"GT468に結合する能力を有し、且つ以下の活性:iGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする腫瘍細胞の死滅化、iiGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする腫瘍細胞の増殖の阻害、iiiGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする腫瘍細胞のコロニー形成の阻害、ならびにivGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする腫瘍細胞の転移の阻害の1またはそれ以上を有する抗体。1またはそれ以上の前記活性が、前記細胞によって発現されたおよび/または前記細胞の表面と結合したGT468の細胞外ドメインへの前記抗体の結合によって誘導される、請求項1に記載の抗体。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする前記腫瘍細胞が癌細胞である、請求項1または2に記載の抗体。前記癌細胞が、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態、ならびに肺の転移性癌から成る群より選択される癌に由来する、請求項3に記載の抗体。モノクローナル、キメラ、ヒトもしくはヒト化抗体、または抗体のフラグメントである、請求項1乃至4のいずれか一項に記載の抗体。GT468が配列番号:2に従うアミノ酸配列を有する、請求項1乃至5のいずれか一項に記載の抗体。前記抗体がGT468に特異的に結合する、請求項1乃至6のいずれか一項に記載の抗体。GT468の天然エピトープに結合する、請求項1乃至7のいずれか一項に記載の抗体。配列番号:2~10および35~82から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質もしくはペプチドまたはその免疫原性フラグメントもしくは誘導体、または前記タンパク質もしくは前記ペプチドまたはその免疫原性フラグメントもしくは誘導体を発現する核酸または宿主細胞で動物を免疫する工程を含む方法によって得られる、請求項1乃至8のいずれか一項に記載の抗体。iアクセッション番号DSMACC28224E9-1H9,DSMACC28269B6-2A9,DSMACC282459D6-2F2,DSMACC282561C11-2B5,DSMACC282378H11-1H6,DSMACC289522-1A-1,DSMACC289322-2A-1,DSMACC289622-9B-1,DSMACC289723-33A-1,DSMACC289123-19A-1,DSMACC2894F1133F7D12,DSMACC28924A122D41A10,DSMACC28984E91D122D4,DSMACC296142H111C112B2,DSMACC296251G62H32B4,DSMACC294316-5B-1,DSMACC295620-11A-1,DSMACC294729-1A-2,DSMACC296429-8B-1,DSMACC295935-48B-1,DSMACC296335-50A-2a,DSMACC295738-10B-1,DSMACC295838-1A-1,DSMACC294844-3A-2,DSMACC294945-2A-1,DSMACC295045-8A-2,DSMACC295148-3B-1,DSMACC295248-4A-1,DSMACC294649-3A-1,DSMACC294549-8A-1,DSMACC294451-1A-1,DSMACC295353-13A-2,DSMACC295553-29A-1,DSMACC296054-4B-2,DSMACC295456-4A-2,DSMACC300162-9B-1,DSMACC30394A51E111B7,DSMACC30377H122E62C4,DSMACC303611D71G102B4,DSMACC303818-2A-1,DSMACC304063-1A-2,またはDSMACC30423E52G4の下で寄託されたクローンによって産生されるまたは前記クローンから得られる抗体、iiiの下の前記抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、iiiiの下の前記抗体の特異性を有する抗体、およびiviの下の前記抗体の抗原結合部分または前記抗原結合部位を含む抗体から成る群より選択される抗体。i下の前記抗体の抗原結合部分または抗原結合部位が、iの下の前記抗体の可変領域を含む、請求項10に記載の抗体。請求項1乃至11のいずれか一項に記載の抗体を産生することができるハイブリドーマ。アクセッション番号DSMACC28224E9-1H9,DSMACC28269B6-2A9,DSMACC282459D6-2F2,DSMACC282561C11-2B5,DSMACC282378H11-1H6,DSMACC289522-1A-1,DSMACC289322-2A-1,DSMACC289622-9B-1,DSMACC289723-33A-1,DSMACC289123-19A-1,DSMACC2894F1133F7D12,DSMACC28924A122D41A10,DSMACC28984E91D122D4,DSMACC296142H111C112B2,DSMACC296251G62H32B4,DSMACC294316-5B-1,DSMACC295620-11A-1,DSMACC294729-1A-2,DSMACC296429-8B-1,DSMACC295935-48B-1,DSMACC296335-50A-2a,DSMACC295738-10B-1,DSMACC295838-1A-1,DSMACC294844-3A-2,DSMACC294945-2A-1,DSMACC295045-8A-2,DSMACC295148-3B-1,DSMACC295248-4A-1,DSMACC294649-3A-1,DSMACC294549-8A-1,DSMACC294451-1A-1,DSMACC295353-13A-2,DSMACC295553-29A-1,DSMACC296054-4B-2,DSMACC295456-4A-2,DSMACC300162-9B-1,DSMACC30394A51E111B7,DSMACC30377H122E62C4,DSMACC303611D71G102B4,DSMACC303818-2A-1,DSMACC304063-1A-2,またはDSMACC30423E52G4の下で寄託されたハイブリドーマ。治療薬に結合した、請求項1乃至11のいずれか一項に記載の抗体を含む複合体。治療薬が、毒素、放射性同位体、薬剤または細胞傷害性物質である、請求項14に記載の複合体。請求項1乃至11のいずれか一項に記載の抗体および/または請求項14もしくは15に記載の複合体、ならびに医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖を阻害する方法であって、前記細胞を、請求項1乃至11のいずれか一項に記載の抗体および/または請求項14もしくは15に記載の複合体と接触させることを含む方法。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を死滅させる方法であって、前記細胞を、請求項1乃至11のいずれか一項に記載の抗体および/または請求項14もしくは15に記載の複合体の有効量と接触させることを含む方法。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の転移拡大を阻害する方法であって、前記細胞を、請求項1乃至11のいずれか一項に記載の抗体および/または請求項14もしくは15に記載の複合体の有効量と接触させることを含む方法。被験者においてGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞が関与する疾患または障害を治療するまたは予防する方法であって、請求項1乃至11のいずれか一項に記載の抗体および/または請求項14もしくは15に記載の複合体、または請求項16に記載の医薬組成物を前記被験者に投与することを含む方法。前記疾患または前記障害が腫瘍関連疾患である、請求項20に記載の方法。前記腫瘍関連疾患が癌である、請求項21に記載の方法。前記癌が、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態、ならびに肺の転移性癌から成る群より選択される、請求項22に記載の方法。GT468は生細胞上の抗体による標的となり得、そのような抗体は、増殖阻害のような抗腫瘍作用を促進し得る。GT468は増殖に関与するだけでなく、細胞の運動性、移動および浸潤にも関わる。最も興味深い点として、これらの性質すべてが、腫瘍表現型に実質的に寄与するのみならず、ヒト栄養膜の固有の性質でもあり、その生理的特徴は、速やかに成長し、子宮組織に効率よく侵入することである。ADCCおよびCDCのような免疫エフェクター機能を媒介するそれらの潜在能に加えて、これらの機能すべてに同時に干渉する、GT468に対するmAbが構築できると期待される。本発明は、一般に、腫瘍関連疾患、例えば癌、特に乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態を含む、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞に関連する疾患を治療するおよび/または予防するための治療薬として有用な抗体を提供する。1つの実施形態では、癌疾患は肺の転移性癌である。1つの態様では、本発明は、GT468に結合する能力を有する抗体に関する。本明細書で述べる抗体は、好ましくは、GT468上に存在するエピトープ、好ましくはGT468の細胞外ドメイン内に位置するエピトープ、より好ましくは配列番号:3~10および35~82に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体である。好ましくは、抗体は、細胞表面上に位置するGT468に結合する能力を有し、好ましくはGT468の細胞外ドメイン内、好ましくはGT468のアミノ酸残基23~212内に位置する1またはそれ以上のエピトープに結合し、最も好ましくは配列番号:3~10および35~82のアミノ酸配列の1つの中に位置するエピトープに結合する。1つの好ましい実施形態では、抗体は配列番号:3~10および35~82のアミノ酸配列の1またはそれ以上に特異的である。様々な実施形態において、抗体は、配列番号:2のアミノ酸29~119、好ましくはアミノ酸29~212、より好ましくはアミノ酸23~212を含むペプチドに結合する能力を有する。本発明に包含されるモノクローナル抗体は、IgA、IgG1~4、IgE、IgMおよびIgD抗体を含む。1つの実施形態では、抗体はIgG1抗体、より詳細にはIgG1κまたはIgG1λアイソタイプである。別の実施形態では、抗体はIgG3抗体、より詳細にはIgG3κまたはIgG3λアイソタイプである。さらに別の実施形態では、抗体はIgG4抗体、より詳細にはIgG4κまたはIgG4λアイソタイプである。さらに別の実施形態では、抗体はIgA1またはIgA2抗体である。さらに別の実施形態では、抗体はIgM抗体である。1つの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:75~79に従うペプチドの1またはそれ以上に結合する。1つの実施形態では、抗体は、配列番号:75に従うペプチドおよび/または配列番号:76に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:75に従うペプチドおよび配列番号:76に従うペプチドに結合する。別の実施形態では、抗体は、配列番号:77に従うペプチドおよび/または配列番号:78に従うペプチドおよび/または配列番号:79に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:78に従うペプチドおよび配列番号:79に従うペプチドに結合するか、または配列番号:77に従うペプチド、配列番号:78に従うペプチドおよび配列番号:79に従うペプチドに結合する。1つの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:4に従うペプチドまたは配列番号:80に従うペプチドを免疫のために使用して得られる。別の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:6に従うペプチドまたは配列番号:81に従うペプチドを免疫のために使用して得られる。好ましくは、本発明の抗体は前記ペプチドの1またはそれ以上に結合する。さらなる実施形態では、配列番号:75に従うペプチドおよび/または配列番号:76に従うペプチドに結合する、より好ましくは配列番号:75に従うペプチドおよび配列番号:76に従うペプチドに結合する抗体は、配列番号:4に従うペプチドまたは配列番号:80に従うペプチドを免疫のために使用して得られる。別の実施形態では、配列番号:77に従うペプチドおよび/または配列番号:78に従うペプチドおよび/または配列番号:79に従うペプチドに結合する、より好ましくは配列番号:78に従うペプチドおよび配列番号:79に従うペプチドに結合する、または配列番号:77に従うペプチド、配列番号:78に従うペプチドおよび配列番号:79に従うペプチドに結合する抗体は、配列番号:6に従うペプチドまたは配列番号:81に従うペプチドを免疫のために使用して得られる。1つの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:60~66に従う、好ましくは配列番号:61~66に従うペプチドの1またはそれ以上に結合する。1つの実施形態では、抗体は、配列番号:60に従うペプチドおよび/または配列番号:61に従うペプチドおよび/または配列番号:62に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:60に従うペプチドおよび配列番号:61に従うペプチドおよび配列番号:62に従うペプチドに結合する。1つの実施形態では、抗体は、配列番号:61に従うペプチドおよび/または配列番号:62に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:61に従うペプチドおよび配列番号:62に従うペプチドに結合する。別の実施形態では、抗体は、配列番号:64に従うペプチドおよび/または配列番号:65に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:64に従うペプチドおよび配列番号:65に従うペプチドに結合する。別の実施形態では、抗体は、配列番号:65に従うペプチドおよび/または配列番号:66に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:65に従うペプチドおよび配列番号:66に従うペプチドに結合する。1つの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:82に従うペプチドを免疫のために使用して得られる。好ましくは、本発明の抗体は前記ペプチドに結合する。配列番号:82に従うペプチドは、ペプチドのアミノ酸1と16の間のジスルフィド結合の形成を助けるために付加されたC末端GSリンカーを有する。このペプチドは、おそらくGT468の天然立体配座に類似する。配列番号:82に従うペプチドを免疫のために使用して得られたハイブリドーマ51-1A-1によって産生された抗体は、GT468を発現する癌細胞の増殖およびコロニー形成に対して強い阻害活性を示した。さらなる実施形態では、配列番号:64に従うペプチドおよび/または配列番号:65に従うペプチドに結合する、より好ましくは配列番号:64に従うペプチドおよび配列番号:65に従うペプチドに結合する抗体、または配列番号:65に従うペプチドおよび/または配列番号:66に従うペプチドに結合する、より好ましくは配列番号:65に従うペプチドおよび配列番号:66に従うペプチドに結合する抗体は、配列番号:82に従うペプチドを免疫のために使用して得られる。1つの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:57~60に従うペプチドの1またはそれ以上に結合する。1つの実施形態では、抗体は、配列番号:57に従うペプチドおよび/または配列番号:58に従うペプチドおよび/または配列番号:59に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:57に従うペプチドおよび配列番号:58に従うペプチドに結合するか、または配列番号:57に従うペプチドおよび配列番号:58に従うペプチドおよび配列番号:59に従うペプチドに結合する。別の実施形態では、抗体は、配列番号:59に従うペプチドおよび/または配列番号:60に従うペプチドに結合し、より好ましくは配列番号:59に従うペプチドおよび配列番号:60に従うペプチドに結合する。1つの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:3に従うペプチドを免疫のために使用して得られる。好ましくは、本発明の抗体は前記ペプチドに結合する。好ましくは、本発明の抗体は、癌細胞、特に本明細書で言及する癌型の細胞に結合し、好ましくは、非癌性細胞には実質的に結合せず、より好ましくは胎盤細胞および精巣細胞以外の非癌性細胞には実質的に結合しない。好ましくは、癌細胞のようなGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞への前記抗体の結合は、前記細胞の死滅を媒介する、ならびに/または運動性、移動、浸潤、増殖および/もしくはコロニー形成などの、そのような細胞の1もしくはそれ以上の活性を阻害する。好ましくは、抗体は前記細胞の増殖および/またはコロニー形成を阻害する。本発明の抗体による、細胞の死滅ならびに/または細胞の1もしくはそれ以上の活性の阻害、特に細胞増殖およびコロニー形成の阻害、は、好ましくは前記細胞によって発現されるおよび/または前記細胞の細胞表面と結合している、GT468への抗体の結合によって誘導される。そのような細胞の死滅および/または細胞の1もしくはそれ以上の活性の阻害は、本明細書で述べるように治療に利用できる。特に、細胞の死滅および/または細胞の増殖の阻害および/または細胞のコロニー形成の阻害は、癌転移を含む、癌を治療するまたは予防するために利用できる。細胞の運動性、移動、浸潤、増殖および/またはコロニー形成の阻害は、特に、癌の転移および癌細胞の転移拡大を治療するまたは予防するために利用できる。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞は、好ましくは癌細胞であり、特に、以下の癌疾患:乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態の腫瘍形成性癌細胞から成る群より選択される。1つの実施形態では、癌疾患は肺の転移性癌である。本発明の抗体は、標的細胞傷害、すなわち腫瘍細胞の死滅をもたらすために1またはそれ以上の治療エフェクター成分、例えば放射性標識、細胞毒、治療用酵素、アポトーシスを誘導する物質等に結合し得る。好ましくは、本発明の抗体は、補体依存性細胞傷害CDCを介した溶解、抗体依存性細胞傷害ADCCを介した溶解、アポトーシス、同型接着および/または食作用を誘導することによって、好ましくはCDC媒介性溶解および/またはADCC媒介性溶解を誘導することによって細胞の死滅を媒介する。しかし、本発明はまた、抗体が、補体依存性細胞傷害CDCを介した溶解、抗体依存性細胞傷害ADCCを介した溶解、アポトーシス、同型接着および/または食作用を誘導せずに、細胞の死滅ならびに/または細胞の1もしくはそれ以上の活性の阻害、例えば細胞増殖およびコロニー形成の阻害のような本明細書で述べるその活性を及ぼす実施形態を包含する。例えば、本発明の抗体はまた、単に細胞表面上のGT468に結合することによって、したがって、例えば細胞の増殖をブロックすることによっても作用を及ぼし得る。1つの実施形態では、本発明の抗体は細胞のCDC媒介性溶解を誘導しない。好ましくは、細胞のADCC媒介性溶解は、特定の実施形態では単球、単核細胞、NK細胞およびPMNから成る群より選択される、エフェクター細胞の存在下で起こり、そして食作用はマクロファージによるものである。1つの特に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞、好ましくは乳癌細胞などの癌細胞の増殖を阻害するまたは低減する活性を有する。この活性は、ブロモデオキシウリジン5-ブロモ-2-デオキシウリジン、BrdUを使用したアッセイにおいてGT468を発現する癌細胞の増殖を測定することにより、インビトロinvitroで測定できる。BrdUは、チミジンの類似体である合成ヌクレオシドであり、複製細胞の新たに合成されたDNAに組み込まれて細胞周期のS期の間に、DNA複製の間にチミジンを置換することができる。例えばBrdUに特異的な抗体を使用して、組み込まれた化学物質を検出することは、そのDNAを活発に複製していた細胞を示す。細胞株BT-549、Caov-3、EFO-21、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468およびMDA-MB-231は、GT468発現癌細胞として使用できる。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、細胞株SK-BR-3、MCF-7およびMDA-MB-468の1またはそれ以上の増殖を阻害または低減し、好ましくは細胞株SK-BR-3およびMCF-7の両方の増殖を阻害または低減し、最も好ましくは細胞株SK-BR-3、MCF-7およびMDA-MB-468のすべての増殖を阻害または低減する。これに関して本発明の好ましい抗体は、iハイブリドーマ35-48B-1、35-50A-2a、38-10B-1、38-1A-1、45-2A-1、45-8A-2、48-3B-1、48-4A-1、49-3A-1、51-1A-1、53-13A-2、53-29A1、56-4A-2、62-9B-1、78H111H6および44-3A-2によって産生されるおよび/または前記ハイブリドーマから得られる抗体、iiiの下の抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、ならびにiiiiの下の抗体の特異性を有する抗体および、特に、iの下の抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含む抗体、から成る群より選択される。これに関して本発明の特に好ましい抗体は、iハイブリドーマ35-48B-1、48-3B-1、51-1A-1および56-4A-2によって産生されるおよび/または前記ハイブリドーマから得られる抗体、iiiの下の抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、ならびにiiiiの下の抗体の特異性を有する抗体および、特に、iの下の抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含む抗体、から成る群より選択される。1つの特に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞、好ましくは乳癌細胞などの癌細胞のコロニー形成を阻害するまたは低減する活性を有する。この活性は、クローン原性アッセイにおいてインビトロで測定することができる。細胞株BT-549、Caov-3、EFO-21、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468およびMDA-MB-231は、GT468発現癌細胞として使用できる。クローン原性アッセイは、細胞の生存および増殖への特定物質の有効性を試験するための微生物学技術である。このアッセイは、増殖中の腫瘍細胞への薬剤または放射線の効果を測定するために癌の研究室においてしばしば使用される。実験は3つの主要な工程:i細胞、特に癌細胞の試料に治療を適用する工程、ii組織培養容器に細胞を植える工程、およびiii細胞を増殖させる工程を含む。生じたコロニーを固定し、染色して、計数する。コロニー形成は、個々の腫瘍細胞が器官に定着した場合の転移の形成に関して重要である。抗体の阻害活性は、転移の形成を抑制する上でのそれらの潜在能を示す。クローン原性アッセイにおいてコロニー形成を阻害または低減する活性を有する抗体は、特に本明細書で言及する癌型の、転移および癌細胞の転移拡大を治療するまたは予防するために特に有用である。これに関して本発明の好ましい抗体は、iハイブリドーマ51G62H32B4、78H111H6、16-5B-1、22-1A-1、29-8B-1および51-1A-1によって産生されるおよび/または前記ハイブリドーマから得られる抗体、iiiの下の抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、ならびにiiiiの下の抗体の特異性を有する抗体および、特に、iの下の抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含む抗体、から成る群より選択される。これに関して本発明の特に好ましい抗体は、iハイブリドーマ51G62H32B4、29-8B-1および51-1A-1によって産生されるおよび/または前記ハイブリドーマから得られる抗体、iiiの下の抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、ならびにiiiiの下の抗体の特異性を有する抗体および、特に、iの下の抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含む抗体、から成る群より選択される。1つの特に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、上記で説明したようにGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖を阻害するまたは低減する活性を有し、且つ、上記で説明したようにGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のコロニー形成を阻害するまたは低減する活性を有する。これに関して本発明の好ましい抗体は、iハイブリドーマ51-1A-1によって産生されるおよび/またはハイブリドーマ51-1A-1から得られる抗体、iiiの下の抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、ならびにiiiiの下の抗体の特異性を有する抗体および、特に、iの下の抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含む抗体から成る群より選択される。1つの実施形態では、本発明は、iGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞に結合し、且つiiGT468を発現しないおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴としない細胞には結合しない抗体に関する。本発明の抗体は、好ましくは、iGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の死滅を媒介し、および/または前記細胞の増殖を阻害し、且つiiGT468を発現しないおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴としない細胞の死滅を媒介しない、および/または前記細胞の増殖を阻害しない。本発明の抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒトもしくはヒト化抗体、または抗体のフラグメントであり得、IgG1、IgG2、好ましくはIgG2aおよびIgG2b、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、分泌型IgA、IgDおよびIgE抗体から成る群より選択され得る。本発明の抗体は完全ヒト抗体を含む。そのような抗体は、V-D-J組換えおよびアイソタイプスイッチを受けることにより、GT468に対するヒトモノクローナル抗体の多重アイソタイプを産生することができる、非ヒトトランスジェニック動物、例えばトランスジェニックマウスにおいて作製し得る。そのようなトランスジェニック動物はまた、米国特許出願第2003/0017534号に開示されているようなポリクローナル抗体を産生するためのトランスジェニックウサギであり得る。GT468抗原への本発明の抗体の結合は、例えば補体系の活性化によって、GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞例えば腫瘍細胞の死滅を媒介し得る、ならびに/またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞例えば腫瘍細胞の増殖を阻害し得る。あるいは、またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の死滅を媒介することならびに/またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖を阻害することに加えて、GT468抗原への本発明の抗体の結合は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞例えば腫瘍細胞の運動性、移動、コロニー形成および/または浸潤を阻害することができ、したがって、腫瘍細胞の転移拡大を阻害し得る。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の死滅は、以下の機構:GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の補体依存性細胞傷害CDC;GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のアポトーシス;GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のエフェクター細胞食作用;またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のエフェクター細胞抗体依存性細胞傷害ADCC、の1またはそれ以上によって起こり得る。本発明のすべての態様によれば、GT468は、好ましくはヒトGT468であり、好ましくは配列番号:2に従うアミノ酸配列を有する、より好ましくは配列番号:2に従うアミノ酸配列の細胞外ドメインのアミノ酸配列を有する、特に配列番号:2のアミノ酸23~212にわたるアミノ酸配列を有するヒトGT468である。特に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:3~10および35~82のような、生細胞の表面に存在するGT468の天然エピトープに結合する。さらなる好ましい実施形態では、本発明の抗体は、癌細胞、好ましくは乳癌細胞に特異的である。好ましくは、本発明の抗体は、細胞株BT-549、Caov-3、EFO-21、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468およびMDA-MB-231のようなGT468を発現する癌細胞に特異的であり、NUG-C4胃癌細胞のようなGT468を発現しない癌細胞には結合しない。本発明のある実施形態では、GT468は細胞表面上で発現されるおよび/または細胞の表面と結合する。本発明の抗体は、配列番号:2~10および35~82から成る群より選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質もしくはペプチド、またはその免疫原性フラグメントもしくは誘導体、または前記タンパク質もしくはペプチドまたはその免疫原性フラグメントもしくは誘導体を発現する核酸または宿主細胞で動物を免疫する工程を含む方法によって入手し得る。好ましくは、本発明の抗体は、上記のタンパク質、ペプチドまたはその免疫原性フラグメントもしくは誘導体に特異的である。免疫において使用されるタンパク質またはペプチドに関連して、誘導体は、それが由来するタンパク質またはペプチドと同じ免疫原性を有する、そのようなタンパク質またはペプチドの変異体に関する。特に、抗体、中でもモノクローナル抗体の作製のために免疫において使用される場合のタンパク質またはペプチドの誘導体は、前記タンパク質またはペプチドを免疫において使用した場合に得られる抗体と同じ特異性を有する抗体を提供する。例えば、そのような誘導体は、1またはそれ以上のアミノ酸の欠失、置換または付加を含み得る。特に、前記誘導体は、N末端またはC末端のいずれかまたはその両方にシステインなどの1またはそれ以上のアミノ酸の付加を含み得る。特に好ましい実施形態では、本発明の抗体は、アクセッション番号DSMACC28224E9-1H9,DSMACC28269B6-2A9,DSMACC282459D6-2F2,DSMACC282561C11-2B5,DSMACC282378H11-1H6,DSMACC289522-1A-1,DSMACC289322-2A-1,DSMACC289622-9B-1,DSMACC289723-33A-1,DSMACC289123-19A-1,DSMACC2894F1133F7D12,DSMACC28924A122D41A10,DSMACC28984E91D122D4,DSMACC296142H111C112B2,DSMACC296251G62H32B4,DSMACC294316-5B-1,DSMACC295620-11A-1,DSMACC294729-1A-2,DSMACC296429-8B-1,DSMACC295935-48B-1,DSMACC296335-50A-2a,DSMACC295738-10B-1,DSMACC295838-1A-1,DSMACC294844-3A-2,DSMACC294945-2A-1,DSMACC295045-8A-2,DSMACC295148-3B-1,DSMACC295248-4A-1,DSMACC294649-3A-1,DSMACC294549-8A-1,DSMACC294451-1A-1,DSMACC295353-13A-2,DSMACC295553-29A-1,DSMACC296054-4B-2,DSMACC295456-4A-2,DSMACC300162-9B-1,DSMACC30394A51E111B7,DSMACC30377H122E62C4,DSMACC303611D71G102B4,DSMACC303818-2A-1,DSMACC304063-1A-2,またはDSMACC30423E52G4を有するクローンによって産生される。1つの実施形態では、本発明の抗体は、毒素、放射性同位体、薬剤または細胞傷害性物質などの治療薬に連結される。さらなる態様では、本発明は、本発明の抗体を産生することができるハイブリドーマに関する。好ましいハイブリドーマは、アクセッション番号DSMACC28224E9-1H9,DSMACC28269B6-2A9,DSMACC282459D6-2F2,DSMACC282561C11-2B5,DSMACC282378H11-1H6,DSMACC289522-1A-1,DSMACC289322-2A-1,DSMACC289622-9B-1,DSMACC289723-33A-1,DSMACC289123-19A-1,DSMACC2894F1133F7D12,DSMACC28924A122D41A10,DSMACC28984E91D122D4,DSMACC296142H111C112B2,DSMACC296251G62H32B4,DSMACC294316-5B-1,DSMACC295620-11A-1,DSMACC294729-1A-2,DSMACC296429-8B-1,DSMACC295935-48B-1,DSMACC296335-50A-2a,DSMACC295738-10B-1,DSMACC295838-1A-1,DSMACC294844-3A-2,DSMACC294945-2A-1,DSMACC295045-8A-2,DSMACC295148-3B-1,DSMACC295248-4A-1,DSMACC294649-3A-1,DSMACC294549-8A-1,DSMACC294451-1A-1,DSMACC295353-13A-2,DSMACC295553-29A-1,DSMACC296054-4B-2,DSMACC295456-4A-2,DSMACC300162-9B-1,DSMACC30394A51E111B7,DSMACC30377H122E62C4,DSMACC303611D71G102B4,DSMACC303818-2A-1,DSMACC304063-1A-2,またはDSMACC30423E52G4を有するものである。本発明の抗体は、本明細書では、抗体の名称に言及することによっておよび/または抗体を産生するクローン、例えば4E9-1H9に言及することによって指定される。好ましくは、本発明の抗体は、癌細胞および非悪性細胞を含む種々の細胞型によって発現されるGT468変異体を識別する能力を有する。本発明の抗体は、好ましくは、GT468に結合することにより、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の死滅を媒介する。好ましくは、GT468は前記細胞の表面上で発現される。1つの実施形態では、本発明の抗体は、体依存性細胞傷害CDC、例えばGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の少なくとも約20~40のCDC媒介性溶解、好ましくは約40~50のCDC媒介性溶解、より好ましくは50以上のCDC媒介性溶解を誘導する。あるいは、またはCDCを誘導することに加えて、本発明の抗体は、エフェクター細胞例えば単球、単核細胞、NK細胞およびPMNの存在下で、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の抗体依存性細胞傷害ADCCを誘導し得る。本発明の抗体は、GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のアポトーシスを誘導する、GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の同型接着を誘導する、ならびに/またはマクロファージの存在下でGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の食作用を誘導する能力を有し得る。本発明の抗体は、上述した機能特性の1またはそれ以上を有し得る。好ましくは、本発明の抗体は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のCDC媒介性溶解およびADCC媒介性溶解を誘導し、より好ましくは、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のADCC媒介性溶解を誘導するが、前記細胞のCDC媒介性溶解は誘導しない。本発明の抗体についての例示的な標的細胞は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする癌細胞を含むが、これらに限定されない。特に好ましい実施形態では、本発明の抗体によって媒介される細胞の死滅はGT468特異的である、すなわち本発明の抗体は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の死滅、好ましくはCDCおよび/またはADCC媒介性溶解を媒介するが、GT468を発現しないおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴としない細胞の死滅は媒介しない。上述した抗体は、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態などの癌の治療または予防において腫瘍細胞の死滅を媒介するために使用され得る。1つの実施形態では、癌疾患は肺の転移性癌である。本発明の抗体は、マウス、ラット、ウサギ、モルモットおよびヒトを含むがこれらに限定されない、様々な種に由来し得る。本発明の抗体はまた、1つの種、好ましくはヒトに由来する抗体定常領域が別の種に由来する抗原結合部位と組み合わされているキメラ分子を包含する。さらに、本発明の抗体は、非ヒト種に由来する抗体の抗原結合部位がヒト起源の定常領域およびフレームワーク領域と組み合わされているヒト化分子を包含する。本発明の抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含み、IgG2a例えばIgG2a、κ、λ、IgG2b例えばIgG2b、κ、λ、IgG3例えばIgG3、κ、λおよびIgM抗体を含む。しかし、IgG1、IgA1、IgA2、分泌型IgA、IgDおよびIgE抗体を含む、他の抗体アイソタイプも本発明に包含される。抗体は、全長抗体または、例えばFab、Fab2、Fv、一本鎖Fvフラグメントもしくは二重特異性抗体を含む、その抗原結合フラグメントであり得る。さらに、抗原結合フラグメントは、i免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合した結合ドメインポリペプチド例えば重鎖可変領域または軽鎖可変領域など、iiヒンジ領域に融合した免疫グロブリン重鎖CH2定常領域、およびiiiCH2定常領域に融合した免疫グロブリン重鎖CH3定常領域、を含む結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質を包含する。そのような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、米国特許出願第2003/0118592号および同第2003/0133939号においてさらに開示されている。本発明の抗体は、好ましくは約1~100nMまたはそれ以下の解離平衡定数KDでGT468から解離する。好ましくは、本発明の抗体は関連細胞表面抗原と交差反応せず、したがってそれらの機能を阻害しない。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、以下の性質:aGT468に対する特異性;b約100nMまたはそれ以下、好ましくは約5~10nMまたはそれ以下、より好ましくは約1~3nMまたはそれ以下の、GT468への結合親和性;cCD55/59陰性細胞またはCD55/59陽性細胞に対して高レベルのCDCを媒介する能力;dGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖を阻害する能力;eGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のアポトーシスを誘導する能力;fGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の同型接着を誘導する能力;gエフェクター細胞の存在下でGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のADCCを誘導する能力;hGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする腫瘍細胞を有する被験者の生存を延長させる能力;iGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を枯渇させる能力;j低レベルのGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を枯渇させる能力;ならびに/またはk生細胞の表面でGT468を凝集させる能力の1またはそれ以上によって特徴づけることができる。本発明の抗GT468抗体は、誘導体化する、他の結合特異性部分に連結する、または他の結合特異性部分と共発現させることができる。特定の実施形態では、本発明は、GT468に対する少なくとも1つの第一結合特異性部分例えば抗GT468抗体またはそのミメティック、およびFc受容体例えばFcγRIなどのFcγ受容体、もしくは任意の他のFc受容体またはT細胞受容体、例えばCD3に対する結合特異性のような、エフェクター細胞に対する第二結合特異性部分を含む、二重特異性または多重特異性分子を提供する。したがって、本発明は、GT468と、Fc受容体またはT細胞受容体、例えばCD3の両方に結合する二重特異性および多重特異性分子を包含する。Fc受容体の例は、IgG受容体、Fcγ受容体FcγR、例えばFcγRICD64、FcγRIICD32およびFcγRIIICD16である。IgA受容体例えばFcαRIなどの他のFc受容体も標的とすることができる。Fc受容体は、好ましくはエフェクター細胞、例えば単球、マクロファージまたは活性化単核細胞の表面上に位置する。好ましい実施形態では、二重特異性および多重特異性分子は、受容体の免疫グロブリンFc例えばIgGまたはIgA結合部位とは異なる部位でFc受容体に結合する。それゆえ、二重特異性および多重特異性分子の結合は、生理的レベルの免疫グロブリンによってブロックされない。さらに別の態様では、本発明の抗GT468抗体を誘導体化するか、別の機能的分子、例えば別のペプチドもしくはタンパク質例えばFabフラグメントに連結するまたは前記分子と共発現させる。例えば、本発明の抗体は、1またはそれ以上の他の分子実体、例えば別の抗体例えば二重特異性または多重特異性抗体を作製するため、細胞毒、細胞リガンドまたは抗原例えばイムノトキシンなどの免疫複合体を作製するためなどに機能的に連結することができる例えば化学結合、遺伝子融合、非共有結合的会合または他の方法によって。本発明の抗体は、他の治療成分、例えば放射性同位体、低分子抗癌薬、組換えサイトカインまたはケモカインに連結することができる。したがって、本発明は、多種多様な抗体複合体、二重特異性および多重特異性分子、ならびに融合タンパク質を包含し、これらのすべてが、GT468発現細胞および/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞に結合し、他の分子をそのような細胞に標的するために使用できる。一般に、本発明の目的において、本明細書で述べる抗体複合体、二重特異性および多重特異性分子、ならびに融合タンパク質などのすべての抗体誘導体は、抗体という用語に包含される。さらなる態様では、本発明はまた、非免疫グロブリンドメインに由来するGT468結合タンパク質、特に一本鎖タンパク質を考慮する。そのような結合タンパク質およびそれらの生産のための方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Binzetal.2005NatureBiotechnology2310:1257-1268に記載されている。免疫グロブリンまたは免疫グロブリン由来の結合分子に関して本明細書で与えられる教示は、対応して非免疫グロブリンドメインに由来する結合分子にも適用されることが了解されるべきである。特に、非免疫グロブリンドメインに由来するそのような結合分子を使用して、前記標的を発現するおよび/またはその細胞表面と前記標的の結合を特徴とする細胞のGT468をブロックし、したがって、本発明の抗体に関して本明細書で開示される治療効果、特に腫瘍細胞の増殖のような本明細書で開示される腫瘍細胞の1またはそれ以上の活性の阻害を生じさせることが可能である。義務的ではないが、例えば抗体のFc領域への融合によって、そのような非免疫グロブリン結合分子に抗体のエフェクター機能を付与することが可能である。本発明は、一般に、細胞によって発現されるおよび/または細胞の表面と結合しているGT468を標的とすることによる、疾患、特に腫瘍疾患の治療および/または診断を包含する。これらの方法は、そのような細胞の選択的検出および/または根絶を提供し、それによりGT468を発現しないおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴としない正常細胞への有害作用を最小限に抑える。治療または診断のための好ましい疾患は、腫瘍疾患、特に本明細書で述べるような癌疾患などの、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞が関与するものである。1つの態様では、本発明は、本発明の抗体の1つまたは本発明の抗体の組合せを含有する組成物、例えば医薬組成物および診断組成物/キットを提供する。本発明の医薬組成物は、医薬的に許容される担体を含有してもよく、場合により1またはそれ以上の補助剤、安定剤等を含有してもよい。特定の実施形態では、組成物は、異なるエピトープに結合するまたは、CDCおよび/もしくはADCCを誘導することならびにアポトーシスを誘導することのような、異なる機能特徴を有する抗体の組合せを含有する。本発明のこの実施形態では、抗体は、組合せとして、例えば2またはそれ以上の抗GT468モノクローナル抗体を含有する医薬組成物として使用され得る。例えば、異なるが補完的な活性を有する抗GT468抗体を、所望治療効果を達成するために単一療法において組み合せることができる。好ましい実施形態では、組成物は、CDCを媒介する抗GT468抗体を、アポトーシスを誘導する別の抗GT468抗体と組み合せて含有する。別の実施形態では、組成物は、エフェクター細胞の存在下で標的細胞の極めて有効な死滅を媒介する抗GT468抗体を、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖を阻害する別の抗GT468抗体と組み合せて含有する。本発明はまた、本発明の2またはそれ以上の抗GT468抗体の同時投与または連続投与を含み、好ましくは、前記抗体の少なくとも1つはキメラ抗GT468抗体であり、そして少なくとも1つのさらなる抗体はヒト抗GT468抗体であって、それらの抗体はGT468の同じエピトープまたは異なるエピトープに結合する。好ましくは、本発明のキメラGT468抗体を最初に投与し、次いで本発明のヒト抗GT468抗体を投与するが、ヒト抗GT468抗体は、好ましくは長期間にわたって、すなわち維持療法として投与する。本発明の抗体、複合体、二重特異性/多重特異性分子および組成物は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖が阻害されるおよび/または前記細胞が死滅するように、前記細胞を前記抗体、複合体、二重特異性/多重特異性分子または組成物の有効量と接触させることにより、GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖を阻害するためならびに/またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を選択的に死滅させるための様々な方法において使用できる。1つの実施形態では、前記方法は、場合によりエフェクター細胞の存在下で、例えばCDC、アポトーシス、ADCC、食作用によって、またはこれらの機構の2もしくはそれ以上の組合せによって、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を死滅させることを含む。本発明の抗体を使用して阻害するまたは死滅させることができる、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞は、癌細胞を含む。本発明の抗体、複合体、二重特異性/多重特異性分子および組成物は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞が関与する様々な疾患を、そのような疾患に罹患している患者に抗体を投与することによって治療するおよび/または予防するために使用できる。治療例えば改善できるまたは予防できる例示的な疾患は、腫瘍形成性疾患を含むが、これらに限定されない。治療できるおよび/または予防できる腫瘍形成性疾患の例は、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態などの癌疾患を含む。1つの実施形態では、癌疾患は肺の転移性癌である。1つの態様では、本発明は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の運動性、移動、浸潤、成長増殖およびコロニー形成から選択される1またはそれ以上の活性、好ましくは成長および/またはコロニー形成を阻害する方法であって、前記細胞を本発明の抗体、複合体、二重特異性/多重特異性分子または組成物の有効量と接触させることを含む方法に関する。GT468は、好ましくは前期細胞の表面上で発現される。さらなる態様では、本発明は、本発明の抗体、複合体、二重特異性/多重特異性分子または組成物を被験者に投与することを含む、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞が関与する疾患または障害を治療するまたは予防する方法に関する。好ましくは、前記疾患または障害は腫瘍関連疾患であり、特定の実施形態では、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態から成る群より選択される。1つの実施形態では、癌疾患は肺の転移性癌である。GT468は、好ましくは前記細胞の表面上で発現される。本発明は、腫瘍疾患の予防および/または治療処置のため、すなわち腫瘍疾患を有するまたは腫瘍疾患を発症する危険性がある患者を治療するための、本明細書で述べる作用物質および組成物の使用を含み得る。1つの態様では、本発明は、本明細書で述べる作用物質および組成物の1またはそれ以上の投与を含む、腫瘍増殖を阻害するための方法を提供する。好ましくは、本明細書で述べる作用物質および組成物は、胎盤組織および/または精巣組織などの、組織または器官が腫瘍を有さない場合はその細胞がGT468を実質的に発現するおよび/またはその細胞表面でのGT468の発現を特徴とする組織または器官に、治療活性物質が送達されないまたは実質的に送達されないような方法で投与される。このために、本明細書で述べる作用物質および組成物を局所的に投与することができる。1つの態様では、本発明は、本明細書で述べる治療方法において使用するための本明細書で述べる抗体を提供する。1つの実施形態では、本発明は、本明細書で述べる治療方法において使用するために本明細書で述べる医薬組成物を提供する。本発明の特定の実施形態では、抗体を投与される被験者は、化学療法剤、放射線または、サイトカインなどの、Fc受容体、例えばFcγ受容体の発現もしくは活性を調節する、例えば増強するもしくは阻害する作用物質で付加的に治療される。治療期間中に投与するための典型的なサイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子G-CSF、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子GM-CSF、インターフェロンγIFN-γおよび腫瘍壊死因子TNFを含む。典型的な治療薬は、中でも特に、ドキソルビシン、シスプラチン、タキソテール、5-フルオロウラシル、メトトレキサート、ゲムシタビンおよびシクロホスファミドなどの抗腫瘍薬を含む。さらに別の態様では、本発明は、抗体を得るためにマウスなどの非ヒト動物をヒトGT468またはそのペプチドフラグメントで免疫する免疫方法に関する。免疫のための好ましいペプチドは、配列番号:2~10および35~82から成る群より選択されるものまたはそれらの誘導体である。したがって、好ましい実施形態では、本発明の抗体は、配列番号:2~10および35~82から成る群より選択されるペプチドまたはそれらの誘導体を使用した免疫によって得られるものである。同様に、GT468に対する抗体は、トランスジェニックマウスなどのトランスジェニック非ヒト動物において作製できる。トランスジェニック非ヒト動物は、抗体の全部または一部をコードする重鎖導入遺伝子と軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスであり得る。野生型ならびにトランスジェニック非ヒト動物は、GT468抗原ならびに/またはGT468を発現する核酸および/もしくは細胞またはそのペプチドフラグメントの精製または冨化製剤で免疫することができる。好ましくは、非ヒト動物は、V-D-J組換えおよびアイソタイプスイッチを受けることにより、GT468に対するヒトモノクローナル抗体の多数のアイソタイプ例えばIgG、IgAおよび/またはIgMを産生することができる。アイソタイプスイッチは、例えば古典的または非古典的アイソタイプスイッチによって起こり得る。したがって、さらに別の態様では、本発明は、上述した非ヒト動物由来の単離されたB細胞を提供する。単離されたB細胞を、次に、不死化細胞への融合によって不死化して、本発明の抗体の供給源例えばハイブリドーマを提供することができる。そのようなハイブリドーマすなわち本発明の抗体を産生するも、本発明の範囲に包含される。さらなる態様では、本発明は、本発明の抗体を使用して、患者から単離された生物学的試料においてGT468またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を検出するおよび/またはその量を測定することを含む、腫瘍疾患の診断、検出または観測のための方法に関する。生物学的試料は、腫瘍疾患を有する、腫瘍疾患を有するもしくは腫瘍疾患に罹患することが疑われる、または腫瘍疾患の潜在的可能性を有する患者から単離され得る。本発明による腫瘍疾患の診断、検出または観測のための方法の1つの実施形態では、生物学的試料および/または対照/標準試料は、腫瘍疾患による罹患に関して診断、検出または観測されることになる組織または器官に対応する組織または器官に由来する;例えば診断、検出または観測される腫瘍疾患は乳癌であり、生物学的試料および/または対照/標準試料は乳房組織である。そのような組織および器官を、例えば種々の腫瘍疾患および癌に関連して、本明細書で説明する。腫瘍疾患の診断、検出または観測のための方法の1つの実施形態では、生物学的試料は、組織または器官が腫瘍を有さない場合はその細胞がGT468を実質的に発現しないおよび/またはその細胞表面とGT468の実質的な結合を特徴としない組織または器官に由来する。好ましくは、前記組織は、胎盤組織または精巣組織以外の組織である。典型的には、生物学的試料中の標的分子のレベルを標準レベルと比較し、前記標準レベルからの逸脱が被験者における腫瘍疾患の存在および/または病期を示す。標準レベルは、対照試料例えば健常組織または健常被験者からのにおいて測定されたレベルまたは健常被験者からの平均レベルであり得る。前記標準レベルからの逸脱は、何らかの有意の変化、例えば少なくとも10、20または30、好ましくは少なくとも40または50、またはそれ以上の上昇または低下を表す。好ましくは、前記生物学的試料中のGT468の存在またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の存在、または標準レベルと比較して高い、生物学的試料中のGT468の量またはGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の量は、腫瘍疾患の存在を示す。典型的には、本発明の方法における検出および/または量の測定は、標的分子に特異的に結合する標識抗体の使用を含む。特定の態様では、本発明は、検出可能な標識に連結された本発明の抗体を患者に投与することを含む、腫瘍疾患の検出、すなわち腫瘍疾患の位置または部位、例えば特定の組織または器官の決定のための方法に関する。前記患者における組織または器官の標識化は、前記組織または器官における腫瘍疾患の存在または危険性を指示し得る。本明細書で例示されるように、本発明の抗体は、抗体を発現するハイブリドーマから直接入手できるか、またはクローニングして、宿主細胞例えばCHO細胞またはリンパ球細胞において組換え発現させることができる。宿主細胞のさらなる例は、大腸菌E.coliなどの微生物および酵母などの真菌である。あるいは、本発明の抗体は、トランスジェニック非ヒト動物または植物において組換え生産することができる。しかし、本発明もまた、本明細書で開示される免疫方法を用いた免疫またはワクチン接種により、抗体が患者においてインサイチューinsituで生成される実施形態も考慮する。本発明の抗体を作製するための好ましいハイブリドーマ細胞は、以下の名称とアクセッション番号を有する、DSMZInhoffenstr.7B,38124Braunschweig,Germanyに寄託されたものである:1.2007年3月13日に寄託された、4E9-1H9、アクセッション番号DSMACC28222.2007年3月13日に寄託された、9B6-2A9、アクセッション番号DSMACC28263.2007年3月13日に寄託された、59D6-2F2、アクセッション番号DSMACC28244.2007年3月13日に寄託された、61C11-2B5、アクセッション番号DSMACC28255.2007年3月13日に寄託された、78H11-1H6、アクセッション番号DSMACC28236.2008年3月11日に寄託された、22-1A-1、アクセッション番号DSMACC28957.2008年3月11日に寄託された、22-2A-1、アクセッション番号DSMACC28938.2008年3月11日に寄託された、22-9B-1、アクセッション番号DSMACC28969.2008年3月11日に寄託された、23-33A-1、アクセッション番号DSMACC289710.2008年3月11日に寄託された、23-19A-1、アクセッション番号DSMACC289111.2008年3月11日に寄託された、F1133F7D12、アクセッション番号DSMACC289412.2008年3月11日に寄託された、4A122D41A10、アクセッション番号DSMACC289213.2008年3月11日に寄託された、4E91D122D4、アクセッション番号DSMACC289814.2008年9月1日に寄託された、42H111C112B2、アクセッション番号DSMACC296115.2008年9月1日に寄託された、51G62H32B4、アクセッション番号DSMACC296216.2008年9月1日に寄託された、16-5B-1、アクセッション番号DSMACC294317.2008年9月1日に寄託された、20-11A-1、アクセッション番号DSMACC295618.2008年9月1日に寄託された、29-1A-2、アクセッション番号DSMACC294719.2008年9月2日に寄託された、29-8B-1、アクセッション番号DSMACC296420.2008年9月1日に寄託された、35-48B-1、アクセッション番号DSMACC295921.2008年9月1日に寄託された、35-50A-2a、アクセッション番号DSMACC296322.2008年9月1日に寄託された、38-10B-1、アクセッション番号DSMACC295723.2008年9月1日に寄託された、38-1A-1、アクセッション番号DSMACC295824.2008年9月1日に寄託された、44-3A-2、アクセッション番号DSMACC294825.2008年9月1日に寄託された、45-2A-1、アクセッション番号DSMACC294926.2008年9月1日に寄託された、45-8A-2、アクセッション番号DSMACC295027.2008年9月1日に寄託された、48-3B-1、アクセッション番号DSMACC295128.2008年9月1日に寄託された、48-4A-1、アクセッション番号DSMACC295229.2008年9月1日に寄託された、49-3A-1、アクセッション番号DSMACC294630.2008年9月1日に寄託された、49-8A-1、アクセッション番号DSMACC294531.2008年9月1日に寄託された、51-1A-1、アクセッション番号DSMACC294432.2008年9月1日に寄託された、53-13A-2、アクセッション番号DSMACC295333.2008年9月1日に寄託された、53-29A-1、アクセッション番号DSMACC295534.2008年9月1日に寄託された、54-4B-2、アクセッション番号DSMACC296035.2008年9月1日に寄託された、56-4A-2、アクセッション番号DSMACC295436.2009年7月16日に寄託された、62-9B-1、アクセッション番号DSMACC300137.2010年2月18日に寄託された、4A51E111B7、アクセッション番号DSMACC303938.2010年2月18日に寄託された、7H122E62C4、アクセッション番号DSMACC303739.2010年2月18日に寄託された、11D71G102B4、アクセッション番号DSMACC303640.2010年2月18日に寄託された、18-2A-1、アクセッション番号DSMACC303841.2010年2月18日に寄託された、63-1A-2、アクセッション番号DSMACC304042.2010年3月3日に寄託された、3E52G4、アクセッション番号DSMACC3042。本発明の好ましい抗体は、上述したハイブリドーマによって産生されるおよび上述したハイブリドーマから得られるものならびにそのキメラ化およびヒト化形態である。本発明のさらなる好ましい抗体は、上述したハイブリドーマによって産生されるおよび上述したハイブリドーマから得られる抗体の特異性を有するものならびに、特に、上述したハイブリドーマによって産生されるおよび上述したハイブリドーマから得られる抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含むものである。好ましい実施形態では、抗体、特に本発明によるキメラ形態の抗体は、配列番号:17もしくは24によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントのようなヒト重鎖定常領域に由来するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域CHを含む抗体を包含する。さらなる好ましい実施形態では、抗体、特に本発明によるキメラ形態の抗体は、配列番号:18もしくは22によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントのようなヒト軽鎖定常領域に由来するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域CLを含む抗体を包含する。特に好ましい実施形態では、抗体、特に本発明によるキメラ形態の抗体は、配列番号:17もしくは24によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントのようなヒトCHに由来するアミノ酸配列を有するCHを含み、且つ配列番号:18もしくは22によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントのようなヒトCLに由来するアミノ酸配列を有するCLを含む抗体を包含する。配列番号:17によって表されるアミノ酸配列を含むCHは、配列番号:20によって表される核酸配列を含む核酸によってコードされ得る。配列番号:24によって表されるアミノ酸配列を含むCHは、配列番号:23によって表される核酸配列を含む核酸によってコードされ得る。配列番号:18によって表されるアミノ酸配列を含むCLは、配列番号:19によって表される核酸配列を含む核酸によってコードされ得る。配列番号:22によって表されるアミノ酸配列を含むCLは、配列番号:21によって表される核酸配列を含む核酸によってコードされ得る。上記で使用されるフラグメントまたはアミノ酸配列のフラグメントは、抗体配列の一部、すなわちN末端および/またはC末端で短縮された抗体配列であり、抗体において前記抗体配列に置き換わった場合、GT468への前記抗体の結合および好ましくは本明細書で述べる前記抗体の機能、例えばCDC媒介性溶解またはADCC媒介性溶解の機能を保持する配列に関する。好ましくは、アミノ酸配列のフラグメントは、前記アミノ酸配列からのアミノ酸残基の少なくとも80、好ましくは少なくとも90、95、96、97、98または99を含む。本明細書で述べるアミノ酸配列のフラグメントは、前記アミノ酸配列をコードする核酸配列のそれぞれのフラグメントによってコードされ得る。本発明はまた、本明細書で述べる抗体またはその部分、例えば抗体鎖をコードする遺伝子または核酸配列を含む核酸に関する。核酸は、ベクター、例えばプラスミド、コスミド、ウイルス、バクテリオファージまたは、例えば遺伝子工学において通常使用される、他のベクター内に含まれ得る。ベクターは、適切な宿主細胞中および適切な条件下でのベクターの選択を可能にするマーカー遺伝子のようなさらなる遺伝子を含み得る。さらに、ベクターは、適切な宿主におけるコード領域の適切な発現を可能にする発現制御エレメントを含み得る。そのような制御エレメントは当業者に公知であり、プロモータ、スプライスカセットおよび翻訳開始コドンを含み得る。好ましくは、本発明の核酸は、真核細胞または原核細胞における発現を可能にする上記発現制御配列に作動可能に連結される。真核細胞または原核細胞における発現を確実にする制御エレメントは当業者に周知である。本発明による核酸分子の構築のため、上記核酸分子を含むベクターの構築のため、適切に選択された宿主細胞へのベクターの導入のため、発現を生じさせるまたは達成するための方法は、当分野において周知である。本発明のさらなる態様は、本明細書で開示される核酸またはベクターを含む宿主細胞に関する。本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになる。用語の定義本発明がより容易に理解され得るために、特定の用語を最初に定義する。付加的な定義は詳細な説明全体にわたって示す。GT468という用語は、好ましくはヒトGT468、特にi配列番号:1の核酸配列を含む核酸のような、配列番号:2のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸またはii配列番号:2のアミノ酸配列を含むタンパク質に関し、そして前記配列のあらゆる変異体、特に突然変異体、スプライス変異体、立体配座変異体、アイソフォーム、対立遺伝子変異体、種変異体および種ホモログ、特に天然に存在するものを包含する。対立遺伝子変異体は、遺伝子の正常配列の変化に関するものであり、その重要性はしばしば不明である。完全な遺伝子配列決定は、しばしば所与の遺伝子についての数多くの対立遺伝子変異体を同定する。種ホモログは、所与の核酸またはアミノ酸配列が起源とするものとは異なる種を起源とする核酸またはアミノ酸配列である。GT468という用語は、iGT468スプライス変異体、ii特にNグリコシル化状態のような異なるグリコシル化を有する変異体を含む、GT468の翻訳後修飾変異体、iiiGT468立体配座変異体、ivGT468癌関連およびGT468非癌関連変異体を包含する。1つの実施形態では、GT468という用語は、細胞外ドメインまたはエクトドメインに対応するGT468の部分に関し、好ましくはN末端疎水性ドメインを含まないGT468のアミノ酸配列に関する。GT468という用語は、配列番号:2のアミノ酸29~119、好ましくはアミノ酸29~212、より好ましくはアミノ酸23~212または配列番号:2の変異体の対応するアミノ酸を含むタンパク質を包含する。本発明によれば、GT468についての細胞外ドメインまたはエクトドメインという用語は、GT468を発現する細胞の表面と結合して認められるGT468の部分に関する。好ましくは、前記細胞外ドメインまたはエクトドメインは細胞外区画に存在する。GT468の細胞外ドメインまたはエクトドメインは、好ましくはN末端疎水性ドメインを欠く完全長GT468の部分を指す。本発明によれば、GT468についての疎水性ドメインという用語は、細胞外ドメインの一部ではなく、好ましくはGT468のN末端近傍に位置する疎水性配列を含むGT468の部分に関する。GT468の疎水性ドメインは、GT468の疎水性配列に先行し、N末端に位置する配列を含み得る。配列番号:2に関して、N末端疎水性ドメインは、好ましくはアミノ酸1~22を含む。本発明のGT468ポリペプチドに関して同定されるいかなる疎水性ドメインまたは配列も、疎水性ドメインまたは配列を同定するために当分野で通常使用される基準に従って同定されることが了解される。疎水性ドメインの正確な境界は異なり得るが、おそらく本明細書で最初に同定されたドメインのいずれかの末端の約5アミノ酸以下が異なると考えられる。場合により、それゆえ、GT468ポリペプチドの細胞外ドメインは、本明細書で同定される疎水性ドメイン/細胞外ドメイン境界のいずれかの側に約5またはそれ以下のアミノ酸を含み得る。細胞表面は、当分野におけるその通常の意味に従って使用され、したがって、タンパク質および他の分子による結合のためにアクセス可能な細胞の外側を含む。細胞の表面上で発現されるGT468という表現は、細胞によって発現されるGT468が前記細胞の表面と結合して認められることを意味する。GT468は、細胞の表面に位置し、細胞に添加されたGT468特異的抗体による結合のためにアクセス可能である場合、前記細胞の表面と結合している。好ましい実施形態では、その細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞は、GT468を発現する細胞である。GT468が細胞によって発現される場合、前記細胞の表面と結合したGT468は、発現されるGT468の一部だけ、特に上記で定義したその細胞ドメインだけであってもよいことが了解されるべきである。本発明によれば、発現および/または結合のレベルが胎盤細胞または胎盤組織における発現および/または結合と比較してより低い場合、GT468は細胞において実質的に発現されないおよび/または細胞表面と実質的に結合していない。好ましくは、発現および/または結合のレベルは、胎盤細胞または胎盤組織における発現および/または結合の10未満、好ましくは5、3、2、1、0.5、0.1または0.05未満であるかまたはさらにより低い。好ましくは、発現および/または結合のレベルが、脳、肺、乳房、結腸、肝臓、胃、腎臓、前立腺、膵臓、卵巣、脾臓、皮膚、心筋および子宮内膜の1またはそれ以上の非腫瘍形成性、非癌性組織における発現および/または結合のレベルを2倍程度、好ましくは1.5倍程度しか上回らず、好ましくは前記非腫瘍形成性、非癌性組織における発現および/または結合のレベルを超えない場合、GT468は細胞において実質的に発現されないおよび/または細胞表面と実質的に結合していない。好ましくは、発現もしくは結合のレベルが検出限界より下である場合および/または発現もしくは結合のレベルが細胞に添加されたGT468特異的抗体による結合を可能にするには低すぎる場合、GT468は細胞において実質的に発現されないおよび/または細胞表面と実質的に結合していない。本発明によれば、発現および/または結合のレベルが、脳、肺、乳房、結腸、肝臓、胃、腎臓、前立腺、膵臓、卵巣、脾臓、皮膚、心筋および子宮内膜の1またはそれ以上の非腫瘍形成性、非癌性組織における発現および/または結合のレベルを好ましくは2倍以上、好ましくは10倍、100倍、1000倍または10000倍上回る場合、GT468は細胞において発現されるおよび/または細胞表面と結合している。好ましくは、発現もしくは結合のレベルが検出限界より上である場合および/または発現もしくは結合のレベルが細胞に添加されたGT468特異的抗体による結合を可能にするのに十分なだけ高い場合、GT468は細胞において発現されるおよび/または細胞表面と結合している。好ましくは、細胞において発現されるGT468は、前記細胞の表面上で発現されるまたは表面上に露出されている。ラフトという用語は、細胞の形質膜の外葉領域に位置するスフィンゴ脂質とコレステロールに富む膜マイクロドメインを指す。そのようなドメイン内で結合する特定のタンパク質の能力および凝集体または巣状凝集体を形成するそれらの能力は、タンパク質の機能を生じさせることができる。例えば、そのような構造体内へのGT468分子の移行により、本発明の抗体が結合した後、形質膜において高密度のGT468抗原-抗体複合体が形成される。そのような高密度のGT468抗原-抗体複合体は、CDCの間の補体系の効率的な活性化を可能にし得る。本発明によれば、疾患という用語は、癌、特に本明細書で述べる癌の形態を含む、何らかの病的状態を指す。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞に関連する疾患は、本発明によれば、疾患組織または器官の細胞における発現および/または結合が、好ましくは健常組織または器官での状態と比較して増大していることを意味する。増大は、少なくとも10、特に少なくとも20、少なくとも50、少なくとも100、少なくとも200、少なくとも500、少なくとも1000、少なくとも10000またはさらにそれ以上の増大を指す。1つの実施形態では、発現および/または細胞表面との結合は疾患組織においてのみ認められ、一方健常組織での発現は抑制されている。本発明によれば、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞に関連する疾患は、癌疾患などの腫瘍疾患を含む。さらに、本発明によれば、癌疾患などの腫瘍疾患は、好ましくは、腫瘍細胞または癌細胞がGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とするものである。本明細書で使用される、腫瘍疾患、腫瘍関連疾患または腫瘍形成性疾患は、腫瘍および/または腫瘍転移の生成または生成する傾向をもたらし得る、異常に調節された細胞成長、増殖、分化、接着および/または移動によって特徴づけられる疾患を包含する。腫瘍細胞とは、急速で制御されない細胞増殖によって成長し、新たな増殖を開始させた刺激が停止した後も成長し続ける異常細胞を意味する。腫瘍とは、急速で制御されない細胞増殖によって成長し、新たな増殖を開始させた刺激が停止した後も成長し続ける細胞または組織の異常な群を意味する。腫瘍は、構造機構および正常組織との機能的協調の部分的または完全な欠如を示し、通常は、良性、前悪性または悪性のいずれかであり得る、明確な組織塊を形成する。好ましくは、本発明による腫瘍疾患、腫瘍関連疾患または腫瘍形成性疾患は、癌疾患、すなわち悪性疾患であり、腫瘍細胞は癌細胞である。好ましくは、腫瘍疾患、腫瘍関連疾患または腫瘍形成性疾患は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞によって特徴づけられ、腫瘍細胞は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞は、好ましくは腫瘍細胞または癌細胞であり、好ましくは本明細書で述べる腫瘍および癌の腫瘍細胞または癌細胞である。好ましくは、そのような細胞は、胎盤細胞および/または精巣細胞以外の細胞である。本発明による好ましい癌疾患または癌は、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態から成る群より選択される。1つの実施形態では、癌疾患は、肺の転移性癌から成る群より選択される。本発明によれば、癌腫は、器官の内層上皮細胞から発症する癌である。絨毛癌は、通常は胎盤の、悪性で栄養膜性および高侵襲性の癌である。絨毛癌は肺への早期血行性転移を特徴とする。肉腫は、中胚葉の増殖を生じさせる結合組織骨、軟骨、脂肪の癌である。これは、上皮起源である癌腫と大きく異なる。腎細胞癌または腎細胞腺癌としても知られる腎細胞癌腫は、血液をろ過して老廃物を除去する腎臓内の非常に小さな管である、近位曲尿細管の内層で発生する腎癌である。腎細胞癌腫は、成人における群を抜いて最も一般的なタイプの腎癌であり、すべての尿生殖器腫瘍の中で最も致死的である。腎細胞癌腫の異なるサブタイプは、明細胞腎細胞癌および乳頭状腎細胞癌である。明細胞腎細胞癌は最も一般的な形態の腎細胞癌腫である。顕微鏡下で見た場合、明細胞腎細胞癌を構成する細胞は、非常に色が薄いまたは透明に見える。乳頭状腎細胞癌は2番目に頻度の高いサブタイプである。これらの癌は、腫瘍の、大部分ではないにせよ一部においては、小指様の突起乳頭と呼ばれるを形成する。転移とは、そのもとの部位から身体の別の部分への癌細胞の拡がりを意味する。転移の形成は非常に複雑な過程であり、原発性腫瘍からの悪性細胞の分離、細胞外マトリックスの侵襲、体腔および脈管に入るための内皮基底膜の貫入、および次に、血液によって輸送された後、標的器官の浸潤に依存する。最後に、標的部位における新たな腫瘍の成長は血管新生に依存する。腫瘍転移はしばしば原発性腫瘍の除去後にも起こり、これは、腫瘍細胞または成分が残存し、転移潜在能を発現し得るからである。1つの実施形態では、本発明による転移という用語は、原発性腫瘍および所属リンパ節系から離れた転移に関する遠隔転移に関する。続発性または転移性腫瘍の細胞はもとの腫瘍におけるものに類似する。これは、例えば、卵巣癌が肝臓に転移した場合、続発性腫瘍は異常な肝細胞ではなく異常な卵巣細胞で構成されることを意味する。肝臓における腫瘍は、その場合、肝癌ではなく転移性卵巣癌と呼ばれる。1つの実施形態では、本発明による癌は、転移性乳癌、好ましくは肺の転移性乳癌である。疾患の治療という用語は、疾患またはその症状を治癒する、期間を短縮する、改善する、予防する、進行もしくは悪化を遅らせるもしくは阻止する、または発症を予防するもしくは遅延させることを包含する。患者という用語は、本発明によれば、ヒト、非ヒト霊長動物または別の動物、特に哺乳動物、例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコまたはマウスおよびラットなどのげっ歯動物を意味する。特に好ましい実施形態では、患者はヒトである。本発明によれば、試料は、本発明に従って有用な任意の試料、特に体液を含む組織試料および/または細胞試料のような生物学的試料であり得、パンチ生検を含む組織生検のような従来の方法で、および血液、気管支吸引液、痰、尿、便または他の体液を採取することによって入手し得る。本発明によれば、生物学的試料という用語はまた、生物学的試料の画分を包含する。抗体という用語は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも2本の重H鎖と2本の軽L鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。抗体という用語はまた、すべての組換え形態の抗体、特に本明細書で述べる抗体、例えば原核生物において発現される抗体、非グリコシル化抗体ならびに本明細書で述べる任意の抗原結合抗体フラグメントおよび誘導体を包含する。各々の重鎖は、重鎖可変領域本明細書ではVHと略すと重鎖定常領域から成る。各々の軽鎖は、軽鎖可変領域本明細書ではVLと略すと軽鎖定常領域から成る。VHおよびVL領域は、フレームワーク領域FRと称されるより保存された領域が間に組み入れられた、相補性決定領域CDRと称される超可変性の領域にさらに細分できる。各々のVHとVLは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置された、3つのCDRと4つのFRから成る:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞例えばエフェクター細胞および古典的補体系の第一成分C1qを含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。ヒト化抗体という用語は、非ヒト種からの免疫グロブリンに実質的に由来する抗原結合部位を有する分子であって、分子の残りの免疫グロブリン構造はヒト免疫グロブリンの構造および/または配列に基づく分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全な可変ドメインを含み得るかまたは可変ドメイン内の適切なフレームワーク領域に移植された相補性決定領域CDRだけを含み得る。抗原結合部位は、野生型であり得るかまたは1もしくはそれ以上のアミノ酸置換によって修飾され得る、例えばより厳密にヒト免疫グロブリンに類似するように修飾され得る。ヒト化抗体の一部の形態は、すべてのCDR配列を保存する例えばマウス抗体からの6つのCDRすべてを含むヒト化マウス抗体。また別の形態は、もとの抗体に比べて変化した1またはそれ以上のCDRを有する。キメラ抗体という用語は、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の各々の一部が、特定の種に由来するまたは特定のクラスに属する抗体内の対応する配列と相同であり、鎖の残りのセグメントは別の抗体内の対応する配列に相同である抗体を指す。典型的には、軽鎖と重鎖の両方の可変領域が哺乳動物の1つの種に由来する抗体の可変領域を模倣し、定常部分は別の種に由来する抗体の配列に相同である。そのようなキメラ形態の1つの明らかな利点としては、可変領域が、例えばヒト細胞試料に由来する定常領域と組み合わせて、容易に入手可能なB細胞または非ヒト宿主生物からのハイブリドーマを使用して現在公知のソースから好都合に誘導できることである。可変領域は調製の容易さという利点を有し、特異性がソースに影響されないが、一方定常領域はヒトであるので、抗体を注射したとき非ヒトソースからの定常領域の場合よりもヒト被験者から免疫応答を惹起する可能性が低い。しかし、前記定義はこの特定例に限定されない。抗体の抗原結合部分または単に結合部分という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の1またはそれ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって実行され得ることが示されている。抗体の抗原結合部分という用語に包含される結合フラグメントの例は、iVL、VH、CLおよびCHドメインから成る一価フラグメントである、Fabフラグメント;iiヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された2つのFabフラグメントを含む二価フラグメントである、Fab2フラグメント;iiiVHドメインとCHドメインから成るFdフラグメント;iv抗体の1本の腕のVLドメインとVHドメインから成るFvフラグメント;vVHドメインから成るdAbフラグメントWardetal.,1989Nature341:544-546;vi単離された相補性決定領域CDR、ならびにvii場合により合成リンカーによって連結されていてもよい2またはそれ以上の単離CDRの組合せを含む。さらに、Fvフラグメントの2つのドメイン、VLおよびVHは別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を用いて、VL領域とVH領域が対合して一価分子を形成する一本鎖タンパク質一本鎖FvscFvとして知られる;例えば、Birdetal.1988Science242:423-426;およびHustonetal.1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883参照としてそれらを作製することを可能にする合成リンカーによって連結され得る。そのような一本鎖抗体も、抗体の抗原結合部分という用語に包含されることが意図されている。さらなる例は、i免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合した結合ドメインポリペプチド、iiヒンジ領域に融合した免疫グロブリン重鎖CH2定常領域、およびiiiCH2定常領域に融合した免疫グロブリン重鎖CH3定常領域を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である。結合ドメインポリペプチドは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域であり得る。結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、米国特許出願第2003/0118592号および同第2003/0133939号にさらに開示されている。これらの抗体フラグメントは当業者に公知の従来技術を用いて得られ、フラグメントは無傷抗体と同じ方法で有用性に関してスクリーニングされる。エピトープという用語は、抗体に結合することができるタンパク質決定基を意味し、本明細書では結合という用語は、好ましくは特異的結合に関する。エピトープは、通常はアミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基群から成り、一般に特異的な三次元構造特徴ならびに特異的な電荷特徴を有する。立体配座エピトープと非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下では前者への結合が失われるが後者への結合は失われないという点で識別される。本明細書で使用される不連続エピトープという用語は、タンパク質の一次配列内の少なくとも2つの別々の領域から形成されるタンパク質抗原上の立体配座エピトープを意味する。二重特異性分子という用語は、2つの異なる結合特異性を有する任意の物質、例えばタンパク質、ペプチド、またはタンパク質もしくはペプチド複合体を含むことが意図されている。例えば、前記分子は、a細胞表面抗原およびbエフェクター細胞の表面上のFc受容体に結合し得るまたはそれらと相互作用し得る。多重特異性分子またはヘテロ特異性分子という用語は、3以上の異なる結合特異性を有する任意の物質、例えばタンパク質、ペプチド、またはタンパク質もしくはペプチド複合体を含むことが意図されている。例えば、前記分子は、a細胞表面抗原、bエフェクター細胞の表面上のFc受容体、およびc少なくとも1つの他の成分に結合し得るまたはそれらと相互作用し得る。したがって、本発明は、GT468に対する、およびエフェクター細胞上のFc受容体などの他の標的に対する、二重特異性、三重特異性、四重特異性および他の多重特異性分子を含むが、これらに限定されない。二重特異性抗体という用語はまた、ダイアボディを包含する。ダイアボディは、VHドメインとVLドメインが1本のポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上の2つのドメインの間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって前記ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、2つの抗原結合部位を創製する、二価の二重特異性抗体である例えば、Holliger,P.,etal.1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak,R.J.,etal.1994Structure2:1121-1123参照。本発明はまた、本発明において抗体という用語に包含される、本明細書で述べる抗体の誘導体を含む。抗体誘導体という用語は、抗体の任意の修飾形態、例えば抗体と別の物質または別の抗体の複合体を指す。本明細書で使用される場合、抗体が動物を免疫することによってまたは免疫グロブリン遺伝子ライブラリをスクリーニングすることによってある系から得られ、選択された抗体が、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、さらに一層好ましくは少なくとも96、97、98または99同一である場合、その抗体は特定の生殖細胞系配列に由来する。典型的には、特定生殖細胞系配列に由来する抗体は、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と10個以下のアミノ酸の相違、より好ましくは5個以下、またはさらに一層好ましくは4、3、2または1個以下のアミノ酸の相違を示す。本明細書で使用される場合、ヘテロ抗体という用語は、そのうちの少なくとも2つが異なる特異性を有する、共に連結された2またはそれ以上の抗体、それらの誘導体または抗原結合領域を指す。これらの異なる特異性は、エフェクター細胞上のFc受容体に対する結合特異性、および標的細胞、例えば腫瘍細胞上の抗原またはエピトープに対する結合特異性を含む。本明細書で述べる抗体はヒト抗体であり得る。ヒト抗体という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域と定常領域を有する抗体を含むことが意図されている。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基例えばインビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によってまたはインビボinvivoでの体細胞突然変異によって導入される突然変異を含み得る。本明細書で使用されるモノクローナル抗体という用語は、単一分子組成の抗体分子の製剤を指す。モノクローナル抗体は、特定エピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。1つの実施形態では、モノクローナル抗体は、不死化細胞に融合した、非ヒト動物、例えばマウスから得られたB細胞を含むハイブリドーマによって産生される。本明細書で使用される、組換え抗体という用語は、a免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックまたはトランスクロモソーマルである動物例えばマウスまたはそれから作製されたハイブリドーマから単離された抗体、b抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、c組換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体、およびd免疫グロブリン遺伝子配列の他のDNA配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって作製された、発現された、創製されたまたは単離された抗体などの、組換え手段によって作製される、発現される、創製されるまたは単離されるすべての抗体を包含する。本明細書で使用される、トランスフェクトーマという用語は、CHO細胞、NS/0細胞、HEK293細胞、HEK293T細胞、植物細胞、または酵母細胞を含む真菌などの、抗体を発現する組換え真核生物宿主細胞を包含する。本明細書で使用される、異種抗体は、そのような抗体を産生するトランスジェニック生物に関連して定義される。この用語は、トランスジェニック生物で構成されない生物において認められるものに対応する、および一般にトランスジェニック生物以外の種に由来するアミノ酸配列またはコード核酸配列を有する抗体を指す。本明細書で使用される、ヘテロハイブリッド抗体は、異なる生物起源の軽鎖と重鎖を有する抗体を指す。例えば、マウス軽鎖と結合したヒト重鎖を有する抗体はヘテロハイブリッド抗体である。本明細書で述べる抗体は、好ましくは単離されている。本明細書で使用される単離された抗体は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図されている例えば、GT468に特異的に結合する単離された抗体は、GT468以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。ヒトGT468のエピトープ、アイソフォームまたは変異体に特異的に結合する単離された抗体は、しかし、他の関連抗原、例えば他の種からの関連抗原例えばGT468種ホモログに対して交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、実質的に他の細胞物質および/または化学物質不含であり得る。本発明の1つの実施形態では、単離されたモノクローナル抗体の組合せは、異なる特異性を有し、十分に定義された組成で組み合わされた抗体に関する。本発明による結合という用語は、好ましくは特異的結合に関する。特異的結合は、抗体などの物質が、それが特異的である抗原またはエピトープなどのあらかじめ定められた標的に対し、別の標的への結合に比べてより強く結合することを意味する。ある物質が第一標的に対して、第二標的についての解離定数KDよりも低い解離定数で結合する場合、その物質は第二標的に比べて第一標的により強く結合する。好ましくは、物質が特異的に結合する標的についての解離定数KDは、その物質が特異的に結合しない標的についての解離定数KDよりも10倍以上、好ましくは20倍以上、より好ましくは50倍以上、さらに一層好ましくは100倍、200倍、500倍または1000倍以上低い。典型的には、抗体は、約1×10-7Mまたはそれ以下のKDに相当する親和性で結合し、あらかじめ定められた抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原例えばBSA、カゼインへの結合についてのその親和性より少なくとも2桁低いKDに相当する親和性で所定の抗原に結合する。本明細書で使用される、KDMという用語は、特定の抗体-抗原相互作用の解離平衡定数を指すことが意図されている。本明細書で使用される、アイソタイプは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス例えばIgMまたはIgG1を指す。本明細書で使用される、アイソタイプスイッチは、それによって抗体のクラスまたはアイソタイプがある1つのIgクラスからその他のIgクラスの1つに変化する現象を指す。1つの対象に適用される場合の、本明細書で使用される天然に生じるという用語は、対象が自然界で見出され得るという事実を指す。例えば、自然界で供給源から単離できる生物ウイルスを含む中に存在し、実験室においてヒトによって意図的に改変されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に生じる。本明細書で使用される再編成されたという用語は、Vセグメントが、それぞれ基本的に完全なVHまたはVLドメインをコードする立体配座においてD-JまたはJセグメントに直接隣接して位置する、重鎖または軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の立体配置を指す。再編成された免疫グロブリン抗体遺伝子の遺伝子座は、生殖細胞系DNAとの比較によって同定できる;再編成された遺伝子座は、少なくとも1つの組換え七量体/九量体相同性エレメントを有する。Vセグメントに関して本明細書で使用される再編成されていないまたは生殖細胞系立体配置という用語は、VセグメントがDまたはJセグメントに直接隣接するように組み換えられていない立体配置を指す。本明細書で使用される、核酸分子という用語は、DNA分子およびRNA分子を含むことが意図されている。核酸分子は一本鎖または二本鎖であり得るが、好ましくは二本鎖DNAである。本発明に従って述べる核酸は、好ましくは単離されている。単離された核酸という用語は、本発明によれば、核酸が、i例えばポリメラーゼ連鎖反応PCRによって、インビトロで増幅された、iiクローニングによって組換え生産された、iii例えば切断とゲル電気泳動分画によって、精製された、またはvi例えば化学合成によって、合成されたことを意味する。単離された核酸は、組換えDNA技術による操作のために利用可能な核酸である。核酸は、本発明によれば、単独でまたは同種もしくは異種であり得る他の核酸と組み合わせて存在し得る。好ましい実施形態では、核酸は、前記核酸に関して同種または異種であり得る発現制御配列に機能的に連結されており、同種という用語は、核酸が天然の状態でも発現制御配列に機能的に連結されていることを意味し、異種という用語は、核酸が天然では発現制御配列に機能的に連結されていないことを意味する。RNAおよび/またはタンパク質もしくはペプチドを発現する核酸などの核酸と発現制御配列は、それらが、前記核酸の発現または転写が前記発現制御配列の制御下または影響下にあるように互いに共有結合されている場合、互いに機能的に連結されている。核酸が、次に、コード配列に機能的に連結された発現制御配列により機能的タンパク質へと翻訳される場合、前記発現制御配列の誘導は、コード配列内のフレームシフトを引き起こさずにまたは前記コード配列が所望タンパク質もしくはペプチドへと翻訳されることができない事態を伴わずに、前記核酸の転写を生じさせる。発現制御配列という用語は、本発明によれば、プロモータ、リボソーム結合部位、エンハンサーおよび遺伝子の転写またはmRNAの翻訳を調節する他の制御エレメントを含む。本発明の特定の実施形態では、発現制御配列は調節され得る。発現制御配列の正確な構造は種または細胞型に応じて異なり得るが、一般に、TATAボックス、キャップ配列、CAAT配列等のような、それぞれ転写および翻訳の開始に関与する5非転写配列ならびに5および3非翻訳配列を含む。より詳細には、5非転写発現制御配列は、機能的に連結された核酸の転写制御のためのプロモータ配列を含有するプロモータ領域を含む。発現制御配列はまた、エンハンサー配列または上流活性化配列を含み得る。本発明によれば、プロモータまたはプロモータ領域という用語は、発現される核酸配列に対して上流5側に位置し、RNAポリメラーゼのための認識および結合部位を提供することによって配列の発現を制御する核酸配列に関する。プロモータ領域は、遺伝子の転写の調節に関与するさらなる因子のためのさらなる認識および結合部位を含み得る。プロモータは、原核生物または真核生物遺伝子の転写を制御し得る。さらに、プロモータは誘導的であり得、誘導物質に応答して転写を開始させ得るか、または転写が誘導物質によって制御されない場合は構成的であり得る。誘導的プロモータの制御下にある遺伝子は、誘導物質が存在しない場合は発現されないかまたはわずかだけ発現される。誘導物質の存在下では、遺伝子のスイッチが入って作動するかまたは転写のレベルが上昇する。これは、一般に、特異的転写因子の結合によって媒介される。本発明による好ましいプロモータは、SP6、T3およびT7ポリメラーゼについてのプロモータ、ヒトU6RNAプロモータ、CMVプロモータ、およびある部分または複数の部分が、例えばヒトGAPDHグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼのような他の細胞タンパク質の遺伝子のプロモータのある部分または複数の部分に融合しており、付加的なイントロンを含むかまたは含まない、それらの人工ハイブリッドプロモータ例えばCMVを包含する。本発明によれば、発現という用語は、その最も一般的な意味で使用され、RNAの生産またはRNAとタンパク質/ペプチドの生産を含む。この用語はまた、核酸の部分的発現も含む。さらに、発現は一過性または安定に行われ得る。好ましい実施形態では、核酸分子は、本発明によれば、適切な場合は核酸の発現を制御するプロモータと共に、ベクター内に存在する。ベクターという用語は、本明細書ではその最も一般的な意味で使用され、核酸が、例えば原核細胞および/または真核細胞に導入され、適切な場合はゲノム内に組み込まれることを可能にする、前記核酸のための任意の中間媒体を含む。この種のベクターは、好ましくは細胞において複製および/または発現される。ベクターは、プラスミド、ファージミド、バクテリオファージまたはウイルスゲノムを含む。本明細書で使用されるプラスミドという用語は、一般に、染色体DNAとは独立して複製することができる、染色体外遺伝物質の構築物、通常は環状DNA二本鎖に関する。抗体の発現のためのベクターとして、抗体重鎖と軽鎖が異なるベクター内に存在するベクター型または重鎖と軽鎖が同じベクター内に存在するベクター型のいずれかが使用できる。特定核酸配列およびアミノ酸配列、例えば配列表に示すものに関して本明細書で与える教示は、前記特定配列と機能的に等価の配列、例えば特定アミノ酸配列の性質と同じまたは類似の性質を示すアミノ酸配列および特定核酸配列によってコードされるアミノ酸配列の性質と同じまたは類似の性質を示すアミノ酸配列をコードする核酸配列を生じさせる、前記特定配列の修飾型にも関連するように解釈されるべきである。同様に、特定抗体または特定抗体を産生するハイブリドーマに関して本明細書で与える教示は、特定抗体のアミノ酸配列および/または核酸配列と比較して修飾されているが機能的に等価であるアミノ酸配列および/または核酸配列を特徴とする抗体にも関連するように解釈されるべきである。1つの重要な性質は、抗体のその標的への結合を保持することまたは抗体のエフェクター機能を維持することである。好ましくは、特定配列に関して修飾された配列は、それが抗体内の前記特定配列に取って代わったときGT468への前記抗体の結合を保持し、および好ましくは本明細書で述べる前記抗体の機能、例えばCDC媒介性溶解またはADCC媒介性溶解の機能を保持する。特にCDR、超可変領域および可変領域の配列が、GT468に結合する能力を失わずに修飾され得ることは当業者に認識される。例えば、CDR領域は、本明細書で特定される抗体の領域に同一であるかまたは高度に相同である。高度に相同により、1~5、好ましくは1~4、例えば1~3または1または2の置換がCDR内で為され得ることが企図される。加えて、超可変領域および可変領域は、本明細書で特定して開示される領域と実質的な相同性を示すように修飾され得る。本明細書で述べる特定核酸はまた、特定の宿主細胞または生物においてコドン使用頻度を最適化するために修飾された核酸を含むことが了解されるべきである。生物間でのコドン使用頻度の相違は、異種遺伝子発現に関する様々な問題を導き得る。もとの配列の1またはそれ以上のヌクレオチドを変化させることによるコドン最適化は、核酸が発現される同種または異種宿主における前記核酸の発現の最適化、特に翻訳効率の最適化をもたらすことができる。例えば、ヒトに由来し、抗体の定常領域および/またはフレームワーク領域をコードする核酸を、例えばキメラまたはヒト化抗体を作製するために本発明に従って使用する場合、特に、場合により本明細書で述べる他の生物に由来する核酸などの異種核酸に融合した、前記核酸を、マウスまたはハムスターなどのヒトとは異なる生物からの細胞において発現させる場合は、コドン使用頻度の最適化のために前記核酸を修飾することが好ましいと考えられる。例えば、それぞれ配列番号:19および20に従う核酸配列のような、ヒト軽鎖および重鎖定常領域をコードする核酸配列は、最適化されたコドン使用頻度をもたらすがアミノ酸配列の変化は生じさせない、1またはそれ以上、好ましくは少なくとも1、2、3、4、5、10、15、20および好ましくは10、15、20、25、30、50、70または100までまたはそれ以上のヌクレオチド置換を含むように修飾することができる。そのようなヌクレオチド置換は、好ましくは、配列番号:19および20と、それぞれ、それらの修飾された対応物との以下のアラインメントに示す置換から選択され、コードされるアミノ酸配列に変化を生じさせない、それぞれ配列番号:19および20内のヌクレオチドの置換に関するか、またはそれぞれヒト軽鎖および重鎖定常領域をコードする他の核酸配列内の対応位置での対応する置換に関する。好ましくは、コードされるアミノ酸配列に変化を生じさせない、配列番号:19および20と、それぞれ、それらの修飾された対応物との以下のアラインメントに示す置換はすべて、それぞれヒト軽鎖および重鎖定常領域をコードする核酸配列内で生じる。配列番号:19と配列番号:21のアラインメント:配列番号:20と配列番号:23のアラインメント:さらに、本発明によれば、本明細書で述べるアミノ酸配列、特にヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列を、所望アロタイプ、例えば白人母集団において認められるアロタイプに配列を適合させるように修飾することは望ましい場合がある。そのような修飾は、好ましくは配列番号:17内の以下のアミノ酸置換:K93R、D235EおよびL237M、または他のヒト重鎖定常領域内の対応する位置のアミノ酸置換から成る群より選択される。好ましくは、これらの修飾のすべてがヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列に含まれる。本発明によれば、対応する位置という用語は、2つの核酸またはタンパク質配列の配列アラインメントにおいて互いに整列されるヌクレオチドまたはアミノ酸残基に関する。本発明によれば、核酸配列、アミノ酸配列またはペプチドの変異体、誘導体、修飾形態またはフラグメントは、好ましくは、それぞれそれが由来する核酸配列、アミノ酸配列またはペプチドの機能特性を有する。そのような機能特性は、他の分子との相互作用または他の分子への結合を含む。1つの実施形態では、核酸配列、アミノ酸配列またはペプチドの変異体、誘導体、修飾形態またはフラグメントは、それぞれそれが由来する核酸配列、アミノ酸配列またはペプチドと免疫学的に等価である。好ましくは、特定核酸配列と、前記特定核酸配列に関して修飾されたまたは前記特定核酸配列の変異体である核酸配列との間の相同性の程度は、少なくとも70、好ましくは少なくとも75、より好ましくは少なくとも80、さらに一層好ましくは少なくとも90、または最も好ましくは少なくとも95、96、97、98または99である。GT468核酸変異体に関して、相同性の程度は、好ましくは少なくとも約300、少なくとも約400、少なくとも約450、少なくとも約500、少なくとも約550、少なくとも約600または少なくとも約630ヌクレオチドの領域に対して与えられる。好ましい実施形態では、相同性の程度は、配列表に示す核酸配列などの参照核酸配列の全長に対して与えられる。好ましくは、2つの配列は、互いにハイブリダイズして安定な二本鎖を形成することができ、ハイブリダイゼーションは、好ましくはポリヌクレオチド間の特異的ハイブリダイゼーションを可能にする条件ストリンジェントな条件下で実施される。ストリンジェントな条件は、例えば、MolecularCloning:ALaboratoryManual,J.Sambrooketal.,Editors,2ndEdition,ColdSpringHarborLaboratorypress,ColdSpringHarbor,NewYork,1989またはCurrentProtocolsinMolecularBiology,F.M.Ausubeletal.,Editors,JohnWileySons,Inc.,NewYorkに記載されており、例えば、ハイブリダイゼーション緩衝液3.5×SSC、0.02Ficoll、0.02ポリビニルピロリドン、0.02ウシ血清アルブミン、2.5mMNaH2PO4pH7、0.5SDS、2mMEDTA中、65°Cでのハイブリダイゼーションが参照できる。SSCは、0.15M塩化ナトリウム/0.15Mクエン酸ナトリウム、pH7である。ハイブリダイゼーション後、DNAを転写した膜を、例えば2×SSC中室温で洗浄し、次に0.1~0.5×SSC/0.1×SDS中68°Cまでの温度で洗浄する。本発明において、アミノ酸配列の変異体は、アミノ酸挿入変異体、アミノ酸欠失変異体および/またはアミノ酸置換変異体を含む。好ましくは、実質的な相同性を示すアミノ酸配列間のような、特定アミノ酸配列と、前記特定アミノ酸配列に関して修飾されたまたは前記特定アミノ酸配列の変異体であるアミノ酸配列との間の類似性、好ましくは相同性の程度は、少なくとも70、好ましくは少なくとも80、さらに一層好ましくは少なくとも90、または最も好ましくは少なくとも95、96、97、98または99である。GT468ポリペプチド変異体に関して、類似性または相同性の程度は、好ましくは少なくとも約100、少なくとも約120、少なくとも約140、少なくとも約160、少なくとも約180、少なくとも約200、少なくとも約210または212アミノ酸の領域に対して与えられる。好ましい実施形態では、類似性または相同性の程度は、配列表に示すアミノ酸配列などの参照アミノ酸配列の全長に対して与えられる。上述した修飾配列または配列変異体のすべてが本発明の範囲内である。配列類似性は、同一であるかまたは保存的アミノ酸置換であるアミノ酸の割合を示す。2つのポリペプチドまたは核酸配列の間の配列相同性は、2つの配列の間で同一であるアミノ酸またはヌクレオチドの割合を示す。相同性パーセントは最良アラインメント後に得られ、このパーセントは純粋に統計的であり、2つの配列間の相違はランダムにおよびそれらの全長にわたって分布する。2つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の配列比較は、従来、それらを最適に整列した後これらの配列を比較することによって実施され、前記比較は、配列類似性の局所領域を同定し、比較するためにセグメントごとにまたは比較ウインドウごとに実施される。比較のための配列の最適アラインメントは、手動で行う以外に、SmithandWaterman,1981,AdsApp.Math.2,482の局所相同性アルゴリズムによって、NeddlemanandWunsch,1970,J.Mol.Biol.48,443の局所相同性アルゴリズムによって、PearsonandLipman,1988,Proc.NatlAcad.Sci.USA85,2444の類似性検索法によって、またはこれらのアルゴリズムを用いたコンピュータプログラムWisconsinGeneticsSoftwarePackage,GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,Wis.のGAP、BESTFIT、FASTA、BLASTP、BLASTNおよびTFASTAによって作成され得る。相同性パーセントは、これら2つの配列間の相同性パーセントを得るために比較する2つの配列間で同一の位置の数を決定し、この数を比較した位置の数で除して、得られた結果に100を乗じることによって算定される。保存的置換は、例えば、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および/または両親媒性の類似度に基づいて行われ得る。例えば:a非極性疎水性アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンを含む;b極性中性アミノ酸は、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンを含む;c正電荷を有する塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシンおよびヒスチジンを含む;ならびにd負電荷を有する酸性アミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。置換は、典型的にはa~dの群内で行われ得る。加えて、グリシンとプロリンは、αへリックスを破壊するそれらの能力に基づいて互いに置換され得る。一部の好ましい置換は、以下の群:iSとT;iiPとG;ならびにiiiA、V、LおよびIにおいて行われ得る。公知の遺伝暗号、ならびに組換えおよび合成DNA技術を考慮して、当業者は、保存的アミノ酸変異体をコードするDNAを容易に構築することができる。本発明は、抗体の機能または薬物動態特性を変化させるためにFc領域内で変更が加えられた抗体を包含する。そのような変更は、C1q結合とCDCまたはFcγR結合とADCCの低下または上昇を生じさせ得る。置換は、例えば、重鎖定常領域のアミノ酸残基の1またはそれ以上において実施でき、それにより、修飾抗体と比較して、抗原に結合する能力を保持しながらエフェクター機能の変化を生じさせ得る。米国特許第5,624,821号および同第5,648,260号参照。抗体のインビボ半減期は、分子が無傷CH2ドメインまたは無傷IgFc領域を含まないようにIg定常ドメインまたはIg様定常ドメインのサルベージ受容体エピトープを修飾することによって改善できる。米国特許第6,121,022号および同第6,194,551号参照。インビボ半減期は、Fc領域内に突然変異を作製することによって、例えば252位のロイシンをトレオニンに置換することによって、254位のセリンをトレオニンに置換することによって、または256位のフェニルアラニンをトレオニンに置換することによってさらに延長できる。米国特許第6,277,375号参照。さらに、抗体のエフェクター機能を変化させるために抗体のグリコシル化パターンを改変することができる。例えば、Fc受容体に対するFc領域の親和性を高め、ひいてはNK細胞の存在下で抗体のADCC上昇を生じさせるために、通常はFc領域の297位のAsnに結合するフコース単位を付加しないトランスフェクトーマにおいて抗体を発現させることができる。Shieldetal.2002JBC,277:26733参照。さらに、CDCを改変するためにガラクトシル化の修飾が実施できる。あるいは、別の実施形態では、飽和突然変異誘発などにより、抗GT468抗体コード配列の全部または一部に沿ってランダムに突然変異を導入することができ、生じる改変された抗GT468抗体を結合活性に関してスクリーニングできる。本明細書で使用される、組換え宿主細胞または単に宿主細胞という用語は、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことが意図されている。そのような用語は、特定の対象細胞だけでなくそのような細胞の子孫も指示することが意図されていることは了解されるべきである。突然変異または環境影響のいずれかのためにある種の修飾が後の世代で起こり得るので、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でないことがあるが、それでもなお本明細書で使用される宿主細胞という用語の範囲に包含される。組換え宿主細胞は、例えば、CHO細胞、NS/0細胞およびリンパ球細胞などのトランスフェクトーマを含む。本明細書で使用される、被験者という用語は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を包含する。非ヒト動物という用語は、すべての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生動物、爬虫類等のような哺乳動物および非哺乳動物を包含する。トランスジェニック動物という用語は、1またはそれ以上の導入遺伝子、好ましくは重鎖および/もしくは軽鎖導入遺伝子、または導入染色体動物の天然ゲノムDNAに組み込まれているかまたは組み込まれていないを含むゲノムを有し、好ましくは導入遺伝子を発現することができる動物を指す。例えば、トランスジェニックマウスは、マウスが、GT468抗原および/またはGT468を発現する細胞で免疫された場合ヒト抗GT468抗体を産生するように、ヒト軽鎖導入遺伝子と、ヒト重鎖導入遺伝子またはヒト重鎖導入染色体のいずれかを有し得る。ヒト重鎖導入遺伝子は、トランスジェニックマウス、例えばHCo7またはHCol2マウスなどのHuMAbマウスの場合のように、マウスの染色体DNAに組み込まれ得るか、またはヒト重鎖導入遺伝子は、国際公開公報第WO02/43478号に記載されているトランスクロモソーマル例えばKMマウスの場合のように、染色体外に維持され得る。そのようなトランスジェニックおよびトランスクロモソーマルマウスは、V-D-J組換えおよびアイソタイプスイッチを受けることによりGT468に対するヒトモノクローナル抗体の多数のアイソタイプ例えばIgG、IgAおよび/またはIgEを産生することができると考えられる。本明細書で使用される低減するまたは阻害するとは、レベル、例えば細胞の増殖のレベルの全体的低下、好ましくは5またはそれ以上、10またはそれ以上、20またはそれ以上、より好ましくは50またはそれ以上、最も好ましくは75またはそれ以上の全体的低下を生じさせる能力を意味する。細胞の活性を阻害するという語句または同様の語句は、細胞の活性の完全なまたは基本的に完全な阻害および細胞の活性の低下を包含する。好ましくは、前記細胞の活性の阻害は、腫瘍細胞の増殖を低減しおよび/または腫瘍細胞の死滅を誘導し、したがって、腫瘍阻害作用または腫瘍破壊作用を有する。mAbの作用機構以下は、本発明の抗体の治療効果の基礎となる機構についての考察を提供するものであるが、いかなる意味においても本発明を限定するとみなされるべきではない。本明細書で述べる抗体は、好ましくはADCCまたはCDCを介して、免疫系の成分と相互作用し得る。本発明の抗体はまた、ペイロード例えば放射性同位体、薬剤または毒素を標的して腫瘍細胞を直接死滅させるためにも使用でき、または伝統的な化学療法剤と相乗作用的に使用して、化学療法剤のTリンパ球への細胞傷害性副作用のために損なわれた可能性がある抗腫瘍免疫応答を含み得る補完的な作用機構を通して腫瘍を攻撃することができる。しかし、本発明の抗体はまた、単に細胞表面上のGT468に結合することによって、したがって、例えば細胞の増殖をブロックすることによって、作用を及ぼし得る。抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCは、好ましくは抗体によって印づけられた標的細胞を必要とする、本明細書で述べるエフェクター細胞、特にリンパ球の細胞死滅能力を表す。ADCCは、好ましくは、抗体が腫瘍細胞上の抗原に結合し、抗体Fcドメインが免疫エフェクター細胞の表面のFc受容体FcRと係合した場合に起こる。Fc受容体のいくつかのファミリーが同定されており、特定細胞集団は規定されたFc受容体を特徴的に発現する。ADCCは、抗原提示を導く様々な程度の即時腫瘍破壊および腫瘍に対するT細胞応答の誘導を直接誘導する機構とみなすことができる。好ましくは、ADCCのインビボでの誘導は、抗腫瘍T細胞応答および宿主由来の抗体応答を導く。補体依存性細胞傷害CDCは、抗体によって指令され得る別の細胞死滅方法である。IgMは補体活性化のために最も有効なアイソタイプである。IgG1およびIgG3も、古典的補体活性化経路を介してCDCを指令する上でどちらも非常に有効である。好ましくは、このカスケードにおいて、抗原-抗体複合体の形成は、IgG分子などの関与する抗体分子のCH2ドメイン上のごく近接する多数のC1q結合部位の露出を生じさせるC1qは補体C1の3つのサブ成分の1つである。好ましくは、これらの露出されたC1q結合部位は、それまでは低親和性のC1q-IgG相互作用を高いアビディティの相互作用へと変換し、それが一連の他の補体タンパク質を含む事象のカスケードを開始させ、エフェクター細胞走化性/活性化物質C3aおよびC5aのタンパク質分解放出を導く。好ましくは、補体カスケードは、細胞内および細胞外への水と溶質の自由な通過を促進する細胞膜の細孔を作り出す、膜傷害性複合体の形成で終了する。抗体の作製本発明の抗体は、従来のモノクローナル抗体法、例えばKohlerandMilstein,Nature256:4951975の標準的体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む、様々な技術によって作製できる。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原則として、モノクローナル抗体を作製するための他の技術、例えばBリンパ球のウイルスもしくは発癌性形質転換または抗体遺伝子のライブラリを使用したファージディスプレイ技術も使用できる。モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製するための好ましい動物系は、マウスの系である。マウスにおけるハイブリドーマの作製は極めて広く確立された手順である。免疫プロトコールおよび融合のために免疫脾細胞を単離する技術は当分野において公知である。融合パートナー例えばマウス骨髄腫細胞および融合手順も公知である。モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製するための他の好ましい動物系は、ラットおよびウサギの系である例えばSpieker-Poletetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92:93481995に記載されており、Rossietal.,Am.J.Clin.Pathol.124:2952005も参照のこと。さらに別の好ましい実施形態では、GT468に対するヒトモノクローナル抗体は、マウスの系ではなくヒト免疫系の部分を担持するトランスジェニックまたはトランスクロモソーマルマウスを使用して作製できる。これらのトランスジェニックおよびトランスクロモソーマルマウスは、それぞれHuMAbマウスおよびKMマウスとして知られるマウスを含み、本明細書では集合的にトランスジェニックマウスと称する。そのようなトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体の作製は、国際公開公報第WO2004035607号の中でCD20に関して詳述されているように実施できる。モノクローナル抗体を作製するためのさらに別の方法は、規定された方法の抗体を産生するリンパ球から抗体をコードする遺伝子を直接単離することであり、例えばBabcocketal.,1996;Anovelstrategyforgeneratingmonoclonalantibodiesfromsingle,isolatedlymphocytesproducingantibodiesofdefinedstrategy参照。組換え抗体の作製の詳細については、WelschofandKraus,RecombinantantibodiesforcancertherapyISBN-0-89603-918-8およびBennyK.C.LoAntibodyEngineeringISBN1-58829-092-1も参照のこと。免疫GT468に対する抗体を作製するために、上述したように、組換え発現されたGT468抗原もしくはそのフラグメントおよび/またはGT468を発現する細胞の富化製剤である、GT468配列に由来する担体結合ペプチドでマウスを免疫することができる。あるいは、完全長ヒトGT468例えば配列番号:1をコードするDNAまたはそのフラグメント、特に配列番号:3~10および35~82をコードするものでマウスを免疫することができる。GT468抗原の精製または富化製剤を使用した免疫が抗体を生じない場合は、免疫応答を促進するためにGT468を発現する細胞、例えば細胞株でマウスを免疫することもできる。免疫応答は、免疫プロトコールの間に尾静脈または後眼窩の採血によって得られる血漿および血清試料で観測できる。十分な力価の抗GT468免疫グロブリンを有するマウスを融合のために使用できる。特異的抗体を分泌するハイブリドーマの割合を高めるために、犠死および脾切除の3日前にGT468発現細胞により腹腔内または静脈内経路でマウスを追加免疫することができる。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの作製GT468に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを作製するために、免疫マウスから脾細胞およびリンパ節細胞を単離し、マウス骨髄腫細胞株などの適切な不死化細胞株に融合することができる。生じたハイブリドーマを、次に、抗原特異的抗体の産生に関してスクリーニングすることができる。次に個々のウエルを、ハイブリドーマを分泌する抗体に関してELISAによってスクリーニングすることができる。GT468発現細胞を使用した免疫蛍光法およびFACS分析により、GT468に対して特異性を有する抗体を同定できる。抗体分泌ハイブリドーマを再びプレートに植え付け、スクリーニングして、抗GT468モノクローナル抗体に関してまだ陽性である場合は、限界希釈法によってサブクローニングできる。安定なサブクローンをその後インビトロで培養し、特性づけのために組織培養培地において抗体を生成することができる。モノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの作製本発明の抗体はまた、例えば、当分野で周知のように組換えDNA技術と遺伝子トランスフェクション法の組合せを用いて、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて作製できるMorrison,S.1985Science229:1202。例えば、1つの実施形態では、対象とする1または複数の遺伝子、例えば抗体遺伝子を、国際公開公報第WO87/04462号、同第WO89/01036号および欧州特許第EP338841号に開示されているGS遺伝子発現系または当分野で周知の他の発現系によって使用されるような、真核生物発現プラスミドなどの発現ベクターに連結することができる。クローニングされた抗体遺伝子を有する精製プラスミドを、CHO細胞、NS/0細胞、HEK293T細胞またはHEK293細胞などの真核生物宿主細胞、あるいは植物由来細胞、真菌または酵母細胞のような他の真核細胞に導入することができる。これらの遺伝子を導入するために使用される方法は、電気穿孔、リポフェクチン、リポフェクタミンその他のような当分野で記述されている方法であり得る。宿主細胞へのこれらの抗体遺伝子の導入後、抗体を発現する細胞を同定し、選択することができる。これらの細胞はトランスフェクトーマであり、その後それらを発現レベルに合わせて増幅し、抗体を生産するためスケールアップすることができる。これらの培養上清および/または細胞から組換え抗体を単離し、精製することができる。あるいは、クローン化した抗体遺伝子を、微生物、例えば大腸菌などの原核細胞を含む他の発現系において発現させることができる。さらに、抗体は、ヒツジおよびウサギからの乳もしくはニワトリからの卵などのトランスジェニック非ヒト動物において、またはトランスジェニック植物において生産できる;例えば、Verma,R.,etal.1998J.Immunol.Meth.216:165-181;Pollock,etal.1999J.Immunol.Meth.231:147-157;およびFischer,R.,etal.1999Biol.Chem.380:825-839参照。無傷抗体を発現するための部分抗体配列の使用すなわちヒト化およびキメラ化aキメラ化マウスモノクローナル抗体は、毒素または放射性同位体で標識した場合、ヒトにおける治療用抗体として使用できる。非標識マウス抗体は、反復適用した場合ヒトにおいて高度に免疫原性であり、治療効果の低下をもたらす。主たる免疫原性は重鎖定常領域によって媒介される。ヒトにおけるマウス抗体の免疫原性は、それぞれの抗体をキメラ化またはヒト化した場合、低減するまたは完全に回避することができる。キメラ抗体は、その異なる部分が異なる動物種に由来する抗体、例えばマウス抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体である。抗体のキメラ化は、マウス抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をヒト重鎖および軽鎖の定常領域と連結することによって達成される例えばKrausetal.,inMethodsinMolecularBiologyseries,RecombinantantibodiesforcancertherapyISBN-0-89603-918-8によって述べられているように。好ましい実施形態では、キメラ抗体は、ヒトκ軽鎖定常領域をマウス軽鎖可変領域に連結することによって作製される。同じく好ましい実施形態では、キメラ抗体は、ヒトλ軽鎖定常領域をマウス軽鎖可変領域に連結することによって作製できる。キメラ抗体の作製のための好ましい重鎖定常領域は、IgG1、IgG3およびIgG4である。キメラ抗体の作製のための他の好ましい重鎖定常領域は、IgG2、IgA、IgDおよびIgMである。bヒト化抗体は、主として6つの重鎖および軽鎖相補性決定領域CDRに位置するアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。この理由から、CDR内のアミノ酸配列はCDRの外側の配列よりも個々の抗体の間で多様である。CDR配列は大部分の抗体-抗原相互作用に関与するので、異なる性質を有する異なる抗体に由来するフレームワーク配列に移植された特定の天然に生じる抗体からのCDR配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然に生じる抗体の性質を模倣する組換え抗体を発現することが可能である例えば、Riechmann,L.etal.1998Nature332:323-327;Jones,P.etal.1986Nature321:522-525;およびQueen,C.etal.1989Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:10029-10033参照。そのようなフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む公的DNAデータベースから入手できる。これらの生殖細胞系配列は、B細胞の成熟の間にVDJ結合によって形成される、完全に構築された可変遺伝子を含まないので、成熟抗体遺伝子配列とは異なる。生殖細胞系遺伝子配列はまた、可変領域全体にわたって個々に均一に高親和性の二次レパートリー抗体の配列とも異なる。例えば、体細胞突然変異は、フレームワーク領域1のアミノ末端部分およびフレームワーク領域4のカルボキシ末端部分では比較的低頻度である。さらに、多くの体細胞突然変異は抗体の結合特性を有意に変化させない。このため、もとの抗体と類似の結合特性を有する無傷組換え抗体を再創製するために特定抗体のDNA配列全体を得る必要はない国際公開公報第WO99/45962号参照。CDR領域にわたる部分重鎖および軽鎖配列は、典型的にはこの目的のために十分である。部分配列を使用して、いずれの生殖細胞系可変および連結遺伝子セグメントが組み換えられた抗体可変遺伝子に寄与したかを決定する。次に、生殖細胞系配列を使用して可変領域の欠けている部分を充填する。重鎖および軽鎖リーダー配列はタンパク質成熟の間に切断され、最終的な抗体の性質には寄与しない。欠けている配列を加えるために、クローン化されたcDNA配列を連結またはPCR増幅によって合成オリゴヌクレオチドと組み合わせることができる。あるいは、可変領域全体をひと組の短いオーバーラップするオリゴヌクレオチドとして合成し、PCR増幅によって結合して完全な合成可変領域クローンを作製することができる。この工程は、特定の制限部位の除去もしくは組込み、または特定コドンの最適化のようなある種の利点を有する。天然配列と同じアミノ酸コード能力を有する合成V配列を創製するために、ハイブリドーマからの重鎖および軽鎖転写産物のヌクレオチド配列を使用して合成オリゴヌクレオチドの重複するセットを設計する。合成重鎖およびκ鎖配列は3つの方法で天然配列と異なるようにすることができる:オリゴヌクレオチド合成およびPCR増幅を容易にするためにひと続きの反復ヌクレオチド塩基を中断する;最適翻訳開始部位をコザック規則Kozak,1991,J.Biol.Chem.266:19867-19870に従って組み込む;およびHindIII部位を翻訳開始部位の上流に構築する。重鎖および軽鎖可変領域の両方について、最適化したコード鎖および対応する非コード鎖配列を、対応する非コードオリゴヌクレオチドのほぼ中間点で30~50ヌクレオチドに分割する。したがって、各々の鎖について、オリゴヌクレオチドを150~400ヌクレオチドのセグメントにわたる重複する二本鎖セットに構築できる。次にそのプールを鋳型として使用して150~400ヌクレオチドのPCR増幅産物を生成する。典型的には、1つの可変領域オリゴヌクレオチドセットを2つのプールに分割し、それらを別々に増幅して2つのオーバーラップするPCR産物を生成する。次にこれらのオーバーラップ産物をPCR増幅によって組み合わせて完全な可変領域を形成する。また、発現ベクター構築物に容易にクローニングできるフラグメントを作製するために重鎖または軽鎖定常領域のオーバーラップフラグメントをPCR増幅に含めることが望ましいと考えられる。再構築したキメラ化またはヒト化重鎖および軽鎖可変領域を、次に、クローン化したプロモータ、リーダー、翻訳開始、定常領域、3非翻訳、ポリアデニル化および転写終結配列と組み合わせて発現ベクター構築物を形成する。重鎖および軽鎖発現構築物を、単一ベクターに組み合わせるか、宿主細胞に同時トランスフェクトする、連続的にトランスフェクトするまたは別々にトランスフェクトすることができ、その後それらを融合して、両方の鎖を発現する宿主細胞を形成する。ヒトIgGκについての発現ベクターの構築において使用するためのプラスミドを以下で述べる。PCR増幅したV重鎖およびVκ軽鎖cDNA配列を使用して完全な重鎖および軽鎖ミニ遺伝子を再構築し得るようにプラスミドを構築することができる。これらのプラスミドは、完全なヒト、またはキメラIgG1κもしくはIgG4κ抗体を発現するために使用できる。同様のプラスミドを、他の重鎖アイソタイプの発現のためまたはλ軽鎖を含む抗体の発現のために構築することができる。したがって、本発明の別の態様では、本発明の抗GT468抗体の構造特徴を利用して、GT468への結合のような、本発明の抗体の少なくとも1つの機能特性を保持する、構造的に関連したヒト化抗GT468抗体を創製する。より詳細には、マウスモノクローナル抗体の1またはそれ以上のCDR領域を組換えによって公知のヒトフレームワーク領域およびCDRと組み合わせて、付加的な、組換え操作された本発明のヒト化抗GT468抗体を作製することができる。抗原発現細胞への結合GT468に結合する抗体の能力は、実施例で述べるような標準的な結合アッセイ例えばELISA、ウエスタンブロット法、免疫蛍光法およびフローサイトメトリ分析を用いて測定することができる。抗体の単離と特性づけ抗GT468抗体を精製するため、選択したハイブリドーマをモノクローナル抗体精製用の2リットルスピナーフラスコで増殖させることができる。あるいは、抗GT468抗体は透析バイオリアクターで生産できる。上清をろ過し、必要に応じて濃縮した後、プロテインG-セファロースまたはプロテインA-セファロースによるアフィニティクロマトグラフィに供することができる。純度を保証するため、溶出したIgGをゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィによって検査することができる。緩衝液をPBSに交換し、1.43の吸光係数を使用してOD280によって濃度を測定できる。モノクローナル抗体をアリコートに分け、-80°Cで保存することができる。選択した抗GT468モノクローナル抗体がユニークなエピトープに結合するかどうかを調べるため、部位指定または多部位指定突然変異誘発が使用できる。アイソタイプの決定精製抗体のアイソタイプを決定するため、様々な市販のキット例えばZymed、RocheDiagnosticsによるアイソタイプELISAが実施できる。マイクロタイタープレートのウエルを抗マウスIgで被覆することができる。ブロックした後、プレートをモノクローナル抗体または精製アイソタイプ対照と周囲温度で2時間反応させる。次に、ウエルをマウスIgG1、IgG2a、IgG2bもしくはIgG3、IgAまたはマウスIgM特異的ペルオキシダーゼ結合プローブのいずれかと反応させることができる。洗浄後、プレートをABTS基質1mg/mlで展開し、405~650のODで分析することができる。あるいは、IsoStripMouseMonoclonalAntibodyIsotypingKitRoche、カタログ番号1493027を、製造者によって述べられているように使用してもよい。フローサイトメトリ分析免疫マウスの血清中の抗GT468抗体の存在またはGT468を発現する生細胞へのモノクローナル抗体の結合を明らかにするために、フローサイトメトリが使用できる。天然にまたはトランスフェクション後にGT468を発現する細胞株とGT468発現を欠く陰性対照標準的な増殖条件下で増殖させたを、ハイブリドーマ上清中または1FBSを含むPBAS中で様々な濃度のモノクローナル抗体と混合し、4°Cで30分間インキュベートすることができる。洗浄後、APCまたはAlexa647で標識したIgG抗体を、一次抗体染色と同じ条件下でGT468結合モノクローナル抗体に結合させることができる。単一生細胞にゲートをかける光散乱および側方散乱特性を用いたFACS装置でのフローサイトメトリによって試料を分析できる。単一測定においてGT468特異的モノクローナル抗体を非特異的結合抗体と区別するために、同時トランスフェクションの方法が使用できる。GT468と蛍光マーカーをコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトした細胞を上述したように染色することができる。トランスフェクトした細胞は、抗体染色細胞とは異なる蛍光チャネルで検出できる。トランスフェクト細胞の大部分は両方の導入遺伝子を発現するので、GT468特異的モノクローナル抗体は蛍光マーカー発現細胞に選択的に結合するのに対し、非特異的抗体は非トランスフェクト細胞に同等の比率で結合する。フローサイトメトリアッセイに加えてまたはその代わりに、蛍光顕微鏡検査を用いた選択的アッセイを使用し得る。細胞を上述したように正確に染色し、蛍光顕微鏡によって検査することができる。免疫蛍光顕微鏡検査免疫マウスの血清中の抗GT468抗体の存在またはGT468を発現する生細胞へのモノクローナル抗体の結合を明らかにするために、免疫蛍光顕微鏡検査による分析が使用できる。例えば、自然にまたはトランスフェクション後にGT468を発現する細胞株とGT468発現を欠く陰性対照を、10ウシ胎仔血清FCS、2mML-グルタミン、100IU/mlペニシリンおよび100μg/mlストレプトマイシンを添加したDMEM/F12培地中、標準的な増殖条件下でチャンバースライドガラスにおいて増殖させる。その後細胞をメタノールまたはパラホルムアルデヒドで固定するかまたは未処理のままにし得る。次に、細胞をGT468に対するモノクローナル抗体と25°Cで30分間反応させることができる。洗浄後、細胞を同じ条件下でAlexa555標識抗マウスIgG二次抗体MolecularProbesと反応させ得る。その後、免疫蛍光顕微鏡によって細胞を検査できる。細胞をメタノール固定またはパラホルムアルデヒド固定し、TritonX-100で透過処理した場合、細胞中の総GT468レベルが観察できる。生細胞および透過処理していないパラホルムアルデヒド固定細胞では、GT468の表面局在化が検査できる。加えて、密着結合へのGT468のターゲティングは、ZO-1などの密着結合マーカーとの共染色によって分析できる。さらに、抗体結合の作用および細胞膜内のGT468局在が検査できる。ウエスタンブロット法抗GT468IgGを、ウエスタンブロット法によってGT468抗原との反応性に関してさらに試験することができる。簡単に述べると、GT468を発現する細胞からの細胞抽出物と適切な陰性対照を調製し、ドデシル硫酸ナトリウムSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動に供することができる。電気泳動後、分離された抗原をニトロセルロース膜に転写し、ブロックして、試験するモノクローナル抗体でプローブする。抗マウスIgGペルオキシダーゼを用いてIgG結合を検出し、ECL基質で展開することができる。免疫組織化学抗GT468マウスIgGを、当業者に周知の方法である免疫組織化学によって、例えば、トランスフェクション後に、通常の外科手術の間に患者からまたは、GT468を発現する細胞株を接種した異種移植腫瘍を担持するマウスから得た、非癌組織もしくは癌組織試料からのパラホルムアルデヒドもしくはアセトン固定した凍結切片またはパラホルムアルデヒドで固定したパラフィン包埋組織切片を使用して、GT468抗原との反応性に関してさらに試験することができる。免疫染色のために、GT468に対して反応性の抗体をインキュベートし、次いで販売者の指示に従ってホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウス抗体またはヤギ抗ウサギ抗体DAKOと共にインキュベートすることができる。インビトロでの抗体の食作用および細胞死滅化活性GT468に特異的に結合することに加えて、抗GT468抗体は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の食作用および死滅化を媒介するそれらの能力に関して試験することができる。インビトロでのモノクローナル抗体活性の試験は、インビボモデルにおける試験に先立つ初期スクリーニングを提供する。抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCC:簡単に述べると、健常ドナーからの多形核細胞PMN、NK細胞、単球、単核細胞または他のエフェクター細胞をFicollHypaque密度遠心分離、次いで夾雑赤血球の溶解によって精製することができる。洗浄したエフェクター細胞を、10熱不活化ウシ胎仔血清あるいは5熱不活化ヒト血清を添加したRPMIに懸濁し、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする51Cr標識標的細胞と、エフェクター細胞対標的細胞の様々な比率で混合することができる。あるいは、標的細胞を蛍光増強リガンドBATDAで標識してもよい。死細胞から放出される増強リガンドとユウロピウムの高度蛍光キレートを蛍光光度計によって測定できる。別の選択的手法は、ルシフェラーゼによる標的細胞のトランスフェクションを利用し得る。添加したルシファーイエローは生細胞によってのみ酸化され得る。次に精製抗GT468IgGを様々な濃度で添加することができる。無関係なヒトIgGが陰性対照として使用できる。アッセイは、使用するエフェクター細胞型に依存して37°Cで4~20時間実施できる。試料を、培養上清中の51Crの放出またはEuTDAキレートの存在を測定することによって細胞溶解に関して検定できる。あるいは、ルシファーイエローの酸化から生じる発光が生細胞の測定であり得る。抗GT468モノクローナル抗体はまた、細胞溶解が複数のモノクローナル抗体で増強されるかどうかを調べるために様々な組合せで試験することができる。補体依存性細胞傷害CDC:モノクローナル抗GT468抗体は、様々な公知の技術を用いてCDCを媒介するそれらの能力に関して試験できる。例えば、補体用の血清は、当業者に公知の方法で血液から入手できる。mAbのCDC活性を測定するために、種々の方法が使用できる。例えば51Cr放出を測定するかまたはヨウ化プロピジウムPI排除アッセイを用いて膜透過性上昇を評価することができる。簡単に述べると、標的細胞を洗浄し、5×105/mlを様々な濃度のmAbと共に室温または37°Cで10~30分間インキュベートすることができる。次に、血清または血漿を添加して20v/vの最終濃度にし、細胞を37°Cで20~30分間インキュベートすることができる。各々の試料からのすべての細胞をFACSチューブ中のPI溶液に添加できる。その後、FACSArrayを用いたフローサイトメトリ分析によって混合物を直ちに分析できる。選択的アッセイでは、CDCの誘導を接着細胞上で測定することができる。このアッセイの1つの実施形態では、アッセイの24時間前に細胞を組織培養平底マイクロタイタープレートに3×104/ウエルの密度で接種する。その翌日、増殖培地を取り出し、三組の細胞を抗体と共にインキュベートする。対照細胞は、それぞれバックグラウンド溶解および最大溶解の測定のために増殖培地または0.2サポニンを含有する増殖培地と共にインキュベートする。室温で20分間のインキュベーション後、上清を取り、DMEM中の20v/vヒト血漿または血清あらかじめ37°Cに温めておくを細胞に添加して、37°Cでさらに20分間インキュベートする。各々の試料からのすべての細胞をヨウ化プロピジウム溶液10μg/mlに添加する。次に、上清を、2.5μg/ml臭化エチジウムを含有するPBSに交換し、TecanSafireを用いて520nmでの励起後の蛍光放出を600nmで測定する。特異的溶解の割合を以下のように算定する:特異的溶解=試料蛍光-バックグラウンド蛍光/最大溶解蛍光-バックグラウンド蛍光×100。モノクローナル抗体による細胞増殖の阻害:アポトーシスを開始させる能力に関して試験するため、モノクローナル抗GT468抗体を、例えば、GT468陽性腫瘍細胞またはGT468でトランスフェクトした腫瘍細胞と共に37°Cで約20時間インキュベートすることができる。細胞を採取し、アネキシンV結合緩衝液BDbiosciences中で洗浄して、FITCまたはAPCと結合したアネキシンVBDbiosciencesと共に暗所で15分間インキュベートすることができる。各々の試料からのすべての細胞をFACSチューブ中のPI溶液PBS中10μg/mlに添加し、フローサイトメトリによって直ちに評価できる上記のように。あるいは、モノクローナル抗体による細胞増殖の全般的阻害は市販のキットを用いて検出できる。DELFIACellProliferationKitPerkin-Elmer、カタログ番号AD0200は、マイクロプレートにおける増殖細胞のDNA合成の間の5-ブロモ-2-デオキシウリジンBrdUの取込みの測定に基づく非同位体免疫検定法である。取り込まれたBrdUは、ユウロピウム標識モノクローナル抗体を用いて検出される。抗体検出を可能にするため、細胞を固定し、Fix溶液を使用してDNA変性する。非結合抗体を洗い流し、DELFIA誘導剤を添加して標識抗体からユウロピウムイオンを溶液中に解離し、溶液中で前記イオンはDELFIA誘導剤の成分と高度蛍光キレートを形成する。検出に時間分解蛍光光度法を用いて、測定された蛍光は、各々のウエルの細胞におけるDNA合成に比例する。前臨床試験GT468に結合するモノクローナル抗体はまた、GT468を発現する腫瘍細胞の増殖を制御する上でのそれらの効果を測定するため、インビボモデルにおいて例えば、場合によりトランスフェクション後に、GT468を発現する細胞株を接種した異種移植腫瘍を担持する免疫不全マウスにおいて試験することができる。GT468を発現する腫瘍細胞を免疫無防備状態マウスまたは他の動物に異種移植した後、本発明の抗体を使用してインビボ試験を実施できる。腫瘍の形成または腫瘍関連症状を予防する抗体の作用を測定するため、腫瘍を有さないマウスに抗体を投与し、次いで腫瘍細胞を注射することができる。腫瘍の増殖、転移または腫瘍関連症状を低減するそれぞれの抗体の治療効果を測定するため、抗体を腫瘍担持マウスに投与することができる。抗体適用を、細胞増殖抑制薬、増殖因子阻害剤、細胞周期遮断薬、血管新生阻害剤または他の抗体などの他の物質の適用と組み合わせて、組合せの相乗作用効果および潜在的毒性を測定することができる。本発明の抗体によって媒介される毒性副作用を分析するため、動物に抗体または対照試薬を接種し、GT468抗体治療に関連する可能性がある症状に関して詳細に検討することができる。GT468抗体のインビボ適用の起こり得る副作用は、特に、胎盤を含むGT468発現組織における毒性を含む。ヒトおよび他の種、例えばマウスにおいてGT468を認識する抗体は、ヒトにおけるモノクローナルGT468抗体の適用によって媒介される潜在的副作用を予測するために特に有用である。エピトープマッピング本発明の抗体によって認識されるエピトープのマッピングは、GlennE.Morris、ISBN-089603-375-9によるEpitopeMappingProtocolsMethodsinMolecularBiologyおよびOlwynM.R.Westwood,FrankC.HayによるEpitopeMapping:APracticalApproachPracticalApproachSeries,248の中で詳述されているように実施できる。I.GT468に結合する二重特異性/多重特異性分子本発明のさらに別の実施形態では、GT468に対する抗体は、複数の結合部位または標的エピトープに結合する二重特異性または多重特異性分子を作成するために、誘導体化するまたは別の機能的分子、例えば別のペプチドまたはタンパク質例えばFabフラグメントに連結することができる。例えば、本発明の抗体は、別の抗体、ペプチドまたは結合ミメティックなどの1またはそれ以上の他の結合分子に機能的に連結できる例えば化学結合、遺伝子融合、非共有結合的会合または他の方法によって可能である。したがって、本発明は、GT468に対する少なくとも1つの第一結合特異性部分と2番目の標的エピトープに対する第二結合特異性部分を含む二重特異性および多重特異性分子を包含する。本発明の特定実施形態では、2番目の標的エピトープは、Fc受容体、例えばヒトFcγRICD64もしくはヒトFcα受容体CD89、またはT細胞受容体、例えばCD3である。それゆえ、本発明は、FcγR、FcαRまたはFcεRを発現するエフェクター細胞例えば単球、マクロファージまたは多形核細胞PMNと、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする標的細胞の両方に結合することができる二重特異性および多重特異性分子を包含する。これらの二重特異性および多重特異性分子は、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞をエフェクター細胞に標的し、Fc受容体を介したエフェクター細胞活性、例えばGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の食作用、抗体依存性細胞傷害ADCC、サイトカイン放出、またはスーパーオキシドアニオンの生成を開始させ得る。本発明の二重特異性および多重特異性分子は、抗Fc結合特異性および抗GT468結合特異性部分に加えて、第三の結合特異性部分をさらに含み得る。1つの実施形態では、第三結合特異性部分は、抗増強因子EF部分、例えば細胞傷害活性に関与する表面タンパク質に結合し、それによって標的細胞に対する免疫応答を高める分子である。抗増強因子部分は、所与の分子、例えば抗原または受容体に結合し、それによってFc受容体または標的細胞抗原に対する結合決定基の作用の増強を生じさせる、抗体、機能的抗体フラグメントまたはリガンドであり得る。抗増強因子部分は、Fc受容体または標的細胞抗原に結合することができる。あるいは、抗増強因子部分は、第一および第二結合特異性部分が結合する実体とは異なる実体に結合することができる。例えば、抗増強因子部分は細胞傷害性T細胞に結合することができる例えば、CD2、CD3、CD8、CD28、CD4、CD40、ICAM-1または標的細胞に対する免疫応答の増大を生じさせる他の免疫細胞を介して。1つの実施形態では、本発明の二重特異性および多重特異性分子は、例えばFab、Fab、Fab2、Fvまたは一本鎖Fvを含む、少なくとも1つの抗体を結合特異性部分として含む。前記抗体はまた、軽鎖もしくは重鎖二量体であり得るか、またはFvもしくはLadneretal.,米国特許第4,946,778号に記載されている一本鎖構築物のようなその任意の最小フラグメントであり得る。抗体はまた、米国特許出願第2003/0118592号および同第2003/0133939号に開示されているような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質であり得る。1つの実施形態では、本発明の二重特異性および多重特異性分子は、エフェクター細胞の表面上に存在するFcγRまたはヒトFcαRに対する結合特異性部分、および標的細胞抗原、例えばGT468に対する第二結合特異性部分を含む。1つの実施形態では、Fc受容体に対する結合特異性は、その結合がヒト免疫グロブリンGIgGによってブロックされないモノクローナル抗体によって提供される。本明細書で使用される、IgG受容体という用語は、第1番染色体に位置する8つのγ鎖遺伝子のいずれかを指す。これらの遺伝子は、3つのFcγ受容体クラス:FcγRICD64、FcγRIICD32およびFcγRIIICD16に分類される、合計12の膜貫通型または可溶性受容体アイソフォームをコードする。1つの好ましい実施形態では、Fcγ受容体はヒト高親和性FcγRIである。これらの好ましいモノクローナル抗体の作製と特性づけは、国際公開公報第WO88/00052号および米国特許第4,954,617号においてFangeretal.によって記述されている。これらの抗体は、受容体のFcγ結合部位とは異なる部位でFcγRI、FcγRIIまたはFcγRIIIのエピトープに結合し、したがって、それらの結合は生理的レベルのIgGによって実質的にブロックされない。本発明において有用な特異的抗FcγRI抗体は、mAb22、mAb32、mAb44、mAb62およびmAb197である。他の実施形態では、抗Fcγ受容体抗体は、モノクローナル抗体22のヒト化形態H22である。H22抗体の作製と特性づけは、Graziano,R.F.etal.1995J.Immunol.15510:4996-5002および国際公開公報第WO94/10332号に記載されている。H22抗体を産生する細胞株は、HA022CL1の名称の下に1992年11月4日にAmericanTypeCultureCollectionに寄託され、アクセッション番号CRL11177を有する。さらなる他の好ましい実施形態では、Fc受容体に対する結合特異性は、その結合が、好ましくはヒト免疫グロブリンAIgAによってブロックされない、ヒトIgA受容体、例えばFcα受容体FcαRICD89に結合する抗体によって提供される。IgA受容体という用語は、第19番染色体に位置する1個のα遺伝子FcαRIの遺伝子産物を包含することが意図されている。この遺伝子は、55~110kDaの数個の選択的にスプライシングされる膜貫通型アイソフォームをコードすることが公知である。FcαRICD89は、単球/マクロファージ、好酸性および好中性顆粒球上で構成的に発現されるが、非エフェクター細胞集団では発現されない。FcαRIはIgA1およびIgA2の両方に対して中等度の親和性を有し、前記親和性はG-CSFまたはGM-CSFなどのサイトカインに暴露後に増大するMorton,H.C.etal.1996CriticalReviewsinImmunology16:423-440。IgAリガンド結合ドメインの外側でFcαRIに結合する、A3、A59、A62およびA77と同定された4つのFcαRI特異的モノクローナル抗体が記述されているMonteiro,R.C.etal.1992J.Immunol.148:1764。FcαRIおよびFcγRIは、それらが、1主として免疫エフェクター細胞上で、例えば単球、PMN、マクロファージおよび樹状細胞上で発現される、2高レベル例えば5,000~100,000/細胞で発現される、3細胞傷害活性例えばADCC、食作用のメディエータである、4それらに標的される、自己抗原を含む抗原の抗原提示増強を媒介するので、本発明における使用のための好ましいトリガ受容体である。別の実施形態では、二重特異性分子は、一方の抗体が主としてCDCを誘導することによって働き、他方の抗体が主としてアポトーシスを誘導することによって作用するような、補完的な機能活性を有する本発明に従った2つのモノクローナル抗体から成る。本明細書で使用されるエフェクター細胞特異的抗体は、エフェクター細胞のFc受容体に結合する抗体または機能的抗体フラグメントを指す。本発明における使用のための好ましい抗体は、内因性免疫グロブリンによって結合されない部位でエフェクター細胞のFc受容体に結合する。本明細書で使用される、エフェクター細胞という用語は、免疫応答の認識期および活性化期ではなく、免疫応答のエフェクター期に関与する免疫細胞を指す。例示的な免疫細胞は、骨髄系またはリンパ系起源の細胞、例えばリンパ球例えばB細胞および細胞溶解性T細胞CTLを含むT細胞、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多形核細胞、顆粒球、マスト細胞ならびに好塩基球を含む。一部のエフェクター細胞は、特異的Fc受容体を発現し、特異的免疫機能を実行する。好ましい実施形態では、エフェクター細胞は抗体依存性細胞傷害ADCCを誘導することができ、例えば好中球はADCCを誘導できる。例えば、FcRを発現する単球、マクロファージは、標的細胞を特異的に死滅させることおよび抗原を免疫系の他の成分に提示すること、または抗原を提示する細胞に結合することに関与する。他の実施形態では、エフェクター細胞は、標的抗原、標的細胞または微生物を貪食することができる。エフェクター細胞上での特定のFcRの発現は、サイトカインのような体液性因子によって調節され得る。例えば、FcγRIの発現はインターフェロンγIFN-γによって上方調節されることが認められている。この発現増強は、標的に対するFcγRI担持細胞の細胞傷害活性を増大させる。エフェクター細胞は、標的抗原または標的細胞を貪食するまたは溶解することができる。標的細胞は、本発明の抗体によって標的され得る、被験者例えばヒトまたは動物における任意の望ましくない細胞を意味する。好ましい実施形態では、標的細胞は、GT468を発現するもしくは過剰発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞である。GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞は、典型的には腫瘍細胞を含む。本発明の二重特異性および多重特異性分子は、化学的手法例えばD.M.Kranzetal.1981Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:5807参照、ポリドーマ技術Readingへの米国特許第4,474,893号参照、または組換えDNA技術を用いて作製できる。特に、本発明の二重特異性および多重特異性分子は、当分野で公知の方法を用いて、構成要素である結合特異性部分、例えば抗FcR結合特異性部分と抗GT468結合特異性部分を結合することによって作製できる。例えば、二重特異性および多重特異性分子の各々の結合特異性部分を別々に作製し、その後互いに結合することができる。結合特異性部分がタンパク質またはペプチドである場合は、共有結合連結のために様々なカップリング剤または架橋剤が使用できる。架橋剤の例は、プロテインA、カルボジイミド、N-スクシンイミジル-S-アセチル-チオアセテートSATA、5,5-ジチオビス2-ニトロ安息香酸DTNB、o-フェニレンジマレイミドoPDM、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDP、およびスルホスクシンイミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートスルホ-SMCCを含む例えば、Karpovskyetal.1984J.Exp.Med.160:1686;Liu,MAetal.1985Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:8648参照。他の方法は、PaulusBehringIns.Mitt.1985No.78,118-132;Brennanetal.Science1985229:81-83、およびGlennieetal.J.Immunol.1987139:2367-2375によって述べられているものを含む。好ましい結合剤はSATAおよびスルホ-SMCCであり、どちらもPierceChemicalCo.Rockford,ILから入手できる。結合特異性部分が抗体である場合は、それらを2本の重鎖のC末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によって結合できる。特に好ましい実施形態では、結合の前に、ヒンジ領域を奇数、好ましくは1個のスルフヒドリル残基を含むように修飾する。あるいは、両方の結合特異性部分を同じベクター内にコードさせ、同じ宿主細胞において発現させ、構築することができる。この方法は、二重特異性および多重特異性分子がMAb×MAb、MAb×Fab、Fab×Fab2またはリガンド×Fab融合タンパク質である場合に特に有用である。本発明の二重特異性および多重特異性分子、例えば二重特異性分子は、一本鎖二重特異性抗体のような一本鎖分子、1つの一本鎖抗体と1つの結合決定基を含む一本鎖二重特異性分子、または2つの結合決定基を含む一本鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性および多重特異性分子はまた、一本鎖分子であり得るかまたは少なくとも2つの一本鎖分子を含み得る。二重特異性および多重特異性分子を作製するための方法は、例えば米国特許第5,260,203号;同第5,455,030号;同第4,881,175号;同第5,132,405号;同第5,091,513号;同第5,476,786号;同第5,013,653号;同第5,258,498号;および同第5,482,858号に記載されている。二重特異性および多重特異性分子の、それらの特異的標的への結合は、固相酵素免疫検定法ELISA、放射免疫検定法RIA、FACS分析、生物学的検定法例えば増殖阻害またはウエスタンブロット法によって確認できる。これらのアッセイの各々は、一般に、特定対象とするタンパク質-抗体複合体の存在を、対象複合体に特異的な標識試薬例えば抗体を使用することによって検出する。例えば、FcR-抗体複合体は、例えば抗体-FcR複合体を認識して特異的に結合する酵素結合抗体または抗体フラグメントを用いて検出できる。あるいは、複合体は様々な他の免疫検定法のいずれかを用いて検出できる。例えば、抗体を放射性標識し、放射免疫検定法RIAにおいて使用することができる例えば、Weintraub,B.,PrinciplesofRadioimmunoassays,SeventhTrainingCourseonRadioligandAssayTechniques,TheEndocrineSociety,March,1986参照。放射性同位体は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用などの手段によってまたはオートラジオグラフィによって検出できる。II.免疫複合体別の態様では、本発明は、細胞毒、薬剤例えば免疫抑制剤または放射性同位体などの治療成分または物質に結合した抗GT468抗体を特徴とする。そのような複合体を本明細書では免疫複合体と称する。1またはそれ以上の細胞毒を含有する免疫複合体を免疫毒素と称する。細胞毒または細胞傷害性物質は、細胞に有害であり、特に細胞を死滅させる任意の物質を含む。例としては、タキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1-デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログを含む。本発明の免疫複合体を形成するための適切な治療薬は、代謝拮抗物質例えばメトトレキサート、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、5-フルオロウラシルデカルバジン、アルキル化剤例えばメクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチンBSNUおよびロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンC、およびシスジクロロジアミン白金IIDDPシスプラチン、アントラサイクリン類例えばダウノルビシン以前のダウノマイシンおよびドキソルビシン、抗生物質例えばダクチノマイシン以前のアクチノマイシン、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシンAMC、ならびに抗有糸分裂薬例えばビンクリスチンおよびビンブラスチンを含むが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、治療薬は細胞傷害性物質または放射性毒性物質である。別の実施形態では、治療薬は免疫抑制剤である。さらに別の実施形態では、治療薬はGM-CSFである。好ましい実施形態では、治療薬は、ドキソルビシン、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミドまたはリシンAである。本発明の抗体はまた、癌などのGT468関連疾患を治療するための細胞傷害性放射性薬剤を生成するために放射性同位体、例えばヨウ素-131、イットリウム-90またはインジウム-111に結合することができる。本発明の抗体複合体は所与の生物学的応答を改変するために使用でき、薬剤成分は古典的化学療法剤に限定されると解釈されるべきではない。例えば、薬剤成分は、所望生物活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質は、例えば、アブリン、リシンA、シュードモナス外毒素もしくはジフテリア毒素などの酵素的に活性な毒素もしくはその活性フラグメント;腫瘍壊死因子もしくはインターフェロンγなどのタンパク質;または、例えばリンホカイン、インターロイキン1IL-1、インターロイキン2IL-2、インターロイキン6IL-6、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSF、顆粒球コロニー刺激因子G-CSFもしくは他の増殖因子などの生物学的応答調節剤を含み得る。そのような治療成分を抗体に結合するための技術は周知であり、例えば、Arnonetal.,MonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapy,inMonoclonalAntibodiesAndCancerTherapy,Reisfeldetal.eds.,pp.243-56AlanR.Liss,Inc.1985;Hellstrometal.,AntibodiesForDrugDelivery,inControlledDrugDelivery2ndEd.,Robinsonetal.eds.,pp.623-53MarcelDekker,Inc.1987;Thorpe,AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview,inMonoclonalAntibodies84:BiologicalAndClinicalApplications,Pincheraetal.eds.,pp.475-5061985;Analysis,Results,AndFutureProspectiveOfTheTherapeuticUseOfRadiolabeledAntibodyInCancerTherapy,inMonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapy,Baldwinetal.eds.,pp.303-16AcademicPress1985、およびThorpeetal.,ThePreparationAndCytotoxicPropertiesOfAntibody-ToxinConjugates,Immunol.Rev.,62:119-581982参照。さらなる実施形態では、本発明による抗体を、抗体を放射性同位体に結合することを可能にするリンカー-キレート化剤、例えばチウキセタンに連結する。III.医薬組成物別の態様では、本発明は、本発明の抗体の1つまたは本発明の抗体の組合せを含有する組成物、例えば医薬組成物を提供する。医薬組成物は、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,19thEdition,Gennaro,Ed.,MackPublishingCo.,Easton,PA,1995に開示されているような従来技術に従って医薬的に許容される担体または希釈剤ならびに任意の他の公知の補助剤および賦形剤と共に製剤し得る。1つの実施形態では、組成物は、異なる機構によって作用する本発明の複数の例えば2またはそれ以上の単離された抗体の組合せ、例えば、主としてCDCを誘導することによって働く1つの抗体と主としてアポトーシスを誘導することによって作用する別の抗体の組合せを含む。本発明の医薬組成物はまた、併用療法において、すなわち他の作用物質と組み合わせて投与することができる。例えば、併用療法は、少なくとも1つの抗炎症薬または少なくとも1つの免疫抑制剤と本発明の組成物を含み得る。1つの実施形態では、そのような治療薬は、ステロイド系薬剤またはNSAID非ステロイド系抗炎症薬などの1またはそれ以上の抗炎症薬を含む。好ましい薬剤は、例えば、アスピリンおよび他のサリチル酸塩、ロフェコキシブVioxxおよびセレコキシブCelebrexなどのCox-2阻害剤、イブプロフェンMotrin、Advil、フェノプロフェンNalfon、ナプロキセンNaprosyn、スリンダクClinoril、ジクロフェナクVoltaren、ピロキシカムFeldene、ケトプロフェンOrudis、ジフルニサルDolobid、ナブメトンRelafen、エトドラクLodine、オキサプロジンDayproおよびインドメタシンIndocinなどのNSAIDを含む。別の実施形態では、そのような治療薬は、低用量シクロホスファミド、抗CTLA4抗体、抗IL2または抗IL2受容体抗体のような、制御性T細胞の枯渇または機能的不活性化を導く物質を含む。さらに別の実施形態では、そのような治療薬は、タキソール誘導体、タキソテール、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ドキソルビシンAdriamycin、シスプラチンPlatinol、シクロホスファミドCytoxan、Procytox、Neosarなどの、1またはそれ以上の化学療法剤を含む。別の実施形態では、本発明の抗体は、好ましくは乳癌、肺癌、胃癌および/または卵巣癌、または、例えば本明細書で述べるような他の癌型に罹患している患者において治療効果を示す、化学療法剤と併用して投与し得る。さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、放射線治療および/または自己末梢幹細胞移植もしくは骨髄移植と併用して投与し得る。さらに別の実施形態では、本発明の抗体は、抗CD25抗体、抗EPCAM抗体、抗EGFR、抗Her2/neuおよび抗CD40抗体から選択される1またはそれ以上の抗体と併用して投与し得る。さらなる実施形態では、本発明の抗体は、補体活性化を増強するために抗C3bi抗体と併用して投与し得る。本明細書で使用される、医薬的に許容される担体は、生理的に適合性であるあらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を包含する。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与例えば注射または注入によるに適する。投与経路に依存して、活性化合物、すなわち抗体、二重特異性および多重特異性分子を、化合物を不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護するための物質で被覆し得る。医薬的に許容される塩は、親化合物の所望生物活性を保持し、いかなる望ましくない毒性作用も与えない塩を指す例えば、Berge,S.M.etal.1977J.Pharm.Sci.66:1-19参照。そのような塩の例は、酸付加塩および塩基付加塩を含む。酸付加塩は、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等のような非毒性無機酸から、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸等のような非毒性有機酸から誘導されるものを含む。塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のようなアルカリ土類金属から、ならびにN,N-ジベンジルエチレンジアミン、N-メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等のような非毒性有機アミンから誘導されるものを含む。本発明の組成物は、当分野で公知の様々な方法によって投与することができる。当業者に認識されるように、投与の経路および/または方式は所望結果に依存して異なる。活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤のような、急速な放出から化合物を保護する担体と共に製造され得る。生分解性で生体適合性のポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などが使用できる。そのような製剤の製造のための方法は一般に当業者に公知である。例えば、SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson,ed.,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1978参照。ある一定の投与経路によって本発明の化合物を投与するためには、化合物の不活性化を防ぐ物質で化合物を被覆するかまたは化合物を前記物質と同時投与する必要があり得る。例えば、化合物を適切な担体、例えばリポソーム、または希釈剤中で被験者に投与し得る。医薬的に許容される希釈剤は、生理食塩水および水性緩衝液を含む。リポソームは、水中油中水型CGFエマルションならびに従来のリポソームを含むStrejanetal.1984J.Neuroimmunol.7:27。医薬的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散液および滅菌注射溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末を含む。医薬活性物質のためのそのような媒質および物質の使用は当分野において公知である。従来の媒質または物質が活性化合物と不適合性である場合を除き、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が企図される。補助的な活性化合物も組成物に組み込むことができる。治療組成物は、典型的には製造および保存条件下で無菌且つ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬剤濃度に適した他の秩序構造体として製剤できる。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール等、およびそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆剤の使用によって、分散液の場合は必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持できる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。吸収を遅延させる物質、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることにより、注射用組成物の持続的吸収を生じさせることができる。滅菌注射用溶液は、必要量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した成分の1つまたは成分の組合せと共に適切な溶媒中に組み込み、その後滅菌精密ろ過することによって製造できる。一般に、分散液は、基本分散媒および上記に列挙したものの中から必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を組み込むことによって製造される。滅菌注射溶液の製造のための滅菌粉末の場合、好ましい製造方法は、あらかじめ滅菌ろ過したその溶液から有効成分および任意の付加的な所望成分の粉末を生成する真空乾燥および凍結乾燥である。投薬レジメンは、最適所望応答例えば治療応答を与えるように調整される。例えば、単回ボーラスを投与し得るか、数回の分割用量を一定期間にわたって投与してもよく、または治療状況の緊急性によって指示されるのに比例して用量を低減または増加してもよい。投与の容易さおよび用量の均一性のために非経口組成物を投与単位形態で製剤することは特に好都合である。本明細書で使用される投与単位形態は、治療される被験者のための単一投与量として適する物理的に分離した単位を表す;各々の単位は、必要な医薬担体と共同して所望治療効果を生じさせるように計算された、あらかじめ定められた量の活性化合物を含有する。本発明の投与単位形態についての詳細は、a活性化合物の独自の特性および達成されるべき特定の治療効果、ならびにb個体における感受性の治療のためにそのような活性化合物を配合することの当分野に固有の限界によって決定され、直接それらに依存する。医薬的に許容される抗酸化剤の例は:1水溶性抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等;2油溶性抗酸化剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソールBHA、ブチル化ヒドロキシトルエンBHT、レシチン、没食子酸プロピル、α-トコフェロール等;および3金属キレート化剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸EDTA、ソルビトール、酒石酸、リン酸等を含む。治療組成物に関して、本発明の製剤は、経口、経鼻、局所口腔および舌下を含む、経直腸、経膣および/または非経口投与に適するものを含む。製剤は、単位投与形態で好都合に提供され得、薬学の技術分野において公知の任意の方法によって製造され得る。単一投与形態を生産するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される被験者および特定の投与方式に依存して異なる。単一投与形態を生産するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、一般に治療効果を生じさせる組成物の量である。一般に、100のうちで、この量は約0.01~約99の有効成分、好ましくは約0.1~約70、最も好ましくは約1~約30の有効成分の範囲である。経膣投与に適する本発明の製剤はまた、適切であることが当分野において公知の担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡またはスプレー製剤を含む。本発明の組成物の局所または経皮投与用の剤型は、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入剤を含む。活性化合物は、無菌条件下で、医薬的に許容される担体、および必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝剤または噴射剤と混合し得る。本明細書で使用される非経口投与および非経口的に投与されるという語句は、通常は注射による、腸内および局所投与以外の投与方式を意味し、限定されることなく、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入を含む。本発明の医薬組成物において使用し得る適切な水性および非水性担体の例は、水、エタノール、ポリオール例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等およびそれらの適切な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆材料の使用によって、分散液の場合は必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持できる。これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などの補助剤も含有し得る。微生物の存在の防止は、滅菌手順、ならびに種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を含有することの両方によって確保し得る。また、糖類、塩化ナトリウム等のような等張剤を組成物に含めることも望ましいと考えられる。加えて、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる物質を含めることにより、注射用医薬形態の持続的吸収を生じさせ得る。1つの実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、皮下注射によって結晶形態で投与される。Yangetal.2003PNAS,10012:6934-6939参照。本発明の化合物を薬剤としてヒトおよび動物に投与する場合、それらを単独で、または医薬的に許容される担体と組み合わせて、例えば0.01~99.5より好ましくは0.1~90の有効成分を含有する医薬組成物として投与することができる。選択される投与経路に関わらず、適切な水和形態で使用され得る本発明の化合物および/または本発明の医薬組成物は、当業者に公知の従来の方法によって医薬的に許容される投与形態に製剤される。本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の用量レベルは、患者への毒性を伴わずに、特定の患者、組成物および投与方式について所望治療応答を達成するために有効な有効成分の量が得られるように変化させ得る。選択される用量レベルは、使用される本発明の特定組成物の活性、投与経路、投与の時間、使用される特定化合物の排泄速度、治療期間、使用される特定組成物と併用される他の薬剤、化合物および/または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的健康および病歴、ならびに医学技術分野において周知の同様の因子を含む様々な薬物動態因子に依存する。当分野における通常技術を有する医師または獣医は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医は、医薬組成物中で使用される本発明の化合物の用量を、所望治療効果を達成するために必要とされるよりも低いレベルから開始し、所望効果が達成されるまで徐々に投与量を増加することができる。一般に、本発明の組成物の適切な1日用量は、治療効果を生じさせるのに有効な最小用量である化合物の量である。そのような有効用量は、一般に上述した因子に依存する。投与は静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下経路であることが好ましく、好ましくは標的部位の近位に投与される。所望する場合は、治療組成物の有効1日用量を、1日を通じて適切な間隔で別々に投与される2、3、4、5、6またはそれ以上の分割用量として、場合により単位投与形態で投与し得る。本発明の化合物は単独で投与することが可能であるが、医薬製剤組成物として本発明の化合物を投与することが好ましい。1つの実施形態では、本発明の抗体は、毒性副作用を低減するために注入によって、好ましくは24時間以上のような長期間にわたる緩徐な持続注入によって投与し得る。投与はまた、2~24時間、例えば2~12時間にわたる持続注入によって実施し得る。そのようなレジメンは、必要に応じて1回またはそれ以上、例えば6ヵ月後または12ヵ月後に反復し得る。投与量は、抗GT468抗体を標的する抗イディオタイプ抗体を使用することにより、生物学的試料において投与後の循環モノクローナル抗GT468抗体の量を測定することによって決定するまたは調整することができる。さらに別の実施形態では、抗体は、例えば週に1回、6ヵ月またはそれ以上の期間にわたるような、維持療法によって投与される。さらに別の実施形態では、本発明による抗体は、GT468に対する抗体の1回注入、次いで放射性同位体に結合したGT468に対する抗体の注入を含むレジメンによって投与し得る。前記レジメンを、例えば7~9日後に反復してもよい。治療組成物は、当分野で公知の医療装置を用いて投与できる。例えば、好ましい実施形態では、本発明の治療組成物は、米国特許第5,399,163号;同第5,383,851号;同第5,312,335号;同第5,064,413号;同第4,941,880号;同第4,790,824号;または同第4,596,556号に開示されている装置のような、無針皮下注射装置で投与できる。本発明において有用な周知のインプラントおよびモジュールの例は、制御された速度で薬剤を供給するための移植可能な微量注入ポンプを開示する、米国特許第4,487,603号;皮膚を通して薬剤を投与するための治療装置を開示する、米国特許第4,486,194号;正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示する、米国特許第4,447,233号;持続的薬剤送達のための可変流量移植可能注入装置を開示する、米国特許第4,447,224号;マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬剤送達システムを開示する、米国特許第4,439,196号;および浸透圧薬剤送達システムを開示する、米国特許第4,475,196号に記載されているものを含む。多くの他のそのようなインプラント、送達システムおよびモジュールが当業者に公知である。ある実施形態では、本発明の抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするように製剤できる。例えば、血液脳関門BBBは多くの高度親水性化合物を排除する。本発明の治療化合物がBBBを越えることを確実にするため所望する場合、それらを、例えばリポソーム中に製剤することができる。リポソームを製造するための方法については、例えば米国特許第4,522,811号;同第5,374,548号;および同第5,399,331号参照。リポソームは、特定細胞または器官内に選択的に輸送され、したがって標的薬剤送達を促進する1またはそれ以上の部分を含有し得る例えばV.V.Ranade1989J.Clin.Pharmacol.29:685参照。例示的な標的部分は、葉酸塩またはビオチン例えばLowetal.への米国特許第5,416,016号参照;マンノシドUmezawaetal.1988Biochem.Biophys,Res.Commun.153:1038;抗体P.G.Bloemanetal.1995FEBSLett.357:140;M.Owaisetal.1995Antimicrob.AgentsChemother.39:180;および界面活性剤プロテインA受容体Briscoeetal.1995Am.J.Physiol.1233:134を含む。本発明の1つの実施形態では、本発明の治療化合物はリポソームに製剤される。より好ましい実施形態では、リポソームは標的部分を含む。最も好ましい実施形態では、リポソーム中の治療化合物は、所望領域に近位の部位、例えば腫瘍の部位にボーラス注射によって送達される。組成物は、容易に注射可能である程度に流動性でなければならない。組成物は、製造および保存条件下で安定でなければならず、また細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されねばならない。さらなる実施形態では、本発明の抗体は、胎盤を横切る輸送を防ぐまたは低減するように製剤できる。これは、当分野で公知の方法によって、例えば抗体のPEG化によってまたはFab2フラグメントの使用によって実施できる。さらにCunningham-RundlesC,ZhuoZ,GriffithB,KeenanJ.1992Biologicalactivitiesofpolyethylene-glycolimmunoglobulinconjugates.Resistancetoenzymaticdegradation.J.Immunol.Methods,152:177-190;およびLandorM.1995Maternal-fetaltransferofimmunoglobulins,Ann.AllergyAsthmaImmunol.74:279-283が参照できる。腫瘍治療のための治療有効用量は、完全または部分的であり得る、客観的腫瘍応答によって測定できる。完全応答CRは、疾患の臨床的、放射線医学的または他の証拠がないことと定義される。部分応答PRは、凝集腫瘍サイズの50以上の縮小から生じる。進行までの平均時間は、客観的腫瘍応答の持続性を特徴づける測定値である。腫瘍治療のための治療有効用量はまた、疾患の進行を安定化するその能力によっても測定できる。癌を抑制する化合物の能力は、ヒト腫瘍における効果を予測する動物モデル系において評価できる。あるいは、組成物のこの特性は、当業者に公知のインビトロアッセイにより、細胞増殖またはアポトーシスを阻害する化合物の能力を検査することによって評価できる。治療化合物の治療有効量は、腫瘍サイズを縮小させるまたはさもなければ被験者において症状を改善することができる。当業者は、被験者の大きさ、被験者の症状の重症度、および選択される特定組成物または投与経路などの因子に基づいてそのような量を決定することができる。組成物は無菌でなければならず、また組成物が注射器によって送達可能である程度に流動性でなければならない。水に加えて、担体は、等張緩衝食塩水、エタノール、ポリオール例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール等、ならびにそれらの適切な混合物であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆剤の使用によって、分散液の場合は必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持できる。多くの場合、等張剤、例えば糖類、マンニトールまたはソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。吸収を遅延させる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることにより、注射用組成物の長期吸収を生じさせることができる。活性化合物が適切に保護されている場合、上述したように、化合物は、例えば不活性希釈剤または同化可能な食用担体と共に、経口投与し得る。IV.本発明の用途および方法本発明の抗体本明細書で述べる免疫複合体、二重特異性/多重特異性分子、組成物および他の誘導体を含むは、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞が関与する疾患の治療を含む、数多くの治療上の有用性を有する。例えば、前記抗体は、本明細書で述べるような様々な疾患を治療するまたは予防するために、例えばインビトロもしくはエクスビボexvivoで培養下の細胞に、または例えばインビボでヒト被験者に投与することができる。本明細書で使用される、被験者という用語は、GT468に対する抗体に応答するヒトおよび非ヒト動物を包含することが意図されている。好ましい被験者は、疾患細胞、特に正常細胞と比較して変化したGT468の発現パターンおよび/またはその細胞表面とGT468の変化した結合パターンによって特徴づけられる細胞を死滅させることによって矯正または改善できる疾患を有するヒト患者を含む。例えば、1つの実施形態では、本発明の抗体は、腫瘍形成性疾患、例えば、乳癌を含む、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする腫瘍細胞の存在によって特徴づけられる疾患を有する被験者を治療するために使用できる。治療および/または予防できる腫瘍形成性疾患の例は、GT468を発現するすべての癌および腫瘍実体を包含し、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態を含む。これらの癌は、早期、中期または進行期、例えば転移であり得る。1つの実施形態では、癌疾患は肺の転移性癌である。本発明において述べる医薬組成物および治療方法はまた、本明細書で述べる疾患を予防するための免疫またはワクチン接種にも使用し得る。別の実施形態では、本発明の抗体は、GT468もしくは特定形態のGT468のレベル、またはそれらの膜表面にGT468を含む細胞のレベルを検出するために使用でき、その後、それらのレベルを上述したような特定の疾患または疾患症状に結びつけることができる。あるいは、抗体を使用して、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の機能を低下させるまたは前記細胞の機能と相互作用させて、それによりこれらの細胞を疾患の重要なメディエータとして関係づけることができる。これは、抗体とGT468との間での複合体の形成を可能にする条件下で、試料および対照試料を抗GT468抗体と接触させることによって達成できる。抗体とGT468との間で形成される任意の複合体を検出し、試料と対照試料、すなわち参照試料において比較する。本発明の抗体は、最初にインビトロでの治療または診断用途に関連するそれらの結合活性に関して試験することができる。例えば、本明細書で述べるフローサイトメトリアッセイを用いて抗体を試験できる。さらに、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖を阻害することおよび/または前記細胞を死滅させることを含む、少なくとも1つのエフェクター媒介性エフェクター細胞活性を開始させる抗体の活性を検定することができる。例えば、CDCおよび/またはアポトーシスを開始させる抗体の能力が検定できる。CDC、同型接着、分子クラスタリングまたはアポトーシスを検定するためのプロトコールを本明細書で述べる。本発明の抗体は、以下の生物活性:GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の増殖および/もしくは分化を阻害すること;GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を死滅させること;エフェクター細胞の存在下でGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の食作用もしくはADCCを媒介すること;補体の存在下でGT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のCDCを媒介すること;GT468を発現するおよび/もしくはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞のアポトーシスを媒介すること;同型接着を誘導すること;ならびに/またはGT468に結合したとき脂質ラフトへの移行を誘導すること、の1またはそれ以上をインビボまたはインビトロで誘発するために使用できる。特定の実施形態では、本発明の抗体は、様々なGT468関連疾患を治療する、予防するまたは診断するためにインビボまたはインビトロで使用される。GT468関連疾患の例は、中でも特に、乳癌、肺癌、胃癌、卵巣癌、肝細胞癌、結腸癌、膵癌、食道癌、頭頸部癌、腎癌、特に腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、黒色腫、肉腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、胎盤性絨毛癌、子宮頸癌および甲状腺癌、ならびにそれらの転移形態などの癌を含む。1つの実施形態では、癌疾患は肺の転移性癌である。本発明の抗体組成物をインビボおよびインビトロで投与する適切な経路は、当分野において周知であり、当業者によって選択され得る。上述したように、本発明の抗GT468抗体は、1またはそれ以上の他の治療薬、例えば細胞傷害性物質、放射性毒性物質、抗血管新生薬および/または本発明の抗体に対する免疫応答の誘導を低減する免疫抑制剤と同時投与することができる。抗体は、治療薬に連結し得るか免疫複合体としてまたは治療薬とは別に投与することができる。後者別途投与の場合、抗体は、治療薬の前、後もしくは治療薬と同時に投与できるか、または他の公知の治療法、例えば抗癌療法、例えば放射線と同時投与できる。そのような治療薬は、中でも特に、上記で列挙したような抗腫瘍薬を含む。化学療法剤と本発明の抗GT468抗体の同時投与は、腫瘍細胞に細胞傷害作用を生じさせる異なる機構によって働く2つの抗癌剤を提供する。そのような同時投与は、薬剤に対する耐性の発現または腫瘍細胞を抗体と非反応性にする腫瘍細胞の抗原性の変化に起因する問題を解決することができる。本発明の別の特定実施形態では、抗体を投与される被験者は、VEGFまたはVEGFRを標的とする抗体および血管新生を阻害する1またはそれ以上の化合物を含む、抗血管新生薬で付加的に治療される。これらの薬剤による前処置または並行適用は、バルク腫瘍内への抗体の浸透を改善し得る。本発明の別の特定実施形態では、抗体を投与される被験者は、EGFR受容体に結合するモノクローナル抗体ならびにEGFR、Her1またはHer2/neu受容体によって開始されるシグナル伝達を阻害する化合物を含む、増殖因子受容体シグナル伝達を阻害する化合物で付加的に治療される。標的特異的エフェクター細胞、例えば本発明の組成物例えば抗体、多重特異性および二重特異性分子に連結されたエフェクター細胞も、治療薬として使用することができる。ターゲティングのためのエフェクター細胞は、マクロファージ、好中球または単球などのヒト白血球であり得る。他の細胞は、好酸球、ナチュラルキラー細胞および他のIgG受容体またはIgA受容体担持細胞を含む。所望する場合は、治療される被験者からエフェクター細胞を得ることができる。標的特異的エフェクター細胞は、生理的に許容される溶液中の細胞の懸濁液として投与できる。投与される細胞の数は約108~109であり得るが、治療目的に依存して異なる。一般に、その量は、標的細胞、例えばGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする腫瘍細胞における局在化を得るため、および、例えば食作用によって細胞の死滅を生じさせるために十分な量である。投与経路も多様であり得る。標的特異的エフェクター細胞による治療は、標的細胞の除去のための他の技術と併用して実施できる。例えば、本発明の組成物および/またはこれらの組成物を有するエフェクター細胞を使用した抗腫瘍治療は、化学療法と共に使用できる。加えて、併用免疫療法は、2つの異なる細胞傷害性エフェクター集団を腫瘍細胞の排除へと向かわせるために使用し得る。例えば、抗FcRIまたは抗CD3に連結された抗GT468抗体をIgG受容体またはIgA受容体特異的結合物質と共に使用し得る。本発明の二重特異性および多重特異性分子はまた、細胞表面上の受容体をキャップし、除去することなどにより、エフェクター細胞上のFcγRまたはFcαRレベルを調節するために使用できる。抗Fc受容体の混合物もこのために使用できる。補体に結合するIgG1、IgG2、IgG3またはIgMからの部分のような、補体結合部位を有する本発明の組成物例えば抗体、多重特異性および二重特異性分子ならびに免疫複合体も、補体の存在下で使用できる。1つの実施形態では、本発明の結合物質および適切なエフェクター細胞による、標的細胞を含む細胞の集団のエクスビボ治療は、補体または補体を含有する血清の添加によって補足できる。本発明の結合物質で被覆された標的細胞の食作用は、補体タンパク質の結合によって改善され得る。別の実施形態では、本発明の組成物で被覆された標的細胞はまた、補体によって溶解され得る。さらに別の実施形態では、本発明の組成物は補体を活性化しない。本発明の組成物はまた、補体と共に投与することができる。したがって、抗体、多重特異性または二重特異性分子と血清または補体を含有する組成物は本発明の範囲内である。これらの組成物は、補体が抗体、多重特異性または二重特異性分子にごく近接して位置するという点で有利である。あるいは、本発明の抗体、多重特異性または二重特異性分子と補体または血清を別々に投与することができる。標的細胞への本発明の組成物の結合は、GT468抗原-抗体複合体の、細胞膜の脂質ラフトへの移行を生じさせ得る。そのような移行は、CDCを効率的に活性化および/または増強し得る高密度の抗原-抗体複合体を形成する。また、本発明の抗体組成物例えば抗体および免疫複合体ならびに使用のための指示書を含むキットも本発明の範囲内である。キットは、免疫抑制試薬、細胞傷害性物質もしくは放射性毒性物質などの1もしくはそれ以上の付加的な試薬、または1もしくはそれ以上の付加的な本発明の抗体例えば補完的活性を有する抗体をさらに含み得る。したがって、本発明の抗体組成物で治療される患者は、本発明の抗体の治療効果を高めるまたは増大させる、細胞傷害性物質または放射性毒性物質などの別の治療薬を付加的に投与され得る本発明の抗体の投与前に、抗体の投与と同時にまたは抗体の投与後に。他の実施形態では、例えば被験者をサイトカインで治療することにより、FcγまたはFcα受容体の発現または活性を調節する、例えば増強するまたは阻害する物質で被験者を付加的に治療することができる。好ましいサイトカインは、顆粒球コロニー刺激因子G-CSF、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子GM-CSF、インターフェロンγIFN-γ、および腫瘍壊死因子TNFを含む。本明細書で述べる抗体および医薬組成物の治療効果を高めるための他の重要な物質は、分枝グルコース残基のホモ多糖であり、様々な植物および微生物、例えば細菌、藻類、真菌、酵母および穀物によって生産されるβ-グルカンである。生物によって生産されるβ-グルカンのフラグメントも使用し得る。好ましくは、β-グルカンは、骨格グルコース単位の少なくとも一部、例えば骨格グルコース単位の3~6がβ1,6分枝などの分枝を有する、β1,3グルコースのポリマーである。特定の実施形態では、本発明は、被験試料と対照試料を、抗体またはその部分とGT468の間での複合体の形成を可能にする条件下で、GT468に特異的に結合する抗体と接触させることを含む、試料中のGT468抗原の存在を検出する、またはGT468抗原の量を測定するための方法を提供する。次に、複合体の形成を検出し、対照試料と比較して被験試料との間での複合体形成の差が被験試料中のGT468抗原の存在を指示する。さらに別の実施形態では、本発明は、インビボまたはインビトロでGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞の存在を検出するまたは前記細胞の量を測定するための方法を提供する。その方法は、i検出マーカーに結合した本発明の組成物を被験者に投与すること;およびiiGT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞を含む領域を同定するために、被験者を、前記検出マーカーを検出するための手段に暴露することを含む。上述した方法は、特に、癌疾患などのGT468関連疾患を診断するためおよび/またはGT468関連疾患の局在化のために有用である。好ましくは、対照試料中のGT468の量よりも高い被験試料中のGT468の量は、試料が由来する被験者、特にヒトにおけるGT468関連疾患の存在を指示する。上述した方法において使用される場合、本明細書で述べる抗体は、i検出可能なシグナルを提供する;ii第一もしくは第二標識によって提供される検出可能なシグナルを改変するように第二標識と相互作用する、例えばFRET蛍光共鳴エネルギー転移;iii電荷、疎水性、形状もしくは他の物理的パラメータによって移動度、例えば電気泳動移動度に影響を及ぼす、またはiv捕捉部分、例えば親和性、抗体/抗原もしくはイオン錯体形成を生じさせる、ように機能する標識と共に提供され得る。蛍光標識、発光標識、発色団標識、放射性同位体標識、同位体標識、好ましくは安定な同位体標識、同重体標識、酵素標識、粒子標識、特に金属粒子標識、磁性粒子標識、ポリマー粒子標識、ビオチンなどの低分子有機分子、受容体または細胞接着タンパク質もしくはレクチンなどの結合分子のリガンド、結合剤の使用によって検出できる核酸および/またはアミノ酸残基を含む標識配列等のような構造体が、標識として適切である。標識は、非限定的に、硫酸バリウム、ヨーセタム酸、イオパノ酸、カルシウムイポデート、ジアトリゾ酸ナトリウム、ジアトリゾ酸メグルミン、メトリザミド、チロパノ酸ナトリウム、ならびにフッ素-18および炭素-11などの陽電子放射体、ヨウ素-123、テクネチウム-99m、ヨウ素-131およびインジウム-111などのガンマ線放射体、フッ素およびガドリニウムなどの核磁気共鳴のための核種を含む。さらに別の実施形態では、本発明の免疫複合体を使用して、化合物例えば治療薬、標識、細胞毒、放射性毒素、免疫抑制剤等を抗体に連結することにより、GT468がその表面と結合している細胞にそのような化合物を標的することができる。したがって、本発明はまた、循環腫瘍細胞などの、GT468を発現するおよび/またはその細胞表面とGT468の結合を特徴とする細胞をエクスビボまたはインビトロで局在化するための方法を提供する。本発明を以下の実施例によってさらに説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。実施例1:試験材料および方法本明細書で言及する技術および方法は、それ自体公知の方法でおよび、例えばSambrooketal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ndEdition1989ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.に記載されているように、または以下で述べるように実施される。キットおよび試薬の使用を含むすべての方法は製造者の情報に従って実施される。組織および細胞株組換えDNA作業は、公式の許可を得て、Rheinland-Pfalz州政府の規則に従って実施した。組織は、通常診断または治療手順の間のヒト余剰材料として入手し、使用時まで-80°Cで保存した。乳癌細胞株MCF-7およびBT549をDMEM/10FCS中で培養した。RNAの単離、RT-PCRおよびリアルタイムRT-PCRRNAの抽出、第一鎖cDNAの合成、RT-PCRおよびリアルタイムRT-PCRを先に記述されているように実施したKoslowski,M.,Sahin,U.,Huber,C.Tureci,O.2006Hum.Mol.Genet.15,2392-2399。エンドポイント分析のためにGT468特異的オリゴヌクレオチドセンス5-AAATTTGGCAGCTGCCTTCAC-3;アンチセンス5-TGATGCCACATTCAGTAACAC-3、60°Cでアニーリングを35サイクルのRT-PCRにおいて使用した。リアルタイム定量的発現分析を40サイクルのRT-PCRにおいて三重に実施した。HPRTセンス5-TGACACTGGCAAAACAATGCA-3;アンチセンス5-GGTCCTTTTCACCAGCAAGCT-3、62°Cでアニーリングに正規化した後、腫瘍試料中のGT468転写産物を、ΔΔCT計算を用いて正常組織と比較して定量化した。任意に選択した試料からの増幅産物のクローニングし、配列決定することによってPCR反応の特異性を確認した。バイオインフォマティクス栄養膜特異的分子のインシリコクローニングのために、別のところで詳述されているデータマイニング法を修正し、適合させたKoslowski,M.,Bell,C.,Seitz,G.,Lehr,H.A.,Roemer,K.,Muntefering,H.,Huber,C.,Sahin,U.Tureci,O.2004CancerRes.64,5988-5993;Koslowski,M.,Tureci,O.,Bell,C.,Krause,P.,Lehr,H.A.,Brunner,J.,Seitz,G.,Nestle,F.O.,Huber,C.Sahin,U.2002CancerRes.62,6750-6755;Koslowski,M.,Sahin,U.,Huber,C.Tureci,O.2006Hum.Mol.Genet.15,2392-2399。簡単に述べると、GenBankの階層的キーワード検索をデジタルcDNAライブラリサブトラクションと組み合わせた。キーワード検索のために、ENTREZSearchandRetrievalSystemhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrezを使用して、胎盤または栄養膜組織で特異的に発現されると注釈されている遺伝子に関してGenBankのヌクレオチド配列ファイルにアクセスした。冗長性を防ぐためにすべてのヒトヌクレオチド配列に対して各々のヌクレオチド配列についての配列相同性検索プログラムBLASTNhttp://ncbi.nlm.nih.gov/blastを連続的に実施した。2番目のフィルタとして、NCBIhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLASTのESTデータベースに対する各々の対象DNA配列のBLAST検索によるキーワード検索によって得たすべてのクローンについて電子ノーザンeNorthernを実施した。公知のいくつかのcDNAライブラリが正しく注釈されていないことを考慮に入れたScheurle,D.,DeYoung,M.P.,Binninger,D.M.,Page,H.,Jahanzeb,M.Narayanan,R.2000CancerRes.60,4037-4043。デジタルサブトラクションのために、各々のプールが単一ライブラリまたは数個のライブラリのいずれかであり得る、cDNAライブラリの2つのプールAとBの間で遺伝子発現を比較する、NCBIhttp://cgap.nci.nih.gov/Tissues/xProfilerの癌ゲノム解剖プロジェクトCancerGenomeAnatomyProjectのcDNAxProfilerツールを使用した。dbESTにおけるすべてのcDNAライブラリを検索するために、プールAとプールBについての検索オプションを、生物についてはヒト、ライブラリ群についてはすべてのESTライブラリに設定した。検索オプション設定にマッチする胎盤および栄養膜組織から作製したすべてのcDNAライブラリを、混合組織ライブラリを除いてプールAに割り当てた。プールBについては、胎盤、栄養膜、精巣、卵巣および胎児の全身を除く正常組織から作製したすべてのcDNAライブラリを選択した。GT468プロモータ領域の分析のために、EMBOSSCpGPlotRice,P.,Longden,I.Bleasby,A.2000TrendsGenet.16,276-277ソフトウエアを使用した。さらに、GT468タンパク質配列の分析をMEMSAT3Jones,D.T.,Taylor,W.R.Thornton,J.M.1994Biochemistry33,3038-3049、TMpredHofmann,K.Stoffel,W.1993Biol.Chem.Hoppe-Seyler374,166、およびGORIVGarnier,J.,Osguthorpe,D.J.Robson,B.1978J.Mol.Biol.120,97-120で実施した。抗血清、免疫蛍光法および免疫化学GT468のアミノ酸117~127に対して惹起されるポリクローナル抗血清は、抗体受託生産サービスSquarix,Marl,Germanyによって作製された。VECTORNovaREDSubstrateKitVector,Burlingame,CAを製造者の指示に従って使用して、組織凍結切片に関して免疫組織化学を実施した。ウエスタンブロット分析のために、Triton-Xで溶解した細胞から抽出した全タンパク質30μgを使用した。抽出物を還元試料緩衝液Roth,Karlsruhe,Germanyで希釈し、SDS-PAGEに供して、その後PVDF膜Pall,EastHills,NYに電気転写した。pAKTCellSignaling,Danvers,MA、AKTCellSignaling,Danvers,MA、サイクリンD1SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CAおよびβ-アクチンAbcam,Cambridge,UKに対して反応性の抗体で免疫染色を実施し、次いでホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスおよびヤギ抗ウサギ二次抗体Dako,Glostrup,Denmarkを用いて一次抗体を検出した。siRNA二本鎖GT468siRNA二本鎖Qiagen,Hilden,Germanyセンス5-rCCAUGAGAGUAGCCAGCAdTdT-3、アンチセンス5-rUUGCUGGCUACUCUCAUGGdAdG-3は、GT468mRNA配列NM_021796.3のヌクレオチド670~690を標的した。対照として、スクランブルsiRNA二本鎖センス5-rUAACUGUAUAAUCGACUAGdTdT-5、アンチセンス5-rCUAGUCGAUUAUACAGUUAdGdA-3を使用した。GT468サイレンシング試験のために、HiPerFectトランスフェクション試薬Qiagenを製造者の指示に従って使用して、細胞を10nMsiRNA二本鎖でトランスフェクトした。すべての結果を、ヌクレオチド342~362を標的する2番目のセットのGT468siRNA二本鎖センス5-rGGUUCAGGACAAAGUCCAAdTdT-3、アンチセンス5-rUUGGACUUUGUCCUGAACCdGdG-3で再現した。siRNAのトランスフェクション後の細胞増殖分析siRNA二本鎖でのトランスフェクションの24時間後に、10FCSを添加した培地で1×104細胞を48時間培養した。WallacVictor2マルチラベルカウンターPerkinElmer,Boston,MAで、DELFIA細胞増殖キットPerkinElmer,Boston,MAを製造者の指示に従って使用して、新たに合成されたDNA鎖へのBrdUの取込みを測定することによって増殖を分析した。細胞周期分析様々な濃度の10FCSを添加した培地で細胞を培養した。siRNA二本鎖でのトランスフェクションの72時間後に細胞を採取し、EtOH固定して、ヨウ化プロピジウムで染色した後、フローサイトメトリによるDNA含量分析に供した。細胞周期の異なる期にある細胞を、CellQuest商標ProBD,FranklinLakes,NJおよびFlowJo商標TreeStar,Ashland,ORフローサイトメトリ解析ソフトウエアを使用して定量した。siRNAトランスフェクションの48時間後および72時間後にアポトーシス細胞をアネキシンV染色によって定量した。細胞移動およびインビトロ浸潤アッセイ実験の前に12時間無血清培地で培養した細胞に関して、8.0μm細孔膜を有するトランスウエルチャンバーBDBiosciences,SanJose,CAにおいて細胞移動アッセイを実施した。siRNA実験のために、上述したsiRNA二本鎖でのトランスフェクションの24時間後に細胞を無血清条件に移した。無血清培地400μl中の4×104細胞を上部チャンバーに加えた。下部チャンバーは、化学誘引物質として5FCSを添加した培地800μlを含んだ。24時間後、膜の下側に移動していた細胞を氷冷メタノールで固定した;膜を切り出し、顕微鏡スライドに載せて、蛍光顕微鏡検査のためにHoechstDako,Glostrup,Denmarkで封入した。5つのランダムな視野内の細胞倍率100倍を各々の膜について計数した。すべての実験を三重に実施した。細胞の化学運動性への作用を、上部と下部の両方のチャンバーに化学誘引物質を添加して同じ実験設定を用いて分析した。インビトロ浸潤アッセイのために、無血清培地中で1mg/mlに希釈したMatrigelBDBiosciences,SanJose,NJ100μlで上部チャンバーを調製した。ゲル化のためにチャンバーを37°Cで5時間インキュベートした。抗体とのインキュベーション後の細胞増殖分析内因性にGT468を発現する癌細胞株BT-549、Caov-3、EFO-21、MCF-7およびMDA-MB-231を、DMEM細胞培養培地で1:2に希釈したハイブリドーマ上清と共に72時間インキュベートした。WallacVictor2マルチラベルカウンターPerkinElmerで、DELFIA細胞増殖キットPerkinElmerを製造者の指示に従って使用して、新たに合成されたDNA鎖へのBrdUの取込みを測定することによって増殖を分析した。あるいは、内因性にGT468を発現する癌細胞株SK-BR-3およびMCF-7を、それぞれ、指示されている濃度で72時間または120時間、DMEM細胞培養培地で希釈したHPLC精製ハイブリドーマ上清と共にインキュベートした。上述したように増殖を分析した。あるいは、内因性にGT468を発現する癌細胞株SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468、および対照としてGT468陰性黒色腫細胞株MelHoを、DMEMSK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468またはRPMIMelHo細胞培養培地で希釈したFPLC精製ハイブリドーマ上清10μg/mlおよび50μg/mlと共に72時間インキュベートした。WallacVictor2マルチラベルカウンターPerkinElmerで、DELFIA細胞増殖キットPerkinElmerを製造者の指示に従って使用して、新たに合成されたDNA鎖へのBrdUの取込みを測定することによって増殖を分析した。免疫蛍光顕微鏡検査免疫マウスの血清中の抗GT468抗体の存在またはGT468を発現する生細胞へのモノクローナル抗体の結合を明らかにするため、免疫蛍光顕微鏡検査分析を使用した。GT468-eGFPでトランスフェクトしたCHO細胞を、10ウシ胎仔血清FCS、2mML-グルタミン、100IU/mlペニシリンおよび100μg/mlストレプトマイシンを添加したDMEM/F12培地中、標準的な増殖条件下でチャンバースライドにおいて増殖させた。次に細胞をメタノールまたはパラホルムアルデヒド/0.1サポニンで固定した。細胞をGT468に対する抗体と共に25°Cで60分間インキュベートした。洗浄後、細胞を同じ条件下でAlexa555標識抗マウスIgG二次抗体MolecularProbesと共にインキュベートした。GT468ペプチド特異的ELISAMaxiSorpまたはMicrowellプレートNuncを適切なGT468ペプチド5または10μg/mlで37°Cにて1時間被覆した。PBS/3BSAを用いて4°Cで一晩ブロッキングを実施した。PBSで洗浄した後、プレートにハイブリドーマ上清PBS/3BSAで1:5もしくは1:10希釈、または2×PBS/6BSA、pH7.3で1:2希釈または精製抗体PBS/3BSA、pH7.3で1μg/mlに希釈を負荷し、室温で1時間インキュベートした90rpmで軌道振とう。PBSで洗浄した後、PBS/3BSA、pH7.3中の二次抗体HRPO結合ヤギ抗マウスIgG、サブクラス12a2b3、JacksonImmunoResearchを添加し、90rpmで軌道振とうしながら室温で1時間インキュベートした。PBSでの最終洗浄工程後、100mM酢酸ナトリウムpH5.2中の1mMまたは1.5mMABTSから成る基質溶液を添加した。使用の直前に、基質溶液に0.3μl/mlの30H2O2を添加した。30~60分後にTecanSafireプレートリーダーTecanで405nmの吸収を測定した。GT468に対するヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの作製マウス脾細胞を、以下で述べる種々の免疫プロトコールを使用してあらかじめ免疫しておいた動物から単離し、標準プロトコールに基づきPEGでマウス骨髄腫細胞株に融合した。生じたハイブリドーマを、次に、ペプチド特異的ELISA、GT468CrELISAおよびGT468-eGFPでトランスフェクトしたCHO細胞を使用してGT468特異性を有する免疫グロブリンの産生を免疫蛍光法IFによってスクリーニングした。免疫マウスからの脾リンパ球の単一細胞懸濁液を、50PEGRocheDiagnostics,CRL738641を使用して2:1の比率でP3X63Ag8U.1非分泌性マウス骨髄腫細胞ATCC,CRL1597または56-4A-2、62-9B-1および63-1A-2の場合はP3X63Ag8.653マウス骨髄腫細胞ATCC,CRL1580と融合した。細胞を平底マイクロタイタープレートに約3×104/ウエルで塗布し、次に10ウシ胎仔血清、2ハイブリドーマ融合物およびクローニング用添加剤HFCS,RocheDiagnostics,CRL1363735さらに10mMHEPES、0.055mM2-メルカプトエタノール、50μg/mlゲンタマイシンおよび1×HATSigma,CRLH0262を含有する選択培地で約2週間インキュベートした。10~14日後、個々のウエルをペプチド特異的ELISAによって抗GT468モノクローナル抗体に関してスクリーニングした。抗体を分泌するハイブリドーマを再び植え付け、スクリーニングして、抗GT468モノクローナル抗体に関してまだ陽性である場合は、限界希釈によってサブクローニングした。次に安定なサブクローンをインビトロで培養し、特性づけのために組織培養培地中で少量の抗体を生成した。親細胞の反応性を保持するELISAおよびIFによって、各々のハイブリドーマから少なくとも1つのクローンを選択した。ハイブリドーマ上清からのモノクローナル抗体の精製HiTrap商標MabSelectSuRe商標を使用した一段階アフィニティクロマトグラフィを実施することにより、ハイブリドーマ上清から抗体を作製した。抗体アイソタイプに依存してpH3.0~pH4.0の100mMクエン酸塩で溶出した後、収集した画分を直ちに1MTris、pH8.0で中和した。さらなる実験のために抗体製剤をPBS5Lに対して2回透析し、滅菌ろ過して0.2μm、4°Cで保存した。アイソタイピングハイブリドーマ上清のアイソタイピングのために、IsoStripMouseMonoclonalAntibodyIsotypingKitRocheを製造者によって述べられているように使用した。GT468を発現する細菌の粗溶解物を使用したCrELISA手順抗原の調製大腸菌XLOLR細菌をGT468pQEプラスミドまたは挿入物なしpQE標準と称するのいずれかで形質転換し、LB培地でA600nm~0.35Eに増殖させた。2mMIPTGでタンパク質発現を誘導し、細胞を37°Cでさらに4時間増殖させた。タンパク質発現の適切な誘導とその反応速度をクマシーゲル分析によって観測した。細菌を遠心沈殿させ、0.2mMプロテアーゼ阻害剤AEBSF塩酸塩AppliChemを含有する少量のPBS、pH7.2に再懸濁した。細胞を氷上に置き、超音波処理BransonSonicPowerASmithklineによって破砕した。GT468および標準溶解物を、0.2mMAEBSFおよび20v/vグリセロールを含有するPBS中2mg/mlの総タンパク質濃度に希釈した。アリコートを窒素中で衝撃凍結し、使用時まで-70°Cで保存した。固相酵素免疫検定法の実施使用前に、GT468ならびに標準溶解物を被覆緩衝液100mMHEPES、pH7に希釈し、次に平底F96Maxisorpマイクロウエルプレート50μl/ウエル、Nuncに移して、37°Cで2時間吸着させた。抗原の固定化後、0.1Tween20を含有する洗浄緩衝液50mMTris、150mM塩化ナトリウム、pH7.2でプレートを2回洗浄し、その後洗浄剤なしで2回洗浄した。1:100希釈したヒト血清50μlを各ウエルについて添加し、周囲温度にて軌道振とう機で1時間インキュベートした。一部の実験では、ヒト血清を、アッセイに供する前に前処理した。各々個々の血清試料を、GT468または標準溶解物で被覆したウエルで並行して二重に試験した。プレートを上述したように再び洗浄し、3w/v粉乳を含有する50mMHEPESpH7.4中で1:5000希釈した50μl/ウエルの二次抗体ヤギ抗ヒトIgG-AP、Dianovaと共に室温で1時間インキュベートした。プレートを100μl/ウエルの基質溶液[ALP緩衝液RocheDiagnostics,Mannheim,Germany1mlにつき4-ニトロフェニルリン酸二ナトリウム塩六水和物Merck2mg]で室温にて30分間展開し、直ちにマイクロプレートリーダーVictor2Wallac,Perkin-Elmer,Turku,Finlandで405nmでの吸光度値を読み取った。フローサイトメトリ分析GT468pcDNA3.1プラスミドまたは挿入物なしのプラスミドモックでトランスフェクトしたHEK293細胞を採取し、氷冷メタノールで固定して、PBS/10FCSで30分間ブロックした。細胞をハイブリドーマ上清と共に1時間インキュベートし、PBS/1FCSで10分間ずつ2回洗浄して、ヤギ抗マウスCy3二次抗体JacksonImmunoResearchLaboratoriesと共にインキュベートした。さらに、GT468プラスミドDNAまたは挿入物なしのプラスミドモックでトランスフェクトしたSK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-468、NUG-C4細胞またはHEK293細胞を採取し、PBS/5FCS/0.1アジ化ナトリウムでブロックした。細胞をハイブリドーマ上清と共にまたはPBS/5FCS/0.1アジ化ナトリウムで希釈した5μg/mlの精製抗体と共に1時間インキュベートし、PBS/5FCS/0.1アジ化ナトリウムで5分間ずつ3回洗浄して、ヤギ抗マウスAPC二次抗体JacksonImmunoResearchLaboratoriesと共にインキュベートした。BectonDickinsonからのFACSarrayを用いて細胞を分析した。クローン原性アッセイクローン原性アッセイまたはコロニー形成アッセイは、単一細胞がコロニーへと成長する能力を分析するインビトロでの細胞生存検定法である。コロニーを形成する能力へのGT468抗体の有効性を調べるためにこのアッセイを実施した。GT468を発現するSK-BR-3細胞を48穴プレートに接種した2000細胞/ウエル。ハイブリドーマ上清からのFPLC精製抗体の存在下で45μg/ml細胞を2週間増殖させ、すべてのアッセイを三重に実施した。コロニーを固定し、6グルタルアルデヒドv/vおよび0.5クリスタルバイオレットw/vで染色した。OlympusデジタルコンパクトカメラC-750UltraZoomを用いて、染色して乾燥したプレートから写真を撮影し、目視で分析した。ウエスタンブロット法GT468pcDNA3.1プラスミドまたは挿入物なしのプラスミドモックでトランスフェクトしたHEK293細胞の全細胞溶解物を、Triton-Xベースの溶解緩衝液50mMHEPESpH7.4、10v/vグリセロール、1v/vTritonX-100、150mMNaCl、1.5mMMgCl2、5mMEDTA、100mMNaFを用いて調製した。抽出物を還元試料緩衝液Rothに希釈し、SDS-PAGEに供して、その後PVDF膜Pallに電気転写した。GT468に反応性のポリクローナル抗体Koslowskietal.2007またはハイブリドーマ上清からのFPLC精製抗体5μg/mlで免疫染色を実施し、次いでホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ二次抗体JacksonImmunoResearchLaboratoriesで一次抗体を検出した。早期処置異種移植モデル5×106のGT468陽性BEWO胎盤性絨毛癌細胞をヌードマウスに皮下注射した。腫瘍細胞の接種の3日後に動物を精製モノクローナル抗体で処置した200μg静脈内、8動物/群。抗体を週に2回、2週間投与した。カリパスを用いて腫瘍の成長を観測した。実験的転移アッセイエストロゲン依存性MCF-7細胞の注射の1週間前に、17β-エストラジオール持続放出型ペレット1mg、60日間放出;InnovativeResearchofAmericaの皮下移植によって無胸腺ヌードマウスを作製した。1×106MCF-7の静脈内注射後、動物を精製モノクローナル抗体200μgで週に2回処置した。細胞の注射の5週間後に無胸腺マウス5~8動物/群の肺における腫瘍量の定量のためにリアルタイムPCRを使用した。QIAampDNAMiniKitQiagenを使用して肺組織からのDNAを抽出し、ヒト第17番染色体のαサテライト領域の226bpフラグメントセンス5-CAGCTGACTAAACAGAAGCAG-3;アンチセンス5-GAGTTGAATGCAGTCATCACAG-3をDNA200ngから増幅した。腫瘍量DNAコピー数を、健常対照マウスからの正常肺に対して定量化した。実施例2:GT468は様々な腫瘍において異常に活性化され、高発現される胎盤特異的栄養膜遺伝子を同定するため、もともと発明者が生殖細胞特異的分子のインシリコ同定のために開発したものであるKoslowski,M.,Bell,C.,Seitz,G.,Lehr,H.A.,Roemer,K.,Muntefering,H.,Huber,C.,Sahin,U.Tureci,O.2004CancerRes.64,5988-5993;Koslowski,M.,Tureci,O.,Bell,C.,Krause,P.,Lehr,H.A.,Brunner,J.,Seitz,G.,Nestle,F.O.,Huber,C.Sahin,U.2002CancerRes.62,6750-6755;Koslowski,M.,Sahin,U.,Huber,C.Tureci,O.2006Hum.Mol.Genet.15,2392-2399、ゲノム全体のデータマイニング法を適合させた。原則として、真正に胎盤特異的な遺伝子の予測のためにGenBankの階層的キーワード検索をデジタルcDNAライブラリサブトラクションと組み合わせた。GT468はこのアプローチによって同定された。GT468mRNAを、正常組織および腫瘍組織標本の包括的なセットにおいてエンドポイントRT-PCRおよび定量的リアルタイムRT-PCRによって検討した。GT468発現が胎盤に限定されることが確認された。すべての他の正常組織標本では、転写産物の量は、高感度RT-PCRのちょうど検出限界であるかまたは検出限界未満である図1A、B、C、表1。唯一の例外は精巣であるが、転写産物レベルは胎盤で認められるレベルより3~4対数低い。表1:エンドポイントRT-PCRによって分類した組織および細胞株におけるGT468の発現しかしながら、種々の癌型にわたる原発性腫瘍標本の3886/225および腫瘍細胞株の5522/40において、さもなければ転写が厳密に制御されるこの遺伝子の異常な活性化が認められた。GT468の保有率および転写産物レベルは乳癌および乳癌細胞株において最も高かった図1A、B、C。62の原発性乳癌試料のうち4482はGT468発現に関して陽性非栄養膜正常組織におけるバックグラウンドを少なくとも100倍上回ると定義されると評価され、2415/62は低発現100~1000倍、4025/62は中発現1000~10,000倍、そして1711/62は高発現>10,000倍を示した図1B。さらに、50の肺癌試料のうち2142ならびに胃癌および卵巣癌においてGT468転写を認めた表1。GT468の誘導は、組織学的サブタイプ、腫瘍の病期または腫瘍悪性度と相関しなかった。リアルタイムRT-PCRを使用して、微量のGT468転写産物だけが40サイクルのRT-PCR後に正常組織において検出できた。発現カットオフ値点線、すべての正常組織の平均発現3STD99パーセンタイル値を超える正常組織は胎盤と精巣だけであった図20A。乳癌に加えて、肺癌、卵巣癌、胃癌、前立腺癌、膵癌、腎細胞癌、肝癌、肉腫、甲状腺癌および頭頸部癌からの試料においてGT468の高発現を認めた図20B。GT468発現プラスミド陽性対照、SK-BR-3乳癌、BEWO胎盤性絨毛癌、JAR胎盤性絨毛癌、HCT-15結腸癌、LnCaP前立腺癌、HeLa子宮頸癌、MDA-MB-468乳癌、JEG-3胎盤性絨毛癌、JIMT-1乳癌、LA1-55n神経芽細胞腫、PC-3前立腺癌、BT-20乳癌およびNCI-H929骨髄腫でトランスフェクトしたHEK293細胞におけるGT468発現のウエスタンブロット分析は、これらの癌細胞株におけるGT468の発現を明らかにした図21。MelHO悪性黒色腫およびNUGC4胃癌は試験陰性であった。実施例3:GT468は癌細胞の表面上に位置し、抗体にとってアクセス可能であるGT468特異的ペプチドエピトープ配列番号:2のアミノ酸117~127に対するポリクローナルウサギ抗体ウサギ抗GT468/C末端を惹起した。低分子干渉RNAsiRNAを使用したGT468の遺伝子サイレンシングによって抗体の特異性を確認した。siRNAを排除するため、2組のGT468特異的siRNA二本鎖、スクランブル非サイレンシングオリゴヌクレオチドおよび非トランスフェクト細胞に関して標的活性実験を実施した。乳癌細胞株MCF-7およびBT-549をこれらのsiRNA二本鎖でトランスフェクトすることにより、対照と比較して構成的GT468mRNA発現の80~90の安定で再現可能な低下が達成された図1D。この所見と一致して、ウエスタンブロット法でのGT468の予測サイズに従って検出された26kDaのバンドは、両細胞株においてほぼ完全に消失し図1E、GT468タンパク質発現の堅固なノックダウンと抗体の特異性の両方を証明した。ウサギ抗GT468/C末端での一次ヒト組織試料におけるGT468タンパク質のウエスタンブロット染色は、この遺伝子が、それが発現される唯一の正常組織としての胎盤と同等のレベルで乳癌標本において検出可能であることを確認した図1F。ヒト乳癌組織切片でのウサギ抗GT468/C末端による免疫組織化学は、RT-PCRによってGT468mRNA発現に関して陽性と分類された標本における特異的免疫反応性を示した。染色は腫瘍細胞集団に限定され、隣接間質細胞および非腫瘍性上皮細胞ならびに患者のマッチする正常組織は反応性ではなかった図1G。腫瘍細胞の免疫染色は形質膜において顕著であり、GT468が細胞表面タンパク質であることの証拠を提供した。GT468タンパク質配列のトポロジーのインシリコ解析は、アミノ酸5~22にわたる疎水性ドメイン、続いてアミノ酸23~212によって構成される大きな細胞外ドメインを予測した。GT468の細胞外部分のアミノ酸29~119は、トランケートされた透明帯ZPドメインである。ZPドメインは、TGF-β受容体III型、ウロモジュリン、糖タンパク質GP2ならびに精子受容体ZP2およびZP3を含む、様々な細胞外に露出された受容体様タンパク質において認められBork,P.Sander,C.1992FEBSLett.300,237-240、重合に関与するJovine,L.,Janssen,W.G.,Litscher,E.S.Wassarman,P.M.2006BMC.Biochem.7,11。構成的に発現されるGT468の細胞内局在を、おそらくこのタンパク質の細胞外部分にそのエピトープアミノ酸117~127を有する、ウサギ抗GT468/C末端で染色したMCF-7およびBT-549乳癌細胞の免疫蛍光顕微鏡検査によって評価した。両細胞株は細胞膜において明確な染色を示した図2A。siRNAが誘導するGT468発現のノックダウン後のシグナルの喪失は染色の特異性を確認した。最も重要な点として、特異的膜染色はメタノール固定細胞だけでなく非固定天然細胞でも認められ図2B、抗体のエピトープが細胞膜の透過処理なしでもアクセス可能であることを示唆し、したがってカルボキシ末端の細胞外局在という予測されたトポロジーを裏付けた。実施例4:siRNAが誘導するGT468の遺伝子サイレンシングは癌細胞の運動性、移動および浸潤を阻害し、増殖をブロックする腫瘍細胞におけるGT468の生物学的重要性を調べるため、基本的細胞機能へのそのsiRNA誘導性遺伝子サイレンシングの影響を検討した。最初に、トランスウエル移動アッセイにおける乳癌細胞株MCF-7およびBT-549の性能を検討した。5FCSを化学誘引物質としてシステムの上部および下部の両チャンバーに添加することによって評価した両細胞株の基線運動性化学運動性は、GT468特異的siRNA二本鎖によって実質的に阻害された図3A。その結果として、細胞の指向性走化性遊走能の著明な低下も認められた図3B。さらに、細胞はMatrigelの障壁を突破して化学誘引物質勾配に沿って移動することができなかったので、細胞の化学浸潤活性はGT468siRNA処理によって大きく影響された図3C。次に、DNAへのBrdUの取込みによって測定した腫瘍細胞増殖は、GT468特異的siRNA二本鎖により両細胞株において80~90低下することが認められた図4A。細胞周期分析は、増殖ブロックのための基礎となる原因として、GT468siRNAでトランスフェクトした細胞における明確なG1/S停止を明らかにした図4B。細胞の生命力は影響を受けず、アネキシンVでの染色はアポトーシス細胞死についての徴候を示さなかった図4C。実施例5:抗GT468抗体での癌細胞の処理は細胞増殖を阻害するウサギ抗GT468/C末端および非反応性対照抗体と共にインキュベートしたMCF-7およびBT-549細胞の増殖を測定した。GT468のターゲティングは、濃度依存的に両細胞株の増殖の効率的な阻害を生じさせた図5。実施例6:siRNA誘導性サイレンシングの下流作用および抗体が誘導するGT468の機能的拮抗作用真核細胞の増殖と細胞周期進行はサイクリンおよびサイクリン依存性キナーゼCDKによって支配される。個々のサイクリンは、一連のCDKの活性を刺激することによって細胞周期の異なる時期に作用する。制限点制御はサイクリンDおよびサイクリンE依存性キナーゼファミリーによって媒介されるMorgan,D.O.1997Annu.Rev.CellDev.Biol.13,261-291;Sherr,C.J.2000CancerRes.60,3689-3695。GT468サイレンシングが、サイクリン発現の変化を介して認められた細胞周期調節不全を誘導するかどうかを検討するため、GT468siRNAで処理したMCF-7およびBT-549乳癌細胞におけるサイクリンD1、D2、D3およびサイクリンEの発現を測定した。興味深いことに、リアルタイムPCRによって測定したサイクリンD1転写産物の有意の減少図6Aならびにウエスタンブロット法でのサイクリンD1タンパク質レベルの有意の低下図6Bが、GT468ノックダウンの結果として起こった。分析した他のサイクリンに関しては転写レベルの変化を認めなかった。サイクリンD1は、細胞周期のG1期からS期への進行の主要調節因子であることが知られている。興味深いことに、散発性乳癌の腫瘍形成において、サイクリンD1の過剰発現が初期事象とみなされているCaldon,C.E.,Daly,R.J.,Sutherland,R.L.Musgrove,E.A.2006J.CellBiochem.97,261-274;Sutherland,R.L.Musgrove,E.A.2004J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia.9,95-104。D型サイクリンは不安定であり、それらの誘導、合成および触媒パートナーとの集合はすべて、持続的なマイトジェンシグナル伝達に依存する。したがって、D型サイクリンは増殖因子センサーとして働き、細胞外因子に応答して活性なキナーゼを形成するSutherland,R.L.Musgrove,E.A.2004J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia.9,95-104;Sherr,C.J.1993Cell73,1059-1065。乳癌において、サイクリンD1発現がホスファチジルイノシトール3-キナーゼPI3K/AKT依存性経路によって制御されることが示されているSutherland,R.L.Musgrove,E.A.2004J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia.9,95-104;DAmico,M.,Hulit,J.,Amanatullah,D.F.,Zafonte,B.T.,Albanese,C.,Bouzahzah,B.,Fu,M.,Augenlicht,L.H.,Donehower,L.A.,Takemaru,K.etal.2000J.Biol.Chem.275,32649-32657;Muise-Helmericks,R.C.,Grimes,H.L.,Bellacosa,A.,Malstrom,S.E.,Tsichlis,P.N.Rosen,N.1998J.Biol.Chem.273,29864-29872。AKTは、グリコーゲンシンターゼキナーゼ3βGSK-3βを不活性化し、それによってサイクリンD1の転写ならびにそのタンパク質分解による代謝回転および核内のそのタンパク質レベルを上昇させるSutherland,R.L.Musgrove,E.A.2004J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia.9,95-104,Diehl,J.A.,Cheng,M.,Roussel,M.F.Sherr,C.J.1998GenesDev.12,3499-3511;Radu,A.,Neubauer,V.,Akagi,T.,Hanafusa,H.Georgescu,M.M.2003Mol.CellBiol.23,6139-6149。加えて、AKT経路は、GT468が明らかに関与する他の2つの細胞機能、癌細胞の運動性と移動の重要な調節因子であるSutherland,R.L.Musgrove,E.A.2004J.Mammary.Gland.Biol.Neoplasia.9,95-104,Cantley,L.C.2002Science296,1655-1657;Luo,J.,Manning,B.D.Cantley,L.C.2003CancerCell4,257-262。このことが我々に、GT468がMCF-7およびBT-549細胞におけるAKTキナーゼの調節に影響を及ぼすかどうかを分析することを促した。PI3Kの過剰活性化に続くAKTの構成的リン酸化および過剰活性化が腫瘍細胞において頻繁に認められる。siRNA技術によるGT468のサイレンシング後のAKTのSer473リン酸化pAKTのレベルの定量および抗GT468/C末端抗体によるその機能的拮抗作用はどちらも、特にMCF-7細胞においてpAKTレベルの著明な低下を生じさせ図6C、D、AKTキナーゼの活性化がGT468の下流作用の遂行に関与することを示唆した。興味深いことに、PTENを欠き、それゆえより高いレベルのPI3K過剰活性化を有するBT-549細胞において、pAKTの下方調節はより顕著ではなかった。実施例7:GT468特異的モノクローナル抗体Balb/cまたはC57/BL6マウスをKLH結合ペプチドで免疫した。ペプチド50μgおよびアジュバントとしてMontanideISA50V50μlを1、15、45および86日目に腹腔内i.p.注射した。マウスの血清中のGT468に対する抗体の存在を24、57および92日目にペプチド特異的ELISAによって観測した。検出可能な免疫応答を有するマウスを、モノクローナル抗体の作製のために脾摘出術の3日前に追加免疫した。配列番号:3~10に従う配列を有するペプチドを、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの作製のために使用した。例えば、配列番号:3のペプチドを使用した免疫はハイブリドーマ4E9-1H9および9B6-2A9を生成し、配列番号:4のペプチドを使用した免疫はハイブリドーマ59D6-2F2を生成し、そして配列番号:6のペプチドを使用した免疫はハイブリドーマ61C11-2B5および78H11-1H6を生成した。後者の抗体はIgG1アイソタイプであった。モノクローナル抗体の特異的結合を確実にするためにペプチド特異的ELISAを実施した。ハイブリドーマ上清を、マウスの免疫のために使用したそれぞれのペプチドに対して1:5または1:10希釈で試験した。対照として、すべてのハイブリドーマ上清を2つの無関係なペプチドに対して試験した。すべてのモノクローナル抗体は、マウスの免疫のために使用したそれぞれのペプチドとのみ特異的に反応した図7。完全長GT468タンパク質へのモノクローナル抗体の特異的結合を免疫蛍光IF顕微鏡検査によって分析した。GT468-eGFP融合構築物のトランスフェクションの24時間後にCHO細胞をハイブリドーマ上清1:5希釈で染色した。eGFPシグナルと二次抗マウス抗体Alexa55のシグナルを併合すると、GT468-eGFPトランスフェクト細胞の染色だけを示し、非トランスフェクト細胞は陰性であった図8。GT468へのモノクローナル抗体の結合が癌細胞の増殖に及ぼす影響を分析するため、内因性にGT468を発現する癌細胞株BT-549、Caov-3、EFO-21、MCF-7およびMDA-MB-231をハイブリドーマ上清1:2希釈と共に72時間インキュベートした。細胞の増殖をDNAへのBrdUの取込みによって測定した。モノクローナル抗体4E91H9は、使用した濃度で細胞の増殖を変化させなかったが、抗体9B62A9および59D62F2は、分析したすべての癌細胞株の増殖を明らかに低減した図9。したがって、細胞によって発現されるGT468を選択的に標的するモノクローナル抗体を作製できることが示された。さらに、GT468を発現する癌細胞の増殖を阻害する、GT468に対するモノクローナル抗体を作製できることが示された。実施例8:GT468pcDNA3.1プラスミドでの免疫とそれに続くペプチド/タンパク質注射から得られるGT468特異的モノクローナル抗体Balb/cまたはC57/BL6マウスを、1日目と15日目にGT468pcDNA3.1プラスミドおよびアジュバントとしてPEIマンノースにより筋肉内i.m.経路で免疫した。その後、ペプチド50μgおよびアジュバントとしてMontanideISA50V50μl腹腔内、またはタンパク質150μgおよび不完全フロイントアジュバントIFA皮下を30日目と45日目に注射した。マウスの血清中のGT468に対する抗体の存在をペプチド特異的ELISAまたはCrELISAによって観測した。検出可能な免疫応答を有するマウスを、モノクローナル抗体の作製のために脾摘出術の3日前に追加免疫した。GT468DNAを使用した2回の筋肉内免疫およびそれに続く組換えGT468タンパク質の2回の皮下投与は、ハイブリドーマ22-1A-1、22-2A-1、22-9B-1、23-33A-1および23-19A-1を生じさせた。GT468DNAを使用した2回の筋肉内免疫およびそれに続く配列番号:10に従うペプチドの2回の腹腔内投与は、ハイブリドーマF1133F7D12を生じさせた。GT468DNAを使用した2回の筋肉内免疫およびそれに続く配列番号:3に従うペプチドの2回の腹腔内投与は、ハイブリドーマ4A122D41A10および4E91D122D4を生じさせた。以下の表は、得られた抗体およびそれらのアイソタイプを列記する。表2:GT468DNAでの免疫およびそれに続くペプチド/他の注射によって得られたモノクローナル抗体ハイブリドーマ22-1A-1、22-2A-1、22-9B-1、23-33A-1および23-19A-1からのモノクローナル抗体の特異的結合を確実にするため、粗溶解物ELISACrELISAを実施した。ハイブリドーマ上清を、GT468pQE発現ベクターで形質転換した大腸菌の溶解物に対して試験した。対照として、ハイブリドーマ上清を、挿入物なしのモックpQEプラスミドで形質転換した大腸菌の溶解物に関して試験した。すべてのモノクローナル抗体は、特異的GT468溶解物とのみ特異的に反応した図10A。ハイブリドーマF1133F7D12、4A122D41A10および4E91D122D4からのモノクローナル抗体の特異的結合を確実にするため、ペプチド特異的ELISAを実施した。ハイブリドーマ上清を、マウスの免疫のために使用したそれぞれのペプチドに対して試験した。対照として、ハイブリドーマ上清を無関係なペプチドに対して試験した。モノクローナル抗体は、マウスの免疫のために使用したそれぞれのペプチドとのみ特異的に反応した図10B。完全長GT468タンパク質へのモノクローナル抗体の特異的結合を、上述したフローサイトメトリ分析によって分析した。モノクローナル抗体4E91D122D4のフローサイトメトリ分析のために、約40のトランスフェクション率で一過性にトランスフェクトしたHEK細胞を使用した。すべてのハイブリドーマ上清はGT468トランスフェクト細胞の特異的染色を示し、モックトランスフェクト細胞では染色を認めなかった図11。完全長GT468タンパク質へのモノクローナル抗体の特異的結合をウエスタンブロット法によって分析した。すべてのハイブリドーマ上清は、GT468pcDNA3.1発現プラスミドでトランスフェクトしたHEK293細胞の溶解物と特異的反応性を示したが、モックトランスフェクト細胞の溶解物はシグナルを示さなかった図12;モック溶解物中のハイブリドーマ上清23-33A-1のかすかなシグナルは、HEKGT468溶解物のスピルオーバーから生じると考えられる。モノクローナル抗体が結合するGT468タンパク質中のエピトープを同定するため、ペプチドELISAを実施した。完全なGT468タンパク質配列を、11アミノ酸の重複を有する51のオーバーラップペプチド15量体のセットとして合成した。すべてのハイブリドーマ上清をこれらのペプチドへの特異的結合に関してELISAで試験した。対照として、無関係なペプチドを使用した。すべての上清はGT468ペプチドへの特異的結合を示した。ハイブリドーマ上清22-1A-1、23-33A-1および23-19A-1は各々、2つのオーバーラップペプチドへの結合を示し、GT468の線状エピトープへの反応性を示唆した。22-2A-1および22-9B-1の結合パターンはより複雑であり、GT468タンパク質の立体配座エピトープに対する反応性を示唆した。GT468へのモノクローナル抗体の結合が癌細胞の増殖に及ぼす影響を分析するため、内因性にGT468を発現する癌細胞株SK-BR-34A122D41A10またはMCF-74E91D122D4を、図14に示されている濃度で精製ハイブリドーマ上清と共に72時間または120時間インキュベートした。DNAへのBrdUの取込みによって細胞の増殖を測定した。無関係な対照モノクローナル抗体は細胞の増殖を変化させなかったが、モノクローナル抗体4A122D41A10および4E91D122D4は、明らかに濃度依存的に細胞の増殖を低下させた図14。実施例9:種々の免疫方法を用いて得られたGT468特異的モノクローナル抗体Balb/cまたはC57/BL6マウスを表3に示すように免疫した。ペプチド:ペプチド50μgおよびアジュバントとしてMontanideISA50V50μlを腹腔内i.p.注射した。DNA:GT468プラスミドDNA25μgおよびアジュバントとしてPEIマンノースを筋肉内i.m.注射した。組換えタンパク質:GT468タンパク質150μgおよび不完全フロイントアジュバントIFAを皮下s.c.注射した。細胞:GT468プラスミドDNAでトランスフェクトした1~2×107HEK293細胞を腹腔内i.p.注射した。一般に、免疫原を2週間ごとに投与した。検出可能な免疫応答を有するマウスを、モノクローナル抗体の作製のために脾摘出術の3日前に追加免疫した。表3:免疫プロトコール以下の表は、得られた抗体およびそれらのアイソタイプを列記する。表4:種々の免疫方法を用いて得られたモノクローナル抗体実施例10:GT468特異的モノクローナル抗体の試験モノクローナル抗体が結合しているGT468タンパク質のエピトープを同定するため、図13および25に示す11アミノ酸の重複を有する51のオーバーラップペプチド15量体のセットを使用したペプチド特異的ELISAを実施した。精製ハイブリドーマ上清を、各々、すべてのペプチドへの特異的結合に関してELISAで試験した。対照として無関係なペプチドを使用した。配列番号:3のペプチドを免疫のために使用して、ハイブリドーマ4A51E111B7、7H122E62C4、11D71G102B4および3E52G4を作製した。表5に示すように、15の上清はGT468ペプチドへの特異的結合を示した。15の上清のうちで、13の上清は1個のペプチドまたは2もしくは3個の隣接ペプチドに結合し、GT468の線状エピトープの認識を示唆し、2つの上清は、少なくとも部分的に、非隣接ペプチドに結合し、エピトープの線状/立体配座の定義付けを示唆した。9の上清は、ペプチド特異的ELISAにおいてGT468ペプチドへの特異的結合を示さなかったが、FACSまたはIFでは結合を示し、GT468の非線状立体配座エピトープに対する反応性を示唆した。表5:ペプチド特異的ELISAにおけるモノクローナル抗体の試験GT468タンパク質への、ハイブリドーマからのモノクローナル抗体の特異的結合をフローサイトメトリ分析によって分析した。pDisplay-GT468アミノ酸116~212で安定にトランスフェクトした天然の非固定HEK293細胞またはモックトランスフェクト細胞を、FPLCで精製したハイブリドーマ上清5μg/mlで染色した。プラスミドpDisplay-GT468アミノ酸116~212において、GT468のアミノ酸116~212をC末端でPDGF受容体膜貫通ドメインに融合する。この構築物は、細胞の形質膜上でのGT468アミノ酸116~212の安定な発現を確実にする。細胞を、その天然立体配座のGT468への結合を検出する非固定状態の上清で染色した。ハイブリドーマ上清はGT468トランスフェクト細胞の特異的染色を示したが、モックトランスフェクト細胞では染色を認めなかった図15。内因性にGT468を発現する非固定腫瘍細胞への、ハイブリドーマからのモノクローナル抗体の特異的結合をフローサイトメトリ分析によって分析した。MCF-7、MDA-MB-468およびSK-BR-3乳癌細胞を、内因性にGT468を発現する腫瘍細胞として使用し、GT468を発現しないNUG-C4胃癌細胞を陰性対照として使用した。天然の非固定細胞をFPLC精製ハイブリドーマ上清5μg/mlで染色した。ハイブリドーマ上清は、GT468を発現する癌細胞の特異的染色を様々な程度に示した。上清の一部については細胞集団が有意に染色されるが42H111C112B2、22-1A-1、35-50A-2a、54-4B-2、別の上清では亜集団細胞の約5だけが陽性である図16。これは、強発現亜集団への結合を指示する。これらの結果は、抗体がGT468を発現する腫瘍細胞に結合できることを明らかにする。完全長GT468タンパク質への、ハイブリドーマ上清中のモノクローナル抗体の特異的結合をウエスタンブロット法によって分析した。FPLC精製ハイブリドーマ上清5μg/mlは、GT468発現プラスミドでトランスフェクトしたHEK293細胞の溶解物と特異的反応性を示したが、モックトランスフェクト細胞の溶解物はシグナルを示さず、GT468への結合が特異的であることを明らかにした図17、23。ハイブリドーマ上清からのモノクローナル抗体の増殖阻害活性を増殖アッセイにおいて分析した図18、22。内因性にGT468を発現する乳癌細胞SK-BR-3、MDA-MB-468、MCF-7およびGT468陰性MelHo黒色腫細胞またはNUGC4胃癌細胞を96穴プレートに接種し5000細胞/ウエル、指示されている濃度のFPLC精製ハイブリドーマ上清と共にインキュベートした。72時間後にDNAへのBrdUの取込みによって細胞の増殖を測定した。すべての値を、ハイブリドーマ上清と共にインキュベートしていない対照細胞に正規化する。MelHoまたはNUGC4対照細胞では増殖阻害を認めなかった。ハイブリドーマ上清は、濃度依存的に様々な程度でGT468発現乳癌細胞への特異的増殖阻害活性を示した。抗体の一部35-48B-1、48-3B-1、51-1A-1、56-4A-2は、試験したGT468陽性細胞株のすべてに有意の作用を示した。癌細胞の増殖へのGT468抗体結合の影響を分析するため、内因性にGT468を発現するMCF-7癌細胞を精製モノクローナル抗体と共に72時間インキュベートした。対照抗体は細胞の増殖を変化させなかったが、抗体4A51E111B7、7H122E62C4、11D71G102B4、18-2A-1、63-1A-2および3E52G4は癌細胞の増殖を低減した図27。内因性にGT468を発現するSK-BR-3細胞のコロニー形成への、ハイブリドーマからのモノクローナル抗体の阻害活性を分析するため、クローン原性アッセイを実施した。細胞を48穴プレートに接種し3000細胞/ウエル、FPLC精製ハイブリドーマ上清45μg/mlと共にインキュベートした。14日間にわたって増殖させたコロニーをグルタルアルデヒドで固定し、目視評価のためにクリスタルバイオレットで染色した。細胞を抗体と共にインキュベートすることにより、コロニー形成が低減または阻害された図19。コロニー形成は、個々の腫瘍細胞が器官に定着した場合の転移の形成に関して重要である。抗体の阻害活性は、転移の形成を抑制する上でのそれらの潜在能を示す。実施例11:抗GT468モノクローナル抗体での処置はヌードマウスにおいて異種移植腫瘍の増殖を減弱させるGT468陽性BEWO胎盤性絨毛癌細胞をヌードマウスに皮下注射し、動物を精製抗GT468モノクローナル抗体で処置した。図24は、抗GT468モノクローナル抗体での処置がヌードマウスにおいてBEWO胎盤性絨毛癌異種移植腫瘍の増殖を減弱させることを明らかにする。実施例12:抗GT468モノクローナル抗体での処置はヌードマウスの肺における転移腫瘍量を減少させるMCF-7細胞を、17β-エストラジオール持続放出型ペレットの皮下移植によって前処置した無胸腺ヌードマウスに静脈内注射し、動物を精製抗GT468モノクローナル抗体で処置した。細胞の注射の5週間後に無胸腺マウスの肺における腫瘍量の定量のために用いたリアルタイムPCRは、抗GT468モノクローナル抗体で処置したマウスの肺における転移腫瘍量の有意の減少を明らかにした図26A、B。"