"細胞膜透過性ペプチドCPPおよびRNA結合性蛋白質RBPを含むキャリア蛋白質と、該キャリア蛋白質のN末端側またはC末端側に連結した、近赤外線領域の波長を有する光で機能する光増感剤PSTとからなる構造を有することを特徴とするキャリア分子。前記光増感剤PSTが700nm~1000nmの波長を有する光で機能するものである、請求項1に記載のキャリア分子。前記光増感剤PSTが、下記構造式で表される化合物DY750、図3に示す蛍光スペクトルを有する化合物AlexaFluor750または図4に示す吸収スペクトルを有する化合物IRDye800CWである、請求項1または2に記載のキャリア分子。前記キャリア蛋白質が、さらにプロテアソーム分解シグナル配列タグPDSおよび/またはHis-richタグHRを含む、請求項1~3のいずれかに記載のキャリア分子。前記キャリア蛋白質において、N末端側から、細胞膜透過性ペプチドCPP、RNA結合性蛋白質RBP、プロテアソーム分解シグナル配列タグPDSおよび/またはHis-richタグHRがこの順序で連結されており、かつ当該キャリア蛋白質のC末端側に前記光増感剤PSTが連結されている、請求項1~4のいずれかに記載のキャリア分子。前記CPPが、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有する、ヒト免疫不全ウイルス由来Tattrans-activatoroftranscription蛋白質中の12アミノ酸からなるペプチドである、請求項1~5のいずれかに記載のキャリア分子。YGRKKRRQRRRG配列番号1前記RBPが、配列番号4で示されるアミノ酸配列を有する、ヒト由来U1AU1smallnuclearribonucleoproteinAのRNA結合ドメインである、請求項1~6のいずれかに記載のキャリア分子。AVPETRPNHTIYINNLNEKIKKDELKKSLYAIFSQFGQILDILVSRSLKMRGQAFVIFKEVSSATNALRSMQGFPFYDKPMRIQYAKTDSDIIAKMK配列番号4請求項1~7のいずれかに記載のキャリア分子と、該RNAキャリア分子中のRBPに結合したRNAとからなる構造を有するキャリア分子/RNA複合体。前記RNAが、shorthairpinRNAshRNA、smallinterferingRNAsiRNAまたはmicroRNAmiRNAである、請求項8に記載のRNA複合体。請求項8または9に記載のキャリア分子/RNA複合体を含む遺伝子治療薬。がんまたはウイルス疾患を対象とする、請求項10に記載の遺伝子治療薬。生体外において、請求項8または9に記載のキャリア分子/RNA複合体を細胞と接触させて当該細胞内のエンドソームに局在化させる工程、および該キャリア分子/RNA複合体中のPSTが機能する近赤外線領域の波長を有する光を照射して該キャリア分子/RNA複合体を細胞質中に拡散させる工程を含むことを特徴とする、細胞質内へのRNAの送達方法。非特許文献1および2に記載された方法によりRNAを細胞内に導入する場合、励起光として可視光が用いられるが、可視光は生体内への透過性に劣る。そのため、生体の表層たとえば皮膚表面にある細胞へのRNAの導入には適用できるが、生体内の深部にある細胞へのRNAの導入には不適当である。本発明は、細胞障害や発熱の問題を起こさず、生体透過性のよい好ましくは波長700~1000nm程度の近赤外光を利用してRNAを細胞内に導入する手段を提供することを目的とする。本発明者らは、近赤外光を励起光とする蛍光色素のうち特定のものが、非特許文献1等に記載の複合体中の蛍光色素として用いた場合に、近赤外光の照射により光増感剤として作用し、エンドソームから細胞質にRNAを放出させる能力を有することを見いだした図1参照。さらに、その複合体中の融合タンパク質に特定のペプチドをさらに加えることにより、RNAの細胞質内への導入効率をさらに高めることができることを見出し、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は下記の事項を包含する。[1]細胞膜透過性ペプチドCPPおよびRNA結合性蛋白質RBPを含むキャリア蛋白質と、該キャリア蛋白質のN末端側またはC末端側に連結した、近赤外線領域の波長を有する光で機能する光増感剤PSTとからなる構造を有することを特徴とするキャリア分子。[2]前記光増感剤PSTが700nm~1000nmの波長を有する光で機能するものである、[1]に記載のキャリア分子。[3]前記光増感剤PSTが、下記構造式で表される化合物DY750、図3に示す蛍光スペクトルを有する化合物AlexaFluor750または図4に示す吸収スペクトルを有する化合物IRDye800CWである、[1]または[2]に記載のキャリア分子。[4]前記キャリア蛋白質が、さらにプロテアソーム分解シグナル配列タグPDSおよび/またはHis-richタグHRを含む、[1]~[3]のいずれかに記載のキャリア分子。[5]前記キャリア蛋白質において、N末端側から、細胞膜透過性ペプチドCPP、RNA結合性蛋白質RBP、プロテアソーム分解シグナル配列タグPDSおよび/またはHis-richタグHRがこの順序で連結されており、かつ当該キャリア蛋白質のC末端側に前記光増感剤PSTが連結されている、[1]~[4]のいずれかに記載のキャリア分子。[6]前記CPPが、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有する、ヒト免疫不全ウイルス由来Tattrans-activatoroftranscription蛋白質中の12アミノ酸からなるペプチドである、[1]~[5]のいずれかに記載のキャリア分子。YGRKKRRQRRRG配列番号1[7]前記RBPが、配列番号2で示されるアミノ酸配列を有する、ヒト由来U1AU1smallnuclearribonucleoproteinAのRNA結合ドメインである、[1]~[6]のいずれかに記載のキャリア分子。AVPETRPNHTIYINNLNEKIKKDELKKSLYAIFSQFGQILDILVSRSLKMRGQAFVIFKEVSSATNALRSMQGFPFYDKPMRIQYAKTDSDIIAKMK配列番号2[8][1]~[7]のいずれかに記載のキャリア分子と、該RNAキャリア分子中のRBPに結合したRNAとからなる構造を有するキャリア分子/RNA複合体。[9]前記RNAが、shorthairpinRNAshRNA、smallinterferingRNAsiRNAまたはmicroRNAmiRNAである、[8]に記載のRNA複合体。[10][8]または[9]に記載のキャリア分子/RNA複合体を含む遺伝子治療薬または診断薬。[11]がんまたはウイルス疾患を対象とする、[10]に記載の遺伝子治療薬または診断薬。[12]生体外において、[8]または[9]に記載のキャリア分子/RNA複合体を細胞と接触させて当該細胞内のエンドソームに局在化させる工程、および該キャリア分子/RNA複合体中のPSTが機能する近赤外線領域の波長を有する光を照射して該キャリア分子/RNA複合体を細胞質中に拡散させる工程を含むことを特徴とする、細胞質内へのRNAの送達方法。本発明によるRNAキャリアは大部分を生体分子である蛋白質で合成することができるため、生分解性で細胞毒性がなく、安全なRNAキャリアとして使用することができる。また、近赤外光を照射したときのみRNAが細胞質内に拡散するので、位置やタイミングを指定してRNAを細胞質内に送達させ、RNAi等のRNA機能の発現を引き起こすことができる。―キャリア蛋白質―本発明におけるキャリア蛋白質は、少なくとも細胞膜透過性ペプチドCPPとRNA結合性蛋白質RBPを必須の構成要素として含み、好ましくはさらにプロテアソーム分解シグナル配列タグPDSおよび/またはHis-richタグHRを構成要素として含むペプチド融合タンパク質を指す。CPP、RBP、PDS、His6の要素同士は、直接ペプチド結合を介して連結していてもよいし、リンカーとなるペプチド通常1~20個程度のアミノ酸からなるものを介して連結していてもよい。また、上記所定の要素およびリンカーを含むキャリア蛋白質全体がペプチドアミノ酸のみで構成されることが望ましいが、リンカーとしてペプチドアミノ酸以外の化合物、たとえばPEGポリエチレングリコールなどを用いてキャリア蛋白質を構成することも可能である。必要に応じて、キャリア蛋白質の内部または末端に上記要素以外のペプチドが含まれていてもよい。たとえば、発現ベクターが産生した本発明のキャリア蛋白質をアフィニティクロマトグラフィによって精製回収するためのHisタグまたはGSTタグがキャリア蛋白質のN末端付近に連結されていてもよいキャリア蛋白質の回収後に上記Hisタグを切断しない場合は、当該Hisタグを膜透過性を高めるためのHRとして利用することができる。そのようなHRはキャリア蛋白質のN末端側およびC末端側の両方に連結されていてもよい。。また、後述するような手法によりPSTをキャリア蛋白質に連結させるために、システインを末端付近に位置させておいてもよい。細胞膜透過性ペプチドCPPCPPは、一般的にアルギニンなどの塩基性アミノ酸に富んだアミノ酸配列を有する、細胞膜と結合し自身を細胞内に取り込ませる働きを持つポリペプチドとして知られており、膜透過性ドメインProteinTransductionDomainPTDと称されることもある。当初、CPPは、細胞膜を透過して自発的に細胞内に侵入すると考えられたため細胞膜透過性ペプチドと命名されているが、現在では一般的に、主に細胞のエンドサイトーシス経路を経て細胞内に取り込まれると考えられている。そして、CPPに連結させて細胞内に運ぼうとする積み荷の性質により、そのままエンドソームに局在化することも多い。本発明においてCPPは、これと連結した複合体の他の要素と共にエンドソームに局在化する能力を有するペプチドを指す用語として定義される。本発明では様々なCPPを用いることができ、目的とする細胞通常は哺乳動物細胞に対応するものであればよく、その種類は特に限定されるものではない。また、CPPは、野生型のアミノ酸配列を有するものであってもよいし、細胞内に侵入する好ましくは野生型よりも優れた能力を有する範囲で、野生型のアミノ酸配列に対して置換、欠失、付加を施した変異型のアミノ酸配列を有するものであってもよい。たとえば、ヒト免疫不全ウイルスI型HIV1に由来するTransactivatoroftranscriptionproteinTatタンパク質に含まれる、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドは、本発明におけるCPPとして好適である。YGRKKRRQRRRG配列番号1また、フロックハウスウイルスFHVに由来する配列番号3で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、および配列番号4で示されるアミノ酸配列を有するCTP512CytoplasmicTransductionPeptideも、本発明における好ましいCPPとして挙げられる。RRRRNRTRRNRRRVR配列番号3YGRRARRRRRRR配列番号4その他、Revペプチド、ネコヘルペスウイルスCoatタンパク質由来ペプチド、ポリアルギニンなどもCPPとして挙げられる。RNA結合性蛋白質RBPRBPは、RNAの塩基配列または立体構造に依存的または非依存的に結合するタンパク質として公知である。本発明では様々なRBPを用いることができ、その種類は特に限定されるものではないが、通常、RNAの特定の塩基配列または立体構造を認識し、特定のRNAと特異的に結合するものを用いるようにする。また、RBPは、野生型のアミノ酸配列を有するものであってもよいし、RNAと結合する好ましくは野生型よりも優れた能力を有する範囲で、野生型のアミノ酸配列に対して置換、欠失、付加を施した変異型のアミノ酸配列を有するものであってもよい。たとえば、配列番号2で示されるアミノ酸配列を有する、ヒト由来U1AU1smallnuclearribonucleoproteinAのRNA結合ドメインは、本発明におけるRBPとして好適である。AVPETRPNHTIYINNLNEKIKKDELKKSLYAIFSQFGQILDILVSRSLKMRGQAFVIFKEVSSATNALRSMQGFPFYDKPMRIQYAKTDSDIIAKMK配列番号2また、sex-lethalタンパク質は、上記ヒト由来U1AよりもRNA運搬能にやや劣るが、本発明のRBPとして用いてもよい。その他、アミノアシルtRNA合成酵素、伸長因子Tu、RRMモチーフを構造中に有するタンパク質などの、公知のRBPを用いることもできる。プロテアソーム分解シグナル配列タグPDSプロテアソーム分解シグナル配列は、タンパク質の末端に付加されるアミノ酸配列であって、そこにユビキチンが結合し、プロテアソームでその配列を有するタンパク質を分解しうるものとして公知であり、タンパク質分解シグナル配列、分解促進配列などと称されることもある。本発明では様々なPDSを用いることができ、その種類は特に限定されるものではない。また、PDSは、野生型のアミノ酸配列を有するものであってもよいし、プロテアソームにより分解される好ましくは野生型よりも優れた能力を有する範囲で、野生型のアミノ酸配列に対して置換、欠失、付加を施した変異型のアミノ酸配列を有するものであってもよい。たとえば、CL1、CL2、CL6,CL9,CL10、CL11、CL12、CL15、CL16、SL17、PESTなどの公知のPDSを用いることができる。なお、PDSを用いた場合、複合体が細胞質内に導入された後、キャリア蛋白質がプロテアソーム分解系を介して分解され、キャリアタンパク質とRNAの解離が促進されることにより、RNAの機能発現の効果が高くなるものと考えられる。His-richタグHRHRは、典型的には6個のヒスチジンHisからなる、複合体の細胞内への導入効率をより高めることのできるペプチドである。6個のヒスチジンからなるペプチドはアフィニティクロマトグラフィのために利用されているHisタグとしても知られている。本発明におけるHRは、そのようなHisタグと同じく6個のヒスチジンのみからなるペプチドであってもよいし、HRを用いない場合よりも細胞内侵入性を向上させる能力を有する範囲でHis6を改変したペプチド、たとえばヒスチジンの数を7~10個程度に増加させたペプチドや、ヒスチジン以外のアミノ酸を織り交ぜたペプチドであってもよい。HRを構成するアミノ酸数は通常は6~20個程度であり、また全アミノ酸中のヒスチジンの割合は通常は50~100の範囲である。作製方法上記の要素を含むキャリア蛋白質は公知の手段により作製することができる。代表的には、1PCR法を利用して本発明の所定の要素を含むポリペプチドに対応する塩基配列を有するDNAを作製し、2作製したDNAをプラスミド等のベクターに導入し、3部位特異的変異導入法SiteDirectedMutagenesisを利用して、C末端にシステインが配置されたポリペプチドに対応する塩基配列を有するベクターを作製し、4得られたベクターを発現させて目的とするキャリア蛋白質を回収する、という方法が挙げられる。―キャリア分子―本発明におけるキャリア分子は、上述したキャリア蛋白質と、近赤外線領域の波長の光近赤外光で機能する光増感剤とが連結した分子を指す。光増感剤PST近赤外線領域の波長の光近赤外光で機能する光増感剤とは、近赤外光を照射することにより、細胞内に取り込まれエンドソームに局在化していた複合体を細胞質中に拡散させ所定の機能を発揮させる状態にすることが可能である光増感剤をいう。なお、そのメカニズムとしては、近赤外光の照射により励起された光増感剤が一重項酸素を発生させ、これがエンドソーム膜を不安定化させる破壊するためであると推測される。本発明において、近赤外領域は700nm~2500nmを指す。本発明では、そのような近赤外線領域の波長、より好ましくは700~1000nmの波長、特に好ましくは700~850nmの波長の光で機能する、換言すれば極大励起波長がこれらの領域にある光増感剤が用いられる。上記の近赤外線領域の波長が好ましい理由は、生体中のヘモグロビンや水による吸収を回避して、生体組織透過性が高い波長だからである。本発明におけるPSTの具体例としては、DY750DYOMICSGmbH社製、AlexaFluor750登録商標、Invitrogen社製、IRDye800CW登録商標、LI-COR社製が挙げられる。DY750は、下記式に示す構造式および図2に示す励起スペクトル極大励起波長は747nmを有する化合物であるDYOMICSGmbH社ホームページ、httpwwwdyomicscomdy750html参照。AlexaFluor750は、構造式は明らかにされていないが、図3に示す蛍光スペクトルを有する化合物で極大励起波長は749nmであるInvitrogen社ホームページ、httpwwwinvitrogenjpcataloguemolecularprobesalexaalexaindexhtmlおよびhttpwwwinvitrogenjpcataloguemolecularprobesalexaalexafluor750indexhtml参照。IRDye800CWは、構造式は明らかにされていないが、図4に示す励起スペクトル極大励起波長は774nmを有する化合物であるLI-COR社のホームページより入手可能なカタログ、httpbiosupportlicorcomdocs800CWMicro08618pdf参照。作製方法キャリア分子は公知の手法によりキャリア蛋白質とPSTとを連結させて作製することができる。代表的には、キャリア蛋白質中唯一のシステインをN末端付近またはC末端付近に配置しておき、一方PSTには当該システインのチオール基と選択的に反応するキャリア蛋白質中の他のアミノ酸残基とは反応しないマレイミド基を導入しておき、これらの官能基を反応させてキャリア蛋白質にPSTを結合させる手法が挙げられる。このような手法は、市販のマレイミド基の付いたPSTを用いて、末端1箇所にシステインを含むキャリア蛋白質と混ぜ合わせたのちに、ゲル濾過スピンカラムなどで未反応のPSTを除去することで行うことができる。―キャリア分子/RNA複合体―本発明におけるキャリア分子/RNA複合体単に複合体と称するときもある。は、上述したキャリア分子にRBPを介してRNAが結合した複合体を指す。ただし、RNAはRBPとの特異的な結合とともに、正電荷を多く有するCPPたとえばTatとの静電気的非特異的な結合によってキャリア分子と複合体を形成していてもよい。RNAキャリア蛋白質中のRBPに結合させるRNAは、当該RBPのRNA認識部位に認識される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドと、細胞質内に導入することにより所定の機能を発揮する塩基配列を有するオリゴヌクレオチド以下機能性RNAと称する。とを含み、これらは直接結合していても、リンカーとなるオリゴヌクレオチドを介して結合していてもよい。機能性RNAとしては様々なRNAを用いることができ、その種類は特に限定されるものではない。本発明における代表的な機能性RNAとしては、特定の遺伝子の発現を抑制するためのshRNAshorthairpinRNA、siRNAsmallinterferingRNA、miRNAmicroRNAが挙げられる。また、細胞内で特定のタンパク質を合成するためのmRNAや、タンパク質の特定の部位に非天然アミノ酸を導入するための改変されたtRNAも本発明における機能性RNAとして用いることができる。その他、アンチセンスRNA、アプタマーRNA、リボザイムなども本発明における機能性RNAとなり得る。形成方法キャリア分子/RNA複合体は、あらかじめ作製したキャリア分子とRNAとを溶液中で混合することにより、容易に形成させることができる。これらの混合量モルの比率は適宜調整することができるが、たとえば、実施例で用いているキャリアTatU1ATatU1ACL1TatU1AHis6の場合、RNA:キャリア分子=1:5~10とすることが好ましい。―キャリア分子/RNA複合体の細胞質内への送達方法―本発明によるキャリア分子/RNA複合体は、以下のような手順により細胞質内に送達することができる。まず、キャリア分子/RNA複合体を細胞と接触させて当該細胞内のエンドソームに局在化させる。通常、細胞にキャリア分子/RNA複合体を含む溶液を添加すれば、一定の時間の経過の後、エンドサイトーシスにより自ずとキャリア分子/RNA複合体は取り込まれ、細胞内のエンドソームに局在化する。細胞は、通常は動物細胞ヒトの細胞を含むであり、生体内にあるものでも、生体外にあるもの培養細胞でもよい。すなわち、本発明による細胞質内へのRNAの送達方法は、生体内、生体外どちらにおいても適用することができる。次いで、キャリア分子/RNA複合体中のPSTが機能する近赤外線領域の波長を有する光を照射して該キャリア分子/RNA複合体を細胞質中に拡散させる。そのような所定の近赤外光を照射しなければ、キャリア分子/RNA複合体はほとんどエンドソーム中に局在化したままであり、RNAの所定の機能は実質的に発現しない。励起光を照射する手段は特に限定されるものではない。所定の波長の近赤外光を発するキセノンアークランプや色素ポンプレーザーを光源とし、必要に応じて適切なフィルターを用いて、RNAの機能を発現させたい所望の部位の細胞に近赤外光を照射すればよい。このような手順によりキャリア分子/RNA複合体が細胞質内に送達された後は、細胞質中の各種の生体物質の作用によりRNAの所定の機能が発揮される。たとえば、機能性RNAとしてsiRNAまたはshRNAを用いた場合、Dicer酵素の作用によりリンカー配列部分および一本鎖ループ配列部分が切断分解され、二本鎖部分が細胞固有の特定の構造体に認識されることにより、mRNAからの翻訳反応を阻害し、RNAiが達成される。―用途―本発明のキャリア分子は、当該キャリア分子に結合しうる任意のRNAを細胞質内に導入することができ、その用途は特に限定されるものではない。代表的には、本発明のキャリア分子/RNA複合体は、たとえばがんやウイルス疾患を対象とする遺伝子治療薬として使用することができる。この場合、RNA機能性RNAとしては、RNAiによりがんまたはウイルス疾患の原因となっている特定の遺伝子の発現を抑制することのできる、適切な塩基配列を有するものが選択される。1キャリア蛋白質の調製CPPとしてヒト免疫不全ウィルス由来Tat蛋白質の11アミノ酸からなる膜透過ドメインと、RBPとしてヒト由来U1AのRNA結合ドメインとを融合した、配列番号5で示されるアミノ酸配列を有するキャリア蛋白質TatU1Aを調製した。下記配列番号5のアミノ酸配列中、二重下線部1324位がTat、下線部36132位がU1Aの配列である。また、この蛋白質のC末端に、PDSとしてのCL1、あるいはHRとしてのHis6タグを付加した、それぞれ配列番号6および7で示されるアミノ酸配列を有するキャリア蛋白質TatU1ACL1およびTatU1AHis6も同時に調製した。下記配列番号6のアミノ酸配列中、二重下線部1324位がTat、下線部36132位がU1A、一点鎖線135150位がCL1の配列である。下記配列番号7のアミノ酸配列中、二重下線部1324位がTat、下線部36132位がU1A、二点鎖線135141位がHis6の配列である。なお、いずれのキャリア蛋白質も、後にチオール反応性の色素光増感剤を付加するため、C末端はシステインにしてある。このC末端のシステインは、キャリア蛋白質の中で唯一のシステインである。2キャリア蛋白質への光増感剤としての近赤外蛍光色素の付加1で調製したキャリア蛋白質に、近赤外光で励起される蛍光色素を付加した。蛍光色素として、DY750、HiLyteFluor750、IRDye800CW、AlexaFluor750、DyLight750、DyLight800を用いた。ProteinAssayKitを用いて定量したキャリア分子の蛋白質濃度と、分光光度計を用いて吸光度測定により定量した蛍光色素濃度から、蛍光色素付加率を求めた。付加率が10~30程度になるように、未標識のキャリア蛋白質を添加し調製した。3近赤外蛍光色素の付いたキャリア蛋白質によるRNAの細胞内エンドソーム内導入と近赤外光による細胞質への拡散種々の蛍光色素で標識したキャリア蛋白質ここではTatU1Aについて、U1Aが認識する配列を付加したshRNAの細胞質移行を試みた。shRNAとTatU1A蛍光色素コンジュゲート以下これをキャリアと呼ぶをそれぞれ最終濃度200nMおよび2mMとなるように混合し、遮光条件下で37°Cで10分間インキュベーションすることにより、キャリアshRNA複合体を調製した。ここでは、複合体の細胞内局在を可視化するために、FAM標識したshRNAを用いた。約70コンフルエントになるまで培養した哺乳動物細胞に、上記キャリアshRNA混合液を添加し、37°Cで2時間、CO2インキュベーターで培養した。それぞれの蛍光色素の励起波長で光照射し、キャリアshRNA複合体の細胞内局在を蛍光顕微鏡観察により評価した。蛍光色素光増感剤としてAlexaFluor750DY750IRDye800CWを用いた場合にのみ、細胞内に点在していたshRNAが近赤外光の照射により細胞質に拡散した。すなわち、近赤外光照射特異的にキャリアshRNA複合体を細胞質に導入できることを示した。このときHiLyteFluor750、AlexaFluor750、およびDyLight750を用いた場合は750±20nmの光、IRDye800CWおよびDyLight800を用いた場合には780±20nmの光を励起光として用いた。4近赤外光による哺乳動物細胞の細胞質内へのRNA導入とそのRNAの機能発現RNAiの確認750nm付近に吸収をもつ蛍光色素DY750を付加したTatU1Aを用いて、近赤外光照射によるRNAi誘導の検討を行った。shRNAとTatU1ADY750をそれぞれ最終濃度200nMおよび2mMとなるように混合し、遮光条件下で37°Cで10分間インキュベーションすることにより、TatU1ADY750shRNA複合体を調製した。ここでは、EGFPのmRNAを標的とするため、antiEGFP配列のshRNAを用いた。EGFPを安定発現するCHO細胞を約70コンフルエントになるまで培養し、上記TatU1ADY750shRNA混合液を添加し、さらに37°C、2時間CO2インキュベーターで培養した。DY750の励起波長で光照射し、37°Cで20時間CO2インキュベーターで培養した後、細胞を回収し、フローサイトメトリー法によりRNAi効果を検討した。その結果、光照射した細胞集団のEGFP平均蛍光強度は、光照射しなかったものと比較し、顕著に減少した。すなわち、光照射を行った細胞において、EGFPに対するRNAi効果が認められた。以上の結果から、TatU1ADY750によりshRNAを細胞内に導入し、光照射特異的に、つまり近赤外光を照射したときのみshRNAを細胞質に移行させることができ、RNAishRNAの機能発現を誘導することができた。5RNA運搬能の高いキャリア蛋白質の選抜上記1で作製したTatU1Aに対して、CPP部分をFHVまたはCTP512に変えたものを作製した。しかし、FHVU1AやCTPU1Aの細胞質へのRNA運搬能はTatU1Aと大差なかった。次に、CPPとしてTatを用い、RBP部分をSxl蛋白質またはバクテリオファージλNペプチドにしたものを作製した。このTatSxlはのRNA運搬能を持っていたもののTatU1Aより劣っていた。TatλNはRNA運搬能が全く見られなかった。次に、1で作製したTatU1ACL1、TatU1AHis6およびTatU1AのRNA運搬能を調べたところ、TatU1ACL1およびTatU1AHis6はTatU1AよりもRNA運搬能が高かった。すなわち、キャリア蛋白質部分としては、TatU1ACL1およびTatU1AHis6が、以上で検討された中で最もRNAキャリアとしての能力が高かった。6近赤外光による哺乳動物細胞の細胞質内へのRNA導入とそのRNAの機能発現RNAiの確認4と同様、750nm付近に吸収をもつ蛍光色素DY750を付加したTatU1AHis6を用いて、近赤外光照射によるRNAi誘導の検討を行った。shRNAとTatU1AHis6DY750をそれぞれ最終濃度200nMおよび2mMとなるように混合し、遮光条件下で37°Cで10分間インキュベーションすることにより、TatU1AHis6DY750shRNA複合体を調製した。ここでは、EGFPのmRNAを標的とするため、antiEGFP配列のshRNAを用いた。EGFPを安定発現するCHO細胞を約70コンフルエントになるまで培養し、上記TatU1AHis6DY750shRNA混合液を添加し、さらに37°C、2時間CO2インキュベーターで培養した。DY750の励起波長で光照射し、37°Cで20時間CO2インキュベーターで培養した後、細胞を回収し、フローサイトメトリー法によりRNAi効果を検討した。その結果、光照射した細胞集団のEGFP平均蛍光強度は、光照射しなかったものと比較し、顕著に減少した。すなわち、光照射を行った細胞において、EGFPに対するRNAi効果が認められた。以上の結果から、TatU1AHis6DY750によりshRNAを細胞内に導入し、光照射特異的にshRNAを細胞質に移行させることができ、RNAishRNAの機能発現を誘導することができた。7ヒトの腫瘍細胞における近赤外光RNAi誘導4と同様、750nm付近に吸収をもつ蛍光色素DY750を付加したTatU1ACL1を用いて、近赤外光照射によるRNAi誘導の検討を行った。shRNAとTatU1ACL1DY750をそれぞれ最終濃度200nMおよび2mMとなるように混合し、遮光条件下で37°Cで10分間インキュベーションすることにより、TatU1ACL1DY750shRNA複合体を調製した。ここではヒト腫瘍細胞である悪性中皮腫細胞211Hを用いた。EGFPを安定発現する211H細胞を約70コンフルエントになるまで培養し、上記TatU1ACL1DY750shRNA混合液を添加し、さらに37°C、2時間CO2インキュベーターで培養した。DY750の励起波長で光照射し、37°Cで20時間CO2インキュベーターで培養した後、細胞を回収し、フローサイトメトリー法によりRNAi効果を検討した。その結果、光照射した細胞集団のEGFP平均蛍光強度は、光照射しなかったものと比較し、顕著に減少した。すなわち、光照射を行った細胞において、EGFPに対するRNAi効果が認められた。"