経口例えば、舌下投与組成物中に1以上の抗原およびToll様受容体TLRアゴニストを含有する免疫原性組成物。経口投与組成物が口腔内で迅速に崩壊するように設計された固体分散剤型である、請求項1に記載の免疫原性組成物。アジュバントが、TLR1アゴニスト、TLR2アゴニスト、TLR3アゴニスト、TLR4アゴニスト、TLR5アゴニスト、TLR7アゴニスト、TLR8アゴニスト、TLR9アゴニストまたはそれらの任意の組合せの群より選択される、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。TLRアゴニスト、またはTLRアゴニストの組合せの中の少なくとも1つのTLRアゴニストが合成物である、請求項3に記載の免疫原性組成物。アジュバントがTLR4アゴニストおよびTLR2アゴニストの組合せ、特にShigellaflexineri外膜タンパク質調製物、またはAGP、例えばCRX527などのTLR4アゴニストおよびTLR2アゴニストPam3CysLipである、請求項3に記載の免疫原性組成物。アジュバントがTLR2アゴニスト、特にPam3CysLipである、請求項3に記載の免疫原性組成物。アジュバントがTLR9アゴニスト、特に免疫刺激オリゴヌクレオチド、特に1つ以上のCpGモチーフを含む免疫刺激オリゴヌクレオチドである、請求項3に記載の免疫原性組成物。アジュバントがTLR5アゴニスト、特にフラジェリンまたはその断片である、請求項3に記載の免疫原性組成物。アジュバントがTLR4アゴニストであり、それがAGP、特にCRX527である、請求項3に記載の免疫原性組成物。アジュバントがTLR78アゴニストである、請求項3に記載の免疫原性組成物。TLR78アゴニストがイミダゾキノリン分子、特にリン脂質またホスホノ脂質基に共有結合したイミダゾキノリンである、請求項10に記載の免疫原性組成物。TLR78アゴニストがCRX642である、請求項10または11に記載の免疫原性組成物。更に免疫刺激剤、例えばQS21を含有する、請求項1~12のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。固体分散剤型が口腔内に置かれて約1~約60秒以内、特に約1~約30秒以内、約1~約10秒以内または約2~8秒以内に崩壊する、請求項1~13のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。更に粘膜付着性物質を含有する、請求項1~14のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。粘膜付着性物質が、以下の群、すなわち、ポリアクリル酸ポリマー、セルロース誘導体または天然高分子、例えばゼラチン、アルギン酸ナトリウムおよびペクチンより選択される、請求項15に記載の免疫原性組成物。抗原がインフルエンザに由来する、請求項1~16のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。医薬に使用するための、請求項1~17のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。疾患の治療および/または予防に使用するための、請求項1~17のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。前記組成物を経口投与するステップを含む免疫方法に使用するための、請求項1~17のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。前記組成物を舌下投与するステップを含む免疫方法に使用するための、請求項1~17のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。本発明は、経口投与組成物中に1つ以上の抗原およびToll様受容体TLRアゴニストを含有する免疫原性組成物を提供する。本発明は、口腔内で迅速に崩壊するように設計された経口投与固体分散剤型中に、1つ以上の抗原およびToll様受容体TLRアゴニストを含有する免疫原性組成物を提供する。本発明の更なる実施形態では、前記の組成物を経口投与、特に舌下投与するステップを含む免疫方法に使用するために、本明細書に定義されるような免疫原性組成物が提供される。本発明の更なる実施形態では、1つ以上の抗原およびToll様受容体TLRアゴニストを含有する、経口特に舌下投与に適した、本明細書に定義されるような免疫原性組成物が提供される。本発明の更に別の実施形態では、1つ以上の抗原およびToll様受容体TLRアゴニストを含有する、本明細書に定義されるような経口特に舌下投与免疫原性組成物が提供される。本発明の更なる態様では、医薬に使用するための本明細書に定義されるような免疫原性組成物が提供される。本発明の更なる態様では、疾患の治療および/または予防に使用するための本明細書に定義されるような免疫原性組成物が提供される。経口投与、経口投与される、経口ワクチン接種、経口免疫、経口送達という用語は、本明細書において用いられる場合、口腔内への抗原の適用を指すことを意図し、そこで抗原を含有する免疫原性組成物は、頬咽頭領域の粘膜組織での免疫応答を促進する形で吸着される。誤解を避けるために、これらの用語は、摂取、すなわち、抗原が飲み込まれる、または他の任意の方法で胃に入ることによる抗原の投与を包含しない。特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、舌下投与、すなわち舌の下に投与される。経口例えば、舌下投与組成物は、本明細書において用いられる場合、口腔内に投与される組成物を指すことを意図し、そこで免疫原性組成物または抗原を含有する組成物の少なくとも抗原成分は、頬咽頭領域の粘膜組織での免疫応答を促進する方法で吸着される。誤解を避けるために、これらの用語は、摂取、すなわち、抗原が飲み込まれる、もしくは他の任意の方法で胃に入ることによって、または当業者に知られている免疫原性組成物の他の任意の投与方法例えば、筋肉内、皮内、鼻腔内もしくは経皮投与によって投与される組成物を包含しない。特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、舌下投与、すなわち舌の下に投与される。経口投与免疫原性組成物は、液体または固体投与剤型でありうる。本発明の特定の実施形態では、免疫原性組成物は、口腔内で迅速に崩壊する固体投与剤型である。免疫原性組成物は、口腔内で迅速に崩壊する固体分散剤型である。崩壊後、投与剤型の成分は、粘膜関連リンパ組織を包括するように頬咽頭領域の粘膜組織を迅速に覆い、それと接触して保持される。これにより、抗原成分が、抗原の吸収が可能な組織と接触する。本発明の特定の実施形態では、口腔内に置かれて約1~約60秒以内、特に約1~約30秒以内、約1~約10秒以内または約2~8秒以内に崩壊する固体投与剤型である免疫原性組成物が提供される。通常、崩壊時間は37°Cの水中で60秒未満であり、これは米国薬局方第23版、1995に規定された崩壊方法に従って試験され得る。特定の実施形態では、経口投与免疫原性組成物は、粘膜付着性物質を含有する。適切な固体投与剤型は、WO1999021579EP1024824B1に記載される。本発明の特定の実施形態では、粘膜付着性物質を含有する製剤が提供され、そこで粘膜付着性物質は、以下の群、すなわち、ポリアクリル酸ポリマー、セルロースおよびその誘導体または天然高分子例えばゼラチン、アルギン酸ナトリウムおよびペクチンより選択される。特定の実施形態では、粘膜付着性物質は、キトサンまたはその誘導体、でんぷんおよびその誘導体、ヒアルロン酸およびその誘導体、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ポリガラクツロン酸ナトリウム、デキストラン、マンナン、セルロースフィルム、合成非分解性ポリマー、ポリアクリル酸系ポリマー、カーボポールまたはそれらの組合せからなる群より選択される。本発明の更なる実施形態では、免疫原性組成物は、抗原およびアジュバントに加えて、マトリックス形成剤および補助的な成分を含有する。本発明での使用に適したマトリックス形成剤は、ゼラチン、デキストリンならびにダイズ、コムギおよびオオバコ種子タンパク質などの動物性または植物性タンパク質に由来する物質;アカシア、グアー、寒天およびキサンタンなどのゴム;多糖類;アルギン酸;カルボキシメチルセルロース;カラギーナン;デキストラン;ペクチン;ポリビニルピロリドンなどの合成ポリマー;ならびにゼラチン‐アカシア複合体のようなポリペプチド/タンパク質または多糖類の複合体を含む。本発明での使用に適した他のマトリックス形成剤は、マンニトール、デキストロース、ラクトース、ガラクトースおよびトレハロースなどの糖類;シクロデキストリンなどの環状糖類;リン酸ナトリウム、塩化ナトリウムおよびケイ酸アルミニウムなどの無機塩類;ならびにグリシン、Lアラニン、Lアスパラギン酸、Lグルタミン酸、Lヒドロキシプロリン、Lイソロイシン、LロイシンおよびLフェニルアラニンなどの2~12炭素原子を有するアミノ酸を含む。1種以上のマトリックス形成剤が、固形化前の溶液または懸濁液中に組み込まれうる。マトリックス形成剤は、界面活性剤とともに、または界面活性剤を含まずに存在しうる。マトリックスの形成に加えて、マトリックス形成剤は、溶液または懸濁液中での任意の活性成分の分散を維持するために役立ちうる。これは特に、水に十分溶解できず、そのため、溶解ではなく懸濁されなければならない抗原の場合に有用である。免疫原性組成物の更なる実施形態では、更に、保存剤、抗酸化剤、界面活性剤、増粘剤、着色剤、香味剤、pH調整剤、甘味剤または矯味剤などの補助的な成分もまた、組成物中に組み込まれうる。適切な着色剤は、赤色、黒色および黄色酸化鉄、ならびにEllisEverard社から入手可能なFDC青色2号およびFDC赤色40号などのFDC色素を含む。適切な香味剤は、ミント、ラズベリー、リコリス、オレンジ、レモン、グレープフルーツ、キャラメル、バニラ、サクランボおよびブドウ香味剤ならびにそれらの組合せを含む。適切なpH調整剤は、クエン酸、酒石酸、リン酸、塩酸およびマレイン酸を含む。適切な甘味剤は、アスパルテーム、アセスルファムKおよびタウマチンthaumaticを含む。適切な矯味剤は、重炭酸ナトリウム、イオン交換樹脂、シクロデキストリン包接化合物、吸着質またはマイクロカプセル化活性物質を含む。本発明の免疫原性組成物は抗原を含有し、それはヒトもしくは動物病原体、またはヒトもしくは動物において発病を引き起こす物質に対する免疫応答を誘導することができる。抗原という用語は、当業者にとって周知である。抗原は、ヒトもしくは動物において免疫応答を引き起こすことができるタンパク質、多糖類、ペプチド、核酸、タンパク質‐多糖類コンジュゲート、分子またはハプテンであり得る。抗原は、ウイルス、細菌、寄生生物、原生動物もしくは真菌に由来するものであっても、相同であっても、または分子を模倣するように合成されてもよい。免疫原性組成物は、1つ以上の抗原を含んでもよく、その実施形態では、抗原は、同一の生物から採取されてもよく、異なる生物から採取されてもよい。本発明の特定の実施形態では、抗原はインフルエンザに由来する。本発明の免疫原性組成物は、Toll様受容体アゴニストを含有する。TLRアゴニストとは、直接リガンドとして、または間接的に内因性もしくは外因性リガンドの生成を介して、TLRシグナル伝達経路を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができる成分を意味するSabroeら、JI2003p16305。Toll様受容体TLRは、I型膜貫通受容体であり、昆虫からヒトの間で進化的に保存されている。これまでに10個のTLRが解明されているTLR1~10Sabroeら、JI2003p16305。TLRファミリーのメンバーは、類似の細胞外ドメインおよび細胞内ドメインを有し;それらの細胞外ドメインは、ロイシンに富む反復配列を有することが示されており、それらの細胞内ドメインは、インターロイキン1受容体IL1Rの細胞内領域と類似している。TLR細胞は、免疫細胞と他の細胞血管上皮細胞、脂肪細胞、心筋細胞および腸上皮細胞を含むとの間で異なって発現される。TLRの細胞内ドメインは、その細胞質領域にIL1Rドメインも有するアダプタータンパク質Myd88と相互作用することができ、サイトカインのNFκB活性化を引き起こし;このMyd88経路は、サイトカイン放出がTLR活性化によってもたらされる1つの方法である。TLRの主な発現は、抗原提示細胞例えば、樹状細胞、マクロファージなどのような細胞型においてである。TLRを介した刺激による樹状細胞の活性化は、樹状細胞の成熟およびIL12などの炎症性サイトカインの産生を引き起こす。これまでに行われた研究では、いくつかのアゴニストはいくつかのTLRに共通であるが、TLRは異なる種類のアゴニストを認識することが発見されている。TLRアゴニストは、主に細菌またはウイルスに由来し、フラジェリンまたは細菌性リポ多糖類LPSなどの分子を含む。ある実施形態では、toll様受容体アゴニストは、Toll様受容体TLR4アゴニストであり、好ましくは、リピドA誘導体、具体的にはモノホスホリルリピドAまたはより具体的には3脱アシル化モノホスホリルリピドA3DMPLなどのアゴニストである。3DMPLは、MPL登録商標という商標でGlaxoSmithKlineBiologicalsNorthAmericaから入手可能であり、主にIFNγTh1表現型を有するCD4T細胞応答を促進する。それは、GB2220211Aに開示される方法に従って生成され得る。化学的には、それは、3、4、5または6アシル化された鎖を有する3脱アシル化モノホスホリルリピドAの混合物である。好ましくは、本発明の組成物では、小粒子3DMPLが使用される。小粒子3DMPLは、022μmフィルターによってろ過滅菌されうるような粒径を有する。このような調製物は、国際特許出願番号WO9421292に記載される。リピドAの合成誘導体は公知であり、下記を含むがそれらに限定されないTLR4アゴニストであると考えられる。すなわち、OM1742デオキシ6o2デオキシ23ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ4oホスホノβDグルコピラノシル23ヒドロキシテトラデカノイルアミノαDグルコピラノシルジハイドロジェンホスフェート、WO9514026。OM294DP3ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ4オキソ5アザ93ヒドロキシテトラデカノイルアミノデカン110ジオール110ビスジハイドロジェンホスフェートWO9964301およびWO000462。OM197MPAcDP3ドデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ4オキソ5アザ93ヒドロキシテトラデカノイルアミノデカン110ジオール1ジハイドロジェンホスフェート10WO0146127。使用されうる他のTLR4リガンドは、WO9850399もしくはUS6303347AGPを調製するための方法もまた開示されるに開示されたもののようなアルキルグルコサミニドホスフェートAGP、またはUS6764840に開示されるような製薬上許容されうるAGPの塩である。いくつかのAGPはTLR4アゴニストであり、いくつかはTLR4アンタゴニストである。両方とも、アジュバントとして有用であると考えられる。本発明の特定の実施形態では、アジュバントは、AGPであるTLR4アゴニストである。特定の実施形態では、TLR4アゴニストはCRX524またはCRX527である。CRX527およびCRX524は、以前に記載されている米国特許第6113918号;実施例15および16、ならびにWO2006012425、WO2006016997参照。TLR4Sabroeら、JI2003p16305を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができる他の適切なTLR4リガンドは、例えば、グラム陰性細菌由来のリポ多糖類およびその誘導体、またはその断片、特にLPSの非毒性誘導体3DMPLなどである。他の適切なTLRアゴニストは:熱ショックタンパク質HSP10、60、65、70、75もしくは90;サーファクタントタンパク質A、ヒアルロン酸オリゴ糖、ヘパラン硫酸断片、フィブロネクチン断片、フィブリノゲンペプチドおよびbディフェンシン2、ムラミルジペプチドMDPまたは呼吸器合胞体ウイルスのFタンパク質である。1つの実施形態では、TLRアゴニストは、HSP60、70または90である。本発明の更なる実施形態では、TLRアゴニストは、TLR2アゴニストSabroeら、JI2003p16305である。適切には、TLR2を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストは、1つ以上のリポタンパク質、ペプチドグリカン、Mtuberculosis、Bburgdorferi、Tpallidumに由来する細菌性リポペプチド;Staphylococcusaureusなどの種に由来するペプチドグリカン;リポテイコ酸、マンヌロン酸、Neisseriaのポリン、細菌線毛、Yersinaの毒性因子、CMVビリオン、麻疹赤血球凝集素、および酵母由来のザイモサンである。本発明の特定の実施形態では、TLR2アゴニストは、合成リポペプチドPam3CysLipである例えば、Fisetteら、JournalofBiologicalChemistry27846252参照。本発明の更なる実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、TLR4アゴニストおよびTLR2アゴニストを含有する。特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Shigellaflexineri外膜タンパク質調製物SFOMPを含有する。特定の実施形態では、免疫原性組成物は、AGP例えばCRX527などのTLR4アゴニストおよびTLR2アゴニストPam3CysLipを含有する。本発明の免疫原性組成物は、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8もしくはTLR9アゴニストまたはそれらの組合せを含有しうる。本発明の1つの実施形態では、TLR1Sabroeら、JI2003p16305を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストが使用される。適切には、TLR1を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストは:トリアシル化リポペプチドLP;フェノール可溶性モジュリン;MycobacteriumtuberculosisLP;細菌性リポタンパク質のアセチル化アミノ末端を模倣するSプロピルNパルミトイルCysSerLysOH、三塩酸Pam3CysLPおよびBorreliaburgdorfei由来のOspALPより選択される。別の実施形態では、TLR3Sabroeら、JI2003p16305を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストが使用される。適切には、TLR3を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストは、二本鎖RNAdsRNA、またはウイルス感染に関連した分子核酸パターンであるポリイノシン‐ポリシチジル酸PolyICである。別の実施形態では、TLR5Sabroeら、JI2003p16305を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストが使用される。適切には、TLR5を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストは、細菌のフラジェリンまたはその変異型である。前記のTLR5アゴニストはフラジェリンであってもよく、またはTLR5アゴニスト活性を保持したフラジェリンの断片であってもよい。フラジェリンは、Hpylori、Styphimurium、Vcholera、Smarcesens、Sflexneri、Tpallidum、Lpneumophilia、Bburgdorferei、Cdifficile、Rmeliloti、Atumefaciens、Rlupine、Bclarridgeiae、Pmirabilis、Bsubtilus、Lmoncytogenes、PaeruginosaおよびEcoliからなる群より選択されるポリペプチドを含み得る。特定の実施形態では、フラジェリンは、StyphimuriumフラジェリンBGenbank受入番号AF045151、StyphimuriumフラジェリンBの断片、EcoliFliCGenbank受入番号AB028476、EcoliFliCの断片、StyphimuriumフラジェリンFliCATCC14028およびStyphimuriumフラジェリンFliCの断片からなる群より選択される。特定の実施形態では、前記のTLR5アゴニストは、WO2009156405に記載されるような末端が切断されたフラジェリン、すなわち超可変ドメインが欠失されたフラジェリンである。この実施形態の1つの態様では、前記のTLR5アゴニストは、FliCΔ174400;FliCΔ161405およびFliCΔ138405からなる群より選択される。更なる実施形態では、前記のTLR5アゴニストは、WO2009128950に記載されるようなフラジェリンである。TLR5アゴニストがフラジェリンの断片である場合、前記の断片はTLR5アゴニスト活性を保持し、従ってTLR5活性化に関与するその配列部分を保持していなければならないことが理解されるであろう。フラジェリンのNH2およびCOOH末端ドメイン、具体的には例えば、Salmonellaではアミノ酸86~92が、TLR5の相互作用および活性化にとって重要であることが、当業者に知られている。別の実施形態では、TLR6Sabroeら、JI2003p16305を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストが使用される。適切には、TLR6を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストは、マイコバクテリアリポタンパク質、ジアシル化LP、およびフェノール可溶性モジュリンである。更なるTLR6アゴニストはWO2003043572に記載される。別の実施形態では、TLR7Sabroeら、JI2003p16305を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストが使用される。適切には、TLR7を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストは、一本鎖RNAssRNA、N7位およびC8位でのグアノシンアナログであるロキソリビン、またはイミダゾキノリン化合物、またはその誘導体である。1つの実施形態では、TLRアゴニストはイミキモドである。更なるTLR7アゴニストはWO02085905に記載される。別の実施形態では、TLR8Sabroeら、JI2003p16305を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストが使用される。適切には、TLR8を介したシグナル伝達応答を引き起こすことができるTLRアゴニストは、一本鎖RNAssRNA、抗ウイルス活性を有するイミダゾキノリン分子、例えばレシキモドR848であり;レシキモドはまたTLR7によっても認識することができる。使用されうる他のTLR8アゴニストは、WO2004071459に記載されるものを含む。1つの実施形態では、TLR78アゴニストがイミダゾキノリン分子、特にリン脂質またホスホノ脂質基に共有結合したイミダゾキノリンである、本発明の免疫原性組成物が提供される。特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物はCRX642WO2010048520参照を含有する。免疫刺激オリゴヌクレオチドまたは他の任意のToll様受容体TLR9アゴニストもまた使用されうる。本発明のアジュバントまたはワクチンまたは免疫原性組成物に使用するために好ましいオリゴヌクレオチドは、CpGを含んでいるオリゴヌクレオチドであり、好ましくは少なくとも3個、より好ましくは少なくとも6個以上のヌクレオチドで間隔を空けた2個以上のジヌクレオチドCpGモチーフを含んでいる。CpGモチーフはシトシンヌクレオチドに続くグアニンヌクレオチドである。本発明のCpGオリゴヌクレオチドは、通常デオキシヌクレオチドである。好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間は、ホスホロジチオエート結合、またはより好ましくはホスホロチオエート結合であるが、ホスホジエステル結合および他のヌクレオチド間結合は本発明の範囲内である。混在したヌクレオチド間結合を有するオリゴヌクレオチドもまた、本発明の範囲内に含まれる。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドまたはホスホロジチオエートを生成する方法は、US5666153、US5278302およびWO9526204に記載される。本発明に使用されるCpGオリゴヌクレオチドは、当技術分野において公知の任意の方法によって合成されうる例えばEP468520参照。便宜的には、このようなオリゴヌクレオチドは自動合成装置を用いて合成されうる。従って、別の実施形態では、アジュバント組成物は更に、TLR1アゴニスト、TLR2アゴニスト、TLR3アゴニスト、TLR4アゴニスト、TLR5アゴニスト、TLR6アゴニスト、TLR7アゴニスト、TLR8アゴニスト、TLR9アゴニスト、またはそれらの組合せからなる群より選択される更なる免疫刺激剤を含有する。本発明の特定の実施形態では、TLRアゴニスト、またはTLRアゴニストの組合せの中の少なくとも1つのTLRアゴニストが合成物である、本発明の免疫原性組成物が提供される。合成とは、TLRアゴニストが天然に生じたものではないことを意味する。本発明の免疫原性組成物は、更なる免疫刺激剤、例えばQuilAおよびその誘導体などのサポニンを含有しうる。QuilAは、南米の樹木QuilajaSaponariaMolinaから分離されたサポニン調製物であり、Dalsgaardらによって1974年にアジュバント活性を有するとして最初に記載された。QuilAに関連した毒性を持たずにアジュバント活性を保持する精製されたQuilAの断片、例えばQS7およびQS21QA7およびQA21としても知られているは、HPLCによって単離されているEP0362278。QS21は、QuillajasaponariaMolinaの樹皮に由来する天然のサポニンであり、それはCD8細胞傷害性T細胞CTL、Th1細胞および顕著なIgG2a抗体応答を誘導し、本発明において好ましいサポニンである。本発明の免疫原性組成物は医薬に使用するために適しており、従って、本明細書に記載されるような免疫原性組成物は、医薬に使用するために提供される。更なる実施形態では、本明細書に記載されるような免疫原性組成物は、特にヒトに対して、前記の組成物を経口投与特に舌下投与するステップを含む免疫方法に使用するために提供される。更なる実施形態では、本明細書に記載されるような免疫原性組成物は、特にヒトにおける疾患の予防および/または治療に使用するために提供される。更なる実施形態では、特にヒトにおける疾患の予防および/または治療のための薬剤の製造における、本明細書に記載されるような免疫原性組成物の使用が提供される。本発明のワクチン組成物に関する本明細書の実施形態はまた、本発明の免疫原性組成物に関する実施形態にも適用でき、その逆もまた同様である。本明細書における含むcomprisingcompriseおよびcomprisesという用語は、いかなる場合においても、からなるconsistingofconsistofおよびconsistsofという用語と任意に置き換え可能であることを、本発明者らは意図している。材料および方法動物モデルおよびワクチン投与6~8週齢のメスBALBcマウスをCharlesRiversCanadaから入手した。舌下免疫付与のために、ケタミンおよびキシラジンのip注射によってマウスを麻酔した。マイクロピペットによってワクチンを投与した。飲み込みの影響を避けるため、Agとアジュバントの総量を8μlに抑えた。im注射は、50μlの量で大腿筋に行われた。0日目および14日目にマウスを免疫し、28日目に屠殺した。血清IgGELISA最後の免疫付与の2週間後28日目に最終採血を行った。特異的IgG定量および機能的な血清抗体の存在のために血清を採取した。コーティング抗原として界面活性剤スプリットASI32006を用いたELISAによって、マウスの抗ASolomonIsland32006IgG抗体の定量を行った。スプリットFlu抗原をコーティングバッファー005M炭酸重炭酸、pH96で05μgml25ng50μlの最終濃度に希釈し、AffiniPureヤギ抗マウスIgGFcγ断片特異的抗体JacksonImmunoResearchをコーティングバッファーで10μgmL50ng50μlの最終濃度に希釈した。コーティング抗原と捕捉抗体を平底96ウェルポリスチレンプレートMaxisorpNunc上に4時間、20°Cで吸着させた。インキュベーション後、プレートをDPBSCa2またはMg2を含まないダルベッコリン酸緩衝生理食塩水;Gibco005Tween20Sigmaで4回洗浄した。その後、1ウシ血清アルブミンBSASigmaを含有するDPBSとともに、プレートを20°Cで1時間インキュベートした。PBS、005Tween20および1BSAを含有するバッファーサンプル希釈バッファーに血清を希釈し、その後、スプリットFluコーティングプレートに段階希釈して添加し、4°Cで16~18時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートをPBS005Tween20で4回洗浄した。その後、二次抗体である、サンプル希釈バッファーで110000に希釈したペルオキシダーゼコンジュゲートAffiniPureヤギ抗マウスIgGFcγ断片特異的をそれぞれのウェルに添加し、37°Cで30分間インキュベートした。洗浄ステップPBS005Tween20後、プレートをTMBペルオキシダーゼ基質BDBiosciencesとともに20°Cで30分間インキュベートした。1MH2SO4で反応を停止させ、450nmで測定した。特異的血清IgG濃度は、SoftMaxProによって4変数方程式を用いて標準から計算し、ngmlで表した。粘膜サンプル調製2回目の免疫付与の2週間後、抗原特異的IgA抗体の定量のために、気管支肺胞洗浄BAL、鼻洗浄、唾液、膣洗浄および糞便を採取した。BALおよび鼻洗浄サンプルは、直接IgA定量のために試験された。唾液サンプルは、プロテアーゼ阻害剤混合物PICの錠剤completeminiRocheを含有する300μLのサンプル希釈バッファーを添加することによって綿棒から抽出され、試験する前に15秒間2回、サンプルをボルテックスした。膣洗浄サンプルは、PICおよびブロメライン25μgmLSigmaを含有する200μLのサンプル希釈バッファーに希釈され、37°Cで1時間インキュベートされ、評価される前に15秒間ボルテックスされた。糞塊は、PIC含有サンプル希釈バッファーの添加までドライアイス上に置かれた。糞便の重さを量り、mgでのそれらの重量の5倍に相当するμLの容量に再懸濁した。サンプルをホモジナイズしKontesホモジナイザー、4°C、7300rpmで5分間遠心分離した。上清を回収し、ELISAによって評価した。IgAELISA血清IgG定量について記載されたものと同様のELISAによって、マウスの抗ASI32006IgA抗体の定量を行った。より具体的には、コーティングバッファー005M炭酸重炭酸、pH96で2μgml100ng50μlの最終濃度に希釈されたスプリットFlu抗原およびコーティングバッファーで10μgmL50ng50μlの最終濃度に希釈されたヤギ抗マウスIgAα鎖特異的Sigmaを用いて、コーティングを行った。一晩置きブロッキングステップ後、粘膜サンプルをスプリットFluコーティングプレートに段階希釈して添加し、4°Cで16~18時間インキュベートした。インキュベーション後、二次抗体である、サンプル希釈バッファーで16000に希釈したペルオキシダーゼコンジュゲートAffiniPureヤギ抗マウスIgAα鎖特異的をそれぞれのウェルに添加し、37°Cで30分間インキュベートした。TMBペルオキシダーゼ基質BDBiosciencesとともにインキュベーション後、1MH2SO4で反応を停止させ、450nmで測定した。IgA濃度は、SoftMaxProによって4変数方程式を用いて標準から計算され、ngmlで表された。赤血球凝集抑制HIアッセイ2回目の免疫付与の2週間後に採取された個々の血清に対して、HIアッセイを行った。受容体破壊酵素Sigmaによる一晩の処理によって、非特異的阻害剤を血清から除去した。その後、カルシウム生理食塩水Calciumsalinesolutionを加えて110希釈を行い、続いてニワトリまたはオンドリブタroosterpig赤血球の50vv溶液とともに4°Cで60分間インキュベートして非特異的凝集素を除去した。処理された血清を25μlのPBSに段階希釈し、その後、株特異的インフルエンザ抗原8赤血球凝集素ユニットを有する全ウイルスを含有する同量のPBSとともに45分間室温でインキュベートした。ニワトリまたはオンドリの成鳥から得られた赤血球の05vv懸濁液を添加し、混合物を更に45分間インキュベートした。反応に続いて目視検査が行われ:赤い点の形成は陽性反応抑制を示し、細胞の広範な斑点は陰性反応赤血球凝集を示す。陰性対照として、また、アッセイのバックグラウンド値を測定するために、バッファーで免疫されたマウスの血清サンプルを同時に試験した。すべての血清は二連で行われた。HAI力価は、赤血球凝集を抑制した最後の希釈の逆数として記録された。統計解析すべての統計解析は下記のように行われた。値は対数に変換され、シャピロ‐ウィルク正規性検定を用いてガウス分布について解析された。群の大部分が正規分布または許容限度内の歪度1≦1および尖度1≦2の値を有する場合、一元配置分散分析およびダンネットの多重比較検定を行った。他の場合は、クラスカル‐ウォリス分散分析およびダンの多重比較検定を行った。結果および考察舌下ワクチン接種の有効性を決定するために、TLR2および4アゴニストによって免疫補助された、モデル抗原としてインフルエンザ抗原を用いた新規ワクチン製剤を、全身性免疫応答および粘膜免疫応答を誘導するそれらの能力について試験した。細菌由来のTLR24アゴニストであるShigellaflexineri外膜タンパク質調製物SFOMP、およびTLR2アゴニストである合成リポペプチドPam3CysLipを最初に評価した。BALBcマウスを、舌下経路によって、SFOMP5μg、Pam3CysLip10μg、またはコレラ毒素CTのいずれかによって免疫補助された界面活性剤スプリットASI32006ウイルスを用いて、2週間間隔で2回免疫した。最後の免疫付与の2週間後、ウイルス特異的抗体のレベルを、ELISAおよびHIアッセイによって測定した。ASolomonIsland特異的な血清IgG抗体は、SFOMPまたはPam3CysLipによって免疫補助されたスプリット抗原で免疫された麻酔動物で検出された。免疫補助製剤で舌下免疫されたすべてのマウスは、筋肉内ワクチン接種群と統計的に同様のIgGレベルを示した図1。7μgの抗原のPam3CysLipによる免疫補助または14μgの抗原のSFOMPによる免疫補助は、免疫補助されていないワクチンと比較した場合、IgGレベルが有意に増加した。血清IgGの機能性はHIアッセイによって実証され、図1に示されるように、舌下ワクチンの免疫補助は、理論的には最低でも防御の60に関与するHIアッセイ力価をもたらした。このデータは、舌下免疫においてTLR24アゴニストを使用できる可能性を示唆した。舌下ワクチン接種におけるTLR2および/またはTLR4アゴニストの可能性を確かめるために、純粋な合成TLR4アゴニストCRX527を単独で、または純粋なTLR2アゴニストPam3CysLipと組み合わせて使用した。CRX527は、標準的な免疫付与レジメンにおいて1μgの用量で試験された。血清IgGELISA分析は、TLR4アゴニストCRX5271μg±TLR2アゴニストPam3CysLip5μgおよびスプリットインフルエンザ抗原を含有するワクチン製剤が、舌下免疫付与後の抗原‐特異的血清IgG応答の誘導に有効であることを示した図2。この研究では、舌下ワクチンの免疫補助効果は、それぞれのアジュバントで観察された。HIアッセイでは、ワクチンの舌下投与後の機能的な血清抗体の存在が確認された。同一群のマウス内での応答のばらつきの大きさにもかかわらず、血清IgGレベルとHI力価との間には良好な関連性があった。試験されたモデル抗原に対する関連部位での粘膜抗体応答を評価するため、BAL、鼻洗浄および唾液を、抗原特異的IgA抗体の定量のために採取した。加えて、舌下経路によって誘導される粘膜免疫応答の範囲を調べるために、膣洗浄および糞便を採取した。IgAELISA分析は、TLR4アゴニスト±TLR2アゴニストに基づくASI32006ワクチン製剤が、舌下投与された際の粘膜免疫応答の誘導に有効であることを示した。表1に示されるように、抗原特異的IgAは、すべての粘膜部位で検出され、膣洗浄および糞塊サンプルにおいて最も高いレベルであった。免疫補助されていない製剤を含む、いずれの舌下送達ワクチンも、糞便中に抗原特異的応答を誘導した。SolomonIslands界面活性剤スプリット抗原の免疫補助は、少なくとも2倍の抗原特異的IgAレベルの増加を示した。有効な抗原/アジュバントワクチン製剤を同定するために、7種のアジュバント候補1μg用量で免疫補助されたASI32006界面活性剤スプリット抗原を用いて、舌下免疫原性試験を行った。舌下免疫付与の成功を決定するための基準として、筋肉内IM免疫付与を行った。市販されているFluワクチンは1回で済むワクチンとして投与されるため、筋肉内免疫付与は、1回目の免疫の日、または2回目の免疫の日のいずれかで1回投与された。血清IgGELISA分析は、舌下送達される免疫補助されていないFluワクチンの2回の滴下が、特異的血清IgG応答を誘導できることを示したGMC=5267ngmL図3。SFOMPGMC=28771ngmL、Pam3CysLipGMC=40731ngmL、またはCTGMC=42343ngmLによるFluワクチンの免疫補助は、0日目または14日目のいずれかに1回投与された筋肉内免疫と同様の特異的IgGレベルを誘導した。免疫補助されていない舌下Fluワクチンと比較して血清中で55×および77×のIgG産生の増加を誘導する、SFOMPまたはPam3CysLipによる免疫補助に加えて、CRX642GMC=23966ngmLもまたアジュバント効果を示し、有意に高い46×IgGレベルを誘導できた。機能的な血清抗体HI力価≧40は、舌下免疫後に誘導されることができた。動物を免疫補助されていないワクチンで2回免疫した場合、140の動物がHI力価≧40を示した。機能的な抗体を有するマウス数の増加は、SFOMP420、Pam3CysLip420、CRX642420またはCTによって免疫補助されたワクチン製剤において観察された。flu抗原とともにSFOMP±Pam3CysLipを用いた1回目の舌下試験において観察された力価と比較したこれらのHI力価の相違は、恐らく免疫経路のためである。前述のように、同一群の動物内で、高い変動係数が常に観察される。この欠点を克服するためには、粘膜付着性化合物とともに抗原を製剤化することが計画される。舌下免疫後の粘膜免疫応答を、いくつかの粘膜液におけるIgAELISAによって調べた。IM免疫付与とは対照的に、免疫補助されたスプリットインフルエンザ抗原による舌下免疫付与は、BAL、鼻洗浄、唾液、膣洗浄および糞便において抗原特異的IgAを誘導する。モデル抗原としてFluを用いて、試験されたモデル抗原に対する関連部位での粘膜抗体応答の舌下免疫付与における成功基準は、肺液、鼻洗浄および唾液におけるIgA応答を必要とする。BAL分析は、舌下ワクチン接種後の肺液において低レベルの特異的IgAが見出されることを示した表2。最も高いIgA応答は、CTによって免疫補助されたfluワクチンGMC=975ngmLで免疫された動物において観察された。CTに加えて、Pam3CysLipGMC=395ngmL、フラジェリンGMC=404ngmLおよびCpGGMC=410ngmLによって免疫補助されたワクチンは、クラスカル‐ウォリスおよびダンの多重比較検定に基づき、IM免疫付与より有意に高いBALIgAレベルを誘導する。鼻洗浄分析は、舌下ワクチン接種後の鼻洗浄において低レベルの特異的IgAが見出されることを示した。BALと同様に、最も高いIgA応答は、CTによって免疫補助されたfluワクチンGMC=1291ngmLで免疫された動物において観察された。CTに加えて、CpGGMC=433ngmLによって免疫補助されたワクチンだけが、クラスカル‐ウォリスおよびダンの多重比較検定に基づき、IM免疫付与より有意に高い鼻洗浄IgAレベルを誘導する。CTは、免疫補助されていない舌下fluワクチンと比較して、鼻洗浄で有意に高いIgAレベルを誘導する唯一の試験アジュバントであった。唾液分析は、舌下ワクチン接種後の唾液において低レベルの特異的IgAが見出されることを示した。BALおよび鼻洗浄と同様に、最も高いIgA応答は、CTによって免疫補助されたfluワクチンGMC=600ngmLで免疫された動物において観察された。CTに加えて、Pam3CysLipGMC413mLによって免疫補助されたワクチンは、一元配置分散分析およびダンネットの多重比較検定に基づき、IM免疫付与より有意に高い唾液IgAレベルを誘導する。試験されたモデル抗原に対する関連部位での粘膜抗体応答の舌下免疫付与における成功基準によれば、CpG、Pam3CysLipおよびフラジェリンは有望な候補となる。膣洗浄分析は、舌下ワクチン接種後の膣分泌物においてより高レベルの特異的IgAが検出され得ることを示した。前述のように、IgAはIM免疫後には検出されず、バックグラウンドレベルはGMC=354ngmLに設定された。免疫補助されていない舌下Fluワクチンは、IM免疫付与と比較して22倍高いIgAレベルGMC=776ngmLを誘導することができた。SFOMP、Pam3CysLip、CRX642またはフラジェリンによる免疫補助は、IgA応答を大きく増加させ、従って、膣分泌物中にIgAを必要とする抗原に対する有望なアジュバント候補となる。しかし、適切な抗原を用いた更なる研究が必要とされる。特異的IgAはまた、舌下ワクチン接種後の糞便においても検出することができた。免疫補助されていない舌下ワクチンは、IM免疫付与と同様の糞便IgAレベルを誘導した。表2に示されるように、CTによる免疫補助だけが、IM免疫付与と比較してIgA応答を有意に増加させた。結論いくつかのアジュバントが、モデル抗原としてスプリットFluASolomonIslandを用いたマウスの舌下免疫について試験された。有望なアジュバント候補は、SFOMPおよびPam3CysLipであることが示された。しかし、抗原濃度がまだ高すぎる可能性があり、CRX642は、より低い抗原用量では、期待できるアジュバントとなりうる。機能アッセイによれば、舌下免疫の有望なアジュバント候補は、SFOMP、Pam3CysLipおよびCRX642である。試験されたモデル抗原に対する関連部位での粘膜抗体応答の舌下免疫付与における成功基準によれば、CpG、Pam3CysLip、フラジェリンおよびCRX642は、有望な候補となる。CMI分析は、それらのTh1サイトカイン産生およびサイトカインパターンの項目では試験アジュバント間の識別を可能にしなかった。すべての基準を組み合わせると、舌下免疫付与のために最も期待できるアジュバントは、Pam3CysLip、CRX642およびフラジェリンである。