"CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774及びCECT7775のいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746、CECT7747、CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の抗微生物菌株。抗微生物菌株は、口腔感染症をもたらす生物、好ましくはカリエス性生物の増殖に対して阻害活性を示す、請求項1及び2に記載の抗微生物菌株。薬として使用するための、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774及びCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746、CECT7747、CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項4に記載の抗微生物菌株。薬の調製における、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774及びCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される、培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746、CECT7747、CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項6に記載の使用。抗微生物剤、好ましくは抗菌剤として使用するための、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774及びCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746、CECT7747、CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項8に記載の抗微生物菌株。抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製における、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774及びCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される、培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746、CECT7747、CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項10に記載の使用。口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置で使用するための、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774及びCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746、CECT7747、CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項12に記載の抗微生物菌株。口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置のために設計された組成物の調製における、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される、培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項14記載の使用。口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプロバイオティックまたは機能性食品として使用するためのCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項16記載の抗微生物菌株。口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプロバイオティックまたは機能性食品の調製におけるCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される、培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用。抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項18記載の使用。請求項1から3のいずれかに記載の、少なくとも1つの抗微生物菌株を含むプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品。請求項1から3のいずれかに記載の、少なくとも1つの抗微生物菌株を含む医薬組成物または口腔健康のための組成物。配列SEQIDNO:9を含む抗微生物化合物または以下の配列SEQIDNO:1、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14のいずれかを含むDNA配列によってコードされる抗微生物化合物。配列SEQIDNO:9から成る抗微生物化合物または以下の配列SEQIDNO:1、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14のいずれかから成るDNA配列によってコードされる抗微生物化合物。抗微生物化合物は、口腔感染症をもたらす生物、好ましくはカリエス性生物の増殖に対する阻害活性を示す、請求項22または23に記載の抗微生物化合物。抗微生物化合物がペプチドであることを特徴とする、請求項22から24のいずれかに記載の抗微生物化合物。薬として使用するための請求項22から25いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。薬の調製における請求項22から25いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製で使用するための、請求項22から25いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製における請求項22から25いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置で使用するための、請求項22から25いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。口腔感染症の処置のために設計された組成物、好ましくはカリエスの処置のために設計された組成物の調製における、請求項22から25いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレバイオティックまたは機能性食品として使用するための、請求項22から25いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレバイオティックまたは機能性食品の調製における、請求項22から25いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。請求項22から25いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物を含む、プロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品。請求項22から25いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物を含む、医薬組成物または口腔健康のための組成物。配列SEQIDNO:8を含む抗微生物化合物または以下の配列SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5のいずれかを含むDNA配列によってコードされる抗微生物化合物。配列SEQIDNO:8から成る抗微生物化合物また以下の配列SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5のいずれかから成るDNA配列によってコードされる抗微生物化合物。抗微生物化合物は、口腔感染症をもたらす生物、好ましくはカリエス性生物の増殖に対する阻害活性を示す、請求項36または37に記載の抗微生物化合物。抗微生物化合物がペプチドであることを特徴とする、請求項36または37いずれかに記載の抗微生物化合物。抗微生物化合物は、口腔内の酸、好ましくは乳酸の生成を阻害することを特徴とする請求項36から39いずれかに記載の抗微生物化合物。薬としての使用するための請求項36から39いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。薬の調製における請求項36から39いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製で使用するための請求項36から39いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製における、請求項36から39いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置で使用するための、請求項36から39いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。口腔感染症の処置のために設計された組成物、好ましくは抗カリエス組成物の調製における請求項36から39いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレバイオティックまたは機能性食品として使用するための請求項36から39いずれかに記載の抗微生物化合物またはその組み合わせ。口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレバイオティックまたは機能性食品の調製における請求項36から39いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用。請求項36から39いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物を含むプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品。請求項36から39いずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物を含む医薬組成物または口腔健康のための組成物。口腔感染症をもたらす生物、より好ましくはカリエス性生物の増殖に対する阻害活性を好ましくは持つ培養できる抗微生物菌株を単離するプロセスであって、該プロセスは、aカリエスに一度も苦しんだことのない個体から歯肉縁上の歯垢のサンプルを得る工程、b適切な増殖条件下の適切な培地にサンプルを植え、及びカリエスに一度も苦しんでいない個体で最も頻出するサンプルの細菌を単離する工程、cカリエス性細菌の増殖培地中で、単離された菌株を培養して、適切な培養時間後に増殖に対して阻害ハロを示す菌株を選択する工程、を含むことを特徴とするプロセス。工程bにおいて、カリエスに一度も苦しんだことのない個体で最も頻出する細菌をゲノムのパイロシーケンシングによって得ることを特徴とする、請求項51に記載のプロセス。工程cにおいて、菌株は好ましくは、Streptococcus属,Rothia属,Neisseria属,Globicatella属,Johnsonella属,Haemophilus属,Kingella属,Cardiobacterium属,Mannheimia属,Phocoenobacter属及びAggregatibacter属から選択されることを特徴とする、請求項51に記載のプロセス。菌株は、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項53に記載のプロセス。菌株は、Streptococcus属に属し、好ましくはS.sanguis、S.oralis、S.mitis、S.infantisに属する菌株が選択されることを特徴とする、請求項53に記載のプロセス。少なくとも1つの抗微生物菌株は、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴とする、請求項55に記載のプロセス。感染症、好ましくは口腔感染症、より好ましくはカリエスを予防する及び/または処置するための方法であって、前記方法は、口腔に常に生息する病原微生物、好ましくはカリエス性微生物の増殖を阻害するのに効果的な量の請求項1から3のいずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物菌株、または請求項20に記載のプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品、あるいは請求項21に記載の医薬組成物または口腔健康のための組成物、を投与する工程を含むことを特徴とする方法。口腔感染症をもたらす生物、より好ましくはカリエス性生物の増殖に対して阻害活性を好ましくは持つ抗微生物化合物を獲得するプロセスであって、該プロセスは、aカリエスに一度も苦しんだことのない個体から歯肉縁上の歯垢のサンプルを得る工程、b前記サンプルを溶解し、完全なゲノムDNAを前記サンプルから抽出する工程、c抽出されたDNAの残りから、ベクター、好ましくはプラスミドまたはフォスミドのメタゲノムライブラリを調製する工程であって、前記ベクターは宿主細胞に挿入され、かつ前記ベクターが運ぶ、抽出されたDNAを宿主細胞において発現することができる、工程、d宿主細胞にベクターを挿入する工程、eベクターを含む宿主細胞のクローンを、カリエス性微生物を持つ培地に植え、適切な培養時間後に増殖阻害ハロを示すクローンを選択する工程、f阻害活性を示したクローンのベクターのDNAをシーケンシングし、前記DNAがコードする化合物を合成及び/または精製する工程、を含むことを特徴とするプロセス。抽出されたDNAの濃度が少なくとも300μg/mlであることを特徴とする、請求項58に記載のプロセス。フォスミドは、DNA抽出プロセスの後に、好ましくは35乃至45kbの範囲内のサイズのDNAを含んで構築されることを特徴とする、請求項58に記載のプロセス。前記フォスミドは、1kbより小さいサイズのDNAを含むことを特徴とする、請求項58に記載のプロセス。フォスミドを挿入する宿主細胞がE.coliであることを特徴とする、請求項58から61のいずれかに記載のプロセス。DNAインサートを持つフォスミドを含むクローンが植えられる微生物の培地は、カリエス性細菌、好ましくはS.mutansまたはS.sobrinusの培地であることを特徴とする、請求項58から62のいずれかに記載のプロセス。フォスミドのDNA配列は、SEQIDNo:1、SEQIDNo:2、SEQIDNo:3、SEQIDNo:4、SEQIDNo:5、SEQIDNo:6、SEQIDNo:7、SEQIDNo:13、SEQIDNo:14またはそれらの組み合わせを含む配列から選択されることを特徴とする、請求項58から63のいずれかに記載のプロセス。フォスミドのDNA配列は、SEQIDNo:1、SEQIDNo:2、SEQIDNo:3、SEQIDNo:4、SEQIDNo:5、SEQIDNo:6、SEQIDNo:7、SEQIDNo:13、SEQIDNo:14またはそれらの組み合わせから成る配列から選択されることを特徴とする、請求項58から63のいずれかに記載のプロセス。配列SEQIDNO:8またはSEQIDNO:9から選択される配列を含む抗微生物ペプチド、あるいはSEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14のいずれかを含むDNA配列によってコードされる抗微生物化合物の少なくとも1つが得られることを特徴とする、請求項58から65のいずれかに記載のプロセス。配列SEQIDNO:8またはSEQIDNO:9から選択される配列から成る抗微生物ペプチド、あるいは以下の配列SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14のいずれかから成るDNA配列によってコードされる抗微生物化合物の少なくとも1つが得られることを特徴とする、請求項58から65のいずれかに記載のプロセス。フォスミドのDNA配列であるSEQIDNO:1、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13及びSEQIDNO:14、並びにSEQIDNO:8を持つ抗微生物ペプチドは、細菌由来であり、好ましくはバクテリオシンであることを特徴とする、請求項66または67に記載のプロセス。フォスミドのDNA配列であるSEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4及びSEQIDNO:5は、ヒト由来であり、好ましくはデフェンシン/カセリシジンであることを特徴とする、請求項66または67に記載のプロセス。感染症、好ましくは口腔感染症、より好ましくはカリエスを予防する及び/または処置するための方法であって、前記方法は、口腔に常に生息する病原微生物の増殖を阻害するのに効果的な量の請求項22から25のいずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物、または請求項34に記載のプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品、あるいは請求項35に記載の医薬組成物または口腔健康のための組成物、を投与する工程を含むことを特徴とする方法。感染症、好ましくは口腔感染症、より好ましくはカリエスを予防する及び/または処置するための方法であって、前記方法は、口腔に常に生息する病原微生物の増殖を阻害するのに効果的な量の請求項36から39のいずれかに記載の少なくとも1つの抗微生物化合物、または請求項49に記載のプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品、あるいは請求項50に記載の医薬組成物または口腔健康のための組成物、を投与する工程を含むことを特徴とする方法。本発明の目的は、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775のいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株である。好ましい実施形態において、本発明の菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴としている。別の好ましい実施形態において、本発明で開示された抗微生物細菌株は、口腔感染症をもたらす生物、好ましくはカリエス性生物の増殖に対して阻害活性を示す。好ましい実施形態において、本発明の菌株は、歯を占有するように競争的に増殖することに加えて、それらがカリエス性細菌の増殖に対する阻害物質を生産することができることを特徴としている。本発明の別の目的は、薬として使用するための、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株に関する。好ましい実施形態において、本発明で開示された抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴としている。本発明の別の目的は、薬の調製におけるCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用に関する。好ましい実施形態において、前記使用は、前記菌株がStreptococcus属に属することを特徴とし、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択される抗微生物菌株であることを特徴としている。本発明の別の目的は、抗微生物剤、好ましくは抗菌剤として使用するためのCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択された培養できる抗微生物菌株に関する。好ましい実施形態において、抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴としている。本発明の別の目的は、抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製におけるCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択された培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用に関する。好ましい実施形態において、前記使用は、前記菌株がStreptococcus属に属することを特徴とし、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択される抗微生物菌株であることを特徴としている。本発明の別の目的は、口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置で使用するためのCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択された培養できる抗微生物菌株に関する。好ましい実施形態において、本発明の抗微生物菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴としている。本発明の別の目的は、口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置のために設計された組成物の調製における、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用に関する。好ましい実施形態において、本発明の菌株の使用は、培養できる菌株がStreptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴としている。本発明の別の目的は、口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプロバイオティックまたは機能性食品として使用するためのCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775またはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株に関する。好ましい実施形態において、本発明の菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴としている。本発明の別の目的は、口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプロバイオティックまたは機能性食品の調製におけるCECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775のまたはその組み合わせのいずれかから選択される培養できる抗微生物菌株の少なくとも1つの使用に関する。好ましい実施形態において、本発明の菌株は、Streptococcus属に属し、CECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択されることを特徴としている。本発明で開示された別の目的は、本発明の全体にわたって言及されるように、少なくとも1つの培養できる抗微生物菌株と、前記菌株から分泌された抗カリエス性の物質、化合物または分子を含む、プロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品に関する。本発明で開示される別のものは、本発明の全体にわたって言及されるように、少なくとも1つの培養できる抗微生物菌株、または前記菌株から分泌された抗カリエス性の物質、化合物または分子を含む、医薬組成物または口腔健康のために設計された組成物に関する。本発明で開示される別の目的は、SEQIDNO:9を含む抗微生物化合物または以下の配列SEQIDNO:1,SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14のいずれかを含むDNA配列によってコードされる抗微生物化合物に関する。本発明で開示される別の目的は、SEQIDNO:9から成る抗微生物化合物または以下の配列SEQIDNO:1,SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14のいずれかから成るDNA配列によってコードされる抗微生物化合物に関する。本発明の好ましい実施形態において、上記抗微生物化合物は口腔感染症をもたらす生物、好ましくはカリエス性生物の増殖に対する阻害活性を示す。他の好ましい実施形態において、前記抗微生物化合物はペプチドである。本発明の別の目的は、薬としての使用するための前段落で言及された抗微生物化合物またはその組み合わせに関する。本発明で開示された別の目的は、薬の調製における前段落で言及された上記抗微生物化合物またはその組み合わせの少なくとも1つの使用に関する。本発明の別の目的は、抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製で使用するための上記抗微生物化合物またはその組み合わせに関する。本発明で開示される別の目的は、抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製における上記の抗微生物化合物またはその組み合わせの少なくとも1つの使用に関する。本発明の別の目的は、口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置で使用するための上記抗微生物化合物またはその組み合わせに関する。本発明で開示される別の目的は、口腔感染症の処置のために設計された組成物、好ましくはカリエスの処置のために設計された組成物の調製における上記抗微生物化合物またはその組み合わせの少なくとも1つの使用に関する。本発明の別の目的は、口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレビオティックまたは機能性食品として使用するための本発明の上記の抗微生物化合物に関する。本発明に開示される別の目的は、口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレビオティックまたは機能性食品の調製における上記抗微生物化合物またはその組み合わせの少なくとも1つの使用に関する。本発明に開示される別の目的は、本発明の全体にわたって記載されるような少なくとも1つの抗微生物化合物を含むプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品に関する。本発明に開示される別の目的は、本発明の全体にわたって記載されるような少なくとも1つの抗微生物化合物を含む医薬組成物または口腔健康のための組成物に関する。本発明で開示される別の目的は、配列SEQIDNO:8を含む抗微生物化合物または以下の配列SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5のいずれかを含むDNA配列によってコードされる抗微生物化合物に関する。本発明で開示される別の目的は、配列SEQIDNO:8から成る抗微生物化合物または以下の配列SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5のいずれかから成るDNA配列によってコードされる抗微生物化合物に関する。好ましい実施形態において、前記抗微生物化合物は口腔感染症をもたらす生物、好ましくはカリエス性生物の増殖に対する阻害活性を示す。他の好ましい実施形態において、上記抗微生物化合物はペプチドであることを特徴としている。他の好ましい実施形態において、上記抗微生物化合物は、口腔内の酸、好ましくは乳酸の生成を阻害することを特徴としている。本発明で開示される別のものは、薬として使用するための上記抗微生物化合物またはその組み合わせに関する。本発明で開示された別の目的は、薬の調製における前段落で言及された抗微生物化合物またはその組み合わせの少なくとも1つの使用に関する。本発明の別の目的は、抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製で使用するための上記抗微生物化合物またはその組み合わせに関する。本発明の別の目的は、抗微生物組成物、好ましくは抗菌組成物の調製における上記抗微生物化合物またはその組み合わせの少なくとも1つの使用に関する。本発明の別の目的は、口腔感染症の処置、好ましくはカリエスの処置で使用するための上記抗微生物化合物またはその組み合わせに関する。本発明で開示される別の目的は、口腔感染症の処置のために設計された組成物、好ましくは抗カリエス組成物の調製における上記抗微生物化合物またはその組み合わせの少なくとも1つの使用に関する。本発明の別の目的は、口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレバイオオティックまたは機能性食品として使用するための上記少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせに関する。本発明に開示される別の目的は、口腔健康を改善するために、好ましくはカリエスを予防するために設計されたプレバイオオティックまたは機能性食品の調製における上記少なくとも1つの抗微生物化合物またはその組み合わせの使用に関する。本発明に開示される別のものは、本発明の全体にわたって記載されるような抗微生物化合物を少なくとも1つ含むプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品に関する。本発明に開示される別の目的は、本明細書で記載されるような少なくとも1つの抗微生物化合物を含む、医薬組成物または口腔健康のための組成物に関する。本発明に開示される別の目的は、口腔感染症をもたらす生物、より好ましくはカリエス性生物の増殖に対する阻害活性を好ましくは持つ培養できる抗微生物菌株を単離するプロセスに関し、該プロセスは、aカリエスに苦しんでいない個体の歯肉縁上の歯垢からサンプルを得る工程、b適切な増殖条件下の適切な培地にサンプルを植え、及びカリエスに一度も苦しんだことのない個体で最も頻出するサンプルの細菌を単離する工程、cカリエス性細菌の増殖培地中で、単離された菌株を培養して、適切な培養時間後に増殖に対して阻害ハロを示す菌株を選択する工程を含むことを特徴としている。好ましい実施形態において、上記プロセスは、工程bにおいて、カリエスに一度も苦しんだことのない個体で最も頻出する細菌は、それぞれの菌種の割合を評価することを可能にする技術であるメタゲノムのパイロシーケンシングによって評価することを特徴としている。別の好ましい実施形態において、上記プロセスは、工程cにおいて、菌株は好ましくは、Streptococcus属,Rothia属,Neisseria属,Globicatella属,Johnsonella属,Haemophilus属,Kingella属,Cardiobacterium属,Mannheimia属,Phocoenobacter属及びAggregatibacter属から選択されることを特徴としている。具体的には、該菌株は、CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775から選択される。より具体的には、該菌株は、Streptococcus属に属し、好ましくは以下の種S.sanguis,S.oralis,S.mitis,S.infantisまたはこれら4種を含むStreptococcus属のサブグループに属する記載されていない新しい種に属する細菌から選択される。より具体的には、少なくとも1つの抗微生物菌株がCECT7746,CECT7747,CECT7773またはCECT7775から選択される。本発明で開示される別の目的は、感染症、好ましくは口腔感染症、より好ましくはカリエスを予防する及び/または処置するための方法に関し、該方法は、口腔に常に生息する病原微生物、好ましくはカリエス性微生物の増殖を阻害するのに効果的な量の本発明に記載の少なくとも1つの培養できる抗微生物菌株、または前記菌株を含む本発明に記載のプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品、あるいは前記菌株を含む本発明に記載の医薬組成物または口腔健康のための組成物、を投与する工程を含むことを特徴としている。本発明の別の目的は、口腔感染症をもたらす生物、より好ましくはカリエス性生物の増殖に対して阻害活性を好ましくは持つ抗微生物化合物を獲得するプロセスに関し、該プロセスは、aカリエスに一度も苦しんだことのない個体の歯肉縁上の歯垢からサンプルを得る工程、b前記サンプルを溶解し、完全なゲノムDNAを前記サンプルから抽出する工程、c抽出されたDNAの残りから、ベクター、好ましくはプラスミドまたはフォスミドのメタゲノムライブラリを調製する工程であって、前記ベクターは宿主細胞に挿入され、かつ前記ベクターが運ぶ、抽出されたDNAを宿主細胞において発現することができる、工程、d宿主細胞にベクターを挿入する工程、eベクターを含む宿主細胞のクローンを、カリエス生成微生物を持つ培地に植え、適切な培養時間後に増殖阻害ハロを示すクローンを選択する工程、f阻害活性を示したクローンのベクターのDNAをシーケンシングし、前記DNAがコードする化合物を合成及び/または精製する工程を含むことを特徴としている。好ましい実施形態において、上記プロセスは、抽出されたDNAが少なくとも300μg/mlであることを特徴としている。別の好ましい実施形態において、前記プロセスは、DNA抽出プロセスの後に、好ましくは35乃至45kbの範囲内のサイズのDNAを含むフォスミドが構築されることを特徴としている。別の好ましい実施形態において、前記フォスミドは1kbより小さいサイズのDNAを含む。別の好ましい実施形態において、前記プロセスはフォスミドを挿入する宿主細胞がE.coliであることを特徴としている。別の好ましい実施形態において、前記プロセスはDNAインサートを持つフォスミドを含むクローンが植えられる微生物の培地は、カリエス性細菌、好ましくはS.mutansまたはS.sobrinusの培地であることを特徴とする。別の好ましい実施形態において、前記プロセスはフォスミドのDNA配列がSEQIDNo:1、SEQIDNo:2、SEQIDNo:3、SEQIDNo:4、SEQIDNo:5、SEQIDNo:6、SEQIDNo:7、SEQIDNo:13、SEQIDNo:14またはそれらの組み合わせを含む配列から選択されることを特徴とする。別の好ましい実施形態において、前記プロセスはフォスミドのDNA配列がSEQIDNo:1、SEQIDNo:2、SEQIDNo:3、SEQIDNo:4、SEQIDNo:5、SEQIDNo:6、SEQIDNo:7、SEQIDNo:13、SEQIDNo:14またはそれらの組み合わせから成る配列から選択されるものから成ることを特徴とする。別の好ましい実施形態において、前記プロセスは、SEQIDNO:8またはSEQIDNO:9から選択される配列を含む少なくとも1つの抗微生物ペプチドあるいはSEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14のいずれかを含むDNA配列によってコードされる抗微生物化合物を獲得することを特徴とする。別の好ましい実施形態において、前記プロセスは、SEQIDNO:8またはSEQIDNO:9から選択される配列から成る少なくとも1つの抗微生物ペプチドあるいはSEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14のいずれかから成るDNA配列によってコードされる抗微生物化合物を獲得することを特徴とする。別の好ましい実施形態において、フォスミドのDNA配列であるSEQIDNO:1、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:13及びSEQIDNO:14、及びSEQIDNO:8を持つ抗微生物ペプチドは細菌由来であり、好ましくはバクテリオシンである。別の好ましい実施形態において、フォスミドのDNA配列であるSEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4及びSEQIDNO:5はヒト由来であり、好ましくはデフェンシン/カセリシジンである。本発明で開示される別の目的は、感染症、好ましくは口腔感染症、より好ましくはカリエスを予防する及び/または処置するための方法に関し、該方法は、口腔に常に生息する病原微生物、好ましくはカリエス性微生物の増殖を阻害するのに効果的な量の本発明にわたって記載される少なくとも1つの抗微生物化合物、または本発明に記載の少なくとも1つの抗微生物化合物を含むプロバイオティック/プレバイオティック組成物または機能性食品、あるいは本発明に記載の少なくとも1つの抗微生物化合物を含む医薬組成物または口腔健康のための組成物、を投与する工程を含むことを特徴としている。ブダペスト条約に従った微生物の寄託本発明に使用した微生物は、ResearchBuildingoftheUniversityofValencia,CampusBurjassot,Burjassot46100Valencia,Spainにあるスペイン培養細胞系統保存機関に以下の寄託番号を持って寄託した。CECT7746:2010年6月7日に寄託したStreptococcus属の菌株。CECT7747:2010年6月7日に寄託したStreptococcus属の菌株。CECT7773:2010年7月22日に寄託したStreptococcus属の菌株。CECT7774:2010年7月22日に寄託したRothia属の菌株。CECT7775:2010年7月22日に寄託したStreptococcus属の菌株。以下にリストされる実施例の目的は、請求の範囲を限定することなく本発明を例示することである。実施例1.歯肉縁上の歯垢のメタゲノムの獲得最初に、歯肉縁上の歯垢のサンプルを、インフォームドコンセントに署名した後、カリエスに一度も苦しんでいないボランティアから採取しおよび比較のために以前カリエスに苦しんだことのあるボランティア、及びカリエスに苦しんでおり、前記カリエスの病変を呈しているボランティアから採取した。サンプルを得るプロセスは、バレンシア自治政府保険管理局の臨床調査倫理委員会GSP-CSISPによって承認された。各ボランティアの口内の健康状態は、世界保健機関WHOによる口腔の健康の研究に関する推奨および分類nomenclatureに従った歯医者によって評価された。サンプルは無菌のプローブを使用して得た。ボランティアは、サンプルを採取する24時間前から歯を磨かないように指示された。歯垢中の微生物の多様性を研究し、そのメタゲノムを得るために、各個体のすべての歯の表面の歯垢から集められた材料を混合し、その後溶解し、各歯垢の全てのDNAを得た。MasterPure商標CompleteDNA及びRNAPurificationKitEpicentreBiotechnologiesを使用して、メーカーの使用説明書に従って、溶解する工程の中でリゾチームによる処理1mg/mlを37°Cで30分間を加え、DNAを抽出した。DNA濃度をNanoDropThermoScientificで測定し、選択されたサンプルは好ましくは300μg/mlより大きいDNA濃度でなければならず、合計の量が少なくとも5μgなければならない装置の感度の閾値及びパイロシーケンシングを伴うプロセスのため。さらに、ボランティアの歯垢から抽出されたゲノムDNAの完全性を確認するためにDNAサンプルをアガロースゲルで泳動した。続いて、前記抽出されたDNAのパイロシーケンシングを、GSFLX-TitaniumChemistrysequencerRocheを用いて行った。パイロシーケンシングは、直径1μm以下の球体にDNAを固定することを可能にするアダプターを末端に加えることで、圧力下の窒素を用い、約500-800ヌクレオチドの断片へとDNAを断片化することから成る。前記球体は、各球体と一体化したDNAを増幅するエマルジョンPCRemPCRを行うために、マイクロリアクターとして作用する特定の油に導入される。DNAを増幅した球体の集積の後、パイロシーケンシングが行われるGSFLXsequencerRoche内のチタンプレートに溶液を置く。この反応は、ルシフェラーゼのような酵素一式による光線中にヌクレオチドを加えることでポリメラーゼから放出される各ピロリン酸塩分子の形質転換から成る。この光線は加えたヌクレオチドの数に比例し、こうして高感度チャンバーが光のパルスを、相当するDNA配列に変換する19。前記DNAの平均の長さは425pbであった。所定の配列のリードの数がサンプル中のその頻度にのみ関連するように、454-パイロシーケンシング技術によって人工的に複製された、組織的に発生した配列は、454ReplicarFilter20を通して最終データセットから削除した。メタゲノム中のヒトDNAの量は歯肉縁上の歯垢サンプル中の0.5-40の範囲内にあり表1、Megablastを用いてヒトゲノムデータベースを使用して同定され、最終データから削除した。続いて、平均425pbのDNAは、メタゲノムの大部分の機能アサイメントを可能にする表2。さらに、前記リードのアセンブリにより、5kpbより大きい1103のアセンブリコンティグ、10kpbより大きい354のアセンブリを生産する。各6つの口腔サンプルの平均129.5Mpbの、高品質なフィルター処理した配列を得た100pbより大きく、90を超えるヌクレオチドが99.99の正確さを持っていた:パイロシーケンシングのヌクレオチドリードが正確である可能性、すなわち99.99の正確さは、誤っているのはほんの0.01のヌクレオチドだけであることを意味するシーケンシングのエラー。カリエス病変を備えた2つのサンプルにおいて、シーケンスの約70がヒトDNAに属し、この場合高品質のフィルターされたリードの平均32.5Mpbが得られた。実施例2.歯肉縁上の歯垢のフォスミドメタゲノムライブラリの構築パイロシーケンシングのプロセスで使用されなかった、研究に含まれていた健康なボランティアの歯肉縁上の歯垢から抽出した無傷のDNAのサンプルを使用し、前記ボランティアの歯垢のフォスミド好ましくは35-45kbの間の長さを持つインサートのメタゲノムライブラリを構築し、このためにEpiFOS商標FosmidLibraryProductionKitEpicentreBiotechnologiesをメーカーの取扱説明書に従って使用した。簡単に言えば、本発明のメタゲノムライブラリを構築するプロセスの好ましい代替案として、フォスミドは宿主、好ましくは大腸菌に挿入される。上記で説明したように、メーカーの取扱説明書にいくつかの変更、例えばライゲーションの時間を増やすこと20°Cの水浴で12時間、パルスフィールドゲルから抽出したDNAではなく挿入の為にDNA全体を用いること、抽出したDNAの破損を最小限にするためのDNA抽出プロセスをわずかに変更すること切ったピペットチップを使用すること、ボルテックスを避けること、DNAを濃縮するためのCentricommembranesMilliporeを使用することを加えたものに従って、EpiFOS商標FosmidLibraryProductionKitEpicentreを用いてライブラリを調製した。E.coli宿主へのDNAの挿入は、フォスミドをラムダファージ粒子にパッケージングし、その後E.coliのEpi300T1Rに感染させることで行った。パッケージング中に、ライゲーション産物を、1mlファージバッファーの中に30°Cで3時間ウイルスと接触するよう放置した。感染は、ウイルス粒子がE.coli株と接触するよう37°Cで30分間放置することで行った。無菌スティックを用いて単一コロニーを取ることができるのに十分離したプレート上での最適なコロニー濃度を選択するために、混合物の異なる希釈液を、クロラムフェニコールを持つLB寒天培地で培養することで、事前にタイタレーションを行った。続いて、各コロニーを、96穴Elisaプレートのクロラムフェニコール入りLB液体培地の中に接種し、保管する前にもう一度増殖させた。クローンは、氷の結晶ができることを防ぎ細胞の完全な状態を保つために、96ウェルElisa型プレートNuncの19グリセロールの中で-80°Cで保管した。フォスミドは、その間での組み換えプロセスを防止するために、マルチプルコピーを誘導しないまま冷凍した。別々のフォスミドインサートを持つ別々のE.coliクローンを、その後StreptococcusmutansまたはStreptococcussobrinusのようなカリエス性細菌の培地に植えた。それらのクローンは、前記培地において植えた地点の周りに阻害ハロを示すかどうかで選択される。得られたクローンを、様々な利用可能な公共の配列データベースを基礎として、各フォスミドに含まれるDNAの配列相同性を使って同定した。各フォスミドのDNA配列を得るために、QIAGENから市販されているmidiprepキットを使うことで抽出し、ベクターDNAからフォスミド全てのDNAを分離し、直接パイロシーケンシングを行った。このようにして、それぞれのORFを得てその後コードされたペプチドを得る。実施例3.ヒト口腔メタゲノムの多様性の分析カリエスを持つ個体及び健康な個体からの歯肉縁上の歯垢のメタゲノムを、本発明で記載したプロセスを経て一旦得て、前記口腔メタゲノムの多様性を以下の3つの技術を用いて分析した:16SrRNAの分析を用いた分類学的アサイメント:RDPデータベースリボソームデータプロジェクトに対するBLASTNによる類似性検索26を用いて、各メタゲノムから得られたリードから、16SrRNA配列を抽出した。200pb以下のサイズの配列は削除した。配列の系統発生学的アサイメントは、80の信頼閾値でRDPClassifier27を用いて行った。遺伝子分類アサイメント:全てのORFの分類学的アサイメントを、MEGANソフトウェア28に記載された特徴によって、最小共通祖先LCAアルゴリズムを基礎として行った。各配列のLCAを得るために、BLASTxデータベースを、必須NCBIデータベースNRからの非真核生物の配列を含むもう一つの専用データベースに対して用いて相同性検索を行った。各配列のリードについて、少なくとも90の一致を示す結果を持つもののみのLCAの取得を検討した。リードの分類学的アサイメントPhyMM:前記分類学的アサイメントを、ヌクレオチドの相同性及び組成の両方によって配列のアサイメントを組み合わせるPhymmBL29を使用して行い、この目的のために隠れマルコフモデルを使用した。利用可能な完全ゲノムを、細菌と古細菌の全てのゲノムを含む2010年3月時点NCBIデータベースRefSeqと同様に、ヒト口腔微生物叢データベースHOMD30から得て、分類学的構築モデル及びPhymmBLを用いたホモロジー検索を実行するために設計された部分的なデータベースを構築するために使用した。この分析では、分類学的同一性を予測するために、200pbより大きい配列のみを使用した。前記リードの長さを使用し、PhymmBLによる検索の綱レベルの正確さは、75より大きいと評価された。全ての分類学的、機能的な結果は、続く分析のためにMySQLデータベースにおいて分析した。これらの3つの方法を使用して得られた結果は、直接シーケンスしたメタゲノムにおける少数の16S遺伝子は、クローニングまたはPCR技術によるバイアスなしに、口腔メタゲノムに存在する主な分類学的グループであると記載するのに十分であることを示している。試験したサンプルから、健康な個体と病気の個体の間の興味深い違いが観察された。3つの方法によって示された傾向は、桿菌及びガンマプロテオバクテリアの分類学的グループが健康な個体で最も一般的であったのに対し、クロストリジウム及びバクテロイドのような典型的に嫌気性の分類群が病気の被験体のサンプルでより頻出したことであった。ベータプロテオバクテリア主にナイセリア及びTM7門依然として明確な名前がなく、培養できるメンバーがこれまでのところいないにアサインされたリードは、病気の個体のサンプルに非常に低い割合で存在し、よって健康な条件に関連しているかもしれない。16SリボソームRNAの分類アサイメントに基づいたメタゲノム間の対応分析は、口腔の健康が良くない個体のサンプルは同じ群をなす傾向があるのに対し、健康な個体では様々な細菌コンソーシアが見出されたことを示した。今回のメタゲノムの研究によって、本発明は、前記Streptococcus属及びRothia属、より好ましくはStreptococcus属、がカリエスのない被験体において一般的な属であることを実証した。この理由から、抗カリエス活性を持つことがあり得る、カリエスに一度も苦しんだことのない個体からの歯肉縁上の歯垢のサンプルから選択する場合、該選択は前記Streptococcus属及びRothia属、より好ましくはStreptococcus属に属する種を探索することを目標とした培地、培養パラメータ、細菌の顕微鏡での形態、コロニーの形態など。LCA及びPhymmBLアプローチの有意な適用の一つは、著しく一致したほとんどのリードのほとんどは分類学的由来にアサインされた、もっと言えば可能な機能にアサインされるということである。分類と機能を関連づけることによって、細菌グループがそれぞれ果たすであろう生態学的または代謝学的作用の役割を予想することが可能になった。COGオルソローガスグループのクラスタ機能別分類システムを使用することで、カテゴリーは平等に分配されていないこと、及び特定の細菌グループが特定の機能を行うのに特に適していることが観察されるだろう。例えば、防御機構に関与する遺伝子例えば、制限エンドヌクレアーゼ及び薬剤放出ポンプの大部分は桿菌がコードしており、カリエスのない人々で多くのストレプトコッカスが存在することに合わせて、桿菌によってこれらの細菌がヒトの病原体への天然の阻害剤の潜在的な生産者になり得て、口腔感染症の処置のための補充療法戦略において可能であるということを予測することができる。実施例4.ヒト口腔メタゲノム内に存在する微生物の個体数および豊富度の分析伝統的な培養技術及び先駆的な分子の研究に基づいた最初の研究は、16SrRNA遺伝子の増幅およびクローニングを含み、口腔内に約500の様々な種の多様性があると予想した6。現代の技術次世代シーケンシング、NGSを使用することで、操作的分類単位OTUは、4000及び19000の間であると見積もられた。OTUは、与えられた閾値よりも低い類似性を持つ16SrRNA遺伝子の配列は、異なる種に属するという事実を考慮に入れた、DNA配列に基づいた種の数の予想値である。使用される閾値は、16SrRNA遺伝子の標準である、97の配列同一性である;したがって、類似性が97以上であれば、同じ種であると考慮されるが、それが97未満であれば、それは恐らく異なる種である。3人の健康な被験体のより長いパイロシーケンシングのリード250pbは、一人当たり約600OTUであると予想し、最近のプロジェクトはサンガー型シーケンシング22を用いた16SrRNA増幅産物のほぼ全長を持つ11447の増幅産物をシーケンスしようと試み、その結果10人の個体で300OTU以下と予想値が下がった。微生物の多様性の我々の予想は、サンガーシーケンシングリード6,22を使って得られたものと近かったが、我々のメタゲノムデータから抽出された16SrRNAリードによって、PCR増幅では以前に検出されなかった186の新しいOTUを同定した。希薄曲線rarefactionサンプリングのストレスが増加するに従う種の数の飽和および表1で記載したように、様々な多様性指標特にShannon,Simpson,及びChao1指標は、4254のrRNAリードに基づいて、歯垢サンプルに対して73-120の属が見積もられることを示す表1及び表2。カリエス病変を持つ2つのサンプルは低い多様性を示す傾向があるが、多様性に関しては、様々な健康状態であるボランティアのサンプル間でのはっきりとした違いは観察されなかった。メタゲノム内の選択された種の存在を定量化する効果的なツールは、配列動員sequencerecruitmentである。参考細菌ゲノムに対するある特定の同一性閾値よりも著しく一致した個々のメタゲノムのリードを、サンプル中のその生物の豊富さに依存する密度で変化するグラフを描く際に動員した。示されたヌクレオチドの同一性の平均が94より大きい場合、同じ種からのリードから動員されたであろう。今までのところ、Nucmer及びPromerv3.06アルゴリズムを使って我々のメタゲノムと利用可能な1117ゲノムを比べると、我々のサンプル中のこれらの種の豊富度を見積もることができた。驚いたことに、Aggregatibacter属及びStreptococcussanguisに関連する細菌がカリエスなしの人々においてもっとも豊富であり、これは健康の個体における口腔内のこれらの種のより大きなPCR増幅頻度と一致する。Neisseria属もまた、健康な個体のサンプル中で頻度が高かった。さらに、少数の分類群が通常各メタゲノムで優占することを動員グラフは示しており、これは口腔内に多くの多様な細菌が存在するが、少数の分類群は、ほとんどの細菌細胞を含みことを指している。実施例5.口腔生態系内の機能的な多様性本発明で分析された個体の口腔生態系の一部である生物の機能的な多様性を分析するために、得られたメタゲノムのシーケンスのリードをすべて、保存ドメインデータベースCDD24、サブシステムに基づいたアノテーションシステムSEEDおよびTigrFamsプロファイル25の様々なデータベースと比較した。リードの機能的なアサイメントに基づくサンプルの対応分析CoAは、3つの機能別分類システムCDD、SEEDおよびTigrFamsに同様のグループ化パターンを提供した。病気の被験体カリエスを有するからのサンプルは共に群をなし、これは類似の機能グループがこれらのメタゲノムにコードされていることを示し、カリエスに一度も苦しんでない個体からのサンプルは、わずかなカリエスを示す個体とともに、別々に分類される。大人の腸の微生物叢に対して口腔メタゲノムの機能的アサイメントを比較すると、口腔内サンプルはともに分類され、これはコードされた機能の相対的な頻度という意味で、腸と口が2つの異なる生態系であることを示す。本発明は、腸の微生物叢で大きな比率を占めるover-represented機能の単位がある一方で、口腔サンプルで大きな比率を占めるその他の機能の単位があることを明示している。口腔サンプルでは、個体は健康状態に基づいて分類される。応用の見地から、多くの機能別カテゴリーがカリエスのない個体からのサンプル内で過剰に表わされることに注目すると面白い。これらは、グラム陰性菌の競争に関与するDNA捕捉遺伝子を含み、その他はリン脂質の代謝、フルクトース及びマンノース誘導性ホスホトランスフェラーゼシステム、Streptococcusmgaレギュロン、混合有機酸発酵、菌体密度感知遺伝子及びバクテリオシン型抗微生物ペプチドに関与するそれ以外の遺伝子を含む。生物活性化合物である前記バクテリオシンは、潜在的な抗カリエス剤であり、よって本発明は、カリエスに一度も苦しんでいない個体の歯垢は、新規抗微生物物質及び潜在的な抗カリエス物質の遺伝子の貯水池であることを明示する。実施例6.カリエス性Streptococcus培地における本発明のフォスミドライブラリで得られたクローンの阻害アッセイ一度もカリエスに苦しんでいない個体からの歯肉縁上の歯垢のフォスミドライブラリが一旦得られると、異なるフォスミドインサートを持つE.coliの異なるクローンを、StreptococcusmutansまたはStreptococcussobrinusなどのカリエス性細菌の培地に植えた。一度もカリエスに苦しんでいないボランティアのフォスミドメタゲノムライブラリのレプリカを、誘導剤EpicentreTechnologiesを使用してマルチプルコピーに予め誘導したライブラリ中の各プレートの96クローンの増殖を各ペトリ皿が担保hostできるように、Nunc96ピンレポリケーターを使用して前記プレートにピンで植えた。この単純なスクリーニングを使用し、何千ものクローンの抗収率活性アッセイhigh-yieldactivityassayを限られた時間の中で行い、カリエス性微生物の上で阻害ハロを生成するクローンを選択する図1。これらフォスミドのDNA配列またはインサートは、本発明の実施例2で説明したように、寒天の中に広がり、歯のカリエスを引き起こすそれらの細菌の増殖を防ぐ分泌物質を潜在的に生成するものである。続いて、第二の活性スクリーニングを、偽陽性を取り除くために陽性クローンで行った図1B。利用可能な配列についての様々な公共のデータベースに対して各フォスミドに含まれるDNA配列の相同性を用いて、得られたクローンを同定した。各フォスミドからDNA配列を得るために、QIAGENからのmidiprepkitを使用してベクターDNAから分離し、直接シーケンシングを行うことでDNA全体を抽出した。市販のPCC1FosベクターのリバースSEQIDNO:10及びSEQIDNO:11及びT7プライマーSEQIDNO:12を使用した伝統的なサンガー技術を使って20のフォスミドの端の配列を決定した。配列を決定した20のフォスミドのうち、4つの配列が、細菌のDNAとの相同性30-98を示し、5つの他の配列が、ヒトDNAとの99-100の相同性を示した。したがって、阻害能力を示すフォスミドの端の配列の内4つは細菌由来で、5つはヒト由来である。これら二つの場合一つが細菌であり、一つがヒト、インサートはとても短い長さであると判明したので、二つの端の配列は重複し、インサートの全長が得られる。このプロセスを用いて完全に配列を決定できたヒト由来のインサートは244ヌクレオチドありSEQIDNO:1、細菌のインサートは666ヌクレオチドあったSEQIDNO:2。他の7つのインサートの配列は、パイロシーケンシングから得て、2-5のフォスミドを持つグループを用いてDNAをGenomeSequencerFLXpyrosequencerRoche及び組み合わせることによって1/16または1/8プレートの中で得た。得られた配列を、標準パラメータを使用したNewblerprogrammeRocheを用いて組み合わせ、得られたアセンブリは、以前得られたインサートの端の配列に基づいて対応するフォスミドに関連付けられる。9つのインサートの特徴を表3に示す。実施例7.短いS12E及びT5Aフォスミド内の抗微生物ペプチドの同定実施例6に述べられているように、一旦7つのフォスミドの配列が得られたならば、2つの短い長さのDNAインサートのDNA配列を分析して、3’-5’および5’-3’方向にコードされたORFをすべて得た。これらのORFのうち、我々はリボソーム結合配列を含みE.coliの16Sの3’末端に相補的な配列を持つ、それゆえに効果的に翻訳されるもの、及びシグナルペプチドが存在するためSIGNAL-IPソフトウェアを使って同定するあるいは標準的ではない分泌経路SECRETOME-Pソフトウェアを使って同定するのいずれかによって分泌できるものを選択した。前記方法を使って、ヒト由来のフォスミドT5Aから、わずか26アミノ酸の長さSEQIDNO:8の候補のORFを、細菌由来のフォスミドS12Eから、39アミノ酸の長さSEQIDNO:9のもう一つの候補のORFを得た。もっと言えば、これらの遺伝子は、抗微生物ペプチドの特徴を持つアミノ酸組成を示し、さらにヒト由来のT5Aの場合、ジスルフィド架橋を形成できる二つのシステインの存在を確認した。このことは、これらの短い配列及びこれらの正味の正電荷とともに、これらの遺伝子が生物活性の抗微生物ペプチドであることを示唆する。続いて、前記ペプチドを精製した。この目的のために、前記ペプチドを分子量に基づいて分泌された他の生成物から分離した。従って、マルチプルコピーに誘導された15mlの各クローンをブレインハートインフュージョンBHI培地で培養し、細胞を遠心し、上清を回収し、細菌の残存物を取り除くために0.2-マイクロンの孔径のMilliporeフィルターを通してろ過した。分泌された生成物を含むこの上清をAmicon10-kDMilliporeフィルターでもう一度ろ過し、ろ液をAmicon3-kDMilliporeフィルターでもう一度ろ過し、このように1mlの容積に対して3から10kDの間の画分を得た。3kDよりも小さいサイズの画分0-3kDを冷たい条件下でspeed-vacの中で1mlに濃縮した。続いて、それぞれ3-10kD及び0-3kDであるこれらの2つの画分の50-,100-及び150-μlをS.mutansの液体培地及びS.sobrinusの液体培地に加え、吸光度を48穴Fluostarルミノメーター内で、各処置を3重に行い、30分ごとに12-19時間測定した。図2及び3でみられるように、カリエス性細菌の増殖曲線は、ヒト由来のデフェンシン型の抗微生物ペプチドの場合図3、3kDよりも小さい画分がカリエス性細菌の容量依存性の阻害効果を有し、細菌由来のバクテリオシン型抗微生物ペプチドの場合、3-10kD画分がカリエス性細菌の容量依存性の阻害効果を有すること図2を示し、各フォスミドのアミノ酸配列に基づいた予想される分子量と一致した。実施例8.カリエス性細菌に対する本発明の生物活性ペプチドの阻害活性の比較アッセイバクテリオシンの阻害効果を、市販の競合品と比較するために、液体BHI培地内で同様のS.mutans増殖実験を、前述の実施例で記載したように、ただし今回はa100μlの市場での口内洗浄液の主力製品の一つ抗歯垢剤及び口内消毒剤であるListerine登録商標、bバクテリオシンを含むS12Eクローンの100μlの濃縮した上清前述の実施例で説明されたように及びc100μlのListerine登録商標バクテリオシンを含むS12Eクローンの100μlの上清を加えて行った。S.mutansの増殖に対するこの濃度100μlでのバクテリオシンの阻害効果は、この菌種への市販製品の阻害効果よりも大きく図4、さらにバクテリオシンを市販製品に加えることで、前記製品のS.mutansに対する阻害効果が著しく向上することを前記図4で観察できる。実施例9.化学的に合成されたS12E及びT5Aペプチドのカリエス性活性の分析単離した二つの阻害ペプチドSEQIDNO:8及び9の化学的な合成を、固相合成法32及び33によって行った。SPPS固相ペプチド合成によるペプチド合成は、合成的に実験室でペプチド及びタンパク質を作成するために使用される最も一般的な方法で、細菌内で発現するのが難しい天然ペプチドの合成、天然ではないアミノ酸の結合またはペプチド修飾例えばジスルフィド架橋の形成を可能にする。ヒト由来のペプチドの場合、保護基であるFmoc-Cystrt-OHは-SH基を保護するために使用され、-SH基は非常によく反応し、このペプチドにおいて比較的頻出した。ペプチドは球体に共有結合することでN末端アミノ基を遊離させたままにし、単一のN保護されたアミノ酸に結合する。この結合の次に、N保護されたアミノ酸を脱保護し洗浄した。結合、洗浄、脱保護および洗浄のサイクルを繰り返すと、ペプチド鎖が構築される。ペプチドが完成したら、試薬この場合無水のフッ化水素の追加によってペプチドが放出される。合成されたペプチドが正確なペプチドで不純物を包含していないことを確認することを目指した品質管理を、質量分析とHPLCを用いて行った。同定されたペプチドが、カリエス性細菌に対する阻害活性を担うものであることを裏付けるために、S12E細菌由来のバクテリオシン、およびT5Aデフェンシンと似た構造を持つヒト由来のペプチド化学的に合成し、前記ペプチドをそれぞれ4mg、80以上の純度で得た。それらを、0.1のトリクロロ酢酸TCA中に全て再懸濁し、前述の化学的に合成された化合物によってS.mutansの液体培地での阻害をテストするために設計した試験を行った。細菌由来のバクテリオシン型S12Eペプチドの場合、S.mutansの培地に対する阻害活性が特に高濃度で確認された図5。続いて、純度が95以上のより多くのS12Eペプチドを化学的に合成し、前述で得られた阻害効果がTCAによるものではなく、化学的に合成されたS12Eペプチド自体によることを示すために、前記ペプチドを超純水に再懸濁した。高純度の化学的に合成されたS12Eペプチドを備えたS.mutansおよびS.sobrinusの培地の処置が、S.mutans図6AおよびS.sobrinus図6Bの両方のカリエス性細菌への用量依存的な阻害効果を生むことが、もう一度見出された。T5Aペプチドヒト由来、デフェンシン型の場合、最初は阻害効果が見出されなかった。このペプチドは、ヒト抗微生物ペプチドにおいて典型的に存在する2つのシステインを含むいくつかの反応しやすいアミノ酸を有し、2つのシステイン間のジスルフィド架橋は多くの場合ペプチドが活性するために必要であるということがわかる。この理由から、前記ペプチドをもう一度合成し、システイン3と12の間にジスルフィド架橋を、合成の間反応しやすいアミノ酸を保護する。これらの修飾の後、このペプチドが様々な濃度でカリエス性細菌S.mutansの増殖を阻害できること、最大のペプチド濃度である80μgのペプチドを加えた時増殖を完全に阻害できることが確認された。実施例10.長いフォスミド内での阻害遺伝子の同定その他の潜在的な抗微生物化合物について、阻害ハロを生成する全てのフォスミドからDNAを分離し、その端とインサートの全長の配列を決定した表3。これは、抗微生物化合物抗微生物ペプチドだけではなくを生成する細菌の一覧と同時に、これらをコードするヒトゲノムの領域の一覧を得ることを可能にした。対応するクローンが生成した濃縮された上清前述の実施例で示したようにの0-3kDa,3-10kDa,10-100kDa及び>100kDaの画分をS.mutansの液体培地に加えることで、S.mutans培地上で阻害実験を行った。これらの実験は、阻害を引き起こすサイズ画分が、T9B及びT4H細菌フォスミドとW4D図8,T5H図9,A5D11図10及びA4H11図11ヒトフォスミドの0-3kDa画分、及びT1F細菌フォスミドの3-10kDa画分であることを明らかにした。したがって、これらの結果は、小さなサイズのペプチド、すなわち0-3kDaまたは3-10kDaの間の大きさを備えたペプチドによって阻害が生み出されることをもう一度示しており、この結果はそれらがバクテリオシン型またはヒトデフェンシン/カセリシジンの抗細菌ペプチドであるという事実と一致している。同様に、これらの大きさすなわち0-3kDa、場合によってまたは3-10kDaを備えたペプチドをコードするORFの探索を、前記フォスミドの配列上で行い、リボソーム結合配列を持つ遺伝子、シグナルペプチドが存在する遺伝子及び抗菌ペプチドのそれと類似のアミノ酸を使用する遺伝子及び/または他の既知の抗菌ペプチドのそれと類似の配列を持つ遺伝子及び/または疎水性の及び/または正味の正電荷の配列を持つ遺伝子が、阻害剤をコードする遺伝子である可能性がある候補として選択された。実施例11.抗カリエス細菌の同定カリエスに一度も苦しんでいない少数の成人人口の存在は、カリエス性細菌23に対する潜在的なアンタゴニスト効果を備えた菌種の存在の示唆へと導いた。健康な個体から得られた無毒な単離株との病原性菌株の細菌置換bacterialreplacementは、咽頭感染症を防ぐことが十分に証明されており、腸及び他のヒトの生態系の感染症を防ぐために設計されたプロバイオティックに基づいている。健康な被験体の口腔微生物叢に対してカリエス性細菌のメタゲノムを動員することで、S.mutans及びSsobrinusが完全に存在しないことを示す。驚いたことに、カリエス性細菌が検出されないのは、健康な個体で最も豊富な属であるStreptococcus属主にS.sanguisと類似のもの、Aggregatibacter属及びNeisseria属の他の種の非常に強い動員を伴う時であった。これら優占属の単離株がカリエス性細菌とのアンタゴニスト相互作用に関与している可能性を考え、歯垢の新鮮なサンプルを10人の健康な個体メタゲノム配列を得た2人の健康な個体を含むから採取し、Neisseria属,Rothia属及びStreptococcus属に最適な増殖条件下特に血液寒天培地、チョコレート寒天培地、ブルセラ寒天培地及びTSA培地中で、好気生活条件下及び嫌気性容器の中でで培養するのに使用した。顕微鏡検査に続いて、双球菌及び連鎖球菌を選択しStreptococcus属,Rothia属及びNeisseria属の種を見つける可能性を最大限にするため、249の単離株のセットを得た。S.mutansおよびS.sobrinusと同じ培地中で増殖することができたものは、前述のカリエス性細菌がある状態でローン培地に移した。この単純なスクリーニングによって、阻害ハロを持つ16の株を同定した図12および13。16SrRNAのPCR技術及びシーケンシングを用いて、ほとんどの前記株が、S.oralis,S.mitis及びS.sanguis種あるいは他の関連する種と96-99の配列同一性を示す、Streptococcus属の種に属すると同定され、Rothia種でも16S遺伝子でR.mucilaginosa種と100配列同一性を持つと同定された。S.mutans及び/又はS.sobrinusに対する阻害ハロを示した株は、割り当てられた番号CECT7746、CECT7747、CECT7773、CECT7774およびCECT7775として、CECTに寄託した。前に議論したように、CECT7746、CECT7747、CECT7773およびCECT7775菌株は、同じStreptococcus属に属し、したがってそれらを得る方法に加えて、同じ細菌の属に属するので、構造分類の類似性を共有する。具体的には、16Sリボソーム遺伝子配列に基づいて、細菌の属であるStreptococcus属に属する前述の株は、S.mitisCECT7746およびCECT7775種およびS.oralisCECT7747およびCECT7779種に似ている。株CECT7746および7747の完全なゲノムの配列決定することで、これらがStreptococcus属の新しい種であり実施例12参照、異なる個体から来たにも関わらずこれらは姉妹株であり、さらにS.mitis/oralis/infantisの種クラスタに属することを明らかにする。CECTに寄託した別の菌株は、CECT7774番で、Rothia属に属し、より明確にはR.mucilaginosa種に属する。カリエス性種S.mutansまたはS.sobrinusの培地に対する阻害ハロは、図12及び13でそれぞれ観察される。実施例12.菌株CECT7746及びCECT7747の特徴づけ菌株CECT7746及びCECT7747の特徴づけを様々な技術を用いて行った。最初に、これらの2つの菌株の完全なゲノムを、ショットガン7、8及びペアーエンドパイロシーケンシングを用いて得た;これらの2つの末端の間の既知の長さが配列のアセンブリを助けるように、後者は、約3000のヌクレオチドのフラグメントへとDNAを破壊し、各末端からおよそ200のヌクレオチドの配列を決定することから成る。各菌株CECT7746及びCECT7747の完全なゲノムを得るために、我々は、前記菌株の各培地からサンプルを採取することから始めた;具体的には、ショットガンシステム7,8を用いた、RocheTitaniumChemistryからのGS-FLXパイロシーケンサーを用いて、4分の1の培養プレートをパイロシーケンス実験のために使用し、ペアーエンドシステムを用いて、別の4分の1の培養プレートをパイロシーケンス実験のために使用した。両方のシステムを用いて各菌株について得られた配列量は次の通りである:菌株7746ショットガンタイプ:合計165,105,921のヌクレオチドを備えた441.549のリード。ペアーエンドタイプ:合計32,721,622のヌクレオチドを備えた187.530のリード。菌株7747ショットガンタイプ:合計5,711,998のヌクレオチドを備えた28.021のリード。ペアーエンドタイプ:合計51,501,510のヌクレオチドを備えた305.826のリード。各菌株の予想されたゲノムサイズは約2.1Mbであった。菌株CECT7746については、500pbよりも大きいアセンブリの大きさは、2,122,087pbである。菌株CECT7747の場合には、500pbよりも大きいコンティグの大きさは、1,953,989pbである。発明者が標準的なパラメータで適用したNewblerソフトウェアRocheを用いて、配列をフィルター処理し、アセンブリすることで、菌株CECT7746の500pbよりも大きい合計109のアセンブリ、及び菌株CECT7747の合計51のコンティグを得た。続いて、前記ゲノムを自動的にアノテートすることで、前記菌株CECT7746及びCECT7747の完全なゲノム配列を得た。菌株CECT7746及びCECT7747の完全なゲノムを一旦得ると、細菌の系統樹を作成する際に最も普及している、16S及び23SrRNA遺伝子の完全な配列に基づいて得られた系統樹を基に、前記分離株を分類学的にアサインした。16Sと23SrRNA遺伝子の配列を一緒に結合することによって、4,000のヌクレオチドよりも大きい、単一のフラグメントを得、これまでに配列が決定されたStreptococci種の同じフラグメントを一緒に並べたalign。配列を、16S及び23S遺伝子を別々に並べ、MAFFTフリーコンピューターソフトウェアを用いてその配列を一列に並べ、続いて、前述のアラインメントを一緒に結合する。その後、そのアラインメントを、GBlocksフリーコンピューターソフトウェアを用いて精製することで、保存された情報価値のある位置を選択する。500の繰り返しrepeatsを用いたmaximumverisimilitudemethodを利用する、RAxMLプログラムを使用して、前記系統樹を得る。得られた系統樹は、異なる個人に由来し、さらに種のS.mitis/oralis/infantisクラスタに属するにも関わらず、両方の菌株が姉妹株であることを示し、系統樹のトポロジーは、両方の菌株が新しく、記載されていなかった種に属する菌株であることを示す。前記2つの菌株が、異なる種に属するかどうかを決定するために、ANI平均ヌクレオチド同一性を使用した。配列が決定された株のゲノムを比較する場合、ヌクレオチドのレベルで同じ種の相同遺伝子間の類似性の平均は、95よりも大きい34及び35。実際に、分類学者は、この95のANI値を、別々の細菌の単離株が異なる種に属する限界として認めており、また、DNA-DNAハイブリダイゼーション値36において古典的な70の閾値の代わりとして認めている。J-speciesフリーコンピューターソフトウェアを用いて本発明のCECT7746及びCECT7747の2つの配列が決定された菌株の間のANI値を決定し、配列が決定された残りのStreptococciは、2つの菌株が今のところ、記載されていなかった新たな種に属していることを示した。本発明CECT7746の菌株の場合、95の閾値より高い類似性を有する菌株はなく、本発明CECT7747の菌株の場合、配列が決定された別の菌株、StreptococcusM143のみが、前記閾値を超える。前記菌株M143は、ゲノムのドラフト配列があるにも関わらず、種として分類的に記載されていない。ANIを計算するために使用した結果は、Mummer及びBlast36の2つの異なる方法論を用いて得られ、両方の方法論はほとんど同一の結果を示した。実施例13.本発明で開示されているCECT7746及びCECT7747菌株の培地から得られる上清が存在する中でのカリエス性細菌である、S.mutansの阻害アッセイ本発明の2つの菌株、CECT7746及び7747を37°Cの温度で、BHI培地内で増殖させ、その次に、指数増殖期と定常期に、培地の上清を集め、0.2ミクロンのフィルターに通して濾過し、任意の細菌の残留物を除去した。続いて、本発明で示される、前の実施例で述べたように、100、10及び3kDaAmicon、Milliporeの孔サイズを備えた膜を用いて、遠心分離することで、前述の上清をもう一度濾過した。S.mutansの細菌培地の増殖の阻害をもたらす、増殖の定常期で回収した各菌株CECT7746及び7747から得られた上清の画分を、試験菌株、CECT7746図14A及びCECT7747図14Bの両方のために、3kDaよりも小さなサイズの画分に濃縮した。前記結果は、カリエス性種に対する特定の殺菌効果を示す、前記菌株により合成された阻害物質が、バクテリオシンの場合のように、好ましくは、3kDa未満の小さなサイズでなければならないことを表す。これに対して、増殖の指数増殖期に回収した本発明のCECT7746及び7747の菌株の培地の上清のサンプルで、同じ実験を行った際には、S.mutansの細菌培地の増殖の阻害は観察されなかったが図15、このことは、本発明の菌株の細菌増殖の定常期においてのみ、阻害剤が生成されることを示す。3kDaよりも小さい、定常期で得られた上清を濃縮したサンプルを、10分間100°Cの温度にさらした際、S.mutansの培地上での前記上清の阻害活性が維持され、むしろ増加したことが確認された図16。これらの結果は、小さいサイズであるバクテリオシンが極めて熱に安定であって、その集合体を熱ショックによって溶解させた後の方が培地中により溶出し、むしろ抗菌効果を増加させることから、阻害剤がバクテリオシンであって、その他のタイプのペプチドでないという事実と一致する。続いて、S.mutansの培地に対する阻害アッセイを、本発明CECT7746及びCECT7747の菌株の培地から得られた上清で、ただし、前記カリエス性のバクテリアの培地の接種の濃度と増殖温度を修正して行うことにより、前記修正が本発明の菌株の上清の阻害活性に何らかの効果があるか否かを確認した。最初に、培養プレートにS.mutansカリエス性細菌を植え、また、24時間が経過した後、本発明の菌株を同じ培養プレート内に植えた。時間が経過した後、阻害ハロは観察されなかった。これに対して、培養プレートに両方の菌株を同時に植えた時、我々が以前に示したように、S.mutansの増殖の阻害が観察された。本発明CECT7746及び7747の菌株を最初に植え、24時間後、S.mutansの菌株を植えた時、S.mutansの培地の増殖の最も大きな阻害が観察され、このことは、カリエス性細菌の増殖前に阻害剤又は阻害物質がより高い濃度で存在することを示し、さらに、前記細菌の存在は、本発明の菌株による阻害剤の生成を活性化させるのに必要ではないことを示す。続いて、定常期の液体培地に、最初に本発明の菌株を一滴の培地で植え、次にS.mutansの異なる温度:30°C、33°C及び36°Cでのタペストリー培養tapestrycultureにより、カリエス性細菌の増殖に対する阻害実験を、固形培地の中で行った。S.mutansの増殖の阻害は、30°Cの温度で観察されなかったが、33°Cで観察され、それは実際、36°Cで得られたS.mutansの増殖の阻害より大きかった。実施例14.好気生活と嫌気生活の条件下で、本発明CECT7746及びCECT7747の菌株の培地から得られた上清の存在する中で培養された、カリエス性細菌である、S.mutansに対する阻害アッセイカリエス性細菌の増殖に対する本発明の菌株の阻害作用が、好気生活又は嫌気生活によって修正されるか否かを決定するために、固体のBHI培地に、嫌気ジャー内で12時間、定常期において、液体培地で、本発明の菌株を一滴の培地で最初に植え、次に37°CでS.mutansのタペストリー培養tapestryculture、又は37°CでS.mutansを一滴の培地で植えることにより、阻害試験を行った。両方の実験の結果は、嫌気条件で、特に菌株CECT7746において、S.mutansの成長の阻害が非常に低いことを示した図17。したがって、前述の結果は、本発明の菌株が、カリエス性細菌に及ぼした阻害が歯垢の形成の好気的な段階の間、すなわち、歯垢の接着及び歯の上のバイオフィルムの最初の形成の期間中に、より有効であることを実証する。実施例15.人工歯モデルにおけるそのバイオフィルム上の細菌の菌株CECT7746及びCECT7747並びにそれらの上清の抗カリエス性効果本発明で開示された菌株の抗カリエス性効果を実証するために、酸の生成に対する阻害アッセイを、人工歯モデルにおけるバイオフィルム上で菌株CECT7746及びCECT7747で行った。前記実験を、AcademicCenterforDentistryAmsterdamACTA、AmsterdamのActiveAttachmentバイオフィルムモデル上で行った。前記バイオフィルムモデルは、ExterkateRAetal.37に記載された。簡潔には、プロバイオティック菌株が存在する又は存在しない、あるいはその上清が存在する又は存在しない、高い割合のS.mutans4より高いを有するボランティアのヒトの唾液を、ヒドロキシアパタイトディスク又はガラスディスクに接種する。本アッセイでは、Streptococcusmitis/oralis/infantisグループの種に属し、カリエスを有さない個体から得た、カリエス性種の増殖の阻害をもたらさないため陰性対照としてふるまう、分離株C7.1とともに、本発明で開示された菌株CECT7746及び7747を試験する。ヒトの唾液を、-80°Cで保管する。プロバイオティック菌株CECT7746及び7747、ならびに対照菌株C7.1を、およそ4×108cfuColony-FormingUnitsの培養密度が得られるまで、スクロースを備えたBHI培養培地で、12時間増殖させる。続いて、唾液サンプルを、本発明のプロバイオティック菌株CECT7746又は7747の接種菌液と、又は対照菌株C7.1の接種菌液と50で混合し、グラスディスク上に適用した。好気生活及び嫌気生活の下で、調整済の人工唾液培地38内で、バイオフィルムを48時間形成し、一旦形成すると、酸の生成を測定するために、0.2のグルコースを包含しているシステインペプトン水Sigma-Aldrich、StLouis、USA中で、37°Cの温度で3時間インキュベートする。このインキュベーション期間に菌株は酸を生成し、それを発色反応を用いて測定する:バクテリアの代謝を止めるために、前記バイオフィルムをエッペンドルフチューブに移し、80°Cの温度で5分間インキュベートする。PhamLCetal.38によって開示されているプロトコルに従って、SpectraMaxM2分光光度計MolecularDevices,USAを用いた比色アッセイを用いて、L-乳酸の量を酵素的に決定する。対照菌株C7.1と同時に、本発明の菌株CECT7746及び7747の上清による酸の生成の阻害を分析するために、まず、前記菌株の培地の上清を得た。この目的のために、前記菌株の培地を、12時間BHI培地内で増殖させた。続いて、細菌細胞を、遠心分離と、その後に続く0.2ミクロンの大きさを備えた孔を通した濾過によって除去した。培地を、Amicon100-、10-、及び3-kDaUltra膜Milliporeを通して濾過する。3kDaより小さい画分を、ロタバパー内でのその体積の半分に濃縮し、50で唾液サンプルと混合した;続いて、プロバイオティクスの場合のように、酸の産生を測定できるようにするために、バイオフィルムを48時間形成し、0.2のグルコースを包含するBufferedPeptoneWater培養培地38内で3時間インキュベートする。それぞれの処置を、好気生活及び嫌気生活の下で、4重に繰り返す。分析した実験グループは次のとおりであった:1.唾液接種菌液で形成したバイオフィルム。2.唾液接種菌液CECT7746で形成したバイオフィルム。3.菌株CECT7746で形成したバイオフィルム。4.唾液接種菌液CECT7747で形成したバイオフィルム。5.負荷CECT7747で形成したバイオフィルム。6.唾液接種菌液非阻害Streptococcus菌株菌株C7.1で形成したバイオフィルム。7.唾液接種菌液活発な阻害物質を包含した菌株CECT7746の上清で形成したバイオフィルム。8.唾液接種菌液活発な阻害物質を包含した菌株CECT7747の上清で形成したバイオフィルム。9.唾液接種菌液非阻害菌株菌株C7.1の上清で形成したバイオフィルム。10.非阻害Streptococcus菌株菌株C7.1で形成したバイオフィルム。結果を図18に表し、それは、菌株CECT7746実験グループ3又はCECT7747実験グループ5単独で形成された単一特異的なバイオフィルムが、唾液単独で形成された単一特異的なバオイフィルム実験グループ1よりも著しく低い量の酸を生成することを示す。参照値としてヒトの唾液実験グループ1をとると、菌株CECT7747実験グループ8の上清は、好気生活と嫌気生活の両方の下で、酸の生成を著しく減少させたが、他方で、菌株CECT7746実験グループ7の上清は、嫌気生活の下でのみ、バイオフィルムによって生成される酸の量を減少させた。菌株CECT7747のバイオフィルムへの追加は、好気生活と嫌気生活の両方の下で、酸の生成を減少させ、他方で、菌株CECT7746のバイオフィルムへの追加は、好気生活の下でのみ、減少を引き起こした。特に菌株CECT7747及びその上清の場合には、微生物が食物として摂取された糖を発酵させる際に、後者が微生物による酸の生成によって形成されるので、酸の減少は、歯のカリエスの処置及び予防には非常に適切である。酸性pHは明確にエナメルを脱ミネラル化し、カリエスを生成するものであるため、mutansのグループに由来するStreptococciだけでない、任意の酸生成の種が、潜在的にカリエス性であり得る2。したがって、酸生成における減少は、プロバイオティック菌株又はその上清による処置の効果全体が酸の減少であり、その結果として、カリエスの進行のより低い可能性を示すものである。"