"式Iの化合物N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド又は薬学的に許容可能なその塩、エナンチオマー、若しくはそれらの混合物。次式:を有するR-N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド、又は薬学的に許容可能なその塩である、請求項1に記載の化合物。治療における薬剤としての、請求項2に記載の化合物、又は薬学的に許容可能なその塩。喘息、百日咳、ニコチン中毒、広範痛、限局痛、侵害受容性疼痛、炎症性疼痛、中枢性疼痛、中枢及び末梢性神経障害性疼痛、中枢及び末梢性神経原性疼痛、中枢及び末梢神経痛、慢性腱炎、腰痛、術後疼痛、末梢神経障害、内臓痛、骨盤痛、異痛症、有痛性感覚麻痺、しゃく熱痛、異常錯感覚、線維筋痛、痛覚過敏、感覚過敏、痛感過敏、虚血性疼痛、坐骨神経痛を含むがこれらに限定されない急性及び慢性疼痛障害などのさまざまな疼痛状態、間質性膀胱炎を含むがこれに限定されない膀胱炎に関連する疼痛、多発性硬化症に関連する疼痛、関節炎に関連する疼痛、変形性関節症に関連する疼痛、関節リウマチに関連する疼痛、及びがんに関連する疼痛、を処置するための薬剤の製造における、請求項2に記載の化合物の使用。疼痛を処置するための薬剤の製造における、請求項2に記載の化合物の使用。請求項2に記載の化合物及び薬学的に許容可能なキャリアを含んでなる、医薬組成物。以下の治療を必要とする対象の、喘息、百日咳、ニコチン中毒、広範痛、限局痛、侵害受容性疼痛、炎症性疼痛、中枢性疼痛、中枢及び末梢性神経障害性疼痛、中枢及び末梢性神経原性疼痛、中枢及び末梢神経痛、慢性腱炎、腰痛、術後疼痛、末梢神経障害、内臓痛、骨盤痛、異痛症、有痛性感覚麻痺、しゃく熱痛、異常錯感覚、線維筋痛、痛覚過敏、感覚過敏、痛感過敏、虚血性疼痛、坐骨神経痛を含むがこれらに限定されない急性及び慢性疼痛障害などのさまざまな疼痛状態、間質性膀胱炎を含むがこれに限定されない膀胱炎に関連する疼痛、多発性硬化症に関連する疼痛、関節炎に関連する疼痛、変形性関節症に関連する疼痛、関節リウマチに関連する疼痛、及びがんに関連する疼痛を処置する方法であって、請求項2に記載の化合物の治療的に有効な量を該対象に投与する工程を含んでなる、上記の方法。請求項2に記載の化合物の治療的に有効な量を対象に投与する工程を含んでなる、そのような治療を必要とする対象の疼痛を処置する方法。眼科的処置のため又はCS若しくはCRなどの暴動鎮圧剤に対するアンタゴニストとして使用するための、請求項2に記載の化合物の使用。請求項2に記載の化合物の治療的に有効な量を該作用に苦しむ対象に投与することを含んでなる、CS又はCRなどの暴動鎮圧剤の作用を打ち消す方法。非選択性陽イオンチャンネルTRPA1アンタゴニストについて記述する。記載されたアンタゴニストは疼痛及び他の状態を処置するために使用することができる。TRPA1アンタゴニストが介在する病状としては、喘息、百日咳及びニコチン依存症が挙げられる。本発明は、従って非選択性陽イオンチャンネルTRPA1の新規なアンタゴニストを提供する。新規なアンタゴニストは、とりわけ、疼痛を処置するために用いることができる。TRPA1アンタゴニストによって媒介されるさらなる医学的状態としては、喘息、百日咳及びニコチン依存症がある。第1の態様では、本発明は、式Iの化合物、薬学的に許容可能なその塩、エナンチオマー、又はその混合物を提供する本発明の化合物は、1つのキラル中心を含むので、その化合物はエナンチオマーの形態で、及び分割されて、又はラセミ混合物として存在してもよいことは、理解されるだろう。本発明は、式Iの化合物の任意の可能なエナンチオマー、ラセミ体又はその混合物を包含する。本発明の化合物の光学活性な形態は、例えば、ラセミ体のキラルクロマトグラフィーによる分離によって、光学活性な出発物質からの合成によって、又は後に記述される手順に基づく不斉合成によって製造されればよい。本発明の1つの実施態様は、以下の構造を有する式Iの化合物のRエナンチオマーである本発明の化合物は、溶媒和されない形態と同様に溶媒和された、例えば水和した形態で存在してもよいことも、また理解されるだろう。さらに、本発明が式Iの化合物のそのような溶媒和されたすべての形態を包含することは理解されるだろう。本発明の範囲内には、式Iの化合物の塩も入る。一般に、本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、業界に周知の標準的な手法を用いて得られればよく、例えば、十分に塩基性の化合物、例えばアルキルアミンと好適な酸、例えばHCl又は酢酸を反応させて生理学的に許容可能なアニオンを与える。また、カルボン酸又はフェノールのような好適に酸性のプロトンを有する本発明の化合物を、水性媒体中で、1当量のアルカリ金属又はアルカリ土類金属水酸化物又はアルコキシドエトキシド又はメトキシドなど、又は好適に塩基性の有機アミンコリン又はメグルミンなどで処理し、続いて従来の精製技術で処理することによって、対応するアルカリ金属ナトリウム、カリウム又はリチウムなど又はアルカリ土類金属カルシウムなどの塩を作ることが可能であればよい。1つの実施態様では、上記式Iの化合物は、薬学的に許容可能なその塩又は溶媒和物、特に塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、又はp-トルエンスルホン酸塩のような酸付加塩に変換してもよい。本発明の化合物は、治療に、特に喘息、百日咳持続性の咳、ニコチン中毒の治療、及び広範痛、限局痛、侵害受容性疼痛、炎症性痛覚、中枢性疼痛、中枢及び末梢性神経障害性疼痛、中枢及び末梢性神経原性疼痛、中枢及び末梢神経痛、慢性腱炎、腰痛、術後疼痛、末梢神経障害、内臓痛、骨盤痛、異痛症、有痛性感覚麻痺、しゃく熱痛、異常錯感覚、線維筋痛、痛覚過敏、感覚過敏、痛感過敏、虚血性疼痛、坐骨神経痛、間質性膀胱炎を含むがこれに限定されない膀胱炎に関連する疼痛、多発性硬化症に関連する疼痛、関節炎に関連する疼痛、変形性関節症に関連する疼痛、関節リウマチに関連する疼痛、及びがんに関連する疼痛を含むがこれらに限定されない急性及び慢性疼痛障害を含むがこれらに限定されないさまざまな疼痛状態の治療のために有用であることが考えられる。人間のような温血動物における治療のための使用では、本発明の化合物は、従来の医薬組成物の形態で、経口、筋肉内、皮下、局所、鼻腔内、腹腔内、胸腔内、静脈内、硬膜外、髄腔内、経皮的、脳室内、及び関節内への注射を含む任意の経路によって投与されればよい。本発明の1つの実施態様では、投与経路が静脈内、局所、皮内又は筋肉内であればよい。用量は、投与経路、病気の重症度、患者の年齢及び体重、及び特定の患者に最適な個別の投薬計画及び投与量レベルを決定する場合に通常主治医が考慮する他の要因に依存することになる。本発明は、上文で治療に使用するための薬剤の製造に定義されたように、式Iの化合物又は薬学的に許容可能なその塩又は溶媒和物の使用を提供する。特に医療適用では、本発明は、喘息、百日咳持続性の咳、ニコチン中毒を処置するため、及び広範痛、局所的な疼痛、侵害受容性疼痛、炎症性痛覚、中枢性疼痛、中枢及び末梢性神経障害性疼痛、中枢及び末梢性神経原性疼痛、中枢及び末梢神経痛、慢性腱炎、腰痛、術後疼痛、末梢神経障害、内臓痛、骨盤痛、異痛症、有痛性感覚麻痺、しゃく熱痛、異常錯感覚、線維筋痛、痛覚過敏、感覚過敏、痛感過敏、虚血性疼痛、坐骨神経痛、間質性膀胱炎を含むがこれに限定されない膀胱炎に関連する疼痛、多発性硬化症に関連する疼痛、関節炎に関連する疼痛、変形性関節症に関連する疼痛、関節リウマチに関連する疼痛、及びがんに関連する疼痛を含むがこれらに限定されない急性及び慢性疼痛障害のような、さまざまな疼痛状態を処置するための薬剤を製造するための、式Iの化合物の使用を提供する。本発明はさらに、喘息、百日咳持続性の咳、ニコチン中毒を処置するため、及び広範痛、限局痛、侵害受容性疼痛、炎症性痛覚、中枢性疼痛、中枢及び末梢性神経障害性疼痛、中枢及び末梢性神経原性疼痛、中枢及び末梢神経痛、慢性腱炎、腰痛、術後疼痛、末梢神経障害、内臓痛、骨盤痛、異痛症、有痛性感覚麻痺、しゃく熱痛、異常錯感覚、線維筋痛、痛覚過敏、感覚過敏、痛感過敏、虚血性疼痛、坐骨神経痛、間質性膀胱炎を含むがこれに限定されない膀胱炎に関連する疼痛、多発性硬化症に関連する疼痛、関節炎に関連する疼痛、変形性関節症に関連する疼痛、関節リウマチに関連する疼痛、及びがんに関連する疼痛を含むがこれらに限定されない急性及び慢性疼痛障害のような、さまざまな疼痛状態を処置するための式Iの化合物を提供する。本発明のさらなる態様は、上で論じた状態の何れかを患う対象subjectを処置する方法であり、それによって上記の式Iによる化合物又は薬学的に許容可能なその塩若しくは溶媒和物の有効量が、そのような処置を必要とする患者に投与される。従って、本発明は、上に提示した特定の医療適応症を処置する方法を提供し、ここで、式Iの化合物又は薬学的に許容可能なその塩若しくは溶媒和物の有効量が、そのような処置を必要とする患者に投与される本発明はまた、治療における薬剤として使用するための式Iの化合物を提供する。本明細書の関連において、用語の治療は、反対する明確な表示が無い限り予防も包含する。用語の治療的及び治療的にも相応に解釈されるべきである。本発明の関連の中の治療という用語は、さらに、本発明の化合物の有効量を投与し、既存の病状、急性又は慢性若しくは再発性の状態の何れかを緩和することを包含する。この定義は、また再発性の状態を防止するための予防的な治療及び慢性疾患の継続的治療をも包含する。式Iの化合物は、医薬品として、特にTRPA1阻害剤アンタゴニストとしての活性を有する。より詳しくは、本発明のTRPA1阻害剤は、治療に、特に広範痛、限局痛、侵害受容性疼痛、炎症性痛覚、中枢性疼痛、中枢及び末梢性神経障害性疼痛、中枢及び末梢性神経原性疼痛、中枢及び末梢神経痛、慢性腱炎、腰痛、術後疼痛、末梢神経障害、内臓痛、骨盤痛、異痛症、有痛性感覚麻痺、しゃく熱痛、異常錯感覚、線維筋痛、痛覚過敏、感覚過敏、痛感過敏、虚血性疼痛、坐骨神経痛、間質性膀胱炎を含むがこれに限定されない膀胱炎に関連する疼痛、多発性硬化症に関連する疼痛、関節炎に関連する疼痛、変形性関節症に関連する疼痛、関節リウマチに関連する疼痛、及びがんに関連する疼痛を含むがこれらに限定されない急性及び慢性疼痛障害のような、さまざまな疼痛状態を緩和するための治療に有用である。式Iによる化合物は、網膜症、糖尿病性網膜症及び緑内障のような眼科疾患の処置、及びそのような疾患に関連する疼痛の処置に使用してもよい。式Iによる化合物はまた、眼科的処置のために、又はCS若しくはCRのような暴動鎮圧剤に対する反作用剤として、及びそのような薬剤の影響に苦しむ対象を式Iによる化合物の治療的に有効な量を投与することによって処置するために使用してもよい。前述の治療的使用のために投与される用量は、もちろん、使用される化合物、投与方法、望まれる処置、及び適応する疾患によって変動することになる。本発明の化合物の1日投与量は、0.05mg/kg~100mg/kgの範囲であればよい。式Iの化合物及び薬学的に許容可能なその塩は、単独で使われてもよいが、一般には式Iの化合物/塩活性成分が薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤又はキャリアと関連した医薬組成物の形で投与されることになる。好適な医薬製剤を選択及び調製するための従来の手順は、例えばPharmaceuticalsTheScienceofDosageFormDesignsMEAultonChurchillLivingstone1988に記載されている。投与方法によって、医薬組成物は、好ましくは0.05~99w重量によるパーセント、より好ましくは0.05~80w、さらにより好ましくは0.10~70w、そしてなおさらに好ましくは0.10~50wの活性成分を含むことになり、すべての重量パーセントは全組成物を基にする。本発明はまた、式Iの化合物又は薬学的に許容可能なその塩を上文で定義したように薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤又はキャリアと併せて含む医薬組成物を提供する。本発明はさらに、式Iの化合物又は上文で定義したような薬学的に許容可能なその塩を薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤又はキャリアと混合することを含む本発明の医薬組成物の製造方法を提供する。本医薬組成物は、例えばクリーム、溶液又は懸濁液の形態で局所的に例えば、皮膚に;又は全身的に、例えば錠剤、カプセル、シロップ、散剤または顆粒剤の形態で経口投与によって;もしくは溶液又は懸濁液の形態で非経口投与によって;もしくは皮下投与によって;もしくは坐薬の形態での直腸投与によって;もしくは経皮的に投与されてもよい。経口投与のためには、本発明の化合物は、アジュバント又はキャリア、例えば乳糖、サッカロース、ソルビトール、マンニトール;デンプン、例えばジャガイモデンプン、コーンスターチ又はアミロペクチン;セルロース誘導体;結合剤、例えばゼラチン又はポリビニルピロリドン;及び/又は滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、ワックス、パラフィンなどと混合し、次に錠剤に圧縮すればよい。もし被覆錠剤が必要なら、上記のように製造したコアを、例えばアラビアゴム、ゼラチン、滑石及び二酸化チタンを含んでもよい濃縮された糖溶液で被覆すればよい。或いは、錠剤を、揮発し易い有機溶媒に溶解した好適なポリマーで被覆すればよい。軟ゼラチンカプセルを製造するために、本発明の化合物は、例えば植物油又はポリエチレングリコールと混合してもよい。硬ゼラチンカプセルは、前述の錠剤用の賦形剤のどれかを用いて本化合物の顆粒を含有させればよい。同様に、本発明の化合物の液体又は半固体の製剤は、硬ゼラチンカプセルに充填されてもよい。経口適用のための液体製剤は、シロップ又は懸濁液、例えば本発明の化合物を含み、糖とエタノール、水、グリセリン及びプロピレングリコールの混合物とのバランスのとれた溶液、の形態をとってもよい。場合により、そのような液体製剤は、着色材、着香剤、サッカリン及び/又は増粘剤としてのカルボキシメチルセルロース又は当業者が知る他の賦形剤を含んでもよい。本発明の化合物はまた、上記の状態の処置に使用される他の化合物と併用して投与されてもよい。更なる実施態様では、本発明の化合物又は式Iの化合物を含む医薬組成物又は製剤は、他の薬学的に活性な化合物又は下記より選択される化合物と共に、同時に、逐次的に又は別々に投与される:i抗うつ薬の、例えば、アゴメラチン、アミトリプチリン、アモキサピン、ブプロピオン、シタロプラム、クロミプラミン、デシプラミン、ドキセピン、デュロキセチン、エルザソナン、エスシタロプラム、フルボキサミン、フルオキセチン、ジェピロン、イミプラミン、イプサピロン、マプロチリン、ノルトリプチリン、ネファゾドン、パロキセチン、フェネルジン、プロトリプチリン、レボキセチン、ロバルゾタン、セルトラリン、シブトラミン、チオニソキセチン、トラニルシプロマイン、トラゾドン、トリミプラミン、ベンラファキシン、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;ii非定型抗精神病薬の、例えば、クエチアピン及び薬学的に活性なその異性体及び代謝物;iii抗精神病薬の、例えば、アミスルピリド、アリピプラゾール、アセナピン、ベンジソキシジル、ビフェプルノックス、カルバマゼピン、クロザピン、クロルプロマジン、デベンザピン、ジバルプロエックス、デュロキセチン、エスゾピクロン、ハロペリドール、イロペリドン、ラモトリジン、ロクサピン、メソリダジン、オランザピン、パリペリドン、ペルラピン、ペルフェナジン、フェノチアジン、フェニルブチルピペリジン、ピモジド、プロクロルペラジン、リスペリドン、セルチンドール、スルピリド、スプロクロン、スリクロン、チオリダジン、トリフルオペラジン、トリメトジン、バルプロアート、バルプロ酸、ゾピクロン、ゾテピン、ジプラシドン、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;iv抗不安薬の、例えば、アルネスピロン、アザピロン系、ベンゾジアゼピン系、バルビツール酸系の例えば、アジナゾラム、アルプラゾラム、バレゼパム、ベンタゼパム、ブロマゼパム、ブロチゾラム、ブスピロン、クロナゼパム、クロラゼパート、クロルジアゼポキシド、シプラゼパム、ジアゼパム、ジフェンヒドラミン、エスタゾラム、フェノバム、フルニトラゼパム、フルラゼパム、フォサゼパム、ロラゼパム、ロルメタゼパム、メプロバメート、ミダゾラム、ニトラゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、レクラゼパム、トラカゾレート、トレピパム、テマゼパム、トリアゾラム、ウルダゼパム、ゾラゼパム、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;v抗痙攣薬の、例えば、カルバマゼピン、クロナゼパム、エトスクシミド、フェルバメート、ホスフェニトイン、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オキスカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、ルフィナマイド、トピラメート、バルプロエート、ビガバトリン、ゾニサミド、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;viアルツハイマー病治療薬の、例えば、ドネペジル、リバスティグミン、ガランタミン、メマンチン、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;viiパーキンソン病治療薬の、例えば、デプレニル、L-ドーパ、レキップ、ミラペックス、MAOB阻害剤のセレジン及びラサギリンなど、comP阻害剤のタスマー、A-2阻害剤、ドーパミン再取り込阻害剤、NMDAアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニスト、及びニューロンの一酸化窒素シンターゼ阻害剤、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;viii片頭痛治療薬の、例えば、アルモトリプタン、アマンタジン、ブロモクリプチン、ブタルビタール、カベルゴリン、ジクロラールフェナゾン、ジヒドロエルゴタミン、エレトリプタン、フロバトリプタン、リスリド、ナラトリプタン、ペルゴリド、ピゾチフェン、プラミペキソール、リザトリプタン、ロピニロール、スマトリプタン、ゾルミトリプタン、ゾミトリプタン、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;ix脳梗塞治療薬、血栓溶解療法用を含む、例えば、アクチバーゼ及びデスモテプラーゼ、アブシキシマブ、シチコリン、クロピドグレル、エプチフィバチド、ミノサイクリン、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;x尿失禁治療薬の、例えば、ダラフェナシン、ファルボキサート、オキシブチニン、プロピベリン、ロバルゾタン、ソリフェナシン、トルテロジン、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;xi神経障害性疼痛治療薬の、例えば、リドカイン、カプサイシン、及び抗痙攣薬の、例えばガバペンチン、プレガバリン、及び抗うつ薬の、例えばデュロキセチン、ベンラファキシン、アミトリプチリン、クロミプラミン、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;xii侵害受容性疼痛治療薬の、例えば、パラセタモール、非ステロイド系消炎物質及びコキシブ系の、例えば、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ジクロフェナク、ロキソプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、イブプロフェン、ナブメトン、メロキシカム、ピロキシカム、及びオピオイド系の、例えば、モルヒネ、オキシコドン、ブプレノルフィン、トラマドール、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;xiii不眠症治療薬の、例えば、アゴメラチン、アロバルビタール、アロニミド、アモバルビタール、ベンゾクタミン、ブタバルビタール、カプリド、クロラール、クロペリドン、クロレタート、デクスクラモール、エトクロルビノール、エトミダート、グルテチミド、ハラゼパム、ヒドロキシジン、メクロカロン、メラトニン、メフォバルビタール、メタカロン、ミダフルール、ニソバメート、ペントバルビタール、フェノバルビタール、プロポフォール、ラメルテオン、ロレタミド、トリクロホス、セコバルビタール、ザレプロン、ゾルピデム、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など;又はxiv気分安定剤の、例えば、カルバマゼピン、ジバルプロエックス、ガバペンチン、ラモトリジン、リチウム、オランザピン、クエチアピン、バルプロアート、バルプロ酸、ベラパミル、及び同等物、並びに薬学的に活性なその異性体及び代謝物など。そのような配合製品には、本明細書に記載の用量範囲の本発明の化合物、及び他の薬学的に活性な化合物又は化合物類が、承認された用量範囲及び/又は関連する出版物に記載の用量内で使用される。製造方法、実験作業一般的方法使用したすべての溶媒は分析グレードであり、市販の無水溶媒は、日常的に反応に使用した。反応は、通常窒素又はアルゴンの不活性雰囲気下で行った。1H、19F及び13CNMRスペクトルは、Z-グラジエントを備えた5mmBBOプローブヘッドを装備したVarianUnity400NMRスペクトロメータ、又は5mmBBIプローブヘッドを装備したVarianGemini300NMRスペクトロメータ、又はZ-グラジエントを備えた60μL二重逆流プローブヘッドを装備したBrukerAvance400NMRスペクトロメータ、又はVarian400ATBPFGプローブを装備したVarianMercuryPlus400NMRスペクトロメータ、又はZ-グラジエントを備えた4核プローブヘッドを装備したBrukerDPX400NMRスペクトロメータ、又はZ-グラジエントを備えた5mmBBIプローブヘッドを装備したBrukerAvance600NMRスペクトロメータで記録した。実施例の中で特に言及しない限り、スペクトルは、プロトンを400MHzで、19Fを376MHzで、そして13Cを100MHzで記録した。或いは、1H及び13CのNMRスペクトルは、Varian400ATBPFGプローブを装備したVarianMercuryPlus400NMRスペクトロメータで、プロトンを400MHzで及び13Cを100MHzで記録した。次の基準信号を使用した:ジメチルスルホキシド-d6の中心線δ2.501H、δ39.5113C;CD3ODの中心線δ3.311H又はδ49.1513C表示されない限り。NMRスペクトルは、低磁場から高磁場の方向に報告される。或いは、全ての重水素化溶媒は、一般に0.03体積~0.05体積のテトラメチルシランを含んでおり、それを基準信号1H及び13Cの両者に対してδ0.00が充てられたとして使用した。質量スペクトルは、Alliance2795LC、WatersPDA2996及びZQSingleQuadrupoleMassSpectrometerで構成されるWaters液体クロマトグラフィー質量分析又はWatersMicromassZQDetector上で、120°Cで記録した。質量スペクトロメータは、陽イオン又は陰イオンモードで作動するエレクトロスプレーイオン源エレクトロスプレーイオン化を装備した。キャピラリー電圧は3kVであり、コーン電圧は30Vであった。質量スペクトロメータは、0.3秒のスキャン時間で、m/z100~700又はm/z100~1000の間をスキャンした。分離は、WatersX-TerraMSC83.5μm、50又は100mm×2.1mm内径又はScantecLab社から得たACE3AQ100mm×2.1mm内径のいずれかで行った。流速は、それぞれ1.0又は0.3mL/分に調節した。カラム温度は、40°Cに設定した。100AA:95:5、10mMNH4OAc:MeCN;又は95:5、8mMHCOOH:MeCNで開始し100BB:MeCNで終結する、中性または酸性移動相システムを用いた直線的勾配を適用した。質量スペクトルはまた、Alliance2690SeparationsModule、Waters2487Dual1AbsorbanceDetector220及び254nm及びWatersZQSingleQuadrupoleMassSpectrometerで構成されるWaters液体クロマトグラフィー質量分析上で記録した。質量スペクトロメータは、陽イオン又は陰イオンモードで作動するエレクトロスプレーイオン源エレクトロスプレーイオン化を装備した。キャピラリー電圧は3kVであり、コーン電圧は30Vであった。質量スペクトロメータは、0.3又は0.8秒のスキャン時間で、m/z97~800の間をスキャンした。分離は、ChromolithPerformanceRP-18e100×4.6mm上で行った。95AA:0.1HCOOHaq.で開始し、5分後に100BB:MeCNで終結する、直線的勾配を適用した。流速は、2.0mL/分であった。或いは、UltraPressureUP液体クロマトグラフィー質量分析は、AcquityAutosampler、AcquitySampleOrganizer、AcquityColumnManager、AcquityBinarySolventManager、AcquityUPLCPDA検出器及びWatersSQDetectorで構成されるWatersAcquityUPLCシステム上で行った。質量スペクトロメータは、陽イオン又は陰イオンモードで作動するエレクトロスプレーイオン源ESを装備した。キャピラリー電圧は3.0kVに、コーン電圧は30Vにそれぞれ設定した。質量スペクトロメータは、0.105秒のスキャン時間で、m/z100~600の間をスキャンした。ダイオードアレイ検出器は、200~400nmをスキャンした。ColumnManagerの温度は、60°Cに設定した。分離は、Acquityカラム、UPLCBEH、C181.7μM上で、0.5mL/分の流速で実施した。100AA:5MeCN中10mMNH4OAcで開始し、1.3分後に100BB:MeCN、その後100Bを0.6分で終結する、直線的勾配を適用した。ESpos/ESneg、m/z100~600。化合物同定はまた、AgilentTechnologiesによって供給され、6890NG1530NGC、G2614aAutosampler、G2613a注射器及びG2589N質量スペクトロメータで構成されるガスクロマトグラフィー-質量分析システム上で行った。使用したカラムはVF―5質量分析、ID0.25mm×30m、0.25μmVarian社であった。70°C1分間保持で開始し300°C1分間保持で終わる、25°C/分の直線的温度勾配を適用した。質量スペクトロメータは、化学イオン化CIイオン源を装備し、反応ガスはメタンであった。質量スペクトロメータは、m/z50~500の間をスキャンし、スキャンスピードは3.21スキャン/秒に設定した。溶媒遅延は、0分から2.0分に設定した。高速液体クロマトグラフィー分析は、G1379aMicroVacuumDegasser、G1312aBinaryPump、G1367aWellplateauto-sampler、G1316aThermostattedColumnCompartment及びG1315BDiodeArrayDetectorで構成されるAgilentHP1000システム上で行った。カラム:X-Terra質量分析、Waters、3.0×100mm、3.5μm。カラム温度は40°Cに、流速は1mL/分に設定した。DiodeArrayDetectorは、210nmから300nmをスキャンし、ステップ及びピーク幅はそれぞれ2nm及び0.05分に設定した。100AA:95:5、10mMNH4OAc:MeCNで開始し、4分後に100BB:MeCNで終結する、直線的勾配を適用した。高速液体クロマトグラフィー分析はまた、ChromolithPerformanceRPカラムC18、100mm×4.6mmを装着したGynkotekUVD170sUV-vis検出器を装備した勾配ポンプで構成されたGynkotekP580HPGを用いて行った。カラム温度は、25°Cに設定した。MilliQ水中のMeCN/0.1トリフルオロ酢酸を用い、10から100MeCNまで5分で行われる直線的勾配を適用した。流速:3mL/分。キラル純度分析は、Agilent1100PDA検出器を備えた超臨界液体クロマトグラフィーBergerAnalytixシステム上で実施した。カラム温度は、50°Cに設定した。EtOHとCO2混合物の定組成条件で、流速2.0mL/分を適用した。PDAは、190~600nmをスキャンし、220nmを純度測定用に抽出した。キラルHPLC分析は、もう一つの方法として、Gilsonキラルシステム上で、カラム:ChiralpakAD-H4.6×250mm5μm、移動相:100EtOH、流速:0.8mL/分で行った。施光度は、PDR-Chiralレーザー偏光計を用いて測定した。マイクロ波加熱は、2450MHzで連続照射を発生するシングルモードマイクロ波空洞内で行った。薄層クロマトグラフィー薄層クロマトグラフィーはMerckTLC-platesを使用して、CombiFlash登録商標Companion商標上で行った。フラッシュクロマトグラフィーに使用した代表的な溶媒は、クロロホルム/メタノール、ジクロロメタン/メタノール、ヘプタン/酢酸エチル、クロロホルム/メタノール/アンモニア水及びジクロロメタン/メタノール/NH3水の混合物であった。分取クロマトグラフィーは、ダイオードアレイ検出器を備えたWatersautopurificationHPL上で実施した。カラム:XTerra質量分析C8、19×300mm、10μm。MeCN/955、0.1MNH4OAc:MeCNによる狭勾配を、20mL/分の流速で使用した。精製はまた、WatersSymmetry登録商標カラムC18、5μm、100mm×19mmを装備したShimadzuSPD-10aUV―vis検出器を備えたセミ分取用ShimadzuLC-8aHPLC上で達成した。MeCN/MilliQ水中0.1トリフルオロ酢酸による狭勾配を、10mL/分の流速で使用した。或いは、精製は、WatersSunfireカラム150mm×21.2mmを装備しGilson156UV検出器を備えた分取型Gilson281GilsOnPump322HPLC上で達成した。MeCN/水中の0.1ギ酸による狭勾配を、15mL/分の流速で使用した。キラル分取クロマトグラフィーは、KnauerK-2501UV検出器を備えた超臨界液体クロマトグラフィーBergerMultigramシステム上で実施した。カラム温度は、35°Cに設定した。EtOHとCO2混合物の定組成条件で、流速50.0mL/分を適用した。UV検出器は、220nmでスキャンした。UVシグナルで捕集画分を決定した。化合物名は、AdvancedChemistryDevelopmentACD/Labs社、TorontoONCanada、wwwacdlabscomからのソフトウェアACD/Nameバージョン10.06、又はOpenEyeからのLexichem、バージョン1.4、ソフトウェアを使用して命名した。略語:Abs吸収aq水CASケミカルアブストラクトサービスCDI1,1-カルボニルジイミダゾールDCMジクロロメタンDIPEAN,N-ジイソプロピルエチルアミンDMFジメチルホルムアミドDMSOジメチルスルホキシドEDCI1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドESエレクトロスプレーESIエレクトロスプレーイオン化eq同等物GCガスクロマトグラフィーh時間HCl塩酸、塩酸塩HPLC高速液体クロマトグラフィーIPC工程管理Mモルリットル当たりのモル数min分MS質量分析NMR核磁気共鳴prep分取rt室温Rt保持時間SFC超臨界液体クロマトグラフィーTjジャケット温度Ti内部温度TEAトリエチルアミンTLC薄層クロマトグラフィーTHFテトラヒドロフランTLC薄層クロマトグラフィーUV紫外線VCD振動円二色性出発物質実施例1第三級ブチル1-メトキシアミノ-3,3-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート方法12-第三級ブトキシカルボニルアミノ-3,3-ジメチルブタン酸ケミカルアブストラクトサービス102185-35-3、500mg、2.16mmolのジクロロメタン5mL溶液に、1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドケミカルアブストラクトサービス25952-53-8、497mg、2.59mmolを添加し、10分間室温で撹拌した。N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩ケミカルアブストラクトサービス6638-79-5、253mg、2.59mmol及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン0.429mL、2.59mmolのジクロロメタン5mL溶液を添加し、反応混合物を撹拌しながら室温で週末にかけて放置した。混合物は、ジクロロメタン30mLで希釈し、飽和NaHCO3水50mLで抽出した。有機相を、硫酸マグネシウムで乾燥してろ過する前に、水で洗浄した。溶媒を減圧除去し、第三級ブチル1-メトキシアミノ-3,3-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメートを得た466mg、79。1HNMR500MHz,CDCl3δppm0.98s,9H1.43s,9H2.19-2.28m,1H3.21s,3H3.78s,3H4.66d,1H。GC-MSunprotectedaminoacidm/z130,Rt:5.82min。方法2清浄したそして乾燥した10Lの反応器に、ジャケット温度が25°Cで、N-boc-第三級ブチルグリシンNBoctertLeucine,ケミカルアブストラクトサービス102185-35-3188g;0.77mol;1.00eq及びジクロロメタン6.25L;35volを入れ、細かいスラリー状にした。1,1’-カルボニルイミダゾール208.7g;1.3eqを、ガス排出のもと約1分後に1部を撹拌しながら添加し、清澄な淡緑色溶液にした。反応は、ガスクロマトグラフィーでモニターし、ジャケット温度25°Cの室温で1時間後、第2部の1,1’-カルボニルイミダゾール32.1g;0.2eqを添加し、反応混合物を1晩放置した。清澄な反応混合物に、N,O-ジメチルヒドロキシルアミン153.7g;2.0eq、続いてトリエチルアミン215mL;2.0eqを添加した。ジャケット温度を50°Cに設定し、反応の変化はガスクロマトグラフィー分析でフォローした。第2部のN,O-ジメチルヒドロキシルアミン26.9g;0.35eq及びトリエチルアミン37mL;0.35eqを混合物に添加し、反応はジャケット温度50°C内部温度41°Cで48時間継続し、98.7の変換を生じさせた。反応混合物大よそpH8を冷却し、ジャケット温度20°Cで、水2.82L;15volを反応器に加え、生じた混合物を10分間撹拌した。有機層を回収し、水2×2.82L;2×15vol、NaHCO32×2.3L;2×12vol、最後に水2×1.88L;2×10volで2回ずつ洗浄した。有機層を40°Cで減圧濃縮して黄色の残留油状物を得、そしてそれをトルエン250mLと共蒸発させて295gの油状生成物にして一晩放置した。結晶質の混合物が出現した。混合物は、ろ過しP3焼結ディスク:直径100mm、トルエン75mLで洗浄そして乾燥し、白色結晶性物質138gを得た。2番目の収穫158gを得て、熱n-ヘプタン250mLに溶解し、外部の氷水浴で冷却して淡色の物質56gを得た。分析の結果、それぞれ、1番目の収穫は96.8重量、2番目の収穫は72重量であった。NMRアッセイに基づく総収率194gは82であった。実施例2a第三級ブチル1-4-クロロフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート第三級ブチル1-メトキシアミノ-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート実施例1、466mg、1.70mmolを、乾燥テトラヒドロフラン10mLに溶解した。次に4-クロロフェニルマグネシウムブロミドケミカルアブストラクトサービス873-77-8、1.0Mのテトラヒドロフラン溶液、6.79mL、6.79mmolを、室温で滴加した。室温で一晩撹拌した後、反応をNH4Clで停止させ、EtOAc2×50mLで抽出した。併せた有機相を水で1回洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過した。溶媒を除去した後、生成物をシリカゲルカラム上で、10~20のヘプタン:EtOAcで溶出して精製し、第三級ブチル1-4-クロロフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート137mg、25を得た。1HNMR500MHz,CDCl3δppm0.93s,9H1.44s,9H5.12d,1H5.40d,1H7.46d,2H7.95d,2H。MSESIm/z325.8[MH]。実施例2b第三級ブチル1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート乾燥した清浄な10L低温反応器に、4-ブロモベンゾニトリル321g;1.74mol;2.5eq及びテトラヒドロフラン995mL;5.0volを加えた。撹拌した混合物は、窒素雰囲気のもとで不活性化し、冷却したジャケット温度-20°C。冷却した混合物に、内部温度-13°Cでターボグリニヤール試薬iPrMgCl/LiClの14重量テトラヒドロフラン溶液に相当する、Chemetall社のTurboGrignardReagent;1.81L;2.5eqを窒素雰囲気下で加え、1時間14分間約-10°Cより下の温度に維持した。反応中間物は、約0°Cに3時間放置し、>97の変換が得られた分析サンプルは、15重量のNH4Cl水で停止させた。混合物は、ジャケット温度-20°Cに冷却し、第三級ブチル1-メトキシアミノ-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート191g;0.70mol;1.0eqのテトラヒドロフラン溶液496mL;2.6volを、28分間で、約-10°Cから-6°Cで反応器に加えた発熱反応。容器はテトラヒドロフラン221mL;1.3Lですすぎ、反応混合物を20°Cに温め、1晩放置し、約90の変換高速液体クロマトグラフィーを得た。混合物は0°Cジャケット温度-10に冷却し、酒石酸ナトリウムカリウムロッシェル塩153g;1.05eqの水溶液10volを、温度を0°Cから10°Cに保ちながら30分間で滴加し、オレンジ色のスラリーを得た。ジャケット温度を40°Cに設定し、撹拌を内部温度30°Cで止め、相を分離させた。赤色の有機層を回収し、黄色のスラリー様水相は、ジャケット温度30°Cで、iPrOAcで2回2×1.91L;2×10vol抽出した。有機層を併せ7.5L、ジャケット温度30°Cで、かん水混合物で3回33vol;55vol;33vol洗浄した。洗浄後の有機層をジャケット温度60°Cで約1.5Lのボリュームに減圧濃縮し、2Lに希釈したiPrOAc。生成物溶液は、さらに精製すること無しに次の工程実施例3、方法2に進めた。実施例34-2-アミノ-3,3-ジメチルブタノイルベンゾニトリル塩酸塩方法1第三級ブチル1-4-クロロフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート実施例2a、2.30g、7.06mmol及びZnCN20.87g、7.4mmolを、N2gの下でジメチルホルムアミド20mLに溶解した。PdPPh340.86g、0.74mmolを添加し、混合物を130°Cで一晩加熱した。混合物は室温に冷却し、水で希釈してEtOAcで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、そして蒸発させた。生成物は、シリカカラムEtOAc:ヘキサン、1:10で精製し、第三級ブチル1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート961mg、43を得た。第三級ブチル1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート961mg、3.04mmolを0°Cで1.25MHClのMeOH溶液に溶解しそして混合物を室温で8時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を真空乾燥して4-2-アミノ-33-ジメチルブタノイル-ベンゾニトリル塩酸塩110mg、93を得た。1HNMR400MHz,MeODδppm1.02s,9H5.05s,1H7.96d,2H8.20d,2H。MSESIm/z217.1[MH]。方法2清浄にして乾燥した10Lの反応器に、ジャケット温度65°Cで、2-プロパノール573mL及びHClの2-プロパノール溶液5M;696mL;5eqを投入した。混合物に、内部温度53°Cで、前段上記の実施例2bで得た第三級ブチル1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イルカルバメート溶液を一部約150mLずつ9分間で添加した約600mLの添加の後、生成物が沈殿し始めた。スラリーを1時間撹拌し、分析の結果、完全な変換が得られたガスクロマトグラフィー。細かい結晶性スラリーを冷却ジャケット温度0°Cし、一晩放置した。生成物は、減圧してガラスフィルター2つのフィルター;P3焼結ディスク;直径130mm上で分離した約3時間の緩速ろ過。生成物は、それぞれのフィルター上で、冷0°C2-プロパノール496mL;2.6volとiPrOAc650mL;3.4volの混合物及びMeTHF2×425mL;2×3volで変位洗浄した。生成物は、40°Cで1週間にわたって減圧乾燥し、白い細かい結晶性塩酸塩135gを得た。分析の結果、99.5面積254nmの高速液体クロマトグラフィー純度、及び94重量のNMRアッセイを得た。NMRアッセイに基づいた2段にわたる収率は72であった。実施例41-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン清浄にして乾燥した1/2Lの丸底フラスコに、2-クロロ-6-メチルピリジン80g;620mmol;1.0eq及びピペラジン400g;7.40eqを加えた。混合物は、外部のオイル浴を使用して加熱しジャケット温度154°C、磁気的に撹拌した。応時間約6時間後、反応は完了したと考えられガスクロマトグラフィー分析、室温に冷却した。冷混合物に、トルエン475mL;6vol及び水633mL;8volを添加し、清澄な2相にした。水相を回収し、トルエン150mLで抽出した。トルエン層を併せ、ブライン17.5重量;150mLで洗浄し、減圧で濃縮して油状残留物を得た推定量:遊離塩基88g。室温の1Lの反応器に、MeTHF790mL;10volに溶解した遊離塩基の溶液を、HCl水溶液1N;396mL;5eqに添加した。黄色の水相を回収し、外部の氷水浴で冷却し、NaOH5M;95mLでpH>11に塩基性化した。塩基性の水相は、MeTHF792mL;10volで抽出し、水相を回収し、そして有機層は減圧濃縮及び共沸蒸留によって乾燥した。乾燥した生成物含有MeTHF層470mL;5volを外部の氷水浴で冷却し、不透明な溶液を得た。その溶液に、2-プロパノールに溶解したHCl310mL3.0eqをゆっくり加え、オフホワイトの生成物を析出させた。得られたスラリーを1時間冷却し、生成物をガラスフィルターP3焼結ディスク、直径100mmで分離し、氷冷したMeTHF100mLで洗浄した。生成物は40°Cで減圧乾燥し、ジヒドロクロリド塩として101g65を得た。純度は、ガスクロマトグラフィーで測定し96.7面積、NMRアッセイでは、71.5重量塩基であった。収率は、NMRアッセイに基づいて75であった。最終化合物実施例5N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド方法14-2-アミノ-33-ジメチルブタノイルベンゾニトリル塩酸塩実施例3、50mg、0.23mmolを、1,1’-カルボニルジイミダゾール112mg、0.69mmol及びトリエチルアミン0.035mL、0.25mmolのMeCN5mL溶液に添加した。反応混合物は、1-6-メチルピリジン-2-イルピペラジンケミカルアブストラクトサービス55745-89-6、205mg、1.16mmolを添加する前に、室温で90分間撹拌した。混合物は1時間撹拌し、そして溶媒を減圧下でエバポレートした。生成物はメタノールに溶解し、濾過し、そして分取用高速液体クロマトグラフィーで精製し、N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミドを取得した36.3mg、37。1HNMR400MHz,CDCl3δppm0.94s,9H2.40s,3H3.48-3.68m,8H5.25-5.31m,1H5.33-5.39m,1H6.43d,1H6.53d,1H7.40dd,1H7.78m,2H8.14m,2H。MSESIm/z418.3[M-H]。方法2ビストリクロロメチルカルボネート60.6mg、0.20mmolを、4-2-アミノ-3,3-ジメチルブタノイルベンゾニトリル塩酸塩実施例3、129mg、0.51mmol及びトリエチルアミン0.285mL、2.04mmolのジクロロメタン2mL溶液に、室温で、一部ずつ1分以内で添加した。20分間撹拌した後、1-6-メチルピリジン-2-イルピペラジンケミカルアブストラクトサービス55745-89-6、90mg、0.51mmol及びトリエチルアミン0.142mL、1.02mmolのジクロロメタン2mL溶液を滴加し、反応物を90分間撹拌した。反応混合物をMeOHで希釈する前に、揮発物を除去し、濾過しそして分取用高速液体クロマトグラフィーで精製した。画分をプールし、凍結乾燥して、N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド76mg、36を得た。1HNMR500MHz,MeODδppm0.99s,9H2.36s,3H3.53m,8H5.30m,1H6.34m,1H6.57t,3H7.44dd,1H7.88m,2H8.17m,2H。MSESIm/z420.2[MH]。方法3清浄にして乾燥した10Lの反応器に、ジャケット温度22°Cで、1,1’-カルボニルジイミダゾール153.7g;0.74mol;1.5eq続いてジメチルホルムアミド1L;8.0volを加え、清澄な淡黄色の溶液を得た。上記の溶液に、ジャケット温度22°Cで、予め作成した4-2-アミノ-3,3-ジメチルブタノイルベンゾニトリルHCl実施例3の方法2で製造;135g;0.50mol;1.0eq、ジメチルホルムアミド1L;8.0vol及びトリエチルアミン127g;1.26molの懸濁液/溶液の10分轄を、30分間にわたって添加した。温度を25°Cに上げ、生じた混合物を30分間撹拌した。出発物質をイミダゾール尿素中間体に完全に変換させるために、工程管理ガスクロマトグラフィーを行った。ジャケット温度を5°Cに設定し、トリエチルアミン247.5g;5eqを、<10°Cで、反応混合物に添加した。混合物に、内部温度を<30°Cに維持しながら、1-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン2HCl実施例4;184g;1.50eqを一部ずつ33分間で添加した。反応混合物は、ジャケット温度25°Cでさらに30分間撹拌して工程管理を行い、99.5高速液体クロマトグラフィーの変換を得た。混合物を冷却ジャケット温度5°Cし、一晩放置した。混合物に、5°Cで、NH4Cl285g;10eqの水溶液2.0L;15volを分割して8分間で添加した。ジャケット温度を25°Cに設定し、生成した混合物にトルエン2.26L;16.7volを添加した。有機相を回収し、水相は、一度トルエン2.26L;16.7volで抽出した。有機相を併せ、水500mL;3.7volで洗浄し、2×HCl30重量;127mL;2eqの水溶液2.5L;18.5volで2回抽出した。酸性水相は、トルエン1.1L;8.1volで洗浄した。有機層を回収し、水相は反応器に再投入し、EtOAc2.3L;17volを添加した。混合物に、25°Cで、予め作成したNaHCO3249g;5.9eqの水溶液pH8を撹拌のもとに添加した。塩基性の水相を回収し、EtOAc2.2L;16volで洗浄し、有機相を併せてブライン400mLで洗浄し、そして溶液をジャケット温度15°Cで一晩放置した。有機層4Lを、40°Cで大よそ半量に減圧濃縮し、SiO2約250gと混合しそして溶媒を除去して、シリカ粉末のカラムヘッドを得た。シリカカラムヘッドは、予めEtOAcで充填されたシリカカラム120mm×400mm;約4kgのSiO2、40~60メッシュの上に載せた。フラッシュクロマトグラフィー法は約20LのEtOAcを溶離剤として使用し、進行は薄層クロマトグラフィーでモニターした。薄層クロマトグラフィー分析後の画分約250mLをプールし、40°Cで減圧濃縮した。得られた生成物を、40°Cで減圧して乾燥し、191.5gの純白な物質を得た。分析から、99.7面積254nmの高速液体クロマトグラフィー純度及び98.5重量のアッセイ純度を得た。残留溶媒EtOAcは0.1重量であった。この物質180gは、目的のエナンチオマー、N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミドの製造に使用した。NMRアッセイに基づく収率は90であった計算値。実施例6R-N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド方法1実施例5からのラセミ体19mgを、キラルクロマトグラフィーによって分離し、R-N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド5.6mg、30を得た。キラル純度100、次のシステム上での保持時間4.42分:SFCBergerAnalytix、カラム:ChiralcelOD―H;4.6×250mm;5μm、移動相:20EtOH;80CO2、流量:2mL/分。1HNMR500MHz,DMSO-d6δppm0.93s,9H2.29s,3H3.43m,8H5.11d,1H6.52d,1H6.59m,2H7.42dd,1H7.98d,2H8.14d,2H。MSESIm/z420.3[MH]。方法2高圧分取クロマトグラフィーシステムを用いて実施例6を製造するために、キラル分取クロマトグラフィーを用いた。ラセミ体はエタノールに溶解した25g/L供給液。固定相はChiralcelOD20ミクロンであり、移動相はイソヘキサン/エタノールの90:10であった。分離は25°Cの温度で行い、一注入当たり30mLの仕込み0.75gをカラムに負荷した。注入は、120mL/分の流速での分離の効率を高めるため、15分毎に積み重ねた。320nmのUV検出波長を用いた。単一画分1番目の溶出ピークを集め、定期的に採取した画分を高速液体クロマトグラフィーで以下の条件を用いて分析した。ChiralcelOD-H:4.6×250mm:5μm、移動相:60:40のイソヘキサン/IPA、1mL/分、保持時間約8.3分。最終のキラル純度は100。収率は約45であった。実施例7S-N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド実施例5からのラセミ体19mgを、キラルクロマトグラフィーによって分離し、S-N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド4.2mg、22を得た。キラル純度99.8、次のシステム上での保持時間6.34分:SFCBergerAnalytix、カラム:ChiralcelOD-H;4.6×250mm;5μm、移動相:20EtOH;80CO2、流量:2mL/分。1HNMR500MHz,DMSO-d6δppm0.94s,9H2.29s,3H3.42m,8H5.12d,1H6.52d,1H6.60dd,2H7.42dd,1H7.99m,2H8.15m,2H。MSESIm/z420.3[MH]。固体特性R-N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミド実施例6X線粉末回折XRPDパターンは、45kV及び40mAで、高精度長焦点CuKα-線、1.5418ÅのX線波長を使用するPANalyticalX’PROMPDθ-θシステムで収集した。10mmの照射距離を与えるプログラム可能な発散スリット及びプログラム可能な散乱線除去スリットを使用した。0.02ラジアンのソーラースリットを、入射及び回折ビーム経路に使用した。20mmの固定マスクを入射ビーム経路に使用し、ニッケルフィルターを255のアクティブチャンネルを用いるPIXcel検出器の前に置いた。薄い平板試料は、スパチュラを用いて、シリコンの平らなゼロバックグラウンドプレート上に用意した。プレートをサンプルホルダに搭載し、測定する間、水平位置で回転させた。回折パターンは、連続スキャンモードで2°2θ~40°2θの間を収集した。2°2θ及び40°2θの間をスキャンするための合計時間は、約10分であった。R-N-1-4-シアノフェニル-33-ジメチル-1-オキソブタン-2-イル-4-6-メチルピリジン-2-イルピペラジン-1-カルボキサミドのディフラクトグラムを図1に示す。振動円二色性コンピュータスペクトルシミュレーション低エネルギー配置を検索するMonteCarlo分子力学は、Sエナンチオマー断片について、MaestroグラフィックインタフェースSchrodinger社内のMacroModelを使用して行った。最も低いエネルギー配座異性体が5kcal/mol以内の全ての配座異性体はすべて、Gaussian03の中の密度関数理論DFT最小化の出発点として使用した。最適化構造、調和振動周波数/強度、振動円二色性回転力、及びSTPゼロ点エネルギーを含むでのフリーエネルギーは、それぞれの配座異性体に対して決定した。これらの計算では、6-31G基底関数系と併せてB3PW91で一般化された密度勾配近似GGA交換相関密度汎関数を用いた。それぞれの構造に対する振動円二色性スペクトルをシミュレーションし、ローレンツ曲線形12cm1線幅にフィットさせ、シミュレーションと実験スペクトルの間が直接比較出来るように、計算スペクトルをボルツマン加重した。実験に基づく振動円二色性実験的なスペクトルは、約8mgのサンプルを約0.15mLのCDCl3に溶解して取得した。分析は、BioTool社のChiralIR装置を用い、デュアル線源、デュアルPEM、振動円二色性スキャンプロトコルを使用し、0.1mmBaF2セル内で4cm1の分解能で行った。装置は、37.024kHzでを設計した。簡潔に言えば、TRPA1を発現するHEK293細胞を、384ウェルのマイクロタイタープレートで培養し、細胞内カルシウムの変化を報告する蛍光プローブ、Fluo-4、を負荷させる。TRPA1チャンネル活性は、アッセイ緩衝液中でベースライン信号の測定、その後EC80-濃度のTRPA1-アゴニストである亜鉛を適用することによってアッセイする。その後のTRPA1チャンネルを通過するカルシウムの流入は、細胞質カルシウムの増加として検出され、それは、入れ替わりにFluo―4蛍光の増加として報告される。試験化合物の活性は、亜鉛を添加する5分前に化合物を加えることによって評価する。TRPA1遮断薬アンタゴニストは亜鉛の添加によって誘発されるカルシウム流入を阻害し、従ってFluo―4蛍光の増加は起こさない。TRPA1オープナーアゴニストはそれ自身でカルシウム流入を引き起こし、Fluo―4蛍光の増加は、化合物添加の直後に検出される。アッセイでは、HEK293細胞株のTRPA1の発現は、誘導可能なプロモータの制御下にある。それ故、誘導された細胞と誘導されない細胞について、亜鉛刺激からの信号を比較することによってTRPA1信号の特異性を規定することが可能である。TRPA1は、痛みを引き起こす多くの刺激剤によって活性化される。TRPA1-依存の問題において、亜鉛はマウスの侵害受容感覚ニューロンを活性化させる必須生体微量元素である。亜鉛は、TRPA1チャネルを通過する亜鉛の流入を必要とし、そして次に特異的細胞内システイン及びヒスチジン残基を経由して活性化する独特のメカニズムを経由してTRPA1を活性化する。hTRPA1-HEK293-TREx細胞は、ポリ-D-リジン被覆プレートに播種し、細胞培地中でコンフルエントな単層に増殖させた。実験の前に培地を廃棄し、アッセイ緩衝液に溶解したfluo-4NWMolecularProbe社を、細胞に室温で1時間負荷させた。化合物を細胞プレートに添加し、Ca2不含のアッセイ緩衝液中で5分間レインキュベートした。次にCa2含有アッセイ緩衝液中200mMのZn2を細胞に添加し、生の蛍光カウントを、波長470~495nmの励起LEDバンク及び波長515~575nmの放射フィルターを使用して測定した。一般的なアッセイ条件は、次のとおりである:試験化合物:30μM~0.001μM、又はポジティブコントロール及びネガティブコントロール中ゼロ;アッセイ緩衝液pH7.4:Ca2及びMg2の含又は不含のHBSS、10mMHepes、1mMグルコース、0.4NaHCO3、アゴニスト:200μM塩化亜鉛。試験する化合物は100ジメチルスルホキシドで希釈し、そして実験の前に、アッセイ緩衝液でさらに50倍に希釈した。アッセイにおける100活性は、試験化合物不在で200μMのZn2によって起こるピークの蛍光レベルと定義した。IC50は、この反応を50阻害するのに必要な試験化合物の濃度を表した。代表的な化合物のアッセイデータは、以下の表に示す。力価はIC50カルシウム緩衝液における平均信号に比して50阻害に要する濃度として表示され、示された値は少なくとも2つの個別実験の平均である。"