"患者の高コレステロール血症を処置する方法であって、有効量の微生物発酵生成物を投与する、及びリポタンパク質代謝に関わる遺伝子を制御する、ステップを含む前記方法。患者のコレステロールレベルを制御する方法であって、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる有効量の組成物を投与する、並びに、リポタンパク質代謝に関わる遺伝子の発現を制御する、ステップを含む前記方法。前記組成物が液状の経口サプリメントである、請求項2に記載の方法。前記組成物が機能性食品である、請求項2に記載の方法。前記組成物が食品添加物である、請求項4に記載の方法。前記投与ステップが、前記組成物を毎日投与することとしてさらに規定される、請求項2に記載の方法。前記制御ステップが、総血漿コレステロールTCレベルを下げ、低密度リポタンパク質LDLレベルを下げ、及び高密度リポタンパク質HDLレベルを上げることとしてさらに規定される、請求項2に記載の方法。前記制御ステップが、ABCA1、ApoA1及びSR-B1をエンコードする少なくとも一種の遺伝子の発現を上方制御することとしてさらに規定される、請求項7に記載の方法。さらに、CETPをエンコードする遺伝子を下方制御するステップを含む、請求項8に記載の方法。さらに、行われている上方制御及び下方制御ステップを確認するためのアッセイを行うステップを含む、請求項9に記載の方法。個体の高コレステロールを処置する方法であって、有効量の微生物発酵生成物を投与する、ABCA1、ApoA1及びSR-B1をエンコードする少なくとも一種の遺伝子の発現を上方制御する、及びCETPをエンコードする遺伝子を下方制御する、ステップを含む前記方法。前記微生物発酵生成物が、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる組成物からなる、請求項11に記載の方法。前記微生物発酵生成物が、液状の経口サプリメントである、請求項11に記載の方法。さらに、行われている上方制御及び下方制御ステップを確認するためのアッセイを行うステップを含む、請求項11に記載の方法。高コレステロールの発症を防止する方法であって、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる有効量の組成物を投与する、リポタンパク質代謝に関わる遺伝子を制御する、及び高コレステロールの発症を防止する、ステップを含む前記方法。前記組成物が、液状の経口サプリメントである、請求項15に記載の方法。前記組成物が、機能性食品である、請求項15に記載の方法。前記組成物が、食品添加物である、請求項17に記載の方法。前記組成物が、毎日投与される、請求項15に記載の方法。前記制御ステップが、ABCA1、ApoA1及びSR-B1をエンコードする少なくとも一種の遺伝子の発現を上方制御することとしてさらに規定される、請求項15に記載の方法。さらに、CETPをエンコードする遺伝子を下方制御するステップを含む、請求項16に記載の方法。本発明は、有効量の微生物発酵生成物を投与し、そしてリポタンパク質代謝に関わる遺伝子を制御することによる患者の高コレステロール血症を処置する方法を提供する。本発明は、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる有効量の組成物を投与し、そしてリポタンパク質代謝に関わる遺伝子の発現を制御することによる患者のコレステロールレベルを制御する方法を提供する。本発明は、また、有効量の微生物発酵生成物を投与し、ABCA1、ApoA1及びSR-B1をエンコードする少なくとも一種の遺伝子の発現を上方制御し、そしてCETPをエンコードする遺伝子を下方制御することによる患者の高コレステロールを処置する方法を提供する。本発明は、さらに、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる有効量の組成物を投与し、リポタンパク質代謝に関わる遺伝子を制御し、そして高コレステロール発症を防止することによる高コレステロールの発症を防止する方法を提供する。本発明は、一般に、コレステロールレベルが高いかあるいは異常、すなわち高コレステロール血症を有する個体すなわち、ヒトの患者又は動物を、複合的微生物発酵生成物の使用を介して処置する方法を提供する。本発明は、より特定的には、複合的微生物発酵生成物の一定の成分が、コレステロール代謝パスウエイに影響を及ぼし、そしてリポタンパク質代謝に関わる遺伝子を制御することによる作用機序を提供する。ProAlgaZyme商標PAZともいうは、栄養補助食品として30年間にわたって使用された淡水性藻類生態系の新規な発酵生成物である。PAZは、最初は、1980年代の米国において伝説上の若返りの泉と関連してポンセデレオンメディカルディベロップメント社PoncedeLeonMedicalDevelopmentCorp.によりレーベンスツァイトLebenszeit、商標、ドイツ語で生涯を意味するという名で販売された。製品は、2003年にはProAlgaZyme登録商標、PAZとして今日知られるものとなっている。浸出液infusionは、30年以上前に自然発生源の中に発見された淡水生物の独自開発ブレンドの水性発酵生成物であり、以来、管理された条件下で培養されてきた。本発明のProAlgaZyme水性抽出物又はPAZを生じる培養物の寄託物が、バージニア州、マナッサスのアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関AmericanTypeCultureCollectionに寄託PTA-5863として置かれている。ProAlgaZyme経口液体栄養補助食品る発酵プロセス消耗型ろ液consumablefiltrateは、典型的には、約90の塩検出限界<0.1ppmにて重金属フリー及び有機成分の特異なブレンドからなる100ppm以下の全溶解固形物totaldissolvedsolidsを有する。PAZは、また、以前、植物浸出物phyto-percolateと呼ばれていた。PAZ成分は、以下に記載されるProAlgaZyme藻類発酵培地から単離することができ、あるいは、従来知られるすべての適当な方法によって製造することができる。PAZ及び誘導体を製造する適当な方法は、例えば微生物を用いて組換え又は天然にタンパク質を発現する、誘導体を合成的に製造するすなわち、化学的無細胞合成、あるいは、ATCC寄託PTA-5863内に存在する培養培地又は一種以上の種の細胞内容物から誘導体又は活性化合物を抽出することが挙げられる。微生物を使用してPAZ又はその誘導体を製造する場合、すべての適当な天然に発生する又は組換えの微生物を使用可能である。PAZ又はその誘導体は、ATCC寄託PTA-5863内に存在する天然発生種又はその組換えバリアントを用いて製造される。発明性を有するPAZを作る方法もまた開示する。PAZは、まず、ATCC寄託PTA-5863内に見られる水性生物の混合物を培養することにより調製され、混合物は強化された藻類及び細菌培養液を形成する特別な栄養素ブレンドによって増大する。この強化培養物に添加されるものは、逆浸透、蒸留、脱イオン化又は他の手段で精製された精製淡水である。培養物を前記精製淡水及び栄養素ブレンドとともに、本質的に生物学的活性な抽出物を形成する所定の時間、インキュベートされる。強化された藻類及び細菌培養液から抽出物をデカンテーションし、次いで処理する。適当な抽出物処理方法には、ろ過、遠心分離、凍結乾燥、透析、精製、エバポレーション、濃縮、蒸留、処方formulation及び他の方法が挙げられる。デカンテーションされた抽出物の特別な一処理方法は、約0.22μmより大きい粒子を除去する精密ろ過である。本明細書に編入される米国特許出願第11/587,266では、PAZ源となる培養物を、ATCC寄託PTA-5863中に見られる濃厚な藻類、苔、真菌及び細菌の細胞の約100~200mL又は約0.1~約500g以上生体重を約2.5ガロン約10Lの脱イオン化ろ過水に入れたものでできている。この方法では、培養物は、蛍光灯又は全光束灯full-spectrumlightsの下で12:12時間光/暗サイクル、約15~37°Cの間、特に25°Cで育成される。培養物は、約2.5ガロン約10Lの容積を有し、大気とのガス交換を可能にする半透明蓋の付いた透明ドラム形金魚鉢型容器内で育成される。培養物には活性生酵母activeliveyeast、又は37°C~約43°Cの無菌脱イオン化温水50mLに添加された1.0gの乾燥活性酵母から調製されているパン酵母Saccharomycescerevisiaeが与えられた。酵母混合物を攪拌し、室温で10~30分間、あるいは若干泡立つまでインキュベートさせる。以下に定義するように、培養物が充満され、収穫される回数の間に、1回以上、約1mLの調製酵母混合物が各培養物に与えられる。他の酵母培養物及び方法を使用できることは、本発明の範囲内であると考えられる。さらに、従来技術で知られている他の培養条件、材料及び方法は、PAZ、その成分、活性化合物、及び誘導体の製造を支持するならば、使用可能と考えられ、それらは、多種培養物又は単一培養物、バッチ、半連続式、連続式又は他の培養系、バイオリアクター、光リアクター又は他の発酵技術、あるいは、他の適当なソース、支持体やキャリアーを含む。培養液又はPAZは、定期的に各培養物から上部を流し出すことにより回収することができる。このプロセスを収穫と呼び、得られる液体をPAZ、ProAlgaZyme又は水性抽出物と呼び、そしてそれをさらに処理にかけることができる。ここで、PAZが各培養物からデカンテーションされる間に実質的に乱されない培養容器底部に、培養物を形成する大部分の藻類細胞が残る。収穫するために、及び収穫後のデカンテーションされたPAZをろ過又はさらなる処理の前後にバッチ化するために、従来技術で知られるさまざまな材料及び方法を使用可能である。収穫後、PAZはろ過され、望むままに消費される。生理活性を有すること及び消費が安全であることがわかっている。育成容器の液容は、室温約25°Cの逆浸透精製又は脱イオン化ろ過水を用いて元の容積へ戻すことができる。収穫、処理、精製や化合物単離の他の方法やシステムを、PAZ及びその誘導体の製造のために使用可能であると考えられ、適切なら、処理しないことを含む。さらに、PAZは、瓶詰め、濃縮、希釈、乾燥、あるいは他の材料例えば別の方法で処理し、別の方法を採用するとともに処方することができると考えられる。PAZから単離した個々の活性化合物及びそれらの合成等価物であって、本明細書に記載された他の疾患を処置する機能のほかに、患者のコレステロールレベルを下げるのに有効であるものを、単独で使用でき、あるいはそれらを組み合わせてもよい。好ましくは、PAZから単離され、及びPAZで特徴づけられる一種以上の物質であって、化学合成され及び不活性成分の不在の下で投与されるものに処置を限定することができる。本明細書で使用する治療学的有効量は、疾患状態又は健康状態medicalconditionの徴候を、好ましくは高いLDL又は総コレステロールレベル、及び低いHDLコレステロールレベルを緩和する本発明の組成物の量を意味する。さらに、投薬計画は、以下の例に見ることができる。好ましくは、PAZを、液状経口サプリメントとして投与するが、検分される活性を保証することが明らかである合成化合物の投与は、毎日、mg又はμgの範囲の濃縮物で経口的に投与されるカプセル形態と同様である。例えば、一般に、無徴候性の患者に1日当たり約1オンス以上、そして疾患患者に1日当たり3オンス以上投与することができる。さらに、投薬計画は、以下の例に見ることができる。本発明は、有効量の微生物発酵生成物を投与し、そしてリポタンパク質代謝に関わる遺伝子を制御することによる患者の高コレステロール血症を処置する方法を提供する。微生物発酵生成物、すなわち、PAZ、その単離成分、又はその化学合成類似体を投与することにより、リポタンパク質代謝及び/又はコレステロールに関わる一種以上の遺伝子を上方又は下方制御することができる。この方法を以下に詳細に説明する。本発明は、より特定的には、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる有効量の組成物を投与し、そしてリポタンパク質代謝に関わる遺伝子の発現を制御することによる患者のコレステロールレベルを制御する方法を提供する。前記組成物は、好ましくは、液状の経口サプリメントの形態であるが、本明細書に記載された他の形態も使用可能である。前記組成物は、また、機能性食品の形態でもあり得、又は食品添加物でもあり得る。前記組成物の投与は、好ましくは、毎日であるが、本明細書に記載された他の投与プロファイルを使用可能である。前記組成物を投与することによって、さまざまな遺伝子が上方制御及び下方制御される。ApoA1及びSRB1遺伝子の転写が上方制御され、一方、CETPをエンコードする遺伝子の転写が下方制御される。したがって、より一般には、ABCA1、ApoA1及びSRB1エンコードする少なくとも一種の遺伝子を上方制御する、及び/又はCETPをエンコードする遺伝子を下方制御することにより、高いLDL及び総コレステロールTC、並びに低いHDLコレステロールを処置することができる。より特定的には、PAZを投与することによって、TCレベルを下げることが可能であり、LDLレベルを下げることが可能であり、そしてHDLレベルを上げることが可能である。これらの遺伝子の上方制御及び下方制御は、患者から血漿又は血液サンプルを採取し、汎用の方法でTC、HDL及びLDLを分析する等のアッセイを行うことにより確認することができる。本発明は、また、有効量の微生物発酵生成物を投与し、ABCA1、ApoA1及びSR-B1をエンコードする少なくとも一種の遺伝子の発現を上方制御し、及び/又は、CETPをエンコードする遺伝子を下方制御することによる個体の高コレステロールを処置する方法を提供する。微生物発酵生成物は、上記したように、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる組成物である。微生物発酵生成物は、液状経口サプリメントの形態であるが、本明細書に記載された他の投与形態や投与プロファイルも使用可能である。上方制御及び下方制御が前に上記したように行われていることを確認するためにアッセイを行うことができる。本発明は、さらに、PAZ、PAZから単離された特異的成分、及びPAZ成分の化学合成類似体からなる群から選ばれる有効量の組成物を投与し、リポタンパク質代謝に関わる遺伝子を制御し、そして高コレステロールの発症を防止することによる高コレステロールの発症を防止する方法を提供する。これは、高コレステロールにかかるリスクをもつ個体がそれらを保護するための手段を講じる予防方法である。個体が、一旦、高コレステロールにかかるリスクにさらされると確認した場合、前記組成物の服用を開始することができる。前記組成物は、毎日投与され得る。前記組成物は、液状の経口サプリメント、機能性食品、又は食品添加物の形態であり得る。すべての他の投与形態や投与療法を使用可能である。以下の実施例で、遺伝子制御及びコレステロールレベルを測定するために、PAZ及びそのフラクションを用いたさまざまな試験を行っている。遺伝子制御の同様のパターンが、PAZそれ自体と比較して比較的少ない成分を含有する、一定のクロマトグラフィで精製されたフラクション例えば、PF3及びPF4フラクションで処置した動物に観測される。しかし、ApoA1をエンコードする遺伝子の発現は、PF3又はPF4単独よりもPAZでより顕著に強化され、これは、コレステロール代謝に関して有益な効果をもつ追加の成分がPAZ内に存在すること、あるいはこれらの二つのフラクション中の成分の相乗効果を示している。したがって、より一般には、高コレステロールは、ApoA1及び/又はSRB1を上方制御し及び/又はCETPを下方制御するために、PAZ又はそこに含有される化合物を用いて有利に処置することができる。PAZ及びPF4は、CETP及びHMGCoAレダクターゼタンパク質の機能活性についての直接の効果を試験しており、そして効果がないことがわかっている。さらに、このデータは、機序が転写レベルにあることを支持する実施例2参照。PAZ並びにPF3及びPF4成分がこれら三種類の遺伝子の一種以上のinvivoの発現を有利に変更すると証明された能力とは対照的に、培養ヒト肝臓細胞HepG2におけるコレステロール代謝に関わる遺伝子の発現を影響する能力を試験すると、CETPをエンコードする遺伝子の発現にのみ有意な変化が観測された。血管上皮細胞HUVECでinvitro試験すると、得られた結果は一貫性がなく、そしてinvivoのコレステロール代謝で観測された有益な効果と一致しなかった。したがって、観測された活性は、それについて非自明であり、現代の製薬リサーチで採用する方法、すなわち、最初にinvitroで細胞株をスクリーニングする方法を用いてアプローチした時に、PAZは、コレステロール低減組成物としてさらに検討されることから除外されるであろう実施例3参照。PAZの全体効果を実施例1に示すが、それは、LDLだけでなく総血漿コレステロールTCを低減する。PAZは、また、HDLを有意に増大させ、それは、TC/HDL比率の改善を生じる。血漿コレステロールの変化は、また、リポタンパク質粒子でのシフトを伴う。これらの効果のそれぞれは、上記したように、特定の遺伝子の発現の上方制御及び/又は下方制御によって作られる。本発明の化合物を用いてハムスターで実験を行ったが、その結果は、ヒトで期待されるものを予測できる。ハムスターは、ヒトでのコレステロール代謝における候補薬の効能の予測に使用の好ましいモデルである。PAZ、若しくはPAZに由来する調製物又は化合物を、医師により適当とされる投薬計画に従って、毎日投与可能である。この処置は、病的コレステロールレベルをもつと診断された患者へ、コレステロールをより望ましいレベルへ持ってゆくための治療学的療法として提供可能である。別法として、該処置は、さまざまな因子によって、高い総及びLDLコレステロールレベル、及び低いHDLコレステロールレベルに進展する傾向の患者の予防的療法として提供可能であり、この場合、PAZを予防的処置として投与可能である。PAZは、また、機能性食品、又はさまざまな飲料又は他の食材中の食品添加物として投与可能である。本発明の主題であるPAZ、PAZに由来するフラクション、又はPAZの活性成分と等価又は類似する合成化合物は、個々の患者の臨床状態、投与部位及び方法、投与計画、患者年齢、性別、体重、及び医師が知る他の因子を考慮しながら、良質な診療行為に従って投与又は投薬される。したがって、本明細書で目的とする薬学的有効量は、当業分野で知られるような検討によって決定される。量は、生存率の改善やより迅速な回復、若しくは、兆候の改善又は消失、及び当業者によって適当な尺度として選択される他の指標を含むしかし限定されない改善を達成するのに効果的であるべきである。本発明の方法において、本発明の化合物は、さまざまな方法で投与可能である。それは、調剤として投与可能であり、そして単独に又は薬学的に許容可能な担体、希釈剤、アジュバント及びビークルと組み合わせる有効成分として投与可能であることが特記されるべきである。化合物は、経口的、皮下、又は静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、扁桃内及び鼻腔内投与、さらに髄腔内及び注入技術を含む非経口的に投与可能である。化合物のインプラントもまた有用である。処置される患者は、温血動物、特にヒトを含む哺乳類である。薬学的に許容可能な担体、希釈剤、アジュバント及びビークルとさらにインプラント担体は、一般に、不活性で無毒性の固体又は液体充填剤、希釈剤、又は本発明の有効成分と反応しないカプセル化材料を意味する。投与は、数日間にわたって単回投与又は複数回投与であり得る。処置は、一般に、疾患過程及び薬効の長さ、並びに処置される患者の種類に比例した長さを有する。本発明の化合物を非経口投与する場合、それは、一般に、単位投与量の注射剤型溶液、懸濁液、乳濁液に処方される。注射に適当な製薬処方には、無菌の水性溶液又は分散液、及び無菌の注射可能な溶液又は分散液に再構成するための無菌粉体が含まれる。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール例えばグリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等、それらの適当な混合物、及び植物油を含有する溶剤又は分散媒体であり得る。適当な流動性は、例えばレシチンのようなコーチングcoatingの使用により、分散液の場合は要求される粒径の管理により、そして界面活性剤の使用により維持することができる。綿実油、ゴマ油、オリーブ油、大豆油、コーン油、ひまわり油、及びピーナッツ油等の非水性ビークル、ミリスチン酸イソプロピル等のエステルもまた、調剤組成物の溶剤系として使用可能である。さらに、抗菌性防腐剤、抗酸化剤、キレート化剤及び緩衝液を含む、前記組成物の安定性、無菌性及び等張性を強化するさまざまな添加物を添加可能である。微生物の作用の防止は、さまざまな抗菌性及び抗真菌薬、例えばパラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等により確保可能である。多くの場合、等張剤、例えば糖類、塩化ナトリウム等を含むことが望ましい。注射可能な薬剤形態の長びく吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によりもたらされる。しかし、本発明によれば、使用されるすべてのビークル、希釈剤、又は添加剤は、化合物と親和性compatibleである必要があろう。注射可能な無菌溶液は、本発明を実施する際に利用される化合物を、所望により他のさまざまな添加剤とともに必要量の適当な溶剤中に取り込むことにより調製可能である。本発明の薬理学処方は、さまざまなビークル、アジュバント、添加剤、及び希釈剤等のすべての親和性担体を含有する注射可能な処方で患者に投与可能であり、また、本発明で利用される化合物を、モノクローナル抗体、ベクター送達、イオン泳動、高分子マトリックス、リポソーム及びマイクロスフィア等の徐放性皮下インプラントや標的送達系の形態で非経口的に患者に投与可能である。本は発明に有用な送達系の例には、米国特許5,225,182;5,169,383;5,167,616;4,959,217;4,925,678;4,487,603;4,486,194;4,447,233;4,447,224;4,439,196;及び4,475,196が含まれる。多くの他のインプラント、送達系及びモジュールは、当業者に周知である。以下の実験的実施例を参照して、本発明をさらに詳細に説明する。これらの実施例は、説明のためにのみ提供され、特に言及しない限り、限定的な意図ではない。したがって、本発明は、以下の実施例に限定されるよう解釈されるのではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として自明となるすべての変更を含むと解釈されるべきである。実施例1実験の特定の目的は、a生理活性は完全複合混合物を要求するかどうか、あるいはその成分の一又は数種によるものかを決定する、bこのプロセスに由来するPFフラクションをinvitro細胞培養物及びinvivoハムスターの実験モデル系で評価するために、クロマトグラフィ技術を採用して完全PAZ培養ろ過物をその化学及び物理特性に基づくフラクションに分離することであった。材料及び方法血漿コレステロール分析のために、以下のアッセイキットを使用した:ポインテサイエンティフィック社PointeScientificより:コレステロール液体C7510-血漿総コレステロール用トリグリセリドGPO液体試薬セットT7531-血漿TG用HDL/コレステロールMg/DexH7507-マグネシウム沈殿による血漿HDL用和光社Wakoより:遊離コレステロールE435-35801リン脂質C433-36201ProAlgaZymeTMをサブフラクションに分離した。F1:多くのタンパク質を捕獲するための弱陰イオン交換F2:カルボキシル基及び負に帯電したイオンをはじめとする負に帯電した他の官能基性を含有する分子を捕獲するための強陰イオン交換F3:アミノ基及び正に帯電したイオンをはじめとする正に帯電した他の官能基性を含有する分子を捕獲するための強陽イオン交換カラム4非極性有機分子を結合するC18誘導derivatizedカラムF4:採用した一連の樹脂弱陰イオン交換、強陰イオン交換カラム、強陽イオン交換、及びC-18カラムに対して通過する結合しない液体。この通過フラクションをPF4と呼び、これは、カラム4により捕獲されず、そしてまた、生体機能が評価された低極性分子とともに、極性であるが無電荷の有機分子を含む比較的少数の分子を含有する。研究デザインを図1に示す:HF:高脂肪食30カロリー、脂肪由来;飽和脂肪酸を含有するココナッツ油を主とし、1大豆油PAZ:ProAlgaZymeTM完全溶液PF1、PF2、PF3及びPF4は、PAZをクロマトグラフィで分離したフラクションである。対照動物に、通常ハムスター飼料を給餌した。P:高脂肪食30カロリー、ココナッツ油由来を意味する。PW:高脂肪食水PP:高脂肪食完全ProAlgaZymeTM20mLを100mLに希釈PF1:高脂肪食ProAlgaZymeTMのフラクション15mLを100mLに希釈PF2:高脂肪食ProAlgaZymeTMのフラクション25mLを100mLに希釈PF3:高脂肪食ProAlgaZymeTMのフラクション35mLを100mLに希釈PF4:高脂肪食ProAlgaZymeTMのフラクション420mLを100mLに希釈p値=PWに対する統計的有意差OnewayANOVA、STATPLUS;n=10/群p<0.05は、比較される2群間で、パラメータ例えばTCの平均値が統計的に相違することを暗示する。p値が低いほど、統計的有意差が高い。グラフ上、PWと比較して統計的に相違するカラムを、p<0.05又はp<0.01で表示した。要約:コレステロール血症予防的モデル系ハムスターの血漿脂質に関するPAZの予防効果PAZは、28日予防的研究にわたって、血漿総コレステロールTC及び非HDLLDLの統計的有意な減少をもたらす。PAZは、HDLの統計的に有意な増大をもたらし、これは、TC/HDL比率の顕著な改善につながる。血漿コレステロールの変化は、リポタンパク質粒子のシフトを伴う。結果を図S2-12に示す。図2に示すように、飼料平均摂取量は、一般に、4週間にわたって減少した。図3に示すように、平均体重は4週間にわたって増大した。図4は、平均摂水量が4週間にわたって減少したことを示す。図5は、PF3給餌動物の平均TCが水を与えた動物PWよりも有意に低かったことを示す。図6は、PP、PF3及びPF4の場合の平均HDLコレステロールが、水給餌群PWと比較して有意に高かったことを示す。図7は、PF3及びPF4の場合の平均TC/HDL比率が、PWと比較して有意に低かったことを示す。図8は、PP、PF3、及びPF4の場合の平均LDLコレステロールが、PWと比較して有意に減少したことを示す。図9は、トリグリセリドレベルの減少が統計的有意差に達しなかったことを示す。図10は、各群のリポタンパク質プロファイルを示し、そして各PAZ組成物は、プロファイルのシフトを生じた。図11は、水を給餌したハムスターPWと完全ProAlgaZymeTMを給餌したハムスターPPとの間に、リポタンパク質組成物の低密度から高密度粒子へのシフトが存在したことを示す。図12は、水対PF3給餌ハムスターにおいて、リポタンパク質組成物の低密度から高密度へのシフトが存在することを示す。実施例2に記載された実験の目的は、aコレステロール代謝に関わるキータンパク質の機能を変更するPAZ及びそのフラクションの活性の能力について試験すること、及びそのような機序例えばスタチン類についての場合であるを同定すること、bPAZ抽出物のさらなる分別及び活性成分の究極の特徴を促進させるようなアッセイを採用することであった。実施例2この実施例は、コレステロール代謝酵素であるコレステロールエステル転移タンパク質CETP、リン脂質転移タンパク質PLTP及びHMG-CoAレダクターゼHMGRの酵素活性に関して有するPAZ、ろ過物PF4及びPF3の効果の定量分析を詳説する。手順:CETP及びPLTPアッセイ:CETPインヒビタードラッグスクリーニングキットカタログK602-100、及びPLTPインヒビタードラッグスクリーニングキットカタログK602-100を、バイオビジョンリサーチプロダクツ社BioVisionResearchProducts、マウンテンビュー、カリフォルニア州から入手した。酵素アッセイを製造者の指示に従って行った。詳細には、160μLの脱イオン化DI水、PF4無希釈又はPF3DI水で1:10希釈を、96ウエル黒色マイクロタイタープレートのウエルに分配した。次いで、容積を変更した対照ウサギ血清CETP及びPLTPの源を、ウエルに添加した。いくつかのウエルは血清を受けつけなかったので、背景蛍光ブランク対対照として役立てた。1ウエルにつき、1部のアクセプター分子溶液、1部のドナー分子溶液、及び2部の10 ́アッセイバッファーからなるマスターミックスを調製し、各アッセイに使用されるウエル数までスケールアップした。40μLのマスターミックスを各ウエルに添加し、プレートをシールし、37°Cの加湿器内で45分間インキュベートした。各ウエルの蛍光強度を、485nm励起及び527nm放射のフィルタペアを持つラボシステムフルオロスキャンアスセントエフエル蛍光光度計LabsystemsFluoroskanAscentFLfluorometerを用いて測定した。各状態を繰り返して行い、平均を報告した各平均に標準偏差誤差バーを付けた。HMGRアッセイ:HMG-CoAレダクターゼHMGRアッセイキットを、シグマ-アルドリッチ社Sigma-Aldrich、セントルイス、ミズーリ州から入手した。酵素アッセイを製造者の指示に従って行った。詳細には、1.5mLのマイクロチューブに以下の試薬をその順番に加えた:1 ́アッセイバッファー、インヒビターインヒビター対照及び試験サンプルに対する、提供されたプラバスタチンインヒビター、PF415μL又はPF31:10希釈の15μLのいずれか、NADPH、HMG-CoAサブストレート溶液、及びHMGR。1つのチューブは、HMGRを添加させず、ブランクとして使用した。陽性対照サンプルは、HMGRを含有するが、インヒビターを含有しなかった。すべての反応を1mL容積で行った。チューブは、詳細には、HMGRをミックスに添加した後、反応溶液をUV-可視セルに移す前にボルテックスした。島津UV-1601UV-可視分光光度計で340nm吸収の示数を15秒毎に5~7分間、取得した。340nmの吸収示数は、酵素活性を持つサンプル例えば、陽性対照サンプルでNADPH濃縮のせいで減少した。結果:CETP及びPLTPアッセイ:PF4によるCETP図13又はPLTP図14酵素活性を、使用血清の容積にてDI水中のこれらの酵素活性と比較したとき、有意な効果はなかった。PF31:10希釈が存在すると、高血清量図15にてCETP活性のかすかな増大が観測される結論参照。PF3は、DI水と比較して、PLTP活性について負のすなわちインヒビター効果を有するようであった図16。HMGRアッセイ:インヒビターの存在無しでは、HMGR酵素活性は、明らかに下降負の傾きを形成する図17、ピンク色の実線■の近似曲線。予期されるように、インヒビターのプラバスタチン類が存在するときのHMGR活性は有意に減少した図17、ピンク色の実線■の近似曲線HMGRをオレンジ色の実線▲の近似曲線HMGRプラバスタチン類と対比。HMGR活性の減少は、PF4がアッセイに存在したときは検出されなかった図17、ピンク色■の実線の近似曲線HMGRを青色の実線×の近似曲線HMGRPF4と対比。しかし、PF3は、このアッセイで、HMGR活性についてインヒビター様の効果を有することが観察された図17、ピンク色の実線■の近似曲線HMGRを紫色の実線●の近似曲線HMGRPF3と対比。結論:CETP及びPLTPアッセイ:対照蛍光値の倍率の増大対照血清を用いるか、あるいは用いないDI水で得られたアッセイ測定結果は、製造者の指示に報告されるとおりの期待された範囲にあり、これは、アッセイを予期するとおりに行っていることを示す。PAZのPF4フラクションは、これらのアッセイキットを用いたCETP又はPLTPの活性のいずれにも効果を有しないようであった。PAZのPF3フラクション1:10希釈は、CETP及びPLTP活性の効果を有するようであった。しかし、効果は、これらの二種類の酵素の作用機序、及びinvivo高コレステロール血症モデルでのPF3のコレステロールを下げる可能性についての報告に基づいて予期されたものと反する。したがって、このデータ、特にPF3についての解釈のもつ訓戒cautionは正当化される。これらのアッセイでは、PF3はDI水中で10倍希釈されたが、DI水単独やPF4と比較して有意量の塩が存在する。これは、アッセイで使用された蛍光標識脂質で試験した酵素活性に関して逆効果を有し得た。さらに、これらのアッセイに先立って希釈PF3のpHが試験されなかったが、これもまた、同じく逆効果に寄与し得る。本研究の他の重要な面は、PAZが直接にリポタンパク質に作用せず、したがって、現在、高コレステロールを処置するのに使用されるスタチン類と同じ作用機序を持っていないことを示している。HMGRアッセイ:この活性アッセイでは、経時的な340nmの吸収の減少は、NADPH濃度としてのHMGR活性が、HMGRによるNADPへの転換のせいで減少することを示している。PAZのPF4フラクションは、このアッセイではHMGR活性を抑制しなかったようである。しかし、PAZのPF3ろ過物では特記される視認できる抑制が存在した。再び、CETP及びPLTP活性について観測されたPF3の効果を考慮すると、これらの結果を解釈する際の警告となるべきものである。コレステロール代謝に関与する4つの酵素へのPAZフラクションの効果について評価したことを以前に開示した。アッセイを行い、そして、上記したように、CETP、PLTP及びHMG-CoAレダクターゼについての予備的データが得られた。4番目の酵素、レシチン-コレステロールアシルトランスフェラーLCAT;血漿HDL濃縮物の主要な決定因子determinantは、評価できなかった。上記データに基づいて、CETP、PLTP及びHMGRタンパク質へのPF4及びPF3の直接的効果に関する有意な発見はないと結論づけられる。これらのタンパク質は、LCATとともに、薬剤候補のHDL-コレステロールに関する効果を試験する際の、たびたび際立った評価ターゲットであるものの、HDL-コレステロールレベルを増加させるよう導くコレステロール逆転送パスウエイでの他の機序が関与し、この際に評価を検討すべきと考えられる。例えば、ApoA1は、HDL粒子のタンパク質成分の70を構成し、そしてほとんどすべてのHDL粒子に存在する。多くの研究が、HDL-コレステロールレベルを上げる最良の策は、新規なHDLコレステロールの前駆体であるApoA1をより多く作ることであると信じている。この理由のため、内因性apoA-1タンパク質発現の上方制御が、HDL-コレステロールをターゲットとする新規な治療法を開発するための最も有望なアプローチのひとつである考えられる。検討されるべき追加の機序は、膜タンパク質であるクラスBスカベンジャレセプタータイプ1SR-B1及びATP-結合カセット1ABC1前者はHDLの真性レセプターbonafidereceptorとして、後者は脂質転送者としての制御であり、両者は、コレステロール流出に重要であると強く関係づけられている。LDLレセプターの発現とリサイクルの制御、そしてしたがってその利用性もまた、機序であり、これにより、コレステロールレベルが生理学的に調節され、そして評価されるべきである。データは、CETP、PLTP及びHMGR活性へのPF4及びPF3フラクションの効果に関する有意な発見があるかどうかをほとんど明らかにしていない。しかし、invitro酵素アッセイで使用した同一のPAZフラクションは、invivo動物高コレステロール血症モデルにおいてHDL-コレステロールレベルを上昇させる能力を示した。これらの明らかに矛盾する結果は、ainvivoでコレステロールレベルを下げるのに関与する機序は、われわれがinvitroで試験している特定の酵素と関係しない、bこれらのタンパク質の一種以上の発現又はターンオーバーを変更するような別の機序、及び/又は、活性代謝物質を生成するために、PAZの成分に作用するinvivo前生物的変換prebioticconversionパスウエイの要求のためである。この生体内活性化プロセスは、ヒト及び動物の消化管又は血流内、あるいはヒト及び動物の消化管内に存続する細菌性ミクロフローラの中のいずれかで起こり得る。実施例3及び4に記載された実験の目的は、aPAZ及びPAZのフラクションのコレステロール代謝に関与するキータンパク質をエンコードする遺伝子の発現を変更する能力を評価し、そしてそのような機序が同定できるかを評価すること、bPAZ抽出物のさらなる分別と究極の特徴の活性成分を促進するようなアッセイを採用することである。実施例3一の特定目的は、高脂肪食と同時に完全PAZPP及びPAZのフラクション4PF4をハムスターに給餌することによりもたらされるより有益的な血漿脂質プロファイルより低いTC、より高いHDLを説明することであったすなわち予防的モデル。したがって、実施例1で採用した4週間の予防的プロトコル後に回収したハムスター肝臓から採取した組織内のHDL代謝に関わる遺伝子ApoA1、ABCA1、SR-B1及びCETPの発現レベルの評価を行った。もう一つの特定目的は、HepG2及びHUVEC細胞系のいずれかを採用するinvitroHDL遺伝子制御についてPAZ及びそのフラクションの効果を評価することであったデータは示さず。この実施例では、5動物/群のデータを示し、1動物につき3回繰り返した。図13は、コレステロール逆転送パスウエイ、及びアテローム性因子atherosclerosisfactorの発病に関するHDL作用の他のサイトの主成分を示す。ApoA1は、初期のHDL粒子の生成に関与する。ABCA1は、脂質を抹消組織から初期HDLに転送して、より大きなHDL粒子を形成させる。大きいHDL粒子は肝臓上のSR-B1レセプターを介して胆汁へと除去され、血漿からの除去が生起され、そしてApo1はリサイクルされる。CETPは、脂質をHDLから非HDLLDL様粒子へ転送する。この転送が減少することは有利である。細胞培養物、処置、RNA単離Hep-G2細胞をDMEM10FBS、5PenStrep、5L-グルタミン内で培養し、一方、HUVEC細胞をMedium19925mg内皮性成長因子、50mgヘパリン、20FBS、5PenStrep、5L-グルタミン内で培養した。3x105細胞を6-ウエルプレートへ静置した。静置24時間後、細胞を処理した対照、Paz1:100、Paz1-20、Paz1-10、新フラクション-41:100、新フラクション-41:20、新フラクション-41:10、旧フラクション-41:100、旧フラクション-41:20、旧フラクション-41:10。細胞を16時間処理した後、QiagenRNeasyMiniKit及びQiagenQIAshredderを用いて、製造者により提供されるプロトコルに従って全RNAを分離した。RNAをcDNAへHighCapacityRNA-CDNAMasterMixアプライドバイオシステムズ社、AppliedBiosystemsを用いて、製造者により提供されるプロトコルに従って、全RNA1μgから始めて、RNAをcDNAへ転換した。RT-PCR4種類のプライマーをアプライドバイオシステムズ社から取得した。1ホモサピエンスコレステロールエステル転移タンパク質CETP:ファワードプライマー配列ACCTTCTCGCCCACACTGCT配列番号:1、リバースプライマー配列TGAAGCCCCAGGTCTCCAGC配列番号:2;2ホモサピエンスATP-結合カセット、サブファミリーAABCA1:ファワードプライマー配列AAGACCCTGGCTTCGGGACC配列番号:3、リバースプライマー配列ATGGTCTGGGGAACTGGGGC配列番号:4;3ホモサピエンススカベンジャレセプタークラスB、メンバー1SR-B1:ファワードプライマー配列AAGAACGTGCGCATCGACCC配列番号:5、リバースプライマー配列TCATGAAGGCACGTTCGCCG配列番号:6;4APOA1:ファワードプライマー配列CATTTCTGGCAGCAAGATGA配列番号:7、リバースプライマー配列GCCTTCAAACTGGGACACAT配列番号:8。プライマーの最終濃度は、5μMであった。リアルタイムPCRを全25μL反応混合物2μLcDNA、12.5μLの2xSYBRGreenPCRMasterMixアプライドバイオシステムズ社製、1.0μLの各5μmol/Lフォワード及びリバースプライマー、並びに10μLの蒸留水で行った。PCRプログラムを、95°C10分間により開始した後、各サイクル95°C30秒間及び60°C1分間のサーマルサイクル50回を行った。データを、比較Ct法comparativeCtmethodに従って解析し、各サンプル中のグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ発現インビトロジェン社、Invitrogenに対して規格化した:ファワードプライマー配列ACCCAGAAGACTGTGGATGG配列番号:9、リバースプライマー配列CAGTGAGCTTCCCGTTCAG配列番号:10。ハムスター1.ABCA1F:5’-ATAGCAGGCTCCAACCCTGAC-3’配列番号:11R:5’-GGTACTGAAGCATGTTTCGATGTT-3’配列番号:122.CETPF:F:5’-AAGGGTGTCGTGGTCAGTTCT--3’配列番号:13R:F:5’-ACTGATGATCTCGGGGTTGAT--3’配列番号:143.apoA-IF:5’-ACC-GTTCAG-GAT-GAA-AAC-TGT-AG-3’配列番号:15R:5’-GTGACT-CAG-GAG-TTC-TGG-GAT-AAC-3’配列番号:164.SR-B1F:5’-AAG-CCT-GCA-GGT-CTA-TGA-AGC-3’配列番号:17R:5’-AGA-AAC-CTT-CAT-TGG-GTG-GGT-A-3’配列番号:18ヒトCETPF:ACCTTCTCGCCCACACTGCT配列番号:19R:TGAAGCCCCAGGTCTCCAGC配列番号:20配列5’->3’ABCA1F:AAGACCCTGGCTTCGGGACC配列番号:21R:ATGGTCTGGGGAACTGGGGC配列番号:22配列5’->3’SRB1F:AAGAACGTGCGCATCGACCC配列番号:23R:TCATGAAGGCACGTTCGCCG配列番号:24APO-A1F:CATTTCTGGCAGCAAGATGA配列番号:25R:GCCTTCAAACTGGGACACAT配列番号:26実施例4高脂肪食を給餌したハムスター予防的モデルへ完全PAZPP及びPAZのフラクション4PF4を投与することにより達成されるより有益な血漿脂質プロファイルより低いTC、HDLはより高いの原因である機序を探求するために、別法のアプローチを採用した。HDL代謝に関わる特定遺伝子、すなわち、ApoA1、ABCA1、SR-B1、及びCETPの転写の相対レベルを評価するのに、定量的RT-PCRを使用した。この実施例では、5動物/群のデータを示し、1動物につき3回繰り返した。図19は、高脂肪食完全PAZPP又はフラクション4PF4又は水PWを給餌した動物における特定遺伝子の相対的転写レベルを、定常低脂肪飼料及び水CWの対照群と対比したグラフである。高脂肪食及び水を給餌した動物はCETP発現の増大を示したが、これは、CW及びPP/PF4群と比べて血漿LDL及びTCが高いことを説明している。それらは、また、ApoA1発現の減少を示したが、これは、HDLCの産生減少と互いに関係がある。それらは、また、SR-B1発現の減少を示したが、これは、コレステロール逆転送パスウエイを介したコレステロール除去の抑制と互いに関係がある。図20は、高脂肪食完全PAZPP又はフラクション4PF4又は水PWを給餌した動物における特定遺伝子の相対的転写レベルを、高脂肪食及び水PWの対照群と対比したグラフである。PP及びPF4の場合のABCA1及びCETP発現レベルは同様であった。PPでのApoA1発現は、PF4と比較してより高められたが、これは、初期HDL粒子のより大量の生成と互いに関係がある。これは、ウエスタンブロット、及びHDL粒子径/密度によって同定することができる。SR-B1発現レベルは、PF4群でより高いが、これは、除去clearanceの増大と互いに関係がある。これは、TCの有意な減少と互いに関係がある。要約すると、ハムスター肝臓サンプルからのmRNAを使用する遺伝子制御のqPCR分析は、実施例1の研究で特記した脂質血漿プロファイルの変化を実証し、そしてPAZ又はその成分の作用機序として、リポタンパク質代謝のキータンパク質をエンコードする遺伝子の発現を制御していることを支持する。実施例5たびたび究極のinvivo効果正及び負の両方を予測するのに失敗する、現代の医薬開発に代表的に採用される高スループットスクリーニング法と対照的に、PAZの活性成分は、invivo活性のための厳格な評価acidtestを提供するものの、PAZの活性成分の分別は、長期のinvivo法の主な用途によって著しく妨害されている。しかし、CETP遺伝子発現をモニターするためにHEPG2細胞を採用するinvitroアッセイがスクリーニングの代替エンドポイントsurrogateendpointを提供するかもしれないことを示す初期結果を考慮して、培養HEPG2細胞でのCETP発現に関するPAZの効果をさらに試験した。図21は、PAZのさまざまな製造ロットが、HEPG2細胞でのCETP発現の減少に潜在的活性を有することを示す。図22は、用量反応研究結果を示し、ここで、培養培地中のPAZの希釈物を増大させると、CETP発現の抑制の増大と互いに関係があった。これらのデータは、aPAZはきわめて効能があり、有益な効果を達成するために低用量しか必要とされない、及び/又は、ある一定のレベルでPAZの有益な効果を減じるPAZの他の成分が存在し得ることを示す。実施例6コレステロール及びHDLレベル並びにリポタンパク質代謝に関わる一定のキー遺伝子の発現レベルの有意で有益な変化を、invivo予防的モデル系で観察された。しかし、高コレステロール血症を持った個体を処置するために新規な薬剤の需要を考慮し、治療学的モデルでのコレステロール及びリポタンパク質プロファイルを改善するために、PAZ及びPAZに由来するフラクションの能力を評価することが重要であった。治療学的ハムスター実験モデルを採用し、ここで、動物各群8動物に、最初の28日間、高脂肪食を投与して、次いで、屠殺までの追加の21日間、高脂肪食PAZ又はPAZに由来するフラクションを同時投与した。得られた結果を図23-25に示す。図23は、このプロトコルで処置したハムスターの血漿の総コレステロールTC、HDL、及びトリグリセリド類に関するPAZ及びPAZからのフラクション3の効果を表す。図24は、PAZのフラクション3でハムスターを治療学的に処置することによって及ぼされるコレステロール対HDLの比率の減少を示す。図25は、高コレステロール血症にためにPAZの治療学的処置にかけられた動物の肝臓においてApoA1をエンコードする遺伝子の発現の有意な上昇を示す。実施例7PAZ及びPAZに由来するフラクションの長期経口投与は、予防的及び治療学的モデル系の両方で有効であり、リポタンパク質代謝に関与する遺伝子の発現の有意で有益な変化が観察され、遺伝子発現を直接調節する薬剤がそのような変化を比較的迅速リポタンパク質代謝のターンオーバー及びその結果のリポタンパク質プロファイルの変化は実質的に長く要求されるかもしれないがに引き起こしそうであることを考慮し、動物を28日間、高脂肪食で前処置し、次いでPF3、PF4その成分を濃縮するために様々な処理をするか、しないを屠殺とmRNA抽出及びqPCR前の7日間3動物/群投与する短期治療学的モデルで、APOA1及びCETP遺伝子の発現を変更するPAZフラクションの能力を評価した。図26は、これらの結果を表す。意外にも、PF4もそれらの誘導体も、ApoA1発現の有意な強化を作らなかった。しかし、PF3フラクションは、長期治療学的及び予防的研究で得られた結果と矛盾せずに、短期治療学的実験モデルでApoA1の発現を有意に強化し、これは、この遺伝子を直接活性化するPF3中の成分の可能性を示唆している。これらのデータは、PF3について遺伝子発現の有益な変化が観察されたことを示すものの、PF4の短期治療学的研究については遺伝子発現の有益な変化が観察されなかった。しかし、長期治療学的及び予防的研究で得られた遺伝子発現の再現性のある有益な変化を考慮に入れると、これらのデータは、PF4成分中のPAZ成分による遺伝子制御についてのより複合的、たぶん間接的な機序を支持する。実施例8治療学的状態すなわち、PF4投与前に高コレステロール血症を誘発させた動物モデルを採用するのinvivoコレステロール及びリポタンパク質代謝に関するPAZに由来するPF4フラクションの効果を評価するために時間研究を行った。図27は、血漿脂質分析及び肝臓mRNA発現を含む研究デザインを示す。PF4は、実施例1に記載されたクラマトグラフィ法を用いてPAZから導出したフラクション4である。得られた結果を図27-32に表す。異なる時点で、図28は血漿総コレステロールを示し、図29は血漿HDL-cを示し、そして図30は血漿トリグリセリドを示す。図31は、異なる時点でPF4で処置した血漿脂質パラメータTC、HDL、TGの変化を示し、図32は、異なる時点のApoA1及びCETPの遺伝子制御を示す。図33は、invivo実験モデルでのリポタンパク質代謝パラメータの多様研究におけるPAZのフラクションPF4の得られた結果の対比である。この時間研究は、治療学的アプローチ4週間のHF飼料に続いてPF4での処理を使用した。ここで、21日目のPF4ロット3は、28日間予防的アプローチ4週間の同時のHF及びPF4治療介入後のPF4ロット1と極めて類似した脂質プロファイルを示す。治療学的時間研究PF4/ロット3では、ApoA1及びCETP発現の両方とも、21日目に増大した。PF4/ロットを使用する実施例4図20参照ではApoA1が増大し、一方、CETPが減少した。これらの研究の中に観察されたCETP発現の相違は、治療学的モデル系で効果を妨害する薬剤がなくても長期HF給餌の影響を反映していることがあり得る。本願を通して、米国特許を含むさまざまな刊行物が著者及び年並びに特許番号により参照される。刊行物の全引用を以下にリストする。本願が関係する従来技術の状態をより充分に説明するために、これらの刊行物及び特許の開示の全体が本願に編入される。本発明は、例証の方式で記載されており、使用される用語は、限定するよりも単語の説明を意図するのが道理であると理解される。自明なことに、上記の観点から本発明の多くの改変及び変更が可能である。したがって、添付の特許請求の範囲内で、特に説明したのと別の方法で実施できると理解される。"