"発現プロモーターと、H5N1高病原性鳥インフルエンザウイルス又はH1N1パンデミックインフルエンザウイルス由来ヘマグルチニンタンパク質をコードするcDNAの全部又は一部とを含む、組換えワクシニアウイルス。ワクシニアウイルスがLC16m8株である、請求項1に記載の組換えワクシニアウイルス。H5N1高病原性鳥インフルエンザウイルスが、H5亜型クレード1、H5亜型クレード2.1、H5亜型クレード2.2又はH5亜型クレード2.3に属するウイルス株である、請求項1又は2に記載の組換えワクシニアウイルス。H1N1パンデミックインフルエンザウイルスが、H1亜型に属するウイルス株である、請求項1又は2に記載の組換えワクシニアウイルス。ヘマグルチニンタンパク質をコードするcDNAが、以下のa~jのDNAである、請求項1~4のいずれか1項に記載の組換えワクシニアウイルス。a配列番号1に示す塩基配列からなるDNAb配列番号1に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5亜型クレード1に属するウイルス株由来のヘマグルチニンタンパク質をコードするDNAc配列番号2に示す塩基配列からなるDNAd配列番号2に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5亜型クレード2.1に属するウイルス株由来のヘマグルチニンタンパク質をコードするDNAe配列番号3に示す塩基配列からなるDNAf配列番号3に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5亜型クレード2.2に属するウイルス株由来のヘマグルチニンタンパク質をコードするDNAg配列番号4に示す塩基配列からなるDNAh配列番号4に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5亜型クレード2.3に属するウイルス株由来のヘマグルチニンタンパク質をコードするDNAi配列番号5に示す塩基配列からなるDNAj配列番号5に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H1亜型に属するウイルス株由来のヘマグルチニンタンパク質をコードするDNA発現プロモーターがハイブリッドプロモーターである、請求項1~5のいずれか1項に記載の組換えワクシニアウイルス。ハイブリッドプロモーターが、以下のa又はbのDNAからなるものである、請求項6に記載の組換えワクシニアウイルス。a配列番号6に示す塩基配列からなるDNAb配列番号6に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するDNA請求項1~7のいずれか1項に記載の組換えワクシニアウイルスを含む医薬組成物。H5N1高病原性鳥インフルエンザ又はH1N1パンデミックインフルエンザの予防薬である、請求項8に記載の医薬組成物。H5N1高病原性鳥インフルエンザ又はH1N1パンデミックインフルエンザの治療薬である、請求項8に記載の医薬組成物。以下、本発明にかかる組換えワクシニアウイルス及びその用途について詳しく説明するが、本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施し得る。なお、本明細書は、本願優先権主張の基礎となる特願2010-233064号明細書2010年10月15日出願の全体を包含する。また、本明細書において引用した特許文献、非特許文献その他の刊行物は、参照として本明細書に組み込まれるものとする。1.本発明の概要各種ワクチンの中でも、生ワクチンは特に有効なものの一つであるが、一般に、新興ウイルスの弱毒性ワクチンを開発するには非常に長い期間が必要となることが知られており、このことは新型インフルエンザに関しても同様であると考えられる。このような場合に採られる手法の一つとして、生ワクチンとして組換えワクシニアウイルスRVVを作製するという遺伝子工学的手法が知られている。例えば、本発明者らが開発した、狂犬病ウイルス用又はリンダペスト用の組換えワクシニアウイルスは、野外試験等において、優れた感染発症予防効果を発揮することが実証されている例えば、TsukiyamaK.etal.,Arch.Virol.,1989,vol.107,p.225-235参照。また本発明者らは、新型肺炎SARSに関して、その病原体として知られるSARS-CoVのcDNAを有する組換えワクシニアウイルスの作製に成功しておりWO2006/038742、優れた予防効果と再投与可能な製剤であることが確認されている例えば、KitabatakeM.etal.,Vaccine,2007,vol.25,p.630-637参照。RVVの作製に用いる組換え母体となるワクシニアウイルスとしては、安全性の確立されているワクチン株である必要があるが、そのようなワクチン株としてはワクシニアウイルスLC16m8株例えば、臨床とウイルス,vol.3,No.3,p.269,1975参照が知られている。LC16m8株はリスター株から分離されたものであって、実際に予防ワクチンとしての投与実績があり、かつ安全性及び有効性が確認されており、現在製造されている唯一のワクチン株である。また本発明者らは、リンダペスト、HIV、SARS-CoV等に対する組換えワクシニアウイルスの開発検討の過程で、抗体産生能及び細胞性免疫の誘導能を非常に高めることのできる遺伝子発現プロモーターを用いることが、本発明のワクシニアウイルスに有効であることを見出した。具体的にはプラスミドベクターとしてpSFJ1-10やpSFJ2-16を用いることが好ましいことを見出した例えば、JinN-Yetal.,Arch.Virol.,1994,vol.138,p.315-330;ElmowalidGA.etal.,Pros.Natl.Acad.Sci.,2007,vol.104,p.8427-8432;Arch.Virol.,vol.138,p.315-330,1994;特開平6-237773号公報参照。その結果、本発明者は、H5N1高病原性鳥インフルエンザウイルスH5N1HPAIV又はH1N1パンデミックインフルエンザウイルスH1N12009pdmのヘマグルチニンHAタンパク質をコードする遺伝子を、発現プロモーターとともにワクシニアウイルスに組み込むことにより、H5N1HPAIV又はH1N12009pdm由来HAタンパク質を発現する組換えワクシニアウイルスを作製することに成功したものである。本発明にかかる組換えワクシニアウイルスの母体となるウイルスは、上記のとおりワクシニアウイルスである。そのゲノム中にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質をコードするcDNA当該cDNAの全部又は一部が組み込まれたものが、本発明の組換えワクシニアウイルスである。H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質をコードするcDNA当該cDNAの全部又は一部をそれぞれ発現ユニットとし、それぞれワクシニアウイルスベクターに導入した。この発現ユニットをワクシニアウイルスLC16m8株のHA遺伝子領域に導入した。HA遺伝子領域に外来遺伝子を導入してもワクシニアウイルスの増殖活性には影響を与えないので増殖能の弱い安全なワクチン株を組換え母体ウイルスとして使用することができることはすでに知られているVaccine,vol.12,p.675-681,1994参照。組換えワクシニア生ワクチンは、狂犬病ウイルスやリンダペストウイルスに対するものが野外試験されており、その感染発症予防効果の優秀性が証明されている。本発明者は、ハイブリットプロモーターの下流にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子を挿入し、これらの遺伝子を弱毒ワクシニアウイルスLC16m8株のHAタンパク質遺伝子領域に組み込むことで組換えワクシニアウイルスRVVを作製した。ハイブリッドプロモーターは、ポックスウイルスA型封入体ATIプロモーター及び複数反復するワクシニアウイルス7.5kDaタンパク質p7.5前期発現プロモーターにより構成されるJinN-Yetal.,Arch.Virol.,1994,vol.138,p.315-330参照。このプロモーターは、北海道大学の志田壽利博士により開発され、同博士から提供を受けることも可能である。作製したLC16m8株由来RVVは、動物細胞に感染させることにより、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質を大量に発現することが確認され、また動物個体に接種することでH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質に対する高力価の抗体が早期に産生することが併せて確認され、本発明を完成した。2.新型インフルエンザウイルスのHAタンパク質遺伝子を有する組換えワクシニアウイルスの作製H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子は、すでに米国生物工学情報センターNCBI;NationalCenterforBiotechnologyInformationにより提供されるGenBankデータベースhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/において、所定のアクセッション番号AccessionNo.により登録されている。例えば、GenBankアクセッション番号:EF541402に、H5N1HPAIVのクレード1H5亜型クレード1に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子cDNA:配列番号1が登録され、GenBankアクセッション番号:EF541394に、H5N1HPAIVのクレード2.1H5亜型クレード2.1に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子cDNA:配列番号2が登録され、GenBankアクセッション番号:DQ371928に、H5N1HPAIVのクレード2.3H5亜型クレード2.3に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子cDNA:配列番号4が登録されている。また、GenBankアクセッション番号:FJ969540に、H1N12009pdmH1亜型に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子cDNA:配列番号5が登録されている。本発明の組換えワクシニアウイルスに含まれるHAタンパク質をコードする遺伝子cDNAとしては、上記各遺伝子のほか、その一部やその変異配列も用いることができる。例えば、H5N1HPAIVのクレード1のHAタンパク質をコードする遺伝子cDNAとしては、配列番号1に示される塩基配列からなるDNAの一部を欠損させたDNA具体的には、配列番号12に示される塩基配列からなるDNA、H5N1HPAIVのクレード2.1のHAタンパク質をコードする遺伝子cDNAとしては、配列番号2に示される塩基配列からなるDNAの一部を欠損させたDNA具体的には、配列番号13に示される塩基配列からなるDNA、H5N1HPAIVのクレード2.3のHAタンパク質をコードする遺伝子cDNAとしては、配列番号4に示される塩基配列からなるDNAの一部を欠損させたDNA具体的には、配列番号14に示される塩基配列からなるDNAを用いることができる。また、H1N12009pdmのHAタンパク質をコードする遺伝子cDNAとしては、配列番号5に示される塩基配列からなるDNAの一部の塩基を変異置換変異させたDNA具体的には、配列番号15に示される塩基配列からなるDNAを用いることができる。なお、H5N1HPAIVのクレード2.2H5亜型クレード2.2に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子に関しては、当該遺伝子cDNAの一部を欠損させた遺伝子cDNA:配列番号3が、GenBankアクセッション番号:DQ659327に登録されている。これらHAタンパク質遺伝子一部欠損変異させた遺伝子も含むは、すでにクローニングされ、プラスミドに挿入されている。従って、本発明の組換えワクシニアウイルスに含まれる遺伝子、すなわちH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質をコードするcDNAの全部変異配列も含む又はその一部は、通常の遺伝子工学的手法により得ることができる。例えば、遺伝子工学的手法として一般的に用いられているDNA合成装置を用いた核酸合成法を使用することができる。また、鋳型となる遺伝子配列を単離又は合成した後に、それぞれの遺伝子に特異的なプライマーを設計し、PCR装置を用いてその遺伝子配列を増幅するPCR法、又はクローニングベクターを用いた遺伝子増幅法を用いることができる。上記方法は、Moleculercloning,ALaboratoryManual2nded.ColdSpringHarborLaboratoryPress1989等を参照して行うことができる。得られたPCR産物の精製には公知の方法を用いることができる。また、変異配列、特に変異置換型のDNAについては、例えば、上記Moleculercloning,ALaboratoryManual2nded.やCurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons1987-1997等に記載の部位特異的変位誘発法に準じて調製することができる。具体的には、Kunkel法やGappedduplex法等の公知手法により、部位特異的突然変異誘発法を利用した変異導入用キットを用いて調製することができ、当該キットとしては、例えば、QuickChangeTMSite-DirectedMutagenesisKitストラタジーン社製、GeneTailorTMSite-DirectedMutagenesisSystemインビトロジェン社製、TaKaRaSite-DirectedMutagenesisSystemMutan-K、Mutan-SuperExpressKm等:タカラバイオ社製等が好ましく挙げられる。本発明の好ましい態様においては、上記プラスミドに挿入されているH5N1HPAIVのHAタンパク質遺伝子又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子を、上記PCRの鋳型に用いることができる。そして、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子のcDNAを鋳型とし、各遺伝子特異的なプライマーを用いてPCRを行うことにより、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子領域を調製することができる。本発明においては、H5N1HPAIVのクレード1H5亜型クレード1に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子として、配列番号12に示す塩基配列からなるDNAによりコードされる遺伝子をmCl1と称し、H5N1HPAIVのクレード2.1H5亜型クレード2.1に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子として、配列番号13に示す塩基配列からなるDNAによりコードされる遺伝子をmCl2.1と称し、H5N1HPAIVのクレード2.2H5亜型クレード2.2に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子として、配列番号3に示す塩基配列からなるDNAによりコードされる遺伝子をmCl2.2と称し、H5N1HPAIVのクレード2.3H5亜型クレード2.3に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子として、配列番号14に示す塩基配列からなるDNAによりコードされる遺伝子をmCl2.3と称し、H1N12009pdmH1亜型に属するウイルス株由来のHAタンパク質をコードする遺伝子として、配列番号15に示す塩基配列からなるDNAによりコードされる遺伝子をmIVR153と称する。本発明においては、配列番号1~5及び12~15に示される塩基配列からなるDNAのほか、以下の各DNAも、上記各HAタンパク質遺伝子例えばmCl1、mCl2.1、mCl2.2、mCl2.3及びmIVR153等のDNAとして使用することができる。配列番号1に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5N1HPAIVのクレード1由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA。配列番号12に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5N1HPAIVのクレード1由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl1の変異型DNA。配列番号2に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.1由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA。配列番号13に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.1由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl2.1の変異型DNA。配列番号3に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.2由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl2.2の変異型DNA。配列番号4に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.3由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA。配列番号14に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.3由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl2.3の変異型DNA。配列番号5に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H1N12009pdm由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA。配列番号15に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、H1N12009pdm由来のHAタンパク質をコードするDNAmIVR153の変異型DNA。上記の各変異型DNAは、化学合成により得ることができ、あるいは、配列番号1~5及び12~15で表される塩基配列からなるDNA又はその断片をプローブとして、コロニーハイブリダイゼーション、プラークハイブリダイゼーション、サザンブロット等の公知のハイブリダイゼーション法により、cDNAライブラリー及びゲノムライブラリーから得ることもできる。上記ハイブリダイゼーションにおけるストリンジェントな条件としては、例えば、0.1×SSC~10×SSC、0.1~1.0SDS及び20°C~80°Cの条件が挙げられ、より詳細には、37°C~56°Cで30分以上プレハイブリダイゼーションを行った後、0.1×SSC、0.1SDS中、室温で10~20分の洗浄を1~3回行う条件が挙げられる。ハイブリダイゼーション法の詳細な手順については、MolecularCloning,ALaboratoryManual2nded.ColdSpringHarborPress1989等を参照することができる。また、配列番号1に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H5N1HPAIVのクレード1由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA、配列番号12に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H5N1HPAIVのクレード1由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl1の変異型DNA、配列番号2に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.1由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA、配列番号13に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.1由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl2.1の変異型DNA、配列番号3に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.2由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl2.2の変異型DNA、配列番号4に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.3由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA、配列番号14に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H5N1HPAIVのクレード2.3由来のHAタンパク質をコードするDNAmCl2.3の変異型DNA、配列番号5に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H1N12009pdm由来のHAタンパク質をコードするDNA変異型DNA、配列番号15に示す塩基配列と50以上、60以上、70以上、80以上、90以上、95以上、98以上又は99以上の相同性を有し、かつ、H1N12009pdm由来のHAタンパク質をコードするDNAmIVR153の変異型DNAを用いることができる。本発明の組換えワクシニアウイルスに含まれる発現プロモーターは、ワクシニアウイルスのヘマグルチニンHA遺伝子領域内に挿入されるものであり、ポックスウイルスA型封入体ATIプロモーター及び複数反復するワクシニアウイルス7.5kDaタンパク質p7.5前期発現プロモーターにより構成されるハイブリットプロモーターである。このプロモーターは、適当なプラスミドに連結することができ、例えばpBMSF7Cが知られているArch.Virol.vol.138,p.315-330,1994;特開平6-237773号公報参照。本発明において使用可能なハイブリッドプロモーターの塩基配列を配列番号6に示す。但し、本発明においては、配列番号6に示す塩基配列からなるDNAのほか、配列番号6に示す塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するDNAも、発現プロモーター特にハイブリッドプロモーターとして使用することができる。ストリンジェントな条件は前記と同様である。プロモーター活性を有するとは、構造タンパク質又は非構造タンパク質をコードする遺伝子の転写活性を有することを意味する。このハイブリットプロモーターにより発現されるタンパク質は、ワクシニアウイルス感染前期から後期まで完全な糖修飾を受けた形で大量に発現することができる。本発明においては、pBMSF7Cのプロモーター下流にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子を挿入したプラスミドベクターをpBMSF7C-mCl1、pBMSF7C-mCl2.1、pBMSF7C-mCl2.2、pBMSF7C-mCl2.3、pBMSF7C-mIVR153という。これらのプラスミドベクターを、宿主であるワクシニアウイルスに導入することで、組換えワクシニアウイルスを作製することができる。プラスミドベクターの宿主への導入は、公知の任意の手法を採用することができ、例えば弱毒ワクシニアウイルスLC16m8株を感染した動物細胞中にプラスミドベクターpBMSF7C-mCl1、pBMSF7C-mCl2.1、pBMSF7C-mCl2.2、pBMSF7C-mCl2.3、pBMSF7C-mIVR153をそれぞれ導入することにより、ワクシニアウイルスのヘマグルチニンHA遺伝子領域において相同組換えを引き起こし、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子をそれぞれ発現する組換えワクシニアウイルスRVV-FluHAH5-mCl1、RVV-FluHAH5-mCl2.1、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153を作製することができる。なお、RVVの作製に用いたワクシニアウイルスLC16m8株は、動物個体で増殖可能であるが、神経細胞における増殖性は極めて低い弱毒株である。日本では痘瘡ワクチンとして認可されており、約5万人の小児に接種の結果、重篤な副作用は発生していない厚生省種痘研究班研究報告:臨床とウイルス,vol.3,No.3,269,1975参照。一方、免疫誘導能に関しては親株であるLister株と同等であることが報告されており、LC16m8株は安全で効果的なワクチンである。作製した組換えワクシニアウイルスRVV-FluHAH5-mCl1、RVV-FluHAH5-mCl2.1、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153は、ワクシニアウイルスのHAタンパク質遺伝子領域にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子が挿入されるため、ワクシニアウイルス由来のHAタンパク質の発現が欠如する。インフルエンザウイルス由来のHAタンパク質は、モルモット赤血球に対して凝集反応を示すが、ワクシニアウイルス由来のHAタンパク質はモルモット赤血球に対して凝集反応を起こさない。従って、RVV-FluHAH5-mCl1、RVV-FluHAH5-mCl2.1、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153を動物細胞に感染させ、これにより形成するプラークへのモルモット赤血球の凝集反応を指標にして、RVVのスクリーニングを行う。目的のRVVは、赤血球凝集活性を持つレッドプラークを選別すればよい。レッドプラークより得られたウイルスは、ウイルスゲノムを鋳型としてH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子特異的なプライマーによりPCRを行い、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子の導入を確認することができる。H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質の発現は、RVV-FluHAH5-mCl1、RVV-FluHAH5-mCl2.1、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153を感染させた後の動物細胞をサンプルとして、ウエスタンブロット法により確認することができる。なお、抗体は、H5N1HPAIVのHAタンパク質由来のHAペプチドa.a.198-217配列番号10等、又はH1N12009pdmのHAタンパク質由来のHAペプチドa.a.223-234配列番号11等を免疫して作製したウサギ抗血清を用いることができる。RVVの作製において目的遺伝子の挿入部位としては、HAタンパク質遺伝子領域以外として、一般にはチミジンキナーゼTK遺伝子領域が用いられるが、TK遺伝子領域に目的遺伝子を挿入することによるTKの発現欠損によりRVVの増殖性が低下することが知られている。一方、HAタンパク質発現欠損によるRVVの増殖性はほとんど影響がないことが報告されているVaccine,vol.12,p.675-681,1994参照。従って、本発明においては、目的遺伝子の挿入部位としてHAタンパク質遺伝子領域が好ましい。3.新型インフルエンザの予防用及び治療用医薬組成物本発明は、上記組換えワクシニアウイルスを含む、新型インフルエンザすなわちH5N1高病原性鳥インフルエンザ及びH1N1パンデミックインフルエンザの予防薬及び治療薬予防用及び治療用医薬組成物を提供する。また本発明は、上記組換えワクシニアウイルスを患者被験者に投与することを含む、上記新型インフルエンザの予防及び治療方法や、上記新型インフルエンザの予防及び治療のための上記組換えワクシニアウイルスの使用や、上記新型インフルエンザの予防薬及び治療薬を製造するための上記組換えワクシニアウイルスの使用等も提供することができる。本発明の医薬組成物は、あらゆる公知の方法、例えば、筋肉、腹腔内、皮内又は皮下等の注射、あるいは鼻腔、口腔又は肺からの吸入、経口投与により生体に導入することができる。さらに、本発明の医薬組成物に含まれる組換えワクシニアウイルスと、既存の抗ウイルス薬例えば、タミフル、リレンザを併用することも可能である。併用の態様は特に限定されるものではなく、本発明の組換えワクシニアウイルスと既存の抗ウイルス薬とを同時に投与することもでき、また、一方を投与後、一定時間経過後に他方を投与する方法により生体に導入することもできる。また、本発明の医薬組成物は、賦形剤、増量剤、結合剤、滑沢剤等公知の薬学的に許容される担体、緩衝剤、等張化剤、キレート剤、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等と混合することができる。本発明の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、シロップ剤等の経口投与剤、注射剤、外用剤、坐剤、点眼剤等の非経口投与剤などの形態に応じて、経口投与又は非経口投与することができる。好ましくは、皮内、筋肉、腹腔等への局部注射等が例示される。投与量は、有効成分の種類、投与経路、投与対象、患者の年齢、体重、性別、症状その他の条件により適宜選択されるが、ウイルスの一日投与量としては、経口の場合は1000~1000000000PFUplaqueformingunits程度、好ましくは100000~100000000PFU程度であり、非経口の場合は100~1000000000PFU程度、好ましくは1000~100000000PFU程度である。ウイルスは、1日1回投与することもでき、数回に分けて投与することもできる。本発明の組換えワクシニアウイルスは、新型インフルエンザ予防用及び治療用ワクチンとして使用される。また、これまでに、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmに対するワクチンの開発では、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmに対する抗体と細胞障害性T細胞CTLに着目した研究が行われている。従って、予めワクチンとしての抗体価又は細胞性免疫活性を測定しておくことが好ましい。例えば、作製した組換えワクシニアウイルスRVV-FluHAH5-mCl1、RVV-FluHAH5-mCl2.1、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153又は親株であるLC16m8株に対する抗体価は、これらのウイルス株をマウスに接種後、経時的に血清を回収し、血清のH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子に対するELISA価を測定することで得ることができる。RVV-FluHAH5-mCl2.2及びRVV-FluHAH5-mCl2.3を接種したマウスの血清では、接種1週間後からH5N1HPAIVのHAタンパク質に対する抗体価の上昇が認められており、RVV-FluHAH1-mIVR153を接種したマウスの血清は、接種2週間後からH1N12009pdmのHAタンパク質に対する抗体価の上昇が認められる。以上のとおり、本発明者らが作製した組換えワクシニアウイルス総称してFluHA-RVVsというは、新型インフルエンザに対する液性免疫を誘導し得るものである。以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明する。これらの実施例は説明のためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。組換えワクシニアウイルスRVVの作製pBMSF7Cプラスミド特開平6-237773号公報参照のSbfI-SgfIサイト間に、H5N1HPAIVクレード1、クレード2.1、クレード2.2、クレード2.3及びH1N12009pdmの各HAタンパク質遺伝子をそれぞれ組み込むことにより、ヘマグルチニンHA遺伝子領域内のATIp7.5ハイブリットプロモーター下流に上記各HAタンパク質遺伝子が挿入されたプラスミドベクターpBMSF7C-mCl1、pBMSF7C-mCl2.1、pBMSF7C-mCl2.2、pBMSF7C-mCl2.3及びpBMSF7C-mIVR153を作製した図1。具体的には、pBMSF7C-mCl1には配列番号12に示す塩基配列からなるDNAがH5N1HPAIVクレード1のHAタンパク質遺伝子として挿入されており、pBMSF7C-mCl2.1には配列番号13に示す塩基配列からなるDNAがH5N1HPAIVクレード2.1のHAタンパク質遺伝子として挿入されており、pBMSF7C-mCl2.2には配列番号3に示す塩基配列からなるDNAがH5N1HPAIVクレード2.2のHAタンパク質遺伝子として挿入されており、pBMSF7C-mCl2.3には配列番号14に示す塩基配列からなるDNAがH5N1HPAIVクレード2.3のHAタンパク質遺伝子として挿入されており、pBMSF7C-mIVR153には配列番号15に示す塩基配列からなるDNAがH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子として挿入されている。初代腎培養細胞を35mmディッシュに播種し、コンフルエントに達したところで、ワクシニアウイルス弱毒株LC16m8株を、moi=10で、30°Cで1時間感染させた。なお、moimultiplicityofinfectionとは、細胞1個あたりのPFUplaqueformingunitsをいう。感染後、ウイルス溶液を吸引除去し、細胞をPBS-で洗浄した。次いで、5倍希釈TrypLE/0.5mMEDTA/PBS-により処理し、10FCS/DMEM培地抗生物質-、PBS-、HeBSbufferで洗浄後、細胞をHeBSbuffer600μlに懸濁した。プラスミドベクターpBMSF7C-mCl1、pBMSF7C-mCl2.1、pBMSF7C-mCl2.2、pBMSF7C-mCl2.3及びpBMSF7C-mIVR153の各1.5μgを、それぞれ全量30μlになるようにHeBSbufferを用いて希釈し、細胞懸濁液に加えて混和し、氷上で10分間静置した。プラスミドベクターを加えた細胞懸濁液を10μlチップ型金電極で吸い上げ、エレクトロポレーターInvitrogen社製を用いてエレクトロポレーション1200V、パルス幅40ms、パルス回数1回を行った。エレクトロポレーション後、直ちに10FCS/DMEM培地抗生物質-培地2mlであらかじめ35mmディッシュに播種しておいたRK13細胞又は初代腎培養細胞に、添加した。エレクトロポレーション2回分を35mmディッシュに添加し、30°Cで24時間培養した。24時間培養後、スクレーパーを用いて細胞をディッシュから剥がし、細胞懸濁液を回収し、冷水中において超音波処理30sec×4回を行った後、遠心分離2000rpm、10minした。その上清をウイルス溶液として使用した。ウイルス溶液を5FCS/MEM培地に希釈し、150mmディッシュに播種しておいた初代腎培養細胞に30°C、1時間感染させた。ウイルス溶液を吸引除去した後、PBS-で細胞を洗浄した。5FCS/0.5メチルセルロース/MEM培地を添加して、30°Cで96時間培養した。96時間培養後、上清を吸引除去し、PBS-で洗浄した。PBSで希釈したモルモット赤血球溶液を150mmディッシュに添加し、30°Cで30min培養した。赤血球溶液を吸引除去した後、細胞をPBSで2回洗浄した。モルモット赤血球が吸着したプラークを、ピペットマンを用いて回収した。回収したプラークについて、PCRならびに遺伝子配列の決定により前記各HAタンパク質遺伝子の導入を確認した。遺伝子導入が確認されたプラークについてはプラーク精製を3回繰り返した。3回プラーク精製したウイルスについて、小スケール培養を行った。3回目に得たコロニーを500μlの5FCS/MEM培地に懸濁し、冷水中で超音波処理を行った。遠心分離2000rpm、10minを行った後、上清250μlを60mmディッシュに播種しておいた初代腎培養細胞に添加し、30°Cで1時間感染させた。感染後、2.5mlの5FCS/MEM培地を添加し、30°Cで96時間培養した。96時間後にスクレーパーを用いて細胞をフラスコから剥がし、細胞懸濁液を回収した。回収した細胞懸濁液を冷水中で超音波処理30sec、4回した後、遠心分離し、その上清をウイルス溶液として回収した。回収したウイルス溶液は、段階希釈して6ウェルプレートに播種しておいたRK13細胞又は初代腎培養細胞に添加し、30°Cで1時間感染させた。ウイルス溶液を吸引除去した後、PBS-で細胞を2回洗浄した後、5FCS/0.5メチルセルロース/MEM培地を添加して、30°Cで96時間培養した。96時間後に、ウェル中に形成されるプラーク数をカウントすることによりtiterを算出した。この算出したtiterをもとに大スケール培養を行った。150mmディッシュ10枚にRK13細胞又は初代腎培養細胞を播種し、コンフルエントに達したところで、組換えワクシニアウイルス溶液2mlを、moi=0.1で、30°Cで1時間感染させた。感染後、ウイルス溶液を吸引除去し、18mlの5FCS/MEM培地を添加し、30°C、96時間培養した。96時間後にスクレーパーを用いて細胞をフラスコからはがし、細胞懸濁液を回収し、-80°Cで凍結保存した。この細胞懸濁液は凍結融解を1回行った後、冷水中で超音波処理30sec、4回、遠心分離をし、その上清をウイルス溶液として回収した。このウイルス溶液を段階希釈して、6ウェルプレートに播種しておいたRK13細胞又は初代腎培養細胞に感染させて、上記と同様の方法により溶液中のウイルスtiterを算出した。titerを算出したこれらの各ウイルス溶液組換えワクシニアウイルスを、以下の各実施例に示す種々の実験に使用した。PCRによるHAタンパク質遺伝子の導入確認実施例1に示した各HAタンパク質遺伝子cDNA:配列番号12、13、3、14及び15に特異的な以下のプライマーを用い、得られた組換えワクシニアウイルスのゲノムを鋳型としてPCRを行うことにより、当該ウイルスゲノム中に各HAタンパク質遺伝子が導入されているか確認した図2及び3。インサート確認PCR用プライマーの塩基配列<Fプライマー>H5N1HPAIVのHAタンパク質遺伝子4種確認用H1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子確認用<Rプライマー>H5N1HPAIV及びH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子確認用具体的には、反応液組成は、市販のポリメラーゼに添付の緩衝液50μlに対しDNAポリメラーゼ1U、dNTP0.3mM、Fプライマー1μM、Rプライマー1μMとし、サイクル条件は、融解を95°Cで0.5分、アニーリングを58°Cで0.5分、伸長を72°Cで2分とするサイクルを計25サイクルとした。得られたPCR産物を、アガロースゲルを用いて電気泳動し、バンドを確認した。その結果、プライマー設計により予め想定した長さの単一のバンドが認められれば、組換えウイルスゲノム中にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子が導入されていることが分かり、一方、当該バンドが認められなければ、H5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子は導入されていないことが分かることになる。図3に示すように、PCR産物増幅断片の1アガロースゲル電気泳動の結果、組換えウイルスゲノム中にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質遺伝子遺伝子が導入されていることが分かった。ウエスタンブロット法によるH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質の発現確認組換えワクシニアウイルスを、予め6ウェルプレートに播種しておいたRK13細胞に、moi=10で、30°Cで1時間感染させた。感染後、ウイルス溶液を吸引除去し、PBS-により細胞を1回洗浄した。各ウェルに2mlの5FCS/MEM培地を添加し、30°C、18時間培養した。18時間後、培地を吸引除去し、PBS-により細胞を2回洗浄した。100μlの溶解buffer1SDS、0.5NP-40、0.15MNaCl、10mMTris-HClpH7.4を添加して細胞を溶解させ、その溶液を1.5mlのエッペンドルフチューブに移し入れた。回収した溶液は粘性がなくなるまで冷水中で超音波処理を行った。調製した溶液中のタンパク質量は、Lowry法により定量した。電気泳動は、10アクリルアミドゲルを用い、30μgのタンパク質に対して行った。電気泳動終了後、ゲルを取り出し、Semi-dryblotterを用いて2mA/cm2で60分間通電し、ゲル中のタンパク質をPVDFメンブレンにトランスファーした。メンブレンをTBS-T溶液で洗浄した後、5スキムミルク-TBS-T溶液につけてブロッキングを行った。ブロッキング終了後、メンブレンをTBS-T溶液で3回洗浄した。一次抗体は、H5N1HPAIVのHAタンパク質由来のHAペプチドa.a.198-217配列番号10;NDAAEQTKLYQNPTTYISVG又はH1N12009pdmのHAタンパク質由来のHAペプチドa.a.223-234配列番号11;YSKKFKPEIAIRに対するウサギポリクローナル抗体を使用した。一次抗体との反応終了後、メンブレンをTBS-T溶液で3回洗浄した。二次抗体には抗ウサギIgG-linkedHRPOfromDonkey、Amersham社製を使用した。二次抗体との反応終了後、再度TBS-T溶液でメンブレンを3回洗浄し、Immobilonwestern検出用試薬Millipore社製をメンブレンに添加し、蛍光をCCDカメラで取り込み、画像解析した。その結果、図4に示すように、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153の組換えウイルスゲノム中においてH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質が発現していることが分かった。マウスへの組換えワクシニアウイルス接種実験図5図5は、組換えワクシニアウイルスFluHA-RVVsの液性免疫誘導能の確認方法を示す図である。実施例1で得た組換えワクシニアウイルス又は空ベクターを挿入したRVV-EmptyをBALB/cマウス雌に1×107PFUで経内皮接種皮内接種i.d.した後、1、2、3及び4週間後に、眼窩静脈より採血を行った。採取した血液は、すべて血清分離剤を入れた0.5mlチューブにとり、遠心分離15000rpm、10分間して血清を分離回収した。血清は、後述するELISA試験を行うまで、-80°Cに凍結保存した。組換えワクシニアウイルスFluHA-RVVsで免疫したマウス血清中のH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質に対する、ELISA法による抗体価測定96ウェルプレートにH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質をコートしておき、凍結しておいた血清サンプルを100~1000倍に希釈して添加し、4度で一晩静置した。96ウェルプレートをTBS-T溶液で洗浄した後、96ウェルプレートに抗マウスIgG-linkedHRPOfromSheep、Amersham社製を二次抗体として添加した。室温で2時間反応させた後、再度TBS-T溶液で96ウェルプレートを3回洗浄した。発色液を100μl/wellで添加した。室温で30分間静置後、2M硫酸溶液を50μl/wellで添加して反応を停止した。マイクロプレートリーダーで490nmの吸光度を測定した。その結果、図6及び7に示すように、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153を接種したマウス血清中にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmのHAタンパク質に対して高い抗体価の誘導が認められた。組換えワクシニアウイルスRVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153の新型インフルエンザに対する予防効果の検討図8に示すように、RVV-FluHAH1-mIVR153接種による免疫誘導効果が確認されたため、これら組換えワクシニアウイルスワクチン接種マウスに対して、ワクチン接種から5週間後に、鼻からH1N12009pdmを攻撃感染させた。経日的な体重変化を測定し、感染から9日後に剖検を行い、肺の病理解析を行った。ワクチンを接種していないマウスでは、インフルエンザウイルス感染後、経日的に体重が減少していき、9日後には、約20の低下が認められるのに対して、ワクチン接種群ではH1N12009pdm感染後の初期に一過性に体重減少が見られるものの、その後は速やかに体重が増加し、正常値付近にまで回復することが分った。また、肺病理組織を解析から、ワクチンを接種していないマウスへのH1N12009pdmの感染により、肺は、間質細胞の肥厚化や、粘液の滲出、免疫担当細胞であるリンパ球侵潤により肺胞の空間が局所的に充満した肺炎像を示したのに対して、ワクチン接種群では、感染部位である気管支周囲への顕著なリンパ球侵潤は、認められるものの、肺胞腔は、きれいに維持されており、肺炎が顕著に軽減されることが分かった図9。一方、RVV-FluHAH5-mCl2.2又はRVV-FluHAH5-mCl2.3を単回接種したマウスに対して、これら組換えワクシニアウイルスワクチン接種から5週間後に、H5N1HPAIVのクレード2.3を攻撃感染させ、ワクチン効果を検討した。攻撃感染は、1×104PFU及び1×105PFUの2つの濃度で行った。1×104PFU及び1×105PFUのいずれの攻撃感染に対しても、RVV-FluHAH5-mCl2.2又はRVV-FluHAH5-mCl2.3接種群では生存率100であり、体重変化もインフルエンザウイルス感染3日後より増加していき、ほぼ感染前と同じ体重にまで回復した。さらに、高濃度側である1×105PFUの攻撃感染における肺病理組織を解析したところ、ワクチンを接種していないマウスへのH5N1ウイルス感染により、生存していた個体の肺においても、間質細胞の肥厚化が認められたのに対して、RVV-FluHAH5-mCl2.2又はRVV-FluHAH5-mCl2.3接種群では、感染部位である気管支周囲や、血管周囲への顕著なリンパ球侵潤と間質部分の局所的な肥厚化が観察されるものの、肺胞腔は、比較的きれいに維持されており、肺炎が顕著に軽減されていた。よって、今回作製した組換えワクシニアウイルスワクチンは、致死性を示すH5N1HPAIV感染に対しても、感染防御効果を示した。また、クレードの異なるクレード2.2のワクチン接種群でもクレード2.3のウイルス感染に対して十分なワクチン効果を示した。新型インフルエンザ組換えワクシニアウイルスとしては、ヘマグルチニンHAタンパク質を発現するRVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153を用いた図1。これらFluHA-RVVsの効果を評価するために、RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3又はRVV-FluHAH1-mIVR153を1×107PFUで単回皮内接種し、接種から5週間後にH5N1HPAIV又はH1N12009pdmを経鼻感染させ、その後経日的な体重変化測定を行い、感染から9日後に肺組織を採材し図8~11、肺病理組織解析を行った図9及び11。RVV-FluHAH5-mCl2.2、RVV-FluHAH5-mCl2.3及びRVV-FluHAH1-mIVR153接種群は、それぞれのインフルエンザウイルスによる攻撃感染に対して、いずれも体重減少抑制及び肺炎軽減効果を認めた図8~11。従って、本発明のワクシニアウイルスは、新型インフルエンザの予防及び治療効果を有し、新型インフルエンザワクチンとして有用であることが示された。"