以下のいくつかの段階で構成される、溶液中に存在する血液型または表現型の抗抗原抗体antiantigenantibodyを、赤血球によって保有される血液型または表現型の抗原と反応させることによって形成される特異的複合体の実証のための方法であって、該赤血球が磁性粒子と結合しており、反応が、開いた上部および密封された基部を有する反応器内で起こり、反応器の直径が、少なくとも基部に近接した領域では傾斜壁を形成するように小さくなっており、傾斜壁が、抗免疫グロブリンで、または該形成された複合体の抗体と結合しうる他の任意の化合物で、少なくとも部分的にコーティングされている、方法:a赤血球を担持する磁性粒子懸濁液を、血液型または表現型由来の抗抗原抗体を含む可能性がある溶液と接触させる前に:‐反応器を、反応器の傾斜壁の少なくとも一部を覆うように粘性溶液で満たす段階;b反応器に含まれる粘性溶液の上で、該抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液を、赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液と接触させる段階;c赤血球を担持する磁性粒子と、溶液中に含まれる可能性がある血液型または表現型の抗抗原抗体との複合体の形成のために、および、赤血球が含む血液型または表現型の該抗原を特異的に認識するために必要な所定の時間にわたって反応器をインキュベーションする段階;d磁性粒子が反応器の底面および/または傾斜壁の方へ引き寄せられるように、該反応器に対して磁場を印加し、かつ反応器を撹拌する段階;ならびにe該抗免疫グロブリンでまたは抗体と結合しうる他の任意の化合物でコーティングされた反応器の底面および/または反応器の傾斜壁で得られた画像を、肉眼でおよび/または他の任意の適した読み取りシステムで読み取る段階であって、この得られた画像によって、ヒト血液型または表現型の特異的な抗体/抗原複合体の形成の有無を実証することが可能になり、該赤血球を担持する磁性粒子が、抗グリコホリンA抗GPA抗体で予めコーティングされた磁性粒子であること、および該赤血球が抗体/抗原型の相互作用によって該磁性粒子と結合していることを特徴とする、段階。赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を、血液型または表現型の抗抗原抗体を含む可能性がある溶液と接触させる前に、赤血球を担持する磁性粒子の該懸濁液が、1を上回りかつ前記粘性溶液の密度を下回る密度を有する希釈液中で懸濁状態であることを特徴とする、請求項1記載の方法。段階aおよびbが以下であることを特徴とする、請求項2記載の方法:a赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を、ヒト血液型または表現型の抗抗原抗体を含む可能性がある溶液と接触させる前に:i反応器の外で、赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を調製する段階、ii反応器を、反応器の傾斜壁の少なくとも一部を覆うように粘性溶液で満たし、続いて該希釈液で満たす段階;b段階aiで調製された赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を、該抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液と、希釈液の上で接触させる段階。段階aおよびbが以下であることを特徴とする、請求項2記載の方法:a赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を、ヒト血液型または表現型の抗抗原抗体を含む可能性がある溶液と接触させる前に:‐反応器を、反応器の傾斜壁の少なくとも一部を覆うように粘性溶液で満たし、続いて該希釈液で、続いて、抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液で、続いて赤血球懸濁液で満たす段階;b反応器内で、該抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液を、形成されたかまたは形成中の赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液と接触させる段階。段階aおよびbが以下であることを特徴とする、請求項2記載の方法:a赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を、ヒト血液型または表現型の抗抗原抗体を含む可能性がある溶液と接触させる前に:i前記反応器の外で、抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液を調製する段階であって、該磁性粒子が該希釈液中で懸濁状態である、段階、または、既に調製されたそのような懸濁液を入手する段階、ii反応器を、反応器の傾斜壁の少なくとも一部を覆うように粘性溶液で満たし、続いて、段階aiで調製された該希釈液中の抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液で、続いて赤血球懸濁液で満たす段階;b反応器内で、該抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液を、形成されたかまたは形成中の赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液と接触させる段階。以下を特徴とする、請求項5記載の方法:‐段階aiの最後に、希釈液中で懸濁状態である赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を形成させるために、反応器の外で、該磁性粒子を該希釈液中に懸濁状態で含む前記懸濁液を赤血球懸濁液と接触させること;および‐段階aiiで、反応器を、反応器の傾斜壁の少なくとも一部を覆うように粘性溶液で満たし、続いて、該希釈液中で懸濁状態である赤血球を担持する磁性粒子の該懸濁液で満たすこと;b反応器内で、該抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液を、赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液と接触させること。ラボラトリーオートメーションによる分配の自動化の一部としての好ましい自動化された態様において、段階aおよびbが以下であることを特徴とする、請求項5記載の方法:a赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を、ヒト血液型または表現型の抗抗原抗体を含む可能性がある溶液と接触させる前に:i前記反応器の外で、抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液を調製する段階であって、該磁性粒子が前記希釈液中で懸濁状態である段階、または、既に調製されたそのような懸濁液を入手する段階、ii反応器を、赤血球の懸濁液で満たし、続いて、段階aiで調製された該希釈液中の抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液で満たし、続いて、撹拌後に必要な場合、反応器の傾斜壁の少なくとも一部を覆うように、前記粘性物質で満たす段階であって、該粘性物質が反応器の底面に注入される、段階;b反応器内で、該抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液を、形成されたかまたは形成中の赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液と接触させる段階。段階dで、前記反応器に対する磁場の印加および反応器の撹拌を同時に実施することを特徴とする、請求項1~7のいずれか一項記載の方法。段階dで、磁場の印加および撹拌を25分間~10分間の期間、好ましくは5分間~6分間の期間にわたって同時に実施することを特徴とする、請求項1~8のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、磁場の印加が、反応器の外側下方に配置された磁石によって、磁性粒子が反応器の底面の方へ引き寄せられるように実施されることを特徴とする、請求項1~9のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、前記磁石が、10000ガウス~14000ガウスの範囲の規模の永久磁石であることを特徴とする、請求項10記載の方法。段階dにおいて、撹拌が回転撹拌機によって実施されることを特徴とする、請求項1~11のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、撹拌が250rpm~750rpmの範囲の速度で、好ましくは600rpmで実施されることを特徴とする、請求項12記載の方法。段階cにおいて、20°C~40°Cの温度、好ましくは37°C±1°Cの温度で、インキュベーションの持続時間が、10分間~30分間の範囲であることを特徴とする、請求項1~13のいずれか一項記載の方法。磁性粒子が100nm~30μm、好ましくは200nm~15μmの直径を有することを特徴とする、請求項1~14のいずれか一項記載の方法。前記磁性粒子が、強磁性化合物を重量比で少なくとも40含むことを特徴とする、請求項1~15のいずれか一項記載の方法。前記粘性物質が1を上回る密度を有することを特徴とする、請求項1~16のいずれか一項記載の方法。前記粘性物質がゲルから選択される、好ましくは、30±10のPVPポリビニルピロリドン、PVP40もしくはPVP60の中から、またはさらにアルブミン溶液中またはさらにはゼラチン中の、20nm~300nmのさまざまなビーズ直径を有しうるデキストランSephadex商標またはSepharose商標、好ましくはsuperfineG100商標またはSepharose商標4Bもしくは6Bに由来するゲルから選択されることを特徴とする、請求項1~17のいずれか一項記載の方法。段階bにおいて、赤血球懸濁液が粘性溶液の後および前記希釈液の後に積み重ねられる場合、前記抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液を、該赤血球懸濁液より前に積み重ねることができることを特徴とする、請求項1~18のいずれか一項記載の方法。前記希釈液が、前記粘性溶液の密度を上回りかつ前記抗体を含むかまたは含む可能性がある溶液の密度を上回る密度を有することを特徴とする、請求項1~19のいずれか一項記載の方法。反応器が丸底またはV字底のマイクロプレート穴であることを特徴とする、請求項1~20のいずれか一項記載の方法。抗体溶液が、血液型または表現型の抗原に対して特異的に指向する抗体の存在を実証しようとするヒト血漿試料またはヒト血清試料であり、かつ抗免疫グロブリンがヒト抗免疫グロブリンHAGであることを特徴とする、請求項1~21のいずれか一項記載の方法。磁性ビーズによって保有される赤血球がO型の赤血球である段階を含むことを特徴とする、ヒト血漿または血清における不規則抗体検査IATのための、請求項1~22のいずれか一項記載の方法。以下の段階を含む、血液型判定および/または表現型判定のための方法:a抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液を調製する段階であって、該磁性粒子が希釈液中で懸濁状態である、段階、または、既に調製されたそのような懸濁液を入手する段階、bi抗GPAでコーティングされた該磁性粒子の懸濁液を、血液型および/または表現型を判定することが望まれる赤血球の懸濁液と接触させる段階、ii反応器内で、段階bにおいて形成されたかまたは形成中の赤血球を担持する磁性粒子の懸濁液を、既知の特異性を有する抗体を含む血清検査薬と接触させる段階、iiiかき混ぜまたは撹拌する段階、c赤血球を担持する磁性粒子と血清検査薬との複合体の形成のために必要な所定の期間にわたって反応器をインキュベーションする段階;d磁性粒子が反応器の底面および/または傾斜壁の方へ引き寄せられるように、該反応器に対する磁場を印加する段階および反応器を撹拌する段階;ならびにe反応器の底面および/または反応器の傾斜壁で得られた画像を、肉眼でおよび/または他の任意の適切な読み取りシステムで読み取る段階であって、この得られた画像によって、ヒト血液型または表現型の特異的な抗体/抗原複合体の形成の有無を実証することが可能になる、段階。‐段階dにおいて、磁性粒子が反応器の底面の方へ引き寄せられるように、撹拌段階とともに、反応器に対する磁場が印加され;かつ‐段階eにおいて、反応器の底面で得られたかまたはそうでない凝集反応を肉眼でおよび/または他の任意の適切な読み取りシステムで読み取り、この特異的凝集により、ヒト血液型または表現型の特異的な抗体/抗原複合体の形成の存在が実証される、請求項24記載の血液型判定および/または表現型判定のための方法。段階biiにおいて、前記血清検査薬が溶液状態であるかまたは乾燥形態であることを特徴とする、請求項24~25のいずれか一項記載の血液型判定および/または表現型判定のための方法。磁性粒子が100nm~30μm、好ましくは200nm~15μmの直径を有することを特徴とする、請求項24~26のいずれか一項記載の方法。磁性粒子が強磁性化合物を重量比で少なくとも40含むことを特徴とする、請求項24~27のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、磁場の印加が、反応器の外側下方に配置された磁石によって、磁性粒子が反応器の底面の方へ引き寄せられるように実施されることを特徴とする、請求項24~28のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、磁石が、10000ガウス~14000ガウスの範囲の規模の永久磁石であることを特徴とする、請求項24~29のいずれか一項記載の方法。段階biiiおよび/またはdにおいて、撹拌が回転撹拌機によって実施されることを特徴とする、請求項24~30のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、前記反応器に対する磁場の印加および反応器の撹拌が同時に実施されることを特徴とする、請求項24~31のいずれか一項記載の方法。段階biiiにおいて、かき混ぜまたは撹拌の適用が、5秒間~3分間の期間、好ましくは1分間~2分間の期間にわたって実施されることを特徴とする、請求項24~32のいずれか一項記載の方法。段階biiiにおいて、撹拌が、10秒間の間に1000rpm~1200rpmの範囲の速度、好ましくは1200rpmで実施されることを特徴とする、請求項24~33のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、撹拌が、500rpm~800rpm、好ましくは650rpm~750rpmの範囲の速度、好ましくは700rpmで実施されることを特徴とする、請求項24または25記載の方法。段階cにおいて、より好ましくは温度20°C~40°C、好ましくは室温または37°Cで、インキュベーションの持続時間が、2分間~30分間、好ましくは8~20分間の範囲にわたることを特徴とする、請求項24~35のいずれか一項記載の方法。段階dにおいて、より好ましくは20°C~40°Cの温度、好ましくは室温で、磁化の持続時間が、2分30秒間~7分間の範囲、好ましくは5分間であることを特徴とする、請求項24~36のいずれか一項記載の方法。段階dの後およびeの前に、凝集していない赤血球を懸濁させるために一連のかき混ぜをより高速で実行し800~1000rpmで1分間~2分30秒間、その後任意で、存在する場合、分散した小さな凝集物を集合させるための新たな撹拌段階再収集段階をより低い速度350~550rpm、1分間~2分間で実行することを特徴とする、請求項24~37のいずれか一項記載の方法。血清検査薬がIgG型である場合に、抗IgG免疫グロブリン溶液をIgG抗体血清検査薬の濃縮溶液と混合することによって、凝集した試薬を予備的に完成させることを特徴とする、請求項24~38のいずれか一項記載の方法。ヒト血液型または表現型の抗抗原抗体を含む可能性がある溶液が、既知の血液型/表現型特異性を有する抗体を含む血清検査薬である、血液型判定および/または表現型判定のための、請求項1~21のいずれか一項記載の方法。反応器が丸底またはV字底のマイクロプレート穴であることを特徴とする、請求項24~40のいずれか一項記載の方法。赤血球を保有する磁性粒子の懸濁液における赤血球濃度が02~25、好ましくは05~15、好ましくは1±03であることを特徴とする、請求項24~41のいずれか一項記載の方法。磁性粒子の濃度が0001~0007であることを特徴とする、請求項24~42のいずれか一項記載の方法。磁性粒子の濃度が0007±0001であることを特徴とする、請求項24~42のいずれか一項記載の方法。抗GPA抗体が好ましくはマウスまたはヒト起源である哺乳動物抗体であり、赤血球によって保有されるヒトグリコホリンAを特異的に認識することができ、好ましくはシアロ糖タンパク質グリコホリンAに、好ましくはその膜外ドメインに指向することを特徴とする、請求項24~44のいずれか一項記載の方法。抗GPA抗体が、シアロ糖タンパク質グリコホリンAの細胞外部分由来のエピトープに指向するモノクローナル抗体であり、該エピトープがM抗原またはN抗原を部分的に担持するかまたは全く担持せず、とりわけ該エピトープがグリコホリンA成熟鎖のN末端の1~5アミノ酸の断片を含まないことを特徴とする、請求項45記載の方法。抗GPA抗体を、5μg/mg~25μg/mg磁性粒子、好ましくは20μg/mg±3μg/mg磁性粒子の濃度で磁性粒子に連結させることを特徴とする、請求項24~46のいずれか一項記載の方法。抗GPA抗体を、1μg/mg~5μg/mg磁性粒子、好ましくは25μg/mg磁性粒子の濃度で磁性粒子に連結させることを特徴とする、請求項24~46のいずれか一項記載の方法。磁性粒子の懸濁液が、非イオン性界面活性剤、好ましくはsynperonic商標PEF68、Tween商標20、40または80を、01~1w/v、好ましくは025~075m/vまたは05±015の濃度で含む懸濁液であることを特徴とする、請求項24~48のいずれか一項記載の方法。磁性粒子の懸濁液が、非イオン性界面活性剤、好ましくはsynperonic商標PEF68、Tween商標20、40または80を、05~10、好ましくは5±015w/vの濃度で含む懸濁液であることを特徴とする、請求項24~48のいずれか一項記載の方法。溶液中に存在する血液型もしくは表現型の抗抗原抗体と、赤血球によって保有される血液型もしくは表現型の抗原との反応によって形成される特異的複合体を実証するための、とりわけIATのための、または交差適合検査もしくは直接Coombs検査を実施するための、または血液型判定および/もしくは表現型判定のためのキットであって、以下を含むことを特徴とする、キット:‐抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液を含む試薬。抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液が、請求項1~50のいずれか一項記載の方法に定義された通りであって、特に請求項1~50のいずれか一項記載の方法に定義された通りの希釈液中にある、特に、好ましくは多糖性である親水性ポリマーを、好ましくはFicoll商標、とりわけFicoll商標400を、1~25w/v、好ましくは2±03の濃度で含む溶液である希釈液中にある、請求項48記載のキット。溶液中に存在する血液型もしくは表現型の抗抗原抗体と、赤血球によって保有される血液型もしくは表現型の抗原との反応によって形成される特異的複合体を実証するための、とりわけIATもしくは交差適合検査を実施するための、または血液型判定もしくは表現型判定のためのキットであって、以下を含むことを特徴とする、キット:a請求項1~50のいずれか一項記載の方法に定義された通りの希釈液中の、特に、好ましくは多糖性である親水性ポリマー、好ましくはFicoll商標、とりわけFicoll商標400を、1~25w/v、好ましくは2±03の濃度で含む溶液である希釈液中の、抗GPAでコーティングされた磁性粒子の懸濁液を含む、試薬、b必要な場合、開いた上部および密封された基部を有し、その直径が、少なくとも基部に近接した領域では、基部へと下方に伸びる傾斜壁を形成するように小さくなっており、該傾斜壁が、抗免疫グロブリンで、または該形成された複合体の抗体と結合しうる他の任意の化合物で、少なくとも部分的にコーティングされている、反応器または反応器セット、c必要な場合、粘性溶液を含む容器、または必要な場合、請求項1~47のいずれか一項記載の方法に定義された粘性物質で部分的に満たされた各反応器;ならびにd必要な場合、回転撹拌機と連結された1つまたは複数の反応器の外側下方に配置可能である、少なくとも1つの磁石または磁石セット。既知の表現型を有する検査用赤血球の懸濁液を含み、該赤血球に対して懸濁液の前記磁性粒子が連結し得、好ましくは赤血球懸濁液がO型に由来し、かつ02~25、好ましくは05~15、好ましくは1±03の濃度を有することを特徴とする、IATのための、請求項51~53のいずれか一項記載のキット。既知の特異性を有する血清検査薬を、溶液状態でまたは乾燥形態でさらに含むことを特徴とする、血液型判定または表現型判定のための、請求項48~50のいずれか一項記載のキット。実施例1:材料MATERIELおよび方法Aトシル活性化磁性ビーズに対する抗グリコホリンAの連結の例図8参照ESTAPOR商標によるトシル活性化磁性粒子参照記号:R0124に対する抗グリコホリンAの連結を、01Mホウ酸ナトリウム緩衝液pH95またはwith01Mリン酸緩衝液pH74のいずれかを用いて行うことができる。連結の前に、トシル活性化した磁性粒子を、選んだ連結用緩衝中で磁石を用いて2回洗浄する。連結は、ビーズを連結用緩衝液ホウ酸またはリン酸中に再懸濁させること、および抗体をビーズ1mg当たり10μgの濃度で添加することによって行う。抗体の連結は3M硫酸アンモニウムの存在下で行う。‐25mgのトシル磁性粒子すなわち10w/vのビーズ250μlを、01Mリン酸緩衝液pH74または01Mホウ酸ナトリウム緩衝液pH95中で、磁石を用いて2回洗浄する。‐ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石から取り外して、ビーズを10μgの抗グリコホリンAとともに再懸濁させる。‐250μlの3M硫酸アンモニウムをビーズの懸濁液に添加して、最終濃度15Mの硫酸アンモニウムとする。‐ビーズをボルテックス処理によって十分に再懸濁させる‐緩徐な傾斜回転を行いながら室温で24h~48hインキュベートする。‐連結の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石から取り外して、03Mリン酸緩衝食塩水PBSを05BSAw/vとともに含むブロッキング緩衝液中にビーズを再懸濁させる。‐緩徐な傾斜回転を行いながら室温で24h~48hインキュベートする。‐ブロッキング段階の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石から取り外して、03MPBSを01w/vBSAおよび05w/vのsynperonic商標PEF68とともに含む保存溶液中にビーズを再懸濁させる。抗グリコホリンAを連結させたビーズの最終濃度を、保存緩衝液中に1w/vとする。ビーズを使用時まで4°Cで貯蔵する。BESTAPOR商標によるカルボン酸磁性ビーズに対する抗グリコホリンAの連結の例ESTAPOR商標によるカルボン酸磁性ビーズ参照記号:M103040に対する抗GPAの好ましい連結方法は物理的吸着である。用いる抗GPAの濃度はビーズ1mg当たり5μg~25μgとさまざまであり、ビーズ1mg当たり10μgの抗GPAが好ましい。カルボン酸磁性ビーズに対する抗GPAの連結は、以下の通りに実施する:‐25mgのカルボン酸磁性粒子すなわち、10w/vのビーズ250μlを、1mlの10mMリン酸緩衝液pH6中で磁石を用いて2回洗浄する。‐洗浄段階の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石から取り外して、15mlの20mMリン酸緩衝液pH75を用いてビーズを再懸濁させる。‐直ちに抗GPAをビーズ1mg当たり10μgの濃度で添加する。‐ボルテックス処理によって十分に混合する。‐緩徐な傾斜かき混ぜを行いながら室温で2時間インキュベートする。‐チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石の上に置いてビーズを20mMリン酸緩衝液pH75で3回洗浄する。‐洗浄段階の終了時に、03Mリン酸緩衝食塩水PBSを05BSAw/vとともに含むブロッキング緩衝液中にビーズを再懸濁させる。‐緩徐な傾斜かき混ぜを行いながら室温で2時間インキュベートする。‐ブロッキング段階の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石から取り外して、03MPBSを01w/vBSAおよび05w/vのsynperonic商標PEF68とともに含む保存溶液中にビーズを再懸濁させる。抗グリコホリンAを連結させたビーズの最終濃度を、保存緩衝液中に1w/vとする。ビーズを使用時まで4°Cで貯蔵する。CJSRMicroによるカルボン酸磁性ビーズに対する抗グリコホリンAの連結の例JSRMicroによるカルボン酸磁性ビーズ参照記号:MagnosphereMB100に対する抗GPAの連結の好ましい方法は物理的吸着である。用いる抗GPAの濃度はビーズ1mg当たり5μg~25μgとさまざまであり、ビーズ1mg当たり20μgの抗GPAが好ましい。5mgのカルボン酸磁性ビーズに対する抗GPAの連結は、以下の通りに実施する:‐5mgのカルボン酸磁性粒子すなわち、すなわち、10w/vのビーズ50μlを、200μlの50mMMES緩衝液2エタンスルホン酸、pH62中で磁石を用いて2回洗浄する。‐洗浄段階の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐直ちに抗GPAをビーズ1mg当たり20μgの濃度で添加する。‐ボルテックス処理によって十分に混合する。‐緩徐な傾斜かき混ぜを行いながら室温で2時間インキュベートする。‐チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石の上に置いてビーズを50mMMES緩衝液pH62で3回洗浄する。‐洗浄段階の終了時に、03Mリン酸緩衝食塩水PBSを05BSAw/vとともに含むブロッキング緩衝液中にビーズを再懸濁させる。‐緩徐な傾斜かき混ぜを行いながら室温で2時間インキュベートする。‐ブロッキング段階の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石から取り外して、03MPBSを01w/vBSAおよび05w/vのsynperonic商標PEF68とともに含む保存溶液中にビーズを再懸濁させる。抗グリコホリンAを連結させたビーズの最終濃度を、保存緩衝液中に1w/vとする。ビーズを使用時まで4°Cで貯蔵する。D希釈液中での連結させたビーズの希釈ビーズを抗GPAと連結させたところで、これらのものを希釈液LissおよびFicoll商標2w/v中に直接希釈し、続いてそれを粘性溶液またはゲルの上に分配する。希釈液中のビーズの濃度は0005~002でさまざまであってよく、0004が好ましい。実施例2:抗ヒト免疫グロブリンAHGによる傾斜壁および穴の基部のコーティング穴のために用いられるプラスチックの化学的および物理化学的性質により、任意の特異的複合体の抗体がヒト起源である場合に、前記複合体の抗体と特異的に結合しうるヒト抗免疫グロブリンモノクローナルまたはポリクローナルHAGタイプの層で、後者を覆うことが可能である。さらに、このHAG組成物が、補体型血清タンパク質決定基に指向する抗体を含みうることにも留意されたい。AHGでコーティングされない容器の内壁の表面は、固相またはELISA酵素結合免疫吸着アッセイ型の手法における従来の飽和剤を用いて飽和させることができる。例えば、濃度1~10μg/mlのAHG溶液を、02M炭酸緩衝液pH96中に調製することができる。この溶液を、丸底MaxisorpNUNCU8型マイクロプレートの各穴に75μlの容積で分配する。プレートを続いて4°Cで一晩インキュベートする。続いて穴を、プラスチック上に直接吸着されないタンパク質を排除するために、リン酸緩衝液PBS25mM、pH74で洗浄する。続いて穴を、PBS緩衝液中の30g/lのアルブミンalbumen溶液で、1つの穴当たり100μlの割合で処理する。室温での2時間のインキュベーション後に、穴を再びリン酸緩衝液中で洗浄する。実施例3:第1の方法:別個のウェルにおける抗GPA抗グリコホリンAを連結させた磁性ビーズによる赤血球の磁化磁化の一般原理については図9、方法1については図10を参照不規則抗体の検出は、パネルと呼ばれる、既知の表現型を有する赤血球を用いることからなる。1つのパネルは、細胞の3種の補完的表現型からなる。丸底の96ウェルのマイクロタイタープレートの3つのウェルの中に、抗GPAと連結させた5μlのビーズを積み重ね、続いて、貯蔵用緩衝液中で1に希釈した各赤血球パネル45μlを添加する。2つの構成要素を混合した後に、赤血球を直ちに磁化して、以下の段階に用いうるようにする。特異的抗ヒトグロブリン抗IgGまたは抗ヒトグロブリンの混合物抗IgGおよび抗IgMでコーティングされた丸底96ウェルマイクロプレートの3つのウェルの中に、密度が1よりも高い粘性溶液またはゲルを入れて、細胞および血清検査薬を含む反応媒質と抗グロブリンとの間に障壁を作ることができる。障壁の上に密度が1よりも高い粘性希釈液を積み重ね、その上に抗GPAを介して磁化された細胞、ならびに検査しようとする患者またはドナーからの血清または血漿を積み重ねる。マイクロプレートを続いて37°Cで20分間インキュベートする。このインキュベーションの間に、血清中に存在するかまたは存在しない赤血球抗体は、抗原を保有する磁化された赤血球と結合すると考えられる。インキュベーションの終了時に、マイクロプレートを、磁気プレートを備えた回転撹拌機の上に置く。同時に撹拌しながら磁場を印加する間に、抗赤血球抗体をその表面上に保有する磁化された赤血球は、粘性溶液の中を引き寄せられて、底面上にコーティングされたAHGと結合するが、それを保有しない赤血球はそうではないと考えられる。磁場の下での最終的な撹拌は、2つのシーケンスで構成される:第1の撹拌シーケンスは、磁化および感作された赤血球が抗グロブリンによって捕捉されることを可能にし、これは500rpmで2分30秒間~4分間、好ましくは500rpmで3分間持続させるが、一方、第2の撹拌シーケンスはペレットの形成による陰性反応を形作り、このシーケンスは600rpmで30秒間~2分間、好ましくは600rpmで1分間持続させる。陽性反応の場合には、患者またはドナーの血清または血漿によって感作された磁化された細胞は、AHGと結合して、ウェルの底面に赤血球の薄層を形成すると考えられる。陰性反応の場合には、患者またはドナーの血清または血漿によって感作された磁化された細胞は、続いて、ウェルの底面にペレットを形成すると考えられる図3参照。実施例4:第2の方法:血清または血漿による感作時の、抗GPAを連結させた磁性ビーズによる赤血球の磁化各要素の連続的積み重ね図11参照特異的抗ヒトグロブリン抗IgGまたは抗ヒトグロブリンの混合物抗IgGおよび抗IgMでコーティングされた丸底の96ウェルのマイクロタイタープレートの3つのウェルの中に、密度が1よりも高い粘性溶液またはゲルを積み重ねて、細胞および血清検査薬を含む反応媒質と抗グロブリンとの間に障壁を作ることができる。粘性障壁またはゲルの上に希釈液を積み重ね、続いて抗GPAを連結させた磁性ビーズを、続いて貯蔵用緩衝液中に1に希釈した赤血球を積み重ね、最後に検査しようとする患者またはドナー血漿または血清を積み重ねる。マイクロプレートを続いて37°Cで20分間インキュベートする。インキュベーションの間に、抗GPAを連結させた磁性ビーズは赤血球と結合すると考えられる;これは検査しようとする血清または血漿中に存在するかまたはそうでない不規則抗体に関して同じである。各抗体は1つの抗原に対して特異的であり、赤血球に対する1つのものの結合は他のものの結合を妨害しない。したがって、抗原を担持する赤血球は、患者の血漿中に存在するかまたはそうでない抗体によって磁化され、かつ感作されうると考えられる。インキュベーションの終了時に、マイクロプレートを、磁気プレートを備えた回転撹拌機の上に置く。同時に撹拌しながら磁場を印加することにより、不規則抗体をその表面上に保有する赤血球は、粘性溶液の中を引き寄せられて、底面上にコーティングされたAHGと結合するが、それを保有しない赤血球はそうではないと考えられる。磁場の下での最終的な撹拌は、2つのシーケンスで構成される:第1の撹拌シーケンスは、磁化および感作された赤血球が抗グロブリンによって捕捉されることを可能にし、これは500rpmで2分30秒間~4分間、好ましくは500rpmで3分間持続させるが、一方、第2の撹拌シーケンスはペレットの形成による陰性反応を形作り、このシーケンスは600rpmで30秒間~2分間、好ましくは600rpmで1分間持続させる。前の例と同じように、陽性反応の場合には、患者またはドナーの血清または血漿によって感作された磁化された細胞は、AHGと結合して、ウェルの底面に赤血球の薄層を形成すると考えられる。陰性反応の場合には、患者またはドナーの血清または血漿によって感作された磁化された細胞は、続いて、ウェルの底面にペレットを形成すると考えられる。この方法では、磁化が特異的であり抗GPA抗体を介する、この後者の際には干渉が全く起こらず、そのため患者の血漿による赤血球感作が独立に起こるため、別個のウェルにおいて赤血球の磁化を実施する必要がない。実施例5:第3の方法:血清または血漿による感作時の、抗GPAを連結させた磁性ビーズによる赤血球の磁化.希釈液中でのGPAを連結させた磁性ビーズの希釈図12参照.他の2つのものよりも好ましいこの方法では、フィルター上に積み重ねる希釈液中にビーズを直接希釈する。このため、積み重ねの回数は限られ、抗グリコホリンAを連結させたビーズを含む希釈液は試薬とみなされる。前と同じく、特異的抗ヒトグロブリン抗IgGまたは抗ヒトグロブリンの混合物抗IgGおよび抗IgMでコーティングされた丸底の96ウェルのマイクロタイタープレートの3つのウェルの中に、密度が1よりも高い粘性溶液またはゲルを投入し、細胞および血清検査薬を含む反応媒質と抗グロブリンとの間に障壁を作ることができる。抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む希釈液を粘性障壁またはゲルの上に積み重ねる。続いて、貯蔵用緩衝液中に1に希釈した赤血球を、磁性ビーズを含む希釈液の上に積み重ね、最後に検査しようとする患者またはドナーの血漿または血清を赤血球の上に積み重ねる。1つの好ましい態様において、赤血球は、密度が1よりも高い粘性障壁の上に積み重ねられる前に、抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む希釈液と既に混合されている。続いて、血漿または血清を添加して、赤血球希釈液磁性ビーズを混合させる。1つの自動化された態様においては、以下が好ましい:特異的抗ヒトグロブリン抗IgGまたは抗ヒトグロブリンの混合物抗IgGおよび抗IgMでコーティングされた丸底の96ウェルのマイクロタイタープレートの3つのウェルの中に、赤血球、および磁性ビーズを含む希釈液を積み重ねる。プレートを自動撹拌機の上に置くことによって、2つの構成要素を混合する。撹拌の終了時に、自動化装置のチップをウェルの底面に配置することによって、高密度の粘性障壁を混合赤血球希釈液磁性ビーズの下に注入する。その密度のために、粘性障壁は混合物の下に保たれ、それ故に非特異的抗体によるAHGの飽和が回避され、その一方で、細胞および磁性ビーズを含む希釈液によって形成される混合物は、粘性障壁の上により低密度に保たれる。これにより、密度の異なる2つの別個の相が得られる:第1のものは、AGH、および抗GPAを連結させた磁性ビーズを含み、赤血球と混合された希釈液の上にある、より高密度のゲルである。続いて、検査しようとする患者の血漿を混合物の上に置く。マイクロプレートを続いて37°Cで20分間インキュベートする。インキュベーションの間に、検査する血漿中に存在するかまたは存在しない不規則抗体は赤血球と結合すると考えられる。抗原を担持する赤血球は、患者の血漿中に存在するかまたはそうでない抗体によって磁化され、かつ感作されうると考えられる。各抗体は1つの抗原に対して特異的であり、赤血球に対する1つのものの結合は他のものの結合を妨害しない。インキュベーションの終了時に、マイクロプレートを、磁気プレートを備えた回転撹拌機の上に置く。同時に撹拌しながら磁場を印加することにより、不規則抗体を保有する赤血球は、粘性溶液の中を引き寄せられて、底面上にコーティングされたAHGと結合するが、それを保有しない赤血球はそうではないと考えられる。磁場の下での最終的な撹拌は、2つのシーケンスで構成される:第1の撹拌シーケンスは、磁化および感作された赤血球が抗グロブリンによって捕捉されることを可能にし、これは500rpmで2分30秒間~4分間、好ましくは500rpmで3分間持続させるが、一方、第2の撹拌シーケンスはペレットの形成による陰性反応を形作り、このシーケンスは600rpmで30秒間~2分間、好ましくは600rpmで1分間持続させる。前の例と同じように、陽性反応の場合には、患者またはドナーの血清または血漿によって感作された磁化された細胞は、AHGと結合して、ウェルの底面に赤血球の薄層を形成すると考えられる。陰性反応の場合には、患者またはドナーの血清または血漿によって感作された磁化された細胞は、続いて、ウェルの底面にペレットを形成すると考えられる。これらの磁化方法はすべて、ドナーとレシピエントとの適合性に関する検査などの他の検査に差し向けることができる。この場合には、輸血バッグからのドナー細胞を、抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む希釈液の上に乗せる前に、前もって低イオン強度緩衝液中に1に希釈する。これは、不規則抗体によってインビボで感作された疑いのある患者、特に母子不適合性または自己免疫性溶血性疾患の場合に行われる直接coombs検査についても同じである。これらの場合には、インビボで感作された赤血球を、抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む希釈液の上に乗せる前に、前もって低イオン強度緩衝液中に1に希釈する。実施例6:第3の方法を用いる不規則抗体の検出検査図4参照。抗GPAを連結させたビーズを、希釈液LissFicollとも呼ばれる中に直接希釈し、Liss中の10アルブミン溶液中にある3のsuperfineSephadex商標G100型の粘性障壁またはゲルNanolys商標とも呼ばれるの上にそれ自体を積み重ねる。細胞はO型患者の一次チューブから低イオン強度緩衝液中に1に希釈したものか、またはO型のパネル赤血球から貯蔵用緩衝液中に1に希釈したものとする。用いる抗血清検査用血清は患者に由来し、抗D抗C抗Eなどの不規則抗体を含む。この試料を種々の希釈度で検査する。結果の予想は、同じ細胞および同じ抗血清を用いて、すでに商業化されている手法に対して実施した。プロトコール:ヒト抗グロブリン抗IgGがコーティングされた丸底の96ウェルのマイクロタイタープレートScreenLys商標とも呼ばれるのウェル中に、50μlのNanolys商標を積み重ね、続いて抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む50μlのLissFicollを添加する。1に希釈した15μlの赤血球を添加し、検査しようとする15μlの血清または血漿を最後に添加する。マイクロプレートをインキュベーター内に入れて37°Cで20分間おき、続いてマイクロプレートを、マイクロプレートの各ウェルの下に丁度合う磁石のプレートを備えた撹拌機の上に乗せる。磁場の下での最終的な撹拌は2つのシーケンスで構成される:500rpmで3分間、その後に600rpmで1分間。実施例7:不規則抗体の検出検査を用いた、CNRGSFrenchNationalReferenceCentreforBloodGroupsによる抗Dの滴定図5参照保存用緩衝液中に1に希釈したO型赤血球パネルを用いて検査する抗血清としての、CNRGSによる抗D標準物質の希釈系列の使用。標準的抗Dのこの滴定は、記載された方法の検出閾値を実証することを可能にする。プロトコール:Screenlys商標ヒト抗グロブリン抗IgGでコーティングされたプレートのウェル中に、50μlのNanolys商標を積み重ね、続いて抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む50μlのLissFicollをNanolys商標に添加する。1に希釈した15μlの赤血球を添加し、検査しようとする抗Dの15μlの各希釈物を最後に添加する。プレートを続いて37°Cで20分間インキュベートし、続いてマイクロプレートの各ウェルの下に丁度合う磁石のプレートを備えた撹拌機の上に乗せる。磁場の下での最終的な撹拌は2つのシーケンスで構成される:500rpmで3分間、その後に600rpmで1分間。その結果は、不規則抗体の検出の検査が高感度であり、かつ125ng/mlまでの抗Dを検出しうることを示している。この磁化方法は、感度および特異性の点で、既に商業化されている方法と極めて同等である。実施例8:O型赤血球ドナーに対して行った交差適合検査適合性検査図6および7参照.EDTAチューブ上に収集したドナーからのO型赤血球を、不規則性の抗赤血球抗体を含むかまたは含まない可能性がある患者からの血漿または血清に対して検査する。その結果は以下に提示されている。プロトコール:一次チューブドナーから、10μlの濃厚赤血球を1mlの低イオン強度緩衝液中に希釈して、1赤血球懸濁液を作る。Screenlys商標ヒト抗グロブリン抗IgGでコーティングされたプレートのウェル中に、50μlのNanolys商標を積み重ね、続いて抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む50μlのLissFicollをNanolys商標に添加する。1に希釈した15μlの赤血球を添加し、輸血しようとする患者の15μlの血漿または血清を最後に添加する。プレートを続いて37°Cで20分間インキュベートし、続いてマイクロプレートの各ウェルの下に丁度合う磁石のプレートを備えた撹拌機の上に乗せる。磁場の下での最終的な撹拌は2つのシーケンスで構成される:500rpmで3分間、その後に600rpmで1分間。赤血球に対して特異的な抗体を連結させた磁性ビーズを用いたこの磁化方法で得られた結果は、複数の異なる血液型系において、ドナーとレシピエントとの間の適合性を判定しうることを明らかに実証することができる。実施例9:Simonin検査、IgM型の凝集性抗体を用いる方法を含む血液型判定/表現型判定A凝集法検査を実施する前に、抗GPAを連結させた磁性ビーズを、01のBSAw/vおよび05のsynperonic商標PEF68を含むリン酸緩衝液03M中に希釈することによって、磁化用溶液を実現させる。抗GPAを連結させた磁性ビーズの濃度は0001~0004までさまざまであってよく、好ましくは0003である。直接検査またはBethVincent検査の場合には、ABO式血液型由来抗A、抗Bおよび抗AB、Rhesus式血液型由来D、C、c、E、eおよびKell抗原由来の抗原に対して特異的なモノクローナル抗体を、96ウェルマイクロプレートの丸底ウェル中で乾燥させる。個体の赤血球上の関心対象の抗原に関する型判定の実行は、EDTA、クエン酸塩またはヘパリンなどの抗凝固剤の入ったチューブ上に収集された血液試料に対して実施される。1mlの低イオン強度緩衝液、特にLISS緩衝液中に10μlの濃厚赤血球を希釈することによって、チューブ内または丸底のプレートのウェル中に、05~12、好ましくは1の血球懸濁液を生じさせる。上述の乾燥させた抗血清を含む丸底の96ウェルマイクロプレートのウェル中に、10μlの磁化用溶液を積み重ね、それに対して1血球懸濁液30μlを添加する。直接検査と同時に、未使用の隣接ウェルでSimonin検査を実施する:抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む10μlの磁化用溶液をこのように4つの未使用ウェル中に積み重ね、続いて、低イオン強度の貯蔵用緩衝液中に前もって1に希釈した、A1、A2、BまたはO型といった既知の血液型を有する被験赤血球の15μlの懸濁液をビーズに添加し、最後に表現型を判定しようとする患者またはドナーの血漿25μlを添加する。マイクロプレートを自動マイクロプレート撹拌機の上に乗せることにより、これらの構成要素をホモジナイズする。かき混ぜ速度は500~800rpmの間でさまざまであってよく、好ましくは650~750rpm、好ましくは700rpmである。かき混ぜの持続時間は1分間~2分間の間でさまざまであってよく、好ましくは1分30秒間である。マイクロプレートを続いて室温で2分間~15分間、好ましくは10分間インキュベートする。各抗体は1つの抗原に対して特異的であり、赤血球に対する1つのものの結合は他のものの結合を妨害しない。したがって、抗原を担持する赤血球は、抗GPAによって磁化され、かつウェル中で乾燥させた抗血清によって感作されうると考えられる。インキュベーション段階の終了時に、マイクロプレートを、マイクロプレートの各ウェルに丁度合う96個の磁石を備えたプレートの上に乗せる。抗血清に対応する抗原が存在するならば、抗GPAによって感作および磁化された赤血球は、磁場の影響を受けてウェルの底面に引き寄せられて、ペレットを形成すると考えられる。磁化の持続時間は室温で3分間~7分間の間でさまざまであってよく、5分間が好ましい。続いてマイクロプレートを、非凝集性赤血球、すなわちスクリーニングした抗原に関して陰性であるRBCを懸濁させるために撹拌機の上に乗せる。一連のかき混ぜにより、非凝集性赤血球の再懸濁および赤血球凝集物の可視化が以下の通りに可能になる:第1に、かなり強い撹拌により、磁化後に濃厚赤血球をウェルの底面から引き離す。この撹拌は800~1000rpmの範囲の速度で1分間~2分30秒間にわたって行い、好ましくは900rpmで1分45秒間行う。撹拌の終了時に、非凝集性赤血球は分散して均質な懸濁液を形成し、一方、スクリーニングした抗原を発現する赤血球は稠密な凝集物を形成する。しかしながら、よりわずかに発現される抗原の場合には、形成される凝集物は撹拌の終了時により小さく、かつより分散しており、分散した小さな凝集物のすべてを集成させ、そのようにして、完全な、輪郭が明確な凝集物をウェルの底面に形成させるための、いわゆる《再収集》撹拌を必要とする。このいわゆる《再収集》撹拌は低速で、すなわち30秒間から1分間にわたって350~550rpmで、好ましくは45秒間にわたって450rpmで行う。この《再収集》撹拌は、陰性赤血球に対しても強力な凝集物に対しても影響を及ぼさない。続いて、裸眼によって、またはカメラを装着した自動リーダーによって、マイクロプレートを読み取ることができる。陽性反応はウェルの底面での1つまたはいくつかの凝集物の存在を招くと考えられ、一方、陰性反応は赤血球の均質な懸濁液を招くと考えられる。実施例10:患者8人に対する、A1およびB型の検査用赤血球を用いるSimonin検査を含む、ABO血液型判定検査およびRhK表現型判定検査を実施することを可能にするDUOLYS型のマイクロプレート.A試薬:‐乾燥させた血液型抗体を含むDuoLysマイクロプレート‐抗GPAを連結させてリン酸緩衝液03M01BSAw/v05synperonic商標w/vPEF68中に0004に希釈した磁性ビーズを含む磁化用溶液のボトル‐貯蔵用緩衝液中に1に希釈したA1型の検査用赤血球の懸濁液‐貯蔵用緩衝液中に1に希釈したB型の検査用赤血球の懸濁液‐EDTAの抗凝固剤上に収集した、患者からの8件の血液試料Bプロトコール:各血液試料について‐各ウェル1~12中に磁化用溶液10μlを積み重ねる‐ウェル1~10中に:Liss中に生成させた1血球懸濁液30μlを積み重ねる‐カラム11中に:A1群の検査用赤血球懸濁液5μlを積み重ねる‐カラム12中に:B群の検査用赤血球懸濁液5μlを積み重ねる‐ウェル11および12中に:各患者からの血漿25μlを積み重ねる‐700rpmで1分30秒間にわたるマイクロプレートのかき混ぜ‐室温での10分間のマイクロプレートのインキュベーション‐磁石プレート上での5分間にわたるマイクロプレートの磁化‐かき混ぜ:900rpmで1分45秒間450rpmで45秒間‐裸眼による、およびカメラによる読み取りC結果図13参照赤血球に対して特異的な抗体を連結させた磁性ビーズを用いるこの磁化方法で得られた結果は、乾燥抗血清の場合に、うら検査Simonin検査を含む、血液型およびRhK表現型を判定しうることを明らかに実証することができる。実施例11:IgGおよび/またはIgM型の抗体を用いる方法である、凝集による血液表現型判定の手法本発明はまた、液体形態でのIgGおよび/またはIgM検査による赤血球血液型判定/表現型判定を実施することも可能にする。抗血清がIgG型のものである場合には、検索する抗原の特異的抗IgG濃縮溶液で前もって飽和させた抗IgG抗免疫グロブリンから、《凝集性》試薬を調製する。この液体《凝集性》試薬は、このため、他の任意の表現型判定試薬などの血液表現型判定の際に用いられる。検査の実現の前に、抗IgG抗免疫グロブリンを、IgG抗赤血球RBC抗体を含む非精製モノクローナル抗体濃厚液とともにインキュベートして凝集型の試薬を調製する。1mlの低イオン強度緩衝液、特にLISS緩衝液中に10μlの濃厚赤血球を希釈することによって、チューブ内または丸底のマイクロプレートのウェル中に、05~12、好ましくは1の血球懸濁液を調製する。丸底の96ウェルマイクロプレートのウェル中に、10μlの磁化用溶液を積み重ね、それに対して1血球懸濁液15μlを添加して、IgG型またはIgM型の抗RBC《凝集性》試薬25μlを添加する。マイクロプレートを自動マイクロプレート撹拌機の上に乗せることにより、これらの構成要素をホモジナイズする。かき混ぜ速度は1000~1200rpmの間でさまざまであってよく、好ましくは1200rpmである。かき混ぜの持続時間は5秒間~1分間の間でさまざまであってよく、好ましくは10秒間である。マイクロプレートを続いて37°Cで10分間~30分間、好ましくは20分間インキュベートする。各抗体は1つの抗原に対して特異的であり、赤血球に対する1つのものの結合は他のものの結合を妨害しない。したがって、抗原を担持する赤血球は、抗GPAによって磁化され、かつウェルの底面に積み重ねられたIgM型またはIgG型の抗血清によって感作されうると考えられる。インキュベーション段階の終了時に、マイクロプレートを、マイクロプレートの各ウェルの下方に丁度適合する96個の一連の磁石を備えたプレートの上に乗せる。抗血清に対応する抗原が存在するならば、抗GPAによって感作および磁化された赤血球は、磁場の影響を受けてウェルの底面に引き寄せられて、凝集物を形成すると考えられる。磁化の持続時間は室温で5分間~15分間の間でさまざまであってよく、10分間が好ましい。続いてマイクロプレートを、非凝集性赤血球、すなわちスクリーニングした抗原に関して陰性であるものの再懸濁を可能にするために撹拌機の上に乗せる。一連のかき混ぜにより、非凝集性赤血球の再懸濁および赤血球凝集物の可視化が以下の通りに可能になる:第1に、かなり強い撹拌により、磁化後に濃厚赤血球をウェルの底面から引き離す。この撹拌は500~1000rpmの速度で1分間~2分30秒間にわたって行い、好ましくは700rpmで1分30秒間行う。撹拌の終了時に、非凝集性赤血球は分散して均質な懸濁液を形成し、一方、検索する抗原に対応する赤血球は稠密な凝集物を形成する。より弱く発現される抗原については、形成される凝集物は撹拌の終了時により小さく、かつより分散しており、分散した小さな凝集物のすべてを集成させ、そのようにして、完全な、輪郭が明確な凝集物をウェルの底面に形成させるための、いわゆる再収集撹拌を必要とする。このいわゆる再収集撹拌は低速で、すなわち30秒間から1分間にわたって350~550rpmで、好ましくは45秒間にわたって450rpmで行う。このいわゆる再収集撹拌は、陰性赤血球に対しても強力な凝集物に対しても影響を及ぼさない。続いて、裸眼によって、またはカメラを装着した自動リーダーによって、マイクロプレートを読み取ることができる。A試薬‐抗GPAを連結させてPBS03M01BSAw/v05w/vsynperonicPEF68中に0005に希釈した磁性ビーズを含む磁化用溶液のボトル‐抗Jkb抗体のポリクローナル溶液クローンP143、IgM型のボトル‐抗S《凝集性》試薬のボトル:1mlのAGH濃度=18mg/ml20mlの抗SクローンP3S13JS123、IgG型の濃縮溶液‐抗s《凝集性》試薬のボトル:1mlのAGH濃度=18mg/ml20mlの抗s抗体クローンP3YAN3、IgG型の濃縮溶液‐EDTAの抗凝固剤上に収集した、患者からの5件の血液試料Bプロトコール:各血液試料について‐丸底の96ウェルのマイクロプレートの3つのウェル中に、磁化用溶液10μlを積み重ねる‐3つの前記ウェル中への、Liss中に生成させた1血球懸濁液15μlの添加‐3つのウェルのそれぞれの中への、25μlの抗Jkb試薬、抗Sおよび抗sの添加‐1200rpmで10秒間のマイクロプレートの撹拌‐37°Cでの20分間にわたるマイクロプレートのインキュベーション‐磁石プレート上での10分間にわたるマイクロプレートの磁化‐撹拌:700rpmで1分30秒間450rpmで45秒間‐裸眼による、およびカメラによる読み取り。C結果:図14参照赤血球に対して特異的な抗体を連結させた磁性ビーズを用いるこの磁化方法で得られた結果は、複数の異なる血液型系において、ドナーまたは患者の拡張された表現型を判定しうることを明らかに実証することができる。実施例12:ドナー8人の拡張された表現型の判定:免疫付着法を用いる抗Fya、抗Fyb、抗Jka、抗Jkb、抗Sおよび抗s抗血清の使用A試薬:‐抗GPAを連結させたビーズが希釈された、糖をベースとするポリマーおよび低イオン強度緩衝液で作られた希釈液。ビーズを含むこの希釈液の濃度は0004である。‐抗Fyaヒトモノクローナル抗体クローンDGFYA02、IgG型‐抗Fybヒトポリクローナル抗体‐抗Jkaヒトモノクローナル抗体クローンP3HT7、IgM型‐抗Jkbヒトモノクローナル抗体クローンP143、IgM型‐抗Sヒトモノクローナル抗体クローンP3S13JS123、IgG型‐抗sヒトモノクローナル抗体クローンP3YAN3、IgG型‐陰性対照‐Nanolys‐EDTA型の抗凝固剤上に収集されたドナー8人の血液試料Bプロトコール:各ドナーについて検査の前に、抗GPAを連結させたビーズを希釈液LissFicollとも呼ばれる中に直接希釈する。ドナー8人からの赤血球を、抗GPAを連結させたビーズを含む希釈液中に1に希釈する。種々の懸濁液をチューブ内または丸底の96ディープウェルマイクロプレートのウェル中に生成させる。IgGおよびIgMヒト抗グロブリンの混合物抗IgGでコーティングされた丸底の96ウェルのマイクロタイタープレートCrossLys商標とも呼ばれるの7つのウェル中に、50μlの粘性障壁またはゲルNanolys商標とも呼ばれるを積み重ねる。Nanolys商標の上に、ビーズを含む希釈液中にある1血球懸濁液55μlを積み重ねる。最後に、10μlの各抗血清を、血球懸濁液の上に積み重ねる。続いて、マイクロプレートを37°Cで20分間インキュベートする。インキュベーションの終了時に、マイクロプレートを、マイクロプレートの各ウェルの下に丁度合う磁石のプレートを備えた撹拌機の上に乗せる。同時に撹拌しながら磁場を印加することにより、不規則抗体を保有する赤血球は、粘性溶液の中を引き寄せられて、底面上にコーティングされたAHGと結合するが、それを保有しない赤血球はそうではないと考えられる。磁場の下での最終的な撹拌は、2つのシーケンスで構成される:第1の撹拌シーケンスは、磁化および感作された赤血球が抗グロブリンによって捕捉されることを可能にし、これは500rpmで3分間持続させるが、一方、第2の撹拌シーケンスはペレットの形成による陰性反応を形作ることを可能にし、このシーケンスを600rpmで1分間持続させる。陽性反応の場合には、抗血清によって感作された磁化された細胞は、AHGと結合して、ウェルの底面に赤血球の薄層を形成すると考えられる。陰性反応の場合には、抗血清によって感作された磁化された細胞は、続いて、ウェルの底面にペレットを形成すると考えられる。予想される結果を、同じ細胞および同じ抗血清を用いて、すでに商業化されている手法に対しても生成させた。C予想される結果:以下の表を参照得られた結果:図15参照赤血球に対して特異的な抗体を連結させた磁性ビーズを用いるこの磁化方法で得られた結果は、種々の血液型系において、患者またはドナーの拡張された表現型を判定しうることを明らかに実証することができる。実施例13:WeakD抗原に関するドナー48人の表現型判定。免疫付着法を用いる2つの異なるクローン抗Dの混合物の使用図4A試薬‐抗GPAを連結させたビーズが希釈された、糖をベースとするポリマーおよび低イオン強度緩衝液で作られた希釈液。ビーズを含むこの希釈液の濃度は0004である。‐抗Dの混合物クローンESD1およびクローンP3X35‐Nanolys‐EDTA型の抗凝固剤上に収集されたドナー48人の血液試料Bプロトコール:各ドナーについてweakD検査のために、拡張された表現型判定に関するプロトコールを実施することができる。C予想される結果:以下の表を参照D得られた結果:赤血球に対して特異的な抗体を連結させた磁性ビーズを用いるこの磁化方法で得られた結果は、ドナーのweakD表現型を判定しうることを明らかに実証することができる。実施例14:磁性粒子に対して連結させる抗GPA濃度を低下させることによる検査の感度および特異性の向上aJSRMicroによるカルボン酸磁性ビーズに対する抗グリコホリンAの連結JSRMicroによるカルボン酸磁性ビーズ参照記号:MagnosphereMB100に対する抗GPAの好ましい連結方法は物理的吸着である。検査の特異性および感度を高めるために、用いる抗GPAの濃度はビーズ1mg当たり2μg~5μgとさまざまであってよく、好ましくは抗GPAビーズ1mg当たり25μgである。5mgのカルボン酸磁性ビーズに対する抗GPAの連結は以下の通りに実施する:‐5mgのカルボン酸磁性粒子すなわち、10w/vのビーズ50μlを、200μlの50mMMES緩衝液2エタンスルホン酸、pH62中で磁石を用いて2回洗浄する。‐洗浄段階の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐直ちに抗GPAをビーズ1mg当たり25μgの濃度で添加する。‐ボルテックス処理によって十分に混合する。‐緩徐な傾斜かき混ぜを行いながら室温で2時間、または4°Cで24時間インキュベートする。‐チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石の上に置いてビーズを50mMMES緩衝液pH62で3回洗浄する。‐洗浄段階の終了時に、03Mリン酸緩衝食塩水PBSを05BSAw/vとともに含むブロッキング緩衝液中にビーズを再懸濁させる。‐緩徐な傾斜かき混ぜを行いながら室温で2時間インキュベートする。‐ブロッキング段階の終了時に、チューブを磁石の上に置き、ビーズが磁石の方に移動して液体が清澄化したところで、上清をピペットで注意深く除去する。‐チューブを磁石から取り外して、03MPBSを01w/vBSAおよび5w/vのsynperonic商標PEF68とともに含む保存溶液中にビーズを再懸濁させる。抗GPAを連結させたビーズの安定性を高めるためには、本発明者らは、高濃度のsynperonic商標PEF68界面活性剤、例えば:5w/vなどを用いる貯蔵を好んだ。抗グリコホリンAを連結させたビーズの最終濃度は、保存緩衝液中で1w/vである。ビーズを使用時まで4°Cで貯蔵する。B希釈液中での連結させたビーズの希釈ビーズを抗GPAと連結させたところで、これらのものを希釈液LissおよびFicoll商標2w/v中に直接希釈し、続いてそれを粘性溶液またはゲルの上に分配する。希釈液中のビーズの濃度は0005~002でさまざまであってよく、0007±0001w/vが好ましい。実施例15:磁性粒子に対して連結させる抗GPA濃度を低下させることによって感度および特異性の増加を示すO型赤血球ドナーに対して行った交差適合検査適合性検査における比較試験図17参照サグマンニトールsagmannitol血液バッグに保存したドナーからのO型赤血球を、不規則性の抗赤血球抗体を含むかもしくは含まない可能性がある患者からの血漿もしくは血清に対して、または既知の特異性を有する抗血清の複数の異なる希釈物に対して検査する。この検査は、磁性ビーズと連結させて、最終的な希釈液中に0007で希釈した、2つの異なる抗GPA濃度間での比較試験で構成される。結果は以下に提示されている。プロトコール:一次チューブドナーから、10μlの濃厚赤血球を1mlの低イオン強度緩衝液中に希釈して、1赤血球懸濁液を作る。CrossLys商標2種類のヒト抗グロブリン抗IgGおよび抗IgMでコーティングされたプレートのウェル中に、50μlのNanolys商標を積み重ね、続いて抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む50μlのLissFicollをNanolys商標に添加する。1に希釈した15μlの赤血球を添加し、輸血しようとする患者の15μlの血漿または血清を最後に添加する。プレートを続いて37°Cで20分間インキュベートし、続いてマイクロプレートの各ウェルの下に丁度合う磁石のプレートを備えた撹拌機の上に乗せる。磁場の下での最終的な撹拌は2つのシーケンスで構成される:500rpmで3分間、その後に600rpmで2分間。磁性粒子に対して連結させた抗GPAの2種類の濃度間での比較試験により、連結させる抗GPAの濃度が低い場合の陽性反応サイズの増大が示される。同時に陰性反応は、この濃度が同じく低い場合すなわち、25μg/mgの磁性粒子には、より特異的かつより弁別的である。実施例16:高濃度の非イオン性界面活性剤:synperonic商標PEF68とともに貯蔵した場合の磁性粒子の安定性の増加を示す比較試験O型赤血球ドナーに対する交差適合検査にて行った試験図18参照サグマンニトールsagmannitol血液バッグに保存したドナーからのO型赤血球を、不規則性の抗赤血球抗体を含むかもしくは含まない可能性がある患者からの血漿もしくは血清に対して、または既知の特異性を有する抗血清の複数の異なる希釈物に対して検査する。この検査は、最終的な溶液中に希釈する前の、連結された磁性粒子の2つの異なる貯蔵条件間の比較試験で構成される。結果は以下に提示されている。プロトコール:一次チューブドナーから、10μlの濃厚赤血球を1mlの低イオン強度緩衝液中に希釈して、1赤血球懸濁液を作る。CrossLys商標2種類のヒト抗グロブリン抗IgGおよび抗IgMでコーティングされたプレートのウェル中に、50μlのNanolys商標を積み重ね、続いて抗GPAを連結させた磁性ビーズを含む50μlのLissFicollをNanolys商標に添加する。1に希釈した15μlの赤血球を添加し、輸血しようとする患者の15μlの血漿または血清を最後に添加する。プレートを続いて37°Cで20分間インキュベートし、続いてマイクロプレートの各ウェルの下に丁度合う磁石のプレートを備えた撹拌機の上に乗せる。磁場の下での最終的な撹拌は2つのシーケンスで構成される:500rpmで3分間、その後に600rpmで2分間。これらの2つの貯蔵条件間、すなわち05または5のsynperonic界面活性剤を用いた安定性試験により、最終的な溶液中でのそれらの希釈前に5のsynperonicとともに貯蔵した場合にビーズのより優れた安定性が示される。5のsynperonicとともに貯蔵したビーズの場合、37°Cでは、4°Cで貯蔵した同じビーズと陽性反応および陰性反応が同程度であることが明らかに実証されている。一方、連結させたビーズを05のみのsynperonicとともに貯蔵した場合には、37°Cですべての反応の劣化がみられる。