"精子の機能性および/または受精能を改善する方法であって、精子を、ペグ化結合剤であって、精子に結合することができる結合剤を含む有効量の組成物と接触させることを含む、前記方法。結合剤が、精漿タンパク質である、請求項1に記載の方法。精漿タンパク質が、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFP、およびZ13から成る群より選択される、請求項2に記載の方法。結合剤が、精漿タンパク質に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントである、請求項1に記載の方法。精漿タンパク質が、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFP、およびZ13から成る群より選択される、請求項4に記載の方法。精子の機能性および/または受精能を改善する方法であって、精子を、ペグ化膜固定剤を含む有効量の組成物と接触させることを含む、前記方法。膜固定剤が、脂質である、請求項6に記載の方法。脂質が、コレステロール、ジアシルグリセロ脂質、ジアルキルグリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴシン由来ジアシル脂質およびジアルキル脂質、セラミド、ホスファチデート、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、およびホスファチジルグリセロールから成る群より選択される、請求項7に記載の方法。人工授精、または体外受精に用いるための組成物を製造する方法であって、a哺乳動物から精子を入手すること;そしてb精子を、ペグ化結合剤であって、精子に特異的に結合することができる結合剤を含む有効量の組成物と接触させることを含む、前記方法。精子を選別して、X染色体支持精子を、Y染色体支持精子から分離することを更に含む、請求項9に記載の方法。哺乳動物が、ヒト、ウシ、ブタ、またはウマである、請求項9に記載の方法。結合剤が、精漿タンパク質である、請求項9に記載の方法。精漿タンパク質が、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFP、およびZ13から成る群より選択される、請求項12に記載の方法。結合剤が、精漿タンパク質に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントである、請求項9に記載の方法。精漿タンパク質が、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFP、およびZ13から成る群より選択される、請求項14に記載の方法。人工授精または体外受精に用いるための組成物を製造する方法であって、a哺乳動物から精子を入手すること;そしてb精子を、ペグ化膜固定剤を含む有効量の組成物と接触させることを含む、前記方法。膜固定剤が、脂質である、請求項16に記載の方法。脂質が、コレステロール、ジアシルグリセロ脂質、ジアルキルグリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴシン由来ジアシル脂質およびジアルキル脂質、セラミド、ホスファチデート、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、およびホスファチジルグリセロールから成る群より選択される、請求項17に記載の方法。生きている精子、およびペグ化結合剤を含み、該結合剤は精子に特異的に結合することができる、調製品。結合剤が、精漿タンパク質である、請求項19に記載の調製品。精漿タンパク質が、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFP、およびZ13から成る群より選択される、請求項20に記載の調製品。結合剤が、精漿タンパク質に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントである、請求項19に記載の調製品。精漿タンパク質が、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFP、およびZ1から成る群より選択される、請求項22に記載の調製品。生きている精子、およびペグ化膜固定剤を含む、調製品。膜固定剤が、脂質である、請求項24に記載の調製品。脂質が、コレステロール、ジアシルグリセロ脂質、ジアルキルグリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴシン由来ジアシル脂質およびジアルキル脂質、セラミド、ホスファチデート、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールおよびホスファチジルグリセロールから成る群より選択される、請求項25に記載の調製品。精子が、X染色体支持精子である、請求項19~26のいずれか1項に記載の調製品。精子を凍結保存する方法であって、a精子を、凍結保護剤、およびペグ化結合剤であって、精子に結合することができる結合剤を含む組成物と接触させること;そしてb精子を約4°C~約-196°Cの温度で貯蔵することを含む、前記方法。精子を凍結保存する方法であって、a精子を、凍結保護剤、およびペグ化膜固定剤を含む組成物と接触させること;そしてb精子を約4°C~約-196°Cの温度で貯蔵することを含む、前記方法。凍結保護剤が、ポリエチレングリコール;DMSO;エチレングリコール;プロピレングリコール;ポリビニルピロリドン;グリセロールおよびポリエチレンオキシド;ラフィノース;ラクトース;トレハロース;メリビオース;メレチトース;マンノトリオース;スタキオース;デキストラン;ヒドロキシエチルデンプン;スクロース;マルチトール;ラクチトール;およびグリセロールから成る群より選択される、請求項28または請求項29に記載の方法。赤血球および膵臓β島細胞双方について、それぞれの細胞機能は、ペグ化にもかかわらず保存された。FRT内の精子の主な損失は、貪食作用によるので、依然として機能を保存しながら、保護のために精子をペグ化することは可能でありうる。本開示は、精子の機能性および/または受精能を改善する方法および組成物であって、例えば、FRT中の精子の運動性を増強すること、好中球による貪食作用に対して精子を保護すること、およびFRT中の精子の寿命を延長することによる方法および組成物を提供する。精子のペグ化は、体外受精率を、そして更には、胚盤胞の質を改善する場合に価値を有することもできる。開示された方法および組成物は、人工授精に用いられて、例えば、授精に必要な精子の数を減少させ且つ受胎率を改善することができる。一つの側面において、開示された方法は、精子を、ペグ化結合剤であって、精子に結合することができる結合剤を含む有効量の組成物と接触させることによって、精子の表面にモノメトキシポリエチレングリコールmPEGなどのポリエチレングリコールPEGを加えることを含む。特定の態様において、結合剤は、精漿タンパク質である。ウシ精子で用いるための組成物の場合、例えば、有効に用いることができる精漿タンパク質には、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFP、Z13およびクラステリンが含まれるが、これに制限されるわけではない。開示された組成物中で有効に用いることができる他の結合剤には、精漿タンパク質に特異的に結合する単クローン性抗体などの抗体またはその抗原結合フラグメントが含まれる。追加の精子結合剤には、精子表面上の炭水化物を認識するレクチン分子、精子抗原への抗体、そして更に、ウシ精子を延長するのに用いられる且つウシ精子に結合するタンパク質を有する卵黄が含まれる。他の態様において、mPEGなどのPEGは、精子を、精子表面に直接的に共役する反応性基を有するPEG分子を含む有効量の組成物と接触させることによって精子表面に加える。例えば、アミン反応性基を有するPEGは、精子表面タンパク質に共有結合することができる。他の態様において、mPEGなどのPEGは、精子を、ペグ化膜固定剤membraneanchoringagentを含む有効量の組成物と接触させることによって精子表面に加える。特定の態様において、膜固定剤は、コレステロール、ジアシルグリセロ脂質、ジアルキルグリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴシンで由来ジアシル脂質およびジアルキル脂質、セラミド、ホスファチデート、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールまたはホスファチジルグリセロールなどの脂質であるが、これに制限されるわけではない。別の側面において、精子の機能性および/または受精能を改善する方法であって、精子を、脂質-PEG-官能性残基複合体と接触させることを含み、ここにおいて、官能性残基が、精子の機能性および/または受精能を改善する場合に有効である方法を提供する。もう一つの側面において、本開示は、AIまたは体外受精に用いるための調製品を製造する方法であって、哺乳動物から精子を入手し、場合により、その精子を分離して、X染色体支持精子およびY染色体支持精子とし、そして精子を、本明細書中に開示の有効量の組成物および/またはコンストラクトと接触させることを含む方法を提供する。X染色体支持精子をY染色体支持精子から分離する方法は、当業者に知られていて、それには、例えば、フローサイトメトリーが含まれる。このような方法には、米国特許第5,135,759号明細書、米国特許第5,985,216号明細書、米国特許第6,149,867号明細書、および米国特許第6,263,745号明細書に記載の方法が含まれるが、これに制限されるわけではない。また別の側面において、AIまたは体外受精に用いるための調製品であって、生きている精子および本明細書中に開示の組成物および/またはコンストラクトを含む調製品を提供する。特定の態様において、精子は、X染色体を支持する。精子の凍結保存方法も、本開示によって提供する。このような方法は、a精子を、凍結保護剤および本明細書中に開示の有効量の組成物および/またはコンストラクトと接触させ;そしてb精子および組成物/コンストラクトを約4°C~約-196°Cの温度で貯蔵することを含み、ここにおいて、有効量の組成物は、組成物/コンストラクト不含で貯蔵される精子に相対して、精子の機能性および/または受精能を増加させるのに十分である。このような方法において有効に用いることができる凍結保護剤の例には、PEG、ジメチルスルホキシドDMSO、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリビニルピロリドンPVP、ポリエチレンオキシド、ラフィノース、ラクトース、トレハロース、メリビオース、メレチトース、マンノトリオース、スタキオース、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、スクロース、マルチトール、ラクチトールおよびグリセロールが含まれるが、これに制限されるわけではない。関連した側面において、凍結保存された精子および本明細書中に開示の組成物および/またはコンストラクトを含む調製品を提供する。精子を凍結保存する方法は、当該技術分野において周知であり、それには、例えば、米国特許第7,208,265号明細書、および米国特許出願公開第2007/0092860号明細書に開示の方法が含まれる。本明細書中に開示の方法、組成物およびコンストラクトは、雌牛、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ヒト、ラクダ、ウマ、シカ、アルパカ、イヌ、ネコ、ウサギおよび齧歯類動物が含まれ、これに制限されるわけではない、哺乳動物のAIに用いるための精子の調製に特に好都合である。このような方法で用いられる精液は、新鮮射精液であってよいか、または以前に凍結された後、融解されていてもよい。本発明のこれらおよび追加の特徴およびそれらを入手する方法は、以下のより詳細な説明の論及によって明らかになるであろうし、そして本発明は、最もよく理解されるであろう。上に概説されたように、本開示は、精子の機能性および/または受精能を改善する方法を、このような方法で用いるための組成物およびコンストラクトと一緒に提供する。特定の態様において、本明細書中に開示の方法および組成物は、FRT中の精子の運動性を増強する、貪食作用から精子を保護する、および/またはFRT中の精子の寿命を延長する。精子の機能性および/または受精能を増加させる組成物またはコンストラクトの能力は、精子を、その組成物またはコンストラクトと接触させ;被処置精子の受精能獲得およびアクロソーム状態および凍結保存から回復する能力を示す、運動性、好中球攻撃への耐性、膜保全性および/または精子表面マーカーの存在などのパラメーターを測定し;そしてそれら結果を、未処置精子について得られたものと比較することによって決定することができる。修飾された精子の機能性は、子宮頸管外植片または合成類似物とのそれらの相互作用および/またはそれらの受精能獲得能力、アクロソーム反応能力および体外受精能力を調べることによって決定することもできる。上記のパラメーターを測定する技法は、当該技術分野において周知であり、それには、下記のものが含まれる。特定の態様において、開示された方法は、mPEGなどのPEGを、選別済みかまたは未選別の精子の表面に加えることを含む。精子の受精能および/または機能性における精子表面タンパク質の役割射精後、精子は、精巣、精巣上体および副生殖腺からの分泌物から構成される精漿中に入っているCalveteandSanz2007Maxwelletal2007。精漿は、アミノ酸、脂質、脂肪酸、オスモライトosmolytes、膜小胞、ペプチドおよびタンパク質から構成される複雑な混合物であるCalveteandSanz2007Maxwelletal2007。精液からのタンパク質は、雄牛の受精能に関連していることが分かったがKillianetal1993、高受精能と低受精能の雄牛間でのこれらタンパク質のレベルの比較は、これらタンパク質の4種類が、二つの群の雄牛間の約50の変動を説明しうるということを示しているMouraetal2006。これらタンパク質のいくつか、および精子精巣上体通過中に加えられるその他は、精子の特定の領域に結合するし且つ異なったリガンド結合能力を有することが分かった。このような精子表面タンパク質は、精子生存能力Centurionetal2003、運動性Garciaetal2006、子宮免疫活性CalveteandSanz2007Einspanieretal1991、子宮頸管粘液の侵入Tollneretal2008b、受精能獲得状態ManjunathandTherien2002Therienetal1997Tollneretal2009、および卵管EkhlasiHundrieseretal2005Tollneretal2008aYamaguchietal2009および透明帯双方の結合Dostalovaetal1995を調節する活性、および免疫保護を与えるYudinetal2005活性を有することが分かった。集合的に、これら研究は、精子の表面が、精子受精能の調節に重要な役割を有するということを強く示唆している。有蹄類すなわち、ブタ、雄牛、雄羊および種馬の場合、射精液からの成分、特に、副生殖腺からのタンパク質は、精子表面に結合し且つ受精能獲得を阻害する受精能獲得抑制として知られる;Maxwelletal2007。これら受精能獲得抑制因子のいくつかは、主要な精漿タンパク質に由来し、スペルマドヘシンspermadhesinおよびフィブロネクチンII型FN2コリン結合タンパク質ファミリーに属するCalveteandSanz2007。しかしながら、大部分の精液タンパク質の正確な役割は未知であり、精漿のタンパク質組成にも、同じタンパク質ファミリーからのタンパク質の見掛け機能にも、種間で有意差が存在するCalveteandSanz2007Manjunathetal2007。これら差にもかかわらず、FRT中の精子の受精能獲得時の表面に結合したタンパク質および脂質の損失などの膜再造形事象は、哺乳動物種を越えて本質的に保存されるCalveteandSanz2007Tollneretal2009。精子の表面は、それが、いくつかの雌性生殖分泌物からの損傷部位であり、そして更に、上皮および免疫学的攻撃からの保持または損傷の部位であるから、精子受精能の重要な特徴である。したがって、表面特性を増強して、表面の保持または損傷を減少させることは、精子受精能を増加させるかもしれない。しかしながら、精子表面は、更に、FRTからの可溶性シグナルおよびFRTへの特異的組織結合双方と精子の相互作用の部位である。このような特異的相互作用に関与する可溶性シグナルの例には、グリコサミノグリカンGAGおよび高密度リポタンパク質HDL分子が含まれ、それらは双方とも、雌牛の受精能獲得を引き起こすことに関与しているLaneetal1999Therienetal2005Therienetal1995Therienetal1998。精子-組織相互作用の例には、子宮卵管接合部と精子の相互作用Yamaguchietal2009および卵管上皮への結合Gwathmeyetal2006が含まれる。したがって、全体的には、精子表面増強について、精子に保護を加えるが、特異的シグナリングおよび結合が生じることを可能にするバランスを見出す必要がある。この目的を達成する一つの魅力的な手段は、精子を被覆する且つ受精能獲得時に失われる受精能獲得抑制因子に保護剤を加えることである。本発明者は、mPEGが、このような保護剤として働くことができると考えている。薬物Greenwaldetal2003または治療的タンパク質Robertsetal2002へのmPEGの共有結合連結ペグ化として知られるは、宿主免疫系から分子を隠し、そしてこれら物質の流体力学的サイズを増加させる。したがって、ペグ化は、腎クリアランスを減少させ且つタンパク質分解への耐性を増加させることによって、親分子の循環時間を長くするHarrisandChess2003。ペグ化は、更に、細胞を免疫偽装するために、具体的には、輸血、特殊化した細胞移植に用いられてきたが、この場合、ペグ化は、拒絶反応の発現を有意に減少させることができるChenandScott2001。ペグ化および移植の研究は、同遺伝子系ラット膵島についても行われて、ペグ化が、invivo細胞のシグナリングおよび機能を損なわないということを示したChenandScott2001。ウシ精漿の主要タンパク質画分50~70は、集合的にBSPタンパク質と称されるリン脂質結合タンパク質のファミリーによって代表されるManjunathetal2007。BSPタンパク質標示は、FN2ドメインの存在を特徴とするManjunathetal2007。具体的には、BSPは各々、独特のN末端ドメインの後、短いリンカーポリペプチド鎖で隔てられている縦列した二つのFN2ドメインから構成されているConstantineetal1992Wahetal2002。それらBSPFN2ドメインは、コリンリン脂質結合部位Calveteetal1996DesnoyersandManjunath1992を、そして他の表面上に、ヘパリンCalveteetal1996Chandonnetetal1990およびHDLTherienetal1997の結合部位を含有することが分かった。ウシ精漿の場合、三つのFN2ファミリーメンバーが、次の濃度で存在するNaucandManjunath2000:BSP-A1/A2PDC-109としても知られる、15~20mg/mlで存在、BSP-A32~4mg/mlで存在、およびBSP-30kDa4~6mg/mlで存在。射精時に、BSPは、精子膜に結合し、そして受精能獲得中に行われるGAG/HDLで媒介される表面修飾に決定的な役割を果たすTherienetal1998Therienetal1997。BSPタンパク質は、受精能獲得中に精子の表面から失われるTherienetal2001。ウシ精液の場合、主要スペルマドヘシンタンパク質は、精漿中に2~7mg/mlで存在する114残基の非グリコシル化タンパク質である酸性精液タンパク質aSFPであるDostalovaetal1994Wempeetal1992。このタンパク質は、精子の表面にゆるく結合し、そして体外受精能獲得中に定量的に放出されるDostalovaetal1994。そのタンパク質は、酸化保護に役割を有することがありうるし、そして更に、リンパ球および子宮内膜プロゲステロン分泌を刺激することがありうるEinspanieretal1991。Z13として知られるもう一つのスペルマドヘシンも、精漿中に存在する。このタンパク質も、非グリコシル化であるが、二量体として、約0.5mg/mlの濃度で存在するTedeschietal2000。精子の表面に結合するそれらタンパク質は、種間で極めて変動しうると考えられる。更に、精子への転移部位も、変動しうる。例えば、マウスおよびサルの場合、βデフェンシンは、受精能獲得抑制因子の役割を有すると考えられるTollneretal2009Yudinetal2008。更に、マウスの場合、これらタンパク質は、射精後に加えられることはないが、精巣上体を介するそれらの通過中に精子を被覆するYudinetal2008。ヒトの場合、ウシBSP様遺伝子が存在するが、しかしながら、精液中のタンパク質としてのそれらの発現は、極めて少ない成分としてであるLefebvreetal2007。精子表面と会合している且つ受精能獲得によって放出されうるタンパク質の別のファミリーは、16の不変システイン残基を特徴とするタンパク質ファミリーであるCRISPであるTopferPetersenetal2005。ヒトの場合、エッピンSPINLW1としても知られる;KunitzおよびWAPドメイン1を含むセリンペプチダーゼ阻害剤様およびCD52分子は、受精能獲得抑制因子として働くかもしれないFocarellietal1999Focarellietal1998Focarellietal1995。多数の種の精子表面上に存在すると考えられる一つのタンパク質は、クラステリンである表1を参照されたい。精子表面へのポリエチレングリコールの付加一つの側面において、本明細書中に開示の方法は、保護を与えるが、同時に、精子が、FRTを介する上昇において認められる分子配列および細胞相互作用を維持することを可能にし、それによって、精子の機能性および/または受精能を増加させる技法を用いて、精子に保護剤PEGを加えることを包含する。特定の態様において、このような方法は、mPEGなどのPEG、および精子の細胞表面に直接的にかまたは間接的に結合する結合剤を含めた組成物を用いる。広範囲の分子量を有するPEGは、開示された方法において有効に用いることができる。例えば、特定の態様において、PEGは、約200~約40,000ダルトンの範囲内の分子量を有する。本明細書中に開示の方法、組成物およびコンストラクトでの使用が考えられるPEGには、mPEG、モノアルキル置換PEG、タンパク質への共役を可能にする1つ以上のアミン反応性基を有するPEG、ならびに直鎖および分枝状鎖PEGが含まれるが、これらに制限されるわけではない。開示された方法、組成物およびコンストラクトにおいて有効に用いることができるコレステロール-PEG誘導体は、商業的に入手可能であり、それには、NOFCorporationWhitePlainsNYから入手可能なものが含まれる。一つの態様において、結合剤は、精子に結合し且つ受精能獲得時に失われることが知られているタンパク質である。ウシの場合、これらには、例えば、PDC-109NCBIAccessionNP_001001145.1;SEQIDNO:1、BSP-A3NCBIAccessionNP_777265.1;SEQIDNO:2、BSP-30kDaNCBIAccessionNP_777267;SEQIDNO:3、aSFPNCBIAccessionNP_777041.1;SEQIDNO:4およびZ13NCBIAccessionP82292;SEQIDNO:5が含まれる。精子と会合するおよびペグ化に用いることができる追加の可能性のある精漿タンパク質を、下の表1に示す。別の態様において、結合剤は、それ自体、精子に結合し且つ受精能獲得時に失われることが知られている精液タンパク質に結合する分子である。このような分子の例には、レクチン;および精漿タンパク質に結合する抗体およびそれらの抗原結合フラグメント;およびビテロゲニンおよびアポリポタンパク質Bを含めたニワトリ卵黄タンパク質などの、精子に結合することが知られているタンパク質が含まれる。ウシの場合、例えば、このような抗体には、PDC-109、BSP-A3、BSP-30kDa、aSFPおよび/またはZ13に特異的に結合するものが含まれる例えば、ManjunathandSairam1987NaucandManjunath2000を参照されたい。ウシまたはブタ精子へ有意の結合性を示すレクチンには、下の表2に挙げられるものが含まれる。本明細書中に開示の結合剤は、Koderaetal1998Robertsetal2002に記載のものなどの、当業者に周知の技法を用いてペグ化されている。次に、そのペグ化結合剤を、AI前に性別判定済みかまたは性別未判定の精子に加える。他の態様において、PEGは、膜固定剤を用いて精子に取り付けられている。本明細書中で用いられる膜固定剤という用語は、細胞膜を含めた脂質二層中へ自発的に且つ安定して取り込むことが知られている分子を意味する。このような分子の例には、本明細書中にその開示が援用される米国特許出願公開2007/0197466号明細書に記載の合成分子が含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の態様において、膜固定剤は、脂質である。開示された方法において有効に用いることができる脂質には、グリセロリン脂質を含めたジアシル-およびジアルキルグリセロ脂質、および、セラミドを含めた、スフィンゴシンで由来ジアシル-およびジアルキル脂質が含まれるが、これに制限されるわけではない。特定の態様において、脂質は、コレステロール、ジアシルグリセロ脂質、ホスファチデート、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールおよびホスファチジルグリセロールから成る群より選択される。脂質は、1つ以上のcis-脱飽和脂肪酸から誘導されてもよい。脂質は、直接的にか、または、-COCH23CO-、-COCH24COまたは-COCH25CO-などのリンカーによって、PEGに連結することができる。開示された方法において有効に用いることができるPEGリン脂質複合体には、AvantiPolarLipidsIncAlabasterALより入手可能なものが含まれる。ペグ化膜固定剤は、AI前に精子に加える。他の態様において、PEGは、下の実施例7に記載のように、アミン反応性基によって直接的に精子表面タンパク質に取り付けられている。ポリペプチドおよびタンパク質開示された方法、組成物およびコンストラクトに用いられるタンパク質および/またはポリペプチドは、MamjunathandSairamに記載のものなどの、当業者に周知の技法を用いて、精子から単離することができる。或いは、このようなタンパク質および/またはポリペプチドは、タンパク質をエンコードしているポリヌクレオチドを発現ベクター中に挿入し、そして適当な宿主中で抗原を発現させることによって、組換えで製造することができる。当業者に知られているいろいろな発現ベクターはいずれも、用いることができる。発現は、組換えポリペプチドをエンコードしているDNA分子を含有する発現ベクターで形質転換またはトランスフェクションされたいずれか適当な宿主細胞において達成することができる。適する宿主細胞には、原核生物、酵母および高等真核細胞が含まれる。好ましくは、用いられる宿主細胞は、大腸菌E.Coli、ミコバクテリア、昆虫、酵母、またはCOSまたはCHOなどの哺乳動物細胞系である。本明細書中に開示の複合体および組成物は、1つ以上のアミノ酸欠失、付加および/または置換によって修飾された変異ポリペプチド配列を包含する。変異配列は、好ましくは、本明細書中に開示の特異的ポリペプチド配列に、少なくとも75、より好ましくは、少なくとも80、より好ましくは、少なくとも85、より好ましくは、少なくとも90、なおより好ましくは、少なくとも95、そして最も好ましくは、少なくとも98の同一性を示す。同一性百分率は、下記のように比較される二つの配列を整列させ、整列した部分の同一残基の数を決定し、その数を、本発明のクエリーqueried配列中の全残基数で割り、そしてその結果に100を掛けることによって決定する。挙げられた配列同一性レベルを示すことに加えて、変異配列は、好ましくは、本明細書中に開示の特異的配列の機能性に実質的に似ている機能性を示す。好ましくは、変異ポリペプチド配列は、下記のもののような、精子受精能検定において特異的に識別されたポリペプチド配列が有する精子受精能増強活性を少なくとも80、より好ましくは、少なくとも85、より好ましくは、少なくとも90、なおより好ましくは、少なくとも95、そして最も好ましくは、100有する。このような変異型は、概して、本明細書中に開示のポリペプチド配列の一つを修飾し、そして修飾されたポリペプチドまたは融合ポリペプチドの性状を、例えば、本明細書中に記載の代表的な手順を用いて評価することによって識別することができる。特定の態様において、変異配列は、保存的置換、欠失または修飾だけが、特異的に識別された配列とは異なる。本明細書中で用いられる保存的置換は、ペプチド化学における当業者が、ポリペプチドの二次構造および水治療性hydropathicnatureが実質的に未変化であろうと考えるように、あるアミノ酸が、類似の性状を有する別のアミノ酸の代わりに置き換えられているものである。概して、次の群のアミノ酸は、保存的変化を示す:1ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr;2cys、ser、tyr、thr;3val、ile、leu、met、ala、phe;4lys、arg、his;および5phe、tyr、trp、his。変異型は、更に、または或いは、ポリペプチドの抗原性、二次構造および水治療性に最小限の影響を有するアミノ酸の欠失または付加を含めた他の修飾を含有してよい。例えば、ポリペプチドは、タンパク質の転移を同時翻訳でまたは翻訳後に支配するタンパク質のN末端にあるシグナルまたはリーダー配列に共役することができる。そのポリペプチドは、更に、ポリペプチド例えば、ポリ-Hisの合成、精製または識別の容易さのために、または複合体中のポリペプチドの結合性を増強するために、リンカーまたは他の配列に共役することができる。ポリペプチド配列は、整列していてよく、そして特定領域中の同一アミノ酸の百分率は、BLASTPアルゴリズムなどの、公的に入手可能であるコンピューターアルゴリズムを用いて、別のポリペプチドに対して決定することができる。BLASTXおよびFASTXアルゴリズムは、全ての読み枠中の翻訳されたヌクレオチドクエリー配列をポリペプチド配列に対して比較する。アルゴリズムのBLASTファミリーの使用は、NCBIのウェブサイトおよびAltschuletalの公報に記載されている。BLASTN、BLASTP、FASTAまたは類似のアルゴリズムによって得られたクエリー配列による1つ以上のデータベース配列へのヒットhitsは、配列の類似部分を整列させ且つ識別する。ヒットは、類似性の度合い、および配列の重なりの長さの順序で配列している。データベース配列へのヒットは、概して、クエリー配列の配列長さの部分のみにわたる重なりを示す。本明細書中に記載のポリペプチドは全て、当該技術分野においてそれら用語が一般的に用いられるように、単離し且つ精製されている。好ましくは、それらポリペプチドは、少なくとも約80純粋、より好ましくは、少なくとも約90純粋、そして最も好ましくは、少なくとも約99純粋である。このような精製を達成するのに適するいろいろな技法は、当業者に周知である。これらには、例えば、硫酸アンモニウム、PEG、抗体等での、または熱変性による沈降後、遠心分離;イオン交換、ゲル濾過、逆相、ヒドロキシルアパタイトおよびアフィニティークロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー工程;等電点電気泳動;ゲル電気泳動;ならびにこれらおよび他の技法の組み合わせが含まれる。抗体精漿タンパク質を特異的に結合する抗体は、当業者に知られているいろいろな技法のいずれかによって製造することができる例えば、HarlowandLane1988を参照されたい。概して、抗体は、組換え抗体の生産を考えるために、単クローン性抗体の生成を含めた細胞培養技法によって、または適する細菌または哺乳動物細胞宿主中への抗体遺伝子のトランスフェクションによって生じることができる。単クローン性抗体は、KohlerandMilsteinの技法KohlerandMilstein1976、およびその改良法などのハイブリドーマ方法を用いて製造することができる。これら方法は、所望の特異性を有する抗体を生産可能な不死細胞系の製造を包含する。単クローン性抗体は、更に、米国特許第4,816,567号明細書に記載のものなどの組換えDNA方法によって製造することができる。単クローン性抗体をエンコードしているDNA分子は、慣用的な手順を用いて単離し且つ配列決定することができる。組換え抗体、抗体フラグメント、およびそれらの融合およびポリマーは、原核細胞例えば、細菌または真核細胞例えば、酵母、昆虫または哺乳動物細胞中でinvitro発現させ、そして更に、必要なように、周知の方法を用いて精製することができる。抗体は、更に、insilico設計され、且つ合成で生成されるポリヌクレオチドでエンコードされたアミノ酸配列に基づく組換え抗体ライブラリーに由来してよい。insilico生成された配列を設計し且つ入手する方法は、当該技術分野において知られているKnappiketal2000Krebsetal2001米国特許第6,300,064号明細書。機能性Fabフラグメントを生じるのに有用なヒト組み合わせライブラリーの構成方法は、RauchenbergerらRauchenbergeretal2003によって記載されている。抗体の抗原結合フラグメントを生じるための抗体の消化は、当該技術分野において周知の技法を用いて行うことができる。例えば、タンパク質分解酵素パパインは、IgG分子を選択的に切断して、いくつかのフラグメントを生じるが、それらの二つFabフラグメントは各々、無傷の抗原結合部位を包含する共有結合ヘテロ二量体を成す。酵素ペプシンは、IgG分子を切断可能であり、Fab’2フラグメントを含めたいくつかのフラグメントを与えるが、それらは、双方の抗原部位を成す。Fvフラグメントは、IgM、IgGまたはIgA免疫グロブリン分子の選択的タンパク質分解切断によって生じることができるが、より一般的には、当該技術分野において知られている組換え技法を用いて誘導される。Fvフラグメントは、天然抗体分子の抗原認識能力および結合能力のほとんどを保持する抗原結合部位を含めた非共有結合VH::VLヘテロ二量体を包含するEhrlichetal1980Hochmanetal1976Inbaretal1972。広範囲の発現系が、当該技術分野において、Fab、一本鎖可変フラグメントscFv、VLおよびVHを含めた抗体フラグメントの生産に利用可能である。例えば、原核および真核双方の起原の発現系が、抗体フラグメントおよび抗体融合タンパク質の大規模生産に用いることができる。特に好都合であるのは、培地中への多量の抗体フラグメントの分泌を可能にする発現系である。抗体フラグメントおよび抗体融合タンパク質の大規模生産用の真核生物発現系は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物、トランスジェニック動物および下等真核生物に基づくものが記載されている。例えば、抗体フラグメントの費用効果的大規模生産は、酵母発酵系で達成することができる。これら微生物の大規模発酵は、当該技術分野において周知であり、現在、いくつかの組換えタンパク質の大量生産に用いられている。酵母および糸状菌は、遺伝的修飾に利用可能であり、目的のタンパク質は、培地中に分泌させることができる。更に、いくつかの生成物は、それらが、発熱物質、毒素またはウイルス含有物を持っていないという点で、GRASGenerallyRegardedasSafe資格に従う。カンジダボイジニイCandidaboidinii、ハンセヌラポリモルファHansenulapolymorpha、ピキアメタノリカPichiamathanolicaおよびピキアパストリスPichiapastorisなどのメチロトローフのおよび他の酵母は、異種タンパク質の生産用の周知の系である。ミリグラム~グラム量の高レベルのタンパク質を得ることができるし、しかも工業的用途の発酵への拡大が可能である。P.パストリスP.pastoris系は、いくつかの工業規模生産プロセスに用いられる。例えば、scFvフラグメント、ならびに組換え抗体およびそれらのフラグメントの発現のためのPichiaの使用が記載されているAndradeetal2000PennellandEldin1998Ridderetal1995。振とうフラスコ培養物の場合、250mg/L~1g/Lを超えるレベルのscFvを得ることができるEldinetal1997Freyreetal2000。scFvのための類似の発現系は、サッカロミセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、シゾサッカロミセスポンベShizosaccharomycespombe、ヤローウィアリポリティカYarrowialipolyticaおよびクルイベロミセスラクティスKluyveromyceslactisについて記載されているDavisetal1991Horwitzetal1988Swennenetal2002。トリコデルマ属Trichodermaおよびアスペルギルス属Aspergillusなどの糸状菌は、多量のタンパク質を分泌する能力を有する。この性状は、scFvおよびVHHs重鎖抗体の可変ドメインの発現に利用することができるDurandandClanet1988Goukaetal1997KeranenandPenttila1995Nevalainenetal1994Nyyssonenetal1993Puntetal2002RadzioandKuck1997Verdoesetal1995Wardetal1990およびNyyssonenetal国際公開第92/01797号。方法開示された方法の特定の態様において、精子は、人工膣で集め、そして直ちに、単一密度層で精製するPercollTMPLUS,GEHealthcare,下のプロトコルを参照されたい。次に、精子を、有効量の本明細書中に開示の1つ以上の組成物および/またはコンストラクトを含む適切な基剤中で短時間インキュベート後、即時使用または凍結を可能にする適切な増量剤を加える。或いは、組成物および/またはコンストラクトを、射精液に直接的に加える。僅かな希釈、短いインキュベーション15~30分、および増量剤添加の後、得られた混合物を、冷却するかまたは、将来の使用のための凍結する。別の方法の場合、組成物および/またはコンストラクトは、増量した精液に加えることができる。他の態様において、精子は、フローサイトメトリーで性別判定し、そして有効量の1つ以上の開示の組成物および/またはコンストラクトを含有する基剤中で集める。或いは、十分な選別済み精子をいったん集めたら、組成物および/またはコンストラクトを加え、適切な基剤中で短時間インキュベートし、次いで増量剤を加えた後、即時使用かまたは凍結を行う。本明細書中で用いられる、本明細書中で開示の組成物および/またはコンストラクトの有効量という用語は、未処置精子と比較して少なくとも5~50精子運動性を増強する、貪食作用から精子を保護する、および/またはFRT中の精子の寿命を延長する十分な量を意味する。当業者は、開示された方法で用いるために、本明細書中に開示の組成物およびコンストラクトは、水または生理食塩水などの1つ以上の生理学的に許容しうる担体または希釈剤を含めた組成物中に存在できることを理解するであろう。このような組成物は、保存剤、安定化剤、緩衝剤等などの他の成分を付加的に含有してよい。本組成物に用いるのに適する担体、希釈剤および他の成分は、当業者に周知であり、それには、AI用の調製品に現在用いられているものが含まれる。本明細書中に挙げられた米国特許、米国特許出願公開公報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、非特許文献、表、配列、ウェブページ等は全て、本明細書中にそのまま援用される。次の実施例は、本開示を詳しく説明するものであるが、制限するものではない。実施例1精漿タンパク質の精製増量剤不含のウシ射精液を、多数の雄牛から集め、プールし、そして1,500gの低速度で15分間遠心分離して、精子細胞を除去した。その上澄みを、15,000gで15分間再度遠心分離し、そして透明な上澄み精漿SeminalPlasma;SPを保持し且つSPタンパク質の単離に用いた。PDC-109PDC-109は、イオン交換クロマトグラフィーによって次のように精製した。SPを、1MNaCl、25mMTris-HClpH6.4中に透析し、そして1MNaCl、25mMTris-HClpH6.4で予め平衡させた20mL-HiPrepDEAEFF16/10カラム上に装填した。そのカラムを、1MNaCl、25mMTris-HClpH6.4で洗浄し、そしてタンパク質を、1MNaCl、25mMTris-HClpH6.4、10mMホスホコリンで、一段階で溶離した。この操作は、1mLのSPにつき約13mg収量の精製PDC-109を、95より大きい純度で生じた。BSP-30kDaBSP-30kDaは、ゲル濾過クロマトグラフィー後、イオン交換クロマトグラフィーを用いて、二段階で精製した。具体的には、SPを、平衡緩衝液50mMTris-HClpH7.4、150mMNaCl中で1:2に希釈し、そして320mL-HiPrep26/60SepharcylS-200ゲル濾過カラム上に装填した。タンパク質を、50mMTris-HClpH7.4、150mMNaCl中で無勾配溶離した。SDS-PAGEを利用して、BSP-30kDaタンパク質を含有する画分を決定した。BSP-30kDaタンパク質を含有する溶離済み画分を、1MNaCl、25mMTris-HClpH6.4中に透析し、そしてPDC-109について記載のように精製した。この操作は、1mLのSPにつき約6mg収量の精製BSP-30kDaを、95より大きい純度で生じた。BSP-A3BSP-A3は、BSP-30kDaについて上に記載のように、ゲル濾過クロマトグラフィーを用いて精製した。SDS-PAGEを利用して、BSP-A3タンパク質を含有する画分を決定した。この操作は、1mLのSPにつき約6mg収量の精製BSP-A3を、95より大きい純度で生じた。aSFPaSFPは、二段階で、すなわち、ゲル濾過クロマトグラフィー後、イオン交換クロマトグラフィーで精製した。ゲル濾過クロマトグラフィーは、BSP-30kDaタンパク質の単離について記載のように行った。aSFPを含有する画分を決定するSDS-PAGE分析を行った後、選択された画分を、陰イオン交換クロマトグラフィーによって更に精製した。aSFPを含有する溶離済み画分を、結合緩衝液6mMTris-HClpH7.4中に透析し、そして20mL-HiPrepDEAEFF16/10カラム上に装填した。aSFPを、直線勾配の6mMTris-HClpH7.4、1MNaClを用いて溶離した。この操作は、1mLのSPにつき約1.5mg収量の精製aSFPを、95より大きい純度で生じた。実施例2精漿タンパク質への抗体の生成10~16週令のFlemishGiantウサギ2.5~3kgを、精製SPタンパク質への抗体の生成に利用した。精製後、SPタンパク質は、約1mg/mLの濃度に凍結乾燥後、PBS中に透析した。ウサギには、200ugのタンパク質を、初回免疫感作用に1mlのフロイント完全アジュバントと混合したもの、および引き続きの免疫感作用にフロイント不完全アジュバントと混合したもので、2週毎に全8週間注射した。最後の免疫感作後1週間に、ウサギを安楽死させ、心臓穿刺によって採血した。それぞれのタンパク質への血清抗体力価を、ELISAを用いて評価し、そして終末点希釈によって測定したところ、全被験動物が、PDC-109、BSP-30kDa、BSP-A3およびaSFPそれぞれの精漿タンパク質に15,000より大きい力価を生じた。実施例3ペグ化精漿タンパク質の調製および試験a精漿タンパク質のペグ化NHS-dPEG4-ビオチンを、H2O中に再懸濁させた。200マイクログラムずつのPDC-109、BSP-A3、BSP-30kDaおよびaSFPを、1:5、1:20、1:40および1:60のモル比でNHS-dPEG4-ビオチンと混合し、室温で30分間インキュベートした。その反応を、1MTris-HClpH7.4の25mM最終濃度での添加によって止めた。ペグ化タンパク質を、PBSに対して透析して、過剰のPEGを除去した。ペグ化は、SDS-PAGEにより、CoomasieBlue染色で評価した。反応したタンパク質のSDS-PAGEは、NHS-dPEG4-ビオチン対精液タンパク質のモル比増加が、分子量増加を引き起こしたことを示し、ペグ化を強く示唆した。標識ストレプトアビジンでのウェスタンブロットは、この結論を支持した。b精子へのペグ化精液タンパク質結合を示す蛍光顕微鏡法液状増量済み精液からのウシ精子細胞を、パーコールpercoll精製し、そして0.1PEGMW600,Servaの添加を伴って、非受精能獲得用基剤NCM;下の表3を参照されたい中で洗浄した。それら細胞を、ペグ化/ビオチニル化SPタンパク質と一緒に、NCM中において37°Cで30分間インキュベートし、1回遠心分離して、上澄みを除去した。細胞ペレットを、ストレプトアビジン-アレクサフルオルalexafluor488およびLIVE/DEAD定着性遠赤染料fixablefarreddyeを含有するNCM中に再懸濁させ、37°Cで1時間インキュベートした。細胞を、NCM中で1回洗浄し、NCM中に再懸濁させて、107個/mlに近い最終細胞濃度とした。DAPIを、それら細胞に加え、105個細胞を、Superfrostプラススライド上に置いた。それら精子細胞を、LeicaDC500カメラ、蛍光ebq100ランプおよび交換可能フィルターセットを装備したLeicaDMRE顕微鏡で調べた。ビオチニル化PDC-109またはaSFPと一緒にインキュベートした細胞は、精子頭部のアクロソームキャップ部分に強い蛍光シグナルを示した。c精子へのペグ化精液タンパク質結合を示すフローサイトメトリー精子細胞は、増量剤を含有する新鮮射精液の60PercollTMPLUS勾配を介する遠心分離後、NCM中の1回洗浄によって調製した。次に、精子細胞を、各1μg/mLのペグ化SPタンパク質と一緒に28°Cで30分間インキュベートした。ペグ化SPタンパク質とのインキュベーション後、細胞を1回洗浄し、ストレプトアビジン-alexafluor488を細胞に加え、そしてそれらを、37°Cで更に30分間インキュベートした。次に、フローサイトメトリー分析を行った。PDC-109およびBSP-A3は双方とも、ストレプトアビジン-alexafluor488単独でインキュベートされた対照細胞と比較した場合にヒストグラムの右シフトで示されるように、精子細胞への結合を示した。実施例4精子成熟モデルこのモデルの場合、下に詳述するように、ウシ精子を、NCM中において非受精能獲得条件下で一晩インキュベートするFRT中の行程の大部分についての精子経験をそれら状態に模擬し、約90の細胞生存率を開始する。一晩インキュベーション後、精子を、受精能獲得用基剤CM;表4中で希釈して、高効率での受精能獲得、および少ない生存率損失75~85の範囲内の細胞生存率を引き起こす。典型的な実験において、ウシ精子が、カフェイン、db-cAMPおよびIBMX3-イソブチル-1-メチルキサンチンで受精能を獲得する場合、95を越える生存可能細胞が、WGA-フルオレセイン/AnnexinVまたはメロシアニンmerocyanine540結合によって評価されるように、受精能を獲得する表5を参照されたい;WGA染色は、受精能獲得時の染色において約10倍シフトで最も感受性である。細胞が体外で受精能獲得する場合、それらは、アクロソーム反応する能力も獲得する表5。カフェイン、db-cAMP、およびIBMXの組み合わせは、受精能獲得の有効な誘発物質であるが、よりinvivo様の受精能獲得誘発が要求される場合、ヘパリンを用いる。ペグ化精子を、それらが成熟する能力について、具体的には、ヘパリン誘発方法を用いて、未ペグ化精子と比較する。a1日目-PercollTMPLUSを用いたウシ精子精製90PercollTMPLUS溶液は、10xNCMをPercollTMPLUSに加えることによって作る。次に、60単一層勾配を、1xNCMでの希釈によって作る。標準的な方法において、4mlの60PercollTMPLUS/NCMを、15mlファルコン管中に加えた後、液状増量剤標準的なトリス-卵黄、約1:4の卵黄-シトレート-グリセロール増量中の1.5mlの射精液を、静かに上部に装填し、そして室温において700xgで20分間遠心分離する。ペレットを除去し、8mlのNCM中において700xgで5分間の遠心分離によって1回洗浄する。次に、上澄みを除去し、そしてペレットを、1mlのNCM中に再懸濁させる。受精能獲得処置管を、5x107個細胞/mlの精子濃度で設定する。b1日目-フローサイトメトリー分析試料は、フローサイトメトリー分析用に次のように調製する。下の表6に示される成分を、200μlの最終容量中に5x105個のPercollTMPLUSで精製済みのウシ精子と一緒に、室温で10分間インキュベートし、同時に、ヨウ化プロピジウムpropidiumiodidePIを、フローサイトメトリーによって分析する直前に加える。c1日目-ウシ精子試料の一晩インキュベーションPercollTMPLUSで精製済みのウシ精子を、5x107個/mLの細胞濃度で、28°C水浴中においてNCM中で一晩インキュベートする。次に、その精子を、倒立明視野顕微鏡下でおよび/またはQualiSpermを用いて目視評価後、受精能獲得を誘発する。d2日目-非受精能獲得用基剤から受精能獲得用基剤への細胞の遷移一晩インキュベーション後、細胞を、CM表4中に希釈する。具体的には、1mlの一晩インキュベートした精子を、1mlのCM基剤で1:1に希釈する。受精能獲得のための活性剤、具体的には、カフェインおよびdb-cAMPを、1mMの最終濃度で加えインキュベーション開始後約16時間、そしてIBMXを、100mMの最終濃度で加える。或いは、ウシ精子受精能獲得は、ヘパリンまたはメチルβシクロデキストリンコレステロール受容体を用いて誘発する。次に、試料を37°Cで1時間インキュベートする。e2日目-受精能獲得済み精子のフローサイトメトリー分析次に、1日目と同様に、ウシ精子試料を、蛍光標識したSBTI、PNAおよびWGAと一緒に10分間インキュベートし、そしてPIを、フロー分析の直前に加える。実施例5invitro精子試験一連の実験をinvitroで行って、実施例4の精子成熟モデルにおいて精子機能性のいろいろな尺度を改善する精子ペグ化の能力を決定する。精子を、次の特性の変化について、ペグ化の有無で比較する:運動性;膜保全性;ミトコンドリア膜ポテンシャル;膜流動性;クロマチン保全性;脂質過酸化;受精能獲得;アクロソーム反応;精子表面または修飾された精子表面タンパク質への抗体、ヘパリンおよびレクチンの結合性;RFT中で移動する精子の能力;貪食作用への精子の耐性;および体外受精する精子の能力詳細については、表5を参照されたい。実施例6精子へのコレステロール-PEG-フルオレセインの結合ウシ精子およびヒトJurkat細胞に結合するコレステロール-PEG-フルオレセインの能力を、フローサイトメトリーによって次のように評価した。PercollTMPLUSで精製済みのウシ精子5x105個細胞を、0.1mg/mlのBSAを含有するNCM中で希釈し、そして1μg/mlか、または10μg/mlのコレステロール-PEG2000-フルオレセインまたはコレステロール-PEG5000-フルオレセインと一緒に37°Cで30分間インキュベートした。同様に、ヒトJurkat細胞5x105個を、PBS中で希釈し、そして1μg/mlかまたは10μg/mlのコレステロール-PEG2000-フルオレセインまたはコレステロール-PEG5000-フルオレセインと一緒に37°Cで30分間インキュベートした。インキュベーション後、試料を、NCM/BSAまたはPBSで洗浄し、そして細胞を、室温において3900rpmで7分間の遠心分離および上澄みの除去によって回収した。その細胞ペレットを、ウシ精子については、0.1mg/mlのBSAを含有する190μlのNCM中に、そしてJurkat細胞については、190μlのPBS中に再懸濁させた。次に、細胞を、フローサイトメトリーによって分析した。表7は、ウシ精子へのコレステロール-PEG-フルオレセインの結合についての研究結果を示す。表8は、ヒトJurkat細胞へのコレステロール-PEG-フルオレセインの結合についての研究結果を示す。実施例7反応性アミン基による精子細胞へのPEGの結合精子細胞に結合するN-ヒドロキシルスクシンイミドNHS-PEGの能力を、次のように調べた。0.1mg/mlのBSAを含有するNCM中の200μlの5x107個/mlの精子細胞を、100μg/mlの光保護されたNHS-10K-PEGまたはNHS-20K-PEGと一緒に37°Cで30分間インキュベートした。1mlのNCM中の60PercollTMPLUSを、2mL管中に入れ、そして各200μlの精子-PEG試料を、PercollTM勾配の上部に加層後、スイングバケットローター中において700xgで20分間遠心分離した。精子ペレットを取り出し、新しい管に入れた。NCM-BSAを、そのペレットに加えて、全容量を400μlとした。次に、40μlの細胞を、v底96ウェルプレートに移し、B47抗メトキシ-PEGウサギ単クローン性抗体Epitomicsで染色し、洗浄し、Alexa488抗ウサギ抗体で染色し、洗浄し、そして細胞を、フローサイトメトリーによって分析した。それら結果を、下の表9に示す。実施例8invivo現場人工授精試験妊娠を達成することは、雄雌双方の受精能に、そして更には、他の因子動物の管理、出産経歴、年齢、環境、授精手順等などに依存するので、したがって、通常は、試験に多数の動物を必要とするAmannandHammerstedt2002。少なくともウシについては、多数の精子/射精液、そして更には、慎重な研究設計が、多くの変動源を制御することができるということである。ウシの場合、AI試験は、授精に必要な精子数を、単独でDenDassetal1998かまたは、フローサイトメトリー選別Bodmeretal2005、増量剤組成または他の修飾Amannetal1999などの他の変数と一緒に調べるために行われてきた。基本設計は、数頭の雄牛および多数の雌牛を用いた精子用量反応であるDenDassetal1998。或いは、異なった雄からの精子の混合物での異種精子授精後、胎芽回収および遺伝子型決定を行うことは、修飾された精子の受精能を速やかに決定するのに用いることができるし、それをフローサイトメトリー選別するまたは表面修飾することができるDziuk1996Flintetal2003。参考文献AbuchowskiAMcCoyJRPalczukNCvanEsTandDavisFFEffectofcovalentattachmentofpolyethyleneglycolonimmunogenicityandcirculatinglifeofbovinelivercatalaseJBiolChem25235823586AbuchowskiAvanEsTPalczukNCandDavisFFAlterationofimmunologicalpropertiesofbovineserumalbuminbycovalentattachmentofpolyethyleneglycolJBiolChem25235783581AitkenRJBowieHBuckinghamDHarkissDRichardsonDWandWestKMSpermpenetrationintoahyaluronicacidpolymerasameansofmonitoringfunctionalcompetenceJAndrol134454AlghamdiASLovaasBJBirdSLLambGCRendahlAKTaubePCandFosterDNSpeciesspecificinteractionofseminalplasmaonspermneutrophilbindingAnimReprodSci114331344AlvarezJGandStoreyBTSpontaneouslipidperoxidationinrabbitandmouseepididymalspermatozoadependenceofrateontemperatureandoxygenconcentrationBiolReprod32342351AmannRPandHammerstedtRHDetectionofdifferencesinfertilityJAndrol23317325AmannRPSeidelGEJrandBrinkZAExposureofthawedfrozenbullspermtoasyntheticpeptidebeforeartificialinseminationincreasesfertilityJAndrol204246AndradeEVAlbuquerqueFCMoraesLMBrigidoMMandSantosSilvaMASinglechainFvwithFcfragmentofthehumanIgGltagconstructionPichiapastorisexpressionandantigenbindingcharacterizationJBiochem128891895AshworthPJHarrisonRAMillerNGPlummerJMandWatsonPFFlowcytometricdetectionofbicarbonateinducedchangesinlectinbindinginboarandramspermpopulationsMolReprodDev40164176BakerMAHetheringtonLReevesGMullerJandAitkenRJTheratspermproteomecharacterizedviaIPGstripprefractionationandLCMSMSidentificationProteomicsS23122321BakerMAHetheringtonLReevesGMandAitkenRJThemousespermproteomecharacterizedviaIPGstripprefractionationandLCMSMSidentificationProteomicsS17201730BallacheyBEEvensonDPandSaackeRGThespermchromatinstructureassayRelationshipwithalternatetestsofsemenqualityandheterospermicperformanceofbullsJAndrol9109115BodmerMJanettFHassigMdenDaasNReichertPandThunRFertilityinheifersandcowsafterlowdoseinseminationwithsexsortedandnonsortedspermunderfieldconditionsTheriogenology6416471655BrouwersJFandGadellaBMInsitudetectionandlocalizationoflipidperoxidationinindividualbovinespermcellsFreeRadicBiolMed3513821391CalveteJJMannKSanzLRaidaMandTopferPetersenETheprimarystructureofBSP30KamajorlipidgelatinandheparinbiridingglycoproteinofbovineseminalplasmaFEBSLett399147152CalveteJJandSanzLInsightsintostructurefunctioncorrelationsofungulateseminalplasmaproteinsSocReprodFertilSuppl65201215CenturionFVazquezJMCalveteJJRocaJSanzLParrillaIGarciaEMandMartinezEAInfluenceofporcinespermadhesinsonthesusceptibilityofboarspermatozoatohighdilutionBiolReprod69640646ChandonnetLRobertsKDChapdelaineAandManjunathPIdentificationofheparinbindingproteinsinbovineseminalplasmaMolReprodDev26313318ChenAMandScottMDCurrentandfutureapplicationsofimmunologicalattenuationviapegylationofcellsandtissueBioDrugs15833847ConstantineKLMadridMBanyaiLTrexlerMPatthyLandLlinasMRefinedsolutionstructureandligandbindingpropertiesofPDC109domainbAcollagenbindingtypeIIdomainJMolBiol223281298CrossNLandWatsonSKAssessingacrosomalstatusofbovinespermusingfluoresceinatedlectinsTheriogenology428998DapinoDGMariniPEandCabadaMOEffectofheparinoninvitrocapacitationofboarspermBiolRes39631639DavisGTBedzykWDVossEWandJacobsTWSinglechainantibodyencodinggenesonestepconstructionandexpressionineukaryoticcellsBiotechnology9165169deLamirandeEandGagnonCImpactofreactiveoxygenspeciesonspermatozoaabalancingactbetweenbeneficialanddetrimentaleffectsHumReprod10Suppl11521DenDaasJHDeJongGLansbergenLMandVanWagtendonkDeLeeuwAMTherelationshipbetweenthenumberofspermatozoainseminatedandthereproductiveefficiencyofindividualdairybullsJDairySci8117141723DesnoyersLandManjunathPMajorproteinsofbovineseminalplasmaexhibitnovelinteractionswithphospholipidJBiolChem2671014910155DostalovaZCalveteJJSanzLHettelCRiedelDSchoneckCEinspanierRandTopferPetersenEImmuriolocalizationandquantitationofacidicseminalfluidproteininejaculatedswimupandcapacitatedbullspermatozoaBiolChemHoppeSeyler375457461DostalovaZCalveteJJSanzLandTopferPetersenEBoarspermadhesinAWN1OligosaccharideandzonapellucidabindingcharacteristicsEurJBiochem230329336DrobnisEZandOverstreetJWNaturalhistoryofmammalianspermatozoainthefemalereproductivetractOxfRevReprodBiol14145DurandHandClanetMGeneticimprovementofTrichodermareeseiforlargescalecellulaseproductionEnzymeMicrobTechnol10341346DziukPJFactorsthatinfluencetheproportionofoffspringsiredbyamalefollowingheterospermicinseminationAnimalReproductionScience436588EhrlichPHMatsuedaGRMargoliesMNHusainSSandHaberEIsolationofanactiveheavychainvariabledomainfromahomogeneousrabbitantibodybycathepsinBdigestionoftheaminoethylatedheavychainBiochemistry1940914096EinspanierREinspanierAWempeFandScheitKHCharacterizationofanewbioactiveproteinfrombovineseminalfluidBiochemBiophysResCommun17910061010EkhlasiHundrieserMGohrKWagnerATsolovaMPetrunkinaAandTopferPetersenESpermadhesinAQNlisacandidatereceptormoleculeinvolvedintheformationoftheoviductalspermreservoirinthepigBiolReprod73536545EldinPPauzaMEHiedaYLinGMurtaughMPPentelPRandPennellCAHighlevelsecretionoftwoantibodysinglechainFvfragmentsbyPichiapastorisJImmunolMethods2016775EvensonDPDarzynkiewiczZandMelamedMRRelationofmammalianspermchromatinheterogeneitytofertilityScience21011311133FlintAFChapmanPLandSeidelGEJrFertilityassessmentthroughheterospermicinseminationofflowsortedspermincattleJAnimSci8118141822FocarelliRFrancavillaSFrancavillaFDeliaGiovampaolaCSantucciAandRosatiFAsialoglycoproteingp20ofthehumancapacitatedspermsurfaceisahomologueoftheleukocyteCD52antigenanalysisoftheeffectofantiCD52monoclonalantibodyoncapacitatedspermatozoaMolHumReprod54651FocarelliRGiuffridaACapparelliSScibonaMMenchiniFabrisFFrancavillaFFrancavillaSGiovampaolaCDandRosatiFSpecificlocalizationintheequatorialregionofgp20a20kDasialylglycoproteinofthecapacitatedhumanspermatozoonacquiredduringepididymaltransitwhichisnecessarytopenetratezonafreehamstereggsMolHumReprod4119125FocarelliRGiuffridaAandRosatiFChangesinthesialylglycoconjugatedistributiononthehumanspermsurfaceduringinvitrocapacitationpartialpurificationofa20kDasialylglycoproteinofcapacitatedspermatozoaHumReprod1027552759FreyreFMVazquezJEAyalaMCanaanHadenLBellHRodriguezIGonzalezACintadoAandGavilondoJVVeryhighexpressionofananticarcinoembryonicantigensinglechainFvantibodyfragmentintheyeastPichiapastorisJBiotechnol76157163FrijtersACMullaartERoelofsRMvanHoorneRPMorenoJFMorenoOandMertonJSWhataffectsfertilityofsexedbullsemenmorelowspermdosageorthesortingprocessTheriogenology716467GadellaBMandHarrisonRACapacitationinducescyclicadenosine35monophosphatedependentbutapoptosisunrelatedexposureofaminophospholipidsattheapicalheadplasmamembraneofboarspermcellsBiolReprod67340350GarciaEMVazquezJMCalveteJJSanzLCaballeroIParrillaIGilMARocaJandMartinezEADissectingtheprotectiveeffectoftheseminalplasmaspermadhesinPSPIPSPIIonboarspermfunctionalityJAndrol27434443GervasiMGRapanelliMRibeiroMLFarinaMBilliSFranchiAMandPerezMartinezSTheendocannabinoidsysteminbullspermandbovineoviductalepitheliumroleofanandamideinspermoviductinteractionReproduction137403414GillanLEvansGandMaxwellWMFlowcytometricevaluationofspermparametersinrelationtofertilitypotentialTheriogenology63445457GillanLKroetschTMaxwellWMandEvansGAssessmentofinvitrospermcharacteristicsinrelationtofertilityindairybullsAnimReprodSci103201214GoukaRJPuntPJandvandenHondelCAEfficientproductionofsecretedproteinsbyAspergillusprogresslimitationsandprospectsApplMicrobiolBiotechnol47111GreenwaldRBChoeYHMcGuireJandConoverCDEffectivedrugdeliverybyPEGylateddrugconjugatesAdvDrugDelivRev55217250GwathmeyTMIgnotzGGMuellerJLManjunathPandSuarezSSBovineseminalplasmaproteinsPDC109BSPA3andBSP30kDasharefunctionalrolesinstoringspermintheoviductBiolReprod75501507HarlowEandLaneDAntibodiesAlaboratoryManualHarperCVCummersonJAWhiteMRPublicoverSJandJohnsonPMDynamicresolutionofacrosomalexocytosisinhumanspermJCellSci12121302135HarrisJMandChessRBEffectofpegylationonpharmaceuticalsNatRevDrugDiscov2214221HawkHWSpermsurvivalandtransportinthefemalereproductivetractJDairySci6626452660HochmanJGavishMInbarDandGivolDFoldingandinteractionofsubunitsattheantibodycombiningsiteBiochemistry1527062710HorwitzAHChangCPBetterMHellstromKEandRobinsonRRSecretionoffunctionalantibodyandFabfragmentfromyeastcellsProcNatlAcadSciUSA8586788682HowesEAHurstSLaslopAandJonesRCellulardistributionandmolecularheterogeneityofMAC393antigenonthesurfacemembraneofbullspermatozoaMolHumReprod4673681HunterRHAdvancesindeeputerineinseminationafruitfulwayforwardtoexploitnewspermtechnologiesincattleAnimReprodSci79157170IgnotzGGChoMYandSuarezSSAnnexinsarecandidateoviductalreceptorsforbovinespermsurfaceproteinsandthusmayservetoholdbovinespermintheoviductalreservoirBiolReprod77906913InbarDHochmanJandGivolDLocalizationofantibodycombiningsiteswithinthevariableportionsofheavyandlightchainsProcNatlAcadSciUSA6926592662JacksonCJCharltonJLKuzminskiKLangGMandSehonAHSynthesisisolationandcharacterizationofconjugatesofovalbuminwithmonomethoxypolyethyleneglycolusingcyanuricchlorideasthecouplingagentAnalBiochem165114127JimenezIGonzalezMarquezHOrtizRHerreraJAGarciiABetancourtMandFierroRChangesinthedistributionoflectinreceptorsduringcapacitationandacrosomereactioninboarspermatozoaTheriogenology5911711180JohnsonLAFlookJPandHawkHWSexpreselectioninrabbitslivebirthsfromXandYspermseparatedbyDNAandcellsortingBiolReprod41199203JonesRMannTandSherinsRPeroxidativebreakdownofphospholipidsinhumanspermatozoaspermicidalpropertiesoffattyacidperoxidesandprotectiveactionofseminalplasmaFertilSteril31531537KatzDFDrobnisEZandOverstreetJWFactorsregulatingmammalianspermmigrationthroughthefemalereproductivetractandoocytevestmentsGameteRes22443469KeranenSandPenttilaMProductionofrecombinantproteinsinthefilamentousfungusTrichodermareeseiCurrOpinBiotechnol6534537KillianGJChapmanDAandRogowskiLAFertilityassociatedproteinsinHolsteinbullseminalplasmaBiolReprod4912021207KnappikAGeLHoneggerAPackPFischerMWellnhoferGHoessAWolleJPluckthunAandVirnekasBFullysynthetichumancombinatorialantibodylibrariesbasedonmodularconsensusframeworksandCDRsrandomizedwithtrinucleotidesJMolBiol2965786KoderaYMatsushimaAHirotoMNishimuraHIshiiAUenoTandInadaTPegylationofproteinsandbioactivesubstancesformedicalandtechnicalapplicationsProgressinPolymerScience2312331271KohlerGandMilsteinCDerivationofspecificantibodyproducingtissuecultureandtumorlinesbycellfusionEurJImmunol6511519KoppersAJDeIuliisGNFinnieJMMcLaughlinEAandAitkenRJSignificanceofmitochondrialreactiveoxygenspeciesinthegenerationofoxidativestressinspermatozoaJClinEndocrinolMetab9331993207KrebsBRauchenbergerRReiffertSRotheCTesarMThomassenECaoMDreierTFischerDHossAetalHighthroughputgenerationandengineeringofrecombinanthumanantibodiesJImmunolMethods2546784LaneMTherienIMoreauRandManjunathPHeparinandhighdensitylipoproteinmediatebovinespermcapacitationbydifferentmechanismsBiolReprod60169175LefebvreJFanJChevalierSSullivanRCarmonaEandManjunathPGenomicstructureandtissuespecificexpressionofhumanandmousegenesencodinghomologuesofthemajorbovineseminalplasmaproteinsMolHumReprod134553LightfootRJandRestallBJEffectsofsiteofinseminationspermmotilityandgenitaltractcontractionsontransportofspermatozoaintheeweJReprodFertil26113LuKHandSeidelGEJrEffectsofheparinandspermconcentrationoncleavageandblastocystdevelopmentratesofbovineoocytesinseminatedwithflowcytometricallysortedspermTheriogenology62819830MaccarroneMEndocannabinoidsfriendsandfoesofreproductionProgLipidRes45344354MaccarroneMBarboniBParadisiABernaboNGasperiVPistilliMGFezzaFLucidiPandMattioliMCharacterizationoftheendocannabinoidsysteminboarspermatozoaandimplicationsforspermcapacitationandacrosomereactionJCellSci11843934404MahmoudAIandParrishJJOviductfluidandheparininducesimilarsurfacechangesinbovinespermduringcapacitationaflowcytometricstudyusinglectinsMolReprodDev43554560ManjunathPBergeronALefebvreJandFanJSeminalplasmaproteinsfunctionsandinteractionwithprotectiveagentsduringsemenpreservationSocReprodFertilSuppl65217228ManjunathPandSairamMRPurificationandbiochemicalcharacterizationofthreemajoracidicproteinsfrombovineseminalplasmaBiochemJ241685692ManjunathPandTherienIRoleofseminalplasmaphospholipidbihdingproteinsinspermmembranelipidmodificationthatoccursduringcapacitationJReprodImmunol53109119MatthijsAEngelBandWoeldersHNeutrophilrecruitmentandphagocytosisofboarspermatozoaafterartificialinseminationofsowsandtheeffectsofinseminatevolumespermdoseandspecificadditivesintheextenderReproduction125357367MaxwellWMdeGraafSPGhaouiRelHandEvansGSeminalplasmaeffectsonspermhandlingandfemalefertilitySocReprodFertilSuppl641338MedeirosCMandParrishJJChangesinlectinbindingtobovinespermduringheparininducedcapacitationMolReprodDev44525532MitchellJRSengerPLandRosenbergerJLDistributionandretentionofspermatozoawithacrosomalandnuclearabnormalitiesinthecowgenitaltractJAnimSci61956967MouraAAKocHChapmanDAandKillianGJIdentificationofproteinsintheaccessorysexglandfluidassociatedwithfertilityindexesofdairybullsaproteomicapproachJAndrol27201211MullinsKJandSaackeRGStudyofthefunctionalanatomyofbovinecervicalmucosawithspecialreferencetomucussecretionandspermtransportAnatRec225106117NagySJansenJTopperEKandGadellaBMAtriplestainflowcytometricmethodtoassessplasmaandacrosomemembraneintegrityofcryopreservedbovinespermimmediatelyafterthawinginpresenceofeggyolkparticlesBiolReprod6818281835NaucVandManjunathPRadioimmunoassaysforbullseminalplasmaproteinsandtheirquantificationinseminalplasmaandspermBiolReprod6310581066NevalainenHSuominenPandTaimistoKOnthesafetyofTrichodermareeseiJBiotechnol37193200NyyssonenEPenttilaMHarkkiASaloheimoAKnowlesJKandKeranenSEfficientproductionofantibodyfragmentsbythefilamentousfungusTrichodermareeseiBiotechnology11591595OrenBenaroyaRKipnisJandEisenbachMPhagocytosisofhumanpostcapacitatedspermatozoabymacrophagesHumReprod2229472955PennellCAandEldinPInvitroproductionofrecombinantantibodyfragmentsinPichiapastorisResImmunol149599603PuntPJvanBiezenNConesaAAlbersAMangnusJandvandenHondelCFilamentousfungiascellfactoriesforheterologousproteinproductionTrendsBiotechnol20200206RadzioRandKuckUSynthesisofbiotechnologicallyrelevantheterologousproteinsinfilamentousfungiProcessBiochem32529539RathiRColenbranderBBeversMMandGadellaBMEvaluationofinvitrocapacitationofstallionspermatozoaBiolReprod65462470RauchenbergerRBorgesEThomassenWolfERomEAdarRYanivYMalkaMChumakoVjIKotzerSResnitzkyDetalHumancombinatorialFablibraryyieldingspecificandfunctionalantibodiesagainstthehumanfibroblastgrowthfactorreceptor3JBiolChem2783819438205RidderRSchmitzRLegayFandGramHGenerationofrabbitmonoclonalantibodyfragmentsfromacombinatorialphagedisplaylibraryandtheirproductionintheyeastPichiapastorisBiotechnology13255260RobertsMJBentleyMDandHarrisJMChemistryforpeptideandproteinPEGylationAdvDrugDelivRev54459476SaekiKNagaoYHoshiMandNagaiMEffectsofheparinspermconcentrationandbullvariationoninvitrofertilizationofbovineoocytesinaproteinfreemediumTheriogenology43751759SalicioniAMPiattMDWertheimerEVArcelayEAllaireASosnikJandViscontiPESignallingpathwaysinvolvedinspermcapacitationSocReprodFertilSuppl65245259SchroterSOsterhoffCMcArdleWandIvellRTheglycocalyxofthespermsurfaceHumReprodUpdate5302313ScottMDMuradKLKoumpourasFTalbotMandEatonJWChemicalcamouflageofantigenicdeterminantsstealtherythrocytesProcNatlAcadSciUSA9475667571SeniorJDelgadoCFisherDTilcockCandGregoriadisGInfluenceofsurfacehydrophilicityofliposomesontheirinteractionwithplasmaproteinandclearancefromthecirculationstudieswithpolycoatedvesiclesBiochimBiophysActa10627782ShapiroHMNatalePJandKamentskyLAEstimationofmembranepotentialsofindividuallymphocytesbyflowcytometryProcNatlAcadSciUSA7657285730SharpeJCandEvansKMAdvancesinflowcytometryforspermsexingTheriogenology71410SteinKKGoJCLaneWSPrimakoffPandMylesDGProteomicanalysisofspermregionsthatmediatespermegginteractionsProteomics635333543StoreyBTBiochemistryoftheinductionandpreventionoflipoperoxidativedamageinhumanspermatozoaMolHumReprod3203213StoreyBTMammalianspermmetabolismoxygenandsugarfriendandfoeIntJDevBiol52427437SwennenDPaulMFVernisLBeckerichJMFournierAandGaillardinCSecretionofactiveantiRassinglechainFvantibodybytheyeastsYarrowialipolyticaandKluyveromyceslactisMicrobiology1484150TaitzoglouIAKokoliANandKillianGJModificationsofsurfacecarbohydratesonbovinespermatozoamediatedbyoviductalfluidaflowcytometricstudyusinglectinsIntJAndrol30108114TedeschiGOungreEMortarinoMNegriAMaffeoGandRonchiSPurificationandprimarystructureofanewbovinespermadhesinEurJBiochem26761756179TeijeiroJMIgnotzGGandMariniPEAnnexinA2isinvolv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