弱毒化第1パルボウイルスから入手可能なDNA配列を含む弱毒化組換えパルボウイルスであって、該第1パルボウイルスのカプシドタンパク質またはその断片をコードするDNAが、第2パルボウイルスから誘導可能なカプシドタンパク質またはその断片により置換されている、弱毒化組換えパルボウイルス。弱毒化第1パルボウイルスから入手可能なDNA配列が実質的に完全長である、請求項1記載の組換えパルボウイルス。該第2パルボウイルスからのカプシドタンパク質が実質的に完全長である、請求項1または2記載の組換えパルボウイルス。該パルボウイルスが、イヌパルボウイルス、ネコパルボウイルスおよびブタパルボウイルスからなる群から選択される、請求項1~3のいずれか1項記載の組換えパルボウイルス。該第1パルボウイルスが2型イヌパルボウイルスであり、および/または該第2パルボウイルスが2c型イヌパルボウイルスである、請求項1~4のいずれか1項記載の組換えパルボウイルス。請求項1~5のいずれか1項記載の組換えパルボウイルスと医薬上許容される担体とを含む、パルボウイルスによる感染に対する動物の防御のためのワクチン。a.カプシドタンパク質をコードしない少なくとも1つのDNA断片を弱毒化第1パルボウイルス株から得、b.カプシドタンパク質をコードする少なくとも1つのDNA断片を第2パルボウイルス株から得、c.パルボウイルスに許容性である細胞を、工程aおよびbで得られたDNA断片でトランスフェクトし、d.それらのDNA断片を組換え、e.該第1パルボウイルスのゲノムの遺伝的コンテクストにおいて該第2パルボウイルスに由来するウイルスカプシドタンパク質をコードする弱毒化組換えウイルスを選択し、f.細胞培養内でパルボウイルスの産生を可能にする条件下で該細胞を培養し、g.該細胞培養から該組換えパルボウイルスを得る工程を含む、請求項1~5のいずれか1項記載の組換えパルボウイルスの入手方法該パルボウイルスが、イヌパルボウイルス、ネコパルボウイルスおよびブタパルボウイルスからなる群から選択される、請求項7記載の方法。該第1パルボウイルスがイヌパルボウイルス2型株であり、該第2パルボウイルスがイヌパルボウイルス2c型株である、請求項8記載の方法。パルボウイルスによる感染に対する動物の防御のための、請求項6記載のワクチンの使用。該パルボウイルスがイヌパルボウイルス、特にイヌパルボウイルス2c型である、請求項10記載の使用。組換えウイルスの作製商業的に入手可能なNobivacParvoCIntervetSchering-PloughAnimalHealthから株154attを得た。株Jessは2c型ウイルスの野外分離体であった。5ウシ胎児血清を含有するM6B8培地を使用して、付着性イヌまたはネコ腎細胞例えば、A72およびCrFK上でウイルスを増殖させた。標準的なヒルトHirt法McMasterら1981の変法を用いて、感染細胞培養から複製形態RFDNAを調製した。154att株から調製されたRFDNAを制限酵素PstIで消化し、該断片をアガロースゲル電気泳動により分離した。3055塩基対bpのバンドCPVの左側末端に対応するを該ゲルから切り出し、QiagenQiaquickゲル抽出カラムを使用して精製した。CPVJess感染細胞から分離されたRFDNAを制限酵素XmnIで消化した。再び該DNA断片をアガロースゲル電気泳動により分離し、ついで、QiagenQiaquickゲル抽出カラムを使用して約2750bpのバンドカプシド配列を含むCPVの右側末端に対応するを精製した。154attおよびJessからの精製3055bpおよび2750bp断片を合わせ、培養内のA72またはCrFK細胞内にトランスフェクトした。トランスフェクションは、約3μgの各断片と共にLipofectamine2000Invitrogenを該製造業者の説明に従い使用して行った。トランスフェクション後、細胞を継代し、赤血球凝集HAアッセイによりモニターした。継代4においてウイルスがHAにより検出された。ハイブリッドウイルスのDNA配列決定を、RFDNAまたはPCR断片鋳型を使用する標準的なDNA配列決定法を用いて行った。ウイルスを付着性感受性イヌまたはネコ細胞上で限界希釈により精製したクローン化ウイルスDNAから構築された組換えウイルス組換えウイルスをクローン化断片から作製した。ウイルス株154attのゲノムを標準的なクローニングベクターpBluescriptStratageneinc.内にクローニングした。回文末端配列を完全なままに維持するために、幾つかの組換え系が欠損している細菌宿主DL795内で該プラスミドを増殖させた。パルボウイルスゲノムのクローニングは文献に記載されており、要求される技術は当業者に公知である。154attの得られたクローンp154を制限酵素PacIで消化した。この場合、該消化が完全には進行しないように、すなわち、該制限酵素消化が部分的のみとなるようにした。ついで該消化断片を制限酵素XmnIでの消化に付した。ついで該消化DNA断片をアガロースゲル電気泳動により分離し、後記図に示されている断片を該ゲルから切り出し、QiagenQiaquickゲル抽出カラムを使用して精製した。XmnIおよび右側Pac部位は該パルボウイルスゲノム内のカプシド領域に隣接している。154attのカプシド遺伝子を以下のとおりにCPVのビルレント株のカプシド遺伝子により置換した。図2に示されているXmnI部位および右側PacIはカプシド遺伝子の境界の外側に位置する。PacI部位と該カプシド遺伝子の末端との間の約110bpの配列は154att株とビルレント分離体とで有意に異なる。XmnI部位と該カプシド遺伝子の開始部位との間の短い配列~55bpにおける配列変化は未だ示されていない。したがって、成分の置換を該カプシド配列のみに限定するために、該ビルレントCPVカプシド配列を化学合成し、PacI部位とカプシド終止シグナルとの間のワクチン特異的配列を維持させた。以下に、CPVカプシド遺伝子を含有する化学合成配列を示す。以下に示す配列は本明細書においては配列番号1として記載されている。XmnIおよびPacI部位が下線で示されている。カプシドコード領域の終止コドンTAAが示されている。カプシドVp1/Vp2コード配列が太字で示されている。該合成断片を、酵素XmnIおよびPacIを使用してそれが付与されたプラスミドから遊離させ、ついでそれを、図3に示されている断片に連結した。標準的な方法を用いて、コンピテント大腸菌E.coli株DL795を該連結混合物で形質転換し、該組換えプラスミドを含有する細菌を単離し、同定した。ついで、該クローン化大腸菌E.coliから、後記図4に示されている生じたプラスミドp1542cを調製した。以下のとおりにハイブリッドウイルスを調製した。プラスミドp1542cDNAを培養内のA72またはCrFK細胞内にトランスフェクトした。トランスフェクションは、約3μgのDNAと共にLipofectamine2000Invitrogenを該製造業者の説明に従い使用して行った。トランスフェクション後、細胞を継代し、赤血球凝集HAアッセイによりモニターした。継代4においてウイルスがHAにより検出された。ハイブリッドウイルスのDNA配列決定を、RFDNAまたはPCR断片鋳型を使用する標準的なDNA配列決定法を用いて行った。ウイルスを付着性感受性イヌまたはネコ細胞上で限界希釈により精製したインビボ試験ワクチン接種されていない母イヌから生まれたしたがって、CPVに対する母体由来抗体を欠いているワクチン接種されていない6週齢のSPF子イヌの3つの群に、2/2cハイブリッドウイルス、および親ウイルス2型ワクチンおよび2c型野外ウイルスのそれぞれを接種した。動物を臨床的に監視し、血液サンプルを採取した。群1は、2型CPVを含む通常のIntervetワクチンであるParvoCで皮下ワクチン接種された5匹のイヌを含んでいた。群2は、新規ハイブリッド2/2cワクチンで107.5TCID50/mlで皮下ワクチン接種された5匹のイヌを含んでいた。群1のイヌは、2型ウイルスに対する特異的抗体の、該ハイブリッドの場合より高い力価を示すことが判明した。これに対して、群2のイヌは、該ハイブリッドウイルスに対する血清中和SN力価、および赤血球凝集抑制HAIの、より高い力価を示した。したがって、該ハイブリッドウイルス株は、通常の2型ウイルス株に関する適度な防御を維持する一方で、CPV2c型による感染に対する防御の改善をもたらすと結論づけられうる。既存ワクチンが接種されたイヌはいずれも、疾患の徴候を示さなかったが、野外ウイルスが接種された対照イヌは重篤な出血性腸炎を示す。したがって、本発明者らは、驚くべきことに、CPVにおける主要な弱毒化突然変異がカプシドタンパク質遺伝子の外部に位置することを見出した。安全性試験母体由来抗体MDAを有する子イヌにおける2/2cハイブリッドウイルスの安全性を調べるための研究を行った。ワクチン接種された全ての子イヌは該研究の全体にわたって完全に正常なままであった。更に、該ハイブリッドウイルスでワクチン接種されたイヌは良好な血清学的応答を示した。このことは、該ハイブリッドウイルスが通常レベルのMDAを打ち破ることこれは、有効なイヌパルボウイルスワクチンの必須要件であるが可能であったことを示している。