"被験者が、スタチン誘発性筋毒性およびまたはその合併症の1以上を発症するリスクがあるかまたは患っているかどうかを決定する方法であって、前記被験者からの試料における1以上の脂質の濃度を決定する工程であって、前記試料における、対照と比較したときの濃度の上昇または低下が、前記被験者が前記スタチン誘発性筋毒性およびまたは前記合併症を患っていることを示し、ここで、濃度の上昇が対照と比較される1以上の脂質が、12HETE、15HETE、PEP180204、PEO181204、LacCerおよびCerから選択され濃度の低下が対照と比較される1以上の脂質が5HETEおよび89DHETから選択される、工程前記被験者からの試料における1以上の脂質比を決定する工程であって、前記試料における、対照と比較したときの脂質比の上昇または低下が、前記被験者が前記スタチン誘発性筋毒性およびまたは前記合併症を患っていることを示し、ここで、上昇が対照と比較される1以上の脂質比が、12HETE5HETrE、12HETE5HETE、12HETECE204、12HETE15HETrE、12HETELPC160、15HETE89DHET、12HETECK、13HODE89DHETおよび15HETE15HETrEから選択され低下が対照と比較される1以上の脂質比が、1112DHETCer、5HETECE182、89DHETCE181、89DHETLacCer、5HETE9HODE、89DHETGlcGalCer、5HETECer、89DHETCer、11HETE12HETEおよび89DHETCerから選択される、工程または前記被験者からの試料における1以上の脂質濃度および脂質マーカーの組み合わせの1以上の脂質比を決定する工程であって、前記脂質マーカーの組み合わせが、請求項1のに記載の少なくとも1つの脂質および請求項1のに記載の少なくとも1つの脂質比を含み、前記脂質の濃度の上昇または低下およびまたは前記試料における前記脂質比の、対照と比較したときの増減が、前記被験者が前記スタチン誘発性筋毒性およびまたは前記合併症を患っていることを示す、工程;を含む前記方法。スタチンおよびまたは脂質低下薬による被験者の治療が調整を必要とするかどうかを決定する方法であって、前記被験者からの試料における1以上の脂質の濃度を決定する工程であって、前記試料における、対照と比較したときの濃度の上昇または低下が、前記治療が調整を必要としていることを示し、ここで、濃度の上昇が対照と比較される1以上の脂質が、12HETE、15HETE、PEP180204、PEO181204、LacCerおよびCerから選択され濃度の低下が対照と比較される1以上の脂質が5HETEおよび89DHETから選択される、工程前記被験者からの試料における1以上の脂質比を決定する工程であって、前記試料における、対照と比較したときの脂質比の上昇または低下が、前記治療が調整を必要としていることを示し、ここで、上昇が対照と比較される1以上の脂質比が、12HETE5HETrE、12HETE5HETE、12HETECE204、12HETE15HETrE、12HETELPC160、15HETE89DHET、12HETECK、13HODE89DHETおよび15HETE15HETrEから選択され低下が対照と比較される1以上の脂質比が、1112DHETCer、5HETECE182、89DHETCE181、89DHETLacCer、5HETE9HODE、89DHETGlcGalCer、5HETECer、89DHETCer、11HETE12HETEおよび89DHETCerから選択される、工程または前記被験者からの試料における1以上の脂質濃度および脂質マーカーの組み合わせの1以上の脂質比を決定する工程であって、前記脂質マーカーの組み合わせが、請求項1のに記載の少なくとも1つの脂質および請求項1のに記載の少なくとも1つの脂質比を含み、ここで、前記脂質の濃度の上昇または低下およびまたは前記試料における前記脂質比の、対照と比較したときの増減が、前記治療が調整を必要としていることを示す、工程;を含む前記方法。スタチンおよびまたは脂質低下薬による前記治療の調整が、スタチン用量の減少スタチン治療の中止スタチン治療の再開異なるスタチン薬への変更異なる脂質低下薬への変更または1以上のスタチンとの相互作用によって筋毒性をもたらす他の薬物治療の中止を含む、請求項2に記載の方法。前記スタチンまたは脂質低下剤による治療を受けている被験者において、新規スタチンまたは新規脂質低下剤によって誘発される筋毒性の程度を評価するためのものである、請求項1に記載の方法。前記被験者における筋毒性の初期の警告的徴候を決定するためのものおよびまたは被験者に見られる筋毒性の症状がスタチン誘発性筋毒性によるものであるかどうかを決定するためのものである、請求項1~3のいずれか1つに記載の方法。前記脂質濃度およびまたは脂質比の少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つまたは少なくとも5つならびにまたは以下の脂質の組み合わせのいずれかの、前記脂質対照と比較しての以下の濃度変化上昇15HETE、Cer、Cer、低下15HETrE、9HODEおよび5HETE上昇15HETE、低下89DHETおよび15HETrEまたは上昇15HETE、低下89DHETを決定することを含む、請求項1~5のいずれか1つに記載の方法。前記被験者が1以上のスタチンで治療されている前記被験者がスタチン治療を受けたことがあるが、筋肉痛の発症のために前記治療を中止したまたは前記被験者が、まだスタチンで治療されたことがない、請求項1~6のいずれか1つに記載の方法。被験者が、スタチン誘発性筋毒性およびまたはその合併症の1以上を発症する高いリスクがある、請求項1~7のいずれか1つに記載の方法。比較される前記対照が、スタチン治療を受けている、筋毒性の発症前の同じ被験者からの対照試料スタチン治療前またはスタチン治療中止中の、同じ被験者からの対照試料スタチン誘発性筋毒性の徴候または病歴のない被験者からの対照試料スタチン誘発性筋毒性の徴候または病歴のない被験者集団からの対照試料スタチン治療中ではなく、筋毒性の徴候または病歴のない1以上の被験者から決定された対照値スタチン治療中で筋毒性の徴候または病歴のない1以上の被験者から決定された対照値である、請求項1~8のいずれか1つに記載の方法。前記被験者または前記被験者からの試料におけるクレアチンキナーゼ値を決定または評価する工程をさらに含み、任意で、被験者がクレアチンキナーゼ値の上昇を示すかまたは示さない、請求項1~9のいずれか1つに記載の方法。試料が血漿、血清、血液のリポタンパク分画または筋生検組織でありかつまたは脂質濃度およびまたは脂質比が、質量分析法、核磁気共鳴分光法、蛍光分光法または二面偏波式干渉、高速分離法、例えばHPLCまたはUPLC、イムノアッセイ、例えばELISAを用いることによって決定され、かつまたは検体に特異的に結合することができる結合部分を用いることによって決定される、請求項1~10のいずれか1つに記載の方法。被験者におけるスタチン誘発性筋毒性およびまたはその合併症の1以上の予測、診断、予防または治療に使用するための、請求項1~3のいずれか1つにおいて定義された脂質のいずれか1つまたは脂質比における脂質のいずれか1つに対する抗体。スタチン誘発性筋毒性およびまたはその合併症の1以上を予測するための、あるいは請求項1~11のいずれか1つに記載の方法を実施するためのキットであって、請求項1~3のいずれか1つにおいて定義された脂質から選択される脂質標準品1以上の対照マーカー、例えば脂質、例えば請求項1~3のいずれか1つに記載の脂質、またはタンパク質、例えばapoA、apoBもしくはアルブミンおよび任意で請求項1~3のいずれか1つにおいて定義された脂質のいずれか1つに結合することができる抗体または他の結合部分およびまたは前記方法または使用を実施するための試薬;を含む前記キット。スタチン誘発性筋毒性およびまたはその合併症の1以上を予測するための請求項13に記載のキットの使用であって、被験者からの試料における脂質濃度、脂質比またはそれらの脂質の組み合わせが、任意で質量分析法を用いて決定される前記使用。アテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患およびまたはそれらの合併症の1以上を発症するリスクがあるかまたは患っている被験者の治療に使用するためのスタチンまたは脂質低下薬であって、請求項1および4~11に記載の方法、請求項12に記載の抗体、請求項13に記載のキットまたは請求項14に記載の使用のいずれかを用いるとき、前記被験者がスタチン誘発性筋毒性を発症するリスクがあるかまたは患っていると同定される請求項1および4~11に記載の方法、請求項12に記載の抗体、請求項13に記載のキットまたは請求項14に記載の使用のいずれか1つによって、前記被験者がスタチン誘発性筋毒性を発症するリスクがあるかまたは患っていると同定されている請求項1および4~11に記載の方法、請求項12に記載の抗体、請求項13に記載のキットまたは請求項14に記載の使用のいずれかを用いるとき、前記被験者がスタチン誘発性筋毒性を発症するリスクがないかまたはそれを患っていないと同定されるかつまたは請求項1および4~11に記載の方法、請求項12に記載の抗体、請求項13に記載のキットまたは請求項14に記載の使用のいずれか1つによって、前記被験者がスタチン誘発性筋毒性を発症するリスクがないかまたはそれを患っていないと同定されている、前記スタチンまたは脂質低下薬。アテローム性動脈硬化症もしくは心血管疾患およびまたはそれらの合併症の1以上を発症するリスクがあるかまたは患っている被験者の治療に使用するためのスタチンまたは脂質低下薬であって、ここで前記治療が、治療が調整を必要とするかどうかを決定するための請求項2~11に記載の方法のいずれかを用いて評価されるかまたは評価されており、かつそれが調整されるかまたは調整されており、ここで前記スタチンまたは脂質低下薬治療の前記調整が、スタチン用量の減少スタチン治療の中止スタチン治療の再開異なるスタチン薬への変更異なる脂質低下薬への変更または1以上のスタチンとの相互作用によって筋毒性をもたらす他の薬物治療の中止;を含む前記スタチンまたは脂質低下薬。前記スタチンがアトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、フルバスタチンXL、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびまたはシンバスタチンからなる群から選択され前記脂質低下薬がHMGCoAレダクターゼ阻害薬、ナイアシン、コレステロール吸収阻害薬、コレステリルエステル輸送タンパク質阻害薬、胆汁酸封鎖剤フィブラートまたはフィトステロールのいずれかから選択されることができここで場合により、前記コレステロール吸収阻害薬がエゼチミブまたはSCH48461であり前記コレステリルエステル輸送タンパク質阻害薬がトルセトラピブ、アナセトラピブまたはダルセトラピブであり前記胆汁酸封鎖剤がコレセベラム、コレスチラミンまたはコレスチポルであり前記フィブラートがフェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブレートまたはベザフィブラートであり筋毒性が筋疾患、例えば筋ジストロフィーと関連しかつまたはスタチン誘発性筋毒性の1以上の合併症が筋痛症、筋炎、筋障害および横紋筋融解症から選択される、請求項1~16のいずれか1つに記載の方法、抗体、キット、使用またはスタチンもしくは脂質低下薬。発明の詳細な説明本発明は、スタチン誘発性筋毒性を示すバイオマーカーの同定へのリピドミクスの応用の結果である。本発明は、的確な個体が、的確なスタチンまたはコレステロール低下剤を的確な時間および用量で投与されることを確実にする使命を容易にし、それによって、従来、より一般的に用いられていた医薬およびまたは治療レジメンの個別化に向けてこの治療領域を打ち開く。リピドミクスの高い感度と高い特異度の両方によって、最小試料量でさえ分析することができる。本発明によれば、脂質および脂質比は種々の技術によって分析することができる。本発明に関しては、エレクトロスプレーイオン化質量分析法によるリピドミクスが好ましい技術である。ショットガンのこの優れた品質および特異度ならびに標的分析法は、適切な環境に設置された場合に、厳密な規制基準、例えば、医薬品安全性試験実施基準ガイドラインを満たすであろう。本明細書において、筋毒性は、薬物によって誘発される筋肉細胞およびまたは筋肉組織の有害な変化である。本明細書において、筋障害は、筋肉の任意の疾患を指す一般用語である。筋障害は後天性であることも先天性であることもあり、出生時に生じることも後年に生じることもある。本明細書において、筋痛症は、クレアチンキナーゼの上昇を示さない筋肉痛または筋力低下を説明する用語である。本明細書において、筋炎は、CK値の上昇を示す筋肉症状を説明する用語である。本明細書において、横紋筋融解症は、顕著なCKの上昇およびクレアチニンの上昇を示す筋肉症状を特徴とする。本明細書において、筋疾患は、筋肉システムを襲う任意の疾患または障害である。本明細書において、筋ジストロフィーは、筋肉を弱める遺伝性筋疾患である。筋ジストロフィーは、進行性骨格筋筋力低下、筋肉タンパク質の欠損ならびに筋細胞および組織の死を特徴とする。筋ジストロフィーは、デュシェンヌ型、ベッカー型、肢帯型、先天性、顔面肩甲上腕筋、筋緊張性、眼咽頭型、遠位型およびまたはエメリドレフュス型疾患を含むことができる。本明細書において、アテローム性動脈硬化症またはCVDの合併症は、特に、心筋梗塞、AMI、狭心症、一過性脳虚血発作、発作および死から選択される合併症を含む。本明細書において用いられる略語の一部は次の意味を有する。CKはクレアチンキナーゼであり、ADRは薬物有害反応であり、MSは質量分析法であり、HPLCは高速液体クロマトグラフィーであり、またUPLCは超高速液体クロマトグラフィーであり、ROCは受信者操作特性であり、AUCは曲線下面積である。中等度ないし重篤なクレアチンキナーゼの上昇は、ULNの10倍を超えるかまたは10000IULを超えると考えらえるものである。軽度なCKの上昇は、ULNを超えるが、ULNの10倍未満であると考えられる687700JoyTRandHegeleRA,NarrativereviewstatinrelatedmyopathyAnnInternMed2009Jun1615085868。本発明によるスタチンおよびスタチン治療は、それぞれ、好ましくは、それぞれ以下のスタチンおよびそれらによる治療が考えられるセリバスタチンフルバスタチン687700フルバスタチンXL687700ロバスタチンプラバスタチン687700ロスバスタチン85868JacobsonTAetalTowardPainFreeStatinPrescribingClinicalAlgorithmforDiagnosisandManagementofMyalgiaMayoClinProcJune200883687700アトルバスタチン40mg日40または80mg日687700ならびにまたはシンバスタチン80mg日687700。あるいはまた、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチンおよびまたはシンバスタチンは、40mg日で投与されることができる687700。この治療は、フィブラートまたはエゼチミブの投与を含むこともできるし、含まないこともできる687700。エゼチミブと共に、375g日の用量で、コレセベラムをさらに投与することができる85868。本発明において、脂質低下薬または脂質低下剤は、好ましくは、HMGCoAレダクターゼ阻害薬、ナイアシン、コレステロール吸収阻害薬、コレステリルエステル輸送タンパク質阻害薬、胆汁酸封鎖剤フィブラートまたはフィトステロールである。本発明において、コレステロール吸収阻害薬は、好ましくはエゼチミブまたはSCH48461であり、コレステリルエステル輸送タンパク質阻害薬は、好ましくはトルセトラピブ、アナセトラピブまたはダルセトラピブであり、胆汁酸封鎖剤は、好ましくはコレセベラム、コレスチラミンまたはコレスチポルであり、フィブラートは、好ましくはフェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブレートまたはベザフィブラートである。本明細書において、被験者は、限定するものではないが、ヒトおよびヒト以外の霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタならびにげっ歯動物を含むすべての哺乳動物を含む。本発明による特に好ましい被験者はヒトである。本明細書において、ハイリスク被験者は、一般的には、スタチンの高用量およびまたは複数投薬で治療中の、既知の筋疾患を有するかまたは有害事象のリスクを高める可能性のある疾患を有する被験者、特にヒトである。本明細書において、対照は対照試料であることもできるし、単に対照値であることもできる。それが対照値である場合、本発明の方法を開始する前に、それがすでに測定され、算出され、または外挿されたものであることができることは明らかであろう。あるいはまた、対照値は、本発明の方法に従って前記1以上の脂質の濃度または前記1以上の脂質比の決定を行った後に測定され、算出され、または外挿されることができる。従って、本発明による適切な対照値は、文献から採用したものであることができることは明らかであろう。本明細書において、試料は、被験者、被験者群または被験者集団から得られる任意の生体試料と定義される。本発明において、生体試料は全血、血清または血漿であることができるが、血清および血漿が好ましい。患者の血液試料を採取することは、通常の臨床診療の一部である。血液試料は、例えば、患者におけるコレステロール値の測定と関連して採取することができる。採取した血液試料は調製することができ、当業者に公知の技術で血清または血漿を分離することができる。針およびBDVacutainerプラスチックチューブまたはVacutainerPlusプラスチックチューブSSTチューブを用いて、患者から静脈血試料を採取することができる。血清は、室温で10分間1300RCFで遠心分離することによって分離され、小さなプラスチックチューブに80°Cで保存されることができる。試料はまた、全血、血漿または血清の分画、例えばリポタンパク分画であることもできる。他の好ましい実施形態において、試料はまた、組織試料、例えば筋生検組織であることもできる。本発明によって比較が行われる対照における脂質または他の分子は、本明細書において対照マーカーとも呼ばれる。本明細書において、同じ被験者または他の被験者からの対照試料とは、前記被験者から対照試料が直接に得られたことを意味することができる。あるいはまた、しかしながら、前記被験者から直接に入手または採取した試料の物理的または化学的処理、例えば遠心分離、分画、酵素消化、沈殿などの結果として対照試料が得られたことを意味することもできる。同じことは、本明細書において、被験者群または被験者集団からの対照試料について言う場合にもすべてあてはまる。本明細書において、被験者群からの対照試料または被験者集団からの対照試料という用語は、さらに、好ましくは、対照試料が前記群または集団を表すことを含む。これに関連して、代表とは、本発明に関して比較が行われる前記対照試料における1以上の脂質の濃度が、前記群または集団の被験者からの対応する個々の試料における前記脂質の平均濃度に相当することを意味するものとする。好ましくは、前記対照試料におけるすべての脂質の濃度は、前記群または集団の被験者からの対応する個々の試料における前記脂質の平均濃度に相当する。同様に、本発明に関して、1以上の他の分子、例えば、他の脂質またはタンパク質、例えば総PCまたはapoA、apoBもしくはアルブミンに対してそれぞれ比較が行われる場合、代表的対照試料は、この分子の濃度が、前記群または集団の被験者からの対応する個々の試料における前記分子の平均濃度に相当する対照試料である。好ましい実施形態において、本発明の意味における被験者群からの対照試料または被験者集団からの対照試料は、前記群または前記集団の被験者から直接に得たまたは採取した等しい量の試料を混合することによって、あるいは等しい量の、分画、成分またはそれらの反応生成物を混合することによって得られる。本明細書において、対照試料は、それが同じかまたは本質的に同じ方法で同じタイプの生体組織または生体源から得られた場合は被験者の試料に対応する。例えば、被験者の試料が全血、血漿もしくは血清試料またはそれらの分画である場合、対応する対照試料は、それぞれ同様に、全血、血漿もしくは血清試料またはそれらの分画である。このような対応する対照試料は、被験者群または被験者集団からの全血、血漿もしくは血清試料またはそれらの特定の分画から得られた全血、血漿もしくは血清試料またはそれらの分画を含むことは明らかであろう。同じことは、必要な変更を加えて、例えば組織試料に当てはまる。本明細書において、脂質は、疎水性または両親媒性小分子と定義される。本発明において、脂質は以下の命名法に従って命名されるCEはコレステリルエステルであり、Cerはセラミドであり、DAGはジアシルグリセロールであり、PCOはエーテル結合型PCであり、GDはジシアロガングリオシドであり、GlcCerはガラクトシルおよびグルコシルセラミドであり、GMはモノシアロガングリオシドであり、LacCerはラクトシルセラミドであり、LPCはリゾホスファチジルコリンであり、PCはホスファチジルコリンであり、PEはホスファチジルエタノールアミンであり、PIはホスファチジルイノシトールであり、SMはスフィンゴミエリンであり、S1Pはスフィンゴシン‐1‐リン酸であり、HETEはヒドロキシエイコサテトラエン酸であり、DHETはジヒドロキシエイコサトリエン酸であり、HODEはヒドロキシオクタデカジエン酸であり、HETrEはヒドロキシエイコサテトラエン酸であり、AAはアラキドン酸であり、HEPEはヒドロキシヒドロペルオキシエイコサペンタエン酸であり、EPAはエイコサペンタエン酸であり、DHAはドコサヘキサエン酸である。命名法XYは、Xがその分子の脂肪酸部分における全炭素原子数であり、Yがその分子の脂肪酸部分における全二重結合数であることを示す。命名法ABは、DAGおよびPC分子に関して、その分子のグリセロール骨格にAタイプおよびBタイプの脂肪酸部分が結合していることを示す。命名法は、Cer、GlcCer、LacCerおよびSM分子に関して、Cが、アミド結合した脂肪酸部分Aを有する長鎖塩基のタイプであることを示す。本明細書において、用語抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、全長抗体、抗体フラグメントおよび前記脂質に特異的結合を示す抗体サブフラグメントを含む。従って、適切な抗体は、任意のクラスの全免疫グロブリン、二重もしくは多重の抗原もしくはエピトープ特異性を有するキメラ抗体もしくはハイブリッド抗体、またはハイブリッドフラグメントを含むフラグメント2、Fab、Fabなどであることができ、さらに、特異抗原との結合によって抗体のように作用して複合体を形成する任意の免疫グロブリンまたは任意の天然、合成もしくは遺伝子操作されたタンパク質を含む。用語抗体は、抗体の抗原結合フラグメント2、Fdフラグメント、FvフラグメントおよびdAbフラグメントならびに完全抗体を含む。例えば、Fab分子は、Eコリなどの遺伝的に形質転換された宿主において発現され集積されることができる。従って、被験者が祖先抗体を生成するのと同等以上の潜在的多様性を有するFab集団を発現するために、ラムダベクターシステムを利用することができる。HuseWDetalScience1989246127581を参照のこと。このようなFabは、抗体の定義に含まれる。抗体と同様に作用し、特異抗原に特異的に結合する、抗体フラグメントまたはサブフラグメントを含む所定の分子の能力は、当該技術分野で公知の結合アッセイ、例えば、結合パートナーとして対象とする抗原を用いるアッセイによって測定されることができる。本発明による脂質に対する抗体は、当業者に公知の方法によって製造することができる。例えば、マウスを、アジュバントと共に脂質で免疫することができる。2週間隔で3回免疫注射し、血清抗体力価のために隔週に試験採血を行ったマウスからプールとして脾細胞を採取する。脾細胞をアリコート3つに調製し、これらを直ちに融合実験に用いるか、あるいは将来の融合に用いるために液体窒素中に保存する。次いで、StewartFullerJImmunolMethods19891234553の手順に従って融合実験を行う。前記脂質でコーティングされた96ウェルELISAプレート上で、酵素免疫測定法によって、モノクローナル抗体分泌細胞に関して、増殖しているハイブリッドを含むウェルからの上清をスクリーニングする。ELISA陽性培養物を限界希釈によってクローニングし、一般的には、2回連続のクローニング実験後に単一コロニーから樹立されたハイブリドーマが得られる。実施例1材料および方法本治験のために、厳密な基準に従って測定された、明確な筋肉の不耐症表現型を示す患者コホートから被験者を選択した。被験者の選択基準には以下を用いた治験への参加の文書によるインフォームドコンセント18歳以上の男性または女性以下のいずれかによって明らかにされるスタチン関連筋毒性の証拠資料スタチン治療中に生じ、使用中止もしくは用量減少後に止む筋肉痛またはスタチン治療開始後に始まり、スタチン投与を停止するのが不可能と考えられる患者においてなお治療されている間持続する筋肉痛またはスタチンで患者が治療されている間生じ、男性女性医師の意見で、明確にスタチン関連と考えられる筋肉痛または筋肉痛、筋力低下、筋障害もしくは横紋筋融解症によるスタチン不耐症のために、スタチンからエゼチミブに脂質低下レジメンが変更される患者または異常を説明する他の原因が無い場合の、スタチンで治療されている間の正常上限値の15倍を超える血漿CK値の上昇または異常を説明する他の原因が無い場合の、スタチンで治療されている間のミオグロビン尿症もしくは高ミオグロビン血症の存在他に責任を負うべき原因が無い場合の、スタチンで治療されている間の横紋筋融解症の臨床診断。被験者の除外基準には以下を用いた医師の判断で、筋肉痛がスタチンの使用と明確には関連しない患者安定用量のサプリメントで少なくとも直前の3ヶ月間抑制されず、筋毒性の間存在した甲状腺機能低下症前年において既知であり、筋毒性の間存在した甲状腺機能亢進症前年において存在し、筋毒性の間存在したアルコール乱用または薬物乱用の病歴筋毒性時に200μmolL以上の血清クレアチニン値を示す既知の腎機能障害筋毒性時の、硬変、胆道閉塞、急性または慢性の感染性肝炎を伴う既知の重篤な肝疾患既知の遺伝性または後天性筋疾患医師の意見で、患者を治験に不適当な志願者とする原因となる任意の健康状態または精神状態リクルートメントの30日以内の任意の他の薬物治験の関与。対照の選択基準には以下を用いた治験への参加の文書によるインフォームドコンセント18歳以上の男性または女性スタチンの安定用量で少なくとも3ヶ月間治療された既知の脂質異常症現在または過去におけるスタチン関連副作用の非存在。対照の除外基準には以下を用いたスタチンによる筋毒性の非存在が状態の前に確定されている場合を除く、安定用量のサプリメントで少なくとも直前の3ヶ月間抑制されない甲状腺機能低下症スタチンによる筋毒性の非存在が状態の前に確定されている場合を除く、前年において知られている甲状腺機能亢進症スタチンによる筋毒性の非存在が状態の前に確定されている場合を除く、前年におけるアルコール乱用または薬物乱用の病歴スタチンによる筋毒性の非存在が状態の前に確定されている場合を除く、リクルートメント時において200μmolL以上の血清クレアチニン値を示す既知の腎機能障害スタチンによる筋毒性の非存在が状態の前に確定されている場合を除く、リクルートメント時に硬変、胆道閉塞、急性または慢性の感染性肝炎を示す既知の重篤な肝疾患既知の遺伝性または後天性筋疾患医師の意見で、患者を治験に不適当な志願者とする原因となる任意の健康状態または精神状態。リクルートメントの30日以内の任意の他の薬物治験の関与。解析方法質量分析法によるリピドミクス直接注入タンデム質量分析法および2つの液体クロマトグラフィータンデム質量分析法アプローチを用いてヒト血漿中の脂質分子種を分析することによってスタチン誘発性筋毒性を同定した。適用方法は、特に、分子のコレステリルエステル、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリンおよび他のリゾリン脂質、エーテル結合型ホスファチジルコリンおよび他のエーテル結合型リン脂質、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、ジアシルグリセロール、セラミド、グルコシルセラミド、ラクトシルセラミド、遊離脂肪酸ならびにエイコサノイドの定量のために最適化された。本方法に従って以下の材料を用いた。HPLCまたはLCMSグレードのクロロホルム、メタノール、水、アセトニトリル、ギ酸、メタノール、イソプロパノール、酢酸アンモニウム、酢酸、塩化カリウムおよびブチル化ヒドロキシトルエンは、SigmaAldrich社から購入した。HPLCカラムはWaters社から購入した。HPLCプレカラムはPhenomenex社から購入した。抽出に用いたすべての実験器具はクロロホルムに耐性を示した。エアゾール耐性フィルターチップおよびEppendorf2mlsafelocktube、96ウェルtwintecPCRプレートならびにPierceitlitethermosealfoilはVWRInternational社から購入した。COREFilterTipおよび96ウェル2mlWhatmanUniplateは、HamiltonRobotics社から購入した。合成脂質標準品は、AvantiPolarLipids社、Matreya社およびCaymanChemical社から購入した。脂質は、以下のプロトコルに従ってクロロホルムメタノールで抽出した。データの正規化および内因性脂質定量のために、既知量の非内因性合成内部標準で試料をスパイクした。非内因性合成外部標準品でスパイクしたポスト抽出物を品質管理に用いた。適切に計量した量の各標準品をクロロホルムメタノールに溶解して最終濃度500μMにすることによって標準品の原液を調製した。標準原液のそれぞれを含む内部標準混合物を作成し、脂質抽出に用いた。ショットガンリピドミクスのために血漿5μlを用い、セラミドおよびセレブロシドリピドミクスのために血漿10μlを用いた。HamiltonMICROLABSTARシステムを用い、自動で脂質抽出を行った。十分に混合した試料を、氷冷したメタノールおよび01BHTを含む96ウェル2mlWhatmanUniplateに分注した。抽出プロトコルにおける各段階後に試料を十分に混合した。適切な量の内部標準混合物およびクロロホルムおよびメタノールを加えることによって室温で抽出を行った。ショットガンリピドミクスならびにセラミドおよびセレブロシドリピドミクスにおいて、20mM酢酸を加えることによって有機相分離を促進し、500×gで5分間プレートを遠心分離した。この有機相を新規の96ウェル2mlWhatmanUniplateに移した。残りの含水相に適切な量のクロロホルムを加えて洗浄し、次いで遠心分離した。2つの有機相をプールし、N2下で乾燥するまで蒸発させた。次いで、合成外部標準品を添加したクロロホルムメタノールに脂質抽出物を再溶解した。MS分析の前に、20°Cで、抽出物を2mlsafelockEppendorftubeに保存した。脂質抽出物の必要量を、Eppendorf96ウェルtwintecPCRプレートに分注し、蒸発を避けるためにアルミホイルでプレートをヒートシールした。ショットガンリピドミクスにおいて、自動ナノフローイオン源を備えたハイブリッドトリプル四重極リニアイオントラップ質量分析計で脂質抽出物を分析した。この機械を陽イオンモードおよび陰イオンモードで操作した。陽イオンモードにおいて、スプレー電圧は10~14kVに設定し、陰イオンモードにおいて、10~14kVに設定した。03~08psiのガス圧を用い、界面ヒーターは60°Cに設定した。合成標準品を用い、衝突エネルギーおよびデクラスタリング電位を各脂質クラスに最適化した。スキャン速度200Da秒を用い、単位分解能モードでこの質量分析計を操作した。Stahlmanらの記載に基づいて、陽イオンモードおよび陰イオンモードの両方で、多重前駆体イオン走査および中性種脱離走査を用いて脂質分子を分析した。セラミドおよびセレブロシドリピドミクスにおいて、高速液体クロマトグラフィー分析は以下の方法で行った。クロマトグラフ装置には、CTCHTCPALオートサンプラー、RheosAllegroUHPLCポンプ、セラミドおよびセレブロシドリピドミクスのために60°Cに設定された外部カラムヒーターならびにインラインプレカラムを備えたAcquityBEHC18カラムからなるものを用いた。抽出された試料、各10μlをプレカラムに注入し、分析用カラムを通過させて、500μl分の流速で質量分析計に射出させた。セラミドおよびセレブロシドリピドミクスにおいて、脂質検体分離のために、01ギ酸を含むHPLCグレード水中に10mM酢酸アンモニウムを含む溶媒Aと、01ギ酸を含むアセトニトリルイソプロパノール中に10mM酢酸アンモニウムを含む溶媒Bとでグラジエントを用いた。グラジエントは以下のように構築した0分65B2分65B25分75B175分100B225分100B226分65B25分65B。脂質抽出物をHPLCMSMSによって分析した。MS分析は、TurboVイオン源を備えたハイブリッドトリプル四重極リニアイオントラップ質量分析計で行った。この機械は陽イオンモードで操作した。イオン源電圧は、セラミドおよびセレブロシドリピドミクスに関しては5500Vに設定し、ガングリオシドリピドミクスに関しては4500Vに設定し、イオン源温度は400°Cに設定した。合成標準品を用い、衝突エネルギーおよびデクラスタリング電位を各脂質クラスに最適化した。各スキャンに20秒の滞留時間を用いた。Sullardsらの記載に基づいて、マルチプルリアクションモニタリングスキャンモードを用いた。エイコサノイドは固相抽出を用いて抽出した。ブチル化ヒドロキシトルエンを01含む10メタノールで血漿150μlを抽出した。データの正規化および内因性脂質の定量のために、既知量の非内因性合成内部標準で試料をスパイクした。各標準原液を含む内部標準混合物を作成し、脂質抽出に用いた。StrataX33umSPEカートリッジをHPLCグレードメタノールでコンディショニングし、次いで超純水でコンディショニングした。試料をSPEに添着し、次いで35メタノールで洗浄した。アセトニトリルでエイコサノイドを溶出し、溶出試料を窒素雰囲気下で乾燥させた。最終試料抽出物をメタノールで再構成し、質量分析法で直接に分析した。エイコサノイドの分析において、以下のように高速液体クロマトグラフィー分析を行ったクロマトグラフ装置には、CTCHTCPALオートサンプラー、RheosAllegroUHPLCポンプ、45°Cに設定された外部カラムヒーターおよびスイッチングバルブからなるものを用いた。PhenomenexJupiter、250×20mmid5μmHPLCカラムを用いて分離を行った。抽出された試料、各10μlを分析用カラムに注入し、流速300μl分で質量分析計に射出させた。脂質検体分離のために、01ギ酸を含むアセトニトリル水を含む溶媒Aと、アセトニトリルイソプロパノールの溶媒Bとでグラジエントを用いた。グラジエントは以下のように構築した0分0B6分20B650分55B100分55B120分100B140分100B1450分0B180分0B。脂質抽出物をHPLCMSMSによって分析した。MS分析は、TurboVイオン源を備えたハイブリッドトリプル四重極リニアイオントラップ質量分析計で行った。この機械は陰イオンモードで操作し、イオン源電圧は4500Vに設定した。入手可能な合成標準品を用い、衝突エネルギーおよびデクラスタリング電位を各脂質クラスに最適化した。Deemsらの記載に基づいて、マルチプルリアクションモニタリングスキャンモードを用いた。データ処理は以下のように行った初めに、保持時間を処理し、内因性標準品を用い、適切な場合にはInformationDependentAcquisition試験によって各ピークの同定を行った。検出されたピークおよび保持時間に従って生データを自動で処理した。実際の脂質ピークからバックグラウンドノイズを分離するために厳密なカットオフを用いた。各試料を検査し、厳密な判定基準を満たした時にのみ受け入れた。検出されたピークのピーク面積カウントを、対応する脂質名のリストに変換した。濃度を引き出すために、脂質を、内部標準および試料量に対して正規化した。外部標準品をスパイクした対応するポスト抽出物に対する合成内部標準の比率および、抽出されたマトリックスおよび溶媒のMS分析を、分析の品質管理として役立てた。さらに、抽出された参照血漿試料を、機械の性能をモニタリングするために分析した。試料分析の前に、合成または単離された標準品を用いて校正線を得た。用途に基づき、対象とする内因性脂質または検体と同様な特性を有する合成標準品を選択した。校正線は、予想される定量範囲を含む最低限の5つの基準点からなる。校正線は、モニターされる各脂質クラスの定量ダイナミックレンジ、例えば直線定量限界を決定するため用いた。用いた内部標準は内因性脂質と同様な挙動を示すため、それらを内因性脂質種を定量するために用いた。校正線は、内因性脂質の定量に用いた同じ内部標準に基づいた。各プラットフォームに関して、実際の脂質ピークからバックグラウンドノイズを分離するために厳密なカットオフを用いた。各試料を検査し、厳密な判定基準を満たした時にのみ受け入れた。検出されたピークの質量およびカウントを、対応する脂質名のリストに変換した。濃度を引き出すために、脂質を、内部標準および試料量に対して正規化した。統計解析対照群と患者群との間の脂質濃度の変化率を以下のように算出した100対照群におけるAVGC独立な二標本の平均の差の検定およびマンホイットニーのU検定のp値に基づいて、統計的有意性を判定した。さらに、患者と対照とを最もよく分離する脂質分子および濃度カットオフを見出すためにROC曲線を用いた。感度は、正しく同定された患者数を患者総数で割ったものとして算出される。特異度は、正しく同定された対照数を対照総数で割ったものとして算出される。各脂質濃度、脂質対脂質比および脂質対臨床濃度比に関して感度と特異度を算出した。重要なバイオマーカーは、t検定によるP値が005であるか、あるいは感度60であり特異度40である分子または比率と定義した。さらにまた、改善された診断能力を明らかにするために、脂質の組み合わせを用いるロジスティック回帰モデルの例を表7に示す。患者と対照を互いに分離することができる脂質の種々の組み合わせを見出すためにロジスティックモデルを当てはめた。最初に、すべての脂質を可能な説明変数としてセットし、段階的方法を用い、エントリ有意水準を01とし、ステイ有意水準を005として用いるモデルを選択した。2つの重要な脂質、89DHETおよび15HETEが見出された。このモデルにおいてこれら2つの脂質を用いる場合、AUC値は08056である。増加したエントリ値およびステイ値を用いれば、さらに1つの脂質、15HETrEがこのモデルに含まれ、これはAUC値08106を与える。増加したエントリ有意性値およびステイ有意性値を用い同じモデルに当てはめた。このことは、このモデルに脂質を選択するため用いた基準が、前のモデルほど厳密ではないことを意味する。これらの緩い基準を用いて、このモデルに6つの脂質15HETE、15HETrE、Cer、Cer、9HODEおよび5HETEが選択された。これらの脂質では、AUC値は08788である。結果治験試料群において、クレアチンキナーゼ値は、対照および患者において実質的に同一であった。従って、この従来用いられてきた酵素マーカーでは、スタチン誘発性筋障害を予測または診断することができなかった。他方では、リピドームバイオマーカーは、スタチン誘発性筋障害の重要なバイオマーカーと考えられた。本治験において、上記の様に、全部で290の脂質分子を定量した。これらの内、27の脂質分子が、セットの統計基準に基づいて重要なバイオマーカーであった。脂質分子濃度に基づく重要なバイオマーカー候補を表2に示す。異なる脂質対脂質比としてそれらのレベルが表される場合、リピドームバイオマーカーとしての診断的価値は増加する。比率に基づくバイオマーカー候補を表3および4に示す。同定されたバイオマーカー候補の中から選択される好ましい実施形態を表5および6に示す。図1~3のデータは、脂質の3つの異なる組み合わせが、スタチン誘発性筋障害を予測するバイオマーカーであったことを示している15HETE、15HETrE、Cer、Cer、9HODEおよび5HETE89DHET、15HETEおよび15HETrEならびに89DHETおよび15HETE。要約すれば、本治験は、スタチン誘発性筋毒性の新規脂質マーカーを提供する。治験試料群において、クレアチンキナーゼ値は、対照および患者において実質的に同一であったので、リピドームバイオマーカーはスタチン誘発性筋毒性のより具体的な高感度マーカーであった。"