"下記工程1~4を有することを特徴とする光毒性試験方法。1ヒト網膜色素上皮細胞に被験物質を接触させる第一工程、2第一工程で被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞を、第一工程における接触開始後24時間以内に、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光を照射しながら培養する第二工程、3第二工程で培養されたヒト網膜色素上皮細胞を回収し、回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定する第三工程、4第三工程の測定結果によって被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価し、被験物質の光毒性発現能力を検定する第四工程。前記人工光が、紫外光、可視光及び赤外光からなる擬似太陽光であることを特徴とする請求項1記載の光毒性試験方法。第二工程における人工光の照射が、波長360nmでの測定値として3J/cm2から30J/cm2までの範囲である光照射量となる照射であることを特徴とする請求項1又は2記載の光毒性試験方法。前記第四工程において、前記第三工程の測定結果と、対照のヒト網膜色素上皮細胞における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果とを比較し、その差異に基づいて被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価することを特徴とする請求項1~3のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法。前記対照が、ヒト網膜色素上皮細胞に既知の光毒性発現物質を接触させた陽性対照を含むことを特徴とする請求項4記載の光毒性試験方法。前記光毒性発現物質が、クロルプロマジンであることを特徴とする請求項5記載の光毒性試験方法。第二工程における人工光の照射が、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞と対照のヒト網膜色素上皮細胞との少なくともいずれか一方のヒト網膜色素上皮細胞において、人工光の遮光条件下での前記細胞の生存細胞数に対して、光照射条件下での前記細胞の生存細胞数が有意に減少する光照射量を有する照射であることを特徴とする請求項1~6のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法。前記第二工程における人工光の照射が、1回の連続的照射又は2回以上の繰り返し照射からなる間欠的照射であることを特徴とする請求項1~7のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法。前記ヒト網膜色素上皮細胞が、幹細胞由来の網膜色素上皮細胞であることを特徴とする請求項1~8のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法。前記幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞又は神経幹細胞であることを特徴とする請求項9記載の光毒性試験方法。請求項1~10のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法のための、陽性対照としてのクロルプロマジンの使用。請求項1~10のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法に用いるための陽性対照試薬であって、クロルプロマジンを含有することを特徴とする陽性対照試薬。請求項1~10のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法のための、陰性対照としてのペニシリンG、キニーネ、ビチオノール又はクロルヘキシジンの使用。請求項1~10のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法に用いるための陰性対照試薬であって、ペニシリンG、キニーネ、ビチオノール又はクロルヘキシジンを含有することを特徴とする陽性対照試薬。請求項1~10のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法によって、被験物質の光毒性発現能力を検定し、所望の光毒性発現能力を有する物質を選抜することを特徴とする光毒性発現物質の探索方法。請求項1~10のいずれかの請求項記載の光毒性試験方法によって、被験物質の光毒性発現能力を検定し、所望の光毒性発現能力を有さない物質を選抜することを特徴とする擬似太陽光皮膚刺激非誘発物質の探索方法。しかしながら、近年、3T3NRUPTによる光毒性の存在有無等の評価結果が多く蓄積されるようになったところ、偽陽性という結果を含むことも明らかになりつつあり、実際のヒトへの安全性を予測することに対しては必ずしも常に充分満足できるものではなく、新たなinvitro光毒性試験法の開発が望まれている例えば、非特許文献2参照。本発明者らは、このような状況を鑑み鋭意検討した結果、本発明に至った。即ち、本発明は1.下記工程1~4を有することを特徴とする光毒性試験方法以下、本発明光毒性試験方法と記すこともある。1ヒト網膜色素上皮細胞に被験物質を接触させる第一工程2第一工程で被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞を、第一工程における接触開始後24時間以内に、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光を照射しながら培養する第二工程3第二工程で培養されたヒト網膜色素上皮細胞を回収し、回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定する第三工程4第三工程の測定結果によって被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価し、被験物質の光毒性発現能力を検定する第四工程;2.前記人工光が、紫外光、可視光及び赤外光からなる擬似太陽光であることを特徴とする前項1記載の光毒性試験方法;3.第二工程における人工光の照射が、波長360nmでの測定値として3J/cm2から30J/cm2までの範囲である光照射量となる照射であることを特徴とする前項1又は2記載の光毒性試験方法;4.前記第四工程において、前記第三工程の測定結果と、対照のヒト網膜色素上皮細胞における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果とを比較し、その差異に基づいて被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価することを特徴とする前項1~3のいずれかの前項記載の光毒性試験方法;5.前記対照が、ヒト網膜色素上皮細胞に既知の光毒性発現物質を接触させた陽性対照を含むことを特徴とする前項4記載の光毒性試験方法;6.前記光毒性発現物質が、クロルプロマジンCPZであることを特徴とする前項5記載の光毒性試験方法;7.第二工程における人工光の照射が、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞と対照のヒト網膜色素上皮細胞との少なくともいずれか一方のヒト網膜色素上皮細胞において、人工光の遮光条件下での前記細胞の生存細胞数に対して、光照射条件下での前記細胞の生存細胞数が有意に減少する光照射量を有する照射であることを特徴とする前項1~6のいずれかの前項記載の光毒性試験方法;8.前記第二工程における人工光の照射が、1回の連続的照射又は2回以上の繰り返し照射からなる間欠的照射であることを特徴とする前項1~7のいずれかの前項記載の光毒性試験方法;9.前記ヒト網膜色素上皮細胞が、幹細胞由来の網膜色素上皮細胞であることを特徴とする前項1~8のいずれかの前項記載の光毒性試験方法;10.前記幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞又は神経幹細胞であることを特徴とする前項9記載の光毒性試験方法;11.前項1~10のいずれかの前項記載の光毒性試験方法のための、陽性対照としてのクロルプロマジンCPZの使用;12.前項1~10のいずれかの前項記載の光毒性試験方法に用いるための陽性対照試薬であって、クロルプロマジンCPZを含有することを特徴とする陽性対照試薬;13.前項1~10のいずれかの前項記載の光毒性試験方法のための、陰性対照としてのペニシリンGPenicillinG、キニーネQuinine、ビチオノールBithionol又はクロルヘキシジンChlorhexidineの使用;14.前項1~10のいずれかの前項記載の光毒性試験方法に用いるための陰性対照試薬であって、ペニシリンGPenicillinG、キニーネQuinine、ビチオノールBithionol又はクロルヘキシジンChlorhexidineを含有することを特徴とする陽性対照試薬;15.前項1~10のいずれかの前項記載の光毒性試験方法によって、被験物質の光毒性発現能力を検定し、所望の光毒性発現能力を有する物質を選抜することを特徴とする光毒性発現物質の探索方法以下、本発明光毒性発現物質探索方法と記すこともある。;16.前項1~10のいずれかの前項記載の光毒性試験方法によって、被験物質の光毒性発現能力を検定し、所望の光毒性発現能力を有さない物質を選抜することを特徴とする擬似太陽光皮膚刺激非誘発物質の探索方法以下、本発明擬似太陽光皮膚刺激非誘発物質探索方法と記すこともある。;等を提供するものである。本発明光毒性試験方法によれば、被験物質の光毒性発現能力の検定を効果的に行なうことができる。さらに、本発明では、当該試験方法に陽性対照として用いることができる光毒性発現物質を提供することができる。本発明光毒性発現物質探索方法によれば、所望の光毒性発現物質又は擬似太陽光皮膚刺激非誘発物質の探索を簡便に行うことができる。以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。本発明における形質転換体とは、形質転換により作製された細胞等の生命体の全部又は一部を意味する。形質転換体としては、例えば、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞等を挙げることができる。形質転換体は、その対象に依存して、形質転換細胞、形質転換組織、形質転換宿主等とも呼ばれることがある。本発明において用いられる細胞は、形質転換体であってもよい。本発明に関連した、遺伝子操作技術で使用される原核生物細胞としては、例えば、Eschericia属、Serratia属、Bacillus属、Brevibacterium属、Corynebacterium属、Microbacterium属、Pseudomonas属等に属する原核生物細胞、例えば、EschericiaXL1Blue、EschericiaXL2Blue、EschericiaDH1等を挙げることができる。このような細胞は、例えば、MolecularCloning3rdedition’bySambrook,JandRussellDWAppendix3Volume3,VectorsandBacterialstrainsA32ColdSpringHarborUSA2001に具体的に記載されている。本発明に関連したベクターとは、目的のポリヌクレオチド配列を目的の細胞へと移入させることができるベクターを意味する。このようなベクターとしては、例えば、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体及び植物個体等の宿主細胞において自立複製が可能であり、又は、染色体中への組込みが可能である、ポリヌクレオチドの転写に適した位置にプロモーターを含有しているもの等を挙げることができる。このようなベクターのうち、クローニングに適したベクターをクローニングベクターと記すこともある。このようなクローニングベクターは、通常、制限酵素部位を複数含むマルチプルクローニング部位を含む。現在、遺伝子のクローニングに使用可能なベクターは、当該技術分野において多数存在しており、販売元により、微妙な違い例えば、マルチクローニングサイトの制限酵素の種類や配列から名前を代えて販売されている。例えば、MolecularCloning3rdedition’bySambrookJandRussellDWAppendix3,VectorsandBacterialstrainsA32に代表的なものが記載発売元も記載されており、このようなものを当業者は適宜目的に応じて使用することができる。本発明に関連したベクターは、発現ベクター、レポーターベクター、組換えベクターも含む。尚、発現ベクターとは、構造遺伝子及びその発現を調節するプロモーターに加えて種々の調節エレメントが宿主細胞の中で作動し得る状態で連結されている核酸配列を意味する。調節エレメントとしては、例えば、ターミネーター、薬剤耐性遺伝子のような選択マーカー、及び、エンハンサーを含むもの等を挙げることができる。生物例えば、動物の発現ベクターのタイプ及び使用される調節エレメントの種類が宿主細胞に応じて変わり得ることは、当業者に周知の事項である。本発明に関連して組換えベクターとしては、例えば、aゲノムライブラリーのスクリーニングのためには、ラムダFIXベクターファージベクター、bcDNAのスクリーニングのためには、ラムダZAPベクターファージベクター、cゲノムDNAのクローニングするためには、例えば、pBluescriptIISK-pGEM,pCR21ベクタープラスミドベクター等を挙げることができる。また発現ベクターとしては、例えば、pSV2neoベクター、pcDNAベクター、pUC18ベクター、pUC19ベクター、pRcRSVベクター、pLenti6V5Destベクター、pAdCMVV5DESTベクター、pDONAI2neoベクター、pMEI5neoベクター等プラスミドベクター等を挙げることができる。またレポーターベクターとしては、例えば、pGL2ベクター、pGL3ベクター、pGL410ベクター、pGL411ベクター、pGL412ベクター、pGL470ベクター、pGL471ベクター、pGL472ベクター、pSLGベクター、pSLOベクター、pSLRベクター、pEGFPベクター、pAcGFPベクター、pDsRedベクター等を挙げることができる。このようなベクターは、前述のMolecularCloning誌を参考にして適宜利用すればよい。本発明に関連して、核酸分子を細胞内に導入する技術としては、例えば、形質転換、形質導入、トランスフェクション等を挙げることができる。このような導入技術としては、具体的には例えば、AusubelFAら編1988、CurrentProtocolsinMolecularBiologyWileyNewYorkNYSambrookJら1987MolecularCloningALaboratoryManual2ndEd及びその第三版,ColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNY、別冊実験医学遺伝子導入発現解析実験法羊土社、1997等に記載される方法等を挙げることができる。遺伝子が細胞内に導入されたことを確認する技術としては、例えば、ノーザンブロット分析、ウェスタンブロット分析又は他の周知慣用技術等を挙げることができる。また、本発明に関連して、ベクターの導入方法としては、例えば、トランスフェクション、形質導入、形質転換等例えば、リン酸カルシウム法、リポソーム法、DEAEデキストラン法、エレクトロポレーション法、パーティクルガン遺伝子銃を用いる方法等を挙げることができる。本発明光毒性試験方法は、下記工程1~4を有することを特徴とする光毒性試験方法である。1ヒト網膜色素上皮細胞に被験物質を接触させる第一工程2第一工程で被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞を、第一工程における接触開始後24時間以内に、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光を照射しながら培養する第二工程3第二工程で培養されたヒト網膜色素上皮細胞を回収し、回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定する第三工程4第三工程の測定結果によって被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価し、被験物質の光毒性発現能力を検定する第四工程本発明における被験物質としては、特に限定はなく、全ての化学物質が対象となるが、例えば、医薬品、農薬、化粧品、工業製品等の用途に使用される物質、今後使用される可能性がある開発途上の物質等を挙げることができる。本発明における光毒性としては、例えば、擬似太陽光照射が関与している毒性反応により惹起される毒性等を挙げることができる。具体的には、例えば、眼や皮膚等に生じる一次刺激反応としての光刺激性、アレルギー反応である光感作性光アレルギー性、光がん原性、更に光遺伝毒性photogenotoxicity等を挙げることができる。本発明における細胞毒性としては、例えば、細胞死や細胞増殖阻害等細胞の生存に影響を与える毒性等を挙げることができる。細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値は、例えば、血球計算盤を用いる方法、セルカウンターによる方法、3Hチミジン等の放射性同位体を用いる方法3Hチミジン等の放射性同位体を細胞培養液に加えてインキュベートするだけで、生細胞のみを測定する簡便な方法、LDH乳酸脱水素酵素法、ニュートラルレッドNRを用いる方法赤色色素ニュートラルレッドが生細胞のリソゾームに取り込まれ蓄積する性質を利用した方法で、生細胞のみを測定する簡便な方法、クリスタルバイオレットCRを用いる方法クリスタルバイオレットが生細胞の細胞膜に入り込んで染色する性質を利用した方法で、生細胞のみを測定する簡便な方法、テトラゾリウム塩を用いる方法テトラゾリウム塩が細胞内ミトコンドリアの脱水素酵素の基質であり、生存能の高い細胞ほど還元されるテトラゾリウム塩の量が多く、その結果生じるホルマザン量が生存細胞数とよく対応するために、生細胞のみを測定する簡便な方法、マーカー遺伝子例えば、RPE65、Mitf、ZO1の発現量を測定する方法、ATP量を測定する方法、メラニン量を測定する方法、ミトコンドリアの活性をMTT法により測定する方法等の通常用いられる方法により測定すればよい。尚、被験物質の接触と洗浄培地交換との繰り返し等により被験物質の反復接触を行なうときには、各サイクルで回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定することが好ましい。上記のような、細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定する場合には、一般的に入手可能な測定キットを用いて測定してもよい。ミトコンドリアの活性、ATP量、乳酸脱水素酵素活性等の測定キットとしては、例えば、CellTiterGlo登録商標LuminescentCellViabilityAssay、DualGlo登録商標LuciferaseAssaySystem、BrightGlo登録商標LuciferaseAssaySystem、SteadyGlo登録商標LuciferaseAssaySystem、LuciferaseAssaySystems、ApoToxGlo登録商標TriplexAssay、CellTiterFluor登録商標CellViabilityAssay、CytoTox96登録商標NonRadioactiveCytotoxicityAssayプロメガ社、ATPBioluminescenceAssayKitHSIICellProliferationKitI、CellProliferationKitIIロシュ社、LDHCytotoxicityAssayKitCaymanChemical社、ADPAssayKit、EnzyLightBioAssaySystems社等を挙げることができる。本発明光毒性試験方法において、細胞毒性若しくはそれに相関関係として、マーカー遺伝子例えば、RPE65、Mitf、ZO1の発現量を測定する方法を採用する場合について更に詳細に説明する。まずマーカー遺伝子の発現とは、マーカー遺伝子に応じて発現されたポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド若しくは核酸、又は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド若しくはペプチド等の発現を包含する。マーカー遺伝子の発現量を測定する方法としては、目的の細胞等において、例えば、mRNAの転写産物量やポリペプチドの翻訳産物量を測定する方法等を挙げることができる。mRNAの発現量転写産物量を測定する方法としては、例えば、ノーザンブロット法、ドットブロット法、PCR法、リアルタイムPCR法、レポーター遺伝子を利用した方法等の分子生物学的測定方法を含む任意の適切な方法等を挙げることができる。またポリペプチドの発現量翻訳産物量を測定する方法としては、例えば、ELISA法、RIA法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法等の免疫学的測定方法を含む任意の適切な方法等を挙げることができる。尚、遺伝子の発現変動は、通常の分子生物学的測定方法又は免疫学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価されるmRNAレベル又はポリペプチドのタンパク質レベルでの発現量が増加又は減少することを意味する。また、他の方法として、アレイ例えば、DNAアレイ、プロテインアレイを用いた遺伝子解析方法等も挙げることができる。尚、DNAアレイについては、例えば、秀潤社編、細胞工学別冊DNAマイクロアレイと最新PCR法等、プロテインアレイについては、NatGenet2002Dec;32Suppl:526-32等に記載されている。更に、RT-PCR、RACE法、SSCP法、免疫沈降法、two-hybridシステム、インビトロ翻訳等も挙げることできる。尚、このような方法については、例えば、ゲノム解析実験法中村祐輔ラボマニュアル、編集中村祐輔羊土社2002等に記載されている。また、レポーター遺伝子を利用した方法としては、マーカー遺伝子のプロモーター配列に作動可能に連結されるレポーター遺伝子を組み込んだベクターを作製し、それをヒト網膜色素上皮細胞に遺伝子導入することにより、安定形質転換体を作製する方法等を挙げることができる。作製された安定形質転換体は、レポーター遺伝子を細胞内で発現するため、レポーター遺伝子の活性や発現量を測定すれば、当該測定値を生存しているヒト網膜色素上皮細胞の量に相関関係を有する指標値として利用することができる。ここでレポーター遺伝子としては、例えば、ホタルルシフェラーゼ遺伝子fireflyluc、ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子renillaluc、βガラクトシダーゼ遺伝子、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子、又は、核酸構築物が導入される宿主細胞での視覚での選択を可能にする選択マーカー遺伝子を挙げることができる。このような選択マーカー遺伝子としては、例えば、緑色蛍光プロテインGFP遺伝子、青色蛍光プロテインCFP遺伝子、黄色蛍光プロテインYFP遺伝子、赤色蛍光プロテインdsRed遺伝子等の生細胞での観察が可能な蛍光色素マーカー遺伝子又は色素マーカー遺伝子等を挙げることができる。尚、上記選択マーカー遺伝子及び選択マーカータンパク質は、宿主細胞に対して実質的に毒性を示さないことが好ましい。また、レポーター遺伝子の発現有無又はその程度を検出する方法としては、選択マーカータンパク質が酵素である場合も、蛍光プロテインである場合も、公知の検出方法等を利用すればよい。またプロモーターとは、遺伝子の転写の開始部位を決定し、またその頻度を直接的に調節するDNA上の領域を意味する。通常、RNAポリメラーゼが結合して転写を始める塩基配列である。そしてプロモーター配列とは、ある遺伝子のプロモーターの働きを有する部分をいう。プロモーター配列は、通常、推定タンパク質コード領域の第1エクソン又は転写開始点の上流約5kbp以内の領域であることが多いので、DNA解析用ソフトウェアを用いてゲノム塩基配列中のタンパク質コード領域を予測すれば、プロモーター配列を推定することができる。このようなDNA解析用ソフトウェアとしては、例えば、DNASISソフトウェア日立ソフトウェア、GENETYX株式会社ゼネティックス等を挙げることができる。因みに、推定プロモーター配列は、構造遺伝子毎に異なり、通常、構造遺伝子の上流に存在するが、これらに限定されず、構造遺伝子の下流に存在することもある。上記の領域には、Sp1及びAP2等の既知転写調節因子の結合可能配列が存在し、当該領域が発現制御に重要な働きをすることが予想される。このことから少なくとも当該領域に転写を誘導するために必要十分な塩基配列プロモーター配列を含むと推測される。正確な位置は、当該技術分野において周知慣用な技術を用いて調べればよい。プロモーター配列と予測されるDNA配列とを、NCBIデータベースより入手する方法を説明する。ヒトZO1TJP1遺伝子のプロモーター配列を含むと予測される転写開始点上流のゲノムDNA配列は、インターネット上のMCSCGenomeBrowserホームページで、humanreferencesequenceを検索対象データベースとして設定し、TJP1をキーワードとして検索することにより、TJP1遺伝子に関するSequenceandLinkstoToolsandDatabasesのリンク一覧が表示される。このリンク先から、GenomicSequenceNearGeneページへ移動する。次に、SequenceRetrievalRegionOptionsのチェックボックスにチェックを入れ、PromoterUpstreambyを5000basesに設定し、更に5UTRExonsのチェックボックスにチェックを入れた後、submitボタンをクリックすることにより、転写開始点上流5kbと第一エクソンを含む5’UTRのゲノムDNA配列を取得することができる。また、NCBIホームページ上でTJP1をキーワードとして検索することにより、NM0032573なる配列番号を取得することができ、TJP1のmRNA配列を入手することができる。これらのゲノム配列とmRNA配列とを、DNA解析用ソフトウェアを用いて分析することにより、転写開始点より上流の約5kbpのDNA配列を入手することができる。尚、DNA解析用ソフトウェアとしては、前述のように、例えば、DNASISソフトウェア日立ソフトウェア、GENETYX株式会社ゼネティックス等を挙げることができる。またプロモーター配列に作動可能に連結されるとは、所望の遺伝子の発現作動があるプロモーター配列の制御下に配置されることを意味する。プロモーターが遺伝子に作動可能に連結されるためには、通常、その遺伝子のすぐ上流にプロモーターが配置されるが、必ずしも隣接して配置される必要はない。本発明におけるヒト網膜色素上皮細胞とは、例えば、ヒト由来の細胞であって、網膜の外層に位置する上皮細胞である。当該細胞は、視細胞の維持に重要な働きをもつ細胞である。形状は単層の立方上皮細胞であり、相互間はtightjunctionで結合され、黒色の色素を有する細胞である。当該ヒト網膜色素上皮細胞としては、培養可能であれば特に制限はない。好ましい実施形態では、具体的には例えば、幹細胞由来の網膜色素上皮細胞即ち、例えば、胚性幹細胞即ち、ES細胞、人工多能性幹細胞即ち、iPS細胞、神経幹細胞等の幹細胞から分化誘導させた培養が容易なヒト網膜色素上皮細胞等、生体組織から直接取得した培養が容易なヒト網膜色素上皮細胞等を挙げることができる。また、培養細胞化されたがん細胞由来のヒト網膜色素上皮細胞、人為的な操作により不死化された培養が容易なヒト網膜色素上皮細胞等も挙げることができる。ここで幹細胞とは、細胞分裂を経ても同じ分化能を維持する細胞を意味し、組織が傷害を受けたときにその組織を再生することができる。当該幹細胞としては、例えば、胚性幹細胞若しくは組織幹細胞組織性幹細胞、組織特異的幹細胞又は体性幹細胞とも呼ばれる。又は人工多能性幹細胞iPS細胞:inducedpluripotentstemcell等を挙げることができる。本発明光毒性試験方法において使用される好ましい幹細胞としては、例えば、胚性幹細胞即ち、ES細胞、人工多能性幹細胞即ち、iPS細胞、神経幹細胞等を挙げることができる。また、胚性幹細胞即ち、ES細胞とは、自己複製能を有し、多分化能即ち、多能性pluripotencyを有する幹細胞であり、初期胚に由来する多能性幹細胞を意味する。胚性幹細胞は、1981年に初めて樹立され、1989年以降ノックアウトマウス作製にも応用されている。1998年にはヒト胚性幹細胞が樹立されており、再生医学にも利用されつつある。神経幹細胞等を含む組織幹細胞は、胚性幹細胞とは異なり、分化の方向が限定されている細胞であり、組織中の特定の位置に存在し、未分化な細胞内構造をしている。従って、組織幹細胞は多能性のレベルが低い。組織幹細胞は、核/細胞質比が高く、細胞内小器官が乏しい。組織幹細胞は、概して、多分化能を有し、細胞周期が遅く、個体の一生以上に増殖能を維持する。人工多能性幹細胞は繊維芽細胞等分化した細胞をOct34、Sox2、Klf4、Myc等数種類の遺伝子の発現により直接初期化して多分化能を誘導した細胞であり、2006年、山中らによりマウス細胞で樹立されたTakahashiKYamanakaSCell2006126p663676。2007年、ヒト繊維芽細胞でも樹立され、胚性幹細胞と同様に多分化能を有するTakahashiKTanabeKOhnukiMNaritaMIchisakaTTomodaKYamanakaSCell2007131p861872、YuJVodyanikMASmugaOttoKAntosiewiczBourgetJFraneJLTianSNieJJonsdottirGARuottiVStewartRSlukvinIIThomsonJAScience2007318p19171920、NakagawaMKoyanagiMTanabeKTakahashiKIchisakaTAoiTOkitaKMochidukiYTakizawaNYamanakaSNatBiotechnol200826p101106。本発明光毒性試験方法における第一工程は、ヒト網膜色素上皮細胞に被験物質を接触させる工程である。上記第一工程では、ヒト網膜色素上皮細胞に被験物質を接触させる。ヒト網膜色素上皮細胞と被験物質との接触時間として、例えば、1分間以上を、好ましくは5分間以上3日間以内、より好ましくは10分間以上24時間以内等を挙げることができる。当該接触系における保温温度としては、例えば、15°C~42°C程度を、好ましくは35°C~42°C程度、より好ましくは35°C~37°C程度、特に好ましくは37°C程度等を挙げることができる。また、前記接触系が培養液中での系である場合には、当該培養液のpHとしては、例えば、pH5~pH9程度を、好ましくはpH6.5~pH7.8程度を挙げることができる。上記第一工程における被験物質接触時の炭酸ガス濃度としては、例えば、0~25程度等を挙げることができる。上記第一工程における被験物質接触時の好ましい湿度としては、例えば、95±5rh程度、より好ましくは100rh程度等を挙げることができる。ヒト網膜色素上皮細胞に接触させる被験物質の濃度及び適用量については、特に限定はなく、被験物質の種類、予想される被験物質の光毒性発現能力、第一工程でのヒト網膜色素上皮細胞と被験物質との接触時間、第二工程での培養時間、第二工程での光照射量等によって適宜決定すればよい。例えば、0.001μM~10mM程度で、好ましくは0.01μM~5mM程度等を挙げることができる。上記第一工程における接触系内でのヒト網膜色素上皮細胞の密度としては、例えば、1×104cell/cm2~4×106cell/cm2程度で、好ましくは4×104cell/cm2~4×105cell/cm2程度等を挙げることができる。本発明光毒性試験方法における第二工程は、第一工程で被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞を、第一工程における接触開始後24時間以内に、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光を照射しながら培養する工程である。上記第二工程では、第一工程で被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞を、第一工程における接触開始後24時間以内に、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光を照射しながら培養する。そして、被験物質が光毒性発現能力を有する場合には、本工程でその光毒性発現能力を発現させることができる。このとき、前記人工光を吸収する色素や、被験物質を吸着する可能性がある血清等のタンパク質成分を含まない培養液を使用することが好ましい。好ましい実施形態では、第一工程における接触開始後12時間以内、より好ましくは6時間以内、特に好ましくは10分間~2時間程度以内に、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光を照射しながら培養する。勿論、本発明検定方法における好ましい実施形態では、上記第一工程即ち、被験物質との接触と上記第二工程即ち、人工光照射下での培養とが同時に進行しながら実施してもよい。より具体的には、第一工程で接触させた被験物質を除去した状態で第二工程を実施してもよいし、被験物質が存在した状態で第二工程を実施してもよい。第一工程における接触開始後から第二工程における人工光の照射開始前までの期間において、第一工程で被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞は、例えば、15°C~42°C程度を、好ましくは35°C~42°C程度、より好ましくは35°C~37°C程度、特に好ましくは37°C程度等の培養温度下でかつ人工光の非照射下で培養しておけばよい。また第一工程における被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する24時間以内の接触の後、当該培養細胞を洗浄培地交換してから第二工程における人工光の照射に供することによって、細胞外にある被験物質の影響を排除し、第一工程において細胞内にとりこまれた被験物質の作用のみを評価することもできる。上記第二工程における培養時の炭酸ガス濃度としては、例えば、0~25程度等を挙げることができる。上記第二工程における培養時の湿度としては、例えば、95±5rh程度、好ましくは100rh程度等を挙げることができる。照射する人工光は、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光である。好ましくは、例えば、紫外光、可視光及び赤外光からなる擬似太陽光である人工光等を挙げることができる。より好ましくは、例えば、305nm未満の波長の紫外光と850nm以上の波長の赤外光とを含まず、且つ、315nmから800nmまでの範囲の波長分布を有する光を含む疑似太陽光等が挙げられる。前記人工光としては、例えば、紫外線ランプ、水銀ランプ、ハロゲンランプ、LED、キセノンランプ、メタルハライドランプ、ナトリウムランプ等を光源とした光等を利用すればよい。好ましくは、例えば、キセノンランプ、水銀ランプ等を光源とした紫外光や擬似太陽光等を挙げることができる。より好ましくは、例えば、キセノンランプ、水銀ランプ等を光源とした擬似太陽光等が挙げられる。尚、必要に応じて特定の波長のみを通過させるフィルタや特定の波長を遮断するフィルタ等を用いて、所望の波長分布を有する人工光に調整してから使用すればよい。因みに、擬似太陽光を照射するための具体的な光照射装置として、例えば、SOL500、SOL1200、SOL2000DrKHonleMedizintechnik社、SUNTESTCPSCPS、SUNTESTXLSAtlasMaterialTestingTechnology社、SXL2500V2、XI01B140KB1セリック社を挙げることができる。上記第二工程に関して、被験物質が存在した状態で第二工程を実施する場合には、被験物質の人工光照射下での接触時間を調節することもできる。即ち、培養時間及び人工光の光照射量を適宜設定することにより、所望の人工光照射下での接触時間を実現することができる。尚、人工光の照射は、連続的又は間欠的に行なうことができる。人工光の照射を連続的に行なう場合には、培養時間が人工光照射下での接触時間に相当する。例えば、連続的な人工光照射の下で、15分間、30分間、1時間又は2時間培養することにより、15分間、30分間、1時間又は2時間の人工光照射下での接触時間を実現することができる。一方、人工光の照射を間欠的に行なう場合には、人工光の照射時間が人工光照射下での接触時間に相当する。例えば、24時間の培養期間中、最初の12時間を人工光の照射下で培養し、残りの12時間を人工光を遮断した状態で培養することにより、12時間の人工光照射下での接触時間を実現することができる。ヒト網膜色素上皮細胞の培養温度としては、例えば、15°C~42°C程度を挙げることができる。上記第二工程に関して、340nmから380nmまでの範囲の波長分布を含む人工光を照射する際の好ましい光照射量としては、例えば、波長360nmでの測定値として3J/cm2から30J/cm2までの範囲である光照射量等を挙げることができる。このような所望の光照射量を得るには、例えば、人工光の光照射強度及び人工光の光照射時間等を適宜設定すればよい。光照射量J/cm2は、例えば、時間分×光照射強度mW/cm2×60÷1000という数式により算出すればよい。具体的には例えば、波長360nmでの測定値で約2.08mWである光照射強度の人工光を40分間照射することにより、約5J/cm2の光照射量になることが判る。好ましい実施形態では、人工光の照射として、例えば、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞と対照のヒト網膜色素上皮細胞との少なくともいずれか一方のヒト網膜色素上皮細胞において、人工光の遮光条件下での前記細胞の生存細胞数に対して、光照射条件下での前記細胞の生存細胞数が有意に減少する光照射量を有する照射等を挙げることができる。このような好ましい光照射量の設定には、例えば、後述する実施例6に記載される方法等に順じて予備試験を実施すればよく、好ましい光照射量であることを容易に確認することができる。より具体的な実施形態では、人工光の照射として、例えば、波長360nmでの測定値として3J/cm2から30J/cm2までの範囲である擬似太陽光の光照射量となるような光照射等を挙げることができる。より好ましくは、例えば、波長360nmでの測定値として3.5J/cm2から20J/cm2までの範囲である擬似太陽光の光照射量となるような照射等が挙げられる。特に好ましくは、例えば、波長360nmでの測定値として5J/cm2から10J/cm2までの範囲である擬似太陽光の光照射量となるような照射等を挙げることができる。以上の光を照射することにより、より確実に被験物質の光毒性発現能力を発現させることができる。本発明光毒性試験方法における第三工程は、第二工程で培養されたヒト網膜色素上皮細胞を回収し、回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定する工程である。上記第三工程では、第二工程で培養されたヒト網膜色素上皮細胞における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定する。培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係は、前述の通り、例えば、血球計算盤を用いる方法、セルカウンターによる方法、3Hチミジン等の放射性同位体を用いる方法3Hチミジン等の放射性同位体を細胞培養液に加えてインキュベートするだけで、生細胞のみを測定する簡便な方法、LDH乳酸脱水素酵素法、ニュートラルレッドNRを用いる方法赤色色素ニュートラルレッドが生細胞のリソゾームに取り込まれ蓄積する性質を利用した方法で、生細胞のみを測定する簡便な方法、クリスタルバイオレットCRを用いる方法クリスタルバイオレットが生細胞の細胞膜に入り込んで染色する性質を利用した方法で、生細胞のみを測定する簡便な方法、テトラゾリウム塩を用いる方法テトラゾリウム塩が細胞内ミトコンドリアの脱水素酵素の基質であり、生存能の高い細胞ほど還元されるテトラゾリウム塩の量が多く、その結果生じるホルマザン量が生存細胞数とよく対応するために、生細胞のみを測定する簡便な方法、マーカー遺伝子例えば、RPE65、Mitf、ZO1の発現量を測定する方法、ATP量を測定する方法、メラニン量を測定する方法、ミトコンドリアの活性をMTT法により測定する方法等の通常用いられる方法により測定すればよい。尚、被験物質の接触と洗浄培地交換との繰り返し等により被験物質の反復接触を行なうときには、各サイクルで回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を測定することが好ましい。本発明光毒性試験方法における第四工程は、第三工程の測定結果によって被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価し、被験物質の光毒性発現能力を検定する工程である。上記第四工程では、第三工程の測定結果によって被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価し、被験物質の光毒性発現能力を検定する。被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価する際、対照を設定せずに第三工程の測定結果の絶対値で評価してもよいし、対照を設定し、その測定結果との比較で評価してもよい。好ましい実施形態では、上記第三工程の測定結果と、対照のヒト網膜色素上皮細胞における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果とを比較し、その差異に基づいて被験物質の光毒性発現能力の有無又はその程度を評価する。ここで、対照には陰性対照及び陽性対照の両方が設定可能である。陰性対照の例としては、人工光を照射せずに培養するヒト網膜色素上皮細胞群、光照射量が弱い人工光の照射下で培養するヒト網膜色素上皮細胞群、光毒性発現能力を有さないことが予め分かっている物質例えば、溶媒のみを接触させるヒト網膜色素上皮細胞群、等が挙げられる。このような陰性対照を用いる場合には、以下のような検定が可能となる。すなわち、被験物質における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果と、陰性対照における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果とを比較する。そして、被験物質における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の方が低い場合には、当該被験物質は光毒性発現能力を有すると評価し、検定することもできる。さらに好ましい実施形態では、前記対照は、ヒト網膜色素上皮細胞に既知の光毒性発現物質を接触させた陽性対照を含む。陽性対照の例としては、光毒性発現能力を有することが予め分かっている基準物質を接触させて、人工光の照射下で培養するヒト網膜色素上皮細胞群が挙げられる。このような陽性対照を用いる場合には、以下のような検定が可能となる。すなわち、被験物質における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果と、陽性対照における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果とを比較する。そして、被験物質における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の方が低い場合には、当該被験物質は陽性対照で用いた基準物質よりも高い光毒性発現能力を有すると評価し、検定することもできる。さらに、当該基準物質の各濃度又は各適用量において同様に評価し、検定することにより、当該被験物質の光毒性発現能力を定量的に評価し、検定することができる。この際、陽性対照と上記の陰性対照とを併用して設定してもよい。また、陽性対照の回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値が陰性対照のそれよりも低いことをもって、人工光の照射が正しく行われ、試験が成立したことを示すこともできる。さらに好ましい実施形態では、クロルプロマジンCPZを基準物質として陽性対照に用いる。本発明光毒性試験方法のための、クロルプロマジンCPZの陽性対照としての使用も、本発明の1つである。さらに、本発明光毒性試験方法のための、クロルプロマジンCPZの陽性対照としての使用も、本発明の1つである。本発明の陽性対照試薬の1つの様相は、本発明光毒性試験方法に用いるための陽性対照試薬であって、クロルプロマジンCPZを含有する。試薬の形状としては、クロルプロマジンCPZをそのまま用いてもよいし、溶媒に溶かして溶液状としてもよい。さらに、適宜の基剤に含有又は分散させた形状でもよい。さらに好ましい実施形態では、ペニシリンGPenicillinG、キニーネQuinine、ビチオノールBithionol又はクロルヘキシジンChlorhexidineを基準物質として陰性対照に用いる。本発明光毒性試験方法のための、ペニシリンGPenicillinG、キニーネQuinine、ビチオノールBithionol又はクロルヘキシジンChlorhexidineの陰性対照としての使用も、本発明の1つである。さらに、本発明光毒性試験方法のための、ペニシリンGPenicillinG、キニーネQuinine、ビチオノールBithionol又はクロルヘキシジンChlorhexidineの陰性対照としての使用も、本発明の1つである。本発明の陰性対照試薬の1つの様相は、本発明光毒性試験方法に用いるための陰性対照試薬であって、ペニシリンGPenicillinG、キニーネQuinine、ビチオノールBithionol又はクロルヘキシジンChlorhexidineを含有する。試薬の形状としては、ペニシリンGPenicillinG、キニーネQuinine、ビチオノールBithionol又はクロルヘキシジンChlorhexidineをそのまま用いてもよいし、溶媒に溶かして溶液状としてもよい。さらに、適宜の基剤に含有又は分散させた形状でもよい。さらに、より具体的な好ましい比較評価に関する実施形態として下記の方法も挙げることができる。例えば、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値非光照射のための遮光対照を、被験物質の接触開始後24時間以内に人工光の照射下で培養されたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値で割って得られた値PIF値:PhotoIrritationFacor値を求め、当該値PIF値が2より大きく、5より小さい場合には擬陽性、5以上の場合には、被験物質は光毒性陽性であると評価する。本発明光毒性発現物質探索方法は、本発明光毒性試験方法によって、被験物質の光毒性発現能力を検定し、所望の光毒性発現能力を有する物質を選抜するものである。本発明光毒性発現物質探索方法においても、上記した本発明光毒性試験方法と同様の実施形態をとることができる。例えば、上記の陰性対照を用いる場合には、被験物質における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果と、陰性対照における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果とを比較する。そして、陰性対照よりも回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値が統計学的に有意に低い被験物質を選抜するか、又は、回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値が陰性対照の50以下の値となる被験物質を選抜すればよい。一方、クロルプロマジンCPZ等の陽性対照が用いられる場合には、被験物質における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果と、陽性対照における回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値の測定結果とを比較する。そして、陽性対照よりも回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値が統計学的に有意に低い被験物質を選抜するか、又は、回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値が陽性対照と同じ値である時の被験物質の濃度が陽性対照の濃度よりも低い被験物質を選抜することにより、陽性対照で用いられた基準物質よりも高い光毒性発現能力を有する物質を選抜することができる。また、陽性対照が用いられる場合には、回収された培養細胞の細胞毒性若しくはそれに相関関係を有する指標値を定量的に評価し、検定することもできる。具体的には、クロルプロマジンCPZ等の基準物質の各濃度又は各適用量において、被験物質に対して同様に評価し、検定することにより、被験物質の光毒性発現能力を定量的に評価し、検定することができる、そして、所望の光毒性発現能力をする物質を選抜する。本発明擬似太陽光皮膚刺激非誘発物質探索方法は、本発明光毒性試験方法によって、被験物質の光毒性発現能力を検定し、所望の光毒性発現能力を有さない物質を選抜するものである。本発明擬似太陽光皮膚刺激非誘発物質探索方法においても、上記した本発明光毒性試験方法と同様の実施形態をとることができる。尚、探索の対象となる被験物質は、所望の光毒性発現能力を有さない物質であれば何でもよく、例えば、低分子化合物、蛋白質、ペプチド等が挙げられる。本発明光毒性試験方法に基づくシステム工程を有する装置によれば、被験物質の光毒性発現能力の検定をより効率的に行なうことができ、所望の光毒性発現物質又は擬似太陽光皮膚刺激非誘発物質をより簡便に探索することもできる。また、本発明光毒性試験方法によって得られた擬似太陽光皮膚刺激性に関する毒性情報を電子情報記録媒体に記録することにより、毒性情報を包含する有用な電子情報記録媒体を作製することができる。以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。実施例1ヒトES細胞のヒト網膜色素上皮細胞への分化誘導ヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞として、京都大学樹立株であるKhES1株を用いた。前記KhES1株を、bFGF塩基性線維芽細胞増殖因子:basicfibroblastgrowthfactorが添加されたヒトES細胞維持培養用培地、非必須アミノ酸、Lグルタミン、2メルカプトエタノール等を含むにおいて、マイトマイシンC処理したマウス胚性線維芽細胞mouseembryonicfibroblast:MEFフィーダー細胞上で未分化維持培養した。培養後、トリプシン/コラゲナーゼIVを含む解離液を用いて培養皿から回収することにより、ヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞のコロニーを得た。得られたコロニーを、マイクロピペットを用いてピペッティングすることにより、1細胞塊あたり数十細胞程度の大きさに砕いた後、予め0.1ゼラチン液でコートしておいた10cm培養皿に、1μM~10μMSB431542,1μM~10μMCKI-7、1μM~10μMY27632を含むヒトES細胞維持培養用培地10mlに、数百から数千細胞塊程度のヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞のコロニーを播種し、次いで、これを37°C、5CO2インキュベーター内で培養した。翌日培養1日間、浮遊している細胞塊を吸わないように、半分量5mlの培地を除去した後、1μM~10μMY27632を含むSDIA培地GMEM、KSR、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、2-メルカプトエタノール等を含む5mlを前記培養皿に添加し、培養を上記同様に継続した。培養5日間後、未接着の細胞塊を吸わないように、5mlの培地を除去した後、1μM~10μMY27632を含むSDIA培地5mlを前記培養皿に添加し、更に培養を上記同様に継続した。培養8日間後、培地全量を除去した後、PA6conditionedmediumコンフルエント状態のPA6細胞をSDIA培地で1日間培養した後の培養上清10mlを前記培養皿に添加した。以降3日~4日間毎に、PA6conditionedmediumを用いて培地交換した。当該操作により、黒色色素を有するヒト網膜色素上皮細胞が分化誘導された図1及び図2参照。実施例2ヒト網膜色素上皮細胞の培養実施例1により分化誘導された黒色色素を有するヒト網膜色素上皮細胞が存在するコロニーをマイクロピペットを用いてかきとり、次いで0.05トリプシン処理により、細胞分散させた。予めマトリゲルコートしておいた60mm培養皿に、N2添加物を含むDMEM/F12培養液に2~20ng/mlのbFGFが添加された培地を加え、当該培地に得られた分散細胞を播種した。尚、このようにして播種された分散細胞には、ヒト網膜色素上皮細胞以外の不特定の細胞も含まれていた。細胞を培養37°C、5CO2インキュベーター内してコンフルエントになった後、0.25トリプシン処理により、培養皿から細胞を回収した。回収された細胞を、予めマトリゲルコートしておいた10cm培養皿に播種した後、細胞がコンフルエントになるまで培養37°C、5CO2インキュベーター内した。尚、細胞がコンフルエントになった時、培養皿に存在する細胞のうち大多数がヒト網膜色素上皮細胞であった。更に、細胞を、bFGFを含まないN2添加物含有DMEM/F12培養液で1週間以上培養した後、以下の実験で使用した。実施例3本発明光毒性試験方法:第一工程、第二工程非光照射のための遮光対照、第三工程非光照射のための遮光対照実施例2で調製されたヒト網膜色素上皮細胞を、0.25トリプシン処理により、培養皿から細胞を回収した。回収された細胞を、予めマトリゲルコートしておいた96穴培養皿に播種1wellあたり10万又は12万細胞ずつした後、培養37°C、5CO2インキュベーター内を行った。培養2時間~4時間後、96穴培養皿からアスピレータを用いて培地を除去し、次いで、Earle’sBalancedSaltSolutionEBSSを前記96穴培養皿に150μlずつwellの割合で添加し、細胞を洗浄した。次に、前記培養皿に、予めEBSSを用いて調製された被験物質の溶液尚、各々の試験液は下記参照のこと又は溶媒対照液を100μlずつwellの割合で添加した。<被験物質の溶液>aChlorpromazine:濃度01、1、3、10、30、100bペニシリンGPenicillinG:濃度1、3、10、30、100、300、1000cキニーネQuinine:濃度01、03、1、3、10、30、100dビチオノールBithionol:濃度001、003、01、03、1、3、10eクロルヘキシジンChlorhexidine:濃度01、03、1、3、10、30、10096穴培養皿をアルミ箔で包み遮光した後、光照射装置擬似太陽光照射装置SXL-2500V2:セリック社を用いてアルミ箔で遮光したまま40分間光照射光照射量約5Jcm2を行った。光照射後直ちに、前記96穴培養皿をDMEM/F12培養液150μlを用いて2回洗浄した後、当該96穴培養皿に、N2添加物含有DMEM/F12培養液を100μlずつwellの割合で添加し、一晩培養した。培養後、96穴培養皿から培地を除去し、次いで、予め調製しておいたDMEM/F12培養液及びCelltiterGlo反応液の等量混合液を当該96穴培養皿に100μlずつwellの割合で添加した。得られた96穴培養皿をアルミ箔で遮光した状態で振とうしながら室温で30分間放置した後、前記96穴培養皿に含まれる培養物95μlを、白色96穴試験皿へ移した。次いで、当該96穴試験皿に含まれる培養物の発光量尚、当該発光量は、細胞生存率に相関関係を有するものである。を、EnVisionマルチラベルリーダーPerkinElmer社を用いて測定した。測定された値から被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する50阻害濃度IC50を算出し、当該算出値を、細胞毒性それに相関関係を有する指標値を示す値とした。上記の算出方法に従うと、以下の結果になった。<被験物質の細胞毒性>aChlorpromazine:IC50=376bペニシリンGPenicillinG:IC50>1000cキニーネQuinine:IC50=1471図5参照dビチオノールBithionol:IC50>10eクロルヘキシジンChlorhexidine:IC50=427実施例4本発明光毒性試験方法:第一工程、第二工程、第三工程実施例2で調製されたヒト網膜色素上皮細胞を、0.25トリプシン処理により、培養皿から細胞を回収した。回収された細胞を、予めマトリゲルコートしておいた96穴培養皿に播種1wellあたり10万又は12万細胞ずつした後、培養37°C、5CO2インキュベーター内を行った。培養2時間~4時間後、96穴培養皿からアスピレータを用いて培地を除去し、次いで、Earle’sBalancedSaltSolutionEBSSを前記96穴培養皿に150μlずつwellの割合で添加し、細胞を洗浄した。次に、前記培養皿に、予めEBSSを用いて調製された被験物質の溶液尚、各々の試験液は下記参照のこと又は溶媒対照液を100μlずつwellの割合で添加した。<被験物質の溶液>aChlorpromazine:濃度01、1、3、10、30、100bペニシリンGPenicillinG:濃度1、3、10、30、100、300、1000cキニーネQuinine:濃度01、03、1、3、10、30、100dビチオノールBithionol:濃度001、003、01、03、1、3、10eクロルヘキシジンChlorhexidine:濃度01、03、1、3、10、30、100実施例3とは異なり、96穴培養皿をアルミ箔で包むことなく、光照射装置擬似太陽光照射装置SXL-2500V2:セリック社を用いて40分間光照射360nmにおける光照射強度を元に計算すると光照射量約5Jcm2となるを行った。光照射後直ちに、前記96穴培養皿をDMEM/F12培養液150μlを用いて2回洗浄した後、当該96穴培養皿に、N2添加物含有DMEM/F12培養液を100μlずつwellの割合で添加し、一晩培養した。培養後、96穴培養皿から培地を除去し、次いで、予め調製しておいたDMEM/F12培養液及びCelltiterGlo反応液の等量混合液を当該96穴培養皿に100μlずつwellの割合で添加した。得られた96穴培養皿をアルミ箔で遮光した状態で振とうしながら室温で30分間放置した後、前記96穴培養皿に含まれる培養物95μlを、白色96穴試験皿へ移した。次いで、当該96穴試験皿に含まれる培養物の発光量尚、当該発光量は、細胞生存率に相関関係を有するものである。を、EnVisionマルチラベルリーダーPerkinElmer社を用いて測定した。測定された値から被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する50阻害濃度IC50を算出し、当該算出値を、細胞毒性それに相関関係を有する指標値を示す値とした。上記の算出方法に従うと、以下の結果になった。<被験物質の細胞毒性>aChlorpromazine:IC50=58bペニシリンGPenicillinG:IC50>1000cキニーネQuinine:IC50=889dビチオノールBithionol:IC50>10eクロルヘキシジンChlorhexidine:IC50=437実施例5実施例3及び実施例4で算出された50阻害濃度IC50に基づき、前述のPIF値PhotoIrritationFacor値即ち、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値非光照射のための遮光対照を、被験物質の接触開始後24時間以内に擬似太陽光の照射下で培養されたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値で割って得られた値を求めた。その結果を以下に示す。尚、当該値PIF値が5より大きい場合には、被験物質は光毒性陽性であると評価した。<被験物質のPIF値PhotoIrritationFacor値>aChlorpromazine:65本発明光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陽性判定であった。これは、過去のinvivo試験結果と一致している。bペニシリンGPenicillinG:光細胞毒性が認められない。本発明光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陰性判定であった。これは、過去のinvivo試験結果と一致している。cキニーネQuinine:17本発明光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陰性判定であった。これは、LjunggrenBら,PhototoxicpropertiesofquinineandquinidinetwoquinolinemethanolisomerPhotodermatology51331381988に記載されるinvivo試験mousetail試験結果と一致している。dビチオノールBithionol:光細胞毒性が認められない。本発明光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陰性判定であった。これは、本来正しい陰性結果と一致している。尚、光毒性試験バリデーション研究実行委員会委員長吉村功、光毒性試験代替法バリデーション研究報告書2004年8月27日による4施設での酵母―赤血球試験で偽陽性結果であり、本発明光毒性試験方法が優れたものであることが確認された。eクロルヘキシジンChlorhexidine:098本発明光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陰性判定であった。これは、本来正しい陰性結果と一致している。尚、光毒性試験バリデーション研究実行委員会委員長吉村功、光毒性試験代替法バリデーション研究報告書2004年8月27日による4施設での酵母―赤血球試験で偽陽性結果であり、本発明光毒性試験方法が優れたものであることが確認された。比較例1ヒト網膜色素上皮細胞以外のヒト細胞を用いた比較実験Balbc3T3細胞は、結合組織細胞ConnectiveTissueCellであり、線維芽細胞Fibroblastである。10ウシ血清、Lグルタミンを含むDMEM培地で培養されたBalbc3T3細胞を0.25トリプシン処理により、培養皿から細胞を回収した。回収された細胞を、予め0.1ゼラチン溶液でコートしておいた96穴培養皿に播種1wellあたり1万細胞ずつした後、10ウシ血清、Lグルタミンを含むDMEM培地で一晩培養37°C、5CO2インキュベーター内を行った。培養後、96穴培養皿からアスピレータを用いて培地を除去し、次いで、Earle’sBalancedSaltSolutionEBSSを前記96穴培養皿に150μlずつwellの割合で添加し、細胞を洗浄した。次に、前記培養皿に、予めEBSSを用いて調製された被験物質の溶液尚、各々の試験液は下記参照のこと又は溶媒対照液を100μlずつwellの割合で添加した。<被験物質の溶液>aChlorpromazine:濃度01、1、3、10、30、100bペニシリンGPenicillinG:濃度1、3、10、30、100、300、1000cキニーネQuinine:濃度01、03、1、3、10、30、100dビチオノールBithionol:濃度001、003、01、03、1、3、10eクロルヘキシジンChlorhexidine:濃度01、03、1、3、10、30、10096穴培養皿をアルミ箔で包み遮光した後、光照射装置擬似太陽光照射装置SXL-2500V2:セリック社を用いてアルミ箔で遮光したまま40分間光照射360nmにおける照射強度を元に計算すると光照射量約5Jcm2となるを行った。光照射後直ちに、前記96穴培養皿をDMEM/F12培養液150μlを用いて2回洗浄した後、当該96穴培養皿に、N2添加物含有DMEM/F12培養液100μlずつwellの割合で添加し、一晩培養した。培養後、96穴培養皿から培地を除去し、次いで、予め調製しておいたDMEM/F12培養液及びCelltiterGlo反応液の等量混合液を当該96穴培養皿に100μlずつwellの割合で添加した。得られた96穴培養皿をアルミ箔で遮光した状態で振とうしながら室温で30分間放置した後、前記96穴培養皿に含まれる培養物95μlを、白色96穴試験皿へ移した。次いで、当該96穴試験皿に含まれる培養物の発光量尚、当該発光量は、細胞生存率に相関関係を有するものである。を、EnVisionマルチラベルリーダーPerkinElmer社を用いて測定した。測定された値から被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する50阻害濃度IC50を算出し、当該算出値を、細胞毒性それに相関関係を有する指標値を示す値とした。上記の算出方法に従うと、以下の結果になった。<被験物質の細胞毒性>aChlorpromazine:IC50=194bペニシリンGPenicillinG:IC50>1000cキニーネQuinine:IC50=2922dビチオノールBithionol:IC50114eクロルヘキシジンChlorhexidine:IC50=137比較例2比較光毒性試験方法:第一工程、第二工程、第三工程10ウシ血清、Lグルタミンを含むDMEM培地で培養されたBalbc3T3細胞を0.25トリプシン処理により、培養皿から細胞を回収した。回収された細胞を、予め0.1ゼラチン溶液でコートしておいた96穴培養皿に播種1wellあたり1万細胞ずつした後、10ウシ血清、Lグルタミンを含むDMEM培地で一晩培養37°C、5CO2インキュベーター内を行った。培養後、96穴培養皿からアスピレータを用いて培地を除去し、次いで、Earle’sBalancedSaltSolutionEBSSを前記96穴培養皿に150μlずつwellの割合で添加し、細胞を洗浄した。次に、前記培養皿に、予めEBSSを用いて調製された被験物質の溶液尚、各々の試験液は下記参照のこと又は溶媒対照液を100μlずつwellの割合で添加した。<被験物質の溶液>aChlorpromazine:濃度01、1、3、10、30、100bペニシリンGPenicillinG:濃度1、3、10、30、100、300、1000cキニーネQuinine:濃度01、03、1、3、10、30、100dビチオノールBithionol:濃度001、003、01、03、1、3、10eクロルヘキシジンChlorhexidine:濃度01、03、1、3、10、30、100比較例1とは異なり、96穴培養皿をアルミ箔で包むことなく、光照射装置擬似太陽光照射装置SXL-2500V2:セリック社を用いて40分間光照射360nmにおける照射強度を元に計算すると光照射量約5Jcm2となるを行った。光照射後直ちに、前記96穴培養皿をDMEM/F12培養液150μlを用いて2回洗浄した後、当該96穴培養皿に、N2添加物含有DMEM/F12培養液を100μlずつwellの割合で添加し、一晩培養した。培養後、96穴培養皿から培地を除去し、次いで、予め調製しておいたDMEM/F12培養液及びCelltiterGlo反応液の等量混合液を当該96穴培養皿に100μlずつwellの割合で添加した。得られた96穴培養皿をアルミ箔で遮光した状態で振とうしながら室温で30分間放置した後、前記96穴培養皿に含まれる培養物95μlを、白色96穴試験皿へ移した。次いで、当該96穴試験皿に含まれる培養物の発光量尚、当該発光量は、細胞生存率に相関関係を有するものである。を、EnVisionマルチラベルリーダーPerkinElmer社を用いて測定した。測定された値から被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する50阻害濃度IC50を算出し、当該算出値を、細胞毒性それに相関関係を有する指標値を示す値とした。上記の算出方法に従うと、以下の結果になった。<被験物質の細胞毒性>aChlorpromazine:IC50=082bペニシリンGPenicillinG:IC50>1000cキニーネQuinine:IC50=23dビチオノールBithionol:IC50=093eクロルヘキシジンChlorhexidine:IC50=101比較例3比較例1及び比較例2で算出された50阻害濃度IC50に基づき、前述のPIF値PhotoIrritationFacor値即ち、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値非光照射のための遮光対照を、被験物質の接触開始後24時間以内に擬似太陽光の照射下で培養されたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値で割って得られた値を求めた。その結果を以下に示す。尚、当該値PIF値が5より大きい場合には、被験物質は光毒性陽性であると評価した。<被験物質のPIF値PhotoIrritationFacor値>aChlorpromazine:237比較光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陽性判定であった。これは、過去のinvivo試験結果と一致している。bペニシリンGPenicillinG:光細胞毒性が認められない。比較光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陰性判定であった。これは、過去のinvivo試験結果と一致している。cキニーネQuinine:1288比較光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陽性判定であった。これは、LjunggrenBら,PhototoxicpropertiesofquinineandquinidinetwoquinolinemethanolisomerPhotodermatology51331381988に記載されるinvivo試験mousetail試験結果と一致していない。よって、本発明光毒性試験方法は偽陽性結果となった。dビチオノールBithionol:124比較光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陽性判定であった。これは、本来正しい陰性結果と一致していない。尚、光毒性試験バリデーション研究実行委員会委員長吉村功、光毒性試験代替法バリデーション研究報告書2004年8月27日による4施設での酵母―赤血球試験で偽陽性結果であった。よって、比較光毒性試験方法は偽陽性結果となった。eクロルヘキシジンChlorhexidine:14比較光毒性試験方法による評価では、光細胞毒性陰性判定であった。これは、本来正しい陰性結果と一致している。尚、光毒性試験バリデーション研究実行委員会委員長吉村功、光毒性試験代替法バリデーション研究報告書2004年8月27日による4施設での酵母―赤血球試験で偽陽性結果であった。実施例6光照射量の設定のための予備試験OECDガイドラインで陽性対照として用いられているクロルプロマジンCPZを用いて、光照射量と前述のPIF値即ち、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値非光照射のための遮光対照を、被験物質の接触開始後24時間以内に擬似太陽光の照射下で培養されたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値で割って得られた値との関係を検討した。光照射を、2.09mW/cm2トプコン社製UVR300に受光部UD360を取り付けて計測の光を15分間1.87J/cm2、20分間2.50J/cm2、25分間3.13J/cm2、30分間3.75J/cm2、40分間5.00J/cm2、60分間7.51J/cm2の各種条件に設定したうえで、実施例3及び実施例4に記載された方法に準じて光毒性試験方法を実施した。また、非光照射のための対照である遮光条件については、遮光すること以外は上記光照射での光毒性試験方法と同様な方法により、光毒性試験方法を実施した。その結果、測定された値から被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する50阻害濃度IC50を算出し、更に当該算出値に基づきPIF値を求めたところ、15分間ではPIF=1.70、20分間ではPIF=1.72、25分間ではPIF=3.35、30分間ではPIF=4.57、40分間ではPIF=6.53、60分間ではPIF=10.94であった図23参照。以上より、3.75J/cm230分間以下の光照射量ではPIF>5とならず、陽性対照であるクロルプロマジンCPZが陽性と判定できないことから、3.75J/cm2より高い光照射量に設定することが好ましいことが、当該予備試験から確認できた。次いで、上記予備試験に関連して、擬似太陽光の照射が、クロルプロマジンCPZを接触させたヒト網膜色素上皮細胞において、擬似太陽光の遮光条件下での前記細胞の生存細胞数に対して、光照射条件下での前記細胞の生存細胞数が有意に減少する光照射量を有する照射であることを確認した。その結果、15分間1.87J/cm2、20分間2.50J/cm2、25分間3.13J/cm2、30分間3.75J/cm2、40分間5.00J/cm2、60分間7.51J/cm2におけるヒト網膜色素上皮細胞の生存細胞数を調べたところ、光照射時間が40分間である遮光条件下において前記細胞の生存細胞数の減少が認められなかったクロルプロマジンCPZの接触濃度10μg/mlでの結果図3参照を抽出し比較したところ、擬似太陽光の遮光条件下での前記細胞の生存細胞数に対して、光照射条件下での前記細胞の生存細胞数が有意に減少する光照射量は3.13J/cm225分間以上であることが確認できた図24参照。従って、3.13J/cm225分間以上の光照射量であれば、擬似太陽光の照射が適正に行われ、当該光照射量を用いれば、好ましい本発明光毒性試験方法が実施可能であることが確認された。実施例8本発明光毒性試験方法他の実施態様:形質転換体の利用ヒト網膜色素上皮細胞で発現する遺伝子Mitf、RPE65、ZO1等のプロモーター発現制御下にレポーター遺伝子を含むベクターで形質転換されたヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞の作製方法を具体的に記載する。1遺伝子のプロモータークローニング、及び、レポータープラスミドの作製ZO1のプロモーター領域を以下に示す方法により、クローニングする。ヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞より抽出したゲノムDNA20ng又はRPE65遺伝子を含むヒトゲノムBACDNAを鋳型とし、RPE65遺伝子の翻訳開始点及び転写開始点上流5kbの位置に設計したプライマーを用いて、PlatinumTaqpolymeraseインビトロジェン社を用いたPCR法により、所望のDNA断片を増幅する。尚、PCR反応は、GeneAmpPCRSystem9700アプライドバイオシステム社にて、95°C5分間反応させた後、95°C30秒間、55°C30秒間、72°C5分間を30サイクル行い、72°C7分間の反応条件で実施する。得られたPCR産物を、PCRpurificationkitを用いて精製し、PCR産物の末端を制限酵素消化した後、アガロースゲル電気泳動を行うことにより、精製する。精製された所望のDNA断片を、Alkalinephosphataseタカラバイオ社にて脱リン酸化処理を行ったpGL4.17[Luc2/Neo]vectorプロメガ社と、Ligationkitタカラバイオ社を用いて連結する。得られたDNA断片を、大腸菌DH5αコンピテンセルタカラバイオ社に形質転換した後、これを37°CでLB/アンピシリン培地にて一晩培養する。培養後、出現したコロニーをLB/アンピシリン液体培地にて培養して得られた大腸菌からプラスミドDNAを抽出する。尚、抽出されたプラスミドDNAについては、その挿入断片のシークエンスを決定し、変異等の有無を確認する。ヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞へのトランスフェクションに用いるため、各プラスミドをQiafilterプラスミド抽出キットキアゲン社にて再度抽出する。得られたプラスミドDNA20μgを制限酵素処理により直線化した後、精製を行い、線状化DNAを得る。2組換えヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞の作製方法未分化維持培養されたヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞を解離液処理することにより、培養皿からヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞コロニーを回収する。回収されたコロニーをヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞未分化維持培地に懸濁し、これを0.1ゼラチンコートした10cm培養皿に移した後、37°C、5CO2インキュベーターで2時間静置することにより、フィーダー細胞を接着させる。浮遊しているヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞コロニーを含む上清を15mlチューブに移し、これを遠心によりコロニーを沈降させる。このようにして回収されたコロニーをトリプシン液で酵素処理した後、マイクロピペットを用いてピペッティングすることにより、ヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞を単一細胞化する。次いで、得られた細胞を遠心して沈降させる。予め、Opti-MEM培地と2μgの線状化DNA、8μLのFuGENEHDプロメガ社とを混合しておいた液で前記細胞を懸濁し、当該細胞懸濁液を5分間室温にて反応させた後、1μM~10μMY27632を含む未分化維持培地で懸濁する。得られた細胞懸濁液をネオマイシン耐性フィーダー細胞上へ播種し、37°Cにて5CO2インキュベーターで一晩培養する。培地に100μg/mLのG418インビトロジェン社を添加することにより、薬剤選択培養を行う。G418添加の10日~15日後、顕微鏡下でシャーレ中に形成したヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞コロニーを単離し、これを96ウェルプレートに播種する。薬剤選択培養を継続した後、更に10~15日後に増殖した細胞を継代培養して48ウェルプレートに播種する。薬剤選択培養を継続した後、薬剤耐性の安定形質転換細胞株を取得する。3組換えヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞を利用したヒト網膜色素上皮細胞への被験物質の暴露及び毒性値の算出:非光照射のための対照遮光条件組換えヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞を、実施例1に記載された方法に準じて、ヒト網膜色素上皮細胞へと分化誘導する。次いで、実施例2に記載された方法に準じてヒト網膜色素上皮細胞を培養した後、これに、実施例3に記載された方法に準じて被験物質を暴露する。暴露翌日、96穴培養皿から培地を除去した後、予め調製しておいたDMEM/F12培養液及びSteadyGlo反応液の等量混合液を1wellあたり100μl添加する。アルミ箔で遮光した状態で振とうしながら室温で30分間放置した後、95μlを白色96穴培養皿へ移し、これをEnVisionマルチラベルリーダーPerkinElmer社にて発光量を測定する。溶媒対照及び被験物質の各供試濃度における発光量の測定値から当該被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する50阻害濃度IC50を算出し、これを毒性値とする。4組換えヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞を利用したヒト網膜色素上皮細胞への被験物質の暴露及び毒性値の算出:光照射条件組換えヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞を、実施例1に記載された方法に準じて、ヒト網膜色素上皮細胞へと分化誘導する。次いで、実施例2に記載された方法に準じてヒト網膜色素上皮細胞を培養した後、これに、実施例4に記載された方法に準じて被験物質を暴露する。暴露翌日、96穴培養皿から培地を除去した後、予め調製しておいたDMEM/F12培養液及びSteadyGlo反応液の等量混合液を1wellあたり100μl添加する。アルミ箔で遮光した状態で振とうしながら室温で30分間放置した後、95μlを白色96穴培養皿へ移し、これをEnVisionマルチラベルリーダーPerkinElmer社にて発光量を測定する。溶媒対照及び被験物質の各供試濃度における発光量の測定値から当該被験物質のヒト網膜色素上皮細胞に対する50阻害濃度IC50を算出し、これを毒性値とする。5組換えヒト胚性幹細胞即ち、ES細胞を利用したヒト網膜色素上皮細胞を用いた被験物質の光毒性発現能力の評価上記4で算出された50阻害濃度IC50に基づき、前述のPIF値PhotoIrritationFacor値即ち、被験物質を接触させたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値非光照射のための遮光対照を、被験物質の接触開始後24時間以内に擬似太陽光の照射下で培養されたヒト網膜色素上皮細胞における細胞毒性IC50値で割って得られた値を求める。その結果、当該値PIF値が6より大きい場合には、被験物質は光毒性陽性であると評価する。"