フェレドキシン存在下でアルカン合成酵素によりアルカンを合成する、アルカンの製造方法。アルカン合成能を有する微生物によりアルカンを合成することを特徴とする請求項1記載のアルカンの製造方法。上記微生物は、アルカン合成酵素遺伝子が導入された組換え微生物であることを特徴とする請求項2記載のアルカンの製造方法。上記微生物は、フェレドキシン遺伝子が導入された組換え微生物であることを特徴とする請求項2記載のアルカンの製造方法。上記微生物は、アルカン合成酵素遺伝子及びフェレドキシン遺伝子が導入された組換え微生物であることを特徴とする請求項2記載のアルカンの製造方法。上記フェレドキシンに加えてフェレドキシンNADPHレダクターゼの存在下でアルカンを合成する請求項1記載のアルカンの製造方法。フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を、アルカン合成能を有する微生物に導入した組換え微生物によりアルカンを合成することを特徴とする請求項6記載のアルカンの製造方法。上記組換え微生物は、酵母由来であることを特徴とする請求項3~請求項5及び請求項7いずれか一項記載のアルカンの製造方法。上記アルカン合成酵素は、アルデヒドをアルカンに変換する活性を有することを特徴とする請求項1記載のアルカンの製造方法。炭素数9~16のアルカンを製造することを特徴とする請求項1記載のアルカンの製造方法。フェレドキシン遺伝子を導入した、アルカン合成能を有する組換え微生物。フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を更に導入したことを特徴とする請求項11記載の組換え微生物。上記アルカン合成能は、アルカン合成酵素遺伝子を導入することで付与されたものであることを特徴とする請求項11記載の組換え微生物。組換え酵母であることを特徴とする請求項11記載の組換え微生物。そこで、本発明は、上述したような実情に鑑み、アルカン合成酵素活性によりアルカンを合成する反応系において、アルカン生産性に優れたアルカンの製造方法及び組換え微生物を提供することを目的とする。上述した目的を達成するため、本発明者らが鋭意検討した結果、アルカン合成酵素によりアルカンを合成する系においてフェレドキシンの存在下でアルカン生産性が大幅に向上することを見いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下を包含する。1フェレドキシン存在下でアルカン合成酵素によりアルカンを合成する、アルカンの製造方法。2アルカン合成能を有する微生物によりアルカンを合成することを特徴とする1記載のアルカンの製造方法。3上記微生物は、アルカン合成酵素遺伝子が導入された組換え微生物であることを特徴とする2記載のアルカンの製造方法。4上記微生物は、フェレドキシン遺伝子が導入された組換え微生物であることを特徴とする2記載のアルカンの製造方法。5上記微生物は、アルカン合成酵素遺伝子及びフェレドキシン遺伝子が導入された組換え微生物であることを特徴とする2記載のアルカンの製造方法。6上記フェレドキシンに加えてフェレドキシンNADPHレダクターゼの存在下でアルカンを合成する1記載のアルカンの製造方法。7フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を、アルカン合成能を有する微生物に導入した組換え微生物によりアルカンを合成することを特徴とする6記載のアルカンの製造方法。8上記組換え微生物は、酵母由来であることを特徴とする3~5及び7いずれか1記載のアルカンの製造方法。9上記アルカン合成酵素は、アルデヒドをアルカンに変換する活性を有することを特徴とする1記載のアルカンの製造方法。10炭素数9~16のアルカンを製造することを特徴とする1記載のアルカンの製造方法。11フェレドキシン遺伝子を導入した、アルカン合成能を有する組換え微生物。12フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を更に導入したことを特徴とする11記載の組換え微生物。13上記アルカン合成能は、アルカン合成酵素遺伝子を導入することで付与されたものであることを特徴とする11記載の組換え微生物。14組換え酵母であることを特徴とする11記載の組換え微生物。本発明よれば、アルカン合成酵素によりアルカンを合成する反応系におけるアルカン合成の効率、すなわちアルカンの生産性を向上させることができる。すなわち、本発明に係るアルカンの製造方法は、非常に優れた生産効率でアルカンを製造することができ、アルカンの生産コスト低下に寄与することができる。また、本発明に係る組換え微生物は、従来のアルカン合成能を有する微生物と比較して、優れたアルカン合成能を有するため、アルカン製造に非常に有用である。以下、本発明を図面及び実施例を用いてより詳細に説明する。本発明は、アルカン合成酵素によりアルカンを合成する系においてフェレドキシンを存在させることで、アルカンの生産性を向上するものである。ここで、アルカン合成酵素によりアルカンを合成する系としては、アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物といったinvivoの系、アルカン合成酵素により基質を含む反応液中でアルカンを合成するinvitroの系を含む意味である。如何なるアルカン合成系においても、フェレドキシンの存在下では、フェレドキシンの非存在下と比較して、アルカンの生産性が向上することとなる。また、フェレドキシンに加えてフェレドキシンNADPHレダクターゼフェレドキシンNADPレダクターゼと称する場合もあるを存在させることにより、アルカンの生産性を更に顕著に向上させることができる。すなわち、アルカン合成酵素によりアルカンを合成する系においてフェレドキシンとフェレドキシンNADPHレダクターゼを存在させることで、フェレドキシンが単独で存在する場合と比較して、アルカンの生産性がより顕著に向上スルこととなる。<フェレドキシン>フェレドキシンとは、内部に鉄硫黄クラスターを含む鉄硫黄タンパク質であり、電子伝達体として機能するタンパク質である。アルカン合成酵素によりアルカンを合成する系においてフェレドキシンを存在させるには、一例として、アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物にフェレドキシンをコードする遺伝子を導入すればよい。フェレドキシン遺伝子としては、特に限定されず、如何なる生物由来の遺伝子を使用しても良い。例えば、DDBJEMBLGenBank国際塩基配列データベース等の遺伝子情報を格納したデータベースを参照することで、様々な生物種由来のフェレドキシン遺伝子に関する塩基配列やフェレドキシンのアミノ酸配列を特定することができる。一旦、フェレドキシン遺伝子の塩基配列が特定できれば、定法に従って当該遺伝子を単離することができる。例えば、特定した塩基配列に基づいて所定の生物由来のフェレドキシン遺伝子を全合成しても良いし、特定した塩基配列に基づいてプライマーを設計し、所定の生物ゲノムを鋳型として当該プライマーを用いたPCRによりフェレドキシン遺伝子を単離することもできる。特に、アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物にフェレドキシン遺伝子を導入する場合、フェレドキシン遺伝子としては当該微生物由来の遺伝子であることが好ましい。例えば、所定の酵母に対してアルカン合成関連遺伝子を導入して、アルカン合成能を獲得した組換え酵母に対しては、当該酵母由来のフェレドキシン遺伝子を導入すればよい。より具体的に、アルカン合成能を獲得した組換え酵母組換えScerevisiaeに対しては、Scerevisiae由来のフェレドキシン遺伝子を使用することが好ましい。なお、Scerevisiae由来のフェレドキシン遺伝子は、YAH1遺伝子又はYfdx遺伝子として公知である。Scerevisiae由来のフェレドキシン遺伝子の塩基配列及び当該遺伝子によりコードされるフェレドキシンのアミノ酸配列をそれぞれ配列番号1及び2に示す。なお、フェレドキシン遺伝子としては、配列番号2に示すアミノ酸配列をコードするものに限定されず、配列番号2に示すアミノ酸配列に対して70以上の同一性、好ましくは80以上の同一性、より好ましくは90以上の同一性、更に好ましくは95の同一性、最も好ましくは98以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりフェレドキシンとして機能するタンパク質をコードする遺伝子でも良い。同一性の値は、BLASTアルゴリズムを実装したBLASTNやBLASTXプログラムにより算出することができるデフォルトの設定。なお、同一性の値は、一対のアミノ酸配列をペアワイズアライメント分析した際に完全に一致するアミノ酸残基を算出し、比較した全アミノ酸残基中の上記残基数の割合として算出される。また、フェレドキシン遺伝子としては、配列番号2に示すアミノ酸配列をコードするものに限定されず、配列番号2に示すアミノ酸配列に対して、1~20個のアミノ酸、好ましくは1~15個のアミノ酸、より好ましくは1~10個のアミノ酸、更に好ましくは1~5個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなりフェレドキシンとして機能するタンパク質をコードする遺伝子でも良い。さらに、フェレドキシン遺伝子としては、配列番号1に示す塩基酸配列からなるものに限定されず、配列番号1に示す塩基配列からなるDNAの相補鎖の全部又は一部に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつフェレドキシンとして機能するタンパク質をコードするものでもよい。ここでいうストリンジェントな条件とはいわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件を意味し、例えばMolecularCloningALaboratoryManualを参照して適宜決定することができる。具体的には、サザンハイブリダイゼーションの際の温度や溶液に含まれる塩濃度、及びサザンハイブリダイゼーションの洗浄工程の際の温度や溶液に含まれる塩濃度によりストリンジェンシーを設定することができる。なお、配列番号2に示すアミノ酸配列に対して所定のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列をコードする塩基配列や、配列番号1に示す塩基配列と異なる塩基配列からなるDNAを作製する方法としては、特に限定することなく、従来公知の手法を適宜使用することができる。例えば、部位特異的突然変異誘発方法を使用して、所定の塩基を置換することができる。部位特異的突然変異誘発方法としては、例えばTクンケルKunkelの部位特異的変異導入法KunkelTAProcNatiAcadSciUSA82488492、Gappedduplex法等が挙げられる。また、部位特異的突然変異誘発法を利用した変異導入用キット例えばMutanKやMutanGなどを用いて、あるいは、宝酒造社製のLAPCRinvitroMutagenesisシリーズキットを用いて変異を導入することもできる。一方、アルカン合成酵素により基質を含む反応液中でアルカンを合成するinvitroの系にフェレドキシンを存在させる場合、上述したフェレドキシン遺伝子の産物であるフェレドキシンを使用する。タンパク質としてのフェレドキシンは、従来公知の手法により得ることができる。使用可能なフェレドキシンは、未精製の状態でも良いし、粗精製の状態でも良いし、精製された状態のものでも良い。<フェレドキシンNADPHレダクターゼ>フェレドキシンNADPHレダクターゼとは、フェレドキシンとNADPHとの間の酸化還元反応を触媒する酵素である。アルカン合成酵素によりアルカンを合成する系においてフェレドキシンとともにフェレドキシンNADPHレダクターゼを存在させるには、一例として、アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物にフェレドキシンをコードする遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼをコードする遺伝子を導入すればよい。フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子としては、特に限定されず、如何なる生物由来の遺伝子を使用しても良い。例えば、DDBJEMBLGenBank国際塩基配列データベース等の遺伝子情報を格納したデータベースを参照することで、様々な生物種由来のフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子に関する塩基配列やフェレドキシンNADPHレダクターゼのアミノ酸配列を特定することができる。一旦、フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子の塩基配列が特定できれば、定法に従って当該遺伝子を単離することができる。例えば、特定した塩基配列に基づいて所定の生物由来のフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を全合成しても良いし、特定した塩基配列に基づいてプライマーを設計し、所定の生物ゲノムを鋳型として当該プライマーを用いたPCRによりフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を単離することもできる。特に、アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物にフェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入する場合、フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子としては当該微生物由来の遺伝子であることが好ましい。さらに、フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子としては、導入するフェレドキシン遺伝子と同じ生物由来の遺伝子であることがより好ましい。例えば、所定の酵母に対してアルカン合成関連遺伝子を導入して、アルカン合成能を獲得した組換え酵母に対しては、当該酵母由来のフェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入すればよい。より具体的に、アルカン合成能を獲得した組換え酵母組換えScerevisiaeに対しては、Scerevisiae由来のフェレドキシン遺伝子及びScerevisiae由来のフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を使用することが好ましい。なお、Scerevisiae由来のフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子は、ARH1遺伝子又はYfdr遺伝子として公知である。Scerevisiae由来のフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子の塩基配列及び当該遺伝子によりコードされるフェレドキシンNADPHレダクターゼのアミノ酸配列をそれぞれ配列番号3及び4に示す。なお、フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子としては、配列番号4に示すアミノ酸配列をコードするものに限定されず、配列番号4に示すアミノ酸配列に対して70以上の同一性、好ましくは80以上の同一性、より好ましくは90以上の同一性、更に好ましくは95の同一性、最も好ましくは98以上の同一性を有するアミノ酸配列からなりフェレドキシンNADPHレダクターゼとして機能するタンパク質をコードする遺伝子でも良い。同一性の値は、BLASTアルゴリズムを実装したBLASTNやBLASTXプログラムにより算出することができるデフォルトの設定。なお、同一性の値は、一対のアミノ酸配列をペアワイズアライメント分析した際に完全に一致するアミノ酸残基を算出し、比較した全アミノ酸残基中の上記残基数の割合として算出される。また、フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子としては、配列番号4に示すアミノ酸配列をコードするものに限定されず、配列番号4に示すアミノ酸配列に対して、1~50個のアミノ酸、好ましくは1~40個のアミノ酸、より好ましくは1~30個のアミノ酸、更に好ましくは1~20個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなりフェレドキシンNADPHレダクターゼとして機能するタンパク質をコードする遺伝子でも良い。さらに、フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子としては、配列番号3に示す塩基酸配列からなるものに限定されず、配列番号3に示す塩基配列からなるDNAの相補鎖の全部又は一部に対して、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつフェレドキシンNADPHレダクターゼとして機能するタンパク質をコードするものでもよい。ここでいうストリンジェントな条件とはいわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件を意味し、例えばMolecularCloningALaboratoryManualを参照して適宜決定することができる。具体的には、サザンハイブリダイゼーションの際の温度や溶液に含まれる塩濃度、及びサザンハイブリダイゼーションの洗浄工程の際の温度や溶液に含まれる塩濃度によりストリンジェンシーを設定することができる。なお、配列番号4に示すアミノ酸配列に対して所定のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列をコードする塩基配列や、配列番号3に示す塩基配列と異なる塩基配列からなるDNAを作製する方法としては、特に限定することなく、従来公知の手法を適宜使用することができる。例えば、部位特異的突然変異誘発方法を使用して、所定の塩基を置換することができる。部位特異的突然変異誘発方法としては、例えばTクンケルKunkelの部位特異的変異導入法KunkelTAProcNatiAcadSciUSA82488492、Gappedduplex法等が挙げられる。また、部位特異的突然変異誘発法を利用した変異導入用キット例えばMutanKやMutanGなどを用いて、あるいは、宝酒造社製のLAPCRinvitroMutagenesisシリーズキットを用いて変異を導入することもできる。一方、アルカン合成酵素により基質を含む反応液中でアルカンを合成するinvitroの系にフェレドキシン及びフェレドキシンNADPHレダクターゼを存在させる場合、上述したフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子の産物であるフェレドキシンNADPHレダクターゼを使用する。タンパク質としてのフェレドキシンNADPHレダクターゼは、従来公知の手法により得ることができる。使用可能なフェレドキシンNADPHレダクターゼは、未精製の状態でも良いし、粗精製の状態でも良いし、精製された状態のものでも良い。<組換え微生物>本発明において、上述したフェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入する微生物は、アルカン合成能を有する微生物又はアルカン合成能を付与された組換え微生物である。アルカン合成能を有する微生物としては、SynechococcuselongatusPCC7942、SelongatusPCC6301、SynechocystisspPCC6803、ProchlorococcusmarinusCCMP1986、AnabaenavariabilisATCC29413、NostocpunctiformePCC73102、GloeobacterviolaceusPCC7421、NostocspPCC7120、CyanothecespPCC7425及びCyanothecespATCC51142を挙げることができる参考:Science30July2010Vol329No5991pp559562。また、アルカン合成能を付与された組換え微生物としては、上記のアルカン合成能を有する微生物より単離したアルカン合成酵素遺伝子を導入した組換え微生物を挙げることができる。例えば、アルカン合成酵素遺伝子としては、NostocspATCC27347PCC7120から単離したalkS遺伝子、Science30July2010Vol329No5991pp559562及びWO2009140695に記載の遺伝子を使用することができる。より具体的には、例えば、NostocpunctiformePCC73102、SynechococcuselongatesPCC7942、SynechocystisspPCC6803、CyanothecespATCC51142、AcaryochllorismarinaMBIC11017、GleobacterviolaceusPCC7421及びProchlorococcusmarinusstrMIT9303から単離したアルカン合成酵素遺伝子等を使用することができる。アルカン合成酵素遺伝子を導入する微生物としては、酵母を挙げることができる。酵母としては特に限定されないが、Pichiastipitis等のPichia属酵母、Saccharomycescerevisiae等のSaccharomyces属酵母及びCandidatropicalisやCandidaprapsilosis等のCandida属酵母等を挙げることができる。なかでも、アルカン合成酵素遺伝子を導入する微生物としてはSaccharomycescerevisiaeを使用することが好ましい。一例としては、NostocspATCC27347由来のalkS遺伝子をSaccharomycescerevisiaeに導入し、アルカン合成能を有する組換えSaccharomycescerevisiaeを使用することが好ましい。上述したフェレドキシン遺伝子を宿主となる微生物ゲノム、例えば酵母ゲノムに導入することにより、本発明に使用できる組換え微生物、例えば組換え酵母を作製することができる。なお、上述したフェレドキシン遺伝子に加えて、上述したフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を宿主となる微生物ゲノム、例えば酵母ゲノムに導入することにより、本発明に使用できる組換え微生物、例えば組換え酵母を作製することができる。例えば、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を含むDNA断片を、宿主微生物で機能する発現ベクター、好ましくはマルチコピー型のベクターと連結して組換えDNAを作製し、これを微生物に導入して形質転換すればよい。使用可能な発現ベクターは、特に限定されず、プラスミド型ベクター、又は宿主生物中のゲノムに組み込み可能な染色体導入型ベクターを挙げることができる。発現ベクターとしては、特に限定されず、入手可能な如何なる発現ベクターを宿主微生物に応じて適宜選択すればよい。なお、発現ベクターとしては、例えば、プラスミドDNA、バクテリオファージDNA、レトロトランスポゾンDNA、人工染色体DNAYAC:yeastartificialchromosomeなどが挙げられる。プラスミドDNAとしては、例えばpRS413、pRS414、pRS415、pRS416、YCp50、pAUR112又はpAUR123などのYCp型大腸菌酵母シャトルベクター、pYES2又はYEp13などのYEp型大腸菌酵母シャトルベクター、pRS403、pRS404、pRS405、pRS406、pAUR101又はpAUR135などのYIp型大腸菌酵母シャトルベクター、大腸菌由来のプラスミドpBR322、pBR325、pUC18、pUC19、pUC118、pUC119、pTV118N、pTV119N、pBluescript、pHSG298、pHSG396又はpTrc99AなどのColE系プラスミド、pACYC177又はpACYC184などのp15A系プラスミド、pMW118、pMW119、pMW218又はpMW219などのpSC101系プラスミド等、アグロバクテリウム由来のプラスミド例えばpBI101等、枯草菌由来のプラスミド例えばpUB110、pTP5等などが挙げられ、ファージDNAとしてはλファージCharon4A、Charon21A、EMBL3、EMBL4、λgt10、λgt11、λZAP、φX174、M13mp18又はM13mp19などが挙げられる。レトロトランスポゾンとしては、Ty因子などが挙げられる。YAC用ベクターとしてはpYACC2などが挙げられる。さらに、レトロウイルス又はワクシニアウイルスなどの動物ウイルス、バキュロウイルスなどの昆虫ウイルスベクターを用いることもできる。発現ベクターにおいて、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子は、それぞれ発現可能な状態でベクターに組み込まれることが必要である。発現可能な状態とは、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子が導入される宿主生物において所定のプロモーターの制御下に発現されるように、これらフェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子とプロモーターとを連結してベクターに組み込むことを意味する。発現ベクターには、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子のほか、プロモーター及びターミネータ、所望によりエンハンサー等のシスエレメント、スプライシングシグナル、ポリA付加シグナル、選択マーカー、リボソーム結合配列SD配列等を連結することができる。なお、選択マーカーとしては、例えば、アンピシリン耐性遺伝子やカナマイシン耐性遺伝子やハイグロマイシン耐性遺伝子などの抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。また、発現ベクターを用いた形質転換法としても、従来公知の方法を適宜使用することができる。形質転換方法としては、塩化カルシウム法、コンピテントセル法、プロトプラスト又はスフェロプラスト法、電気パルス法等を例示することができる。一方、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子のコピー数を高めるように導入しても良い。すなわち、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を微生物の染色体DNA上に多コピー存在させるように導入しても良い。微生物の染色体DNA上にフェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を多コピーで導入するには、染色体DNA上に多コピー存在する配列を標的に利用して相同組換えにより行うことができる。さらに、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子の発現の増強は、内在する又は導入したフェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子のプロモーター等の発現調節配列を、より高発現可能なものに置換する方法、所定の遺伝子の発現を上昇させるようなレギュレーターを導入する方法などによっても達成される。高発現可能なプロモーターとしては、特に限定されないが、例えば、lacプロモーター、trpプロモーター、trcプロモーター、pLプロモーター等を挙げることができる。また、内在する又は導入したフェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子の発現制御領域に突然変異を導入し、より高発現できるものに改変することも可能である。<アルカン製造>以上で説明したように、本発明によれば、アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物といったinvivoの系、アルカン合成酵素により基質を含む反応液中でアルカンを合成するinvitroの系によってアルカンを優れた生産性で合成できる。アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物を使用する系では、これら微生物に適した培地にて培養し、当該培地中にアルカンを生産することができる。より具体的には、本発明によれば、アルカン合成酵素によるアルカン合成能を向上させることができ、その結果、アルカンの生産性を向上することができる。ここで、アルカン合成能を向上させるとは、アルカン合成酵素によるアルデヒドからアルカンに変換する活性を向上させることを含む意味である。すなわち、アルカン合成酵素によるアルデヒドを基質としたアルカン合成反応は、フェレドキシンの存在によって反応効率が向上する。例えば、上述のNostocspATCC27347PCC7120から単離したalkS遺伝子によりコードされるAlkSタンパク質は、テトラデカノールをテトラデカンに変換する活性を示すが、フェレドキシンの存在下においてはフェレドキシンの非存在下と比較してより大量のテトラデカンを合成することができる。また、このときフェレドキシンに加えてフェレドキシンNADPHレダクターゼが存在すると、より大量のテトラデカンを合成することができる。同様に、アルカン合成酵素により基質を含む反応液中でアルカンを合成するinvitroの系においても、アルカン合成酵素によるアルデヒドを基質としたアルカン合成反応は、フェレドキシンの存在によって反応効率が向上する。したがって本発明によれば、この反応系においてもアルカンの生産性を向上できる。本発明において、生産対象のアルカンとしては特に限定されないが、例えば炭素数が9~16の範囲、好ましくは13~16の範囲のアルカンとする。これらは、粘度の高い液体であり、軽油ディーゼル油や航空機燃料に使用することができる。このようなアルカンは、上述したinvivo或いはinvitroの反応系から定法に従って単離し、その後、精製することができる。以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。実施例1本実施例では、アルカン生産能を付与するとともに、フェレドキシン遺伝子及び又はフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した組換え体酵母を作製し、フェレドキシン、フェレドキシンNADPHレダクターゼのアルカン生産性能に対する効果確認した。クローニングした遺伝子の恒常的発現を目的とし、pESCベクターSTRATAGENE社製への恒常性プロモーターPpgk及びPgapの挿入を実施した。PgapとはSaccharomycescerevisiaeYPH499由来のGlyceraldehyde3PhosphateDehydrogenasegap遺伝子のプロモーターである。まず酵母YPH499株からGenとるくんタカラバイオ社製を用いて精製したゲノムDNAを鋳型としたPCRによりPgapを含むDNA断片を取得した。ポリメラーゼはKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。Pgapを含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1EcoRIPgapF5CACGGAATTCCAGTTCGAGTTTATCATTATCAA3配列番号5Primer2BamHIPgapR5CTCTGGATCCTTTGTTTGTTTATGTGTGTTTATTC3配列番号6反応液組成YPH499genomeDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件95°C2分×25サイクル72°C3分4°CストックPCR産物をQIAGEN社製MinElutePCRpurificationkitを用いて精製後、制限酵素BamHIとEcoRIで消化した。アガロースゲル電気泳動を行ない、07kbpの断片を切り出してQIAGEN社製MinEluteGelextractionkitを用いて精製した。制限酵素BamHIとEcoRIで消化したpESCHISベクターにライゲーションした。得られた配列をシークエンスし、目的とするプラスミドが作製されていることを確認した。Pgapの塩基配列を配列番号7に示す。こうして得られたプラスミドをpESCgapHISと命名した。次に、SaccharomycescerevisiaeYPH499由来phosphoglyceratekinasepgk遺伝子のプロモーターであるPpgkについては以下のように取得した。まず、酵母YPH499からGenとるくんタカラバイオ社製を用いて精製したゲノムDNAを鋳型にしてPCRによりPpgkを含むDNA断片を取得した。ポリメラーゼはKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。Ppgkを含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1MunIPpgk1F5TAGGCAATTGCAAGAATTACTCGTGAGTAAGG3配列番号8Primer2EcoRIPpgk1R5ATAAGAATTCTGTTTTATATTTGTTGTAAAAAGTAG3配列番号9反応液組成YPH499genomeDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件95°C2分×25サイクル72°C3分4°CストックPCR産物をQIAGEN社製MinElutePCRpurificationkitを用いて精製後、制限酵素MunIとEcoRIで消化した。アガロースゲル電気泳動を行ない、07kbpの断片を切り出してQIAGEN社製MinEluteGelextractionkitを用いて精製した。制限酵素EcoRIで消化し、BAP処理したpESCgapHISベクターにライゲーションした。インサートが正しい方向にライゲーションされていることをコロニーPCRで確認し、プラスミドを調製した。配列をシークエンスし、目的とするプラスミドが作製されていることを確認した。Ppgkの塩基配列を配列番号10に示す。こうして得られたプラスミドをpESCpgkgapHISと命名した。上記で作製したpESCpgkgapHISを制限酵素BamHIとNotIで消化し、得られた14kbpのインサート断片を、制限酵素BamHIとNotIで消化したpESCURAベクターにライゲーションした。得られた配列をシークエンスし、目的とするプラスミドが作製されていることを確認した。こうして得られたプラスミドpESCpgkgapURAと命名した。NostocspAT27347のゲノムDNAを鋳型にしてPCRによりアルカン合成酵素遺伝子alkS遺伝子を含むDNA断片を取得した。PCRにはKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。alkS遺伝子を含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1YalkSF25GAGAGGATCCAAAAATGCAGCAGGTTGCAGCCGATTTAG3配列番号11Primer2YalkSR25CAGACTCGAGTTAAGCTGCTGTAAGTCCGTAGG3配列番号12反応液組成NostocspPCC27347ゲノムDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件94°C2分×30サイクル68°C3分16°CストックPCR産物をQIAquickPCRpurificationkitQIAGEN社製で精製した後、制限酵素BamHIとXhoIで消化し、アガロースゲル電気泳動を行なって約07kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Insert部分とした。プラスミドpESCpgkgapURAを制限酵素BamHIとXhoIで消化し、約74kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。上記Insert部分及びVector部分をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地上で生育したコロニーを50μgmlのアンピシリンを含むLB液体培地で培養しプラスミドを抽出した。抽出には、QIAprepspinMiniprepKitQIAGEN社製を用いた。得られたプラスミドをシークエンスし、配列が正しいことを確認し、pESCpgkgapURAalkSと命名した図1。なお、alkS遺伝子の塩基配列及び当該遺伝子がコードするAlkSタンパク質のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号13及び14に示す。ScerevisiaeYPH499のゲノムDNAを鋳型にしてPCRによりフェレドキシン遺伝子Yfdx遺伝子を含むDNA断片を取得した。PCRにはKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。Yfdx遺伝子を含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1YfdxF25CACAGGATCCAAAAATGCTGAAAATTGTTACTCGGG3配列番号15Primer2YfdxR25GGAACTCGAGTTAACTAAAATCGTTGTTATTAACG3配列番号16反応液組成YPH499genomeDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件94°C2分×30サイクル68°C3分16°CストックPCR産物をQIAquickPCRpurificationkitQIAGEN社製で精製した後、制限酵素BamHIとXhoIで消化し、アガロースゲル電気泳動を行なって約05kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Insert部分とした。プラスミドpESCpgkgapHISを制限酵素BamHIとXhoIで消化し、約74kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。上記Insert部分及びVector部分をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地上で生育したコロニーを50μgmlのアンピシリンを含むLB液体培培養しプラスミドを抽出した。抽出には、QIAprepspinMiniprepKitQIAGEN社製を用いた。得られたプラスミドをシークエンスし、配列が正しいことを確認しpESCpgkgapHISYfdxと命名した図2。なお、Yfdx遺伝子の塩基配列及び当該遺伝子がコードするフェレドキシンのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号1及び2に示す。ScerevisiaeYPH499のゲノムDNAを鋳型にしてPCRによりフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子Yfdr遺伝子を含むDNA断片を取得した。PCRにはKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。Yfdr遺伝子を含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1YfdrF25ATATGCGGCCGCAAAAATGAGCTTTGTTCAAATAAGGCAC3配列番号17Primer2YfdrR25GGCCACTAGTTTATATGCCTTCTACACCGTTCC3配列番号18反応液組成YPH499genomeDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件94°C2分×30サイクル68°C3分16°CストックPCR産物をQIAquickPCRpurificationkitQIAGEN社製で精製した後、制限酵素NotIとSpeIで消化し、アガロースゲル電気泳動を行なって約15kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Insert部分とした。プラスミドpESCpgkgapHISを制限酵素NotIとSpeIで消化し、約74kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。上記Insert部分及びVector部分をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地で生育したコロニーを50μgmlのアンピシリンを含むLB培地で培養しプラスミドを抽出した。抽出には、QIAprepspinMiniprepKitQIAGEN社製を用いた。得られたプラスミドをシークエンスし、配列が正しいことを確認しpESCpgkgapHISYfdrと命名した図3。なお、Yfdr遺伝子の塩基配列及び当該遺伝子がコードするフェレドキシンNADPHレダクターゼのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号3及び4に示す。プラスミドpESCpgkgapHISYfdxを制限酵素NotIとSpeIで消化し、約79kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。また、プラスミドpESCpgkgapHISYfdrを制限酵素NotIとSpeIで消化し、約15kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Insert部分とした。上記2つの断片をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地上で生育したコロニーを50μgmlのアンピシリンを含むLB培地で培養しプラスミドを抽出した。抽出には、QIAprepspinMiniprepKitQIAGEN社製を用いた。得られたプラスミドをpESCpgkgapHISYfdxYfdrと命名した図4。上述したように作製した各種発現プラスミドを用いて酵母ScerevisiaYPH499株を形質転換した。形質転換にはFrozenYeastTransformationKitIIZymoResearch社製を用い、添付のマニュアルに従った。SDUraHisBIO101社製adeninehemisulfate寒天培地上で生育したクローンを形質転換体として、アルカン生産性評価に供試した。なお、本例では、pESCpgkgapURAalkSを用いてalkS遺伝子を導入した形質転換体、pESCpgkgapURAalkS及びpESCpgkgapHISYfdxを用いてalkS遺伝子及びフェレドキシン遺伝子を導入した形質転換体、pESCpgkgapURAalkS及びpESCpgkgapHISYfdrを用いてalkS遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体、並びにpESCpgkgapURAalkS及びpESCpgkgapHISYfdxYfdrYPH499を用いてalkS遺伝子、フェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体を作製した。上述のように作製した4種類の形質転換体を3mLのSDUraHisadeninehemisulfate液体培地に植菌し、30°Cで3日間培養した。得られた培養液の一部を最終濃度が1mMとなるようにTetradecanalを添加した5mLのSDUraHisadeninehemisulfate液体培地に植菌し、30°Cで34日間培養した。5mlの培養液を、室温、3000rpmで10min遠心し、上清を除き、飽和食塩水500μlに懸濁した後、20ml容バイアル瓶Agilent社製に移して、GCMS分析を行なった。Tetradecanalを基質として生合成されるアルカンTridecaneの分析をおこない、その生産性の評価を実施した。なお、GCMS分析の条件は下記のとおりである。<ヘッドスペースサンプラー分析条件>ヘッドスペースサンプラーHP7694HewlettPackard社製ZoneTempOven80°CLoop150°CTRLINE200°CEventTimeGCCYCLETIME10minVialEQTIME15minPRESSURIZTIME050minLoopFillTIME02minLoopEQTIME02minINJECTTIME100minVialParameterSHAKEHIGH他バイアル加圧15psiループサイズ3ml<GCMS分析条件>GCMSHP68905973GCMSシステムHewlettPackardWilmingtonDE使用カラムHPINNOWAXAgilent製:19091N213インレット温度260°C検出器温度260°Cインジェクションパラメータースプリット比120キャリアーガスヘリウム10ml分オーブン加熱条件60°C1分25°C分で260°Cまで加熱260°C1分PRESSURIZTIME050minLoopFillTIME02minLoopEQTIME02minINJECTTIME100minVialParameterSHAKEHIGH他バイアル加圧15psiループサイズ3ml結果を図5に示す。図5において、縦軸はアルカンTridecaneの合成量を示している。図5中、YPH499は形質転換前の宿主を意味し、YPH499alkSはalkS遺伝子を導入した形質転換体を意味し、YPH499alkSYfdxはalkS遺伝子及びフェレドキシン遺伝子を導入した形質転換体を意味し、YPH499alkSYfdrはalkS遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体を意味し、YPH499alkSYfdxYfdrはalkS遺伝子、フェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体を意味している。図5に示した結果から、alkS遺伝子を導入した全ての形質転換体はアルカンTridecane合成能を有することが判る。そして、図5に示すように、フェレドキシン遺伝子を導入した形質転換体は、フェレドキシン遺伝子を導入していない形質転換体と比較すると優れたアルカン合成能を有することが判る。一方、フェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を単独で導入しても、アルカン合成能を有意に向上させることはできないことが判る。しかしながら、フェレドキシン遺伝子とフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を共に導入した形質転換体は、非常に優れたアルカン合成能を有することが判った。実験例1本実験例では、アルカン生産能を付与するとともに、フェレドキシン遺伝子及び又はフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した組換え体大腸菌を作製し、フェレドキシン、フェレドキシンNADPHレダクターゼのアルカン生産性能に対する効果確認した。NostocspATCC27437のゲノムDNAを鋳型にしてPCRによりアルカン合成酵素遺伝子alkS遺伝子を含むDNA断片を取得した。PCRにはポリメラーゼとしてKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。alkS遺伝子を含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1alkSF5GCGCGCGGTACCATGCAGCAGGTTGCAGCCG3配列番号19Primer2alkSR5GCGCGCCTCGAGTTAAGCTGCTGTAAGTCCGTAG3配列番号20反応液組成NostocspATCC27437ゲノムDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件94°C2分×30サイクル68°C3分16°CストックPCR産物をQIAGEN社製MinElutePCRpurificationkitを用いて精製後、制限酵素KpnIとXhoIで消化した。アガロースゲル電気泳動を行ない、07kbpの断片を切り出してQIAGEN社製MinEluteGelextractionkitを用いて精製し、Insert部分とした。プラスミドpCDFDuet1ノバジェン社製を制限酵素KpnIとXhoIで消化し、約74kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。上記Insert部分及びVector部分をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。得られた配列をシークエンスし、目的とするプラスミドが作製されていることを確認した。こうして得られたプラスミドをalkSpCDFと命名した図6。大腸菌W3110のゲノムDNAを鋳型にしてPCRによりフェレドキシン遺伝子Efdx遺伝子を含むDNA断片を取得した。PCRにはKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。Efdx遺伝子を含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1EfdxF5GAGATATACATATGCCAAAGATTGTTATTTTGCCTC3配列番号21Primer2EfdxR5CAGACTCGAGTTAATGCTCACGCGCATGGTTG3配列番号22反応液組成W3110genomeDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件94°C2分×30サイクル68°C3分4°CストックPCR産物をQIAquickPCRpurificationkitQIAGEN社製で精製した後、制限酵素NdeIとXhoIで消化し、アガロースゲル電気泳動を行なって約04kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Insert部分とした。プラスミドpCOLADuet1ノバジェン社製を制限酵素NdeIとXhoIで消化し、約37kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。上記Insert部分及びVector部分をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地上で生育したコロニーを50μgmlのアンピシリンを含むLB液体培培養しプラスミドを抽出した。抽出には、QIAprepspinMiniprepKitQIAGEN社製を用いた。得られたプラスミドをシークエンスし、配列が正しいことを確認しEfdxpCOLAと命名した図7。なお、Efdx遺伝子の塩基配列及び当該遺伝子がコードするフェレドキシンのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号23及び24に示す。大腸菌W3110のゲノムDNAを鋳型にしてPCRによりフェレドキシンNADPHレダクターゼEfdr遺伝子を含むDNA断片を取得した。PCRにはKODPlusVer2東洋紡社製を用いた。Efdr遺伝子を含むDNA断片を増幅するため以下の一対のプライマーを設計し、反応液組成及び反応サイクル条件は下記に示すとおりとした。Primer1EfdrF5ATATCCATGGCTGATTGGGTAACAGGC3配列番号25Primer2EfdrR5ATTCGGATCCTTACCAGTAATGCTCCGCTGTC3配列番号26反応液組成W3110genomeDNA100ngμl1μl10×bufferforKODPlusVer25μl2mMdNTPs5μl25mMMgSO44μlPrimer110μM15μlPrimer210μM15μlKODPlus1Uμl1μldH2O31μl50μl反応サイクル条件94°C2分×30サイクル68°C3分4°CストックPCR産物をQIAquickPCRpurificationkitQIAGEN社製で精製した後、制限酵素NcoIとBamHIで消化し、アガロースゲル電気泳動を行なって約08kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Insert部分とした。プラスミドpCOLADuet1ノバジェン社製を制限酵素NcoIとBamHIで消化し、約37kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。上記Insert部分及びVector部分をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地上で生育したコロニーを50μgmlのアンピシリンを含むLB液体培培養しプラスミドを抽出した。抽出には、QIAprepspinMiniprepKitQIAGEN社製を用いた。得られたプラスミドをシークエンスし、配列が正しいことを確認しEfdrpCOLAと命名した図8。なお、Efdr遺伝子の塩基配列及び当該遺伝子がコードするフェレドキシンのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号27及び28に示す。プラスミドEfdxpCOLAを制限酵素NcoIとBamHIで消化し、約41kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Vector部分とした。また、プラスミドEfdrpCOLAを制限酵素NcoIとBamHIで消化し、約08kbの断片を切り出し、MinEluteGelextractionkitQIAGEN社製で精製し、Insert部分とした。上記2つの断片をLigationConvenienceKitニッポンジーン社製を用いてライゲーションし、大腸菌HST08タカラバイオ社製を形質転換した。50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地上で生育したコロニーを50μgmlのアンピシリンを含むLB培地で培養しプラスミドを抽出した。抽出には、QIAprepspinMiniprepKitQIAGEN社製を用いた。得られたプラスミドをEfdxEfdrpCOLAと命名した図9。上述したように作製した各種発現プラスミドを用いて大腸菌BL21株ノバジェン社製を形質転換した。形質転換は添付のマニュアルに従った。ストレプトマイシンおよびカナマイシンを各50μgmlずつを含むLB寒天培地上で生育したクローンを形質転換体として、アルカン生産性評価に供試した。なお、本例では、alkSpCDFを用いてalkS遺伝子を導入した形質転換体、alkSpCDF及びEfdxpCOLAを用いてalkS遺伝子及びフェレドキシン遺伝子を導入した形質転換体、alkSpCDF及びEfdrpCOLAを用いてalkS遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体、alkSpCDF及びEfdxEfdrpCOLAを用いてalkS遺伝子、フェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体を作製した。上述のように作製した4種類の形質転換体を3mLのLBSm、Km各50μgml液体培地に植菌し、37°Cで一晩培養した。得られた培養液の一部を最終濃度が1mMとなるようにTetradecanalおよびIPTGを添加した5mLのLBSm、Km各50μgml液体培地に植菌し、30°Cで34日間培養した。5mlの培養液を、室温、3000rpmで10min遠心して上清を除き、飽和食塩水500μlに懸濁した後、20ml容バイアル瓶Agilent社製に移して、GCMS分析を行なった。Tetradecanalを基質として生合成されるアルカンTridecaneの分析をおこない、その生産性の評価を実施した。なお、GCMS分析における<ヘッドスペースサンプラー分析条件>及び<GCMS分析条件>は実施例1と同じである。結果を図5に示す。図10において、縦軸はアルカンTridecaneの合成量を示している。図10中、BL21は形質転換前の宿主を意味し、BL21alkSはalkS遺伝子を導入した形質転換体を意味し、BL21alkSEfdxはalkS遺伝子及びフェレドキシン遺伝子を導入した形質転換体を意味し、BL21alkSEfdrはalkS遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体を意味し、BL21alkSEfdxEfdrはalkS遺伝子、フェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を導入した形質転換体を意味している。図10に示した結果から、alkS遺伝子を導入した全ての形質転換体はアルカンTridecane合成能を有することが判る。ただし、図10に示すように、フェレドキシン遺伝子やフェレドキシンNADPHレダクターゼ遺伝子を更に導入しても、アルカン合成能が向上することはなかった。