"式I:から選択される化合物であって、Lは、Eは、nは2、3、4、5、又は6であり;mは2、3、又は4であり;及びqは0又は1である化合物。Lが、である請求項1の化合物。nが5である、請求項2の化合物。Lが、である請求項1の化合物。nが4及びmが3である、請求項4の化合物。構造、を有する請求項1の化合物。構造、を有する請求項1の化合物。構造、を有する請求項1の化合物。構造、を有する請求項1の化合物。式Ia又はIbから選択される抗体-薬剤コンジュゲートであって:Lは、nは2、3、4、5、又は6であり;mは2、3、又は4であり;qは0又は1であり;pは1から4であり;及びAbは抗体である抗体-薬剤コンジュゲート。構造から選択される、請求項10の抗体-薬剤コンジュゲート。抗体が、遊離システインアミノ酸を通してリンカーLにコンジュゲートしたシステイン操作抗体Abである、請求項10の抗体-薬剤コンジュゲート。システイン操作抗体の遊離システインアミノ酸が重鎖のA118CEU番号付けである、請求項12の抗体-薬剤コンジュゲート。システイン操作抗体の遊離システインアミノ酸が軽鎖のV205CKabatの番号付けである、請求項12の抗体-薬剤コンジュゲート。システイン操作抗体が遊離のシステインアミノ酸及び配列番号1-49から選択される重鎖の配列と配列番号50-98から選択される軽鎖の配列を含み、該配列中のシステインが遊離のシステインアミノ酸である、請求項12の抗体-薬剤コンジュゲート。システイン操作抗体がiシステイン操作抗体をコードする核酸配列を変異誘発し;iiシステイン操作抗体を発現し;及びiiiシステイン操作抗体を単離し生成することを含む工程により調製される請求項12に記載の抗体-薬剤コンジュゲート。システイン操作抗体が、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びFab断片から選択される、請求項12に記載の抗体-薬剤コンジュゲート。システイン操作抗体が親抗体の一以上のアミノ酸残基を一以上の遊離システインアミノ酸と置換することを含む工程により調製され、親抗体が抗原に選択的に結合し、かつシステイン操作抗体が親抗体と同じ抗原に選択的に結合する、請求項12に記載の抗体-薬剤コンジュゲート。抗体がレセプター1-51:1BMPR1B骨形成タンパク質レセプタータイプIB型;2E16LAT1,SLC7A5;3STEAP1前立腺の6回膜貫通型上皮抗原;40772PCA125,MUC16;5MPFMPF,MSLN,SMR,巨核球増強因子、メソテリン;6Napi3bNAPI-3B,NPTIIb,SLC34A2,溶質輸送体ファミリー34リン酸ナトリウム,メンバー2,II型ナトリウム依存性リン酸トランスポーター3b;7Sema5bFLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,セマフォリン5bHlog,セマドメインsemadomain,7回トロンボスポンジン反復1型及び1型様,膜貫通ドメインTMおよび短い細胞質ドメインセマフォリン5B;8PSCAhlg2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKENcDNA2700050C12,RIKENcDNA2700050C12遺伝子;9ETBRエンドセリンタイプBレセプター;10MSG783RNF124,仮想タンパク質FLJ20315;11STEAP2HGNC_8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前立腺癌関連遺伝子1,前立腺癌関連タンパク質1,前立腺の6回膜貫通型上皮抗原2,6回膜貫通型前立腺タンパク質;12TrpM4BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,一過性レセプター電位カチオンチャネル,サブファミリーM,メンバー4;13CRIPTOCR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,奇形癌腫由来増殖因子;14CD21CR2補体レセプター2又はC3DRC3d/エブスタインバーウイルスレセプター又はHs.73792;15CD79bCD79B,CD79β,IGb免疫グロブリン関連β,B29;16FcRH2IFGP4,IRTA4,SPAP1ASH2ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質1a,SPAP1B,SPAP1C;17HER2;18NCA;19MDP;20IL20Rα21ブレビカン22EphB2R;23ASLG659;24PSCA;25GEDA;26BAFF-RB細胞活性化因子レセプター,BLySレセプター3,BR3;27CD22B細胞レセプターCD22-Bアイソフォーム;28CD79aCD79A,CD79α,免疫グロブリン関連α;29CXCR5バーキットリンパ腫レセプター1;30HLA-DOBMHCクラスII分子Ia抗原のベータサブユニット;31P2X5プリンレセプターP2Xリガンド開口型イオンチャネル5;32CD72B細胞分化抗原CD72,Lyb-233LY64リンパ球抗原64RP105,ロイシンリッチリピートLRRファミリーのI型膜タンパク質34FcRH1Fcレセプター様タンパク質1;35IRTA2免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連2;36TENB2推定上の膜貫通型プロテオグリカン;37PMEL1シルバーホモログ;SILV;D12S53E;PMEL17;SI;SIL;ME20;gp100;38TMEFF1EGF様及び2つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通型タンパク質1;Tomoregulin-1;H7365;C9orf2;C9ORF2;U19878;X83961;39GDNF-Ra1GDNFファミリーレセプターアルファ1;GFRA1;GDNFR;GDNFRA;RETL1;TRNR1;RET1L;GDNFR-アルファ1;GFR-ALPHA-1;U95847;BC014962;40Ly6Eリンパ球抗原6複合体、遺伝子座E;Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1;41TMEM46シサホモログ2アフリカツメガエル;SHISA2;42Ly6G6Dリンパ球抗原6複合体、遺伝子座G6D;Ly6-D,MEGT1;43LGR5ロイシンリッチリピート含有Gタンパク質共役型受容体5;GPR49,GPR67;44RETretプロトオンコジーン;MEN2A;HSCR1;MEN2B;MTC1;PTC;CDHF12;Hs.168114;RET51;RET-ELE1;45LY6Kリンパ球抗原6複合体、遺伝子座K;LY6K;HSJ001348;FLJ35226;46GPR19Gタンパク質共役型受容体19;Mm.4787;47GPR54KISS1レセプター;KISS1R;GPR54;HOT7T175;AXOR12;48ASPHD1アスパラギン酸β-ヒドロキシラーゼドメイン含有1;LOC253982;49チロシナーゼTYR;OCAIA;OCA1A;チロシナーゼ;SHEP3;50TMEM118リングフィンガータンパク質,膜貫通型2;RNFT2;FLJ14627;及び51GPR172AGタンパク質共役型受容体172A;GPCR41;FLJ11856;D15Ertd747eの一以上に結合する、請求項10に記載の抗体-薬剤コンジュゲート。請求項10の抗体-薬剤コンジュゲート化合物と薬学的に許容される希釈剤、担体又は賦形剤を含む薬学的組成物。化学療法剤の治療的有効量を更に含む、請求項20の薬学的組成物。請求項20の薬学的組成物を患者に投与することを含む、癌治療の方法。抗体-薬剤コンジュゲート化合物と併用して、患者に化学療法剤が投与される、請求項22の方法。哺乳動物の癌の治療のための医薬の製造における、請求項10の抗体-薬剤コンジュゲートの使用。請求項10の抗体-薬剤コンジュゲート;容器;及びパッケージ挿入物又は化合物が癌を治療するために使用することができることを示すラベルを含む製造品。典型的実施態様の詳細な説明本発明の特定の実施態様に対して詳細に述べ、その例は、付随する構造と式に示される。本発明は説明される実施態様と併せて説明されるが、それらの実施態様に本発明を限定するものではないことが理解されるであろう。一方、本発明は、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る全ての代替、改変、および均等物を包含することを意図している。当業者は、本発明の実施において使用され得る本明細書に記載のものに類似するか又は等価な多くの方法および材料を認識するであろう。本発明は、説明される方法と材料に決して限定されない。別に規定されない限り、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるように、本明細書で使用される技術用語および科学用語は同じ意味を持ち、SingletonetalDictionaryofMicrobiologyandMolecularBiology2ndEdJWileySonsNewYorkNYandJanewayCTraversPWalportMShlomchikImmunobiology5thEdGarlandPublishingNewYorkと一致する。定義特に明記しない限り、本明細書で使用する以下の用語と語句は、以下の意味を有することが意図される。商品名が本明細書で使用されるとき、出願人は、商品名製品の製剤、ジェネリック医薬品、及び商品名製品の活性薬学的成分を独立に包含することを意図する。用語抗体は本明細書において最も広範な意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体例えば、二重特異性抗体、およびそれらが所望の生物学的活性を示すものであれば、抗体断片を特に網羅する。抗体は、マウス、ヒト、ヒト、キメラ、又は他の種に由来し得る。抗体は、特異的抗原を認識し結合することができる免疫系によって産生されるタンパク質である。ImmunoBiology5thEdGarlandPublishingNewYork。標的抗原は、複数の抗体のCDRによって認識され、エピトープとも呼ばれる多数の結合部位を一般的に有している。異なるエピトープに特異的に結合する抗体の各々は異なる構造を有している。従って、一つの抗原は、複数の対応する抗体を有し得る。抗体は、完全長の免疫グロブリン分子又は完全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、即ち、目的の標的の抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子又はその部分を含み、そのような標的は、限定されないが、癌細胞又は自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞を含む。本明細書に開示される免疫グロブリンは、任意のタイプ例えば、IgG、IgE、IgM、IgD及びIgA、クラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IGA1及びIgA2又は免疫グロブリン分子のサブクラスとすることができる。免疫グロブリンは任意の種に由来することができる。しかしながら、一態様では、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、又はウサギ起源のものである。抗体断片は、完全長抗体の一部、一般にはその抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Fab、Fab’、Fab’2、及びFv断片;ダイアボディ、線形抗体;ミニボディーProteinEngDesignSel17315323、Fab発現ライブラリーによって生成された断片、抗イディオタイプ抗Id抗体、CDR相補性決定領域、及び癌細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原に免疫特異的に結合する上記の何れかのエピトープ結合断片、単鎖抗体分子;及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。本明細書中で用いる用語モノクローナル抗体とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわちこの集団を含む個々の抗体は、微量で存在し得る天然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であって、単一の抗原部位に対するものである。更に、典型的には、異なる決定基エピトープに対する異なる抗体を含む、ポリクローナル抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが、他の免疫グロブリンにより汚染されずに合成される点で有利である。修飾語モノクローナルは、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示し、いずれかの特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って用いるべきモノクローナル抗体は、KohleretalNature256495によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作成されてもよく、あるいは組換えDNA方法によって作成されてもよい例えば、米国特許第4816567号;米国特許第5807715号を参照。モモノクローナル抗体は、例えば、ClacksonetalNature352624628MarksetalJMolBiol222581597記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。本明細書中のモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖及び/又は軽鎖の一部分が特定の種に由来する又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であるが、そのそれらの鎖の残部は別の種に由来する又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であるキメラ抗体、並びにそのような抗体の断片を、それらが望ましい生物学的活性を示す限り、包含し得る米国特許第4816567号;及びMorrisonetalProcNatlAcadSciUSA8168516855。本明細書における対象のキメラ抗体には、非ヒト霊長類例えば旧世界ザル、類人猿など及びヒト定常領域配列に由来する可変ドメイン抗原結合配列を含む霊長類化抗体が含まれる。本明細書においてインタクトな抗体とは、VL及びVHドメイン、並びに軽鎖定常ドメインCL及び重鎖定常ドメインン、CH1、CH2、及びCH3を含む、抗体である。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン例えば、ヒト天然配列定常ドメイン又はそのアミノ酸配列変異体であり得る。インタクトな抗体は、抗体のFc定常領域天然型配列Fc領域またはアミノ酸配列変異体Fc領域に起因し得る生物学的活性を指す、1つ以上のエフェクター機能を有し得る。抗体エフェクター機能の例としては、C1q結合;補体依存性細胞傷害;Fcレセプター結合;抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCC;ファゴサイトーシス;及び細胞表面レセプター、例えば、B細胞レセプター及びBCRなどのダウンレギュラーションが挙げられる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、インタクトな抗体は、異なるクラスに割り当てることができる。インタクトな免疫グロブリン抗体の5つの主要なクラスがあり:IgA,IgD,IgE,IgG,及びIgM;これらのうちのいくつかは、サブクラスアイソタイプ例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、及びIgA2へとさらに分割され得る。種々のクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。種々のクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び3次元構造は、周知である。Ig形態はヒンジの修飾又はヒンジ欠損形態を含むJImmunol16140834090LundetalEurJBiochem26772467256;米国特許出願公開第2005/0048572号;米国特許出願公開第2004/0229310号。遊離システインアミノ酸は、親抗体で操作され、チオール官能基-SHを有し、分子内または分子間ジスルフィド架橋として対合されないシステインアミノ酸残基を指す。チオール反応性値という用語は、遊離システインアミノ酸の反応性の定量的特性評価である。チオール反応性値は、チオール反応性試薬と反応するシステイン操作された抗体中の遊離システインアミノ酸のパーセンテージであり、最大値1に換算される。例えば、チオール反応性試薬、例えばビオチン-マレイミド試薬と収率100で反応してビオチン標識化抗体を生成するシステイン操作された抗体上の遊離システインアミノ酸は、1.0というチオール反応性値を有する。チオール反応性試薬と収率80で反応する同一の又は異なる親抗体にて操作される別のシステインアミノ酸は、0.8のチオール反応性値を有する。チオール反応性試薬と全く反応できない同一の又は異なる親抗体にて操作される別のシステインアミノ酸は、チオール反応性値は0である。特定のシステインのチオール反応性値の決定は、ELISAアッセイ、質量分析、液体クロマトグラフィー、オートラジオグラフィーまたは他の定量的分析試験により実行され得る。親抗体は、1つ以上のアミノ酸残基が1つ以上のシステイン残基に置換されるアミノ酸配列を含む抗体である。親抗体は、天然型または野生型配列を含み得る。親抗体は、他の天然型、野生型または修飾形態の抗体に比して、先在アミノ酸配列修飾例えば、付加、欠失および/または置換を有し得る。親抗体は、目的の標的抗原、例えば生物学的に重要なポリペプチドを指向する。非ポリペプチド抗原例えば、腫瘍関連糖脂質抗原;米国特許第5091178号参照に対して向けられる抗体も意図される。典型的な親抗体は、細胞表面および膜貫通受容体、ならびに腫瘍関連抗原TAAについて親和性と選択制を有する抗体を含む。ファージディスプレイは、変異体ポリペプチドをファージ、例えば繊維状ファージ、粒子の表面においてコートタンパク質に対する融合タンパク質として提示する手法である。ファージディスプレイ法の一つの有用性は、ランダム化されたタンパク質変異体の大規模なライブラリーを、高親和性で標的分子に結合するそれらの配列について迅速かつ効率的にソートすることができるという事実にある。ファージ上のペプチド及びタンパク質ライブラリーの提示は、何百万ものポリペプチドから特異的結合特性を持つものをスクリーニングするために利用されてきた。多価ファージディスプレイ方法は、典型的には繊維状ファージのpIII又はpVIIIとの融合体を通して小さなランダムペプチド及び小タンパク質を提示するために利用されてきたWells及びLowmanCurrOpinStructBiol3355362とその中の引用文献。一価のファージディスプレイでは、タンパク質又はペプチドのライブラリーがファージコートタンパク質又はその一部に融合され、野生型タンパク質の存在下で低レベルで発現される。アビディティー効果は多価のファージと比較して低下しているので、選別は内在性のリガンド親和性に基づいており、ファージミドベクターが使われるが、このベクターはDNA操作を単純化する。Lowman及びWellsMethodsAcompaniontoMethodsinEnzymology32050216。ファージディスプレイは抗体様分子を産生するための技術を含むImmunobiology5thEdGarlandPublishingNewYorkp627628Leeetal。ファージミドは、細菌の複製起点、例えばCo1E1及びバクテリオファージの遺伝子間領域のコピーを有するプラスミドベクターである。ファージミドは、繊維状バクテリオファージ及びラムドイドバクテリオファージを含む、任意の既知のバクテリオファージで使用できる。プラスミドは、一般に、抗生物質耐性の選択マーカーも含む。これらのベクターにクローニングされたDNAのセグメントは、プラスミドとして増殖することができる。これらのベクターを備える細胞がファージ粒子の生産のために必要なすべての遺伝子を備えているとき、プラスミドの複製様式はローリングサークル複製に変化し、プラスミドDNAの1つの鎖のコピーとパッケージファージ粒子を生成する。ファージミドは感染性又は非感染性ファージ粒子を形成しうる。この用語は、異種ポリペプチドがファージ粒子の表面で提示されるように遺伝子融合体として異種ポリペプチド遺伝子と結合したファージコートタンパク質遺伝子又はその断片を含むファージミドを含む。リンカー、リンカーユニット又は連結linkは、抗体を薬剤部分に共有結合させる原子鎖を含む。様々な実施態様において、リンカーは2価のラジカルであり、Lとして特定される。本明細書中で使用される立体化学的な規定および規約は、一般に、SPParkerEdMcGrawHillDictionaryofChemicalTermsMcGrawHillBookCompanyNewYork及びElielEandWilenSStereochemistryofOrganicCompoundsJohnWileySonsIncNewYorkに従う。多くの有機化合物が、光学活性形態で存在し、すなわち、これらは、平面偏光の平面を回転する能力を有する。光学的に活性な化合物の記載において、接頭語のD及びL、又はR及びSは、そのキラル中心に関する分子の絶対配置を表示するために使用される。接頭語d及びl又は及び-は、化合物による平面偏光の回転の符号を表し、-又はlは、この化合物が左旋性であることを意味する。又はdの接頭語を持つ化合物は、右旋性である。所定の化学構造について、これらの立体異性体は、互いに鏡像対称であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーと呼ばれ、そのような異性体の混合物は、しばしばエナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの50:50混合物は、ラセミ混合物もしくはラセミ体と呼ばれ、これは、化学反応もしくはプロセスにおいて立体選択性もしくは立体特異性が存在しない場合に生じ得る。ラセミ混合物およびラセミ体なる用語は、光学活性を有さない、2つのエナンチオマー種の等モル濃度の混合物をいう。薬学的に受容可能な塩なる語句は、本明細書中で使用される場合、抗体-薬剤コンジュゲートADCの薬学的に受容可能な有機もしくは無機の塩をいう。典型的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酸性酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩pamoateすなわち、1,1’-メチレン-ビス-2-ヒドロキシ-3-ナフトエートが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に受容可能な塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンもしくは他の対イオンのような別の分子の包含を含み得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機部分もしくは無機部分であり得る。さらに、薬学的に受容可能な塩は、1つより多くの荷電した原子をその構造内に有し得る。多数の荷電した原子がその薬学的に受容可能な塩の一部分である場合、多数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に受容可能な塩は、1以上の荷電した原子及び/又は1以上の対イオンを有し得る。以下の略称が、本明細書中で使用され、指定された定義を有する:BMEはβ-メルカプトエタノール、BocはN-t-ブトキシカルボニル、citはシトルリン2-アミノ-5-ウレイドペンタン酸、dapはドラプロインdolaproine、DCCは1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミド、DCMはジクロロメタン、DEAはジエチルアミン、DEADはジエチルアゾジカルボキシレート、DEPCはジエチルホスホリルシアニデート、DIADはジイソプロピルアゾジカルボキシレート、DIEAはN,N-ジイソプロピルエチルアミン、dilはドライソロイシンdolaisoleucine、DMAはジメチルアセトアミド、DMAPは4-ジメチルアミノピリジン、DMEはエチレングリコールジメチルエーテルもしくは1,2-ジメトキシエタン、DMFはN,N-ジメチルホルムアミド、DMSOはジメチルスルホキシド、doeはドラフェニンdolaphenine、dovはN,N-ジメチルバリン、DTNBは5,5’-ジチオビス2-ニトロ安息香酸、DTPAはジエチレントリアミンペンタ酢酸、DTTはジチオトレイトール、EDCIは1-3-ジメチルアミノプロピル-3-エチルカルボジイミド塩酸塩、EEDQは2-エトキシ-1-エトキシカルボニル-1,2-ジヒドロキノリン、ES-MSはエレクトロスプレー質量分析、EtOAcは酢酸エチル、FmocはN-9-フルオレニルメトキシカルボニル、glyはグリシン、HATUはO-7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-N、N、N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、HOBtは1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、HPLCは高速液体クロマトグラフィー、ileはイソロイシン、lysはリジン、MeCNCH3CNはアセトニトリル、MeOHはメタノール、Mtrは4-アニシルジフェニルメチルもしくは4-メトキシトリチル、norは1S、2R--ノルエフェドリン、PABはp-アミノベンジルカルバモイル、PBSはリン酸緩衝化生理食塩水pH7、PEGはポリエチレングリコール、Phはフェニル、Pnpはp-ニトロフェニル、MCは6-マレイミドカプロイル、pheはL-フェニルアラニン、PyBropはブロモトリ-ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、SECはサイズ排除クロマトグラフィー、Suはスクシンイミド、TFAはトリフルオロ酢酸、TLCは薄層クロマトグラフィー、UVは紫外線、およびvalはバリン。システイン操作抗体本発明の化合物は、野生型抗体又は親抗体の一以上のアミノ酸が、システインアミノ酸と置換される、システイン操作抗体を含む。抗体の任意の形態は、そのように操作、即ち変異導入されうる。例えば、親Fab抗体断片は、システイン操作Fabを形成するように操作され得、本明細書中でチオFabチオFabと呼ばれる。同様に、親モノクローナル抗体は、チオMabチオMabを形成するように操作され得る。一部位変異は、チオFabにおいて1つの操作システイン残基を生じ、一方、IgG抗体のダイマーの性質に起因して、一部位変異は、チオMabにおいて2つの操作システイン残基を生じる。置換された操作されたシステインCys残基を有する変異体は、新規に導入された操作チオール基の反応性について評価される。チオール反応性値は、0から1.0の範囲の相対的な数値の項であり、任意のシステイン操作抗体について測定され得る。本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、0.6~1.0;0.7~1.0;又は0.8~1.0の範囲内である。本発明の設計方法、選択方法および調製方法は、求電子性官能基と反応性であるシステイン操作抗体を可能とする。これらの方法は、さらに、指定され、設計された、選択的部位にジルコニウム原子を有する抗体ジルコニウムコンジュゲートAZC化合物などの抗体コンジュゲート化合物を可能にする。抗体表面上の反応性システイン残基は、マレイミド又はハロアセチルなどのチオール反応性基を通してジルコニウム部分を特異的にコンジュゲートすることを可能とする。Cys残基のチオール機能のマレイミド基に対する求核反応性は、タンパク質内の他のアミノ酸の機能性、例えばリジン残基のアミノ基又はN末端アミノ基などに比べ約1000倍高い。ヨードアセチル試薬及びマレイミド試薬のチオール固有の機能性によりアミン基と反応し得るが、より高いpH>9.0及びより長い反応時間を要する。本発明のシステイン操作抗体は、好ましくは、野生型、親抗体のカウンターパートの抗原結合能力を保持する。従って、システイン操作抗体は、好ましくは特異的には、抗原に結合することが可能である。そのような抗原としては、例えば、腫瘍関連抗原TAA、細胞表面レセプタータンパク質及び他の細胞表面分子、膜貫通タンパク質、シグナル伝達タンパク質、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、組織発達又は分化関連付けられている分子例えば、既知であるか又は機能性に寄与すると疑われるもの、リンホカイン、サイトカイン、細胞周期の調節に関与する分子、脈管形成に関与する分子、及び血管新生に関連付けられている分子例えば、既知であるか又は機能性に寄与すると疑われるものを含む。腫瘍関連抗原は、クラスター分化因子すなわちCDタンパク質である可能性がある。システイン操作抗体が結合することができる抗原は、上記のカテゴリのいずれかのサブセットのメンバーであり得、前記カテゴリの他のサブセットは対象の抗原に関して異なる特性を持つ他の分子/抗原を含む。親抗体は、米国特許第5821337号の表3に記載されるhuMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7及びhuMAb4D5-8トラスツズマブ、ハーセプチンHERCEPTIN登録商標から選択されるヒト化抗体であってもよく、本明細書に記述されるヒト化520C9抗体国際公開第93/21319号及びヒト化2C4抗体が参照により本明細書に明確に援用される。本発明のシステイン操作抗体は、部位特異的かつ効率的にチオール反応性試薬と結合させることができる。チオール反応性試薬は、多機能リンカー試薬、キャプチャ、すなわち親和性、標識試薬例えば、ビオチン-リンカー試薬、検出標識例えば、フルオロフォア試薬、固相固定化試薬例えばHAROSETM、ポリスチレン、又はガラス、又はジルコニウムリンカー中間体であり得る。チオール反応性試薬の一例はN-エチルマレイミドNEMである。典型的な実施態様において、チオFabのビオチンリンカー試薬との反応は、ビオチン標識化チオFabを与え、それによって操作されたシステイン残基が検出され測定され得る。チオFabの多機能性リンカー試薬との反応は多機能性リンカー付きのチオFabを与え、それにより更にジルコニウム成分又は別の標識と反応され得る。チオFabのジルコニウムリンカー中間体との反応はチオFabジルコニウムコンジュゲートを与える。ここで記載される典型的な方法は一般に抗体の同定及び産生に適用され得、より一般的には本明細書に記載された設計及びスクリーニング工程の適用を通じて別のタンパク質に適用され得る。このようなアプローチは、反応基が、例えば、マレイミド、ヨードアセトアミド、ピリジルジスルフィド、又は他のチオール反応性結合パートナーである、他のチオール反応性剤の結合に適用され得るBioconjugateChem12HermansonGinBioconjugateTechniquesAcademicPressSanDiegopp4055643671。パートナーは、細胞毒性剤例えば、ドキソルビシン又は百日咳毒素などの毒素、フルオレセイン様又はローダミン様蛍光色素などのフルオロフォア、イメージング又は放射線治療の金属のためのキレート剤、ペプチジル又は非ペプチジル標識又は検出タグ、又はポリエチレングリコールの様々なアイソフォームなどのクリアランス修飾剤、第3の成分に結合するペプチド、又はその他の炭水化物又は親油性剤であり得る。典型的な抗体断片であるhu4D5Fabv8で同定された部位は、ここでは主に抗体の定常ドメインにあり、抗体の全ての種にわたって保存されている。これらの部位は、さらに特定の抗体の構造の構造設計及び知識を必要とせずに、かつ抗体の可変ドメインに固有の抗原結合特性の干渉することなく、他の抗体に広く適用可能であるべきである。癌の治療に有用なシステイン操作抗体は、限定されないが、細胞表面レセプター及び腫瘍関連抗原TAAに対する抗体を含む。そのような抗体は、標識成分に結合していないネイキッド抗体、又は式Iの抗体-薬剤コンジュゲートADCとして使用することができる。腫瘍関連抗原は、当技術分野で知られており、当該技術分野で周知の方法及び情報を使用して、抗体を生成する際に使用するために調製することができる。癌の診断及び治療のための効果的な細胞標的を発見する試みにおいて、研究者は、一つ以上の正常な非癌細胞上に比べて癌細胞の一つ以上の特定の型の表面上に特異的に発現された膜貫通ポリペプチド又はそうでなければ腫瘍関連ポリペプチドを同定しようとしてきた。しばしば、そのような腫瘍関連ポリペプチドは、非癌細胞の表面上に比べてより豊富に癌細胞の表面に発現している。そのような腫瘍関連細胞表面の抗原ポリペプチドの同定は、抗体ベースの治療を経由して破壊するために癌細胞を特異的に標的とする能力を生じさせてきた。腫瘍関連抗原TAAの例は、限定されないが、下にリストされたTAA1-51を含む。便宜上、これらの抗原に関連する情報で当該技術分野で知られているすべては以下にリストされ、国立バイオテクノロジー情報センターNCBIの核酸及びタンパク質の配列同定規則に従い、名前、代替名、Genbank受託番号及び主要参照文献を含む。TAA1-51に対応する核酸とタンパク質配列は、GenBankなどの公共のデータベースで利用可能である。抗体により標的とされる腫瘍関連抗原は引用文献で同定された配列に対して少なくとも約70、80、85、90、又は95の配列同一性を含むか、又は引用文献に記載の配列を有するTAAとして、実質的に同一な生物学的特性又は特徴を示す全てのアミノ酸配列変異体及びアイソフォームを含む。たとえば、変異体配列を有するTAAは、一般に、リストされた対応する配列を持つTAAに特異的に結合する抗体に特異的に結合することができる。本明細書に具体的に引用される文献中の配列及び開示は参照により明示的に援用される。腫瘍関連抗原1-51:1BMPR1B骨形成タンパク質レセプタータイプIB型,Genbank受託番号NM_001203tenDijke,P.,etalScience2645155:101-1041994,Oncogene1411:1377-13821997;国際公開第2004063362号請求項2;国際公開第2003042661号請求項12;米国特許出願公開第2003134790-A1号頁38-39;国際公開第2002102235号請求項13;頁296;国際公開第2003055443号頁91-92;国際公開第200299122号実施例2;頁528-530;国際公開第2003029421号請求項6;国際公開第2003024392号請求項2;図112;国際公開第200298358号請求項1;頁183;国際公開第200254940号頁100-101;国際公開第200259377号頁349-350;国際公開第200230268号請求項27;頁376;国際公開第200148204号実施例;図4NP_001194骨形成タンパク質レセプター,タイプIB/pid=NP_001194.1-相互参照:MIM:603248;NP_001194.1;AY0659942E16LAT1,SLC7A5,Genbank受託番号NM_003486BiochemBiophysResCommun255283288Nature395288291GaugitschHWetalJBiolChem2671126711273;国際公開第2004048938号実施例2;国際公開第2004032842号実施例IV;国際公開第2003042661号請求項12;国際公開第2003016475号請求項1;国際公開第200278524号実施例2;国際公開第200299074号請求項19;頁127-129;国際公開第200286443号請求項27;頁222,393;国際公開第2003003906号請求項10;頁293;国際公開第200264798号請求項33;頁93-95;国際公開第200014228号請求項5;頁133-136;米国特許出願公開第2003224454号図3;国際公開第2003025138号請求項12;頁150;NP_003477溶質担体ファミリー7カチオン性アミノ酸輸送体,yシステム,メンバー5/pid=NP_003477.3-ホモサピエンス相互参照:MIM:600182;NP_003477.3;NM_015923;NM_003486_13STEAP1前立腺の6回膜貫通型上皮抗原,Genbank受託番号NM_012449CancerRes6158575860HubertRSetalProcNatlAcadSciUSA961452314528;国際公開第2004065577号請求項6;国際公開第2004027049号図1L;欧州特許第1394274号実施例11;国際公開第2004016225号請求項2;国際公開第2003042661号請求項12;米国特許出願公開第2003157089号実施例5;米国特許出願公開第2003185830号実施例5;米国特許出願公開第2003064397号図2;国際公開第200289747号実施例5;頁618-619;国際公開第2003022995号実施例9;図13A,実施例53;頁173,実施例2;図2A;NP_036581前立腺の6回膜貫通型上皮抗原相互参照:MIM:604415;NP_036581.1;NM_012449_140772PCA125,MUC16,Genbank受託番号AF361486JBiolChem2762737127375;国際公開第2004045553号請求項14;国際公開第200292836号請求項6;図12;国際公開第200283866号請求項15;頁116-121;米国特許出願公開第2003124140号実施例16;相互参照:GI:34501467;AAK74120.3;AF361486_15MPFMPF,MSLN,SMR,巨核球増強因子、メソテリン,Genbank受託番号NM_005823YamaguchiNetalBiolChem269805808ProcNatlAcadSciUSA961153111536ProcNatlAcadSciUSA93136140JBiolChem2702198421990;国際公開第2003101283号請求項14;国際公開第2002102235号請求項13;頁287-288;国際公開第2002101075号請求項4;頁308-309;国際公開第200271928号頁320-321;国際公開第9410312号頁52-57;相互参照:MIM:601051;NP_005814.2;NM_005823_16Napi3bNAPI-3B,NPTIIb,SLC34A2,溶質輸送体ファミリー34リン酸ナトリウム,メンバー2,II型ナトリウム依存性リン酸トランスポーター3b,Genbank受託番号NM_006424JBiolChem2771966519672Genomics62281284FeildJAetalBiochemBiophysResCommun258578582;国際公開第2004022778号請求項2;欧州特許第1394274号実施例11;国際公開第2002102235号請求項13;頁326;欧州特許第875569号請求項1;頁17-19;国際公開第200157188号請求項20;頁329;国際公開第2004032842号実施例IV;国際公開第200175177号請求項24;頁139-140;相互参照:MIM:604217;NP_006415.1;NM_006424_17Sema5bFLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,セマフォリン5bHlog,セマドメインsemadomain,7回トロンボスポンジン反復1型及び1型様,膜貫通ドメインTMおよび短い細胞質ドメインセマフォリン5B,Genbank受託番号AB040878NagaseTetalDNARes7143150;国際公開第2004000997号請求項1;国際公開第2003003984号請求項1;国際公開第200206339号請求項1;頁50;国際公開第200188133号請求項1;頁41-43,48-58;国際公開第2003054152号請求項20;国際公開第2003101400号請求項11;受託番号:Q9P283;EMBL;AB040878;BAA95969.1.Genew;HGNC:10737;8PSCAhlg2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKENcDNA2700050C12,RIKENcDNA2700050C12遺伝子,Genbank受託番号AY358628;RossetalCancerRes6225462553;米国特許出願公開第2003129192号請求項2;米国特許出願公開第2004044180号請求項12;米国特許出願公開第2004044179号請求項11;米国特許出願公開第2003096961号請求項11;米国特許出願公開第2003232056号実施例5;国際公開第2003105758号請求項12;米国特許出願公開第2003206918号実施例5;欧州特許第1347046号請求項1;国際公開第2003025148号請求項20;相互参照:GI:37182378;AAQ88991.1;AY358628_19ETBRエンドセリンタイプBレセプター,Genbank受託番号AY275463;NakamutaMetalBiochemBiophysResCommun17734391991OgawaYetalBiochemBiophysResCommun1782482551991AraiHetalJpnCircJ56130313071992AraiHetalJBiolChem268346334701993SakamotoAYanagisawaMetalBiochemBiophysResCommun1786566631991ElshourbagyNAetalJBiolChem268387338791993HaendlerBetalJCardiovascPharmacol20s1S41992TsutsumiMetalGene22843491999StrausbergRLetalProcNatlAcadSciUSA9916899169032002BourgeoisCetalJClinEndocrinolMetab82311631231997OkamotoYetalBiolChem27221589215961997VerheijJBetalAmJMedGenet1082232252002HofstraRMWetalEurJHumGenet51801851997PuffenbergerEGetalCell79125712661994AttieTetalHumMolGenet4240724091995AuricchioAetalHumMolGenet53513541996AmielJetalHumMolGenet53553571996HofstraRMWetalNatGenet124454471996SvenssonPJetalHumGenet1031451481998FuchsSetalMolMed71151242001PingaultVetalHumGenet111198206;国際公開第2004045516号請求項1;国際公開第2004048938号実施例2;国際公開第2004040000号請求項151;国際公開第2003087768号請求項1;国際公開第2003016475号請求項1;国際公開第2003016475号請求項1;国際公開第200261087号図1;国際公開第2003016494号図6;国際公開第2003025138号請求項12;頁144;国際公開第200198351号請求項1;頁124-125;欧州特許第522868号請求項8;図2;国際公開第200177172号請求項1;頁297-299;米国特許出願公開第2003109676号;米国特許第6518404号図3;米国特許第5773223号請求項1a;Col31-34;国際公開第2004001004号;10MSG783RNF124,仮想タンパク質FLJ20315,Genbank受託番号NM_017763;国際公開第2003104275号請求項1;国際公開第2004046342号実施例2;国際公開第2003042661号請求項12;国際公開第2003083074号請求項14;頁61;国際公開第2003018621号請求項1;国際公開第2003024392号請求項2;図93;国際公開第200166689号実施例6;相互参照:遺伝子座番号:54894;NP_060233.2;NM_017763_111STEAP2HGNC_8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前立腺癌関連遺伝子1,前立腺癌関連タンパク質1,前立腺の6回膜貫通型上皮抗原2,6回膜貫通型前立腺タンパク質,Genbank受託番号AF455138LabInvest8215731582;国際公開第2003087306号;米国特許出願公開第2003064397号請求項1;図1;国際公開第200272596号請求項13;頁54-55;国際公開第200172962号請求項1;図4B;国際公開第2003104270号請求項11;国際公開第2003104270号請求項16;米国特許出願公開第2004005598号請求項22;国際公開第2003042661号請求項12;米国特許出願公開第2003060612号請求項12;図10;国際公開第200226822号請求項23;図2;国際公開第200216429号請求項12;図10;相互参照:GI:22655488;AAN04080.1;AF455138_112TrpM4BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,一過性レセプター電位カチオンチャネル,サブファミリーM,メンバー4,Genbank受託番号NM_017636XuXZetalProcNatlAcadSciUSA981069210697Cell109397407JBiolChem2783081330820;米国特許出願公開第2003143557号請求項4;国際公開第200040614号請求項14;頁100-103;国際公開第200210382号請求項1;図9A;国際公開第2003042661号請求項12;国際公開第200230268号請求項27;頁391;米国特許出願公開第2003219806号請求項4;国際公開第200162794号請求項14;図1A-D;相互参照:MIM:606936;NP_060106.2;NM_017636_113CRIPTOCR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,奇形癌腫由来増殖因子,Genbank受託番号NP_003203又はNM_003212CiccodicolaAetalEMBOJ819871991AmJHumGenet49555565;米国特許出願公開第2003224411号請求項1;国際公開第2003083041号実施例1;国際公開第2003034984号請求項12;国際公開第200288170号請求項2;頁52-53;国際公開第2003024392号請求項2;図58;国際公開第200216413号請求項1;頁94-95,105;国際公開第200222808号請求項2;図1;米国特許第5854399号実施例2;Col17-18;米国特許第5792616号図2;相互参照:MIM:187395;NP_003203.1;NM_003212_114CD21CR2補体レセプター2又はC3DRC3d/エブスタインバーウイルスレセプター又はHs.73792Genbank受託番号M26004FujisakuetalJBiolChem26421182125WeisJJetalJExpMed167104710661988MooreMetalProcNatlAcadSciUSA84919491981987BarelMetalMolImmunol35102510311998WeisJJetalProcNatlAcadSciUSA83563956431986SinhaSKetalJImmunol15053115320;国際公開第2004045520号実施例4;米国特許出願公開第2004005538号実施例1;国際公開第2003062401号請求項9;国際公開第2004045520号実施例4;国際公開第9102536号図9.1-9.9;国際公開第2004020595号請求項1;受託番号:P20023;Q13866;Q14212;EMBL;M26004;AAA35786.1.15CD79bCD79B,CD79β,IGb免疫グロブリン関連βimmunoglobulin-associatedbeta,B29,Genbank受託番号NM_000626又は11038674ProcNatlAcadSciUSA10041264131Blood10030683076MulleretalEurJImmunol2216211625;国際公開第2004016225号請求項2,図140;国際公開第2003087768号,米国特許出願公開第2004101874号請求項1,頁102;国際公開第2003062401号請求項9;国際公開第200278524号実施例2;米国特許出願公開第2002150573号請求項5,頁15;米国特許第5644033号;国際公開第2003048202号請求項1,頁306及び309;国際公開第99/558658号,米国特許第6534482号請求項13,図17A/B;国際公開第200055351号請求項11,頁1145-1146;相互参照:MIM:147245;NP_000617.1;NM_000626_116FcRH2IFGP4,IRTA4,SPAP1ASH2ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質1a,SPAP1B,SPAP1C,Genbank受託番号NM_030764,AY358130GenomeRes1322652270Immunogenetics548795Blood9926622669ProcNatlAcadSciUSA9897729777XuMJetalBiochemBiophysResCommun280768775;国際公開第2004016225号請求項2;国際公開第2003077836号;国際公開第200138490号請求項5;図18D-1-18D-2;国際公開第2003097803号請求項12;国際公開第2003089624号請求項25;相互参照:MIM:606509;NP_110391.2;NM_030764_117HER2ErbB2,Genbank受託番号M11730CoussensLetalScience23011321139YamamotoTetalNature3192302341986SembaKetalProcNatlAcadSciUSA82649765011985SwierczJMetalJCellBiol1658698802004KuhnsJJetalJBiolChem27436422364271999ChoHSetalNature4217567602003EhsaniAetalGenomics15426429;国際公開第2004048938号実施例2;国際公開第2004027049号図1I;国際公開第2004009622;国際公開第2003081210;国際公開第2003089904号請求項9;国際公開第2003016475号請求項1;米国特許出願公開第2003118592号;国際公開第2003008537号請求項1;国際公開第2003055439号請求項29;図1A-B;国際公開第2003025228号請求項37;図5C;国際公開第200222636号実施例13;頁95-107;国際公開第200212341号請求項68;図7;国際公開第200213847号頁71-74;国際公開第200214503号頁114-117;国際公開第200153463号請求項2;頁41-46;国際公開第200141787号頁15;国際公開第200044899号請求項52;図7;国際公開第200020579号請求項3;図2;米国特許第5869445号請求項3;Col31-38;国際公開第9630514号請求項2;頁56-61;欧州特許第1439393号請求項7;国際公開第2004043361号請求項7;国際公開第2004022709号;国際公開第200100244号実施例3;図4;受託番号:P04626;EMBL;M11767;AAA35808.1.EMBL;M11761;AAA35808.1.18NCACEACAM6,Genbank受託番号M18728;BarnettTetalGenomics359661988TawaragiYetalBiochemBiophysResCommun15089961988StrausbergRLetalProcNatlAcadSciUSA9916899169032002;国際公開第2004063709;欧州特許第1439393号請求項7;国際公開第2004044178号実施例4;国際公開第2004031238号;国際公開第2003042661号請求項12;国際公開第200278524号実施例2;国際公開第200286443号請求項27;頁427;国際公開第200260317号請求項2;受託番号:P40199;Q14920;EMBL;M29541;AAA59915.1.EMBL;M18728;19MDPDPEP1,Genbank受託番号BC017023ProcNatlAcadSciUSA991689916903;国際公開第2003016475号請求項1;国際公開第200264798号請求項33;頁85-87;特公平5-003790号公報図6-8;国際公開第9946284号図9;相互参照:MIM:179780;AAH17023.1;BC017023_120IL20RαIL20Ra,ZCYTOR7,Genbank受託番号AF184971;ClarkHFetalGenomeRes13226522702003MungallAJetalNature4258058112003BlumbergHetalCell1049192001DumoutierLetalJImmunol167354535492001ParrishNovakJetalJBiolChem27747517475232002PletnevSetalBiochemistry421261712624SheikhFetalJImmunol17220062010;欧州特許第1394274号実施例11;米国特許出願公開第2004005320号実施例5;国際公開第2003029262号頁74-75;国際公開第2003002717号請求項2;頁63;国際公開第200222153号頁45-47;米国特許出願公開第2002042366号頁20-21;国際公開第200146261号頁57-59;国際公開第200146232号頁63-65;国際公開第9837193号請求項1;頁55-59;受託番号:Q9UHF4;Q6UWA9;Q96SH8;EMBL;AF184971;AAF01320.1.21ブレビカンBCAN,BEHAB,Genbank受託番号AF229053GarySCetalGene2561391472000ClarkHFetalGenomeRes13226522702003StrausbergRLetalProcNatlAcadSciUSA9916899169032002;米国特許出願公開第2003186372号請求項11;米国特許出願公開第2003186373号請求項11;米国特許出願公開第2003119131号請求項1;図52;米国特許出願公開第2003119122号請求項1;図52;米国特許出願公開第2003119126号請求項1;米国特許出願公開第2003119121号請求項1;図52;米国特許出願公開第2003119129号請求項1;米国特許出願公開第2003119130号請求項1;米国特許出願公開第2003119128号請求項1;図52;米国特許出願公開第2003119125号請求項1;国際公開第2003016475号請求項1;国際公開第200202634号請求項1;22EphB2RDRT,ERK,Hek5,EPHT3,Tyro5,Genbank受託番号NM_004442ChanJandWattVMOncogene610571061Oncogene10897905AnnuRevNeurosci21309345IntRevCytol196177244;国際公開第2003042661号請求項12;国際公開第200053216号請求項1;頁41;国際公開第2004065576号請求項1;国際公開第2004020583号請求項9;国際公開第2003004529号頁128-132;国際公開第200053216号請求項1;頁42;相互参照:MIM:600997;NP_004433.2;NM_004442_123ASLG659B7h,Genbank受託番号AX092328米国特許出願公開第20040101899号請求項2;国際公開第2003104399号請求項11;国際公開第2004000221号図3;米国特許出願公開第2003165504号請求項1;米国特許出願公開第2003124140号実施例2;米国特許出願公開第2003065143号図60;国際公開第2002102235号請求項13;頁299;米国特許出願公開第2003091580号実施例2;国際公開第200210187号請求項6;図10;国際公開第200194641号請求項12;図7b;国際公開第200202624号請求項13;図1A-1B;米国特許出願公開第2002034749号請求項54;頁45-46;国際公開第200206317号実施例2;頁320-321,請求項34;頁321-322;国際公開第200271928号頁468-469;国際公開第200202587号実施例1;図1;国際公開第200140269号実施例3;頁190-192;国際公開第200036107号実施例2;頁205-207;国際公開第2004053079号請求項12;国際公開第2003004989号請求項1;国際公開第200271928号頁233-234,452-453;国際公開第0116318号;24PSCA前立腺幹細胞抗原前駆体,Genbank受託番号AJ297436ReiterREetalProcNatlAcadSciUSA95173517401998GuZetalOncogene19128812962000BiochemBiophysResCommun275783788;国際公開第2004022709号;欧州特許第1394274号実施例11;米国特許出願公開第2004018553号請求項17;国際公開第2003008537号請求項1;国際公開第200281646号請求項1;頁164;国際公開第2003003906号請求項10;頁288;国際公開第200140309号実施例1;図17;米国特許出願公開第2001055751号実施例1;図1b;国際公開第200032752号請求項18;図1;国際公開第9851805号請求項17;頁97;国際公開第9851824号請求項10;頁94;国際公開第9840403号請求項2;図1B;受託番号:O43653;EMBL;AF043498;AAC39607.1.25GEDAGenbank受託番号AY260763;AAP14954脂肪腫HMGIC融合パートナー様タンパク質fusion-partner-likeprotein/pid=AAP14954.1-ホモサピエンス種:ホモサピエンスヒト国際公開第2003054152号請求項20;国際公開第2003000842号請求項1;国際公開第2003023013号実施例3,請求項20;米国特許出願公開第2003194704号請求項45;相互参照:GI:30102449;AAP14954.1;AY260763_126BAFF-RB細胞活性化因子レセプター,BLySレセプター3,BR3,Genbank受託番号AF116456;BAFFレセプター/pid=NP_443177.1-ホモサピエンスThompsonJSetalScience29321082111;国際公開第2004058309号;国際公開第2004011611;国際公開第2003045422号実施例;頁32-33;国際公開第2003014294号請求項35;図6B;国際公開第2003035846号請求項70;頁615-616;国際公開第200294852号Col136-137;国際公開第200238766号請求項3;頁133;国際公開第200224909号実施例3;図3;相互参照:MIM:606269;NP_443177.1;NM_052945_1;AF13260027CD22B細胞レセプターCD22-Bアイソフォーム,BL-CAM,Lyb-8,Lyb8,SIGLEC-2,FLJ22814,Genbank受託番号AK026467;WilsonetalJExpMed173137146;国際公開第2003072036号請求項1;図1;相互参照:MIM:107266;NP_001762.1;NM_001771_128CD79aCD79A,CD79α,免疫グロブリン関連αimmunoglobulin-associatedalpha,免疫グロブリンベータCD79Bと共有結合性に相互作用し、IgM分子と表面上で複合体を形成し、B細胞分化に関与するシグナルを伝達するB細胞特異的タンパク質,等電点:4.84,分子量:25028TM:2[P]遺伝子染色体:19q13.2,Genbank受託番号NP_001774.10;国際公開第9207574号図1;米国特許第5644033号;HaetalJImmunol14815261531MuelleretalEurJBiochem2216211625HashimotoetalImmunogenetics40287295PreudhommeetalClinExpImmunol90141146YuetalJImmunol148633637SakaguchietalEMBOJ734573464;29CXCR5バーキットリンパ腫レセプター1は、CXCL13ケモカインによって活性化され、リンパ球遊走及び体液性防御において機能し、HIV-2感染、おそらくエイズ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症において役割を果たす、Gタンパク質共役型受容体;372アミノ酸,等電点:8.54分子量:41959TM:7[P]遺伝子染色体:11q23.3,Genbank受託番号NP_001707.1国際公開第2004040000号;国際公開第2004015426号;米国特許出願公開第2003105292号実施例2;米国特許第6555339号実施例2;国際公開第200261087号図1;国際公開第200157188号請求項20,頁269;国際公開第200172830号頁12-13;国際公開第200022129号実施例1,頁152-153,実施例2,頁254-256;国際公開第9928468号請求項1,頁38;米国特許第5440021号実施例2,col49-52;国際公開第9428931号頁56-58;国際公開第9217497号請求項7,図5;DobneretalEurJImmunol2227952799BarellaetalBiochemJ309773779;30HLA-DOBペプチドを結合しそれらをCD4Tリンパ球に提示するMHCクラスII分子Ia抗原のベータサブユニット;273アミノ酸,等電点:6.56分子量:30820TM:1[P]遺伝子染色体:6p21.3,Genbank受託番号NP_002111.1TonnelleetalEMBOJ428392847JonssonetalImmunogenetics29411413BecketalJMolBiol228433441StrausbergetalProcNatlAcadSciUSA991689916903ServeniusetalJBiolChem26287598766BecketalJMolBiol255113NaruseetalTissueAntigens59512519;国際公開第9958658号請求項13,図15;米国特許第6153408号Col35-38;米国特許第5976551号col168-170;米国特許第6011146号col145-146;KasaharaetalImmunogenetics306668LarhammaretalJBiolChem2601411114119;31P2X5プリンレセプターP2Xリガンド開口型イオンチャネル5は、細胞外ATPにより開閉されるイオンチャネルであり、シナプス伝達及び神経発生に関与する可能性があり、欠乏は、特発性排尿筋不安定性の病態生理の一因となり得る;422アミノ酸,等電点:7.63,分子量:47206TM:1[P]遺伝子染色体:17p13.3,Genbank受託番号NP_002552.2LeetalFEBSLett418195199;国際公開第2004047749号;国際公開第2003072035号請求項10;TouchmanetalGenomeRes10165173;国際公開第200222660号請求項20;国際公開第2003093444号請求項1;国際公開第2003087768号請求項1;国際公開第2003029277号頁82;32CD72B細胞分化抗原CD72,Lyb-2PROTEINSEQUENCEFullmaeaity...tafrfpd1..359;359アミノ酸,等電点:8.66,分子量:40225TM:1[P]遺伝子染色体:9p13.3,Genbank受託番号NP_001773.1国際公開第2004042346号請求項65;国際公開第2003026493号頁51-52,57-58;国際公開第200075655号頁105-106;VonHoegenetalJImmunol14448704877StrausbergetalProcNatlAcadSciUSA991689916903;33LY64リンパ球抗原64RP105,ロイシンリッチリピートLRRファミリーのI型膜タンパク質であり、B細胞の活性化及びアポトーシスを制御し、機能喪失は全身性エリテマトーデスの患者における疾患活性の上昇に関連する;661アミノ酸,等電点:6.20,分子量:74147TM:1[P]遺伝子染色体:5q12,Genbank受託番号NP_005573.1米国特許出願公開第2002193567号;国際公開第9707198号請求項11,頁39-42;MiuraetalGenomics38299304MiuraetalBlood9228152822;国際公開第2003083047号;国際公開第9744452号請求項8,頁57-61;国際公開第200012130号頁24-26;34FcRH1Fcレセプター様タンパク質1,C2タイプIg様ドメイン及びITAMドメインを含む免疫グロブリンFcドメインについての推定上のレセプターであり、B-リンパ球分化において役割を有し得る;429アミノ酸,等電点:5.28,分子量:46925TM:1[P]遺伝子染色体:1q21-1q22,Genbank受託番号NP_443170.1国際公開第2003077836号;国際公開第200138490号請求項6,図18E-1-18-E-2;DavisetalProcNatlAcadSciUSA9897729777;国際公開第2003089624号請求項8;欧州特許第1347046号請求項1;国際公開第2003089624号請求項7;35IRTA2免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連2Immunoglobulinsuperfamilyreceptortranslocationassociated2、B細胞発生及びリンパ腫形成において役割を有し得る推定上の免疫レセプター;一部のB細胞悪性腫瘍においてトランスロケーションによる遺伝子の調節解除が発生する;977アミノ酸,等電点:6.88分子量:106468TM:1[P]遺伝子染色体:1q21,Genbank受託番号ヒト:AF343662,AF343663,AF343664,AF343665,AF369794,AF397453,AK090423,AK090475,AL834187,AY358085;マウス:AK089756,AY158090,AY506558;NP_112571.1国際公開第2003024392号請求項2,図97;NakayamaetalBiochemBiophysResCommun277124127;国際公開第2003077836号;国際公開第200138490号請求項3,図18B-1-18B-2;36TENB2TMEFF2,tomoregulin,TPEF,HPP1,TR,増殖因子のEGF/ヘレグリンファミリー及びフォリスタチンに関連する推定上の膜貫通型プロテオグリカン;374アミノ酸,NCBI受託番号:AAD55776,AAF91397,AAG49451,NCBIRefSeq:NP_057276;NCBIGene:23671;OMIM:605734;SwissProtQ9UIK5;Genbank受託番号AF179274;AY358907,CAF85723,CQ782436国際公開第2004074320号配列番号810;特開2004-113151号公報配列番号2,4,8;国際公開第2003042661号配列番号580;国際公開第2003009814号配列番号411;欧州特許第1295944号頁69-70;国際公開第200230268号頁329;国際公開第200190304号配列番号2706;米国特許出願公開第2004249130号;米国特許出願公開第2004022727号;国際公開第2004063355号;米国特許出願公開第2004197325号;米国特許出願公開第2003232350号;米国特許出願公開第2004005563号;米国特許出願公開第2003124579号;Horieetal2000Genomics67:146-152;UchidaetalBiochemBiophysResCommun266593602LiangetalCancerRes60490712GlynneJonesetalIntJCancerOct159417884;37PMEL1シルバーホモログsilverhomolog;SILV;D12S53E;PMEL17;SI;SIL;ME20;gp100BC001414;BT007202;M32295;M77348;NM_006928;McGlincheyRPetalProcNatlAcadSciUSA1061373113736KummerMPetalJBiolChem28422962306;38TMEFF1EGF様及び2つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通型タンパク質1;Tomoregulin-1;H7365;C9orf2;C9ORF2;U19878;X83961NM_080655;NM_003692;HarmsPWGenesDev1726242629GerySetalOncogene2227232727;39GDNF-Ra1GDNFファミリーレセプターアルファ1;GFRA1;GDNFR;GDNFRA;RETL1;TRNR1;RET1L;GDNFR-アルファ1;GFR-ALPHA-1;U95847;BC014962;NM_145793NM_005264;KimMHetalMolCellBiol2922642277TreanorJJetalNature3828083;40Ly6Eリンパ球抗原6複合体、遺伝子座E;Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1NP_002337.1;NM_002346.2;deNooijvanDalenAGetalIntJCancer103768774ZammitDJetalMolCellBiol22946952;41TMEM46シサホモログshisahomolog2アフリカツメガエル;SHISA2NP_001007539.1;NM_001007538.1;FurushimaKetalDevBiol306480492ClarkHFetalGenomeRes1322652270;42Ly6G6Dリンパ球抗原6複合体、遺伝子座G6D;Ly6-D,MEGT1NP_067079.2;NM_021246.2;MallyaMetalGenomics80113123RibasGetalJImmunol163278287;43LGR5ロイシンリッチリピート含有Gタンパク質共役型受容体5;GPR49,GPR67NP_003658.1;NM_003667.2;SalantiGetalAmJEpidemiol170537545YamamotoYetalHepatology37528533;44RETretプロトオンコジーン;MEN2A;HSCR1;MEN2B;MTC1;PTC;CDHF12;Hs.168114;RET51;RET-ELE1NP_066124.1;NM_020975.4;TsukamotoHetalCancerSci10018951901NaritaNetalOncogene2830583068;45LY6Kリンパ球抗原6複合体、遺伝子座K;LY6K;HSJ001348;FLJ35226NP_059997.3;NM_017527.3;IshikawaNetalCancerRes671160111611deNooijvanDalenAGetalIntJCancer103768774;46GPR19Gタンパク質共役型受容体19;Mm.4787NP_006134.1;NM_006143.2;MontpetitAandSinnettDHumGenet105162164ODowdBFetalFEBSLett394325329;47GPR54KISS1レセプター;KISS1R;GPR54;HOT7T175;AXOR12NP_115940.2;NM_032551.4;NavenotJMetalMolPharmacol7513001306HataKetalAnticancerRes29617623;48ASPHD1アスパラギン酸β-ヒドロキシラーゼドメイン含有1;LOC253982NP_859069.2;NM_181718.3;GerhardDSetalGenomeRes1421212127;49チロシナーゼTYR;OCAIA;OCA1A;チロシナーゼ;SHEP3NP_000363.1;NM_000372.4;BishopDTetalNatGenet41920925NanHetalIntJCancer125909917;50TMEM118リングフィンガータンパク質,膜貫通型2;RNFT2;FLJ14627NP_001103373.1;NM_001109903.1;ClarkHFetalGenomeRes1322652270SchererSEetalNature44034635151GPR172AGタンパク質共役型受容体172A;GPCR41;FLJ11856;D15Ertd747eNP_078807.1;NM_024531.3;EricssonTAetalProcNatlAcadSciUSA10067596764TakedaSetalFEBSLett52097101.親抗体はまた、アルブミン結合ペプチドABP配列を有する融合タンパク質であってもよいDennisetalAlbuminBindingAsAGeneralStrategyForImprovingThePharmacokineticsOfProteinsJBiolChem2773503535043;国際公開第01/45746号。本発明の抗体は、iDennisetalJBiolChem2773503535043の表III及びIV,頁35038;ii米国特許出願公開第20040001827号の[0076];及びiii国際公開第01/45746号の頁12-13に記載のABP配列を有する融合タンパク質を含み、その全てが参照により本明細書に援用される。突然変異によるシステイン操作抗体を調製するため、出発ポリペプチドのアミノ酸配列変異体をコードするDNAが当技術分野で公知の種々の方法により調製される。これらの方法は、ポリペプチドをコードする前に調製したDNAの部位特異的またはオリゴヌクレオチド介在性変異誘発、PCR変異誘発、及びカセット変異誘発による調製を含むがこれらに限定されない。組換え抗体の変異体は、制限断片の操作によって、又は合成オリゴヌクレオチドとの重複伸長PCRによっても構築されうる。変異誘発プライマーは、システインのコドンの置換をコードする。標準的な変異誘発法が、そのような変異システイン操作抗体をコードするDNAを生成するために用いることができる。一般的なガイダンスはSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNY1989及びAusubeletalCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenePublishingandWileyInterscienceNewYorkNY1993に見出すことができる。部位特異的変異誘発法は、置換変異体、すなわち変異タンパク質を作製するための一つの方法であるCarteretalNucleicAcidsRes1344314443HoetalGene775159及びKunkeletalProcNatlAcadSciUSA82488。出発DNAは、望ましい変異をコードするオリゴヌクレオチドをその出発DNAの一本鎖に最初にハイブリダイズすることで改変される。ハイブリダイゼーションの後、DNAポリメラーゼは、プライマーとしてハイブリダイズされたオリゴヌクレオチドを使用し、テンプレートとして出発DNAの一本鎖を使用して、第二鎖全体を合成するために使用される。従って、所望の変異をコードするオリゴヌクレオチドが得られた二本鎖DNAに組み込まれる。部位特異的変異誘発法は、変異を誘発されるべきタンパク質を発現プラスミド内で発現する遺伝子内で行うことができ、得られたプラスミドは配列が決定され、望まれるシステイン置換変異生成の導入を確認するLiuetalJBiolChem2732025220260。部位特異的プロトコールや形式は広く入手可能なもの、例えばQuikChange登録商標多重部位特異的変異生成キットストラタジーン、ラホーヤ、カリフォルニア州である。PCR突然変異誘発はまた、出発ポリペプチドのアミノ酸配列変異体を作るのに適している。HiguchiinPCRProtocolspp177183AcademicPressItoetalGene1026770BernhardetalBioconjugateChem5126132及びValletteetalNucAcidsRes17723733を参照。簡単に説明すると、PCRにおける出発物質としてテンプレートDNAの少量が用いられる場合、テンプレートDNAの対応する領域とは配列が若干異なるプライマーが、プライマーがテンプレートとは異なる場所においてのみ、テンプレート配列とは異なる特異的DNA断片の比較的多量を産生するために用いることができる。変異体を調製するための別の方法であるカセット式変異誘発は、WellsetalGene34315323により記載される技術にもとずく。出発材料は、変異されるべき出発ポリペプチドを含むプラスミド又は他のベクターである。変異されるべき出発DNAのコドンが同定される。同定された変異部位のそれぞれの側にユニークな制限エンドヌクレアーゼ部位が存在する必要がある。そのような制限酵素部位が存在しない場合、それらは出発ポリペプチドDNAの適切な場所でそれらを導入するために、上記オリゴヌクレオチド媒介突然変異誘発法を用いて生成される場合がある。プラスミドDNAは、それを線形化するために、これらの部位で切断される。制限部位間のDNAの配列をコードするが、望まれる変異を含む二本鎖オリゴヌクレオチドは、標準的な方法を用いて合成され、ここでオリゴヌクレオチドの二本鎖は別々に合成され、標準的な技術を用いて一緒にハイブリダイズされる。この二本鎖オリゴヌクレオチドは、カセットと呼ばれる。このカセットは、それが直接プラスミドにライゲーションすることができるように、線状プラスミドの両端と一致する5’及び3’の両端を持つように設計されている。このプラスミドは、今や変異DNA配列を含む。コードされたシステインの置換を含む変異体DNAは、DNA配列決定により確認することができる。単一の変異はまた、PCRに基づく変異誘発によって、テンプレートとして二本鎖プラスミドDNAを用いたオリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発によって生成されるMolecularCloningALaboratoryManual3rdeditionZolleretalMethodsEnzymol100468500ZollerMJandSmithMNuclAcidsRes1064876500。4D5抗HER2チオFABの操作及びチオール反応性システインは抗HER2hu4D5Fabv8Fab断片抗体の重鎖と軽鎖の各位置に導入された米国特許第5821337号;CarteretalProcNatlAcadSci8942854289。全440の重鎖変異と軽鎖変異は本明細書に記載の方法に従って調製された。チオール反応性はPHESELECTORアッセイに従って測定された。重鎖配列は連続番号付けシステムによって番号が付けられる。軽鎖配列は、カバット番号付けシステムに従う。軽鎖において、カバットと連続番号付けは同じ番号を表示する。重鎖hu4D5Fabv8変異体は、HER2レセプタータンパク質への効率的結合及びビオチン化試薬、ビオチン-PEO-マレイミドとのチオール反応性に対して選択された米国特許第7521541号。ある重鎖変異体は、HER2ECDへの結合を制限したか又は損なっているが、その理由はこれが抗体Fabの可変領域のCDRに位置し、抗原結合HER2に重要な残基であるからである。Fabの定常ドメインに位置する残基の幾つかも貧弱なHER2結合を生じるが、その理由はこれらの残基がFabの構造とフォールディングに寄与する場合があり、従ってM13ページpage上で貧弱な4D5-Fab表示を生じるからであるJunutulaJRetalJImmunolMethods3324152。貧弱なHER2ECD結合を持つ重鎖hu4D5Fabv8変異体は、位置1,21,31,33-36,38,48-50,59,87,95,101,104,129,131,132,136,153,155,159,166,169,170,172,197,198,202,215,219にシステイン変異を含んでいた。野生型システイン変異体22,96,147,203,223が測定された。他の重鎖変異体はビオチン化試薬とのチオール反応性を制限していた。システイン操作法により導入されたA121C遊離システインアミノ酸が本明細書で説明され、配列番号32は連続番号付けシステムにより示される。定常ドメインの先頭のこの残基は、EU番号付けシステムにより示されるA118C、又はカバットシステムによるA114Cでもある。本明細書に記載される抗体-薬剤コンジュゲートにおいてコンジュゲートした変異体図5a及び5b、表3及び実施例6は、配列番号32を含む抗体の指定のためにEUシステムのA118Cを用いている。遊離のシステインアミノ酸は表1の中央列の配列に隣接残基を伴って中央にある。重鎖の置換されたアミノ酸と位置が左の行に示される。重鎖hu4D5Fabv8変異体、表1の配列番号1~49はHER2結合とチオール反応性値の約0.8以上を保持しており、野生型システイン変異体を除外している。配列番号1~49表1による抗体はチオール反応性を示しており、捕獲標識、検出標識、薬剤部分又は固体支持体との共有結合を形成するのに有用であり得る。表1の重鎖変異体は、チオFab又はチオMabとして、例えば抗体-薬剤コンジュゲートとしてコンジュゲートし得る。軽鎖hu4D5Fabv8変異体は、HER2レセプターへの効率的結合及びビオチン化試薬、ビオチン-PEO-マレイミドとのチオール反応性に対して選択された米国特許第7521541号。ある軽鎖変異体は、HER2への結合を制限したか又は損なっているが、その理由はこれが抗体Fabの可変領域のCDRに位置し、抗原結合HER2に重要な残基であるからである。Fabの定常ドメインに位置する残基の幾つかはまた貧弱なHER2結合を生じるが、その理由はこれらの残基がFabの構造とフォールディングに寄与する場合があり、従ってM13ページpage上で貧弱な4D5-Fab表示を生じるからであるJunutulaJRetalJImmunolMethods3324152。HER2に対する貧弱な結合を持つ軽鎖hu4D5Fabv8変異体は、位置4,29-32,35,36,50,82,86,89-91,113,115,117,120,126,128,139,141,146,148,179,186,192,202にシステイン変異を含んでいた。野生型システイン変異体23,134,194,214が測定された。他の軽鎖変異体はビオチン化試薬とのチオール反応性を制限していた。本明細書で説明され、システイン操作法により導入されたV205C遊離システインアミノ酸残基及び配列番号96はカバット番号付けシステム及び連続番号付けシステムにより示される。本明細書に記載される抗体-薬剤コンジュゲートにおいてコンジュゲートしたV205変異体図5a及び5b、表3及び実施例6は、配列番号96を含む。遊離のシステインアミノ酸は表2の中央列の配列に隣接残基を伴って中央にある。軽鎖の置換されたアミノ酸と位置が左の行に示される。軽鎖hu4D5Fabv8変異体、表2の配列番号50~98はHER2結合とチオール反応性値の約0.8以上を保持しており、野生型システイン変異体を除外している。配列番号50~98表2による抗体はチオール反応性を示しており、捕獲標識、検出標識、薬剤部分又は固体支持体との共有結合を形成するのに有用であり得る。表2の軽鎖変異体は、チオFab又はチオMabとして、例えば抗体-薬剤コンジュゲートとしてコンジュゲートし得る。コンジュゲーションのためのシステイン操作抗体の調製所定の条件下では、システイン操作抗体は、DTTクリーランドの試薬、ジチオスレイトール、又はTCEPトリス2-カルボキシエチルホスフィン塩酸塩;GetzetalAnalBiochemVol2737380SoltecVenturesBeverlyMA等の還元剤で処理することにより、リンカー試薬とのコンジュゲーションのために反応性になりうる。CHO細胞で発現される完全長システイン操作モノクローナル抗体チオMabGomezetalBiotechnologyandBioeng105748760GomezetalBiotechnolProg2614381445が、新たに導入されたシステイン残基と培地中に存在するシステインの存在の間に形成する可能性のあるジスルフィド結合を還元するために、室温で一晩約50倍過剰のDTTにより還元された。還元されたチオMabは10mM酢酸ナトリウムpH5で希釈され、HiTrapSPFFカラム上にロードされ、150mM塩化ナトリウムを含む50mMのTris-Cl,pH7.5で溶出した。ジスルフィド結合は、50mMTris-Cl,pH7.5中で室温で3時間、15培DHAAによる再酸化を行うことにより、親モノクローナル抗体中に存在するシステイン残基との間で再形成された。当技術分野で公知の他の酸化体、すなわち、酸化剤、及び酸化条件を使用することができる。周囲の空気酸化もまた有効である。この穏やかな、部分的な再酸化工程は、高い忠実度で効率的に鎖内ジスルフィドを形成する。コンジュゲーションを生じさせてチオMab抗体-薬剤コンジュゲートを形成するために、およそ1.5培過剰の薬剤-リンカー中間体、例えば5、8、14、18を添加し、混合し、室温で1時間放置した。コンジュゲーション混合物をHiTrapSPFFカラムにロードして溶出し、過剰の薬剤-リンカー中間体及び他の不純物を取り除いた。N-メチルアラニニルメイタンシノール薬剤部分本発明の抗体-薬剤コンジュゲートADC薬剤部分Dは、微小管阻害、有糸分裂阻害、トポイソメラーゼ阻害、又はDNAインターカレーションを含む任意の作用機序を通じて細胞毒性又は細胞増殖抑制作用を有するメイタンシノイド誘導体である。メイタンシン化合物は、マイクロチューブリンタンパク質であるチュービュリンの重合阻害によって有糸分裂中の微小管の形成を阻害することによって、細胞増殖を阻害するRemillardetalScience18910021005。メイタンシン及びメイタンシノイドは非常に細胞傷害性であるが、癌治療におけるそれらの臨床用途は、それらの乏しい腫瘍選択性に主に起因するそれらの重篤な全身副作用によって非常に制限されている。メイタンシンを用いた臨床試験は、中枢神経系および胃腸系に対する深刻な副作用に起因して中断されたIsseletalCanTreatmentRev5199207。メイタンシノイド薬剤部分は、抗体-薬剤コンジュゲートにおいて魅力的な薬剤部分である。なぜなら、これらは以下であるからである:i発酵又は化学修飾、発酵産物の誘導体化によって調製するために比較的利用可能である、ii非ジスルフィドリンカーを通しての抗体に対するコンジュゲーションに適している官能基を用いた誘導体化に適している、iii血漿中で安定である、及びiv様々な腫瘍細胞株に対して有効である米国特許出願公開第2005/0169933号;国際公開第2005/037992号;米国特許第5208020号。メイタンシノイド誘導体は、公知の方法に従って、遺伝子工学技術を用いて生成される、天然起源から調製されるN-メチルアラニニルメイタンシノール化合物を含むYuetalProcNatAcadSci9979687973;米国特許第6790954号;米国特許第7192750号。最初にアフリカの低木から単離され米国特許第3896111号、メイタンシンは最も効率的に微生物発酵によって得られ米国特許第4151042号;米国特許第6790954号;米国特許第7192750号;米国特許第7432088号、C-3エステルアンサマイトシン混合物を産生する。C-3エステルの還元はメイタンシノールを産生する米国特許第7411063号;米国特許第6333410号。メイタンシノールのC-3ヒドロキシルは、アラニニルエステルを含み米国特許第4137230号;米国特許第4260608号;米国特許第5208020号;及びChemPharmBull123441、選択的に誘導体化され得る米国特許第7301019号;米国特許第7276497号;米国特許第7473796号;米国特許第7598375号。式Iの抗体-薬剤コンジュゲートADCのN-メチルアラニニルメイタンシノールの薬剤部分Dは次の構造を有する:波線はリンカーLに対する結合部位を示す。メイタンシノイド薬剤部分の全ての立体異性体は、本発明の化合物、即ちD.のキラル炭素原子でのRとSコンフィギュレーションの任意の組み合わせを意図されている。一実施態様では、メイタンシノイド薬剤部分Dは、次の立体化学を有する。本発明の式Iの抗体-薬剤コンジュゲートのN-メチルアラニニルメイタンシノール薬剤部分Dと薬剤-リンカー中間体は、米国特許出願公開第2005/0276812号の29頁と32頁にそれぞれ例示されたmpeo-DM1又はmcc-DM1結合など、メイタンシノイド薬剤部分のNメチルアラニニル基に結合したアルキルチオマレイミド結合でなく、Nメチルアラニニル基に対するアミドアルキル結合又はアミドエチレンオキシ結合を含む。N-メチルアラニニルメイタンシノール薬剤-リンカー中間体本発明はNメチルアラニニルメイタンシノール薬剤-リンカー中間体化合物を包含し、ここでリンカーはC-3アラニニルメイタンシノイド部分に結合し、式Iを有する:Lは、Eは、nは2、3、4、5、又は6であり;mは2、3、又は4であり;及びqは0又は1である。リンカーLは、1つまたは複数のメイタンシノール薬剤部分Dおよび抗体ユニットAbを連結して、式Ia又はIbの抗体-薬剤コンジュゲートADCを形成するために用いることができる二官能性又は多官能性部分である。抗体-薬剤コンジュゲートADCは、薬剤と抗体に結合するための反応性官能基を有するリンカーを用いて都合良く調製することができる。システイン操作抗体Abのシステインチオールは、リンカー試薬又は薬剤-リンカー中間体の求電子性官能基Eとの結合を形成することができる。ブロモアセトアミド及びマレイミド官能基は、タンパク質のシステインチオールを含む、チオールと反応することが知られているSchelteetalBioconjugateChem11118123AlleyetalBioconjugateChem19759765。一態様において、リンカーは、抗体に存在する求核システインに対して反応性である求電子基を持つ反応性部位を有する。抗体のシステインチオールは、リンカー上の求電子基と反応性であり、リンカーに共有結合を形成する。有用な求電子性基としては、限定されないが、マレイミド基及びハロアセトアミド基を含む。システイン操作抗体は、KlussmanetalBioconjugateChemistry15765773の766頁のコンジュゲーション方法、及び実施例6のプロトコルに従って、例えばマレイミドまたはα-ハロカルボニル等の求電子性官能基を持つリンカー試薬又は薬剤-リンカー中間体と反応する。チオール反応性官能基、求電子性官能基の例としては、限定されないが、マレイミド、α-ハロアセチル、スクシンイミドエステルなどの活性化エステル、4ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、イソチオシアネート、ビニルスルホン、クロロトリアジン、2-ハロピリジル、クロロピリミジン、及びエナミドが挙げられる。薬剤-リンカー中間体のリンカー部分は、2、3、4、5、又は6メチレン基のアルキルであり得、ここでLはで、nは2、3、4、5又は6である。典型的な実施態様は、図1及び実施例1のmal-mc-ala-May薬剤-リンカー中間体5であり、ここでEはマレイミドでnは5である。S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による2,5-ジオキソピロリジン-1-イル6-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イルヘキサノエート1のアシル化は、S-2-6-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-N-メチルヘキサンアミドプロパン酸3を与える。メイタンシノール4の3ヒドロキシルでの3とのカップリングはmal-hex-ala-May5を与え、抗体-薬剤コンジュゲートのAb-hex-mc-ala-Mayを与えるための抗体とのコンジュゲーションの準備ができる。別の典型的な実施態様は、図2及び実施例2のbra-hex-ala-May8であり、ここでEは2ブロモアセトアミドでnは5である。S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による2,5-ジオキソピロリジン-1-イル6-2ブロモアセトアミドヘキサノエート6のアシル化は、S-2-6-2ブロモアセトアミド-N-メチルヘキサンアミドプロパン酸7を与える。メイタンシノール4の3ヒドロキシルでの7とのカップリングはbra-hex-ala-May8を与え、抗体-薬剤コンジュゲートのAb-acet-hex-ala-Mayを与えるための抗体とのコンジュゲーションの準備ができる。薬剤-リンカー中間体のリンカー部分Lは、エチレンオキシPEGユニットを含み得、ここでLは;nは2、3、4、5、又は6であり;mは2、3、又は4であり;及びqは1である。典型的な実施態様は、図3及び実施例3のmal-PEG3-ala-May薬剤-リンカー中間体14であり、ここでEはマレイミドで、nは4,及びmは3である。アジピン酸から形成される、モノN-ヒドロキシスクシンイミドNHSエステル、6-2,5-ジオキソピロリジン-1-イルオキシ-6-オキソヘキサン酸9を、2,2’-2,2’-オキシビスエタン-2,1-ジイルビスオキシジエタンアミンと反応させて、1-アミノ-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン-18-オイック酸10を与える。メチル2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-カルボン酸により10のマレイミドが形成され、1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アゾオクタデカン-18-オイック酸11を与える。11のNHSエステルがN-ヒドロキシスクシンイミドとDCCにより形成され、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル-1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン18-オエート12を与える。S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による12のアミド化は、S-1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-19,20-ジメチル-13,18-ジオキソ-3,6,9-トリオキサ-12,19-ジアザヘニコサン-21-オイック酸13を与えた。メイタンシノール4の3ヒドロキシルでの13とのカップリングはmal-PEG3-ala-May薬剤-リンカー中間体14を与え、抗体-薬剤コンジュゲートのAb-mal-PEG3-ala-Mayを与えるための抗体とのコンジュゲーションの準備ができる。別法として、メイタンシノール4を、THF/DMF中で、N、N-ジイソプロピルエチルアミン、亜鉛トリフラート、及びS-3,4-ジメチルオキサゾリジン-2,5-ジオン2aと反応させて、3-S-N-メチルアラニニルメイタンシノール4aを与えた図1b。試薬2aは、DCM中で、S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2と三塩化リンから調製される。3-S-N-メチルアラニニルメイタンシノール4aを、1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン-18-オイック酸11、N-3-ジメチルアミノプロピル-N’-エチルカルボジイミド塩酸塩、及びN、N-ジイソプロピルエチルアミンと結合させて、mal-PEG3-ala-May14を与える図3。別の典型的な実施態様は、図4及び実施例4のbra-PEG3-ala-May18であり、ここでEは2ブロモアセトアミドでnは4で,mは3である。1-アミノ-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン-18-オイック酸10は、臭化ブロムアセチルでアシル化され、1-ブロモ-2,16-ジオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15-ジアザヘニコサン-21-オイック酸15を与える。15のNHSエステルがDCM中でN-ヒドロキシスクシンイミドとDCCにより形成され、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、1-ブロモ-2,16-ジオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15-ジアザヘニコサン-21-オエート16を与える。S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による16のアミド化は、リンカー試薬、S-1-ブロモ-22,23-ジメチル-2,16,21-トリオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15,22-トリアザテトラコサン-24-オイック酸17を与えた。メイタンシノール4の3ヒドロキシルでの17とのカップリングはbra-PEG3-ala-May薬剤-リンカー中間体18を与え、抗体-薬剤コンジュゲートのAb-acet-PEG3-ala-Mayを与えるための抗体とのコンジュゲーションの準備ができる。別法として、3-S-N-メチルアラニニルメイタンシノール4a図1bを、1-ブロモ-2,16-ジオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15-ジアザヘニコサン-21-オイック酸15、N-3-ジメチルアミノプロピル-N’-エチルカルボジイミド塩酸塩、及びN、N-ジイソプロピルエチルアミンと結合させて、bra-PEG3-ala-May18を与える図4。アラニニルメイタンシノイド抗体-薬剤コンジュゲート本発明の抗体-薬剤コンジュゲートは、抗体の反応性システインチオール基へのリンカー部分を通して共有結合したN-メチルアラニニルメイタンシノール薬剤部分からなる。抗体-薬剤コンジュゲートADCの例示的実施態様は、システイン操作抗体Ab及びN-メチルアラニニルメイタンシノール薬剤部分Dを含み、ここでその抗体は、一以上の遊離システインアミノ酸を有し、かつその抗体はリンカー部分Lにより、一以上の遊離システインアミノ酸を通してDに結合され;その組成物は次の式を有する:ここでpは1、2、3、又は4である。抗体分子にチオール反応性リンカー部分を介してコンジュゲートさせることができる薬剤部分の数は、本明細書に記載の方法によって導入されたシステイン残基の数によって制限される。従って、式Iの薬剤-リンカー中間体から調製された典型的なADCは、1つ、2つ、3つ、又は4つの操作されたシステインアミノ酸を有する抗体を含む。アラニニルメイタンシノイド抗体-薬剤コンジュゲートの典型的な実施態様は式IaでありLはマレイミド部分を含み、そして式IbでありLはアセトアミドメチル部分を含む。Lは、nは2、3、4、5、又は6であり;mは2、3、又は4であり;qは0又は1であり;pは1から4であり;及びAbは抗体である。式Iaのアラニニルメイタンシノイド抗体-薬剤コンジュゲートの典型的実施態様はAb-mal-hex-ala-May:及びAb-mal-PEG3-ala-May:を含む。式Ibのアラニニルメイタンシノイド抗体-薬剤コンジュゲートの典型的実施態様はAb-acet-hex-ala-May:及びAb-acet-PEG3-ala-May:を含む。本発明のADC化合物は、抗癌活性についての有用性を持つものを含む。特に、化合物は、薬剤部分、即ち毒素にコンジュゲートした、即ちリンカーにより共有結合したシステイン操作抗体が含まれる。薬剤が抗体にコンジュゲートしていないときは薬剤は細胞毒性または細胞増殖抑制効果を持つ。薬剤部分の生物学的活性は、抗体との結合によってこうして調節される。本発明の抗体-薬剤コンジュゲートADCは、腫瘍組織への細胞毒性薬の有効用量を選択的に送達し、それによりより大きな選択性、即ちより少ない有効用量を達成することができる。インビトロの細胞増殖アッセイ一般に、抗体-薬剤コンジュゲートADCの細胞毒性又は細胞増殖抑制効果は、細胞培養培地中で、レセプタータンパク質、例えばHER2を有する哺乳動物細胞を細胞培地中でADCの抗体に曝露し;その細胞を約6時間から約5日間のある期間にわたって培養し;細胞生存率を測定することにより測定される。細胞ベースのインビトロアッセイが、本発明のADCの生存率増殖、細胞毒性、及びアポトーシスの誘導カスパーゼ活性化を測定するために用いられる。抗体-薬剤コンジュゲートのインビトロでの効力を細胞増殖アッセイにより測定した実施例7。CellTiter-Glo登録商標ルミネセンス細胞生存率アッセイは、鞘翅目ルシフェラーゼの組換え発現に基づいた市販のPromegaCorp.,Madison,WI、均質なアッセイ法である米国特許第5583024号;5674713号及び5700670号。この細胞増殖アッセイは、代謝的に活性な細胞の指標である存在するATPの定量に基づいて、培養中の生存細胞の数を決定するCrouchetalJImmunolMeth1608188;米国特許第6602677号。CellTiter-Glo登録商標アッセイは、96ウェル形式で行い、自動化ハイスループットスクリーニングHTSに適応させたCreeetalAntiCancerDrugs6398404。均質なアッセイ法では、血清添加培地で培養した細胞に直接単一試薬CellTiter-Glo登録商標試薬を追加することを含む。細胞の洗浄、培地の除去、及び複数のピペット操作は必要ではない。本システムは、試薬を添加して混合した後10分以内で、384ウェルフォーマットでわずか15細胞/ウェルを検出する。細胞は、ADCで連続的に処理され得るか、又はそれらはADCで処理されてADCから分離されても良い。一般に、細胞は短時間、即ち3時間処理され、連続的に処理された細胞と同様の効力の作用を示した。均質な添加-混合-測定の形式は、細胞の溶解と、存在するATPの量に比例する発光シグナルの生成とをもたらす。ATPの量は、培養物中に存在する細胞の数に直接比例する。CellTiter-Glo登録商標アッセイは、使用される細胞の型および培地に依存して、一般には5時間よりも長い半減期を有する、ルシフェラーゼ反応により生成されるグロー型の発光シグナルを生成する。生存細胞は、相対発光単位RLUに反映される。基質のカブトムシルシフェリンは、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱炭酸され、同時にATPのAMPへの変換を伴い光子を生成する。5日目のインビトロSK-BR-3細胞増殖アッセイの結果に対する試験サンプルの複数の濃度が表3に示される。全てのチオMab抗体-薬剤コンジュゲートはリンカーに関わらず類似のインビトロ効力を示し、これらのコンジュゲートはTMAb-mcc-DM1IC50:5ng/mlに比較して約2倍小さい効力を示した表3。チオMabADCの薬剤負荷1.8DARを従来のADCの薬剤負荷3.5DARと比較したときに、チオMabによるインビトロでの効力の減少は、従来のADCに比例している。コントロールの非結合トラスツズマブ変異体又はチオトラスツズマブ変異体は、本アッセイで試験された最大10000ng/ml濃度で非常にわずかか或いは全く活性を示さなかった。トラスツズマブ-mcc-DM1トラスツズマブエムタンシンemtansine、TMAb-MCC-DM1、T-DM1は、抗体-薬剤コンジュゲートCAS登録番号139504-50-0で、次の構造を有する:ここで、Trは、リンカー試薬スクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートから形成された、マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートリンカー部分mccを通して、メイタンシノイド薬剤部分DM1米国特許第5208020号;米国特許第6441163号に結合したトラスツズマブである。薬剤の抗体に対する比率又は薬剤負荷は、上記のトラスツズマブ-mcc-DM1の構造でpにより表され、1から約8の整数値の範囲である。薬剤負荷の値は1から8である。トラスツズマブ-mcc-DM1は、様々に負荷され結合した抗体-薬剤コンジュゲートの全混合物を含み、ここでは1、2、3、4、5、6、7、及び8の薬剤部分が抗体トラスツズマブに共有結合している米国特許第7097840号;米国特許第2005/0276812号;米国特許第2005/0166993号。インビボでの効力TMAb-mcc-DM16と、DM1に共有結合したmpeo2hex5及びPEG33,4,7,8リンカーを持つ様々なチオMabコンジュゲート実施例6がMMTV-HER2Fo5トラスツズマブ耐性乳腺腫瘍モデルで試験され、これらの結果を図5a、5b及び6に示した。MMTV-HER2Fo5腫瘍移植片が、CRLのnu/nuマウスの番号2/3乳腺脂肪パッド中に移植された。腫瘍が平均体積で180mm3に達したとき、マウスが無作為化され、次いで試験の第0日にDM1コンジュゲートの1回の静脈内投与10g/kgが与えられた。図5aおよび図5bは、1ビヒクルADCバッファー,2LC-V205C-チオ-TMAb-mpeo-DM1,3LC-V205C-チオ-TMAb-mal-PEG3-ala-May,4HC-A118C-チオ-TMAb-mal-PEG3-ala-May,5LC-V205Cチオ-TMAb-mal-hex-ala-May,6TMAb-mcc-DM1trastuzumab-mcc-DM1,T-DM1,7LC-V205C-チオ抗gD5B6-mal-PEG3-ala-May,8LC-V205C-チオ抗gD5B6-mal-hex-ala-May実施例6、8を投与後に、CRLのnu/nuマウスの乳腺脂肪体に播種したMMTV-HER2Fo5トランスジェニック乳腺腫瘍において、時間に対してフィットさせた腫瘍体積変化のプロットを示す。全ての抗体-薬剤コンジュゲート単一用量は10mg/kgで静脈内投与した。抗gD5B6はコントロール抗体であり、それに対応する抗原はFo5腫瘍組織では発現しない。6TMAb-mcc-DM1は、10mg/kgで腫瘍増殖の一部の阻害を示し、それは、DM1投与量の560mg/m2と同じである、全てのチオTMAb-メイタンシノイドコンジュゲートは、より少ない薬剤負荷を有するにもかかわらず、同一の抗体濃度で、同等の活性を有していた。3LC-V205C-チオ-TMAb-mal-PEG3-ala-Mayは、2LC-V205Cチオ-TMAb-mpeo-DM1とのmg/kg用量の比較においてわずかに改善された活性を示した図5a。hexとPEG3リンカーに結合するチオMabは、低い薬剤負荷に起因してインビトロで2倍小さい効力を示してはいるものの、それらはTMAb-mcc-DM1に対して同等のインビボでの有効性を示しており、hexとPEG3のアラニニルメイタンシノールリンカー薬剤部分が抗体-薬剤コンジュゲートの薬物動態特性を改善し得ることを示している。図6は、1ビヒクル:ヒスチジンバッファー8:20mMヒスチジン酢酸,pH5.5,240mMスクロース,0.02PS20,4HC-A118C-チオ-TMAb-mal-PEG3-ala-May,5mg/kg投与量,150μg/m2薬剤曝露,4HC-A118C-チオ-TMAb-mal-PEG3-ala-May,10mg/kg投与量,300μg/m2薬剤曝露,10HC-A118Cチオ抗gD5B6-bra-PEG3-ala-May,5mg/kg投与量,120μg/m2薬剤曝露,10HC-A118Cチオ抗gD5B6-bra-PEG3-ala-May,10mg/kg投与量,240μg/m2薬剤曝露,11HC-A118CチオTMAb-bra-PEG3-ala-May,5mg/kg投与量,115μg/m2薬剤曝露,11HC-A118CチオTMAb-bra-PEG3-ala-May,10mg/kg投与量,230μg/m2薬剤曝露,12HC-A118C,LC-V205Cチオ-TMAb-mal-PEG3-ala-May,5gm/kg投与量,320μg/m2薬剤曝露,12HC-A118C,LC-V205Cチオ-TMAb-mal-PEG3-ala-May,10gm/kg投与量,640μg/m2薬剤曝露による投与後に、CRLのnu/nuマウスの乳腺脂肪体に播種したMMTV-HER2Fo5トランスジェニック乳腺腫瘍において、時間に対してフィットさせた腫瘍体積変化のプロットを示す。全ての抗体-薬剤コンジュゲート単一用量は、研究の開始時に1回静脈内投与された。9匹の動物の一群に、特定の用量で抗体-薬剤コンジュゲートを投与した。ビヒクルと陰性コントロール10抗gD5B6抗体-薬剤コンジュゲートは腫瘍増殖作用を示さなかった。抗HER2抗体-薬剤コンジュゲート4、11及び12は用量依存性及びメイタンシノイド薬剤曝露依存性腫瘍増殖阻害を示した。12HC-A118C,LC-V205Cチオ-TMAb-mal-PEG3-ala-Mayは、システインが重鎖のA118と軽鎖のV205に導入された二重変異体である。薬剤-リンカー中間体、mal-PEG3-ala-May14実施例3は、薬剤/抗体の比率が3.9でほぼ定量的に、二重変異体HC-A118C,LC-V205Cチオ-TMAbへコンジュゲートしていた。10mg/kgのコンジュゲート12を投与された9匹の試験群の動物は2つの部分応答を示した。抗体-薬剤コンジュゲートの投与本発明の抗体-薬剤コンジュゲートは治療されるべき疾患に適した任意の経路で投与され得る。ADCは典型的には非経口的に、すなわち点滴、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内および硬膜外に投与される。薬学的製剤本発明の治療用抗体-薬剤コンジュゲートADCの薬学的製剤は、典型的には、非経口投与、すなわちボーラス、静脈内、腫瘍内注射用に、薬学的に許容される非経口ビヒクルとともに単位用量の注射可能形態で調製される。所望の程度の純度を有する抗体-薬剤コンジュゲートADCは、任意で凍結乾燥製剤または水溶液の形態で薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤または安定剤RemingtonsPharmaceuticalSciences16theditionOsolAEdと混合される。抗体-薬剤コンジュゲート治療本発明の抗体-薬剤コンジュゲートは、例えば腫瘍抗原の過剰発現によって特徴付けられる種々の疾患または障害を治療するために用いられ得る。典型的な病気または過剰増殖性疾患には、良性または悪性腫瘍、白血病及びリンパ系悪性腫瘍が含まれる。他には、神経細胞、グリア、星状、視床下部、マクロファージ、上皮性、間質性、胞胚腔blastocoelic、炎症性、血管新生及び自己免疫性を含む免疫に関する障害を含む。一般に、治療されるべき疾患又は障害は、癌などの過剰増殖性疾患である。ここで治療されるべき癌の例には、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又は悪性リンパ腫を含むがこれらに限定されない。このような癌のより具体的な例には、扁平上皮癌例えば上皮の扁平細胞癌、小細胞肺癌を含む肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞性癌、胃腸癌を含む胃gastricstomach癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、大腸癌、直腸癌、大腸直腸癌、子宮内膜ないし子宮細胞腫、唾液腺細胞腫、腎臓癌又は腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝細胞腫、食道細胞腫、肝細胞腫、肛門部の細胞腫、陰茎細胞腫、並びに頭部及び頚部の癌が含まれる。ADC化合物が治療において用いられ得る自己免疫性疾患は、リウマチ性疾患例えば、関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、全身性エリテマトーデスSLE及びループス腎炎などの狼瘡、多発性筋炎/皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、及び乾癬の関節炎など、変形性関節症、自己免疫性胃腸及び肝臓疾患例えば、炎症性腸疾患例えば潰瘍性大腸炎及びクローン病、自己免疫性胃炎及び悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆管萎縮症、原発性硬化性胆管炎、及び小児脂肪便病など、血管炎例えば、チャング-シュトラウス血管炎、ウェゲナー肉芽腫症及び多発性動脈炎を含むANCA-関連血管炎、自己免疫性神経学的疾患例えば、多発性硬化症、眼球クローヌスミオクローヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫性多発性神経炎など、腎臓疾患例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びベルガー病など、自己免疫性皮膚科疾患例えば、乾癬、蕁麻疹、蕁麻疹、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、及び皮膚紅班性狼瘡など、血液系疾患例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後の紫斑病、及び自己免疫溶血性貧血など、アテローム性動脈硬化、ブドウ膜炎、自己免疫性聴覚疾患例えば、内耳疾患及び聴力障害など、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植及び自己免疫性内分泌系疾患例えば、インスリン依存型糖尿病IDDMなどの糖尿病関連の自己免疫性疾患、アジソン病及び自己免疫性甲状腺疾患例えばグレーブス病及び甲状腺炎などが含まれる。より好ましい前記疾患には、例えば、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、ANCA関連血管炎、狼瘡、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、IDDM、悪性貧血、甲状腺炎及び糸球体腎炎が含まれる。疾患の予防又は治療のために、ADCの適量は、上記のように治療する疾患のタイプ、疾患の重症度及び過程、予防を目的としてか治療を目的として分子を投与するのか、現在の治療法、患者の病歴、及び抗体への反応、注意深い医師の判断により決定されるであろう。分子は、患者に対して、単回、又は一連の治療にわたって適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、約1μg/kgから15mg/kg例えば0.1から20mg/kgの分子が患者への投与のための初期候補用量となり得る。1つの典型的な一日当たりの用量は上記した要因に応じて約1μg/kgから100mg/kg又はそれ以上の範囲である。患者に投与されるべきADCの典型的な投与量は患者の体重の約0.1から約10mg/kgの範囲である。製造品本発明の他の実施態様において、上述した障害の治療に有用な物質を含む製造品又はキットが提供される。製造品は、容器とラベルまたは容器上にあるまたは容器に付属するパッケージ挿入物を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ブリスター包装等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、疾患の治療のために有効である抗体-薬剤コンジュゲートADC及び無菌のアクセスポートを有し得る例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい。組成物中の少なくとも一の活性剤はADCである。ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が選択される疾患、例えば癌の治療のために使用されることを示している。別法として、または加えて、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用静菌水BWFI、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液を含む第二または第三の容器をさらに含んでもよい。これは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの立場から望まれる他の物質をさらに含んでもよい。実施例1mal-hex-ala-May5の合成S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による2,5-ジオキソピロリジン-1-yl6-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イルヘキサノエート1のアシル化は、S-2-6-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-N-メチルヘキサンアミドプロパン酸3を与える図1a。メイタンシノール4の3-ヒドロキシルで3とカップリングさせてmal-hex-ala-May5を与える。MS[MH]843.5.1HNMR400MHz,CD3OD:δ7.11s,1H,6.76s,2H,6.72-6.65m,2H,6.60dd,J=14.7,11.4Hz,1H,5.69dd,J=14.9,9.1Hz,1H,5.49q,J=6.7Hz,1H,4.65dd,J=11.9,2.1Hz,1H,4.19td,J=10.3,4.1Hz,1H,3.97s,3H,3.62-3.55m,2H,3.41-3.34m,5H,3.23d,J=12.7Hz,1H,3.20s,3H,2.94d,J=9.6Hz,1H,2.84s,3H,2.72-2.62m,1H,2.56-2.45m,1H,2.33-2.23m,1H,2.14dd,J=14.1,1.8Hz,1H,1.68s,3H,1.65-1.42m,7H,1.29d,J=6.8Hz,3H,1.28-1.25m,2H,1.23d,J=6.3Hz,3H,0.84s,3H。実施例2bra-hex-ala-May8の合成S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による2,5-ジオキソピロリジン-1-イル6-2ブロモアセトアミドヘキサノエート6のアシル化は、S-2-6-2ブロモアセトアミド-N-メチルヘキサンアミドプロパン酸7を与える図2。メイタンシノール4の3-ヒドロキシルで7とカップリングさせてbra-hex-ala-May8を与える。実施例3mal-PEG3-ala-May14の合成2,2’-2,2’-オキシビスエタン-2,1-ジイルビスオキシジエタンアミンChem-Impex,5.00g,0.0260molのTHF溶液525mLに4-ジメチルアミノピリジン320mg、0.0026molが添加された。添加漏斗を使用して室温で、これに二炭酸ジ-tert-ブチル5.68g,0.0260molのTHF溶液100mLが1時間にわたって添加された。図3。反応物は、最初は濁ったが、その後清澄となった。McReynoldsK.D.etal.,2002,BioorgMedChem,10:625に従い、反応物をさらに2時間撹拌し、次いで濃縮し、ISCO0-20MeOH/DCMにより精製し、tert-ブチル2-2-2-2-アミノエトキシエトキシエトキシエチルカルバメートを淡黄色油として得た2.70g,36。MS[MH]293.3.1HNMR400MHz,CDCl3:δ5.79s,1H,3.69-3.57m,8H,3.56-3.47m,4H,3.32-3.23m,2H,2.84t,J=5.1Hz,2H,1.44s,9H。tert-ブチル2-2-2-2-アミノエトキシエトキシエトキシエチルカルバメート1.219g,4.169mmolとヘキサン二酸アジピン酸、3.046g,20.84mmolのテトラヒドロフラン溶液100mLを含有するフラスコに、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド1.23g,5.98mmolが添加された。反応物を室温で撹拌すると白濁した。2時間後、溶液を0°Cに冷却し、副生成物のN,N’-ジシクロヘキシル尿素をろ過により除去した。反応物をシリカゲル上で濃縮し、ISCO40gcolumn,0-10MeOH/DCM.により精製した。濃縮して、2,2-ジメチル-4,18-ジオキソ-3,8,11,14-テトラオキサ-5,17-ジアザトリコサン-23-オイック酸を透明油として与えた1.28g、73。MS[MH]421.4.1HNMR400MHz,CDCl3:δ10.55s,1H,6.65s,1H,5.27s,1H,3.67-3.62m,8H,3.60-3.52m,4H,3.48-3.41m,2H,3.35-3.23m,2H,2.35t,J=6.3Hz,3H,2.25t,J=6.5Hz,2H,1.44s,9H。2,2-ジメチル-4,18-ジオキソ-3,8,11,14-テトラオキサ-5,17-ジアザトリコサン-23-オイック酸9682.3mg,0.001623molを含有するバイアルに、1,4-ジオキサン中の4M塩化水素を4mL添加した。反応物を30分間撹拌し、次いで濃縮した。炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液5.1mLを加えた。溶液を0°Cに冷却し、10分間撹拌した後、N-メトキシカルボニルマレイミド251.7mg,1.622mmolを加えた。反応物を0°Cで20分間、より撹拌し、次いで室温に温めた。この溶液を、DMFで希釈し、ギ酸の5滴で急冷し、濾過し、rp-HPLCにより精製し、1-アミノ-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン-18-オイック酸10を透明油として与えた297mg,46。MS[MH]401.3.1HNMR400MHz,CDCl3:δ8.66s,1H,6.56t,J=4.8Hz,1H,3.73t,J=5.6Hz,2H,3.66-3.60m,9H,3.56t,J=5.0Hz,2H,3.47-3.41m,2H,2.35t,J=6.7Hz,2H,2.24t,J=6.9Hz,2H,1.77-1.58m,4H。メチル2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-カルボン酸により10のマレイミドが形成され、1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アゾオクタデカン-18-オイック酸11を与えるHermansonGTBioconjugateTechniquesSecondEditionAcademicPressElsevier。11のNHSエステルがDCM中でN-ヒドロキシスクシンイミドとDCCにより形成され、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン-18-オエート12を与える。S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による12のアミド化は、S-1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-19,20-ジメチル-13,18-ジオキソ-3,6,9-トリオキサ-12,19-ジアザヘニコサン-21-オイック酸13を与えた。マレイミド4の3-ヒドロキシルでの13とのカップリングは、mal-PEG3-ala-May薬剤-リンカー中間体14を与える。別法では、メイタンシノール450.0mg,0.0885mmolのDMF1.12mL,14.5mmol及びTHF380mL,4.6mmolの溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン62mL,0.35mmol、亜鉛トリフラート129mg,0.354mmol、及びS-3,4-ジメチルオキサゾリジン-2,5-ジオン2a80.0mg,0.619mmolが添加された図1b。反応物を24時間撹拌し、酢酸エチル2mLを添加し、次いで5分間かけて、飽和1:1炭酸水素ナトリウム水溶液/塩化ナトリウム水溶液の溶液2mLを添加した。溶液を30分間撹拌した後、塩を濾過し、酢酸エチルですすいだ。二相を分離し、水相を酢酸エチル3×2mLで抽出した。混合した有機相を0.25mLまで濃縮した。酢酸エチル2mLを加え、溶液を再び0.25mLまで減少させた。この希釈と濃度をもう一回行った。最後に、酢酸エチルを約2mL溶液となるように添加し、沈殿した塩を0.45ミクロンのシリンジフィルターを通して濾過し、3-S-N-メチルアラニニルメイタンシノール4aを与えた図1b。3-S-N-メチルアラニニルメイタンシノール4aの溶液に、1-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン-18-オイック酸1165.5mg,0.164mmol、N-3-ジメチルアミノプロピル-N’-エチルカルボジイミド塩酸塩31.4mg,0.164mmol、及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン7.71mL,0.0442mmolを添加した。反応液を2時間撹拌し、反応物を濾過し、RP-HPLCで精製し、mal-PEG3-ala-May14を透明油として与えた48.8mg,53。MS[MH]1032.7.1HNMR400MHz,CDCl3:δ6.83s,1H,6.71s,2H,6.70-6.64m,2H,6.47-6.37m,2H,6.27t,J=4.8Hz,1H,5.67dd,J=15.3,9.1Hz,1H,5.35q,J=6.7Hz,1H,4.78dd,J=12.0,2.8Hz,1H,4.29t,J=10.8Hz,1H,3.98s,3H,3.72t,J=5.7Hz,2H,3.67-3.56m,12H,3.54-3.48m,3H,3.44-3.38m,2H,3.36s,3H,3.19s,3H,3.11d,J=12.7Hz,1H,3.01d,J=9.6Hz,1H,2.84s,3H,2.60dd,J=14.1,12.4Hz,1H,2.48-2.38m,1H,2.30-2.13m,4H,1.75-1.58m,8H,1.52-1.40m,1H,1.29t,J=6.0Hz,6H,1.22d,J=12.9Hz,1H,0.80s,3H。実施例4bra-PEG3-ala-May18の合成2,2-ジメチル-4,18-ジオキソ-3,8,11,14-テトラオキサ-5,17-ジアザトリコサン-23-オイック酸9321.8mg,0.7653mmolを含有するバイアルに、1mLの塩化メチレンと1mLのトリフルオロ酢酸を添加した。反応物を30分間攪拌し、濃縮し、1-アミノ-13-オキソ-3,6,9-トリオキサ-12-アザオクタデカン-18-オイック酸10を得た図3。N,N-ジメチルホルムアミド7.65mLを10のバイアルに添加し、溶液を0°Cまで冷却した図4。臭化ブロモアセチル73mL,0.842mmolを添加し、続いてN、N-ジイソプロピルエチルアミン160mL,0.918mmolを添加した。45分間撹拌した後、0.1のギ酸を含む水2mLを溶液に添加し、生成物をRP-HPLCにより精製し、1-ブロモ-2,16-ジオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15-ジアザヘニコサン-21-オイック酸を透明油として与えた89.6mg,27。MS[MH]441.3.1HNMR400MHz,CDCl3:δ7.12s,1H,6.48s,1H,3.89s,2H,3.69-3.54m,12H,3.53-3.41m,4H,2.36t,J=6.6Hz,2H,2.24t,J=6.8Hz,2H,1.76-1.59m,4H。15のNHSエステルがDCM中でN-ヒドロキシスクシンイミドとDCCにより形成され、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル、1-ブロモ-2,16-ジオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15-ジアザヘニコサン-21-オエート16を与える。S-2-メチルアミノプロパン酸N-メチルS-アラニン2による16のアミド化は、リンカー試薬、S-1-ブロモ-22,23-ジメチル-2,16,21-トリオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15,22-トリアザテトラコサン-24-オイック酸17を与える。マレイミド4の3-ヒドロキシルでの17とのカップリングは、bra-PEG3-ala-May薬剤-リンカー中間体18を与える図4。別法として、3-S-N-メチルアラニニルメイタンシノール4aの溶液に、1-ブロモ-2,16-ジオキソ-6,9,12-トリオキサ-3,15-ジアザヘニコサン-21-オイック酸1572.2mg,0.164mmol、N-3-ジメチルアミノプロピル-N’-エチルカルボジイミド塩酸塩31.4mg,0.164mmol、及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン7.71mL,0.0442mmolを添加した。反応液を2時間撹拌し、反応物を濾過し、RP-HPLCで精製し、bra-PEG3-ala-May18を透明油として与えた53.3mg,56。MS[MH]1073.0.1HNMR400MHz,CDCl3:δ7.10s,1H,6.83s,1H,6.66s,1H,6.64s,1H,6.48-6.37m,2H,6.32t,J=4.8Hz,1H,5.68dd,J=15.3,9.1Hz,1H,5.31q,J=6.5Hz,1H,4.79dd,J=12.0,2.8Hz,1H,4.29t,J=11.2Hz,1H,3.98s,3H,3.87s,2H,3.65-3.62m,9H,3.61-3.58m,3H,3.54t,J=5.2Hz,2H,3.50-3.47m,3H,3.42dd,J=9.8,4.9Hz,2H,3.36s,3H,3.19s,3H,3.12d,J=12.7Hz,1H,3.00d,J=9.6Hz,1H,2.85s,3H,2.60dd,J=14.1,12.4Hz,1H,2.49-2.12m,6H,1.69-1.57m,7H,1.46qd,J=12.8,6.4Hz,1H,1.31d,J=6.9Hz,3H,1.28d,J=6.3Hz,3H,1.23d,J=13.0Hz,1H,0.80s,3H。実施例5還元及び再酸化によるコンジュゲーション用システイン操作抗体の調製軽鎖アミノ酸はKabatに従って番号付けされるKabatetalSequencesofproteinsofimmunologicalinterest5thEdUSDeptofHealthandHumanServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMD。重鎖アミノ酸は、Kabatシステムと記された場合を除いてEU番号付けシステムに従って番号付けされるEdelmanetalProcNatlAcadofSciences637885。一文字アミノ酸略語が使用される。CHO細胞で発現された全長のシステイン操作モノクローナル抗体チオMabは、細胞培養条件によって、システイン付加体システインを有するか又は操作されたシステインにグルタチオン付加される。操作されたシステインの反応性チオール基を遊離させるために、チオMabを、pHが約8.0にて、500mMのホウ酸ナトリウム及び500mM塩化ナトリウムに溶解させ、1mMのTCEPトリス2-カルボキシエチルホスフィン塩酸塩の約50~100倍過剰で約1~2時間37°Cで還元する。あるいは、DTTを還元試薬として用いることができる。鎖間ジスルフィド結合の形成は、非還元SDS-PAGEによるか、又は逆相HPLCPLRPカラムクロマトグラフィーを変性させるのいずれかによってモニターした。還元されたチオMabは10mM酢酸ナトリウムpH5で希釈され、HiTrapSカラム上にロードされ、0.3M塩化ナトリウムを含むPBSで溶出した。溶出された還元型チオMabは、3時間、pH7で、2mMのデヒドロアスコルビン酸dhAAで処理されるか、又は一晩室温で2mMの硫酸銅CuSO4水溶液で処理される。周囲の空気酸化もまた有効であり得る。バッファーはセファデックスG25樹脂上で溶出によって交換され、1mMのDTPAを含むPBSで溶出される。チオール/Abの値が、溶液の280nmでの吸光度から還元された抗体濃度を決定すること及びDTNBAldrich,Milwaukee,WIとの反応によるチオール濃度を決定すること、及び412nmでの吸光度の決定によりチェックされる。液体クロマトグラフィー/質量分析は、拡張された質量範囲でTSQ量子トリプル四重極質量分析計で行ったThermoElectron,SanJoseCalifornia。サンプルは75°Cに加熱したPRLP-S1000A、マイクロボアカラム50mm×2.1mm,PolymerLaboratories,Shropshire,UKでクロマトグラフィーにかけた。30-40のBの直線勾配溶媒A:0.05TFA水溶液:アセトニトリル中0.04のTFAが用いられ、溶離液は、エレクトロスプレー源を使用して直接イオン化された。データは、Xcaliburデータシステムによって収集され、デコンボリューションは、ProMassNovatia,LLC,NewJerseyを用いて行った。LC/MS分析の前に、抗体又は薬剤コンジュゲート50マイクログラムがPNGaseF2単位/ml;PROzyme,SanLeandro,CAにより37°Cで2時間処理され、N結合型糖を除去した。疎水性相互作用クロマトグラフィーHICのサンプルが、ブチルHICNPRカラム2.5ミクロンの粒子サイズ、4.6mm×3.5cm東ソーバイオサイエンスに注入され、0.8ml/分で0から70のBの線形勾配で溶出したA:50mMリン酸カリウム中1.5Mの硫酸アンモニウム、pH7、B:50mMのリン酸カリウムpH7、20イソプロパノール。多波長検出器とChemstationソフトウエアを備えたAgilent1100シリーズHPLCシステムが、抗体当たりの薬剤の異なる比率を有する抗体種を分離し、定量化するために使用された。実施例6抗体への薬剤-リンカー中間体のコンジュゲーション実施例5の還元と再酸化法の後、システイン操作抗体をPBSリン酸緩衝生理食塩水緩衝液に溶解し、氷上で冷却した。マレイミド又はブロモ酢酸などのチオール反応性官能基を含む5、8、14及び18などのメイタンシノイド薬剤リンカー中間体の抗体あたりの操作されたシステインに対して約1.5モル当量がDMSOに溶解され、アセトニトリルと水で希釈され、PBS中で冷却され還元され再酸化された抗体に添加された。約1時間後、過剰のマレイミドを添加して反応を停止させ、未反応抗体のチオール基を覆った。反応混合物を遠心限外濾過により濃縮し、システイン操作トラスツズマブ抗体-薬剤コンジュゲートを精製し、PBS中でのG25樹脂を通する溶出によって脱塩し、無菌条件下で0.2μmのフィルターを通して濾過し、貯蔵のために凍結した。上記の手順で、式Iの以下のシステイン操作型N-メチルアラニニルメイタンシノール抗体-薬剤コンジュゲートが調製された:マレイミドDM1コンジュゲート,2LCV205Cチオ-TMAb-mpeo-DM1,平均薬剤付加DAR=1.7,及び6TMAb-mcc-DM1,平均薬剤付加DAR=3.4が、米国特許出願公開第2005/0276812号の実施例4の手順に従って調製され、それは参照により組み込まれる。実施例7インビトロ細胞増殖アッセイADCの有効性は、以下のプロトコルを用いて細胞増殖アッセイにより測定したCELLTITERGLOTMLuminescentCellViabilityAssay,PromegaCorp.TechnicalBulletinTB288;MendozaetalCancerRes6254855488:1.培地に約104細胞SKBR-3,BT474,MCF7又はMDA-MB-468を含む細胞培養物の100μlのアリコートを、96ウェルの不透明壁のプレートの各ウェルに沈着させた。2.コントロールウェルは細胞無しで培地を含有して調製した。3.ADCを実験ウェルに添加し、3-5日間インキュベートした。4.プレートを約30分間室温にて平衡化した。5.各ウェル中に存在する細胞培養培地の容積に等しい容積のCELLTITERGLOTM試薬を加えた。6.内容物をオービタルシェーカーで2分間混合して細胞溶解を誘導した。7.プレートは、発光シグナルを安定化させるために10分間室温でインキュベートした。8.発光を記録し、RLU=相対発光単位としてグラフにて報告された。データは、標準偏差誤差バーと共に、反復の各組について発光の平均値としてプロットされている。プロトコルはCELLTITERGLOTM発光細胞の変形である。培地:SK-BR-3は50/50/10FBS/グルタミン/250μg/mLG-418で生育し、OVCAR-3はRPMI/20FBS/グルタミンで生育する。実施例8高発現HER2トランスジェニック外植マウスにおける腫瘍増殖阻害、インビボでの有効性Fo5マウス乳腺腫瘍モデルが、前述のように単一用量の静脈注射後に、6本発明のTMAb-mcc-DM1及び様々なチオ-TMAb-Mayのインビボ有効性を評価するために採用されPhillipsGDLLiGMDuggerDLetalTargetingHER2PositiveBreastCancerwithTrastuzumabDM1anAntibodyCytotoxicDrugConjugateCancerRes68928090、参照により本明細書に組み込まれる。Fo5モデルは、トランスジェニックマウスモデルであり、ヒトHER2遺伝子が、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーターMMTV-HER2の転写制御下で乳腺上皮において過剰発現される。HER2過剰発現は乳腺腫瘍の自発的な増殖を引き起こす。これらの樹立動物樹立5[Fo5]の一匹の乳腺腫瘍は腫瘍断片~2×2mmの大きさの連続移植によってFVBマウスの後の世代に伝播される。すべての研究は、実験動物の管理と使用に関するガイドラインに従って実施された。各抗体-薬剤コンジュゲート単一用量は、研究の開始、及び移植後第14日に9匹の動物に静脈内投与した。初期腫瘍サイズは約200mm3の体積であった。本発明による抗体-薬剤コンジュゲートとコントロールによる時間の経過による腫瘍増殖阻害の測定は図5a、5b、及び6に示される。明細書全体を通して引用された全ての特許、特許出願、及び参考文献は、出典明示により援用される。"