細書に記載されているような1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子の発現レベルを増加する条件下で培養し、それにより体細胞を分化転換して内皮細胞にすることができる。本発明の方法及び/又は組成物の文脈において考察されている実施態様を、本明細書に記載されている任意の他の方法又は組成物に関して用いることができる。したがって、1つの方法又は組成物に関する実施態様を、本発明の他の方法及び組成物に当てはめることもできる。本明細書で使用されるとき、核酸に関する用語コードする又はコードしているは、本発明が当業者に容易に理解できるように使用されているが、これらの用語を、それぞれ含む又は含んでいると交換可能に使用することができる。本明細書において使用されるとき、a又はanは1つ以上を意味することができる。請求項において使用されるとき、語含んでいると共に使用される場合、語a又はanは1つ又は2つ以上を意味することができる。請求項における語又はの使用は、代替物のみを意味すること又は代替物が相互排他的であることが明確に示されない限り及び/又はを意味するために使用されるが、開示は、代替物及び及び/又はのみを意味する定義を支持する。本明細書で使用されるとき別は、少なくとも二番目又はそれ以上を意味することができる。本出願の全体にわたって、用語約は、値が、値を決定するために用いられる装置、方法の固有誤差変動又は研究被験者に存在する変動を含むことを示すために使用される。本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な記載によって明白となる。しかし、詳細な記載及び特定の例は、本発明の好ましい実施態様を示しているが、本発明の精神及び範囲内の多様な変更及び改変がこの詳細な記載により当業者に明白であるので、例示のため提示されていることが理解されるべきである。内皮細胞は、血管の壁を含み、身体の多様なプロセスにおいて重要である。例えば、内皮細胞は、血管新生、血圧の調節、血栓、炎症及び濾過において役割を果たす。内皮細胞は、細胞の異種群であり、管径、特定の器官への特異化及び形態に応じて多様な特徴を有することができる。内皮細胞の幾つかの特徴には、CD31、CD105エンドグリン及びウィルブランド因子第VIII因子とも呼ばれるの発現、並びにアセチル化低密度リポタンパク質ac-LDLを取り込む能力が含まれる。本発明は、フォワードプログラミング又は分化転換よる内皮細胞産生の方法及び組成物を提供することによって、現行技術による幾つかの主要な問題を克服する。段階的分化プロトコールを使用する以前の方法と対照的に、これらの方法の特定の態様は、フォワードプログラミング又は分化転換により非内皮細胞において内皮プログラミング転写因子のレベルを増加することによって内皮細胞をもたらす。多様な中間体発育段階における異なる増殖因子の添加のような余分の工程は、本発明の方法の特定の態様において不必要でありうる。したがって、本発明の特定の態様は、時間効率及び費用効率がより高くなることができ、例えば幹細胞又は体細胞のような再生可能な供給源から治療用の内皮細胞又は内皮前駆細胞の製造を可能にすることができる。本発明の更なる実施態様及び利点が下記に記載される。I.定義プログラミングは、細胞が産生できる子孫の種類を変更するプロセスである。例えば、細胞は、プログラミングなしの同じ条件下で形成することができるものと比較して、培養又はインビボのいずれかにおいて少なくとも1つの新たな細胞型の子孫を形成できるように変更される場合、プログラムされている。このことは、十分な繁殖の後、新たな細胞型の表面型の特徴を有する子孫の測定可能な割合が観察され、そのような子孫がプログラミングの前に実質的に形成できなかったこと、あるいは、新たな細胞型の特徴を有する割合がプログラミングの前よりも測定できる程度に多いことを意味する。このプロセスは、分化、脱分化及び分化転換を含む。分化は、特異化が乏しい細胞がより特異化された細胞型になるプロセスである。脱分化は、部分的又は最終的に分化した細胞が、多能性又は多分化能のような初期発育段階に戻る細胞プロセスである。分化転換は、1つの分化細胞型が別の分化細胞型に形質転換するプロセスである。特定の条件下、新たな細胞型の特徴を有する子孫の割合は、優先度を増加するために、少なくとも約1、5、25又はそれ以上でありうる。用語内皮プログラミング因子は、単独又は別のプログラミング因子遺伝子との組み合わせで発現したとき、多能性細胞又は非内皮体細胞の直接分化を引き起こして内皮細胞又は内皮前駆体細胞にすることができる遺伝子である。用語フォワードプログラミングは、多能性を有さない分化体細胞とは対照的に、多分化能細胞又は多能性細胞に1つ以上の特異的系列決定遺伝子又は遺伝子産物を提供することにより、多分化能細胞又は多能性細胞をプログラミングすることを意味する。例えば、フォワードプログラミングは、ESC又はiPSCをプログラミングして内皮細胞、内皮前駆体細胞、他の前駆体細胞又は他の分化体細胞にするプロセスを記載することができる。用語外因性は、細胞又は生物体におけるタンパク質、遺伝子、核酸又はポリヌクレオチドに関して使用される場合、人工的又は自然の手段により細胞又は生物体に導入されたタンパク質、遺伝子、核酸又はポリヌクレオチドを意味するか、或いは細胞に関する場合、単離され、後に人工的又は自然の手段により他の細胞又は生物体に導入される細胞を意味する。外因性核酸は、異なる生物体若しくは細胞からのものでありうる又は生物体若しくは細胞内の天然に生じる核酸の1つ以上の追加的なコピーでありうる。外因性細胞は、異なる生物体からのものでありうる又は同じ生物体からのものでありうる。非限定的例として、外因性核酸は、天然の細胞と異なる染色体位置のものであるか、そうでなければ天然に見出されるものと異なる核酸配列によりフランクされたものである。外因性核酸は、エピソームベクターのような染色体外のものでもありうる発現作成物又は発現カセットとは、転写を指示することができる核酸分子を意味する。発現作成物は、最低でも、1つ以上の望ましい細胞型、組織又は器官において遺伝子発現を指示する1つ以上の転写制御エレメント例えば、プロモーター、エンハンサー又は機能的に同等の構造物を含む。転写終結シグナルのような追加のエレメントを含むこともできる。ベクター又は作成物時々、遺伝子送達系又は遺伝子導入ビヒクルと呼ばれるは、インビトロ又はインビボのいずれかにおいて宿主細胞に送達されるポリヌクレオチドを含む巨大分子又は分子の複合体を意味する。プラスミドは、一般的な種類のベクターであり、染色体DNAから独立して複製することができる、染色体DNAから離れている染色外DNA分子である。特定の場合において、環状の二本鎖である。複製の起点ori又は複製起点は、細胞のプラスミドに存在する場合、プラスミドにおいて及び/又はDNA合成が開始する部位において若しくは近接して結合配列を維持することができる、例えばリンパ増殖性ヘルペスウイルスにおけるDNA配列である。EBVの起点は、FR配列30bp反復の20個の不完全コピー、好ましくはDS配列を含むが、EBV結合EBNA-1の他の部位、例えばRep配列を、複製の起点としてDSと置き換わることができるKirshmaierandSugden1998。したがって、EBVの複製起点は、FR、DS若しくはRep配列又は核酸修飾を介した機能的に同等の任意の配列若しくはそれから誘導される合成の組み合わせを含む。例えば、本発明は、Lindneretal2008において特定的に記載されているように、個別のエレメントの挿入又は突然変異のようなEBVの遺伝子操作された複製起点を使用することもできる。用語対応するは、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列の全て若しくは一部と相同性であるすなわち、同一であり、進化的に厳密に関連していないこと又はポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列と同一であることを意味するために本明細書において使用される。対照的に、用語相補的は、相補配列が参照ポリヌクレオチド配列の全て又は一部と相同性であることを意味するために本明細書において使用される。例示として、核酸配列TATACは参照配列TATACに対応し、参照配列GTATAと相補的である。特定のタンパク質をコードする遺伝子、ポリヌクレオチド、コード領域、配列、セグメント、フラグメント又は導入遺伝子は、適切な調節配列の制御下に置かれたとき、インビトロ又はインビボにおいて、遺伝子産物、例えばポリペプチドに転写され、また場合により翻訳される核酸分子である。コード領域は、cDNA、ゲノムDNA又はRNA形態のいずれかに存在することができる。DNA形態で現れる場合、核酸分子は一本鎖すなわち、センス鎖又は二本鎖でありうる。コード領域の境界は、5’アミノ末端の開始コドン及び3’カルボキシ末端の翻訳終止コドンにより決定される。遺伝子は、原核又は真核mRNAからのcDNA、原核又は真核DNAからのゲノムDNA配列及び合成DNA配列を含むことができるが、これらに限定されない。転写終結配列は、通常、遺伝子配列の3’に位置している。用語制御エレメントは、プロモーター領域、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流調節ドメイン、複製の起点、内部リボソーム進入部位IRES、エンハンサー、スプライス接合部位などを集合的に意味し、これらは受容細胞においてコード配列の複製、転写、転写後プロセシング及び翻訳を集合的に提供する。選択されたコード配列が適切な宿主細胞において複製、転写及び翻訳されうる限り、これらの制御エレメントが全て存在する必要はない。用語プロモーターは、DNA調節配列を含むヌクレオチド領域を意味するために本明細書において通常の意味で使用され、ここで調節配列は、RNAポリメラーゼを結合すること及び下流3’方向コード配列の転写を開始することができる遺伝子から誘導される。エンハンサーとは、プロモーターの近位の位置にあるとき、エンハンサードメインが不在のプロモーターから得る転写活性よりも増加した転写活性を付与する核酸配列を意味する。核酸分子を参照して機能的に結合するとは、2つ以上の核酸分子例えば、転写される核酸分子、プロモーター及びエンハンサーエレメントが、核酸分子の転写を可能にするように連結していることを意味する。ペプチド及び/又はポリペプチド分子を参照して機能的に結合するとは、2つ以上のペプチド及び/又はポリペプチド分子が、単一のポリペプチド鎖、すなわち融合物の各ペプチド及び/又はポリペプチド成分の少なくとも1つの性質を有する融合ポリペプチドを生じるように連結していることを意味する。融合ポリペプチドは、好ましくはキメラであり、すなわち異種分子から構成される。相同性は、2つのポリヌクレオチド又は2つのポリペプチドの間の同一性の率を意味する。1つの配列と別の配列との一致は、当該技術に既知の技術により決定することができる。例えば、相同性は、配列情報を整列し、容易に利用可能なコンピュータープログラムを使用して、2つのポリペプチド分子の間の配列情報を直接比較することによって決定することができる。あるいは、相同性は、相同性領域の間に安定した二重鎖の形成を促進する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション、続く一本鎖特異的ヌクレアーゼによる消化及び消化フラグメントのサイズ決定によって決定することができる。2つのDNA又は2つのポリペプチドの配列は、少なくとも約80、好ましくは少なくとも約90、最も好ましくは少なくとも約95のヌクレオチド又はアミノ酸が、上記の方法を使用して決定された分子の確定された長さにわたって、それぞれマッチしている場合に、実質的に相同性である。用語細胞は、当該技術において最も広義の意味で本明細書に使用され、多細胞生物の組織の構造単位である、外側から隔離する膜構造により囲まれている、自己複製の能力を有する、並びに遺伝子情報及びそれの発現する機構を有する生体を意味する。本明細書において使用される細胞は、天然に生じる細胞又は人工的に修飾された細胞例えば、融合細胞、遺伝子修飾細胞などでありうる。本明細書で使用されるとき、用語幹細胞は、少なくとも1種類のより特殊化された細胞を生じることができる細胞を意味する。幹細胞は、自己再生する能力、すなわち未分化状態を維持しながら多数の細胞分化周期を通過する能力を有し、特殊化された細胞型に分化する可能性、すなわち能力を有する。典型的には、幹細胞は、損傷組織を再生することができる。本明細書における幹細胞は、胚幹ES細胞、誘導多能性幹細胞又は組織幹細胞組織特異的幹細胞又は体幹細胞とも呼ばれるでありうるが、これらに限定されない。上記に記載された能力を有する任意の人工的に産生された細胞例えば、本明細書において使用される融合細胞、再プログラム細胞などは、幹細胞でありうる。胚幹ES細胞は、初期胚から誘導される多能性幹細胞である。ES細胞は1981年に最初に確立され、これは1989年からノックアウトマウスの製造にも適用されてきた。1998年には、ヒトES細胞が確立され、これは再生医療のために現在入手可能になりつつある。ES細胞と異なり、組織幹細胞は、限定された分化可能性を有する。組織幹細胞は、組織の特定の位置に存在し、未分化細胞内構造を有する。したがって、組織幹細胞の多能性は典型的に低い。組織幹細胞は、より高い核/細胞質比を有し、細胞内オルガネラをほとんど有さない。大部分の組織幹細胞は、低い多能性、長い細胞周期及び固体の生命を越える繁殖能力を有する。組織幹細胞は、皮膚系、消化器系、骨髄系、神経系などのような、細胞が誘導される部位に基づいて部類に分けられる。皮膚系の組織幹細胞には、表皮幹細胞、毛包幹細胞などが含まれる。消化器系の組織幹細胞には、膵臓共通幹細胞、肝臓幹細胞などが含まれる。骨髄系の組織幹細胞には、造血幹細胞、間葉幹細胞などが含まれる。神経系の組織幹細胞には、神経幹細胞、網膜幹細胞などが含まれる。誘導多能性幹細胞は、iPS細胞又はiPSCと一般的に略され、再プログラミング因子と呼ばれる特定の遺伝子を挿入することにより、非多能性細胞、典型的には成体体細胞から又は線維芽細胞、造血細胞、筋細胞、神経細胞、表皮細胞などのような最終的に分化した細胞から人工的に調製される種類の多能性幹細胞を意味する。多能性は、1つ以上の組織若しくは器官を構成する全ての細胞又は好ましくは3つの胚葉:内胚葉胃の内壁、胃腸管、肺、中胚葉筋肉、骨、血液、必尿生殖器若しくは外胚葉表皮組織及び神経系のいずれかに分化する可能性を有する幹細胞を意味する。本明細書において使用される多能性幹細胞は、3つの胚葉のいずれかから誘導される細胞、例えば全能性細胞又は誘導多能性細胞の直接の子孫に分化しうる細胞を意味する。本明細書で使用されるとき、全能性幹細胞は、卵と精子細胞の融合から産生される細胞のような、生物体を構成する全ての細胞に分化する能力を有する細胞を意味する。受精卵の最初の幾つかの分裂により産生される細胞も、全能性である。これらの細胞は、分化して胚細胞型及び胚外細胞型になることができる。多能性幹細胞は、あらゆる胎児又は成体細胞型を生じることができる。しかし、単独では、これらは胎児又は成体の動物に発育することはできず、それはこれらが胎盤のような胚外組織に寄与する可能性を欠いているからである。対照的に、多くの前駆細胞は多分化能幹細胞であり、すなわち、これらは限られた数の細胞運命に分化することができる。多分化能前駆細胞は、幾つかの他の種類の細胞を生じることができるが、これらの種類は数が限られている。多分化能幹細胞の例は、造血細胞幾つかの種類の血球に発育することができるが、脳細胞又は他の種類の細胞に発育することができない血液幹細胞である。胚を形成する長い一連の細胞分裂の終了時には、最終的に分化した細胞又は特定の機能に永久的に関連づけられたと考慮される細胞となる。本明細書で使用されるとき、用語体細胞は、そのDNAを次世代に直接伝達しない、卵、精子などの生殖細胞以外の任意の細胞を意味する。典型的には、体細胞は限定された多能性を有する又は多能性を有さない。本明細書において使用される体細胞は、天然に生じうる又は遺伝子修飾されうる。細胞は、本明細書で使用されるとき、10未満の望ましくない細胞型を有する場合、特定の望ましくない細胞型を実質的に含有しない、1未満の望ましくない細胞型を有する場合、特定の望ましくない細胞型を本質的に含有しない。しかし、さらにより望ましいものは、細胞個体群全体の0.5未満又は0.1未満が望ましくない細胞型を含む細胞個体群である。したがって、個体群の0.1~1未満中間の率を含むの細胞が望ましくない細胞型を含む細胞個体群は、これらの細胞型を本質的に含まない。培地は、本明細書で使用されるとき、特定の試薬を、そのような作用物質の外部添加がない場合に本質的に含有しない。より好ましくは、これらの作用物質は、不在であるか又は検知されない量で存在する。II.内皮細胞プログラミングに関与する細胞本発明の特定の実施態様において、内皮細胞ではない細胞のフォワードプログラミングにより内皮細胞をもたらす方法及び組成物が開示される。1つ以上の内皮プログラミング因子遺伝子を含む外因性カセット及び/又は内皮細胞同定に特異的なレポーター発現カセットを含む細胞を提供することもできる。幾つかの実施態様において、細胞は、胚幹細胞、胎児幹細胞又は成体幹細胞を含む幹細胞でありうるが、これらに限定されない。更なる実施態様において、細胞は任意の体細胞でありうる。B.幹細胞幹細胞は、全てでなければ大部分の多細胞生物において見出される。これらは、有糸細胞分裂を介してそれら自体を再生する能力により及び多様な範囲の特殊化細胞型に分化する能力によって特徴付けられる。2つの主な種類の哺乳類幹細胞は、胚盤胞において見出される胚幹細胞と成体組織において見出される成体幹細胞である。発育中の胚において、幹細胞は全ての特殊化された胚組織に分化することができる。成体の生物において、幹細胞及び前駆細胞は、特殊化細胞を補充することにより身体の修復系として作用し、また、血液、皮膚又は腸管組織のような再生器官の通常の代謝回転を維持する。ヒト胚幹細胞ESC及び誘導多能性幹細胞iPSCは、内皮細胞を含む身体の全ての細胞型に分化する可能性を保持しながら、インビトロで長期間繁殖することができる。したがって、これらの細胞は、薬剤開発及び治療用途の両方において患者特異的機能性内皮細胞の無制限の供給を提供する可能性がありうる。ヒトESC又はiPSCのインビトロにおける内皮細胞への分化は、通常のインビボ発育を反復し、すなわち、中胚葉分化及び血液新生特異化を含む通常の連続的な発育段階を経る図1。この連続的な発育プロセスは、分化の異なる段階で異なる増殖因子の添加を必要とする。本発明の特定の態様は、通常の発育段階の全てでなければ大部分を迂回して、iPSCの生成と同様に、内皮細胞分化/機能に重要な転写因子の組み合わせの発現を介して、ヒトESC/iPSCからフォワードプログラミングにより完全な機能性内皮細胞を提供する。この手法は、時間効率及び費用効率がより高くなることができ、ヒト一次成体内皮細胞と同一でなければ高度に類似した機能を有する内皮細胞を生じることができる。加えて、ヒトESC/iPSCは、これらの無制限の繁殖と共に、内皮細胞分化の出発細胞個体群として、体細胞と比べて特有の利点を有する。2.胚幹細胞胚幹細胞系統ES細胞系統は、胚盤胞又は初期桑実期胚の内部細胞塊ICMの原外胚葉組織から誘導される細胞の培養である。胚盤胞は、初期段階の胚ヒトではおよそ4~5日齢であり、50~150個の細胞からなる。ES細胞は、多能性であり、3つの一次胚葉:外胚葉、内胚葉及び中胚葉の全ての誘導体への発育の際に生じる。換言すると、特定の細胞型のために十分で必要な刺激を与えると、200個を越える成体の細胞型のそれぞれに発育することができる。これらは、胚体外膜又は胎盤に寄与しない。ほぼ全ての研究は、現在まで、マウス胚幹細胞mES又はヒト胚幹細胞hESを使用して実施されてきた。両方とも必須の幹細胞の特徴を有するが、これらは、分化状態を維持するために非常に異なる環境を必要とする。マウスES細胞は、ゼラチン層に増殖させることができ、白血病抑制因子LIFの存在を必要とする場合がある。ヒトES細胞は、マウス胚線維芽細胞MEFの支持細胞層に増殖させることができ、多くの場合、塩基性線維芽細胞増殖因子胃bFGF又はFGF-2の存在を必要とする可能性がある。最適な培養条件又は遺伝子操作Chambersetal2003なしでは、胚幹細胞は急速に分化する。ヒト胚幹細胞は、幾つかの転写因子及び細胞表面タンパク質の存在により定義することもできる。転写因子Oct-4、Nanog及びSox-2は、分化及び多能性の維持をもたらす遺伝子の抑制を確実にする主要な調節ネットワークを形成するBoyeretal2005hESの同定に最も一般的に使用される細胞表面抗原には、糖脂質SSEA3及びSSEA4、並びにケラタン表面抗原Tra-1-60及びTra-1-81が含まれる。マウスES細胞の得る方法は良く知られている。一つの方法において、マウスの129株からの着床前胚盤胞を、マウス抗血清で処理して、栄養外胚葉を除去し、内部細胞塊を、ウシ胎児血清を含有する培地において化学的に不活性化したマウス胚線維芽細胞の支持細胞層で培養する。発育した未分化ES細胞のコロニーを、ウシ胎児血清の存在下、マウス胚線維芽細胞の支持細胞層で継代培養して、ES細胞の個体群を産生する。幾つかの方法において、マウスES細胞をサイトカイン白血病抑制因子LIFの添加により支持細胞層の不在下で増殖させて、血清含有培養培地とすることができるSmith2000。他の方法では、マウスES細胞を骨形成タンパク質及びLIFの存在下で血清無含有培地において増殖させることができるYingetal2003。ヒトES細胞は、以前に記載された方法Thomsonetal1995Thomsonetal1998ThomsonandMarshall1998Reubinoffetal2000を使用して胎盤胞から得ることができる。一つの方法において、5日目のヒト胎盤胞をウサギ抗ヒト脾臓細胞抗血清に曝露し、次に1:5希釈のモルモット補体に曝露して、栄養外胚葉細胞を溶解する。無傷の内部細胞塊から溶解栄養外胚葉細胞を除去した後、内部細胞塊を、ガンマ不活性化マウス胚線維芽細胞の支持細胞層において、ウシ胎児血清の存在下で培養する。9~15日後、内部細胞塊由来の細胞の凝集塊を、化学的すなわち、トリプシンへの曝露又は機械的に解離し、ウシ胎児血清及びマウス胚線維芽細胞の支持細胞層を含有する新たな培地で再び平板培養することができる。更に繁殖すると、未分化形態を有するコロニーをマイクロピペットで選択し、機械的に解離して凝集塊にし、再び平板培養する米国特許第6,833,269号を参照すること。ES様形態は、明確に高い核対細胞質の比率及び顕著な核小体を有する緻密なコロニーにより特徴付けられる。得られるES細胞は、短時間のトリプシン処理により又はマイクロピペットでの個別のコロニーの選択により、ルーチン的に継代することができる。幾つかの方法において、ヒトES細胞は、塩基性線維芽細胞増殖因子の存在下、線維芽細胞の支持細胞層でES細胞を培養することにより、血清なしで増殖することができるAmitetal2000。他の方法では、ヒトES細胞は、Matrigel商標のようなタンパク質マトリックス又は塩基線維芽細胞増殖因子を含有する調整培地の存在下のラミニンで細胞を培養することにより、支持細胞層なしで増殖することができるXuetal2001。培地は、線維芽細胞を同時培養することにより予め調整される。アカゲザル及びコモンマーモセットのES細胞を単離する方法も知られているThomsonandMarshall1998Thomsonetal1995ThomsonandOdorico2000。ES細胞の別の供給源は、確立されたES細胞系統である。多様なマウス細胞系統及びヒトES細胞系統が知られており、これらの増殖及び繁殖の条件は定義されている。例えば、マウスCGR8細胞系統は、マウス株129胚の内部細胞塊から確立され、CGR8細胞の培養は、支持細胞層なしのLIFの存在下で増殖することができる。更なる例として、ES細胞系統H1、H7、H9、H13及びH14は、Thompsonetalにより確立された。加えて、H9系統のサブクローンH9.1及びH9.2が開発されている。例えばYuandThompson2008に記載されているものこれは参照として本明細書に組み込まれるのような、当該技術に既知のほぼあらゆるES又は幹細胞系統を本発明に使用できることが予想される。本発明に関連して使用されるES細胞の供給源は、胚盤胞、胚盤胞の内部細胞塊を培養することで誘導される細胞又は確立された細胞系統の培養から得られる細胞でありうる。したがって、本明細書で使用されるとき、用語ES細胞は、胚盤胞の内部細胞塊の細胞、内部塊細胞の培養から得られるES細胞及びES細胞系統の培養から得られるES細胞を意味することができる。3.誘導多能性幹細胞誘導多能性幹iPS細胞は、ES細胞の特徴を有するが、分化体細胞の再プログラミングにより得られる細胞である。誘導多能性細胞は、多様な方法により得られてきた。一つの方法では、成人ヒト皮膚線維芽細胞を、レトロウイルス形質導入を使用して転写因子Oct4、Sox2、c-Myc及びKlf4により形質移入するTakahashietal2007。形質移入細胞を、塩基性線維芽細胞増殖因子bFGFを補充した培地においてSNL支持細胞LIFを産生するマウス細胞線維芽細胞系統で平板培養する。およそ25日後、ヒトES細胞コロニーに類似するコロニーが培養に現れる。ES細胞様コロニーを取り出し、bFGFの存在下の支持細胞で拡大する。細胞の特徴に基づくと、ES細胞様コロニーの細胞は、誘導多能性幹細胞である。誘導多能性幹細胞は、ヒトES細胞と形態的に類似しており、多様なヒトES細胞マーカーを発現する。また、ヒトES細胞の分化をもたらすことが知られている条件下で増殖すると、誘導多能性幹細胞はそれに応じて分化する。例えば、誘導多能性幹細胞は、内皮細胞構造及び内皮細胞マーカーを有する細胞に分化することができる。例えばYuandThompson2008に記載されたものを含む、ほぼあらゆるiPS細胞又は細胞系統を本発明に使用できることが予想される。別の方法では、ヒト胎児又は新生児線維芽細胞を、レンチウイルス形質導入を使用して4つの遺伝子Oct4、Sox2、Nanog及びLin28により形質移入するYuetal2007。感染の12~20日後、ヒトES細胞形態を有するコロニーが目に見えるようになる。コロニーを取り出し、拡大する。コロニーを構成する誘導多能性幹細胞は、ヒトES細胞と類似した形態であり、多様なヒトES細胞マーカーを発現し、マウスに注射した後に神経細胞、軟骨及び腸上皮を有する奇形種を形成する。マウスから誘導多能性幹細胞を調製する方法も知られているTakahashiandYamanaka2006。iPS細胞の誘導は、典型的にはSoxファミリーの少なくとも1つのメンバー及びOctファミリーの少なくとも1つのメンバーの発現又はそれらへの曝露を必要とする。Sox及びOctは、ES細胞同一性を特定する転写調節階層の中心であると考えられる。例えば、Soxは、Sox-1、Sox-2、Sox-3、Sox-15又はSox-18でありうる;OctはOct-4でありうる。Nanog、Lin28、Klf4又はc-Mycのような追加の因子は、再プログラミング効率を増加することができ、再プログラミング因子の特定のセットは、Sox-2、Oct-4、Nanog及び場合によりLin-28を含む又はSox-2、Oct4、Klf及び場合によりc-Mycを含むセットでありうる。ES細胞のようなiPS細胞は、抗体のSSEA-1、SSEA-3及びSSEA-4DevelopmentalStudiesHybridomaBankNationalInstituteofChildHealthandHumanDevelopmentBethesdaMd並びにTRA-1-60及びTRA-1-81Andrewsetal1987を使用する免疫組織化学又はフローサイトメトリーによって同定又は確認できる特徴的な抗原を有する。胚幹細胞の多能性は、およそ0.5~10×106細胞を8~12週齢の雄SCIDマウスの後肢筋肉に注射することにより確認できる。3つの胚葉のそれぞれの少なくとも1つの細胞型を示す奇形種が発生する。本発明の特定の態様において、iPS細胞は、上記に記載されたKlf又はNanogと組み合わせたOct4及びSox2のようなOctファミリーメンバー及びSoxファミリーメンバーを含む再プログラミング因子を使用して、体細胞を再プログラミングすることにより作製される。再プログラミング用の体細胞は、線維芽細胞、角化細胞、造血細胞、間葉細胞、肝細胞、胃細胞又はβ細胞のような、誘導して多能性にすることができる任意の体細胞でありうる。特定の態様において、T細胞を再プログラミング用の体細胞の供給源として使用することもできる参照として本明細書に組み込まれる米国特許出願第61/184,546号を参照すること。再プログラミング因子を、組み込みベクター又はエピソームベクターのような1つ以上のベクターに含まれる発現カセット、例えばEBVエレメントに基づいた系から発現することができる参照として本明細書に組み込まれる米国特許出願第61/058,858号;Yuetal2009を参照すること。更なる態様において、再プログラミングタンパク質を、タンパク質形質導入により体細胞に直性導入することができる参照として本明細書に組み込まれる米国特許出願第61/172,079号を参照すること。4.体細胞核移植により誘導される胚幹細胞多能性幹細胞を、供与体核が紡錘体無含有卵母細胞に移入される体細胞核移植により調製することができる。核移植により産生される幹細胞は、供与体核と遺伝子的に同一である。一つの方法では、アカゲザルの皮膚線維芽細胞の供与体線維芽細胞核を、紡錘体無含有の成熟した第二分裂中期のアカゲザル卵母細胞の細胞質に電気融合により導入するByrneetal2007。融合卵母細胞を、イオノマイシンへの曝露により活性化し、次に胚盤胞段階になるまでインキュベートする。次に、選択された胚盤胞の内部細胞塊を培養して、胚幹細胞系統を産生する。胚幹細胞系統は、通常のES細胞形態を示し、多様なES細胞マーカーを発現し、インビトロとインビボの両方で複数の細胞型に分化する。本明細書で使用されるとき、用語ES細胞は、受精核を含有する胚から誘導される胚幹細胞を意味する。ES細胞は、体細胞核移植により誘導される胚幹細胞と呼ばれる、核移植により産生される胚幹細胞と区別される。5.他の幹細胞胎児幹細胞は、自己再生能力及び多能性の分化可能性を有する細胞である。これらを、胎児細胞栄養芽層細胞ヨーロッパ特許第0412700号から、並びに絨毛膜絨毛、羊水及び胎盤国際公開第2003/042405号から単離及び拡大することができる。これらの参考文献は、その全体が参考として本明細書に組み込まれる。胎児幹細胞の細胞表面マーカーには、CD117/c-kit、SSEA3、SSEA4及びSSEA1-が含まれる。体幹細胞は大部分の器官組織において同定されてきた。最適な特徴決定は、造血幹細胞である。これは、細胞表面マーカー及び機能的特性に基づいて精製された中胚葉由来細胞である。骨髄、血液、臍帯血、胎児肝臓及び卵黄嚢から単離された造血幹細胞は、受容者の寿命にわたって造血を再開する及び複数の造血性系列を生じる前駆細胞である全てその全体が参照として本明細書に組み込まれる、米国特許第5,635,387号;同第5,460,964号;同第5,677,136号;同第5,750,397号;同第5,759,793号;同第5,681,599号;同第5,716,827号;Hilletal1996を参照すること。致死的に照射された動物又はヒトに移植された場合、造血幹細胞は、赤血球、好中球マクロファージ、巨核球及びリンパ系造血細胞プールを再生息させることができる。インビトロにおいて造血幹細胞を誘導して、少なくとも幾つかの自己再生細胞分裂を起こすことができ、誘導して、インビボで見られる同じ系列に分化させることができる。したがって、この細胞は幹細胞の基準を満たす。次善の特徴決定は、間葉幹細胞MSCであり、初めは胚体中胚葉から誘導され、成体骨髄から単離され、分化して、筋肉、骨、軟骨、脂肪、骨髄間質及び腱を形成することができる。胚形成の際に、中胚葉は、骨、軟骨、脂肪、骨格筋及び可能であれば内皮を生じる組織である肢芽中胚葉に発育する。中胚葉は、内臓中胚葉に分化し、これは心筋、平滑筋又は内皮と造血前駆細胞からなる血島を生じることができる。したがって原始中胚葉又は間葉幹細胞は、多数の細胞及び組織型の供給源を提供することができる。多数の間葉幹細胞が単離されている例えば、全てその全体が参照として本明細書に組み込まれる、米国特許第5,486,359号;同第5,827,735号;同第5,811,094号、同第5,736,396号;米国特許第5,837,539号;同第5,837,670号;同第5,827,740号;Jaiswaletal1997;Cassiedeetal1996;Johnstoneetal1998;Yooetal1998;Gronthos1994;Makinoetal1999を参照すること。記載されている多くの間葉幹細胞は、全てが、一般に間葉由来であると考慮される分化細胞のみを形成する限定された分化を示している。現在まで、大部分の多分化能間葉幹細胞は、SH2SH4CD29CD44CD71CD90CD106CD120aCD124CD14-CD34-CD45-表現型を発現する。卵形細胞とも呼ばれる、胃腸幹細胞、表皮幹細胞、神経及び肝幹細胞を含む他の幹細胞が同定されているPotten1998Watt1997Alisonetal1998。幾つかの実施態様において、本明細書に記載されている方法に有用な幹細胞には、胚幹細胞、誘導多能性肝細胞、間葉幹細胞、骨髄由来幹細胞、造血幹細胞、軟骨細胞前駆細胞、表皮幹細胞、胃腸幹細胞、神経幹細胞、肝幹細胞、脂肪由来間葉幹細胞、膵臓前駆細胞、毛包幹細胞、内皮前駆細胞及び平滑筋前駆細胞が含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施態様において、本明細書に記載されている方法に有用な幹細胞を、臍帯、胎盤、羊水、絨毛膜絨毛、胚盤胞、骨髄、脂肪組織、脳、末梢血、胃腸管、臍帯血、血管、骨格筋、皮膚、肝臓及び月経血から単離される。月経血から調製される幹細胞は、子宮内膜再生細胞MedistemIncから入手可能と呼ばれる。当業者は、そのような幹細胞を見つけ、単離し、拡大することができる。多様な供給源からヒト幹細胞を単離する詳細な手順は、CurrentProtocolsinStemCellBiologyに記載されており、これはその全体が参照として本明細書に組み込まれる。あるいは、市販のキット及び単離系を使用することができ、例えば、BDバイオサイエンス社のBDFACSAria細胞選別系、BDIMag磁気式細胞分離系及びBDIMagマウス造血前駆細胞豊富化セットである。多様な供給源から幹細胞を単離し、培養する方法も、5,486,359、6,991,897、7,015,037、7,422,736、7,410,798、7,410,773、7,399,632これらはその全体が参照として本明細書に組み込まれるに記載されている。C.体細胞本発明の特定の態様において、分化転換、すなわち1つの体細胞型から別の体細胞型への直接変換の方法、例えば他の体細胞から内皮細胞を誘導する方法を提供することもできる。しかし、ヒト体細胞は、供給、特に成体臓器提供者からの供給が限定されうる。特定の態様において、プログラミング用の出発細胞の無制限の供給を提供するために、体細胞を、hTERT又は腫瘍遺伝子のような不死化遺伝子又はタンパク質の導入により不死化することができる。細胞の不死化は、可逆的例えば、除去可能発現カセットの使用又は誘導性例えば、誘導性プロモーターの使用でありうる。本発明の特定の態様における体細胞は、動物から新たに単離されたもののような一次細胞非不死化細胞でありうる又は細胞系統不死化細胞から誘導されうる。細胞を、被験者からの単離の後に細胞培養で維持することができる。特定の実施態様において、細胞は、本発明の方法に使用される前に1回又は2回以上例えば、2~5回、5~10回、10~20回、20~50回、50~100回又はそれ以上継体される。幾つかの実施態様において、細胞は、本発明の方法に使用される前に1、2、5、10、20又は50回以下継体される。これらを凍結、解凍することなどができる。本明細書に使用される又は記載される体細胞は、天然体細胞又は操作体細胞、すなわち遺伝子的に変更された体細胞でありうる。本発明の体細胞は、典型的には例えばヒト細胞、霊長類細胞又はマウス細胞のような哺乳類の細胞である。これらは周知の方法により得ることができ、生体体細胞を含有する任意の器官又は組織、例えば血液、骨髄、皮膚、肺、膵臓、肝臓、胃、腸、心臓、生殖器官、膀胱、腎臓、尿道及び他の必尿器官などから得ることができる。本発明に有用な哺乳類体細胞には、セトリ細胞、内皮細胞、顆粒膜細胞、神経細胞、膵島細胞、表皮細胞、上皮細胞、肝細胞、毛包細胞、角化細胞、造血細胞、メラニン形成細胞、軟骨細胞、リンパ球B及びTリンパ球、赤血球、マクロファージ、単球、単核球、心筋細胞及び他の筋細胞などが含まれるが、これらに限定されない。幾つかの実施態様において、細胞は、唯一又は主に所望の細胞型において発現することが知られている内在性マーカーの発現に基づいて選択される。例えば、ビメンチンは線維芽細胞マーカーである。他の有用なマーカーには、多様なケラチン、カドヘリン、フィブロネクチン、DC分子などの細胞接着分子が含まれる。体細胞の個体群は、18~96時間、例えば24~48時間、48~72時間などの平均細胞周期時間を有することができる。幾つかの実施態様において、少なくとも90、95、98、99又はそれ以上の細胞が、24、48、72又は96時間のような所定の時間内に分裂することが予測される。本明細書に記載される方法を使用して、1つ以上の体細胞、例えば体細胞のコロニー又は個体群をプログラムして内皮細胞にすることができる。幾つかの実施態様において、本発明の細胞の個体群は、少なくとも90の細胞が目的の表現型又は特徴を示す点において実質的に均一である。幾つかの実施態様において、少なくとも95、96、97、98、99、99.5、99.8、99.9、99.95又はそれ以上の細胞が、目的の表現型又は特徴を示す。本発明の特定の実施態様において、体細胞は、分裂する能力を有する、すなわち体細胞は、有糸分裂後のものではない。体細胞は、部分的又は完全に分化されうる。分化は、特異化が乏しい細胞がより特異化された細胞型になるプロセスである。細胞分化は、細胞のサイズ、形状、極性、代謝活性、遺伝子発現及び/又はシグナルへの反応性における変化を伴うことができる。例えば、造血幹細胞は分化して、骨髄性単球及びマクロファージ、好中球、好塩素球、好酸球、赤血球、巨核球/血小板、樹状細胞及びリンパ様系列T細胞、B細胞、NK細胞を含む全ての血球型を生じる。分化の経路に沿った進行の間に、細胞の最終的な運命がより固定化される。本明細書に記載されるように、部分的に分化された体細胞と完全に分化された体細胞の両方を本明細書に記載されているようにプログラムして、内皮細胞のような所望の細胞型を産生することができる。III.内皮プログラミング因子本発明の特定の態様は、内皮プログラミングのための内皮プログラミング因子を提供する。内皮細胞は、細胞における内皮プログラミング因子のレベルを増加することにより他の細胞供給源から直接産生することができる。内皮細胞の多数の機能を、限定された数の内皮豊富化転写因子の共同作用により転写レベルで制御することができる。内皮細胞豊富化転写因子、特にこのセクションに提示されているそれらの遺伝子のような、内皮細胞分化又は機能に重要な任意の転写因子を本明細書において使用することができる。本発明者たちは、このセクションに提示されている遺伝子の全てのアイソフォーム及び変種が本発明に含まれ、特定のアイソフォーム又は変種の受入番号の限定例が提供されることも考慮する。例えば、本発明に開示されている転写因子の組み合わせの発現を実施することにより、多能性幹細胞から内皮細胞への分化は、通常の発育段階の全てでなければ大部分を迂回することができる。特定の実施態様において、内皮プログラミング因子はERGであり、これは、転写調節因子ERG、ets関連形質転換タンパク質ERG、前立腺癌特異的TMPRSS2-ERG、腫瘍遺伝子様v-ets赤芽球症ウイルスE26、腫瘍遺伝子関連v-ets鳥類赤芽球症ウイルスE26、形質転換タンパク質ERGとしても知られている。幾つかの実施態様において、内皮プログラミング因子は、ERG-1受入番号:NM182918.3;GL209954798配列番号13及び14、ERG-2配列番号9及び10、ERGアイソフォーム3配列番号11及び12又はERG-4受入番号:NM_001136155.1;GL209954807配列番号15及び16のようなERGのアイソフォームでありうる。特定の実施態様において、内皮プログラミング因子遺伝子はERG-3である。他の特定の実施態様において、内皮プログラミング因子はETV2ER71、ETSRP71とも呼ばれるNCBI受入番号NM_014209、バージョンNM_014209.2、GI:153791177配列番号17及び18である。他の実施態様において、1つ以上の内皮プログラミング因子は、v-ets赤血球症ウイルスE26腫瘍遺伝子相同体1鳥類ETS1アイソフォーム1NCBI受入番号NM_001143820、バージョンNM_001143820.1、GI:219689117、ETS1アイソフォーム3NCBI受入番号NM_001162422、バージョンNM_001162422.1、GI:241666445、ETS1アイソフォーム2NCBI受入番号NM_005238、バージョンNM_005238.3、GI:219689116、V-ets赤血球症ウイルスE26腫瘍遺伝子相同体2鳥類ETS2NCBI受入番号NM_005239、バージョンNM_005239.4、GI:56119171、E74様因子1ELF-1アイソフォームbNCBI受入番号NM_001145353、バージョンNM_001145353.1、GI:223941928、ELF-1アイソフォームaNCBI受入番号NMJ72373、バージョンNM_172373.3、GI:223941931、ELK-4アイソフォームaNCBI受入番号NM_001973、バージョンNM_001973.2、GI:41872447、ELK-4アイソフォームbNCBI受入番号NM_021795、バージョンNM_021795.2、GI:41872461、フレンド白血病ウイルス組み込み1FLI-1アイソフォーム2NCBI受入番号NM_001167681、バージョンNM_001167681.1、GI:264681553、FLI-1アイソフォーム1NCBI受入番号NM_002017、バージョンNM_002017.3、GI:194018460、ETV6TEL若しくはTEL1とも呼ばれるNCBI受入番号NM_001987、バージョンNM_001987.4、GI:153267458、T細胞急性リンパ性白血病1TALI、またSCLとも呼ばれるNCBI受入番号NM_003189、バージョンNM_003189.2、GI:197927279、GATA結合タンパク質2GATA2アイソフォーム1変種1NCBI受入番号NM_001145661、バージョンNM_001145661.1、GI:224611698、GATA2アイソフォーム1変種2NCBI受入番号NM_032638、バージョンNM_032638.4、GI:224611697、GATA2アイソフォーム2NCBI受入番号NM_001145662、バージョンNM_001145662.1、GI:224611700又はフォークヘッドFOX転写因子例えば、FoxC、FoxF、FoxH若しくはFoxOファミリーのメンバーである。全ての受入番号、バージョン番号及びGI番号は、2010年7月7日付けで参照として本明細書に組み込まれる。なお他の実施態様において、1つ以上の内皮プログラミング因子はBMP-4であり、これは造血前駆細胞の繁殖及び分化の可能性の調節に重要であるBhardwajetal2001Bhatiaetal1999Chadwick2003。加えて、BMP-4は、ヒト胎児、新生児及び成人造血前駆細胞の初期造血細胞発育を調節することができるDavidsonandZon2000Huberetal1998Marshalletal2000。例えば、BMP-4は、成人及び新生児供給源からの高度に精製した原始ヒト造血細胞の繁殖及び分化を調節することができBhatiaetal1999、BMP-4は、ヒト胚幹細胞に造血性分化を促進することができるChadwick2003。BMP-4は、内皮前駆細胞から内皮細胞への分化を促進することもできるWangetal2007。更なる実施態様において、1つ以上の内皮プログラミング因子は血管内皮増殖因子VEGFであり、これは、胚循環系の形成及び血管新生に関与する重要なシグナル伝達タンパク質である。VEGFは、血管内皮及び他の細胞型例えば、神経細胞、癌細胞、腎臓上皮細胞を含む多様な細胞型に影響を与えることができる。インビトロでは、VEGFは、内皮細胞有糸分裂生起及び細胞移動を刺激することができる。VEGF機能は、癌、糖尿病、自己免疫性疾患及び眼血管疾患を含む多様な疾患状態において重要であることも示されている。さらに更なる実施態様において、1つ以上の内皮プログラミング因子は、Vezfl/DBl、内皮PASドメイン含有タンパク質1EPAS1、FOXO3a、低酸素誘導性転写因子2、FoxF1、FoxH1、FoxC1、FoxC2、クルッペル様因子2又はクルッペル様因子6でありうる。内皮細胞をもたらすフォワードプログラミングは、このセクションに記載されている1つ以上の内皮細胞因子のいずれかの発現を増加することにより達成することができる。IV.遺伝子又は遺伝子産物の送達特定の実施態様において、内皮プログラミング又は分化因子をコードする核酸の送達用ベクターを構築して、細胞においてこれらの因子を発現させることができる。そのようなベクターの成分及び送達方法の詳細が以下に開示される。加えて、タンパク質形質導入組成物又は方法を使用して、内皮プログラミング因子の発現を実施することができる。更なる態様において、以下の系及び方法を、内皮細胞のような所望の細胞型の同定のためのレポーター発現カセットの送達に使用することもできる。特に、内皮細胞特異的調節エレメントを使用して、レポーター遺伝子の発現を駆動することができる。したがって、プログラミングにより誘導される内皮細胞を、レポーターの使用により特徴決定、選択又は豊富化することができる。B.核酸送達系当業者は、標準的組み換え技術例えば、両方とも参照として本明細書に組み込まれるSambrooketal2001及びAusubeletal1996を参照することを介してベクターを構築するのに十分な知識を備えている。ベクターには、プラスミド、コスミド、ウイルスバクテリオファージ、動物ウイルス及び植物ウイルス並びに人工染色体例は、YAC、例えばレトロウイルスベクター例は、モロニーマウス白血病ウイルスMoMLV、MSCV、SFFV、MPSV、SNVなどから誘導されるもの、レンチウイルスベクター例は、HIV-1、HIV-2、SIV、BIV、FIVなどから誘導されるもの、複製可能性形態、複製欠損性形態及び無活力形態gutlessformのものを含むアデノウイルスAdベクター、アデノ関連ウイルスAAVベクター、サルウイルス40SV-40ベクター、ウシパピローマウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクチニアウイルスベクター、ハーベイマウス肉腫ウイルスベクター、ネズミ乳癌ウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。2.ウイルスベクター組み換えウイルスベクターの生成において、非必須遺伝子は、異種又は非天然タンパク質の遺伝子又はコード配列と交換される。ウイルスベクターは、ウイルス配列を利用して核酸、可能であればタンパク質を細胞に導入する一種の発現作成物である。特定のウイルスの、レセプター仲介エンドサイトーシスを介して細胞を感染する又は細胞に侵入する能力、並びに宿主細胞ゲノムに組み込み、ウイルス遺伝子を安定的及び効率的に発現する能力は、これらを、外来核酸を細胞例えば、哺乳類細胞に移入する魅力的な候補にする。本発明の特定の態様の核酸の送達に使用することができるウイルスベクターの非限定例を下記に記載する。レトロウイルスは、それらの遺伝子を宿主ゲノムに組み込む能力、多量の外来遺伝子材料を移入する能力、広範囲の種及び細胞型を感染する能力、並びに特別な細胞系統にパッケージされる能力によって、遺伝子送達ベクターとして有望であるMiller1992。レトロウイルスベクターを構築するために、複製欠損性であるウイルスを産生するために、特定のウイルス配列の代わりに核酸をウイルスゲノムに挿入する。ビリオンを産生するために、gag、pol及びenv遺伝子を含有するが、LRT及びパッケージング成分のないパッケージング細胞系統を構築するMannetal1983。cDNAをレトロウイルスLTR及びパッケージング配列と一緒に含有する組み換えプラスミドを、特別な細胞系統に例えば、リン酸カルシウム沈殿により導入する場合、パッケージング配列は、組み換えプラスミドのRNA転写を可能にして、ウイルス粒子にパッケージさせ、次にこれは培養培地に分泌されるNicolasandRubenstein1988Temin1986Mannetal1983。次に組み換えレトロウイルスを含有する培地を収集し、場合により濃縮し、遺伝子移入に使用する。レトロウイルスベクターは、多種多様な細胞型を感染することができる。しかし、組み込み及び安定した発現は、宿主細胞の分裂を必要とするPaskindetal1975。レンチウイルスは、複雑なレトロウイルスであり、一般的なレトロウイルス遺伝子gag、pol及びenvに加えて、調節的又は構造的機能を有する他の遺伝子を含有する。レンチウイルスベクターは当該技術において良く知られている例えば、Naldinietal1996Zuffereyetal1997Blomeretal1997米国特許第6,013,516号及び同第5,994,136号を参照すること。組み換えレンチウイルスベクターは、非分裂細胞を感染することができ、インビボとエキソビボの両方の遺伝子移入及び核酸配列の発現に使用することができる。非分裂細胞を感染することができる組み換えレンチウイルス適切な宿主細胞が、パッケージング機能を担持する、すなわちgag、pol及びenv、並びにrev及びtatを担持する2つ以上のベクターで形質移入されるは、米国特許第5,994,136号参照として本明細書に組み込まれるに記載されている。3.エピソームベクタープラスミドに基づいた又はリポソームに基づいた染色体外すなわち、エピソームベクターの使用も、本発明の特定の態様において提供される。そのようなエピソームベクターは、例えばoriPに基づいたベクター及び/又はEBNA-1の誘導体をコードしているベクターを含むことができる。これらのベクターは、DNAの大型フラグメントを、細胞に導入する、染色体外に維持する、細胞周期1回あたり1回複製する、娘細胞に効率的に分割する及び免疫反応を実質的に誘発しないことを可能にすることができる。特に、oriPに基づいた発現ベクターの複製を必要とする唯一のウイルスタンパク質であるEBNA-1は、MHCクラスI分子に対して抗原を提示するのに必要なプロセッシングを迂回する効率的な機構を発達させたので、細胞免疫反応を誘発しないLevitskayaetal1997。更に、EBNA-1はトランスに作用してクローン遺伝子の発現を増強し、一部の細胞系統ではクローン遺伝子の発現を100倍まで誘導することができるLangleRouaultetal1998Evansetal1997。最後に、そのようなoriPに基づいた発現ベクターの製造は安価である。他の染色体外ベクターには、他のリンパ増殖性ヘルペスウイルスに基づいたベクターが含まれる。リンパ増殖性ヘルペスウイルスは、リンパ芽球例えば、ヒトBリンパ芽球において複製し、天然の生活環の一部においてプラスミドになるヘルペスウイルスである。単純ヘルペスウイルスHSVは、リンパ増殖性ヘルペスウイルスではない。例示的なリンパ増殖性ヘルペスウイルスには、EBV、カポジ肉腫ヘルペスウイルスKSHV、サイリミヘルペスウイルスHS及びマレック病ウイルスMDVが含まれるが、これらに限定されない。酵母ARS、アデノウイルス、SV40又はBPVのような、エピソームに基づいたベクターの他の供給源も考慮される。当業者は、標準的組み換え技術例えば、両方とも参照として本明細書に組み込まれるManiatisetal1988及びAusubeletal1994を参照することを介してベクターを構築するのに十分な知識を備えている。ベクターは、遺伝子送達及び/又は遺伝子発現を更に調節する、そうでなければ標的細胞に利益特性を提供する他の成分又は機能性を含むこともできる。そのような他の成分には、例えば、細胞への結合又は標的化に影響を及ぼす成分細胞型又は細胞特異的結合を仲介する成分を含む;細胞によるベクター核酸の取り込みに影響を与える成分;取り込み後の細胞内でのポリヌクレオチドの局在化に影響を及ぼす成分例えば、核酸局在化を仲介する作用物質;及びポリヌクレオチドの発現に影響を及ぼす成分が含まれる。そのような成分は、取り込まれてベクターにより送達された核酸を発現する細胞の検出又は選択に使用することができる、検出及び/又は選択マーカーのようなマーカーを含むこともできる。そのような成分を、ベクターの天然の特徴として提供することができる例えば、結合及び取り込みを仲介する成分又は機能性を有する特定のウイルスベクターの使用又はベクターを修飾してそのような機能性を提供することができる。多種多様なそのようなベクターが当該技術において知られており、一般に入手可能である。ベクターが宿主細胞において維持される場合、ベクターは、宿主細胞のゲノム内に組み込まれた自律性構造物として有糸分裂の際に細胞により安定して複製されうる又は宿主の細胞の核若しくは細胞質に維持されうる。4.トランスポゾンに基づいた系特定の実施態様によると、核酸の導入はトランスポゾン-トランスポサーゼ系を使用することができる。トランスポゾン-トランスポサーゼ系の使用は、周知のスリーピングビューティーSleepingBeauty、フロッグプリンスFrogPrinceのトランスポゾン-トランスポサーゼ系後者の記載は、ヨーロッパ特許第1507865号を参照すること又はTTAA特異的トランスポゾンpiggyBac系でありうる。トランスポゾンは単一細胞のゲノム内の異なる位置に動き回ることができるDNAの配列であり、転位と呼ばれるプロセスである。このプロセスにおいて、これらは、突然変異及びゲノムのDNA量に変化を引き起こす可能性がある。トランスポゾンは、かつてはジャンピング遺伝子とも呼ばれ、可動遺伝子エレメントの例である。多様な可動遺伝子エレメントがあり、転位の機構に基づいて分類することができる。クラスI可動遺伝子エレメント又はレトロトランスポゾンは、最初にRNAに転写されることにより自体をコピーし、次に逆転写酵素によりDNAに逆転写され、次にゲノムに別の位置に挿入される。クラスII可動遺伝子エレメントは、トランスポサーゼを使用して1つの位置から別の位置に直接移動して、ゲノム内で自体を切り貼りする。5.mRNA送達当業者は、本発明に有用な任意のmRNAを細胞に送達するのに十分な知識を備えている。例えば、そのような技術は、Yamamotoetal2009により提供される。6.相同組み換え本発明の特定の態様において、核酸分子をゲノム操作の特定の方法により、例えば相同組み換えにより細胞に導入することができる。上記に考察したように、細胞において遺伝子を発現する幾つかの手法は、ゲノムにランダムに組み込むウイルスベクター又は導入遺伝子の使用を伴う。しかしこの手法は、組み込みが、組み込み核酸の発現を効果的に仲介することができない又は天然遺伝子の破壊をもたらす部位に生じる決定を有する。ランダム組み込みに関連する問題は、標的ゲノムの特定の座位、例えばRosa26座への相同組み換えにより部分的に克服することができる。普遍的組み換えとしても知られている相同組み換えHRは、ヌクレオチド配列がDNAの2つの類似又は同一の鎖の間で交換される、全ての生き物に使用される遺伝子組み換えの一種である。技術は、1980年代中期から哺乳類細胞のゲノム操作の標準的な方法である。プロセスは、DNAの物理的な切断及び最終的な再結合の幾つかの工程を伴う。このプロセスは、DNAにおける潜在的に致死的な二本鎖の切断を修復するために最も広範囲に使用されている。加えて、相同組み換えは、真核生物が精子及び卵のような生殖細胞を作製するプロセスである有糸分裂の際に、DNA配列の新たな組み合わせを産生する。DNAのこれらの新たな組み合わせは、個体群が経時的に変化する環境条件に進化的に適合することを可能にする、子孫における遺伝的変異を表す。相同組み合わせは、細菌及びウイルスの異なる菌株及び種の間で遺伝子材料を交換する遺伝子水平伝播にも使用される。相同組み換えは、標的生物体に遺伝子変化を導入する分子生物学の技術としても使用される。相同組み換えを、ゲノム標的修飾として使用することができる。哺乳類細胞における標準的なHRの効率は、処理される細胞のわずか10-6~10-9個であるCapecchi1990。メガヌクレアーゼ又はI-SceIのようなホーミングエンドヌクレアーゼが、HRの効率を増加するために使用されてきた。天然のメガヌクレアーゼと、修飾標的特異性を有する操作メガヌクレアーゼの両方が、HR効率を増加するために利用されてきたPingoudandSilva2007Chevalieretal2002。HRの効率を増加する一つの経路は、プログラム可能なDNA特異性ドメインによりキメラエンドヌクレアーゼを操作することであったSilvaetal2011。ジンクフィンガーヌクレアーゼZFNは、そのようなキメラ分子の一例であり、ここでジンクフィンガーDNA結合ドメインは、FokIのようなIIS型制限エンドヌクレアーゼの触媒ドメインと融合しているDuraietal2005PCT/US2004/030606に概説されている。そのような特異性分子の別の部類には、FokIのようなIIS型制限エンドヌクレアーゼの触媒ドメインと融合している転写アクチベーター様エフェクターTALEDNA結合ドメインが含まれるMilleretal2011PCT/IB2010/000154。TALENを、目的のほぼあらゆる所定の部位における部位特異的ゲノム修飾のために設計することができるCermaketal2011Christianetal2010Lietal2011Milleretal2011Weberetal2011Zhangetal2011。部位特異的DNA結合ドメインは、FokIのようなDNA切断酵素との融合タンパク質として発現される。DNA結合ドメインは、修復アミノ酸の足場であり、それぞれの反復を結合するものは、DNAの単一のヌクレオチドに結合する2つの可変アミノ酸である。例えば、Asn-Asnはグアノシンを結合し、Asn-Ileはアデノシンを結合し、Asn-Glyはチミジンを結合し、His-Aspはシトシンを結合する。これらの2つのアミノ酸は、反復可変2残基RepeatVariableDiresidue又はRVDとしても知られている。多くの異なるRVDが存在し、これらを操作して、TALエフェクター/FokIタンパク質作成物にして、特定のTALENを作り出すことができる。次に、組み換えTALENをコードしているRNAを精製し、部位特異的ゲノム修飾のために細胞に形質移入することができる。TALENが二本鎖DNAの切断を導入すると、DNAを、非相同末端結合NHEJにより又は相同方向修復homologousdirectedrepairHDRにより修飾することができる。このことは、どのような追加の配列がDNA修復の際に提示されるかに応じて、DNAの突然変異誘発、欠失又は付加を可能にする。C.調節エレメント:本発明に有用なベクターに含まれる真核生物発現カセットは、好ましくは、5’から3’の方向にタンパク質コード配列に機能的に結合している真核生物転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグナル及び転写終結/ポリアルデニル化配列を含有する。2.プロモーター/エンハンサープロモーターは、開始及び転写速度が制御される核酸配列の領域である制御配列である。これは、核酸配列の特定の転写を開始するために、RNAポリメラーゼ及び他の転写因子のような、調節タンパク質と分子が結合しうる遺伝子エレメントを含有することができる。語句機能的に位置する、機能的に結合する、制御下に及び転写制御下には、プロモーターが、核酸配列に対して、転写開始及び/又はその配列の発現を制御するために正確な機能位置及び/又は配向にあることを意味する。プロモーターは、一般に、RNA合成の開始部位を位置するように機能する配列を含む。この一番良く知られている例はTATAボックスであるが、例えば哺乳類末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーター及びSV40後期遺伝子のプロモーターのような、TATAボックスを欠いている幾つかのプロモーターでは、開始部位に重なっている別のエレメントが、開始の場所を固定するのを助ける。追加のプロモーターエレメントは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは開始部位の30~110bp上流の領域に位置しているが、多数のプロモーターが開始部位の下流にも機能性エレメントを含有することを示す。コード配列をプロモーターの制御下に置くために、選択したプロモーターの下流すなわち、3’に、転写リーディングフレームの転写開始部位の5’末端を位置させる。上流のプロモーターは、DNAの転写を刺激し、コードされたRNAの発現を促進する。プロモーターエレメントの間の間隔は、多くの場合に可動性であるので、プロモーター機能は、エレメントが互いに反転又は移動したときも保存される。tkプロモーターでは、プロモーターエレメントの間の間隔を、活性が下降し始める前に50bpの間隔に増大することができる。プロモーターに応じて、個別のエレメントは協同的又は独立的のいずれかで機能して、転写を活性化することができると思われる。プロモーターを、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列を意味するエンハンサーと共に使用しても、しなくてもよい。プロモーターは、コードセグメント及び/又はエクソンの上流に位置する5’非コード配列を単離することにより得ることができる核酸配列と天然に会合するものでありうる。そのようなプロモーターを、内在性と呼ぶことができる。同様に、エンハンサーは、その配列の下流又は上流に位置する核酸配列と天然に会合するものでありうる。あるいは、特定の利点は、コード核酸配列を、天然の環境下で核酸配列と通常は会合しないプロモーターを意味する組み換え又は異種プロモーターの制御下に位置することによって得られる。組み換え又は異種エンハンサーは、また、天然の環境下で核酸配列と通常は会合しないエンハンサーを意味する。そのようなプロモーター又はエンハンサーは、他の遺伝子のプロモーター又はエンハンサー、他の任意のウイルス又は原核若しくは真核細胞から単離されるプロモーター又はエンハンサー、並びに天然に生じない、すなわち異なる転写調節領域の異なるエレメント及び/若しくは発現を変更する突然変異を含有するプロモーター又はエンハンサーを含むことができる。例えば、組み換えDNA作成物に最も一般的に使用されるプロモーターは、β-ラクタマーゼペニシリナーゼ、ラクトース及びトリプトファンtrpプロモーター系を含む。プロモーター及びエンハンサーの核酸配列を合成的に産生することに加えて、配列は、本明細書に開示されている組成物に関して、PCR商標を含む、組み換えクローニング及び/又は核酸増幅技術を使用して産生することができるそれぞれ参照として本明細書に組み込まれる米国特許第4,683,202号及び同第5,928,90号を参照すること。更に、ミトコンドリア、葉緑体などのような非核オルガネラ内の配列の転写及び/又は発現を指示する制御配列を用いることができることも考慮される。当然のことながら、発現のために選択されたオルガネラ、細胞型、組織、器官又は生物体におけるDNAセグメントの発現を効果的に指示するプロモーター及び/又はエンハンサーを用いることが重要である。分子生物学の当業者は、タンパク質発現のためのプロモーター、エンハンサー及び細胞型の組み合わせの使用について一般に知っている例えば、参照として本明細書に組み込まれるSambrooketal1989を参照すること。用いられるプロモーターは、導入DNAセグメントの高い発現レベルを指示する適切な条件下で構成的、組織特定的、誘導性及び/又は有用であることができ、このことは組み合わせタンパク質及び/又はペプチドの大規模生産において有利である。プロモーターは、異種又は内在性でありうる。加えて、任意のプロモーター/エンハンサーの組み合わせ例えば、epdisbsibchでワールドワイドウエブを介した真核生物プロモーターデータベースEPDBによるものを使用して、発現を駆動することもできる。T3、T7又はSP6細胞質発現系の使用は、別の可能な実施態様である。真核細胞は、適切な細菌ポリメラーゼが送達複合体の一部として又は追加の遺伝子発現作成物の一部として提供される場合、特定の細菌プロモーターからの細胞質転写を支持することができる。プロモーターの非限定例には、SV40初期又は後期プロモーター、サイトメガウイルスCMV最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスRSV初期プロモーターのような初期又は後期ウイルスプロモーター;例えばベータアクチンプロモーターNg1989Quitscheetal1989、GADPHプロモーターAlexanderetal1988Ercolanietal1988、メタロチオネインプロモーターKarinetal1989Richardsetal1984のような真核細胞プロモーター;並びに環状AMP応答エレメントプロモーターere、血清応答エレメントプロモーターsre、ホルボールエステルプロモーターTPA及びミニマルTATAボックス近傍応答エレメントプロモーターtreのような連鎖応答エレメントプロモーターが含まれる。ヒト成長ホルモンプロモーター配列例えば、ジェンバンク受入番号X05244、ヌクレオチド283-341に記載されているヒト成長ホルモンミニマルプロモーター又はマウス乳癌プロモーターATCCカタログ番号ATCC45007で入手可能の使用も可能である。特定の例は、ホスホグリセンリン酸キナーゼPGKプロモーターでありうる。内皮細胞は、例えばCD31及び/又はVEカドヘリンの細胞表面抗原発現に基づいて容易に同定及び精製することができる。幾つかの実施態様において、フォワードプログラミングにより産生される内皮細胞は、レポーター遺伝子の発現に基づいて同定することができる。特異性と活性の両方を増加するために、シス作用性調節エレメントの使用が考慮されてきた。例えば、内皮細胞特異的プロモーターを使用することができる。多くの内皮細胞特異的プロモーターが当該技術において知られている例えば、DeValandBlack2009を参照すること。例には、Mef2c、Flk1、Tal1、エンドグリン、LM02、Fli1、Tie2、Tie1、Flt1、Gata2、Prox1、ECE1、FLT4、PDGFR-ベータ、FOXP1、NRP1、NOTCH4、LYL1、EPCR、フォンウィルブランド因子、第VIII因子関連抗原、CD31/PECAM-1、アンギオテンシン変換酵素、血管内皮カドヘリンCdh5、CD34、CD102/ICAM-2、CD51/61ビトロネクチンレセプター、CD105/エンドグリン、CD36、CD73/VAP-2又はSca-1のプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。特定の態様において、本発明の方法は、エンハンサー配列、すなわちプロモーター活性を増加する及び比較的長い距離標的プロモーターから数キロベースまで離れているにわたっても配向にかかわらずシスに作用する可能性を有する核酸配列にも関する。しかし、エンハンサー機能は、所定のプロモーターに極めて近接しても機能できるので、そのような長い距離に限定される必要はない。多くの内皮細胞プロモーター及びエンハンサー配列が同定されており、本発明の使用に有用でありうる。例えば、米国特許出願第201000811935号;DeValandBlack2009Liuetal1995Collinsetal1995Schlaegeretal1997を参照すること。3.開始シグナル及び内部リボソーム結合部位特定の開始シグナルを、コード配列の効率的な翻訳に使用することもできる。これらのシグナルは、ATG開始コドン又は隣接配列を含む。ATG開始コドンを含む外因性翻訳制御シグナルの提供が必要な場合がある。当業者は、このことを容易に決定し、必要なシグナルを提供することができる。開始コドンは、全ての挿入の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームのインフレームでなければならないことは良く知られている。外因性翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然又は合成のいずれかでありうる。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメントを含めることにより増強することができる。本発明の特定の実施態様において、内部リボソーム進入部位IRESエレメントの使用は、多重遺伝子又は多シストロン性メッセージを作り出すために使用される。IRESエレメントは、5’メチル化Cap依存性翻訳のリボソームスキャニングモデルを迂回すること及び内部部位で翻訳を開始することができるPelletierandSonenberg1988。ピコナウイルスファミリーの2つのメンバーポリオ及び脳心筋炎からのIRESエレメント及び米国特許第6,184,038号を参照すること。一つの実施態様において、PTDは、ヒト又は他の哺乳類タンパク質から得られる。例示的な哺乳類PTDは、国際公報第03/059940号ヒトSIM-2及び国際公報第03/059941号Mphに記載されている。特定の実施態様において、PTDは合成PTDでありうる。ミニマルTatPTDaa47~57は、タンパク質形質導入の可能性を最適化するために修飾されたHoetal2001。一連の合成PTDと結合したFITCを、培養Tリンパ球で試験した。幾つかの合成PTDは、TatPTDと比較して増強されたタンパク質形質導入を示した。これらのPTDには、YARKARRQARR配列番号5;YARAARRAARR配列番号6;YARAARRAARA配列番号7;YARAAARQARA配列番号8が含まれる。特に、合成PTDYARAAARQARA配列番号8と接合したFITCは、マウスに腹腔内注射されたとき、全血球の取り込みの増強を示した。約6~12個のアルギニン残基から構成されるポリアルギニンペプチドも、幾つかの場合においてタンパク質軽質導入を仲介することができる。ポリアルギニンについての追加の情報は、RothbardetalWenderetalを参照すること。PTDについての追加の情報は、米国特許出願第2003/0082561号;米国特許出願第2002/0102265号;米国特許出願第2003/0040038号SchwarzeetalDerossietalHancocketalBussetalDerossietalLindgrenetalKilicetalAsohetal及びTanakaetalも参照すること。PTDに加えて、細胞取り込みシグナルを使用することができる。そのようなシグナルには、細胞レセプター又は他の表面タンパク質により特異的に認識されるアミノ酸配列が含まれる。細胞取り込みシグナルと細胞との相互作用は、細胞取り込みシグナルを含む人工転写因子の内部移行を引き起こす。幾つかのPTDは、細胞レセプター又は他の表面タンパク質との相互作用によっても機能することができる。多数のアッセイを、アミノ酸配列がPTDとして機能できるか決定するために利用することができる。例えば、アミノ酸配列を、β-ガラクトシダーゼのようなレポータータンパク質と融合して、融合タンパク質を形成することができる。この融合タンパク質を培養細胞と接触させる。細胞を洗浄し、次にレポーター活性についてアッセイする。別のアッセイは、当該のアミノ酸配列及び別の検出可能な配列、例えばエピトープタグを含む融合タンパク質の存在を検出する。この融合タンパク質を培養細胞と接触させる。細胞を洗浄し、次にウエスタン又は免疫蛍光法により分析して、細胞における検出可能な配列の存在を検出する。なお別のアッセイを使用して、推定PTD、DNA結合ドメイン及び場合によりエフェクタードメインを含む融合タンパク質の転写調節活性を検出することができる。例えば、そのような融合タンパク質と接触した細胞を、例えばマイクロアレイ、質量分析及びハイスループット技術を使用してmRNA又はタンパク質の存在又は量についてアッセイすることができる。V.細胞培養一般に、本発明の細胞は、細胞増殖を維持することができる栄養豊富緩衝溶液である培養培地で培養される。本明細書に記載されている方法により幹細胞を単離、拡大及び分化して内皮細胞にするのに適した培地には、高グルコースダルベッコー修飾イーグル培地DMEM、DMEM/F-15、LiebovitzL-15、RPMI1640、イスコフIscove修飾ダルベッコー培地IMDM及びOpti-MEMSFMインビトロゲン社が含まれるが、これらに限定されない。合成培地は、ヒト血清アルブミン、ヒトExCyteリポタンパク質、トランスフェリン、インスリン、ビタミン、必須及び非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、グルタミンを補充したイスコフ修飾ダルベッコー培地IMDMギブコ社のような最小必須培地を含み、分裂促進因子も適している。本明細書で使用されるとき、分裂促進因子は、細胞の分裂を促進する作用物質を意味する。作用物質は、化学的であり、通常は、細胞が細胞分裂を始めるのを助長し、有糸分裂を誘発するある種のタンパク質である。一つの実施態様において、米国特許出願第08/464,599号及び国際公開第96/39487号に記載されているような無血清培地、並びに米国特許第5,486,359号に記載されている完全培地は、本明細書に記載されている方法による使用に考慮される。幾つかの実施態様において、培養培地には、10ウシ胎児血清FBS、ヒト自己血清、ヒトAB血清又はヘパリン2U/mL補充血小板豊富血漿が補充されている。細胞培養を、例えば5~12のCO2雰囲気で維持して培養液のpHを維持し、湿度雰囲気において37°Cでインキュベートし、継体して85未満のコンフルエンスに維持することができる。内皮細胞に分化する多能性幹細胞を、多能性を維持するのに十分な培地で培養することができる。本発明の特定の態様において生成される誘導多能性幹細胞iPS細胞の培養は、米国特許出願第20070238170号及び米国特許出願第20030211603号に記載されているような、霊長類多能性幹細胞、とりわけ胚幹細胞を培養するために開発された多様な培地及び技術を使用することができる。例えば、ヒト胚肝hES細胞と同様に、iPS細胞を、80のDMEMギブコ社番号10829-018又は番号11965-092、熱不活性化していない20の限定ウシ胎児血清FBS、1の非必須アミノ酸、1mMのL-グルタミン及び0.1mMのベータ-メルカプトフェノールに維持することができる。あるいは、ES細胞を、80のノックアウトDMEMギブコ社番号10829-018、20の血清補充ギブコ社番号10828-028、1の非必須アミノ酸、1mMのL-グルタミン及び0.1mMのベータ-メルカプトフェノールから作製される無血清培地に維持することができる。使用直前に、ヒトbFGFを加えて、最終濃度の約4ng/mLにすることができる国際公開第99/20741号。本発明の内皮細胞は、細胞のプログラミングを促進して内皮細胞にするのに十分になるように内皮プログラミング因子の細胞内レベルを増加する条件下で、培地において多能性幹細胞又は他の非内皮細胞を培養して作製することができる。培地は、多様な種類の増殖因子のような、1つ以上の内皮細胞分化及び成熟作用物質を含有することもできる。しかし、内皮プログラミング転写因子の細胞内レベルを増加することによって、本発明の態様は、各段階で培地を交換する必要なく、成熟内皮細胞への大部分の段階を迂回する。したがって、本発明により提供される利点を考慮すると、特定の態様において、内皮プログラミング下で細胞を培養する培地は、1つ以上の内皮細胞分化及び成熟作用物質を実質的に含有しなくてもよい又はそのような作用物質の異なる組み合わせを含有する培地を連続的に交換しなくてもよい。これらの作用物質は、より成熟した表現型に関連づけられるように細胞を誘導するのを助ける又は成熟細胞の生存を優先的に促進する又はこれらの効果の組み合わせを有することができる。本開示に例示されている内皮細胞分化及び成熟作用物質は、内皮細胞系列の細胞の増殖を促進することができる可溶性増殖因子ペプチドホルモン、サイトカイン、リガンドレセプター複合体及び他の成分を含むことができる。そのような作用物質の非限定例には、塩基性FGFbFGF、BMP-4及びVEGF又はこれらのアイソフォーム若しくは変種が含まれるが、これらに限定されない。VI.内皮細胞の特徴細胞を多数の表現型基準に従って特徴決定することができる。基準には、発現細胞マーカーの検出又は定量化、酵素活性、並びに形態的特徴及び細胞内シグナル伝達の特徴決定が含まれるが、これらに限定されない。他の態様において、プログラムされる細胞は、内皮細胞同定のための内皮細胞特異的プロモーターのような組織特異的又は細胞特異的転写調節エレメントを含むレポーター遺伝子発現カセットを含むことができる。本発明の特定の態様に包含される内皮細胞は、本質的に内皮細胞に特徴的な形態的特徴を有する。特徴は、そのようなものを評価する当業者によって容易に理解され、扁平外観及び大型中心核を含む。単一の細胞に存在するそのような特徴の1つ以上は、内皮細胞系列のメンバーである細胞と一致する。細胞が内皮細胞に特徴的な形態的特徴を有するかについての不偏的な決定は、プログラミング子孫細胞、成体又は胎児内皮細胞及び線維芽細胞又はRPE網膜色素上皮細胞のような1つ以上の陰性対照細胞の顕微鏡写真をコード化すること、次に顕微鏡写真を盲検様式で評価すること、並びにコードを解読して、プログラミングによる内皮細胞が正確に同定されているかを決定することによって行うことができる。本発明の細胞は、これらが内皮細胞系列の細胞に特徴的な表現型マーカーを発現するかによって特徴決定することもできる。内皮細胞を識別するのに有用な細胞マーカーの非限定例には、7B4抗原、ACEアンギオテンシン変換酵素、BNH9/BNF13、CD31、CD34、CD54ICAM-1、CD62Pp-セレクチンGMP140、CD105エンドグリン、CD144、CD146、エンドカンESM-1とも呼ばれる、エンドグリンCD105、エンドグリクス-1、エンドムチEndomuci、エオタキシン-3、EPAS1内皮PASドメインタンパク質1、第VIII因子関連抗原、FLI-1、Flk-1VEGFR-2、Flt-1VEGFR-1、GATA2、GBP-1グアニル酸結合タンパク質-1、GRO-アルファ、Hex、ICAM-2細胞間接着分子2、LMO2、LYVE-1、MRBマジックラウンドアバウト、ヌクレオリン、PAL-E病理解剖学的罹患内皮、RTKs、sVCAM-1、TAL1、TEM1腫瘍内皮マーカー1、TEM5腫瘍内皮マーカー5、TEM7腫瘍内皮マーカー7、トロンボモジュリンTM、CD141、VCAM-1血管細胞接着分子-1CD106、VE-カドヘリンCD144及びvWFフォンウィルブランド因子、第VIII因子とも呼ばれるが含まれる。そのようなマーカーの発現レベルの評価は、他の細胞との比較により決定することができる。成熟内皮細胞のマーカーの陽性対照には、目的の種の成体内皮細胞及び確立された内皮細胞系統が含まれる。読者は、永久細胞系統又は長期内皮細胞培養が代謝的に変わって、一次内皮細胞の特定の特徴の発現し損なう場合があることに注意すること。陰性対照には、成体線維芽細胞の細胞系統又は網膜色素上皮RPE細胞のような別の系列の細胞が含まれる。未分化幹細胞は、上記に提示された幾つかのマーカーでは陽性であるが、成熟内皮細胞のマーカーでは陰性であり、下記の実施例において例示されている。本開示に提示されている組織特異的例えば、内皮細胞特異的タンパク質及びオリゴ糖決定因子は、細胞表面マーカーのフローイムノサイトケミストリーflowimmunocytochemistry、細胞内又は細胞表面マーカーの例えば、固定細胞又は組織片の免疫組織化学、細胞抽出物のウエスタンブロット分析及び培地に分泌された細胞抽出物又は産物の酵素結合イムノアッセイのような、任意の適切な免疫技術を使用して検出することができる。細胞による抗原の発現は、有意に検出可能な量の抗体が、場合により細胞を固定した後及び場合により標識二次抗体又は他の接合体例えばビオチンアビジン接合体を標識の増幅に使用する標準的免疫細胞化学又はフローサイトメトリーアッセイにおいて抗原に結合する場合、抗体検出可能であると言われる。組織特異的例えば、内皮細胞特異的マーカーの発現は、ノーザンブロット分析、ドットブロットハイブリダイゼーション分析又は標準的な増幅方法で配列特異的プライマーを使用するリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応RT-PCRによりmRNAレベルで検出することもできる米国特許第5,843,780号。本開示に提示されている特定のマーカーの配列データは、ジェンバンクのような公共のデータバンクから得ることができる。mRNAレベルでの発現は、典型的に制御された実験における標準的なプロトコールによる細胞試料のアッセイの実施が、標準的な時間内に明確に識別可能なハイブリダイゼーション又は増幅産物をもたらす場合、本開示に記載されたアッセイの1つにより検出可能であると言われる。特に必要のない限り、特定のマーカーの発現は、対応するmRNAがRT-PCRにより検出可能である場合に示される。タンパク質又はmRNAレベルで検出される組織特異的マーカーの発現は、レベルが、未分化多能性幹細胞、線維芽細胞又は他の無関係の細胞型のような対照細胞の少なくとも2倍、好ましくは10~50倍を越えて高い場合、陽性であると考慮される。細胞を、これらが内皮細胞系列の細胞に特徴的な酵素活性を示すかによって、特徴決定することができる。例えば、アセチル化低密度リポタンパク質の取り込み、ブラキジニン分解、アンギオテンシンI変換又は酸化窒素産生を検出するアッセイは有用でありうる。例えば、Voytaetal1984Kingetal1989Grafetal1992Mingetal2002を参照すること。他の実施態様において、本発明の細胞を、そのような細胞の1つ以上の細胞接着分子例えば、CD54及び/又はCD62Eの発現を上方制御することにより、管様構造を形成する又は炎症促進性刺激例えば、TNF及び/又はIL-1に反応する能力についてアッセイする。例えば、Chalupowiczetal1995を参照すること。熟練した読者は、プログラミング誘導内皮細胞の利点が、線維芽細胞、免疫細胞、血管周囲細胞、クッパー細胞及び他の間質細胞のような、成体又は胎児組織から単離された一次内皮細胞培養を典型的に汚染する他の細胞型を実質的に含有しないことであることを容易に理解する。プログラミング誘導内皮細胞は、免疫染色及び蛍光活性化の定量化又は他の適切な技術により決定して0.1未満好ましくは100又は10ppm未満が望ましくない細胞型のマーカー又は他の特徴を有する場合、汚染細胞型の幾つか又は全てを実質的に含有しないと特徴決定することができる。更に、プログラミング誘導内皮細胞は、間葉細胞又は造血細胞を含有しない又は実質的に含有しない場合がある。本発明のプログラミングによりもたらされる内皮細胞は、表すことが意図される細胞段階の多数の特徴を有することができる。特定の細胞において表される特徴が多いほど、内皮細胞系列の細胞として特徴決定することができる。少なくとも2、3、5、7又は9個のこれらの特徴を有する細胞がより一層好まれる。培養容器又は投与用調合薬において表されうる特定の細胞個体群を参照すると、細胞の間でのこれらの特徴の発現の均一性が多くの場合に有利である。この状況では、少なくとも40、60、80、90、95又は98の細胞が所望の特性を有する個体群が、より一層好まれる。VII.内皮細胞の使用本発明の特定の態様の方法及び組成物によりもたらされる内皮細胞を、多様な用途に使用することができる。これらには、幾つか上げると、インビボでの内皮細胞の移植又は内移植;インビトロでの細胞毒性化合物、発癌物質、突然変異原増殖/調節因子、医薬化合物などのスクリーニング;心血管疾患及び損傷の機構の解明;薬剤及び/又は増殖因子が作動する機構の研究;患者における癌の診断及びモニタリング;遺伝子療法;並びに生物学的に活性な産物の産生が含まれるが、これらに限定されない。B.試験化合物のスクリーニング本発明のプログラミング誘導内皮細胞を使用して、本明細書において提供される内皮細胞の特性に影響を与える因子例えば、溶媒、小型分子薬剤、ペプチド及びポリヌクレオチド又は環境条件例えば、培養条件若しくは操作をスクリーンすることができる。幾つかの用途において、幹細胞分化又は未分化は、内皮細胞系列に沿った細胞の成熟を促進する又は長期培養においてそのような細胞の繁殖及び維持を促進する因子をスクリーンするために使用される。例えば、候補内皮細胞成熟因子又は増殖因子は、これらを異なるウエルの幹細胞に加え、次に更なる培養又は細胞の使用に望ましい基準に従って、得られた任意の表現型変化を決定することにより試験される。本発明の特定のスクリーニング用途は、薬剤研究における医薬化合物の試験に関する。読者は、一般に、標準的な教科書のInvitroMethodsinPharmaceuticalResearch、アカデミックプレス社、1997及び米国特許第5,030,015を参照すること。本発明の特定の態様において、内皮系列になるようにプログラムされた細胞は、短期培養において内皮細胞系統又は一次内皮細胞に対して以前に実施されているものと同じような標準的薬剤スクリーニング及び毒性アッセイのために、試験細胞の役割を果たす。候補医薬化合物の活性についての評価は、一般に、本発明の特定の態様においてもたらされる内皮細胞を候補化合物と組み合わせること、化合物に寄与する細胞の形態、マーカー表現型又は代謝活性における未処理細胞又は不活性化合物で処理した細胞と比較したあらゆる変化を決定すること、次に化合物の効果を観察された変化と相関させることを伴う。スクリーニングは、化合物が内皮細胞に対して薬理学的効果を有するように設計されているため又は他に効果を有するように設計した化合物が意図されない内皮細胞副作用を有する場合があるため、実施することがある。2つ以上の薬剤を、可能性のある薬剤-薬剤相互作用の効果を検出するために、同時又は連続的のいずれかで細胞と組み合わせることにより組み合わせて試験することができる。幾つかの用途において、化合物は内皮細胞に対する毒性についてスクリーンされる。例えば、Kuzuyaetal2001を参照すること。他の用途では、本明細書に開示されているプログラミング方法により誘導された内皮細胞は、化合物の血管透過性を試験するために使用される。C.内皮細胞療法及び移植本発明は、おそらく心血管疾患、心血管損傷又は組織損傷に起因する、肝機能の程度の回復をそのような療法の必要な被験者に行う、本明細書において提供される内皮細胞の使用も提供する。例えば、本明細書に開示されている方法により誘導される内皮細胞又は内皮前駆細胞を、例えばDzauetal2005及びLietal2009に開示されているように、血管疾患、心血管疾患、虚血性疾患、血管若しくは他の組織の損傷の治療例えば、移植片の操作による又は高血圧症の治療に使用することができる。本明細書において提供される内皮細胞の治療用途における適合性を決定するために、細胞を最初に適切な動物モデルで試験することができる。あるレベルにおいて、細胞を、インビボにおいて表現型を生存及び維持する能力について評価する。本明細書において提供される内皮細胞を、免疫不全動物例えば、SCIDマウス又は化学的若しくは照射により免疫不全にした動物の、腎臓皮膜の下、脾臓の中又は肝小葉の中のような更なる観察のために扱いやすい部位に投与する。組織を数日から数週間又はそれ以上の期間の後で採取し、多能性幹細胞のような出発細胞型が依然として存在するかを評価する。これは、検出可能な標識例えば、緑色蛍光タンパク質又はβ-ガラクトシダーゼを有する投与細胞を準備することにより又は投与細胞に特異的な構成的マーカーを測定することにより実施することができる。本明細書において提供される内皮細胞が齧歯類モデルで試験される場合、投与細胞の存在及び表現型は、ヒト特異的抗体を使用する免疫組織化学若しくはELISAにより又はヒトポリヌクレオチド配列に特異的になるように増幅を引き起こすプライマー及びハイブリダイゼーション条件を使用するRT-PCR分析により評価することができる。mRNA又はタンパク質レベルでの遺伝子発現を評価するのに適したマーカーは、本開示の他の部分に提供されている。本発明の方法によりもたらされる内皮細胞及び内皮前駆細胞を、心血管疾患、血管疾患、血管損傷、組織損傷などを治療する能力について多様な動物モデルで試験することができる。本発明の特定の態様における使用が見出されうる多様なそのような動物モデルは、例えば、Dzauetal2005及びLietal2009において考察されている。のプロフィール酵素又は動物モデルにおける効力によると望ましい機能的特性を示す本発明の特定の態様においてもたらされる内皮細胞及び内皮前駆細胞は、それを必要とするヒト被験者への直接投与に適切でありうる。止血の目的では、細胞を、循環への適切な経路を有する任意の部位に投与することができる。内皮細胞を損傷又は疾患の部位に送達することもできる。本発明の特定の態様においてもたらされる内皮細胞又は内皮前駆体を、それを必要とする任意の被験者の療法に使用することができる。そのような療法に適切でありうるヒトの状態には、心血管疾患、血管疾患、虚血、血管損傷、組織損傷、糖尿病、冠動脈疾患、アテローム動脈硬化症、末梢動脈疾患、動脈瘤又は高血圧症が含まれる。ヒトの療法において、用量は、一般に約109~1012個の細胞、典型的には約5×109~5×1012個の細胞であり、被験者の体重、罹患の性質及び重篤度、並びに投与細胞の複製能力によって調整される。治療の様式及び適切な用量を決定する最終的な責任は、管理する医師にある。本発明の特定の態様は、生物工学により作られた組織移植片の一部を形成する、本明細書において提供される内皮細胞又は内皮前駆細胞を含む。そのような組織移植片は、心臓組織移植片例えば、米国特許出願第20080199843号を参照すること、血管化組織移植片例えば、米国特許出願第20070299508号を参照すること又は当該技術において既知の他の任意の組織移植片例えば、米国特許出願第20080063627号;同第20070184122号;同第20070141037号;同第20100145444号;同第20090324683号;同第20090149569号;同第20070122388号を参照することでありうる。D.市販、治療及び研究目的の配布製造、配布及び使用の目的で本発明の内皮系列の細胞を、典型的には、輸送又は保存を促進するために場合により凍結される、等張賦形剤又は培養培地中の細胞培養又は懸濁液の形態で供給することができる。本発明は、製造、配布又は使用の間の任意の時点で存在する細胞のセット又は組み合わせを含む異なる試薬系も含む。細胞のセットは、未分化幹細胞、体細胞誘導内皮細胞又は他の分化細胞型と組み合わせたプログラミング誘導細胞内皮系列細胞、これらの前駆体及びサブタイプが例示されるがこれらに限定されない、本開示に記載されている2つ以上の細胞個体群の任意の組み合わせを含む。セットにおける細胞個体群は、時々、同じゲノム又はその遺伝子修飾形態を共有する。セットのそれぞれの細胞型を、一緒に又は同じ設備若しくは異なる場所で別々の容器に、同時若しくは異なる時点において、取引関係を共有する同じ実体又は異なる実体の制御下でパッケージすることができる。VIII.プログラミングにおける候補遺伝子を試験する細胞及び方法内皮細胞のような特定の細胞型のプログラミング因子として作用する特定の候補遺伝子又は候補遺伝子の組み合わせの能力を、本開示に提供される方法及び細胞を使用して試験することができる。プログラミングにおける特定の候補遺伝子又は候補遺伝子の組み合わせの効力は、細胞形態、マーカー発現、酵素活性、繁殖能力又は目的の他の特徴に対する効果により評価し、次に候補遺伝子又は組み合わせを含まない平行培養との比較により評価することができる。候補遺伝子は、望ましい細胞型への分化又は望ましい細胞型の機能に重要な転写因子でありうる。特定の態様において、候補遺伝子又は候補遺伝子の組み合わせの発現のために少なくとも1つの発現カセットを含む、多能性幹細胞のような出発細胞を提供することができる。発現カセットは、誘導性プロモーターのような、外部制御可能転写調節エレメントを含むことができる。これらのプロモーターの活性は、生物又は非生物因子の存在又は不在により誘導することができる。誘導性プロモーターは、遺伝子操作の非常に強力なツールであり、それは、これらに機能的に結合した遺伝子の発現が、生物体又は特定の組織の発育の特定の段階においてオン又はオフになりうるからである。大腸菌テトラサイクリン抵抗性オペロンの必須調節成分に基づいたTetオン及びTetオフ誘導性遺伝子発現系を使用することができる。出発細胞において確立されると、インデューサードキシサイクリンDox、テトラサイクリン誘導体は、発現系を用量依存的に制御することができ、候補遺伝子の発現レベルを正確に調節することを可能にする。所望の細胞型の同定を助けるため、出発細胞は、細胞特異的又は組織特異的レポーター発現カセットを更に含むことができる。レポーター発現カセットは、所望の細胞型に特異的な転写調節エレメントと機能的に結合しているレポーター遺伝子を含むことができる。例えば、レポーター発現カセットは、内皮細胞の産生、単離、選択又は豊富化のために、内皮細胞特異的プロモーターを含むことができる。レポーター遺伝子は、当該技術に既知の任意の選択可能又はスクリーン可能なマーカー遺伝子であり、前述の開示に例示されている。IX.実施例以下の実施例は、本発明の好ましい実施態様を示すために含まれる。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能する、本発明者たちにより発見された技術を表し、したがって、その実施の好ましい様式を構成することが考慮できることが、当業者には理解されるべきである。しかし、当業者は、本発明の開示を考慮すると、多くに変更を開示されている特定の実施態様に行うことができ、依然として、本発明の精神及び範囲を逸脱することなく同様又は類似の結果が得られることを理解するべきである。実施例1-内皮細胞へのフォワードプログラミングヒトESC/iPSCからの内皮細胞分化の代替的な手法が図1に示される。内皮細胞は、通常の分化下側の囲みにおいて必要とされる発育段階の全てでなければ大部分を迂回する、適切な導入遺伝子又は導入遺伝子の組み合わせの発現を介して上側の囲み、ヒトESC/iPSCから効率的に誘導できる可能性がある。ヒトESC/iPSCを成熟内皮細胞に直接変換することができる導入遺伝子を同定するのに用いられる戦略図2。ヒトESC/iPSCを、誘導性遺伝子発現のためにrtTETを構成的に発現するように操作した。誘導性プロモーターPtightの制御下の導入遺伝子を、操作済hESC/iPSCにエレクトロポレーションにより導入した。ドキシサイクリンDoxの添加により、導入遺伝子発現を誘導し、EC分化を、フローサイトメトリーにより、ECマーカーCD31、CD144VE-カドヘリンの発現と共に特徴的なEC形態によってモニターする。このようのプログラムされた内皮細胞を、インビトロ及びインビボ機能性アッセイのために精製する。内皮細胞分化のためのヒトESC/iPSC誘導性R/I系統の確立図3。染色体3のヒトRosa26座を選択して、rtTETの発現を可能にし、同時に、染色体位置依存性サイレンシング効果を最小限にした。最初にLoxP組み換え部位LOX71及びLOX2272を、ヒトROSA26遺伝子のエクソン1とエクソン2の間の部位に相同組み換えにより導入した。標的作成物KI作成物は、負の選択のためにジフテリア毒素Aフラグメント遺伝子DTAのホスホグリセリン酸キナーゼプロモーターPGK駆動発現を使用し、約2.0kbの5’アーム及び4.5kbの3’アームを含有する。ヒトBCL2遺伝子SAからのスプライシングアクセプターシグナルをLOX71部位の前に配置して、内在性ヒトROSA26プロモーターからの選択マーカーの発現を可能にした。チミジンキナーゼTKのコード領域を含めて、ガンシクロビルの使用による工程2での不正確なCre/LoxP組み換え事象に対する負の選択を可能にした。ネオマイシンホスホトランスフェラーゼNeoを、相同組み換え工程1の際に正の選択に使用した。口蹄疫ウイルスペプチド2Aを使用して、内在性ヒトROSA26プロモーターからTKとNeoの遺伝子を同時発現した。BGHpAは、ウシ成長ホルモン遺伝子から誘導されるポリアデニル化シグナルである。相同組み換えは、Cre/LoxP組み換えを介する効率的なカセット交換のために親ヒトESC/iPSC系統を生じた。内皮細胞分化の誘導性細胞系統を確立するために、構成的に活性な真核生物延長因子1αプロモーターpEFにより駆動されたrtTETを、組み換え仲介カセット交換RMCEベクター及びCre発現プラスミドの脂質媒介同時形質移入によりRosa26座に導入した。ピューロマイシンNアセチルトランスフェラーゼPuroを使用して、組み換え事象を選択した。正確に組み換えられた誘導性細胞は、ピューロマイシンPuro及びガンシクロビルTK-に抵抗性があり、ジェネテシン選択Neo-に対して感受性がある。ヒトH1ESC誘導性系統におけるTetオン誘導性遺伝子発現の確認図4。図4Aは、2ベクターPiggyBac安定遺伝子発現系を示す。Ptightは、rtTET反応性の誘導性プロモーターであり;pEFは、真核生物延長因子1αプロモーターであり;hPBaseは、ヒト細胞における発現が最適化されているコドンを有するPiggyBacトランスポサーゼのコード領域である。Ptightプロモーターにより駆動されるEGFPを、図4Aに示されている両方のFugeneHD仲介形質導入を使用してヒトESC誘導性系統に導入した。安定したPiggyBacトランスポゾン組み込みを有するヒトESCを、ジェネテシン100μ/mLで選択した。細胞を、ドキシサイクリン1μg/mLを用いる又は用いない誘導の2日後に観察し、ドキシサイクリン誘導細胞におけるEGFP発現を顕微鏡で確認した。図4BNは、ドキシサイクリン1μg/mLを用いる又は用いない誘導の4日後のヒトESC誘導性系統におけるEGFP発現のフローサイトメトリー分析を示す。灰色線は、EGFPベクターでの形質移入によるヒトESC誘導性系統であり;黒色線は、ドキシサイクリンを用いる又は用いない誘導の4日後の安定したPiggyBacトランスポゾン組み込みを有するヒトESCR/I系統である。ERG-3発現を介するヒト胚幹細胞ESC誘導性系統からの内皮細胞ECのフォワードプログラミング図5。ERG-3を、Ptightプロモーターの制御下でPiggyBacベクター図4Aにクローンし、hPBase発現ベクターと共に、エレクトロポレーションによりヒトESC誘導性系統に導入した。形質移入細胞を、安定したゲノム導入遺伝子組み込みを有する形質転換体の選択のために、ジェネテシン100μg/mlの存在下でマトリゲルのTeSR培地で培養した。ドキシサイクリン0.2μg/mlを加えてERG発現を誘導し、TeSRを、10ng/mlの塩基性FGF及び20ng/mlのVEGF両方ともペプロテック社を補充した内皮無血清培地ESFM;インビトロゲン社に代えた。分化細胞は、ERG誘導の2~3日目にEC形態を得る。図5に示されているように、フォワードプログラムされたECの明視野像は、EC形態を示した。ERG-3がこれらの実験のために選択されたが、他のERGアイソフォームERG-1、ERG-2及びERG-4を含むも同様の結果をもたらした。したがって、ERGアイソフォーム3は、一貫してより効率的なアイソフォームなので実験のために選択されたが、他の全てのアイソフォームを使用することもでき、それは全てのアイソフォームがフォワードプログラミングにより内皮細胞をもたらすからである。ETV2発現を介するヒト胚幹細胞ESC誘導性系統からの内皮細胞ECのフォワードプログラミング。ETV2を、Ptightプロモーターの制御下でPiggyBacベクター図4Aにクローンし、次にhPBase発現ベクターと共に、エレクトロポレーションによりヒトESC誘導性系統に導入した。形質移入細胞を、安定したゲノム導入遺伝子組み込みを有する形質転換体の選択のために、ジェネテシン100μg/mlの存在下でマトリゲルのTeSR培地で培養した。ドキシサイクリン0.2μg/mlを加えてETV2発現を誘導し、TeSRを、10ng/mlの塩基性FGF及び20ng/mlのVEGF両方ともペプロテック社を補充した内皮無血清培地ESFM;インビトロゲン社に代えた。分化細胞は、ETV2誘導の2~3日目にEC形態を得る。図6から分かるように、フォワードプログラムされたECの明視野像は、EC形態を示した。フォワードプログラムされたECにおけるマーカーのフローサイトメトリー発現分析。ERG-3誘導分化細胞は、ECマーカーCD144及びCD31の発現を上方制御し、一方、ヒト多能性幹細胞マーカーTRA-1-60の発現を下方制御した図7。ETV2誘導分化細胞は、ECマーカーCD144及びCD31の発現を上方制御し、一方、ヒト多能性幹細胞マーカーTRA-1-60の発現を下方制御した図8。経時的にERG-3誘導EC及びETV2誘導ECは、ECマーカーCD31、CD144,ESAM、CD34の発現を増加したが、造血マーカーCD43、CD45、CD41a、CD235aを増加しなかった図9。フォワードプログラミングと通常の分化との比較。誘導3日目の細胞培養を、Accutase処理インビトロゲン社により解離して単一細胞懸濁液にし、10ng/mlの塩基性FGFを補充したESFMにおいてゼラチン被覆プラスチックで平板培養した。2時間平板培養した後、非接着性細胞を含有する培地を除去し、結合細胞を、10ng/mlの塩基性FGF及び5μg/mlのヒトフィブロネクチンインビトロゲン社を補充したESFMで培養した。ERG-3-EC及びETV2-ECの形態は、HUVEC及びEECと高度に類似していた図10。動脈ECマーカーのフローサイトメトリー分析。ERG-3-EC及びETV2-ECにおける動脈ECの3つのマーカーCD304/NRP1、CD184及びDLL4全ての発現は、HUVEC及びEECと異なるこれらの誘導ECの動脈への運命を示唆する図11。HUVECにおいて見出されるマーカーの分析。ERG-3-EC及びETV2-ECは、HUVECと比較して、CD144、vWF及びeNOSと同様の染色パターンを示す図12。DAPIを使用して、核を対比染色した。染色はHUVECよりも一般に弱かったが、vWFはERG-3-EC及びETV2-ECの両方において明確に発現した。密着結合において見出されるタンパク質の分析。密着結合タンパク質のクローディン5及びZO-1は、ERG-3-EC及びETV2-ECに発現する図13。フォワードプログラムされたECは、ECの機能的特性を示す。Ac-LDLを、ERG-3-EC及びETV2-ECにより組み込んだ図14。ECを、AcLDL-Dil接合体インビトロゲン社、2μg/mlと共に37°Cで4時間インキュベートし、続いて対比染色のために0.5μg/mlのHoechst33258と共に5分間インキュベートした。フローサイトメトリー分析では、Ac-LDL処理培養を、Accutase解離の前に新たな培地で一晩培養した。未処理ECを対照として使用した。バリア機能試験は、ERG-3-ECがHUVECと類似していることを明らかにした図15。特に、ERG-3-ECは、HUVEと比較してバリア機能回復において同様の動態を示したが、ETV2-ECは遅く、ERG-3-ECとETV2-ECがバリア機能に関して異なっていることを示唆した。ERG-3-ECは、また、凝固マトリゲルで平板培養したとき、管を形成する能力においてHUVECと類似していた図16。フォワードプログラムされたECの血液生成機能。ETV2及びERG-3誘導は、50のESFM、50のStemLineHSC培地シグマ社、10ng/mlのFGF、5ng/mlのVEGF、50ng/mlのSCF、20ng/mlのSCF、10ng/nlのTPO、10ng/mlのIL3及び20ng/mlのIL6を含有する培地において実施した。造血細胞はCD31CD43表現型により定義された、ETV2において検出されたが、ERG-3誘導培養では検出されなかった図18。9日目のETV2培養における大部分の造血細胞もCD235a/CD41a-CD45であり、最終的に造血であることが示唆された。フォワードプログラムされたECの間葉生成の可能性。ERG-3-ECを、10ng/mlのFGF2を含有し、20ng/mlのVEGF又は1μg/mlのA83-10TGFβインヒビターのいずれかを追加的に補充したESFMにおいて培養した。間葉細胞CD31-CD73CD105表現型により定義されるへのERG-3-ECの漸進的な移行が、FGFA83-01を含有する培養において観察されたが、FGFVEGFでは観察されなかった図19。ETV2-EC細胞は同様の間葉移行を受けたが、効率はERG-3-ECよりも低かった。実施例2-内皮細胞又は内皮前駆体細胞への分化転換フォワードプログラミングと同様に、内皮細胞又は内皮前駆体細胞を、皮膚線維芽細胞、脂肪組織由来細胞、角化細胞及び血球のようなヒト体細部からの分化転換により得ることもできる。体細胞を内皮細胞又は内皮前駆体細胞に変換することができる遺伝子を同定するために、レンチウイルス導入遺伝子送達系を、候補遺伝子の誘導性発現に使用することができるTETオン系と呼ばれる。簡潔には、サイトメガウイルスCMVプロモーターが、rtTETタンパク質の発現を駆動するために使用され、候補遺伝子は、rtTET反応性の誘導性プロモーターPtightと呼ばれるの制御下に置かれる。rtTETと導入遺伝子発現レンチウイルスの両方を使用して、細胞に同時形質導入する。ドキシサイクリン0.2~1μg/mLを形質導入細胞に加えて、導入遺伝子の発現を誘導し、細胞培養培地を内皮細胞培養培地に代えて、プログラミングを支持する。あるいは、piggyBacベクター系レンチウイルス送達系ではなくを、候補遺伝子の誘導性発現に使用することができる。内皮細胞又は内皮前駆体の確認は、hESC/iPSCからのフォワードプログラミングと同様に実施され、形態的特徴、細胞表面マーカー発現及び機能的特性を含むことができる。ERG及びETV2のような、hESC/iPSCからのフォワードプログラミングにより同定される遺伝子は、内皮細胞又は内皮前駆体へのヒト体細胞の分化転換に使用される強力な候補であるが、追加のプログラミング遺伝子例えば、OCT4のようなiPSC再プログラミング遺伝子が、体細胞において確立された分化状態を不安定化して、最適なプログラミング効率を達成するために必要でありうる。本明細書に開示及び請求されている全ての方法を、本開示を考慮して過剰な実験をすることなく作製及び実施することができる。本発明の組成物及び方法は好ましい実施態様に関して記載されてきたが、本発明の概念、精神及び範囲を逸脱することなく、本明細書に開示されている方法及び方法の工程又は一連の工程に変形を適用できることは、当業者には明白である。より詳細には、科学的にも生理学的にも関連する特定の作用物質を、本明細書に記載の作用物質で置換することができ、同じ又は同様の結果が達成されることは明白である。そのような同様の置換及び変更は、全て、当業者に明白であり、添付の請求項で定義されている本発明の精神、範囲及び概念の範囲内であると見なされる。参考文献例示的な手順又は本明細書に記載されたものへの他の詳細な補足を提供する程度の以下の参考文献は、参照として本明細書に特定的に組み込まれる。米国特許第4,683,202号米国特許第5,030,015号米国特許第5,302,523号米国特許第5,322,783号米国特許第5,384,253号米国特許第5,460,964号米国特許第5,464,765号米国特許第5,486,359号米国特許第5,486,359号米国特許第5,538,877号米国特許第5,538,880号米国特許第5,550,318号米国特許第5,563,055号米国特許第5,580,859号米国特許第5,589,466号米国特許第5,591,616号米国特許第5,610,042号米国特許第5,635,387号米国特許第5,656,610号米国特許第5,677,136号米国特許第5,681,599号米国特許第5,702,932号米国特許第5,716,827号米国特許第5,736,396号米国特許第5,736,524号米国特許第5,750,397号米国特許第5,759,793号米国特許第5,780,448号米国特許第5,789,215号米国特許第5,811,094号米国特許第5,827,735号米国特許第5,827,740号米国特許第5,837,539号米国特許第5,837,670号米国特許第5,843,780号米国特許第5,925,565号米国特許第5,928,906号米国特許第5,935,819号米国特許第5,945,100号米国特許第5,981,274号米国特許第5,994,136号米国特許第5,994,624号米国特許第6,013,516号米国特許第6,184,038号米国特許第6,833,269号米国特許第6,991,897号米国特許第7,015,037号米国特許第7,399,632号米国特許第7,410,773号米国特許第7,410,798号米国特許第7,422,736号米国特許出願第08/464,599号米国特許出願第61/058,858号米国特許出願第61/172,079号米国特許出願第61/184,546号米国特許出願公開第2002/0102265号米国特許出願公開第2003/0040038号米国特許出願公開第20030211603号米国特許出願公開第20070122388号米国特許出願公開第20070141037号米国特許出願公開第20070184122号米国特許出願公開第20070238170号米国特許出願公開第20070299508号米国特許出願公開第20080063627号米国特許出願公開第20080199843号米国特許出願公開第20090149569号米国特許出願公開第20090324683号米国特許出願公開第20100145444号米国特許出願公開第2003/0082561号米国特許出願公開第20100081193号AlexanderetalProcNatAcadSciUSA85509250961988AlisonetalHepatol29678831998AmitetalDevBio2272712782000AndrewsetalInTeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsRobertsonIRLPress2072461987AsohetalProcNatlAcadSciUSA9917107122002AusubeletalCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenePublAssocIncJohnWileySonsIncMA1996AusubeletalInCurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySonsIncNewYork1994BhardwajetalNatImmunol21721802001BhatiaetalJExpMed189113911481999BlomeretalJVirol71664166491997BoyeretalCell122947562005BussetalMolCellBiol8396039631988ByrneetalNature4504975022007CassiedeetalJBoneMinerRes11126412731996ChadwicketalBlood1029069152003ChalupowiczetalJCellBiol1302072151995ChambersetalCell113643552003ChenandOkayamaMolCellBiol7274527521987CollinsetalFASEBJ98999091995CurrentProtocolsinStemCellBiologyBhatiaetalJohnWileyandSonsInc2007DavidsonandZonCurrTopDevBiol5045602000DerossietalJBioChem26910444104501994DerossietalJBiolChem271181881996DerossietalTrendsinCellBiol884871998DeValetalDevelopmentalCell161801952009DzauetalHypertension467182005ElliottandOHareCell882232341997ヨーロッパ特許第1507865号ヨーロッパ特許第0412700号ErcolanietalJBiolChem26315335153411988EvansetalInCancerPrinciplesandPracticeofOncologyDevitaetalLippincotRavenNY105410871997FawelletalProcNatlAcadSciUSA916646681994FecbhdmeretalProcNatlAcadSciUSA84846384671987FraleyetalProcNatlAcadSciUSA76334833521979FrankelandPaboCell55118911931988GhoshandBachhawatInLiverDiseasesTargetedDiagnosisandTherapyUsingSpecificReceptorsandLigandsWuetalMarcelDekkerNY871041991GopalMolCellBiol5118811901985GrafetalJCardiovasPharm20SI68201992GrahamandVanDerEbVirology524564671973GronthosBlood84416441731994HancocketalEMBOJ10403340391991HarlandandWeintraubJCellBiol101109410991985HilletalExpHematol249369431996HoetalCancerRes6147472001HuberetalBlood92412841371998InvitroMethodsinPharmaceuticalResearchAcademicPress1997JaiswaletalJCellBiochem642953121997Johnstoneetal2382652721998KaeppleretalPlantCellRep84154181990KanedaetalScience2433753781989KarinetalCell363713791989KatoetalJBiolChem266336133641991KilicetalStroke341304102003KingetalAmJPhysiolCellPhysiol256C1231C12381989KirchmaierandSugdenJVirol72465746661998KleinetalNature32770731987KuzuyaetalArteriosclThrombVascularBiol217652001LangleRouaultetalJVirol72618161851998LevitskayaetalProcNatlAcadSciUSA9412616126211997LietalJCellBiochem1061941992009LindgrenetalTrendsinPharmacolSci21991032000LindneretalJVirol8256937022008LiuetalCirculationRes776386431995MacejakandSarnowNature35390941991MakinoetalJClinInvest1036977051999ManiatisetalMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborPressColdSpringHarborNY1988MannandFrankeLEMBOJ10173317391991MannetalCell331531591983MannoetalNatMed1234272006MarshalletalBlood96159115932000McLaughlinetalBlood98333233392001MilleretalAmJClinOncol152162211992MingetalMolecCellBiol22846784772002NabeletalScience244134213441989NaldinietalScience2722632671996NgNucAcidRes176016151989NicolasandRubensteinInVectorsAsurveyofmolecularcloningvectorsandtheirusesRodriguezandDenhardtedsStonehamButterworthpp4945131988NicolauandSeneBiochimBiophysActa7211851901982NicolauetalMethodsEnzymoh1491571761987NikolovaKrstevskietalBMCDevelopmentalBiology9722009PaskindetalVirology672422481975PCT出願国際公開第03/059940号PCT出願国際公開第03/059941号PCT出願国際公開第94/09699号PCT出願国際公開第94/09699号PCT出願国際公開第95/06128号PCT出願国際公開第96/39487号PCT出願国際公開第99/20741号PCT出願国際公開第2003/042405号PelletierandSonenbergNature3343203251988PotrykusetalMolGenGenet1991691771985PottenPhilosTransRSocLondBBiolSci353821301998PotteretalProcNatlAcadSciUSA81716171651984QuitscheetalJBiolChem264953995451989ReubinoffetalNatBiotechnol18399B4042000RichardsetalCell372632721984RippeetalMolCellBiol106896951990RothbardetalNatMed6125372000SambrookandRussellMolecularCloningALaboratoryManual3rdEdColdSpringHarborLabPress2001SambrooketalInMolecularCloningALaboratoryManualVol1ColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNY71917291989SchlaegeretalProcNatlAcadSciUSA94305830631997SchwarzeetalScience285146671999SchwarzeetalScience285156915721999SmithInOriginsandPropertiesofMouseEmbryonicStemCellsAnnuRevCellDevBiol2000TakahashiandYamanakaCell1266636762006TakahashietalCell126663762007TakahashietalCell1318618722007TanakaetalJImmunol170129182003TeminInGeneTransferKucherlapatiNYPlenumPress1491881986ThomsonandMarshallCurrTopDevBiol381331651998ThomsonandOdoricoJTrendsBiotechnol1853572000ThomsonetalProcNatlAcadScieUSA92784478481995ThomsonetalScience28211451998TurKaspaetalCellBiol67167181986VlaeminckGuillemetalMechanismsofDevelopment913313352009VoytaetalJCellBiol99203420401984WangetalNatureBiotech253173182007WattPhilosTransRSocLondBBiolSci3538311997WenderetalProcNatlAcadSciUSA971300382000WilsonetalScience244134413461989WongetalGene1087941980WuandWuBiochemistry278878921988WuandWuJBiolChem262442944321987XuetalNatBiotechnol199719742001YamamotoetalEurJPharmaceuticsandBiopharmaceutics71484892009YangandRussellProcNatlAcadSciUSA87414441481990YingetalCell1152812922003YooetalJBoneJointSureAm80174517571998YuandThompsonGenesDev221987972008YuetalScience318191719202007YuetalScience3247978012009ZufiereyetalNatBiotechnol158718751997"