"水系においてバイオフィルム内の定着性微生物を処理する方法であって、以下の工程、1水中で初期活性を有する1種以上の酵素を系に添加する工程、2前記酵素をホウ素化合物で調整してホウ素調整酵素を形成する工程、3前記系に1種以上の殺生剤を添加する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素が、前記酵素又は殺生剤の最後の添加後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持するのに十分な濃度で前記ホウ素化合物がポリオール溶媒と組み合わせて添加され、かつ前記酵素及び前記殺生剤が、組合せによる相乗作用を生じることを特徴とする方法。バイオフィルム内の定着性微生物を浮遊させる方法であって、1種以上の酵素を水系に添加してバイオフィルムと接触させる工程であって、前記酵素が、ホウ素化合物で調整されてホウ素調整酵素を形成する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素が、前記接触後2時間以上その初期活性の40以上の活性を保持するのに十分な濃度で前記ホウ素化合物がポリオール溶媒と組み合わせて添加され、前記酵素が、前記定着している微生物を浮遊させるのに十分な種類及び濃度であるように選択されることを特徴とする方法。1種以上の殺生剤を添加する工程を更に含み、前記ホウ素調整酵素が、前記酵素又は殺生剤の最後の添加後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持する請求項1又は2記載の方法。前記バイオフィルムが、循環水系中にある請求項1乃至3のいずれかに記載の方法。前記バイオフィルムが、微温湯系中にある請求項1乃至4のいずれかに記載の方法。前記ホウ素調整酵素が、12時間以上前記酵素の初期活性の40以上の活性を保持する請求項1乃至5のいずれかに記載の方法。前記ホウ素調整酵素が、24時間以上前記酵素の初期活性の75以上の活性を保持する請求項1乃至6のいずれかに記載の方法。前記ホウ素調整酵素が、系内の水に添加する前に前記酵素及び前記ホウ素化合物を接触させることにより形成される請求項1乃至7のいずれかに記載の方法。前記ホウ素調整酵素が、系内の水中で前記酵素を前記ホウ素化合物と接触させることにより形成される請求項1乃至7のいずれかに記載の方法。前記ホウ素調整酵素及び前記殺生剤が、一緒に、実質的に同時に、又は別々に添加される請求項3乃至9のいずれかに記載の方法。前記酵素、前記含ホウ素化合物及び前記殺生剤が、実質的に連続的に添加される請求項3乃至10のいずれかに記載の方法。1種以上の前記酵素及び前記殺生剤が、水系に断続的に添加される請求項3乃至10のいずれかに記載の方法。前記酵素が、プロテアーゼ、カルボヒドラーゼ、エステラーゼ、ヒドラーゼ、アミラーゼ、カタラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、インベルターゼ、レバンバイオヒドロラーゼ及びそれらの混合物からなる群から選択される請求項1乃至12のいずれかに記載の方法。前記酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ又はそれらの混合物である請求項13記載の方法。前記酵素が、1E-3~3E-3Augの活性で使用されるプロテアーゼである請求項1乃至14のいずれかに記載の方法。前記酵素が、100~500Nugに対応する濃度で使用されるアミラーゼである請求項1乃至15のいずれかに記載の方法。前記ホウ素化合物が、ホウ砂、ホウ酸、酸化ホウ素、オルトホウ酸塩、メタホウ酸塩、ピロホウ酸塩、過ホウ酸塩、ボロン酸又はそれらの混合物から選択される請求項1乃至16のいずれかに記載の方法。前記ホウ素化合物が、0.1乃至10の濃度で存在する請求項1乃至17のいずれかに記載の方法。前記殺生剤が、チアゾール/イミダゾール殺生剤、ニトロパラフィン殺生剤、チアジアジン、ジチオカルバメート、チオシアネート又は塩化第四級アンモニウム又はそれらの混合物から選択される請求項1乃至18のいずれかに記載の方法。前記殺生剤の濃度が、1乃至150ppmである請求項1乃至19のいずれかに記載の方法。前記水系が、1種以上の腐蝕防止剤を含む請求項1乃至20のいずれかに記載の方法。前記腐蝕防止剤が、酸化腐蝕防止剤又は皮膜形成腐蝕防止剤である請求項21記載の方法。前記水中の浮遊性細菌及び定着性細菌の合計が、1000cfumL未満に保持されている請求項1乃至22のいずれかに記載の方法。前記水系中の浮遊性細菌及び定着性細菌の合計が、10cfumL未満に保持されている請求項1乃至23のいずれかに記載の方法。前記ホウ素調整酵素と組み合わせた前記殺生剤が、レジオネラ微生物、アエロバクターレバニカム、緑膿菌、ロードツルーラグルチニス酵母菌、枯草菌からなる群から選択される有機体の成長を減じるのに効果的である請求項3乃至24のいずれかに記載の方法。前記ホウ素調整酵素と組み合わせた前記殺生剤が、系内のレジオネラ微生物の成長を減じるのに効果的である請求項25記載の方法。水の処理方法であって、以下の工程、1水中で初期活性を有する1種以上の酵素を提供する工程、2ホウ素調整酵素を製造するのに十分な濃度のホウ素化合物をポリオール溶媒と組み合わせて前記酵素を調整する工程、31種以上の殺生剤を添加する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素を水と接触させる際に、それが前記水との接触後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持し、かつ前記酵素及び前記殺生剤が、組合せによる相乗作用を生じることを特徴とする処理方法。微生物のすむ微温湯系の汚染除去方法であって、以下の工程、1水中で初期活性を有する1種以上の酵素を系に導入する工程、2ホウ素調整酵素を製造するのに十分な濃度のホウ素化合物をポリオール溶媒と組み合わせて前記酵素を調整する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素が、前記導入後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持することを特徴とする方法。前記微温湯が、40乃至55°Cである請求項28記載の方法。前記微温湯が、45乃至50°Cである請求項28又は29記載の方法。酵素、殺生剤及びポリオール溶媒と組み合わせた含ホウ素化合物を含む貯蔵安定性組成物であって、前記組成物が、皮膜形成腐蝕防止剤と相溶性であり、かつ前記酵素及び前記殺生剤が、組合せによる相乗作用を生じることを特徴とする組成物。1種以上の酵素、腐蝕防止剤、殺生剤及びポリオール溶媒と組み合わせた含ホウ素化合物を含み、かつ前記酵素及び前記殺生剤が、組合せによる相乗作用を生じることを特徴とする濃縮物。少なくとも前述の先行技術の欠点の一部を回避又は改良する工業用循環水の処理方法を提供することが本発明の目的である。プラントの閉鎖の必要性を回避する、又はプラントが洗浄のために閉鎖されることなく安全に作業しうる期間を少なくとも長くする方法及び組成物を提供することが本発明の好ましい実施態様の目的である。バイオフィルムが、例えばレジオネラ菌のような微生物をすまわせる微温湯の設備の汚染を除去する方法及び組成物を提供することは更なる目的である。第一の面によれば、本発明は、水の系においてバイオフィルム内の定着性微生物を処理する方法であって、前記方法が水中で初期活性を有する1種以上の酵素を系に添加する工程、前記酵素をホウ素化合物で調整してホウ素調整酵素を形成する工程を含み、前記ホウ素調整酵素が前記添加後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持するのに十分な濃度で前記ホウ素化合物が添加される方法を提供する。第二の面によれば、本発明は、バイオフィルム内の定着性微生物を浮遊させる方法であって、前記方法が1種以上の酵素を水の系に添加してバイオフィルムと接触させる前記酵素はホウ素化合物で調整されてホウ素調整酵素を形成する工程を含み、前記ホウ素調整酵素が前記接触後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持するのに十分な濃度で前記ホウ素化合物が添加され、前記酵素が前記定着性微生物を浮遊させるのに十分な種類及び濃度であるように選択される方法を提供する。特に本発明は、酸化又は皮膜形成腐蝕防止剤を含む循環水の系を処理する方法であって、前記方法が初期活性量を有する1種以上の酵素を系に添加する工程を含み、前記酵素の各々が腐食防止剤の存在下で酵素の添加、及び1種以上の殺生剤の系への添加後2時間以上初期量の40以上の活性を保持するのに十分なホウ素化合物濃度で調整される方法を提供する。本発明の好ましい実施態様においては、腐蝕防止剤の存在下で1種以上の酵素の活性を4時間以上、好ましくは8時間以上初期量の約40以上に保持するように十分なホウ素化合物が添加される。非常に好ましい実施態様においては、酵素の活性を12時間以上初期活性の約40以上に保持する。24時間後に75以上、及びほぼ100の活性が保持される場合もある。好ましくは、前記方法は更に1種以上の殺生剤を添加する工程を含み、前記ホウ素調整酵素が添加後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持する。本発明の方法は特に、バイオフィルムが循環水の系に存在する場合に適する。それはまたバイオフィルムが循環していない微温湯の系に存在する場合にも使用するのに適する。好ましくは、ホウ素調整酵素は12時間以上前記酵素の初期活性の40以上を保持し、更に好ましくはホウ素調整酵素は24時間以上前記酵素の初期活性の75以上を保持する。ホウ素調整酵素は、前記酵素及び前記ホウ素化合物を水に添加する前にそれらを接触させる予備調整することにより、あるいはホウ素調整酵素は前記酵素を水中において前記ホウ素化合物と接触させることにより形成されることに注目することが重要である。ホウ素調整酵素及び前記殺生剤は、一緒に、実質的に同時に、又は別々に添加されることが好ましい。別の好ましい実施態様においては、酵素、含ホウ素化合物及び殺生剤が、一緒に、実質的に同時に又は別々に、及び任意の順序で添加される。好ましくは、酵素は、プロテアーゼ、カルボヒドラーゼ、エステラーゼ、ヒドラーゼ、アミラーゼ、カタラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、インベルターゼ、レバンバイオヒドロラーゼ及びそれらの混合物からなる群から選択される。最も好ましくは、酵素はプロテアーゼ、アミラーゼ又はそれらの混合物である。好ましい一実施態様においては、酵素は5E-4~10E-3Aug、更に好ましくは1E-3~3E-3Aug、最も好ましくは約2.5E-3Augの活性で使用されるプロテアーゼである。別の好ましい実施態様においては、酵素は10~1000Nug、更に好ましくは100~500Nug、最も好ましくは約300Nugに対応する濃度で使用されるアミラーゼである。酵素は腐蝕防止剤を含む水に添加する前に、あるいは添加直後にホウ素化合物と組み合わせることが望ましい。理論に縛られることは望まないが、ホウ素化合物は酵素の変性を保護するために明らかにそれを予備調整する。ホウ素化合物は、本明細書においては単純化のためにホウ素と言及される場合もある。好ましくは、ホウ素化合物は、ホウ砂、ホウ酸、酸化ホウ素、オルトホウ酸塩、メタホウ酸塩、ピロホウ酸塩、過ホウ酸塩、ボロン酸又はそれらの混合物から選択される。好ましくは、ホウ素の質量の酵素乾燥タンパク質としての質量に対する比は3:1乃至3:10である。好ましくはホウ素化合物は、0.01乃至10、更に好ましくは0.1乃至10の濃度で存在する。好ましくは殺生剤は、チアゾール/イミダゾール殺生剤、ニトロパラフィン殺生剤、チアジアジン、ジチオカルバメート、チオシアネート又は塩化第四級アンモニウム又はそれらの混合物から選択され、好ましくは0.1乃至1000ppm、更に好ましくは1乃至150ppm、最も好ましくは10乃至50ppmの濃度で使用される。殺生剤は、好ましくは環境上許容しうる、酵素との組合せで系内のレジオネラ菌の成長を抑制するのに効果的な種類及び濃度である。非常に好ましい殺生剤は、チアゾール/イミダゾール殺生剤特にイソチアゾリン誘導体及びニトロパラフィン殺生剤例えば、2ブロモ2ニトロプロパン13ジオールから選択される。好ましい実施態様においては、水は、酸化腐蝕防止剤又はフィルム形成腐蝕防止剤のような腐蝕防止剤を1種以上含む。好ましくは酵素は、12時間以上にわたって循環水において効果的な活性を保持する割合で添加され、殺生剤は、浮遊性及び定着性細菌を併せて1000cfumL未満、望ましくは10cfumL未満に保持するように選択される。好ましくは、前記水中の浮遊性及び定着性細菌は合計で1000cfuml未満、更に好ましくは10cfuml未満に保持される。好ましくは、前記ホウ素調整酵素と組み合わせた殺生剤は、レジオネラ微生物、アエロバクターレバニカムlevanicum、緑膿菌、ロードツルーラグルチニスRhodoturulaglutinis酵母菌、枯草菌からなる群から選択される有機体の成長を減じるのに効果的である。最も好ましくは、前記ホウ素調整酵素と組み合わせた殺生剤は、系内におけるレジオネラ微生物の成長を減じるのに効果的である。本発明による好ましい方法は、長期間24時間以下にわたって酵素を腐蝕防止剤による失活から保護することが見いだされた。第三の面によれば、本発明は、水中において初期活性を有する1種以上の酵素を提供する工程、ホウ素調整酵素を製造するのに十分な濃度のホウ素化合物で前記酵素を調整する工程、1種以上の殺生剤を添加する工程を含み、前記ホウ素調整酵素を水と接触させる際に、それが前記水との接触後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持する水の処理方法を提供する。第四の面によれば、本発明は、水中において初期活性を有する1種以上の酵素で系を処理する工程、ホウ素調整酵素を製造するのに十分な濃度のホウ素化合物で前記酵素を調整する工程を含み、前記ホウ素調整酵素を前記水と接触させる際に、それが前記水との接触後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持するレジオネラ菌のすむ微温湯の系の汚染除去方法を提供する。好ましくは、微温湯は40乃至55°C、更に好ましくは45乃至50°Cである。第六の面によれば、本発明は、初期活性を有する1種以上の酵素、水との接触後2時間以上前記初期活性の40以上を保持するホウ素調整酵素を形成するために前記酵素を調整及び安定化するのに十分な量のホウ素化合物、及び1種以上の殺生剤、を含む水を処理する組成物を提供する。ある種の実施態様においては、本発明は、1種以上の酵素、1種以上の殺生剤、及び所定の濃度以下の酸化又は皮膜形成腐蝕防止剤を含む水に添加した後2時間以上その初期活性の40以上を保持するように前記1種以上の酵素を予備調整及び安定化するのに十分なホウ素化合物を組み合わせて含む組成物を提供する。ホウ素調整酵素及び殺生剤は、一緒又は別々に連続的又は断続的に添加しうる。しかしながら、ホウ素調整酵素、及び殺生剤は実質的に同時に添加されるのが非常に好ましい。更に好ましくは、第二の面による組成物から溶液を形成することにより組み合わせて一緒に添加される。本発明の実施においては、添加は連続的でも短い間隔で繰り返してもよいが、例えば8、12、又は24時間間隔のような長時間の間隔で繰り返されるほうが好ましい。所望であれば、組成物は選択された腐蝕防止剤も含みうる。本出願人は、保護されていない酵素は約1時間以内に殺生剤及び腐蝕防止剤の両方により失活することを見いだした。例えば、本発明者は、22ジブロモ3ニトリロプロピオンアミドDBNPAのような殺生剤と組み合わせたプロテアーゼは、現代の腐蝕防止剤を含む工業用循環水の系において1時間後にその活性は5未満になることを見いだした。これに対し、本発明者はまた、使用するのに環境上等で安全な濃度の殺生剤は数時間後に十分効果的になり、活性な酵素の存在下では12時間有効であることも見いだした。酵素が8又は12時間その活性の50以上を保持するのに十分に安定化されれば、組合せは腐蝕防止剤を含む系における先行技術と比較して驚くほど効果的である。好ましくは酵素は、プロテアーゼ、カルボヒドラーゼ、エステラーゼ、ヒドラーゼ、アミラーゼ、カタラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、インベルターゼ、レバンバイオヒドロラーゼ及びそれらの混合物からなる群から選択される。更に好ましくは、酵素はプロテアーゼ、アミラーゼ又はそれらの混合物である。好ましくは酵素は、プロテアーゼ、カルボヒドラーゼ、エステラーゼ、ヒドラーゼ、アミラーゼ、カタラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、インベルターゼ、及びそれらの混合物からなる群から選択された1種以上の酵素である。好ましくは、プロテアーゼは、使用時に5E-4~10E-3Aug、更に好ましくは1E-3~3E-3Aug、最も好ましくは約2.5E-3Augの活性を供給するのに十分な濃度で使用される。好ましくは、アミラーゼは、使用時に10~1000Nug、更に好ましくは100~500Nug、最も好ましくは約300Nugの活性を提供するのに十分な濃度で使用される。好ましくは、ホウ素化合物は、ホウ砂、ホウ酸、酸化ホウ素、オルトホウ酸塩、メタホウ酸塩、ピロホウ酸塩、過ホウ酸塩、ボロン酸又はそれらの混合物から選択され、好ましくは0.1乃至10の濃度である。ホウ素化合物は、自己分解活性を抑え、輸送及び貯蔵中の変質に対して酵素を安定化するために予め添加されていたが、これまでは腐蝕防止剤、又は殺生剤の効果に対して酵素を保護するために、あるいはそれらの存在下で長時間酵素の活性を保持する目的で、選択された濃度で酵素と組み合わされてはいなかった。適するホウ素化合物は、ホウ酸、酸化ホウ素、オルト、メタ、又はピロホウ酸及び過ホウ酸ナトリウムである。当業者に認められるように、ホウ素はすでに、酵素を自己分解から保護するために、あるいは貯蔵及び輸送中防錆剤として作用するために低濃度で酵素と組み合わされていたが、腐蝕防止剤等の存在下における酵素の活性の損失を防ぐように選択された濃度のホウ素化合物で酵素を予備処理することは実施されていなかった。本発明の好ましい実施態様においては、ホウ素化合物の効果は、ポリオール又はその他のミセル不混和性溶媒のような適する溶媒の添加により増大する。好ましい実施態様においては、ポリオール溶媒を前記ホウ素化合物に添加する。ポリオール溶媒は、好ましくはグリセロール、プロピレングリコール、グリセロール及びプロピレングリコールの混合物、及びその他のミセル不混和性溶媒から選択される。殺生剤は、好ましくは、チアゾール/イミダゾール殺生剤、ニトロパラフィン殺生剤、チアジアジン、ジチオカルバメート、チオシアネート又は塩化第四級アンモニウム又はそれらの混合物から選択される。好ましくは殺生剤は、0.1乃至10、更に好ましくは1乃至10の濃度で使用される。前述のように本発明において使用するのに非常に好ましい殺生剤は、チアゾール/イミダゾール殺生剤特にイソチアゾリン誘導体及びニトロパラフィン殺生剤特に2ブロモ2ニトロプロパン13ジオールから選択される。有用なその他の殺生剤には、限定するわけではないが以下のものが含まれる。35ジメチルテトラヒドロ2H135チアジアジン2チオンのようなチアジアジン、ジメチルジチオカルバミン酸ナトリウムのようなジチオカルバメート、エチレンビスジナトリウム、メチレンビスチオシアネートのようなチオシアネート、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウムのような塩化第四級アンモニウム、塩化ジアルキルメチルベンジルアンモニウムCHG、塩素、次亜塩素酸塩、二酸化塩素、過酸化水素、過酢酸、グルタルアルデヒド、N4ジヒドロキシαオキソベンゼンエタンイミドイルクロライド、1アルキルアミノ3アミノプロパンアセテート、ビススルホン、5クロロ2メチル4イソチアゾリン3オン、2メチル4イソチアゾリン3オン、2ベンゾチアゾール、トリスニトロメタンTN、ブロモクロロジメチルヒダントイン、2クロロ46ビスsトリアジン、ペンタクロロフェネートを有するフェノール類、他のクロロフェノールのナトリウム塩、NNジメチルジチオカルバミン酸カリウム、50、シアノチオイミドカルボン酸、Nメチルジチオカルバミン酸ジナトリウムの混合物、20.3、22ジブロモ3ニトリロプロピオンアミド、20、23ジブロモプロピオン酸ヒドロキシエチル、30、ポリエチレンジクロライド、60、ナトリウムペンタクロロフェネート、次亜塩素酸カルシウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、ヘキサヒドロ13ビスsトリアジン、4モルホリン、44ジモルホリン、ヘキサヒドロ135トリスsトリアジン、ドデシルグアニジンHC1のようなグアニジン、ビス、oフェニルフェノール及びフェノキシエタノール、oベンジルpクロロフェノール。SEBlockによるDisinfectionSterilizationandpreservationpp385389に記載されているようなその他の殺生剤もまた本発明の実施において有用である。しかしながら今日まで試験したもののうち、イソチアゾリン誘導体、ニトロパラフィン及びそれらの組合せが非常に好ましい。本発明の組成物は、好ましくは更に腐蝕防止剤、好ましくは酸化防止剤又は皮膜形成防止剤を含む。第七の面によれば、本発明は、酵素、殺生剤及びホウ素又は含ホウ素化合物を含む、皮膜形成腐蝕防止剤と相溶性の貯蔵安定性組成物を提供する。第八の面によれば、本発明は、1種以上の酵素、腐蝕防止剤、殺生剤及びホウ素又は含ホウ素化合物を含む濃縮物が提供される。本発明による好ましい配合物の実施例には以下のものが含まれる。部ww水1035エトキシ化アルコール010キシレンスルホン酸ナトリウム、40020mピロリドン010ジプロピレングリコールメチルエーテルDPM015CaCl2、5溶液0110ホウ砂0535ジクロロフェニルボロン酸05KathonWT1152ブロモ2ニトロプロパン13ジオール16プロテアーゼAlcalase25L525アミラーゼThermamyl300DL125セルラーゼCarezyme1000L120このうち乾燥タンパク質としての質量は約5.1。このうち乾燥タンパク質としての質量は約3.6。このうち乾燥タンパク質としての質量は約1。本発明による別の好ましい配合物の実施例には以下のものが含まれる。部ww水2050CaCl2、5110ホウ酸11035ジクロロフェニルボロン酸13KathonWT1152ブロモ2ニトロプロパン13ジオール110アミラーゼ115セルラーゼ525リゾチーム015プロテアーゼSavinase16L17更に、ある種の酵素が種々の温度範囲でバイオフィルムを優先的に消化することが見いだされた。低温冷たい又は周囲温度の水におけるバイオフィルムの消化に優れている酵素の例には以下のもが含まれる。プロテアーゼ:Savinase、キモトリプシンセルラーゼ:14βDグルカン4glocanoヒドロラーゼアミラーゼ:amylozyme、ハイジアスターゼリパーゼ:Lリパーゼ、takamineリパーゼ微温湯又はもっと温かいお湯の系に見いだされるような比較的高温においてバイオフィルムを消化することが見いだされたいる酵素の例には以下のものが含まれる。プロテアーゼ:Protinase、Panazymeセルラーゼ:Promalt、Oloclastアミラーゼ:Nervanase、SbozzimanteSPCリパーゼ:Lipozyme本発明を実施するための最良の態様添付データを参照して、本発明を実施例により更に記載しよう。種々の酵素に及ぼす種々の腐蝕防止剤及び種々の殺生剤の影響本発明者により実施された実験は、多くの腐蝕防止剤の存在下では酵素が安定ではないことを示した。クロムを基剤とする腐蝕防止剤を断念し、モリブデン及び無機ホスホン酸塩が段階的に減少してから、完全に有機の腐蝕防止剤例えば、1ヒドロキシエチリデン11ジホスホン酸、スルホネートスチレン/無水マレイン酸コポリマー、ポリアクリレートが工業的標準になった。後者の防止剤群は酵素活性に不利な影響を及ぼす。実験は以下のものを用いて実施した。腐蝕防止剤及び濃度ppm1.モリブデン酸ナトリウム10及び1002.ヒドロキシホスホノ酢酸としてホスホネート100及び10003.塩化亜鉛として亜鉛塩10及び1004.1ヒドロキシエチリデン11ジホスホン酸10及び1005.ポリカルボキシレートコポリマーAcusol44510及び1006.ブチンジオールポリエトキシレートButyne49710及び100殺生剤及び濃度1.5クロロ2メチル4イソチアゾリン3オン2メチル4イソチアゾリン3オンKathonWT2.22ジブロモ3ニトリロプロピオンアミドDowicide43.エチレンビスチオカルバミン酸ジナトリウムSC29574.ジメチルジチオカルバミン酸ナトリウムFreshgard405.ナトリウムペンタクロロペアンテDowicide76.2ブロモ2ニトロプロパン13ジオールMyacideAS全ての殺生剤は5、15及び100ppmで試験した。酵素及び濃度プロテアーゼAlcalase25L25Aug1000倍に希釈アミラーゼTakatherm300LX300kNug1000倍に希釈pH全ての試料のpHは8冷却塔の水の通常のpHに調整した。酵素分析この明細書においては、特に指示がないかぎりプロテアーゼの活性は、Novozyme標準試験法NoB863GBManualProcedureforDeterminationProteolyticActivityinEnzymePreparationsandDetergentsにしたがって評価し、アミラーゼの活性は、Novozyme標準試験法NoB309dGBManualProcedureforDeterminationAlphAmylaseActivityinEnzymePreparationsandDetergentsにより評価した。手順1.Schott瓶中の100mLの蒸留水に腐蝕防止剤又は殺生剤を添加する。2.少量のNaOH及びHClでpHを8に調整する。3.試料を30°Cの湯浴に30分入れる。4.酵素を添加する。5.十分に混合してストップウォッチを開始する。6.60分、2時間、6時間、24時間、48時間で1mLのアリコートをとり、酵素活性を評価する。7.初期活性のとして報告する。結果を表1~10に示す。表中のA0は示された時間に残存する初期活性のである。注表1~10において、A0は示された時間に残存する初期活性のである。アミラーゼ活性分析は、0.03Nugの検出限界を有する3Nugの添加された活性の1。プロテアーゼ活性分析は5E-7Augの検出限界を有する2.5E-5Augの添加された活性の2。nt=試験されずそれ以前の時点の活性が検出限界以下であった場合。本発明による配合物の効果以下の実施例は、本発明による配合物の効果を示し、表11~13に示されるデータが本発明を実証する。試験した腐蝕防止剤及び濃度1.モリブデン酸ナトリウム100ppm2.ヒドロキシホスホノ酢酸としてホスホネート1000ppm3.塩化亜鉛として亜鉛塩100ppm4.1ヒドロキシエチリデン11ジホスホン酸100ppm5.ポリカルボキシレートコポリマーAcusol445100ppm試験した酵素及び濃度アミラーゼTermamyl300300kNug1000倍に希釈pH全ての試料のpHは8冷却塔の水の通常のpHに調整した。手順1.Schott瓶中の100mLの蒸留水に腐蝕防止剤を添加する。2.少量のNaOHでpHを8に調整する。3.30°Cの湯浴に30分入れて温度調整する。4.15ppmのイソチアゾリンKathonWT及び15ppmの2ブロモ2ニトロプロパン13ジオールを添加する。5.酵素を添加する。6.十分に混合してストップウォッチを開始する。7.15分、60分、24時間、48時間で1mLのアリコートをとり、酵素活性を評価する。8.初期活性のとして報告する。試験した本発明による配合物1.Termamyl300L20プロピレングリコール16ホウ砂2グリセロール4Teric1641タンパク質としての乾燥質量酵素の質量の約3.62.Termamyl300L20プロピレングリコール16ホウ砂4グリセロール4Teric16413.Termamyl300L20プロピレングリコール16ホウ砂6グリセロール6蟻酸ナトリウム1結果を表11~13に示す。好ましい実施態様及び先行技術間の比較方法以下の非酸化殺生剤が現在冷却塔に使用されている。1.5クロロ2メチル4イソチアゾリン3オン2メチル4イソチアゾリン3オンKathonWTCalgonH510等2.22ジブロモ3ニトリロプロピオンアミドDowicide43.エチレンビスチオカルバミン酸ジナトリウムCalgon製SC29574.ジメチルジチオカルバミン酸ナトリウムFreshgard40alcobamnmbrogdex555carbons5.ナトリウムペンタクロロペアンテDowicide76.2ブロモ2ニトロプロパン13ジオールMyacideAS全ての殺生剤は100ppmで試験した。試験した酵素及び濃度アミラーゼAlcalase25DXL25Aug1000倍に希釈pH全ての試料のpHは8冷却塔の水の通常のpHに調整した。手順1.Schott瓶中の100mLの蒸留水に殺生剤を添加する。2.少量のNaOHでpHを8に調整する。3.湯浴中で30°Cにする約30分保持する。4.酵素を添加する。5.十分に混合してストップウォッチを開始する。6.30分、2時間、24時間、48時間で1mLのアリコートをとり、酵素活性を評価する。7.初期活性のとして報告する。試験した配合物4.Termamyl300DX20プロピレングリコール16ホウ砂4グリセロール4Teric16415.Termamyl300DX20プロピレングリコール16ホウ砂6グリセロール4蟻酸ナトリウム1結果を表14~15に示す。先行技術に及ぼす腐蝕防止剤の効果殺生剤及び腐蝕防止剤を含む冷却塔水に既知の量の酵素を添加する。腐蝕防止剤及び/又は殺生剤の変性作用に酵素を所定の時間1、2、6、24時間暴露した後、既知の量の細菌/菌類接種材料を冷却水に添加する。このことは、バイオフィルムを乱した結果微生物が導入されるときの冷却塔内の典型的な状態をシミュレートすることである。微生物は、腐蝕防止剤を含む冷却水と酵素の組合せに1時間暴露する。60分後に標準プレート集計技術を用い生存数を数値化する。媒体トリプトン水25mlの瓶中の塩水消毒試験微生物PアエルギノーザaeruginosaATCC15442アエロバクター属levanicumATCC15552ロードツルーラグルチニスRhodotorulaglutinisATCC2527枯草菌ATCC19659調製微生物を3×10mlのトリプトンソーヤ培養液に移す。36°Cにおいて一晩培養する。25mlの消毒した万能瓶の10×3mLのアリコートに培養液を分ける。酵素-プロテアーゼ-Alkalase25DXNovozymesから-アミラーゼ-Termamyl300DXNovozymesから-0.2μのフィルターで濾過したRhodotorulaglutinis細胞培養液からのレバンバイオヒドロラーゼ、730単位mLに対応する濃縮物殺生剤-メチレンビスチオシアネートMBTMerckから-ジメチルジチオカルバメート13エチルビスチオカルバミン酸ジナトリウム15CarbamatePrentissから対照消毒した蒸留水試験手順1.40ppmのホスホン酸亜鉛腐蝕防止剤表中ではciと示されているを添加することによりシミュレートした冷却塔水を調製する。2.6×100mLの消毒した瓶に塩化ナトリウムとして200ppmの塩化物イオン及び硫酸ナトリウムとして200ppmの硫酸塩イオン添加する。所定量の殺生剤を添加する。3.プロテアーゼ及びアミラーゼに関して最終濃度がそれぞれ2.5E-3Aug及び300Nugになるように純粋又は配合された形で酵素を添加する。4.30°Cの湯浴中に瓶を入れる。ストップウォッチを開始する。5.T=1時間において細菌数が~10E6cfumLになるように第一の瓶に接種材料を添加する。6.細菌接種材料を45分間消化する。7.連続希釈法を用いて平板培養することにより生存する細菌数を数値化する。8.酵素を冷却水に1時間暴露した結果を報告する。9.2、4、6及び24時間の暴露時間に関して工程5~8を繰り返す。注:処理方法を差別化するために、45分間の処理中に細菌数が2~3log減少するような濃度で殺生剤を使用する。結果結果を表16に要約する。先行技術実施例4との比較のための本発明による実施例この実施例においては、方法及び物質は実施例4に記載したとおりであった。しかしながら、以下の本発明による酵素配合物を代わりに使用した。6.Alcalase25DXL20Termamyl300DX20プロピレングリコール16ホウ砂45グリセロール47.Alcalase25DXL20Termamyl300DX20プロピレングリコール1635ジクロロフェニルボロン酸2グリセロール4Teric16414種の微生物を用いた結果を表17~20に示す。本発明による水処理剤のレジオネラ菌に対する殺生剤の効果を、腐食が防止された水において本発明によらない酵素/殺生剤の組合せと比較した。レジオネラ菌の取扱は特別な対策を必要とし、開発された試験方法は補遺1に示す。2種類の配合物について試験した。配合物8ホウ素無、比較Alcalase25DXL20Termamyl300DX20配合物9本発明に従ってホウ砂を含むAlcalase25DXL20Termamyl300DX20プロピレングリコール16ホウ砂45グリセロール4水QC結果を表21に示す。以下の配合物は特別な状況で使用するのに好ましい実施態様を表し、本発明を実際に適用する代表的な実施例である。配合物は、示された又はその他の適する使用時に希釈される濃縮物である。配合物10配合物10は、冷却塔の初期例えば3ヶ月毎のような定期的洗浄用の洗浄溶液である。冷却塔の状態に依存して、冷却水1トンあたり100~1000mLの割合で添加する。部ww水119エトキシ化アルコール7キシレンスルホン酸ナトリウム,4015mピロリドン73CaCl25溶液6ホウ砂3KathonWT822ブロモ2ニトロプロパン13ジオール46プロテアーゼAlcalase25L17アミラーゼThermamyl300DL23セルラーゼCarezyme1000L448~72時間通常週末にかけてで循環させる。配合物11配合物11は配合物10と同様であるが、バイオフィルム含量の高い系で使用するためのものである。部ww水299エトキシ化アルコール7キシレンスルホン酸ナトリウム,4015ジプロピレングリコールメチルエーテルDPM12CaCl25溶液135ジクロロフェニルボロン酸15KathonWT112ブロモ2ニトロプロパン13ジオール2プロテアーゼAlcalase25L11アミラーゼThermamyl300DL2セルラーゼCarezyme1000L146配合物12配合物12は、2ブロモ2ニトロプロパン13ジオールの冷却水中の濃度を7~15ppmに保持するために冷却水に継続的に添加少なくとも48時間毎に1回するための維持溶液である。部ww水346CaCl25溶液8ホウ酸61KathonWT132ブロモ2ニトロプロパン13ジオール65アミラーゼ113セルラーゼ19リゾチーム15配合物1312と同様であるが、より古い冷却塔例えば、大気に開放された、有機物をたくさん含む、木材製等用である。部ww水401CaCl25溶液8ホウ酸3535ジクロロフェニルボロン酸06KathonWT132ブロモ2ニトロプロパン13ジオール65アミラーゼ113セルラーゼ12プロテアーゼSavinase16L5結果の考察実施例1の表1~4は、プロテアーゼ及びアミラーゼのような酵素が、低濃度でも高濃度でも幅広い腐蝕防止剤の存在下では多くの場合約2時間以内でそれらの初期活性の約2未満に例えば、これらの実験における検出限界以下に低下し、手頃な濃度では多くの場合1時間以内に実質的に効果がなくなることを示す。3時間後には出発濃度の2を超える場合はない。実施例1の表5~10は、殺生剤が同様に、低濃度及び高濃度の両方の添加後約2~3時間以内に酵素の有効性を初期濃度の1又は2未満に低下させることを示す。実施例2の表11~13は、本発明に従って酵素をホウ素化合物で予備調整すると、市販の有用な濃度の一般的な腐蝕防止剤の存在下でそれらの活性を保持することを示す。いずれの場合も、酵素は24時間の間その活性の少なくとも約40、場合によっては60以上保持する。好ましい実施態様の配合物3の場合には、保持された活性は24時間後に約60乃至約90である。好ましくは、ホウ素化合物は溶媒、特にホウ素の水中における溶解を容易にする溶媒、例えばプロピレングリコールのようなポリオールと組み合わせる。表11~13に示される実施例においては、殺生剤が一般的な用途において使用されるような濃度で冷却塔に導入される。本発明の組成物は、殺生剤単独の使用の商業上可能な代用として、殺生剤単独の先行技術の使用よりずっと低い殺生剤濃度で、イソチアゾリン及び/又はニトロパラフィン殺生剤を酵素とともに同時に添加するのに十分な大量の水の環境中で酵素活性を延長する。実施例3の表14及び15は、試験した数種の市販の殺生剤のうち、イソチアゾリン殺生剤KathonWT-5クロロ2メチル4イソチアゾリン3オン2メチル4イソチアゾリン3オン及びニトロパラフィン殺生剤2ブロモ2ニトロプロパン13が殺生剤として選択された本発明による配合物が、予期せぬことに酵素との組合せにおいて驚くほど優れた結果を提供することを示す。好ましい組合せは、腐蝕防止剤の存在下でも、そして殺生剤の濃度が冷却塔における推奨濃度を10~15倍でも長期間活性を保持する。実施例4表16-実験1は、Pedersonの先行技術の好ましい殺生剤、MBT、22ppmが酵素の不在下で1時間後に少なくとも5log低下させ、24時間後には50以上有効であることを示す。更に、好ましい酵素の存在下であるが、腐蝕防止剤の不在下実験2では、MBTは2時間後には酵素の不在下と同様又はそれ以上の結果を示すが、24時間後にはそうではない。しかしながら、腐蝕防止剤の存在下では、MBTおよびレバンバイオヒドロラーゼの先行技術の組合せは失敗である実験4。腐蝕防止剤の存在は、MBTレバンバイオヒドロラーゼの組合せの有効性を1時間以内ではMBT単独のそれより低下させ実験4、組合せは2時間未満後には1log低下未満の有効性である。このことは、実際には、容易ならぬ酵素活性の調節の問題を創造し、大量の水又は空気調節設備中で使用するのに総合的には不経済な方法となる、酵素の連続添加又は約1時間間隔での繰り返し添加が必要とされることを意味する。これらの結果はPederson自身のデータと一致する。Pedersonの実験腐蝕防止剤を含まない系は、殺生剤を酵素の添加の2時間後に添加した場合には、殺生剤単独より組合せのほうが1log未満改良されることを示すが、Pedersonはこのことについて論評しなかった。実施例5表17は、本発明による配合物が腐蝕防止剤存在下の先行技術の組合せ表16の実験3より有意に有効であることを示す。表17の実験1は、本発明に従って配合された好ましい実施態様が、変性する腐蝕防止剤及び/又は殺生剤の存在下でさせ24時間後に有効性を保持していることを示す。組合せの殺生剤作用は殺生剤単独より有意に良好である。先行技術のMBTレバンバイオヒドロラーゼの組合せでさえ、本発明に従ってホウ素化合物で調整した場合表17の実験4には、24時間後にある程度活性を保持する。しかしながら、冷却塔内で見いだされる条件下では、MBTレバンバイオヒドロラーゼは、試験した本発明に組合せの最低の有効性の中に入る。表18は、アエロバクターレバニカムについて得られた結果表17がPアエルギノーザ細菌の場合に表18にも同様に適用されうることを示す。酵素をホウ素又はホウ素化合物と組み合わせた本発明による組合せは、腐蝕防止剤及び/又は殺生剤の変性作用に対して安定性を増大させた。組み合わせたホウ素及び酵素及び殺生剤の殺生剤作用は、殺生剤単独より有意に良好であるのに対し、1時間後の配合されていない酵素は殺生剤単独と比較して殺生剤作用がほとんど又は全く改良されていない。Pアエルギノーザは殺生剤に対して一層耐性があるので、あらゆる殺生剤の濃度を有意に増大させたことに注目されたい。表19及び20は、それぞれ、ロードツルーラグルチニス酵母菌及び枯草菌の場合にも同様な結果が明らかであることを示す。この場合も、酵素及びホウ素は、腐食剤及び/又は殺生剤の変性作用に対して一層安定である。[ホウ素酵素殺生剤]の組合せの殺菌作用は殺生剤単独より有意に良好である。表21は、腐蝕防止剤で処理されたレジオネラ菌を含む水において、本発明による処理ではレジオネラ菌が4時間後及び少なくとも24時間までは4log減少することを示す。これに対し、腐蝕防止剤の存在下であるがホウ素化合物で予備調整していない同一の酵素及び殺生剤の単純な組合せでは、約2時間を超えると活性が保持されず、6時間後にはレジオネラ菌のlog減少がほとんど検出されなくなる。微温湯の系の汚染除去試験微温湯の系の汚染除去試験は、病院において適する保健省公務員の精密な調査のもとに実施された。実施したところは温度範囲が46.5乃至49.1°Cの微温湯の系であった。処理は、微温湯の出口への全ての通路を6時間の試験期間中塞いで一晩実施した。使用した製品は2液系で、第一の液体は調整した酵素を含み、第二の液体は殺生剤を含んだ。両方の液体を、製品1部に対して200~250部の水の割合で大量の水に添加した。製品は、微温湯の貯蔵タンクを経て回路に投与された。水を浪費しながら、流量が少ないことを確認して全ての蛇口及びシャワーをわずかに開いた。生ぬるい又は比較的温かいお湯の系に見いだされるような、本発明により特に比較的高温でバイオフィルムを消化するのに適することが見いだされている酵素には、ProtinaseTPanazymeのようなプロテアーゼ、PromaltOloclastのようなセルラーゼ、NervanaseSbozzimanteSPCのようなアミラーゼ、及びLipozymeのようなリパーゼが含まれ、これらのうちいずれか又は全てが微温湯の系の汚染除去に適する。水の試料は、試験前に微生物の評価のために微温湯の回路の種々の試料採取点から取った。6時間後、系に投与した製品を消失させるために全ての蛇口及びシャワーを十分に開いた。食物グレードの染料を指示薬として添加し、目で検出できる色の不在が酵素の安全量ppmを示した。水の洗浄完了後に水の試料を取った。次いで微温湯の系の通常の供給を開始し、6日後に再び試料を取った。回収技術は、試料の回収に30秒を要した。全ての水の温度は、前述の範囲である46.5乃至49.1°Cであった。結果は、微温湯の系の有意な汚染除去を示した。前述の結果に基づいて、汚染除去は毎月繰り返されるであろう。冷たい又は周囲温度の水のような比較的低温の系で使用する場合には、以下の酵素が特に適することが見いだされた。Savinaseキモトリプシンのようなプロテアーゼ、14βDグルカン4glocanoヒドロラーゼのようなセルラーゼ、amylozyme、ハイジアスターゼのようなアミラーゼ及びLリパーゼ、takamineリパーゼのようなリパーゼ。熱いお湯の系を洗浄するための高温酵素系、及び冷たい水の系を処理するための低温酵素系を用い、2つの系を一緒に使用しうる。あるいは、水の系全体の温度勾配が保証されるか未知である場合には、定着性バイオフィルムを浮遊させるために同一の系に両方を使用しうる。したがって、要約すると、腐蝕は循環水の系では大きな問題である。微生物の存在もまたこれらの系では大きな問題である。酵素は、現代許容されうる腐蝕防止剤により、また殺生剤により失活する。使用するのに安全な量の殺生剤単独では、定着性及び浮遊性の両方の細菌を殺すのに有効ではない。過去に示唆された殺生剤及び酵素の組合せは、酵素が実質的に1時間未満で失活するため、また安全な使用量では殺生剤が有効である期間より長く必要とされるために、腐蝕防止剤を含む系では有効ではない。非酸化殺生剤の大部分は細胞膜上に吸着されることにより細菌を殺す。殺生剤はまた酵素タンパク質上に吸着され、それにより酵素活性を効果的に失活させる。定着性の微生物がバイオフィルム内にすむ微温湯の系において同様な問題が生ずる。これまで次亜塩素酸塩のような塩素試薬でそのような系を処理することが通常であったが、これらは浮遊性の微生物に対してのみ有効であり、定着性の微生物はバイオフィルム内にそのまま生しうる。本発明者は、配合物に十分にホウ素を添加することにより、あるいはホウ素の濃度を増大させることにより、酵素が24時間の間その活性の少なくとも40を保持する点に達しうること、場合によってはその期間にその活性のほぼ100を保持しうることを見いだした。当業者は、本明細書に開示されている本発明の概念から逸脱することなく、本発明による組成物が例示されている以外の酵素及び殺生剤の組合せを使用しうること、及びその他の濃度で及びその他の添加剤を用いて組成物を配合しうることを認めるであろう。補遺1レジオネラ菌を含む冷却水に及ぼす酵素/殺生剤の組合せの効果を試験する方法種々の酵素配合物を用いて単離及び処理されたバイオフィルム内に存在するレジオネラニューモフィラ菌微生物に対する冷却塔殺菌剤の殺菌効果を測定するために開発された方法。異例の安全対策以下の実験は、病原菌である可能性のあるレジオネラニューモフィラ菌を含む。この試験法は、最小の感染力のある量を超える細菌細胞数を含む。試験は、クラス2層流キャビネットで実施すべきである。原理レジオネラ細菌には3つの形態、すなわち、自由に浮んでいる浮遊性の形態、バイオフィルムとして成長する形態及び原生動物又は藻類に結合している形態で見いだされうる。この試験方法は、酵素処理したバイオフィルムに捕捉されているレジオネラ菌に対する冷却塔殺生剤の有効性を実証する方法の概要を説明する。バイオフィルムは、バイオフィルムをこすりおとし、それをリン酸緩衝液希釈水中に再び懸濁させることにより冷却塔から除去する。酵素配合物を4×100mLのアリコートに調製し、代表するアニオンと組み合わせた腐蝕防止剤を添加する。1時間接触させたのち、1mLの接種材料を添加して酵素溶液により1時間消化させ、10ppmのイソチアゾリンを添加してその後1時間接触させる。プレート集計法により生存するレジオネラ菌を測定する。試験は、2時間、6時間及び24時間冷却塔水と接触させた酵素について繰り返す。材料ペトリ皿培養器36±1°Cピペット及び先端ボルテックスミキサーガラス容器種々の大きさのビーカー25mLの万能瓶14mLのマッカートニー瓶広口瓶、1L、500mL目盛付きピペット、0.1mL、1mL、5mL及び10mL種々の容量のシリンジクラス2層流キャビネット濾過単位装置例えば、SartoriusSM16219又はSM16517濾過単位装置に適合する0.2μmのフィルター脱脂綿を詰めた殺菌したパスツールピペットメスブレードガラス製スプレッダーマクファーランドスタンダード緩衝化木炭酵母菌抽出物寒天BCYEOxoidレジオネラ菌寒天基剤12.5g水450mL12.5gを450mLの希釈水中に懸濁させ、穏やかに沸騰させて完全に溶解させる。1Lの瓶に入れる。121°Cにおいて15分間オートクレーブ処理することにより殺菌する。50°Cに冷却し、無菌でOxoidBCYE助剤SR110A混合物を穏やかに添加し、殺菌したペトリ皿に注ぐ。フィルターパッドを洗浄するための滅菌水10.0mLの蒸留水を万能広口瓶に入れ、121°Cにおいて15分間オートクレーブ処理する。合成冷却塔水以下のものを含む1Lの溶液を調製する。200ppmの硫酸塩イオン200ppmの塩化物イオン100ppmのリン酸亜鉛2Lのガラス製ビーカーに移し、アルミ箔で蓋をする。121°Cにおいて20分間滅菌する。対照のために1Lのリン酸緩衝液液希釈液を2Lのガラス製ビーカーに入れ、アルミ箔で蓋をする。121°Cにおいて20分間滅菌する。リン酸緩衝液原液34.0gのKH2PO4を500mLの蒸留水に溶解させ、1NNaOHでpHを7.2に調整して1Lに希釈する。リン酸緩衝液希釈液1.25mLのリン酸緩衝液原液を1Lの蒸留水に添加する。9mLずつマッカートニー瓶に入れ、121°Cにおいて20分間滅菌する。試験有機物レジオネラニューモフィラ菌NCTC11404レジオネラ菌を成長させた実験室の冷却塔から。注意深く基層からバイオフィルムをこすり落とす。リン酸緩衝化水に懸濁させる。酵素溶液の添加にはこれを使用する。作業技術以下の酵素配合物を試験した。T1Alcalase25DXL20Thermamyl300DX20プロピレングリコール16ホウ砂45グリセロール4水QCT2:非配合酵素一連の8個の125mLの滅菌試料容器の各々に100mLの滅菌蒸留水を添加する。各容器に標識をつける。最初の4個の容器はT1のために使用し、残りの4個はT2のために使用する。T111時間消化後のT1T124時間消化後のT1T166時間消化後のT1T12424時間消化後のT1T211時間消化後のT2T224時間消化後のT2T266時間消化後のT2T22424時間消化後のT2試験される酵素組成物を各容器に添加して、各容器において2.5×E-3Augプロテアーゼ濃度及び300Nugアミラーゼ濃度とする。10ppmのリン酸亜鉛腐蝕防止剤を添加する。タイマーを開始する。以下の時間間隔1時間後に、T11及びT21という標識をつけた容器に1mLのレジオネラ菌懸濁液を添加し、ただちに10mLの懸濁液をレジオネラプレート計数器に取る処理前。1時間消化させる。1時間の消化後に10ppmのイソチアゾリンを添加し、更に1時間放置する。10mLの懸濁液をレジオネラプレート計数器に取る処理後。4時間後に、T12及びT22という標識をつけた処理で前記試験を繰り返す。6時間後に、T16及びT26という標識をつけた処理で前記試験を繰り返す。24時間後に、T124及びT224という標識をつけた処理で前記試験を繰り返す。レジオネラプレート集計得られた各試料について以下の手順を実施する。10mLの試料を0.22μmのフィルターで濾過する。10mLの滅菌水でフィルターを洗浄して殺生剤残留物を洗い流す。無菌でフィルターパッドを除去して、火を通したメスブレードで粉々に切断し、10mLの滅菌蒸留水中に懸濁させる。30秒攪拌して生存細胞を懸濁させる。9mLの滅菌蒸留水中で一連の10倍希釈液を調製する。処理前の試料について、104、103及び102希釈液から0.1mLをBCYE寒天プレートに2回移す。処理後の試料について、104、103、102及び101希釈液から0.1mLをBCYE寒天プレートに2回移す。計算25乃至250のコロニーを含むプレート上でコロニー数を集計する。生存レジオネラ菌は、処理前後の集計から計算し、対数に変換する。なお、本発明の好ましい形態として、例えば以下のものが挙げられる。1水系においてバイオフィルム内の定着性微生物を処理する方法であって、以下の工程、1水中で初期活性を有する1種以上の酵素を系に添加する工程、2前記酵素をホウ素化合物で調整してホウ素調整酵素を形成する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素が前記添加後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持するのに十分な濃度で前記ホウ素化合物が添加されることを特徴とする方法。2バイオフィルム内の定着性微生物を浮遊させる方法であって、1種以上の酵素を水系に添加してバイオフィルムと接触させる工程であって、前記酵素が、ホウ素化合物で調整されてホウ素調整酵素を形成する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素が、前記接触後2時間以上その初期活性の40以上の活性を保持するのに十分な濃度で前記ホウ素化合物が添加され、前記酵素が、前記定着している微生物を浮遊させるのに十分な種類及び濃度であるように選択されることを特徴とする方法。31種以上の殺生剤を添加する工程を更に含み、前記ホウ素調整酵素が、前記酵素又は殺生剤の最後の添加後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持する1又は2記載の方法。4前記バイオフィルムが、循環水系中にある1乃至3のいずれかに記載の方法。5前記バイオフィルムが、微温湯系中にある1乃至4のいずれかに記載の方法。6前記ホウ素調整酵素が、12時間以上前記酵素の初期活性の40以上の活性を保持する1乃至5のいずれかに記載の方法。7前記ホウ素調整酵素が、24時間以上前記酵素の初期活性の75以上の活性を保持する1乃至6のいずれかに記載の方法。8前記ホウ素調整酵素が、系内の水に添加する前に前記酵素及び前記ホウ素化合物を接触させることにより形成される1乃至7のいずれかに記載の方法。9前記ホウ素調整酵素が、系内の水中で前記酵素を前記ホウ素化合物と接触させることにより形成される1乃至7のいずれかに記載の方法。10前記ホウ素調整酵素及び前記殺生剤が、一緒に、実質的に同時に、又は別々に添加される3乃至9のいずれかに記載の方法。11前記酵素、前記含ホウ素化合物及び前記殺生剤が、実質的に連続的に添加される3乃至10のいずれかに記載の方法。121種以上の前記酵素及び前記殺生剤が、水系に断続的に添加される3乃至10のいずれかに記載の方法。13前記酵素が、プロテアーゼ、カルボヒドラーゼ、エステラーゼ、ヒドラーゼ、アミラーゼ、カタラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、インベルターゼ、レバンバイオヒドロラーゼ及びそれらの混合物からなる群から選択される1乃至12のいずれかに記載の方法。14前記酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ又はそれらの混合物である13記載の方法。15前記酵素が、1E-3~3E-3Augの活性で使用されるプロテアーゼである1乃至14のいずれかに記載の方法。16前記酵素が、100~500Nugに対応する濃度で使用されるアミラーゼである1乃至15のいずれかに記載の方法。17前記ホウ素化合物が、ホウ砂、ホウ酸、酸化ホウ素、オルトホウ酸塩、メタホウ酸塩、ピロホウ酸塩、過ホウ酸塩、ボロン酸又はそれらの混合物から選択される1乃至16のいずれかに記載の方法。18前記ホウ素化合物が、0.1乃至10の濃度で存在する1乃至17のいずれかに記載の方法。19前記殺生剤が、チアゾール/イミダゾール殺生剤、ニトロパラフィン殺生剤、チアジアジン、ジチオカルバメート、チオシアネート又は塩化第四級アンモニウム又はそれらの混合物から選択される1乃至18のいずれかに記載の方法。20前記殺生剤の濃度が、1乃至150ppmである1乃至19のいずれかに記載の方法。21前記水系が、1種以上の腐蝕防止剤を含む1乃至20のいずれかに記載の方法。22前記腐蝕防止剤が、酸化腐蝕防止剤又は皮膜形成腐蝕防止剤である21記載の方法。23前記水中の浮遊性細菌及び定着性細菌の合計が、1000cfumL未満に保持されている1乃至22のいずれかに記載の方法。24前記水系中の浮遊性細菌及び定着性細菌の合計が、10cfumL未満に保持されている1乃至23のいずれかに記載の方法。25前記ホウ素調整酵素と組み合わせた前記殺生剤が、レジオネラ微生物、アエロバクターレバニカム、緑膿菌、ロードツルーラグルチニス酵母菌、枯草菌からなる群から選択される有機体の成長を減じるのに効果的である3乃至24のいずれかに記載の方法。26前記ホウ素調整酵素と組み合わせた前記殺生剤が、系内のレジオネラ微生物の成長を減じるのに効果的である25記載の方法。27水の処理方法であって、以下の工程、1水中で初期活性を有する1種以上の酵素を提供する工程、2ホウ素調整酵素を製造するのに十分な濃度のホウ素化合物で前記酵素を調整する工程、31種以上の殺生剤を添加する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素を水と接触させる際に、それが前記水との接触後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持することを特徴とする処理方法。28微生物のすむ微温湯系の汚染除去方法であって、以下の工程、1水中で初期活性を有する1種以上の酵素を系に導入する工程、2ホウ素調整酵素を製造するのに十分な濃度のホウ素化合物で前記酵素を調整する工程、を含み、前記ホウ素調整酵素が、前記導入後2時間以上前記初期活性の40以上の活性を保持することを特徴とする方法。29前記微温湯が、40乃至55°Cである28記載の方法。30前記微温湯が、45乃至50°Cである28又は29記載の方法。31水を処理する組成物であって、1初期活性を有する1種以上の酵素、2前記水との接触後2時間以上前記初期活性の40以上を保持するホウ素調整酵素を形成するために、前記酵素を調整して安定化するのに十分な量のホウ素化合物、及び31種以上の殺生剤、を含むことを特徴とする組成物。32前記酵素が、プロテアーゼ、カルボヒドラーゼ、エステラーゼ、ヒドラーゼ、アミラーゼ、カタラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、インベルターゼ、レバンバイオヒドロラーゼ及びそれらの混合物からなる群から選択される31記載の組成物。33前記酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ又はそれらの混合物である31又は32記載の組成物。34前記プロテアーゼが、使用時に1E-3~3E-3Augの活性を提供するのに十分な濃度で使用される33記載の組成物。35前記アミラーゼが、使用時に100~500Nugの活性を提供するのに十分な濃度で使用される33又は34記載の組成物。36前記ホウ素化合物が、ホウ砂、ホウ酸、酸化ホウ素、オルトホウ酸塩、メタホウ酸塩、ピロホウ酸塩、過ホウ酸塩、ボロン酸又はそれらの混合物から選択される31乃至35のいずれかに記載の組成物。37前記ホウ素化合物が、0.1乃至10の濃度で存在する31乃至35のいずれかに記載の組成物。38前記ホウ素化合物にポリオール溶媒が添加される31乃至37のいずれかに記載の組成物。39前記ポリオール溶媒が、グリセロール、プロピレングリコール、グリセロール及びプロピレングリコールの混合物、及びその他のミセル不混和性溶媒から選択される38記載の組成物。40前記殺生剤が、チアゾール/イミダゾール殺生剤、ニトロパラフィン殺生剤、チアジアジン、ジチオカルバメート、チオシアネート又は塩化第四級アンモニウム又はそれらの混合物から選択される31乃至39のいずれかに記載の組成物。41前記殺生剤が、1乃至10の濃度で使用される31乃至40のいずれかに記載の組成物。42腐蝕防止剤、好ましくは酸化防止剤又は皮膜形成防止剤を更に含む31乃至41のいずれかに記載の組成物。43酵素、殺生剤及び含ホウ素化合物を含む貯蔵安定性組成物であって、前記組成物が、皮膜形成腐蝕防止剤と相溶性であることを特徴とする組成物。441種以上の酵素、腐蝕防止剤、殺生剤及び含ホウ素化合物を含むことを特徴とする濃縮物。"