"電気化学的分析における一般式I:式中、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されてよい及び/又は必要に応じて中断されてよいC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表し;及びRは、リンカー基である。で示される化合物の標識としての使用。Xが、酸素によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレンを表し;Yが、酸素によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレンを表し;Zが、酸素によって必要に応じて中断されているC1~C8アルキレンを表す、請求項1に記載の使用。Xが、xが1又は2である-CH2x-であり;Yが、yが1又は2である-CH2y-であり;Zが、zが1~8である-CH2z-である、請求項1に記載の使用。Fc及びFc’が同じであり、X及びYが同じである、請求項1~3のいずれか1項に記載の使用。分析が、電気化学的に標識されている基質を検出する分析である、請求項1~4のいずれか1項に記載の使用。分析が、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドから選択される生物学的基質を検出する分析である、請求項1~5のいずれか1項に記載の使用。分析が、アミノ酸、ペプチド及びタンパク質から選択される生物学的基質を検出する分析である、請求項1~6のいずれか1項に記載の使用。電気化学的分析で用いるために標識残基を有する官能性標識付与化合物を製造する方法であって、該方法が、一般式I:式中、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されてよい及び/又は必要に応じて中断されてよいC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表し;及びRは、酸素原子を有するリンカー基である。で示される化合物を官能性化合物と反応させて、一般式III:A-L-FIII式中、Aは、一般式Ia:ここで、Fc、Fc’、X、Y及びZは、上記のとおりである。を表し、Fは、官能基を表し;及びLは、リンカー基を表す。で示される官能性標識付与化合物を得ることを有する、官能性標識付与化合物の製造方法。標識化基質の製造方法であって、該方法が、一般式III:A-L-FIII式中、A、F及びLは、請求項8に規定したとおりである。で示される化合物を基質と反応させて標識化基質を製造することを有する、標識化基質の製造方法。アミノ酸、ヌクレオチド、ヌクレオシド、糖類、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、炭水化物、ミクロ粒子及びナノ粒子から基質を選択する、請求項9に記載の方法。基質が、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、及びポリヌクレオチドから選択した生物学的基質である、請求項9又は10に記載の方法。基質が、アミノ酸、ペプチド及びタンパク質から選択した生物学的基質である、請求項9又は10に記載の方法。請求項9~12のいずれか1項に記載の方法で用いるための官能性標識付与化合物であって、一般式III:A-L-FIII式中、Aは、一般式Ia:ここで、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されてよい及び/又は必要に応じて中断されてよいC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表す。で示される標識付与残基を表し、Lは、リンカー基を表し;Fは、標識付与残基を基質に結合するために、基質と反応する官能基を表す。を有する、官能性標識付与化合物。Fが、アミノ酸、ヌクレオチド、ヌクレオシド、糖類、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、及びポリヌクレオチド、炭水化物、ミクロ粒子及びナノ粒子から選択される基質と反応する官能基を表す、請求項13に記載の官能性標識付与化合物。官能基Fが、スクシンイミドエステル基、ホスホラミダイト基、マレイミド基、ビオチン基及びアジド基から選択される、請求項9~14のいずれか1項に記載の官能性標識付与化合物。官能基が、ホスホラミダイト基である、又はホスホラミダイト基から誘導可能である、請求項9~15のいずれか1項に記載の官能性標識付与化合物。電気化学的分析で用いるための標識化基質であって、一般式IIIa:A-L-F’-SIIIa式中、Aは、一般式Ia:ここで、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキレン鎖を表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されている及び/又は必要に応じて中断されているC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表す。を表し、L~F’は、リンカー基を表し;Sは、基質を表す。である標識化基質。基質が、生体分子、ミクロ粒子及びナノ粒子から選択される、請求項17に記載の標識化基質。基質が、アミノ酸、ヌクレオチド、ヌクレオシド、糖類、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド及び炭水化物から選択される生体粒子である、請求項17又は18に記載の標識化基質。基質が、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドから選択される、請求項17又は18に記載の標識化基質。基質が、オリゴヌクレオチドである、又はオリゴヌクレオチドを有する、請求項17~20のいずれか1項に記載の標識化基質。基質が、アミノ酸、糖類、ペプチド、タンパク質から選択される、請求項17~19のいずれか1項に記載の標識化基質。分析ターゲットの存在を求めるための分析キットであって、請求項17~22のいずれか1項に記載の標識化基質を有する、分析キット。一般式I:式中、Fcは、置換されているフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されているフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されてよい及び/又は必要に応じて中断されてよいC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表し;及びRは、リンカー基である。で示される化合物。各々のフェロセニル残基が、ハロ、C1~C4アルキル、ハロアルキル、アリール、C1~C4アルケニル及びシアノから選択される少なくとも1つの置換基により置換されている、請求項24に記載の化合物。一般式I:式中、Fc及びFc’は、それぞれ、置換されていないフェロセニル残基であり、Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、1以上の置換基により置換されている及び/又は-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって中断されているC6~C12アルキレン鎖又はC1~C12アルキレンであり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表し;及びRは、リンカー基である。で示される化合物。Xが、xが1~6である-CH2x-であり;Yが、yが1~6である-CH2y-である、請求項24~26のいずれか1項に記載の化合物。Zが、酸素によって必要に応じて中断されているC6~C8アルキレンを表す、請求項24~27のいずれか1項に記載の化合物。リンカー基Rが、化合物を官能基又は基質に結合させるように、官能基の又は基質の適合基と反応できる基を有する、請求項24~28のいずれか1項に記載の化合物。から選択される化合物。N,N-ジフェロセニルメチル-6-アミノヘキサノール又はその類似体であって、その両方のフェロセニル基が、1以上の置換基により置換されている、N,N-ジフェロセニルメチル-6-アミノヘキサノール又はその類似体。N,N-ジフェロセニルメチル-6-アミノヘキサノールから又はその類似体から誘導される標識付与残基を有する標識化基質であって、両方のフェロセニル残基が、1以上の置換基により置換されている、標識化基質。核酸の検出方法であって、該方法が、プローブとアンプリコンの間のハイブリダイゼーションを可能にする条件下で、相補的な核酸プローブと核酸を接触させ、次いで、ハイブリダイズされている又はハイブリダイズされていないプローブを選択的に分解する工程を行うことを有し、プローブを、請求項24~32のいずれか1項に記載の化合物により標識し、該方法が、プローブを標識する化合物の電気化学的活性を測定する工程を有し、前記電気化学的活性が、プローブの分解程度に定量的に又は定性的に依存する、核酸の検出方法。請求項24~32のいずれか1項に記載の化合物により標識されているアミノ酸、ペプチド又はタンパク質の検出方法であって、化合物の電気化学的活性を測定する工程を有する、検出方法。本発明は、電気化学的分析において一般式I:式中、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されてよい及び/又は必要に応じて中断されてよいC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表し;及びRは、リンカー基である。で示される化合物の標識としての使用を提供する。本発明に用いられる化合物は、電気化学的分析で用いるのに効果的な標識であることが見出されている。とりわけ、化合物を、標識した又は標識化した基質を製造するように用いてよい。標識され得る基質として興味深い分子は、限定されないが、アミノ酸、ヌクレオチド、ヌクレオシド、糖類、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、炭水化物及び任意のそれらの分子の誘導体を含む。本発明の化合物を用いて標識され得る他の基質は、ラテックス常磁性のミクロ粒子及びナノ粒子を含む。一般式Iで示される標識付与化合物、及び該標識付与化合物から誘導可能な標識を有する標識された分子は、電気化学的方法に潜在的に有益であり、それらの電気化学的特性を、標識又はそれらの環境について情報を得るように用いることができる。例えば、本発明の化合物は、WO03/074731号に記載されている方法における使用又はWO2005/05657号に記載されている方法における使用として見出され得る。本発明に用いられる化合物において、Xが、必要に応じて酸素によって中断されているC1~C6アルキレンを表し;Yが、必要に応じて酸素によって中断されているC1~C6アルキレンを表し;Zが、必要に応じて酸素によって中断されているC1~C8アルキレンを表すことが好ましい。Xは、好ましくは、xが1~6、好ましくは、1~4、特に1又は2である-CH2x-であり;又は酸素によって中断されているC1~C6アルキレン、例えば、-CH23-O-CH2-、-CH22-O-CH22-、又は-CH2-O-CH23-である。Yは、好ましくは、yが1~6、好ましくは、1~4、特に1又は2である-CH2y-であり;又は酸素によって中断されているC1~C6アルキレン、例えば、-CH23-O-CH2-、-CH22-O-CH22-、又は-CH2-O-CH23-である。好ましくは、X及びYは同じである。好ましくは、Fc及びFc’は同じであり、X及びYは同じである。好ましくは、Zは、zが1~8、好ましくは、1~6、特に2~6である-CH2z-であり;又は必要に応じて酸素によって中断されているC1~C8アルキレン、例えば、-CH22-O-CH23-、又は-CH22-O-CH23-である。1つの好ましい実施形態では、Xは、xが1又は2である-CH2x-であり;又はYが、yが1又は2である-CH2y-であり;及びZが、zが1~8である-CH2z-である。X及びYが-NR5-により中断されているアルキレン鎖を表し、R5は、好ましくは、水素又はC1~C4アルキル、更に好ましくは水素を表す。1つの好ましい実施形態では、本発明は、一般式II:式中、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;xは、1又は2であり;yは、1又は2であり;zは、1~8であり;及びRは、リンカー基である。で示される化合物の電気化学的標識としての使用を提供する。好ましくは、x及びyは、それぞれ1に等しい。一般式I又は一般式IIで示される化合物におけるフェロセニル残基は、以下に更に開示されているように、置換されていないフェロセニルであってよく又は1若しくは両方が、置換されてよい。フェロセニル残基が同じであることは好ましく、従って、Fcが1以上の置換基により置換されており、Fc’が同じ位置に同じ置換基を有することが好ましい。反対のことが内容から明らかである場合を除いて、用語基質は、自然に生じた基質と合成基質の両方を含むように、本明細書の残り全体で用いられる。合成基質は、自然に生じた基質の合成類似体を含む。基質は、単一のヌクレオチドと単一のアミノ酸を含む。例えば、酵素などの基質の開裂に依存する分析の場合に、単一のアミノ酸は、基質としてみなされてよい。なぜなら、それは、プロテアーゼ酵素によって開裂し得る内部の化学結合を有していないけれども、このような化学結合は、マーカーの結合によって形成され得るからである。本発明は、本発明に係る化合物を用いて化学物質ケミカルエンティティを検出する方法を提供する。本発明に係る電気化学的分析における使用は、例えば、電気化学的に標識された基質を検出するための分析においてでよい。電気化学的分析は、例えば、電気化学的に標識された基質の量を求めるための分析であってよい。分析は、好都合的には、標識された基質の量を検出又は求めるためであってよく、標識された基質は、アミノ酸、ヌクレオチド、ヌクレオシド、糖類、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、炭水化物、ミクロ粒子及びナノ粒子から選択される。所定の好ましい実施形態では、分析は、標識された基質の量を検出又は求めるためであり、標識された基質は、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドから選択される。別の好都合な実施形態では、分析は、標識された基質の量を検出又は求めるためであり、標識された基質は、アミノ酸、ペプチド及びタンパク質から選択される。基質に結合する目的で、標識は、官能基又は官能性付与基を加えることによって官能化されてよい。従って、本発明は、基質への結合を促進するのに適した官能基に結合した本発明の化合物から誘導可能な残基を有する官能性誘導体を更に提供する。本発明は、また、電気化学的分析で用いるために標識残基を有する官能性標識化合物を製造する方法を提供し、該方法が、一般式I:式中、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されてよい及び/又は必要に応じて中断されてよいC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表し;及びRは、酸素原子を有するリンカー基である。で示される化合物を官能性化合物と反応させて、一般式III:A-L-FIII式中、Aは、一般式Iaここで、Fc、Fc’、X、Y及びZは、一般式Iを参照して上記のとおりである。を表し、Fは、官能基、特に、標識化残基の基質への結合のために基質と反応させるための官能基を表し;及びLは、リンカー残基を表す。で示される官能性標識化合物を得ることを有する。リンカー残基Lは、概して、リンカー基Rから誘導可能なリンカー残基である。例えば、RがOH基であり、又はOH基を有する場合に、Lは、通常-O-を表す又は有する。更に、本発明は、基質を製造する方法を提供し、標識された基質を製造するように、一般式III:A-L-FIII式中、A、F及びLは上記の通りである。で示される化合物を基質と反応させることを有する。更に、本発明は、基質の製造において用いるための官能性標識化合物を提供し、官能性標識化合物は一般式III:A-L-FIII式中、A、F及びLは上記の通りである。を有する。本発明は、また、電気化学的分析で用いるための標識化基質であって、一般式IIIa:A-L-F’-SIIIa式中、Aは、一般式Ia:ここで、Fcは、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されている又は置換されていないフェロセニル残基であり、Fcと同じであってよく又は異なってよく;Xは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Yは、-O-、-S-又は-NR5-によって必要に応じて中断されているC1~C6アルキレン鎖であり、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを表し;Zは、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって必要に応じて置換されてよい及び/又は必要に応じて中断されてよいC1~C12アルキレン鎖であり、ここで、R1は、水素又はC1~C4アルキルを表す。を表し、L~F’は、リンカー残基を表し;Sは、基質を表す。で示される標識化基質を提供する。リンカー残基-L-F’-は、一般に、一般式IIIの残基-L-F-から誘導可能である残基である。本発明は、本発明に係る基質を用いた分析を更に提供する。電気化学的検出の適用は、蛍光検出に比べて多くの利点を有する。電気化学的検出は、非常に高レベルの感度の可能性を有しており、蛍光よりも広範囲なリニアダイナミックレンジを示す。試料が光学的に透明である必要はない。また、バックグラウンドの汚染物質からの干渉も少ない多くの生物学的試料は自家蛍光自発蛍光する。電気化学的活性マーカーが、基質に結合するかどうか及び基質の性質に依存して異なる電気化学的特性を示すという観察に、電気化学的検出は基づく。例えば、アミノ酸に結合した電気化学的標識の場合に、示される特性は、アミノ酸の同定に依存するだけでなく、アミノ酸残基がペプチド又はタンパク質に組み込まれているかどうか及び全てのそのようなペプチド又はタンパク質の長さにも依存する。適切な環境下において、アミノ酸残基に結合したマーカーの電気化学的活性は、検出可能な程度で変化して、単一又は非常に少ないアミノ酸残基の結合の以下の損失をもたらし得る。電気化学的活性マーカーが結合した分子の寸法及び特性は、電気化学的マーカーの観察可能な特性に影響を及ぼす。それは、例えば、拡散によりマーカーの移動速度に又は電界に応じてその移動速度に影響を及ぼすことによって起こり得る。マーカーの電気化学的活性は、また、それが結合している分子の存在から得られる立体効果により影響を受け得る。例えば、立体障害は、マーカーが電極に接近して電子を受容又は供与するのを防ぐ可能性がある。そして、マーカーがペプチドに結合した場合に、ペプチドの二次構造一次配列により大部分が求められるようには、マーカーの物理的性質に影響を及ぼし得る。例えば、ペプチドの構造が電気化学的活性マーカーを立体的に阻害するようにマーカーがペプチドのアミノ酸残基に結合する場合に、ボルタンメトリーにより観察可能な信号が減少し得る。ペプチドの分解消化は、二次構造要素を破壊又は除去解放して、マーカーに対するペプチド構造の影響を減少又は無効に又は根絶できる。従って、ペプチドの分解は、マーカー部位により生じる電気化学的信号の変化通常、増加をもたらす。微分パルスボルタンメトリー実験において、特定の適用電圧におけるファラデー電流応答は、ペプチドの分解により増加し得る。類似的に、マーカーがヌクレオチドと結合した場合に、電気化学的特性は、ヌクレオチドがオリゴヌレクオチドに組み込まれているかどうかによって、そのオリゴヌレクオチドの長さに対して及びオリゴヌレクオチドの配列に対して特に結合場所付近で影響を受け得る。電気化学的活性マーカーに関する情報は、ボルタンメトリー又はアンペロメトリー法によって得られる。微分パルスボルタンメトリーはとりわけ適切である。必要に応じて、寸法、電荷又は疎水性などの1以上の特性に基づいて分子を排除するのを選択的に可能にする膜によって覆われる1以上の電極を用いた電気化学的検出工程を行ってよい。それは、溶液中の荷電種などから生じるバックグラウンドノイズ電流を排除するのを支援し得る。本発明の1つの実施形態では、電気化学的分析に用いる一般式Iで示される化合物は、N,N-ジ-アミノアルコールであり、アミノアルコール残基は、2~10の炭素原子、好ましくは、2~8の炭素原子、特に、3~6の炭素原子を有利に有する。好ましくは、アルコール残基は、1以上のヘテロ原子及び/又は1以上の基により必要に応じて中断されており置換されていない又は置換されている直鎖アルコール残基である。ヘテロ原子の例示は、例えば、酸素、硫黄又は窒素である。存在してよい基は、限定されないが、ヘテロシクロアルキルを含むシクロアルキル、-O-、-S-、-CO-、-CONH-、-NHCO-及び-NH-並びに-NR1-式中、R1はC1~C4アルキルである。を含む。置換基は、存在する場合に、例えば、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、オキソ、アミノ、エステル又はアミドから選択される1以上の基により必要に応じて置換されてよいC1-C4アルキルC1-C4アルケニルヒドロキシ、ハロ、シアノ、オキソ、アミノ、エステル又はアミドにより置換されているC1-C4アルケニルアリール又はヒドロキシ、ハロ、シアノ、オキソ、アミノ、エステル又はアミドにより置換されているアリールであってよい。好ましくは、ジフェロセニルアルキル基のアルキレン残基は、1~4の炭素原子、好ましくは、1又は2の炭素原子を有する。好ましくは、アルキレン残基は、両方のフェロセニルアルキル基が同じである。従って、好ましくは、ジフェロセニルアルキル基は、ジフェロセニルメチル又はジフェロセニルエチルであり、フェロセニル残基は、それぞれの場合に、独立して、置換されてなくてよい又は1以上の置換基により置換されてよい。一般式I、II及びIIIで示される化合物、及び一般式Iaの標識残基を有する本発明で用いられる化合物標識化合物、官能性標識化合物及び標識された基質を含むにおいて、2つのフェロセニル残基Fc及びFc’は、それぞれ、好ましくは独立して、置換されていない及び置換されているフェロセニル残基から選択される。1つの実施形態では、一般式I、II及びIIIで示される化合物及び一般式Iaの標識残基における2つのフェロセニル残基は、それぞれ、置換されていないフェロセニルである。他の実施形態では、1又はそれぞれのフェロセニル残基の1又は両方のペンタジエニル環は、1以上の置換基によって置換されてよく、その性質及び位置は、所望の様式で、フェロセン残基の酸化還元特性に影響を与えるように選択される。フェロセニル残基のペンタジエニル環は、標識の電気化学的感度を実質的に低下させない任意の環置換基により、付加的に又は代わりに、置換されてよい。1つの実施形態では、少なくとも1つ及び好ましくは両方のフェロセニル残基は、ハロ;ヒドロキシ、ハロ、シアノ、オキソ、アミノ、エステル又はアミドにより置換されている1以上の基により必要に応じて置換されてよいC1-C4アルキル;C1-C4アルケニル;ヒドロキシ、ハロ、シアノ、オキソ、アミノ、エステル又はアミドにより置換されているC1-C4アルケニル;アリール;ヒドロキシ、ハロ、シアノ、オキソ、アミノ、エステル又はアミドにより置換されているアリールから選択された1以上の置換基を有する置換されたフェロセニル残基である。好ましい置換基は、C1~C4アルキル、例えば、メチル又はエチル;NH2、NHR2、NR3R4により置換されるC1-C4アルキルを含み、R2、R3及びR4は、直鎖又は分岐状C1~C4アルキル;例えば、ブロモ又はフルオロなどのハロ;例えば、ビニルなどのC1~C4アルケニルからそれぞれ独立して選択される。例えば、本発明の1つの実施形態では、フェロセニル残基が分子の残りと結合した位置に隣接した環位置において、各々のフェロセニル残基は単一の置換基を有する。その実施形態の例示として、化合物ビスフェロセニルメチル-6-アミノヘキサノールがある。別の実施形態では、両方のフェロセニル残基は置換されていない。その実施形態の例示として、化合物N,N-ジ-6-アミノヘキサノールがある。更なる例示的なフェロセニル残基は、1’メチルフェロセニル2メチルフェロセニル1’ビニルフェロセニル1’ブロモフェロセニル及び2345-テトラメチル-1’,2’,3’,4’,5’-ペンタメチルフェロセニルを有する。フェロセニル残基が同じであることが好ましい。それは、より強い信号を与えると考えられる。残基Zは、置換されてなくてよく又は置換されてよい。置換基は、存在する場合に、例えば、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、アミノ及び置換されていない又は置換されているC1-C4アルキル、C1-C4アルケニル又はアリールから選択される1以上の置換基であってよく;各々の場合において任意の置換基は、制限されないが、ヒドロキシ、ハロ、シアノ、オキソ、アミノ、エステル又はアミドを含む。残基Zは、必要に応じて、ヘテロシクロアルキルを含むシクロアルキル、-O-、-S-、-CO-、-CONH-、-NHCO-及び-NH-及び-NR1-ここで、R1はC1~C4アルキルであるから選択される1又は必要に応じて1以上の原子又は残基により中断されてよい。残基Z内で中断として含み得るシクロアルキル残基の例示として、5~7環原子、特に、6環原子を有するシクロアルキル環、例えば、シクロヘキシル、ピペリジニル、モルホリニルなどがある。好ましくは同じである残基X及びYは、1~6、好ましくは、1~4の炭素原子、特に、1又は2の炭素原子、より特に、1つの炭素原子の鎖長さを有利に有する。残基X及びYは、それぞれ、-O-、-S-又は-NR5-、例えば、-NH-により必要に応じて中断されるアルキレン鎖を表してよい。好ましい残基X及びYは、例えば、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH23-O-CH2-、-CH2-O-CH23-、-CH23-O-CH22-及び-CH22-O-CH23-を含む。基質への結合は、任意の適切な結合によるもの、典型的には、基質側鎖への結合によるものであってよい。一般式Iで示される化合物におけるリンカー基Rは、直接的な又は本明細書に記載されるような官能基を用いた基質への結合を達成するのに適した任意の基であってよい。Rは、好ましくは、ヒドロキシル基若しくは保護されているヒドロキシル基、又はヒドロキシル基若しくは保護されているヒドロキシル基を有する基である。しかしながら、使用中に化合物が結合する基質を考慮して、任意の他の適切なリンカー基Rが選択され得るということを理解されたい。タンパク質、ペプチド若しくはアミノ酸側鎖又はタンパク質、ペプチド若しくはアミノ酸末端残基の誘導体化のための様々な合成法が発展してきた。例えば、タンパク質におけるリジン残基は、スクシンイミドエステルとの反応により誘導体化されてよい。他のアミノ酸残基における誘導体化のために、他の既知の合成法を用いてよい。例えば、マレイミド剤は、システイン残基を誘導体化するように用いてよい。N-ヒドロキシスクシンイミドエステルは、タンパク質若しくはペプチドのアミノ末端若しくは側鎖アミノ基、又はアミノ酸のアミノ残基を誘導体化するように用いてよい。ヌクレオチドに適した誘導体化法もまた既知であり、例えば、ホスホラミダイト残基を用いる。上記の誘導体化法は、他の方法を用いてよいけれども、本発明の化合物を基質に結合するのに用いられ得る方法で説明される。本発明に従って標識された基質は、官能性標識化合物を得るように必要に応じて官能化した後に、基質、例えば、アミノ酸、ヌクレオチド例えば、オリゴデオキシリボヌクレオチド又はオリゴリボヌクレオチド、ヌクレオシド、糖分、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、炭水化物及び任意のそれらの分子の誘導体から選択される基質と、本発明に係る化合物との反応により調製されてよい。好ましい実施形態では、基質は、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドである。ヌクレオチドは、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン又はウリジンから選択されてよい。ヌクレオチドのリボース又はデオキシリボース基に結合した基によって、例えば、2’、3’又は5’位に、例えば、酸素又は窒素原子によって、好ましくは、ヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドのヌクレオチドを標識に結合する。最も好ましくは、ヌクレオチドは、3’又は5’位に、例えば、5’位に、結合する。他の位置における結合もまた可能である。ヌクレオチドの場合に、本発明の標識を結合する1つの好都合な方法は、ホスホラミダイトを用いた官能化によるものである。オリゴヌクレオチドのホスホラミダイト基への結合は、オリゴヌクレオチド合成において幅広く行われており、従って、ホスホラミダイトにより官能化された標識のオリゴヌクレオチドに結合するための方法及び条件は、既知であり、当業者にとって当然のことである。更に、それは、標準オリゴ製造方法の使用を有利に可能にする。本発明に係る分析で用いるためのオリゴヌクレオチドは、有利に、2~50のヌクレオチド、更に好ましくは、2~40のヌクレオチド、特に、15~35のヌクレオチド、特別に好ましくは、18~30のヌクレオチドを有するヌクレオチドである。いくつかの用途では、更に短いオリゴヌクレオチド、例えば、2~14のヌクレオチド、更に好ましくは、2~10のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドが有益であり得る。例えば、システイン、リジンを用いてタンパク質に結合することは、場合によっては、適切な緩衝溶液において室温でタンパク質とフェロセニル標識を一緒に培養することによって達成できる。標識がシステイン又はリジンに有利に結合しているが基質配列が適切な位置にシステイン又はリジンを有さない配列は、必要に応じて、1以上のシステイン又はリジン残基を追加的な残基として又は別の残基のための置換基として追加するように変えられてよい。タンパク質に結合するための代替的な方法は、標識のビオチン化及び商業用ストレプトアビジン化タンパク質逆の場合も同じの使用を含んでよい。例として、基質を、任意の標準技術により、例えば、市販のビオチン化キットの使用によりビオチン化してよい。ビオチン化基質は、例えば、抗体商業的及び幅広く利用可能ななどのストレプトアビジン又はアビジン共役化合物に結合する。しかしながら、適切な標識する官能基の使用により、類似の標識が、多くの位置の選択された1つに基質と結合してよいことは当業者にとって明らかである。一般式III:A-L-FIII式中、A~Lは、好ましくは、一般式Iで示される化合物から誘導される残基であり、Fは官能基であるで示された官能性標識化合物。一般式IIIで示される好適な官能性標識化合物は、一般式IIIb:A-O-FIIIb式中、A-Oは、好ましくは、一般式Iのリンカー基Rがヒドロキシル又はヒドロキシル含有基であり又は保護されているヒドロキシル基である場合に、ヒドロキシ水素原子又は保護基の損失によって、一般式Iで示される化合物から誘導される残基であり、Fは官能基である。で示される化合物を含む。一般式III及び一般式IIIbにおける官能基Fとして有する本発明の標識とともに使用可能な適切な官能基は、限定されないが、スクシンイミドエステル基、ホスホラミダイト基、マレイミド基、ビオチン及びアジド基を含んでよい。しかしながら、標識すべき基質への標識化合物の結合を容易にする任意の官能基を用いてよいことを理解されたい。本発明は、また、試料中の核酸例えば、RNA又はDNAの検出方法を提供し、該方法は、核酸を増幅する例えば、PCR又は他の核酸増幅技術による任意の工程、続いて、プローブとアンプリコンの間のハイブリダイゼーションを可能にする条件下で、相補的な核酸プローブとアンプリコンを接触させる工程、次いで、ハイブリダイズされている又はハイブリダイズされていないプローブを選択的に低下する例えば、一本又は二本鎖の特定ヌクレアーゼの使用により工程を有し、前記プローブを、本発明の電気化学的活性化合物により標識化し、当該方法は、プローブを標識化する化合物の電気化学的活性を測定する工程を有し、前記電気化学的活性は、プローブの分解程度に定量的に又は定性的に依存する。本発明は、本発明の電気化学的活性化合物により抗体又は誘導体例えば、分析においてターゲット抗原に結合してよいを検出する方法も提供し、本発明は、化合物の電気化学的活性を測定する工程を有する。本発明は、患っている病気を診断又は監視する方法も提供し、本発明は、患っている組織又は体液の前記病気に伴うプロテアーゼ又はプロテアーゼ阻害剤の検出において本発明の方法を使用することを含む。本発明は、患っている病気を診断又は維持する方法も提供し、本発明は、患っている組織又は体液の前記病気に伴うペプチド又はタンパク質を検出するように本発明の方法を使用することを含む。本発明は、患っている病気を診断又は監視する方法も提供し、本発明は、患っている組織又は体液の前記病気に伴うヌクレアーゼ又はヌクレアーゼ阻害剤の検出において本発明の方法を使用することを含む。更に、本発明は、患っている病気を検出するために本発明の方法の使用を提供する。本発明は、また、病原菌又は他の望ましくない有機物、例えば、食品損傷有機物を検出する方法を提供し、本発明は、本発明の方法を使用することを含む。更に、本発明は、電気化学的測定法におけるN,N-ジグリシン誘導体、例えば、N,N-ジグリシンアミド誘導体の電気化学的標識としての使用を提供する。本発明は、必要に応じて、例えば、試料容器、電気化学的検出のための電極を有するコンテナ、分析又は標準および制御における使用のための酵素などの他の分析要素と組み合わせて、本発明の標識された基質を有する分析も提供する。前記分析は、本発明の1以上の異なる標識された基質を有してよい。その場合に、異なる標識された基質の存在は、それらを、異なる電気化学的特性を有する本発明の電気化学的標識により標識することによって異なって検出することができ例えば、異なる酸化電位、従って、分析を多重例えば、二重分析にでき、異なる基質は、同じ試料容器内に存在する場合に識別区別できる。本発明は、付加的な実施形態において一般式I:式中、Fcは、置換されているフェロセニル残基であり、Fc’は、置換されているフェロセニル残基であり、Fcと同じ又は異なってよく;Xは、C1~C6アルキレン鎖であり、必要に応じて、-O-、-S-、又は-NR5-によって中断され、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを示し;Yは、C1~C6アルキレン鎖であり、必要に応じて、-O-、-S-、又は-NR5-によって中断され、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを示し;Zは、C1~C12アルキレン鎖であり、-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONR1-、-NR1CO-又は-NR1-によって、必要に応じて置換されてよく及び/又は必要に応じて中断されてよく、ここで、R1は水素又はC1~C4アルキルを表し、Rはリンカー基である。で示される化合物を提供する。その実施形態では、各々のフェロセニル残基が、ハロ、C1~C4-アルキル、ハロアルキル、アリール、C1~C4アルケニル及びシアノから選択される少なくとも1つの置換基によって置換されることが好ましい。更に付加的な実施形態において、本発明は、一般式I:式中、Fc及びFc’は、それぞれ置換されていないフェロセニル残基であり、Xは、C1~C6アルキレン鎖であり、必要に応じて、-O-、-S-、又は-NR5-によって中断され、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを示す。Yは、C1~C6アルキレン鎖であり、必要に応じて、-O-、-S-、又は-NR5-によって中断され、ここで、R5は、水素又はC1~C6アルキルを示す。Zは、C6~C12アルキレン鎖であり、又は1以上の置換基により置換されている又は-O-、-S-、シクロアルキル、-CO-、-CONH-、-NHCO-若しくは-NR1-から選択される基により中断されているC6~C12アルキレンでありここで、R1は水素又はC1~C4アルキルを表す。、Rはリンカー基である。で示される化合物を提供する。更なる付加的な実施形態において、Xが、xが1~6である-CH2X-を表し、Yが、yが1~6である-CH2y-を表すことが好ましい。前記付加的な実施形態及び更なる追加的な実施形態では、Zは、酸素によって必要に応じて中断されているC6~C8アルキレンを好ましくは表す。好ましくは、リンカー基Rは、官能基の又は基質の適合基と反応して化合物を前記官能基又は前記基質に結合できる基を有し、例えば、Rは、ヒドロキシ、保護されているヒドロキシ、又はヒドロキシ又は保護されているヒドロキシ基を有する残基であってよい。表1は、以下に、一般式IVa、Va、VIa、VIIa及びVIIIaにおいて、本発明に係る所定の好ましい化合物を示しており、本発明に係る電気化学的分析において標識として用いることができ、及び本発明に係る官能性標識化合物及び標識された基質を調製するように用いることができる。表1は、また、一般式IVb、Vb、VIb、VIIb及びVIIIbにおいて、本発明に係る例示的な対応官能性標識化合物を示す。表1における式では、各々のフェロセニルは、同じ又は異なってよい1より多い置換基Rを、任意の環位に環位置に有してよい立体障害の濃度がそれに対して低減することについて、考慮することを除いて。フェロセニル基の1つに1以上の置換基がある場合に、他のフェロセニル基は、同じ位置に同じ置換基を有するものと理解されたい。表1の一般式IVa、Va、VIa、VIIa及びVIIIa並びにそれらの官能性対応物均等物において、1以上の環置換基R11又はR13が、各々のフェロセニルの隣接したペンタジエニル環即ち、分子の残りに直接結合している環に存在する場合に、好ましくは、その結合に隣接した環位に前記環置換基がある。1以上の環置換基R11、R13が、それぞれの隣接したペンタジエニル環に存在する場合に、それらの置換基は、互いに任意の位置であってよい。1以上の環置換基R10、R12又はR14が、各々のフェロセニルの各々の末端ペンタジエニル環即ち、分子の残りにフェロセニルを繋いでいる結合から離れている環に存在する場合に、それらの置換基は互いに任意の位置であってよい。表1における一般式IVa、Va、VIa、VIIa及びVIIIa並びにそれらの官能性対応物において、隣接又は末端の環に環置換基が示されているが、各々のフェロセニルの両方のペンタジエニル環が、1以上の置換基を有することも可能である。特別に好ましい実施形態では、化合物は、N,N-ジ-6-アミノヘキサノール以下に標識Aとして実施例で言及されるである。本発明に従って用いることができる他の好ましい標識は、2-アミノ-1-ピペリジン-1-ylエタノン及びN,N-ジ--2-アミノエトキシエタノールを有し、1又は各々のフェロセニル残基は、置換されてなくてよく、又は1以上の置換基によって置換されてよい。フェロセニル残基が両方とも置換されていない化合物N,N-ジフェロセニルメチル-6-アミノヘキサノールは、優れた電気化学的特性を有することが見出されている。本明細書における実施例で説明するように、その化合物において各々のフェロセニル残基における1以上の置換基の組み込み各々のフェロセニルにおける置換基が同じであるをは、修飾電気化学特性を有する化合物を得るように用いることができ、適切な置換基選択によって1組の化合物を用意し、そこから2以上を多重反応の目的で選択することができる。優れた電気化学的特性を有することが見出されている本発明に係る例示的な所定の化合物が表2に示される:図1を参照すると、本発明に記載されるサイクリックボルタンメトリー実験に用いるのに適した電気化学的セル1が概略的に示される。セルは、容器2を有し、100mMの塩化ナトリウム水溶液であるバックグラウンド電解質溶液3を有する。溶液3に浸されたのは、プリント印刷した炭素作用電極5、プリントした炭素カウンター電極6、及び銀/銀の塩化物参照電極7であり、全て銀コネクタを有する。試料は、作用電極の表面上に広げられ、ボルタンメトリーは、銀コネクタをポテンショメーター上における適切な鉛に接続することによって行われる。説明することによって、試料は、以下のように準備されてよい:フェロセニル標識前駆体2ngは、DMSO1mL中に溶解する。10μLの一定分量が、この溶液から取り出され、従って、緩衝液500μL中で更に蒸留される。次いで、一定分量20μLを、電気化学的スキャンを行うようにスクリーン印刷電極に適用する。以下の実施例は本発明を説明する。材料及び方法-標識の合成及び分析フェロセンカルボン酸は、シグマ-アルドリッチから得た。フェロセンカルボアルデヒドは、シグマ-アルドリッチから得た。6-アミノヘキサノールは、シグマ-アルドリッチから得た。グリシンは、シグマ-アルドリッチから得た。NNジイソプロピルエチルアミンは、シグマ-アルドリッチから得た。2-シアノエチルジイソプロピルクロロホスホラミダイトは、シグマ-アルドリッチから得た。濃度1mg/mLにおけるパパイン溶液は、シグマ-アルドリッチから得た。Anti-goatIgG及びビオチン化したgoatIgGは、シグマから得た。PCR法は、PTC-100又はPTC-200ProgrammableThermalControllerMJResearch社を用いて行い、又はPeqLabのフラットベッドサーモサイクラーのStreptavidinストレプトアビジンコーティングマイクロタイタ-ウェルは、SigmaScreen商標登録の高密度ウェルであった。材料及び方法-電気化学的検出電極は、インクベースであり、ポリマー基質例えば、Mylar上にスクリーン印刷され、続いて、GMNameプレートワシントン州シアトルにより熱硬化製造される。実施例1N,N-ジフェロセニルメチル-6-アミノヘキサノールの合成標識A乾燥THF25mLにおけるフェロセンカルボアルデヒド2.1g、9.81mmol及び6-アミノヘキサン-1-オール0.5g、4.27mmolを、オーブンで乾燥したフラスコに加えた。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド2.3g、10.90mmolを、溶液に分割添加した。反応を一晩中放置した。反応は、エチルアセテート40mL内で起こり、NaCO3飽和;20mL、ブライン20mL及びMilliQ水20mLで、有機層を洗浄した。次いで、有機分画を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を真空中で除去した。次いで、粗生成物は、9:1の溶液B:溶液A溶液A:エチルアセテート95TEA5、溶液B:石油エーテル40-6095、TEA5を用いて、純粋な生成物ダークオレンジ固体を生じるように、並べられるcolumned。85の収率1HNMRδ41841741336634822015913113CNMRδ77837740769870586888633653025217331027432588HRMSC28H33N1O1Fe2としての計算値:5191430;実測値5191438化合物標識Aの電気化学は、図2のボルタモグラムに示される。生成物標識は、0.275Vの酸化還元電位を有することが分かった。実施例2ジ-メチルフェロセニルメチル-6-アミノヘキサノールの合成aジメチルアミノメチルフェロセンカルボアルデヒドメチルフェロセンの合成1g、5mmolはEt2Oに溶解し、n-ブチルリチウム2.51mL、6.25mmolをゆっくりと加えて、反応混合物を16時間室温で攪拌した。16時間後、反応混合物を、DMF0.4mL、6.25mmolによりクエンチし、再び、4時間室温で攪拌した。次いで、水15mLを反応に加えた。次いで、有機層を、エーテルにより抽出した2x25mL。組み合わせた有機層を、硫酸マグネシウムにより乾燥し、濾過し、溶媒を、72の収率で生成物ダークレッド/ブラウンの油を利用するように真空下で除去した。1HNMRδ98142141436420813CNMRδ19328678347787757707662758718703702700684680592566448447HRMSC14H18N1O1Fe1として計算値:2720737実測値2720731。RefBiotCGlorianGMaciejewskiLABrocardJSDomarleOBlampainGMilletPGeorgesAJAbessoloHDiveDLebibiJJMedChem19974037153718b標識Bの合成標識Bジメチルアミノメチルフェロセンカルボアルデヒド1.1g、4.04mmolを乾燥THF30mLに溶解した。次いで、6-アミノヘキサン-1-オール0.25g、2.13mmolを加えた。続いて、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド1.3g、6.16mmolを反応混合物に加えた。溶液を、一晩中室温で、窒素下で攪拌した。次いで、エチルアセテート20ml及び1NのNaOH飽和;20mLを加え、続いて、有機層を、NaCO325mL、ブライン25mL及びMilliQフィルター処理水25mLにより抽出し、次いで、MgSO4上で乾燥し、及び真空中で溶媒を除去し、オレンジ油を得た0.95、75。1HNMRδ418417413366348220217159131HRMSC34H49N301Fe2として計算値6273012実測値6273126。生成化合物の電気化学は、図3のボルタモグラムに示される。生成物標識Bは、0.38Vの酸化還元電位を有することが分かった。実施例32アミノ-1-ピペリジンlylエタノンの合成標識CaN,N-グリシンの合成フェロセンカルボアルデヒド2.1gを、乾燥THF20mLを有する丸底のフラスコに加えた。グリシン0.5gを溶液に加え、反応をN2下で攪拌した。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド2.3gを、攪拌溶液に分割添加した。反応を一晩中攪拌した。溶液は、エチルアセテート40mLと1Mの水酸化ナトリウム水溶液40mLの間で分割した。有機分画を、飽和NaHCO3水溶液飽和;20mL、ブライン40mL及び水40mLにより洗浄した。有機分画を、MgSO4を用いて乾燥し、溶媒を除去した。次いで、粗生成物を並べた溶媒A:石油エーテル40-60:TEA95:5、溶媒B:エチルアセテート:TEA95:5。生成物はダークオレンジ固体80であった。1HNMRδ40994052402235493348197913CNMRδ1715780775771689674611HRMSC24H25N1O2Fe2として計算値4773974実測値4774213。bジフェロセニルグリシンから標識Cの合成N2下において0°Cで乾燥DCM100mL内で上記3aで得られるジ-フェロセニルグリシン誘導体の攪拌溶液に、乾燥DCM2mLにおける塩化オキサリル0.87mLを、均圧滴下漏斗を用いて滴下して加えた。反応は室温まで上昇し、2時間攪拌した。次いで、溶媒を除去し、酸塩化物生成物を乾燥DCM75mL内に加えた。乾燥DCM75mL内の6-アミノヘキサン-1-オール0.56gを0°CN2下で滴下漏斗を用いて滴下して加えた。続いて、室温まで上昇しながら反応を2時間に亘って攪拌した。次いで、溶液をNaHCO3飽和;100mL及び1.0MのHCL100mLで洗浄した。有機分画をMgSO4上で乾燥し、次いで、溶媒を除去し、生成物を得た85。オレンジ/イエロー固体。1HNMRδ41136535514811813CNMRδ1733277807739769062103885354532023067267525542544mz576生成化合物標識Cの電気化学は、以下の表3及び図4のボルタモグラムに示される。実施例4ホスホラミダイト官能基を結合するための一般的な合成法上記の反応式において出発材料として示されるフェロセニル誘導体を説明し、上記の実施例1~3又は以下の実施例9~13で製造される全ての化合物のモル当量で置換されてよい。N,N-ジイソプロピルエチルアミンを、窒素雰囲気下で乾燥THF25mL内でフェロセン誘導体2.1mmolの攪拌溶液に加えた。2-シアノエチルジイソプロピルクロロホスホラミダイト0.2ml、3.15mmolを滴下して加え、得られる混合物を15分間攪拌した。MilliQフィルター処理水200mLを加え、溶液を更に30分間攪拌した。エチルアセテート-トリエチルアミン1:1、25mLを加え、沈殿物を形成した。混合物を、飽和NaHCO325mL及びMilliQフィルター処理水25mLで洗浄した。有機分画をMgSO4上で乾燥させ、溶媒を真空中で除去した。次いで、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより浄化した石油エーテルエチルアセテート9:1。フェロセニル出発材料として標識Cによる上記の方法を用いて、以下に記載した特徴データを有する式IXのホスホラミダイト官能性化合物を得た。1HNMR642341841339038237135434426423516913512331PNMRδ14723HRMSC39H53N4O3Fe2P1として計算値7680973実測値7681254。実施例5オリゴヌクレオチドプローブと結合した標識Aの使用オリゴヌクレオチドの合成を、標準オリゴヌクレオチド固相合成技術を用いて行い、ヌクレオチドを、オリゴヌクレオチドストランド鎖の5’末端に段階的に加えた。オリゴヌクレオチド鎖へのそれぞれの添加は、デ-ブロッキング、カップリング、キャッピング及び酸化工程である4つの反応を有する。オリゴヌクレオチド配列が所望の長さに完成すると、電気化学的標識を、ホスホラミダイト結合を用いて加えた。方法5’及び3’ターゲット特定プライマー及びウラシルDNAグリコシラーゼUDG工程を用いた標準PCR法により、ターゲット配列をChlamydiatrachomatisターゲットから増幅した。PCR条件を以下の表1に要約した。PCR反応が完了したときに、5’と3’のプライマーの間におけるターゲット上の位置の中間の配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブ5’末端において電気化学的標識Aにより標識したを、PCR反応生成物に加えて、アンプリコン上のそのターゲットに対してアニールした。T7エキソヌクレアーゼ二重鎖の核酸のために特定されているを管に加え、それがdsRNAを分解するのを可能するように培養した。プローブを、PCRアンプリコンに対してアニール結合する程度まで、T7エキソヌクレアーゼによって分解した。次いで、電気化学的検出を行い、標識Aにより標識された分解生成物ヌクレオチドのために、0.2Vの特徴的な酸化還元電位におけるピークを示した。UNGプロトコール37°Cx10分94°Cx10分PCRプロトコール94°Cx30秒58°Cx45秒72°Cx60秒繰り返し工程x39サイクル72°Cx7分結果図5は、Chlamydiatrachomatisの陽性試料強いピーク及び陰性試料ピークの欠如の両方のための既知の標識の特定の酸化還元電位におけるピーク高さを電流として示す。図6は、標識A電気化学的標識と合成したモノヌクレオチド及びジヌクレオチドの質量分析法を示す。図7は、分析生成物の質量分析法であり、標識A電気化学的標識に連結されているモノヌクレオチドに対する正確な相関関係を示し、電気化学的残基は、分析で検出した。図8は、Chlamydiaターゲットを、濃度範囲においてPCR反応に直接加えた実験の結果を示す。これは、PCRを用いて増幅し、次いで、標識Aのオリゴヌクレオチドプローブを用いて検出した。図9は、濃度範囲のChlamydiaターゲットをDNA抽出プロセスに加え即ち、PCRに直接加えないて、抽出プロセスからの生産物を、PCRを用いて増幅し、次いで、標識Aにより標識されたオリゴヌクレオチドプローブを用いて検出した実験の結果を示す。実施例6qPCRに対する性能の比較a図10は、ノロウィルスのための、標識Aプローブを用いた電気化学的検出とSYBRGreenベースのqPCR分析との間の比較を示す。材料及びプロトコールは以下のとおりである:BiolineSensiMixdUBioline1XSYBRGreen03μMフォワードプライマー03μMリバースプライマー05UUNGUNGプロトコール37°Cx10分60°Cx2分qPCRプロトコール95°Cx10分95°Cx15分45°Cx10分72°Cx10分繰り返し最終3工程x39サイクル1°Cずつ増加における47°C95°C特定でない増幅のためにチェックするように溶融されるエンドポイントCt値の十進法の逆数は、qPCR結果が化学的結果に対する直接の比較を与えるように用いられる。データは、電気化学的分析が200アトグラムであるための検出の制限を示す。qPCR分析のための検出の制限は、2~20フェトグラムとの間として示される。このレベルより低くにおいて、Ct値は、40サイクルカットオフよりも大きく、40のCt値の逆数として水平線により示される。qPCR陰性試料は、しきい値よりも上に上昇しなかった。これは、標識Aを用いた電気化学的分析の好都合な感度を示す。b図11は、Streptococcusequiのための、標識Aプローブを用いた電気化学的検出とSYBRGreenベースのqPCR分析との間の比較を示す。電気化学的分析とqPCR分析の両方が、この実験で試験される最低DNA濃度20フェトグラムに下がって検出することができるということを、データが示す。20フェトグラムにおける電気化学的検出のための信号:ノイズ比は、この実験で4:1であった。20フェトグラムは、SequiDNAの8遺伝子複製と等しい。実施例7タンパク質と直接結合した標識Aa図12aは、活性NHSエステルエタノールの合成乾燥THF25mL内におけるフェロセンカルボアルデヒド2.1g、9.81mmolとエタノールをオーブンで乾燥したフラスコに加えた。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド2.3g、10.90mmolを溶液に分割添加した。反応を一晩中放置した。反応物をエチルアセテート40mL内に加え、有機層を、NaCO3飽和;20mL、ブライン20mL及びMilliQ水20mLで洗浄した。次いで、有機分画を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を真空中で除去した。次いで、粗生成物を、純粋な生成物標識Dダークオレンジ固体を生じるように、9:1の溶液B:溶液A溶液A:エチルアセテート95TEA5、溶液B:石油エーテル40-6095、TEA5を用いて、並べた。85収率;1HNMRδ41841741336634822013CNMRδ77837740769870586888633653025217331027432588HRMSC26H33N102Fe2mzとして計算値5011430実測値5011438。標識Dの電気化学は、以下の表及び図14のボルタモグラムに示される。実施例10ジ-フェロセニルグリシンアミノアルコールの合成N,N-2アセチル-6-アミノヘキサノールは、N-6-ヒドロキシヘキシル-2-ジフェロセニルメチルアミノ-アセトアミド標識Eとも呼ばれる。乾燥DCM内2mLにおける塩化オキサリル0.87mLを、0°CN2下で乾燥DCM100mLにおいてジフェロセニルグリシン実施例3aに記載されるように得られるの攪拌溶液に、均圧漏斗を用いて滴下して加えた。反応は室温まで暖まり、2時間攪拌した。次いで、溶媒を除去し、酸塩化物生成物を、乾燥DCM内75mLに加えた。乾燥DCM75mL内の6-アミノヘキサン-1-オール0.56gを、0°CN2下で滴下漏斗を用いて、滴下して加えた。室温まで温めながら反応を2時間攪拌した。次いで、反応を、NaHCO3飽和;100mLと1.0MのHCl100mLにより洗浄した。有機分画をMgSO4上で乾燥し、次いで、溶媒を、生成物標識E85を得るように除去した。オレンジ/黄色固体。lHNMRδ41135533114811813CNMRδ1733277807739769062103885354532023067267525542544HRMSC24H25N102Fe2として計算値5760988実測値5761264標識Eの電気化学は、以下の表のデータに説明される。実施例116-1メチルフェロセニルアミノヘキサンl-オール1’-ビニルフェロセンカルボアルデヒド122mg、0.5mmolを乾燥THF5cm3内に溶解し、6-アミノヘキサン-l-オール及びナトリウムトリアセトキシボロヒドリドで連続して処理した。溶液を室温で一晩攪拌した。この時間の後に、反応を、10cm3の飽和したNaHCO3を添加することによりクエンチした。有機層を分離し、次いで、液層は、エチルアセテート3x103cmにより再び抽出した。組み合わされた有機抽出物を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、フィルター処理又は濾過し、赤い固体を与えるように真空中で濃縮した。生成物をシリカクロマトグラフィーにより浄化し、1:1エチルアセテート:ヘキサンの1水酸化アンモニアを溶出し、オレンジ油72mgとして、50収率で所望の生成物を与えた。1HNMRδH63853050342541540735933222314915513313912213313CNMR5C13431113837836714692690672628521327271255HRMSmz5661825電極電位298mV実施例126-ビスl-メチルフェロセニルアミノヘキサン-1-オール1’-ブロモフェロセンカルボアルデヒド85mg、0.29mmolを乾燥THF内3cm3内で溶解し、6-アミノヘキサン-1-オール25mg、0.144mmol及びナトリウムトリアセトキシボロヒドリドで連続して処理した。溶液は、室温で一晩中攪拌した。この時間の後に、反応を、5cm3の飽和NaHCO3の添加によりクエンチした。有機層を分離し、次いで、液層は、エチルアセテート3x103cmを用いて再び抽出した。組み合わされた有機抽出物は、硫酸マグネシウム上で乾燥し、フィルター処理し、次いで、真空中で濃縮し、赤い固体を与えた。生成物は、シリカクロマトグラフィーにより浄化し、1:1エチルアセテート:ヘキサンの1水酸化アンモニアを溶出し、黄色油17mgとして、17収率で所望の生成物を与えた。1HNMRδH43242140536334623114515812713613CNMRδC784729708705686679631628521330273260HRMSmz6697929電極電位437mV実施例136-メチルアミノヘキサンl-オールメチルフェロセンカルボアルデヒド1g、5mmolを乾燥THF内で溶解した30cm3。6-アミノヘキサン-1-オール0.25g、2.13mmolを加えた。次いで、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド1.3g、6.16mmolを反応混合物に加えた。溶液を、一晩中室温で窒素下で攪拌した。エチルアセテート20cm3及び1MのNaOH20cm3を加え、有機層は、飽和したNaHCO325cm3、ブライン25cm3及びMilliQフィルター処理水25cm3で抽出し、次いで、硫酸マグネシウム上で乾燥し、及び真空中で溶媒を除去し、オレンジ油を得た。粗生成物を、純粋な生成物オレンジ油を生じる0.95、65ように、9:1の溶液B:溶液A溶液A:エチルアセテート95TEA5、溶液B:石油エーテル40-6095、TEA5を用いて、並べられる。1HNMRδH41841741336634823622015913113CNMRδC778774769705689633530521331274258124HRMSmz5398156電極電位330mV上記の表におけるデータは、フェロセニル残基に対する置換基の含有及びその置換基の選択が、電極電位に影響を与えるようにどのようにして用いてよいかを示す。これは、化合物の電気化学的検出を、様々な異なる条件下で行うことを可能にし、例えば、最適測定電位を選択する、又は存在してよい不純物との干渉により測定感度が妥協できる条件を避ける。更に、異なる電極電位による標識の使用は、多重反応の発展を可能にし、1より多くの測定を同じ試料で行ってよい。"