"3次元培養皮膚細胞を被験物質に曝露する工程;該細胞におけるATF3、GCLM、DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、ZFAND2A、SRXN1及びDNAJA4、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも1の発現を測定する工程;及び測定された該発現に基づいて該被験物質の皮膚感作性を評価する工程、を含む物質の皮膚感作性の評価方法。ATF3、GCLM、DNAJB4及びHSPA6、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも1の発現が測定される、請求項1記載の方法。ATF3、GCLM、DNAJB4及びHSPA6、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも2の発現が測定される、請求項2記載の方法。前記測定された前記発現に基づいて前記被験物質の皮膚感作性を評価する工程が、該測定された該発現のレベルを該被験物質への曝露後と対照物質への曝露後との間で比較して、該被験物質への曝露後の発現レベルが高い場合に該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、請求項1~3のいずれか1項記載の方法。前記測定された前記発現に基づいて前記被験物質の皮膚感作性を評価する工程が、該測定された該発現のレベルを該被験物質への曝露前後で比較して、該被験物質への曝露後の発現レベルが高い場合に該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、請求項1~3のいずれか1項記載の方法。前記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して2倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、請求項4又は5記載の方法。前記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して3倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、請求項4又は5記載の方法。前記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して5倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、請求項4又は5記載の方法。前記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して10倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、請求項4又は5記載の方法。前記3次元培養皮膚細胞が3次元培養表皮細胞である、請求項1~9のいずれか1項記載の方法。前記3次元培養皮膚細胞が3次元培養ヒト由来表皮細胞である、請求項1~9のいずれか1項記載の方法。測定される発現がmRNA発現である、請求項1~11のいずれか1項記載の方法。本発明は、3次元培養皮膚中の遺伝子発現を指標に物質の皮膚感作性をインビトロで評価する方法に関する。本発明者らは、生体の皮膚における物質の皮膚感作性をインビボ試験と同様に精度良く評価することができるインビトロモデルの開発を試みた結果、3次元培養皮膚細胞における特定の遺伝子の発現を指標とすることによって、動物試験の代替法となり得る高精度な物質の皮膚感作性評価試験が可能となることを見出した。すなわち、本発明は以下を提供する。13次元培養皮膚細胞を被験物質に曝露する工程;該細胞におけるATF3、GCLM、DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、ZFAND2A、SRXN1及びDNAJA4、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも1の発現を測定する工程;及び測定された該発現に基づいて該被験物質の皮膚感作性を評価する工程、を含む物質の皮膚感作性の評価方法。2ATF3、GCLM、DNAJB4及びHSPA6、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも1の発現が測定される、1記載の方法。3ATF3、GCLM、DNAJB4及びHSPA6、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも2の発現が測定される、2記載の方法。4上記測定された上記発現に基づいて上記被験物質の皮膚感作性を評価する工程が、該測定された該発現のレベルを該被験物質への曝露後と対照物質への曝露後との間で比較して、該被験物質への曝露後の発現レベルが高い場合に該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、1~3のいずれか1に記載の方法。5上記測定された上記発現に基づいて上記被験物質の皮膚感作性を評価する工程が、該測定された該発現のレベルを該被験物質への曝露前後で比較して、該被験物質への曝露後の発現レベルが高い場合に該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、1~3のいずれか1に記載の方法。6上記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して2倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、4又は5記載の方法。7上記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して3倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、4又は5記載の方法。8上記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して5倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、4又は5記載の方法。9上記被験物質への曝露後の発現レベルが該被験物質への曝露前又は対照物質への曝露後のそれと比較して10倍以上高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択する工程である、4又は5記載の方法。10上記3次元培養皮膚細胞が3次元培養表皮細胞である、1~9のいずれか1に記載の方法。11上記3次元培養皮膚細胞が3次元培養ヒト由来表皮細胞である、1~9のいずれか1に記載の方法。12測定される発現がmRNA発現である、1~11のいずれか1に記載の方法。本発明によれば、高精度且つ動物試験の代替法となり得る、物質の皮膚感作性評価のためのインビトロ試験方法を提供することができる。本明細書において、皮膚感作性物質skinsensitizerとは、化学品の分類および表示に関する世界調和システムTheGloballyHarmonizedSystemforClassificationandLabelingofChemicals:GHSに準拠して定義され、すなわち皮膚への接触によりアレルギー反応を誘発する物質をいう。すなわち、本明細書において、皮膚感作性skinsensitizationとは、皮膚との接触によりその皮膚に炎症やアレルギー等の過剰な免疫応答を誘発し得る性質をいう。本明細書において、皮膚感作性物質及び皮膚感作性は、接触感作性物質contactsensitizer及び接触感作性contactsensitizationとそれぞれ同義に使用され得る。本明細書において、ATF3、GCLM、DNAJB4homologsubfamilyBmember4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、ZFAND2A、SRXN1、及びDNAJA4homologsubfamilyAmember4は、それぞれNCBINationalCenterforBiotechnologyInformationのヌクレオチドデータベース[httpwwwncbinlmnihgovnucleotide]にそのmRNAの配列が登録されているタンパク質である。[登録番号]ATF3:NM001030287、NM001040619、NM001674、GCLM:NM002061、DNAJB4:NM007034、HSPA6:NM002155、HSPA1A:NM005345、HSPH1:NM006644、ZFAND2A:NM182491、SRXN1:NM080725、及びDNAJA4:NM001130182。また、ATF3、GCLM、DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1及びZFAND2Aは、は、それぞれNCBIのヒトのメンデル遺伝データベースOMIMOnlineMendelianInheritanceinManhttpwwwncbinlmnihgovomimに登録されているタンパク質である。[登録番号]ATF3:MIMID603148、GCLM:MIMID601176、DNAJB4:MIMID611327、HSPA6:MIMID140555、HSPA1A:MIMID140550、HSPH1:MIMID610703、ZFAND2A:MIMID610699。DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、DNAJA4は熱ショックタンパク質で分子シャペロンとして機能する。GCLMはグルタチオン生合成に関与する。ZFAND2Aは転写因子である。SRXN1はペルオキシレドキシンの活性化を解して抗酸化反応に関与している。本発明は、物質の皮膚感作性の評価方法を提供する。本発明の方法は、3次元培養皮膚細胞を被験物質に曝露する工程;該細胞におけるATF3、GCLM、DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、ZFAND2A、SRXN1及びDNAJA4、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも1の発現を測定する工程;及び、測定された該発現に基づいて該被験物質の皮膚感作性を評価する工程、を包含する。本発明の方法で用いられる3次元培養皮膚細胞とは、好ましくは3次元培養表皮細胞であり、より好ましくは3次元培養ヒト由来表皮細胞である。このような3次元培養皮膚細胞は、培養系を構築してもよいが、市販されているものを購入することもできる。市販の3次元培養皮膚細胞の例としては、EpiDermTMMatTekCorporation社製、EpiSkinSkinEthic社製、RHESkinEthic社製、LabcyteエピモデルJTEC社製等が挙げられる。3次元培養皮膚細胞の構築は、例えば、特開2000201695や特開200513717に記載の方法に従って、コラーゲンゲルに包埋した繊維芽細胞と表皮細胞とを共培養することや、Ponecらの方法に従って、表皮細胞を気液界面培養することによって行うことができる。また、本発明の方法で用いられる3次元培養皮膚細胞は、分化した表皮細胞を含むものであればよいが、角層を含むものが好ましく、基底層、有棘層、顆粒層及び角層を含むものがより好ましい。本発明の方法に用いられる被験物質としては、特に制限されず、任意の動物、植物、又は微生物に由来する化合物;合成化合物;ならびにそれらの混合物及びそれらを含む組成物等が挙げられる。被験物質の形態も特に制限されず、固体、半固形、ゲル、液体、気体等いずれの形態であってもよいが、液体が好ましい。上記3次元培養皮膚細胞を被験物質に曝露する手段としては、当該分野で公知の手段であればよく、例えば、当該被験物質の細胞培養培地への添加、または細胞への直接的な添加例えば、滴下、塗布、散布、噴霧、パッチ等が挙げられる。被験物質の濃度及び曝露量は、被験物質の形態、化学的性質、細胞毒性、予想される皮膚感作性の強度等に基づいて適宜設定すればよい。好ましくは、適当な濃度に希釈した被験物質の所定量を、37°C、5CO2の条件下で6時間、該細胞に適用する。具体的には、3次元培養皮膚の気層表面に形成された角層部に被験物質を滴下することにより曝露する。単位面積当たりの曝露量は10~40μL/0.6cm2がより好ましい。また適用する被験物質を溶解させる際の溶媒としては、アセトンとオリーブ油の混合物比率は3:1が好ましい、エタノール、水などが好ましい。本発明の方法においては、上記3次元培養皮膚細胞におけるATF3、GCLM、DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、ZFAND2A、SRXN1及びDNAJA4、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも1の発現が測定される。発現は、上記タンパク質及びそれらをコードする遺伝子うちのいずれか1について測定すればよいが、複数例えば任意の2つ、3つ、4つ、若しくは5つ以上について測定してもよい。タンパク質発現と遺伝子発現を組み合わせて測定してもよいが、その場合、同じ種類のタンパク質と遺伝子との組み合わせ例えば、ATF3タンパク質とATF3遺伝子との組み合わせではなく、異なる種類のタンパク質と遺伝子の組み合わせが好ましい。本発明の方法においては、ATF3、GCLM、DNAJB4及びHSPA6、ならびにそれらをコードする遺伝子から選択されるうちの少なくとも1の発現を測定するのが好ましく、これらのうち二つ以上を含む組み合わせがより好ましい。ATF3、GCLM、DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、ZFAND2A、SRXN1及びDNAJA4、ならびにそれらをコードする遺伝子の発現は、当該タンパク質の発現、当該タンパク質をコードするmRNAの発現、又は当該遺伝子のプロモーターの活性化等を指標として測定することができる。測定は、指標とするパラメータ例えば、タンパク質発現、遺伝子又はmRNA発現、プロモーター活性化等の測定方法として当該分野で公知の方法に従って行えばよい。例えば、遺伝子又はmRNA発現の測定方法としては、ドットブロット法、ノーザンブロット法、RT-PCR、リアルタイムRT-PCR、マイクロアレイ、レポーター遺伝子を用いたプロモーター活性や転写活性の蛍光光学的測定レポーターアッセイ等、及びこれらの組み合わせが挙げられる。タンパク質発現の測定方法の例としては、アガロースゲル電気泳動、SDS-PAGE、クロマトグラフィー法、免疫学的測定法例えば、免疫組織化学、ELISA、ウエスタンブロット、免疫沈降等、比色定量法、質量分析、電子顕微鏡観察等、及びこれらの組み合わせが挙げられる。次いで、本発明の方法においては、上記のとおり測定された発現に基づいて、被験物質の皮膚感作性を評価する。評価は、例えば、上記のとおりタンパク質又は遺伝子の発現を測定し、必要に応じて測定値を定量化した後、測定された発現レベルを、被験物質への曝露の前後で、又は被験物質曝露群と被験物質非曝露群若しくは対照物質曝露群との間で、比較することによって行われ得る。あるいは、評価は、上記のとおり測定された発現レベルを、種々の濃度の被験物質間で比較することによって行われ得る。ATF3、GCLM、DNAJB4、HSPA6、HSPA1A、HSPH1、ZFAND2A、SRXN1、DNAJA4、又はそれらをコードする遺伝子の発現レベルに影響を与えた物質を皮膚感作性物質として選択することができる。好ましくは、上記タンパク質又は遺伝子の発現レベルを増強した物質を、皮膚感作性物質として選択する。例えば、本発明の方法においては、上記のとおり測定されたタンパク質又は遺伝子の発現レベルを被験物質への曝露後と対照物質への曝露後との間で比較して、該被験物質への曝露後の発現レベルが対照物質への曝露後に対して高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択することができる。また例えば、本発明の方法においては、上記のとおり測定されたタンパク質又は遺伝子の発現レベルを被験物質への曝露前と曝露後との間で比較して、曝露後の発現レベルが曝露前に対して高い場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択することができる。また例えば、本発明の方法においては、被験物質の濃度を段階的に変えて上記タンパク質又は遺伝子の発現レベルを測定し、より高濃度の被験物質への曝露後により高い発現レベルが観察された場合に、該被験物質を皮膚感作性物質として選択することができる。また、本発明の方法においては、被験物質の濃度を段階的に変えて細胞毒性を測定し、細胞毒性が示されない濃度範囲において、上記タンパク質又は遺伝子の発現レベルを測定するのが好ましい。なお細胞毒性の測定は、LDH漏出を指標とした細胞生存率測定法など当該分野で公知の方法に従って行えばよい。細胞毒性が示されない濃度範囲の具体的な例としては、細胞生存率が50以上の濃度範囲が挙げられる。発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは2倍以上、より好ましくは3倍以上、さらに好ましくは5倍以上、なお好ましくは10倍以上高いことである。あるいは好ましくは、発現レベルが高いとは、統計学的に有意に高いことを意味し得る。例えば、ATF3の場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは5倍以上、より好ましくは10倍以上、さらに好ましくは20倍以上高いことである。また例えば、GCLMの場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは3倍以上、より好ましくは5倍以上、さらに好ましくは10倍以上高いことである。また例えば、DNAJB4の場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは3倍以上、より好ましくは5倍以上、さらに好ましくは8倍以上高いことである。また例えば、HSPA6の場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは4倍以上、より好ましくは20倍以上、さらに好ましくは50倍以上高いことである。また例えば、HSPA1Aの場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは3倍以上、より好ましくは5倍以上、さらに好ましくは10倍以上高いことである。また例えば、HSPH1の場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは3倍以上、より好ましくは5倍以上、さらに好ましくは8倍以上高いことである。また例えば、ZFAND2Aの場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは3倍以上、より好ましくは5倍以上、さらに好ましくは10倍以上高いことである。また例えば、SRXN1の場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは3倍以上、より好ましくは5倍以上、さらに好ましくは8倍以上高いことである。また例えば、DNAJA4の場合、発現レベルが高いとは、被験物質への曝露後の発現レベルが、被験物質への曝露前若しくは対照物質への曝露後のそれと比較して、好ましくは3倍以上、より好ましくは5倍以上、さらに好ましくは8倍以上高いことである。以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。実施例11サンプルの被験物質への曝露3D培養皮膚モデルEpiDermTMMatTekcorporationより入手を、あらかじめ37°Cで温めておいた付属の培地500μLの入った24ウェルプレートに移し、37°CのCO2インキュベーターにて10時間~18時間前培養した。前培養後、新たにあらかじめ37°Cに温めておいた付属の培地200μLの入った24ウェルプレートに組織を移した。被験物質は、アセトンとオリーブ油を3:1の比率v/vで混合した溶媒AOO或いは精製水にて適切な濃度に希釈した。希釈した被験物質10μLを組織全体に広がるように適用し、37°CのCO2インキュベーターにて6時間培養した。被験物質としては、公知の感作性物質:強度extreme感作性物質であるジニトロフルオロベンゼン1Fluoro24dinitrobenzene:DNFB、シグマアルドリッチ社製;中程度moderate感作性物質であるフェニルアセタールアルデヒドPhenylacetaldehyde:PAA、シグマアルドリッチ社製;軽度weak感作性物質であるエチレングリコールジメタクリレートEthyleneglycoldimethacrylate:EGDM、シグマアルドリッチ社製、ならびに非感作性物質である塩化ベンザルコニウムBenzalkoniumchloride:BAC、シグマアルドリッチ社製、及び溶媒対照AOOを用いた。2totalRNAの回収培養後、組織をPBS-800μLで3回洗浄後、組織をピンセットにて剥ぎ取り、1mLのTRIzolInvitrogenに組織を浸漬し破砕した。ホモジナイザーにより細胞を細断し、室温で5分放置後、クロロホルム200μLを添加して激しく混合して、12,000×gで15分間、4°Cにて遠心操作を行った。上層の水層を注意深く分取し、新しいチューブに移した後、等量の70エタノール水を添加して、混合した。混合液はRNAを精製するため、カラムRNeasy,QIAGEN社に添加した。その後、付属のプロトコールに従ってtotalRNA溶液を回収した。3cDNA合成回収したtotalRNA500ngからcDNAを合成した。cDNA合成にはSuperscriptTMIIIInvitrogen社製を用い、手順はキットに付属されているプロトコールに従った。まず始めに、RNA溶液とOligodT20プライマー、dNTPミックスをあらかじめ混和し、65°Cにて5分間反応させた。サンプルを2分以上氷冷後、反応バッファー、MgCl2、DTT、逆転写酵素、RNaseinhibitorを加え、50°Cで50分反応後、85°Cで5分間反応させた。その後、RNAを分解するためRNaseHを添加し、37°Cにて20分反応を行った。反応後の溶液をcDNA溶液とし、リアルタイム発現解析に用いた。4リアルタイムPCR解析3で調製したcDNA溶液を精製水にて2倍希釈し、そのうち2μLをリアルタイムPCRに供した。標的遺伝子としては、HSPA1A遺伝子、HSPA6遺伝子、ATF3遺伝子、HSPH1遺伝子、GCLM遺伝子、DNAJA4遺伝子、DNAJB4遺伝子、ZFAND2A遺伝子、及びSRXN1遺伝子の9遺伝子、ならびに内在性コントロールとしてGAPDH遺伝子を用いた。増幅用プローブ及びプライマーには、標的遺伝子特異的なリアルタイムPCR用プローブセットTaqMan登録商標GeneExpressionAssayAppliedBiosystems社製を用いたHSPA1A:Hs00271229s1、HSPA6:Hs00275682s1,GCLM:Hs00978073m1、ATF3:Hs00231069m1、HSPH1:Hs00971475m1、DNAJA4:Hs00388055m1、DNAJB4:Hs00199826m1、ZFAND2A:Hs00380809m1、SRXN1:Hs00607800m1、GAPDH:Hs99999905m1。1サンプルにつき、cDNA溶液2μL、プローブセット1μL、TaqMan登録商標UniversalPCRMasterMixAppliedBiosystems社製10μL、精製水7μLを専用の96ウェルプレートにて混和し、AppliedBiosystems7500FastリアルタイムPCRシステムAppliedBiosystems社製にてリアルタイムPCR解析を行った。発現量の比較はΔΔCt法にて相対比較を行った。即ち、標的遺伝子と内在性コントロールのCt値の差を算出した後ΔCt、被験物質処理群のΔCtから溶媒対照群のΔCtを引くことによりΔΔCt値を算出した。最後に2を産出することにより、溶媒対照群の発現を1としたときの被験物質処理群の相対発現量を求めた。5LDH漏出を指標とした細胞生存率測定被験物質を曝露した後の細胞生存率は、タカラバイオ社製のLDHCytotoxicityDetectionKitを用いて測定した。具体的には、組織を採取した後に残った培養液を回収した。一方LDHcytotoxicityDetectionkitに含まれるCatalyst溶液とDyeSolutionを45:1で混和しこれをReactionmixとした。培養液とReactionmixを50Lずつ混合し、室温、遮光にて30分反応させて後、490nmの吸光度を測定した。尚参照波長として650nmの吸光度も測定した。以下のような数式から、各被験物質暴露群の細胞生存率を算出した。細胞生存率=100被験物質処理群の吸光度-未処理群の吸光度/5ドデシル硫酸ナトリウム処理群の吸光度-未処理群の吸光度×1005結果表1に被験物質曝露後の細胞の生存率を示す。データは3回の測定の平均及び標準偏差を示す。何れの物質の場合も、高濃度の曝露により細胞の生存率が低下し、高濃度では細胞毒性が現れることが分かった。表1記載の被験物質への曝露による各遺伝子の発現の変化を調べた。被験物質の細胞毒性による影響を除外するため、表1記載の濃度のうち50以上の細胞生存率が維持された濃度についての遺伝子発現を調べた。結果を表2及び図2に示す。データは3回の測定の平均及び標準偏差を示す。何れの遺伝子も、感作性物質に対して濃度依存的に発現を増加させる傾向を有する一方で、非感作性物質に対しては濃度による発現の変化は見られなかった。すなわち、これらの遺伝子は皮膚感作性物質に応答して発現を増加させている。実施例2水不溶性物質曝露評価実施例1と同様に、3D培養皮膚モデルEpiDermTMMatTekcorporationより入手に被験物質を曝露した。被験物質としては、感作性の有無が既知で、且つ水に不溶の物質を選定した。感作性物質としては、強度Strong感作性物質であるベータプロピオラクトンbetapropiolactone:BPL、東京化成社製、中程度moderate感作性物質であるパルミトイルクロリドpalmitoylchloridePalC、シグマアルドリッチ社製、非感作性物質としてはヘキサンhexaneシグマアルドリッチ社製を用いた。いずれの被験物質も、AOOを溶媒として適切な濃度に希釈し、希釈した被験物質10μLを組織全体に広がるように適用して、37°CのCO2インキュベーターにて6時間培養した。実施例1と同様に、但し、HSPA1A遺伝子、HSPA6遺伝子、ATF3遺伝子、HSPH1遺伝子の4遺伝子を標的遺伝子として、totalRNAの抽出、cDNAの合成を行い、リアルタイムPCRにて発現解析を行った。表3に被験物質曝露後の細胞の生存率を、表4及び図3に被験物質への曝露による各遺伝子の発現の変化を示す。データは2回の測定の平均を示す。何れの遺伝子も、感作性物質に対して発現を増加させる傾向を有する一方で、非感作性物質に対しては発現の変化は見られなかった。水に不溶性であり、高濃度での暴露が必要な物質であっても本発明の方法で感作性の評価が可能であることが示された。"