"以下のa~c;a配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列と配列同一性が85以上であり、b3-キヌクリジノンを還元してR-3-キヌクリジノールを生成し、もしくは、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを還元してS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成し、c配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、ハロゲン原子存在下でのカルボニル化合物に対する反応性が高い、の性質を示すポリペプチド。前記ハロゲン原子が塩素原子である、請求項1に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2、5、8、11、23、26、28、29、30、32、33、34、40、45、46、48、61、62、64、65、66、68、71、72、75、78、79、80、81、83、88、90、95、96、100、103、105、108、115、116、119、123、128、130、133、137、141、146、152、164、168、169、170、176、177、180、189、191、196、200、201、203、211、218、225、226、229、230、231、234、240、242、および262番目、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸が置換されているか、および/またはN末端及びC末端のいずれかにアミノ酸が1つもしくは複数個付加されている、請求項1または2に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2番目がイソロイシンもしくはアラニン、5番目がアルギニン、8番目がアラニン、11番目がバリンもしくはスレオニン、23番目がスレオニン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジンもしくはロイシン、29番目がロイシン、30番目がセリン、32番目がヒスチジン、33番目がロイシン、34番目がメチオニン、40番目がアルギニン、45番目がセリンもしくはスレオニン、バリン、プロリン、46番目がメチオニンもしくはイソロイシン、48番目がスレオニン、61番目がグリシン、62番目がアラニンもしくはスレオニン、64番目がスレオニン、65番目がスレオニン、66番目がバリン、68番目がセリンもしくはロイシン、71番目がグルタミン、72番目がフェニルアラニン、75番目がシステインもしくはヒスチジン、78番目がヒスチジン、79番目がアラニン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、83番目がアラニン、88番目がセリン、90番目がセリン、95番目がグリシン、96番目がアスパラギン酸もしくはリジン、100番目がスレオニン、103番目がヒスチジン、105番目がスレオニンもしくはバリン、108番目がスレオニン、115番目がイソロイシン、116番目がスレオニン、119番目がグルタミン酸、123番目がグリシン、128番目がヒスチジン、130番目がアスパラギン、133番目がアスパラギン酸、137番目がスレオニン、141番目がバリン、146番目がアラニン、152番目がセリン、164番目がスレオニン、168番目がアルギニン、169番目がセリン、170番目がアルギニン、176番目がバリン、177番目がアラニン、180番目がシステイン、189番目がスレオニン、191番目がイソロイシン、196番目がロイシン、200番目がバリン、201番目がアラニン、203番目がグリシン、211番目がバリン、218番目がバリン、225番目がセリン、226番目がスレオニンもしくはバリン、229番目がバリン、230番目がイソロイシン、231番目がフェニルアラニン、234番目がロイシン、240番目がアラニン、242番目がスレオニン、262番目がメチオニンに置換、C末端にトリプトファン、およびアルギニンが付加、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が導入されている、請求項3に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2番目がイソロイシン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、61番目がグリシン、68番目がセリン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、83番目がアラニン、95番目がグリシン、96番目がリジン、119番目がグルタミン酸、123番目がグリシン、130番目がアスパラギン、152番目がセリン、196番目がロイシン、200番目がバリン、230番目がイソロイシン、および234番目がロイシンに置換、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換が導入されており、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、塩化物イオン存在下での安定性が向上している請求項4に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に下記の1~17;12番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、25番目がアルギニン、23番目がスレオニン、100番目がスレオニン、201番目がリジン、326番目がチロシン、428番目がヒスチジン、61番目がグリシン、234番目がロイシン、568番目がセリン、680番目がチロシン、130番目がアスパラギン、781番目がスレオニン、883番目がアラニン、988番目がセリン、1095番目がグリシン、1196番目がリジン、12105番目がスレオニン、226番目がバリン、13119番目がグルタミン酸、196番目がロイシン、14123番目がグリシン、15152番目がセリン、16200番目がバリン、および17230番目がイソロイシン、から選択されるアミノ酸置換が導入されている請求項5に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に次の群;2番目がイソロイシンもしくはアラニン、5番目がアルギニン、8番目がアラニン、23番目がスレオニン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジンもしくはロイシン、29番目がロイシン、30番目がセリン、32番目がヒスチジン、33番目がロイシン、34番目がメチオニン、40番目がアルギニン、45番目がセリンもしくはスレオニン、バリン、プロリン、46番目がメチオニンもしくはイソロイシン、48番目がスレオニン、61番目がグリシン、62番目がアラニンもしくはスレオニン、65番目がスレオニン、66番目がバリン、68番目がセリンもしくはロイシン、71番目がグルタミン、72番目がフェニルアラニン、75番目がシステインもしくはヒスチジン、78番目がヒスチジン、79番目がアラニン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、88番目がセリン、90番目がセリン、95番目がグリシン、96番目がアスパラギン酸もしくはリジン、100番目がスレオニン、103番目がヒスチジン、105番目がバリン、108番目がスレオニン、115番目がイソロイシン、116番目がスレオニン、123番目がグリシン、128番目がヒスチジン、130番目がアスパラギン、133番目がアスパラギン酸、137番目がスレオニン、141番目がバリン、146番目がアラニン、152番目がセリン、164番目がスレオニン、168番目がアルギニン、169番目がセリン、170番目がアルギニン、176番目がバリン、177番目がアラニン、180番目がシステイン、189番目がスレオニン、191番目がイソロイシン、200番目がバリン、203番目がグリシン、211番目がバリン、218番目がバリン、225番目がセリン、226番目がスレオニン、229番目がバリン、230番目がイソロイシン、231番目がフェニルアラニン、234番目がロイシン、240番目がアラニン、242番目がスレオニン、262番目がメチオニンに置換、C末端にトリプトファン、アルギニンが付加、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が導入されており、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、塩化物イオンによる反応阻害に対する抵抗性が向上している請求項4に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に下記の1~55;12番目がアラニン、40番目がアルギニン、229番目がバリン、22番目がイソロイシン、32番目がイソロイシン、11番目がバリン、46番目がメチオニン、64番目がスレオニン、42番目がイソロイシン、11番目がスレオニン、46番目がメチオニン、52番目がイソロイシン、28番目がロイシン、46番目がメチオニン、62番目がイソロイシン、29番目がロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、72番目がイソロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、82番目がイソロイシン、45番目がスレオニン、46番目がメチオニン、92番目がイソロイシン、45番目がバリン、46番目がメチオニン、102番目がイソロイシン、45番目がプロリン、46番目がメチオニン、168番目がアルギニン、112番目がイソロイシン、45番目がセリン、46番目がメチオニン、90番目がセリン、122番目がイソロイシン、46番目がイソロイシン、132番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、142番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、48番目がスレオニン、152番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、62番目がスレオニン、162番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、65番目がスレオニン、172番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、66番目がバリン、182番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、68番目がセリン、192番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、78番目がヒスチジン、202番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、177番目がアラニン、215番目がアルギニン、23番目がスレオニン、100番目がスレオニン、201番目がリジン、228番目がアラニン、2328番目がヒスチジン、61番目がグリシン、234番目がロイシン、2428番目がヒスチジン、62番目がアラニン、79番目がアラニン、164番目がスレオニン、2529番目がシステイン、2630番目がセリン、231番目がフェニルアラニン、2733番目がロイシン、2834番目がメチオニン、2946番目がメチオニン、3046番目がメチオニン、68番目がセリン、3162番目がアラニン、115番目がイソロイシン、141番目がバリン、169番目がセリン、180番目がシステイン、242番目がスレオニン、262番目がメチオニン、3268番目がセリン、3368番目がロイシン、105番目がバリン、3471番目がグルタミン、3572番目がフェニルアラニン、133番目がアスパラギン酸、3675番目がシステイン、137番目がスレオニン、203番目がグリシン、3775番目がヒスチジン、226番目がスレオニン、3880番目がチロシン、130番目がアスパラギン、3981番目がスレオニン、4083番目がアラニン、4183番目がアラニン、176番目がスレオニン、4288番目がセリン、4390番目がセリン、4495番目がグリシン、4596番目がアスパラギン酸、170番目がアルギニン、46103番目がヒスチジン、189番目がスレオニン、191番目がイソロイシン、47108番目がスレオニン、146番目がアラニン、164番目がスレオニン、218番目がバリン、48116番目がスレオニン、128番目がヒスチジン、49119番目がグルタミン酸、196番目がロイシン、50123番目がグリシン、51152番目がセリン、52201番目がアラニン、53211番目がバリン、264番目がトリプトファン、54225番目がセリン、264番目がアルギニン、および55240番目がアラニン、から選択されるアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が導入されている請求項7に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に次の群;2番目がイソロイシン、8番目がアラニン、11番目がバリンもしくはスレオニン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジン、32番目がヒスチジン、33番目がロイシン、34番目がメチオニン、45番目がセリンもしくはスレオニン、46番目がメチオニンもしくはイソロイシン、48番目がスレオニン、61番目がグリシン、62番目がスレオニン、64番目がスレオニン、65番目がスレオニン、66番目がバリン、68番目がセリン、71番目がグルタミン、75番目がシステインもしくはヒスチジン、78番目がヒスチジン、79番目がアラニン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、83番目がアラニン、88番目がセリン、90番目がセリン、95番目がグリシン、96番目がアスパラギン酸もしくはリジン、116番目がスレオニン、119番目がグルタミン酸、123番目がグリシン、128番目がヒスチジン、130番目がアスパラギン、137番目がスレオニン、152番目がセリン、170番目がアルギニン、176番目がバリン、177番目がアラニン、196番目がロイシン、200番目がバリン、203番目がグリシン、225番目がセリン、226番目がスレオニン、230番目がイソロイシン、234番目がロイシンに置換、C末端にアルギニンが付加、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が1つもしくは複数導入されており、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、有機塩化物存在下での安定性が向上している請求項4に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に下記の1~44;12番目がアラニン、40番目がアルギニン、229番目がバリン、22番目がイソロイシン、11番目がバリン、46番目がメチオニン、64番目がスレオニン、32番目がイソロイシン、11番目がスレオニン、46番目がメチオニン、42番目がイソロイシン、28番目がロイシン、46番目がメチオニン、52番目がイソロイシン、29番目がロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、62番目がイソロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、72番目がイソロイシン、45番目がスレオニン、46番目がメチオニン、82番目がイソロイシン、45番目がバリン、46番目がメチオニン、92番目がイソロイシン、45番目がプロリン、46番目がメチオニン、168番目がアルギニン、102番目がイソロイシン、45番目がセリン、46番目がメチオニン、90番目がセリン、112番目がイソロイシン、46番目がイソロイシン、122番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、132番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、48番目がスレオニン、142番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、62番目がスレオニン、152番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、65番目がスレオニン、162番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、66番目がバリン、172番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、68番目がセリン、182番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、78番目がヒスチジン、192番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、177番目がアラニン、208番目がアラニン、2128番目がヒスチジン、61番目がグリシン、234番目がロイシン、2228番目がヒスチジン、62番目がアラニン、79番目がアラニン、164番目がスレオニン、2329番目がシステイン、2433番目がロイシン、2534番目がメチオニン、2646番目がメチオニン、68番目がセリン、2768番目がセリン、2871番目がグルタミン、2975番目がシステイン、137番目がスレオニン、203番目がグリシン、3075番目がヒスチジン、226番目がスレオニン、3180番目がチロシン、130番目がアスパラギン、3281番目がスレオニン、3383番目がアラニン、3483番目がアラニン、176番目がバリン、3588番目がセリン、3690番目がセリン、3795番目がグリシン、3896番目がアスパラギン酸、170番目がアルギニン、39116番目がスレオニン、128番目がヒスチジン、40119番目がグルタミン酸、196番目がロイシン、41123番目がグリシン、42152番目がセリン、43201番目がアラニン、および44225番目がセリン、264番目がアルギニン、から選択されるアミノ酸置換が導入されている請求項9に記載のポリペプチド。前記有機塩化物がクロロケトンである、請求項9または10に記載のポリペプチド。前記クロロケトンがクロロアセトン、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンのいずれかである、請求項11に記載のポリペプチド。前記a~cに加え、さらにd配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、補酵素に対する親和性が高い、の性質を示す、請求項1または2に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2、46、68、および95番目、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸が置換されている、請求項13に記載のポリペプチド。配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、68番目がセリン、および95番目がグリシン、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換が導入されている、請求項14に記載のポリペプチド。請求項1~15のいずれか1項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。請求項16に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。還元型補酵素再生能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求17に記載のベクター。還元型補酵素再生能を有するポリペプチドがグルコース脱水素酵素である、請求項18に記載のベクター。請求項17~19のいずれかに記載のベクターにより宿主細胞を形質転換して得られる形質転換体。前記宿主細胞が大腸菌である請求項20記載の形質転換体。請求項1~15のいずれかに記載のポリペプチド、または、請求項20もしくは請求項21に記載の形質転換体および/またはその処理物を、カルボニル化合物に作用させることを特徴とする、アルコール化合物の製造方法。前記カルボニル化合物が非対称ケトンであり、生成物が光学活性アルコールである、請求項22に記載の製造方法。前記カルボニル基を有する化合物が、下記式1:式中、R1及びR2は水素原子、ハロゲン原子、置換されていても良いアルキル基、置換されていても良いアラルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていても良いアルコキシ基、アミノ基、またはニトロ基であるか、もしくは、R1とR2が互いに結合し環を形成しても良い。但し、R1とR2は構造が異なるで表される非対称ケトンであり、その生成物が下記式2:式中、R1、R2は前記と同じ、は不斉炭素を表すで表される光学活性アルコールである、請求項23に記載の製造方法。前記カルボニル基を有する化合物が、3-キヌクリジノンもしくはその塩、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン、3-クロロ-1-2-フェニルプロパン-1-オンのいずれかである請求項23に記載の製造方法。請求項1~15のいずれかに記載のポリペプチド、または、請求項20もしくは請求項21に記載の形質転換体および/またはその処理物を、カルボニル化合物に作用させて、光学活性アルコールを得る工程を有することを特徴とする、医薬品原薬の製造方法。前記光学活性アルコールがR-3-キヌクリジノンであり医薬品原薬がソリフェナシン、または、前記光学活性アルコールがS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールであり医薬品原薬がデュロキセチンである、請求項26に記載の製造方法。本発明の課題は、ハロゲン原子存在下で反応性が低下する野生型酵素を改変し、ハロゲン原子存在下での反応性が野生型酵素よりも向上した改変型カルボニル還元酵素を提供することである。また、該酵素または該酵素を生産する形質転換体を利用した光学活性アルコールの効率的な製造方法を提供することである。本発明者らは、野生型酵素遺伝子にランダムに変異を導入して作製した変異型酵素ライブラリーの中から、ハロゲン原子存在下での反応性が野生型酵素よりも向上した改変型カルボニル還元酵素を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のa~c;a配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列と配列同一性が85以上であり、b3-キヌクリジノンを還元してR-3-キヌクリジノールを生成し、もしくは、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを還元してS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成し、c配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、ハロゲン原子存在下でのカルボニル化合物に対する反応性が高い、の性質を示すポリペプチドに関する。前記ハロゲン原子は塩素原子であることが好ましい。前記配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2、5、8、11、23、26、28、29、30、32、33、34、40、45、46、48、61、62、64、65、66、68、71、72、75、78、79、80、81、83、88、90、95、96、100、103、105、108、115、116、119、123、128、130、133、137、141、146、152、164、168、169、170、176、177、180、189、191、196、200、201、203、211、218、225、226、229、230、231、234、240、242、および262番目、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸が置換されているか、および/またはN末端及びC末端のいずれかにアミノ酸が1つもしくは複数個付加されていることが好ましい。前記配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2番目がイソロイシンもしくはアラニン、5番目がアルギニン、8番目がアラニン、11番目がバリンもしくはスレオニン、23番目がスレオニン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジンもしくはロイシン、29番目がロイシン、30番目がセリン、32番目がヒスチジン、33番目がロイシン、34番目がメチオニン、40番目がアルギニン、45番目がセリンもしくはスレオニン、バリン、プロリン、46番目がメチオニンもしくはイソロイシン、48番目がスレオニン、61番目がグリシン、62番目がアラニンもしくはスレオニン、64番目がスレオニン、65番目がスレオニン、66番目がバリン、68番目がセリンもしくはロイシン、71番目がグルタミン、72番目がフェニルアラニン、75番目がシステインもしくはヒスチジン、78番目がヒスチジン、79番目がアラニン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、83番目がアラニン、88番目がセリン、90番目がセリン、95番目がグリシン、96番目がアスパラギン酸もしくはリジン、100番目がスレオニン、103番目がヒスチジン、105番目がスレオニンもしくはバリン、108番目がスレオニン、115番目がイソロイシン、116番目がスレオニン、119番目がグルタミン酸、123番目がグリシン、128番目がヒスチジン、130番目がアスパラギン、133番目がアスパラギン酸、137番目がスレオニン、141番目がバリン、146番目がアラニン、152番目がセリン、164番目がスレオニン、168番目がアルギニン、169番目がセリン、170番目がアルギニン、176番目がバリン、177番目がアラニン、180番目がシステイン、189番目がスレオニン、191番目がイソロイシン、196番目がロイシン、200番目がバリン、201番目がアラニン、203番目がグリシン、211番目がバリン、218番目がバリン、225番目がセリン、226番目がスレオニンもしくはバリン、229番目がバリン、230番目がイソロイシン、231番目がフェニルアラニン、234番目がロイシン、240番目がアラニン、242番目がスレオニン、262番目がメチオニンに置換、C末端にトリプトファン、およびアルギニンが付加、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が導入されていることが好ましい。前記ポリペプチドは、前記a~cに加え、さらにd配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して補酵素に対する親和性が高いとの性質を示すことが好ましい。なお、補酵素に対する親和性の観点では、前記cの活性は必須ではなく、前記a、bおよびdの性質を示すポリペプチドであれば補酵素に対して高い親和性を有する。前記配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2、46、68、および95番目、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸が置換されていることが好ましく、次の群;2番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、68番目がセリン、および95番目がグリシン、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換が導入されていることがより好ましい。本発明は、また、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明は、また、前記ポリヌクレオチドを含むベクターに関する。前記ベクターは、還元型補酵素再生能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含むものであることが好ましく、還元型補酵素再生能を有するポリペプチドがグルコース脱水素酵素であることがより好ましい。本発明は、また、前記ベクターにより宿主細胞を形質転換して得られる形質転換体に関する。前記宿主細胞が大腸菌であることが好ましい。本発明は、また、前記ポリペプチド、または、前記形質転換体および/またはその処理物を、カルボニル化合物に作用させることを特徴とする、アルコール化合物の製造方法に関する。前記カルボニル化合物が非対称ケトンであり、生成物が光学活性アルコールであることが好ましい。前記カルボニル基を有する化合物が、下記式1:式中、R1及びR2は水素原子、ハロゲン原子、置換されていても良いアルキル基、置換されていても良いアラルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていても良いアルコキシ基、アミノ基、またはニトロ基であるか、もしくは、R1とR2が互いに結合し環を形成しても良い。但し、R1とR2は構造が異なるで表される非対称ケトンであり、その生成物が下記式2:式中、R1、R2は前記と同じ、は不斉炭素を表すで表される光学活性アルコールであることが好ましい。前記カルボニル基を有する化合物が、3-キヌクリジノンもしくはその塩、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン、3-クロロ-1-2-フェニルプロパン-1-オンのいずれかであることが好ましい。本発明は、また、前記ポリペプチド、または、前記形質転換体および/またはその処理物を、カルボニル化合物に作用させて光学活性アルコールを得る工程を有することを特徴とする、医薬品原薬の製造方法に関する。前記光学活性アルコールがR-3-キヌクリジノンであり医薬品原薬がソリフェナシン、または、前記光学活性アルコールがS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールであり医薬品原薬がデュロキセチンであることが好ましい。本発明により、ハロゲン原子存在下での反応性が野生型よりも向上した改変型カルボニル還元酵素及びその遺伝子、その遺伝子を含むベクター、そのベクターで形質転換された形質転換体、その形質転換体の処理物、およびそれらを利用した光学活性アルコールの効率的な製造方法を提供することができる。本発明のポリペプチドは、以下のa~cの性質を示すことを特徴とする:a配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列と配列同一性が85以上であり、b3-キヌクリジノンを還元してR-3-キヌクリジノールを生成し、もしくは、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを還元してS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成し、c配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、ハロゲン原子存在下でのカルボニル化合物に対する反応性が高い。[変異の記載方法]なお、本明細書において、アミノ酸、ペプチド、タンパク質は下記に示すIUPAC-IUB生化学命名委員会CBNで採用された略号を用いて表される。また、特に明示しない限り、ペプチドおよびタンパク質のアミノ酸残基の配列は、左端から右端にかけてN末端からC末端となるように表される。また、参照を容易にするため、一般的に用いられている下記の命名法を適用する。1つは、もとのアミノ酸;位置;置換したアミノ酸と記述する方法であり、例えば、位置64におけるチロシンのアスパラギン酸への置換はY84Dと表される。多重変異については、ハイフン記号-により分けることで表記する。例えば、S41A-Y64Dとは、位置41のセリンをアラニンへ、かつ、位置64のチロシンをアスパラギン酸へ置換することを示す。[アミノ酸の略号]A=Ala=アラニン、C=Cys=システイン、D=Asp=アスパラギン酸、E=Glu=グルタミン酸、F=Phe=フェニルアラニン、G=Gly=グリシン、H=His=ヒスチジン、I=Ile=イソロイシン、K=Lys=リシン、L=Leu=ロイシン、M=Met=メチオニン、N=Asn=アスパラギン、P=Pro=プロリン、Q=Gln=グルタミン、R=Arg=アルギニン、S=Ser=セリン、T=Thr=スレオニン、V=Val=バリン、W=Trp=トリプトファン、Y=Tyr=チロシン[配列同一性]ポリペプチドやポリヌクレオチドの配列同一性とは、対比される2つのポリペプチドまたはポリヌクレオチドを最適に整列させ、アミノ酸又は核酸塩基例えば、A、T、C、G、U、またはIが両方の配列で一致した位置の数を比較塩基総数で除し、そして、この結果に100を乗じた数値で表される。配列同一性は、例えば、以下の配列分析用ツールを用いて算出し得る;GCGWisconsinPackageウィスコンシン大学、theExPASyWorldWideWeb分子生物学用サーバースイスバイオインフォマティックス研究所、BLAST米国生物工学情報センター、GENETYXゼネティックス社。本発明において、変異を導入する前の野生型酵素は、配列表の配列番号1で表される263個のアミノ酸残基からなり、3-キヌクリジノンを還元してR-3-キヌクリジノールを生成する、もしくは、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを還元してS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成する能力を有するポリペプチドである。ポリペプチドの起源は限定されるものではないが、好ましくはバークホルデリアBurkholderia属に属する微生物、より好ましくはバークホルデリアエスピーBurkholderiasp.YT株由来のカルボニル還元酵素である。本菌株は、小野寺らにより見出された微生物であり、平成20年8月18日付けで、受託番号NITEP-613として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8に寄託されている。また、野生型酵素は塩化物により反応が阻害されることが知られているJ.Biosci.Bioeng.,104,416-4192007。本発明の野生型酵素は、配列表の配列番号2に示されるポリヌクレオチドによりコードされる。このポリヌクレオチドは、例えば、MolecularCloning2ndEditionJosephSambrook,ColdSpringHarborLaboratoryPress1989等に記載される通常の遺伝子工学的手法に準じてバークホルデリア属、好ましくはバークホルデリアエスピーBurkholderiasp.YT株から取得することができる。即ち、バークホルデリアエスピーBurkholderiasp.YT株のゲノムDNAから後述の[参考例1]に記載の方法でPCRを行うことにより、配列番号1で示されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド、または配列番号2で示されるポリヌクレオチドを増幅して野生型酵素遺伝子を調製することができる。本発明のポリペプチドは、配列番号1に示すアミノ酸配列に改変を加えて得られるものであってもよい。配列番号1に示すアミノ酸配列に加える改変としては、置換、付加、挿入もしくは欠失が挙げられ、1種類の改変例えば置換のみを含むものであっても良いし、2種以上の改変例えば、置換と挿入を含んでいても良い。上記の複数個のアミノ酸とは、例えば、40個、好ましくは20個、より好ましくは10個、さらに好ましくは8個、5個、4個、3個、または2個のアミノ酸を意味する。また、改変を加えた後のアミノ酸配列と、配列番号1に示すアミノ酸配列との配列の同一性は85以上、好ましくは92以上、より好ましくは96以上、さらに好ましくは97以上、98以上、98.5以上、99以上である。改変を加えたカルボニル還元酵素は、配列番号1に示すアミノ酸配列のうち、少なくとも1個、または複数個のアミノ酸が置換、付加、挿入もしくは欠失されたアミノ酸配列を有し、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のカルボニル還元酵素と配列同一性が85以上のポリペプチドからなる酵素であることが好ましい。配列表の配列番号1に示したアミノ酸配列においてアミノ酸が置換、挿入、欠失、付加される場所は特に制限されないが、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち、2、5、8、11、23、26、28、29、30、32、33、34、40、45、46、48、61、62、64、65、66、68、71、72、75、78、79、80、81、83、88、90、95、96、100、103、105、108、115、116、119、123、128、130、133、137、141、146、152、164、168、169、170、176、177、180、189、191、196、200、201、203、211、218、225、226、229、230、231、234、240、242、262番目のアミノ酸のいずれか1つ、もしくは複数が置換されており、および/またはN末端、C末端のいずれかにアミノ酸が1つもしくは複数個付加されているポリペプチドであることが好ましい。さらに好ましくは、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2番目がイソロイシンもしくはアラニン、5番目がアルギニン、8番目がアラニン、11番目がバリンもしくはスレオニン、23番目がスレオニン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジンもしくはロイシン、29番目がロイシン、30番目がセリン、32番目がヒスチジン、33番目がロイシン、34番目がメチオニン、40番目がアルギニン、45番目がセリンもしくはスレオニン、バリン、プロリン、46番目がメチオニンもしくはイソロイシン、48番目がスレオニン、61番目がグリシン、62番目がアラニンもしくはスレオニン、64番目がスレオニン、65番目がスレオニン、66番目がバリン、68番目がセリンもしくはロイシン、71番目がグルタミン、72番目がフェニルアラニン、75番目がシステインもしくはヒスチジン、78番目がヒスチジン、79番目がアラニン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、83番目がアラニン、88番目がセリン、90番目がセリン、95番目がグリシン、96番目がアスパラギン酸もしくはリジン、100番目がスレオニン、103番目がヒスチジン、105番目がスレオニンもしくはバリン、108番目がスレオニン、115番目がイソロイシン、116番目がスレオニン、119番目がグルタミン酸、123番目がグリシン、128番目がヒスチジン、130番目がアスパラギン、133番目がアスパラギン酸、137番目がスレオニン、141番目がバリン、146番目がアラニン、152番目がセリン、164番目がスレオニン、168番目がアルギニン、169番目がセリン、170番目がアルギニン、176番目がバリン、177番目がアラニン、180番目がシステイン、189番目がスレオニン、191番目がイソロイシン、196番目がロイシン、200番目がバリン、201番目がアラニン、203番目がグリシン、211番目がバリン、218番目がバリン、225番目がセリン、226番目がスレオニンもしくはバリン、229番目がバリン、230番目がイソロイシン、231番目がフェニルアラニン、234番目がロイシン、240番目がアラニン、242番目がスレオニン、262番目がメチオニンに置換、C末端にトリプトファンもしくはアルギニンが付加、からなるいずれかのアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が1つもしくは複数導入されているポリペプチドである。また、本発明のポリペプチドは、塩化物イオン存在下での安定性の向上の観点から、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち次の群;2番目がイソロイシン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、61番目がグリシン、68番目がセリン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、83番目がアラニン、95番目がグリシン、96番目がリジン、119番目がグルタミン酸、123番目がグリシン、130番目がアスパラギン、152番目がセリン、196番目がロイシン、200番目がバリン、230番目がイソロイシン、234番目がロイシン、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換が導入されていることが好ましい。さらに、下記の1~17;12番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、25番目がアルギニン、23番目がスレオニン、100番目がスレオニン、201番目がリジン、326番目がチロシン、428番目がヒスチジン、61番目がグリシン、234番目がロイシン、568番目がセリン、680番目がチロシン、130番目がアスパラギン、781番目がスレオニン、883番目がアラニン、988番目がセリン、1095番目がグリシン、1196番目がリジン、12105番目がスレオニン、226番目がバリン、13119番目がグルタミン酸、196番目がロイシン、14123番目がグリシン、15152番目がセリン、16200番目がバリン、および17230番目がイソロイシン、から選択されるアミノ酸置換が導入されているポリペプチドであることがより好ましい。また、本発明のポリペプチドは、塩化物イオンによる反応阻害に対する抵抗性の向上の観点から、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に次の群;2番目がイソロイシンもしくはアラニン、5番目がアルギニン、8番目がアラニン、23番目がスレオニン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジンもしくはロイシン、29番目がロイシン、30番目がセリン、32番目がヒスチジン、33番目がロイシン、34番目がメチオニン、40番目がアルギニン、45番目がセリンもしくはスレオニン、バリン、プロリン、46番目がメチオニンもしくはイソロイシン、48番目がスレオニン、61番目がグリシン、62番目がアラニンもしくはスレオニン、65番目がスレオニン、66番目がバリン、68番目がセリンもしくはロイシン、71番目がグルタミン、72番目がフェニルアラニン、75番目がシステインもしくはヒスチジン、78番目がヒスチジン、79番目がアラニン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、88番目がセリン、90番目がセリン、95番目がグリシン、96番目がアスパラギン酸もしくはリジン、100番目がスレオニン、103番目がヒスチジン、105番目がバリン、108番目がスレオニン、115番目がイソロイシン、116番目がスレオニン、123番目がグリシン、128番目がヒスチジン、130番目がアスパラギン、133番目がアスパラギン酸、137番目がスレオニン、141番目がバリン、146番目がアラニン、152番目がセリン、164番目がスレオニン、168番目がアルギニン、169番目がセリン、170番目がアルギニン、176番目がバリン、177番目がアラニン、180番目がシステイン、189番目がスレオニン、191番目がイソロイシン、200番目がバリン、203番目がグリシン、211番目がバリン、218番目がバリン、225番目がセリン、226番目がスレオニン、229番目がバリン、230番目がイソロイシン、231番目がフェニルアラニン、234番目がロイシン、240番目がアラニン、242番目がスレオニン、262番目がメチオニンに置換、C末端にトリプトファン、アルギニンが付加、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が導入されていることが好ましい。さらに、下記の1~55;12番目がアラニン、40番目がアルギニン、229番目がバリン、22番目がイソロイシン、32番目がイソロイシン、11番目がバリン、46番目がメチオニン、64番目がスレオニン、42番目がイソロイシン、11番目がスレオニン、46番目がメチオニン、52番目がイソロイシン、28番目がロイシン、46番目がメチオニン、62番目がイソロイシン、29番目がロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、72番目がイソロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、82番目がイソロイシン、45番目がスレオニン、46番目がメチオニン、92番目がイソロイシン、45番目がバリン、46番目がメチオニン、102番目がイソロイシン、45番目がプロリン、46番目がメチオニン、168番目がアルギニン、112番目がイソロイシン、45番目がセリン、46番目がメチオニン、90番目がセリン、122番目がイソロイシン、46番目がイソロイシン、132番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、142番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、48番目がスレオニン、152番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、62番目がスレオニン、162番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、65番目がスレオニン、172番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、66番目がバリン、182番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、68番目がセリン、192番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、78番目がヒスチジン、202番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、177番目がアラニン、215番目がアルギニン、23番目がスレオニン、100番目がスレオニン、201番目がリジン、228番目がアラニン、2328番目がヒスチジン、61番目がグリシン、234番目がロイシン、2428番目がヒスチジン、62番目がアラニン、79番目がアラニン、164番目がスレオニン、2529番目がシステイン、2630番目がセリン、231番目がフェニルアラニン、2733番目がロイシン、2834番目がメチオニン、2946番目がメチオニン、3046番目がメチオニン、68番目がセリン、3162番目がアラニン、115番目がイソロイシン、141番目がバリン、169番目がセリン、180番目がシステイン、242番目がスレオニン、262番目がメチオニン、3268番目がセリン、3368番目がロイシン、105番目がバリン、3471番目がグルタミン、3572番目がフェニルアラニン、133番目がアスパラギン酸、3675番目がシステイン、137番目がスレオニン、203番目がグリシン、3775番目がヒスチジン、226番目がスレオニン、3880番目がチロシン、130番目がアスパラギン、3981番目がスレオニン、4083番目がアラニン、4183番目がアラニン、176番目がスレオニン、4288番目がセリン、4390番目がセリン、4495番目がグリシン、4596番目がアスパラギン酸、170番目がアルギニン、46103番目がヒスチジン、189番目がスレオニン、191番目がイソロイシン、47108番目がスレオニン、146番目がアラニン、164番目がスレオニン、218番目がバリン、48116番目がスレオニン、128番目がヒスチジン、49119番目がグルタミン酸、196番目がロイシン、50123番目がグリシン、51152番目がセリン、52201番目がアラニン、53211番目がバリン、264番目がトリプトファン、54225番目がセリン、264番目がアルギニン、および55240番目がアラニン、から選択されるアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が導入されていることがより好ましい。また、本発明のポリペプチドは、有機塩化物存在下での安定性の向上の観点から、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に次の群;2番目がイソロイシン、8番目がアラニン、11番目がバリンもしくはスレオニン、26番目がチロシン、28番目がヒスチジン、32番目がヒスチジン、33番目がロイシン、34番目がメチオニン、45番目がセリンもしくはスレオニン、46番目がメチオニンもしくはイソロイシン、48番目がスレオニン、61番目がグリシン、62番目がスレオニン、64番目がスレオニン、65番目がスレオニン、66番目がバリン、68番目がセリン、71番目がグルタミン、75番目がシステインもしくはヒスチジン、78番目がヒスチジン、79番目がアラニン、80番目がチロシン、81番目がスレオニン、83番目がアラニン、88番目がセリン、90番目がセリン、95番目がグリシン、96番目がアスパラギン酸もしくはリジン、116番目がスレオニン、119番目がグルタミン酸、123番目がグリシン、128番目がヒスチジン、130番目がアスパラギン、137番目がスレオニン、152番目がセリン、170番目がアルギニン、176番目がバリン、177番目がアラニン、196番目がロイシン、200番目がバリン、203番目がグリシン、225番目がセリン、226番目がスレオニン、230番目がイソロイシン、234番目がロイシンに置換、C末端にアルギニンが付加、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換および/またはアミノ酸付加が1つもしくは複数導入されていることが好ましい。さらに、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列に下記の1~44;12番目がアラニン、40番目がアルギニン、229番目がバリン、22番目がイソロイシン、11番目がバリン、46番目がメチオニン、64番目がスレオニン、32番目がイソロイシン、11番目がスレオニン、46番目がメチオニン、42番目がイソロイシン、28番目がロイシン、46番目がメチオニン、52番目がイソロイシン、29番目がロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、62番目がイソロイシン、32番目がヒスチジン、46番目がメチオニン、72番目がイソロイシン、45番目がスレオニン、46番目がメチオニン、82番目がイソロイシン、45番目がバリン、46番目がメチオニン、92番目がイソロイシン、45番目がプロリン、46番目がメチオニン、168番目がアルギニン、102番目がイソロイシン、45番目がセリン、46番目がメチオニン、90番目がセリン、112番目がイソロイシン、46番目がイソロイシン、122番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、132番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、48番目がスレオニン、142番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、62番目がスレオニン、152番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、65番目がスレオニン、162番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、66番目がバリン、172番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、68番目がセリン、182番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、78番目がヒスチジン、192番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、177番目がアラニン、208番目がアラニン、2128番目がヒスチジン、61番目がグリシン、234番目がロイシン、2228番目がヒスチジン、62番目がアラニン、79番目がアラニン、164番目がスレオニン、2329番目がシステイン、2433番目がロイシン、2534番目がメチオニン、2646番目がメチオニン、68番目がセリン、2768番目がセリン、2871番目がグルタミン、2975番目がシステイン、137番目がスレオニン、203番目がグリシン、3075番目がヒスチジン、226番目がスレオニン、3180番目がチロシン、130番目がアスパラギン、3281番目がスレオニン、3383番目がアラニン、3483番目がアラニン、176番目がバリン、3588番目がセリン、3690番目がセリン、3795番目がグリシン、3896番目がアスパラギン酸、170番目がアルギニン、39116番目がスレオニン、128番目がヒスチジン、40119番目がグルタミン酸、196番目がロイシン、41123番目がグリシン、42152番目がセリン、43201番目がアラニン、および44225番目がセリン、264番目がアルギニン、から選択されるアミノ酸置換が導入されていることがより好ましい。なお、有機塩化物はクロロケトンであることが好ましく、クロロアセトン、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンのいずれかであることがより好ましい。また、本発明のポリペプチドは、補酵素に対する親和性の観点から、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列のうち、2、46、68、および95番目のアミノ酸から選択される1つもしくは複数のアミノ酸が置換されていることが好ましい。さらに好ましくは、配列表の配列番号1に示すアミノ酸のうち次の群;2番目がイソロイシン、46番目がメチオニン、68番目がセリン、および95番目がグリシン、から選択される1つもしくは複数のアミノ酸置換が導入されていることが好ましい。なお、塩化物イオン存在下での安定性、塩化物イオンによる反応阻害に対する抵抗性、及び有機塩化物存在下での安定性に関しては後述する。本発明における3-キヌクリジノンを還元してR-3-キヌクリジノールを生成する活性は下記評価方法で得られたR-3-キヌクリジノールの光学純度が85e.e.以上あればよく、好ましくは90e.e.以上、より好ましくは95e.e.以上である。最も好ましくは96、97、98、99e.e.以上である。[R-3-キヌクリジノールを生成する能力の評価方法]0.1M3-キヌクリジノン塩酸塩及び0.1M還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸以下、NADPHを含む0.5Mリン酸緩衝液pH6.5に、本発明のポリペプチドを加えて30°Cで反応させる。反応後、ジクロロメタンなどの有機溶媒で抽出操作を行い、下記のガスクロマトグラフィー条件で分析することにより、生成した3-キヌクリジノールの、その立体配置及び光学純度を確認することができる。<ガスクロマトグラフィー分析条件>カラム:GammaDEX30m、内径0.25mm、SUPELCO社製カラム温度:150°C注入口温度:220°C検出器温度:220°C検出:FIDキャリアーガス:ヘリウム、流量:100kPa保持時間:3-キヌクリジノン約9.8分、S-3-キヌクリジノール約11.5分、R-3-キヌクリジノール約12.0分なお、光学活性3-キヌクリジノールの光学純度は下記式より求めることができる。R体の光学純度e.e.={R体のピーク面積-S体のピーク面積}÷{R体のピーク面積S体のピーク面積}×100また、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを還元してS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成する活性は下記の方法で評価することができる。本発明における3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを還元してS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成する活性は本評価方法で得られたS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの光学純度が85e.e.以上あればよく、好ましくは90e.e.以上、より好ましくは95e.e.以上である。最も好ましくは96、97、98、99e.e.以上である。[S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成する能力の評価方法]10mM3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン、1ジメチルスルホキシド、及び10mMNADPHを含む0.5Mリン酸緩衝液pH6.5に、本発明のポリペプチドを加えて30°Cで反応させる。反応後、ジクロロメタンなどの有機溶媒で抽出操作を行い、下記のクロマトグラフィー条件で分析することにより、生成した3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの、その立体配置及び光学純度を確認することができる。[高速液体クロマトグラフィーによる分析条件]カラム:ChiralcelOD-H250mm、内径4.6μm、ダイセル化学工業社製カラム温度:30°C検出波長:240nm移動相:n-ヘキサン/イソプロパノール=97.5/2.5保持時間:S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オール約19.9分、R-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オール約21.5分、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン約12.2分なお、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの光学純度は下記式より求めることができる。S体の光学純度e.e.={S体のピーク面積-R体のピーク面積}÷{S体のピーク面積R体のピーク面積}×100ハロゲン原子存在下とは、ハロゲン原子のいずれか1つ、または複数を含む化合物と、本発明の酵素が共存する状態を示す。ハロゲン原子とは、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、アスタチン原子のことをいう。ハロゲン原子は、塩素原子であることが好ましい。より好ましくは、塩素分子単体Cl2、塩化物イオンCl-、無機塩化物あるいは有機塩化物のいずれか1つまたは複数である。無機塩化物としては、塩化アルミニウム、塩化アンモニウム塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化スズ、塩化セシウム、塩化チオニル、塩化ナトリウム、塩化ニトロシル、塩化バリウム、塩化ベンゼンジアゾニウム、塩化マグネシウム、塩化リチウム、塩化亜鉛、塩化鉛、塩化金III酸、塩化銀、塩化水銀、塩化水酸化マグネシウム、塩化水酸化銅II、塩化水素塩酸、塩化鉄、塩化白金VI酸、塩素酸、塩素酸カリウム、過塩素酸、過塩素酸リチウムなどであることが好ましく、塩酸または塩化ナトリウムであることがより好ましい。有機塩化物としては、1つまたは複数の塩素原子を置換基として有するアルカン、アルケン、アルキン、シクロアルカン、アリール、ヘテロアリール化合物であることが好ましく、クロロアルコール化合物もしくはクロロケトン化合物であることがより好ましく、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オール、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン、クロロアセトン、フェナシルクロライド、m-クロロフェナシルクロライドであることが最も好ましい。塩化物が酸性またはアルカリ性を示す場合、適当な酸やアルカリでpHを調整した状態でも良く、酸性もしくは塩基性の塩化物と有機化合物や無機化合物の塩の形態でも良い。好ましくは3-キヌクリジノン塩酸塩である。塩化物と酵素が共存する状態とは、必ずしも酵素を含む液体に塩化物が溶解している必要はなく、酵素を含む液体と塩化物を含む液体、もしくは酵素を含む液体と固体の塩化物など不均一な状態でも良く、これを物理的に攪拌し、混合した状態でも良い。ハロゲン原子存在下で反応性の高い酵素とは、配列表の配列番号1に記載の野生型酵素と比較して、前記ハロゲン原子存在下で一定時間処理した後、もしくは、前記ハロゲン原子存在下で、3-キヌクリジノン、もしくは3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンに対する酵素の還元活性が高いことを示す。好ましくは塩化物に対する酵素の安定性、もしくは塩化物による反応阻害に対する抵抗性が高い酵素である。塩化物に対する酵素の安定性が高いとは、具体的には、塩化ナトリウムとインキュベートした後の3-キヌクリジノンに対する残存活性を後述の実施例12に記載する方法で測定した場合に、野生型酵素と比較して残存活性が1以上高いことであり、好ましくは5以上、さらに好ましくは10以上、最も好ましくは20以上高いことをいう。また、塩化物による反応阻害に対する抵抗性が高いとは、具体的には、塩化ナトリウム存在条件下での3-キヌクリジノンに対する相対活性を後述の実施例14に記載する方法で測定した場合に、野生型酵素と比較して相対活性が1以上高いことであり、好ましくは5以上、さらに好ましくは10以上、最も好ましくは20以上高いことをいう。塩化物に対する酵素の安定性は、例えば、以下の方法で評価できる。[塩化物に対する酵素の安定性の評価方法]酵素を含む無細胞抽出液に任意の濃度例えば0.01~50の塩化物を含む緩衝液好ましくはpH5~8の0.01~1Mリン酸緩衝液を加えて任意の温度例えば4~40°Cでインキュベートする。塩化物と緩衝液が不均一な場合は振とう、または攪拌しながらインキュベートする。塩化物を加えた直後0時間目と任意の処理時間0.1~48時間でサンプリングし、それを0.1Mのリン酸カリウム水溶液pH7.0で希釈し、その希釈液を用いて下記の[カルボニル化合物に対する還元能力の評価方法]で酵素の活性を測定する。残存活性は下記式で算出することができる。残存活性=[任意の処理時間での酵素活性]÷[0時間目の酵素活性]×100配列表の配列番号1に記載のカルボニル還元酵素と比較して塩化物に対する安定性が高い改変型カルボニル還元酵素とは、上記の評価を行なった場合の残存活性が、野生型に比べて1以上高い酵素であり、好ましくは5以上、さらに好ましくは10以上、最も好ましくは20以上高い酵素である。[カルボニル化合物に対する還元能力の評価方法]ジメチルスルホキシド0.3v/vを含む100mMリン酸カリウム緩衝液pH6.5にNADPHもしくは還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド以下、NADH0.25mM、還元活性を評価したいカルボニル化合物例えば3-キヌクリジノンもしくは3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン1~50mMおよび本発明のポリペプチドを含む反応液を30°Cで反応させ、NADPHもしくはNADH量の減少に伴う波長340nmの吸光度の減少を測定することにより、還元反応の進行を容易に評価することができる。吸光度が減少した場合、本発明のペプチドは評価対象のカルボニル化合物を還元する能力を有する、と判断することができる。なお、吸光度の減少速度が速いほど、評価対象のカルボニル化合物に対する還元能力が高いといえる。また、ポリペプチドの還元能力は数値化することも可能であり、還元活性1Uは1分間に1μmolのNADPHの消費を触媒する酵素量とした。また、塩化物による反応阻害に対する抵抗性は、例えば、以下のように決定することができる。[塩化物による反応阻害に対する抵抗性の評価方法]まず、前記[カルボニル化合物に対する還元能力の評価方法]で塩化物が存在しない条件での酵素の活性を測定する。これを[塩化物非存在下での酵素活性]とする。次に任意の濃度例えば0.01~50の塩化物と[カルボニル化合物に対する還元能力の評価方法]と同じ濃度のカルボニル化合物とジメチルスルホキシド0.3v/vを含む100mMリン酸カリウム緩衝液pH6.5で同様に活性を測定する。これを[塩化物存在下での酵素活性]とする。相対活性は下記式で算出することができる。相対活性=[塩化物存在下での酵素活性]÷[塩化物非存在下での酵素活性]×100本明細書中で、配列表の配列番号1に記載のカルボニル還元酵素と比較して塩化物による反応阻害に対する抵抗性が高い改変型カルボニル還元酵素とは、上記の評価を行なった場合の残存活性が、野生型に比べて1以上高いことであり、好ましくは5以上、さらに好ましくは10以上、最も好ましくは20以上高いことである。本明細書での補酵素に対する親和性が高い酵素とは、配列表の配列番号1に記載の野生型酵素と比較して、還元型補酵素に対するKm値が小さい酵素のことを示す。還元型補酵素としては好ましくはNADPHである。同一補酵素濃度では補酵素に親和性が高い酵素ほど反応性が高くなり、有用である。さらに、野生型酵素は塩化物と補酵素が競合阻害する関係にあり、補酵素への親和性が向上した改変型カルボニル還元酵素は、塩化物による阻害抵抗性も向上しているため、有用である比較例4および実施例33。還元型補酵素のKm値は、例えば、以下の方法で評価できる。[補酵素に対する親和性の評価方法]任意の濃度例えば、1~0.01mMの範囲で4つ以上の異なる濃度の還元型補酵素例えば、NADPH存在下で前記[カルボニル化合物に対する還元能力の評価方法]と同様の方法で、任意のカルボニル化合物例えば3-キヌクリジノンもしくは3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンに対する還元酵素活性を測定する。測定した還元酵素活性の値を用いてラインウィーバーバークプロットを作成し、これよりKm値を算出することができる。本明細書中で、配列表の配列番号1に記載の野生型カルボニル還元酵素と補酵素に対する親和性が高い改変型カルボニル還元酵素とは、上記の評価を行なった場合のKm値が、野生型酵素を100とした場合の、99以下、好ましくは95以下、さらに好ましくは90以下、最も好ましくは80以下である酵素のことである。本発明の改変型カルボニル還元酵素は、下記の方法により探索することができる。エラープローンPCR法Leungetal.,Technique1,11-151989、あるいは同様の原理に基づいたキットを用いて、配列表の配列番号2に示す塩基配列野生型酵素遺伝子に1つ以上の塩基配列の置換、挿入、欠失、付加が導入されたDNA断片を得ることができる。例えば、野生型酵素遺伝子をテンプレートにプライマー1:5’-GGATAACAATTTCATAAGGAGGTTACATATG-3’配列表の配列番号3、およびプライマー2:5’-CTAGAGGATCCCCGGGTACCTTA-3’配列表の配列番号4とDiversifyPCRRandomMutagenesisKitClontech社製を用いて、野生型酵素遺伝子全長にランダムに変異が導入され、かつ開始コドンにNdeI認識部位が付加され、終始コドンの直後に新たな終止コドンTAAとKpnI認識部位が付加された複数種類の二本鎖DNA変異型酵素遺伝子を得ることができる。この増幅断片をNdeI及びKpnIで消化し、プラスミドpUCN18PCR法によりpUC18タカラバイオ社製の185番目のTをAに改変してNdeIサイトを破壊し、更に471-472番目のGCをTGに改変することにより新たにNdeIサイトを導入したプラスミドのlacプロモーターの下流のNdeI認識部位とKpnI認識部位の間に挿入し、このプラスミドを用いてエシェリヒアコリEscherichiacoliHB101株以下、E.coliHB101を形質転換する。形質転換した大腸菌を100μg/mLのアンピシリンを含むLBプレート培地に塗布し、シングルコロニーの大腸菌を得る。また、野生型遺伝子の代わりに前記方法で得られた変異型酵素遺伝子を用いて、同様の操作でさらに変異を導入した変異酵素ライブラリーを作製することもできる。上記ライブラリーから、本発明の改変型カルボニル還元酵素を選抜することができる。選抜方法としては特に限定されないが、好ましくは下記の方法である。[塩化物に対する安定性が向上した酵素のプレート評価による選抜法]変異酵素ライブラリーの各組換え菌及び野生型酵素を生産する組換え菌例えば、参考例3に示すE.coliHB101pNBSを適当な培地例えば200μg/mlのアンピシリンを含む2×YT培地トリプトン1.6、イーストエキス1.0、塩化ナトリウム0.5、pH7.0に接種し、37°Cで24時間振盪培養する。得られた各培養液を菌体破砕処理し、遠心分離後、沈殿を除去し、無細胞抽出液を得る。各酵素を含む無細胞抽出液に適当な濃度の塩化物好ましくは終濃度0.64Mの塩化ナトリウム、もしくは終濃度0.01~0.02のクロロアセトンを含む緩衝液好ましくはpH5~8の0.01~1Mリン酸緩衝液を加えて適当な温度例えば4~40°Cでインキュベートする。0.1~48時間程度インキュベートした後、処理した各無細胞抽出液を96穴プレートAGCテクノグラス社製に分注し、NADPH好ましくは1.5mMとカルボニル化合物好ましくは20mMの3-キヌクリジノン塩酸塩を含むリン酸緩衝液pH5~7を加えて、10~40°Cで反応する。経時的にUVサンプル撮影装置FAS-III東洋紡績社製でNADPHの蛍光を観察する。この時、反応が進行しない酵素液はNADPHの蛍光が残存するが、反応が進行した無細胞抽出液はNADPHの減少に伴い、蛍光がなくなる。対照である野生型酵素に比べ、短時間で蛍光がなくなった酵素を塩化物に対する安定性が向上した酵素として選抜した。選抜した酵素の培養液からプラスミドを抽出し、BigDyeTerminatorCycleSequencingKitアプライドバイオシステムズジャパン社製およびAppliedBiosystems3130xlジェネティックアナライザアプライドバイオシステムズジャパン社製を用いて改変型カルボニル還元酵素遺伝子の塩基配列を決定し、変異部位を特定することができる。[塩化物による反応阻害に対する抵抗性が向上した酵素のプレート評価による選抜法]変異酵素ライブラリーの各組換え菌及び野生型酵素を生産する組換え菌例えば、参考例3に示すE.coliHB101pNBSを適当な培地例えば前記の培地に接種し、37°Cで24時間振盪培養する。得られた各培養液を菌体破砕処理し、無細胞抽出液を得る。各無細胞抽出液を96穴プレートAGCテクノグラス社製に分注し、適当な濃度の塩化物好ましくは終濃度0.64M~1.28Mの塩化ナトリウム、NADPH好ましくは1.5mMとカルボニル化合物好ましくは20mMの3-キヌクリジノン塩酸塩を含むリン酸緩衝液pH5~7を加えて、10~40°Cで反応した。経時的にUVサンプル撮影装置FAS-III東洋紡績社製でNADPHの蛍光を観察する。反応が進行しない酵素液はNADPHの蛍光が残存するが、反応が進行した無細胞抽出液はNADPHの減少に伴い、蛍光がなくなる。対照である野生型酵素に比べ、短時間で蛍光がなくなった酵素を塩化物による反応阻害に対する抵抗性が向上した酵素として選抜する。選抜した酵素の培養液からプラスミドを抽出し、前記の方法で改変型カルボニル還元酵素遺伝子の塩基配列を決定し、変異部位を特定することができる。得られた複数の改変型カルボニル還元酵素の変異を部位特異的変異導入によって、一方のいくつか、あるいは双方を組み合わせることで、一方の性質の強化あるいは双方の性質を併せ持つ改変型カルボニル還元酵素を作製できる。このような酵素も本発明の酵素に含まれる。本発明のポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドをコードするものであれば特に限定されないが、例えば、配列表の配列番号2に示した野生型酵素をコードする塩基配列からなるポリヌクレオチド、又はこれに改変を加えて得られるポリペプチドが挙げられる。野生型酵素遺伝子の改変方法としては、CurrentProtocolsinMolecularBiologyFrederickM.Ausubel,GreenePublishingAssociatesandWiley-Interscience1989等に記載の公知の方法を用いることができる。すなわち、野生型酵素遺伝子の塩基の1個、または複数個例えば、40個、好ましくは20個、より好ましくは10個、さらに好ましくは5個、4個、3個、または2個の塩基を置換、付加、挿入もしくは欠失することにより、野生型酵素のアミノ酸配列を改変したポリヌクレオチドを作製することができる。例えば、エラープローンPCR法Leungetal.,Technique1,11-151989などのPCRを用いた変異導入法や、あるいは市販のキットDiversifyPCRRandomMutagenesisKitClontech社製、TransformerMutagenesisKitClontech社製、EXOIII/MungBeanDeletionKitストラタジーン社製、QuickChangeSiteDirectedMutagenesisKitストラタジーン社製などの利用が挙げられる。ポリヌクレオチドを部位特異的変異導入法により作製する場合、部位特異的変異導入法としては、例えば、OlfertLandtらGene,96,125-1281990、SmithらGeneticEngineering,3,1,Setlow,J.PlenumPress、VlasukらExperimentalManipulationofGeneExpression,Inouye,M.AcademicPress、Hos.N.HuntらGene,77,511989の方法やQuikChangeIIKitストラタジーン社製の市販キットの利用等が挙げられる。なお、2箇所に変異を導入する場合には上記方法に準じた方法を2回繰り返すことにより、目的とするポリヌクレオチドを得ることができる。尚、複数の他のポジションが他のアミノ酸で置換されている場合も当該方法により、目的とするポリヌクレオチドを得ることができる。本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとしては、例えば、3-キヌクリジノンを還元してR-3-キヌクリジノールを生成し、もしくは、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを還元してS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを生成する活性を有し、配列表の配列番号1に示すアミノ酸配列からなるカルボニル還元酵素と比較して、ハロゲン原子存在下でのカルボニル化合物に対する反応性が高いポリペプチドをコードし、かつ、配列表の配列番号2に示した塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチドと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドが好ましい。ここで、配列表の配列番号2に示したポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドとは、配列表の配列番号2に示した塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドをプローブとして、ストリンジェントな条件下にコロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法、あるいはサザンハイブリダイゼーション法等を用いることにより得られるポリヌクレオチドを意味する。ハイブリダイゼーションは、MolecularCloning2ndEditionJosephSambrook,ColdSpringHarborLaboratoryPress1989等に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドとは、例えば、コロニーあるいはプラーク由来のポリヌクレオチドを固定化したフィルターを用いて、0.7~1.0Mの塩化ナトリウム存在下、65°Cでハイブリダイゼーションを行った後、2倍濃度のSSC溶液1倍濃度のSSC溶液の組成は、150mM塩化ナトリウム、15mMクエン酸ナトリウムよりなるを用い、65°Cの条件下でフィルターを洗浄することにより取得できるDNAを挙げることができる。好ましくは65°Cで0.5倍濃度のSSC溶液で洗浄、より好ましくは65°Cで0.2倍濃度のSSC溶液で洗浄、更に好ましくは65°Cで0.1倍濃度のSSC溶液で洗浄することにより取得できるポリヌクレオチドである。以上のようにハイブリダイゼーション条件を記載したが、これらの条件に特に制限されない。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度や塩濃度など複数の要素が考えられ、当業者であればこれら要素を適宜選択することで最適なストリンジェンシーを実現することが可能である。上記の条件にてハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドとしては、配列番号2に示されるポリヌクレオチドと、配列同一性が70以上、好ましくは80以上、より好ましくは90以上、さらにより好ましくは95以上、最も好ましくは98以上のDNAを挙げることができ、コードされるポリペプチドが、本発明のポリペプチドの性質を有する限り、上記ポリヌクレオチドに包含される。本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現ベクターに挿入することにより、ポリペプチド発現ベクターを作製できる。上記で用いる発現ベクターとしては、適当な宿主生物内で当該ポリヌクレオチドがコードするポリペプチドを発現できるものであれば、特に限定されない。このようなベクターとしては、例えば、プラスミドベクター、ファージベクター、コスミドベクターなどが挙げられ、さらに、他の宿主株との間での遺伝子交換が可能なシャトルベクターも使用できる。このようなベクターは、例えば大腸菌の場合では、通常、lacUV5プロモーター、trpプロモーター、trcプロモーター、tacプロモーター、lppプロモーター、tufBプロモーター、recAプロモーター、pLプロモーター等の制御因子を含み、本発明のDNAと作動可能に連結された発現単位を含む発現ベクターとして好適に使用できる。例えば、pUCN18参考例2参照、pSTV28タカラバイオ社製、pUCNTWO94/03613公報などが挙げられる。本明細書で用いる用語制御因子は、機能的プロモーター及び、任意の関連する転写要素例えばエンハンサー、CCAATボックス、TATAボックス、SPI部位などを有する塩基配列をいう。本明細書で用いる用語作動可能に連結は、遺伝子の発現を調節するプロモーター、エンハンサー等の種々の調節エレメントと遺伝子が、宿主細胞中で作動し得る状態で連結されることをいう。制御因子のタイプ及び種類が、宿主に応じて変わり得ることは、当業者に周知の事項である。各種生物において利用可能なベクター、プロモーターなどに関して、微生物学基礎講座8、安藤忠彦、共立出版、1987などに詳細に記述されている。ベクターは、還元型補酵素再生能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含んでいてもよい。還元型補酵素再生能を有するポリペプチドとしては、例えば、グルコース脱水素酵素が挙げられる。ベクターにより宿主細胞を形質転換することにより、形質転換体を得ることができる。或いは、形質転換体として、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを染色体中に導入して得られる形質転換体も挙げられる。ベクターにより形質転換するための宿主細胞としては、各ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリペプチド発現ベクターにより形質転換され、導入したポリヌクレオチドがコードするポリペプチドを発現することができる細胞であれば、特に制限されない。宿主細胞として利用可能な微生物としては、例えば、エシェリヒアEscherichia属、バチルスBacillus属、シュードモナスPseudomonas属、セラチアSerratia属、ブレビバクテリウムBrevibacterium属、コリネバクテリイウムCorynebacterium属、ストレプトコッカスStreptococcus属、及びラクトバチルスLactobacillus属など宿主ベクター系の開発されている細菌、ロドコッカスRhodococcus属及びストレプトマイセスStreptomyces属など宿主ベクター系の開発されている放線菌、サッカロマイセスSaccharomyces属、クライベロマイセスKluyveromyces属、シゾサッカロマイセスSchizosaccharomyces属、チゴサッカロマイセスZygosaccharomyces属、ヤロウイアYarrowia属、トリコスポロンTrichosporon属、ロドスポリジウムRhodosporidium属、ピキアPichia属、及びキャンディダCandida属などの宿主ベクター系の開発されている酵母、ノイロスポラNeurospora属、アスペルギルスAspergillus属、セファロスポリウムCephalosporium属、及びトリコデルマTrichoderma属などの宿主ベクター系の開発されているカビ、などが挙げられる。また、微生物以外でも、植物、動物において様々な宿主ベクター系が開発されており、特に蚕を用いた昆虫Nature,315,592-5941985や菜種、トウモロコシ、ジャガイモなどの植物中に大量に異種タンパク質を発現させる系が開発されており、好適に利用できる。これらのうち、導入及び発現効率から細菌が好ましく、大腸菌が特に好ましい。本発明のベクターは、公知の方法により宿主微生物に導入できる。例えば、宿主微生物として大腸菌を用いる場合は、ポリペプチド発現ベクターとして前記の発現ベクターpUCN18に改変型カルボニル還元酵素をコードするポリヌクレオチドを導入した本発明のプラスミド実施例2~9に示すpNBSm01~58を、市販のE.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製などを用いて、そのプロトコールに従って操作することにより、当該ベクターを宿主細胞に導入した形質転換体例えば、実施例9に示すE.coliHB101pNBSm58が得られる。また、本発明のポリペプチド及び後述する還元型補酵素再生能を有するポリペプチドの両ポリペプチドを、同一菌体内で発現させた形質転換体も育種することができる。すなわち、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び還元型補酵素再生能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、同一のベクターに組み込み、これを宿主細胞に導入することにより得られる他、これら2種類のDNAを不和合性グループの異なる2種のベクターにそれぞれ組み込み、それらを同一の宿主細胞に導入することによっても得られる。このようにして得られる形質転換体としては、例えば、改変型カルボニル還元酵素をコードするヌクレオチドを前記の発現ベクターpUCN18に導入した組換えベクター例えば、実施例2に示したpNBSm01と還元型補酵素再生能を有するポリペプチドであるグルコース脱水素酵素をコードするポリヌクレオチドを含むベクター例えば、参考例8に示すpSTVG、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製に導入した形質転換体であるE.coliHB101pNBSm01,pSTVG実施例24参照などが挙げられる。ポリペプチド、もしくは形質転換体および/またはその処理物を、カルボニル化合物に作用させることにより、アルコール化合物を製造することができる。基質となるカルボニル化合物は特に制限されるものではないが、カルボニル基を有する化合物が非対称ケトンである場合、その産物が有用な光学活性アルコールとなるため、非常に有益な反応となる。前記カルボニル基を有する化合物としては、例えば、下記式1:式中、R1及びR2は水素原子、ハロゲン原子、置換されていても良いアルキル基、置換されていても良いアラルキル基、置換されていても良いアリール基、置換されていても良いアルコキシ基、ヒドロキシル基、アミノ基、またはニトロ基であるか、もしくは、R1とR2が互いに結合し環を形成しても良い。但し、R1とR2は構造が異なるで表される非対称ケトンが挙げられ、その場合、生成物は下記式2:式中、R1、R2は前記と同じ、は不斉炭素を表すで表される光学活性アルコールである。前記R1、R2は炭素数1~14のアルキル基、炭素数6~14のアリール基、炭素数4~14のヘテロアリール基、炭素数1~5のアルコキシ基、炭素数2~5のアルコキシカルボキシル基、炭素数1~5の直鎖もしくは分岐鎖アルキル基、炭素数2~5のアルケニル基、炭素数5~10のシクロアルキル基、炭素数4~9のヘテロシクロアルキル基、カルボキシル基、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アミノ基、またはニトロ基が好ましい。なお、上記で言う置換基としてはハロゲン原子、ヒドロキシル基、カルボキシル基、アミノ基、シアノ基、ニトロ基、アルキル基、アリール基、アラルキル基、アルコキシ基などである。また、上記で言うハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などである。基質である非対称ケトンとしては、3-キヌクリジノンもしくはその塩酸塩、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン、3-クロロ-1-2-フェニルプロパン-1-オンが特に好ましい。本発明のポリペプチドもしくは本発明のポリペプチドを発現させた形質転換体および/またはその処理物を用いて、前記カルボニル基を有する化合物を還元してアルコールを製造する場合、以下のように実施され得る。但し、以下の方法に限定されるわけではない。適当な溶媒例えば100mMリン酸緩衝液pH6.5など、カルボニル化合物である基質例えば、3-キヌクリジノン、もしくはその塩酸塩、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを加え、NADPHや酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸以下、NADP等の補酵素、及び該形質転換体の培養物および/またはその処理物などを添加し、pH調整下、攪拌して反応させる。ここで、処理物とは、例えば、粗抽出液、培養菌体、凍結乾燥生物体、アセトン乾燥生物体、菌体破砕物、またはそれらの固定化物等で、該ポリペプチドの酵素触媒活性が残存している物を意味する。この反応は5~80°C、好ましくは10~60°C、より好ましくは20~40°Cの温度で行われ、反応中反応液のpHは3~10、好ましくは4~9、より好ましくは5~8に維持する。反応はバッチ式あるいは連続方式で行われ得る。バッチ方式の場合は、反応基質は0.01~100w/v、好ましくは0.1~70、より好ましくは0.5~50の仕込み濃度で添加され得る。また、反応の途中で新たに基質を追加添加しても良い。また、反応には水系溶媒を用いても良いし、水系の溶媒と有機系の溶媒とを混合して用いても良い。有機系溶媒としては、例えば、トルエン、酢酸エチル、酢酸n-ブチル、ヘキサン、イソプロパノール、ジイソプロピルエーテル、メタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。ここで形質転換体の処理物等とは、例えば、無細胞抽出液、培養菌体、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、あるいはそれらの磨砕物、これらの混合物などを意味する。更にそれらは、ポリペプチド自体あるいは菌体のまま公知の手段で固定化されて用いられ得る。また、本反応を行う際に、本発明のポリペプチド及び還元型補酵素再生能を有するポリペプチドの両者を生産する形質転換体、例えば、E.coliHB101pNBSm01,pSTVG実施例24参照を用いれば、補酵素の使用量を大幅に減らすことが可能となる。還元型補酵素再生能を有するポリペプチドについて、次に詳述する。本発明のポリペプチドの生産能を有する形質転換体を用いて、カルボニル化合物を還元してアルコール化合物を合成する場合、補酵素としてNADPHもしくはNADHが必要となる。上記のように、反応系にNADPHもしくはNADHを必要な量だけ添加しても実施し得る。しかし、酸化された該補酵素NADPやNADを還元型NADPHやNADHに変換する能力以後還元型補酵素再生能力と呼ぶを有する酵素をその基質と共に、つまり補酵素再生系を本発明のポリペプチドと組み合わせて反応を行うことにより、高価な補酵素の使用量を大幅に削減することができる。還元型補酵素再生能力を有する酵素としては、ヒドロゲナーゼ、ギ酸脱水素酵素、カルボニル還元酵素、グルコース-6-リン酸脱水素酵素及びグルコース脱水素酵素等を用いることができる。好適には、グルコース脱水素酵素が用いられる。このような反応は、補酵素再生系を不斉還元反応系内に添加することによっても行われ得るが、本発明の酵素をコードするポリヌクレオチド及び還元型補酵素再生能を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの両者により形質転換された形質転換体を触媒とした場合は、還元型補酵素再生能を有する酵素を別に調製し反応系内に添加しなくても、効率的に反応を行うことができる。このような形質転換体は、先述の宿主-ベクター系及び形質転換体についてで記載した方法により得られる。例えば、前記E.coliHB101pNBSm01,pSTVG実施例24が挙げられる。反応後の反応液からのアルコールの採取方法は特に限定されないが、反応液から直接、あるいは菌体等を分離後、酢酸エチル、トルエン、t-ブチルメチルエーテル、ヘキサン、塩化メチレン等の溶剤で抽出し、脱水後、蒸留、再結晶あるいはシリカゲルカラムクロマトグラフィー等により精製すれば、高純度のアルコール化合物が容易に得られる。本発明のポリペプチド、形質転換体及び/またはその処理物を、カルボニル化合物に作用させて光学活性アルコールを得る工程を経て、医薬品原薬を製造することができる。好ましくはR-3-キヌクリジノールを原料として、公知の方法例えば、J.Med.Chem.48,6597-66062005に記載の方法で、1S,3 ́R-キヌクリジン-3 ́-イル1-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボン酸ソリフェナシンが容易に製造できる。また、別の好ましい医薬品原薬としてはS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを原料として、公知の方法例えば、J.Label.Compd.Radiopharm.34,213-2231995に記載の方法で、S-N-メチル-3-1-ナフタレニルオキシ-3-2-チオフェン-プロパンアミンデュロキセチンが容易に製造できる。以下、実施例で本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。なお、以下の実施例において用いた組み換えDNA技術に関する詳細な操作方法などは、次の成書に記載されている:MolecularCloning2ndEditionJosephSambrook,ColdSpringHarborLaboratoryPress1989、CurrentProtocolsinMolecularBiologyFrederickM.Ausubel,GreenePublishingAssociatesandWiley-Interscience1989。参考例1バークホルデリアエスピーBurkholderiasp.YT株由来の3-キヌクリジノン還元活性を有するポリペプチド野生型酵素をコードするDNAの取得バークホルデリアエスピーBurkholderiasp.YT株NITEP-613より、3-キヌクリジノン及び3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンに対する還元活性を有するポリペプチド以下、本ポリペプチドをRBSと呼ぶをコードするDNAをPCRにより取得した。[バークホルデリアエスピーYT株の染色体DNAの調製]500ml容坂口フラスコに、バクトトリプトン16g、酵母エキス10g、塩化ナトリウム5g、アデカノールLG-109日油株製0.1gいずれも1L当たりの組成からなる液体培地pH750mlを調製し、120°Cで20分間蒸気殺菌をおこなった。この培地に、予め同培地にて前培養しておいたバークホルデリアエスピーBurkholderiasp.YT株の培養液を5ml接種し、30°Cで18時間振盪しながら培養を行った。この培養液から、Murray等の方法Nucl.AcidsRes.8,43211980に記載の方法に従って染色体DNAを抽出した。[PCR反応]プライマー3:5’-ATATATACATATGACCCACCCGCAACCCCG-3’配列表の配列番号5、プライマー4:5’-TATAGGTACCTTATCAAAGCTTGTCGAACGCGAG-3’配列表の配列番号6を用いて、バークホルデリアエスピーBurkholderiasp.YT株の染色体DNAを鋳型としてPCRを行った。その結果、配列表の配列番号2に示す塩基配列からなる遺伝子の開始コドン部分にNdeI認識部位が付加され、かつ終始コドンの直後に新たな終止コドンTAAとKpnI認識部位が付加された二本鎖DNARBS遺伝子が得られた。PCRは、DNAポリメラ-ゼとして、PrimeSTARHSDNApolymeraseタカラバイオ社製を用いて行い、反応条件はその取り扱い説明書に従った。参考例2組換えベクターpNBSの構築参考例1で得られたRBS遺伝子をNdeI及びKpnIで消化し、プラスミドpUCN18PCR法によりpUC18タカラバイオ社製の185番目のTをAに改変してNdeIサイトを破壊し、更に471-472番目のGCをTGに改変することにより新たにNdeIサイトを導入したプラスミドのlacプロモーターの下流のNdeI認識部位とKpnI認識部位の間に挿入し、組換えベクターpNBSを構築した。参考例3ポリペプチドを発現する組換え生物の作製参考例2で構築した組換えベクターpNBSを用いて、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、組換え生物E.coliHB101pNBSを得た。また、pUCN18を用いてE.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、組換え生物E.coliHB101pUCN18を得た。参考例4組換え生物におけるDNAの発現参考例3で得た2種類の組換え生物E.coliHB101pUCN18、E.coliHB101pNBSを、200μg/mlのアンピシリンを含む2×YT培地トリプトン1.6、イーストエキス1.0、塩化ナトリウム0.5、pH7.05mlに接種し、37°Cで24時間振盪培養した。上記の培養で得られたそれぞれ培養液について、遠心分離により菌体を集め、5mlの100mMリン酸緩衝液pH6.5に懸濁した。これを、UH-50型超音波ホモゲナイザーSMT社製を用いて破砕した後、遠心分離により菌体残渣を除去し、無細胞抽出液を得た。これら無細胞抽出液の3-キヌクリジノン還元活性を測定した。3-キヌクリジノンに対する還元活性は、100mMリン酸緩衝液pH6.5に、3-キヌクリジノン5mM、補酵素NADPH0.25mM、および無細胞抽出液を添加して30°Cで1分間反応を行い、波長340nmにおける吸光度の減少速度より算出した。この反応条件において、1分間に1μmolのNADPHをNADPに酸化する酵素活性を1Uと定義した。それぞれの組換え生物の3-キヌクリジノン還元活性を以下に示す。E.coliHB101pUCN18については、3-キヌクリジノン還元活性は0.1U/mg以下であった。一方、RBSを発現させたE.coliHB101pNBSの3-キヌクリジノン還元活性は100U/mgであった。また、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンに対する還元活性は、100mMリン酸緩衝液pH6.5に、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン10mM、補酵素NADPH0.25mM、および無細胞抽出液を添加して30°Cで1分間反応を行い、波長340nmにおける吸光度の減少速度より算出した。この反応条件において、1分間に1μmolのNADPHをNADPに酸化する酵素活性を1Uと定義した。それぞれの組換え生物の3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン還元活性を以下に示す。E.coliHB101pUCN18については、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン還元活性は0.1U/mg以下であった。一方、RBSを発現させたE.coliHB101pNBSの3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン還元活性は25U/mgであった。以上のように、参考例3で得られた組換え生物は3-キヌクリジノン及び3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンに対する還元活性を有し、RBSの発現が認められた。参考例5野生型酵素RBSの各種化合物に対する安定性参考例4と同様の方法で野生型酵素の無細胞抽出液を得た。この無細胞抽出液の3-キヌクリジノン還元活性を測定し、これを0時間目の活性とした。この無細胞抽出液に表1に示した化合物を添加し、硫酸もしくは水酸化ナトリウムでpH6.5に調整後、30°Cで24時間インキュベートした。また、対照として何も添加しない無細胞抽出液も同様にインキュベートした。24時間後、各無細胞抽出液を希釈し、参考例4と同様の方法で3-キヌクリジノン還元活性を測定した。残存活性は下記式より算出し、この値を各種化合物に対する安定性の指標とした。残存活性=[24時間目の酵素活性]÷[0時間目の酵素活性]×100結果を表1に示す。野生型酵素は硫酸ナトリウムに比べて、無機塩化物である塩化ナトリウム、塩化カリウム存在下での安定性が低かった。また、野生型酵素はアセトフェノンに比べて有機塩化物であるフェナシルクロライド、m-クロロフェナシルクロライドに対する安定性が低かった。このように野生型酵素は塩化物に対する安定性が低かった。参考例6野生型酵素RBSの各種化合物による反応阻害参考例4と同様の方法で野生型酵素の無細胞抽出液を得た。この無細胞抽出液の3-キヌクリジノン還元活性を測定し、これを阻害剤なしの活性とした。表2に示した化合物及び5mM3-キヌクリジノン、0.25mM補酵素NADPHを含む100mMリン酸緩衝液pH6.5に、無細胞抽出液を添加して30°Cで1分間反応を行い、波長340nmにおける吸光度の減少速度より3-キヌクリジノンに対する還元活性を算出した。相対活性は下記式より算出し、この値を各種化合物による反応阻害の指標とした。相対活性=[各種化合物存在下での酵素活性]÷[阻害剤なしの酵素活性]×100結果を表2に示す。野生型酵素は硫酸ナトリウムに比べて、無機塩化物である塩化ナトリウム、塩化カリウムにより大きく阻害を受けた。このように野生型酵素は塩化物により強い反応阻害を受けた。実施例1変異酵素ライブラリーの作製参考例2で作製したRBS遺伝子を含むプラスミドpNBSをテンプレートに、プライマー1:5’-GGATAACAATTTCATAAGGAGGTTACATATG-3’配列表の配列番号3およびプライマー2:5’-CTAGAGGATCCCCGGGTACCTTA-3’配列表の配列番号4を用いてエラープローンPCR法Leungetal.Technique1,11-151989を用いて、RBS遺伝子全長にランダムな変異を導入したDNA増幅断片を得た。この増幅断片を制限酵素NdeIおよびKpnIで消化したのち、同酵素で処理した高発現ベクターpUCN18に組み込み、複数の変異酵素発現プラスミドを作製した。このプラスミドを用いてE.coliHB101を形質転換し、100μg/mLのアンピシリンを含むLBプレート培地に塗布した。生育したコロニーは変異導入されたRBS遺伝子を有する組換え大腸菌であり、この組換え菌群を変異酵素ライブラリー1とした。実施例2改変型カルボニル還元酵素の選抜1変異酵素ライブラリーより無機塩化物の1つである塩化ナトリウムに対する安定性が向上した改変型カルボニル還元酵素を選抜した。実施例1で作製した変異酵素ライブラリー1の各組換え菌及び参考例3で作製したE.coliHB101pNBS対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液60μlに10mMEDTA2Na及び1TritonX-100を含むリン酸緩衝液pH7.0240μlを加え、37°Cで1時間インキュベートした。各処理液を遠心し、上清を無細胞抽出液とした。各無細胞抽出液100μlに1.24M塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液pH6.5を加え、30°Cで18時間インキュベートした塩化ナトリウム処理。塩化ナトリウム処理した各無細胞抽出液を96穴プレートAGCテクノグラス社製に50μl分注し、6mMのNADPHを含むリン酸緩衝液pH6.550μlと20mM3-キヌクリジノン塩酸塩を含むリン酸緩衝液pH6.5100μlを加え30°Cで反応した。経時的にUVサンプル撮影装置FAS-III東洋紡績社製でNADPHの蛍光を観察した。反応が進行しない酵素液はNADPHの蛍光が残存するが、反応が進行した無細胞抽出液はNADPHの減少に伴い、蛍光がなくなった。対照であるE.coliHB101pNBSの無細胞抽出液野生型酵素に比べ、早く蛍光がなくなった酵素を塩素原子存在下で反応性の高い酵素、すなわち塩化ナトリウムに対する安定性が向上した改変型カルボニル還元酵素として選抜した。選抜した酵素の培養液からプラスミドを抽出し、BigDyeTerminatorCycleSequencingKitアプライドバイオシステムズジャパン社製およびAppliedBiosystems3130xlジェネティックアナライザアプライドバイオシステムズジャパン社製を用いて変異型RBS遺伝子の塩基配列を決定し、変異部位を特定した。塩化ナトリウムに対する安定性の向上した改変型カルボニル還元酵素を表3に示す。表3に示す17種類の塩化ナトリウムに対する安定性が向上した酵素を取得した。実施例3改変型カルボニル還元酵素の選抜2変異酵素ライブラリーより有機塩化物の1つであるクロロアセトンに対する安定性が向上した改変型カルボニル還元酵素を選抜した。実施例1で作製した変異酵素ライブラリー1の各組換え菌及び参考例3で作製したE.coliHB101pNBS対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液60μlに10mMEDTA2Na及び1TritonX-100を含むリン酸緩衝液pH7.0240μlを加え、37°Cで1時間インキュベートした。各処理液を遠心し、上清を無細胞抽出液とした。各無細胞抽出液100μlに0.02クロロアセトンを含むリン酸緩衝液pH6.5を加え、30°Cで18時間インキュベートしたクロロアセトン処理。塩化ナトリウム処理した各無細胞抽出液を96穴プレートAGCテクノグラス社製に50μl分注し、6mMのNADPHを含むリン酸緩衝液pH6.550μlと20mM3-キヌクリジノン塩酸塩を含むリン酸緩衝液pH6.5100μlを加え30°Cで反応した。経時的にUVサンプル撮影装置FAS-III東洋紡績社製でNADPHの蛍光を観察した。対照であるE.coliHB101pNBSの無細胞抽出液野生型酵素に比べ、早く蛍光がなくなった酵素を塩素原子存在下で反応性の高い酵素、すなわちクロロアセトンに対する安定性が向上した酵素として選抜した。実施例2と同様の方法で変異型RBS遺伝子の塩基配列を決定し、変異部位を特定した。クロロアセトンに対する安定性が向上した酵素を表4に示す。表4に示す13種類のクロロアセトンに対する安定性が向上した酵素を取得した。実施例4改変型カルボニル還元酵素の選抜3変異酵素ライブラリーより無機塩化物の1つである塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した改変型カルボニル還元酵素を選抜した。実施例1で作製した変異酵素ライブラリー1の各組換え菌及び参考例3で作製したE.coliHB101pNBS対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液60μlに10mMEDTA2Na及び1TritonX-100を含むリン酸緩衝液pH7.0240μlを加え、37°Cで1時間インキュベートした。各処理液を遠心し、上清を無細胞抽出液とした。無細胞抽出液を96穴プレートAGCテクノグラス社製に50μl分注し、6mMのNADPHを含むリン酸緩衝液pH6.550μlと1.24M塩化ナトリウムと20mM3-キヌクリジノン塩酸塩を含むリン酸緩衝液pH6.5100μlを加え30°Cで反応した。経時的にUVサンプル撮影装置FAS-III東洋紡績社製でNADPHの蛍光を観察した。対照であるE.coliHB101pNBSの無細胞抽出液野生型酵素に比べ、早く蛍光がなくなった酵素を塩素原子存在下で反応性の高い酵素、すなわち塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した改変型カルボニル還元酵素として選抜した。実施例2と同様の方法で変異型RBS遺伝子の塩基配列を決定し、変異部位を特定した。塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した酵素を表5に示す。表5に示す23種類の塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した酵素を取得した。実施例5変異酵素ライブラリーの作製実施例2で取得したT2I-L46M変異酵素の変異型RBS遺伝子を含むプラスミドpNBSm1をテンプレートに実施例1と同様の方法で変異酵素ライブラリーを作製し、これを変異酵素ライブラリー2とした。実施例6改変型カルボニル還元酵素の選抜4変異酵素ライブラリー2より有機塩化物の1つであるクロロアセトンに対する安定性が向上した改変型カルボニル還元酵素を選抜した。実施例5で作製した変異酵素ライブラリー2の各組換え菌及び実施例2で取得したT2I-L46M変異酵素を生産するE.coliHB101pNBSm1対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液60μlに10mMEDTA2Na及び1TritonX-100を含むリン酸緩衝液pH7.0240μlを加え、37°Cで1時間インキュベートした。各処理液を遠心し、上清を無細胞抽出液とした。各無細胞抽出液100μlに0.02クロロアセトンを含むリン酸緩衝液pH6.5を加え、30°Cで18時間インキュベートしたクロロアセトン処理。クロロアセトン処理した各無細胞抽出液を96穴プレートAGCテクノグラス社製に50μl分注し、6mMのNADPHを含むリン酸緩衝液pH6.550μlと20mM3-キヌクリジノン塩酸塩を含むリン酸緩衝液pH6.5100μlを加え30°Cで反応した。経時的にUVサンプル撮影装置FAS-III東洋紡績社製でNADPHの蛍光を観察した。対照であるE.coliHB101pNBSm1の無細胞抽出液T2I-L46M変異酵素に比べ、早く蛍光がなくなった酵素をクロロアセトンに対する安定性が向上した酵素として選抜した。実施例2と同様の方法で変異型RBS遺伝子の塩基配列を決定し、変異部位を特定した。得られたクロロアセトンに対する安定性が向上した改変型カルボニル還元酵素を表6に示す。表6に示す11種類のクロロアセトンに対する安定性が向上した改変型カルボニル還元酵素を取得した。実施例7改変型カルボニル還元酵素の選抜5変異酵素ライブラリー2より無機塩化物の1つである塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した改変型カルボニル還元酵素を選抜した。実施例5で作製した変異酵素ライブラリー2の各組換え菌及び実施例2で取得したT2I-L46M変異酵素を生産するE.coliHB101pNBSm1対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液60μlに10mMEDTA2Na及び1TritonX-100を含むリン酸緩衝液pH7.0240μlを加え、37°Cで1時間インキュベートした。各処理液を遠心し、上清を無細胞抽出液とした。無細胞抽出液を96穴プレートAGCテクノグラス社製に50μl分注し、6mMのNADPHを含むリン酸緩衝液pH6.550μlと1.24M塩化ナトリウムと20mM3-キヌクリジノン塩酸塩を含むリン酸緩衝液pH6.5100μlを加え30°Cで反応した。経時的にUVサンプル撮影装置FAS-III東洋紡績社製でNADPHの蛍光を観察した。対照であるE.coliHB101pNBSm1の無細胞抽出液T2I-L46M変異酵素に比べ、早く蛍光がなくなった酵素を塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した改変型カルボニル還元酵素として選抜した。実施例2と同様の方法で変異型RBS遺伝子の塩基配列を決定し、変異部位を特定した。得られた塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した改変型カルボニル還元酵素を表7に示す。表7に示す13種類の塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上した改変型カルボニル還元酵素を取得した。実施例8多重変異改変型カルボニル還元酵素の作製実施例2で取得したプラスミドpNBSm01を鋳型として、プライマー5:5’-ATATATACATATGATCCACCCGCAACCCCG-3’配列表の配列番号7、プライマー6:5’-CGGCGATCCGCGGCAGGGAGCCGGCCCAGT-3’配列表の配列番号8を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちT2I、L46M、F68Sのアミノ酸置換を有するN末端側のポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得たN末端側DNA。同様にプラスミドpNBSm01を鋳型として、プライマー7:5’-ACTGGGCCGGCTCCCTGCCGCGGATCGCCG-3’配列表の配列番号9、プライマー8:5’-TATAGGTACCTTATCAAAGCTTGTCGAACG-3’配列表の配列番号10を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちF68Sのアミノ酸置換を有するC末端側のポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得たC末端側DNA。N末端側DNAとC末端側DNAを混合し、これを鋳型として、プライマー5、プライマー8を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちT2I、L46M、F68Sのアミノ酸置換を有するポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得た。参考例2と同様の方法でpUCN18に導入し、pNBSm57を作製した。このpNBSm57を用いて、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、改変型カルボニル還元酵素T2I-L46M-F68Sを生産する組換え生物E.coliHB101pNBSm57を得た。実施例9多重変異改変型カルボニル還元酵素の作製実施例2で取得したプラスミドpNBSm01を鋳型として、プライマー9:5’-ATATATACATATGACCCACCCGCAACCCCG-3’配列表の配列番号11、プライマー6を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちL46M、F68Sのアミノ酸置換を有するN末端側のポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得たN末端側DNA。同様にプラスミドpNBSm01を鋳型として、プライマー7、プライマー8を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちF68Sのアミノ酸置換を有するC末端側のポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得たC末端側DNA。N末端側DNAとC末端側DNAを混合し、これを鋳型として、プライマー9、プライマー8を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちL46M、F68Sのアミノ酸置換を有するポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得た。参考例2と同様の方法でpUCN18に導入し、pNBSm58を作製した。このpNBSm58を用いて、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、改変型カルボニル還元酵素L46M-F68Sを生産する組換え生物E.coliHB101pNBSm58を得た。実施例10改変型カルボニル還元酵素の作製参考例2で取得したプラスミドpNBSを鋳型として、プライマー5:5’-ATATATACATATGATCCACCCGCAACCCCG-3’配列表の配列番号7、プライマー8:5’-TATAGGTACCTTATCAAAGCTTGTCGAACG-3’配列表の配列番号10を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちT2Iのアミノ酸置換を有するポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得た。参考例2と同様の方法でpUCN18に導入し、pNBSm59を作製した。このpNBSm59を用いて、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、改変型カルボニル還元酵素T2Iを生産する組換え生物E.coliHB101pNBSm59を得た。実施例11改変型カルボニル還元酵素の作製参考例2で取得したプラスミドpNBSm01を鋳型として、プライマー9:5’-ATATATACATATGACCCACCCGCAACCCCG-3’配列表の配列番号11、プライマー8:5’-TATAGGTACCTTATCAAAGCTTGTCGAACG-3’配列表の配列番号10を用いてPCRを行い、配列番号1に示すアミノ酸配列のうちL46Mのアミノ酸置換を有するポリペプチドをコードする二本鎖DNAを得た。参考例2と同様の方法でpUCN18に導入し、pNBSm60を作製した。このpNBSm60を用いて、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、改変型カルボニル還元酵素L46Mを生産する組換え生物E.coliHB101pNBSm60を得た。実施例12改変型カルボニル還元酵素の評価1実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素の各組換え菌及び参考例3で作製したE.coliHB101pNBS対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液について、遠心分離により菌体を集め、培養液と等量の100mMリン酸緩衝液pH6.5に懸濁した。これを、UH-50型超音波ホモゲナイザーSMT社製を用いて破砕した後、遠心分離により菌体残渣を除去し、無細胞抽出液を得た。無細胞抽出液500μlに1.24M塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液pH7.0500μlを加え、30°Cでインキュベートした塩化ナトリウム処理。0時間目と20時間目の塩化ナトリウム処理液をサンプリングし、希釈して参考例4に示した方法で3-キヌクリジノンに対する還元活性を測定した。下記式より残存活性は算出し、この値を塩化ナトリウムに対する安定性の指標とした。残存活性=[20時間目の酵素活性]÷[0時間目の酵素活性]×100野生型酵素及び改変型カルボニル還元酵素の残存活性を表8に示す。表8に示した改変型カルボニル還元酵素は野生型酵素よりも無機塩化物の1つである塩化ナトリウムに対する安定性が向上していた。実施例13改変型カルボニル還元酵素の評価2実施例2~9で取得した改変型カルボニル還元酵素の各組換え菌及び参考例3で作製したE.coliHB101pNBS対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液について、遠心分離により菌体を集め、培養液と等量の100mMリン酸緩衝液pH6.5に懸濁した。これを、UH-50型超音波ホモゲナイザーSMT社製を用いて破砕した後、遠心分離により菌体残渣を除去し、無細胞抽出液を得た。無細胞抽出500μlに0.02クロロアセトンを含むリン酸緩衝液pH7.0500μlを加え、30°Cでインキュベートしたクロロアセトン処理。0時間目と20時間目のクロロアセトン処理液をサンプリングし、希釈して参考例4に示した方法で3-キヌクリジノンに対する還元活性を測定した。下記式より残存活性は算出し、この値をクロロアセトンに対する安定性の指標とした。残存活性=[20時間目の酵素活性]÷[0時間目の酵素活性]×100野生型酵素及び改変型カルボニル還元酵素の残存活性を表9に示す。表9に示した改変型カルボニル還元酵素は野生型酵素よりも有機塩化物の1つであるクロロアセトンに対する安定性が向上していた。また、実施例8及び9で作製した多重変異酵素T2I-L46M-F68S、L46M-F68Sは改変型カルボニル還元酵素T2I-L46MやF68Sに比べてさらに安定性が向上していた。実施例14改変型カルボニル還元酵素の評価3実施例2~11で取得した改変型カルボニル還元酵素の各組換え菌及び参考例3で作製したE.coliHB101pNBS対照をそれぞれ参考例4と同様の方法で培養した。得られた各培養液について、遠心分離により菌体を集め、培養液と等量の100mMリン酸緩衝液pH6.5に懸濁した。これを、UH-50型超音波ホモゲナイザーSMT社製を用いて破砕した後、遠心分離により菌体残渣を除去し、無細胞抽出液を得た。塩化ナトリウム存在下での3-キヌクリジノンに対する還元活性を、0.62M塩化ナトリウム、5mM3-キヌクリジノン、0.25mM補酵素NADPHを含む100mMリン酸緩衝液pH6.5に、無細胞抽出液を添加して30°Cで1分間反応を行い、波長340nmにおける吸光度の減少速度より算出した。また、塩化ナトリウム非存在下での3-キヌクリジノンに対する還元活性についても参考例4に示した方法で算出した。下記式より相対活性を算出し、この値を塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性の指標とした。相対活性=[塩化ナトリウム存在下での酵素活性]÷[塩化ナトリウム非存在下での酵素活性]×100野生型酵素及び改変型カルボニル還元酵素の相対活性を表10に示す。表10に示した改変型カルボニル還元酵素は野生型酵素よりも無機塩化物の1つである塩化ナトリウムによる反応阻害に対する抵抗性が向上していた。また、実施例8及び9で作製した多重変異酵素T2I-L46M-F68S、L46M-F68Sは改変型カルボニル還元酵素T2I-L46MやF68Sに比べて、さらに反応阻害に対する抵抗性が向上していた。実施例15参考例4と同様の方法で野生型酵素及び改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mを生産するE.coliHB101pNBS01およびT2I-R32H-L46Mを生産するE.coliHB101pNBS43を培養し、無細胞抽出液を得た。この無細胞抽出液の3-キヌクリジノン還元活性を測定し、これを阻害剤なしの活性とした。表11に示した化合物及び5mM3-キヌクリジノン、0.25mM補酵素NADPHを含む100mMリン酸緩衝液pH6.5に、無細胞抽出液を添加して30°Cで1分間反応を行い、波長340nmにおける吸光度の減少速度より3-キヌクリジノンに対する還元活性を算出した。相対活性は下記式より算出し、この値を各種化合物による反応阻害の指標とした。結果を表11に示す。相対活性=[各種化合物存在下での酵素活性]÷[阻害剤なしの酵素活性]×100表11に示した改変型カルボニル還元酵素は野生型酵素よりも臭化カリウムやヨウ化ナトリウムのようなハロゲン原子を含む化合物による反応阻害に対する抵抗性が向上していた。実施例16改変型カルボニル還元酵素を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例2~11で取得した改変型カルボニル還元酵素を生産する各組換え菌をそれぞれ参考例4と同様に培養後、超音波ホモゲナイザーによる菌体破砕を実施し、無細胞抽出液1mlを得た。この無細胞抽出液1mlに、NADPH51mg、3-キヌクリジノン塩酸塩10mgを添加し、6N水酸化ナトリウムでpH6.5に調製し、30°Cで1時間攪拌した。反応液の一部をサンプリングし、6N水酸化ナトリウムでpH13以上とした後にn-ブタノールで抽出した。抽出液を後述の[ガスクロマトグラフィーによる分析条件2]の条件で分析することにより、3-キヌクリジノールの生成を確認した。その結果、取得したすべての改変型カルボニル還元酵素が3-キヌクリジノンを立体選択的に還元し、R-3-キヌクリジノールを生成していた。比較例1組換え生物E.coliHB101pNBSを用いたR-3-キヌクリジノールの製造野生型酵素を生産するE.coliHB101pNBSを参考例4と同様に培養後、超音波ホモゲナイザーによる菌体破砕を実施し、無細胞抽出液100mlを得た。この無細胞抽出液100mlに、グルコース脱水素酵素商品名:GLUCDHAmanoII、天野エンザイム社製1000U、グルコース24g、NADP3mg、塩化物として塩酸を含む3-キヌクリジノン塩酸塩19gを添加し、5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.5に調整しながら、30°Cで20時間攪拌した。反応液の一部をサンプリングし、6N水酸化ナトリウムでpH13以上とした後にn-ブタノールで抽出した。抽出液を下記の[ガスクロマトグラフィーによる分析条件1]で分析し、R-3-キヌクリジノールへの変換率を測定した。また、抽出液を下記の[ガスクロマトグラフィーによる分析条件2]の条件で分析することにより、R-3-キヌクリジノールの光学純度を測定した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は45であり、その光学純度は99e.e.以上であった。野生型酵素は塩化物存在下で反応阻害、酵素失活を受けるため変換率が低かった。[ガスクロマトグラフィーによる分析条件1]カラム:Rtx-5amineキャピラリーカラム30m、内径0.25mm、Restek社製検出器:水素炎イオン化検出器注入部温度:220°C、カラム温度:150°C、検出器温度:220°Cキャリアーガス:ヘリウム、流量130KPa[ガスクロマトグラフィーによる分析条件2]カラム:GammaDEX30m、内径0.25mm、SUPELCO社製検出器:水素炎イオン化検出器注入部温度:220°C、カラム温度:150°C、検出器温度:220°Cキャリアーガス:ヘリウム、流量70KPa比較例2組換え生物E.coliHB101pNBSを用いたR-3-キヌクリジノールの製造塩化物非存在下で野生型酵素を用いて、R-3-キヌクリジノールを製造した。3-キヌクリジノン塩酸塩を等量の水に溶解し、水酸化ナトリウムでpH12に調整した後、2倍量のn-ブタノールで3回抽出した。抽出液を減圧濃縮し、フリー体3-キヌクリジノンの結晶を得た。野生型酵素を生産するE.coliHB101pNBSを参考例4と同様に培養後、超音波ホモゲナイザーによる菌体破砕を実施し、無細胞抽出液100mlを得た。この無細胞抽出液100mlに、グルコース脱水素酵素商品名:GLUCDHAmanoII、天野エンザイム社製1000U、グルコース24g、NADP3mgを添加し、硫酸でpH6.5に調整しながら3-キヌクリジノン15gを加えた。5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.5に調整しながら、30°Cで20時間攪拌した。反応液の一部をサンプリングし、6N水酸化ナトリウムでpH13以上とした後にn-ブタノールで抽出した。抽出液を前記の[ガスクロマトグラフィーによる分析条件1]で分析し、R-3-キヌクリジノールへの変換率を測定した。また、抽出液を下記の[ガスクロマトグラフィーによる分析条件2]の条件で分析することにより、R-3-キヌクリジノールの光学純度を測定した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は100であり、その光学純度は99e.e.以上であった。野生型酵素は塩化物非存在下では比較例1に比べ変換率が高かった。しかし、本法ではフリー体3-キヌクリジノンを調製する工程が必要であり、効率的な製造法ではなかった。実施例17組換え生物E.coliHB101pNBSm01を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mを生産するE.coliHB101pNBSm01を参考例4と同様の方法で無細胞抽出液を調製し、比較例1と同様の方法でキヌクリジノン還元反応を実施した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は100であり、その光学純度は99e.e.以上であった。改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mを用いた反応での変換率は比較例1の野生型酵素を用いた場合よりも高く、塩化物の1つである3-キヌクリジノン塩酸塩存在下での反応性が向上していた。実施例18組換え生物E.coliHB101pNBSm05を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素F68Sを生産するE.coliHB101pNBSm05について、実施例17と同様の方法でキヌクリジノン還元反応を実施した。その結果、変換率は100、光学純度は99e.e.以上であった。改変型カルボニル還元酵素F68Sを用いた反応での変換率は比較例1の野生型酵素を用いた場合よりも高く、塩化物の1つである3-キヌクリジノン塩酸塩存在下での反応性が向上していた。実施例19組換え生物E.coliHB101pNBSm10を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素D95Gを生産するE.coliHB101pNBSm10について、実施例17と同様の方法でキヌクリジノン還元反応を実施した。その結果、変換率は100、光学純度は99e.e.以上であった。改変型カルボニル還元酵素D95Gを用いた反応での変換率は比較例1の野生型酵素を用いた場合よりも高く、塩化物の1つである3-キヌクリジノン塩酸塩存在下での反応性が向上していた。実施例20組換え生物E.coliHB101pNBSm01を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mを生産するE.coliHB101pNBSm01を参考例4と同様に培養後、超音波ホモゲナイザーによる菌体破砕を実施し、無細胞抽出液100mlを得た。この無細胞抽出液100mlに、グルコース脱水素酵素商品名:GLUCDHAmanoII、天野エンザイム社製1000U、グルコース32g、NADP3mg、3-キヌクリジノン塩酸塩26gを添加し、5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.5に調整しながら、30°Cで30時間攪拌した。反応液の一部をサンプリングし、6N水酸化ナトリウムでpH13以上とした後にn-ブタノールで抽出した。抽出液を比較例1と同様の方法で分析した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は95であり、その光学純度は99e.e.以上であった。塩化物存在下での反応性が向上した改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mは比較例1の野生型酵素よりも高濃度の反応が可能だった。実施例21組換え生物E.coliHB101pNBSm43を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例6で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-R32H-L46Mを生産するE.coliHB101pNBSm43について実施例20と同様の方法でキヌクリジノン還元反応を実施した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は100であり、その光学純度は99e.e.以上であった。実施例22組換え生物E.coliHB101pNBSm44を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例6で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-A45S-L46M-G90Sを生産するE.coliHB101pNBSm44について実施例20と同様の方法でキヌクリジノン還元反応を実施した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は100であり、その光学純度は99e.e.以上であった。実施例23組換え生物E.coliHB101pNBSm45を用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例6で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-A45T-L46Mを生産するE.coliHB101pNBSm45について実施例20と同様の方法でキヌクリジノン還元反応を実施した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は100であり、その光学純度は99e.e.以上であった。参考例7組換えベクターpSTVGの構築プライマー10:5’-GCCGAATTCTAAGGAGGTTAACAATGTATAAAGATTTAGAAGG-3’配列表の配列番号12と、プライマー11:5’-CTGCAGGTCGACTTATCCGCGTCCTGCTTGG-3’配列表の配列番号13を用い、プラスミドpGDK1Eur.J.Biochem.186,3891989に記載の方法で取得及び調製可能を鋳型としてPCRを行い、バシラスメガテリウムBacillusmegateriumIAM1030株由来のグルコース脱水素酵素以後、GDHと呼ぶ遺伝子の開始コドンから5塩基上流に大腸菌のリボゾーム結合配列に、さらにその直前にEcoRI認識部位が付加され、かつ、終止コドンの直後にSalIおよびPstI認識部位が付加された二本鎖DNAGDH遺伝子を取得した。得られたGDH遺伝子をEcoRIおよびPstIで消化し、プラスミドpSTV28タカラバイオ社製のEcoRI-PstI部位に挿入して、組換えベクターpSTVGを構築した。参考例8ポリペプチドを発現する組換え生物の作製参考例2で構築した組換えベクターpNBSおよび参考例7で構築したpSTVGの2つの組換えベクターを用いて、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、組換え生物E.coliHB101pNBS,pSTVGを得た。また、pUCN18及びpSTV28を用いてE.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、組換え生物E.coliHB101pUCN18,pSTV28を得た。参考例9組換え生物におけるDNAの発現参考例8で得た2種の組換え生物E.coliHB101pNBS,pSTVG、E.coliHB101pUCN18,pSTV28、それぞれを、200μg/mlのアンピシリンおよび100μg/mlのクロラムフェニコールを含む2×YT培地トリプトン1.6、イーストエキス1.0、塩化ナトリウム0.5、pH7.05mlに接種し、37°Cで24時間振盪培養した。上記の培養で得られたそれぞれの培養液について、遠心分離により菌体を集め、5mlの100mMリン酸緩衝液pH6.5に懸濁した。これを、UH-50型超音波ホモゲナイザーSMT社製を用いて破砕した後、遠心分離により菌体残渣を除去し、無細胞抽出液を得た。これら無細胞抽出液の3-キヌクリジノン還元活性を参考例6と同様の方法で測定した。また、GDH活性についても測定した。GDH活性は、1Mトリス塩酸緩衝液pH8.0に、グルコース0.1M、補酵素NADP2mM、および無細胞抽出液を添加して25°Cで1分間反応を行い、波長340nmにおける吸光度の増加速度より算出した。この反応条件において、1分間に1μmolのNADPをNADPHに還元する酵素活性を1Uと定義した。それぞれの組換え生物の3-キヌクリジノン還元活性およびGDH活性を以下に示す。E.coliHB101pUCN18,pSTV28については、3-キヌクリジノン還元活性、GDH活性共に0.1U/mg以下であった。また、RBS、GDHを共発現させたE.coliHB101pNBS,pSTVGの3-キヌクリジノン還元活性は100U/mg、GDH活性は40U/mgであった。実施例24組換え生物E.coliHB101pNBSm01,pSTVGの作製実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mをコードする遺伝子を含む組換えベクターpNBSm01および参考例5で構築したpSTVGの2つの組換えベクターを用いて、E.coliHB101コンピテントセルタカラバイオ社製を形質転換し、組換え生物E.coliHB101pNBSm01,pSTVGを得た。実施例25組換え生物E.coliHB101pNBSm01,pSTVGを用いたR-3-キヌクリジノールの製造実施例24で取得したE.coliHB101pNBSm01,pSTVGを参考例4と同様に培養後、超音波ホモゲナイザーによる菌体破砕を実施し、無細胞抽出液100mlを得た。この無細胞抽出液100mlにグルコース24g、NADP3mg、3-キヌクリジノン塩酸塩19gを添加し、5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.5に調整しながら、30°Cで20時間攪拌した。反応液の一部をサンプリングし、6N水酸化ナトリウムでpH13以上とした後にn-ブタノールで抽出した。抽出液を比較例1と同様の方法で分析した。その結果、R-3-キヌクリジノールへの変換率は100であり、その光学純度は99e.e.以上であった。比較例3組換え生物E.coliHB101pNBSを用いたS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの製造野生型酵素を生産するE.coliHB101pNBSを参考例4と同様に培養後、超音波ホモゲナイザーによる菌体破砕を実施し、無細胞抽出液100mlを得た。この無細胞抽出液100mlに、グルコース脱水素酵素商品名:GLUCDHAmanoII、天野エンザイム社製1000U、グルコース30g、トルエン10g、NADP10mg、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを15g添加し、5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.25に調整しながら、30°Cで攪拌した。反応開始後24時間目に反応液の一部をサンプリングし、酢酸エチルで抽出した。抽出液を下記の高速液体クロマトグラフィーの条件で分析し、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールへの変換率とその光学純度を測定した。その結果、変換率は78であり、その光学純度は99e.e.であった。[高速液体クロマトグラフィーによる分析条件]カラム:ChiralcelOD-H4.6μm内径×250mm;ダイセル化学社製カラム温度:30°C検出波長:240nm移動相:n-ヘキサン/イソプロパノール=97.5/2.5保持時間:S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オール約19.9分、R-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オール約21.5分、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン約12.2分実施例26組換え生物E.coliHB101pNBSm01を用いたS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの製造実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mを生産するE.coliHB101pNBSm01について比較例3と同様の方法で3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン還元反応を実施した。反応終了後、比較例2と同様の方法で分析した。その結果、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの変換率は95であり、その光学純度は99e.e.であった。改変型カルボニル還元酵素T2I-L46Mを用いた反応での変換率は比較例3の野生型酵素を用いた場合よりも高く、有機塩化物の1つである3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン存在下での反応性が向上していた。実施例27組換え生物E.coliHB101pNBSm05を用いたS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの製造実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素F68Sを生産するE.coliHB101pNBSm05について実施例26と同様の方法で3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン還元反応を実施した。その結果、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの変換率は92であり、その光学純度は99e.e.以上であった。改変型カルボニル還元酵素F68Sを用いた反応での変換率は比較例3の野生型酵素を用いた場合よりも高く、有機塩化物の1つである3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン存在下での反応性が向上していた。実施例28組換え生物E.coliHB101pNBSm10を用いたS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの製造実施例2で取得した改変型カルボニル還元酵素D95Gを生産するE.coliHB101pNBSm10について実施例26と同様の方法で3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン還元反応を実施した。その結果、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの変換率は96であり、その光学純度は99e.e.以上であった。改変型カルボニル還元酵素D95Gを用いた反応での変換率は比較例3の野生型酵素を用いた場合よりも高く、有機塩化物の1つである3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン存在下での反応性が向上していた。実施例29組換え生物E.coliHB101pNBSm43を用いたS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの製造実施例6で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-R32H-L46Mを生産するE.coliHB101pNBSm43について実施例26と同様の方法で3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン還元反応を実施した。その結果、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの変換率は98であり、その光学純度は99e.e.以上であった。改変型カルボニル還元酵素T2I-R32H-L46Mを用いた反応での変換率は比較例3の野生型酵素を用いた場合よりも高く、有機塩化物の1つである3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オン存在下での反応性が向上していた。実施例30組換え生物E.coliHB101pNBSm01,pSTVGを用いたS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの製造実施例24で取得したE.coliHB101pNBSm01,pSTVGを参考例4と同様に培養し、培養液100mlを得た。この培養液100mlにグルコース30g、トルエン10g、NADP10mg、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを15g添加し、5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.25に調整しながら、30°Cで攪拌した。反応開始後24時間目に反応液の一部をサンプリングし、酢酸エチルで抽出した。抽出液を比較例2と同様の方法で分析した。その結果、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの変換率は96であり、その光学純度は99e.e.以上であった。実施例311S,3 ́R-キヌクリジン-3 ́-イル1-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボン酸塩酸塩の製造工程1実施例24で取得したE.coliHB101pNBSm01,pSTVGを参考例4と同様に培養後、超音波ホモゲナイザーによる菌体破砕を実施し、無細胞抽出液200mlを得た。この無細胞抽出液200mlにグルコース48g、NADP6mg、3-キヌクリジノン塩酸塩38gを添加し、5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.5に調整しながら、30°Cで20時間攪拌した。20時間後、反応液を比較例1と同様の方法で分析した。その結果、R-3-キヌクリジノールの光学純度は99e.e.以上であった。反応液を6N水酸化ナトリウムでpH13以上とした後にn-ブタノールで抽出し、抽出液を減圧乾燥し、結晶を得た。この結晶を再結晶化し、R-3-キヌクリジノール21gの結晶を得た。工程2ジクロロメタン200mlにS-1-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン10.6gと炭酸カリウム10.6gを加え、氷中で冷却しながら、ジクロロメタン20mlとクロロぎ酸エチル5.8mlを混合した溶液を添加し、室温で一晩攪拌した。一晩後、反応液に水を添加し、室温で30分攪拌した。有機層を分離した後、水と飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した後、減圧濃縮した。濃縮液をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、S-1-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボン酸を得た。工程3トルエン120mlに精製したS-1-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボン酸12gとR-3-キヌクリジノール16.3gを加え、水素化ナトリウム1.7gを添加した後、140°Cで3時間加熱した。反応後、室温まで冷却し、飽和食塩水を添加した後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水で洗浄した後、20塩酸で抽出した。水層を1M水酸化ナトリウムでpH10に調整した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで脱水した。抽出液を減圧濃縮した後、塩酸を加えたアセトニトリルとジエチルエーテル中で結晶化し、無色の結晶の1S,3 ́R-キヌクリジン-3-イル-1-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボン酸塩酸塩10.1gを得た。改変型カルボニル還元酵素により製造したR-3-キヌクリジノールを原料に用いて、容易に医薬品原薬1S,3 ́R-キヌクリジン-3 ́-イル1-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボン酸塩酸塩ソリフェナシンを製造できた。実施例32S-N-メチル-3-1-ナフタレニルオキシ-3-2-チオフェン-プロパンアミン塩酸塩の製造工程1実施例24で取得したE.coliHB101pNBSm01,pSTVGを参考例4と同様に培養し、培養液200mlを得た。この培養液100mlにグルコース60g、トルエン20g、NADP20mg、3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オンを30g添加し、5Nの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによりpH6.25に調整しながら、30°Cで24時間攪拌した。反応後、トルエンで抽出し、有機層を減圧濃縮し、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オール26gを得た。濃縮液を比較例2と同様の方法で分析した結果、S-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの光学純度は99e.e.以上であった。工程240メチルアミン/メタノール溶液93gにS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オール21.6gを室温で滴下し、30分間反応させた。メタノール及びメチルアミンを減圧下で留去した後、水を加えメチル-t-ブチルエーテルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄した後、減圧濃縮した。濃縮物にn-ヘプタンを加え、析出した固体をろ別し、S-3-N-メチルアミノ-1-2-チエニルプロパン-1-オールの微黄色結晶17.4gを得た。工程3ペンタンで洗浄した水素化ナトリウム5gをジメチルアセトアミドに懸濁し、S-3-N-メチルアミノ-1-2-チエニルプロパン-1-オール17gを添加した後、70°Cで加熱しながら攪拌した。溶液が透明になった後、1-フルオロナフタレン26gを添加し、90°Cで2時間攪拌した。反応後、水を添加し、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、減圧濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、S-N-メチル-3-1-ナフタレニルオキシ-3-2-チオフェン-プロパンアミン17gを得た。次にS-N-メチル-3-1-ナフタレニルオキシ-3-2-チオフェン-プロパンアミンを酢酸エチルに溶解した後、0.44M塩酸/酢酸エチル溶液を滴下し、結晶化させた。室温で1時間攪拌後、冷却し、ジエチルエーテルを混合して、結晶をろ別し、S-N-メチル-3-1-ナフタレニルオキシ-3-2-チオフェン-プロパンアミン塩酸塩15gを得た。改変型カルボニル還元酵素により製造したS-3-クロロ-1-2-チエニルプロパン-1-オールを原料に用いて、容易に医薬品原薬S-N-メチル-3-1-ナフタレニルオキシ-3-2-チオフェン-プロパンアミン塩酸塩を製造できた。比較例4野生型酵素の補酵素に対するKm値の算出参考例3で作製したE.coliHB101pNBS対照を参考例4と同様の方法で培養した。得られた培養液について、遠心分離により菌体を集め、培養液と等量の100mMリン酸緩衝液pH6.5に懸濁した。これを、UH-50型超音波ホモゲナイザーSMT社製を用いて破砕した後、遠心分離により菌体残渣を除去し、無細胞抽出液を得た。3-キヌクリジノンに対する還元活性を、5mM3-キヌクリジノン、0.025mM~0.25mM補酵素NADPHを含む100mMリン酸緩衝液pH6.5に、無細胞抽出液を添加して30°Cで1分間反応を行い、波長340nmにおける吸光度の減少速度より算出した。また、0.62M塩化ナトリウム存在下での3-キヌクリジノンに対する還元活性についても同様に補酵素濃度を変えて測定した。各測定結果のラインウィーバーバークプロットを図2に示す。NADPHに対するKm値は塩化ナトリウム非存在下では18.9μM、塩化ナトリウム存在下では191.3μMであった。また、塩化ナトリウム非存在下及び存在下それぞれのラインウィーバーバークプロットの関係から塩化ナトリウムはNADPHと競合阻害の関係にあることが示された。実施例33変異型酵素の補酵素に対するKm実施例2及び実施例11で取得した改変型カルボニル還元酵素T2I-L46M、F68S、D95G及びL46Mをそれぞれ生産するE.coliHB101pNBSm01、E.coliHB101pNBSm05、E.coliHB101pNBSm10、E.coliHB101pNBSm60について比較例4と同様の方法で塩化ナトリウム非存在下でのNADPHに対するKm値を算出した。その結果、塩化ナトリウム非存在下でのNADPHに対するKm値はT2I-L46Mが6.4μM、F68Sが13.8μM、D95Gが15.5μM、L46Mが6.3μMであった。比較例4の野生型酵素のKm値を100とした場合、これらの改変型カルボニル還元酵素はそれぞれ33.9、73.0、82.0、33.3とNADPHに対するKm値が小さく、補酵素NADPHに対する親和性が向上していた。また、実施例14に示したようにこれらの改変型カルボニル還元酵素は野生型酵素に比べ塩化ナトリウムに対する阻害抵抗性も向上していた。参考例10で示したように、野生型酵素において、塩化ナトリウムはNADPHと競合阻害の関係にあり、補酵素に対する親和性の向上は塩化ナトリウムに対する阻害抵抗性の向上効果をもたらすことが示された。"