以下の[1]~3のいずれかに記載の蛋白質の活性が親株に比べて向上した微生物を培地に培養し、該培地中にLアミノ酸を生成、蓄積せしめ、該培地中からLアミノ酸を採取することを特徴とする、Lアミノ酸の製造法。[1]配列番号2で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質[2]配列番号2で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつYeiG活性を有する蛋白質[3]配列番号2で表されるアミノ酸配列と80以上の相同性があるアミノ酸配列からなり、かつYeiG活性を有する蛋白質微生物が以下の[1]~[3]のいずれかに記載のDNAで形質転換された微生物、又は該DNAの発現調節配列を改変することにより該遺伝子の発現が親株に比べて増加した微生物である、請求項1記載のL‐アミノ酸の製造法。[1]請求項1の[1]~[3]のいずれかに記載の蛋白質をコードするDNA[2]配列番号1で表される塩基配列を有するDNA[3]配列番号1で表される塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNA微生物が、エシェリヒア属に属する微生物である請求項1または2記載のL‐アミノ酸の製造法。L-アミノ酸が、L-グルタミンである、請求項1~3のいずれかに記載のL-アミノ酸の製造法。本発明の目的は、エシェリヒア属に属する微生物を用いて効率的なL-アミノ酸の製造法を提供することにある。本発明は、以下の1~4に関する。1以下の[1]~3のいずれかに記載の蛋白質の活性が親株に比べて向上した微生物を培地に培養し、該培地中にLアミノ酸を生成、蓄積せしめ、該培地中からLアミノ酸を採取することを特徴とする、Lアミノ酸の製造法。[1]配列番号2で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質[2]配列番号2で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、YeiG活性を有する蛋白質[3]配列番号2で表されるアミノ酸配列と80以上の相同性があるアミノ酸配列からなり、かつYeiG活性を有する蛋白質2微生物が以下の[1]~[3]のいずれかに記載のDNAで形質転換された微生物、又は該DNAの発現調節配列を改変することにより該遺伝子の発現が親株に比べて増加した微生物である、1記載のL‐アミノ酸の製造法。[1]請求項1の[1]~[3]のいずれかに記載の蛋白質をコードするDNA[2]配列番号1で表される塩基配列を有するDNA[3]配列番号1で表される塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNA3微生物が、エシェリヒア属に属する微生物である1または2記載のL‐アミノ酸の製造法。4L-アミノ酸が、L-グルタミンである、1~3のいずれかに記載のL-アミノ酸の製造法。本発明により、微生物を用いて効率的なL-アミノ酸の製造法を提供することができる。1.本発明の製造法で用いる微生物1YeiG活性が親株に比べて向上した微生物本明細書においてYeiG活性とは、配列番号2で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質が有する活性をいい、本明細書においてYeiG活性を有する蛋白質とは、配列番号2で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質と、実質的に同等の活性を有する蛋白質をいう。YeiG活性が親株に比べて向上した微生物とは、a親株の染色体DNA上にあるYeiGをコードする遺伝子を改変することにより得られる、i親株より該蛋白質の比活性が向上した微生物、およびii親株よりYeiGの生産量が向上した微生物、ならびにb親株をYeiGをコードするDNAで形質転換して得られる微生物、である。なお、本明細書中における親株とは、野生株でも、変異株であってもよく、改変または形質転換の対象である元株である。該親株としては例えば微生物がEscherichiacoliである場合、EcoliK12株、B株、Br株の野生株、またはその変異株をあげることができ、該変異株としてはEcoliXL1Blue、EcoliXL2Blue、EcoliDH1、EcoliMC1000、EcoliATCC12435、EcoliW1485、EcoliJM109、EcoliHB101、EcoliNo49、EcoliW3110、EcoliNY49、EcoliMP347、EcoliNM522、EcoliBL21、EcoliME8415等をあげることができる。YeiG活性を有する蛋白質としては、以下の[1]~[3]のいずれかに記載の蛋白質、[1]配列番号2表されるアミノ酸配列を有する蛋白質、[2]配列番号2で表されるアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつYeiG活性を有する蛋白質、および[3]配列番号2で表されるアミノ酸配列と80以上の相同性があるアミノ酸配列を有し、かつYeiG活性を有する蛋白質、をあげることができる。上記において、1以上のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつYeiG活性を有する蛋白質は、MolecularCloningALaboratoryManualThirdEditionColdSpringHarborLaboratoryPress以下、モレキュラークローニング第3版と略す、CurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySons以下、カレントプロトコールズインモレキュラーバイオロジーと略す、NucleicAcidsResearch106487、ProcNatlAcadSciUSA796409、Gene34315、NucleicAcidsResearch134431、ProcNatlAcadSciUSA82488等に記載の部位特異的変異導入法を用いて、例えば配列番号2で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNAに部位特異的変異を導入することにより、取得することができる。欠失、置換または付加されるアミノ酸残基の数は特に限定されないが、上記の部位特異的変異法等の周知の方法により欠失、置換または付加できる程度の数であり、1個から数十個、好ましくは1~20個、より好ましくは1~10個、さらに好ましくは1~5個である。配列番号2で表されるアミノ酸配列において1個以上のアミノ酸が欠失、置換または付加されたとは、同一配列中の任意の位置において、1個または複数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されていてもよい。アミノ酸残基の欠失または付加が可能なアミノ酸の位置としては、例えば配列番号2で表されるアミノ酸配列のN末端側およびC末端側の10アミノ酸残基をあげることができる。欠失、置換または付加は同時に生じてもよく、置換または付加されるアミノ酸は天然型と非天然型とを問わない。天然型アミノ酸としては、L-アラニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-アルギニン、L-グルタミン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、L-システインなどがあげられる。以下に、相互に置換可能なアミノ酸の例を示す。同一群に含まれるアミノ酸は相互に置換可能である。A群:ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、ノルバリン、アラニン、2アミノブタン酸、メチオニン、Oメチルセリン、tブチルグリシン、tブチルアラニン、シクロヘキシルアラニンB群:アスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、2アミノアジピン酸、2アミノスベリン酸C群:アスパラギン、グルタミンD群:リジン、アルギニン、オルニチン、24ジアミノブタン酸、23ジアミノプロピオン酸E群:プロリン、3ヒドロキシプロリン、4ヒドロキシプロリンF群:セリン、スレオニン、ホモセリンG群:フェニルアラニン、チロシンまた、YeiG活性を有する蛋白質としては、配列番号2で表されるアミノ酸配列との相同性が80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上、最も好ましくは99以上の相同性を有するアミノ酸配列からなる蛋白質であり、かつYeiG活性を有する蛋白質をあげることができる。アミノ酸配列や塩基配列の相同性は、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLASTProNatlAcadSciUSA905873やFASTAMethodsEnzymol18363を用いて決定することができる。このアルゴリズムBLASTに基づいて、BLASTNやBLASTXとよばれるプログラムが開発されている[JMolBiol215403]。BLASTに基づいてBLASTNによって塩基配列を解析する場合には、パラメータは例えばScore=100、wordlength=12とする。また、BLASTに基づいてBLASTXによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメータは例えばscore=50、wordlength=3とする。gappedalignmentを得るために、Altschulらに記載されるようにGappedBLASTを利用することができる。あるいは、PSIBlastまたはPHIBlastを用いて、分子間の位置関係Idおよび共通パターンを共有する分子間の関係を検出する繰返し検索を行うことができる。BLAST、GappedBLAST、PSIBlast、およびPHIBlastプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータを用いることができるhttpwwwncbinlmnihgov参照。配列番号2で表されるアミノ酸配列において1以上のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなる蛋白質が、YeiG活性を有する蛋白質であることは、例えば活性を確認したい蛋白質をコードするDNAで親株を形質転換し、得られた形質転換体のホルミルグルタチオン加水分解活性をJourBiolChem28114514に記載の方法により測定し、親株のホルミルグルタチオン加水分解活性を比較することにより確認することができる。上記aのiの親株よりYeiG活性を有する蛋白質の比活性が向上した微生物としては、親株が有する該蛋白質のアミノ酸配列において1アミノ酸以上、好ましくは1~10アミノ酸、より好ましくは1~5アミノ酸、さらに好ましくは1~3アミノ酸が置換しているアミノ酸配列を有する蛋白質を有しているため、親株のYeiG活性を有する蛋白質と比較して、ホルミルグルタチオン加水分解活性が向上した変異型蛋白質を有する微生物をあげることができる。上記aのiiの親株よりYeiG活性を有する蛋白質の生産量が向上した微生物としては、親株の染色体DNA上に存在する該蛋白質をコードする遺伝子の転写調節領域またはプロモーター領域の塩基配列において1塩基以上、好ましくは1~10塩基、より好ましくは1~5塩基、さらに好ましくは1~3塩基の塩基が置換しているプロモーター領域を有しているため、親株のYeiG活性を有する蛋白質の生産量と比較して、該蛋白質の生産量が向上している微生物をあげることができる。上記bの親株をYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAで形質転換して得られる微生物としては、[4]上記[1]~[3]のいずれかに記載の蛋白質をコードするDNA、[5]配列番号1で表される塩基配列中のコーディング領域の塩基配列を有するDNA、または[6]配列番号1で表される塩基配列中のコーディング領域の塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNA、を用いて親株を形質転換して得られる微生物をあげることがでる。該微生物としては、外来のYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAをi染色体DNA上に有する微生物、およびii染色体外に有する微生物をあげることができる。すなわち、iの微生物は、親株がYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを保有していない場合は、新たに導入された該DNAを1つまたは2つ以上、染色体DNA上に有する微生物であり、親株がYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを元来保有する場合には、新たに導入された該DNAを含む2つ以上のYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを染色体DNA上に有する微生物である。iiの微生物は、YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAをプラスミドDNA上に有する微生物である。上記でいうハイブリダイズするとは、特定の塩基配列を有するDNAまたは該DNAの一部にDNAがハイブリダイズすることである。したがって、該特定の塩基配列を有するDNAまたはその一部は、ノーザンまたはサザンブロット解析のプローブとして用いることができ、またPCR解析のオリゴヌクレオチドプライマーとして使用できるDNAである。プローブとして用いられるDNAとしては、少なくとも100塩基以上、好ましくは200塩基以上、より好ましくは500塩基以上のDNAをあげることができ、プライマーとして用いられるDNAとしては、少なくとも10塩基以上、好ましくは15塩基以上のDNAをあげることができる。DNAのハイブリダイゼーション実験の方法はよく知られており、例えば当業者であれば本願明細書に従い、ハイブリダイゼーションの条件を決定することができる。該ハイブリダイゼーションの条件は、モレキュラークローニング第2版、第3版2001年、MethodsforGeneralandMolecularBacteriolgyASMPress1994、ImmunologymethodsmanualAcademicpressに記載の他、多数の他の標準的な教科書に従っておこなうことができる。上記のストリンジェントな条件とは、DNAを固定化したフィルターとプローブDNAとを50ホルムアミド、5×SSC750mmollの塩化ナトリウム、75mmollのクエン酸ナトリウム、50mmollのリン酸ナトリウムpH76、5×デンハルト溶液、10の硫酸デキストラン、および20μglの変性させたサケ精子DNAを含む溶液中で42°Cで一晩、インキュベートした後、例えば約65°Cの02×SSC溶液中で該フィルターを洗浄する条件が好ましいが、より低いストリンジェント条件を用いることもできる。ストリンジェンな条件の変更は、ホルムアミドの濃度調整ホルムアミドの濃度を下げるほど低ストリンジェントになる、塩濃度および温度条件の変更により可能である。低ストリンジェント条件としては、例えば6×SSCE20×SSCEは、3mollの塩化ナトリウム、02mollのリン酸二水素ナトリウム、002mollのEDTA、pH74、05のSDS、30のホルムアミド、100μglの変性させたサケ精子DNAを含む溶液中で、37°Cで一晩インキュベートした後、50°Cの1×SSC、01SDS溶液を用いて洗浄する条件をあげることができる。また、さらに低いストリンジェントな条件としては、上記した低ストリンジェント条件において、高塩濃度例えば5×SSCの溶液を用いてハイブリダイゼーションを行った後、洗浄する条件をあげることができる。上記した様々な条件は、ハイブリダイゼーション実験のバックグラウンドを抑えるために用いるブロッキング試薬を添加、または変更することにより設定することもできる。上記したブロッキング試薬の添加は、条件を適合させるために、ハイブリダイゼーション条件の変更を伴ってもよい。上記したストリンジェントな条件下でハイブリダイズ可能なDNAとしては、例えば上記したBLASTやFASTA等を用いて上記したパラメータ等に基づいて計算したときに、配列番号1で表される塩基配列中のコーディング領域の塩基配列からなるDNAと少なくとも90以上、好ましくは95以上、より好ましくは97以上、さらに好ましくは98以上、特に好ましくは99以上の相同性を有するDNAをあげることができる。2.本発明で用いられる微生物の調製1YeiG活性が親株に比べて向上した微生物の調製YeiG活性が親株に比べて向上した微生物のうち、比活性が親株のYeiG活性を有する蛋白質より高い微生物は、YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAをinvitroにおける変異剤を用いた変異処理、またはエラープローンPCRなどに供することにより該DNAに変異を導入した後、該変異DNAを親株の染色体DNA上に存在する変異導入前のYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAと公知の方法[ProcNatlAcadSciUSA20006640]を用いて置換することにより該変異DNAを発現する改変体を作成し、上記した方法により親株と改変体のYeiG活性、すなわちホルミルグルタチオン加水分解活性を比較することにより取得することができる。また、YeiG活性を有する蛋白質の活性が親株より高い微生物のうち、該蛋白質の生産量が親株の生産量より向上している微生物は、親株が有するYeiG蛋白質をコードする遺伝子の転写調節領域およびプロモーター領域、例えば該蛋白質の開始コドンの上流側200bp、好ましくは100bpの塩基配列を有するDNAをinvitroにおける変異処理、またはエラープローンPCRなどに供することにより該DNAに変異を導入した後、該変異DNAを親株の染色体DNA上に存在する変異導入前のYeiG活性を有する蛋白質をコードする遺伝子の転写調節領域およびプロモーター領域と公知の方法[ProcNatlAcadSciUSA20006640]を用いて置換することにより変異型の転写調節領域またはプロモーター領域を有する改変体を作成し、RTPCRまたはノーザンハイブリダイゼーションなどにより、親株と改変体のYeiG活性を有する蛋白質をコードする遺伝子の転写量を比較する方法、またはSDSPAGEなどにより親株と改変体のYeiG活性を有する蛋白質の生産量を比較する方法により確認することができる。また、親株のYeiG活性を有する蛋白質をコードする遺伝子のプロモーター領域を公知の強力なプロモーター配列と置換することによっても、親株よりYeiG活性を有する蛋白質の生産量が向上した微生物を取得することもできる。そのようなプロモーターとしては、Ecoliで機能するtrpプロモーターPtrp、lacプロモーターPlac、PLプロモーター、PRプロモーター、PSEプロモーター等の、エシェリヒアコリやファージ等に由来するプロモーター、SPO1プロモーター、SPO2プロモーター、penPプロモーター等をあげることができる。またPtrpを2つ直列させたプロモーター、tacプロモーター、lacT7プロモーター、letIプロモーターなどの人為的に造成したプロモーターもあげることができる。以下に、YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAの取得法、および親株を該DNAで形質転換して得られる微生物の調製法について詳細に説明する。aYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAの取得YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAは、例えば上記11のYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAの塩基配列に基づき設計することができるプローブDNAを用いた、微生物、好ましくはEcoliの染色体DNAライブラリーに対するサザンハイブリダイゼーション、または該塩基配列に基づき設計することができるプライマーDNAを用いた、微生物、好ましくはEcoliの染色体DNAを鋳型としたPCRPCRProtocolsAcademicPressにより取得することができる。また、各種の遺伝子配列データベースに対して上記11のYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAの塩基配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上、最も好ましくは99以上の相同性を有する配列を検索し、該検索によって得られた塩基配列に基づき、該塩基配列を有する微生物の染色体DNA、cDNAライブラリー等から上記した方法によりYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを取得することもできる。取得したDNAをそのまま、あるいは適当な制限酵素などで切断し、常法によりベクターに組み込み、得られた組換え体DNAを宿主細胞に導入した後、通常用いられる塩基配列解析方法、例えばジデオキシ法ProcNatlAcadSciUSA745463または3700DNAアナライザーアプライドバイオシステムズ社製等の塩基配列分析装置を用いて分析することにより、該DNAの塩基配列を決定することができる。上記のベクターとしては、pBluescriptIIKSストラタジーン社製、pDIRECTNucleicAcidsRes186069、pCRScriptAmpSKストラタジーン社製、pT7Blueノバジェン社製、pCRIIインビトロジェン社製およびpCRTRAPジーンハンター社製などをあげることができる。宿主細胞としては、Escherichia属に属する微生物などをあげることができる。Escherichia属に属する微生物としては、例えば、EcoliXL1Blue、EcoliXL2Blue、EcoliDH1、EcoliMC1000、EcoliATCC12435、EcoliW1485、EcoliJM109、EcoliHB101、EcoliNo49、EcoliW3110、EcoliNY49、EcoliMP347、EcoliNM522、EcoliBL21、EcoliME8415等をあげることができる。組換え体DNAの導入方法としては、上記宿主細胞へDNAを導入する方法であればいずれも用いることができ、例えば、カルシウムイオンを用いる方法ProcNatlAcadSciUSA692110、プロトプラスト法特開昭63248394、エレクトロポレーション法NucleicAcidsRes166127等をあげることができる。塩基配列を決定した結果、取得されたDNAが部分長であった場合は、該部分長DNAをプローブに用いた、染色体DNAライブラリーに対するサザンハイブリダイゼーション法等により、全長DNAを取得することができる。更に、決定されたDNAの塩基配列に基づいて、パーセプティブバイオシステムズ社製8905型DNA合成装置等を用いて化学合成することにより目的とするDNAを調製することもできる。上記のようにして取得されるDNAとして、例えば、配列番号2で表されるアミノ酸配列を有する蛋白質をコードするDNA、および配列番号1で表される塩基配列を有するDNAをあげることができる。bYeiG活性を有する蛋白質を発現するプラスミドベクターで形質転換された微生物の取得上記aの方法で得られるYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAをもとにして、必要に応じて、YeiG活性を有する蛋白質をコードする部分を含む適当な長さのDNA断片を調製する。また、YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAの塩基配列を、宿主細胞での発現に最適なコドンとなるように、塩基を置換することにより、生産率が向上した形質転換体を取得することができる。該DNA断片を適当な発現ベクターのプロモーターの下流に挿入することにより、組換え体DNAを作製する。該組換え体DNAを、該発現ベクターに適合した宿主細胞に導入することにより、YeiG活性を有する蛋白質の活性が宿主細胞、すなわち親株より向上した形質転換体を得ることができる。宿主細胞としては、微生物、好ましくは原核生物、より好ましくは細菌、さらに好ましくはEscherichia属に属する微生物、最も好ましくはEcoliを用いることができる。発現ベクターとしては、上記宿主細胞において自律複製可能または染色体中への組込が可能で、YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを転写できる位置にプロモーターを含有しているものが用いられる。Ecoli等の原核生物を宿主細胞として用いる場合は、YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを有する組換え体DNAは、原核生物中で自律複製可能であると同時に、プロモーター、リボソーム結合配列、YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNA、転写終結配列より構成された組換え体DNAであることが好ましい。プロモーターを制御する遺伝子が含まれていてもよい。発現ベクターとしては、pColdI、pCDF1b、pRSF1bいずれもノバジェン社製、pMALc2xニューイングランドバイオラブス社製、pGEX4T1ジーイーヘルスケアバイオサイエンス社製、pTrcHisインビトロジェン社製、pSE280インビトロジェン社製、pGEMEX1プロメガ社製、pQE30キアゲン社製、pET3ノバジェン社製、pKYP10特開昭58110600、pKYP200AgricBiolChem48669、pLSA1AgricBiolChem53277、pGEL1ProcNatlAcadSciUSA824306、pBluescriptIISK、pBluescriptIIKSストラタジーン社製、pTrS30エシェリヒアコリJM109pTrS30より調製、pTrS32エシェリヒアコリJM109pTrS32より調製、pPAC31、pUC19Gene33103、pSTV28、pUC118タカラバイオ社製、pPA1特開昭63233798等を例示することができる。プロモーターとしては、Ecoli等の宿主細胞中で機能するものであればいかなるものでもよい。例えば、trpプロモーターPtrp、lacプロモーターPlac、PLプロモーター、PRプロモーター、PSEプロモーター等の、Ecoliやファージ等に由来するプロモーター、SPO1プロモーター、SPO2プロモーター、penPプロモーター等をあげることができる。またPtrpを2つ直列させたプロモーター、tacプロモーター、lacT7プロモーター、letIプロモーターのように人為的に設計改変されたプロモーター等も用いることができる。リボソーム結合配列であるシャイン-ダルガノShineDalgarno配列と開始コドンとの間を適当な距離例えば6~18塩基に調節したプラスミドを用いることが好ましい。YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを発現ベクターに結合させた組換え体DNAにおいては、転写終結配列は必ずしも必要ではないが、構造遺伝子の直下に転写終結配列を配置することが好ましい。このような組換え体DNAとしては、例えばプラスミドpTyeiGをあげることができる。cYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAが染色体DNAに組み込まれた微生物の取得上記aの方法で得られるYeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを染色体DNAの任意の位置に組み込むことにより、YeiG活性を有する蛋白質の活性が親株より高い微生物を取得することもできる。YeiG活性を有する蛋白質をコードするDNAを微生物の染色体DNAの任意の位置に組み込む方法としては、相同組換えを利用した方法をあげることができ、宿主、すなわち親株としてEcoliを用いる場合にはProcNatlAcadSciUSA976640に記載の方法をあげることができる。上記の方法に従って調製される親株よりもYeiG活性が向上した微生物の具体例としてはYeiG活性を有する蛋白質を発現するプラスミドベクターであるpTyeiGを有する大腸菌JPpTyeiGをあげることができる。3.本発明のLアミノ酸の製造法本発明の微生物の培養は、該微生物が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等を含有し、該微生物の培養を効率的に行える天然培地または合成培地培を用いて培養することができる。炭素源としては、該微生物が資化し得るものであればよく、グルコース、フラクトース、スクロース、キシロース、アラビノースこれらを含有する糖蜜、セルロース系バイオマスの糖化液、グリセロール、デンプンあるいはデンプン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール類等を用いることができる。窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機酸もしくは有機酸のアンモニウム塩、その他の含窒素化合物、並びに、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、各種発酵菌体、およびその消化物等を用いることができる。無機塩としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等を用いることができる。培養は、通常振盪培養または深部通気攪拌培養等の好気的条件下で行う。培養温度は15~40°Cがよく、培養時間は、通常5時間~7日間である。培養中pHは30~90に保持する。pHの調整は、無機または有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシウム、アンモニア等を用いて行う。また、培養中必要に応じて、アンピシリンやテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。プロモーターとして誘導性のプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときには、必要に応じてインデューサーを培地に添加してもよい。例えば、lacプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはイソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシド等を、trpプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはインドールアクリル酸等を培地に添加してもよい。上記方法で取得することができる本発明の微生物を培地に培養し、該培地中にLアミノ酸を生成、蓄積せしめ、該培地中からLアミノ酸を採取することによりL-アミノ酸を製造することができる。培地中に生成、蓄積したL-アミノ酸の採取は、活性炭やイオン交換樹脂などを用いる通常の方法あるいは、有機溶媒による抽出、結晶化、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等により行うことができる。以下、本発明の実施例を示すが本願発明は以下の実施例に限定されるものではない。yeiG遺伝子発現プラスミドの造成以下の方法でyeiG遺伝子発現プラスミドを造成した。エシェリヒアコリJM101株をLB培地10glバクトトリプトンディフコ社製、5glイーストエキスディフコ社製、5gl塩化ナトリウムに植菌し30°Cで一晩培養した。培養後、カレントプロトコールズインモレキュラーバイオロジーに記載の飽和フェノールを用いる方法により、該微生物の染色体DNAを単離精製した。yeiG遺伝子増幅用のプライマーDNAとして配列番号3および4で表される塩基配列からなる合成DNAを用いてPCRを行った。PCRは、鋳型として01μgの染色体DNA、05μmolLの各プライマー、25unitsのPyrobestDNAポリメラーゼ、5μLのPyrobestDNAポリメラーゼ用×10緩衝液、各200μmolLのdNTPdATP、dGTP、dCTPおよびdTTPを含む反応液50μLを調製し、96°Cで15秒間、55°Cで30秒間、72°Cで1分間の工程を30回繰り返すことにより行った。約08kbのDNA断片が増幅したことを確認し、該DNA断片を常法に従って精製した。該DNA断片およびtrpプロモーターを含む発現ベクターpTrS30[エシェリヒアコリJM109pTrS30より調製]をそれぞれHindIII、SacIで切断し、アガロースゲル電気泳動によりDNA断片を分離した後、ジーンクリーンIIキットGENECLEANIIkit、BIO101社製を用いて、制限酵素消化DNA断片をそれぞれ回収した。上記で得られたyeiG遺伝子を含む08kb断片、pTrs30の制限酵素消化断片をDNAligationKitVer2タカラバイオ社製を用いて連結した。得られた連結体DNAを用いてエシェリヒアコリDH5α株タカラバイオ製を形質転換し、アンピシリン耐性を指標に形質転換体を選択した。選択した形質転換体のコロニーより公知の方法に従ってプラスミドを抽出し、制限酵素を用いてその構造を解析することにより、trpプロモーター下流にyeiG遺伝子が連結された発現ベクターであるpTyeiGが取得されていることを確認した。Lグルタミン、Lグルタミン酸生産能を有する微生物の作製Lグルタミン、Lグルタミン酸生産能を持つエシェリヒアコリを作製するため、Lプロリン合成経路上のγグルタミン酸キナーゼをコードするproBとγグルタミルリン酸レダクターゼをコードするproAを欠損した株、グルタミンシンテターゼアデニリルトランスフェラーゼをコードするglnEを欠損した株、グルタミン酸シンテースをコードするgltB、gltDを欠損した株を作製した。1proBA遺伝子欠損エシェリヒアコリJM101の作製遺伝子欠損用マーカー遺伝子の構築相同組換えを用いたエシェリヒアコリの遺伝子欠損および遺伝子置換のためのマーカー遺伝子として用いるcat遺伝子およびsacB遺伝子を以下の方法で単離した。配列番号5および6で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットとして用い、pHSG396を鋳型としてPCRを行い、cat遺伝子を含むDNA断片を得た。PCRはPyrobestDNApolymeraseタカラバイオ社製を用いて、添付説明書に従って行なった。また配列番号7および8で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットとして用い、常法により調製したバチルスズブチリス168株の野生株のゲノムDNAを鋳型としてPCRを行い、sacB遺伝子を含むDNA断片を得た。cat遺伝子を含むDNA断片、sacB遺伝子を含むDNA断片をそれぞれ精製した後、SalIで切断した。フェノール/クロロホルム処理、およびエタノール沈殿を行い、両者を等モルの比率で混合してDNAligationKitVer2タカラバイオ社製を用いて連結した。該連結反応液をフェノール/クロロホルム処理、およびエタノール沈殿にて精製したものを鋳型とし、配列番号6および8で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットとして用いてPCRを行い、得られた増幅DNAをQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製し、cat遺伝子およびsacB遺伝子を含むDNA断片を取得した。proBA遺伝子欠損株の作成配列番号9および10で表わされる塩基配列からなる合成DNA、並びに配列番号12および14で表わされる塩基配列からなる合成DNAをそれぞれプライマーセットとして用い、常法により調製したエシェリヒアコリJM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を取得した。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物と、catsacB断片を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してcatBsacB断片が挿入されたproBA周辺領域を含む約46kbのDNA断片が増幅されたことを確認した。また配列番号9および11で表わされる塩基配列からなる合成DNA、ならびに配列番号13および14で表わされる合成DNAをそれぞれプライマーセットとして用い、JM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を得た。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してproBA遺伝子が欠失したproBA周辺領域を含む約2kbのDNA断片が増幅されたことを確認した。次にエシェリヒアコリJM101株をpKD46で形質転換した後、100mgLのアンピシリンを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpKD46を保持するエシェリヒアコリJM101株以下、エシェリヒアコリJM101pKD46と称すを選択した。10mmolLのLアラビノースと50μgmlのアンピシリンの存在下で培養して得られたエシェリヒアコリJM101pKD46に、電気パルス法により上記で取得したcatsacB断片の挿入されたproBA遺伝子周辺領域を含むDNA断片を導入した。得られた形質転換体を。25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地LBクロラムフェニコールアンピシリンに塗布して培養し、クロラムフェニコール耐性コロニーを選択した。相同組換えが生じた株はクロラムフェニコール耐性かつシュクロース感受性を示すので、選択したコロニーを10シュクロース、25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地およびLBクロラムフェニコールアンピシリンにレプリカし、クロラムフェニコール耐性、かつシュクロース感受性を示した株を選択した。選択した株について配列番号7および9で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、proBA遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入されていることを確認した。proBA遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入された株を上記と同様に培養してコンピテントセルを調製し、上記で得られたproBA遺伝子が欠失したproBA周辺領域を含むDNA断片を電気パルス法により導入した。得られた形質転換体をLBシュクロース寒天培地で培養し、シュクロース耐性コロニーを選択した。相同組換えを起こした株はcatsacB断片は含まず、よってクロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示すため、選択したコロニーをLBクロラムフェニコール寒天培地およびLBシュクロース寒天培地にレプリカし、クロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示した株を選択した。選択した株の中からアンピシリン感受性を示す株、すなわちpKD46が脱落した株を選択し、その株について配列番号9および14で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、proBA遺伝子が欠損していることを確認した。上記のようにしてproBA遺伝子が欠損した株を取得し、エシェリヒアコリJP株と命名した。glnE遺伝子欠損エシェリヒアコリの作製配列番号15および16で表わされる塩基配列からなる合成DNA、並びに配列番号18および20で表わされる塩基配列からなる合成DNAをそれぞれプライマーセットとして用い、常法により調製したエシェリヒアコリJM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を取得した。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物と、catsacB断片を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してcatBsacB断片が挿入されたglnE周辺領域を含む約46kbのDNA断片が増幅されたことを確認した。また配列番号15および17で表わされる塩基配列からなる合成DNA、ならびに配列番号19および20で表わされる合成DNAをそれぞれプライマーセットとして用い、JM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を得た。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してglnE遺伝子が欠失したglnE周辺領域を含む約2kbのDNA断片が増幅されたことを確認した。次にエシェリヒアコリJP株をpKD46で形質転換した後、100mgLのアンピシリンを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpKD46を保持するエシェリヒアコリJP株以下、エシェリヒアコリJPpKD46と称すを選択した。10mmolLのLアラビノースと50μgmlのアンピシリンの存在下で培養して得られたエシェリヒアコリJPpKD46に、電気パルス法により上記で取得したcatsacB断片の挿入されたglnE遺伝子周辺領域を含むDNA断片を導入した。得られた形質転換体を。25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地LBクロラムフェニコールアンピシリンに塗布して培養し、クロラムフェニコール耐性コロニーを選択した。相同組換えが生じた株はクロラムフェニコール耐性かつシュクロース感受性を示すので、選択したコロニーを10シュクロース、25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地およびLBクロラムフェニコールアンピシリンにレプリカし、クロラムフェニコール耐性、かつシュクロース感受性を示した株を選択した。選択した株について配列番号7および15で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、glnE遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入されていることを確認した。glnE遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入された株を上記と同様に培養してコンピテントセルを調製し、上記で得られたglnE遺伝子が欠失したglnE周辺領域を含むDNA断片を電気パルス法により導入した。得られた形質転換体をLBシュクロース寒天培地で培養し、シュクロース耐性コロニーを選択した。相同組換えを起こした株はcatsacB断片は含まず、よってクロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示すため、選択したコロニーをLBクロラムフェニコール寒天培地およびLBシュクロース寒天培地にレプリカし、クロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示した株を選択した。選択した株の中からアンピシリン感受性を示す株、すなわちpKD46が脱落した株を選択し、その株について配列番号15および20で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、glnE遺伝子が欠損していることを確認した。上記のようにしてglnE遺伝子が欠損した株を取得し、エシェリヒアコリJPE株と命名した。gltB、gltD遺伝子欠損エシェリヒアコリの作製配列番号21および22で表わされる塩基配列からなる合成DNA、並びに配列番号24および26で表わされる塩基配列からなる合成DNAをそれぞれプライマーセットとして用い、常法により調製したエシェリヒアコリJM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を取得した。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物と、catsacB断片を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してcatBsacB断片が挿入されたgltB、gltD周辺領域を含む約46kbのDNA断片が増幅されことを確認した。また配列番号21および23で表わされる塩基配列からなる合成DNA、ならびに配列番号25および26で表わされる合成DNAをそれぞれプライマーセットとして用い、JM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を得た。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してgltB、gltD遺伝子が欠失したgltB、gltD周辺領域を含む約2kbのDNA断片が増幅されたことを確認した。次に10mmolLのLアラビノースと50μgmlのアンピシリンの存在下で培養して得られたエシェリヒアコリJPpKD46に、電気パルス法により上記で取得したcatsacB断片の挿入されたgltB、gltD遺伝子周辺領域を含むDNA断片を導入した。得られた形質転換体を、25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地LBクロラムフェニコールアンピシリンに塗布して培養し、クロラムフェニコール耐性コロニーを選択した。相同組換えが生じた株はクロラムフェニコール耐性かつシュクロース感受性を示すので、選択したコロニーを10シュクロース、25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地およびLBクロラムフェニコールアンピシリンにレプリカし、クロラムフェニコール耐性、かつシュクロース感受性を示した株を選択した。選択した株について配列番号7および21で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、gltB、gltD遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入されていることを確認した。gltB、gltD遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入された株を上記と同様に培養してコンピテントセルを調製し、上記で得られたgltB、gltD遺伝子が欠失したgltB、gltD周辺領域を含むDNA断片を電気パルス法により導入した。得られた形質転換体をLBシュクロース寒天培地で培養し、シュクロース耐性コロニーを選択した。相同組換えを起こした株はcatsacB断片は含まず、よってクロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示すため、選択したコロニーをLBクロラムフェニコール寒天培地およびLBシュクロース寒天培地にレプリカし、クロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示した株を選択した。選択した株の中からアンピシリン感受性を示す株、すなわちpKD46が脱落した株を選択し、その株について配列番号21および26で表わされる塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、gltB、gltD遺伝子が欠損していることを確認した。上記のようにしてgltB、gltD遺伝子が欠損した株を取得し、エシェリヒアコリJPBD株と命名した。Lグルタミンの生産実施例2で得られたJP株、JPE株およびJPBD株に実施例1で得られたpTyeiGおよびpTrs30を形質転換した。得られた形質転換体をそれぞれJPpTyeiG、JPpTrs30、JPEpTyeiG、JPEpTrs30、JPBDpTyeiG、JPBDpTrs30と命名した。上記で得られた形質転換体を50μgmlのアンピシリンを含む8mlのLB培地が入った太型試験管に接種し、30°Cで17時間培養した。該培養液を100μgmlのアンピシリンを含む培地[16gLリン酸水素二カリウム、14gLリン酸二水素カリウム、5gL硫酸アンモニウム、1gLクエン酸無水、5gLカザミノ酸ディフコ社製、10gLグルコース、10mgLビタミンB1、25mgL硫酸マグネシウム7水和物、50mgL硫酸鉄7水和物、100mgLLプロリン、pH72に10molLの水酸化ナトリウムで調整、グルコース、ビタミンB1、硫酸マグネシウム7水和物、硫酸鉄7水和物は別個に加圧滅菌後添加した]が8ml入っている試験管に1接種し、30°Cで24時間培養した後、該培養液を遠心分離して培養上清を取得した。該培養上清中の培養生成物の蓄積量を高速液体クロマトグラフィーHPLCにより定量した。結果を表1に示す。グリセロール培地、キシロース培地、アラビノース培地ではグルコースの代わりにこれらを炭素源として用いた。これらの培地を用いた場合の培養生成物の蓄積量を表2~表4に示す。表1~4に示した通り、グルコース、グリセロール、キシロース、アラビノースのいずれを原料とした場合でもエシェリヒアコリJP株にプラスミドpTrs30を導入した株ではLグルタミンの蓄積が全く認められなかったのに対し、プラスミドpTyeiGの導入によりyeiG遺伝子の発現を強化したJPpTyeiG株では、いずれの培地においてもLグルタミンの蓄積が認められた。また、その他の宿主を用いた場合においてもpTyeiGの導入によりpTrs30を導入した場合と比べ顕著なLグルタミン蓄積量の増加が見られた。