"腫瘍の治療のための、PAK1阻害物質と第二抗過剰増殖化合物との組合せ。前記腫瘍が上昇レベルのPAK1タンパク質を呈する請求項1に記載の組合せ。前記腫瘍が乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍である請求項1又は2に記載の組合せ。PAK1阻害物質が式Iの化合物である請求項1~3の何れか一項に記載の組合せ:前記第二抗過剰増殖化合物がアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質である請求項1~4の何れか一項に記載の組合せ。アポトーシスタンパク質の阻害物質の前記阻害物質がBV6又はG24416である請求項5に記載の組合せ。前記第二抗過剰増殖化合物がEGFR阻害物質又はアンタゴニストである請求項1~6の何れか一項に記載の組合せ。前記EGFR阻害物質がエルロチニブ、ゲフィチニブ又はラパチニブである請求項7に記載の組合せ。前記第二抗過剰増殖化合物がRas/Raf/MEK/Erkシグナル伝達カスケードの阻害物質である請求項1~4の何れか一項に記載の組合せ。前記第二抗過剰増殖化合物がPI3K/AKT/mTORシグナル伝達カスケードの阻害物質である請求項1~4の何れか一項に記載の組合せ。第二抗過剰増殖化合物がSrcキナーゼの阻害物質である請求項1~4の何れか一項に記載の組合せ。癌又は過剰増殖障害の治療のための、PAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖剤の共投与。腫瘍の治療のための医薬の調製のための、PAK1阻害物質と第二抗過剰増殖化合物との組合せの使用。前記腫瘍が上昇レベルのPAK1タンパク質を呈する請求項13に記載の使用。前記腫瘍が乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍である請求項13又は14に記載の使用。PAK1阻害物質が式Iの化合物である請求項13~15の何れか一項に記載の使用:前記第二抗過剰増殖化合物がアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質である請求項13~16の何れか一項に記載の使用。アポトーシスタンパク質の阻害物質の前記阻害物質がBV6又はG24416である請求項17に記載の使用。前記第二抗過剰増殖化合物がEGFR阻害物質又はアンタゴニストである請求項13~16の何れか一項に記載の使用。前記EGFR阻害物質がエルロチニブ、ゲフィチニブ又はラパチニブである請求項19に記載の使用。前記第二抗過剰増殖化合物がRas/Raf/MEK/Erkシグナル伝達カスケードの阻害物質である請求項13~16の何れか一項に記載の使用。前記第二抗過剰増殖化合物がPI3K/AKT/mTORシグナル伝達カスケードの阻害物質である請求項13~16の何れか一項に記載の使用。第二抗過剰増殖化合物がSrcキナーゼの阻害物質である請求項13~16の何れか一項に記載の使用。癌又は過剰増殖障害の治療のための医薬の調製のための、PAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖剤の使用。腫瘍の治療方法であって、前記腫瘍を、第二抗過剰増殖化合物との組合せにおいてPAK1阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法。前記腫瘍が上昇レベルのPAK1タンパク質を呈する請求項25に記載の方法。前記腫瘍が乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍である請求項25又は26に記載の方法。PAK1阻害物質が式Iの化合物である請求項27に記載の方法:前記第二抗過剰増殖化合物がアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質である請求項25-28の何れかに記載の方法。アポトーシスタンパク質の阻害物質の前記阻害物質がBV6又はG24416である請求項29に記載の方法。前記抗過剰増殖化合物がEGFR阻害物質又はアンタゴニストである請求項25-28の何れかに記載の方法。前記EGFR阻害物質がエルロチニブ、ゲフィチニブ又はラパチニブである請求項31に記載の方法。前記第二抗過剰増殖化合物がRas/Raf/MEK/Erkシグナル伝達カスケードの阻害物質である請求項25-28の何れかに記載の方法。前記第二抗過剰増殖化合物がPI3K/AKT/mTORシグナル伝達カスケードの阻害物質である請求項25-28の何れかに記載の方法。第二抗過剰増殖化合物がSrcキナーゼの阻害物質である請求項25-28の何れかに記載の方法。癌又は過剰増殖障害を患っている患者を治療する方法であって、それを必要としている患者にPAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖剤を共投与することを含んでなる方法。a又はan実体なる表現は、ここで使用される場合、一又は複数のその実体を指し;例えば化合物は一又は複数の化合物又は少なくとも一つの化合物を指す。このように、a、一又は複数の、及び少なくとも一つのなる用語はここでは互換的に使用されうる。本明細書中及び特許請求の範囲において用いられる含む、含んでいる、包含する、包含している及び包含するなる用語は、述べられた形質、整数、成分又は工程の存在を特定することを意図するが、一又は複数の他の形質、整数、成分、工程、又はその群の存在又は付加を妨げない。処置するおよび処置なる用語は、治療的処置の両方をいい、その目的は、望ましくない生理学的変化または障害、例えば、癌の増殖、発生または広がりを予防するかまたは遅くすることである。本発明の目的で、有利または望ましい臨床結果としては、検出可能であれ検出不可能であれ、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の安定化された状態、疾患の進行の遅延または減速、疾患状態の軽減または緩和、および寛解が含まれる。また、処置は、処置を受けない場合に予測される生存と比較される場合に、生存を延長することを意味し得る。処置を必要とするものとしては、その状態または障害をすでに有するもの、並びにその状態または障害を有しやすいもの、あるいはその状態または障害が予防されるべきであるものが含まれる。治療上の有効量なる表現は、本明細書中に記載される特定の疾患、状態又は障害を処置するか、特定の疾患、状態または障害の一又は複数の症状を寛解、軽減または排除するか、あるいは特定の疾患、状態、または障害の一又は複数の症状の発生を予防または遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。癌の場合、薬物の治療上の有効量は、癌細胞の数を減少させ得;腫瘍のサイズを減少させ得;周辺器官への癌細胞の浸潤を阻害し得;腫瘍の転移を阻害し得;腫瘍の増殖をある程度まで阻害し得;そして/または癌に関連する症状のうちの一又は複数をある程度まで緩和し得る。薬物が、存在する癌細胞の増殖を防止し得、そして/または殺傷し得る場合、この薬物は、細胞増殖抑制性および/または細胞障害性であり得る。癌治療のためには、効力は、例えば、疾患の進行までの時間を評価すること、および/または応答速度を決定することによって測定され得る。本明細書中で用いる相乗的なる用語は、2以上の単一の薬剤の相加効果よりも効果が高い治療的併用を指す。PAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖剤間の相乗的相互作用の決定は、ここに記載のアッセイから得られる結果に基づきうる。この本発明によって提供される組合せは、いくつかのアッセイシステムで評価され、データは、抗癌薬間の相乗作用、相加作用および拮抗作用を定量化するために、標準的なプログラムを利用して分析されうる。好適に利用されるプログラムは、NewAvenuesinDevelopmentalCancerChemotherapyAcademicPress1987Chapter2のChouandTalalayによって記述されるものである。0.8未満の併用インデックス値は相乗効果を示し、1.2を超える値は拮抗作用を示し、0.8~1.2の値は相加効果を示す。併用療法は相乗効果を示してよく、相乗的である、つまり、共に用いる活性成分が別々の化合物を用いて得られる効果の合計よりも大きい場合に得られる効果である。相乗効果は、活性成分が:同時に処方され、併用された単位投薬製剤として同時に投与又は送達されるか、別個の製剤として交互に又は並列して送達されるか、又はある種の他の計画による場合に、達成することができる。交互療法で送達される場合、相乗効果は、化合物が、例えば別々のシリンジで異なった注射によって逐次的に投与されるか又は送達される場合に達成されうる。一般に、交互療法の間、各活性成分の有効用量は逐次的、つまり連続的に投与されるが、組合せ療法では有効量の2つ異常の活性成分は共に投与される。癌及び癌性なる用語は、典型的に制御されない細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物の生理的な状態を指すか又は表す。腫瘍は一又は複数の癌性細胞を含む。癌の例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ悪性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の鱗状癌腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞種、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮の癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎性癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝性癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫ならびに頭頸部癌が含まれる。癌腫なる用語は、形質転換した上皮細胞から成る浸潤性悪性腫瘍を指す。扁平上皮癌なる用語は、皮膚、唇、口、食道、膀胱、前立腺、肺、膣、及び子宮頸部を含む多くの異なる臓器において生じうる扁平上皮細胞に作用する癌腫のサブセットを指す。それは扁平上皮の悪性腫瘍である。作用機構に関係なく、化学療法剤は癌の治療において有用な生物学的又は化学化合物である。化学療法剤の種類には、限定するものではないが、アルキル化剤、アンチメタボライ、紡錘体阻害剤植物アルカロイド、細胞障害性/抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害薬、タンパク質、抗体、光増感剤及びキナーゼ阻害薬が含まれる。化学療法剤は、ターゲティング療法と非ターゲティングの従来の化学療法において用いられる化合物を含む。化学療法剤の例は、エルロチニブGenentechOSIPharm、ボルテゾミブMillenniumPharm、フルベストラントAstraZeneca、スニチブPfizerSugen、レトロゾールNovartis、メシル酸イマチニブNovartis、フィナスネートNovartis、オキサリプラチンSanofi、5FU、ロイコボリン、ラパマイシンWyeth、ラパチニブGSK572016GlaxoSmithKline、ロナファーミブ、ソラフェニブBayerLabs、ゲフィチニブAstraZeneca、AG1478、アルキル化剤、例えばチオテパ及びCYTOXANシクロスホスファミド;ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類;ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパのようなアジリジン類;アルトレートアミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチローロメラミンを含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類;アセトゲニン及びブラタシノン;カンプトセシンを含む;ブリオスタチン;カリスタチン;CC1065、カルゼレシン及びバイゼレシン合成類似体を含む;クリプトフィシン;ドラスタチン;デュオカルマイシン;エレトロビン;パンクラチスタチン;サルコディクチン;スポンジスタチン;クロランブシル、クロルマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード;ニトロスレアス、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン;エネジイン抗生物質等の抗生物質、特にカリケアマイシンγ1I及びカリケアマイシンωI1、例えば、AgnewChemIntlEdEngl33:183186を参照のこと;ダイネミシン、ダイネミシンAを含む;クロドロネートなどのビスホスホネート;エスペラマイシン;同様にネオカルチノスタチン発光団及び関連色素蛋白エネジイン抗生物質発光団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、6ジアゾ5オキソLノルロイシン、ADRIAMYCIN、モルフォリノドキソルビシン、シアノモルフォリノドキソルビシン、2ピロリノドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マセロマイシン、マイトマイシンCなどのマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン;メトトレキセート及び5フルオロウラシルのような抗代謝産物;デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセートのような葉酸類似体;フルダラビン、6メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体;アンシタビン、アザシチジン、6アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジンのようなピリミジン類似体;カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンのようなアンドロゲン類;アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤;フロリン酸のような葉酸リプレニッシャー;アセグラトン;アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;エニルウラシル;アムサクリン;ベストラブシル;ビサントレン;エダトラキセート;デフォファミン;デメコルシン;ジアジコン;エルフォミチン;酢酸エリプチニウム;エポチロン;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダミン;メイタンシン及びアンサマイトシンのようなメイタンシノイド;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダムノール;ニトラクリン;ペントスタチン;フェナメット;ピラルビシン;ポドフィリン酸;2エチルヒドラジド;プロカルバジン;PSK多糖類複合体;ラゾキサン;リゾキシン;シゾフラン;スピロゲルマニウム;テニュアゾン酸;トリアジコン;222トリクロロトリエチルアミン;トリコテセン、ロリデンA及びアングイデン;ウレタン;ビンデシン;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン;アラビノシド;シクロホスファミド;チオテパ;タキソイド、例えばTAXOL、ABRAXANE、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤、及びTAXOTERESanofiAventis;クロラムブシル;GEMZAR;6チオグアニン;メルカプトプリン;メトトレキセート;シスプラチン及びカルボプラチンのようなプラチナ類似体;ビンブラスチン;エトポシド;ミトキサントン;ビンクリスチン;ビノレルビン;ナベルビン;ノバントロン;テニポシド;エダトレキセート;ダウノマイシン;アミノプテリン;カペシタビン;イバンドロナート;CPT11;トポイソメラーゼインヒビターRFS2000;ジフルオロメチロールニチン;レチノイン酸などのレチノイド類;並びに上述したものの製薬的に許容可能な塩類、酸類及び誘導体が含まれる。また、化学療法剤の定義には、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン剤、抗エストロゲン及び選択的エストロゲンレセプターモジュレーターなど、例えばタモキシフェンタモキシフェンクエン酸塩を含む、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、4ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストーン、及びFARESTON;アロマターゼ酵素を阻害するアロマターゼ阻害物質、それらは副腎でのエストロゲン産生を調節するものであり、例えば4イミダゾール類、アミノグルテチミド、MEGASE、AROMASIN、ホルメスタイン、ファドロゾール、RIVISOR、FEMARA及びARIMIDEX;抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン;並びにトロキサシタビン;プロテインキナーゼインヒビター;脂質キナーゼインヒビター;アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に不粘着性細胞増殖に関係するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を抑制するもの、例えばPKCα、Raf及びHRas;リボザイム、例えばVEGF発現インヒビター及びHER2発現インヒビター;遺伝子治療ワクチン、例えばALLOVECTIN、LEUVECTIN及びVAXIDなどのワクチン;PROLEUKINrIL2;LURTOTECANなどのトポイソメラーゼ1インヒビター;ABARELIXrmRH;ベバシズマブGenentechなどの抗血管形成剤;及び上記のものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体が含まれる。また、化学療法剤の定義には、治療的抗体、例として、アレムツズマブ、ベバシズマブGenentech;セツキシマブImclone;パニツムマブAmgen、リツキシマブGenentechBiogenIdec、ペルツズマブ2C4Genentech、トラスツズマブGenentech、及びトシツモマブが含まれる。発明のPI3K阻害物質と組み合わされる化学療法剤としての治療的能力を有するヒト化モノクローナル抗体には、アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エピラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、パーツズマブ、パキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブおよびビシリズマブが含まれる。次の省略を本出願において使用する:DCIS、SCLC、NSCLC;SCC。PAKは、ヒト癌細胞において一般的に制御解除された多くの経路に関与する。PAK1はマイトジェン活性化プロテインキナーゼ、JUNN末端キナーゼ、ステロイドホルモン受容体、及び核内因子κβシグナル伝達経路の要素であり、全て発癌に関与してきた。PAKはMEK及びRAF1をそれぞれセリン298及びセリン338においてそれらをリン酸化することによって活性化する。PAK1によるRas誘発形質転換の増加は、細胞外シグナル制御キナーゼMAPK経路を通したシグナル伝達へのその効果と相関し、JNK又はp38MAPK経路への効果と分離可能だった。ERK/MEK経路の構成的活性化は腫瘍の形成、進行及び生存に関わり、更に無秩序な増殖、アポトーシスの制御の喪失及び予後不良を特徴とする攻撃的表現型に関連する。腫瘍形成及び進行は、癌細胞におけるアポトーシス促進性シグナルの不活性化を必要とする。PAK活性は幾つかの重要なアポトーシス促進性経路を下方制御することが示されている。RAF1のPAK1リン酸化はミトコンドリアへのRAF1トランスロケーションを誘導し、そこでそれはアポトーシス促進タンパク質細胞死のBCL2アンタゴニストをリン酸化する。PAK1、PAK2、PAK4及びPAK5はまた、CV1由来SV40保有腎臓、チャイニーズハムスター及びヒト胎児由来腎臓293T細胞等の選ばれた細胞タイプにおいてBADを直接リン酸化し不活性化することが報告されている。しかしながら、ヒト腫瘍細胞におけるPAK1下流の関連経路は部分的にのみ理解されたままである。PAK1は様々な正常組織において広く発現される;しかしながら、発現は卵巣、乳房及び膀胱癌において著しく増加される。luminal乳癌では、PAK1のゲノム増幅はタモキシフェン治療への耐性と関連し、おそらくPAK1によるエストロゲン受容体の直接リン酸化及びリガンド非依存トランス活性化の結果として生じる。PAK1は、過剰増殖障害の治療における使用に効果的な治療剤の開発のための魅力的な標的である。増殖実験-PAK1ゲノムコピー数及び遺伝子発現を乳房、肺及び頭頸部腫瘍の大規模パネルについて決定した。PAK1ゲノム増幅はluminal乳癌に蔓延し、PAK1タンパク質発現はリンパ節浸潤及び転移に関連する。コピー数ゲインをを有する幾つかのゲノム領域が比較ゲノムハイブリダイゼーションアプローチによって乳癌において同定されている。DNAコピー数に関する51の乳房腫瘍のアッセイは高分解能一塩基多型アッセイを使用して変化し、GenomicIdentificationofSignificantTargetsinCancer法76MbのプラトーはPAK1遺伝子を有する。PAK1増幅の度数はこの腫瘍パネルにおいて17であり、コピー数ゲインはmRNA発現と良く相関した。類似な結果がまた大規模パネルn=165の乳房腫瘍において得られ、高分解能SNP分析によってゲノム増幅についてまた分析した。PAK1遺伝子増幅はまん延し、平均DNAコピー数はluminalホルモン受容体陽性腫瘍において最も多く、basal乳房腫瘍において最も少なかった。これらの実験は、PAK1が染色体11の76Mbアンプリコンにおいて腫瘍促進性駆動遺伝子でありうることを示唆する。PAK1発現は正常乳房上皮細胞に不在であるが、一次乳腺癌の39の悪性細胞において検出された。PAK1タンパク質発現レベル及び細胞内局在を、組織マイクロアレイの免疫組織化学染色によって確認した。並行して、PAK1抗体の強固で選択的なIHC反応性を、これらの細胞からのタンパク質抽出物の免疫ブロット分析により癌細胞株において確認した。226の一次乳癌、15のDCIS、32の乳癌リンパ節転移、97のNSCLC、27のSCLC及び130の頭頸部扁平上皮癌についてのPAK1タンパク質発現を表1にまとめた。PAK1染色強度は、細胞質及び/又は核において無又は低染色から非常に強い染色まで腫瘍組織間で異なった。RNAを88の一次乳癌試料から精製し、細胞質PAK1IHC染色は増加mRNA発現と相関した。これらのデータはPAK1発現が乳癌において広範に上方制御され、高発現が疾患攻撃性と相関することを示す。強い核及び細胞質PAK1発現は扁平非小細胞肺においても蔓延し、選択的PAK1阻害はインビトロ及びインビボにおける遅延細胞周期と相関した。PAK1タンパク質の発現を27のSCLC及び97のNSCLCの組織マイクロアレイにおいて分析し、後者は30の腺癌及び67のSCCから成った。43/67扁平NSCLCサンプルはPAK1発現について陽性であり、全ケースの52は悪性細胞において中程度又は強の強度の染色を示した。PAK1の核局在化はまた、有意な割合の扁平NSCLC腫瘍において明らかだった。扁平上皮癌とは対照的に、NSCLC腺癌及びSCLC腫瘍は、細胞質のみにおいて弱~中程度レベルのみのPAK1を発現した。隣接する正常肺組織ははっきりと確認できるレベルのPAK1を発現しなかった。上昇PAK1発現は、頭頸部腫瘍、扁平上皮癌の他の徴候においても蔓延した。頭頸部腫瘍において、上昇PAK1発現は、頭頸部腫瘍、扁平上皮癌の他の徴候においても蔓延した。扁平NSCLCの前臨床腫瘍モデルにおけるPAK1阻害の抗腫瘍効果NCIH520.X1及びEBC1異種移植片モデルにおけるshRNAを使用したPAK1発現の阻害は腫瘍増殖の有意な阻害をもたらした。腫瘍確立後、動物にスクロース飲料水中においてDoxを投与し、腫瘍増殖を21-24日間モニタした。NCIH520.X1腫瘍保有動物では、PAK2ではなくPAK1の阻害がコントロールshLacZマウスと比較して腫瘍増殖を有意に減少させ、投与の最終日に測定された。PAK1及びPAK2の組合せノックダウンは、PAK1阻害単独のものに匹敵する腫瘍増殖の阻害をもたらした。等しい結果がEBC1腫瘍異種移植片を使用して得られ、腫瘍増殖の66.8阻害がPAK1のインビボノックダウン後に観察された。最後に、異種移植片モデル双方の腫瘍進行データを、腫瘍サイズが治療の開始から2倍になるのに必要な時間分析した。この計量では、PAK1阻害はまたほかのコホートと比較して有意な抗腫瘍効果をもたらした。Dox治療は良好な耐容性を示し、どの動物も明らかな体重減少を示さなかった。免疫組織化学による異種移植片腫瘍の分析は、shLacZコントロールと比較してshPAK1を発現するDox処置腫瘍において、Ki67陽性腫瘍細胞において有意な低下を示した。Ki67陽性核の割合を定量化し、インビボでのPAK1ノックダウンの抗増殖効果は統計的に有意であると示された。PAK1及びPAK2はDox処置腫瘍において80超低減され、PAK1ノックダウンは示唆されたように低下AKT活性化と関連しなかった。PAK1ゲノムコピー数ゲインを伴う細胞株の分析は、細胞生存についてPAK1発現及び活性への依存を示した。RhoファミリーGTPaseによってPAK13活性化を防止するIPA3、アロステリック阻害物質を使用したPAK1触媒活性の阻害は、アポトーシスの明白な誘発をもたらし、死細胞のアネキシンV/ヨウ化プロピジウム染色について蛍光活性化細胞ソーティング分析によって決定された。この表現型は24-48時間内で明瞭であり、PAK1発現の選択siRNA媒介ノックダウンを使用して確認された。PAK1阻害によって誘発される細胞死はまた、カスパーゼ活性化、PARP切断及びMEK1S298及びERK1/2の減衰リン酸化と関連した。このように、PAK1増幅を伴う乳癌細胞におけるPAK1阻害から生じる細胞死の強い導入は、このキナーゼが少なくとも一部では腫瘍細胞アポトーシスを抑制することによって発癌性表現型に寄与することを示唆する。PAK1への依存は、それが乳癌のサブポピュレーションについて弱点でありうることを示唆し、癌遺伝子依存性のエビデンス及びこの疾患徴候におけるPAK1標的治療の根拠を提供する。50を超える扁平非小細胞肺癌及び頭頸部扁平上皮癌におけるPAK1の異常細胞質発現は、それらがまた持続増殖及び生存についてPAK1発現に依存しうることを更に示唆する。現在では、扁平NSCLCにおける更なる既知の遺伝子異常は、変異又はメチル化によるp53、p16Ink4a、PTEN及びLKB1機能喪失、及びEGFR、MET、HER2及びPIK3CAなどのプロテインキナーゼの変異又は増幅活性化を含む。従って、PAK1を過剰増幅又は過剰発現する腫瘍細胞における抗腫瘍効果及び腫瘍細胞死を増加するために、PAK1酵素活性又はスカフォールド機能の阻害は、これらのクリティカルな増殖及び生存経路を標的にする治療剤と相乗的に組合せられうる。このような腫瘍細胞は、限定するものではないが、DCIS、扁平NSCLC及び頭頸部SCCを含む。PAKキナーゼの阻害物質が記載されている。。shRNA誘発PAK1ノックダウンと分子標的治療との組合せはNSCLC細胞のアポトーシスを誘発する小分子ライブラリーをPAK1アンタゴニスト及び他の抗過剰増殖剤間の強力な相乗相互作用を同定するためにスクリーニングした。細胞生存度スクリーニングを、EBC1shPAK1同質遺伝子細胞、及び食品医薬品局承認オンコロジー薬物、シグナル伝達経路阻害物質及びDNA傷害剤を含む200の小分子化合物のパネルを使用して実施した。試験化合物の中で、アポトーシスタンパク質の阻害物質のアンタゴニスト、上皮増殖因子受容体、MAPK/ERKキナーゼ1/2及びSrcファミリーキナーゼが、PF3758309との組合せにおいて劇的な増強効果を示した。これらの薬剤の何れも、PAK1阻害の不在においては、EBC1細胞の増殖及び生存に強い単剤効果を示さなかった。このように、PAK1阻害は、幾つかのクラスのよく特徴付けられた分子標的治療の効果を大いに増大できる。MEKキナーゼの阻害物質603626EMWallace等CurrTopicsMedChem20055215AktSrcandInibitorofApoptosisProteins5995ADSchimmerandSDaliliHematology2005215が総説されている。IAPタンパク質の生存促進性活性は、カスパーゼの第二ミトコンドリアアクチベーターによってアンタゴナイズされ、多くのアンタゴニストが記載されており、SMACアミノ末端ペプチドを模倣しIAPとSMAC及び活性化カスパーゼ9との関連を破壊する。特に、BV61509は、バキュロウイルスIAPリピートドメインに結合するこのようなクラスの小分子アンタゴニストの一つを代表し、cIAP1及びcIAP2の急速な自己ユビキチン化及びプロテアソーム分解を促進する。小分子スクリーニングデータと一致して、強い組合せ活性を、EBC1細胞におけるPAK1及びIAPの二重阻害について確認した。コントロールと比較した、Doxで共処理された場合のEBC1shPAK1細胞へのBV6効力における劇的な増加は、アネキシンVフローサイトメトリーアッセイ及び切断カスパーゼ3、6、7及び9のイムノブロッティングによって決定される細胞アポトーシスの強い誘発に反映される。重要なことには、増強された細胞殺傷のエビデンスはまた、PAK又はRac1触媒活性の薬理学的阻害物質を使用して観察された。この明瞭な相乗作用を更に探索するために、我々はアポトーシスの誘導に対するPAK1及びIAP阻害のありうる分子メカニズムを調査した。組合せPAK1及びIAP阻害は、BV6によって誘発されるIAPタンパク質分解の改変キネティックス又はTNFαによる増加された自己分泌シグナル伝達を含まなかった。最後に、更なるNSCLC細胞株を、どちらかの単剤の活性に最小限のみ関与するものを含め、PAK1及びIAPの組合せ阻害から生じる抗腫瘍効果について調査した。PAK1発現の一過性siRNA媒介ノックダウンと、その後のBV6処置は、SKMES1及びNCI-H441細胞生存度の有意な低下をもたらした。MEK及びPI3K経路の阻害によるPAK1及びPAK2の組合せ阻害も調査した。低減された細胞生存度及びアポトーシスバイオマーカーの誘導によって決定される組合せ効果を、PAK、MEK及びPI3Kシグナル伝達の阻害後に観察した。まとめると、これらの研究は、乳房及びNSCLCがPAK1阻害物質を伴う合理的組合せ療法に関して幾つかの機会を提供しうる強い前臨床サポートを提供する。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍をPAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖化合物と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍をPAK1阻害物質及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、PI3K/AKT/mTOR経路又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストと接触させることを含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍をPAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖化合物と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍をPAK1阻害物質及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、PI3K/AKT/mTOR経路又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストと接触させることを含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍であり、腫瘍をPAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖化合物と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍であり、腫瘍をPAK1阻害物質及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、Akt又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストと接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈する乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍であり、腫瘍をPAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖化合物と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈する乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍であり、腫瘍をPAK1阻害物質及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、Akt又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストと接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及び第二抗過剰増殖化合物と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、Akt又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストと接触させることを含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及び第二抗過剰増殖化合物と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、Akt又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストと接触させることを含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈する乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍であり、腫瘍を式Iの化合物及び第二抗過剰増殖化合物と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈する乳房腫瘍、扁平非小細胞肺腫瘍又は扁平頭頸部腫瘍であり、腫瘍を式Iの化合物及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、Akt又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストと接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びBV6又はG24416と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びBV6又はG24416と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びEGFR阻害物質アンタゴニストと接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びEGFR阻害物質又はアンタゴニストと接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びエルロチニブ、ゲフィチニブ又はラパチニブと接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びエルロチニブ、ゲフィチニブ又はラパチニブと接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びRas/Raf/MEK/Erkシグナル伝達カスケードの阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びRas/Raf/MEK/Erkシグナル伝達カスケードの阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びAktキナーゼの阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びAktキナーゼの阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の一実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、腫瘍を式Iの化合物及びSrcキナーゼの阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、腫瘍を治療する方法であって、前記腫瘍が上昇レベルのPAK1を呈し、腫瘍を式Iの化合物及びSrcキナーゼの阻害物質と接触させる工程を含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、癌又は過剰増殖障害を患っている患者を治療する方法であって、それを必要としている患者にPAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖剤を共投与することを含んでなる方法が提供される。本発明の別の実施態様では、癌又は過剰増殖障害を患っている患者を治療する方法であって、それを必要としている患者に、PAK1阻害物質及びEGFR、Raf/MEK/ERK経路、Src、Akt又はアポトーシスタンパク質の阻害物質の阻害物質又はアンタゴニストを共投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施態様では、本発明は、腫瘍の治療のための、PAK1阻害物質と第二抗過剰増殖化合物との組合せを提供する。別の実施態様では、本発明は、癌又は過剰増殖障害の治療のための、PAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖剤の共投与を提供する。別の実施態様では、本発明は、腫瘍の治療のための医薬の調製のための、PAK1阻害物質と第二抗過剰増殖化合物との組合せの使用を提供する。別の実施態様では、本発明は、癌又は過剰増殖障害の治療のための医薬の調製のための、PAK1阻害物質及び第二抗過剰増殖剤の使用を提供する。以下の実施例は、発明の範囲内の化合物の生物学的評価を説明する。以下のこれらの実施例は、当業者がより明瞭に理解し、本発明を実施するのを可能にするために提供される。それらは発明の範囲を制限するものとして考えられるできではなく、単にその説明的及び例示的なものである。実施例1組織サンプルホルマリン固定パラフィン包埋組織塊及び対応する病理学報告を、97の逐次NSCLC及び27の逐次SCLC、130の頭頸部SCC、15のDCIS、226の一次乳癌及び32の乳癌リンパ節転移から得た。組織マイクロアレイを前述のように組み立てた。乳腺癌を有する逐次患者では、手術を1989及び1998間で実施し、患者は広範囲局所切除術及び術後放射線治療又は乳房切除術を受けた。患者はアジュバント化学療法及び/又はアジュバントホルモン療法を受けたか又はアジュバント治療を受けなかった。エストロゲン受容体陽性患者において、タモキシフェンを5年間、内分泌療法として使用した。リンパ節陽性腫瘍、又はER及び/又は一次腫瘍>3cmを有する<50才の患者は、3ウィークリー静脈内レジメンにおいて6サイクル、アジュバントシクロホスファミド、メトトレキサート、及び5フルオロウラシルを受けた。ER、リンパ節陽性腫瘍を有する>50才の患者はまたCMFを受けた。エストロゲン受容体量を、酵素結合免疫吸着測定法技術を使用して決定した。サイトゾルERレベルが全サイトゾルタンパク質の>10fmol/mgである時、腫瘍が陽性であると考えた。HER2ステータスをHercepTestで評価した。受容体値を、EORTCクオリティコントロールスキームにおける参加によってモニタした。手術可能なNSCLCシリーズは、30の腺癌及び67の扁平上皮癌からの外科的切除試料を含んだ。臨床及び病理学データは75の癌について入手可能だった。35のケースはステージT1であり、40ケースはステージT2だった。53のケースはステージN0であり、22のケースはステージN1だった。患者はアジュバント化学療法を受けず、放射線療法に関する情報は入手不可だった。頭頸部扁平上皮癌シリーズは、11の中咽頭癌、27の口腔に生じる癌、17の喉頭癌及び75の下咽頭癌を含んだ。9の癌はUICCステージ1であり、16はステージ2であり、29はステージ3であり、76はステージ4だった。術後に108の患者は放射線治療を受けた。実施例2ゲノムコピー数及び発現分析Affymetrix500KSNPアレイ分析では、ゲノムDNA調製、チッププロセシング及びデータ分析を過去に公開のように実施した。有意ゲイン又はロスの領域を、GISTICアルゴリズムを使用して同定した。適合腫瘍サンプルの発現アレイデータを収集するために、RNAを88ケースの一次乳癌からの凍結組織から抽出し、AffymetrixHGU133遺伝子発現マイクロアレイに適用した。遺伝子プローブ強度データを、腫瘍を公開基準に従いbasal、luminalA、luminalB、Her2及び正常タイプに再分類するために使用した。226507atプローブセットを、PAK1mRNA発現を代表するために選択した。実施例3細胞培養及び生存度アッセイ細胞株をHealthScienceResearchResourcesBank又はAmericanTypeCultureCollectionから入手し、10ウシ胎児血清及び4mMのLグルタミンを有するRoswellParkMemorialInstitute1640培地又はダルベッコ変法イーグル培地において37°C及び5CO2で維持した。DNAへのチミジン取り込みによる細胞増殖の分析では、細胞を18時間、1μCi/ウェル[3H]チミジンでインキュベートし、FiltermateTM196harvesterを使用してUnifilterGF/Cプレートに収集した。MicroScintTM20液体シンチレーションカクテルを乾燥フィルタープレートに加え、続いて密封し、TopcountTMにおいてカウントした。フローサイトメトリーによる細胞周期分析では、1×106の密度の細胞を70氷冷エタノールにおいて1時間固定し、次いでPBSで洗浄し、ヨウ化プロピジウム溶液、0.05mg/mlのPIにおいて3時間4°Cでインキュベートした。細胞をFacScanフローサイトメーターで直ちに分析した。細胞生存におけるPAK1の役割を確認するために、細胞質ヒストン関連DNA断片の量をRocheのCellDeathDetectionELISAPluskitを使用して定量化した。また、フローサイトメトリーによる細胞死分析では、細胞を遠心分離によって収集し、製造者の指示に従ってアネキシンVFITC及びPI溶液で染色した。200化合物ライブラリーを使用したpharmarray生存度スクリーンでは、EBC1shPAK1細胞をcompletegrowthmediumにおいて培養し、化合物の添加より前に、未処理か又は300ng/mLのドキシサイクリンで3日間処理した。次いで細胞を384ウェルプレートに適切な密度で再播種し、72時間、各化合物の6濃度で処理した。細胞生存度を、CellTiterGloLuminescentAssayを使用してATP量によって評価した。細胞増殖阻害及びEC50差異を、PAK1ノックダウン及び野生型細胞について決定した。実施例4RNA干渉及び誘導性shRNA細胞プールの生成PAK1及びPAK2の低分子干渉RNAオリゴヌクレオチドをDharmaconRNAiTechnologiesから得た。この研究において使用された低分子ヘアピン型RNAオリゴヌクレオチドは次の通りである:LacZshRNA5’CTTATAAGTTCCCTATCAGTGATAGAGATCCCCAATAAGCGTTGGCAATTTATTCAAGAGATAAATTGCCAACGCTTATTTTTTTTGGAA3’、LacZshRNA5’TTCCAAAAAAAATAAGCGTTGGCAATTTATCTCTTGAATAAATTGCCAACGCTTATTGGGGATCTCTATCACTGATAGGGAACTTATAAG3’、PAK1shRNA15’GATCCCCGAAGAGAGGTTCAGCTAAATTCAAGAGATTTAGCTGAACCTCTCTTCTTTTTTGGAAA3’、PAK1shRNA15’AGCTTTTCCAAAAAAGAAGAGAGGTTCAGCTAAATCTCTTGAATTTAGCTGAACCTCTCTTCGGG3’、PAK2shRNA35’GATCCCCCTGCATAACCTGAATGAAATTCAAGAGATTTCATTCAGGTTATGCAGTTTTTTGGAAA3’、PAK2shRNA35’AGCTTTTCCAAAAAACTGCATAACCTGAATGAAATCTCTTGAATTTCATTCAGGTTATGCAGGGG-3’。誘発性shRNA保有レンチウイルスコンストラクトを、前述の方法に基づき、LipofectamineTM使用してHEK293T細胞において水疱性口内炎ウイルスエンベロープ糖タンパク質及びHIV1パッケージングタンパク質を発現するプラスミドを用いて、所望のshRNAを有するpHUSHLentiGFP及びpHUSHLentidsRedコンストラクトを共トランスフェクトすることによって作成した。標的細胞をこれらのウイルスで形質導入し、dsRed又はGFP又は双方の存在についてフローサイトメトリーによって滅菌ソーティングした。細胞をウエスタンブロット分析によってドキシサイクリン誘発タンパク質ノックダウンについて特徴付けた。実施例5イムノブロッティング及び免疫蛍光凍結腫瘍を小Bessman組織粉砕機を使用して乾燥氷上において粉砕し、タンパク質抽出物を細胞抽出バッファー、1mMのフッ化フェニルメチルスルホニル、ホスファターゼインヒビターカクテル1/2、及び1錠のCompleteEDTAfreeMiniTMプロテアーゼインヒビターカクテルで4°Cで調製した。溶解物を15分間16,100gで遠心分離し、タンパク質濃度をBCAタンパク質アッセイを使用して決定した。ウエスタンブロット分析では、タンパク質を4-12SDSPAGEで分離し、ニトロセルロース膜に移した。イムノブロッティングを、PAK1、p27、E2F1及び抗βアクチンについて一次抗体を使用して実施した。二次抗体をPierceBiotechnologyから得た。免疫蛍光イメージングをp27Kip1について一次抗体を使用して実施した。二次抗体をMilliporeCorporationから得た。画像を自動分析ルーチンを使用してMetamorphにおいて分析した。簡潔には、核染色パターンを均一にするために平滑化フィルタをDAPIチャンネルに適用した。次いでMetamorphにおけるMWCSアプリケーションを使用し、DAPI染色核を同定しカウントし、Cy3チャンネルにおいてp27について陽性又は陰性としてそれらを分類した。実施例6腫瘍異種移植片モデル培養NCIH520.X1及びEBC1細胞を培養物からとり、ハンクス平衡塩液に懸濁し、Matrigelと1:1に混合し、その後ナイーブ雌NCRヌードマウスの右脇腹に移植した。およそ250mm3の平均体積の腫瘍を有するマウスを、各10マウスの治療コホートにグループ化した。マウスは5スクロースのみ又は5スクロース1mg/mlのドキシサイクリンを、コントロール及びノックダウンコホートでそれぞれ受けた。全水ボトルを週に3回変えた。体重及び腫瘍体積測定を研究の間、週に2回測定した。全実験手順はAmericanPhysiologySocietyの指針に従い、GenentechsInstitutionalAnimalCareandUseCommitteeに承認された。腫瘍体積を次の式によって算出した:腫瘍体積=0.5、ここでaは最大腫瘍直径であり、bは垂直腫瘍直径である。腫瘍体積結果を平均腫瘍体積±平均の標準誤差として表す。研究の終了時点でのパーセント増殖阻害を、INH=100[EOSビヒクル-EOS処理/EOSビヒクル]として算出した。Dunnetのt検定を使用したデータ分析及びp値の生成をJMPソフトウェアを使用して実施した。異種移植片組織を10の中性緩衝化ホルマリンにおいて24時間固定し、次いでプロセシングし、パラフィン包埋した。切片を3μmの厚さでカットし、十分な生腫瘍を有する試料を免疫組織化学によって更に評価した。抗Ki67を検出のためにDAKOARKKitと共に使用した。組織をヘマトキシリンで対比染色し、脱水し、マウントした。抗原回復を製造者の指示に従いDAKOTargetRetrievalKitを用いて実施した。免疫組織化学的Ki67陽性細胞の定量化のために、画像をx100の最終倍率でAriolSL50自動スライドスキャニングプラットフォームによって取得した。腫瘍特異的領域をAriolソフトウェアにおいて分析のために手動で同定した。33ジアミノベンジジン特異的色範囲を色相、彩度、及び強度色空間を使用して特定し、染色の領域を定量化し、アウトプットは全細胞数に対する全Ki67陽性細胞だった。前述の説明又は以下の請求の範囲に開示される特性は、それらの特定の形態において、又は開示の機能を実施するための手段、又は開示の結果を得るための方法又はプロセスによって表現され、その多様な形態において発明を実現するために、適宜別々に、又はこのような特性の何れかの組合せにおいて活用されうる。前述の発明を、例えば理解の明瞭化のために、説明及び実施例によって幾らか詳細に記載した。変化及び改良が添付の請求の範囲内において実施されうることが、当業者に明らかだろう。従って、上記記載は説明を意図するものであり、制限するものではないことが理解される。従って、発明の範囲は上記記載を基準にして決定されるべきではなく、以下の添付の請求の範囲を、かかる請求の範囲が有する全範囲の均等なものと共に基準にして決定されるべきである。ここに引用される特許、公開出願、及び科学文献は当業者の知識を確立し、各々が特異的及び個々に出典明記によって援用されるように記載されるのと同じ程度に、それらの全体を出典明記によってここに援用する。ここに引用される何れかの参照文献及びこの明細書の特定の教示間の何れかの矛盾は、後者により解消される。同様に、単語又は表現の分野で理解される定義及びこの明細書において特に示される単語又は表現の定義は、後者によって解消される。"