"本明細書中に記載される発明。発明の要旨本出願人は、本出願においてBAFF-RまたはBCMAと呼ばれる、ポリペプチドをコードするcDNAクローンを同定した。このクローンは、腫瘍壊死因子TNFファミリーに属する、腫瘍壊死因子BAFFB細胞活性化因子に結合する。BAFFは、WO/9912964本明細書中で参考として援用されるに以前に記載されたのと同じ分子である。1つの実施形態において、本発明は、BAFF-Rを使用する方法を提供する。このような方法に含まれるのは、BAFF-Rポリペプチドを使用して、動物における、B細胞増殖、樹状細胞誘導B細胞増殖および成熟を阻害する方法または免疫グロブリン産生を阻害する方法である。また含まれるのは、BAFF-Rポリペプチドを使用して、動物における、B細胞増殖、樹状細胞誘導B細胞増殖および成熟を刺激する方法または免疫グロブリン産生を刺激する方法、またはBAFF-Rポリペプチドおよび抗T抗体、CD40リガンドまたは抗CD40リガンドを使用して、動物における、B細胞増殖、樹状細胞誘導B細胞増殖および成熟、または免疫グロブリンの産生を同時刺激する方法である。別の実施形態において、本発明は、自己免疫疾患、高血圧、心臓血管症癌、腎臓障害、B細胞リンパ増殖疾患、免疫抑制疾患、器官移植、およびHIVの処置において、BAFF-Rを使用する方法を提供する。また含まれるのは、BAFF-Rとそのリガンドとの間のシグナル伝達経路に関与する免疫応答の処置、抑制、または変化のために因子を使用する方法、およびBAFF-Rまたはそのエピトープに特異的な抗体の投与によって、炎症を阻害する方法である。本発明の方法は、好ましくは、BAFF-Rポリペプチド、異種アミノ酸配列に融合されたBAFF-Rポリペプチドを含むキメラ分子、または抗BAFF-R抗体ホモログの治療有効量を投与することによって行われる。1つの実施形態において、本発明は、BAFF-Rポリペプチドおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合されたBAFF-Rポリペプチドを含むキメラ分子を提供する。このようなキメラ分子の例は、免疫グロブリンまたはエピトープタグ配列のFc領域に融合されたBAFF-Rを含む。別の実施形態において、本発明は、BAFF-Rポリペプチドに特異的に結合する抗体を提供する。必要に応じて、抗体は、モノクローナル抗体である。本発明は、例えば以下の項目を提供する:項目1動物におけるB細胞の増殖を阻害する方法であって、該方法は、以下:aBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b異種アミノ酸配列に融合された、BAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、キメラ分子;およびc抗BAFF-R抗体ホモログ、からなる群より選択される、治療有効量の組成物を投与する工程を包含する、方法。項目2動物における免疫グロブリン産生を阻害する方法であって、該方法は、以下:aBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b異種アミノ酸配列に融合された、BAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、キメラ分子;およびc抗BAFF-R抗体ホモログ、からなる群より選択される、治療有効量の組成物を投与する工程を包含する、方法。項目3動物における樹状細胞誘導性B細胞の増殖および成熟を阻害する方法であって、該方法は、以下:aBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b異種アミノ酸配列に融合された、BAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、キメラ分子;およびc抗BAFF-R抗体ホモログ、からなる群より選択される、治療有効量の組成物を投与する工程を包含する、方法。項目4自己免疫疾患を処置する方法であって、該方法は、以下:aBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b異種アミノ酸配列に融合された、BAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、キメラ分子;およびc抗BAFF-R抗体ホモログ、からなる群より選択される、治療有効量の組成物を投与する工程を包含する、方法。項目5動物における高血圧を処置する方法であって、該方法は、以下:aBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b異種アミノ酸配列に融合された、BAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、キメラ分子;およびc抗BAFF-R抗体ホモログ、からなる群より選択される、治療有効量のB細胞増殖インヒビターを投与する工程を包含する、方法。項目6動物における腎障害を処置するための方法であって、該方法は、以下:aBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b異種アミノ酸配列に融合された、BAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、キメラ分子;およびc抗BAFF-R抗体ホモログ、からなる群より選択される、治療有効量のB細胞増殖インヒビターを投与する工程を包含する、方法。項目7B細胞リンパ増殖障害を処置する方法であって、該方法は、以下:aBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b異種アミノ酸配列に融合された、BAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントを含む、キメラ分子;およびc抗BAFF-R抗体ホモログ、からなる群より選択される、治療有効量のB細胞増殖インヒビターを投与する工程を包含する、方法。項目8前記BAFF-Rポリペプチドが可溶性である、項目1~7に記載の方法。項目9前記可溶性BAFF-Rポリペプチドが、BAFF-R細胞外ドメインを含む、項目8に記載の方法。項目10前記BAFF-R細胞外ドメインが、免疫グロブリンに融合される、項目9に記載の方法。項目11項目1~7に記載の方法であって、ここで前記BAFF-Rポリペプチドが、以下:a配列番号1のアミノ酸残基1~184を含む単離されたネイティブな配列のBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b配列番号1のアミノ酸残基1~184を含むネイティブな配列のBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントと少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたBAFF-Rポリペプチド;c配列番号1のアミノ酸残基1~184を含むネイティブな配列のBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントと少なくとも90のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたBAFF-Rポリペプチド;d配列番号1のアミノ酸残基1~51を含む単離されたBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;およびe配列番号1のアミノ酸残基8~41を含む単離されたBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント、からなる群より選択される、方法。項目12前記抗BAFF-R抗体ホモログが、モノクローナル抗体である、項目1~7に記載の方法。項目13前記抗BAFF-R抗体ホモログが、BCMA-IgGを含む、項目1~7に記載の方法。項目14前記動物が哺乳動物である、項目1~7に記載の方法。項目15前記哺乳動物がヒトである、項目14に記載の方法。項目16BAFF-RとBAFFとの間のシグナル伝達経路に関わる免疫応答を処置、抑制または変化する方法であって、該方法は、該BAFF-RとBAFFとの間の結合を妨げ得る、有効量の因子を投与する工程を包含する、方法。項目17BAFF-Rに特異的な抗体またはその活性なフラグメントの治療有効量を投与する工程を包含する、炎症を阻害する方法。項目18BAFF-Rに特異的な抗体またはそのエピトープの治療有効量を投与する工程を包含する炎症を阻害する方法。項目19治療有効量の単離されたBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。項目20項目19に記載の薬学的組成物であって、ここで前記単離されたBAFF-Rポリペプチドは、以下:a配列番号1のアミノ酸残基1~184を含む単離されたネイティブな配列のBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;b配列番号1のアミノ酸残基1~184を含むネイティブな配列のBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントと少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたBAFF-Rポリペプチド;c配列番号1のアミノ酸残基1~184を含むネイティブな配列のBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメントと少なくとも90のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたBAFF-Rポリペプチド;d配列番号1のアミノ酸残基1~51を含む、単離されたBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント;およびe配列番号1のアミノ酸残基8~41を含む、単離されたBAFF-Rポリペプチドまたはそのフラグメント、からなる群より選択される、組成物。項目21前記BAFF-Rポリペプチドフラグメントが、免疫グロブリンに融合されたBAFF-R細胞外ドメインを含む、項目19に記載の薬学的組成物。詳細な説明I.定義本明細書中で使用される場合、用語BAFF-RおよびBCMAは、ネイティブ配列BAFF-RおよびBAFF-Rの改変体これらは、本明細書中でさらに定義されるを含む。BAFF-Rは、マウスまたはヒトの組織型のような種々の供給源あるいは別の供給源から単離され得るか、あるいは組換え方法または合成方法によって調製され得る。ネイティブ配列BAFF-Rは、天然に由来するBAFF-Rと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このようなネイティブ配列BAFF-Rは、天然から単離され得るか、あるいは組換え手段または合成手段によって調製され得る。BAFF-Rの天然に存在する短縮形態または分泌形態例えば、可溶性形態例えば、細胞外ドメイン配列を含む、天然に存在する改変体形態例えば、選択的スプライシング形態および天然に存在するBAFF-Rの対立遺伝子改変体。本発明の1つの実施形態において、ネイティブ配列BAFF-Rは、配列番号1のアミノ酸1~184を含む、成熟または全長のネイティブ配列BAFF-Rポリペプチドあるいはそれらのフラグメントである。BAFF-R細胞外ドメインまたはBAFF-RECDとは、BAFF-Rの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを本質的に含まない、BAFF-Rの形態をいう。通常、BAFF-R細胞外ドメインは、1未満のこのような膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを有し、そして好ましくは0.5未満のこのようなドメインを有する。通常、BAFF-RECDは、配列番号1のアミノ酸残基8~41、配列番号1のアミノ酸残基4~51、または配列番号1のアミノ酸残基1~53を含む。本発明の好ましい実施形態において、BAFF-RECDは、配列番号1のアミノ酸残基1~51を含む。本発明のBAFF-Rポリペプチドについて同定された膜貫通ドメインが、この型の疎水性ドメインを同定するための当該分野で慣用的に使用される基準に準じて同定されることが、当業者に理解される。膜貫通ドメインの正確な境界は、変化し得るが、ほぼおそらく、本明細書中に詳細に言及されるこのドメインのいずれかの末端で約5アミノ酸までで変化し得る。従って、BAFF-RECDは、必要に応じて、アミノ酸8~41配列番号1を含む。BAFF-R改変体は、全長ネイティブ配列BAFF-Rについて配列番号1に示される推定アミノ酸配列を有するBAFF-Rとか、またはBAFF-RECD配列と、少なくとも約80のアミノ酸配列同一性を有する、以下に規定されるような活性なBAFF-Rを意味する。このようなBAFF-R改変体としては、例えば、1以上のアミノ酸残基が、配列番号1の配列の末端またはC末端で付加または欠失されている、BAFF-Rポリペプチドが挙げられる。通常、BAFF-R改変体は、配列番号1のアミノ酸配列と、少なくとも約80または85のアミノ酸配列同一性、より好ましくは、少なくとも約90のアミノ酸配列同一性、そしてさらにより好ましくは、少なくとも約95のアミノ酸配列同一性を有する。本明細書中で同定されるBAFF-R配列に関するパーセントアミノ酸配列同一性は、最大のパーセント配列同一性を達成するように候補配列およびBAFF-R配列ならびに導入ギャップ必要な場合を整列化そして、この配列同一性の部分として、いかなる保存的置換も考慮しないした後の、BAFF-R配列のアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のための整列化は、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア例えば、BLAST、ALIGNまたはMegalignDNASTARソフトウェアを使用して、当業者の範囲内にある種々の方法で達成され得る。当業者は、整列化を測定するための適切なパラメーター比較される配列の全長にわたって最大の整列化を達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含むを決定し得る。本明細書中で使用される場合、用語エピトープタグ化したとは、タグポリペプチドに融合されたBAFF-Rまたはそのドメイン配列を含む、キメラポリペプチドをいう。タグポリペプチドは、それに対して抗体が作製され得るかまたはある他の薬剤によって同定され得る、エピトープを提供するように、十分な残基を有するが、これはなお、BAFF-Rの活性を干渉しないように十分短い。好ましくは、タグポリペプチドはまた、抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないように、全く固有のものである。適切なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも6アミノ酸残基を有し、通常、約8~約50の間のアミノ酸残基好ましくは、約10~約20残基を有する。本明細書中に開示される種々のポリペプチドを記載するために使用される場合、単離されたとは、同定され、そしてその天然の環境の成分から分離および/または回収されたポリペプチドを意味する。その天然の環境の混入成分は、通常、このポリペプチドの診断用途または治療用途を干渉せず、これらとしては、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性溶質または非タンパク質性溶質が挙げられ得る。好ましい実施形態において、ポリペプチドは、1スピンカップspinningcup配列決定機の使用によって少なくとも15残基のN末端または内部アミノ酸配列を得るに十分な程度にか、または2クーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を使用する、非還元条件または還元条件下のSDSPAGEで均質なまでに、精製される。単離されたポリペプチドとしては、組換え細胞内のインサイチュのポリペプチドが挙げられる。これは、BAFF-Rの天然の環境の少なくとも1つの成分が存在しないからである。しかし、通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも1つの精製工程によって調製される。用語抗体は、最も広範な意味で用いられ、そして特に単一のBAFF-Rモノクローナル抗体アゴニスト、アンタゴニストおよび中和抗体を含むおよびポリエピトープ特異性を有する抗BAFF-R抗体組成物を包含する。用語モノクローナル抗体は、本明細書中で使用される場合、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体、すなわち、微量で存在し得る可能な天然に存在する変異以外は同一であるこの集団が含む個々の抗体をいう。ポリペプチドの精製された調製物または実質的に純粋な調製物は、本明細書中で使用される場合、ポリペプチドとともに天然で存在する他のタンパク質、脂質および核酸から分離されたポリペプチドを意味する。好ましくは、このポリペプチドはまた、このポリペプチドを精製するために用いられた他の物質例えば、抗体、マトリックスなどからも分離されている。用語処置する処置および治療は、本明細書中で使用された場合、治癒的治療、予防prophylactic治療および予防的preventative治療をいう。用語ペプチド、タンパク質およびポリペプチドは、本明細書中で交換可能に用いられる。生物学的に活性なは、本明細書中で用いられる場合、直接的または間接的に行われ得る、インビボまたはインビトロで活性を有することを意味する。BAFF-Rの生物学的に活性なフラグメントは、例えば、レセプターの活性部位と70アミノ酸相同性を、より好ましくは少なくとも80、そして最も好ましくは少なくとも90相同性を有し得る。レセプターに関する同一性または相同性は、候補配列中の、配列番号1のBAFF-R残基と同一であるかまたは配列番号1中のアミノ酸残基の規定された部分と同一であるアミノ酸残基の百分率として本明細書中で定義される。用語哺乳動物は、本明細書中で使用される場合、哺乳動物として分類される任意の動物をいい、これとしては、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、マウスおよびネコが挙げられる。本発明の好ましい実施形態では、哺乳動物はヒトである。本発明の実施は、他に示さない限り、当該分野の技術範囲内である、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学的、微生物学、組換えDNAおよび免疫学の従来技術を用いる。このような技術は、文献に記載される。ここで、本発明のこの好ましい実施形態が詳細に参照される。本発明は、B細胞の増殖および成熟ならびに免疫グロブリンの分泌をもたらす、BAFF-RおよびBAFF-R関連分子の使用に関する。本発明は、免疫関連障害によって必要となるような、免疫系の応答をもたらすためのBAFF-RおよびBAFF-R関連分子の使用に関する。さらに、本発明は、遺伝子治療法による、BAFF-RまたはBAFF-R関連遺伝子の使用を通した癌および免疫障害の処置を包含する。本発明の配列によって形質転換された宿主によって産生されるBAFF-Rおよびそのホモログ、ならびに当該分野で公知のプロセスによって精製されたかまたは既知のアミノ酸配列から産生されたネイティブなBAFF-Rは、抗癌適用、抗腫瘍適用および免疫調節適用のための種々の方法において有用である。これらはまた、他の疾患に対する治療および方法において有用である。本発明の別の局面は、アンチセンス治療において、BAFF-Rをコードする単離された核酸によってコードされるポリペプチドの使用に関する。本明細書中で使用される場合、アンチセンス治療とは、細胞条件下で、目的のリガンドをコードする細胞性mRNAおよび/またはDNAと特異的にハイブリダイズし、それゆえ、すなわち、転写および/または翻訳を阻害することによって、コードされるタンパク質の発現を阻害するオリゴヌクレオチドまたはそれらの誘導体の投与またはインサイチュ生成をいう。結合は、従来の塩基対相補性によってであってもよく、または例えば、DNA二重鎖に対する結合の場合、二重らせんの主溝における特異的相互作用を通してであってもよい。一般に、アンチセンス治療とは、当該分野において一般的に用いられるある範囲の技術をいい、そしてオリゴヌクレオチド配列に対する特異的結合に依存する任意の治療を包含する。本発明のアンチセンス構築物は、例えば、細胞中で転写された場合、BAFF-リガンドをコードする細胞性mRNAの少なくとも一部に相補的であるRNAを産生する発現プラスミドとして送達され得る。あるいは、このアンチセンス構築物は、エキソビボで生成されるオリゴヌクレオチドプローブであり得る。このようなオリゴヌクレオチドプローブは好ましくは、内因性ヌクレアーゼに耐性であり、それゆえ、インビボで安定である、改変されたオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチドとして使用するための例示的な核酸分子は、DNAのホスホルアミデート、ホスホチオエートおよびメチルホスホネートアナログである例えば、5,176,996;5,264,564;および5,256,775を参照のこと。さらに、アンチセンス治療において有用なオリゴマーを構築するための一般的アプローチは、例えば、本明細書中に参考として得に援用される、VanDerKrolら1988Biotechniques6:958-976およびSteinら1988CnacerRes48:2659-2668によって概説されている。本発明のBAFF-Rは、上記で考察したように、TNFレセプターファミリーのメンバーである。このタンパク質、そのフラグメントまたはホモログは、広範囲の治療適用および診断適用を有し得る。本発明のポリペプチドは特に、本明細書中に参考として援用されるWO99/12964に以前に記載されたポリペプチドであるBAFFと相互作用する。しかし、本明細書中に開示されるペプチドおよび方法は、BAFF-Rまたはそのフラグメントと特異的に相互作用する分子の同定を可能にする。特定の実施形態における本願発明は、BAFFに結合する能力を有する、BAFF-R由来ペプチドを用いる方法を包含する。BAFF-Rのフラグメントは、いくつかの方法で例えば、組換えによって、PCRによって、タンパク質分解消化によって、または化学合成によって産生され得る。ポリペプチドの内部フラグメントまたは末端フラグメントは、このポリペプチドをコードする核酸の一方の末端または両方の末端から1以上のヌクレオチドを除去することによって生成され得る。変異誘発されたDNAの発現は、ポリペプチドフラグメントを産生する。本発明において使用するためのキメラ分子はまた、当該分野で公知の技術を使用して産生され得る。本発明は、異種アミノ酸配列例えば、免疫グロブリンのIgGFcドメインに融合されたBAFF-Rポリペプチドまたはその改変体のキメラ分子の使用を意図する。好ましくは、このようなキメラ分子は可溶性であり、そして可溶性BAFF-Rポリペプチドを含む。ポリペプチドフラグメントはまた、従来のMerrifield固相f-mocまたはt-boc化学として当該分野で公知の技術を用いて化学合成され得る。例えば、本発明のペプチド配列およびDNA配列は、フラグメントの重複なしに所望の長さのフラグメントへと任意に分割されてもよいし、所望の長さの重複するフラグメントへと分割されてもよい。これらのような方法は、以下でより詳細に記載される。可溶性形態のBAFF-Rの生成可溶性形態のBAFF-Rはしばしば、効果的にシグナルを出し、それゆえ、天然の膜形態をここで模倣する薬物として投与され得る。本明細書中で請求されるBAFF-Rが可溶性サイトカインとして天然に分泌されることが可能であるが、そうでない場合、分泌させるようにこの遺伝子を再度操作し得る。可溶性分泌形態のBAFF-Rを作製するために、N末端膜貫通領域および茎stalk領域のいくつかの部分をDNAレベルで除去して、そしてこれらを、選択された発現系における効率的なタンパク質分解性切断を可能にする、I型リーダー配列あるいはII型リーダー配列で置き換える。当業者は、分泌発現構築物中に保持された茎領域の量を変動させて、リガンド結合特性および分泌効率の両方を最適化し得る。例えば、全ての可能な茎長を含む構築物すなわち、N末端短縮物は、アミノ酸1で始まりアミノ酸51までのタンパク質が生じるように調製され得る。最適な長さの茎配列は、この型の分析から生じる。本発明の好ましい実施形態では、可溶性BAFF-Rポリペプチドは、以下である:配列番号1のアミノ酸残基1~51を含む、単離されたネイティブ配列BAFF-Rポリペプチドもしくはそのフラグメント;配列番号1のアミノ酸残基1~51を含むネイティブ配列BAFF-Rポリペプチドと少なくとも80そしてより好ましくは90のアミノ酸配列同一性を有する単離されたBAFF-Rポリペプチドもしくはそのフラグメント;または配列番号1のアミノ酸残基8~41を含む、単離されたBAFF-Rポリペプチドもしくはそのフラグメント。BAFF-Rと反応性の抗体の生成本発明はまた、本願BAFF-Rまたはそのコレセプターと特異的に反応性の抗体を包含する。抗タンパク質/抗ペプチド抗血清またはモノクローナル抗体は、標準的なプロトコルによって作製され得る例えば、Antibodies:ALaboratoryManual、HawlowおよびLane編ColdSpringHarborPress:1988を参照のこと。マウス、ハムスターまたはウサギのような哺乳動物は、免疫原性形態のペプチドで免疫され得る。タンパク質またはペプチドに免疫原性を付与するための技術としては、当該分野で周知の、キャリアに対する結合体化または他の技術が挙げられる。BAFF-Rまたはそのコレセプターの免疫原性部分は、アジュバントを存在させて投与され得る。免疫の前進は、血漿または血清中の抗体力価の検出によってモニタリングされ得る。標準的なELISAまたは他の免疫アッセイは、抗原としての免疫原とともに用いられて、抗体のレベルを評価し得る。好ましい実施形態では、本願抗体は、BAFF-Rもしくはそのコレセプターの抗原決定基例えば、配列番号1のポリペプチドの抗原決定基または密接に関連したヒトもしくは非ヒト哺乳動物ホモログ例えば、70、80または90パーセント相同、より好ましくは少なくとも95パーセント相同に免疫特異的である。本発明のなおさらなる好ましい実施形態では、抗BAFF-Rまたは抗BAFF-コレセプター抗体は、例えば、配列番号1に80パーセント未満相同である、好ましくは配列番号1に90パーセント未満相同である、そして最も好ましくは配列番号1に95パーセント未満相同であるタンパク質に実質的に交差反応しないすなわち、特異的に反応する。実質的に交差反応しないによって、抗体が、配列番号1のタンパク質についての結合親和性の10パーセント未満、より好ましくは5パーセント未満、そしてさらにより好ましくは1パーセント未満の結合親和性である、非相同タンパク質についての結合親和性を有することが意味される。本明細書において使用される用語抗体とは、BAFF-Rまたはそのレセプターと特異的に反応性でもある、そのフラグメントをも含むことが意図される。抗体は、慣用技術を用いてフラグメント化され得、そのフラグメントは、抗体全体について上記されるのと同様の様式で有用性についてスクリーニングされ得る。例えば、Fab’2フラグメントは、ペプシンで抗体を処理することにより作製され得る。得られたFab’2フラグメントを処理して、Fab’フラグメントを処理して、ジスルフィド架橋を還元して、Fab’フラグメントを生成する。本発明の抗体はさらに、抗BAFF-Rまたは抗BAFF-コレセプター活性を有する二特異性およびキメラの分子を包含することが意図される。従って、BAFF-Rおよびそのコレセプターに対して指向されるモノクローナル抗体Abおよびポリクローナル抗体Abの両方、ならびにFab’およびFab’2のような抗体フラグメントを使用して、BAFF-Rおよびそのそれぞれのコレセプターの作用をブロックし得る。種々の形態の抗体はまた、標準的な組換えDNA技術を用いて作製され得る。本明細書において参考として具体的に援用される、WinterandMilstein,Nature349:293-2991991。例えば、ヒト定常ドメインに動物抗体由来の抗原結合ドメインが結合したキメラ抗体が構築され得る例えば、Cabillyetal.,米国特許第4,816,567号、これは本明細書において参考として援用される。キメラ抗体は、ヒト臨床処置において使用される場合、動物抗体によって惹起される、観察される免疫原性応答を減少し得る。さらに、BAFF-Rまたはそのコレセプターを認識する、組換えヒト化抗体が合成され得る。ヒト化抗体は、その領域が特異的抗原を担うヒトIgG配列のほとんどを含むキメラである。動物は、所望の抗原で免疫され、対応する抗体が単離され、そして特異的抗原結合を担う可変領域配列の部分が取り出される。次いで、動物由来の抗原結合領域が、抗原結合領域が欠失されたヒト抗体遺伝子の適切な位置にクローニングされる。ヒト化抗体は、ヒト抗体における異種すなわち、種間の配列の使用を最小化し、従って、処置された被験体における免疫応答を惹起する可能性が低くなる。異なるクラスの組換え抗体の構築はまた、異なるクラスの免疫グロブリンから単離された、可変ドメインおよびヒト定常ドメインCH1、CH2、CH3を含む、キメラまたはヒト化の抗体を作製することによって達成され得る。例えば、抗原結合部位価が増加した抗体は、ヒト:鎖定常領域を有するベクター中に抗原結合部位をクローニングすることによって組換え産生され得るArulanandametal.,J.Exp.Med.,177:1439-14501993、これは、本明細書において参考として援用される。さらに、標準的な組換えDNA技術を用いて、抗原結合部位の付近のアミノ酸残基を変更することによってその抗原と組換え抗体との結合親和性を変更し得る。ヒト化抗体の抗原結合親和性は、分子モデリングに基づく変異誘発により増加され得るQueenetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.86:10029-331989、これは、本明細書により参考として援用される。アナログの生成:変更されたDNAおよびペプチドの配列の生成BAFF-Rのアナログは、天然に存在するBAFF-Rとは、アミノ酸配列が異なり得るか、または配列を有しない点で異なり得るか、あるいはその両方であり得る。非配列改変には、BAFF-Rのインビボまたはインビトロの化学誘導体化が含まれる。非配列改変としては、アセチル化、メチル化、リン酸化、カルボキシル化、またはグリコシル化における変化が挙げられるがそれらに限定されない。好ましいアナログとしては、配列番号1に与えられる配列とは、1つ以上の保存的アミノ酸置換の分、または1つ以上の非保存的なアミノ酸置換、欠失もしくは挿入であって、BAFFリガンドの活性を除外しないものの分、その配列が異なる、BAFF-R、その生物学的に活性なフラグメントが挙げられる。保存的置換としては、代表的に、あるアミノ酸を類似の特性を有する別のアミノ酸に置換することが挙げられる。例えば、以下の群の中での置換:バリン、グリシン;グリシン、アラニン;バリン、イソロイシン、ロイシン;アスパラギン酸、グルタミン酸;アスパラギン、グルタミン;セリン、スレオニン;リジン、アルギニン;およびフェニルアラニン、チロシン。使用全長BAFF-R遺伝子配列番号2またはその部分は、cDNAライブラリーについてのハイブリダイゼーションプローブとして用いられて、例えば、配列番号2に開示されるBAFF-R配列と所望の配列同一性を有する、なお他の遺伝子を単離し得る。BAFF-Rをコードするヌクレオチド配列はまた、BAFF-Rをコードする遺伝子をマッピングするため、および遺伝子障害を有する個体の遺伝的分析のための、ハイブリダイゼーションプローブを構築するために用いられ得る。スクリーニングアッセイは、BAFF-Rの生物学的活性を模倣するリード化合物を見出すように設計され得る。そのようなスクリーニングアッセイとしては、化学ライブラリーのハイスループットスクリーニングに受け入れられるアッセイが挙げられ、これにより、そのアッセイが低分子薬物候補を同定するために特に適切となる。企図される低分子としては、合成有機化合物または無機化合物が挙げられる。BAFF-Rまたはその改変形態をコードする核酸はまた、トランスジェニック動物またはノックアウト動物のいずれかを作製するために用いられ得る。これは次いで、治療上有用な試薬の開発およびスクリーニングにおいて有用となる。本明細書に記載されるように、本発明の1つの実施形態において、BAFF-Rポリペプチドを用いて、動物におけるB細胞増殖、樹状細胞誘導されたB細胞増殖および成熟または免疫グロブリン生成を刺激する方法、あるいはBAFF-Rおよび抗T抗体、CD40リガンドまたは抗CD40リガンドを用いて動物における、B細胞増殖、樹状細胞誘導されたB細胞増殖および成熟または免疫グロブリン産生を同時刺激する方法が提供される。BAFF-Rポリペプチドを用いて、B細胞増殖、樹状細胞誘導されたB細胞増殖および成熟または免疫グロブリン産生を阻害する方法もまた包含される。別の実施形態において、本発明は、自己免疫疾患、高血圧、心臓血管障害、腎臓障害、B細胞リンパ増殖障害、免疫抑制疾患、臓器移植、炎症およびHIVの処置においてBAFF-Rを用いる方法を提供する。BAFF-Rとそのリガンドとの間のシグナル伝達経路を包含する免疫応答を、処置、抑制または変更するための因子を用いる方法もまた包含される。1つの実施形態において、本発明は、BAFF-Rポリペプチドおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。例えば、BAFF-Rポリペプチドのための適切なキャリア、およびその処方物はRemington’sPharmaceuticalSciences,16thed.,1980,MackPublishingCo.,Osloetal編に記載されている。代表的には、薬学的に受容可能な塩の適切な量をその処方物に用いてその処方物の等張性を付与する。そのキャリアの例としては、生理食塩水のような緩衝液、リンゲル溶液、およびデキストロース溶液が挙げられる。その溶液のpHは、好ましくは、約5~約8であり、そしてより好ましくは、約7.4~約7.8である。さらなるキャリアとしては、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリクスのような徐放性調製物が挙げられる。このマトリクスは、成型された物品例えば、リポソーム、フィルムまたは微粒子の形態で存在する。当業者には、特定のキャリアが、例えば、投与されるBAFF-Rポリペプチドの投与経路および濃度に依存してより好ましくあり得ることは明白である。投与は、注射例えば、静脈内、腹腔内、皮下内、筋肉内によるか、または有効形態で血流に送達されることが確実になる、注入のような他の方法達成され得る。本発明の実施では、そうでないと指示しない限り、当該分野の技術常識に入る、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、微生物学、組換えDNA、タンパク質化学、および免疫学の慣用技術を使用する。例えば、以下を参照のこと:MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ndedition.Sambrook,FritschandManiatis,eds.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989;DNACloning,VolumesIandIID.N.Glover,ed,1985;OligonucleotideSynthesis,M.J.Gait,ed.,1984;米国特許第4,683,195号Mullisetal.,;NucleicAcidHybridizationB.D.HamesandS.J.Higgins,eds.,1984;TranscriptionandTranslationB.D.HamesandS.J.Higgins,eds.,1984;CultureofAnimalCellsR.I.Freshney,ed.AlanR.Liss,Inc.,1987;ImmobilizedCellsandEnzymes,IRLPress,1986;APracticalGuidetoMolecularCloningB.Perbal,1984;MethodsinEnzymology,Volumes154and155Wuetal.,eds,AcademicPress,NewYork;GeneTransferVectorsforMammalianCellsJ.H.MillerandM.P.Calos,eds.,1987,ColdSpringHarborLaboratory;ImmunochemicalMethodsinCellandMolecularBiologyMayerandWalker,eds.,AcademicPress,London,1987;HandbookofExperimentImmunology,VolumesI-IVD.M.WeirandC.C.Blackwell,eds.,1986;ManipulatingtheMouseEmbryo,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1986。以下の実施例は、本発明を例示するために提供され、そして本発明を制限するとはみなされるべきではない。実施例1:プレートアッセイを使用してのBAFF-Rに対するBAFF結合の検出本実施例において、プレートアッセイを使用するBAFFのBAFF-Rトランスフェクト細胞に対する結合が記載される。全長ヒトBAFF-Rを、SuperscriptIIプレ増幅キットLifeTechnologiesを使用して、BJABポリARNAから生成し、cDNAテンプレートを生成し、そしてBAFF-Rの5’および3’コード配列に相補的なプライマーを使用してPfu1によって増幅した。PCR産物を、CH269pCEP4の誘導体Invitrogenにクローニングした。得られるクローンをpJST535と命名した。EBNA-1遺伝子293EBNAを含有するヒト胚腎臓細胞を、フィブロネクチンでコートした6ウェルのプレートに播種し、そして種々の希釈のpJST535またはバックグラウンドコントロールとしてのCH269のいずれかで、リポフェクタミンLifeTechnologiesによってトランスフェクトした。トランスフェクションの48時間後、トランスフェクトした細胞を、可溶性flag-hBAFFアミノ酸L83-L285に結合するそれらの能力について、以下のようにアッセイした。全てのインキュベーションを室温で行った。馴化培地を、ウェルから吸引し、そして細胞をBHA緩衝液20mMHEPESpH7.0、0.5mg/mlBSA、0.1NaN3で洗浄し、そして1mMMgCl2、1mMCaCl2、および0.1NaN3を含有するPBS中において希釈した0.5μg/mlのFLAG-hBAFFでインキュベートした。1時間のインキュベーションの後、BAFF溶液を除去し、そしてその細胞をBHAで洗浄した。その細胞を、次に、1μg/mlの抗FLAGモノクローナル抗体M2Sigmaを含有するPBS溶液中で30分間インキュベートした。この溶液を吸引し、そしてその細胞をBHAで洗浄した。次いで、その細胞を、アルカリホスファターゼ結合体化ヤギ抗マウスIgGfab’2JacksonImmunoResearchの1:3000希釈中で30分間インキュベートした。この溶液を吸引し、そしてその細胞をBHAで洗浄した。内因性アルカリホスファターゼに起因するバックグラウンド染色の量を減少するために、その細胞を、15分間、100mMNaCl、100mMTris-ClpH9.5、および5mMMgCl2中にて希釈した2.5mMのレバミソールVectorLaboratories中でインキュベートした。アルカリホスファターゼの色素生産性検出のために、インヒビター溶液を吸引し、そしてその細胞をファーストレッドおよびナフトールホスフェートPierceの溶液中でインキュベートした。染色を観察し、そして低出力顕微鏡で写真を撮った。ファーストレッド色素の沈着を、BAFF-Rを発現するプラスミドpJST535でトランスフェクトした全てのウェルについて観察した。細胞中へトランスフェクトしたプラスミドの量として滴定されたシグナルの頻度は、減少した。コントロールの発現ベクターCH269でトランスフェクトされた細胞について染色は観察されなかった。また、FLAG-hBAFFが染色プロトコルから排除された場合、または別のTNFファミリーメンバーのリガンド、FLAGタグ化LIGHTでflag-hBAFFを置換した場合、いずれのトランスフェクトされた細胞についても、染色は観察されなかった。したがって、BAFF-Rトランスフェクト細胞のBAFFでの染色は、特異的であるようであった。実施例2:FACS分析によるBAFF-Rでトランスフェクトされた細胞に対するBAFF結合この実施例は、FACS分析を使用しての、BAFFのBAFF-Rトランスフェクト細胞への検出を記載する。全長BAFF-RをコードするプラスミドであるpJST535を、FuGene6BoehringerMannheimを使用して、293EBNA細胞中にトランスフェクトした。トランスフェクションの24または48時間後に、細胞を5mMのEDTAをPBS中で使用してプレートから除去し、そして計数した。その細胞を2回FACS緩衝液10の胎仔ウシ血清、0.1NaN3、および10μg/mlのhIgGJacksonImmunoResearchを含有するPBSで洗浄し、次いで、2.5×105個の細胞を、1時間氷上で、FACS緩衝液中に9μg/mlから0.037μg/mlの範囲の濃度に希釈したFLAG-hBAFFとともにインキュベートした。その細胞をFACS緩衝液で洗浄し、そして抗FLAGモノクローナル抗体M2の5μg/mlとともに30分間氷上でインキュベートした。その細胞を、FACS緩衝液で洗浄し、そして30分間、氷上で、R-フィコエリスリン結合体化Fab’2ロバ抗マウスIgGおよび10μg/mlの7-AADの1:100希釈を含有する溶液中でインキュベートした。その細胞をFACS緩衝液で洗浄した後、それらを、1パラホルムアルデヒドを含有するFACS緩衝液中で再懸濁した。続いてFACS分析を行い、そこで7-AAD陽性死細胞が分別された。FACS分析の結果は、BAFF-Rでトランスフェクトした細胞の画分がBAFFに結合し得ることを示す。9μg/mlのBAFF濃度で、約28の細胞が、366の平均の蛍光強度MFIでBAFFに結合する。PE標識ロバ抗マウス試薬単独を使用した場合、細胞の有意なシフトは存在しない。細胞の1.3のみが、23.5のMFI全ての細胞の平均は5.5を有する。BAFF-Rトランスフェクト細胞についてのシグナルは、BAFFの漸減量で滴定される。100ng/mlで、8.76の細胞が、78.9のMFIを有する。実施例3:GFPマーカーを含むBAFF/BAFF-R相互作用のFACS分析この実施例において、BAFFの、BAFF-RおよびGFPレポータープラスミドと同時トランスフェクトした細胞に結合する能力が記載される。293EBNA細胞を、pJST535およびGFPレポータープラスミドを用いて、実施例2に記載するようにトランスフェクトした。そのレポータープラスミドは、膜に結合したGFP分子をコードする。2つのプラスミドの同時トランスフェクションを使用して、本発明者らは、BAFFに結合し得たトランスフェクトした細胞のパーセンテージを分析した。その細胞を、プレートから除去し、そしてBAFF結合に供し、そして実施例2に記載されるように検出した。再び、7-AADを死滅細胞を分別するために含めた。そのサンプルをFACSによって分析し、そしてプロットした。その右上四半分は、結合したBAFFフィコエリスリン陽性および発現するGFPを有する細胞を表す。GFPでトランスフェクトした細胞の全てがBAFFに結合するようには見えないが、有意な画分の細胞が、コントロールに比較して右上四半分に存在する。トランスフェクトされた細胞の33パーセントは、8パーセントに比較して右上部にある。特定のレベルのBAFF-R発現が、BAFFがその細胞に結合するのに必要とされることであり得る。それはまた、同時レセプターが、高親和性相互作用に必要とされること、およびこのレセプターが、293EBNA細胞に限定されることが可能である。実施例4:BAFF-R-Fc融合物によるflag-hBAFFの免疫沈降この実施例は、flag-hBAFFの、BAFF-R-FcヒトIgG1のFcドメインに融合したBAFF-RのシステインリッチドメインCRDから構成される分子との特定の相互作用を記載する。BAFF-RのCRDを、実施例1におけるように、3’プライマーとして、hBAFF-Rコード配列のヌクレオチド132~152に相補的なオリゴを使用して、BJABポリARNAからRT-PCRによって生成した。得られるPCRフラグメントを、マウスIgGカッパシグナル配列CH269の下流およびヒトIgGのFc部分の上流においてクローニングした。この構築物を、pJST538と命名した。構築物pJST538またはCH269を、293EBNAにリポフェクタミンによってトランスフェクトした。馴化培地および細胞抽出物を、トランスフェクションの20時間後に収集した。細胞を、20mMTrispH7.5/50mMNaCl/0.5NP40/0.5デオキシコール酸中に可溶化し、遠心分離した。馴化培地および細胞抽出物のアリコートを、等容量の2×SDS還元緩衝液と合わせ、煮沸し、そしてSDS-PAGEおよびウエスタントランスファーに供した。発現を評価するために、その膜を、TBST中の5の脱脂乾燥乳中で、室温で30分間、西洋ワサビペルオキシダーゼHRPに結合体化したマウス抗ヒトIgGの1:3000希釈でプローブし、そしてTBSTで洗浄した。ブロットをECLAmershamで現像し、フィルムに露光した。免疫沈降を、flag-hBAFFまたはflag-hTWEAKのいずれかの25ngを、pJST538またはCH269のいずれかとともに、4°Cで、1時間、攪拌しながら、トランスフェクトした293EBNA由来の0.5mlの馴化培地とともにインキュベートし、その後30μlのプロテインA-SepharosePharmaciaを添加し、そして一晩攪拌を続けることによって行った。プロテインA-SepharoseビーズをPBSで2回洗浄し、そして2×SDS還元サンプル緩衝液中で再懸濁した。SDS-PAGEおよびウエスタンブロットトランスファーの後に、そのブロットを、5脱脂乾燥乳中で、TBST中の5μg/mlの抗flagモノクローナル抗体M2Sigmaとともに、室温で1時間インキュベートした。ブロットをTBSTで洗浄し、そしてTBST中、5脱脂乾燥乳中のヤギ抗マウスIgGHRP結合体JacksonImmunoresearchの1:3000希釈とともに、室温で30分間インキュベートした。ブロットをECLAmershamで減増し、そしてフィルムに露光した。pJST538の293EBNA細胞へのトランスフェクションの際に、約43kDaのタンパク質の発現が、両方の細胞抽出物および馴化培地において、ウエスタンブロット分析によって、マウス抗ヒトIgGJacksonImmunoresearch検出され、これは、BAFF-R-Fc融合物が効率的に発現され、そして分泌されたことを示す。免疫沈降において、バンドを、BAFF-R-Fcおよびflag-hBAFFのインキュベーションの結果としてのみ観察した。このバンドは、flag-hBAFFの直接ロードしたサンプルと同時に移動した。その他のレーンのいずれも、シグナルを生成しなかった。これは、BAFF-R-Fcとflag-hBAFFとの間の相互作用が、特異的であることを示す。実施例5:可溶性レセプター形態の生成ヒトにおける使用のためのレセプターインヒビターを形成するために、当業者は、細胞外ドメインのヒトレセプターcDNA配列を必要とする。マウスの形態が公知である場合、ヒトcDNAライブラリーは、マウスcDNA配列を使用してスクリーニングされ、そしてそのような操作は、当該分野で慣用的に行われる。ヒトcDNA配列を用いて、当業者は、オリゴヌクレオチドプライマーを設計して、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインの非存在下で、レセプターの細胞外ドメインのPCR増幅を行い得る。代表的には、1つは、最後のジスルフィド連結したTNFドメインと膜貫通ドメインとの間のほとんどのアミノ酸を含む。当業者は、得られる可溶性レセプターの効力を最適化するように含まれる柄の領域の量を変化させ得る。この単純化した部分は、種々のC末端Ig融合キメラベクターにクローニングし得るように、適切な制限部位を含むように操作される。あるいは、当業者は、3’末端に終結シグナルを挿入し得、そして、レセプターの可溶性形態をIg融合キメラアプローチの使用に頼ることなしに、作成し得る。得られるベクターを、酵母、昆虫細胞、細菌、および哺乳動物を含むバイオテクノジーにおいて使用されるほとんどの系において発現し得、全ての発現の型についての例が存在する。種々のヒトFcドメインは、所望のように、FcRを最適化するかまたは排除するために、または相互作用を相補するために、結合され得る。あるいは、これらのFcドメインの変異形態は、FcR選択的に除去するため、またはFcドメインへの相互作用またはN連結糖の付着これは特定の利点を有するを相補するために使用され得る。実施例6:アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体の生成上記の可溶型レセプターを用いて、従来の方法によってマウスを免疫し、そしてモノクローナル抗体を作成し得る。ELISA法によって同定される、得られた組換えmAbは、種々のインビトロ細胞性アッセイにおいて、可溶性抗体またはプラスチック上へ固定された抗体のいずれかとして、アゴニスト活性についてさらにスクリーニングされ得る。しばしば、HT29細胞株の死亡は、都合の良いシステムであり、多くのTNFレセプターを通じたシグナル伝達に感受性である。この株が目的のレセプターを保有しない場合、その全長レセプターは、HT29株中に安定にトランスフェクトされ得、ここで細胞障害性アッセイを行うことを可能にする。あるいは、このような細胞を、細胞センサー装置に用いて、レセプターの活性化がpH変化シグナル伝達事象の指標であるを惹起し得るか否かを評価し得る。このような様式およびこの方法において、TNFファミリーレセプターシグナルウェルは、このレセプターによって誘引される実際の生物学的事象を知るには必要のないものである。アゴニストmAbは、臨床使用のためにヒト化される。この手順はまた、アンタゴニストmAbを規定するためにも用いられ得る。このようなmAbは、アゴニスト活性の欠損およびレセプター-リガンド相互作用を阻害する能力ELISA、古典的結合方法またはBIAコア方法によってモニターされる場合によって規定される。最終的に、アゴニスト抗体に応答する、種々の細胞によるケモカイン分泌の誘導は、スクリーニングアッセイを形成し得る。実施例7:レセプター-リガンド相互作用のインヒビターのスクリーニングレセプター-Ig融合タンパク質を用いて、当業者は、レセプターに直接結合し得る分子についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングし得る。次いで、これらの分子は、レセプター-リガンド相互作用を阻害する能力について、レセプター-Ig融合タンパク質および可溶型のリガンドを用いて、ELISA形式のアッセイにおいて、試験され得る。このELISAは、阻害性化合物について、種々の天然産物ライブラリーなどをスクリーニングするために直接用いられ得る。このレセプターは、HT29株のような細胞株中にトランスフェクトされ、生物学的アッセイこの場合細胞毒性を形成し、次いでスクリーニングアッセイを形成し得る。実施例8:BAFF-R-IgGは、正常マウスにおいてB細胞数の減少を起こす8週齢の雌性BALB/cマウスを、JacksonLaboratoryBarHarbor,MEから購入した。8日前、5日前、1日前および2日後、PBS、400μgのヒトBAFF-R-huIgG1hBAFF-R-Ig融合タンパク質TeresaCachero,Biogenより供給、または400μgの精製ヒトIgGHuIgGSandoz,Basel,Switzerlandのいずれかを、マウス1群に3匹に、腹腔内投与した。0日目に、マウスに、10ヒツジ赤血球SRBCColoradoSerumCompany,Denver,COを100μl投与した。屠殺時に、心臓穿刺を介してEDTを含有するチューブに血液を収集し、そして赤血球を低張緩衝液中に溶解した。血液をまた、血清調製のためのEDTAなしに収集した。単一細胞懸濁液を脾臓および腸間膜リンパ節MLNから調製し、そして赤血球を低張性緩衝液に溶解した。PE結合体化抗CD45R/B220、抗シンデカンsyndecan/CD138および抗B7.2、ならびにFITC結合体化抗IgMおよび抗CD45R/B220を用いて、フローサイトメトリーを実施した。全てのmAbは、PharmingenSanDiego,CAから購入した。簡略には、Fcレセプターを、氷上で15分間10μg/mlのFcBlockPharmingenを用いてブロックし、続いてPE結合体化mAbおよびFITC結合体化mAbを添加し、そして氷上で20~30分間インキュベートした。細胞を1回洗浄し、そして0.5パラホルムアルデヒドに懸濁した。FACSCaliburTMフローサイトメトリーBectonDickinson,SanJose,CAにおいて細胞蛍光データを得、そしてCELLQuestTMソフトウェアBectonDickinsonを用いて分析した。hBAFF-R-Igを用いる処理後、試験した末梢血液および末梢リンパ器官において、B細胞数は、ほぼ50減少していた。B220高IgM低B220highIgMlowB細胞は、PBS処理マウスおよびHuIgG処理マウスにおいて、それぞれ、細胞の23.4および21.5とみなされたが、一方、この集団は、hBAFF-R-Ig処理マウスにおいては、細胞のわずか9.9であった。血漿細胞シンデカンsndecan/CD138は、hBAFF-R-Ig処理マウスにおける3.9と比較して、PBS処理マウスおよびHuIgG処理マウスの血液中で、それぞれ、5.7および4.8程度までわずかに減少するようであった。B7.2分子は、hBAFF-R-Ig処理マウスにおける1.9と比較して、PBS処理マウスおよびHuIgG処理マウスにおいて、それぞれ、B220細胞の3.1および4.5に上方制御された。脾臓B220高B220highB細胞は、PBS処理したマウスおよびHuIgG処理したマウスにおける、それぞれ36.7および40と比較して、hBAFF-R-Ig処理マウスでは18.8と顕著な減少であった。この低下は、IgM高IgMhighおよびIgM低IgMlowの両方の小集団において観察された表8Aを参照のこと。脾臓において、新しく形成されたB細胞区画B220低IgM高には変化は観察されなかったデータ示さず。血漿細胞シンデカン/CD138は、hBAFF-R-Ig処理したマウスにおける、2.4と比較して、PBS処理したマウスおよびHuIgG処理したマウスの脾臓において、それぞれ3.3および3.4と減少がわずかであるようであった。MLNは、PBS処理したマウスおよびHuIgG処理したマウスにおける、それぞれ26.7および35.8と比較して、hBAFF-R-Ig処理マウスでは14.1と、B220B細胞の減少を示した。データを、表8Aにまとめる。SRBCを用いた免疫後のhBAFF-R-Ig処理マウスの血液および脾臓中の血液細胞および血漿細胞におけるB7.2B細胞のパーセンテージは低下しており、このことは、B細胞活性化および/または成熟の阻害、ならびに活性化B細胞の潜在的に増大した排除が存在することを示唆する。非常に少ない割合の抗原特異的B細胞が、活性化され、そして任意の抗原この場合、SRBCに応答した。hBAFF-R-Ig処理は、試験した全ての組織においてB細胞の割合のそのような劇的な減少約50を生じたので、hBAFF-R-Igの活性は、また得られた成熟B細胞を標的するようである。従って、BAFF-R融合タンパク質は、B細胞媒介疾患において臨床適用を有する治療薬として用いられ得る。疾患としては、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス病、グレーヴズ病、ヴェーゲナー肉芽腫症、多発性結節性動脈炎、および急速進行性糸球体腎炎のような本質的に自己免疫である疾患が挙げられる。治療剤はまた、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、原発性アミロイドーシスまたは免疫細胞関連アミロイドーシス、および重度不定単一クローン性高ガンマグロブリン血症monoclonalgammopathyofundeterminedsignificanceMGUSのような血漿細胞障害において適用を有する。腫瘍学の標的としては、B細胞癌腫、白血病、およびリンパ腫が挙げられる。実施例9:可溶性BAFF-Rを用いた、インビトロでのBAFF誘導性B細胞増殖のブロック本実施例において、本発明者らは、可溶性BAFF-R:hIgG1融合タンパク質が、マウス脾細胞におけるBAFF誘導性B細胞増殖をブロックし得ることを示す。Balb/cマウスからマウス脾細胞5×105細胞/mlを単離し、そして10ウシ胎仔血清JRH、2mMグルタミン、100単位/mlのペニシリンおよび100mg/mlのストレプトマイシンLifeTechnologiesを補充した、100μlのRPMILifeTechnologiesを含有する96ウェルプレート中で培養した。次いで、種々の量のヒトBAFF、10μg/mlのヒトBAFF-R:hIgG1またはヒトIg、ならびに10μg/mlの抗マウス表面μ重鎖JacksonImmunoResearchを添加した。37°Cでの培養48時間後、1μCi/ウェル[メチル-3H]チミジンDupontNENを用いて細胞を24時間パルスし、そしてTomtecOrange,CT細胞ハーベスターを用いて収集した。Betaplate液体シンチレーションカウンターPharmaciaBiotechで放射活性を測定した。図8は、脾細胞増殖アッセイSplenocyteProliferationAssayの結果を示す。添加されたヒトBAFF試薬の量に対する、マウス脾臓細胞に取り込まれたカウント毎分CPMを示す。抗μまたは融合タンパク質またはコントロールhIgGのレベルは、10μg/mlで一定に保つ。黒四角は、BAFFのみで誘導された増殖のレベルを示す。黒丸は、BAFFおよび抗μを用いた、細胞の増殖を示す。白三角の曲線は、BAFF-R:hIgG1BAFFを抗μBAFF-R:hIgG1とともに添加した場合に観察された阻害を示す。白菱形は、コントロールのヒトIgを用いて観察された阻害を示す。BAFFプラス抗μの添加は、インビトロにおいてマウス脾細胞の増殖を生じる。細胞に取り込まれた3Hチミジンのレベルは、BAFF単独または抗μ単独のいずれかを脾細胞に添加したときに得られたレベルよりも有意に高い。BAFF単独での脾細胞の処理は、非常に高い濃度でのみ、3Hチミジン取り込みを生じる。抗μ単独の添加は、増殖を生じない。漸増する量のBAFFおよび10μg/mlの抗μとともに、脾細胞に10μg/mlのコントロールヒトIgを添加した場合、増殖のレベルにおいて穏やかな減少が存在した。対照的に、同じ条件下で、10μg/mlのヒトBAFF-R:hIgG1融合タンパク質を、このアッセイに添加した場合、増殖の程度は、BAFF単独処理について観察されたレベルへ減じる。このことは、BAFF-R:hIgG1融合タンパク質がBAFFおよび抗μによって誘導される脾細胞の増殖を阻害し得ることを示す。実施例10:BAFF-R:hIgG1を用いた、Raji細胞に対するBAFFの結合のブロック本実施例においては、RajiB細胞リンパ腫株に結合するBAFFの減少を生じる、BAFF-R:hIgG1融合タンパク質とのBAFFのプレインキュベーションを記載する。このFACSアッセイでは、20μg/ml~39ng/mlにわたる2倍稀釈で、ヒトBAFF-R:hIgG1またはヒトLTβR:hIgG1とともに、または融合タンパク質なしのいずれかで、200ng/mlFLAG標的化ヒトBAFFを、氷上で30分間、プレインキュベートした。Ca2もMg2も含まず、そして10FCSJRHおよび0.05アジ化ナトリウムを含むPBSを含有するFACS緩衝液中でインキュベーションを行った。プレインキュベーション後、BAFF融合タンパク質混合物を5×106RajiATCC細胞/mlに添加した。このインキュベーションを、30分間氷上に置き、次いで4°Cで2mlのFACS緩衝液を用いて細胞を洗浄した。結合したBAFFを検出するため、5μg/mlの抗FLAG抗体M2Sigmaを細胞に添加し、30分間氷上でインキュベートした。この細胞を再度上記のように洗浄し、次いで1:100稀釈のPE結合体化ロバ抗マウスIgJacksonImmunoResearchとともに30分間インキュベートした。FACS緩衝液を用いて細胞を再度洗浄した後、細胞を1パラホルムアルデヒドで固定し、そしてFACS登録商標BectonDickinsonandCo.で読み取った。図9は、BAFFブロッキングアッセイの結果を示す。Raji細胞に対するBAFF結合を試験するFACS登録商標分析から得たMFI平均蛍光強度の読み取りを示す。黒四角は、細胞への結合の前にBAFFとともにヒトBAFF-R:hIgG1をプレインキュベートする場合のデータを示す。丸は、BAFFに対する非特異的融合タンパク質であるヒトLTβR:hIgG1の添加によって得られた曲線を示す。x軸は、細胞とのインキュベーション前に200ng/mlまでBAFFに添加された融合タンパク質の量を示す。融合タンパク質をヒトBAFFとともにプレインキュベートしないとき、サンプルの平均蛍光強度MFIは80であった。ヒトLTβR:hIgG1をBAFFとともにプレインキュベートするときは、20μg/mlでさえ、Raji細胞に対するBAFF結合の検出は変化しない。しかし、ヒトBAFF-R:hIgG1をBAFFとともにプレインキュベートするとき、625ng/mlの融合タンパク質でさえ20~25まで、MFIは実質的に減少する。この実験についてのバックグラウンドMFIは7である。従って、BAFF-R:hIgG1は、RajiB細胞に対するBAFF結合をブロックするのに非常に効果的である。実施例11:BAFF-R-IgGは、トランスジェニックマウスにおいて狼瘡様自己免疫障害を減弱する本実施例は、末梢B細胞プールを減じ、そして巨脾腫症および腎炎の発生を阻害するBAFF-R-Igの効果を記載する。5ヶ月齢のBAFFトランスジェニックTgマウスC57BL/6および年齢の適合する同腹仔を、本実験に用いた。BAFFTgマウスは、リンパ性障害および全身性エリテマトーデスに類似の自己免疫の表現型を表すMackayら、1999。この表現型は、増大した末梢性B細胞集団を含み、この集団は、移行性Transitional1T1および2T2、成熟M、帯域marginalzoneMZおよびCD1high/IgMhighのB細胞を含んだ。PBS、400mgの精製したヒトIgGhIgSandoz,Basel,Switzerland3/群、または400μgのCHO由来ヒトBAFF-R-huIgG1hBCMA-Ig融合タンパク質2/群を、0日目、4日目、7日目、11日目、14日目、18日目、21日目、25日目、28日目、32日目、35日目に、このマウスに腹腔内投与し、40日目に屠殺した。屠殺の時点で脾臓重量を測定し、そして低張性緩衝液中での赤血球溶解後、単一細胞懸濁液を調製した。FITC結合体化抗CD21/CD35、PE結合体化抗IgDおよび抗CD1、cychrome結合体化抗CD45R/B220、およびビオチン結合体化抗IgMを用いて、フローサイトメトリーを実施した。全てのmAbは、PharmingenSanDiego,CAから購入した。簡略には、Fcレセプターを氷上で10分間10μg/mlFcBlockPharmingenを用いてブロックし、続いて氷上で30分間ビオチン結合体化mAbを添加し、細胞を1回洗浄し、続いて、FITC、PE、Cychrome結合体化Ab、ストレップ-アビジンAPCおよび10μg/mlFcBlockを添加した。細胞を氷上で30分間インキュベートし、1回洗浄し、そして0.5パラホルムアルデヒドに懸濁した。細胞蛍光データをFACSCaliburフローサイトメーターBectonDickinson,SanJose,CA上で得て、CELLQuestsoftwareBectonDickinsonを用いて分析した。尿分析用のMultistix10SG試薬片BayerCorp.,DiagnosticsDivisionを用いてマウス尿中のタンパク質の存在を測定した。結果を以下の表11Aおよび11Bに示す:3ヶ月齢BaffTgマウスn=3および年齢の適合した同腹仔n=2の脾臓を単離し、そして材料および方法に記載のようにFACS分析に供した。T1、T2、MおよびMZ細胞を、以下の表面マーカーの発現によって規定したhi:high高.,lo:low低.,int:intermediate中間:T1:IgD、IgMhigh、CD21loMZ:IgD、IgMhi、CD21T2:IgD、IgMhi、CD21hiM:IgD、IgMlo、CD21int10ヶ月齢BaffTgマウスn=3および年齢の適合した同腹仔n=3を、表1に記載のようにFACS分析に供した。BaffTgマウスへのhBAFF-R-Igの投与後、脾臓中のT1、T2、M、MZ集団およびCD1high/IgMhighB細胞は、PBSおよびhIgで処理したBAffTgマウスに比べて、有意に低下した。T1、T2、M、MZおよびCD1high/IgMhighのB細胞の総数は、PBSで処理したコントロールの同腹仔のレベルと同程度かまたは低いレベルまで減じた図10a、10b、10c。BaffTgマウスのBAFF-RIg処置は、BAFF-R処置マウスが正常サイズの脾臓を有した一方で、コントロール処置BaffTgマウスが巨脾腫を示したという観察により証明されるように、Baff媒介性自己免疫疾患の低減を生じた図11。さらに、タンパク尿の発症、腎不全の徴候がBAFF-R-Ig処置マウスにおいて阻害されたのに対し、コントロール処置BaffTgマウスでは、タンパク尿レベルの増加により決定されるように、腎炎を発症した図12。Baffについてのトランスジェニックマウスは、末梢B細胞の数が非常に増加しており、そして本発明者らの分析により、これらのマウスにおいてT1、T2、MZB細胞亜集団が主に増大していることが示された。B細胞発生T1およびT2の移行段階は、チェックポイントであり、この段階において、自己反応性B細胞はおそらく除去されている。CD1hi/IgMhighB細胞これは、周辺領域に存在する傾向にあるはまた、BaffTgマウスにおいて非常に増加していた。この後者のB細胞集団は、NZB/NZW狼瘡マウスにおいて自己抗体生成の主要な供給源であることが示された。BaffTgマウスをBAFF-RIgで処置することにより、T1、T2、MZおよびCD1hiB細胞集団が、野生型同腹仔コントロールにおいて見出されたレベルと同様以下のレベルまで減少した。BAFF-RIgは、末梢B細胞プールを減少し、そして巨脾症および腎炎の発症を阻害するように機能する。従って、全身エリテマトーデス、ループス腎炎におけるその有用性に加え、BAFF-RIgの作用はまた、本質的に自己免疫疾患であるB細胞媒介性疾患例えば、重症筋無力症、自己免疫溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス病、グレーブス病、ヴェーゲナー肉芽腫症、結節性多発性動脈炎および急速進行性糸球体腎炎においても同様に有用である。この治療薬剤はまた、プラズマ細胞障害例えば、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、H鎖病、原発性または免疫担当細胞関連アミロイド-シス、および意味未決定の単一クローン性高ガンマグロブリン血症monoclonalgammopathyofundeterminesignificanceMGUSにおいて適用を有する。腫瘍学の標的としては、B細胞癌腫、白血病、およびリンパ腫が挙げられる。実施例12:BAFFトランスジェニックマウスにおける平均動脈圧この実験は、BAFFトランスジェニックマウスにおける血圧の測定を記載する。BAFFトランスジェニックマウスの表現型評価の間に行われた観察により、マウスにおける高血圧についての可能性が示された。上記のBaffTgマウスを、ケタミンで麻酔した。左頸動脈を頸部切開により露出させた。血圧および心拍数を測定するために、頸動脈にカテーテルを挿入した。このカテーテルを圧力変換器に接続し、そして血圧をGouldデータ取得システムPo-Ne-MahDataAquisitionSystemおよびGouldpolygraphを用いて測定した。拍動圧波形から、収縮期血圧、拡張期血圧、平均血圧および心拍数を導出した。2つの群のマウスを用いた:BAFFトランスジェニックn=8および野生型コントロールn=9。図13は、2群を平均した平均動脈圧MAPmmHgを示す。示されるように、BAFFトランスジェニックマウスは、102±8mmHgという平均MAPを有した。コントロールマウスは、92±6mmHgという平均MAPを有した。従って、BAFFマウスは、コントロールに対して、MAPが10mmHg増加していることを示すが、統計的有意には達しなかったANOVA。データのより詳細な分析を図14に示す。この図において、個々の動物からの結果を示す。野生型コントロールBAFF-において、データ分布は、代表的な二項分布になった。対照的に、BAFFトランスジェニックマウスBAFFにおける血圧は、それらが2群に分類されるかのように現れた。一方の群は、120~130mmHg範囲であり、もう一方の群は、80~90mmHg範囲であった。集団として、BAFFトランスジェニックマウスは、ネガティブコントロールマウスと比較して、高血圧の傾向を有する。動脈圧の個々のレベルの分析により、BAFFトランスジェニックマウスが2つの亜集団、すなわち、一方は、高血圧、もう一方は正常血圧に分けられる。従って、可溶性BAFF-R、融合タンパク質または抗体ホモログの投与は、高血圧の効果を改善し得る。実施例13:確立された疾患を有するSNF1マウスのBAFF-R-Ig処置は、重篤な腎炎への進行を遅らせる雌性狼瘡易発性SWR×NZBF1SNF1マウス21週齡であり、中程度の腎炎30~100mg/dlタンパク尿を示すに、200μgの融合タンパク質ヒトBAFF-R-huIgG1hBCMA-Ig、ヒトIgGHuIgGSandozまたは200μlのPBSを1週間に1回、8週間にわたり、腹腔内で与えた。各マウスの尿をAlbustixBayerCorp.,Terrytown,NYを用いてタンパク尿について1週間に1回モニターした。100mg/dlを超えるタンパク尿を、重篤な腎炎とスコアリングした。BAFF-R-Igを一過性にトランスフェクトしたEBNA293細胞から生成した。hBCMA-Igを過剰発現する293細胞由来の馴化培地を、プロテインAカラムにロードした。タンパク質を25mMリン酸100mMNaClpH2.8を用いて溶出し、続いて、1/20容量の0.5MNaPO4pH8.6を用いて中和した。OD280に基づいて選択した画分を、還元および非還元のSDS-PAGEゲルおよびウェスタンブロットに供して、精製タンパク質を同定した。処置の3週間後、HuIgGおよびPBSを与えたマウスのそれぞれ75および87.5と比較して、BAFF-R-Igで処置したマウスの50が重篤な腎炎を示したという結果になった図15を参照のこと。これらのデータは、可溶性BAFFレセプター、BCMA-IgがB細胞媒介性自己免疫疾患例えば、ループス腎炎をブロックするように機能し得、疾患進行において顕著な遅延を生じる。実施例14:正常マウスのBAFF-R-Ig処置は、脾臓樹状細胞DCの数の減少および異型の脾臓局在を生じる7週齡の雌性BALB/cマウス3匹/群に、20μgまたは50μgのヒトBAFF-R-IgG1hBCMA-Ig、50μgのヒトIgGHuIgGまたは100μlのPBSのいずれかを、1週間に1回、4週間にわたり、腹腔内で与えた。hBCMA-Ig融合タンパク質を、安定にトランスフェクトしたCHO細胞株の培養上清から精製した。脾臓を最後に注射してから8日後に得て、そして37°Cで1時間、コラゲナーゼSigmacatC-5138で消化した。単一細胞の懸濁物を調製し、高浸透圧緩衝液中でRBCを溶解し、そして細胞を3回、PBSで洗浄した。脾細胞を、抗CD11c-ビオチン、続いて、ストレプトアビジン-APC、抗CD8a-cychrome、および抗CD4-FITCで染色することによりフローサイトメトリー分析用に調製して、DC集団を評価した。別の実験において、雌性BALB/cN=3マウスに、100μghBCMA-Igを1週間に1回、4週間にわたり腹腔内で与えた。その後、脾臓を、CO2で冷却した2-メチルブタンを用いてOCT中に急速凍結した。低温切片を切り出し、そしてアセトン固定した。切片を、DCを可視化するために抗CD11c-ビオチン、続いてストレプトアビジン-AP、そして基質BCIPPierceとともに、好金属性マクロファージを可視化するためにmAbMOMA-1、続いて抗ラットIgG-HRPJacksonImmunoResearchそして基質3,3’ジアミノベンジジンSigma,St.Louis,MO,Cat.D-1293とともに、濾胞性樹状細胞folliculardendriticcellFDCを可視化するために抗CD35-ビオチン、続いてストレプトアビジンAP、そして基質アルカリホスファターゼ基質キットI,VectorcatSK-5100とともにインキュベートした。20μgまたは50μgのBCMA-Igのいずれかで1週間に1回、4週間にわたりインビボで処置したマウスは、HuIgGおよびPBS処置コントロールと比較して、脾臓CD11cDCにおいて有意な減少を示したステューデントt検定によりp<0.05。この減少は、試験した全てのCD11cDC集団について見られた:CD8a-CD4-、CD8aCD4-、およびCD8a-CD4図16、表14A。脾臓DCこれは、重要な抗原提示細胞であるにおけるこの減少は、B細胞活性化、成熟および体液性免疫に影響を及ぼし得る。凍結脾臓切片を、材料および方法において記載したように、マウスから得た。BCMA-Ig処置マウスは、抗CD11cで染色した場合に、異型のDCホーミングパターンを示した。DCは、通常は、チャネルにまたがる周辺領域における濃度で、白色脾髄のT細胞領域内および周辺領域内に局在する。しかし、BCMA-Ig処置マウス由来のDCが見出され、これは、周辺領域の周界を取り囲んでおり、そして白色脾髄内にさらに移動し得ることはほとんどないようであるデータは示さず。従って、可溶性BAFFレセプターとのBAFF/BAFF-R相互作用のブロッキングは、抗原提示細胞として機能するそれらの能力に影響を及ぼし得るDCのホーミングパターンを妨害し、それによりB細胞活性化、成熟および体液性免疫に影響を及ぼすようである。さらに、BCMA-Ig処置マウスの脾臓は、免疫組織化学により決定されるように、CD35FDCを欠いていたデータは示さず。FDCは、胚中心GC内のB細胞に抗原を提示するように機能するので、このような細胞の欠如は、GC構造およびB細胞親和性成熟に対して好ましくない影響を有し得る。本発明のポリペプチド、組成物および方法において、本発明の趣旨または範囲を逸脱することなく種々の改変および変化が行われ得ることは当業者に明らかである。従って、本発明は、本発明の改変および変化が添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物の範囲内に入る場合は、これらの改変および変化を包含する。"