式I:A-B-C-D-E-F......I[式中、Aは、アミノ酸cまたはpのいずれかであり、Bは、アミノ酸pまたはqのいずれかであり、Cは、アミノ酸yであり、Dは、アミノ酸aまたはtのいずれかであり、Eは、アミノ酸qまたはwのいずれかであり、Fは、アミノ酸eである]を有するヘキサペプチド、その薬学上許容される塩、誘導体または立体異性体を含むことを特徴とする化合物。配列番号1~19から選択されるいずれかの配列である請求項1に記載の化合物。ヘキサペプチドの配列が、配列番号10の配列である請求項1または2に記載の化合物。ヘキサペプチドの配列が、配列番号5、11、12、15から選択されるいずれかである請求項1または2に記載の化合物。式Iの一部を形成する前記アミノ酸が、L-アミノ酸、D-アミノ酸またはそれらの混合物である請求項1ないし4のいずれかに記載の化合物。ヘキサペプチドの配列が、ダイレクト配列またはレトロインベルソ配列であるペプチドを含む請求項1ないし5のいずれかに記載の化合物。請求項1ないし6のいずれかに記載の化合物を含有することを特徴とする医薬。請求項1ないし6のいずれかに記載の化合物を含有し、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAからなる群に含まれる疾患の予防及び/または治療において使用されることを特徴とする医薬。病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAからなる群に含まれる疾患の予防及び/または治療のために設計された医薬組成物の製造のために用いることを特徴とする請求項1ないし6のいずれかに記載の化合物の使用。請求項1ないし6のいずれかに記載の少なくとも1種の化合物を含むことを特徴とする医薬組成物。病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAからなる群に含まれる疾患の予防及び/または治療のための方法であって、請求項1ないし6のいずれかに記載の少なくとも1種の化合物、または請求項10に記載の医薬組成物の治療上有効な量を患者に投与することを特徴とする方法。本発明者らは、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAなどを予防または治療するための治療可能性を有する化合物を同定するための方法を行った。その方法は、好ましくは、ショウジョウバエ疾患モデルにおける、ヘキサペプチド化学ライブラリーのinvivoスクリーニング、及びその病態を元の状態に戻す化合物の選択を含む。分子量が大きすぎると化合物の細胞吸収が制限されるため、潜在的治療薬の探索に用いる分子サイズは考慮すべき重要な側面である。より活性の高い化合物を生み出すための分子の最適化は、通常、その最終サイズの増大を伴う。しかしながら、分子量が1000より大きくなると、そのバイオアベイラビリティが低下することにより分子の治療可能性が下がるので、小さな化合物から出発することが必要となる。従って、現在商品化されている薬物の80は分子量が450未満である。アミノ酸の平均分子量は約135Daである。そのため、ヘキサペプチドのおよそのサイズは810Da前後である。6個を越えるアミノ酸によって形成されるペプチドライブラリーのスクリーニングでは非常に大きな分子になる。他方、ジ-、トリ-、テトラ-及びペンタペプチドのコレクションが存在するが、分子を構成するアミノ酸の数が増えると、デコンボリューション中により多くの定義されたペプチドがもたらされ、それによって活性のある化合物を発見する確率が高まる。480のCTGリピートCTG480を発現する、非特許文献2に記載されているショウジョウバエモデルが示す表現型は成熟蛹期で致死性表現型に至るが、Mblのレベルに応答し、化学修飾を受けやすいことから、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAなどを予防または治療するための治療可能性を有する化合物の系統的探索にこのモデルが好適となることが見出された。本発明は、位置スキャニング形式でのコンビナトリアルペプチド化学ライブラリーのスクリーニングで始まる。この化学ライブラリーは120個のバイアルで構成され、各バイアルは、特定の位置において単一のアミノ酸を共有し残り全てが異なるヘキサペプチドの混合物からなる。そのため、有望なバイアルが検出されると、活性アミノ酸が所定位置で同定される。アッセイした各位置バイアルにおいて最も活性が高いアミノ酸を組み合わせることはデコンボリューションとして知られている。本発明の好ましい実施形態では、体内でのペプチドの平均寿命を引き延ばすために、本発明において用いられる化学ライブラリーのペプチドは、腸内プロテアーゼによって認識されず分解を受けにくい、天然アミノ酸のD-立体異性体で構成した。よって、本発明は、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピートまたはAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAなどの予防及び/または治療のための、ショウジョウバエ及びマウスにおいて検証されたinvivo治療可能性を有するヘキサペプチドを含む化合物に関する。本発明の化合物の作用機序は、技術の現状において公知の化合物によってもたらされるものよりも効果的であるが、これは、本発明の化合物が、前記リピートを有する毒性フラグメントによって形成された二本鎖ヘアピンループに結合して脱構造化することが可能であるか、または伸長を有するRNAを一本鎖構造で維持することが可能であり、それによって、CUGヘアピンループとの結合によって病理学的表現型をもたらすか、または強める可能性もある任意の他の分子とMBNLの異常な結合または隔離が妨げられるためである。詳しくは、本発明では、式IA-B-C-D-E-Fを有するペプチドを含む化合物、またはその薬学上許容される立体異性体、混合物、塩もしくは模倣ペプチドをアッセイした。以下に、式Iの位置A~Fのそれぞれの部分であり得るアミノ酸を定義する。なお、これらのアミノ酸は、天然アミノ酸の立体異性体を表すために通常用いられる三文字コード及び小文字コードの両方を用いて呼称する。Aは、アミノ酸cyscまたはpropであってよく、Bは、アミノ酸propまたはglnqであってよく、Cは、アミノ酸tyryであってよく、Dは、アミノ酸alaaまたはthrtであってよく、Eは、アミノ酸glnqまたはtrpwであってよく;かつFは、アミノ酸glueである。好ましい実施形態では、本発明のペプチドの一部であるアミノ酸は、腸内プロテアーゼによって認識されず分解を受けにくいD-アミノ酸である。しかしながら、実施例で示すように、L-アミノ酸からなるペプチドも活性を示す。本発明において、模倣ペプチドとは、式Iを有するペプチドの配列と相補的、相同かつ/または等価な配列を特徴とするペプチド有機分子を意味すると理解される。本発明の化合物はまた、一般式Iを有するペプチドの相補的、相同かつ/または等価な機能的配列も含む。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、一般式Iを有するペプチドの配列と少なくとも80同一または相同である相同配列を含む。さらに、本発明の化合物は、式Iを有するものの化学的類似体であるペプチド、誘導環状ペプチド、ダイマー及び/またはマルチマーを含み得る。本発明において示されるように、上述のペプチドを含む化合物は、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピートまたはAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAなどの予防及び/または治療において用い得る。配列番号1~16の配列に相当するヘキサペプチドを前記疾患の治療について試験し、ヘキサペプチドp10配列番号10が、上述のショウジョウバエモデルにおいて、脳及び筋肉の両方で、どちらの場合でも用量依存的に毒性を元の状態に戻したことから、とりわけ好ましかった。さらに、p10を、そのレトロインベルソ配列を含む配列を有するペプチドの内因的発現により、モデルのハエの眼及び筋肉における表現型は元の状態に戻り、それによって、CTGリピートの毒性に対するp10及びその誘導体の作用が確認される。アラニンスキャニングの結果、ならびにトランスジェニックハエの作出により、p10の配列内の全てのアミノ酸がその活性に必要であること、そして活性がその残基の側鎖にあることが示された。p10は、invitroでCUGリピートと結合し、ヘアピンループを展開する。この結合は、ペプチド配列に依存し、リピートの数が増えると多くなる。DM1モデルマウスにおけるp10の筋肉内注射により、筋肉転写物のスプライシング異常だけでなく、組織学的レベルでの異常も元の状態に戻った。この作用は全身性であり、1回の注射の後少なくとも4週間維持された。上述のように、p10は、試験したもののうち最も効果的なものであることから、本発明の好ましい化合物であるが、本発明は、式Iの範囲内に含まれる他の化合物、例えば、p11、p5、p12及びp15などもまた、毒性CUG転写物の存在下で異なる程度の特異性及び効力を示すことも示している実施例16及び図29参照。従って、本発明の第1の態様は、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAなどの予防及び/または治療において用いられる、式Iを有するヘキサペプチドを含む化合物、またはそれらの模倣ペプチドに関する。本発明の第2の態様は、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2FXTAS、HD及びFAなどの予防及び/または治療のために設計された医薬組成物の製造のための前記化合物の使用に関する。本発明において開示される化合物は、生薬開発の技術の現状における知識に従って、ヒト患者または動物において有効成分として用いることができ、処方物に調製し、かつ/または投与することができる。よって、本発明の第3の態様は、本発明のペプチドの少なくとも1種を少なくとも別の有効成分と組み合わせて含む医薬組成物に関する。前記組成物はまた、例えば、前記有効成分の体内吸収またはその活性化に寄与する、不活性物質として有効成分とともに加えられる少なくとも1種の賦形剤も含み得る。前記賦形剤は、前記組成物の結合成分、例えば、デンプン、糖またはセルロースなど;増量剤、例えば、植物性セルロース、第二リン酸カルシウム、ベニバナなど;崩壊剤;滑沢剤、例えば、タルク、シリカまたはステロイド脂肪など;コーティング剤;甘味剤;香味剤;着色剤などの維持のために設計され得る。前記組成物は、有効成分をその治療標的に到達させるのに有用な任意の投与経路によって、例えば、消化経路経口、舌下、胃腸または直腸、非経口経路皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、脊髄内、腹腔内、皮内または関節内、呼吸経路または局所経路によって投与することができる。本発明のもう1つの態様は、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2、FXTAS、HD及びFAなどの予防及び/または治療のための方法に関し、その方法は、本発明のヘキサペプチドの少なくとも1種を含む医薬組成物の治療上有効な量を患者に投与することを含む。本発明において、治療上有効な量とは、病因が、CUGリピート、CCUGリピート、CGGリピート、CAGリピート及びAAGリピートを含む毒性転写物の存在に基づく疾患、例えば、DM1、SCA8、DM2及びSCA8などに関連する病態を予防または治療することが可能な量を意味すると理解される。本発明では、ショウジョウバエDM1モデルにおいて40μMより高く250μMより低いp10濃度、好ましくは70.4μMで有望な結果が見られた。以下に、本発明において行った実施例を示して得られた結果を例示するが、それらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。コンビナトリアルヘキサペプチド化学ライブラリーのスクリーニング:各化学ライブラリーバイアルは、特定の位置において単一のアミノ酸を共有し残りが異なる250万のペプチドの混合物からなる図1A。よって、占め得る20のアミノ酸によって定義される6つの位置の組合せによって、計5千万の異なる配列に加えてこの化学ライブラリーを構成する120のバイアルが得られる。位置スキャニングコンビナトリアル化学ライブラリーの使用は、その分子の各位置が残りの位置と独立にアッセイされ、その結果、6つのヘキサペプチド位置のそれぞれについて最も良い候補アミノ酸を特定することが可能となるという原理に基づく。よって、このスクリーニングの結果を読み取ることによって、各位置に関して最も活性の高いアミノ酸が得られた。次に、それらの組合せを基に、特定の配列のペプチドを合成しデコンボリューションとして知られる図1B、これらの分子を再びアッセイした。化学ライブラリーを構成する120のバイアルを個々に、80μM濃度の103Y-Gal4の制御下で480CTGを発現させることによって起こる蛹の致死性表現型に関してアッセイした。これらの結果の統計分析を行ったところ、計28の有望なバイアルp<0.05;全体の23.3が明らかになり、そのそれぞれは特定の位置に活性なアミノ酸を示す。このように、ヘキサペプチドの位置O1、O2、O3、O4、O5及びO6に対してそれぞれ計6、3、6、4、2及び7つの活性アミノ酸が得られた図2A。デコンボリューションを行うために、生物学的アッセイにおけるそれらの活性の程度に基づいて、これら28個のアミノ酸から10個を選択した図2A。最後に、定義されたヘキサペプチドの合成を行うために、可能性がある組合せのうち16の配列を選択した図2B。これらの16のペプチドの選択は、類似の位置にある活性アミノ酸の物理的特性と化学的特性の間の冗長な基準に基づいた。16の定義されたヘキサペプチドを最大可能濃度で、それらが溶解したDMSOの割合の関数としてアッセイした。p10は、80μM濃度でDMSOを用いた対照に比べて、誕生した雌の数に有意な増加を示した。表1は、本発明のペプチドの活性を示す。はp値<0.05を示す。-は、対照チューブでも試験チューブでも雌が誕生しなかったことを示す。p10の効果を確認するために、以下の濃度:20μM、40μM、80μM、125μM、250μMで用量応答アッセイを行った図3。p10は20μM及び40μMでは活性を示さなかったが、80μM雌の数は対照より1.43倍多い及び125μM雌の数は対照より1.47倍多いでは活性が高まった。非線形検定によってデータ解析を行ったところ、この表現型では、p10の有効用量50ED50は70.4μMであることが明らかになった。250μMでは、おそらくは高濃度でのペプチドの毒性作用のために、ペプチドの活性は低下した。p10の毒性試験:p10の毒性を分析するために、自家製栄養培地で、野生型遺伝子型OrRを有するハエに対する効果を試験した。この食餌においてハエが耐用性を示し得るDMSOの最大値は知られていないので、胚期からかまたはL1幼虫期からかのいずれかでそれらの個体を漸増濃度の溶媒に曝すことからなる第1の実験を行った。自家製食餌中のDMSOに対する耐用性は、Sigmaから供給されているインスタント栄養培地で測定されたものの3~4倍程度高いことが判明した0.1に対して0.3~0.4、図4。胚期からDMSOで処置した個体で得られた生存結果は、おそらくは選択された胚の中に無精卵が存在したために、極めて高い変動性を示した図4A。幼虫期から処置した個体は、はるかに均一な挙動を示した図4B。よって、L1幼虫に漸増濃度のp10を与えることとし、蛹期及び成虫期に達した個体を数えた。p10は、アッセイしたどの濃度でも、どの発達段階でも毒性は無く67.5μM、125μM、250μM、500μM及び1mM;各場合、nは150;図4C、結論として、図3に示される場合において、遺伝子型依存的な毒性作用があると言える。ペプチド配列における各アミノ酸の妥当性試験:p10の各残基のCTG480に対する活性への寄与を調べるために、アラニンスキャニング実験を行った。これらの実験はこのペプチドの各アミノ酸をアラニンで置換し、残りのアミノ酸を保持することに基づく。アラニンは小型のアミノ酸であり、一般に、あまり大きな活性がないことから、このタイプの試験に用いられる。各アラニン置換によって個々のアミノ酸の寄与を調べられることから、この実験は、一方でp10が最適化を受け得るかどうかを評価すること置換がその分子の効力を高める場合、またはどのアミノ酸がその機能に重要か決定すること置換がその活性を低下させる場合を可能とする。p10の配列は5種類の置換が可能であり、そのため、5つの新規なヘキサペプチドを合成し、これらを103Y-Gal4;UAS-CTG480/ハエ、市販の食餌で致死性表現型に関してアッセイした。それらは全て元の分子よりも低い活性を示し、このことは、この機能アッセイにおいてp10の配列中のアミノ酸は全て、このペプチドの最終的な活性に必要であることを示す図5。他の組織におけるp10の活性の確認p10は間接飛翔筋において、CTG480によって起こる組織学的異常を改善する:DM1に特徴的な主な症状は筋肉に影響を及ぼすので、モデルハエにおいてこの組織に対するp10の効果を検討することにした。ミオシン重鎖プロモーターMhc-Gal4系統の制御下でのCTG480の発現は、間接飛翔筋IFMに組織学的レベルでの異常をきたし、これには筋繊維の喪失及び進行性の退化が含まれる。これらの異常はその機能に影響を及ぼし、ハエは飛翔できなくなる。ペプチドp10を、自家製栄養培地にて、BenzerBenzer1973非特許文献3により開発されたシリンダー落下法を用いて飛翔欠如表現型に関してアッセイした。DMSOを用いた対照nは55に比べてハエの飛翔能に変化は見られなかったアッセイ濃度は62.5μM及び125μM;それぞれnは117及び77。しかしながら、3~4日齢のモデルハエの胸部断面の顕微鏡分析では、筋肉に組織学的レベルでの改善が明らかになった図6。ハエの飛翔能はIFM筋節の構造変換及び代謝変化に極めて敏感であることから、このことは見られた改善がなぜ機能的改善をもたらさなかったという理由となり得る。この知見を確認するため、ならびに見られた効果を定量するために、p10に対して以下の濃度:62.5μM、125μM、250μM及び500μMで用量応答アッセイを行い、10日齢のハエで準超薄組織切片を作製した図7A~E。処置区のハエにおいて筋肉面積を定量したところ、有意な用量依存的改善が明らかになった図7F。これらの結果はまた、p10は脳及び筋肉の双方で活性があることから、このp10の効果は組織特異的因子とは無関係であることも示す。しかしながら、500μMでは、これらの筋肉は縮小を示し、ハエの生存力は低下した。p10を含むL-アミノ酸ペプチドの内因的発現はCTGリピートによって起こる表現型を抑制する:p10の投与は、CTG480によって起こる表現型を少なくとも部分的に抑制した。本発明において最初に行ったこれらの実験では、p10は食餌に加えられたので、多くの分子がどのように最終的に細胞に到達したのかを特定することはできなかった。p10の投与を厳密に制御し、このペプチドがCUG480転写物と同じ組織に同時に存在することを保証するために、Gal4/UAS系を用い、内因的かつ制御された様式でp10を発現することができるトランスジェニックハエを作出した。このようにして、全てp10に相当する配列番号10の配列に基づくが図9、ショウジョウバエにおけるコドン使用頻度傾向すなわち、同義部位においてG、特にCの使用を好む;PowellMoriyama1997非特許文献4を考慮し、配列番号10の配列に開始メチオニンならびに3つのスペーサーグリシンを付加した種々のペプチドをコードした、配列番号17~19を有する3つの異なる導入遺伝子p17~p19を設計した。さらに、導入遺伝子の発現を増強するために、ATC開始コドンの上流に、Kozak配列を含んだショウジョウバエのact5C遺伝子の5’UTRの21個のヌクレオチドを付加した。p17は、配列番号10のそのままのペプチド配列を含んだ。上記に述べたように、このヘキサペプチド化学ライブラリーのペプチドはD-アミノ酸からなる。D-型右旋性のアミノ酸はL-型左旋性の立体異性体であり、細胞ではL-アミノ酸だけが合成され、タンパク質に組み込まれる。結果として、p10の側鎖の配置がその機能に重要であるならば、p17がL-アミノ酸からショウジョウバエにより合成される場合には、その機能は失われる。このため、配列番号10のペプチド配列が逆転して逆ペプチドとなった構築物p18非特許文献5、6を作出することにした。これらの導入遺伝子を作出した時点で、文献に記載されている最小の構築物は20を越えるアミノ酸を有するペプチドをコードするものであったが、これはペプチドp17及びp1810個のアミノ酸しか持たないの大きさの2倍である。このため、ペプチドp17とp18の構築物を合わせて19個のアミノ酸を有するペプチドとした構築物p19を作出した。これら3つの構築物をショウジョウバエ胚の生殖細胞系統の前駆体にマイクロインジェクションし、各導入遺伝子に対して10系統のトランスジェニックハエを得た。得られたトランスジェニックハエを、本発明に際して作出された、GMR-Gal4UAS-CTG480/CyO及びMhc-Gal4UAS-CTG480/TM6b組換えハエ系統それぞれ眼及び筋肉においてCTGリピートの発現を指令したと交配させた。sev-Gal4UAS-CTG480/ハエの場合と同様に、成虫GMR-Gal4UAS-CTG480/UAS-GFPハエは著しい粗面眼の表現型を示した。19°C及び21°CでのCTG480とp18またはp19p17はこの限りでないの同時発現は、対照個体よりも目に見えて粗面度の低い眼を持つハエをもたらした図11;図10B~C及びE~F。これらの結果から、p10の配列を逆向きに含むL-アミノ酸ペプチドは、これらのリピートにより誘発される表現型を抑制し得ることが確認され、ペプチドp18及びp19の発現がCTG480の毒性を改変することから、これらのペプチドが翻訳され、短いにもかかわらず活性があったことが示される。しかしながら、25°C及び29°Cではこれとは反対の減少が起こった。25°Cでは、p18またはp19の内因的発現はCTGリピートの毒性を増大させ、眼の縮小、色素沈着の欠如及び個眼の劇的な癒着をもたらした図10H~I。29°Cでは、GMR-Gal4UAS-CTG480/CyOハエとUAS-p18ハエまたはUAS-p19ハエとの交配からは、CyOバランサーを持たない後代は生まれなかったが、このことはp10が前記の温度でGMR-Gal4UAS-CTG480個体の生存力を引き下げた。25°C及び29°Cにおいてp18及びp19単独の発現はいずれの表現型も生じなかったことは注目に値する図10G。温度変化がCTG480導入遺伝子とペプチドp17~p19の発現に異なる影響を及ぼすことを考えれば、ペプチドp17~p19はゲノムの異なる領域に挿入されるので、到達されるべきペプチド量とリピート量の間の関係が存在する可能性がり、その後、p10が毒性となる。重要なことに、アッセイされたp18導入遺伝子を有する全系統UAS-p18すなわち、5系統及びp19導入遺伝子を有する3系統UAS-p19のうち1系統は、GMR-Gal4UAS-CTG480ハエの表現型を改善したが、アッセイした構築物p17の5系統UAS-p17にそのような系統は無かった。このことは、p10のアミノ酸の側鎖の配向がその活性に不可欠な役割を果たすということを示す。25°C、Mhc-Gal4系統でのCTG480とp18またはp19の同時発現はまた、羽化したばかりの成虫においてIFMの組織学的異常を抑制し、筋肉パッケージの大きさを増した図12。このことにより、CTG480に対するp10の効果が確認される。ここでもまた、p18及びp19導入遺伝子を有する系統だけが表現型を改善した。p10の作用機序の研究:invivoで得られた結果は、CTGリピートの毒性に対するp10の効果を示した。さらに、図13は、いかにしてp10が細胞に対してその効果を発揮し得るのかを概説するいくつかの仮説を示す。まず、p10は、Gal4/UAS系に干渉するかまたは毒性RNAの安定性を低下させるかのいずれかによって、CUG480転写物のレベルに影響を及ぼし得る図13A。他方、p10はCUGリピートと結合して、それにより隔離されているMblなどの核因子を放出することができる。このようにして、前記タンパク質は再びそれらの正常な機能を遂行することができる図13B。p10はまた、CUGリピートと結合して、毒性の二本鎖ヘアピンループを形成するような折り畳みを防ぐこともできる図13C。最後に、p10は、これらのリピートによって起こった変更の下流にある、例えばMblの拮抗薬を阻害し、その結果としてこれらのタンパク質の機能の欠損を補完する他のタンパク質または転写物に作用し得る図13D。提案されている各仮説を検証するために、分子レベルで、またinvitroで、下記の実施例に説明される複数の実験を行うことにした。p10はCTG480の発現レベルに影響を及ぼさない:p10がCTG480の発現に影響を及ぼしたかどうかを調べるために、2つの異なる戦略を用いた。第一に、Mhc-Gal4/;UAS-ルシフェラーゼ/ハエに、自家製栄養培地中、250μMのペプチドを与えた。p10は光放射レベルに若干の低下を生じた。しかしながら、この違いはDMSOを用いた対照に対して有意ではなくα=0.05、T検定;図14、このことから、このペプチドは非特異的にGal4/UAS系に影響を及ぼすのではなかったことが示される。しかしながら、対照ハエの食餌にDMSO単独が存在する場合には、ルシフェラーゼタンパク質レベルの上昇が起こった。これらの結果は、この溶媒が、おそらくは位置依存的多様性の抑制と呼ばれる効果のために、この導入遺伝子の発現に影響を及ぼす可能性がある。第二に、p10を種々の濃度で与えたMhc-Gal4/;UAS-CTG/ハエで始め、RT-PCRにより、p10がCUG480転写物のレベルに特異的に影響を及ぼしたかどうかを判定した。PCR反応において得られたバンドの強度を定量した後、いずれの濃度においてもCUG480のレベルに有意な違いは検出されなかったが図15、このことは、p10が転写物の量に影響を及ぼさなかったことを示す。p10とMblの間の配列類似性の研究:MEGA配列比較プログラムを用いたバイオコンピューター解析により、p10のアミノ酸が、Muscleblindタンパク質の第1ジンクフィンガーこのドメインを介して該タンパク質はRNAと結合するの保存された配列の逆配列と部分的に一致することが判明した図16。このアライメントにおいて、p10のトリプトファンはMblのフェニルアラニン芳香族、非極性及び疎水性でもあるアミノ酸の位置と一致し、そのタンパク質とCUGリピートとの結合を媒介する。この類似性を考えて、Mblと毒性RNAとの結合に対する該ペプチドの影響を検討することにした。Mblのジンクフィンガーの発現及び精製:このペプチドがこれらのリピートとの結合においてMblと競合し得るかどうかを確認するために、RNAとタンパク質の間のinvitro結合アッセイを行うことにした。このようなアッセイを行うために、Mblタンパク質を発現及び精製することが必要であった。様々な理由で、Mblのジンクフィンガーに相当する部分MblZF、アミノ酸1~98のみを用いた。第一には、ショウジョウバエには7つの異なるMblイソ型が存在する。MblDイソ型以外のものは全て、2つのジンクフィンガーを含む領域Nt末端を共通に持ち、Ct配列が異なる。他方、MBNL1とMblのジンクフィンガーはどちらもその標的配列と結合するのに十分である。誘導ベクターに市販のpET-15bベクターをクローニングする際に、MblZFタンパク質を、その精製を容易にするための6つのヒスチジン、ならびにTEVタバコエッチウイルスプロテアーゼ切断部位と融合させた。大腸菌におけるMblZF発現の至適条件を見つけるために、種々の因子の組合せをアッセイした。まず、本発明者らは3つの異なる細菌株から出発した。BL21DE3株は、T7バクテリオファージプロモーターに基づく発現系のために設計された株である。この株は非毒性組換えタンパク質の発現に適切である。発現されるタンパク質が毒性である場合には、大腸菌のBL21pLysDE3は、低レベルのT7リゾチームを構成的に発現するという利点を有し、これにより、T7RNAポリメラーゼのレベルを抑制することによって、組換え遺伝子の基底発現が低減される。最後に、BL21pLysDE3コドン株は、ヒトコドンのtRNAをコードし、細菌が極めて低レベルでしか持たない遺伝子を含む。第二に、ジンクフィンガードメインは、システイン残基とヒスチジン残基の間の硫黄イオンの1原子と結合する核酸結合ドメインである。亜鉛金属は、それが存在しないとジンクフィンガーは展開され、それらの標的と結合する能力を消失することから、このタイプのドメインの安定性に極めて重要である。このため、MblZFタンパク質の発現の際に用いた全ての培養培地で、2種類の異なる濃度のZnCl2をアッセイした50μM及び100μM。さらに、ジンクフィンガーを有するタンパク質はほとんど不溶性で、不安定な分子である傾向がある。このため、本発明者らは、2つの異なる温度、30°Cと16°Cでアッセイを行った。試験した全ての組合せのうち、BL21DE3株、50μM濃度のZnCl2及び誘導温度16°C、1mMのIPTGを用いた場合に、高い割合の可溶性MblZFを得るに至った図17A。精製プロセスは、培地中に亜鉛の存在が維持されたFPLCシステムでのアフィニティークロマトグラフィーによって行った。タンパク質の最大溶出は、およそ300mMのイミダゾールで起こった図17B。得られた総タンパク質濃度は2.73mg/ml198μM;図17Cであり、これは培養液1リットル当たりタンパク質1.4mgの収率を意味する。その後の精製サイクルでも、この値は有意には変化しなかった。精製済みタンパク質が精製後もその天然のコンフォメーションであるかどうか確認するために、その円偏光二色性CDスペクトルを分析した。円偏光二色性は、分子による右旋性及び左旋性偏光ビームの分子の吸収の違いに基づく電子吸収分光技術である。タンパク質が違えばその円偏光二色性スペクトルも違うので、この技術は、理論スペクトルとの比較により、異なる分子のコンフォメーションを同定することを可能とする図18B。リン酸バッファー中のMblZFで得られる円偏光二色性スペクトルはMBNL1のジンクフィンガーに関して示されているものと類似し、203nmに顕著なピーク構造欠損を表すと220nmに弱いピークαヘリックスを表すを有する図18A。MblZFの場合、このパターンは保存されているが、それらの値はやや右へシフトしていた図18C。最後に、MblZFが溶液中で単量体として見られるのか複合体を形成しているのかを判定するため、本発明者らは分子排除クロマトグラフィーを行った図18D。分子排除クロマトグラフィーは、分子をそれらの分子量の関数として分離するカラムクロマトグラフィー法である。MblZFに関して得られた排除容量は、単量体型のタンパク質サイズに等しい分子量13.4KDaに相当していた。このクロマトグラフィーにより単一の溶出ピークが明らかになり、このことは、少なくともこれらのアッセイ条件下では、MblZFはそれ自体で複合体を形成しないことを示す。p10はinvitroにおいてCUGリピートと結合するが、MblZFと競合しない:タンパク質と核酸の間の相互作用のinvitro研究のための種々の技術のうち、蛍光偏光FPアッセイは、その迅速性と感度の点で特筆に値する。この技術は懸濁液中での蛍光性分子の回転運動の変化に基づく。従って、偏光ビームが、小分子にコンジュゲートされた蛍光体を励起すると、この小分子は蛍光放射に必要な時間より早く回転拡散を受け、その結果、蛍光放射時に分子のランダムな再配列が起こる偏光解消。しかしながら、この分子の回転は、媒体の粘度または分子の体積が変化すると遅くなり、放射される光の偏光が増す。従って、分子の偏光変化を測定することにより、その分子と媒体に加えられた別の分子との間の結合を検出することができる図19。本発明では、これらの分子はp10、MblZF、及びカルボキシフルオレセイン蛍光体とコンジュゲートされた23のCUGリピートFAM-CUG23であった。FP実験を構成するために、まず、2種類の異なる濃度のFAM-CUG23RNA6nM及び60nMをアッセイした。両場合ともRNAが検出され、MblZFを加えた際に蛍光偏光値に有意な増加が見られp値<0.0001、結合が起こったことが示される。プローブ及びタンパク質両方の使用を減らすために、6nM濃度のFAM-CUG23で検討することにした。MblZFとFAM-CUG23の間に見られた相互作用はタンパク質量に比例した図20B。結合曲線の統計分析から、IC50の理論値は900nMであった。この結合の特異性を確認するために、非標識RNAであるCUG23FAM-CUG23に対して1:10、1:100及び1:200を用いた競合試験を行った。全ての場合において、アッセイした全ての非標識プローブ濃度で競合が見られた図20A。p10も、FAM-CUG23の偏光に若干の増加を生じたp値:0.0176;図20D。しかしながら、漸増量のp10を加えても、おそらくはp10のサイズが小さいために結合曲線は得られなかった図20D。FAM-CUG23にp10とMblZFを同時に加えると、RNAの偏光に、MblZF単独の添加によって生じるものよりも大きな増加が生じたp値:0.0158;図20C。この結果は、両分子が、他の分子の結合に干渉することなくRNAと結合し得ることを示唆する。しかしながら、MblZFとp10を同時に添加した後の偏光値の増加は、双方単独により生じた増加の合計よりも低かったΔmPMbl:99.5;ΔmPp88:21.75;ΔmPMblp88:108.25が、これは部分的競合の存在を除外するものではない。FPアッセイにおいてp10により起こったRNAの変化は、おそらくはその分子の分子量が小さい900Da未満ために小さい。このため、本研究をゲルリターデイション実験で補助することにした。これらのアッセイは、安定なタンパク質-核酸複合体とそれらの個々の成分との間の電気泳動移動度の違いに基づく。FAM-CUG23RNAは入手可能であることから、蛍光ゲルリターデイションアッセイを設定することにした。検出のためのRNAの最適量を決定した後60nM;図21A、このRNAとMblZFの間の結合を調べた。前記結合は、ゲルにおける遊離RNAに相当するバンドの強度の低下とゲル孔の内部におけるシグナルの出現結合したRNAの両方を生じた。しかしながら、このゲルにはリターデイションバンドは見られず、このことは、結合後に生じた複合体が全てゲル孔内に保持されていたことを示す。このゲル孔内部のシグナルは、結合が非標識CUG23プローブと競合した際に1:100低下し、これは相互作用の特異性を示す。さらに、蛍光性RNAを熱変性したMblZFタンパク質とともにインキュベートした場合にも、FAM-CUG23と、MblZFと同じ濃度の異なるタンパク質コラーゲンα3との間で反応が行った場合にも結合は起こらなかったが、この場合にも結合の特異性が確認される図21B。FAM-CUG23がMblZFの6-ヒスチジンタグと結合する可能性を除外するために、この6-ヒスチジンタグをTEVプロテアーゼ消化によって除去した図22A-C。ヒスチジンを含まないMblZFタンパク質MblZFΔHisはRNA結合能力を保持していた図22D。MblZFとFAM-CUG23の間で形成された複合体の、ゲル孔内での保持は、RNAとこのタンパク質の間で大型の凝集体が形成されることによって起こり得る。前記複合体のサイズを小さくするために、本発明者らは4つのCUGリピートを含むRNAFAM-CUG4を用いた。MBNL1のジンクフィンガーは、その配列の中央部に4つの非相補的ヌクレオチドを付加することによってループの形成を助長するならば、最小4トリプレットによって形成されるCUGリピートと結合し得る。図21Cに示されるように、MblZFはFAM-CUG4と結合するが、形成された複合体は同様にゲル孔内に保持された。MblZFの等電点Ipは9.5である。本発明者らのアッセイにおいて使用される電気泳動バッファーのpHは8.5であり、これは本ゲル内でのMblZFの総電荷は正であることを意味する。リターデイションゲルは非変性ゲルであり、従って、分子に負電荷を与えるSDSはこの媒体中に存在せず、そのため、分子は陽極へ向かって移動する。RNAは負電荷を有し、電気泳動中に複合体を引きずる可能性があることから、一般に、前記のことはゲルリターデイションアッセイにおいては通常不都合なことではない。しかしながら、中央にゲル孔を配置した水平2.5アガロースゲルに複合体を流し、クーマシーで染色することにより、FAM-CUG23がMblZFを動員できるかどうかを確認することにした図23A。この実験では、単独のMblZFタンパク質が、タンパク質分子量マーカーとは逆方向の陰極に向かって移動した。MblZFをFAM-CUG23とともにインキュベートした場合、陰極に向かって移動したタンパク質おそらく非結合タンパク質の量は減ったが、MblZFのIpより大きいpH10.5で電気泳動を行った場合さえ、やはりゲルの陽極側にはシグナルが見られなかった図23B。必要な負電荷を与えるために、ホルムアルデヒドFAと架橋させてその反応物を変性条件下でポリアクリルアミドゲルに流すかSDSの存在下;図23C、あるいはタンパク質を変性させることなくタンパク質に電荷を与えるServaBlueGを加えることによってFAM-CUG23-MblZF複合体を固定化した。どの場合にも、複合体がゲルの内部に浸透することはなかった。p10がCUGRNA分子と結合できるかどうかを判定するために、該ペプチドとFAM-CUG23との間で同様のゲルリターデイション実験を行うことにした。p10はこのRNAと結合し、MblZFに関して記載したように、複合体の一部がゲル孔内に保持された。しかしながら、この場合には、リターデイションバンドはゲル内部に見られなかった図24A。p10は高ペプチド濃度500μM以上、図24BでFAM-CUG23と結合したが、このことは、少なくともこのアッセイ条件下では両分子間の親和性が低いことを示す。この親和性は、リピートのサイズを減じると低下したFAM-CUG4、図24C。p10がRNAとの結合に関してMblZFと競合し得るかどうかを判定するために、両者をFAM-CUG23の存在下でインキュベートした。p10はMblZFの結合を妨げなかったこの場合には、全てのRNAがゲル孔内に保持されたため図24D。これはタンパク質とペプチドの間の相乗効果か、または両者が異なるRNA部位に結合すべき場合には相加作用かのいずれかによるものであり得る。p10は他の配列に対するより高い親和性でCUGリピートと結合する:p10とCUGリピートとの間で見られた結合の特異性を検討するために、2つの実験を行った。第一に、アラニンスキャニングの際に作出された5つのヘキサペプチドをアッセイした。これらにはFAM-CUG23と有意に結合するものはなく図25A、全てのp10残基がこのRNAとの相互作用に必要であることを示す。興味深いことに、これらのペプチドはショウジョウバエにおいてCTG480導入遺伝子の毒性を抑制することはなかったが、このことは、p10の、CUGリピートと結合する能力がそのinvivo活性に必要であることを示す。第二に、本発明者らは、カルボキシフルオレセインFAMで蛍光標識された他のRNA及びDNA配列二本鎖及び一本鎖の両方に対するp10の効果を検討した図25C。前記分子には、1DMPK遺伝子の3’UTR領域に由来する19ntで構成されている一本鎖RNAssRNA、2DMPKの一本鎖配列と融合された4つのCUGリピートで構成されているRNAdsssRNA、34つのCAGCUGリピートからなる完全な二本鎖ヘアピンループを形成し得るRNAdsRNA、44つのCTGリピートで構成されているDNAdsDNA及び5同じDMPK遺伝子の3’UTR領域の19ntに相当するDNAを含んだ。p10は全ての場合で結合した図25B。さらに、配列GUC4を有する非標識変異型RNAこれにはヒトMBNL1タンパク質のジンクフィンガーは結合しない及びtRNAは、p10とFAM-CTG23の間の結合をシフトさせた。全体として、これらのデータは、RNAに対するp10の結合が配列特異的であること他のヘキサペプチドは違う挙動を示したため及びこのペプチドが2種類以上の核酸と結合し得ることを示す。しかしながら、p10は試験した核配列と異なる親和性で結合できた。ゲルリターデイション実験で検出されたペプチド-RNA複合体及びペプチド-DNA複合体はゲル孔内に保持されたことから、各相互作用に関する解離定数Kdを決定することはできなかった。p10と前記核酸の間の結合を定量するため、ならびに全ての場合において前記ペプチドがカルボキシフルオレセインと結合したという可能性を除外するために、p10の配列中に存在するトリプトファンに関して固有蛍光消光実験を設定することにした。トリプトファンは、280nmの波長に最大吸収を有し、300~350nmの間に溶媒極性による最大放射ピークを有する。この残基の蛍光は、それを含むタンパク質のコンフォメーションが例えば別の分子との結合により改変された際に変化する。従って、漸増量のDMPK-CUG4、DMPK及びCAGCUG4RNA分子、ならびにCTG4及びDMPKDNAを固定量5μMのp10とともにインキュベートし、ペプチドの蛍光放射の変化を351nmで測定した。いずれの場合にも、媒体に加えたRNAまたはDNAの量に比例してシグナルが低下し、これにより、これまでに見られた結合が確認される。しかしながら、遊離ペプチドの蛍光に対して各濃度点について放射される蛍光を直線で表したところ傾きの異なる直線が得られ、このことは核酸が異なれば、蛍光消光率及び従って結合親和性が異なることを示す図26。この曲線の傾きは、DMPK-CUG4分子-0.034±0.003ではCTG4-0.019±0.005及びDMPKRNA:-0.024±0.003及びDNA:-0.028±0.002よりも有意に大きかったp値<0.01。しかしながら、CAGCUGRNA-0.028±0.003では、この違いは統計的に有意ではなかったp値>0.1;図26B。DMPK-CUG4分子は、それらのDMPK環境中でCUGリピートを含んだ。全体として、このことは、ペプチドの一部に標的結合選択性が存在しており、従って、それがinvivoにおいて毒性RNAと好ましく結合することが可能であったことを示す。p10はCUGリピートのコンフォメーション変化を起こす:p10により誘導されるRNAの二次構造における可能性のある変化を検討するために、まず、本発明者らは非標識CUGリピートCUG60を有するRNAを用いて円偏光二色性CD実験を行った。核酸の円偏光二色性はその配列を構成している塩基の集積によって生じる。結果として、分子がRNAと結合してその構造に影響を及ぼすとそのCDスペクトルに変化が検出される。CUG60RNA1μMをMblZFタンパク質1μM及び1.5μMとともにインキュベートすると、スペクトルのピーク波長はシフトしなかったが、そのタンパク質により放出されるシグナルの強度が低下し図27A、このことは、MblZFの結合がRNA塩基のパッケージングに影響を及ぼしたことを示す。前記RNAを漸増濃度0.1μM、0.5μM、1μM、10μM及び20μMの配列番号10のペプチドとともにインキュベートしたところ、同様の効果が見られた図27B。読み取り中、RNAは円二色計内のキュベットで10°Cに維持された。各3時間の実験中にRNAが分解された可能性があり、このことが観察されたシグナル強度の低下を説明すると考えられる。この可能性を除外するために、CUG60RNAのCDスペクトルを0時点及び3時間の時点で測定したCUG60RNAは常に10°Cで維持した。3時間の時点で、CUG60のスペクトルは0時点で得られたスペクトルから変化を示さなかったが、このことは見られた効果が特異的であったことを示す図27D。さらに、アラニンスキャニングペプチドp29.10.5μM及び1μM及びp29.41μMはRNAスペクトルを変化させず図27E及び27F、これにより、結合特異性が確認される。最後に、RNAにMblZF0.5μMを加えた後にp100.5μMを加えた場合、またはその逆の場合には、CDシグナルの増強は見られなかったが、このことは、それらの一方によってRNAにもたらされた変化が、その後に他方を加えても可逆的とはならないことを示唆する。これらの結果は、p10がRNA塩基の集積を減らし、従って、その分子の二次的コンフォメーションに影響を及ぼしたことを示す。このような変化がヘアピンループ構造の消失を起こすかどうかを確認するために、グアニンがその類似体2-アミノプリンで置換された、23CUGリピートからなるRNA2-AP-CUG23を用いて実験を行った。2-APが一本鎖環境にある場合、それは375nmで蛍光を放射する。しかしながら、前記の放射は、その分子が二重ヘリックスの一部を形成している場合には著しく消光される。CD実験及びTrp-FQ実験で結合が検出された低濃度のMblZF及びp10ではRNA:タンパク質≦1:5、そのいずれもが2-APの蛍光に変化を生じなかった図28A~B。しかしながら、p10の濃度を100μMRNA:ペプチド1:100まで高めると、2AP-CUG23RNAは、二本鎖から一本鎖へとコンフォメーション変化を受け、分子の蛍光放射が2.9倍高まる図28B。この効果の特異性を確認するために、アラニンスキャニングペプチドpayawe及びppyawaをp10と同じ濃度100μMの2-AP-CUG23RNAとともにインキュベートする同様の実験を行った。これらのペプチドに蛍光放射に変化を生じるものはなく、DMSO単独でも同じであった図28C。従って、これらの結果は、p10はCUGリピートによって形成された二本鎖を脱安定化し得ることを示し、MblZFとペプチドは異なる様式でRNAと結合することが確認される。DM1マウスモデルにおけるp10の効果の検証哺乳類におけるp10の毒性試験:哺乳類においてp10の潜在的毒性作用を試験し、次のアッセイのための最大耐用量を確定するために、前記ペプチドをFVB野生系統由来のマウスに投与した。腸管壁によるペプチドの吸収が低いため、4~5週齢のマウスの前脛骨筋に、4種類の用量0.5μg、1μg、10μg及び100μgを用い、各用量につき計6個体のマウス雌3個体、雄3個体を用いて筋肉注射を行うことにした。注射4週間後に、マウスを犠牲にし、視覚的剖検を行い、筋肉の組織形態学的試験と血液検査を併用した図31。対照として、同量のDMSO0.5μg及び1μg用量の場合には0.2、10μg及び100μg用量の場合には2を注射したマウスを用いた。処置マウスの筋肉の視覚的剖検及び組織学的解析では、DMSO対照に比べて有意な違いは見られなかった。場合によっては、やや粘液水腫体液の蓄積の徴候が見られ、おそらくは注射自体によって生じた軽度の炎症が見られた図31。しかしながら、血液検査では、処置マウスと対照マウスの間に違いは見られなかった。腎活性のマーカーとして、本発明者らは血中の胆汁酸、尿素及びクレアチニンの量を測定した。骨格筋及び心臓の傷害のマーカーとしてクレアチンホスホキナーゼCPK酵素を用い、肝臓傷害のマーカーとしてアルカリ性ホスファターゼAP、ガンマ-グルタミルトランスペプチダーゼGGT及びグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼGPTを用いた。全てのマウス対照を含むは標準値に比べて高い尿素値及びAP値を示した。さらに、2DMSOを施した対照動物は異常に高いGPT値及びCPK値を示した。これはDMSOの毒性または注射自体によるものである可能性がある。しかしながら、10μg及び100μg用量では、対照よりもはるかに高い血中尿素値及びGPT値を示した。尿素はタンパク質代謝の最終産物である。尿素は肝臓で生成され、尿中に排泄される。腎臓が適切に機能していなければ、血中に尿素が蓄積する。GPTは肝臓に高濃度で存在し、少ないが腎臓、心臓及び筋肉にも存在する。これらの器官に傷害があれば、この酵素が血中に放出され、検査値に高く現れる。さらに、100μg用量で処置したマウスのうち2個体が注射p/iおよそ11日後に死に至ったことは注目に値することであり、これにより、閾値を超えた場合のp10の毒性が確認される。これらの2個体のうち1個体から死ぬ直前に採血することができた。このマウスは極端に高い血中尿素値、クレアチニン値、CPK値及びGGT値を示した例えば、CPKは標準値の上限の28倍、DMSO対照の15倍。p10はHSALRマウスにおけるSerca1転写物及びTnnt3転写物のスプライシング異常を元の状態に戻す:p10は、ショウジョウバエのCNS、筋肉及び眼におけるCTG480の影響を抑制し、invitroにおいてCUGリピートと結合した。DM1哺乳類モデルにおいてこれらの結果の妥当性を検証するために、HSALRマウスにおいてp10をアッセイすることにした。これらのマウスは異種転写物であるヒト骨格アクチンHSAにおいて250のCUGリピートを発現し、転写物の選択的スプライシングに異常を含む、DM1の大部分の症状を再現する。患者及びHSALRマウスの両方において選択的スプライシングの最も明確な例の1つが、Ca2依存性ATPアーゼSerca1転写物のエキソン22のスプライシングである。健康な集団では、このエキソンは、胎児型では排除され、成体には含まれる。しかしながら、患者とHSALRマウスの両方で、エキソン22は生涯を通じて排除され、従って、胎児パターンが成体個体でも維持される。Tnnt3タンパク質は骨格筋の速筋繊維の筋節に見られる。その転写物は、いわゆる胎児型エキソンFの選択的スプライシングを受ける。健康な集団では、このエキソンは成体個体には存在しないが、DM1患者及びHSALRマウスでは、この胎児型エキソンが維持される。p10がHSALRマウスにおけるSerca1及びTnnt3のスプライシング異常を元の状態に戻すことができるかどうかを調べるために、このペプチドの2種類の用量0.5μg及び10μgの筋肉注射を施した。処置マウスを注射1週間後、2週間後及び4週間後に犠牲にし、右下肢p10を注射及び左下肢0.5μg用量の場合には生理食塩水血清中0.2DMSO、10μg用量の場合には生理食塩水血清中2DMSOを注射の両方の前脛骨筋を解剖した。対照として、本発明者らは、両下肢にDMSO含有血清を注射したHSALRマウスの場合と同様に、両下肢に注射を行ったFVBマウス及びHSASRマウスヒト骨格アクチン転写物において5つのCUGリピートを発現するを用いた。0.5μgで処置したマウスのSerca1転写物及びTnnt3転写物のRT-PCR分析では、アッセイを行ったどの時点でも、それぞれエキソン22及び胎児型Fの封入体に有意な変化は明らかにならなかったゲルは示されていない。しかしながら、10μgの注射を行った5個体のうち2個体のマウス、両場合ともp10がスプライシング異常を元の状態に戻した図32A~C。Tnnt3転写物に関して得られた複雑なバンドパターンを考えても、本発明者らはp10により誘導された胎児型エキソンFの封入率の増加を正確に定量することはできなかった。Serca1の場合、p10はエキソン22の封入率を1.31週間p/i、p値>0.05、25.92週間p/i、p値<0.05及び38.34週間p/i、p値<0.01高めた図R40D。最後に、p10はCapzb遺伝子の筋肉転写物のスプライシングに影響を及ぼさなかったが、そのプロセシングはモデルHSALRマウスにおいては変更されないので、これを特異性対照として用いた図32A~C。4週間p/iにて同じマウスの右下肢p10を注射及び左下肢血清及び2DMSOを注射におけるSerca1転写物のプロセシングを分析したところ、処置されていない下肢において、エキソン22の封入率は、両下肢にDMSOを注射したHSALRマウスによって示されるものよりも大きかった図33。このことは、血液によって左下肢の前脛骨筋に到達したp10の量が全身的にスプライシング異常を部分的に元の状態に戻すのに十分なものであったことを示す。p10はHSALRマウスの筋肉の組織学的異常を元の状態に戻す:DM1マウス及びHSALRマウス両方の主要な組織学的レベルの特徴は、筋繊維における中心核の存在である。これらのマウスの前脛骨筋に0.5μg及び10μgの注射を行うと、DMSOで処置したHSALRマウスに比べて中心核を有する細胞の割合を有意に減ったが、FVBマウスにおいては変化は見られなかった図34。この効果は注射4週間後により顕著となり、それが遅効性のプロセスであることを示す。全体として、このモデルマウスにおいて得られた結果により哺乳類におけるp10の治療可能性が確認され、これはDM1及びDM2及びSCA8の治療法の嘆息に新たな試験経路を拓く。AAG対照、CGG、CCUG及びCAGなどの、CUGリピートとは異なるリピートによって形成されたヘアピンループの脱構造化または開環における本発明のいくつかのペプチドp10、p11、p5、p12及びp15の比較アッセイ:図29に見て取れるように、本実施例において、本発明者らは、p10の他、本発明で説明されるコンビナトリアルペプチドライブラリーのデコンボリューションから得られた4つのペプチドp11、p5、p12及びp15をアッセイするために2-アミノプリンアッセイを用いる。これらの結果は、これらのペプチドで得られた活性表1と、CUG23プローブの、二次構造を脱構造化して一本鎖となる能力との間の相関を示す。全ての場合で用いる濃度は100μMである。従って、この実験により、p10は最も活性が高いことから好ましいペプチドであるが、表1の残りのペプチド、特にp11、p5、p12及びp15も有意なレベルの特異性及び効力を示すことが示される。他方、図30に示されるように、本発明のペプチド特にp10は、例えば、AAG、CGG、CCUG及びCAGなどの、CUGリピート以外のリピートによって形成されるヘアピンループに対して異なる結合親和性を有する。本実施例で、本発明者らはp10と、CUGリピートとは異なるが、これもまた長いリピートを有するRNAの毒性が報告されている疾患に関与しているリピートに結合するp10の能力を試験した。一方でp10AAG、CGG、CCUG及びCAGAAGは二次構造を形成しないので対照として使用を用い、他方で、アラニンスキャニング後に得られた不活性ペプチドの1つppyawaを用いる同じ実験を用いるトリプトファン消光アッセイを用いた。これらの結果は、p10が、他のタイプの繰り返し配列に対し、これまでにDMPK-CUG4p10に対するその結合の特異性が高いで見られたものと同等の結合レベルを示すことを示す図26。この結合は、それぞれFXTAS疾患及びDM2疾患に関与するCGGリピート及びCCUGリピートの存在下で増強された。3種類のアッセイ点3種類の異なるプローブ濃度を用い、それぞれ2回測定した。これらの結果を、p10単独によって与えられるシグナルに対してノーマライズした。p10についての結果は、アラニンスキャニングペプチドの1つppyawa活性無しと比べて、異なるRNAリピートの存在に対して全く異なる応答を示した。ほぼ全てのタイプのリピートの存在下でp10によって示される強度の低下は、ペプチドppyawaを用いる場合、劇的に方向を転じる強度を増す。この強度の低下ではなく増強はまたプローブの結合のタイプの指標にもなり、p10の効力は、異なるタイプのリピートによって形成される二次構造との相互作用のタイプと密接に関連している。単一のアッセイ点が示されるプローブ10μM。結果は、供試ペプチドの最初の値を含めることができるようにノーマライズせずに示す。