次の工程を含む陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体の製造方法a陰イオン性高分子を含む有機溶媒溶液と磁気共鳴映像ナノ造影剤を含む有機溶媒溶液とを混合して、陰イオン性高分子/磁気共鳴映像ナノ造影剤複合体を取得する工程;及びb前記取得された陰イオン性高分子/磁気共鳴映像ナノ造影剤複合体に陽イオン性高分子を添加して、陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体を取得する工程。前記陰イオン性高分子は、ポリグルタミン酸、ポリアクリル酸、アルギン酸、カラギナン、ヒアルロン酸、ポリスチレンスルホン酸塩、カルボキシメチルセルロース、セルロース硫酸塩、デキストラン硫酸塩、ヘパリン、ヘパリン硫酸塩、ポリメチレンコグアニジン及びコンドロイチン硫酸塩からなる群から選択されることを特徴とする請求項1に記載のナノ粒子複合体の製造方法。前記陽イオン性高分子は、キトサン、ポリエチレンイミン、ポリL-リジン、ポリジアリルジメチル塩化アンモニウム、ポリアリルアミン、塩酸塩、ポリオルニチン、ポリビニルアミン塩酸塩、ポリ2-ジメチルアミノエチルメタクリレート、ポリアミドアミン、デンドリマー及びゼラチンからなる群から選択されることを特徴とする請求項1に記載のナノ粒子複合体の製造方法。前記磁気共鳴映像ナノ造影剤は、鉄Fe、マンガンMn、コバルトCo、ガドリニウムGd、プラセオジムPR、サマリウムSm、ユーロピウムEu、テルビウムTb、ジスプロシウムDy、ホルミウムHo、エルビウムEr、ツリウムTm、イッテルビウムYb、ルテニウムLu及びこれらの複合体からなるナノ粒子群から選択されることを特徴とする請求項1に記載のナノ粒子複合体の製造方法。請求項1から請求項4のいずれか一項に記載の方法で製造され、陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体。本発明の目的は、酸化鉄基盤ナノ粒子をポリガンマグルタミン酸γPGAとキトサン高分子複合体内部に封入して、磁気共鳴信号を効果的に増加させて、人体内の特定細胞や機関の標識感度を向上させるナノ粒子磁気共鳴映像ナノ造影剤を含有する陰イオン性高分子と陽イオン性高分子を含有するナノ粒子複合体の製造方法を提供することにある。前記目的を解決するために、本発明はa陰イオン性高分子を含む有機溶媒溶液と磁気共鳴映像ナノ造影剤を含む有機溶媒溶液を混合して、陰イオン性高分子/磁気共鳴映像ナノ造影剤複合体を取得する工程;及びb前記取得された陰イオン性高分子/磁気共鳴映像ナノ造影剤複合体に陽イオン性高分子を添加して、陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体を取得する工程を含む陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体の製造方法を提供する。本発明はまた、前記方法で製造されて、陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体を提供する。本発明の他の特徴及び実施態様は、以下の詳細な説明及び添付された特許請求範囲からより一層明白になる。他の方式で定義されない限り、本明細書において使用されたあらゆる技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野に熟練した専門家によって通常理解されるものと同じ意味を有する。通常、本明細書において使用された命名法及び以下で詳述する実験方法は、本技術分野において周知であり、しかも汎用されるものである。一観点において、本発明は、a陰イオン性高分子を含む有機溶媒溶液と磁気共鳴映像ナノ造影剤を含む有機溶媒溶液を混合して、陰イオン性高分子/磁気共鳴映像ナノ造影剤複合体を取得する工程;及びb前記取得された陰イオン性高分子/磁気共鳴映像ナノ造影剤複合体に陽イオン性高分子を添加して、陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体を取得する工程を含む、陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体の製造方法に関する。本発明において、前記陰イオン性高分子は、ポリグルタミン酸Polyglutamicacid、ポリアクリル酸Polyacrylicacid、アルギン酸Alginate、カラギナンCarrageenan、ヒアルロン酸Hyaluronicacid、ポリスチレンスルホン酸塩Polystyrenesulfonate、カルボキシメチルセルロースCarboxymethylcellulose、セルロース硫酸塩Cellulosesulfate、デキストラン硫酸塩Dextransulfate、ヘパリンHeparin、ヘパリン硫酸塩Heparinsulfate、ポリメチレンコグアニジンPolymethylene-co-guanidine及びコンドロイチン硫酸塩Condroitinsulfateからなる群から選択されることを特徴とする。本発明は、生体親和性素材である陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合性を利用して、酸化鉄基盤ナノ粒子をコーティングする方法に関し、用いられたポリガンマグルタミン酸γPGAは、韓国清麹醤から由来したバチルス菌Bacillussubtilisにより生合成された超高分子量の天然アミノ酸高分子物質として、優れた生体適合性と生分解能力を有している。構成アミノ酸であるグルタミン酸に存在する多量のカルボキシル基によって、陰イオン性高分子に分類され、陽イオン性ミネラルとの反応性が優れており、食品添加剤、健康機能食品、化粧品、及び医薬品への多様な応用が期待される。特に、疎水性薬物や有用蛋白質及び抗原を封入する効果が優れて、薬物伝達システムdrugdeliverysystemに活用しようとする研究が活発に進められているが、この時封入物の安定性を確保するために、陽イオン性高分子であるキトサンとイオン性自己組立を誘導して、ゲル化gelationさせたナノ粒子を形成することができる。本発明において、前記陽イオン性高分子は、キトサンChitosan、ポリエチレンイミンPolyethylenimine、ポリL-リジンPolyL-lysine、ポリジアリルジメチル塩化アンモニウムPolydiallyldimethylammoniumchloride、ポリアリルアミンPolyallylamine、塩酸塩hydrochloride、ポリオルニチンPoly-ornithine、ポリビニルアミン塩酸塩Polyvinylaminehydrochloride、ポリ2-ジメチルアミノエチルメタクリレートPoly2-dimethylaminoethylmethacrylate、ポリアミドアミンPolyamidoamine、デンドリマーdendrimer及びゼラチンGelatinからなる群から選択されることを特徴とする。本発明の陽イオン性高分子として用いられたキトサンは、海老、カニのような甲殻類から由来する天然動物性食物繊維であり、溶解状態で陽電荷を帯びる陽イオン性高分子物質である。グルコサミン結合からなるキトサンは、その分子構造が人体組織と非常に類似する構造をなしており、人体親和性が非常に優秀で、免疫反応拒否反応が起きないために、種々の食医薬品分野に応用されている。本発明において、前記磁気共鳴映像ナノ造影剤は、鉄Fe、マンガンMn、コバルトCo、ガドリニウムGd、プラセオジムpraseodymium、PR、サマリウムsamarium、Sm、ユーロピウムeuropium、Eu、テルビウムterbium、Tb、ジスプロシウムdysprosium、Dy、ホルミウムholmium、Ho、エルビウムerbium、Er、ツリウムthulium、Tm、イッテルビウムytterbium、Yb、ルテニウムlutetium、Lu及びこれらの複合体からなるナノ粒子群から選択されることを特徴とする。本発明で、磁気共鳴映像ナノ造影剤とは、磁気共鳴映像造影効果が出る酸化鉄ナノ粒子として、有機溶媒で合成したマンガンがドープされた酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子を用いて、これは短い炭化水素鎖からなる界面活性剤で安定化されていて、疎水性性質を示す。本発明の一様態では、陰イオン性高分子としてPGA、陽イオン性高分子としてキトサンを用いて、酸化鉄基盤ナノ粒子を磁気共鳴映像ナノ造影剤として、γ-PGA/キトサン複合体内部に封入して製造したナノ複合体を提示している。しかし、前記陰イオン性高分子は、ポリグルタミン酸、ポリアクリル酸、アルギン酸、カラギナン、ヒアルロン酸、ポリスチレンスルホン酸塩、カルボキシメチルセルロース、セルロース硫酸塩、デキストラン硫酸塩、ヘパリン、ヘパリン硫酸塩、ポリメチレンコグアニジン及びコンドロイチン硫酸塩からなる群から選択でき、前記陽イオン性高分子は、キトサン、ポリエチレンイミン、ポリL-リジン、ポリジアリルジメチル塩化アンモニウム、ポリアリルアミン、塩酸塩、ポリオルニチン、ポリビニルアミン塩酸塩、ポリ2-ジメチルアミノエチルメタクリレート、ポリアミドアミン、デンドリマー及びゼラチンからなる群から選択でき、前記磁気共鳴映像ナノ造影剤は、鉄Fe、マンガンMn、コバルトCo、ガドリニウムGd、プラセオジムPR、サマリウムSm、ユーロピウムEu、テルビウムTb、ジスプロシウムDy、ホルミウムHo、エルビウムEr、ツリウムTm、イッテルビウムYb、ルテニウムLu及びこれらの複合体からなるナノ粒子群から選択できることは当業者にとって自明であるHyonBinNaetalAdvancedMaterials2121332009ConroySunetalAdvancedDrugDeliveryReviews6012522008JianLuetalBiomaterials3029192009JLeeetalNatureMedicine13952007。他の観点において、本発明は、前記方法で製造され、陰イオン性高分子及び陽イオン性高分子のイオン結合によって形成された高分子複合体に磁気共鳴映像ナノ造影剤が封入されているナノ粒子複合体に関する。本発明の他の様態においては、生体親和的な天然高分子であるポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン複合体内部に酸化鉄基盤ナノ粒子を封入して、優れた磁気共鳴信号増幅効果を示す磁気共鳴映像ナノ造影剤を開発するために、酸化鉄基盤ナノ粒子は、高分子量500kDaのポリガンマグルタミン酸γPGAでコーティングして、有機溶媒相から水溶液相に相転移を誘導した。その次に、粒子の均一性と安定性を確保してターゲット特異的リガンドを導入し易しい官能基であるアミンamine基を導入するために、キトサンでその表面を再度コーティングした。この時、ポリガンマグルタミン酸γPGAとキトサンは、いかなる化学的な修飾なしに単純なイオン性自分組立で複合体を形成して、生体親和性を一層高めようとした。また、高分子量のポリガンマグルタミン酸γPGAを利用することによって、ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン複合体内部に相当な数の酸化鉄基盤ナノ粒子が封入される効果を得ることができた。これは、複合体内部に閉じ込められている酸化鉄基盤ナノ粒子の相互作用により、磁気共鳴信号増幅の相乗効果を誘発するため、一つの粒子として存在する時より優れた造影効果を示す。本発明のまた他の様態で、磁気共鳴映像造影効果を示す酸化鉄ナノ粒子として、有機溶媒で合成したマンガンがドープされた酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子を用いた。これは、短い炭化水素鎖からなる界面活性剤で安定化されていて、疎水性性質を有する。従って、粒子は有機溶媒相に均一に分散し、8nm程度の径を有する球状である。マンガンがドープされた酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子を水溶液相に相転移させるために、500kDa分子量のポリガンマグルタミン酸γPGAでコーティングした。ポリガンマグルタミン酸γPGAは、グルタミン酸のガンマカルボキシル基とアルファ-アミノ基がマミド結合したガンマ-ポリペプチド形態の構造で、アルファ-カルボキシル基が露出して、陰イオン性を有するようになるが、この部分が酸化鉄ナノ粒子表面を攻撃して、炭化水素界面活性剤を押し出して表面に結合を形成するようになる。その中の一部のカルボキシル基は、結合を形成することなく、外部に露出するため、コーティングされた表面が陰電荷を帯びるようになる。ポリガンマグルタミン酸γPGAがコーティングされたマンガンがドープされた酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子に陽イオン性のキトサンを加えると、イオン性相互作用によって、球状の高分子複合体が形成される。キトサンは、本来N-アセチル-D-グルコサミン単位体からなるキチンという物質を脱アセチル化させて得られる物質であり、本発明で用いたキトサンは、分子量が50kDa程度で脱アセチル化が80程度である。グルタルアルデヒドGlutaraldehydeは、キトサンのアミン基を架橋させ鎖と鎖との間の結合力を増加させる役割を果たす。また、ポリエチレングリコールPolyethyleneglycolを粒子表面に少量結合させることによって、粒子のペギル化Pegylationによる粒子安定性及び溶解度向上、RESReticuloendothelialsystem細胞による取り込みuptakeを防止して、血中半減期を高める効果を与える。MRIrelaxivityとは、ナノ粒子が含んでいる磁気性元素、すなわち、鉄FeやマンガンMnの単位濃度を基準として、T1やT2緩和時間が減少する程度を示す値である。これは、造影剤の磁気共鳴信号増幅能力を数値化したもので、T2造影剤の場合r2で表記する。以下、本発明を実施例を挙げて詳述する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に制限されないことは当分野において通常の知識を有する者にとって自明である。≪実施例1:試薬及び粒子製造≫実施例1-1:試薬の製造アセチルアセトン鉄IIIIronIIIacetylacetonateとアセチルアセトンマンガンIImanganeseIIactylacetonateを原料でとして、有機溶媒である1-オクタデセン1-octadecene上で高温反応して、マンガンがドープされた酸化鉄ナノ粒子MnFe2O4を合成し、この時ナノ粒子の安定剤として界面活性剤であるオレイン酸oleicacidを添加した。そして、分子量500kDaのポリガンマグルタミン酸γPGA株バイオリーダーズ、韓国、分子量50kDaのキトサン株MIRAEBIOTECH、韓国、PEG-NHS株サンバイオ、韓国を準備した。実施例1-2:酸化鉄ナノ粒子の相転移過程ポリガンマグルタミン酸PGA分子量:500kDaをDMSO溶媒に10mg/mL濃度で溶かし、マンガンがドープされた酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子は、クロロホルムchloroform上で10mg/mLに分散させた。前記二つの溶液を密閉された容器中において、窒素ガスで泡立ちbubblingを10分以上続け、窒素雰囲気を作った後、各々の溶液10mLを混ぜた後、温度60°Cで2時間撹拌して、ポリガンマグルタミン酸/マンガンがドープされた酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子を製造した。製造された複合体に溶液に残っている界面活性剤と反応不純物を取り除くために、ヘキサン、エタノール及びクロロホルムを混合した有機溶媒をhexane:ethanol:chloroform=2:1:1加えた後、5000rpmで10分間遠心分離した後、上澄み液は捨て、下に残った沈殿物を真空状態デシケーターで一日程度放置し残っている有機溶媒を完全に取り除いた。有機溶媒が完全に取り除かれた複合体に50mMのNaHCO3溶液を20mL程度加えた後、残った沈殿物が完全に溶けるまでボルテックスvortexingし、音波処理sonicationを行った後、0.2μmセルロースフィルターadventecを利用してろ過した。実施例1-3:ポリガンマグルタミン酸γPGA/酸化鉄ナノ粒子とキトサンのイオン性結合複合体形成キトサンは、水溶液に10mg/mL濃度で溶かし、水10mLを撹拌しながら、キトサン溶液3mLを添加して、ピペットを利用して、実施例1-2で準備したポリガンマグルタミン酸γPGA/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子溶液1mLを添加し、600rpmで2時間撹拌して、さらに10μLのグルタルアルデヒドglutaraldehydeを添加して、1時間撹拌した。ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体水溶液相に存在するアミン基の定量は、ニンヒドリンninhydrin法で実施した。この時、標準溶液としてL-リジンL-lysine溶液を利用した。実施例1-4:ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/酸化鉄ナノ粒子複合体のペギル化pegylation前記実施例1-3で準備したポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体に含まれたアミン基のモル濃度比2倍モル濃度のPEG-NHSを3次蒸溜水に溶かし、二つの溶液の体積を1:1で混ぜた後、12時間程度撹拌した。反応しない高分子物質とNHSを取り除くために、5000rpmで10分程度遠心分離し、上澄み液を捨て、沈殿物を3次蒸溜水に再分散させた後、再度遠心分離して精製した。ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体の大きさは、DLS、TEM、及びSEMで観察した。その結果、DLSで測定した粒子の大きさは、90~200nmの分布を示していることを確認することができた図3A。これは、人体内に取り込ませた時、EPRenhancedpermeationandretention効果に適した大きさであり、異常組織でのターゲット指向的な特性を持つ。TEMを介して、粒子の大きさと内部を観察してみた結果、相当数のマンガン-酸化鉄ナノ粒子を球状のポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン高分子複合体内部にお封入していることが確認された図3B。これは先に説明したように、マンガン-酸化鉄ナノ粒子が、高分子複合体内部で相互作用を起こしながらMRI信号を効果的に増幅させる相乗効果が期待できる。また、SEMを介して、粒子の表面形状と大きさを観察した結果、DLSで測定された大きさと似た90~200nm程度の球状の粒子を観察することができた図3C。≪実施例2:ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体の活性測定≫実施例2-1:ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子のMRI緩和能relaxivity測定前記の実施例1-3で準備したポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体溶液のMRI緩和能は、4.7T小動物用MRIを利用して測定し、溶液相に存在する鉄とマンガン元素の定量は、ICP-AESで測定した。その結果、ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体のr2は、507FeMnmM-1s-1程度であり、すでに相溶化された水溶液相で合成されたデキストラン基盤酸化鉄粒子のr2値より4倍以上増加した数値であることを確認することができた図4。実施例2-2:ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体細胞内伝達実施例2-1で製造したナノ粒子複合体を癌細胞のHeLa細胞内に伝達する実験を実施した。粒子は、25μg/mL濃度で処理した後、プルシアンブルーprussianblueで染色して、伝達有無を確認した。ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体の表面は、キトサンのアミン基によって陽電荷を帯びるが、これは一般的に陰電荷を帯びている細胞膜によく付着し、細胞内の伝達が容易との特徴があり、粒子は25μg/mL濃度で処理した後、プルシアンブルーで染色して、伝達の有無を確認した図5。実施例2-3:ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体で標識された細胞のMRIイメージ実施例2-2で粒子を処理した細胞を集めて、4.7T小動物MRI装備でMRIイメージを得ることができた。ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体によって標識された細胞は、MRIイメージ上でも確認できるが、標識されない細胞は、周辺の水と共に明るく見られるが、標識された細胞は、暗く示されることを確認することができる。これらのことから、ポリガンマグルタミン酸γPGA/キトサン/マンガン酸化鉄MnFe2O4ナノ粒子複合体が、特定細胞内によく伝達される特性を示し、MRIイメージ結果、少量の粒子だけでも磁気共鳴信号によるイメージ暗化darkening効果が起きることを確認することができた図5。