培養皮膚の角質層表面側からリポソーム分散液を投与して、細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リポソームが卵黄由来のリン脂質、大豆由来のリン脂質及び該リン脂質の水素添加物から選ばれる一種又は二種以上で形成される、請求項1記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リポソームが卵黄由来のリン脂質で形成される、請求項1又は2記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リン脂質に含まれるホスファチジルコリン含量が90重量以上である、請求項1~3のいずれか一項記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リン脂質の配合量が0.1~4重量の範囲である、請求項1~4のいずれか一項記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リン脂質の配合量が0.1~0.5重量の範囲である、請求項1~5のいずれか一項記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リポソーム分散液の平均粒子径が500nm以下である、請求項1~6のいずれか一項記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リポソーム分散液の平均粒子径が90~200nmの範囲である、請求項1~6のいずれか一項記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。培養皮膚が、線維芽細胞を含むコラーゲンゲルの上に表皮角化細胞を播種して培養し、下から基底層、有棘層、顆粒層及び角質層が形成された培養皮膚である、請求項1~8のいずれか一項記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リポソーム分散液の投与方法が、拡散セルに挟みこんだ培養皮膚に、リポソーム分散液が角質層を満たすように投与する方法である、請求項1~9のいずれか一項記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。リポソーム分散液の投与方法が、投与後にリポソーム分散液を取り除く工程を含む方法である、請求項10記載の細胞間脂質の周期構造を改善する方法。請求項1~8のいずれか一項記載の方法により作製される培養皮膚。請求項1~8のいずれか一項記載の方法を適用した培養皮膚を用いて経皮吸収性試験、経皮毒性試験、代謝試験及び皮膚外用剤の有効性試験を行う方法、並びにそのためのリポソーム分散液調製用キット。培養皮膚の細胞間脂質の周期構造を容易に改善させることで、培養皮膚のバリア機能を向上させて生体皮膚に近付ける方法と、この方法によって作製されるバリア機能を生体皮膚に近付けた培養皮膚を提供することを目的とした。本発明者らは、これらの課題に対して鋭意検討した結果、角質層が形成されている培養皮膚の角質層表面側からリポソーム分散液を投与することにより、細胞間脂質の周期構造を改善させる方法を見出した。すなわち、本発明は、培養皮膚の細胞間脂質の周期構造を改善させる方法と、この方法によって作製した培養皮膚、又はこの方法を適用するための試薬器具のキットを提供するものである。培養皮膚とは、例えばポリカーボネート膜やコラーゲンゲル、線維芽細胞を含むコラーゲンゲル等の上に表皮角化細胞を播種し、必要に応じて浸漬培養、気相液体培養を行い作製されるものであり、三次元培養皮膚モデルとも呼ばれる。本発明に用いる培養皮膚は、作製方法や細胞の由来に特に限定されず、支持体の上に角質層が形成されたものであれば良い。主にヒト由来の細胞で作製される。市販されている培養皮膚としては、例えば、TESTSKINLSE-high東洋紡ライフサイエンス、LabCyteEPI-MODELJ-TEC、Epidermクラボウ、EpiskinSkinEthic等を使用することができる。これらの培養皮膚の角質層表面側から、リポソーム分散液を投与する。リポソーム分散液を投与する方法として、例えば、スポイト等を用いて角質層の上部にリポソーム分散液を投与する方法が挙げられる。投与量は特に限定されないが、角質層全体をリポソーム分散液で満たすために、培養皮膚透過有効面積0.79cm2あたり10μLから300μL投与される。10μL未満では、角質層全体がリポソーム分散液で満たされるのに十分ではなく、300μLを超えると、コスト面から不経済である。また、角質層上部からリポソーム分散液がこぼれないように、角質層の上にアッセイリング等を置き、その内部にリポソーム分散液を投与することもできる。さらに、経皮吸収試験において汎用される拡散セルに培養皮膚を挟みこみ、リポソーム分散液を角質層側から投与する方法もある。リポソーム分散液の調製方法は特に限定されるものではなく、例えば、バンガム法、押し出し法、界面活性剤除去法、逆相蒸発法、高圧乳化法、超音波照射法等多くの調製法がある。その一例を示すと、リン脂質とクロロホルム等の有機溶剤を混合し、減圧下濃縮乾固させてリン脂質の薄膜を形成させたのち、このリン脂質に精製水を加えて水和し、超音波を照射してリポソームを形成させる。リポソームは、天然由来のリン脂質あるいは合成リン脂質を用いることができるが、卵黄由来のリン脂質、大豆由来のリン脂質及び該リン脂質の水素添加物から選ばれる一種又は二種以上で形成すると製造コストの点で望ましい。リン脂質としては、例えば、大豆由来リン脂質、大豆由来水素添加リン脂質、大豆由来水素添加リゾリン脂質、卵黄由来リン脂質、卵黄由来水素添加リン脂質、卵黄由来水素添加リゾリン脂質等を使用することが望ましく、必要に応じてその一種又は二種以上を用いることができる。特に、卵黄由来のリン脂質、大豆由来のリン脂質及び該リン脂質の水素添加物がよく、その中でも卵黄由来リン脂質が特に望ましい。その中で、ホスファチジルコリン含量は特に限定されるものではないが、好ましくは80重量以上、さらに好ましくは90重量以上である。本発明でのリポソーム分散液中のリン脂質含有量は特に限定されるものではないが、好ましくは0.1~4重量の範囲であり、さらに好ましくは0.1~0.5重量の範囲である。0.1重量よりも少ない量では細胞間脂質の周期構造を改善する効果が期待できず、4重量を越える量ではリポソーム分散液の安定性に問題がある場合がある。本発明でのリポソームの平均粒子径は特に限定されるものではないが、好ましくは500nm以下であり、さらに好ましくは90~200nmの範囲である。平均粒子径が1μmを超えるとリポソーム調製直後から凝集により粒子径が大きくなりリポソームの安定性に問題がある場合がある。平均粒子径が90nmよりも小さい場合にはリポソームの形態を維持することができない場合がある。本発明の方法では、培養皮膚の角質層表面側からリポソーム分散液を投与するだけで、バリア機能に重要となる細胞間脂質の周期構造を改善させ、角質層の構造を生体皮膚に近付けることができる。さらに、バリア機能改善のために細胞培養の条件を調整する方法とは異なり、細胞間脂質の周期構造を改善させる操作に特別な設備も技術も要しないので、培養皮膚を製造する当業者のみならず、培養皮膚を利用する当業者の誰にでも実施可能である。例えば、細胞培養の設備がなくても、市販されている三次元培養ヒト皮膚モデルを購入してこれにリポソーム分散液を投与するだけで、細胞間脂質の構造や機能を実際の動物やヒト皮膚に近づけた培養皮膚モデルとすることができ、本発明の培養皮膚を経皮吸収性試験や経皮毒性試験、代謝試験等に用いることができる。また、本発明の培養皮膚を用いると、細胞間脂質に影響する経皮吸収促進剤等の添加剤を含む組成物の評価試験において、実際の動物皮膚やヒト皮膚での挙動を適切に推測することができる。培養皮膚の角質層表面側から、リポソーム分散液を投与する。本発明で言うリポソーム分散液は、リポソームを含んでいればクリーム等の組成物でも良い。リポソーム分散液は、バンガム法のほか、既知の方法を用いることで調製され、電子顕微鏡、透過型電子顕微鏡、原子間力顕微鏡等によって、脂質の膜構造を観察すれば、リポソームが形成されていることを確認することができる。リポソーム分散液を投与してから、リポソームを構成する脂質が角質層に浸透するのに必要な時間経過後、リポソーム分散液の残渣を回収する。必要に応じてリン酸緩衝生理食塩水PBS、生理食塩水及び精製水等で角質層表面側の洗浄を行うこともできる。投与してから残渣を回収するまでに必要な時間は、使用する培養皮膚によって異なるが、細胞間脂質の周期構造が不完全なものほど時間は短くて良く、10分以内で充分な場合もある。長時間投与しても良いが、48時間以上の投与は、投与後の経皮吸収性試験や経皮毒性試験等を実施することを鑑みて現実的でない。本発明のリポソーム分散液調製キットとは、細胞間脂質の周期構造の改善に用いるリポソーム分散液を調製するために必要な試薬、器具及びリポソーム分散液を指す。投与のための器具や残渣除去のため器具、更に本発明の培養皮膚を使用する各種試験に必要な器具や培養皮膚そのものを含んでも含まなくとも良い。一例として、経皮吸収性試験に用いられる三次元培養ヒト皮膚モデルに本発明の方法を適用し、細胞間脂質の周期構造を改善させた三次元培養ヒト皮膚モデルの作製方法の一例を示す。三次元培養ヒト皮膚モデルを経皮吸収性試験用の拡散セルに挟みこみ、レシーバーをレシーバー液で満たす。経皮吸収性試験用の拡散セルは、縦型のものでも横型のものでも良い。レシーバー液は、三次元培養ヒト皮膚モデルに悪影響がなければ何を使用しても良く、例えばPBS-や生理食塩水等を用いることができる。拡散セルは、経皮吸収性試験を行う時と同様に例えば32~37°C等で保温しても良い。三次元培養ヒト皮膚モデルを挟み込んだ拡散セルの角質層表面側から、本発明のリポソーム分散液調製キットを用いて調製したリポソーム分散液を三次元培養ヒト皮膚モデルに投与する。これを1時間放置した後に、リポソーム分散液の残渣を回収し、PBS-で角質層表面側の洗浄を行うことで、本発明の細胞間脂質の周期構造を改善させた培養皮膚が完成する。角質層表面側からリポソーム分散液の残渣を除いた後、拡散セルに挟み込んだ状態のまま、本発明の細胞間脂質の周期構造を改善させた三次元培養ヒト皮膚モデルを用い、経皮吸収性試験を行うことができる。製造例1卵黄由来のリン脂質COATSOMENC-50、日油4gをクロロホルム40mLに溶かし、減圧下濃縮して脂質の薄膜を形成させた。これに精製水100mLを加えて超音波処理し、孔径0.2μmのフィルターでろ過してリン脂質の配合量が4重量であるリポソーム分散液を得た。このリポソーム分散液を、精製水で希釈して適当な濃度として動的光散乱光度計DLS-7000、大塚電子で測定した。キュムラント法によって解析した平均粒子径は、250nmであった。角質層が形成されている三次元培養ヒト皮膚モデルTESTSKINLSE-high、東洋紡ライフサイエンスを購入し、購入したモデルの使用方法に従い、培地から取り出した。透過有効面積0.79cm2でレシーバー容量5mLの縦型拡散セルパーメギアにレシーバー液としてPBS-を満たし、レシーバー液を32°Cで保温して、角質層表面側からリポソーム分散液300μLを投与した。20時間経過後、リポソーム分散液の残渣を回収し、角質層表面側を200μLのPBS-で5回洗浄し、リポソーム分散液の投与によって細胞間脂質の周期構造を改善させ、バリア機能をヒト皮膚に近付けた三次元培養ヒト皮膚モデルを作製した。製造例2卵黄由来のリン脂質COATSOMENC-50、日油0.1gをクロロホルム1mLに溶かし、減圧下濃縮して脂質の薄膜を形成させた。これに精製水100mLを加えて超音波処理し、孔径0.2μmのフィルターでろ過してリン脂質の配合量が0.1重量であるリポソーム分散液を得た。このリポソーム分散液を用いて製造例1と同様に処理し、リポソーム分散液の投与によって細胞間脂質の周期構造を改善させ、バリア機能をヒト皮膚に近付けた三次元培養ヒト皮膚モデルを作製した。製造例3卵黄由来のリン脂質COATSOMENC-50、日油0.5gをクロロホルム5mLに溶かし、減圧下濃縮し精製水100mLを加えて超音波処理し、孔径0.2μmのフィルターでろ過してリン脂質の配合量が0.5重量であるリポソーム分散液を得た。このリポソーム分散液を用いて製造例1と同様に処理し、リポソーム分散液の投与によって細胞間脂質の周期構造を改善させ、バリア機能をヒト皮膚に近付けた三次元培養ヒト皮膚モデルを作製した。製造例4大豆由来のリン脂質SLP-PC92、辻製油4gをクロロホルム40mLに溶かし、減圧下濃縮して脂質の薄膜を形成させた。これに精製水100mLを加えて超音波処理し、孔径0.2μmのフィルターでろ過してリン脂質の配合量が4重量であるリポソーム分散液を得た。このリポソーム分散液を用いて製造例1と同様に処理し、リポソーム分散液の投与によって細胞間脂質の周期構造を改善させ、バリア機能をヒト皮膚に近付けた三次元培養ヒト皮膚モデルを作製した。製造例5大豆由来のリン脂質SLP-PC92H、辻製油4gをクロロホルム40mLに溶かし、減圧下濃縮して脂質の薄膜を形成させた。これに精製水100mLを加えて超音波処理し、孔径0.2μmのフィルターでろ過してリン脂質の配合量が4重量であるリポソーム分散液を得た。このリポソーム分散液を用いて製造例1と同様に処理し、リポソーム分散液の投与によって細胞間脂質の周期構造を改善させ、バリア機能をヒト皮膚に近付けた三次元培養ヒト皮膚モデルを作製した。比較例1角質層が形成されている三次元培養ヒト皮膚モデルTESTSKINLSE-high、東洋紡ライフサイエンスを購入し、培地から取り出してリポソーム分散液非投与の三次元培養ヒト皮膚モデルとした。比較例2リポソーム分散液の代わりに精製水を用い、製造例1と同様に処理して、リポソーム分散液投与の比較対照となる、精製水を投与して細胞間脂質の周期構造とバリア機能がヒトに近付いていない三次元培養ヒト皮膚モデルを作製した。試験例1製造例1~製造例5の三次元培養ヒト皮膚モデルと比較例1の三次元培養ヒト皮膚モデルをそれぞれ0.1トリプシン溶液に浸して角質層のみを剥離し、脱水後に精製水を加えて水分量が20になるように調整してキャピラリーチューブφ1mm;W.Mullerに詰め測定試料とした。SPring-8の高輝度X線を用いて、小角広角X線回折同時測定を行い、細胞間脂質のラメラ構造と充填構造を同時に測定した。測定条件は、X線の波長0.1nm、カメラ長は400nmとし、カメラはRAXISリガク、イメージングプレート型検出器のサイズは300×300mmを使用した。得られたX線回折像は、FIT2DESRFを用いて二次元化した。即ち、標準試料にベヘン酸銀格子定数d=5.838nmを用い、横軸を散乱ベクトルS=q/2π、縦軸をピーク強度としてプロットした。比較例1のリポソーム分散液非投与の三次元培養ヒト皮膚モデルと比べて、小角X線回折のプロファイルにおけるS=0.271nm-1の回折ピークが強まった場合にラメラ構造の改善効果あり、広角X線回折のプロファイルにおけるS=2.41nm-1の回折ピークが強まった場合に充填構造の改善効果ありと判定し、共に改善効果が見られたものを細胞間脂質の周期構造改善の効果ありと判定した。図1は、製造例4及び比較例1の測定試料における小角X線回折のプロファイルを示す。比較例1のリポソーム分散液非投与の三次元培養ヒト皮膚モデルにおいて、細胞間脂質のラメラ構造に相当するS=0.271nm-1の回折ピークは見られず、コレステロールの周期であるS=0.294nm-1の回折ピークがわずかに見られた。一方、製造例4の三次元培養ヒト皮膚モデルにおいては、S=0.271nm-1に回折ピークが出現した。これらのことは、製造例4の三次元培養ヒト皮膚モデルにおいて、細胞間脂質のラメラ構造が改善されたことを示す。図2は、製造例4及び比較例1の測定試料における広角X線回折のプロファイルを示す。比較例1のリポソーム分散液非投与の三次元培養ヒト皮膚モデルにおいて、細胞間脂質の充填構造に相当するS=2.41nm-1の回折ピークがわずかに見られた。一方、製造例4の三次元培養ヒト皮膚モデルにおいては、S=2.41nm-1の回折ピークが強まった。これらのことは、製造例4の三次元培養ヒト皮膚モデルにおいて、細胞間脂質の充填構造が改善されたことを示す。製造例1から製造例5のリン脂質分散液を三次元培養ヒト皮膚モデルへ投与した場合の細胞間脂質の周期構造改善効果について検討した結果を表1に示す。細胞間脂質の周期構造改善の効果が見られたものは○、改善の効果がより強く見られたものは◎と示した。いずれのリン脂質分散液の投与によっても、細胞間脂質のラメラ構造や充填構造に由来する回折ピークが強まり、細胞間脂質の周期構造が改善されることが示された。さらに、これらの結果は、リン脂質が角質層表面で周期構造を形成したのではなく、元々三次元培養ヒト皮膚モデルに含まれていた細胞間脂質が周期構造を形成したことを示している。試験例2製造例1の三次元培養ヒト皮膚モデル及び比較例2の三次元培養ヒト皮膚モデルを、レシーバー液としてPBS-を満たした拡散セルに挟み込み、レシーバー液を32°Cで保温した。角質層表面側からカフェインの2重量水溶液300μLを適用し、3時間後のレシーバー液を回収し、三次元培養ヒト皮膚モデルを透過したカフェイン量をHPLCにて定量した。図3は、三次元培養ヒト皮膚モデルを透過したカフェイン量を示す。この結果から明らかなように、リポソーム分散液を角質層表面側から投与した三次元培養ヒト皮膚モデルにおいては、水溶性低分子であるカフェインの透過量が少ないことから、バリア機能が高まったことが示された。つまり、簡便な操作によって、バリア機能が実際の皮膚に近付いた三次元培養ヒト皮膚モデルを作製できることが明らかとなった。被験物質1大豆由来のホスファチジルコリンSLP-PC92、辻製油0.5gをクロロホルム5mLに溶かし、減圧下濃縮し、カフェインの2重量水溶液100mLを加えて超音波処理し、孔径0.2μmのフィルターでろ過してカフェインリポソーム製剤を調製した。被験物質2カフェインリポソーム製剤の比較対照として、カフェインの2重量水溶液を調製した。試験例3製造例1の三次元培養ヒト皮膚モデルを、レシーバー液としてPBS-を満たした縦型拡散セルに挟み込み、レシーバー液を32°Cで保温した。被験物質1カフェインリポソーム製剤又は被験物質2カフェインの2重量水溶液300μLを適用し、3時間後にレシーバー液を回収し、三次元培養ヒト皮膚モデルを透過したカフェイン量をHPLCにて定量した。図4は、三次元培養ヒト皮膚モデルを透過したカフェイン量を示す。この結果は、リポソーム製剤によって、カフェインの透過量が促進することを示しており、モルモット皮膚において行われた同様の試験の結果と類似する。以上から、本発明の培養皮膚は、生体皮膚での挙動を正しく推測するのに適したものであると考えられる。