"本願明細書に記載された発明。腎細胞ガンRCCは野生型ではあるが機能的には不活性であるp53を維持している。RCCにおけるp53の抑制の機構は優勢であり、これは、ガンにおけるp53機能の回復についての、これまでのところはまだ知られていない分子標的の存在を示している。腫瘍細胞において野生型p53活性を回復させることができる物質を同定することが大いに必要とされている。発明の要旨NF-κB活性に関連する状態は、NF-κBのインヒビターを含む組成物をその必要がある患者に投与することによって処置することができる。NF-κB活性は構成的である場合も、誘導されたものである場合も、または基底レベルである場合もある。NF-κBの阻害によってp53が活性化される場合もある。NF-κBの阻害によって機能的にサイレントであるp53が活性化させられる場合もある。処置される状態は、ガン、炎症、自己免疫疾患、対宿主性移植片病、HIV感染に関連する状態、または構成的に活性なNF-κBに依存して獲得された前ガン細胞であり得る。処置することができるガンの形態としては、腎細胞ガン、肉腫、前立腺ガン、乳ガン、膵臓ガン、骨髄腫、骨髄性白血病およびリンパ芽球性白血病、神経芽細胞腫、膠芽細胞腫、HTLV感染によって引き起こされるガンが挙げられるがこれらに限定はされない。NF-κBのインヒビターは以下の式のアミノアクリジンであり得る:ここで、R1は、Hまたはハロゲンであり;R2は、Hまたは必要に応じて置換されたアルコキシであり;R3は、Hまたは必要に応じて置換されたアルコキシであり;そしてR4は、Hまたは必要に応じて置換された脂肪族、アリール、もしくは複素環である。アミノアクリジンは9-アミノアクリジンまたはキナクリンであり得る。組成物にはさらに、TNFファミリーのポリペプチドの死受容体の活性化因子が含まれる場合がある。活性化因子は、TNFポリペプチド例えば、NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L、CD27L/CD70、FasL/CD95、CD30L、TNF-β/LT-α、LT-β、またはTRAILであり得る。機能的にサイレントなp53を調節する物質は、候補の物質を、p53応答性レポーターを含む細胞に対して加え、そしてp53応答性レポーターのシグナルのレベルを測定することによって同定することができる。この物質は、対照と比較したシグナルの差によって同定することができる。この物質はp53の活性を増大させる場合も、また低下させる場合もある。細胞には、機能的にサイレントなp53が含まれる場合がある。NF-κBを調節する物質は、候補の物質を、p53応答性レポーターを含む細胞に対して加え、そしてp53応答性レポーターのシグナルのレベルを測定することによって同定することができる。この物質は、対照と比較したシグナルの差によって同定することができる。この物質はNF-κBの活性を増大させる場合も、また低下させる場合もある。細胞には、機能的にサイレントなp53が含まれる場合がある。細胞には、NF-κBトランス活性化複合体も含まれる場合がある。例えば、本願発明は以下の項目を提供する。項目1NF-κB活性に関連する状態を処置する方法であって、NF-κBのインヒビターを含む組成物を、その必要がある患者に投与する工程を包含する、方法。項目2前記NF-κB活性が構成的であるかまたは誘導されたものである、項目1に記載の方法。項目3前記NF-κB活性が基底レベルにある、項目1に記載の方法。項目4NF-κBの阻害によってp53が活性化される、項目1に記載の方法。項目5前記状態がガンである、項目1に記載の方法。項目6NF-κBの阻害によって、機能が損なわれた野生型p53の活性化が誘導される、項目5に記載の方法。項目7前記ガンが、腎細胞ガン、肉腫、前立腺ガン、乳ガン、膵臓ガン、骨髄腫、骨髄性白血病およびリンパ芽球性白血病、神経芽細胞腫、膠芽細胞腫、およびHTLV感染によって引き起こされるガンからなる群より選択される、項目5に記載の方法。項目8前記状態が、炎症、自己免疫疾患、対宿主性移植片病、またはHIV感染に関連する状態である、項目1に記載の方法。項目9前記状態が、構成的に活性なNF-κBに依存して獲得された前ガン細胞である、項目1に記載の方法。項目10NF-κBのインヒビターが以下の式:のアミノアクリジンであり、ここで、R1は、Hまたはハロゲンであり;R2は、Hまたは必要に応じて置換されたアルコキシであり;R3は、Hまたは必要に応じて置換されたアルコキシであり;そしてR4は、Hまたは必要に応じて置換された脂肪族、アリール、もしくは複素環である、項目1に記載の方法。項目11前記アミノアクリジンが、9-アミノアクリジンおよびキナクリンからなる群より選択される、項目10に記載の方法。項目12前記組成物はさらに、TNFファミリーのポリペプチドの死受容体の活性化因子を含む、項目10に記載の方法。項目13前記活性化因子が、NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L、CD27L/CD70、FasL/CD95、CD30L、TNF-β/LT-α、LT-β、およびTRAILからなる群より選択されるTNFファミリーのポリペプチドである、項目12に記載の方法。項目14機能的にサイレントなp53を活性化させる物質をスクリーニングする方法であって:a候補の物質を、p53応答性レポーターを含む細胞に対して加える工程;b該p53応答性レポーターのシグナルのレベルを測定する工程を包含し、それによって、bでの対照を上回るシグナルによって物質が同定される、方法。項目15前記細胞が、機能的にサイレントなp53を含む、項目14に記載の方法。項目16NF-κBを阻害する物質をスクリーニングする方法であって:a候補の物質を、p53応答性レポーターを含む細胞に対して加える工程;b該p53応答性レポーターのシグナルのレベルを測定する工程を包含し、それによって、bでの対照を上回るシグナルによって物質が同定される、方法。項目17前記細胞が機能的にサイレントなp53を含む、項目16に記載の方法。項目18前記細胞がNF-κBトランス活性化複合体を含む、項目16に記載の方法。詳細な説明本発明の化合物、生成物、および組成物、ならびに方法を開示し、そして記載する前に、本明細書中で使用される専門用語は特定の実施形態を記載する目的のためだけのものであり、限定するようには意図されないことが理解される。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形a、an、およびtheには、その状況が他の場所で明確に示されない限りは複数形についての言及も含まれることに留意されなければならない。1.定義用語分岐しているは、本明細書中で使用される場合は、1個から24個までの骨格原子を含む基であって、ここで、この基の骨格鎖が主鎖からの1つ以上の付随する分岐を含む基を意味する。本明細書中の好ましい分岐している基には1個から12個までの骨格原子が含まれる。分岐している基の例としては、イソブチル、t-ブチル、イソプロピル、-CH2CH2CHCH3CH2CH3、-CH2CHCH2CH3CH2CH3、-CH2CH2CCH32CH3、-CH2CH2CCH33などが挙げられるがこれらに限定はされない。用語分岐していないは、本明細書中で使用される場合は、1個から24個までの骨格原子を含む基であって、ここで、この基の骨格鎖が一直線に伸びている基を意味する。本明細書中の好ましい分岐していない基には1個から12個までの骨格原子が含まれる。用語環式またはシクロは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、3個から12個までの骨格原子、好ましくは、3個から7個の骨格原子の環を保有している1つ以上の閉じた環不飽和であるか飽和であるかは問わないを有している基を意味する。用語低級は、本明細書中で使用される場合は、1個から6個の骨格原子を有している基を意味する。用語飽和は、本明細書中で使用される場合は、骨格原子の全ての利用可能な原子価結合が他の分子に結合している基を意味する。飽和基の代表的な例としては、ブチル、シクロヘキシル、ピペリジンなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語不飽和は、本明細書中で使用される場合は、2つの隣接している骨格原子の少なくとも1つの利用可能な原子価結合が他の原子には結合していない基を意味する。不飽和基の代表的な例としては、-CH2CH2CH=CH2、フェニル、ピロールなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語脂肪族は、本明細書中で使用される場合は、分岐していない基、分岐している基、または環状の炭化水素基を意味し、これは置換されている場合も、また置換されていない場合もあり、飽和である場合も、また、不飽和である場合もあるが、芳香族ではない。用語脂肪族にはさらに、炭化水素骨格の1つ以上の炭素を置き換えている酸素、窒素、硫黄、またはリン原子を含む脂肪族基が含まれる。用語芳香族は、本明細書中で使用される場合は、4n2個の非局在πパイ電子を有している不飽和の環式炭化水基を意味し、これは置換されている場合も、また置換されていない場合もある。用語芳香族にはさらに、炭化水素骨格の1つ以上の炭素を置き換えている窒素原子を含む芳香族基が含まれる。芳香族基の例としては、フェニル、ナフチル、チエニル、フラニル、ピリジニル、イソオキサゾリルなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語置換されたは、本明細書中で使用される場合は、1つ以上の水素または他の原子が炭素または適切なヘテロ原子から除去され、そして、別の基で置き換えられている基を意味する。本明細書中の好ましい置換された基は、1個から5個、最も好ましくは1個から3個の置換基で置換されている。2つの置換基を有している原子はジと記載され、一方、2つ以上の置換基を有している原子はポリによって記載される。このような置換基の代表的な例としては、脂肪族基、芳香族基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルコキシ、ハロ、アリールオキシ、カルボニル、アクリル、シアノ、アミノ、ニトロ、リン含有基、硫黄含有基、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アシルアミノ、アミジノ、イミノ、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、アルキルスルフィニル、トリフルオロメチル、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール、ヘテロアリール、セミカルバジド、チオセミカルバジド、マレイミド、オキシイミノ、イミデート、シクロアルキル、シクロアルキルカルボニル、ジアルキルアミノ、アリールシクロアルキル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アリールシクロアルキルカルボニル、アリールホスフィニル、アリールアルキルホスフィニル、アリールシクロアルキルホスフィニル、アリールホスホニル、アリールアルキルホスホニル、アリールシクロアルキルホスホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、アリールシクロアルキルスルホニル、これらの組み合わせ、およびこれらの置換基が挙げられるがこれらに限定はされない。用語置換されていないは、本明細書中で使用される場合は、それに対していずれの基もさらに結合させられていないか、またはそれについて置換されていない基を意味する。用語アルキルは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、分岐しているかまたは分岐していない、飽和脂肪族基を意味する。アルキル基の代表的な例としては、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、オクチル、デシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語アルケニルは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、鎖に沿っていずれかの安定した部位で生じ得る少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含む、分岐しているかまたは分岐していない、不飽和脂肪族基を意味する。アルケニル基の代表的な例としては、エテニル、E-およびZ-ペンテニル、デセニルなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語アルキニルは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、鎖に沿っていずれかの安定した部位で生じ得る少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を含む、分岐しているかまたは分岐していない、不飽和脂肪族基を意味する。アルキニル基の代表的な例としては、エチニル、プロピニル、プロパルギル、ブチニル、ヘキシニル、デシニルなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語アリールは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、必要に応じて他の芳香族環式基または非芳香族環式基に縮合させることができる、置換されているかまたは置換されていない芳香族基を意味する。アリール基の代表的な例としては、フェニル、ベンジル、ナフチル、ベンジリジン、キシリル、スチレン、スチリル、フェネチル、フェニレン、ベンゼントリイルなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語アルコキシは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、1つの末端エーテル結合によって結合させられたアルキル、アルケニル、またはアルキニル基を意味する。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソ-プロポキシ、n-ブトキシ、2-ブトキシ、tert-ブトキシ、n-ペントキシ、2-ペントキシ、3-ペントキシ、イソペントキシ、ネオペントキシ、n-ヘキソキシ、2-ヘキソキシ、3-ヘキソキシ、3-メチルペントキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、クロロメトキシ、ジクロロメトキシ、およびトリクロロメトキシが挙げられるがこれらに限定されない。用語アリールオキシは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、1つの末端エーテル結合によって結合させられたアリール基を意味する。用語ハロゲン、ハライド、またはハロは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、フッ素F、塩素Cl、臭素Br、ヨウ素I、およびアスタチンAtを意味する。ハロ基の代表的な例としては、クロロアセトアミド、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミドなどが挙げられるがこれらの限定はされない。用語ヘテロは、本明細書中で使用される場合は、組み合わせて、炭素または水素以外の任意の元素の1つ以上の原子を含む基を意味する。ヘテロ基の代表的な例としては、窒素、酸素、硫黄、およびリンを含むがこれに限定されないヘテロ原子を含む基が挙げられるがこれらに限定はされない。用語複素環は、本明細書中で使用される場合は、ヘテロ原子を含む環式基を意味する。複素環の代表的な例としては、ピリジン、ピペラジン、ピリミジン、ピリダジン、ピペラジン、ピロール、ピロリジノン、ピロリジン、モルホリン、チオモルホリン、インドール、イソインドール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、フラン、ベンゾフラン、ジベンゾフラン、チオフェン、チアゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾチオフェン、キノリン、イソキノリン、アザピン、ナフトピラン、フラノベンゾピラノンなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語カルボニルまたはカルボキシは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、炭素-酸素二重結合を含む基を意味する。カルボニルを含む基の代表的な例としては、アルデヒドすなわち、ホルミル、ケトンすなわち、アシル、カルボン酸すなわち、カルボキシル、アミドすなわち、アミド、イミドすなわち、イミド、エステル、無水物などが挙げられるがこれらに限定はされない。用語アクリルは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、CH2=CQCOO-によって表される基を意味する。ここでは、Qは脂肪族または芳香族基である。用語シアノ、シアネート、またはシアン化物は、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、炭素-窒素二重結合を意味する。シアノ基の代表的な例としては、イソシアネート、イソチオシアネートなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語アミノは、本明細書中で使用される場合は、単独で、または組み合わせて、骨格窒素原子を含む基を意味する。アミノ基の代表的な例としては、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル、ウレイドなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語リン含有基は、本明細書中で使用される場合は、酸化された状態で少なくとも1つのリン原子を含む基を意味する。代表的な例としては、リン酸、ホスフィン酸、リン酸エステル、ホスフィニデン、ホスフィノ、ホスフィニル、ホスフィニリデン、ホスホ、ホスホン、ホスホラニル、ホスホラニリデン、ホスホロソなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語硫黄含有基は、本明細書中で使用される場合は、硫黄原子を含む基を意味する。代表的な例としては、スルフヒドリル、スルフェノ、スルフィノ、スルフィニル、スルホ、スルホニル、チオ、チオキソなどが挙げられるがこれらに限定はされない。用語必要に応じたまたは必要に応じては、本明細書中で使用される場合は、続いて記載される事象または状況が生じる場合も、または生じない場合もあり、そして、この記載には、上記の事象または状況が起こる例と、それが起こらない例が含まれることを意味する。例えば、表現必要に応じて置換されたアルキルは、アルキル基が置換されている場合も、または置換されていない場合もあり、そしてこの記載には、置換されていないアルキルと置換されているアルキルの両方が含まれることを意味する。用語有効量は、本明細書中で提供される化合物、生成物、または組成物に関して使用される場合は、所望される結果を提供するために十分な量の化合物、生成物、または組成物を意味する。必要な抽出物の量は、使用される特定の化合物、生成物、または組成物、その投与形式などに応じて様々であろう。したがって、正確な有効量を特定することは必ずしも可能ではない。しかし、適切な有効量は、日常的に行われている実験だけを使用することによって本発明の開示によって与えられる情報により当業者であれば決定できる。用語適切なは、本明細書中で使用される場合には、記載される目的についての本明細書中で提供される化合物、生成物、または組成物と適合する基を意味する。記載される目的についての適合は、日常的に行われている実験だけを使用して当業者であれば容易に決定できる。本明細書中で使用される場合は、用語投与するは、化合物の投与量を記載するために使用される場合には、化合物の単回投与または複数回投与を意味する。本明細書中で使用される場合は、アポトーシスは、細胞小器官の完全性を保ったままの細胞体積の段階的な収縮;光学顕微鏡または電子顕微鏡で見ることができるクロマチンの凝縮すなわち、核の凝縮;ならびに/あるいは、遠心分離堆積アッセイcentrifugedsedimentationassayによって決定されるヌクレオソームのサイズの断片へのDNAの切断を含む、細胞死の1つの形態を意味する。細胞死は、食作用性細胞による完全な細胞断片アポトーシスボディーの飲み込みを伴って、細胞膜の完全性が失われる例えば、膜のブレブ形成と生じる。本明細書中で使用される場合は、用語ガンは、アポトーシス性の刺激に対する耐性を特徴とする任意の状態を意味する。本明細書中で使用される場合は、用語ガンの処置は、化学療法および放射線治療を含むがこれらに限定されない当該分野で公知のガンについての任意の処置を意味する。本明細書中で使用される場合は、用語~との組み合わせは、アミノアクリジンの投与および別の処置手段を記載するために使用される場合には、アミノアクリジンを、別の処置の前に、別の処置と一緒に、または別の処置の後で、あるいはそれらと組み合わせて投与することができることを意味する。本明細書中で使用される場合は、用語処置または処置するは、ある状態からの哺乳動物の防御について言う場合には、この状態を予防する、抑制する、抑える、または排除することを意味する。状態の予防には、この状態の発症の前に哺乳動物を処置することが含まれる。状態の抑制には、状態の誘導後ではあるが、その臨床的所見の前に哺乳動物を処置することが含まれる。状態を抑えることには、状態の臨床的所見の後に哺乳動物を処置することが含まれ、その結果、状態は軽減されるか、または維持される。状態の排除には、状態の臨床的所見の後に哺乳動物を処置することが含まれ、その結果、哺乳動物はそれ以上の状態に見舞われることはない。本明細書中で使用される場合は、用語腫瘍細胞は、アポトーシス性の刺激に対する耐性を特徴とする任意の細胞を意味する。2.腫瘍中でのp53の抑制についてのNF-κBによって媒介される機構本発明は、NF-κB活性を阻害することにより、機能的にブロックされたp53を有しているガン細胞においてp53が活性化される場合があるという発見に関係する。腫瘍中のp53経路の不活化は、p53変異よりもはるかに広い範囲の現象である。腫瘍が野生型p53を維持していてもなお、その機能は通常は完全であるか、または一部が失われているかのいずれかである。これらの場合には、そのようなガンの中のp53は薬理学的再活性化のための標的と見ることができるので、治療の観点から特に興味深い。p53活性が組織特異的機構によってブロックされているいくつかのタイプの腫瘍が存在している。したがって、Hdm2の過剰発現は肉腫において特に頻度が高く、一方、ヒトパピローマウイルスのE6は大部分の子宮頸ガンにおいてp53を不活化する。RCCは、この種類の腫瘍の別の例を提供し、これは、本発明者らによって最近報告されたように、RCCの中の野生型p53が、おそらくは組織特異的である未知の優勢な機構によって抑えられているので、とりわけ興味深い分析対象である。したがって、p53の再活性化は、この、これまでのところは治療不可能な形態のガンの処置のため、ならびに、p53を不活化させるための同様の機構を有している他のガンの処置についての興味深い方針であると考えられている。NF-κB活性は、インビトロおよびインビボでのアポトーシスの抑制に関係している。常に、多くのアポトーシス耐性腫瘍はNF-κBの構成的な活性化を獲得する。腫瘍細胞中でのNF-κBの活性化は、おそらく、自然界での死の刺激例えば、TNF,Fas、またはTRAILおよび薬理学的な死の刺激化学療法剤のいずれに対しても耐性を提供することによって、おそらくその悪性の表現型を導いている。構成的に活性なNF-κBは多くの腫瘍のタイプにおいて記載されているが、NF-κBの活性化とp53の阻害との間の関係は、完全には理解されてはいない。ガン例えば、機能性p53または野生型p53を有しているガンは、NF-κB活性を阻害することによって処置される場合がある。これは、野生型p53活性の回復とその活性化を導くことができる。NF-κB活性のインヒビターはまた、化学療法、放射線治療、自然界に存在している死リガンド例えば、TNFポリペプチドのような処置によるp53依存性のアポトーシスまたはp53非依存性のアポトーシスに対してガンを感作させるためにも使用される場合がある。それらのp53の状態にはかかわらず、大部分のヒトのガンは、構成的にNF-κBを過剰に活性化させる。結果として、NF-κBのインヒビターは、トランス活性化NF-κB複合体の転写抑制複合体への再プログラミングの理由から、それらのp53状態にはかかわらずいずれの腫瘍の処置にも使用することができる。3.アミノアクリジンアミノアクリジンは、NF-κB活性を阻害するために使用することができる物質の代表的な例である。アミノアクリジンは以下の式のものであり得る:ここで、R1は、Hまたはハロゲンであり;R2は、Hまたは必要に応じて置換されたアルコキシであり;R3は、Hまたは必要に応じて置換されたアルコキシであり;そしてR4は、Hまたは必要に応じて置換された脂肪族、アリール、もしくは複素環である。アミノアクリジンの代表的な例としては、9-アミノアクリジンまたはメパクリンMepacrineこれは、キナクリンとしても知られている、さらには、実施例2に記載されるアミノアクリジンが挙げられるがこれらに限定はされない。腫瘍細胞を感作させるためにアミノアクリジンを使用することは、多くのアミノアクリジンが限られた副作用しか有さないので、魅力的である。9AAは、1942年から治療薬として使用されている。特定の9AA誘導体は、DNA損傷活性を介在できると考えられている。しかし、本発明者らにより、9AAとキナクリンはDNA損傷活性を示さないことが見出された。9aaとキナクリンはいずれも、インビトロおよびインビボで正常な細胞に比べて腫瘍に対してより毒性があることが明らかにされている。さらに、いずれの化合物も、RCCを除く様々な腫瘍細胞のタイプについてp53を活性化させることができ、そしてp53依存性の死滅をさせることができることが示されている。p53依存性のそれらの抗腫瘍活性は、それらの野生型p53または機能性p53を有している腫瘍の標的化に基づいて、従来の化学療法剤からアミノアクリジンを明確に区別させる。アミノアクリジンはp53活性化物質のいずれの既知のカテゴリーにも適合しない。これらはp53の蓄積を引き起こし得るが、これらは、DNA損傷薬とは異なり、p53のリン酸化を誘導することはできない。さらに、アミノアクリジンはDNAの損傷を引き起こすことはない。その代わりに、アミノアクリジンの最初の効果は、p53の活性化に対しては現れず、NF-κBの抑制に対して現れる。これは、後にp53の誘導を導く。重要なことは、NF-κBの阻害によって、細胞内で、p53の活性化に対する直接的なアプローチのいずれによっても目を覚まさせることができないp53機能が活性化されることであり、これには、Arfの導入、Hdm2のノックダウン、またはp53の異所性の過剰発現が含まれる。NF-κBの阻害は、通常は、NF-κBの主要なネガティブ調節因子であるIκBの安定化を通じて行われる。遺伝的には、これは、このタンパク質の調節性のリン酸化部位を変異させることによって、そして、IκBリン酸化のブロックを導く上流のキナーゼの阻害を通じて薬理学的に行うことができる。多くの既知のNF-κBの化学的インヒビターは、この機構を通じて作用する。IκBの安定化によって、細胞質隔離と、転写因子としてのNF-κB複合体の機能的不活化が生じる。アミノアクリジンの活性は、それらが、トランス活性化の完全な抑制を伴う活性化の刺激に応答して、核内でのNF-κB複合体の蓄積を強力に促進するので、これまでの薬物よりも優れている場合がある。したがって、アミノアクリジンは、IκBの下流で作用し、そしてNF-κBの不活性な複合体への変換を含む機構によってNF-κBを阻害することができる。NF-κB依存性転写の欠損によって、IκBこれは、NF-κBの直接的な転写標的であるのプールの枯渇と、通常は、IκBによって発揮される、核からの排出の欠損が原因である核内でのNF-κBの保持が導かれる場合がある。興味深いことに、NF-κB活性化が関係している細胞性因子IKKα、IKKβ、TBK1、PKC-ζのいずれのノックアウトによっても、アミノアクリジンの効果は模倣されず、このことは、これらの全てがアミノアクリジンの標的ではないことを示唆している。p65を含む不活性なNF-κB複合体の核での蓄積がUV、ドキソルビシン、およびダウノルビシンでの細胞の処理の後に生じることが最近報告されたが、これらの処置はいずれも、おそらくはNF-κB阻害活性が弱いことが原因で、p53を活性化することにおいてはアミノアクリジンと匹敵するものではない。アミノアクリジンは、NF-κBによるシグナル伝達標準的なNF-κB活性化経路のIκBリン酸化アームに対してだけではなく、NF-κB活性化の別の機構を介しても有効であり得る。これは、刺激されたNF-κB活性をブロックするアミノアクリジン例えば、9AAの能力によってサポートされ、そして腫瘍細胞の中での構成的NF-κB活性の基底レベルをもまた効率よく低下させる。対照的に、IKK2インヒビターは、刺激されたNF-κB活性をブロックすることができるのみである。4.組成物本発明は、アミノアクリジンと必要に応じて化学療法剤を含む組成物に関係する。本発明はまた、アミノアクリジンと必要に応じてTNFポリペプチドを含む組成物にも関係する。a.化学療法剤化学療法剤は、アポトーシスを誘導する任意の薬理学的物質または化合物であり得る。薬理学的物質または化合物は、例えば、有機低分子、ペプチド、ポリペプチド、核酸、または抗体である場合もある。化学療法剤は、細胞傷害性物質または細胞増殖抑制剤、あるいはそれらの組み合わせである場合もある。細胞傷害性物質は、1DNAを複製する細胞の能力を妨害すること、ならびに2ガン細胞中で細胞死および/またはアポトーシスを誘導することによって、ガン細胞が増殖することを妨げる。細胞増殖抑制剤は、細胞増殖を調節する細胞性のシグナル伝達プロセスの調節、妨害、または阻害を通じて作用し、そして時には低い連続的レベルで存在する。細胞傷害性物質として使用することができる化合物のクラスとしては、以下が挙げられる:アルキル化剤ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素、およびトリアジンを含むがこれらに限定はされない;ウラシルマスタード、クロロメチン、シクロホスファミドCytoxan登録商標、イフォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレン-メラミン、トリエチレンチオホスホルアミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、およびテモゾロミド;代謝拮抗物質葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、およびアデノシンデアミナーゼインヒビターを含むがこれらに限定はされない:メトトレキセート、5-フルオロウラシル、フロキシウリジン、シタラビン、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、およびゲムシタビン;自然界に存在している生成物およびそれらの誘導体例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍性抗生物質、酵素、リンホカイン、およびエピポドフィロトキシン:ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ara-c、パクリタキセルパクリタキセルはタキソールTaxol登録商標として市販されている、ミトラマイシン、デオキシコ-ホルマイシン、マイトマイシン-c、l-アスパラギナーゼ、インターフェロン好ましくは、IFN-α、エトポシド、およびテニポシド。他の増殖性細胞傷害性物質は、ナベルベンnavelbene、CPT-11、アナストラゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イフォサミド、およびドロロキサフィンである。微小管に影響を及ぼす物質は、細胞の有糸分裂を妨害し、そしてそれらは細胞傷害活性について当該分野でよく知られている。本発明に有用な微小管に影響を及ぼす物質としては、アロコルヒチンNSC406042、ハリコンドリンBNSC609395、コルヒチンNSC757、コルヒチン誘導体例えば、NEC33410、ドラスタチン10NSC376128、マイタンシンNSC153858、リゾキシンNSC332598、パクリタキセルタキソール登録商標、NSC125973、タキソール登録商標誘導体例えば、誘導体例えば、NSC608832、チオコルヒチンNSC361792、トリチルシステインNSC83265、硫酸ビンブラスチンNSC49842、硫酸ビンクリスチンNSC67574、自然界に存在しているエポチロンおよび合成のエポチロンエポチロンA、エポチロンB、およびジスコデルモライドを含むがこれらに限定はされないService,1996Science,274:2009を参照、エストラムチン、ノコダゾール、MAP4などが挙げられるがこれらに限定はされない。このような物質の例はまた、Bulinski1997J.CellSci.110:3055-3064;Panda1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:10560-10564;Muhlradt1997CancerRes.57:3344-3346;Nicolaou1997Nature387:268-272;Vasquez1997Mol.Biol.Cell.8:973-985;およびPanda1996J.Biol.Chem.271:29807-29812にも記載されている。エピドフィロトキシンのような細胞傷害性物質;抗新生物性の酵素;トポイソメラーゼインヒビター;プロカルバジン;ミトキサントロン;シスプラチンおよびカルボプラチンのような白金配位錯体;生物学的応答修飾因子;増殖インヒビター;抗ホルモン治療薬;ロイコボリン;テガフール;および造血性成長因子もまた適している。使用することができる細胞増殖抑制剤としては、ホルモンおよびステロイド合成のアナログを含むが挙げられるがこれらに限定はされない:17α-エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニソン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニソロン、メチル-テストステロン、プレドニソロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセンhlorotrianisene、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックスが挙げられるがこれらに限定はされない。他の細胞増殖抑制剤は、マトリックスメタロプロテイナーゼインヒビターのような抗血管形成剤、および抗VEGF抗体のような他のVEGFインヒビターであり、そして、ZD6474およびSU6668のような低分子もまた含まれる。Genetechによる抗Her2抗体もまた利用することができる。適切なEGFRインヒビターはEKB-569不可逆的インヒビターである。EGFRに免疫特異的なImclone抗体C225、およびsrcインヒビターもまた含まれる。カソデックスCasodex登録商標ビカルタミド、AstraZenecaもまた細胞増殖抑制剤としての使用に適している。これは、アンドロゲン依存性のガン腫を非増殖性にする。細胞増殖抑制剤のさらに別の例は抗エストロゲンであるタモキシフェンTamoxifen登録商標であり、これは、エストロゲン依存性の乳ガンの増殖または成長を阻害する。細胞増殖シグナルの伝達のインヒビターは、細胞増殖抑制剤である。代表的な例としては、上皮成長因子インヒビター、Her-2インヒビター、MEK-1キナーゼインヒビター、MAPKキナーゼインヒビター、PI3インヒビター、Srcキナーゼインヒビター、およびPDGFインヒビターが挙げられる。b.TNFポリペプチドTNFポリペプチドは、リガンドのTNFスーパーファミリーのメンバーであり得る。TNFポリペプチドの代表的な例としては、NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L、CD27L/CD70、FasL/CD95、CD30L、TNF-β/LT-α、LT-β、およびTRAILが挙げられるがこれらに限定はされない。TNFスーパーファミリーのメンバーは、免疫系の維持および機能に関係しており、そしてアポトーシスを誘発することができる、自然界に存在しているタンパク質である。TNFポリペプチドはTRAILである場合もあり、これは、主に腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導するが、正常な細胞では誘導しない。これらのいわゆる死リガンドの活性は、TNF受容体ファミリーのメンバーとの結合によって媒介されると考えられている。TNF受容体ファミリーには、それらの細胞内部分に構造が類似している死ドメインが含まれる。個々の死リガンドに特異的なこれらの受容体の連結によって、カスパーゼの活性化を生じる事象のカスケードの活性化が誘発される。TNFポリペプチドによって結合されるTNF-R受容体の代表的な例としては、LNGFR/p75、CD40、CD137/4-1BB/ILA、TNFRI/p55/CD120a、TNFRII/p75/CD120b、CD134/OX40/ACT35、CD27、Fas/CD95/APO-1、CD30/Ki-1、LT-βR、DR3、DR4、DR5、DcR1/TRID、TR2、GITR、およびオステオプロテゲリンが挙げられるがこれらに限定はされない。腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導するそれらの特有の能力の理由から、TNFファミリーのメンバーは抗ガン剤である可能性があると考えられる。しかし、多くの腫瘍細胞は死リガンドのプロアポトーシス作用を回避し、それによって死リガンド感受性であるガンに対するこれらの物質の使用を減少させ、腫瘍が宿主免疫応答を回避できる。NF-κBのインヒビターの使用は、死リガンド例えば、TNFポリペプチドの死滅に対して腫瘍細胞を感作させるために使用することができる。他の物質をTNFポリペプチドの代わりに使用できることもまた想定される。例えば、TNFポリペプチドの活性を模倣する抗体を使用することができる。このような抗体の代表的な例としては、FAS、TRAIL受容体、またはTNFRに対するアゴニスト抗体が挙げられるがこれらに限定はされない。加えて、アプタマーおよび対応するレセプターを活性化することができる他の合成のリガンドが使用される場合もある。c.塩組成物の有効成分は、種々の薬学的に許容される塩の形態で有用であり得る。用語薬学的に許容される塩は、薬剤師に明らかである塩の形態、すなわち、実質的に非毒性であり、所望される薬物動態特性、おいしさ、吸収、分布、代謝、または排せつの特性を提供するものを意味する。より実際的には、選択においてもまた重要である他の要因は、原材料費、結晶化の容易さ、収量、安定性、吸湿性、および得られるバルクの薬物の流動性である。好都合なことに、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせて有効成分から、またはそれらの薬学的に許容される塩から調製され得る。有効成分の薬学的に許容される塩としては、塩酸、ヒドロキシメタンスルホン酸、臭化水素、メタンスルホン酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファミン酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、パモン酸、スルファニル酸、2-アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセトン酸isethonicacidのような様々な有機酸および無機酸を用いて形成された塩が挙げられるがこれらに限定はされず、そして、種々の他の薬学的に許容される塩例えば、硝酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩などが含まれる。四級アンモニウムイオンのような陽イオンは、陰イオン性部分についての薬学的に許容される対イオンとして想定される。加えて、本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、ナトリウム、カリウム、およびリチウムのようなアルカリ金属;カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属;ジシクロヘキシルアミン、トリブチルアミン、およびピリジンのような有機塩基;ならびにアルギニン、リジンなどのアミノ酸を用いて形成され得る。薬学的に許容される塩は、通常の化学的な方法によって合成することができる。一般的には、塩は、遊離の塩基または酸を、化学量論的な量または過剰な、所望される塩を形成する、無機もしくは有機の酸または塩基と、適切な溶媒または溶媒混合物中で反応させることによって調製される。一般的には、塩の対イオンは、化合物を合成するのに使用される反応物質によって決定することができる。反応物質に応じた、塩の対イオンの混合物が存在する場合がある。例えば、NaIが反応を促進させるために添加される場合は、対イオンは、ClとIとの対アニオンの混合物であり得る。さらに、プレパラティブHPLCによって、酢酸が溶媒の中に存在する場合には、元々の対イオンが、酢酸陰イオンによって交換されることになる場合もある。塩の対イオンは、様々な対イオンに交換することができる。対イオンは好ましくは、上記に記載される塩を形成するように、薬学的に許容される対イオンに交換される。対イオンを交換するための手順は、WO2002/042265、WO2002/042276、およびS.D.Clas,QuaternizedColestipol,animprovedbilesaltabsorbent:InVitrostudies.JournalofPharmaceuticalSciences,802:128-1311991その内容は引用により本明細書中に組み入れられるに記載されている。明確にするという理由のために、対イオンは、本明細書中の化学構造に示すことはできない。d.処方物組成物にはさらに、1つ以上の薬学的に許容される別の成分単数または複数例えば、ミョウバン、安定剤、抗微生物剤、緩衝液、着色剤、香味剤、アジュバントなどが含まれる場合がある。組成物は、通常の様式で処方された錠剤またはトローチ剤の形態である場合もある。例えば、経口投与用の錠剤およびカプセル剤には、一般的な賦形剤が含まれる場合がある。賦形剤としては、結合剤、増量剤、滑沢剤、崩壊剤、および湿潤剤が挙げられるがこれらに限定はされない。結合剤としては、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプンの粘液、およびポリビニルピロリドンが挙げられるがこれらに限定はされない。増量剤としては、乳糖、糖、微結晶セルロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、およびソルビトールが挙げられるがこれらに限定はされない。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、およびシリカが挙げられるがこれらに限定はされない。崩壊剤としては、ジャガイモデンプン、およびグリコール酸ナトリウムデンプンが挙げられるがこれらに限定はされない。湿潤剤としては、ラウリル硫酸ナトリウムが挙げられるがこれらに限定はされない。錠剤は、当該分野で周知の方法にしたがってコーティングすることができる。組成物はまた、液体処方物である場合もある。これには、水性または油性の懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ、およびエリキシル剤が含まれるがこれらに限定はされない。組成物はまた、使用前に水または他の適切な媒体で構成するための乾燥生成物として処方される場合もある。このような液体調製物には、添加剤が含まれる場合がある。添加剤としては、懸濁剤、乳化剤、非水性媒体、および保存剤が挙げられるがこれらに限定はされない。懸濁剤としては、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース/糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、および水素化食用脂が挙げられるがこれらに限定はされない。乳化剤としては、レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、およびアカシアが挙げられるがこれらに限定はされない。非水性媒体としては、食用油脂、アーモンド油、ヤシ油、油性のエステル、プロピレングリコール、およびエチルアルコールが挙げられるがこれらに限定はされない。保存剤としては、p-ヒドロキシ安息香酸メチルまたはp-ヒドロキシ安息香酸プロピル、およびソルビン酸が挙げられるがこれらに限定はされない。組成物はまた、坐剤として処方することもできる。これには、ココアバターまたはグリセリドを含むがこれらに限定はされない坐剤基剤が含まれ得る。組成物はまた、吸入用に処方される場合もある。これは、液剤、懸濁液、または乳濁液を含むがこれらに限定されない形態であり得、乾燥粉末として、あるいは、高圧ガス例えば、ジクロロジフルオロメタンまたはトリクロロフルオロメタンを使用してエアゾールの形態で投与される場合がある。組成物はまた、クリーム剤、軟膏、ローション、ペースト、薬の入った湿布薬、パッチ、または膜を含むがこれらに限定はされない、水性または非水性の媒体を含む、処方された経皮用処方物である場合もある。組成物はまた、注射または点滴を含むがこれらに限定されない方法による、非経口投与用に処方される場合もある。注射用の処方物は、油性または水性の媒体中の懸濁液、液剤、または乳濁液の形態であり得、そして懸濁剤、安定剤、および分散剤を含むがこれらに限定はされない処方剤が含まれる場合がある。組成物はまた、滅菌の発熱物質を含まない水を含むがこれに限定はされない適切な媒体での再構成用の粉末形態で提供される場合もある。組成物はまた、デポー製剤として処方される場合もある。これは、移植によって、または筋肉内注射によって投与することができる。組成物は、適切な高分子物質または疎水性物質例えば、許容される油の中の乳濁液として、イオン交換樹脂とともに、あるいは、難溶性誘導体として例えば、難溶性の塩として処方される場合もある。組成物はまた、リポソーム調製物として処方される場合もある。リポソーム調製物には、目的の細胞または角質層に浸潤して細胞膜と融合し、それによってリポソーム内容物の細胞内への送達を生じるリポソームを含めることができる。例えば、米国特許第5,077,211号、米国特許第4,621,023号、または米国特許第4,508,703号これらは引用により本明細書中に組み入れられるに記載されているリポソームのようなリポソームを使用することができる。皮膚の状態を標的化するように意図された組成物は、酸化によるダメージを引き起こすUVまたは複数の物質に対する哺乳動物の皮膚の露出前、露出の間、または露出後に投与することができる。他の適切な処方物は、ニオゾームniosomeを使用することができる。ニオゾームは、大部分が非イオン性脂質から構成される膜を有している、リポソームと類似している脂質小胞であり、そのいくつかの形態は角質層を通過して化合物を輸送するために有効である。5.処置組成物は、アミノアクリジンをそれを必要としている患者に投与することにより、インビボでNF-κB活性に関連する状態を処置するために使用され得る。NF-κB活性は、任意のレベルであり得、その低下によって状態の処置が導かれる。NF-κB活性はまた基底レベルである場合もある。NF-κB活性はまた、構成的なレベルである場合もある。NF-κB活性はまた、誘導された構成的なレベルである場合もある。NF-κB活性に関連する状態はガンである場合もある。以下を含むがそれらに限定はされない種々のガンが処置され得る:膀胱ガン加速された膀胱ガンおよび転移性膀胱ガン、乳ガン、結腸ガン結腸直腸ガンを含む、腎臓ガン、肝臓ガン、肺ガン小細胞性肺ガンおよび非小細胞性肺ガン、ならびに肺腺ガンを含む、卵巣ガン、前立腺ガン、睾丸ガン、尿生殖路ガン、リンパ系のガン、直腸ガン、咽頭ガン、膵臓ガン外分泌性膵臓ガンを含む、食道ガン、胃ガン、胆嚢ガン、頸ガン、甲状腺ガン、腎ガン、および皮膚ガン扁平上皮細胞ガンを含む;白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、およびバーキットリンパ腫を含むリンパ系の造血系腫瘍;急性および慢性の骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、および前骨髄球性白血病を含む骨髄系統の造血系腫瘍;星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、および神経鞘腫を含む中枢神経系および抹消神経系の腫瘍;線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉種を含む間葉に由来する腫瘍;ならびに、黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞癌、奇形癌、腎細胞ガンRCC、膵臓ガン、骨髄腫、骨髄性白血病およびリンパ芽球性白血病、神経芽細胞腫、および膠芽細胞腫を含む他の腫瘍。成人のTリンパ芽球性白血病ATLの原因因子であるHTLVのtaxによって誘導されるトランスフォーメーションは、RCCに関係しているものと同じ分子標的を共有し得る。例えば、NF-κBは、taxでトランスフォーメーションされた細胞において構成的に活性である。RCCと同様に、p53活性は、taxでトランスフォーメーションされた細胞においてはNF-κBの活性化を通じて阻害され、そしてp53の阻害には、p300の隔離は含まれない。P53の不活化についての共通の機構に基づくと、組成物はまた、HTLVによって誘導される白血病を処置するために使用することもできる。それらのp53状態にはかかわらず、ヒトのガンの大半は、構成的に過剰に活性化されたNF-κBを有している。組成物はまた、トランス活性化NF-κB複合体を転写抑制複合体に再プログラミングすることによってNF-κBを阻害することもできる。これはまた、それらのp53状態とは無関係に、任意の腫瘍の処置にも使用することができる。組成物はまた、HIVLTRがNF-κB活性に強く依存しているので、HIV感染を処置するために使用することもできる。組成物はまた、構成的なNF-κB活性化によって引き起こされ得る抗ガン剤耐性を克服するためのアジュバント療法に使用される場合もある。抗ガン剤は本明細書中に記載される化学療法剤であり得る。a.投与組成物は、化学療法および放射線治療のような他の抗ガン治療と同時に、またはそれと一緒に一定の間隔でmetronomically投与することができる。用語同時または同時には、本明細書中で使用される場合は、他の抗ガン治療および組成物が、互いに48時間、24時間、12時間、6時間、3時間またはそれ未満の間に投与されることを意味する。用語一定の間隔では、本明細書中で使用される場合は、化学療法とは別のタイミングでの、そして反復投与および/または化学療法の投薬計画に対して一定の頻度での組成物の投与を意味する。組成物は、経口、非経口、舌下、経皮、直腸、粘膜を介して、局所、吸入によって、口腔投与によって、またはそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない任意の形式で投与することができる。非経口投与としては、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、および関節内が挙げられるがこれらに限定はされない。組成物はまた、組成物を徐放することができ、さらに、ゆっくりに制御された静脈内注入が可能であるインプラントの形態で投与される場合もある。b.投与量治療での使用に必要な薬剤の治療有効量は、処置される状態の性質、活性が所望される時間、ならびに、患者の年齢および状態に応じて変化し、最終的にはかかりつけの医師によって決定される。所望される用量は、好都合には、単回投与で、または例えば、1日に1回、2回、3回、4回、またはそれ以上に分けられた用量として適切な間隔で投与される複数回投与として投与され得る。複数回投与が多くの場合に所望、または必要とされる。他の治療薬と組み合わせて投与される場合には、組成物は、比較的少ない投与量で投与され得る。加えて、標的化剤の使用によって必要な投与量を比較的少なくすることができる。特定の組成物は、低い毒性、高いクリアランス、第3アミンの遅い切断速度を含むがこれに限定されない要因が原因で、比較的多い投与量で投与される場合がある。結果として、組成物の投与量は、約1ng/kgから約200mg/kgまで、約1μg/kgから約100mg/kgまで、または約1mg/kgから約50mg/kgまでであり得る。組成物の投与量としては、約1μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg、100μg/kg、125μg/kg、150μg/kg、175μg/kg、200μg/kg、225μg/kg、250μg/kg、275μg/kg、300μg/kg、325μg/kg、350μg/kg、375μg/kg、400μg/kg、425μg/kg、450μg/kg、475μg/kg、500μg/kg、525μg/kg、550μg/kg、575μg/kg、600μg/kg、625μg/kg、650μg/kg、675μg/kg、700μg/kg、725μg/kg、750μg/kg、775μg/kg、800μg/kg、825μg/kg、850μg/kg、875μg/kg、900μg/kg、925μg/kg、950μg/kg、975μg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、または100mg/kgが挙げられるがこれらに限定はされない任意の投与量であり得る。6.診断方法組成物はまた、患者の腫瘍を組成物によって処置することができるかどうかを診断するために使用することもできる。腫瘍の試料は患者から得ることができる。腫瘍の細胞には、その後、p53レポーターシステム例えば、p53応答性lacZレポーターが形質導入され得る。形質導入された細胞は、その後、組成物とともにインキュベートされる。対照を上回る、p53によって媒介されるシグナルの生産は、腫瘍を組成物で処置できることを示す。7.スクリーニング方法本発明はまた、NF-κB活性を調節する物質を同定する方法にも関する。NF-κB活性を調節する物質は、NF-κB活性の調節因子の候補を細胞をベースとするNF-κBによって活性化される発現システムに対して加えることを含む方法によって同定することができる。ここでは、NF-κB活性の調節因子は、NF-κBによって活性化された発現のレベルを変化させる能力によって同定される。NF-κB活性を調節する物質はまた、NF-κB活性の調節因子の候補を、細胞をベースとするp53によって活性化される発現システムに対して加えることを含む方法によっても同定することができる。ここでは、NF-κB活性の調節因子は、p53によって活性化させられる発現のレベルを変化させる能力によって同定される。NF-κB活性を調節する物質はまた、NF-κBまたはp53によって活性化される発現システムに対して、アミノアクリジンとNF-κB活性の調節因子の候補を添加すること、NF-κBまたはp53によって活性化された発現のレベルを対照と比較することを含む方法によって同定することもできる。ここでは、NF-κB活性の調節因子は、NF-κBまたはp53によって活性化される発現システムのレベルを対照と比較して変化させる能力によって同定される。細胞には、機能的にサイレントなp53が含まれる場合がある。細胞には、また、NF-κBトランス活性化複合体も含まれる場合がある。p53によって活性化される発現システムは、腎ガン細胞株である場合がある。細胞株は、肉腫細胞株である場合もある。細胞株はまた、増幅されたmdm2を有している細胞株である場合もある。細胞株はまた、HPV-E6を発現する細胞株である場合も、また、HPV-E6を発現することが可能な細胞株である場合もある。候補の物質は、ライブラリーすなわち、化合物のコレクションの中に存在する場合がある。このような物質は、例えば、発現ライブラリーの中のDNA分子によってコードされる場合もある。候補の物質は、馴化培地中、または細胞抽出物中に存在する。他のこのような物質としては、105ダルトン未満、好ましくは、104ダルトン未満、そしてなおさらに好ましくは、103ダルトン未満の分子量を有している低分子として当該分野で公知である化合物が挙げられる。このような候補の物質は、複数の予め決定された化学反応にしたがって調製された複数の合成の物質例えば、ペプチドを含む組み合わせライブラリーのメンバーとして提供される場合もある。多様な種類のこのようなライブラリーは確立されている手順にしたがって調製することができ、そして候補の物質のライブラリーのメンバーを本明細書中に記載されているように同時にまたは連続してスクリーニングできることは、当業者に明らかであろう。スクリーニング方法は、インビトロアッセイ、細胞をベースとするアッセイ、およびインビボアッセイを含む種々の形式で行うことができる。任意の細胞を、細胞をベースとするアッセイとともに使用することができる。好ましくは、本発明と共に使用される細胞としては哺乳動物細胞が挙げられ、さらに好ましくは、ヒト細胞、およびヒト以外の霊長類の細胞が挙げられる。細胞をベースとするスクリーニングは、NF-κBおよび/またはp53の活性化についての代理マーカーを発現する遺伝子修飾された腫瘍細胞を使用して行うことができる。このようなマーカーとしては、細菌のβ-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、および機能強化された緑色蛍光タンパク質EGFPが挙げられるがこれらに限定はされない。代理マーカーの発現量は、比色分析、発光分析、および蛍光分析を含むがこれらに限定されない当該分野で標準的である技術を使用して測定することができる。細胞をベースとするアッセイにおいて使用することができる細胞の代表的な例としては、腎細胞ガン細胞が挙げられるがこれに限定はされない。予想される調節因子が、例えば混合によって細胞に添加される条件は、アポトーシスまたはシグナル伝達を妨害する他の調節性の化合物が原則としては存在しない場合に細胞がアポトーシスまたはシグナル伝達を受けることができる条件である。効果的な条件には、細胞増殖を可能にする適切な培地、温度、pH、および酸素条件が含まれるがこれらに限定はされない。適切な培地は、通常、増殖因子および吸収できる炭素、窒素、およびリン酸塩の供給源、さらには適切な塩、無機化合物、金属、および他の栄養素例えば、ビタミンを含む固体または液体の培地である。これには、細胞を培養することができ、その結果、細胞がアポトーシスまたはシグナル伝達を示すことができる有効な培地が含まれる。例えば、哺乳動物細胞については、培地としては、10のウシ胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地を挙げることができる。細胞は、組織培養フラスコ、試験管、マイクロタイター皿、およびペトリ皿を含むがこれらに限定はされない様々な容器の中で培養することができる。培養は、細胞に適切な温度、pH、および二酸化炭素含有量で行われる。このような培養条件はまた、当業者の範囲内である。予想される調節因子を細胞に対して添加するための方法としては、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞による発現すなわち、裸の核酸分子、組み換え体ウイルス、レトロウイルス発現ベクター、およびアデノウイルスの発現を含む発現システムを使用する、イオン対合剤ionpairingagentの使用、および細胞透過のための界面活性剤の使用が挙げられるがこれらに限定はされない。本発明には、以下の限定ではない実施例によって説明される複数の態様がある。材料および方法細胞使用した腎細胞ガン細胞株、RCC45、RCC54、およびACHNは、Gurovaetal.,2004.CancerRes64,1951-1958に記載されている。H1299、HT1080、MCF7、LNCaP、PC3、DU145、HCT116、SK-N-SH、W138細胞は、ATCCから入手した。正常な腎臓上皮細胞NKEの初代培養物は、J.DidonatoClevelandClinicFoundation,OHから提供された。リー-フラウメニ癌症候群の患者に由来する041線維芽細胞株は、G.Starkから提供された。Mel7およびMel29細胞は、Kichinaetal.,2003.Oncogene22,4911-4917に記載されている黒色腫細胞株である。全ての細胞を、10のFBS、1mMのピルビン酸ナトリウム、10mMのHepes緩衝液、55nMのβ-メルカプトエタノールと、抗生物質を補充したRPMI1640培地の中で維持した。p53応答性β-ガラクトシダーゼを有しているレポーター細胞株は、Gurova,etal.,2004.CancerRes64,1951-1958に記載されているものであった。p53応答性ルシフェラーゼを有しているレポーター細胞株は、p21-ConALucプラスミドのトランスフェクションと、その後のG418での選択によって作成した。NF-κB依存性ルシフェラーゼを有しているレポーター細胞株は、pNF-κBLucとpEGFP-mitoClontechプラスミドの同時トランスフェクションと、その後のG418pEGFP-mitoプラスミドによって提供されるマーカーについての選択によって得た。myc、またはClock/Bmal応答性レポーターを有しているレポーター細胞株は、C.BurkhartandM.AntochClevelandClinicFoundation,OHから好意によって提供された。p53の発現が阻害されている細胞は、siRNAの発現のためのpBabeH1-sip53またはpBabeH1-siGFPベクターのレトロウイルス形質導入と、その後のピューロマイシンについての選択によって作成した。プラスミドp53、Arf発現ベクター、pBabeH1-siHdm2、p21-ConALucレポータープラスミドは、Gurova,etal.,2004.CancerRes64,1951-1958に記載されている。pNF-κBLucプラスミドは、N.NeznanovClevelandClinicFoundation,ref.59によって提供された。pss-IκBを発現するpCDNA3ベクターは、I.BudunovaNorthwesternUniversityによって提供された。siRNAの発現のためのpBabeH1-sip53およびpBabeH1-siGFPベクターは、Gurova,etal.,2004CancerRes64,1951-1958に記載されているpBabeH1-siHDM2ベクターと同様に、siRNAの発現のためのH1プロモーターと64オリゴヌクレオチドループ鋳型を、pBabeH1-puroベクターの左のLTRに挿入することによって作成した。p53およびGFPに対するsiRNAの配列は、Brummelkamp,etal.,2002.Science296,550-553に記載されている。p53またはGFPの発現のためのレンチウイルスプラスミドは、Gurova,etal.,2004.CancerRes64,1951-1958に記載されている。化学物質34,000種類の化合物のDiverSetライブラリーは、Chembridge,Inc.から入手した。30d9および9AAの周辺の集中的ライブラリーは、Chembridge,Inc.から提供された。全ての他の化合物はSigmaより入手した。レトロウイルスおよびレンチウイルスの形質導入60mmのプレートにプレートしたパッケージング細胞ClontechによるA293を、製造業者による推奨にしたがってLipofectaminPlusInvitrogenを使用して2μgのレトロウイルスベクターDNAでトランスフェクトした。培地を8時間後に交換した。8μg/mlのポリブレンPolybreneSigmaを補充したウイルスを含む培地を、トランスフェクションの24時間後および48時間後に回収し、そして感染のために使用した。ウイルスが形質導入された細胞を、感染していない細胞を完全に死滅させることができる適切な選択物質ベクターに応じて、G418、ハイグロマイシン、またはピューロマイシンに対する耐性について選択した。p53またはEGFP対照ベクターを有している組み換え体レンチウイルスのストックを、リポフェクタミン試薬Invitrogenを使用して水疱性口内炎ウイルスのウイルス構造タンパク質とGタンパク質をコードするパッケージングプラスミドとともにpLV-CMV-p53およびpLV-CMV-EGFPプラスミドでトランスフェクトした293細胞株を使用して調製した。293T細胞によるウイルスを含む培地を48時間後に回収し、4μg/mlのポリブレンの存在下で標的細胞に移し、そしてウイルスを超遠心分離によって50~100倍に濃縮した。ウイルス力価通常は、108IU/mlを、Rat1a細胞p53の異所性発現に対して耐性であることが知られているの感染、その後のピューロマイシンに対する選択およびコロニーのカウントによって決定した。化合物のライブラリーのスクリーニング2×104個のRCC45ConALacZ細胞を、標準的な添加剤を含む200μLのフェノールレッドを含まないRPMI培地中の96ウェルプレートのウェルにプレートした。一晩のインキュベーションの後、対照とともに、DMSO溶液中の化合物のライブラリーを、プラスチック製の細菌増殖装置bacterialreplicator200/-100nLの助けを借りて添加した。化合物の最終濃度はおよそ5μg/mlであった。ネガティブ対照はDMSOとし、ポジティブ対照はドキソルビシン溶液0.2、0.6、および2μMとした。24時間後、ONPGを含む溶解緩衝液を、氷上の培地に直接添加した。37°Cで3時間のインキュベーションの後、β-ガラクトシダーゼ活性を、λ=430mmでのWallack1420プレートリーダーPerkinElmerの吸光度の読取値から概算した。ドキソルビシンの最も有効な濃度よりも強いONPG反応を誘導した全ての化合物を、最初のヒットと考えた。レポーターアッセイ同時トランスフェクションの準備のために、2×105個の細胞を6ウェルプレートにプレートし、そして一晩のインキュベーションの後、種々の濃度のp53、Arf、Ss-IκB、またはsiHDM2を発現するプラスミドと組み合わせた0.5μgのレポータープラスミドp21-ConALucまたはpNF-κBLucを、LipofectaminPlus試薬GibcoBRLを用いてトランスフェクトした。対応する空のベクターを、2μgまでの量の全DNAで、全てのトランスフェクションに加えた。トランスフェクション効率の正規化を0.2μgのpCMV-LacZプラスミドを添加することによって行った。ルシフェラーゼ活性とβ-ガラクトシダーゼ活性を、ルシフェラーゼアッセイシステムPromegaまたはβ-ガラクトシダーゼ酵素システムPromegaによって、細胞溶解緩衝液Promegaでのトランスフェクションの48時間後に調製した溶解物中で測定した。発光反応と比色反応を、Wallack1420プレートリーダーPerkinElmerで読み取った。組み込まれたレポーターの準備。レポーターが組み込まれている2×104個の細胞を96ウェルプレートにプレートした。一晩のインキュベーションの後、化合物またはレンチウイルスを生産する細胞からの培地を添加した。様々なタイミングで細胞溶解物を、レポーター溶解緩衝液Promegaを使用して調製した。ルシフェラーゼ活性またはβ-ガラクトシダーゼ活性、およびタンパク質濃度を、標準的なキットPromega,Luciferaseandβ-galactosidaseassaysystems,BioradProteinAssayKitを使用して細胞溶解物のアリコートの中で測定した。細胞生存率のアッセイ5×103個の細胞を6ウェルプレートにプレートし、様々な濃度の薬物で24時間処理した。その後、薬物を含まない新しい培地を添加した。コロニーの数を、5~6日間のインキュベーション後に概算した。細胞の生存率は、未処理の対照と比較した、処理した細胞のメチレンブルー染色の強度の割合として概算した染色したコロニーからメチレンブルーを0.1のSDSによって抽出し、そして分光光度計で定量した。細胞周期の分析106個の細胞を100mmのプレートにプレートし、そして一晩のインキュベーションの後、種々の濃度の9AAまたはドキソルビシンを添加した。インキュベーション時間の終了後、細胞を回収し、固定し、ヨウ化プロピジウムで染色した。DNA含有量をFACScaliburBectonDickinsonを使用して測定し、CellQuestソフトウェアを使用して分析した。ウェスタンブロット分析細胞を、1mMのPMSFSigma、10μg/mlのアプロチニンSigma、および10μg/mlのロイペプチンSigmaを含むRIPA緩衝液25mMのTrisHCl、pH7.2、125mMのNaCl、1のNP40、1のデオキシコール酸ナトリウム、1mMのEDTA中で溶解させた。タンパク質濃度を、BioRadDcタンパク質アッセイキットを用いて決定した。等量のタンパク質を4~20の勾配のプレキャストゲルNovex上で泳動させ、PVDF膜Amersham上にブロットした。以下の抗体を使用した:抗p53モノクローナルマウスDO1Santa-Cruz、抗p21モノクローナルマウスF-5Santa-Cruz、抗mdm2モノクローナルマウスSMP14Santa-Cruz。p53のリン酸化状態を、製造業者による推奨にしたがって、Cellsignalingによるホスホ-p53サンプラーキット、抗p65C20、SantaCruz、抗ホスホ-p65ser536,CellSignaling、抗IκBaC21,SantaCruz、抗p50NLS,SantaCruzを使用して分析した。HRP結合二次抗体はSanta-Cruzから購入した。データの定量はQuantityOneBioRadを使用して行った。免疫蛍光の免疫染色チャンバースライドの中の細胞をPBSで洗浄し、そこで室温の10のリン酸緩衝化ホルマリン、-20°Cの100のメタノール、および-20°Cのアセトンで固定した。その後、スライドをPBS中の3のBSA、0.1のTritonX100の溶液中で1時間ブロックした。抗p65抗体C-20、Santa-Cruzを、ブロッキング溶液中で1μg/mlの濃度で添加した。二次抗ウサギCy2結合抗体Sigmaを使用した。全ての洗浄は、ブロッキング溶液を用いて行った。DNA-トポイソメラーゼII活性のアッセイHT1080細胞を、0.02から0.04mCi/mLの[14C]チミジン、比活性53mCi/mmolAmershamで24時間標識した。標識したHT1080細胞を、種々の濃度のエトポシドVP-16、アムサクリンm-AMSA、または9-アミノアクリジンで1時間処理した。トポIIによって媒介されるDNAの切断の誘導を、SDS-KCl技術の改良を使用してタンパク質DNA複合体の沈殿を測定することによって決定した。プロテアソーム阻害アッセイプロテアソームアッセイキットは、BostonBiochem,Inc.から購入し、製造業者による推奨にしたがって使用した。電気泳動の移動度のアッセイEMSA核抽出物は、Chernov,etal.,1997.Oncogene14,2503-2510に記載されているように調製した。NF-κB結合部位に相当するアニーリングしたオリゴヌクレオチドSanta-Cruzを、Klenowポリメラーゼによって[α-32P]dCTPで、その後、T4ポリヌクレオチドキナーゼによって[γ-32P]dATPで放射標識した。107cpmの標識したオリゴヌクレオチドを、ProbeQuantカラムAmershamでアフィニティー精製した。放射標識したオリゴヌクレオチドを、非特異的結合を防ぐための1μgのポリ-dIdCAmershamとともに、10μgのタンパク質核抽出物に対して添加し、そして室温で30分間インキュベートした。スーパーシフトのために、200ngの抗p65抗体、抗p50抗体、または抗-抗体を反応に添加した全ての抗体はSantaCruzによる。30分間のインキュベーションの後、反応混合物の全てを0.5×TBE緩衝液中の4のポリアクリルアミドゲルにロードし、200Vで2時間泳動した。乾燥させたゲルをX線フィルムに対して30分から1時間露光させた。動物実験5~6週齢の雄のNIHSwiss無胸腺ヌードマウスをHarlanから購入した。5×106個の腫瘍細胞を100μLのPBSの中でマウスの脇腹に接種した。腫瘍が5mmの直径に達した時点で、薬物の腹腔内注射を、PBS中の50のDMSOの100μlの溶液の中で開始したPBSに溶解させたキナクリンを除く。媒体として、PBS中の50のDMSOを使用した。腫瘍の大きさを一日おきに三次元で測定した。実施例1RCC細胞をベースとする、p53活性化物質の単離のための読み出しp53のトランス活性化機能は、まだ知られていないインヒビターによってRCC細胞の中で阻害され、このことは、このタイプの腫瘍細胞、さらにはp53と同様の阻害を有している他の腫瘍細胞を選択的に死滅させるためのアプローチとしての、薬物によって媒介されるp53機能の回復を示唆している。p53の再活性化がRCC細胞に対して毒性であるかどうかを試験するために、本発明者らは、インヒビターを枯渇させる試みにおいて5種類のRCCに由来する細胞株においてp53を異所で発現させた。細胞に、組み込まれたp53応答性レポーターConALacZを補ってp53の再活性化をモニタリングした。p53cDNAを、CMVプロモーターを有しているレンチウイルスベクターを使用して形質導入した。p53欠損肺腺ガン細胞株H1299これは野生型p53に対して反応性であるおよびラットの繊維芽細胞様細胞株Rat1これは、ヒトp53に対して耐性であるを対照として使用した。図1に示すように、RCC中の休眠状態のp53は再活性化させることができ、そしてこの再活性化によって腫瘍細胞の死が導かれた。特定の発現レベルから開始すると、p53は、同時に、細胞傷害性になり、そしてRCC45細胞中のレポーターを誘導することにおいて活性となった図1aおよびb。このことは、細胞例えば、RCC細胞を、p53を再活性化させることができる物質のスクリーニングのための細胞をベースとするレポーターシステムにおいて使用できることを示している。このことはまた、腫瘍細胞例えば、RCC細胞中でのp53の再活性化が細胞傷害性であり得ることも示している。実施例2化合物のライブラリーのスクリーニングによるRCCの中での強力なP53活性化因子としてのアミノアクリジンの同定本発明者らは、RCC特異的p53の抑制の機構を解明するためのツールとしてもまた使用することができる治療可能性を有している低分子を単離するために、RCC中のp53トランス活性化を回復することができる化合物の、細胞をベースとする直接のスクリーニングを行った。RCC45ConALacZ細胞を、34,000種類の化合物の様々な化学的ライブラリーをスクリーニングするために使用したChembridgeCorporation。β-ガラクトシダーゼ活性を、化合物とのインキュベーションの24時間後に細胞溶解物中で測定した。1μMのドキソルビシンよりも高いβ-ガラクトシダーゼ活性を誘導した28種類の化合物を、最初のヒットと考えた図2a。最も活性のあった化合物化合物30d9は、RCC45細胞中のレポーターの22倍の誘導を生じ、これは、ドキソルビシンよりも7倍強く作用した。化合物30d9の近くで構築した、40種類の化合物からなる構造アナログのライブラリーを、同じ細胞をベースとするレポーターアッセイを使用してスクリーニングした。化合物1の式の2つの物質が活性であることが明らかになった。その後、化合物30d9の59種類の誘導体のライブラリーをスクリーニングした。これには、抗ガン剤であるアムサクリンamsaと抗マラリア薬であるキナクリンを含めた。試験した化合物のうちの12種類が、RCC45細胞の中でp53を再活性化させ、それらの活性はドキソルビシンと同等例えば、amsaからドキソルビシンよりも7~10倍高い活性までの範囲であった。化合物30d9および9AAが最も強かった図2b。キナクリンは中程度のレベルの活性を示した。SAR分析は、アミノアクリジンがp53を再活性化させることができることを示していた。実施例3アミノアクリジンは種々の細胞型におけるp53の強力な活性化因子である9AAは、RCC45細胞中でのp53レポーター遺伝子の誘導だけではなく、p21/Waf1およびHdm2のタンパク質レベルの分析によって判断される内因性p53応答性遺伝子の誘導においても、ドキソルビシンよりもはるかに強かった図3aおよびb。興味深いことに、p53経路が極めて活性であるMCF7細胞においては、9AAの効果はドキソルビシンよりも弱かった図3aおよびb。本発明者らは、野生型p53を有しているいくつかの他のレポーター細胞株中でのp53のトランス活性化に対する9AAの効果を試験した。試験した細胞の大部分において、9AAは、ドキソルビシンまたは使用した他のDNAを損傷させる薬物よりもはるかに強いレポーター活性を刺激し図3cおよびデータは示さない、このことは、共通の機構が種々の腫瘍細胞型における活性なp53のネガティブな制御に関係していることを示唆している。9AAによるp53の最も強い誘導は、多くのアッセイにおいてRCC細胞株と並行して使用したヒト線維肉腫HT1080細胞において観察された。9AAの効果はp53依存性であった。なぜなら、レポーター活性の刺激は、p53ヌルH1299細胞またはsiRNAによってp53発現が阻害されている細胞においては検出されなかったからである図3cおよびd。9AAは、1μMのような低い濃度でp53を活性化させた図3e。活性化の速度はDNAを損傷させる刺激と比較すると異常に遅い。9AAによって誘導されるp53依存性トランス活性化は12時間でわずかに検出できるようになり、そして、処理のおよそ36時間後に最大に達した図3f。9AAとの1時間のインキュベーションが、数時間後に検出可能なp53の活性化を開始させるには十分であった図3f。実施例4アミノアクリジンは野生型p53を有している腫瘍に対しては毒性があるp53の活性化がp53依存性細胞傷害性に形を変えるかどうかを試験するために、本発明者らは、p53の状態が異なる細胞の生存率に対する9AAの効果を比較した。この目的のために、本発明者らは、抗p53を発現する構築物または対照であるsiRNAを発現する構築物のいずれかを発現する同系の対である細胞株のシリーズを作成した。siRNAによるp53のダウンレギュレーションの程度を、ウェスタン免疫ブロッティングによって試験した。試験した全ての細胞変異体に対して9AAが毒性を有していることが明らかになった。しかし、これはp53の発現が低下している細胞に対しては毒性が低く、HT1080細胞においては極大差が観察された図4aおよびb。用量に応じて、9AAは、p53依存性の増殖の停止3μMまたはアポトーシス20μM、図4cを生じた。低用量の9AAは、さらに長い時間のインキュベーション48時間までの後でもなおアポトーシスを生じることはなく、一方、高用量のこの化合物によって、先に増殖が停止されることなくアポトーシスが誘導された。おそらくはG1チェックポイントの制御の欠損が原因で対照細胞よりもp53が欠損している細胞の周期の中での細胞の分布の変化がより強く生じたドキソルビシンとは反対に、細胞周期の分布におけるごくわずかな変化が9AAで処理したp53欠損細胞において観察された図4c。興味深いことに、DNAの損傷を生じる機構を通じて作用する化学療法剤例えば、カンプトテシン、ドキソルビシンか、または微小管ネットワークに影響を与えることによって作用する化学療法剤例えば、タキソール、ビンブラスチンのいずれの毒性も、p53依存性ではないことが明らかになった図4d。このことは、アミノアクリジンが従来の化学療法剤とは異なる機構を通じて腫瘍細胞を死滅させることを示唆している。正常な細胞も活性なp53を有しているので、本発明者らは、正常な腎臓上皮細胞およびヒトの2倍体線維芽細胞WI38に対する9AAの毒性を試験した。これらの正常な細胞型はいずれも、RCCまたは他の腫瘍細胞と比較して、9AAに対してより耐性があった図4eおよびf。実施例5アミノアクリジンをベースとする薬物はインビボで抗腫瘍効果を有しているアミノアクリジンのインビボでの抗腫瘍効果を、それらのp53状態が異なり、そしてヌードマウスにおいて皮下で増殖させたp53ルシフェラーゼレポーターを有しているHT1080細胞を使用して、異種移植腫瘍モデルにおいて試験した。腫瘍細胞中でのp53依存性ルシフェラーゼレポーターの活性を、インビボでの9AAの生体利用性を試験するために使用した。9AAおよびキナクリンはいずれも、腫瘍中のp53を活性化させることができ図5a、そしていずれの化合物も、上記の実験と同様の特性を示したデータは示さない。キナクリンの効果についてのp53依存性を十分に引き出すために、HT1080sip53細胞左脇腹およびHT1080siGFP細胞右脇腹をマウスに接種した。腫瘍が5mmの直径に達した後、マウスに、50mg/kgのキナクリンを毎日腹腔内注射し、5-フルオロウラシル5FU、35mg/kgを比較のために使用した。図5bに示すように、キナクリンは、5FUと同じ程度までp53を発現する腫瘍の増殖を阻害し、そしてp53欠損腫瘍の増殖に対しては効果がなかった。これは、アミノアクリジンがp53依存性の様式で異種移植腫瘍のインビボでの増殖を阻害することを示している図5b。マウスにはまた、2×106個のヒト前立腺ガン細胞をPC3p53ネガティブを使用して、または変異体p53を含むDU145細胞を接種した。マウスを、経口強制飼養によって100mg/kgの用量のキナクリンで、または対照としての滅菌水で処置した。腫瘍の増殖は、キナクリンで処置したマウスにおいては約50減少した。興味深いことに、このことは、アミノアクリジンもまた、p53依存性の様式で異種移植腫瘍のインビボでの増殖を阻害することを示している。実施例6アミノアクリジンによって媒介されるp53の活性化の機構本発明者らは、最初に、アミノアクリジンが、p53を誘導する化合物についての周知の作用機構であるDNAの損傷を通じてp53を活性化させるかどうかを試験した。9AA誘導体の1つであるamsaはトポイソメラーゼIIの毒性を介してDNAの損傷を引き起こすので、本発明者らは、トポイソメラーゼIIの別のインヒビターであるamsaおよびエトポシドと比較して、9AAがインビトロではトポイソメラーゼII活性に対して効果がないことを試験し、明らかにした図6a。さらに、9AAは、DNAの切断に感受性であるキナーゼATM、ATRなどを介してp53を活性化するDNAを損傷させる薬物から予想することができるように、p53のリン酸化状態には影響は与えなかった。ポジティブ対照としてこれらの実験で使用したドキソルビシンは、p53のリン酸化を誘導し、このことによって、上流のp53によるシグナル伝達がRCCにおいて機能的であることが確認された図6b。この結果は、様々なタイプのDNAの損傷によってはRCC中のp53は活性化させられないことを示す以前の結果とともに、アミノアクリジンがDNAの損傷とは異なる機構によってp53を活性化させることを示している。プロテアソームインヒビターは未修飾のp53タンパク質の蓄積を引き起こすp53活性化物質の別のクラスを構成する。9AAでの処置に応答したリン酸化されていないp53の蓄積と、細胞質内での薬物の顕著な局在化蛍光顕微鏡でモニターしたは、アミノアクリジンがプロテアソームの分解のインヒビターとして作用できることを示唆しした。この仮説は、直接的なインビトロでのアッセイを使用して図6c、そしてプロテアソームの分解についての別の標的であるIκBのレベルに対する9AAの効果をモニターすることによって[21]これは、プロテアソーム活性とは無関係な指標として使用した排除された。MG132ポジティブ対照として使用したプロテアソームの分解のインヒビターは、IκBのリン酸化形態の蓄積を生じたが、9AAでの処置によっては、驚くべきことに、反対の効果があり、これによって、IκBの段階的な減少と、その後の完全な消滅が導かれた図6dおよびe。これらの結果は、アミノアクリジンはプロテアソームの阻害によってはp53を活性化をさせることはないことを示している。実施例7アミノアクリジンはNF-κBを阻害する実施例6に示したように、9AAによってIκBの分解は予想外に誘導された。これらの結果に基づいて、本発明者らはNF-κβ経路に対するアミノアクリジンの可能性のある効果に焦点をあてた。本発明者らは、NF-κBの転写活性に対する9AAの効果を試験するために、NF-κB応答性レポーターが組み込まれているp53ヌルH1299細胞を使用した。本発明者らは、9AAとキナクリンはいずれも、レポーターの基底の活性およびTNF-によって誘導される活性を阻害したことを明らかにした図7a。これらは、TNFでの刺激前-24~0時間、TNFでの刺激と同時0時間、またはTNFでの刺激の後0~6時間に添加された場合に有効であったデータは示さない。これらはまた、NF-κBフィードバック調節ループの不可欠な部分であるIκBのTNFによって刺激される誘導も阻害した図7b。驚くべきことに、9AAおよびキナクリンによるNF-κB依存性トランス活性化のブロックは、NF-κBのDNA結合活性における同時用量依存性の増加と同時に生じた図7c。いくらかの増大は、TNFでの刺激を伴わない場合にもなお観察され、これには、p50/p50ホモ二量体が主に関係している図7d。この増大は、薬物をTNFと組み合わせて投与した場合に特に強く、これには、p65/p50およびp50/p50NF-κB複合体の両方が関係していた図7cおよびd。NF-κB複合体のDNA結合活性の増大は、免疫蛍光染色によって観察した場合には、9AAの存在下では、TNFで刺激した場合のp65を含むNF-κB複合体の核での蓄積と相関していた。本発明者らは、p65は9AAの存在とは無関係に核に侵入するが、薬物によって核の中でのその存在時間が有意に延長させられることを見出した図7e。これはおそらく、核からのNF-κBのシャトル輸送の役割を担うIκBの欠損が原因である。これらの結果は、アミノアクリジンが、異常な機構を通じて作用するNF-κBのトランス活性化の強力なインヒビターであることを示している。IκBを安定化させることによって作用する以前に記載されたインヒビターとは反対に、アミノアクリジンは、NF-κB複合体を転写不活性な状態に転換させることによって作用し得る。これは、そのシャトル因子shuttlingfactorIκBの誘導の欠損が原因で核に捕捉される。NF-κB複合体の機能的な不活化に応答することができる機構のなかでも、p65のリン酸化NF-κB活性に不可欠であると報告されているを欠損させることにより、ヒストン脱アセチル化酵素HDACを複合体に動員して、転写開始部位のクロマチンの不活性な形態への変換を生じる。この可能性を試験するために、本発明者らは、TNFで処理した細胞の核内でのp65のリン酸化に対する9AAの効果を分析した。TNFだけで処理した細胞の中では、リン酸化されたp65の割合は全p65と平行して増加した。TNFと9AAで処理した細胞においては、リン酸化されたp65の割合は増加しなかった図7f。これらの結果は、アミノアクリジンの存在下では、p65はリン酸化された状態、したがって、おそらくは不活性な形態で優先的に核に侵入することを示している。不活性なNF-κBは、刺激されていない核内では、HDACとの複合体として存在する。トリコスタチンATSAによるHDAC活性の阻害によって、NF-κB依存性の転写の活性化が生じ、これにはさらなる刺激はともなわない。アミノアクリジンによるNF-κBの不活化もまたHDACに関係している場合には、NF-κBのTSAによって刺激された誘導に対して効果はないはずである。実際、NF-κBレポーター細胞のTSAでの処理によって、9AAによってブロックすることはできなかったNF-κB依存性転写の有意な活性化が生じた図7h。これらの結果は、アミノアクリジンは不活性なNF-κB複合体の蓄積を生じることができ、そして、それらの不活化がHDACに関係していることを示している。p65のリン酸化のブロックは、アミノアクリジンの抗NF-κB活性についての唯一の機構ではない可能性がある。本発明者らは、9AAでの処理によって、細胞質および核のプールにおいてp50の増加が生じることを明らかにした図7g。p50/p50ホモ二量体その割合はこのNF-κBサブユニットの9AAによって媒介される蓄積にともなって増加した図7dはまた、不活性なNF-κB複合体の形成にも関係している可能性があった。実施例8アミノアクリジンはNF-κBの阻害を通じてRCCの中でp53を活性化させるアミノアクリジンはRCC細胞中で2つの強い効果を生じる。これらは、DNAの損傷、またはプロテアソームの分解の阻害には関係していない異常な方法でp53を活性化させる。これはまた、NF-κBも、異常な方法で、転写活性のあるNF-κB複合体を転写不活性な形態に変換させることによって阻害する。これはおそらく、p65/RelAのリン酸化の阻害が原因である。p53およびNF-κBに対するアミノアクリジンの効果は極めて特異的である。なぜなら、これらは、c-Myc、またはN-Myc、アンドロゲン受容体、またはCLOCK/BMAL1のような他の試験した因子によって調節された転写に対しては効果がないからであるデータは示さない。本発明者らは、アミノアクリジンによるp53の活性化およびNF-κBの抑制が薬物の活性と関係しているのか、または薬物の活性とは無関係であるのか、そして、相関している場合には、これは初期事象であるのかどうかを知ることについて興味を抱いた。本発明者らは、p53の活性化がNF-κBの抑制の要因である可能性を容易に排除することができた。なぜなら、NF-κB経路に対するアミノアクリジンの効果の全てがp53欠損細胞H1299と、さらにはp53野生型細胞HT1080細胞において見られたからである。さらに、アミノアクリジンによるNF-κBの阻害は、化合物の投与後1時間以内に検出できるが、p53に対するそれらの効果は、通常はゆっくりであり、効果が見え始めるには12から16時間の処置が必要である図2d。正反対のモデルアミノアクリジンによるNF-κBの抑制がp53の活性化を駆動するを研究するために、本発明者らはiNF-κBが別の機構によって阻害された場合にp53活性と共に何が生じるかを試験し、そしてiiNF-κB欠損細胞中でのp53活性化に対するアミノアクリジンの効果を分析した。p53およびNF-κBに対する9AAおよびキナクリンの二重効果をさらに確認するために、本発明者らは、2種類の用量の9AA2μMおよび10μM、それぞれ、増殖の停止とアポトーシスを引き起こすで処理した2種類のRCC細胞株、RCC45とRCC54の全体的な遺伝子発現プロフィールの変化を、マイクロアレイハイブリダイゼーションを使用して分析した。RNAを処理の16時間後に単離し、この処理は、細胞死の兆候が生じる前にp53を誘導するために十分であった。アレイ上に提示された36847遺伝子のうちのわずかに0.6が、両方の細胞株において少なくとも一方の用量で少なくとも2倍、それらのmRNA量を変化させた。最もアップレギュレートされた遺伝子としては、p21、mdm2、さらにはいくつかの他のp53標的が挙げられる表1。一方、IκBα、IL-8、ならびに、いくつかのケモカインおよびサイトカイン表2全てNF-κB応答性遺伝子によってコードされるは、処理の結果として強く抑制された。これらの結果により、p53のインデューサー、およびNF-κBの転写のインヒビターとしてのアミノアクリジンの二重効果を確認した。RCC細胞中のNF-κB活性を抑制するために、本発明者らは、両方のリン酸化部位が欠失している安定なIκB変異体である、IκBスーパーサプレッサーss-IκBを使用した。この変異体のRCCACHN細胞への形質導入によって、NF-κBレポーター活性の3倍の阻害が生じ図8a、これは、NF-κBが試験した全てのRCC細胞株の中で構成的に活性であるという本発明者らの観察と一致していた。重要なことは、同じ細胞の中でのp53応答性レポーターの活性は、NF-κB阻害性ss-IκBが形質導入されると5倍に増大したことである図8b。同様の効果が、別のRCC株であるRCC54、さらには、非RCC細胞であるHT1080データは示さないにおいて観察された。これらはいずれも、p53の活性化により9AAに応答した図3a。注目すべきは、ss-IκBは、p53経路の直接的な調節因子例えば、Arf、siRNAからHdm2、またはp53自体の形質導入よりもはるかに強く、RCCにおいてp53を活性化させた図8b。したがって、本発明者らは、NF-κB活性のブロックによって、RCC細胞中のp53のトランス活性化を回復させることができること、そしてアミノアクリジンはおそらくこの機構を通じて作用することを明らかにした。アミノアクリジンによるNF-κBの阻害がそのp53活性化効果に唯一関与しているものであるかどうかを試験するために、本発明者らは、ss-IκBによって阻害されているNF-κBを有しているRCC細胞を9AAで処理した。本発明者らは、ss-IκBを安定に発現するRCC細胞株を作成することはできなかった。なぜなら、NF-κBの阻害はRCC細胞の生存率を妨害したからである非公開の観察。したがって、NF-κBが抑制されている細胞に対するアミノアクリジンの効果を、一時的なトランスフェクション実験において試験した。ここでは、ss-IκBの導入を、NF-κBまたはp53応答性レポーターのいずれかと組み合わせた。ACHNへのss-IκBのトランスフェクションによってNF-κBレポーター活性が阻害され、9AAでの処理によって全くさらなる阻害が生じなかった場合のレベルにまで低下した。これらの条件下では、9AAはそれ以上p53応答性レポーターを活性化させることはできず図8c、これは、アミノアクリジンのp53活性化効果がNF-κB機能の阻害によって媒介されていること、そしてNF-κB活性がRCCにおいてはp53の抑制に応答性であることを示している。実施例9耐性腫瘍細胞の感作本発明者らは、次に、死リガンドに耐性である腫瘍細胞を感作させるアミノアクリジンの能力を試験した。本発明者らは、前立腺、腎臓、肺、および乳房に由来する、もともと死リガンドでの処理に対して耐性であった腫瘍細胞が、非毒性または毒性が低い濃度のアミノアクリジンの存在下で処理した場合には、TNF、Fas、およびTRAILに対して劇的に感作させられたことを見出した図9。実施例10アミノアクリジンの抗腫瘍適用本発明者らは、従来の化学療法に対するアミノアクリジンの効力を試験した。この目的のために、本発明者らは、RCCに由来する腫瘍細胞とRCC以外に由来する腫瘍細胞それぞれのタイプについて6種類、さらには、正常な腎臓細胞NKEのセットについて、いくつかの化学療法剤ドキソルビシン、タキソール、および5-フルオロウラシル、9AA、およびキナクリンQCのIC50を比較した。非RCC細胞株には、MCF7wtp53、HT1080wtp53、H1299p53ヌル、U2OSwtp53、LNCaPwtp53、およびHCT116wtp53を含めた。RCCの平均のIC50は、使用したすべての化学療法剤について非RCC細胞株よりも高く、そして正常な細胞のIC50に近かった。これは、臨床報告と一致していた図10。9AAおよびキナクリンは、試験した10種類のRCC細胞株のうちの9種類においてp53によって媒介されるトランス活性化を効率よく回復させたデータは示さない。これらの化合物は、後者のp53状態とは無関係に、RCC細胞および非RCC細胞の両方に対して同等に有効であった。さらに表3も参照のこと。本発明者らは、次に、アミノアクリジンがエキソビボでの臓器の培養においても同様の効果を生じることを確認した。新しいRCC標本と同じ患者に由来する正常な腎臓の断片を、p53応答性lacZレポーター図10Bを有しているレンチウイルスベクターを含む培地中の短時間臓器培養物の中に24時間入れた。その後、組織試料をキナクリンまたはドキソルビシンでさらに24時間処理し、その後、グルタルアルデヒドで固定し、そしてβ-ガラクトシダーゼ活性についてX-gal青色染色を使用して染色した。図10Bに示すように、キナクリンは、腫瘍試料中でp53応答性レポーターの発現を誘導したが、ドキソルビシンは誘導しなかった。いずれの薬物によっても、正常な腎臓試料内因性β-ガラクトシダーゼ活性を発現する正常な腎臓構造が見られた中ではレポーターの誘導は検出できなかった。レポーターを形質導入しなかった全ての腫瘍試料においては、X-galポジティブ染色は観察されなかった。したがって、p53機能はアミノアクリジンによって回復させられた。このアッセイはまた、アミノアクリジン処理に対する腫瘍の応答性を予想することができる予後検査の基準として使用することもできる。1つの化合物において2つの重要な特性NF-κB活性の阻害とp53の活性化が組み合わされていることによって、アミノアクリジンの可能な用途が提供される。最も将来性のある自然界に存在している抗ガン性サイトカインの1つであるTRAILに対する腫瘍細胞の耐性には、通常、構成的に活性なNF-κBと、p53の阻害が関係している。これは、TRAIL受容体の1つであるDR5の発現を制御する。9AAは、試験した2種類のRCC細胞株においてTRAILレポーターDR5の発現を誘導することができた表1。したがって、NF-κBの阻害とp53の活性化を同時に行うことができる化合物は、TRAILに対して耐性である腫瘍細胞を覆すと予想される。本発明者らは、TRAIL耐性RCC細胞株であるRCC54とRCC45をキナクリンと組み合わせて処理することによってこれを試験した。正常な腎臓上皮細胞を比較のために使用した。図10Cに示すように、キナクリンは、腫瘍のTRAIL耐性を覆したが、正常な腎臓細胞については覆すことはできず、このことは、アミノアクリジンのガンに対する適用の別の形態を示している。最後に、本発明者らは、ヌードマウスに皮下注射したACHN細胞によって形成された腫瘍の異種移植片の増殖に対するキナクリンの効果を試験し、5-フルオロウラシル5FUを用いた場合に観察された効果と同様の、腫瘍増殖の約50の阻害を見出した。しかし、これには、5FUの投与にともなった有意な体重の減少20まではなかった図10D。"