野生型ヒトNGALの配列配列番号1と少なくとも70同一であるアミノ酸配列又はそのフラグメントを含む変異体NGALタンパク質であって、aLys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165の中の5つ以上の残基が、欠失によって又は非正荷電アミノ酸残基による置換によって変異し、さらに、b残基Asn39、Ala40、Tyr52、Ser68、Trp79、Arg81、Tyr100、Tyr106、Phe123、Lys125、Tyr132、Phe133及びリジン134が変異していないか、又は保存的置換され、さらにc変異体NGALタンパク質がシデロフォアと結合する能力を有し、さらにd変異体NGALタンパク質が尿中に排出される、前記変異体NGALタンパク質。Lys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165の中の6つ以上の残基が非正荷電アミノ酸で置換される、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。Lys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165の中の7つ以上の残基が非正荷電アミノ酸で置換される、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。Lys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165の中の8つ以上の残基が非正荷電アミノ酸で置換される、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。Lys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165の中の9つ以上の残基が非正荷電アミノ酸で置換される、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。Lys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165の中の10以上の残基が非正荷電アミノ酸で置換される、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。変異体NGALタンパク質が制菌活性を有する、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。対象に変異体NGALタンパク質を全身投与して一定時間後に尿中に蓄積される変異体NGALタンパク質のが、対象にWTNGALタンパク質を全身投与した後同じ時間をかけて尿中に蓄積されるWTNGALタンパク質のより大きい、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。対象に変異体NGALタンパク質を全身投与して一定時間後に尿中に蓄積される変異体NGALタンパク質のが、対象にWTNGALタンパク質を全身投与した後同じ時間をかけて尿中に蓄積されるWTNGALタンパク質のより10倍以上大きい、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。対象に変異体NGALタンパク質を全身投与して一定時間後に尿中に蓄積される変異体NGALタンパク質のが、対象にWTNGALタンパク質を全身投与した後同じ時間をかけて尿中に蓄積されるWTNGALタンパク質のより100倍以上大きい、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。対象に変異体NGALタンパク質を全身投与して一定時間後に尿中に蓄積される変異体NGALタンパク質のが、対象にWTNGALタンパク質を全身投与した後同じ時間をかけて尿中に蓄積されるWTNGALタンパク質のより100倍以上大きい、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。対象に変異体NGALタンパク質を全身投与して3時間後に尿中に蓄積される変異体NGALタンパク質のが1以上である、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。対象に変異体NGALタンパク質を全身投与して3時間後に尿中に蓄積される変異体NGALタンパク質のが2以上である、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。対象に変異体NGALタンパク質を全身投与して3時間後に尿中に蓄積される変異体NGALタンパク質のが5以上である、請求項1に記載の変異体NGALタンパク質。請求項1に記載の変異体NGALタンパク質をコードする核酸配列。作動するようにプロモーターに連結された、請求項15に記載の核酸配列を含む発現ベクター。請求項15に記載の核酸を安定的に発現する細菌細胞。請求項15に記載の核酸を安定的に発現する哺乳動物細胞。請求項1に記載の変異体NGALタンパク質含む医薬組成物。請求項1に記載の変異体NGALタンパク質及びシデロフォアの複合体を含む医薬組成物。シデロフォアが、エンテロケリン、ピロガロール、カルボキシミコバクチン、カテコール及び前記の変種から成る群から選択される、請求項20に記載の医薬組成物。シデロフォアがpH非感受性である、請求項20に記載の医薬組成物。シデロフォアが尿pHで変異体NGALタンパク質及び鉄と結合する、請求項20に記載の医薬組成物。シデロフォアが変異体NGALタンパク質及び鉄と尿中で結合する、請求項20に記載の医薬組成物。シデロフォアが血液pHで変異体NGALタンパク質及び鉄と結合する、請求項20に記載の医薬組成物。シデロフォアが変異体NGALタンパク質及び鉄と血中で結合する、請求項20に記載の医薬組成物。変異体NGALタンパク質及びシデロフォアが11のモル比で存在する、請求項20に記載の医薬組成物。鉄過負荷をその必要がある対象で治療する方法であって、前記方法が、請求項20に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与する工程を含む、前記方法。尿道感染をその必要がある対象で治療する方法であって、前記方法が、請求項19に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与する工程を含む、前記方法。詳細な説明本発明は部分的には、腎臓で再吸収されず、したがって野生型NGALとは異なり尿中に排出されるNGALタンパク質の変異型の開発に依拠する。NGALのこれらの変異型は、鉄結合シデロフォア例えばエンテロケリンと結合する能力を有し、さらに尿への排出によって体外へ鉄を運び出すために用いることができる。したがって、本発明の変異体NGALタンパク質は、鉄過負荷並びに鉄過負荷に付随する疾患及び異常の治療に用いることができる。さらにまた、本発明の変異体NGALタンパク質は制菌活性を有し、尿道感染の治療に用いることができる。したがって、本発明は、変異体NGALタンパク質、そのような変異体NGALタンパク質単独又はシデロフォアと複合体形成を含む医薬組成物、並びに多様な異常および疾患の治療例えば鉄過負荷に付随する疾患の治療及び尿道の細菌感染の治療におけるそのような変異体NGALタンパク質及び組成物の使用を提供する。本発明のこれらの特徴及び他の特徴はさらに完全に下記で及び本出願の他の部分で述べる。略語及び定義略語NGALは好中球ゼラチナーゼ関連リポカリンを指す。NGALはまた、当分野ではヒト好中球リポカリン、シデロカリン、aミクログロブリン関連タンパク質、ScnNGAL、リポカリン2、24p3、超誘導性タンパク質24SIP24、ウテロカリン及びneu関連リポカリンと称される。NGALのこれらの別称は本明細書では互換的に用いることがある。特段の記載がなければ、本明細書で用いられるNGALという用語は、任意のNGALタンパク質、フラグメント又は変異体を含む。いくつかの実施態様では、NGALタンパク質は変異体NGALタンパク質である。略語hNGALはヒトNGALを指す。略語WTは野生型、例えば野生型ヌクレオチド又はアミノ酸配列を指す。本明細書で用いられる約という用語は、ほぼ、ざっと、およそ又は...の範囲を意味する。約という用語が数で表される範囲と一緒に用いられるとき、表示された数値の上及び下に境界を広げることによって当該範囲が加減される。一般的に本明細書では、約という用語は、20の上下変動より高くし又はより低くすることによって記載の値より上又は下に数値を加減するために用いられる。NGALNGALは約22kDの分子量を有する小さなタンパク質であり、シデロフォア結合タンパク質である。シデロフォアは、鉄と結合しこれをキレートする有機分子である。細菌はシデロフォアエンテロケリンを生成し、哺乳動物は、カテコールと称される、同様なタイプであるがより単純な分子を内因的に発現する。エンテロケリンは鉄に対して極めて高い親和性を有し、野生型NGALはエンテロケリン鉄複合体に対し高い親和性を有する。エンテロケリン鉄NGAL複合体はpH非感受性であり、結合した鉄はレドックス不活性である。したがって、そのようなNGAL複合体が結合した鉄は、酸素ラジカル生成の触媒に利用することができず、NGALはinvivoで使用される理想的な鉄キレート物質である。NGALは細胞内で生成されるや直ちに細胞外間隙に分泌され、腎臓で迅速に排除される半減期10分。このタンパク質の血清及び尿レベルは、多数の疾患モデルで非常に高くなることがある。NGALタンパク質は健康なヒトの腎臓へ輸送され、糸球体のろ過障壁ろ過のカットオフサイズは70kDを通過して初期尿に入ることができるが、続いてNGALは、近位細管の上皮の先端側に局在するメガリン又はメガリンキュビリンキュビリンレセプターによって効率的に再吸収される。メガリンは広い基質特異性を有する遍在性レセプターであり、腎臓の近位細管の先端表面で発現されるそこでメガリンはタンパク質再吸収に中心的に関係する。メガリンのその基質への結合はイオンの相互反応によって媒介され、その負に荷電した基質結合ドメインは尿のろ過物中のタンパク質の正に荷電した表面と効率的に結合することができる。いったん吸収されエンドサイトーシスによって取り込まれると直ちにNGALはリソソームに輸送され、そこで分解される。分解されると直ちに、NGALが腎臓に輸送した鉄は再吸収される。NGAL変異体本発明は変異体NGALタンパク質を提供する。前記変異体には変異が導入されて正荷電残基メガリン相互作用に必要とされ得るが除去されたものが含まれるが、ただし前記に限定されない。WTNGALと同様に、本発明のNGAL変異体はエンテロケリン鉄複合体に対して高い親和性を有するが、メガリンに対しては有意に軽減された親和性を有するようである表1。したがって、腎臓のメガリンレセプター媒介機構によって再吸収されるのではなく、本発明のNGAL変異体、並びにエンテロケリン及び鉄とこれら変異体との複合体は腎臓で効率的に再吸収されず、その代わり尿中に排出される。したがって、本発明の変異体NGALタンパク質を用いて、身体から過剰な鉄を効率的に除去し、安全なレドックス不活性型で尿に輸送することができる。さらにまた、以前の報告は、NGALエンテロケリン鉄がほとんどまたは全く化学的有害性又は細胞有害性をもたないことを示し、前記が治療で、例えば鉄過負荷に付随する疾患及び異常例えばヘモクロマトーシスの治療で安全に用いられる可能性を示唆している。本明細書で用いられる変異体NGALタンパク質及びNgal変異体という用語は、WTヒトNGALのアミノ酸配列配列番号:1、図1のHsNGALの配列を参照されたいと1つ以上のアミノ酸により相違するタンパク質又はアミノ酸配列を指す。本発明の変異体NGALタンパク質は1つ以上の非保存的変異を有することができ、この場合、あるアミノ酸が異なる構造又は化学的特性を有する別のアミノ酸で置換される。本発明のいくつかの実施態様では、NGALタンパク質の表面の塩基性/正荷電リジン、アルギニン及び/又はヒスチジン残基例えばメガリンと相互作用する残基は、これらの残基を非塩基性/非正荷電残基で置換することによって変異が導入される。前記は非保存的変異である。例えば、本発明のいくつかの実施態様では、塩基性/正荷電リジンLys-K、アルギニンArg-R及び/又はヒスチジンHis-H残基例えばメガリン相互作用で必要とされ得るNGALタンパク質の表面の残基は、非塩基性/非正荷電残基、例えばアラニンAla-A、アスパラギンAsn-N、アスパラギン酸Asp-D、システインCys-C、グルタミンGlu-Q、グルタミン酸Glu-E、グリシンGly-G、イソロイシンIle-I、ロイシンLeu-L、メチオニンMet-M、フェニルアラニンPhe-F、プロリンPro-P、セリンSer-S、スレオニンThr-T、トリプトファンTrp-W、チロシンTyr-Y及びバリンVal-Vで置換される。いくつかの実施態様では、塩基性/正荷電リジン、アルギニン及び/又はヒスチジンは負に荷電した残基、例えばアスパラギン酸Asp-D及びグルタミン酸Glu-Eで置換される。いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は1つ以上の保存的変異を有することができる。この場合、あるアミノ酸が同様な構造又は化学的特性を有する別のアミノ酸で置換される。例えば、いくつかの実施態様では、シデロフォア相互作用に必要とされるNGALの残基を無傷のままにしておくか、又はそれら前記で保存的変異を導入することが所望される。多様な他の保存的アミノ酸置換例えば体外に鉄を輸送する本発明のNGAL変異体の能力を破壊しない保存的アミノ酸置換をNGALタンパク質全体で実施することができる。保存的アミノ酸置換の1つのタイプは同様な側鎖を有する残基の互換性に依存する。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸グループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンである。脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸のグループはセリン及びスレオニンである。アミド含有側鎖を有するアミノ酸のグループはアスパラギン及びグルタミンである。芳香族側鎖を有するアミノ酸のグループはフェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンである。塩基性側鎖を有するアミノ酸のグループはリジン、アルギニン及びヒスチジンである。硫黄含有側鎖を有するアミノ酸のグループはシステイン及びメチオニンである。有用な保存的アミノ酸置換のグループは、バリンロイシンイソロイシン、フェニルアラニンチロシン、リジンアルギニン、アラニンバリン、及びアスパラギングルタミンである。本発明の変異体NGALタンパク質は、本明細書下記で示す特定の残基の変異の他に、多様な変異付加、欠失及び置換を含むを含むことができる例えばNGAL変異体のN及び/又はC末端への付加又は前記末端からの欠失を含む。そのような変異はいずれも、当該NGAL変異体の能力シデロフォアとの結合能力、鉄の輸送能力及び/又は尿中へ排出される能力にそれら変異が悪影響を与えない程度に実施することができる。更なる実施態様では、本発明のNGAL変異体は1つ以上の天然に存在しないアミノ酸を含むことができる。非天然アミノ酸例えば、固有の側鎖官能基ハロゲンを含む、不飽和炭化水素、複素環、シリコン及び有機金属ユニットを含むアミノ酸は、タンパク質の安定性の改善に利点を提供することができる。そのような天然に存在しないアミノ酸は多数知られている。そのような天然に存在しないアミノ酸を本発明のNGAL変異体で用いることができる。ある種の実施態様では、本発明は、WTヒトNGAL又は他のいくつかのNGAL変異体と一定の同一性を有するNGAL変異体を提供する。以下の用語は、2つ以上のポリヌクレオチド又はアミノ酸配列間における配列関係性を表すために用いられる:配列同一性、配列同一性パーセンテージ及び同一性。これらの用語は当分野におけるそれらの通常の意味にしたがって用いられる。配列同一性パーセンテージは参照配列に対して測定される。配列同一性という用語は、2つのポリヌクレオチド又はアミノ酸配列が同一であることを意味するすなわち1ヌクレオチド毎の基準で。配列同一性のパーセンテージは、最適にアラインメントを実施した2つの配列を比較し、同一の核酸塩基又はアミノ酸が両配列に存在する位置の数を決定して一致する位置数を入手し、一致する位置数を総位置数で割り、さらに結果に100を乗じて配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算する。NGALにおける13の非保存陽性表面残基NGALタンパク質は、種の間で保存されない13の塩基性/陽性アミノ酸残基、すなわちLys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165を含む。本出願で提示するデータは、これら13のアミノ酸残基の多様な組合せの変異が、WTNGALと同様にエンテロケリン鉄と結合する能力を有するが、WTNGALとは異なり腎で効率的に再吸収されないNGAL変異体の創出をもたらすことを示す。そのようなNGAL変異体は、シデロフォア例えばエンテロケリンと複合体を形成するとき、尿へのその排出を促進することによって体外へ過剰な鉄を送り出すために用いることができる。そのようなNGALタンパク質はまた制菌活性を有し、尿道の細菌性感染の治療に用いることができる。ある実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は、WTヒトNGALのアミノ酸配列を土台にするが1つ以上の変異を含むアミノ酸配列又はそのフラグメントを含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。ある実施態様では、本発明は、WTヒトNGALと比較したとき以下のアミノ酸の位置のうち1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、9つ、10、11、12又は13全てが変異したNGALを提供する:Lys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき、列挙した13のアミノ酸の位置の5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき、列挙した13のアミノ酸の位置の6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき、列挙した13のアミノ酸の位置の7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき、列挙した13のアミノ酸の位置の8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき、列挙した13のアミノ酸の位置の9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき、列挙した13のアミノ酸の位置の10以上が変異する。ある実施態様では、変異アミノ酸残基は欠失される。別の実施態様では、変異アミノ酸残基は正に荷電していないアミノ酸で置換されるすなわち非保存的置換。別の実施態様では、変異アミノ酸残基は負に荷電したアミノ酸で置換されるすなわち非保存的置換。別の実施態様では、NGAL変異体はそのような変異の任意の組合せを含むことができる。すなわち、欠失、非正荷電アミノ酸による置換又は負荷電アミノ酸による置換の任意の組合せが、上記に列挙したアミノ酸残基のいずれか1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、9つ、10、11、12又は13全てに存在し得る。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK15が非荷電アミノ酸SerSを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK46が負荷電アミノ酸GluEを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK50が非荷電アミノ酸ThrTを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK59が非荷電アミノ酸GlnQを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK62が非荷電アミノ酸GlyGを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK73が負荷電アミノ酸AspDを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK74が負荷電アミノ酸AspDを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK75が脂肪族アミノ酸GlyGを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK98が非荷電アミノ酸GlnQを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、HisH118が非極性アミノ酸PheFを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、ArgR130が非荷電アミノ酸GlnQを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、LysK149が非荷電アミノ酸GlnQを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある好ましい実施態様では、本発明は、HisH165が非荷電アミノ酸AsnNを含むがただし前記に限定されないで置換されるNGAL変異体を提供する。ある実施態様では、本発明は、WTヒトNGALの配列配列番号:1と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列、又はそのフラグメントを含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここでLys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149及びHis165の中の1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、9つ、10、11、12又は13全ての残基が欠失するか、又は正に荷電していないアミノ酸、例えば負に荷電したアミノ酸で置換され、さらに前記NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここで前記NGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。本発明の例示的なNGAL変異体には、変異体K1、K2、K3、K5、I1、I3、F4、F5及びB2の配列表2参照を含むもの、又は前記の配列のフラグメント若しくは変種を含むものが含まれる。いくつかの実施態様では、そのような変種は、残基15、46、59、62、73、74、75、98、118、130、149及び165で表2に規定したアミノ酸配列を有するが、他のアミノ酸残基は、以下を条件として前記規定の配列と異なり得る:NGAL変異体は、WTヒトNGALの配列配列番号:1と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるか、又は前記のフラグメントであり、さらにNGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにまたNGAL変異体はiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。ある実施態様では、本発明は、K3NGAL変異体の配列配列番号:2と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15、46、73、74、75、98、118、130、149及び165は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、K2NGAL変異体の配列配列番号:3と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15、73、74、75、98、118、130、149及び165は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、I3NGAL変異体の配列配列番号:4と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基62、73、74、75及び98は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、I1NGAL変異体の配列配列番号:5と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15、73、74、75及び130は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、K5NGAL変異体の配列配列番号:6と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15、46、98、118、130、149および165は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、F4NGAL変異体の配列配列番号:8と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15及び46は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、F5NGAL変異体の配列配列番号:9と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15、46及び165は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、B2NGAL変異体の配列配列番号:10と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15、46、118及び165は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。別の実施態様では、本発明は、K1NGAL変異体の配列配列番号:7と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列を含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここで残基15、46、59、98、118、130、149及び165は各々WTヒトNGALの配列と異なり、各々は非正荷電アミノ酸であり、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち5以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち6以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち7以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち8以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち9以上が変異する。いくつかの実施態様では、WTヒトNGALと比較したとき列挙した13のアミノ酸の位置のうち10以上が変異する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。更なる実施態様では、13の非保存陽性/塩基性表面残基の1つ以上で変異を有する上記に記載のNGAL変異体はまた、下記の5つの保存陽性/塩基性表面残基における1つ以上の変異、又はこの詳細な説明の以下の他の部分に記載する他の変異の1つ以上を有することができる。NGALにおける5つの保存陽性/塩基性表面残基NGALタンパク質は、ヒト、ラット、マウス、チンパンジー、乳牛、イヌ、イノシシ及びアカゲザルの種間で保存されている5つの塩基性/陽性表面アミノ酸、すなわち残基ArgR43、ArgR72、ArgR140、LysK142及びLysK157を含む。ある実施態様では、本発明は、WTヒトNGALと比較したときこれらアミノ酸の位置の1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つ全てが変異したNGAL変異体を提供する。ある実施態様では、前記変異アミノ酸残基は欠失される。別の実施態様では、前記変異アミノ酸残基は非正荷電アミノ酸で置換されるすなわち非保存的変異。別の実施態様では、前記変異アミノ酸残基は負荷電アミノ酸で置換されるすなわち非保存的変異。別の実施態様では、NGAL変異体はそのような変異の任意の組合せを含むことができる。すなわち、欠失、非正荷電アミノ酸による置換又は負荷電アミノ酸による置換の任意の組合せを、上記に列挙したアミノ酸残基の1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つで提供することができる。ある実施態様では、本発明は、WTヒトNGALの配列配列番号:1と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列、又はそのフラグメントを含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここでArgR43、ArgR72、ArgR140、LysK142及びLysK157の中の1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つ全てが欠失するか、又は非正荷電アミノ酸例えば負荷電アミノ酸で置換され、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はまたiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。更なる実施態様では、詳細な説明のこの部分に記載した、5つの保存陽性/塩基性表面残基の1つ以上で変異を有するNGAL変異体はまた、詳細な説明の先の部分に記載した13の非保存陽性/塩基性表面残基の1つ以上の変異、又はこの詳細な説明の以下の部分に記載する他の変異の1つ以上を有することができる。NGALの補足的表面残基以下のアミノ酸残基はNGALタンパク質の表面に位置し、NGALタンパク質とメガリンタンパク質との相互作用で、及び/又は腎臓におけるNALの再吸収で役割を果たすことができる:アミノ酸残基1-15、17-26、40-50、57-62、71-82、84-89、96-105、114-118、128-131、134、140-151、157-165及び170-174。ある実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は、ヒトNGALのアミノ酸配列を土台とするが、WTヒトNGALの残基1-15、17-26、40-50、57-62、71-82、84-89、96-105、114-118、128-131、134、140-151、157-165及び170-174に位置する個々のアミノ酸残基の1つ以上で変異を含むアミノ酸配列またはそのフラグメントを含むか、前記から成るか、又は本質的に前記から成る。別の実施態様では、前記変異アミノ酸残基の1つ以上が欠失され得る。別の実施態様では、前記変異アミノ酸残基は、非正荷電アミノ酸負荷電アミノ酸を含むが、ただしこれに限定されないで置換され得る。別の実施態様では、NGAL変異体はそのような変異の任意の組合せすなわち、上記列挙のアミノ酸残基の任意の1つ以上における、欠失、非正荷電アミノ酸による置換及び/又は負荷電アミノ酸による置換の任意の組合せを含むことができる。表2は、本発明で意図されるNGALの表面残基における全ての可能な変異の詳細を提供する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。ある実施態様では、本発明は、WTヒトNGALの配列配列番号:1と少なくとも70、又は少なくとも75、又は少なくとも80、又は少なくとも85、又は少なくとも90、又は少なくとも95、又は少なくとも98同一であるアミノ酸配列、又はそのフラグメントを含むか、本質的に前記から成るか、又は前記から成るNGAL変異体を提供し、ここでWTヒトNGALの残基1-15、17-26、40-50、57-62、71-82、84-89、96-105、114-118、128-131、134、140-151、157-165及び170-174に位置する個々のアミノ酸残基の1つ以上は欠失されるか、又は非正荷電アミノ酸例えば負荷電アミノ酸で置換され、さらにここで、NGAL変異体は、a尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はb腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALと比較してより低レベルの腎近位細管再吸収を示し、及び/又はcメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではなく、及び/又はdWTNGALと比較してメガリンキュビリンレセプターに対して軽減親和性を有し、及び/又はeWTヒトNGALと比較してその溶媒接近可能表面により低い正荷電を有する残基を有し、さらにここでNGAL変異体はiシデロフォアと結合することができ、及び/又はii鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はiv制菌活性を有する。好ましい実施態様では、そのようなNGAL変異体は、NGALエンテロケリン相互作用に必要とされる以下のアミノ酸残基の1つ以上で、又はより好ましくは全てで変異しないかすなわちWTヒトNGALと同じアミノ酸配列を有する、又はこれら残基で変異が導入されるならば保存的置換のみが導入される:アスパラギン39、アラニン40、チロシン52、セリン68、トリプトファン79、アルギニン81、チロシン100、チロシン106、フェニルアラニン123、リジン125、チロシン132、フェニルアラニン133及びリジン134。NGAL変異体の機能的特性ある種の実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は一定の規定された機能を有する。例えばいくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は以下の特性の1つ以上を有する:aそれらは尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示し、及び/又はbそれらは腎臓の近位細管で再吸収されないか、又はWTヒトNGALよりも低い腎近位細管再吸収レベルを示し、及び/又はcそれらはメガリンキュビリンレセプター媒介機構による腎再吸収の基質ではない。同様に、いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は以下の特性の1つ以上を有する:iそれらはエンテロケリン型シデロフォアと結合することができ、及び/又はiiそれらは鉄と複合体を形成したエンテロケリン型シデロフォアと結合することができ、及び/又はiiiそれらはエンテロケリン結合ポケットの保全された三次元構造を有し、及び/又はivそれらは制菌活性を有する。本発明の変異体NGALタンパク質の上記の特性の各々はそれについて試験し及び/又は定量することができ、いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は一定の数値的範囲内に収まる機能的特性を有する。例えばいくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は尿中に排出されるか、又はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示す。本発明の変異体NGALタンパク質の排出は、例えば本出願の実施例の部分に記載する方法を用いて検出及び定量することができる。例えば、対象例えばマウスまたはヒト対象へのその投与からある時間後に尿中に存在する変異体NGALタンパク質の量を測定することが可能で、投与総量のパーセンテージとして表し実施例及び表1参照、尿中の蓄積を提供することができる。あるNGAL変異体の尿中の蓄積を他の変異体又はWTNGALの蓄積と比較することができる。NGAL若しくはNGAL変異体又は前記のシデロフォア複合体を放射能標識するか例えば放射性鉄で、又はいくつかの他の検出可能部分で標識してその検出及び定量を容易にすることができる。いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質はWTヒトNGALよりもはるかに高いレベルの尿中への排出を示す。例えばNGAL変異体は、WTヒトNGALよりも6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、100倍、又はそれより高いレベルの尿中排出を示すことができる。図5で分かるように、WTNGALは02未満の尿中蓄積を有することができる腹腔に投与した量のとして測定。対照的に、図3、図5及び表1から分かるように、本発明のNGAL変異体は、1を超える、又は2を超える、又は3を超える、又は4を超える、又は5を超える、又は6を超える、又は7を超える、又は8を超える、又は9を超える、又は10を超える、又は15を超える、又は20を超える、又は前記を超える尿中蓄積を有することができる投与後3時間の腹腔投与量のとして測定。いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質はシデロフォア例えばエンテロケリンと結合することができ、及び/又はそれらは鉄と複合体を形成したシデロフォアと結合することができる。シデロフォア及びシデロフォア鉄複合体と結合する本発明のNGAL変異体の能力は、例えば本出願の実施例の部分に記載する方法を用いて試験及び/又は定量することができる。例えばNGAL本発明のNGAL変異体を含む及びシデロフォア分子例えばエンテロケリン及び鉄は1:1:1の分子比で互いに結合し、さらにNGAL本発明のNGAL変異体を含む及びシデロフォア分子例えばカテコール及び鉄は1:3:1の分子比で互いに結合する。したがって鉄の放射能標識型を用いて、NGALとシデロフォア分子及び鉄との結合を、あるNGALタンパク質によって保持される放射能標識鉄のを調べることによって測定または概算することができる。保持される鉄鉄シデロフォアのを、複数のNGAL変異体間で又は1つのNGAL変異体とWTNGAL間で比較することができる。いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は、WTNGALと比較したとき同様な鉄鉄シデロフォア保持を示す。いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は、WTNGALと比較したときより高い鉄鉄シデロフォア保持、例えば15倍、2倍、25倍又は前記より大きな倍数の高い鉄鉄シデロフォア保持を示す。いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は、約20以上又は約30以上又は約40以上の鉄鉄シデロフォア保持を示す。いくつかの実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質は抗菌活性を有する。本発明のNGAL変異体の抗菌活性は、例えば当分野で公知の標準的な方法論を用いて、例えばNGAL変異体の存在下で細菌を培養し、細菌の増殖、生存、数などに対するNGAL変異体の影響をNGAL変異体が存在しないコントロール条件と比較して評価することによって試験及び定量することができる。非NGALリポカリンNGALの変異体の他に、本発明はまた、シデロフォア鉄複合体との結合能力を有するが腎臓で再吸収されない他のリポカリンの変異体を作製し得ることも予期する。そのようなリポカリン変異体を本明細書に記載のNGAL変異体と同様に用いて体外に鉄を輸送し、したがって鉄過負荷疾患の治療で用い得ることが期待される。そのようなリポカリン変異体を尿道の細菌感染の治療に用い得ることもまた期待される。リポカリンファミリーには約20の公知のタンパク質が存在する。シデロフォア鉄複合体と結合する、任意のリポカリンタンパク質又はそのホモローグ、変種、誘導体、フラグメント若しくは変種を変異させて、本発明のリポカリン変異体を提供することができる。本発明にしたがって用いることができるリポカリンの例には、レチノール結合タンパク質、リポカリンアレルゲン、アフロディシン、アルファ2ミクログロブリン、プロスタグランジンDシンターゼ、ベータラクトグロブリン、ビリン結合タンパク質、ニトロフォリン、リポカリン1、リポカリン12及びリポカリン13が含まれるが、ただしこれらに限定されない。シデロフォアシデロフォアは高親和性の鉄例えばFe3結合化合物である。公知のシデロフォアの大半が細菌によって産生される。細菌は、鉄を除去又はキレートし、鉄を細菌内に輸送する細菌の生存に必要なプロセス目的のために、周囲環境にシデロフォアを放出する。当分野で公知のシデロフォアには、TRENCAM、MECAM、TRENCAM32HOPO、パラバクチン、カルボキシミコバクチン、フシゲン、トリアセチルフサリニン、フェリクローム、コプロゲン、ロドトルール酸rhodotorulicacid、オルニバクチン、エクソケリン、フェリオキサミン、デスフェリオキサミンB、エーロバクチン、フェリクローム、リゾフェリン、ピオケリン、ピオベルジンが含まれるが、ただしこれらに限定されない。これらの化合物の構造は以下に記載されている:HolmesetalStructure2005132941andFloetalNature2004432917921前記文献は参照により本明細書に含まれ。上記のシデロフォアのいくつかはリポカリンNGALを含むと結合することが知られていて、これらシデロフォアとリポカリンの複合体は鉄と結合できることが知られている例えば以下を参照されたい:HolmesetalStructure2005132941;FloetalNature2004432917921;GoetzetalMolecularCell20021010331043;MorietalEndocyticdeliveryoflipocalinsiderophoreironcomplexrescuesthekidneyfromischemiareperfusioninjuryJClinInvest2005115610621。本発明の変異体NGALタンパク質はまたシデロフォアとの複合体を形成することができ、それによって鉄をキレートしこれを輸送することができる。いくつかの特徴では、本発明は、本発明の変異体NGALタンパク質とシデロフォア本明細書に列挙したシデロフォアが含まれるが、ただしこれらに限定されないとの複合体を提供する。好ましい特徴では、シデロフォアは、エンテロケリン、ピロガロール、カルボキシミコバクチン、カテコール及び前記の変種または誘導体から成る群から選択される。鉄と理想的にはpH非感受性態様で結合する能力を保持し、さらにNGAL及び/又は本発明のNGAL変異体の1つ以上と結合する能力を保持するシデロフォアの任意の変種又は誘導体を用いることができる。変異体MGALタンパク質の製造及びシデロフォアとの複合体本発明の変異体NGALタンパク質は、タンパク質薬の製造のために当分野で公知の任意の適切な方法を用いて製造できる。変異体NGALタンパク質は、例えば組換えタンパク質の生産のために公知の標準的な技術を用いて、例えば、適切なプロモーターの制御下でNGAL変異体をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを細胞例えば細菌細胞又は哺乳動物細胞にデリバーし、さらに前記細胞を前記タンパク質が発現される条件下で培養することによって製造するすることができる。組換えタンパク質の大規模培養、単離及び精製のための方法は当分野で公知であり、本発明のNGAL変異体の製造で用いることができる。同様に、ペプチド及びタンパク質を合成により生産する方法も当分野で公知であり、本発明のNGAL変異体の製造で用いることができる。ある種の実施態様では、本発明は、本発明のNGAL変異体及び1つ以上の補足タグを含む融合タンパク質を提供する。そのような補足タグはNGAL変異体のN又はC末端に融合させるか、又はいくつかの事例ではタグの挿入がNGAL変異体の機能に悪影響を及ぼさない程度に内部箇所に付加することができる。適切なタグには、グルタチオンSトランスフェラーゼGST、ポリヒスチジンHis、アルカリホスファターゼAP、セイヨウワサビペルオキシダーゼHRP及び緑色蛍光タンパク質GFPが含まれるが、ただしこれらに限定されない。他の適切なタグもまた当業者には明白であろう。タグはいくつかの適用のためにNGALの単離及び/又は精製のための補助、及び/又はそれらの検出の促進を含む有用であり得る。タンパク質の多くの化学的改変がタンパク質系薬剤の特性の改善に有用であることは当分野で公知であり、そのような改変を本発明にしたがって用い、治療に適用される本発明の変異体NGALタンパク質の安定性を改善し、免疫原性を減少させることができる。例えば、ポリエチレングリコールポリマー鎖を別の分子に共有結合させるプロセスすなわちPEG化は、タンパク質性薬剤を宿主の免疫系から覆い隠し、さらにまた流体力学的サイズ溶液中のサイズを増加させ、循環半減期を延長し、タンパク質系薬剤の水への溶解性を改善できることは当分野では周知である。多様な他の化学的改変もまた公知であり、本発明の変異体NGALタンパク質とともに用いることができる。本発明の変異体NGALタンパク質及びシデロフォア例えばエンテロケリン又はその誘導体若しくは変種を含む複合体は、当分野で公知の方法論例えば本出願の実施例の部分で提供するものを用いて容易に調製できる。例えば、NGALシデロフォア複合体は、NGAL変異体NGALを含む及びシデロフォアを1:1のモル比例えばEntで、又は1:3のモル比例えばカテコールで一緒に混合することによって調製できる。前記混合物を室温で適切な時間、例えば30分インキュベートし、複合体を形成させることができる。続いて結合したシデロフォアNGAL複合体から未結合シデロフォアを、標準的な分離技術例えば遠心分離系技術、ろ過系技術又は他のサイズ依存分離技術を用いて除去/分離することができる。治療方法-鉄過負荷ある実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質並びにそのような変異体NGALタンパク質を含む複合体及び組成物を用いて、過剰な鉄レベル又は鉄過負荷に付随する症状、疾患又は異常を治療することができる。特に、本発明の変異体NGALタンパク質とシデロフォア例えばエンテロケリンとの複合体及びそのような複合体を含む組成物を用いて、体内の鉄をキレートし尿への鉄の排出を促進することができる。血流中の大量の遊離鉄は特に肝臓、心臓及び内分泌腺の細胞損傷をもたらし得る。過剰鉄の原因は遺伝性であり得る。例えば鉄過剰は、遺伝性症状、例えばヘモクロマトーシス1型古典的ヘモクロマトーシス、ヘモクトマトーシス2A又は2B型若年型ヘモクロマトーシス、ヘモクロマトーシス3型、ヘモクロマトーシス4型アフリカ型鉄過負荷、新生児ヘモクロマトーシス、無セルロプラスミン血症又は先天性無トランスフェリン血症によって引き起こされ得る。鉄過剰の非遺伝性原因の例には、食事性鉄過負荷、輸血性鉄過負荷サラセミア又は他の先天性血液疾患の患者に実施された輸血による、血液透析、慢性肝疾患例えばC型肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝炎、晩発性皮膚ポルフィリン症、門脈大静脈後方シャント、代謝機能不全過負荷症候群、鉄剤過剰投与例えば小児の鉄消費により引き起こされるもの、又は他の任意の急性若しくは慢性鉄過負荷の原因が含まれる。鉄過負荷の治療に利用可能な2つの一般的な鉄キレート剤はデフェロキサミンDFO及びデフェリプロン経口DFOである。その高コスト及び非経口投与の必要性のために、標準的な鉄キレート剤デフェロキサミンは、急性及び/又は慢性鉄中毒の多くの個体で使用されない。デフェロキサミンは、非経口的に通常は12時間に及ぶ持続的な皮下輸液として1週間に3から7回投与されねばならない。治療は多くの時間を必要とし痛みを伴い得る。結果としてコンプライアンスはしばしば極めて低い。副作用には、局所の皮膚反応、失聴、腎毒性、肺毒性、生長遅延及び感染が含まれる。デフェリプロンは、輸血性鉄過負荷の症状の治療に用いることができる唯一の経口的に活性な鉄キレート薬である。デフェリプロンは、デフェロキサミン治療が禁忌であるサラセミアメジャーの患者、又はデフェロキサミン治療に対して重篤な毒性を示す患者で二番手の治療として指示される。デフェリプロンは、心臓鉄の毒性及び鉄負荷サラセミア患者の死亡率の標的器官であるから鉄を除去する経口鉄キレート剤である。しかしながら、デフェリプロンは経口投与の利点を示すが、前記は顕著な毒性を伴いその長期的安全性及び有効性については問題がある。副作用、アレルギー又は有効性の欠如のためにデフェロキサミンを使用できない患者でデフェリプロンを用いることが推奨されている。デフェリプロンは、遺伝子毒性、好中球減少症及び顆粒球減少症を含む重大な安全性に関する問題を伴う。好中球の1週間隔のモニタリングが推奨される。胃腸管及び関節の問題が発生する可能性があり、肝毒性は既に報告されている。したがって、また別の簡便で安全で効果的な鉄キレート治療例えば本発明によって提供されるものに対する明確な要請が存在する。本発明の変異体NGALタンパク質、及び特に前記のシデロフォアとの複合体を用いて遊離鉄をキレートし、例えば有害な鉄循環レベルを有害レベル未満に低下させるために腎臓を介して体内から過剰な鉄を除去することができる。治療方法-尿道の細菌感染WTNGALが制菌活性を有することは公知である。前記制菌活性は、部分的にはWTNGALが細菌のシデロフォアにしっかりと結合し、細菌における鉄の枯渇及び細菌の増殖阻害をもたらす能力に依拠するGoetzetalMolCell1010331043。本発明の変異体NGALタンパク質は、WTNGALと同様に細菌のシデロフォアと結合する能力を有し、したがって抗菌活性を有し得る。さらにまた、本発明の変異体NGALタンパク質は腎により吸収されず、尿中に蓄積されるので、それらは、尿道の細菌感染の治療で使用するために特に適切である。医薬組成物及び投与本発明はまた、本明細書に記載の変異体NGALタンパク質及び前記とシデロフォアとの複合体を含み、多様な疾患、異常及び症状鉄過負荷及び細菌感染を含むの治療に有用であり得る、医薬組成物、処方物、キット及び医療装置を提供する。医薬処方物には、経口又は非経口筋肉内、皮下及び静脈内を含むに適切なものが含まれる。本発明によって提供される医療装置の例には、ビーズ、フィルター、シャント、ステント及び体外ループが含まれただし前記に限定されない、前記装置は、それら装置を対象に埋め込み或いは投与できるように、変異体NGAL又はその複合体が対象中の過剰な鉄をキレート又は吸収することを可能にする態様で、本明細書に記載の変異体NGAL又はその複合体で被覆されてあるか或いは前記を含む。変異体NGALタンパク質及びその複合体の治療的に有効な量の投与は、治療薬剤に適した任意の投与態様により達成することができる。当業者は煩雑な実験を実施することなく投与態様を容易に選択することができる。適切な態様には、全身投与又は局所投与、例えば経口、経鼻、非経口、経皮、皮下、経膣、経頬、直腸、局部、静脈内ボーラス及び輸液、腹腔内又は筋肉内投与態様が含まれ得る。好ましい実施態様では、経口又は静脈内投与が用いられる。他の好ましい実施態様では、本発明の組成物は、所望の作用部位例えば腎臓に、例えば局所注射又は局所輸液によって、又はタンパク質若しくは薬剤を特定の組織に誘導するために有用な物質例えば抗体などを使用することによって直接投与される。意図される投与態様に応じて、治療的に有効な量の本発明の変異体NGALタンパク質及び複合体は、固体、半固体又は液体投薬形、例えば注射可能物、錠剤、座薬、ピル、経時放出性カプセル、エリキシル、チンキ、エマルジョン、シロップ、散剤、リキッド、懸濁物などであり得る。ある実施態様では、本発明の変異体NGALタンパク質及び複合体は、通常の製薬慣行にしたがってユニット投薬形で処方され得る。液体、特に注射可能な組成物は、例えば溶解または分散によって調製することができる。例えば、本発明の変異体NGALタンパク質及び複合体は、医薬的に許容できる溶媒、例えば水、食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、エタノールなどと混合し、それによって注射可能な等張溶液又は懸濁物を生成することができる。非経口注射可能物の投与は、皮下、筋肉内又は静脈内注射および輸液に利用することができる。注射可能物は、通常の形態で流動性溶液若しくは懸濁物として、又は注射前に液体に溶解するために適切な固体形として調製することができる。非経口投与のためのある実施態様は、米国特許3710795号前記文献は参照により本明細書に含まれるにしたがって、徐放系又は持続放出系の埋め込みを利用する。本発明の変異体NGALタンパク質及び複合体は滅菌することができ、適切な任意のアジュバント、保存料、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、溶解促進剤、塩例えば浸透圧調整用、pH緩衝剤、及び/又は他の医薬的に許容できる物質酢酸ナトリウム又はオレイン酸トリエタノールアミンを含むがただしこれらに限定されないを含むことができる。さらにまた、本発明の組成物はまた、他の治療に有用な物質、例えば他の鉄キレート剤又は鉄過負荷の治療で有用な他の薬剤、又は本明細書に記載した症状のいずれかの治療に有用な他の薬剤を含むことができる。本発明の組成物は、それぞれ通常的な混合、顆粒化又はコーティング方法にしたがって調製することができ、さらに本医薬組成物は、重量または体積で約01から約99、好ましくは約1から約70の本発明の化合物又は組成物を含むことができる。用いることができる用量及び投薬レジメンは、以下を含む多様な要件にしたがって決定することができる:対象の種、年齢、体重、性別及び医学的状態;症状の重篤性;投与経路;対象の腎臓または肝臓機能;及び用いられる具体的な変異体又は複合体。当業者は、例えば上記に記載した要件を考慮しながら、症状の治療又は予防に有用な本発明の変異体又は複合体の有効量を容易に決定及び/又は処方することができよう。投薬方法はまた以下で提供される:LSGoodmanetalThePharmacologicalBasisofTherapeutics201265thed1975前記文献は参照により本明細書に含まれる。ある実施態様では、本発明の組成物は、NGAL成分が約1から約100mgkg体重の用量範囲で、典型的には約1から約10mgkg体重の投薬で投与されるように、血中で約01ngmLから約100ngmLの範囲、例えば約10ngmLから約20ngmLの範囲の濃度を生じるように投与される。本発明の組成物のシデロフォア成分の量は、したがって変異体NGALタンパク質と結合する所望の化学量論が達成されるように選択される例えば1:1又は1:3。上記の治療方法に加えて、本発明の変異体NGALタンパク質シデロフォア複合体は、サンプルから鉄をキレート及び/又は除去するために有用であり得るこの場合、前記サンプルは対象の体内に存在しない。したがって、ある実施態様では、本発明は液体から鉄を除去する方法を提供し、前記方法は、前記液体を変異体NGALタンパク質シデロフォア複合体と一緒に、サンプルの鉄が変異体NGALタンパク質シデロフォア複合体と結合するために十分な時間混合する工程を含み、ここで前記変異体NGALタンパク質シデロフォア複合体はサンプルの鉄をキレートすることができる。ある実施態様では、鉄を結合させた変異体NGALタンパク質シデロフォア複合体は、続いてサンプルから除去することができる。好ましい実施態様では、サンプルは生物学的液体例えば血液、血清、血漿又は尿である。ある種の実施態様では、変異体NGALタンパク質シデロフォア複合体は体外で例えば体外装置中でサンプルと混合され、続いて前記サンプルは身体へデリバリーされるか又は戻される。例えば、そのような方法を用いて、輸液用血液サンプルで又は透析工程で過剰な鉄をキレート及び/又は除去することができる。例えば、対象の血液または別の体液を身体から取り出し、本発明の化合物または組成物で処理して過剰な鉄をキレート又は除去し、続いて前記を対象に戻すことができる。実施例変異体NGALタンパク質並びに治療用鉄キレート剤として及び抗菌剤としてのそれらの使用リポカリン2Lcn2好中球ゼラチナーゼ関連リポカリンNGALとも称されるは、高い親和性で鉄と結合するタンパク質である。鉄と結合するために、NGALは、細菌によって産生されるシデロフォアと称される補助因子と結合するかNGALエンテロケリン鉄相互作用については結合定数Km=041x109M;エンテロケリンエンテロバクチン:鉄相互作用についてはKm=041x1049M、又は細菌性及び哺乳動物性酵素の組合せによって産生されるカテコール含有化合物と結合するカテコール鉄に対してKm=04±109M;カテコール鉄相互作用に対してKm=10459M。NGALはまた細菌感染及び急性腎損傷によって顕著にアップレギュレートされ、血液及び尿中に分泌される。細菌感染時に、NGALはエンテロケリン鉄と結合することによって細菌から鉄を引き離し、細菌の増殖阻害をもたらす。血清NGALは結合したエンテロケリン:鉄とともに腎臓の糸球体によってろ過されるが、その大半は腎に保持され再吸収され、そこで分解される。NGALはほとんど尿に漏出及び排出されない。例えば、最近の研究によって示されたように、NGALを腹腔に注射したとき、WTNGALの70以上が腎臓に蓄積するが、01未満が3時間後に尿に見出される。血清NGALの腎による捕捉及び保持は、メガリン低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質2LRP2とも称されるマルチリガンドレセプターによるNGALの再吸収によって達成される。メガリンは、近位細管の上皮の先端形質膜に存在し、そこでメガリンは糸球体のろ過物と接触する。メガリンはキュビリンと結合する。NGALは、補助因子例えばエンテロケリン又はカテコールを用いることによって鉄を輸送し、特異的に腎臓に鉄をデリバリーすることができる。治療用鉄キレート剤及び抗微生物剤としての変異体NGAL糸球体ろ過の分子カットオフは約70kDである。組換えNGAL又は天然のNGALそれぞれ約205kD及び23-25kDの分子量を有するは糸球体でろ過され得るが、続いてメガリンによって及び/又はキュビリンを含むメガリン結合複合体によって近位上皮中に効率的に再吸収される。メガリンは、アポ及び鉄付加NGALに対して約60nMの結合親和性を有するHvidbergetalFEBSLetters2005579773777。メガリンは、糸球体ろ過後に多くのタンパク質NGAL、アポE、リポタンパク質リパーゼ、ラクトフェリン、アプロチニンなどを含むの再吸収に必要なマルチリガンド細胞内レセプターであるChristensenandBirnNatureReviewsMolecularCellBiology200232582682002。メガリンタンパク質中のA型リピートのメガリン酸性領域とリガンドの塩基性領域との間の静電気的相互作用がリガンドレセプター認識に必要であるすなわち、メガリンはリガンドタンパク質の正荷電表面を認識するMoestrupandVerrostAnnualReviewsofNutrition2001214074282001。ヒトNGALタンパク質の表面のいくつかの塩基性アミノ酸残基はしたがってメガリンに対するその高い結合親和性に必要とされ、これらの塩基性残基の変異は、その内部の杯状部分におけるエンテロケリン鉄に対する結合親和性を保全しながら、NGALとメガリンとの間の静電気的相互作用を破壊し得る。変異体NGALとメガリンとの間の損なわれた相互作用は、変異体NGALエンテロケリン鉄又はアポ変異体NGALが、糸球体ろ過後にろ過物から再吸収されることなく尿中にろ過されるのを許容できる。前者の事例ではエンテロケリンが変異体NGAL複合体中に存在する、変異体NGALは鉄を血液から吸収し、尿にそれを輸送することができる。これは、シデロフォア鉄と結合した対象物例えば動物又はヒトから鉄を除去することを可能にする。また別には、変異体アポNGALの事例では、尿へのNGALの蓄積がもたらされ、尿道での細菌増殖が阻害され得る。本発明の変異体NGALタンパク質は、臨床治療で少なくとも2つの潜在的な応用を有する。第一に、変異体NGALタンパク質を効率的な鉄キレート剤として用い、鉄過負荷異常を有する対象例えばヒト対象から過剰な鉄を除去することができる。鉄過負荷の患者例えばヘマクロマトーシス、鎌状血球症、サラセミア、赤血球又は他の生物学的生成物の多重輸液によるは、例えば静脈内輸液によって、鉄を含まないシデロフォア例えばエンテロケリンと結合させた変異体NGALを投与される。エンテロケリンは血清の鉄をキレートし、NGALエンテロケリン鉄複合体を形成する。この複合体は大半が腎臓へ輸送され、続いて糸球体によってろ過される。前記複合体は糸球体ろ過物中に残存し、近位細管の上皮細胞中のメガリンと結合することができないので再吸収されない。前記は続いて尿中に出現し、最終的にはそれに結合した鉄と一緒に排出される。変異体NGALは、鉄過負荷のヒト対象から過剰な鉄を除去する効率的なツールであり得る。エンテロケリン及び鉄と結合するNGALの分子比は111である。10gの変異体アポNGAL前記は約500μモルに等しいが鉄過負荷の患者に投与されるならば、理論的には約500μモルまたは約279mgの鉄が変異体NGAL及びエンテロケリンと結合し、排出のために尿にデリバリーされ得る変異体NGALの尿中への蓄積を100と仮定する。ヒトは主として腸管細胞の剥離及び死んだ皮膚細胞により毎日わずか1-2mgの鉄を失い、食物から毎日わずかに1-2mgの鉄を得ることを考えるならば、前記は、鉄過負荷のヒトの患者から過剰な鉄を除去するために非常に効率的な方法である。第二に、変異体NGALタンパク質を抗微生物剤として用い、尿道感染UTIの患者を治療できる。UTIのヒト対象に輸液により変異体アポNGALが投与される。変異体NGALは腎臓に輸送され、尿中にろ過され、メガリンに対するその結合親和性の低下のために再吸収されない。いったん尿中に入れば、前記変異体アポNGALタンパク質はUTIの細菌のシデロフォア例えばエンテロケリンと結合してそれら細菌の増殖阻害をもたらす。実験の設計及び実験手順ヒトNGALのクローニングヒトNGALcDNAGenbankアクセッション番号NM005564をオープンバイオシステムズOpenBiosystemsから入手し、分泌されるNGALタンパク質をコードするオープンリーディングフレームをPfuUltraDNAポリメラーゼStratageneを用いてPCRにより増幅し、さらに位置特異的変異導入のためにpGEX4T3プラスミドベクターGEHealthcareでクローニングする。ヒトNGALタンパク質の構造ヒトNGALタンパク質の構造によれば、タンパク質表面のアミノ酸残基、特に塩基性残基は、高親和性結合のためにメガリンとの静電気的相互作用を媒介することができる図1及び4A。NGAL変異体の指定NGALタンパク質の表面には、種々の哺乳動物種ヒト、マウス、ラット、チンパンジー、ウシ、イノシシ及びアカゲザルを含むの間で保存される5つの塩基性アミノ酸残基R43、72、140及びK142、157が存在し、一方、13の非保存塩基性残基が存在するR130;K15、46、50、59、62、73、74、75、97、149;H118、165。これらの塩基性残基を他の非塩基性残基に変異させることができる。NGAL変異体の作製NGALタンパク質表面の異なる種々のアミノ酸残基を、以下の位置特異的変異導入キットQuickchangeSiteDirectedLightningMultiMutagenesisKitStratageneを用いて変異させ、NGALタンパク質の種々の位置に変異を有する多くの変異体が作製された。表2に示す、57のNGAL変異体が作製された配列番号2-10、21-68、247-251。NGALタンパク質の生成野生型及び変異体プラスミド構築物を大腸菌BL21GEHealthcareにエレクトロポレーションによって導入し、IPTGを最終濃度02mMで5時間添加することによって野生型及び変異体アポNGALタンパク質の発現を誘導し、続いてGST系プルダウン及びセファロースカラムによるFPLC系ゲルろ過の組合せによって精製する。エンテロケリン及び鉄に対する変異体NGALの結合親和性鉄の放射能活性型、55Fe3を用いて、NGAL変異体タンパク質をそのエンテロケリン及び鉄との結合能力について調べる。エンテロケリン及び55Fe3に対するNGALの結合親和性は、変異体及び野生型NGALタンパク質によって保持された55Fe3のパーセンテージを調べることによって概算した野生型NGALタンパク質を陽性コントロールとして用いることができる。NGALエンテロケリン鉄複合体の調製NGALエンテロケリン鉄複合体は、NGALタンパク質、エンテロケリン及び55Fe3を111のモル比各々4nmoleで一緒に混合することによって調製される。前記混合物を30分RTでインキュベートし、7000rpmで5分、4回の遠心分離によって10Kマイクロコンで洗浄し、未結合のエンテロケリン及び55Fe3を除去し、NGALエンテロケリン55Fe3複合体は前記マイクロコンに保持される。NGAL変異体のマウスでのスクリーニングヒト、マウスのメガリンタンパク質間には76のアミノ酸同一性及び87のアミノ酸類似性が存在し、それらはおそらく非常に類似する結合特性を有することを示している。本実験では、ヒトNGALタンパク質とマウスメガリンとの結合を試験した。ヒト及びマウスメガリンタンパク質間のアミノ酸同一性及び類似性の程度が高いために、マウス系は、メガリンキュビリン依存腎再吸収を回避し最終的には尿にデリバーされる変異体NGALタンパク質の能力をスクリーニングするために有用なモデルを提供する。放射能標識NGALエンテロカリン55Fe3複合体を雌のC57BL6マウス4週の腹腔内に注射し、尿を代謝ケージで収集する。3時間の尿収集の後、マウスを殺し、腎臓及び肝臓を収集して重さを測定し、05MのNaOH及び1のSDSの溶液中で70°Cにて一晩可溶化する。尿、腎臓及び肝臓の放射能をシンチレーションカウンターで調べる。NGALエンテロケリン鉄複合体の蓄積は総注入複合体のパーセンテージとして計算される。実験結果57のNGAL変異体を作製した表2;配列番号2-10、21-68、247-251。29のアポタンパク質変異体を大腸菌BL21で生成し、それらのエンテロケリン結合親和性及び腹腔内ip注射後のC57BL6マウスでの輸送について調べた。図3Aに示すように、全ての変異体ヒトNGALタンパク質は、111各々4nmoleのモル比でのエンテロケリン鉄とのインキュベーション室温で30分間後に総鉄の167から457を保持し、それらのエンテロケリン鉄に対する結合親和性の保全を示したエンテロケリンの量が多ければNGALのローディングは増加するであろう。腹腔内注射により投与したとき、6つの変異体NGALエンテロケリン55Fe3複合体が、野生型NGAL複合体と比較して尿中蓄積の顕著な増加を示した変異体K3、K2、I3、I1、K5及びK1。3時間後の肝臓及び腎臓における蓄積低下もまた観察された図3B、C、D;表1。I1、I3、K1、K2、K3及びK5変異体の6、69、19、93、196及び29が3時間後にそれぞれ尿にデリバリーされ、一方、A2、B4、C3、D1、F2、G3、H2及びI5変異体NGAL複合体の018、013、026、01、011、017、027及び005のみが尿に存在した。基質として野生型NGALPDBアクセッション番号1ng1Aの結晶構造を用い、K3変異体の構造をSwissmodelhttpswissmodelexpasyorgにより予測した。図4Aに示すように、予測されたK3変異体タンパク質の3D構造は野生型タンパク質と同様なポケットを含み、エンテロケリン鉄に対する親和性が保全されているという我々の発見を支持する。しかしながら、K3変異体タンパク質は、溶媒が接近できる表面に野生型NGALタンパク質よりも少ない陽性アミノ酸を示し図4B、メガリンとの静電気的相互作用の能力が低下すること及びマウス導入後の尿への蓄積が増加することと一致する。表1:変異体Ngalタンパク質のエンテロケリン55Fe3との結合、及びC57BL6マウスのip注射後3時間の尿、腎臓及び肝臓におけるNgalエンテロケリン55Fe3の蓄積本実施例中の上付き数字は、本実施例の後に続く参考文献リストの番号付与参考文献を指す。実施例2及び図6-17の変異体K1-K8は、本明細書の表2に配列が提供される変異体D14、D141、D1421、d14211、d14213、d14214、WT3及びD142である。鉄の輸送は重要な問題を提示する。なぜならば遊離第二鉄イオンは、生理学的pHの好気性溶液中では不溶性1018Mであるが、いくつかのキレート剤による可溶化に際して有害な酸素種を生成し得る鉄の反応型を生じるからである。結果として特殊化された機構が鉄輸送のために要求され、これら特殊化機構は、鉄と直接結合するために保存されたモチーフを利用するかトランスフェリン及びフェリチン又は埋め込まれた補助因子を利用するタンパク質で見出される。細胞外鉄輸送は大半がトランスフェリンによって媒介されるが、これらの遺伝子が欠失したマウスは極めて限定された表現型を示すBaraschDevelopmentalCell2009。Ngalと称されるリポカリンスーパーファミリーのメンバーは、カテコールと呼ばれる新規な補助因子のファミリー又はカテコールから構築される関連する細菌性シデロフォアと結合するとき高い親和性の鉄担体として機能することが判明したBaraschMolecularCell2002。鉄の存在下では、NgalシデロフォアFeIII複合体はナノモル以下の親和性で生じBaraschNatureChemicalBiology2010、明るい赤色タンパク質を形成した前記は何日間も溶液中で安定であり、前記複合体にしっかりと結合した鉄の輸送に関してinvivoで安定であった。Ngalはinvivoで発現されるが、多数の損傷刺激はNgalの濃度を数桁上昇させる。その後、Ngalは血清中を往来し、腎臓のメガリンレセプターによって捕捉されると考えられる腎臓でNgalはシデロフォアFe複合体を除去する。尿型Ngalの代謝については極めて多くのことが判明しているがNgalは遠位ネフロンから発現され、完全長タンパク質として尿中に分泌される、この除去系及びメガリンレセプターの役割について判明していることは極めて少ないメガリンレセプターはNgalの唯一の確認されたレセプターである。このプロセスを深く調べるために、メガリンの条件付き変異体を試験することができる。さらにまた、野生型マウスでの試験のために、一連のNgal変異体を試験することができる。そのような変異体のいくつかは、メガリンが存在する近位細管を飛び越え、その結果尿中にそれらが出現する。これらの変異体は高い親和性でなおシデロフォアFeIIIと結合することができ赤色タンパク質を生成することができ、さらにおそらくレドックス不活性な態様で明確に鉄を排出できる。実際、鉄を微生物に与えるのではなく前記は小分子キレート剤に関する主要な問題である、NgalシデロフォアFe複合体は鉄を細菌から隔離する。メガリンはNgalの重要なリサイクルレセプターであるという仮説を試験することができる。メガリンNgal複合体が阻止されるとき、Ngalはしっかりと結合した鉄を尿に運ぶことができ、したがって鉄過負荷疾患の通常的症候群の安全な治療薬として役立つと期待される。鉄過負荷は臨床的には通常的に出現し、その治療は、細菌の増殖を誘発するとともに多くの細胞系列にとって有害であることが分かった。鉄過負荷は輸血の通常的な後遺症であるが、肝炎、慢性腎疾患でも、一般的遺伝性疾患例えばヘマクロマトーシスの場合と同様に鉄負荷はよく知られている。本発明は、タンパク質Ngalヒトで種々のタイプの組織損傷で大量に発現されるによる鉄輸送経路の発見に密接に関係している。Ngalの代謝に関する我々の研究は、安全な治療用鉄キレート剤としてNgalを用いることができるという考えについての証拠を提供する。鉄は循環トランスフェリンによって特異的に結合されるトランスフェリンは鉄の生体利用性を保全し鉄のレドックス毒性を防止する。しかしながら、トランスフェリン非結合鉄NTBIは多様な疾患13遺伝性及び非遺伝性原因を含むを有する患者で出現する。NTBIは肝臓47、心臓812、内分泌腺1318及び腎臓1921を損傷し、重症の過負荷は、ヘイバーワイスHaberWeiss及びフェントンFenton反応2425を介して反応性酸素種ROSを触媒することによって致死性であり得る2223。今日まで、2つの小分子、デフェロキサミンDFO及びデフェリプロンがNTBIのキレート及び鉄過負荷の治療に利用可能である2628。しかしながら、これらの分子は顕著な毒性を示す。DFOは、皮膚反応、失聴、腎及び肺毒性、さらにもっとも重要なことには真菌感染2932を引き起こす真菌感染はDFO真菌シデロフォアの誘導体であるが病原体に鉄をデリバリーできることの結果である32。デフェリプロンはまた、遺伝子毒性、好中球減少症及び顆粒球減少症、並びに腎疾患3334と密接に関係する。したがって、鉄を微生物にデリバリーしない新規な薬剤が有害でないNTBI排出のために必要である。本発明は内在性鉄輸送機構MolecularCell2002;NatureNV2005;NatureChemicalBiology20103538を利用する前記機構は鉄を身体から安全に排出するために操作される。その担体は好中球ゼラチナーゼ関連リポカリンNgalと呼ばれる。本発明は、鉄となおしっかりと結合しているNgalの安全な排出を可能にする変異体Ngalを必要とする。Ngalは小さな鉄担体タンパク質22kDaであり、前記は、ヒトまたは動物が刺激典型的には急性腎損傷を引き起こすに曝露されたとき、血清及び尿中で顕著に発現されるAKIJASN2003JCI2005Lancet2005AnnIntMed20083942。したがって、前記タンパク質はAKIのバイオマーカーとして今日周知であり、優に100を超える論文がその激烈な発現を確認しているが、ほんの数研究室がその生物学を調べているだけである。我々は、Ngalはいったん発現されると迅速に循環中に分泌され、そこで結合補助因子によって例えば内因性カテコール又は関連するカテコール型シデロフォアエンテロケリン、Ent36鉄を捕捉することができる。カテコール型シデロフォアは鉄を捕捉するために細菌によって合成される図6参照。したがって、Ngalは細菌のための鉄の捕捉を妨害し、制菌作用を提供する。Ngalは輸送に対して安定であり、それは糸球体によってろ過され、近位細管によって捕捉され図7、そこでNgalは分解されて鉄はリサイクルのために放出される38。Ngalは、近位細管細胞のメガリンによって細胞内に取り込まれると考えられ、Ngalメガリン間の直接的相互作用は表面プラズモン共鳴SPRBiacore43によって性状が調べられた。本発明は、メガリンを回避するがなおEnt鉄と結合することができ、したがって尿中にNTBIを安全に排出することができる治療薬を提供できるNgal変異体に関する。Ngal変異体を用いるNgalメガリン相互作用の評価メガリンは、ろ過されたNgalの再吸収を媒介する主要なレセプター43であり得るので、40の変異体Ngalタンパク質を生成したそれらのいくつかはNgalメガリン相互作用を標的とするようであった。これらの変異体の1つK6及びその最適化誘導体部分的に近位細管を飛び越え尿中に出現するを用いて、メガリン仮説を試験することができる。この変異体を用いて、タンパク質の相互作用並びに野生型マウス及び条件付きメガリンノックアウトにおける細胞及び器官による捕捉を調べ、メガリンの遮断は鉄の排出を可能にすることを確認できる。この系を用いてさらに別の変異体も試験することができる。Ngal変異体のNgalEntFeIII相互作用の評価Ngalは中心の杯状部分を含み、EntFeIIIが結合するとき前記杯状部分で明るい赤色タンパク質35が生成される図8。Ngal変異体メガリンとの相互作用が低下するように操作されたもまた、EntFeIIIと混合したとき明るい赤色を生成し、リガンド親和性の保持を示した。蛍光消光技術及びX線結晶解析を用いて、Ngal複合体を定量的に解析することができる。変異体NgalEntFeIIIのデリバリーによる安全な鉄の排出K6及び最適化変異体をマウスに投与して、遺伝性HEF4445及び後天性ヘモクロマトーシス44のネズミモデルでNTBIのキレート及び鉄IIIの尿への排出を試験することができる。有効性は、NTBIの血清及び肝からの枯渇を測定することによって評価でき、毒性は酸化性ストレスの測定によって排除できる。さらに内因性Ngalの発現我々はそれを以前に発見したは腎の損傷の開始を示す。有意性:鉄過負荷患者は、血清トランスフェリン飽和の上昇>50及び血清フェリチンレベルの上昇>1000μgLを示す13。彼らはまた、循環中のトランスフェリン非結合鉄NTBI、例えばサラセミア血清で09-128μmolL遺伝性ヘマクロマトーシスHH血清2で4-163μMとともに細胞内の不安定な鉄プールLIP46を示す。これらの異常な鉄プールはヘイバーワイス及びフェントン反応に加わわる前記反応は脂質及びタンパク質を酸化し、ヒドロキシル、フェリル又はパーフェリル種を形成することによってヌクレオチドを変異させる242547。最終的に、感受性を有する以下を含む多様な器官で細胞死が見出される:肝臓線維症/肝硬変及び肝細胞性肝癌47、心臓うっ血性心筋症812、腎臓近位細管細胞の壊死及びアポトーシス1921及び内分泌腺糖尿病、甲状腺機能低下及び生殖線機能低下1318。一般的には、2つのタイプの鉄過負荷疾患、遺伝性ヘマクロマトーシスHH及び後天性ヘマクロマトーシスAHが存在する。HHは、鉄代謝の調節に関係する例えば以下の遺伝子の機能低下によって引き起こされる:HFE1型HH、HJV2A型HH、HAMP2B型HH、TfR23型HH、SLC40A14型HH、CP無セルロプラスミン血症、TF無トランスフェリン血症348。もっとも一般的なもの、I型HFEC282Y対立遺伝子座では、28の雄が鉄過負荷であった49。対照的に、AHは、輸血、サラセミアメジャー、シデロブラスト性及び溶血性貧血、食事性鉄過負荷、慢性腎及び肝疾患C型肝炎又はアルコール又はポルフィリン症によるによって引き起こされる34448。5百万の輸血米国で15百万ユニット年以上がもっとも一般的なAHの原因である50。ヒトは1-2mgの鉄を毎日失うが、血液1ユニットは250mgの鉄を含むので、輸血は鉄過負荷を引き起こす。明瞭な毒性の証拠は20回の輸血後に出現する5153。慢性腎疾患もまた、近位細管及び尿空間に過剰鉄の蓄積による症状をもたらし得る。鉄は、HIV関連ネフローゼ54及びネフローゼ症候群の他の型55で腎臓の皮質に蓄積される。尿中鉄はまた、ヘモグロビン尿症及びミオグロビン尿症56、化学療法シスプラチン57;ドキソルビシン58、虚血再灌流5960及び移植虚血61を含む多様な病因によるAKIの共通の所見である。尿中への鉄の放出は細胞損傷の危機的段階であると考えられている6269。総合すれば、HH及びAHの患者は両方とも鉄キレート療法を受けてなくても器官の損傷を有している2223。2つの鉄キレート化学物質がこれまで臨床的に使用されているが2628、両方とも毒性及び長期安全性の懸念のために制限を受けている例えばデフェラシロクス:腎不全性致死性疾患に続く将来の不確実性、低顆粒球症及び他の毒性ExpertOpinDrugSaf2007623592934。本発明は、内在性鉄輸送機構を利用する、非常に効率的で毒性のない鉄過負荷治療用鉄キレート剤の開発のために操作された新規な方法を提供する。Ngalは以下の特徴のためにこのアプローチに対して非常に適切である。第一に、Ngalは鉄担体及び腎臓細胞の増殖因子として同定された。第二に、Ngalは、細菌のシデロフォア例えばグラム陰性細菌由来のエンテロケリンEnt、グラム陽性細菌由来のバシリバクチン及びミコバクテリア由来のカルボキシミコバクチン3670、また別には哺乳動物で見出される内在性カテコール38を用いることによって鉄と結合する。Ent及びカテコールは鉄に対して極めて高い親和性を有しそれぞれKd=1049M及び10459M、さらにNgalはEntFe及びカテコールFeと強力に結合しKd=04nM3638、このことはこれら複合体が鉄を隔離することを可能にする。実際、Ngalによる細菌のシデロフォアのキレートは、Ngalマウスは細菌接種物を除去できないと仮定するならば、本質的免疫応答の決定的特徴である37。これらのデータは高い親和性の鉄キレート剤DFOKd=1030M37と対照的である前記はリゾプスRhizopusに鉄をデリバリーし致死性ムコール菌症を誘発する37。第三に、鉄とNgalとの結合は、反応性Fe2のフェナントロリン及び3’フルオレセインHPF試験の抑制によって示されるようにその反応性を制限する。換言すれば、Ngalとの結合はフェントン反応を阻止する38。第四に、NgalがEnt55Fe又はカテコール55Feとともに提示されるとき、Ngalは鉄を担持することができ、このNgal複合体は続いて5分後に血清から回収され得る。第四に、Ngalは循環中を移動する鉄を担持し、オートラジオグラフィーによって示されるようにマウス腎へ誘導する3840図9。このプロセスは、極めて高い蓋然性で、糸球体によるNgal複合体のろ過とその後に続く近位細管の先端膜でのメガリン媒介エンドサイトーシスを必要とした43なぜならば、我々はメガリンノックアウトマウスの尿中にNgalを見出し74図10、さらに表面プラズモン共鳴解析BiacoreはNgal及びメガリンが直接相互作用することを示したからであるKd=60nM43。第五に、同じプロセスがヒトでも進行したなぜならば、NgalはAKIの患者の近位細管のリソソームで可視化されたからである図6。第六に、Entは鉄の非存在下であってもNgalに対して非常に高い親和性を有しKd=357nM75、一方、カテコールそのものは極めて低い親和性でNgalと結合しKd=200±6nM38、Entは、鉄捕捉及び輸送のためにカテコールより良好な候補物質であることを示した。最後に、NgalEntFeIII複合体はpH非感受性で、pH40でも分解せず、一方、NgalカテコールtFeIII複合体はpH65まで安定であるが、酸性化はカテコール依存蛍光消光を徐々に逆転させ、pH60で鉄を解離させた図1238。したがって、酸性pHにおけるその安定性にために、NgalEntFeIIIは酸性化尿で解離するとは思われない。要約すれば、NgalカテコールEntは循環中のNTBIを高い親和性でキレートし、腎臓で鉄を除去する。この経路はヒトにおいてinvivoで活性であり、潜在的に大量のNgal及び鉄を輸送する。もしGFRが140L日であり、血清Ngalが20ngmLであるとすると、28mg日のNGAL014μmole及び8μgの鉄が近位細管でリサイクルされるが、虚血、腎不全、敗血症の状況では、Ngalレベルは100-1000倍上昇し、非常に実質的な除去機構が進行し得ることを意味する残留GFRに左右される。したがって、腎臓における鉄の捕捉を理解し、新規な治療法を創出するために、我々はNgalの再吸収を破壊しようと決めた。刷新:A.刷新の第一の領域は鉄過負荷疾患の治療を取り扱わねばならない鉄過負荷疾患はあまりにも長期間有害なキレート剤に依存してきた2934。本発明は、高効率で無害なNTBIキレート剤を開発する方法を提供する。この方法は、以下の点で従来の鉄キレート剤を凌ぐ多くの利点を有する:1Ngalは腎臓に鉄をデリバリーする内在性経路を提供する35363839;2NgalEntは、鉄に対して他の公知のいずれの物質よりも高い親和性を有する7172;3NgalEntFeIIIはレドックス不活性である38;4NgalEntFeIIIは酸性化尿で安定であり38、したがって5尿中の鉄をキレートし、おそらく一定の腎疾患で損傷を緩和することができる。B.刷新の第二の領域はNGAL鉄の対処の説明である。バイオルミネセンスマウスを用いて、腎臓及び尿のNgal遺伝子発現のタイミング及び強度を比較することができる前記はこのプールの生合成及び分泌の明瞭な理解を提供するParagasetalInReview。Ngal変異体を野生型マウスにおけるメガリンの役割について直接試験し、メガリン欠損マウスの解析のための補完的データを提供することができる。このアプローチはまた、第二のNGALレセプター24p3R76がネフロンに存在し得るという考えを試験することができる。Ngal変異体の作製によるNgalメガリン相互作用の評価メガリンは、メガリンの負に荷電したリガンド結合ドメインとリガンドの正に荷電した表面ドメインとの間の一連の静電気的相互作用を利用してそのリガンドと結合すると考えられる77。したがって、Ngalの正荷電表面残基を変異させることによって、メガリンNgal相互作用を破壊することができる。ソフトウェアPymol78を用い、ヒトNgalの表面ドメインをその結晶構造をもとにして同定したRStrongPDBno1L6M。表面ドメインは18の正荷電アミノ酸Lys15、Lys46、Lys50、Lys59、Lys62、Lys73、Lys74、Lys75、Lys98、His118、Arg130、Lys149、His165、R43、72、140及びK142、157を含み、そのうち5つは哺乳動物で保存され36てあり、これらの残基を位置特異的変異導入のために選択した。ヒトNgalのORFシグナルペプチド配列を含まないをpGEX4T3細菌発現ベクターAmershamでクローニングし、変異導入用鋳型の生成のためにGSTNgal融合物を作製した。続いて保存されている正荷電表面残基をアラニンに変異させた。非保存アミノ酸を非正荷電残基非ヒトNgalタンパク質で同じ位置を占めるに変異させた。変異導入のために、単一方法又は位置特異的変異導入キットQuickChangeSiteDirectedMutagenesiskitStratageneとの組合せ方法を用い、40のNgal変異体クローンを作出した。続いて、大腸菌BL21で02mMのIPTGによる誘導によって野生型及び変異体Ngalタンパク質を生成し、我々が確立したプロトコール3538を用いてGST系親和性単離及びゲルろ過クロマトグラフィーにより精製した。続いて、これらNgalタンパク質をC57BL6マウス4週に導入し80μg400μL、どの変異体が3時間以内に腎吸収を飛び越えて尿に出現するかを同定することによって、それらを機能的にスクリーニングした。Ngal変異体K1、K2、K3、K5、K6及びK8が、ラットで作成したヒトNgal特異的抗体RDSystemを用いたSDSPAGE及びイムノブロットによって尿で検出され組換えNgal=21KDa;内在性Ngal=25KDa、変異は近位細管上皮の形質膜のリサイクリングレセプターに対する親和性の消失をもたらすことを示唆した。対照的に、野生型、K4及びK7変異体は尿で検出されず、したがって再吸収の可能性は極めて高い図13。これらのデータはNgalメガリン相互作用についての価値の高い情報を提供する。なぜならば、それらは、Ngal再吸収における変化がメガリンNgal相互作用における変化に帰するか否かの試験であり、血清Ngalの除去メカニズムについての洞察を提供し、鉄排出のための変異体の最適化を可能にするからである。NGALメガリン相互作用のための構造的基準メガリンとの相互作用野生型ヒトNgalリガンドフリー及びヒト腎臓皮質から精製したチップ結合メガリンKd=約60nM43は、α2マクログロブリン親和性クロマトグラフィーによって以前に解析された79。BiacoreT100技術を用いて、野生型及びK6又は他の変異体とメガリンとの相互作用を比較した。細菌のシデロフォア及びカテコールリガンドを用いることによって、リガンド結合がNgalメガリン相互作用に影響するか否かも試験できる。BIAエバリュエーション41ソフトBiacoreを用い、動力学的及び平衡パラメーターを誘導するために全体的にデータを適合させながらデータを計算することができる。ある範囲のカップリング及び再生条件もまた用いことができるが、抗体捕捉はしばしばもっとも明確なデータを提供する。メガリン媒介エンドサイトーシス古典的メガリン発現細胞モデルを用いて、メガリンの結合及びエンドサイトーシスを解明することができる。そのような細胞には、HK290及びブラウンノルウェーラット卵黄嚢上皮43が含まれる。ラット卵黄嚢細胞は、メガリンがこれらの細胞でヒトNgalのエンドサイトーシスを媒介する唯一のレセプターであるので重要である抗メガリン抗体中和抗体はメガリンshRNAより有効であることが証明されたにより取り込みは完全に停止した43。野生型及びK6変異体タンパク質及び他の変異体を蛍光プローブAlexa488MolecularProbesで標識し、ゲルろ過GEBiotechPD10及び透析Pierce10Kcassetteにより浄化し3543、抗ヒト及び抗ラットメガリン抗体antaCruz;200μgml43の存在下又は非存在下でそれらの取り込み速度を調べた無血清DMEM中の50μgmL、05-6時間。前記抗体は野生型ヒトNgalのBN細胞での取り込みを阻止することが以前に示された43。Ngalのエンドサイトーシスは、ZeissLSM510META倒立共焦点レーザー走査顕微鏡及び細胞抽出物のイムノブロットを用い、ヒトNgalの存在を検出することによって測定できる。これらの実験は、K6捕捉の失敗は不完全なNgalメガリン相互作用に帰することができるか否か、さらに親和性の欠如又はエンドサイトーシスの欠如が真に部分的であるか否かを決定することができる。そのとおりであるならば、さらに別の変異を提供してメガリンとの残留相互作用を破壊することができる。K6又は他の変異体の残りの正荷電表面残基を上記のような単一又は組合せアプローチを用いて変異させ、さらにBiacoreアッセイ及び細胞取り込みアッセイを用いて繰り返し試験することができる。これらの変異導入の結果として、Ngal捕捉におけるメガリンの役割及びNgalのメガリン結合ドメインを明らかにすることができる。さらにまた、最適変異体もまた創出することができる。また別のレセプター我々のデータ図9及び13及び以前に刊行された報告43は、メガリンがNgalの必須のレセプターであることを示唆している。しかしながら、近位細管に非メガリンレセプターが存在する可能性がある。主要な候補は24p3RSLC22A17であり、前記は腎臓全体で見出されNgalのエンドサイトーシスを媒介することが示されているが、その機能は未だ確定されていない。ヒト24p3Rを過剰発現する安定的にトランスフェクトしたHEK293細胞を作製し、Alexa488標識野生型及びK6変異体Ngal及びNgalEntFeIIIの取り込みを、例えば共焦点顕微鏡及びイムノブロットを用いることによって決定することができる。もし24p3Rが野生型Ngalの取り込みを刺激するならば、前記はNgalのレセプターであり、K6変異体及び他の変異体はこのレセプターとの相互作用の欠如を示し得る。Ngal変異体のinvivo分布メガリンの条件付きノックアウトネズミモデル91を用いて更なるNgalメガリン試験を実施することができる。前記モデルでは、フロクス化floxedメガリンマウス及びgGTCre近位細管のS3セグメントの細胞の80で遺伝子を特異的に欠失させる92を用いて近位細管上皮でメガリンが欠失されている。TEWillnow91によれば、これら条件付き欠失マウスは生存可能で繁殖能力を有する。メガリン欠失効率は、抗メガリン抗体による免疫組織化学的染色により確認できる。欠失が完全である場合、メガリンffマウスをメガリンfgGTCreマウスと交配して、メガリンffgGtCreマウス25及び同複仔コントロールメガリンff25、メガリンfgGtCre25及びメガリンf25を作製した。メガリン欠失マウスn=12は、フロクス化対立遺伝子座及びgGTcreリコンビナーゼのPCR遺伝子型決定によって同定できる。Alexa488若しくはローダミン標識野生型又はK6変異体2つの異なる標識の使用は負荷電Alexa488又は正荷電ローダミンによる要因を回避するためを4週齢マウスの腹腔内注射によって試験し、それらの輸送をZeissLSM510META倒立共焦点レーザー走査顕微鏡及び抗ヒト抗体によるイムノブロットを用いて分析した。メガリン発現は、近位腎上皮、上皮小体細胞、精巣状態上皮細胞、II型肺細胞、乳房上皮及び甲状腺小胞細胞に限定されているので、野生型及びノックアウトマウスにおける野生型Ngal及び変異体Ngalの両方の分布を解明して、invivoのNgalメガリン相互作用を探索することができる。近位細管によるWTNgalの捕捉が条件付きメガリンノックアウト腎で停止し、さらにNgalが分泌されるならば図10に類似、メガリンはおそらく腎における唯一のNgalレセプターであり、レセプター24p3Rは必須ではないと推定される。これが正しければ、野生型Ngalの分布もまた種々の組織のメガリン分布と相関性を示すはずである。さらにまた、Ngal変異体例えばK6がメガリンに対して低い親和性を有するならば、尿中へのそれらの漏出は直接的に説明できる。他方、野生型Ngalがメガリンノックアウトの近位細管で及びメガリン非発現の体細胞によって捕捉されるならば、また別のレセプターが予想される。この事例では、変異体Ngalの分泌は、メガリンに対してだけでなく非メガリンレセプターに対する親和性低下の結果であり得る。Ngal変異体におけるNgalEntFeIII相互作用の評価Ngalは、高い親和性でEntFeIII及びEntと特異的に結合しそれぞれ04nM及び357nM3675、さらに前記は結合した鉄をたとえ低pHでさえ遊離させることができない38。Ngalは、もはや化学反応に加わることができないように鉄を隔離し、複合体は循環中の輸送のために安定である。再吸収消失変異体がなお第二鉄シデロフォアと高い親和性で結合する能力を有するか否かを試験することができる。初期的データは、Entの存在下で変異体は鉄を保持することを示し図14、さらに明瞭な赤い着色を提示する。K6NgalEnt相互作用を定量し、導入された変異の構造的影響を決定することができる。NgalによるEntFeIIIの結合の定量的測定蛍光消光FQ方法NatureChemicalBiology201038、図10を用いて、Ngal及びNgal変異体第二鉄シデロフォア相互作用のスペクトルを定量し9398、Ent結合の親和性測定値を導き出すことができる。励起λexc=281nm及び発光λem=340nmデータを、EntFeに曝露した、100nMのK6Ngal変異体タンパク質溶液32μgmLのユビキチン及び5DMSOを含むから収集できる。前記複合体のpH感受性は、蛍光シグナルが安定化するまで溶液のpHを増加調節することによって決定できる。データは、一部位結合モデルDYNAFIT99による非線形回帰分析を用いて調べることができる。コントロール実験を実施してタンパク質の安定性を確認することができる。また別の技術にはSPR及びイソサーマルタイトレーション熱量測定例えば強力な基に由来するもの86が含まれる。変異体NgalEntFeIIIの生成のための構造的基礎メガリン結合能力を損なうために導入された変異が第二鉄シデロフォアリガンド認識を妨げないことを確認するために、K6±EntFeIIIの構造をX線結晶学によって決定することができる。20を超えるNgal結晶構造ヒト、ネズミ及び変異体型を含む±N結合CHO空のもの及び一連の天然シデロフォア又は合成アナローグと結合したものは以前に決定されている36389399100。K6変異体は、全ての公知のNgal結晶形で結晶接触に影響を与えるので、前記をdenovoな構造決定としてアプローチできる。結晶化のために、タンパク質を、還元非還元PAGE及び同時静的動的光分散concurrentstaticdynamiclightscattering;SLSDLSによる質量分析によって決定される純度及び単分散性を用いて、GSTクロマトグラフィー、続いてゲルろ過及びイオン交換クロマトグラフィーによって高度に精製することができる。単分散するタンパク質調製物を、サブマイクロリットルの自動装置及び市販のファクトリアルスクリーンを用いて結晶性についてスクリーニングできる。結晶化を触媒する確立された方法論を用いて初期結晶を通常の結晶化形式で最適化することができる。また別には、タンパク質をさらに厳密に精製するか、又はFabと複合体を形成させることができるネズミNgalFab複合体の構造[20PEG4000及び10イソプロパノールpH=70から結晶化、空間群:P212121、a=379Å、b=694Å、c=1176Å;dmin=215Å、Rmerge=004]を決定した16を超える抗ヒトNgal抗体Fabパネルを共同結晶形成のために用いることができる。回折データを収集することができる。利用可能な種々のソフトパッケージのいずれかを用いてデータを変換し、直接的相違フーリエ同形結晶のため、分子置換MR、MAD一般的にセレノメチオニンを使用又はMIRAS多様な推論方法のいずれかを使用によって相転移を実施できる。これらのデータはNgalEnt相互作用の特徴を定量的に決定し、K6又は他の変異体がEntFeIIIに対して親和性を保持しているか否かを示すことができる。これらの試験は、導入された変異がリガンド結合を損なうことを示すことができ、さらにそれら構造を用いてさらに別の変異を操作することができる。変異体NgalEntFeIIIのデリバリーによる安全な鉄の排出K6NgalEntがNTBIを効率的にキレートして腎臓から尿へデリバリーできるか否かを試験するために、K6Ent55FeIII複合体80μgをマウス4週に導入し、代謝ケージで3時間尿を収集した。図16に示すように、注射したK655FeIII複合体の1623が尿にデリバリーされ、これは尿で見出されるK6タンパク質のパーセンテージと一致するが図13、野生型注射物は01未満が排出された。肝臓には微量<1の55FeIIIが蓄積し、鉄はいったんK6Entによってキレートされたことを示しているキレートされたものは主に腎臓及び尿にデリバリーされた。これらのデータを基にして、K6Entが内在性NTBIを捕捉し、キレートし、輸送してこれを除去できるか否かを試験できる。ヘモクロマトーシスのネズミモデルにおけるK6EntによるNTBIのキレート及び排出マウスモデルの確立及び評価Hfe遺伝子を欠く遺伝性ヘモクロマトーシス1型のマウスモデルは市場JacksonLabsStock003812から入手できる。これらのマウスは離乳後12週間で器官の鉄過負荷を生じる。後天性ヘモクロマトーシスのマウスモデルは以前に報告されたように作製することができる101。この輸血媒介鉄過負荷のマウスモデルは、イソフラン麻酔マウスの後眼窩動脈叢を介したレシピエントへの保存4°Cで14日マウスRBCの輸血170-175gdLヘモグロビンで200又は400μLによって作製された前記輸血はヒトへの1-2ユニットのRBC輸血に匹敵する。簡単に記せば、RBCは30-50匹のC57BL6マウスからCPDA1溶液Baxter中に入手し、新生児用白血球高効率軽減フィルターNeonatalHighEfficiencyLeukocyteReductionFilterPurecellNeoを用いて白血球を減少させ、続いて遠心分離によって17gdLの最終ヘモグロビンレベルに濃縮するにより静脈内輸液によって導入できる。HFEマウスのためには、K6Entの用量は、12時間で179mgのK6Ent、毎週3回、4週間であった。この用量は以下の計算に依拠する:HFEマウスについては、NTBIは約37μM、血液体積は約16mLであり、鉄キレート及び除去を最大にするために、Mgalの半減期が10分であることを考慮して、12時間治療の間に等モルのNgalEntが循環中に持続的に存在すべきであるか、或いは12時間にわたって約085μmole約179mgのNgalEntが理論的に要求される。同様に、輸血マウスのための用量は、ただ1回の治療期間である12時間の間にK6Ent約058μM12mgである。アポK6は陰性コントロールであるなぜならば、前記は鉄に結合せず、さらに内在性カテコールは解離するからである。WTNgalはまた有用なコントロールであるなぜならば、前記はメガリンに捕捉され、さらに鉄を尿へ輸送しないからである。治療有効性は、血清及び尿中の鉄、肝臓、脾臓及び腎臓の鉄濃度、マクロファージ及び肝細胞の細胞内鉄蓄積、並びに上記に記載したK6Ent処置マウスと比較したK6又は野生型処置マウスの血漿サイトカインケモカインの測定によって評価できる。K6Ngalは抗ヒト抗体によるイムノブロットによって尿で検出できる。予備的データは、K6は尿に出現し、K6Entは血清NTBIを顕著に減少させ、HFEマウス及び輸血過負荷の鉄含有量を減少させ、さらにまた古いRBC輸液でサイトカインケモカインのレベルを正常化させることを示唆する。鉄媒介細胞損傷に対するK6Ent治療の効果腎臓の過酸化脂質におけるレドックス活性の測定値は鉄触媒超酸化物ストレスのマーカーである前記はマロンジアルデヒドによって測定される。K6治療に付したマウスの腎皮質を髄質から分離して均質化し106107、TCA及びチオバルビタール酸で処理し、上清を535nmで読み取る。マロンジアルデヒドナノモルで発現されるは分子吸光係数156x105M1cm1535nmを用いて計算する。K6による治療時の腎損傷のさらに別の測定は、マウス抗体RDsystemによる内在性マウスuNgal25KDaの検出である。NgalはAKIを引き起こす刺激ラジカルの攻撃を含むによる損傷から3時間以内に発現される。我々は種々の処置群でuNgalを測定するであろう。マウス尿の遊離鉄およびレドックス活性の測定本明細書に提示したデータは、鉄はK6Ngalと強固に結合し酸性尿においてさえもレドックス不活性であることを示唆している。前記は、K6、K6Ent及び野生型Ngalで処置したマウスの尿中の触媒性鉄を測定する、Gutterridgeの古典的分光測定ブレオマイシン試験57を用いて試験することができる。Chelex処理した発熱因子を含まない水に尿を収集し、マイクロコン10K、Milliporeを用いて作製した限外濾過物をブレオマイシンアッセイで測定する。標準曲線はFeCl3を加えた尿を用いて調製し、クレアチニンAbcam1mg当たりのブレオマイシン検出可能な鉄を記録する。レドックス活性を測定する第二の方法もまた用いることができる。鉄媒介ヒドロキシルラジカルの生成は、アスコルビン酸の存在下での3’フルオレセインHPF;Invitrogenのフルオレセインへの変換によって検出できるEx490nm、Em515nm94。図12に示すように、野生型Ngalは、カテコールFeIIIの活性を消失させたK6、K6Ent及びWTNgalEntで処置したマウスの尿が試験される。陽性コントロールは、K6が後に続くEnt/カテコールFeIIIスーパーオキシドラジカルの生成を阻害するである。表2はアミノ酸配列リスト及び変異体NGALタンパク質のアミノ酸配列を示す。作製した変異体NGALタンパク質は配列番号2-10;21-68;247-251として示される。表2はまたNGALの全ての位置において非正荷電アミノ酸への置換を有する推定的変異体NGALタンパク質を示す配列番号69-246全ての表面残基を含む、その表面残基は以下の位置を含む:1-15位配列番号69-83、17-26位配列番号85-94、4-50位配列番号108-118、57-62位配列番号125-130、71-82位配列番号139-150、84-89位配列番号152-157、96-105位配列番号164-173、114-118位配列番号182-186、128-131位配列番号196-199、140-151位配列番号208-219、157-165位配列番号225-233、170-174位配列番号238-242。本発明を前述の例示的実施態様で説明および例証してきたが、前記開示は単なる例示によって実施され、本発明の範囲前記は下記の特許請求の範囲によってのみ制限されるを逸脱することなく、多数の改変が本発明の実施の詳細において為され得ることは理解されよう。開示した実施態様の特徴は、本発明の範囲内において多様な態様で組み合わされ、再構成することができる。参考文献リスト