生物学的流体の試料におけるPTX3タンパク質のレベルを定めるための方法であって、次の工程i96ウェルのELISAのプレートを、ラットの単クローン抗体を含有する100μlの溶液により被覆し、及び一夜の間、4°Cでインキュベートする工程ii次いで、プレートを、緩衝剤溶液及び非特異結合部位をブロックし得る溶液により洗浄する工程iii2時間の間の周囲温度でのインキュベートの後、プレートを、更に洗浄緩衝剤により洗浄する工程iv繰り返して、50μlの、適切な媒体において希釈する標準組換えヒトPTX3又は試験下の生物学的流体の試料を、各ウェルにおいて配置し、及びプレートを2時間の間37°Cでインキュベートする工程vプレートを洗浄緩衝剤により繰り返し洗浄し、及び次いで洗浄緩衝剤における25ngmlのビオチン化した抗PTX3のラビットのIgGの100μlを、各ウェルに添加する工程viプレートを1時間の間37°Cでインキュベートし、及び次いで洗浄緩衝剤により繰り返し洗浄する工程vii100μlの希釈したストレプトアビジンペルオキシダーゼを各ウェルに添加し、及びプレートを1時間の間周囲温度でインキュベートする工程viiiプレートを洗浄緩衝剤により繰り返し洗浄した後、100μlの色素生産性基質を各ウェルに添加する工程ixプレートを短時間に周囲温度でインキュベートし、停止溶液を添加し、及びプレートを405nmで自動読取機により読み取る工程を含み改善は、工程において用いるラットの単クローン抗体が、ハイブリドーマMNB10からのか、又はハイブリドーマPen3から得られる抗体であり工程において用いるストレプトアビジンペルオキシダーゼが18000に希釈され及び工程において用いる色素生産性基質がテトラメチルベンジジンであるという事実にあることを特徴とする、方法。工程における溶液において、ラットの単クローン抗体の濃度が、約700ngmlであることを特徴とする、請求項1の方法。工程における溶液が被覆緩衝剤溶液であることを特徴とする、請求項1又は2の方法。前記緩衝剤溶液が15mMの炭酸塩緩衝剤を含有し、及びそのpHが96であることを特徴とする、請求項3の方法。工程において用いる緩衝剤溶液が、PBS005のトゥイーン20から構成されることを特徴とする、請求項1~4の何れか1項の方法。前記溶液を約300μlウェルの量において用いることを特徴とする、請求項5の方法。工程において用いる非特異結合部位をブロックし得る溶液が、PBS005のトゥイーン20からなる緩衝剤溶液における粉乳の5溶液から構成されることを特徴とする、請求項1~6の何れか1項の方法。非特異結合部位をブロックし得る前記溶液を、約300μlウェルの量において用いることを特徴とする、請求項7の方法。工程において特定する洗浄を、好ましくは3回繰り返し、毎回に約300μlの溶液を各ウェルについて用いることを特徴とする、請求項1~8の何れか1項の方法。工程において、用いる標準組換えヒトPTX3を、ウェルにおいて、75pgmlから12ngまでに増加する量で配置することを特徴とする、請求項1~9の何れか1項の方法。試験血漿試料を希釈するのに用いる媒体が、PBS2のBSA018のEDTAから構成されることを特徴とする、請求項1~10の何れか1項の方法。抗PTX3のラットの単クローン抗体を生産し得るハイブリドーマであって、前記ハイブリドーマが、MNB10ブダペスト条約に従い、イタリア国のジェノバ所在のアドバンスドバイオテクノロジセンタに、2004年4月16日付けで受託された、受託番号PD04001及びPen3ブダペスト条約に従い、イタリア国のジェノバ所在のアドバンスドバイオテクノロジセンタに2001年8月2日付けで受託された、受託番号PD01004を備える群より選ばれる、ハイブリドーマ。ラットの単クローン抗体の特異的な抗PTX3であって、ハイブリドーマMNB10及びPen3によって生産される単クローン抗体の群から選ばれる抗体。生物学的流体におけるPTX3タンパク質のレベルを定めるためのキットであって、前記キットがラットの抗PTX3の単クローン抗体を含むことを特徴とする、キット。それがまた、ラビットの抗PTX3多クローン性抗体を含むことを特徴とする、請求項14のキット。それがまた、精製組換えPTX3タンパク質を含むことを特徴とする、請求項14又は15のキット。それがまた、セイヨウワサビペルオキシダーゼと複合化したストレプトアビジンを含むことを特徴とする、請求項14~16の何れか1項のキット。それがまた、洗浄緩衝剤溶液を含むことを特徴とする、請求項14~17の何れか1項のキット。それがまた、アッセイすべき生物学的流体の試料のための希釈剤を含むことを特徴とする、請求項14~18の何れか1項のキット。前記希釈剤にEDTAが包含されることを特徴とする、請求項19のキット。それがまた、色素原を含むことを特徴とする、請求項14~20の何れか1項のキット。色素原がテトラメチルベンジジンの溶液から構成されることを特徴とする、請求項21のキット。それがまた、停止溶液を含むことを特徴とする、請求項14~20の何れか1項のキット。PTX3は、この系統の新しい一員であり、その系統はインターロイキン1によって刺激される内皮細胞において見出された。PTX3は、典型的な長鎖のペントラキシンであり、C末端領域の203個のアミノ酸によって特徴付けられ、それは、古典的なペントラキシンとの相同性を表示し、及びN末端領域の178個のアミノ酸が相同性を欠くことによって特徴付けられる。CRP及びSAPとは対照的に、PTX3は、種々の種類の細胞において、主として、内皮細胞において、及び単核の食細胞において、IL1に対して、及び腫瘍壊死因子に対しては応じて生産されるが、インターロイキン6には応じてはいない。さらに、PTX3は、単球によって、マイコバクテリアの細胞壁の成分に応じて、及び未刺激の滑膜細胞によって、関節リウマチを有する患者において生産される。タンパク質PTX3の識別は、1992年にまで遡るFetalのCloningofanewgenerelatedtoCreactiveproteinandserumamyloidPcomponent、JBiolChem、1992年、2672219022197。また、細菌においてのその生産が、VidalAllesV等によってInducibleexpressionofPTX3anewmemberofthepentraxinfamilyinhumanmononuclearphagocytes、Blood、1994年、8434833493において記述され、その一方で、真核細胞でのその生産が、BottazziB等のMultimerformationandligandrecognitionbythelongpentraxinPTX3SimilaritiesanddifferenceswiththeshortpentraxinCreactiveproteinandserumamyloidcomponent、JBiolChem1997年、2723281732823によって記述されていることが知られている。それにもかかわらず、タンパク質PTX3の生物学的機能はまだ十分に理解されていない。最近の調査は、PTX3タンパク質のレベルが敗血症又は心筋梗塞のような急性のか又は慢性の炎症性疾病を患う患者において増加することを実証した。特に、Peri等は、PTX3タンパク質のレベルが、694±1126ngmlのピークに、院内冠動脈単位までの投与後75時間の梗塞患者において達することを報告した2000、102636641。さらに、またより一層最近、PTX3タンパク質のレベルが、梗塞患者において、死亡の危険性を、発症の後の3月において指し示すことが観察されたR等のPrognosticsignificanceofthelongpentraxinPTX3inacutemyocardialinfarctioncomparisonwithCreactiveproteinNTproBNPandtroponinT、abstract3091、SupplementIV、page680、Circulation2003108。より一層詳しくは、著者は、ST部分の上昇を有する心筋梗塞に苦しむ患者の代表的な数において、急性の相でのPTX3タンパク質のレベルが、死亡の危険性を予測する独立した情報を提供することを報告した。同じ予測は、C反応性タンパク質のか、又はNTプロBNP又はトロポニンTのような他の生物的心臓性マーカのレベルに基づいてはなされ得ない。さらに、本発明者は、脳卒中を患う患者において、PTX3タンパク質のレベルが、中枢神経系によって被る損傷に比例することを示す実験データを承知している。文献において報告されるPTX3の測定Peri等のloccitMullerB等のCirculatinglevelsofthelongpentraxinPTX3correlatewithseverityofinfectionincriticallyillpatients、CritCareMed、2001年、2914041407FazziniF等のPTX3insmallvesselvasculitidesAnindependentindicatorofdiseaseactivityproducedatsitesofinflammation、ArthritisandRheumatism、2001年、4428412850は、PTX3タンパク質に特異的な単クローン抗体に基づき、及びPTX3タンパク質に特異的なビオチン化した多クローン性のラビットのIgGに基づくELISA法によって遂行された。前述の単クローン抗体はMNB4として文献において識別されるが、対応するハイブリドーマは公衆にとってアクセスし易いものではない。特に、前述の方法は、MullerB等の前の引用箇所によって詳細に記述され、及び次の工程を備えるa96ウェルのELISAのプレート、Denmarkを、100μlのラットの単クローン抗体NMB4として、15000に、被覆のために用いる緩衝剤において希釈するにより被覆し、及び一夜の間4°Cでインキュベートした工程bプレートを、次いで、ダルベッコのリン酸塩緩衝剤塩類溶液であって、005のトゥイーン20を含有するもの、及び200μlの5の粉乳により洗浄して、非特異結合部位をブロックした工程c2時間の間の周囲温度でのインキュベート後、プレートを再度3回洗浄緩衝剤により洗浄した工程d50μlの標準組換えヒトPTX3であって、RPMI1640媒体、Berlin、Germany及び2ウシ血清アルブミン、StLouis、MOにおいて希釈したもの、又は試験血漿の試料を、3通りで、各ウェルにおいて配置し、及びプレートを2時間の間37°Cでインキュベートした工程eプレートを、3回、洗浄緩衝剤により洗浄し、及び100μlの抗TPX3のラビットの血清であって、ビオチンと複合化し、洗浄緩衝剤において12000に希釈したものを添加した工程fプレートを、1時間の間37°Cでインキュベートし、及び次いで、3回、200μlの洗浄緩衝剤により洗浄した工程g100μlのストレプトアビジンペルオキシダーゼであって、デキストラン基質と複合化したもの、Copenhagen、Denmarkであり、14000に希釈したものを、各ウェルに添加し、及びプレートを1時間の間周囲温度でインキュベートした工程hプレートを4回洗浄した後、100μlの色素生産性基質ABTSMicrowellPeroxidaseSubstrateSystem、Gaithersburg、MDを添加した工程iプレートを、405nmで、自動読取機により読み取った工程を包含する。本発明の1種の局面は、本発明者が観察した事実に基づくもので、それは、前述の既知の方法でいくつもの不利な点が現れることが観察されたことである。既知の方法の第1の不利な点は、その事実からなり、それは、幾人かの患者の血漿の場合に、試験血漿試料の異なる希釈で決定されるPTX3のレベルが、遂行した希釈に対して比例しないという事実である。本発明者は、今回、この不利な点が、驚くべきことに、試験血漿試料に対してEDTAを添加することによって克服されることを見出した。これについての理由がまだ完全に明瞭になっていないという事実にもかかわらず、本発明者が仮定するものであって、それによって、本発明の範囲を制限することは望まないが、観察された効果が、錯体のMg及びCaイオンに対するEDTAの能力のためにそうなったもので、その結果、同じ結果がまた他の錯化剤により得られるべきである。第2の不利な点は、既知の方法の感度200pgmlが、約5の正常な対象において、PTX3タンパク質の測定のためには十分でないという事実で成っている。本発明者は、今回、その方法の感度が、75pgmlにまで、新しい単クローン抗体を用いること、ストレプトアビジンペルオキシダーゼの濃度を変えること及び異なる色素原を用いることによって、高められ得ることを見出した。したがって、本発明は、その1種の局面において、生物学的流体の試料におけるPTX3タンパク質のレベルを定めるための方法に関し、その方法は次の工程i96ウェルのELISAのプレートを、ラットの単クローン抗体を含有する100μlの溶液により被覆し、及び一夜の間、4°Cでインキュベートする工程ii次いで、プレートを、緩衝剤溶液及び非特異結合部位をブロックし得る溶液により洗浄する工程iii2時間の間の周囲温度でのインキュベーションの後、プレートを、再び洗浄緩衝剤により洗浄する工程iv繰り返して、50μlの、適切な媒体において希釈する標準組換えヒトPTX3又は試験下の生物学的流体の試料を、各ウェルにおいて配置し、及びプレートを2時間の間37°Cでインキュベートする工程vプレートを洗浄緩衝剤により繰り返し洗浄し、及び次いで洗浄緩衝剤における25ngmlのビオチン化した抗PTX3のラビットのIgGの100μlを、各ウェルに添加する工程viプレートを1時間の間37°Cでインキュベートし、及び次いで洗浄緩衝剤により繰り返し洗浄する工程vii100μlの希釈したストレプトアビジンペルオキシダーゼを各ウェルに添加し、及びプレートを1時間の間周囲温度でインキュベートする工程viiiプレートを洗浄緩衝剤により繰り返し洗浄した後、100μlの色素生産性基質を各ウェルに添加する工程ixプレートを短時間に周囲温度でインキュベートし、停止溶液を添加し、及びプレートを405nmで自動読取機により読み取る工程を含み改善は、工程において用いるラットの単クローン抗体が、ハイブリドーマMNB10ABCPD04001からのか、又はハイブリドーマPen3から得られる抗体であり工程において用いるストレプトアビジンペルオキシダーゼが18000に希釈され及び工程において用いる色素生産性基質がテトラメチルベンジジンであるという事実にある。好ましくは、工程において、ラットの単クローン抗体の溶液における濃度は、約700ngmlである。さらに、工程において用いる溶液は、有利には、被覆緩衝剤溶液から構成される。好ましくは、前記緩衝剤溶液は、15mMの炭酸塩緩衝剤を含有し、及びそのpHは96である。典型的には、工程において用いる緩衝剤溶液は、PBS005のトゥイーン20から構成される。有利には、前記溶液は、約300μlウェルの量において用いる。好ましくは、工程において用いる非特異結合部位をブロックし得る溶液は、PBS005トゥイーン20からなる緩衝剤溶液における粉乳の5溶液から構成される。有利には、非特異結合部位をブロックし得る前記溶液を、約300μlウェルの量において用いる。工程において特定する洗浄は、好ましくは3回繰り返し、各回数で約300μlの溶液を各ウェルについて用いる。好ましくは、工程において、用いる標準組換えヒトPTX3は、ウェルにおいて、75pgmlから12ngまでに増加する量で配置される。有利には、試験血漿試料を希釈するのに用いる媒体は、PBS2のBSA018のK3EDTAから構成される。この溶液におけるEDTAの存在は、極めて重要であり、その理由には、既に述べたように、本発明者によって、これが、遂行された希釈に比例するPTX3の測定を得ることができるようにすることを見出したからである。工程において用いるビオチン化した抗TPX3ラビットIgGは、好ましくは、MullerB等の前の引用箇所に従って得られる。また、工程において用いるストレプトアビジンペルオキシダーゼは、好ましくは、セイヨウワサビペルオキシダーゼ複合化ストレプトアビジンAmdex、Copenhagen、Denmarkである。典型的に、工程において用いる停止溶液は1M溶液のH2SO4である。有利には、工程において用いるTMB基質溶液は、会社のPharmingenのカタログ番号2642KKに相当する。他の局面において、本発明は、抗PTX3のラットの単クローン抗体を生産し得るハイブリドーマに関し、これは、前記ハイブリドーマが、MNB10ブダペスト条約に従い、ItalyのGenoa所在のAdvancedBiotechnologyCentreに160404付けで受託された、受託番号PD04001及びPen3ブダペスト条約に従い、イタリア国のジェノバ所在のアドバンスドバイオテクノロジセンタに02082001付けで受託された、受託番号PD01004を備える群より選ばれることにおいて特徴付けられる。前述のハイブリドーマの選定は、それが、本発明に従う抗PTX3ラット単クローン抗体を生産するもので、例えば、以下の例1において記載するもののような慣習的な方法によって実行することができる。別の局面において、本発明は、特異的な抗PTX3ラット単クローン抗体に関し、それは、前述のハイブリドーマMNB10及びPen3によって生産される単クローン抗体を備える群より選ばれる。特異的な抗PTX3ラット単クローン抗体の本発明のハイブリドーマからの調製は、特別な限定を被らず、及び例えば、以下の例2において記載するもののような慣習的な方法によって実行することができる。また別の局面において、本発明は、生物学的流体におけるPTX3タンパク質のレベルを定めるためのキットに関しており、それは、それが抗PTX3ラット単クローン抗体を含むことにおいて特徴付けられる。好適な態様において、PTX3タンパク質のレベルの決定は、心血管性及び又は脳血管性疾病を患うヒト個体の血清上でのそれらの死の危険性の早期診断について実行される。好ましくは、前述のキットはまた、抗PTX3ラビット多クローン性抗体を含む。有利には、前述のキットはまた、精製組換えPTX3タンパク質を含む。好適な態様では、前述のキットはまた、セイヨウワサビペルオキシダーゼと複合化したストレプトアビジンを含む。有利には、前述のキットはまた、洗浄緩衝剤溶液を含む。好ましくは、前述のキットはまた、アッセイすべき生物学的流体の試料のための希釈剤を含む。典型的に、前述のキットはまた、色素原として、テトラメチルベンジジンの溶液を含む。最後に、前述のキットには、停止溶液をも含めることができる。以下の図1及び次の例は、更に本発明を例証するのに役立つものであるが、それを制限するものではない。図1では、全血漿の希釈をx軸上に示す。光学密度をy軸上に示す。見ることができるように、心不全を有する患者の血清における検出可能なPTX3タンパク質のレベルは、全血漿希釈間隔の約14及び約116の間において、EDTAの不存在下、実際に存在するタンパク質のレベルよりも約3倍低い。しかし、EDTAの添加は、標準曲線のものに本質的に相当するレベルが得られることを可能にする。Lewisのラットを、200μgのPTX3により皮下に3回、15日の間隔で免疫化する。抗体の反応のELISAアッセイによっての評価後、融合を、最も高い抗体の表題を有する動物により遂行する。a予め免疫化したラットの脾臓を、滅菌条件下に取り出し、及び3回の10mlのDMEMにより洗浄し、プラスチック製ペトリ皿で3mlのDMEM培地を含有するものに移し、及び針を用いて脱凝集させ、及び又は注射筒ピストンにより押しつぶす細胞懸濁物を試験管に移し、DMEM培地により50mlにまで補い、及び70μmのスクリーンによりろ過して細胞凝集物を除去する脾細胞を2回の50mlのDMEM培地により洗浄するTurkにおいて計数する。b骨髄腫細胞は、対数増殖期でなければならず、及び停滞期であってはならない。細胞を2回の50mlのDMEM培地により洗浄する。それらを計数するcSP20の細胞を脾細胞に添加して、脾細胞及び骨髄腫の間での比率を得るDMEMにより50mlにまで補い、及び1700rpmで7分間遠心分離するパスツールピペットにより、上清を、それがすべて除去されるように取り除く沈降した細胞を撹拌し、試験管を指により振とうし、及び次いで37°Cに維持したDMEMにおける37PEGの06mlを添加するパスツールピペットにより、細胞を極めて緩徐に再懸濁させ、PEGを添加したときから2分待ち、及び次いで800rpmで6分間遠心分離する上清をパスツールピペットにより除去する。細胞を再懸濁し、試験管を緩やかに指により振とうし、及び37°Cに維持したDMEMを、少しずつ、20ml容量まで添加する1300rpmで10分間遠心分離する上清を除去し、及び細胞の塊を、極めて緩徐に、HATDMEMにより、パスツールピペットを用いて、再懸濁するそれらを、125×106×mlの濃度にまで希釈し、及び次いでそれらの02mlを平底の96ウェルのプレートにおいてウェル当りに播種し、ウェル当り25×105細胞を持つようにするプレートを37°Cでウェル加湿インキュベータにおいてインキュベートし、及びコロニーの存在を1週間後に検査する融合後7日に、培地を取り除き、及び200μlの新鮮HATDMEMを添加する融合後10日目及び15日目の間で選別を遂行する次いで、HTDMEM培地において陽性のハイブリドーマをクローン化し第2のクローン化後、HTDMEM培地をハイブリドーマについてのDMEMにより置換することができる。骨髄腫用培地ヒポキサンチンアミノプテリンチミジン骨髄腫用培地ヒポキサンチンチミジン3774gのPEGのcodeの33132を、パイレックス、FCSを含まない126mlのDMEMを添加し、及びよく混合する。02μmのフィルタによりろ過し、試験管当り1mlを等分し、及び冷蔵室において貯える。を用いる単クローン抗体の精製Ca及びMgを有するPBS450mlの蒸留水50mlのPBS3mlの1MのNaOHSepharoseProteinG4fastflow、cat、17061801樹脂を4回PBSにより、傾斜法又は軽微な遠心分離によって洗浄し、次いで、それを10にまでPBS01アジ化ナトリウムにより希釈し、及びそれを冷蔵室において貯えるグリシン01MのHCl緩衝剤pH28750mgのグリシンを100mlの蒸留水において溶解し、及びpH28にまで、280μlの37HClにより調節する15MのTRISHCl緩衝剤pH881817gのTRISを100mlの蒸留水において溶解し、及びpH88にまで37HClにより調節する1種の7mlプラスチック製のミニカラム。カラムで3ml容量にまで樹脂セファロースプロテインG4ファストフローを負荷する20mlのPBSにより、樹脂が乾ききらないように洗浄する腹水又は血清をPBSにより13に希釈し、及び02μmのフィルタ上でろ過する樹脂を4回通過させ、及びその最後で樹脂のレベルでの流れを停止させる30mlのPBSにより洗浄する9mlのpH28グリシンHCl緩衝剤を添加し、及び3種の試験管において溶出物を収集する直ちに、pH7にまで、100から150μlまでのpH88のTRISHCl緩衝剤を添加することによって調節する合計のタンパク質を測定し、及び必要なら、それらをCentriplus50又は100により濃縮するPBSに対して透析し、等分し、及び凍結する。96ウェルのELISAのプレート446612を、100μlの被覆緩衝剤溶液であって、精製したMNB10抗体を含有するものにより被覆し、及び一夜の間、4°Cでインキュベートしたプレートを、3回、300μlウェルの洗浄緩衝剤溶液により洗浄し、及び次いで300μlの洗浄緩衝剤であって、5粉乳を有するものを添加して、非特異結合部位をブロックした2時間の間の周囲温度でのインキュベートの後、プレートを、3回洗浄緩衝剤により洗浄した繰り返して、50μlの標準組換えヒトPTX3、及びPBS2BSA019K3EDTAにおいて希釈する試験下の血漿の試料を、各ウェルにおいて配置し、及びプレートを2時間の間37°Cでインキュベートしたプレートを5回洗浄緩衝剤により洗浄し、及び洗浄緩衝剤における25ngmlのビオチン化したラビットの抗PTX3のIgGの100μlを、各ウェルに添加したプレートを1時間の間37°Cでインキュベートし、及び次いで5回、300μlの洗浄緩衝剤により洗浄した100μlのセイヨウワサビペルオキシダーゼ複合化ストレプトアビジンのAmdexであって、18000に希釈したものを各ウェルに添加し、及びプレートを1時間の間、周囲温度でインキュベートしたプレートを5回洗浄緩衝剤により洗浄した後、100μlのTMBの基質溶液を各ウェルに添加したプレートを5分間の間、周囲温度でインキュベートした50μlの停止溶液を各ウェルに添加した405nmで吸光度を反応の停止から30分以内に読み取った。ヒトの生物学的流体においてPTX3のレベルを測定するためのキットは、次のものを含む1マイクロプレート12×8ウェルのラット抗PTX3抗体MNB10を被覆したもの。2リン酸塩緩衝剤溶液におけるビオチン化ラビット抗PTX3IgG。3リン酸塩緩衝剤溶液におけるセイヨウワサビペルオキシダーゼ複合化ストレプトアビジン。4標準品緩衝剤溶液において24、1、05、02及び005ngmlでの精製組換えPTX3。5洗浄緩衝剤溶液リン酸塩緩衝剤塩類溶液の溶液。6希釈剤リン酸塩緩衝剤塩類溶液の溶液における1ウシ血清アルブミン及び019K3EDTA。7基質005モルlのクエン酸塩緩衝剤における安定化した026mgmlのテトラメチルベンジジン及び001のH2O2。8停止溶液1MのH2SO4。