"Mdm2アンタゴニストの存在下で実施することを特徴とする、インフルエンザウイルス、特にワクチンシードの製造方法。前記Mdm2アンタゴニストは、前記インフルエンザウイルスの製造を量的に改善するのに使用されることを特徴とする、請求項1に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。前記Mdm2アンタゴニストは、Mdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤であることを特徴とする、請求項1又は2に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。前記インフルエンザウイルスは、A型、B型及びC型、特にA型インフルエンザウイルスの亜型であるH1N1株、H2N2株、H3N2株、H4N2株、H4N6株、H5N1株、H5N2株、H7N7株及びH9N2株、特にA型H3N2ウイルスから選択されることを特徴とする、請求項1~3に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。ヒト以外の細胞システムで実施し、該細胞システムにはインフルエンザウイルスを感染させ、その感染前、感染後又は感染と同時に前記Mdm2アンタゴニストを添加することを特徴とする、請求項1~4のいずれか1項に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。発育鶏卵の尿膜細胞で実施することを特徴とする、請求項1~5のいずれか1項に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。invitroでの細胞培養により実施することを特徴とする、請求項1~5のいずれか1項に記載の製造方法。CHO、MDCK、COS、CV-1、Vero、BHK21、PERC6、A549、HEK、HeLa、AGE1.CR、AGE1.CR.pIX、EB66、EBx、及び、Hep-2から選択される細胞株においてinvitroで実施することを特徴とする、請求項7に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。a発育鶏卵、又は、細胞培地中の細胞株の細胞のいずれかであってもよい細胞システムにインフルエンザウイルス、特にインフルエンザワクチンシードを感染させる工程、b前記インフルエンザウイルス、特にインフルエンザワクチンシードを複製できる条件下で、工程aで選択、感染させた製造用細胞システムを培養する工程、並びに、c培養上清及び/又は培養細胞中に製造されたインフルエンザウイルス全粒子、特にワクチンシードを回収する工程を有することを特徴とする、請求項1~8のいずれか1項に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。工程cで回収した前記ウイルスを不活化する工程を有することを特徴とする、請求項9に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。前記ウイルスは、野生型ウイルス、感染個体から得られた一次ウイルス分離株、組換ウイルス、弱毒化ウイルス、リアソートメントにより得られたウイルス、又は、逆遺伝学的に製造されたウイルスであることを特徴とする、請求項1~10のいずれか1項に記載のインフルエンザウイルスの製造方法。前記Mdm2アンタゴニストは、Mdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤であり、イミダゾリン誘導体、イミダゾール誘導体、オキシインドール誘導体、スピロインドリノン誘導体、キノリン誘導体特にイソキノリン誘導体、ビスアリールスルホンアミド誘導体、ベンゾジアゼピン誘導体、ピペリジン誘導体、フェノキシ酢酸誘導体、フェノキシメチルテトラゾール誘導体、カルコン誘導体、テトラゾール誘導体、ジスルフィド誘導体、ジアミノアリール誘導体、及び、ペプチド誘導体から選択されることを特徴とする、請求項1~11のいずれか1項に記載の製造方法。前記Mdm2アンタゴニストは、Mdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤であり、下記式:で表されるNutlin-3±-4-[4,5-ビス4-クロロフェニル-2-2-イソプロポキシ-4-メトキシフェニル-4,5-ジヒドロイミダゾール-1-カルボニル]ピペラジン-2-オン、下記式:で表されるNSC66811分子2-メチル-7-[フェニルフェニルアミノメチル]-8-キノリノール、及び、下記式:で表される各分子から選択されることを特徴とする、請求項1~12のいずれか1項に記載の方法。請求項1~13のいずれか1項に記載の方法によりインフルエンザウイルスを製造することを特徴とする、インフルエンザウイルスワクチンの調製方法。請求項1~13のいずれか1項に記載の方法により製造したインフルエンザウイルス全粒子を用いて抗原性表面タンパク質を製造することを特徴とする、請求項13に記載のワクチンの調製方法。得られたワクチンは、死滅病原体又は生きた弱毒化病原体に相当することを特徴とする、請求項14又は15に記載の方法。本発明は、Mdm2活性への拮抗作用、とりわけ、p53-Mdm2相互作用を阻害する作用がインフルエンザウイルスの複製サイクルに影響を及ぼすという予想されなかった観察結果に基づいている。こうして、本発明は、Mdm2タンパク質アンタゴニストの存在下で実施することを特徴とする、インフルエンザウイルス及びワクチンシードの新規な製造方法を提供する。Mdm2タンパク質アンタゴニストは、特に上記インフルエンザウイルスの製造を量的に改善するのに使用されるものであり、従来技術には開示も示唆もされていない。特定の一実施形態によれば、Mdm2タンパク質アンタゴニストは、Mdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤である。本発明を詳述する前に、本発明の文脈で使用される用語の明確な定義を記載する。インフルエンザウイルスとは、あらゆるインフルエンザウイルスを意味するものであり、特にヒト、トリ、ウマ、ブタ及びネコの各インフルエンザウイルスを意味するものである。上記インフルエンザウイルスは、A型、B型及びC型から選択できる。特に、上記インフルエンザウイルスはA型であってもよく、特にH1N1株、H2N2株、H3N2株、H4N2株、H4N6株、H5N1株、H5N2株、H7N7株及びH9N2株、特にAH1N1型ウイルス及びAH3N2型ウイルスであってもよい。H1N1株の具体例としては、A/ポルトリコ/8/34A/PR/8/34とも言う、A/ニューカレドニア/20/99、A/北京/262/95、A/ヨハネスブルグ/282/96、A/テキサス/36/91、及び、A/カリフォルニア/969/09AH1N1sov等が挙げられる。H3N2株の具体例としては、A/パナマ/2007/99、A/モスクワ/10/99、及び、A/ヨハネスブルグ/33/94等が挙げられる。B型インフルエンザウイルスとしては、例えばB/ポルトリコ/8/34、B/ヨハネスブルグ/5/99、B/ウィーン/1/99、B/アナーバー/1/86、B/メンフィス/1/93、B/ハルビン/7/94、N/山東/7/97、B/香港/330/01、及び、B/山梨/166/98型等が挙げられる。由来を問わず全てのインフルエンザウイルスが本発明の対象ではあるが、本発明は、ヒトインフルエンザウイルス、特にヒト個体群で循環するインフルエンザウイルスに対して最も有益である。特定の一実施形態によれば、インフルエンザウイルスは、ヒトAH1N1型ウイルス及びヒトAH3N2型ウイルスから選択される。本発明の文脈において、ウイルスとは、野生型ウイルス、感染個体から得られた一次ウイルス分離株、組換ウイルス、弱毒化ウイルス、リアソートメントにより得られたウイルス、及び、逆遺伝学的に製造されたウイルスを包含する。ワクチンの製造に使用されるワクチンシードは、多くの場合、遺伝子リアソートメントにより又は逆遺伝学的に得られ、従って、ワクチンシードは本発明におけるウイルスの一具体例である。現在、従来のワクチン製造方法は、各インフルエンザウイルスについてWHOが毎年定めるプロトタイプシード3種それぞれに対し、A/PR8/34H1N1株を用いた遺伝子リアソートメントにより鶏卵においてワクチンシードを得ることを第一の基礎としている。ほとんどのワクチン製造業者は、通常、これらの主にA/PR/8/34親ウイルスに由来するリアソータントウイルスを使用している。従って、ワクチンシードはそれぞれ、プロトタイプ株と、鶏卵内での所望の複製能を有するA/PR8/34H1N1ウイルスとの遺伝子リアソートメントのプロセスの結果として得られる。野生型インフルエンザウイルス自然循環するウイルスであるプロトタイプウイルスとしても知られるのウイルス粒子には、一本鎖RNAで構成された異なる遺伝子セグメント分節8本が含まれており、各遺伝子は、ウイルスのタンパク質:HA、NA、M1、M2、NP、NS1、NEP、PB1、PB1F2、PB1N40、PB2及びPAのうち所定の1~3種をコードする。リアソートメントにより得られたワクチンシードは、大量生産に適合したプロトタイプウイルス現時点では、A/PR/8/34親株組成62に相当するの遺伝的背景に基づいて、少なくともプロトタイプ株のHA及びNAをコードする遺伝子セグメントを含むリアソータントワクチンに相当する。このような遺伝子リアソートメントの結果、3種類の年次プロトタイプ株ワクチンシードとして知られるから得られたリアソータントワクチンは、その後、鶏卵内で又は細胞培養により増幅することができる。現在のところ、工業規模では鶏卵システムが非常に広く用いられている。ここ数年で開発された他のワクチンシードの製造手法として逆遺伝学に基づくものも挙げられるが、逆遺伝学によるワクチンシードの製造は、WHOによって認可、登録された方法ではない。どのような手法がワクチンシードの製造に採用されたとしても、多くの場合、ワクチンは、尿膜細胞又はinvitro細胞培養で製造されたワクチンシードを精製したHA及びNA抗原に相当する。ワクチンにおいて、場合によっては、これらの糖タンパク質をアジュバントと組み合わせてもよい。現在、ワクチン量は一定量のHA抗原によって定義されている1回分当たり15μg/ウイルス亜型。ワクチンバッチのバリデーションには、NA抗原の陽性検出が必要である。本発明の文脈において、Mdm2アンタゴニストとは、Mdm2と相互に作用して、その生物活性を少なくとも部分的にブロックできる分子を意味するものである。中でも、本発明の文脈において、使用されるMdm2アンタゴニストは、Mdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤のように作用するものである。Mdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤とは、p53タンパク質とMdm2タンパク質との相互作用を妨げる化合物と定義できる。これらの化合物は、例えばMdm2標的アンチセンスデオキシヌクレオチド、より広義にはペプチド性又は非ペプチド性低分子量分子であり、p53とMdm2との界面に結合して、それらの会合を妨げる。ガン抑制タンパク質p53は、細胞周期、アポトーシス、DNA修復、及び、多くの代謝経路を制御するのに中心的な役割を担っている。その中心的な位置付けのため、p53タンパク質は、ヒトのガンにおいて突然変異するタンパク質として最も一般的なものである。実際、50近くのガンにおいてp53遺伝子の突然変異が見られ、該タンパク質の不活化又は喪失が引き起こされる。更に広く見れば、ほとんどの場合、ガンにおいてp53の機能は阻害される。通常の条件下では、p53の活性及び量は、Mdm2タンパク質Murinedoubleminute2、Hdm2としても知られるによって厳密に制御されている。このユビキタスタンパク質はE3ユビキチンリガーゼであり、特に、p53と直接、相互作用することができる。これら2つのタンパク質の複合体の形成は、自己調節ループの工程であり、すなわち、p53は活性化されると、Mdm2のP2プロモーターと結合してMdm2の転写及び発現を誘導する。一方、Mdm2はと言うと、p53と結合することができ、様々なメカニズムでp53を阻害することができるp53転写活性化能の阻害、p53の細胞核からの非局在化、及び、プロテアソームによるp53の分解Freedmanetal.,CellMolLifeSci.,1999Jan,551,96-107。本発明の文脈では、任意のMdm2アンタゴニスト、特にMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の任意の阻害剤を使用できる。このような化合物が有する特性のうち、最も周知であるのは、p53タンパク質の活性の誘導及び細胞増殖の阻害である。p53タンパク質とMdm2タンパク質との相互作用には、両パートナーのアミノ末端領域が関与している。これらの相互作用領域は、酵母ツーハイブリッド法だけでなく免疫沈降法でも確認されている。上記領域は、p53では領域1~41/52に相当し、Mdm2では領域1/19~118/202に相当する。部位特異的突然変異誘発実験から、Mdm2との相互作用において重要な、p53上のいくつかの残基:Leu14、Phe19、Leu22及びTrp23が示されたKleinC,etal.,Br.J.Cancer,2004Oct18;918:1415-9。p53タンパク質とMdm2タンパク質との相互作用を阻害する化合物の有効性を評価する主な方法は、阻害される生物学的パラメータ、すなわちp53/Mdm2相互作用の関数として反応曲線を作成することによって、50阻害濃度IC50及び間接的には阻害定数Cheng-Prusoff式によるKiを算出する方法である。例えば、表面プラズモン共鳴SPR、Biocore測定によって阻害分子をMdm2と競合させることでIC50値を算出できる。Vassilevetal.,Science.,2004Feb6;3035659:844-8に記載されるように、様々な濃度の化合物をMdm2組換タンパク質と培養し、p53組換タンパク質がグラフトされたチップを備えた容器SPRに注入する。他に、蛍光測定法に基づいた試験を採用してもよいKaneetal.,AnalBiochem.,2000Feb1;2781:29-38;Luetal.,J.Med.Chem.,2006Jun29;4913:3759-62。Nutlin-3等の分子ファミリーの場合、該化合物のIC50値は約100~300nmであるVassilevetal.,2004上記文献。NSC66811分子の場合、Ki定数は120nMであるLuetal.,2006上記文献。このような競合実験では、p53由来の天然ペプチド、特にp53の残基13~29に対応するペプチド、及び、SEQIDNo.1:PLSQETFSDLWKLLPEN-NH2のペプチドをコントロールとして導入することができるLuetal.,2006上記文献を参照、この文献において測定及び記載されたKi定数:6670nM。本発明の文脈では、特に、上記文献Vassilevetal.,2004、Kaneetal.,2000、Luetal.,2006に記載された競合試験の少なくとも1つにおいて上記ペプチドより低いKi値又はIC50値を示す化合物を、Mdm2/p53相互作用の阻害剤と考慮している。より一般的には、上記文献Luetal.,2006及び補足情報JM060023に記載された競合試験において、10μM未満、好ましくは5μM未満、更に好ましくは1μM未満のKi値を示す化合物が好ましい。本発明の文脈において使用できるMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤の例として、イミダゾリン誘導体特に米国特許第6,734,302号明細書;国際公開第03/051359号;国際公開第2007/082805号;国際公開第2007/063013号;欧州特許第1463501号明細書;国際公開第2006/097261号;米国特許出願公開第2008/0255119号明細書;及び、国際公開第2008/130614号に記載のもの、イミダゾール誘導体特に国際公開第2008/130614号明細書;及び、国際公開第2008/119741号に記載のもの、オキシインドール誘導体特に米国特許第7,576,082号明細書;及び、国際公開第2008/034736号に記載のもの、スピロインドリノン誘導体特に欧州特許第1856123号明細書;J.Med.Chem.,2006,49,3432-5;米国特許出願公開第60/781958号明細書;米国特許第7,495,007号明細書;国際公開第2007/104714号;及び、国際公開第2008/141975号に記載のもの、キノリン誘導体、特にイソキノリン誘導体特に国際公開第2008/034039号;米国特許出願公開第2009/0068144号明細書;及び、ChemMedChem,2008,3,1118-28に記載のもの、ビスアリールスルホンアミド誘導体特に欧州特許第1519932号明細書に記載のもの、ベンゾジアゼピン誘導体特にJ.Med.Chem.,2005,48,909-12;欧州特許第1443937号明細書;及び、米国特許第7,115,598号明細書に記載のもの、ピペリジン誘導体特に米国特許第7,060,713号明細書;及び、国際公開第2008/005268号に記載のもの、フェノキシ酢酸誘導体及びフェノキシメチルテトラゾール誘導体特に欧州特許第0947494号明細書に記載のもの、カルコン誘導体特にBiochemistry,2001,40,336-44;及び、米国特許第7,514,579号明細書に記載のもの、テトラゾール誘導体特に米国特許出願公開第2008/0262200号明細書に記載のもの、ジスルフィド誘導体特に米国特許出願公開第2009/008553号明細書に記載のもの、ジアミノアリール誘導体特に国際公開第2006/032631号;国際公開第2007/107543号;及び、国際公開第2007/107545号に記載のもの並びにペプチド誘導体特にBottgeretal.,ResearchPaper,711,1997,860-9に記載のもの等、従来技術においてMdm2タンパク質の阻害剤として記載されたものが挙げられる。これらの阻害剤の概要については、LutzWeber,ExpertOpin.Ther.Patents,2010,202,179-190及びShangaryetal.,AnnuRevPharmacolToxicol.,2009;49:223-41に記載されており、詳細についても上記文献を参照されたい。より具体的な例として、下記式:で表されるNutlin-3±-4-[4,5-ビス4-クロロフェニル-2-2-イソプロポキシ-4-メトキシフェニル-4,5-ジヒドロイミダゾール-1-カルボニル]ピペラジン-2-オンVassilevetal.,Science,2004Feb6,3035659,844-8に記載されるもの、腫瘍学的治験において2つの第I相試験の対象である、下記式:で表されるNSC66811分子2-メチル-7-[フェニルフェニルアミノメチル]-8-キノリノール、及び、下記式:式中、X、Y、R1、R2、R3、R4及びR5は、国際公開第2008/119741号の記載と同義であるで表される各分子が挙げられる。これらの分子はガン治療の用途で知られているが、インフルエンザウイルスの製造を量的に改善する用途は今まで予見されていなかった。本発明がなす貢献は、Mdm2アンタゴニスト、好ましくはMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤をインフルエンザウイルス又はワクチンシードの製造に使用する点にある。その製造にはあらゆる手法を用いることができる。インフルエンザウイルス又はワクチンシードは、Mdm2アンタゴニスト、特にMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤の存在下、細胞システムにおいて製造される。Mdm2アンタゴニスト、特にMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤の効果は、当業者によって調整される複数のパラメータ、すなわち阻害剤の量、阻害剤を添加するタイミング、感染時の初期ウイルス量、製造時間によって影響される。例えば、Mdm2アンタゴニスト、特にMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤は、濃度0.1~100μMで使用される。特に、Nutlin-3等のイミダゾール誘導体を使用する場合、濃度は1μM~10μM程度であることが好ましく、NSC66811等のキノリン誘導体を使用する場合、濃度は0.5μM~5μM程度であることが好ましい。選択した細胞システム鶏卵又は培養細胞にインフルエンザウイルス又はインフルエンザワクチンシードを感染させる。Mdm2アンタゴニスト、特にMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤は、感染前、感染後又は感染と同時に添加できる。ウイルス、特にワクチンシードは、発育鶏卵の尿膜細胞で、又は、invitroでの細胞培養により製造できる。使用する細胞の種類は、細胞培養、ウイルスの複製及び製造、並びに、ウイルス抗原の製造に好適なものであれば特に限定されない。上記細胞は、ヒト由来若しくはその他動物由来の哺乳類細胞、鳥類細胞又は昆虫細胞から選択されることが有利である。哺乳類細胞としては、特にヒト細胞由来、ブタ細胞由来又はイヌ細胞由来の培養細胞が挙げられる。特に、肺上皮細胞由来の細胞ヒト肺ガン細胞A549CCL-185等や腸管上皮細胞由来の細胞Caco-2ATCC:HTB-37であってもよい。また、哺乳類細胞としては、以下の細胞等も挙げられる。SJPLブタ肺上皮細胞特にATCCに寄託されたPTA-3256細胞株米国特許出願公開第2004/0142450号明細書及び国際公開第2009/059411号等イヌ由来MDCK細胞BHK21CCL-10、MesocricetusauratusハムスターヒトHOS細胞特にCRL-1543細胞株等特定の一実施形態において、上記細胞は細胞培養に適合した鳥類細胞であり、例えば以下の細胞等が挙げられる。CCL-141AnasplatyrhynchusdomesticusCRL-12135Gallusgallus、ConA-C1VICKCRL-12203Gallusgallus、UMNSAH/DF-1CRL-12357Gallusgallus、ConA-B1-VICKCRL-1590Gallusgallus、SL-29CRL-1708Coturnixcoturnixjaponica、QT6CRL-1962Coturnixcoturnixjaponica、QM7Quailmuscleclone7CRL-2111Gallusgallusニワトリ、DT40CRL-2112Gallusgallusニワトリ、DT95CRL-8135Meleagrisgallopavoシチメンチョウ、MDTC-RP19ATCCに寄託されたQM7筋芽細胞株CRL-1632、米国特許出願公開第2005/0084503号に記載されるもの他の鳥類細胞株も当業者に公知であり、使用できる。上記細胞は特に鳥類胚細胞であってもよい。国際公開第03/076601号及び国際公開第2008/129058号には、EB66及びEBx細胞株が記載されている。Lohrらは、ウイルスの増殖用又は複製用のAGE1.CR及びAGE1.CR.pIX鳥類細胞株の樹立を記載している。また、国際公開第2009/004016号には、ウイルス製造用に不死化させた鳥類細胞及びその作製方法が記載されている。特定の一実施形態によれば、上記細胞は、MDCK細胞、Vero細胞及びA549細胞から、通常はインフルエンザウイルス製造に使用される鳥類細胞株から選択される。MDCK細胞は、例えば米国特許出願公開第2006/0188977号明細書及び欧州特許第1862537号明細書に記載されている。特に、MDCK-SF101ATCC:PTA-6501、MDCK-SF102ATCC:PTA-6502、及び、MDCK-SF103ATCC:PTA-6503といった細胞株が挙げられる。上記細胞は、例えば以下の細胞から選択される。Vero細胞、特にCCL-81Cercopithecusaethiops、Vero細胞株CHO細胞、特にCRL-12444Cricetulusgriseusチャイニーズハムスター及びCHODP-12clone1933aIL8.92NB28605/12細胞株MDCK細胞、特にCCL-34Canisfamiliaris、MDCKNBL-2細胞株COS細胞、特にCRL-1650Cercopithecusaethiops、COS-1細胞株、CRL-1651Cercopithecusaethiops、COS-7細胞株CV1細胞、特にCCL-70Cercopithecusaethiops、CV-1細胞株HeLa細胞Hep-2細胞CV-1、CV-C、Vero及びBSC-1細胞株をウイルス製造に使用することは、例えば米国特許第6,303,371号明細書に記載されている。有利な実施形態において、上記細胞は、CHO、MDCK、COS、CV-1、Vero、BHK21、PERC6、A549、HEK、HeLa、AGE1.CR、AGE1.CR.pIX、EB66、EBx、及び、Hep-2から選択される。上記細胞は、医療用途での細胞培養によるウイルス製造が規制当局により認可された細胞株から選択されることが有利である。特定の一実施形態によれば、本発明に係るインフルエンザウイルスの製造方法は、a発育鶏卵、又は、細胞培地中の細胞株の細胞のいずれかであってもよい細胞システムにインフルエンザウイルス、特にインフルエンザワクチンシードを感染させる工程、b上記インフルエンザウイルス、特にインフルエンザワクチンシードを複製できる条件下で、工程aで選択、感染させた製造用細胞システムを培養する工程、並びに、cインフルエンザウイルス全粒子、特にワクチンシード、特に培養上清及び/又は培養細胞中に製造されたインフルエンザウイルス全粒子、特にワクチンシードを回収する工程を有する。鶏卵システムの場合にはinvivoで培養し、細胞株の場合にはinvitroで培養する。Mdm2アンタゴニスト、特にMdm2タンパク質とp53タンパク質との相互作用の阻害剤は、任意のインフルエンザウイルス、特に野生型ウイルス、感染個体から得られた一次ウイルス分離株、組換ウイルス、弱毒化ウイルス、リアソートメントにより得られたウイルス、又は、逆遺伝学的に製造されたウイルスを製造する際に使用できる。特定の一実施形態によれば、上記製造は細胞システムにおいてinvitroで実施できる。好ましくは無血清培地、より好ましくは動物由来タンパク質フリー培地調整済みcalibrated合成培地である細胞培地で、選択したインフルエンザウイルスを細胞株の細胞に感染させる。特定の一実施形態によれば、感染細胞は、蛋白質分解酵素の存在下、培地において、ウイルスが上記培地で確実に十分に増殖できる条件下で培養される。上記蛋白質分解酵素は、例えば、トリプシン、キモトリプシン、サーモリシン、ペプシン、パンクレアチン、パパイン、プロナーゼ、サブチリシンA、エラスターゼ、フーリン及びカルボキシペプチダーゼから選択される。該酵素は、組換酵素であること、すなわち動物由来ではないことが有利である。インフルエンザウイルスの分節性によって、本発明に係る方法はリアソータントインフルエンザウイルスの製造にも適用できる。この場合、選択した細胞システムを少なくとも2種類のインフルエンザウイルス株に感染させるため、2種類のウイルス株に由来するセグメント分節の混合物が一つの宿主細胞で製造されることとなる。ウイルスの構築の際、ウイルス断片には理論上あらゆる組み合わせが考えられる。新規な組み合わせはリアソータントと呼ばれる。抗体等を用いて他のウイルスを抑制又は排除することにより、特定のリアソータントを選択することができる。ワクチンシードはこのような方法で生成される。このような手法についての詳細は、KilnourneE.D.,PlotkinSAandMortimerE.A.Eds,Vaccines,1994を参照されたい。また、本発明に係る方法は、逆遺伝学的なインフルエンザウイルスの製造にも適用できる。特に、細胞に発現プラスミドをトランスフェクトすることで組換ウイルスを製造できるJGenVirol.,2000Dec;81Pt12:2843-7。また、それほど広くは採用されていないが、精製タンパク質、特に精製NP、PB1、PB2及びPAタンパク質の存在下、invitroでcDNAコンストラクトから転写したインフルエンザウイルスRNAの修飾転写物を用いる手法もある。得られた合成リボ核粒子は、その後、事前にインフルエンザウイルスを感染させておいた細胞に転写する。この手法についての詳細は、Enami,Proc.Natl.Acad.Sci.8th,1990,3802-3805、EnamiandPalese,J.Virol.,1991,65,2511-25131991及びLuytjes,Cell.,1989,59,1107-1113を参照されたい。本発明の文脈において、特定の一実施形態によれば、本発明に係るインフルエンザウイルス、特にワクチンシードの製造方法は、回収したウイルスを不活化する工程を有していてもよい。不活化は任意の公知手法で実施でき、例えば、ホルムアルデヒド、β-プロピオラクトン、エーテル、界面活性剤Tween-80等添加エーテル、セチルトリメチルアンモニウムブロミドCTAB、TritonN102、デオキシコール酸ナトリウム、又は、リン酸トリ-N-ブチルで処理することで実施できる。本発明に係るウイルス、特にワクチンシードの製造方法は、ワクチンの製造方法に含まれていてもよい。この場合、本発明に係るワクチンの調製方法は、製造したインフルエンザウイルス全粒子から抗原性表面タンパク質HA及びNAを製造する工程を有する。この際、場合によっては、得られたウイルス全粒子を含む培地、特に上清をデオキシリボ核酸DNA消化酵素デオキシリボヌクレアーゼ又は核酸分解酵素等で処理する必要がある。また、陽イオン界面活性剤セチルトリメチルアンモニウム又はミリスチルトリメチルアンモニウム塩、リポフェクチン又はリポフェクトアミン等を添加してもよい。多くの場合、ウイルス又は表面タンパク質の回収は、濃縮及び/又は精製を伴い、当業者に周知の手法によって、特に限外濾過又は遠心分離を行って実施される例えば、Furminger,Nicholson,WebsterandHayEds.,Textbookofinfluenza,chapter24,pp.324-332を参照。本発明に係る方法で得られたワクチンは、死滅不活化とも言う病原体又は生きた弱毒化病原体に相当するものであってもよい。ワクチンは、例えば、ウイルスの製造後に得られる培養上清に相当するものであるか、又は、本発明に係る方法で製造されたウイルスを用いて得ることができる抗原性表面タンパク質に相当するものであってもよい。添付の図面を参照しつつ、以下の実施例によって本発明が説明されるが、本発明は以下の実施例に決して限定されることはない。以下の全実施例において、実験は37°Cの温度で実施した。培地はDMEMRef.41966、Gibcoを使用し、感染時にトリプシン1μg/mL、Sigmaを添加した。1インフルエンザによる細胞変性効果に対するNutlin-3の効果:A/モスクワ/10/99H3N2ウイルス感染A549細胞での試験A549細胞ATCCAmericanTypeCultureCollection:CCL185は、肺ガン由来細胞である。この細胞は、II型肺胞上皮細胞と同様な特徴ヒト気道由来の極性化上皮細胞を示すLieberetal.,IntJCancer,1976Jan15;171:62-70。感染した親から得た肺組織に対して幾つかのex-vivo実験を実施したところ、この種の上皮細胞がインフルエンザウイルスの初期感染部位を構成しているらしいことが分かったNichollsetal.,NatMed.,2007Feb;132:147-9、vanRieletal.,Science,2006Apr21;3125772:399。従って、上記細胞はインフルエンザウイルス研究に適切なものと考えられるため、インフルエンザウイルスの基礎研究の分野において非常に広く用いられている。一般的には、ウイルスによる細胞変性効果を経時的に観察及びモニタリングすることで、細胞層の感染の程度を一次評価できる。ウイルスによる細胞変性効果は、特に、感染細胞同士が融合して多核細胞構造合胞体を形成することを特徴とする。細胞層における上記構造の量及び大きさを光子顕微鏡で観察することで、感染の程度を推測できる。Nutlin-310μMの存在下及び非存在下、同じ感染条件MOI感染多重度=2×10-3で得られた細胞変性効果を比較したところ、図1非感染MOCK細胞を参照として使用に示される通り、24hpihourspost-infection感染24時間後以降かなりの差異が認められた。Nutlin-3の非存在下では、A549細胞は、感染が進んだ際に特徴的に見られる細胞変性効果を示し、多数の細胞集合体及び合胞体構造を有している。それに比べて、Nutlin-3で処理した分子を感染14時間前に添加した後、感染工程を通じて保持した細胞は、更に顕著な細胞変性効果を示し、特により大きな合胞体感染構造を有している。2ウイルス製造に対するNutlin-3の効果:A/モスクワ/10/99H3N2ウイルス感染A549細胞での試験上清の感染価TCID50/mlを経時的に測定して、感染工程中に製造、放出されたウイルスを定量したところ、Nutlin-3の存在下の方が子孫ウイルス量はより多かった24hpi及びそれ以降、1log10の差で増加;図2A。そして、より正確に理解するため、ウイルスRNAを抽出し、リアルタイムRT-qPCRで定量することによって、上清のウイルスゲノムコピー数M/mlを定量した図2B。48hpi時点では、Nutlin-3の非存在下で測定されたコピー数は6.66×106M/mlであったのに対し、Nutlin-3の存在下ではコピー数は2.44×108M/mlであった。すなわち、ウイルス製造量について36倍超の増加が見られた。72hpi時点で同様に算出したところ、Nutlin-3を使用した条件の方が88倍の増加が見られた。3各種の初期接種量のウイルスを用いてウイルス複製周期1サイクル以上で製造されたウイルスの力価に対するNutlin-3の効果:前処理の効果、及び、各種濃度のNutlin-3の効果の評価aA/モスクワ/10/99H3N2ウイルス感染A549細胞での試験Nutlin-3の存在下又は非存在下、各種の量MOI=0.01、0.1及び1のウイルスをA549細胞に感染させ、ウイルス周期1サイクル10hpi又はウイルス周期複数サイクル28hpi後、RT-qPCRで上清中のコピー数M/mlを測定した。感染14時間前T=-14h又は感染時点ですぐにT=0h、細胞をNutlin-3と接触させた図3。いずれの場合も、Nutlin-3は一度に添加する。ウイルス周期1サイクル10hpiの時間尺度では、上清中のウイルスゲノムはMOIが0.1又は1という感染条件下でのみ定量できた。細胞がNutlin-3の存在下にある場合、上清中のコピー数M/mlは多くなった。例えば、Nutlin-3の存在下、T=0で処理を開始した場合、感染細胞の上清におけるゲノムコピー数は、Nutlin-3を使用しなかったコントロールと比較して、MOI=0.1及びMOI=1ではそれぞれ11~50倍多くなった図3。同様の実験を、前処理を行う時間を変更して感染10時間前に対して14時間前、MOI=10-3で実施した。48hpi時点では、Nutlin-3によって、上清中のコピー数M/mlがコントロールと比較して、濃度0.1μM、1μM及び10μMではそれぞれ1.5倍、5.7倍及び40倍多くなる図4。bA/モスクワ/10/99H3N2ウイルス感染MDCK細胞での試験MDCK細胞株ATCC:CCL-34は、実験室でのインフルエンザウイルス製造に最も広く用いられている細胞株である。この細胞株は登録されたものでもあり、Novartis社及びSolvay社がこの細胞株でワクチンバッチを製造している。図5に示される結果から、初期MOI値10-3において、感染14時間前に前処理した場合、各種濃度0.1、1及び10μMのNutlin-3分子によって、ウイルス周期を複数サイクル連続した後の細胞上清のウイルス力価ゲノムコピー数M/mlが大きく増加したことが分かる。24hpi時点では、Nutlin-3の存在下ではゲノムコピー数M/mlがコントロールと比較して19倍にまで多くなっている。これらの追加データによって、A549細胞株で得られた結果が裏付けられる。4ウイルス複製に対する別のMdm2アンタゴニスト分子NSC66811の効果:A/モスクワ/10/99H3N2ウイルス感染A549細胞での試験Mdm2と相互作用し、従ってp53/Mdm2相互作用をブロックするものNutlin-3と同様の作用を持つものとして、下記式:で表されるNSC66811分子2-メチル-7-[フェニルフェニルアミノメチル]-8-キノリノール、MerckBiosciencesが知られている。この分子は、濃度2μM及び20μM、MOI=10-3で使用した。図6は、48hpi時点で得られた結果を表し、NSC66811分子の場合も、Nutlin-3分子について上述したのと全く同様の結果が得られることを示している。よって、48hpi時点では、NSC66811の濃度が2μMの場合、上清中のゲノムコピー数Mがコントロールと比較して約6倍多くなっている。同様に、72hpi時点では、NSC66811の濃度が20μMの場合、上清中のゲノムコピー数Mがコントロールと比較して約5倍多くなっている。5ウイルス複製に対するMdm2過剰発現の効果:A/モスクワ/10/99H3N2ウイルス感染A549細胞での試験ウイルス製造に対するMdm2過剰発現の効果も検討した。図7に示す結果は、初期MOI値10-3の場合の48hpi及び72hpiでのコピー数を示しており、Mdm2タンパク質が過剰発現するとpcdNA-Hdm2、H3N2ウイルスの複製効率が低くなることが分かる。この結果から、インフルエンザウイルス製造において試験した分子の効果は、Mdm2タンパク質に対するアンタゴニスト作用と実際に関連していることが裏付けられる。6結論1、2、3、4及び5に示した全ての実験から、2つの異なる細胞システムA549/MDCKでのインフルエンザウイルス製造に対して、Nutlin-3又は別のMdm2アンタゴニスト分子NSC66811が明らかに効果を示すことが分かる。Mdm2過剰発現条件下で得られた結果から、試験した2種類の分子p53-Mdm2相互作用の阻害剤の作用様式と、それらがインフルエンザウイルスの細胞製造を調節する性質とが機能的に関連していることが裏付けられる。"