"明細書に記載の方法。本発明は、上記課題の解決を意図するものである。本発明の目的は、単子葉植物のアグロバクテリウム形質転換法を改良し、従来法よりも迅速な形質転換方法を提供することにある。本発明の方法によれば、従来のアグロバクテリウム形質転換法よりも効率良く、はるかに迅速に、形質転換植物を作出することが可能である。本発明者らは、従来の知見に反して、植物成長因子存在下で1~3日間培養した単子葉植物の種子に対して、アグロバクテリウムを介した形質転換が可能であることを見出すことによって、本発明を完成した。従って、本発明は以下を提供する。1.単子葉植物の形質転換方法であって、所望の組換え遺伝子を含むアグロバクテリウムで、単子葉植物の種子を感染する工程を包含し、ここで、該種子は植物成長因子を含む培地に播種後1~3日間前培養して発芽させた発芽種子である、方法。2.前記種子が無傷の種子である、項目1に記載の方法。3.前記植物成長因子がオーキシンである、項目1に記載の方法。4.前記植物成長因子が2,4-Dである、項目1に記載の方法。5.前記単子葉植物が、イネ科植物である、項目1に記載の方法。6.前記イネ科植物が、イネである、項目5に記載の方法。本発明は、単子葉植物の形質転換方法に関し、所望の組換え遺伝子を含むアグロバクテリウムで、無傷の種子を感染する工程を包含する。本発明の方法において、種子は、無傷の状態で感染され、形質転換しようとする植物試料のカルスを調製するなどの処理は必要とされない。アグロバクテリウムでの感染に供される種子は、播種後1~3日目の種子であり得る。また、感染の時点で、種子は、発芽した状態であり得る。形質転換される単子葉植物は、好ましくはイネ科植物であり、より好ましくはイネOryzasativaL.である。イネは、インディカ種であっても、ジャポニカ種であってもよい。本発明によれば、改良された、アグロバクテリウムを介した単子葉植物の形質転換方法が提供される。本発明の方法においては、形質転換を意図される植物の無傷の種子が、所望の組換え遺伝子を含むアグロバクテリウムで感染される。本発明の使用により、より効率良く、そしてより迅速に、形質転換植物を作出することが可能となる。以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書定義を含めてが優先する。用語の定義以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。本明細書において使用する場合、植物成長因子とは、植物細胞の成長を促進する因子をいう。植物成長因子としては、オーキシン、ジベレリン、サイトカイニン、および他の植物ホルモンが挙げられるが、これらに限定されない。オーキシンとしては、2,4-D、インドール酢酸IAAが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法が適用される植物は、単子葉植物である。好ましい単子葉植物としては、イネ科植物例えば、イネおよびトウモロコシが挙げられる。本発明の方法が適用される最も好ましい植物は、イネであり、特に、ジャポニカイネである。また植物は、特に他で示さない限り、植物体、および植物体から得られる種子を意味する。植物発現用ベクターの作製単子葉植物に所望の組換え遺伝子を導入するために、所望の組換え遺伝子を含む適切な植物発現用ベクターが構築される。このような植物発現用ベクターは、当業者に周知の遺伝子組換え技術を用いて作製され得る。アグロバクテリウム形質転換法において使用するための植物発現用ベクターの構築には、例えば、pBI系またはpPZP系のベクターが好適に用いられるが、これらに限定されない。所望の組換え遺伝子は、植物に導入されることが所望される任意のポリヌクレオチドをいう。本発明における所望の組換え遺伝子は、天然から単離されたものに限定されず、合成ポリヌクレオチドも含み得る。合成ポリヌクレオチドは、例えば、配列が公知の遺伝子を、当業者に周知の手法によって合成または改変することにより入手し得る。本発明における所望の組換え遺伝子としては、例えば、形質転換される植物において発現が所望される、その植物に対して内因性または外因性である任意のポリヌクレオチド、および植物においてある内因性遺伝子の発現制御が所望される場合の、その標的となる遺伝子のアンチセンス配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。植物において発現が意図される場合、所望の組換え遺伝子は、自己のプロモーターすなわち、天然において該遺伝子が作動可能に連結しているプロモーターを作動可能な様式で含むか、または自己のプロモーターを含まない場合もしくは自己のプロモーター以外のプロモーターをさらに含むことが所望される場合、任意の適切なプロモーターと作動可能に連結される。使用され得るプロモーターとしては、構成的プロモーター、および植物体の一部において選択的に発現するプロモーター、ならびに誘導性のプロモーターが挙げられる。植物発現用ベクターにおいて、さらに種々の調節エレメントが宿主植物の細胞中で作動し得る状態で連結され得る。調節エレメントは、好適には、選抜マーカー遺伝子、植物プロモーター、ターミネーター、およびエンハンサーを含み得る。使用される植物発現用ベクターのタイプおよび調節エレメントの種類が、形質転換の目的に応じて変わり得ることは、当業者に周知の事項である。選抜マーカー遺伝子は、形質転換植物の選抜を容易にするために使用され得る。ハイグロマイシン耐性を付与するためのハイグロマイシンフォスフォトランスフェラーゼHPT遺伝子、およびカナマイシン耐性を付与するためのネオマイシンフォスフォトランスフェラーゼIINPTII遺伝子、およびビアラフォス耐性を付与するためのフォスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼPAT遺伝子のような薬剤耐性遺伝子が好適に用いられ得るが、これらに限定されない。植物プロモーターは、選抜マーカー遺伝子に作動可能に連結される、植物で発現するプロモーターを意味する。このようなプロモーターの例としては、カリフラワーモザイクウイルスCaMVの35Sプロモーター、およびノパリン合成酵素のプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。ターミネーターは、遺伝子のタンパク質をコードする領域の下流に位置し、DNAがmRNAに転写される際の転写の終結、およびポリA配列の付加に関与する配列である。ターミネーターの例としては、CaMV35Sターミネーター、およびノパリン合成酵素遺伝子のターミネーターTnosが挙げられるが、これらに限定されない。エンハンサーは、目的遺伝子の発現効率を高めるために用いられ得る。エンハンサーとしては、CaMV35Sプロモーター内の上流側の配列を含むエンハンサー領域が好適である。エンハンサーは、1つの植物発現用ベクターあたり複数個用いられ得る。植物の形質転換単子葉植物の形質転換に用いられるアグロバクテリウムは、任意のアグロバクテリウム属細菌であり得、好ましくはAgrobacteriumtumefaciensである。アグロバクテリウムは、所望の組換え遺伝子を含む植物発現用ベクターで例えば、エレクトロポレーションによって形質転換される。形質転換されたアグロバクテリウムで種子を感染することにより、所望の組換え遺伝子を植物に導入し得る。導入された組換え遺伝子は、植物中のゲノムに組み込まれて存在する。なお、植物中のゲノムとは、核染色体のみならず、植物細胞中の各種オルガネラ例えば、ミトコンドリア、葉緑体などに含まれるゲノムを含んでいう。形質転換が意図される植物の種子は、籾殻を除去した後、無傷の状態で前培養される。種子に関して無傷とは、種子が、胚珠を除去すること、および胚盤を傷つけることなどの人為的な操作を受けていない状態であることをいう。前培養において、種子は、適切な濃度のオーキシン例えば、2,4-Dを含む培地例えば、N6D培地に播種されて、代表的には1日~3日間、保温され得る。このときの温度は、代表的には25~35°C、好ましくは27~32°Cである。前培養の完了後、種子は殺菌され、次いで水で十分に洗浄される。次いで、種子は、無菌操作下で、形質転換されたアグロバクテリウムで感染され得る。アグロバクテリウムでの感染共存培養の間、種子は、暗黒下で、代表的には2日間~5日間、好ましくは3日間、保温される。このときの温度は、代表的には26~28°C、好ましくは28°Cである。次いで、種子は、培地中のアグロバクテリウムを除菌するために、適切な除菌剤例えば、カルベニシリン、クラフォランによる処理に供される。形質転換された種子が、選抜マーカー例えば、ハイグロマイシン耐性などの薬剤耐性を基準として選抜される。適切な除菌条件および選抜条件下での培養後、選抜された形質転換種子は、適切な植物調節物質を含む再分化培地例えば、MS培地に移され、適切な期間、保温され得る。植物体を再生するためには、再分化した形質転換体は、発根培地例えば、植物調節物質を含まないMS培地に移される。根の発育が確認された後、形質転換体は、鉢上げされ得る。植物に導入された所望の組換え遺伝子は、植物において意図される目的例えば、目的とされる新たな形質の発現、またはある内因性の遺伝子の発現の制御のために作用し得る。所望の組換え遺伝子が植物に導入されたか否かは、当業者に周知の手法を用いて、確認され得る。この確認は、例えば、ノーザンブロット解析を用いて行い得る。具体的には、再生した植物の葉から全RNAを抽出し、変性アガロースでの電気泳動の後、適切なメンブランにブロットする。このブロットに、導入遺伝子の一部分と相補的な標識したRNAプローブをハイブリダイズさせることにより、目的の遺伝子のmRNAを検出し得る。あるいは、所望の組換え遺伝子の導入によって、植物における内因性遺伝子の発現制御が所望される場合、標的となる内因性遺伝子の発現を、例えば、上記のノーザンブロット解析を用いて、試験し得る。標的となる内因性遺伝子の発現が、非形質転換のコントロール植物におけるその発現に比べて有意に抑制されている場合、所望の組換え遺伝子は植物に導入され、そして発現の制御に作用したことが確認される。従来の方法は、アグロバクテリウムでの感染の前に、通常、3~4週間の脱分化誘導期間を必要とする。対照的に、本発明の方法は、脱分化を誘導する工程を必要としないので、形質転換単子葉植物を作出するために必要な日数を短縮することが可能である。さらに、本発明の方法によれば、従来法における選抜に要する期間を短縮することも可能となり、培養変異の影響を低減することが可能となる。本発明の方法の好ましい1つの実施態様において、形質転換単子葉植物を作出するために必要とされる日数は約32日であり、従来のアグロバクテリウム形質転換方法例えば、下記実施例2を参照において必要とされる日数約90日の約3分の1程度である。また、本発明の方法によれば、日本晴の種子の場合で、10~15の形質転換効率が得られる。どんとこい、キタアケなどの他のイネ品種でも同程度に高い形質転換効率が達成可能である。従って、本発明の方法を使用することによって、従来の形質転換法よりも効率良く、および迅速に、形質転換植物を作出することが可能である。以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。以下に実施例を挙げて、本発明を具体的に説明する。この実施例は、本発明を限定するものではない。実施例で使用した、材料、試薬などは、他に特定のない限り、商業的な供給源から入手可能である。実施例1:本発明の方法によるイネ植物の形質転換材料ジャポニカ品種である日本晴を材料に以下の方法によって形質転換を行った。種子の滅菌70エタノールで30秒、続けて2.5次亜塩素酸ナトリウム溶液で20分間滅菌した後、滅菌水で洗浄した。ベクター形質転換細胞を選抜するマーカー遺伝子であるハイグロマイシン耐性遺伝子と、形質転換細胞のレポーターとなるGFPGreenFluorescentProtein遺伝子をT-DNA上に有するバイナリーベクターpCAMBIA1390-sGFP図1をAgrobacteriumtumefaciensEHA105菌に形質転換し実験に用いた。アグロバクテリウムを感染させるイネ種子の前培養滅菌したイネの種子を、2,4-Dを含むN6D培地Toki、PlantMolecularBiologyReport、1511997に置床し、30°C明条件下で1~3日間前培養しアグロバクテリウムによる感染に供した。N6D培地の組成は、以下のとおりである:30g/lスクロース、0.3g/lカザミノ酸、2.8g/lプロリン、2mg/l2,4-D、4g/lゲルライト、pH5.8。アグロバクテリウムの感染上記の様に1~5日間前培養したイネ種子をそのままアグロバクテリウム菌液に浸せきした後、2N6-AS培地Hieiら、ThePlantJournal199462、271-282に移植し、暗黒下28°Cで共存培養を行った。2N6-AS培地の組成は、以下のとおりである:N6の無機塩類及びビタミン類ChuC.C.1978;Proc.Symp.PlantTissueCulture,SciencePressPeking,pp.43-50、1g/lカザミノ酸、2mg/l2,4-D、30g/lショ糖、2g/lゲルライト、アセトシリンゴン20mg/ml。なお、アセトシリンゴンは、10~40mg/mlの濃度を用いた場合でも、同様の結果が得られた。除菌及び形質転換カルスの選抜共存培養の完了後、500mg/lカルベニシリンを含有するN6D液体培地を用いてアグロバクテリウムを前培養した種子から洗い流した。次いで形質転換した細胞を選抜するために形質転換処理種子を薬剤として50mg/lハイグロマイシン及び500mg/lカルベニシリンを含有するN6D培地選抜培地に置床した。選抜培地上における形質転換細胞の出現は、置床後のカルスの出現および増殖、ならびにレポーター遺伝子GFPの発現を指標に評価した。形質転換体の再分化選抜培地に置床後2週間目に、選抜培地上で増殖の見られたカルスを再分化培地Toki1997に移植した。再分化培地の組成は、以下のとおりである:カルベニシリン500mg/lおよびハイグロマイシン50mg/lを補充したMS培地30g/lスクロース、30g/lソルビトール、2g/lカザミノ酸、2mg/lカイネチン、0.02mg/lNAA、4g/lゲルライト、pH5.7。鉢上げ再分化した形質転換体を、発根培地ハイグロマイシン25mg/lを補充した、ホルモンを含まないMS培地上に移して、根の発育を確認した後に、鉢上げした。再生植物体を用いたサザン分析得られた再生植物体及び非形質転換植物体の葉からゲノムDNAを抽出し、EcoRIで消化した後、図6に示されるXmnIプローブ14kb及びsGFPプローブを混合して調製した標識プローブを用いて、サザンブロットを行った。サザンブロットは、常法MolecularCloningALaboratoryManual第2版ManiatisらColdSpringHarborLaboratoryPress1989に従って行った。その結果、染色体にプラスミドDNAが挿入されたことが、示された。結果播種後、1日間、2日間、および3日間前培養し、薬剤ハイグロマイシン選抜の7日目、および14日目、ならびに再分化培地へ移してから14日目の組織を観察した。その結果を、図2~4に示す。各図の左側のパネルは、GFPの蛍光を観察した結果を示す。また、各図の右側のパネルは、自然光下で観察した組織を示す。これらの結果から明らかなように、播種後、1日間、2日間、および3日間前培養した無傷の種子のいずれを用いた場合であっても、GFPを発現し、かつ薬剤に耐性な組織が得られた上段および中段。さらに、再分化培地での培養の結果、再分化植物体が得られた下段。この結果は、1~3日間の前培養をした無傷の種子がアグロバクテリウムによって感染され、外来遺伝子がその種子の細胞内に導入されたことを示す。実施例1の結果を、前培養日数とGFP発現組織出現率との関係、および前培養日数と薬剤存在下で増殖可能な組織の出現率との関係をまとめた結果を図5AおよびBに示す。図5の結果から、1日間の前培養においても、GFPを発現する組織、および薬剤存在下で増殖し得る組織は出現するが、その出現する割合は、前培養日数の増加とともに増加することが示された。形質転換し、ハイグロマイシン耐性となった組織を、再分化させたところ、1日間の前培養の場合は2クローン再分化率1.7、2日間の前培養の場合は11クローン再分化率10.5、3日間の前培養の場合は44クローン再分化率38.6が再分化した。この結果は、1~3日間前培養した無傷の種子を用いることによって、植物体に再分化する形質転換体が得られたことを示す。前培養日数と再分化植物体が得られる割合との関係をまとめた結果を図5Cに示す。図5の結果から、1日間の前培養においても、再分化植物体が得られるが、その出現する割合は、前培養日数の増加とともに増加することが示された。さらに、再分化植物体の葉を用いてサザンブロットを行ったところ、外来遺伝子が植物細胞の染色体に挿入されていることが確認された。従って、本発明の方法を用いることによって、植物の迅速な形質転換が可能になった。"