"a修飾部分に複合されたインスリン化合物を含むインスリン化合物複合体と、bカチオンとを含む錯体において、前記インスリン化合物複合体が、前記カチオンと錯化されている錯体。前記インスリン化合物複合体が、ヒトインスリンを含む、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体が、インスリン化合物類似体を含む、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、Lys28及びPro29を伴うヒトインスリンである、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、未変性プロインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、人工的プロインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、5個以下のアミノ酸を有するC-ペプチドを含むミニプロインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、切断可能又は切断不可能であるリーダーペプチドを有する未変性プロインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、切断可能又は切断不可能であるリーダーペプチドを有する人工的プロインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、a5個以下のアミノ酸を有するC-ペプチドと、b切断可能な又は切断不可能であるリーダーペプチドと、を含むミニプロインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、プロインスリン化合物及び該プロインスリン化合物のC末端又はN末端で連結されたリーダーペプチド又は担体タンパク質を含むプレプロインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、インスリン化合物A鎖B鎖を含む1本鎖インスリン化合物であり、前記A鎖及び/又はB鎖が他方に対する付着点で1、2又は3アミノ酸だけ切断されている可能性がある、請求項3に記載の錯体。前記インスリン化合物類似体が、リーダーペプチド又は担体タンパク質を含むインスリン化合物である、請求項3に記載の錯体。前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりもさらに水溶性の高いものにするように選択されている、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の親水性をもつものにするように選択されている、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりも高い両親媒性をもつものにするように選択されている、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を約7.4のpHで水溶液中で対応する未複合インスリン化合物よりも少なくとも1.05、1.25、1.5、1.75、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5又は15倍高い溶解度を示すものにするように選択されている、請求項14に記載の錯体。前記修飾部分が、約4~約8の範囲のpHで約1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、50g/L、75g/L、100g/L、125g/L又は150g/Lを超える溶解度をもつインスリン化合物複合体を提供するように選択されている、請求項14に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体の水溶性が亜鉛添加により低減されている、請求項1に記載の錯体。a前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており;b前記インスリン化合物複合体の水溶性が亜鉛添加により低減されている、請求項1に記載の錯体。a前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており、b前記インスリン化合物複合体の水溶性が亜鉛添加により低減されており、c前記錯体の水溶性がインスリン化合物の前記水溶性よりも大きい、請求項1に記載の錯体。a前記インスリン化合物複合体がアシル化インスリン化合物であり;b前記カチオンが亜鉛であり;かつc前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、請求項1に記載の錯体。a前記インスリン化合物複合体が、対応する未複合インスリン化合物以上の水溶性をもつアシル化インスリン化合物であり;b前記カチオンが亜鉛であり、かつc前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、請求項1に記載の錯体。対応する親インスリン化合物に対して前記インスリン化合物複合体の相対的親油性が1以下である、請求項1に記載の錯体。対応する親インスリン化合物krelに比べた前記インスリン化合物複合体の前記相対的親油性が1以下であり、akrel=tconjugate-t0/thuman-t0であり;b相対的親和性が、40°Cでの定組成溶離によりLiChroSorbRP185μm、250×4mm高性能液体クロマトグラフィカラム上で測定され、c溶離剤としては、i10のアセトニトリルを含有するpH7.3の0.1Mのリン酸ナトリウム緩衝液、及びii水中の50アセトニトリル、といった混合物が使用され;d0.1mMの硝酸ナトリウムを注入することにより空隙時間t0が識別され、eci及びciiの混合物間の比率を変動させることにより、ヒトインスリンについての保持時間が少なくとも2t0に調整される、請求項1に記載の錯体。前記相対的親油性が約1以下である、請求項25に記載の錯体。a前記インスリン化合物がヒトインスリンであり、b前記相対的親油性が1未満である、請求項25に記載の錯体。前記相対的親油性が0.99、0.98、0.97、0.96、0.95、0.94、0.93、0.92、0.91又は0.90未満である、請求項25に記載の錯体。前記修飾部分がアルキル部分でない、請求項25に記載の錯体。前記修飾部分が、中に挿入されたオキシ基を含む炭素鎖である、請求項25に記載の錯体。前記修飾部分が5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17又は18個の炭素をもつ炭素鎖であり、前記炭素鎖が、中に挿入された2、3、4、5、6、7、8、9又は10個のオキシ基を含む、請求項25に記載の錯体。前記修飾部分が、5、6、7、8、9又は10個の炭素をもつ炭素鎖であり、前記炭素鎖が、中に挿入された2、3又は4個のオキシ基を含む、請求項25に記載の錯体。前記修飾部分が2、3、4、5、6、7、8、9又は10個のポリアルカレングリコール単位を含む、請求項25に記載の錯体。前記修飾部分が、1、2又は3個のポリエチレングリコール単位及び1、2又は3個のポリプロピレングリコール単位を含む、請求項25に記載の錯体。a前記カチオンが亜鉛であり、b前記インスリン化合物複合体の水溶解度が亜鉛添加により低減される、請求項25に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度以下である、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度より大きい、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が前記インスリン化合物複合体の溶解度の5倍超である、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度の約1/15~5倍である、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度の約1/10~約2倍である、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が前記インスリン化合物複合体の溶解度の約1/10から0倍未満である、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの前記インスリン化合物複合体の溶解度の約1/10超から約7.4のpHでの前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さい溶解度までである、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの前記インスリン化合物複合体の溶解度の約1/10超から約7.4のpHでの前記インスリン化合物複合体の溶解度以下の溶解度までである、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に大きい、請求項1に記載の錯体。約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さい、請求項1に記載の錯体。a約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつb前記カチオン-インスリン化合物複合体が、約5~約8.5のpH範囲にわたり水溶液中で約2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120又は130g/Lより大きい割合で可溶である状態にとどまる、請求項1に記載の錯体。a約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつb前記カチオン-インスリン化合物複合体が、5.8~約8.5のpH範囲にわたり水溶液中で約1g/Lより大きい割合で可溶である状態にとどまる、請求項1に記載の錯体。a約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつb前記カチオン-インスリン化合物複合体が、6.5~約8のpH範囲にわたり水溶液中で約1、5、10又は20g/Lより大きい割合で可溶である状態にとどまる、請求項1に記載の錯体。a約7.4のpHでの前記カチオン-インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約7.4のpHでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつb前記カチオン-インスリン化合物複合体が、6.9~約7.8のpH範囲にわたり水溶液中で約1、5、10又は20g/Lより大きい割合で可溶である状態にとどまる、請求項1に記載の錯体。a前記錯体がR型錯体であり、かつb約7.4のpHで、前記錯体の前記水溶解度が約10~約150g/L、約20~約130g/L、約30~約110g/L又は約35~約60g/Lである、請求項1に記載の錯体。a前記錯体がNPH型錯体であり、かつb約7.4のpHで、前記錯体の前記水溶解度が約1~約150g/L、約5~約120g/L、又は約10~約90g/Lである、請求項1に記載の錯体。a前記錯体がT型錯体であり、かつb約7.4のpHで、前記錯体の前記水溶解度が約30~約175g/L、約50~約160g/L又は約70~約150g/Lである、請求項1に記載の錯体。a前記錯体がプロタミンを含むR型Zn錯体であり、かつb約7.4のpHで、前記錯体の前記水溶解度が約10~約110g/L、約20~約85g/L又は約30~約70g/Lである、請求項1に記載の錯体。a前記錯体がプロタミンを含むT型Zn錯体であり、かつb約7.4のpHで、前記錯体の前記水溶解度が約10~約150g/L、約20~約130g/L、約30~約110g/L又は約35~約60g/Lである、請求項1に記載の錯体。a前記インスリン化合物複合体がモノ複合体であり、かつb前記錯体が、約4~6.5未満のpH、約4~5.8未満のpH、約4.2~約5.5のpHで水溶液中で結晶を生成する請求項1に記載の錯体。a前記インスリン化合物複合体がモノ複合体であり、b前記カチオンが亜鉛であり、かつc錯体が約4.4~約5.2で水溶液中で結晶を生成する、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体が、pI±2.5に等しいpHで水溶液中で結晶を生成する、請求項1に記載の錯体。a前記修飾部分が、親油性構成要素にカップリングされたPAG構成要素及び/又はPAGを含み、前記親油性構成要素がアルキル、脂肪酸及び直鎖又は分枝脂質からなる群から選択され、かつbPAG構成要素又は親油性構成要素のいずれかがインスリン化合物にカップリングされている、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、インスリン化合物上の1つ以上のアミノ基にカップリングされている、請求項58に記載の錯体。修飾部分が前記A鎖の前記カルボキシ末端でカップリングされかつ/又は、修飾部分が前記インスリン化合物の前記B鎖の前記カルボキシ末端でカップリングされている、請求項58に記載の錯体。修飾部分が前記インスリン化合物の前記B鎖にカップリングされているリーダーペプチドのN末端においてカップリングされている、請求項58に記載の錯体。修飾部分がアミノ酸側鎖官能基においてカップリングされている、請求項58に記載の錯体。a前記インスリン化合物がA1、B1及び/又はB29においてアミノ基を含み;かつbA1、B1及びB29からなる群から選択された位置でインスリン化合物上の単一のアミノ基に単一の修飾部分がカップリングされている、請求項58に記載の錯体。a前記インスリン化合物がB1及び/又はB29においてアミノ基を含み、b第1の修飾部分がB1においてアミノ基にカップリングされ、かつc第2の修飾部分がB29においてアミノ基にカップリングされている、請求項58に記載の錯体。a前記インスリン化合物がB29においてアミノ基を含み、かつb単一の修飾部分がB29においてアミノ基にカップリングされている、請求項58に記載の錯体。修飾部分が、前記インスリン化合物内の遊離アミノ基においてカップリングされてカルバメート結合を形成する、請求項58に記載の錯体。a前記インスリン化合物が遊離ヒドロキシル基を含み、かつb前記遊離ヒドロキシル基に修飾部分がカップリングされてカルボキシル、エーテル又はカルボナート結合を形成する、請求項58に記載の錯体。a前記インスリン化合物が遊離SH基を含み、かつb前記-SH基に修飾部分がカップリングされて、チオエステル、チオエーテル又はスルホナート結合を形成する、請求項58に記載の錯体。a前記複合されたインスリン化合物分子が前記修飾部分にアシル化されており、かつb前記修飾部分が、脂肪酸、3個以上の炭素を有するアルキル又はアミノ酸で構成されていない、請求項1に記載の錯体。a前記複合されたインスリン化合物分子が前記修飾部分にアシル化されており、かつb前記修飾部分が脂肪酸、3個以上の炭素をもつアルキル、又はアミノ酸を含まない、請求項1に記載の錯体。前記カチオン構成要素が一価又は多価の金属カチオンを含む、請求項1に記載の錯体。前記カチオン構成要素がNa、Li及びKから選択された一価の金属カチオンを含む、請求項1に記載の錯体。前記カチオン構成要素がZn、Mn、Ca、Fe、Ni、Cu、Co及びMgからなる群から選択された2価の金属カチオンを含む、請求項1に記載の錯体。前記カチオン構成要素がZnを含む、請求項1に記載の錯体。前記カチオン構成要素が約90、95、99又は99.9超のZnである、請求項1に記載の錯体。インスリン化合物複合体対カチオン構成要素のモル比が、約1:1~約1:100、約1:2~約1:12又は約1:2~約1:7の間にある、請求項1に記載の錯体。キモトリプシン分解に対する前記錯化インスリン化合物複合体の耐性が対応する未錯化インスリン化合物複合体の前記キモトリプシン分解よりも大きい、請求項1に記載の錯体。キモトリプシン分解に対する前記錯化インスリン化合物複合体の耐性が、前記対応する錯化され、ただし未複合のインスリン化合物のキモトリプシン分解よりも大きい、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体が、という構造を有する修飾部分に対しA1、B1及び/又はB29においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体が、という構造を有する修飾部分に対しB29においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体が、という構造を有する修飾部分に対しA1及びB29においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体が、という構造を有する修飾部分に対してA1、B1及び/又はB29においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分がという式を有し、式中mは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20でありnは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20である、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分がという式を有し、式中PAGは、m個のサブユニットを有するPAG部分であり、mは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20であり、nは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20である、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記修飾部分が、という構造を有する、請求項1に記載の錯体。前記インスリン化合物複合体が、A1、B1及び/又はB29において、2~20個のPEGサブユニット、2~15個のPEGサブユニット又は2~10個のPEGサブユニットを有する直鎖又は分枝PEG部分にカップリングされている、請求項1に記載の錯体。請求項1に記載の錯体を含む、錯体混合物。請求項1に記載の錯体を含む、固体混合物。請求項1に記載の錯体を含む、ハイブリッド錯体。請求項1に記載の錯体を含む、共結晶。前記組成物が凍結乾燥された粉末として提供される、請求項1に記載の錯体を含む組成物。薬学的に許容可能な純度レベルを有する混合物内の請求項1に記載の錯体。a請求項1に記載の錯体と、b第2のインスリン化合物複合体又は未複合インスリン化合物と、を含む組成物。請求項108a及び/又は108bの前記錯体が固体として提供されている、請求項108に記載の組成物。a108a及び108bの前記錯体のうちの1つが結晶性固体として提供され、かつbもう1つが非晶質固体として提供されている、請求項108に記載の組成物。108a及び/又は108bの前記錯体が結晶性固体として提供されている、請求項108に記載の組成物。a第3の修飾部分にカップリングされたインスリン化合物を含むインスリン化合物複合体及びbカチオン構成要素を含み、前記インスリン化合物複合体が前記カチオンと錯化されている第3の錯体をさらに含む、請求項108に記載の組成物。108a及び108bの前記錯体の前記インスリン化合物複合体が異なるインスリン化合物を含む、請求項108に記載の組成物。108a及び108bの前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項108に記載の組成物。a108a及び108bの前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつb前記異なるインスリン化合物複合体が異なる溶解度を有する、請求項108に記載の組成物。a108a及び108bが異なるインスリン化合物複合体を含み、かつb前記錯体のうちの1つが親油性インスリン化合物複合体を含み、もう1つが親水性インスリン化合物複合体を含む、請求項108に記載の組成物。a108a及び108bの前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつb前記錯体のうちの1つが約1~約4時間の循環半減期を有し、かつc前記錯体のうちのもう1つが、前記第1の錯体の循環半減期よりも大きい循環半減期を有する、請求項108に記載の組成物。a108a及び108bの前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつb前記錯体のうちの1つが急速作用型プロファイルを有し、かつc前記錯体のうちのもう1つが中~長時間作用型プロファイルを有する、請求項108に記載の組成物。a108a及び108bの前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつb前記錯体のうちの1つが基礎インスリン化合物制御に適したプロファイルを有し、かつc前記錯体のうちのもう1つが食後グルコース制御に適したプロファイルを有する、請求項108に記載の組成物。実質的に均質な溶解、単一のインビボ溶解曲線及び/又は単一のピーク薬力学プロファイルという特性のうちの1つ以上のものを示す結晶である、請求項108に記載の組成物。HIM2とインスリン化合物の共結晶である、請求項108に記載の組成物。HIM2とIN105の共結晶である、請求項108に記載の組成物。IN105とインスリン化合物の共結晶である、請求項108に記載の組成物。第2の活性成分がインスリン化合物であり、インスリン化合物との共結晶化が、前記インスリン化合物複合体の結晶の前記溶解度との関係において前記結晶の前記溶解度を低減させる、請求項108に記載の組成物。前記第2の活性成分がインスリン化合物であり、インスリン化合物との共結晶化が、前記インスリン化合物複合体の結晶の前記溶解度との関係において前記結晶の前記溶解度を増大させる、請求項108に記載の組成物。前記インスリン化合物複合体と前記第2の活性成分の共結晶化が、所望の治療活性をもつ共結晶を達成するように選択される、請求項108に記載の組成物。a急速作用型、急速排泄型又は高効能インスリン化合物複合体と、b長時間作用型、緩慢排泄型又は低効能インスリン化合物複合体とを含む共結晶である、請求項108に記載の組成物。食後グルコース制御に適したPK/PDプロファイルを有する共結晶である、請求項108に記載の組成物。基礎インスリン化合物オーバーナイト制御に適したPK/PDプロファイルを有する共結晶である、請求項108に記載の組成物。a請求項1に記載の錯体と、b未複合インスリン化合物と、を含む組成物。前記インスリン化合物がヒトインスリン又はlys-proインスリン化合物である、請求項130に記載の組成物。2つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項1に記載の錯体。インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含む、請求項1に記載の錯体。2つの異なるインスリン化合物を含む2つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項1に記載の錯体。2つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項1に記載の錯体。インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含む、請求項1に記載の錯体。2つの異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。3つの異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。少なくとも2つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項1に記載の錯体。少なくとも2つの異なるインスリン化合物複合体の共結晶を含む、請求項1に記載の錯体。1つのインスリン化合物複合体を含み、さらに未複合インスリン化合物を含む、請求項1に記載の錯体。未複合インスリン化合物と共に錯体の形で前記インスリン化合物複合体を含む、請求項1に記載の錯体。2つの異なる親水性インスリン化合物複合体を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。親水性インスリン化合物複合体及び親油性インスリン化合物複合体を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。親水性インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。未複合インスリン化合物と共に結晶化されるHIM2を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。未複合インスリン化合物と共に結晶化されるIN105を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。IN105と共に結晶化されるHIM2を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。インスリン化合物及びIN105と共に結晶化されるHIM2を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項1に記載の錯体。長時間プロファイルを有し、請求項1に記載の錯体を含む共結晶。錯化剤をさらに含む、請求項1に記載の錯体。前記錯化剤が、プロタミン、サルフェンsurfen、グロビンタンパク質、スペルミン、スパーミジンアルブミン、アミノ酸、カルボン酸、ポリカチオン重合体化合物、カチオンポリペプチド、ポリリシン、アニオンポリペプチド、ヌクレオチド及びアンチセンスからなる群から選択される、請求項152に記載の錯体。プロタミンが実質的にない、請求項1に記載の錯体。固体の形をした、請求項1に記載の錯体。結晶性固体の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。棒状結晶の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。不規則形態を有する結晶の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。約0.5~約40μmの範囲の平均直径を有する結晶の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。図1、2、3、4又は5に示されている通りの形態を有する結晶の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。乾燥固体の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。非晶質固体及び結晶性固体の混合物の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。実質的に純粋な粉末の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。カチオン-インスリン化合物複合体固体及び1つ以上の付加的な薬学的に許容可能な構成要素を含む粉末の形をした、請求項155に記載の錯体を含む組成物。液体の未溶解構成要素として請求項155に記載の錯体を含む組成物。液体中の沈殿物として請求項155に記載の錯体を含む組成物。懸濁液、エマルジョン又はマイクロエマルジョンの構成要素として請求項155に記載の錯体を含む組成物。乾燥状態で前記固体が、a約96w/w超のインスリン化合物複合体と、b約0.05~約4w/wのZnと、を含む、請求項155に記載の錯体。乾燥状態で前記固体が、a約91w/w超のインスリン化合物複合体と、b約0.3~約4w/wのZnと、c約0.2~約5w/wのフェノールと、を含む、請求項155に記載の錯体。乾燥状態で前記固体が、a約82w/w超のインスリン化合物複合体と、b約0.5~約4w/wのZnと、c約0.2~約14w/wのプロタミンと、を含む、請求項155に記載の錯体。乾燥状態で前記固体が、a約71w/w超のインスリン化合物複合体と、b約0.5~約4w/wのZnと、c約0.2~約14w/wのプロタミンと、d約0.2~約15w/wのフェノールと、を含む、請求項155に記載の錯体。乾燥状態で前記固体が、a約0.1~約2w/wのZnと、b約0.08~約1w/wのフェノールと、を含む、請求項155に記載の錯体。乾燥状態で前記固体が、a約0.5~約1.3w/wのZnと、b約0.1~約0.7w/wのフェノールと、を含む、請求項155に記載の錯体。乾燥状態で前記固体が、a1w/w以上から約3.5w/wまでのZnと、b約0.1~約3w/wのフェノールと、を含む、請求項155に記載の錯体。乾燥状態で前記固体が、a1.3w/w以上から約2.2w/wまでのZnと、b約0.4~約2w/wのフェノールと、を含む、請求項155に記載の錯体。前記固体が、約90、95又は99超、結晶性である、請求項155に記載の錯体。前記固体が、約90、95又は99超、非晶質である、請求項155に記載の錯体。前記固体が、非晶質固体と結晶性固体の混合物を含む、請求項155に記載の錯体。前記固体が、複合及び未複合インスリン化合物を含む、請求項155に記載の錯体。請求項155に記載の錯体を含む薬学組成物。前記錯体が、液体中に存在する固体を含む、請求項180に記載の薬学組成物。前記固体が緩衝液中に存在する、請求項181に記載の薬学組成物。安定剤をさらに含む、請求項180に記載の薬学組成物。前記安定剤がフェノール化合物である、請求項183に記載の薬学組成物。前記安定剤がフェノール、m-クレゾール及びパラベンからなる群から選択される、請求項183に記載の薬学組成物。カチオン-インスリン化合物複合体錯体を製造する方法において、水溶液中でインスリン化合物複合体とカチオンを組合わせるステップを含む方法。前記水溶液が、中に溶解した有機溶媒を含む、請求項186に記載の方法。それを必要としている対象に対して、請求項1に記載の錯体を薬学的に許容可能な量だけ投与するステップを含む、治療方法。前記対象が糖尿病患者である、請求項188に記載の方法。前記組成物が、経口、経口摂取、非経口、口腔、舌下、経鼻、吸入及び経皮からなる群から選択された経路により投与される、請求項188に記載の方法。前記組成物が、経口、経口摂取、非経口、口腔、舌下、経鼻、吸入及び経皮からなる群から選択された経路による投与のために処方された薬学組成物の構成要素として投与される、請求項188に記載の方法。請求項1に記載の構成要素及び担体を含む薬学組成物。経口、経口摂取、非経口、口腔、舌4発明の要約一般に、本発明は、修飾部分に複合されたインスリン化合物を伴うインスリン化合物複合体及びカチオンを含む錯体において、インスリン化合物複合体がカチオンと錯化されている錯体を提供する。該インスリン化合物は例えば未変性インスリン又はインスリン類似体であってよい。インスリン化合物の例としてはヒトインスリン、リスプロインスリン、des30インスリン、未変性プロインスリン、人工プロインスリンなどが含まれる。カチオン構成要素は、例えばZn、Mn、Ca、Fe、Ni、Cu、Co及びMgから成る群から選択された2価の金属カチオンであり得る。修飾部分は、インスリン化合物複合体を、対応する未複合インスリン化合物に比べて溶解度が大きい、小さい又は同等のものにするように選択され得る。該修飾部分は好ましくは、インスリン化合物複合体を、約7.4のpHで、水溶液中で対応する未複合インスリン化合物に比べ少なくとも1.05、1.25、1.5、1.75、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5又は15倍の溶解度を有するものにするように選択されている。好ましくは、該修飾部分は、約7.4のpHで約1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、50g/L、75g/L、100g/L、125g/L又は150g/Lを超える水溶解度をもつインスリン化合物複合体を提供するように選択されている。さらに修飾部分は、インスリン化合物複合体を、対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており、該インスリン化合物複合体の水溶性は、亜鉛添加により低減される。もう1つの実施形態においては、該修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛添加により低減され、錯体の水溶性はインスリン化合物の水溶性よりも大きい。さらにもう1つの実施形態においては、対応する親インスリン化合物に比べたインスリン化合物複合体の相対的親油性krelは1以下である。本発明は同様に、修飾部分に複合されたインスリン化合物をもつ新規インスリン化合物複合体をも提供している。例えば、本発明は、という式を有する修飾部分に対しカップリングされたインスリン化合物において、式中、-X、Y、及びZが、独立して選択された連結基であり、各々が任意に存在し、Xが存在する場合それは共有結合によりインスリン化合物にカップリングされており、-R1及びR2のうちの少なくとも1つが存在し、それが低級アルキルであり、任意にはカルボニル基を含み、-R2が-CH3、-H、トシレーートといったようなキャッピング基であり、そうでなければ活性化基であり、-PAGが、2つ以上のアルカレングリコール部分を取込みすなわちオキシアルカレン部分、任意には-S-、-O-、-N-、及び-CO-から成る群から選択された2つ以上の付加的部分を取込む直鎖又は分枝炭素鎖であり、-前記修飾部分が、最大3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24又は25個の重原子を有する、インスリン化合物を提供している。本発明の実施形態においては、X、Y及びZのうちのいずれか1つ又は複数のものが不在であってよい。さらに、X、Y及び/又はZが存在する場合、それらは独立して-CO-、-O-、-S-、-C-及び-N-の中から選択され得る。一実施形態では、Zは-CO-である。もう1つの実施形態では、Zは存在しない。一部の実施形態において、R1は低級アルキルであり、R2は存在しない。その他の実施形態においては、R2は低級アルキルであり、R1は存在しない。もう1つの実施形態においては、該修飾部分は、-C、-C-、-O-、=O、-S-、-N-、-Si-から成る群から選択された3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、19、20、21、22、23、24又は25個の原子の主鎖をもつ直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分を含み得る。重原子は標準的には2つ以上の炭素原子及び、-O-、-S-、-N-及び=Oから成る群から選択された2つ以上の非炭素重原子を含むことになる。炭素原子及び非炭素重原子は標準的には、各非炭素重原子あたり少なくとも1個の炭素原子、好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも2個の炭素原子、より好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも3個の炭素原子という比率で存在する。炭素原子及び酸素原子は標準的には各酸素原子あたり少なくとも1個の炭素原子、好ましくは各酸素原子あたり少なくとも2個の炭素原子、より好ましくは各酸素原子あたり少なくとも3個の炭素原子という比率で存在する。修飾部分は、分枝又は直鎖C1-6、分枝又は直鎖、又はカルボニルといった2つ以上のキャッピング基を含み得る。修飾部分は標準的には水素を含み、水素のうちの2つ以上のものは、重原子であるものの上記式中では重原子として計数すべきでないフッ素で置換され得る。修飾部分は、一部のケースでは特定的に未置換アルキル部分を除外し得る。修飾部分は例えば、アミノ酸上の利用可能な基、例えばアミノ基、ヒドロキシル基又は遊離カルボン酸基ポリペプチドに対して、例えばカルバメート、カルボナート、エーテル、エステル、アミドといったような連結基、又は第2級アミン基又はジスルフィド結合によってカップリングされ得る。連結基内の分子は修飾部分の一部として計数される。好ましい実施形態においては、修飾部分の分子量はHIM2修飾部分の分子量より小さい。本発明は、なお式中、nは、1、2、3又は4でありmは1、2、3、4又は5である及び/又はなお式中、nは、1、2、3、4又は5でありmは1、2、3又は4であるという式をもつ修飾部分を有するインスリン化合物複合体を含む。新規の修飾部分ならびにインスリンを修飾するためのかかる部分の使用があれば重宝であると思われ、その他のポリペプチドがそれ自体本発明の態様である。また、本発明は、本発明のインスリン化合物複合体及び/又はカチオン-インスリン化合物複合体を含む新規の処方をも提供している。発明者らは、驚くべきことに、ある種の脂肪酸組成物が特にポリペプチド及びポリペプチド複合体例えばインスリン及びインスリン化合物複合体の経口送達のため及び/又は本発明のカチオン-インスリン化合物複合体錯体の経口送達のために特に有用であることを発見した。1態様では、本発明は、2つ以上の飽和又は不飽和C4、C5、C6、C7、C8、C9又はC10脂肪酸及び/又はかかる脂肪酸の塩を伴う脂肪酸組成物を提供している。好ましい脂肪酸はカプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸である。好ましい脂肪酸塩は、カプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸のナトリウム塩である。組成物の脂肪酸含有量は標準的には、約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、又は3.0w/wを下限とし、約3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、又は12.0w/wを上限とする範囲にある。さらにもう1つの実施形態においては、組成物の脂肪酸含有量は約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、又は3.0w/wを下限とし、約3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、又は12.0w/wを上限とする範囲内にあり、組成物の脂肪酸含有量は、典型的に単一脂肪酸、好ましくはカプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸又はラウリン酸又はその塩1個あたり90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.6、99.7、99.8、又は99.9w/wより大きい。また、本発明は、本発明のインスリン化合物複合体、カチオン-インスリン化合物複合体錯体及び/又は処方物を用いてインスリン欠乏症を治療する又は対象の体内のインスリンを補足する方法をも提供している。該方法は一般に、それを必要としている対象に対して、本発明のインスリン化合物複合体、カチオン-インスリン化合物複合体錯体及び/又は処方物のうちの2つ以上のものを治療上有効な量だけ投与するステップを含んでいる。6定義以下に示すのは、本明細書及びクレーム全体を通して使用されている用語の定義である。提供されている定義は、別に指定のない限り本明細書全体を通して適用される。本書で定義されていない用語は、その用語が関係する技術分野において一般的に理解されている意味を有する。付加は、アミノ酸配列に関して使用される場合、その配列のいずれかの端部又は両方の端部における1個以上のアミノ酸の延長、ならびにその配列内の挿入を含む。錯体というのは、1つ以上のインスリン化合物又はインスリン化合物複合体が1つ以上の金属原子又はイオンと配位結合を形成する分子会合を意味する。錯体は溶液中でも、又結晶、微結晶又は非晶質固体といった固体としても存在し得る。錯体混合物というのは、溶液又は固体のいずれの形態であろうと、2つ以上の異なる錯体を有する混合物を意味する。錯体混合物は、例えば、異なるインスリン化合物、異なるインスリン化合物複合体、異なるハイブリッド錯体、異なるカチオン、これらの組合せとの錯体を含み得る。ハイブリッド錯体というのは、2つ以上の異なるインスリン化合物及び/又はインスリン化合物複合体を有するカチオン-インスリン化合物複合体錯体を意味する。錯化剤というのは、多数の電荷を有し、インスリン化合物複合体に結合するか又はインスリン化合物複合体と錯化する分子を意味する。本発明で使用するのに適した錯化剤の例としては、プロタミン、スルフェン、グロビンタンパク質、スペルミン、スペルミジンアルブミン、アミノ酸、カルボン酸、ポリカチオン重合体化合物、カチオンポリペプチド、アニオンポリペプチド、ヌクレオチド及びアンチセンスが含まれる。その開示全体が本発明に参照として援用されているブランジェBrange、J.、GalenicsofInsulincompound、SpringerVerlag、BerlinHeidelberg1987年、を参照のこと。アミノ酸の付加、欠失又は置換に関連して使用される保存的という用語は、インスリン化合物の治療的効力を完全に低減させないアミノ酸鎖内の付加、欠失又は置換を意味する。すなわち、該効力は、対応する未変性インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照の治療的効力に比べて低いか、同じであるか又は高い可能性がある。親水性のというのは、水溶性特性を示すことを意味し、親水性部分という用語は、親水性であり、及び/又はもう1つの化学物質に付着した場合にかかる化学物質の親水性を増大させる部分を意味する。例としては、ポリエチレングリコールといったようなポリアルキレン部分及び糖が含まれるが、これらに制限されるわけではない。親油性は、脂肪及び脂肪組織内での蓄積といったような脂肪溶解度特性、脂質中で溶解する能力及び/又は生体膜に侵入し、それと相互作用し、及び/又はそれを横断する能力を意味し、親油性部分という用語は、親油性であり、及び/又はもう1つの化学物質に付着した時点でかかる化学物質の親油性を増大させる部分を意味する。両親媒性というのは、親水性と親油性の特性を示すことを意味し、両親媒性部分という用語は、ポリペプチド又は非ポリペプチド薬物に付着した時点で、結果として得られる複合体の両親媒性を増大させるすなわち親水性及び両親媒性の両方を増大させる部分、例えば一部のPEG-脂肪酸修飾部分、及び糖-脂肪酸修飾部分を意味する。低級アルキルというのは、1~6個の炭素原子すなわちC1、C2、C3、C4、C5又はC6を有する置換又は未置換、直鎖又は分枝アルキル部分を意味する。高級アルキルというのは、6個以上の炭素原子、例えばC7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20などを有する、置換又は未置換、直鎖又は分枝アルキル部分を意味する。単分散型というのは、混合物中の化合物の約100パーセントが同じ分子量をもつ化合物混合物を表わしている。実質的に単分散型というのは、その混合物中の化合物の少なくとも約95パーセントが同じ分子量を有する化合物混合物を表わしている。純粋に単分散型というのは、その混合物中の化合物の約100パーセントが同じ分子量を有しかつ同じ分子構造を有する化合物混合物を表わしている。かくして、純粋に単分散型の混合物は単分散混合物であるものの、単分散型混合物は、必ずしも純粋に単分散型の混合物であるわけではない。実質的に純粋に単分散型というのは、その混合物内の化合物の少なくとも約95パーセントが同じ分子量及び同じ分子構造をもつ化合物混合物を表わしている。かくして、実質的に純粋に単分散型の混合物は、実質的に単分散型の混合物であるが、実質的に単分散型の混合物は必ずしも実質的に純粋に単分散型の混合物ではない。カチオン-インスリン化合物複合体組成物のインスリン化合物複合体構成要素は好ましくは単分散型、実質的に単分散型、純粋に単分散型又は実質的に純粋に単分散型であるが、多分散型でもあり得る。多分散型というのは、単分散型、実質的に単分散型、純粋に単分散型又は実質的に純粋に単分散型でない分散性を有することを意味する。本書で特定的に使用されているとおりの未変性インスリン化合物は、天然、合成又は遺伝子工学処理された供給源によって提供される哺乳動物インスリン化合物例えば、ヒトインスリン、ウシインスリン化合物、ブタインスリン化合物又は鯨インスリン化合物を意味する。ヒトインスリンは、ジスルフィド結合により架橋される21アミノ酸A鎖及び30アミノ酸B鎖から成る。適切に架橋されたヒトインスリンはA7とB7の間に1つ、A20とB19の間に2つ目、そしてA6とA11の間に3つ目のジスルフィド架橋を含んでいる。ヒトインスリンは3つの遊離アミノ基すなわちB1-フェニルアラニン、A1-グリシン及びB29-リジンを有する。A1位及びB1位の遊離アミノ基はαアミノ基である。B29位の遊離アミノ基はe-アミノ基である。インスリン類似体は、対応する未変性インスリンに比べて一部の、全ての又は増強された活性を示すか又は対応する未変性インスリンに比べて一部の、全ての又は増強された活性を示すポリペプチドへとインビボ又はインビトロで転換されるポリペプチド、例えば2つ以上の保存的アミノ酸付加、欠失及び/又は置換を伴うヒトインスリンの構造をもつポリペプチドを意味する。インスリン類似体は、ダヒヤットDahiyatら、の名前で02年3月18日付けで出願された米国特許出願公開第20030049654号明細書タンパク質ライブラリ用タンパク質設計自動化で記述されているもののような既知の技術を用いて同定可能である。ヒト及び非ヒト動物のプロインスリン、プレプロインスリン、インスリン前駆体、1本鎖インスリン前駆体及びそれらの類似体は、本書では同様に、非哺乳動物インスリンがそうであるようにインスリン類似体とも呼ばれている。当該技術分野では数多くのインスリン類似体が知られている以下の論述参照。前後関係から特定的に別途指示がなされているのでないかぎり例えばヒトインスリンなどといったような特定のインスリンに言及されている場合、インスリン化合物という用語は、未変性インスリン及びインスリン類似体を含むように広く使用される。ポリアルキレングリコール又はPAGというのは、置換又は未置換の、直鎖又は分枝ポリアルキレングリコール重合体、例えばポリエチレングリコールPEG、ポリプロピレングリコールPPG及びポリブチレングリコールPBG及びそれらの組合せ例えばPEG、PPG、PPG及びPBGサブユニットから選択された2つ以上の異なるPAG単位といったような2つ以上の異なるPAGサブユニットの組合せを含む直鎖及び分枝重合体を意味し、ポリアルキレングリコールのモノアルキルエーテルを含む。PAGサブユニットという用語は、単一のPAG単位を意味し、例えばPEGサブユニットは単一のポリエチレングリコール単位、例えば-CH2CH2O-を意味し、PPGサブユニットは単一ポリプロピレングリコール単位、例えば-CH2CH2CH2O-を意味し、PBGサブユニットは、例えば-CH2CH2CH2CH2O-といった単一のプロピレングリコール単位を意味する。PAG及び/又はPAGサブユニットは同様に、置換されたPAG又はPAGサブユニット、例えばメチル、エチル又はプロピル側鎖といったアルキル側鎖を含むPAG又はイソ-PPG又はイソ-PBGといった2つ以上の分枝PAGサブユニットを含むPAGをも含んでいる。プロインスリン化合物というのは、B鎖のC末端が5個以上のアミノ酸を有する天然の又は人工のCペプチドを介してA鎖のN末端にカップリングされているインスリン化合物を意味する。プレプロインスリン化合物は、可溶性タンパク質として排泄を促進するように選択された配列、又はN末端の複合を防止するように選択された配列、又は精製を増強させるように選択された配列例えば精製カラムに対する結合親和性をもつ配列といったような、B鎖のN末端にカップリングされたリーダー配列をさらに含むプロインスリン化合物を意味する。1本鎖インスリン化合物前駆体又はミニプロインスリン化合物というのは、B鎖のC末端又はC末端から除去された1、2、3又は4個のアミノ酸を有する切断型B鎖が、介入するC-ペプチド無しで、又は1、2、3、又は4個のアミノ酸を有する短縮C-ペプチドを介して、A鎖又はN末端で1、2、3又は4個のアミノ酸だけ短縮された切断型A鎖のN末端にカップリングされているインスリン化合物を意味している。プロタミンというのは、天然例えば魚の精巣又は組換え型供給源から得られる強塩基性タンパク質の混合物を意味する。ホフマンHoffmann、J.A.ら、ProteinExpressionandPurification、第1号:127~133頁1990年を参照のこと。プロタミン組成物は、往々にしてプロタミン塩基と呼ばれるタンパク質の塩を比較的含まない調製物又はタンパク質の塩を含む調製物の中に入って供給され得る。タンパク質、ペプチド及びポリペプチドは、本書では、少なくとも2個、そして最大では任意の長さのアミノ酸配列をもつ化合物を意味するべく互換的に用いられる。R型というのは、フェノールといったような安定化化合物、カチオン、インスリン化合物複合体の存在下で形成される錯体立体構造を意味する。T型というのは、フェノールといったような安定化化合物無しでカチオン及びインスリン化合物複合体の存在下で形成される錯体立体構造を意味する。A型又はR型錯体はプロタミンを含んでいても、又除去してもよい。科学的に許容可能な対照というのは、実験主題の当業者にとって許容可能である実験的対照を意味する。固体というのは、本書では構造の3次元規則性が存在する物質の状態を意味する。この用語は、結晶性固体、非晶質固体の両方そして結晶性固体と非晶質固体の組合せを意味するように、広く使用されている。カチオン-インスリン化合物複合体固体というのは、好ましくは1価又は多価のカチオンと配位された、カチオン-インスリン化合物複合体を含む固体を意味している。結晶は、規則的多面体形状をもつ固体を意味する。結晶性というのは、結晶の特性をもつ固体を意味する。微結晶というのは、標準的に1ミクロン~100ミクロンの範囲内の最長寸法の顕微鏡的大きさの結晶性状態にある物質で主として構成される固体を意味する。一部のケースでは、微結晶性組成物の個々の結晶は、大部分が単結晶組成のものである。一部の実施形態においては、本発明の結晶は微結晶ではない。微晶質という用語は、微結晶である状態を意味する。非晶質という用語は、形が結晶でない固体材料を意味する。当業者であれば、例えばX線結晶学技術、走査電子顕微鏡検査又は光学顕微鏡を用いて、標準的技術を利用して非晶質材料と結晶を区別することが可能である。固体混合物は、2つの異なる固体の混合物を意味する。結晶混合物は、2つの異なる結晶の混合物を意味する。共結晶は、2つ以上の異なるインスリン化合物及び/又はインスリン化合物複合体をもつ結晶を意味する。本発明のカチオン-インスリン化合物複合体錯体は、以上の形態のいずれかで、又はかかる形態のうちの2つ以上のものの混合物の形で提供され得る。置換というのは、インスリン化合物配列内部の2つ以上のアミノ酸残基をもう1つのアミノ酸で交換することを意味する。一部のケースでは、置換されたアミノ酸は、機能的等価物として作用し、サイレント改変を結果としてもたらす。置換は、保存的であり得、例えば、置換されたアミノ酸が属するクラスの他の成員から保存的置換を選択することができる。非極性疎水性アミノ酸の例としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン及びメチオニンが含まれる。極性中性アミノ酸の例としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン及びグルタミンが含まれる。正荷電塩基性アミノ酸には、アルギニン、リジン及びヒスチジンが含まれる。負荷電酸性アミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が含まれる。水溶性又は水溶解度は、別に指定のない限り、7.4のpHでの水性緩衝溶液中で決定される。7発明の詳細な説明本発明は、カチオン-インスリン化合物複合体錯体及びかかる錯体を含むさまざまな組成物ならびにかかる錯体及び組成物の製造及び使用方法を提供する。該錯体は、インスリン化合物欠乏を特徴とする身体条件といったようなさまざまな医学的身体条件の治療のためにインスリン化合物を投与する上で有用である。錯体は一般にカチオン構成要素とインスリン化合物複合体構成要素を含む。インスリン化合物複合体構成要素は一般に、修飾部分にカップリングされたインスリン化合物を含んでいる。錯体及び/又は組成物のその他の適切な構成要素の例としては、安定化剤、錯化剤及びカチオン-タンパク質錯体を調製する上で使用するための当該技術分野において既知のその他の構成要素が含まれる。本発明は同様に、新規のインスリン化合物複合体及びかかるインスリン化合物複合体及び/又はカチオン-インスリン化合物複合体錯体を含む脂肪酸処方物をも提供する。7.1インスリン化合物該カチオン-インスリン化合物複合体は、インスリン化合物構成要素を含んでいる。該インスリン化合物は、例えばヒトインスリンといったような哺乳動物のインスリン化合物又はインスリン化合物類似体であり得る。広範なインスリン化合物類似体が当該技術分野において既知である。好ましいインスリン化合物類似体は、リジンを含む、例えばB26、B27、B28、B29及び/又はB30位でB鎖のC末端から5アミノ酸以内にリジンを含むものである。B28位にあるアミノ酸残基がAsp、Lys、Leu、Val又はAlaであり;B29位にあるアミノ酸残基がLys又はProであり;B10位にあるアミノ酸残基がHis又はAspであり;B1位にあるアミノ酸残基がPhe、Aspであるか又は単独で欠失させられているか又はB2位の残基の欠失と組合わせて欠失されており;B30位のアミノ酸残基がThrAlaであるか又は欠失されており;かつB9位のアミノ酸残基がSer又はAspであるただしB28位かB29位がLysであることを条件とする点を除いて、インスリン化合物の配列を有する適切な一組の類似体が、欧州特許出願公開第1227000107号明細書その開示全体が本発明に参照として援用されている。の中で記されている。適切なインスリン化合物類似体のその他の例としては、AspB28ヒトインスリン、LysB28ヒトインスリン、LeuB28ヒトインスリン、ValB28ヒトインスリン、AlaB28ヒトインスリン、AspB28ProB29ヒトインスリン、LysB28ProB29ヒトインスリン、LeuB28ProB29ヒトインスリン、ValB28ProB29ヒトインスリン、AlaB28ProB29ヒトインスリンならびに上述の置換指針を用いて提供される類似体が含まれる。インスリン化合物フラグメントには、B22B30ヒトインスリン、B23B30ヒトインスリン、B25B30ヒトインスリン、B26B30ヒトインスリン、B27B30ヒトインスリン、B29B30ヒトインスリン、B1B2ヒトインスリン、B1B3ヒトインスリン、B1B4ヒトインスリン、B1B5ヒトインスリン、ヒトインスリンのA鎖、及びヒトインスリンのB鎖が含まれるがこれらに制限されるわけではない。適切なインスリン化合物のさらにその他の例は、血液グルコースを制御するための不溶性組成物という題の米国特許出願公開第20030144181A1号明細書、03年7月31日;安定なインスリン処方物という題の米国特許出願公開第20030104983A1号明細書、03年6月5日;インスリン前駆体及びインスリン類似体前駆体を作製するための方法という題の米国特許出願公開第20030040601A1号明細書、03年2月27日;改良された安定性を有する無亜鉛及び低亜鉛インスリン調製物という題の米国特許出願公開第20030004096A1号明細書、03年1月2日;安定なインスリン処方物という題の米国特許第6,551,992B1号明細書、03年4月22日;インスリン及びインスリン類似体の改良型調製のためのCペプチドという題の米国特許第6,534,288B1号明細書、03年3月18日;血液グルコースを制御するための不溶性組成物という題の米国特許第6,531,448B1号明細書、03年3月11日;イプシロンアミノ基の選択的アシル化という題の米国特許第RE37,971E号明細書、03年1月28日;肺インスリン結晶という題の米国特許出願公開第20020198140A1号明細書、02年12月26日;不溶性インスリン組成物という題の米国特許第6,465,426B2号明細書、02年10月15日;脂肪酸アシル化インスリン類似体という題の米国特許第6,444,641B号明細書、02年9月3日;イースト中での改良された発酵収量を有するインスリン前駆体及びインスリン前駆体類似体を作製するための方法という題の米国特許出願公開第20020137144A1号明細書、02年9月26日;安定化されたインスリン処方物という題の米国特許出願公開第20020132760A1号明細書、02年9月19日;不溶性インスリン組成物という題の米国特許出願公開第20020082199A1号明細書、02年6月27日;アシル化インスリンの投与方法という題の米国特許第6,335,316B1号明細書、02年1月1日;不溶性インスリン組成物という題の米国特許第6,268,335B1号明細書、01年7月31日;イースト中での改良された発酵収量を有するインスリン前駆体及びインスリン前駆体類似体を作製するための方法という題の米国特許出願公開第20010041787A1号明細書、01年11月15日;安定化されたアシル化インスリン処方物という題の米国特許出願公開第20010041786A1号明細書、01年11月15日;肺インスリン結晶という題の米国特許出願公開第20010039260A1号明細書、01年11月8日;不溶性インスリン組成物という題の米国特許出願公開第20010036916A1号明細書、01年11月1日;単量体インスリン類似体の投与方法という題の米国特許出願公開第20010007853A1号明細書、01年7月12日;アシル化インスリンの投与方法という題の米国特許第6,051,551A号明細書、00年4月18日;安定なインスリン処方物という題の米国特許第6,034,054A号明細書、00年3月7日;インスリンリスプロ送達方法という題の米国特許第5,970,973A号明細書、99年10月26日;単量体インスリン類似体処方物という題の米国特許第5,952,297A号明細書、99年9月14日;アシル化インスリン類似体という題の米国特許第5,922,675A、99年7月13日;吸入されたインスリンの生物学的利用能の改良手段としての単量体インスリンの使用という題の米国特許第5,888,477A号明細書、99年3月30日;糖尿病患者の血液グルコースレベルを所望の範囲内に維持するための方法という題の米国特許第5,873,358A号明細書、99年2月23日;単量体インスリン類似体処方物という題の米国特許第5,747,642A号明細書、98年5月5日;アシル化インスリン化合物類似体という題の米国特許第5,693,609A号明細書、97年12月2日;単量体インスリン類似体処方物という題の米国特許第5,650,486A号明細書、97年7月22日;イプシロンアミノ基の選択的アシル化という題の米国特許第5,646,242A号明細書、97年7月8日;安定なインスリン類似体結晶の調製という題の米国特許第5,597,893A号明細書、97年1月28日;インスリン類似体処方物という題の米国特許第5,547,929A号明細書、96年8月20日;安定な亜鉛インスリン化合物類似体結晶の調製という題の米国第5,504,188A号明細書、96年4月2日;インスリン類似体処方物という題の米国第5,474,978A号明細書、95年12月12日;単量体インスリン類似体処方物という題の米国特許第5,461,031A号明細書、95年10月24日;インスリンを製造するためのプロセスという題の米国特許第4,421,685A号明細書、83年12月20日;増大した亜鉛結合を伴うインスリン誘導体という題の米国特許第6,221,837号明細書、01年4月24日;真性糖尿病の治療のための薬学処方物という題の米国特許第5,177,058号明細書、93年1月5日これは、インスリン化合物-B31-Arg-OH及びヒトインスリン-B31-Arg-B32-Arg-OHを含む、B31で1つの塩基で修飾され5.8~8.5の間の等電点を有するインスリン化合物誘導体及び/又は薬学的に許容可能な賦形剤の中のその生理学的に寛容された塩のうちの少なくとも1つ、そして1μg~約200μgの亜鉛/IUの範囲の比較的高い亜鉛イオン含有量を含む薬学処方物について記述している。上述の特許文書の各々の開示全体が、特にさまざまなインスリン化合物類似体の製造、使用及び組成について教示する目的で、本発明に参照として援用されている。カチオン-インスリン化合物複合体を調製するために使用されるインスリン化合物は、さまざまな認識されたペプチド合成技術、例えば従来の溶液方法、固相方法、半合成方法及び組換え型DNA方法のいずれかにより調製され得る。例えば、チャンスChanceら、米国特許出願第07/388,201号明細書、欧州特許第383472号明細書、ブランジェら、欧州特許第214826号明細書、及びベラガヤBelagajeら、米国特許第5,304,473号明細書は、さまざまなプロインスリン化合物及びインスリン化合物類似体を開示し、本発明に参照として援用されている。インスリン化合物類似体のA及びB鎖は同様に、プロインスリン化合物様の前駆体分子又は1本鎖インスリン化合物前駆体分子を介して、組換え型DNA技術を用いて調製可能である。例えば、その開示全体がペプチド合成、組換え体産生及び製造に関するそれらの教示について本発明で参照として援用されている、フランクFrankら、Peptides:SynthesisStructureFunction、Proc.SeventhAm.Pept.Symp.、Eds.D.Rich及びE.グロスGross1981年;BerndGutte、Peptides:Synthesis、Structures、andApplications、AcademicPress1995年10月19日;チャンChan、ウェンWeng及びホワイトWhite、Peter編、FmocSolidPhasePeptideSynthesis:APracticalApproach、OxfordUniversityPress2000年3月を参照のこと。7.2修飾部分カチオン-インスリン化合物複合体錯体は、インスリン化合物複合体を提供するべくインスリン化合物に例えば共有結合又はイオンによりカップリングされた修飾部分を含む。修飾部分は、本書に記述されているような所望の特性をもつインスリン化合物を提供する、インスリン化合物にカップリングされる部分である。例えば修飾部分は、さまざまな環境例えば消化管及び/又は血流内で該インスリン化合物の分解速度を低下させることができ、かくしてこのような環境内で修飾部分の不在下であれば分解させられると思われるよりも少ないインスリン化合物が修飾された形状で分解されることになる。好ましい修飾部分は、インスリン化合物複合体が親インスリン化合物の生物活性を治療上有意な百分率だけ保持できるようにするものである。さらに好ましい修飾部分は、両親媒性又は親水性であり、及び/又はこのインスリン化合物複合体を両親媒性又は親水性にするか又は、対応するインスリン化合物又は対応する未複合インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりも低い親油性を与えるものである。カチオン-インスリン化合物複合体組成物中で有用である適切な修飾部分及びインスリン化合物複合体の例は、その開示全体が本発明に参照として援用されている以下の特許の中に見い出すことができる;アミノ含有生物活性剤のトリアルキルロック促進性重合体プロドラッグという題の米国特許第6,303,569号明細書、01年10月16日;米国特許第6,214,330号明細書クマリン及び関連芳香族系重合体プロドラッグ、01年4月10日;生物学的活性物質に対してリンク可能な水溶性非抗原性重合体という題の米国特許第6,113,906号明細書、00年9月5日;実質的に純粋なヒスチジンリンクされたタンパク質重合体複合体という題の米国特許第5,985,263号明細書、99年11月16日;酸素運搬タンパク質の投与に付随する副作用の削減方法という題の米国特許第5,900,402号明細書、99年5月4日;複合安定化された治療薬組成物、それを含む送達及び診断処方物、並びにそれを作製及び使用するための方法という題の米国特許第5,681,811号明細書、97年10月28日;アリールイミデートで活性化されたポリアルキレンオキシドという題の米国特許第5,637,749号明細書、97年6月10日;ポリペプチド修飾用のポリアルキレンオキシドの活性カルボン酸塩という題の米国特許第5,612,460号明細書、97年3月18日;生物学的に活性な求核試薬に複合されたアズラクトン活性化型ポリアルキレンオキシドという題の米国特許第5,567,422号、96年10月22日;環式イミドチオンで活性化されたポリアルキレンオキシドという題の米国特許第5,405,877号明細書、95年4月11日;及び複合安定化されたポリペプチド組成物、それを含む治療用送達及び診断処方物、並びにそれを作製及び使用するための方法という題の米国特許第5,359,030号明細書、94年10月25日。本発明の処方物において有用である複合ポリペプチドのさらなる例は、その明細書全体が本書に参照として援用されている以下の米国特許出願の中に見い出すことができる;米国特許出願第09/134,803号明細書、98年8月14日出願;第10/018,879号明細書、01年12月19日出願;第10/235,381号明細書、02年9月5日出願;第10/235,284号明細書、02年9月5日出願;及び第09/873,797号明細書、01年6月4日出願。以下の特許及び特許出願の各々の開示全体は、ポリペプチドを修飾するために用いられる部分に関するそれらの教示のため、本発明に参照として援用されている。修飾部分は、その主鎖の中に弱い又は分解可能な連結を含み得る。例えば、PAGは、加水分解の可能性あるラクチド、グリコリド、カーボネート、エステル、カルバメートなどといったような加水分解不安定連結を含むことができる。このアプローチは、重合体を、より低分子量のフラグメントへと切断させることができるようにする。かかる重合体の例は、例えばその開示全体が本発明に参照として援用されている、ハッベルHubbellらに対する米国特許第6,153,211号明細書の中に記述されている。同様に、その開示全体が本発明に参照として援用されているエクウライブEkwuribeらに対する米国特許第6,309,633号明細書も参照のこと。修飾部分は、任意の親水性部分、親油性部分、両親媒性部分、塩形成部分及びその組合せを含むことができる。代表的な親水性、両親媒性及び親油性重合体及び修飾部分が、以下でより詳細に記述されている。7.2.1親水性部分適切な親水性部分の例としては、PAG部分、その他の親水性重合体、糖部分、ポリソルベート部分及びそれらの組合せが含まれる。7.2.2ポリアルキレングリコール部分PAGは反復アルキレングリコール単位を伴う化合物である。一部の実施形態においては、該単位は全て同一である例えば、PEG又はPPG。その他の実施形態においては、アルキレン単位は異なっている例えばポリエチレン-コ-プロピレングリコール又はPLURONICS登録商標。重合体は、無作為共重合体例えば酸化エチレン及び酸化プロピレンが共重合されている又は分枝若しくはグラフト共重合体であり得る。PEGは、好ましいPAGであり、きわめて望ましい特性を有し、食品医薬品局により一般に安全なものとみなされているGRASことから、生物学的利用分野において有用である。PEGは一般にH-CH2CH2On-Hという式を有し、ここでnは約2~約4000以上の範囲にあり得るが、キャッピング部分は、例えばモノ-メトキシ又はジ-ヒドロキシと変動しうる。PEGは標準的に無色無臭、水溶性又は水混和性分子量に応じて、熱安定性、化学的不活性、加水分解安定性を有し、一般に無毒性である。PEGは同様に、生体適合性があり、標準的に体内で免疫応答を生成しない。好ましいPEG部分は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50個以上のPEGサブユニットを含む。PEGは、単分散型、実質的に単分散型、純粋に単分散型又は実質的に純粋に単分散型例えば、その開示全体が本発明に参照として援用されている、共に01年6月4日付けの米国特許出願第09/873,731号明細書及び米国特許出願第09/873,797号明細書において当該出願人らにより以前に記述されているようなもの、又は多分散型であり得る。比較的低分子量の単分散型重合体を使用することの1つの利点は、それらが容易に明確な複合体分子を形成し、このことが再現可能合成及びFDA承認の両方を容易にし得るという点にある。PEGは、インスリン化合物の残りの部分に複合される前に各末端でヒドロキシル基と直鎖になり得る。PEGは、もう一方の末端がインスリン化合物にカップリングされるヒドロキシル基であるのに対し一方の末端が比較的不活性のアルコキシ基例えば直鎖又は分枝OC1-6である、メトキシ-PEG又はmPEGといったようなアルコキシPEGであってもよい。PEGは、1つの実施形態においてR-PEG-nOHmとして表わされ得る分枝のものであり得、ここで式中Rはペンタエリスリトール、糖、リジン又はグリセロールといったような中心標準的には多水酸基のコア作用物質を表わし、nはPEGサブユニットの数を表わし、各腕について変動する可能性があり標準的には1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50であり、mは腕の数を表わし、2からコア作用物質上の付着部位の最大数Zの範囲内にある。各分岐は同じか又は異なるものであり得、例えばエーテル及び/又はエステルで終結され得る。腕の数mは、3~100以上の範囲であり得、末端ヒドロキシル基のうちの1つ以上のものがインスリン化合物の残りにカップリングされ得、そうでなければ化学的修飾に付され得る。その他の分枝PEGは、式CH3O-PEG-pR-Zによって表わされるものを含み、ここでPは2又は3に等しく、Rはリジン又はグリセロールといったような中心コアを表わし、Zは容易な化学的活性化に付されるカルボキシルといったような基を表わす。さらにもう1つの分枝形態であるペンダントPEGは、PEG鎖の端部ではなく、又はそれに加えてPEG主鎖に沿ってカルボキシルといった反応基を有する。分岐したPEGは、Lが連結基でありXが活性化された末端基である式PEG-LCHX2nにより表わされ得る。7.2.3糖部分本書に記述されている修飾部分は、糖部分を含むことができる。一般に、該糖部分は、少なくとも1つのサッカロース基の炭水化物産物である。代表的な糖部分としては、グリセロール部分、単糖、2糖、3糖及びオリゴ糖そして多糖類例えばでんぷん、グリコーゲン、セルロース及び多糖類樹脂が含まれるが、これらに制限されるわけではない。特定的な単糖類には、C6以上の好ましくはC6~C8糖例えばグルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、リボース及びセドヘプツロースが含まれ、2糖及び3糖類には、スクロース、セロビオース、マルトース、ラクトース及びラフィノースといったような2つ又は3つの単糖類単位好ましくはC5~C8を有する部分が含まれる。糖部分を用いた複合は、その開示全体が本発明に参照として援用されている米国特許出願第第5,681,811号明細書、5,438,040号明細書及び5,359,030号明細書の中で記述されている。7.2.4ポリソルべート部分修飾部分は1つ以上のポリソルベート部分を含み得る。例としては、ソルビタンエステル及び、ポリオキシエチレンで誘導体化されたポリソルベートが含まれる。ポリソルべート部分を用いた複合は、その開示全体が本発明に参照として援用されている米国特許出願第5,681,811号明細書、5,438,040号明細書及び5,359,030号明細書の中で記述されている。7.2.5.生体適合性ある水溶性ポリカチオン部分一部の実施形態においては、生体適合性ある水溶性ポリカチオン重合体を使用することができる。生体適合性ある水溶性ポリカチオン重合体としては、例えば、ペンダント基として付着したプロトン化複素環を有するあらゆる修飾部分が含まれる。この文脈において水溶性というのは、修飾部分全体が、20~37°Cの温度で、緩衝生理食塩水又は共溶媒としての少量の添加有機溶媒を伴う緩衝生理食塩水といったような水溶液中で可溶であることを意味している。一部の実施形態では、修飾部分自体は、水溶液自体の中では充分に可溶ではないが、PEG鎖といったような水溶性重合体とのグラフト化により溶解状態になる。例としては、ポリD-Lys、ポリオルニチン、ポリArg又はポリヒスチジンを含む天然又は合成アミノ酸又はアミノ酸混合物のその他の正荷電ポリアミノ酸及びポリ-L-Lysなどの修飾部分側鎖又はMMD主鎖のいずれかの上にアミン基を有するポリアミン、及び非ペプチドポリアミン例えばポリアミノスチレン、ポリアミノアクリラート、ポリN-メチルアミノアクリラート、ポリN-エチルアミノアクリラート、ポリN,N-ジメチルアミノアクリラート、ポリN,N-ジエチルアミノアクリラート、ポリアミノメタクリラート、ポリN-メチルアミノメタクリラート、ポリN-エチルアミノメタクリラート、ポリN,N-ジメチルアミノメタクリラート、ポリN,N-ジエチルアミノメタクリラート、ポリエチレンイミン、第4級アミンの重合体例えばポリN,N,N-トリメチルアミノアクリラートクロリド、ポリメタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド及びキトサンといった天然又は合成多糖類が含まれる。7.2.6その他の親水性部分修飾部分は同様に、その他の親水性重合体も含み得る。例としてはポリオキシエチル化ポリオール例えばポリオキシエチル化グリセロール、ポリオキシエチル化ソルビトール、及びポリオキシエチル化グルコース;ポリビニルアルコールPVA;デキストラン;炭水化物ベースの重合体などが含まれる。重合体は、直鎖又は分岐鎖の上述の重合体の単量体に基づく単独重合体、又はランダム若しくはブロック共重合体及び三元重合体であり得る。適切な付加的な重合体の特定的な例としては、ポリオキサゾリン、二官能性ポリアクリロイルモルホリンPAcM及びポリビニルピロリドンPVPが含まれるが、これらに制限されるわけではない。PVP及びポリオキサゾリンは当該技術分野において周知の重合体であり、その調製は当業者には容易に明らかとなる。PAcM及びその合成及び使用は、その開示全体が本発明に参照として援用されている米国特許第5,629,384号明細書及び米国特許第5,631,322号明細書において記述されている。7.2.7生体接着性ポリアニオン部分ある種の親水性重合体は、潜在的に有用な生体接着性特性を有すると思われる。かかる重合体の例は、マチオヴィツMathiowitzらに対する米国特許第6,197,346号明細書中などで見い出される。カルボキシル基を含むこれらの重合体例えば、ポリアクリル酸は生体接着性を示し、本書で記述されているインスリン化合物とも容易に複合される。ポリラクチド-コ-グリコリド、ポリ無水物、及びポリオルトエステルといったような、分解時点でカルボン酸基を曝露する急速生体内崩壊性重合体が、同様に、生体接着性重合体でもある。これらの重合体は、インスリン化合物を消化管に送達するのに使用可能である。重合体が分解するにつれて、それらはカルボン酸基を曝露してそれらが消化管に強く接着できるようにすることができ、又インスリン化合物複合体の送達を助けることができる。7.2.8親油性部分一部の実施形態においては、修飾部分は1つ以上の親油性部分を含んでいる。親油性部分は、アルキル部分、アルケニル部分、アルキニル部分、アリール部分、アリールアルキル部分、アルキルアリール部分、脂肪酸部分、アダマンタンチル、及びコレステリルならびに親油性重合体及び/又はオリゴマを含めたただしこれらに制限されるわけではない当業者であれば理解できるようなさまざまな親油性部分であり得る。アルキル部分は、飽和又は不飽和、直鎖、分枝又は環状炭化水素鎖であり得る。一部の実施形態においては、該アルキル部分は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50個以上の炭素原子を有する。例としては、飽和、直鎖アルキル部分、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、ノナデシル及びエイコシル;飽和、分枝アルキル部分例えば、イソプロピル、sec-ブチル、tert-ブチル、2-メチルブチル、tert-ペンチル、2-メチル-ペンチル、3-メチルペンチル、2-エチルヘキシル、2-プロピルペンチル及び、ビニル、アリル、1-ブテニル、2-ブテニル、エチニル、1-プロピニル及び2-プロピニルを含むただしこれらに制限されるわけではない。上述の飽和アルキル部分から誘導された不飽和アルキル部分が含まれる。その他の実施形態では、アルキル部分は低級アルキル部分である。さらにその他の実施形態においては、アルキル部分は、C1~C3の低級アルキル部分である。一部の実施形態においては、修飾部分は特定的にアルキル部分で構成されておらず、又は特定的に低級アルキル部分で構成されておらず、又は特定的にアルカン部分で構成されておらず、又は特定的に低級アルカンで構成されていない。アルキル基は、未置換であるか又は1つ以上の置換基で置換されるかのいずれかであり得、かかる置換基は好ましくは、複合体の合成方法と干渉もせず、又複合体の生物活性を除去しもしない。潜在的に干渉する官能基は、その官能基を非干渉性にするべく保護基で適切に遮断され得る。各置換基は任意には、付加的な非干渉性置換基と置換され得る。非干渉性という用語は、いずれかの反応を本発明のプロセスに従って実施する実現可能性を無くさないものとして置換基を特徴づけする。親油性部分は、天然又は合成の飽和又は不飽和の、直鎖又は分枝の脂肪酸部分といったような脂肪酸部分であり得る。一部の実施形態においては、脂肪酸部分は、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24個以上の炭素原子を有する。一部の実施形態では、修飾部分は特定的に脂肪酸部分で構成されず、又は特定的に2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24個以上の炭素原子を有する脂肪酸部分で構成されない。修飾部分がアリール環を含む場合、この環は、分子内でカルバメート部分と反応しその加水分解を助けることができるような形で位置づけされる求核官能基例えばOH又はSHで官能化され得る。一部の実施形態においては、該求核基は、インビボで加水分解されるか又はその他の形で分解される能力をもつ保護基で保護され、その結果該保護基が脱保護された時点で、複合体の加水分解及び結果としての親インスリン化合物の放出が容易になる。適切な修飾部分のその他の例としては、-CCH2OH3;-CHCH2OH2;-CCH33;-CHCH32が含まれる。7.2.9.両親媒性部分一部の実施形態においては、修飾部分は両親媒性部分を含んでいる。数多くの重合体及びオリゴマが両親媒性である。これらは往々にして、直鎖、分岐又はグラフト重合体又は共重合体といったような重合体及び/又はオリゴマの形をしている可能性のある、親水性及び親油性部分を含むブロック共重合体、分岐共重合体又はグラフト共重合体である。両親媒性修飾部分は、本書で記述されている親油性及び親水性部分のいずれかの組合せを含み得る。かかる修飾部分は標準的に、往々にしてこの修飾部分の末端端部にある例えばハロ、ヒドロキシ、アミン、チオール、スルホン酸、カルボン酸、イソシアナート、エポキシ、エステルなどといった少なくとも1つの反応性官能基を含んでいる。これらの反応性官能基は、親油性直鎖又は分岐鎖アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル又はアルキルアリール基、又は親油性重合体又はオリゴマを付着するために使用され得、かくして修飾部分の親油性を増大させるそして、これらを一般的に両親媒性にする。親油基は、例えば、モノ又はジカルボン酸から誘導され得、又該当する場合には、無水物又は酸塩化物といったようなカルボン酸の反応性等価物から誘導され得る。親油基のための適切な前駆体の例としては、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、イソ酪酸、トリメチル酢酸、カプロン酸、カプリル酸、ヘプタン酸、カプリン酸、ペラルゴン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セラト酸ceraticacid、モンタン酸、イソステアリン酸、イソノナン酸、2-エチルヘキサン酸、オレイン酸、リシノール酸、リノール酸、リノレン酸、エルカ酸、大豆脂肪酸、亜麻仁脂肪酸、脱水ヒマシ油脂肪酸、トール油脂肪酸、油桐脂肪酸、ヒマワリ脂肪酸、紅花脂肪酸、アクリル酸、メタクリル酸、無水マレイン酸、無水オルトフタル酸、テレフタル酸、イソフタル酸、アジピン酸、アゼライン酸、セバシン酸、無水テトラヒドロフタル酸、無水ヘキサヒドロフタル酸、コハク酸及びポリオレフェインカルボン酸がある。末端親油基は等価である必要はない。すなわち、結果としての共重合体は、同じ又は異なるものである末端親油基を含み得る。親油基は、以上で定義されているように2つ以上のモノ又はジ官能性アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールアルキル又はアルキルアリール基から誘導され得る。7.2.10PAG-アルキル修飾部分修飾部分は、1つ以上の直鎖又は分枝PAG部分及び/又は2つ以上の直鎖又は分枝、置換又は未置換アルキル部分を有する直鎖又は分枝重合体部分であり得る。あるケースでは、かかる分子は両親媒性とみなされる。しかしながらPAG及びアルキル部分は、かかる部分をさらに親油性の又はさらに親水性のものにするべく変動し得る。一部の実施形態では、修飾部分は特定的にアルキル部分で構成されておらず、又その他の実施形態では修飾部分は特定的にアルカン部分で構成されていない。一部の実施形態におけるPAG部分は、直鎖又は分枝形状に配置された1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25個のPAGサブユニットを含む。一部の実施形態におけるPAG部分はPEG、PPG及び/又はPBGサブユニットを含む。一部の実施形態におけるアルキル部分は、好ましくは2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20個の炭素原子を有する。アルキル部分は、好ましくはアルカン部分である。修飾部分は-OCH3といったようなキャッピング部分を含み得る。さらに、修飾部分はピバロイル基といったような疎水基を含み得る。一の実施形態において、修飾部分は、という式を有し、式中、o、p及びqは独立して0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50であり、o、p及びqのうち少なくとも1つは少なくとも2である。X、Y及びZは独立して-C-、-O-、-CO-、-COO-、-OCO-、-NH-、-NHCO-、及び-CONH-、の中から選択され、RはH又はアルキル、好ましくは低級アルキル、より好ましくはメチルである。変数o、p及びqは好ましくは、親水性又は両親媒性の修飾部分を生成するように選択され、好ましくは、親水性又は両親媒性のインスリン化合物複合体、好ましくはモノ複合体、ジ複合体又はトリ複合体を生成するべくインスリン化合物との関係において選択される。基礎インスリン化合物維持のために使用されるべきインスリン化合物複合体のための1つの好ましい実施形態においては、該インスリン化合物に近位のPAG及びインスリン化合物に遠位のアルキル部分を生成するようにo、p及びqが選択されている。代替的には、O、P及びQは、インスリン化合物に遠位のPAG及びインスリンに近位のアルキルを生成するべく選択可能である。一の変形実施形態においては、Rはピバロイル基又はアルキル-ピバロイル基である。関係する実施形態においては、修飾部分はという式を有し、ここで式中mは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25であり、nは2~100、好ましくは2~50、より好ましくは2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24又は25であり、Xは-C-、-O-、-CO-、-NH-、-NHCO-又は-CONH-であり、Yは低級アルキル又は-Hである。Xは好ましくはOであり、Yは好ましくは-CH3である。一部のケースでは、カルボニル基-CO-は不在であってよく、-CH2-部分は、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。好ましい実施形態においては、修飾部分は直前の修飾部分がB29にあるヒトインスリンにカップリングされている場合、結果としてのモノ複合体はIN105と呼ばれる、及び直前の修飾部分がB29でヒトインスリンにカップリングされている場合、結果としてのモノ複合体はHIM2と呼ばれる、から選択された構造を有する。以上の部分のいずれかを、例えばA1、B1又はB29などの求核残基においてヒトインスリンにカップリングさせることができる。一部のケースでは、カルボニル基-CO-は不在であるか又はアルキル部分、好ましくは低級アルキル部分と交換してもよく、-CH2-部分は、ヒドロキシル基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。もう1つの実施形態においては、修飾部分は、という式を有し、各々のCは独立して選択され、m個の炭素をもつアルキル部分であり、mは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20であり;各PAGは独立して選択され、n個のサブユニットを有するPAG部分であり、nは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25であり;各々のXは、独立して選択され、PAGをCにカップリングさせる連結基であり、好ましくは-C-、-O-、-CO-、-NH-、-NHCO-又は-CONH-である。一部の実施形態においては、Cm-X部分は不在であり、PAGn部分は-OH部分又は-OCH3部分で終結される。例えば、PAGは、PEG、PPG及び/又はPBGサブユニットを含む1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20個のPAGサブユニットを有するメトキシ終端PAG又はヒドロキシ終端PAGであり得る。一部のケースでは、カルボニル基-CO-を、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得るアルキル部分、好ましくは低級アルキル部分で交換することができる。修飾部分は、例えばという式を有することができ、ここで各々のCは独立して選択され、m個の炭素をもつアルキル部分であり、mは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20であり;各PAGは独立して選択され、n個のサブユニットを有するPAG部分であり、nは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24又は25であり;Xは、-O-又は-NH-であり;各々のOは、独立して選択され1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14又は15である。例えば、PAGは、PEG、PPG及び/又はPBGサブユニットを含む1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20個のPAGサブユニットを有し得る。一部のケースでは、付着点に近位のカルボニル基-CO-は不在であるか、そうでなければ、アルキル部分、好ましくは低級アルキル部分と交換してもよく、-CH2-部分は、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。修飾部分は、例えば、という式を有することができ、各々のCは独立して選択され、m個の炭素をもつアルキル部分であり、mは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20であり;各PAGは独立して選択され、n個のサブユニットを有するPAG部分であり、nは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25であり;各々のXは、独立して選択され、PAGをCにカップリングさせる連結基であり、好ましくは-C-、-O-、-CO-、-NH-、-NHCO-、又は-CONH-であり、各々のOは独立して選択され、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14又は15である。一部の実施形態においては、Cm-X部分は不在であり、PAGn部分は-OH部分又は-OCH3部分で終結される。例えば、PAGは、PEG、PPG及び/又はPBGサブユニットを含む1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20個のPAGサブユニットを有するメトキシ終端PAG又はヒドロキシ終端PAGであり得る。一部のケースでは、付着点に近位のカルボニル基-CO-は不在であり得、-CH2-部分は、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。もう1つの実施形態においては、修飾部分は、という式を有していてよく、式中、-X、Y、及びZは、独立して選択された連結基であり、各々は任意に存在し、Xが存在する場合それは共有結合によりインスリン化合物にカップリングされており、-R1及びR2のうちの少なくとも1つが存在し、それは低級アルキルであり、任意にはカルボニル基を含み、-R2は-CH3、-H、トシレートといったようなキャッピング基であり、そうでなければ活性化基であり、-PAGは、1つ以上のアルカレングリコール部分を取込みすなわちオキシアルカレン部分、任意には-S-、-O-、-N-、及び-CO-からなる群から選択された1つ以上の付加的部分を取込む直鎖又は分枝炭素鎖であり、-修飾部分は、最大3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25個の重原子を有する。本発明の実施形態においては、X、Y及びZのうちのいずれか1つ又は複数のものが不在であってよい。さらに、X、Y及び/又はZが存在する場合、それらは独立して-CO-、-O-、-S-、-C-及び-N-の中から選択され得る。一実施形態では、Zは-CO-である。もう1つの実施形態では、Zは存在しない。一部の実施形態において、R1は低級アルキルであり、R2は存在しない。その他の実施形態においては、R2は低級アルキルであり、R1は存在しない。もう1つの実施形態においては、該修飾部分は、-C、-C-、-O-、=O、-S-、-N-、-Si-からなる群から選択された3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、19、20、21、22、23、24又は25個の原子の主鎖をもつ直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分を含み得る。重原子は標準的には1つ以上の炭素原子及び、-O-、-S-、-N-及び=Oからなる群から選択された1つ以上の非炭素重原子を含むことになる。炭素原子及び非炭素重原子は標準的には、各非炭素重原子あたり少なくとも1個の炭素原子、好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも2個の炭素原子、より好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも3個の炭素原子という比率で存在する。炭素原子及び酸素原子は標準的には各酸素原子あたり少なくとも1個の炭素原子、好ましくは各酸素原子あたり少なくとも2個の炭素原子、より好ましくは各酸素原子あたり少なくとも3個の炭素原子という比率で存在する。修飾部分は、分枝又は直鎖C1-6、分枝又は直鎖、又はカルボニルといった1つ以上のキャッピング基を含み得る。修飾部分は標準的には水素を含み、水素のうちの1つ以上のものは、重原子であるものの上記式中では重原子として計数すべきでないフッ素で置換され得る。修飾部分は、一部のケースでは特定的に未置換アルキル部分を除外し得る。修飾部分は例えば、アミノ酸上の利用可能な基、例えばアミノ基、ヒドロキシル基又はカルボン酸基ポリペプチドに対して、例えばカルバメート、カルボナート、エーテル、エステル、アミドといったような連結基、又は第2級アミン基又はジスルフィド結合によってカップリングされ得る。連結基内の分子は修飾部分の一部として計数される。好ましい実施形態においては、修飾部分の分子量はHIM2修飾部分の分子量より小さい。本発明は、なお式中、nは、1、2、3又は4でありmは1、2、3、4又は5であるという式をもつ修飾部分を含む。本発明は、なお式中、nは、1、2、3、4又は5でありmは1、2、3又は4であるという式をもつ修飾部分を含む。本発明は、という式を有し、式中、mが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20であり、nが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20である、修飾部分を含む。本発明は、という式を有し、式中PAGがm個のサブユニットを有するPAG部分であり、mが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20であり、nが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19又は20である、修飾部分をも含んでいる。その他の好ましい修飾部分は、を含む以下の修飾部分は、基礎インスリン化合物交換投薬計画において使用するために特に好ましいものであり得る。さらにその他の修飾部分には以下のものが含まれる;なお式中、Rは-H、-OH、-CH2OH、-CHOH2、-COOH、-CH2COOH又は活性化部分例えばカルボジイミド、混合無水物又はN-ヒドロキシスクシンイミド、又はキャッピング基である。本発明は同様に、タンパク質又はペプチド、好ましくはインスリン化合物に付着したこのような部分をも含む。以下では、特定の複合戦略についてより詳細に論述する。これらの修飾部分のうち、好ましい部分は、インスリン化合物を対応する未複合インスリン化合物よりも低い親油性及び/又は高い親水性を有するものにするものである。本発明はさらに1つ以上のカルボニル基、好ましくは1、2、3、4又は5個のカルボニル基を含むこのような修飾部分を含んでおり、このカルボニル基は、該修飾部分内に挿入されてもよいし又はカルボニルで-O-又は-CH2-を交換することもできる。さらに、-CH2-又は-CH3部分のうちのいずれかを例えば、同じ又は異なるものであり得る1、2、3、4又は5個のPAGサブユニットを有するPAG鎖又は-OH又は低級アルキルで置換することもできる。好ましくはRは、各-O-が最も近い-O-から少なくとも2個の炭素だけ分離されるような形で選択される。本発明は同様に、2つ以上の部分がリジンといったような分岐部分に付着している分枝修飾部分をも含む。本発明の実施形態に従った複合体の親水性/親油性といったような薬学的特性は例えば、PAG単量体の数、アルキル鎖のタイプ及び長さ、PAG-ペプチド連結の性質及び複合部位の数を増減させることによって、修飾部分の親油性及び親水性部分を調整することによって変動させることができる。修飾部分-ペプチド連結の正確な性質は、それが生理学的pHで又は血漿中での加水分解に対し敏感でかつ/又は安定しているような形で変動可能である。本発明は同様に、ポリペプチド、好ましくはインスリン化合物に対してカップリングされた上述の修飾部分のいずれかをも含む。好ましくは、修飾部分は、ポリペプチドを例えば少なくとも1.05、1.25、1.5、1.75、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、又は15という乗数だけ対応する未複合ポリペプチドより大きい溶解度をもつものにする。本発明の修飾部分は、例えば、利用可能なあらゆる付着点においてヒトインスリンといったようなインスリン化合物にカップリングされ得る。好ましい付着点は、求核残基例えばA1、B1及び/又はB29である。さらには、本発明の1つの態様が、カルボン酸形態での、式VII及びVIIIの部分といったようなただしこれらに制限されるわけではない新規の修飾部分を含むことがわかるだろう。さらに、修飾部分がカルボキシル基を含む場合、それを混合無水物に転換させ、アミド結合を含有する複合体を作り上げるべくペプチドのアミノ基と反応させることができる。もう1つの手順においては、カルボキシル基を水溶性カルボジイミドで処理し、ペプチドと反応させて、アミド結合を含有する複合体を生成することができる。その結果、本発明は、式VII及びVIIIの修飾部分の活性化された形態及びカルボジイミド、混合無水物又はN-ヒドロキシスクシンイミドといったような本発明のその他の新規のオリゴマといったような、本書で提示された新規の部分の活性化された形態を含んでいる。一部のケースでは、修飾部分は、アミノ酸又はC末端にカップリングされた2つ以上の一連のアミノ酸、又はポリペプチドの側鎖を介してポリペプチドに対してカップリングされ得る。例えば、1つの実施形態においては、修飾部分は、Thrの-OH又は-COOHでカップリングされ、mm修飾されたThrは、カルボキシ末端でポリペプチドにカップリングされる。例えば、一実施形態においては、修飾部分は、Thrの-OH又は-COOHでカップリングされ、修飾されたThrはdes-Thrインスリン化合物のB29アミノ酸例えばヒトインスリンのためのB29Lysにカップリングされる。もう1つの例では、mmは、インスリン化合物B鎖から末端オクタペプチドのThrの-OH又は-COOHでカップリングされ、mm修飾されたオクタペプチドは、des-オクタインスリン化合物のB22アミノ酸にカップリングされる。その他の変形形態は、本明細書に照らして当業者には明白となるであろう。7.2.11塩形成部分一部の実施形態においては、修飾部分は塩形成部分を含む。塩形成部分は、カルボキシラート及びアンモニウムを含めただし、これらに制限されるわけではない。当業者であれば理解できる通り、さまざまな適切な塩形成部分であり得る。修飾部分が塩形成部分を含んでいる一部の実施形態においては、インスリン化合物複合体は塩形態で提供される。これらの実施形態では、インスリン化合物複合体は、例えばクロロ、ブロモ、ヨード、ホスファート、アセタート、カルボナート、スルファート、トシレート及びメシレートといった陰イオン、又はナトリウム、カリウム、カルシウム、リチウム及びアンモニウムといった陽イオンを含めてただし、これらに制限されるわけではない。、当業者であれば理解できる通りの適切な薬学的に許容可能な対イオンと会合させられる。修飾部分の以上の例は、例示を目的とするものであり、いかなる形であれ制限的なものとしてみなされるべきではない。当業者であれば、本書に開示され請求されている化学的複合機序の限界内で、特定の機能性を達成するのに適した複合用部分が可能であるということを認識することだろう。従って、本書で開示されている原理に従って、付加的な部分を選択し使用することができる。7.3複合戦略、例えばインビボ分解を受ける可能性が低く従って血漿半減期が増大している複合体を生成するために、修飾部分との複合度、分子上の複合部位の選択及び修飾部分の選択といったような因子を変動させることができる。例えば、修飾部分の会合を容易にするのに適した適切な付着すなわち修飾部分複合部位においてインスリン化合物構造上の1、2、3、4、5個以上の部位に修飾部分を含むようにインスリン化合物を修飾させることが可能である。一例を挙げると、かかる適切な複合部位は、リジンアミノ酸残基といったようなアミノ酸残基を含み得る。一部の実施形態においては、インスリン化合物複合体はモノ複合体である。その他の実施形態においては、インスリン化合物複合体は、ジ複合体、トリ複合体、テトラ複合体、ペンタ複合体などといったようなマルチ複合体である。インスリン化合物上の修飾部分の数は、インスリン化合物上の複合部位の数によってのみ制限される。さらにその他の実施形態においては、インスリン化合物複合体はモノ複合体、ジ複合体、トリ複合体、テトラ複合体及び/又はペンタ複合体の混合物である。好ましい複合戦略は、親インスリン化合物の生物活性の一部分又は全てを関連づける複合体を生み出すような戦略である。好ましい付着部位には、A1N末端、B1N末端、及びB29リジン側鎖が含まれる。B29モノ複合体及びB1、B29ジ複合体がきわめて好ましい。もう1つの好ましい付着点は、インスリン化合物のCペプチド構成要素又はリーダーペプチド構成要素上のアミノ官能基である。インスリン化合物に対し1つ以上の修飾部分すなわち単一の又は複数の修飾部分構造をカップリングすることができる。複数の中の修飾部分は好ましくは同じものである。ただし、複数の中の修飾部分が互いに異なるものであり得る、又は代替的には、複数の中の修飾部分の一部分が同じであり、一部分が異なるものであり得る、ということも理解すべきである。複数の修飾部分がインスリン化合物にカップリングされている場合、加水分解型結合でインスリン化合物に対し1つ以上の修飾部分をカップリングさせ、非加水分解型結合でインスリン化合物に対し1つ以上の修飾部分をカップリングさせることが好ましい可能性がある。代替的には、インスリン化合物に対し該複数の修飾部分をカップリングする結合は全て、加水分解型であり得るものの、例えば1つ以上の修飾部分が体内で加水分解によりインスリン化合物から比較的急速に除去され得かつ1つ以上の該修飾部分が体内で加水分解によりインスリン化合物からより低速で除去されるような形でさまざまな度合の加水分解性を有する可能性もある。7.3.1インスリン化合物に対する修飾部分のカップリング修飾部分は、好ましくはインスリン化合物に共有結合によりカップリングされる。修飾部分上の2つ以上の部分が、インスリン化合物に対し共有結合によってカップリングされ得る。カップリングは、加水分解型又は非加水分解型結合又はこれら2つの混合すなわち異なる複合部位での異なる結合を利用し得る。一部の実施形態では、インスリン化合物は、加水分解型結合例えばエステル、カーボネート又は加水分解型カルバメート結合を用いて修飾部分にカップリングされる。加水分解型カップリングの使用により、プロドラッグとして作用するインスリン化合物複合体が提供されることになる。プロドラッグアプローチは、修飾部分複合部位がインスリン化合物の結合領域内にある場合といったような、インスリン化合物-修飾部分複合体が不活性であるすなわち、複合体にインスリン化合物の一次的作用機序を通して体に影響を及ぼす能力が欠如している場合に、望ましい可能性がある。加水分解型カップリングの使用は同様に、活性薬物を提供するために1つ以上の修飾部分がそのそれぞれのインスリン化合物-修飾部分複合体から分割されるにつれて一定の与えられた時限全体にわたりインスリン化合物を投与する、時間放出又は制御放出効果を提供することもできる。その他の実施形態においては、インスリン化合物は、非加水分解型結合例えば非加水分解型カルバメート、アミド又はエーテル結合を利用して修飾部分にカップリングされる。非加水分解型結合の使用は、例えば投与後少なくとも2時間という長い時間血流内を治療上有意な量のインスリン化合物複合体が循環できるようにすることが望まれる場合に、好ましい可能性がある。インスリン化合物を非加水分解式に修飾部分に共有結合によりカップリングするのに使用される結合は、標準的に共有結合、エステル部分、カーボナート部分、カルバメート部分、アミド部分及び第2級アミン部分からなる群から選択される。修飾部分は、求核ヒドロキシル官能基及び/又はアミノ官能基を含めたただし、これらに制限されるわけではない。さまざまな求核残基においてインスリン化合物にカップリングされ得る。求核ヒドロキシル官能基は、例えば、セリン及び/又はチロシン残基において見い出され、求核アミノ官能基は例えばヒスチジン及び/又はLys残基において及び/又はインスリン化合物のA又はB鎖の2つ以上のN末端において見い出され得る。修飾部分がナトリウム利尿ペプチドのN末端にカップリングされる場合、カップリングは好ましくは第2級アミンを形成する。修飾部分は、例えば、チオエステル、チオエーテル又はスルホナート結合を形成することにより、遊離-SH基においてインスリン化合物にカップリングされ得る。修飾部分は、2つ以上のアミノ基を介してインスリン化合物にカップリングされ得る。ヒトインスリンにおける例は、A1、B1及びB29にアミノ基を含んでいる。一の実施形態においては、インスリン化合物上の単一のアミノ基に対し単一の修飾部分がカップリングされる。もう1つの実施形態においては、インスリン化合物上の異なるアミノ基に対し2つの修飾部分が各々結びつけられる。2つのアミノ基にカップリングされた2つの修飾部分が存在する場合、好ましい配置はB1及びB29におけるカップリングである。多数の重合体が存在する場合、重合体は全て同じであってよく、そうでなければ、重合体のうちの1つ以上のものがその他のものと異なっていてよい。インスリン化合物に対する重合体のカップリングのさまざまな方法及びタイプが、その開示全体が本発明に参照として援用されている01年6月04日付けのポリアルキレングリコールを含むインスリン化合物複合体の混合物、その使用及びその製造方法という題の米国特許出願第09/873,899号明細書の中で記述されている。さらにもう1つの実施形態においては、修飾部分の一部分が加水分解される部分的プロドラッグアプローチを使用することができる。例えば、親油性構成要素がインビボで加水分解してマイクロペグ化複合体を生成する親水性及び親油性構成要素をもつ修飾部分について記述している、その開示全体が本発明に参照として援用されているエクウライブらに対する米国特許第6,309,633号明細書を参照のこと。7.3.2修飾部分の選択及びインスリン化合物複合体及びその錯体の特性修飾部分は、インスリン化合物複合体及びその錯体に対し所望の属性を提供するように選択され得る。好ましい修飾部分は、該インスリン化合物を、この修飾部分の不在下でのインスリン化合物の水溶解度に比べ水溶液中でより可溶なものにする、好ましくは水溶液中で親インスリン化合物すなわち対応する未複合インスリン化合物よりも少なくとも1.05、1.25、1.5、1.75、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5又は15倍の溶解度を有するものにするように選択される。例えば未錯化未変性ヒトインスリンは、約7.4のpHで最高18mg/mlの溶解度を有する。発明者らは、驚くべきことに、少なくとも1.05、1.25、1.5、1.75、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、又は15の乗数だけヒトインスリンよりも大きい溶解度を有するヒトインスリン複合体を錯化する方法を発見した。ある種の実施形態においては、修飾部分は、約4~約8の範囲内のpH、好ましくは約5~約7.5の範囲内のpH、理想的には約7.4のpHで1g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、20g/L、50g/L、100g/Lさらには150g/Lを上回る水溶解度を有するインスリン化合物複合体を提供するように選択される。当該技術分野は、対応する未複合インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりも哺乳動物においてより高い経口生物学的利用能を有するものであり得る。その他の実施形態においては、インスリン化合物複合体は、対応する未複合インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりもヒトにおいてより高い経口生物学的利用能を有する。一部の実施形態では、例えば複合体の血漿レベルにより測定されるようなインスリン化合物複合体の吸収は、未複合インスリン化合物対照の吸収よりも少なくとも1.5、2、2.5、3、3.5又は4倍高い。本発明の一部の態様では、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりも高い溶解度を有するものにするように選択されるものの、その他の態様では、修飾部分は同様に又は代替的に、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の親水性をもつものにするように選択され得る、ということがわかるだろう。さらに、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりも両親媒性の高いものにするように選択され得る。一部の実施形態では、カチオン-インスリン化合物複合体錯体は、a対応する未錯化インスリン化合物複合体、b対応する未錯化かつ未複合インスリン化合物、及び/又はc対応する錯化され、かつ、未複合のインスリン化合物以上の水溶性を有している。好ましい実施形態においては、インスリン化合物複合体の水溶性は、Znを添加することによって低減される。一部の実施形態では、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度を有するものにするように選択されており、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛の添加によって低減される。その他の実施形態においては、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度を有するものにするように選択されており、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛添加により低減され、カチオン錯体の水溶性は、インスリン化合物の水溶性よりも大きい。もう1つの態様においては、インスリン化合物複合体は、脂肪酸アシル化インスリン化合物であり、カチオンは亜鉛であり、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛添加により低減される。さらにもう1つの実施形態においては、インスリン化合物複合体は、対応する未複合インスリン化合物以上の水溶性をもつ脂肪酸アシル化インスリン化合物であり、カチオンは亜鉛であり、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛の添加により低減される。ある好ましい実施形態においては、対応する親インスリン化合物と比べたインスリン化合物複合体の親油性は1以下である。対応する親インスリン化合物に比べたインスリン化合物複合体の相対的親和性krelは、例えば、40°Cでの定組成溶離によるLiChroSorbRP185μm、250×4mm高性能液体クロマトグラフィカラム上で相対的親油性が測定される場合、krel=tconjugate-t0/thuman-t0の通りに決定され得る。以下の混合物を溶離剤として使用できる;すなわち、10アセトニトリルを含むpH7.3の0.1Mのリン酸ナトリウム緩衝液、及び水中の50アセトニトリル。空隙時間t0は、0.1mMの硝酸ナトリウムを注入することにより識別される。ヒトインスリンについての保持時間は、ci及びciiの混合物間の割当てを変動させることにより少なくとも2t0に調整される。好ましくは、これらの実施形態において、相対的親油性は1に等しいが1未満か又は実質的に1より小さい。好ましい実施形態においては、インスリン化合物はヒトインスリンであり、相対的親油性は1未満である。好ましくは、相対的親和性は、0.99、0.98、0.97、0.96、0.95、0.94、0.93、0.92、0.91又は0.90未満である。インスリン及びインスリン複合体の溶解度及び/又は親油性を決定するための技術についての論述は、その開示全体が本発明に参照として援用されている1998年5月12日付けのハレラントHarelundらに対して発行された、アシル化インスリンという題の米国特許第5,750,499号明細書の中に記されている。一実施形態においては、相対的親油性は上述の通りであり、修飾部分は5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17又は18個の炭素を有する炭素鎖であり、ここで炭素鎖は、中に挿入された2、3、4、5、6、7、8、9又は10個のオキシ基を含む。もう1つの実施形態においては、相対的親油性は上述の通りであり、修飾部分は5、6、7、8、9又は10個の炭素を有する炭素鎖であり、ここで炭素鎖は中に挿入された2、3又は4個のオキシ基を含む。関連する実施形態においては、相対的親油性は上述の通りであり、修飾部分は2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個のポリアルカレングリコール単位を含む。もう1つの関連実施形態においては、相対的親和性は上述の通りであり、修飾部分は、1、2又は3個のポリエチレングリコール単位及び1、2又は3個のポリプロピレングリコール単位を含む。7.4.金属カチオン構成要素及び錯体の特性カチオン-インスリン化合物複合体錯体は金属カチオンを含む。カチオン構成要素として使用するための適切な金属カチオンとしては、インスリン化合物複合体と錯化、凝集又は結晶化する能力をもつあらゆる金属カチオンが含まれる。金属カチオンは、インスリン化合物複合体に対し錯化されることが好ましい。単一の又は多数のカチオンを使用することができる。カチオンは好ましくはインスリン化合物複合体に対する有意な酸化性をもたない。すなわち錯体がその意図された目的のために役に立たなくなるまでの酸化性をもたない。一部の実施形態においては、金属カチオンは生体適合性をもつ。金属カチオンは、注入部位における有意な免疫反応といったような、レシピエントの体に対する過度に有意な有害効果を示さない場合に、生体適合性を有する。しかしながら、一部の状況においては、毒性及びその他の有害な効果の危険性よりもカチオン-インスリン化合物複合体組成物の利点の方が勝っている可能性があり、従ってかかる状況下ではこれらの危険性を受諾できるかもしれない。生物学的に活性な作用物質を安定化させるための金属カチオンの妥当性及び必要とされる生物学的に活性な作用物質に対する金属カチオンの比率は、粒度削減及び/又はカプセル封入の前及び後に金属カチオンで安定化された生物学的に活性な作用物質の粒子に対しポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動法、逆相クロマトグラフィ及びHPLC分析といったようなさまざまな安定性試験を実施することによって、当業者により決定され得る。金属カチオン構成要素は適切には、1つ以上の1価、2価又は3価の金属カチオン又はその組合せを含む。好ましい実施形態においては、金属カチオンは、II群又は遷移金属カチオンである。適切な2価のカチオンの例としては、Zn、Mn、Ca、Fe、Ni、Cu、Co及び/又はMgを含む。1価のカチオンが含まれている場合、それは好ましくはNa、Li又はKである。カチオンは好ましくは、塩化物又は酢酸塩といったような塩として添加され、最も好ましくはZnCl2及びZnAcである。インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的には約1:1~約1:100の間、好ましくは約1:2~約1:12の間、より好ましくは約1:2~約1:7の間、又は約1:2、1:3、1:4、1:5、1:6又は1:7の間である。特定の実施形態においては、Znはカチオン構成要素として用いられ、それは、約1:1~約1:100、好ましくは約1:2~約1:12、そしてより好ましくは約1:2~約1:7又は約1:2、1:3、1:4、1:5、1:6又は1:7の亜鉛カチオン構成要素対インスリン化合物複合体モル比で提供される。カチオン構成要素は、好ましくは約90超が単一カチオン、例えばZnである。好ましくは、カチオンは約95、99又は99.9超がZnである。好ましくは、キモトリプシン分解に対する錯化インスリン化合物複合体の耐性は、対応する未錯化インスリン化合物複合体のキモトリプシン分解よりも大きい。好ましくは、キモトリプシン分解に対する錯化インスリン化合物複合体の耐性は、対応する錯化された、ただし未複合のインスリン化合物のキモトリプシン分解よりも大きい。錯化インスリン化合物複合体は対応する未複合インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照よりも哺乳動物においてより高い経口生物学的利用能を有し得る。その他の実施形態では、錯化インスリン化合物複合体は、対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照よりもヒトにおいてより高い経口生物学的利用能を有する。一部の実施形態では、例えば複合体の血漿レベルにより測定されるような錯化インスリン化合物複合体の吸収は、未錯化インスリン化合物複合体の吸収よりも少なくとも1.5、2、2.5、3、3.5、又は4倍高い。錯化インスリン化合物複合体は、錯化された未複合のインスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりも哺乳動物においてより高い経口生物学的利用能を有し得る。その他の実施形態では、錯化インスリン化合物複合体は、対応する錯化されたただし未複合のインスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりもヒトにおいてより高い経口生物学的利用能を有する。一部の実施形態では、例えば複合体の血漿レベルにより測定されるような錯化インスリン化合物複合体の吸収は、錯化された、ただし未複合のインスリン化合物の吸収よりも少なくとも1.5、2、2.5、3、3.5、又は4倍高い。7.5錯化剤一部の実施形態では、カチオン-インスリン化合物複合体組成物は、1つ以上の錯化剤を含む。本発明において使用するのに適した錯化剤の例としては、プロタミン、スルフェン、グロビンタンパク質、スペルミン、スペルミジン、アルブミン、アミノ酸、カルボン酸、プロカチオン重合体化合物、カチオンポリペプチド、アニオンポリペプチド、ヌクレオチド及びアンチセンスが含まれる。その開示全体が本発明に参照として援用されているブランジェ、J.、GalenicsofInsulincompound、Springer-Verlag、BerlinHeidelberg1987年を参照のこと。組成物を安定化するため錯化剤の妥当性は、本開示に照らして当業者により決定され得る。一部の実施形態においては、カチオン-インスリン化合物複合体組成物は、特異的に錯化剤を排除しているか又は実質的にこれを含んでいない。好ましい錯化剤はプロタミンである。固体形態では、プロタミンは好ましくは約3:1~約1:3のインスリン化合物対プロタミンモル比、より好ましくは約2:1~約1:2のモル比、理想的には約1:1のモル比で存在することになる。一部の実施形態では、カチオン-インスリン化合物複合体組成物は、特定的にプロタミンを排除しているか又はこれを実質的に全く含んでいない。例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリントレオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、アスパラギン、グルタミン酸及びヒスチジン、並びにジグリシンといったオリゴペプチドといったアミノ酸を錯化剤として使用することもできる。カルボン酸も同様に、錯化剤として使用するのに適している。例としては、酢酸、及びヒドロキシカカルボン酸、例えば、クエン酸、3-ヒドロキシブチル酸及び乳酸が含まれる。7.6.安定化剤一部の実施形態では、カチオン-インスリン化合物複合体組成物は1つ以上の安定化剤を含んでいる。好ましい安定化剤としてはフェノール化合物及び芳香族化合物が含まれる。好ましいフェノール化合物は、フェノール、m-クレゾール及びm-パラベン又はその混合物である。安定化剤は、安定化剤の不在である対応するカチオン-インスリン化合物複合体組成物といったような科学的に許容可能な対照と比べてカチオン-インスリン化合物複合体組成物の安定性を改善するあらゆる量で提供することができる。7.7.錯体の態様錯体は、カチオン-インスリン化合物複合体の実質的に純粋な粉末、又はその他の薬学的に許容可能な構成要素と共にカチオン-インスリン化合物複合体固体を含む粉末といった乾燥固体として提供され得る。錯体は同様に、水性又は有機媒質中に溶解した状態でかつ/又はかかる媒質中の未溶解固体として、提供されてもよい。7.7.1.固体組成物カチオン-インスリン化合物複合体錯体は固体として提供され得る。該固体は、例えば乾燥状態にあってもよく、又水溶液、有機溶媒、エマルジョン、マイクロエマルジョン又はその他の非乾燥形態で未溶解の状態にあってもよい。一の実施形態においては、カチオン-インスリン化合物複合体錯体は純粋な加工済み固体組成物として提供される。純粋な加工された固体組成物の中で、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は標準的に約3:4~約3:0.5インスリン化合物複合体:カチオン、約3:3.5~約3:1、又理想的には約3:1である。加工済み純粋固体T型組成物カチオン、インスリン化合物複合体を伴い、プロタミンは伴わないの中で、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約3:4~約3:0.5インスリン化合物複合体:カチオン、約3:3.5~約3:1、又は理想的には約3:1である。加工済み純粋な固体T型プロタミン組成物カチオン、インスリン化合物複合体及びプロタミンを伴うの中では、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約3:6~約3:0.5インスリン化合物複合体:カチオン、約3:5~約3:1又理想的には約3:2である。加工済み純粋固体R型lente組成物カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物例えばフェノール化合物を伴い、プロタミンは伴わないの中で、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約3:4.5~約3:0.9、好ましくは約3:3.9~約3:2.4である。加工済み純粋な固体R型ultralente組成物カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物例えばフェノール化合物を伴い、プロタミンは伴わないの中では、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約3:12~約3:4.5超、好ましくは約3:9~約3:4.8、より好ましくは約3:6~約3:5.4の範囲内にあり得る。加工済み純粋固体R型プロタミン組成物カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物例えばフェノール化合物及びプロタミンを伴うの中では、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は標準的に約3:12~約3:3、好ましくは約3:9~約3:4.5、より好ましくは約3:6.9~約3:5.4の範囲内であり得る。1価のカチオン、例えばNaについては、固体は約3:6~約3:3のインスリン化合物複合体対カチオン比を有するものと予想されることになる。本発明の固体組成物は、例えば、本発明のインスリン化合物複合体及び/又はカチオン-インスリン化合物複合体錯体を含む粉末といったような組成物を含み得る。好ましくは、固体組成物は、薬学的に許容可能なレベルの純度、すなわちヒトの体内で使用するための該組成物の妥当性を受容し難いほどに低減させることになるような汚染物質が無いレベルで提供される。一部の実施形態においては、カチオン-インスリン化合物複合体構成要素が約90超、好ましくは約95超、より好ましくは約99超結晶性である組成物が提供される。その他の実施形態においては、カチオン-インスリン化合物複合体構成要素が約90超、好ましくは約95超、より好ましくは約99超の非晶質固体である組成物が提供されている。さらにその他の実施形態では、カチオン-インスリン化合物複合体構成要素が、非晶質固体と結晶性固体の混合物中に存在する組成物が提供されている。例えば、非晶質固体対結晶性固体の比率は約1:10~約10:1又は約1:9~約9:1、又は約1:8~約8:1、又は約1:7~約7:1、又は約1:6~約6:1、又は約1:5~約5:1、又は約1:4~約4:1、又は約1:3~約3:1、又は約1:2~約2:1又は約1:1であり得る。さらに、未変性インスリン化合物を含む固体とインスリン化合物複合体を含む固体、又は1つのインスリン化合物複合体を含む固体と異なるインスリン化合物複合体を含む固体といったように異なるインスリン化合物を有するカチオン-インスリン化合物固体の混合物を用いて、組成物を提供することができる。さらに、固体のタイプ及びインスリン化合物/インスリン化合物複合体構成要素は全て変動し得る。例えば、非晶質インスリン化合物複合体及び未変性インスリン化合物を用いてZn-インスリン化合物結晶を含む組成物を提供することができ、そうでなければ結晶性Zn-インスリン化合物複合体及び未変性インスリン化合物を用いた非晶質Zn-インスリン化合物固体を含む組成物を提供することができる。溶解プロファイル及び/又は薬物動態プロファイルの変動といったような物理的特性の変動を達成するためにかかる混合物を使用することができる。固体の平均粒度は好ましくは、約0.1~約100ミクロン、より好ましくは1~50ミクロン、なお一層好ましくは1~25ミクロン、理想的には1~15ミクロンの範囲内である。微結晶化条件、噴霧乾燥、摩砕、真空乾燥、凍結乾燥などにより小さな粒度を得ることが可能である。1つの実施形態においては、組成物は、乾燥された時点で、約96w/w超のインスリン化合物複合体及び約0.05、0.1、0.15又は0.2~約4w/wの亜鉛を含有する。もう1つの実施形態では、該組成物は、乾燥された時点で約91w/wのインスリン化合物複合体、約0.05、0.1、0.15、又は0.2~約4w/wの亜鉛及び約0.2~約5w/wのフェノールを含有する。さらにもう1つの実施形態においては、該組成物は、乾燥された時点で、約82w/w超のインスリン化合物複合体、約0.05、0.1、0.15又は0.2~約4w/wの亜鉛、約0.2~約14w/wのプロタミンを含有する。さらにもう1つの実施形態においては、組成物は、乾燥された時点で約71w/wのインスリン化合物複合体、約0.05、0.1、0.15又は0.2~約4w/wの亜鉛、約0.2~約14w/wのプロタミン、及び約0.2~約15w/wのフェノールを含有する。もう1つの実施形態においては、該組成物は、乾燥された時点で約0.1~約2w/wのZn、及び約0.08~約1w/wのフェノール、好ましくは約0.5~約1.3w/wのZn及び約0.1~約0.7w/wのフェノール、より好ましくは1以上から約3.5w/wまでのZn、約0.1~約3w/wのフェノール、さらに一層好ましくは1.3以上から約2.2w/wまでのZn、そして約0.4~約2w/wのフェノールを含む。錯体は、lente型の調製物の形で提供可能である。例えば、好ましい乾燥lente型調製物中では、Znは約0.1~約2w/wの範囲の量で提供され、フェノールは約0.08~約1w/wの範囲の量で存在し、残りのw/wはインスリン化合物複合体である。理想的には、乾燥したlente型調製物のためには、Znは約0.5~約1.3w/wの範囲の量で提供され、フェノールは、約0.1~約0.7w/wの範囲内の量で存在し、残りのw/wはインスリン化合物複合体である。Ultralente型の調製物の形で錯体を提供することが可能である。例えば、好ましい乾燥されたultralente型の調製物中では、Znは、1以上から約3.5w/wの範囲の量で提供され、フェノールは約0.1~約3w/wの範囲の量で存在し、残りのw/wはインスリン化合物複合体である。理想的には乾燥されたultralente型調製物のためには、Znは1.3以上から約2.2w/wまでの範囲の量で提供され、フェノールは、約0.4~約2w/wの範囲の量で存在し、残りのw/wはインスリン化合物複合体である。7.7.2液体組成物カチオン-インスリン化合物複合体錯体は、液体の未溶解構成要素として提供され得る。例えば、液体は、沈殿物としてのカチオン-インスリン化合物複合体を含む水溶液であってよく、そうでなければカチオン-インスリン化合物複合体を、懸濁液、エマルジョン又はマイクロエマルジョンの構成要素として提供することもできる。液体は、同様に未溶解構成要素と共に、溶解した構成要素又は錯体を含むこともできる。7.7.3混合物及び共結晶本発明の組成物は、例えば、錯体混合物、固体混合物、ハイブリッド錯体及び共結晶を含み得る。かくして、例えば、本発明は、2つ以上のインスリン化合物複合体及び/又は未複合インスリン化合物を含む組成物を提供する。さらに、組成物が固体を含む場合、固体は異なる形態を有し得る。かくして、例えば、1つの固体は結晶性であり得、もう1つの固体は非晶質固体であり得る。他の場所で指摘されているとおり、該固体は、乾燥された形状で提供されてもよいし、又は液体混合物の固体構成要素として提供されてもよい。好ましい実施形態においては、本発明の混合物は2つ以上の異なるインスリン化合物複合体を含み、異なるインスリン化合物複合体は異なる溶解度を有する。1つの実施形態においては、錯体のうちの一方は親油性インスリン化合物複合体を含み、もう1つの錯体は親水性のインスリン化合物複合体を含む。さらにもう1つの実施形態においては、錯体は、1つ以上の錯体が約1~約4時間の循環半減期を有し、2つ以上の錯体が第1の錯体循環半減期よりも著しく長い循環半減期をもつ異なるインスリン化合物複合体を含み得る。関連する実施形態においては、1つの錯体は急速作用型プロファイルを有し、もう1つの錯体は中~長時間作用型プロファイルを有する。さらに、1つの錯体は基礎インスリン化合物制御に適したプロファイルを有することができ、もう1つの錯体は食後グルコース制御に適したプロファイルを有する。好ましい混合物は、HIM2とインスリンの混合物、HIM2とIN105の混合物、IN105とインスリン化合物の混合物、IN105及び脂肪酸アシル化インスリンの混合物、HIM2と脂肪酸アシル化インスリンの混合物である。適切な脂肪酸アシル化インスリンについては、その開示全体が本発明に参照として援用されている以下の米国特許の中で記述されている;血液グルコース制御のための不溶性組成物という題の米国特許第6,531,448号明細書、03年3月11日発行;イプシロンアミノ基の選択的アシル化という題の米国特許第RE37,971号明細書、03年1月28日発行;不溶性インスリン組成物という題の米国特許第6,465,426号明細書、02年10月15日発行;脂肪酸アシル化インスリン類似体という題の米国特許第6,444,641号明細書、02年9月3日発行;アシル化インスリンの投与方法という題の米国特許第6,335,316号明細書、02年1月1日発行;不溶性インスリン組成物という題の米国特許第6,268,335号明細書、01年7月31日発行;アシル化インスリンの投与方法という題の米国特許第6,051,551号明細書、00年4月18日発行;アシル化インスリン類似体という題の米国特許第5,922,675号明細書、99年7月13日発行;アシル化タンパク質粉末の調製という題の米国特許第5,700,904号明細書、97年12月23日発行;付与されたアシル化インスリン類似体という題の米国特許第5,693,609号明細書、97年12月2日発行;イプシロンアミノ基の選択的アシル化、という題の米国特許第5,646,242号明細書、97年7月8日;脂肪酸アシル化タンパク質のゲル化削減という題の米国特許第5,631,347号明細書、97年5月20日発行;ぺプチドのアシル化方法及び新規のアシル化剤という題の米国特許第6,451,974号明細書、02年9月17日発行;アシル化インスリンという題の米国特許第6,011,007号明細書、00年1月4日発行;98年5月12日に付与されたアシル化インスリンという題の米国特許第5,750,497号明細書;選択的アシル化方法という題の米国特許第5,905,140号明細書、1999年5月18日発行;インスリン誘導体という題の米国特許第6,620,780号明細書、2003年9月16日発行;インスリン誘導体という題の米国特許第6,251,856号明細書、2001年1月26日発行;肺送達用の安定な濃縮インスリン調製物という題の米国特許第6,211,144号明細書、2001年4月3日発行;肺インスリン結晶という題の米国特許第6,310,038号明細書、2001年10月30日発行;及び、安定化されたインスリン組成物という題の米国特許第6,174,856号明細書、2001年1月16日発行。特に好ましいのは、ヒトインスリンのLysB29に共有結合した12、13、14、15又は16炭素脂肪酸を有するモノ脂肪酸アシル化インスリンである。1つの実施形態においては、本発明は2つの異なるインスリン化合物及び/又はインスリン化合物複合体を有する共結晶を提供する。好ましくは、共結晶は、実質的に均質な溶解、単一のインビボ溶解曲線及び/又は単一ピークの薬力学プロファイルといった特徴のうちの1つ以上のものを示す。好ましい共結晶は、HIM2とインスリンの共結晶、HIM2とIN105の共結晶、IN105とインスリン化合物の共結晶である。1つの実施形態においては、共結晶はヒトインスリンを含み、ヒトインスリンとの共結晶化は、インスリン化合物複合体の対応する結晶の溶解度に比べて結晶の溶解度を低減させる。もう1つの実施形態においては、共結晶はヒトインスリンを含み、ヒトインスリンとの共結晶化は、インスリン化合物複合体の対応する結晶の溶解度に比べて該結晶の溶解度を低減させる。1つの実施形態においては、共結晶は急速作用型、急速排泄型及び/又は高効能インスリン化合物複合体及び長時間作用型、低速排泄型及び/又は低効能インスリン化合物複合体を含む。好ましくは共結晶は、食後グルコース制御又は基礎インスリン化合物オーバーナイト制御に適したPK/PDプロファイルを有する。もう1つの実施形態においては、本発明は、ヒトインスリン又はリスプロインスリンと共にインスリン化合物複合体が含まれている混合物又は共結晶を提供する。本発明の混合物は2つの異なるインスリン化合物複合体を含み得る。混合物はインスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含み得る。混合物は異なるインスリン化合物を伴う異なるインスリン化合物複合体を含み得る。さらに、本発明は2つの異なるインスリン化合物複合体及び/又はインスリン化合物複合体と未複合インスリン化合物を有する錯体を提供する。本発明は、2個、3個又はそれ以上の異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶を提供する。本発明は、未複合インスリン化合物を伴うインスリン化合物複合体を有する錯体を提供する。本発明は、2つ以上の異なる親水性インスリン化合物複合体;2つ以上の異なる疎水性インスリン化合物複合体;2つ以上の異なる両親媒性インスリン化合物複合体;親水性インスリン化合物複合体及び親油性インスリン化合物複合体;親水性インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物;HIM2と未複合インスリン化合物;IN105と未複合インスリン化合物;HIM2とIN105;HIMとインスリン化合物及びIN105;及び以上の要素のその他の組合せを伴う共結晶を提供する。その他の場所で言及されているように、錯体は乾燥した固体として、溶液中の溶解した錯体及び/又は溶液中の未溶解錯体として提供され得る。例えば長時間プロファイルを有する錯体又は共結晶を提供するべく、さまざまな組合せを利用することができる。7.8.発明の錯体の溶解度好ましくは、約7.4のpHでのカチオン-インスリン化合物複合体錯体の水溶解度は、未錯化インスリン化合物複合体の水溶解度の約1/15、1/14、1/13、1/12、1/11、1/10、1/9、1/8、1/7、1/6、1/5倍から約0、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10倍未満までである。上述の上限及び下限のあらゆる組合せが本発明の範囲内に入る。ただし、好ましい範囲は約1/15倍から5倍未満まで、より好ましくは約1/10倍~約2倍であり、理想は約1/10倍から0倍未満までである。本発明の特に驚くべき態様においては、約7.4のpHでの溶液中のカチオンインスリン化合物複合体の水溶解度は、往々にして約7.4のpHでの溶液中のインスリン化合物複合体の水溶解度より実質的に低い。しかしながら、一部の実施形態においては、約7.4のpHでのカチオン-インスリン化合物複合体の水溶解度は約7.4のpHでの溶液中のインスリン化合物複合体の水溶解度と同じであるか、それより大きいか又はそれより実質的に大きいかであり得る。1つの驚くべき実施形態においては、約7.4のpHでのカチオン-インスリン化合物複合体錯体の水溶解度は、約7.4のpHでの対応する未錯化インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に低く、カチオン-インスリン化合物複合体錯体は、約5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.1、又は6.9に始まり約7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8又は8.9で終るpH範囲全体を通して水溶液中で約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120又は130g/L超で可溶状態にとどまる。さらにもう1つの実施形態では約7.4のpHでのカチオン-インスリン化合物複合体錯体の水溶解度は、約7.4のpHでの溶液中の対応するインスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に低く、カチオン-インスリン化合物複合体錯体は、約5.8~約8.5のpH範囲、好ましくは約6.5~約8のpH範囲、より好ましくは約6.9~約7.8のpH範囲全体を通して水溶液中で約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120又は130g/L超で可溶状態にとどまる。[質問:g/L溶解度は、錯体の重量又はインスリン化合物複合体の重量を用いて測定されるのか]好ましくは、本発明のインスリン化合物複合体は、インスリン化合物複合体の濃度が約0.5mg/ml~約50mg/ml、好ましくは約5mg/ml~約30mg/ml、より好ましくは約15mg/ml~約30mg/mlである場合、PI/-約2.5に等しいpHで水溶液中で結晶を生成するように選択され、結晶は、カチオンが、好ましいZである場合、インスリン化合物複合体に対するカチオン約3、4又は5w/wで発生し始める。好ましい結晶は約4、4.1、4.2、4.3又は4.4~約5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7又は5.8の範囲のpH、好ましくは約4から6.5未満までのpH、好ましくは約4から5.8未満まで、好ましくは約4.2から約5.5まで、より好ましくは約4.4から約5.2までのpHで水溶液中でプロタミン無しのモノ複合体について存在する。好ましくは、結晶は約3.5から5.8未満まで、好ましくは約3.8から約5.5まで、より好ましくは約4.0から約5.2までのpHでプロタミン無しのジ複合体について存在する。好ましくは、結晶は約3から5.5未満まで、好ましくは約3.3から約5まで、より好ましくは約3.8~約4.8のpHでプロタミン無しのトリ複合体について存在する。7.8.1R型の錯体好ましくは、約7.4のpHにおけるインスリン化合物複合体のR型Zn錯体の水溶解度は、約10~約150g/L、より好ましくは約20~約130g/L、より好ましくは約30~約110g/L、より好ましくは約35~約60g/Lの範囲をもつ。好ましくは、約7.4のpHでのプロタミンを伴うインスリン化合物複合体のR型Zn錯体の水溶解度は、約10~約110g/L、好ましくは約20~約85g/L、より好ましくは約30~約70g/Lの範囲を有する。7.8.2.T型錯体好ましくは、約7.4のpHでのインスリン化合物複合体のT型Zn錯体の水溶解度は、約30~約175g/L、より好ましくは約50~約160g/L、より好ましくは約70~約150g/Lの範囲を有する。好ましくは、約7.4のpHでのプロタミンを伴うインスリン化合物複合体のT型Zn錯体の水溶解度は、約10~約150g/L、より好ましくは約20~約130g/L、より好ましくは約30~約110g/L、より好ましくは約35~約60g/Lの範囲を有する。7.8.3.NPH型錯体好ましくは約7.4のpHでのインスリン化合物複合体のNPH型錯体の水溶解度は、約1~約150g/L、より好ましくは約5~約120g/L、さらに一層好ましくは約10~約90g/Lの範囲を有する。7.9薬学的特性カチオンとのインスリン化合物複合体の錯化は、一般に、対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照に比べて改善されたインスリン化合物複合体の薬学的特性を結果としてもたらす。一部のケースでは、錯化されたインスリン化合物複合体は、対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照と比べて長時間の又はその他の形で改変されたpKプロファイルを示すことになる。あるケースでは、pKプロファイルはリスプロ様のプロファイルを示すことになる。pKプロファイルは、例えばマウス、ラット、イヌ又はヒトにおける標準的インビボ実験を用いて査定することができる。カチオン-インスリン化合物複合体錯体の属性を査定するための本書で記述されている検定は、本発明の1つの態様である。錯体は、改善された化学的安定性を示し得る。血漿の存在、プロテアーゼの存在、肝臓ホモジネートの存在、酸性条件の存在及び塩基性条件の存在といったようなさまざまな検定条件に錯体を曝露することによって、さまざまな安定性属性を査定することが可能である。これらの検定条件のうちのいずれか2つ以上のものにおける錯化インスリン化合物複合体の安定性が同じ条件での未錯化インスリン化合物複合体の安定性よりも大きい場合に、未錯化インスリン化合物複合体に比べた安定性が改善されている。酸性環境において安定性を決定するための好ましい検定には、少なくとも2時間pH2の溶液に対し錯化インスリン化合物複合体を曝露することを含み、ここで対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照に比べた錯化インスリン化合物複合体の分解の減少が安定性改善の指標である。安定性をテストするには、インビボ検定も使用することができる。例えば、対照の消化管に対する曝露及び適切な対照との比較により、錯化インスリン化合物複合体の安定性をテストすることができる。7.10製造方法本発明は同様に、本書で記述されているカチオン-インスリン化合物複合体組成物の製造方法をも提供している。該方法には一般に、固体を形成するべく本書に記述されているような1つ以上のカチオンと本書に記述されているような1つ以上のインスリン化合物複合体を接触させるステップを含んでいる。Znといったような2価のカチオンについては、約2mg/mlから約50mg/mlの範囲のインスリン化合物濃度をもつ水溶液中の組成物を作るのに用いられるインスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約1:15インスリン化合物複合体:カチオン~約1:0.4、好ましくは約1:9~約1:2の範囲であり得る。上述の水溶液条件下でT型固体カチオン及びインスリン化合物複合体を伴いプロタミンを伴わないを作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は好ましくは約1:1.5~1:3、理想的には約1:2である。上述の水溶液条件下でR型固体カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物例えばフェノール化合物を伴いプロタミンを伴わないを作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、好ましくは約1:4~1:9、好ましくは約1:7~約1:9、理想的には約1:8である。上述の水溶液条件でT型プロタミン固体カチオン及びインスリン化合物複合体及びプロタミンを伴うを作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は好ましくは約1:1.5~1:9、理想的には約1:2である。上述の水溶液条件下でR型プロタミン固体カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物例えばフェノール化合物及びプロタミンを作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は約1:2~1:15、好ましくは約1:7~約1:9、理想的には約1:8である。インスリン化合物複合体は、好ましくは、2超から約100g/Lまで、好ましくは約3、4、5、6、7、8、9又は10から約40g/Lまで、より好ましくは、約10から約30g/Lまでの範囲内の濃度を達成するように計算される量で、緩衝液に添加される。カチオンが2価例えばZn、Caである場合、それは、好ましくは約0.04~約10g/L、好ましくは約0.1~約5g/L、より好ましくは約0.2~約4g/Lの範囲内の濃度を達成するように計算された量で添加される。T型結晶又はT型プロタミン結晶については、カチオン濃度は好ましくは約0.04~約1g/L、より好ましくは約0.1~約0.3g/Lの範囲内にある。R型結晶又はR型プロタミン結晶については、カチオン濃度は好ましくは約1~約5g/L、より好ましくは約1.5~約4g/Lの範囲内にある。カチオンが一価である場合、それは好ましくは、約0.08~約40g/L、好ましくは約0.4~約20g/L、より好ましくは約0.8~約16g/Lの範囲内の濃度を達成するように計算された量で添加される。該方法はさらに、カチオン及びインスリン化合物複合体と安定化剤を組合わせるステップを含み得る。好ましい安定化剤については以上で記述されている。使用される場合、該安定化剤は、この安定化剤の不在下で同じ試薬及び反応条件を用いて達成されるよりも高い固体形成度を提供するのに充分な量で添加される。安定化剤がフェノール化合物例えばフェノール、m-クレゾール、m-パラベンである場合、それは、約10~約50w/w、より好ましくは約20~約40w/w、さらに一層好ましくは約25~約35w/wの範囲の量で添加され得る。より好ましい実施形態においては、安定化剤はフェノール化合物例えばフェノール、m-クレゾール、m-パラベンであり、約0.01~約10w/w、より好ましくは0.01~約5w/w、さらに一層好ましくは0.01~約1w/wの範囲の量で添加され得る。かくして、一実施形態においては、該方法には、カチオン-インスリン化合物複合体組成物を生み出すために水溶液中でインスリン化合物複合体、カチオン及び安定化剤を組合せることを含み、ここで該組合せは可溶化された錯体及び/又は結晶性又は非晶質固体を生み出すことができる。該方法はさらに、カチオン及びインスリン化合物複合体と組合せられるプロタミンといった錯化剤の使用をも含んでいてよく、又任意には安定化剤をも含む。約5~約8の範囲内のpHを有する水溶液中で固体を調製するためには、プロタミンは、インスリン化合物複合体との関係において約4~約45w/wプロタミン/インスリン化合物、好ましくは約8~約25w/w、より好ましくは約9~約20w/w、理想的には約10~約12w/wの量で提供される。T型固体のためには、好ましいpH範囲は約5~約6、より好ましくは約5~約5.5、より一層好ましくは約5.1~約5.3、理想的には約5.2である。R型固体については、好ましいpH範囲は、約6~約7、より好ましくは約6.2~約6.8、さらに一層好ましくは約6.4~約6.6、理想的には約6.5である。発明者らは、驚くべきことに、フェノールといったような安定化剤の不在下でT型錯体をプロタミンT型錯体に転換できるということを発見した。T型錯体は、フェノールの不在下で水溶液中のインスリン化合物分子とZnを錯化することによって作られる。次にT型錯体をプロタミンT型錯体に転換させるためにプロタミンが添加される。量及びpH範囲は上述の通りである。かくして、1つの実施形態においては、該方法には、カチオン-インスリン化合物複合体組成物を生み出すべく水溶液中でインスリン化合物複合体、カチオン及び錯化剤を組合わせることを含み、ここで該組合せは、可溶化された錯体及び/又は結晶性又は非晶質固体を生み出し得る。もう1つの実施形態では、該方法には、カチオン-インスリン化合物複合体組成物を生み出すべく水溶液中でインスリン化合物複合体、カチオン、錯化剤及び安定化剤を組合わせることを含み、ここで該組合せは、可溶化された錯体及び/又は結晶性又は非晶質固体を生み出し得る。一部の実施形態では、組成物は防腐剤を含むことができる。適切な防腐剤の例としては、ベンジルアルコール、P-ヒドロキシ安息香酸エステル、グリセロールが含まれる。フェノール、m-クレゾール及びm-パラベンといったような安定化剤を防腐剤として使用することもできる。抗菌有効性を増強させるために、グリセロール及びフェノールが合わせて添加される。固体を調製する上で有用なその他の構成要素には、NaCl、グリセロール及び単糖類といったような等張作用物質が含まれる。カチオンインスリン化合物複合体固体は標準的に比較的迅速に形成可能である。例えば、固体形成は3日以内、往々にして24時間以内で完了する。結晶形成を改善させるため反応を減速させることが一部のケースで望まれる。本発明の一実施形態においては、固体は、固体の沈殿を誘発するための温度の低下を必要とすることなく、室温25°Cで形成される。例えば、R型及びT型結晶については室温が有効である。固体形成のための温度は約0°~約40°C、好ましくは約17~約30°C、より好ましくは約22~約27°C、理想的には約25°Cである。一実施形態においては、該方法には、結晶性又は非晶質固体を提供するためインスリン化合物複合体及び金属カチオンを水溶液中で組合せるステップが含まれている。カチオンが添加されることになるインスリン化合物複合体を含有する水溶液は、好ましくはインスリン化合物複合体のpI/-約1.5、好ましくはpI/-約1、より好ましくはpI/-約0.75の範囲内のpHをもつ緩衝溶液である。これらの範囲は同様にT型、R型及びプロタミン錯体にもあてはまる。しかしながら、中性プロタミン錯体NPH-型については、好ましいpHは約7~約8.5であり、より好ましくは約7.5~約8である。ひとたび金属カチオンが添加された時点で、pHはわずかに変化する可能性があり、上述のpH範囲を目安としてpHを調製することができる。フェノール化合物を用いると、軽微なpH変化があり得、酸又は塩基を用いて好ましい範囲に調整することができる。インスリン化合物複合体のpI値は標準的に、約7未満、好ましくは約6未満、より好ましくは約5.5未満のpHを必要とする。中性修飾部分を伴うヒトインスリンモノ複合体は標準的に約4.75/-0.25のpI範囲を有する。ヒトインスリンジ複合体についてはpI範囲は標準的に4.25/-0.25である。ヒトインスリントリ複合体については、pI範囲は標準的に3.5/-0.25である。適切な緩衝液系の例としては、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、トリス緩衝液、リン酸ナトリウムと酢酸アンモニウムの混合物、酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸ナトリウムと酢酸アンモニウムの混合物及びクエン酸緩衝液及び同じくエタノール及び/又はアセトニトリル[B]例えば、約1:1~約10:1のA:Bの百分率比でをも含む上述の緩衝液系[A]のいずれかが含まれる。カチオン-インスリン化合物複合体固体が、エタノール又はアセトニトリルといったような有機溶媒を含有する水性混合物の中で形成され得るということは、本発明の驚くべき態様である。本発明の1つの独自の特長は、有用なカチオン-インスリン化合物複合体錯体を提供することに加えて、本発明は同様に、製造プロセス中の未複合インスリン化合物からカチオン-インスリン化合物複合体を分離する方法をも提供している。このプロセスでは、カチオン-インスリン化合物複合体を溶液から沈殿させることができ、可溶化された未複合インスリン化合物を例えばろ過により除去することができる。この特長により、インスリン化合物複合体の製造における2つのステップ、すなわち濃縮ステップと凍結乾燥ステップが削除される。遠心分離及び/又はろ過とそれに続く洗浄例えばエタノール/水での及び凍結乾燥又は真空乾燥といったような標準的な技術を用いて、加工済み純粋固体組成物を形成させ得る。フェノール及び/又はカチオン含有量を調整するために多数回の洗浄を使用することができる。7.11処方既知の技術に従って薬学的担体に入った形で投与するために錯体を処方し得る。例えば、薬学的剤形の選択、製作及び使用に関するその教示についてその開示全体が本発明に参照として援用されている、アルフォンソAlfonsoR.ジェナーロGennaro、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy、LippincottWilliamsWilkinsPublishers2003年6月、及びハワードHowardC.アンセルAnsel、PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems、LippincottWilliamsWilkinsPublishers、第7版1999年10月を参照のこと。標準的には非晶質固体又は結晶性固体の形をした錯体を薬学的に許容可能な担体と組合わせることができる。担体は、薬学組成物中のその他のあらゆる成分と適合性があるという意味で許容可能でなくてはならず、活性成分により提供される利点に関して、対象にとって過度に有害であってはならない。担体は固体又は液体、又は両方であり得る。それは好ましくは、例えば錠剤といったような一回服用量処方物として処方される。単位剤形は、例えば約0.01又は0.5重量~約95重量又は99重量のカチオン-インスリン化合物錯体を含有し得る。薬学組成物は、任意には1つ以上の副成分を内含する構成要素を含めたただしこれに制限されるわけではない周知の薬学的技術のいずれかによって調製可能である。適切な薬学組成物の例としては、経口、直腸、吸入例えばエアゾルを介した、口腔例えば舌下、膣内、非経口例えば皮下、筋内、皮内、関節内、胸腔内、腹腔内、大脳内、動脈内又は静脈内、局所、粘膜表面気道表面を含む、鼻腔表面及び経皮投与用に作られたものが含まれる。任意の与えられた例における最も適切な経路は、治療されている身体条件の性質及び重症度及び使用されている特定のカチオン-インスリン化合物錯体の性質により左右されることになる。好ましい経口組成物は、対象による摂取用に調製された組成物である。理想的には、経口組成物は、胃の中の通過を切り抜ける又は実質的に切抜けるようにそして活性成分の送達のため腸内で完全に又は実質的に完全に溶解するように調製される。適切な経皮系の例としては、超音波、イオン導入及びパッチ送達系が含まれる。1つの態様においては、本発明は、1つ以上の飽和又は不飽和C4、C5、C6、C7、C8、C9又はC10脂肪酸及び/又はかかる脂肪酸の塩を含む脂肪酸組成物を提供する。好ましい脂肪酸は、カプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸である。好ましい脂肪酸塩は、カプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸のナトリウム塩である。好ましい脂肪酸組成物は、単一の脂肪酸又は単一の脂肪酸塩を含み、その他の脂肪酸又は脂肪酸塩を実質的な量を含んでいない。本発明の1つの態様においては、組成物の脂肪酸含有量は、約90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.6、99.7、99.8又は99.9w/w超の単一脂肪酸である。もう1つの実施形態においては、組成物の脂肪酸含有量は、約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、又は3.0w/wを下限とし約3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9又は12.0w/wを上限とする範囲内にある。さらにもう1つの実施形態においては、組成物の脂肪酸含有量は、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、又は3.0w/wを下限とし3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9又は12.0w/wを上限とする範囲内にあり、組成物の脂肪酸含有量は約90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.6、99.7、99.8又は99.9w/w超の単一脂肪酸である。これらの処方物の活性構成要素は、複合又は未複合、錯化又は未錯化タンパク質及び/又はペプチドを内含し得る。好ましいタンパク質及び/又はペプチドは、本書に記述されているものである。好ましい複合体は、本書で記述されているものである。好ましい錯体は、本書で記述されているものである。好ましい経口組成物は、対象による摂取用に調製された組成物である。理想的には、経口組成物は、胃の中の通過を切り抜ける又は実質的に切り抜けるように、かつ活性成分の送達のため腸内で完全に又は実質的に完全に溶解するように調製される。一部のケースでは、処方は腸溶コーティングを含み、一部のケースでは、処方は特定的に腸溶コーティングを排除することになる。組成物は好ましくは、錠剤、硬カプセル又は軟カプセルとして提供されるが、本書に記述されるその他の形態も適切である。本発明の脂肪酸組成物は、脂肪酸アシル化インスリンを含み得る。適切な脂肪酸アシル化インスリンの例は、その開示全体が本発明に参照として援用されている以下の米国特許の中で記述されている;すなわち血液グルコースを制御するための不溶性組成物という題の米国特許第6,531,448号明細書、03年3月11日発行;イプシロンアミノ基の選択的アシル化という題の再発行米国特許第RE37,971号明細書、03年1月28日発行;不溶性インスリン組成物という題の米国特許第6,465,426号明細書、02年10月15日発行;脂肪酸アシル化インスリン類似体という題の米国特許第6,444,641号明細書、02年9月3日発行;アシル化インスリンの投与方法という題の米国特許第6,335,316号明細書、02年1月1日発行;不溶性インスリン組成物という題の米国特許第6,268,335号明細書、01年1月31日発行;アシル化インスリンの投与方法という題の米国特許第6,051,551号明細書、00年4月18日発行;アシル化インスリン類似体という題の米国特許第5,922,675号明細書、99年7月13日発行;アシル化タンパク質粉末の調製という題の米国特許第5,700,904号明細書、97年12月23日発行;アシル化インスリン類似体、付与されたという題の米国特許第5,693,609号明細書、97年12月2日発行;イプシロンアミノ基の選択的アシル化という題の米国特許第5,646,242明細書、97年7月8日発行;脂肪酸アシル化タンパク質のゲル化低減という題の米国特許第5,631,347号明細書、97年5月20日発行;ペプチドのアシル化方法及び新規のアシル化剤という題の米国特許第6,451,974号明細書、02年9月17日発行;アシル化インスリンという題の米国特許第6,011,007号明細書、00年1月4日発行;98年5月12日に付与されたアシル化インスリンという題の米国特許第5,750,497号明細書;選択的アシル化方法という題の米国特許第5,905,140号明細書、1999年5月18日発行;インスリン誘導体という題の米国特許第6,620,780号明細書、2003年9月16日発行;インスリン誘導体という題の米国特許第6,251,856号明細書、2001年1月26日発行;肺送達のための安定な濃縮インスリン調製物という題の米国特許第6,211,144号明細書、2001年4月3日発行;肺インスリン結晶という題の米国特許第6,310,038号明細書、2001年10月30日発行;及び安定化されたインスリン組成物という題の米国特許第6,174,856号明細書、2001年1月16日発行。特に好ましいのはヒトインスリンのLysB29に共有結合した12、13、14、15又は16炭素脂肪酸を有するモノ脂肪酸アシル化インスリンである。経口投与に適した薬学組成物は、各々、粉末又は顆粒として;水性、又は非水性液体中の溶液又は懸濁液として;又は水中油又は油中水型エマルジョンとして、インスリン化合物複合体の混合物を予め定められた量だけ含有しているカプセル、カシェ剤、口中錠又は錠剤といったような個別単位の形で提示され得る。かかる処方物は、インスリン化合物複合体の混合物と適切な担体上述の通りの1つ以上の副成分を含有し得るものを会合させるステップを含む任意の適切な薬学的方法によって調製可能である。処方物は、固体の懸濁液、錯化されたカチオン-インスリン化合物複合体、未錯化活性成分例えば未変性インスリン化合物、インスリン化合物複合体及びそれらの混合物を含み得る。一般に、本発明の薬学組成物は、液体又は固体担体又はその両方と錯体を均質かつ密に混和させ次に必要とあらば結果として得られた混合物を整形するステップにより調製される。例えば、任意には、1つ以上の副成分と共にインスリン化合物複合体の混合物を含有する粉末又は顆粒を圧縮又は成形することにより錠剤を調製することができる。適切な機械の中で、任意には結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤及び/又は表面活性剤/分散剤と混合した粉末又は顆粒といったような自由に流動する形の混合物を適切な機械の中で圧縮することにより、圧縮錠剤を調製することが可能である。不活性液体結合剤で加湿した粉末化組成物を適切な機械の中で成形することにより、湿式錠剤を作ることができる。口腔舌下投与に適した薬学組成物には、通常スクロース及びアカシア又はトラガカントである着香された基剤内にインスリン化合物複合体の混合物を含む口中錠;及びゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアといったような活性基剤中のインスリン化合物複合体の混合物を含むトローチが含まれる。適切な処方物の例は、米国特許出願公開第20030229022号明細書薬学処方物;同第20030236192号明細書持続放出型組成物の放出プロファイルの修正方法;同第20030096011号明細書不安定な作用物質のサブミクロン粒子の生成方法及びその使用;同第20020037309号明細書重合体系持続放出型組成物の調製プロセス;同第20030118660号明細書残留溶媒抽出方法及びそれにより生成される微小粒子;並びに米国特許第6,180,141号明細書活性主成分担体としての複合ゲル微小粒子;同第6,737,045号明細書肺送達インスリン化合物のための方法及び組成物;同第6,730,334号明細書薬物送達ビヒクルとしての多腕ブロック共重合体;同第6,685,967号インスリン化合物の肺送達のための方法及び組成物;同第6,630,169号明細書微粒子送達システム及び使用方法;同第6,589,560号明細書安定なガラス状態粉末処方物;同第6,592,904号明細書分散性巨大分子組成物及びその調製及び使用方法;同第6,582,728号明細書吸入可能な乾燥粉末を生成するための巨大分子の噴霧乾燥;同第6,565,885号明細書薬学組成物スプレー乾燥方法;同第6,546,929号明細書乾燥粉末分散器具及びその使用方法;同第6,543,448号明細書乾燥粉末医薬品を分散させるための器具及び方法;同第6,518,239号明細書改良された分散性を有する乾燥粉末組成物;同第6,514,496号明細書分散性抗体組成物及びその調製並びに使用方法;同第6,509,006号明細書エアゾル化された医薬品の肺送達のための装置、組成物及び方法;同第6,433,040号明細書安定化された生物活性調製物及び使用方法;同第6,423,344号明細書分散性巨大分子組成物及びその調製及び使用方法;同第6,372,258号明細書薬物及び疎水性アミノ酸のスプレー乾燥方法;同第6,309,671号明細書安定なガラス状態粉末処方物;同第6,309,623号明細書用量計測式吸入器で使用するための安定化された調製物;同第6,294,204号明細書形態学的に均一なマイクロカプセルを生成する方法及び当該方法によって生成されたマイクロカプセル;同第6,267,155号明細書粉末充填システム、器具及び方法;同第6,258,341号明細書安定なガラス状態粉末処方物;同第6,182,712号明細書動力充填器具及びその使用方法;同第6,165,463号明細書分散性抗体組成物及びその調製及び使用方法;同第6,138,668号明細書エアゾル化された医薬品を送達するための方法及び装置;同第6,103,270号明細書分散性微細粒子を処理するための方法及びシステム;同第6,089,228号明細書乾燥粉末医薬品を分散させるための器具及び方法;同第6,080,721号明細書副甲状腺ホルモンの活性フラグメントの肺送達;同第6,051,256号明細書分散性巨大分子組成物及びその調製及び使用方法;同第6,019,968号明細書分散性抗体組成物及びその調製及び使用方法;同第5,997,848号明細書インスリン化合物の肺送達のための方法及び組成物;同第5,993,783号明細書乾燥粉末アルファ1抗トリプシンの肺投与のための方法及び器具;同第5,922,354号明細書分散性微細粉末を加工するための方法及びシステム;同第5,826,633号明細書粉末充填システム、器具及び方法;同第5,814,607号明細書副甲状腺ホルモンの活性フラグメントの肺送達;同第5,785,049号明細書乾燥粉末医薬品の分散のための方法及び器具;同第5,780,014号明細書乾燥粉末アルファ1抗トリプシンの肺投与のための方法及び器具;同第5,775,320号明細書エアゾル化された医薬品を送達するための方法及び装置;同第5,740,794号明細書乾燥粉末医薬品の分散のための器具及び方法;同第5,654,007号明細書分散性微細粉末を加工するための方法及びシステム;同第5,607,915号明細書副甲状腺ホルモンの活性フラグメントの肺送達;同第5,458,135号明細書エアゾル化された医薬品を送達するための方法及び装置;同第6,602,952号明細書キトサン及びポリエチレングリコール又は関連重合体から誘導されたヒドロゲル;及び同第5,932,462号明細書分子及び表面にカップリングするための多腕、単官能性重合体の中に見出すことができる。さらに、適切な持続放出処方物は、その開示全体が本発明に参照として援用されている、99年10月19日に発行された持続放出型薬学調製物という題の、カーディナルヘルスCardinalHealthの米国特許第5,968,554号明細書中に記述されている。適切な微小粒子処方物は、03年10月30日に公開された微小粒子の形成及び単離に有用な方法及び製品という題の、スフェリック社Spherics、Incの国際特許出願公開第2003049,701号パンフレット中に記述されている。適切な生物接着性処方物は、04年5月6日に公開された強化された胃内保持を伴う生物接着性薬物送達システムという題の、スフェリック社の国際特許出願公開第2003051,304号パンフレット中に記述されている。非経口投与に適した本発明の実施形態に従った薬学組成物は、錯体の無菌水性及び非水性注射溶液を含み、かかる調製物は、好ましくは、意図されたレシピエントの血液と等張である。これらの調製物は、該組成物を意図されたレシピエントの血液と等張にする溶質、酸化防止剤、緩衝液及び静菌剤を含有し得る。水性及び非水性無菌懸濁液は、懸濁剤及び増粘剤を含み得る。組成物は、例えば密封されたアンプル及びバイアルびんといった一回服用量又は多数回服用量容器に入った体裁をとり、使用直前に例えば生理食塩水又は注射用蒸留水といった無菌液体担体を添加するだけでよいフリーズドライ凍結乾燥条件で保管され得る。前述した種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から即席注射容器及び懸濁液を調製することができる。例えば、密封された容器内の単位剤形の形での錯体混合物を伴う注射可能な安定した無菌組成物を提供することができる。錯体混合物は、対象の体内への注射のために適した液体組成物を形成するべく適切な薬学的に許容可能な担体で戻すことのできる凍結乾燥物の形で提供可能である。非経口単位剤形は標準的に約1マイクログラム~約10mgの錯体混合物を含む。錯体が実質的に不水溶性である場合、生理学的に許容可能なものである充分な量の乳化剤を、水性担体内で錯体を乳化させるのに充分な量で利用することができる。このような1つの有用な乳化剤が、ホスファチジルコリンである。経口投与のための固体剤形には標準的に約2mg~約500mg、好ましくは約10mg~約250mg、理想的には約20mg~約110mgの錯体が含まれている。直腸投与に適した薬学組成物は、好ましくは一回服用量座薬としての体裁をとる。これらは、例えばカカオバターといった1つ以上の従来の固体担体と錯体を混和すること、そして次に結果としての混合物を整形することによって調製可能である。皮膚に対する局所施用に適した薬学組成物は、軟こう、クリーム、ローション、ペースト、ジェル、スプレー、エアゾル又はオイルの形をとる。使用可能な担体としては、ワセリン、ラノリン、PEG、アルコール、経皮浸透増強剤、及びそれらの2つ以上の組合せが含まれる。経皮投与に適した薬学組成物は、長時間にわたりレシピエントの表皮と密に接触した状態にとどまるように適合された個別パッチとしての体裁をとり得る。経皮投与に適した組成物は同様にイオン導入例えばPharmaceuticalResearch36:3181986年参照により送達することもでき、標準的にインスリン化合物複合体の混合物の任意に緩衝させた水溶液の形をとることもできる。適切な処方物は、クエン酸塩又はビス/トリス緩衝液pH6又はエタノール/水を含み、0.1~0.2Mの活性成分を含有する。好ましい実施形態においては、錯体は、その開示全体が本発明に参照として援用される、オパウェールOpawaleらにより03年8月13日に出願された米国仮特許出願第60/494,821号明細書に記述されている通りの固体脂肪酸処方物の構成要素として投与される。ある実施形態においては、インスリン化合物複合体は、固体を形成するのに必要とされるカチオン及び/又はその他の構成要素とは別に提供可能である。例えば、インスリン化合物複合体は乾燥した固体として提供し、カチオン、安定化剤、防腐剤及び/又はその他の構成要素を含む緩衝溶液を別に提供し、かくしてユーザーがカチオン-インスリン化合物複合体錯体を生成すべく別々の構成要素を組合せることができるようにすることが可能である。7.12治療方法カチオン-インスリン化合物複合体組成物及びその処方物は、外来源からのインスリン化合物の投与が無い状態で対象が提供する量と比べて循環するインスリン化合物の量を増大させることで所望の治療的又は生理学的効果が生み出される身体条件の治療において有用である。例えば、治療対象身体条件はI型又はII型糖尿病、前糖尿病及び/又は代謝症候群であり得る。1つの実施形態においては、組成物は糖尿病の症候を軽減させるために投与される。もう1つの実施形態においては、組成物は、糖尿病の発症を防止又は遅延させるために前糖尿病の対象に対して投与される。本発明の方法による投与のためのカチオン-インスリン化合物複合体組成物の有効量は、混合物によって及び対象によって幾分か変動することになり、対象の年令及び身体条件、送達経路及び治療される身体条件といった要因により左右されることとなる。かかる投薬量は当業者にとって既知の日常的な薬理学的手順に従って決定され得る。一般的提案として、全ての重量がインスリン化合物複合体混合物の重量に基づいて計算されているものとして、約0.025~約10mg/kgの活性成分すなわち複合体の経口投薬量が治療的効力を有することになる。より好ましい範囲は約0.06~約1mg/kgであり、さらに一層好ましい範囲は約0.125~約0.5mg/kgである。非経口投薬量は標準的に約0.5μg/kg~約0.5mg/kgの範囲であり、ここで全ての重量はインスリン化合物複合体混合物の重量に基づいて計算されている。より好ましい範囲は約1μg/kg~約100μg/kgである。投与の頻度は、通常一日1回、2回又は3回又は該身体条件を制御するのに必要なだけの回数である。代替的には、カチオン-インスリン化合物複合体組成物を連続輸液により投与することができる。治療持続時間は、治療されているインスリン化合物欠乏症のタイプによって異なり、対象の寿命の続く限りであり得る。錯体は例えば食前0~30分以内に投与され得る。例えば錯体は就寝前0~2時間以内に投与され得る。8.合成実施例以下の実施例は、本発明を例示し、かつ説明する目的で提示されている。8.1保護されたMPEG6C3オリゴマ3-{2-[2-2-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオン酸tert-ブチルエステルの合成乾燥THF10mL中でメチルヘキサエチレングリコール1.0g、3.37mmol及びアクリル酸tert-ブチル0.216g、1.69mmolを溶解させた。溶液に対しナトリウム金属0.4mg、0.016mmolを添加した。室温で4時間攪拌した後、反応混合物を1MのHCl15mLの添加により急冷した。急冷した反応混合物を次にCH2Cl21×50mL、1×25mLで抽出した。有機層を乾燥させMgSO4、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ溶離剤は酢酸エチルでの精製の後、油として生成物を得た0.832g、58。8.2MPEG6C3オリゴマ酸3-{2-[2-2-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオン酸の合成tert-ブチルエステル0.165g、0.0389mmolをトリフルオロ酢酸2.0mL中で、室温で攪拌することによって脱保護させた。次に一定重量0.125g、87になるまで含有量を濃縮させた。8.3MPEG6C3オリゴマ3-{2-[2-2-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオン酸2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルエステルの合成乾燥CH2Cl215mL中で酸0.660g、1.79mmol及びN-ヒドロキシスクシニミド0.2278g、1.97mmolを溶解させた。エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩EDC、0.343g、1.79mmolを添加した。一晩室温で攪拌した後、反応混合物をCH2Cl2で希釈し、水2×45mLで洗浄した。有機層を乾燥させMgSO4、一定の重量まで濃縮した。生成物は油であった0.441g、53。8.4保護されたMPEG4C3オリゴマ3-2-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ-プロピオン酸tert-ブチルエステルの合成乾燥THF10mL中でメチルテトラエチレングリコール1.0g、4.80mmol及びアクリル酸tert-ブチル0.308g、2.40mmolを溶解させた。溶液に対しナトリウム金属0.6mg、0.024mmolを添加した。室温で4時間攪拌した後、反応混合物を1MのHCl15mLの添加により急冷した。急冷した反応混合物を次にCH2Cl21×50mL、1×25mLで抽出した。有機層を乾燥させMgSO4、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ溶離剤は酢酸エチルでの精製の後、油として生成物を得た1.28g、79。8.5MPEG6C3オリゴマー酸3-2-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ-プロピオン酸の合成tert-ブチルエステル1g、3.42mmolをトリフルオロ酢酸6.0mL中で室温で攪拌することによって脱保護させた。次に一定重量0.87g、91になるまで含有量を濃縮させた。8.6MPEG4C3オリゴマ3-2-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-エトキシ-プロピオン酸2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルエステルの合成乾燥CH2Cl220mL中で酸0.6g、2.14mmol及びN-ヒドロキシスクシニミド0.271g、2.35mmolを溶解させた。エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩EDC、0.409g、2.14mmolを添加した。一晩室温で攪拌した後、反応混合物をCH2Cl2で希釈し、水2×45mLで洗浄した。有機層を乾燥させMgSO4、一定の重量まで濃縮した。生成物は油であった0.563g、69。8.7保護されたMPEG4C3オリゴマ3-2-メトキシ-エトキシ-プロピオン酸tert-ブチルエステルの合成乾燥THF20mL中でメチルテトラエチレングリコール5.0g、41.6mmol及びアクリル酸tert-ブチル2.66g、20.8mmolを溶解させた。溶液に対しナトリウム金属0.47mg、20.8mmolを添加した。室温で4時間攪拌した後、反応混合物を1MのHCl30mLの添加により急冷した。急冷した反応混合物を次にCH2Cl21×100mL、1×50mLで抽出した。有機層を乾燥させMgSO4、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ溶離剤は酢酸エチルでの精製の後、油として生成物を得た7.5g、89。8.8MPEG6C3オリゴマ酸3-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-プロピオン酸の合成tert-ブチルエステル1g、4.90mmolをトリフルオロ酢酸6.0mL中で、室温で攪拌することによって脱保護させた。次に一定重量0.652g、89になるまで含有量を濃縮させた。8.92-[2-2-プロポキシ-エトキシ-エトキシ]-エタノール1の合成トリエチレングリコール19.5g、0.13molをテトラヒドロフラン150mL中で溶解させ、水素化ナトリウム2.60g、0.065molを0.5時間にわたり分量添加し、反応をさらに1時間攪拌した。その後、テトラヒドロフラン30mL中に溶解させた1-ブロモプロパノール8.0g、0.065molを添加用漏斗を介した滴下により添加し、反応を室温で一晩攪拌した。粗反応混合物をセライトを通してろ過し、CH2Cl2で洗浄し、蒸発乾固させた。結果としての油をCH2Cl2250mL中で溶解させ、飽和NaCl250mL、H2O250mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィシリカ、酢酸エチルにより、黄色がかった油である1を得た2.24g、18収量。8.10炭酸4-ニトロ-フェニルエステル2-[2-2-プロポキシ-エトキシ-エトキシ]-エチルエステルの合成CH2Cl220mL中に4-ニトロクロロホルマート3.45g、17.1mmol及び12.2g、11.4mmolを溶解させた。10分間攪拌した後、TEA2.1mL、15mmolを添加し反応を室温で一晩攪拌した。粗反応を、CH2Cl250mLで希釈し、1MのHCl50mL、H2O50mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィシリカ、酢酸エチル/ヘキサン、3:2により、黄色がかった油である2を得た2.57g、63収量。8.11炭酸2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルエステル2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチルエステルの合成トリエチレングリコールモノメチルエーテル1.0g、6.1mmol及びN、N’-ジスクシニミジルカルボナート1.87g、7.3mmolをアセトニトリル10mL中に溶解させた。次にトリエチルアミン1.3mL、9.15mmolを添加し、室温で反応を一晩攪拌した。粗反応を蒸発乾固させ、飽和NaHCO350mL中に溶解させ、酢酸エチル2×50mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィシリカ、酢酸エチルにより、透明油である1を得た0.367g、20収量。8.12炭酸2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルエステル2-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-エチルエステル1の合成トリエチレングリコールモノメチルエーテル1.0g、4.8mmol及びN、N’-ジスクシニミジルカルボナート1.48g、5.8mmolをアセトニトリル10mL中に溶解させた。次にトリエチルアミン1.0mL、7.2mmolを添加し、室温で反応を一晩攪拌した。粗反応を蒸発乾固させ、飽和NaHCO330mL中に溶解させ、酢酸エチル2×30mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィシリカ、酢酸エチル/MeOH、20:1により、透明油である1を得た0.462g、28収量。8.13ブト-3-エン酸エチルエステルの合成ビニル酢酸10.0g、0.12molをエタノール200mL中に溶解させ、濃硫酸0.75mL、0.014molを添加した。反応を4時間加熱還流した。粗反応を酢酸エチル200mLで希釈し、H2O200mL、飽和NaHCO3200mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させ、透明な油である1を得た3.17g、23。8.144-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-酪酸エチルエステルの合成トリエチレングリコールモノメチルエーテル4.27g、0.026mol及びブト-3-エン酸エステル1.5g、0.013molをテトラヒドロフラン10mL中で溶解させた。次に塊のNa°0.030g、0.013molを添加し、反応を4時間攪拌した。粗反応を1MのHCl20mLで急冷し、酢酸エチルで洗浄した3×20mL。有機層を組合せ、H2O2×10mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させて黄色がかった油として2を得た1.07g、30収量。8.154-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-酪酸の合成4-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]エトキシ}-酪酸エチルエステル1.07g、4.0mmolを1MのMaOH10mL中に溶解させ、反応を2時間攪拌した。粗反応をインスリン化合物複合体40mLで希釈し、濃HClで最高pH2まで酸性化させ、CH2Cl22×50mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させて透明な油である3を得た0.945g、94収量。8.164-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-酪酸2,5-ジオキソ-ピロリジン-1-イルエステルの合成N-ヒドロキシスクシニミド0.55g、4.8mmol及びEDCI1.15g、6.0mmolをCH2Cl27mL中に溶解させた。次に、CH2Cl22mL中に溶解させた4-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-酪酸0.940g、3.8mmolを添加した。反応を室温で一晩攪拌した。粗反応をCH2Cl221mLで希釈し、1MのHCl30mL、H2O30mLで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィシリカ、酢酸エチルにより、透明油である4を得た0.556g、43収量。9錯体の調製インスリン化合物複合体の亜鉛錯体の調製のための方法が調査された。インスリン化合物及びインスリン化合物類似体の錯化/結晶化に使用される公表済みの方法にとって例外的なものである新しい方法が、HIM2の亜鉛錯体を作るために開発された。HIM2は、という構造を有しB29にカップリングされた修飾部分を伴うヒトインスリンモノ複合体である。という構造を有しB29にカップリングされた修飾部分を伴うヒトインスリンモノ複合体であるIN105を用いて、さらなる錯体が調製された。該方法は、インスリン化合物複合体固体のT型及びR型そしてプロタミンカチオン錯体という3つの主要なタイプを提供した。9.1T型固体の調製と分析9.1.1HIM2のT型Zn錯体2g/Lの調製試行10のHClを用いて最高3の最終pHを有する、約2g/LのHIM2溶液を調製した。以上の溶液の10mLのアリコート20mgのタンパク質に対し、0.25Mという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。2w/wのZnCl2溶液20又は40μLを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.1又は5.5に調整した。室温又は5°Cで15分間溶液を攪拌し、その後一日室温又は5°Cに放置して固体を形成させた。反応を室温又は5°Cに一日放置させた後、結晶又は沈殿は全く形成しなかった。安定な亜鉛インスリン化合物類似体結晶の調製という題の米国特許第5,504,188号明細書の実施例2を参照のこと。9.1.2HIM2のT型Zn錯体濃度10g/L10のHClを用いて最高3の最終pHを有する約10g/LのHIM2溶液を調製した。以上の溶液の10mL100mgのタンパク質アリコートに対し、0.25Mという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。10w/wのZnCl2溶液40μLを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.20に調整した。5°Cで15分間溶液を攪拌し、その後5日間5°Cに放置して固体を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、10分間2000RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DI脱イオン水で洗浄した。この溶液を10分間2000RPMで遠心分離してから水を傾瀉し、さらなる5mLの低温DI水で固体を洗浄した。ここでも又、試料を約2000RPMで約10分間遠心分離してからH2Oを傾瀉した。試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、10分間2000RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で乾燥させて白色固体を得た。9.1.3HIM2のT型Zn錯体濃度20g/L10のHClを用いて最高3の最終pHを有する約20g/LのHIM2溶液を調製した。以上の溶液の10mL200mgのタンパク質アリコートに対し、0.25Mという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。10w/wのZnCl2溶液80μLを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.37に調整した。5°Cで15分間溶液を攪拌し、その後4日間5°Cに放置して固体を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DI脱イオン水で洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してから水を傾瀉し、さらなる5mLの低温DI水で固体を洗浄した。ここでも又、試料を約2600RPMで約20分間遠心分離してからH2Oを傾瀉した。試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で乾燥させて白色固体を得た。9.1.4HIM2のT型Zn錯体濃度30g/L10のHClを用いて最高3の最終pHを有する約30g/LのHIM2溶液を調製した。以上の溶液の50mL1.5gのタンパク質アリコートに対し、0.25Mという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。10w/wのZnCl2溶液600μLを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.34に調整した。溶液を5日間5°Cに放置して固体を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を10mLの低温DI脱イオン水で洗浄し、各洗浄毎に遠心分離し、水を傾瀉した。次に、試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで3回洗浄した。それを15分間2800RPMで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で乾燥させて白色固体を得た。図1及び2は、24時間成長させた結晶を示すZeissAxiovert顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。図1では、結晶サイズは長さが約11.3μMであり、直径約5.3μMである。図2では、左側の結晶のサイズは、長さが約15.1μMであり、直径約5.9μMであり、右側の結晶のサイズは長さ約9.1μMであり、直径約5.3μMである。図3は、5日間成長させた結晶を示すZeissAxiovert顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。1つの態様では、本発明は、図1、2又は3に示されている形態を有する結晶を含んでいる。9.1.5HIM2のT型Zn錯体濃度50g/L10のHClを用いて最高3の最終pHとなるように約50g/LのHIM2溶液を調製した。以上の溶液の10mLアリコートに対し、0.25Mという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。10ZnCl2溶液200μLを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.23に調整した。5°Cで15分間溶液を攪拌し、4日間5°Cに放置して固体形成を発生させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉し、さらなる5mLの低温DIH2Oで固体を洗浄した。ここでも又、試料を約2600RPMで約20分間遠心分離してからH2Oを傾瀉した。試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で3日間乾燥させた。9.1.6HIM2のT型Zn錯体1gスケール10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約10g/LのHIM2溶液を調製した。以上の溶液の50mL500mgのタンパク質アリコートに対し、0.25Mという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。10のZnCl2溶液200μLを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.49に調整した。5°Cで15分間溶液を攪拌し、その後7日間5°Cに放置して固体形成を発生させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を10mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。さらに2回水洗浄を繰り返した。次に、試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。さらに2回EtOHでの洗浄を同じ要領で実施してから、試料を凍結乾燥機上に置いて4日間乾燥させた。9.1.7中性pHでのHIM2のT型Zn錯体5gスケール10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約10g/LのHIM2溶液を調製した。試料に2ミリリットルの10ZnCl2溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.05に調整した。溶液を一晩室温で攪拌して固体形成を発生させた。350mL入りの微細フリット4.5~5μmディスク型漏斗ChemGlassCGl402-28、直径90mmに対し、複数の部分に分けて乳状のZn-HIM2反応混合物500mLを添加した。約4~6時間真空を適用しながら、枝付きフラスコ内にろ液を収集した。1つの選択肢として、ろ塊を100mLの低温1ZnCl2で洗浄し、別々にろ液を収集することができる。ろ塊を100mLの氷冷水で洗浄し、ろ液を再度収集した。ろ過を同様にさらに100mLの氷冷100エタノールで洗浄し、ろ液を再度収集した。ろ塊の最終洗浄液は100mLの新鮮氷冷水であり、最終ろ液を収集した。ろ塊を真空下で乾燥させかつ/又は12~18時間空気乾燥させた。乾燥の後、ろ塊を漏斗からこそげ取り、秤量し、HPLCを介して氷分/タンパク質含有量を測定した。さまざまな洗浄ステップから収集されたろ液を同様に、プロセス中の喪失Zn-HIM2の濃度を判定する目的でHPLCを用いて分析した。ろ過により2.5w/wのZn含有量が生み出され、全体的収量は98であった。9.1.8中性pHでのHIM2のT型Zn錯体500mgスケール10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約10g/LのHIM2溶液を調製した。試料に200μLの10ZnCl2溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.06に調整した。溶液を15分間5で、その後2日間5°Cに放置して固体形成を発生させた。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を10mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を15分間2800RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。さらに2回水洗浄を繰り返した。その後、試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。さらに2回のEtOH洗浄を同じ要領で行なってから、凍結乾燥機上に試料を置いて2日間乾燥させた。9.2R型固体の調製及び分析9.2.12g/Lのフェノールを用いたHIM2のR型Zn錯体氷酢酸を用いて最高3の最終pHとなるまで約2g/LのHIM2溶液を調製した。上述の溶液の10mLアリコートに対して33マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.89に調整した。160μLの10w/wのZnCl2溶液を試料に添加した。15分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に3日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間3400RPMで遠心分離させた。上清を傾瀉し、固体を5mLの低温DI水で洗浄した。この溶液を15分間3200RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。次に、試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、15分間3200RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。再び試料を5mLの低温EtOHで洗浄したが、遠心分離はしなかった。固体を管の底面に沈降させ、次にこれを高速真空内に入れて乾燥させた。9.2.220g/LでのHIM2のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約20g/LのHIM2溶液を調製した。上述の溶液の10mLアリコートに対して66マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを6.43に調整した。320μLの10w/wのZnCl2溶液を試料に添加した。15分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に4日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉し、固体をさらに5mLの低温DIH2Oで洗浄した。ここでも又、試料を20分間2600RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉した。試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を3日間凍結乾燥させた。9.2.330g/LでのHIM2のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約30g/LのHIM2溶液を調製した。上述の溶液の10mLアリコートに対して99マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを6.47に調整した。次に480μLの10w/wのZnCl2溶液を試料に添加した。15分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に4日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉し、固体をさらに5mLの低温DIH2Oで洗浄した。ここでも又、試料を20分間2600RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉した。試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を3日間凍結乾燥させた。図4は、4日間成長させた固体を示す。写真はZeissAxiovert顕微鏡を用いて撮影したものである。結晶の平均長は約9.7μMである。9.2.450g/LでのHIM2のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約50g/LのHIM2溶液を調製した。上述の溶液の10mLアリコートに対して165マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを6.82に調整した。800μLの10のZnCl2溶液を試料に添加した。15分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に4日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉し、固体をさらに5mLの低温DIH2Oで洗浄した。ここでも又、試料を20分間2600RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉した。試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を3日間凍結乾燥させた。9.2.51gスケールでのHIM2のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約10g/LのHIM2溶液を調製した。上述の溶液の50mLアリコートに対して165マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを6.42に調整した。800μLの10のZnCl2溶液を試料に添加した。15分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に7日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を10mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。さらに2回の水洗浄を同じ要領で行った。試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。さらに2回のEtOH洗浄を同じ要領で実施してから試料を凍結乾燥機上に4日間置いた。9.2.65gスケールでのHIM2のR型Zn錯体10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約10g/LのHIM2溶液を調製した。上述の溶液450mLに対して500マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.1に調整した。800μLの10のZnCl2溶液を試料に添加した。15分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に一晩放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。以上で実施した反応を3回のろ過試行に分割した。試行1では、反応混合物を、微細フリット漏斗を通してろ過し、その後1のZnCl2溶液で洗浄した。材料を真空ろ過を介して一晩乾燥させた。第2の試行は、同様にろ紙も含んでいる中度フリットフィルター上でろ過した。次に物質をエタノールと水で洗浄し、一晩真空ろ過を介して乾燥させた。最終的に第3の試行を微細フリット漏斗を通してろ過し、1のZnCl2溶液で洗浄し、同じくエタノールと水でも洗浄した。この材料を一晩、真空ろ過下でも乾燥させた。9.2.7.中性pHでのHIM2のR型Zn錯体10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで約10g/LのHIM2溶液を調製した。上述の溶液50mLに対して165マイクロリットルの液化フェノールを添加した。次に200マイクロリットルの10のZnCl2溶液を試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.18に調製した。溶液を2日間室温に放置して沈殿物を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2800RPMで遠心分離した。しかしながら、材料は最初管の底面に沈降しなかったため、約2時間遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を60分間2800RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉した。さらに2回水洗浄を繰り返した。その後、試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、60分間2800RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。さらに2回EtOH洗浄を同じ要領で実施した。材料は、3回目のEtOH洗浄の後濁っており一晩冷蔵庫内に置いて反応をさらに沈降させた。溶媒を傾瀉し、材料を2日間凍結乾燥機上に置いた。9.3.プロタミン固体の調製及び分析9.3.1.酸性pHでのプロタミンを用いたHIM2のT型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHを有していたHIM2の10g/Lの原液に対してプロタミンを添加した。以上の溶液の10mLアリコート100mgのタンパク質に対し0.25Mという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。10のZnCl2溶液200マイクロリットルを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを最高5に調整した。5°Cで15分間溶液を攪拌し、その後2日間5°Cで放置して固体形成を発生させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を10mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。さらに2回のH2O洗浄を同じ要領で行なった。その後、試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。同じ要領でさらに2回EtOH洗浄を実施してから、試料を2日間凍結乾燥機上に置いた。9.3.2中性pHでのプロタミンを用いたHIM2のT型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHになるまで約30g/LのHIM溶液を調製した。以上の溶液の50mLアリコート1.5gのタンパク質に対し、1ミリリットルの氷酢酸を添加した。600マイクロリットルの10ZnCl2溶液を反応に添加し、その後225ミリグラムのプロタミンを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを6.95に調整し反応を2日間5°Cに放置して固体形成を発生させた。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を10mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。さらに2回のH2O洗浄を同じ要領で行なった。次に試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。同じ要領でさらに2回EtOH洗浄を実施してから試料を3日間凍結乾燥機上に置いた。9.3.3酸性pHでのプロタミンを用いたHIM2のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHになるまで約10g/LのHIM2溶液を調製した。以上の溶液の150mLアリコート1.5gのタンパク質に対し、液化フェノール2.48mLを添加した。反応のpHを濃水酸化アンモニウムを用いて最高6.57に調整した。12マイクロリットルの10ZnCl2溶液を反応に添加し、その後225ミリグラムのプロタミンを添加した。反応混合物を15分間室温で攪拌してから、室温に2日間放置して固体形成を発生させた。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を50mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を15分間2800RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。さらに2回のH2O洗浄を同じ要領で行なった。次に試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、15分間2800RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。同じ要領でさらに2回EtOH洗浄を実施してから試料を2日間凍結乾燥機上に置いた。9.3.4中性pHでのプロタミンを用いたHIM2のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHとなるまで、約10g/LのHIM2溶液を調製した。150mLの反応に対し液化フェノール495mLを添加した。次に600ミリリットルの10ZnCl2溶液を反応に添加し、その後75mgのプロタミンを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.01に調整した。反応を室温に3日間放置して固体を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を50mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を15分間2800RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。さらに2回のH2O洗浄を同じ要領で行なった。その後、試料を50mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、15分間2800RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。同じ要領でさらに2回EtOH洗浄を実施してから、試料を2日間凍結乾燥機上に置いた。9.4インスリン化合物ジ複合体錯体の調製及び分析9.4.1A1及びB29インスリン化合物ジ複合体でのT型Zn錯体ヒトインスリンDICON-1のB29及びA1にカップリングされた修飾部分-COCH25OCH2CH27OCH3を有するインスリン化合物ジ複合体を、約10g/Lで溶液に添加し、10のHClを用いて最終pH3.15になるように調製した。以上の溶液の3.75mLアリコートに対し、0.25Mという最終濃度まで氷酢酸を添加した。その後15μLの10ZnCl2溶液を試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを4.90に調整した。5°Cで15分間溶液を攪拌し、次に5°Cに6日間放置して、固体を形成させた白色固体を生成した。9.4.2A1及びB29インスリン化合物ジ複合体でのR型Zn錯体DICON-1を約10g/Lで溶液に添加し、10HClを用いて最終pH3.15になるように調製した。以上の溶液の3.75mLアリコートに対して約12μLの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.75に調整した。60μLの10ZnCl2溶液を試料に添加した。溶液を室温で15分間攪拌し、次に6日間室温に放置して、より多くの沈殿物を形成させた白色固体を生成した。反応混合物を遠心分離管に移し、20分間2600RPMで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を20分間2600RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉し、さらに5mLの低温DIH2Oで固体を洗浄した。再び試料を2600RPMで20分間遠心分離してからH2Oを傾瀉した。試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、20分間2600RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を6日間凍結乾燥させた。9.4.3ジ複合体B1、B2910mg/mLDICON-1を約10g/Lで溶液に添加し、33μLの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを5.34に調整した。その後160μLの10ZnCl2溶液を試料に添加した。溶液を2週間室温に放置して固体形成を発生させた白色固体を生成した。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで3回洗浄した。溶液を15分間2800RPMで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。その後、試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで3回洗浄した。再び試料を15分間2600RPMで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。試料を2日間凍結乾燥させた。9.4.4ジ複合体B1、B2920mg/mLDICON-1を約20g/Lで溶液に添加し、66μLの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.65に調整した。その後320μLの10ZnCl2溶液を試料に添加した。溶液を2週間室温に放置して固体形成を発生させた白色固体を生成した。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで3回洗浄した。溶液を15分間2800RPMで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。その後、試料を5mLの200プルーフの低温EtOHで3回洗浄した。再び試料を15分間2600RPMで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。試料を2日間凍結乾燥させた。9.5T型IN105固体の調製及び分析9.5.1IN105モノ複合体のT型Zn錯体濃度10g/L10のHClを用いて最高3の最終pHをもつIN105溶液を約10g/L100mgで調製した。50μLの10w/wZnCl2溶液を試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.52に調整した。濁った溶液を攪拌し、次に5日間室温に放置して固体を形成させた。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2900RPMで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を10mLの低温DI水で3回洗浄した。この溶液を10分間2900RPMで遠心分離してから、水を傾瀉し、固体を低温DI水のもう1つの分量で洗浄した。その後試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで3回洗浄し、10分間2900RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。試料を真空乾燥させて白色固体90mgを得た。9.5.2IN105モノ複合体のT型Zn錯体1gスケール10のHClを用いて最高3の最終pHとなるように、約10g/L1gのIN105溶液を調製した。試料に対し500μLの10ZnCl2溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを最高7.4に調整した。濁った溶液を15分間攪拌し、次に室温に最高2日間放置してからろ過した。反応混合物を、ハウスバキューム下で焼結ガラス漏斗微細を通してろ過した。ろ過した材料の入った焼結ガラス漏斗を一晩ガラス乾燥機内で真空下に置き、結果として白色微細粉末900mgを得た。9.5.3中性pHでのIN105モノ複合体のT型Zn錯体5gスケール10のHClを用いて最高3の最終pHとなるように、約10g/LのIN105溶液5g、ロットNobex040706Lを調製した。試料に対し2mLの10ZnCl2溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを最高7.4に調整した。次に、濁った溶液を一晩室温に放置して、ろ過の前に固体を形成させた。以上で実施された反応を、50mLの遠心分離管4本に分割し、最初に3200RPMで合計2時間遠心分離した。次に材料を20分間9000RPMで遠心分離に付し、一晩5°Cで保管した。上清を傾瀉し、固体を各管から10mLの低温DIH2Oで洗浄した。管を逆さにし最高1時間3200RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉し、固体をさらに10mLの低温DIH2Oで洗浄した。再び、試料を最高一時間3200RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで2回洗浄し、1時間3200RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。2日間試料を真空乾燥させて、白色粉末1.64gロットNobex040730L-Aを得た。9.6R型IN105固体の調製及び分析9.6.1中性pHでのフェノールを用いたIN105複合体でのR型Zn錯体10のHClを用いて最高3の最終pHとなるように、約10g/L500mgのIN105溶液を調製した。以上の溶液に対し200μLの10ZnCl2溶液及び165μLの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを7.37に調整した。濁った溶液を室温に最高2日間放置して固体を形成させてからろ過した。反応混合物を、ハウスバキューム下で焼結ガラス漏斗微細を通してろ過した。ろ過した材料の入った焼結ガラス漏斗を一晩ガラスデシケータ内で真空下に置き、結果として白色微細粉末440mgを得た。9.6.2スケール5gでのIN105複合体のR型Zn錯体10のHClを用いて最高3の最終pHとなるように、約10g/LのIN105溶液4.2g、ロットNobex040706Lを調製した。以上の溶液に対し1.5mLの液化フェノール及び1.8mLの10ZnCl2溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてpHを最高7.4に調整した。強く濁った溶液を一晩室温に放置して、より多くの沈殿物を形成させた。以上で実施された反応を、50mLの遠心分離管4本に分割し、最初に3200RPMで2時間遠心分離した。次に材料を20分間9000RPMで遠心分離に付し、朝まで5°Cで保管した。上清を傾瀉し、固体を各管から10mLの低温DIH2Oで洗浄した。管を逆さにし最高1時間3200RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉し、固体をさらに10mLの低温DIH2Oで洗浄した。再び、試料を最高一時間3200RPMで遠心分離してからH2Oを傾瀉した。試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで2回洗浄し、1時間3200RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉した。2日間試料を真空乾燥させて、白色粉末2.34gを得た。9.7プロタミンIN105固体の調製及び分析9.7.1酸性pHでのプロタミンを用いたIN105モノ複合体のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHとなるように、約10g/LのIN105溶液を調製する。以上の溶液の15mLアリコート150mgのタンパク質に対し、液化フェノール248μLを添加する。反応のpHを最高6.50まで、濃水酸化アンモニウムで調整する。1マイクロリットルの10ZnCl2溶液を反応に添加し、その後22.5ミリグラムのプロタミンを添加する。反応混合物を15分間室温で攪拌してから、2日間室温に放置して固体形成を発生させる。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離する。溶液を傾瀉し、固体を5mLの低温DIH2Oで洗浄する。この溶液を、15分間2800RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉する。同じ要領でさらに2回H2O洗浄を行なう。その後試料を10mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、15分間2800RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉する。さらに同じ要領で2回EtOH洗浄を実施してから、試料を2日にわたり真空乾燥させる。9.7.2中性pHでのプロタミンを用いたIN105複合体のR型Zn錯体の調製10のHClを用いて最高3の最終pHとなるように、約10g/LのIN105溶液を調製する。15mLの溶液に対し、液化フェノール49.5μLを添加する。その後、60マイクロリットルの10ZnCl2溶液を反応に添加し、その後7.5mgのプロタミンを添加する。pHを7.00まで、濃水酸化アンモニウムで調整する。反応を3日間室温に放置して固体を形成させる。反応混合物を遠心分離管に移し、15分間2800RPMで遠心分離する。溶液を傾瀉し、固体を5.0mLの低温DIH2Oで洗浄した。この溶液を、15分間2800RPMで遠心分離してから、H2Oを傾瀉する。同じ要領でさらに2回H2O洗浄を行なう。その後試料を50mLの200プルーフの低温EtOHで洗浄し、15分間2800RPMで遠心分離してからEtOHを傾瀉する。さらに同じ要領で2回EtOH洗浄を実施してから、試料を2日にわたり真空乾燥させる。9.7.3IN105のR型結晶性Zn錯体の調製25の有機物質を含有する粗製の15mg/mLのIN105溶液のpHを、1MのHClを用いて3.47に調整した。40~60°Cの水浴中で固体フェノールを融解させ、0.218mLを反応フラスコに加えた。その後、反応に対し0.4mLの4酸性化ZnCl2水溶液を添加した。溶液のpHを、6.6という最終pHに1MのNaOHを用いて調整した。pHを調整しながら、10mLのアリコートを次のpH値で引き抜いた:4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0、6.2、6.4及び6.6。攪拌することなく試料を24時間放置した。顕微鏡で針状結晶が観察された。9.7.430の有機物を含有するIN105のR型結晶性Zn錯体の調製MPEG3プロピオニルインスリン化合物の新鮮な15mg/mL溶液を、250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中で調製し、1MのHClを用いてpHを2.81に調整した。溶液に対して液化フェノール0.040mLと95のEtOH4.25mLを添加した。その後0.400mLの4酸性化ZnCl2溶液を反応混合物に添加した。50のNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で1mLのアリコートを引抜きながら、3.7~5.4まで溶液のpHを調整した:4.0、4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4。試料を24時間攪拌無しで放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、4.0~5.2のpH範囲から針状結晶を示した図5参照。9.7.5100mMの酢酸アンモニウム緩衝液中のIN105のR型結晶性Zn錯体の調製EtOH30、20及び10100mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でMPEG3プロピオニルインスリン化合物の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClでpHを2.8に調整した。溶液に対して液化フェノール、0.040mL及び95のEtOH、4.25mLを添加した。その後、0.400mLの4の酸性化ZnCl2溶液を反応混合物に添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で0.5mLのアリコートを引抜きながら、2.9~5.6まで溶液のpHを調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6。試料を24時間攪拌無しで放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、4.4~4.8のpH範囲から針状結晶を示した。100mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でMPEG3プロピオニルインスリン化合物の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClでpHを2.8に調整した。溶液に対して液化フェノール、0.040mL及び95のEtOH、2.25mLを添加した。その後、0.400mLの4の酸性化ZnCl2溶液を反応混合物に添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で0.5mLのアリコートを引抜きながら、2.9~5.6まで溶液のpHを調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6。試料を24時間攪拌無しで放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、4.8~5.4のpH範囲から円状結晶を示した。100mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でMPEG3プロピオニルインスリン化合物の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClでpHを2.8に調整した。溶液に対して液化フェノール、0.040mL及び95のEtOH、1.15mLを添加した。その後、0.400mLの4の酸性化ZnCl2溶液を反応混合物に添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で0.5mLのアリコートを引抜きながら、2.8~5.6まで溶液のpHを調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6。試料を24時間攪拌無しで放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、5.0~5.6のpH範囲から針状結晶を示した。9.7.60.1及び0.2のフェノールを用いた20の有機物質中のIN105のR型結晶性Zn錯体の調製100mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でMPEG3プロピオニルインスリン化合物の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClでpHを3.0に調整した。溶液に対して液化フェノール、0.010mL及び95のEtOH、2.5mLを添加した。その後、0.400mLの4の酸性化ZnCl2溶液を反応混合物に添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で0.5mLのアリコートを引抜きながら、3.2~5.6まで溶液のpHを調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6。試料を24時間攪拌無しで放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、4.4~5.4のpH範囲から円状結晶を示した。100mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でMPEG3プロピオニルインスリン化合物の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClでpHを3.0に調整した。溶液に対して液化フェノール、0.020mL及び95のEtOH、2.5mLを添加した。その後、0.400mLの4の酸性化ZnCl2溶液を反応混合物に添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で0.5mLのアリコートを引抜きながら、3.3~5.6まで溶液のpHを調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6。試料を24時間攪拌無しで放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、4.4~5.2のpH範囲から円状結晶を示した。9.7.78.0グラムスケール、pH4.8及び室温でのIN105のR型結晶型Zn錯体の調製250mMの酢酸アンモニウム緩衝液内でMPEG3プロピオニルインスリン化合物の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.0に調整した。溶液に対して液化フェノール2.13mL及び95のEtOH225mLを添加した。その後、4の酸性化されたZnCl2溶液21.3mLを反応混合物に添加した。5MのNH4OHを用いて、溶液のpHを4.8に調整した。溶液を24時間攪拌無しで放置してから、結晶を収獲した。T=0顕微鏡写真で針状結晶を観察した。250mL入り遠心分離管6本に反応混合物を分割することによって、結晶を収獲した。管を10°Cで8分間10,000RPMで回転させてから、上清を傾瀉した。その後、各管に対して10mLの低温H2Oを添加してから、6本を2本に統合した。遠心分離プロセスを冷水でもう1度そして低温EtOHでさらに2度繰り返した。その後、結晶を2日間卓上型凍結乾燥機で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において93の収量w/wが生成された。9.7.81.5グラムスケール、pH4.8及び室温でのIN105のR型結晶性Zn錯体の調製pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム100mL中に1.52gの固体IN105を溶解させることにより、MPEG3プロピオニルインスリン化合物IN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHCl/5MのNH4OHを用いて溶液をpH2.8に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、400μLの融解フェノール及び42.5mLの95EtOHを添加した。次に4mLの4酸性化水性ZnCl2を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、5MのNH4OHを用いてpH4.8に調整した。その後、結晶が収獲される前に48時間攪拌せずに反応を放置した。顕微鏡を介し、21時間後に針状結晶形成が観察された。反応スラリーを50mL入り遠心分離管4本に分割することにより、結晶を収獲した。最初管を8分間1000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。各管内の結晶を、氷冷H2Oの5mLアリコートで1回洗浄し、次に8分間3000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷H2Oの5mLアリコートで1回そして次に氷冷EtOHの5mLアリコートで1回、洗浄/回転手順を繰り返した。その後結晶を一晩真空デシケータ内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において73の収量w/wが生成された。9.7.9スケール1.5グラム、pH4.4及び室温でのIN105のR型結晶性Zn錯体の調製pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム100mL中に1.50gの固体IN105を溶解させることにより、MPEG3プロピオニルインスリン化合物IN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて溶液をpH2.6に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、400μLの融解フェノール及び42.5mLの95EtOHを添加した。次に4mLの4酸性化水性ZnCl2を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、5MのNH4OHを用いてpH4.4に調整した。その後、結晶が収獲される前に22時間攪拌せずに反応を放置した。顕微鏡を介し、2時間後に針状結晶形成及び沈殿物の混合物が観察された。反応混合物は21時間後顕微鏡を介して完全に結晶性であるように思われた。反応スラリーを250mL入り遠心分離管1本に移すことにより、結晶を収獲した。最初管を8分間10,000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。結晶を、氷冷H2Oの20mLアリコートで1回洗浄し、次に8分間10,000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷H2Oの20mLアリコートで1回、次に氷冷EtOHの20mLアリコートで2回、そして最後に氷冷H2Oの20mLアリコートで1回洗浄/回転手順を繰り返した。その後結晶を一晩真空デシケータ内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において67の収量w/wが生成された。9.7.10スケール8.0グラム、pH4.8及び室温でのIN105のR型結晶性Zn錯体の調製pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム533mL中に7.98gの固体IN105を溶解させることにより、MPEG3プロピオニルインスリン化合物IN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて溶液をpH2.4に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、2.13mLの融解フェノール及び225mLの95EtOHを添加した。次に21.3mLの4酸性化水性ZnCl2を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、5MのNH4OHを用いてpH4.8に調整した。その後、結晶が収獲される前に21時間攪拌せずに反応を放置した。反応混合物は、顕微鏡を介し2時間後に完全に結晶性であるように思われた。反応スラリーを250mL入り遠心分離管6本に分割することにより、結晶を収獲した。最初管を8分間10,000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。各管内の結晶を、氷冷H2Oの10mLアリコートで1回洗浄し、次に8分間10,000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷H2Oの10mLアリコートで1回、次に氷冷EtOHの10mLアリコートで2回、そして最後に氷冷H2Oの10mLアリコートで1回洗浄/回転手順を繰り返した。その後結晶を2日間真空デシケータ内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において87の収量w/wが生成された。9.7.1110.0グラムスケール、pH4.8及び室温でのIN105のR型結晶性Zn錯体の調製pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム670mL中に10.06gの固体IN105を溶解させることにより、MPEG3プロピオニルインスリン化合物IN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて溶液をpH2.6に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、2.7mLの融解フェノール及び285mLの95EtOHを添加した。次に27mLの4酸性化水性ZnCl2を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、5MのNH4OHを用いてpH4.8に調整した。その後、結晶が収獲される前に21時間攪拌せずに反応を放置した。反応混合物は、顕微鏡を介し205時間後に完全に結晶性であるように思われた。反応スラリーを250mL入り遠心分離管6本に分割することにより、結晶を収獲した。最初管を10°Cで8分間10,000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。各管内の結晶を、氷冷H2Oの10mLアリコートで1回洗浄し、250mL入りの遠心分離管2本に統合し、次に10°Cで8分間10,000RPMで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷H2Oの30mLアリコートで1回、次に氷冷EtOHの30mLアリコートで2回、そして最後に氷冷H2Oの30mLアリコートで1回洗浄/回転手順を繰り返した。その後結晶を3日間ベンチトップ凍結乾燥機内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において89の収量w/wが生成された。9.8有機溶媒を用いたHIM2の結晶性Zn錯体の調製と分析9.8.1HIM2のR型Zn錯体の調製250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.95に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH3.5mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液600μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.14から6.0に調整した:4.2、4.4図6A参照、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4図6B参照、5.6、5.8、6.0。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.4で針状結晶を示した。4.6~6.0のpH範囲は、さまざまな形状及びサイズの大きい結晶性様の固体を示している。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.95に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH3.5mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液400μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.22から6.0に調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2図7A参照、5.4、5.6、5.8、6.0。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.2~6.0でさまざまな形状及びサイズの結晶性様の固体を示している。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.95に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH3.5mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液200μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.19から6.0に調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0図7B参照、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.4~4.6でさまざまな形状及びサイズの結晶性様の固体を示した。4.8~5.8のpH範囲は、より均質な針状結晶を示している。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.95に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH2.6mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液600μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.04から6.0に調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4図8A参照、5.6、5.8、6.0。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.6~5.4で平坦な雪片様の結晶を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.95に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH2.6mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液400μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.05から6.0に調整した:4.2、4.4、4.6、4.8、5.0図8B参照、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH5.0で針状結晶を、pH5.2で結晶様固体を、そしてpH5.4で平坦な雪片様の結晶を示した。Rxn6250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.95に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH2.6mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液200μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.09から6.0に調整した:4.2、4.4、4.6、4.8図9A参照、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.8~5.6で針状結晶及び結晶様固体を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液250μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを2.97から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.6~5.8で結晶様沈殿を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液200μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.06から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4図9B参照、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.6~5.6で結晶様沈殿を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液150μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.09から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH5.0~5.2で、さまざまな形状及びサイズの結晶を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール40μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液100μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.09から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0図10A参照、5.2、5.4図10B参照、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH5.0で針状結晶を示し、5.2~5.6でさまざまな形状及びサイズの大きい結晶性材料を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール20μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液250μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.08から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、pH4.8~5.8で結晶様沈殿を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール20μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液200μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.05から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、非常に小さい結晶様固体を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール20μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液200μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.05から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、非常に小さい結晶様固体を示した。250mMの酢酸アンモニウム緩衝液中でHIM2の新鮮な15mg/mL溶液を調製し、5MのHClを用いてpHを2.76に調整した。溶液に対して液化フェノール20μL、及び95のEtOH4.25mLを添加した。その後、反応混合物に対して4の酸性化ZnCl2溶液100μLを添加した。5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々で500μLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.06から5.8に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8。24時間攪拌せずに試料を放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真は、非常に小さい結晶様固体を示した。9.9亜鉛を用いたHIM2及びIN105の共結晶9.9.1HIM2及びIN105のR型共結晶化Zn錯体の調製9.9.250:50HIM2:IN105pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に37.3mgのHIM2と36.4mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.84に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl280μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.19~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4及び5.6。試料を4時間攪拌せずに放置した。4時間後に撮影した顕微鏡写真は4.4~5.6のpH範囲でさまざまなサイズ及び形状の結晶を示している。pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に37.1mgのHIM2と35.9mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH3.03に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.38~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0図11A参照、5.2図11B参照、5.4及び5.6図12A参照。試料を4時間攪拌せずに放置した。4時間後に撮影した顕微鏡写真は4.6~5.6のpH範囲でほとんどが短い針状結晶を示している。9.9.370:30HIM2:IN105pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に53.4mgのHIM2と23.2mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.62に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl280μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.02~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2図12B参照、5.4及び5.6。試料を1時間攪拌せずに放置した。1時間後に撮影した顕微鏡写真は4.4~5.6のpH範囲でさまざまなサイズ及び形状の結晶様沈殿を示している。pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に53.6mgのHIM2と24.5mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.89に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.28~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2図13A参照、5.4及び5.6。試料を1時間攪拌せずに放置した。1時間後に撮影した顕微鏡写真はほとんどが4.6~4.8のpH範囲からさまざまなサイズ及び形状の結晶様沈殿を、そして5.0~5.4のpH範囲で数多くの短い針状結晶を示している。9.9.430:70HIM2:IN105pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に23.3mgのHIM2と54.7mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.84に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl280μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.27~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4及び5.6。試料を1時間攪拌せずに放置した。1時間後に撮影した顕微鏡写真は4.4~5.0のpH範囲でさまざまなサイズ及び形状の結晶様沈殿を、そして5.2~5.6のpH範囲で僅かな針状結晶を示している。pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に24.8mgのHIM2と54.9mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH3.09に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを3.47~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4及び5.6図13B参照。試料を1時間攪拌せずに放置した。1時間後に撮影した顕微鏡写真はほとんどが4.4~5.0のpH範囲からさまざまな円形サイズの結晶様沈殿をそして5.2~5.6のpH範囲でさまざまな形状及びサイズの結晶を示している。9.9.5HIM2及びIN105のR型共結晶化Zn錯体の調製9.9.650:50HIM2:IN105pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に37.4mgのHIM2と35.9mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.60に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを2.15~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4及び5.6。試料を24時間攪拌せずに放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真はpH=4.6~5.6でさまざまな形状及びサイズの結晶固体を示した。9.9.770:30HIM2:IN105pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に57.0mgのHIM2と24.5mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.43に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを2.92~5.60に調整した:4.4、4.6図14A参照、4.8、5.0、5.2、5.4及び5.6。試料を24時間攪拌せずに放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真はpH5.0~5.2のpH範囲で針状結晶を示した。9.9.830:70HIM2:IN105pH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に24.1mgのHIM2と53.8mgのIN105を溶解させることにより、HIM2及びIN105の新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.35に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを2.60~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0図14B参照、5.2、5.4及び5.6。試料を24時間攪拌せずに放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真はpH5.0~5.2のpH範囲で針状結晶を示した。9.9.9HIM2及びヒトインスリンのR型共結晶化Zn錯体の調製9.9.1050:50HIM2:インスリンpH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に39.2mgのHIM2と36.7mgのインスリンを溶解させることにより、HIM2及びインスリンの新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH2.53に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを2.82~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2図15A参照、5.4及び5.6。試料を24時間攪拌せずに放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真はpH5.2及び5.4でさまざまな形状及びサイズの結晶様の固体を示した。数多くの小さい針状結晶がpH5.6で観察された。9.9.1170:30HIM2:インスリンpH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に56.5mgのHIM2と20.2mgのインスリンを溶解させることにより、HIM2及びインスリンの新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH3.23に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを2.82~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4及び5.6。試料を24時間攪拌せずに放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真はpH5.2及び5.6でさまざまな形状及びサイズの結晶様の固体を示した。9.9.1230:70HIM2:インスリンpH7.5の250mMの酢酸アンモニウム4mL中に21.8mgのHIM2と49.2mgのインスリンを溶解させることにより、HIM2及びインスリンの新鮮な溶液を調製した。5MのHClを用いて、溶液をpH3.23に調整した。40~60°Cの温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに16μLの融解フェノールと1.75mLの95EtOHを添加した。その後、反応フラスコに対し、4の酸性化水性ZnCl240μLを加えた。次に、5MのNH4OHを用い、以下の所望のpHの各々において0.500mLのアリコートを引き抜きながら、溶液のpHを2.93~5.60に調整した:4.4、4.6、4.8、5.0、5.2、5.4図15B参照及び5.6。試料を24時間攪拌せずに放置した。24時間後に撮影した顕微鏡写真はpH4.8で平坦な雪片様の結晶を示した。pH5.0では、針状及び雪片様の結晶の混合が存在した。pH5.2~5.6では数多くの小さい針状結晶が観察された。10Zn錯体の水溶解度1mL入りの円錐形反応バイアルびんに、0.1Mのリン酸緩衝生理食塩水PBS、ろ過済み、pH=7.4200マイクロリットルを添加した。このバイアルびんに対して、飽和が観察されるまでゆっくりと少量の試料を添加した。定期的に溶液をボルテックス処理した。飽和時点で、バイアルびんを小さい遠心分離管の中に置き、室温で3分間2000RPMで遠心分離した。遠心分離の後、上清から10μLの試料を取り出し、490μLの緩衝液0.1MのPBS中で希釈した。HPLCを介してこの希釈試料を分析してその濃度を判定した。11ZnIN105錯体のためのインビトロ酵素耐性例インスリン化合物複合体IN105を10mMのリン酸ナトリウム緩衝液pH約7.4内に供給し、その濃度をHPLCにより判定した最高0.6mg/mLで親と複合体間の等モル比較を行なうことができるように溶液を緩衝液で希釈する。最高7.53U/mLの濃度まで1mMのHCl中で、凍結乾燥されたキモトリプシン酵素を再懸濁させた。試料管に、各試料の1.53mLアリコートを加え、対照管内に0.850mLを加えた。試料は、1試料につき4本の対照管と共にデュプリケートにてテストした。アリコートを37°Cで15分間サーモミキサー内でインキュベートした。その後、17μLのキモトリプシン酵素を各々の試料管に加えた。各々の対照管に1mMのHCl5μLを加えた。添加直後に、試料及び対照管から200μLを取り出し、先に遠心分離管内にアリコートとして引き抜いた1のTFA50μLの中に入れた。この試料をT=0として用いた。以下の間隔でインスリン化合物Zn無し、IN105Zn無し及びインスリン化合物速効型インスリン化合物についてのサンプリング手順を反復した:0、2、5、8、12、15及び30分。対照手順は以下の間隔で反復した:0、8、15、30分。T型及びR型の試料については、手順を以下の間隔で反復した:0、12、40及び60分。HPLCを介して分析を行なうことができるまで、-20°Cで試料を保管した。各消化物についてそれぞれのT=0分に対して分解百分率を判定するためにHPLCを実施した。残留百分率の自然対数と時間の関係をプロットし、各消化物について線形回帰を実施した。t1/2:-0.693/勾配という等式を用いて半減期を計算した。12.処方物例12.1液体処方物例12.1.1R6型Zn-HIM2緩衝液研究のための緩衝溶液12.1.2カプリン酸/ラウリン酸処方物経口液体希釈剤の調製所要滅菌水体積の約60を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。1Nの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いて必要に応じてpHを7.7~7.9に調整した。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を45~50°Cに調整し、この温度を維持した。次に温溶液にカプリン酸を添加し、カプリン酸が溶解するまで混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。必要に応じて、INの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いてpHを7.7~7.9に調整した。次に5分間溶液を混合した。所要体積の100に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、IN105、HIM2又はZnHIM2を検量し、例えばタンパク質の1mgのIN105を検量し、1mLの処方物と組合わせて、処方物中1mg/mLのIN105を生成した。12.1.3オレイン酸/カプリン酸/ラウリン酸/コール酸塩処方物経口液体希釈剤の調製下表に示した構成要素を有するR型ZnHIM2の経口液体処方物を調製した:1mg/mLタンパク質当量のR型ZnHIM2ZnHIM2-Rを含有するように、経口液体試料を調製した。冷凍庫-20°CからZnHIM2-Rを取り出し、デシケータ内に置き、室温に戻した。ZnHIM2-Rの1mg/mLのタンパク質当量を以下の通り経口液体希釈溶液中で調製した。6.4mgのZnHIM2-Rを秤量した。その後、容器に5.0mLの経口液体希釈物を移し、穏やかに旋回させて混合した。溶液が溶解するのに約45分かかった。結果として得た溶液は懸濁液濁った外観であった。投薬の前に、溶液を穏やかに60秒間旋回させて、溶液が均質な溶液であることを確認した。ZnHIM2-Rについては、タンパク質含有量は78.6、1mg/mLタンパク質当量、数量=5mLであった。ZnHIM2-Rの量=1mg/mL/0.786}×5.0mL=6.4mg。ZnHIM2-R濃度=6.4mg/5.0mL=1.28mg/mLタンパク質含有量について調整された1mg/mL当量。12.1.4カプリン酸液体処方物の調製所要滅菌水体積の約60を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。1Nの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いて必要に応じてpHを7.7~7.9に調整し、この温度を維持した。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を45~50°Cに調整した。次に温溶液にカプリン酸を添加し、カプリン酸が溶解するまで混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。必要に応じて、INの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いてpHを7.7~7.9に調整した。次に5分間溶液を混合した。所要体積の100に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、IN105を検量し、例えばタンパク質の1mgのIN105を検量し、1mLの処方物と組合わせて、処方物中1mg/mLのIN105を生成した。12.1.5リン酸緩衝液液体処方物中のカプリン酸塩及び/又はラウリン酸塩pH7.8又は8.2の100mMのリン酸ナトリウム緩衝液の調製。1L入りフラスコに1.17グラムのモノナトリウムリン酸塩一水和物1.17グラムを移した。約500mLの滅菌水を添加し、溶解するまで充分に混合した。次に24.58グラムの第2リン酸ナトリウム七水化物24.58グラムを添加し、溶解するまで充分混合した。滅菌水で、体積まで希釈し、充分に混合した。0.22μmのフィルターを通してろ過した。1NのHCl又は1NのNaOHで7.8又は8.2にpHを調整した。IN105のためには、pH7.8又は8.2の適切な体積のリン酸緩衝液の60を適当な容器に移した。次に、最終溶液の3w/vを生成するように計算した量のカプリン酸を添加し、溶解するまで充分混合した。その後1NのHCl又は1NのNaOHでpHを7.8又は8.2に調整した。pH7.8又は8.2のリン酸緩衝液で適切な体積例えば100mLまで希釈した。BN-054については、適当な容器内でpH7.8の100mMのリン酸ナトリウム緩衝液400グラムを計量した。9.7グラムのカプリン酸ナトリウムと11.1グラムのラウリン酸ナトリウムを添加し、溶解するまで充分に混合した。500グラムの正味重量に等しくなるように適切な量のpH7.8の100mMのリン酸ナトリウム緩衝液を添加した。12.1.6アルギニン又はトロラミンを用いた液体処方物pH7.8の100mMのリン酸ナトリウム緩衝液の調製。1L入りフラスコに1.17グラムのモノナトリウムリン酸塩一水和物1.17グラムを移した。約500mLの滅菌水を添加し、溶解するまで充分に混合した。次に24.58グラムの第2リン酸ナトリウム七水化物24.58グラムを添加し、溶解するまで充分混合した。滅菌水で、容積まで希釈し、充分に混合した。0.22μmのフィルターを通してろ過した。1NのHCl又は1NのNaOHで7.8にpHを調整した。適当な容器内に適切な体積のpH7.8のリン酸緩衝液の60を移した。容器に下表に記されている通りの適切な量のアルギニン又はトロラミンを加え、溶解するまで充分混合した。その後最終溶液の3w/vを生成するように計算した量のカプリン酸塩を加えて、溶解するまで充分混合した。次に、1NのHCl又は1NのNaOHを用いてpHを7.8に調整した。pH7.8のリン酸緩衝液で適切な体積例えば100mLまで希釈した。投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、IN105を検量し、例えばタンパク質の1mgのIN105を検量し、1mLの処方物と組合わせて、処方物中1mg/mLのIN105を生成した。12.1.7カプリル酸を用いた液体処方物所要滅菌水体積の約60を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。1Nの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いて必要に応じてpHを7.7~7.9に調整した。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を45~50°Cに調整し、この温度を維持した。次に温溶液にカプリル酸を添加し、カプリル酸が溶解するまで混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。必要に応じて、INの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いてpHを7.7~7.9に調整した。次に5分間溶液を混合した。所要体積の100に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、IN105を検量し、例えばタンパク質の1mgのIN105を検量し、1mLの処方物と組合わせて、処方物中1mg/mLのIN105を生成した。12.1.8リノール酸を用いた液体処方物pH7.8の100mMのリン酸ナトリウム緩衝液の調製。1L入りフラスコに1.17グラムのモノナトリウムリン酸塩一水和物1.17グラムを移した。約500mLの滅菌水を添加し、溶解するまで充分に混合した。次に24.58グラムの第2リン酸ナトリウム七水化物24.58グラムを添加し、溶解するまで充分混合した。滅菌水で、容積まで希釈し、充分に混合した。0.22μmのフィルターを通してろ過した。1NのHCl又は1NのNaOHで7.8にpHを調整した。適当な容器内に適切な体積のpH7.8のリン酸緩衝液の60を移した。その後最終溶液の3w/vを生成するように計算した量のリノール酸ナトリウムを加えて、溶解するまで充分混合した。次に、1NのHCl又は1NのNaOHを用いてpHを7.8に調整した。pH7.8のリン酸緩衝液で適切な体積例えば100mLまで希釈した。12.1.9カプリン酸/ラウリン酸液体処方物の調製所要滅菌水体積の約60を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。1Nの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いて必要に応じてpHを7.7~7.9に調整し。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を45~50°Cに調整し、この温度を維持した。次に温溶液にカプリン酸及び/又はラウリル酸を添加し、カプリン酸及び/又はラウリン酸が溶解するまで混合した。温度を21~25°C又は室温に調整し、液体のpHを測定した。必要に応じて、INの水酸化ナトリウム又は1Nの塩酸を用いてpHを7.7~7.9に調整した。次に5分間溶液を混合した。所要体積の100に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、IN105を検量し、例えばタンパク質の1mgのIN105を検量し、1mLの処方物と組合わせて、処方物中1mg/mLのIN105を生成した。12.2.固体投薬処方物例12.2.1Nobex-IN105-[854]-を用いたカプリン酸塩/ラウリン酸塩固体投薬処方物の調製及び溶解プロファイル計量紙片weighpaper上に約58mgのカプリン酸ナトリウム、57mgのラウリン酸ナトリウム、286mgのマンニトール、30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び6mgタンパク質のNobex-IN105を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約350psiで圧縮して錠剤を形成する。USP器具2溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は50rpm、媒質体積は500mLであった。勾配系を用いてHPLCにより溶解試料を分析した。移動相は、0.1のTFAを伴う水移動相A及び0.1のTFAを伴うアセトニトリル移動相Bであった。利用された勾配は以下の通りであった:0分、100移動相A;11分、65移動相A;15分、20移動相A;16分、20移動相A;17分、100移動相A。波長は214nmであり、カラムはC18150×2mmであった。以下の表及びグラフは、6mgのZn-IN105タンパク質、286mgのマンニトール、58mgのカプリン酸ナトリウム、57mgのラウリン酸ナトリウム及び30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウムExplotabを含有するNobex-Zn-IN105錠剤処方物[854]の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。12.2.2錠剤1個あたり143mgのカプリン酸塩及び140mgのラウリン酸塩の固体剤形錠剤処方物調製処方物Nobex-IN105-[856]の調製計量紙片上に約143mgのカプリン酸ナトリウム、140mgのラウリン酸ナトリウム、150mgのマンニトール、30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び6mgタンパク質のNobex-IN105を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約350psiで圧縮して錠剤を形成する。USP器具2溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は50rpm、媒質体積は500mLであった。勾配系を用いてHPLCにより溶解試料を分析した。移動相は、0.1のTFAを伴う水移動相A及び0.1のTFAを伴うアセトニトリル移動相Bであった。利用された勾配は以下の通りであった:0分、100移動相A;11分、65移動相A;15分、20移動相A;16分、20移動相A;17分、100移動相A。波長は214nmであり、カラムはC18150×2mmであった。以下の表及びグラフは、6mgのZn-IN105タンパク質、150mgのマンニトール、143mgのカプリン酸ナトリウム、140mgのラウリン酸ナトリウム及び30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウムExplotabを含有するNobex-Zn-IN105錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。12.2.3錠剤1個あたり143mgのカプリン酸塩の固体剤形錠剤処方物調製処方物Nobex-IN105-[856]の調製計量紙片上に約143mgのカプリン酸ナトリウム、150mgのマンニトール、30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び6mgタンパク質のNobex-IN105を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約350psiで圧縮して錠剤を形成する。USP器具2溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は50rpm、媒質体積は500mLであった。勾配系を用いてHPLCにより溶解試料を分析した。移動相は、0.1のTFAを伴う水移動相A及び0.1のTFAを伴うアセトニトリル移動相Bであった。利用された勾配は以下の通りであった:0分、100移動相A;11分、65移動相A;15分、20移動相A;16分、20移動相A;17分、100移動相A。波長は214nmであり、カラムはC18150×2mmであった。以下の表及びグラフは、6mgのZn-IN105タンパク質、150mgのマンニトール、143mgのカプリン酸ナトリウム、及び30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウムExplotabを含有するNobex-Zn-IN105錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。12.2.4錠剤1個あたり286mgのカプリン酸塩の固体剤形錠剤処方物調製処方物Nobex-IN105-[860]の調製計量紙片上に約286mgのカプリン酸ナトリウム、150mgのマンニトール、30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び6mgタンパク質のNobex-IN105を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約350psiで圧縮して錠剤を形成する。USP器具2溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は50rpm、媒質体積は500mLであった。勾配系を用いてHPLCにより溶解試料を分析した。移動相は、0.1のTFAを伴う水移動相A及び0.1のTFAを伴うアセトニトリル移動相Bであった。利用された勾配は以下の通りであった:0分、100移動相A;11分、65移動相A;15分、20移動相A;16分、20移動相A;17分、100移動相A。波長は214nmであり、カラムはC18150×2mmであった。以下の表及びグラフは、6mgのZn-IN105タンパク質、150mgのマンニトール、286mgのカプリン酸ナトリウム、及び30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウムExplotabを含有するNobex-Zn-IN105錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。12.2.5錠剤1個あたり100mgのカプリン酸塩の固体剤形錠剤処方物調製処方物Nobex-IN105-[861]の調製計量紙片上に約100mgのカプリン酸ナトリウム、150mgのマンニトール、25mgのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び6mgタンパク質のNobex-IN105を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約350psiで圧縮して錠剤を形成する。USP器具2溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は50rpm、媒質体積は500mLであった。勾配系を用いてHPLCにより溶解試料を分析した。移動相は、0.1のTFAを伴う水移動相A及び0.1のTFAを伴うアセトニトリル移動相Bであった。利用された勾配は以下の通りであった:0分、100移動相A;11分、65移動相A;15分、20移動相A;16分、20移動相A;17分、100移動相A。波長は214nmであり、カラムはC18150×2mmであった。以下の表及びグラフは、6mgのZn-IN105タンパク質、150mgのマンニトール、100mgのカプリン酸ナトリウム及び25mgのでんぷんグリコール酸ナトリウムExplotabを含有するNobex-Zn-IN105錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。12.2.6錠剤1個あたり150mgのカプリン酸塩の固体剤形錠剤処方物調製処方物Nobex-IN105-[862]の調製計量紙片上に約150mgのカプリン酸ナトリウム、150mgのマンニトール、25mgのクロスカルメロースナトリウム及び6mgタンパク質のNobex-IN105を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約350psiで圧縮して錠剤を形成する。USP器具2溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は50rpm、媒質体積は500mLであった。勾配系を用いてHPLCにより溶解試料を分析した。移動相は、0.1のTFAを伴う水移動相A及び0.1のTFAを伴うアセトニトリル移動相Bであった。利用された勾配は以下の通りであった:0分、100移動相A;11分、65移動相A;15分、20移動相A;16分、20移動相A;17分、100移動相A。波長は214nmであり、カラムはC18150×2mmであった。以下の表及びグラフは、6mgのZn-IN105タンパク質、150mgのマンニトール、150mgのカプリン酸ナトリウム、及び25mgのクロスカルメロースナトリウムExplotabを含有するNobex-Zn-IN105錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。13インビトロ酵素耐性例インスリン化合物複合体HIM2を10mMのリン酸ナトリウム緩衝液pH約7.4内に供給し、その濃度をHPLCにより判定する最高0.6mg/mLで親と複合体間の等モル比較を行なうことができるように溶液を緩衝液で希釈する。7.53U/mLの濃度まで1mMのHCl中で、凍結乾燥されたキモトリプシン酵素を再懸濁させた。試料管に、各試料の1.53mLアリコートを加え、対照管内に0.850mLを加えた。試料は、1試料につき4本の対照管と共にデュプリケートにてテストした。アリコートを37°Cで15分間サーモミキサー内でインキュベートした。その後、17μLのキモトリプシン酵素を各々の試料管に加えた。各々の対照管に1mMのHCl5μLを加えた。添加直後に、試料及び対照管から200μLを取り出し、先に遠心分離管内にアリコートとして引き抜いた1のTFA50μLの中に入れた。この試料をT=Oとして用いた。以下の間隔でインスリン化合物Zn無し、HIMZn無し及びインスリン速効型インスリン化合物についてのサンプリング手順を反復した:0、2、5、8、12、15及び30分。対照手順は以下の間隔で反復した:0、8、15、30分。T型及びR型の試料については、手順を以下の間隔で反復した:0、12、40及び60分。HPLCを介して分析を行なうことができるまで、-20°Cで試料を保管した。各消化物についてそれぞれのT=0分に対して分解百分率を判定するためにHPLCを実施した。残留百分率の自然対数と時間の関係をプロットし、各消化物について線形回帰を実施した。t1/2:-0.693/勾配という等式を用いて半減期を計算した。14.インビトロ例14.1長時間型マウス血液グルコース糖検定MBGA5匹の雄のCF-1マウスチャールズリバーラボラトリーCharlesRiverLaboratories:25~30gの6組の用量グループは、インスリン化合物複合体テスト品又は組換え型ヒトインスリンのいずれかの皮下注射を受けた。テスト品を、0.1w/wのウシ血清アルブミンを含有するリン酸緩衝液0.01M、pH約7.4で戻し100、66.6、43.3、30、20及び13.3μg/kgで投薬した。インスリンを、0.1w/wのウシ血清アルブミンを含有するリン酸緩衝液0.01M、pH約7.4で戻し、50、33.3、21.7、15、10及び6.7μg/kgで投薬した。大腿部及びそけい部が形成する嚢状腔の中に皮下用量を受けた後、動物を室温で30分間かごに戻し、次に急速に麻酔し、終末的に出血させた。グルコース検定のために、血液試料をヘパリン管内に収集した。グルコース検定が遅延した場合、管を氷水中に保管し、検定前に室温まで暖め直した。メーカーの指示事項に従って各使用日の開始時点で較正するグルコース計例えばOneTouch登録商標Basic;ライフスキャンLifescanを用いて、血漿グルコースを測定した。次に、組換え型ヒトインスリン応答について生成される標準曲線との関係においてインスリン化合物複合体の効能を計算した。計算は、組換え型ヒトインスリンが27.4IU/mgの効能をもつという仮定に基づいていた。図16-20に結果を示している。図16は、HIM2についてのMBGAバイオポテンシープロファイルを示す。図17は、Zn-HIMインスリン化合物製品R型についてのMBGAバイオポテンシープロファイルを示す。図18は、Zn-HIM2インスリン化合物製品T型についてのMBGAバイオポテンシープロファイルを示す。図19は、プロタミンを伴うZn-HIM2インスリン化合物製品についてのMBGAバイオポテンシープロファイルを示す。図20は、投薬から30分後及び90分後におけるR型プロタミン錯体のグルコース低下効果を示す。これらの結果は、HIM2のバイオポテンシーがZnの錯化によって著しく低減されないことを示している。R型プロタミン錯体図17[7]を参照は、90分後よりも30分後において大きいグルコース低減を示している。さらに、図21~24は、以下のような構造を有するIN-186、IN-192、IN-190、IN-191、IN-189、IN-178、IN-193、IN-194、IN-185、IN-196及びIN-197についてのMBGAバイオポテンシープロファイルを示している:B1モノ複合体、IN-186:B29モノ複合体、IN-197;B29モノ複合体、IN-187:B29モノ複合体、IN-178:B29モノ複合体、IN-190:B29モノ複合体、IN-196:B29モノ複合体、IN-191:B29モノ複合体、IN-189:14.2イヌクランプ研究14.2.1初期HIM2研究大腿動脈内にカテーテルを設置することによって、イヌn=3又は6を外科的に準備したイソフルラン麻酔。動物を16~17日間回復させ、その後一晩断食させ、意識ある状態で研究した。60分の平衡期間後に、20分の統制期間があり、その後口から薬物を与えた。実施例に示されている通りに調製した緩衝溶液中でZn-HIM2R型インスリン化合物をテストした。誤り出典不明。さらに、実施例に示されている通りに調製したカプリン酸及びラウリン酸を含有する経口液体処方物中のR型及びNPH型錯体をテストした。誤り出典不明。3つのテスト試料全てを1用量レベルのみでテストした用量レベルを以前の実験結果に基づいて同定した。血漿グルコースレベルを次に、4時間脚の静脈を通してD-20の輸液により正常血糖値でクランプした。グルコース、インスリン化合物及びC-ペプチドの測定のため-20、0、5、10、20、30、45、90、120、180及び240分で血液試料4mlを採取した。血漿グルコースレベルをクランプするために必要なだけ、動脈血試料を得た。各実験において合計72mlの血液を採取した。次の測定を実施した:グルコース輸液速度、インスリン化合物濃度、C-ペプチド濃度、及び血漿Cペプチドレベル内生的インスリン化合物放出の推定を可能にするため。正常血糖を維持するのに必要なグルコース輸液速度は、インスリン化合物作用指数を提供する。実験に従って、カテーテルの自由端部を皮下に埋め、2週間イヌを回復させてから、異なるテスト品を使用するもう1つの研究を行なった。投薬する上で動物を無作為化し、合計3回使用した。イヌの合計数は6であった。図25及び26は結果を示している。14.2.2初期IN105研究乾燥重量に基づいて34のタンパク質、46の炭水化物、14.5の脂肪及び5.5の繊維という規定食での給餌を受けていた一晩断食済みの意識ある雑種犬6頭について研究を行なった。各動物には、実験のおよそ3週間前に、別途記述されている通り1、大腿動脈内にサイラスティックカテーテルを挿入した。実験当日にカテーテルを局所麻酔下でその皮下嚢状腔から除去した。テスト品;Nobex-IN105ロットKJ-173-095KJ-173-116は1.0mg/mlの濃度で経口脂肪酸処方物Nobex-IN-[753]-040422の形で提供された。各々のイヌは、0.25mg/kgの経口用量のNobex-IN1051.0mg/ml、0.25ml/kg投薬体積を受けた。t=0でNobex-IN105を与え、正常血糖値を維持するべく橈側皮静脈を通してグルコースD-20を輸液した。前述の通り1インスリン及びグルコースを測定するため動脈血液試料を抜き取った。実験を完了した後、初期外科処置の間そうであったように、動脈カテーテルを皮下に埋めた。実験中、1匹のイヌが投薬後直ぐに嘔吐し、用量のうちの一部分しか投与されなかった。従って、この実験からの結果は、このイヌから得たデータを伴ったものと伴わないもので報告された。動脈血漿インスリンレベルは、Nobex-IN105の経口投与後、異常値を経口-2iを含めて、6匹のイヌ全てにおいて上昇した。平均動脈インスリンは、6.0±1.4μU/ml6.3±1.7μU/ml、n=5から投与から10分後の109.4±31.4μU/ml127.8±30.1μU/ml、n=5のピークまで上昇し、その後降下して、150分後までに全てのイヌは基線インスリンレベルまで戻った図27及び28。正常血糖値はグリコース輸液により維持された。正常血糖値を維持するために必要とされるグルコース輸液速度は、動脈インスリンの上昇がより大きいものである動物において最大であった図27及び28。グルコース輸注速度曲線下平均面積AUC0-240は、578.5±144.5mg/kg/分669.4±137.7mg/kg/分、n=5であった。14.2.3固体処方物グルコース-クランプモデルを用いた処方物スクリーニング研究を、乾燥重量に基づいて34のタンパク質、46の炭水化物、14.5の脂肪及び5.5の繊維という規定食での給餌を受けていた一晩断食済みの意識ある雑種犬について実施した。各動物には、実験のおよそ3週間前に別途記述されている通り参考文献1、大腿動脈内にサイラスティックカテーテルを挿入した。実験当日にカテーテルを局所麻酔下でその皮下嚢状腔から除去した。テスト品は、異なる液体処方物の形での1.0mg/mLのZnIN105又はカプセル又は錠剤1個あたり5~6mgのIN105を含有していた。全ての実験における各々のイヌは、t=0で一回目そしてt=120分で2回目という連続2回、約0.25mg/kgの異なる経口液体用量又は5又は6mgのIN105を含有するカプセル又は錠剤を受けた。正常血糖値を維持するべく橈側皮静脈を通してグルコースD-20を輸注した。一部のケースでは、効果が120分を超えて持続した場合、投薬後研究時間を延長した。前述の通り参考文献1、インスリン、グルコース及びC-ペプチドの測定のために、動脈血液試料を抜き取った。実験完了後、動脈カテーテルを皮下組織内に置き直した。溶液及び固体剤形の両方の処方物は、異なるレベルの脂肪酸、緩衝液、希釈剤及び崩壊剤を用いて調製された。変数を最小限におさえるため、液体及び固体処方物は、一貫したレベルのIN105及び各々の賦形剤カプリン、ラウリン、カプリル、ミリスチン、リノール酸を含有し、かくして脂肪酸含有量、緩衝液、希釈剤マンニトール又は微晶質セルロース及び/又は崩壊剤Explotabの相対量のみを変動させた。グルコース輸注速度及びIN105吸収血漿インスリン免疫反応性データを評価し、各々の投薬された処方物と比較した。最初に、より容易に固体剤形に転換されると思われる液体処方物へと最適化済み液体処方物参考文献2を単純化し洗練するために、実験を行なった。これは、遊離脂肪酸を対応するナトリウム塩で置換すること例えばカプリン酸ナトリウムにより置換されたカプリン酸、ならびに必要でなくなったとみなされた緩衝液構成要素クエン酸、トロラミン、トロメタミン、水酸化ナトリウムを除去することにより、実施された。さらに、リノール酸、カプリル酸及びミリスチン酸といったその他の脂肪酸及びアミノ酸、アルギニンの効果を、IN105の吸収に対するその効果について検討した。実験毎に1~2匹のイヌを用いた初期プロトタイプスクリーンの後、処方物と個々の動物の間の可変性及び一貫性をより良く判定するべく、わずかなプロトタイプ処方物を選択し、付加的なイヌにおいてテストした。IN105の溶解プロファイル及び脂肪酸含有量を評価するため、1つの溶解方法を開発し、さまざまな候補処方物について、溶解研究を実施した。結果初期実験では、付加的な賦形剤無くリン酸緩衝液中の3w/vのカプリン酸ナトリウム塩が投与されたイヌは、トロラミン/クエン酸/トロメタミン/水酸化ナトリウム緩衝液中の3w/vのカプリン酸を含有する最適化された液体処方物と比べ類似の応答を示した図29-30。このことは、脂肪酸形態のナトリウム塩が酸形態に匹敵する形の挙動を示すこと、そして付加的な緩衝液構成要素が該処方に寄与しなかったことを実証した。3のカプリン酸塩を3のカプリル酸又は3のリノール酸で置換する代替的脂肪酸を評価する別の研究においては、いずれの代替案も有意な効果を示さなかった。カプリル酸を使用すると低~中レベルのグルコースが必要となるが、一方リノール酸を使用しても、いかなるグルコース輸注の必要性も結果としてもたらされず、効果の欠如を示唆した。両方の処方物共、比較的低レベルの動脈インスリンを示した。アルギニンを含有する液体処方物は、相対的にGIR又はIN105レベルに対する利点を全く示さなかった。一次研究では、Carverプレスを用いて手で圧縮された錠剤及び硬カプセル内に充てんされた粉末配合物の両方として、固体処方物を評価した。57mgのカプリン酸塩/57mgのラウリン酸塩と6mgのIN105インスリン当量、0.25mg/kgの粉末配合物であるカプセルは、最高120分の第1回投薬においては有意な効果を全く示さず、第2回投薬では、IN105吸収と同時にGIRで有意な効果が見られ、ここで0から120分までレベルが基線よりもはるかに高かった。これらのデータは、カプセル剤形においてIN105の応答が可変的にではあるものの潜在的に遅延されるということを示唆している。溶解は錠剤に比べカプセルでわずかだけ遅延されたが、インビトロ/インビボの相関関係はほとんど又は全く存在しない可能性がある。初期プロトタイプ錠剤スクリーニング研究では143mgのラウリン酸塩を伴って又は伴わずに143mgのカプリン酸塩と共に6mgのIN105及び150mgのマンニトール、30mgのでんぷんグリコール酸ナトリウムを含有する錠剤は、54mgのカプリン酸塩又は/又は54mgのラウリン酸塩を伴う同じ錠剤に比べ著しく高いGIR及びIN105吸収を示した図31、32及び33。このことは、カプリン酸塩及びラウリン酸塩のレベル増大に対してより高いGIR及びIN105レベルの適正な用量応答を示唆している。表は、IN105充てんカプセルに対する早期の一貫性あるGIR応答を示した。さらに、IN105錠剤は、投薬を受けた全てのイヌにおいてインスリンの動脈血漿上昇を示した。一連の最終的研究においては、3つのプロトタイプ錠剤処方物処方物[856]は143mgのカプリン酸塩及び140mgのラウリン酸塩を含有し、[860]は286mgのカプリン酸塩を含有し、[862]は150mgのカプリン酸塩を含有していたを5匹のイヌ各処方物について3匹の異なるイヌにおける評価のために選択して、効能の一貫性を査定した図34~37。動脈血漿インスリンレベルは、150mg又は280mgのカプリン酸塩又は143mg/140mgのカプリン酸塩/ラウリン酸塩のいずれかを含む錠剤の形で処方された6mgインスリン当量のIN105の投与の後に対応するGIR応答を伴って、3匹全てのイヌにおいて18種全ての用量で各々イヌ3匹×3錠剤×3用量上昇した図31-32及び38-42。C-ペプチドレベルng/mlは、150mg及び280mgのカプリン酸塩錠剤平均n=2で、第1回投薬中0.30±0.05~0.22±0.02そして第2回投薬で0.1±0.05~0.02±0.0の初期レベルからの低下を示し、140mg/140mgのカプリン酸塩/ラウリン酸塩錠剤では、第1回投薬中0.21±0.05~0.05±0.02そして0.18±0.05~0.18±0.01の低下を示した。これは、外因性IN105インスリンの結果としての膵臓からのCペプチド分泌の抑制を表わしている。IN105の3つのプロトタイプ錠剤処方物全てが、日数の違いを含めイヌ内及びイヌ間毎にかつ用量間で一貫性あるIN105吸収レベル及び結果としてのグルコース輸注速度を示した。6匹のイヌから成るセットを用いた最終的研究の間に、1匹のイヌイヌ3は、全ての液体及び固体投薬量でより低い応答を経験した。より精確に結果を代表するように、イヌ3からの結果を伴って及び伴わずにデータを提示した。完全な用量を受けなかった強制飼養不良、嘔吐など又は内因性インスリンを有していたイヌからのデータは削除した。溶解研究:錠剤及びカプセルの代表的試料を溶解テスト上述に付した。論述これらの研究は、経口送達された6mgのIN105約0.25mg/kgを含有しかつ崩壊剤でんぷんグリコール酸ナトリウム及びマンニトールを伴うラウリン酸ナトリウム塩又はカプリン酸塩を含有するプロトタイプIN105錠剤が、正常血糖を保つのにグルコース輸注を必要とする動脈血漿インスリンの有意でかつ一貫性ある上昇を結果としてもたらしたということを実証している。これらのプロトタイプ錠剤は、カプリン酸塩又はラウリン酸塩を匹敵するレベルで含む液体処方物と少なくとも同じ位良好でかつそれよりも優れている可能性のあるIN105レベル及びGIR速度を結果としてもたらした。プロトタイプ錠剤形態は、経口液体処方物の吸収プロファイルを維持する。選択されたプロトタイプ錠剤処方物の相対的経口バイオポテンシー例えば280mg及び150mgのカプリン酸塩を含む錠剤、n=6、GIRについてのAUC=496±117及び500±275は、液体処方物例えば3w/vのカプリン酸の液体処方物、n=5、GIRについてのAUC=182±92及び198±119よりも優れていると思われる。データは、マンニトール及び崩壊剤、でんぷんグリコール酸ナトリウムと共に唯一の脂肪酸としてカプリン酸ナトリウムを含む錠剤が、臨床研究で使用するための固体剤形のさらなる開発において有用であると思われるということを示唆している。データは又、選択されたプロトタイプのカプリン酸塩錠剤形態150mg又は286mgのいずれかでのカプリン酸ナトリウムの形でのIN105の経口投与の後のインスリンレベルが、両方の用量で、投薬後約20分前後での標準的Tmax及び約59.0±20.1及び62.9±25.4μUnits/mlのCmaxを伴って定常的にピークに達したことをも示唆している。血漿インスリンレベルは、各用量の後、10~15分間Cmaxレベル近くまで上昇した状態にとどまり、120分間全体を通して基底レベルより高くとどまった。これらの錠剤を用いて正常血糖を維持するのに必要とされるGIRは、両方の用量で30~40分又はその前後でTmaxに達し、GIRCmaxは、8.4±1.99及び7.41±2.18mg/kg/分の平均に達した。錠剤剤形は、最適化された液体処方物に比べ正常血糖を維持するのにより高いGIRCmax7.4~8.4対4.5~5.4を要し、より長い時間100~120分対60~90分グルコース輸注を要した。履歴的SQ及び吸入インスリンの動脈血漿インスリンレベルと比べ、これらのプロトタイプ錠剤は、SQ及び吸入送達に類似した最大インスリンレベルを提供し、吸入インスリンのものに匹敵するインスリンプロファイルと似ているように思われる図34~37。プロトタイプ錠剤実験は、選択されたプロトタイプ錠剤が、錠剤プレスを用いて生産できる臨床処方物の生産に重点的に取組むための将来の開発を含めてIN105をさらに評価するための固体投薬量処方物として適しているということを示唆している。本明細書は、参照を容易にすることのみを目的とした主題を伴う節に分割されている。節及び主題見出しは、本発明の範囲を制限するように意図されたものではない。本書で記述されている実施形態は、本発明の数多くの態様及び属性を例示する目的をもつものであり、本発明の範囲を制限するように意図されたものではない。"