"ポリマー担体の表面へ付加された複数の金属ナノ粒子を含む多重モード検出剤であって、前記金属ナノ粒子または前記ポリマー担体へ付加された1種以上の標的特異的結合剤をさらに含む、前記検出剤。前記金属ナノ粒子が、金、銀、コバルト、マンガンおよび鉄からなる群から選択される1種以上の金属および金属酸化物を含む、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記金属ナノ粒子が金を含む、請求項2に記載の多重モード検出剤。前記ポリマー担体がポリε-カプロラクトンを含む、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記ポリマー担体がポリd,l-ラクチド-コ-グリコリドを含む、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記1種以上の標的特異的結合剤が、抗体、Fab断片またはその結合断片である、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記1種以上の標的特異的結合剤がEGFR特異的抗体である、請求項6に記載の多重モード検出剤。前記1種以上の標的特異的結合剤が、細胞表面受容体を特異的に標的化するペプチド配列である、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記1種以上の標的特異的結合剤が、EGFRを特異的に標的化するペプチド配列である、請求項8に記載の多重モード検出剤。前記1種以上の標的特異的結合剤が、アルギニン-グリシン-アスパラギン酸塩トリペプチドである、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記1種以上の標的特異的結合剤が、α-V-βIIIインテグリン受容体に結合する、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記ポリマー担体が修飾されたポリε-カプロラクトンを含む、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記ポリマー担体が露出したチオール基を有するゼラチンの少なくとも1つの層を含む、請求項12に記載の多重モード検出剤。前記金属ナノ粒子が金を含む、請求項13に記載の多重モード検出剤。前記金属ナノ粒子が約2ナノメートル~約30ナノメートルである、請求項14に記載の多重モード検出剤。前記ポリマー担体が約500ナノメートル~約10ミクロンである、請求項1または15に記載の多重モード検出剤。前記標的特異的結合剤が、抗体およびペプチド配列からなる群から選択される、請求項16に記載の多重モード検出剤。前記ポリマー担体が画像化剤をカプセル化する、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記画像化剤が、蛍光団、放射標識、X線造影剤およびポジトロン放出断層撮影法用薬剤からなる群から選択される、請求項18に記載の多重モード検出剤。前記画像化剤が近赤外蛍光色素である、請求項19に記載の多重モード検出剤。前記金属ナノ粒子が約10~約20nmである、請求項15に記載の多重モード検出剤。前記ポリマー担体が約1.5ミクロンである、請求項16に記載の多重モード検出剤。前記標的特異的結合剤が前記金属ナノ粒子へ付加される、請求項1に記載の多重モード検出剤。前記標的特異的結合剤が前記金属ナノ粒子および前記ポリマー担体へ付加される、請求項1に記載の多重モード検出剤。多重モード画像化剤を製造する方法であって、aポリマーコア粒子を製作する工程と;b前記ポリマーコア粒子に少なくとも1つのコーティングを添加してポリマー担体を形成する工程と;c1種以上の金属ナノ粒子を前記コーティングへ付加する工程と;d前記少なくとも1つのコーティングまたは1種以上の金属ナノ粒子を標的特異的結合剤により官能化する工程とを含む方法。前記ポリマーコア粒子がポリε-カプロラクトンを含む、請求項25に記載の方法。前記1種以上の金属ナノ粒子が、金、銀および鉄からなる群から選択される1種以上の金属および金属酸化物を含む、請求項25に記載の方法。前記金属ナノ粒子が金を含む、請求項27に記載の方法。前記金属ナノ粒子が約2ナノメートル~約30ナノメートルである、請求項25に記載の方法。前記ポリマー担体が約500ナノメートル~約10ミクロンである、請求項25に記載の方法。前記標的特異的結合剤がEGFR特異的抗体である、請求項25に記載の方法。前記標的特異的結合剤が、アルギニン-グリシン-アスパラギン酸塩トリペプチドである、請求項25に記載の方法。前記標的特異的結合剤がα-V-βIIIインテグリン受容体に結合する、請求項25に記載の方法。前記ポリマー担体が約1.5ミクロンである、請求項25に記載の方法。前記ポリマーコア粒子の製作が、前記ポリマーコア粒子内に画像化剤をカプセル化することをさらに含む、請求項25に記載の方法。前記画像化剤が、蛍光団、放射標識およびポジトロン放出断層撮影法用薬剤からなる群から選択される、請求項35に記載の方法。前記少なくとも1つのコーティングがチオールで修飾したゼラチンである、請求項25に記載の方法。前記金属ナノ粒子が約10~約20nmである、請求項25に記載の方法。前記標的特異的結合剤が、抗体、Fab断片またはその結合断片である、請求項25に記載の方法。1.組成物本明細書において開示されるのは多重モード検出剤およびそれを作製する方法である。かかる薬剤は、口腔癌、食道癌、胃癌および結腸癌等の表在性腫瘍病巣のより効果的な早期診断を促進する。本明細書において開示される検出剤の態様は多重モード検出剤であり、各々はポリマー担体の表面に付加された複数の金属ナノ粒子を含む。各検出剤は、金属ナノ粒子またはポリマー担体へ付加された1種以上標的特異的結合剤をさらに含む。多重モード技術は、多重モード検出剤への標的特異的結合剤の局所投与に部分的に基づく。本明細書において使用される時、標的特異的結合剤という用語は、標的の分子または構造への親和性を有し、ファンデルワールス力、ロンドン力、共有結合、イオン結合、水素結合またはこれらの相互作用の組み合わせを介して標的分子または化合物と相互作用または会合する分子または化合物を意味する。本明細書において開示される組成物は1種以上の画像化剤もカプセル化することができる。本明細書において使用される時、カプセル化するという用語は、ポリマー担体内に封入されることまたはポリマー担体と会合することを意味する。カプセル化は、ポリマー担体の表面でのまたはポリマー担体内での分子または化合物の会合を含むことができる。かかる画像化剤は、蛍光団、放射標識、X線造影剤、RAMAN分光法用薬剤およびポジトロン放出断層撮影法用薬剤を含む。蛍光団の例は、ローダミン、フルオレセイン、イソチオシアネート、フィコエリトリン、フィコシアニン、フルオレサミンおよび金属キレートを含む。放射標識の例は、3H、123I、125I、131I、32P、35S、14C、51Cr、36Cl、57Co、55Fe、59Fe、90Y、99mTcテクネチウム99の準安定異性体、および75Seを含む。さらに、X線造影剤は、ディアトリゾエートHypaque50、メトリゾアートIsopaque370、イオキサグラートHexabrix、イオパミドールIsovue370、イオヘキソールOmnipaque350、イオキシランOxilan350、イオプロミドUltravist370およびイオジキサノールVisipaque320を含む。他の薬剤は、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシルTEMPO基、DID蛍光色素アナログ、および全重水素化したアルキルホスホニウム基またはアリールホスホニウム基を含む。粒子内に画像化剤をカプセル化する方法は当該技術分野において公知である。例えば、溶媒置換方法は核酸、低分子およびペプチドのカプセル化に使用されている例えばOsteretal.JournalofControlledRelease20061113:371-381;Ribeiroetal.FoodHydrocolloids221:12-17を参照されたい。ポリマー担体は任意の構造であり、画像化剤のカプセル化および金属ナノ粒子の付加を可能にする材料から構成され得る。特定の実施形態において、ポリマー担体は、1種以上のシリカ、ポリε-カプロラクトン、ポリd,l-ラクチド-コ-グリコリド、および/またはその修飾物を含むコア粒子から構築することができる。コア粒子は色素または他の画像化剤の凝集でもあり得る。コア粒子の生産のために有用な他の材料は、ポリチオラート、システイン含有ペプチド、ポリアクリレート、ポリアクリル酸、ポリビニルピロリドンPVP、ポリエチレングリコールPEG、ポリヌクレオチド、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリ核酸、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアリルアミンおよびポリアミノ酸、多糖特にキトサン、カルボフィル、カルボマーおよびカルボポール、ポリジメチルアミノアルキルメタクリレートおよびポリジメチルアミノアルキルアクリレート等のポリマー、ならびにコポリマーのポリジメチルアミノアルキルメタクリレート-コ-トリメチルアミノアルキルメタクリレートおよびポリジメチルアミノアルキルアクリレート-コ-トリメチルアミノアルキルアクリレートを含む。担体を生産する方法は、当該技術分野において公知であり、単一エマルジョン方法および溶媒置換方法を含む例えばFurtadoMosqueiraetal.JournalofPharmaceuticalSciencesSpecialIssue:Papersfromthe1999MacromolecularDrugDeliveryConference2000895:614-626;Roscaetal.JournalofControlledRelease2004992:271-280を参照されたい。多重モード検出剤の特定の態様は、ポリマー担体のコア粒子に付加されるかまたはポリマー担体のコア粒子と会合する1種以上のゼラチン層を含む。本明細書において使用される時、ゼラチンという用語は、水溶液を吸収することができ、ゲルを形成できる任意の親水性物質または材料を意味する。例示的なゲル化材料は、ゼラチン、多糖、セルロース、コラーゲン、ケラチンおよびポリケタールおよびβ-ラクトグロブリンを含む。特定の実施形態において、ゲル化材料は生体分解性または生体適合性である。ポリマー材料を調製する方法は、当該技術分野において周知である例えばPapisovM.I.etal.Biomacromolecules20056:2659-2670;Mathiowitzetal.Nature,1997386:410-414;Tsungetal.AAPSPharmSci.200131:Article11を参照されたい。ゼラチン層またはコア粒子は標的特異的結合剤を含む様々な基により誘導体化することができる。有機ポリマーの誘導体化を実行して、それらの表面で選択された反応基を曝露することができる例えばTownsend,S.A,etal.Biomaterials20072834:5176-5184;Weiss,B.,etal.BioconjugateChemistry2007184:1087-1094;andGindy,M.E.,etal.PMreprints200695:989-990を参照されたい。さらに、タンパク質、ペプチド、抗体および低分子等の標的特異的結合剤をポリマーへ付加することは、当該技術分野において公知である例えば米国特許第7,022,336号;Bumgarneretal.JControlRelease20091372:90-7;Syetal.Biomaterials20103118:4987-94;Balmayoretal.J.R.Soc.Interface201110.1098/rsif.2010.0531を参照されたい。標的特異的結合剤は、標的、リガンド、ペプチド例えばアルギニン-グリシン-アスパラギン酸塩RGDトリペプチド、タンパク質、抗体、Fab断片およびFab’2断片およびペプチド模倣物化合物を結合する低分子であり得る。例示的な標的は、受容体例えばα-V-βIIIインテグリン受容体およびEGFR受容体、リン脂質、糖タンパク質およびタンパク質を含む。特定の態様において、多重モード検出剤は、ポリマー担体の表面へ付加された金属ナノ粒子を含む。ポリマー担体の表面は、本明細書において記載されるようなコア粒子、またはコア粒子の表面に付加されるゼラチン層のどちらかであり得る。金属ナノ粒子の多様性は組成物における使用のために好適である。特定の実施形態において、好適なナノ粒子は本質的に球形の形態である。他の実施形態において、他の形態が使用される。ナノ粒子は金属からなる。特異的実施形態において、金属ナノ粒子は、金、銀および鉄の金属および金属酸化物を含む。金属ナノ粒子は均質、または2つ以上の金属からブレンドされ得る。ナノ粒子の表面は、標的特異的結合剤による官能化のために好適な1種以上の化学的反応基を有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子の表面は単一タイプの複数の均一に分布した反応基を含む。使用のために好適なナノ粒子のいくつかの非限定例は、金、チオール残基、架橋された鉄、アミノプロピルシリル酸化アシルCLIO保護基、銀、アミン有機ポリマー、COOHまたはNH2またはCOOHの量子ドットである。金属ナノ粒子のサイズ例えば平均中間直径は、約2nm~約100nm;約5nm~約50nm;約2nm~約30nm;および約10nm~約20nmの範囲である。1セットのナノ粒子内のサイズ分布は正規分布であるが、しかしながら、特定の適用のために、セットは二峰性タイプまたは他のタイプの分布等の他のサイズ分布を有することができる。ナノ粒子のサイズ分布および平均直径は、光散乱、電子顕微鏡法およびサイズ排除クロマトグラフィーを含むが、これらに限定されない当該技術分野において公知のいずれか方法によって測定することができる。特異的実施形態において、多重モード検出剤は、ポリε-カプロラクトンへ吸着されたコロイド金Au-PCLまたはシリカマイクロ粒子および蛍光ガイド散乱技術を含む。造影が促進された蛍光画像は疑わしい病巣の局在の良好な決定を支援するが、OCTは蛍光ガイダンス下で使用されて、組織形態を可視化し、従って、新生物疾患のための確認ツールとして役立つ。本明細書において開示される多重モード検出剤は公知の画像化技法において有用である。例えば、多重モード検出剤は光干渉断層撮影法OCT画像化において使用することができる。他の検出方法は、蛍光顕微鏡検査法、電子常磁性共鳴法、ラマン分光法およびポジトロン放出断層撮影法を含む。特定の実施形態において、多重モード技術はコア材料としてPCLまたはシリカのマイクロスフェアを使用して構築される。コア材料は図1において示されるように近赤外蛍光色素をさらに取り込む。単一エマルジョン方法を用いて色素をカプセル化するコア粒子を形成することができる。図1中に示される実施形態において、取り込みはセチルトリエチルアンモニウムブロミドの存在下において実行される。図1において、近赤外コア粒子10を含み、アミンで修飾したPCL粒子すなわちポリマー担体は、単一エマルジョン方法に従って構築される。PCLポリマー担体10は公知の技法に従ってチオール化されてチオールで官能化したポリマー担体20を形成する。図1中に示される実施形態において、陽イオン性PCLマイクロ粒子表面をチオール化したゼラチンで修飾して、コロイド金ナノ粒子3010nm~20nmの共有結合による付加を可能にする。Au-PCLマイクロ粒子40の表面は、EGFR特異的抗体50等の標的特異的結合剤で修飾することができる。特定の実施形態において、標的特異的結合剤はα-V-β-IIIαvβ3インテグリン受容体の標的化のためのアルギニン-グリシン-アスパラギン酸塩RGDトリペプチドである。図1において示される実施形態において、750nmの吸収スペクトルを持つDID蛍光色素アナログは近赤外色素として前癌性病巣の蛍光ガイドOCT画像化のために使用される。多重モード検出剤は、局所投与に際して、特異的に特定の細胞へ結合することができる。特定の実施形態において、細胞は前癌性であり、かかる癌細胞上で過剰発現される受容体とRGDおよびEGFRの相互作用を介して結合される。かかる結合が起こる場合、PCLコアから生じる蛍光造影は病巣の局在の良好な決定を支援する。次いで、OCTは蛍光ガイダンス下で使用されて、組織形態を可視化し、従って、癌存在のための早期診断ツールとして役立つ。本明細書において開示される組成物は、薬学的に許容される不活性担体物質中で、ルーチンの方法によって、経口、局所、または非経口例えば鼻腔内、皮下、筋肉内、静脈内、または動脈内投与することができる。組成物は、0.25μg/kg/日~5mg/kg/日の投薬量、および1μg/kg/日~500μg/kg/日の投薬量で投与することができる。投与の最適な投薬量およびモードは、容易に従来のプロトコルによって決定することができる。2.製作の方法本明細書において開示される態様は、多重モード画像化剤を製造する方法を含む。特に、方法はポリマーコア粒子の製作を含む。例えば、コア粒子は画像化剤の存在下において、溶媒例えばジクロロメタン中にPCL等のポリマーを溶解することによって生産される。かかる混合物は、溶媒中でポリマーの混合物および画像化剤が水相と乳化される単一エマルジョン方法を行って、水中油型O/Wエマルジョンを生産することができる。検出剤のコア粒子はコア粒子内にカプセル化された画像化剤により形成される。画像化剤は検出剤をPET装置等の検出装置において可視化する。さらに開示された方法の特定の態様は、ポリマーコア粒子へ少なくとも1つのコーティングを添加してポリマー担体を形成することを含む。例えば、かかるコーティングはゼラチンを含む。コア粒子の表面はチオール化したゼラチンにより修飾することができる。チオール化のために、ゼラチンの溶液はチオール化剤例えば2-イミノチオラン中で調製することができる。チオール化したゼラチンのチオール官能基SH-を、使用されるポリマーのアミノ基の表面へ容易に付加して、検出剤のコア粒子を作製することができる。特定の態様において、方法は1種以上の金属ナノ粒子を多重モード検出剤へ付加することをさらに含む。これは、例えば、生物学的システムにおいて反応しない金属例えば金、銀、酸化鉄を使用して達成することができ、粉砕されてナノメートルサイズの粒子を生産する。かかる粒子は当該技術分野において公知の様々な手技から得ることができる例えばMcFarlandetal.J.Chem.Educ.2004814:544A;LunaMartinezetal.Mater.Sci.Forum:Adv.Elec.Microscop.Nanomat.2010644:51-55;Gardea-Torresdeyetal.JournalofNanoparticleResearch199913:397-404;Zhouetal.Chem.Mater.1999119:2310-2312を参照されたい。ナノ粒子は、Sigma-AldrichSt.Louis、MOおよびNanostructuredAmorphousMaterials,Inc.Houston、TXから市販で得ることもできる。多重モード検出剤は、クエン酸ナトリウムによるテトラクロロ金酸の還元多重モード検出剤の表面へ付加される20~30nm金粒子の形成をもたらすによる金ナノ粒子のコーティング等の公知の手技を使用して、金属ナノ粒子により覆うことができる。2nm~10nmの金ナノ粒子については、水素化ホウ素ナトリウムを使用する。特定の実施形態において、金属ナノ粒子を使用して標的特異的結合剤付加を促進することができ、それは光を強く反射することによって画像化造影を促進するだろう。ナノ粒子の表面は、公知の方法論を用いて合成することができる直線状のペプチド配列例えばACD/CRG/DCF/CGG/GGG/COOH等の標的特異的結合剤により官能化することができる。3.キット多重モード検出剤の調製に必要な1種以上の成分は、キットの形態で都合よく提供することができる。キットは、開示された方法に従って官能化された多重モード検出剤を調製するために成分の使用説明書に加えて、カップリング反応、ブロッキング反応または非ブロッキング反応のいずれかの実行に有用な1種以上の試薬を含むことができる。キットは包装材料も含むことができる。開示は以下の実施例によってさらに説明される。実施例は説明の目的のためのみに提供される。それらは開示の範囲または内容を限定するものとして決して解釈されるべきでない。実施例1早期結腸癌のより効果的な診断のためのナノテクノロジーベースの多重モードアプローチ1.5μmの平均サイズを持つ近赤外蛍光色素で標識したPCLマイクロ粒子は、単一エマルジョンプロセスによって製作され、チオールで修飾したゼラチンコート上への吸着によって20nmのコロイド金により表面コートされた。次いで、これらの粒子をシステイン基を有するアルギニン-グリシン-アスパラギン酸塩RGDトリペプチドにより官能化して、チオール-金共有結合を使用して金表面へ付加し、α-V-β-IIIαvβ3インテグリン受容体前癌性上皮細胞上で過剰発現されるを効果的に標的化する。官能化効率の予備的な試験を、AmericanTypeCultureCollectionATCC、Richmond、VAからのHT29およびSW480結腸癌細胞株で実行したSainsbury,etal.2007J.Phys.Chem.C,111:12992-12999。以下は使用した方法論の簡潔な記述である。高度に操作されたAu-PCLマイクロスフェアを製造して造影剤として使用した。金ナノ粒子20nmのサイズを使用してRGD付加を促進し、光を強く反射することによってOCT画像化造影を促進する。ナノ粒子の表面は、Tufts大学MA、USAの研究中核施設で合成された、直線状の配列ACD/CRG/DCF/CGG/GGG/COOHを持つRGDにより官能化された。このペプチドは、前癌性の上皮細胞によって過剰発現されるanb3-インテグリン受容体を特異的に認識する。他の配列を同様に試験したが、この配列は、最近の研究において使用される4つの癌細胞株ヒト結腸腺癌グレードII-HT29、ヒト結腸腺癌SW480、ヒト子宮頸癌HeLaおよびヒト食道癌HET1Aに対して最も高い親和性を示した。NIR蛍光色素D-12731[Invitrogen、USA]、DiRとしても公知を使用して、これらのマイクロ粒子を標識し、装置の蛍光チャンネルにおいて可視化する。簡潔には、1gのPCLを16.7mlのジクロロメタンCH2Cl2中に溶解し、次いでDiR色素10μMの濃度を添加した。生じた油相混合物を、SilversonホモジナイザーSilverstoneMachinesLtd、CA、USAを8000rpmおよび室温で5分間使用して、333mlの脱イオン水抵抗:18.2MW;MilliporeCorp.、USA中の1gの臭化セチルトリメチルアンモニウムCTABの水相と乳化して、水中油型O/Wエマルジョンを生産した。次いでエマルジョンを室温で24時間撹拌して、ジクロロメタンを蒸発させ、PCLマイクロ粒子を形成凝固させた。生じたマイクロ粒子懸濁物を4000rpmで10分間遠心分離し、ペレットを水で2~3回洗浄して過剰なCTABを取り除き、次いで冷凍乾燥した。次いで、マイクロ粒子を、クエン酸ナトリウムによるテトラクロロ金酸の還元20~30nm金粒子の形成をもたらすによる標準的手技を使用して製作された金ナノ粒子で覆った。クエン酸金ナノ粒子を付加するために、PCL粒子の表面をチオール化ゼラチンにより最初に修飾した。チオール化のために、ゼラチン溶液を調製し、2-イミノチオラン酸性および中性のpHで安定した環状チオイミダート化合物と共にインキュベーションした。全体では、1gのゼラチンを100mlの蒸留水中に溶解し、次いで変動量の2-イミノチオラン10~100mg/ゼラチンgと共に室温で15時間インキュベーションした。2リットルビーカー中で繰り返し水を取り替えて、5mM塩酸、続いて1mM塩酸溶液に対して繰り返し透析を各々24時間行って未反応イミノチオランを取り除いた。精製したチオール化ゼラチンをさらなる使用のために冷凍乾燥し、4°Cで保存した。チオール化ゼラチンのチオール官能基SH-は、PCLマイクロ粒子の上のCTABのアミノ基の表面へ容易に付加することができる。これを達成するために、1gのPCL-CTABマイクロ粒子を350mlの精製水中に分散させ、20mlの10mMエチレンジアミン四酢酸EDTA溶液中の100mgのチオール化ゼラチンを添加した。次いで反応混合物を4°Cで1日間強く撹拌した。過剰なチオール化ゼラチンは、4000rpmで10分間の遠心分離によってチオ官能化PCL粒子から除去した。水による2回の洗浄後に、ペレットを150mlの水中に再分散した。5湿重量の金ナノ粒子を迅速に撹拌されているチオ官能化PCL粒子の中へ1滴ずつ徐々に2~3時間添加し、次いで4°Cへ移して一晩穏やかに撹拌した。この後、サンプルを遠心分離し、ペレットを水中に再び分散させ、冷凍乾燥した。次いでRGDペプチドをマイクロ粒子へ付加した。RGD0.1nMを2mlの蒸留水で希釈した。合計で200mgの十分に特徴づけられたAu-PCLナノ粒子を50mlの脱イオン水中に分散させた。この分散は、100mlの分散させたAu-PCLナノ粒子を含有する2つの三角フラスコへと分けられた。両方の三角フラスコをアルミニウムフォイルにより包んで、光曝露を阻害した。1つの三角フラスコ中に、1.5mlのRGDを添加し、4°Cで48時間撹拌した暗所において。他のフラスコ中に、同じ条件下で1.5mlのRGDを添加し、次いで20mgのTrout試薬を添加し、4°Cで48時間撹拌した。続いて反応混合物を遠心分離してRGD結合ナノ粒子を回収し、蒸留水で2回洗浄し、遠心分離した。次いで5mlの水をマイクロ粒子へ添加し、凍結乾燥して、精製した粒子を得た。製作後に、金ナノ粒子でコートされたPCLマイクロ粒子を、Multisizer商標3BeckmanCoulter、CA、USAを使用して、サイズおよびサイズ分布について特徴づけた。この装置は、電解質溶液中の非伝導性粒子によって生産された電気抵抗の変化を測定する。マイクロ粒子を水で希釈し、希釈した懸濁物を、粒子サイズ測定に好適な濃度が得られるまで、標準的電解質溶液を含有するガラスビーカーへ添加した。測定はすべて室温で実行した。1.6μmの平均サイズで0.5μmの標準偏差が観察された。マイクロ粒子の走査電子顕微鏡画像を図2中に示す。20kVの加速電圧のHitachiS-4800HitachiHigh-Technologies、UK電界放出走査顕微鏡を使用した。冷凍乾燥したマイクロ粒子の金でコートされた表面形態を反射モードで観察した。蛍光チャンネルを備えた特注の倒立顕微鏡を、細胞培養で、および研究の後の期間で組織の薄いサンプル50μmの厚さで、画像化造影剤を予備的に試験するために使用した。倒立顕微鏡プラットフォームはLeitzLaborlux正立顕微鏡Leitz、ドイツの修飾によって構築された。キセノンアークランプは光の連続的な広いバンドを提供し、照射源として蛍光励起のために使用され、ハロゲンランプは照射源として明視野画像化のために使用された。光ガイドファイバー束およびリレー光学を使用して、Nikon対物レンズ100×油浸;1.25開口数[NA]へキセノンランプから励起光線を送った。サンプルからの蛍光シグナルは同じ対物レンズによって集められ、電荷結合デバイスCCDカメラRoleraXR;Q-Imaging、BC、カナダへリレーされた。蛍光モードでは、NIRフィルタモデル41037;Chroma、VT、USAをCCDカメラの前に置いて、サンプルからの後方反射シグナルを却下し、蛍光色素からの放射のみがCCDセンサに到達することを可能にする。明視野画像化において、コンデンサレンズを使用して、ハロゲン源からサンプルへ照射光線を送る。画像は同じ対物レンズによって拡大され、CCDセンサへリレーされた。先にPhysicalSciencesMA、USAで構築された、スペクトル領域SDアプローチに基づく既存のOCT画像化システムを、OCT画像化のために使用した。蛍光チャンネルを装置のプローブへ追加した。データ収集ソフトをアップグレードして、同時OCT蛍光画像を可能にした。SD-OCT/蛍光画像システムは、光源835および1310nm、光ファイバー干渉計2×2ファイバースプリッター、サーキュレーター、ならびにリファレンスおよびサンプルのアームオプティックス、スペクトル検出ユニット回折格子、分光計レンズ系およびデジタルInGaAsカメラ、画像化プローブ、およびデータ収集および処理装置コンピューター、カメラボードおよびディスプレイの5つのサブシステムからなる。画像化プローブは、OCTおよび蛍光画像の両方を可能にする2つのチャンネルを有する。このプローブは、NIR色素を励起する745nmのレーザーダイオードモデルQFLD745;QPhotonics、MI、USAを使用する励起ポート、およびOCT画像化ポートを有する。OCTチャンネルは、光線コリメーター、OCTラスターを生成する2つの走査ミラーおよび5×走査レンズモデルLSM03;Thorlabs、NJ、USAからなる。カスタムダイクロイックフィルターAndoverCorporation、MA、USAを使用して、サンプル上でOCTおよび蛍光励起光線を組み合わせて、同時にOCTおよび蛍光画像の両方を採取する。NIR促進応答カメラRoleraXRを蛍光画像のために使用する。励起光は、NIRフィルタモデル、ChromaTechnologyCorp.、VT、USA41037によって遮断される。ベンチトップ型画像化プローブは、組織において約10μmの距離分解能でラスターOCT画像最大7×7mm、および比較的高いフレームレート20フレーム/秒以上、画像解像力に依存しての比較的大きな視野の蛍光画像25×25mmを採取することができる。上で生産された多重モード検出剤の試験は、nu/nuヌードマウス中のHT29結腸癌異種移植モデルで実行された。マウスの左脇腹下に細胞を接種し、腫瘍塊は約10日間増殖させた。屠殺に続いて、腫瘍を採取し、対照非修飾Au-PCLマイクロ粒子およびRGD修飾したAu-PCLマイクロ粒子により処理した。腫瘍組織および正常組織の切片は、腫瘍標本については10スライドおよび正常組織サンプルについては10スライド上に20μm厚で切断した。組織サンプルを組織包埋媒質TEM中で維持し、PBSで洗浄して包埋媒質を除去した。50mgのDIR-PCLAu粒子冷凍乾燥したを対照粒子非修飾として使用した。それらを2mg/mlでPBS中で分散した。凝集があれば、4°Cで30分間撹拌を実行した。50mgのRGD修飾DIR-PCL-Au粒子懸濁物は、25mlの水中の50mgのDIR-PCL-Au粒子への2mgの純粋なRGDの添加によって作製した。このサンプルを4000gで10分間遠心分離し、ペレットを2mg/mlでPBS中に分散させた。次いで切片を得て、OCTおよび蛍光顕微鏡検査法を使用して画像化した。RGDで官能化したマイクロ粒子の強い結合および官能化していないマイクロ粒子の弱い結合が、HT29およびSW480の結腸細胞株において観察された。正常組織および腫瘍組織の両方のサンプルでのインキュベーション前後に撮影されたOCTおよび蛍光画像の両方は、腫瘍組織サンプルに対して造影の増加それぞれ散乱および蛍光造影の促進を示した。これらの結果は、蛍光ガイドOCT画像化と組み合わせたRGDで官能化したマイクロ粒子の局所投与が、早期結腸癌の局在のより効果的な決定を支援することを示す。実施例2口腔前癌病巣の検出のためのEGFR標的化金ナノ粒子でコートされたポリε-カプロラクトンマイクロ粒子の開発現在の口腔癌診断は、生検および病理学的分析によって確認される組織変成に基づく。ルーチンの歯科検査において使用できる前癌性病巣に特異的な早期検出技術は、好ましい臨床転帰を提供する。この実施例の主な目的は、口腔中の前癌性病巣の二重検出技術として、表皮増殖因子受容体EGFR標的化金ナノ粒子でコートされたポリε-カプロラクトンAu-PCLマイクロスフェアを開発することであった。蛍光色素をカプセル化したPCLマイクロ粒子直径2mm~3mmは、セチルトリエチルアンモニウムブロミドの水溶液と有機溶媒中のポリマーを混合し、制御された撹拌下で乳化する単一エマルジョン方法を使用して形成された。生じたマイクロ粒子のサイズおよび表面形態は、ポリマー濃度、水相に対する有機相の比、添加率、および撹拌速度によって規定される。これらのパラメータを至適化して、直径1μm~5μmで正に荷電した表面を有するPCLマイクロスフェアを生成した。正に荷電した陽イオン性マイクロスフェア表面をチオール化ゼラチンにより修飾して、チオール-金リンケージを介する金ナノ粒子20nm~40nmの共有結合を可能にした。次いでAu-PCLマイクロスフェアの表面を、水溶液からの吸着によってEGFR抗体により修飾した。処方は、サイズ、表面電荷および形態について特徴づけられた。微分干渉DIC顕微鏡、共焦点反射顕微鏡、および2光子蛍光顕微鏡を使用して、EGFR特異的相互作用を確認する細胞結合研究を実行する。結果から、陽イオン性PCLマイクロ粒子が成功して疎水性の蛍光色素をカプセル化でき、金ナノ粒子およびEGFR特異的抗体により官能化できたことが示される。EGFR標的化マイクロ粒子は、非修飾マイクロ粒子と比較して、HCPC-1を含むEGFRを過剰発現する癌細胞株への非常に効果的な結合も示した。過剰量の可溶性抗体によってEGFR特異的結合を置き換えることができた。EGFR標的化Au-PCLマイクロスフェアは、EGFRを過剰発現する口腔前癌性病巣の検出における反射画像および蛍光画像のための有用なプラットフォームを提供する。インビトロおよびエクスビボのデータ図3および4から、リガンド特異的受容体を過剰発現する前癌性細胞へこの多重モード技術が効率的に結合し、促進された蛍光造影を生産して影響を受けた領域の局在を決定し、続いてOCT画像化を行い癌存在を確認できることが示される。出版物、特許出願、特許、および本明細書において言及される他の参照はすべて、それらの全体を参照として援用される。矛盾が生じる場合には、定義を含めて本明細書に従うものとする。加えて、材料、方法、および実施例は、単に説明的なものであり、限定を意図したものではない。特別に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書において記載されるものと類似または等価である方法および材料を、本発明の実行または試験において使用することができるが、好適な方法および材料は以下に記載される。同等物当業者は、単なるルーチンの実験作業を使用するだけで、本明細書において特に記載された特定の実施形態に対する多数の同等物を認識または確認することができよう。かかる同等物は、以下の請求項の範囲内に包含されることが意図される。"