式式中、X01はSer、Ala、もしくはAibでありX03はSer、Ala、もしくはAibでありX08はMet、Leu、もしくはNleでありX10はAsn、Ala、Val、Asp、Glu、もしくはGlnでありX11はLeu、Ala、Val、Met、Lys、Ile、Arg、Har、もしくはTrpでありX12はGly、Ala、His、もしくはArgでありX13はLys、Ala、Leu、Gln、Arg、His、もしくはTrpでありX14はHis、Leu、Arg、Phe、Trp、もしくはSerでありX15はIleもしくはLeuでありX16はGlnもしくはAsnでありX17はAspもしくはSerでありX18はAla、Leu、Met、Glu、Ser、もしくはPheでありX22はAla、Phe、Glu、Ser、Leu、Asn、Trp、もしくはLysでありX25はHis、Arg、Leu、Trp、もしくはLysでありかつX26はLys、His、Ala、Ser、Asn、もしくはArgであるまたは、式のアミノ酸128、129、130、131、132、133、134、もしくは135を含むが、但し、X18の少なくとも1つがLeuでもMetでもなく、X22がPheでなく、X26がHisでない、式の断片を含む、ポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。式式中、X01はSer、Ala、もしくはAibでありX03はSer、Ala、もしくはAibでありX08はMet、Leu、もしくはNleでありX10はAsn、Gln、もしくはAspでありX11はLeu、Arg、Har、もしくはLysでありX12はGlyもしくはAlaでありX14はHis、Trp、もしくはSerでありX15はIleもしくはLeuでありX16はGlnもしくはAsnでありX17はAspもしくはSerでありX18はAlaもしくはLeuでありX22はAlaもしくはPheでありかつX26はLysもしくはHisであるまたは、式のアミノ酸128、129、130、131、132、133、134、もしくは135を含む、式の断片を含む、請求項1記載のポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。式式中、X01はSer、Ala、もしくはAibでありX03はSer、Ala、もしくはAibでありX08はMet、Leu、もしくはNleでありX10はAsnもしくはGlnでありX11はLeu、Arg、もしくはHarでありX12はGlyもしくはAlaでありX14はHisもしくはTrpでありX16はGlnもしくはAsnでありX17はAspもしくはSerでありX18はAlaもしくはLeuでありX22はAlaもしくはPheでありかつX26はLysもしくはHisであるまたは、式のアミノ酸128、129、130、131、132、133、134、もしくは135を含む、式の断片を含む、請求項2記載のポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。X01およびX03がAlaでありX10がGlnでありX11がArgでありX12がAlaでありかつX14がTrpである、請求項1~3のいずれか一項記載のポリペプチド。X01がAlaでありX03がAibでありX10がGlnでありX11がHarでありX12がAlaでありかつX14がTrpである、請求項1~3のいずれか一項記載のポリペプチド。X18がAlaであるかX22がAlaであるかまたはX26がLysである、請求項1~5のいずれか一項記載のポリペプチド。X18がAlaでありX22がAlaでありかつX26がLysである、請求項6記載のポリペプチド。SPPTHと比較して中性水溶液中で高い溶解度を示す、請求項1~7のいずれか一項記載のポリペプチド。PTH受容体アゴニストである、請求項1~8のいずれか一項記載のポリペプチド。hPTHの親和性より高い親和性でR0状態のヒトPTH1受容体に結合する、請求項1~9のいずれか一項記載のポリペプチド。長さが50アミノ酸未満である、請求項1~10のいずれか一項記載のポリペプチド。アミノ酸配列または、該配列のアミノ酸128、129、130、131、132、133、134、もしくは135を含む、その断片を含む、請求項1~11のいずれか一項記載のポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。アミノ酸配列を含む、請求項12記載のポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。アミノ酸配列または、該配列のアミノ酸128、129、130、131、132、133、134、もしくは135を含む、その断片を含む、請求項1~11のいずれか一項記載のポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。アミノ酸配列を含む、請求項14記載のポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。以下からなる群より選択されるアミノ酸配列または、該配列のアミノ酸128、129、130、131、132、133、134、もしくは135を含む、その断片を含む、請求項1~11のいずれか一項記載のポリペプチドまたは薬学的に許容されるその塩。請求項1~16のいずれか一項記載のポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。固相合成によって合成された、請求項1~16のいずれか一項記載のポリペプチド。副甲状腺機能低下症、高リン酸血症、骨粗鬆症、骨折修復、骨軟化症、関節炎、および血小板減少症からなる群より選択される疾患を有する対象を治療するための方法であって、該疾患を治療するのに十分な量の請求項1~16のいずれか一項記載のポリペプチドまたは請求項17記載の薬学的組成物を該対象に投与する工程を含む、方法。投与経路が、皮下経路、静脈内経路、鼻腔内経路、経肺経路、経皮経路、および経口経路からなる群より選択される、請求項19記載の方法。請求項1~16のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする配列を含む、核酸。プロモーターに機能的に連結された、請求項21記載の核酸。請求項22記載の核酸を含む、ベクター。請求項23記載のベクターを含む、細胞。ポリペプチドが発現する条件下で請求項24記載の細胞を増殖させる工程を含む、該ポリペプチドを作製する方法。前記ポリペプチドを精製する工程をさらに含む、請求項25記載の方法。詳細な説明本発明は、PTH受容体において持続型の活性を有する新しい副甲状腺ホルモン類似体に関する。これらの類似体の例は、SPPTHAAKPTHrPおよびAibSPPTHAAKPTHrPである。下記のように、これらのポリペプチドは、インビトロでは、非Gタンパク質共役R0コンフォメーションのPTH1受容体に対してPTHおよび他の参照ポリペプチドより高い親和性で結合する。従って、これらのポリペプチドは、培養細胞において長時間のcAMPシグナル伝達応答を誘導する。これらのポリペプチドはまた、臨床検査動物においてPTHまたは他の試験類似体と比較して血中カルシウムイオンレベルを長時間増加させた。これらの類似体はインビボでの持続型の特性が確認されたので、副甲状腺機能低下症などの状態の治療剤として有用である。例示的なポリペプチドであるSPPTHAAKおよびAibSPPTHAAKは、ヒトPTH配列に基づくN末端部分およびヒトPTHrP配列に基づくC末端部分を含む。N末端部分およびC末端部分は両方とも、親和性を増強するアミノ酸置換を含む。驚いたことに、これらのポリペプチドは、下記の実施例に示したように、インビトロでは高い結合親和性およびcAMPシグナル伝達効力を示し、インビボでは大きな機能効果を示した。最後に、これらのポリペプチドは、下記のように、野生型PTHポリペプチドに匹敵する高い溶解度を示した。これらの特性に基づいて、これらのポリペプチドは、PTH受容体における長時間の活性が望ましい任意の用途において、例えば、副甲状腺機能低下症の治療に使用することができる。PTHアゴニストのR0結合対RG結合PCT公報WO2009017809に記載のように、Gタンパク質と結合していないが、アゴニストと結合することができる新規のR0状態のPTH受容体が特定された。これまで、2つのGタンパク質共役受容体型であるGタンパク質と結合している型およびGタンパク質と結合していない型を区別することができると考えられていた。GPCRシグナル伝達には、Gタンパク質が受容体によって直接活性化されることが必要である。すなわち、RG状態が形成しなければならず、このRG形成はアゴニストリガンドの結合によって誘導することができる。アゴニストリガンドが結合するとRG状態が誘導されるか、安定化され、相互に、RG状態はアゴニストの高親和性結合を安定化する。GTP、またはGTPγSなどの非加水分解性GTP類似体が結合すると、受容体と共役しているGタンパク質は受容体から解離して、受容体は低親和性状態に戻る。現在では、PTHRなどの一部のGPCRは、GTPγSの存在下でも、従って、恐らく、受容体がGタンパク質と結合していない時でも、ある特定のアゴニストリガンドに高親和性で結合することができる新規の状態を形成できると認識されている。このR0状態の発見に基づいて、PCT公報WO2009017809は、RG状態に加えて、R0状態に高親和性で結合するリガンドの活性半減期が、R0に低親和性で結合するリガンドの活性半減期より長いことについて述べている。この長時間活性は、インビボでのリガンドのバイオアベイラビリティにも薬物動態にも左右されない。それに対応して、作用期間が短いアゴニストは、R0型受容体に対する親和性が低い。以下の実施例に記載のように、インビトロで、SPPTHAAKおよびAibSPPTHAAKとR0型PTH受容体との結合はhPTHと比較してかなり大きく、SPPTHAAKおよびAibSPPTHAAKはインビトロおよびインビボの両方で持続型の活性を示す。従って、本発明のポリペプチドは持続型のPTHアゴニストとして適している。本発明のポリペプチドの作製本発明のポリペプチドは、液相ペプチド合成または固相ペプチド合成によって、および組み合わせ化学を用いたインサイチュー合成によって作製するのに適している。特に、固相ペプチド合成法はヒトPTHの生成において首尾良く適用されており、これらの化合物の生成に使用することができる。ヒトPTHを比較的大規模に生成することに成功したことが、GoudetalJBoneMinRes67811991において報告されている。合成ペプチド合成法は、一般的に、自動合成装置および固相として適切な樹脂の使用を必要とし、固相には望ましいポリペプチドのC末端アミノ酸が取り付けられる。次いで、FMOCまたはBOCをベースとする化学プロトコールを用いて、適切に保護された型の次の望ましいアミノ酸を連続してカップリングすることによって、典型的には、合成が完了するまで、N末端方向にペプチドが伸長される。次いで、ペプチドから、通常、樹脂からペプチドが切断されると同時に、保護基が切断される。次いで、従来法を用いて、例えば、溶媒としてアセトニトリル、イオン対形成剤としてトリフルオロ酢酸を用いた逆相HPLCによって、ペプチドは単離および精製される。このような手順は非常に多くの刊行物において概説されており、例えば、StewartandYoungSolidPhasePeptideSynthesis2ndEditionPierceChemicalCompanyRockfordILを参照してもよい。本発明のポリペプチドはまた、当技術分野において公知の任意の方法によって組換えによって作製することもできる。本発明のポリペプチド、特に、ゲノムにコードされているアミノ酸しか含まないポリペプチドを産生するために、原核生物発現系ならびに真核生物発現系も使用することができる。ポリペプチドの修飾本明細書に記載のいかなるポリペプチドも、N末端修飾またはC末端修飾などの1つまたは複数の修飾を含有してよい。修飾には、アセチル化、アシル化、ADPリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γカルボキシル化、グリコシル化、GPIアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、トランスファーRNAを介したタンパク質へのアミノ酸付加、例えば、アイジニル化、およびユビキチン結合が含まれる。例えば、ProteinsStructureandMolecularProperties2ndEdTECreightonWHFreemanandCompanyNewYork1993、およびWoldFPosttranslationalProteinModificationsPerspectivesandProspectspgs112inPosttranslationalCovalentModificationofProteinsBCJohnsonEdAcademicPressNewYork1983SeifteretalMethodsEnzymol182626646、およびRattanetalAnnNYAcadSci663A62を参照されたい。本発明のいかなるポリペプチドも、異種配列をさらに含み、従って、融合タンパク質を形成してよい。融合タンパク質は、融合パートナー、例えば、精製タグまたは検出タグ、例えば、直接的もしくは間接的に検出することができるタンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質、血球凝集素、またはアルカリホスファターゼ、DNA結合ドメイン、遺伝子活性化ドメイン、精製タグ、または分泌シグナルペプチドを含んでもよい。他の態様において、融合パートナーは、cmyc、ポリヒスチジン、またはFLAGなどのタグでもよい。それぞれの融合パートナーは、1つまたは複数のドメイン、例えば、プレプロトリプシンシグナル配列およびFLAGタグを含有してもよい。他の場合では、融合パートナーはFcタンパク質である。疾患を治療する方法本明細書に記載のポリペプチを用いて、PTH機能不全またはカルシウムもしくはリン酸の不均衡に関連する任意の疾患を治療することができる。前記ポリペプチドは、副甲状腺機能低下症、高リン酸血症、骨粗鬆症、骨折修復、骨軟化症、関節炎、または血小板減少を治療するのに用いられてもよく、対象における幹細胞動員を高めるために用いられてもよい。本発明の治療方法において任意の投与方法を使用することができる。医師は、治療を受けている患者に適した投与を決定するだろう。これは、患者の年齢および大きさ、疾患または状態の重篤度、ならびに治療されている特定の疾患または状態にある程度左右されるだろう。薬学的組成物の処方本明細書に記載の任意のポリペプチドの投与は、対象および疾患状態を治療する化合物濃度をもたらす任意の適切な手段によるものでよい。前記ポリペプチドは、任意の適切な担体物質に溶解されて任意の適切な量で含まれてもよく、一般的に、組成物の総重量の1~95重量の量で存在する。組成物は、経口投与経路、非経口投与経路、直腸投与経路、皮膚投与経路、鼻腔内投与経路、腟投与経路、吸入投与経路、皮膚投与経路、眼投与経路、または頭蓋内投与経路に適した剤形で提供されてもよい。従って、前記組成物は、例えば、錠剤、アンプル、カプセル、丸剤、散剤、顆粒剤、懸濁液、エマルジョン、溶液、ヒドロゲルを含むゲル、パスタ剤、軟膏、クリーム、硬膏剤、水剤、浸透圧送達装置、坐剤、浣腸、注射液、移植片、スプレー、またはエアロゾルの形でもよい。薬学的組成物は従来の薬務に従って処方されてもよい。薬学的組成物は、投与されるとすぐに、または投与後、任意の所定の時間もしくは期間で活性化合物を放出するように処方されてもよい。後者のタイプの組成物は一般に徐放製剤と知られる。徐放製剤には、長期間にわたって体内で実質的に一定の濃度の本発明の薬剤を生じる製剤所定の遅れ時間の後に、長期間にわたって体内で実質的に一定の濃度の本発明の薬剤を生じる製剤体内で比較的一定した有効なレベルの薬剤を維持すると同時に、血漿中薬剤レベルの変動に関連した望ましくない副作用を最小限にすることによって、所定の期間の間に薬剤の作用を持続する製剤薬剤の作用を局在させる製剤、例えば、罹患組織もしくは罹患臓器に隣接して、または罹患組織もしくは罹患臓器の中に徐放組成物を空間的に配置する薬剤投与の利便性を実現する製剤、例えば、組成物を週1回または2週間に1回、投与する製剤および担体または化学誘導体を用いて、化合物を特定の標的細胞タイプに送達することによって薬剤の作用を標的化する製剤が含まれる。胃腸管における吸収ウィンドウが狭い、または生物学的半減期が比較的短い化合物については、徐放製剤の形で化合物を投与することが特に好ましい。問題になっている化合物の代謝速度を放出速度が上回る徐放を得るために、多くの任意の戦略を遂行することができる。一例では、徐放は、例えば、様々なタイプの徐放組成物およびコーティングを含む様々な製剤パラメータおよび成分の適切な選択によって得られる。従って、化合物は、適切な賦形剤を用いて、投与されると化合物を徐放する薬学的組成物に処方される。例には、一単位または複数単位の錠剤またはカプセル組成物、油溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロカプセル、分子複合体、マイクロスフェア、ナノ粒子、パッチ、およびリポソームが含まれる。非経口組成物本明細書に記載のポリペプチドを含有する組成物は、剤形、製剤の中に入れて注射、注入、もしくは移植することによって、または従来よりある無毒の薬学的に許容される担体およびアジュバントを含む適切な送達装置もしくは移植片を介して非経口投与されてもよい。このような組成物の処方および調製は薬剤処方の当業者に周知である。非経口使用のための組成物は単位剤形で提供されてもよく、適切な防腐剤が添加されてもよい数回分の用量を含むバイアルの中に入れて提供されてもよい。組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、注入装置、または移植用の送達装置の形をとってもよく、使用前に水または別の適切なビヒクルを用いて再構成される乾燥粉末として提示されてもよい。活性薬剤の他に、組成物は、非経口的に許容される適切な担体およびまたは賦形剤を含んでもよい。活性薬剤は、徐放のためにマイクロスフェア、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどに組み込まれてもよい。さらに、組成物は、懸濁剤、可溶化剤、安定化剤、pH調整剤、張性調整薬剤、およびまたは分散剤を含んでもよい。前記のように、本発明による薬学的組成物は滅菌注射剤に適した形をとってもよい。このような組成物を調製するために、適切な活性薬剤は、非経口的に許容される液体ビヒクルに溶解または懸濁される。使用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、適量の塩酸、水酸化ナトリウム、または適切な緩衝液を添加することによって適切なpHに調整された水、13ブタンジオール、リンガー溶液、デキストロース溶液、および塩化ナトリウム等張液がある。水性製剤はまた、1種類または複数種の防腐剤を含有してもよい。化合物の1つが水に少ししか溶けない、または水にわずかに溶ける場合、溶解促進剤または可溶化剤を添加することができる。または、溶媒は10~60wwのプロピレングリコールなどを含んでもよい。以下の実施例は、本発明の限定ではなく例示を目的とする。実施例1ポリペプチド合成例示的なペプチドAla112Aib3Gln10Har11Trp14PTHPTHrPおよびAla1121822Aib3Gln10Har11Trp14Lys26PTHPTHrPは、MassachusettsGeneralHospitalBiopolymerCore施設によって合成された。AibおよびHarは、それぞれ、αアミノイソ酪酸およびホモアルギニンに相当する。例示的なペプチドAla1312Gln10Arg11Trp14PTHPTHrPおよびAla13121822Gln10Arg11Trp14Lys26PTHPTHrPは、SigmaAldrichおよびAmericanPeptideCompanyIncによって合成された。全てのポリペプチドを10mM酢酸に溶解し、80°Cで保管した。PACE法またはアミノ酸分析によってポリペプチド濃度を求めた。これらのポリペプチドをそれぞれ以下の表1に示した。ポリペプチド実施例2特徴付けR0RG結合およびcAMP効力PTH、SPPTH、SPPTHAAK、AibSPPTH、およびAibSPPTHAAKとR0型およびRG型のPTH1受容体との結合を、PCT公報WO2009017809に記載の方法または類似方法を用いて測定した。簡単に述べると、非加水分解性ヌクレオチド類似体GTPγSの添加はR0型受容体に有利に働く。例えば、ネガティブドミナントGαsサブユニットを用いた細胞のコトランスフェクションはRG型に有利に働く。結合は、放射性トレーサーリガンドの置換に基づいて測定される。図1Aに示したように、4種類の試験ポリペプチドは、PTHと比較して、R0型のラットPTH受容体と約1~2桁強い結合を示した。特に、SPPTHAAKは2桁超の結合増加を示したの75に対して97のlogEC50。データは4回の実験の平均であり、それぞれの実験を2回繰り返して行った。GraphPadPrism40を用いて、曲線をデータにフィットさせた。それぞれの図の中の挿入図はフィットパラメータを示す。ラットPTH受容体におけるRG結合もまた、hPTHと比較してSPPTHAAKおよびAibSPPTHAAKにおいて高かった。2つの異なる方法ラジオイムノアッセイおよびルシフェラーゼ遺伝子と融合したcAMP応答エレメントを用いて、これらのポリペプチドのcAMP刺激活性も評価した。簡単に述べると、RIAcAMPアッセイは、Okazakietalに記載のように、96ウェルプレートの中に入っているマウス前造骨細胞株であるインタクトなMC3T3E1細胞において行った。細胞を、IBMXの存在下で、様々濃度の示されたリガンドによって室温で30分間、処理した。この後に、緩衝液を除去し、50mMHClを添加することによって反応を終わらせた。次いで、HCl溶解物のcAMP含有量をRIAによって求めた。データは6回の実験の平均であり、それぞれの実験を2回繰り返して行った。GraphPadPrism40を用いて、曲線をデータにフィットさせた。挿入図は、それぞれの曲線のフィットパラメータを示す。cAMP応答エレメントルシフェラーゼ応答を以下の通りに測定した。MC3T3E1細胞を、cAMPPKA経路を介してシグナル伝達を評価するように設計されたプラスミド構築物である、cAMP応答エレメントプロモーターと融合したルシフェラーゼ遺伝子をコードするプラスミドDNAによって96ウェルプレートの中でトランスフェクトした。トランスフェクションの48時間後に、細胞を、ビヒクルまたは様々な濃度の示されたリガンドを含有する培地中で37°Cで4時間インキュベートした。次いで、PromegaSteadyGlo試薬およびPerkinElmerCoEnvisionプレートリーダーを用いて、ルシフェラーゼ活性を発光として測定した。データは3回の実験の平均であり、それぞれの実験を2回繰り返して行った。ビヒクル処理ウェルにおいて得られた未処理の基底値は9434±1303カウント秒であった。GraphPadPrism40を用いて、曲線をデータにフィットさせた。図中の挿入図はフィットパラメータを示す。cAMP効力とR0結合またはRG結合との相関関係も計算した。R0結合とcAMP効力との間には強い相関関係が観察された。RG結合とcAMP効力との間には弱い相関関係が観察された。ヒトPTH受容体を用いてR0結合実験およびRG結合実験を繰り返した。本試験では、DeanetalMolEndocrinol22156662008に記載のように、R0およびRGPTHR1コンフォメーションの競合結合アッセイを、トランスフェクトCOS7細胞から調製された膜において行った。データは3回の実験の平均であり、それぞれの実験を2回繰り返して行った。GraphPadPrism40を用いて、曲線をデータにフィットさせた。挿入図はフィットパラメータを示す。ラット受容体と同様に、SPPTH、SPPTHAAK、AibSPPTH、およびAibSPPTHAAKポリペプチドは、PTHと比較して強いR0結合を示した。ヒト受容体を用いて、cAMP効力アッセイも試験した。本試験では、LLCPCK1細胞から得られ、ヒトPTHR1で安定にトランスフェクトされたHKRKB7細胞を、ビヒクルまたは様々な濃度の示されたリガンドを含有する緩衝液中で30分間インキュベートし、細胞中のcAMP含有量をRIAによって測定した。SPPTHAAK、AibSPPTHAAK、SPPTH、およびAibSPPTHはPTHに似たcAMP効力を示した。データをまとめたものを表2に示した。受容体結合およびcAMP活性化データのまとめ実施例3リガンドを洗い流した後のcAMP応答リガンドを洗い流した後に、SPPTHAAK、AibSPPTHAAK、SPPTH、およびAibSPPTHがcAMP活性を刺激する能力も試験した。cAMP洗い流し応答アッセイは、OkazakietalProcNatlAcadSciUSA10516525302008に記載のように、MC3T3E1細胞が入っている96ウェルプレートにおいて行った。細胞を、ビヒクルまたは示されたリガンドによって室温で5分間、処理した。それぞれのリガンドについて2つのウェルを用いて初期値を得た。これらのウェルの中で、細胞をリガンドおよびIBMXとコインキュベートした。5分間の初期処理後に、緩衝液を除去し、初期ウェルについては、50mMHClを添加することによって反応を終わらせた。他のウェルでは、細胞を緩衝液で3回リンスし、横座標に示したように緩衝液中で様々な時間、インキュベートした。この後に、緩衝液を、IBMXを含有する緩衝液と交換し、細胞をさらに5分間インキュベートした。この後に、緩衝液を除去し、50mMHClを添加することによって反応を終わらせた。次いで、HCl溶解物のcAMP含有量をRIAによって求めた。図7Aおよび7Bに示したように、SPPTH、SPPTHAAK、AibSPPTH、およびAibSPPTHAAKは、cAMP刺激活性をPTHより長期間維持した。従って、これらのポリペプチドには持続型のアゴニスト活性があることが分かる。実施例4マウスにおける研究マウスにおける血中Ca応答もアッセイした。マウスに、最終用量が5nmolkg体重となるようにビヒクルまたは示されたリガンドを皮下注射し、注射後の複数の時間で尾から採血し、BayerRapidLabモデル348血液分析器を用いてCa濃度を評価した。示したように、投与して2時間後、PTHを含む全てのポリペプチドが同様のカルシウムレベルを示した。しかしながら、後の時点では、SPPTH、SPPTHAAK、AibSPPTH、またはAibSPPTHAAKを与えたマウスにおける血中カルシウムレベルは、PTHまたはビヒクルを与えたマウスと比較して高かった。静脈内注射による10nmolkgを用いた類似実験も行い、類似した結果が得られた。図8Eに示したように、絶食条件下で行った類似実験も行った。実施例5ラットにおける研究甲状腺上皮小体切除術を受けているラットに対するポリペプチドの効果も試験した。本試験では、5週齢の雄CrlCDラットをCharlesRiverLaboratoriesJapanIncから入手し、20~26°Cおよび35~75湿度の標準的な実験条件下で1週間、馴化させた。ラットには、水道水ならびに11カルシウム、10リン酸、および250IU100gのビタミンD3を含有する標準的なげっ歯類用飼料を自由に与えた。6週齢ラットに対して甲状腺上皮小体切除術を行った。手術の24時間後に、尾静脈採血からの血清中カルシウムイオンによってTPTXラットを選択した。手術の72時間後のiCaによって、TPTXラットを、5匹または6匹の動物からなる6つの群に分けた。TPTXビヒクル群には、尾静脈から1mlkg体重の用量のビヒクルを静脈内投与した。SPPTH、SPPTHAAK、AibSPPTH、およびAibSPPTHAAKをそれぞれ125nmolkgの用量でTPTXラットに静脈内注射した。血清中のカルシウムおよびリン酸を測定するために、ケタミンを用いてラットを麻酔し、それぞれの注射の後、様々な時間で頚静脈から血液を得た。自動分析器によって血清中のカルシウムおよびリンを確かめた。図10Aおよび10Bに示したように、ポリペプチドを静脈内投与すると血清中カルシウムレベルは長期間増加し、血清中リン酸レベルは低下した。比較のために、125nmolkgおよび5nmolkgのSPPTHを、125nmolkg、5nmolkg、および20nmolkgのPTHと比較した類似実験も示した。PTHおよびSPPTHは正常ラットおよびTPTXラットにおいて類似したプロファイルを示したので、これらの差異は薬物動態の変化によって媒介されるようには見えなかった。TPTXラットにおける、これらのペプチドの特性を表3に示した。ペプチド薬物動態実施例6カニクイザルにおける高カルシウム血症アッセイ血清中および尿中のカルシウムレベルおよびリン酸レベルに対するSPPTHおよびSPPTHAAKの効果をカニクイザルにおいて試験した。簡単に述べると、3歳または4歳の雄カニクイザルの体重を測定した。血液を採取してチューブに入れた。サルに、03mlkgの用量の各ポリペプチドを静脈内投与または皮下投与した。原液中のポリペプチド濃度は、25mmolLリン酸クエン酸緩衝液100mmolLNaCl005Tween80で希釈することによって調整した。投与する直前には、全てのポリペプチドを氷上に置いた。それぞれ3匹のサルからなる群にポリペプチドを投与した。カルシウムレベルおよびリンレベルの時間経過をモニタリングするために、投与して1時間後、2時間後、4時間後、および8時間後に、伏在静脈によって血液を採取した。SPPTHの血漿半減期は約4分であることが観察された。図12Aおよび12Bに示したように、SPPTHまたはSPPTHAAKの注射によって、注射後かなりの時間にわたって血清中カルシウムが増加した。血清中リン酸も同様に減少した。図12Cは、比較のために、図12Aおよび12Bの実験の40倍の用量で皮下投与されたPTHの短時間の高カルシウム血作用を示す。ビヒクルと比較して、いずれのポリペプチドを与えたマウスでも尿中カルシウムクレアチニン比は減少した。図13Bに示したように、尿中リン酸クレアチニン比も測定した。2つの異なる用量を用いたポリペプチドの皮下注射を用いて類似実験を行った。これらの実験から、SPPTHおよびSPPTHAAKを用いて、用量依存的に血清中カルシウムの増加が観察された。血清中無機リン酸の低下も観察された。図15Dは血清中クレアチニンレベルの増加を示す。尿中のカルシウムデータおよびリン酸データも収集した。これらのデータは、図15A~15Dに示した同じ実験からのものである。注射前およびその後の時間で24時間間隔で採尿し、Ca、Pi、ならびにクレアチニンを評価した。CaおよびPIはクレアチニンとの比で表した。図15Gおよび15Hは注射前の値からの変化を示す。データは平均±semn3群である。実施例7溶解度異なる緩衝液中でのSPPTHAAKおよびSPPTHの相対溶解度をインビトロ沈殿アッセイにおいて評価した。それぞれのポリペプチドについて、それぞれ50μgの凍結乾燥ポリペプチド粉末を含む2本のバイアルを調製した。一方のバイアルを、pH74のPBS50μlに溶解して再構成した。他方のバイアルを、最終濃度が10mgmlまたは15mgmlとなるように10mM酢酸50μlに溶解して再構成した。室温で1時間後に、バイアルを15000xgで2分間、遠心分離した。上清を除去し、PierceBCAアッセイを用いてタンパク質含有量をアッセイした。それぞれのポリペプチドについて、PBS試料の含有量を、対応する酢酸試料の含有量のパーセントとして表した。図16Aに示したように、SPPTHAAKおよびSPAibPTHAAKポリペプチドはhPTHNH2と同様の溶解度を示した。hPTHrP、断片、および類似体の溶解度試験を図16Bに示した。SPPTHAAKの安定性試験も行った。異なるペプチド濃度のSPPTHAAKを、5°C、25°C、および40°Cで4週間にわたって50mMリン酸クエン酸緩衝液中ならびに10mM酢酸中で保管した。逆相HPLCによるインタクトなペプチドの分析から、4週間25°Cで、ほぼ完全な安定性が明らかになった。40°Cでは、HPLCクロマトグラム上に主ピークのショルダーとして、メチオニンオキシド誘導体である可能性が高い分解産物が検出された。実施例8リン酸化欠損PTH受容体における効果SPPTHAAKの活性を、野生型PTH受容体の代わりにPDPTH受容体を発現するノックインマウスにおいて試験した。Bounoutasによって説明されたように、PD受容体は内部移行に欠陥があり、このために長時間のcAMPシグナル伝達が可能である。野生型PTHおよびより強力なMPTHが野生型マウスおよびPDマウスにおいて血中カルシウムレベルを変える能力を試験した。図17Aおよび図17Bに示したように、PDマウスでは、野生型マウスと比較して血中カルシウムレベルの上昇は低下したか、無くなった。2種類のマウス間での血中cAMPレベルも比較した。野生型PTHおよびMPTHについては、PDマウスでは、野生型マウスと比較して血中cAMPレベルの大きさが大きくなり、持続期間が延びた。野生型マウスおよびPDマウスにおける血中カルシウムレベルに対するSPPTHAAKの効果を図19に示した。驚いたことに、SPPTHAAKは、注射後少なくとも6時間、血中カルシウムレベルを下げ、ビヒクル対照で見られるレベルを一度も超えなかった。実施例9TPTXラットにおける毎日の反復投与げっ歯類およびサルにおいて実施した本発明者らの単回注射実験から、生物学的活性が持続する、場合によっては、24時間を超えて持続することが明らかになった。本発明者らは、顕著な高カルシウム血症により示されたように、これらの実験において高用量が用いられたために超長期間持続したと考えている。ヒトでの治療使用のためには、血中Caを正常化するだけの十分な用量が投与される。鍵となる実験は、反復投与計画後にsCaの正常化が本当に実現可能かどうか確かめる実験である。従って、本発明者らは、TPTXラットを、1nmolkg、2nmolkg、4nmolkg、および8nmolkgの用量のSPPTHを用いて10日間、毎日処置する図20A~2Dの実験を行った。比較のために、0075mcgkgおよび02mcgkgの用量の1252ビタミンDを同じ期間に使用した。本研究では、4nmolkg用量のSPPTHによってsCaが最も満足に管理された。なぜなら、最後の注射の8時間後に高カルシウム血症が避けられ、24時間で、正常に近いsCaが維持されたからである。4nmolkg用量のSPPTHを用いた時に、全ての時点でカルシウム尿排泄が少ないことが印象に残った。これは、8~9mgdlの範囲のsCaを実現するのに必要な用量である02μgkgのカルシトリオールを用いた時の尿中カルシウムの上昇と対照をなす。統計解析概して、前記のデータを平均±標準誤差で表した。SASソフトウェアを用いて統計的有意性を確かめた。p値005の差異は統計的に有意であるとみなされた。P005、P001、P0001他の態様2010年5月13日に出願された米国特許出願第61334319号および2010年11月18日に出願された米国特許出願第61415141号を含む、本明細書で述べられた全ての特許、特許出願、および刊行物は、それぞれの独立した特許、特許出願、または刊行物が参照により組み入れられるように詳細かつ個々に示されるのと同じ程度に参照により本明細書に組み入れられる。