"被検体の狼瘡を処置するための方法であって、化合物Aを前記被検体に投与する工程を有する方法。請求項1記載の方法において、前記被検体はヒトである方法。請求項2記載の方法において、前記化合物Aは経口投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは一日一回投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは一日二回投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aはプロドラッグとして投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは約1mg/kg~約100mg/kgの範囲の用量で投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは約50mg/kg~約100mg/kgの範囲の用量で投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは約50mg/kgの用量で投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは約1mg~約1gの用量で投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは約5mg~約100mgの用量で投与されるものである方法。請求項3記載の方法において、前記化合物Aは約5mg~約30mgの用量で投与されるものである方法。請求項1~12のいずれか記載の方法において、前記被検体は処置の間に血清IL-12の減少を経験するものである方法。請求項1~12のいずれか記載の方法において、前記被検体は処置の間に腎臓pSTAT3の減少を経験するものである方法。請求項1~12のいずれか記載の方法において、前記被検体は処置の間に脾臓形質細胞の減少を経験するものである方法。請求項1~12のいずれか記載の方法において、前記被検体は処置の間に血清抗核抗体の減少を経験するものである方法。請求項1~12のいずれか記載の方法において、前記被検体は処置の間に血清IFNαの減少を経験するものである方法。請求項1~12のいずれか記載の方法において、前記被検体は処置の間にタンパク尿の減少を経験するものである方法。ループス腎炎を含む狼瘡の新たな処置の必要性が存在する。LL-PCを標的として減少させることができる狼瘡処置の必要性が特に存在する。化合物Aで被検体の狼瘡を処置するための方法が提供される。一実施形態において、被検体はヒトである。一実施形態において、化合物Aは経口投与される。一実施形態において、化合物Aは一日一回投与される。一実施形態において、化合物Aは一日二回投与される。一実施形態において、化合物Aはプロドラッグとして投与される。一実施形態において、化合物Aは約1mg/kg~約100mg/kgの範囲の用量で投与される。一実施形態において、化合物Aは約50mg/kg~約100mg/kgの用量で投与される。一実施形態において、化合物Aは約50mg/kgの用量で投与される。一実施形態において、化合物Aは約1mg~約1gの用量で投与される。一実施形態において、化合物Aは約5mg~約100mgの用量で投与される。一実施形態において、化合物Aは約5mg~約20mgの用量で投与される。一実施形態において、被検体は処置の間に血清IL-12の減少を経験する。一実施形態において、被検体は処置の間に腎臓pSTAT3の減少を経験する。一実施形態において、被検体は処置の間に脾臓形質細胞の減少を経験する。一実施形態において、被検体は処置の間に血清抗核抗体の減少を経験する。一実施形態において、被検体は処置の間に血清IFNαの減少を経験する。一実施形態において、被検体は処置の間にタンパク尿の減少を経験する。量、持続時間などのような測定可能な値に関して言及する時に本明細書において使用される場合、約という用語は、その値の合理的な変動、例えば、特定された値から±10などを含むように意図される。例えば、約50という語句は50の±10、すなわち45~55を含み得る。本明細書において使用される場合、被検体という用語は、ヒトを含む温血動物、好適には哺乳類を含む。好適な実施形態において、被検体は霊長類である。またさらに好適な実施形態において、被検体はヒトである。化合物Aを使用して被検体の狼瘡を処置するための方法が提供される。化合物Aは[8-4-メタンスルホニル-フェニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イル]-[3-4-メチル-ピペラジン-1-イル-フェニル]-アミンという化学名を有するJAK2インヒビタである。化合物Aは下記の構造を有する。本発明において使用される化合物Aはプロドラッグを含む任意の適切な化学的形態で投与されてもよい。適切なプロドラッグは親化合物の薬学的に許容可能な塩の形態を含む。好適には、プロドラッグは投与後に親化合物すなわち、化合物Aに転換する。本明細書において使用される通り、薬学的に許容可能な塩は親化合物の誘導体を指し、親化合物の誘導体においては、化合物の酸性塩または塩基塩を作ることによって化合物が変性させられる。薬学的に許容可能な塩の例は、塩基性アミン残基の鉱酸塩または有機酸塩を含むが、それらには限定されない。したがって、一実施形態において、化合物Aは親化合物の塩誘導体として投与される。一実施形態において、化合物Aは化合物Aの酸性塩として投与される。任意の適切な投与方法が使用されてもよい。例として、注入皮下、静脈、非経口、腹腔内、髄腔内など、経口、直腸、経粘膜、吸入、および経皮を含む。注入によって投与される時には、注入はボーラス投与または持続注入であり得る。化合物Aは、IV注入、または錠剤もしくはカプセルなどの経口投薬形態によって投与されるのが好ましい。例えば、化合物Aは無菌凍結乾燥粉末として提供されてもよく、無菌凍結乾燥粉末は、注入前に、例えば、注入のための無菌水、塩水溶液NaCl、またはマンニトール溶液で再構成されてもよい。したがって、一実施形態において、化合物Aは静脈IV注入によって投与される。別の実施形態において、化合物Aは経口投与される。一実施形態において、化合物Aは錠剤で経口投与される。別の実施形態において、化合物Aはカプセルで経口投与される。経口投与に関しては、化合物Aは当業者に周知の薬学的に許容可能な担体と化合物Aを組み合わせることによって容易に製剤化され得る。こうした担体は、化合物Aが、処置される被検体による経口摂取のために、錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリ、懸濁液、乳剤などとして製剤化されることを可能にする。経口使用のための薬学的製剤は、固体賦形剤と化合物Aを組み合わせ、選択的に、結果として生じる混合物を粉砕し、所望される場合には、錠剤または糖衣錠のコアを取得するために適切な補助剤を添加した後で顆粒の混合物を加工することによって取得されることができる。適切な賦形剤は、増量剤もしくは希釈剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、抗接着剤、流動促進剤、湿潤剤および界面活性剤、冷却剤および顔料、香味剤、甘味料、吸収剤、ならびに風味遮断剤を含む。希釈剤は典型的には、錠剤のサイズを増加させるために、わずかな量の活性薬物に添加される。最も一般的な希釈剤はラクトースであり、ラクトースはαラクトースまたはβラクトースという2つの異性体型で存在し、結晶質または非晶質のいずれかであり得る。様々な種類のラクトースは噴霧乾燥ラクトースモノハイドレート例えば、Super-Tab商標、α-ラクトースモノハイドレート例えば、FastFlo登録商標、無水α-ラクトース、無水β-ラクトース、および凝集ラクトースを含む。他の希釈剤は、圧縮糖NF、デキストロース賦形剤NF、およびデキストレートNFなどの糖を含む。好適な希釈剤はラクトースモノアンヒドリド例えば、FastFlo登録商標である。他の好適な希釈剤は微晶質セルロース例えば、Aviccl登録商標PHおよびCoolus商標、および超微小セルロース例えば、Elcema登録商標を含む。希釈剤はデンプンやデンプン誘導体を含んでもよい。デンプンは、小麦、とうもろこし、米、およびじゃがいもから取得された天然のデンプンを含む。他のデンプンは、事前にゼラチン化されたデンプンNF、およびデンプングリコール酸ナトリウムNFを含む。デンプンおよびデンプン誘導体は崩壊剤としても機能する。他の希釈剤は、2塩基性リン酸カルシウムUSP例えば、Di-Tab登録商標およびEmcompress登録商標、3塩基性リン酸カルシウムNF例えば、Tri-Tab登録商標およびTri-Cafos登録商標、および硫酸カリシウムNF例えば、Compactrol登録商標などの無機塩を含む。マンニトールUSP、ソルビトールNF、およびキシリトールNFのようなポリオールもまた希釈剤として働いてもよい。多くの希釈剤が崩壊剤や結合剤としても機能し、これらの追加の特性は処方物を開発する時に考慮に入れられなければならない。崩壊剤は、錠剤を破壊して、薬学的な活性成分の粒子と賦形剤とにするために錠剤処方物に含まれ、賦形剤は活性成分の溶解を容易にすると共に活性成分のバイオアベイラビリティを高める。デンプンのカルボキシメチルエーテルの架橋ナトリウム塩例えば、デンプングリコール酸ナトリウムNF、Explotab登録商標、およびPrimogel登録商標を含むデンプンおよびデンプン誘導体が有用な崩壊剤である。好適な崩壊剤はStarch1500登録商標などの事前にゼラチン化されたデンプンである。別の好適な崩壊剤は架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム例えば、クロスカルメロースナトリウムNF、Ac-Di-Sol登録商標である。他の崩壊剤は、架橋ポリビニルピロリドン例えば、クロスポビドンNF、微晶質セルロース例えば、Avicel登録商標PHを含む。結合剤は薬学的活性成分や他の賦形剤を凝集するための湿式造粒賦形剤として使用される。結合剤は粉末の流れを改善し成形性を改善するように選択される。結合剤は、微晶質セルロースNF、メチルセルロースUSP、カルボキシメチルセルロースナトリウムUSP、ヒドロキシプロピルメチルセルロースUSP、ヒドロキシエチルセルロースNF、およびヒドロキシプロピルセルロースNFなどのセルロース誘導体を含む。他の結合剤は、ポリビドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチンNF、天然ガム例えば、アカシア、トラガカント、グアー、およびペクチン、デンプンペースト、事前にゼラチン化されたデンプンNF、スクロースNF、とうもろこしシロップ、ポリエチレングリコール、およびアルギン酸ナトリウム、アンモニウムカルシウムアルギネート、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、ポリエチレングリコールを含む。好適な結合剤は、ポリビニルピロリドンであり、特にポリビドンUSPであり、好適にはポリビドンK-29/32である。潤滑剤は、パンチ面への錠剤の粘着を防ぐと共に圧縮段階の間に摩擦を減少させるために錠剤処方物において使用される。潤滑剤は典型的には、野菜油例えば、コーン油、鉱物油、ポリエチレングリコール例えば、PEG-4000およびPEG-6000、ステアリン酸の塩例えば、ステアリン酸カルシウムおよびフマル酸ステアリルナトリウム、鉱物塩例えば、タルク、無機塩例えば、塩化ナトリウム、有機塩例えば、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、およびオレイン酸ナトリウム、およびポリビニルアルコールを含む。好適な潤滑剤はステアリン酸マグネシウムである。糖衣錠のコアは適切なコーティングを提供されてもよい。この目的のために、濃縮糖溶液が使用されてもよく、濃縮糖溶液は必要に応じて、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および/または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい。染料または顔料は活性化合物の用量の異なる組み合わせを識別または特徴付けるために錠剤または糖衣錠のコーティングに添加されてもよい。経口的に使用されることができる薬学的製剤は、ゼラチンで作られた押込み式カプセルを含むだけでなく、ゼラチンと、グリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤とで作られたシールされた柔らかいカプセルを含む。押込み式カプセルは、ラクトースなどの増量剤、デンプンなどの結合剤、および/またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、選択的に安定剤を有する混合物中に化合物Aを含むことができる。柔らかいカプセルにおいて、化合物Aは、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体中で溶解または懸濁させられてもよい。また、安定剤が添加されてもよい。経口投与のための処方物全てがこうした投与に適した用量のものであるべきである。口腔内投与に関して、組成物は従来の方法で処方された錠剤またはトローチ剤の形態をとってもよい。吸入による投与に関して、化合物Aは、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオルエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体などの適切な高圧ガスを用いて、加圧パックまたは噴霧器からのエアロゾル噴霧提示の形態で送達されるのが便利である。加圧エアロゾルの場合、用量単位は測定した量を送達するための弁を提供することによって決定されてもよい。例えば、吸入具または吸入器における使用のためのゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、その化合物と、ラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末ベースとの粉末混合物を含んで処方されてもよい。化合物Aは、注入、例えば、ボーラス注入または持続注入による非経口投与のために処方されてもよい。注入のための処方物は、保存剤を添加された単位用量の形態、例えば、アンプルまたは多回投与容器で提示されてもよい。組成物は、油性または水性のビヒクル中の、懸濁液、溶液、または乳剤のような形態をとってもよく、懸濁剤、安定剤、および/または分散剤などの処方剤を含んでもよい。非経口投与のための薬学的処方物は水溶性形態の化合物Aの水溶液を含む。さらに、化合物Aの懸濁液は適切な油性注入懸濁液として調製されてもよい。適切な親油性溶媒またはビヒクルは、ごま油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームを含む。水性注入懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含んでもよい。選択的に、懸濁液は、高濃度溶液の調製を可能にするように化合物Aの可溶性を増加させる適切な安定剤または薬剤を含んでもよい。化合物Aは、使用前には、例えばピロゲンを含まない無菌水などの適切なビヒクルを用いた構成のために粉末の形態のものであってもよい。化合物Aはまた、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の座薬の基剤を含有する、座薬または停留浣腸などの直腸組成物に製剤化されてもよい。先に記載された製剤に加えて、化合物Aはまたデポ製剤として製剤化されてもよい。こうした長時間作用型製剤は、例えば、皮下または筋肉内植込みによって、または筋肉注射によって投与されてもよい。このように、例えば、化合物Aは、例えば、許容可能な油中の乳剤としての適切なポリマー材料または適切な疎水性材料、またはイオン交換樹脂と共に製剤化されたり、難溶性の誘導体、例えば、難溶性の塩として製剤化されたりしてもよい。リポソームと乳剤とは疎水性薬物に対する送達ビヒクルまたは担体の周知例である。ジメチルスルホイシドなどの特定の有機溶媒もまた利用されてもよいが、それらは通常非常に毒性があるという代償を伴う。さらに、化合物Aは治療剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスなどの徐放システムを使用して送達されてもよい。様々な形態の徐放性材料が確立されており、それらは当業者には周知である。徐放性カプセルは、それらの化学的性質に応じて、数時間から100日を超える期間の間、化合物Aを放出してもよい。薬学的組成物はまた適切な固相またはゲル相の担体または賦形剤を備えてもよい。こうした担体または賦形剤の例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーを含むが、それらには限定されない。化合物Aは、狼瘡を処置するために有効な量、すなわち、疾患の症状を妨げ、緩和し、または改善するために有効な量、処置される被検体の生存を延ばすために有効な量、および/または被検体における狼瘡関連バイオマーカに好ましい影響を与えるために有効な量で投与される。化合物Aの有効量の決定は本明細書において提供される詳細な開示や実施例を鑑みた当業者の能力の充分な範囲内である。有効量は、被検体の大きさ、狼瘡疾患の重篤度、投与の頻度例えば、一日に複数回に対して一日一回、化合物の投与の方法、被検体の健康状態や共存症の状態、例えば、同じ薬物または同様な薬物を用いる処方する医師の判断や経験、投与の方式、投与される剤形のバイオアベイラビリティ特性、選択された用法、および併用療法の種類例えば、グルココルチコイドなどの要因に従って変化し得る。例えば、単独療法のための化合物Aの有効量は、化合物Aが他の狼瘡治療と組み合わせて共に使用される時に有効である化合物Aの量よりも多い用量であり得る。有効な用量はインビトロまたは動物モデルの試験系から導き出される用量反応曲線から推定されることができ、有効な用量は被検体の表面積または体重に基づいてもよい。化合物の最適な用量未満である少ない用量で処置を始めることができる。その後、現状で最適な効果に到達するまで、わずかな増分で用量を増加させることができる。一日分の総用量は、所望される場合には、その日の間に、ポーションに分割されて投与されてもよい。用法を最適化するために、化合物Aの有効性が処置を受けている被検体内の様々なバイオマーカに対する処置の効果をモニタリングすることによってモニタリングされることができる。有用なバイオマーカは本明細書の実施例に列挙されるものを含む例えば、抗核抗体、IFNαおよびIL-12などのサイトカイン、タンパク尿、JAK2インヒビタなど。狼瘡処置の有効性をモニタリングするために特に便利な2つのバイオマーカはタンパク尿および抗核抗体である。有効な用量の化合物Aは処置前のバイオマーカのレベルと比較して所望の方法でバイオマーカを変化させる例えば、タンパク尿を減少させ、抗核抗体を減少させ、pSTAT3を減少させるなどである。こうして、化合物Aの有効な用量は、少ない用量で開始して、これらのバイオマーカのうちの1つ以上をモニタリングしながら徐々に増やすことによって最適化されることができる。概して、治療を開始する前に患者からのバイオマーカ例えば、タンパク尿または抗核抗体の最初の評価と、処置の間の異なる時点における1つ以上の追加の評価とを取得することが好ましい。こうした用途において、治療前のベースライン決定が決定され、それからバイオマーカ例えば、タンパク尿または抗核抗体の変化が治療の流れの間に決定される。あるいは、2つ以上の連続した決定が処置前ベースライン測定を必要とすることなく処置の間に行われることができる。こうした用途においては、バイオマーカ例えば、タンパク尿または抗核抗体の最初の評価が、レベルが増加しているか、または減少しているかを決定するためのベースラインレベルとして被検体から行われるべきである。好適な実施形態において、化合物Aを用いた処置を受けている被検体は狼瘡疾患と関連付けられる1つ以上のバイオマーカの望ましい変化を経験する。狼瘡と関連付けられる適切なバイオマーカは、リンパ腺腫、脾腫、脾臓の白血球数、血清IL-12、血清C3、腎臓糸球体細胞充実度、腎臓間質浸潤、腎臓pSTAT3、脾臓形質細胞、血清抗核抗体、血清抗dsDNA抗核抗体、血清IFNα、タンパク尿、肺浸潤物、血清IL-17A、血清IL-6、血清CCL3/MIP-1α、血清CXCL10/IP-10、血清CXCL9/MIG、血清IL-4、血清IL-13、血清TNFα、血清KC/IL-8、および血清CTxを含む。したがって、一実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間にリンパ腺腫の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に脾腫の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に脾臓の白血球数の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清IL-12の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清C3の増加を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に腎臓糸球体細胞充実度の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に腎臓間質浸潤の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に腎臓pSTAT3の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に脾臓間質細胞の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清抗核抗体の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清抗ds-DNA抗核抗体の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清INFαの減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間にタンパク尿の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に肺浸潤物の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清IL-17Aの減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清IL-6の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清CCL3/MIP-1αの減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清CXC10/IP-10の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清CXC9/MIGの減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清IL-4の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清IL-13の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清TNFαの減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清KC/IL-8の減少を経験する。別の実施形態において、被検体は化合物Aを用いた処置の間に血清CTxの減少を経験する。化合物Aの投与レジメンは、剤形の薬物動態、処置または阻害される狼瘡症状の種類、被検体の大きさ、狼瘡疾患の重篤度、および有効用量などの要因に従って変化し得る。化合物Aの投与のタイミングは、上記の考慮や本発明の詳細な開示を鑑みて有効性を最適化したり副作用を最小化したりするように、処置する医師によって容易に変更されることができる。本発明に従った化合物Aに対する投薬スケジュールには広い柔軟性がある。特定の実施形態において、特定の実施形態において、投薬スケジュールは他のJAKインヒビタに適していることが公知の投薬スケジュールから適合させられることができる。例えば、JAKインヒビタであるタソシチニブCP-690550やINCB028050がそれぞれ、二日ごとに5mg~30mgの用量、または一日ごとに4mg~10mgの用量で関節リウマチに有効であることが示されたCoombs、J.H.etal、2010;www.medpagetoday.com/MeetingCoverage/ACR/23308。従来技術のJAKインヒビタが関節リウマチを処置するために使用され、狼瘡を処置するために使用されなかったとしても、比較は可能である。なぜならば、有効なJAKインヒビタは両方の疾患を処置する能力があるからである。化合物Aは任意の適切な用量で投与されてもよい。一実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約0.01mg~約1gの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約0.1mg~約200mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約1mg~約500mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約1mg~約100mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約10mg~約200mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約10mg~約100mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約25mg~約150mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約50mg~約100mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約55mg~約100mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約1mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たりの約5mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約10mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約50mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは体重1kg当たり約100mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約0.1mg~約1gの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約0.5mg~約500mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約1mg~約100mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約5mg~約50mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約5mg~約30mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約5mg~約20mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約1mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約5mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約10mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約20mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約30mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約40mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約50mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約100mgの用量で投与される。別の実施形態において、化合物Aは約200mgの用量で投与される。上記の用量は化合物Aを投与するあらゆる方法に適し、特に経口投薬に適している。化合物Aは任意の適切なスケジュールに従って上記の用量で投与されてもよい。化合物Aの投薬量は一定であるか、または投薬スケジュールの範囲内で変化されるかであり得る。a所望のバイオマーカの変化が観察されない場合、またはb顕著な薬物関連毒性が観察される場合でなければ、化合物Aの用量は、スケジュールの間、一定のレベルで維持されてもよく、aの場合には、次の用量が例えば約20~30だけ増加させられることができ、bの場合には、次の用量が例えば約20~30だけ減少させられることができる。適切な化合物Aのスケジュールは典型的には月一回の投薬から一日に複数回の投薬の範囲である。好適な実施形態において、化合物Aは一日一回投与される。別の実施形態において、化合物Aは週一回投与される。別の実施形態において、化合物Aは一日に二回投与される。別の実施形態において、化合物Aは一日に三回投与される。別の実施形態において、化合物Aは一日に四回投与される。1つ以上の追加の狼瘡処置を化合物Aの投与と組み合わせて使用することができる。こうした処置は狼瘡薬剤を含み、狼瘡薬剤は、グルココルチコイド、ヒドロキシクロロキン、ミコフェノール酸モフェチルMMF、アザチオプリンAZA、およびシクロホスファミドCTXを含むが、それらには限定されない。これらの薬剤の適切な用量は当該分野において周知である。材料および方法動物狼瘡になりやすい6週齢のメスのMRL/lprJacksonLabs、第000485号のマウスと狼瘡になりにくい対照のMRL/MpjJacksonLabs、第000486号のマウスとを生後6週間でJacksonLaboratoriesメイン州BarHarborから取得した。SLEになりやすい自然発症NZBWF1/JNZMカタログ番号第100008号のメスのマウスと実験の時間からの範囲内で狼瘡になりにくいNZW/LacJカタログ番号第001058号のメスのマウスとを生後15週間でJacksonLaboratoriesメイン州BarHarborから取得した。全てのマウスを24時間の明暗周期で維持し、食料や水を自由裁量で入手可能にした。全ての実験動物の手順は、Cephalon,IncのInstitutionalAnimalCareandUseCommitteeIACUCの規制、承認されたIACUCプロトコルの第03-040号および第03-03-041号によって承認され、そしてそれらに従った。MRL/lprマウスは、一次リンパ組織と二次リンパ組織とにおける自己反応性T細胞および自己反応性B細胞の適切なアポトーシスを妨げる不活性Fas分子中枢性寛容機構と末梢性寛容機構との両方における欠陥によって迅速なリンパ増殖性疾患にかかる。この障害のある寛容機構により、末梢に入る全T細胞および全B細胞のうちの一定の割合が、自己タンパク質/組織に反応する可能性が高いので、若年期に自己免疫を起こす。MRL/lprモデルのマウスはいくつかの慢性炎症疾患の様な症状にかかり、それらは、抗核抗体の発生、関節炎、皮膚科的兆候、タンパク尿をもたらし最終的に死をもたらす免疫複合体媒介性糸球体腎炎を含む早期狼瘡および末期狼瘡の特性である。あまり特徴付けられていない現象はCNSおよび心臓の症状であり、それらの両方ともヒトにおいてはより一般的である。これまでの最適化の研究や妥当性の研究が、疾患は罹患したMRL/lpr動物だけに現れ、対照マウスであるMRL/Mpには現れないことと、抗核抗体ANAが第4週から第12週の間に迅速に形成し、第18週から第25週程度でループス腎炎の発症をもたらし、タンパク尿が存在することとを明らかに示した。致死率はメスにおいて高く、生後約25週間で生じ、直腸疾患は、糸球体腎炎、糸球体浸潤物、硬化症、および血管炎を含む。皮膚炎と関連付けられる脾腫とリンパ腺腫との両方もまた観察されることができる。NZM種は遺伝的な進行性全身性紅斑性狼瘡SLEのマウスモデルとして働く。NZMマウスにおける疾患の展開は異常なポリクローナルB細胞活性によって特徴付けられ、DNAや他の核抗原に対する自己抗体、および細胞骨格タンパク質に対する自己抗体を含む様々な自己抗体を多く作り出す。循環する免疫複合体の増加が高齢のマウスにおいて致命的な糸球体腎炎をもたらし得る。化合物A化合物Aを以下で記載される5工程の方法と類似した方法で調製した国際出願第PCT/US01/37363号の実施例35を参照されたい。工程1:メタノール約25mL中の1-3-ブロモ-フェニル-ピペラジン約1gと酢酸約0.4mLとの溶液に水/メタノール中で37のホルムアルデヒド約56.7:37:6.3、水:ホルムアルデヒド:メタノール、約5mLを添加する。混合物を約18時間室温で攪拌する。懸濁液を氷/水浴中で約5°Cに冷却し、シアノ水酸化ホウ素ナトリウム約5gを小分けにして添加する。混合物を攪拌して約18時間室温まで温める。混合物を飽和含水塩化アンモニウム約200mLの中にゆっくりと注ぎ、約1時間攪拌する。混合物をジクロロメタンで抽出する約75mLで3回。組み合わされた有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過して蒸発させる。1-3-ブロモ-フェニル-4-メチル-ピペラジンを淡黄色油約1gとして生じさせるように、材料を約18時間高真空下に置く。1HNMR400MHz,CDCl3,δ,pm:7.10dd,=8.2,8.2Hz,1H,7.04dd,J=2.1,2.1Hz,1H,6.95ddd,J=7.8,1.7,0.7Hz,1H,6.83ddd,J=8.3,2.4,0.6Hz,1H,3.23-3.18m,4H,2.58-2.54m,4H,2.35s,3H.MS=255,257MH。工程2:1,4-ジオキサン約100mL中の3-ブロモ-ピリジン-2-イルアミン約10gの溶液にエトキシカルボニルイソチオシアネート約7mLを滴下添加する。混合物を約18時間窒素雰囲気の下で攪拌する。揮発性物質を蒸発させて、ろう様固体を生じさせる。回収した材料をヘキサン約250mLで圧潰する。N-3-ブロモ-2-ピリジニル-N’-カルボエトキシ-チオ尿素を単離し、さらに精製することなく使用する。1HNMR400MHz,D3C2SO,δ,ppm:11.46s,1H,11.43s,1H,8.49dd,J=4.6,1.5Hz,1H,8.18dd,J=8.0,1.5Hz,1H,7.33dd,J=8.0,4.7Hz,1H,4.23q,J=7.1Hz,2H,1.27t,J=7.2Hz,3H.MS=215MH。工程3:メタノール約70mLとエタノール約70mLとの混合物中のヒドロキシルアミンヒドロクロリド約17gとN,N-ジイソプロピルエチルアミン約26mLとの攪拌した懸濁液にN-3-ブロモ-2-ピリジニル-N’-カルボエトキシ-チオ尿素を添加する。混合物を室温で約2時間攪拌して約18時間約60°Cに加熱する。懸濁液を室温まで冷却し、濾過し、そしてメタノールですすぎ、水ですすぎ、それからメタノールですすぐ。8-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イルアミンをオフホワイト固体約8gとして単離する。1HNMR400MHz,D3C2SO,δ,ppm:8.58d,J=6.4Hz,1H,7.73d,J=7.6Hz,1H,6.80t,J=7.0Hz,1H,6.25s,2H.MS=213,215MH。工程4:オーブン乾燥チューブを酢酸パラジウム約0.2gとトリフェニルホスフィン約0.6gで満たす。チューブを高真空下から取り除き、約5分間窒素流の下でバックフラッシュする。1,4-ジオキサン約10mLなどの適切な溶媒を添加し、混合物を適切な時間例えば、約10分間窒素の下で攪拌する。8-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イルアミン約0.75gと、4-メチルスルホニルフェニルボロン酸約1gと、N,N-ジメチルホルムアミド約10mLなどの適切な溶媒と、水約10mL中で約1.5Mの炭酸ナトリウムなどの適切な塩基とを添加する。窒素の下で約2分間室温で混合物を攪拌して、チューブをシールし、約18時間約80°Cで加熱した。混合物を丸底フラスコに移し、揮発性物質を減圧下で蒸発させる。製品を適切な方法で単離する。例えば、水約100mLを添加して混合物を攪拌してもよい。次に濾過によって固体を収集し、選択的に水ですすぎ、空気乾燥させ、エーテル/ジクロロメタン約4:1、約10mLで圧潰し、濾過してエーテルですすいでもよい。8-4-メタンスルホニル-フェニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イルアミンを黄褐色固体約0.6gとして単離する。MP=236~239°C。1HNMR400MHz,D3C2SO,δ,ppm:8.63d,J=6.3Hz,1H,8.38d,J=7.9Hz,2H,8.03d,J=7.9Hz,2H,7.84d,J=7.3Hz,1H7.03t,J=7.0Hz,1H,6.21brs,2H,3.28s,3H.MS=289MH。工程5:オーブン乾燥チューブに酢酸パラジウム約10mgと、2,2’-ビス-ジシクロヘクシルホスファニル-ビフェニル約30mgと、8-4-メタンスルホニル-フェニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イルアミン約75mg、1-3-ブロモ-フェニル-4-メチル-ピペラジン約80mg、炭酸セシウムなどの適切な塩基約270mgと、1,4-ジオキサンなどの適切な溶媒約5mLを添加する。チューブを取り外し、窒素で三回バックフラッシュする。チューブをシールし、約72時間80°Cで加熱する。混合物を室温まで冷却し、製品を適切な方法で単離する。例えば、冷却した混合物をジクロロメタン約10mLで希釈し、珪藻土のプラグを通して濾過し、ジクロロメタンですすぎ、蒸発させてもよい。次に、例えばISCO自動生成装置例えば、アミン変性シリカゲルカラムでは、ヘキサン中で5から100のエチルアセテートを使用して、例えば、クロマトグラフィを介して材料を精製してもよい。[8-4-メタンスルホニル-フェニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリジン-2-イル]-[3-4-メチル-ピペラジン-1-イル-フェニル]-アミンすなわち、化合物Aを黄色固体約0.07gとして単離する。MP=232~234°C。1HNMR400MHz,CDCl3,δ,ppm:8.49d,J=7.2Hz,1H,8.2d,J=7.5Hz,2H,8.08d,J=7.9Hz,2H,7.65d,J=7.7Hz,1H,7.38s,1H,7.27-7.20m,1H,7.04-6.95m,2H,6.84s,1H,6.60d,J=8.0Hz,1H,3.30-3.25m,4H,3.10s,3H,2.63-2.58m,4H,2.38s,3H.MS=463MH。フローサイトメトリフローサイトメトリに使用される抗体は、抗マウスCD138-APCeBioscience、カリフォルニア州SanDiegoと、抗マウスCD19-FITCeBioscience、カリフォルニア州SanDiegoと、抗マウスCD38-PEeBioscience、カリフォルニア州SanDiegoと、抗マウスCD45R/B220-CyceBioscience、カリフォルニア州SanDiegoと、ラットIgG1-APCアイソタイプ対照eBioscience、カリフォルニア州SanDiegoと、ラットIgG2a-PEアイソタイプ対照eBioscience、カリフォルニア州SanDiegoとから成った。AccuriC6フローサイトメータを使用して全てのサンプルを分析した。全てのElispot実験に対する脾細胞のエキソビボ培養を含む全ての実験に対して完全培地を使用した。完全培地は、RPMI1640Cellgro、バージニア州Manassasに加えて、1のPen-StrepCellgro、バージニア州Manassas、1のL-GlnCellgro、バージニア州Manassas、1のNEAACellgro、バージニア州Manassas、β-MECellgro、バージニア州Manassasに加えて、10のFBSCellgro、バージニア州Manassasから成った。先に公開された報告書Neubert、Meisteretal.、2008において使用されたように、洗浄したRCB溶解脾細胞を形質細胞マーカの目的で染色した。本明細書において使用される場合、形質細胞という用語は下記の免疫表現型の定義を指す。MRL/lprモデルに対する生きたCD19陰性、CD45R/B220陰性、CD138陽性、CD38陽性の結果として形質細胞を定義した。チューブ/サンプル当たりで合計200,000~500,000の結果を収集した。不充分なサンプルは骨髄における形質細胞の決定を限定した。フロー染色プロトコルは以下の通りであった。簡潔に言うと、完全培地上で定義済みと、抗CD19-FITC抗体、抗CD38-PE抗体、抗CD45R/B220-Cyc抗体、および抗CD138-APC抗体を有する2.5μgの抗CD16/CD32FcBlockとに細胞を懸濁した。氷の上での染色後20分で、サンプルを洗浄して固定した。以下で記載される通り、整合した適切なアイソタイプを用いて全てのサンプルを複製した。血清サイトカインサンプルのLuminex分析サイトカイン分析のための血清サンプルの処理のために、-80°Cの凍結した血漿を氷上で解凍し、ボルテックスし、デブリや凝集物を取り除くために10分間遠心分離した。製造元の指導に従ってLuminex登録商標アッセイのために合計25μL~50μLの血清を使用した。マウスサイトカイン10-plexビーズキットInvitrogen、カリフォルニア州Carlsbad、第LMC0001号を使用して10種類の異なるマウスサイトカインを測定した。簡潔に言うと、200μLの洗浄溶液キットの構成要素でフィルタプレートMillipore、メイン州Billerica、第MAIPSWU10号を事前に濡らし、ウェルごとに25μLのビーズを添加した。血清サンプルを希釈し、50μLの合計量すなわち、製造元によって提供されるような25μLのアッセイ希釈剤に加えた25μLのサンプル血清をウェルごとに添加した。ビーズを有するプレートを暗闇でオービタルシェーカ上で室温RTで2時間インキュベートした。インキュベーションの終わりに、キットのバッファ中でプレートを二回洗浄し、キットと共に提供されたビオチン希釈剤中に1:10100μLの希釈度で二次ビオチン化抗体を添加した。暗闇で室温で一時間プレートをインキュベートして、キットのバッファ中で二回洗浄した。アッセイ希釈剤中のストレパビジンをウェルごとに100μLで添加して、暗闇で室温で30分インキュベートした。プレートを三回洗浄して、100μLのキットの洗浄溶液を添加し、暗闇で室温で2分~3分間かき混ぜた。データ獲得分析ソフトウェアを有するLuminexxMAP200装置Invitrogen、カリフォルニア州SanDiego、第MAP0200号上で、このインキュベーション期間の直後にプレートを走らせた。真空マニフォルド装置Pall、ミシガン州AnnArbor、第5017号を使用して全てのビーズ洗浄を行った。全てのサイトカインLuminexアッセイに関して、基準に沿った最低点または製造元によって設定された検知の限界を下回る値を範囲外と考え、推測しなかったが、特定のアッセイに対する標準曲線に沿って最低点を想定した。尿分析全タンパク質の回収と分析とのために尿サンプルを酸沈殿させた。充分な尿が残されたサンプルをUristix登録商標白血球尿分析MRL/lpr調査のみのために使用した。簡潔に言うと、標準的なタンパク質溶液を正常なマウス血清から調製し、混濁度によるマウスタンパク尿アッセイのための基準として使用した。標準的な調製は以下のとおりであった。0μL、5μL、10μL、15μL、20μL、30μL、40μL、および50μLの、キットにおいて提供された場合、4mg/mLのマウス血清標準タンパク質溶液を全く同様に2つのカラムに添加した。最終的な量を50μLに調節するために個々のウェルにPBSを添加した。尿サンプルの調製のために、卓上微小遠心分離器を使用して3分間9880×gで尿サンプルを遠心分離した。尿の上清1μL~50μLを全く同様に添加した。合計50μLに量を調節するためにPBSを添加した。懸濁度アッセイのために、空のカラムの中に25μLの0.1NのHClを添加し、テストカラムの中に250μLの3のスルホサリチル酸を添加した。10分間室温でマイクロプレートをインキュベートし、450nmの単一ビームを有するELISAリーダを使用してプレートを読み取った。Uristix登録商標ストリップアッセイのために、ストリップを並べてラベル付けした。20マイクロリットルの尿を各テストストリップの正方形上に配置し、結果を記録する前に少なくとも30秒インキュベートした。全尿分析プレートに基づいた全てのアッセイに関して、基準に沿った最低点または製造元によって設定された検知の限界を下回る値を範囲外と考え、推測しなかったが、その特定のアッセイに対する標準曲線に沿って最低点を想定した。組織構造組織構造分析のために、左腎および肺NZMモデルのみを各動物から取り出し、オービタルロッカ上で48時間25°Cで10緩衝中性10ホルマリンEMD中に固定して、dH2Oを流して一晩洗浄し、処理する準備が整うまで4°Cで70エタノール中に保存した。組織構造分析に使用される腎臓染料は、ヘマトキシリンおよびエオシンHEと、過ヨウ素酸シッフPASと、トリクロム染色WistarInstitute、ペンシルバニア州Philadelphiaとを含んだ。病理学者が3つ全ての染色切片を採点の目的で使用した。組織構造の採点の全てが独立委員会の認定を受けた獣医学病理学者によって盲検で行われたJulieEngiles、VMD、DACVP;UniversityofPennsylvania。得点値を決定するために複数の染料を使用した。図8、図19、および図20の画像は、病理学者によって盲検で選択された切片の最も悪い影響を受けた範囲を示す。腎臓IC-GN採点方法Smith、Dongetal.、20071.糸球体細胞充実度-得点1-5:ゼロ、低度、中度、高度、重度2.糸球体壊死-得点1-5:ゼロ、低度、中度、高度、重度3.糸球体硬化症-得点1-5:ゼロ、低度、中度、高度、重度4.間質浸潤-得点1-5:ゼロ、低度、中度、高度、重度5.尿細管萎縮-得点1-5:ゼロ、低度、中度、高度、重度6.間質線維症-得点1-5:ゼロ、低度、中度、高度、重度7.血管炎-得点1-5:ゼロ、低度、中度、高度、重度特定の病理学者の定義壊死を示す、糸球体係蹄内の核デブリ/核濃縮の存在によって壊死を定義した。多くのサンプルにおいて、これは糸球体係蹄のほんのわずかの部分だけの非常に軽く珍しい発見であった。PAS陽性トリクロム陰性材料の壊死によって糸球体係蹄の消失も考えられた。糸球体係蹄または糸球体嚢の中の繊維増殖または線維症の増加によって糸球体壊死を定義した。時には糸球体壊死は糸球体変化の最終段階と考えられるが、本明細書においては、糸球体壊死は糸球体壊死として活性な進行性線維症を示す糸球体壊死として分類される。腎尿細管上皮の内腔直径および/または平坦化の増加、または細管の脱落によって尿細管萎縮を分類した。炎症性浸潤物として間質浸潤を考えた。血管炎-非炎症性変性/増殖性の脈管の病状を考慮に入れるためのより緩やかな血管炎の定義。脈管変化の大部分は軽く、平滑筋細胞の増殖と細胞外マトリックスのヒアリン化とによって特徴付けられる動脈硬化と考えられることができた。この変化は糸球体の病状に付随する高血圧を反映することがあり得る。非常にわずかの動物において、あきらかな血管炎が存在した。大部分の炎症性の変化は血管壁の範囲内であり、上皮には損傷がほとんどないか、または全くなく、明らかな出血/フィブリンの漏れもなかった。多くの炎症性の変化は繊維芽細胞の血管周囲縁も有する。薬力学PD分析118日目NZMモデルまたは98日目MRL/lprモデルに最後の用量の投与後三時間で脾臓と腎臓とを収集し、冷却したイソペンテンを用いてドライアイス上で急速冷凍し、-80°Cで保存した。溶解した脾臓と腎臓とを下記のプロトコルを使用して処理した。組織抽出試薬IInvitrogen、第FNN0071号中のプロテアーゼインヒビタカクテルCalbiochem、第539136号とHaltホスファターゼインヒビタカクテルThermoscientific、第78420号またはRocheホスファターゼインヒビタカクテルRoche、第04906837001号とを組み合わせることによって調製した、700マイクロリットルの組織抽出バッファを各サンプルに添加した。PT10-35PolytronホモジナイザVWR、第97036-082号を使用してサンプルを均質化して凍結した。均質化の後、10分間2000×gで4°Cにてサンプルを遠心分離し、15分間14,000×gの最高速度で4°Cにて上清を再遠心分離した。脂質/脂肪のデブリの上部層を取ることを避けるために注意深く上清を取り除いた。BCAタンパク質アッセイPierce、第83228号を使用してタンパク質濃度を3mg/mlに調節した。Luminex登録商標3-plexビーズキットInvitrogenを使用して脾臓JAK/STATpSTAT1/3/5a/bの活動を分析した。製造元の指示に従って両アッセイを行った。薬物動態PK分析化合物濃度を決定するための定量分析のために、血漿サンプル、腎臓サンプル、および脾臓サンプルを提出した。ヘパリン化チューブの中に血液サンプルを収集し、血漿を分離するために遠心分離16,000×g、5分間するまで氷の上に配置した。分析の間、上清を収集し、-20°Cで保存した。分析の時に、内部標準物質アルプレノロールを含有する2つの量の冷たいアセトニトリルを各サンプルに添加し、次に、それらのサンプルをボルテックスし、遠心分離した。上清を取り除き、オートサンプラーバイアルの中に配置し、液体クロマトグラフ/質量分光法LC-MS-MSによってサンプル中に存在する化合物の量を分析した。5ng/mL~20000ng/mLの濃度範囲で連続希釈法を介して行われた、ビヒクルだけすなわち、そのテストした種のビヒクルグループに由来するビヒクル対照の脾臓または腎臓のいずれかの標準曲線組織特異的に対してサンプル中の化合物濃度を定量化した。標準曲線の最高点よりも10を超えて高い濃度を含むサンプルをアセトニトリルで1:10に希釈した。血漿、腎臓、および脾臓に対する検知の限界は10ng/mL未満であった。抗核抗体ANAELISAアッセイあつらえて自家作成したELISAアッセイによって抗dsDNAと抗Smith抗原抗体との測定を行った。InovaDiagnostics,Inc.からクロマチン被覆プレートを購入した。抗dsDNAと抗SmithAg抗体とのそれぞれの検知のための被覆抗原として、精製ウシ胸腺dsDNASigma、ミシガン州St.Louisまたは精製ウシSmith抗原GenWay、カリフォルニア州SanDiegoを使用した。被覆したプレートをホウ酸塩硫酸塩食塩水BSSで洗浄し、1のウシ血清アルブミンBSAと0.1のTween-20界面活性剤とを含有するBSSでブロッキングした。マウス抗クロマチン抗体Sigma、2B1または25週齢のMRL/lpr血清を使用して標準曲線を生成した。マウス抗dsDNA抗体Abcam、マサチューセッツ州Camridgeまたはマウス抗Smith抗原抗体Abcamを各アッセイの基準として使用した。二次抗体をAbcamから購入しヤギ抗マウスpAb-HRP、基質をRocklandペンシルバニア州Gilbertsvilleから購入しTMB、20mLのdH2Oに対して1mLの濃縮硫酸を使用して反応停止バッファを生成した。570nMの基準波長を用いて450nMで読み取るVictor-X4分光光度計を使用して、発色させたプレートを読み取った。全てのANAELISAアッセイに関して、基準に沿った最低点または製造元によって設定された検知の限界を下回る値を範囲外と考え、推測しなかったが、その特定のアッセイに対する標準曲線に沿って最低点を想定した。抗体分泌B細胞ElispotアッセイB細胞ElispotコンポーネントをMabTechスウェーデン、NackaStrandに注文し、ニトロセルロースIPフィルタプレートをMilliporeマサチューセッツ州Billericaに注文した。精製ウシ胸腺dsDNASigma、精製ウシSmith抗原GenWay、または溶解したニワトリ赤血球細胞Rockland、ペンシルバニア州Gilbertsvilleに由来する煮沸し濾過した精製ニワトリクロマチンのいずれか10μg/mLでElispotウェルを被覆した。ガラス均質化を使用して脾臓を処理し、60μmの滅菌細胞ストレーナを通して濾過し、BioLegendカリフォルニア州SanDiego溶解バッファを使用して赤血球細胞RBCを溶解した。処理した脾細胞を培養培地の各ウェルに添加した。抗体を分泌する細胞種ASCの正確な生体外個体数の非対称性を回避するために、ポリクローナルミトゲン様LPSで細胞を刺激しなかったが、本物の生体外抗体放出のモニタリングを可能にするように培地のみでインキュベートした。全てのIgG産出ASCに対する陽性対照として、抗マウスpan-IgGを使用し、結果を正規化するために使用した。各モデルに対する初期テスト段階で各抗原に対する個体数を同定した。クロマチンおよび全IgGのみに関しては、各ウェルに30,000個の脾細胞を添加した。Smith抗原およびdsDNAに関しては、各ウェルに500,000個の細胞を添加した。ウェルごとの点出現率の飽和限界により、異なる抗原に対して異なる数の脾細胞を添加した。これらの制約は以前に確立された。B細胞Elispotを37°Cで一晩インキュベートした。各アッセイを展開するために、各ウェルに二次抗体を添加し、インキュベートし、洗浄し、アルカリ性ホスファターゼストレパビジンを共役体として使用し、使用した基質はBCIP-NBTだった。点が見えるまでプレートを発色させた。ImmunospotC.T.L.スキャナおよびBiospotソフトウェアCellularTechnologyLtd.、オハイオ州ShakerHeightsを使用して全てのElispot分析を行った。培地と細胞とだけのウェルを減じた値として結果を示した。統計分析GraphPadPrism5.0ソフトウェアを使用して全ての統計を行った。両側Mann-Whitneyまたはペアスチューデントt-検定生存データ図面の説明で述べられている場合のいずれかを使用して、研究終了時分析を行った。時間の経過に伴う変化を示すグラフに関して、グループ間で比較するために一次元配置分散分析を使用した。比較のためのグループ間の割合変化に関して、研究終了時測定に関して特に断りがない場合には、割合の差に関してビヒクルと比較して各パラメータに対して濃度曲線下面積AUCを決定した。実施例化合物AはMRL/lprマウスにおいて狼瘡を効果的に処置するプロトコルMRL/lprマウスを最初に無作為化し、初期出血を収集し、ベースライン測定のために体重を記録した図1。全ての個々のマウスの耳にタグ付けし、実験全体を通してモニタリングした例えば、グループ番号-ケージの文字-マウス番号、したがって、3B5=グループ3G3、ケージB、マウス番号5。マウスは同齢であり、6週齢から8週齢で処置を開始した。ほおの出血および尿の収集を実験全体を通して毎週続けた。サイトカインやANAのレベル、タンパク尿、体重、リンパ腫、一般的な健康状態、および死亡率を含むいくつかのパラメータに関してマウスを個々に追跡した。死亡率を除いた全てのパラメータを2カ月ごとに評価し、死亡率は毎日モニタリングした。全てのグループはグループごとで少なくとも10匹から12匹の最小数から成る。生体外実験は、形質細胞、血清補体C3、およびANAのレベルに関するフローサイトメトリ分析と、タンパク尿および白血球と、血清サイトカインのプロファイリングと、腎臓の組織変化と、化合物レベル脾臓、腎臓、血漿における薬物動態PKの決定とを含んだ。マウスを個々に追跡した。全てのデータに関して、マウスを集団にグループ分けし、平均±標準誤差としてデータをグラフ化した。死亡率を除き、2カ月ごとの観察と収集したデータとを各グループに関して記録した。死亡率は毎日観察した。材料および方法の節上記と図1とに記載される通り、最終段階の読み取った情報を分析した。化合物Aを用いた処置に関して、8週齢から11週齢まで一日二回b.i.d.経口p.o.で提供されたすなわち、100mg/kgの用量に関して、午前中に100mg/kgを動物に投与し、午後に100mg/kgを動物に投与した1のDMSOに加えてPEG400中に懸濁された化合物Aでマウスを処置して、11週齢から18週齢まで処置することなく休み、21週齢まで残りの三週間の間用量を一日二回経口で提供される化合物A薬物処置を再び開始した。標準的治療は週三回腹腔内に1.5mg/kgで提供されるデキサメタゾンDEXを含んだ。ビヒクルは化合物A薬物処置と同時に一日二回経口で与えられるPEG4001のDMSOであった。このモデルに対する組織保持の薬物動態分析が図2で見ることができる。図2に関して注目すべきことは、腎臓内の化合物Aのレベルは血漿曝露レベルと同様であったことである。これは腎臓が狼瘡における疾患の病状に関する重要な部位であるので重要である。リンパ腫、脾腫、および白血球数化合物Aで処置されたMRL/lprマウスは55mg/kgの用量と100mg/kgの用量とに対してリンパ腫の低下を示したが、30mg/kgの用量ではリンパ腫の低下を示さなかった100mg/kgと55mg/kgとに対して100がリンパ腫を伴わず、ビヒクルに対しては0であった。p1mg/mLは太字得点=-疾患なし1、軽度2、中度3、高度4、重篤な疾患5化合物Aは、狼瘡を促進する耐放射線性/耐化学性で病原性の骨髄長命形質細胞の出現率を減少させる狼瘡に罹りやすい15週齢のNZMマウスに、合計で二週間、100mg/kg、55mg/kg、または30mg/kgの化合物Aを週二回経口で投与するか、標準的治療の基準薬であるシクロホスファミドを生理食塩水中で50mg/kgで週一回腹腔内に投与するか、またはビヒクルPEG400を一日二回経口で投与した。研究終了前24時間、各マウスに2mgのチミジン類似体であるブロモデオシリウリジンBrdUを腹腔内に注入した。BrdUカタログ番号第550891号と抗BrdU-FITC染色キットカタログ番号第559619号とをBDBiosciencesニュージャージー州FranklinLakesから取得した。BrdU注入後24時間、脾臓と骨髄とをフロー染色のために白血球を単離するように個々に処理した。抗BrdU-FITCBrdUキットから取得しただけでなく、抗CD19-Cyc、抗CD38-PE、および抗CD138-APC全て、カリフォルニア州SanDiegoのeBioscienceから取得したで細胞の表面を染色した。分析は、図42に示される通り、生きたSSC/FSCの集団、CD19陰性、CD38陽性に関するゲーティングと、CD138陽性BrdU陰性非環式長命形質細胞、領域R2、またはBrdU陽性環式短命形質細胞、領域R1に関するゲーティングとを含んだ。AccuriC6フローサイトメータを使用して全てのサンプルを分析した。全てのElispot実験に対する脾細胞の生体外培養を含む全ての実験に対して完全培地R10を使用した。完全培地は、RPMI1640Cellgro、バージニア州Manassasに加えて、1のPen-StrepCellgro、バージニア州Manassas、1のL-GlnCellgro、バージニア州Manassas、1のNEAACellgro、バージニア州Manassas、β-MECellgro、バージニア州Manassasに加えて10のFBSCellgro、バージニア州Manassasから成る。図は、脾臓短命形質細胞図38と、骨髄から単離した短命形質細胞図39と、脾臓長命形質細胞図40と、骨髄から単離した長命形質細胞図41とを示す。ゲーティングの例と、短命形質細胞R1および長命形質細胞R2のゲートとを提供する代表的なドットプロットもまた示される図42。グラフは平均±標準誤差を示し、統計学的テストは両側Mann-Whitneyのt検定を含み、p0.05は有意と考えた。示された全ての結果は生きた細胞において元々サイズをゲーティングされ、グラフはCD19陰性CD38/CD138両陽性の集団を示し、その集団は、BrdUを組み込んだ環式なので短命形質細胞、領域R1を参照されたいか、またはBrdUを組み込んでいない非環式なので長命形質細胞、領域R2を参照されたいのいずれかであった。化合物Aは、狼瘡に罹りやすいNZMマウスから通常耐放射線性で耐化学性の長命形質細胞を減少させた。図38~図42に示す通り、環式短命、領域R1と非環式長命、領域R2との両方のCD138形質細胞が化合物Aの処置の際に減少する。100mg/kgの用量の化合物Aは骨髄において短命形質細胞と長命形質細胞との両方に影響を与える図39および図41。3つ全ての用量が脾臓における長命形質細胞に影響を与えた図40。長命形質細胞を標的化することは、これらの細胞が、殺傷するのが困難であり、通常耐化学性で耐放射線性であり、骨髄構造内で何十年も生存することができ、SLEの間に抗核抗体のうちの大部分を作り出すことができるので重要である。好適な実施形態本発明の好適な実施形態は下記の実施形態を含む。実施形態1:化合物Aを被検体に投与する工程を含む、被検体における狼瘡を処置するための方法。実施形態2:有効量の化合物Aを被検体に投与する工程を含む、被検体における狼瘡を処置するための方法。実施形態3:被検体における狼瘡を処置するための薬剤の製造における化合物Aの使用。実施形態4:被検体における狼瘡を処置する際に使用するための化合物A。実施形態5:化合物Aが経口投与される、実施形態1~実施形態4のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態6:化合物Aが約0.01mg/kg~約1,000mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態7:化合物Aが約1mg/kg~約500mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態8:化合物Aが約10mg/kg~約200mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態9:化合物Aが約25mg/kg~約150mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態10:化合物Aが約50mg/kg~約100mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態11:化合物Aが約55mg/kg~約100mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態12:化合物Aが約1mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態13:化合物Aが約5mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態14:化合物Aが約10mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態15:化合物Aが約50mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態16:化合物Aが約100mg/kgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態17:化合物Aが約0.1mg~約1mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態18:化合物Aが約0.5mg~約500mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態19:化合物Aが約1mg~約100mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態20:化合物Aが約5mg~約50mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態21:化合物Aが約5mg~約30mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態22:化合物Aが約5mg~約20mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態23:化合物Aが約1mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態24:化合物Aが約5mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態25:化合物Aが約10mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態26:化合物Aが約20mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態27:化合物Aが約30mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態28:化合物Aが約40mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態29:化合物Aが約50mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態30:化合物Aが約100mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態31:化合物Aが約200mgの用量で投与される、実施形態1~実施形態5のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態32:被検体が処置の間にリンパ腫の減少を経験する、実施形態1~実施形態31のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態33:被検体が処置の間に脾腫の減少を経験する、実施形態1~実施形態32のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態34:被検体が処置の間に脾臓の白血球数の減少を経験する、実施形態1~実施形態33のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態35:被検体が処置の間に血清IL-12の減少を経験する、実施形態1~実施形態34のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態36:被検体が処置の間に血清C3の増加を経験する、実施形態1~実施形態35のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態37:被検体が処置の間に腎臓糸球体細胞充実度の減少を経験する、実施形態1~実施形態36のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態38:被検体が処置の間に腎臓間質浸潤の減少を経験する、実施形態1~実施形態37のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態39:被検体が処置の間に腎臓pSTAT3の減少を経験する、実施形態1~実施形態38のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態40:被検体が処置の間に脾臓形質細胞の減少を経験する、実施形態1~実施形態39のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態41:被検体が処置の間に血清抗核抗体の減少を経験する、実施形態1~実施形態40のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態42:被検体が処置の間に血清抗dsDNA抗核抗体の減少を経験する、実施形態1~実施形態41のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態43:被検体が処置の間に血清INFαの減少を経験する、実施形態1~実施形態42のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態44:被検体が処置の間にタンパク尿の減少を経験する、実施形態1~実施形態43のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態45:被検体が処置の間に肺浸潤物の減少を経験する、実施形態1~実施形態44のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態46:被検体が処置の間に血清IL-17Aの減少を経験する、実施形態1~実施形態45のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態47:被検体が処置の間に血清IL-6の減少を経験する、実施形態1~実施形態46のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態48:被検体が処置の間に血清CCL3/MIP-1αの減少を経験する、実施形態1~実施形態47のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態49:被検体が処置の間にCXCL10/IP-10の減少を経験する、実施形態1~実施形態48のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態50:被検体が処置の間に血清CXCL9/MIGの減少を経験する、実施形態1~実施形態49のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態51:被検体が処置の間に血清IL-4の減少を経験する、実施形態1~実施形態50のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態52:被検体が処置の間に血清IL-13の減少を経験する、実施形態1~実施形態51のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態53:被検体が処置の間に血清TNFαの減少を経験する、実施形態1~実施形態52のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態54:被検体が処置の間に血清KC/IL-8の減少を経験する、実施形態1~実施形態53のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態55:被検体が処置の間に血清CTxの減少を経験する、実施形態1~実施形態54のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態56:被検体がヒトである、実施形態1~実施形態55のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態57:化合物Aが一日一回投与される、実施形態1~実施形態56のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態58:化合物Aが一日二回投与される、実施形態1~実施形態56のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態59:化合物Aが一日三回投与される、実施形態1~実施形態56のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。実施形態60:化合物Aが一日四回投与される、実施形態1~実施形態56のいずれかに記載の方法、使用、または化合物。当業者が理解する通り、本発明の多数の改変と多数の変化形とが上記の教示を鑑みて考えられる。したがって、添付の特許請求の範囲内で、本発明は本明細書に具体的に記載されたものとは異なる方法で実施されてもよく、本発明の範囲は全てのこうした変化形を含むことを意図されることが理解される。本明細書において言及された全ての刊行物は、あらゆる目的でその全体が参照により組み込まれる。参考文献AlperovichGIRamaetalNewimmunosuppresorstrategiesinthetreatmentofmurinelupusnephritisLupus161824AringerMandJSSmolenTumournecrosisfactorandotherproinflammatorycytokinesinsystemiclupuserythematosusarationalefortherapeuticinterventionLupus133447BertsiasGandDTBoumpasUpdateonthemanagementoflupusnephritisletthetreatmentfitthepatientNatClinPractRheumatol446472BodyJJIDieletalProfilingthesafetyandtolerabilityofbisphosphonatesSeminOncol31738BoumpasDTRFurieetalAshortcourseofBG9588improvesserologicactivityanddecreaseshematuriainpatientswithproliferativelupusglomerulonephritisArthritisRheum4871927BouzidKABahlousetalCtelopeptidesoftypeIcollageninpostmenopausalwomenanexperienceinaTunisianclinicallaboratoryTunisMed884679ChevrierSCGentonetalCD93isrequiredformaintenanceofantibodysecretionandpersistenceofplasmacellsinthebonemarrownicheProcNatlAcadSciUSA1063895900ChunHYJWChungetalCytokineIL6andIL10asbiomarkersinsystemiclupuserythematosusJClinImmunol274616CoombsJHBJBloometalImprovedpainphysicalfunctioningandhealthstatusinpatientswithrheumatoidarthritistreatedwithCP690550anorallyactiveJanuskinaseinhibitorresultsfromarandomiseddoubleblindplacebocontrolledtrialAnnRheumDis694136CunninghamJPathogenesisandpreventionofbonelossinpatientswhohavekidneydiseaseandreceivelongtermimmunosuppressionJAmSocNephrol1822334EgnerWTheuseoflaboratorytestsinthediagnosisofSLEJClinPathol5342432EspeliMSBokersetalLocalRenalAutoantibodyProductioninLupusNephritisJAmSocNephrolFairhurstAMAEWandstratetalSystemiclupuserythematosusmultipleimmunologicalphenotypesinacomplexgeneticdiseaseAdvImmunol92169FuQXChenetalAssociationofelevatedtranscriptlevelsofinterferoninduciblechemokineswithdiseaseactivityandorgandamageinsystemiclupuserythematosuspatientsArthritisResTher10R112HoussiauFAandEMGinzlerCurrenttreatmentoflupusnephritisLupus1742630KamenDLandJDAleleSkeletalmanifestationsofsystemicautoimmunediseasesCurrOpinEndocrinolDiabetesObes175405KissEGLakosetalAntinuscleosomeantibodyareliableindicatorforlupusnephritisAutoimmunity423938LacotteSHDumortieretalIdentificationofnewpathogenicplayersinlupusautoantibodysecretingcellsarepresentinnephritickidneysofF1miceJImmunol184393745MeisterSUSchubertetalExtensiveimmunoglobulinproductionsensitizesmyelomacellsforproteasomeinhibitionCancerRes67178392MorelLGeneticsofSLEevidencefrommousemodelsNatRevRheumatol634857MorimotoSYTokanoetalTheincreasedinterleukin13inpatientswithsystemiclupuserythematosusrelationstootherTh1Th2relatedcytokinesandclinicalfindingsAutoimmunity341925MullerSJDiekeretalPathogenicantinucleosomeantibodiesLupus174316NeubertKSMeisteretalTheproteasomeinhibitorbortezomibdepletesplasmacellsandprotectsmicewithlupuslikediseasefromnephritisNatMed1474855NiewoldTBJHuaetalHighserumIFNalphaactivityisaheritableriskfactorforsystemiclupuserythematosusGenesImmun8492502ObengEALMCarlsonetalProteasomeinhibitorsinduceaterminalunfoldedproteinresponseinmultiplemyelomacellsBlood107490716SanzIandFELeeBcellsastherapeutictargetsinSLENatRevRheumatol632637SmithDLXDongetalAfemalepreponderanceforchemicallyinducedlupusinSJLJmiceClinImmunol1221017SmithBouvierDLAADivekaretalAroleforsexchromosomecomplementinthefemalebiasinautoimmunediseaseJExpMed2051099108SozzaniSDBosisioetalTypeIinterferonsinsystemicautoimmunityAutoimmunity43196203TucciMLLombardietalOverexpressionofinterleukin12andThelper1predominanceinlupusnephritisClinExpImmunol15424754"