γGluX及びγGluXGlyからなる群から選ばれるペプチドXはCys及びその誘導体を除くアミノ酸又はアミノ酸誘導体を表すを、合計量で乾燥重量当り0005以上含有する酵母エキス。前記ペプチドを、合計量で002以上含有する請求項1に記載の酵母エキス。前記XがValである、請求項1又は2に記載の酵母エキス。前記XがnValである、請求項1又は2に記載の酵母エキス。前記酵母がサッカロマイセスセレビシエである、請求項1~4のいずれか一項に記載の酵母エキス。酵母をγGluX、γGluXGly、及びXGlyからなる群から選ばれるペプチドXはCys及びその誘導体を除くアミノ酸又はアミノ酸誘導体を表すを含む培地で培養し、得られた菌体から酵母エキスを調製することを含む、γGluX及びγGluXGlyからなる群から選ばれるペプチドを含む酵母エキスの製造方法。前記培地は前記ペプチドを01ppm以上含み、前記酵母エキスはγGluX及びγGluXGlyからなる群から選ばれるペプチドを、合計量で乾燥重量当り0005以上含有する、請求項6に記載の方法。前記XがValである、請求項6又は7に記載の方法。前記XがnValである、請求項6又は7に記載の方法。前記酵母が、前記ペプチドの細胞内への取込みが向上するように改変されている、請求項6~9のいずれか一項に記載の方法。前記酵母のHgt1pの活性が強化された、請求項10に記載の方法。前記酵母のPtr2pの活性が強化された、請求項10に記載の方法。前記酵母のグルタチオン合成酵素の活性が強化された、請求項10~12のいずれか一項に記載の方法。nValを含む培地で酵母を培養することを含む、γGlunValを含む酵母エキスの製造方法。前記酵母のγグルタミルシステイン合成酵素の活性が強化された、請求項14に記載の方法。前記酵母がサッカロマイセスセレビシエである、請求項6~15のいずれか一項に記載の方法。X及びXGlyからなる群から選ばれるアミノ酸又はペプチドXはCys及びその誘導体を除くアミノ酸又はアミノ酸誘導体を表すを添加した酵母エキス原料に、γグルタミル基転移酵素を作用させることを含む、γGluX及びγGluXGlyからなる群から選ばれるペプチドを含む酵母エキスの製造方法。前記アミノ酸又はペプチドの添加量は、合計量で酵母エキス原料の乾燥重量当り1以上であり、前記酵母エキスはγGluX及びγGluXGlyからなる群から選ばれるペプチドを、合計量で乾燥重量当り0005以上含有する、請求項17に記載の方法。前記XがValである、請求項17又は18に記載の方法。前記XがnValである、請求項17又は18に記載の方法。前記酵母がサッカロマイセスセレビシエである、請求項17~20のいずれか一項に記載の方法。本発明により、γGluX、もしくはγGluXGly、又はこれらの両方を含む酵母エキスを製造することができる。これらのペプチドを含む酵母エキスは、コク味の点で優れている。また、γGluXを含む酵母エキスは、γGluXGlyを含む酵母エキスを製造する原料としても有用である。本発明の酵母エキスは、γGluX及びγGluXGlyから選ばれるペプチドXはCys及びその誘導体を除くアミノ酸又はアミノ酸誘導体を表すを、合計量で酵母エキスの乾燥重量当り0005以上含有する酵母エキスである。本発明の酵母エキスは、前記ペプチドを、合計量で乾燥重量当り0005以上、002以上、01以上、又は05以上含有する。本発明の酵母エキスの原料となる酵母は、後述する本発明の方法に用いられる酵母と同様である。前記ペプチド中のGlu、及びGlyは、各々グルタミン酸、及びグリシンを示す。また、符号‐はペプチド結合を表す。γGluのγとは、グルタミン酸のγ位のカルボキシル基を介して他のアミノ酸が結合していることを意味する。Xは、天然アミノ酸の中でCys及びその誘導体を除く19種類のアミノ酸又はその誘導体を示す。Cysはシステインを示し、その誘導体としては、α-アミノ酪酸、β-アミノ酪酸等が挙げられる。前記Cys及びその誘導体を除くアミノ酸には、グリシンGly、アラニンAla、バリンVal、ロイシンLeu、イソロイシンIle、セリンSer、スレオニンThr、メチオニンMet、アスパラギンAsn、グルタミンGln、プロリンProなどの中性アミノ酸、アスパラギン酸Asp、グルタミン酸Gluなどの酸性アミノ酸、リジンLys、アルギニンArg、ヒスチジンHisなどの塩基性アミノ酸、及びフェニルアラニンPhe、チロシンTyr、トリプトファンTrpなどの芳香族アミノ酸が含まれる。特に、Xが疎水性アミノ酸の場合、前記ペプチドのコク味効果が高く、このようなペプチドは特異な例である。このようなアミノ酸の例として、Val、Ala、Leu、Pheなどを例示することができる。また、アミノ酸の誘導体として、例えばノルバリンnVal、ノルロイシンnLeu、tert-ロイシンtLeu、及びヒドロキシプロリンHypなどを例示することができる。上記ペプチドのうち、特定の例としては、γGluValGly、γGluVal、γGlunValGly、γGlunVal、及びValGlyである。尚、上記アミノ酸及びアミノ酸誘導体は、すべてL-体である。本発明の酵母エキスは、形状は特に制限されず、粉体状でもよく、溶液であってもよい。また、本発明の酵母エキスは、従来の酵母エキスと同様の用途、例えば、調味料、食品添加物、又は健康食品等として利用することができる。本発明の酵母エキスは、コク味付与効果に優れている。コク味とは、五基本味により表現できない味を意味し、基本味のみならず、厚み、ひろがり、持続性、まとまりなど基本味の周辺の味をも増強する味をいう。コク味付与効果は、うま味や塩味の共存下でより発揮されるため、酵母エキスにL-グルタミン酸ナトリウムや呈味性ヌクレオチド等のうま味物質、及び/又は食塩等の塩味物質を添加してもよい。また、調味料、食品添加物又は健康食品に、本発明の酵母エキスと共に、うま味物質及び/又は塩味物質を加えてもよい。実施例に示すように、γGluValGlyを含む酵母エキス、特に下記に示す本発明の方法により製造された酵母エキスを含む溶液は、同溶液中に含まれるγGluValGlyと同濃度のγGluValGly溶液よりもコク味増強効果が高かった。このことは、本発明の酵母エキスの有用性を示している。本発明の酵母エキスは、例えば、下記に示す本発明の方法により製造することができる。本発明の第一の方法は、酵母をγGluXGly、γGluX、及びXGlyから選ばれるペプチドXはCys及びその誘導体を除くアミノ酸又はアミノ酸誘導体を表すを含む培地で培養し、得られた菌体から酵母エキスを調製することにより、γGluXGly及びγGluXから選ばれるペプチドを含有する酵母エキスを製造する方法である。酵母は、γGluX、γGluXGly、又はXGlyを細胞内に取込むことができる限り特に制限されず、サッカロミセスセレビシエ等のサッカロミセス属、キャンディダユティリス等のキャンディダ属、ピヒアパストリス等のピヒア属、シゾサッカロミセスポンベ等のシゾサッカロミセス属等に属する酵母を例示することができる。中でも、サッカロミセスセレビシエやキャンディダユティリスが特定の例であり、これらは酵母エキスの生産によく用いられている。本発明の酵母は、1倍体でもよいし、2倍性またはそれ以上の倍数性を有するものであってもよい。酵母は、γGluX、γGluXGly、又はXGlyを細胞内に取込み、γGluX及び/又はγGluXGlyを細胞内に蓄積し得る限り、野生株であっても、各種変異株のいずれであってもよい。変異株としては、γ-グルタミルシステイン合成酵素GSH1及び/又はグルタチオン合成酵素GSH2の活性を増強させた株が挙げられる。また、酵母は、γGluX、γGluXGly、又はXGlyの細胞内への取込みが向上するように改変されていてもよい。γGluX、γGluXGly、又はXGlyの取込みは、これらのペプチドの取込みに関与するタンパク質の活性を増強することにより、向上させることができる。Hgt1pはGSHに特異的なトランスポーターであることが報告されていたが、Hgt1pの活性を増強することによってγGluValGlyまたはγGlunValGlyの取込みが向上することが示された。したがって、Hgt1p活性の増強により、γGluValGlyだけでなく、他のγGluXGlyペプチドの細胞中への取込みも向上され得る。また、Ptr2pはオリゴペプチド輸送体であることが報告されている。Ptr2pの活性を増強することによって、ValGlyの取込みが増強されるようであることが示された。したがって、Ptr2p活性の増強により、ValGlyだけでなく他のXGlyペプチドの細胞中への取込みが向上され得る。サッカロマイセスセレビシエのPtr2pをコードする遺伝子のヌクレオチド配列を配列番号58に示す。このヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を配列番号59に示す。前記酵素又はタンパク質の活性を増強する方法としては、これらをコードする染色体上の遺伝子のプロモーターをより強力なものに変更することによって発現を強化させる方法、染色体上に目的の遺伝子を挿入することにより多コピー化を促し、発現を強化させる方法、目的遺伝子を含むプラスミドを酵母に導入することにより発現を強化させる方法等が挙げられる。プロモーターは、各種レポーター遺伝子を用いることにより、在来のプロモーターの高活性型のものを取得してもよいし、或いは公知の高発現プロモーター、例えば、PGK1、PDC1、TDH3、TEF1、HXT7などを用いてもよい。或いは、CEN4の複製開始点を持つプラスミドや2μmDNAの複製開始点を持つ多コピー型プラスミドを用いてもよい。或いは、染色体上の任意の領域に目的遺伝子を導入する為に、トランスポゾンを用いてもよいし、150コピーあるrDNA配列を標的に目的遺伝子を導入してもよい。γ-グルタミルシステイン合成酵素の活性の増強は、例えば米国特許第7553638号、OtakeYetalBioscienceandIndustryvolume50No10pp9899941992等に開示されている。また、米国特許第7553638号にはグルタチオン合成酵素遺伝子の破壊について開示されているが、γ-グルタミルシステイン合成酵素の活性増強と同様にして、グルタチオン合成酵素活性も増強させることができる。Hgt1pの活性も、同様にして増強することができる。サッカロマイセスセレビシエのGsh1p及びGsh2pをコードする遺伝子の塩基配列は、それぞれSaccharomycesGenomeDatabasehttpwwwyeastgenomeorgに開示されている。また、キャンディダユティリスのGsh1p及びGsh2pをコードする遺伝子の塩基配列は、米国特許第7553638号に開示されている。サッカロマイセスセレビシエのGsh1pをコードする遺伝子の塩基配列を配列番号60に示す。同塩基配列によってコードされるアミノ酸配列を配列番号61に示す。サッカロマイセスセレビシエのGsh2pをコードする遺伝子の塩基配列を配列番号19に示す。同塩基配列によってコードされるアミノ酸配列を配列番号20に示す。Hgt1pをコードする遺伝子は、SaccharomycesGenomeDatabasehttpwwwyeastgenomeorgより取得することができる。同塩基配列は、Hgt1pの別名として、Gsh11p、Opt1p等が挙げられる。サッカロマイセスセレビシエのGSH11として開示されている配列を、配列番号21に示す。また、同塩基配列によってコードされるアミノ酸配列を配列番号22に示す。酵母エキスを製造する方法を説明する。まず、酵母を前記ペプチドを含む培地で培養する。培地は、酵母が増殖し得るものであれば特に制限されないが、実施例に記載したSD培地に限定されることなく通常工業的に用いられる培地を利用することができる。酵母の培養に際して、上記培地にγGluX、γGluXGly、又はXGlyを添加する。これらのペプチドは、1種単独であってもよく、任意の複数種の混合物であってもよい。また、これらのペプチドは、培養開始時から培地に含まれていてもよく、培養途中の任意の時点で培地に添加されてもよい。培養途中での前記ペプチドの培地への添加は、培養終了時の0~50時間前、01~24時間前、又は05~6時間前である。また、培養途中での添加は、連続的に添加される形式でもよい。前記ペプチドを含む培地での培養に先立って、前培養を行ってもよい。前培養に用いる培地は、前記ペプチドを含んでいてもよく、含んでいなくてもよい。培地に添加するペプチドの量は、添加時の培養液中の最終濃度で通常01ppm以上、05ppm以上、1ppm以上、10ppm以上、又は50ppm以上である。ペプチドの量の上限は特に制限されないが、例えば費用の観点から100000ppm以下、又は50000ppm以下と設定することもでき、通常10000ppm以下、1000ppm以下、又は500ppm以下である。培地に添加するペプチドの量は、添加時の培養液中の最終濃度で通常01ppm以上、05ppm以上、1ppm以上、10ppm以上、又は50ppm以上である。ペプチドの量の上限は、特に制限されない。しかし、例えば、費用の観点から100000ppm以下、又は50000ppm以下と設定することもでき、通常10000ppm以下、1000ppm以下、又は500ppm以下である。培養条件は、通常の酵母エキスの製造と同様の条件を採用することができ、用いる酵母に応じて適宜変更することができる。バッチ培養、フェドバッチ培養、連続培養など任意の方法を使用することができる。サッカロマイセスセレビシエの場合は、25~35°Cで、27~33°Cで、又は28~32°Cで振とう培養等により好気的に培養することが好ましい。上記のようにして酵母を培養すると、酵母の細胞中に、γGluX、γGluXGly、又はこれらの両方が蓄積する。培地にγGluX、又はXGlyを添加した場合、細胞内にこれらのペプチドが蓄積することに加え、γGluXGlyも蓄積する。これは、細胞内に取込まれたγGluX、及びXGlyから、細胞内のγ-グルタミル基転移酵素の働きによってγGluXGlyが生成することによると推定される。尚、実施例に示すように、酵母中のγGluVal、及びγGluValGlyの含有量と、細胞中のGSHの含有量とは相関しないことから、従来の方法で製造された酵母エキスは、GSHを高濃度で含有する酵母から製造されたものであっても、γGluX又はγGluXGlyを高濃度に含有しないと考えられる。得られた酵母からの酵母エキスの調製は、通常の酵母エキスの調製と同様にして行えばよい。酵母エキスは、酵母菌体を熱水抽出したものを処理したものでもよいし、酵母菌体を消化したものを処理したものでもよい。また、必要に応じて得られた酵母エキスを濃縮してもよいし、乾燥し粉末の形態にしてもよい。上記のようにして、γGluX、γGluXGly、又はこれらの両方の含有量が高められた酵母エキスが得られる。好適な形態では、酵母エキスは、γGluX、γGluXGly、又はこれらの両方を、合計量で乾燥重量当り0005以上、002以上、01以上、又は05以上含有する。上記のようにして得られるγGluXを含む酵母エキスに、下記に示す方法と同様にして、γ-グルタミル基転移酵素を作用させることによって、γGluXGlyを含む酵母エキスを製造することができる。本発明の第二の方法は、X及びXGlyからなる群から選ばれるアミノ酸又はペプチドXはCys及びその誘導体を除くアミノ酸又はアミノ酸誘導体を表すを添加した酵母エキス原料に、γグルタミル基転移酵素を作用させることにより、γGluX及びγGluXGlyから選ばれるペプチドを含む酵母エキスを製造する方法である。X又はXGlyに、γ-グルタミル基転移酵素を作用させると、γGluX又はγGluXGlyが生成する。したがって、X又はXGlyを含む酵母エキスに、γグルタミル基転移酵素を作用させることによっても、γGluX又はγGluXGlyを含む酵母エキスが得られる。X及び/又はXGlyを含む酵母エキスは、X及び/又はXGlyを含む培地で培養した酵母から調製したものであってもよく、酵母エキス原料にX及び/又はXGlyを加えたものであってもよい。酵母エキス原料としては、通常の方法で得られる酵母エキスを使用することができる。酵母エキス原料に添加するX又はXGlyは、1種単独であってもよく、任意の複数種の混合物であってもよい。X及び/又はXGlyの添加量は、合計量で酵母エキス原料の乾燥重量当り1以上、5以上、又は10以上である。γ-グルタミル基転移酵素による反応は、水又は緩衝液等の水性溶媒中で行う。具体的には、例えば、酵母エキス原料を水性溶媒に溶解し、γ-グルタミル基転移酵素を添加する。反応条件は、用いるγ-グルタミル基転移酵素に応じて適宜設定することができる。通常、pH3~9、15~70°Cで、1~300分間、又はpH5~8、30~70°Cで、5~150分間反応させる。酵母エキス原料の水性溶媒中の濃度は、操作性の見地から定めればよい。通常、酵母エキス原料の乾燥重量として、01~50、又は05~20である。γ-グルタミル基転移酵素としては、グルタミナーゼ、γグルタミルトランスペプチダーゼγGTP等が挙げられる。酵素量は、γGTPについては、pH85、25°Cの溶液中で1分間あたりにγグルタミルpニトロアニリドより10μmoleのpニトロアニリンを遊離する活性を1ユニットと定義した場合シグマ総合カタログ20082009年版の917ページに記載の定義、通常0001~1000unitsml、0005~100unitsml、001~25unitsml、又は005~10unitsmlである。グルタミナーゼについても、γGTPに準じて酵素量を適宜設定することができる。酵素反応後、γ-グルタミル基転移酵素を失活させるための処理、例えば80~100°Cでの熱処理を行ってもよく、そのような処理を行わなくてもよい。γ-グルタミル基転移酵素の基質として、γ-グルタミル化合物、例えばGSHを反応液に加えてもよい。また、酵母エキスに含まれるGSHを基質としてもよい。この場合、GSHの含有量を高めた酵母、例えばGsh1p及び/又はGsh2pの活性を増強した酵母から調製した酵母エキスを用いることができる。酵母エキス中のGSHの含有量は、多ければ多いほうがよいが、通常乾燥重量あたり1~50、1~30、又は5~20である。上記のようにして、γGluX、γGluXGly、又はこれらの両方の含有量が高められた酵母エキスが得られる。酵母エキスは、γGluX、γGluXGly、又はこれらの両方を、合計量で乾燥重量当り0005以上、002以上、01以上、又は05以上含有する。得られた酵母エキスは、必要に応じて濃縮してもよいし、乾燥し粉末の形態にしてもよい。以下、本発明を実施例に基づいて更に具体的に説明する。なお、本発明は以下の実施例になんら限定されるものではない。実施例1:各種酵母エキス中のγGluValGly及びγGluValの検出各種市販酵母エキス中のγGluValGly、γGluVal及びValGly含量を測定した。測定は、下記方法に従って、ペプチドを6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートAQCを用いて蛍光誘導体化し、LCMSMSにより検出することより行った。まず、適当な濃度に希釈した各種酵母エキス溶液25μL、又はγGluValGly、γGluVal、及びValGlyを含む標準液25μLに、MillQ水25μL、5μM内部標準物質溶液Lアラニン333d3、シグマ社AlaD3、DLバリン23444555d8、シグマ社Vald8。いずれも安定同位体で標識されている。5μL、硼酸緩衝液日本ウォーターズ社製AccQFluor登録商標試薬キット付属品30μLを添加した。この混合物に、AQC試薬溶液上記試薬キットの試薬粉末をアセトニトリル1mL中に溶解することにより調製10μLを添加した。得られた混合物を10分間、55°Cで加熱後、01のギ酸水溶液100μLを加え、分析サンプルとした。次に、上記のように調製した分析サンプルを下記逆相液体クロマトグラフィーで分離した後、質量分析装置に導入した。分離条件は下記の通りである。1HPLC:Agilent1200シリーズ2分離カラム:UnisonUKPhenyl内径20mm、長さ100mm、粒子径3μmImtakt社製3カラム温度:40°C4移動相A:25mMギ酸アンモニウム5移動相B:メタノール6流速:025mL/min7溶出条件:溶出は、移動相A及び移動相Bの混合液を用いて行った。混合液に対する移動相Bの比率は以下の通り。0分5、0分~17分5~40、17分~171分40~80、171分~19分80、19分~191分80~5、191分~27分5。その後、前述の分離条件によって溶出されたγGluValGly、γGluVal、及びValGlyの誘導体化合物を質量分析計に導入してHPLCMSクロマトグラフィーにより定量を行った。分析条件は下記の通り。1質量分析装置:ABSciexAPI3200QTRAP2検出モード:SelectedIonMonitoringポジティブイオンモード3選択イオン:表1γGluValGly、γGluVal、及びValGlyの誘導体化合物の定量は、解析ソフトAnalystver142を用いて行った。定量を行うための内部標準物質として、γGluValGlyとγGluValの誘導体化合物の場合はAlad3の誘導体化合物を、ValGlyの誘導体化合物の場合はVald8の誘導体化合物を、各々用いた。結果を表2に示す。表中、NDは定量限界以下を表す以下、同様。誘導体化された内部標準アミノ酸、γGluValGly、γGluVal、及びValGly標品の分析結果HPLCMSクロマトグラムを図1に示す。表1に示すように各種酵母エキス中のγGluValGlyは多くとも数ppmであり、γGluVal、ValGlyは、多くとも数十ppmオーダーであった。実施例2:各種酵母細胞中のγGluValGly及びγGluValの検出次に、各種酵母細胞中に含まれているγGluValGly及びγGluVal含量を測定した。菌株は、標準菌株としてサッカロマイセスセレビシエS288C株、及びGSH含量が高い菌株としてサッカロマイセスセレビシエAJ14819株FERMBP08502株として国際寄託されているを用いた。S288C株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源部門NRBC:NITEBiologicalResourceCenter、〒2920818千葉県木更津市かずさ鎌足258にNBRC1136の番号で保存されており、分譲を受けることができる。また、同株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション12301ParklawnDriveRockvilleMaryland20852UnitedStatesofAmericaにもATCC26108の番号で保存されており、分譲を受けることができる。また、AJ14819株は、市販のサッカロマイセスセレビシエ菌株から取得した1倍体酵母をEMSにて変異処理し、MET25遺伝子の発現がメチオニンによって抑制されない変異株として選択された菌株であり、2002年9月11日付けで独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター〒3058566日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6に受託番号FERMP19007として寄託され、平成2003年10月1日にブダペスト条約に基く国際寄託に移管され、受託番号FERMBP08502が付与されている特許第4352877号。上記の各々の菌株をSD培地と5gの硫酸アンモニウムを混合したものを100mlの滅菌水に溶解し、pHを52程度に調製し、フィルター濾過滅菌したもの得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようになお、吸光度は、BECKMANCOULTER社のDU640SPECTROPHTOMETERを用いて測定した。SD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml。複数本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で19時間振とう培養した。得られた培養液から、400ODユニットOD660が1である培養液1mlに含まれる菌体を1ODユニットと定義する。分の菌体を遠心分離により採取した。上清は可能な限り取り除き、残った菌体を45mlのmilliQ水に懸濁した。再度遠心分離により菌体を集菌し、45mlのmilliQ水に再懸濁した。この操作を累計3回繰り返すことにより、菌体から培地分を完全に除去した。得られた洗浄菌体は、約15mlのmilliQ水に懸濁し、70°Cで10分間加熱した。この工程にて菌体内に含まれるエキス分を抽出した。次に、遠心操作によりエキスと菌体残渣を分離した。エキスから10kDaの遠心濾過膜MILLIPORE社:AmiconUltra05mL10Kカタログ番号UFC501096を用いて細胞デブリを除去し、得られた画分を実施例1と同様にしてAQC試薬にて誘導体化し、LCMSMSによりγGluValGly及びγGluValを測定した。一方、常法チオール基に結合する蛍光試薬ABDFを用いて、エキス中のGSHを誘導体化し、HPLCにて分離、定量した。により、菌体内のGSH量を測定した。また、乾燥菌体重量は、洗浄菌体を4時間104°Cで乾燥させることにより測定した。このようにして測定した一定量の培養液に含まれる酵母細胞から調製したエキス中のγGluValGly、γGluValの量、及び乾燥菌体重量から、乾燥菌体あたりに含まれるこれらペプチドの含量を算出した。結果を表3に示す。その結果、γGluValGlyまたはγGluVal含量とGSH含量の相関は特に見られなかった。実施例3:S288C株へのγGluValGlyの添加1S288C株をSD培地500ml容坂口フラスコ中50mlに1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml。複数本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で16時間振とう培養した。前記SD培地には、あらかじめ最終濃度で100ppmとなるようにγGluValGly国産化学株より購入を添加した。上記培養液を用いて、実施例2と同様に乾燥菌体あたりに含まれるγGluValGlyを算出した。その結果、γGluValGly含量は、約20000ppm2であった。また、各種洗浄工程で、洗浄液に含まれるγGluValGlyの含量を測定したが、遠心3回目の操作で001ppm、すなわち定量限界以下となった。菌体洗浄操作は、更にもう1回行っているため、4段分離により、洗浄工程で培地中のγGluValGlyは十分に除去されており、菌体抽出液に持ち越されていないことが確認された。実施例4:S288C株へのγGluValGlyの添加2S288C株をSD培地500ml容坂口フラスコ中50mlに1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml、複数本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で19時間振とう培養した。19時間後に、所定濃度になるように各種濃度のγGluValGly水溶液を添加し、1時間培養を継続した。これらの培養液を用いて、実施例2と同様に乾燥菌体あたりに含まれるγGluValGlyの含量を算出した。また、抽出されたエキス中の固形分を計算することにより、エキス固形分中のγGluValGlyの量も計算した。結果を表4に示す。その結果、γGluValGlyの添加量に応じて、乾燥菌体及びエキス固形分当りのγGluValGlyの含量が増加した。実施例5:γGluValGly含有酵母エキスの製造γGluValGlyを添加して培養した酵母菌体より酵母エキスを製造した。S288C株をSD培地500ml容坂口フラスコ中50mlに1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml、12本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で19時間振とう培養した。19時間後に、最終濃度で50ppmになるようにγGluValGly水溶液を添加し、1時間培養を継続した。得られた全ての培養液から集菌し、実施例2と同様の手順で菌体洗浄を行った。400ODユニット分の洗浄菌体を15mlのmilliQ水に懸濁した。同懸濁液を70°Cで10分間保持することにより、酵母菌体からエキスを抽出した。更に遠心分離を行い、菌体残渣を取り除き、エキスのみを回収した。このエキス添加区エキスに含まれるγGluValGly濃度を測定したところ約300ppmであり、固形分は約1であった。なお、γGluValGlyを培養液に添加せずに同様の操作により調製したエキス無添加区エキスに含まれるγGluValGly濃度は定量限界以下であり、固形分は約1であった。このようにして調製したエキスについて、MSGグルタミン酸ナトリウム存在下でのコク味を、次のようにして評価した。まず、コントロールとして、02MSG及び05NaClを含有する水溶液を用い、これを官能評点00と定義した。次に、02MSG、05NaCl、及び10ppmのγGluValGlyを含む水溶液をコク味の標準溶液とし、官能評点30と定義した。これら2つをコク味強度の基準として、エキスのコク味強度を、エキスと02MSG、及び05NaClを含む水溶液を被検サンプルとして評価した。なお、被検サンプル中の添加区エキスの量は、γGluValGly濃度が10ppmになるように調製した。無添加区エキスは、被検サンプル中の固形分が添加区エキスと同じになるように調製した。即ち、コク味の標準溶液と添加区エキスの被検サンプル中のγGluValGly濃度は同等であり、添加区エキスの被検サンプルと無添加区エキスの被検サンプルの固形分は同等である。このようにして準備した被検サンプルを専門のパネラー4名で、コク味を評価した。その結果、4名のパネラー全員が、添加区エキスの方が、同じ濃度のγGluValGlyよりもコク味が強いと評価した。更に、コク味について、異なる段階での味の評価、すなわち先味および中味のコク味と、後味のコク味についての評価を行った。各々のコク味について4名のパネルの点数の平均点を評点とした。結果を表5に示す。尚、先味および中味とは喫食後0から4秒までに感じる呈味であり、後味とは喫食後5秒以降に感じる呈味のことを示す。この結果から分かるように、γGluValGlyを培養工程で添加して調製したエキスは、γGluValGlyが何らかの代謝を受けたか、又は、γGluValGlyと酵母エキス中の成分との相乗作用により、先および中味、ならびに後味のコク味が増強されたと推定される。実施例6:S288C株へのγGluValの添加1S288C株をSD培地500ml容坂口フラスコ中50mlに1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml、複数本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で24時間振とう培養した。前記SD培地には、あらかじめ最終濃度で100ppmとなるようにγGluValBachem株より購入を添加した。この培養液を用いて、実施例2と同様に乾燥菌体あたりに含まれるγGluVal及びγGluValGlyの量を算出した。結果を表6に示す。その結果、酵母細胞内に取込まれたγGluValの一部は、γGluValGlyに変換されていた。実施例7:S288C株へのγGluValの添加2S288C株をSD培地500ml容坂口フラスコ中50mlに1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml、複数本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で19時間振とう培養した。19時間後に、所定濃度になるように各種濃度のγGluVal水溶液を添加し、1時間培養を継続した。これらの培養液を用いて、実施例2と同様に乾燥菌体あたりに含まれるγGluValの含量を算出した。また、抽出されたエキス中の固形分を計算することにより、エキス固形分中のγGluValも計算した。結果を表7に示す。その結果、γGluValの添加量に応じて、乾燥菌体及びエキス固形分当りのγGluValの含量が増加した。実施例8:S288C株へのValGlyの添加S288C株をSDP培地SD培地作製に用いる硫酸アンモニウムをプロリンで代替。プロリン最終濃度は01gL500ml容坂口フラスコ中50mlに1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSDP培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml、複数本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で24時間振とう培養した。このSDP培地には、あらかじめ最終濃度で100ppmとなるようにValGlyBachem株より購入を添加した。この培養液を用いて、実施例2と同様に乾燥菌体あたりに含まれるγGluValGlyの含量を算出した。結果を表8に示す。ValGlyを培地に添加した場合は、酵母細胞内にγGluValGlyが蓄積した。実施例9:γ-グルタミル基転移酵素を作用させた、ValGlyを添加した酵母エキス固形分あたりにGSHを約8含有する酵母エキス市販の酵母エキスに試薬のGSHを添加したサンプルの1水溶液を調製し、NaOHを用いてそのpHを70に調製した。この溶液に、粉末のValGlyを水溶液中の最終濃度で400ppm、800ppm、又は4000ppmになるように添加し、被検サンプルを作製した。また、ValGlyを添加しない酵母エキス水溶液をコントロールとした。これらの被検サンプルにグルタミナーゼ大和化成株式会社グルタミナーゼダイワSDC100Sを1mgmlになるように添加し、37°Cで120分間酵素反応を行った。また、グルタミナーゼの代わりに、γGTPシグマ社ウマ腎臓由来γグルタミルトランスペプチダーゼ、コードG9270100UNを005mgmlになるように添加し、同様に37°Cで120分間酵素反応を行った。反応液は、速やかに氷冷し、γGluValGly、GSH、及びCysGly含量を測定した。その結果、下記表に示す通り、ValGly無添加区では、γGluValGlyはほとんど生成しなかったが、ValGlyの添加量を増やすにつれ、より多くのγGluValGlyの生成が見られた。特に、γGTPを用いた場合に、γGluValGlyの生成が顕著であった。ValGlyの代わりに、ValやnValを添加し、同様の酵素反応を行うことにより、γGluValやγGlunValも生成する。実際、ValGlyの代わりに、Valを最終濃度で4000ppm、又はnValを最終濃度で800ppm、4000ppm添加し、γGTPを用いて同様の実験を行った。本実験においても、キャンディダユティリスから調製した酵母エキスを市販の酵母エキスとして使用した。更に、反応液の乾燥固形物を測定し、乾燥固形物中のγGluVal含量、又はγGlunVal含量を算出した。その結果、Valを最終濃度で4000ppm添加したときは、酵母エキスの乾燥固形物あたり0239のγGluValが生成し、nValを最終濃度で800ppm添加したときは、酵母エキスの乾燥固形物あたり0709のγGlunValが生成し、nValを最終濃度で4000ppm添加したときは、酵母エキスの乾燥固形物あたり1029のγGlunValが生成した。γGlunValの測定は、実施例1と同様にして標準溶液として1μMのγGlunValを用いることによって、行った。誘導体化されたγGlunVal標品の分析結果HPLCMSクロマトグラムを図2に示す。実施例10:GSH2強化株へのγGluVal添加GSH2発現強化株を下記手順にて育種することができる。1S288C株のウラシル要求株ura3変異株の取得ウラシル要求株は、常法に従い変異剤処理したサッカロマイセスセレビシエ株を5FOAを含む寒天培地にスプレッドし、生育してくる菌株の中からura3変異株を選択することにより取得することができる例えば、METHODSINYEASTGENETICS2000EDITIONの179ページを参照。また、ウラシル要求株は、以下に示すように、URA3遺伝子を除いたURA3近傍DNAをS288C株に導入し、URA3遺伝子を破壊することによっても、取得することができる。まず、配列番号1及び2に示すプライマーを用い、S288C株の染色体DNAを鋳型とするPCRにより、URA3の上流500bpを増幅した。また、配列番号3及び4に示すプライマーを用い、URA3の下流500bpを増幅した。PCRの条件は、熱変性94°C、10秒、アニーリング55°C、10秒、伸張72°C、1分、25サイクルであった。次に、エタノール沈殿によって精製したこれら2つのDNA断片を鋳型に、配列番号5及び6に示すプライマーを用いてオーバーラップPCRを行い、URA3遺伝子の上流500bp及び、下流500bpを結合した1kbのDNA断片を得た。このDNA断片でS288C株を形質転換した後、ウラシルを添加したSD培地で一晩培養し、5FOA平板培地に菌体を塗布した。得られた形質転換体からura3Δ0株を取得した。2プロモーター置換の為の鋳型プラスミドの作製まず、配列番号7及び8のプライマーを用い、サッカロマイセスセレビシエ野生株の染色体DNAを鋳型とするPCRによりURA3ローカスを増幅した熱変性94°C、10秒、アニーリング50°C、10秒、伸張72°C、1分、25サイクル。得られたDNA断片をエタノール沈殿により精製後、SphI及びEcoRIで消化し、プラスミドpUC19のSphIEcoRI部位に挿入し、pUC19URA3を得た。次に、配列番号9及び10に示すプライマーを用いてサッカロマイセスセレビシエ野生株の染色体DNAよりPGK1プロモーター領域を増幅した。このDNA断片をPstIで消化し、PstIで消化及び、CIAP処理を行ったpUC19URA3のPstI部位に挿入し、pUC19PGK1pURA3を得た。同様に、配列番号11及び12に示すプライマーを用いて増幅したPGK1プロモーターをAatIIで消化し、AatIIで消化及び、CIAP処理を行ったpUC19PGK1pURAのAatII部位に挿入し、pUC19PGK1pURA3PGK1pを得た。なお、作成した鋳型プラスミドの塩基配列を配列決定して確認したところ、S288C株の染色体DNAを鋳型とした場合に想定される塩基配列と同等であった。よって、野生株の染色体DNAの代わりにS288C株の染色体DNAを鋳型に用いても同様のプラスミドを作造できる。3染色体上のGSH2遺伝子へのPGK1プロモーターの導入5’端にGSH2の上流配列をもつ配列番号13のプライマー、及びGSH2遺伝子の開始コドンから始まる一部のORF内配列を持つ配列番号14のプライマーを用い、pUC19PGK1pURA3PGK1pを鋳型にPCRを行い熱変性94°C、10秒、アニーリング60°C、10秒、伸張72°C、4分、25サイクル、PGK1プロモーターに挟まれたURA3を持つDNA断片を調製する。このDNA断片でura3Δ0株を形質転換し、SD平板培地に塗布し得られる形質転換体から、GSH2プロモーターがPGK1プロモーター-URA3-PGK1プロモーターに置換された株を取得することができる。4URA3選択マーカーの除去とGSH2遺伝子のプロモーター置換GSH2プロモーターがPGK1プロモーター-URA3-PGK1プロモーターに置換された株を、ウラシル添加SD培地で一晩培養し、適量を5FOA平板培地に塗布する。出現したコロニーから、導入されたPGK1プロモーター間の相同組換えにより、URA3が除去され、GSH2プロモーターがPGK1プロモーターに置換した株を取得することができる。さらに、野生型ゲノムを鋳型に、配列番号15及び16のプライマーを用いて増幅したDNAを前記株に導入することにより、URA3が野生型に復元し、GSH2プロモーターがPGK1プロモーターに置換していること以外、ura3Δ0株と遺伝子型が全く同一な株を取得できる。このようにして得られる菌株から酵母エキスを製造し、実施例3、4、6~8と同様に評価する。実施例11:HGT1強化株へのγGluValGly添加HGT1発現強化株は実施例10と同様の手法により取得することができる。具体的にはpUC19PGK1pURA3PGK1pを鋳型に、5’端にGSH11の上流配列を持つ配列番号17のプライマー、及びGSH11遺伝子の開始コドンから始まる一部のORF内配列を持つ配列番号18のプライマーを用いてPCRを行い、得られたDNA断片を出芽酵母に導入することにより、GSH11のプロモーターをPGK1プロモーターに置換した細胞を取得する。このようにして得られる菌株から酵母エキスを製造し、実施例3、4、6~8と同様に評価する。実施例12:HGT1またはPRT2改変株のγGluValGly取込み活性の評価GSH特異的輸送体と考えられていたHgt1p及びペプチド輸送体Ptr2pのγGluValGly蓄積に対する影響を以下のように評価した。1S288Cからのウラシル要求性変異株の取得ジェネティシン抵抗性カセットを、pUC19AOXG418BRIを鋳型として使用し、プライマーURA3KmL1及びURA3KmR2を使用して、PCRにより増幅した。プラスミドpUC19AOXG418BRIは、pUC19ベクターにクローニングしたサッカロマイセスセレビシエADH1プロモーターの制御下のEcoliトランスポゾンTn5由来のカナマイシン耐性遺伝子からなる。BR1は、このプラスミドでは、親のpUC19AOXG418のPADH1とkaznRの間にあるBamHI及びEcoRI部位が削除されていることを意味する。PADH1kanRカセットあるいはその同等物も、鋳型としてpUC19AOXG418BRIの代わりにプラスミドpKat7またはpUM2を使用し、上記のプライマーURA3KmL1及びURA3KmR2を使用して、PCRにより得ることができる。プライマーURA3KmL1の5末端の40ヌクレオチドはURA3上流領域に相同的であり、プライマーURA3KmR2の5末端の40ヌクレオチドはURA3下流領域に相補的である。得られたDNA断片を使用してサッカロマイセスセレビシエS288Cを形質転換した。形質転換体を200μgmlのG418を含むYPDプレート上で選択した。URA3遺伝子の欠失は、プライマーura3up2及びura3dn2を使用してPCRにより確認した。得られた株はS288Cura3Δ0PADH1kanRであった。本株はS288Cura3Δ0とも称する。本株を使用してHGT1またはPTR2過剰発現株を構築した。他方、HGT1またはPTR2欠失株を構築するために使用する別のウラシル要求性変異株を以下のようして得た。URA3をプロモーター及びターミネーター領域とともに含む断片を、S288Cの染色体DNAを鋳型として使用し、前述のプライマーura3up2及びura3dn2を使用するPCRにより増幅した。この断片をpBluescriptIIKSのSmaI部位にクローニングし、その構造を配列決定分析により確認した。得られたプラスミドをpKSURA313と称した。プラスミドpKSURA313をStuI及びNcoIで消化し、クレノーフラグメントで処理してNcoI部位を平滑末端化した。得られた438kbの断片を、loxPkanMXloxPモジュールを含む、pUG6から得た164kbのHincIIHincII断片とライゲーションした。得られたプラスミドはpKSURA313kanMXと称した。本プラスミドのマップ及び構築スキームを図5、配列番号29に示す。その後、URA3断片に隣接するkanMX遺伝子を、前述のプライマーura3up2及びura3dn2、並びにpKSURA313kanMXを鋳型として使用するPCRによって増幅した。得られた断片を使用してサッカロマイセスセレビシエS288C株を形質転換し、形質転換体を200μgmlのG418を含むYPD培地上で選択した。その結果、URA3のコード領域の227ヌクレオチドを欠失したS288Cの誘導株を得た。この欠失はura3Δ227loxPkanMXloxPと称した。kanMXマーカーを欠失するために、得られた株を、GAL1プロモーターの制御下のCreリコンビナーゼをコードする遺伝子及びURA3を選択マーカーとして含むプラスミドpSH47で形質転換した。細胞をYPD培地からYPGに移すことにより誘導されるCreリコンビナーゼ合成の後、マーカーが欠失された。プラスミドpSH47が欠失した得られた株をS288Cura3Δ227loxPと称した。2HGT1欠失変異株の取得Agleu2CaURA3Agleu2カセットを含むDNA断片を、プラスミドpAG61を鋳型として使用し、プライマーhgt1pUG6u及びhgt1pUG6dを使用するPCRによって増幅した。Agleu2CaURA3Agleu2カセットは、アシュビアゴシピLEU2遺伝子の2個の同一の断片に囲まれた、アシュビアゴシピTEFプロモーター及びターミネーターの制御下のカンジダアルビカンスURA3遺伝子を含む。LEU2遺伝子断片のそれぞれは、C末端領域から該遺伝子の3UTRにわたる470bpの配列である。Agleu2CaURA3Agleu2カセットはプラスミドpAG61から切り出すことができる。プライマーhgt1pUG6uの5末端の47ヌクレオチドはHGT15領域に相同的であり、プライマーhgt1pUG6dの5末端の44ヌクレオチドはHGT13領域に相補的である。得られた断片を使用してS288Cura3Δ227loxP株を形質転換した。形質転換体をSD培地を含むプレート上で選択した。HGT1遺伝子のコード領域の1981~2400位のヌクレオチドを欠失した、得られた株S288Cura3Δ227loxPhgt1Δ1981Agleu2CaURA3Agleu2をS288Chgt1Δと称した。HGT1遺伝子の欠失は、プライマーhgt151及びhgt132を使用して、PCRにより確認した。3PTR2欠失変異株の取得プラスミドpUC19AOXG418BRIからPADH1kanRモジュールをXbaIとSacIで切り出し、プラスミドpUG6の同じ部位へサブクローン化した。得られたプラスミドをpLoxPPADH1kanR5と称した。loxPPADH1kanRloxPモジュールを含むDNA断片を、pLoxPPADH1kanR5プラスミドを鋳型として使用し、プライマーptr2pUG6u及びptr2pUG6dを使用するPCRにより増幅した。プライマーhgt1pUG6uの5末端の47ヌクレオチドはPTR25領域に相同的であり、プライマーhgt1pUG6dの5末端の44ヌクレオチドはPTR23領域に相補的である。得られた断片を使用してS288Cura3Δ227loxP株を形質転換した。形質転換体を、200μgmlのG418を含むYPD培地を含むプレート上で選択した。PTR2遺伝子のコード領域の422~1388位のヌクレオチドを欠失する、得られた株S288Cura3Δ227loxPptr2Δ967loxPPADH1kanRloxPは、S288Cptr2Δと指称する。PTR2遺伝子の欠失は、プライマーptr251及びptr231を使用して、PCRによって確認した。4S288C株からのHGT1及びPTR2欠失変異株の取得株S288Chgt1Δptr2ΔはS288Cptr2Δ株と同様にして構築した。ただし、S288Chgt1Δ株は形質転換に使用した。5Hgt1p過剰生産株の取得ADH1のプロモーターを含むDNA断片を、サッカロマイセスセレビシエ株S288Cの染色体DNAを鋳型として使用し、プライマーadh1L1及びadh1R1を使用するPCRによって増幅した。得られた断片をプラスミドpUC19のSmaI部位へクローン化し、その構造を配列決定分析によって確認した。得られたプラスミドをpUC19PADH1rと称した。プラスミドpKSURA313からのHindIIIHindIII断片を、pKSURA3Hd産生プラスミドpBluescriptIIKSのHindIII部位へサブクローン化した。プラスミドpUC19PADH1rからのKpnISalI断片をpKSURA3HdのSalIKpnI部位へクローン化した。得られたプラスミドをpKSURA3PADH1と称した。その後、プラスミドpKSURA3PADH1をClaIとBsrGIで消化した。消化したプラスミドをクレノーフラグメントで平滑末端化し、セルフライゲーションさせた。pKSURA3PADH15dと称する、得られたプラスミドをEcoRIで消化し、クレノーフラグメントで処理した後、XbaIで消化した。得られた断片をPADH1の断片と結合し、XbaI及びBstZ17IによりプラスミドpUC19PADH1rから切り出した。得られたプラスミドをpKSURA3PADH1LRと称した。PADH1URA3PADH1カセットを含むDNA断片を、プラスミドpKSURA3PADH1LRを鋳型として使用し、プライマーPADH1HGT1及びHGT1PADH1を使用するPCRにより増幅した。プライマーPADH1HGT1の5末端の40ヌクレオチドはHGT1コード領域の最初の40ヌクレオチドに相補的であり、プライマーHGT1PADH1の5末端の40ヌクレオチドはHGT1上流領域に相同的である。HGT1上流領域を含むDNA断片を、サッカロマイセスセレビシエS288C株の染色体DNAを鋳型として使用し、プライマーhgt53及びhgt33を使用するPCRにより増幅した。その後、上記のようにして得た断片を、ShevchukNABryksinAVNusinovichYACabelloFCSutherlandMLadischS2004ConstructionoflongDNAmoleculesusinglongPCRbasedfusionofseveralfragmentssimultaneouslyNucleicAcidsRes32e19に記載されたようにして、プライマーhgt53及びPADH1HGT1を使用するPCRにより融合した。得られた断片を使用してS288Cura3Δ0PADH1kanR株を形質転換した。形質転換体をSD培地を含むプレート上で選択した。その結果、S288Cura3Δ0PADH1kanRPADH1URA3PADH1HGT1株を得た。この株をS288CPADH1HGT1と称した。プロモーター置換実験のスキームを図9に示す。プライマーhgt53はプライマー1に相当し、プライマーhgt33はプライマー2に相当し、プライマーHGT1PADH1はプライマー3に相当し、プライマーPADH1HGT1はプライマー4に相当する。6Ptr2p過剰生産株の取得PTR2の在来プロモーターの置換は、HGT1のプロモーターの置換と同様に行った。以下のプライマーを使用した。ptr52、プライマー1に相当ptr32、プライマー2に相当PTR2PADH1、プライマー4に相当PADH1PTR2、プライマー3に相当プライマーPADH1PTR2の5末端の40ヌクレオチドはPTR2コード領域の最初の40ヌクレオチドに相補的であり、プライマーPTR2PADH1の5末端の30ヌクレオチドはPTR2上流領域に相同的である。7変異株の評価各株を、最終濃度100ppmのγGluValGlyを含む5mlのSD培地を含む50mlチューブ中で培養した。それぞれの株を初発OD60005で一晩培養することによりチューブ中に接種し、チューブを240rpm、30°Cの回転振盪機上に置いた。培養時間は7時間とした。その後、2mlの液体培養物から遠心分離により細胞を回収し、1mlのmilliQ水で3回洗浄した。その後、洗浄した細胞を1mlのmilliQ中に懸濁し、水浴上70°Cで10分間インキュベートして細胞内物質を抽出した。細胞デブリとエキスを遠心分離によって分離した後、水相を清浄なバイアルに移し、減圧乾燥した。このようにして乾燥エキスを調製した。その後、乾燥エキス中のγGluValGlyの量をLCMSMS分析により測定した。以下に詳細な手順を示す。器具質量分析計TripleQuadrupoleAgilent6410HPLCAgilent1200カラムThermoHypersilKeystoneC18100mm21mm5μm1サンプルを100μlの水に溶解した後、100μlのアセトニトリルを加え、遠心分離した。2190μlの上清を新しいチューブに移し、乾燥させた。3ペレットを40μlの水に溶解した。4誘導体化のために、得られた溶液20μlを60μlのバッファー及び80μlの誘導体化試薬と混合し、55°Cで10分間インキュベートした。5インキュベーションの後、200μlの01HCOOH水溶液を加えてAQC誘導体化反応を停止した。得られた溶液40μlをHPLCのために採取し、溶出液中のγGluValGlyをMSMS検出器により分析した。HPLC条件移動相A-H2O中の01HCOOH移動相B-MeCN中の01HCOOH流速-0250mlminこれらのデータから、細胞内のγGluValGly量を算出した。結果を表13及び14に示す。HGT1遺伝子はγGluValGlyの培地からの輸送に必須であるが、PTR2はそうではないことが示された。実施例13:Hgt1p過剰生産株へのγGluValGly添加の効果実施例12で得られたHgt1p過剰生産株S288CPADH1HGT1、及びその親株S288CのγGluValGly取り込み能を、実施例4に記載したのと同様の方法で評価した。γGluValGlyの培地への添加量は最終濃度で100ppmとした。その結果、S288Cにおける乾燥細胞重量に対するγGluValGlyの細胞内含量は約09であったが、S288CPADH1HGT1における乾燥重量細胞に対するγGluValGlyの細胞内含量は約49であった。この結果によりHgt1p生産過剰の効果が確認される。実施例14:S288C株へのγGlunValGly添加の効果実施例4に記載の方法と同様にして、S288C株のγGlunValGly取り込み能を評価した。γGlunValGlyを最終濃度が10ppm又は100ppmとなるように予め培地に添加した。また、γGlunValGlyの定量は、実施例1に記載の方法と同様にして行い、標準液としてγGluValGlyの代わりに1μMのγGlunValGlyを用いて行った。その結果、乾燥菌体あたりに含まれるγGlunValGlyの含有量は、培地にγGlunValGlyを添加しなかった場合は定量限界以下であったが、培地に最終濃度で10ppm添加した場合は約007であり、培地に最終濃度で100ppm添加した場合は約009であった。誘導体化したγGlunValGly標品の分析結果HPLCMSクロマトグラムを図2に示す。実施例15:S288C株へのγGlunVal添加の効果実施例7に記載の方法と同様にして、S288C株のγGlunVal取り込み能を評価した。γGlunValを最終濃度が10ppm又は100ppmとなるように予め培地に添加した。また、γGlunValの定量は実施例1と同様にして行い、標準液としてγGluValのかわりに1μMのγGlunValを用いて行った。その結果、培地にγGlunValを添加しなかった場合の乾燥菌体あたりに含まれるγGlunValは定量限界以下であったが、培地に最終濃度で10ppm添加した場合は約003、最終濃度で100ppm添加した場合は約013であった。実施例16:γGlunValGly含有酵母エキスの製造実施例5に記載の方法と同様にしてγGlunValGlyを添加して培養した酵母菌体より酵母エキスを製造した。S288C株をSD培地500ml容坂口フラスコ中50mlに1エーゼ分植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml、12本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で19時間振とう培養した。19時間後に、最終濃度で50ppmになるようにγGlunValGly水溶液を添加し、1時間培養を継続した。得られた全ての培養液から集菌し、実施例2の記載と同様の手順で菌体洗浄を行った。400ODユニット分の洗浄菌体を15mlのmilliQ水に懸濁した。同懸濁液を70°Cで10分間保持することにより、酵母菌体からエキスを抽出した。更に遠心分離を行い、菌体残渣を取り除き、エキスのみを回収した。このエキス添加区エキスに含まれるγGlunValGly濃度を測定したところ約100ppmであり、固形分は約1であった。なお、γGlunValGlyを培養液に添加せずに同様の操作により調製したエキス無添加区エキスに含まれるγGlunValGly濃度は定量限界以下であり、固形分は約1であった。このようにして調製したエキスについて、MSGグルタミン酸ナトリウム存在下でのコク味を、次のようにして評価した。まず、コントロールとして、02MSG及び05NaClを含有する水溶液を用い、これを官能評点00と定義した。次に、02MSG、05NaCl、及び1ppmのγGlunValGlyを含む水溶液をコク味の標準溶液とし、官能評点30と定義した。これら2つをコク味強度の基準として、エキスのコク味強度を評価した。エキスのコク味強度は、エキスと02MSG、及び05NaClを含む水溶液を被検サンプルとして評価した。被検サンプル中の添加区エキスの量は、γGlunValGly濃度が1ppmになるように調製した。無添加区エキスは、被検サンプル中の固形分が添加区エキスの被検サンプルと同じになるように調製した。即ち、コク味の標準溶液と添加区エキスの被検サンプル中のγGlunValGly濃度は同等であり、添加区エキスの被検サンプルと無添加区エキスの被検サンプルの固形分は同等である。更に、添加区エキス中のγGlunValGlyと同じ濃度になるように無添加区エキスにγGlunValGlyを添加したモデルサンプルも評価した。即ち、モデルサンプル中のγGlunValGly濃度は約100ppmであり、固形分は約1であった。このようにして準備した被検サンプルについて、専門のパネラー4名で、コク味を評価した。その結果、4名のパネラー全員が、添加区エキスの方が、同じ濃度のγGluValGlyよりもコク味が強いと評価した。更に、コク味を先味および中味のコク味と、後味のコク味についての評価を行う為に、各々のコク味について4名のパネルの点数の平均点を評点とした。結果を表15に示す。尚、先味および中味とは喫食後0から4秒までに感じる呈味であり、後味とは喫食後5秒以降に感じる呈味のことを示す。この結果から分かるように、γGlunValGlyを培養工程で添加して調製したエキスは、γGlunValGlyが何らかの代謝を受けたか、又は、γGlunValGlyと酵母エキス中の成分との相乗作用により、先味および中味、ならびに後味のコク味が増強したと推定される。実施例17:Hgt1p過剰生産株へのγGlunValGly添加の効果実施例12で得られたHgt1p過剰生産株S288CPADH1HGT1、及びその親株S288CのγGlunValGly取り込み能を実施例4及び実施例13に記載したのと同様の方法で評価した。γGlunValGlyの培地への添加量は最終濃度で100ppmとした。その結果、S288Cにおける乾燥菌体重量でのγ―GlunValGlyの細胞内含量は約009であったが、S288CPADH1HGT1における乾燥菌体重量でのγ―GlunValGlyの細胞内含量は約284であった。実施例18:Ptr2p過剰生産株へのValGly添加の効果実施例12で得られたHgt1p過剰生産株であるS288CPADH1HGT1、実施例12で得られたPtr2p過剰生産株であるS288CPADH1PTR2P、及びそれらの親株S288Cの、ValGlyからのγGluValGly生産能を評価した。各株を、最終濃度100ppmのValGlyを含む10mlのSD培地を含む50mlチューブ中で培養した。それぞれの株を初発OD600001で一晩培養することによりチューブ中に接種し、チューブを240rpm、30°Cの回転振盪機上に置いた。培養時間は20時間とした。その後、2mlの液体培養物から遠心分離により細胞を回収し、1mlのmilliQ水で3回洗浄した。その後、洗浄した細胞を1mlのmilliQ中に懸濁し、水浴上70°Cで10分間インキュベートして細胞内物質を抽出した。細胞デブリとエキスを遠心分離によって分離した後、水相を清浄なバイアルに移し、減圧乾燥した。このようにして乾燥エキスを調製した。その後、乾燥エキス中のγGluValGlyの量を、実施例12に記載したように、LCMSMS分析により測定した。結果から判る通り、PTR2は培地からのValGlyのトランスポーターであるようであり、ValGlyから細胞内のγGluValGly含量を増加させるのに有効であった。実施例19:GSH1過剰発現株へのnValの添加の効果S288C株を、実施例8に記載のValGly無添加区と同様にしてSDP培地で培養した。その後、細胞内γGlunValGly及びγGlunValを測定したが、検出限界未満であった。そこで、GSH1過剰発現株へのnValの添加の影響を評価した。先ず、GSH1過剰発現株を下記のようにして構築した。1サッカロマイセスセレビシエ野生株のウラシル要求性株の取得ウラシル要求性株を実施例10に記載したのと同様の方法で得た。ただし、S288C株の代わりに、サッカロマイセスセレビシエ野生株を使用した。得られた株はプライベートナンバーAJ14956が付与され、工業技術院生命工学工業技術研究所現独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター、〒3058566日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1つくば中央第6に2010年8月18日に寄託され、受託番号FERMP22000が付与された。該寄託は2010年11月17日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、受託番号FERMBP11299が付与された。2GSH1過剰発現株の取得鋳型プラスミドpAUAを使用して、GSH1の在来プロモーターをADH1のプロモーターと置換した。その後、本発明者らが以前に報告した方法により、AJ14956のGSH1の在来プロモーターをADH1のプロモーターと置換した。その後、削除したURA3遺伝子を、実施例10に記載したのと同様の方法で野生型株に戻した。このようにしてGSH1過剰発現株AG1を得、該株はいうまでもなくウラシル非要求性であった。その後、このAG1株をnValを添加したSD培地で培養した。具体的には、1エーゼ分のAG1株をSD培地に植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、初発OD660が001になるようにSDP培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml。複数本に植菌し、30°Cで120rpmの速度にて回転方式で23時間振とう培養した。23時間後、nVal溶液を10ppmあるいは100ppmの最終濃度で加え、培養を1時間継続した。その後、γGlunValの量を実施例15に記載の方法と同様にして測定した。10ppmのnValを培地に添加した場合はγGlunVal含量は007であり、100ppmのnValを添加した場合はγGlunVal含量は037であった。その後、100ppmのnValを使用して培養した培地からγGlunValを含む酵母エキスを基本的に実施例16に記載の方法と同様にして調製した。この酵母エキスは乾燥物として144のγGlunValを含んでいた。この酵母エキスはその特徴から、先味および中味について強いコク味を与えると考えられる。実施例20:GSH2過剰発現株へのγGluValの添加の効果S288Cからのura3Δ0の代わりに実施例19に記載したAJ14956を使用したことを除いて、GSH2過剰発現株PG2を、基本的に実施例10に記載の方法と同様にして構築した。対照として、実施例10及び実施例19に記載の方法と同様にして、削除したURA3遺伝子を野生型遺伝子に戻すことによりAJ14956からWT株を得た。1エーゼ分のWT株またはPG2株をSD培地に植菌し、30°Cで120rpmの速度で24時間振とう培養した。得られた培養液の吸光度を測定し、培養液を初発OD660が001になるように、γGluValを種々の濃度で添加したSD培地2L容バッフルフィン付き三角フラスコ中400ml。複数本に植菌し、OD660が所定の値になるまで30°Cで120rpmの速度にて回転方式で振とう培養した。その後、乾燥菌体及び抽出されたエキスの固形物分中のγGluValGlyの量を前記の方法で計算した。結果に示されるように、GSH2過剰発現株のPG2はγGluValを培地から取り込み、細胞中でγGluValGlyに変換した。実施例21:GSH2過剰発現株へのγGluValの添加の効果1切出し可能なkanMXマーカー及びTDH3プロモーターを含む鋳型プラスミドの調製グリセルアルデヒド3ホスフェートデヒドロゲナーゼをコードするTDH3遺伝子のプロモーターを含むDNA断片を、鋳型としてS288C株の染色体DNAを使用し、tdh3EcoR1及びtdh3Pci1プライマーを使用して、PCRにより増幅した。得られた断片をpUC57ベクターのSmaI部位へクローン化した。TDH3遺伝子のプロモーターがHindIII部位からEcoRI部位の方向に向いているプラスミドを選択し、pUC57PTDH3と称した。クローン化したDNA断片の構造は配列決定分析により確認した。pUC57PTDH3のNdeISalIDNA断片を、pUG6のNdeISalI部位へクローン化した。得られたプラスミドをpUG6PTDH3と称した。2GSH1及びGSH2在来プロモーターのTDH3のプロモーターによる置換loxPkanMXloxPPTDH3カセットを、鋳型としてpUG6PTDH3を使用し、GSH1pUG及びPTDH3GSH1プライマーを使用するPCRにより増幅した。得られたDNA断片を使用してS288C株を形質転換した。形質転換体を200μgmlのG418を含むYPD培地上で選択した。その結果、GSH1遺伝子のプロモーターがTDH3のプロモーターで置換されたS288C誘導株が得られた。そして常法による5FOAを含む培地上での選択により例えば、METHODSINYEASTGENETICS2000EDITIONp179を参照、この株のura3誘導株を得た。実施例12に記載したように、pSH47プラスミドでの形質転換により、得られた株からkanMXマーカーを削除した。その結果、S288Cura3loxPPTDH3GSH1株を得た。次いでGSH2遺伝子の在来プロモーターをTDH3のプロモーターで置換した。この目的のために、loxPkanMXloxPPTDH3カセットを、pUG6PTDH3を鋳型として使用し、PTDH3GSH2及びGSH2pUGプライマーを使用するPCRにより増幅した。GSH2上流領域は、鋳型としてS288C株の染色体DNAを使用し、GSH2up2及びGSH2dtailプライマーを使用するPCRにより増幅した。得られた断片を、GSH2up2及びPTDH3GSH2プライマーを使用して、オーバーラップエクステンションPCRe19により融合した。得られたDNA断片を使用してS288Cura3loxPPTDH3GSH1株を形質転換した。形質転換体を200μgmlのG418を含むYPD培地上で選択した。その結果、S288Cura3loxPPTDH3GSH1loxPkanMXloxPPTDH3GSH2株を得た。その後、この株から上記のようにしてkanMXマーカーを削除し、S288Cura3loxPPTDH3GSH1loxPPTDH3GSH2株を得た。本株をY3560と称した。3GSH2過剰発現プラスミドの構築PTDH3GSH2構築物を、鋳型としてY3560染色体DNAを使用し、yepgsh2F及びyepgsh2Rプライマーを使用して増幅した。これらのプライマーの5配列の45ヌクレオチドは、YEp24プラスミドのSmaIBamHI断片に隣接する領域に相補的であった。次いでYEp24プラスミドをSmaI及びBamHIで消化し、得られた断片のより大きいものをアガロースゲル電気泳動により分離した。得られたPTDH3GSH2及びYEp24断片を混合したものを使用してS288Cura3Δ227loxP及びY3560株を形質転換した。形質転換体をSD培地上で選択した。得られたプラスミドをYEp24PTDH3GSH2と指称し、得られた株をS288Cura3Δ227YEp24PTDH3GSH2及びY3560YEp24PTDH3GSH2とそれぞれ指称した。4変異株の評価S288Cura3Δ227YEp24PTDH3GSH2、Y3560YEp24PTDH3GSH2、S288C及びY3560株をそれぞれ、50mlチューブ中の、最終濃度100ppmのγGluValを含む10mlのSD培地で培養した。Y3560株については、ウラシルも培地に添加した。それぞれの株を初発OD600001で一晩培養することによりチューブ中に接種し、チューブを240rpm、30°Cの回転振盪機上に18時間置いた。その後、2mlの液体培養物から遠心分離により細胞を回収し、1mlのmilliQ水で3回洗浄した。その後、洗浄した細胞を1mlのmilliQ中に懸濁し、水浴上70°Cで10分間インキュベートして細胞内物質を抽出した。細胞デブリとエキスを遠心分離によって分離した後、水相を清浄なバイアルに移し、減圧乾燥した。このようにして乾燥エキスを調製した。その後、乾燥エキス中のγGluValGlyの量を、実施例12に記載したようにしてLCMSMS分析により測定した。結果を表18に示す。結果に示されるように、GSH2過剰発現株は細胞中のγGluValをγGluValGlyに変換した。