"β1316グルカンを含有する肌のキメ改善剤。β1316グルカンが、β13結合に対するβ16結合の分岐度が50~100であるβ1316グルカンである請求項1に記載の肌のキメ改善剤。β1316グルカンの濃度0.5w/v、pH5.0、30°Cの水溶液での粘度が5~200cPである請求項1又は2に記載の肌のキメ改善剤。β1316グルカンが、オーレオバシジウム属の微生物が産生するβ1316グルカンである請求項1~3の何れかに記載の肌のキメ改善剤。オーレオバシジウム属の微生物が、オーレオバシジウムプルランスGMNH1A1株FERMP19285、又はGMNH1A2株FERMP19286である請求項4に記載の肌のキメ改善剤。肌のキメ改善剤が化粧品組成物、医薬外用組成物、又は医薬部外品外用組成物である請求項1~5の何れかに記載の肌のキメ改善剤。β1316グルカンを含有する皮膚バリア機能改善剤。β1316グルカンが、β13結合に対するβ16結合の分岐度が50~100であるβ1316グルカンである請求項7に記載の皮膚バリア機能改善剤。β1316グルカンの濃度0.5w/v、pH5.0、30°Cの水溶液での粘度が5~200cPである請求項7又は8に記載の皮膚バリア機能改善剤。β1316グルカンが、オーレオバシジウム属の微生物が産生するβ1316グルカンである請求項7~9の何れかに記載の皮膚バリア機能改善剤。オーレオバシジウム属の微生物が、オーレオバシジウムプルランスGMNH1A1株FERMP19285、又はGMNH1A2株FERMP19286である請求項10に記載の皮膚バリア機能改善剤。皮膚バリア機能改善剤が化粧品組成物、医薬外用組成物、又は医薬部外品外用組成物である請求項7~11の何れかに記載の皮膚バリア機能改善剤。本発明は、β1316グルカンの新たな用途の提供を課題とする。本発明者らは、上記課題を解決するために研究を重ね、β1316グルカンを皮膚に塗布することにより、肌のキメが改善し、皮膚バリア機能が改善することを見出した。本発明はこれらの知見に基づき完成されたものであり、以下の肌のキメ改善剤、及び皮膚バリア機能改善剤を提供する。項1.β1316グルカンを含有する肌のキメ改善剤。項2.β1316グルカンが、β13結合に対するβ16結合の分岐度が50~100であるβ1316グルカンである項1に記載の肌のキメ改善剤。項3.β1316グルカンの濃度0.5w/v、pH5.0、30°Cの水溶液での粘度が5~200cPである項1又は2に記載の肌のキメ改善剤。項4.β1316グルカンが、オーレオバシジウム属の微生物が産生するβ1316グルカンである項1~3の何れかに記載の肌のキメ改善剤。項5.オーレオバシジウム属の微生物が、オーレオバシジウムプルランスGMNH1A1株FERMP19285、又はGMNH1A2株FERMP19286である項4に記載の肌のキメ改善剤。項6.肌のキメ改善剤が化粧品組成物、医薬外用組成物、又は医薬部外品外用組成物である項1~5の何れかに記載の肌のキメ改善剤。項7.β1316グルカンを含有する皮膚バリア機能改善剤。項8.β1316グルカンが、β13結合に対するβ16結合の分岐度が50~100であるβ1316グルカンである項7に記載の皮膚バリア機能改善剤。項9.β1316グルカンの濃度0.5w/v、pH5.0、30°Cの水溶液での粘度が5~200cPである項7又は8に記載の皮膚バリア機能改善剤。項10.β1316グルカンが、オーレオバシジウム属の微生物が産生するβ1316グルカンである項7~9の何れかに記載の皮膚バリア機能改善剤。項11.オーレオバシジウム属の微生物が、オーレオバシジウムプルランスGMNH1A1株FERMP19285、又はGMNH1A2株FERMP19286である項10に記載の皮膚バリア機能改善剤。項12.皮膚バリア機能改善剤が化粧品組成物、医薬外用組成物、又は医薬部外品外用組成物である項7~11の何れかに記載の皮膚バリア機能改善剤。健常な皮膚では、表皮の最も外側の角質層において、角質細胞が整然と並び、その間に、天然保湿成分や、セラミドのような細胞間脂質が満たされている。正常な角質層は、このようなキメの整った状態であることにより、細菌やウイルスなどの異物が体内に侵入するのを防ぎ、皮膚に加わる外部刺激を和らげ、皮膚の水分や天然保湿成分の喪失を防いでいる。即ち、皮膚のバリア機能を果たしている。β1316グルカンは、健常な肌のキメを改善するだけでなく、乾燥や炎症などにより乱れたキメも改善できる。また同様に、皮膚バリア機能を改善することができる。以下、本発明を詳細に説明する。本発明の肌のキメ改善剤、及び皮膚バリア機能改善剤は、β1316グルカンを有効成分として含む。<β1316グルカン>β1316グルカンは、酵母、担子菌キノコ類、かび類、乳酸菌、その他微生物等の細胞壁に大量に含まれている。また、β1316グルカンを菌体外へ分泌する菌体も知られている。中でも、オーレオバシジウム属微生物はβ1316グルカンを主に生産するので、オーレオバシジウム属微生物由来のβ1316グルカンが好ましい。本発明に用いるβ1316グルカンにおいて、主鎖のβ13結合数に対する側鎖のβ16結合数の比率である分岐度は、通常約50~100、好ましくは約75~100、より好ましくは約85~100であればよい。β1316グルカンが上記分岐度を有することは、β1316グルカンをエキソ型のβ13グルカナーゼキタラーゼM、ケイアイ化成製で加水分解処理した場合に分解生成物としてグルコースとゲンチオビオースが遊離すること、及びNMRの積算比から確認できる今中忠行監修、微生物利用の大展開、10121015、エヌティーエス2002。β1316グルカンの溶解度は、pH及び温度に依存する。β1316グルカンは、pH3.5、温度25°Cの条件で2mg/ml水溶液を調製しようとすると、その一部が一次粒子径0.05~2μmの微粒子を形成し、残部は水に溶解する。本発明において粒子径は、レーザー回折散乱法により測定した値である。本発明に用いるβ1316グルカンは、水溶液の30°C、pH5.0、濃度0.5w/vにおける粘度が、通常は2000cPmPas以下、好ましくは200cPmPas以下、より好ましくは100cPmPas以下、さらに好ましくは50cPmPas以下であればよい。上記粘度の下限値は、通常10cPmPas程度であり得る。本発明において、粘度は、BM型回転粘度計を用いて、温度30°C、回転数12rpmで測定した値である。β1316グルカンは、それを含む系中の金属イオン濃度によっては、溶解時にゲル化、凝集、沈殿することがある。そのため、金属イオン濃度が、β1316グルカンの固形分1g当たり0.4g以下であることが好ましく、0.2g以下であることがより好ましく、0.1g以下であることがさらにより好ましい。β1316グルカンが水溶液状態のものである場合は、金属イオン濃度は、水溶液の100ml当たり120mg以下であることが好ましく、50mg以下であることがより好ましく、20mg以下であることがさらにより好ましい。ここでいう金属イオンには、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、第3~第5族金属イオン、遷移金属イオンなどが含まれるが、混入する可能性のある金属イオンとしては、代表的には、低粘度β1316グルカンの製造において使用されるアルカリ由来のカリウムイオン、ナトリウムイオンなどが挙げられる。金属イオン濃度は、限外ろ過や透析により調整できる。金属イオン濃度が上記範囲であれば、水溶液状態で保存する場合や、水溶液状態で加熱滅菌する際に、β1316グルカンのゲル化、凝集、沈殿が生じ難い。また、固形で使用する場合は、再溶解させる場合に凝集などが生じ難い。オーレオバシジウム属微生物が生産するβ1316グルカンオーレオバシジウム属に属する微生物由来のβ1316グルカンは、1N水酸化ナトリウム重水溶液を溶媒とする溶液の1HNMRスペクトルが約4.7ppm及び約4.5ppmの2つのシグナルを有する。NMRの測定値は条件の微妙な変化によって変化し、また誤差を伴うことは周知のことであることから、約4.7ppm約4.5ppmは、通常予測される範囲の測定値の変動幅例えば±0.2を含む数値を意味する。オーレオバシジウム属の微生物が産生するβ1316グルカンは、菌体外に分泌されるため、キノコ類やパン酵母の細胞壁に含まれるβグルカンと比べて、回収が容易であり、また水溶性である点で好ましいものである。オーレオバシジウム属の微生物は、分子量が100万以上の高分子量のβグルカンから分子量が数万程度の低分子のβグルカンまでを培養条件に応じて産生することができる。中でも、培養液が比較的低粘度である点、β1316グルカンを高生産する点、及び得られるβ1316グルカンが、水への溶解性が良く、高分岐で、低分子量である点で、オーレオバシジウムプルランスが生産するものが好ましい。中でも、オーレオバシジウムプルランスGMNH1A1株、又はGMNH1A2株独立行政法人産業技術研究所特許生物寄託センターにそれぞれFERMP19285及びFERMP19286として寄託済みが産生するものがより好ましい。GMNH1A1株及びGMNH1A2株は、オーレオバシジウム属AureobasidiumspK1株の変異株である。オーレオバシジウム属K1株は、見かけ上の分子量が200万以上と100万程度の2種類のβ1,31,6グルカンを産生することが知られている。また、オーレオバシジウム属微生物が産生するβ1316グルカンは、通常、硫黄含有基を有するところ、K1株の産生するβグルカンはスルホ酢酸基を有することが知られているArgBiolChem4711671172科学と工業641311351990。GMNH1A1株、及びGMNH1A2株が生産するβ1316グルカンもスルホ酢酸基を有すると考えられる。オーレオバシジウム属微生物の中には、リン酸基のようなリン含有基、リンゴ酸基などを含むβ1316グルカンを産生する菌種、菌株も存在する。GMNH1A1株及びGMNH1A2株は、後に実施例において示すようにメインピークが見かけ上50~250万の高分子量のβグルカン微粒子グルカンとメインピークが見かけ上2~30万の低分子量のβグルカンの両方を産生する菌株である。この微粒子状グルカンは、一次粒子径が0.05~2μm程度である。この高分子量のβグルカンは、グルカンの凝集により微粒子状になっているため、見かけ上の分子量が50~250万であるが、水に溶解した状態では、見かけ上の分子量は2~30万であると考えられる。従って、本発明のβ1316グルカンとしては、水に溶解した状態での分子量が2~30万程度のものが好ましく、分子量が2~15万程度のものがより好ましい。本発明において、β1316グルカンの分子量は、東ソー社製のトーヨーパールHW65カラムサイズ75cm×φ1cm、排除分子量250万デキストランを用いて、0.1Mの水酸化ナトリウム水溶液を溶離液としてゲルろ過クロマトグラフィーで測定した値である。オーレオバシジウム属微生物が産生するβ1316グルカンとしては、水溶液にしたときの粘度が、オーレオバシジウム属微生物が産生する天然型β1316グルカンより低いものが好ましい。この低粘度β1316グルカンは、水溶液の30°C、pH5.0、濃度0.5w/vにおける粘度が、通常200cPmPas以下であり、より好ましくは100cPmPas以下であり、さらに好ましくは50cPmPas以下であり、さらにより好ましくは10cP以下であればよい。上記粘度の下限値は、通常5cPmPas程度であり得る。この低粘度グルカンは、オーレオバシジウム属微生物が産生する天然型β1316グルカンと同様の一次構造を有し得る。具体的には、1N水酸化ナトリウム重水溶液を溶媒とする溶液の1HNMRスペクトルが約4.7ppm及び約4.5ppmの2つのシグナルを有するものである。NMRの測定値は条件の微妙な変化によって変化し、また誤差を伴うことは周知のことであることから、約4.7ppm約4.5ppmは、通常予測される範囲の測定値の変動幅例えば±0.2を含む数値を意味する。オーレオバシジウム属微生物によるβ1316グルカンの生産方法β1316グルカンは、例えば、これを産生する微生物の培養上清に有機溶媒を添加することにより沈殿物として得ることができる。オーレオバシジウム属の微生物を培養して、β1316グルカンを産生させる方法は種々報告されている。培養培地に使用できる炭素源としては、シュークロース、グルコース、フラクトースなどの炭水化物、ペプトンや酵母エキスなどの有機栄養源等を挙げることができる。窒素源としては、硫酸アンモニウムや硝酸ナトリウム、硝酸カリウムなどの無機窒素源等を挙げることができる。場合によってはβグルカンの産生量を上昇させるために適宜、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などの無機塩、更には鉄、銅、マンガンなどの微量金属塩やビタミン類等を添加するのも有効な方法である。オーレオバシジウム属微生物を、炭素源としてシュークロースを含むツアペック培地にアスコルビン酸を添加した培地で培養した場合、高濃度のβ1316グルカンを産生することが報告されているArgBiolChem4711671172科学と工業641311351990;特開平7-51082号公報。しかし、培地は、微生物が生育し、β1316グルカンを生産するものであればよく、特に限定されない。必要に応じて酵母エキスやペプトンなどの有機栄養源を添加してもよい。オーレオバシジウム属の微生物を上記培地で好気培養するための条件としては、10~45°C程度、好ましくは20~35°C程度、さらに好ましくは25~30°C程度の温度条件、3~7程度、好ましくは3.5~5程度のpH条件等が挙げられる。効果的に培養pHを制御するためにアルカリ、あるいは酸で培養液のpHを制御することも可能である。更に培養液の消泡のために適宜、消泡剤を添加してもよい。培養時間は通常1~10日間程度、好ましくは1~4日間程度であり、これによりβグルカンを産生することが可能である。なお、βグルカンの産生量を測定しながら培養時間を決めてもよい。上記条件下オーレオバシジウム属の微生物を4~6日間程度通気攪拌培養すると、培養液にはβ1316グルカンを主成分とするβグルカン多糖が0.1~数含有されており、その培養液の粘度はBM型回転粘度計東機産業社製により30°Cでは数百cPから数千cPmPasという非常に高い粘度を有する。この培養を遠心分離して得られる上清に例えば有機溶媒を添加することにより、β1316グルカンを沈殿物として得ることができる。<低粘度β1316グルカンの製造方法>上記の高粘度のβ1316グルカンを含む培養液を、常温で攪拌しながら、これにアルカリを添加すると、急激に粘度が低下する。アルカリは、水溶性で、かつ医薬品や食品添加物として用いることができるものであればよく、特に限定されない。例えば、炭酸カルシウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、炭酸アンモニウム水溶液などの炭酸アルカリ水溶液;水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、水酸化カルシウム水溶液などの水酸化アルカリ水溶液;あるいはアンモニア水溶液などを使用できる。アルカリは、培養液のpHが12以上、好ましくは13以上になるように添加してもよい。例えば、水酸化ナトリウムを使用して培養液のpHを上げる場合は、水酸化ナトリウムの最終濃度が好ましくは0.5以上、より好ましくは1.25以上になるように添加すればよい。水酸化ナトリウムの最終濃度の上限は通常5程度とすればよい。培養液にアルカリを添加し、良く攪拌すると、瞬時に培養液の粘度が低下する。次いで、アルカリ処理後の培養液から菌体などの不溶性物質を分離する。培養液の粘度が低いため、菌体を自然沈降させて上澄みを回収する方法デカント法、遠心分離、ろ紙あるいはろ布を利用した全量ろ過、フィルタープレス、更に膜ろ過MF膜などの限外ろ過などの方法で、容易に不溶性物質とグルカンとを分離できる。ろ紙あるいはろ布による全量ろ過の場合は、セライトなどろ過助剤を利用するのも一つの手段である。工業的にはフィルタープレスによる菌体除去が好ましい。また、不溶性物質除去前のβグルカン液は必要に応じて水で希釈しても良い。濃度が高すぎると不溶性物質除去が困難であり、低すぎても効率的でない。βグルカン濃度は、例えば01mgml~20mgml程度、好ましくは05mgml~10mgml程度、さらに好ましくは1mgml~5mgml程度が良い。次いで、βグルカンを含む溶液に酸を添加して中和する。中和は、不溶物の除去前に行ってもよい。酸は、医薬や食品添加物として使用できるものであればよく、特に限定されない。例えば、塩酸、燐酸、硫酸、クエン酸、リンゴ酸などを使用できる。酸の使用量は、溶液又は培養液の液性が中性pH5~8程度になるような量とすればよい。即ち、中和はpH7に合わせることを必ずしも要さない。pH12以上のアルカリ処理後、中和して得られるβ1316グルカンは、30°C、pH5.0、濃度0.5w/vにおける粘度が通常200cP以下、場合によっては、100cP以下、50cP以下、又は10cP以下である。この粘度の下限値は、通常5cPmPas程度であり得る。粘度は製造方法ないしは精製方法によって変動する。アルカリ処理された低粘度のβ1316グルカンは、中和しても粘度が高くなることがない。さらに、常温15~35°Cでは、液性をpHが4を下回るような酸性にしても、粘度が高くなることがない。また、培養上清をアルカリ処理、及び中和した後に、菌体などを除去するのに代えて、培養上清から菌体などを除去した後に、アルカリ処理、及び中和を行うこともできる。得られるβグルカン水溶液からβグルカンより低分子量の可溶性夾雑物例えば塩類などを除去する場合は、例えば限外ろ過を行えばよい。また、アルカリ処理、除菌した後、中和せずに、アルカリ性条件下で限外ろ過することもでき、これにより透明性、熱安定性、長期保存性に一層優れる精製β1316グルカンが得られる。アルカリ性条件は、pH10以上、好ましくは12以上であり、pHの上限は通常13.5程度である。このようにして得られる水溶液に含まれるβ1316グルカンは、乾燥させて固形製剤にする場合も、また水溶液のまま製剤として使用する場合も、一旦、水溶液から析出させることができる。β1316グルカンの析出方法は、特に限定されないが、例えば、限外ろ過などにより濃縮してグルカン濃度を1w/w以上にした水溶液に、エタノールのようなアルコールを、水溶液に対して容積比で等倍以上、好ましくは2倍以上添加することにより、β1316グルカンを析出させることができる。この場合にpHをクエン酸などの有機酸によりpHを酸性、好ましくはpH4未満、さらに好ましくはpH3-3.7に調製して、エタノールを添加すると高純度のβ1316グルカンの粉末を得ることができる。β1316グルカンを低粘度化することにより、限外ろ過などによる濃縮を容易に行えることから、アルコール沈殿に使用するアルコール量を少なくすることができる。固形物として得る場合は、低粘度β1316グルカン水溶液を直接乾燥させてもよく、析出させたβ1316グルカンを乾燥させてもよい。乾燥は、噴霧乾燥法、凍結乾燥法等公知の方法で行うことができる。製剤本発明の剤は、β1316グルカンに、医薬外用剤、医薬部外品外用剤、又は化粧品に一般に使用されている基剤及び添加剤を配合して、医薬外用組成物、医薬部外品外用組成物、又は化粧品組成物にすることができる。<医薬外用組成物>医薬外用組成物の剤型としては、エアゾール剤、液剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、ゲル剤、リニメント剤、又はパップ剤等が挙げられる。中でも、塗布し易い点で、液剤、乳剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤が好ましい。基剤としては、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、キサンタンガム、カラギーナン、マンナン、アガロース、デキストリン、カルボキシメチルデンプン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、メトキシエチレン-無水マレイン酸共重合体、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、プルラン等のポリマー類;白色ワセリン、黄色ワセリン、パラフィン、セレシンワックス、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類;ゲル化炭化水素例えば、商品名プラスチベース、ブリストルマイヤーズスクイブ社製;ステアリン酸等の高級脂肪酸;セタノール、オクチルドデカノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール;ポリエチレングリコール例えば、マクロゴール4000等;プロピレングリコール、グリセリン、ジプロピレングリコール、13ブチレングリコール、濃グリセリン等の多価アルコール;モノオレイン酸エステル、ステアリン酸グリセリド等の脂肪酸エステル類;リン酸緩衝液などが挙げられる。剤型に応じて、基剤を適宜選択できる。また、添加剤としては、溶解補助剤、無機充填剤、pH調節剤、保湿剤、防腐剤、粘稠剤、酸化防止剤、清涼化剤などが挙げられる。医薬外用組成物中のβ1316グルカンの含有量は、乾燥重量に換算して、製剤全体に対して、約0.001~5wwが好ましく、約0.01~1wwがより好ましく、約0.1~0.5wwがさらにより好ましい。上記範囲であれば、使用し易い量の組成物中に、肌のキメ改善効果、及び皮膚バリア機能改善が十分に得られるだけのβ1316グルカンが含まれる。<化粧品組成物>化粧品組成物の剤型としても、医薬外用組成物と同様の剤型、例えば、エアゾール剤、液剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、ゲル剤、リニメント剤、又はパップ剤等が挙げられる。中でも、塗布し易い点で、液剤、乳剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤が好ましい。また、化粧水、化粧用乳液、化粧用クリーム、化粧用ゲル、美容液、パック剤、リップクリーム、リップグロス、洗顔剤、ボディソープ、ハンドクリーム等のスキンケア用品や、ファウンデーション、口紅等のメイクアップ用品等の組成物が挙げられる。化粧品組成物は、通常化粧品に用いられる成分、例えば、精製水、アルコール類低級アルコール、多価アルコールなど、油脂類、ロウ類、炭化水素類のような基剤と、必要に応じて、界面活性剤、増粘剤、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、安定剤、防腐剤、着色剤、香料のような添加剤とを配合して調製することができる。化粧品組成物中のβ1316グルカンの含有量は、乾燥重量に換算して、製剤全体に対して、約0.001~5wwが好ましく、約0.01~1wwがより好ましく、約0.1~0.5wwがさらにより好ましい。上記範囲であれば、使用し易い量の組成物中に、肌のキメ改善効果、及び皮膚バリア機能改善が十分に得られるだけのβ1316グルカンが含まれる。<医薬部外品外用組成物>医薬部外品外用組成物は、その種類に応じて、医薬外用組成物、又は化粧品組成物について説明した基剤、添加剤を配合して調製できる。医薬部外品外用組成物中のβ1316グルカンの含有量は、乾燥重量に換算して、製剤全体に対して、約0.001~5wwが好ましく、約0.01~1wwがより好ましく、約0.1~0.5wwがさらにより好ましい。上記範囲であれば、使用し易い量の組成物中に、肌のキメ改善効果、及び皮膚バリア機能改善が十分に得られるだけのβ1316グルカンが含まれる。使用方法本発明の剤は、使用対象の皮膚の状態、年齢、性別などによって異なるが、例えば以下の方法で使用できる。即ち、1日に、例えば約1~5回、好ましくは約1~3回、1回当たり例えば、約0.1~5gを皮膚に塗布すればよい。また、β1316グルカンの1日使用量が、好ましくは約0.1~50mg、より好ましくは約0.5~25mgとなるように組成物を塗布すればよい。塗布期間は、約1~14日間とすればよい。本発明の剤は、乾燥、炎症、日焼け、皮脂欠乏症乾皮症などによる肌のキメの乱れ、及びバリア機能の低下の予防、治療、又は改善のために好適に使用できる。従って、健常人の他、これらの皮膚症状を有する人が好適な使用対象となる。以下、本発明の実施例を挙げてより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。A精製β1316グルカンの製造1低粘度β1316グルカンの調製11βグルカンの培養産生上記表1に示す組成を有する液体培地100mlを500ml容量の肩付きフラスコに入れ、121°Cで、15分間、加圧蒸気滅菌を行った後、オーレオバシジウムプルランスAureobasidiumpullulansGMNH1A1株FERMP19285を同培地組成のスラントより無菌的に1白金耳植菌し、130rpmの速度で通気攪拌しつつ、30°Cで24時間培養することにより種培養液を調製した。次いで、同じ組成の培地200Lを300L容量の培養装置丸菱バイオエンジ製に入れ、121°Cで、15分間、加圧蒸気滅菌し、上記のようにして得られた種培養液2Lを無菌的に植菌し、200rpm、27°C、40L/minの通気攪拌培養を行った。なお、培地のpHは水酸化ナトリウム及び塩酸を用いてpH4.2~4.5の範囲内に制御した。96時間後の菌体濁度はOD660nmで23OD、多糖濃度は0.5で、硫黄含量から計算される置換スルホ酢酸含量は0.09であった。<多糖濃度測定>多糖濃度は、培養液を数mlサンプリングし、菌体を遠心分離除去した後、その上清に最終濃度が66となるようにエタノールを加えて多糖を沈殿させて回収した後、イオン交換水に溶解し、フェノール硫酸法で定量した。<置換スルホ含量測定>同様にして菌体を除去した培養上清にエタノールを最終濃度が66となるように添加し、βグルカンを沈殿回収した。その後、再度イオン交換水に溶解し、再度遠心分離後、その上清に最終濃度が0.9になるように食塩を加えた後、再度66エタノールでβグルカンを回収した。このβグルカン回収精製操作を更に2回繰り返し、得られたβグルカン水溶液をイオン交換水で透析後、凍結乾燥によりβグルカン粉末を得た。このβグルカン粉末を燃焼管式燃焼吸収後、イオンクロマト法で組成分析した結果、S含量は239mg/kgであり、この値から計算される置換スルホ酢酸含量は0.09であった。1-2アルカリ処理上記のようにして得られた培養液の粘度をBM型回転粘度計東京計器製を用いて、30°C、12rpmで測定したところ、1500cPmPasであった。測定に用いるロータは粘度に合わせて適当なものを選択した。この培養液に水酸化ナトリウムの最終濃度が2.4となるように、25水酸化ナトリウムを添加し攪拌したところpH13.6、瞬時に粘度が低下した。引き続いて50クエン酸水溶液でpH5.0となるように中和してから、βグルカン濃度0.5w/vにおける粘度を測定したところ、そのときの上記測定方法による粘度は、20cPであった。次いで、この培養液にろ過助剤としてKCフロック日本製紙社製を1wt添加し、薮田式ろ過圧搾機薮田機械製を用いて菌体を除去し、最終的に培養ろ液約230Lを得た。その多糖濃度は0.5で、ほぼ100の回収率であった。1-3βグルカン水溶液の脱塩上記のβグルカン水溶液培養ろ液を0.3に希釈後、限外ろ過UF膜分子量カット5万、日東電工社製を用いて脱塩を行い、最終的にナトリウムイオン濃度を20mg/100mlに落とした後、50クエン酸水溶液によりpHを3.5に調整した。引き続いて、ホット充填用加熱ユニット日阪製作所製を用いて95°Cで、3分間保持することにより殺菌処理を行い、最終製品のβグルカン水溶液を得た。この時のβグルカンの濃度をフェノール硫酸法により測定したところ0.22であった。また、培養液からのトータル収率は約73であった。<硫黄含有量の測定>また、得られたβグルカン水溶液をイオン交換水で透析後、凍結乾燥によりβグルカン粉末を得た。本βグルカンの組成分析結果からS含量は330mg/kgであり、これから計算される置換スルホ酢酸含量は0.12であった。<結合状態の確認>また、脱塩を行った上記培養ろ液について、コンゴーレッド法によって、480nmから525nm付近への波長シフトを確認することができたのでβ13結合を含むグルカンを含有していることが証明されたKOgawaCarbohydrateResearch67527535、今中忠行監修微生物利用の大展開10121015エヌティーエス2002。そのときの極大値へのシフト差分はΔ048500μg多糖であった。上記培養ろ液15mlを取り出し、30mlのエタノールを添加し、4°C、1000rpm、10minで遠心して、沈殿する多糖を回収した。66エタノールで洗浄し、4°C、1000rpm、10分間遠心して、沈殿する多糖に2mlのイオン交換水と、1mlの1N水酸化ナトリウム水溶液を添加撹拌後、60°C、1時間保温して沈殿を溶解させた。次に80°Cにて凍結後、一晩、真空凍結乾燥を行い、乾燥後の粉末を1mlの1N水酸化ナトリウム重水溶液に溶解させ、2次元NMRに供した。2次元NMR13C-1HCOSYNMR106ppmと相関関係を有する1HNMRスペクトルを図1に示す。このスペクトルにおいて4.7ppmと4.5ppm付近との2つのシグナルが得られた。この結果、本βグルカンがβ1316グルカンであることが証明された今中忠行監修、微生物利用の大展開、10121015、エヌティーエス2002。それぞれの1HNMRシグナルの積分比から、β13結合/β16結合の比は1.15であることが判明した。従って、主鎖のβ13結合に対する側鎖のβ16結合の分岐度は、約87である。<粒度測定>次に、レ-ザ回折散乱式粒度分布測定装置を用いて培養液の粒度を測定したところ、粒子としては0.3μmと100μm程度の大きさのところにピ-クが見られた。続いて、超音波を照射しながら、粒度測定を行うと、100μmのピ-クはみるみるうちに消失し、0.3μmのピ-クが増え、最終的に0.3μmのみとなった。超音波照射したときの培養液の粒度分布を図2に示す。0.3μmのピークはβ1316グルカンの一次粒子によるピークであり、100~200μmのピークはβ1316グルカンの一次粒子が凝集した二次粒子によるピークであると考えられる。また、二次粒子はマグネチックスターラ-による攪拌、軽い振とうでも同じように消失し、容易に砕けて一次粒子になることが確認された。よって、二次粒子は非常に緩い凝集と考えられる。<分子量測定>また、東ソー社製のトーヨーパールHW65カラムサイズ75cm×φ1cm、排除分子量250万デキストランを用いて、0.1Mの水酸化ナトリウム水溶液を溶離液としてゲルろ過クロマトグラフィーを行い、溶解β1316グルカンとβ1316グルカンの1次粒子とを含む溶液の分子量を測定したところ、溶解β1316グルカンに由来する2~30万のピークの低分子画分と、1次粒子に由来する見かけ上50~250万の高分子画分との二種類が検出された。分子量のマーカーとしてShodex社製のプルランを用いた。水溶性β1316グルカンと微粒子とを分離するため、上記の微粒子画分と可溶性画分とを含むβ1316グルカン溶液をアドバンテック社製のフィルター0.2μmでろ過を行ったところ、50~250万の高分子画分が消失した。このことから、高分子画分はβ1316グルカンの一次粒子や一次粒子が凝集した二次粒子に相当することが判明した。よって、水溶性β1316グルカンの分子量は2~30万と考えられる。2粉末化βグルカンの調製1-2において、アルカリ処理および菌体除去処理により調製された微粒子β1316グルカンを含むβ1316グルカン水溶液に、最終濃度が66となるようにエタノールを添加して、多糖グルカンを沈殿させ、遠心分離法により回収した。次いで凍結乾燥法によりエタノールと水分を除去し、乾燥β1316グルカンを得た。そのときの収率はエタノール沈殿前の全糖濃度と比較して95以上であった。次いで、得られた乾燥β1316グルカンを最終濃度が0.3w/vとなるように水に溶解分散後、前述したと同様にして東ソー社製のトーヨーパールHW65カラムサイズ75cm×φ1cm、排除分子量250万デキストランにより0.1Mの水酸化ナトリウム水溶液を溶離液としてゲルクロマトグラフィーを行い、分子量を測定したところ、得られた多糖の分子量は2~30万のピークの低分子画分と見かけ上50~250万の高分子画分の二種類からなることが判明した。ここで、分子量のマーカーとしてShodex社製のプルランを用いた。一方、水溶性β1316グルカンと微粒子を分離するため、本法で調製したβ1316グルカン水溶液微粒子と可溶化グルカンを含むものをアドバンテック社製のフィルター0.2μmでろ過を行ったところ、50~250万の高分子画分が消失した。よって、本法により得られたβ1316グルカンを乾燥させても、再溶解させれば乾燥前のβ1316グルカンと同様の物理的挙動を再現することが実証された。3高純度β1316グルカン粉末の製造1においてアルカリ処理を行い低粘度化した培養液多糖濃度0.55mg/ml90Lを50クエン酸水溶液9kgで中和後、濾過助剤日本製紙ケミカル製粉末セルロ-スKCフロックを1.8kgプレコートした薮田式濾過圧搾機40D4を通して、菌体を取り除いた。ろ液を限外濾過スパイラルエレメント日東電工製NTU3150-S4で9Lまで濃縮した。本濃縮液を攪拌しながら、pHを3.03.5にクエン酸により調整して、エタノール18Lを加え、βグルカン/エタノール/水スラリーを得た。スラリーの粘度はBM型粘度計で22mPas30°Cであった。室温で3時間静置し、上澄み液エタノール/水約17Lを取り除いた。残ったスラリーの粘度は45mPas30°Cであった。本濃縮スラリー10Lを坂本技研型の噴霧乾燥装置R3を用いて噴霧乾燥し、360gのβ1316グルカン粉末を得た回収率80。得られたβ1316グルカンの純度はNMRスペクトルの解析の結果、90以上であった。なお、得られたβ1316グルカン粉末を1N水酸化ナトリウム重水溶液に溶解させ、NMRスペクトルを測定したところ、1HNMRスペクトルが約4.7ppm及び約4.5ppmの2つのシグナルを得た。また、得られたβ1316グルカン粉末の濃度0.5w/vの水溶液の粘度は200cP以下であったpH5.0、30°C。上記記載の方法によって得られた精製βグルカンを下記の試験に供した。実施例1炎症を有する腕の皮膚におけるバリア機能の改善効果10ラウリル硫酸ナトリウム水溶液を被験者1群女性3名20~30代の腕の9cm2に15分間パッチ処理し、完全に洗い流した後、後掲の表2に示す組成の被験組成物103β1316グルカン配合ゲル、及び被験組成物1においてβ1316グルカンを精製水に変えた以外は同じ組成のコントロール組成物1を、それぞれ0.25g塗布した。上記操作を1日に2回、連続して2日間行った。3日目以降からは、1日1回入浴以後にパッチ部分へ配合ゲル0.5gの塗布を連続して5日間行ない、合計1週間塗布を継続して行った。また、ラウリル硫酸ナトリウム水溶液のパッチ処理だけ行い、その後に何も塗布しない未処置群も設けた。塗布完了後に、経皮水分蒸散量を測定した。<経皮水分蒸散量の測定方法>TEWAMETERTM300CourageKhazaka社製を用いて、3日後および1週間後に各被験者の腕を測定した。なお、測定は恒温恒湿室温度25°C,湿度40内にて30分馴化後に行った。結果を図3に示す。図3中、0.3ゲルは被験組成物1を示し、Controlはコントロール組成物1を示し、Nontreatmentは未処置を示す。図3から明らかなように、β1316グルカンを配合することにより、経皮水分蒸散量が大きく低下した。一方、β1316グルカン未配合のコントロール組成物1は、経皮水分蒸散量を全く低下させなかった。水分蒸散量が多いことは、皮膚のバリア機能が低下していることを示す。なお、皮膚バリア機能と水分保持能とは別の機能であり、従って、水分蒸散量と皮膚の水分保持量とは必ずしも相関しない。実施例2健常な顔の皮膚におけるバリア機能の改善効果被験者1群女性3名20~30代の顔の左右半分ずつに、1日2回朝晩、上記被験組成物1、及びコントロール組成物1を、それぞれ、0.5g塗布した。これを連続2週間行い、経皮水分蒸散量を測定した。なお、測定は恒温恒湿室温度25°C,湿度40内にて30分馴化後に行った。結果を図4に示す。図4中、0.3ゲルは被験組成物1を示し、Controlはコントロール組成物1を示す。図4から明らかなように、β1316グルカンを配合することにより、経皮水分蒸散量が大きく低下した。一方、β1316グルカン未配合のコントロール組成物1は、経皮水分蒸散量を全く低下させなかった。実施例3皮膚へのキメ改善効果被験者女性3名20~30代の顔の左右半分ずつに、1日2回朝晩、下記表3に組成を示す被験組成物2、及び被験組成物2においてβ1316グルカンを精製水に替えた以外は同じ組成のコントロール組成物2を、それぞれ0.5g塗布した。これを連続2日間行い、皮膚表面をVISCOSCANVC98で撮影した。皮膚表面画像を図5に示す。図5中、アクアβ0.3配合製剤は被験組成物2を示し、アクアβ未配合製剤はコントロール組成物2を示す。図5から明らかなように、β1,31,6グルカンを含む被験組成物2を塗布することにより、コントロールと比べて肌の溝の幅皮溝の形成が促進改善され、さらに肌の膨らみ皮丘;皮溝で囲まれたひし形の膨らんだ部分が増し、即ちキメが改善したことが分かる。一方、β1,31,6グルカン未配合のコントロール組成物2を塗布しても、肌のキメの改善は確認されなかった。"