"a丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分を流体中に懸濁されたアグロバクテリウムAgrobacterium細胞と接触させ、アグロバクテリウム細胞が対象となる異種ペプチドまたはタンパク質をコードする発現可能なコンストラクトを含む工程と;b丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理し、それによってアグロバクテリウム細胞が丸のままの植物または植物部分にインフィルトレーションされる工程とを含み、圧力サイクル複数可の少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含み、0.5秒~60秒の期間の間維持される、対象となる異種ペプチドまたはタンパク質を産生する方法。a丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分を流体中に懸濁したアグロバクテリウム細胞と接触させる工程と;b丸のままの植物または丸のままの手を加えていない植物の部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理する工程と、を含み、圧力サイクル複数可の少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含み、0.5秒~60秒の期間の間維持される、丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分の中へアグロバクテリウム細胞をインフィルトレーションする方法。前記発現可能なコンストラクトが植物で発現可能なコンストラクトであり、対象となる異種ペプチドまたはタンパク質の一過性の発現を提供するように選択される、請求項1~2のいずれか一項に記載の方法。前記圧力が0.5秒~60秒の期間の間維持される、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記圧力は、丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分が細菌細胞懸濁物中のアグロバクテリウム細胞に接している間に、該植物または植物部分に適用される、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。前記アグロバクテリウム細胞の懸濁物が少なくとも1.0のOD600を含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。前記丸のままの植物または植物部分およびアグロバクテリウム細胞が、閉じたシステム特に丸のままの植物または植物部分の収容のために構成されたチャンバーおよびチャンバー中の空気および/または流体圧力を調節して増加させるための手段を含むシステム内で、1つまたは複数の圧力サイクルにより処理される、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。前記チャンバーは、地上部および地中部を含む植物体全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項7に記載の方法。前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分のみがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるが、植物の地上部に加えて地中部を含む植物全体が1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項7に記載の方法。前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルにおいて圧力に曝露されるように構成されるが、前記植物の地中部特に植物根は、それらがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されず、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされないようにチャンバーの外部に配置される、請求項7に記載の方法。前記丸のままの植物または植物部分を処理する工程が、a少なくとも2サイクル;またはb少なくとも3サイクル;またはc少なくとも4サイクル;またはd少なくとも8サイクルを含む、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。前記圧力サイクルの少なくとも1つが、a少なくとも3.5barの圧力;またはb少なくとも4.5bar;またはc少なくとも6.5bar;またはd少なくとも8bar;またはe少なくとも12barにより丸のままの植物または植物部分を処理することを含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。前記圧力が、a0.5秒/サイクル~10秒/サイクル;またはb1秒/サイクル~5秒/サイクル;またはc0.5秒/サイクル~1秒/サイクルの間で適用される、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。大気圧と比較して増加した圧力により丸のままの植物または植物部分を処理する前記工程が、a少なくとも0.5秒/サイクルで、少なくとも8barの圧力で、少なくとも1サイクル;またはb少なくとも0.5秒/サイクルで、少なくとも6barの圧力で、少なくとも2サイクル;またはc少なくとも1秒/サイクルで、少なくとも4.5barの圧力で、少なくとも8サイクルを含む、請求項1~13のいずれか一項の方法。丸のままの植物または植物部分を大気圧と比較して増加した圧力により処理する前記工程が、少なくとも1秒/サイクルで、少なくとも4.5barの圧力の、少なくとも8サイクルを含む、請求項1~14のいずれか一項に記載の方法。丸のままの植物または植物部分をアグロバクテリウム細胞と接触させる前記工程が、a植物またはその部分をアグロバクテリウム細胞の懸濁物に漬け、懸濁物が少なくとも2.5のOD600を含む工程と、b植物またはその部分を少なくとも2.5のOD600を含むアグロバクテリウム細胞の懸濁物の使用によって生成されたエアゾールへ曝露する工程とを含む、請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。前記工程が、a封入されたチャンバー中のアグロバクテリウム細胞の懸濁物中に植物またはその部分を浸水する工程と、b浸水した植物またはその部分を含むアグロバクテリウム細胞の懸濁物へ液体の流体圧力を適用する工程とを含む、請求項~16のいずれか一項に記載の方法。前記植物が8、9または10の発育ステージのタバコ属の種特にニコチアナタバカムNicotianatabacum種であり、該植物が約6.5cm~約16.5cmの間の平均長を有する、請求項1~17のいずれか一項に記載の方法。前記適用される圧力サイクルのすべてが、大気圧と比較して増加した圧力を含む、請求項1~18のいずれか一項に記載の方法。1つまたは複数の圧力サイクルを含む前記加圧処理は、丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分が細菌細胞懸濁物中に浸水している間に適用される、請求項1~19のいずれか一項に記載の方法。前記複数の植物または植物部分が、流体中に懸濁されて1つまたは複数の圧力サイクルにより処理されたアグロバクテリウム細胞と接触される、請求項1~20のいずれか一項に記載の方法。丸のままの植物または植物部分の収容のために構成されたチャンバーならびにチャンバー中の空気および/または流体の圧力を調節して増加させるために構成された手段を含む、丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分の中へアグロバクテリウム細菌をインフィルトレーションするためのおよび/または丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分において異種ペプチドまたはタンパク質を産生するためのシステム。コンプレッサーおよび減圧装置を含む、請求項22に記載のシステム。流体の流れを調節する、チャンバーの内部と外部との間の流体経路を提供するための複数の注入口、流出口および導管を含む、請求項22に記載のシステム。前記チャンバーが、内部において液体の霧化またはアエロゾル化のために形作られる複数のノズルを含む、請求項22または24のいずれか一項に記載のシステム。前記チャンバーが、地上部および地中部を含む植物体全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項22~25のいずれか一項に記載のシステム。前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分のみがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるが、植物の地上部に加えて地中部を含む植物全体が1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項22~25のいずれか一項に記載のシステム。前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルにおいて圧力に曝露されるように構成されるが、前記植物の地中部特に植物根は、それらがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されず、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされないようにチャンバーの外部に配置される、請求項22~25のいずれか一項に記載のシステム。前記チャンバーが挿入または除去の間の植物の地上部の通過を可能にする1つまたは複数の開口部を含み、その開口部が弾性シールにより裏打ちされる、請求項28に記載のシステム。前記弾性シールが弾性の空気圧シールまたは水圧シールである、請求項29に記載のシステム。丸のままの植物もしくは植物部分の中へアグロバクテリウム細菌をインフィルトレーションするためのおよび/または丸のままの植物もしくは植物部分において異種ペプチドまたはタンパク質を産生するための請求項22~30のいずれか一項に記載のシステムの使用。短い期間内で工業規模で実質的な量の組換えタンパク質例えばパンデミック発生または新たな疾患の予防のためのサブユニットワクチン等を産生することができるシステムおよび方法のための必要性がある。本発明はこの必要性を満たす手段および方法を提供する。特に、本発明は、i丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分を、流体中に懸濁したアグロバクテリウム細胞と接触させ、アグロバクテリウム細胞が対象となる異種ペプチドまたはタンパク質をコードする発現可能な特に植物で発現可能なコンストラクトを含む工程と;ii該植物もしくは植物部分または複数の植物もしくは植物部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理し、それによってアグロバクテリウム細胞が丸のままの植物または植物部分にインフィルトレーションされる工程とを含み、発現可能なコンストラクトが対象となる異種ペプチドまたはタンパク質の一過性の発現を提供するように選択され、圧力サイクルの少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含む、対象となる異種ペプチドまたはタンパク質を産生する方法を一実施形態において提供する。本発明の特定の実施形態において、植物は1つまたは複数の圧力サイクルにより処理され、それらはすべて大気圧と比較して増加した圧力を含む。特定の実施形態において、1つのサイクルあたりの圧力は0.5秒~60秒の期間の間維持される。一実施形態において、本発明は、i丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分を、流体中に懸濁したアグロバクテリウム細胞と接触させる工程と;ii該植物もしくは植物部分または複数の植物もしくは植物部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理する工程とを含み、発現可能なコンストラクトが対象となる異種ペプチドまたはタンパク質の一過性の発現を提供するように選択され、圧力サイクルの少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含む、植物もしくは植物部分または複数の植物もしくは植物部分の中へアグロバクテリアをインフィルトレーションする方法を提供する。本発明の特定の実施形態において、植物は1つまたは複数の圧力サイクルにより処理され、それらはすべて大気圧と比較して増加した圧力を含む。特定の実施形態において、1つのサイクルあたりの圧力は0.5秒~60秒の期間の間維持される。本発明の一実施形態において、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分およびアグロバクテリウム細胞は、閉じたシステム特に丸のままの植物、特に丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分の収容のために構成されたチャンバーおよびチャンバー中の空気および/または流体の圧力を調節して増加させるための手段を含むシステム内で、1つまたは複数の圧力サイクルにより処理される。本発明の一実施形態において、チャンバーは、地上部および地中部を含む植物体全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される。本発明の別の実施形態において、チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分のみがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるが、植物の地上部に加えて地中部を含む植物全体が1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される。本発明のさらに他の実施形態において、チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルにおいて圧力に曝露されるように構成されるが、植物の地中部特に植物根は、それらがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されず、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされないようにチャンバーの外部に配置される。本発明の一実施形態において、1つまたは複数の圧力サイクルを含む加圧処理は、丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分が細菌細胞懸濁物中のアグロバクテリウム細胞に接している間に、該植物または植物部分に適用される。本発明の一実施形態において、アグロバクテリウム細胞の懸濁物は、少なくとも1.0の、特に少なくとも1.5の、特に少なくとも2.0の、特に少なくとも2.5の、特に少なくとも3.0の、特に少なくとも3.5の、特に少なくとも4.0の、特に少なくとも4.5のOD600を含む。本発明の一実施形態において、圧力サイクルの少なくとも1つは、植物全体特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分が、大気圧と比較して増加した圧力にさらされること、特に丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分が、少なくとも0.5bar、特に少なくとも1.0bar、特に少なくとも1.5bar、特に少なくとも2.0bar、特に少なくとも2.5bar、特に少なくとも3.0bar、特に少なくとも3.5bar、特に少なくとも4.0bar、特に少なくとも4.5bar、特に少なくとも5.0bar、特に少なくとも5.5bar、特に少なくとも6.0bar、特に少なくとも7.0bar、特に少なくとも8.0bar、特に少なくとも9.0bar、特に少なくとも10.0bar、特に少なくとも11.0bar、および特に少なくとも12.0barの圧力にさらされることを含む。植物を損傷せずに植物または植物部分の中への細菌懸濁液の最大のインフィルトレーションを可能にする最適な圧力は、インフィルトレーション法において使用される、植物種に依存してそして与えられた植物種内で変動し、多様性にも依存して変動する。実施例において本明細書で開示されるように、試験システムを使用することによって当業者は最適な圧力条件を容易に決定することができる。本発明の一実施形態において、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分を処理する工程は、少なくとも2サイクル、特に少なくとも3サイクル、特に少なくとも4サイクル、特に少なくとも5サイクル、特に少なくとも6サイクル、特に少なくとも7サイクル、特に少なくとも8サイクル、特に少なくとも9サイクル、特に少なくとも10サイクル、特に少なくとも11サイクルを含み、該サイクルの少なくとも1つまたは特定の実施形態においてすべての該サイクルは、少なくとも0.5bar、特に少なくとも1.0bar、特に少なくとも1.5bar、特に少なくとも2.0bar、特に少なくとも2.5bar、特に少なくとも3.0bar、特に少なくとも3.5bar、特に少なくとも4.0bar、特に少なくとも4.5bar、特に少なくとも5.0bar、特に少なくとも5.5bar、特に少なくとも6.0barの圧力で、少なくとも0.1秒/サイクル、特に少なくとも0.2秒/サイクル、特に少なくとも0.3秒/サイクル、特に少なくとも0.4秒/サイクル、特に少なくとも0.5秒/サイクル、特に少なくとも1秒/サイクル、特に少なくとも1.5秒/サイクル、特に少なくとも2.0秒/サイクル、特に少なくとも2.5秒/サイクル、特に少なくとも3.0秒/サイクル、特に少なくとも3.5秒/サイクル、特に少なくとも5.0秒/サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理する工程は、少なくとも2サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理する工程は、少なくとも4サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理する工程は、少なくとも5サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理する工程は、少なくとも6サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理する工程は、少なくとも7サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理する工程は、少なくとも8サイクルを含む。本発明の一実施形態において、圧力サイクルの少なくとも1つは、少なくとも2.5barの圧力により丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理することを含む。本発明の一実施形態において、圧力サイクルの少なくとも1つは、少なくとも3.5barの圧力により丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理することを含む。本発明の一実施形態において、圧力サイクルの少なくとも1つは、少なくとも4.5barの圧力により丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理することを含む。本発明の一実施形態において、圧力サイクルの少なくとも1つは、少なくとも6barの圧力により丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理することを含む。本発明の一実施形態において、圧力サイクルの少なくとも1つは、少なくとも8barの圧力により丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理することを含む。本発明の一実施形態において、圧力サイクルの少なくとも1つは、少なくとも12barの圧力により丸のままの植物もしくは複数の丸のままの植物または植物部分もしくは複数の植物部分を処理することを含む。本発明の一実施形態において、圧力は0.5秒/サイクル~10秒/サイクルの間で適用される。本発明の一実施形態において、圧力は1秒/サイクル~5秒/サイクルの間で適用される。本発明の一実施形態において、圧力は0.5秒/サイクル~1秒/サイクルの間で適用される。本発明の一実施形態において、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分を、大気圧と比較して増加した圧力により処理する工程は、少なくとも0.5秒/サイクルで、少なくとも3.0barの圧力で、少なくとも5サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分を、大気圧と比較して増加した圧力により処理する工程は、少なくとも1秒/サイクルで、少なくとも4.5barの圧力で、少なくとも8サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分を、大気圧と比較して増加した圧力により処理する工程は、少なくとも0.5秒/サイクルで、少なくとも8.0barの圧力で、少なくとも1サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分を、大気圧と比較して増加した圧力により処理する工程は、少なくとも0.5秒/サイクルで、少なくとも6.0barの圧力で、少なくとも2サイクルを含む。本発明の一実施形態において、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分をアグロバクテリウム細胞と接触させる工程は、i植物またはその部分をアグロバクテリウム細胞の懸濁物に漬け、懸濁物が少なくとも1.0、特に少なくとも1.5、特に少なくとも2.0、特に少なくとも2.5、特に少なくとも3.0、特に少なくとも3.5、特に少なくとも4.0、特に少なくとも4.5のOD600を含む工程と、ii植物またはその部分を少なくとも1.0、特に少なくとも1.5、特に少なくとも2.0、特に少なくとも2.5、特に少なくとも3.0、特に少なくとも3.5、特に少なくとも4.0、特に少なくとも4.5のOD600を含むアグロバクテリウム細胞の懸濁物の使用によって生成されたエアゾールへ曝露する工程とを含む。本発明の一実施形態において、植物は8、9または10の発育ステージのニコチアナ属Nicotianaの種特にニコチアナタバカムtabacum種である。一実施形態において、本発明は、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物の部分の収容のために構成されたチャンバーならびにチャンバー中の空気および/または流体の圧力を調節して増加させるために構成された手段を含む、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分の中へアグロバクテリアをインフィルトレーションするためのおよび/または異種ペプチドまたはタンパク質を産生するためのシステムを提供する。本発明の一実施形態において、システムはコンプレッサーおよび減圧装置を含む。本発明の一実施形態において、システムは、流体の流れを調節する、チャンバーの内部と外部との間の流体経路を提供するための複数の注入口、流出口および導管を含む。本発明の一実施形態において、チャンバーは、内部において液体の霧化またはアエロゾル化のために形作られる複数のノズルを含む。本発明の一実施形態において、チャンバーは、地上部および地中部を含む植物体全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される。本発明の一実施形態において、チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分のみがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるが、植物の地上部に加えて地中部を含む植物全体が1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される。本発明の一実施形態において、チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルにおいて圧力に曝露されるように構成されるが、植物の地中部特に植物根は、それらがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されず、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされないようにチャンバーの外部に配置される。本発明の一実施形態において、チャンバーは挿入または除去の間の植物の地上部の通過を可能にする1つまたは複数の開口部を含み、その開口部は弾性シール特に弾性の空気圧シールまたは水圧シールにより裏打ちされる。一実施形態において、本発明は、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物もしくは植物の部分の中へアグロバクテリウム細菌をインフィルトレーションするためおよび/または異種ペプチドまたはタンパク質を産生するための、本発明に記載のおよび本明細書において記載されるようなシステムの使用に関する。定義本出願の範囲内で使用される専門的な用語および表現は、概して植物生物学の関連技術において一般に適用される意味が与えられるべきである。以下の用語の定義はすべて本出願の全部の内容へ適用される。単語含むことは他のエレメントまたは工程を除外せず、不定冠詞1つのaまたは1つのanは複数を除外しない。単工程は請求項中に列挙された複数の特徴の機能を満たすことができる。特に属性または値に関連する本質的に、約、近似的にという用語および同種のものは、正確な属性または正確な値もそれぞれ定義する。約という用語は、与えられた数の値または範囲の文脈において、与えられた値または範囲の20内、10内、5内、または2内にある値または範囲を指す。本発明内で使用される時植物は、手を加えていない植物、実質的に手を加えていない植物、または複数の手を加えていないかもしくは実質的に手を加えていない植物;丸のままの植物、実質的に丸のままの植物、または複数の丸のままかもしくは実質的に丸のまま植物、およびその任意の発育ステージのその子孫を指す。本出願の目的のために、手を加えていない植物は、本質的に手を加えずに閉じられた脈管系それは傷害または病巣に起因した管の流体の排出を示さないを含む植物を指すと理解される。本発明内で使用される時植物部分は、切り枝、植物器官、植物組織または植物細胞を含む、植物のいずれかの部分を指し、その植物部分は、植物の分離された部分または丸のままの手を加えていない植物の部分であり得る。丸のままの手を加えていない植物の部分は、たとえ分離してインフィルトレーションしたとしても、植物の残りの部分が、手を加えていない植物の手を加えていない閉じられた脈管系へと完全に一体化される脈管系を備えた植物の機能的コンポーネントとして提供される植物部分を指すことが意味される。本発明内で使用される時植物細胞は、花粉、胚珠および接合子を含む植物の構造的単位および生理的単位を指す。植物細胞は、細胞壁のないプロトプラスト、分離された単一細胞、培養された細胞またはより高度に組織化された単位丸のままの手を加えていない植物を含む、植物の組織、植物器官または丸のままの植物等であるがこれらに限定されないの部分としての細胞の形態であり得る。本明細書において使用される時植物組織は、構造的単位または機能的単位へと組織化される複数の植物細胞を意味する。これは植物体または培養における植物の任意の組織を含む。本明細書において使用される時植物器官は、植物の別個の部分または分化した部分根、茎、葉、花、花部分、花芽、胚、種子または果物等であるが、これらに限定されないを指す。これは植物体または培養における植物の任意の器官を含む。本発明内で使用される時植物材料は、葉、茎、根、花または花部、果物、花粉、胚珠、接合子、種子、切り枝および植物の任意の他の部分を含む、植物体または培養のいずれかにおける、植物、その組織および器官から得ることができる分泌物または抽出物を含むが、これらに限定されない任意の固体、液体または、ガスの組成物、またはその組み合わせを指す。本発明内で使用される時植物細胞培養は、植物細胞の培養プロトプラスト、細胞培養細胞、培養された植物の組織における細胞、外植体における細胞および花粉培養等であるが、これらに限定されないを包含する。本発明内で使用される時タバコ植物は、ニコチアナタバカムまたはN.タバカムを含むがこれらに限定されないニコチアナ属に属する種の植物を指す。本発明の特定の実施形態は、ニコチアナタバカムを特定せずにタバコ植物という用語を使用して本明細書において記載し、かかる記述はニコチアナタバカムを特異的に含むと解釈される。ポリヌクレオチドという用語は、本明細書においてクレオチドのポリマー非修飾または修飾されたデオキシリボ核酸DNAまたはリボ核酸RNAであり得るを指すとして使用される。したがって、ポリヌクレオチドは、限定されずにゲノムDNA、相補DNAcDNA、mRNAまたはアンチセンスRNAであり得る。さらに、ポリヌクレオチドは、一本鎖もしくは二本鎖DNA、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるDNA、DNAおよびRNAを含むハイブリッド分子、または一本鎖および二本鎖領域の混合物を備えたハイブリッド分子であり得る。加えて、ポリヌクレオチドはDNA、RNAまたは両方を含む三本鎖領域からなることができる。ポリヌクレオチドは1つまたは複数の修飾塩基ホスホチオエート等を含むことができ、ペプチド核酸PNAであり得る。概して、本発明によって提供されるポリヌクレオチドは、cDNA、ゲノムDNA、オリゴヌクレオチドもしくは個々のヌクレオチドの単離またはクローン化された断片、または前述のものの組み合わせから組み立てることができる。ヌクレオチド配列という用語は、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含むがこれらに限定されないヌクレオチドのポリマーの塩基配列を指す。本明細書において使用される時遺伝子配列という用語は、ポリペプチドまたは生物学的に活性のあるRNAをコードする核酸分子またはポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を指し、タンパク質の断片のみをコードする部分的なコード配列のヌクレオチド配列を包含する。遺伝子配列は、コード配列と比較して上流または下流に位置する遺伝子発現に対して調節機能を有する配列、および遺伝子のイントロン配列も含むことができる。プロモーターという用語は、遺伝子の転写の開始を指令する遺伝子の5’末端のヌクレオチド配列を指す。概して、プロモーター配列はそれが作動可能に連結される遺伝子の発現を駆動するのに必要であるが必ずしも十分だとは限らない。発現可能な遺伝子コンストラクトのデザインにおいて、遺伝子は、プロモーターに十分接近してそしてプロモーターに対して好適な方向で、遺伝子の発現がプロモーター配列によって制御されるように置かれる。プロモーターは、遺伝子に対して上流におよびその天然の設定におけるプロモーターとそれが制御する遺伝子の間の距離に近似する転写開始部位からの距離で優先的に配置される。当該技術分野において公知のように、この距離の若干の変動はプロモーター機能の喪失なしに許容することができる。本明細書において使用される時作動可能に連結されたという用語は、そのコーディング領域の転写がそのプロモーターによって制御され調節されるような方法で、プロモーターがコーディング領域に連結されることを意味する。プロモーターをコーディング領域へ作動可能に連結するための手段は当該技術分野において周知である。本明細書において使用される時発現制御配列はプロモーターを含み、1つまたは複数のエンハンサー配列、転写終結配列、ポリアデニル化配列、3’または5’非翻訳配列、イントロン性配列、リボソーム結合部位、および植物細胞中の遺伝子の発現を安定化するか他の方法で制御し得る他の配列を含み得るが、これらに限定されない。発現制御配列は、内在性すなわち植物宿主において天然に見出されるまたは外来性植物宿主において天然に見出されないであり得る。外来性発現配列は、選択された条件下で植物細胞において機能的である限り、植物配列であってもなくてもよい。異種遺伝子または異種コード配列は、形質転換または処理される予定の植物に対して外来性であるかまたはこれらの植物において天然に見出されず、異種ポリペプチドまたは生物学的に活性のあるその断片をコードする遺伝子またはコード配列を指す。異種遺伝子配列は、ウイルス配列、原核生物配列および真核生物配列を含む。原核生物コード配列は、微生物配列、細菌配列またはウイルス配列例えばワクチンとして投与され得る抗原の産生のためのを含むが、これらに限定されない。真核生物コード配列は哺乳類配列またはヒト配列を含むが、リーダー配列または分泌シグナル配列、標的化配列、および同種のものを含むがこれらに限定されない非哺乳動物さらに他の植物からの配列も含むことができる。1つの好ましい態様において、異種遺伝子核酸はヒトタンパク質をコードする。異種遺伝子または異種コード配列という用語は、天然に存在する配列、突然変異した配列、バリアント配列、化学的に合成された配列、ゲノム配列、cDNA配列またはかかる配列の任意の組み合わせを含むが、これらに限定されない。遺伝子への参照は、生物学的に活性のあるタンパク質をコードする全長遺伝子またはその断片を包含する。本明細書において使用される時異種ペプチドまたは異種タンパク質という用語は、上で定義されるような異種遺伝子または異種コード配列から発現される、オリゴペプチドおよびポリペプチドまたはタンパク質を含むペプチドを指す。したがって、植物において産生された異種ペプチドまたは異種タンパク質は、植物に対して外来性であるかまたはこれらに植物において天然に見出されない。異種ペプチドまたは異種タンパク質は、哺乳類またはヒトのペプチドまたはタンパク質であり得る。異種ペプチドまたは異種タンパク質は、それがバリアントであるか、または植物ペプチドもしくはタンパク質から突然変異されるか、または産生している植物種、系統もしくは品種において天然に見出されないペプチドまたはタンパク質であるならば、植物ペプチドまたはタンパク質であり得る。本明細書において使用される時TDNA境界は、アグロバクテリウム株A.ツメファシエンスtumefaciens株もしくはA.リゾゲネスrhizogenes株またはその修飾もしく突然変異した形態等の病原性遺伝子産物によって認識することができる約25ヌクレオチド長の配列を含み、連結されるDNA配列の真核細胞好ましくは植物細胞への移行に十分であるDNA断片を指す。この定義は、野生型Tiプラスミドからの天然に存在するT-DNA境界すべてに加えてその任意の機能的誘導体を含むがこれらに限定されず、化学的に合成されたT-DNA境界を含む。一態様において、本発明に記載の発現コンストラクトのコード配列および発現制御配列は、2つのT-DNA境界の間に位置する。一過性の発現を提供するように選択されるという用語は、植物における一過性の遺伝子発現のために、特に安定した形質転換に必要な従来のバイナリーベクターのエレメント形質転換選択遺伝子等の除去によって、特異的にデザインされた発現コンストラクトを指す例えばRPHellensetal,PlantMethods205,1:13を参照されたい。本明細書において使用される時界面活性剤という用語は疎水性部分および親水性部分を一般的に含む界面活性剤を指す例えば、Bhairi,AGuidetothePropertiesandUsesofDetergentsinBiologicalSystems,Calbiochem-NovabiochemCorp.1997を参照されたい。界面活性剤は、1つまたは複数の荷電基を含むかどうかに依存して、陰イオン性、非イオン性、両性イオン性または陽イオン性として分類することができる。陰イオン性界面活性剤は負に荷電した基を含んでおり、正味の負電荷を有する。非イオン性界面活性剤は荷電していない極性基を含んでおり、電荷を持たない。これらの界面活性剤は、一般的にアルキルフェノールまたは第一級アルコールもしくは第二級アルコールとアルキレンオキシドの反応生産物であるか、またはアミンオキシド、ホスフィンオキシドまたはジアルキルスルホキシドである。例えば、WO/2005/076766中で植物インフィルトレーションシステムにおいて好適に使用することができる界面活性剤を開示する。特に、例示的な非イオン性界面活性剤は、t-オクチルフェノキシポリエトキシエタノールトリトンX-100、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンツイーン20、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンツイーン21、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタンツイーン40、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタンツイーン60、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンツイーン80、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンツイーン85、オクチルフェノキシポリエトキシエタノールIGEPALCA-630/NP-40、トリエチレングリコールモノラウリルエーテルブリジ30、およびモノラウリン酸ソルビタンスパン20を含むが、これらに限定されない。両性イオン性界面活性剤は正に荷電した基および負に荷電した基の両方を含んでおり、正味電荷を持たない。好適な両性イオン性界面活性剤は、ベタインカルボキシベタイン等、スルホベタインスルタインとしても公知である、アミドベタインおよびスルホアミドベタインかかるものはC8-C18、好ましくはC10-C18を含み得る、アルキルベタイン、スルホベタイン、アミドベタインおよびスルホアミドベタイン、例えば、ラウリルアミドプロピルベタインLABタイプベタイン、n-アルキルジメチルアンモニオメタンカルボキシラートDAMC、n-アルキルジメチルアンモニオエタンカルボキシラートDAECおよびn-アルキルジメチルアンモニオプロパンカルボキシラートDAPC、n-アルキルスルタイン、n-アルキルジメチルアンモニオアルキルスルホナート、N-アルキルジメチルアンモニオエタンスルホナートDAES、n-アルキルジメチルアンモニオプロパンスルホナートDAPSおよびn-アルキルジメチルアンモニオブタンスルホナートDABS、ヘキサデシルジメチルアンモニオプロパンスルホナート、n-アルキルアミドメタンジメチルアンモニオメタンカルボキシラート、n-アルキルアミドメタンジメチルアンモニオエタンカルボキシラート、ラウリルアミドプロピルベタインLAB、n-アルキルアミドメタンジメチルアンモニオメタンスルホナート、n-アルキルアミドエタンジメチルアンモニオエタンスルホナートおよびn-アルキルアミドプロパンジメチルアンモニオプロパンスルホナート、3-[3-コラミドプロピルジメチルアンモニオ]-1-プロパンスルホナートCHAPS、および3-[3-コラミドプロピルジメチルアンモニオ]-2-ヒドロキシ-l-プロパンスルホナートCHAPSO、リン脂質例えば、ホスファチジルエタノールアミンホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ジアシルフォスファチジルコリン、ジアルキルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾフォスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルグリセロール、リゾフォスファチジルイノシトール、飽和脂肪酸誘導体および不飽和脂肪酸誘導体例えばエチルエステル、プロピルエステル、コレステロールエステル、補酵素Aエステル、ニトロフェニルエステル、ナフチルエステル、モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリド、脂肪アルコール、脂肪アルコールアセテートならびに同種のもの、リポポリサッカライド、糖脂質およびスフィンゴ脂質例えばセラミド、セレブロシド、ガラクトシルジグリセリド、ガングリオシード、ラクトセレブロシド、リゾスルファチドおよび同種のものを含むが、これらに限定されない。陽イオン性界面活性剤はインフィルトレーションの条件下で正に荷電した基を有する。好適な陽イオン性界面活性剤は、第四級アミンまたは第三級アミンを含むが、これらに限定されない。例示的な第四級アミン界面活性剤は、塩化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアミンCTAB;CalbiochemB22633またはAldrichnum;85582-0、塩化セチルトリメチルアンモニウムCTAC1;Aldrichnum;29273-7、臭化ドデシルトリメチルアンモニウムDTAB、Sigmanum;D-8638、塩化ドデシルトリメチルアンモニウムDTACI、臭化オクチルトリメチルアンモニウム、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムTTAB、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウムTTACI、臭化ドデシルエチルジメチルアンモニウムDEDTAB、臭化デシルトリメチルアンモニウムD10TAB、臭化ドデシルトリフェニルホスホニウムDTPB、臭化オクタデシルイルトリメチルアンモニウム、塩化ステアラルコニウム、塩化オレアルコニウム、塩化セトリモニウム、アルキルトリメチルアンモニウムメトスルファート、塩化パルミトアミドプロピルトリメチル、クオタニウム84MackerniumNLE;McintyreGroup,Ltd.、および小麦脂質エポキシドMackerniumWLE;McintyreGroup,Ltd.を含むが、これらに限定されない。例示的な第三級アミン界面活性剤は、オクチルジメチルアミン、デシルジメチルアミン、ドデシルジメチルアミン、テトラデシルジメチルアミン、ヘキサデシルジメチルアミン、オクチルデシルジメチルアミン、オクチルデシルメチルアミン、ジデシルメチルアミン、ドデシルメチルアミン、塩化トリアセチルアンモニウム、塩化セトリモニウムおよびアルキルジメチルベンジルアンモニウムクロライドを含むが、これらに限定されない。陽イオン性界面活性剤の追加のクラスは、ホスホニウム、イミダゾリンおよびエチル化アミン基を含むが、これらに限定されない。陰イオン性界面活性剤は、一般的に有機硫酸塩および有機スルホン酸塩の水溶性アルカリ金属塩である。これらは、ラウリン酸カリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、アルキルポリオキシエチレンスルファート、アルギン酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、フォスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸およびそれらの塩、グリセリルエステル、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、コール酸および他の胆汁酸例えば、コール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、タウロコール酸、グリコデオキシコール酸ならびにその塩例えば、デオキシコール酸ナトリウムなどを含むが、これらに限定されない。短鎖アルコールエタノール、1-プロパノールおよび1-ブタノール等などの共界面活性剤を加えて使用することができる。上記の界面活性剤のいずれかの組み合わせを使用することができる。具体的に上でリストされない界面活性剤も本発明の範囲内にさらに包含される。使用された界面活性剤の量は、界面活性剤のタイプおよび処理される植物の組織すなわちワックスで覆われた葉の表面の厚みなどに応じて変動するだろう。一般的に、界面活性剤は、アグロバクテリウム懸濁物の体積の0.005~約1にわたる濃度で使用される。好ましくは0.005~約0.5、より好ましくは約0.005~約0.05の濃度範囲である。一般的に、より低いレベルのイオン性界面活性剤が非イオン性界面活性剤よりも使用されるだろう。本明細書において使用される時バキュームインフィルトレーションという用語は、細胞間または間質腔の中へ病原菌例えばアグロバクテリウムの浸透を可能にする方法および植物と病原菌との間の相互作用を研究する方法に関する。物理的に、真空は、植物の組織における細胞の間の空気空間を減少させる陰性の大気圧を生成する。継続期間が長いほどおよび真空の圧力が低いほど、植物の組織内の空気空間は少ない。増加した圧力により、インフィルトレーション培地感染性形質転換ベクターを含むが植物の組織の中へ移動することが可能になる。植物形質転換のために、アグロバクテリウムの存在下において植物部分に一定の期間で真空を適用することができる。本明細書において使用される時大気圧という用語は、地球大気においてその表面より上の空気の重さによって表面に対してかけられる単位面積あたりの力を定義する。圧力は、単位面積あたりの表面上にかけられる力または重さであり、パスカルPaで測定される。キログラム質量によって表面上にかけられる圧力は9.8Paに等しい。全大気によって地球表面上にかけられる圧力は約100,000Paである。通常、大気圧はミリバールmbで示される。1mbは100Paと等しく、したがって標準大気圧は約1000mbである。実際、大気圧の実際の値は場所、高度および天候に依存して変動する。海面で、一般的には観測値は970mb~1040mbの範囲にわたる。圧力が高度とともに減少するので、様々な場所で観察された圧力を同じレベル通常海面に調節しなければならない。閉じた容器中で封入された流体上に静止してかけられた圧力は、流体のすべての部分および容器の壁に損失なしに伝達される。静止流体については、その中の2つのポイントの間の圧力の差異は、流体の密度および2ポイントの間の深さの差異のみに依存する。したがって、流体はその中に浸漬されたすべての物体上に圧力をかけ、それは外部から適用される流体の上部への圧力プラス液体の重さからの静止流体圧力と等しい。特別に定義されない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と意味を有する。当業者に公知の様々な方法論が本明細書において参照される。参照されたかかる公知の方法論を説明する出版物および他の材料は、それらの全体の参照によって完全に説明されるかのように本明細書に援用される。本発明の実行は、特別の指示の無い限り、化学、分子生物学、微生物学および植物生物学の従来の技法を用い、これらは当該技術分野の技術内である。当業者に公知の任意の好適な材料および/または方法を本発明の実行において利用することができるが、好ましい材料および/または方法が記載される。以下の記述および実施例において参照される材料、試薬および同種のものは、特に断りのない限り商業的供給源から得ることができる。本発明は、植物において一過性に、対象となるペプチドおよび/またはタンパク質の発現のための、特に薬学的に価値のあるペプチドおよび/またはタンパク質の発現のための、システムおよび方法に関する。特に、本発明は、丸のままの手を加えていない植物、または複数の丸のままの植物、または植物体における植物器官または組織を含む丸のままの手を加えていない植物の部分の中へアグロバクテリウム細胞を導入する改善された方法を提供する。本発明の方法は、他の方法によって得られたものよりも高い組換えタンパク質の収率をもたらす、多くの植物の単独または同時の効果的なアグロインフィルトレーションを提供する。方法は容易にスケールの変更および自動化することでき、組換えタンパク質の需要の変化を満たす。植物のアグロインフィルトレーションはこれらの2つの方法のうちの1つに従って現在実行されている。第1の方法は、アグロバクテリウム細胞の懸濁物により充填された注射器を使用し、細菌を個々の葉に注入する。注射器を葉の下側に配置し、細菌懸濁物が葉の全体にわたって広がるようにプランジャーを穏やかに押し出す。この方法は労力を要し、スケールアップに適用可能ではない。第2の方法は植物による細菌の取り込みを支援するために真空を使用することを含む。典型的には、植物をチャンバーの内部に上下逆さまで置き、葉を細菌懸濁液の中に完全に浸漬する。チャンバー中の圧力を約10分の数ミリバールにする。最初に空気を真空まで葉から引き抜き、空気を再導入するときに、葉は液体を引き込む。真空プロセスは少なくとも2つの短所を有し、望ましい低圧力まで圧力を導くのに数分間かかるので遅い。真空はインフィルトレーションした植物に対して特定の無視できないストレスを生成し、それはインフィルトレーションプロセスからの回復または生存が困難な植物をもたらす。一態様において、本発明は、丸のままの植物または複数の丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物体における植物器官または植物組織を含む丸のままの手を加えていない植物の部分の中へアグロバクテリウム細胞を導入する改善された方法を提供する。本発明の方法は、真空または陰圧を使用する当該技術分野において公知の方法とは異なり、陽性の流体圧力または陽性および陰性の流体圧力の組み合わせを与え、アグロバクテリウム細胞が、丸のままの植物または複数の丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物体における植物器官または植物組織を含む丸のままの手を加えていない植物の部分にインフィルトレーションすることを促進する。本発明は、アグロバクテリウム細胞と接触されるかまたは接触されてきた、丸のままの植物または複数の丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物体における植物器官または植物組織を含む丸のままの手を加えていない植物の部分に陽性の流体圧力を送達するためのシステムおよび手段も提供する。本発明に従えば、丸のままの植物または複数の丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分および細菌が閉鎖条件下で1つまたは複数の圧力サイクルによる処理にさらされる場合、陽性の流体圧力が送達される。流体圧力は、流体水または空気等内のいくつかのポイントでの圧力である。例えば、閉鎖条件下で流体が含まれる体積は一定である。本発明の様々な実施形態において、流体圧力の規格は固定体積のチャンバー内の気圧を指す。流体圧力が、本発明の方法が実施される場所で閉鎖システムの外側の周囲気圧を超える場合、陽圧と称される。丸のままの植物または複数の丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物体における植物器官または植物組織を含む丸のままの手を加えていない植物の部分および細菌が、周囲気圧よりも高い標的圧力に曝露されている場合、陽圧または過剰圧力が提供される。過剰圧力および陽圧という用語は本明細書において互換的に使用される。周囲気圧は方法が実施される場所の高度および方法が実施される時間の天候に依存して変動し、当該技術分野において公知の技法および機器によって容易に決定することができる。多くの単位を使用して圧力の値を表現することができる。例えば、barは100キロパスカルと等しく、海面での地球上の大気圧とおよそ等しい圧力の単位である。大気圧は多くの場合ミリバールで与えられ、そこで標準的な海面圧力1気圧は1013.25mbarhPaとして定義され、1.01325barと等しい。したがって本発明において有用な陽圧値は周囲気圧のパーセンテージ値に換算して表現することができ、例えばそして限定されずに、110、125、150、175、200、250、300、350、400、350、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1110、1150、1200、または任意の中間値、または前述のものを超える任意の値である。類似した慣例を周囲気圧よりも低い圧力値である陰圧の記載のために使用することができる。陽圧はあるいは絶対値に換算して表現することができ、例えばそして限定されずに、1.1気圧、1.5気圧、2気圧、2.5気圧、3気圧、3.5気圧、4気圧、4.5気圧、5気圧、5.5気圧、6気圧、6.5気圧、7気圧、7.5気圧、8気圧、8.5気圧、9気圧、9.5気圧、10気圧、10.5気圧、11気圧、11.5気圧、12気圧、など;または1.1bar、1.5bar、2bar、2.5bar、3bar、3.5bar、4bar、4.5bar、5bar、5.5bar、6bar、6.5bar、7bar、7.5bar、8bar、8.5bar、9bar、9.5bar、10bar、10.5bar、11bar、11.5bar、12bar、または任意の中間値、または前述のものを超える任意の値である。周囲気圧が記述中の比較のために本明細書において提供されない場合、周囲気圧は海面での地球上の標準大気圧であることが意図される。本明細書において使用される圧力サイクルという用語は、一定の期間にわたる圧力における1シリーズの変化を指す。一実施形態において、圧力サイクルは標的圧力すなわち、与えられた期間内で到達されるべき圧力を含む。例えば、チャンバー中の所望される圧力は、圧力サイクルの間に周囲気圧と平衡状態から開始し標的圧力へ変化し周囲気圧に戻る。したがって、本発明において使用されるチャンバーは、大気より上に圧力を増加させることによって圧力サイクルを開始し、大気と平衡化することによって圧力サイクルを終えることができる。本発明の様々な実施形態において、開始圧力および終末圧力が異なり、各々は周囲気圧と異なり得る。例えば、陽性気圧のパルスは単一の圧力サイクルである。圧力サイクルは、特定の実施形態において複数の標的圧力例えば第1の標的圧力、第2の標的圧力、第3の標的圧力などを含み得る。したがって、異なる圧力サイクルは、各々異なる開始圧力および終末圧力、ならびに任意の数の不連続の中間標的圧力または開始圧力から終末圧力への連続的な推移を有することができる。本発明の方法において、複数の異なる圧力サイクルを適用することができ、各々を1つまたは複数回2、3、4、5、6、7、8、9または10回等であるがこれらに限定されないを適用することができる。したがって、本発明の方法またはさらに圧力サイクルにおいて、圧力の変動は、経時的にグラフまたは波形正弦波、矩形波、三角波もしくはのこぎり波または前述のもののうちの1つに近似する任意の波形によって表現することができる。本発明の様々な実施形態において、期間または程度の面から流体圧力の任意の規格は、丸のままの手を加えていない植物または複数の丸のままの植物または丸のままの手を加えていない植物の部分へ適用される、圧力サイクルの全体的な期間および圧力のピーク値を指す。例えば、0.5秒で少なくとも4.5のbarの圧力により丸のままの植物または植物部分を処理することを含む圧力サイクルへの参照は、植物へ適用された圧力の全体的な持続期間が0.5秒であり、大気より上に圧力を4.5barのピーク値で増加させて、大気と平衡化することによって圧力サイクルを終える期間を含み得ることを意味する。好ましくは、本発明の圧力サイクルは陽圧である標的圧力を含む。特定の実施形態において、本発明の方法は陰圧である標的圧力を含まない。他の実施形態において、本発明の方法は、陽圧である第1の標的圧力に加えて、陰圧である第2の標的圧力を含む。他の実施形態において、本発明の方法は、陽圧である第2の標的圧力と同様に陰圧である第1の標的圧力を含む。本発明の方法においてオプションの休止期間を圧力サイクルの間に含むことができる。かかる休止期間は、約0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5または5および最大10秒以上の間持続してもよい。特定の実施形態において、発現コンストラクトを含むアグロバクテリウム細胞を、丸のままの植物または複数の丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物体における植物器官または植物組織を含む丸のままの手を加えていない植物の部分の中へインフィルトレーションする。一実施形態において、インフィルトレーションは、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤および両性イオン性界面活性剤を含む界面活性剤の存在下において実行される。使用できる界面活性剤の非限定的例は、トリトンX-100またはSilwetL-77植物に対して比較的低い毒性を示す強い界面活性剤である。複数の植物細胞において発現コンストラクトが対象となるペプチドまたはタンパク質を発現することを可能にする好適な条件下で植物または植物の組織をインキュベーションした後に、植物または植物部分植物器官または植物組織等またはその細胞においてタンパク質を検出し定量することができる。収穫後に、ペプチドまたはタンパク質の単離は当該技術分野においてルーチンの方法を使用して実行することができる。例えば、少なくともバイオマスの部分をホモジナイズし、組換えペプチドまたはタンパク質を抽出し、さらに精製することができる。抽出は好適な溶媒中にホモジネートを浸すかまたは浸漬することを含み得る。精製法は、ペプチド、タンパク質もしくはタンパク質複合体の特定のサイズ、電気泳動移動度、生物学的活性および/または単離されるべきペプチドまたはタンパク質の正味電荷に基づくか、またはタンパク質におけるタグ分子の存在に基づく免疫親和性精製および精製手順を含むが、これらに限定されない。単離されたペプチドまたはタンパク質の特徴づけは免疫アッセイまたは当該技術分野において公知の他の方法によって行うことができる。例えば、ペプチドまたはタンパク質は、ウエスタンブロットによって、またはペプチドまたはタンパク質が実質的に精製される場合はクマシーブルー染色することによって、SDS-PAGEゲル上で分析することができる。本発明の別の実施形態において、陽性の流体圧力の応用に際してアグロバクテリウム細胞と接触される、手を加えていない丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物器官または植物組織の植物部分を処理するシステムが提供される。本発明のシステムは、丸のままの植物特に丸のままの手を加えていない植物または植物器官もしくは植物組織等の植物の部分または複数のかかる丸のままの植物もしくは植物部分を収容するためのチャンバーおよび陽性の流体圧力を送達するための手段を含む。チャンバーは、本発明の目的のための一定の形状を維持し、本発明において使用される流体に対する透過性がない当該技術分野において公知の任意の材料から作製することができる。チャンバーは、丸のままの植物または植物組織等の植物の部分を収容および回収でき、チャンバー中の圧力を調節する、少なくとも1つの開口部を含む複数の注入口および流出口を含む。特定の実施形態において、チャンバーは、チャンバーとシーリング係合してチャンバーを閉鎖することに適合した開口部およびカバー、チャンバーの側面またはカバーを通してバルブ開口部を形成する手段、ならびにシーリング係合においてチャンバーおよびカバーをロック位置に放出可能に維持するための固定手段;ならびにチャンバーの内部および外部との間の流体経路の提供のためのバルブ開口部に対して据え付けた少なくとも1つの柔軟なバルブ手段を含む。システムは、複数の丸のままの植物または植物部分をアグロバクテリウム細胞と接触させる手段を任意で提供することができる。好ましくは、アグロバクテリウム細胞と丸のままの植物または植物部分の接触は、陽圧が送達されるチャンバー中で実行される。陽性の流体圧力は当該技術分野における公知の任意の手段によって送達することができる。一実施形態において、本発明では、丸のままの手を加えていない植物をチャンバーの内部で上下逆さまで配置し、葉をアグロバクテリウム細胞を含む液体中に完全に浸漬する。チャンバーは注入口バルブ経由で減圧装置を通して圧縮空気源へ連結される。チャンバーは、1つの壁、好ましくはチャンバーの蓋に設置された放出バルブも含む。減圧装置および注入口バルブは、1つまたは複数の標的圧力がチャンバー中で達成できるようにチャンバー中の圧力を調節するために使用される。例えば、陽圧の送達を開始するために、チャンバーは閉鎖され、注入口バルブはオフへと切り替えられ、減圧装置は標的圧力に設定される。植物が液体中に浸漬された後、チャンバーが標的圧力を達成するのに十分な第1の期間、および標的圧力がチャンバー中で維持されるときに第2の期間で注入口バルブは開けられる。期間が経過した後、注入口バルブを閉鎖し、放出バルブを開けてチャンバーが周囲気圧へ戻ることを可能にする。別の実施形態において、本発明では、複数のノズルおよびチャンバーの側面上の放出バルブを含むチャンバーの内部に丸のままの手を加えていない植物が配置される。ノズルは一般のマニホールドへ連結され、そしてそれは第1の注入口バルブを介してアグロバクテリウム細胞を含む液体のリザーバーに連結される。圧縮空気源は減圧装置および第2の圧力バルブを通してノズルへ連結される。減圧装置を使用して、チャンバー中で達成されるべき標的圧力を設定する。例えば、陽圧の送達を開始するために、チャンバーを閉鎖し、注入口バルブ、圧力バルブおよび放出バルブをすべて閉鎖し、減圧装置を標的圧力へ設定する。次いで、細菌を含む液体が圧縮空気によって霧化またはアエロゾル化され、チャンバーの内部の植物上にノズルを通して噴霧されるように、注入口バルブおよび圧力バルブは協調的に開けられる。注入口バルブおよび圧力バルブ、または圧力バルブは、チャンバーが標的圧力を達成するのに十分な第1の期間、および標的圧力がチャンバー中で維持されるときに第2の期間で開けられる。期間が経過した後、注入口バルブおよび/または圧力バルブを閉鎖し、放出バルブを開けてチャンバーが周囲気圧に戻ることを可能にする。本発明の他の実施形態において、液体の流体圧力または水圧は、丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分が浸水されるインフィルトレーション培地の封入された体積へ適用されることが意図される。液体流体圧力は、任意の従来の手段ギヤーポンプ、ベーンポンプおよびピストンポンプを含む水圧ポンプ等であるがこれらに限定されないによって供給することができる。上記の機器に加えて、本発明のシステムは、様々な他の機器、例えばバルブ例えば逃がしバルブ、チェックバルブ、手動バルブ、作動バルブ、ニードルバルブおよび同種のものに加えて前述のバルブのうちの少なくとも1つを含む組み合わせ、フィルター例えば細菌用フィルターおよび粒子用フィルターおよび同種のものに加えてその組み合わせ、センサー例えば圧力、温度、流量、湿度、伝導性、気体混合物、液体レベルおよび同種のものに加えて前述のセンサーのうちの少なくとも1つを含む組み合わせ、温度の制御ヒーター、熱交換器、冷却器、ドライヤーおよび同種のもの等、圧力の制御コンプレッサーおよび同種のもの等、流れ制御ポンプ、ファン、送風器および同種のもの等に加えて、前述の制御のうちの少なくとも1つを含む組み合わせ、および導管例えば流体導管と電線用導管および同種のものに加えて前述の導管のうちの少なくとも1つを含む組み合わせをさらに含み得る。上記の機器に加えて、本発明のシステムは、複数の丸のままの植物または植物部分植物器官または植物組織等をある場所からチャンバーへ輸送するための手段、アグロバクテリウム細胞と複数の丸のままの植物または植物組織の接触を促進するための手段、チャンバー中の複数の丸のままの植物または植物組織を収容するための手段、チャンバー中の複数の丸のままの植物または植物部分植物器官または植物組織等を配置および再配置するための手段、チャンバーから複数の丸のままの植物または植物部分を回収するための手段を任意でさらに含むことができる。好ましくは、1つまたは複数の前述の手段は自動化された電気的機械システムであり、モーターによる輸送システム、工場自動化システム、セキュリティーシステム、プロセス制御システム、データ通信システム、データ保存システムおよびコンピューティングシステムを含むが、これらに限定されない。本発明の一実施形態において、チャンバーは、チャンバー内の複数の丸のままの手を加えていない植物を植物全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地と接触するように収容および配置するための手段を含む。特に、複数の植物は、その地上部および地中部を含む植物体全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるように配置される。この構成において、植物の地上部に加えて地中部も含む植物全体をアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地と接触させる。浸水した植物は1つまたは複数の圧力サイクルにさらされ、圧力サイクルの少なくとも1つは大気圧と比較して増加した圧力を含み、特定の実施形態において、圧力は0.5秒~60秒の期間の間維持される。1つまたは複数の圧力サイクルの間に、チャンバーは好ましくはその内部の空気がないかまたは無視できる状態で閉鎖およびシールされ、その結果、封入されたインフィルトレーション培地上に圧力が適用される場合、チャンバーはチャンバーの壁からの抵抗性に起因して加圧されるようになり、実質的に一様な圧力が浸水した植物を含むチャンバーの全体にわたって伝達される。この構成において、浸水した植物に作用する圧力は、システムへ適用されたものと実質的に同じである。本発明の別の実施形態において、チャンバーは、チャンバー内の複数の丸のままの手を加えていない植物を植物の一部分のみがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地と接触するように収容および配置するための手段を含む。特に、複数の植物は、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるが、植物の地中部特に植物の根がインフィルトレーション培地中に浸水されないように配置される。この構成において、植物の地上部に加えて地中部を含む植物全体は1つまたは複数の圧力サイクルにさらされ、圧力サイクルの少なくとも1つは大気圧と比較して増加した圧力を含み、特定の実施形態において、圧力は0.5秒~60秒の期間の間維持される。図5は本発明のかかる実施形態の一例を示す。システム10は蓋12を有するチャンバー11を含む。蓋12によりチャンバー11はシーリングで閉鎖することができる。図5中に示されるように、この実施例において、丸のままの手を加えていない植物13は、植物の地上部を液体中に完全に浸漬してチャンバーの内部に上下逆さまで提供される。システム10は導管15を通してチャンバー11と連結する液体タンク14も含む。液体タンク14はピストン17と連結したプランジャーロッド16を含む。ピストン17が下方へ移動される場合、液体タンク14からの液体は導管15を通してチャンバー11の中へ圧迫されるだろう。植物の葉が浸漬され大気圧と関連する圧力にさらされるように、チャンバー11中の液体レベルおよびさらに圧力が上昇される。本発明のさらに他の実施形態において、複数の植物は、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルにさらされ、圧力サイクルの少なくとも1つは大気圧と比較して増加した圧力を含み、特定の実施形態において、圧力は0.5秒~60秒の期間の間維持されるように、チャンバー中に配置される。この構成において、植物の地中部特に植物根は、それらがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されず、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされないようにチャンバーの外部に配置される。1つまたは複数の圧力サイクルの間に、チャンバーは好ましくはその内部の空気がないかまたは無視できる状態で閉鎖およびシールされ、その結果、封入されたインフィルトレーション培地に圧力が適用される場合、チャンバーはチャンバーの壁からの抵抗性に起因して加圧されるようになり、実質的に一様な圧力が浸水した植物の地上部を含むチャンバーの全体にわたって伝達される。この構成において、浸水した植物に作用する圧力は、システムへ適用されたものと実質的に同じである。チャンバーの内部に丸のままの手を加えていない植物の地上部を収容するが地中部をチャンバーの外側に配置するために、チャンバーの1つの側面典型的には上部は、挿入または除去の間の植物の地上部の通過を可能にするために1つまたは複数の開口部を含み得る。開口部の寸法は、丸のままの手を加えていない植物の部分が開口部において存在するので可変的である。開口部は、開口部の可変的な寸法にもかかわらず開口部を閉鎖することができるように弾性シールにより裏打ちされる。シールの弾性は、植物部分を機械的障害から保護することを支援することができる。典型的には、シールの弾性に起因して主要茎の周囲でシールが形成されるように、丸のまま手を加えていない植物を配置する。弾性シールは互いに向けて対抗して摺動するように構成され、一時的な気密接合または防水接合を効果的に形成するように開口部を閉鎖することができる。圧力サイクルの間に、植物のインフィルトレーション培地および地上部が弾性シールによって封入されているが、チャンバーは一時的に加圧することができる。かかる実施形態の一例は図6中に示される。図6はチャンバー20の概略的横断面図である。チャンバー20はヒンジ23を用いて互いと連結される2つの壁部分21、22を有する。図6中の左側図面は開放状態におけるチャンバー20を示す。2つの壁部分21、22の自由端部で可膨張式シール24が提供される。図6の右図面は、チャンバーが緊密にシールされるように膨張した2つのシール24による閉鎖状態におけるチャンバー20を示す。図7はチャンバー26の斜視概略図を示す。左側図面において示されるチャンバー26は、互いから間を置いて配置されている2つの可膨張式シール24による開放状態におけるものである。シールは各々蓋部25の縁部で提供される。蓋部25は、例えば摺動する様式で互いに向けておよび互いから離れて移動可能である。一旦植物が部分的に挿入されれば図7中で上部右図面を参照、2つの蓋部25は植物の茎の周囲で閉鎖され、シール24はチャンバー26を緊密にシールするために膨張される。移動可能な蓋部および長手方向のシール24により示された配置が単に例示的な実施形態であり、他の立体配置が本発明によって包含されることは当業者によって理解される。例えば、チャンバー26は、円筒状または管状の形態を有する代わりに、植物の部分の収容のために円形開口部を備えた球状形態を有することができる。円形開口部の縁部に沿って、植物の茎の周囲でチャンバーの全体の開口部を閉鎖するような程度に膨張可能な単一の環状シールが提供され得る気密シールまたは防水シールを提供する等。特定の実施形態において、発明は弾性の空気圧シールまたは水圧シールを提供し、そこで各々のシールは、圧縮した空気もしくは不活性ガスまたは膨張圧力下の水圧流体が導入される空洞を含む。膨張圧力により、シールと丸のまま手を加えていない植物の部分との間に存在するギャップの中へそのままでは脱気したシールを柔軟に拡張させ、一時的な気密接合または防水接合を効果的に形成する。1つの特定の立体配置において、少なくとも2つの対抗するシールが1つまたは複数の丸のまま手を加えていない植物の主要茎が配置される開口部を裏打ちする。膨張に際して、対抗するシールは互いを押し出してそれらの間の植物の主要茎複数可をトラップするまでそれらの間の空間の中へ拡張して、一時的な気密接合または防水接合を形成する。一旦シール膨張圧力が除去されれば、シールは脱気した位置に戻り、チャンバーの内部の圧力を効果的に逃がす。一実施形態において、弾性シールへの膨張圧力の適用およびチャンバー中のインフィルトレーション培地への水圧の適用は順番に行えることが意図される。好ましくは、弾性シールへの膨張圧力の適用は水圧の適用に先立ち、その結果チャンバーが加圧されるようになる前に接合が形成される。いくつかの適用において、水圧液体手段が適用されていてもよいが、一般的には圧縮空気は膨張媒体として利用される。可膨張式シールは3つの異なる面半径方向の内側、半径方向の外側、および軸方向において多目的な立体配置を提供する。歯止めの形態のシールは、閉鎖端部、司教帽状端部および連続的なループを形成することができる。空気圧シールまたは水圧シールは、シリコーン、ブタジエンスチレンSBR、クロロプレンネオプレン、エチレンプロピレンEPDMおよびフッ素化炭化水素Viton登録商標を含むエラストマーの種類から作製することができる。当業者は、広範囲の電気部品ハードウェア、ソフトウェア、ファームウェアまたは実質的にはその任意の組み合わせ等;および機械的力または機械的運動を与え得る広い範囲のコンポーネント剛体、バネもしくはねじれ物体および水力学ならびに電気磁気的に作動する装置またはその任意の組み合わせを有する、様々なタイプの電気機械的システムによって、本明細書において記載された様々な実施形態を個別におよび/またはまとめて実施できることを認識するだろう。したがって、本明細書において使用される時電気機械システムは、トランスデューサーと作動可能にカップルした電気回路例えばアクチュエーター、モーターと圧電性結晶など、少なくとも1つの個別の電気回路を有する電気回路、少なくとも1つの集積回路を有する電気回路、少なくとも1つの特定用途向け集積回路を有する電気回路、コンピュータープログラムによって構成された汎用計算装置を形成する電気回路例えばプロセスを少なくとも部分的に実行するコンピュータープログラムによって構成された汎用コンピューターおよび/または本明細書において記載される装置、またはプロセスを少なくとも部分的に実行するコンピュータープログラムによって構成されたマイクロプロセッサーおよび/または本明細書において記載される装置メモリー装置を形成する電気回路例えばランダムアクセスメモリの形態、コミュニケーション装置を形成する電気回路例えばモデム、コミュニケーションスイッチまたは光学電気機器、およびその任意の非電気式類似物光学的または他の類似物等を含むがこれらに限定されない。様々な実施形態において、対象となる遺伝子複数可特に対象となる異種遺伝子複数可を備えた発現コンストラクトを保有するアグロバクテリウムの細胞を使用して、植物または植物部分の細胞および/または細胞外空間中の一過性の発現のために、丸のままの手を加えていない植物もしくは植物部分植物器官または植物組織等への遺伝子複数可を送達する。一般的に、好適な発現コンストラクトは少なくとも1つのT-DNA境界配列、発現調節配列例えば誘導可能または構成的であり得るプロモーター、活性が組織特異的であるかまたは組織バイアスがかかるプロモーター、および発現調節配列へ作動可能に連結された対象となる遺伝子を含む。特定の実施形態において、発現コンストラクトは、好適なプロモーターおよびさらなる発現調節配列の制御下で選択可能な標識遺伝子をさらに含む。特定の実施形態において、発現コンストラクトは、1つまたは複数の複製起点アグロバクテリウム種において発現コンストラクトを含むベクターを複製するのに好適な少なくとも1つの複製起点を含むベクターの一部である。本発明において使用することができるアグロバクテリウム種は、アグロバクテリウムツメファシエンスtumefaciens、アグロバクテリウムリゾゲネスrhizogenes、アグロバクテリウムラジオバクターradiobacter、アグロバクテリウムルビrubi、アグロバクテリウムビティスvitisを含み、これらに限定されないが、特にアグロバクテリウムツメファシエンスおよびアグロバクテリウムリゾゲネスである。一実施形態において、少なくとも1つのアグロバクテリウム株はアグロバクテリウムツメファシエンスを含む。使用するアグロバクテリウム種は野生型例えば病原性または安全化株であり得る。アグロバクテリウムの好適な株は、野生型株例えばアグロバクテリウムツメファシエンス等または1つまたは複数の遺伝子が突然変異して形質転換効率を増加させた株例えば突然変異体またはキメラのvirA遺伝子もしくはvirG遺伝子の存在に起因してvir遺伝子発現および/またはその誘導が改変されたアグロバクテリウム株等例えばChenandWinans,1991,J.Bacteriol.173:1139-1144;およびScheeren-Grootetal.,1994,J.Bacteriol.176:6418-6246、多重コピーのプラスミドと好ましくは連結されたpTiBo542に由来するスーパーvirG遺伝子等の余剰のvirG遺伝子コピーを含むアグロバクテリウム株例えば米国特許第6,483,013号における記載されるようなを含む。他の好適な株は、A.ツメファシエンスC58C1VanLarebekeetal.,Nature252:169-1701974、A136Watsonetal.,J.Bacteriol123:255-2641975;LBA4011Klapwijketal.,J.Bacteriol141:128-1361980、LBA4404Hoekemaetal.,Nature303:179-1801983;EHA101Hoodetal.,J.Bac.168:1291-13011986;EHA105Hoodetal.,TransRes.2:208-2181993;AGL1Lazoetal.,Bio/Technology2:963-9671991;A281Hoodetal.,supra1986を含むが、これらに限定されない。複数のアグロバクテリウム株各々は異なる遺伝子を発現するを使用して、個々のタンパク質またはヘテロ多量体タンパク質を産生するかまたは対象となるペプチドまたはタンパク質の収率を促進することができる。発現することができる異なる遺伝子の非限定的例はウイルス起源のサイレンシング抑制因子をコードする遺伝子である。あるいはまたは加えて、単一のアグロバクテリウム株は、異なる対象となる遺伝子特に対象となる異種遺伝子を含む複数の配列を含むことができる。異なる遺伝子は単一の核酸分子例えば単一のベクター内に含まれるかまたは異なるベクター中で提供されてもよい。本発明の方法は、以下のものを含むが、これらに限定されない植物の多くの種のアグロバクテリウムインフィルトレーションおよび一過性の発現に使用することができる。タバコニコチアナ属の種、レタス、アルファルファ、緑豆、ほうれん草、タンポポ、ラディッキョ、ルッコラ、エンダイブ、キクヂシャ、チコリー、アーティチョーク、トウモロコシ、じゃがいも、コメ、ダイズ、綿、小穀物類、小麦、大麦、ソルガム、サトウダイコン、キャノーラ、アブラナ科例えばアブラナ、シロイヌナズナ、ウキクサ、およびトマト。好適な植物器官または組織は一般的に植物の任意の部分になりえる。1つの好ましい態様において、植物組織は葉組織である。一態様において、植物組織は少なくとも1つの次元において少なくとも約7~8cmの葉を含む植物からの葉組織である。様々な実施形態において、細胞が異種タンパク質を消化するプロテアーゼを検出不能または低レベルで含む植物種、品種またはさらに植物器官少なくともおよそタンパク質が植物組織から単離される時間までに、異種タンパク質を発現する核酸の導入からの期間の間に植物において発現された異種タンパク質の例えば約5未満、約1未満、約0.1未満が消化されるが選択される。プロテアーゼレベルは、異種タンパク質発現のウエスタンブロット分析を含む当該技術分野においてルーチンの方法の使用でアッセイすることができる。ニコチアナ属の例示的な種は、ニコチアナアフリカナafricana、ニコチアナアムプレキシカウリスamplexicaulis、ニコチアナアレントシarentsii、ニコチアナベンサミアナbenthamiana、ニコチアナビゲロビbigelovii、ニコチアナコリンボサcorymbosa、ニコチアナデブネイdebneyi、ニコチアナエクセルシオルexcelsior、ニコチアナエキシグアexigua、ニコチアナグルチノサglutinosa、ニコチアナグッドスピーディgoodspeedii、ニコチアナゴセイgossei、ニコチアナヘスペリスhesperis、ニコチアナイングルバingulba、ニコチアナナイチアナknightiana、ニコチアナマリチマmaritima、ニコチアナメガロシホンmegalosiphon、ニコチアナミエルシmiersii、ニコチアナネソフィラnesophila、ニコチアナノクチフロラnoctiflora、ニコチアナヌジカウリスnudicaulis、ニコチアナオトホラotophora、ニコチアナパルメリpalmeri、ニコチアナパニクラタpaniculata、ニコチアナペツニオイデスpetunioides、ニコチアナプルムバギニフォリアplumbaginifolia、ニコチアナレパンダrepanda、ニコチアナロスラタrosulata、ニコチアナロツンジホリアrotundifolia、ニコチアナルスチカrustica、ニコチアナセトケリsetchelli、ニコチアナストクトニstocktonii、ニコチアナエアスチイeastii、ニコチアナスアベオレンスsuaveolensまたはニコチアナトリゴノフィラtrigonophyllaを含むが、これらに限定されない。望ましくは、第1のタバコ植物は、ニコチアナアムプレキシカウリス、ニコチアナベンサミアナ、ニコチアナビゲロビ、ニコチアナデブネイ、ニコチアナエクセルシオル、ニコチアナグルチノサ、ニコチアナグッドスピーディ、ニコチアナゴセイ、ニコチアナヘスペリス、ニコチアナナイチアナ、ニコチアナマリチマ、ニコチアナメガロシホン、ニコチアナヌジカウリス、ニコチアナパニクラタ、ニコチアナプルムバギニフォリア、ニコチアナレパンダ、ニコチアナルスチカ、ニコチアナスアベオレンスまたはニコチアナトリゴノフィラである。ニコチアナタバカムの例示的な品種は、商業品種DACMataFina、PO2、BY-64、AS44、RG17、RG8、HB04P、BasmaXanthiBX2A、Coker319、Hicks、McNair、944MN944、Burley21、K149、YakaJB125/3、KasturiMawar、NC297、Coker371Gold、Wislica、Simmaba、TurkishSamsun、AA37-1、B13P、BU21×HojaParadoの交配からのF4、97系統、Samsun、PO1BU64、CC101、CC200、CC27、CC301、CC400、CC500、CC600、CC700、CC800、CC900、Coker176、Coker319、Coker371Gold、Coker48、CU263、DF911、Galpaoタバコ、GL26H、GL350、GL737、GL939、GL973、HB04P、K149、K326、K346、K358、K394、K399、K730、KT200、KY10、KY14、KY160、KY17、KY171、KY907、KY160、LittleCrittenden、McNair373、McNair944、msKY14×L8、NarrowLeafMadole、NC100、NC102、NC2000、NC291、NC297、NC299、NC3、NC4、NC5、NC6、NC606、NC71、NC72、NC810、NCBH129、OXFORD207、Periqueタバコ、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R610、R630、R7-11、R7-12、RG17、RG81、RGH4、RGH51、RGH4、RGH51、RS1410、SP168、SP172、SP179、SP210、SP220、SPG-28、SPG-70、SPH20、SPNF3、TN86、TN90、TN97、TND94、TND950、TRTomRossonMadole、VA309、VA309またはVA359等を含む。任意のステージのタバコ植物を使用することができ、特にタバコ植物は、ステージ6、7、8、9、10、11、12、13、14または15である。本発明の特定の実施形態において、ステージ8、9または10での植物は使用され、そこで植物は約6.5cm~約16.5cmの間の平均長を有する。ステージ10で植物は5~6週齢であり、高さは約15cmであり、よく伸長した葉および最大1つの開いた花を持つ。2009年2月のCORESTAガイドN°7、AScaleForCodingGrowthStagesInTobaccoCrops、TaskForceGrowthStagesandIdentificationKeysforTobacco、pp.1-15、CentredeCo-operationpourlesRecherchesScientifiquesauTabac.http://www.coresta.org/Guides/Guide-No7-Growth-Stages_Feb09.pdf中で1~9のスケールにわたるタバコにおける重要な成長段階を同定する代替システムが開示される。CORESTAシステムによれば、成長段階2~8における植物、しかし特に成長段階3~5における植物を使用することができる。大きな葉表面面積を備えたタバコ植物が好ましい。本発明の方法において既に成長した植物を使用できるか、または植物組織の源として使用できることが、本発明の特有の利点である。本発明は、成長した商業的に入手可能な植物、特にタバコにおけるタンパク質産生を利用することを可能にするシステムおよび方法を提供し、短期間で治療用使用または予防的使用のために必要な量の組換え異種ペプチドまたはタンパク質を調達するという問題に対する新規の解決策を提供する。本発明の一態様において、方法は丸のままの植物または植物部分植物組織等の中へ対象となる異種ペプチドもしくはタンパク質または生物学的に活性のあるその断片をコードする配列を含む発現コンストラクトを導入すること、および植物または植物部分においてタンパク質を一過性に発現することを含む。コード配列は、植物または植物部分の細胞および/または細胞外空間においてコード配列の転写を駆動することができる発現制御配列へ作動可能に連結される。好ましくは、発現コンストラクトは、大きな腫瘍を誘導するT-DNATiプラスミドからの少なくとも1つのT境界配列を含む。さらに、好ましくは、発現コンストラクトは、少なくともアグロバクテリウム種アグロバクテリウムツメファシエンスの細胞において複製できるベクター内に含まれる。一態様において、丸のままの植物または植物部分は既に成長した植物からの葉組織を含む。好ましくは、植物例えばニコチアナタバカムは比較的大きな葉例えば少なくとも1つの次元において約7~8cm以上を含む。発現コンストラクトは発現ベクターの一部であり得、細菌の複製起点アグロバクテリウムおよび/または大腸菌の複製起点等の追加の所望される配列、細菌アグロバクテリウム等および/または植物細胞において機能するレポーター遺伝子例えばGUS、GFP、EGFP、BFP、ガラクトシダーゼおよびその修飾形態ならびに選択可能なマーカー遺伝子例えば抗生物質耐性遺伝子および同種のものを含むことができる。この目的のために、本発明の方法において使用される外来のDNAはマーカー遺伝子も含むことができ、その発現は初期のクローニングステージの間に非形質転換細胞からの形質転換細胞の分離を可能にする。かかるマーカー遺伝子は一般的に形質転換細胞と非形質転換細胞を表現型により区別することを可能にするタンパク質をコードする。しかしながら、発現コンストラクト/ベクターが導入される植物組織からの異種ペプチドまたはタンパク質の単離にマーカー遺伝子が必要とされないことは、本発明に記載の一過性のタンパク質産生方法の利点である。発現コンストラクトは、PVXのp25タンパク質、タバコエッチウイルスのP1-HcProタンパク質およびトマトブッシースタントウイルスのp19タンパク質を含み、これらに限定されない、サイレンシング抑制因子特にウイルスサイレンシング抑制因子によりさらに相補することができる。本明細書において使用される時、一過性の発現のレベルは、1kgの植物組織質量あたり少なくとも約250マイクログラム、少なくとも約500マイクログラム、少なくとも約750マイクログラム、少なくとも約1mg、少なくとも約2mg、少なくとも約3mg、少なくとも約4mg、少なくとも約5mg、少なくとも約10mg、少なくとも約15mg、少なくとも約25mg、少なくとも約50mg、少なくとも約75mg、少なくとも約100mg、少なくとも約150mg、少なくとも約200mg、少なくとも約500mg、少なくとも約1000mg、少なくとも約1.5g、少なくとも約2g、少なくとも約2.5g、少なくとも約5g、少なくとも約7.5g、少なくとも約10g、少なくとも約15g、または少なくとも約20gを発現する能力を指す。本明細書において使用される時一過性は、好適な植物組織からタンパク質の単離を可能にするのに十分に長い一定の期間を指す。好ましくは、タンパク質発現は、植物組織の中への発現コンストラクトの導入後に、少なくとも約1日、少なくとも約2日、少なくとも約3日、少なくとも約4日、少なくとも約5日、少なくとも約6日、少なくとも約7日、少なくとも約8日、少なくとも約9日、少なくとも約10日、少なくとも約11日、少なくとも約12日、少なくとも約13日、少なくとも約14日、または少なくとも約15日内に好適な高いレベルである。一態様において、好適な高いレベルは、植物組織の中への発現コンストラクトの導入後に、3~7日または5~10日内およびより好ましくは3~5日または5~7日内に得られる。本発明の方法によって産生された組換えタンパク質は、これらの産物がヒトへの直接的な摂取、注入または適用例えば局所投与のために使用されるので、医薬品として使用することができ、栄養補助食品および薬用化粧品としての有用性のために発現させることができる。同様に規制された動物用産物の産生において有用である組換えタンパク質も発現され得る。産生され得る例示的なタンパク質は、増殖因子、受容体、リガンド、シグナル伝達分子;キナーゼ、酵素、ホルモン、腫瘍抑制因子、血液凝固タンパク質、細胞周期タンパク質、代謝タンパク質、神経タンパク質、心臓タンパク質、特定の疾患状態で欠損したタンパク質、抗体、抗原、疾患への抵抗性を提供するタンパク質、抗微生物タンパク質、インターフェロンおよびサイトカインを含むが、これらに限定されない。一態様において、配列をコードする抗原は防御免疫反応の誘導のために配列を含む例えばワクチン配合におけるように。かかる好適な抗原は、微生物抗原ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原および同種のものを含む;多細胞生物からの抗原多細胞の寄生動物等;アレルゲン;およびヒトまたは動物の病理学と関連する抗原例えば癌、自己免疫疾患および同種のもの等を含むが、これらに限定されない。1つの好ましい態様において、ウイルス抗原は、HIV抗原;インフルエンザへの防御免疫反応を付与するための抗原;ロタウイルス抗原;炭疽菌抗原;狂犬病抗原;および同種のものを含むが、これらに限定されない。ワクチン抗原は、例えば発現コンストラクト中で繰り返され、任意で1つまたは複数のリンカー配列によって分離される、異なるかまたは同じ抗原コード配列を含む、多価ペプチドまたはポリペプチドとしてコードされ得る。本発明の方法を使用して、化学物質合成または工業プロセスのための酵素経路を再現するために1つまたは複数の遺伝子を発現することができる。本発明は、以下の非限定的な図、表および実施例への参照によってさらに記載される。パートA:N.ベンサミアナのトランスフェクションのための陽圧によるアグロ-インフィルトレーションの効率の真空と比較した評価実施例1:全体的なセットアップ:植物を、A91蛍光タンパク質TurboGFPの遺伝子を保有するAGL1アグロバクテリウム株、およびA17p19サイレンシング抑制因子の遺伝子を保有するAGL1アグロバクテリウム株の混合物からなる細菌懸濁液によりインフィルトレーションした。TurboGFPは、コペポーダのポテリーナプルマータPontellinaplumata節足動物門;甲殻綱;アゴアシ亜綱;橈脚類からクローン化された緑色蛍光タンパク質CopGFPの改善されたバリアントである[ShaginDA,etal.,GFP-likeproteinsasubiquitousmetazoansuperfamily:evolutionoffunctionalfeaturesandstructuralcomplexity.MolBiolEvol.2004;215:841-50.]。TurboGFPは他の緑色蛍光タンパク質の蛍光よりも先に目視可能な明るい緑色蛍光励起/放射、最大=482/502nmを保持する。TurboGFPはEvrogenEvrogenJointStockCompany;Miklukho-Maklayastr、16/10、117997、Moscow、ロシアから入手可能である。インフィルトレーションした植物におけるTurboGFPの発現は、1インフィルトレーションの2日後から収穫の日の間に青色光下で、丸のままの植物または分離したインフィルトレーションした葉のイメージングによって定期的にモニタリングし、2抽出後にマイクロプレート蛍光リーダーで定量化した。1.1バキュームインフィルトレーション:バキュームインフィルトレーションは、真空逃がしバルブ5mmの直径およびV-710Buchiポンプ3.8m3/時間V-855レギュレーターの追加によって修飾された30×30×30cmの内部寸法を備えたLabconco真空チャンバーにより実行された。適用される真空パラメータは以下のとおりであった。-大気圧から50mbar絶対圧への3分間の圧力低下、-50mbarでの1分間の保持時間、-約3秒の急速な逃がし。この実験のために、細菌懸濁液により充填された1Lまたは2Lのビーカー中での地上部の浸漬によって、植物をひとつずつインフィルトレーションした。1.2過剰圧力:過剰圧力セットアップを図1中で示す。植物を上部蓋と連結されたその場限りのホルダーを通して1つの圧力チャンバー体積約10リットルの内部に上下逆さまで置いた。液体表面とホルダーとの間のクリアランスを最小限にするように、ホルダー位置を調製した。一旦蓋が閉鎖されたならば、以下の連続順序を実行して、陽圧により植物およびアグロバクテリウムを処理した。1.手動式ボールバルブV2およびV3の調整バルブを閉鎖して、V1を所望される圧縮空気圧力に設定した。2.V2を10秒間開け、タンクの内部で達成された圧力を水銀圧力計M1によってモニタリングした。3.V2を閉鎖し、V3を開けてサイレンサーS1を通してシステムを通気することによってタンクを大気圧に戻した。4.蓋を開け、植物をホルダーから除去した。実施例2:アグロバクテリウム接種物の調製A91蛍光タンパク質TurboGFPの遺伝子を保有するAGL1株およびA17p19サイレンシング抑制因子の遺伝子を保有するAGL1株の混合物からなる6×濃縮接種物を調製し表1および2、インフィルトレーションの日まで4°Cで保存した。表1表2濃縮接種物を、インフィルトレーションの開始~1時間前に室温~20°Cで、インフィルトレーション溶液5mMMES、10mMMgCl2、pH5.6中で1×の最終的な濃度に希釈した。1×の最終的な濃度は、A91およびA17の1:1比で0.3の最終的なOD600nmに対応する。第2の実験については、1v/vトリトンX-100のストック溶液をインフィルトレーション溶液中で調製し、指定されたときに、1:100希釈でインフィルトレーションタンク中の接種物に加えて0.01v/vトリトンX-100の最終的な濃度を達成する。実施例3:バイオマス産生ニコチアナベンサミアナ、アクセッションMIMの植物を、20時間の光、26°C/20°Cの昼/夜の温度および70/50の昼/夜の相対湿度により温室中で成長させた。自然光が200W/m2未満である場合20時間の光、約100μmol/m2/sのPARを与える15000または20000のルクス照明装置により2時00分~22時00の間に、人工照明を自動的に作動させる。植物をロックウールブロックGrodanDeltaGrowBlocksサイズ6.5において成長させた。地下灌水による灌水同時施肥を、30分間25mmの水で2日ごとに適用した。施肥は、2.5mS/cmのECおよび5.8のpHに調節された。実施例4:インフィルトレーションパラメータインフィルトレーション実験において、6つの異なる条件を比較した。使用するパラメータは表3中で報告される。表3第2のインフィルトレーション実験において、9つの異なる条件を比較した。使用するパラメータは表4中で報告される。表4インフィルトレーション連続順序を開始する直前に植物を重量測定した。インフィルトレーションの終了時に、植物をチャンバーから取り出し、ドリッピングラック中で上下逆さまに保持した。重量の測定値を通気工程の完了の2分および10分後にそれぞれとった。これらの2つの測定の間に、最後の計量の終了時に回収領域において植物を配置ながら植物をラック中に上下逆さまで再び置いた。インフィルトレーション前後の重さの差異は、植物においてインフィルトレーションした接種物の体積の指標として使用することができる。実施例5:回収およびインキュベーションの条件インフィルトレーション後に、植物を収穫までS2コンパートメント中の温室ベンチに置いた。必要な場合にドリップ灌水システムを使用して水および肥料を植物に与えた。環境条件回収およびインキュベーション相の間に使用される施肥、光サイクルおよび温度等は、植物の成長のために使用されるものと同じであった上記参照。turboGFP発現に影響を与えないことが以前に示されているので、植物の暗所インキュベーションはなかった。実施例6:蛍光イメージングのためのセットアップturboGFPの一過性の発現は、インフィルトレーションの5日または6日後に青色光下での植物の撮影によってモニタリングした。turboGFP482nmで最大励起の励起の範囲内の光を放射するダークリーダーランプHL32THandLamp、ClareChemicalResearch、USAを使用した。ランプ製造者によって提供されたアンバーフィルターを装備したデジタルカメラにより暗所環境において写真を撮影した。実施例7:収穫次いで植物を青色光下に置き、すべては伸長し、蛍光を示すインフィルトレーションした葉を回収した。先端でのみ蛍光を示す主枝および腋枝の頂点の葉は収穫しなかった。収穫した葉を蛍光イメージングのためのプラスチックシートの下に最初に置いた。次いでそれらをジップバッグ中に置き、収穫が完了するまで4°Cに移した。次いでバッグをすべて研究室に戻し、葉を分析のために加工するまで、マイナス80°Cに移した。実施例8:蛍光の定量化1つのサンプルが、完全にホモジナイズした単一の植物から収穫されたすべてのインフィルトレーションした葉に対応するように、各々のバッグの内容物をコーヒーグラインダー/ドライアイス方法を使用して細粉に破砕した。1.00g±0.05g凍結重量の粉末のサブサンプルを抽出のためにドライアイス上で調製した。抽出は、3mLの抽出緩衝液50mMトリスベース;100mMNaCl;EDTA1mM;0.2トリトンX-100;pH7.5に対して1gの凍結重量の比で、2工程の20秒間のボルテックス続いて20000gで15分間の遠心分離によって実行された。可溶性抽出物を分析のために冷凍した。抽出物中のTurboGFP濃度励起最大:482nm/放射最大:502nmを、ブルーオプティカルキット励起:490nm/放射:510~570nmにより蛍光モードにおいてモジュラスマイクロプレートリーダーTurnerBiosystemsで蛍光測定によって決定した。抽出物を抽出緩衝液中で1:100に希釈し、200μLを黒色96ウェルプレートに三重でロードした。抽出緩衝液中で最終的に1:100に希釈したモック抽出物A17のみをインフィルトレーションし、サンプルのために記載されるものと同じ条件で調製されたN.b.葉サンプルからの抽出物に異なる量のTurboGFP対照タンパク質rTurboGFP、EvrogenFP552を加えることによって、スタンダードカーブを作製した。1:100に希釈したサンプルからの蛍光は、第1の実験において0.4~1.3×10000単位および第2の実験において1.4~2.5×10000単位にわたり、三重の間での変動係数CVは<2であった。表5TurboGFP濃度の関数としての蛍光単位のスタンダードカーブ。表中に示されるように調製された植物抽出物TurboGFPを発現しないA17のみをインフィルトレーションしたN.b.葉サンプルからのモック抽出物中のTurboGFP対照タンパク質rTurboGFP、EvrogenFP552のスタンダード希釈の200μLから、ブルーオプティカルキットにより蛍光モードにおいてモジュラスマイクロプレートリーダーTurnerBiosystemsで蛍光を読み取ることによって、この曲線を得た。各々の希釈を三重で読み取り、標準誤差SEを計算した<0.01×10000蛍光単位、示されない。このスタンダードカーブを使用して、TurboGFPを発現するインフィルトレーションした植物材料から調製された可溶性抽出物中のTurboGFP濃度を定量した。実施例9:全可溶性タンパク質の定量化抽出物中の全可溶性タンパク質を、マイクロプレートリーダーで595nmの吸光度測定によってPierce24236からのクマシー-プラスアッセイ試薬を使用して決定した。抽出物を超純水中で1:10または1:20に希釈し、10μLを平底マイクロプレートに三重でロードした。100~400μg/mLの濃度範囲でウシ血清アルブミンBSAの連続的な希釈からスタンダードカーブを作製した。結果は三重間の変動係数CVが8未満の場合に有効であると判断された。結果第1のインフィルトレーション実験を実行して、真空50mbar絶対圧によるインフィルトレーションの効率を0.5barから2.5barにわたる陽圧値と比較した表3。インフィルトレーションの効率は、インフィルトレーション後の葉面積にわたる接種物の分布を調査することによって最初に査定された。葉の軸外の側面を観察する場合、インフィルトレーションされた面積は暗緑色として見える。真空によってインフィルトレーションした植物において、すべての葉の面積のほぼ100は一様にインフィルトレーションされた。0.5~1.5barにわたる陽圧を使用してインフィルトレーションした植物は、接種物の非常にまだら状の分布を葉面積にわたり示した。下部の葉のインフィルトレーションはより低かった。インフィルトレーションは真空によってインフィルトレーションした植物におけるほど完全ではなかったが、2.0~2.5barにわたる陽圧値を使用してインフィルトレーションした植物は、接種物のより一様な分布を示した。第2の実験は、葉の内部の接種物の浸透を改善するために1.5bar~3.5barにわたる陽圧表4を使用して実行された。接種物への0.01トリトンX-100の追加も2.5barの過剰圧力条件と組み合わせて試験された。デタージェントの追加は、複数の植物システムにおけるインフィルトレーションおよびアグロバクテリウム媒介性一過性の発現の効率を促進することが報告されている。以下の3つの対照条件を使用した。植物を0.01トリトンX-100の存在または非存在下で50mbarの真空および注射器によってインフィルトレーションした。この第2の実験において、使用される植物は、より伸長した葉を持つ進んだ発育ステージステージ10、平均16.5cmの高さ、第1の実験においてステージ8に対応するわずか6.5cmと比較されたいに到達していた。使用した最低の陽圧1.5barでさえ、一般的に第1の実験の間よりも植物のインフィルトレーションはよりよかった。これには以下の2つの主な理由があるだろう。1実践的な理由のために、植物のサイズから、葉のすべてが過剰圧力タンクにおいて接種物中に完全に浸漬されたことがより容易に保証された。および2伸長した葉には、接種物の広がりを促進する細胞間隙における多くの空間を備えた葉組織の構造があるので、より効率的にインフィルトレーションすることができる。第1の実験において、過剰圧力が高いほどより一様で完全なインフィルトレーションが起こるという最初に指摘されたような傾向が検出された。3.0または3.5barによりインフィルトレーションした植物は、真空によってインフィルトレーションした植物のものに同等と思われる接種物の非常に一様な分布を示した。このステージでは0.01トリトン-X100の使用の明確な効果を検出することができなかった。インフィルトレーション後の回収およびインキュベーション相の間の植物の表現型をモニタリングした。収穫の時に、葉緑素含有量定量化されなかったのわずかな低下は、インフィルトレーションのために使用された条件と無関係に、インフィルトレーションした葉で目視可能であったすなわちより薄い緑色。他のストレスに関連する兆候萎れ、重度な萎黄病または壊死等はインフィルトレーション条件のいずれかにおいても観察されなかった。A91およびA17により共インフィルトレーションした植物におけるTurboGFPの発現を、青色光下でブラックボックス中に植物を置くことによって、インキュベーション相インフィルトレーション2日後~収穫の日の間に定期的にモニタリングし、アンバーフィルターによりTurboGFPからの蛍光を観察またはイメージした。GFPが発現される場合葉面積は緑色蛍光を放射する。GFPが発現されないかまたは濃度が低い場合、葉面積は植物組織からの天然の自己蛍光に起因して赤色に見える。すべてのインフィルトレーション条件について、低いGFP発現がインフィルトレーション2日後では既に目視可能であり、インフィルトレーションされた葉において時間とともに増加し、一方同時に植物は継続して発育し、インフィルトレーションされなかった頂点の新しく伸長した葉はGFP蛍光を示さず赤色に見えた。第1の実験および第2の実験において植物のサイズに起因して丸のままの植物のイメージングが技術的に実現可能でなかったので図示せず、GFP発現における明確な差異は、異なる条件においてインフィルトレーションした植物間で目視可能であった。これらの差異は収穫の日に撮影された分離した葉の画像からより容易に観察され得る。第1の実験において、非常にまだら状のパターンのGFP蛍光が、最低の過剰圧力0.5~1.5barを使用してインフィルトレーションした植物の葉から観察され、下部の葉からの蛍光は非常に弱かった。2.5barの最高値を含む陽圧条件のいずれかにおいてインフィルトレーションした植物の葉からよりも、より明るいGFP蛍光が真空によってインフィルトレーションした植物の葉から観察された。小さな植物を使用するこの実験において平均6.5cmの高さ、1つの植物あたり少数の葉のみ一般的に4~6枚が収穫の時にGFP蛍光を示し、定量化のために回収された。各々の植物について回収した葉から得た凍結粉末からの全可溶性タンパク質抽出後に、定量化を実行した。結果および統計解析表6および7は、陽圧によってインフィルトレーションした植物におけるGFP発現が、この実験において使用される最も高い過剰圧力2.5barでさえ、真空によってインフィルトレーションした植物におけるものよりも有意に低かったことを明らかに示す。使用した過剰圧力が高いほどインフィルトレーションした葉におけるGFP発現が高いという一般的傾向も現れた。第2の実験において使用される植物がより進行した発育ステージステージ10、平均16.5cmの高さであり、一般的に第1の実験の間よりもインフィルトレーションが良好であることは既に指摘されていた。これは、効果的にTurboGFPを発現し、平均で第1の実験において得られた収率よりも2倍高いバイオマスの1単位あたりのTurboGFPの高い収率で各々の植物について回収された葉の数によって反映された。伸長した葉のみがこの方法でインフィルトレーションすることができ、他の方法によるよりも全体として少ないインフィルトレーションした葉をもたらすので、注射器によりインフィルトレーションした植物からより少ない材料が回収されたと指摘することは重要である。定量化データ表8~10は、3.0barの過剰圧力によりインフィルトレーションした植物におけるTurboGFP発現が、注射器または真空トリトンなしでインフィルトレーションした植物におけるものとは有意に異なっていなかったことを示す。2.0~3.0barにわたる圧力値によりインフィルトレーションした植物における発現における差異は、統計的に有意ではなかった。しかしながら、有意により低いGFP発現は1.5barによりインフィルトレーションした植物において観察された。接種物への0.01のトリトンX-100の追加は、真空でインフィルトレーションした植物におけるTurboGFP蓄積の有意であるが中程度の増加1つの植物あたり<15の増加を引き起こす。2.5barでの陽圧と併用して0.01トリトンX-100を加える効果は明らかではなかった。表6。95の信頼区間による条件間の差異の分析95の信頼区間により各々のペアのスチューデントのt検定を使用して、g凍結重量あたりのμgGFPで表現されたGFP濃度に基づいたインフィルトレーション条件のグルーピング同じ文字で接続していないレベルは有意に異なる。表7。95の信頼区間による条件間の差異の分析95の信頼区間により各々のペアのスチューデントのt試験を使用して、TSPで表現されたGFP濃度に基づいたインフィルトレーション条件のグルーピング同じ文字で接続していないレベルは有意に異なる。表8。95の信頼区間による条件間の差異の分析95の信頼区間により各々のペアのスチューデントのt試験を使用して、インフィルトレーションした葉のマイクログラムGFP/g凍結重量に基づいたインフィルトレーション条件のグルーピング同じ文字で接続していないレベルは有意に異なる。表9。95の信頼区間による条件間の差異の分析95の信頼区間により各々のペアのスチューデントのt試験を使用して、1つの植物あたりのmgGFPに基づいたインフィルトレーション条件のグルーピング同じ文字で接続していないレベルは有意に異なる。表10。95の信頼区間による条件間の差異の分析95の信頼区間により各々のペアのスチューデントのt試験を使用して、TSP濃度のパーセントにおけるGFP濃度に基づいたインフィルトレーション条件のグルーピング同じ文字で接続していないレベルは有意に異なる。結論使用されるバイオマスがアグロ-インフィルトレーションのために現在使用した発育ステージステージ10、5~6週齢の植物、約15cmの高さ、よく伸長した葉および最大1つの開いた花に到達した場合、丸のままN.ベンサミアナ植物のアグロ-インフィルトレーションのための2.0~3.0barの間の過剰圧力の効率および組換えTurboGFPの一過性の発現は、バキュームインフィルトレーションの現在使用される方法のものに匹敵する。1.5bar以下の過剰圧力が使用された場合、またはインフィルトレーションのために使用された植物がより若い発育ステージすなわちステージ8であった場合、過剰圧力によるインフィルトレーションの効率は、真空によるインフィルトレーションよりも低かった。3.5barという高い陽圧の使用についての植物ストレスの目視可能な兆候に関する有害効果は、インフィルトレーション後の回収およびインキュベーションの間に観察されなかった。特注の機器を使用する可能性を考慮すると、過剰圧力が圧縮空気によってタンクへもたらされ、完全真空サイクルは平均で4~5分間とるが、インフィルトレーションそれ自体がほぼ瞬間的であるので本明細書において陽圧は10秒間維持された、過剰圧力はインフィルトレーションサイクル時間をかなり減少させる能力を有する。インフィルトレーション溶液への0.01のトリトンの追加は、2.5barの試験圧力では過剰圧力によるインフィルトレーションの効率を改善しなかった。しかしながら、バキュームインフィルトレーションの間の同じ濃度のこのデタージェントの使用は、インフィルトレーションした葉におけるGFPの発現の有意な増加を引き起こした。パートB:ニコチアナタバカムによる陽圧を使用するインフィルトレーション実施例10:手順および方法バキュームインフィルトレーションおよび陽圧を使用する本発明の方法の直接比較を3つのタバコ品種について行なった。この実験において、合計150のタバコ植物各々のタバコ品種あたり50を標準的温室条件24°Cおよび20時間の光下で発芽および成長させた。N.タバカム植物を、タバコウイルスからのサイレンシング抑制因子SoSと組み合わせて緑色蛍光タンパク質TurboGFPを含むアグロバクテリウム培養Agl1により形質転換した。バキュームインフィルトレーションは、一般に使用される条件のセット50mbar、60秒の保持時間および7つの異なる陽圧条件を使用して適用された。特に、2つの因子陽圧値[1.5~4.5bar]および圧力サイクルの数パルス[1~8]を検査し、その一方で圧力保持時間/パルスを1秒に維持して全プロセス時間を最小に維持する。インフィルトレーションした植物をインフィルトレーションの5日後に収穫し、GFP発現を定性的および定量的に分析した。GFPの定性的な推測をインフィルトレーション後に青色光下で葉を撮影することによって実行した。葉におけるGFP存在量の定量的分析を、ブルーオプティカルキット励起:490nm/放射:510~570nmによる蛍光モードにおいてモジュラスマイクロプレートリーダーTurnerBiosystemsで蛍光測定によって決定した。約80mgの葉ディスクを、すべての処理された植物について1つの植物あたり3枚の葉位置1~3から完全に伸長した葉が0であることは茎頂端分裂組織を示すからパンチャーにより回収した。単一の植物の3枚の葉からのサンプルをプールし、次いで1mLのGFP抽出緩衝液50mMトリス、1mMEDTA、100mMNaCl、0.2トリトンX-100、pH7.5の存在下において約2.5分間TissueLyserQiagen中で破砕した。10μLの上清をGFP抽出緩衝液により1:20に希釈し、蛍光を定量化した。市販のEvrogentGFPタンパク質により作製したスタンダードカーブを使用して、GFP濃度を計算した。抽出緩衝液中で1:40に希釈したGFP不含有葉の抽出物に異なる量のTurboGFP対照タンパク質TurboGFP、EvrogenFP552を加えることによって、スタンダードカーブを調製した。10.1結果各々の品種について個別の2要因ANOVAを行なって、蛍光平均値の均等性を試験し、相互作用および主効果の有意な証拠があるかどうかをチェックする。0.05のαレベル第1種の過誤についての標準的レベルのリスクについての圧力パルス相互作用の有意な証拠はないが、植物1および植物2については圧力およびパルスの主効果、および植物3については圧力主効果のみの有意な証拠があった。モデルから相互作用項を省いて付加モデルも計算したが、妥当な差異はなかった。植物1は、4.5barの圧力および8パルスのサイクルについての蛍光平均値の間で有意により高い差異を示した。シンプルANOVAを使用して、最適条件からの蛍光測定をバキューム法を使用して得られた参照測定と比較する表11を参照。p値および観察された反応値の変動量からR2および調整されたR2、表10を参照されたい、植物2について、参照との統計的に有意な差異があることが推論される。表11比較は、0.05のファミリー誤差率により第1種の過誤の率を制御して、平均値間の差異についての信頼区間を採用することによってさらに調べられる。圧力0.05真空および4.5過剰圧力の区間は両者ともエンドポイントとして0を有し、これらの差異がこの特定の事例において過剰圧力が最も良好であることが有意であると示す。表12上記の観察は定性的なGFP定量化によって確認され、それはより高い圧力および増加したパルス数がより高いGFP発現を引き起こすことを視覚的に認識することができる。図2、3および4中に示される2D等高線図は、実験と同じ範囲に関する反応等高線図において、2つの因子にわたり、予測された蛍光応答値を示したすなわち、外側の範囲の予測はない。10.2結論データは、バキューム法の使用によって得られた測定と比較して、4.5barの過剰圧力および8パルスのサイクルで、植物2についての有意に高い蛍光測定を示す。圧力およびパルスを増加させた場合、3つのN.タバカム品種は蛍光測定の増加を示し、このことは、圧力および圧力サイクル数を増加させることがインフィルトレーション効率を改善するという結論を導く。"