"琥珀から低級アルコールで抽出する工程を含むエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。琥珀を粉砕後疎水性有機溶媒により洗浄する工程、低級アルコールで抽出する工程、及びカラムクロマトグラフィーで分画する工程を含む、エンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。カラムクロマトグラフィーが、炭化水素が化学結合したシリカゲルを充填剤とする、請求項2記載の方法。琥珀を粉砕後疎水性有機溶媒により洗浄する工程、低級アルコールで抽出する工程、及び二相分離により分画する工程を含むエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。前記二相分離により分画する工程が、低級エーテル及び水相による二相分離により分画する工程であって、水相に酸性の水溶液及び塩基性の水溶液を用いて、それぞれ塩基性の水溶性成分及び酸性の水溶性成分を除去して中性画分を得る工程を含む請求項4記載の方法。前記二相分離により分画する工程が、低級エーテル及び水相による二相分離により分画する工程であって、水相に塩基性の水溶液を用いて酸性の水溶性成分を抽出し、次に再度有機溶媒で逆抽出して酸性画分を得る工程を含む請求項4記載の方法。低級アルコールでの抽出を微温ないし室温で7日以上行なう請求項1~6いずれか1項記載の方法。疎水性有機溶媒が、ベンゼン、ヘキサン及びクロロホルムからなる群から選択される1種以上の有機溶媒である請求項2~7いずれか1項に記載のエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。低級アルコールが、エタノール、メタノール、プロパノールもしくはブタノール又はこれらのアルコールからなる群から選ばれる2種以上のアルコール混合物である請求項1~8いずれか1項記載の方法。琥珀から抽出した抽出物を含むエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤。請求項1~9いずれか1項に記載の方法により得られるエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤。琥珀から低級アルコールで抽出する工程を含む方法で抽出した抽出物を含むメラニン産生抑制剤。請求項1~9いずれか1項に記載の方法により得られるエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤を含むメラニン産生抑制剤。請求項12又は13記載のメラニン産生抑制剤を含む美白用化粧料。上述のように、美白のために、エンドセリン-1及びSCF産生抑制剤を開発する試みがあり、例としては、白蘭花の抽出物特許文献1、ブラックジンジャーの抽出物特許文献2、ユッカの抽出物特許文献3、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物特許文献5、ビワの花部からの抽出物特許文献6、コウカトケンの抽出物特許文献7などがあげられる。しかしながら、これらは遺伝子レベルにおいてはエンドセリン-1及びSCFのmRNA発現上昇抑制を確認しているもののタンパク質レベルでは、エンドセリン-1及びSCFの産生抑制を確認していないか、具体的にエンドセリン-1及びSCF産生抑制をタンパク質レベルで確認されていても、最終的な目的であるメラニンの産生抑制については確認していない。また、琥珀熱水抽出物について、種々の効能のひとつとして、メラニン産生抑制作用に言及する報告はあるものの、その抑制作用は、30-40程度の抑制に過ぎないものであった。そこで、本願発明は、琥珀の抽出物について、具体的にメラニン産生を抑えることが確認できるエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤を開発することを第1の課題とする。本願発明は、琥珀由来のより効果的なメラニン産生抑制剤を開発することを第2の課題とする。本願発明者等は、新規なエンドセリン-1及びSCF産生抑制剤を探索していたところ、琥珀抽出物をカラムクロマトグラフィー又は二相分離により分画した特定の画分から、エンドセリン-1及びSCF産生抑制剤を見出した。さらに、本願発明者らは、これらのエンドセリン-1及びSCF産生抑制剤が有意なメラニン産生抑制能を有することを確認して、本願発明を完成させたものである。本願発明は以下の発明を包含する。1.琥珀から低級アルコールで抽出する工程を含むエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。2.琥珀を粉砕後疎水性有機溶媒により洗浄する工程、低級アルコールで抽出する工程、及びカラムクロマトグラフィーで分画する工程を含む、エンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。3.カラムクロマトグラフィーが、炭化水素が化学結合したシリカゲルを充填剤とする、上記2記載の方法。4.琥珀を粉砕後疎水性有機溶媒により洗浄する工程、低級アルコールで抽出する工程、及び二相分離により分画する工程を含むエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。5.前記二相分離により分画する工程が、低級エーテル及び水相による二相分離により分画する工程であって、水相に酸性の水溶液及び塩基性の水溶液を用いて、それぞれ塩基性の水溶性成分及び酸性の水溶性成分を除去して中性画分を得る工程を含む上記4記載の方法。6.前記二相分離により分画する工程が、低級エーテル及び水相による二相分離により分画する工程であって、水相に塩基性の水溶液を用いて酸性の水溶性成分を抽出し、次に再度有機溶媒で逆抽出して酸性画分を得る工程を含む上記4記載の方法。7.低級アルコールでの抽出を微温ないし室温で7日以上行なう上記1~6いずれかに記載の方法。8.疎水性有機溶媒が、ベンゼン、ヘキサン及びクロロホルムからなる群から選択される1種以上の有機溶媒である上記2~7いずれかに記載のエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤の製造方法。9.低級アルコールが、エタノール、メタノール、プロパノールもしくはブタノール又はこれらのアルコールからなる群から選ばれる2種以上のアルコール混合物である上記1~8いずれかに記載の方法。10.琥珀から抽出した抽出物を含むエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤。11.上記1~9いずれかに記載の方法により得られるエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤。12.琥珀から低級アルコールで抽出する工程を含む方法で抽出した抽出物を含むメラニン産生抑制剤。13.上記1~9いずれかに記載の方法により得られるエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤を含むメラニン産生抑制剤。14.上記12又は13記載のメラニン産生抑制剤を含む美白用化粧料。本願発明は、琥珀成分中から、新規なエンドセリン-1及びSCF産生抑制剤並びにメラニン産生抑制剤を提供するという極めて優れた効果を奏する。また、本発明に係る新規なエンドセリン-1及びSCF産生抑制剤並びにメラニン産生抑制剤はエタノールに溶解するため、ざらつき感を与えることなく化粧品に配合できる。更に、本願発明の新規なエンドセリン-1及びSCF産生抑制剤並びにメラニン産生抑制剤の製造は、40°C程度~室温のエタノールに約1か月浸漬するだけでも可能で、高エネルギーを発する機材を用意しなくても調製できて簡便である。1.はじめに1-1.琥珀琥珀とは主にマツ属植物の樹脂が長期間地下に埋没し凝結してできた化石で、主に樹脂、精油、コハク酸等を含む。エタノールやジエチルエーテル或いはベンゼンに少量溶ける非特許文献1。琥珀そのものを装飾工芸品、宝石、絶縁材料に用いたり、琥珀の削りカスをお香にするなどの用途のほかに、19世紀頃にはキズ薬などに使用されていた。さらに老化に伴う種種の病気に対する防止効果が言い伝えられてきた。1-2.エンドセリンエンドセリンは、21個のアミノ酸で構成される強力な血管収縮ペプチドであり、エンドセリン-1、エンドセリン-2、エンドセリン-3という3種類のペプチド異性体がある。肺、腎臓、脳、胎盤など体の様々な組織で産生されるが、エンドセリン-1は特に血管の内皮で非常に多く産生されている。エンドセリンの一番重要な作用は、血管収縮であるが、線維芽細胞の活性化、および細胞増殖という作用もある。エンドセリン1は標的細胞のエンドセリン受容体ETA受容体及びETB受容体を介してホスホリパーゼCの活性化、カルシウムチャンネルの開口など多様な細胞内シグナル伝達系を活性化する。その結果、ホルモン神経伝達物質分泌調節、細胞増殖分化作用などさまざまな作用が奏される。さらに、エンドセリンはメラノサイトの発生増殖に必須な物質とされている。1-3.SCFSCFは、造血の初期に作用するサイトカインであり、273個のアミノ酸で構成される膜結合型SCFと、タンパク質分解酵素の作用により切断されて膜から遊離する分泌型SCFとが存在する。SCFは主に線維芽細胞、骨髄の内皮細胞等で産生される。1-4.エンドセリン-1及びSCFの産生抑制によるメラニン合成刺激の抑制多くの研究から、UV-B照射後に表皮ケラチノサイトからエンドセリン-1やSCF等の因子が産生され、それらの刺激を受けて表皮メラノサイトが増殖し、メラニン合成能を高めることが報告されている。特に、エンドセリン-1とSCFを共存させると、各々単独に作用させるよりもメラノサイトの増殖、並びにチロシナーゼの発現を相乗的に促進させることが報告されており、これらの因子の下流で働く情報伝達系を遮断することに起因したメラニン産生抑制を介する美白効果を誘導する物質の開発が盛んに行われている。本願発明者らは、琥珀抽出物からエンドセリン-1及びSCFの産生抑制能を有する組成物を見出した。2.エンドセリン-1産生抑制剤及びSCF産生抑制剤の琥珀からの調製方法本願発明のエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤は、琥珀から抽出したエンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する組成物、具体的には、以下の2-1.及び2-2.でそれぞれ説明される1琥珀から抽出されるエンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する抽出物及び2琥珀からのエンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する抽出物の精製される組成物粗精製品を含むが包含される。2-1.琥珀からのエンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する抽出物の調製本願発明の琥珀からエンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する抽出物を抽出する方法には、琥珀から低級アルコールで有効成分を抽出する工程を含んでいる。より具体的には、本願発明は、少なくとも、琥珀から有効成分である抽出物を低級アルコールで抽出する工程を含み、好適には、抽出の前処理工程として、琥珀を粉砕する工程、及び、必要に応じて、粉砕された琥珀を疎水性有機溶媒で洗浄処理する工程が含まれる。また、本願発明には、前記琥珀から低級アルコールで抽出する工程により抽出された抽出物を炭化水素結合型シリカゲルカラムで分画する工程を含めることもできる。以下に工程について説明する。前処理工程琥珀を溶媒抽出しやすいように、適宜な大きさまで粉砕する。粉砕手段としては、やすり、ジェットミル粉砕機を用いることができる。また、琥珀を宝石として加工する際に出る切りくずを粉砕したものなどを用いることもできる。粉砕する大きさは特に限定されないが、溶媒による抽出効率から見て、例えば、平均粒径が100μmまで、好適には、10~30μm程度とすることができる。粉砕した琥珀を、必要に応じ、疎水性有機溶媒で、洗浄する。疎水性有機溶媒としては、ヘキサン、ベンゼン、クロロホルム又はこれらの混合物等を用いることができる。この洗浄は、省略することもできる。抽出工程琥珀又は前記前処理工程で粉砕若しくは粉砕及び洗浄された琥珀を低級アルコールに浸漬して抽出物を得ることができる。例えば、琥珀又は前記前処理工程で粉砕若しくは粉砕及び洗浄された琥珀を微温もしくは室温で低級アルコールに長期間浸漬して抽出物を得る。具体的には、琥珀又は前記前処理工程で粉砕若しくは粉砕及び洗浄された琥珀を、例えば25°Cから50°Cの温度で、低級アルコールに、7日以上、好適には15日以上浸漬することにより抽出物を得る。より具体的には、例えば、エタノールの場合には、琥珀又は前記前処理工程で粉砕若しくは粉砕及び洗浄された琥珀を、25°Cから50°Cの温度で7日以上、好適には40°Cで約1ヶ月15日から30日間浸漬することにより抽出物を得る。抽出物は、濃縮し、乾固すると、茶褐色あめ状の乾固物となる。なお、低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、ブタノール又はこれらの混合物などを用いることができる。このようにして得られたエンドセリン-1産生抑制能及び/又はSCF産生抑制能を有する抽出物は、エンドセリン-1産生抑制能及び/又はSCF産生抑制能を有する組成物、或いは、エンドセリン-1産生抑制能及び/又はSCF産生抑制能を増強させる組成物として使用できる。また、本抽出物は、皮膚の美白剤としても使用できる。2-2.エンドセリン-1及び/又はSCF産生抑制能を有する抽出物の粗精製物上記2-1で得られたエンドセリン-1及び/又はSCF産生抑制能を有する抽出物をカラムクロマトグラフィー又は二層分離により分画し、粗精製物としての組成物を得ることができる。これらの組成物を本願発明のエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤とすることができる。2-2-1.カラムクロマトグラフィーによる分画得られた抽出物乾固物を、低級アルコール、例えば、エタノールに溶かし、炭化水素化学結合型シリカゲル、例えばオクタデシルシリル化したシリカゲルを担体としたカラムクロマトグラフィーを行うことにより、溶出液を分画することができる。特に、最初に溶出される無色透明な液例えば、全溶出量の1~5体積の次に溶出される、濃黄色透明な液でかつ乾固したとき濃黄色あめ状になる画分例えば、全溶出量の10~15体積は、保存安定性に優れ、エンドセリン-1産生抑制能及び/又はSCF産生抑制能を有している。本分画分を、琥珀からのエンドセリン-1産生抑制能及び/又はSCF産生抑制能を有する成分を含有する組成物の粗精製物として使用できる。本画分であるこのような粗精製物は、エンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤として用いることができる。前記カラムクロマトグラフィーにより精製した抽出物には、以下の実施例におけるF2画分も含まれる。また、本画分は、乾固して又は適切な溶媒、例えば低級アルコール、具体的にはエタノールに溶解して使用できる。また、吸着カラムクロマトグラフィーにより更に、精製することができる。具体的には、吸着カラムクロマトグラフィーとしては、シリカゲルを担体としたカラムクロマトグラフィーを用いることができる。溶出溶媒としては、例えば、ベンゼン、酢酸エチルの混合液を溶媒として、具体的には、ベンゼン:酢酸エチル501で溶出することができる。2-2-2.二相分離による分画i水溶成分除去上記2-1.により得られた琥珀の低級アルコール抽出物乾固物を、適宜な有機溶媒を用いて、水相と有機溶媒相の二相で更に分画することができる。有機溶媒としては、非極性の有機溶媒、例えば、低級エーテル、ジクロロメタン、ベンゼンなどが挙げられ、具体的には、ジメチルエーテル又はジエチルエーテルが挙げられる。該有機溶媒に、得られた琥珀の低級アルコール抽出物を溶解し、溶け残った成分を除去する。次に、琥珀抽出物を溶解した有機溶媒を水で洗浄する。具体的には、純水、例えば、超純水製造装置で製造された超純水を添加し、水溶性成分を取り除く。必要に応じて、純水を用いる水溶性成分の除去を3~5度繰り返す。中性画分N画分その後、酸性の水溶液及び塩基性の水溶液を、必要に応じ、複数回添加し、混合することにより、それぞれ塩基性の水溶性成分及び酸性の水溶性成分を、最終的に着色成分が除かれるまで、除去する。まず酸性の水溶液で1回以上、たとえば、3~5回洗浄し、次に、塩基性の水溶液で、複数回洗浄し、琥珀抽出物を溶解した有機溶媒の着色が除かれるまで、洗浄することが望ましい。酸性の水溶液としては、いずれの酸性の水溶液も使用可能であるが、例えば、塩酸、クエン酸水溶液、及び酢酸が上げられ、より具体的には、pH30の希塩酸が挙げられる。塩基性の水溶液としては、いずれの塩基性の水溶液も使用可能であるが、例えば、水酸化ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、水酸化カルシウム水溶液、より具体的には、pH120の水酸化ナトリウム水溶液を用いることができる。最後に純水で洗浄する。塩基性溶媒と最後の純水での洗浄後の洗浄液はA画分調製用にまとめておく。塩基性の水溶性成分及び酸性の水溶性成分が除去された琥珀抽出物溶解有機溶媒から有機溶媒を揮発させ、エンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する組成物を得ることができる。上記中性画分N画分と命名するは、エンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する組成物、或いはエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤として用いることができる。iii酸性画分A画分上記で水溶成分が除去後の琥珀抽出物が溶解した有機溶媒を、必要に応じ、まず、酸性の水溶液で洗浄する。本酸性水溶液による洗浄は省略することもできるが、酸性洗浄液で初めに洗浄することが望ましい。次に、塩基性の水溶液で洗浄する。洗浄した後の塩基性の水溶液を集める。さらに、有機溶媒を最後に純水で洗浄した場合はこの洗浄液も上記洗浄後塩基性水溶液に加えることができる。その後、前記した洗浄後塩基性水溶液を酸で中和し、必要に応じ、飽和するまで塩を添加する。ここで加える塩は、上記洗浄で使用した塩基性水溶液とその中和のために添加した酸で生じる塩と同じ塩でよい。たとえば、塩基性水溶液として水酸化ナトリウム水溶液を用い、中和に塩酸を用いた場合は、塩化ナトリウムを塩として飽和まで添加することができる。塩で飽和後、有機溶媒で逆抽出し、有機溶媒を揮発させ、酸性画分を得ることができる。該酸性画分は、エンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する組成物とすることができる。逆抽出に用いる有機溶媒も、上述と同様に、低級エーテル、低級エーテル、ジクロロメタン、ベンゼンなどが挙げられ、具体的には、ジメチルエーテル又はジエチルエーテルが挙げられる。酸性の水溶液としては、いずれの酸性の水溶液の使用可能であるが、例えば、塩酸、クエン酸水溶液、及び酢酸が挙げられ、より具体的には、pH30の希塩酸が挙げられる。塩基性の水溶液としては、いずれの塩基性の水溶液も使用可能であるが、例えば、水酸化ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、水酸化カルシウム水溶液、より具体的には、pH120の水酸化ナトリウム水溶液を用いることができる。上記酸性画分A画分と命名するは、エンドセリン-1及び/又はSCF産生の抑制能を有する組成物、或いは、エンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤として用いることができる。2-3.エンドセリン-1の産生及びSCF産生のテスト上記2-1.で得られた琥珀抽出物、2-2-1で得られたカラムクロマトグラフィーによる粗精製物、並びに2-2-2.で得られたN画分及びA画分などのテストサンプルについて、細胞に対するエンドセリン-1の産生及びSCF産生効果を調べることにより、エンドセリン-1の産生抑制能及びSCF産生抑制能の検定をすることができる。1エンドセリン-1エンドセリン-1の発現量については、たとえば、ヒト皮膚由来の細胞、たとえば、ケラチノサイトに、テストサンプルを与え、その後、全細胞からmRNAを抽出し、たとえば、PCRの市販キットにより、エンドセリン-1のmRNA発現量を調べること事ができる。また、エンドセリン-1の直接的定量は、たとえば、放射線や蛍光、ビオチン、酵素でラベルした抗エンドセリン-1抗体を用いるElisa法で定量することもできる。2SCFSCFの発現量については、たとえば、ヒト皮膚由来の細胞、たとえば、ケラチノサイトに、テストサンプルを与え、その後、全細胞からmRNAを抽出し、たとえば、PCRの市販キットにより、SCFのmRNA発現量を調べること事ができるJournalofInvestigativeDermatology116578586。また、SCFの直接的定量は、たとえば、放射線や蛍光、ビオチン、酵素でラベルしたSCF抗体を用いるElisa法やウエスタンブロット法で定量することもできる。3.メラニン産生抑制剤上記2.で記載のエンドセリン-1産生抑制剤及び/又はSCF産生抑制剤、具体的には、2-1.で得られた琥珀抽出物、2-2-1で得られたカラムクロマトグラフィーによる粗精製物、並びに2-2-2.で得られたN画分及びA画分は、メラノサイト刺激抑制剤及び/又はメラニン産生抑制剤として使用することができる。3-1.メラニン産生抑制の検定メラニンの産生量は、ケラチノサイトとメラノサイト若しくはメラノーマ細胞の共培養の系において試料を添加して培養した後、産生されたメラニンを比色法により測定することができる6066。また、ヒト皮膚細胞を用いて、試料を添加して培養した後、フォンタナマッソン法にて染色して、その染色程度を比較して検討することもできる。4.医薬製剤又は化粧料本願発明のエンドセリン-1産生抑制剤、SCF産生抑制剤、及び/又はメラニン産生抑制剤は、適切な賦形剤を用いて、例えば、医薬製剤又は化粧料とすることができる。例えば、乳糖、シリカゲル、結晶セルロース、又はデンプンなどの添加物に吸収させることで、粉体化して製剤とすることもできる。本願発明の医薬製剤又は化粧料には、これらで通常用いられる添加剤を添加することができるが、例えば、牛血清アルブミン、卵白アルブミン、ミルクカゼインなどのタンパク質、マルトース、スクロース、トレハロースなどの糖類、ヘパリン、キトサン、アルギン酸、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、カルボキシメチルセルロースなどの多糖類などを安定化剤として添加することもできる。さらに、増粘剤としては例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、デキストラン、ヒアルロン酸ナトリウム等の水溶性多糖類等が挙げられる。油相の増粘剤として、各種脂肪酸や油脂類等が挙げられる。保存剤としては例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のアルキルパラベン等が挙げられる。4-1.化粧料本願発明のエンドセリン-1産生抑制剤、SCF産生抑制剤、及び/又はメラニン産生抑制剤は化粧料に添加することができる。例えば、エンドセリン-1産生抑制能及びSCF産生抑制能を有する琥珀からの抽出物、又は該抽出物から精製した組成物は、美白用の化粧料に添加することができる。より具体的には、イ本願発明の琥珀から低級アルコールを用いて抽出したエンドセリン-1産生抑制能及びSCF産生抑制能を有する抽出物、ロ琥珀からのエンドセリン-1産生抑制能及び/又はSCF産生抑制能を有する成分を含有する組成物の粗精製物、若しくはF2画分、ハ中性画分N画分及び/又はニ酸性画分A画分を含有する美白用化粧料とすることができる。本発明の琥珀抽出物は乾固された状態又は適宜な溶媒に溶解した状態、例えば、エタノールで溶解した状態で、化粧料に添加することができる。本発明のエンドセリン-1産生抑制剤、SCF産生抑制剤、及び/又はメラニン産生抑制剤の含有量は、化粧料全体を100とした場合に、0.0001~50質量程度添加することができる。例えば、上記した2-1.の琥珀抽出物、2-2-1.カラムクロマトグラフィーによる分画、及び又は2-2-2.二相分離による分画、いずれについても、化粧料全体を100とした場合に、0001~50質量程度、より好ましくは、0001~10質量添加することができる。具体的には、F2画分、N画分、A画分又は前記3種の画分の内2種以上の混合物を、化粧料全体を100とした場合に、0001~50質量程度、より好ましくは、0001~10質量程度添加することができる。本発明の琥珀から得られたエンドセリン-1産生抑制剤、SCF産生抑制剤、及び/又はメラニン産生抑制剤が添加された化粧料は、その剤形は問わず、乳液,クリーム,軟膏,溶液,ゲル等の剤形や、パック,ローション,パウダー,スティック等が挙げられる。本発明の化粧料には、化粧料の原料として通常用いられるその他の添加剤成分を適宜含有させることができる。また、本発明の化粧料には、通常化粧料原料として用いられるその他の基剤成分を含有させることができる。基剤成分としては、液体油脂,固体油脂シア脂等,ロウ類ミツロウ等,炭化水素油流動パラフィン,パラフィン,ワセリン等,高級脂肪酸ステアリン酸等,高級アルコールセタノール等,合成エステル油ミリスチン酸オクチルドデシル等,シリコーン類メチルポリシロキサン等等の油性成分,各種の界面活性剤,金属イオン封鎖剤,水溶性高分子カルボキシビニルポリマー等,増粘剤,各種の粉末成分,香料,水等が挙げられる。4-2.皮膚外用薬本発明の琥珀から得られたエンドセリン-1産生抑制剤、SCF産生抑制剤、及び/又はメラニン産生抑制剤は、また、皮膚外用薬に添加することもできる。このような皮膚外用薬は、シミ、くすみ対策、又は皮膚の色素沈着の除去、防止などに用いることができる。皮膚外用薬としては、液状、ペースト状、クリーム状、軟膏状、パウダー状、貼付剤など種々の形態に製造できる。さらに皮膚外用薬には、他の通常添加される成分、例えば、鉱物油、高級アルコール、動植物油、ワックス類、シリコーン油などの油剤、保湿剤、湿潤剤、水溶性高分子、低級アルコール、水、抗酸化剤、pH調整剤、色素、顔料、防腐殺菌剤、消炎剤などの薬効剤、キレート剤などを添加することもできる。また、例えば、上記した2-1.の琥珀抽出物、2-2-1.カラムクロマトグラフィーによる分画、及び又は2-2-2.二相分離による分画、いずれについても、皮膚外用薬全体を100とした場合に、0001~50質量程度、より好ましくは、0001~10質量添加することができる。具体的には、F2画分、N画分、A画分又は前記3種の画分の内2種以上の混合物を、皮膚外用薬全体を100とした場合に、0001~50質量程度、好より好ましくは、0001~10質量程度添加することができる。[実施例1]<琥珀の抽出法>ロシアバルト海沿岸産琥珀を100メッシュ程度にまで粉砕し、10gをヘキサン100mLに浸漬し、室温で一週間放置後、ろ紙No2でろ過し、ろ液は廃棄した。ろ取した粉末をエタノール100mLに浸漬し、40°Cの水浴上あるいは恒温機内に一週間放置した後、ろ紙No2でろ過し、ろ液は暗所で保管した。ろ取した粉末はエタノール50mLに浸漬し、アルミホイル等でフタをして40°Cの水浴上あるいは恒温機内に一週間放置した後、ろ紙No2で再度ろ過した。さらに50mLのエタノールに浸漬することを2回繰り返し、ろ過後、ろ液をすべて合わせた。これをわずかに温めながら38°C程度エバポレーターで濃縮乾固し、茶褐色であめ状の琥珀エタノール抽出物約13gを得た。<F2画分の調製>このエタノール抽出物04gをエタノール2mLに溶かし、オクタデシルシリル化シリカゲル和光純薬工業社製ワコーゲル100C1811gを担体とし、メタノール和光純薬工業社製試薬特級を溶媒としたカラムクロマトグラフィーカラムサイズ22cmid×47cmを行い、溶出液の色により分取した。通常は紫外線可視分光光度計を用いて特定波長の吸光度で判断し分取するが、琥珀含有成分に関する情報を正確に得ることが困難なため、目視で判断した。溶出液が濃黄色透明である画分採取量17mLを集め、エバポレーターで乾固し、濃黄色透明なあめ状画分を330mg得た。この画分をF2とした。<中性画分及び酸性画分の調製>またF2とは別に、エタノール抽出物05gをジエチルエーテル国産化学社製試薬特級20mLに溶かし、溶け残ったものをろ過して除去した後、ろ液を100mL分液ロートに入れ、超純水製造装置日本ミリポア社製から採取した超純水5mLを加えて、栓をして振り混ぜ、時々コックを開いて内圧を戻しながら、平衡に達するまで1分程度振り混ぜて抽出した。その後2層に分離するまで5分程静置し、下層を捨てた。再び超純水5mLを分液ロートに加えて抽出を繰り返し、下層を取り除く作業を2回繰り返した。その後、あらかじめ超純水18mLに塩酸シグマ社製試薬特級2μLを加えて調製しておいたpH30塩酸を5mL分液ロートに加えて抽出し、下層を取り除く作業を3回繰り返した。再度、超純水5mLを分液ロートに加えて抽出し、下層を捨てた。その後、あらかじめ超純水62mLに水酸化ナトリウム関東化学社製45mgを加えて調製しておいたpH120水酸化ナトリウム水溶液を5mL分液ロートに加えて抽出し、下層を取り除く作業を下層に色がつかなくなるまで6~12回繰り返した。この時、振り混ぜると2層に分離できなくなることがあったが、その際は一夜放置して分離させた。また、一夜放置しても分離できなかった時は、分液ロートの中身を取り出し、遠心機KUBOTA社製で遠心3000rpm、30分して分離させた。このpH120水酸化ナトリウム水溶液の下層を1つにまとめ、暗所で保管した。これに残った分液ロートに超純水5mLを加えて抽出し、下層を捨てた。分液ロートに残った有機層を集め、エバポレーターで乾固し、薄黄色固体の画分を105mg得た。この画分をNとした。また、暗所で保管しておいたpH120水酸化ナトリウム水溶液の下層に塩酸を加えて中和させた後、飽和状態になるまで塩化ナトリウム純正化学社製試薬特級を加え、その後100mL分液ロートを用いてこの下層の溶液20mLにつきジエチルエーテル5mLを3回加えて逆抽出した。そして、有機層をすべて合わせてエバポレーターで乾固し、淡黄色固体の画分を233mg得た。この画分をAとした。[実施例2]<F2画分、N画分及びA画分のGeneChip商標による遺伝子解析でのエンドセリン-1遺伝子並びにSCF遺伝子の発現確認>ダルベッコ変性イーグル培地DMEMインビトロジェン社製に5ウシ血清FETALBOVINESERUM、以下FBSとするEQUITECHBIO社製と1抗菌剤PenicillinStreptomycinGlutamineインビトロジェン社製を添加した培養液以下、DMEM培地とするに、ヒト由来不死化表皮角化細胞以下HaCaTとするを264×106cellsmLの濃度で懸濁し、あらかじめDMEM培地を13mL入れておいた直径15cmのディッシュNunc社製に2mLずつ播種し、95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養した。培養上清を吸引除去後、フェノールレッド不含ダルベッコ変性イーグル培地インビトロジェン社製に1抗菌剤PenicillinStreptomycinGlutamineを入れた培養液以下、無血清DMEM培地とするを15mLずつディッシュに入れ、さらに48時間培養した。培養上清を吸引除去後、フェノールレッド不含ダルベッコ変性イーグル培地に01ウシ血清アルブミンEQUITECHBIO社製と1抗菌剤PenicillinStreptomycinGlutamineを入れた培養液以下、処理用DMEM培地とするを10mL入れた。そこへ、終濃度30μgmLになるようエタノールに溶解したF2画分及びN画分、A画分をそれぞれ処理用DMEM培地に混ぜたものエタノール終濃度033を、5mLずつ添加した。また、処理用DMEM培地にエタノール終濃度033になるようエタノールを添加した培養液を処理したものをcontrolとした。これらのディッシュを95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養した。RNA精製キットRNeasyMiniKitQIAGEN社製を用いて処理した細胞から総RNAを抽出した産物を以下、totalRNAとする。totalRNA量は分光光度計NanoDropを用いて260nmにおける吸光度により求めた。このtotalRNAをGeneChip商標EukaryoticPolyARNAControlKit、GeneChip商標Expression3’AmplificationOneCyclecDNASynthesisKit、GeneChip商標SampleCleanupModule、GeneChip商標Expression3’AmplificationReagentsを用い、Affymetrix社が推奨するプロトコルに準じてBiotinLabeledした相補的RNAを調製した。GeneChip商標HybridazationOven640にてcRNAをGeneChip商標にハイブリダイゼーションした後、GeneChip商標FluidicsStation450で洗浄し、染色後GeneChip商標Scanner3000で蛍光強度を読み取った。マイクロアレイデータ解析ソフトウェアGeneSpringGXVer905アジレントテクノロジー社製を用い、得られた画像データを元に発光量の割合を測定し、controlサンプルのエンドセリン-1mRNA発現量を100とした時のエンドセリン-1mRNA発現量の比、並びにcontrolサンプルのSCFmRNA発現量を100とした時のSCFmRNA発現量の比を算出した。結果を表1に示す。HaCaTにおいて、F2画分を添加したときのエンドセリン-1mRNA発現は、controlサンプルに対して84、またN画分を同様に添加した場合は97、さらにA画分を同様に添加した場合は484と、有意に発現抑制されていることが示唆された。またF2画分を添加したときのSCFmRNA発現は、controlサンプルに対して271、またN画分を同様に添加した場合は120、さらにA画分を同様に添加した場合は287と、有意に発現抑制されていることが示唆された。[実施例3]<UVB照射後のHaCaTを用いた琥珀エタノール抽出物並びにF2画分、N画分、及びA画分のエンドセリン-1mRNA発現抑制並びにSCFmRNA発現抑制確認>DMEM培地に、HaCaTを925×105cellsmLの濃度で懸濁し、あらかじめDMEM培地を41mL入れておいた直径60cmのディッシュNunc社製に865μLずつ播種し、95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養した。培養上清を吸引除去後、無血清DMEM培地を50mLずつディッシュに入れ、さらに48時間培養した。培養上清を吸引除去後、PhosphateBufferedSaline以下、PBSとするを20mL入れた。そこへ、302nmにピークを有する6Wの放電管UVP社製を取り付けたUVSL26P紫外線照射装置UVP社製を用いて90mJcm2の照射量になるように125μWcm2のUVBを12分間照射し、その後ただちに処理用DMEM培地375mLに交換した。次いで、終濃度25μgmLになるようエタノールに溶解した琥珀エタノール抽出物及びF2画分、N画分、A画分をそれぞれ処理用DMEM培地に混ぜたものエタノール終濃度025を、125mLずつ添加した。また、UVBを照射せずに処理用DMEM培地にエタノール終濃度025になるようエタノールを添加した培養液を処理したものをUVB未照射サンプルとした。さらに、UVB照射後、処理用DMEM培地にエタノール終濃度025になるようエタノールを添加した培養液を処理したものをUVB照射サンプルとした。これらのディッシュを95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養した。これらを上記の実施例2に示した方法でtotalRNAを抽出し、totalRNA量を求めた。次いでこのtotalRNAを元に、PrimeScriptTMRTreagentKitTaKaRa社製を用い、添付文書に従ってRT反応を行った。さらにSYBR商標PremixExTaqTMIITaKaRa社製を用い、添付文書に従って反応液を調製した。この反応液をquantitativeRTPCR法によりエンドセリン-1、SCF及び内部標準であるGAPDHの各プライマーと反応させた。そして、UVB未照射サンプルのエンドセリン-1mRNA発現量を100としたときの試料添加サンプルにおける相対的な変化を算出した。その際、内部標準であるGAPDHの値で補正した。またSCFmRNA発現量についても同様にして算出した。エンドセリン-1mRNA発現の結果を図1-1に示す。HaCaTにおいて、UVB照射後のエンドセリン-1mRNA発現は、UVB未照射サンプルに対して147にまで発現上昇したのに対し、UVB照射後に琥珀エタノール抽出物を添加した場合は、UVB未照射サンプルに対して291、またF2画分を同様に添加した場合は311、さらにN画分を同様に添加した場合は323、そしてA画分を同様に添加した場合は608と、UVBを照射したにも拘らずエンドセリン-1mRNA発現が有意に抑制されていることが確認された。次にSCFmRNA発現の結果を図1-2に示す。HaCaTにおいて、UVB照射後のSCFmRNA発現は、UVB未照射サンプルに対して120にまで発現上昇したのに対し、UVB照射後に琥珀エタノール抽出物を添加した場合は、UVB未照射サンプルに対して623、またF2画分を同様に添加した場合は630、さらにN画分を同様に添加した場合は620、そしてA画分を同様に添加した場合は888と、UVBを照射したにも拘らずSCFmRNA発現が有意に抑制されていることが確認された。[実施例4]<UVB照射後のHaCaTを用いた琥珀エタノール抽出物並びにF2画分、N画分、及びA画分のエンドセリン-1タンパク質産生抑制確認>DMEM培地に、HaCaTを540×106cellsmLの濃度で懸濁し、あらかじめDMEM培地を2mL入れておいた6穴プレートTPP社製に83μLずつ播種し、95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養した。培養上清を吸引除去後、無血清DMEM培地を2mLずつ入れ、さらに48時間培養した。培養上清を吸引除去後、PBSを20mL入れた。そこへ、302nmにピークを有する6Wの放電管を取り付けたUVSL26P紫外線照射装置を用いて30mJcm2の照射量になるように125μWcm2のUVBを4分間照射し、その後ただちにPBSを抜いた。そこへ終濃度25、50μgmLになるようそれぞれエタノールに溶解した琥珀エタノール抽出物及びF2画分、N画分、A画分をそれぞれ処理用DMEM培地に混ぜたものを、15mLずつ入れた。また、UVB照射後、処理用DMEM培地にエタノール終濃度025になるようエタノールを添加した培養液を処理したものをcontrolとした。これらのプレートを95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養し、その後培養上清中に産生されたエンドセリン-1量を、Endothelin1HumanELISAKitRDSystems社製を用いたELISA法により測定した。そしてcontrolサンプルにおけるエンドセリン-1産生量を100としたときの、試料添加サンプルにおけるエンドセリン-1産生量の割合を算出した。結果を図2に示す。UVB照射後のHaCaTにおいて、琥珀エタノール抽出物を終濃度25μgmLになるよう添加したときのエンドセリン-1産生量は、controlサンプルに対して622、またF2画分を同様に添加した場合は514、さらにN画分を同様に添加した場合は509、そしてA画分を同様に添加した場合は744にそれぞれ抑制されていたことから、琥珀エタノール抽出物及びF2画分、N画分、A画分は有意なエンドセリン-1産生抑制能を有することが確認された。また、琥珀エタノール抽出物、F2画分、N画分及びA画分は、濃度依存的にエンドセリン-1産生を抑制することがわかった。[実施例5]<HaCaT細胞と正常マウスメラノサイトとの共培養を用いた琥珀エタノール抽出物並びにF2画分及びN画分のメラニン産生抑制確認>RPMI1640培地インビトロジェン社製に10FBS、1抗菌剤PenicillinStreptomycinGlutamine、01mMβ-メルカプトエタノールシグマアルドリッチジャパン社製、及び200nM12Oテトラデカノイルホルボール13アセタートTPAロシュ社製を添加した培養液以下、RPMI1640培地とするに、正常マウスメラノサイト以下、MelanAとするを127×106cellsmLの濃度で懸濁し、あらかじめRPMI1640培地を821μL入れておいた6穴プレートTPP社製に79μLずつ播種した。またこれとは別に、DMEM培地にHaCaTを301×106cellsmLの濃度で懸濁し、あらかじめDMEM培地を333μL入れておいたセルカルチャーインサートファルコン社製に17μLずつ播種したものを用意し、先ほどの6穴プレートの上に重ねた。これを95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養した。培養上清を吸引除去後、フェノールレッド不含RPMI1640培地インビトロジェン社製に1抗菌剤PenicillinStreptomycinGlutamineを添加した培養液以下、無血清RPMI1640培地とするを6穴プレートには900μLずつ、セルカルチャーインサートには350μLずつ入れ、さらに48時間培養した。培養上清を吸引除去後、フェノールレッド不含RPMI1640培地に01ウシ血清アルブミンEQUITECHBIO社製と1抗菌剤PenicillinStreptomycinGlutamineを入れた培養液以下、処理用RPMI1640培地とするを6穴プレートに対して900μLずつ入れた。さらに、終濃度30μgmLになるようエタノールに溶解した琥珀エタノール抽出物、F2画分、及びN画分をそれぞれ処理用RPMI1640培地に混ぜたものエタノール終濃度025を、セルカルチャーインサートに対して350μLずつ入れた。また、処理用RPMI1640培地にエタノール終濃度025になるようエタノールを添加した培養液を処理したものをcontrolとした。上記のプレートを95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養したのち、MelanAのみをトリプシンEDTA免疫生物研究所社製を用いて回収し、細胞数をカウントした後、1IGEPALCA630シグマアルドリッチジャパン社製、01mMエチレンジアミン四酢酸EDTA和光純薬工業社製、及び01mMフッ化フェニルメチルスルホニルPMSFロシュ社製を添加した10mMリン酸緩衝液pH68を20μL加え、遠心機KUBOTA社製で遠心18000rpm、5分した。上清を吸引した後、ジエチルエーテル国産化学社製100μLを加えてさらに遠心12000rpm、5分し、上清を吸引した。そこへ、1cellあたり8μLの085NKOHを加えて沈殿物を溶解し、マルチラベルカウンターパーキンエルマージャパン社製にて405nmにおける吸光度を測定した。controlサンプルにおけるメラニン産生量を100としたときの、試料添加サンプルにおけるメラニン産生量の割合を算出した。結果を図3に示す。HaCaTにおけるメラニン産生量は、controlサンプルに対して琥珀エタノール抽出物を終濃度30μgmLになるよう添加したときは、222、またF2画分を同様に添加した場合は352、さらにN画分を同様に添加した場合は493にそれぞれ抑制されていたことから、琥珀エタノール抽出物、F2画分、及びN画分は有意なメラニン産生抑制能を有することが確認された。[実施例6]<正常ヒト皮膚3次元モデルを用いた琥珀エタノール抽出物並びにF2画分、N画分及びA画分のメラニン産生抑制確認>正常ヒト皮膚3次元組織モデルMEL300Aクラボウ社製を95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで1時間培養した。その後302nmにピークを有する6Wの放電管を取り付けたUVSL26P紫外線照射装置を用いて30mJcm2の照射量になるように125μWcm2のUVBを4分間照射した。次いで、終濃度25、50μgmLになるようそれぞれエタノールに溶解した琥珀エタノール抽出物及びF2画分、N画分、A画分を、それぞれHanksBalancedSaltSolutions以下、HBSSとするインビトロジェン社製に混ぜたものを、100μLずつ組織の上に添加した。また、UVB照射後、HBSSにエタノール終濃度025になるようエタノールを添加した溶液を組織の上に添加したものをcontrolとした。さらに、UVB照射後、組織の上に何も投与せずに培養したものを陰性controlとした。これらを95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで15日間培養した。その際、1日おきにEPI100LLMM維持培地クラボウ社製の交換と琥珀エタノール抽出物、F2画分、N画分、及びA画分の添加を行った。結果を図4に示す。フォンタナマッソン染色によりメラニンを黒色に染色したとき、controlであるエタノール処理組織bでは黒色の染色像が多く認められたのと比較して、琥珀エタノール抽出物、F2画分、N画分及びA画分を終濃度25μgmL、50μgmLになるようそれぞれエタノールに溶解した液を処理した組織ceg及びi25μgmL;dfh及びj50μgmLでは、いずれも容量依存的な黒色染色像の低下が認められた。以上の結果から、琥珀エタノール抽出物及びF2画分、N画分、A画分は、メラニン産生抑制活性を有していることがわかった。[実施例7]<UVB照射後のHaCaTを用いた琥珀エタノール抽出物、F2画分、N画分及びA画分のSCF発現抑制確認>DMEM培地に、HaCaTを895×105cellsmLの濃度で懸濁し、あらかじめDMEM培地を11mL入れておいた直径35cmのディッシュCORNING社製に391μLずつ播種し、95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで24時間培養した。培養上清を吸引除去後、無血清培地を15mLずつディッシュに入れ、さらに48時間培養した。培養上清を吸引除去後、PBSを10mL入れた。そこへ、302nmにピークを有する6Wの放電管を取り付けたUVSL26P紫外線照射装置を用いて90mJcm2のUVBを1回照射し、ただちに処理用培地1125mLに交換した。次いで、終濃度25、50μgmLになるようエタノールに溶解した琥珀エタノール抽出物、F2画分、N画分及びA画分をそれぞれ処理用培地に混ぜたものエタノール終濃度025を、375μLずつ添加した。また、UVB照射後、処理用培地にエタノール終濃度025になるようエタノールを添加した培養液を処理したものをcontrolとした。上記のディッシュを95空気‐5炭酸ガスの下、37°Cで48時間培養したのち、超純水に01MTrisHCl、001ラウリル硫酸ナトリウムシグマアルドリッチジャパン社製、1NP40メルク社製、コンプリート錠ロシュ社製を添加した抽出バッファーを用いて細胞内のタンパク質を抽出した。次いで、常法に従いウェスタンブロッティングを行い、細胞内で発現したSCFタンパク質を検出した。その際、10SDSポリアクリルアミドゲルを用いて電気泳動を行い、ポリビニリデンジフロリドメンブレンミリポア社製にタンパク質を転写させた。SCFタンパク質の検出を行う際は、1次抗体として抗ヒトSCFK089ウサギ抗体IBL社製、並びに2次抗体としてホースラディッシュペルオキシダーゼ標識抗ウサギヤギ抗体ジャクソンイムノリサーチ社製を用い、内部標準であるGAPDHタンパク質の検出を行う際は、1次抗体として抗ヒトGAPDHマウス抗体ミリポア社製、並びに2次抗体としてホースラディッシュペルオキシダーゼ標識抗マウスヤギ抗体ジャクソンイムノリサーチ社製を用いた。バンドの検出は、ECLプラスウェスタンブロッティング検出試薬GEヘルスケアジャパン社製と2次抗体を反応させて化学発光後、ハイパーフィルムECLGEヘルスケアジャパン社製を感光させ、現像を行った。解析にはImageJソフトウェアを用い、controlサンプルのSCFタンパク質発現量を100としたときの試料添加サンプルにおける相対的な変化を算出した。その際、内部標準であるGAPDHの値で補正した。結果を図5に示す。HaCaTにおいて90mJcm2のUVBを照射した後に琥珀エタノール抽出物を終濃度25μgmLになるよう添加したときのSCFタンパク質の発現は、controlサンプルに対して059倍、またF2画分を同様に添加した場合は040倍、さらにN画分を同様に添加した場合は042倍、そしてA画分を同様に添加した場合は056倍にそれぞれ減少していたことから、琥珀エタノール抽出物及びF2画分、N画分、A画分はUVBを照射したにも拘らず有意なSCF発現抑制能を有することが確認された。また、琥珀エタノール抽出物、F2画分及びA画分は、濃度依存的にSCFタンパク質の発現を抑制することがわかった。"