"ai配列番号54B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83および配列番号74B9;Hu4B9-65からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号64B9;Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号114B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と;ii配列番号124B9のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号134B9のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号144B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;bi配列番号54B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83および配列番号74B9;Hu4B9-65からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号64B9;Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号114B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と;ii配列番号41Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列CDRL1、配列番号42Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号144B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;ci配列番号54B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83および配列番号47Hu4B9-82、-83からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号38Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号114B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と;ii配列番号41Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列CDRL1、配列番号42Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号144B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域からなる群から選択される、免疫グロブリン重鎖可変領域と免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる、ヒトFGFR2に結合する単離抗体。前記CDR配列が、ヒトおよびヒト化フレームワーク配列の間に挿入される、請求項1に記載の抗体。請求項1に記載の免疫グロブリン重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項1に記載の免疫グロブリン軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項3に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項4に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項5に記載の核酸をさらに含んでなる、請求項6に記載の発現ベクター。請求項5に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項6に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項7に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項5に記載の発現ベクターをさらに含んでなる、請求項9に記載の宿主細胞。a宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項8または9に記載の宿主細胞を培養するステップと;b前記免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを精製するステップを含んでなる、免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを生成する方法。a宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域および/または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項10または11に記載の宿主細胞を培養し、それによって抗体または抗体の抗原結合性断片を生成するステップと;b前記抗体または前記抗体の抗原結合性断片を精製するステップを含んでなる、ヒトFGFR2に結合する抗体または抗体の抗原結合性断片を生成する方法。a配列番号24B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号44B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;b配列番号35Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号40Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;c配列番号37Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号44Hu4B9-82のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;およびd配列番号37Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号46Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域からなる群から選択される、免疫グロブリン重鎖可変領域と免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる、ヒトFGFR2に結合する単離抗体。請求項14に記載の免疫グロブリン重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項14に記載の免疫グロブリン軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項15に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項16に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項15に記載の核酸をさらに含んでなる、請求項18に記載の発現ベクター。請求項17に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項18に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項19に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項17に記載の発現ベクターをさらに含んでなる、請求項21に記載の宿主細胞。a宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項20または21に記載の宿主細胞を培養するステップと;b前記免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを精製するステップを含んでなる、免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを生成する方法。a宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域および/または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項22または23に記載の宿主細胞を培養し、それによって抗体または抗体の抗原結合性断片を生成するステップと;b前記抗体または前記抗体の抗原結合性断片を精製するステップを含んでなる、ヒトFGFR2に結合する抗体または抗体の抗原結合性断片を生成する方法。a配列番号214B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号234B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;b配列番号54Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号58Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;c配列番号56Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号60Hu4B9-82のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;およびd配列番号56Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号62Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖からなる群から選択される、免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる、ヒトFGFR2に結合する単離抗体。請求項26に記載の免疫グロブリン重鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項26に記載の免疫グロブリン軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項27に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項28に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項27に記載の核酸をさらに含んでなる、請求項30に記載の発現ベクター。請求項29に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項30に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項31に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項29に記載の発現ベクターをさらに含んでなる、請求項33に記載の宿主細胞。a宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項32または33に記載の宿主細胞を培養するステップと;b前記免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを精製するステップを含んでなる、免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを生成する方法。a宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域および/または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項34または35に記載の宿主細胞を培養し、それによって抗体または抗体の抗原結合性断片を生成するステップと;b前記抗体または前記抗体の抗原結合性断片を精製するステップを含んでなる、ヒトFGFR2に結合する抗体または抗体の抗原結合性断片を生成する方法。前記抗体が、表面プラズモン共鳴による測定で500pMまたはそれ未満のKDを有する、請求項1、14、または26のいずれか一項に記載の抗体。細胞を請求項1、14、または26のいずれか一項に記載の有効量の抗体に曝露して、腫瘍細胞の増殖を阻害するまたは低下させるステップを含んでなる、腫瘍細胞の増殖を阻害するまたは低下させる方法。哺乳類を請求項1、14、または26のいずれか一項に記載の有効量の抗体に曝露して、腫瘍の増殖を阻害するまたは低下させるステップを含んでなる、哺乳類において腫瘍の成長を阻害するまたは低下させる方法。請求項1、14、または26のいずれか一項に記載の有効量の抗体をそれを必要とする哺乳類に投与するステップを含んでなる、哺乳類において癌を治療する方法。前記癌が、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、および頭頸部癌からなる群から選択される、請求項41に記載の方法。前記哺乳類がヒトである、請求項41に記載の方法。ヒトFGFR2に特異的な阻害抗体は、マウスとヒトFGFR2の間の高い相同性のために作成が困難であった。特にマウスおよびヒトFGFR2のリガンド結合ドメインは、およそ98の配列同一性を有するWeietal.,2006,HYBRIDOMA25:115-124。従って治療薬として使用し得る、改善されたFGFR2抗体に対する必要性がある。本発明は、ヒトFGFR2と特異的に結合する抗体ファミリーの発見に基づく。抗体は、FGFR2に特異的に結合する抗体のCDRに基づく、FGFR2結合部位を含有する。治療薬として使用される場合、抗体は例えばヒト化されて改変され、ヒト患者に投与した際の免疫応答が低下または排除される。本発明の抗体は、ヒトFGFR2の活性化を予防しまたは阻害するすなわち中和する。本発明の抗体を使用して、生体外または生体内で腫瘍細胞の増殖を阻害し得る。ヒト癌患者または動物モデルに投与されると、抗体は、ヒト患者または動物モデルにおいて腫瘍成長を阻害しまたは低下させる。本発明のこれらのおよびその他の態様および利点は、以下の図、詳細な説明、および特許請求の範囲によって例証される。本明細書の用法では、含むincludingは、制限を意図せず、言及される例は非限定的である。以下の図面を参照して、本発明をより完全に理解し得る。本発明のFGFR2抗体は、ヒトFGFR2ポリペプチドの生物学的活性の中和に基づいて選択された、モノクローナル抗体の抗原結合部位をベースとする。抗体はヒトFGFR2結合部位を画定する、免疫グロブリン可変領域CDR配列を含有する。これらの抗体は中和活性があることから、特定の癌細胞および腫瘍の成長および/または増殖阻害のために有用である。抗体を改変して、ヒト患者に投与した際の免疫応答を最小化または排除し得る。本発明の様々な特徴および態様を下でより詳細に考察する。本明細書の用法では、特に断りのない限り、抗体という用語は、無処理抗体または修飾、遺伝子改変、または化学的にコンジュゲートされた抗原結合性断片をはじめとする、無処理抗体例えば無処理モノクローナル抗体または抗体の抗原結合性断片例えばモノクローナル抗体の抗原結合性断片を意味する。修飾または遺伝子改変されている抗体の例は、キメラ抗体、ヒト化抗体、および多特異性抗体例えば二重特異性抗体である。抗原結合性断片の例としては、Fab、Fab’、Fab’2、Fv、一本鎖抗体例えばscFv、および二特異性抗体が挙げられる。毒素部分にコンジュゲートした抗体は、化学的にコンジュゲートした抗体の一例である。ヒトFGFR2に結合する抗体本発明の抗体は、a構造CDRH1-CDRH2-CDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、b構造CDRL1-CDRL2-CDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなり、重鎖可変領域と軽鎖可変領域は組み合わさって、ヒトFGFR2に結合する単一結合部位を画定する。本明細書で開示されるように、抗体は、a構造CDRH1-CDRH2-CDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、b免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなってもよく、重鎖可変領域と軽鎖可変領域は組み合わさって、ヒトFGFR2に結合する単一結合部位を画定する。CDRH1は、配列番号54B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83、配列番号74B9;Hu4B9-65、および配列番号47Hu4B9-82、-83からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRH2は、配列番号64B9;Hu4B9-65および配列番号38Hu4B9-82、-83からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRH3はアミノ酸配列FDY4B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83および配列番号114B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる。明細書全体を通じて、特定の配列番号に続いて、配列がそれに由来する抗体を括弧内に示す。例えば配列番号47Hu4B9-82、-83は、配列番号47が、Hu4B9-82、-83で示されるヒト化抗体4B9に由来することを意味する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号5または配列番号74B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号64B9;Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号114B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号54B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83または配列番号47Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号38Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号114B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる。好適には、CDRH1、CDRH2、およびCDRH3配列は、ヒトまたはヒト化免疫グロブリンFRの間に挿入される。抗体は、無処理抗体または抗原結合性抗体断片であり得る。別の実施形態では、抗体は、a構造CDRL1-CDRL2-CDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域と、b免疫グロブリン重鎖可変領域とを含んでなり、IgG軽鎖可変領域とIgG重鎖可変領域は組み合わさって、ヒトFGFR2に結合する単一結合部位を画定する。ACDRL1は配列番号124B9および配列番号41Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRL2は配列番号134B9および配列番号42Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRL3は配列番号144B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号124B9のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1;配列番号134B9のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2;および配列番号144B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号41Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1;配列番号42Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2;および配列番号144B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる。好適には、CDRL1、CDRL2、およびCDRL3配列は、ヒトまたはヒト化免疫グロブリンFRの間に挿入される。抗体は、無処理抗体または抗原結合性抗体断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、a構造CDRH1-CDRH2-CDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、b構造CDRL1-CDRL2-CDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなり、重鎖可変領域と軽鎖可変領域は組み合わさって、ヒトFGFR2に結合する単一結合部位を画定する。CDRH1は配列番号5または配列番号74B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83からなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRH2は配列番号64B9;Hu4B9-65および配列番号38Hu4B9-82、-83からなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRH3はアミノ酸配列FDYおよび配列番号114B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82、-83からなる群から選択されるアミノ酸配列である。CDRL1は配列番号124B9および配列番号41Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83からなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRL2は、配列番号134B9および配列番号42Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83からなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRL3は配列番号144B9;Hu4B9-65;Hu4B9-82;Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号24B9、配列番号35Hu4B9-65、および配列番号37Hu4B9-82、-83からなる群から選択される免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号44B9、配列番号40Hu4B9-65、配列番号44Hu4B9-82、および配列番号46Hu4B9-83からなる群から選択される免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号24B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号44B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号35Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号40Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号37Hu4B9-82,-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号44Hu4B9-82のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号37Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号46Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、i配列番号214B9、配列番号54Hu4B9-65、および配列番号56Hu4B9-82、-83からなる群から選択される免疫グロブリン重鎖と、ii配列番号234B9、配列番号58Hu4B9-65、配列番号60Hu4B9-82、および配列番号62Hu4B9-83からなる群から選択される免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。特定の実施形態では、抗体は、i配列番号214B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、ii配列番号234B9のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。特定の実施形態では、抗体は、i配列番号54Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、ii配列番号58Hu4B9-65のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。特定の実施形態では、抗体は、i配列番号56Hu4B9-82、-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、ii配列番号60Hu4B9-82のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。特定の実施形態では、抗体は、i配列番号56Hu4B9-82,-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、ii配列番号62Hu4B9-83のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、ヒトFGFR2に結合する単離抗体は、配列番号24B9、配列番号35Hu4B9-65、および配列番号37Hu4B9-82、-83の全可変領域またはフレームワーク領域配列と少なくとも70、75、80、85、90、95、98、または99同一である、アミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。別の実施形態では、ヒトFGFR2に結合する単離抗体は、配列番号44B9、配列番号40Hu4B9-65、配列番号44Hu4B9-82、および配列番号46Hu4B9-83の全可変領域またはフレームワーク領域配列と、少なくとも70、75、80、85、90、95、98、または99同一である、アミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる。相同性または同一性は、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGNまたはMegalignDNASTARソフトウェアのような公的に利用可能なコンピュータソフトウェアの使用など、当該技術分野の技術範囲内である様々なやり方で判定されてもよい。blastp、blastn、blastx、tblastn、およびtblastxプログラムによって用いられるアルゴリズムを使用するBLASTBasicLocalAlignmentSearchTool分析Karlinetal.,1990PROC.NATL.ACAD.SCI.USA87,2264-2268;Altschul,1993J.MOL.EVOL.36,290-300;Altschuletal.,1997NUCLEICACIDSRES.25,3389-3402は、配列類似性検索の目的に合わせられる。BLASTプログラムによって使用されるアプローチは、最初にクエリー配列とデータベース配列間の類似断片を検討し、次に同定された全てのマッチの統計的有意性を評価し、最後に事前に選択した有意性閾値を満たしたマッチのみを要約する。配列類似性検索における基本的問題の考察については、その全体を参照によって援用するAltschuletal.,1994NATUREGENETICS6,119-129を参照されたい。当業者は、比較される配列の完全長全体にわたって、最大の整列を達成するのに必要なあらゆるアルゴリズムをはじめとする、配列比較測定に適したパラメータを判定し得る。histogram、descriptions、alignments、expectすなわちデータベース配列に対する報告されたマッチの統計的有意性閾値、cutoff、matrix、およびfilterの検索パラメータは、デフォルト設定である。blastp、blastx、tblastn、およびtblastxによって使用されるデフォルト重み行列は、BLOSUM62行列であるその全体を参照によって援用するHenikoffetal.,1992PROC.NATL.ACAD.SCI.USA89,10915-10919。4つのblastnパラメータは次のように調節してもよい:Q=10ギャップ生成ペナルティ;R=10ギャップ伸長ペナルティ;wink=1クエリーに沿ってwink番目の位置ごとにワードヒットを作製する;およびgapw=16ギャップを含むアラインメントを作製する範囲内でウィンドウ幅を設定する。同等のBlastpパラメータ設定は、Q=9;R=2;wink=1;およびgapw=32であってもよい。検索はまた、NCBINationalCenterforBiotechnologyInformationBLASTAdvancedOptionパラメータを使用して実施してもよい。例えばGCosttoopengap[整数値]:デフォルト=ヌクレオチドでは5/タンパク質では11;ECosttoextendgap[整数値]:デフォルト=ヌクレオチドでは2/タンパク質では1;qPenaltyfornucleotidemismatch[整数値]:デフォルト=-3;rrewardfornucleotidematch[整数値]:デフォルト=1;eexpectvalue[実数値]:デフォルト=10;Wwordsize[整数値]:デフォルト=ヌクレオチドでは11/megablastでは28/タンパク質では3;yDropoffXforblastextensionsinbits:デフォルト=blastnでは20/他では7;XXdropoffvalueforgappedalignmentinbits:デフォルト=全てのプログラムで15、blastnには適用されず;およびZfinalXdropoffvalueforgappedalignmentinbits:blastnでは50、他では25。ペアワイズタンパク質間配列比較のためのClustalWもまた、使用してもよいデフォルトパラメータとしては、例えばBlosum62行列およびGapOpeningPenalty=10およびGapeExtenstionPenalty=0.1が挙げられる。GCGパッケージバージョン10.0で利用できる配列間のBestfit比較は、DNAパラメータGAP=50gapcreationpenaltyおよびLEN=3gapextensionpenaltyを使用し、タンパク質比較における同等の設定はGAP=8およびLEN=2である。前述の各実施形態では、組み合わさってヒトFGFR2に結合する免疫グロブリン重鎖可変領域および/または軽鎖可変領域配列は、重鎖および/または軽鎖可変領域のフレームワーク領域にアミノ酸の変更例えば少なくとも1、2、3、4、5、または10個のアミノ酸の置換、欠損、または付加を含有してもよいことが本明細書で熟考された。いくつかの実施形態では、単離抗体は、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、950pM、900pM、850pM、800pM、750pM、700pM、650pM、600pM、550pM、500pM、450pM、400pM、350pM、300pM、250pM、200pM、150pM、100pM、50pMまたはそれ未満のKDで、ヒトFGFR2と結合する。特に断りのない限り、KD値は、例えば実施例5および9に記載される条件下で、表面プラズモン共鳴法によって測定される。抗体の生成本発明の抗体を生成する方法は、当該技術分野で知られている。例えば本明細書で提供される配列情報を使用して、軽鎖可変領域および重鎖可変領域をコードするDNA分子を化学的に合成し得る。合成DNA分子は、例えば定常領域コード配列および発現調節配列をはじめとするその他の適切なヌクレオチド配列にライゲートして、所望される抗体をコードする、従来の遺伝子発現コンストラクトを生成し得る。定義された遺伝子コンストラクトの生成は、当該技術分野の通例の技術範囲内である。代案としては、本明細書で提供される配列は、その配列が、本明細書で提供される配列情報、またはハイブリドーマ細胞中のマウス抗体重軽鎖をコードする遺伝子に関する先行技術の配列情報に基づく、合成核酸プローブを使用して、従来のハイブリダイゼーション技術またはポリメラーゼ連鎖反応PCR技術によって、ハイブリドーマからクローンし得る。所望の抗体をコードする核酸は、発現ベクターに組み込みライゲートし得て、それは従来の形質移入または形質転換技術を通じて宿主細胞に導入し得る。例示的な宿主細胞は、さもなければIgGタンパク質を産生しない、大腸菌E.coli細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、HeLa細胞、幼若ハムスター腎臓BHK細胞、サル腎培養細胞COS、ヒト肝細胞癌細胞例えばHepG2、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞が免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域をコードする遺伝子を発現できるようにする条件下で培養し得る。特定の発現および精製条件は、用いられる発現系次第で変化する。例えば大腸菌E.coli中で遺伝子を発現させる場合、改変遺伝子を例えばTrpまたはTacなどの適切な細菌プロモーター、および原核生物シグナル配列から下流に配置させることで、それを最初に発現ベクターにクローンする。発現された分泌タンパク質は、光屈折小体または封入小体中に蓄積し、フレンチプレスまたは超音波処理による細胞の破砕後に採取し得る。次に光屈折小体を可溶化し、当該技術分野で既知の方法によって、タンパク質を再び折り畳んで切断する。改変遺伝子が例えばCHO細胞などの真核宿主細胞中で発現される場合、それは最初に、適切な真核生物プロモーター、分泌シグナル、IgGエンハンサー、および様々なイントロンを含有する発現ベクターに挿入される。この発現ベクターは、定常領域の全部または一部をコードする配列を任意に含有して、重鎖または軽鎖の全部またはその一部が発現できるようにする。遺伝子コンストラクトは、従来のconvention技術を使用して、真核生物宿主細胞に導入し得る。宿主細胞は、VLまたはVH断片、VL-VHヘテロ二量体、VH-VLまたはVL-VH一本鎖ポリペプチド、完全長重または軽免疫グロブリン鎖、またはその部分を発現し、そのそれぞれが別の機能例えば細胞毒性を有する部分に付着してもよい。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、重鎖例えば重鎖可変領域または軽鎖例えば軽鎖可変領域の全部または一部を発現するポリペプチドを発現する、単一ベクターで形質移入される。別の実施形態では、宿主細胞は、a重鎖可変領域を含んでなるポリペプチドおよび軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドをコードし、またはb免疫グロブリン重鎖全体および免疫グロブリン軽鎖全体をコードする単一ベクターで形質移入される。なおも別の実施形態では、宿主細胞は1つを超える発現ベクター例えば重鎖または重鎖可変領域の全体または一部を含んでなるポリペプチドを発現する1つの発現ベクターと、軽鎖または軽鎖可変領域の全体または一部を含んでなるポリペプチドを発現する別の発現ベクターで同時形質移入される。免疫グロブリン重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドは、ポリペプチドを発現できるようにする条件下において、このような可変領域をコードする発現ベクターによって形質移入された宿主細胞を培養することで生成し得る。発現に続いて、例えばグルタチオン-S-トランスフェラーゼGSTおよびヒスチジンタグのような親和性タグなど、当該技術分野で良く知られている技術を使用して、ポリペプチドを収集して精製し得る。ヒトFGFR2に結合するモノクローナル抗体または抗体の抗原結合性断片は、a完全長または部分的免疫グロブリン重鎖をコードする発現ベクターと、完全長または部分的免疫グロブリン軽鎖をコードする別個の発現ベクター;またはb双方の鎖例えば完全長または部分的重鎖および軽鎖をコードする単一発現ベクターで形質移入された宿主細胞を、双方の鎖が発現できるようにする条件下で培養することにより生成し得る。無処理抗体または抗体の抗原結合性断片は、例えばプロテインA、プロテインG、グルタチオン-S-トランスフェラーゼGSTやヒスチジンタグのような親和性タグなどの当該技術分野で良く知られている技術を使用して、収集し精製し得る。単一発現ベクターから、または2つの別個の発現ベクターから重鎖および軽鎖を発現することは、当該技術分野の通常の技術の範囲内である。抗体の修飾抗体および抗体断片の抗原性を低下させまたは排除する方法は、当該技術分野で知られている。抗体がヒトに投与されると、抗体は、好適にはヒト化されて、ヒトにおける抗原性が低下しまたは排除される。好適には、ヒト化抗体は、抗原に対して、それが由来する非ヒト化マウス抗体と同一のまたは実質的に同一の親和性を有する。1つのヒト化アプローチでは、その中でマウス免疫グロブリン定常領域がヒト免疫グロブリン定常領域で置換されている、キメラタンパク質が作られる。例えばMorrisonetal.,1984,PROC.NAT.ACAD.SCI81:6851-6855、Neubergeretal.,1984、NATURE312:604-608;米国特許第6,893,625号明細書Robinson;米国特許第5,500,362号明細書Robinson;および米国特許第4,816,567号明細書Cabillyを参照されたい。CDRグラフトとして知られているアプローチでは、軽鎖および重鎖可変領域のCDRが、別の種からのフレームワークにグラフトされる。例えばマウスCDRをヒトFRにグラフトし得る。本発明のいくつかの実施形態では、抗FGFR2抗体の軽鎖および重鎖可変領域のCDRが、ヒトFRまたはコンセンサスヒトFR上にグラフトされる。コンセンサスヒトFRを作り出すために、いくつかのヒト重鎖または軽鎖アミノ酸配列からのFRを配列比較して、コンセンサスアミノ酸配列を同定する。CDRグラフトは、米国特許第7,022,500号明細書Queen;米国特許第6,982,321号明細書Winter;米国特許第6,180,370号明細書Queen;米国特許第6,054,297号明細書Carter;米国特許第5,693,762号明細書Queen;米国特許第5,859,205号明細書Adair;米国特許第5,693,761号明細書Queen;米国特許第5,565,332号明細書Hoogenboom;米国特許第5,585,089号明細書Queen;米国特許第5,530,101号明細書;Queen;Jonesetal.1986NATURE321:522-525;Riechmannetal.1988NATURE332:323-327;Verhoeyenetal.1988SCIENCE239:1534-1536;およびWinter1998FEBSLETT430:92-94に記載される。SUPERHUMANIZATION商標と称されるアプローチでは、ヒトCDRとヒト化されるマウス抗体との構造的な類似性に基づいて、ヒトCDR配列がヒト生殖細胞系遺伝子から選択される。例えば米国特許第6,881,557号明細書Foote;およびTanetal.,2002,J.IMMUNOL169:1119-1125を参照されたい。免疫原性を低下させるその他の方法としては、再形成、ハイパーキメラ化、およびベニアリング/表面再構成が挙げられる。例えばVaswamietal.,1998,ANNALSOFALLERGY,ASTHMA,IMMUNOL81:105;Roguskaetal.,1996,PROT.ENGINEER9:895-904;および米国特許第6,072,035号明細書Hardmanを参照されたい。ベニアリング/表面再構成アプローチでは、マウス抗体中の表面接近可能アミノ酸残基が、ヒト抗体中の同一位置でより頻繁に見られるアミノ酸残基によって置換される。このタイプの抗体表面再構成は、例えば米国特許第5,639,641号明細書Pedersenに記載される。マウス抗体をヒトにおける医療用途に適した形態に転換する別のアプローチは、ACTIVMAB商標技術Vaccinex、Inc.,Rochester、NYとして知られており、それはワクシニアウィルスベースのベクターが哺乳類細胞内で抗体を発現することを伴う。IgG重軽鎖に高レベルのコンビナトリアル多様性が生じるとされている。例えば米国特許第6,706,477号明細書Zauderer;米国特許6,800,442号明細書Zauderer;よび米国特許6,872,518号明細書Zaudererを参照されたい。マウス抗体をヒトでの使用に適した形態に転換する別のアプローチは、KaloBiosPharmaceuticals,Inc.PaloAlto,CAによって商業的に実施される技術である。この技術は、抗体を選択するためのエピトープ注目ライブラリーを作成する、独自仕様のヒト受容体ライブラリーの使用を伴う。マウス抗体をヒトでの医療用途に適した形態に修飾する別のアプローチは、XOMAUSLLC.によって商業的に実施されるHUMANENGINEERING商標技術である。例えば国際公開第93/11794号パンフレット、および米国特許第5,766,886号明細書;米国特許第5,770,196号明細書;米国特許第5,821,123号明細書;および米国特許第5,869,619号明細書を参照されたい。上のアプローチのいずれかをはじめとするあらゆる適切なアプローチを使用して、本明細書で開示されるヒト抗体の免疫原性を低下させ、または排除し得る。抗体が治療薬として使用される場合、それは標準生体外共役化学を使用して、小分子毒素または放射性核種などのエフェクター部分にコンジュゲートし得る。エフェクター部分がポリペプチドである場合、抗体をエフェクターに化学的にコンジュゲートさせ、またはエフェクターに融合タンパク質として結合させ得る。融合タンパク質の構築は、当該技術分野の通常の技術の範囲内である。抗体の使用本明細書で開示される抗体を使用して、例えば乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、および頭頸部癌などの様々な形態の癌を治療し得る。癌細胞は、癌細胞の増殖を阻害しまたは低下させるように、治療的有効量の抗体に曝露される。いくつかの実施形態では、抗体は、癌細胞の増殖を少なくとも40、50、60、70、80、90、95、98、99、または100阻害する。いくつかの実施形態では、開示される抗体をヒト患者において腫瘍成長を阻害する方法で使用し得る。方法は、治療的有効量の抗体を患者に投与するステップを含んでなる。FGFR2の過剰発現および/または活性化と関連づけされている癌としては、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、肺癌、ある種の脳癌、メラノーマ、および胃腸癌例えば結腸直腸癌、膵臓癌、胃癌、頭頸部癌が挙げられる。本明細書の用法では、疾患を治療するとは、a疾患の症状を低減し;b疾患の進行を阻害し;c疾患の退縮を引き起し;またはd疾患を治癒させることを意味する。概して活性構成要素の治療的有効量は、例えば1mg/kg~100mg/kg、1mg/kg~10mg/kgなど、0.1mg/kg~100mg/kgの範囲内である。投与量は、疾患のタイプと程度、または治療される適応症、患者の全般的健康、抗体の生体内効力、製剤処方、および投与経路などの変数に左右される。初期用量は、所望される血液レベルまたは組織レベルを迅速に達成するために、上限レベルを越えて増大させ得る。代案としては、初期用量は最適用量よりも低くあり得て、治療過程において1日量を徐々に増大させてもよい。ヒト用量は、例えば0.5mg/kg~20mg/kgで行われるようにデザインされた、従来の第I相用量漸増試験中で最適化し得る。投与回数は、投与経路、投与量、および治療される疾患などの要素に応じて変動し得る。例示的な投与回数は、日に1回、週に1回、および隔週で1回である。望ましい投与経路は、例えば静脈輸液などの非経口経路である。モノクローナル抗体ベースの薬剤の処方は、当該技術分野の通常の技術の範囲内である。本発明のいくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は凍結乾燥されて、投与時に緩衝食塩水で戻される。治療用途では、抗体は、好適には薬学的に許容できるキャリアと組み合わせられる。本明細書の用法では、薬学的に許容できるキャリアとは、過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答、またはその他の問題または合併症がなく、利点/リスク比が釣り合った、ヒトおよび動物の組織と接触する用途に適した、緩衝液、キャリア、および賦形剤を意味する。キャリアは、製剤のその他の成分と適合性であり、受容者にとって有害でないという意味で、許容可能でなくてはならない。薬学的に許容できるキャリアとしては、製薬投与に適合する、緩衝液、溶剤、分散媒、コーティング、等張剤、および吸収遅延剤などが挙げられる。薬理的活性物質のためのこのような媒体および作用物質の使用は、当該技術分野で知られている。本発明の抗体を含有する医薬組成物は、投薬単位形態で提供し得て、あらゆる適切な方法で調製し得る。医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように処方されなくてはならない。投与経路の例は、静脈内IV、皮内、吸入、経皮、局所、経粘膜、および直腸内投与である。モノクローナル抗体投与の望ましい経路は、IV輸液である。有用な製剤は、製薬技術で良く知られている方法によって調製し得る。例えばRemington’sPharmaceuticalSciences,18thed.MackPublishingCompany,1990を参照されたい。非経口投与に適した製剤構成要素としては、注射用水、食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶剤などの無菌希釈剤;ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤;アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤;EDTAなどのキレート化剤;酢酸、クエン酸またはリン酸などの緩衝液;および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。静脈内投与のための適切なキャリアとしては、生理学的食塩水、静菌水、CremophorEL商標BASF,Parsippany,NJまたはリン酸緩衝食塩水PBSが挙げられる。キャリアは、製造および保存条件下で安定しているべきであり、微生物から保護されていなくてはならない。キャリアは、例えば水、エタノール、ポリオール例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレンpolyetheyleneグリコール、およびそれらの適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。医薬製剤は、好適には無菌である。滅菌は、例えば滅菌濾過膜を通した濾過によって達成し得る。組成物が凍結乾燥されている場合、濾過滅菌は凍結乾燥と水戻しに先だって、またはそれに続いて実施し得る。以下の実施例は単に例証的であり、本発明の範囲または内容をどのようにも制限することは意図されない。実施例1:細胞系および試薬KATOIII、HEC-1-A、AN3CA、SNU-16、およびヒト肺癌細胞系は、AmericanTypeCultureCollectionRockville,MDから得られた。FDCP-1およびBa/F3、MFM-223、MFE-296、MFE-280、MFE-319、およびESS-1細胞は、GermanCollectionofMicroorganismsandCellCulturesから得られた。全てのヒト細胞系は、供給業者が規定する使用説明書に従って、5CO2含有雰囲気中、37°Cで培養した。全てのFGFは、RDSystems,Inc.Minneapolis,MNから購入された。機能性FGFR2抗体をスクリーニングする細胞ベースアッセイを確立するために、最初に野性型FGFR2とFGFR2の癌関連変異体または変種を発現するように、Ba/F3およびFDCP-1細胞を遺伝子操作した。以下の方法によって、FGFR駆動性FDCP細胞およびBa/F3細胞を得た。FDCP-1細胞を電気穿孔によって、IIIb、IIIcアイソフォームまたはヒトFGFR2のC-末端トランケート型変種、ならびに癌関連FGFR2-IIIbS252WまたはFGFR2-IIIbN550K変異体をコードするプラスミドで形質移入した。G418600μg/mlを用いた選択に続いて単一クローンを単離し、MTT[3-4、5-ジメチルチアゾール-2-イル-2、5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド]アッセイSigma-Aldrich,St.Louis,MOによって、IL3不在下でそれらのFGF1依存性増殖について試験した。MTT試薬10μlを細胞に添加し、4時間後に2NのHCLを添加した100μlの10SDSで反応を停止させた。プレートを翌日分析した。IL3不在下で、強いFGF-1依存性増殖を示すクローンを引き続く試験で使用した。FGFR2を発現するレトロウィルスを作成するために、cDNAをコードする様々なヒトFGFR2変種をそれぞれレトロウィルスベクターに挿入した。レトロウィルスは、リポフェクトアミン2000Invitrogen,Carlsbad,CAを使用して、Phoenix細胞を形質移入して作成された。レトロウィルスを含有する上清を使用して、8μg/mlのポリブレンSigma-Aldrich存在下、2500rpmで90分間の遠心分離によってBa/F3細胞を感染させた。個々のクローンを限界希釈によって単離し、細胞表面受容体の発現をフローサイトメトリーよって確認した。FGFRが増幅された癌細胞系は、次のようにして同定された。FGFR2増幅遺伝子コピー数>7のためには、WellcomeTrustSangerInstitutewww.sanger.ac.ukのCGPコピー数データベースが必要であった。FGFR2特異的プライマー5’-ACTTGGGCTGGAGTGATTTG-3’配列番号24および5’-AATCCCATCTGCACACTTCC-3’配列番号25および参照遺伝子トランスケトラーゼプライマー5’-CAAAAACATGGCTGAGCAGA-3’配列番号26および5’-GAAACAGGCCCCACTTTGTA-3’配列番号27を使用して、定量的PCRqPCRによって、FGFR2増幅の可能性がある細胞系のコピー数を分析した。本質的にToyokawaetal.,2009,ONCOL.REP.21:875-880で説明されるようにして、FGFR2遺伝子のコピー数を計算した。FGFR遺伝子発現分析は、次のようにして実施した。RNeasy商標ミニキットQiagen,Valencia,CAによって、全RNAを単離した。FGFR2、FGFR2-IIIb、FGFR2-IIIc、およびHPRTに対して特異的なプライマーを用いて、QuantiTect商標SYBRGreenRT-PCRキットQiagenを使用して、定量的RT-PCRqRT-PCRを実施した。発現レベルをHPRTに正規化した。以前の研究は、FGFRの異所性発現が、マウスpro-BBa/F3または骨髄FDCP-1細胞中において、IL-3不在下のFGF1依存性増殖をもたらすことを実証しているTannheimeretal.,2000,BREASTCANCERRES.2:311-320;Ornitzetal.,1996,J.BIOL.CHEM.271:15292-15297。予期されたように、IL-3およびFGF1不在下において、野生型FGFR2を安定して発現するFDCP-1細胞の顕著な増殖はなかった。FGF1、3、7、10、および22は、FGFR2-IIIbを通じてシグナルを伝達し、FGFR2-IIIcは、FGF1、2、4、6、9、16、17、18、および20をはじめとする幅広いリガンドのパネルに応答することが知られているTannheimeretal.,前出;Ornitzetal.,前出;Zhangetal.,2006,J.BIOL.CHEM.281:15964-15700。FGFR2のIIIbアイソフォームを発現するFDCP-1細胞の増殖は、FGF7およびFGF10によって刺激されるが、FGF2およびFGF9によっては刺激されない図2。IIIcアイソフォームを発現する細胞の増殖は、FGF2およびFGF9によって特異的に高められた図3。実施例2:抗FGFR2モノクローナル抗体の生成C-末端でヒトFc部分と融合した、ヒトFGFR2IgD2-IgD3IIIbおよびヒトFGFR2IgD2-IgD3IIIcの1:1混合物で、マウスを免疫化した。マウスの免疫化および細胞融合は、商業的供給業者PrecisionAntibody,Columbia,MDによって実施された。一次スクリーニングでは、ELISA形式を使用してハイブリドーマ上清をスクリーニングし、ヒトFGFR2IgD2-IgD3への結合を検出した。一次スクリーニングを通過した抗体には、下の実施例3に記載される細胞ベース増殖アッセイである二次スクリーニングを実施した。一次スクリーニングは、ヒトFGFR2の細胞外ドメインで免疫化されたマウスの脾臓融合から得られたマウスハイブリドーマクローン上清を使用して実施した。アッセイプレートを100ng/ウェルの組換え可溶性FGFR2細胞外ドメインで被覆し、次にPBS中の5ミルクによって室温で1時間ブロックした。次に50μlのハイブリドーマ上清を各ウェルに添加して、抗体を室温で1時間結合させた。プレートを洗浄緩衝液0.1Tween20添加PBSで3回洗浄し、HRP-コンジュゲートヤギ抗マウスIgG重鎖および軽鎖二次抗体とのインキュベーションがそれに続いた。TMBテトラメチルベンゼンを基質として使用してアッセイを発色させ、吸光度を620nmで読み取った。実施例3:FGFR2拮抗抗体の同定FGFR2拮抗抗体をスクリーニングするために、FGFR2抗体を含有するハイブリドーマ上清を以下の5つのFGFR2の形態の1つを異所性発現するFDCP細胞に添加した:1野性型FGFR2-IIIb;2野性型FGFR2-IIIc;3FGFR2-IIIbS252W;4FGFR2-IIIbN550K;および5C-末端トランケーションがあるFGFR2-IIIb。平底96ウェルプレート70,000細胞/ウェル内のFGFR2発現細胞に、ヘパリン5μg/ml±FGF18ng/mlと共に、上清を1:1の比率容積で添加した。37°Cで2日間のインキュベーション後に、上述のようにMTTアッセイを実施した。クローン4B9の上清は、FGFR2のIIIb-アイソフォームによって駆動されるFDCP-1増殖に対する、強力な選択的阻害を実証した。クローン4B9によって産生される抗体4B9抗体GP369とも称されるをさらなる特性解析のために、従来の技術によって精製した。表面プラズモン共鳴分析は、抗体4B9がヒトFGFR2-IIIbに対して強力な親和性を示し、ヒトFGFR2-IIIcに対して検出可能な結合を示さなかったことを示唆した。ヒトGFR1-IIIcまたはFGFR3-IIIbに対する抗体4B9の結合は、検出されなかった。実施例4:配列分析IsoStrip商標マウスモノクローナル抗体アイソタイプ判定キットを使用し、製造会社RocheAppliedScience,Indianapolis,INの使用説明書に従って、実施例1の抗体4B9の軽鎖アイソタイプおよび重鎖アイソタイプを判定した。抗体は、κ軽鎖およびIgG1重鎖と判定された。5’RACERapidAmplificationofcDNAEndsを使用して、抗体4B9の重鎖および軽鎖可変領域を配列決定した。RNeasy商標Miniprepキットを使用して、供給業者Qiagen,Valencia,CAの使用説明書に従って、4B9モノクローナルハイブリドーマ細胞系から全RNAを抽出した。SMARTer商標RACEcDNA増幅キットClontech,PaloAlto,CAを使用して、製造会社の使用説明書に従って、5’RACE用ランダムプライマー使用して、完全長第一鎖cDNA含有5’末端を作成した。KODHotStart商標ポリメラーゼEMDChemicals,Gibbstown,NJを使用して、製造会社の使用説明書に従って、κ鎖および重IgG1鎖の可変領域をPCRで増幅した。5’cDNA末端の増幅では、SMARTer商標RACEcDNA増幅キットと併せて、5’CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT3’配列番号28と5’CTAATACGACTCACTATAGGGC3’配列番号29の混合物であるUniversalPrimerMixAプライマーClontechを5’プライマーとして使用した。上の5’プライマーおよび3’IgG1定常領域特異的プライマーである5’TATGCAAGGCTTACAACCACA3’配列番号30を使用して、重鎖可変領域を増幅した。上の5’プライマーおよび3’κ定常領域特異的プライマーであるCGACTGAGGCACCTCCAGATGTT3’配列番号31によって、κ鎖可変領域を増幅した。個々のPCR生成物をアガロースゲル電気泳動によって単離し、Qiaquick商標ゲル精製キットを使用して、製造会社Qiagenの使用説明書に従って精製した。引き続いてZeroBluntTOPO登録商標PCRクローニングキットを使用して、製造会社Invitrogenの使用説明書に従って、PCR生成物をpCR4Bluntプラスミドにクローンし、標準分子生物学技術を通じてDH5-α細菌Invitrogenに形質転換した。標準ジデオキシDNA配列決定法を使用して、BeckmanGenomicsDanvers,MAからのM13順方向5’GTAAAACGACGGCCAGT3’配列番号32およびM13逆方向プライマー5’CAGGAAACAGCTATGACC3’配列番号33を使用し、形質転換細菌クローンから単離されたプラスミドDNAを配列決定して、可変領域配列の配列を同定した。VectorNTIソフトウェアInvitrogenおよびIMGT/V-Questウェブサーバーを使用して配列を分析し、可変領域配列を同定および確認した。4B9抗体の可変領域をコードする核酸配列、およびそれを画定するタンパク質配列を下に要約するアミノ末端シグナルペプチド配列は示されない。CDR配列Kabat定義は、アミノ酸配列中で太字/下線で示される。4B9抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号14B9抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号24B9抗体のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号34B9抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号4表1は、本明細書の実施例で考察される各配列の配列番号を示す、一致度チャートである。マウスモノクローナル抗体重鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表2に示す。マウスモノクローナル抗体κ軽鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表3に示す。完全長重鎖またはκ鎖抗体配列を作り出すために、上の各可変配列をそれぞれの定常領域と組み合わせる。例えば完全長重鎖は、重可変配列とそれに続くマウスIgG1重鎖定常配列を含んでなり、完全長κ鎖は、κ可変配列とそれに続くマウスκ軽鎖定常配列を含んでなる。マウスIgG1重鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号16マウスIgG1重鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号17マウスκ軽鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号18マウスκ軽鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号19以下の配列は本実施例で説明される各抗体について、実際のまたは熟考された完全長重鎖および軽鎖配列すなわち可変および定常領域配列の双方を含有するを表わす。抗体の適切な分泌のためのシグナル配列もまた、DNA配列の5’末端、またはタンパク質配列のアミノ末端に含まれる。可変領域配列を他の定常領域配列にライゲートして、活性完全長IgG重鎖および軽鎖を生成し得る。4B9の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号204B9の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号214B9の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号224B9の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号23表4は、本実施例で考察する抗体の完全長配列と、配列表に示すものとの対応を示す。実施例5:結合親和性以下のタンパク質RDSystems,Inc.,Minneapolis,MNに対するモノクローナル抗体4B9の結合親和性および結合動態を測定した:組換えヒトFGFR1βIIIb/FcキメラrhFGFR1β-IIIc-Fc、組換えヒトFGFR2βIIIb/FcキメラrhFGFR2β-IIIb-Fc、組換えヒトFGFR2βIIIc/FcキメラrhFGFR2β-IIIc-Fc、組換えヒトFGFR3βIIIb/FcキメラrhFGFR3β-IIIb-Fc、および組換えヒトFGFR2βIIIb/Fcバージョンその中でFc領域が酵素的に除去されている。BiacoreT100装置GEHealthcare,Piscataway,NJを使用して、表面プラズモン共鳴によって、結合親和性および結合動態を測定した。標準カップリングプロトコルを使用して、供給業者の使用説明書GEHealthcareに従って、アミンカップリングによって、ウサギ抗マウスIgGsGEHealthcareをカルボキシメチル化デキストランCM4センサーチップGEHealthcare上に固定化した。0.05の界面活性剤P20GEHealthcareを含有するPBSを泳動用緩衝液として使用して、25°Cおよび37°Cで分析を実施した。流速10μl/分で、個々のフローセル内において抗体を捕捉した。各抗体毎に注入時間を変えて、30~60RUのRmaxを得た。緩衝液、および泳動用緩衝液で希釈したFGFRタンパク質を参照表面抗体捕捉なしおよび活性表面試験抗体上に60μl/分で240秒間逐次注入した。解離相を900秒までモニターした。次に10mMグリシン-HClpH1.7を流速60μl/分で60秒間にわたり2回注入して、表面を再生した。試験されたFGFRタンパク質の濃度範囲は、50~3.125nM2倍希釈であった。BIAevaluationソフトウェアGEHealthcareの動態学機能を使用して、二重参照減法で動態学パラメータを測定した。各抗体の動態学パラメータ、ka結合速度定数、kd解離速度定数、およびKD平衡解離定数を測定した。25°Cおよび37°Cにおける、FGFRタンパク質に対するモノクローナル抗体の動力学値を表5に要約する。表5の結果は、抗体4B9が、約5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、750pM、650pM、610pM以下のKDで、rhFGFR2β-IIIbに結合することを実証する。結果はまた、抗体4B9が、rhFGFR1β-IIIb、rhFGFR2β-IIIc、およびrhFGFR3β-IIIbに結合しないことも実証する。実施例6:抗増殖性活性抗体4B9の効力を定量的に評価するために、FGFR2-IIIbまたはFGFR2-IIIcを発現するFDCP-1細胞を使用して、用量反応試験を実施した。FGFR2-IIIbまたはFGFR2-IIIcを発現するFDCP-1細胞をIL3不在下で、96ウェルプレートに接種した。様々な量のFGFおよびヘパリンを添加した。MTTアッセイを2~3日後に実施した。FGF1およびヘパリン存在下において、FGFR2-IIIb、FGFR2-IIIc、またはC-末端トランケート型FGFR2-IIIbを発現するFDCP-1細胞に、様々な量の抗体4B9含有上清を添加した。MTTアッセイを2日後に実施した。FGF1およびヘパリン存在下において、FGFR2-IIIbS252WまたはFGFR2-IIIbN550Kを発現するFDCP-1細胞に、様々な量の精製抗体4B9を添加した。MTTアッセイを2日後に実施した。抗体4B9は、FGFR2-IIIbによって駆動されるFDCP-1細胞のFGF1誘導性増殖を用量依存的様式で強力に阻害する一方、4B9は、FGFR2-IIIcを発現するFDCP細胞のFGF1誘導性増殖に対しては、顕著な効果がなかった図4。FRS2アダプター分子の構成的リン酸化と、下流シグナル伝達の活性化を引き起こすC-末端トランケート型FGFR2-IIIbは、胃癌および乳癌細胞系に見られるItohetal.,1994,CANCERRES.54:3237-3241;Moffaetal.,2004,MOL.CANCERRES.2:643-652。抗体4B9は、C-末端トランケート型FGFR2-IIIbによって駆動されるFDCP-1細胞の増殖を強力に阻害する図4。FGFR2変異は子宮内膜腫瘍標本のおよそ12で報告されているPollocketal.,前出;Duttetal.,前出。FGFR2中の体細胞活性化変異は、IgD2およびIgD3間のリンカー領域、細胞外膜近傍ドメイン、またはキナーゼドメイン内に密集する。子宮内膜腫瘍における最も一般的な変異の2つは、リガンド特異性を変化させてリガンド結合親和性を増大させるS252W変異、およびキナーゼ活性を増大させるキナーゼドメイン中のN550K変異である。精製抗体4B9は、野性型FGFR2-IIIb、ならびにFGFR2-IIIbS252WおよびFGFR2-IIIbN550Kによって駆動される細胞増殖をそれぞれ0.3nM、3.0nM、および8.1nMのIC50値で強力に阻害する図5。実施例7:FGFR2活性化シグナル伝達経路の阻害FGFR2活性化シグナル伝達経路に対する、抗体4B9の効果を調べた。FGFR2のチロシンリン酸化に対する抗体4B9の効果を調べるために、SNU-16細胞を用量5μg/mlの抗体によって37°Cで1時間処理し、ヘパリン単独20μg/mlまたはヘパリン-プラス-FGF730ng/mlによる15分間の刺激がそれに続いた。1NP-40、20mMのTris-HClpH8.0、137mMのNaCl、10グリセロール、2mMのEDTAを含有し、プロテアーゼ阻害剤RocheAppliedScienceおよびHaltホスファターゼ阻害剤ThermoScientificが添加されたNP-40溶解緩衝液に、細胞を溶解した。抗FGFRY653/Y654RDSystems,Inc.,Minneapolis,MN、抗FGFR2sc-122SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA、抗ホスホ-ERK1/2および抗ERK1/2CellSignalingTechnology,Danvers,MA、抗β-チューブリン、クローンAA2MilliporeCorporation;Billerica,MA抗体を用いて、ウエスタンブロットによって溶解産物を分析した。化学発光基質ECLPlus商標,AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway,NJによって、免疫ブロットを検出した。製造会社の使用説明書RDSystemsに従って、ヒトホスホ-RTKおよびMAPKキナーゼアレイRDSystemsを実施した。ホスホ-RTKアレイでは、細胞をNP-40溶解緩衝液中で溶解した。Array緩衝液1で希釈した細胞溶解産物を添加する1時間前に、アレイをArray緩衝液1によって室温でブロックし、次に4°Cで一晩インキュベートした。アレイを化学発光によって視覚化した。ホスホ-MAPKアレイでは、Lysis緩衝液6で細胞を溶解した。希釈細胞溶解産物をアレイに添加した。4°Cで一晩のインキュベーション後に、アレイを抗ホスホ-MAPK抗体と室温で2時間混合し、上述のように視覚化した。FGF7は、FGFR2を過剰発現するBa/F3細胞中、およびFGFR2増幅SNU-16細胞中において、FGFR2のチロシンリン酸化と、引き続く細胞外シグナル調節性キナーゼ1および2ERK1/2の活性化を誘導した。抗体4B9は、これらの細胞中で、FGFR2のリガンド誘導性チロシンリン酸化、およびERK1/2の活性化を効果的に抑制した。これに加えて、抗体4B9は、SNU-16細胞中においてFGFR2タンパク質レベルを下方制御した。抗体への曝露の早くも2時間後に、FGFR2タンパク質レベルのわずかな低下が観察された。タンパク質レベルの劇的な低下は、6時間の時点で見られた。ERK、c-JunNH2-末端キナーゼJNK、p38MAPK、AKT、およびそれらの下流エフェクター分子のリン酸化を測定するホスホ-MAPKアレイを使用して、これらの細胞系中において、下流シグナル伝達経路の活性化を調査した。リガンド刺激の不在下では、ERK1/2のわずかなリン酸化のみが見られた。FGF7によるSNU-16細胞の刺激は、ERK1/2のリン酸化を顕著に増大させた。マイトジェン活性化およびストレス活性化キナーゼ2MSK2、p38αMAPK、90-kDリボソームタンパク質キナーゼ1RSK1、Akt1、およびp70S6キナーゼp70S6Kのリン酸化の増大が観察された。抗体4B9は、FGF7によって活性化された全ての下流シグナル伝達タンパク質のリン酸化を効果的にブロックした。実施例8:腫瘍異種移植成長の阻害抗体4B9の生体内活性を評価するために、FGFR2遺伝子の増幅を持つヒト癌異種移植片の成長に対する抗体4B9の効果を試験した。試験した4種のFGFR2-増幅細胞系の内、SNU-16およびMFM-223のみがマウスに腫瘍を生じた。そのため、SNU-16およびMFM-223異種移植腫瘍に対する抗体4B9の有効性を試験した。全てのマウスは、OLAWPublicHealthServicePolicyonHumanCareandUseofLaboratoryAnimalsおよびILARGuidefortheCareandUseofLaboratoryAnimalsに従って取り扱かった。全ての生体内研究は、AVEOInstitutionalAnimalCareandUseCommitteeによって認可されたプロトコルに従って実施した。SNU-16生体内研究では、10週齢のメスC.B-17SCIDマウスTaconic,Germantown,NYの右脇腹に、1:1のRPMI1640Invitrogen,Carlsbad,CA/マトリゲルBDBiosciences,SanJose,CA中の5×106個の細胞を皮下接種した。ノギスを使用して、腫瘍測定を週に2回実施した。腫瘍体積は、次の式を使用して計算した:V=0.5×幅×幅×長さ。腫瘍が200mm3の体積に近づいたら、マウスを無作為に10匹ずつの5群に分けた。翌日、マウスを20mg/kgのmIgGBioXCell;WestLebanon,NH、2mg/kgの4B9、5mg/kgの4B9、10mg/kgの4B9、または20mg/kgの4B9で、腹腔内注射によって処理した。マウスには実験の実施期間中、週2回投薬した。最終投与の72時間後、腫瘍成長阻害を計算するために、腫瘍体積を再度測定した。全ての統計学的分析は、GraphPadPRISM登録商標バージョン4.00を使用して実施した。一元配置分散分析およびチューキー多重比較試験を使用してusingwith、最終腫瘍体積を分析した。SNU-16異種移植腫瘍は、20mg/kgの対照マウスIgG、または2、5、10または20mg/kgの抗体4B9で処理した。図6に示すように、各4B9処理群は、対照群が実験に残る最終日である43日目に、mIgG処理対照と比較して、有意な腫瘍成長阻害を示したそれぞれ70、72、77、および82、p<0.001。全ての処理は良好に耐えられ、顕著な体重低下はなかった。腫瘍溶解産物もまた分析した。FGFR2のチロシンリン酸化の阻害と同時に、抗体4B9は、腫瘍中のFGFR2タンパク質の総量を下方制御した。実験終了時に採取された腫瘍からの対照IgGまたは4B9処理腫瘍サンプル中において、全ERK1/2またはホスホ-ERK1/2に、有意差は検出されなかった。生体外のSNU-16細胞のホスホ-受容体チロシンキナーゼRTKプロフィールとは対照的に、SNU-16異種移植片のRTKアレイ分析は、FGFR2が生体内でチロシンリン酸化された主要RTKであることを明らかにし、4B9は、試験した4B9処理SNU-16腫瘍の2つで、FGFR2チロシンリン酸化を顕著に阻害した。生体外では、SNU-16細胞増殖は、4B9処理に対して感受性でなかった。生体内におけるSNU-16細胞中のFGFR2のチロシンリン酸化は、生体内における活性化FGFR2シグナル伝達に対するSNU-16異種移植片の依存性が、抗体4B9処理に対するそれらの感受性を説明することを示唆する。抗体4B9の効果はまた、FGFR2増幅乳癌細胞系MFM-223の生体内成長に対しても調査された。これらの研究のために、5週例のメスNCrヌードマウスTaconic;Germantown,NYの左脇腹の皮下に0.72mgの90日間放出17-βエストラジオール錠剤InnovativeResearch;Sarasota,FLを埋め込み、右脇腹に1:1のEMEMATCC;Manassas、VA/マトリゲル中の10×106個のMFM-223細胞を皮下接種した。腫瘍が200mm3の体積に近づいたら、マウスを無作為に10匹ずつの2群に分けで、20mg/kgのmIgGBioXCell;WestLebanon,NHまたは20mg/kgの4B9でIP処理した。マウスには実験の実施期間中、週2回投薬した。全ての統計学的分析は、GraphPadPRISM登録商標バージョン4.00を使用して実施した。本実験は2群のみで実施されたので、最終腫瘍体積および重量27日目、最終投与の48時間後は、対応のない両側t検定を用いて分析した。25日目には、MFM-223異種移植片では、mIgG処理対照と比較して、4B9処理マウスでは、腫瘍体積p=0.0015;図7および最終腫瘍重量p=0.0188に66を上回る阻害があった。全ての処理は良好に耐えられ、顕著な体重低下はなかった。SNU-16異種移植片で観察されたのと同様に、4B9は、腫瘍中で、FGFR2のチロシンリン酸化阻害と同時に、全FGFR2タンパク質を強力に下方制御した。実験終了時に採取された腫瘍からの対照IgGまたは4B9のどちらかで処理された腫瘍サンプル中において、全またはホスホ-ERK1/2phosphor-ERK1/2に、有意差は検出されなかった。実施例9:抗FGFR2抗体のヒト化A.ヒト化FGFR2抗体の構築本実施例は、4B9と命名されたマウス抗体のヒト化と、得られたヒト化抗体の特性解析について述べる。ヒト化抗FGFR2IIIb抗体は、当該技術分野で良く知られている方法を使用してデザインされた。デザインされたアミノ酸配列はコドン最適化DNA配列に転換され、DNA2.0、Inc.によって合成され、以下をこの順で含む:5’HindIII制限部位、コザックコンセンサス配列、アミノ末端シグナル配列、ヒト化可変領域、ヒトIgG1またはκ定常領域、停止コドン、および3’EcoRI制限部位。In-Fusion商標PCRクローニングClontech,MountainView,CAを使用して、HindIIIおよびEcoRI部位を通じて、ヒト化重鎖をpEE6.4Lonza,Basel,Switzerlandにサブクローニングした。In-Fusion商標PCRクローニングを使用して、HindIIIおよびEcoRI部位を通じて、ヒト化κ軽鎖をpEE14.4Lonzaにサブクローニングした。ヒト化抗体鎖を293T細胞に一過性に形質移入して、抗体を作成した。引き続く生体外分析のために、抗体を精製した。ヒト化抗体とヒトFGFR2IIIbの結合は、下述するようにして測定された。結果を表12および13に要約する。ヒト化免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖可変領域の可能な各組み合わせを下の表6に示す。ヒト化4B9抗体の可変領域をコードする核酸配列、およびそれを画定するタンパク質配列を下に要約するアミノ末端シグナルペプチド配列は示されない。CDR配列Kabat定義は、アミノ酸配列中で太字で示され下線付きである。Hu4B9-65重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号34Hu4B9-65重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号35Hu4B9-82、-83重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号36Hu4B9-82、-83重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号37Hu4B9-65κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号39Hu4B9-65κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号40Hu4B9-82κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号43Hu4B9-82κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号44Hu4B9-83κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号45Hu4B9-83κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号46実施例9で作成された抗体について、免疫グロブリン重鎖可変領域を画定するアミノ酸配列を図8で配列比較する。適切な発現/分泌のためのアミノ末端シグナルペプチド配列は、示されない。CDR1、CDR2、およびCDR3Kabat定義は、ボックスによって同定される図9を参照されたい。実施例9の抗体について、免疫グロリン軽鎖可変領域を画定するアミノ酸配列を図10で配列比較する。適切な発現/分泌のためのアミノ末端シグナルペプチド配列は、示されない。CDR1、CDR2、およびCDR3Kabat定義は、ボックスによって同定される図11を参照されたい。表7は、本明細書の実施例で考察される各配列の配列番号を示す、一致度チャートである。マウスおよびヒト化モノクローナル抗体重鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表8に示す。マウスおよびヒト化モノクローナル抗体κ軽鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表9に示す。完全長ヒト化重鎖またはκ鎖抗体配列を作り出すために、上の各可変配列をそれぞれのヒト定常領域と組み合わせる。例えば完全長重鎖は、重可変配列と、それに続くヒトIgG1重鎖定常配列を含んでなる。完全長κ鎖は、κ可変配列と、それに続くヒトκ軽鎖定常配列を含んでなる。ヒトIgG1重鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号49ヒトIgG1重鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号50ヒトκ軽鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号51ヒトκ軽鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号52以下の配列は本実施例で説明される各抗体について、実際のまたは熟考された完全長重鎖および軽鎖配列すなわち可変および定常領域配列の双方を含有するを表わす。抗体の適切な分泌のためのシグナル配列もまた、DNA配列の5’末端、またはタンパク質配列のアミノ末端に含まれる。可変領域配列をその他の定常領域配列にライゲートして、活性完全長IgG重鎖および軽鎖を生成し得ることも本明細書で熟考された。完全長ヒト化Hu4B9-65重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号53完全長ヒト化Hu4B9-65重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号54完全長ヒト化Hu4B9-82、-83重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号55完全長ヒト化Hu4B9-82、-83重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号56完全長ヒト化Hu4B9-65軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号57完全長ヒト化Hu4B9-65軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号58完全長ヒト化Hu4B9-82軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号59完全長ヒト化Hu4B9-82軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号60完全長ヒト化Hu4B9-83軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号61完全長ヒト化Hu4B9-83軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号62便宜のため、表10は、本実施例で考察される各配列の配列番号を示す一致度チャートを提供する。下の表11は、完全長ヒト化免疫グロブリン重鎖および軽鎖の可能な各組み合わせを含有する抗体を示す。ヒト化可変領域を含有する完全長免疫グロブリン重鎖および軽鎖を含有する可能な抗体コンストラクトの内3つを下に示す:Hu4B9-65=ヒト化Hu4B9-65重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域配列番号54プラスHu4B9-65軽鎖可変領域およびヒトκ定常領域配列番号58Hu4B9-82=ヒト化Hu4B9-82、-83重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域配列番号56プラスHu4B9-82軽鎖可変領域およびヒトκ定常領域配列番号60Hu4B9-83=ヒト化Hu4B9-82、-83重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域配列番号56プラスHu4B9-83軽鎖可変領域およびヒトκ定常領域配列番号62B.ヒト化抗FGFR2モノクローナル抗体の結合親和性単量体組換えヒトFGFR2βIIIbrhFGFR2β-IIIb-切断に対する、実施例9で作成されたモノクローナル抗体の結合親和性および相互作用動態をBiacoreT100BiacoreGEHealthcare,Piscataway、NJ装置を使用して、表面プラズモン共鳴によって測定した。標準カップリングプロトコルを使用して、供給業者の使用説明書に従って、アミンカップリングBiacoreによって、ヤギ抗ヒトIgGFcJacksonImmunoResearch、カタログ番号109-005-098をカルボキシメチル化デキストランCM4センサーチップBiacore上に固定化した。0.05の界面活性剤P20Biacoreを含有するPBSInvitrogenを泳動用緩衝液として使用して、25°Cおよび37°Cで分析を実施した。流速10μl/分で、個々のフローセル内において精製抗体を捕捉した。各抗体毎に注入時間を変えて、30~90RUのRmaxを得た。緩衝液、または泳動用緩衝液で希釈した切断rhFGFR2β-IIIbを参照表面抗体捕捉なしおよび活性表面試験抗体上に60μl/分で240秒間逐次注入した。解離相を900秒までモニターした。次にpH2.25のグリシングリシンpH2.0BiacoreおよびpH2.5Biacoreから作成されたを30μl/分で60秒間にわたり2回注入して、表面を再生した。20~1.25nMの濃度2倍連続希釈のrhFGFR2β-IIIb-切断を使用して、実験を実施した。BIAevaluationソフトウェアBiacoreの動態学機能を使用して、二重参照減法で動態学パラメータを測定した。各抗体の動態学パラメータ、ka結合速度定数、kd解離速度定数、およびKD平衡解離定数を測定した。25°CにおけるrhFGFR2β-IIIb-切断に対する特定の精製モノクローナル抗体すなわちHu4B9-65、Hu4B9-82、およびHu4B9-83の動力学値を表12に要約する。表12の結果は、25°Cで試験すると、精製抗体が、約260pM~約490pMの範囲にわたる親和性を有することを実証する。37°CにおけるrhFGFR2β-IIIb-切断に対する特定の精製モノクローナル抗体すなわちHu4B9-65、Hu4B9-82、およびHu4B9-83の動力学値を表13に要約する。表13の結果は、37°Cで試験すると、精製抗体が、約890pM~約930pMの範囲にわたる親和性を有することを実証する。実施例10:ヒト化抗FGFR2モノクローナル抗体の抗増殖性活性ヒト化抗FGFR2抗体の効力を細胞ベース増殖アッセイで評価した。96ウェルプレート内の8ng/mlのFGF1および5μg/mlのヘパリンを含有するIL-3非含有培地に、FGFR2-IIIbを発現するFDCP-1細胞を接種した。抗体の連続希釈を調製して、プレートに添加した。2日間のインキュベーション後に、実施例1で上述したようにMTTアッセイによって細胞増殖を調べた。図12に示すように、ヒト化抗体Hu4B9-65、Hu4B9-82、およびHu4B9-83は、FGF1誘導性FDCP-FGFR2-IIIb細胞増殖の用量依存的阻害を実証した。3回の独立した実験からの4B9、Hu4B9-65、Hu4B9-82、およびHu4B9-83の平均IC50は、それぞれ1.4、4.9、5.7、および4.7nMである。参照による援用本明細書で言及される各特許文献および科学論文の開示全体は、あらゆる目的のために参照によって援用する。同等物本発明は、その趣旨または本質的特性を逸脱することなく、その他の特定形態で具現化されてもよい。したがって前述の実施形態は、本明細書に記載される本発明を限定せず、全ての点で例証的と見なされる。したがって本発明の範囲は、前述の説明ではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の同等物の意義と範囲内に入る全ての変更は、その中に包含されることが意図される。"