メチレンブルー法の固相での反応原理を濾紙の上で実施することを特徴とした硫化水素濃度の定量方法で、予め硫酸亜鉛を吸収させたセルロース製濾紙を用いてサンプリングし、次に塩酸酸性化でNNDimethylpphenylenediamineと塩化第2鉄からなる発色液をサンプリングした位置の中央に滴下して、サンプル中の硫化水素と定量的に反応が進み、青いメチレンブルーの分子が定量的に生成するメカニズムを利用した口腔内硫化水素の簡易定量キット。請求項1において、発色液を滴下した後に、酸化剤、pH緩衝剤、および、界面活性剤からなる固定化液を滴下することによって、濾紙クロマトグラフィーの原理によって、未反応物および夾雑物質を濾紙周辺部に展開して、生成したメチレンブルー化合物の青色をより鮮明にさせる固定液と名付けた組成物。請求項1および2において、濾紙に替えて綿棒を用いることによって、口腔内の特定の場所から直接サンプリングできること特徴とした硫化水素検査キット。請求項3において、綿棒でのサンプリング後、発色反応の際に水分吸収容量を増加させる補助濾紙を追加すること特徴とした硫化水素検査キット。請求項1における発色液すなわちNNDimethylpphenylenediamineを含む組成物の保存性を高めるためにチオグリセロールを共存させる組成物およびこれを用いた口臭検査キット解決しようとする問題点は、口臭の程度の診断において、簡易でかつ信頼できる方法がないことである。口臭の判定のために、メチレンブルー法とペーパークロマトグラフィーの原理を用いて固相での発色に用いることによって、簡便、かつ目視により判定できる。本発明の測定原理は、塩化第2鉄の存在下で硫化物イオンがNNDimethylpphenylenediamineと反応して定量的に生成する発色メチレンブルーより硫化水素および硫化物イオンを定量することである。メチレンブルーは安定な色素であるので高感度で確実な測定ができる。本発明は、濾紙もしくは綿棒に亜鉛を含有させた支持体を用いて検体中の硫化水素を捕捉、固定後、発色剤NNDimethylpphenylenediamineと塩化第2鉄からなる化学反応産物を固定液、補助濾紙を用いることにより、反応夾雑物を除去し、メチレンブルーを単離することである。そして目視あるいは光電色差計により硫化水素を定量することである。本発明の口臭診断キットは、被験者が、当該診断濾紙もしくは綿棒を口に含んだ後、発色薬を滴下して反応させ、さらに固定液を添加することによってより鮮やかな青色の色調に発色することができ、肉眼的に簡単に結果を定量的に判定できるという利点がある。本発明は、亜鉛含有支持体を用いて検体中の硫化水素を捕捉、固定後、発色剤としてNNDimethylpphenylenediamine溶液を添加し、次いで塩化第2鉄溶液を加えて生成されるメチレンブルー量を簡便に目視できるように、多角的に思考、実験、考察を重ねたものである。基本となる反応原理を図1に示した非特許文献6、特許文献1。すなわち、亜鉛含有支持体におけるメチレンブルー反応は、メチレンブルー色に加えて赤褐色を呈し、反応で生じたメチレンブルーの青色の識別を見づらくしている。しかしながら、固定液組成物50~100microLの添加による化学反応と補助濾紙付加によるペーパークロマトグラフィーの原理からメチレンブルー以外の反応夾雑物を固層反応相から周辺に展開して除外し、バックグランドを鮮明にすることにより、正確且つ簡便にメチレンブルー量が目視できる。従来の方法は溶液中に硫化水素を捕捉する亜鉛化合物を加えて形成されるメチレンブルーを遠心分離操作後、分光光度計の吸光度より硫化水素を定量するのが一般的であった。しかしながら、操作が煩雑で、多くの機器が必要であった。特許文献、非特許文献を含めてこのようなメチレンブルー量から口臭硫化水素を測定する方法は見出すことができない。新メチレンブルー分析法―特開2007-292565菅原庄吾ら、砂泥堆積物溶存硫化物の簡便な現場抽出吸光度定量及びその有明海北東部堆積物への適用、分析化学5911551161本発明の要素は、塩化第2鉄を吸収させた担体具体的には、濾紙もしくは綿棒からなるもので、これを口に入れて口臭サンプルを採取する、あるいは、唾液や舌苔など液体を含むサンプルを直接吸収して被検物質を採取する。その後、発色液によって、生成された硫化水素の濃度に対して定量的に発色が進行することによって口臭の程度を測定できるものである。固定液はメチレンブルーの生成発色を速やかに進行させ、かつ安定化させるための試薬で、本明細書において固定液と呼んでいる、酸化剤とpH緩衝材および界面活性剤からなる組成物を用い、メチレンブルーの検出を鮮明にする。濾紙での検出方法濾紙片における口臭硫化水素の発色法と固定液の添加効果口臭硫化水素判定濾紙の作製硫酸亜鉛溶液の調製:Zincsulfateheptahydrateシグマアルドリッチ株式会社2gを蒸留水8mlに溶解し、20硫酸亜鉛溶液を作製した。そして濾紙片直径215mm、厚さ07mm;AdvantecNo526;東洋濾紙会社に硫酸亜鉛溶液100microLを滴下し、自然乾燥した後、室温で保存した。図2は、濾紙を支持器具で挟んで使いやすくした口臭硫化水素判定濾紙である。発色反応によって生成されたメチレンブルーは塩基性色素であるため、セルロースよりなる木綿繊維、中性濾紙に吸着されやすいと考えられる。事実、陰イオン交換クロマトグラフイー用濾紙、および陽イオン交換クロマトグラフイー用濾紙厚さ023mmWhatmanP81WhatmanIntLtdEnglandで試みたところ、発色試薬が固層反応相で沈殿したり、あるいは拡がってメチレンブルーの生成反応がスムースに進行せず、一定のメチレンブルー色素を検出ことができなかった。発色剤の組成の決定メチレンブルー法の発色のために必要な試薬のそれぞれについて、最適な濃度を決定するために、それぞれの試薬を種々の濃度で準備して、発色試験を繰り返してそれぞれの最適濃度を決めた。至適硫酸亜鉛濃度の決定硫酸亜鉛溶液は、Zincsulfateheptahydrateを使用して蒸留水で調製した。そして各濃度5~40の硫酸亜鉛溶液100microLを濾紙片直径215mm、厚さ07mm;AdvantecNo526に滴下し、自然乾燥させた後、室温で保存した。反応試験は、次のように実施した。すなわちプラスチック製容器55ml容量;Falcon社組織培養フラスコ3108KN3362041、日本ベクトンディッキンソン株式会社、東京の底に125mMNa2S溶液01ml、次いで容器壁に34M塩酸01mlを加え、濾紙片を挿入後、容器のキャップを閉めた。そしてNa2S溶液と塩酸を接触させて硫化水素を発生させ、040の硫酸亜鉛溶液を含有する濾紙片に捕捉、固定させた。5分後、濾紙片を容器から取り出し、実施例1に従い、メチレンブルー量をNF333簡易型分光色差計日本電色工業株式会社、東京でA660測定した。硫酸亜鉛濃度の上昇に従い、硫化水素の捕捉量は増加した。しかしながら、亜鉛の食事摂取基準は一般に10mgdayであり、その耐容上限量は男性で40~45mgday、女性で30~35mgdayであるとされている。従って、これらのことを考慮して、硫酸亜鉛溶液20濃度を用いて濾紙片あたりの硫酸亜鉛量は食品安全基準の範囲である20mgとした図3。至適塩化第2鉄濃度の決定NNDimethylpphenylenediamine溶液と塩化第2鉄溶液の共存下で生成されるメチレンブルー量に対する塩化第2鉄溶液の至適濃度を調べた。すなわち、塩化第2鉄和光純薬、東京は12M塩酸溶液和光純薬、東京を使用して0-50mgml濃度の塩化第2鉄溶液を調製した。それ以外は図3と同じ実験条件である。図4に示すように、メチレンブルー量の生成は10mgml塩化第2鉄溶液が最適であった。それゆえにメチレンブルーの生成反応には10mgml塩化第2鉄溶液を使用することにした。至適塩酸濃度の決定塩化第2鉄溶液を調製する際の至適塩酸濃度を決めるために、12M塩酸和光純薬、東京溶液を使用して01M~45M塩酸溶液を調製した。塩化第2鉄を溶解する至適塩酸濃度は図5に示すように、メチレンブルー量の生成から12M塩酸溶液であることが分かった。従って、メチレンブルー生成反応における塩酸濃度は12M塩酸溶液とした。至適NNDimethylpphenylenediamine濃度の決定NNDimethylpphenylenediamine溶液はエタノールで10mgml~20mgmlに調製した。それ以外は図1と同じ実験条件である。メチレンブルー生成反応はNNDimethylpphenylenediamine濃度の上昇と共に増加し、10mgml~15mgmlでプラトーに達した図6。20mgmlではメチレンブルー生成量はさらに増加したが、NNDimethylpphenylenediamine溶液の一部に沈殿が生じた。それゆえに至適濃度は10mgmlのNNDimethylpphenylenediamine溶液とした。検査キットの組成上記の条件検討の結果、最適な条件を組み合わせて、下記のような組成で検査キットを構成した。1.発色液溶液の調製NNDimethylpphenylenediamine溶液はNNDimethylpphenylenediamine関東化学、東京100mgをエタノール和光純薬、東京1mlに溶解し、低温保存した。そして使用時にその溶液005mlに01MTrisHCl緩衝液045mlを加えて10倍希釈、さらにその01mlに01MTrisHCl緩衝液09mlを加えて10倍希釈した。2.塩化第2鉄10mgml溶液の調製塩化第2鉄和光純薬、東京100mgを12M塩酸99mlに溶解。尚、12M塩酸は12M塩酸和光純薬、東京10mlに、蒸留水90mlを加えて調製し、低温室で保存した。固定液の原理と組成の決定メチレンブルー生成反応は強酸性下で進行するが、メチレンブルーの発色度はpHや還元により強く影響を受ける。より鮮明な発色を得るために、発色剤を添加した後、酸化剤およびpH緩衝剤を添加することが効果的であった。具体的には、酸化剤として過マンガン酸カリウム、pH緩衝剤として塩化アンモニウムおよびリン酸2水素カリウムからなる組成液pH4.2を濾紙に添加した。さらに、これらの試薬の浸透を容易にさせる界面活性剤を用いることが有効で、試験した結果、なかでもCetylpyridiniumchlorideを用いることによって、酸化剤とpH緩衝剤は、濾紙の中を速やかに展開拡散させることができた。その際、固定液の滴下位置が重要であった。濾紙の中央付近に吸着させたサンプルに発色剤を同じく中央付近に滴下し、ついで固定液を濾紙の中央に当該固定液を滴下することによって、濾紙の持つクロマトグラフィー効果によって、余分となった発色剤および夾雑物質が濾紙の中央から周辺へと移動して、一方、反応後に生じたメチレンブルー色素は中央に残ったままとなった。すなわち、発色剤の色である赤褐色は、周辺部分へと移動し、反応で生ずるメチレンブルーの色が、鮮明な青となって中央部に残り、反応結果を明確に判定することができるようになった。固定液の調製固定液は下記のように各溶液を混合して調製し、室温で保存した。11Mリン酸2水素カリウム溶液10ml25Cetylpyridiniumchloride溶液1.0ml320mgml過マンガン酸カリウム溶液20microL4400mM塩化アンモニウム溶液3.3ml尚、2~4の調製は次のようにした。25Cetylpyridiniumchloride溶液の調製:Cetylpyridiniumchloride5gに蒸留水95mlを加えて溶解。320mgml過マンガン酸カリウム溶液の調製:過マンガン酸カリウム200mgを1Mリン酸2水素カリウム溶液10mlに溶解。4400mM塩化アンモニウム溶液の調製:1Mリン酸2水素カリウム溶液を溶媒として塩化アンモニウムを加えて400mM塩化アンモニウム溶液を調製。固定液の効果を示す実験結果を示した。4つの実験区を設け、硫化水素の有無と固定液の添加の有無を比較した。図7および表1に示すように鮮明且つ安定したメチレンブルー色素を検出することができると共に、生成反応で使用した発色試薬や反応夾雑物をペーパークロマトグラフィーの原理により固層反応相から周辺に除外することができ、バックグランドを鮮明にすることができた。すなわち、硫化水素を含有しない濾紙片は発色試薬の添加により赤褐色を呈するが固定液を50~100microL添加することにより無色になり、また硫化水素を含有する濾紙片は鮮明なブルー色を呈した。気相における硫化水素量と濾紙片メチレンブルー量の関係硫化水素はNa2S9H2O特級;和光純薬より調製した。Na2S9H2Oは蒸留水に溶解し、125mM溶液で凍結保存した。そして使用時に蒸留水で希釈した。硫化水素の調製はプラスチック製容器の底にNa2S溶液各01mlを加え、次いで容器壁に34M塩酸01mlを加え、濾紙片を挿入した後、容器のキャップを閉めた。そしてNa2S溶液と塩酸を接触させて硫化水素を発生させ、硫化水素を濾紙片に捕捉、固定した。5分後、濾紙片を容器から取り出し、発色液NNDimethylpphenylenediamine1mgml溶液30microLをその上に添加した。30秒後、さらに塩化鉄溶液15microLを添加し、5分間、室温に放置した。そして固定液50microLを濾紙の中央部に添加した。硫化水素量の増加と共にメチレンブルーの青色が鮮明になった。気相における硫化水素量と反応生成したメチレンブルー量の関係を図8に示した。実際の発色は鮮やかな青であるが、特許明細書のためグレーで表した。また、写真撮影後、メチレンブルー量をNF333簡易型分光色差計日本電色工業株式会社、東京でA660測定し、分光色差計のデータをグラフ化したところ、硫化水素量とメチレンブルー量の関係は0~2microgtubeにおいて直線関係が得られた図9。硫化水素の定量における新規測定法とガスクロマトグラフィーの相関ガスクロマトグラフィーマススペクトロメトリーGCMSによる硫化水素の分析は長田ら非特許文献7の報告に従い、四重極GCMSQP5000;島津を用いて行った。各濃度の硫化水素標品2microgmlトルエン;和光純薬の抽出は硫化水素標準品を含む15ml褐色バイアル瓶を50度に加熱し、SPMEのヘッドスペースを60分間挿入して行った。また、Na2S溶液からの硫化水素はスクリューキャップで密封した15ml褐色バイアル内に蒸留水で溶解した02mMNa2S溶液27microLと34M塩酸和光純薬27microLを5分間の反応より合成した。反応終了後、Na2Sと塩酸の混合液をマイクロシリンジを用いて褐色バイアルから除去し、SPMEを用いてバイアル内に充満した硫化水素を抽出した。OsadaKetalEffectofanorallyingestedmugwortandmushroomextractmixtureonurineodorfromagedmiceBiosciBiotechnolBiochem72124912562008ガスクロマトグラフィーはRestekStabilwaxcolumnを使用し、キャリアガスとしてヘリウムエアリキード工業ガス株式会社、東京;24mlminを用いた。カラムオーブンの温度は40度で5分間維持した後、毎分10度の割合で240度まで増加させた。注入部の温度は230度とした。その結果、図10に示すようなガスクロマトグラムで保持時間1分で硫化水素を検出、定量することができた。図10では、上から、1硫化水素標準標品05microgtube、2同10microgtube、3同20、4同4、および5Na2Sに塩酸を加えてできる硫化水素を同じ保持時間のピークとして検出できた。また、硫化水素濃度と34MSioncurrent量図11、ならびに新規測定法によるメチレンブルー量との間に0~2microgの間で直線関係が得られた。溶液滴下における硫化水素量と濾紙片のメチレンブルー量の関係を次のようにして調べた。各濃度のNa2S溶液50microLを濾紙片に添加する。30秒後、発色液NNDimethylpphenylenediamine1mgml溶液30microLをその上に添加する。30秒後、さらに塩化鉄溶液15microLを添加し、5分間室温にて反応を進めた。そして固定液50microLを濾紙の中央部に添加した。バックグラウンドにある発色液の赤褐色は周辺に流されて消えてしまいメチレンブルーの青色が鮮明に残った図13。写真撮影後、メチレンブルー量をNF333簡易型分光色差計日本電色工業株式会社、東京でA660測定したところ、硫化水素量とメチレンブルー量の関係は0~340ng濾紙において直線関係が得られた図14。また、検体溶液を直接、濾紙片に滴下する方法は気相中の検体を捕捉、固定する方法より検出感度が約13.8倍高いことが明らかになった。綿棒での口臭硫化水素検出方法綿棒における口臭硫化水素の発色法と補助濾紙の付加効果について述べる。口臭硫化水素判定綿棒の作製小綿棒、中綿棒はそれぞれ20硫酸亜鉛溶液100microL、150microLを吸収させ、自然乾燥した後、室温で保存した図15。綿棒として市販されている通常の綿棒が使用可能で、綿棒のサイズによって吸収できるサンプル量は、次の様な量であった。綿棒サイズ小:サンプル量50~100microL、中:サンプル量50~150microL綿棒を支持体とした測定キットの調製1発色液NNDimethylpphenylenediamine1mgml溶液の調製。低温保存したNNDimethylpphenylenediamine溶液100mgml005mlに01MTrisHCl緩衝液045mlを加えて10倍希釈、さらにその01mlに01MTrisHCl緩衝液09mlを加えて10倍希釈する。2発色液30microLを綿棒先端から吸収。3塩化第2鉄10mgml溶液の調製塩化第2鉄和光純薬、東京100mgを12M塩酸99mlに溶解。尚、12M塩酸は12M塩酸和光純薬、東京10mlに、蒸留水90mlを加えて調製し、低温室で保存した。430秒後、塩化鉄15microLを綿棒先端から吸収。55分後、補助濾紙管を装着し、次いで固定液50microLを先端から吸収、発色。6補助濾紙管を取り除き発色の判定綿棒は硫化水素濃度によりリング状にブルー色を呈する。小型および中型綿棒における硫化水素の検出の手順小綿棒の場合1.サンプルの採取2.30秒後、発色液15microLを先端から吸収3.30秒後、塩化鉄30microLを先端から吸収4.5分後、固定液50microLを先端から吸収、発色。中綿棒の場合1.サンプルの採取2.30秒後、発色液50microLを先端から吸収3.30秒後、塩化鉄30microLを先端から吸収4.5分後、固定液100microLを先端から吸収、発色。補助濾紙管の役割と作製綿棒におけるメチレンブルー反応において、クロマトグラフィー原理に基づいた夾雑物質を展開して除去するには、十分な溶液の浸透が必要となる。しかしながら綿棒の吸水量には限度がある。そこで、綿棒の軸側に吸収体として筒状の濾紙を追加した。それを補助濾紙管と名付けた。濾紙厚さ07mm;AdvantecNo526;東洋濾紙会社を14mmx25mmに裁断し、直径約5mmの円筒状の補助濾紙管を作製した図16綿棒による発色過程において、固定液の添加効果は濾紙片と同様に認められた。しかしながら、綿棒の吸水容量は濾紙片に比して小さいため、その効果は十分でなかった。そのため、補助濾紙の装着を試みた。その結果、図17表2に示すように鮮明且つ安定したメチレンブルー色素を検出することができると共に、生成反応で使用した発色試薬や反応夾雑物をペーパークロマトグラフィーの理論により固層反応相から補助濾紙へと移動させ、発色場所から除外することができ、バックグランドを鮮明にすることができた。このように補助濾紙の役割は、給水容量を増加させて、ペーパークロマトグラフィーの原理の昂進であり、濾紙でなくとも水分を速やかに吸収できる物質、すなわち綿や紙、シリカゲルなどの入手しやすい素材を用いても同様の効果が得られる。綿棒における硫化水素量とメチレンブルー量の関係各濃度の硫化ソーダ溶液50microLを綿棒先端から吸収させる。30秒後、発色液NNDimethylpphenylenediamine1mgml溶液30microLを綿棒先端から吸収させる。30秒後、塩化鉄溶液15microLを綿棒先端から吸収し、補助濾紙管を装着して5分間、室温に放置する。次いで固定液50microLを先端から吸収し、発色させる。補助濾紙管を取り除いて写真撮影後、NF333簡易型分光色差計を用いてA660で測定した。中綿棒を用いた反応後の写真を示した図18。綿棒の頭の部分は反応で生成したメチレンブルーが鮮明な青を示し、綿棒の軸の方に位置する前述の補助濾紙は、未反応の試薬や夾雑物質をクロマトの原理で移動させて赤褐色に変化している明細書ではカラー写真が使えないのでグレースケールで示した。実施例2より得られた方法に基づいて綿棒における硫化水素量とメチレンブルー量の関係を求めたところ、中綿棒を用いても図19、小綿棒の場合でも図20、いずれもほぼ直線関係が得られた。従って、綿棒を用いてメチレンブルー量から硫化水素量を計測することができる。中綿棒と小綿棒とサイズの異なった綿棒を用いて、種々の濃度の硫化水素を与えた後、発色液で反応させ、生成したメチレンブルーの発色をA660で測定した。チオグリセロールの添加による検出試薬の安定化法口臭硫化水素検出試薬の調製NNDimethylpphenylenediamine原液の調製:NNDimethylpphenylenediamine300mgはチオグリセロール各溶液3mlに溶解し、発色原液として低温室で保存した。尚、チオグリセロール各溶液はチオグリセロールをエタノールに溶解して調製した。表3に示すようにNNDimethylpphenylenediamine溶液は保存時間と共に酸化変色し、メチレンブルー生成反応が低下した。一方、チオグリセロールの添加は濃度に依存してNNDimethylpphenylenediamine溶液の酸化変色を抑制した。しかしながら、逆に過剰のチオグリセロール添加はメチレンブルー生成反応を40抑制した。従ってNNDimethylpphenylenediamine300mgはチオグリセロール溶液3mlに溶解し、発色原液として低温室で保存した。NNdimethylpphenylenediamineは、チオグリセロール各溶液3mlに溶解し、発色原液として低温室で保存した。保存期間毎に01MTrisHCl緩衝液で100倍希釈した後、それぞれ300microLを96穴マイクロプレートに注入し、マイクロプレートリーダーでA540を測定した。Porphyromonasgingivalisにおける硫化水素量とメチレンブルー量の関係Perssonらは歯周病原性菌であるPorphyromonasgingivalisは硫化水素の発生源として口臭の一因であると報告した。またWashioらは舌苔において硫化水素を産生する細菌数と口臭が相関すると報告した。これらの事実からPG菌数と硫化水素の発生量の関係について調べた。PGはGAM培地日水製薬;東京を用いて嫌気条件下37度で72時間培養し、発生する硫化水素量は実施例2に従いメチレンブルー量を測定した。その結果、PGは1200ngの硫化水素を産生することがわかった図21。WashioJetalJMedMicrobiol548898952005Hydrogensulfideproducingbacteriaintonguebiofilmandtheirrelationshipwithoralmalodourヒトでの口臭濃度の測定口臭外来患者における舌苔の硫化水素量とオーラルクロマで測定した口臭との関係を調べた。口臭の原因物質である硫化水素は主に口腔内細菌が脱落上皮細胞や白血球を分解して産生され、また舌背に付着する舌苔がその産生部位の一つであると考えられている。事実、Washioらは舌苔において硫化水素を産生する細菌数と口臭が相関することを報告している。これらの事実から実施例3に従い口臭外来患者の舌苔について、メチレンブルー量より硫化水素を測定し、舌苔の硫化水素量とオーラルクロマで測定した口臭との関係について調べた。口臭外来患者の舌苔は綿棒を用いて、舌背中央部を縦に10回擦過して採取した。表4に示すように80歳の女性患者におけるオーラルクロマでの口臭測定値は硫化水素:294ng10ml、メチルメルカプタン:78ng10ml、ジメチルスルファイド:16ng10mlであったが、舌苔の硫化水素量は図22に示すようにメチレンブルーの鮮やかな青色が観察され35ng相当量であることが判った。また74歳の女性患者の口臭は硫化水素:238ng10ml、メチルメルカプタン:53ng10ml、ジメチルスルファイド:68ng10mlで、舌苔の硫化水素量は70ngであった。一般に口臭の産生部位は、口腔内細菌が存在する歯肉溝や歯苔と考えられているが、歯苔より直接サンプリングして硫化水素を定量する方法は未だに報告されていない。従って、本願の方法は、口臭患者の硫化水素発生部位を直接的に特定できる初めての方法である。表4においては、オーラロクロマトで測定した硫化水素量は、患者1と2では、ほぼ似た値であるが、本願の方法では、大きく値は異なった。オーラロクロマトでは、口腔内の全体の気相の分析しかできないが、本願の方法では、口腔内の特定の位置の硫化水素量を定量できることを意味している。新規な特徴を持った方法であるといえる。硫化水素は口臭の原因物質として有名であるが、近年、NOCOと同様にガス状バイオファクターgasotransmitterとして注目されている非特許文献9、10。すなわち、内皮由来弛緩因子、抗炎症因子など情報伝達ガス分子として生理的に重要な機能を有していることが明らかにされつつある。しかしながら、その定量法については既にガスクロマトグラフィーをはじめ比色法など確立されているが、高価な機器の必要性やその操作の煩雑さから必ずしも十分に実用化されていない。このような背景から安価で、かつ簡便で目視できるような測定法の開発が待たれる。GadallaMetalJNeurochem20101131426FallerSetalAnesthesiology2010113104115