"式I、IIまたはIII:を有する化合物またはそれらの薬学的に許容される塩:[式中、XはCまたはNであり、R1、R2、R3およびR4は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択されるか;または、R3およびR4は、環の隣接する炭素原子と一緒に、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、縮合している、あるいは縮合していない、単環、二環、または三環式の複素環または炭素環を形成し、R5は、CN、-CONR101R102、-COR101、-COOR101、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101、R102またはであり、ここで、R15は、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、ヒドロキシ、シアノ、またはニトロであり;R101およびR102は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリールからなる群より選択され;ここで、R101およびR102は、それぞれ、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲンまたはアルコキシまたはアリールオキシの1つ以上によって随意的に置換されたアルキル、ハロゲンまたはアルコキシまたはアルキルまたはトリハロアルキルの1つ以上によって随意的に置換されたアリール、アリールまたはヘテロアリールまたは=Oまたはヒドロキシによって随意的に置換されたアルキルによって随意的に置換されたヘテロシクロアルキル、ヒドロキシによって随意的に置換されたシクロアルキル、随意的に1つ以上のハロゲンまたはアルコキシまたはアルキルまたはトリハロアルキルによって置換されたヘテロアリール、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびジアルキルアミノカルボニルからなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールでありR6、R7、R8、R9およびR10は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択されるか;または、R6、R7、R8、R9およびR10のうちのいずれか2つがフェニル環の隣接する炭素原子と一緒に、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、縮合している、あるいは縮合していない、単環、二環、または三環式の複素環または炭素環を形成し、R11、R12、R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アルキルアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択され;ここで、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R101およびR102のそれぞれは、随意的に、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって独立して置換されている]。ahERGを発現する細胞およびhERGを発現しない細胞からなる2種類の異なる型の細胞を用いて化合物を個別にインキュベートし;bラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイを用いて各細胞型における前記化合物誘発性の細胞応答をモニタリングし;c前記化合物の存在下、ラベルフリーバイオセンサーhERG活性化剤を、前記hERG発現細胞とともにインキュベートし;d前記化合物の存在下、前記hERG発現細胞における、前記ラベルフリーバイオセンサーhERG活性化剤誘発性の細胞応答をモニタリングし;e前記化合物がhERG調節因子であるか否かを示唆する、前記化合物のバイオセンサーインデックスを生成する各工程を含む、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法。aGPR35-hERG複合体を含む組成物を試験薬と接触させ;bGPR35-hERG相互作用をアッセイすることを含む、GPR35-hERG複合体干渉分子を同定する方法。aGPR35を発現する細胞を提供し;b前記細胞を化合物と接触させ;cラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイを使用して前記化合物をプロファイリングする各工程を含む、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法。前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35調節因子である、請求項4記載の方法。GPR35、hERGまたはGPR35-hERG複合体に関連した病的状態または疾患を患う、またはそれらに罹りやすい被験体を治療するための新しい薬物治療法が非常に必要とされている。特に、現在利用可能なものに関して特性安全性プロフィール、有効性、または物理的特性などの1つ以上が改善された新規薬物が、依然として必要とされている。GPR35および/またはGPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連した疾患の予防および/または治療のための組成物および方法が開示される。例えば、式I、IIまたはIII:を有する化合物の類が、それらの化合物の薬学的に許容される塩を含めて開示され、ここで:XはCまたはNであり、R1、R2、R3およびR4は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択されるか;またはR3およびR4は、環の隣接する炭素原子と一緒に、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、縮合している、あるいは縮合していない、単環、二環、または三環式の複素環または炭素環を形成し、R5は、CN、-CONR101R102、-COR101、-COOR101、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101、R102またはであり、ここで、R15は、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、ヒドロキシ、シアノ、またはニトロであり;R101およびR102は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリールからなる群より選択され;ここで、R101およびR102は、それぞれ、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲンまたはアルコキシまたはアリールオキシの1つ以上によって随意的に置換されたアルキル、ハロゲンまたはアルコキシまたはアルキルまたはトリハロアルキルの1つ以上によって随意的に置換されたアリール、アリールまたはヘテロアリールまたは=Oまたはヒドロキシによって随意的に置換されたアルキルによって随意的に置換されたヘテロシクロアルキル、ヒドロキシによって随意的に置換されたシクロアルキル、ハロゲンまたはアルコキシまたはアルキルまたはトリハロアルキルの1つ以上によって随意的に置換されたヘテロアリール、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびジアルキルアミノカルボニルからなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールであり;R6、R7、R8、R9およびR10は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択されるか;またはR6、R7、R8、R9およびR10のうちのいずれか2つが、フェニル環の隣接する炭素原子と一緒に、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、縮合している、あるいは縮合していない、単環、二環、または三環式の複素環または炭素環を形成し、R11、R12、R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アルキルアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択され;ここで、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R101およびR102のそれぞれは、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換される。式I、IIまたはIIIの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を治療に有効な量で被験体に投与することを含む、被験体におけるGPR35および/またはGPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連した疾患を予防および/または治療する方法もまた開示される。式I、IIまたはIIIの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を治療に有効な量で含む、被験体におけるGPR35および/またはGPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連した疾患を予防および/または治療するための医薬組成物についても開示される。GPR35および/またはGPR35-hERG複合体の調節因子をスクリーニングする方法についても開示される。GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子を分類する方法、およびGPR35-hERGシグナル伝達複合体の活性が病態生理学的に関連する疾患の治療的予防または治療のためのGPR35-hERG調節因子の使用についても開示される。本明細書に取り込まれ、その一部を構成する添付の図面は幾つかの実施の形態を例証しており、その説明とともに、本開示の組成物および方法を明らかにする。本化合物、組成物、物品、デバイス、および/または方法を開示し、説明する前に、他に特に規定されない限り、特定の合成方法または特定の処理/治療方法に限定されず、あるいは、他に特に規定されない限り、特定の試薬に限定されず、当然ながら、それ自体は変化しうることが理解されよう。本明細書で用いられる専門用語は、単に特定の実施の形態を説明する目的のためのものであって、限定することは意図されていないこともまた理解されよう。背景A.電位依存性のイオンチャネル電位依存性のイオンチャネルは、例えば心臓および神経などの興奮組織における細胞表面膜を貫通するタンパク質である。チャネルを通過するイオンは、心筋活動電位の根幹を成している。NaおよびCa2イオンの流入は、それぞれ、活動電位の脱分極性の立ち上り相およびプラトー相を調節する。Kイオンの流出は、細胞膜を再分極し、活動電位を終結させ、筋肉の弛緩を可能にする。再分極電流の速い成分は、ヒトエーテルアゴーゴー関連遺伝子hERGによってコードされたKチャネルを通過する。再分極障害は、活動電位の持続期間を延長し、弛緩を遅延させ、心拍の乱れを促進しうる。活動電位の延長は、心電図ECGで測定したQT間隔の長期化として臨床的に検出される。薬物誘発性のQTの長期化は、再分極障害に起因した薬物の重篤な合併症であり、致命的な心室性不整脈の危険性の増大に関連する。薬物誘発性のQTの長期化は、ほとんどの場合、hERGのKチャネルの遮断と関係している。多量の薬物、例えばメタンスルホンアニリド、ドフェチリド、MK-499、およびE-4031などは、心臓において、hERGなどのKイオンチャネルを遮断し、感受性者に生命を脅かす心室性不整脈および心臓麻痺を引き起こすことが知られている。残念ながら、薬物誘発性の心室性不整脈の発生は、臨床試験で検出するには少なすぎることが多い。1.hERGKCNH2またはヒトエーテルアゴーゴー関連遺伝子hERGは、一体化されてKv11.1カリウムチャネルを形成する、Kv11.1α-サブユニットをコードする。hERG遺伝子は、小胞体において、コアがグリコシル化された未成熟の135kDaのタンパク質Kv11.1として翻訳され、ゴルジ装置において複合的にグリコシル化された成熟した155kDaのタンパク質へと転化される。WarmkeらProcNatlAcadSci19949134383442;参照することにより援用されるは、hERG遺伝子の配列および構造およびその野生型の翻訳生成物であるKv11.1について開示している。hERGタンパク質の配列はNP_00229に開示されている。hERG遺伝子の配列はNM_00238に開示されている。例えばテルフェナジン抗ヒスタミン剤、アステミゾール抗ヒスタミン剤、およびシサプリド消化管運動などの非心臓血管薬によるhERGチャネルの遮断に起因する突然死は、それら薬剤の市場からの撤退の原因となる。最近、バイオックス、セレブレックスおよびベクストラなどの薬剤も、心臓への危険な副作用に関連する懸念のため、市場から撤収された。その結果、Kチャネルに関連する心臓安全性は、規制機関の主要な関心事となっている。費用のかかる自然淘汰を未然に防ぐため、できるだけ早急に、最先端の化合物におけるhERGチャネルの阻害活性を排除することが、創薬における最優先となってきている。hERG遮断活性について、可能性のある薬物分子を試験するための現在の方法は、幾つかの限定を有する。細胞系のパッチクランプ電気生理学または動物実験に基づいた技術は技術的に難しく、臨床前の心臓安全性試験の処理能力および正確さの要件を満たさない。他のアッセイは、結合の検出および定量化のために、放射性同位体でラベル付けした、蛍光性の、染料と結合した、またはビオチニル化した標識を使用する。しかしながら、これらの標識の多くは、標識化後に活性が低下してしまう。加えて、放射性同位体でラベル付けした類似体の使用は、複雑な基幹施設の必要性および放射性活性化合物の操作のための許諾などの実施上の制限をもたらす。本明細書において、hERGKチャネル、またはhERG、またはhERGイオンチャネル、またはhERGチャネルなどと称される、このチャネルの雑多な性質は、その相互作用から浮上しうる致命的転帰の可能性に関連した、多様な化学構造との結合を生じさせるCavalliAetalJMedChem200245384453。これらの現実は、すべての新規薬物候補に、天然型または組み換え型で発現したヒトhERGタンパク質を使用する機能的パッチクランプアッセイ法の試験を受けさせるという日米EU医薬品規制調和国際会議InternationalCongressofHarmonizationおよび米国食品医薬品局の推奨をもたらす結果となったBodeGetalFundamClinPharmacol20021610518。自動化された、高スループットのパッチクランプ法が最近開発されているが、このようなシステムは、特殊なオペレータ、生細胞、およびかなりの資本投資を必要とするBridglandTaylorMetalJPharmacolToxicolMethods20065418999;DubinAetalJBiomolScreen20051016881。それ以上に重要なことは、これらの電気生理学的なアプローチが、小分子によるhERG変調の、可能性のある機能的結果ではなく、イオン束および膜電位を測定することに限定されることである。したがって、薬物候補などの分子のhERGチャネルへの結合を特徴付けおよび定量化するための新しい組成物および方法を開発する必要がある。B.Gタンパク質共役受容体GPCRGタンパク質共役受容体は、受容体の幅広いスーパーファミリーを含めた固有の膜タンパク質である。Gタンパク質共役受容体GPCRのファミリーの仲間は、少なくとも250も存在するStraderetalFASEBJ97457541995;StraderetalAnnuRevBiochem63101321994。ヒト遺伝子の1はGPCRをコードしうると推定されている。多くのGPCRは、一般的な分子構造および一般的なシグナル伝達機構を共有する。歴史的には、GPCRは6つのファミリーに分類されており、最初は関係がないと考えられていたが、そのうちの3つは脊椎動物で見出されている。最近の研究から、幾つかの新しいGPCRファミリーが同定されており、それらのすべてについて、一般的な進化上の起源の可能性が示唆されている。ほとんどのGPCRについての特徴的特性の1つは、7つの疎水性アミノ酸残基、または膜貫通領域TM、7回膜貫通型7TM領域はTM1、TM2、TM3、TM4、TM5、TM6、およびTM7として指定されるが一次構造に配置され、それらの各領域において細胞膜を貫く貫通することである。ドメインは、3つの細胞内ループi1、i2、およびi3、3つの細胞外ループe1、e2、およびe3、およびアミノN-末端およびカルボキシC-末端のドメインが接続した膜貫通α-ヘリックスを表すと考えられているPalczewskietalScience28973945。ほとんどのGPCRは、機能性のタンパク質構造を安定化させると考えられるジスルフィド結合を形成する最初の2つの細胞外ループのそれぞれに、単一の保存されたシステイン残基を有する。先に詳しく述べたこれらの構造は、Gタンパク質共役受容体タンパク質の中では一般的であり、タンパク質が膜を貫通する領域膜貫通領域または膜透過領域に対応するアミノ酸配列、および膜貫通領域に近いアミノ酸配列は、受容体の中でも高度に保存されていることがよく知られている。よって、GPCRの高度の相同性に起因して、新しいGPCRの同定は、このような新しい種類の細胞内部分および細胞外部分の両方における良好な同定として、当業者によって容易に達成される。1.GPR35GPR35は、1998年に最初に同定されたロドプシン様GPCRである[BFODowdTNguyenAMarcheseRChengKRLynchHHHengLFKolakowskiJrSRGeorgeDiscoveryofthreenovelGproteincoupledreceptorgenesGenomics47310313]。ヒトGPR35遺伝子は、309アミノ酸からなるタンパク質をコードする。GPR35は、例えば胃腸組織、リンパ系組織、並びに中枢および末梢の神経組織など、さまざまな哺乳動物組織において発現される。幾人かの治験医師は、GPR35が、胃癌の進行OkumuraSetalCancerSci95131135、神経細胞の興奮性およびシナプスの放出の調節JGuoetalJPharmacolExpTher324342351、痛覚HOhshiroetalBiochemBiophysResCommun365344348、短指症-精神遅滞症候群の発症AEShrimptonetalClinGenet66537544、および血圧の調節KDMinetalBiochemBiophysResCommun3935560に関与することを報告している。GPR35を活性化するGPR35リガンド、特に内因性リガンドは、長い間、同定が試みられている。今までに、キヌレン酸、NPPB、ザプリナスト、およびリゾホスファチジン酸LPAを含めた、4つのGPR35アゴニストが報告されている。キヌレン酸とLPAは両方とも、GPR35の内因性リガンドであると推測された[JWangNSimonaviciusXWuGSwaminathJReaganHTianLLingKynurenicacidasaligandfororphanGproteincoupledreceptorGPR35JBiolChem2812202122028;SOkaROtaMShimaAYamashitaTSugiuraGPR35isanovellysophosphatidicacidreceptorBiochemBiophysResComm395232237]。キヌレン酸とLPAは両方とも、GPR35を発現するHEK293細胞および/またはCHO細胞に幾つかの細胞応答を引き起こす。例えば、GPR35を発現するHEK293細胞では、2-アシルLPAは、GPR35発現細胞におけるCa2応答、すなわち、RhoAおよびERKのリン酸化反応の活性化を著しく高める。2-アシルLPAはまた、受容体分子の内在化を誘発する。それにもかかわらず、キヌレン酸またはLPAがGPR35の天然のアゴニストであるか否かは不明確なままである。GPR35に関連する病的状態または疾患を患う、またはそれらを生じやすい被験体を治療するための新規薬物治療が渇望されている。特に、現在利用可能な薬物に関する特性安全性プロフィール、有効性、または物理的特性などの1つ以上が改善された新規薬物が依然として必要とされている。C.GPR35-hERG複合体本発明は、hERG-GPR35シグナル伝達複合体に関する。hERG-GPR35シグナル伝達複合体は、物理的な受容体間の相互作用を介してhERGとGPR35の間に形成されるシグナル伝達複合体であり、細胞原形質膜に位置している図1、7、および12参照。シグナル伝達複合体は、改変細胞例えば、組み換えによってhERGチャネルおよびGPR35を共発現するHEK-hERG-GPR35細胞、または体内に生じた細胞例えば、結腸癌細胞HT29、白血病細胞HL-60、または胃癌細胞MKN45、または心不全の種に由来する心筋細胞などの初代心臓細胞のいずれかに形成される。細胞は、動物細胞またはヒト細胞でありうる。HL-60は、主にGPR35を発現し、hERGの発現は比較的低い。材料A.化合物式I、IIまたはIII:を有する化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩が開示され、ここで:XはCまたはNであり、R1、R2、R3およびR4は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択されるか;またはR3およびR4は、環の隣接する炭素原子と一緒に、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、縮合している、あるいは縮合していない、単環、二環、または三環式の複素環または炭素環を形成し、R5は、CN、-CONR101R102、-COR101、-COOR101、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101、R102またはであり、ここで、R15は、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、ヒドロキシ、シアノ、またはニトロであり;R101およびR102は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリールからなる群より選択され;ここで、R101およびR102は、それぞれ、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ハロゲンまたはアルコキシまたはアリールオキシの1つ以上によって随意的に置換されたアルキル、ハロゲンまたはアルコキシまたはアルキルまたはトリハロアルキルの1つ以上によって随意的に置換されたアリール、アリールまたはヘテロアリールまたは=Oまたはヒドロキシによって随意的に置換されたアルキルによって随意的に置換されたヘテロシクロアルキル、ヒドロキシによって随意的に置換されたシクロアルキル、随意的に1つ以上のハロゲンまたはアルコキシまたはアルキルまたはトリハロアルキルによって置換されたヘテロアリール、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびジアルキルアミノカルボニルからなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールであり;R6、R7、R8、R9およびR10は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択されるか;または、R6、R7、R8、R9およびR10のうちのいずれか2つがフェニル環の隣接する炭素原子と一緒に、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基によって随意的に独立して置換された、縮合している、あるいは縮合していない、単環、二環、または三環式の複素環または炭素環を形成し、R11、R12、R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、-NO2、-OR101、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アルキルアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より選択され;ここで、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R101およびR102のそれぞれは、水素、ハロゲン、シアノ、-OR101、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、-COR101、-COOR101、-CONR101R102、-NR101R102、-NR101SO2R102、-NR101COR102、-SO2R102、-SR101、-SO2NR101R102、R101およびR102からなる群より独立して選択される1つ以上の置換基で随意的に独立して置換されている。幾つかの形態では、本開示の化合物は、式Iの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。他の幾つかの形態では、本開示の化合物は、式IIの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。他の幾つかの形態では、本開示の化合物は、式IIIの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。幾つかの形態では、本開示の化合物は、式Iの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ここで、式Iの化合物は、からなる群より選択される化合物である。幾つかの形態では、本開示の化合物は、式IIの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ここで、式IIの化合物は、からなる群より選択される化合物である。幾つかの形態では、本開示の化合物は、式IIIの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、ここで、式IIIの化合物は、からなる群より選択される化合物である。1.異性体以下、本開示の化合物と称される、式I、IIまたはIIIの化合物に不斉中心が存在するときは、その化合物は光学異性体エナンチオマーの形態で存在しうる。幾つかの形態では、本開示の化合物および組成物は、式I、IIまたはIIIの化合物のラセミ混合物を含めた、エナンチオマーおよび混合物を含みうる。幾つかの形態では、2つ以上の不斉中心を含む式I、IIまたはIIIの化合物について、本開示の化合物および組成物は、化合物のジアステレオマー型それらの個別のジアステレオマーおよび混合物を含みうる。式I、IIまたはIIIの化合物がアルケニル基または部分を含むときは、幾何異性体が生じうる。2.互変異性型本開示の組成物および化合物は、式I、IIまたはIIIの化合物の互変異性型を含む。構造異性体が低エネルギー障壁を介して相互変換可能なときは、相互変異性互変異性が生じうる。これは、例えばイミノ、ケト、またはオキシム基を含む、式I、IIまたはIIIの化合物のプロトン互変異性、または芳香族部分を含む化合物のいわゆる原子価互変異性の形態をとりうる。その結果として、単一の化合物は2種類以上の異性を示す場合がある。固体および液体形態の互変異性体のさまざまな比は、分子におけるさまざまな置換基、ならびに化合物の単離に用いられる特定の結晶化技術に応じて決まる。3.塩本開示の組成物および化合物は、無機酸または有機酸に由来する塩の形態で使用することができる。特定の化合物に応じて、化合物の塩は、さまざまな温度および湿度における薬学的安定性の改善、または水または油中における望ましい溶解性など、1つ以上の塩の物理的特性に起因して有利でありうる。幾つかの事例では、化合物の塩は、化合物の単離、精製、および/または分割における助剤として用いることもできる。塩を患者に投与することが例えば、インビトロで使用されるのとは対照的に意図されている場合、その塩は薬学的に許容されていることが好ましい。薬学的に許容される塩という用語は、化合物本開示の化合物などを、ヒトがそのアニオンを摂取するのに適していると一般的に考えられている酸、または、ヒトがそのカチオンを摂取するのに適していると一般的に考えられている塩基と組み合わせることによって調製された塩のことを指す。薬学的に許容される塩は、親化合物と比較して水溶解度が大きいことから、本開示の方法の生成物として特に有用である。医薬における使用では、本開示の化合物の塩は、非毒性の薬学的に許容される塩である。薬学的に許容される塩に包含される塩とは、一般的には、遊離塩基を適切な有機または無機酸と反応させることによって調製された、本開示の化合物の非毒性の塩のことを指す。本開示の化合物の適切な薬学的に許容される酸付加塩としては、可能な場合には、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、ホウ酸、フルオロホウ酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、カルボン酸、スルホン酸、および硫酸などの無機酸に由来するもの、ならびに、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イソチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、コハク酸、トルエンスルホン酸、酒石酸、およびトリフルオロ酢酸などの有機酸に由来するものなどが挙げられる。適切な有機酸としては、一般に、例えば、脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族araliphatic、複素環式heterocyclylic、カルボン酸およびスルホン酸の類の有機酸が挙げられる。適切な有機酸の具体的な例としては、酢酸、トリフルオロ酢酸、ギ酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、ジグルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、ステアリン酸、サリチル酸、p-ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸パモ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トルエンスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、アルゲン酸algenicacid、β-ヒドロキシ酪酸、ガラクタル酸、ガラクツロン酸、アジピン酸、アルギン酸、酪酸、カンファー酸、カンファースルホン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ドデシル硫酸、グリコヘプタン酸、グリセロリン酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、ニコチン酸、2-ナフタレンスルホン酸naphthalesulfonate、シュウ酸、パルモ酸palmoate、ペクチン酸pectinate、3-フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、チオシアン酸、トシル酸およびウンデカン酸が挙げられる。さらには、本開示の化合物が酸部分を有する場合には、それらの薬学的に許容される適切な塩としては、例えばナトリウムまたはカリウム塩などのアルカリ金属塩;例えば銅、カルシウムまたはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩;および、例えば第4級アンモニウム塩などの適切な有機リガンドによって形成される塩が挙げられる。幾つかの形態では、塩基性塩は、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、コリン、ジエチルアミン、ジオールアミン、グリシン、リジン、メグルミン、オラミン、トロメタミンおよび亜鉛の塩を含めた非毒性の塩を形成する塩基から形成される。有機塩は、トロメタミン、ジエチルアミン、N,N-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミンN-メチルグルカミン、およびプロカインなどの第2級、第3級または第4級のアミン塩から形成されうる。塩基性の窒素含有基は、低アルキルC1~C6ハロゲン化物例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルの塩化、臭化、およびヨウ化物、硫酸ジアルキル例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミル、長鎖ハロゲン化物例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリルの塩化、臭化、およびヨウ化物、アリールアルキルハロゲン化物例えば、臭化ベンジルおよび臭化フェネチル、および他のものなどの薬剤によって4級化されうる。幾つかの形態では、例えばヘミ硫酸塩およびヘミカルシウム塩などの酸および塩基のヘミ塩も形成されうる。本開示の化合物は、非溶媒和および溶媒和の両方の形態で存在しうる。本明細書では溶媒和物とは、溶媒と溶質、または分散手段と分散相の非共有結合性または易分散性の組合せが存在する、非水溶液または分散質である。幾つかの形態では、薬学的に許容される塩、特に本明細書に開示される-COOH含有化合物の塩は、銅IIまたはZnIIの基レートの形態をしている。4.プロドラッグ本開示の化合物のいわゆるプロドラッグも開示される。よって、それ自体は薬理学的活性をほとんど有しない、本開示の化合物のある特定の誘導体は、体内または体表面に投与される場合、例えば加水分解などによって、所望の活性を有する本開示の化合物へと変換されうる。このような誘導体はプロドラッグと称される。プロドラッグの使用についてのさらなる情報は、ProdrugsasNovelDeliverySystemsVol14ACSSymposiumSeriesおよびBioreversibleCarriersinDrugDesignPergamonPress1987に掲載されている。本明細書で開示されるプロドラッグは、例えば、式Iの化合物中に存在する適切な官能基を、例えばHBundgaardElsevier1985によるDesignofProdrugsに記載されるプロモイエティとして当業者に知られているある特定の部分と置換することによって生成することができる。5.同位体1つ以上の原子が、通常自然界において見られる原子質量または質量数とは異なった原子質量または質量数を有する原子によって置換されているという事実以外は、式I、II、III、IV、VまたはVIに列挙された化合物に等しい、同位体で標識された化合物もまた開示される。本開示の化合物に導入されうる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素および塩素の同位体、例えば、それぞれ、2H、3H、13C、11C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、および36Clなどが挙げられる。前述の同位体および/または他の原子の他の同位体を含めた、本開示の化合物、それらのプロドラッグ、および前記化合物または前記プロドラッグの薬学的に許容される塩が意図されている。ある特定の同位体で標識された本開示の化合物、例えば3Hおよび14Cなどの放射性同位体が導入されたものは、薬物および/または基質の組織分布アッセイに有用である。トリリチウム化した、すなわち3H、および炭素-14、すなわち14Cの同位体は、調製容易性および可検出性に関して特に好ましい。さらには、重水素すなわち2Hなどのより重い同位体による置換は、例えばインビボにおける半減期の増大または必要用量の低減など、より大きい代謝安定性に起因する、ある特定の治療上の利点を提供することができ、したがって、ある状況においては好ましいであろう。同位体で標識された、式I、II、III、IV、VまたはVIの化合物および他の開示化合物およびそれらのプロドラッグは、一般に、同位体で標識されていない試薬を容易に利用可能な同位体で標識された試薬に置換することによる、下記のスキームおよび/または実施例および調製に開示される手順を実行することによって、調製することができる。6.一般的な合成スキーム式I、IIまたはIIIの化合物および他の本開示の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、有機化学の分野で知られている合成方法、または当業者によく知られている改質および誘導体化の方法と一緒に、実施例のセクションに記載される例によって示される方法で調製することができる。本明細書で用いられる出発物質は市販されているか、または、当技術分野で既知の日常的な方法COMPENDIUMOFORGANICSYNTHETICMETHODSVolIVI出版:WileyInterscienceなどの標準参考図書に開示される方法などによって調製することができる。好ましい方法としては、限定はしないが、下記のものが挙げられる。以下の合成順序のいずれかの間に、関係する分子のいずれかにおける感受性基または反応基を保護することが必要および/または望ましいであろう。これは、参照することにより本明細書に含まれる、例えばTWGreeneProtectiveGroupsinOrganicChemistryJohnWileySons1981;TWGreeneandPGMWutsProtectiveGroupsinOrganicChemistryJohnWileySons1991、およびTWGreeneandPGMWutsProtectiveGroupsinOrganicChemistryJohnWileySons1999に記載されるものなど、従来の保護基を用いて達成することができる。生成物の単離および精製は、通常の技能を有する化学者に知られている標準的な手順によって達成される。7.用語の定義アルキルという用語は、1~20個の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖の飽和ヒドロカルビル置換基すなわち、炭化水素から水素を除去することによって得られる置換基のことを指し;前記置換基は、1つの実施の形態では1~12個の炭素原子;別の実施の形態では、1~10個の炭素原子;別の実施の形態では、1~6個の炭素原子;別の実施の形態では、1~4個の炭素原子を含有する。このような置換基の例としては、メチル、エチル、プロピルn-プロピルおよびイソプロピルを含む、ブチルn-ブチル、イソブチル、sec-ブチルおよびtert-ブチルを含む、ペンチル、イソアミル、へキシルなどが挙げられる。アルケニルという用語は、1つ以上の二重結合および2~20個の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖のヒドロカルビル置換基のことを指し;前記置換基は、別の実施の形態では、2~12個の炭素原子;別の実施の形態では、2~6個の炭素原子;別の実施の形態では、2~4個の炭素原子を含有する。アルケニルの例としては、エテニルビニルとしても知られる、アリル、プロペニル1-プロペニルおよび2-プロペニルを含むおよびブテニル1-ブテニル、2-ブテニルおよび3-ブテニルを含むが挙げられる。アルケニルという用語は、シスおよびトランスの幾何学的配置、あるいは、EおよびZの幾何学的配置を有する置換基を包含する。ベンジルという用語は、フェニルによって置換されたメチルラジカル、すなわち、以下の構造のことをいう:炭素環という用語は、3~14個の炭素環原子環原子とは、結合して環を形成する原子であるを含む、飽和した環、部分的に飽和した環、または芳香環のことを指す。炭素環は、典型的には、3~10個の炭素環原子を含む。例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、およびフェニルが挙げられる。あるいは炭素環系は、ナフタレニル、テトラヒドロナフタレニルテトラリニルとしても知られる、インデニル、イソインデニル、インダニル、ビシクロデカニル、アントラセニル、フェナントレン、ベンゾナフテニルフェナレニルとしても知られる、フルオレニル、およびデカリニルなど、縮合した2つまたは3つの環でありうる。複素環という用語は、3~14個の環原子環原子とは、結合して環を形成する原子であるを含む、飽和した環、部分的に飽和した環、または芳香環のことを指し、前記環原子の少なくとも1つはヘテロ原子、すなわち酸素、窒素、または硫黄であり、残りの環原子は炭素、酸素、窒素、および硫黄からなる群より独立して選択される。シクロアルキルという用語は、3~14個の炭素原子を有する飽和炭素環式の置換基のことを指す。1つの実施の形態では、シクロアルキル置換基は3~10個の炭素原子を有する。シクロアルキルの例としてはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。シクロアルキルという用語は、このような縮合シクロアルキル基を置換基として有する基がシクロアルキル基の炭素原子に結合した、C6~C10芳香環または5~10員環の芳香族複素環に縮合されている置換基も包含する。このような縮合シクロアルキル基が1つ以上の置換基によって置換される場合、その1つ以上の置換基は、他に特に規定されない限り、それぞれ、シクロアルキル基の炭素原子に結合する。縮合したC6~C10芳香環または5~10員環の芳香族複素環は、ハロゲン、C1~C6アルキル、C3~C10シクロアルキル、または=Oで随意的に置換されうる。シクロアルケニルという用語は、3~14個の炭素原子、典型的には3~10個の炭素原子を有する部分的に不飽和な炭素環式の置換基のことを指す。シクロアルケニルの例としては、シクロブテニル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルが挙げられる。シクロアルキルまたはシクロアルケニルは、単環であって差し支えなく、典型的には3~6個の環原子を包含する。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、およびフェニルが挙げられる。あるいは、ビシクロデカニルおよびデカリニルのように2つまたは3つの環が縮合される場合もある。アリールという用語は、1つの環または2つまたは3つの縮合環を含む、芳香族置換基のことを指す。アリール置換基は6~18個の炭素原子を有しうる。一例として、アリール置換基は、6~14個の炭素原子を有しうる。アリールという用語は、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルなどの置換基のことを指す。アリールという用語は、例えばC5またはC6炭素環などのC4~C10炭素環に縮合した、または、4~10員環の複素環に縮合した、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルなどの置換基も含み、ここで、このような縮合アリール基を置換基として有する基は、アリール基の芳香族炭素に結合する。このような縮合アリール基が1つ以上の置換基によって置換される場合は、その1つ以上の置換基は、他に特に規定されない限り、それぞれ、縮合アリール基の芳香族炭素に結合する。縮合C4~C10炭素環または4~10員環の複素環は、ハロゲン、C1~C6アルキル、C3~C10シクロアルキル、または=Oで随意的に置換されて差し支えない。したがって、アリール基の例としては、フェニル、ナフタレニル、テトラヒドロナフタレニルテトラリニルとしても知られる、インデニル、イソインデニル、インダニル、アントラセニル、フェナントレニル、ベンゾナフテニルフェナレニルとしても知られる、およびフルオレニルが挙げられる。幾つかの事例では、ヒドロカルビル置換基例えば、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリールなどにおける炭素原子の数は、接頭辞Cx~Cy-によって示され、ここでxは、置換基における炭素原子の最小値であり、yは最大値である。よって、例えばC1~C6-アルキルとは、1~6個の炭素原子を含むアルキル置換基のことを指す。さらに説明すると、C3~C6-シクロアルキルとは、3~6個の炭素環原子を含む飽和シクロアルキルのことを指す。幾つかの事例では、1つ以上のヘテロ原子を含む環状置換基例えば、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルにおける原子の数は接頭辞X~Y員環によって示され、ここでxは置換基の環状部分を形成する原子の最小数であり、yは最大数である。よって、例えば、5~8員環のヘテロシクロアルキルとは、ヘテロシクロアルキル環状部分に1つ以上のヘテロ原子を含む、5~8個の原子を含むヘテロシクロアルキルのことを指す。水素という用語は、水素置換基のことを指し、-Hで表されうる。ヒドロキシという用語は-OHのことを指す。別の用語と組み合わせて用いられる場合、接頭辞ヒドロキシは、接頭辞が付加された置換基が1つ以上のヒドロキシ置換基によって置換されていることを示す。1つ以上のヒドロキシ置換基を有する炭素を有する化合物としては、例えば、アルコール、エノールおよびフェノールが挙げられる。ヒドロキシアルキルという用語は、少なくとも1つのヒドロキシ置換基によって置換されたアルキルのことを指す。ヒドロキシアルキルの例としては、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピルおよびヒドロキシブチルが挙げられる。ニトロという用語は-NO2を意味する。シアノニトリルとも称されるという用語は-CNを意味し、次式によっても表されうる:カルボニルという用語は-CO-を意味し、次式によっても表されうる:アミノという用語は-NH2を意味する。アルキルアミノという用語は、水素原子の代わりに少なくとも1つのアルキル鎖がアミノ窒素に結合したアミノ基のことを指す。アルキルアミノ置換基の例としては、メチルアミノ式-NHCH3で表されるすなわち次式:などのモノアルキルアミノ、および、ジメチルアミノ式-NCH32で表されるすなわち次式:などのジアルキルアミノが挙げられる。アミノカルボニルという用語は-CO-NH2を意味し、次式によっても表されうる:ハロゲンという用語は、フッ素-Fと表されうる、塩素-Clと表されうる、臭素-Brと表されうる、またはヨウ素-Iと表されうるのことを指す。1つの実施の形態では、ハロゲンは塩素である。別の実施の形態では、ハロゲンはフッ素である。接頭辞ハロという用語は、接頭辞が付加された置換基が、1つ以上の独立して選択されたハロゲン置換基によって置換されていることを示す。例えば、ハロアルキルとは、少なくとも1つのハロゲン置換基によって置換されたアルキルのことを指す。2つ以上の水素がハロゲンによって置換される場合、そのハロゲンは同一であっても異なっていてもよい。ハロアルキルの例としては、クロロメチル、ジクロロメチル、ジフルオロクロロメチル、ジクロロフルオロメチル、トリクロロメチル、1-ブロモエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、2,2,2-トリフルオロエチル、ジフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、ジフルオロプロピル、ジクロロプロピル、およびヘプタフルオロプロピルが挙げられる。さらに説明すると、ハロアルコキシという用語は、少なくとも1つのハロゲン置換基によって置換されたアルコキシのことを指す。ハロアルコキシ置換基の例としては、クロロメトキシ、1-ブロモエトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシペルフルオロメチルオキシとしても知られる、および2,2,2-トリフルオロエトキシが挙げられる。置換基が2つ以上のハロゲン置換基によって置換される場合、それらのハロゲン置換基は同一であっても異なっていてもよい特に明記しない限り。接頭辞ペルハロは、接頭辞が付加された置換基上の各水素置換基が、独立して選択されたハロゲン置換基によって置換されることを示す。すべてのハロゲン置換基が同一の場合、接頭辞によってハロゲン置換基が特定されうる。よって、例えばペルフルオロという用語は、接頭辞が付加された置換基上の各水素置換基が、フッ素置換基によって置換されていることを意味する。説明の目的で、ペルフルオロアルキルという用語は、フッ素置換基が各水素置換基の代替となっているアルキル置換基のことを指す。ペルフルオロアルキル置換基の例としては、トリフルオロメチル-CF3、ペルフルオロブチル、ペルフルオロイソプロピル、ペルフルオロドデシル、およびペルフルオロデシルが挙げられる。さらなる説明を目的として、ペルフルオロアルコキシという用語は、各水素置換基がフッ素置換基によって置換されたアルコキシ置換基のことを指す。ペルフルオロアルコキシ置換基の例としては、トリフルオロメトキシ-O-CF3、ペルフルオロブトキシ、ペルフルオロイソプロポキシ、ペルフルオロドデコキシ、およびペルフルオロデコキシが挙げられる。オキソという用語は=Oのことを指す。オキシという用語はエーテル置換基のことを指し、-O-とも表されうる。アルコキシという用語は、-O-Rとしても表されうる、酸素に連結したアルキルのことを指し、ここでRはアルキル基である。アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよびブトキシが挙げられる。アルキルチオという用語は、-S-アルキルを意味する。例えばメチルチオは-S-CH3である。アルキルチオの他の例としては、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオ、およびへキシルチオが挙げられる。アルキルカルボニルという用語は-CO-アルキルを意味する。例えばエチルカルボニルは次式によっても表されうる:他のアルキルカルボニルの例としては、メチルカルボニル、プロピルカルボニル、ブチルカルボニル、ペンチルカルボニル、およびへキシルカルボニルが挙げられる。アミノアルキルカルボニルという用語は-CO-アルキル-NH2を意味する。例えばアミノメチルカルボニルは、次式によっても表されうる:アルコキシカルボニルという用語は-CO-O-アルキルを意味する。例えばエトキシカルボニルは、次式によっても表されうる:他のアルコキシカルボニルの例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、ペントキシカルボニル、およびへキシルオキシカルボニルが挙げられる。別の実施の形態では、カルボニルの炭素原子が第2のアルキルの炭素原子に付加する場合、得られる官能基はエステルである。チオおよびチアという用語は二価の硫黄原子を意味し、このような置換基は-S-と表すことができる。例えば、チオエーテルは、アルキル-チオ-アルキル、あるいはアルキル-S-アルキルと表される。チオールという用語はスルフヒドリル置換基のことを指し、-SHと表すことができる。チオンという用語は=Sのことを指す。スルホニルという用語は-SO2のことを指し、次式によっても表されうる:よって、例えばアルキル-スルホニル-アルキルという用語はアルキル-SO2-アルキルのことを指す。アルキルスルホニルの例としては、メチルスルホニル、エチルスルホニル、およびプロピルスルホニルが挙げられる。アミノスルホニルという用語は-SO2-NH2を意味し、次式によっても表されうる:スルフィニルまたはスルホキシドという用語は-SO-を意味し、次式によっても表されうる:よって、例えばアルキルスルフィニルアルキルまたはアルキルスルホキシドアルキルとは、アルキル-SO-アルキルのことを指す。典型的なアルキルスルフィニル基としては、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、ブチルスルフィニル、およびへキシルスルフィニルが挙げられる。ヘテロシクロアルキルという用語は、合計で3~14個の環原子を含む、飽和または部分的に飽和した環構造のことを指す。前記環原子の少なくとも1つはヘテロ原子すなわち、酸素、窒素、または硫黄であり、残りの環原子は炭素、酸素、窒素、および硫黄からなる群より独立して選択される。あるいは、ヘテロシクロアルキルは縮合した2つまたは3つの環を含んでもよく、そのような環の少なくとも1つはヘテロ原子を環原子として含みうる例えば、窒素、酸素、または硫黄。ヘテロシクロアルキル置換基を有する基では、基に結合するヘテロシクロアルキル置換基の環原子は少なくとも1つのヘテロ原子であって差し支えなく、または前記環原子は環炭素原子であってもよく、ここで前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子と同一の間に存在していて差し支えなく、あるいは、前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子とは異なる環に存在していてもよい。同様に、ヘテロシクロアルキル置換基が同じようにある基または置換基によって置換される場合、前記基または置換基は少なくとも1つのヘテロ原子に結合して差し支えなく、あるいは、前記基または置換基は環炭素原子に結合してもよく、ここで、前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子と同一の間に存在して差し支えなく、あるいは、前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子とは異なる環に存在していてもよい。ヘテロシクロアルキルという用語は、C6~C10芳香環または5~10員環の芳香族複素環に縮合した置換基も包含し、ここで、このような縮合ヘテロシクロアルキル基を置換基として有する基は、ヘテロシクロアルキル基のヘテロ原子、またはヘテロシクロアルキル基の炭素原子に結合する。このような縮合ヘテロシクロアルキル基が1つ以上の置換基によって置換される場合、その1つ以上の置換基は、他に特に規定されない限り、それぞれ、ヘテロシクロアルキル基のヘテロ原子、またはヘテロシクロアルキル基の炭素原子に結合する。縮合したC6~C10芳香環または5~10員環の芳香族複素環は、ハロゲン、C1~C6アルキル、C3~C10シクロアルキル、または=Oで随意的に置換されうる。ヘテロアリールという用語は、5~14個の環原子を含む芳香環構造のことを指し、前記環原子の少なくとも1つはヘテロ原子すなわち、酸素、窒素、または硫黄であり、残りの環原子は炭素、酸素、窒素、および硫黄からなる群より独立して選択される。ヘテロアリールは、単環または2つまたは3つの縮合環でありうる。ヘテロアリール置換基の例としては、ピリジル、ピラジル、ピリミジニル、およびピリダジニルなどの6員環の置換基;トリアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、1,2,3-、1,2,4-、1,2,5-、または1,3,4-オキサジアゾリルおよびイソチアゾリルなどの5員環の置換基;ベンゾチオフラニル、イソベンゾチオフラニル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、プリニル、およびアントラニリルなどの6/5員環の縮合環置換基;および、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニル、および1,4-ベンズオキサジニルなどの6/6員環の縮合環が挙げられる。ヘテロアリール置換基を有する基では、基に結合するヘテロアリール置換基の環原子は少なくとも1つのヘテロ原子であって差し支えなく、あるいは、前記環原子は環炭素原子であってもよく、ここで、前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子と同一の環に存在して差し支えなく、あるいは、前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子とは異なる環に存在してもよい。同様に、ヘテロアリール置換基が同じようにある基または置換基によって置換される場合、前記基または置換基は、少なくとも1つのヘテロ原子に結合して差し支えなく、あるいは環炭素原子に結合して差し支えなく、ここで、前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子と同一の環に存在して差し支えなく、あるいは、前記環炭素原子は少なくとも1つのヘテロ原子とは異なる環に存在してもよい。ヘテロアリールという用語は、ピリジルN-オキシド、およびピリジンN-オキシド環を含有する基も包含する。単環ヘテロアリールの例としては、フラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロフラニル、チオフェニルチオフラニルとしても知られる、ジヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリル、イソピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イソイミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、トリアゾリル、テトラゾリル、ジチオリル、オキサチオリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリニル、イソチアゾリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、チアジアゾリル、オキサチアゾリル、オキサジアゾリルオキサジアゾリル、1,2,4-オキサジアゾリルアゾキシミルazoximylとしても知られる、1,2,5-オキサジアゾリルフラザニルとしても知られる、または1,3,4-オキサジアゾリルを含む、オキサトリアゾリル1,2,3,4-オキサトリアゾリルまたは1,2,3,5-オキサトリアゾリルを含む、ジオキサゾリル1,2,3-ジオキサゾリル、1,2,4-ジオキサゾリル、1,32-ジオキサゾリル、または1,3,4-ジオキサゾリルを含む、オキサチアゾリル、オキサチオリル、オキサチオラニル、ピラニル1,2-ピラニルまたは1,4-ピラニルを含む、ジヒドロピラニル、ピリジニルアジニルとしても知られる、ピペリジニル、ジアジニルピリダジニル1,2-ジアジニルとしても知られる、ピリミジニル1,3-ジアジニルまたはピリミジルとしても知られる、またはピラジニル1,4-ジアジニルとしても知られるを含む、ピペラジニル、トリアジニルs-トリアジニル1,3,5-トリアジニルとしても知られる、as-トリアジニル1,2,4-トリアジニルとしても知られる、およびv-トリアジニル1,2,3-トリアジニルとしても知られるを含む、オキサジニル1,2,3-オキサジニル、1,3,2-オキサジニル、1,3,6-オキサジニルペントキサゾリルとしても知られる、1,2,6-オキサジニル、または1,4-オキサジニルを含む、イソオキサジニルo-イソオキサジニルまたはp-イソオキサジニルを含む、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、オキサチアジニル1,2,5-オキサチアジニルまたは1,2,6-オキサチアジニルを含む、オキサジアジニル1,4,2-オキサジアジニルまたは1,3,5,2-オキサジアジニルを含む、モルホリニル、アゼピニル、オキセピニルoxepinyl、チエピニルthiepinyl、およびジアゼピニルが挙げられる。2-縮合環ヘテロアリールの例としては、インドリジニル、ピリンジニルpyrindinyl、ピラノピロリル、4H-キノリジニル、プリニル、ナフチリジニル、ピリドピリジニルピリド[3,4-b]-ピリジニル、ピリド[3,2-b]-ピリジニル、またはピリド[4,3-b]-ピリジニルを含む、およびプテリジニル、インドリル、イソインドリル、インドレニニルindoleninyl、イソインダゾリル、ベンズアジニルbenzazinyl、フタラジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、ベンゾジアジニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンズオキサゾリル、インドキサジニル、アントラニリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキサニル、ベンズオキサジアゾリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチエニル、イソベンゾチエニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズオキサジニル、ベンズイソオキサジニル、およびテトラヒドロイソキノリニルが挙げられる。3-縮合環ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルの例としては、5,6-ジヒドロ-4H-イミダゾ[4,5,1-ij]キノリン、4,5-ジヒドロイミダゾ[4,5,1-hi]インドール、4,5,6,7-テトラヒドロイミダゾ[4,5,1-jk][1]ベンズアゼピン、およびジベンゾフラニルが挙げられる。縮合環ヘテロアリールの他の例としては、例えば、インドリル、イソインドリルイソベンズアゾリルまたは擬イソインドリルとしても知られる、インドレニニル擬インドリルとしても知られる、イソインダゾリルベンズピラゾリルとしても知られる、ベンズアジニルキノリニル1-ベンズアジニルとしても知られるまたはイソキノリニル2-ベンズアジニルとしても知られるを含む、フタラジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、ベンゾジアジニルシンノリニル1,2-ベンゾジアジニルとしても知られるまたはキナゾリニル1,3-ベンゾジアジニルとしても知られるを含む、ベンゾピラニルクロマニルまたはイソクロマニルを含む、ベンゾチオピラニルチオクロマニルとしても知られる、ベンズオキサゾリル、インドキサジニルベンズイソオキサゾリルとしても知られる、アントラニリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキサニル、ベンズオキサジアゾリル、ベンゾフラニルクマロニルcoumaronylとしても知られる、イソベンゾフラニル、ベンゾチエニルベンゾチオフェニル、チオナフテニル、またはベンゾチオフラニルとしても知られる、イソベンゾチエニルイソベンゾチオフェニル、イソチオナフテニル、またはイソベンゾチオフラニルとしても知られる、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズオキサジニル1,3,2-ベンズオキサジニル、1,4,2-ベンズオキサジニル、2,3,1-ベンズオキサジニル、または3,1,4-ベンズオキサジニルを含む、ベンズイソオキサジニル1,2-ベンズイソオキサジニルまたは1,4-ベンズイソオキサジニルを含む、テトラヒドロイソキノリニル、カルバゾリル、キサンテニル、およびアクリジニルなどのベンゾ-縮合ヘテロアリールが挙げられる。ヘテロアリールという用語は、C5またはC6炭素環などのC4~C10炭素環、または4~10員環の複素環に縮合する、ピリジルおよびキノリニルなどの置換基も包含し、ここで、このような縮合アリール基を置換基として有する基はヘテロアリール基の芳香族炭素またはヘテロアリール基のヘテロ原子に結合する。このような縮合ヘテロアリール基が1つ以上の置換基によって置換される場合、前記1つ以上の置換基は、他に特に規定されない限り、それぞれ、ヘテロアリール基の芳香族炭素またはヘテロアリール基のヘテロ原子に結合する。縮合C4~C10炭素環または4~10員環の複素環は、ハロゲン、C1~C6アルキル、C3~C10シクロアルキル、または=Oで随意的に置換されうる。エチレンという用語は-CH2-CH2-基のことを指す。エチネレンethyneleneという用語は-CH=CH-基のことを指す。プロピレンという用語は-CH2-CH2-CH2-基のことを指す。ブチレンという用語は-CH2-CH2-CH2-CH2-基のことを指す。メチレンオキシという用語は-CH2-O-基のことを指す。メチレンチオキシという用語は-CH2-S-基のことを指す。メチレンアミノという用語は-CH2-NH-基のことを指す。エチレンオキシという用語は-CH2-CH2-O-基のことを指す。エチレンチオキシという用語は-CH2-CH2-S-基のことを指す。エチレンアミノという用語は-CH2-CH2-NH-基のことを指す。置換基はその置換基が1つ以上の水素原子と結合する少なくとも1つの炭素、硫黄、酸素または窒素原子を含む場合に置換可能である。よって、例えば、水素、ハロゲン、およびシアノはこの定義の範囲に含まれない。置換基が置換されていると記載される場合、非水素置換基が、水素置換基の代わりに、置換基の炭素、酸素、硫黄または窒素上に存在する。よって、例えば、置換アルキル置換基とは、少なくとも1つの非水素置換基が、水素置換基の代わりにアルキル置換基に存在している、アルキル置換基である。説明の目的で、モノフルオロアルキルとはフルオロ置換基によって置換されたアルキルであり、ジフルオロアルキルとは2つのフルオロ置換基によって置換されたアルキルのことである。置換基に2つ以上の置換が存在する場合には、各非水素置換基は同一であっても異なっていてもよい特に明記しない限りことが理解されよう。置換基が随意的に置換されていると記載される場合には、その置換基は、1置換されていない、または2置換されている、のいずれかでありうる。置換基の炭素が、置換基のリストのうちの1つ以上で随意的に置換されていると記載される場合、炭素上の水素の1つ以上存在する範囲内では、独立して選択された随意的な置換基で、別々に、および/または一緒に置換されうる。置換基の窒素が、置換基のリストのうちの1つ以上で随意的に置換されていると記載される場合、窒素上の水素の1つ以上存在する範囲内では、それぞれ、独立して選択された随意的な置換基によって置換されうる。典型的な置換基の1つは-NRRと表されて差し支えなく、ここで、RおよびRは、それらが付加する窒素原子と一緒に複素環を形成してもよい。RおよびRがそれらが付加する窒素原子と一緒に形成する複素環は、部分的または完全に飽和されていて差し支えない。1つの実施の形態では、複素環は3~7個の原子で構成される。別の実施の形態では、複素環は、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、ピリジルおよびチアゾリルからなる群より選択される。本明細書では、置換基、ラジカル、および基という用語は、相互に入れ替え可能に用いられる。置換基の群が、置換基のリストのうちの1つ以上で随意的に置換されていると集合的に記載される場合、その群は、1置換不可能な置換基、2随意的な置換基によって置換されていない置換可能な置換基、および/または3随意的な置換基の1つ以上によって置換された置換可能な置換基を含みうる。置換基が、最大で特定の数までの非水素置換基で随意的に置換されていると記載される場合、その置換基は、1未置換であるか、または2最大で特定の数までの非水素置換基によって、または、置換基上の置換可能な位置の最大数まで置換されているかのいずれかであって差し支えなく、そのいずれか少ない方である。よって、例えば、置換基が最大で3つの非水素置換基によって随意的に置換されたヘテロアリールとして記載される場合、3つ未満の置換可能な位置を有するヘテロアリールは、ヘテロアリールが有する置換可能な位置と同数の非水素置換基までしか随意的に置換されない。説明の目的で、テトラゾリル置換可能な位置を1つしか有しないは、最大で1つの非水素置換基でしか随意的に置換されない。さらなる説明を目的として、アミノ窒素が最大で2つの非水素置換基で随意的に置換されていると記載される場合、アミノ窒素が第1級窒素の場合には、その窒素は最大で2つの非水素置換基で随意的に置換されるのに対し、アミノ窒素が第2級窒素の場合にはアミノ窒素は最大で1つの非水素置換基でしか随意的に置換されない。複数部分の置換基に付加された接頭辞は、第1の部分にのみ適用される。説明の目的で、アルキルシクロアルキルという用語は、2つの部分、すなわちアルキルとシクロアルキルを含む。よって、C1~C6-アルキルシクロアルキルにおけるC1~C6-という接頭辞は、アルキルシクロアルキルのアルキル部分が1~6個の炭素原子を含むことを意味する;C1~C6-という接頭辞は、シクロアルキル部分についての記載ではない。さらなる説明を目的として、ハロアルコキシアルキルにおける接頭辞ハロは、アルコキシアルキル置換基のアルコキシ部分のみが1つ以上のハロゲン置換基によって置換されていることを示す。ハロゲン置換がアルキル部分でのみ生じうる場合、置換基はアルコキシハロアルキルと記載される。ハロゲン置換がアルキル部分とアルコキシ部分の両方で生じうる場合には、その置換基はハロアルコキシハロアルキルと記載される。置換基が複数の部分で構成されるときは、他に明記しない限り、その最後の部分は、分子の残りの部分に結合する点としての役割をすることが意図されている。例えば、置換基A-B-Cでは、部分Cが分子の残りの部分に結合する。置換基A-B-C-Dでは、部分Dが分子の残りの部分に結合する。同様に、置換基アミノカルボニルメチルでは、メチル部分が分子の残りの部分に結合し、ここで、前記置換基は次のように表されうる:置換基トリフルオロメチルアミノカルボニルでは、カルボニル部分が分子の残りの部分に結合し、ここで、前記置換基は、次のように表されうる:置換基が、ある群より独立して選択されると記載される場合には、各置換基は他のものとは独立して選択される。したがって、各置換基は、他の置換基と同一であても異なっていてもよい。医薬組成物式I、IIまたはIIIの化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を治療に有効な量で含む、被験体を予防および/または治療するための医薬組成物が開示される。幾つかの形態では、本開示の医薬組成物は、化合物またはそれらの薬学的に許容される塩がGPR35に病態生理学的に関連した疾患の予防および/または治療に有効な組成物であり、ここで、前記化合物は、式I、IIまたはIIIの化合物である。他の幾つかの形態では、本開示の医薬組成物は、化合物またはそれらの薬学的に許容される塩がGPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連した疾患の予防および/または治療に有効な組成物であり、ここで、前記化合物は式I、IIまたはIIIの化合物である。他の幾つかの形態では、本開示の医薬組成物は、1種類以上の治療薬をさらに含む組成物である。幾つかの形態では、本開示の医薬組成物は、化合物またはそれらの薬学的に許容される塩と1種類以上の治療薬が、被験体におけるGPR35および/またはGPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連した疾患を予防および/または治療するのに相乗効果を生み出す組成物である。他の幾つかの形態では、本開示の医薬組成物は、化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の、1種類以上の治療薬に対する重量比が、約1:100~約100:1、または約1:50~約50:1、または約1:10~約10:1、または約1:5~約5:1の範囲の組成物である。他の幾つかの形態では、本開示の医薬組成物は、1種類以上の治療薬が、抗炎症薬、抗代謝異常薬antimetabolicdisorderagent、抗鬱血性心不全薬anti-congestiveheartfailureagent、抗癌剤、キヌレン酸、NPPB、ザプリナストおよびリゾホスファチジン酸LPAからなる群より選択される組成物である。他の幾つかの形態では、本開示の医薬組成物は、被験体が哺乳動物である組成物である。GPR35-hERG複合体干渉分子を特定する本開示の方法において特定された分子を治療に有効な量で含む、被験体を治療するための医薬組成物が開示される。GPR35-hERG相互作用を防ぐすることができる、GPR35-hERG複合体関連疾患の治療薬も開示される。GPR35-hERG相互作用を破壊することができる、GPR35-hERG複合体関連疾患の治療薬も開示される。幾つかの形態では、上述の医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含みうる。薬学的に許容されるとは、生物学的に望ましくない材料、または他の望ましくない材料ではないことを意味する、すなわち、その材料は、望ましくない生物学的作用を生じることなく、または、医薬組成物の他の成分のいずれかと有害な方式で相互作用を生じることなく、被験体に投与されうる。担体は、当業者に周知のように、有効成分の分解を最小限に抑え、かつ、被験体における不利な副作用を最小限に抑えるように選択することができる。担体は、固体、液体、またはその両方であって差し支えなく、例えば、0.05~100、0.05~99、0.05~98、0.05~97、0.05~96、0.05~95、0.05~94、0.05~93、0.05~92、0.05~91、0.05~90、0.05~85、0.05~80、0.05~75、0.05~70、0.05~65、0.05~60、0.05~55、0.05~50、0.05~45、0.05~40、0.05~35、0.05~30、0.05~25、0.05~20、0.05~15、0.05~10、0.05~5、0.05~4、0.05~3、0.05~2、0.05~1、0.05~0.8、0.05~0.6、0.05~0.5、0.05~0.4、0.05~0.3、0.05~0.2、0.05~0.1、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.8~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100、100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05の重量の活性化合物を含みうる、例えば錠剤などの単位用量組成物として、前記化合物とともに製剤化されて差し支えない。本開示の化合物は、標的薬物担体として適切なポリマーと結合させてもよい。他の薬理活性物質も存在して差し支えない。適切な投与経路のいずれかを本開示の組成物に使用することができる。適切な投与経路としては、例えば、局所、腸enteral、局部、全身、または非経口が挙げられる。例えば、投与は、皮膚上、吸入、浣腸、結膜、点眼、点耳、歯槽、鼻、鼻腔内、膣、膣外、経膣、眼、眼球内、経眼、腸、口腔、口内、経口、腸、直腸、直腸内、経直腸、注射、点滴、静脈内、動脈内、筋肉内、大脳内、心室内、脳室内、心臓内、皮下、骨内、皮内、髄腔内、腹腔内、膀胱内、陰茎海綿体内、骨髄内、頭蓋内、経皮、経粘膜、経鼻、嚢内、硬膜外epidural、peridural、硝子体内などでありうる。適切な担体およびそれらの剤形は、RemingtonTheScienceandPracticeofPharmacyedARGennaroMackPublishingCompanyEastonPA1995に記載されている。典型的には、薬学的に許容される塩は、製剤を等張にするために、適正な量で製剤に用いられる。薬学的に許容される担体の例としては、限定はしないが、生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液が挙げられる。溶液のpHは、好ましくは約5~約8であり、さらに好ましくは約7~約7.5である。さらなる担体としては、そのマトリクスが、例えば、フィルム、リポソームまたは微小粒子などの成形物品の形態でありうる、例えば抗ウイルス薬を含む、固体の疎水性ポリマーの半透過性のマトリクスなどの持続放出性の製剤が挙げられる。例えば、投与経路および投与される組成物の濃度に応じて、ある特定の担体がより好ましいであろうことは、当業者にとって明白であろう。医薬担体は当業者に周知である。これらは、最も典型的には、ヒトに薬物を投与するための標準的な担体であり、例えば、滅菌水、生理食塩水、および生理学的pHの緩衝液などの溶液が挙げられる。薬学的に許容される賦形剤の例としては、限定はしないが、増粘剤、希釈剤、緩衝液、保存料、界面活性剤などが挙げられる。本開示の化合物は、好ましくはこのような経路に適合した医薬組成物形態、および、目的の治療または予防に有効な用量で、いずれかの適切な経路で投与されうる。活性化合物および組成物は、例えば、経口、直腸、非経口、眼、吸入、または局所に投与することができる。固体の投与形態の経口投与は、各々が本開示の化合物または組成物の少なくとも1種類を所定の量で含む、例えば、硬カプセルまたは軟カプセル、丸薬、カシェ剤、トローチ剤、または錠剤などの不連続単位で提供されて差し支えない。幾つかの形態では、経口投与は粉末または顆粒の形態であって差し支えない。幾つかの形態では、経口の製剤は、例えばトローチ剤などの舌下剤である。このような固体の投与形態では、式Iの化合物は、通常、1つ以上のアジュバントと併用される。このようなカプセルまたは錠剤は、放出制御製剤を含んでいてもよい。カプセル、錠剤、および丸薬の事例では、その投与形態に緩衝剤も含めて差し支えなく、あるいは、腸溶コーティングを用いて調製することもできる。幾つかの形態では、経口投与は液体の剤形であってもよい。経口投与のための液体の投与形態としては、例えば、当技術分野で一般的に用いられる不活性の希釈剤例えば水を含む、薬学的に許容されるエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシル剤が挙げられる。このような組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、香味料例えば甘味料、および/または香料などのアジュバントも含みうる。幾つかの形態では、本開示の組成物は非経口の投与形態を含みうる。非経口投与としては、例えば、皮下注射、静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、および点滴が挙げられる。注射用製剤例えば、滅菌した注射可能な水性または油性の懸濁液は、適切な分散剤、湿潤剤、および/または懸濁剤を使用して、既知の技術に従って製剤されて差し支えない。幾つかの形態では、本開示の組成物は、局所投与形態を含みうる。局所投与としては、例えば、経皮パッチまたはイオントフォレーシス装置などを介した経皮投与、眼球内投与、または鼻腔内または吸入投与が挙げられる。局所投与用の組成物には、例えば、局所ゲル、スプレー、軟膏、およびクリームも含まれる。局所製剤は、皮膚または他の患部を通じた有効成分の吸収または浸透を高める化合物を含んでいてもよい。化合物および組成物が経皮デバイスによって投与される場合、投与は、液体用容器と多孔質膜タイプのパッチ、または固体マトリクスの種類のパッチのいずれかを使用して達成される。この目的のための典型的な剤形としては、ゲル、ハイドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏、粉剤、ドレッシング、フォーム、フィルム、皮膚用パッチ剤、ウェファ、インプラント、スポンジ、ファイバ、包帯およびマイクロエマルションが挙げられる。リポソームも使用することができる。典型的な担体としては、アルコール、水、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールが挙げられる。浸透促進剤を導入することもできる。例えば、JPharmSci88955958byFinninandMorganを参照。眼への局所投与に適した剤形としては、例えば、本開示の化合物または組成物を適切な担体に溶解または懸濁した点眼が挙げられる。眼または耳への投与に適した典型的な剤形は、等張のpH調節された滅菌生理食塩水に懸濁または溶解した、微粉化した懸濁液または溶液の点滴剤の形態でありうる。眼および耳への投与に適した他の剤形としては、軟膏、生分解性例えば吸収性ゲルスポンジ、コラーゲンおよび非生分解性例えばシリコーンのインプラント、ウェファ、レンズ、および、ニオソームまたはリポソームなどの微粒子またはベシクル系vesicularsystemsが挙げられる。架橋ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、またはメチルセルロースなどのセルロースポリマー、あるいは、例えばゲランガムなどのヘテロ多糖類ポリマーなどのポリマーを、塩化ベンザルコニウムなどの保存料と一緒に導入することができる。このような剤形は、イオントフォレーシスによって送達させることもできる。鼻腔内投与または吸入による投与では、本開示の活性化合物は、患者によって圧迫または送り出されるポンプ式スプレー容器から溶液または懸濁液の形態で、または、適切な推進剤の使用とともに加圧容器またはネブライザーからエアゾールスプレーの形態で、都合よく送達される。鼻腔内投与に適した製剤は、典型的には、乾燥粉末吸入器から乾燥粉末単独で、例えばラクトースとの乾式混合による混合物として、または、例えばホスファチジルコリンなどのリン脂質と混合した混合成分粒子として、のいずれかの形態で、あるいは、1,1,1,2-テトラフルオロエタンまたは1,1,1,2,3,3,3-ヘプタフルオロプロパンなどの適切な推進剤を使用した、または使用しない、加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器好ましくは細かい霧状にするために電気流体力学を利用した噴霧器、またはネブライザーから、エアゾールスプレーとして投与される。鼻腔内用途では、粉末は、例えばキトサンまたはシクロデキストリンなどのバイオ接着剤bioadhesiveagentを含みうる。幾つかの形態では、本開示の組成物は直腸製剤も含みうる。このような直腸製剤は、例えば坐剤の形態でありうる。従来の坐剤ベースはカカオ脂であるが、必要に応じて、さまざまな代替物を利用することができる。薬学の分野で知られている他の担体物質および投与方法も利用することができる。本開示の医薬組成物は、有効な剤形および投与方法など、周知の薬学技術のいずれかによって調製されうる。有効な剤形および投与方法に関する上記検討事項は当技術分野で周知であり、標準的な教科書に記載されている。薬物の剤形は、例えば、HooverJohnERemingtonsPharmaceuticalSciencesMackPublishingCoEastonPennsylvania1975;LibermanetalEdsPharmaceuticalDosageFormsMarcelDeckerNewYorkNY1980;およびKibbeetalEdsHandbookofPharmaceuticalExcipientsAmericanPharmaceuticalAssociationWashington1999に論じられている。式I、IIまたはIIIの本開示の化合物は、さまざまな病状または病態の治療または予防において、単独で、または他の治療薬と組み合わせて使用することができる。本開示の化合物および組成物と他の治療薬は、同時に同一の投与形態、または別々の投与形態のいずれかで、または連続的に投与することができる。典型的な治療薬は、例えば、抗炎症薬、抗代謝異常薬、抗鬱血性心不全薬、抗癌剤、キヌレン酸、NPPB、ザプリナスト、リゾホスファチジン酸LPA、および本明細書に開示される式I、IIまたはIIIの化合物からなる群より選択されるものでありうる。2種類以上の化合物の組合せでの投与は、2種類の化合物が、一方の存在により他方の生物学的作用が変わるほど十分に近い時間で投与されることを意味する。2種類以上の化合物は、同時に、並行にまたは連続して投与しても差し支えない。その上、同時投与は、投与前に化合物を混合することにより、もしくは同じ時点であるが異なる解剖学的部位に、または異なる投与経路を使用して、化合物を投与することにより行うことができる。並行投与、共投与、同時投与および同時に投与したという句は、化合物が組合せで投与されることを意味する。前記化合物および/または前記化合物を含有する組成物の投薬計画は、患者のタイプ、年齢、体重、性別および病状;投与経路;および使用される特定の化合物の活性;を含む様々な容易に基づいて得る。それゆえ、投薬計画は幅広く異なり得る。先に示された状態の治療または予防において、一日での体重1キログラム当たり約0.001mgから約100mgの投薬量が有用である。開示された化合物の他の効果的な投薬計画単剤または分割剤で投与されるは、以下に限られないが、約0.01から約100mg/kg/日、約0.1から約50mg/kg/日、約0.5から約30mg/kg/日、約0.01から約10mg/kg/日、および約0.1から約1.0mg/kg/日が挙げられる。投薬単位組成物は、一日の用量を構成するそのような量または約数を含有し得る。多くの場合、化合物の投与は一日に複数回繰り返される。所望であれば、一日の合計用量を増加させるために、一般に、一日に複数の投薬を使用しても差し支えない。経口投与について、前記組成物は、患者への投薬量を対症調節するために、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、75.0、100、125、150、175、200、250および500ミリグラムの活性成分を含有する錠剤形態で提供することができる。製剤は一般に、約0.01mgから約500mgの活性成分、または約1mgから約100mgの活性成分を含有する。静脈内では、用量は、一定速度の注入の最中に、約0.1から約10mg/kg/分におよび得る。効果的な量の本発明の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、包接体、またはプロドラッグ;および薬学的に許容される担体またはビヒクルを含む医薬組成物が開示されている。これらの組成物は、追加の薬剤をさらに含んでもよい。これらの組成物は、hERG-GPR35複合体の活性を調節し、それゆえ、代謝異常などのhERG-GPR35関連の人間のかかる病気の予防および治療を改善するのに有用である。細胞外因性GPR35遺伝子および外因性hERG遺伝子を含む遺伝子操作された細胞が開示されている。ある形態では、外因性GPR35遺伝子および外因性hERG遺伝子は、前記細胞中に、宿主細胞とは別の核酸に存在する。ある形態では、外因性核酸が、宿主細胞の核酸と組み換えされる。内因性GPR35遺伝子および外因性hERG遺伝子を含む遺伝子操作された細胞も開示されている。外因性GPR35遺伝子および内因性hERG遺伝子を含む遺伝子操作された細胞も開示されている。開示された細胞のある形態において、GPR35遺伝子、hERG遺伝子または両方の遺伝子は、変異体遺伝子であり得る。その変異体遺伝子は、GPR35-hERG相互作用を防ぐか、または複合体を形成させるが、下流シグナル伝達経路を抑制または阻害することができる。開示された細胞のある形態では、GPR35遺伝子がGPR35タンパク質を発現し、hERG遺伝子がhERGタンパク質を発現する。GPR35タンパク質は、GPR35融合タンパク質であり得る。ある形態では、GPR35融合タンパク質は、myc-GPR35であり得る。GPR35融合パートナーは、以下に限られないが、GST、HA、GFP、HPR、Hisであり得る。この融合パートナーは、以下に限られないが、アフィニティータグまたはビジュアルタグであって差し支えない。開示された細胞のある形態では、GPR35およびhERGタンパク質は、両方のタンパク質が同じ細胞中で同時発現されるときに、相互作用して、GPR35-hERGシグナル伝達複合体を形成する。GPR35-hERGシグナル伝達複合体は、hERGおよびGPR35同時発現細胞中の細胞表面でhERGチャンネルタンパク質およびGPR35タンパク質の間の物理的相互作用によって形成される。ある形態では、開示された細胞は、GPR35のコード領域に動作可能に結合した調節可能なプロモータをさらに含む。この調節可能なプロモータは、以下に限られないが、テトラサイクリン誘発性プロモータ、T-RExTMプロモータ、熱ショック誘発性プロモータ、重金属イオンプロモータまたは核ホルモン受容体誘発性プロモータ、または条件付きで活性が調節される他のプロモータ要素であり得る。ある形態では、調節可能なプロモータはtetオペレータを含む。ある形態では、調節可能なプロモータはCMVプロモータ要素を含む。ある形態では、開示された細胞は、hERGのコード領域に動作可能に結合した調節可能なプロモータをさらに含む。ある形態では、開示された細胞は、選択可能なマーカーをさらに含む。その選択可能なマーカーは、以下に限られないが、テトラサイクリン、アンピシリン、ネオマイシン、G418またはゲンタマイシンであり得る。ある実施の形態において、選択可能なマーカーおよびGPR35コード領域は、同じ核酸上にある。本発明のある態様において、GPR35および選択可能なマーカーコード領域は、IRESまたは2A-様配列により動作可能に結合されている。ある実施の形態において、GPR35および選択可能なマーカーコード領域は、異なるプロモータに動作可能に結合されている。本発明のある態様において、選択可能なマーカーおよびGPR35コード領域は、異なる核酸上にある。本発明のある態様において、GPR35コード領域は、cDNAからのものである。開示された細胞のある形態では、その細胞は、以下に限られないが、動物細胞、または哺乳類細胞であり得る。ある形態では、その細胞は、293細胞、HEK細胞、CHO細胞、Hela細胞、COS細胞、A431細胞、A549細胞、Jurkat細胞、PC12細胞、ヒトTリンパ球、Cos7細胞およびマウス細胞またはこれらの細胞のいずれかの誘導体からなる群より選択され得る。開示された細胞のある形態では、GPR35遺伝子およびhERG遺伝子は同じ核酸上にある。ある形態では、GPR35遺伝子およびhERG遺伝子は異なる核酸上にある。本発明は、GPR35またはhERGのいずれかのみ、またはその両方を調節する化合物例えば、小分子をスクリーニングするために使用できる細胞株も提供する。本発明の方法および細胞は、GPR35およびhERGの間で形成されたシグナル伝達複合体をアッセイし、シグナル伝達複合体に作用する調節因子を分類する方法を提供する。本発明は、本発明の細胞を構築するための、関連する細胞、核酸および方法をさらに提供する。本発明の1つの実施の形態は、GPR35またはGPR35変異体を含む核酸、hERGまたはhERG変異体を含む核酸、またはその任意の組合せを有する細胞を提供する。1つの実施の形態において、核酸はDNAまたはRNAである。1つの実施の形態において、核酸はウイルスベクターである。ウイルスベクターとしては、以下に限られないが、バキュロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、または遺伝子を細胞中に送達するための他のウイルスに由来のものが挙げられる。1つの実施の形態において、核酸はプラスミドである。いくつかの実施の形態において、核酸はトランスポゾンを含む。いくつかの実施の形態において、核酸は合成微小染色体である。いくつかの実施の形態において、細胞は、hERGのコード領域に動作可能に結合した第2のプロモータを含む核酸をさらに含む。1つの実施の形態において、GPR35コード領域に動作可能に結合した調節可能なプロモータおよびhERGのコード領域に動作可能に結合した第2のプロモータは、同じ核酸上にある。1つの実施の形態において、GPR35コード領域に動作可能に結合した調節可能なプロモータおよびhERGのコード領域に動作可能に結合した第2のプロモータは、異なる核酸上にある。いくつかの実施の形態において、調節可能なプロモータは、細胞のゲノム中に既存のGPR35コード領域に動作可能に結合している。いくつかの実施の形態において、本発明の細胞はコード領域を含まない。多くのGPCRにより、特定のシグナル伝達分子の細胞レベル、例えば、カルシウムおよび/またはcAMPレベルに検出可能な変化が生じる。その上、ラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイは、刺激の際の細胞応答の、経路不偏であるが経路感受性の手段を提案する。当業者は、コード領域を用いずに、これらの変化を容易に検出することができる。本発明のある態様において、細胞は安定している。本発明の他の実施の形態において、細胞は、少なくとも、1つのシグナル伝達成分例えば、過渡的にトランスフェクトされたGPR35またはhERGについて安定ではない。いくつかの実施の形態において、細胞はさらに、GPR35またはhERGチャンネルのいずれかに結合することが知られている化合物を含むおよび/または接触させられる。複合体1つ以上のGPCRおよびhERGを含む、単離されたGタンパク質共役受容体GPCR-hERG複合体が開示されている。開示された複合体および組成物は、複合体に結合する分子をスクリーニングするために使用することができる。当業者には、単離された複合体またはこの複合体を含む組成物の様々な用途が知られているであろう。ここに開示されたGPCR-hERG複合体を含む組成物も開示されている。開示された複合体および組成物のある形態では、GPCR-hERG複合体はGPR35-hERGであり得、GPCRはGPR35である。ある形態では、GPCR-hERG複合体は標識を含む。その標識は、以下に限られないが、蛍光標識、放射性標識、酵素標識、またはアフィニティー標識であり得る。キット以下に記載する治療または予防の方法の実施に使用するのに適したキットも開示されている。ある形態では、そのキットは、開示された方法を実施するのに十分な量で、1種類以上の開示された化合物および投薬のための容器を含む第1の投薬形態を含有する。ある形態では、キットは、1種類以上の開示された化合物、および1種類以上の他の治療薬を含み得る。例示の治療薬は、例えば、抗癌剤であり得る。GPR35-hERGを発現する遺伝子操作された細胞株およびその細胞株を取り扱うための使用説明書を含むキットも開示されている。ある形態では、そのキットは、GPR35-hERG複合体を調節する化合物をスクリーニングするための使用説明書をさらに含む。GPR35-hERGを発現する遺伝子操作された細胞株およびその細胞株を取り扱うための使用説明書を含み、さらに、GPR35-hERG複合体干渉分子を同定する開示の方法において同定された分子を含む組成物を含むキットも開示されている。方法本発明の方法の全ては、本発明の化合物のみで、もしくは他の薬剤、または他の抗癌剤と組み合わせて、実施されてもよい。A.スクリーニング1.hERG調節因子hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法であって、a化合物を、hERGを発現する細胞およびhERGを発現しない細胞からなる2種類の異なるタイプの細胞と共に個別にインキュベーションする工程;bラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイにより、各細胞タイプについての前記化合物に誘発された細胞応答をモニタする工程;c前記化合物の存在下で、ラベルフリーバイオセンサーhERG活性化剤をhERG発現細胞と共にインキュベーションする工程;d前記化合物の存在下で、前記ラベルフリーバイオセンサーhERG活性化剤に誘発された細胞応答をモニタする工程;およびe前記化合物がhERG調節因子であるか否かを示す、前記化合物のバイオセンサーインデックスを生成する工程を有してなる方法も開示されている。ある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、f電気生理学的方法を使用して、前記化合物がhERG調節因子であると確認する工程をさらに含む。他のある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、ラベルフリーバイオセンサーhERG活性化剤が、hERG活性化剤、hERGイオンチャンネル活性化剤、またはhERG経路活性化剤である方法である。他のある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、hERG活性化剤が、マロトキシン、RPR260243、NS1643、NS3623、PD-118057、PD-307243、A-935142、フルフェナム酸、ニフルム酸、およびジフルニサルからなる群より選択される方法である。ある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、hERG発現細胞株が、白血病細胞株、胃癌細胞株、神経芽細胞腫細胞株、乳癌細胞株、ヒト結腸癌細胞株、心循環系細胞株、および神経性細胞株からなる群より選択される方法である。他のある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、hERG発現細胞株は、細胞株HL60、細胞株SGC7901、細胞株MGC803、細胞株SH-SY5Y、細胞株MCF-7、細胞株HT-29、細胞株HCT8、および細胞株HCT116からなる群より選択される方法である。他のある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、hERG非発現細胞株が、ヒト胎児由来腎臓細胞株およびチャイニーズハムスター卵巣細胞株からなる群より選択される方法である。ある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、hERG非発現細胞株が、細胞株HEK-293および細胞株CHO-K1からなる群より選択される方法である。他のある形態では、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法は、工程eが、前記化合物のバイオセンサーインデックスを公知のhERG調節因子のバイオセンサーインデックスと比較する工程を含む方法である。2.GPR35調節因子GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法であって、aGPR35を発現する細胞を提供する工程;b前記細胞を化合物と接触させる工程;およびcラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイを使用して、前記化合物をプロファイルする工程を有してなる方法も開示されている。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記プロファイルする工程が、前記化合物のバイオセンサーインデックスを生成し、前記化合物がGPR35調節因子であるか否かを判定する各工程を含む方法である。他のある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記判定する工程が、前記化合物のバイオセンサーインデックスを公知のGPR35調節因子のバイオセンサーインデックスと比較する工程を含む方法である。他のある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物がGPR35アゴニストである方法である。他のある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物のバイオセンサーインデックスが前記公知のGPR35調節因子のバイオセンサーインデックスと類似している場合、前記化合物がGPR35調節因子である方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35アゴニストが、キヌレン酸、NPPB、ザプリナストおよびリゾホスファチジン酸LPAからなる群より選択される方法である。他のある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、工程bが、前記細胞を化合物および公知のGPR35アゴニストと接触させる工程を含む方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物のバイオセンサーインデックスが公知のGPR35アンタゴニストのバイオセンサーインデックスと類似している場合、前記化合物がGPR35アンタゴニストである方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、式I、IIまたはIIIを有するGPR35調節因子である方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35調節因子である方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35調節因子である方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35調節因子である方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35調節因子である方法である。ある形態では、GPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法は、GPR35がヒトである方法である。3.GPR35-hERG複合体調節因子GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、a化合物がGPR35特異的調節因子またはhERG特異的調節因子であるか、もしくはいずれでもないかを判定する工程;およびb前記化合物がGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子であるか否かを判定する工程を有してなる方法も開示されている。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、工程aが、上述したような、hERG特異的調節因子をスクリーニングする方法、および/またはGPR35特異的調節因子をスクリーニングする方法によるものである方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、工程bが、iGPR35-hERG複合体を含む細胞を提供する工程;ii前記細胞を前記化合物と接触させる工程;iii1種類以上の適切なアッセイを使用することによって、前記化合物をプロファイルする工程を含む方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、プロファイルする工程iiiが、シグナルを前記アッセイで分析し、前記化合物がGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子であるか否かを判定する各工程を含む方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記アッセイがラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイである方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記アッセイが交差脱感作DMRアッセイである方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERG複合体により作用する前記調節因子のアゴニズム作用を判定するために、前記アッセイが行われる方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、GPR35特異的アゴニストマーカーに対する、またはhERG特異的活性化剤マーカーに対する、前記GPR35-hERG複合体により作用する前記調節因子のアンタゴニズム作用を判定するために、前記アッセイが行われる方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子がGPR35アゴニストであり、かつhERG活性化剤でもある方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子が、hERGをトランス活性化させるGPR35特異的アゴニストである方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子が、hERGをトランス活性化させないGPR35特異的アゴニストである方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子が、GPR35をトランス活性化させるhERG特異的活性化剤である方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子が、GPR35をトランス活性化させないhERG特異的活性化剤である方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子が、GPR35アゴニストでも、hERG活性化剤でもない方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子が、上述したような調節因子を調節する補助調節因子である方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子が前記複合体に作用するときに、シグナル伝達経路が調節される方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記シグナル伝達経路が、GPR35特異的調節因子がGPR35のみに作用するときに形成されたシグナル伝達経路に実質的に類似している方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記シグナル伝達経路が、hERG特異的調節因子がhERGのみに作用するときに形成されたシグナル伝達経路に実質的に類似している方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記シグナル伝達経路が、GPR35特異的調節因子がGPR35のみに作用するとき、またはhERG特異的調節因子がhERGのみに作用するときに形成されたシグナル伝達経路とは異なる方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記シグナル伝達経路が、GPR35特異的調節因子がGPR35のみに作用するときに形成されたシグナル伝達経路と、hERG特異的調節因子がhERGのみに作用するときに調節されたシグナル伝達経路との組合せである方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、式I、IIまたはIIIを有するGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子である方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子である方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子である方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子である方法である。ある形態では、GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子をスクリーニングする方法は、前記化合物が、からなる群より選択される化学構造を有するGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子である方法である。開示された組成物および方法は、一部には、シグナル伝達経路の調節因子例えば、活性化剤、遮断薬、アゴニスト、逆作動薬、またはアンタゴニストを同定するためのアッセイ、並びにそのようなアッセイに使用される組成物に関する。詳しくは、開示は、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に作用する調節因子を同定し分類するためのアッセイ、並びにそのようなアッセイに使用される組成物に関する。ある形態では、開示は、発現生成物の検出を含む。その検出としては、以下に限られないが、対応するmRNAの発現、タンパク質の発現、タンパク質の位置、およびGPR35とhERGとの間の相互作用、各成分のシグナル伝達結果および活性化されている全体のシグナル伝達複合体の検出が挙げられる。いくつかの実施の形態において、開示は、化合物をシグナル伝達hERG-GPR35複合体の成分の潜在的な調節因子と接触させ、その後、シグナル伝達経路の下流の活性を測定することにより働くアッセイを含む。測定できる効果の例としては、以下に限られないが、特定の細胞核酸の転写、特定の遺伝子の翻訳および化合物例えば、カルシウムまたはcAMPの濃度変化、タンパク質の転座、およびラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイにより測定される積分細胞応答が挙げられる。開示された、いくつかの実施の形態は、例えば、GPR35/hERGシグナル伝達複合体の調節因子として作用する小分子のハイスループットスクリーニングまたは検出のための、機能細胞系アッセイを提供する。本発明のいくつかの実施の形態は、受容体例えば、GPR35からのシグナルが、別の受容体例えば、hERGの活性を調節する、および/または変化が測定できる例えば、カルシウムおよび/またはcAMPレベル、またはDMRシグナル細胞応答を調節する、共役反応を提供する。本開示は、ここに記載された様々な方法を提供する。明確にするために、本開示は、シグナル伝達複合体中の任意の成分の調節因子およびその関連経路をスクリーニングするために使用することができる。本開示によれば、構成アイソフォームを含むGPR35の任意の変異体が発現され得る。あるいは、hERGチャンネルの任意の変異体が、多くの異なる組合せを達成できるように発現され得る。i.分類本開示は、hERG-GPR35シグナル伝達複合体活性化剤の部類に関する。これらの活性化剤は、1GPR35アゴニストであり、かつhERG活性化剤でもあるhERG-GPR35複合体活性化剤、または2hERGトランス活性化GPR35アゴニストすなわち、hERGチャンネルをトランス活性化できる機能的に選択的なGPR35アゴニスト;または3GPR35トランス活性化hERG活性化剤すなわち、GPR35をトランス活性化できる機能的に選択的なhERG活性化剤;または4hERG非トランス活性化GPR35アゴニストすなわち、hERGをトランス活性化できないGPR35特異的アゴニスト;または5GPR35非トランス活性化hERG活性化剤すなわち、GPR35をトランス活性化できないhERG特異的活性化剤であり得る図12および13参照。hERGリガンドによるhERGチャンネルの活性化は、同じ複合体中でGPR35をトランス活性化するどうか分からないのに対し、GPR35アゴニストによるGPR35の活性化は、同じ複合体中のhERGチャンネルをトランス活性化するかどうか分からない。hERG-GPR35アゴニストによるhERG-GPR35シグナル伝達複合体の活性化は、同じ複合体内でhERGおよびGPR35の両方の活性化をもたらし得る図12。本開示は、hERG-GPR35シグナル伝達複合体活性化剤を分類する方法に関する。開示の方法は、hERG-GPR35複合体調節因子の部類を定義するための細胞アッセイのパネルの組合せである図1から11、および図14から17に示された実施例参照:1ポイントオブコンタクトアッセイ例えば、受容体転座、Ca2動員、cAMP変化、タンパク質ホスホリル化またはGPR35提示細胞中のGPR35により作用する調節因子の作用を判定するための統合アッセイ例えば、ラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイを含む細胞アッセイ;2hERG提示細胞中のhERGチャンネルにより作用する調節因子の作用を判定するためのパッチクランプ記録;3hERGおよびGPR35同時発現細胞中のhERG-GPR35複合体により作用する調節因子のアゴニズム作用を判定するための統合アッセイ例えば、ラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイ;および4hERGおよびGPR35同時発現細胞中のhERG活性化剤マーカー、および/またはGPR35アゴニストマーカーに対するhERG-GPR35複合体により作用する調節因子のアンタゴニズム作用を判定するための統合アッセイ。hERG活性化剤マーカーがマロトキシンであることが好ましいのに対し、GPR35アゴニストマーカーは、NPPB、キヌレン酸、ザプリナスト、またはYE210であることが好ましい。4.GPR35-hERG複合体干渉分子GPR35-hERG複合体干渉分子を同定する方法であって、GPR35-hERG複合体を含む組成物を試験薬と接触させ、GPR35-hERGの相互作用をアッセイする各工程を含む方法が開示されている。開示された方法のある形態では、GPR35-hERGの相互作用のないことは、試験薬がGPR35-hERG複合体干渉分子であることを示す。開示された方法のある形態では、GPR35-hERG相互作用をアッセイする工程は、GPR35を単離し、GPR35-hERGの相互作用を示すhERGの存在を検出する各工程を含む。ある形態では、GPR35-hERG相互作用をアッセイする工程は、hERGを単離し、GPR35-hERGの相互作用を示すGPR35の存在を検出する各工程を含む。開示された方法のある形態では、GPR35-hERG相互作用をアッセイする工程は、試験薬の存在下対不在下でのGPR35-hERGの相互作用を比較する工程を含む。試験薬の不在下と、試験薬の存在下とでのGPR35-hERGの相互作用の存在は、その試験薬がGPR35-hERG複合体干渉分子ではないことを示す。試験薬の不在下でのGPR35-hERGの相互作用の存在および試験薬の存在下でのGPR35-hERGの相互作用の不在は、その試験薬がGPR35-hERG複合体干渉分子であることを示す。開示された方法のある形態では、GPR35-hERG複合体を含む組成物は細胞である。ある形態では、その細胞は動物細胞であり得る。例えば、その細胞はヒトまたはマウスであり得る。ある形態では、その細胞は遺伝子組換え操作された細胞である。開示された方法のある形態では、GPR35-hERG複合体干渉分子はGPR35-hERGの相互作用を防止する。開示された方法のある形態では、GPR35-hERG複合体干渉分子はGPR35-hERGの相互作用を妨害する。GPR35-hERGの相互作用の防止または妨害は様々な様式で起こり得る。この干渉分子は、hERGのGPR35結合領域と同一の配列を含み、それゆえ結合に競合し得る。例えば、GPR35におけるhERG結合領域のアミノ酸を含むペプチドは、GPR35とhERGとの相互作用を防止または妨害し得る。前記干渉分子は、同一ではないけれども、結合に競合するために、hERGのGPR35結合領域またはGPR35のhERG結合領域を模倣できる。あるいは、前記干渉分子は、相互作用部位の内の1つを遮断することによって、相互作用を単に遮断し得る。例えば、GPR35におけるhERG結合領域に対する抗体は、hERGのGPR35と相互作用する能力を遮断し得る。当業者には、干渉分子の一般的な機構およびこれらをどのように検定するかが知られているであろう。開示された方法のある形態では、GPR35-hERG複合体干渉分子は、抗体またはその断片であり得る。ある形態では、GPR35-hERG複合体干渉分子は、タンパク質またはペプチドであり得る。ある形態では、GPR35-hERG複合体干渉分子は、化合物、またはその薬学的に許容される塩であり得る。ある形態では、GPR35-hERG複合体干渉分子は核酸であり得る。B.治療上述した化合物および組成物は、GPR35、hERGおよび/またはGPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連する疾患の阻害、低減、予防、および/または治療に有用である。したがって、ある形態では、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を予防および/または治療する方法であって、被験体に治療に有効な量の先に開示された化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示される。適切な被験体は、哺乳類の被験体を含み得る。哺乳類としては、以下に限られないが、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、齧歯類、ウサギ、霊長類などが挙げられ、胎内の哺乳類も包含される。ある形態では、ヒトが被験体である。ヒトの被験体は、いずれの性別であっても、どの成長期であっても差し支えない。1.hERG調節因子hERGは、hERGイオンチャンネルの活性を直接的または間接的に調節できる分子である。hERGチャンネルの活性を直接的に調節するhERG調節因子は、hERGチャンネルに結合し、それゆえ、hERG電流、hERGによるイオン流束、および/またはhERGによる細胞シグナル伝達などのhERG活性における変化を生じさせ分子であるこのタイプの調節因子は、hERG特異的調節因子と称される。hERGチャンネルの活性を間接的に調節するhERG調節因子は、細胞中のhERG関連シグナル伝達複合体に結合し、それゆえ、hERG電流、hERGによるイオン流束、および/またはhERGチャンネルまたはhERG関連シグナル伝達複合体による細胞シグナル伝達などのhERG活性における変化を生じさせ分子であるこのタイプの調節因子は、hERG経路調節因子と称される。hERG活性における変化は、調節因子の不在下での細胞中のhERGチャンネルまたはhERG関連シグナル伝達複合体の基礎活性に対して参照される。2.GPR35調節因子ある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の式IIまたはIIIの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩がGPR35調節因子である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩がGPR35アゴニストである方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記GPR35が、G1213-ROCKRhoAおよびRhoキナーゼ経路を通じて細胞のシグナル伝達を媒介する方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記疾患が、炎症、喘息、代謝異常、鬱血性心不全、および癌からなる群より選択される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記代謝異常が、糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病、不十分な耐糖能、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満症、老化、シンドロームX、アテローム性動脈硬化、心臓病、脳卒中、高血圧症および末梢血管疾患からなる群より選択される方法。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記癌が、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性癌、乳癌、結腸癌、肺癌、表皮癌、肝臓癌、食道癌、胃癌、脳の癌および腎臓癌からなる群より選択される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物がGPR35アンタゴニストである方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、直腸、頬、舌下、静脈内、皮下、皮内、経皮、腹腔内、経口、点眼、腸管外および局所の投与からなる群より選択される1つ以上の経路により投与される方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の経口剤型を投与することによって行われる方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の注射剤型の投与である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の座剤型の投与である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩のゲル、クリーム、粉末、泡、結晶、リポソーム、スプレーまたは液体の懸濁剤型の術中点滴注入法による投与である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、経皮貼布または経皮パッドの形態にある、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の投与である方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、投与日で体重1kg当たり約0.001から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約0.01から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約0.1から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約1から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約1から約50mg、または投与日で体重1kg当たり約10から約50mgの量で投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、1種類以上の治療薬をさらに含む方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記治療薬は、抗炎症薬、抗代謝異常薬、抗鬱血性心不全薬または抗癌薬である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記治療薬が、式IIまたはIIIの化合物、またはその薬学的に許容される塩である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、キヌレン酸、NPPB、ザプリナストまたはリゾホスファチジン酸LPAである方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が別々の製剤中で投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が同じ製剤中で投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が同時にまたは順次に投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が、同じまたは異なる経路により投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を予防および/または治療する上で相乗効果を生じる方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記疾患が、単薬として投与される前記化合物またはその薬学的に許容される塩、または前記1種類以上の治療薬による治療に対して無感応である、耐性がある、または効果がない方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が、各々、正常な個体の治療量の1/100から1/2未満、または正常な個体の治療量の1/10から1/4未満の量で投与される方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記被験体が哺乳類である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記被験体が、前記疾患の治療または前記投与を必要とすると認定されている方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記治療の有効性について前記被験体をモニタする工程をさらに含む方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記被験体をモニタする工程が、その被験体から得た組織サンプルを分析する工程を含む方法である。3.GPR35-hERG複合体調節因子ある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の式I、IIまたはIIIの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。ある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、被験体を予防および/または治療する方法であって、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体に、治療に有効な量の、からなる群より選択される化学構造を有する化合物またはその薬学的に許容される塩を投与する工程を含む方法が開示されている。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩がGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記疾患が、炎症、喘息、代謝異常、鬱血性心不全、および癌からなる群より選択される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記代謝異常が、糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病、不十分な耐糖能、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満症、老化、シンドロームX、アテローム性動脈硬化、心臓病、脳卒中、高血圧症および末梢血管疾患からなる群より選択される方法。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記癌が、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性癌、乳癌、結腸癌、肺癌、表皮癌、肝臓癌、食道癌、胃癌、脳の癌および腎臓癌からなる群より選択される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、直腸、頬、舌下、静脈内、皮下、皮内、経皮、腹腔内、経口、点眼、腸管外および局所の投与からなる群より選択される1つ以上の経路により投与される方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の経口剤型を投与することによって行われる方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の注射剤型の投与である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の座剤型の投与である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩のゲル、クリーム、粉末、泡、結晶、リポソーム、スプレーまたは液体の懸濁剤型の術中点滴注入法による投与である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記投与が、経皮貼布または経皮パッドの形態にある、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の投与である方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩が、投与日で体重1kg当たり約0.001から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約0.01から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約0.1から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約1から約100mg、または投与日で体重1kg当たり約1から約50mg、または投与日で体重1kg当たり約10から約50mgの量で投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、1種類以上の治療薬をさらに含む方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記治療薬は、抗炎症薬、抗代謝異常薬、抗鬱血性心不全薬または抗癌薬である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記治療薬が、式I、IIまたはIIIの化合物、またはその薬学的に許容される塩である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、キヌレン酸、NPPB、ザプリナストまたはリゾホスファチジン酸LPAである方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が別々の製剤中で投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が同じ製剤中で投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が同時にまたは順次に投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が、同じまたは異なる経路により投与される方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が、GPR35に病態生理学的に関連する疾患を予防および/または治療する上で相乗効果を生じる方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記疾患が、単薬として投与される前記化合物またはその薬学的に許容される塩、または前記1種類以上の治療薬による治療に対して無感応である、耐性がある、または効果がない方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記1種類以上の治療薬が、各々、正常な個体の治療量の1/100から1/2未満、または正常な個体の治療量の1/10から1/4未満の量で投与される方法である。ある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記被験体が哺乳類である方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記被験体が、前記疾患の治療または前記投与を必要とすると認定されている方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記治療の有効性について前記被験体をモニタする工程をさらに含む方法である。他のある形態では、先に開示した被験体を予防および/または治療する方法は、前記被験体をモニタする工程が、その被験体から得た組織サンプルを分析する工程を含む方法である。開示は、炎症、代謝異常、糖尿病、鬱血性心不全、または癌などのhERG-GPR35複合体関連疾患の予防および治療を改善するためのhERG-GPR35複合体調節因子の使用に関する。このhERG-GPR35複合体調節因子としては、以下に限られないが、式IからIIIに示された分子が挙げられる。開示は、代謝異常および癌などのhERG-GPR35関連ヒト疾患を治療または予防する方法であって、その必要のある被験体に、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、包接体、またはプロドラッグ、もしくは本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、包接体、またはプロドラッグを含む医薬組成物を投与する工程を有してなる方法をさらに包含する。これらの方法は、その被験体に、追加の薬剤を別にまたは本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、包接体、またはプロドラッグと組み合わせた組成物として投与する工程を含んでもよい。開示は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、包接体、またはプロドラッグ、もしくは有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、包接体、またはプロドラッグを含む医薬組成物を使用して、インビボまたはインビトロで代謝異常および癌などのhERG-GPR35関連ヒト疾患を治療する方法をさらに包含する。4.GPR35-hERG複合体干渉分子GPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連する疾患を有する被験体を治療する方法であって、その被験体に、治療に有効な量の、開示された方法で同定された分子を投与する工程を有してなる方法も開示されている。例えば、GPR35-hERG複合体干渉分子で被験体を治療することにより、GPR35-hERG複合体シグナル伝達経路に影響し得るGPR35-hERG相互作用を防止または妨害することができる。この経路を必要とする疾患は、そのシグナル伝達経路を遮断することによって治療することができる。開示された方法のある形態では、被験体は、その疾患の治療を必要としていると認定されている。開示された方法のある形態では、その方法は、治療の有効性について前記被験体をモニタする工程をさらに含む。C.GPR35-hERG複合体形成の干渉GPR35-hERG複合体形成を防止する方法であって、GPR35およびhERG発現細胞をGPR35-hERG複合体干渉分子と接触させる工程を有してなる方法も開示されている。GPR35-hERG複合体形成を防止する方法であって、GPR35-hERG複合体を含む組成物をGPR35-hERG複合体干渉分子と接触させる工程を有してなる方法も開示されている。GPR35-hERG複合体結合分子を同定する方法であって、単離されたGPR35-hERG複合体またはそのGPR35-hERG複合体を含む組成物を試験分子と接触させる工程、およびその試験分子がGPR35-hERG複合体に結合しているか否かを判定する工程を有してなる方法も開示されている。ある分子は、GPR35-hERGシグナル伝達複合体に直接結合せずに、その複合体に影響を与えるまたは調節することができ、ある分子は直接の結合を必要とする。開示された複合体および組成物は、結合研究に使用することができる。分子がGPR35-hERG複合体に結合したか否かを判定した後、次いで、その分子がその複合体を調節するか否かまたはその逆も判定することができる。単離された複合体または組成物を使用することにより、その複合体を含む細胞株を使用するよりも、結合研究のためのより都合が良く、より安価な実験が可能になる。開示された方法は、被験体を治療するために、並びにGPR35-hERG複合体シグナル伝達経路を研究するために、使用することができる。D.遺伝子操作された細胞の作製および使用本発明は加えて、様々な関連方法を提供する。本発明の細胞は、様々な方法、例えば、関連アッセイに利用することができる。本発明のある態様は、細胞からGPCRを発現する方法であって、その細胞に、受容体コード領域に動作可能に結合したプロモータを含む核酸を導入する工程を有してなる方法を提供する。いくつかの実施の形態において、その方法は、前記核酸を、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、またはウイルスベクターによる感染によって導入する工程を含む。1つの実施の形態において、前記受容体コード領域に動作可能に結合したプロモータは、調節可能なプロモータである。本発明のある態様は、GPR35/hERGシグナル伝達複合体の活性を検出またはモニタする方法であって、aGPR35/hERGシグナル伝達複合体が存在する条件下で本発明の細胞を培養する工程;およびb細胞応答を検出する工程を有してなる方法を提供する。本発明のある態様は、化合物の、GPR35/hERGシグナル伝達複合体の活性化に影響を与えるまたは調節する能力を測定する方法であって、aGPR35/hERGシグナル伝達複合体が存在する条件下で本発明の細胞を培養する工程;bその細胞を前記化合物と接触させる工程;およびc細胞応答を測定する工程を有してなる方法を提供する。本発明によれば、構成アイソフォームを含むGPR35のどの変異体も発現され得る。あるいは、hERGチャンネルのどの変異体も、多くの異なる組合せが達成できるように発現され得る。例えば、GPR35経路の活性化を必要としないhERGトランス活性化GPR35アゴニストをスクリーニングするために、活性なGPR35アゴニストがGPR35経路を刺激するのを防止する変異体GPR35を発現する遺伝子操作細胞を使用することができる。このことは、そのGPR35アゴニストのhERGトランス活性化能力が、トランス活性化するためのGPR35経路以外の何かを使用することを示すであろう。E.用語の追加の定義本明細書中、様々な刊行物が引用されている。本出願が関連する技術分野をより十分に説明するために、これらの刊行物の開示は全体として、本明細書中に組み込まれている。開示された引用は、その引用が依拠する文に議論されているその中に含まれる題材について、個別にかつ具体的に引用により含まれる。1.A冠詞本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられるところの、単数形のa、anおよびtheおよびこれらに類する用語は、文脈が明確にそうでないと指示するのでない限り、複数形を含む。したがって例えば、apharmaceuticalcarrier医薬品担体への言及は、かかる担体の2種類または3種類以上の混合物等を含む。2.省略形当業者に周知の省略形が使用される場合がある例えば、単数または複数の時間についてhまたはhr、単数または複数のグラムについてgまたはgm、ミリリットルについてmL、室温についてrt、ナノメートルについてnm、モルについてM、その他これらに類する省略形。3.About約例えば、開示される実施態様を説明する際に用いられる、組成物中の成分の量、濃度、体積、処理温度、処理時間、収率、流速、圧力等の数値と、これらの範囲とを修飾する約Aboutの語は、例えば、化合物、組成物、濃縮物または使用処方を作るための典型的な測定および取り扱い手順と、これらの手順での故意でないエラーと、本方法を実行するために使用される出発材料または成分の製法、出所または純度の違いと、これらに類する検討とを通じて発生しうる数量変動を意味する。約という用語は、特定の初期濃度または混合を有する組成物または処方のエージングのために異なる量と、特定の初期濃度または混合を有する組成物または処方を混合または処理するために異なる量とをも含む。約という用語で修飾されるか否かに関わらず、本明細書に添付される特許請求の範囲は、これらの量の均等物を含む。4.分析方法分析方法は、例えば、分子または物質を測定する方法である。例えば、ガスクロマトグラフィー、ゲル透過クロマトグラフィー、高分解能ガスクロマトグラフィー、高分解能質量分析、または質量分析が分析方法である。5.アッセイすることAssayingアッセイすること、アッセイ、その他これらに類する用語は、例えば分子または細胞のような物の特性、例えば、有無、量、程度、反応速度論、動態か、リガンドまたはマーカーのような1種類以上の外部刺激を用いる刺激に対する細胞の光学的または生体インピーダンス応答のタイプかを測定するための分析を指す。ある刺激に対する細胞の応答のバイオセンサーシグナルを生成することはアッセイの場合がある。6.応答をアッセイすることAssayingtheresponse応答をアッセイすること、その他これに類する用語は、応答を特徴づけるための手段を使うことを意味する。例えば、ある分子がある細胞と接触される場合に、該分子に曝露された際の該細胞の応答をアッセイするためにバイオセンサーが使用されることがある。7.アゴニズムおよびアンタゴニズムモードアゴニズムモード等の用語は、細胞がある分子に曝露されて該分子がDMRシグナルのようなバイオセンサーシグナルを誘発する能力があるかどうかを測定するアッセイであるのに対し、アンタゴニズムモードは、ある分子の存在下であるマーカーに曝露されて、該分子が前記マーカーに対応する細胞のバイオセンサーシグナルを調節する能力があるかどうかを測定するアッセイである。8.バイオセンサーバイオセンサーまたはこれに類する用語は、生物学的な構成要素を物理化学的検出器構成要素と組み合わせる被分析物の検出装置を指す。バイオセンサーは、組織、微生物、病原体、細胞またはこれらの組合せのような生物学的構成要素または要素と、光学的、圧電式、電気化学的、熱量測定式または磁気的手法のような物理化学的手法で作動する検出器要素と、両方の構成要素と関係する変換器という3つの部分からなるのが典型的である。前記生物学的構成要素または要素は、例えば、生細胞、病原体またはこれらの組合せの場合がある。実施態様では、光学的バイオセンサーは、生細胞、病原体またはこれらの組合せにおける分子識別または分子刺激事象を定量可能なシグナルに変換するための光学的変換器を含む場合がある。ラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイに使用される一般的なバイオセンサーは、表面プラズモン共鳴、プラズモン共鳴イメージング、共鳴導波路グレーティングバイオセンサー、光結晶バイオセンサー、および電気インピーダンスバイオセンサーである。9.バイオセンサー応答バイオセンサー応答、バイオセンサー出力シグナル、バイオセンサーシグナルまたはこれらに類する用語は、細胞を有するセンサーシステムの細胞応答に対するいずれかの反応である。バイオセンサーは、細胞応答を定量可能なセンサー応答に変換する。バイオセンサー応答は、RWGまたはSPRのような光学的バイオセンサーによって測定される刺激の際の光学的応答であるか、電気的バイオセンサーによって測定される、刺激の際の細胞の生体インピーダンス応答である。バイオセンサー応答は、刺激の際の細胞応答に直接関連するため、バイオセンサー応答および細胞応答は、開示される実施態様では相互に交換可能なように使用される場合がある。10.バイオセンサーシグナルバイオセンサーシグナルまたはこれに類する用語は、刺激の際の応答によって発生し、バイオセンサーで測定される細胞のシグナルを指す。11.バイオセンサーインデックスバイオセンサーインデックスまたは類似の用語は、バイオセンサーのデータ集から構成されたインデックスである。バイオセンサーインデックスは、第1プロファイル、または第2プロファイルなどのバイオセンサープロファイル集であり得る。このインデックスは、どのようなタイプのデータからなっていても差し支えない。例えば、プロファイルのインデックスは、N-DMRデータ点だけからなっていても差し支えなく、P-DMRデータ点であっても、またはその両方であっても差し支えなく、もしくはインピーダンスデータ点であっても差し支えない。そのインデックスは、プロファイル曲線に関連するデータ点の全てであっても差し支えない。12.細胞ここに用いた細胞という用語は、個々の細胞、細胞株、またはそのような細胞に由来する培養物も称する。培養物は、同じまたは異なるタイプの単離細胞を含む組成物を称する。共培養という用語は、複数のタイプの細胞が、同じ皿内で互いに完全にまたは部分的に接触しながら一緒に培養される場合を称するために使用される。13.細胞培養細胞培養または細胞を培養することは、制御された条件下で原核細胞または真核細胞のいずれかが増殖するプロセスを指す。細胞培養は、多細胞真核生物、特に、動物細胞由来の細胞を培養することだけでなく、複雑な組織および器官を培養することも指す。14.細胞パネル細胞パネルまたはこれに類する用語は、少なくとも2つのタイプの細胞を含むパネルである。細胞は、本明細書に開示されるいかなるタイプまたは組合せであってもかまわない。15.細胞応答細胞応答またはこれに類する用語は、刺激に対する細胞によるいずれかの反応である。16.細胞プロセス細胞プロセスまたはこれに類する用語は、細胞において、または、細胞によって起こるプロセスである。細胞プロセスの例は、増殖、アポトーシス、ネクロシス、分化、細胞シグナル伝達、極性変化、遊走または形質転換を含むが、これらに限定されない。17.細胞標的細胞標的またはこれに類する用語は、外部刺激でその活性が修飾される場合のあるタンパク質または核酸のような生体高分子である。細胞標的は、酵素、キナーゼ、イオンチャンネルおよび受容体のようなタンパク質であることが最も一般的である。18.特徴づけることCharacterizing特徴づけることまたはこれに類する用語は、リガンド、分子、マーカーまたは細胞のような物質について、該リガンド、分子、マーカーまたは細胞のプロファイルを得ることのように、前記物質のいずれかの特性についての情報を収集することを指す。19.化合物の互換性本開示の目的に関して、化合物、類似体、および組成物という用語は、全ての鏡像形体、ジアステレオマー形体、塩などの全てを含む、ここに記載された化学物質を等しく同様に表し、化合物、類似体、および組成物という用語は、本明細書中に交換可能に使用されている。20.含むcomprise本明細書の説明および特許請求の範囲を通じて、含むという語と、comprisingおよびcomprisesのようなその変形とは、含むが、限定されないことを意味し、例えば他の追加物、構成要素、整数またはステップを排除することを意図しない。21.~から実質的になるconsistingessentiallyof~実施態様における~から実質的になるとは、例えば、バイオセンサー表面上の表面組成物と、表面組成物、処方または組成物を作成または使用する方法と、本開示の物品article、機器または装置とを指し、特許請求の範囲に掲げた構成要素またはステップと、さまざまに選択される、特定の反応剤、特定の添加物または成分、特定の薬剤、特定の細胞または細胞株、特定の表面修飾剤または条件、特定のリガンド候補またはこれらに類する構造、材料またはプロセスのように、開示された組成物、物品、装置および製造使用方法の基本的で新規な特性に実質的に影響のない、他の構成要素またはステップとを含む場合がある。開示された構成要素またはステップの基本的特性に実質的に影響を与える場合があるか、本開示に望ましくない特徴を授与する場合がある事項は、例えば、細胞のバイオセンサー表面への親和性の低下と、刺激の細胞表面受容体または細胞内細胞への異常な親和性と、リガンド候補またはこれに類する刺激への応答における変則的または逆方向の細胞活性とを含む。22.構成要素開示された組成物を調製するために用いられる構成要素と、本明細書に開示される方法に使用される組成物とが開示される。これらおよびその他の材料は本明細書に開示され、これらの材料の組合せ、サブセット、相互作用、グループ等が開示されるとき、これらの化合物のそれぞれさまざまな個別および集団の組合せおよび順列は明示的に開示されない場合があっても、それぞれは具体的に企図され本明細書に説明されることが理解される。したがって、分子A、BおよびCのクラスが、分子D、EおよびFのクラスとともに開示され、組合せ分子の実施例であるA-Dが開示される場合には、個別に列挙されない場合であっても、それぞれが個別的かつ集団的に企図された意味の組合せである、A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-EおよびC-Fが開示されたと考えられる。同様に、いずれかのサブセットまたは組合せも開示されたと考えられる。したがって、例えば、A-E、B-FおよびC-Eのサブグループが開示されたと考えられるであろう。このコンセプトは、開示される組成物の製造使用方法におけるステップを含むが、限定されない、本件出願の全ての局面に適用される。したがって、実行可能なさまざまな追加のステップがある場合には、これらの追加のステップのそれぞれは、開示された方法の実施態様のいずれかの具体的な実施態様か、実施態様の組合せかとともに実行される場合がある。23.接触させるContacting接触させるまたはこれに類する用語は、分子相互作用が、分子か、細胞か、マーカーか、少なくとも1種類の化合物または組成物か、少なくとも2種類の組成物か、物品または機械とこれらのいずれかとのような、少なくとも2つの事物thingの間で可能な場合に、分子相互作用が起こりうるように近傍に運ぶことを意味する。例えば、接触することは、混ぜたり触れたりするために近くにいるように、少なくとも2種類の組成物、分子、物品または事物を接触させることを指す。例えば、組成物Aの溶液と培養細胞Bとがあって、組成物Aの溶液を培養細胞Bに注ぐことは、組成物Aの溶液を培養細胞Bと接触させるであろう。細胞をリガンドに接触させることは、該細胞が該リガンドにアクセスできることを確実にするために前記リガンドを前記細胞に運ぶことであろう。本明細書に開示されるいかなるものも他のいずれかのものと接触させられる場合があることが理解される。例えば、細胞は、マーカーまたは分子、バイオセンサー等と接触させられる場合がある。24.化合物および組成物化合物および組成物は本発明の技術分野における標準的な意味がある。分子、物質、マーカー、細胞または試薬のような特定の指示対象designationの用いられる場所がどこであれ、これらの指示対象を含む、これらの指示対象からなる、および、これらの指示対象から実質的になる組成物が開示されることを理解すべきである。したがって、特定の指示対象としてマーカーが用いられるところでは、そのマーカーを含む組成物か、そのマーカーからなる組成物か、そのマーカーから実質的になる組成物かも開示されるであろうことが理解される。適切な場合には、特定の指示対象が示されるところでは、その指示対象の化合物も開示されるものと理解される。例えば、EGFのような具体的な生物学的材料が開示される場合には、化合物形状のEGFも開示される。25.対照対照または対照レベルまたは対照細胞という用語その他これらに類する用語は、これによって変化が測定される基準として定義され、例えば、対照は実験に従属するのではなく、定義されたパラメーターのセットに従属する、あるいは、対照は処理前または処理後のレベルに基づく。対照は、試験対象の実験作業と並行してか、試行の前または後かに実験作業が進められるか、あるいは、対照は予め定められた標準かの場合がある。26.包接体本発明に使用するための化合物は、溶媒和物とは対照的に、薬物と宿主が化学量論的または非化学量論的な量で中に存在する薬物-宿主封入複合体である、包接体などの複合体を形成するかもしれない。ここで称される化合物は、化学量論的または非化学量論的な量であって差し支えない2種類以上の有機および/または無機成分も含有し得る。得られた複合体は、イオン化され得る、部分的にイオン化され得る、またはイオン化され得ない。そのような複合体のレビューについては、seeJPharmScL6412691288byHaleblianを参照のこと。27.検出検出またはこれに類する用語は、分子またはマーカーで誘発される細胞応答を発見または感知して、感知された応答を異なる分子ごとに区別できる本開示の装置および方法の能力を指す。28.薬物候補分子の直接作用直接作用またはこれに類する用語は、薬物候補分子が細胞に独立に作用する結果である。29.DMRインデックスDMRインデックスまたは類似の用語は、DMRデータ集から構成されたバイオセンサーインデックスである。30.DMRシグナルDMRシグナルまたはこれに類する用語は、刺激に対する細胞の応答によって発生し、光学的バイオセンサーで測定される、細胞のシグナルを指す。31.DMR応答DMR応答またはこれに類する用語は、光学的バイオセンサーを用いるバイオセンサー応答である。DMRは、動的質量再分配または動的細胞物質再分配を指す。P-DMRは陽性DMR応答であり、N-DMRは陰性DMR応答で、RP-DMRは回復P-DMR応答である。32.疾患マーカー疾患マーカーは、hERGチャンネル関連疾患、またはGPR35関連疾患、もしくはGPR35-hERG複合体関連疾患の特定、診断、または予後に使用できる任意の試薬、分子、物質などである。33.薬物候補分子薬物候補分子またはこれに類する用語は、薬物またはファーマコフォアとして機能できる能力について試験される試験分子である。この分子はリード分子と考えられる場合がある。34.有効性有効性またはこれに類する用語は、理想的または最適な条件下で所望のサイズの効果を起こす能力である。関連する概念である有効性から有効性を区別するのはこれらの条件である。有効性は現実の条件下での変化に関係する。有効性は、受容体占有率と、分子、細胞、組織または全身レベルで応答を開始する能力との間の関係性である。35.hERG調節因子hERG調節因子は、hERGイオンチャンネルの活性を直接的または間接的に調節できる分子である。hERGチャンネルの活性を直接的に調節するhERG特異的調節因子は、hERGチャンネルに結合し、それゆえ、hERG電流、hERGによるイオン流束、および/またはhERGによる細胞シグナル伝達などのhERG活性における変化を生じさせる分子である。hERGチャンネルの活性を間接的に調節するhERG経路調節因子は、細胞中のhERG関連シグナル伝達複合体に結合し、それゆえ、hERG電流、hERGによるイオン流束、および/またはhERGチャンネルまたはhERG関連シグナル伝達複合体による細胞シグナル伝達などのhERG活性における変化を生じさせる分子である。hERG活性における変化は、調節因子の不在下での細胞中のhERGチャンネルまたはhERG関連シグナル伝達複合体の基礎活性に対して参照される。36.hERG活性化剤hERG活性化剤は、適切な印加電圧でhERGチャンネルを通じて電流を増加させる、および/または適切なKCl濃度の存在下でhERGチャンネルを通じてイオン流束を増加させる、および/または細胞中のhERGチャンネルまたはhERG関連シグナル伝達複合体を通じて細胞シグナル伝達を誘発する分子である。その例には、マロトキシン、フルフェナム酸、およびニフルム酸がある。37.hERG経路活性化剤hERG経路活性化剤は、細胞中のhERGチャンネルまたはhERG関連シグナル伝達複合体を通じて細胞シグナル伝達を誘発する分子である。hERG経路活性化剤は、hERG電流、および/またはhERGによるイオン流束における変化を生じても生じなくてもよい。変化は、増加または減少し得る。その例には、ジフルニサル、AG126、およびチルホスチン51がある。38.hERGイオンチャンネル活性化剤hERGイオンチャンネル活性化剤は、hERGチャンネルに直接結合し、活性化させ、それゆえ、hERG電流の増加、および/またはhERGイオン流束の増加、および/またはhERGチャンネルを通じての細胞シグナル伝達をもたらす分子である。その例には、マロトキシン、フルフェナム酸、およびニフルム酸がある。hERGイオンチャンネル活性化剤は、細胞シグナル伝達を誘発してもしなくてもよい。39.hERG阻害剤hERG阻害剤は、hERGチャンネル、またはhERG関連シグナル伝達複合体中のhERGタンパク質に結合し、それゆえ、hERG電流および/またはhERGイオン流束を阻害する分子である。40.hERG経路阻害剤hERG経路阻害剤は、hERG関連シグナル伝達複合体中のhERGタンパク質ではなく受容体に結合し、それゆえ、hERG電流および/またはhERGイオン流束を阻害する分子である。その例としては、チルホスチン51が挙げられる。41.hERGイオンチャンネル阻害剤hERGイオンチャンネル阻害剤は、hERGチャンネルに直接結合し、それゆえ、hERG電流および/またはhERGイオン流束を阻害する分子である。その例としては、ドフェチリジが挙げられる。42.hERGチャンネル関連疾患hERGチャンネル関連疾患は、その疾患の原因またはその疾患の治療がhERGチャンネルの調節により変えられる疾患である。例示の疾患には、白血病、結腸癌、胃癌、乳癌、または肺癌などの癌がある。例示の疾患には、遺伝子突然変異により生じる遺伝性QT延長性症候群LQTS、薬物分子により生じる後天性LQTS、およびクラスIII不整脈がある。43.より高い、阻害これらに類する語より高い、増大する、上昇するまたは上昇またはこれらに類する用語、もしくはこれらの用語の変形は、基底レベルから上に、すなわち、対照と比較して、増大することを指す。低い、より低い、減少させる。低減するまたは減少またはこれらに類する用語、もしくはこれらの用語の変形は、基底レベルより下に、例えば、対照と比較して、低減することを指す。例えば基底レベルは、アゴニストまたは拮抗物質のような分子の添加の前か、該分子の非存在下かでの正常なinvivoのレベルである。阻害するinhibitまたは動詞inhibitの諸語形またはこれらに類する用語は、減少または抑制することを指す。44.より高い、増大する、上昇する、上昇より高い、増大する、上昇する、または上昇または類似の用語またはこれらの用語の変形は、例えば、対照と比べて、基本レベルを超えた増大を称する。低い、より低い、減少する、低下するまたは減少または類似の用語、またはこれらの用語の変形は、例えば、対照と比べて、基本レベルより低下を称する。例えば、基本レベルは、活性に対するアゴニストまたはアンタゴニストなどの薬剤の添加前、または不在下、またはその添加後の正常なインビボレベルである。例えば、分子の受容体への結合を記載するために、低下または増大を使用することができる。この文脈において、低下は、結合が109MのKdを有すると定義でき、この相互作用が減少した場合、結合が減少したことを意味し、Kdが106Mに減少し得る状況を記載するであろう。これらの用語の内の1つが使用されたときはいつでも、対照からの1、5、10、20、50、100、500、または1000の増大または低下であり得ることが理解されよう。45.分子の存在下分子の存在下またはこれに類する用語は、培養細胞に分子を接触または曝露させることを指す。前記接触または曝露は、刺激が細胞と接触される前またはその最中に起こる場合がある。46.インデックスインデックスまたはこれに類する用語は、データのコレクションである。例えばインデックスは、1個または2個以上の調節プロファイルを含むリスト、表、ファイルまたはカタログの場合がある。指標は、データのいずれかの組合せから作成できることが理解される。例えばDMRプロファイルは、P-DMR、N-DMRおよびRP-DMRを有する場合がある。インデックスは、前記プロファイルが完成したデータか、前記P-DMR、N-DMR、RP-DMRまたはこれらのうちのいずれかのポイントか、これらまたはその他のデータの組合せかを用いて作成できる。インデックスはかかる情報のいずれかのコレクションである。典型的には、インデックスを比較するとき、前記インデックスは同種のデータ、すなわち、P-DMRに対しP-DMRである。47.阻害する阻害するまたは類似の用語は、特定の特徴を妨害または抑制することを意味する。これは、概して、ある標準的なまたは予測される値に対する、言い換えれば、相対的であるが、必ずしも、その標準的なまたは予測される値を言及する必要はないと理解される。例えば、ホスホリル化を阻害するとは、標準または対照に対して起こるホスホリル化の量を妨害または抑制することを意味する。48.既知の分子既知の分子またはこれに類する用語は、正確な作用メカニズムは既知または未知の場合があるが、薬理学/生物学/生理学/病理生理学的活性が既知である分子である。49.既知の調節因子既知の調節因子またはこれに類する用語は、少なくとも1種類の標的が既知で、親和性も既知である、調節因子である。例えば、既知の調節因子は、GPR35アゴニスト、GPR35アンタゴニストなどであって差し支えない。50.既知調節因子バイオセンサーインデックス既知調節因子バイオセンサーインデックスまたはこれに類する用語は、既知調節因子について収集されたデータによって作成された調節因子バイオセンサーインデックスである。例えば、既知の調節因子バイオセンサーインデックスは、前記既知調節因子が細胞パネルに作用するプロファイルと、マーカーのパネルに作用する調節プロファイルとでできる場合があり、マーカーの各パネルは前記細胞のパネル中のある細胞についてのものである。51.既知調節因子DMRインデックス既知調節因子DMRインデックスまたはこれに類する用語は、既知調節因子について収集されたデータにより作成される調節因子DMRインデックスである。例えば既知調節因子DMRインデックスは、細胞のパネルに作用する既知調節因子のプロファイルと、マーカーのパネルに対する既知調節因子の調節因子プロファイルとでできる場合があり、マーカーの各パネルは前記細胞のパネル中の細胞についてのものである。52.hERG特異的調節因子hERG特異的調節因子は、hERGチャンネルへの直接的な結合によりhERGイオンチャンネルの活性を調節できる分子である。hERG特異的調節因子は、hERG電流、hERGによるイオン流束、および/またはhERGによる細胞シグナル伝達などのhERG活性における変化を生じ得る。53.hERG発現細胞hERG発現細胞は、hERGチャンネルを内生的または組換え的いずれかで発現する細胞である。hERG発現細胞は、白血病細胞株、胃癌細胞株、神経芽細胞腫細胞株、乳癌細胞株、ヒト結腸癌細胞株、心血管細胞株、およびニューロン細胞株であり得る。hERGを発現する細胞は、HL60、細胞株SGC7901、細胞株MGC803、細胞株SH-SY5Y、細胞株MCF-7、細胞株HT-29およびHCT8、並びに細胞株HCT116であって差し支えない。54.hERG非発現細胞hERG非発現細胞は、どのような機能的hERGタンパク質も発現しない細胞である。例には、HEK-293および細胞株CHO-K1などの、ヒト胎児由来腎臓細胞株およびチャイニーズハムスター卵巣細胞株がある。55.ラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイまたは類似の用語は、細胞応答を検出またはモニタするためにラベルフリーバイオセンサーを使用する任意のアッセイである。56.電気生理学方法電気生理学方法は、生物細胞および組織の電気的性質を研究する任意の方法である。その方法は、単一イオンチャンネルタンパク質から心臓などの全体の臓器までの多種多様な規模で電圧変化または電流の測定を含む。神経科学において、その方法は、ニューロンの電気活性、特に活動電位活性の測定を含む。脳波検査法などの、神経系からの大規模電気シグナルの記録は、電気生理学的記録と称してもよい。57.既知のhERG調節因子既知のhERG活性化剤は、アッセイに使用されるときに、何らかで示されるように、hERG活性化剤であると知られた任意のhERG活性化剤である。既知のhERG遮断薬としては、以下に限られないが、三酸化ヒ素、アステミゾール、ベプリジル、クロロキン、シサプリド、クラリスロマイシン、ジソピラミド、ドフェチリド、ドンペリドン、ドロペリドール、エリスロマイシン、フルオキセチン、フルボキサミン、ハロファントリン、ハロペリドール、イブチリド、レボメタジル、メソリダジン、メタドン、ノルフルオキセチン、ペンタミジン、ピモジド、プロブコール、プロカインアミド、キニジン、スパルフロキサシン、テルフェナジン、フェキソフェナジン、チオリダジン、ベラパミルが挙げられる。既知のhERG活性化剤としては、RPR260243、PD-118057、PD-307243、マロトキシン、ニフルム酸、フルフェナム酸、NS1643、NS3623、A-935142およびICA-105574が挙げられる。58.GPR35特異的調節因子GPR35特異的調節因子またはGPR35調節因子または類似の用語は、GPR35に直接結合し、それゆえ、GPR35の活性を調節する任意の調節因子である。一般的なGPR35特異的調節因子は、3種類の細胞アッセイの内の1つでGPR35活性を調節することができる:1Gqo5を同時発現するしないにかかわらないHEK-GPR35などの遺伝子操作細胞におけるCa2動員アッセイ。Gqo5は、その活性化によりCa2動員がもたらされるGタンパク質であり、このGqo5タンパク質は、前記細胞中で発現されたときに非Gq共役受容体のアゴニスト誘発活性化により活性化され得る。GPR35は非Gq共役受容体であると考えられるので、Gqo5の同時発現は、GPR35アゴニスト誘発Ca2動員シグナルを検出するために必要である。2受容体内在化アッセイ。受容体の内在化は、ほとんど全てのGPCRに対して迅速に普遍的になる。3共鳴導波路グレーティングバイオセンサーなどの光学式バイオセンサーにより保証される、ラベルフリー動的質量再配分DMRアッセイ。GPR35調節因子は、アゴニスト、アンタゴニスト、逆作動薬、および偏ったアゴニズムであり得る。59.GPR35発現細胞GPR35発現細胞は、その細胞の細胞膜中で機能的GPR35を生成する任意の細胞である。60.GPR35アゴニストGPR35アゴニストは、細胞中のGPR35受容体に結合し、それゆえ活性化させる任意の分子である。本発明におよび/または刊行された文献に開示された例としては、以下に限られないが、ジフニサル、フルフェナム酸、フルンキシン、フロセミド、ニフルム酸、NPPB、トルフェナム酸、ザプリナスト、YE210、またはDNQXが挙げられる。61.既知GPR35アゴニスト既知GPR35アゴニストは、アッセイに使用されるときに、何らかで示されるように、GPR35アゴニストであると知られた任意のGPR35アゴニストである。62.GPR35アンタゴニストGPR35アンタゴニストは、GPR35受容体に結合するが、その活性を阻害する任意の分子である。63.既知GPR35アンタゴニスト既知GPR35アンタゴニストは、アッセイに使用されるときに、何らかで示されるように、GPR35アンタゴニストであると知られた任意の既知GPR35アンタゴニストである。現在まで、文献に報告されているGPR35アンタゴニストはない。64.GPR35に病態生理学的に関連するGPR35が、疾患または怪我に関連する、またはそれから生じる体の機能的変化に関与している場合、何かがGPR35に病態生理学的に関連する。65.炎症炎症は、任意の特異的または非特異的免疫応答である。炎症は、病原体、損傷細胞、または刺激物などの、有害な刺激に対する維管束組織の複雑な生物反応の一部である。炎症は、有害な刺激を除去するための、また治癒プロセスを開始するための、生物による防護の試みである。炎症は、急性または慢性いずれかに分類できる。急性炎症は、有害な刺激に対する体の初期反応であり、リンパ漿および白血球特に顆粒球の血液から損傷組織への移動の増加により達成される。たくさんの生化学事象が伝搬し、局所脈管系、免疫系、および損傷組織内の様々な細胞を含む免疫反応を完成させる。慢性炎症として知られている長期化した炎症は、炎症部位に存在する細胞のタイプにおける進行性のシフトをもたらし、同時破壊と炎症プロセスからの組織の治癒により特徴付けられる。66.代謝異常代謝異常は、糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病、不十分な耐糖能、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満症、老化、シンドロームX、アテローム性動脈硬化、心臓病、脳卒中、高血圧症および末梢血管疾患などの代謝の病気である。67.鬱血性心不全鬱血性心不全CHFは、酸素の豊富な血液を体に送達するためのポンプとしての心臓の機能が、体の必要性を満たすのに不十分である状態である。鬱血性心不全は、心筋を弱化させる疾患、または心筋の硬化を生じる疾患、または体組織による酸素の需要を心臓の送達する能力を超えて増加させる疾患により、生じ得る。多くの疾患は、心室のポンプ作用を損ない得る。例えば、心室の筋肉は、心臓発作または感染心筋炎により弱化され得る。筋肉の弱化により心室の減少したポンプ能力は、収縮不全と呼ばれる。各心室収縮収縮期後、心室の筋肉は、緩和して、血液を心房から心室に充満させる必要がある。心室のこの緩和は拡張期と呼ばれる。ヘモクロマトーシスやアミロイドーシスなどの疾患により、心筋の硬化が生じ、心室の緩和し充満する能力を損ない得る;これは、拡張不全と称される。この最も一般的な原因は、肥厚肥大心臓を招く長期間に亘る高血圧である。その上、ある患者では、心臓のポンプ作用および充満能力が正常であるかもしれないが、体組織による高い酸素需要例えば、甲状腺機能亢進症によりのために、心臓が適切な血流を供給することが困難になるであろう高拍出性心不全と呼ばれる。またある患者では、これらの要因の1つ以上が存在して、鬱血性心不全が生じ得る。鬱血性心不全は、体の多くの器官に影響を与え得る。例えば、弱化した心筋は、腎臓に十分な血液を供給できず、次いで、この腎臓は、塩分ナトリウムと水を排出する正常な能力を失い始めるかもしれない。この低減した腎臓機能により、体がより多くの流体を維持し得る。肺が、流体により充満され始め肺水腫、そのヒトの運動する能力が低減するであろう。流体は同様に肝臓に蓄積し、それによって、体から毒素を除き、必須タンパク質を生成する能力が損なわれるであろう。腸が、栄養素および薬を吸収するのが効率的ではなくなるであろう。やがて、未治療の悪化した鬱血性心不全により、体のほとんど全ての器官が影響を受ける。68.癌癌は、前立腺癌、白血病、ホルモン依存性癌、乳癌、結腸癌、肺癌、表皮癌、肝臓癌、食道癌、胃癌、脳の癌および腎臓癌などの不適切に制御された細胞の分化または分裂の疾患である。癌は、体細胞中の遺伝子変異の進行性の蓄積から生じる多くの疾患である。癌は、経路調節不全疾患とも見られる-少数の主要経路が、癌をもたらす異常な細胞増殖において優位を占める。腫瘍細胞がその隣接細胞より早く成長する能力が、下流のタンパク質の恒常的活性化によりしばしば促進される。数十年に亘る遺伝子研究により、多種多様な腫瘍関連遺伝子とその変異体が発見されてきた。その多くは、少数の経路に関与するシグナル伝達タンパク質に優先的に生じる。遺伝子の突然変異は、たいてい、正の調節ループ機能の獲得において強化され、負の調節ループ機能の損失ではメチル化された遺伝子が強化され、細胞の正常な協力行動が妨害され、それゆえ、腫瘍の表現型を促進する。癌の兆候における顕著な特徴は、突然変異したタンパク質が、細胞内または細胞間のシグナル伝達ネットワークという背景において、癌細胞のシグナル伝達をどのように変更し、制御するかである。69.GPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子GPR35-hERG複合体調節因子またはGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子は、GPR35またはhERGのいずれか、もしくはその両方に結合し、よってGPR35-hERGシグナル伝達複合体の活性を調節する分子である。GPR35-hERG複合体調節因子またはGPR35-hERGシグナル伝達複合体調節因子は、hERG-GPR35同時発現細胞におけるDMRアッセイにおいて交差脱感作を生じることができる。70.交差脱感作MDRアッセイ交差脱感作MDRアッセイは、hERGおよびGPR35同時発現細胞において、マロトキシンなどのhERG活性化剤またはザプリナストやYE210などのGPR35アゴニストのいずれかにより媒介される細胞応答を脱感作する分子の能力を測定するラベルフリー光学バイオセンサー細胞アッセイであり、その分子自体も、その細胞中でアゴニズム活性を示す。71.アゴニズム作用アゴニズム作用は、分子の受容体への結合であって、その受容体の活性化をもたらし、それゆえ、その受容体の既知のアゴニストに関する細胞応答に類似の細胞応答を引き起こす結合を称する。72.アンタゴニズム作用アンタゴニズム作用は、分子の受容体への結合であって、その受容体の阻害をもたらす結合を称する。73.hERGトランス活性化GPR35アゴニストhERGトランス活性化GPR35アゴニストは、hERGチャンネルが、hERGおよびGPR35同時発現細胞においてGPR35と複合体を形成したときに、GPR35に一度結合したら、hERGチャンネルをトランス活性化できるGPR35アゴニストである。74.hERG非トランス活性化GPR35アゴニストhERG非トランス活性化GPR35アゴニストは、hERGチャンネルが、hERGおよびGPR35同時発現細胞においてGPR35と複合体を形成したときに、GPR35に一度結合したら、hERGチャンネルをトランス活性化しないGPR35アゴニストである。75.GPR35トランス活性化hERG活性化剤GPR35トランス活性化hERG活性化剤は、GPR35受容体が、hERGおよびGPR35同時発現細胞においてhERGと複合体を形成したときに、hERGチャンネルに一度結合したら、GPR35受容体をトランス活性化できるhERG活性化剤である。76.GPR35非トランス活性化hERG活性化剤GPR35非トランス活性化hERG活性化剤は、GPR35受容体が、hERGおよびGPR35同時発現細胞においてhERGと複合体を形成したときに、hERGチャンネルに一度結合したら、GPR35受容体をトランス活性化しないhERG活性化剤である。77.正常な個々の治療量ある組成物において、複数の活性治療薬が存在する。これは、複合組成物と呼ばれる。それゆえ、複合組成物内で、正常な個々の治療量は、活性治療薬の1つが単一の活性治療薬として投与される投薬量である。78.GPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連するGPR35-hERG複合体が、疾患または怪我に関連する、またはそれから生じる体の機能的変化に関与している場合、何かがGPR35-hERG複合体に病態生理学的に関連する。79.治療薬治療薬は、治療効果を有すると判定されている任意の薬剤である。80.抗炎症薬抗炎症薬は、抗炎症活性を有する任意の薬剤である。抗炎症薬の例には、イブプロフェン、アスピリン、タイレノールなどのCox阻害剤、またはGPR35アゴニスト、またはGPR35-hERG複合体活性化剤がある。81.抗代謝異常薬抗代謝異常薬は、代謝異常に関連する疾患を抑制する、低減させる、または予防する効果を有する任意の薬剤である。代謝は、人体が食物からエネルギーを得るまたは生成するために使用するプロセスである。食物は、タンパク質、炭水化物および脂質から構成されている。消化系の化学物質が食物部分を糖類と酸に分解し、それゆえ、燃料を提供する。体はこの燃料を直ちに使用でき、または肝臓、筋肉および体脂肪などの組織中にエネルギーを貯蔵できる。代謝異常は、人体内の異常な化学反応がこのプロセスを妨害するときに起こる。このことが起こると、健康でいるのに必要なある物質を多く摂りすぎ、他の物質を少なくしか摂らないであろう。82.抗鬱血性心不全薬抗鬱血性心不全薬は、利尿薬などの、鬱血性心不全に関連する疾患を抑制する、低減させる、または予防する効果を有する任意の薬剤である。83.抗癌薬抗癌薬は、ビンブラスチンやタキソールなどの、抗癌効果を有する任意の薬剤である。84.遺伝子操作細胞遺伝子操作細胞は、一時的または永久的いずれかの様式で、1つ以上の遺伝子が加えられたか、除去されたか相同的組換えまたはsiRNAプラスミドなどの、遺伝子遮断により、変更された、任意の細胞である。遺伝子操作細胞という用語は、核酸などの外因性物質を含むように操作された細胞を称する。例えば、外因性GPR35、外因性hERGまたはその両方を含むように操作された遺伝子操作細胞が、ここに開示されている。85.細胞ここに用いた細胞という用語も、個々の細胞、細胞株、またはそのような細胞に由来する培養物を称する。培養物は、同じまたは異なるタイプの単離細胞を含む組成物を称する。共培養という用語は、複数のタイプの細胞が、同じ皿内で互いに完全にまたは部分的に接触しながら一緒に培養される場合を称するために使用される。細胞は、外因性核酸を含む、組換え操作された細胞であり得る。細胞は、特定の対象細胞だけではなく、そのような細胞の子孫または潜在的な子孫も称する。ある一時的変異が、突然変異または環境の影響のために後継世代に生じるかも知れないので、そのような子孫は、実際に、親の細胞とは同一ではないかもしれないが、それでも、ここに用いた用語の範囲内に含まれる。86.融合タンパク質融合タンパク質は、以下の特徴の1つまたはいくつかを助長する、標的タンパク質のCまたはN末端のいずれかに位置するタンパク質またはペプチドである:1改善された溶解度-標的タンパク質のN末端の可溶性融合パートナーのC末端への融合は、たいてい、標的タンパク質の溶解度を改善させる;2改善された検出-短いペプチドエピトープタグ、もしくは抗体によりウェスタンブロット分析または生物理学的方法により例えば、蛍光によるGFP認識されるタンパク質のいずれかの末端への標的タンパク質の融合は、発現または精製中の結果として生じたタンパク質の検出を容易にする;3改善された精製-親和性樹脂に特異的に結合するいずれかの末端で使用されたタンパク質に、単純な精製スキームが開発された;4局在化-通常は標的タンパク質のN末端に位置する、特定の細胞区画にタンパク質を送るためのアドレスとして働くタグ;5改善された発現E-高度に発現された融合パートナーのC末端への標的タンパク質のN末端の融合により、標的タンパク質の高レベル発現がもたらされる。GPR35融合タンパク質は、標的タンパク質GPR35のCまたはN末端のいずれかに位置するタンパク質またはペプチドを称する。その例には、緑色蛍光タンパク質GFPがGPR35のN末端に位置しているGFP-GPR35、またGFPがGPR35のC末端に位置しているGPR35-GFPがある。87.相互作用する相互作用する、相互作用などは、2つ以上の分子が、分子間の無作為の接触のために生じる触れることを超越する様式で互いに触れることを意味する。相互作用するは、2つ以上の分子の間の結合と考えられ、したがって、解離定数および結合定数並びに平衡定数を有し得る。88.GPR35-hERGシグナル伝達複合体GPR35-hERGシグナル伝達複合体またはGPR35-hERG複合体またはGPR35-hERGオリゴマーまたは類似の用語は、hERGおよびGPR35同時発現細胞において細胞表面でhERGチャンネルタンパク質とGPR35タンパク質との間の物理的相互作用により形成された複合体を称する。89.調節可能なプロモータプロモータまたは類似の用語は、遺伝子転写開始部位TSSの上流のゲノム配列における領域を称するために使用されるが、TSSの下流の配列も、転写の開始に影響するであろう。TSSからの距離に応じて、近位プロモータTSSの周りの数百のヌクレオチドおよび遠位プロモータTSSの上流の数千以上のヌクレオチドの用語も使用される。近位と遠位のプロモータの両方とも、転写の細胞-、組織-、器官-、成長段階-および環境要因-特異的調節の複雑なプロセスに関与する数組の様々な要素を含む。TSS選択を調節するほとんどのプロモータ要素は、近位プロモータに局在化しているPlantProm:植物プロモータ配列のデータベース、ShahmuradovetalNucleicAcidsRes31114117。調節可能なプロモータは、別の分子により調節され得るプロモータである。例えば、ある分子の存在または不在は、プロモータ活性を開始するか、またはプロモータ活性を妨げ得る。90.選択可能マーカー選択可能マーカーは、トランスフェクションプロセスのクローン選択中に外因性遺伝子陽性細胞を選択するために使用される分子である。この選択可能マーカーは、以下に限られないが、テトラサイクリン、アンピシリン、ネオマイシン、G418またはゲンタマイシンであり得る。91.ラベルここに用いたラベルおよびタグという用語は、GPR35-hERG複合体などの別の残基に共有結合または非共有結合した部分としての存在を称し、このラベルにより、他の残基の位置および/または活性をモニタすることが可能になる。一例において、ラベルは蛍光性であり得る。92.GPR35-hERG複合体結合分子GPR35-hERG複合体結合分子という用語は、GPR35-hERG複合体に結合できる任意の分子を称する。93.試験分子試験分子または試験薬剤などは、1つ以上の活性または特徴がアッセイされている任意の分子である。94.GPR35-hERG相互作用GPR35-hERG相互作用という用語は、1つ以上のGPR35分子の1つ以上のhERG分子との相互作用を称する。この相互作用は、複数の分子間の無作為の接触のために生じる触れることを超越する容器での触れることの形態である。95.GPR35-hERG複合体干渉分子GPR35-hERG複合体干渉分子という用語は、GPR35-hERG相互作用に干渉する任意の分子を称する。例えば、その分子は、その相互作用を防ぐか、またはGPR35とhERGとの間で既に生じている相互作用を妨害し得る。GPR35-hERG複合体干渉分子の例は、GPR35上のhERG相互作用部位またはhERG上のGPR35相互作用部位いずれかを模倣するペプチドであろう。96.GPR35およびhERG同時発現細胞GPR35およびhERG同時発現細胞は、GPR35およびhERGの両方を発現する細胞である。その細胞は初代細胞であっても、細胞株であっても差し支えない。GPR35およびhERG発現細胞は、外因性のGPR35およびhERG、または外因性GPR35および内因性hERGまたはその逆の組合せを発現する組換え操作細胞でもあり得る。GPR35およびhERG同時発現細胞株は、GPR35およびhERGの両方を動作可能に発現するように操作された任意の細胞株である。97.GPR35-hERG複合体関連疾患GPR35-hERG複合体関連疾患は、GPR35-hERG複合体が、その疾患の初発および進行に重要な役割を果たす疾患である。可能性のあるGPR35-hERG複合体関連疾患としては、代謝異常、鬱血性心不全、炎症例えば、ウイルス感染誘発炎症、関節炎など、癌例えば、結腸癌および胃癌、および神経障害が挙げられる。98.GPR35-hERG発現遺伝子操作細胞株GPR35-hERG発現遺伝子操作細胞株は、GPR35およびhERGの両方を動作可能に発現するように遺伝子操作された任意の細胞株である。GPR35-hERG発現遺伝子操作細胞株は、外因性のGPR35およびhERGの両方、または外因性GPR35および内因性hERGまたはその逆の組合せを発現する。99.ラベルフリーバイオセンサーhERG活性化剤ラベルフリーバイオセンサーhERG活性化剤または類似の用語は、hERG活性化剤であり、かつラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイを使用して、hERG発現細胞における検出可能なバイオセンサーシグナルを誘発することができる。このバイオセンサーhERG活性化剤は、hERG活性化剤、hERG経路活性化剤、またはhERGイオンチャンネル活性化剤であり得る。その例には、マロトキシン、RPR260243、NS1643、NS3623、PD-118057、PD-307243、A-935142、フルフェナム酸、ニフルム酸、またはジフルニサルであり得る。100.リガンドリガンドまたはこれに類する用語は、生物学的な目的に役立てるために、生体分子と結合して複合体を形成する物質または組成物または分子である。リガンドとその標的分子との間の実際に不可逆的な共有結合は生物学的システムではまれである。受容体へのリガンド結合は受容体タンパク質の立体配座、すなわち、3次元形状を変化させる。受容体タンパク質の配座状態は該受容体の機能状態を決定する。結合の傾向または強度は親和性とよばれる。リガンドは、基質、遮断薬、阻害剤、活性化剤および神経伝達物質を含む。放射性リガンドは、放射性同位元素で標識されたリガンドで、蛍光リガンドは蛍光タグが付いたリガンドで、両方は、受容体生物学および生化学研究用のトレーサーとしてしばしば利用されるリガンドと考えられる場合がある。リガンドと調節因子とは互いに交換可能に用いられる。101.ライブラリライブラリまたはこれに類する用語はコレクションである。ライブラリは本明細書に開示されるいずれかのもののコレクションの場合がある。例えば、インデックスのコレクションはインデックスライブラリであり、プロファイルのコレクションはプロファイルライブラリであり、DMRインデックスのコレクションはDMRインデックスライブラリである。また、分子のコレクションは分子ライブラリで、細胞のコレクションは細胞ライブラリで、マーカーのコレクションはマーカーライブラリである。ライブラリは例えば、ランダム的または非ランダム的の場合があり、決定または未決定の場合がある。例えば、既知調節因子のDMRインデックスまたはバイオセンサーインデックスのライブラリが開示される。102.維持する維持するなどの単語は、状態を継続することを称する。治療に関して、維持は、基礎レベル、たいてい、治療していないレベルまたはプラセボまたは標準により治療しているレベルなどの対照からの20、15、10、9、8、7、6、5。4、3、2、1、または0.1未満を称し得る。103.物質物質は、物理的物体の構成に参加する何かの化学物質、生化学物質、生物製剤、またはその混合実体のある部分である。104.マーカーマーカーまたはこれに類する用語は、バイオセンサー細胞アッセイにおけるシグナルを発生するリガンドである。前記シグナルは、少なくとも1種類の特異的標的を通じて媒介される、少なくとも1種類の特異的細胞シグナル伝達経路および/または少なくとも1種類の特異的細胞プロセスの特性であり、でなければならない。前記シグナルは正または負またはいずれかの組合せ例えば振動の場合がある。105.マーカーパネルマーカーパネルまたはこれに類する用語は、少なくとも2種類のマーカーを含むパネルである。前記マーカーは、異なる経路のものであってもよく、同じ経路のものであってもよく、異なる標的のものであってもよく、同じ標的のものであってすらよい。106.マーカーバイオセンサーインデックスマーカーバイオセンサーインデックスまたはこれに類する用語は、あるマーカーについて収集されたデータによって作成されるバイオセンサー指標である。例えば、バイオセンサーインデックスは、細胞のパネルに作用するマーカーのプロファイルと、マーカーのパネルに対するマーカーの調節プロファイルとでできる場合があり、マーカーの各パネルは前記細胞のパネルの細胞についてのものである。107.マーカーDMRインデックスマーカーDMRインデックスまたはこれに類する用語は、あるマーカーについて収集されたデータによって作成されるバイオセンサーDMRインデックスである。例えば、マーカーDMRインデックスは、細胞のパネルに作用するマーカーのプロファイルと、マーカーのパネルに作用する前記マーカーの調節プロファイルとでできる場合があり、マーカーの各パネルは前記細胞のパネルの細胞についてのものである。108.模倣mimic本明細書で用いられるところの模倣またはこれに類する用語は、参照対象の1つまたは2つ以上の機能を実行することを指す。例えば、分子模倣体はある分子の1つまたは2つ以上の機能を実行する。109.調節する調節するmodulateまたは動詞modulateの諸語形は、細胞標的を通じて媒介される細胞活性の増大、減少または維持のいずれかを意味する。これらの語のうち1つが用いられるところでは、対照から、1、5、10、20、50、100、500または1000の増大か、1、5、10、20、50または100の減少かの場合があることも開示されていると理解されよう。110.調節する調節するまたは類似の用語は、増大または減少の標準的な意味を称する。111.調節因子調節因子またはこれに類する用語は、細胞標的の活性を制御するリガンドである。調節因子は、標的タンパク質のような細胞標的と結合するシグナル調節分子である。112.調節比較調節比較またはこれに類する用語は、1次プロファイルおよび2次プロファイルを正規化した結果である。113.調節因子バイオセンサーインデックス調節因子バイオセンサーインデックスまたはこれに類する用語は、調節因子について収集されたデータによって作成されるバイオセンサーインデックスである。例えば、調節因子バイオセンサーインデックスは、細胞のパネルに作用する調節因子のプロファイルと、マーカーのパネルに対する前記調節因子の調節プロファイルとでできる場合があり、マーカーの各パネルは細胞の前記パネルの細胞についてのものである。114.調節因子DMRインデックス調節因子DMRインデックスまたはこれに類する用語は、調節因子について収集されたデータによって作成されるDMRインデックスである。例えば、調節因子DMRインデックスは、細胞のパネルに作用する調節因子のプロファイルと、マーカーのパネルに対する前記調節因子の調節プロファイルとでできる場合があり、マーカーの各パネルは細胞の前記パネルの細胞についてのものである。115.マーカーのバイオセンサーシグナルを調節するバイオセンサーシグナルを調節するまたはこれに類する用語は、マーカーでの刺激に応答してバイオセンサーシグナルまたは細胞のプロファイルの変化を起こすことである。116.DMRシグナルを調節するDMRシグナルを調節するまたはこれに類する用語は、マーカーでの刺激に応答してDMRシグナルまたは細胞のプロファイルの変化を起こすことである。117.分子本明細書で用いられるところの用語分子またはこれに類する用語は、化学的分子か、明確な分子量を有する分子かの形状で存在する、生物学的または生化学的または化学的存在を指す。分子またはこれに類する用語は、サイズに関係なく、化学的、生化学的または生物学的な分子を指す。多くの分子は有機分子とりわけ共有結合で連結された炭素原子を含む分子として言及されるタイプであるが、分子酸素のような単純な分子気体と、一部の硫黄に基づくポリマーのようなより複雑な分子とを含む一部の分子は炭素を含まない。一般的な用語分子は、タンパク質、核酸、炭水化物、ステロイド類、有機医薬品、小分子、受容体、抗体および脂質のような多数の記述クラスまたはグループの分子を含む。適切なときは、サブグループへの本方法の分子の適用のため、一般的なクラスである分子と、タンパク質のような指名されたサブクラスとの両方をかかる分子に代表させる意図を損なうことなく、これらのより説明的な用語タンパク質のような該用語の多くは、重複するグループの分子を説明するの1個または2個以上が本明細書で用いられるであろう。具体的に示されない限り、分子という語は、特定の分子と、薬学的に許容できる塩のような前記特定の分子の塩とを含むであろう。118.分子混合物moleculemixture分子混合物またはこれに類する用語は、少なくとも2種類の分子を含む混合物である。前記2種類の分子は、構造的に異なるすなわち、鏡像異性体か、組成的に異なる例えば、タンパク質のアイソフォームか、グリコフォームか、異なるポリエチレングリコールPEG修飾を有する抗体かか、構造的かつ組成的に異なる例えば、未精製天然抽出物または未精製合成化合物かの場合があるが、これらに限定されない。119.分子バイオセンサーインデックス分子バイオセンサーインデックスまたはこれに類する用語は、分子について収集されたデータによって作成されるバイオセンサーインデックスである。例えば、分子バイオセンサーインデックスは、細胞のパネルに作用する分子のプロファイルと、マーカーのパネルに対する前記分子の調節プロファイルとでできている場合があり、マーカーの各パネルは細胞の前記パネルの細胞についてのものである。120.分子DMRインデックス分子DMRインデックスまたはこれに類する用語は、分子について収集されたデータによって作成されるDMRインデックスである。例えば、分子バイオセンサーインデックスは、細胞のパネルに作用する分子のプロファイルと、マーカーのパネルに対する前記分子の調節プロファイルとでできている場合があり、マーカーの各パネルは細胞の前記パネルの細胞についてのものである。121.分子インデックス分子インデックスまたはこれに類する用語は、分子に関するインデックスである。122.分子で処理される細胞分子で処理される細胞またはこれに類する用語は、分子に曝露されてきた細胞である。123.分子調節インデックス分子調節インデックスまたはこれに類する用語は、細胞のパネルに作用するマーカーのパネルのバイオセンサー出力シグナルを調節できる分子の能力を示すインデックスである。前記調節インデックスは、分子の存在下でのマーカー刺激に対する細胞の応答の特異的バイオセンサー出力シグナルパラメーターをいかなる分子も存在しないときのマーカー刺激に対する細胞の応答の特異的バイオセンサー出力シグナルパラメーターに対して正規化することによって生成される。124.分子薬理学分子薬理学またはこれに類する用語は、システム細胞生物学か、システム細胞薬理学か、細胞に作用する分子の作用モードかを指す。分子薬理学は、毒性か、特定の細胞プロセス例えば、増殖、分化、活性酸素種シグナル伝達に影響を与える能力か、特定の細胞標的を調節できる能力かによって特徴づけられることがしばしばあるが、これらに限定されない。125.正規化正規化またはこれに類する用語は、例えば少なくとも1個の共通変数を除去するように、データ、プロファイルまたは応答を調整することを意味する。例えば、細胞に作用するマーカーの応答と、該細胞に作用するマーカーおよび分子の応答という2個の応答が発生する場合に、正規化は、前記分子非存在下で、前記マーカーで誘発される応答と、前記分子存在下での応答とを比較すること、正規化された応答が前記マーカーに対する前記分子の調節に起因する応答を表すように、前記マーカーに起因する応答を除去することという動作を指すかもしれない。調節比較は、分子の存在下調節プロファイルでの前記マーカーの1次プロファイルおよび2次プロファイルを正規化することにより作成される。126.任意的Optional任意的、任意的にまたはこれらに類する用語は、その後の記述の事象または状況が起こるであろうものも起こらないであろうものもあること、および、前記記述は前記事象または状況が起こる場合と起こらない場合とを含むことを意味する。127.またはまたはまたはこれに類する用語は、特定のリストのいずれか1つのメンバーを意味し、そのリストのメンバーのいずれかの組合せも含む。128.防止する防止するまたは防止するの他の形態は、特定の特徴または状態を停止することを意味する。防止するは、一般に、例えば、低減するまたは阻害するよりも決定的であるので、対照との比較は必要ない。ここに用いたように、何かは、低減され得るが、阻害や防止はされ得ないが、低減される何かは、阻害も防止もされ得る。同様に、何かは、低減され滑阻害され得るが、防止され得ない。低減する、阻害するまたは防止するが使用されている場合、具体的にそうではないと示されていない限り、他の2つの単語の使用も明白に開示されていると理解される。それゆえ、ホスホリル化を阻害することが開示されている場合、ホスホリル化を低減すること、および防止することも開示されている。129.プロファイルプロファイルまたはこれに類する用語は、細胞のような組成物について収集されたデータを指す。プロファイルは本明細書に説明されるラベルフリーバイオセンサーから収集される場合がある。i.1次プロファイル1次プロファイルまたはこれに類する用語は、分子が細胞と接触するときに発生するバイオセンサー応答、バイオセンサー出力シグナルまたはプロファイルを指す。典型的には、1次プロファイルは、初期細胞応答を差し引きゼロのバイオセンサーシグナルすなわち基線に対して正規化した後に得られる。ii.2次プロファイル2次プロファイルまたはこれに類する用語は、分子の存在下でのマーカーに対する細胞のバイオセンサー応答またはバイオセンサー出力シグナルである。2次プロファイルは、分子がマーカーで誘発される細胞応答またはバイオセンサー応答を調節できる能力の指示として使用される場合がある。iii.調節プロファイル調節プロファイルまたはこれに類する用語は、分子の存在下でのマーカーの2次プロファイルと、いかなる分子も存在しないときのマーカーの1次プロファイルとの間の比較である。前記比較は、例えば前記2次プロファイルから前記1次プロファイルを減算するか、前記1次プロファイルから前記2次プロファイルを減算するか、前記1次プロファイルに対して前記2次プロファイルを正規化するかによって行われる場合がある。130.パネルパネルまたはこれに類する用語は、予め定められた被検体例えば、マーカー、細胞または経路のセットである。パネルは、ライブラリから被検体を選定することから作成される場合がある。131.陽性対照陽性対照またはこれに類する用語は、データ収集のための条件がデータ収集につなげられることを示す対照である。132.強化するpotentiate強化する、強化されたまたはこれらに類する用語は、分子によって起こった、細胞でのマーカーのバイオセンサー応答の特定のパラメーターの増大を指す。マーカーの1次プロファイルを、分子の存在下での同一細胞における同一マーカーの2次プロファイルと比較することによって、マーカーで誘発される細胞のバイオセンサー応答の前記分子による調節を計算することができる。陽性の調節は、前記分子がマーカーによって誘発されるバイオセンサーシグナルの増大を起こすことを意味する。133.効力効力またはこれに類する用語は、所定の程度の効果を発生するために必要な量という観点から表現された、分子活性の尺度である。例えば、非常に効力が強い薬物は、低濃度で大きい反応を起こす。効力は親和性および有効性に比例する。親和性は、薬物分子が受容体と結合する能力である。134.刊行物本件出願を通じて、さまざまな刊行物が引用される。本件出願に関する技術水準をより完全に説明するために、これらの刊行物の開示内容は、それらの全体が引用により本件出願に取り込まれる。開示される引用文献は、引用文献を参照する文中で説明される材料であって、前記引用文献に含まれる材料についても、引用により本明細書に個別具体的に取り込まれる。135.範囲範囲は、約aboutある特定の数値から、および/または、約別の特定の数値までとして本明細書で表現される場合がある。かかる範囲が表現されるとき、ある形態は、前記ある特定の数値から、および/または、前記別の特定の数値までを含む。同様に、先行詞約aboutの使用により数値が近似値として表現されるとき、前記特定の数値は包含された数値の1つ構成することが理解されるべきであろう。前記範囲のそれぞれの端点は、他の端点との関係で、および、該他の端点とは無関係に、の両方で有意であることがさらに理解されよう。本明細書には多数の数値が開示されること、および、それぞれの数値は、該数値自体に加えて、約その特定数値としても本明細書に開示されることも理解される。例えば、10という数値が開示される場合、約10も開示される。ある数値が開示されるとき、当業者により適切に理解されるとおり、当該数値以上、当該数値以上と、数値間の可能な範囲とがともに開示される。例えば、数値10が開示される場合、10以下および10以上も開示される。本件出願を通じて、データは多数の異なるフォーマットで提供されること、および、このデータは、終点および始点と、該データの点の任意の組合せの範囲とを表すことも理解される。例えば、特定のデータの点10と、特定のデータの点15とが開示される場合、10と15の間とともに、10および15を超える、10および15以上、10および15未満、10および15以下、および10および15ちょうども開示されると考えられることが理解される。2つの特定の単位の間のそれぞれの単位も開示されることも理解される。例えば、10および15が開示される場合、11、12、13および14も開示される。136.受容体受容体またはこれに類する用語は、移動可能なシグナル伝達またはシグナル分子が会合することがある、細胞の原形質膜または細胞質のいずれかに包埋されるタンパク質分子である。受容体に結合する分子はリガンドとよばれ、神経伝達物質のようなペプチド、ホルモン、医薬品または毒素の場合があり、かかる結合が起こるとき受容体は、細胞応答を通常は開始する配座変化を起こす。しかし、一部のリガンドは、いかなる応答も誘発することなく受容体を遮断するにすぎない例えば、アンタゴニスト。リガンドで誘発される受容体の変化は、該リガンドの生物活性を構成する生理学的変化をもたらす。137.低減する低減するまたは低減するの他の形態は、ある事象または特徴の低下を意味する。これは、概して、ある標準または予測される値に対するものであり、言い換えれば、相対的であるが、必ずしも、その標準値または相対値が参照される必要はないことが理解される。例えば、ホスホリル化を低減させるは、標準または対照に対して行われるホスホリル化の量の低下を意味する。138.ロバストなバイオセンサーシグナルロバストなバイオセンサーシグナルは、その振幅がノイズレベルまたは陰性対照応答のいずれかより3倍、10倍、20倍、100倍または1000倍のように顕著に上回るバイオセンサーシグナルである。しばしば陰性対照応答は、アッセイ緩衝溶液すなわちビヒクルの添加後のバイオセンサー応答である。前記ノイズレベルは、いかなる溶液をさらに添加しないときの細胞のバイオセンサーシグナルである。細胞はいかなる溶液を添加する前でもいつも溶液に覆われることは特記に値する。139.ロバストなDMRシグナルロバストなDMRシグナルまたはこれに類する用語は、ロバストなバイオセンサーシグナルのDMR形状である。140.応答応答またはこれに類する用語は、いずれかの刺激に対するいずれかの反応である。141.サンプルサンプルまたはこれに類する用語により意味されるのは、動物、植物、菌類等か、天然産物、天然産物の抽出物等か、動物由来の組織または器官か、被検者の体内か、被検者から直接取り出されるか、培養で維持される細胞か、培養細胞株由来かのいずれかの細胞か、細胞溶解液または溶解液の分画または細胞抽出物か、例えばポリペプチドまたは核酸のような細胞または細胞材料由来の1種類以上の分子を含む溶液かであって、本明細書に説明されるとおりアッセイされるものである。サンプルは、細胞または細胞の構成要素を含む、例えば、血液、尿、糞便、唾液、涙、胆汁であるが、これらに限定されないいずれかの体液または分泌物の場合もある。142.塩および薬学的に許容される塩本発明の化合物は、無機または有機酸に由来する塩の形態で使用してもよい。特定の化合物に応じて、その化合物の塩は、様々な温度と湿度における向上した医薬安定性、または水中または油中の所望の溶解度などの塩の物理的性質の1つ以上のために有利であるかもしれない。ある場合には、化合物の塩は、その化合物の単離、精製、および/または分割において補助剤として使用してもよい。塩が、患者に投与されることを意図している場合例えば、インビトロの状況で使用されるのではなく、その塩は薬学的に許容されることが好ましい。薬学的に許容される塩という用語は、式IまたはIIの化合物を、その陰イオンまたはその陽イオンが、一般に、ヒトの摂取に適していると考えられる酸または塩基と組み合わせることによって調製される塩を称する。薬学的に許容される塩は、親の化合物と比べて大きい水溶解度のために、本発明の方法の生成物として特に有用である。薬に使用するために、本発明の化合物の塩は、非毒性の薬学的に許容される塩である。薬学的に許容される塩という用語に包含される塩は、一般に、遊離塩基を適切な有機または無機酸と反応させることによって調製される、本発明の化合物の非毒性塩である。本発明の化合物の適切な薬学的に許容される酸付加塩としては、可能な場合、塩化水素酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、ホウ酸、ホウフッ化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、炭酸、スルホン酸、および硫酸などの無機酸、並びに酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イソチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、コハク酸、トルエンスルホン酸、酒石酸、およびトリフルオロ酢酸などの有機酸に由来のものが挙げられる。適切な有機酸の例としては、一般に、脂肪族、脂環式、芳香族、アラリファティック、ヘテロ環式、カルボン酸、およびスルホン酸の部類の有機酸が挙げられる。適切な有機酸の特別な例としては、アセテート、トリフルオロアセテート、ホルメート、プロピオネート、スクシネート、グリコレート、ジグリコレート、ラクテート、マレート、酒石酸、シトレート、アスコルベート、グルクロネート、マリエート、フマレート、ピルベート、アスパルテート、グルタメート、ベンゾエート、アントラニル酸、メシレート、ステアレート、サリチレート、p-ヒドロキシベンゾエート、フェニルアセテート、マンダレート、エンボネートパモエート、メタンスルホネート、エタンスルホネート、ベンゼンスルホネート、パントテネート、トルエンスルホネート、2-ヒドロキシエタンスルホネート、スファニレート、シクロヘキシルアミノスルホネート、アルゲン酸、β-ヒドロキシ酪酸、ガラクタレート、ガラクツロネート、アジペート、アルギネート、ブチレート、カンホレート、カンホルスルホネート、シクロペンタンプロピオネート、ドデシルサルフェート、グリコヘプタノエート、グリセロホスフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ニコチネート、2-ナフタレンスルホネート、オキサレート、パルモエート、ペクチネート、3-フェニルプロピオネート、ピクレート、ピバレート、チオシアネート、トシレート、およびウンデカノエートが挙げられる。さらに、本発明の化合物が酸性部位を担持する場合、その適切な薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属塩、すなわち、ナトリウム塩またはカリウム塩;アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩またはカリウム塩;および適切な有機リガンドにより形成された塩、例えば、第四級アンモニウム塩が挙げられるであろう。別の実施の形態において、塩基塩は、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、コリン、ジエチルアミン、グリシン、リシン、メグルミン、オラミン、トロメタミン、および亜鉛の塩を含む、非毒性塩を形成する塩基から形成される。有機塩は、トロメタミン、ジエチルアミン、N,N-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミンN-メチルグルカミン、およびプロカインなどの第二級、第三級または第四級アミン塩から製造されるであろう。塩基性窒素含有基は、低級アルキルCrC6ハロゲン化物例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチル塩化物、臭化物、およびヨウ化物、硫酸ジアルキルすなわち、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル、長鎖ハロゲン化物すなわち、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル塩化物、臭化物、およびヨウ化物、アリールアルキルハロゲン化物すなわち、ベンジルおよびフェネチル臭化物などの作用物質により第四級化されるであろう。1つの実施の形態において、酸および塩基のヘミ塩は、例えば、ヘミ硫酸塩およびヘミカルシウム塩であってよい。本発明の化合物およびその塩は、非溶媒和形態と溶媒和形態の両方で存在するであろう。143.シグナル伝達経路定義された経路または類似の用語は、シグナル例えば、外因性リガンドの受信から細胞応答例えば、細胞標的の増加した発現までの細胞の経路である。ある場合には、リガンドの受容体への結合により生じる受容体活性化は、そのリガンドに対する細胞の応答に直接結びつけられる。しかしながら、多くの細胞表面受容体について、リガンドと受容体との相互作用は、細胞の応答には直接的に関係ない。活性化された受容体は、細胞の挙動へのリガンドの最終的な生理的影響が生じる前に、最初に、細胞内の他のタンパク質と相互作用しなければならない。たいてい、いくつかの相互作用する細胞タンパク質の鎖の挙動は、受容体の活性化後に変えられる。受容体の活性化により誘発される完全に一式の細胞変化は、シグナル伝達機構または経路と呼ばれる。このシグナル伝達経路は、比較的単純または極めて複雑のいずれかであり得る。144.相乗作用ここに用いた相乗効果または相乗作用という用語は、2種類以上の薬剤を含む組合せの治療効果が、単一の薬剤が施される治療の治療効果よりも効果的であることを意味する。さらに、2種類以上の薬剤を含む組合せの相乗効果により、1種類以上の薬剤のより少ない投薬量の使用および/または患者へのその薬剤の頻度の少ない投与が可能になる。薬剤の少ない投薬量を使用する能力および/またはその薬剤をより少ない頻度で投与する能力のために、疾患または状態の予防、管理または治療におけるその薬剤の有効性を低減させずに、患者へのその薬剤の投与に関連する毒性が低減する。その上、相乗効果により、疾患または状態の予防、管理または治療におけるその薬剤の有効性を改善することができる。さらに、2種類以上の薬剤の組合せの相乗効果により、いずれの薬剤でも単独の使用に関連する悪影響または望ましくない副作用が避けられるか、低減するであろう。本出願中ずっと、様々な用語の定義が開示されている。いくつかの用語は1つの範疇で定義されているが、それらの用語の定義は、開示全体の他の部分にも適用できる。145.インデックスの類似性インデックスの類似性または類似の用語は、インデックスのパターン、および/またはスコアのマトリクスに基づく、1つの分子について1つである、2つのインデックス間、または少なくとも3つのインデックスの中での類似性を表現するための用語である。スコアのマトリクスは、対応する細胞中の異なる分子の1次プロファイルのシグネチャ、および各マーカーに対する異なる分子の調節プロファイルの性質と割合などの、それらの対応物に強力に関連している。例えば、より高いスコアがより類似している特徴に与えられ、より低いまたは負のスコアが異なる特徴に与えられる。分子調節インデックスに見つかる調節には、正、負および中性の3種類しかないので、類似性マトリクスは比較的単純である。例えば、単純なマトリックスは、同一の調節例えば、正の調節にスコア1を割り当て、非同一の調節にスコア-1を割り当てる。146.被験体subject本明細書を通じて用いられるところの被験体は、個体を意味する。したがって、被験体は、例えば、ネコ、イヌ等の家畜化された動物、家畜例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ等、実験動物例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット等、哺乳類、非ヒト哺乳類、霊長類、非ヒト霊長類、齧歯類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類および他のいずれかの動物を含む場合がある。被験体は、霊長類またはヒトのような哺乳類である。被験体は非ヒトの場合がある。147.溶媒和物本発明の化合物、およびその薬学的に許容される塩は、完全に非晶質から完全に結晶質までに及ぶ固体状態の連続体で存在することもある。それらは、非溶媒和形態および溶媒和形態でも存在することもある。溶媒和物という用語は、前記化合物および1種類以上の薬学的に許容される溶媒分子例えば、EtOHを含む分子複合体を表す。水和物という用語は、溶媒が水である溶媒和物である。薬学的に許容される溶媒和物は、溶媒が同位体置換されていてもよい溶媒物例えば、D2O、d6-アセトン、d6-DMSOを含む。有機化合物の溶媒和物および水和物の現在許容されている分類体系は、孤立部位、チャンネル、および金属イオンが配位された溶媒和物および水和物を区別するものである。例えば、KRMorrisPolymorphisminPharmaceuticalSolidsを参照のこと。孤立部位溶媒和物および水和物は、溶媒例えば、水分子が、有機化合物の媒介分子により互いが直接接触しないように孤立しているものである。チャンネル溶媒和物において、溶媒分子は、それらが他の溶媒分子に隣接している格子チャンネルにある。金属イオン配位溶媒和物において、溶媒分子は金属イオンに結合している。溶媒または水が堅く結合している場合、その複合体は、湿度にかかわらずに明確な化学量論組成を有する。しかしながら、チャンネル溶媒和物および吸湿性化合物におけるように、溶媒または水が弱く結合している場合には、水または溶媒の含有量は、湿度および乾燥状態に依存する。そのような場合、非化学量論組成が基準となる。本発明の化合物、およびその薬学的に許容される塩は、その化合物および少なくとも1種類の他の成分が化学量論量または非化学量論量で存在する多成分複合体塩および溶媒和物以外のとして存在することもある。このタイプの複合体としては、包接体薬物-宿主包有複合体および共結晶が挙げられる。後者は、概して、非共有相互作用により互いに結合された中性分子構成要素の結晶質複合体と定義されるが、中性分子の塩との複合体でもあり得る。共結晶は、溶融結晶化により、溶媒からの再結晶化により、または成分を一緒に物理的研削することにより、調製される。例えば、OAlmarssonandMJZaworotkoChemCommun1718891896を参照のこと。多成分複合体の一般評論については、JKHaleblianJPharmSci64126988を参照のこと。148.安定した医薬組成物に関して使用した場合、安定したまたは類似の用語は、一般に、当該技術分野において、表示期間に亘る既定の貯蔵条件下で活性成分の損失が、特定の量未満、通常は10未満であることを意味するものと理解される。組成物が安定であると考えられるのに必要な時間は、各製品の使用と相対的であり、製品を製造し、品質管理と検査のために製品を保有し、製品を卸売業者または顧客に直接出荷し、そこで最終的に使用される前に再び貯蔵されるという商業上の実用性により決定される。数ヶ月の安全要因を含めると、医薬品の最低製品寿命は通常は一年、好ましくは18ヶ月超である。ここに用いたように、安定したという用語は、これらの市場の実態および2°Cから8°Cまでの冷蔵条件などの容易に達成可能な環境条件で製品を貯蔵し輸送する能力を参照する。149.物質substance物質またはこれに類する用語は、いずれかの物理的対象である。材料は物質である。分子、リガンド、マーカー、細胞、タンパク質およびDNAは物質と考えられる場合がある。機械または物品は物質自体であると考えられるよりもむしろ、物質でできていると考えられるであろう。150.試験分子試験分子またはこれに類する用語は、該試験分子についてのなんらかの情報を得る方法に用いられる分子である。試験分子は、未知または既知の分子の場合がある。151.組織組織または類似の用語は細胞の集合を称する。概して、組織は被験体から得られる。152.治療する治療するまたは治療は、疾患、病的状態、または不調を治癒する、改善する、安定化させる、または予防するつもりでの、患者の医学的管理を意味する。これらの用語は、積極的な治療、すなわち、疾患、病的状態、または不調の改善に明確に向けられた治療を含み、また表面的な治療、すなわち、関連する疾患、病的状態、または不調の原因の除去に向けられた治療も含む。これらの用語は、原因となる疾患の徴候が低減すること、および/または、前記徴候を起こす原因となる細胞的、生理学的または生化学的原因またはメカニズムが低減することを意味する。この文脈で用いられる低減は、疾患の生理学的状態だけでなく、疾患の分子的状態を含む、疾患の状態と比較する意味であると理解される。その上、これらの用語は、待期療法、すなわち、疾患、病的状態、または不調の治癒よりもむしろ症状の緩和のために計画された療法;予防的処置、すなわち、関連する疾患、病的状態、または不調の進行を最小にするまたはある程度また完全に阻害することに向けられた処置;および支持療法、すなわち、関連する疾患、病的状態、または不調の改善に向けられた別の特異的療法を補うために用いられる療法を含む。これらの用語は、治癒または緩和目的の治療と予防目的の治療の両方を意味する。この治療は、急性または慢性いずれで行っても差し支えない。治療は、対照に対して、少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、99、99.9、99.99、100の、1つ以上の症状または特徴の低減を意味し得ると理解される。これらの用語の文脈で、予防は、疾患を有すると診断された患者またはそのような疾患を発症する危険のある患者において、ここに特定された疾患を予防する化合物または組成物開示された化合物および組成物などのの能力を称する。この文脈において、予防は、対照に対して疾患の兆候を遅らせることを含む。これらの用語は、治療が、意図した結果のいずれを生じるのに実際に効果的であることは必要としない。結果が意図されていることで十分である。153.治療薬治療薬または類似の用語は、治療分野で状態または疾患を予防するまたは治療する上で有用である任意の分子または組成物である。例えば、抗癌剤は、被験体における癌細胞の形成を防ぐ、被験体における癌細胞の数を減らす、または被験体における全ての癌細胞をなくすことができる任意の薬剤であり得る。154.治療に有効である治療に有効であるという用語は、使用される組成物の量が、ここに定義された被験体を治療するのに十分な量のものであることを意味する。155.毒性毒性は、物質または分子が、その物質または分子に曝露されている、細胞、組織、器官、または生物全体などの何かを損傷させられる程度である。例えば、肝臓、または肝臓中の細胞、肝細胞が、ある物質により損傷を受け得る。156.毒性マーカー毒性マーカーは、例えば、生物または細胞または組織または器官における、ある物質の毒性のレベルを特定する、診断する、予知するために使用できる、任意の試薬、分子、物質などである。157.トランス活性化トランス活性化は、細胞中のある受容体の活性化により、同じ細胞中の別の受容体も活性化できるプロセスを称する。そのようなトランス活性化は、直接的すなわち、療法の受容体がダイマーまたはオリゴマーなどの複合体を形成し、よって、第1の受容体の活性化により、第2の受容体の構造変化が生じ、それにより、第2の受容体が活性化されるであっても、間接的すなわち、2種類の受容体が必ずしも、シグナル伝達複合体内になくてもよい;しかしながら、第1の受容体の活性化が、経路内のシグナル伝達タンパク質が第2の受容体を活性化させる経路につながるであっても差し支えない。158.誘発するTrigger誘発するまたはこれに類する用語は、応答のような事象を開始または起動する動作を指す。159.値Values構成要素、成分、添加物、細胞タイプ、マーカーおよびこれらに類する局面と、これらの範囲とについて開示される具体的または好ましい値は、例示のためだけである。これらの値は、他の明示された値や明示された範囲内の他の値を排除するものではない。本開示の組成物、装置および方法は、本明細書に説明される値と、具体的な値と、より具体的な値と、好ましい値のうち、いずれかの値またはいずれかの組合せを有するものを含む。したがって、開示された方法、組成物、物品および機械は、本明細書に説明されるさまざまなステップ、分子、組成物その他これらに類するものを、含むか、からなるか、から実質的になるやり方で組み合わされる場合がある。例えば、これらは、本明細書で定義されるとおりのリガンドを含む分子を特徴づけるための方法か、本明細書で定義されるとおりのインデックスを作成する方法か、本明細書で定義されるとおりの薬物発見の方法かにおいて使用される場合がある。160.未知分子未知分子またはこれに類する用語は、既知または未知の化学構造を有し、未知の生物学的/薬理学的/生理学的/病理生理学的活性を有する分子である。161.重量明細書および請求項における、組成物または物品中の特定の要素または構成要素の重量部への言及は、重量部が表現されている組成物または物品中の要素または構成要素と、任意の他の要素または構成要素との間の重量関係を意味する。それゆえ、2重量部の構成要素Xおよび5重量部の構成要素Yを含有する化合物において、XおよびYは、2:5の重量比で存在し、追加の構成要素がその化合物中に含まれているか否かにかかわらずに、そのような比で存在する。構成要素の重量パーセントは、そうではないと具体的に述べられていない限り、その構成要素が含まれる配合物または組成物の総重量に基づく。以下の実施例は、特許請求の範囲に記載される化合物、組成物、物品、デバイスおよび/または方法がどのようになされ、評価されるかについての完全な開示および説明を当業者に提供するために記載されており、純粋に典型例であって、本開示を制限することは意図されていない。数値例えば、量、温度などに関しては正確さを確保するよう努力がなされているが、ある程度の誤差および偏差が考慮されべきである。他に明記されない限り、部は重量部であり、温度は°Cまたは周囲温度であり、圧力は大気圧であるかそれに近い。A.実施例11.式I、II、III、IV、VおよびVIの化合物の調製以下は、式I、II、III、IV、VまたはVIの化合物の調製の例である。この実施例は純粋に典型例であって、本開示を制限することは意図されていない。i.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[4-n-ブチルフェニル]-2,5-ジヒドロフラン3-ヒドロキシ-3-[4-n-ブチルフェニル]-2-ブタノン10.0g0.0455モル、マロノニトリル6.0g0.091モル、リチウムエトキシド2.3ml2.3ミリモル、およびTHF50mlを混合し、還流下で一晩沸騰させた。エタノール中で再結晶させることにより、純粋な生成物2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[4-n-ブチルフェニル]-2,5-ジヒドロフランを得た。収量9.95g、収率69.1。融点:129.3~130.5°C。1HNMR:δ7.259d,2H,7.112d,2H,2.638t,2H,CH2,2.225s,3H,Me,1.997s,3H,Me,1.60-1.28m,4H,CH2,0.931t,3H,CH3。13CNMR:182.476,175.753,145.841,131.069,129.6922C,125.0752C,110.914,110.406,109.088,104.728,101.724,58.830,35.236,33.277,22.3352C,14.558,13.873。HPLC:100。ii.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[2,4-ジフルオロフェニル]-2,5-ジヒドロフラン3-ヒドロキシ-3-[2,4-ジフルオロフェニル]-2-ブタノン8g0.04モル、マロノニトリル5.3g0.08モル、およびリチウムエトキシド2ml2ミリモルを50mlのTHF中で一晩還流した。終了後、エタノールから結晶化させることにより、純粋な生成物2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[2,4-ジフルオロフェニル]-2,5-ジヒドロフランを得た。収量4.5g、収率37.9。融点:219.0~221.4°C。1HNMR:δ7.441d,1H,7.066dd,1H,6.945d,1H,2.274s,3H,Me,2.041s,3H,Me。19FNMR:-104.81d,1F,107.294d,1F。HPLC:100。iii.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-スピロ-シクロヘキシル-2,5-ジヒドロフラン1-ヒドロキシ-1-シクロヘキシル-エタノン14.2g0.1モル、マロノニトリル13.2g0.2モル、ナトリウムエトキシド100ml0.1モル、1Mのエタノール溶液およびエタノール100mlを混合し、室温で一晩反応させた。エタノール中で結晶化させることにより、純粋な生成物2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-スピロ-シクロヘキシル-2,5-ジヒドロフランを得た。収量16.1g、収率67.5。融点:236.5~237.5°C。1HNMR:δ2.337s,3H,Me,1.86-1.70m,11H,ring。13CNMR:182.387,175.230,110.980,110.458,108.999,104.883,101.437,58.572,33.1232C,23.918,21.2892C,14.499。HPLC:100。iv.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-フェニル-5-ペルフルオロメチル-2,5-ジヒドロフラン3-ヒドロキシ-3-フェニル-4,4,4-トリフルオロ-2-ブタノン10.0g0.046モル、マロノニトリル6.1g0.092モル、リチウムエトキシド2.5ml2.5ミリモルおよびTHF20mlを混合し、一晩還流させた。カラムクロマトグラフィ100ジクロロメタン、シリカゲル、60~200メッシュに通し、純粋な生成物2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-フェニル-5-ペルフルオロメチル-2,5-ジヒドロフランを得た。収量3.75g、収率25.9。融点:133~135°C。1HNMR:7.577-7.546m,3H,Ar,7.444-7.410m,2H,Ar,2.479s,3H,Me。19FNMR:-72.852。13CNMR:174.224,172.148,131.908,130.191,127.467,125.742,121.682,109.793,109.511,109.098,108.099,98.521,62.938,15.439。GC/MS:317[M2],247[M-CF3]。HPLC:100。v.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[3,4-ジクロロフェニル]-2,5-ジヒドロフラン3-ヒドロキシ-3-[3,4-ジクロロフェニル]-2-ブタノン15g0.064モル、マロノニトリル8.5g0.129モルおよびリチウムエトキシド3.2ml3.2ミリモル、1Mのエタノール溶液を80mlのTHF溶液中で攪拌し、還流条件下で一晩沸騰させた。真空吸引下、ロータリーエバポレーターでTHFの大部分を除去することにより、溶液を濃縮した。残った残渣を塩化メチレン中に溶解させ、塩水2×、続いて脱イオン水2×で洗浄した。有機層を無水MgSO4上で乾燥させ、ろ過し、溶媒を除去した。変性アルコールから粗生成物を再結晶化し、生成物2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[3,4-ジクロロフェニル]-2,5-ジヒドロフランを得た。収量5.5g、収率25.9。融点:226.4~228.6°C。1HNMR:δ7.579d,1H,7.324d,1H,7.070dd,1H,2.254s,3H,Me,2.001s,3H,Me。13CNMR:180.253,175.015,135.676,134.630,134.382,131.982,127.552,124.595,110.580,109.966,108.810,105.822,100.107,60.573,22.894,22.894,14.637。HPLC:100。vi.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-スピロ-フルオレニリデンfluorenylidine-2,5-ジヒドロフラン9-ヒドロキシ-9-アセチル-フルオレン5.0g0.0223モル、マロノニトリル2.94g0.0446モル、無水炭酸カリウム3.1g0.0223モル、18-クラウン-6エーテル触媒量および乾燥THF50mlを混合し、一晩還流した。エタノールから結晶化することによって、純粋な生成物2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-スピロ-フルオレニリデン-2,5-ジヒドロフランを回収した。収量3.22g、収率45.0。融点:302~303°C。1HNMR:δ7.760d,2H,7.566t,2H,7.393t,2H,7.187d,2H,1.935s,3H。13CNMR:177.504,140.459。HPLC:100。vii.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5,5-トリメチル-2,5-ジヒドロフランスキーム1に従い、エタノール120mL溶媒中で、化合物a14.59g、142.9ミリモル、マロノニトリル29.87g、452.2ミリモル、およびマグネシウムエトキシド18.5g、2ミリモルを混合し、一晩還流させた。カラムクロマトグラフィの後、純粋な102-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5,5-トリメチル-2,5-ジヒドロフランを得た。収量:8.30g。収率:29。1HNMR:δ2.36s,3H,1.63s,3H;GC-MS199。純粋な82-シアノ-2-1-アミノ-2,2-ジシアノビニルメチレン-3-シアノ-4,5,5-トリメチル-2,5-ジヒドロフランを副生成物として得た。GC-MS265。viii.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[23456-ペンタフルオロフェニル]-2,5-ジヒドロフランスキーム2に従い、化合物b10.0g、0.04モル、マロノニトリル5.3g、0.08モル、およびリチウムエトキシド2mL、2ミリモルをTHF30mL中で混合し、一晩還流させた。カラムクロマトグラフィ100ジクロロメタン、60~200メッシュのシリカゲルの後、純粋な92-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[23456-ペンタフルオロフェニル]-2,5-ジヒドロフランを得た。収量:2.7g。収率:19.2。融点:175.5~177.6°C。1HNMR:δ2.340s,3H,Me,2.124t,3H,Me,Fとのカップリング。19FNMR:-138.048m,2F,-148.058m,1F,-158.890m,2F。13CNMR:177.895,174.651,145.9962C,143.004,138.6012C,110.327,109.800,108.618,107.992,106.275,97.567,61.044,24.986,14.363。HPLCによる純度,λ=300nm,100。ix.チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸スキーム3に従い、最初に、コンデンサと添加漏斗を装着した三口フラスコ中で、化合物c27g、0.141モルをK2CO382.80g、0.60モルおよびDMF300mLと混合した。この混合物にメルカプト酢酸エチル17.5g、0.141モルを60~70°Cで滴下して加えた。この混合物を、出発物質がGC/MSで検出されなくなるまで、60~70°Cで一晩加熱した。次に、混合物を水600mLに注ぎ、ジエチルエーテル2×100mlで抽出した。有機層を塩水3×400mlで洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。溶媒を蒸発させた後、茶色がかった粗目的物を得て、次の反応に十分な純度であることを確認し71.0g、100、GC/MS212の化合物dをもたらした。化合物d29g、0.137モルを、THF200mL、メタノールおよびLiOH1M、200mLの混合物に溶かした。この混合物を一晩還流させて、濃塩酸50mLに注いだ。次に、その酸混合物を水で500mLまで希釈した。固体をろ過し、水で洗浄した3×100mL。淡黄色の固体の化合物11をメタノール100mLで洗浄し、真空下で一晩乾燥させた21g、83。GC-MS140[M-COOH]。x.3-メチル-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸スキーム4に従い、コンデンサと添加漏斗を装着した三口フラスコ内で、化合物e15.00g、0.073モルをK2CO340.30g、0.29モルおよびDMF200mLと混合した。この混合物に、メルカプト酢酸エチル9.06g、0.073モルを60~70°Cで滴下して加えた。混合物を、出発物質がGC/MSで検出されなくなるまで、60~70°Cで一晩加熱した。次に、混合物を水400mLに注ぎ、ジエチルエーテル2×200mlで抽出した。有機層を塩水3×150mlで洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。溶媒を蒸発させた後、茶色がかった目的の粗化合物f13.10gを得、次の反応に十分な純度であることを確認した。化合物f13.10g、0.0579モルをTHF100mL、メタノールおよびLiOH1M、100mLの混合物に溶かした。この混合物を一晩還流し、濃塩酸30mLに注いだ。次に、この酸混合物を水で400mLに希釈した。固体をろ過し、水で洗浄した3×100mL。淡黄色の固体の化合物12をメタノール2×30mLで洗浄し、真空下で一晩乾燥させた9.73g。GC-MS154[M-COOH]。xi.3,6-ジブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン2-ウンデカノンスキーム5に従い、0°Cにおいて、CH2Cl270mLを溶媒とした、化合物g12.43g、0.0417モルとAlCl312.78g、0.0959モルの混合物に、窒素流下で、n-塩酸ウンデカノイル10.25g、0.0500モルを滴下して加えた。これを、少量の出発物質しかGC/MSで検出されなくなるまで、0°Cで約12時間攪拌した。次に、混合物をHCl200mL、6Mに注ぎ、有機物をヘキサン/CH2Cl21:12×200mLで抽出した。有機溶液を合わせて塩水2×100mLおよび水100mLで洗浄した。無水MgSO4上で乾燥後、溶媒を蒸発させた。低融点の固体の化合物15を回収し、これをEtOHから再結晶化して精製生成物を得た18.32g、94。GC-MS465[M]。xii.ジエチルジチエノ[3,2-b:2,3-d]チオフェン-2,6-ジカルボキシレートジエチルジチエノ[3,2-b:2,3-d]チオフェン-2,6-ジカルボキシレートを、文献FreyJosephBondAndrewDHolmesAndrewBImprovedsynthesisofdithieno32b23dthiopheneandderivativesforcrosscouplingChemicalCommunications20022024242425に従って合成した。xiii.N,N-ビス2-ヒドロキシエチル-4-[2-チオフェン-2-イルビニル]アニリンN,N-ビス2-ヒドロキシエチル-4-[2-チオフェン-2-イルビニル]アニリンを、文献欧州特許出願公開第647874号明細書。1995JenKYADrostKJPreparationofpolyimideshavingnonlinearopticalpropertiesに従って合成した。xiv.4-{[N-メチル,N-2-ヒドロキシエチル-アミノ]-フェニレン-チエン-5}-ホルメートリチウム塩スキーム6に従い、N2保護下で、ヘキサンを溶媒としたn-BuLiの溶液8mL、2.5Mを、-78°Cで、THF50mLを溶媒とした化合物h4.58g、0.020モルの溶液に滴下して加えた。溶液は緑色に急速に変化した。添加後、この反応溶液を-10°Cまでゆっくりと温め、次いで、再び-78°Cまで冷却した。数グラムのドライアイスを素早く加えた。濁った溶液が、黄色っぽい色に変化し、黄色の固体が形成された。次に、この混合物を室温まで温めた。次いで、この混合物に10mlの水を加えると、澄明な溶液が形成された。THF溶媒の大部分を蒸発させた後、残った濁った溶液中の固体を回収し、ETOHから再結晶化することによって化合物26を得た2.50g。2.50gの乾燥した26をMeOH/H2SO4濃中で一晩還流させた。水を加えた後、MeOHを除去し、酢酸エチルを用いて所望の生成物25を抽出した。EtOHからの再結晶後、所望の生成物25を得た2.40g。GC-MS317。xv.2,2-ビチオフェン-5-カルボキサルデヒド化合物30および2,2-ビチオフェン-5-メタノール化合物27スキーム7に従い、N2保護下、THF100mLを溶媒とした、化合物i45g、0.184モルとMg4.42g、0.184モルの混合物の溶液を数時間還流させた。数mlのDMFを添加し、得られた溶液を一晩攪拌した。反応後、氷水で冷却した塩酸水溶液を、この溶液が酸性になるまで加えた。酢酸エチル2×100mlを用いて、この酸性水溶液から有機物を抽出した。この有機層をNaHCO3水溶液および塩水で洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。酢酸エチルを蒸発させた後、残渣を5酢酸エチル/95ヘキサン溶液と混合した。固体の熱ろ過を行ったジアルデヒド。ろ液を室温まで冷却し、化合物30の結晶35.6g、64.6を得た。N2保護下、4.00g0.105モルのNaBH4を、3041g、0.211モルのメタノール溶液に少しずつ加えた。この反応を一晩行った。MeOHを除去して残渣を得、これを酢酸エチルに溶かした。この酢酸エチルを塩水で洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。酢酸エチル溶媒を除去して化合物27を得た35.6g、64.6。1HNMRおよびGC-MSにより、的確な化合物であることを確認した。xvi.5-ヒドロキシメチル-5-ホルミル-2,2-ビチオフェン5-ヒドロキシメチル-5-ホルミル-2,2-ビチオフェンを、文献米国特許第5,508,440号明細書。ChangCTLeeCTLinFLpolythiophenederivativesusefulforpreventinginflammationandedemaに従って合成した。xvii.5-{2-[4-[ビス2-ヒドロキシエチルアミノ]フェニル]エテニル]}-2,2-ビチオフェン-5-ホルメートナトリウム塩スキーム8に従い、N2保護下、ヘキサンを溶媒としたn-BuLiの溶液3.3mL、2.5Mを、THF50mLを溶媒とした化合物j1.00g、2.7ミリモルの溶液に、-78°Cで、滴下して加えた。添加後、この反応溶液を-10°Cまでゆっくりと温め、再び-78°Cまで冷却した。数グラムのドライアイスを急速に加えた。濁った溶液は黄色っぽい色に変化し、黄色い固体を形成した。次に、この混合物を室温まで温めた。次いで10mlの水をこの混合物に加えると、澄明な溶液が形成された。この溶液に、30mlのNaHCO3水溶液を加えた。THF溶媒の大部分を蒸発させた後、残った濁った溶液中の固体を回収し、ETOHから再結晶化させて29を得た0.20g。xviii.化合物A、B、C、D、E、およびFの合成これらの化合物を、スキーム9チオフェン誘導体の一般的な合成戦略に示すものと同様のプロトコルを用いて合成した。化合物AYE210の詳細な合成手順を一例として用いた。高速液体クロマトグラフHPLCを使用してすべての化合物を精製し、1HNMRと13CNMRの両方を用いて特徴付けした。3,4-ジブロモチエニル-2-メチルケトン42の合成窒素流下、CH2Cl2300mLを溶媒とした、3,4-ジブロモチオフェン4172.60g、0.30モルとAlCl392.46g、0.69モルの混合物の溶液に、0°Cで、塩化アセチル24.73g、0.32モルを滴下して加えた。これを、出発物質がGC/MSで検出されなくなるまで、2~3時間攪拌した。次に、混合物をHCl500mL、6Mに注ぎ、有機物を、CH2Cl22×300mLを用いて抽出した。有機溶液を合わせて、塩水2×150mLおよび水150mLで洗浄した。無水MgSO4上で乾燥後、溶媒を蒸発させた。低融点の固体を回収した。この固体は、さらなる精製をせずに使用するのに十分な純度であった80.80g、95。融点:75~78°C。1HNMR300MHz,CD2Cl2δ7.67s,1H,2.69s,3H。13CNMR300MHz,CD2Cl2189.6,140.6,130.2,118.0,117.3,29.7,HRMSESIm/z[C6H4Br2OS]の計算値:281.8300、実測値:282.9000。6-ブロモ-3-メチル-エチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボキシレート48の合成化合物4280.80g、0.29モルを、コンデンサと添加漏斗を装着した三口フラスコ内で、K2CO3196.70g、1.43モルおよびDMF250mLと混合した。この混合物に、60~70°Cで、メルカプト酢酸エチル32.80mL、0.30モルを滴下して加えた。触媒量の18-クラウン-620mgを触媒として使用した。混合物を、出発物質がGC/MSで検出されなくなるまで、60~70°Cで一晩加熱した。次に、この混合物を水1000mLに注ぐと、淡黄色の固体が形成された。ろ過後、固体を水で洗浄し3×500mL、ろ過した。回収した固体をメタノール300mLで洗浄し、次の反応に十分な純度であることを確認した78.40g、90。融点:91~92°C。1HNMR300MHz,CD2Cl2δ7.48s,1H,4.36q,2H,2.63s,3H,1.38t,3H。13CNMR300MHz,CD2Cl2159.4,137.9,137.6,135.1,125.7,124.2,99.7,57.8,11.1,10.7。HRMSESIm/z[C10H9BrO2S2]の計算値:303.9200、実測値:303.3000。6-ブロモ-3-メチル-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸Aの合成化合物4878.40g、0.26モルをTHF400mL、メタノール50mLおよびLiOH100mL、10溶液の混合液に溶かした。この混合液を一晩還流し、濃塩酸300mLに注いだ。次にこの酸混合液を水で1000mLに希釈した。固体をろ過し、水で洗浄した3×500mL。淡黄色の固体をメタノール300mLで洗浄し、真空下で一晩乾燥させた68.10g,96。融点280~282°C。1HNMR300MHz,DMSOδ8.08s,1H,2.60s,3H。13CNMR300MHz,DMSO163.6,140.7,140.1,137.7,129.7,129.2,102.1,14.2。HRMSMALDIm/z[C8H5BrO2S2-H2OH]の計算値:258.8887、実測値:258.8883。2.材料および方法i.材料ザプリナストは、BioMolInternationalInc.ペンシルベニア州、プリマスミーティング所在から得た。細胞培養に適合したEpic登録商標384バイオセンサーマイクロプレートは、コーニング社ニューヨーク州、コーニング所在から得た。HEK293およびHT-29は、AmericanTypeCellCultureバージニア州、マナッサス所在から得た。細胞培養培地は以下のとおりであった:110のウシ胎仔血清FBS、4.5g/リットルのグルコース、2mMのグルタミン、およびHEK293の抗生物質が補われたイーグル培地MEM;および210のFBS、4.5g/リットルのグルコース、2mMのグルタミン、およびヒト結腸直腸腺癌HT29の抗生物質が補われたマッコイ5A改変培地。ii.カルシウムフラックスアッセイFluo-4Direct商標CalciumAssayKitは、Invitrogenスターターパック、カタログ番号F10471から購入した。HEK293細胞15000細胞/ウェルおよびHT29細胞30000細胞/ウェルを、ポリD-リシン被覆384ウェルプレートコーニング社、カタログ番号3845に播種し、37°Cで一晩培養した。翌日、Ca2フラックスアッセイを、製造業者の使用説明書にしたがって行い、蛍光比340nm/380nmをFDSS創薬スクリーニングシステム、浜松ホトニクス株式会社、日本国で測定した。化合物を、Ca2アッセイ緩衝液中で10倍株最終濃度10μMとして調製した。96ウェルプレートコーニング社、カタログ番号3664内で、一過性トランスフェクションされた細胞に関するCa2フラックスアッセイを行った。HEK293細胞25000細胞/ウェルを1日目に播種した。細胞を2日目に、Lipofectamine商標LTXInvitrogenを使用して、myc-GPR35またはHA-Gqo5いずれかでトランスフェクションしたか、または両方のプラスミドmyc-GPR35/HA-Gqo5のDNA比2:1で同時トランスフェクションした。トランスフェクションから24時間後に、Ca2フラックスアッセイを行った。iii.HA-Gqo5プラスミドのクローニングヒトGqcDNAプラスミドをMissouriSTcDNAResourceCenterwwwcDNAorgから購入した。HA-タグを、PCRによりヒトGqcDNAのN末端に挿入したJTakasakiTSaitoMTaniguchiTKawasakiYMoritaniKHayashiandMKoboriANovelGaq11selectiveInhibitorJBiolChem2794743847445。最後の5つのアミノ酸を、PCTによりGCGLYと交換して、HA-Gqo5プラスミドを作製したBRConklinZFarfelKDLustigDJuliusandHRBourneSubstitutionofthreeaminoacidsswitchesreceptorspecificityofGqtothatofGiNature1993363274276。次いで、発現ベクターpcDNA3.1中にこのGqo5cDNAをサブクローニングした。iv.HT29細胞およびトランスフェクションされたHEK293細胞を使用したウェスタンブロットHT29細胞サンプル当たり107の細胞を収穫し、プロテアーゼ阻害剤カクテルRocheを含む1のNP40溶解緩衝液150mMのNaCl、25mMのトリス、1のNP40、pH7.5中で溶解させた。タンパク質を15SDSゲル上で分離した。膜を、一晩4°Cでウサギ抗-GPR351:1000Abcam、Ab76217でブロットし、次いで、30分間に亘り、二次HRP標識ヤギ抗ウサギまたはウマ抗ヤギ抗体1:20000で希釈でブロットした。FujifilmLuminescentImageAnalyzerLAS3000Fujifilm、ニューヨーク州、バルハラ所在でECLプラスキットGEHealthcareを使用して、ウェスタンブロットを展開させた。v.cAMPアッセイ384ウェルプレートBDBioscience、カタログ番号354660HEK293については10000細胞/ウェル、HT29については20000細胞/ウェル内に細胞を平板培養した。細胞を一晩、完全増殖培地内で培養した。翌日、製造業者の使用説明書Promega、カタログ番号V1502にしたがって、cAMP-Gloアッセイを行った。細胞を、溶解緩衝液を添加する前に、30分間に亘り、0.5μMまたは5μMのフォルスコリンを含む誘導緩衝液または含まない誘導緩衝液中で20μMの化合物と共にインキュベーションした。TecanSafireIIリーダーを使用して、蛍光を測定した。vi.免疫蛍光共焦点イメージングHT29細胞を8ウェルチャンバースライド10,000細胞/ウェル上で平板培養し、24時間に亘り37°Cでインキュベーションした。翌日、細胞を15分間に亘り1×PBS内の4ホルムアルデヒドで固定し、その後、1×PBS中に4のヤギ血清、0.1のBSA、0.1のトリトンX-100を含有する緩衝液中で2時間に亘りブロッキングし、透過化処理した。PBSによる5分間の洗浄後、固定細胞を、24時間に亘り3BSA/PBS緩衝液中において一次抗体抗-GPR35Abcam1:300と共にインキュベーションし、その後、室温で1時間に亘り3BSA/PBS緩衝液中において二次抗体AlexaFluor登録商標488ヤギ抗ウサギIgGHLInvitrogen1:250と共にインキュベーションした。最後に、細胞をPBSで一度洗浄し、1.5mmの厚いガラスカバースリップで密封した。イメージングまで、乾燥させたスライドを4°Cで貯蔵した。共焦点イメージングは、Zeiss共焦点顕微鏡Axiovert40で行った。GPR35内在化研究については、細胞を24時間に亘り37°Cでインキュベーションした後、その細胞を、固定する前に、1時間に亘り37°CでGPR35の異なるリガンドで処理したザプリナスト、10μM;ニフルム酸、20μM;6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸、20μM;タルニフルメート、20μM;ジクロフェナク、20μM;フロセミド、20μM。MacBiophotonicsImageJソフトウェアhttpwwwmacbiophotonicscadownloadshtmを使用して、共焦点画像を解析した。vii.その場でのEpicプレート上でのGPR35のRNAiノックダウンHT29細胞におけるGPR35ノックダウンを、ヒトGPR35mRNAを標的とした一過性トランスフェクションされた小ヘアピンshRNAにより、384ウェルEpicプレート上で行った。HT29細胞を1日目に20,000細胞/ウェルで播種した。2日目に、細胞を、製造業者の使用説明書にしたがって、EffecteneQiagenを使用して、GPR35を標的とするプラスミドDNApGFP-V-RS-shRNAで一過性トランスフェクションした。細胞を3日目に洗浄し、トランスフェクションの48時間後である4日目に、Epic細胞アッセイを行った。viii.光学バイオセンサーシステムおよび細胞アッセイラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイ全細胞検出に、Epicベータ版の波長検波システムコーニング社、ニューヨーク州、コーニングを使用した。このシステムは、温度制御ユニット、光学検出ユニット、およびロボット式搭載型液体取扱ユニットからなる。この検出ユニットは、集積光ファイバに重点を置き、約15秒の間隔で細胞応答の速度測定が可能である。また、Epicリーダーシステムに液体取扱アクセサリが取り付けられた、Epic工業システムも使用した。RWGバイオセンサーは、センサー表面近くの局所屈折率の微小変化を検出することができる。細胞内の局所屈折率は、生物量例えば、タンパク質、分子複合体の密度とその分布の関数であるので、バイオセンサーは、天然細胞におけるリガンド誘発動的質量再配分を非侵襲的に検出するためにエバネッセント波を利用する。エバネッセント波は、細胞中に達し、距離で指数関数的に減少し、約150nmの特徴的な検出容積をもたらし、受容体活性化を通じて媒介される光学応答が、エバネッセント波がサンプリングされている細胞の部分について平均を表すだけであることを示す。受容体活性化の下流の多くの細胞事象の合算が、リガンド誘発DMRの反応速度と振幅を決定する。バイオセンサー細胞アッセイについて、細胞は、概して、バイオセンサーマイクロプレート中の50μlの対応する培養培地中に懸濁された3から15継代でウェル当たり約1から2×104の細胞を使用して増殖させ、約1日に亘り空気/5のCO2下37°Cで培養した。アッセイの時点で全ての細胞の培養密度は約95から100であった。分子溶液を、貯蔵した濃縮溶液をHBSS1×ハンクス平衡塩溶液に20mMのHEPES、pH7.1を添加で希釈することにより調製し、384ウェルのポリプロピレン分子貯蔵プレートに移して、分子源プレートを調製した。二段階アッセイを行う場合、分子源プレートとマーカー源プレートの両方を別々に作製した。並行して、細胞をHBSSで2回洗浄し、30μlのHBSS中に保持して、細胞アッセイプレートを調製した。次いで、細胞アッセイプレートおよび分子源プレートとマーカー源プレートの両方を前記リーダーシステムの槽内でインキュベーションした。約1時間のインキュベーション後、細胞アッセイマイクロプレート中の全てのバイオセンサーのベースライン波長を記録し、ゼロに正規化した。その後、ベースラインを確立し、細胞が定常状態に到達したことを確実にするために、2から10分間の連続記録を行った。次いで、搭載型液体取扱機を使用して、10μlのマーカー溶液をピペットで細胞アッセイプレートに採取することによって、細胞応答を誘発させた。分子のマーカー誘発応答への影響を研究するために、所定の用量一般にEC80またはEC100でのマーカーによる二次刺激を適用した。二次刺激の直前に、マイクロプレート中の全てのバイオセンサーの共鳴波長を再び正規化して、第2のベースラインを確立した。2つの刺激は、通常、約1時間隔てた。全ての研究は、制御温度28°Cで行った。各々が少なくとも3回反復した、少なくとも2つの独立した組の実験を行った。アッセイの変動係数が10未満であることが分かった。3.結果i.HT29細胞中のGPR35の発現および位置Gタンパク質共役受容体GPCRは、細胞表面タンパク質の最大の群の1つを構成し、現行の治療薬および開発中の薬物の両方の主要標的を表す。多くのcDNAクローンは、確立されたGPCRに対して、特に膜貫通領域において、特に高い配列類似性に基づいてGPCRをコードすることが予測される。そのようなオーファンGPCRについて、アゴニスト、アンタゴニスト、および情報伝達経路の特定は、新薬標的の発見のための業界による主要な努力を表す。ヒトゲノムDNAスクリーニング中に最初に発見されたオーファンGPCRであるGPR35は、プリン作動性P2Y受容体、ニコチン酸受容体HM74、リゾホスファチジン酸受容体GPR23、およびオーファン受容体であるGPR55との配列相同性が限られている。最高レベルのGPR35mRNAが免疫組織および胃腸組織で見つかり、肺組織と神経組織では発現が限られていた。GPR35の初期の記述後に今ではGPR35aと示される、オクムラ等は、N末端で追加の31のアミノ酸をコードしたヒト胃癌cDNAライブラリからスプライスバリアントGPR35bを単離したOkumuraSBabaHKumadaTNanmokuKNakajimaHNakaneYHiokiKandIkenakaKCloningofaGproteincoupledreceptorthatshowsanactivitytotransformNIH3T3cellsandisexpressedingastriccancercellsCancerSci95131135。GPR35aおよびGPR35bのmRNAレベルは、胃癌組織中で発現上昇され、悪性転換における両方のスプライスバリアントの役割を示唆した。しかしながら、ヒト結腸癌細胞におけるGPR35の発現は調査されていなかった。SABiosciencesからのGPR35プライマーを使用したリアルタイムPCRは、HT29は、少なくともmRNAレベルで、比較的高いレベルのGPR35を発現することを示した。その後のウェスタンブロッティングは、HT29溶解産物が、その分子量が、それぞれ、GPR35aおよびGPR35bの両方の予測値に近いGPR35アイソフォームを含有することを示した図1a。HT29はヒト結腸腺癌II型細胞株である。共焦点像は、GPR35が細胞表面原形質膜に主に位置していることをさらに示した図1b。面白いことに、抗GPR35抗体を使用したGPR35の染色パターンは、細胞表面で均一に分布する代わりに、あるマイクロドメイン内、ことによると脂質ラフト内に主に位置するおよび/または他の受容体と複合体を形成することを示唆している。それにもかかわらず、これらの結果は、HT29は、mRNAレベルとタンパク質レベルの両方で、比較的高いレベルのGPR35aおよびGPR35bを発現し;GPR35は、細胞表面に主に位置していることを示唆している。ii.既知GPR35アゴニストであるザプリナストにより生じたHT29中のGPR35のDMRシグナルおよび受容体の内在化全てのGPCRにほぼ共通するのは、アゴニスト誘発受容体内在化プロセスである。それゆえ、既知GPR35アゴニストであるザプリナストの受容体内在化を生じる能力を最初に調査した。ザプリナストは、既知cGMP依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤でもある。図2Aに示されるように、ザプリナストによる刺激の30分後のHT29細胞の共焦点像からも明らかなように、ザプリナストは10マイクロモル濃度で、実際に、受容体の内在化を生じた。緑色のドットは、受容体が内在化され、エンドソーム粒子と結合していることを示すのに対し、青色のドットは核DAPI染色を示す。Ca2動員アッセイを使用すると、いくつかの研究は、ザプリナスト、LPA、NPPBおよびキヌレン酸を含む、いくかの既知GPR35アゴニストは、GPR35のみを発現する遺伝子操作されたHEK293細胞においてCa2動員を誘発できなく、これらのアゴニストが、ロバストなGa2シグナルを誘発するためには、GPR35およびGqo5の同時発現が必要であることを示唆している。ここで、Fluo-4Ca2アッセイを使用して、HT29細胞を調査した。結果は、ザプリナストは、HT29細胞において著しいCa2動員を誘発できなかったことを示した図4A。光学バイオセンサーは主に、細胞応答を特徴付けるために表面に結合した電磁波を利用するので、結果として生じた、DMR動的質量再配分とも称される光信号は統合応答であり、経路感受性であるが経路不偏である性質の受容体を通じて媒介される細胞シグナル伝達を反映している。それゆえ、HT29細胞におけるGPR35シグナル伝達のアッセイを行った。その結果は、ザプリナストがHT29細胞において用量依存性で飽和可能DMRシグナルを誘発したことを示した図2Bおよび2C。P-DMR事象を生じるEC50が、137nMであることが分かった。RNAiノックダウンを使用した追跡研究は、GPR35ノックダウンがザプリナストDMRシグナルをある程度抑制したのでデータは図示せず、ザプリナストDMRシグナルがGPR35に特異的であることを示唆する。これらの結果は、ザプリナストは、HT29において外因性GPR35のアゴニストとして機能し、受容体の内在化および飽和可能なDMRシグナルを生じられることを示唆する。しかしながら、ザプリナストは、GPR35a、GPR35b、またはその両方に特異的であることは不明である。予測されるように、遺伝子操作したHEK293細胞において、ザプリナストは、Gqo5またはGPR35のみを発現する細胞において、明白なCa2動員シグナルを生じることができなかったが、GPR35およびGqo5を同時発現する細胞において、極めて明白なCa2シグナルを誘発した。ひとまとめにして考えると、これらの結果は、ザプリナストが実際にGPR35アゴニストであることを示唆する。iii.Epicシステムを使用した化合物ライブラリスクリーニングEpicシステムは、HT29細胞中でザプリナストDMRシグナルを検出できることが分かり、ザプリナストはGPR35に関連しているので、化合物ライブラリをスクリーニングする上で、HT29Epic細胞アッセイを使用することが興味深いであろう。化合物誘発DMRシグナルとザプリナストDMRシグナルとの間の類似性に基づいて、式IからVIに示された全ての化合物を含む多数の潜在的なGPR35アゴニストを発見した。図6Aは、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸が10マイクロモル濃度で、ザプリナストDMRシグナルとほとんど同一のDMRシグナルを生じた実施例を示したのに対し、図6Cは、化合物の関数として、刺激の5分後の各化合物により誘発されたDMRシグナルの振幅に基づいて計算したDMRシグナルを示した。これらの結果は、多くの化合物が、振幅が50pmより大きい、ザプリナストまたはYE210誘発DMRシグナルいずれかと類似のDMRシグナルを誘発したことを示した図6C。アゴニズム活性を示したこれらの化合物のほとんど全てが、ザプリナストによる連続刺激に応答してHT29細胞の脱感作を生じられることも分かり一例が、図6BおよびDに示されている、これの化合物がGPR35特異的アゴニストとして働くことを示唆する。iv.本開示としての式IからVIの化合物の代表的な化合物はGPR35アゴニストであるEpic細胞アッセイスクリーニングにより同定されたこれらの化合物をさらに特徴付けるために、いくつかのアッセイを使用した。一例が図3に要約されている。共焦点像は、ザプリナストと同様に、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸が受容体の内在化を生じたことを示したが図3B、細胞表面にはいくらかのGPR35受容体が残っている図3A。6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸は、165nMのEC50で、用量依存性の飽和可能なDMRシグナルも誘発した図3Cおよび図3D。RNAiノックダウン研究も、GPR35のRNAiノックダウンにより、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸のDMRシグナルがある程度減衰されたことを示した。遺伝子操作されたHEK293細胞において、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸がザプリナストと同様に挙動することが分かった-6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸は、Gqo5またはGPR35のみを発現する細胞において、明白なCa2動員シグナルを生じることができなかったが、GPR35およびGqo5を同時発現する細胞において、極めて明白なCa2シグナルを誘発した図5C。ひとまとめにして考えると、これらの結果は、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸も潜在的なGPR35アゴニストとして働くことを示唆する。v.HT29細胞におけるGPR35シグナル伝達はG1213-ROCK経路に関連しているGPR35のシグナル伝達経路は、特にHT29細胞において、現在、大部分は未知である。CHO-K1細胞およびHEK293細胞などの遺伝子操作された細胞において、受容体のみが発現された場合、発現されたGPR35が、Ca2動員を誘発できないことが分かった。受容体が一度活性化されたら、Ca2動員を生じるためには、GPR35および雑多なGタンパク質Gqo5の両方による細胞の同時トランスフェクションが必要であることが分かった。天然のHT29細胞において、ザプリナストまたは6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸によるGPR35の活性化は、検出可能なCa2シグナルを生じられないことも分かった図4A。同じことが、Gqo5またはGPR35のみを発現する遺伝子操作されたHEK293細胞においても当てはまった図5。面白いことに、Epic細胞アッセイは、ザプリナストDMRシグナルは、ホスホリパーゼC阻害剤U73122、またはコレラ毒素CTX、または百日咳毒素PTXいずれかによるHT29細胞の前処理に無感応であることも示したそれぞれ、図4B~D。PLCは、Gq経路の下流であるが、Ca2動員の上流の標的である;U73122によりザプリナストDMRシグナルを調節できないことは、ザプリナストシグナルが大部分はGq経路によるものではないことを示唆する。CTXは、Gsシグナル伝達経路を絶つことが知られている;CTXがザプリナストDMRシグナルを減衰できないことは、ザプリナストシグナルがGs経路によるものではないことを示唆する。ザプリナストも、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸も、Gs経路の従来のセカンドメッセンジャー読出しである細胞内cAMP濃度の増加を生じられなかったという観察が一致した。同様に、Gi経路キラーPTXも、ザプリナストDMRにほとんど影響がなかった。ザプリナストも、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸も、Giシグナル伝達の従来のセカンドメッセンジャー読出しである、フォルスコリン同時刺激HT29細胞における細胞内cAMP濃度の抑制を生じられなかったという観察も、このことに矛盾しない。ひとまとめにして考えると、これらの結果は、GPR35が、特別な経路を通じてシグナル伝達を媒介することを示唆する。面白いことに、アクチンフィラメント破壊剤であるサイトカラシンDが、ザプリナストDMRシグナルを完全に遮断できることが分かり、ROCK阻害剤のY27632がザプリナストシグナルをある程度減衰させた図4Eおよび図4F。これらの結果は、GPR35が、G1213-ROCK経路を通じて、シグナル伝達を優先的に媒介するであろうことを示唆する。同様に、本開示により発見されたGPR35アゴニストである6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸も、HT29細胞においてCa2シグナルを生じられないことも分かった。HT29中の6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸DMRは、PCL素材剤U73122、CTX、またはPTXに対して無感応であることが分かった。しかしながら、6-ブロモ-3-メチルチエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸DMRは、サイトカラシンDにより遮断され、Y27632によってある程度減衰された。ひとまとめにして考えると、これらの結果は、GPR35が、主にG1213-ROCK経路を通じて、シグナル伝達を媒介することを示唆する。B.実施例21.材料および方法i.材料ザプリナストは、BioMolInternationalInc.ペンシルベニア州、プリマスミーティング所在から得た。細胞培養に適合したEpic384バイオセンサーマイクロプレートは、コーニング社ニューヨーク州、コーニング所在から得た。HEK293細胞およびHT-29細胞は、AmericanTypeCellCultureバージニア州、マナッサス所在から得た。細胞培養培地は以下のとおりであった:110のウシ胎仔血清FBS、4.5g/リットルのグルコース、2mMのグルタミン、およびHEK293の抗生物質が補われたイーグル培地MEM;および210のFBS、4.5g/リットルのグルコース、2mMのグルタミン、およびヒト結腸直腸腺癌HT29の抗生物質が補われたマッコイ5A改変培地。HEKhERG安定細胞株HEK-hERGおよびCHOhERG安定細胞株CHO-hERGの両方とも、Sun等JBiolChem20062815877にしたがって維持した。細胞を、毎週1~2回、継代培養し、15回未満で継代培養された細胞を全ての実験に使用した。ii.カルシウムフラックスアッセイFluo-4DirectCalciumAssayKitは、Invitrogenスターターパック、カタログ番号F10471から購入した。HEK293細胞15000細胞/ウェルおよびHT29細胞30000細胞/ウェルをポリD-リシン被覆384ウェルプレートコーニング社、カタログ番号3845に播種し、その細胞を37°Cで一晩培養した。翌日、Ca2フラックスアッセイを、製造業者の使用説明書にしたがって行い、蛍光比340nm/380nmをFDSS創薬スクリーニングシステム、浜松ホトニクス株式会社、日本国で測定した。化合物を、Ca2アッセイ緩衝液中で10倍株最終濃度10μMとして調製した。96ウェルプレートコーニング社、カタログ番号3664内で、一過性トランスフェクションされた細胞に関するCa2フラックスアッセイを行った。HEK293細胞25000細胞/ウェルを1日目に播種した。細胞を2日目に、LipofectamineLTXInvitrogenを使用して、myc-GPR35またはHA-Gqo5いずれかでトランスフェクションしたか、または両方のプラスミドmyc-GPR35/HA-Gqo5のDNA比2:1で同時トランスフェクションした。トランスフェクションから24時間後に、Ca2フラックスアッセイを行った。iii.HA-Gqo5プラスミドのクローニングヒトGqcDNAプラスミドをMissouriSTcDNAResourceCenterwwwcDNAorgから購入した。HA-タグを、PCRによりヒトGqcDNAのN末端に挿入したJTakasakiTSaitoMTaniguchiTKawasakiYMoritaniKHayashiandMKoboriANovelGaq11selectiveInhibitorJBiolChem2794743847445。最後の5つのアミノ酸を、PCTによりGCGLYと交換して、HA-Gqo5プラスミドを作製したBRConklinZFarfelKDLustigDJuliusandHRBourneSubstitutionofthreeaminoacidsswitchesreceptorspecificityofGqtothatofGiNature1993363274276。次いで、発現ベクターpcDNA3.1中にこのGqo5cDNAをサブクローニングした。iv.HT29細胞およびトランスフェクションされたHEK293細胞を使用したウェスタンブロットHT29細胞サンプル当たり107の細胞を収穫し、プロテアーゼ阻害剤カクテルRocheを含む1のNP40溶解緩衝液150mMのNaCl、25mMのトリス、1のNP40、pH7.5中で溶解させた。タンパク質を15SDSゲル上で分離した。膜を、一晩4°Cでウサギ抗-GPR351:1000Abcam、Ab76217でブロットし、次いで、30分間に亘り、二次抗体である、HRP標識ヤギ抗ウサギまたはウマ抗ヤギ抗体1:20000で希釈でブロットした。FujifilmLuminescentImageAnalyzerLAS3000Fujifilm、ニューヨーク州、バルハラ所在でECLプラスキットGEHealthcareを使用して、ウェスタンブロットを展開させた。v.cAMPアッセイ384ウェルプレートBDBioscience、カタログ番号354660HEK293については10000細胞/ウェル、HT29については20000細胞/ウェル内に細胞を平板培養した。細胞を一晩、完全増殖培地内で培養した。翌日、製造業者の使用説明書Promega、カタログ番号V1502にしたがって、cAMP-Gloアッセイを行った。細胞を、溶解緩衝液を添加する前に、30分間に亘り、0.5μMまたは5μMのフォルスコリンを含む誘導緩衝液または含まない誘導緩衝液中で20μMの化合物と共にインキュベーションした。TecanSafireIIリーダーを使用して、蛍光を測定した。vi.免疫蛍光共焦点イメージングHT29細胞を8ウェルチャンバースライド10,000細胞/ウェル上で平板培養し、24時間に亘り37°Cでインキュベーションした。翌日、細胞を15分間に亘り1×PBS内の4ホルムアルデヒドで固定し、その後、1×PBS中に4のヤギ血清、0.1のBSA、0.1のトリトンX-100を含有する緩衝液中で2時間に亘りブロッキングし、透過化処理した。PBSによる5分間の洗浄後、固定細胞を、24時間に亘り3BSA/PBS緩衝液中において一次抗体抗-GPR35Abcam1:300と共にインキュベーションし、その後、室温で1時間に亘り3BSA/PBS緩衝液中において二次抗体AlexaFluor登録商標488ヤギ抗ウサギIgGHLInvitrogen1:250と共にインキュベーションした。最後に、細胞をPBSで一度洗浄し、1.5mmの厚いガラスカバースリップで密封した。イメージングまで、乾燥させたスライドを4°Cで貯蔵した。共焦点イメージングは、Zeiss共焦点顕微鏡Axiovert40で行った。GPR35内在化研究については、細胞を24時間に亘り37°Cでインキュベーションした後、その細胞を、固定する前に、1時間に亘り37°CでGPR35の異なるリガンドで処理したザプリナスト、10μM;ニフルム酸、20μM;YE210、20μM;タルニフルメート、20μM;ジクロフェナク、20μM;フロセミド、20μM。MacBiophotonicsImageJソフトウェアhttpwwwmacbiophotonicscadownloadshtmを使用して、共焦点画像を解析した。vii.その場でのEpicプレート上でのGPR35のRNAiノックダウンHT29細胞におけるGPR35ノックダウンを、ヒトGPR35mRNAを標的とした一過性トランスフェクションされた小ヘアピンshRNAにより、384ウェルEpicプレート上で行った。HT29細胞を1日目に20,000細胞/ウェルで播種した。2日目に、細胞を、製造業者の使用説明書にしたがって、EffecteneQiagenを使用して、GPR35を標的とするプラスミドDNApGFP-V-RS-shRNAで一過性トランスフェクションした。細胞を3日目に洗浄し、トランスフェクションの48時間後である4日目に、Epic細胞アッセイを行った。viii.光学バイオセンサーシステムおよび細胞アッセイラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイ全細胞検出に、Epicベータ版の波長検波システムコーニング社、ニューヨーク州、コーニングを使用した。このシステムは、温度制御ユニット、光学検出ユニット、およびロボット式搭載型液体取扱ユニットからなる。この検出ユニットは、集積光ファイバに重点を置き、約15秒の間隔で細胞応答の速度測定が可能である。また、Epicリーダーシステムに液体取扱アクセサリが取り付けられた、Epic工業システムも使用した。RWGバイオセンサーは、センサー表面近くの局所屈折率の微小変化を検出することができる。細胞内の局所屈折率は、生物量例えば、タンパク質、分子複合体の密度とその分布の関数であるので、バイオセンサーは、天然細胞におけるリガンド誘発動的質量再配分を非侵襲的に検出するためにエバネッセント波を利用する。エバネッセント波は、細胞中に達し、距離で指数関数的に減少し、約150nmの特徴的な検出容積をもたらし、受容体活性化を通じて媒介される光学応答が、エバネッセント波がサンプリングされている細胞の部分について平均を表すだけであることを示す。受容体活性化の下流の多くの細胞事象の合算が、リガンド誘発DMRの反応速度と振幅を決定する。バイオセンサー細胞アッセイについて、細胞は、概して、バイオセンサーマイクロプレート中の50μlの対応する培養培地中に懸濁された3から15継代でウェル当たり約1から2×104の細胞を使用して増殖させ、約1日に亘り空気/5のCO2下37°Cで培養した。アッセイの時点で全ての細胞の培養密度は約95から100であった。分子溶液を、貯蔵した濃縮溶液をHBSS1×ハンクス平衡塩溶液に20mMのHEPES、pH7.1を添加で希釈することにより調製し、384ウェルのポリプロピレン分子貯蔵プレートに移して、分子源プレートを調製した。二段階アッセイを行う場合、分子源プレートとマーカー源プレートの両方を別々に作製した。並行して、細胞をHBSSで2回洗浄し、30μlのHBSS中に保持して、細胞アッセイプレートを調製した。次いで、細胞アッセイプレートおよび分子源プレートとマーカー源プレートの両方を前記リーダーシステムの槽内でインキュベーションした。約1時間のインキュベーション後、細胞アッセイマイクロプレート中の全てのバイオセンサーのベースライン波長を記録し、ゼロに正規化した。その後、ベースラインを確立し、細胞が定常状態に到達したことを確実にするために、2から10分間の連続記録を行った。次いで、搭載型液体取扱機を使用して、10μlのマーカー溶液を細胞アッセイプレートにピペットで採取することによって、細胞応答を誘発させた。分子のマーカー誘発応答への影響を研究するために、所定の用量一般にEC80またはEC100でのマーカーによる二次刺激を適用した。二次刺激の直前に、マイクロプレート中の全てのバイオセンサーの共鳴波長を再び正規化して、第2のベースラインを確立した。2つの刺激は、通常、約1時間隔てた。全ての研究は、制御温度28°Cで行った。各々が少なくとも3回反復した、少なくとも2つの独立した組の実験を行った。アッセイの変動係数が10未満であることが分かった。ix.同時免疫沈降およびウェスタンブロッティングT175フラスコ内にHEK-hERG細胞を播種した。製造業者の使用説明書にしたがって、LipofectamineLTXInvitrogenを使用して、これらの細胞にmyc-GPR35をトランスフェクションした。24時間のトランスフェクション後、同時免疫沈降Co-IP研究にその細胞を使用した。Co-PI研究のために、HT29細胞サンプル当たり107の細胞を収穫し、プロテアーゼ阻害剤カクテルRocheを含む1のNP40溶解緩衝液150mMのNaCl、25mMのトリス、1のNP40、pH7.5中で溶解させた。細胞溶解産物を、タンパク質Aセファロースが結合したウサギ抗-GPR35Abcam、Ab76217またはウサギ抗-HERGAlomoneLabs、APC-062いずれかで、免疫沈降させた。タンパク質を15SDSゲル上で分離し、次いで、膜に移した。この膜を、4°Cで一晩、ウサギ抗-GPR351:1000でブロットし、次いで、30分間に亘り、二次抗体のHRP標識ヤギ抗ウサギまたはウマ抗ヤギ抗体1:20000で希釈でブロットした。FujifilmLuminescentImageAnalyzerLAS3000Fujifilm、ニューヨーク州、バルハラ所在でECLプラスキットGEHealthcareを使用して、ウェスタンブロットを展開させた。x.IonWorksを使用した自動化パッチクランプ記録HERGチャンネルを安定して発現するCHO-K1細胞を、約70の培養密度となるまで、T175フラスコ中で培養した。この細胞をPBSで2回洗浄し、次いで、2.5mlの0.25トリプシン/EDTAを2.5mlのPBSと混合し、このT175フラスコに加えた。細胞を、37°Cで、希釈したトリプシン/EDTA溶液と共に約2分間インキュベーションし、次いで、室温で約3分間連続してインキュベーションした。20mlの新たな培地を加えて、細胞を懸濁させ、50mlの管に移した。細胞を5分間に亘り750rpmで遠心分離した。余計な培地を除去し、6mlの外部緩衝液137mMのNaCl、4mMのKCl、1.8mMのCaCl2、1mMのMgCl2、10mMのHEPES、10mMのグルコース、pH7.4内に細胞を再度懸濁させた。次いで、細胞をさらに5分間に亘り450rpmで遠心分離した。最後に、細胞を4mlの外部緩衝液中に再度懸濁させ、血球計を使用して、細胞数を計数した。細胞懸濁液を外部緩衝液で2.5×106細胞/mlまで希釈した。4mlの再懸濁細胞を、IonWorks内の細胞貯留部に加えた。使用した内部溶液は、40mMのKCl、100mMのグルコン酸カリウム、3.2mMのMgCl2、2mMのCaCl2、5mMのHEPES、pH2.5KOHにより調節したを含有する。200μlのDMSO株からのアンフォテリシンBを65mlの内部溶液に加え、十分に混合して、パッチプレート上の細胞の内部への電気的アクセスを達成した。化合物を10mMのDMSO株から調製し、外部緩衝液中で希釈して、3×化合物溶液を製造した。この3×化合物溶液の60μ/ウェルを384ウェルプレートのA、B、CおよびD列に移した。報告されたHERGチャンネル活性化剤であるPD11857Sigma-Aldrichを活性化剤陽性対照として使用した最終濃度30および50μM。HERG遮断薬ドフェチリドFisherScientificを遮断薬陽性対照として使用した最終濃度100nM。IonWorksQuattroPatchPlatePPCカタログ番号9000-0902、MolecularDevices内の最終的なDMSO濃度は0.5であった。最終的な化合物濃度は50μMであった。各化合物を、1つのPPCプレート上の4つのウェルに加えた。HERG電流をIonWorksQuattroMolecularDevicesで記録した。HERG電流を記録するために、細胞を最初に-80mVで保ち、次いで、40mVで5秒間、脱分極させて、そのチャンネルを活性化させた。その後に-35mVに戻る最中に、末尾電流を測定した。IonWorksQuattro登録商標SystemSoftwareバージョン2.0.4.4を使用してデータ分析を行った。50MΩ未満のシール抵抗または0.1nA未満のHERG末尾電流を有するウェルからのデータは除いた。hERG末尾電流比後/前-化合物が平均DMSO対照の平均2SDより大きかった場合、活性化剤のヒットを選択した。hERG末尾電流比後/前-化合物が平均DMSO対照の平均-2SDより小さかった場合、阻害剤のヒットを選択した。2.結果i.HT29細胞は、GPR35およびhERGチャンネルの両方を発現するSABiosciencesからのGPR35プライマーを使用したリアルタイムPCRは、HT29は、少なくともmRNAレベルで、比較的高いレベルのGPR35を発現することを示した。その後のウェスタンブロッティングは、HT29溶解産物が、その分子量が、それぞれ、GPR35aおよびGPR35bの両方の予測値に近いGPR35アイソフォームを含有することを示した図1aおよび図7A。HT29は、hERGイオンチャンネルを発現することが公知である。ウェスタンブロッティングの研究は、HT29がhERG1aおよびhERG1bの両方を発現することを示す図7B。共焦点イメージングは、GPR35が細胞表面原形質膜に主に位置していることをさらに示した図1b。面白いことに、抗GPR35抗体を使用したGPR35の染色パターンは、細胞表面で均一に分布する代わりに、脂質ラフトなどのあるマイクロドメイン内に主に位置するおよび/または他の受容体と複合体を形成することを示す。それにもかかわらず、これらの結果は、HT29は、mRNAレベルとタンパク質レベルの両方で、比較的高いレベルのGPR35aおよびGPR35bを発現し;GPR35は、細胞表面に主に位置していることを示す。ii.GPR35は、HT29細胞においてhERGイオンチャンネルと物理的に相互作用する同時免疫沈降Co-IPアッセイは、受容体の対の間の物理的相互作用を判定するための最も基準になる検査として見られてきた。図7に示されるように、抗-GPR35カラムは、hERG1bおよびGPR35a/bの両方を特異的に引き下げることができる。同様に、抗-hERGカラムは、hERG1a/bおよびGPR35a/bの両方を特異的に引き下げることができる。これらの結果は、HT29において、hERG1bは、GPR35aおよび/またはGPR35bに物理的に結合してシグナル伝達複合体となることを示す。iii.GPR35は、遺伝子操作されたHEK293細胞においてもhERGイオンチャンネルと物理的に相互作用するGPR35/hERGシグナル伝達複合体の特異性をさらに判定するために、HEK-hERG安定細胞にmyc-タグ付きGPR35で一過性トランスフェクションした。安定株は、比較的高いレベルのhERG1を発現する。GPR35およびhERG1の間の潜在的な相互作用を特徴付けるために、同時免疫沈降Co-IPアッセイをさらに用いた。その結果は、抗-mycカラムが、hERG1bおよびGPR35の両方を特異的に引き下げられることを示したデータは図示せず。同様に、抗-hERGカラムは、hERG1bおよびGPR35の両方を特異的に引き下げることができるデータは図示せず。これらの結果は、遺伝子操作されたHEK細胞において、hERG1bはGPR35と物理的に結合していることを示す。iv.GPR35/hERGシグナル伝達複合体を特徴付けるためのハイコンテントイメージアッセイ全てのGPCRにほぼ共通するのは、アゴニスト誘発受容体内在化プロセスである。それゆえ、既知GPR35アゴニストであるザプリナストの受容体内在化を生じる能力を調査した。ザプリナストは、既知cGMP依存性ホスホジエステラーゼ阻害剤であり、GPR35アゴニストでもある。図2Aに示されるように、ザプリナストによる刺激の30分後のHT29細胞の共焦点イメージングからも明らかなように、ザプリナストは10マイクロモル濃度で、実際に、受容体の内在化を生じた。ドットは、受容体が内在化され、エンドソーム粒子と結合していることを示すのに対し、青色は核DAPI染色を示す。これらの結果は、GPR35は、一度活性化されると、内在化を経ることができ、GPR35/hERG複合体を特徴付けることために、ハイコンテントイメージングまたはスクリーニングアッセイを使用することができる。v.GPR35/hERGシグナル伝達複合体を特徴付けるためのラベルフリーバイオセンサーDMRアッセイラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイは、受容体シグナル伝達の非侵襲正の統合手段を提供する。詳しくは、共鳴導波路グレーティングバイオセンサーを含む光学バイオセンサーは、刺激に応答した細胞の動的質量再配分DMRを測定する。これらのバイオセンサー細胞アッセイは、受容体シグナル伝達の経路不偏であるが経路感受性の手段を提供する。GPR35、特にGPR35/hERG複合体のシグナル伝達の大部分が未知であるが、GPR35/hERGシグナル伝達複合体を特徴付けるために、ラベルフリー受容体アッセイを使用することが可能である。その結果は、ザプリナストが、HT29細胞において、用量依存性の飽和可能なDMRシグナルを誘発したことを示した図2Aおよび2B。P-DMR事象を生じるEC50が、137nMであることが分かった。ザプリナストは、2種類の公知のGPR35アゴニストである、ザプリナストおよびNPPBによるその後の刺激に対して、HT29の脱感作を用量依存的に生じた図8。両方のアゴニストはEC100で調査した。これらの結果は、ザプリナストはGPR35アゴニストとして機能し、GPR35/hERGシグナル伝達複合体を調査するために、ラベルフリー細胞アッセイを使用できることを示す。vi.GPR35/hERGシグナル伝達複合体を特徴付けるためのパッチクランプアッセイhERGは電位型イオンチャンネルであるので、自動化パッチクランプアッセイを行った。その結果は、ザプリナストは、CHO-hERG細胞においてhERG活性の非調節因子すなわち、活性化剤でも、阻害剤でもないとして働くことを示した図9。これらの結果は、ザプリナストは、hERGのチャンネル活性を直接的に調節しないことを示す。vii.GPR35/hERGシグナル伝達複合体を特徴付けるためのDMRアッセイEpic細胞アッセイを使用して、ザプリナストが、HEK-293細胞において図10A、並びにHEK-hERG細胞図10Bにおいて、ネットゼロDMRシグナルを誘発することが分かった。ザプリナストは、HEK-hERG細胞において、マロトキシンDMRシグナルにはほとんどまたは全く影響がないことも分かった図10C。マロトキシンは既知hERG活性化剤である。これらの結果は、ザプリナストは、GPR35が提示されない場合、hERGのチャンネル活性およびシグナル伝達を直接的に調節しないことをさらに示す。面白いことに、GPR35およびhERGの両方が内因的に発現されるHT29細胞において、ザプリナストはマロトキシンDMRシグナルをある程度減衰させることができる図11A。その逆もまた当てはまる-マロトキシンは、ザプリナストDMRシグナルをある程度減少させることができる図11B。さらに、マロトキシンDMRは、ザプリナストDMRシグナルとは著しく異なることが分かった。ひとまとめにして考えると、これらの結果は、ザプリナストが、GPR35アゴニスト、GPR35/hERGシグナル伝達複合体アゴニストであるが、直接的なhERG調節因子ではないことを示す。C.実施例31.材料および方法i.材料ザプリナストは、BioMolInternationalInc.ペンシルベニア州、プリマスミーティング所在から得た。細胞培養に適合したEpic384バイオセンサーマイクロプレートは、コーニング社ニューヨーク州、コーニング所在から得た。全てのチルホスチン化合物は、SigmaChemicalCo.ミズーリ州、セントルイス所在から得た。HEK293細胞およびHT29細胞は、AmericanTypeCellCultureバージニア州、マナッサス所在から得た。細胞培養培地は以下のとおりであった:110のウシ胎仔血清FBS、4.5g/リットルのグルコース、2mMのグルタミン、およびHEK293の抗生物質が補われたイーグル培地MEM;および210のFBS、4.5g/リットルのグルコース、2mMのグルタミン、およびヒト結腸直腸腺癌HT29の抗生物質が補われたマッコイ5A改変培地。ii.カルシウムフラックスアッセイFluo-4DirectCalciumAssayKitは、Invitrogenスターターパック、カタログ番号F10471から購入した。HEK293細胞15000細胞/ウェルおよびHT29細胞30000細胞/ウェルを、ポリD-リシン被覆384ウェルプレートコーニング社、カタログ番号3845に播種し、37°Cで一晩培養した。翌日、Ca2フラックスアッセイを、製造業者の使用説明書にしたがって行い、蛍光比340nm/380nmをFDSS創薬スクリーニングシステム、浜松ホトニクス株式会社、日本国で測定した。化合物を、Ca2アッセイ緩衝液中で10倍株最終濃度10μMとして調製した。96ウェルプレートコーニング社、カタログ番号3664内で、一過性トランスフェクションされた細胞に関するCa2フラックスアッセイを行った。HEK293細胞25000細胞/ウェルを1日目に播種した。細胞を2日目に、LipofectamineLTXInvitrogenを使用して、myc-GPR35またはHA-Gqo5いずれかでトランスフェクションしたか、または両方のプラスミドmyc-GPR35/HA-Gqo5のDNA比2:1で同時トランスフェクションした。トランスフェクションから24時間後に、Ca2フラックスアッセイを行った。iii.HA-Gqo5プラスミドのクローニングヒトGqcDNAプラスミドをMissouriSTcDNAResourceCenterwwwcDNAorgから購入した。HA-タグを、PCRによりヒトGqcDNAのN末端に挿入したJTakasakiTSaitoMTaniguchiTKawasakiYMoritaniKHayashiandMKoboriANovelGaq11selectiveInhibitorJBiolChem2794743847445。最後の5つのアミノ酸を、PCTによりGCGLYと交換して、HA-Gqo5プラスミドを作製したBRConklinZFarfelKDLustigDJuliusandHRBourneSubstitutionofthreeaminoacidsswitchesreceptorspecificityofGqtothatofGiNature1993363274276。次いで、発現ベクターpcDNA3.1中にこのGqo5cDNAをサブクローニングした。iv.HT29細胞およびトランスフェクションされたHEK293細胞を使用したウェスタンブロットHT29細胞サンプル当たり107の細胞を収穫し、プロテアーゼ阻害剤カクテルRocheを含む1のNP40溶解緩衝液150mMのNaCl、25mMのトリス、1のNP40、pH7.5中で溶解させた。タンパク質を15SDSゲル上で分離した。膜を、一晩4°Cでウサギ抗-GPR351:1000Abcam、Ab76217でブロットし、次いで、30分間に亘り、二次抗体である、HRP標識ヤギ抗ウサギまたはウマ抗ヤギ抗体1:20000で希釈でブロットした。FujifilmLuminescentImageAnalyzerLAS3000Fujifilm、ニューヨーク州、バルハラ所在でECLプラスキットGEHealthcareを使用して、ウェスタンブロットを展開させた。v.cAMPアッセイ384ウェルプレートBDBioscience、カタログ番号354660HEK293については10000細胞/ウェル、HT29については20000細胞/ウェル内に細胞を平板培養した。細胞を一晩、完全増殖培地内で培養した。翌日、製造業者の使用説明書Promega、カタログ番号V1502にしたがって、cAMP-Gloアッセイを行った。細胞を、溶解緩衝液を添加する前に、30分間に亘り、0.5μMまたは5μMのフォルスコリンを含む誘導緩衝液または含まない誘導緩衝液中で20μMの化合物と共にインキュベーションした。TecanSafireIIリーダーを使用して、蛍光を測定した。vi.免疫蛍光共焦点イメージングHT29細胞を8ウェルチャンバースライド10,000細胞/ウェル上で平板培養し、24時間に亘り37°Cでインキュベーションした。翌日、細胞を15分間に亘り1×PBS内の4ホルムアルデヒドで固定し、その後、1×PBS中に4のヤギ血清、0.1のBSA、0.1のトリトンX-100を含有する緩衝液中で2時間に亘りブロッキングし、透過化処理した。PBSによる5分間の洗浄後、固定細胞を、24時間に亘り3BSA/PBS緩衝液中において一次抗体抗-GPR35Abcam1:300と共にインキュベーションし、その後、室温で1時間に亘り3BSA/PBS緩衝液中において二次抗体AlexaFluor登録商標488ヤギ抗ウサギIgGHLInvitrogen1:250と共にインキュベーションした。最後に、細胞をPBSで一度洗浄し、1.5mmの厚いガラスカバースリップで密封した。イメージングまで、乾燥させたスライドを4°Cで貯蔵した。共焦点イメージングは、Zeiss共焦点顕微鏡Axiovert40で行った。GPR35内在化研究については、細胞を24時間に亘り37°Cでインキュベーションした後、その細胞を、固定する前に、1時間に亘り37°CでGPR35の異なるリガンドで処理したザプリナスト、10μM;ニフルム酸、20μM;YE210、20μM;タルニフルメート、20μM;ジクロフェナク、20μM;フロセミド、20μM。MacBiophotonicsImageJソフトウェアhttpwwwmacbiophotonicscadownloadshtmを使用して、共焦点画像を解析した。vii.その場でのEpicプレート上でのGPR35のRNAiノックダウンHT29細胞におけるGPR35ノックダウンを、ヒトGPR35mRNAを標的とした一過性トランスフェクションされた小ヘアピンshRNAにより、384ウェルEpicプレート上で行った。HT29細胞を1日目に20,000細胞/ウェルで播種した。2日目に、細胞を、製造業者の使用説明書にしたがって、EffecteneQiagenを使用して、GPR35を標的とするプラスミドDNApGFP-V-RS-shRNAで一過性トランスフェクションした。細胞を3日目に洗浄し、トランスフェクションの48時間後である4日目に、Epic細胞アッセイを行った。viii.光学バイオセンサーシステムおよび細胞アッセイラベルフリーバイオセンサー細胞アッセイ全細胞検出に、Epicベータ版の波長検波システムコーニング社、ニューヨーク州、コーニングを使用した。このシステムは、温度制御ユニット、光学検出ユニット、およびロボット式搭載型液体取扱ユニットからなる。この検出ユニットは、集積光ファイバに重点を置き、約15秒の間隔で細胞応答の速度測定が可能である。また、Epicリーダーシステムに液体取扱アクセサリが取り付けられた、Epic工業システムも使用した。RWGバイオセンサーは、センサー表面近くの局所屈折率の微小変化を検出することができる。細胞内の局所屈折率は、生物量例えば、タンパク質、分子複合体の密度とその分布の関数であるので、バイオセンサーは、天然細胞におけるリガンド誘発動的質量再配分を非侵襲的に検出するためにエバネッセント波を利用する。エバネッセント波は、細胞中に達し、距離で指数関数的に減少し、約150nmの特徴的な検出容積をもたらし、受容体活性化を通じて媒介される光学応答が、エバネッセント波がサンプリングされている細胞の部分について平均を表すだけであることを示す。受容体活性化の下流の多くの細胞事象の合算が、リガンド誘発DMRの反応速度と振幅を決定する。バイオセンサー細胞アッセイについて、細胞は、概して、バイオセンサーマイクロプレート中の50μlの対応する培養培地中に懸濁された3から15継代でウェル当たり約1から2×104の細胞を使用して増殖させ、約1日に亘り空気/5のCO2下37°Cで培養した。アッセイの時点で全ての細胞の培養密度は約95から100であった。分子溶液を、貯蔵した濃縮溶液をHBSS1×ハンクス平衡塩溶液に20mMのHEPES、pH7.1を添加で希釈することにより調製し、384ウェルのポリプロピレン分子貯蔵プレートに移して、分子源プレートを調製した。二段階アッセイを行う場合、分子源プレートとマーカー源プレートの両方を別々に作製した。並行して、細胞をHBSSで2回洗浄し、30μlのHBSS中に保持して、細胞アッセイプレートを調製した。次いで、細胞アッセイプレートおよび分子源プレートとマーカー源プレートの両方を前記リーダーシステムの槽内でインキュベーションした。約1時間のインキュベーション後、細胞アッセイマイクロプレート中の全てのバイオセンサーのベースライン波長を記録し、ゼロに正規化した。その後、ベースラインを確立し、細胞が定常状態に到達したことを確実にするために、2から10分間の連続記録を行った。次いで、搭載型液体取扱機を使用して、10μlのマーカー溶液を細胞アッセイプレートにピペットで採取することによって、細胞応答を誘発させた。分子のマーカー誘発応答への影響を研究するために、所定の用量一般にEC80またはEC100でのマーカーによる二次刺激を適用した。二次刺激の直前に、マイクロプレート中の全てのバイオセンサーの共鳴波長を再び正規化して、第2のベースラインを確立した。2つの刺激は、通常、約1時間隔てた。全ての研究は、制御温度28°Cで行った。各々が少なくとも3回反復した、少なくとも2つの独立した組の実験を行った。アッセイの変動係数が10未満であることが分かった。ix.同時免疫沈降およびウェスタンブロッティングT175フラスコ内にHEK-hERG細胞を播種した。製造業者の使用説明書にしたがって、LipofectamineLTXInvitrogenを使用して、これらの細胞にmyc-GPR35をトランスフェクションした。24時間のトランスフェクション後、同時免疫沈降研究にその細胞を使用した。Co-PIアッセイプロトコルを使用した。例えば、HT29細胞サンプル当たり107の細胞を収穫し、プロテアーゼ阻害剤カクテルRocheを含む1のNP40溶解緩衝液150mMのNaCl、25mMのトリス、1のNP40、pH7.5中で溶解させた。細胞溶解産物を、タンパク質Aセファロースが結合したウサギ抗-GPR35Abcam、Ab76217またはウサギ抗-HERGAlomoneLabs、APC-062いずれかで、免疫沈降させた。タンパク質を15SDSゲル上で分離した。膜を、4°Cで一晩、ウサギ抗-GPR351:1000でブロットし、次いで、30分間に亘り、二次抗体のHRP標識ヤギ抗ウサギまたはウマ抗ヤギ抗体1:20000で希釈でブロットした。FujifilmLuminescentImageAnalyzerLAS3000Fujifilm、ニューヨーク州、バルハラ所在でECLプラスキットGEHealthcareを使用して、ウェスタンブロットを展開させた。x.IonWorksを使用した自動化パッチクランプ記録HERGチャンネルを安定して発現するCHO-K1細胞を、約70の培養密度となるまで、T175フラスコ中で培養した。この細胞をPBSで2回洗浄し、次いで、2.5mlの0.25トリプシン/EDTAを2.5mlのPBSと混合し、このT175フラスコに加えた。細胞を、37°Cで、希釈したトリプシン/EDTA溶液と共に約2分間インキュベーションし、次いで、室温で約3分間連続してインキュベーションした。20mlの新たな培地を加えて、細胞を懸濁させ、50mlの管に移した。細胞を5分間に亘り750rpmで遠心分離した。余計な培地を除去し、6mlの外部緩衝液137mMのNaCl、4mMのKCl、1.8mMのCaCl2、1mMのMgCl2、10mMのHEPES、10mMのグルコース、pH7.4内に細胞を再度懸濁させた。次いで、細胞をさらに5分間に亘り450rpmで遠心分離した。最後に、細胞を4mlの外部緩衝液中に再度懸濁させ、血球計を使用して、細胞数を計数した。細胞懸濁液を外部緩衝液で2.5×106細胞/mlまで希釈した。4mlの再懸濁細胞を、IonWorks内の細胞貯留部に加えた。使用した内部溶液は、40mMのKCl、100mMのグルコン酸カリウム、3.2mMのMgCl2、2mMのCaCl2、5mMのHEPES、pH2.5KOHにより調節したを含有する。200μlのDMSO株からのアンフォテリシンBを65mlの内部溶液に加え、十分に混合して、パッチプレート上の細胞の内部への電気的アクセスを達成した。化合物を10mMのDMSO株から調製し、外部緩衝液中で希釈して、3×化合物溶液を製造した。この3×化合物溶液の60μ/ウェルを384ウェルプレートのA、B、CおよびD列に移した。報告されたHERGチャンネル活性化剤であるPD11857Sigma-Aldrichを活性化剤陽性対照として使用した最終濃度30および50μM。HERG遮断薬ドフェチリドFisherScientificを遮断薬陽性対照として使用した最終濃度100nM。IonWorksQuattroPatchPlatePPCカタログ番号9000-0902、MolecularDevices内の最終的なDMSO濃度は0.5であった。最終的な化合物濃度は50μMであった。各化合物を、1つのPPCプレート上の4つのウェルに加えた。HERG電流をIonWorksQuattroMolecularDevicesで記録した。HERG電流を記録するために、細胞を最初に-80mVで保ち、次いで、40mVで5秒間、脱分極させて、そのチャンネルを活性化させた。その後に-35mVに戻る最中に、末尾電流を測定した。IonWorksQuattro登録商標SystemSoftwareバージョン2.0.4.4を使用してデータ分析を行った。50MΩ未満のシール抵抗または0.1nA未満のHERG末尾電流を有するウェルからのデータは除いた。hERG末尾電流比後/前-化合物が平均DMSO対照の平均2SDより大きかった場合、活性化剤のヒットを選択した。hERG末尾電流比後/前-化合物が平均DMSO対照の平均-2SDより小さかった場合、阻害剤のヒットを選択した。2.結果i.化学合成および特徴付け次の化学物質を合成した:1.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[4-n-ブチルフェニル]-2,5-ジヒドロフラン2.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[2,4-ジフルオロフェニル]-2,5-ジヒドロフラン3.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-スピロ-シクロヘキシル-2,5-ジヒドロフラン4.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-フェニル-5-ペルフルオロメチル-2,5-ジヒドロフラン5.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4-メチル-5-スピロ-フルオレニリデン-2,5-ジヒドロフラン6.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[2,3,4-トリクロロフェニル]-2,5-ジヒドロフラン7.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[3,4-ジクロロフェニル]-2,5-ジヒドロフラン8.2-シアノ-2-1-アミノ-2,2-ジシアノビニルメチレン-3-シアノ-4,5,5-トリメチル-2,5-ジヒドロフラン9.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5-ジメチル-5-[23456-ペンタフルオロフェニル]-2,5-ジヒドロフラン10.2-ジシアノメチレン-3-シアノ-4,5,5-トリメチル-2,5-ジヒドロフラン11.チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸12.3-メチル-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸13.3-メチル-6-ブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸14.6-へキシル-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸15.3,6-ジブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-ウンデカノン16.3-n-ウンデシル-6-ブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸17.3-n-トリデシル-6-ブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸18.3-n-デシル-6-ブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸19.3-n-ペンタデシル-6-ブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸20.3-n-テトラデシル-6-ブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸21.3-n-オクチル-6-ブロモ-チエノ[3,2-b]チオフェン-2-カルボン酸22.5-メチル-ジチエノ[3,2-b:2,3-d]チオフェン-2-カルボン酸23.ジエチルジチエノ[3,2-b:2,3-d]チオフェン-2,6-ジカルボキシレート24.N,N-ビス2-ヒドロキシエチル-4-[2-チオフェン-2-イルビニル]アニリン25.メチル-5-{2-[4-N-メチル、N-2-ヒドロキシエチル-アミノフェニル]エテニル}-チオフェン-2-ホルメート26.5-{2-[4-N-メチル、N-2-ヒドロキシエチル-アミノフェニル]エテニル}-チオフェン-2-ホルメートリチウム塩27.2,2-ビチオフェン-5-メタノール28.5-ヒドロキシメチル-5-ホルミル-2,2-ビチオフェン29.5-{2-[4-[ビス2-ヒドロキシエチルアミノ]フェニル]エテニル]}-2,2-ビチオフェン-5-ホルメートナトリウム塩30.2,2-ビチオフェン-5-カルボキサルデヒド化合物1、2、3、4、5、および7の合成および特徴付けは、先の特許出願米国仮特許出願第61/291,742号明細書。FangYHeMQSunHFerrieAMTranEWeiYDengHNiuWMoleculesrelatedhERGionchannelsandtheusethereof2009年12月31日出願;参照することによってその全体が援用されるに詳述されている。化学物質13、14、16、17、18、19、20、21、および22の合成および特徴付けは、先の特許出願米国仮特許出願第61/291747号明細書。FangYHeMSunHFerrieAMTranEDengHNiuWandWeiYEGFRVEGFRdualmodulatorsandmethodsofusing2009年12月31日出願;参照することによってその全体が援用されるに詳述されている。化合物23ジエチルジチエノ[3,2-b:2,3-d]チオフェン-2,6-ジカルボキシレートは、文献Freyら、ChemicalCommunications20022024242425に従って合成した。化合物24N,N-ビス2-ヒドロキシエチル-4-[2-チオフェン-2-イルビニル]アニリンは、文献Jenら、欧州特許出願公開第647874号、1995年に従って合成した。化合物285-ヒドロキシメチル-5-ホルミル-2,2-ビチオフェンは、文献Changら、米国特許第5,508,440号明細書1996年に従って合成した。ii.HT29細胞は、GPR35およびhERGチャンネルの両方を発現するGタンパク質共役受容体GPCRは、細胞の表面タンパク質の最大の群の内の1つを構成し、現行の治療薬および開発中の薬物の主要標的を表す。多くのcDNAクローンは、確立されたGPCRに対して、特に膜貫通領域において、高い配列類似性に基づいてGPCRをコードすることが予測される。そのようなオーファンGPCRについて、アゴニスト、アンタゴニスト、および情報伝達経路の特定は、新薬標的の発見のための業界による主要な努力を表す。ヒトゲノムDNAスクリーニング中に最初に発見されたオーファンGPCRであるGPR35は、プリン作動性P2Y受容体、ニコチン酸受容体HM74、リゾホスファチジン酸受容体GPR23、およびオーファン受容体であるGPR55との配列相同性が限られている。最高レベルのGPR35mRNAが免疫組織および胃腸組織で見つかり、肺組織と神経組織では発現が限られていた。GPR35の初期の記述後に今ではGPR35aと示される、オクムラ等は、N末端で追加の31のアミノ酸をコードしたヒト胃癌cDNAライブラリからスプライスバリアントGPR35bを単離したOkumuraetalCancerSci95131135。GPR35aおよびGPR35bのmRNAレベルは、胃癌組織中で発現上昇され、悪性転換における両方のスプライスバリアントの役割を示唆した。しかしながら、ヒト結腸癌細胞におけるGPR35の発現は調査されていなかった。SABiosciencesからのGPR35プライマーを使用したリアルタイムPCRは、HT29細胞は、少なくともmRNAレベルで、比較的高いレベルのGPR35を発現することを示したデータは図示せず。その後のウェスタンブロッティングは、HT29細胞溶解産物が、その分子量が、それぞれ、GPR35aおよびGPR35bの両方の予測値に近いGPR35アイソフォームを含有することを示した図1aおよび図7A。HT29は、hERGイオンチャンネルを発現することが公知である。ウェスタンブロッティングの研究は、HT29がhERG1aおよびhERG1bの両方を発現することを示す図7B。HT29は、ヒト結腸腺癌II型細胞株である。共焦点イメージングは、GPR35が細胞表面原形質膜に主に位置していることをさらに示した図1b。面白いことに、抗GPR35抗体を使用したGPR35の染色パターンは、細胞表面で均一に分布する代わりに、あるマイクロドメイン内、ことによると脂質ラフト内に主に位置するおよび/または他の受容体と複合体を形成することを示唆している。それにもかかわらず、これらの結果は、HT29は、mRNAレベルとタンパク質レベルの両方で、比較的高いレベルのGPR35aおよびGPR35bを発現し;GPR35は、細胞表面に主に位置していることを示唆している。iii.GPR35は、HT29細胞においてhERGイオンチャンネルと物理的に相互作用する同時免疫沈降Co-IPアッセイは、受容体の対の間の物理的相互作用を判定するための最も基準になる検査として見られてきた。図7に示されるように、抗-GPR35カラムは、hERG1bおよびGPR35a/bの両方を特異的に引き下げることができる。同様に、抗-hERGカラムは、hERG1a/bおよびGPR35a/bの両方を特異的に引き下げることができる。これらの結果は、HT29において、hERG1bは、GPR35aおよび/またはGPR35bに物理的に結合してシグナル伝達複合体となることを示す。iv.GPR35は、遺伝子操作されたHEK293細胞においてもhERGイオンチャンネルと物理的に相互作用するGPR35/hERGシグナル伝達複合体の特異性をさらに判定するために、HEK-hERG安定細胞にmyc-タグ付きGPR35で一過性トランスフェクションした。安定株は、比較的高いレベルのhERG1を発現する。GPR35およびhERG1の間の潜在的な相互作用を特徴付けるために、同時免疫沈降Co-IPアッセイをさらに用いた。その結果は、抗-mycカラムが、hERG1bおよびGPR35の両方を特異的に引き下げられることを示したデータは図示せず。同様に、抗-hERGカラムは、hERG1bおよびGPR35の両方を特異的に引き下げることができるデータは図示せず。これらの結果は、遺伝子操作されたHEK細胞において、hERG1bはGPR35と物理的に結合していることを示す。v.GPR35アンタゴニストの同定利用できる直接結合アッセイがないので、分子のGPR35アゴニズム活性を判定するために、3種類の異なる細胞アッセイを使用した。アッセイは:1Gqo5を同時発現するものとしないHEK-GPR35などの遺伝子操作された細胞におけるCa2動員アッセイ。Gqo5は、その活性化によりCa2動員をもたらすGタンパク質であり、このGqo5タンパク質は、細胞中で発現されたときに非Gq共役受容体のアゴニスト誘発活性化により活性化させることができる。GPR35は非Gq共役受容体であると考えられるので、GPR35アゴニストが誘発したCa2動員シグナルを検出するために、Gqo5の同時発現が必要である。2受容体内在化アッセイ。受容体内在化は、迅速であり、ほとんど全てのGPCRにとって普遍的である。3共鳴導波路グレーティングバイオセンサーなどの光学バイオセンサーにより見込まれる、ラベルフリー動的質量再配分DMRアッセイ。DMRシグナルは、刺激の際に積算された細胞応答を表すので、DMRアッセイは、積算式細胞アッセイである。DMRアッセイは、経路感受性であるが、経路不偏である測定のための所定の経路が必須ではないことを意味する。Ca2動員アッセイは、既知GPR35アゴニストであるザプリナスト10マイクロモル濃度は、GPR35およびGqo5の両方を発現する遺伝子操作されたHEK293細胞において、検出可能なCa2動員シグナルを誘発するが、親細胞、もしくはGPR35またはGqo5のいずれかを発現する遺伝子操作された細胞のいずれにおいても、誘発しなかったことを示した図14。さらに、GPR35を内因的に発現する天然のHT29細胞において、ザプリナストは、どのような検出可能なCa2動員シグナルも生じなかった図4A。これらのデータは、ザプリナストがGPR35特異的アゴニストであり、GPR35は実際に、Gq共役受容体ではない。HEK-GPR35-Gqo5細胞に関するCa2動員アッセイも、以下の化合物が活性であることを示した:ジフルニサル、フルフェナム酸、フルンキシン、フロセミド、ニフルム酸、NPPB、トルフェナム酸、ザプリナスト、DNQX。受容体内在化アッセイは、ザプリナスト400ナノモル濃度が、未刺激の細胞と比べて、細胞原形質膜関連蛍光の消失、および細胞内蛍光小胞の出現により示されるように、HT29細胞中の著しい受容体内在化をもたらすことを示した図2A。ここで、細胞を、30分間に亘りザプリナストの有無で刺激し、固定し、透過化し、抗GPR35抗体および蛍光二次抗体で染色した後に、共焦点イメージングが得られる。DMRアッセイは、ザプリナストが、用量依存性の飽和可能なDMRシグナルを誘発し、P-DMR事象を生じるそのEC50が137nMであることを示した図2。GPR35ノックダウンは、ザプリナストDMRシグナルをある程度抑制したので、RNAiノックダウンを使用した追跡研究は、ザプリナストDMRシグナルがGPR35に特異的であることを示すデータは図示せず。これらの結果は、ザプリナストが、HT29において内因性GPR35のアゴニストとして働くことを示す。vi.hERG調節因子の同定hERG調節因子を特定し、確認するために、2種類の異なる細胞アッセイを使用した。第1に、遺伝子操作されたCHO細胞CHO-hERGにおいてhERG電流を検出するために、自動化パッチクランプを使用した。hERGは、電位型イオンチャンネルである。その結果は、ザプリナストは、ザプリナストの不在下と存在下で得られた末尾電流に基づいて、CHO-hERG細胞においてhERG活性の非調節因子すなわち、活性化剤でも、阻害剤でもないとして働くことを示した図9。末尾電流値は、前化合物電流で割った後化合物電流の比であった。パッチのシール抵抗に関連する電流の絶対値は、ウェル毎に異なるので、この値は、試験した化合物によるhERG調節により予測的である。これらの結果は、ザプリナストは、hERGのチャンネル活性を直接的に調節しないことを示す。第2に、hERG活性化剤を検出するために、DMRアッセイを使用した。既知hERG活性化剤であるマロトキシンにより、HT29細胞において用量依存性の飽和可能なDMRシグナルが生じた図15。マロトキシンDMRシグナルは、GPR35アゴニストであるザプリナストのDMRシグナルとは異なる。特異性を確認するために、HEK-hERG細胞を使用したDMRアッセイを行い、マロトキシンによっても、hERG1を安定に発現する遺伝子操作されたHEK-293細胞において、類似のDMRシグナルが生じたが、親のHEK-293細胞において、検出可能なDMRシグナルすなわち、ネットゼロDMRシグナルはなかったことが示された。これらの結果は、マロトキシンはhERG活性化剤であり、hERGチャンネルの活性化により、細胞例えば、HT29細胞、または遺伝子操作されたHEK-hERG細胞においてシグナル伝達が誘発され得ることを示す。vii.hERG-GPR35調節因子の同定上述した方法は、GPR35リガンドまたはhERG調節因子いずれかを同定することができる。hERG-GPR35複合体調節因子を同定するために、交差脱感作DMRアッセイを使用した。ここで、最初に、HT29細胞におけるhERG活性化剤であるマロトキシン誘発DMRシグナルを脱感作または減衰させる能力について、分子を調査した。分子が、hERG活性化剤ではないが、GPR35アゴニストであり、既知マロトキシン誘発DMRによるその後の刺激に対して細胞を脱感作させることができる場合、その分子は、hERG-トランス活性化GPR35アゴニストと称される。その一例は、既知GPR35アゴニストのザプリナストである。HT29細胞のザプリナストによる前処理により、hERG活性化剤のマロトキシンによるその後の刺激に応答して、細胞が用量依存的に脱感作された図16。第2に、HT29細胞におけるGPR35アゴニスト誘発DMRシグナルを脱感作または減衰させる能力について、前記分子を調査した。分子が、GPR35アゴニストではないが、GPR35DMRに基づくGPR35アゴニストによるその後の刺激に対して細胞を脱感作させることができるhERG活性化剤である場合、その分子は、GPR35-トランス活性hERG活性化剤と称される。その一例は、既知hERG活性化剤アゴニストであるが、直接的なGPR35アゴニストではないマロトキシンである。HT29細胞のマロトキシンによる前処理により、GPR35アゴニストであるザプリナストによるその後の刺激に応答して、細胞が用量依存的に脱感作された図17。viii.hERG-GPR35複合体調節因子の分類上述した一連のアッセイを使用して、スキーム1~6に示された一連の分子を、hERG特異的調節因子、またはGPR35特異的調節因子、もしくはhERG-GPR35複合体調節因子のいずれかとして同定した。表1は、これらの分子の実験データおよび分類を示す。表に列挙された化合物の構造化学名または参照数字が付与されているが以下に示されている。HEK-GPR35-Gqo5細胞を使用したCa2動員アッセイ、HT29細胞hERG1およびGPR35を内因的に発現したを使用したDMRアッセイ、CHO-hERG1細胞を使用した自動化パッチクランプ電気生理学的記録、およびHT29細胞を使用した交差脱感作アッセイを含む一連のアッセイに基づいて、分類を得た。見つけられたクラスは:クラスA:GPR35アゴニストおよびhERG活性化剤、GPR35-hERG複合体アゴニスト;クラスB:hERGトランス活性化GPR35アゴニスト;クラスC:hERG非トランス活性化GPR35アゴニスト;クラスD:GPR35トランス活性化hERG活性化剤;クラスE:GPR35非トランス活性化hERG活性化剤など。GPR35アゴニストが、活性および不活性の、HEK-GPR35-Gqo5細胞においてCa2動員を誘発する能力に基づく2つのサブタイプに分類できることは、注目に値する。GPR35は非GqまたはGi共役受容体であり、多くのGPCRリガンドは機能的選択性を示すことが知られているので、このことは意外なことではない。配列i.GPR35aのタンパク質配列GPR35aのタンパク質配列配列番号:9UniProtKB/Swiss-Prot:Q9HC97は次の通りである:MNGTYNTCGSSDLTWPPAIKLGFYAYLGVLLVLGLLLNSLALWVFCCRMQQWTETRIYMTNLAVADLCLLCTLPFVLHSLRDTSDTPLCQLSQGIYLTNRYMSISLVTAIAVDRYVAVRHPLRARGLRSPRQAAAVCAVLWVLVIGSLVARWLLGIQEGGFCFRSTRHNFNSMAFPLLGFYLPLAVVVFCSLKVVTALAQRPPTDVGQAEATRKAARMVWANLLVFVVCFLPLHVGLTVRLAVGWNACALLETIRRALYITSKLSDANCCLDAICYYYMAKEFQEASALAVAPSAKAHKSQDSLCVTLAii.mRNA配列ofGOR35aホモサピエンスGタンパク質共役受容体35aGPR35a配列番号:1、mRNANCBI参照配列:NM_005301.2は次の通りである:1caggccagagtcccagctgtcctggactctgctgtggggaagggctgatgcaggtgtgga61gtcaaatgtgggtgcctcctgcagccgggtgccaggaggggtggaggggccaccctgggc121tttgtccgggagcctggtcttcccgtccttgggctgacaggtgctgctgcctctgagccc181tccctgctaagagctgtgtgctgggtaaggctggtggccctttgggctccctgtccagga241tttgtgctctggagggtagggcttgctgggctggggactggaggggaacgtggagctcct301tctgcctcctttcctgccccatgacagcaggcagatcccaggagagaagagctcaggaga361tgggaagaggatctgtccaggggttagacctcaagggtgacttggagttctttacggcac421ccatgctttctttgaggagttttgtgtttgtgggtgtggggtcggggctcacctcctccc481acatccctgcccagaggtgggcagagtgggggcagtgccttgctccccctgctcgctctc541tgctgacctccggctccctgtgctgccccaggaccatgaatggcacctacaacacctgtg601gctccagcgacctcacctggcccccagcgatcaagctgggcttctacgcctacttgggcg661tcctgctggtgctaggcctgctgctcaacagcctggcgctctgggtgttctgctgccgca721tgcagcagtggacggagacccgcatctacatgaccaacctggcggtggccgacctctgcc781tgctgtgcaccttgcccttcgtgctgcactccctgcgagacacctcagacacgccgctgt841gccagctctcccagggcatctacctgaccaacaggtacatgagcatcagcctggtcacgg901ccatcgccgtggaccgctatgtggccgtgcggcacccgctgcgtgcccgcgggctgcggt961cccccaggcaggctgcggccgtgtgcgcggtcctctgggtgctggtcatcggctccctgg1021tggctcgctggctcctggggattcaggagggcggcttctgcttcaggagcacccggcaca1081atttcaactccatggcgttcccgctgctgggattctacctgcccctggccgtggtggtct1141tctgctccctgaaggtggtgactgccctggcccagaggccacccaccgacgtggggcagg1201cagaggccacccgcaaggctgcccgcatggtctgggccaacctcctggtgttcgtggtct1261gcttcctgcccctgcacgtggggctgacagtgcgcctcgcagtgggctggaacgcctgtg1321ccctcctggagacgatccgtcgcgccctgtacataaccagcaagctctcagatgccaact1381gctgcctggacgccatctgctactactacatggccaaggagttccaggaggcgtctgcac1441tggccgtggctcccagtgctaaggcccacaaaagccaggactctctgtgcgtgaccctcg1501cctaagaggcgtgctgtgggcgctgtgggccaggtctcgggggctccgggaggtgctgcc1561tgccaggggaagctggaaccagtagcaaggagcccgggatcagccctgaactcactgtgt1621attctcttggagccttgggtgggcagggacggcccaggtacctgctctcttgggaagaga1681gagggacagggacaagggcaagaggactgaggccagagcaaggccaatgtcagagacccc1741cgggatggggcctcacacttgccacccccagaaccagctcacctggccagagtgggttcc1801tgctggccagggtgcagccttgatgacacctgccgctgcccctcggggctggaataaaac1861tccccacccagagtciii.GPR35aのcDNAGPR35aのcDNA配列配列番号:2は次の通りである:ATGAATGGCACCTACAACACCTGTG26GCTCCAGCGACCTCACCTGGCCCCCAGCGATCAAGCTGGGCTTCTACGCCTACTTGGGCG86TCCTGCTGGTGCTAGGCCTGCTGCTCAACAGCCTGGCGCTCTGGGTGTTCTGCTGCCGCA146TGCAGCAGTGGACGGAGACCCGCATCTACATGACCAACCTGGCGGTGGCCGACCTCTGCC206TGCTGTGCACCTTGCCCTTCGTGCTGCACTCCCTGCGAGACACCTCAGACACGCCGCTGT266GCCAGCTCTCCCAGGGCATCTACCTGACCAACAGGTACATGAGCATCAGCCTGGTCACGG326CCATCGCCGTGGACCGCTATGTGGCCGTGCGGCACCCGCTGCGTGCCCGCGGGCTGCGGT386CCCCCAGGCAGGCTGCGGCCGTGTGCGCGGTCCTCTGGGTGCTGGTCATCGGCTCCCTGG446TGGCTCGCTGGCTCCTGGGGATTCAGGAGGGCGGCTTCTGCTTCAGGAGCACCCGGCACA506ATTTCAACTCCATGGCGTTCCCGCTGCTGGGATTCTACCTGCCCCTGGCCGTGGTGGTCT566TCTGCTCCCTGAAGGTGGTGACTGCCCTGGCCCAGAGGCCACCCACCGACGTGGGGCAGG626CAGAGGCCACCCGCAAGGCTGCCCGCATGGTCTGGGCCAACCTCCTGGTGTTCGTGGTCT686GCTTCCTGCCCCTGCACGTGGGGCTGACAGTGCGCCTCGCAGTGGGCTGGAACGCCTGTG746CCCTCCTGGAGACGATCCGTCGCGCCCTGTACATAACCAGCAAGCTCTCAGATGCCAACT806GCTGCCTGGACGCCATCTGCTACTACTACATGGCCAAGGAGTTCCAGGAGGCGTCTGCAC866TGGCCGTGGCTCCCAGTGCTAAGGCCCACAAAAGCCAGGACTCTCTGTGCGTGACCCTCG926CCTAAiv.GPR35bのタンパク質配列GPR35bのタンパク質配列配列番号:3SOkumuraHBabaTKumadaKNanmokuHNakajimaYNakaneKHiokiKIkenakaCloningofaGproteincoupledreceptorthatshowsanactivitytotransformNIH3T3cellsandisexpressedingastriccancercellsCancerSci95131135は次の通りである:MLSGSRAVPTPHRGSEELLKYMLHSPCVSLTMNGTYNTCGSSDLTWPPAIKLGFYAYLGVLLVLGLLLNSLALWVFCCRMQQWTETRIYMTNLAVADLCLLCTLPFVLHSLRDTSDTPLCQLSQGIYLTNRYMSISLVTAIAVDRYVAVRHPLRARGLRSPRQAAAVCAVLWVLVIGSLVARWLLGIQEGGFCFRSTRHNFNSMAFPLLGFYLPLAVVVFCSLKVVTALAQRPPTDVGQAEATRKAARMVWANLLVFVVCFLPLHVGLTVRLAVGWNACALLETIRRALYITSKLSDANCCLDAICYYYMAKEFQEASALAVAPRAKAHKSQDSLCVTLAv.GPR35bのcDNAGPR35bのcDNA配列配列番号:4は次の通りである:1ATGCTGAGTGGTTCCCGGGCTGTCCCCACTCCACACCGTGGCAGTGAAGAGCTGCTGAAG61TACATGCTTCATAGTCCTTGCGTCTCTCTGACCATGAATGGCACCTACAACACCTGTGGC121TCCAGCGACCTCACCTGGCCCCCAGCGATCAAGCTGGGCTTCTACGCCTACTTGGGCGTC181CTGCTGGTGCTAGGCCTGCTGCTCAACAGCCTGGCGCTCTGGGTGTTCTGCTGCCGCATG241CAGCAGTGGACGGAGACCCGCATCTACATGACCAACCTGGCGGTGGCCGACCTCTGCCTG301CTGTGCACCTTGCCCTTCGTGCTGCACTCCCTGCGAGACACCTCAGACACGCCGCTGTGC361CAGCTCTCCCAGGGCATCTACCTGACCAACAGGTACATGAGCATCAGCCTGGTCACGGCC421ATCGCCGTGGACCGCTATGTGGCCGTGCGGCACCCGCTGCGTGCCCGCGGGCTGCGGTCC481CCCAGGCAGGCTGCGGCCGTGTGCGCGGTCCTCTGGGTGCTGGTCATCGGCTCCCTGGTG541GCTCGCTGGCTCCTGGGGATTCAGGAGGGCGGCTTCTGCTTCAGGAGCACCCGGCACAAT601TTCAACTCCATGGCGTTCCCGCTGCTGGGATTCTACCTGCCCCTGGCCGTGGTGGTCTTC661TGCTCCCTGAAGGTGGTGACTGCCCTGGCCCAGAGGCCACCCACCGACGTGGGGCAGGCA721GAGGCCACCCGCAAGGCTGCCCGCATGGTCTGGGCCAACCTCCTGGTGTTCGTGGTCTGC781TTCCTGCCCCTGCACGTGGGGCTGACAGTGCGCCTCGCAGTGGGCTGGAACGCCTGTGCC841CTCCTGGAGACGATCCGTCGCGCCCTGTACATAACCAGCAAGCTCTCAGATGCCAACTGC901TGCCTGGACGCCATCTGCTACTACTACATGGCCAAGGAGTTCCAGGAGGCGTCTGCACTG961GCCGTGGCTCCCAGTGCTAAGGCCCACAAAAGCCAGGACTCTCTGTGCGTGACCCTCGCC1021TAAvi.hERG1aのタンパク質配列hERG1aのタンパク質配列配列番号:5NCBI参照配列:NP_000229.1は次の通りである:MPVRRGHVAPQNTFLDTIIRKFEGQSRKFIIANARVENCAVIYCNDGFCELCGYSRAEVMQRPCTCDFLHGPRTQRRAAAQIAQALLGAEERKVEIAFYRKDGSCFLCLVDVVPVKNEDGAVIMFILNFEVVMEKDMVGSPAHDTNHRGPPTSWLAPGRAKTFRLKLPALLALTARESSVRSGGAGGAGAPGAVVVDVDLTPAAPSSESLALDEVTAMDNHVAGLGPAEERRALVGPGSPPRSAPGQLPSPRAHSLNPDASGSSCSLARTRSRESCASVRRASSADDIEAMRAGVLPPPPRHASTGAMHPLRSGLLNSTSDSDLVRYRTISKIPQITLNFVDLKGDPFLASPTSDREIIAPKIKERTHNVTEKVTQVLSLGADVLPEYKLQAPRIHRWTILHYSPFKAVWDWLILLLVIYTAVFTPYSAAFLLKETEEGPPATECGYACQPLAVVDLIVDIMFIVDILINFRTTYVNANEEVVSHPGRIAVHYFKGWFLIDMVAAIPFDLLIFGSGSEELIGLLKTARLLRLVRVARKLDRYSEYGAAVLFLLMCTFALIAHWLACIWYAIGNMEQPHMDSRIGWLHNLGDQIGKPYNSSGLGGPSIKDKYVTALYFTFSSLTSVGFGNVSPNTNSEKIFSICVMLIGSLMYASIFGNVSAIIQRLYSGTARYHTQMLRVREFIRFHQIPNPLRQRLEEYFQHAWSYTNGIDMNAVLKGFPECLQADICLHLNRSLLQHCKPFRGATKGCLRALAMKFKTTHAPPGDTLVHAGDLLTALYFISRGSIEILRGDVVVAILGKNDIFGEPLNLYARPGKSNGDVRALTYCDLHKIHRDDLLEVLDMYPEFSDHFWSSLEITFNLRDTNMIPGSPGSTELEGGFSRQRKRKLSFRRRTDKDTEQPGEVSALGPGRAGAGPSSRGRPGGPWGESPSSGPSSPESSEDEGPGRSSSPLRLVPFSSPRPPGEPPGGEPLMEDCEKSSDTCNPLSGAFSGVSNIFSFWGDSRGRQYQELPRCPAPTPSLLNIPLSSPGRRPRGDVESRLDALQRQLNRLETRLSADMATVLQLLQRQMTLVPPAYSAVTTPGPGPTSTSPLLPVSPLPTLTLDSLSQVSQFMACEELPPGAPELPQEGPTRRLSLPGQLGALTSQPLHRHGSDPGSvii.hERG1aのcDNA配列hERG1aのcDNA配列配列番号:6は次の通りである:ATGCCGGTGCGGAGGGGC19CACGTCGCGCCGCAGAACACCTTCCTGGACACCATCATCCGCAAGTTTGAGGGCCAGAGC79CGTAAGTTCATCATCGCCAACGCTCGGGTGGAGAACTGCGCCGTCATCTACTGCAACGAC139GGCTTCTGCGAGCTGTGCGGCTACTCGCGGGCCGAGGTGATGCAGCGACCCTGCACCTGC199GACTTCCTGCACGGGCCGCGCACGCAGCGCCGCGCTGCCGCGCAGATCGCGCAGGCACTG259CTGGGCGCCGAGGAGCGCAAAGTGGAAATCGCCTTCTACCGGAAAGATGGGAGCTGCTTC319CTATGTCTGGTGGATGTGGTGCCCGTGAAGAACGAGGATGGGGCTGTCATCATGTTCATC379CTCAATTTCGAGGTGGTGATGGAGAAGGACATGGTGGGGTCCCCGGCTCATGACACCAAC439CACCGGGGCCCCCCCACCAGCTGGCTGGCCCCAGGCCGCGCCAAGACCTTCCGCCTGAAG499CTGCCCGCGCTGCTGGCGCTGACGGCCCGGGAGTCGTCGGTGCGGTCGGGCGGCGCGGGC559GGCGCGGGCGCCCCGGGGGCCGTGGTGGTGGACGTGGACCTGACGCCCGCGGCACCCAGC619AGCGAGTCGCTGGCCCTGGACGAAGTGACAGCCATGGACAACCACGTGGCAGGGCTCGGG679CCCGCGGAGGAGCGGCGTGCGCTGGTGGGTCCCGGCTCTCCGCCCCGCAGCGCGCCCGGC739CAGCTCCCATCGCCCCGGGCGCACAGCCTCAACCCCGACGCCTCGGGCTCCAGCTGCAGC799CTGGCCCGGACGCGCTCCCGAGAAAGCTGCGCCAGCGTGCGCCGCGCCTCGTCGGCCGAC859GACATCGAGGCCATGCGCGCCGGGGTGCTGCCCCCGCCACCGCGCCACGCCAGCACCGGG919GCCATGCACCCACTGCGCAGCGGCTTGCTCAACTCCACCTCGGACTCCGACCTCGTGCGC979TACCGCACCATTAGCAAGATTCCCCAAATCACCCTCAACTTTGTGGACCTCAAGGGCGAC1039CCCTTCTTGGCTTCGCCCACCAGTGACCGTGAGATCATAGCACCTAAGATAAAGGAGCGA1099ACCCACAATGTCACTGAGAAGGTCACCCAGGTCCTGTCCCTGGGCGCCGACGTGCTGCCT1159GAGTACAAGCTGCAGGCACCGCGCATCCACCGCTGGACCATCCTGCATTACAGCCCCTTC1219AAGGCCGTGTGGGACTGGCTCATCCTGCTGCTGGTCATCTACACGGCTGTCTTCACACCC1279TACTCGGCTGCCTTCCTGCTGAAGGAGACGGAAGAAGGCCCGCCTGCTACCGAGTGTGGC1339TACGCCTGCCAGCCGCTGGCTGTGGTGGACCTCATCGTGGACATCATGTTCATTGTGGAC1399ATCCTCATCAACTTCCGCACCACCTACGTCAATGCCAACGAGGAGGTGGTCAGCCACCCC1459GGCCGCATCGCCGTCCACTACTTCAAGGGCTGGTTCCTCATCGACATGGTGGCCGCCATC1519CCCTTCGACCTGCTCATCTTCGGCTCTGGCTCTGAGGAGCTGATCGGGCTGCTGAAGACT1579GCGCGGCTGCTGCGGCTGGTGCGCGTGGCGCGGAAGCTGGATCGCTACTCAGAGTACGGC1639GCGGCCGTGCTGTTCTTGCTCATGTGCACCTTTGCGCTCATCGCGCACTGGCTAGCCTGC1699ATCTGGTACGCCATCGGCAACATGGAGCAGCCACACATGGACTCACGCATCGGCTGGCTG1759CACAACCTGGGCGACCAGATAGGCAAACCCTACAACAGCAGCGGCCTGGGCGGCCCCTCC1819ATCAAGGACAAGTATGTGACGGCGCTCTACTTCACCTTCAGCAGCCTCACCAGTGTGGGC1879TTCGGCAACGTCTCTCCCAACACCAACTCAGAGAAGATCTTCTCCATCTGCGTCATGCTC1939ATTGGCTCCCTCATGTATGCTAGCATCTTCGGCAACGTGTCGGCCATCATCCAGCGGCTG1999TACTCGGGCACAGCCCGCTACCACACACAGATGCTGCGGGTGCGGGAGTTCATCCGCTTC2059CACCAGATCCCCAATCCCCTGCGCCAGCGCCTCGAGGAGTACTTCCAGCACGCCTGGTCC2119TACACCAACGGCATCGACATGAACGCGGTGCTGAAGGGCTTCCCTGAGTGCCTGCAGGCT2179GACATCTGCCTGCACCTGAACCGCTCACTGCTGCAGCACTGCAAACCCTTCCGAGGGGCC2239ACCAAGGGCTGCCTTCGGGCCCTGGCCATGAAGTTCAAGACCACACATGCACCGCCAGGG2299GACACACTGGTGCATGCTGGGGACCTGCTCACCGCCCTGTACTTCATCTCCCGGGGCTCC2359ATCGAGATCCTGCGGGGCGACGTCGTCGTGGCCATCCTGGGGAAGAATGACATCTTTGGG2419GAGCCTCTGAACCTGTATGCAAGGCCTGGCAAGTCGAACGGGGATGTGCGGGCCCTCACC2479TACTGTGACCTACACAAGATCCATCGGGACGACCTGCTGGAGGTGCTGGACATGTACCCT2539GAGTTCTCCGACCACTTCTGGTCCAGCCTGGAGATCACCTTCAACCTGCGAGATACCAAC2599ATGATCCCGGGCTCCCCCGGCAGTACGGAGTTAGAGGGTGGCTTCAGTCGGCAACGCAAG2659CGCAAGTTGTCCTTCCGCAGGCGCACGGACAAGGACACGGAGCAGCCAGGGGAGGTGTCG2719GCCTTGGGGCCGGGCCGGGCGGGGGCAGGGCCGAGTAGCCGGGGCCGGCCGGGGGGGCCG2779TGGGGGGAGAGCCCGTCCAGTGGCCCCTCCAGCCCTGAGAGCAGTGAGGATGAGGGCCCA2839GGCCGCAGCTCCAGCCCCCTCCGCCTGGTGCCCTTCTCCAGCCCCAGGCCCCCCGGAGAG2899CCGCCGGGTGGGGAGCCCCTGATGGAGGACTGCGAGAAGAGCAGCGACACTTGCAACCCC2959CTGTCAGGCGCCTTCTCAGGAGTGTCCAACATTTTCAGCTTCTGGGGGGACAGTCGGGGC3019CGCCAGTACCAGGAGCTCCCTCGATGCCCCGCCCCCACCCCCAGCCTCCTCAACATCCCC3079CTCTCCAGCCCGGGTCGGCGGCCCCGGGGCGACGTGGAGAGCAGGCTGGATGCCCTCCAG3139CGCCAGCTCAACAGGCTGGAGACCCGGCTGAGTGCAGACATGGCCACTGTCCTGCAGCTG3199CTACAGAGGCAGATGACGCTGGTCCCGCCCGCCTACAGTGCTGTGACCACCCCGGGGCCT3259GGCCCCACTTCCACATCCCCGCTGTTGCCCGTCAGCCCCCTCCCCACCCTCACCTTGGAC3319TCGCTTTCTCAGGTTTCCCAGTTCATGGCGTGTGAGGAGCTGCCCCCGGGGGCCCCAGAG3379CTTCCCCAAGAAGGCCCCACACGACGCCTCTCCCTACCGGGCCAGCTGGGGGCCCTCACC3439TCCCAGCCCCTGCACAGACACGGCTCGGACCCGGGCAGTTAGviii.hERG1bのタンパク質配列hERG1bのタンパク質配列配列番号:7NCBI参照配列:NP_742053.1は次の通りである:MPVRRGHVAPQNTFLDTIIRKFEGQSRKFIIANARVENCAVIYCNDGFCELCGYSRAEVMQRPCTCDFLHGPRTQRRAAAQIAQALLGAEERKVEIAFYRKDGSCFLCLVDVVPVKNEDGAVIMFILNFEVVMEKDMVGSPAHDTNHRGPPTSWLAPGRAKTFRLKLPALLALTARESSVRSGGAGGAGAPGAVVVDVDLTPAAPSSESLALDEVTAMDNHVAGLGPAEERRALVGPGSPPRSAPGQLPSPRAHSLNPDASGSSCSLARTRSRESCASVRRASSADDIEAMRAGVLPPPPRHASTGAMHPLRSGLLNSTSDSDLVRYRTISKIPQITLNFVDLKGDPFLASPTSDREIIAPKIKERTHNVTEKVTQVLSLGADVLPEYKLQAPRIHRWTILHYSPFKAVWDWLILLLVIYTAVFTPYSAAFLLKETEEGPPATECGYACQPLAVVDLIVDIMFIVDILINFRTTYVNANEEVVSHPGRIAVHYFKGWFLIDMVAAIPFDLLIFGSGSEELIGLLKTARLLRLVRVARKLDRYSEYGAAVLFLLMCTFALIAHWLACIWYAIGNMEQPHMDSRIGWLHNLGDQIGKPYNSSGLGGPSIKDKYVTALYFTFSSLTSVGFGNVSPNTNSEKIFSICVMLIGSLMYASIFGNVSAIIQRLYSGTARYHTQMLRVREFIRFHQIPNPLRQRLEEYFQHAWSYTNGIDMNAVLKGFPECLQADICLHLNRSLLQHCKPFRGATKGCLRALAMKFKTTHAPPGDTLVHAGDLLTALYFISRGSIEILRGDVVVAILGMGWGAGTGLEMPSAASRGASLLNMQSLGLWTWDCLQGHWAPLIHLNSGPPSGAMERSPTWGEAAELWGSHILLPFRIRHKQTLFASLKix.hERG1bのcDNA配列hERG1bのcDNA配列配列番号:8は次の通りである:ATGCCGGTGCGGAGGGG18CCACGTCGCGCCGCAGAACACCTTCCTGGACACCATCATCCGCAAGTTTGAGGGCCAGAG78CCGTAAGTTCATCATCGCCAACGCTCGGGTGGAGAACTGCGCCGTCATCTACTGCAACGA138CGGCTTCTGCGAGCTGTGCGGCTACTCGCGGGCCGAGGTGATGCAGCGACCCTGCACCTG198CGACTTCCTGCACGGGCCGCGCACGCAGCGCCGCGCTGCCGCGCAGATCGCGCAGGCACT258GCTGGGCGCCGAGGAGCGCAAAGTGGAAATCGCCTTCTACCGGAAAGATGGGAGCTGCTT318CCTATGTCTGGTGGATGTGGTGCCCGTGAAGAACGAGGATGGGGCTGTCATCATGTTCAT378CCTCAATTTCGAGGTGGTGATGGAGAAGGACATGGTGGGGTCCCCGGCTCATGACACCAA438CCACCGGGGCCCCCCCACCAGCTGGCTGGCCCCAGGCCGCGCCAAGACCTTCCGCCTGAA498GCTGCCCGCGCTGCTGGCGCTGACGGCCCGGGAGTCGTCGGTGCGGTCGGGCGGCGCGGG558CGGCGCGGGCGCCCCGGGGGCCGTGGTGGTGGACGTGGACCTGACGCCCGCGGCACCCAG618CAGCGAGTCGCTGGCCCTGGACGAAGTGACAGCCATGGACAACCACGTGGCAGGGCTCGG678GCCCGCGGAGGAGCGGCGTGCGCTGGTGGGTCCCGGCTCTCCGCCCCGCAGCGCGCCCGG738CCAGCTCCCATCGCCCCGGGCGCACAGCCTCAACCCCGACGCCTCGGGCTCCAGCTGCAG798CCTGGCCCGGACGCGCTCCCGAGAAAGCTGCGCCAGCGTGCGCCGCGCCTCGTCGGCCGA858CGACATCGAGGCCATGCGCGCCGGGGTGCTGCCCCCGCCACCGCGCCACGCCAGCACCGG918GGCCATGCACCCACTGCGCAGCGGCTTGCTCAACTCCACCTCGGACTCCGACCTCGTGCG978CTACCGCACCATTAGCAAGATTCCCCAAATCACCCTCAACTTTGTGGACCTCAAGGGCGA1038CCCCTTCTTGGCTTCGCCCACCAGTGACCGTGAGATCATAGCACCTAAGATAAAGGAGCG1098AACCCACAATGTCACTGAGAAGGTCACCCAGGTCCTGTCCCTGGGCGCCGACGTGCTGCC1158TGAGTACAAGCTGCAGGCACCGCGCATCCACCGCTGGACCATCCTGCATTACAGCCCCTT1218CAAGGCCGTGTGGGACTGGCTCATCCTGCTGCTGGTCATCTACACGGCTGTCTTCACACC1278CTACTCGGCTGCCTTCCTGCTGAAGGAGACGGAAGAAGGCCCGCCTGCTACCGAGTGTGG1338CTACGCCTGCCAGCCGCTGGCTGTGGTGGACCTCATCGTGGACATCATGTTCATTGTGGA1398CATCCTCATCAACTTCCGCACCACCTACGTCAATGCCAACGAGGAGGTGGTCAGCCACCC1458CGGCCGCATCGCCGTCCACTACTTCAAGGGCTGGTTCCTCATCGACATGGTGGCCGCCAT1518CCCCTTCGACCTGCTCATCTTCGGCTCTGGCTCTGAGGAGCTGATCGGGCTGCTGAAGAC1578TGCGCGGCTGCTGCGGCTGGTGCGCGTGGCGCGGAAGCTGGATCGCTACTCAGAGTACGG1638CGCGGCCGTGCTGTTCTTGCTCATGTGCACCTTTGCGCTCATCGCGCACTGGCTAGCCTG1698CATCTGGTACGCCATCGGCAACATGGAGCAGCCACACATGGACTCACGCATCGGCTGGCT1758GCACAACCTGGGCGACCAGATAGGCAAACCCTACAACAGCAGCGGCCTGGGCGGCCCCTC1818CATCAAGGACAAGTATGTGACGGCGCTCTACTTCACCTTCAGCAGCCTCACCAGTGTGGG1878CTTCGGCAACGTCTCTCCCAACACCAACTCAGAGAAGATCTTCTCCATCTGCGTCATGCT1938CATTGGCTCCCTCATGTATGCTAGCATCTTCGGCAACGTGTCGGCCATCATCCAGCGGCT1998GTACTCGGGCACAGCCCGCTACCACACACAGATGCTGCGGGTGCGGGAGTTCATCCGCTT2058CCACCAGATCCCCAATCCCCTGCGCCAGCGCCTCGAGGAGTACTTCCAGCACGCCTGGTC2118CTACACCAACGGCATCGACATGAACGCGGTGCTGAAGGGCTTCCCTGAGTGCCTGCAGGC2178TGACATCTGCCTGCACCTGAACCGCTCACTGCTGCAGCACTGCAAACCCTTCCGAGGGGC2238CACCAAGGGCTGCCTTCGGGCCCTGGCCATGAAGTTCAAGACCACACATGCACCGCCAGG2298GGACACACTGGTGCATGCTGGGGACCTGCTCACCGCCCTGTACTTCATCTCCCGGGGCTC2358CATCGAGATCCTGCGGGGCGACGTCGTCGTGGCCATCCTGGGTATGGGGTGGGGGGCGGG2418CACTGGACTGGAAATGCCCTCTGCAGCCTCAAGAGGTGCGAGCCTTCTGAATATGCAGTC2478ACTGGGGCTGTGGACCTGGGACTGCCTGCAGGGTCACTGGGCTCCTTTAATTCACCTAAA2538CTCAGGCCCTCCAAGCGGGGCCATGGAGAGGAGCCCCACGTGGGGTGAGGCTGCTGAACT2598CTGGGGTTCCCACATTCTCCTTCCCTTCAGGATCCGCCACAAACAGACACTTTTTGCTTC2658CTTAAAGTAG参考文献1.米国特許出願公開第2007/0265418号明細書。HeMFusedthiophenesmethodsformakingfusedthiophenesandusesthereof2.米国特許出願公開第2007/0161776号明細書。HeMFusedthiophenesmethodsformakingfusedthiophenesandusesthereof3.米国特許第6393190号明細書。HeMLeslieTMChromophoresforpolymericthinfilmsandopticalwaveguidesanddevicescomprisingthesame4.BFODowdTNguyenAMarcheseRChengKRLynchHHHengLFKolakowskiJrSRGeorgeDiscoveryofthreenovelGproteincoupledreceptorgenesGenomics473103135.SOkumuraHBabaTKumadaKNanmokuHNakajimaYNakaneKHiokiandKIkenakaCloningofaGproteincoupledreceptorthatshowsanactivitytotransformNIH3T3cellsandisexpressedingastriccancercellsCancerSci951311356.JGuoDJWilliamsHLPuhlIIISRIkedaInhibitionofNtypecalciumchannelsbyactivationofGPR35anorphanreceptorheterologouslyexpressedinratsympatheticneuronsJPharmacolExpTher3243423517.HOhshiroHTonaiKachiKIchikawaGPR35isafunctionalreceptorinratdorsalrootganglionneuronsBiochemBiophysResCommun3653443488.AEShrimptonBRBraddockLLThomsonCKSteinJJHooMoleculardelineationofdeletionson2q373inthreecaseswithanAlbrighthereditaryosteodystrophylikephenotypeClinGenet665375449.KDMinMAsakuraYLiaoKNakamaruHOkazakiTTakahashiKFujimotoSItoATakahashiHAsanumaSYamazakiTMinaminoSSanadaOSeguchiANakanoYAndoTOtsukaHFurukawaTIsomuraSTakashimaNMochizukiMKitakazeIdentificationofgenesrelatedtoheartfailureusingglobalgeneexpressionprofilingofhumanfailingmyocardiumBiochemBiophysResCommun393556010.JWangNSimonaviciusXWuGSwaminathJReaganHTianLLingKynurenicacidasaligandfororphanGproteincoupledreceptorGPR35JBiolChem281220212202811.SOkaROtaMShimaAYamashitaTSugiuraGPR35isanovellysophosphatidicacidreceptorBiochemBiophysResComm395232237ZSuetalElectrophysiologiccharacterizationofanovelhERGchannelactivatorBiochemPharm771383200912.MBridglandTayloretalJPharmacolToxicolMethods20065418999ADubinetalJBiomolScreen2005101688113.JWWarmkeJWetalProcNatlAcadSci1994913438344214.HSunetalJBiolChem2006281587715.JTakasakiTSaitoMTaniguchiTKawasakiYMoritaniKHayashiandMKoboriANovelGαq11selectiveInhibitorJBiolChem2794743847445BRConklinZFarfelKDLustigDJuliusandHRBourneSubstitutionofthreeaminoacidsswitchesreceptorspecificityofGqtothatofGiNature199336327427616.JFreyADBondABHolmesImprovedsynthesisofdithieno32b23dthiopheneandderivativesforcrosscouplingChemicalCommunications2002202424242517.欧州特許出願公開第647874号明細書。1995KYAJenKJDrostPreparationofpolyimideshavingnonlinearopticalproperties18.米国特許第5508440号明細書。CTChangCTLeeFLLinpolythiophenederivativesusefulforpreventinginflammationandedema"