"増殖性疾患の処置のためのエポチロンを含む医薬製剤。実施例:以下の実施例は、本発明を説明しようとするものであって、その範囲を限定しようとするものではない。とりわけ、そこに述べるセルラインは、単に代表的なものにすぎず、代表的である別のセルラインおよび腫瘍細胞で置き換えることができるので、本発明の範囲を限定するとは見なされない。化合物溶液の調製DMSO中、エポチロンBの保存溶液を10mg/mlで調製して、-20°Cで保存する。最終濃度が5v/vDMSO、005v/vTween80、および95v/v生理食塩水となるまで、アリコートを水溶液に希釈する。細胞および細胞培養条件ヒト結腸直腸腺癌セルラインHCT-15をAmericanTypeCultureCollectionから入手して、提供者により薦められた通り、その細胞をインビトロで培養する。HCT-15は、P-糖タンパク質の過剰発現およびグルタチオン依存抵抗性機構によって多剤抵抗性である上皮様セルラインである。Colo205セルラインはまた、患者の腹水液から単離された結腸癌セルラインでもあり、上皮様形態を示し、一般には薬物感受性であると考えられる。ヒトアンドロゲン非依存性前立腺癌セルラインを使用して、マウスにおける皮下および正位置モデルを確立する。ヒト転移性前立腺癌PC-3MをIJFidler博士から得て、7v/vFBSを補ったHamのF12K培地で培養する。そのPC-3Mセルラインは、PC-3細胞[ATCCCRL1435;AmericanTypeCultureCollection]の脾臓内注射の後、ヌードマウスにおいてもたらされる肝臓転移からの単離の結果であり、それらは、10ウシ胎児血清、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、L-グルタミン、2倍のビタミン溶液およびペニシリン-ストレプトマイシンを補ったEagleのMEMで増殖することができる。PC-3Mセルラインは、ホルモン非感受性である。PC-3セルラインは、恐らく、誘導PC-3Mセルラインであるので、アンドロゲン受容体ネガティブである。PC-3は、ATCCから入手可能なセルラインであり、62年齢のカフカス人男性から単離されたグレードIVの前立腺癌に対応する;その細胞は、低い酸性ホスファターゼおよびテストステロン-5-α-レダクターゼ活性を示す。その細胞は、形態上の染色体数が62本である、ほぼ三倍体である。正常なY染色体は、Qバンド分析では検出することができない。ヒト肺腺癌A549は、上皮形態を示し、シチジンジホスホコリン経路を利用して、レシチンを高いパーセンテージの不飽和化脂肪酸で合成することができ;染色体6本および長腕の染色体1本を伴う下部末端動原体マーカー染色体が全ての中期において見出される。ヒト乳癌ZR-75-1は、乳房上皮起源のものであり;その細胞は、エストロゲンおよび他のステロイドホルモンの受容体を有し、三倍体を越える染色体数を持つ。ヒト表皮癌セルラインKB-8511KB-31癌セルラインから誘導されるP-gp過剰発現セルラインをRMBaker博士,RoswellParkMemorialInstituteから得て、前記の通り培養する。KB-31のようなKB-8511細胞は、KBセルラインから誘導され、それらはヒト表皮癌細胞であり;KB-31細胞は、10ウシ胎児血清、L-グルタミン、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むDulbeccoの修飾されたEagleの培地を使用して、単層で増殖することができ;次いで、それらを22時間の倍加時間で増殖し、それらの相対的コロニー形成率は約60である。KB-8511は、コルヒチン処置サイクルの使用により、KB-31セルラインから誘導されるセルラインであり;それは、KB-31細胞と比べた場合、コルヒチンに対して40倍の相対的抵抗性を示し;それは、KB-31と同じ条件下に増殖することができる。セルラインの特徴に関してより詳細には、ATCCカタログおよびその中に引用されている文献、または上に引用した他の文献を参照されたい。上述した以下のセルラインは、DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHでの1998年2月20日にブダペスト条約の下、各々、以下の取得番号:PC-3M:DSMACC2338;A-549:DSMACC2337;KB-8511:DSMACC2342にて寄託されている。加えて、上述した以下のセルラインは、DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHでの1998年12月1日にブダペスト条約の下、各々、以下の取得番号:ZR-75-1:DSMACC2376;HCT-15:ACC2377にて寄託されている。以下において、行った試験に関する一般的な方法を記載する。特定条件を述べる場合、これらは、次のパラグラフに提示する一般的な記述より優先する。抗増殖アッセイ抗増殖アッセイを先に記載したように行う。簡単に言えば、細胞を96ウェルのマイクロタイタープレートに15×103細胞/ウェルで播種して、一晩インキュベートする。1日目に、化合物を連続希釈で加える。次いで、そのプレートをさらに2~5日間インキュベートし、少なくとも1つの細胞倍加を可能とした後、細胞を33v/vグルタルアルデヒドで固定し、水で洗浄して、005w/vメチレンブルーで染色する。洗浄した後、染料を3v/vHClで溶出して、光学密度をSpectraMax340で665nmにて測定する。式:/×100を使用して、IC50値をコンピューターシステムにより決定する。IC50は、インキュベーション期間が終わった時点で対照培養と比べて1ウェルあたり細胞を50へと導く薬物濃度として定義される。皮下移植した腫瘍に対するインビボでの抗腫瘍活性雌または雄のBALB/cnu/nuマウスを、食物および水を自由に摂取させながら、無菌条件下に保つ。腫瘍移植の時点で、マウスの体重は20~25グラムである。キャリアマウスにおける細胞の皮下注射により、腫瘍を確立する。処置開始前に、その結果得られた腫瘍を最低限3回の連続移植に連続的にかける。マウスをForene麻酔にかけながら、腫瘍フラグメントを動物の左側腹部に13ゲージのトロカール針で皮下移植する。腫瘍増殖および体重を週1回または2回モニターする。処置は全て、静脈内投与で施し、腫瘍タイプにより、平均腫瘍体積が約100~250mm3となったら開始する。式:/6を使用して、腫瘍体積を測定する。エポチロンBでの処置は、投与用量および回数が様々である。予め決定しておいた最適処置レジメンにより、コンパラトール物質を投与する。処置過程にわたり腫瘍体積の変化があることに加えて、抗腫瘍活性をT/Cとして表わす。式:退行=×100により、腫瘍退行は、処置開始時点での平均腫瘍体積と比べて最も少ない平均腫瘍体積を表わす。腫瘍が約15~25cm3を超える大きさに達した動物をいずれも屠殺する。詳細は、以下に見出すことができる。正位置に注射した細胞に対するインビボでの抗腫瘍活性先に記載した方法により、ヒト前立腺癌PC-3M細胞を各々の動物の前立腺の左室に注射する。処置を細胞注射後14日目に開始する。この時点で、20mgまでの平均腫瘍重量を確立する。エポチロンBを1回または週1回投与する。マウスを腫瘍接種後42日目に屠殺して、前立腺を注意して摘出し、付着組織を切除して、重量を測る。メセンゲアルリンパ節を転移の存在に関して試験し、付着組織を切除して、重量を測る。腸間膜リンパ節を転移の存在に関して試験し、付着組織を切除して、重量を測る。腫瘍重量および体重を週1回または2回モニターする。処置は全て、静脈内投与で施し、細胞注射後14日目に開始する。エポチロンBでの処置は、投与用量および回数が様々である。抗腫瘍活性をT/Cとして表わす。統計分析統計分析に関する基本方法は、多重比較のための試験を使用し、処置グループ間での相違、およびグループ内での相違に関する統計上の有意性を判断して、処置が安定な疾患または腫瘍退行を誘発するかどうかを決定することである。皮下腫瘍体積は、通常、分散しないので、ランク付けしたデータに対するノンパラメトリックなKruskal-Wallisの一方向性ANOVA試験を使用して、処置グループ間での皮下腫瘍体積における相違を決定し、Dunnett試験を使用して、対照グループと比べての処置グループ間での相違に関する統計上の有意性を決定する。Student-Newman-Keuls方法を使用して、全てのグループ間での二点比較を行う。臓器重量は、通常、正常分散せず、ノンパラメトリック試験を使用して分析するか、または正規性に変換して、一方向性ANOVA、続いて、Dunnett試験により、またはTukeyを使用して分析する。Δ腫瘍体積に関する統計分析は、ランク付けしたデータに対するKruskal-Wallisの一方向性ANOVA試験を使用し、Dunnettの試験により処置グループをビヒクル対照と比べる。処置グループとビヒクル対照との間での体重における相違を二点t試験により分析する。Fisherの完全試験を使用して、グループ間での死亡率における相違の有意性を決定する。全ての試験に関して、有意性のレベルをp<005で設定するが、これらの小さな試料の大きさに関しては、08という所望の粉末レベルは決して得られないことに注目されたい。正位置モデルに関して、FisherのExactTestを使用して、転移を有するマウスの割合が処置グループと対照との間で相違しているかどうかを測定する。いずれの統計計算もSigmaStat20を使用して行う。材料エポチロンBは、粘液細菌Sorangiumcellulosumの培養から、BiopharmaceuticalsProductionandDevelopmentDepartmentNovartisPharmaBaselSwitzerlandにより精製される。TAXOLはBristolMyersSquibbから、パクリタクセルはCalbiochemおよび5-フルオロウラシルはRocheから購入する。細胞培養材料はIntegraBioScienceからである。液体媒体、ウシ胎児血清および媒体添加剤はGibcoBRLからである。BALBcnunuマウスはBomholtgaardから、またはNovartisAnimalFarmから得る。正常BALBcマウスはIffaCredoから、またはNovartisAnimalFarmから得る。最大耐量の測定MTD測定のために、雌BALBcヌードマウスまたはBALBcマウスを一度エポチロンBで処置する。投与量を増加させ、マウスを医薬処置の後10日間、明白な毒性効果の出現に関して観察する。実施例1:最大耐量の測定最大耐量試験の結果を表1および表2に示す。エポチロンBを2、4、6、8、10または12mgkgの投与量で1回ivボーラスとして投与する。マウスの生存および体重を毎日追跡する。体重の変化を、最後に測定した体重と処置前のものの比較により決定する。エポチロンBを2、4、6、8、10または12mgkgの投与量で1回ivボーラスとして投与する。マウスの生存および体重を毎日追跡する。体重の変化を、最後に測定した体重と処置前のものの比較により決定する。これらの実験から、正常マウスにおいてMTDは約4mg/kg、一方ヌードマウスではMTDは約6mg/kgであることが導かれる。実施例2:エポチロンBの毒性エポチロンBの亜慢性静脈内毒性を評価するために、致死率、臨床的兆候、体重、餌消費、血液学、臨床生化学、尿検査および臓器重量、ならびに巨視的および微視的試験を含む、非GLP2週間iv毒性実験を、非腫瘍担持、正常雌BALBcマウスで行う。実験は、各々3mg/kgおよび10mg/kgのエポチロンBを1日目および8日目に投与する2種の異なる投与量レジメに基づく。動物の半分を15日目に殺し、検死を行う。残りの半分に関して、5週間の回復期間を2回目の投与の後に殺す前に与え、続いて43日目に検死する。しかし、10mg/kg投与量において、回復グループの全ての動物を、不健康な一般的状態のために19日目に早めに殺している。いずれの濃度でも処置期間に致死は起こらず、3mg/kgのグループに関して、回復グループの全ての動物が実験の最後まで生存する。体重減少が、10mg/kg投与量グループのすべての動物で第1および第2週の間に観察されるが、3mg/kg投与量での体重減少は第2週でのみ明らかである。回復期間中の体重増加は処置およびコントロール動物で同じである。両方の投与レベルのエポチロンBは多くの白血球、特に好中球およびリンパ球の数の減少を全ての処置動物で誘導するが、効果は10mg/kg投与量でより明白である。加えて、好塩基球数のわずかな上昇および単球の減少したレベルが両方の投与レベルで数匹の動物で観察される。赤血球細胞のパラメーターのわずかに低下した値が増加した網状赤血球および血小板と共に、10mg/kg投与量でのみ記録される。回復期間の最後に、血液学的パラメーターは3mg/kg投与量回復グループの4匹中2匹の動物で正常であるが、他の2匹はまだ白血球細胞数減少に罹患している。処置動物の臨床化学プロフィールで、エポチロンBでの処置に明らかに関係があるはずがない、わずかな変化のみが観察される。両方の投与量でのエポチロンBの処置は、胸腺、脾臓および子宮重量に明白な変化を導く。加えて、肝臓重量のわずかな変化が観察される。。3mg/kg投与量に関して、回復期間の最後の臓器重量はコントロール動物と同等であり、完全な回復を示す。。15日目に殺した動物の組織学的に処理した選択組織の微視的調査は、3mg/kgおよび10mg/kg投与量の各々で、胸腺の中程度から著しい萎縮を明らかにする。加えて、脾臓のリンパの極小の萎縮、胸骨骨髄における極小から軽微な脊髄形成不全、および脾臓における極小に増加した造血が10mg/kgで観察される。3mg/kgにおいて、胸骨骨髄は極小から軽微な赤血球および骨髄球萎縮を示す。極小単一細胞壊死が、両方の投与レベルで腸粘膜で記されるが、10mg/kg投与量で高い発生率である。両方の投与レベルからの回復グループはわずかな脊髄過形成および/または骨髄の萎縮を示す。10mg/kgで、わずかなリンパ萎縮がまた脾臓で見られ、加えて、軽微から中程度なヘモジデリン沈着が存在する。10mg/kgで、微視的試験に利用可能な胸腺組織は存在せず、胸腺萎縮がこれらのマウスで起こっているはずであることを示す。胸腺における組織学的変化は、3mg/kg投与量回復グループからの動物に関して43日目で見られない。結論として、3mg/kgエポチロンBの投与レベルが、43日の全観察期間について致死なしで耐容性であったが、10mg/kgを投与された動物は、不健康な状態のために19日目に殺す。体重減少は両方の投与レベルで処置期間中に起こる。血液学は、両方の投与グループにおいて、白血球、好中球およびリンパ球の低い値を、数匹のマウスに関する好塩基球の高いおよび単球の低い数と共に確認する。臨床化学的プロフィールに対する効果は観察されない。中程度から著しい胸腺の萎縮が処置期間後のみに3および10mg/kgで、10mg/kg投与量の極小リンパ萎縮と共に観察される。加えて、骨髄における脊髄形成不全および脾臓の増加した造血が10mg/kgで検出可能である。骨髄の軽微な赤血球および骨髄球萎縮が3mg/kgで見られる。単一細胞壊死が3および10mg/kgで処置期間の最後のみに腸粘膜で検出される。結論エポチロンBの毒性学的発見に関する実施例1および2の要約データから明らかになる最も重要な結論は以下の通り要約できる:BALBcバックグラウンドの正常およびヌードマウスへのエポチロンBの1回投与量iv投与のMTDは各々4mg/kgおよび6mg/kgに対応する。ヌードマウスは、従って、正常マウスよりも化合物の毒性効果に感受性が低い。正常マウスにおいて、1週間離れて投与した2回の3mg/kgの投与は十分耐容性であり、最初の投与の43日後まで致死をもたらさない。10mg/kg投与レベルの同じ投与レジメは、全ての処置動物の死をもたらす。実施例3:細胞系に対するエポチロンのインビトロ活性エポチロンBの強い抗増殖活性が、あるヒト癌細胞系で確認される;これらの実験の結果を表3に要約する。エポチロンBは一般にパクリタクセルより高い効果を、特に多剤耐性表現型に対して示す。a平均±SD、n=2。b2日曝露;c3日曝露MDR=多剤耐性実施例4:ヒト結腸直腸腺癌HCT-15に対するエポチロンの抗腫瘍活性腫瘍容量を単独または組合わせで使用する抗腫瘍剤の活性の腫瘍な指標として使用し、体重の変化を処置耐容性の指標として測定する。表4から導き出されるように、エポチロンBの1回4mg/kg投与は、医薬耐性、P-gp過発現、HCT-15大腸腫瘍において腫瘍の退行をもたらすことができる。この活性は、TAXOLの5回20mg/kg投与または2回75mg/kgの5-フルオロウラシルよりも優れている。HCT-15腫瘍はTAXOLおよび5-フルオロウラシルに耐性であり、各々50および88の最終T/C値が得られる。エポチロンB処置は、体重が処置下で安定しているため十分耐容性である;媒体処置マウスは体重が増加する。処置による致死はエポチロンBで観察されない。比較して、TAXOL処置で幾分かの致死が、およびより高い程度の致死が5-フルオロウラシルで観察される;しかし、処置グループが少数であるため、これは統計的有意には到達しない。いずれかの処置で生存したマウスは、安定な体重を証明する。この結果は、エポチロンBが、TAXOLおよび5-フルオロウラシルに耐性なHCT-15腫瘍に対して明白な抗腫瘍効果をもたらし、この4mg/kg投与量で十分耐容性であることを示す。約25mgの腫瘍断片を各雌ヌードマウスの左横腹に移植する。処置を腫瘍移植14日後に開始する。エポチロンBを1回4mg/kg、ivで14日目に投与する。5-フルオロウラシルを75mg/kg、ivで14日目および21日目に投与する。TAXOLをivで20mg/kg/日で、2日毎に5回処置投与する。抗腫瘍活性をT/Cとして示す。腫瘍抑制は処置の開始時の平均腫瘍容量と比較した最終平均腫瘍容量を示す。Δ腫瘍容量は最後の処置の日の腫瘍容量から処置の最初の日の腫瘍容量を引いたものである。Δ腫瘍容量における統計学的分析は、Dunnetts検定を使用し、処置グループをコントロールと比較する。体重変化における統計学的分析は、t-検定を使用し、処置前の体重と処置の最後を比較する;処置開始時のマウス体重~20-25g。有意差なしは、略語nsで示す。示すデータは、実験の最後まで生存した動物の平均±SEMで示す。実施例5:皮下的に移植した雌BALBcヌードマウスにおけるヒトKB-8511類表皮癌に対するTAKOLと比較したエポチロンBの抗腫瘍効果表5から導き出されるように、エポチロンBの種々のレジメがヌードマウスにおけるTAXOL耐性KB-8511腫瘍の生育の阻害に可能である。4mg/kgエポチロンBの1回投与は一過性抑制を示すが、腫瘍は処置後40日目までに再生育し、24の最終T/Cとなる。この1回エポチロンB投与は十分耐容性であり安定な体重となり、致死は起こらない。エポチロンBの1週間1回の投与は、腫瘍生育の用量依存的阻害をもたらす:4mg/kgは98抑制をもたらす;2mg/kgは一過性44抑制および14の最終T/Cをもたらす;1mg/kgは最終T/C81をもたらす。TAXOLはKB-8511腫瘍に不活性である。実験の最後に、4mg/kg/週エポチロンBで処置した5/8のマウスおよび2mg/kg/週エポチロンBで処置した1/8のマウスは検出可能な腫瘍はない。1週間に1回4mg/kgは体重を減少させる傾向にあるが、この値は統計学的有意には到達しない。媒体コントロール、2および1mg/kg/週エポチロンBおよびTAXOLグループは全て体重の増加を示し、致死はなく、十分に耐容性の処置を示す。これらの結果は、エポチロンBが、TAXOL耐性である実験的類表皮腫瘍に対して有効であることを示す。約25mgの腫瘍断片を各雌ヌードマウスの左横腹に移植する。処置を腫瘍移植13日後に開始する。エポチロンBを1回4mg/kg、ivで13日目に、または4、2または1mg/kgivで1週間に1回投与する。TAXOLをivで20mg/kg/日で、2日毎に5回処置投与する。抗腫瘍活性をT/Cとして示す。腫瘍抑制は処置の開始時の平均腫瘍容量と比較した最終平均腫瘍容量を示す。腫瘍容量の変化は最後の処置の日の腫瘍容量から処置の最初の日の腫瘍容量を引いたものである。Δ腫瘍容量における統計学的分析は、Dunnetts検定を使用し、処置グループをコントロールと比較する。体重変化における統計学的分析は、t検定を使用し、処置前の体重と処置の最後を比較する;処置開始時のマウス体重~20-25g。有意差なしは、略語nsで示す。示すデータは、実験の最後まで生存した動物の平均±SEMで示す。この実験から、TAXOLは有効ではないが、エポチロンB処置は有効な抗腫瘍活性を示すことが導かれる;4mg/kg投与量で抑制さえ認められる。実施例6:正位置に注入したPC-3M前立腺細胞に対するエポチロンの抗腫瘍活性最初に前立腺で生育し、次いでメセンゲアルリンパ節に転位を形成したPC-3M腫瘍に対するエポチロンBの活性の測定の結果を表6に示す。本実験的前立腺癌モデルにおいて、PC-3M細胞を最初に前立腺で生育させ、次いで腸間膜リンパ節に転位を形成させる。臓器重量を処置の抗腫瘍活性の評価に使用する。表6はリンパ節への影響が観察されない細胞注入後14日目から、前立腺および腸間膜リンパ節が劇的に重量を増加させる細胞注入後42日目の進行を示す。エポチロンBの全ての投与レジメは、前立腺重量の減少および腸間膜リンパ節への腫瘍の転移の予防に非常に有効である。進行中の処置の全て、抗腫瘍活性は同等である。媒体試験コントロールの全ての動物と比較して、各エポチロンB処置グループにおいて、1匹の動物のみが検出可能な転移があり、エポチロンBでの処置が検出可能な転移の形成を有意に減少させることを示す。エポチロンB処置は高用量では十分耐容性ではない。6mg/kg1回投与、または4mg/kg2回投与は体重減少の傾向があるだけであるが、8mg/kg1回または5mg/kg1週間1回の投与は体重の有意な減少をさせる。処置は腫瘍担持マウスの生存を促進するように見える;しかし、処置グループ当たり少数であるために、これは6mg/kgレジメでのみ統計学的有意に到達する。エポチロンBはこのモデルで、初期腫瘍の減少および転移の予防の両方の観点から優れた抗腫瘍活性を有する。しかし、エポチロンBは、あるレジメでは耐容性が乏しい。本実験の結果は、エポチロンBがヒト前立腺癌に対してインビトロおよびインビボの両方で活性であることを示す。エポチロンBはまた、前立腺癌の正位置モデルで初期腫瘍の減少および検出可能な転移の形成の強い阻害をできる。更に、それはまた付加的実験で試験する必要があるが、これらの腫瘍担持マウスの生存を促進する可能性がある。この強力な抗腫瘍活性と並行して、エポチロンBは試験した投与レジメで有意な体重減少をする。しかし、この乏しい耐容性の理由は未知である。正位置PC-3MモデルにおけるエポチロンBの活性は特に注目すべきである。正位置モデルは初期腫瘍がヒトで位置している組織内に腫瘍を位置し、殆どの皮下腫瘍移植モデルと異なり、転移が頻繁に起こる。したがって、エポチロンBの前立腺における初期腫瘍生育の抑制および腸間膜リンパ節転移の形成および/または生育の阻害はエポチロンBの有意な活性を示す。要約として、相対的に化学療法に耐性であると考えられる実験的前立腺癌モデルにおける強い抗腫瘍活性のために、エポチロンBは前立腺癌の将来有望な薬剤であると考えられる。20μLPBS中の1×106PC-3M細胞を各雄ヌードマウスの前立腺の左室に注入する。処置を腫瘍細胞注入後14日目に開始する。エポチロンBをivで1回6または8mg/kg、または1週間に1回4または5mg/kg投与する。抗腫瘍活性をT/Cとして示す。体重の差は実験の最後まで生存している動物に対してのみ考える。Δ体重における統計学的分析は、t検定を使用し、処置前の体重と処置の最後を比較する;処置開始時のマウス体重~20-25g。有意差なしは、略語nsで示す。実施例7:ヒト肺非小細胞癌A549に対するエポチロンBの効果3百万から1千万の細胞を、異系交配無胸腺マウスの右腋窩にsc移植し、約100mm3の腫瘍容量が確立されるまで生育させる。エポチロンBは蒸留水中の5グルコース中1DMSOの溶液中製剤し、ivで1回のみ、1週間1回、1週間3回または1週間5回投与する。陽性コントロールをD5Wで6倍に希釈して製剤し、iv3回/週で投与するTAXOLの臨床製剤で行う。抗腫瘍活性を実験の最後にT/C。抑制は式:-×100を使用して計算する。統計学的有意は片側Studentt検定を使用して評価する。結果:表7はA549腫瘍の結果を要約する。エポチロンBは、6mg/kg投与したとき、有意な腫瘍抑制をを検出可能な毒性なしに誘導する。1回/1週間の4mg/kg投与は、腫瘍静止を誘導するが、13の体重減少をする。比較して、3回/週の15mg/kg投与では、全ての動物を毒性のために実験の最初の週で安楽死させる。05mg/kg、5回/週は1回のみのレジメと同等な腫瘍阻害を誘導するが、23体重減少をもたらす蓄積的毒性が明らかである。TAXOL、20mg/kgの3回/週投与は腫瘍生育を阻害せず、16の体重減少を8匹中1匹の死亡と共に誘導する。処置を移植後16日目に開始する。エポチロンBをivで6mg/kg1回、4mg/kg1週間1回、15mg/kg1週間3回、または05mg/kg1週間5回投与する。TAXOLをivで1週間3回20mg/kg、1時間離して10mg/kgの分割量として投与する。媒体コントロールをivで1週間3回投与する。全ての最終データを37日目にとる。アスタリスク1個は、片側Studentst検定を使用して、p<005およびアスタリスク2個はp<001を示す。NE:評価せず-動物を化合物毒性のために安楽死。実施例8:ヌードマウスにおけるA549肺非小細胞癌に対するTAXOLと比較したエポチロンBの効果ヒト腫瘍異種移植片モデルの調製のための材料および方法は先に記載の通りである。1千万のまたは1百万の細胞を、異系交配無胸腺マウスの右腋窩にsc移植し、約100mm3の腫瘍容量が確立されるまで生育させる。エポチロンBは蒸留水中の5グルコース中1DMSOの溶液中製剤し、ivで1週間1回、3週間投与する。陽性コントロールをD5Wで4倍に希釈して製剤し、iv3回/週で3週間、1時間離して分割量として投与するTAXOLの臨床製剤で行う。抗腫瘍活性を実験の最後にT/C。抑制は式:×100を使用して計算する。測定は、定期の3週間実験の終了後更に2週間行い、医薬誘導体重減少の回復および抗腫瘍効果の持続性を評価する。統計学的有意は片側Studentt検定、DunnettsまたはDunns検定を使用して評価する。結果:表8は標準3週間実験のA549腫瘍の結果を要約する。エポチロンBの1週間1回の投与は統計学的に有意な、腫瘍生育の用量依存的抑制を示し、医薬の最高濃度で腫瘍静止に近づく。エポチロンBは35および3mg/kgで腫瘍生育の著しい阻害をする。療法の投与量ともかなりの、しかし回復可能な、約15の体重減少をもたらす。2および1mg/kg投与量は、統計学的に有意な43および74T/Cをもたらし、2mg/kgでは体重は増えず、1mg/kgでは通常の体重増加である。2回10mg/kgの分割量で投与するTAXOLは、腫瘍生育を阻害しないが、19体重減少をもたらす。処置を移植後13日目に開始する。エポチロンBをivで1、2、3および35mg/kgで1週間に1回3週間投与する。TAXOLをivで1週間3回20mg/kg、1時間離して10mg/kgの分割量として投与する。最終データを34日目に取る。アスタリスク1個は片側Studentst検定を使用してp<005およびアスタリスク2個はDunnettsまたはDunns検定を使用してp<005を示す。測定を、定期の3週間実験の終了後、更に2週間行い、5週目の最終データを表9に要約する。抗腫瘍効果は未変化のままであり、一方動物体重は回復する。35、3、2および1mg/kg投与レベルのエポチロンBのT/C値は各々12、16、49および72であり、全てのグループは正常の体重増加をする。TAXOLは効果のないままであり、動物はわずかに2の体重増加しかしない。表1に記載の実験の測定を更に2週間伸ばす。最終データを48日目に記録する。アスタリスク1個は片側Studentst検定を使用してp<005およびアスタリスク2個はDunnettsまたはDunns検定を使用してp<005を示す。実施例9:ZR-75-1乳腫瘍におけるエポチロンBの抗腫瘍効果表10は乳癌細胞系ZR-75-1におけるTAXOLとエポチロンのB効果を比較した実験の結果を示す。本腫瘍モデルに使用した方法は上記に載されている。データから、最良の投与スケジュールは、4mg/kgの1週間毎の投与である。しかし、全ての投与量で致死が観察され、ZR-75-1腫瘍は他の腫瘍タイプと比較してマウスの全体的な健康に影響し得ることを示す。約25mgの腫瘍断片を各雌ヌードマウスの左横腹に移植する;皮下エストロゲンペレットを逆の横腹に入れる。処置を腫瘍移植19日後に開始する。エポチロンBを1、2または4mg/kgの量で、1週間に1回または2週間毎に投与する。示すデータはコントロールの最終日である47日目に生存する動物からである。抗腫瘍活性をT/Cとして示す。腫瘍抑制は、処置開始時の平均腫瘍用量と比較した最終平均腫瘍用量を示す。腫瘍容量の変化は最後の処置の日の腫瘍容量から処置の最初の日の腫瘍容量を引いたものである。実施例10:皮下的に移植したColo205大腸腫瘍に対する5-フルオロウラシルと比較したエポチロンBの抗腫瘍効果表11は皮下的に移植したColo205腫瘍に対するエポチロンBの効果および5-フルオロウラシルの効果を示す。5-フルオロウラシルでの標準処置またはTAXOLでの処置が有効でないHCT-15細胞系腫瘍の処置と比較して、ここでは5-フルオロウラシルでの処置はまだ有効であるが、エポチロンBでより低い。HCT-15細胞がTAXOLおよび5-フルオロウラシルでの標準大腸癌処置の療法に反応しない実施例4のデータと合わせて、これはエポチロンBが実際既知の標準処置に抗療性である腫瘍の処置に適していることを示す。他方、標準処置が働くものでもより有効である。好ましい処置スケジュールは、2週間毎の4mg/kgであると推定できる。この処置は、抑制がみられないが7匹中4匹の動物のみが生存する5-フルオロウラシルよりもより良い。約25mgの腫瘍断片を各雌ヌードマウスの左横腹に移植する。処置を腫瘍移植14日後に開始する。エポチロンBを4mg/kg、ivで1回または1週間に1回または2週間毎に投与する。5-フルオロウラシルをivで75mg/kg/日で、14、21、28日目に投与する。示すデータは、処置4日後の32日目に生存している動物からである。抗腫瘍活性をT/Cとして示す。腫瘍抑制は処置の開始時の平均腫瘍容量と比較した最終平均腫瘍容量を示す。腫瘍容量の変化は最後の処置の日の腫瘍容量から処置の最初の日の腫瘍容量を引いたものである。実施例11:フェーズ1、進行した固体腫瘍の成人患者へのエポチロンB単剤での1週間1回投与の用量調査研究治験センターの数2目的第1:急性および蓄積性毒性の両方を含む安全プロフィールの特徴付け、および標準全身治療が失敗したまたはその患者のための標準全身治療が存在しない進行した固体腫瘍の成人患者への1週間1回の静脈内点滴による単剤エポチロンB投与の最大耐量の決定のため。第2:1.この患者の集団への1週間1回の静脈内点滴により投与された単剤エポチロンBの抗腫瘍活性の薬物動態学の特徴付け;得られるデータは、安全性および効果の予測を助ける薬物動態学/薬物動力学相関を成すために薬物動態学データと対比する。2.この患者の集団への1週間1回の静脈内点滴により投与された単剤エポチロンBの抗腫瘍活性の予備的証拠を得るため。3.1週間1回の静脈内点滴により単剤エポチロンBを投与された進行した固体腫瘍の成人患者の間の腫瘍内医薬レベルを、前臨床モデルと相関させるため。4.効果および反応と関係する遺伝子を同定するための、利用可能であり、評価可能な治療前および治療後の腫瘍生検サンプルの薬物動態情報を得るため;これは個々の遺伝子発現の遺伝的分析または遺伝子チップ法のいずれかで行う。設計これは標準全身治療が失敗したまたはその患者のための標準全身治療が存在しない進行した固体腫瘍の成人患者への1週間1回の静脈内点滴による単剤エポチロンB投与の安全性、薬物動態学および薬力学の公開ラベル、用量漸増試験である。処置期間は24週投与までである。許容できない毒性または疾病進行を経験した患者は早くに打ち切る。完全なまたは部分的反応を達成した患者、または24回投与の最後に安定した疾病状態の患者は、研究者の判断により、スポンサーによる許可の後に延長プロトコールに従って更に処置を続ける。適格な患者は疾病進行または許容できない毒性まで、更なるサイクルを受ける。MTDを確立するための一団あたり3-6名の登録患者の標準フェーズ1プロトコールを用いる。用量漸増は修飾Fibonacciスキームに従い、各一団の患者の最初の4週間の毒性に基づいて進行する。最初の量は01mg/m2であり、下記の用量に続く:02、03、05、07および09mg/m2。暫定MTDは3-6名の患者の少なくとも2名に用量限定毒性が観察される用量レベルの直ぐ下と定義する。暫定MTDと定義された一団に、次いでエポチロンBの安全性、薬物動態学および薬力学プロフィールの更なる評価を介してMTDを確認するために合計12名の更なる患者を登録する。全ての毒性は改定USNationalCancerInstituteCommonToxicityCriteriaに従って定義する。DLTを本プロトコールで定義する;しかし、一般に、DLTの性質は、不治の固体腫瘍の設定においてさえ許容できないと考えられるものである。患者包含基準本試験への包含のために以下の基準を満たすべきである:1.男性または女性患者≧18歳。2.標準全身的治療および1回までの付加的全身治療に失敗したもの、またはその患者のための標準全身治療が存在しない、組織学的に証明された進行した固体腫瘍。3.正常の制度上の上限を超えた腫瘍マーカー値を含む、SouthwesternOncologyGroupSolidTumorResponseCriteriaにより定義された少なくとも一つの測定可能な、または評価可能なまたは評価不可能な疾病の部位。4.妊娠している可能性のある女性は試験医薬の開始前に血清β-HCG妊娠試験が陰性でなければならない。生殖の可能性のある男性および女性患者は試験の間中および試験医薬の中止後3ヶ月間、避妊に有効な方法を行うことに同意しなければならない。5.≦2の世界保健機関PerformanceStatusScore。6.少なくとも3ヶ月の余命。7.スクリーニング法の前に得た署名された告知に基づく同意。除外基準以下のものが当てはまる場合、試験からの除外が必要である:1.妊娠または授乳中の女性患者。閉経後の女性は妊娠の可能性がないことの考慮のために少なくとも12ヶ月無月経でなければならない。2.重篤なおよび/または抑制できない医学的疾病の患者、3.識別できる脳転移を有する患者。4.急性または既知の慢性肝臓疾患の患者、5.ヒト免疫不全ウイルス感染の既知の診断。6.試験参加前30日以内に治験薬を投与された患者。7.試験参加前4週間以内に化学療法を受けた患者。8.試験参加前4週間以内に事前の放射線治療を受けた患者。9.先に骨髄の≧25に放射線治療を受けた患者。10.試験参加前2週間以内に大手術を受けた患者。11.肝臓、腎臓の障害または以下の臨床試験パラメーターにより定義される血液学的機能の患者:血小板数<100×109/L絶対的好中球数<15×109/L血清ALT>25×正常の制度上の上限血清総ビルビリン>15×IULN血清クレアチニン>15×IULN14.患者は<5年他の初期悪性腫瘍がないか、または、元の場所の非黒色腫皮膚癌および子宮頸癌の場合、活動性疾患がない。サンプルサイズ本試験は約40名の患者を必要とする。処置透明、無色静脈内濃縮物として1mg/1mlに調剤された個々の2mgガラスバイアルにエポチロンBを入れる。物質をポリエチレングリコール300中に調剤し、50から100ml09SodiumChlorideInjectionUSPで希釈し、輸液のための所望の最終濃度を達成する。1回30分静脈内点滴として、7日毎に投与する。出発レベルは01mg/m2である。この投与量はイヌであるエポチロンBに関して最も感受性の種における最低毒性用量の3分の1として計算する。上記のように、投与量漸増は修飾Fibonacciスキームに従う。試験は、エポチロンBによりもたらされることが既知の血液学的または他の毒性を経験した個体に関する処置延期、投与減少または処置の中断を決める。処置は、患者が疾病進行または許容不可能な毒性を経験しない限り、最大24週間の毎週投与まで続ける。24回投与の最後に、完全なまたは部分的な反応を達成した患者および安定な疾病の患者は、研究者の判断により、スポンサーによる許可の後に延長プロトコールに従って更に処置を続ける。安全性調査項目エポチロンBの安全性は身体検査により、および生命徴候、臨床検査室結果、有害な事象、および付随する医薬の使用の評価により評価する。有害な事象は、顕在化したものおよび申告の両方であり、USNationalCancerInstituteExpandedCommonToxicityCriteriaを使用して等級付けする。効果調査項目このフェーズ1試験は効果の検出のために設計されていないが、活性は目標腫瘍反応および無進行の長さおよび全体的生存の割合の関数として証明される。基底腫瘍評価は、全ての測定可能な、評価可能なおよび評価不可能な疾病の最適な試験を含む。評価は身体検査および胸部X線、および、適当な場合、胸郭、腹部および骨盤のコンピューター化断層写真;腹部および骨盤のソノグラフ;全ての骨性領域の骨レントゲン写真を伴う骨シンチグラム;および腫瘍マーカー値の測定を含む。追跡試験は6週間毎および処置の停止後に行う。目標状態は、SWOG反応基準を基本にしたNovartisガイドラインを使用した臨床評価である。全ての完全なおよび部分的な反応は少なくとも4週間後の第2評価により確認しなければならない。最良の腫瘍反応を、SWOG反応基準を使用して、各患者に関して計算する。薬物動態学以下の薬物動態学パラメーターを計算し、サイクル1および2に関して分析する:tmax、Cmax、λZ、t1/2、AUCおよびRARA=AUTτサイクル2/AUTτサイクル1を蓄積の指標として評価する。投与比例の先の評価は、異なる投与グループの中の最後の投与量からのAUCに基づく。PK/PDと観察される毒性の相関は安全性の予測物として行う。薬力学腫瘍生検サンプルを、実行でき、利用できる予備治療および治療の最初のサイクルの後で得る。これらの生検サンプルを遺伝子チップ法を使用した遺伝子発現の分析のために調製し、次いでp53状態、MAP4RNA発現およびmdr1RNA発現に関して別々に分析する。統計方法処置誘導臨床有害事象または、臨床試験、生命徴候、または健康診断異常を同定し、値をフラッグする。異常の割合を一団により作表する。目的の反応割合を一団により示す。説明的統計学は、一団による基本的薬物動態学パラメーターの要約に使用する。実施例12:フェーズ1、進行した固体腫瘍の成人患者へのEPO906単剤での3週間1回投与の用量調査研究治験センターの数2場所グラスゴー、イギリスおよびニューカースル、イギリス目的第1:急性および蓄積性毒性の両方を含む安全プロフィールの特徴付け、および標準全身治療が失敗したまたはその患者のための標準全身治療が存在しない進行した固体腫瘍の成人患者への3週間1回の静脈内点滴による単剤エポチロンB投与の最大耐量の決定のため。第2:1.この患者の集団への3週間1回の静脈内点滴により投与された単剤エポチロンBの抗腫瘍活性の薬物動態学の特徴付け;得られるデータは、安全性および効果の予測を助ける薬物動態学/薬物動力学相関を成すために薬物動態学データと協調する。2.この患者の集団への3週間1回の静脈内点滴により投与された単剤エポチロンBの抗腫瘍活性の予備的証拠を得るため。3.3週間1回の静脈内点滴により単剤エポチロンBを投与された進行した固体腫瘍の成人患者の間の腫瘍内医薬レベルを、前臨床モデルと相関させるため。1週間1回の静脈内点滴により単剤エポチロンBを投与された進行した固体腫瘍の成人患者の間の腫瘍内医薬レベルの、前臨床モデルに対する補正のため。4.効果および反応と関係する遺伝子を同定するための、利用可能であり、評価可能な治療前および治療後の腫瘍生検サンプルの薬物動態情報を得るため。企画これは標準全身治療が失敗したまたはその患者のための標準全身治療が存在しない進行した固体腫瘍の成人患者への3週間毎の静脈内点滴による単剤エポチロンB投与の安全性、薬物動態学および薬力学の公開ラベル、用量漸増試験である。処置期間は6回21日サイクルまでである。許容できない毒性または疾病進行を経験した患者は早くに打ち切る。完全なまたは部分的反応を達成した患者、または6サイクルの最後に安定した疾病状態の患者は、研究者の判断により、スポンサーによる許可の後に延長プロトコールに従って更に処置を続ける。適格な患者は疾病進行または許容できない毒性まで、更なるサイクルを受ける。用量限定毒性の非存在下で、用量漸増は下記の通り進行する:1.最初の用量漸増:100用量増加。2.第1から第2団からの100用量増加に続く用量漸増:グレード2の毒性が同定されない限り、67用量増加。3.グレード2の毒性の同定に続く最終用量漸増:研究者およびスポンサーの間で到達した一致に基づいた、25-67用量増加。用量漸増は患者の各団に関する第1サイクルの毒性に基づく。暫定MTDは3-6名の患者の少なくとも2名に用量限定毒性が観察される用量レベルのすぐしたと定義する。暫定MTDと定義された一団に、次いでエポチロンBの安全性、薬物動態学および薬力学プロフィールの更なる評価を介してMTDを確認するために合計12名の更なる患者を登録する。患者内の用量漸増は認められない。全ての毒性は改定USNationalCancerInstituteCommonToxicityCriteriaに従って定義する。DLTを本プロトコールで定義する;しかし、一般に、DLTの性質は、不治の固体腫瘍の設定においてさえ許容できないと考えられるものである。患者包含基準本試験への包含のために以下の基準を満たすべきである:1.男性または女性患者≧18歳。2.標準全身的治療および1回までの付加的全身治療に失敗したもの、またはその患者のための標準全身治療が存在しない、組織学的に証明された進行した固体腫瘍。3.正常の制度上の上限を超えた腫瘍マーカー値を含む、SouthwesternOncologyGroupSolidTumorResponseCriteriaにより定義された少なくとも一つの測定可能な、または評価可能なまたは評価不可能な疾病の部位。4.妊娠している可能性のある女性は試験医薬の開始前に血清β-HCG妊娠試験が陰性でなければならない。生殖の可能性のある男性および女性患者は試験の間中および試験医薬の中止後3ヶ月間、避妊に有効な方法を行うことに同意しなければならない。5.≧2の世界保健機関PerformanceStatusScore。6.少なくとも3ヶ月の余命。7.スクリーニング法の前に得た署名された告知に基づく同意。除外基準以下のものが当てはまる場合、試験からの除外が必要である:1.妊娠または授乳中の女性患者。閉経後の女性は妊娠の可能性がないことの考慮のために少なくとも12ヶ月無月経でなければならない。2.重篤なおよび/または抑制できない医学的疾病の患者。3.識別できる脳転移を有する患者。4.急性または既知の慢性肝臓疾患の患者。5.ヒト免疫不全ウイルス感染の既知の診断。6.試験参加前30日以内に治験薬を投与された患者。7.試験参加前4週間以内に化学療法を受けた患者。8.試験参加前4週間以内に事前の放射線治療を受けた患者。9.先に骨髄の≧25に放射線治療を受けた患者。10.試験参加前2週間以内に大手術を受けた患者。11医療レジメに対する不従順の経歴のある患者12.肝臓、腎臓の障害または以下の臨床試験パラメーターにより定義される血液学的機能の患者:血小板数<100×109/L絶対的好中球数<15×109/L血清ALTまたはAST>25×正常の制度上の上限血清総ビルビリン>15×IULN血清クレアチニン>15×IULN13.患者は<5年他の初期悪性腫瘍がないか、または、元の場所の非黒色腫皮膚癌および子宮頸癌の場合、活動性疾患がない。サンプルサイズ本試験は約40名の患者を必要とする。処置透明、無色静脈内濃縮物として1mg/1mlに調剤された個々の2mgガラスバイアルにエポチロンBを入れる。物質をポリエチレングリコール300中に調剤し、50から100ml09SodiumChlorideInjectionUSPで希釈し、輸液のための所望の最終濃度を達成する。1回30分静脈内点滴として、21日毎に6サイクル投与する。出発レベルは03mg/m2である。この投与量はイヌであるエポチロンBに関して最も感受性の種における最低毒性用量の3分の1として計算する。GLP毒性試験--01mg/kg、3週間後に1回に繰り返す--においてイヌで2倍投与量以下で致死が見られなったため、TLDは005mg/kgの範囲を概算する。イヌのmg/kgをヒトのkg/m2に変換するため、出発用量を1/3×005mg/kg×20kg/m2=03mg/m2と計算する。用量漸増は上記に概説の方法に従う。試験は、エポチロンBによりもたらされることが既知の血液学的または他の毒性を経験した個体に関する処置延期、投与減少または処置の中断を決める。処置は、患者が疾病進行または許容不可能な毒性を経験しない限り、最大6サイクル投与まで続ける。6サイクルの最後に、完全なまたは部分的な反応を達成した患者および安定な疾病の患者は、研究者の判断により、スポンサーによる許可の後に延長プロトコールに従って更に処置を続ける。安全性可変性エポチロンBの安全性は身体検査により、および生命徴候、臨床検査室結果、有害な事象、および付随する医薬の使用の評価により評価する。有害な事象は、顕在化したものおよび申告の両方であり、USNationalCancerInstituteExpandedCommonToxicityCriteriaを使用して等級付けする。効果可変性このフェーズ1試験は効果の検出のために設計されていないが、活性は目標腫瘍反応および無進行の長さおよび全体的生存の割合の関数として証明される。基底腫瘍評価は、全ての測定可能な、評価可能なおよび評価不可能な疾病の最適な試験を含む。評価は身体検査および胸部X線、および、適当な場合、胸郭、腹部および骨盤のコンピューター化断層写真;腹部および骨盤のソノグラフ;全ての骨性領域の骨レントゲン写真を伴う骨シンチグラム;および腫瘍マーカー値の測定を含む。追跡試験は毎2サイクル後および処置の停止後に行う。目標状態は、SWOG反応基準を基本にしたNovartisガイドラインを使用した臨床評価である。全ての完全なおよび部分的な反応は少なくとも4週間後の第2評価により確認しなければならない。最良の腫瘍反応を、SWOG反応基準を使用して、各患者に関して計算する。薬物動態学以下の薬物動態学パラメーターを計算し、サイクル1および2に関して分析する:tmax、Cmax、λZ、t1/2、AUCおよびRARA=AUTτサイクル2/AUTτサイクル1を蓄積の指標として評価する。投与比例の先の評価は、異なる投与グループの中の最後の投与量からのAUCに基づく。PK/PDと観察される毒性の相関は安全性の予測物として行う。薬力学腫瘍生検サンプルを、実行でき、利用できる予備治療および治療の最初のサイクルの後で得、効果および反応と相関した生物学的因子を同定する。統計方法処置誘導臨床有害事象または、研究室、生命徴候、または健康診断異常を同定し、値をフラッグする。異常の割合を一団により作表する。目的の反応割合を一団により示す。説明的統計学は、一団による基本的薬物動態学パラメーターの要約に使用する。考察:一緒に考えて、実施例はエポチロンBでの処置がaまた標準処置が失敗した腫瘍、例えば、5-フルオロウラシル処置が失敗した大腸腫瘍、またはTAXOLが失敗したものに対して;bまたTAXOL処置が失敗した腫瘍、例えば、肺、特に非小細胞胚癌、および/または類上皮、特に子宮頸癌に対して;cまた正位置腫瘍および、例えば、前立腺癌における転移の形成に対して;dまたインビトロアッセイにおいて、エポチロンBがTAXOLより高い活性を示す乳癌に対して有効である証拠を提供する。好ましい投与レジメは、MTDの約1/3から2/3での毎週の処置からMTD1回までの範囲であり、最良の処置は毎週から3週間に1回投与の範囲である。"