"個体における減少した内因性アポE活性に関連する状態の治療のための化合物を同定及び/又は得るための方法であって、以下の:被験化合物の存在下においてマクロファージによるアポトーシス細胞の摂取を測定する、を含む、前記方法。被験化合物の非存在下に対して被験化合物の存在下において増加したアポトーシス細胞の摂取が、該化合物が減少した内因性アポE活性に関連する状態の治療において有用でありうることの指標である、請求項1に記載の方法。前記病気の状態が、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、脳卒中及び骨粗鬆症から成る群から選ばれる、請求項1又は2に記載の方法。摂取がアポEの非存在下で測定される、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。摂取がアポEの存在下で測定される、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。増加した炎症活性に関連する状態の治療又は予防のための化合物を同定及び/又は得るための方法であって、以下の:被験化合物の存在下における、マクロファージによるアポトーシス細胞の摂取を刺激するアポEポリペプチドの能力を測定する、を含む、前記方法。増加した炎症活性に関連する状態の治療又は予防のための化合物を同定及び/又は得るための方法であって、以下の:被験化合物の存在下における、アポE欠損マクロファージによる1つ以上のアポトーシス性アポE欠損細胞の摂取を測定する、を含む、前記方法。被験化合物の非存在下に対して被験化合物の存在下において増加したアポトーシス細胞の摂取が、該化合物が増加した炎症活性に関連する状態の治療において有用でありうることの指標である、請求項6又は7に記載の方法。前記増加した炎症活性に関連する状態が、多発性硬化症、リューマチ関節炎、過敏性腸症候群、クローン病、脳卒中、心筋梗塞、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、乾癬又は接触性過敏性皮膚炎である、請求項6~8のいずれか1項に記載の方法。アポトーシス細胞の蓄積に関連する状態の治療のための化合物を同定及び/又は得るための方法であって、以下の:被験化合物の存在下における、マクロファージによるアポトーシス細胞の摂取を刺激するアポEポリペプチドの能力を測定すること、を含む、前記方法。アポトーシス細胞の蓄積に関連する状態の治療又は予防のための化合物を同定及び/又は得るための方法であって、以下の:被験化合物の存在下で、アポE欠損マクロファージを1つ以上のアポトーシス性アポE欠損細胞と接触させ、そして前記マクロファージによる前記アポトーシス細胞の摂取を測定すること、を含む、前記方法。被験化合物の非存在下に対する被験化合物の存在下におけるアポトーシス細胞の摂取の増加が、前記化合物が、アポトーシス細胞の蓄積に関連する状態の治療において有用でありうることの指標である、請求項10又は11に記載の方法。前記状態が、組織外傷、外傷性脳損傷、急性呼吸窮迫症候群、細菌性敗血症、膵炎又は心膜炎である、請求項10~12のいずれか1項に記載の方法。前記被験化合物がヒトアポEのペプチド断片又はそのアナログである、請求項1~13のいずれか1項に記載の方法。被験化合物を、アポトーシス細胞食作用を刺激する剤として同定することを含む、請求項1~14のいずれか1項に記載の方法。前記被験化合物を単離することを含む、請求項15に記載の方法。前記被験化合物を合成及び/又は製造することを含む、請求項15に記載の方法。前記化合物を、その医薬として性質を最適化するために修飾することを含む、請求項15~17のいずれか1項に記載の方法。前記化合物を医薬として許容可能な賦形剤を含む組成物に製剤することを含む、請求項15~18のいずれか1項に記載の方法。減少した内因性のアポE活性、増加した炎症活性またはアポトーシス細胞の蓄積に関連する状態を治療するために使用される医薬組成物の製造方法であって、以下の:請求項1~18のいずれか1項に記載の方法を用いて、アポトーシス細胞食作用を刺激する化合物を同定及び/又は得て;そしてそれにより同定された化合物を医薬として許容可能な担体と混合する、を含む、前記方法。個体におけるアポトーシス細胞の蓄積に関連する状態の治療方法であって、以下の:前記個体におけるアポEの発現及び/又は活性を増加させる、を含む、前記方法。アポEポリペプチド又はその模倣剤を前記個体に投与することにより、アポE活性が増加される、請求項21に記載の方法。前記アポEポリペプチドがヒトアポEのペプチド断片である、請求項22に記載の方法。前記アポトーシス細胞の蓄積に関連する状態が、組織外傷、外傷性脳損傷、急性呼吸窮迫症候群、細菌性敗血症、膵炎及び心膜炎から成る群から選ばれる、請求項21~23のいずれか1項に記載の方法。アポトーシス細胞の蓄積に関連する状態の治療に使用される医薬の製造における、アポEポリペプチド又はその模倣剤の使用。前記アポEポリペプチドが、ヒトアポEのペプチド断片である、請求項25に記載の使用。個体における内因性のアポEの減少に関連する状態の治療方法であって、アポトーシス細胞食作用を刺激する化合物を投与することを含む、前記方法。前記化合物がヒトアポEのペプチド断片又はそのアナログ又は誘導体である、請求項27に記載の方法。前記病気の状態が、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、脳卒中及び骨粗鬆症からなる群から選ばれる、請求項27又は28に記載の方法。減少した内因性アポEに関連する状態の治療のための医薬の製造における、アポトーシス細胞食作用を刺激する化合物の使用。前記化合物がヒトアポEのペプチド断片又はそのアナログ又は誘導体である、請求項30に記載の使用。前記病気の状態が、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、脳卒中及び骨粗鬆症からなる群から選ばれる、請求項30又は31に記載の使用。個体における増加した炎症活性に関連する状態の治療方法であって、アポトーシス細胞食作用を刺激する化合物を投与することを含む、前記方法。前記化合物が、ヒトアポEのペプチド断片又はそのアナログ又は誘導体である、請求項33に記載の方法。前記増加した炎症活性に関連する状態が、多発性硬化症、リューマチ関節炎、過敏性腸症候群、クローン病、脳卒中、心筋梗塞、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、乾癬又は接触性過敏性皮膚炎である、請求項33または34に記載の方法。増加した炎症活性に関連する状態の治療のための医薬の製造における、アポトーシス細胞食作用を刺激する化合物の使用。前記化合物が、ヒトアポEのペプチド断片である、請求項36に記載の使用。前記増加した炎症活性に関連する状態が、多発性硬化症、リューマチ関節炎、過敏性腸症候群、クローン病、脳卒中、心筋梗塞、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、乾癬又接触性過敏性皮膚炎である、請求項36または37に記載の方法。食作用の効率を調節する化合物の同定方法であって、以下の:a培養マクロファージを、アポE由来ペプチド、模倣剤又は他の被験化合物に曝露し;b前記マクロファージとアポトーシス細胞の懸濁液を接触させ;そしてc前記マクロファージにより摂取されたアポトーシス細胞数を測定する、を含む、前記方法。方法及び材料インビトロの食作用アッセイマウス腹腔マクロファージをすべての食作用アッセイのために使用した。マウス腹腔を氷温の滅菌Hanks溶液Sigmaで洗浄することによって、マクロファージをC57B16野生型又はアポEマウスのいずれかから無菌的に単離した。腹腔滲出細胞を予め冷却した滅菌ガラスチューブに保存し、その後RPMI培地で2回洗浄した300g、10分で沈殿した。細胞ペレットを最終的にRPMI10FCSに再懸濁し、そしてml当たり5×105細胞でプラスチック組織培養チャンバースライドNunc上に蒔いた。マクロファージを37°Cで2時間付着させ、そして単離の4~10日後に食作用アッセイにおいて使用するまでRPMI10FCS中でインキュベーションする前に、冷DulbeccosPBSで洗浄した。細胞の維持に使用したFCS中のウシアポEの存在による、いなかる可能性のある効果も除くために、血清を含まない条件下で、食作用アッセイにおいて使用するためのすべての細胞を完全に洗浄した。ラテックスビーズ食作用アッセイは、IchinoseIchinoseMetal1994CellImmunol156508から改変した。すなわち、4.5×109個のビーズ/mlの蒸留水中2μmの蛍光ミクロスフィアカルボキシレート修飾された、MolecularProbeを1BSAでコーティングし、そして5分間超音波処理した。HEPES緩衝食塩水pH7.5でマクロファージ単層を洗浄し、そして250μlの同じ溶液とともに30分間プレインキュベーションした。BSAコーティングしたラテックスビーズをくわえて、2.5×106個のビーズ/ウエルとし、マクロファージを37°Cで1時間インキュベーションし、その間に食作用が起こった。摂取されないビーズを氷温のDulbeccosPBSで5回激しく洗浄して除去した。そして、0.25トリプシンブタ膵臓由来のIIS型、Sigmaを加えることによってマクロファージを放出させ、グルタルアルデヒド最終濃度0.5を加えることによって固定した。FACStarBectonDickinsonを使用するフローサイトメトリーによって、摂取された粒子の数を測定し、チューブあたり10,000細胞を分析し、マクロファージあたりの摂取された粒子数の平均をFCSPressソフトウエアを用いて計算した。アポトーシス性の胸腺細胞の食作用アッセイは、先に記載の手順ScottRSetal2001Nature411207を改変した。胸腺細胞は、C57Bl6又はアポEマウスから、胸腺を20mMトリス-HClで緩衝化したRPMI10FCS、pH7.2中に取り出し、そして40メッシュスクリーンの細胞解離ふるいSigmaを通すことによって調製した。得られた細胞懸濁液を沈殿させ500g×5分、107細胞/mlでRPMI10FCS中に再懸濁した。食作用アッセイに細胞を使用する前日に培養中に細胞を入れた3~9日後、胸腺細胞を滅菌DulbeccosPBSで3回洗浄し、そして5×106細胞で再構成し、そしてCellTrackerGreenで、37°Cで30分間標識した。そして、標識された細胞をPBSで洗浄し、そして新鮮な血清を含まないRPMI培地中で、37°Cで30分間インキュベートし、PBS中で再度洗浄し、血清を含まないRPMI中で一夜インキュベートした。AnnexinV染色及びフローサイトメトリーにより測定して、血清の除去により70超のアポトーシス性の胸腺細胞が回収された。ウエルあたり2×106のアポトーシス性の胸腺細胞を加えた以外は、ラテックスビーズと同様に食作用アッセイを実施した。70エタノール中1酢酸で90分間マクロファージをスライドガラス上に固定し、それらを画像分析システムに取付けた蛍光顕微鏡ProvisAXOlympus下で観察することによって、摂取された胸腺細胞を計数した。ウエルあたり18の視野のそれぞれにおいて、摂取された胸腺細胞数及びマクロファージの総数を計数し、そして食作用指数の平均を計算した。組織標本成体雄性マウスC57Bl16、アポE又はLDLRマウスのいずれかIshibashiSetal1994JClinInvest931885;1群6匹をCO2で窒息させてと殺し、そして血清の調製のために心臓穿刺によって血液を採取した。組織肝臓の左葉、左肺及び脳の左辺縁を解剖して迅速に氷温食塩水中にいれ、そしてOCT包埋媒体中に包埋し、-80°Cで凍結した。食餌性脂肪負荷を受ける動物については、と殺前の10週間、通常の固形飼料を高脂肪含量固形飼料1.25コレステロール、7.5飽和脂肪に換えた。すべての他の動物は通常の固形飼料を受容し、そしてずっと水は自由摂取した。そして、凍結切片4μmを各組織から調製し、そしてポリ-L-リジンでコーティングしたスライドガラス上に集め、氷温のアセトン中で90分間固定し、空気乾燥させて-20°Cで分析するまで凍結した。体軸上の組織のおよそ中心点から、約4mmにわたって横断面を取った。各抗原又は2色若しくは3色の免疫蛍光実験における抗原群について、4mmにわたって等間隔250μmごとの16の切片を使用し、MosedaleらMosedaleDEetal1996JHistochemCytochem441043により推奨されたとおり、10の切片は一次抗体を、そして16のうちから無作為に選んだ6の切片は最初の抗体を省略した対照としての役割を果たした。免疫蛍光染色すべての免疫蛍光染色は、Mosedaleetalの記載の通りに、定量的免疫蛍光法のために最適化された条件下で実施したMosedaleetal上記。すなわち、脂肪酸を含まないBSAを3含むPBS中で30分間、切片を脱水し、そしてPBS3BSA中の一次抗体に18時間曝露した。PBS中での3分間の洗浄を3回した後、直接に標識した一次物を使用する以外は、スライドガラスを、PBS3BSA中25μgmlの好適な蛍光標識した2次抗体に6時間曝露した。PBS中でさらに3回洗浄後、スライドガラスを水ですすぎ、空気乾燥してCitiflourAF1下でマウントし、そして画像分析システムを用いて分析するまで、20°Cで保存した。以下の商業的に入手可能な一次抗体を使用した:抗マクロファージF480抗原抗体MCAP497Serotec25μgml;抗CD11b抗体M170Serotec25μgml;抗MHCクラスII抗体IAbMCA1500F;Serotec20μgml;抗フィブリン抗体ogen44408004;Biogenesis20μgml;抗マウスTNF抗体AB410NA;RDSystems50μgml;抗PCNA抗体M0879;Dako12μgml。すべての2次抗体は、最小交差反応性のロバ抗体JacksonImmunoresearch、すべての抗体溶液は、核を対比染色するためのブルーチャネル上で可視的なHoechst33342最終濃度1μgmlも含んだ。アポトーシス性及び壊死性細胞の検出先に記載されたとおりGavrieliYetal1992JCellBiol119493、InSituCellDeathDetectionキットRocheを製造者の指示にしたがって使用するTUNEL反応により、瀕死の細胞を検出した。ウシDNaseIRoche50mMTrispH7.5、1mMMgCl2中最終濃度10μgmlを陽性対照として;フルオレッセイン標識dUTPを除いたものを陰性対照として使用して、切片を前処理した。マウス肝臓においては、約70のTUNEL細胞がCM1抗体を使用して活性化カスパーゼ-3について陽性に染色し、Hoechst33342の蛍光について見ると核の濃縮の兆候を示し、このキットを用いてTUNELと検出された細胞の大部分が、製造者により要求されたとおりのStadelmannLassmannの定義による壊死とは対照的にアポトーシスを起こしていた。リポタンパク質プロフィールの分析プールした血清サンプルを、先に記載の通りにGraingerDJetal1995NatMed11067Sepharose6Bカラムを正確に使用するゲルろ過クロマトグラフィーにかけた。コレステロールオキシダーゼ法を用いて、得られた分画中にコレステロールを検出し、先に記載されたゲル電気泳動及びウエスタンブロッティングYokodeMetalScience2501273により分析したアポリポタンパク質溶出プロフィールに基づいてさまざまなリポタンパク質クラスに割り当てた。結果インビトロのマクロファージによるアポトーシス細胞の取り込みに対するアポE欠損の効果アポE-欠損マウスE及び対照としての野生型WTマウスから、腹腔マクロファージを調製した。96時間培養後、E及びWT細胞をそれぞれ蛍光標識したアポトーシス性WT胸腺細胞に提示し、これを37°Cで1時間にわたって摂取させた。各マクロファージが摂取した胸腺細胞数を、アポトーシス小体を排除するマクロファージの能力の尺度として、免疫蛍光顕微鏡観察により定量した。この期間に、WTマクロファージはそれぞれ1.65±0.12個のアポトーシス性WT胸腺細胞を摂取したが、生きた胸腺細胞を用いた場合には摂取は見られず、このアッセイがアポトーシス小体の取り込み特異的であったことを確認した。対照的に、Eマクロファージは25未満のアポトーシス性胸腺細胞を同じ期間内に摂取したp<0.05、スチューデントの対のないt-検定;図2B。マウスアポEに対するFITC標識した抗体を用いるフローサイトメトリーは、胸腺細胞がアポEを発現するが、マクロファージよりも低レベルであることを示した。したがって、我々は、E胸腺細胞を用いて実験を繰り返した。興味深いことに、WTマクロファージは、それらがWT胸腺細胞を摂取したp<0.05、スチューデントt検定;図2CようにはE胸腺細胞を摂取せず、摂取するマクロファージ及びアポトーシス性胸腺細胞の両方がアポE欠損である場合には、アポトーシス小体の取り込みにおけるより大きな障害が見られ、野生型の系よりも約60少ないアポトーシス細胞が摂取されたp<0.05、ANOVA;図2C。これらの結果を合わせると、アポトーシス小体の摂取がアポEの完全な非存在下でも起こりうるが、そのプロセスが大きく減弱されていることが実証される。アポトーシス小体の摂取が、マクロファージ又は胸腺細胞パートナーにおけるアポE欠損によって同程度低下するため、我々は可溶性アポEの外因性の添加が正常な機能を回復することが出来るか否かを試験した。1μMヒトアポE3の添加は、内因性のアポE欠損により引き起こされた胸腺細胞摂取の減弱を回復したアポEを加えないものに対して、p<0.05;野生型細胞に対してp=0.98、スチューデントの対のないt-検定;図2C。我々は、アポEはアポトーシス小体の取り込みの重要な調節剤であり、それが取り込みの間の直接的な細胞相互作用に参加する受容体:リガンド対において機能するのではないであろうが、おそらく細胞表面における情報伝達を含むより複雑な制御的役割を有するであろうと結論した。次に、我々はアポEがマクロファージ食作用のスペクトルの広い調節剤であるか又はアポトーシス細胞の取り込みに特異性を有するのかを試験した。フローサイトメトリーを用いて測定した図2D、Eマクロファージによる蛍光標識されたラテックスビーズの取り込みは、WTマクロファージによる取り込みから識別不可能でありp=0.86、スチューデントの対のないt-検定;図2E、食作用に対するアポEの効果がアポトーシス小体の取り込みに特異的であったことを実証した。インビボにおけるアポトーシス小体のクリアランスに対するアポE欠損の効果アポE-欠損マウス及び野生型同腹子対照中にインビボで存在するアポトーシス小体の数を分析した。肝臓の左葉の4mmにわたって250μmの間隔で凍結切片を調製し、瀕死の細胞及び細胞断片を、DNAの切断を標識するTUNEL反応を用いて検出した。一般的なマクロファージマーカーF480との同時染色は、TUNEL陽性の細胞の大半>98が野生型及びアポE欠損の肝臓の両方においてF480であったことを明らかにしたほとんどのTUNEL陽性細胞はマクロファージであった。しかしながら、TUNEL標識がアポトーシス細胞だけでなく、組織調製の方法に依存して、壊死性細胞又はさらに健康な細胞をも染色するかもしれないことに注意することは重要である。しかしながら、われわれの切片では、Hoechst蛍光について見た場合、多くのTUNEL細胞がアポトーシス細胞の特徴を有したすなわち、核のクロマチン濃縮及び空胞形成が明白であった。さらに、TUNEL細胞の60~70も活性カスパーゼ3に関して染色した。これらの観察を併せると、TUNEL染色は、肝臓におけるマクロファージ細胞の死の有用な指標であり、Stadelmann及びLassmann上記の発見と一致することが示された。肝臓中の瀕死のマクロファージF480TUNELの数は、野生型同腹子対照に比べて、アポE欠損マウスにおいて劇的に増加した図3A~C。アポトーシス性マクロファージの絶対数p<0.01、スチューデントの対のないt-検定;図3B及びTUNELであったマクロファージ集団の比率p<0.05、スチューデントの対のないt検定;図3Cの両方が増加した。野生型の動物においては、F480細胞の約10はTUNELでもあったが、アポE-欠損動物においては、50超がTUNELであった。われわれは、アポトーシス性肝細胞F480TUNEL細胞の数に対するアポE欠損の影響も調べた。しかしながら、非マクロファージ細胞内コンパートメント中の細胞死の比率は、マクロファージコンパートメント中の比率よりも非常に低かったため、われわれの実験は、この集団に対するアポE欠損の影響を検出するには足りないものであった図3D。アポE欠損マウスの肝臓中において観察されたアポトーシス性マクロファージの増加は、マクロファージの死の速度の増加又はアポトーシス小体のクリアランス速度の低下のいずれかによりもたらされたのかもしれない。これらの2つの可能性を識別するために、我々はマクロファージ集団をより完全に分析して、マクロファージ集団のマウス肝臓中での動力学の図式を提供した。先ず、我々は、F480細胞の総数を、肝臓中の核の総数のパーセンテージとして表すことによって、肝臓マクロファージ集団のサイズを推定した図4A、B。アポ欠損マウスにおけるTUNELマクロファージの数及び比率の劇的な増加にもかかわらず、肝臓マクロファージ集団全体は、アポE欠損動物において顕著に大きかったp<0.05;スチューデントの対のないt-検定;図3B。この見かけのパラドクスに対しては、われわれのインビトロにおける観察に一致して、アポトーシス小体のクリアランスがアポE-欠損マウスにおいて顕著に効率が低い、又はアポEの非存在下におけるマクロファージの補充が、マクロファージの死におけるいかなる増加よりもなお高かった、という少なくとも2つの単純な説明がある。この第二の可能性を調査するために、我々は単球上で高度に発現されるモノクローナル抗体M170により検出されるインテグリンCD11bが組織マクロファージ集団中に補充された後にダウンレギュレーションされるという観察結果を活用した。その結果、肝臓中のM170F480細胞は、マクロファージ補充の代理の指標として使用可能である。アポE-欠損は、肝臓中のM170F480マクロファージの絶対数を2倍超に増加させたがp<0.05、スチューデントの対のないt-検定;図4C、これは新たに補充されたマクロファージの割合におけるわずかな増加を表すにすぎないC57Bl6マウスにおける8.3に比較して、アポE-欠損マウスにおいて10.0。したがって、マクロファージ補充の比率のいかなる増加も死んだ又は瀕死のマクロファージの数に見られる大きな増加よりも実質的に小さい。マクロファージ集団の増殖が非常に稀な事象であるため分析した肝臓切片においてPCNAF480細胞は見られなかった、我々は、マクロファージ補充の増加は、アポE-欠損マウスにおいて見られるマクロファージ集団の増加の主な原因ではないと思われる。野生型及びアポE-欠損マウス由来の肝臓におけるマクロファージ集団の動態の要約を図4Dに示す。アポE欠損は、マクロファージ集団のホメオスタシスを顕著に混乱させ、わずかであるが統計学的に有意なマクロファージ補充における増加、生きたマクロファージ数の大きな増加をもたらしたが、最も顕著な効果は、アポトーシス小体数の劇的な増加である。この分析に基づいて、我々は、アポトーシス小体のクリアランスは、インビボ並びにインビトロにおいてアポE-欠損マウスの肝臓で低下する、と結論する。他の組織におけるマクロファージ集団の動態肝臓サンプルを取得したと同じマウスの脳左辺縁及び左肺から凍結切片を調製した。肝臓中と同様に、アポE-欠損は肺胞マクロファージ集団のサイズを増加させ図5A、この増加に寄与する主要因子は、死んだ及び瀕死の細胞の蓄積である図5B。肺に見られる効果の大きさは肝臓に見られるものと非常によく類似していた。脳組織マクロファージ集団ミクログリアを特徴づけるために、同じ抗体マーカーを使用することはできなかった、なぜなら、それらはF480モノクローナル抗体で弱く染色されるのみであったからである。しかしながら、肝臓及び肺のF480細胞のサブセットを染色するのみであるMHCクラスIIに対する抗体は、ミクログリアを染色した。アポE欠損は、脳におけるMHCクラスII細胞の数を増加させたが図5C、肺及び肝臓において見られたF480集団よりも低度であった。しかしながら、他の組織における我々の観察結果と一致して、TUNELであったMHCクラスII細胞の絶対数及び割合は顕著に増加した図5D。同様の結果がミクログリア集団を検出するためのCD14に対する抗体を用いて得られたが、CD14は新たに補充されたマクロファージ又は活性化ミクログリアを選択的に検出しているのかもしれない。これらの観察結果を併せると、インビトロで観察されたアポEの非存在下におけるアポトーシス小体の取り込みの減弱は、アポE-欠損マウスにおいて平衡状態で排除されないアポトーシス小体の全身的な蓄積をもたらし、そして、おそらくアポトーシス細胞のクリアランスの欠損に応答して、さまざまな組織へのマクロファージの補充がわずかではあるが統計学的に有意に増加したことを示す。肝臓における炎症マーカーに対するアポE欠損の効果アポE-欠損マウス及びそれらの野生型同腹子からの肝臓における2つの炎症マーカーの相対的レベルを測定するために、定量的免疫蛍光法を使用した。サイトカインTNFαは、急性の炎症の間に上方制御されるが、正常では健康な肝臓の主に血管周囲領域に非常に低いレベルでのみ存在する図6A。TNFαについての染色は、野生型同腹子に比べてアポE欠損マウスにおいて1.5倍高かったp<0.05;MannWhitneyU検定;図6B。このサイトカインのレベルが両群において低かったにもかかわらず、アポE欠損は、統計学的にそしておそらく生物学的に有意な変化をTNFαレベルにおいて導いた。肝細胞生成物フィブリノーゲンについての染色も図6CアポE欠損によって増加したp<0.05;スチューデントの対のないt-検定;図6D。主に血液凝固に関与するにもかかわらず、フィブリノーゲンは陽性の急性期反応体すなわち、そのレベルが急性の炎症反応中に増加する遺伝子産物として知られている。これらの2つの無関係の全身性の炎症マーカーTNFα及びフィブリノーゲンは、対照に比べてアポE-欠損マウスにおいて高くなっている。マクロファージ集団の動態に対する血漿コレステロール濃度の効果インビボにおいては、アポE欠損は非常に顕著なリポタンパク質代謝の制御ミスをもたらす。リポタンパク質代謝における変化が間接的にマクロファージ集団の動態に影響を及ぼすか否かを決定するために、我々はアポE欠失に依存しない、リポタンパク質代謝を変更するための2つの方法を使用した。先ず、我々は野生型マウスに高コレステロール食を10週間与える影響を調べ、これは、先に観察されたように、血漿LDL及びVLDLコレステロール濃度を増加させ、HDLコレステロールを低下させ図7A、脂肪を与えたC57Bl6マウスはアポE欠損マウスのプロフィールに非常によく似ていた。この期間の最後には、肝臓マクロファージ集団における相違はなかったp=0.94;正常の固形飼料を与えた野生型マウスに対するスチューデントの対のないt-検定;図7B。同様に、LDL受容体の遺伝的欠失は、先に観察されたように、アポEの欠失後に見られた大きさに匹敵するリポタンパク質代謝の障害を引き起こしたにもかかわらず、肝臓中のマクロファージ集団にごくわずかな効果を及ぼしp=0.07;スチューデントの対のないt-検定;図7D、脳および肺の集団には効果がなかったp=0.88、スチューデントt-検定;図7D。我々は、リポタンパク質代謝における全身性の変化は、アポE欠損マウスに見られたマクロファージ集団の動態の変化を引き起こすとは考えられず、そしてさらに、アポE:LDL受容体相互作用は、我々の観察したアポトーシス小体のクリアランスの減弱を仲介するとは考えられないと結論した。マクロファージにおけるアポEタンパク質の完全な欠損は、インビトロにおいて一般的な食作用機能に影響することなくアポトーシス細胞の摂取を特異的に減弱することが本明細書において示される。この欠損は、インビボでアポE-欠損マウスのさまざまな組織においてアポトーシス細胞及び断片の蓄積を顕著に増加させ、これらの組織における生きたマクロファージ集団を大きくする。これは次に、TNFα及びフィブリノーゲンを含む前炎症性マーカーの全身性の増加と関連する。アポEの遺伝的欠失が血管壁へのマクロファージの補充を促進することが以前に報告されていたが例えば、LessnerSetal2002AmJPathol1602145及びRecklessJJCetal1997Circulation951542、これは、アポE欠損に直接的ではなく、局所的な脂質沈着への間接的な反応であると考えられてきた。脂質代謝の変化がこれらの効果の原因でないことは本明細書中で示され、そして本データは、アポトーシス細胞断片の取り込み障害によりもたらされる、リポタンパク質代謝に依存しない、アポEの組織マクロファージ補充に対する全身性の効果図8の最初の直接的な証拠を提供する。これらの結果は、アポE遺伝子型およびマクロファージに富む炎症性成分を伴うさまざまな病気との関連の根底にある、中心的な生理学的メカニズムの直接的な証拠をしめす。アポEはアポトーシス小体の効率的なクリアランスに必要であり、異なるアポE遺伝子型がアポトーシス小体のクリアランスにおけるわずかな相違に関連する。経時的に、インビボではアポトーシス小体のクリアランスにおけるこのわずかな低下でさえ、単球/マクロファージ経路を通じた流れの増加をもたらし、そして表現型における全身性の前炎症性シフトに寄与する。かかるシフトの1つの後遺症は、アルツハイマー病及び動脈硬化の指標である、機能的組織構造の損失に導く線維化傾向である。"