"アミン基、ヒドロキシル基、脂肪酸基、及びPEGからなる群から選択される末端官能基を含む超分岐ポリマーを含有する眼科用組成物。更に、炭酸脱水素酵素阻害剤を含む、請求項1に記載の眼科用組成物。更に、非イオン性界面活性剤を含む、請求項1に記載の眼科用組成物。更に、非イオン性界面活性剤を含む、請求項2に記載の眼科用組成物。該超分岐ポリマーの平均分子量が1,000~750,000ダルトンMwの範囲内である、請求項1に記載の眼科用組成物。該超分岐ポリマーが、ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン、及びポリエステルからなる群より選択されるコアを含む、請求項1又は2に記載の眼科用組成物。pHが3.0~8.0の範囲内である、請求項1に記載の眼科用組成物。該超分岐ポリマーの濃度が0.01~5w/vの範囲内である、請求項1に記載の眼科用組成物。更に、ベータブロッカーを含む、請求項2に記載の眼科用組成物。該炭酸脱水素酵素阻害剤が、ドルゾラミド、ブリンゾラミド、及びアセタゾラミドからなる群より選択される、請求項2に記載の眼科用組成物。該非イオン性界面活性剤が、PEG、ポリソルベート、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース、及びヒドロキシエチルセルロースからなる群より選択される、請求項3に記載の眼科用組成物。該非イオン性界面活性剤が、PEG、ポリソルベート、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース、及びヒドロキシエチルセルロースからなる群より選択される、請求項4に記載の眼科用組成物。該ベータブロッカーが、カルテオロール、レボブノロール、ベタキソロール、メチプラノロール、チモロール、及びプロプラノロールからなる群より選択される、請求項9に記載の眼科用組成物。該超分岐ポリマーのコアがポリエステルであって、末端官能基として、ヒドロキシル基、脂肪酸基、及びPEGを含む、請求項6に記載の眼科用組成物。該超分岐ポリマーの平均分子量が、1,000~12,000ダルトンMwの範囲内である、請求項14に記載の眼科用組成物。該超分岐ポリマーの濃度が、0.001~4w/vの範囲内である、請求項14に記載の眼科用組成物。超分岐ポリエステル、チモロール、ドルゾラミド、及びポリソルベート80を含有する眼科用組成物であって、該超分岐ポリエステルが、ポリエステルヒドロキシル基、脂肪酸基、及びPEGからなる群より選択される末端官能基を含む、眼科用組成物。超分岐ポリエステル、チモロール、ブリンゾラミド、及びポリソルベート80を含有する眼科用組成物であって、該超分岐ポリエステルが、ポリエステルヒドロキシル基、脂肪酸基、及びPEGからなる群より選択される末端官能基を含む、眼科用組成物。本発明の目的は、有効成分の改善した水溶解度及び角膜透過性を有する、改善した眼科用組成物を提供することである。本発明者らは、超分岐ポリマーを含む眼科用組成物の研究を行い、超分岐ポリマーが強力な生体接着性を有する粘液接着性ポリマーであり、このことが、負に荷電した角膜ムチン膜と陽イオン性超分岐ポリマーとの間の強力な静電気的相互作用をもたらすことを見出した。本発明者らは、超分岐ポリマーが、ドルゾラミド又はブリンゾラミド等の緑内障治療に用いられる、炭酸脱水素酵素阻害剤の水溶解度増加させること、更には、ドルゾラミド又はブリンゾラミドの水溶解度が、超分岐ポリマーの濃度の上昇に伴って直線的に増加することを見出した。加えて、本発明者らは、invitroヒト角膜上皮細胞培養研究に基づいて、ヒドロキシル官能基を有するBis-MPA超分岐ポリエステル第2世代等の超分岐ポリマーが、細胞傷害性又は目に刺激を与えることなく最高4w/vまで安全に使用することができること、更には、超分岐ポリマーが、ドルゾラミド及びチモロールの、インタクトな角膜への角膜透過及び分配を増加させ、ドルゾラミド及びチモロールの親油性角膜への分配を増加させることを見出した。すなわち、本発明は以下のとおりである:1アミン基、ヒドロキシル基、脂肪酸基、及びポリエチレングリコールPEGからなる群から選択される末端官能基を含む超分岐ポリマーを含有する眼科用組成物、2更に炭酸脱水素酵素阻害剤を含む、上記1に記載の眼科用組成物、3更に非イオン性界面活性剤を含む、上記1又は2に記載の眼科用組成物、4前記超分岐ポリマーの平均分子量が1,000~750,000ダルトンMwの範囲内である、上記1に記載の眼科用組成物、5前記超分岐ポリマーが、ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン、及びポリエステルからなる群より選択されたコアを含む、上記1又は2に記載の眼科用組成物、6pHが3.0~8.0の範囲内である、上記1に記載の眼科用組成物、7超分岐ポリエステルの濃度が0.01~5w/vの範囲内である、上記1に記載の眼科用組成物、8更にベータブロッカーを含む、上記2に記載の眼科用組成物、9該炭酸脱水素酵素阻害剤が、ドルゾラミド、ブリンゾラミド、及びアセタゾラミドからなる群より選択される、上記2に記載の眼科用組成物、10該非イオン性界面活性剤が、PEG、ポリソルベート、ヒドロキシルプロピルメチルセルロースHPMC、及びヒドロキシエチルセルロースHECからなる群より選択される、上記3に記載の眼科用組成物、11該ベータブロッカーが、カルテオロール、レボブノロール、ベタキソロール、メチプラノロール、チモロール、及びプロプラノロールからなる群より選択される、上記8に記載の眼科用組成物、12該超分岐ポリマーのコアがポリエステルであって、末端官能基として、ヒドロキシル基、脂肪酸基、及びPEGを含む、上記5に記載の眼科用組成物、13該超分岐ポリマーの平均分子量が1,000~12,000ダルトンMwの範囲内である、上記12に記載の眼科用組成物、14該超分岐ポリマーの濃度が0.001~4w/vの範囲内である、上記12に記載の眼科用組成物、15超分岐ポリエステル、チモロール、ドルゾラミド、及びポリソルベート80を含有する眼科用組成物であって、該超分岐ポリエステルが、ポリエステルヒドロキシル基、脂肪酸基、及びPEGからなる群より選択される末端官能基を含む、眼科用組成物、16超分岐ポリエステル、チモロール、ブリンゾラミド、及びポリソルベート80を含有する眼科用組成物であって、該超分岐ポリエステルが、ポリエステルヒドロキシル基、脂肪酸基、及びPEGからなる群より選択される末端官能基を含む、眼科用組成物。本発明の組成物は、眼の状態を治療するための、局所投与可能な治療用組成物である。当該眼の状態としては、緑内障、及び、例えば、白内障、結膜炎、感染症、炎症又は網膜症等の眼疾患が挙げられる。本発明の詳細な説明は以下のとおりである。本発明は超分岐ポリマーを含む眼科用組成物を包含する。本発明に係る超分岐ポリマーは、例えば、ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン又はポリエステルコアを有する超分岐ポリマーなどの、医薬上許容されるいかなる超分岐ポリマーでもあり得る。本発明の眼科用組成物における超分岐ポリマーの分子量は、1,000~750,000ダルトンの範囲内であり、好ましくは、1,000~12,000ダルトンの範囲内である。分子量は、動的光散乱によって測定された平均分子量である。本発明の眼科用組成物における超分岐ポリマーの濃度は、0.001~10w/vの範囲内であり、好ましくは0.001~5w/vの範囲内、より好ましくは0.001~4w/vの範囲内、より好ましくは0.01~4w/vの範囲内、より好ましくは0.01~3w/vの範囲内である。上述の眼科用組成物は、炭酸脱水素酵素阻害剤も含み得る。炭酸脱水素酵素阻害剤は、炭酸脱水素酵素の活性を抑制する医薬品類で、抗緑内障剤として有用であることが既知である。本発明の眼科用組成物中に存在し得る炭酸脱水素酵素阻害剤の例としては、ドルゾラミド、ブリンゾラミド又はアセタゾラミドが挙げられる。上述の眼科用組成物は、非イオン性界面活性剤も含み得る。非イオン性界面活性剤は、例えば、ポリソルベート80、PEG8000、HPMC又はHEC等の、医薬上許容される添加物として知られる、いかなる非イオン性界面活性剤でもあり得る。本発明の眼科用組成物は、眼への局所使用のために従来採用されるpHの範囲へ調節された後、有利に使用される。通常pH3~8へ、好ましくはpH5~8へ調節された後、使用される。pH調節のために、塩酸、酢酸、水酸化ナトリウム等を用いることができる。本発明の眼科用組成物は、ベータブロッカーも含み得る。ベータブロッカーは、眼内の圧力眼圧を減少させることが既知であり、緑内障患者の視神経への傷害及び失明のリスクを軽減させるのに使用される。本発明の眼科用組成物におけるベータブロッカーは、カルテオロール、レボブノロール、ベタキソロール、メチプラノロール、チモロール及びプロプラノロール等の、眼科用組成物内で使用可能であることが既知である、いかなるベータブロッカーでもあり得る。本発明の第1の特定の実施形態は、超分岐ポリマー、チモロール、ドルゾラミド、PEG8000及びポリソルベート80を含む眼科用組成物である。当該組成物は、好ましくは、約0.001~10w/vの超分岐ポリマー、最も好ましくは約1~5w/v、及び0.05~1w/vのチモロール、最も好ましくは約0.5w/v、及び約0.05~5w/vのドルゾラミド、最も好ましくは約0.5~2w/v、及び約0.05~5w/vのPEG8000、最も好ましくは約0.5~4w/v、及び約0.05~5w/vのポリソルベート80、最も好ましくは約0.5~4w/v、を含み、それぞれの患眼に対し1日1回又は2回投与し得る。本発明の第2の特定の実施形態は、超分岐ポリマー、チモロール、ブリンゾラミド、PEG8000及びポリソルベート80を含む眼科用組成物である。当該組成物は、好ましくは、約0.001~10w/vの超分岐ポリマー、最も好ましくは約1~5w/v、及び0.05~1w/vのチモロール、最も好ましくは約0.5w/v、及び約0.05~5w/vのブリンゾラミド、最も好ましくは約0.5~2w/v、及び約0.05~5w/vのPEG8000、最も好ましくは約0.5~4w/v、及び約0.05~5w/vのポリソルベート80、最も好ましくは約0.5~4w/v、を含み、それぞれの患眼に対し1日1回又は2回投与し得る。本発明の第3の特定の実施形態は、超分岐ポリエステル、チモロール、ドルゾラミド、PEG8000及びポリソルベート80を含む眼科用組成物である。当該組成物は、好ましくは、約0.1~10w/vの超分岐ポリエステル、最も好ましくは約1~5w/v、及び0.05~1w/vのチモロール、最も好ましくは約0.5w/v、及び約0.05~5w/vのドルゾラミド、最も好ましくは約0.5~2w/v、及び約0.05~5w/vのPEG8000、最も好ましくは約0.5~4w/v、及び約0.05~5w/vのポリソルベート80、最も好ましくは約0.5~4w/v、を含み、それぞれの患眼に対し1日1回又は2回投与し得る。本発明の第4の特定の実施形態は、超分岐ポリエステル、チモロール、ブリンゾラミド、PEG8000及びPEG8000を含む眼科用組成物である。当該組成物は、好ましくは、約0.1~10w/vの超分岐ポリエステル、最も好ましくは約1~5w/v、及び0.05~1w/vのチモロール、最も好ましくは約0.5w/v、及び約0.05~5w/vのブリンゾラミド、最も好ましくは約0.5~2w/v、及び約0.05~5w/vのPEG8000、最も好ましくは約0.5~4w/v、及び約0.05~5w/vのポリソルベート80、最も好ましくは約0.5~4w/v、を含み、それぞれの患眼に対し1日1回又は2回投与し得る。本発明に係る眼科用組成物は、自体公知の薬理学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤を含むことができ、眼科用組成物調製の自体公知の方法によって処方し得る。本発明の眼科用組成物は、点眼、乳濁液、及び眼軟膏などの、眼科用製剤として従来使用されるいかなる医薬品剤形によっても提供され得る。点眼剤は、例えば、透明な溶液、眼科用懸濁液、眼科用乳濁液である点眼液のような水溶性製剤であり得、同様に、非水溶性点眼液及び非水溶性眼科用懸濁液のような非水溶性製剤でもあり得る。上記点眼液製剤は、緩衝剤例えば、リン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酒石酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、アミノ酸、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等、等張剤例えば、ソルビトール、グルコース及びマンニトールなどの糖類、グリセリン、濃グリセリン、PEG及びプロピレングリコールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムなどの塩、保存剤又は防腐剤例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、メチルp-オキシベンゾエート又はエチルp-オキシベンゾエートなどのP-オキシベンゾエート、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸又はその塩、チメロサール、クロロブタノール等、可溶化補助剤又は安定化剤例えば、シクロデキストリン及びその派生物、ポリビニルピロリドンなどの水溶性ポリマー、チロキサポールなどの界面活性剤、pH修飾剤例えば、塩酸、酢酸、リン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム等、増粘剤例えば、HEC、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、HPMC、カルボキシメチルセルロース及びそれらの塩、キレート剤例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、濃リン酸ナトリウム等の、通常組み入れられる様々な添加物を含み得る。水溶性懸濁液形態の点眼剤は、上記添加剤に加え、懸濁剤例えば、ポリビニルピロリドン、グリセリンモノステアレート及び分散剤例えば、チロキサポールなどの界面活性剤、アルギン酸ナトリウムなどのイオン性ポリマーも含むことができ、これらは、点眼剤がより均一な微粒子であって、十分に拡散する水溶性懸濁液であることを保証する。水溶性懸濁液形態の点眼剤は、好ましくは、緩衝剤としてクエン酸ナトリウム又は酢酸ナトリウム、等張剤として濃グリセリン及び/又はプロピレングリコール、並びに懸濁剤としてポリビニルピロリドンを含む。好ましい分散剤は、界面活性剤及び/又はアルギン酸ナトリウムである。該界面活性剤は、好ましくは、チロキサポールである。本発明の眼科用組成物は、緑内障等の眼疾患に罹患している又は罹患の可能性のある哺乳動物例えば、ヒト、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、サルへ投与し得る。投与経路及び用量は対象者の症状、年齢及び体重に依存して変わり得るが、成人に対して、好ましくは、1~複数滴の一用量で1日1~8回投与された場合、水溶性点眼剤に含まれる本発明の眼科用組成物中の活性剤の濃度は、約0.001~5w/v、好ましくは約0.01~3w/vである。使用の意図と反する悪影響が無いのであれば、本発明の眼科用組成物は、例えば、ステロイド性抗炎症剤デキサメタゾン、プレドニゾロン、ロテプレドノール、フルオロメトロン、フルオシノロン等、非ステロイド性抗炎症剤ジクロフェナクナトリウム、プラノプロフェン、ブロムフェナク、ケトロラクトロメタミン、ネパフェナク、フルルビプロフェンナトリウム等、抗アレルギー剤トラニラスト、フマル酸ケトチフェン、塩酸オロパタジン、クロモグリク酸ナトリウム、ペミロラストカリウム、ネドクロミルナトリウム等、抗ヒスタミン剤塩酸エピナスチン、塩酸アゼラスチン、Azalastinehydrochrilidem、塩酸ジフェンヒドラミン等、緑内障治療剤塩酸ピロカルピン、サリチル酸フィゾスチグミン、チモロール、イソプロピルウノプロストン、ラタノプロスト、塩酸ベタキソロール、アプラクロニジン、酒石酸ブリモニジン、Carbacol、ジピベフリン、ビマトプロスト、トラボプロスト、酒石酸ブリモニジン等、抗生物質アジスロマイシン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸フラジオマイシン、トブラマイシン、スルベニシリン、セフメノキシム、エリスロマイシン、コリスチン、オキシテトラサイクリン、ポリミキシンB、クロラムフェニコール、ミクロノマイシン、ジベカシン、シソマイシン等、抗菌剤スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、オフロキサシン、ノルフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、塩酸モキシフロキサシン、エノキサシン、塩酸シプロフロキサシン、シノキサシン、スパルフロキサシン、トシル酸トスフロキサシン、ナリジクス酸、ピペミド酸三水和物、ピペミド酸、フレロキサシン、レボフロキサシン、ガチフロキサシン等、及び抗ウイルス剤イドクスウリジン、アシクロビル等、並びに抗真菌剤ピマリシン、フルコナゾール、ミコナゾール、アムホテリシンB、フルシトシン、イトラコナゾール等、抗VEGF抗体ペガプタニブ等など、他の適切な薬理学的有効物質を含み得る、又はこれらの物質と併用し得る。本発明の眼科用組成物は、等張剤、緩衝剤、保存剤、懸濁剤、増粘剤、安定化剤、pH調節剤等の、医薬上許容される添加物を適切に含む溶液中で、活性剤、超分岐ポリマー、及び任意で非イオン性界面活性剤を、溶解又は分散することで産生し得る。本発明者らは、先の出願、米国特許出願12774419の内容全体を本明細書に参照として組み入れる。以下の実施例により、更に本発明の詳細を説明するが、これらの実施例は単なる実例であり、本発明の範囲を限定することを意図しない。実施例1様々な濃度の超分岐ポリマーHPLupasol登録商標G20、Lupasol登録商標G35、Lupasol登録商標PS及びPEGを含む水溶液におけるドルゾラミドのpH溶解度特性方法pH5.5、pH6、pH6.5、pH7、pH7、pH8及びpH8.5の0.1w/vリン酸緩衝溶液で、塩酸ドルゾラミド懸濁液を調製した。異なるHPと分子量8000のPEGを様々な濃度で含む水溶液中においても、同様の懸濁液を調製した。ポリソルベート80とPEG8000との組み合わせも試みた。pHはmicro-pHelectrodeThermoScientificを用いて、正確に測定した。1MNaOH又は1MHClのいずれかを使用し、所望のpHに調節した。前記懸濁液を初めに、10分間室温で攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。懸濁液を更に30分間室温に置いて平衡化した後、10分間の超音波処理を行い、最終的に0.45μmのシリンジフィルターで濾過した。UPLCを使用して、ドルゾラミド濃度について、該濾液を解析した。ドルゾラミドの検出は以下を使用して行った:水中での勾配1v/vトリエチルアミンTEA:室温、流速0.7mL/min、波長254nm及び注入体積10μL、BEHC181.7μm、2.1x50mmカラムでアセトニトリル法を行った。ドルゾラミドの濃度を見出すために、キャリブレーション曲線を作成した。使用したポリマーの特性は表1に記載した。結果及び考察図1は、pHが5.65から上昇するにつれ、ドルゾラミドの水溶解度が減少し、pH7で最低になることを明らかにしている。COSOPT登録商標はpH5.65で製剤化されているため、pH5.65の0.1w/vリン酸緩衝液中で、異なるHPが様々な濃度で存在する際の、ドルゾラミドの溶解度を定量した。結果を図2に示す。pH5.65で、ドルゾラミドの溶解度は、HPの濃度が0.1から1w/vへ上昇するに従って増加した。同様に、pH7において、図3の棒グラフに示されるように、ドルゾラミドの溶解度は、HPの濃度が0.1w/vから4w/vへ上昇するのに伴って直線的に増加した。図4で示されるように、pH7で、様々な濃度のPEG8000、並びに、0.5及び0.1w/vのHPLupasol登録商標PSの組み合わせを適用した。図4から明らかなように、約20PEG8000及び0.5Lupasol登録商標PS、又は、17PEG8000及び1Lupasol登録商標PSを使用することで、pH7のリン酸緩衝液中で、2w/vのドルゾラミド溶解度COSOPT登録商標と同様を達成し得る。結論本発明者らは、ドルゾラミドの水溶解度が、HP及びPEGの濃度の上昇に伴って増加することを見出した。PEGの場合、PEGの分子量の増加に伴い、直線的に溶解度も上昇した。更に、PEG存在下で、ポリソルベート80はドルゾラミド分子の拡散を助け、水中での沈殿を阻害する。これらの結果から、HPはドルゾラミドの溶解性を有意に亢進すると結論づけた。更に、親水性ポリエチレングリコールがドルゾラミド溶解性促進剤であることを見出した。上記結果は、生理学的なpH付近のpH値で、超分岐ポリマー及びPEGをドルゾラミド溶解性促進添加物として使用することの有用性を明示している。実施例2ムチン-超分岐ポリマーの生体接着結合強度のinvitro判定のための単純な流動学的方法ムチン-ポリマーの生体接着結合強度を定量するため、単純な粘度測定法を採用した。Lupasol登録商標PSと呼ばれる市販のHPの粘接着特性を決定するため、pH7で、市販品のCOSOPT登録商標と比較しながら、ブタ胃ムチンを有する様々な濃度のHPの生体接着力を計算した。ブタ胃ムチンはモデルムチンとして使用したが、全てのムチンは一般的な、物理学的、構造的、及び流動学的特性を共有していると思われるため、ブタ胃ムチンは生体接着性物質の第一の評価には十分なモデルであるとされている。方法全ての測定にブルックフィールド粘度計BrookfieldRotationalLVDVE粘度計を用いた。全ての粘度測定にコードナンバー18の軸を使用した。マニュアルにあるように、rpmのせん断率s-1への変換には、ファクター1.32を使用した。pH7の0.1w/vリン酸緩衝液中で、15w/v胃ムチン溶液を調製した。リン酸緩衝液中で0.5w/v及び1w/vLupasol登録商標PSの個別の粘度を測定した。リン酸緩衝液中の15ムチンの粘度も測定した。粘度は、20°Cで2.6~80s-1の様々なせん断率Dにおいて測定した。HassanEetalPharmRes5491pH7の0.1w/vリン酸緩衝液中で、様々な濃度のLupasol登録商標PS、PEG、並びに、15w/v胃ムチン有り及び無しで、各10mLのサンプルを5サンプル調製した。サンプル7はオリジナルのCOSOPT登録商標市販品である。20°Cでの粘度を様々なせん断率で測定した。上述のように、生体接着力は等式1及び2を使用して計算した。生体接着力Fは以下の等式1のように計算した:σは1秒当りのせん断率であり、ηbは以下の等式2による実験測定値に基づいている:ηtは系の粘度係数であり、ηm及びηpはそれぞれムチン及び生体接着性ポリマー例えば、HPやPEG8000の個別の粘度係数である。等式1及び2が有効であるには、ηt、ηm及びηpは、同一の濃度、温度、時間、及びせん断率で測定されるほうがよい。生体接着性現象は、前角膜領域において代替する涙液の接触時間に主要な役割を果たす。結果及び考察図5に示されるように、リン酸緩衝液中で低濃度のHPは、COSOPT登録商標サンプル7及びムチンサンプル1に比べて、相対的に低い粘度を有している。HP0.5、サンプル2、及び、1、サンプル4の粘度は、高せん断率において比較的水に近く、高せん断率において、0.5w/vHP及び1w/vの粘度間の相違は無視できる。HPの製剤への添加は、最終的な製剤の流動学的特性を変えないであろうから、上記結果は、局所的点眼液に非常に適合し得る、流動学的特性を有する添加物として、HPを使用することの有用性を明確に示唆している。生体接着力は、せん断率80s-lの図5から得られるデータに基づいて定量した。ポリマーは一般的に高せん断率100s-1付近で生体接着特性を示すため、高いせん断率を選択した。図6で示されるように、低濃度0.5w/v及び1w/vHP-ムチン系の生体接着結合強度は、COSOPT登録商標-ムチン系のそれのほぼ2倍を上回る。2w/vPEGの添加により1w/vHP-ムチン系の生体接着力が変化しなかったことは、2PEGが、pH7で、HPによって起きる生体接着力へ影響しないであろう、ということを示唆している。概して、図6に示される結果は、低濃度HPの生体接着強度は、COSOPT登録商標製剤中に存在するポリマーに比べ、相対的に有意であることを示している。生体接着現象は、薬剤の眼でのバイオアベイラビリティを増加するのに大きく寄与し得る。結論結論として、生体接着性の粘度判定法によって得られたデータは、超分岐ポリマーが、目のムチンと強く相互作用する可能性のある、生体接着性添加物質であることを示唆している。ムチンとHP間の当該生体接着力は、最終的に薬剤の眼でのバイオアベイラビリティの亢進をもたらす可能性がある。実施例3pH5.65及びpH7での、HPLupasol登録商標PS並びに、ポリソルベート80、又は、PEG及びポリソルベート80の組み合わせを含む新規製剤での、チモロール存在下におけるドルゾラミドの水溶解度方法pH5.65のクエン酸緩衝液中で、塩酸ドルゾラミド及び0.5w/vチモロールの懸濁液を調製したコントロールサンプル。同様の懸濁液も、pH3のクエン酸緩衝液中で、2w/vHPを含む水溶液として調製した。最終的なpHは、HP添加後に1MNaOHを用いて5.65に調節したサンプル1。表3にあるように、pH5.65で様々な分子量のPEG及びポリソルベート80の組み合わせも試みた。表3は、10mMクエン酸緩衝液で調製された、全ての異なる試験サンプル懸濁液を示している。同様に、クエン酸緩衝液ではなく、pH7のリン酸緩衝液でのドルゾラミドの溶解度を試験する製剤として、10mMリン酸緩衝液中で再度製剤を調製した表3。最初に懸濁液を10分間室温で攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。前記懸濁液を更に30分間室温で平衡化した後、10分間の超音波処理を行い、最終的に0.45μmのシリンジフィルターで濾過した。実施例1と同じ条件で、UPLCを使用して、ドルゾラミド及びチモロールの濃度について、濾液を解析した。結果及び考察本実験において、本発明者らは、HP、PEG、及びポリソルベート80を溶解度促進添加物として使用した。pH5.65及びpH7で、様々な組み合わせを試みた。図7に示されるように、pH5.65及びpH7でチモロール存在下において、ドルゾラミドの溶解度は、添加物無しのコントロールサンプルに比べ、添加物を加えた場合の方が増加することが示された。pH5.65で、全ての場合において、ドルゾラミドの溶解度は2を超えており、HP又はPEG及びポリソルベート80の組み合わせの添加により、チモロール存在下で、ドルゾラミドの溶解度は増加した。市販のCOSOPT登録商標製品は、pH5.65で2w/vドルゾラミドを有するが、HP又はPEGの添加によるpH5.65での2w/vを越えるドルゾラミド溶解度の亢進は、用量を増やすことによる、薬剤の有効性亢進について有用に寄与しないであろう。故に、10mMリン酸緩衝液中で難溶解性0.5w/v溶解度未満のドルゾラミドの、pH7での溶解度のデータはより重要である。上記製剤サンプル内のチモロールの溶解度それぞれ正確に0.5w/vチモロールを含むは、pH5.65及びpH7で添加物を加えても変化しないことも判明した。COSOPT登録商標はpH5.65で調合されているため、製剤サンプルへのpH5.65での様々な濃度の異なるHPの添加により、チモロール存在下でのドルゾラミド溶解度を定量した。結果を図7に示す。棒グラフで示されるように、pH5.65及びpH7で、HPの濃度を0.5から2w/vへ上昇させるに伴い、ドルゾラミド溶解度は直線的に増加する。しかしながら、ドルゾラミドの溶解度の亢進に対するHPの影響は、pH7よりもpH5.65での方がより明白である。図8で示されるように、HPへのポリソルベート80の添加はドルゾラミドの溶解度を増加する。チモロール存在下でのドルゾラミドの水溶解度の改善は、pH5.65で、HP、又は、PEG及びポリソルベート80を組み合わせて添加した場合に有意であった。この場合、ポリソルベート80はドルゾラミド分子の拡散を助け、PEG存在下で水中での沈殿を阻害した。pH7でチモロール存在下での、HPとポリソルベート80との組み合わせは、ドルゾラミド溶解度を亢進するのに最良の組み合わせであった。上記結果から、pH7でチモロール存在下において、HP及びポリソルベート80は、ドルゾラミドの溶解度を有意に増加すると結論づけることができる。親水性PEGもドルゾラミド溶解度促進剤であることが判明した。更に、低濃度のポリソルベート80とPEG8000との組み合わせも、ドルゾラミドの溶解度を亢進する、非常に有用な添加物であることが証明された。概して、最適化濃度のHP及びポリソルベートを有するpH7の製剤が、眼でのバイオアベイラビリティを高めるのに非常に有用であろう。結論上記結果は、およそ1w/vのドルゾラミドを角膜へ透過させるのに、より寄与するであろう生理学的なpH付近のpH値で、ドルゾラミド溶解度を促進する添加物として、HP及びポリソルベート80を使用することの有用性を明示している。ポリソルベート80も、pH7でHP存在下難溶解性であるドルゾラミドの沈殿を抑制する、効果的な乳化剤であることが証明された。実施例4HPLupasol登録商標PS及びポリソルベート80を含む新規局所的製剤のための、ドルゾラミド及びチモロールのinvitro角膜透過研究pH5.65のオリジナルの市販されている局所的製剤有効成分のみと比べ、0.5w/vHPの添加、又は、0.5w/vHP及び1w/vポリソルベート80の添加の効果を検討するために、ドルゾラミド及びチモロールCOSOPT登録商標の有効成分の角膜透過についてinvitroの実験を実施した。材料及び方法実験方法1.製剤調製:ドルゾラミド及びチモロールのinvitro角膜透過性を検討する、及び角膜加水分解効果を決定するために、10mMクエン酸緩衝液中で、以下の3溶液を調合した。上記サンプルは0.45μmシリンジフィルターで濾過した。双方のサンプルの初期濃度は、UPLC解析により決定した。実験結果から以下の推定を行った:aHP独占的にHPexclusively試験1と試験2のデータの比較から。b角膜透過性へのポリソルベート80試験2及び試験3の比較有意性。cHPポリソルベート80組み合わせの有意性試験1、試験2、試験3のデータの比較から。2.invitroラビット角膜透過実験3~4ポンド重量の3匹の雄ラビットニュージーランドは、11~12週齢であった。二酸化炭素ガスの過剰投与により屠殺した後、直ちに眼球を取り出し、生理食塩水で洗浄し、透過実験に使用する角膜を分離した。過剰な染色を除くために、新たに調製したレセプター溶液表4でそれぞれの角膜を洗浄した。6つのインタクトで新鮮な角膜を、ガラス製の隣接拡散セルのドナー区画とレセプター区画間の固定部に、上皮表面がドナー区画に面するように固定した。図9は本実験で使用した単純拡散セルの模式図を示している。透過に使用できる角膜の面積は0.211cm2であった。レセプター区画は、表4に記載されている組成に従って、pH7.2で新たに調製したレセプター溶液で満たした。一定分量5mLのサンプル1を2つのインタクトな角膜上に置き、ドナーセルの開口部をカバーガラスで密封した。サンプル1を置いてから10分後に、一定分量5mLのサンプル2を次の2つのインタクトな角膜上へ置いた。更に10分後、一定分量5mLのサンプル3を残りの2つのインタクトな角膜へ置いた。レセプター溶液それぞれのレセプターセルに5mLは、6つ全ての場合において、ウォータージャケットを介して、攪拌しながら34°Cに一定に保たれた。既定の時間間隔10、20、40、60、80、100、120、140、160、及び180分で、レセプター溶液から200μLのサンプルを回収した。その後、レセプターセルに等量のリン酸緩衝液を加えた。薬剤濃度はUPLCで解析した。3.解析ドルゾラミド及びマレイン酸チモロール検出条件は以下であった、水中での勾配1v/vトリエチルアミンTEA:室温、流速0.7mL/min、波長254nm及び298nm並びに注入体積1μL、BEHC181.7μm、2.1x50mmカラムでアセトニトリル法を行った。4.角膜透過パラメーターの計算実験終了時に、それぞれの角膜接着性強膜なしを脱イオン水に浸した後、重さを量った。湿った角膜を一晩オーブンで乾燥させ、再び重量を量った。重さの違いから角膜の水和作用を計算した。薬剤透過の最終結果は累積透過量Qと表した。パラメーターは以下のように計算した:結果及び考察UPLCで決定したドルゾラミド及びチモロールの初期濃度を表5に示す。角膜水和作用は、角膜の正味湿重量及び乾燥重量に基づいて測定した。通常、正常哺乳動物の角膜水和作用w/wは、75~80の範囲にある。概して、全ての試験サンプルの水和作用で有意な変化は無く、それらは全ての場合で望ましい範囲内にあった。故に、HP又はポリソルベート80は、角膜の水和作用に影響を与えなかった。図10及び11は、それぞれドルゾラミド及びチモロールの角膜透過特性を明らかにしている。ドルゾラミド及びチモロールの時間依存的な透過性は、単離したラビット角膜を通して34°Cで注意深く調べた。ドルゾラミドの角膜を介した総累積透過量、及び3時間後の総透過量は、添加物無しのコントロールサンプルと比べ、0.5w/vHPを含む試験製剤で相対的に高かった。更に、HPと共にポリソルベート80を添加した場合は、HPのみを含む製剤よりも、より多量のドルゾラミドを透過し、角膜透過性を亢進した。概して、0.5w/vHP及び1w/vポリソルベート80の添加により、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過率は、約25~30亢進した。同様の傾向はチモロールについても見られた図11。したがって、HPとポリソルベート80の組み合わせは、有効成分の角膜透過性を改善した。図12は、ドルゾラミド及びチモロールの総透過パーセンテージを示している。明らかに、HP及びポリソルベート80の存在により、角膜を介し透過した有効成分ドルゾラミド及びチモロールのパーセンテージが増加した。ドルゾラミド及びチモロールの場合では、全ての試験製剤は同様の初期濃度を有していた10未満の変化ことは注目すべきであり、同様のpH条件下で、各添加物の影響を決定することは容易であった。試験2と試験1とを比較することで、HPを添加物として使用することの有意性が明確に証明される。図13は、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過係数を示す。透過係数は、ドナー溶液中の薬剤の初期濃度に反比例した。ドルゾラミドの場合、試験2及び試験3の透過係数はより高く、HPを含まないpH5.65のコントロール製剤試験1と比べ、0.5HP存在下でドルゾラミドの角膜透過率が亢進したことを示唆している。試験3は試験2よりも相対的に高い角膜透過性を有し、ポリソルベート80の影響を示している。ポリソルベート80は粘度促進剤として作用する可能性があるため、角膜透過についてのドルゾラミド及びチモロールのバイオアベイラビリティを増加させている。概して、図13のデータは、pH5.65でHP無しのコントロール試験1COSOPT登録商標の有効成分製剤と類似と比べて、試験2及び3それぞれHP及びHPポリソルベート80を含む製剤では、チモロール及びドルゾラミドの透過係数が、より高いことを明示している。ドルゾラミド及びチモロールの拡散係数遅延時間に反比例するは、HP及びポリソルベート80の添加により有意に変化しなかった図14を参照。故に、HP及びポリソルベート80は角膜表面に影響しない。仮に、拡散係数が有意に増加又は減少したならば、それは角膜表面の性質の変化を示している。拡散係数は薬剤化合物の固有の性質であるため、添加物によって変化しないはずである。HPはチモロール及びドルゾラミドの被包を促進することで、チモロールの角膜上皮への分配を亢進する。この理論は図15のデータによっても支持される。試験3のチモロール及びドルゾラミドの角膜表面への分配係数は試験1よりも高く、このことは、0.5w/vの高機能性HP存在下で、チモロール及びドルゾラミドの親油性角膜への分配の改善を示している。従って、HP存在下での改善した透過性は、主に上皮への改善した分割portioningに起因している。分配は製剤溶液中のHP濃度を上げることで、更に亢進する可能性がある。HPは主に以下の理由a高機能ポリエチレンイミンの枝分かれ構造内への分子被包、b薬剤分子とHPのイオン性機能性アミン基との間の静電気的相互作用、及び、c荷電HPの粘液接着性挙動、により角膜透過性を亢進している。0.5w/vHP及び1w/vポリソルベート80の添加により、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過率は約25~30近く亢進した。HPが存在することで、pH5.65でのドルゾラミド及びチモロールの角膜への分配が増加した。HP及びポリソルベート80の添加により、角膜拡散率及び角膜水和率に有意な変化は認められないことは、これらの添加物が角膜表面へ有害な影響を有しないことを示唆している。ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過係数が、HP存在下において相対的に高いことは、HPの効果的な薬剤担体添加物としての有意性を示唆している。従って、本発明者らは、現在の市販品と比較して、増強された角膜透過性を有する新規製剤を見出した。角膜透過性はHPの濃度を上げることで更に亢進し得る。結論pH5.65でHPなどの添加物存在下で、ドルゾラミド及びチモロールの累積透過量は、添加物無しのコントロール製剤COSOPT登録商標有効成分製剤と比べて相対的に高かった。0.5w/vHP及び1w/vポリソルベート80の製剤への添加により、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過率は、約25~30近く亢進した。HPの存在下で、有効成分の角膜上皮への分配が増加する。従って、HPとポリソルベート80の組み合わせは、COSOPT登録商標有効成分の眼でのバイオアベイラビリティを増加させるのに非常に有効である可能性がある。実施例5pH7のリン酸緩衝液で、HPLupasol登録商標PS若しくはHP及びポリソルベート80の組み合わせ、又は、PEG及びポリソルベート80の組み合わせを含む水溶液中における、ブリンゾラミドの溶解度の亢進pH7の10mMリン酸緩衝液中で、チモロール存在下における、ブリンゾラミドの水溶解度を検討した。方法リン酸緩衝液中に1w/vブリンゾラミドを含む懸濁液を、コントロールサンプルとして調製した。上記表7のように、HP、PEG及びポリソルベート80を様々な組み合わせで含有する水溶液10mMリン酸緩衝液中において、過多のブリンゾラミド>1w/vを含む同様の懸濁液も調製した。最終的なpHは1MNaOHを用いて7に調節した。初めに懸濁液を10分間室温で攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。前記懸濁液を更に30分間室温で平衡化した後、10分間の超音波処理を行い、最終的に0.45μmのシリンジフィルターで濾過した。実施例1と同じ条件で、UPLCを使用して、ブリンゾラミド濃度について、濾液を解析した。結果及び考察図16は、様々なpH値の10mMリン酸緩衝液におけるブリンゾラミドの溶解度を示している。pHが4から7へ上昇するのに伴って、ブリンゾラミドの水溶解度は明らかに減少した。ブリンゾラミドの溶解度はpH7で最低となったことは、pH7での完全な非イオン性の挙動と一致している。ブリンゾラミドのイオン化は8.4から10へのpHの上昇に伴って増加するため、溶解度も急に増加し、これは、当該pHの範囲内でのブリンゾラミドのアニオン性の性質と一致する。前記溶解度の特性はドルゾラミドと非常に類似している。それ故、眼でのバイオアベイラビリティを亢進し、かつ、ブリンゾラミドの眼への刺激を減らすために、pH7.4付近涙液のpHは7.44での亢進した溶解度を有する、親油性ブリンゾラミド薬の開発は重要である。本研究において、本発明者らは、HP、PEG、及びポリソルベート80を溶解度促進添加物として使用し、pH7で様々な組み合わせを試みた。図17では、ブリンゾラミドの溶解度が添加物を加えることで増加することを示している。図17に示されるように、双方の場合チモロール有りと無しにおいて、ブリンゾラミドの溶解度は、HP濃度の上昇に伴って増加する。0.5w/vHP及び1w/vポリソルベート80を有し、チモロールが無い場合、ブリンゾラミドの溶解度は約11mg/mLである。PEG8000の添加は、PEG400以上に、ブリンゾラミドの溶解度を亢進するようである。しかしながら、コントロール溶液、及び0.5w/vチモロールを含んでいる全ての添加物有りの製剤の溶解度は相対的に低かった。従って、チモロールpH7の水中で、ブリンゾラミドよりも相対的により溶解性であるは、局所的製剤サンプル中に存在することで、ブリンゾラミドの水溶解度に影響を与える。これらの結果は、ドルゾラミドと称される他の炭酸脱水素酵素に関する結果実施例1と非常に類似している。pH7での高溶解性イオン性チモロールによる上記溶解度の減少は、チモロールの添加又は塩析効果による、溶液のイオン強度の変化に起因している可能性がある。市販品AZARGA登録商標は、pH7.4で10mg/mLブリンゾラミド及び5mg/mLチモロールを有する眼科用懸濁液であるが、HP又はPEGの添加によるpH7での溶解度の亢進は、1を超える用量に増加させることによる薬剤の有効性亢進に有用に寄与するであろう。ポリソルベート80のHPへの添加は、沈殿を防ぐことによって、ブリンゾラミドの溶解度を増加させている。ポリソルベート80は界面活性剤として作用する可能性があり、それにより、HP存在下における相分離後のブリンゾラミドの凝集を減らしている。0.5w/vHP及び1w/vポリソルベートの組み合わせは、pH7の製剤で0.5w/vチモロール存在下において非常に有効であろう。チモロール存在下でのブリンゾラミド水溶解度の改善は、pH7において、HP又はPEGとポリソルベート80の組み合わせの添加により有意であった。ポリソルベート80はブリンゾラミド分子の拡散を助け、PEG存在下で水中での沈殿を阻害する。HPとポリソルベート80の組み合わせは、pH7でチモロール存在下において、ブリンゾラミドの溶解度を亢進する良い組み合わせであろう。上記結果より、HP及びポリソルベート80は、pH7のチモロール存在下において、疎水性ブリンゾラミドの溶解度を有意に亢進すると結論づけることができる。親水性PEGもまた、ブリンゾラミド溶解度促進剤であること、更には、低濃度のポリソルベート80及びPEG8000の組み合わせも、疎水性ブリンゾラミドの溶解度の亢進のための非常に有用な添加物であることが証明された。概して、最適化濃度のHP及びポリソルベート80を有するpH7の製剤が、眼でのバイオアベイラビリティを高めるのに非常に有用であろう。結論上記結果は、生理学的pHに近いpH値で、HP及びポリソルベート80を疎水性ブリンゾラミドの溶解度促進添加物として使用することの有用性を明示している。ポリソルベート80も、pH7のHP存在下において、難溶解性のブリンゾラミドの沈殿を抑制する、効果的な乳化剤であることが証明された。チモロールは、溶液のイオン強度を変えることで、ブリンゾラミドの溶解度に影響を与え得る。実施例6末端ヒドロキシル基を有するHPを含む、ドルゾラミド及びチモロールのinvitro角膜透過研究オリジナルの市販局所的製剤有効成分のみと比較して、ヒドロキシル官能基を有する超分岐ポリエステルの添加の効果を検討するため、ドルゾラミド及びチモロールCOSOPT登録商標の有効成分の角膜透過invitro実験を実施した。Boltorn登録商標H20と称される市販のHPを含む新規製剤の一般的な定義は、ポリエステルコア及び16の末端ヒドロキシル官能基を有するHPであり、pH7又はpH7.4で調合した非イオン性親油性ドルゾラミドの溶解度を亢進する。ヒドロキシル末端基を有する超分岐ポリエステルの一般的な構造本実験に使用したHPの特性を表8に記載する。当該HPは、一分子あたり16の第一ヒドロキシル基を有し、固形分は100w/vである。2w/vまでのHPを含む新規製剤から、ドルゾラミド及びチモロールのinvitroでの角膜透過性を決定した。HP濃度の有効成分への効果も決定した。pH7.4でCOSOPT登録商標の有効成分を含む、標準的な溶液をコントロールサンプルとして使用した。材料及び方法製剤調製ドルゾラミド及びチモロールのinvitro角膜透過性を調べるため、及び、角膜の加水分解効果を決定するために、以下の3つの溶液を0.1w/vリン酸緩衝液中表9で調合した。まず、適切に測量した固形有効成分に10mMリン酸緩衝液を加え、15分間完全に攪拌した。次に、5w/vHP懸濁溶液の有効体積を試験サンプル2及び試験サンプル3へ加え、表9に記載の正確な濃度で作製した。その後、上記3つの試験溶液を室温で10分間攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。攪拌後、溶液を5分間超音波処理した。コントロール溶液コントロールサンプル1は別として、HPを有する溶液はpHを合わせる前、白い泥状物の懸濁液となった。全ての有効及び非有効成分を完全に希釈した後、1MNaOH又は1MHClを使用してpHを7.4に調節し、表8のような正確な組成物を作製するため、追加の緩衝液を加えた。全ての場合において、懸濁溶液はpHの調製と共に作製し、それらを室温で更に15時間又はそれ以上攪拌することにより平衡化した。最終的な所望のpHを確認するために、全てのサンプル溶液のpHを再度測定した。角膜透過を検討するために、これらの懸濁溶液を、直接サンプルドナー溶液として使用した。溶解度を決定するために、懸濁液を0.45μmシリンジフィルターで濾過した。それぞれのサンプルを超純水で希釈した後希釈係数=1000、UPLCを使用して、ドルゾラミド及びチモロールの濃度について、その濾液を解析した。invitroの角膜透過特性の結果と、実施例4のpH5.65で有効成分を含むコントロールサンプルで得られたデータとの比較も行った。2~3kg重量の3匹の雄ラビットニュージーランドを、イソフルランの過剰吸入によって屠殺した後、直ちに、眼球を取り出し、透過実験に使用する角膜を分離した。実験手順の詳細は先の実施例4に記載されている。算出したパラメーターは、実施例4に記載されているCd[ng/mL]はドナー溶液中の有効医薬成分の初期薬剤濃度とする表10。結果及び考察UPLCによって決定したドルゾラミド及びチモロールの初期濃度を表10に示す。角膜水和作用のパーセンテージ算定は表10に示す。角膜水和作用は、角膜の正味湿重量及び乾燥重量に基づいて測定した。通常、正常哺乳類動物における角膜水和作用は75~80の範囲内である。概して、全ての試験サンプルの水和作用には有意な変化が無く、それらは全ての場合において望ましい範囲内にあった。従って、HPは角膜水和作用に影響を与えなかった。図18及び19は、それぞれドルゾラミド及びチモロールの角膜透過特性を明らかにしている。試験サンプル1、2及び3で得られた透過特性と共に、実施例4のpH5.65でのコントロールサンプルの透過特性もプロットした。ドルゾラミド及びチモロールの時間に依存した透過性を、34°Cで、単離したラビット角膜を通し、注意深く調べた。ドルゾラミドの角膜を介した累積総透過量、及び2時間後の総透過量は、添加物無しのコントロールサンプルと比べ、0.5w/vHP試験2及び2w/vHP試験3を含む試験製剤で相対的に高かった。更に、0.5HPから2HPへの濃度の上昇により、両有効成分の角膜透過性が増加することが示された。2w/vHPを含む製剤試験3において、有効成分の角膜透過性はpH5.65の市場製品COSOPT登録商標製剤中に有効成分のみよりも高い図19及び図20を参照。更に、2w/vHPを含む製剤は、2時間後の角膜透過において、高い透過率傾きの変化を有し、有意に亢進した。概して、ヒドロキシル官能基を有するHPの添加は、HPの濃度の上昇に伴って、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過率を有意に亢進する。従って、HPは、緑内障治療に使用されるCOSOPT登録商標又はTRUSOPT登録商標又はAZOPT登録商標として知られる市販品と比べた場合、有効成分の角膜透過性を改善した。図20は、2時間後のドルゾラミド及びチモロールの総透過パーセンテージを示す。明らかに、HPの存在で、角膜を介して透過した有効成分ドルゾラミド及びチモロールのパーセンテージが増加した。ドルゾラミドの場合、全ての試験製剤は異なる初期濃度を有し、チモロールの場合は同様の濃度10未満の変化であったことは注目すべきである。ドルゾラミドの異なる初期濃度は、主にHPによる溶解度の上昇に起因する。試験1と比べ試験2及び試験3では、添加物としてHPを使用することの有意性が図20から明らかである。角膜透過性、分配係数及び拡散係数を決定するために、図19及び図20の2時間後までの傾きを使用した。図21は、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過係数を示す。透過係数は、ドナー溶液中の薬剤の初期濃度に反比例した。両有効成分において、試験2及び試験3の透過係数がより高いことは、HP存在下で、ドルゾラミドdorozamideが、HPを含まないコントロール製剤試験1と比べ、亢進した角膜透過率を有することを示唆している。試験3は試験2よりも相対的に高い角膜透過性を有し、従って、HP濃度の上昇の影響を示している。概して、図21のデータは、HPを含む試験2及び試験3製剤のチモロール及びドルゾラミドの透過係数が、pH7.4でHP無しのコントロール試験1、及び、pH5.65のCOSOPT登録商標コントロール製剤COSOPT登録商標有効成分製剤と同様と比較して、より高かったことを明示している。ドルゾラミド及びチモロールの拡散係数遅延時間と反比例するは、HPの添加により有意に変化しなかった図22を参照。従って、HPは角膜の表面には影響しない。仮に、拡散係数が有意に増加又は減少したならば、それは、角膜表面の特性の変化を示しているであろう。拡散係数は薬剤化合物の固有の特性であるため、添加物の付加で変化しないはずである。HPはチモロール及びドルゾラミドの被包を促進し、チモロール及びドルゾラミドの角膜上皮への分配を亢進する。この理論は図23で示唆されたデータによっても支持される。試験2及び3の、チモロール及びドルゾラミドの角膜表面への分配係数が試験1よりも高いことは、高機能性ヒドロキシル基HPの存在下で、チモロール及びドルゾラミドの親油性角膜への分配の改善を示している。従って、HP存在下での改善した透過性は、主に改善した上皮への分配に起因している。製剤溶液中のHPの濃度を0.5から2w/vへ上昇させることで、透過性は更に亢進した。しかしながら、分配係数及び透過係数は物質濃度の機能ではないであろうから、これらのパラメーターはHP濃度の上昇によって有意に変化しなかった。pH7.4でHP添加物市販のヒドロキシル官能基を有するBoltorn登録商標H20等の存在下で、ドルゾラミド及びチモロールの累積透過量は、添加物無しのコントロール製剤と比べ、相対的に高かった。製剤中におけるそのようなHPの濃度の上昇は、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過率を有意に亢進した。ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過係数は、HP存在下で相対的に高かった。有効成分の角膜上皮への分配はHP存在下で増加した。従って、ヒドロキシル官能基を有するHPは、COSOPT登録商標有効成分の眼でのバイオアベイラビリティを高めるのに非常に有効であろう。実施例7pH7.4の10mMリン酸緩衝液中でHP及びチモロールの存在下における、ドルゾラミド及びブリンゾラミド等の炭酸脱水素酵素阻害剤の水溶解度を検討した。Boltorn登録商標W3000と呼ばれるHPを使用した。このHPの末端官能基は、PEG親水性及び不飽和長鎖脂肪酸である。本実験で使用した超分岐ポリエステルのモデルを以下に示す。両親媒性末端基を有する超分岐ポリエステル本実験に使用したHPの特性を表12に記載する。前記HPは、一分子当り50の第一ヒドロキシル基を有し、その固形分は55w/wである。表13は、pH7.4の10mMリン酸緩衝液中で調製した、様々な試験サンプル製剤を示す。5w/v乳濁液を調製するために、継続的な攪拌及び60~70°Cでの加熱をしながら、少なくとも30分間、測量したろうを塗られたBoltorn登録商標W3000にゆっくりと水を拡散させ、その後、更に15時間継続的によく攪拌し、フラスコ内に均一な乳濁混合液を得た。適切に測量した固形有効成分に10mMリン酸緩衝液を加え、15分間完全に攪拌した。次に、表13に記載の正確な濃度で作製するために、5w/vHP乳濁溶液の有効体積を適切に希釈した。その後、前記サンプル試験乳濁溶液を室温で10分間攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。攪拌後、乳濁液を5分間超音波処理した。全ての有効及び非有効成分を完全な乳濁液とした後、1MNaOHを使用してpHを7.4に調節し、表13の正確な組成物を作製するために追加の緩衝液を加えた。pH調製とともに、乳濁溶液を室温で更に15時間又はそれ以上攪拌することで平衡化した。最終的に所望のpH7.4であることを確認するために、全てのサンプル乳濁溶液のpHを再び測定した。実施例1と同じ条件で、UPLCを使用して、CAI濃度について濾液を解析した。結果及び考察本実験では、両親媒性の自己乳化HPを、溶解度促進添加物として使用した。pH7.4で様々な濃度のHPを試みた。図24において、ブリンゾラミド及びドルゾラミドの溶解度がHP濃度の上昇に伴って増加することが示されている。5w/vHPと共に0.5w/vチモロールが存在する場合、ドルゾラミド及びブリンゾラミドの溶解度はCAIの約2w/vである。2w/vHPにHPMCを添加しても溶解度は亢進しなかった。市販のAZARGA登録商標懸濁液は、pH7.4で1w/vブリンゾラミドを有し、COSOPT登録商標はpH5.65で2w/vドルゾラミドを有するのに対し、HPの添加によるpH7.4での溶解度の亢進は、用量を1w/vを超えるまで増やすことによる薬剤の有効性の亢進に対し、有用に寄与するであろう。従って、眼でのバイオアベイラビリティを亢進し、CAIの眼への刺激を減らすために、pH7.4付近涙液のpHは7.4での亢進した溶解度を有する、ブリンゾラミド又はドルゾラミドを開発することは重要である。実施例8両親媒性官能基を有するHPBoltorn登録商標W3000を含むドルゾラミド及びチモロールのinvitro角膜透過研究オリジナルの市販局所的製剤有効成分のみと比較して、両親媒性官能基を有するHPの添加による効果を検討するために、ドルゾラミド及びチモロールCOSOPT登録商標の有効成分の角膜透過についてのinvitroの実験を実施した。新たな局所的製剤は、親水性官能基として非イオン性PEGを、疎水性官能基として不飽和脂肪酸市販されているを有するが故、両親媒性となるBoltorn登録商標W3000超分岐ポリエステルを含む。pH7.41でこのHPを2w/vで加えることで、ドルゾラミドの溶解度は4.3から15mg/mLへ増加した。本実験において、ドルゾラミド及びチモロールのinvitroでの角膜透過性は、COSOPT登録商標と同等の、2w/vまでのHPを含む、新規製剤により決定した。HP濃度の有効成分への効果も決定した。pH7.4でCOSOPT登録商標有効成分を含む標準溶液をコントロールサンプルとして使用した。材料及び方法1.製剤調製ドルゾラミド及びチモロールのinvitroでの角膜透過を調べるため、並びに角膜の加水分解効果を決定するために、0.1w/vリン酸緩衝液中で、以下の3つの溶液表14を調合した。適切に測量した固形有効成分に10mMリン酸緩衝液を加え、15分間完全に攪拌した。次に、5w/vHP懸濁溶液の有効体積を試験2へ加え、表14のように正確な濃度で作製した。その後、前記3つの試験溶液を室温で10分間攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。攪拌後、溶液を5分間超音波処理した。全ての有効及び非有効成分を完全に希釈した後、1MNaOH又は1MHClを使用して、pHを7.4又は5.65のいずれかに調節し、表15の正確な組成物を作製するために追加の緩衝液を加えた。pHの調節とともに液の外観は表14に記されている、製剤を室温で更に15時間又はそれ以上攪拌することで平衡化した。最終的に所望のpHであることを確認するために、全てのサンプル溶液のpHを再度測定した。角膜透過研究のために、これらの製剤を直接サンプルドナー溶液として使用した。溶解度を決定するために、懸濁液/乳濁液を0.45μmシリンジフィルターで濾過した。それぞれのサンプルを超純水で希釈した後希釈係数=1000、UPLCを使用して、ドルゾラミド及びチモロールの濃度について濾液を解析した。2.invitroラビット角膜透過実験実施した実験手順及び解析は、先の実施例4に詳細が記載されている。算出したパラメーターは実施例4に記載されているCd[ng/mL]はドナー溶液中の有効医薬成分の初期薬剤濃度とする表15から。結果及び考察UPLCにより決定した、ドルゾラミド及びチモロールの初期濃度を表15に示す。角膜水和作用パーセンテージの算定は表16に示す。角膜水和作用は、角膜の正味湿重量及び乾燥重量に基づいて測定した。通常、正常な哺乳動物の角膜の水和作用w/wは75~80の範囲内にある。試験1及び3は共に80を超えている。しかしながら、分配及び透過係数の計算値に違いはなく、このことは、高い水和作用が原因のいかなる角膜損傷もないであろうことを示唆している。概して、全ての試験サンプルの水和作用で有意な変化は認められず、全ての場合において望ましい範囲内であった。従って、HPは角膜水和作用に影響を与えないと考えられる。図25及び26は、それぞれドルゾラミド及びチモロールの角膜透過特性を明らかにしている。ドルゾラミド及びチモロールの時間依存的な透過性を、単離したラビットの角膜を通して、34°Cで注意深く調べた。ドルゾラミドの角膜を介した累積総透過量、及び2時間後の総透過量は、pH7.4で添加物無しのコントロールサンプル試験1と比較して、2w/vHPを含む試験製剤試験2で相対的に高かった。試験2新規製剤のドルゾラミドの総透過は、試験3のドルゾラミドの透過特性と同等であった。しかしながら、市販品がpH5.65で調製されているのに対し、試験1はpH7.4で調製されており、試験1は患者にとってより苦痛がないであろうことは注目すべきである。透過性はHP濃度を上げることで更に増加する可能性がある。更に、ドルゾラミドとは異なり、同様の水溶解度を有する試験1及び3と比べて、試験2ではHP存在下でチモロールの透過性が有意に増加した図26を参照。2w/vHPを含む製剤試験2では、チモロールの角膜透過性は、pH5.65の市販品COSOPT登録商標製剤中に有効成分のみよりも、ほぼ2倍高い図27を参照。この結果は、ドルゾラミド及びチモロール双方について、局所的製剤用の薬剤担体としてHPを使用することの重要性を明確に説明している。概して、両親媒性官能基を有するHPの添加は、HP濃度の上昇に伴って、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過率を有意に亢進する。従って、両親媒性官能基を有する樹状ポリエステルHPは、緑内障治療に使用される市販品COSOPT登録商標又はTRUSOPT登録商標又はAZOPT登録商標として既知と比較して、有効成分の角膜透過性を改善する。図27は、3時間後のドルゾラミド及びチモロールの総透過パーセンテージを示す。明らかに、HPが存在することで、角膜を介して透過した有効成分ドルゾラミド及びチモロールのパーセンテージが増加する試験2を参照。pH7.4で調製した試験2では、pH5.65で調製した試験3よりも、ドルゾラミドの総透過がわずかに高かった。ドルゾラミドの場合、全ての試験製剤は異なる初期濃度を有し、チモロールの場合は、全ての試験製剤で同様の濃度を有することは注目すべきである。ドルゾラミドの異なる初期溶解度は、主にHPによる溶解度上昇に起因する。試験3pH5.65及び試験1pH7.4と比べ、試験2において、図27でHPを添加物として使用することの有意性が説明されている。角膜透過性、分配係数及び拡散係数を決定するために、図26及び27の傾きを使用した。図28は、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過係数を示す。透過係数は、ドナー溶液中の薬剤の初期濃度に反比例する。両有効成分について、pH7.4及びpH5.65のコントロールサンプルと比較して、試験2の透過係数は高く、従って、HPを含まないコントロール製剤試験1及び3と比べて、HP存在下での有効医薬成分が亢進した角膜透過率を有することを示唆している。試験3は試験2よりも相対的に高い角膜透過性を有し、pHの影響を示している。生理学的なpHでの有効医薬成分は、類似の溶解度についての透過性に、より貢献する。概して、図28のデータは、pH7.4でHP無しの試験1、及び、pH5.65のCOSOPT登録商標コントロール製剤COSOPT登録商標有効成分製剤と類似と比較して、HPを含む試験2の製剤では、チモロール及びドルゾラミドの透過係数が高いことを明示している。ドルゾラミド及びチモロールの拡散係数遅延時間に対し反比例するは、HPの添加により有意に変化しなかった図29を参照。従って、HPは角膜表面にいかなる影響も与えない。仮に、拡散係数が有意に増加又は減少したならば、それは角膜表面の特性の変化を示しているであろう。拡散係数は薬剤化合物の固有の特性であるため、添加物を加えることでは変化しないはずである。試験2の角膜表面へのチモロール及びドルゾラミドの分配係数が、試験1及び3よりも高いことは、高機能性両親媒性HPの存在下で、親油性角膜へのチモロール及びドルゾラミドの分配の改善を示している。従って、HP存在下で亢進した透過性は、主に改善した上皮への分配に起因する。製剤溶液中のHP濃度を2から5w/vへ上昇させることで、透過性が更に亢進する可能性がある。両親媒性官能基を有する市販のBoltorn登録商標W30002w/vなどのHP添加物の存在下で、pH7.4でのドルゾラミド及びチモロールの累積透過量は、添加物無しで同様のpH値であるコントロール製剤と比較して、ほぼ2倍高かった。製剤中における、そのようなHPの2w/vを超える濃度の上昇により、pH5.65の市販品と比べて、ドルゾラミド及びチモロールの角膜透過率は更に亢進する可能性がある。新規局所的製剤はpH7.4で調製されているため、患者にとってより助けとなり安心して利用できる。有効成分の角膜上皮への分配はHP存在下で増加した。従って、両親媒性官能基を有するHPは、COSOPT登録商標有効成分の眼でのバイオアベイラビリティを増加させるのに非常に効果的であろう。実施例9Bis-MPAポリエステル超分岐ポリマーBMPA-HP、又は、PEG及びBMPA-HPの組み合わせによる、炭酸脱水素酵素阻害剤CAIの溶解度亢進pH7.4の10mMリン酸緩衝液で、チモロール存在下における、ドルゾラミド及びブリンゾラミド等のCAIの水溶解度への、官能性超分岐ポリマーの影響を検討した。BMPA-HPの一般的な定義は、ジメチロールプロピオン酸Bis-MPAポリエステルコア及び末端ヒドロキシルOH官能基を有する超分岐ポリマーである。末端ヒドロキシル官能基の数は、超分岐ポリエステルの世代に依存する。世代は、分岐層の数又はコアから末端官能基への分岐の広がりにより定義される。例えば、第2世代BMPA超分岐ポリエステルは、16のヒドロキシル基を含み、一方で、第3世代は32のヒドロキシル基を含む。BMPA-HPの構造は以下に示す。超分岐bis-MPAポリエステル第3世代3rdBMPA-HP本研究で使用した、異なる世代のポリエステルHPの特性を表17に記載する。材料及び方法表18は、pH7.4の10mMリン酸緩衝液中で調製した、様々な試験サンプル乳濁液コントロール溶液は除くを示す。適切に測量した固形有効成分に10mMリン酸緩衝液を加え、15分間完全に攪拌した。次に、5w/vBMPA-HP溶液の有効体積を適切に希釈し、表18に記載の正確な濃度で作製した。その後、サンプル試験溶液を室温で10分間攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。攪拌後、溶液を5分間超音波処理した。全ての有効及び非有効成分を完全に懸濁した後、1MNaOHを使用してpHを7.4に調節し、表18記載の正確な組成物を作製するために追加の緩衝液を加えた。pH調製とともに、懸濁溶液を室温で更に15時間又はそれ以上攪拌することで平衡化した。最終的に所望のpH7.4であることを確認するため、全てのサンプル溶液のpHを再度測定した。実施例1と同じ条件で、UPLCを使用して、CAIについて濾液を解析した。結果及び考察本実験では、第2世代BMPA-HP又は第3世代BMPA-HPを、溶解度促進添加物として用い、pH7.4で各々を様々な濃度で試験した。眼でのバイオアベイラビリティを亢進しCAIによる眼への刺激を減らすために、pH7.4付近涙液のpHは7.4で、亢進した溶解度を有する親油性ブリンゾラミド又はドルゾラミド薬剤を開発することは重要である。0.5チモロール存在下で、5の第3世代BMPA-HPを有するドルゾラミド及びブリンゾラミドの溶解度は、CAIのわずか約slightlyabout1w/vである。下の世代である第2世代BMPA-HPでは、CAIの溶解度は、第3世代BMPA-HP全てのサンプルについて、添加物として使用した第2世代BMPA-HPと同様の濃度でと比較して、10未満近く減少した。2w/vPEG8000とHPとの組み合わせを使用した場合、CAIの溶解度は劇的に増加するコントロールより4倍高い。2w/vPEG8000を2w/vBMPA-HPへ加えることで、CAIの溶解度はほぼ倍加した図31を参照。市販品AZARGA登録商標懸濁液はpH7.4で1ブリンゾラミドを有し、COSOPT登録商標はpH5.65で2w/vドルゾラミドを有するが、BMPA-HP添加によるpH7.4での溶解度の亢進は、1w/vを超える用量に増やすことによる、薬剤の有効性亢進に対し有用に寄与するであろう。上記結果は、生理学的pHに近いpH値で、疎水性CAIの溶解度促進剤としてBMPA-HPを使用することの有用性を明示している。BMPA-HPを含む溶液にPEGを加えることで、CAIの溶解度は更に改善した。実施例10Bis-MPA超分岐ポリエステルの眼への刺激性を決定する、ヒト角膜上皮HCE組織培養研究、及び細胞毒性に基づいた、眼科研究のための最適化サンプル適用時間方法及び材料サンプルは、以下の表19に従ってリン酸緩衝生理食塩水中AZOPT登録商標を除くで調製し、0.2μm無菌シリンジフィルターを用いて無菌化した。0.02BAKをポジティブコントロールとして使用した。再構築したヒト角膜上皮は、SkinEthicslaboratoryフランスから購入した。細胞培養方法を以下に記す:上皮をアガロースから6-wellプレート中の維持培地へ移す↓組織の順化:37°C、5CO2、≧95湿度で少なくとも2時間↓組織を24-wellプレート中の新たな維持培地へ移す↓3つの組織それぞれ30μL/30mg試験物質↓室温で20分間又は40分間インキュベート↓PBSで洗浄↓組織を新たな維持培地へ移す↓37°C、5CO2、≧95湿度で16±1時間インキュベート↓組織を培養培地中のMTT溶液へ移すMTTインキュベーション↓組織を3時間インキュベート37°C、5CO2、≧95↓挿入物をイソプロパノールに浸すホルマザン抽出↓最低2時間ホルマザン抽出を行う室温で↓挿入物に穴を開けホモジェナイズ↓プレート分光光度計で570nmのODを測定処理した培養のそれぞれの生存率は、対応するネガティブコントロール100生存に対する、試験化学物質で処理した培養の、MTT変換パーセンテージから算出した。以下の等式を使用した:生存率=[個別のOD化学物質/平均ODネガティブコントロール]×100HCE生存率分類予測モデル:NI生存率≧60、I生存率<60、即ち、ネガティブコントロールと比べて、試験産物から得られた生存率が<60である場合、その産物は刺激性であると分類されるinvivoでの分類に従う。結果及び考察図32で示されるように、実験区分において、生存率のための上記等式を使用して、様々なサンプル表19に従うの生存率を計算した。60未満の生存率であるサンプルは刺激性とみなした。トリプリケートに基づく、細胞生存率の標準偏差は、全てのサンプルで7未満であった。細胞毒性研究の結果から、4w/vまでの第3世代BMPA-HPを有する眼科用サンプルは、60を超える細胞生存率を有し、眼の刺激性はないであろうということが明らかとなった図32を参照。図32の結果は、角膜上皮細胞に対し、適用時間1時間で50未満の細胞生存率であるAZOPT登録商標が、細胞毒性を示す可能性があることも明らかにしている。5w/v第2世代Bis-MPAを含むサンプルも、60未満の細胞生存率を有し、眼の刺激を起こした。先の検討結果を組み合わせることで、市販の超分岐ポリエステルBis-MPAの様々な濃度での細胞毒性を図33で明らかにする。点眼液中で同一濃度であるとき、第2世代BMPA-HPにより起きる上皮細胞の傷害故に眼部刺激は、第3世代BMPA-HPにより起きる眼部刺激より低いことが、前記の図より明らかとなった。分岐の広がり又は長さそれ故分子量及び末端官能基の数は、HPの世代数の減少とともに減少する。図33の結果は、世代数の減少に伴う細胞毒性の減少は、主に、末端官能基と上皮細胞との相互作用時間の減少に起因するであろうことを示している。結論上皮細胞死の割合は、用量濃度及び世代モル質量及び分岐の広がりの増加に伴って増加した。市場製品AZOPT登録商標の場合、50未満の細胞生存率で、眼部刺激を起こし、おそらくそれは、0.01w/vBAKに1時間曝露したことに起因しているであろう。実施例11BMPA-HP又は非イオン性界面活性剤とBMPA-HPの組み合わせを含むCAIの溶解度亢進pH7.4の10mMリン酸緩衝液中で、チモロール存在下での、ドルゾラミドの水溶解度及び安定性を検討した。方法及び材料まず、適切に測量した固形有効成分に10mMリン酸緩衝液を加え、15分間完全に攪拌した。有効医薬成分が完全に溶解した後、超分岐第2世代BMPA-HPを溶液に加えた。HPが溶解した後、必要な製剤濃度のPEG8000を加えた。その後、サンプル試験溶液を室温で10分間攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。攪拌後、溶液を20分間超音波処理した。全ての有効及び非有効成分を完全に溶解させた後、1MNaOHを使用してpHを7.4に調節し、表20及び21のような正確な組成物を作製するために、追加の緩衝液を加えた。pHの調製とともに、製剤を室温で更に15時間又はそれ以上攪拌することで平衡化した。サンプルを0.45μmシリンジフィルターで濾過した。最終製剤にポリソルベート80を添加した。サンプル番号3については、pH調節後に、製剤を60°C24時間で平衡化し、それからポリソルベート80を加えた。最終的に所望のpH7.4であることを確認するために、全てのサンプル溶液のpHを再度測定した。全てのサンプルは14日間25及び60°Cで保存し、各サンプルを超純水で希釈した後希釈係数=1000、UPLCを使用して、ドルゾラミド及びチモロールについて、濾液を解析した。結果及び考察本研究では、溶解度促進添加物として、第2世代BMPA-HPを調べた。pH7.4で、非イオン性界面活性剤、例えば、PEG及びポリソルベート80、との様々な組み合わせを試みた。サンプル調製後、全ての製剤は室温で透明な溶液であった。図34において、ドルゾラミドの溶解度が、4w/vHP及び2w/vPEGの添加にともない、増加することが示されている。図34に示されるように、4w/vHP及び2w/vPEGを含む製剤では、初日から2週間後までにドルゾラミドの濃度は徐々に減少している。4w/vHP及び2w/vPEGを含む製剤は、2週間後には懸濁液となった。本発明者らは、ドルゾラミド濃度の減少率が、1w/vポリソルベート80の添加サンプルS1で減少することを見出した。ドルゾラミド濃度は2週間で9.6mg/mLから8.4mg/mLへ減少した。従って、高濃度のポリソルベート80は沈殿を防ぎ、新規製剤の安定化を助ける。2週間に渡って、全ての製剤のpHはほとんど変化しなかった表20及び表21を参照。2週間に渡り、チモロール濃度は有意に変化しなかった。市販品AZARGA登録商標懸濁液はpH7.4で1w/vブリンゾラミドを有し、COSOPT登録商標はpH5.65で2ドルゾラミド有するが、HP及び非イオン性界面活性剤の添加による、pH7.4での溶解度の亢進は、用量を1w/v以上に増やすことによる、薬剤の有効性の亢進に有用に寄与するであろう。結論上記結果は、生理学的pH付近のpH値で、CAI溶解度促進剤として、第2世代BMPA-HPをPEG8000及びポリソルベート80との組み合わせで使用することの有用性を明確に証明している。実施例12リン酸緩衝液中で、超分岐bis-MPAポリエステル-16-ヒドロキシル、第2世代第2世代BMPA-HP、PEG8000及びポリソルベート80を、様々な組み合わせで含む水溶液で、チモロール存在下における、炭酸脱水素酵素阻害剤ドルゾラミド及びブリンゾラミドの溶解度及び安定性に基づく、pH7.4の局所的製剤を決定する研究を行った。方法及び材料表22は、pH7.4の10mMリン酸緩衝液中で調製した、全ての異なる試験サンプルを示す。まず、適切に測量した固形有効成分に10mMリン酸緩衝液を加え、有効医薬剤が溶解するまで完全に攪拌した。次に、固形BMPA-HP粉末をサンプル製剤1、2及び3へ加えた。HPの溶解後、外観は透明溶液であった。適量の非イオン性界面活性剤PEG8000等を製剤に加え、上記表22に記載の製剤含有量になるように正確な濃度で作製した。その後、全ての試験溶液を室温で10分間攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。攪拌後、溶液を5分間超音波処理した。全ての有効及び非有効成分を完全に溶解させた後、1MNaOH又は1MHClを使用して、pHを7.4又は5.65に合わせ、表22のサンプル組成に従う正確な組成物を作製するために追加の緩衝液を加えた。pHの調節とともに、室温で更に24時間又はそれ以上攪拌することで平衡化し、試験溶液を作製した。ポリソルベート80及び超分岐ポリエステルを含むサンプルについては表2、ポリソルベート80だけは、最終製剤を24時間、60°Cで平衡化した後に加えられた。最終的な所望のpHを確認するために、全てのサンプル溶液のpHを再度調節した。各サンプルを超純水で希釈した後希釈係数=1000、UPLCを使用して、炭酸脱水素酵素阻害剤、チモロール及びHPの濃度について濾液を解析した。CAI及びチモロール検出について、実施例1から得られた最適条件を使用した。それぞれの製剤の外観及びpHを、室温及び60°Cで1ヶ月間記録した。結果及び考察本研究では、ヒドロキシル末端基を有するHP、PEG、及びポリソルベート80を、溶解度促進添加物として使用した。先の結果に基づいて、最良の製剤を決定するために、pH7.4で様々な組み合わせを試みた。図35は、4w/vHP及び、2w/vPEG又は4w/vポリソルベート80存在下において、ドルゾラミドの溶解度が有意に増加することを示すサンプル1、2及び3。しかしながら、ドルゾラミドの溶解度は、PEG8000サンプル5若しくはポリソルベート80サンプル6単独、又はそれらの組み合わせサンプル4の存在下では、有意に増加しなかったことから、超分岐ポリエステルの製剤への添加は、溶解度促進剤として明らかに有益であることを示している。しかしながら、ヒドロキシル基を有するHPをポリソルベート80との組み合わせで含む製剤サンプル2は、HP、ポリソルベート80及びPEG8000を含む製剤サンプル1と比較して、同等の溶解度を有することから、PEG8000の添加は避けることが可能である。概して、ドルゾラミド及びチモロール溶解度のデータに基づいて、サンプル2が最良の製剤であることを見出した。ポリソルベート80などの界面活性剤をHPへ添加することでも、ドルゾラミドをHP内に被包し沈殿を防ぐことにより、ドルゾラミドの溶解度を増加する。表23及び24は、全ての製剤サンプルについて、4週間に渡るドルゾラミド及びチモロールの安定性試験の結果を示す。表から明らかなように、サンプル1及びサンプル2は比較的安定で、1ヵ月後も透明な溶液である。PEGを含まないサンプル2がサンプル1と同等の結果であるため、サンプル1のPEGは無くても良いであろう。結論上記結果は、ヒドロキシル末端官能基を有するHPを、界面活性剤ポリソルベート80及びPEG8000等と組み合わせて使用することの利点を明確に示している。界面活性剤ポリソルベート80の挙動は、沈殿を防ぐことにより、CAIの溶解度を増加するのに非常に有益である。溶解度及び1ヶ月間の安定性の結果に基づく好ましい製剤は、pH7.4のリン酸緩衝液中に、4w/v第2世代BMPA-HP及び4ポリソルベート80のみの組み合わせとともに、有効成分を含む製剤である。実施例13BisMPA超分岐ポリエステル及びポリソルベート80を含む、新規局所的製剤についての、ドルゾラミド及びチモロールのinvitro角膜透過研究方法及び材料ドルゾラミド及びチモロールのinvitro角膜透過性を調べるため、並びに角膜加水分解効果を決定するために、0.1w/vリン酸緩衝液中で以下の3つの溶液表27を調合した。まず、適切に測量した固形有効成分に10mMリン酸緩衝液を加え、15分間完全に攪拌した。サンプルナンバー2及び3の場合、表25の組成になるよう第2世代BMPA-HP粉末を溶液に添加した。その後、3つの試験溶液を室温で10分間攪拌した60°Cまでの5分間の加熱とともに。攪拌後、溶液を5分間超音波処理した。全ての有効及び非有効成分を完全に溶解させた後、1MNaOH又は1MHClを使用してpHを7.4又は5.65に調節し、表のサンプル組成のような正確な組成物を作製するために、追加の緩衝液を添加した。pHの調製とともに、サンプル1及び2については、室温で更に24時間又はそれ以上攪拌することにより平衡化し、試験溶液を作製した。サンプルナンバー2及び3については、24時間、60°Cで平衡化を実施した。その後、ポリソルベート804w/vを添加し、再度pHを調節した。最終的な所望のpHを確認するために、全てのサンプル溶液のpHを再度測定した。これらの透明な溶液を、直接サンプルドナー溶液として角膜透過研究に使用した。溶解度を決定するために、試験溶液を0.45μmシリンジフィルターで濾過した。各サンプルを超純水で希釈した後希釈係数=1000、UPLCを使用して、ドルゾラミド及びチモロールの濃度について、濾液を解析した。使用した材料及び機器、並びにラビット角膜研究手順の詳細は、実施例4に示されている。結果及び考察UPLCで決定したドルゾラミド及びチモロールの初期濃度を表26に示す。角膜の正味湿重量及び乾燥重量に基づいて、角膜水和作用を測定した。通常、正常哺乳動物の角膜水和作用w/wは、75~85の範囲内にある。概して、表27に示されるように、全ての試験サンプルの水和作用に有意な変化は無く、全てが望ましい範囲内にあった。従って、HP及びポリソルベート80は角膜水和作用に影響を与えなかった。図36及び図37は、それぞれドルゾラミド及びチモロールの角膜透過特性を明らかにしている。単離したラビット角膜を通して、34°Cで、ドルゾラミド及びチモロールの時間依存的な透過性を注意深く調べた。図36から、角膜を介したドルゾラミドの累積総透過量及び3時間後の総透過量は、pH7.4で、4w/vHP及びポリソルベート80を含む試験製剤試験3では、pH5.65で、同じ製剤試験2と比べて、相対的に高かった。明らかに、ドルゾラミドの透過はpH7.4で増強され、これは親油性の角膜上皮に対し非常に良い結果をもたらすであろう、ドルゾラミドの非イオン性の挙動に起因している。試験3のドルゾラミド角膜透過性は、pH5.65で添加物無しのコントロール溶液試験1と同等である。試験1が2w/vドルゾラミドを含むのに対し、試験3が1w/vドルゾラミドを含むことは留意すべきである。試験3は試験1の半分の濃度のドルゾラミドを含むが、角膜透過特性は類似している。眼への刺激をもたらす可能性のある、pH5.65の市販品と比べて、試験3はpH7.4で調製されているため、試験3は患者にはより苦痛が無いであろう。図37のチモロール透過特性は、試験3が、試験1コントロール溶液と比べ、有意に高い角膜透過性を有することを示唆している。pH7.4の試験3においては、同様の水溶解度をもつ試験1と比べて、超分岐ポリエステル及びポリソルベート80の存在により、チモロールの透過性は明らかに亢進している。概して、市販品に対し亢進したチモロールの透過性及び同等のドルゾラミド透過性は、HP及びポリソルベート80を含む新規製剤の主要な利点である。図38より、試験3新規製剤における、3時間後のドルゾラミド及びチモロールの総透過パーセンテージは、試験1市販品の有効成分よりも少なくとも2倍高かった。HP及びポリソルベート80の存在によって、角膜を介して透過した有効成分ドルゾラミド及びチモロールのパーセンテージが明らかに増加する。角膜透過係数及び分配係数を決定するために、図36及び37の傾きを使用した。透過係数は、ドナー溶液の薬剤初期濃度に反比例する。試験2の透過係数図39を参照及び分配係数図40を参照は、試験1よりも相対的に高い。試験1及び試験2溶液は共にpH5.65であることは留意すべきである。上記結果は、HP及びポリソルベート80の影響で、有効成分の分配及び透過が亢進することを示唆している。pHの効果により、試験3の透過係数及び分配係数は試験2よりも高い。試験3製剤は、非イオン性のドルゾラミド及びチモロールの透過性により貢献するであろう、pH7.4で調製されている。概して、上記結果は、ドルゾラミド及びチモロール双方についての、局所的製剤の薬剤担体として、HP及びポリソルベート80を使用することの重要性を明確に示している。概して、図39のデータは、pH7.4でHP無しの試験1及びpH5.65のCOSOPT登録商標コントロール製剤COSOPT登録商標有効成分製剤と同様と比較して、HP及びポリソルベート80を含む試験2の製剤で、チモロール及びドルゾラミドの透過係数が高いことを明確に示している。HP及びポリソルベート80は、チモロール及びドルゾラミドの被包を促進するため、チモロールの角膜上皮への分配を亢進する。この理論は図40のデータによっても支持される。チモロール及びドルゾラミドの角膜表面への分配係数が、試験1及び試験2よりも、pH7.4の試験3で最も高いことは、pH5.65ではなく、pH7.4で、高機能性HPの存在下で、親油性の角膜へのチモロール及びドルゾラミドの分配が改善することを示している。従って、HP存在下での改善した透過性は、主に上皮への分配の改善に起因する。結論市販の樹枝状Bis-MPAHP及びポリソルベート80などの、HP添加物存在下で、pH7.4における有効医薬剤の累積透過量は、ドルゾラミドの場合は市販品とほぼ同等、チモロールについては2倍を超える透過性であった。当該新規局所的製剤はpH7.4で調製されるため、親油性角膜上皮への透過に、より寄与し、患者にとって満足のいくものである。従って、ヒドロキシル末端基を有するHP及びポリソルベート80は、COSOPT登録商標有効成分の眼でのバイオアベイラビリティを増加するのに非常に有効であろう。"