"標的核酸と相補的な一部領域を含む24~121ntの長さの第1鎖と、前記第1鎖の標的核酸と相補的な一部領域と相補的結合を形成する領域を持つ13~21ntの長さの第2鎖とを含む、RNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖は、5末端に1乃至3ntの突出部を持つことを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第2鎖は、3末端に1乃至3ntの突出部を持つことを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖の5末端が平滑末端であることを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖と結合する第2鎖の長さは、13~16ntであることを特徴とする請求項4に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖の標的核酸と相補的な一部領域の長さは、19~21ntであることを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記標的核酸は、mRNA、microRNA、piRNA、コードDNA配列及び非コードDNA配列のいずれか一つであることを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖の第2鎖と相補的結合を形成しない一本鎖領域は、リンカーによって前記第2鎖と相補的結合を形成する領域に連結されることを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記リンカーは、化学的リンカーであることを特徴とする請求項8に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記化学的リンカーは、核酸、PNA、ペプチド、ジスルフィド結合または、ポリエチレングリコールであることを特徴とする請求項9に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖は、一本鎖領域に前記標的核酸と相補的な配列をさらに含むことを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖は一本鎖領域にアンチセンスDNA、アンチセンスRNA、リボザイム及びDNAザイムで構成された群から選択される核酸オリゴヌクレオチドをさらに含むことを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記核酸分子は、化学的変形を含むことを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記化学的変形は、前記核酸分子に含まれる少なくとも1種のヌクレオチドのリボースの2位置のヒドロキシル基が、水素原子、フッ素原子、-O-アルキル基、-O-アシル基、及びアミノ基のいずれか一つに置き換えられることによって得られる請求項13に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記化学的変形は、前記核酸分子に含まれる少なくとも1種のヌクレオチドのホスフェートバックボーンがホスホロチオエート型phosphorothioateform、ホスホロジチオエート型phosphorodithioateform、アルキルホスホネート型alkylphosphonateform、ホスホラミデート型phosphoramidateform及びボラノホスフェート型boranophosphateformのいずれか一つに置き換えられることによって得られる請求項13に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記化学的変形は、前記核酸分子に含まれる少なくとも1種のヌクレオチドがLNAlockednucleicacid、UNAunlockednucleicacid、モルホリノMorpholino及びPNApeptidenucleicacidのいずれか一つに置き換えられることによって得られる請求項13に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記化学的変形は、前記核酸分子が、脂質、細胞透過性ペプチド及び細胞標的リガンドからなる群から選択される一つ以上と結合することによって得られる請求項13に記載のRNAiを誘導する核酸分子。前記第1鎖で前記一本鎖領域を構成する塩基の少なくとも一つ以上が巨大bulky塩基類似体baseanalogを含むことを特徴とする請求項1に記載のRNAiを誘導する核酸分子。請求項1~18のいずれか一項に記載のRNAiを誘導する核酸分子に細胞伝達体が結合している核酸複合体。前記細胞伝達体はカチオン性ポリマー、脂質、細胞透過性ペプチド及び細胞標的リガンドからなる群から選択されることを特徴とする請求項19に記載の核酸複合体。請求項19に記載の核酸複合体を細胞内に導入させることを特徴とするRNAiを誘導する核酸分子の細胞内伝達方法。請求項1~18のいずれか一項に記載のRNAiを誘導する核酸分子を含有する遺伝子発現抑制用組成物。前記核酸分子に細胞伝達体をさらに結合させたことを特徴とする請求項22に記載の遺伝子発現抑制用組成物。請求項1~18のいずれか一項に記載のRNAiを誘導する核酸分子を細胞内に導入させる工程を含む細胞内標的遺伝子の発現抑制方法。前記核酸分子に細胞伝達体を追加的に結合させたことを特徴とする請求項24に記載の細胞内標的遺伝子の発現抑制方法。請求項1~18のいずれか一項に記載のRNAiを誘導する核酸分子を細胞内で発現させる工程を含む細胞内標的遺伝子の発現抑制方法。請求項1~18のいずれか一項に記載の構造を持つRNAiを誘導する核酸分子を含有する抗癌組成物。前記核酸分子に細胞伝達体を追加的に結合させたことを特徴とする請求項27に記載の抗癌組成物。前記核酸分子は、腫瘍関連遺伝子を標的遺伝子とすることを特徴とする請求項27に記載の抗癌組成物。前記腫瘍関連遺伝子は、KRas、Wnt-1、Hec1、Survivin、Livin、Bcl-2、XIAP、Mdm2、EGF、EGFR、VEGF、VEGFR、Mcl-1、IGF1R、Akt1、Grp78、STAT3、STAT5a、β-catenin、WISP1及びc-mycのいずれか一つであることを特徴とする請求項29に記載の抗癌組成物。本発明の目的は、遺伝子発現抑制効果が向上した新しい構造のRNAiを誘導する核酸分子を提供することにある。前記目的を達成するために、本発明は標的核酸と相補的な一部領域を含む24~121ntの長さの第1鎖と、前記第1鎖の標的核酸と相補的な一部領域と相補的結合を形成する領域を持つ13~21ntの長さの第2鎖で構成されるRNAiを誘導する核酸分子を提供する。また、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子に細胞伝達体が結合している核酸複合体を提供する。また、本発明は、前記核酸複合体を細胞内に導入させることを特徴とするRNAiを誘導する核酸分子の細胞内伝達方法を提供する。また、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を含有する遺伝子発現抑制用組成物を提供する。また、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を含有する遺伝子発現抑制用キットを提供する。また、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を細胞内に導入させる工程を含む遺伝子発現抑制方法を提供する。また、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を細胞内で発現させる工程を含む細胞内標的遺伝子の発現を抑制させる方法を提供する。また、本発明は、前記構造を持つ前記RNAiを誘導する核酸分子を含有する抗癌組成物を提供する。また、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を利用することを特徴とする癌の予防または、治療方法を提供する。本発明の他の特徴及び具現例は、以下の詳細な説明及び添付された特許請求範囲からより一層明白になる。他の方式で定義されない限り、本明細書において使用されたあらゆる技術的科学的用語は、本発明が属する技術分野に熟練した専門家によって通常理解されるものと同じ意味を有する。通常、本明細書において使用された命名法及び以下で詳述する実験方法は、本技術分野において周知であり、しかも汎用されるものである。本発明の詳細な説明などにおいて使用される主な用語の定義は、下記の通りである。本願においてRNAiとは、標的遺伝子のmRNAと相同である配列を持つ鎖とこれと相補的な配列を持つ鎖で構成される二本鎖RNAdsRNAを細胞等に導入して、標的遺伝子mRNAの分解を誘導することで標的遺伝子の発現を抑制するメカニズムを意味する。本願においてsiRNAsmallinterferingRNAとは、配列特異的に効率的な遺伝子発現抑制genesilencingを媒介する短い二本鎖のRNAdsRNAを意味する。本願においてアンチセンス鎖とは、関心がある標的核酸に実質的に、または100相補的なポリヌクレオチドであり、例えば、mRNAmessengerRNA、mRNAでないRNA配列e.g.,microRNA、piwiRNA、tRNA、rRNA及びhnRNAまたは、コードまたは、非コードDNA配列と全体として、または一部として相補的であってもよい。本願において、アンチセンス鎖及びガイド鎖は、区別しないで用いられる。本願においてセンス鎖sensestrandとは、標的核酸と同じ核酸配列を持つポリヌクレオチドであり、mRNA、mRNAでないRNA配列e.g.,microRNA、piwiRNA、tRNA、rRNA及びhnRNAまたは、コードまたは、非コードDNA配列と全体として、または一部として同じポリヌクレオチドをいう。本願において遺伝子とは、最広義の意味と見なされるべきであり、構造蛋白質または調節蛋白質を暗号化することができる。この時、調節蛋白質は転写因子、熱ショック蛋白質またはDNA/RNA複製、転写及び/または翻訳に係る蛋白質を含む。また、本発明において、発現抑制の対象になる目的遺伝子は、ウイルスゲノムに内在するもので、動物遺伝子で統合されたり染色体外の構成要素として存在することができる。例えば、目的遺伝子はHIVゲノム上の遺伝子であってもよい。この場合、siRNA分子はほ乳動物細胞内HIV遺伝子の翻訳を不活性化させるのに有用である。一観点において、本発明は、標的核酸と相補的な一部領域を含む24~121ntの長さの第1鎖と、前記第1鎖の標的核酸と相補的な一部領域と相補的結合を形成する領域を持つ13~21ntの長さの第2鎖で構成されるRNAiを誘導する核酸分子に関する図1。本発明において、前記標的核酸は、これに限定されるのではないか、mRNA、microRNA、piRNApiwiinteractingRNA、コードDNA配列及び非コードDNA配列等であってもよい。本発明において、前記第1鎖の標的核酸と相補的な一部領域の長さは、19~21ntであることを特徴とする。従って、前記第1鎖は第2鎖と結合しない一本鎖領域を含み、好ましくは、第1鎖は一本鎖領域にアンチセンスDNA、アンチセンスRNA、リボザイム及びDNAザイムDNAzymeからなる群から選択される核酸オリゴヌクレオチドをさらに含むことを特徴とする。本発明において、前記第1鎖のうちの第2鎖と相補的結合を形成しない一本鎖領域は、直接または、リンカーによって前記第2鎖と相補的結合を形成する領域に連結され、この時、リンカーは、化学的リンカーchemicallinkerであってもよい。この時、前記化学的リンカーは、これに制限されるのではないが、核酸nucleicacidmoiety、PNAPNAmoiety、ペプチドpeptidemoiety、ジスルフィド結合disulfidebondまたは、ポリエチレングリコールpolyethyleneglycolmoietyであることを特徴とする。また、本発明において、前記第1鎖は、一本鎖領域に前記標的核酸と相補的な配列を追加で含有するか、相補的でない配列を含有することを特徴とし、相補的な場合において、本発明に係る核酸分子の二本鎖領域、即ちsiRNAの標的核酸に相補的な領域と連続的に位置してもよく、遠く離れて位置してもよい。同様に、siRNAが標的する配列と前記一本鎖領域のリボザイムやDNAザイムが標的する配列は、連続的に位置してもよく、遠く離れて位置してもよい。また、前記第1鎖の一本鎖領域が前記siRNAの標的遺伝子と相補的な配列を持つ場合において、一本鎖領域に含まれる配列がアンチセンスDNAまたは、アンチセンスRNAならば、その配列とsiRNAの標的遺伝子の配列が、約70-80以上、好ましくは約80-90以上、さらに好ましくは約95-99以上相補的であることを特徴とし、一本鎖領域がリボザイムまたはDNAザイムならば、その配列とsiRNAの標的遺伝子の配列が、約50-60以上相補的であることを特徴とする。また、前記一本鎖領域は、5乃至100ntであってもよい。5nt以下であれば、遺伝子発現抑制効率の増加効果が足りなく、100nt以上の場合、RNA分子の合成効率が低下する。また、前記一本鎖領域は、好ましくは9乃至100ntであり、または、50nt以下の長さを持つことを特徴とし、さらに好ましくは10乃至15ntの長さを持つことを特徴とする。本発明において、前記第1鎖で前記一本鎖領域を構成する塩基中少なくとも一つ以上が巨大bulky塩基類似体baseanalogを含むことを特徴とする。フェニル基を持つデオキシアデノシンdeoxyadenosine誘導体のような巨大塩基類似体が拡張配列に含まれていれば、この拡張配列と相補的に結合するmRNA鎖は巨大塩基類似体の位置で開裂cleavageが起きることになる。このような開裂を誘導する巨大塩基類似体であれば制限なしに本発明に含まれてもよい。本発明では、siRNAのアンチセンス鎖を標的mRNA配列と相補的に長く伸ばした核酸構造体の場合、5末端の部分は、RNAi機序として作用し、同時に3末端の部分は、アンチセンスメカニズムとして作用するか5末端siRNA部分を標的mRNAに誘導する作用をすると予想した。この時、アンチセンス3末端のmRNAに相補的な配列がDNAの場合には、RNaseH依存的mRNA切断を誘導することができる。また、アンチセンス3末端の一本鎖領域を構成する塩基中少なくとも一つ以上が巨大塩基類似体を含むか、一本鎖領域がmRNAと結合してバルジbulge構造を形成する場合であっても開裂を誘導できると予想した。また、第1鎖の一本鎖領域にリボザイムやDNAザイムを導入した核酸分子の場合には相乗的開裂synergisticcleavageを誘導できると予想した。19-21ntの長さのアンチセンス鎖及び13-16ntの長さのセンス鎖で構成されたsiRNA分子として、アンチセンス鎖の5末端が平滑末端bluntendであるsiRNA構造体は、siRNAのセンス鎖によるオフ-ターゲット効果の発生や他のRNAi機序を阻害することなく優秀な標的遺伝子発現抑制効率を提供するもので大韓民国公開特許10-2009-0065880、このようなsiRNAに本発明に係る構造を適用させる場合、オフ-ターゲット効果を最小化しながら第1鎖の一本鎖領域に含まれる核酸オリゴヌクレオチドによる前記のような効果を同時に示すことができる。本願においてオフ-ターゲット効果Offtargeteffectとは、本来siRNAは、アンチセンス鎖と相補的な配列を持つmRNAの分解を誘導して、該当mRNAの遺伝子発現を抑制する効果を得るために用いられるものであるにもかかわらず、siRNAのセンス鎖によって他のmRNAの分解が発生する場合、センス鎖によって発生するこのような予想できない他のmRNAの分解乃至当該遺伝子の発現抑制効果、及びsiRNAのアンチセンス鎖が誤ったターゲットとペアリングして他のmRNAの分解が発生するアンチセンス鎖による他のmRNAの分解が発生する当該遺伝子の発現抑制効果を全て含む。本発明の核酸分子は、一般に合成されたものであるが、これに限定されない。即ち、本発明において、前記核酸分子は、化学的または、酵素学的に合成されたものであってもよい。本発明のsiRNA分子は、標準組換え技法によって自然発生的遺伝子から誘導することができるが、この場合、発現を変化させる標的遺伝子のmRNAの少なくとも一部分とヌクレオチド配列レベルで実質的に相補的であることを特徴とする。そこで、本発明に係る核酸分子は、化学的変形を含むことを特徴とする。前記化学的変形は、前記核酸分子に含まれる少なくとも1種のヌクレオチドのリボースの2位置のヒドロキシル基が、水素原子、フッ素原子、-O-アルキル基、-O-アシル基、及びアミノ基のいずれか一つに置き換えられることを特徴とするが、これに制限されることなく核酸分子の伝達能を高めるなら、-Br、-Cl、-R、-ROR、-SH、-SR、-N3及びCNR=alkyl、aryl、alkyleneのいずれか一つに置き換えられてもよい。また、前記化学的変形は、少なくとも1種のヌクレオチドのホスフェートバックボーンがホスホロチオエート型phosphorothioateform、ホスホロジチオエート型phosphorodithioateform、アルキルホスホネート型alkylphosphonateform、ホスホラミデート型phosphoramidateform及びボラノホスフェート型boranophosphateformのいずれか一つに置き換えられてもよい。また、前記化学的変形は、前記核酸分子に含まれる少なくとも1種のヌクレオチドがLNAlockednucleicacid、UNAunlockednucleicacid、モルホリノMorpholino、PNApeptidenucleicacidのいずれか一つに置き換えられることを特徴とし、前記化学的変形は、前記核酸分子が、脂質、細胞透過性ペプチドcellpenetratingpeptide及び細胞標的リガンドからなる群から選択される一つ以上と結合することを特徴とする。さらに、本発明に係る核酸分子は、細胞伝達体に結合して細胞内に導入されることができる。従って、他の観点において、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子に細胞伝達体が結合している核酸複合体に関する。本発明において、前記細胞伝達体はカチオン性ポリマー、脂質、細胞透過性ペプチド及び細胞標的リガンドからなる群から選択されることを特徴とし、カチオン性ポリマー、カチオン性脂質のようなカチオン性細胞伝達体は、invitro及びinvivoのいずれの状態でも核酸、即ちsiRNAを細胞内に伝達するために用いられるものであり、陽性に電荷された伝達のための試薬である。カチオン性細胞伝達体は、本発明の核酸分子と強く相互作用をして、複合体を形成することによって、RNAiを誘導する核酸分子が効果的に細胞内導入されるようにする。ポリエチレンイミンPEIのようなカチオン性ポリマー、またはリポフェクトアミンLipofectamine2000Invitrogenのようなリポソームが用いられるが、これに制限されることなく陽性で電荷された伝達のための試薬の場合、本発明に係る複合体を提供するために使用できることは、本発明が属する技術分野において通常の知識を有する者には自明である。また、コレステロールのような脂質は、核酸分子に直接的に連結されたり、他の細胞伝達体に結合した後、核酸分子と結合することによって間接的に連結されたりする。さらに、本発明の実施例は、本発明に係るRNAiを誘導する核酸分子が、効率的に標的遺伝子発現抑制効果をもたらすことを示す。従って、また他の観点において、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を含有する遺伝子発現抑制用組成物に関する。この時、前記核酸分子は、前記細胞伝達体が結合した核酸複合体の形態で含まれてもよい。本発明の実施例では、標的遺伝子として、KRASだけでなく、CTNNB1-2を標的とするsiRNAに対しても同様に本発明に係る核酸構造適用時標的遺伝子発現抑制効率が顕著に増加してその効能も長く持続させる可能性があることを確認しており、本発明に係る核酸分子構造は、その他の標的遺伝子をターゲットにする核酸分子を提供した場合にも同様の結果が得られることは、本発明が属する技術分野において通常の知識を有する者には自明である。一方、前記遺伝子発現抑制用組成物は遺伝子発現抑制用キットkitの形態で提供できる。遺伝子発現抑制用キットは瓶、筒tub、小袋sachet、封筒envelope、チューブ、アンプルampoule等のような形態であってもよく、これらは部分的にまたは全体的にプラスチック、ガラス、紙、ホイール、ワックスなどから形成される。容器は、最初は容器の一部であるか、または機械的、接着性、またはその他の手段によって、容器に付着できる、完全にまたは部分的に分離可能な栓を取り付けることができる。容器はまた注射針によって内容物に接近できる、ストッパーが取り付けられる。前記キットは外部パッケージを有することができ、外部パッケージは構成要素の使用に関する使用説明書を含んでもよい。また他の観点において、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を利用して細胞内標的遺伝子の発現を抑制させる方法に関する。即ち、前記RNAiを誘導する核酸分子を細胞内に導入させる工程を含む細胞内標的遺伝子の発現抑制方法に関する。本発明において、前記RNAiを誘導する核酸分子の第1鎖は、標的遺伝子のmRNA配列に相補的であることを特徴とする。本発明において、前記標的遺伝子は内因性endogeneous遺伝子であるか導入遺伝子transgeneであってもよい。この時、本発明に係る核酸分子は、必ずしも合成siRNAに制限されなく、細胞内で発現ベクター等を利用して発現するsiRNAやshRNAにも適用可能な長所がある。即ち、本発明に係る核酸分子は、細胞内で発現させることによって標的遺伝子の発現を抑制させることができる。従って、また他の観点において、本発明は、前記RNAiを誘導する核酸分子を細胞内で発現させる工程を含む細胞内標的遺伝子の発現抑制方法に関する。一方、本発明に係るRNAiを誘導する核酸分子は、過発現によって癌を発生させたり、成長させたりする遺伝子、即ち腫瘍関連遺伝子を標的遺伝子として前記標的遺伝子の発現を抑制させるために利用されることができるため、抗癌組成物として有用である。この時、腫瘍関連遺伝子は、これに制限されないか、KRas、Wnt-1、Hec1、サバイビンSurvivin、Livin、Bcl-2、XIAP、Mdm2、EGF、EGFR、VEGF、VEGFR、Mcl-1、IGF1R、Akt1、Grp78、STAT3、STAT5a、β-カテニンβcatenin、WISP1及びc-mycいずれか一つであることを特徴とする。本発明の一実施例では、本発明に係る構造のsiRNA分子を細胞内導入することによって、癌細胞の成長に関与する遺伝子であるKRASの発現を抑制して、β-カテニンを標的遺伝子とするsiRNA分子を作製して癌細胞株が死滅することを確認した。本発明に係る抗癌組成物は、前記RNAiを誘導する核酸分子、または前記核酸分子と細胞伝達体が結合した複合体を単独で含んだり一つ以上の薬学的許容される担体、賦形剤または希釈剤を含んで薬学組成物で提供でき、前記複合体は疾患及びこれの重症程度、患者の年令、体重、健康状態、性別、投与経路及び治療期間等により適切な薬学的に有効な量で薬学組成物に含まれる。前記において薬学的に許容される組成物とは、生理学的に許容され、ヒトに投与される時、通常胃腸障害、めまいのようなアレルギー反応またはこれと類似する反応を起こさない組成物のことをいう。前記担体、賦形剤及び希釈剤としては、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、燐酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、マグネシウムステアレート及び鉱物油が挙げられる。前記薬学組成物は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤等をさらに含んでもよい。また、本発明の薬学組成物は、ほ乳動物に投与された後、活性成分の迅速、持続または遅延放出を提供できるように当業界に公示された方法を使って、剤形化される。剤形は滅菌注射溶液などの形態でありうる。一方、本発明に係るRNAiを誘導する核酸分子、または本核酸分子と細胞伝達体が結合した複合体は、従来公知の抗癌化学療法剤を追加的に含むことによって、併用効果が期待できる。例えば、シスプラチンcisplatin、カルボプラチンcarboplatin、オキサリプラチンoxaliplatin、ドキソルビシンdoxorubicin、ダウノルビシンdaunorubicin、エピルビシンepirubicin、イダルビシンidarubicin、ミトキサントロンmitoxantrone、バルルビシンvalrubicin、クルクミンcurcumin、ゲフィチニブgefitinib、エルロチニブerlotinib、イリノテカンirinotecan、トポテカンtopotecan、ビンブラスチンvinblastine、ビンクリスチンvincristine、ドセタキセルdocetaxel、パクリタキセルpaclitaxel等が用いられる。以下、本発明を実施例を挙げて詳述する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に制限されないことは当業者において通常の知識を有する者にとって自明である。実施例1:ロングアンチセンスガイディッドlongantisenseguidedsiRNAの作製:製造例1第2鎖の長さは、21ntと短く維持し、第1鎖で第2鎖と二本鎖を形成する領域を19ntにして、第1鎖の3末端を標的mRNAと相補的な配列で17ntの長さの一本鎖領域を持つように作製した。作製された長いアンチセンス鎖を持つsiRNAをロングアンチセンスlongantisensesiRNAlsiRNAと命名した。拡張配列に含まれる核酸オリゴヌクレオチドによってsiRNAが標的mRNAに誘導されるか典型的なアンチセンス機構antisensemechanismとして作用する図2。実施例2:ロングアンチセンスlongantisenseasiRNAの作製:製造例2第2鎖の長さを、15ntと短く維持し、第1鎖で第2鎖と二本鎖を形成する領域を19ntにして、第1鎖の3末端を標的mRNAと相補的な配列で17ntの長さの拡張配列を持ち5末端は平滑末端を持つように作製した。作製された長いアンチセンス鎖を持つsiRNAは、ロングアンチセンスasiRNAlasiRNAと命名した。拡張配列に含まれる核酸オリゴヌクレオチドによってsiRNAが標的mRNAに誘導されるか典型的なアンチセンス機構として作用する図3。実施例3:DNAザイムまたは、リボザイム-guidedsiRNAsiRZNAの作製:製造例3CTNNB1-2siRNA及びDz339DNAザイムを利用して、センス鎖の長さを21ntと短く維持し、19ntの長さのアンチセンス鎖の3末端にDNAザイムを持つように長いアンチセンス鎖を持つ構造を作製した。作製された構造体をDNAザイム-guidedsiRNAsiRZNAと命名した図4。実施例4:KRAS遺伝子の発現を阻害するlsiRNA作製及びKRAS遺伝子発現抑制能確認癌細胞の成長に関与する遺伝子であるKRASの発現を阻害するsiRNAをデザインした。また、既存siRNA構造192のアンチセンス鎖の3末端に各5、10、15ntが加わったロングアンチセンスsiRNAlsiRNAを作製した。この時、下記の通り標的mRNAと相補的な配列のDNAに拡張された構造21S5d、10d、15dと、対照群として標的mRNAと相補的でない配列のDNAに拡張された構造21S5c、10c、15cを作製して、標的遺伝子発現抑制効率を比較した図5。またlsiRNAのシード配列seedsequenceを変異させた構造2115d-mutを作製して、lsiRNAの遺伝子抑制力がsiRNAと共にシード配列依存的であるかをテストした。各siRNA及びlsiRNAは、10nM濃度でリポフェクトアミン2000invitrogenを利用してAGScellATCCCRL1739、Gastricadenocarcinoma、humanにトランスフェクションした。mRNA測定のためのReal-timePCRに用いられたプライマーは下記の通りである。KRASフォワード配列5’-GAGTGCCTTGACGATACAGC-3’配列番号15リバース配列5’-CCCTCATTGCACTGTACTCC-3’配列番号16その結果、図6に示された通り、標的mRNAに相補的な一本鎖領域を持つlsiRNAの場合、既存siRNA構造に比べて向上した標的遺伝子抑制力を見せることを確認しており、この傾向は前記一本鎖領域の長さに比例することが分かった。それに対して、標的mRNAに相補的でない一本鎖領域を持つlsiRNA対照群の場合、このような向上した遺伝子発現抑制は観察できなかった。また、シード配列変異seedsequencemutationを持つlsiRNAの場合には、標的遺伝子抑制力が略消えたことを確認した。これは、lsiRNAが既存siRNAと共にシード配列依存的なRNAiメカニズムで標的遺伝子を抑制して、変形された構造による非特異的遺伝子抑制現象が起きないことを示している。次に、lsiRNAがsiRNAに比べて細胞内導入後、標的遺伝子抑制力をよりよく維持するかを調べた。既存siRNA構造の場合、細胞導入1日後遺伝子発現抑制力が最高に達しており、2日、3日になるにつれて抑制力が減少することを確認した図7。それに対して、lsiRNAの場合、細胞内導入後3日までにも標的遺伝子発現抑制力が維持されることが分かった。また、標的mRNAに相補的でない一本鎖領域を持つlsiRNA対照群の場合、このような向上した遺伝子発現抑制を観察できなかった。この結果は、標的遺伝子のmRNAに相補的な一本鎖領域を持つlsiRNAの場合、既存siRNA構造に比べてさらに高い効率の遺伝子発現抑制力を示すだけでなく、その効能もより長く維持されることを示している。実施例5:KRAS遺伝子発現を阻害するlasiRNA作製及びKRAS遺伝子発現抑制能確認実施例4に追加して、本発明に係る核酸分子構造がアシンメトリックショーターデュプレックスasymmetricshorterduplexsiRNAasiRNAに適用時、これの標的遺伝子発現抑制力を向上させることができるか調べた。実施例4同様に既存asiRNA構造のアンチセンス鎖の3末端に標的mRNAと相補的な配列のDNAに拡張された構造16S5d、10d、15d及び相補的でない配列のDNAに拡張された対照群16S5c、10c、15cロングアンチセンスasiRNAlasiRNAを作製してAGS細胞にトランスフェクションした後、癌細胞成長阻害力を比較した図8。これらのRNAをAGS細胞にトランスフェクションした後、実施例4と同様の方法でreal-timePCRを行って、標的遺伝子であるKRAS発現抑制効率を検証した図9。各asiRNA及びlasiRNAは、10nM濃度でリポフェクトアミン2000invitrogenを利用して、AGScellATCCCRL1739,Gastricadenocarcinoma,humanにトランスフェクションした。その結果、lsiRNAに似てlasiRNAの場合にも標的mRNAに相補的な一本鎖拡張配列を持つlasiRNAは拡張配列の長さに比例して標的mRNA抑制力が増加することを確認した。それに対して、拡張配列が標的mRNAに相補的でない場合にはこのような効果は観察できなかった。実施例6:KRAS遺伝子発現を阻害するlasiRNA及びlasiRNAによるAGS癌細胞成長抑制能確認次に、siRNA及びasiRNA対応各々向上した標的遺伝子抑制力を示すKRAS標的lsiRNA及びlasiRNA構造がAGS癌細胞の成長抑制力も増加させるかを確認した。これのために、10nMのRNAを96ウェルプレートに播種されたAGS細胞にリポフェクトアミン2000でトランスフェクションしてから5日後の細胞の生存率を顕微鏡観察で直接細胞の個数を目でカウントして測定した。その結果、KRASmRNA発現抑制能と癌細胞成長抑制力が高い相関を持つことを確認した。即ち、siRNAに比べて15個の拡張配列を持つlsiRNA21S15dは、さらに強力な癌細胞成長抑制力を見せることを確認し、asiRNAに比べてlasiRNA16S15dの癌細胞成長抑制力も増加したことを確認した図10。一方、シード配列に突然変異を導入したlsiRNAの場合LASmut、癌細胞成長阻害を誘導できないことを確認することによって、長い拡張配列構造による非特異的細胞毒性が現れないことを検証することができた。このような結果は、siRNA及びasiRNAのアンチセンス鎖3-末端に標的mRNAに相補的な一本鎖領域を導入することによって、遺伝子抑制力及びそれに伴う細胞内表現型発現を増加させることができることを示している。実施例7:拡張配列がRNAであるlsiRNA及びlasiRNAによるKRAS遺伝子発現抑制能確認次に、lsiRNA及びlasiRNAの拡張配列がDNAでないRNAの場合にも、各々相応するsiRNA及びasiRNAに比べて標的遺伝子発現抑制力が増加するかを調べた。図11のように10個のmRNA相補的拡張配列を持つlsiRNA21S10r及びlasiRNA16S10rを作製し、対照群としてmRNAに相補的でない拡張配列を持つ構造21S10rc、16S10rcも共に作製した。これらをAGS細胞にトランスフェクションした後、実施例4と同様の方法でKRASmRNA発現抑制効率を調べた。その結果、図12に示されたように、RNA拡張配列を持つ場合にも、lsiRNAとlasiRNAは、各々相応するsiRNAとasiRNAに比べてさらに高い標的遺伝子抑制能を示し、特にRNA拡張配列を持つlasiRNAはDNA拡張配列を持つlasiRNAに比べてさらに増加した抑制能を示すことを確認した。これは、ロングアンチセンス拡張配列がDNAだけでなくRNAの場合にも目標とする遺伝子発現抑制能を達成できることを示している。実施例8:CTNNB1遺伝子発現を阻害するlasiRNA作製及びCTNNB1遺伝子発現抑制能確認8-1:CTNNB1mRNA発現レベル測定次に、本発明に係る核酸分子構造が異なる遺伝子を標的遺伝子とするasiRNAの活性増加を誘導できるか確認するために、β-カテニンCTNNB1を標的にするasiRNAに対応するlasiRNA構造を作製した図13。その次に、Hep3B細胞ATCCHB8064にリポフェクトアミン2000で10nMの濃度でトランスフェクションした後、リアルタイムPCRで標的遺伝子の発現抑制力を調べた。CTNNB1フォワード配列5’-ATGTCCAGCGTTTGGCTGAA-3’配列番号32リバース配列5’-TGGTCCTCGTCATTTAGCAGTT-3’配列番号33その結果、図14に示したように、既存siRNA構造に比べてasiRNAの場合、標的遺伝子発現抑制力が減少したが、15ntのmRNA配列に相補的なDNAをアンチセンス3末端に持つlasiRNA16S15dの場合、siRNAと類似する程度で標的遺伝子抑制力が増加することを確認した。それに対して、拡張DNA配列が標的遺伝子と相補的でない場合16S15cには、asiRNAに比べて標的遺伝子抑制力の減少が大きくなかった。従って、lasiRNA構造の場合、asiRNA配列と関係なくlasiRNA構造依存的に標的遺伝子抑制力を増加させることを確認した。8-2:Hep3B癌細胞成長阻害力測定このようなlasiRNA構造による標的遺伝子抑制力増加は、Hep3B癌細胞成長阻害力測定を介して再検証された。即ち、10nMのsiRNA、asiRNA、lasiRNAをHep3B細胞に導入してから5日後、細胞成長程度を、細胞数測定を介して調べた。細胞の生存率は、顕微鏡観察を介して直接細胞の個数を目で測定して調べた。簡単に説明すると、96ウェルプレートに播種されたAGS細胞に10nMのsiRNA、asiRNA、lasiRNAをトランスフェクションさせてから5日後、生き残った細胞の数を直接目でカウントして測定した。その結果、図15に示したように、siRNAに比べてasiRNAの癌細胞死滅力は、多少減少したが、標的遺伝子相補的拡張配列を持つlasiRNAの場合、siRNAと類似する程度の細胞死滅力を示しており、一方標的遺伝子と相補的でない拡張配列を持つlasiRNAは、細胞死滅力がasiRNAに比べて増加しないことを確認することができた。これは、アンチセンス鎖の3末端に標的遺伝子と相補的な配列を含有する拡張配列を持つsiRNA分子は、標的遺伝子発現抑制力が増加することを示す。実施例9:遺伝子発現抑制機序の分析本発明に係る核酸分子が、従来の192siRNAやasiRNAと同じRNAi機序によって遺伝子発現を抑制させるか確認するために、下記の実験を行った。即ち、標的mRNAに対する切断部位を分析するために、5’RACE分析を行った。先ず、実施例4及び5で作製したsiKRAS、asiKRAS、LaiKRAS、LasiKRASをPEIを利用してHeLa細胞に導入してから18時間後にトリリージェントキットTrireagentkitAmbionで全RNAを抽出した。全RNA3μgは、前処理なしに025μgのGeneRacerRNAoligoをライゲーションligationさせた後、GeneRacerRNAoligo-ライゲーションされた全RNAをGeneRaceroligodT及びSuperScript商品名IIIRTkitInvitrogenを利用して逆転写させた。RNAオリゴライゲーションされたmRNAは、遺伝子特異的なプライマーを利用して増幅した。その次に、PCR産物は、TAvectorRBCでクローンした後、M13フォワードプライマーでシーケンスした。KRASGenespecificPrimer5-CTGCATGCACCAAAAACCCCAAGACA-3配列番号34KRASGeneSpecificPrimerNested5-CACAAAGAAAGCCCTCCCCAGTCCTCA-3配列番号35その結果、図16に示したように、siKRAS、asiKRASを処理した場合と、LsiKRAS、LasiKRASを処理した場合共に同じ大きさのRACE産物を得ることができた。また、これらRACE産物をT-vectorRBCにクローニングした後、シーケンスを介して塩基配列上正確な切断位置を確認した結果、siKRAS、asiKRAS、LsiKRAS、LasiKRAS共にアンチセンス鎖の5末端から10番目と11番目の塩基との間に該当するmRNAの位置が切断されたことを確認した。"