"微生物による食品の腐敗を防止または抑制するための、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物の使用。前記微生物が細菌または真菌である、請求項1に記載の使用。前記細菌がシュードモナスまたはバチルス属からの食品腐敗種である、請求項2に記載の使用。前記真菌が以下の属:アルテルナリア、アスペルギルス、フザリウム、ボトリチス、コレトトリカム、サッカロマイセス、クルイベロマイセスおよびチゴサッカロマイセスの1つからの食品腐敗種である、請求項2に記載の使用。前記食品が果物、堅果、野菜、種子、糖、乳製品、液状もしくはペースト状食品、肉、魚またはパンから得られる、これらをもたらす、またはこれらそのものである、前請求項のいずれか1項に記載の使用。前記食品がイチゴである、前請求項のいずれか1項に記載の使用。前記微生物がボトリチスシネレアまたはコレトトリカムアキュタタム、好適にはボトリチスシネレアである、請求項6に記載の使用。前記組成物がキレート剤をさらに含む、前請求項のいずれか1項に記載の使用。微生物による食品の腐敗の防止または抑制方法であって、それを必要とする食品に効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む、方法。BladBladbandadeLupinusalbusdoce―スイートL.アルバスからのバンドは、β-コングルチン、ルピナス属の種中に存在する主要な貯蔵タンパク質の、安定した中間分解生成物に与えられた名称である。173個のアミノ酸残基からなり、ルピナスからのβ-コングルチンの前駆体をエンコードする遺伝子GenBankにおいてアクセッション番号AAS97865で公表される、1791個のヌクレオチドの内部断片GenBankにおいてアクセッション番号ABB13526で登録される、519個のヌクレオチドによりエンコードされる20kDのポリペプチドとして特徴づけられる。Blad末端配列をエンコードするプライマーを用いてゲノムルピナスDNAからの配列を増幅する場合、~620bpの生成物が得られ、Bladをエンコードする遺伝子断片中のイントロンの存在を示す。自然発生Bladは、発芽の開始後4~12日の間、ルピナス種の子葉のみにβ-コングルチンの集中的かつ限定的なタンパク質分解の後蓄積する、210kDのグリコオリゴマーの主成分である。前記オリゴマーはグリコシル化しているが、自然発生Bladはグルコシル化していない。Blad含有グリコオリゴマーは、いくつかのポリペプチドを含み、主なものは14、17、20、32、36、48および50kDの分子量を示す。20kDのポリペプチド、Bladは、オリゴマー中でもっとも豊富なポリペプチドであり、レクチン活性を有する唯一のものであると考えられる。自然発生Bladは8日齢の植物体中の総子葉タンパク質の約80を占める。L.アルバスβ-コングルチン前駆体をエンコードする配列SEQIDNO:1を図1に示す。β-コングルチン親サブユニットをコードする配列は残基70~1668に位置する。エンコードされた、533個のアミノ酸残基のβ-コングルチン親サブユニットSEQIDNO:2は:である。Bladに対応するβ-コングルチン前駆体をエンコードする配列の内部断片SEQIDNO:3を図2に示す。BladポリペプチドSEQIDNO:4は:である。本発明は、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物に関する。従って、SEQIDNO:4のポリペプチド配列またはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物に関する。代替実施形態では、組成物は本質的にBladもしくはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドからなる、および/または抗微生物ポリペプチドは本質的にBladもしくはその活性変異体からなる。さらなる実施形態では、Bladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれらからなる抗微生物ポリペプチドは分離形態で用いることができる。Bladの活性変異体は、抗微生物剤として作用する能力を保持するすなわち、抗微生物活性を有する―こうした活性のレベルおよびどのように測定するかの説明は以下参照Bladの変異体である。Bladの活性変異体は、その範囲内に、SEQIDNO:4の断片を含む。好適な実施形態では、SEQIDNO:4の断片は、SEQIDNO:4の長さの少なくとも10、好適には少なくとも20、好適には少なくとも30、好適には少なくとも40、好適には少なくとも50、好適には少なくとも60、好適には少なくとも70、好適には少なくとも80、好適には少なくとも90、もっとも好適にはSEQIDNO:4の長さの少なくとも95であるものが選択される。Bladまたはその変異体は一般的には、少なくとも10個のアミノ酸残基、例えば少なくとも20、25、30、40、50、60、80、100、120、140、160または173個のアミノ酸残基の長さを有する。Bladの活性変異体は、その範囲内に、例えば全配列について、または少なくとも20個、好適には少なくとも30個、好適には少なくとも40個、好適には少なくとも50個、好適には少なくとも60個、好適には少なくとも80個、好適には少なくとも100個、好適には少なくとも120個、好適には少なくとも140個、もっとも好適には少なくとも160個以上の隣接するアミノ酸残基の領域について、SEQIDNO:4との相同性、例えば少なくとも40の同一性、好適には少なくとも60、好適には少なくとも70、好適には少なくとも80、好適には少なくとも85、好適には少なくとも90、好適には少なくとも95、好適には少なくとも97、もっとも好適には少なくとも99同一性を有するポリペプチド配列も含む。タンパク質相同性の測定方法は当技術分野において周知であり、当業者であれば、本文脈では相同性はアミノ酸同一性ハード相同性と称されることもあるに基づいて計算されることを理解するだろう。相同活性Blad変異体は一般的には、置換、挿入または削除、例えば1、2、3、4、5~8個以上の置換、挿入または削除によりSEQIDNO:4のポリペプチド配列とは異なる。置換は好適には保守的である、すなわちアミノ酸を同様のアミノ酸で置換することができ、それによって同様のアミノ酸は以下の群:芳香族残基F/H/W/Y、非極性脂肪族残基G/A/P/I/L/V、極性非荷電脂肪族C/S/T/M/N/Qおよび極性荷電脂肪族D/E/K/Rの1つを共有する。好適な亜群は:G/A/P;I/L/V;C/S/T/M;N/Q;D/E;およびK/Rを含む。上述のようなBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドは、N末端および/またはC末端にいずれかの数のアミノ酸残基を付加したBladまたはその活性変異体からなり得るが、ただしポリペプチドは抗微生物活性を保持する同様に、こうした活性のレベルおよびこれをどのように測定するかの説明は以下参照。好適には、300個以下のアミノ酸残基、より好適には200個以下のアミノ酸残基、好適には150個以下のアミノ酸残基、好適には100個以下のアミノ酸残基、好適には80個、60個または40個以下のアミノ酸残基、もっとも好適には20個以下のアミノ酸残基をBladまたはその活性変異体の一端または両端に付加する。上述のようなBladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドは、本発明において例えば植物、動物または微生物供給源から取り出した精製および/または組換えタンパク質の形態で用いることができる。組換え形態の製造はBladの活性変異体の製造を可能にする。自然発生Bladの精製方法は当技術分野においてすでに説明されている例えばRamosetal.1997Planta2031:26-34およびMonteiroetal.2010PLoSONE51:e8542。自然発生Bladの適切な供給源は、好適には発芽の開始後約4~約14日の間に採取された、より好適には発芽の開始後約6~約12日の間例えば発芽の開始から8日後に採取された、ルピナスアルバスのようなルピナス属の植物、好適には該植物の子葉である。当技術分野では、Bladを含む粗抽出物をもたらす総タンパク質抽出方法、およびこうした抽出物の、例えばBladを含むBlad含有グリコオリゴマーを含む部分精製抽出物をもたらすタンパク質精製方法が開示されている。Bladそのものを分離するには、SDS-PAGEおよび/または、好適にはC-18カラム上での逆相RP-HPLCを用いることができる。Bladを含むグリコオリゴマーを含む部分精製抽出物を得る代替方法は、Bladのキチン結合活性を用いることである。グリコオリゴマーは、キチン親和性クロマトグラフィー精製の一部として、キチンカラムと非常に強く結合し、0.05NのHClで溶離される。この精製方法の一例の詳細は以下のとおりである:8日齢のルピナス属植物から子葉を採取し、10mMのCaCl2およびMgCl2を含有するMilli-Qplus水pHは8.0に調節中に均質化する。そのホモジェネートをチーズクロスに通してろ過し、4°Cで、1時間30,000gで遠心分離する。ペレットをその後、10w/vのNaCl、10mMのEDTAおよび10mMのEGTAを含有するpH7.5の100mMのトリス-HCl緩衝剤中に懸濁させ、4°Cで1時間撹拌し、4°Cで、1時間30,000gで遠心分離する。浮遊物に含まれる総グロブリン画分を硫酸アンモニウム561g/lで沈殿させ、冷却しながら1時間撹拌しつづけ、4°Cで、30分間30,000gで遠心分離する。得られたペレットを、pH7.5の50mMのトリス-HCl緩衝剤に溶解し、同じ緩衝剤で平衡化したPD-10カラム中で脱塩し、同じ緩衝剤で予め平衡化したキチン親和性クロマトグラフィーカラムに通す。カラムをpH7.5の50mMのトリス-HCl緩衝剤で洗浄し、結合タンパク質を0.05NのHClで溶離する。溶離した画分をすぐに2Mのトリスで中和し、ピーク画分を溜め、凍結乾燥させ、SDS-PAGEにより分析する。キチンカラムの製造について、粗キチンをSigmaから入手し、以下のとおり処理する:キチン試料をMilli-Qplus水のみで、その後0.05NのHClで洗浄する。次に1w/vの炭酸ナトリウムで、次にエタノールで、洗浄剤の吸収度が0.05未満になるまで洗浄する。キチンを次にピペット先端に充填し、pH7.5の50mMのトリス-HCl緩衝剤で平衡化する。組換えタンパク質の製造方法は当技術分野において周知である。ここで適用されるこうした方法は、Bladまたはその活性変異体を含むポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチドを適切な発現ベクターに挿入するステップ、該ポリヌクレオチドの1つ以上のプロモーター例えばT7lacのような誘導性プロモーターとの、および対象の他のポリヌクレオチドまたは遺伝子との並置を可能にするステップ、発現ベクターを適切な細胞または有機体例えばエシェリキアコリ中に導入するステップ、形質転換細胞または有機体においてポリペプチドを発現するステップ、ならびに発現した組換えポリペプチドをその細胞または有機体から取り出すステップを含む。こうした精製を補助するため、発現ベクターは、ポリヌクレオチドが、例えば精製を補助することができる末端タグ:例えば、親和性精製のためのヒスチジン残基のタグをさらにエンコードするように構成することができる。組換えポリペプチドを精製した後、精製タグは、例えばタンパク質分解開裂により、ポリペプチドから取り出すことができる。Bladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを含む組成物では、該ポリペプチドは好適には部分精製形態、より好適には精製形態である。前記ポリペプチドは、これに自然と関連する1つ以上の他のポリペプチドを有さない環境中に存在する、および/または存在する総タンパク質の少なくとも約10に相当する場合、部分精製である。前記ポリペプチドは、これに自然と関連する他のポリペプチドをすべて、またはほとんどの有さない環境中に存在する場合、精製である。例えば、精製Bladとは、Bladが組成物中の総タンパク質の少なくとも約50、少なくとも約60、少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、少なくとも約98、または少なくとも約99に相当することを意味する。Bladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを含む組成物では、ルピナスタンパク質分は本質的にBladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなるポリペプチドを含むBlad含有グリコオリゴマーからなり得る。Bladを含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを含む組成物は、当業者により組成物に添加された別の化合物を含む製剤とすることもできる。食品腐敗および食品微生物による食品の腐敗とは、その栄養および/または商業的価値を低下させる、例えば味、臭いまたは外観例えば形、色、質感、硬度の変化をもたらす、微生物による食品のいずれかの変質を意味する。食品の語により、栄養または楽しみを理由にヒトまたは動物により消費されるいずれかの液体または固体物質を意味することを意図している。食品は直接または間接的に例えば、穀類の精製のように、調理または加工後に消費され得る。適用できる場合、食品は好適には、収穫された植物食品例えば果物、野菜、種子および動物から分離された製品例えば肉、魚、乳のように、その自然環境から分離された形態で考慮される。食品は、果物、堅果、野菜、種子、糖、乳製品、液状もしくはペースト状食品、肉、魚またはパンから得ることができる、これらをもたらすことができる、またはこれらそのものとすることができる。果物から得られる食品としてはワインおよびフルーツジュースが挙げられる。種子をもたらす植物としては、穀類例えばトウモロコシ、小麦、大麦、モロコシ、キビ、米、カラス麦およびライ麦およびマメ科植物例えばマメ、エンドウマメおよびレンズマメが挙げられる。糖類、好適にはスクロースは、テンサイまたはサトウキビから得ることができる。乳製品としては、ミルク、クリーム、チーズおよびヨーグルトが挙げられる。液状またはペースト状食品としては、スープ、ソース、ピクルス、マヨネーズ、サラダクリームおよび他のサラダドレッシング、ジャム、シロップならびに乳児食品が挙げられる。考慮される肉および/または魚食品は加工されていてもいなくてもよく、調理されていてもされていなくてもよい。さらに考慮される特定の食品は次のセクションで説明するが、ここでは本発明の使用および方法において標的とすることができる微生物により腐敗され得る食品の例について記載する。食品は、サンドイッチ、パイ、キッシュ等のような調理済み複合食品、とくに現在チルド保存用にデザインされているものも含む。微生物標的本発明者らは、微生物による食品の腐敗を防止または抑制するための、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物の使用を提供する。食品の腐敗を引き起こし得る微生物―食品腐敗微生物―としては、とくに、細菌および真菌が挙げられる。こうした使用では、抗微生物ポリペプチドは抗微生物食品防腐剤とみなすことができる。抗微生物ポリペプチドを用い、グラム陽性またはグラム陰性細菌による食品の腐敗を防止または抑制することができる。とくに好適な細菌標的括弧内にはそれらが腐敗させ得る食品の例を記載としては:食品腐敗シュードモナス種、例えばシュードモナスアエルギノサPseudomonasaeruginosa、シロイヌナズナおよびレタス、シュードモナスシリンガエPseudomonassyringae、各種植物性食品、例えばビート、小麦および大麦、シュードモナストラシイPseudomonastolaasii、キノコ、シュードモナスアガリシPseudomonasagarici、キノコ、シュードモナスフラジPseudomonasfragi、乳製品およびシュードモナスルンデンシスPseudomonaslundensis、ミルク、チーズ、肉および魚、もっとも好適にはP.アエルギノサ;ならびに食品腐敗バチルス種、例えばバチルスサブチリスBacillussubtilis、トマト、ジャガイモ、パンおよびバチルスコアグランスミルク、トマトジュースが挙げられる。抗微生物ポリペプチドを用い、単細胞酵母または多細胞糸状真菌による食品の腐敗を防止または抑制することができる。とくに好適な酵母菌標的括弧内にはそれらが腐敗させ得る食品の例を記載としては:食品腐敗サッカロマイセス種、例えばサッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、糖、液糖、ワイン、およびフルーツジュースのようなソフトドリンク;食品腐敗クルイベロマイセス種、例えばクルイベロマイセスマルキシアヌスKluyveromycesmarxianus、チーズ;ならびに食品腐敗チゴサッカロマイセス種、例えばチゴサッカロマイセスバイリZygosaccharomycesbailii、ワイン、フルーツジュース、サラダドレッシングおよびトマトソースおよびチゴサッカロマイセスロウキシZygosaccharomycesrouxii、液糖、フルーツジュース、ジャムおよびサラダドレッシングが挙げられる。とくに好適な糸状菌標的括弧内にはそれらが腐敗させ得る食品の例を記載としては:食品腐敗アルテルナリア種、例えばアルテルナリアアルテルナタAlternariaalternata、ジャガイモ、アルテルナリアアルボレセンスAlternariaarborescens、トマト、アルテルナリアアルブスチAlternariaarbusti、ナシ、アルテルナリアブラシカエAlternariabrassicae、野菜、アルテルナリアブラシシコラAlternariabrassicicola、アブラナ属作物、アルテルナリアカロチインクルタエAlternariacarotiincultae、ニンジン、アルテルナリアコンジャンクタAlternariaconjuncta、パースニップ、アルテルナリアダウシAlternariadauci、ニンジン、アルテルナリアユーフォルビイコラAlternariaeuphorbiicola、アブラナ属作物、アルテルナリアガイセンAlternariagaisen、セイヨウナシ、アルテルナリアインフェクトリアAlternariainfectoria、小麦、アルテルナリアジャポニカAlternariajaponica、アブラナ属作物、アルテルナリアペトロセリニAlternariapetroselini、パセリ、アルテルナリアセリニAlternariaselini、パセリ、アルテルナリアソラニAlternariasolani、ジャガイモ、トマトおよびアルテルナリアスミルニAlternariasmyrnii、アレクサンダース、パセリ;食品腐敗アスペルギルス種、例えばアスペルギルスフミガタスAspergillusfumigatus、堅果、ジャガイモ、米およびパン、アスペルギルスニガーAspergillusniger、果物および野菜、例えばブドウおよびタマネギ、およびアスペルギルスフラバスAspergillusflavus、穀物、ピーナツ;食品腐敗フザリウム種、例えばフザリウムオキシスポラムFusariumoxysporum、果物およびフザリウムグラミネアラムFusariumgraminearum、大麦、小麦およびトウモロコシ;食品腐敗ボトリチス種、例えばボトリチスシネレアイチゴ、ブドウおよびトマト;ならびに食品腐敗コレトトリカム種、例えばコレトトリカムアキュタタムイチゴ、セロリ、リンゴ、アボカド、ナス、コーヒーおよびグアバ、コレトトリカムココデスColletotrichumcoccodes、トマト、ジャガイモ、コレトトリカムカプシシColletotrichumcapsici、バジル、ヒヨコマメ、コショウ、コレトトリカムクラシペスColletotrichumcrassipes、パッションフルーツ、コレトトリカムグロエスポリオイデスColletotrichumgloesporioides、野菜および果物、例えばマルメロおよびリンゴ、コレトトリカムグラミニコラColletotrichumgraminicola、穀類、コレトトリカムカハワエColletotrichumkahawae、コーヒー、コレトトリカムリンデムチアヌムColletotrichumlindemuthianum、マメ、コレトトリカムムサエColletotrichummusae、バナナ、コレトトリカムニグラムColletotrichumnigrum、トマト、コレトトリカムオルビクラレColletotrichumorbiculare、メロン、キュウリ、コレトトリカムピシColletotrichumpisi、エンドウマメおよびコレトトリカムサブリネオラムColletotrichumsublineolum、米が挙げられる。好適な実施形態では、抗微生物ポリペプチドは、微生物による果物、好適にはイチゴの腐敗を防止または抑制するために用いられ、好適にはこの場合微生物はボトリチスシネレアまたはコレトトリカムアキュタタム、好適にはボトリチスシネレアである。当業者であれば、日常的な方法によって、抗微生物ポリペプチドを用いていずれかの特定の背景における腐敗を防止または抑制するのに適した濃度すなわち効果的な濃度を識別することができるだろう。好適には、例えば、Bladは少なくとも1μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、または少なくとも150μg/ml、および350μg/mlまで、500μg/mlまで、600μg/mlまで、1mg/mlまで、2.5mg/mlまで、5mg/mlまでまたは10mg/mlまでの濃度で用いられる。好適には、選択されるBladの濃度は10μg/ml~5mg/ml、より好適には50μg/ml~2.5mg/ml、より好適には100μg/ml~1mg/ml、さらにより好適には150μg/ml~600μg/ml例えば約250μg/mlである。本発明者らは、Bladが少なくとも400μg/mlまでは動物に非毒性である証拠実施例4および5を参照を提供した。本発明者らは、驚くべきことに、Bladのキレート剤例えばEDTAとの組み合わせが相乗的な抗微生物効果を生むことを見出した。従って、好適には、キレート剤は抗微生物ポリペプチドの抗微生物活性を向上させるのに用いられ、こうしたキレート剤の使用は特定のレベルの腐敗の防止または抑制を達成するのに必要な抗微生物ポリペプチドの濃度を低下させることができる。キレート剤別名、金属イオン封鎖剤は、金属イオンと結合し、非共有複合体を形成し、イオンの活性を低減するいずれかの化合物である。適切なキレート剤としては、EDTAエチレンジアミンテトラ酢酸およびEGTAエチレングリコールビスβ-アミノエチルエーテル-N,N,N’,N’-テトラ酢酸のようなポリアミノカルボキシレートが挙げられる。好適には、EDTAはキレート剤として、好適には少なくとも10μg/ml、少なくとも50μg/ml、または少なくとも100μg/ml、および500μg/mlまで、1mg/mlまで、5mg/mlまで、10mg/mlまで、または20mg/mlまでの濃度で用いられる。好適には、EDTAは0.1mg/ml~1mg/mlの濃度で用いられる。成果抗微生物ポリペプチドを用い、食品上で食品腐敗微生物の増殖を阻害する静微生物活性を有することを意味する、および/または該微生物を殺滅する殺微生物活性を有することを意味することができ、微生物による該食品の腐敗が防止または抑制される。当業者であれば、微生物のとくに所望の増殖阻害または殺滅を達成するのに適した用量および/または濃度を識別することができる。好適には、静微生物剤として用いる場合、抗微生物ポリペプチドは、抗微生物ポリペプチドが存在しない同等の条件と比べて、増殖率を10、より好適には50、より好適には75、より好適には90、より好適には95、より好適には98、より好適には99、さらにより好適には99.9低減する。もっとも好適には、抗微生物ポリペプチドは微生物のいかなる増殖も防止する。好適には、殺微生物剤として用いる場合、抗微生物ポリペプチドは、抗微生物ポリペプチドが存在しない同等の条件と比べて、微生物の集団の10、より好適には該集団の50、より好適には該集団の75、より好適には該集団の90、より好適には該集団の95、より好適には該集団の98、より好適には該集団の99、さらにより好適には該集団の99.9を殺滅する。もっとも好適には、抗微生物ポリペプチドは微生物の集団のすべてを殺滅する。微生物による食品の腐敗を防止または抑制するのに用いる場合、抗微生物ポリペプチドは好適には効果的な量、すなわち、好適には抗微生物ポリペプチドが存在しない同等の条件と比べて、検出可能なレベルの腐敗防止または抑制例えば腐敗率の低下が達成されるレベルの微生物の増殖阻害および/または殺滅をもたらす量で用いられる。好適には、効果的な量の抗微生物ポリペプチドはヒトまたは動物に非毒性である。使用および方法本発明者らは、微生物による食品の腐敗を防止または抑制するための、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物の使用を提供する。この目的のため、彼らは、それを必要とする食品に効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む、微生物による食品の腐敗の防止または抑制方法も提供する。好適には、効果的な量の抗微生物ポリペプチドはヒトまたは動物に非毒性である。腐敗の防止または抑制は、食品の貯蔵、輸送、取扱、加工または陳列中に起こり得る。抗微生物ポリペプチドを含む組成物は例えば食品中に混合することができ、または例えば食品の表面に例えば液膜または噴霧として塗布してもよい。また食品は前記組成物中に浸漬しおよび任意でその中に維持してもよい。いずれかの特定の食品について、防腐剤としての前記組成物の使用は、乾燥、加熱、冷蔵または冷凍、浸透抑制例えばシロップまたは塩の使用、真空包装、缶詰および瓶詰、ゼリー化、ポッティング、ジャギング、イオン化照射、パルス電界処理、高圧食品保存、および超高水圧食品保存、抗酸化剤の使用、ならびに/または他の抗微生物防腐剤例えば二酸化硫黄、二酸化炭素、エタノール、酢酸、クエン酸、乳酸、ソルビン酸、安息香酸塩、硝酸塩および亜硝酸塩、亜硫酸塩、プロピオン酸カルシウムならびにメチルクロロイソチアゾリノンの使用を含む、その他の周知の食品保存技術、抗微生物剤等と組み合わせることができる。以下の実施例では、BLADは、Ramosetal.1997Planta2031:26-34:文献のMaterialsandMethodsセクションのPlantmaterialandgrowthconditionsおよびPurificationofproteins部分参照、に従って精製した20kDのBladポリペプチドを含む自然発生Blad含有グリコオリゴマーを示す。定義:MIC―最小阻害濃度:微生物の目に見える増殖を阻害するもっとも低い抗微生物剤の濃度MFC/MBC―最小殺真菌/殺細菌濃度または最小致死濃度:標準の条件下、24時間後に初期接種の99.9を殺滅するのに必要なもっとも低い抗微生物剤の濃度BLADの殺細菌活性[各種細菌種についてのBLADのMICおよびMBCミューラーヒントン培地を用いる]とくに、P.アエルギノサおよびB.サブチリスは食品の腐敗を引き起こし得る。BLADは、P.アエルギノサに対して、100μg/mlで静細菌性であり、250μg/mlで殺細菌性であることが見出された。P.アエルギノサに対して、BLADは50μg/mlで、またはEDTAは1mg/mlで増殖を阻害するすなわち両方とも静細菌性であるが、2つの組み合わせは殺細菌性である。BLADの殺真菌活性[各種糸状真菌についてのBLADのMICおよびMFCRPMI培地を用いる][各種糸状真菌についてのBLADのMIC各種培地を用いる][0.6または0.9w/vのポテトデキストロース寒天PDA25°Cで3日培養上でのボトリチスシネレアBMに対するBLADの阻害ハロ直径データ]0.6寒天上、B.シネレアの増殖は、BLADの量を20μgから200μgまで増加させることによりますます阻害された。0.9寒天上で5mg/mlおよび10mg/mlでは顕著な阻害は見られなかった。[0.9w/vの寒天を有するPDA25°Cで3~5日培養上での各種酵母菌に対する200μg/ディスクのBLADの阻害ハロ直径データ]BLADは200μg/ディスクで、すべて食品の腐敗を引き起こし得る、これらの酵母菌のすべての顕著な増殖阻害を示した。イチゴ防腐/除染試験BLADでの処理後、B.シネレア汚染に対するイチゴの感受性を調べた。商業的な供給業者より供給される無処理のイチゴの38までが汚染されることが見出されサンプルサイズ:500gの箱10個、イチゴ汚染の問題を示した。試験プロトコル1.均質な代表となるサンプルを用意する。2.水中で洗浄し、70v/vエタノールを用いて除染する。3.水中で2回すすぐ。4.各種濃度のBLADで処理する対照については省略した:処理溶液中に1分間浸漬させた後、滅菌水を含んで湿ったスポンジ、ろ紙およびプラスチックメッシュを含有する培養ペトリ皿において乾燥させる。5.各イチゴに1~5×106胞子/mlのB.シネレア胞子溶液10μlを接種する。6.以下の条件下で5日間培養する:温度:25°C/-3°C相対湿度:80~90光:直射日光から保護7.間を置いて、1gのサンプルを収集し、ボルテックスを用いて均質化する。8.一連の10進希釈を行う。9.固体培地上に分散させ、コロニー数測定を行う。すべての取扱技術は、オートクレーブ材料を用い、滅菌条件下で行われた。以下のデータは、B.シネレア胞子溶液を接種した後B.シネレアに感染したイチゴの割合を表す。BLADは150μg/ml~350μg/mlの濃度で、B.シネレアでの汚染の開始を顕著に遅延させ、対照と比べて汚染イチゴの合計割合を低減させた。モルモットにおけるBLADの経皮毒性実験化学物質の試験のためのOECDガイドライン、No.402、急性経皮毒性を用いて、InstitutoSuperiordeAgronomiaによりリスボン工科大学獣医学部で行われた機密実験2006年7月18日~2006年8月1日。実験は優良実験室規範および動物福祉に従って行われた。BLADの急性経皮毒性は、経皮毒性実験に適した動物として広く受け入れられている、モルモットへの単回投与後に評価された。BLADを、各10匹の2群の無毛皮膚に、それぞれ200μg/mlおよび400μg/ml投与した。投与後、動物を15日間観察し続け、その間の体重、罹患率および死亡率を記録した。材料および方法1.材料試験項目:BLADを5mg/mlで用意し黄色がかった不透明な液体、0~4°C、-80°Cで保存した。動物:アルビノモルモット;系統:バルセロナのHarlanIbericaによるダンキンハートレイHsdPoc:DH用いた動物の数:30体重:400~449g齢:6週ハウス:動物を消毒した木粉リグノセルが入ったポリエチレンの箱に個別に入れた。周囲条件:a光周期:12時間毎の明/暗のサイクルb制御環境:19/22°Cの平均温度および60の平均湿度適応:動物は試験の開始前の7日間、試験の環境条件下に置いた。食糧:バルセロナのHarlanIbericaにより供給されるGlobalDiet2014、RodentMaintenanceDiet;水、適宜2.方法投与:動物を試験の48時間前に剃毛し、病変のない皮膚を持つ動物のみに実験を行った。1mlのアリコート200μg/mlまたは400μg/mlを各動物の剃毛した皮膚に投与した。実験デザイン:実験の30匹の動物を4つの群、各10匹の2群および各5匹の2群に分けた。1つの群の10匹には200μg/mlでBLADを投与し試験群1、もう1つの群の10匹にはBLADを400μg/mlで投与した試験群2。5匹の2群は対照とした:1つの群には水1mlアリコートを投与し、もう1つの群はすべての他の群と同様に扱ったが、いずれの投与も行わなかった。成果:投与後、動物を15日間毎日観察し、罹患のいずれかの兆候、または死亡を記録した。罹患に関して、投与部位での皮膚病変の発症および正常な行動パターンの変化のような一般的な毒性の兆候にとくに注意を払った。体重は投与前および試験期間の終わりに個別に測定した。結果どちらの濃度のBLADでも、経皮投与領域におけるいずれかの物理的な変化または飲水/摂食もしくは一般行動の変化の兆候は見られなかった。BLAD投与後、副作用も死亡も起こらなかった。体重の増加はすべての群において同様だったこうした幼齢の動物の成長から予想される増加と一致していた。結論400μg/mlまでのあるいはこれより高い濃度のBLADは経皮毒性を示さない。アルビノラットにおけるBLADの経口毒性実験化学物質の試験のためのOECDガイドライン、No.401、急性経口毒性を用いて、InstitutoSuperiordeAgronomiaによりリスボン工科大学獣医学部で行われた機密実験。実験は優良実験室規範および動物福祉に従って行われた。BLADの急性経口毒性は、経口毒性実験に適した動物として広く受け入れられている、ラットへの単回投与後に評価された。BLADは強制給餌により、各10匹の2群に、それぞれ200μg/mlおよび400μg/mlで投与した。投与後、動物を15日間観察し続け、その間の体重、罹患率および死亡率を記録した。観察期間後、動物は安楽死させ、剖検を行った。材料および方法1.材料試験項目:BLADを5mg/mlで用意し黄色がかった不透明な液体、0~4°C、-80°Cで保存した。動物:ラタスノルベジカスRattusnorvegicus;系統:バルセロナのHarlanIbericaからリスボンの獣医学部の動物飼育場が入手したウィスターハノーバー用いた動物の数:30体重:250~300g齢:10週ハウス:動物は消毒した木粉リグノセルが入ったポリエチレンの箱に個別に入れた。周囲条件:a光周期:12時間毎の明/暗のサイクルb制御環境:19/22°Cの平均温度および60の平均湿度適応:動物は試験の開始前の7日間、試験の環境条件下に置いた。食糧:バルセロナのHarlanIbericaより供給されるGlobalDiet2014、RodentMaintenanceDiet;水、適宜2.方法投与:1mlのアリコート200μg/mlまたは400μg/mlを各動物に、胃一般的には強制給餌として知られる経口経口腔食道挿管法により投与した。投与は用いた動物の種に適した金属プローブで行った。動物は投与前の18時間は絶食させ、投与の3時間後に給餌した。実験デザイン:実験の30匹の動物を4つの群、各10匹の2群および各5匹の2群に分けた。1つの群の10匹には200μg/mlでBLADを投与し試験群1、もう1つの群の10匹にはBLADを400μg/mlで投与した試験群2。5匹の2群は対照とした:1つの群には水1mlアリコートを投与し、もう1つの群はすべての他の群と同様に扱ったが、いずれの投与も行わなかった。成果:投与後、動物を15日間毎日観察し、罹患の兆候、または死亡を記録した。体重は投与前および試験期間の終わりに個別に測定した。観察期間後、動物は、その後の剖検のため、二酸化炭素で飽和した雰囲気下での窒息により安楽死させた。結果どちらの濃度のBLADでも、いずれかの物理的な変化または飲水/摂食もしくは一般行動の変化の兆候も見られなかった。BLAD投与後、副作用も死亡も起こらなかった。体重の増加はすべての群において同様だったこうした幼齢の動物の成長から予想される増加と一致していた。剖検/胸腔および腹腔の器官の肉眼観察でそれに変化がないことがわかった。結論400μg/mlまでのあるいはこれより高い濃度のBLADは経口毒性を示さない。"