"核酸および夾雑物質を含む生物学的サンプルから、好ましくはDNAを含む核酸を単離および精製するための方法であって、該方法は、1.該サンプルを、陰イオン界面活性剤イオンの供給源を含むが、キレート剤も錯化剤も本質的に含まない、溶解バッファーと混合するステップ、2.ステップ1において得られた混合物をインキュベートして、DNA、RNA、およびタンパク質を含む溶解産物を得るステップ、3.必要に応じて、該溶解産物に存在する該RNAを崩壊させるステップ、4.Rb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物を含む群、好ましくはRb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、アルカリ金属の一価イオンおよび/またはアルカリ土類金属の二価イオンを含む溶液を、該溶解産物に加えることにより、好ましくは沈殿させることによって、該溶解産物から該界面活性剤イオンを除去するステップ、5.好ましくはサイズ排除クロマトグラフィーによって、該核酸を、沈殿物および該溶解産物に存在するさらなる夾雑物質、少なくとも最後に言及したものから分離して、精製された核酸含有溶出液を得るステップを含む、方法。緩衝化物質、H2SO4、および陰イオン界面活性剤イオンの供給源を含む溶解バッファーであって、ここで該バッファーは、7.5~10のpH、好ましくは8~9のpH、および最も好ましくは8.5のpHを有し、好ましくは、EDTAおよびMg2イオンを本質的に含まない、溶解バッファー。プロテアーゼをさらに含む、請求項2に記載の溶解バッファー。前記バッファーにおける前記界面活性剤イオンの前記供給源の濃度が、1mmol/L~100mmol/L、好ましくは5mmol/L~75mmol/L、より好ましくは10mmol/L~50mmol/L、および最も好ましくは25mmol/Lである、請求項2または3に記載の溶解バッファー。前記バッファーにおける前記緩衝化物質の濃度が、1mmol/L~100mmol/L、好ましくは5mmol/L~75mmol/L、より好ましくは10mmol/L~50mmol/L、および最も好ましくは25mmol/Lである、請求項2~4のいずれかに記載の溶解バッファー。前記緩衝化物質対前記界面活性剤イオンの前記供給源の分子比が、3:1~1:3の範囲、好ましくは2:1~1:2の範囲、より好ましくは1.2:1~1:1.2の範囲、および最も好ましくは1:1である、請求項2~5のいずれかに記載の溶解バッファー。前記バッファーにおけるCl-イオンの濃度が、10mmol/L未満、好ましくは1mmol/L未満、より好ましくは0.1mmol/L未満である、請求項2~6のいずれかに記載の溶解バッファー。細胞含有生物学的サンプルにおける細胞を溶解する方法であって、該方法は、1.該サンプルを請求項2~7のいずれかに記載の溶解バッファーと混合するステップ、2.ステップ1において得られた混合物をインキュベートして、少なくともDNA、RNA、およびタンパク質を含む溶解産物を得るステップ、を含む、方法。前記溶解産物に含まれる前記RNAを崩壊させるステップをさらに含む、請求項8に記載の方法。前記混合物をインキュベートして、溶解産物を得るステップ、および前記サンプルから前記RNAを崩壊させるステップが、該混合物を、60°Cより上、好ましくは60°C~70°C、より好ましくは61°C~65°C、および最も好ましくは62°Cの温度まで加熱することによる、単一ステップにおいて実施される、請求項1または9に記載の方法。前記混合物が、10分間~80分間、好ましくは15分間~60分間、より好ましくは20分間~50分間、および最も好ましくは30分間~45分間加熱される、請求項10に記載の方法。20μL~150μL、好ましくは30μL~120μL、より好ましくは50μL~100μL、および最も好ましくは80μLの溶解バッファー体積が、10mgのサンプル組織の溶解のために使用される、請求項1または請求項8~11のいずれかに記載の方法。前記サンプルが、細胞含有生物学的サンプルであり、好ましくは、新鮮または凍結された組織、血液、およびグラム陰性細菌を含む群から選択される、請求項1または請求項8~12に記載の方法。前記組織が、哺乳類の組織、好ましくはヒトの組織である、請求項13に記載の方法。好ましくはゲノムDNAを含む核酸の単離および精製のためのキットであって、該キットは、1.請求項2~7のいずれかに記載の溶解バッファー、2.使用者によって溶解されるべき水溶性アルカリ土類金属塩の形態で、または使用者によって希釈されるべきストック溶液として、もしくはすぐに使える溶液としてのいずれかで、Rb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物を含む群、好ましくはRb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、アルカリ金属の一価イオンおよび/またはアルカリ土類金属の二価イオンの供給源、3.必要に応じて、夾雑物質から核酸、好ましくはゲノムDNAをゲル濾過クロマトグラフィーによって精製するためのクロマトグラフィーデバイスであって、少なくとも1つのクロマトグラフィーユニットを含み、該ユニットは、1入り口および出口を有する中空本体であって、好ましくはゲルベッドを形成する、サイズ排除の特性を提供する固体マトリックスを含む、中空本体、2該固体マトリックスを該クロマトグラフィーユニット内に保持するように、該出口と該固体マトリックスとの間に置かれる、有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜、3非有孔の環であって、該有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜と該マトリックスとの間に置かれて、該フリット、フィルター、フリース、または膜の外側領域を塞いで、移動相が該マトリックスを通ることなく該フリット、フィルター、フリース、または膜に入ることを防ぐ、非有孔の環、4必要に応じて、該クロマトグラフィーユニットの該入り口および/または出口を塞ぐための少なくとも1つの取り外し可能な閉鎖デバイス、および5必要に応じて、該マトリックスを通過後の該移動相溶出液を収集するための少なくとも1つの収集管を含み、ここで該固体マトリックスは、150bp~500bp、好ましくは200bp~400bp、および最も好ましくは250bp~300bpのサイズ排除限界を有するゲル形成ポリマーである、クロマトグラフィーデバイス、ならびに4.必要に応じて、該溶出液からの1つまたはそれより多くの標的核酸の直接増幅のためのプライマー、を含む、キット。従って、本発明の目的は、細胞含有生物学的サンプルから、特にDNAを含む、核酸を単離および精製するための方法であって、ここで夾雑物質例えば、タンパク質、特にヌクレアーゼ、および他の細胞構成要素から精製された核酸を単離するのに必要とされるステップの数は、公知の方法と比較して低減されており、その一方、さらに、PCRのような技術による直接的なその後の分析に適した、高品質のDNAを保証する、方法を提供することである。高品質の核酸、および特にさらに高品質の精製されたDNA、好ましいpreferredゲノムDNAが、少なくともDNA、RNA、およびタンパク質を含む生物学的サンプルから、好ましくはゲノムDNAを含む核酸を単離および精製するための方法によって、多様な生物学的サンプルから得られ得ることが、今や驚くべきことに見出されており、その方法は、1.上記サンプルを、陰イオン界面活性剤を含むが、好ましくはキレート剤も錯化剤も本質的に含まない、溶解バッファーと混合するステップ、2.ステップ1において得られた混合物をインキュベートして、少なくともDNA、RNA、およびタンパク質を含む溶解産物を得るステップ、3.必要に応じて、上記溶解産物に存在するRNAを崩壊させるステップ、4.好ましくはRb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物を含む群、好ましくはRb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、アルカリ金属の一価イオンおよび/またはアルカリ土類金属の二価イオンを含む溶液を、上記溶解産物に加えることによって、好ましくは上記溶解産物から界面活性剤イオンを沈殿させるステップ、5.沈殿物および上記溶解産物に存在するさらなる夾雑物質から核酸を分離するステップであって、ここで少なくとも上記さらなる夾雑物質は、サイズ排除クロマトグラフィーによって、好ましくは分離される、ステップ、を含む。上記沈殿物は、サイズ排除クロマトグラフィーまたはゲル濾過クロマトグラフィー以外の任意の他の手順によって除去され得るが、また、上記夾雑物質とともに、上記ゲル濾過クロマトグラフィーによって除去され得る。上記沈殿物が、任意の他の手順によって除去される場合、液体残余例えば、遠心分離後の上清または濾過後の溶出液は、好ましくは、ゲル濾過クロマトグラフィーサイズ排除クロマトグラフィーSECによってさらに精製される。サイズ排除クロマトグラフィーからの溶出液として、上記核酸は得られる。上記核酸、特に上記DNAは、ステップ2~5の全ての間、本質的に溶液に残る。さらに、全手順の間にキレート剤も錯化剤も上記サンプルに全く加えられないことが好ましい。このことは特に、本手順の間に上記サンプルに加えられるどの溶液も、キレート剤も錯化剤も含まないことが好ましいことを意味する。本発明の方法を用いて、高度に精製されたDNAは、例えば、わずか約45分間30分間の溶解、10分間の沈殿、3分間の、カラムを前もって回転させるステップ、およびクロマトグラフィーによる分離自体のための3分間で、組織サンプルから得られ得、他方、代表的に、例えば、QIAampキットQIAGEN,Hilden,Germanyを用いた同じ量の組織の溶解および精製には、約2.5時間が必要である。本発明の方法は、ともかく、細胞夾雑物質から精製された、DNAを含む精製された核酸を提供する。特に、使用される条件およびステップに依存して、DNAおよびRNAの混合物を得ることができるか、またはRNAからも分離された高度に精製されたDNAが調製され得る。以下において、用語DNAが使用される場合、DNA含有の精製された核酸サンプルは、RNAを含むか、またはRNAからも分離されるかのいずれかを意味する。好ましくは、上記方法の条件により、本質的にRNAを含まない、高度に精製されたDNAをもたらす。UV/Vis分光法、ゲル電気泳動、伝導度測定法、HPLC分析、PCRおよびさらなるアッセイによって判定されるような純度および収量に関して、本発明の方法によって単離されたDNAの質および純度は、ベンチスケールの精製のための当該分野の方法例えば、非常に好結果のQIAamp技術QIAGEN,Hilden,Germanyなどによって得られるDNAの質および純度に等しいか、または多くの場合、それよりもさらに優れている。さらに、本発明の方法によって得られるDNA含有溶出液は、長期保存のために凍結され得るか、または上記溶出液から上記DNAを単離するための任意の追加のステップの必要なく、クロマトグラフィー後すぐに、定量リアルタイムPCRqRT-PCR、およびPCRなどのような後の適用において処理され得る。上記DNAは、精製プロセスの間、本質的に溶液に残り、有機溶媒例えば、エタノールなどの添加によって沈殿することも、固体マトリックス例えば、シリカ膜または陰イオン交換樹脂に収着することも結合することもないので、本発明の方法は、当該分野から公知である、DNAを単離および精製するための方法よりもずっと迅速である。さらに、本発明の方法は、完全に自動化され得る。原則として、全ての種類のデオキシリボ核酸DNAは、本発明の方法を用いて、多種多様な生物学的サンプルから単離され得、それには合成の、遺伝子操作された、または天然に存在する一本鎖もしくは二本鎖のDNA、デオキシリボヌクレオチドのオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチド、制限エンドヌクレアーゼを用いてDNAを一部消化することによって得られるDNAのフラグメント、ミトコンドリアDNA、プラスミドDNA、ならびにメタゲノムmetagenomicDNAが挙げられ、それらは、小生活圏または群集において見出される全ての微生物から得られるDNA全体を表す。好ましくは、本発明の方法は、ゲノムDNAを単離および精製するために使用され、このゲノムDNAは、プラスミドDNA、制限エンドヌクレアーゼの作用によって一部消化されるDNA、およびメタゲノムDNAと対照的に、本発明の関連において、1つの単一生物から得られる高分子量DNAであって、この生物の遺伝情報全体を含むものである。この好ましい実施形態において、精製された高分子量DNAが得られるが、DNAのより小さなフラグメントは、クロマトグラフィー材料内に保持される。その高分子量および大きなサイズに起因して、無傷の高品質のゲノムDNAは、単離手順の間の機械的応力、特にせん断応力sheerstressによってか、または化学的分解および酵素による分解によってのいずれかでの比較的高いリスクのゲノムDNAの分解が存在するので、単離および精製することが難しい。他方、分解したDNAは、後の分析において、定量誤差および定性誤差の両方をもたらし得る。本発明の方法は、DNA、特にゲノムDNAを、多様な異なる生物学的サンプルから単離および精製するための、迅速で、ロバストで、安全で、扱うのが容易で、しかも穏やかな方法を提供する。本発明に従うDNAを単離および精製する方法のために、上記溶解産物中の多量の塩がさらに精製プロセスを複雑にするので、低塩溶解条件下で迅速な溶解手順を可能にする溶解バッファーが必要とされた。さらに、溶解バッファーの他の成分がまた、本発明に従う精製手順のその後のステップにも、続く後の適用にも干渉しないこと、またはシンプルで迅速な精製ステップによって、潜在的に干渉する成分が除去され得、他方、本発明の方法において、DNAが、本質的に溶液に残ることが必要であった。界面活性剤イオンを提供する陰イオン界面活性剤、好ましくは硫酸イオンの供給源を提供する陰イオン界面活性剤、最も好ましくはドデシル硫酸イオンDS-を含むが、好ましくはキレート剤も錯化剤も本質的に含まない、新しい溶解バッファーを用いることによって、生物学的サンプルの迅速だが穏やかな溶解が達成され得ることが、驚くべきことに見出されている。本発明に従って、溶解バッファーは、細胞の細胞膜を破壊および/または壊すための活性成分例えば、洗剤を含む水性溶液であり、細胞内成分例えば、DNA、RNA、タンパク質、脂質、代謝産物などが溶液中に放出されることを引き起こす。上記細胞内成分を含む溶液は、溶解産物と呼ばれる。従って、本発明のさらなる目的は、緩衝化物質、H2SO4、および陰イオン界面活性剤を含む溶解バッファーであって、ここで上記バッファーは、7.5~10のpH、好ましくは8~9のpH、および最も好ましくは8.5のpHを有し、好ましくは、キレート剤、錯化剤、Mg2イオンのいずれも本質的に含まない。本発明のバッファーは、低塩溶解条件下で、サンプル材料の迅速な溶解を可能にする。本発明に関して、用語低塩条件は、低張条件を指し、それは、上記バッファー溶液における総イオン濃度が、溶解されるべき細胞内の総イオン濃度よりも低いことを意味する。NaClの場合、例えば、0.9重量未満のNaCl約310μmol/Lの溶解したイオンに相当する約155mmolのNaClを含む水性溶液は低張である。幾分多量の固体物質を含むサンプル例えば、組織サンプルでさえ、例えば、56°Cで40分未満以内に通常完全に溶解する。原則として、溶解は、45°C~70°Cの範囲に及ぶ温度、好ましくは50°C~68°Cの範囲に及ぶ温度、および最も好ましくは62°Cで実施され得る。本発明の溶解バッファーは、幾分低量の塩を含み、好ましくはPCR反応のポリメラーゼのための補因子として必要である二価イオンに対するキレート剤も錯化剤も本質的に含まず、上記溶解バッファーのpHは、PCR反応のための最適pH範囲内に入るので、本発明の溶解バッファーを用いて得られる溶解産物は、後の適用例えば、qRT-PCRなどにおいて直接使用され得る。PCR反応において必要であるポリメラーゼ酵素の補因子として必要である、二価イオン例えば、Mg2イオンに対するキレート剤であるEDTAを一般に含む、当該分野から公知である溶解バッファーを用いることは、通常可能ではない。本発明に従う、適切な陰イオン界面活性剤は、例えば、スルフェートsufate、スルホネート、およびカルボキシレート、好ましくは、アルキルスルフェート脂肪アルコールスルフェート、アルカンスルホネート、アルキルベンゼンスルホネート、およびアルキルカルボキシレートである。特に好ましくは、ドデシル硫酸イオンDS-と同様の沈殿挙動を示す界面活性剤イオンを提供する界面活性剤であり、より好ましくは、硫酸イオンを提供する界面活性剤であり、そして最も好ましくは、ドデシル硫酸イオンの供給源を提供する界面活性剤である。一旦水に溶解するとドデシル硫酸イオンH3CCH211SO4-を溶液に放出する任意の化合物が、ドデシル硫酸イオンの供給源として使用され得る。ドデシル硫酸イオンの供給源は、好ましくは、ドデシル硫酸ナトリウムSDS、ドデシル硫酸アンモニウム、およびドデシル硫酸リチウムを含む群から選択され、そして最も好ましくは、ドデシル硫酸ナトリウムである。本発明に従って、上記溶解バッファーは、好ましくはキレート剤も錯化剤も本質的に含まない。このような剤についての非限定的な例は、EDTA、EGTA、EDDSエチレンジアミン二酢酸、NTAニトリロ三酢酸、グルコン酸、イソアスコルビン酸、酒石酸、クエン酸、イミノジスクシネート、トリエタノールアミンである。本発明に関して、溶解バッファーは、10mg/L未満、好ましくは1mg/L未満、より好ましくは0.1mg/L未満、さらにより好ましくは0.001mg/L未満を含む場合、および最も好ましくは、本発明の溶解バッファーがEDTAを全く含まない0mg/L場合、キレート化合物も錯化化合物も、例えばEDTAを、本質的に含まない。好ましい実施形態において、本発明の溶解バッファーは、プロテアーゼと組み合わせて使用される。時折プロテイナーゼと称されるプロテアーゼは、ポリペプチド鎖タンパク質におけるアミノ酸を繋ぐペプチド結合の加水分解開裂を触媒する酵素である。適切なプロテアーゼは、当該分野から公知であり、それにはQIAGENプロテイナーゼKまたはQIAGENプロテアーゼQIAGEN,Hilden,Germanyが挙げられるが、それらに限定されない。幾分高価なプロテイナーゼKは、精製手順の結果を損なうことなく、より廉価なQIAGENプロテアーゼと置き換えられ得ることが見出されている。上記プロテアーゼは、供給されたまますぐに使える溶解バッファー溶液中にすでに存在し得るか、または生物学的サンプルを上記溶解バッファーと混合した後に使用者によってその混合物に加えられ得る。上記バッファーにおける陰イオン界面活性剤の濃度は、溶解されるべきサンプルに依存する。上記バッファーにおける界面活性剤イオン、好ましくは硫酸イオン、の供給源の濃度は、好ましくは1mmol/L~100mmol/L、より好ましくは5mmol/L~75mmol/L、さらにより好ましくは10mmol/L~50mmol/L、および最も好ましくは25mmol/Lである。上記緩衝化物質は、少なくとも7.5のpHを提供する任意の適切な緩衝化物質例えば、TRIS、HEPES、HPPS、または任意のアンモニアバッファーなどであり得る。好ましい緩衝化物質は、TRISである。上記バッファーにおける上記緩衝化物質の濃度は、好ましくは1mmol/L~100mmol/Lの範囲、より好ましくは5mmol/L~75mmol/Lの範囲、さらにより好ましくは10mmol/L~50mmol/Lの範囲、および最も好ましくは25mmol/Lである。上記バッファーにおける上記緩衝化物質例えば、TRIS対上記陰イオン界面活性剤、特に硫酸イオンの供給源の分子比は、好ましくは3:1~1:3の範囲、より好ましくは2:1~1:2の範囲、さらにより好ましくは1.2:1~1:1.2の範囲、および最も好ましくは1:1である。多量の液体化合物を含むサンプル例えば、血液が溶解される場合、好ましくは2倍濃縮バッファー2×が使用され、ここで上記陰イオン界面活性剤および上記緩衝化物質それぞれの濃度は、上記サンプルの液体によって混合物の希釈度が高くなりすぎるのを避けるために、それぞれ2mmol/L~200mmol/L、より好ましくは10mmol/L~150mmol/L、さらにより好ましくは20mmol/L~100mmol/L、および最も好ましくは50mmol/Lである。上記溶解バッファーはまた、例えば、10倍濃度の、上記陰イオン界面活性剤および上記緩衝化物質を含み、使用前に使用者によって希釈されるべき濃縮物の形態10×溶解バッファーで提供され得る。本発明のバッファー組成物は、安定剤の存在なしでさえ8ヶ月超の間、室温で安定であるが、本発明の溶解バッファーは、当業者に周知である、安定剤例えば、アジ化ナトリウム、可溶化剤、または同様のものを含む群から選択されるさらなる活性成分を含み得る。H2SO4は、硫酸塩例えば、SrSO4の幾分低い溶解度に起因して、沈殿溶液precipitatingsolutionからのあらゆる過剰なアルカリ金属イオンまたはアルカリ土類金属イオンの有効な除去を確実にするために、上記バッファー組成物中で酸性化合物として使用される。上記バッファーにおける塩素イオンの濃度は、好ましくは10mmol/L未満、より好ましくは1mmol/L未満、さらにより好ましくは0.1mmol/L未満である。本発明は、細胞含有生物学的サンプルにおける細胞を溶解する方法をさらに提供し、この方法は、1.上記サンプルを本発明に従う溶解バッファーと混合するステップ、2.ステップ1において得られた混合物をインキュベートして、DNA、RNA、およびタンパク質を含む溶解産物を得るステップ、を含む。好ましくは、溶解前にも溶解の間にも、キレート剤、錯化剤のいずれも上記サンプルに加えない。本発明に従って、上記溶解産物に存在するRNAは、必要に応じて、上記サンプルを溶解させた後に崩壊させられ得る。本発明に関して、RNAを崩壊させるステップは、上記溶解産物中に溶解したRNAの量を低減および/またはRNAを不活化および/またはDNAからのその分離を容易にする任意の方法を含み、それには、RNAを、部分的もしくは完全にのいずれかで、熱によって、化学的に、および/もしくは酵素によって加水分解する、消化する、形質転換する、そして/もしくは分解する、ならびに/または例えば、沈殿手順、収着手順、もしくは同様のものによって、上記溶液からRNAもしくはそのフラグメントを除去する、任意の方法が挙げられる。上記サンプルにおけるRNAを崩壊させるためのシンプルな方法は、崩壊剤のさらなる添加なく、上記サンプルを少なくとも60°Cの温度まで加熱することによるものである。RNAが上記サンプル中に残される場合、上記サンプルの加熱は、ほんの58°Cまで、好ましくは56°Cまでが推奨される。高度に精製されたDNAのための好ましい実施形態において、上記生物学的サンプルと上記溶解バッファーとの混合物をインキュベートするステップ、および上記溶解産物に存在するRNAを崩壊させる随意選択のステップは、好ましくは上記混合物を、60°Cと等しい、または60°Cより上、好ましくは60°C~70°C、より好ましくは61°C~65°C、および最も好ましくは62°Cの温度まで加熱することによる、単一ステップにおいて実施される。完全な溶解およびRNAの崩壊を確実にするために、サンプルが加熱されなければならない期間は、処理されているサンプルの種類および量に依存する。好ましくは、上記混合物は、10分間分間min~80分間分間min、より好ましくは15分間~60分間、さらにより好ましくは20分間~50分間、および最も好ましくは30分間~45分間加熱される。溶解ステップの間、または溶解ステップ後に温度を80°Cまで上昇させることにより、上記サンプル中のタンパク質例えば、酵素を、所望されるDNA、特にゲノムDNAに影響することなく、さらに変性させるdenaturate。この場合、もちろんRNAは得られない。特定の量の細胞含有サンプル材料を溶解するために使用される溶解バッファーの体積は、処理されている上記サンプル材料の種類およびサイズに依存する。組織サンプルの場合、例えば、大きな組織サンプルを、そのサンプルと上記溶解バッファーとを混合する前に、約4mm3以下の片に切断することが有用であり得る。好ましくは20μL~150μL、より好ましくは30μL~120μL、さらにより好ましくは50μL~100μL、および最も好ましくは80μLの溶解バッファー体積が、10mgのサンプル組織の溶解のために使用される。本発明の方法を用いて、10mgのサンプルから得ることができるDNAの量は、上記サンプル例えば、その種類および年数に依存する。本発明の方法を用いて、通常約5μg~70μgのゲノムDNAが10mgの異なる組織サンプルから得られる。約10mgの量は、分子診断において一般的に分析されるサンプルの量である。しかし、本発明の方法を用いて、例えば、それぞれ、g範囲またはμg範囲~ng範囲での、より多くの量、またはより少ない量のサンプル材料を処理することも可能であることが理解されるべきである。この場合、試薬、バッファー、固体マトリックスの量、ならびに上記クロマトグラフィーデバイスの寸法は、拡大するか、または縮小することによって調整されなければならず、そのことは当業者に周知である。本発明の方法を用いて、多種多様な生物学的サンプル由来の細胞は、それらの核酸、好ましくはゲノムDNAを精製するために、溶解され、さらに処理され得、上記生物学的サンプルには動物およびヒトの組織例えば、肝臓、脾臓、肺、心臓、脳、腎臓など、動物およびヒトの血液、動物およびヒトの細胞の細胞培養物、動物およびヒトの骨髄、流体、痰、または精子、酵母、細菌、昆虫、植物、ならびにげっ歯類の尾が挙げられるが、それらに限定されない。好ましくは、上記サンプルは、動物およびヒトが起源の細胞含有生物学的サンプルである。別の好ましい実施形態において、上記サンプルは、グラム陰性細菌を含むか、またはグラム陰性細菌からなる。上記サンプルは、その天然の環境から取得された後すぐに溶解されていても新鮮なサンプル、溶解される前に、凍結させることによってか、あるいは化学的安定化剤の作用例えば、ホルマリン固定およびパラフィン包埋FFPE組織などまたはシトレートもしくはヘパリンを含む血液安定化剤の作用によって、安定化されていてもよい。さらにより好ましくは、上記サンプルは、新鮮または凍結された組織および血液を含む群、最も好ましくは哺乳類の組織および血液、から選択される。すでに上で説明したように、上記溶解バッファーは、好ましくは、いかなるキレート剤も本質的に含まず、そのpH値は、PCR反応のための最適範囲内に入る。従って、上に記載されるように得られた溶解産物は、さらなる精製なく、PCR反応において直接使用され得る。この場合、上記溶解産物における幾分高濃度の上記界面活性剤イオン例えば、上記ドデシル硫酸イオンに起因して、上記溶解産物の希釈が必要である。予備実験において、312μmol/Lより上のSDSの濃度が、PCR反応を強く阻害することが見出されているので、本発明の単離および精製手順について、ドデシル硫酸イオンおよび核酸を含むサンプルからドデシル硫酸イオンを選択的に除去するための方法であって、ここで、上記核酸、特にDNAは、本質的に溶液に残る、方法が大いに好ましい。この理由のために、上記サンプルを溶解、および必要に応じて、その溶解産物に存在するRNAを崩壊させた後、さらなるステップにおいて、ドデシル硫酸イオンのような界面活性剤イオンが、好ましくは沈殿によって上記溶解産物から除去されることが特に好ましい。好ましくは、本願と同じ出願日を有する同じ出願人の、表題methodforprecipitatinganionicsurfactantionsinthepresenceofnucleicacidsを有する同時係属中の出願に記載されるように、Rb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物を含む群、好ましくはRb、Cs、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、アルカリ金属の一価イオンおよび/またはアルカリ土類金属の二価イオンそれは、ドデシル硫酸イオンとの不溶性の沈殿物を形成するを含む沈殿溶液が上記溶解産物に加えられる。好ましい実施形態において、上記沈殿溶液は、アルカリ土類金属イオンを含み、特に好ましい実施形態において、上記沈殿溶液は、Sr2イオンを含む。本発明に関して、沈殿させるステップという用語は、溶解したDNAおよびドデシル硫酸イオンを含む溶液に、上記ドデシル硫酸イオンと相互作用もしくは反応して、得られた溶液において不溶性である化合物を形成し、従って上記溶液から沈殿させる、物質または物質の混合物を加えるステップとして理解される。好ましくは、上記DNAは、このステップの間、本質的に溶液に残る。上記DNAは次に、沈殿物から、および上記溶解産物に存在し得るさらなる夾雑物質から分離され、ここで少なくとも上記さらなる夾雑物質が、好ましくはサイズ排除クロマトグラフィーによって、分離されて、精製されたDNA含有溶出液が得られる。上記沈殿物は、サイズ排除クロマトグラフィーまたはゲル濾過クロマトグラフィー以外の任意の他の手順によって除去され得るが、また、上記ゲル濾過クロマトグラフィーによって、上記夾雑物質とともに除去され得る。上記沈殿物が、任意の他の手順によって除去される場合、液体残余例えば、遠心分離後の上清または濾過後の溶出液は、好ましくは、ゲル濾過クロマトグラフィーSECによってさらに精製される。上記サイズ排除クロマトグラフィーからの溶出液として、その核酸は得られる。界面活性剤イオン例えば、上記ドデシル硫酸イオンとアルカリ金属またはアルカリ土類金属の上記イオンとの相互作用から形成される固体物質、および上記溶解バッファーに不溶性であるさらなる固体物質を含む上記沈殿物例えば、複合体化界面活性剤イオンまたはその誘導体、およびタンパク質、ならびに沈殿したタンパク質などは、ゲル濾過ステップの前またはゲル濾過において除去される。本発明のさらなる利点は、DNA含有溶液を精製するためのサイズ排除クロマトグラフィーの使用に起因して、固体物質だけではなく、溶解した夾雑物質例えば、生物学的サンプルに代表的に存在する、タンパク質、必要に応じてRNAの残留フラグメント、代謝産物、脂質、および他の成分も、溶解したDNAから分離されることである。界面活性剤イオン、好ましくは上記ドデシル硫酸イオンを選択的に沈殿させるステップは:本願と同じ出願日を有する同じ出願人の、表題methodforprecipitatinganionicsurfactantionsinthepresenceofnucleicacidsを有する同時係属中の出願に記載されるように、1.Rb、Cs、Ca2、Sr2、およびBa2、もしくはそれらの混合物を含む群、好ましくはRb、Cs、Ca2、Sr2、およびBa2、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、アルカリ金属の一価イオンおよび/またはアルカリ土類金属の二価イオンを含む溶液沈殿溶液を液体サンプルに加えるステップ、ならびに2.必要に応じて、上記液体サンプルおよび上記沈殿溶液を含む混合物をインキュベートして、沈殿物の形成の完了を確実にするステップ、によって好ましくは実施される。好ましい実施形態において、上記沈殿溶液は、アルカリ土類金属の二価イオンを含み、特に好ましい実施形態においてSr2イオンを含む。上記沈殿溶液は、好ましくは、水に溶解するとアルカリ金属の一価イオンおよび/またはアルカリ土類金属の二価イオンを提供する、アルカリ金属および/またはアルカリ土類金属の水溶性の塩例えば、RbCl、SrCl2、CaCl2、またはBaCl2などを含む。これらのイオンは、水に、中性またはアルカリ性のpHの水性溶液に、または水性バッファーに不溶性の、上記界面活性剤イオン、特に好ましくは上記ドデシル硫酸イオン、との化合物を形成し、それは、沈殿物の形成をもたらし、従って溶解した界面活性剤イオンを上記溶液から除去する。上記沈殿溶液における一価および二価の金属イオンの濃度は、0.1mol/L~10mol/Lの範囲、好ましくは0.5mol/L~5mol/Lの範囲、より好ましくは0.75mol/L~2.5mol/Lの範囲、および最も好ましくは0.9mol/L~1.2mol/Lの範囲にあるのが好ましい。上記沈殿溶液におけるこのような幾分高濃度の上記イオンは、少ない体積の添加を可能にし、従ってサンプル溶液の高すぎる希釈度を避けるために好ましい。特定の体積のサンプル溶液溶解産物に加えられる沈殿溶液の体積は、上記サンプル溶液における上記界面活性剤イオンの濃度に依存する。好ましい実施形態において、サンプル溶液対沈殿溶液の体積比は、4:1~12:1の範囲、好ましくは5:1~11:1の範囲、より好ましくは6:1~10:1の範囲、および最も好ましくは7:1~9:1の範囲にある。例えば、80μLのサンプル溶液が、本発明に従って、サンプルを溶解させることによって得られる場合、次いで、ドデシル硫酸イオンのような上記界面活性剤イオンを沈殿させるために、好ましくは1Mの沈殿溶液10μLが加えられる。さらなる好ましい実施形態において、上記混合物は、-10°C~10°Cで、好ましくは-5°C~5°Cで、より好ましくは-2.5°C~2.5°Cで、および最も好ましくは-1°C~1°Cでインキュベートされる。インキュベーション温度が低ければ低いほど、より迅速に沈殿が完了する。しかし、インキュベーション温度は、全混合物の凝固を避けるために上記混合物の凝固点より上であるべきである。特定のサンプル混合物の凝固点は、その混合物に溶解した塩の量に依存し、そのことは当業者に周知であり、そしてインキュベーション温度は、それに応じて選択される。インキュベートするステップは、好ましくは、3分間~60分間、好ましくは5分間~30分間、および最も好ましくは約10分間実施される。好ましくは、混合物は、氷浴において所定の時間の間、静置したままにしておき、それにより、沈殿物の形成の完了を確実にする。好ましい実施形態において、形成された上記沈殿物は次に、濾過によって、好ましくはゲル濾過クロマトグラフィーによって除去され得る。上記沈殿物および上記溶解産物に存在するさらなる夾雑物質からDNAを分離するステップについて、好ましくは、本願と同じ出願日を有する同じ出願人の、表題chromatographicdeviceandmethodforisolatingandpurifyingnucleicacidsを有する同時係属中の出願に記載されるゲル濾過クロマトグラフィーによって、夾雑物質からDNA、好ましくはゲノムDNAを精製するためのクロマトグラフィーデバイスが使用され、上記デバイスは、少なくとも1つのクロマトグラフィーユニットを含み、上記ユニットは、1.入り口および出口を有する中空本体であって、好ましくはゲルベッドを形成する、サイズ排除の特性を提供する固体マトリックスを含む、中空本体;2.好ましくは任意のサイズの核酸が通るのを可能にし、上記固体マトリックスを上記クロマトグラフィーユニット内に保持するように、上記出口と上記固体マトリックスとの間に置かれる、有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜、3.非有孔の環であって、上記有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜と上記マトリックスとの間に置かれて、上記フリット、フィルター、フリース、または膜の外側領域を塞いで、移動相が上記マトリックスを通ることなく上記フリットに入ることを防ぐ、非有孔の環、4.必要に応じて、上記クロマトグラフィーユニットの上記入り口および/または出口を塞ぐための少なくとも1つの取り外し可能な閉鎖デバイスclosingdevice、および5.必要に応じて、上記マトリックスを通過後の移動相溶出液を収集するための少なくとも1つの収集管を含み、ここで上記固体マトリックスは、好ましい実施形態において、150塩基対bp~500塩基対bp、好ましくは200bp~400bp、および最も好ましくは250bp~300bpのサイズ排除限界sizeexclusionlimitを有するゲル形成ポリマーである。好ましくは、上記ゲル形成ポリマーは、10KDa~10000KDa、より好ましくは20kDa~8000kDaの相当するサイズ排除限界を有する。このデバイスを用いて、DNAのクロマトグラフィーによる精製のために一般的に使用される他のクロマトグラフィーの方法と対照的に、DNAではなく夾雑物質が、上記固体マトリックスに収着され、従って、1つの単一のすすぐrinsingステップにおいて、クロマトグラフィーによる精製が実施されるのを可能にするネガティブクロマトグラフィーは可能である。従って、上記ステップは、単一ステップクロマトグラフィーと称され得る。このようなクロマトグラフィーデバイスは、低分子量の夾雑物質を除去することができるだけではなく、固体物質のための、特にドデシル硫酸イオンおよび一価アルカリ金属イオンまたは二価アルカリ土類金属イオンから形成される沈殿物のための、デプスフィルターとしても働くことができる。上記沈殿物は、上記ゲルベッドには入らず、その上部表面上に残る。固体物質は通常、ゲルの孔を詰まらせるclock傾向にあり、従ってさらなるクロマトグラフィーを阻止するか、または妨げるので、このことは、さらにもっと驚くべきことである。本願と同じ出願日を有する同じ出願人の、表題chromatographicdeviceandmethodforisolatingandpurifyingnucleicacidsを有する同時係属中の出願に記載される上記クロマトグラフィーデバイスを本発明の方法と組み合わせて用いて、残留のドデシル硫酸イオンを本質的に含まない、高度に精製された脱塩DNA、特にgDNA、を含む溶解産物が得られ得る。上記クロマトグラフィーデバイスは、好ましくはサイズ排除クロマトグラフィーSECに使用される。本発明において、好ましくは水ベースの移動相例えば、水、水性有機溶媒、または水性バッファー/溶液が移動相として使用される。この場合、SECはまた、ゲル濾過クロマトグラフィーと称される。サイズ排除クロマトグラフィーは、クロマトグラフィーの方法であり、ここで分子は、それらのサイズに基づいて、より正確には、それらの流体力学上の体積に基づいて分離される。一般的に、水性媒体例えば、デキストラン、アガロース、ポリアクリルアミド、またはそれらの混合物中に懸濁されるとき、ゲルベッドを形成することができる固体マトリックスは、バッファー中に懸濁され、ガラス、プラスチック、テフロン登録商標、または移動相にも検体にも反応しない任意の他の材料で作られたカラムの中空本体に詰められる。精製されるべきサンプルは、次に上記ゲルベッドの上部表面の中央にのせられ、重力によって、または遠心分離もしくは圧力によって強いられるかのいずれかでゲルを通過する。本発明に従って、好ましくは、カラムを下って移動相が移動するように遠心分離力がかけられ、ここで上記カラムは、遠心分離機において回転させられるいわゆるスピンカラム技術。上記ゲルにおける架橋に起因して、特定のサイズの孔が上記ゲルの内部に存在する。低分子は、上記孔を透過することができ、従って、カラムを下って通るにつれて保持されて、ゲルベッドをよりゆっくりと移動するが、他方、大きな分子は、上記孔を透過できず、より速く上記カラムを下って移動する。上記カラムを通過後、精製された検体を含む移動相今や溶出液と称されるは、次に、上記カラムの出口で収集される。上記固体マトリックスを上記カラムの中空本体内に保持するために、有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜が、好ましくは上記カラムの出口と上記固体マトリックスとの間に置かれる。SECにおいて、サイズ排除限界は、分子量を定義し、ここで分子は、大きすぎて固定相で捕らえることができない。固体マトリックスのサイズ排除限界は、上記ゲルにおける架橋の度合いによって調整され得る。異なる程度の架橋を有するゲルベッドを形成することができる多種多様な固体マトリックスは、市販されている。ゲル濾過クロマトグラフィーにおいて、および特にスピンカラムを用いるゲル濾過クロマトグラフィーにおいてしばしば遭遇する問題は、移動相が上記カラムの内壁に沿って流れ落ちる場合があり、従って上記固体マトリックスを通ることなく上記フリットに入ることである。これは、精製されるべきサンプル溶液の全てが、ゲルベッドの平らな表面の中央に正確にのせられるとは限らないとき、または上記サンプルがのせられるのが速すぎるとき、特に高スループットの適用について言える。移動相が上記ゲルベッドに入らないとき、クロマトグラフィーによる分離は全く起こらず、汚染された溶出液が得られる。この問題を克服するために、好ましくは本発明において使用される上記クロマトグラフィーデバイスは、上記有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜と上記マトリックスとの間に置かれる非有孔の環を備えている。この環は、上記フリット、フィルター、フリース、または膜の外側領域を塞いで、従って、移動相が上記マトリックスを通ることなく上記フリットに入ることを防ぐ。さらに、上記カラム内の移動相の速度は遅くなり、従って選択性を改善する。随意選択のクロマトグラフィーデバイスは、上記クロマトグラフィーユニットの入り口および出口を塞ぐための取り外し可能な閉鎖デバイスを含み得、上記固体マトリックスは、好ましくは、水、有機溶媒と水との均一homogenous混合物、または水性バッファーを含む群から選択される溶媒中で前もって膨張させた、ゲルの形態で供給される。この場合、上記溶媒は、好ましくは、使用直前に上記クロマトグラフィーユニットからパージされ、他方、遠心分離によって、同時にマトリックスベッドを確立する前もって回転させるステップ。上記ゲル形成ポリマーは、好ましくは、デキストラン、アガロース、ポリアクリルアミド、またはそれらの混合物を含む群から選択され、そしてより好ましくは、デキストランとポリアクリルアミドとの混合物である。異なるサイズ排除限界のこのようなゲル形成ポリマーは、例えば、Sephacryl、Sephadex、またはSepharoseの商標名の下で市販されている。特に好ましい固体マトリックスは、GE-Healthcareから市販されているS-400HRSephacryl樹脂であり、これは、271bp20kDa~8000kDaに相当するのサイズ排除限界を有する球形のsphericalアリルデキストラン/N,N’-メチレンビスアクリルアミドマトリックスである。さらに適切なゲル形成ポリマーは、5.000kDaのサイズ排除限界を有する、ヒドロキシル化メタクリルポリマー、例えば、TosohBioscienceLLP前TosoHaasから入手可能であるHW65のようなメタクリルベースmethacrylicbasisを有し得る。例えば、マルチウェルプレートの形態でのここで上記マルチウェルプレートの各ウェルは、1つの別個のクロマトグラフィーユニットを含む、並行様式の複数のクロマトグラフィーユニットを含むクロマトグラフィーデバイスを用いることによって、本発明の方法を用いた、数多くの異なるサンプルの並行高スループット処理が可能である。本発明に従って、上記沈殿物および上記溶解産物に存在するさらなる夾雑物質からDNAをサイズ排除クロマトグラフィーによって分離して、精製されたDNA含有溶出液を得るステップは、好ましくは、1.上記クロマトグラフィーユニット中の上記マトリックスベッドを遠心分離によって確立するステップ前もって回転させるステップ、2.上記溶解産物を上記マトリックスベッドの上部表面の中央にのせるステップ、3.遠心分離によって上記クロマトグラフィーユニットからDNAを溶出し、同時にその溶出液を収集するステップ、を含む。ステップ2と3との間で、さらなるステップ、特に洗浄ステップ、を実施しなければならないことがないことが、特に好ましい。所望されるDNAは、上記マトリックスのゲル形成ポリマーには結合せず、溶出するので、ステップ3は、ステップ2後すぐに実施され得る。上記クロマトグラフィーユニットにおける上記マトリックスベッドの体積は、好ましくは、100μL~2mLの範囲、より好ましくは500μL~1mLの範囲、および最も好ましくは700μL~800μLである。上記クロマトグラフィーユニットにおける上記マトリックスベッドの充填レベルは、好ましくは0.5cm~2.0cmの範囲、より好ましくは1.0cm~1.5cmの範囲にある。標準的な96ウェルプレートにおいて、上記マトリックスベッドの体積は、好ましくは約0.8mLである。上記マトリックスは、好ましくは、水中での上記ゲル形成ポリマーの分散物、塩溶液例えば、0.9のNaCL、または適切なバッファー例えば、TE、TAE、PBS、または同様のバッファー、もしくは希釈したバッファーにおいて、などとして提供されるが、上記分散物は、上記ゲル形成ポリマーの、好ましくは60~90、より好ましくは70~80、および特に75を含む。使用されるマトリックスベッドの正確な体積および充填レベルは、カラムによって定義される中空本体のサイズおよび形、ならびに精製されるべきサンプルの種類および量に依存し、そのことは当業者に周知である。好ましくは、100μLまでのサンプル体積が、600μL~800μlのマトリックスベッドで詰めたカラム、または1.0cm~1.5cmの充填レベルのマトリックスベッドで詰めたカラムにのせられる。本明細書中で、前もって回転させるステップは、好ましくは、500~900×gで1分間~7分間、好ましくは700×gで2分間~5分間、および最も好ましくは700×gで3分間、上記デバイスを遠心分離することによって実施される。上記クロマトグラフィーユニットからDNAを溶出するステップは、好ましくは、500~900×gで1分間~7分間、好ましくは700×gで2分間~5分間、および最も好ましくは700×gで3分間、上記デバイスを遠心分離することによって実施される。好ましくは、適用される時間および遠心分離力は、前もって回転させるために使用される時間および力に相当するはずである上記参照のこと。本発明は、好ましくはDNAを含む核酸の単離および精製のため、より好ましくは高度に精製されたDNA、好ましくはゲノムDNAの単離のためのキットをさらに提供し、そのキットは、1.本発明に従う溶解バッファー、2.使用者によって溶解されるべき水溶性アルカリ土類金属塩の形態で、または使用者によって希釈されるべきストック溶液として、もしくはすぐに使える溶液としてのいずれかで、Rb、Cs2、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物を含む群、好ましくはRb、Cs2、Ca2、Sr2、Ba2、もしくはそれらの混合物からなる群から選択される、アルカリ金属の一価イオンおよび/またはアルカリ土類金属の二価イオンの供給源、3.必要に応じて、夾雑物質から核酸、好ましくはゲノムDNAをゲル濾過クロマトグラフィーによって精製するためのクロマトグラフィーデバイスであって、少なくとも1つのクロマトグラフィーユニットを含み、上記ユニットは、1入り口および出口を有する中空本体であって、好ましくはゲルベッドを形成する、サイズ排除の特性を提供する固体マトリックスを含む、中空本体、2上記固体マトリックスを上記クロマトグラフィーユニット内に保持するように、上記出口と上記固体マトリックスとの間に置かれる、有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜、3非有孔の環であって、上記有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜と上記マトリックスとの間に置かれて、上記フリット、フィルター、フリース、または膜の外側領域を塞いで、移動相が上記マトリックスを通ることなく上記フリットに入ることを防ぐ、非有孔の環、4必要に応じて、上記クロマトグラフィーユニットの上記入り口および/または出口を塞ぐための少なくとも1つの取り外し可能な閉鎖デバイス、および5必要に応じて、上記マトリックスを通過後の移動相溶出液を収集するための少なくとも1つの収集管を含み、ここで上記固体マトリックスは、好ましくは、150bp~500bp、好ましくは200bp~400bp、および最も好ましくは250bp~300bpのサイズ排除限界を有するゲル形成ポリマーである、クロマトグラフィーデバイス、ならびに4.必要に応じて、上記溶出液からの1つまたはそれより多くの標的核酸の直接増幅のための1つまたはそれより多くのプライマー、を含む。さらに、好ましくは、本手順を実施するための、上記キットの内容物を使用するための指示が得られる。実施例材料および一般実験手順ゲル濾過媒体をGE-HealthcareFreiburg,Germanyから得、イオン交換媒体をMerckKgaADarmstadt,Germanyから得た。そうでないと言及されない限り、分析される組織サンプルは、ラットの肝臓組織サンプルであった。gDNAの量および純度の決定:精製されたサンプル溶出液中のgDNAgDNAの収量の量を見積もるために、上記サンプルの吸光度を、260nmの波長でUV/Vis分光法によって測定した。320nmで測定されたバックグラウンド吸収値を、OD260値260nmでの光学濃度から減算し、その値にDNAの比吸光度係数specificabsorbancefactorである50、および希釈係数を掛けて、μg/μLでのgDNA濃度を得た。さらに、UV/Vis分光法をまた、得られたDNAの純度を判定するために使用した。残留固体粒子は、明瞭な吸光度ピークを示さないが、スペクトル全体において、ベースラインの上昇をもたらす。遊離ヘモグロビンは、410nmの波長で最大の吸光度を有するが、塩およびアジ化ナトリウムのような保存剤は、230nmより下の波長で吸収する。SpectramaxIIMolecularDevices,Sunnyvale,CA,USA96ウェルプレート光度計を、UV/Visスペクトルを記録するために使用した。得られたgDNAの量のより正確な決定をHPLC分析を用いて実施した。上記スペクトルにおけるgDNA含有ピークについての曲線下面積AUCをソフトウェアによって計算し、HPLC標準曲線と比較して、上記サンプル中のgDNAの量を決定した。HPLC分析をまた、VisionBioCadワークステーションPerseptiveBiosystems,Framingham,MA,USAを用いてサンプルの純度を決定するために使用した。イオン交換樹脂TMAE-FractogelSE.Merck,Darmstadt,Germanyを充填した0.83mLのPeekカラムを使用した。pH7.2に緩衝化した35容のカラム体積にわたって、CaCl2の勾配を0mmol/Lから始めて300mmol/Lまで漸増させ、1.5mL/分の流量で、上記サンプルを分析した。吸光度を260nmおよび410nmで連続的に監視した。アガロースゲル電気泳動を、2.5μLのSYBR-GreenIIを含む0.8のアガロースゲル50mLを用いて実施した。サンプルを、40分間の期間、100ボルトの電圧を用いて泳動した。上記ゲルを、BioRadまたはLTF-LabortechnikWasserburg,Germanyから市販されている装置を用いて分析した。SDS定量化:残留SDSの濃度を、96ウェル光度計内で使用されるように適合されたRusconiらの改変された手順に従って、UV/Vis分光法によって決定したRusconietal.Anal.Biochem.,2001,2951,31-37。そのアッセイは、カルボシアニン色素StainsAll4,5,4’,5’-ジベンゾ-3,3’-ジエチル-9-メチルチオカルボシアニンブロミドとSDSとの特異的な反応に基づいており、それは黄色の形成をもたらす438nmで最大の吸光度。SDSは、本実施例において、ドデシル硫酸イオンの供給源として使用されるので、溶液中のSDSの量容量モル濃度は、溶液に存在するドデシル硫酸イオンの量容量モル濃度と等しいということが理解されるべきである。上記色素のストック溶液1mL50のイソプロパノール1.0mL中1.0mgのStainsAllを1.0mLのホルムアミドおよび18mLの水で希釈して、上記色素のすぐに使える溶液を得た。上記サンプル中のSDSの量を決定するために、5μLのサンプル溶液を、マイクロタイタープレートに置き、100μLのすぐに使える溶液と混合し、そして438nmで上記プレートを読む前に、暗所で室温にて5分間インキュベートした。上記サンプル中のSDSの量を、それぞれ250μmol/L、167μmol/L、111μmol/L、74μmol/L、49μmol/L、32μmol/L、および21μmol/LのSDS濃度を含む溶液の438nmでの吸光度を記録することによって確立した較正曲線と比較することによって検索した。伝導度測定:上記サンプルにおけるイオン強度を決定するために、20°Cに較正したConsortC831ConductometerLTF-Labortechnik,Wasserburg,Germanyを用いて伝導度測定を実施した。2mLの最小限の体積が、測定に必要であるので、各サンプルの20μLのアリコートを、測定前に1980μLの水で希釈した。PCR増幅:リアルタイムPCRqRT-PCRアッセイを、Rotor-Gene2000または3000サイクラーCorbett,Sydney,Australia上で50μLの規模で、またはTaqMan7700分析器AppliedBiosystems,FosterCity,CA,USAにおいて行った。junRT-PCRアッセイについて、AppliedBiosystemsDarmstadt,Germanyからのプライマー/プローブシステムFAMに基づいて、20×JunPCRプライマー/プローブ混合物を含む市販のキットPart.No:4327113Fを、AppliedBiosystemsからの2×TaqManPCRユニバーサルマスター混合物と組み合わせて使用した。ゲノムDNA標準を、QIA-symphonyプラットフォームQIAGEN,Hilden,GermanyにおけるQIAsymphonyDNAキットを用いてラットの尾から精製し、製造者のプロトコルQIAGEN,Hilden,Germanyに従って、QIAGENチップ2500を用いて、その後の陰イオン交換クロマトグラフィーAEXによってさらに精製した。上記gDNAを、-20°Cにてアリコートで保存し、使用直前に解凍した。実施例1:異なるバッファー、異なるpHでのブタ肝臓組織の溶解以下の組成の溶解バッファーを調製した:参照バッファーA:100mmol/LのTRIS、5mmol/LのEDTA、100mmol/LのMgSO4、および100mmol/LのSDS、これをH2SO4の添加によってpH6.0に調製した;参照バッファーB:100mmol/LのTRIS、5mmol/LのEDTA、100mmol/LのMgSO4、および100mmol/LのSDS、これをH2SO4の添加によってpH8.0に調製した;本発明に従う溶解バッファー:TRIS25mmol/L、SDS25mmol/L、これをH2SO425v/vの添加によってpH8.5に調製した。全てのバッファー組成物を水性溶液として調製した。参照バッファー組成物AおよびBは、細胞含有材料を溶解するために一般的に使用される標準的なバッファー組成物を基礎としており、アルカリ性pH、および37°Cより高い温度でRNAを分解することが報告されたMg2イオンをさらに含むものであるN.G.AbouHaidarandI.G.IvanovZ.Naturforsch.1999,54c,542-548。ブタ肝臓組織のサンプル各25mgを、それぞれ500μLの参照バッファーA、参照バッファーB、および本発明に従うバッファーで、56°Cにてインキュベートした。タンパク質の枯渇を補助するために、10μLのQIAGENプロテイナーゼK2.5AU/mlQIAGEN,Hilden,Germanyを各サンプル溶液に加えた。ブタ肝臓組織の溶解は、参照バッファーBおよび本発明のバッファーを用いて通常40分間以内に完了するが、残留組織フラグメントは、参照バッファーAを用いるとき、2時間のインキュベーション後でさえ依然として存在した。従って、AbouHaidarらによって記載される結果は、実証できなかった。参照実施例2:参照バッファーBを用いて得られる溶解産物からのドデシル硫酸イオンの沈殿ドデシル硫酸のカリウム塩が、酸性またはほとんど中性のpHにおいて非常に低い溶解度を有することは、当該分野から公知であったが、参照バッファーBを用いて得られる上記溶解産物における上記ドデシル硫酸イオンを、カリウムイオンの添加によって沈殿させることを初めに試みた。上記溶解産物を、ドデシル硫酸イオンの沈殿、およびその後の形成された沈殿物の除去後に、PCR反応において直接使用することを意図して、PCR反応が通常約8~9のpHを必要とするので、ドデシル硫酸イオンを沈殿させるためにアルカリ性のカリウム塩の溶液を上記溶解産物に加えた。この理由のために、炭酸カリウムK2CO3および炭酸水素カリウムKHCO3をカリウムイオンのアルカリ性供給源として試験した。20mgのブタ肝臓組織のサンプルを500μLの参照バッファーBpH8.0に懸濁し、56°Cで30分間インキュベートした。上記ドデシル硫酸イオンを上記溶解産物から沈殿させるために、1サンプル当たり140μLの0.25MのK2CO3水性溶液、および1サンプル当たり350μLの0.25MのKHCO3水性溶液を、2つのサンプルにそれぞれ加えた。全てのサンプルを氷浴で5分間インキュベートした。KHCO3の添加は、上記溶解産物のpHを著しく変化させなかったが、K2CO3の添加後にpHのわずかな上昇を観測した。この理由のために、K2CO3で処理されたサンプルを2のHCl水性3μLを加えることによって中和した。全てのサンプルを遠心分離して、上記沈殿物を除去し、その上清のアリコート4μLをアガロースゲルにおいて分析した。陽性対照DNAとして、参照バッファーBを用いて溶解したブタ肝臓組織の2つのさらなるサンプルを、RNアーゼ処理を含む、磁性粒子に基づく結合-洗浄-溶出コンセプトを用いて、QIAsymphonyDNAハンドブック05/2008に従って、QIAsymphonyプラットフォームQIAGEN,Hilden,Germanyにおいて精製した。電気泳動ゲルを図2に示す。上記サンプルに存在するフラグメントのサイズを同定するために、Gibco1kbプラスDNAラダーInvitrogenGmbH,Karlsruhe,Germanyを長さの標準として使用したレーン1。レーン2および3において、QIAsymphonyプラットフォームを用いて精製された溶解産物を分析した。これらのサンプルにおいて、適正な質の、gDNAを主に検出したが、多くの量のリボソームRNArRNAがK2CO3レーン4および5およびKHCO3レーン6および7で処理した上記サンプルに存在する。AbouHaidarによると、pH8.0での30分間の溶解時間内にTRISバッファーとマグネシウムイオンとの組み合わせによって加水分解されているはずだったので、上記サンプル中のrRNAの存在は予期しないものであった。従って、0.25倍濃度~2倍濃度範囲の異なる濃度の参照バッファーBを用いて、増加した40分間のインキュベーション時間で、56°Cにて、その溶解実験を繰り返した。バッファー濃度に関わらず、全サンプルのSYBR-greenIIで染色したアガロースゲルにおいて、無傷のRNAを検出したデータを示さず。従って、マグネシウムイオンと、さらにSDSを含み、わずかにアルカリ性のpHのTRISバッファーとの組み合わせは、無傷のゲノムDNAの存在下、溶解した組織サンプルからのRNAの崩壊に使用することができない。実施例3:マグネシウムイオンなしでの、種々の温度におけるRNAの崩壊組織サンプルの溶解および得られた溶解産物に存在するRNAの崩壊に与える温度の効果を研究するために、10mgのブタ肝臓のサンプルを、25mmol/LのTRISおよび25mmol/LのSDSを含むが、EDTAおよびMgCl2を全く含まず、H2SO4の添加によってpH8.0に調整したバッファーに懸濁した。そのサンプルを異なる温度で40分間インキュベートし、その後、ゲル電気泳動によって分析した。結果を図3に表す:多くの量のRNAは、上記サンプルを56°Cでインキュベートした後に依然として存在するが、RNAの量は、上記サンプルを60°Cでインキュベートした後には著しく低減される。上記サンプルを、60°Cより上の温度でインキュベートするとき、ゲル電気泳動によってRNAを全く検出し得ない。最適温度を62°Cに決定した。さらに、右側のアガロースゲルに示されるように、gDNAの完全性を損なうことなく上記溶解バッファーからEDTAを除外することは可能であり、そのことは、キレート剤を除去する必要なしでの、その後のPCR反応を可能にする。さらなる実験において、10mgの肝臓組織のサンプルを異なる溶液/バッファーにおいて62°Cで30分間インキュベートすることによって、上記サンプルを溶解に供した。各実験を二重で実施した。結果を図4に表す:水において、ならびにSDSを含まない25mmol/LのTRISの水性溶液において、検出可能gDNAは観測されなかった。市販のQIAGENATLバッファーQIAGEN,Hilden,Germanyにおいて、ならびにTRISおよびSDSを含む本発明に従うバッファーにおいて、RNAの完全な崩壊を観測したが、上記サンプルに存在するgDNAは、加水分解から保護される。MgSO4それぞれ50mMまたは100mMをTRIS/SDSバッファーに加えることは、RNAが、62°Cの温度でさえ、加水分解から保護されることをもたらす。従って、最適なバッファー組成は、TRISおよびSDSを、両方が25mmol/Lの濃度で含むべきであり、上記バッファー溶液のpHは硫酸の添加によってpH8.5に調整されるが、Mg2イオンおよびEDTAを含むべきでない。プロテアーゼ例えば、QIAGENプロテアーゼまたはQIAGENプロテイナーゼK10μL;2.5AU/mlは、好ましくはタンパク質の崩壊を補助するために組織材料の再懸濁後に、上記バッファーに加えられ得る。実施例4:上記溶解産物からのgDNAの精製に使用されるスピンカラムの最適化本願と同じ出願日を有する同じ出願人の、表題methodforprecipitatinganionicsurfactantionsinthepresenceofnucleicacidsを有する同時係属中の出願に記載されるように、塩化ストロンチウムはまた、残留タンパク質を沈殿させることにおいて有効であること、および沈殿溶液による低いサンプル希釈度を確実にするために、上記沈殿溶液におけるSrCl2の濃度は、1.0Mに調整されるべきであることが見出されている。10μLのこの1Mの沈殿溶液は、本発明に従って、80μLの溶解バッファー中の10mgの組織をインキュベートすることによって得られる溶解産物から、ドデシル硫酸イオンおよび残留タンパク質の沈殿をもたらすのに十分である。沈殿物の形成の完了を確実にするために、上記サンプルを濾過デバイスにかける前に、氷浴においてそれらをインキュベートすることは有利である。ドデシル硫酸イオンおよびSr2イオンから形成された上記沈殿物を除去することにおいて、濾過がより有効であること、ならびに2.5cmのカラムの高さおよび0.8cm~0.9cmの内径を有するスピンカラムにおいて、均一ゲルベッド形成を確実にするのに必要な樹脂の最低限の量が600μLであることが、さらに見出されている。さらに、スピンカラムを用いるゲル濾過クロマトグラフィーにおいて一般的に観測される問題、すなわち、溶解産物が上記ゲルベッドに入ることなく上記スピンカラムの内壁を流れ落ちて上記フリットを通過し得るという事実は、上記有孔のフリット、フィルター、フリース、または膜と上記マトリックスとの間に置かれて、上記フリット、フィルター、フリース、または膜の外側領域を塞いで、移動相が上記マトリックスを通ることなく上記フリットに入ることを防ぐ、非有孔の環を導入することによって解決されている。次に、上記マトリックスベッドの最適なサイズ排除限界を決定した。600μLの異なる市販のゲル濾過マトリックス球形のアリルデキストランおよびN,N’-メチレンビスアクリルアミドのマトリックスを含むSephacryl樹脂を、密なシリカフリットMat.No.1017499,QIAGEN,Hilden,Germany、プラスチック環、およびスクリューキャップを備える、図1に記載されるようなスピンカラムに充填した。使用される上記樹脂のサイズ排除限界を表1に示す示される限り、それぞれ塩基対bpまたはkDa。全ての樹脂を使用前に水中で平衡にした:10mLの樹脂を40mLの水と混合し、上記樹脂を10mLの堆積物が得られるまで沈降させ、その上清水を捨てた。この手順を3回繰り返した。最終的に、懸濁された樹脂の体積を水の添加によって10mLに調整した。700×gで3分間の前もって遠心分離するステップ前もって回転させるステップにおいてゲルベッドを確立することにより、使用のためのカラムを調製した。各カラムについて、上記沈殿物を含む、上に記載されるように10mgの組織から得られた全溶解産物を、上記ゲルベッドの上部表面の中央にのせた。DNAを次に、700×gで3分間上記カラムを回転させることによって溶出した。各実験を、少なくとも二重で実施した。上記溶出液に存在するgDNAおよびSDSの量を上に記載されるように測定した。上記サンプルの伝導度を、プールされたサンプルの希釈した溶液を用いて決定し、ここで、同じ樹脂を用いて精製された全てのサンプルを合わせた。結果を図5に描く。全ての樹脂は、上に述べられる濾過方法と比較して、上記サンプルに存在するSDSおよびさらにイオンの量を著しく低減するのに適している。GoldenbergerらD.Goldenbergeretal.GenomeRes.1995,4,368-370によると、サンプルにおける345μmol/Lを超えるSDS濃度は、完全にPCR反応を阻害する。リアルタイムPCR反応について、SDSの許容できる最大限の量は約250μmol/Lである。S400HR樹脂を用いて、上記サンプルからSDSを完全に除去することが可能である。この樹脂はまた、RNAの残留小フラグメントを除去することにおいて有用であることを証明した。実施例5:上記溶出液のPAGE分析精製プロセスにおけるタンパク質除去の程度を評価するため、およびゲル濾過クロマトグラフィー後に得られる上記溶出液に存在するタンパク質の残留量を決定するために、S400HR樹脂を用いて実施例4に従って精製されたサンプルを、SDSを含む市販のTRIS/HEPES4~20勾配ポリアクリルアミドゲルLTF-LABORTECHNIKにおいて、PAGE分析によって分析した。上記ゲルを、NOVEXXCellIIシステムInvitrogenGmbH,Karlsruhe,Germanyを用いて、供給されたTRIS/HEPESバッファーにおいて、100ボルトで25分間泳動した。上記ゲルとともに提供された15μLの2×バッファーで、タンパク質サイズマーカーをスパイクした上記サンプル15μLを希釈した。その混合物を95°Cまで5分間加熱し、次に氷浴において冷却し、その後、上記ゲルのポケットに載せた。上記ゲルを、Gradipure染料Gradipore,Sydney,Australiaに浸すことによって一晩染色し、次に水ですすいだ。結果を図6に表す。Lと名付けられたレーンは、InvitrogenKarlsruhe,GermanyからのSeaBlueタンパク質標準である。レーン1において、本発明の溶解バッファーを用いて10mgのブタ肝臓組織から得られた15μLの粗製溶解産物を分析した。レーン2において、15μLの同じ溶解産物を、本発明に従う沈殿溶液の添加後に分析した濾過ステップなしで。比較として、レーン3において、QIAampKitを用いて得られ、15μLのRnアーゼAでさらに処理された15μLの溶解産物を分析した。レーン4において、RNアーゼを加えずにQIAampキットを用いて得られた15μLの溶解産物を分析した。比較として、QIAGENプロテアーゼおよびRNアーゼAを、それぞれレーン5および6において分析した。レーン7~9のそれぞれにおいて、本発明に従うゲル濾過クロマトグラフィーによる精製後に得られた、上記溶出液のアリコート20μLを分析した全体で100μLの溶出液を得た。レーン10および11において、QIAampキットを用いることによって得られた、上記溶出液のアリコート20μLを分析した全体で400μLの溶出液を得た。多くの量のタンパク質が、塩化ストロンチウムの添加によって、すでにSDSと一緒に同時沈殿することが分かり得る。タンパク質の残りの量は、本発明に従ってゲル濾過クロマトグラフィーによって効率的に除去され得、本発明の方法を用いて得られる結果は、特にQIAampキットから得られる溶出液の希釈度が4倍高いことを念頭に置くと、市販のQIAampキットを用いて得られる結果と同等である。肺のサンプルおよびマウスの尾から得られる結果は同等であるデータを示さず。実施例6:上記溶出液のAEX-HPLC分析微量の残留夾雑物質例えば、タンパク質およびRNAフラグメントを検出するために、陰イオン交換AEXHPLC分析を、TMAE-FractogelSHPLCカラムにおいて、pH7.2、1.5mL/分の流量で、CaCl2勾配を用いて行った。35容のカラム体積にわたって、5のTRISpH7.2を含む、水中0mmol/LCaCl2~300mmol/LCaCl2の範囲に及ぶ勾配を確立した。注入体積として200μLを使用した。最初の実験において、本発明のバッファーを用いてRNアーゼの存在なしで10mgのブタ肝臓組織をインキュベートすることから得られる、200μLの粗製溶解産物を分析した。7つの画分をHPLCから収集し、一般方法に従って色素Stains-Allと反応させ、引き続いてアガロースゲルにおいて分析した。HPLCクロマトグラムおよびアガロースゲルのフォトグラムを図7に描く。画分1および2は、上記色素と反応しなかった。このことは、SDSおよび核酸の濃度が、21μmol/LのSDSの検出限界より下であることを示す。画分3および4は、上記色素を加えると青色を示した。このことは、アガロースゲルにおいてSYBR-GreenIIで染色し得ない、ヌクレオチドまたは可溶性タンパク質の存在を示す。画分5および6を、RNAに代表的である伝導度で溶出し、アガロースゲルにおいて100bpよりも小さい核酸のかすかなバンドを得たが、画分7は、ゲノムDNAを含んだ。さらなる実験において、本発明の方法によって精製されたサンプルと、市販のQIAampキットを用いて精製されたサンプルとを、HPLC分析によって比較した。ゲノムDNAの量を決定するために、陰イオン交換クロマトグラフィーによって精製した、E.coliゲノムDNAの漸増量を用いた較正曲線を使用して、gDNA溶出ピークの曲線下面積AUCを、上記カラムに載せたgDNAの量に関連づけた。図8において、本発明を用いて精製したサンプルaおよびQIAampKitを用いて精製したサンプルbの重ね合わされたクロマトグラムを表し、両方のトレースを260nmの波長で監視した。本発明に従って精製した50μLの上記溶出液から得られた収量図8におけるトレースは、QIAampKitを用いて得られた200μLの溶出液から得られたgDNAの量と比較して、著しくより高かった比較として、図8におけるトレースaおよびbを、一般的な注入体積に対して正規化した。これにより、上記溶出液における高濃度のgDNAが、本発明に従う精製方法を用いて達成され得ることが実証される。残留タンパク質および他の不純物の量は、HPLCクロマトグラムにおけるそれぞれのピークの統合によって決定されるように、両方のサンプルにおいて同等であった。本発明に従って精製した上記サンプルに存在するgDNAの量は、較正曲線を用いて決定された9.2μgであったが、QIAampKitを用いて得られたgDNAの量は6.2μgであった。実施例7:UV/Vis分光法を用いた、上記溶出液におけるgDNAの収量および純度の決定10mgのブタ肝臓の12サンプルを、ゲル濾過ステップにおいて溶離剤として水を用いて本発明の方法に従って溶解および精製し、同じ溶離剤を用いQIAampカラムを用いて精製した10mgのブタ肝臓の6サンプルと比較した。結果を図9に示し、それはHPLC分析によって得られた結果を支持する。gDNAがその最大の吸光度を有する、260nmの波長での吸光度は、本発明に従う方法によって精製される上記サンプルにおいて、QIAampで精製したサンプルにおけるものよりも常に高かった。さらに、ベースラインは、本発明に従って精製された上記サンプルのスペクトルにおけるベースラインと比較して、上記QIAampで精製したサンプルのスペクトルにおいて上昇し、そのことは、上記QIAampサンプルにおいて、より多量の残留固体粒子を示し得る。実施例8:精製したラットの尾のgDNAのRT-PCR分析本発明に従って溶解および精製された上記サンプルにおいて、PCRインヒビターが全く存在しないことを確実にするために、ラットの尾のサンプル20mgを、上に詳細されるように本発明の方法に従って溶解および精製した。これらの精製したサンプルを次に、RotorgeneシステムCorbett,Sydney,Australiaにおけるjun-システムを用いて、リアルタイムPCRRT-PCRにおいて分析し、AEXクロマトグラフィーを用いて、gDNAを用いて得られた結果と比較した。20×junPCRプライマー/プローブ混合物を含む市販のプライマー/プローブシステムFAM-TAMRA,AppliedBiosystems,Darmstadt,Germanyを、AppliedBiosystemsからの2×TAQmanPCRユニバーサルマスター混合物と組み合わせて使用した。RT-PCRを製造者の指示に従って実施した。特に、ポリメラーゼ活性化を、混合物を20分間、95°Cまで加熱することによって実施し、サイクルを95°Cで15秒間、二重鎖を融解することによって実施し、アニーリングを60°Cで60秒間実施した。全体で、40サイクルを行った。その反応混合物は、22.5μLのgDNA含有サンプル、25μLの上記マスター混合物、および2.5μLの上記プライマー混合物からなった。本発明の溶解および精製プロセスから得られたサンプルを、PCRにおける鋳型として、希釈していない形態で、および水での希釈係数10、100および1000後に使用した。上記サンプルにおける高濃度のgDNAに起因して、希釈していないサンプル図10における曲線1は、幾分強い生成物阻害を示したが、希釈係数に関わらず、本発明の方法によって溶解および精製された全ての上記サンプルの配列を増幅することは可能であった。水で10倍希釈した上記サンプル曲線2は、弱い阻害のみを示した。増幅前に100倍、または1000倍に希釈した上記サンプルにおいて、それぞれ阻害を観測しなかった曲線3および4。比較として、標的の存在なしで反応がまた行われ標的反応なし、NTC、AEXクロマトグラフィーによって精製された3つのサンプルを、同じ条件下でも増幅した。QIAampキットを用いて溶解および精製されたサンプルと比較して、同様の結果を、本発明に従って溶解および精製された10mgの凍結肝臓組織に由来するサンプルで得た。図11は、異なる希釈度の上記精製されたサンプルを用いて、junアッセイにおけるこれらのサンプルのRT-PCTにおいて得られたCT値の比較を示す。再度、生成物阻害を、本発明によって精製された希釈していないサンプルを用いた反応において観測する。本発明に従って精製された、それぞれ10倍、100倍、および1000倍希釈したサンプルから得られたCT値は、QIAampで精製したサンプルを用いて得られたCT値よりも常に低かった。このことは、より多量の、本発明に従って精製された上記サンプルに存在するgDNAを示す。junアッセイをまた、本発明に従って溶解されて、その後、沈殿によってSDSが除去されたが、ゲル濾過ステップを用いてさらに精製されなかったサンプルを用いて行った。このアッセイにおいて、希釈していないもの、2倍希釈したもの、4倍希釈したもの、および8倍希釈したものを完全に阻害した。しかし、16倍希釈した溶液からの増幅は可能であった。実施例9:本発明の方法によって、およびQIAampキットを用いることによって異なる組織サンプルから得られた、gDNAの収量の比較表2に列挙される異なる組織のサンプルを、本発明に従って溶解し、ストロンチウムイオンを加えることによって上記溶解産物からSDSを沈殿させるか、または上記サンプルをQIAampプロトコルに従って溶解した。溶解および本発明の場合、沈殿後、同じ精製方法によって同じ種類の組織から得られた上記サンプルをプールし、次に100μLのアリコートに分けた。これらのアリコートを、本発明の方法に従って、またはQIAampプロトコルに従って、それぞれ精製した。上記サンプルに存在するgDNAの量を、UV/Vis分光法および/またはHPLC分析によって分析した。得られた平均結果を表2に示す。実施例10:ヒト血液サンプルの溶解および精製血液サンプルの高い液体含有量に起因して、50mmol/LのTRISおよび50mmol/LのSDSを含み、H2SO4の添加によってpH8.5に調整した2倍濃縮溶解バッファー2×を、細胞の溶解のために使用した。同じドナーからのヒト血液40μLの2つのサンプルを、等量の2×溶解バッファーと混合した。血液タンパク質を次に10μLのQIAGENプロテアーゼ2.5AU/mlの添加によって枯渇させた。上記サンプルを62°Cで10分間インキュベートした。SDSを、上に記載されるように沈殿によって上記溶解産物から除去し、上記サンプルを、本発明のスピンカラムを用いて、ゲル濾過クロマトグラフィーによって精製した。5μLおよび10μLのアリコートを次に、アガロースゲルにおいて分析した図12。gDNAバンドは、分析された全てのサンプルにおいて現われたが、より短いフラグメントは、検出できなかった。上記サンプル内に存在するgDNAの量の定量化により、18SgDNAプライマーを用いて、上記サンプルにおける600ngのgDNAの平均収量が明らかになった2つのサンプルのそれぞれについて、RT-PCRを二重で実施し、gDNAの量を、全ての4つの実験からの平均値として決定した。実施例11:異なる動物組織サンプルのRT-PCR本発明の方法を用いてか、または市販のDNeasyキットQIAGEN,Hilden,Germanyを用いるDNeasyプロトコルに従って溶解および精製したラットの肝臓、腎臓、および脾臓の組織から得られた、精製gDNA50ngUV/Vis分光法によって見積もられた通りを、RT-PCRの標的として使用した。新鮮組織サンプルおよび凍結組織サンプル、および市販のRNAlater試薬QIAGEN,Hilden,Germanyにおいて安定化されたサンプルを使用した。上記サンプルを次に、TAQmanシステムにおけるSYBR-GreenベースのRT-PCR反応において分析した。図13において分かり得るように、RT-PCR反応において得られたCT値は、分析されたサンプルの種類に関わらず、両方の方法について同等であるそれぞれ新鮮、凍結、およびRNAlaterにおいて安定化。10mmol/LのTRIS/HClおよび0.5mmol/LのEDTAを含み、pH9.0に調整した溶出バッファーを、上に記載される手順に従って、上記スピンカラムを平衡化するために、および溶離剤として、使用した。実施例12:肝臓サンプルおよび脾臓サンプルからの高分子量gDNAの精製それぞれ20mgのラットの肝臓組織および脾臓組織を、本発明に従って溶解および精製した。溶解は30分以内に完了した。各実験を二重で実施した。得られた溶解産物におけるgDNAの質を、PCR反応において、およびエチジウムブロマイド染色したアガロースゲルにおいて分析した図14。上記ゲルは過負荷されたにも関わらず、それは高分子量のgDNAバンドをはっきりと示す。上記サンプルの、260nmの波長での吸光度対280nmの波長での吸光度の比によって見積もられた、上記サンプルに存在するgDNAの量、ならびに純度を表3に表す。反応条件は最終的に最適化されなかったが、良好な純度の多量のgDNAを得た。実施例13:異なるカラムバッファーの比較凍結ラット肝臓組織のサンプル10mgを、それぞれ本発明に従って溶解した。沈殿剤の添加後、本願と同じ出願日を有する同じ出願人の、表題chromatographicdeviceandmethodforisolatingandpurifyingnucleicacidsを有する同時係属中の出願に記載されるカラムを用いて、上記サンプルを、それぞれ水およびバッファーAEにおいて平衡化した、ゲル濾過クロマトグラフィーによって精製した。さらに、数個のサンプルを、本発明に従う2倍濃縮溶解バッファーに溶解し、実施例11の溶出バッファーにおいて平衡化した前述のスピンカラムを用いるゲル濾過クロマトグラフィーによって精製した。得られた溶出液をゲル電気泳動によって分析し、gDNAの量、およびSDS、ならびに上記溶出液の伝導度を決定した。SDSは、5つのサンプルにおいてのみ検出された。結果を図15に表す。実施例14:FFPE-組織サンプルからのgDNAの単離および精製ラット肝臓のホルマリン固定パラフィン包埋FFPEブロックからの10μmの厚さのサンプルを溶解し、gDNAを単離し、そしてa市販のQIAampキットQIAGEN,Hilden,Germanyを用いて、およびb本発明の方法を用いて精製した。aFFPEブロックからの各10μmでの3つの切片を、1mLのキシレンにおいて溶解し、10秒間のボルテックスによって混合し、2分間、全速fullspeedで遠心分離した。上清をピペッティングにより除いた。1mLのEtOHを各サンプルに加えることによって残留キシレンを抽出し、上記サンプルを10秒間ボルテックスし、それらを2分間、全速で遠心分離し、上清を除いた。上記サンプルを含む口の開いている管opentubeを室温で20分間インキュベートして、残留EtOHを蒸発させた。得られたペレットを180μLのバッファーATLQIAGEN,Hilden,Germanyに再懸濁させた。各サンプルに、20μLのプロテイナーゼK2.5AU/mlQIAGEN,Hilden,Germanyを加え、上記サンプルをボルテックスによって混合した。上記サンプルを90°Cで1時間インキュベートする前に、それらを56°Cで1時間インキュベートした。上記サンプルを室温まで冷却し、次に1μLのRNアーゼA10U/mlQIAGEN,Hilden,Germanyを各サンプルに加えた。200μLのバッファーALQIAGEN,Hilden,Germanyを各溶解産物に加え、上記サンプルをボルテックスによって完全に混合した。200μLのEtOHを次に加え、上記サンプルを再度ボルテックスした。上記溶解産物をQIAampMinEluteカラムQIAGEN,Hilden,Germanyに移し、6000×gで1分間遠心分離した。上記QIAampMinEluteカラムを清潔な2mLの収集管内に置き、フロースルーflow-throughを捨てた。上記カラムを開け、500μLのバッファーAW1QIAGEN,Hilden,Germanyで洗浄し、6000×gで1分間遠心分離した。上記QIAampMinEluteカラムを清潔な2mLの収集管内に置き、フロースルーを捨てた。上記カラムを再び開け、500μLのバッファーAW2QIAGEN,Hilden,Germanyで洗浄し、6000×gで1分間遠心分離した。上記QIAampMinEluteカラムを清潔な2mLの収集管内に置き、フロースルーを捨てた。ほんのわずかなバッファーを除去するために、膜を全速で3分間遠心分離した。gDNAの溶出を、清潔な1.5mLのマイクロ遠心分離管において、RNアーゼを含まない水100μlを用いて、室温で1分間インキュベートし、全速で1分間遠心分離することによって行った。bFFPEブロックからの各10μmの厚さを有する3つの切片を、10μLのQIAGENプロテアーゼ2.5AU/mlHilden,Germanyおよび1μLのRNアーゼA7000U/mlを補充した、80μLの本発明に従う溶解バッファー25mmol/lのTris/H2SO4、25mmol/LのSDS、pH8.5に溶解した。上記サンプルをボルテックスによって混合した。3つのサンプルを62°Cで30分間インキュベートし、次に90°Cで1時間インキュベートし、他方、他の3つのサンプルを90°Cで1時間インキュベートする前に56°Cで1時間インキュベートした。各サンプルに10μLの沈殿溶液1mol/LのSrCl2を加え、上記サンプルをボルテックスによって混合し、氷上で10分間インキュベートした。各サンプルを次に、本願と同じ出願日を有する同じ出願人の、表題chromatographicdeviceandmethodforisolatingandpurifyingnucleicacidsを有する同時係属中の出願に従って、前もって回転させたスピンカラム単一ステップカラムに移し、上記カラムを700×gで3分間遠心分離し、他方、gDNAを含む溶出液を収集した。得られたgDNAの量および質を評価するために、標的として、18SrRNAについてコードする遺伝子を用いて、TAQmanシステムにおいてSYBRGreenベースのRT-PCRを実施した。結果を図16および17に表す。RT-PCRにおいて得られたCT値が、両方の方法について同等である本発明によって精製した上記サンプルはわずかにより低いCT値を有するが、本発明の方法を用いることによって得られたgDNAの量は、市販のキットを用いることによって得られたgDNAの量よりも約1.5倍~ほとんど約2倍高い。図17から分かり得るように、溶解時間を1時間まで伸ばすことは、FFPEサンプルから得られるgDNAの収量に対し有利な効果を有する。"