"セルロースを糖化する方法であって、1セルロース含有材料をイオン液体で処理する工程、および2工程1で糖化率が1を超えたときに得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程を含み、該イオン液体のカチオン種が、置換ピリジニウムである、方法。前記イオン液体のカチオン種が、ピリジン環上の窒素原子が置換基と結合した置換ピリジニウムであって、該置換基が、置換基が炭素数3~6の直鎖状のアルキル基である、請求項1に記載の方法。前記イオン液体のカチオン種が、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウムおよび1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムからなる群より選択される少なくとも1種である、請求項1に記載の方法。前記イオン液体のアニオン種が、ハロゲンである、請求項1から3のいずれかの項に記載の方法。セルロース含有材料からエタノールを生産する方法であって、aセルロース含有材料をイオン液体で処理する工程、b工程aで糖化率が1を超えたときに得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程、およびc工程bで得られた反応液とエタノール生産微生物とを混合し、該微生物を培養する工程を含み、該イオン液体のカチオン種が、置換ピリジニウムである、方法。前記イオン液体のカチオン種が、ピリジン環上の窒素原子が置換基と結合した置換ピリジニウムであって、該置換基が、置換基が炭素数3~6の直鎖状のアルキル基である、請求項5に記載の方法。前記イオン液体のカチオン種が、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウムおよび1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムからなる群より選択される少なくとも1種である、請求項5に記載の方法。前記イオン液体のアニオン種が、ハロゲンである、請求項5から7のいずれかの項に記載の方法。前記セルラーゼの全部または一部が、前記微生物に由来し、該微生物が、セルラーゼを分泌または表層提示するように形質転換されたセルラーゼ発現微生物である、請求項5から8のいずれかの項に記載の方法。本発明は、セルロース含有材料から低コストでかつ効率的に有用物質を生産する方法を提供することを目的とする。本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、セルロース含有材料を特定のイオン液体で処理することによってセルロースが糖化されることを見出し、さらにこの処理液にセルラーゼ発現微生物を添加して培養することによって、効率よくエタノール発酵できることを見出し、本発明を完成させた。本発明は、セルロースを糖化する方法を提供し、該方法は、1セルロース含有材料をイオン液体で処理する工程、および2工程1で糖化率が1を超えたときに得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程を含み、該イオン液体のカチオン種は、置換ピリジニウムである。1つの実施態様では、上記イオン液体のカチオン種が、ピリジン環上の窒素原子が置換基と結合した置換ピリジニウムであって、該置換基が、置換基が炭素数3~6の直鎖状のアルキル基である。1つの実施態様では、上記イオン液体のカチオン種は、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウムおよび1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムからなる群より選択される少なくとも1種である。1つの実施態様では、上記イオン液体のアニオン種は、ハロゲンである。本発明はまた、セルロース含有材料からエタノールを生産する方法を提供し、該方法は、aセルロース含有材料をイオン液体で処理する工程、b工程aで糖化率が1を超えたときに得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程、およびc工程bで得られた反応液とエタノール生産微生物とを混合し、該微生物を培養する工程を含み、該イオン液体のカチオン種は、置換ピリジニウムである。1つの実施態様では、上記イオン液体のカチオン種が、ピリジン環上の窒素原子が置換基と結合した置換ピリジニウムであって、該置換基が、置換基が炭素数3~6の直鎖状のアルキル基である。1つの実施態様では、上記イオン液体のカチオン種は、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウムおよび1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムからなる群より選択される少なくとも1種である。1つの実施態様では、上記イオン液体のアニオン種は、ハロゲンである。1つの実施態様では、上記セルラーゼの全部または一部が、前記微生物に由来し、該微生物が、セルラーゼを分泌または表層提示するように形質転換されたセルラーゼ発現微生物である。本発明によれば、セルロース含有材料から低コストでかつ効率的に有用物質を生産する方法を提供することができる。セルロース本明細書において、セルロースとは、グルコースがβ-1,4-グルコシド結合により重合した重合体およびその誘導体をいう。重合体の重合度は、特に限定されないが、好ましくは200以上である。誘導体としては、例えば、カルボキシメチル化、アルデヒド化、もしくはエステル化などの誘導体が挙げられる。セルロースは、その部分分解物である、セロオリゴ糖、セロビオースを含んでいてもよい。また、配糖体であるβグルコシド、リグニンおよび/またはヘミセルロースとの複合体であるリグノセルロース、さらにペクチンなどとの複合体を含んでいてもよい。セルロースは、結晶性セルロースであってもよいし、非結晶性セルロースであってもよいが、好ましくは結晶性セルロースを含む。また、天然由来のものであってもよいし、人為的に合成したものであってもよい。セルロースの由来は、特に限定されず、植物由来のものでも、真菌由来のものでも、細菌由来のものであってもよい。本明細書において、糖化とは、セルロースのβ-1,4-グルコシド結合が加水分解を受け、グルコースやセロビオースなどの還元糖が生成することをいい、糖化率とは、加水分解を受けてグルコースおよびセロビオースを生成したセルロースの割合をいう。セルロース含有材料としては、特に限定されない。例えば、綿や麻などの天然繊維品、レーヨン、キュプラ、アセテート、リヨセルなどの再生繊維品、稲ワラなどの各種ワラ、籾殻、バガス、木材チップなどの農産廃棄物、古紙、建築廃材などの各種廃棄物などを含むバイオマス木質系および草本系が挙げられる。セルロース含有材料は、リグノセルロースを含む実バイオマスの場合には、イオン液体で処理する前に、処理効率を向上するために、適宜粉砕などにより微細化されていることが好ましい。なお、処理工程において微細化されてもよい。セルラーゼセルラーゼは、セルロース加水分解酵素とも呼ばれ、セルロースのβ1,4-グルコシド結合を加水分解する。セルラーゼの種類としては、代表的には、エンドβ1,4-グルカナーゼ以下、単にエンドグルカナーゼという、セロビオヒドロラーゼ、およびβ-グルコシダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。エンドグルカナーゼは、通常、セルラーゼと称される酵素であり、セルロースを分子内部から切断し、グルコース、セロビオース、およびセロオリゴ糖重合度が3以上であり、そして通常、10以下であるが、これに限定されないを生じる。エンドグルカナーゼは、非結晶化されたセルロース、可溶性セロオリゴ糖、およびカルボキシメチルセルロースCMCのようなセルロース誘導体などの結晶化度の低いまたは非晶性のセルロースに対する反応性が高いが、結晶構造を有するセルロースミクロフィブリルへの反応性は低い。エンドグルカナーゼは、非晶性セルロースを加水分解する酵素の代表例である。エンドグルカナーゼとしては、例えば、トリコデルマリーセイ由来エンドグルカナーゼ特に、EGIIが挙げられるが、これに限定されない。セロビオヒドロラーゼは、セルロースの還元末端または非還元末端のいずれかから分解してセロビオースを遊離する。セロビオヒドロラーゼは、結晶構造を有するセルロースミクロフィブリルのような結晶性セルロースを分解するが、カルボキシメチルセルロースCMCのようなセルロース誘導体などの結晶化度の低いまたは非晶性のセルロースに対する反応性は低い。セロビオヒドロラーゼは、結晶性セルロースを加水分解する酵素の代表例である。結晶性セルロースの分子間および分子内の密な水素結合による強固な構造に起因して、セロビオヒドロラーゼによる結晶性セルロースの加水分解は、エンドグルカナーゼによる非晶性セルロースの加水分解に比較して遅い。セロビオヒドロラーゼには2種類あり、それぞれセロビオヒドロラーゼ1およびセロビオヒドロラーゼ2と称される。セロビオヒドロラーゼとしては、例えば、トリコデルマリーセイ由来セロビオヒドロラーゼ特に、CBH2が挙げられるが、これに限定されない。β-グルコシダーゼは、セルロースにおいては、非還元末端からグルコース単位を切り離していくエキソ型の加水分解酵素である。β-グルコシダーゼは、アグリコンまたは糖鎖とβ-D-グルコースとのβ1,4-グルコシド結合を切断し、セロビオースまたはセロオリゴ糖を加水分解してグルコースを生成する。β-グルコシダーゼは、セロビオースまたはセロオリゴ糖を加水分解する酵素の代表例である。β-グルコシダーゼは現在、1種類知られており、β-グルコシダーゼ1と称される。β-グルコシダーゼとしては、例えば、アスペルギルスアクレアータス由来β-グルコシダーゼ特に、BGL1挙げられるが、これに限定されない。セルラーゼとしては、天然由来のものであってもよいし、組換えDNA技術により製造されたものであってもよいし、市販されているものであってもよい。精製されたものであってもよいし、酵素産生微生物などそのままであってもよい。酵素製剤であってもよいし、セルラーゼ発現微生物などであってもよい。例えば、クロストリジウムサーモセラムClostridiumthermocellumなどのClostridium属、TrichodermareeseiなどのTrichoderma属またはAspergillusoryzaeやAspergillusnigerなどのAspergillus属由来のセルラーゼが挙げられる。Pyrococcus属に代表される超好熱性古細菌由来のセルラーゼであってもよい。セルラーゼとしては、2種以上を組み合わせて用いてもよい。好ましくは、セルロースをグルコースにまで糖化することが可能な組み合わせである。イオン液体本発明に用いるイオン液体は、置換ピリジニウム塩である。置換ピリジニウム塩は、以下の式Iで表される。置換ピリジニウム塩のカチオン種は、ピリジン環上の窒素原子が置換基と結合した置換ピリジニウムである。カチオン種における置換基式IにおけるRは、炭素数1~8の直鎖状または分岐状のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基であることが好ましい。好ましいアルキル基としては、炭素数1~6、より好ましくは炭素数3~6の直鎖状のアルキル基が挙げられる。具体的には、n-プロピル基、n-ブチル基、n-ペンチル基、n-ヘキシル基が挙げられる。好ましいカチオン種としては、例えば、N-n-プロピルピリジニウム、N-n-ブチルピリジニウム、N-n-ペンチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウム、1,4-ジメチルピリジニウム、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、1-n-ブチル-4-メチルピリジニウム、1-n-ブチル-2,4-ジメチルピリジニウム、1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムが挙げられる。より好ましくは、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウム、1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムである。カチオン種としては、2種以上を組み合わせて用いてもよい。置換ピリジニウム塩のカチオン種は、ピリジン環上の炭素原子も置換基と結合していてもよい。置換基としては、特に限定されないが、好ましくはメチル基、エチル基が挙げられる。置換基が結合する炭素原子の位置も、特に限定されず、複数あってもよい。好ましくは、2位、3位、4位である。置換ピリジニウム塩のアニオン種としては、特に限定されず、例えば、ハロゲンアニオン、カルボキシレートアニオン、スルホネートアニオン、リン酸アニオンが挙げられる。ハロゲンアニオンとしては塩素アニオン、臭素アニオンおよびヨウ素アニオンなどが挙げられる。カルボキシレートアニオンとしては、炭素数1~18のモノカルボキシレートアニオンおよびジカルボキシレートアニオン、例えばホルメートアニオン、アセテートアニオン、フマレートアニオン、オキサレートアニオン、ラクテートアニオンおよびピルベートアニオンが挙げられる。スルホネートアニオンとしては、スルホン酸アニオン、メタンスルホン酸アニオン、オクタンスルホン酸アニオン、ドデカンスルホン酸アニオンおよびエイコサンスルホン酸アニオンなどが挙げられる。リン酸アニオンとしては、リン酸アニオン、メチルリン酸モノエステルアニオン、エチルリン酸モノエステルアニオン、プロピルリン酸モノエステルアニオン、ブチルリン酸モノエステルアニオン、メチルリン酸ジエステルアニオン、エチルリン酸ジエステルアニオン、プロピルリン酸ジエステルアニオン、ブチルリン酸ジエステルアニオンなどが挙げられる。好ましくは、各種リン酸アニオン、カルボキシレートアニオン、ハロゲンアニオンである。より好ましくは、ハロゲンイオンである。アニオン種としては、2種以上を組み合わせて用いてもよい。置換ピリジニウム塩としては、上述したカチオン種とアニオン種とを適宜組み合わせたものが挙げられる。例えば、N-n-プロピルピリジニウムクロリド、N-n-ブチルピリジニウムクロリド、N-n-ペンチルピリジニウムクロリド、N-n-ヘキシルピリジニウムクロリド、1,4-ジメチルピリジニウムクロリド、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウムクロリド、1-n-ブチル-4-メチルピリジニウムクロリド、1-n-ブチル-2,4-ジメチルピリジニウムクロリド、1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムクロリドが挙げられる。好ましくは、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウムクロリド、N-n-ヘキシルピリジニウムクロリド、1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムクロリドである。カチオン種またはアニオン種としては、2種以上を組み合わせて用いてもよい。イオン液体は、商業的に入手できるほか、公知の方法で合成することができる。合成方法としては、特に限定されず、カチオンを塩化物との塩として合成、精製し、次いで所望のアニオンを有するイオン液体の塩と反応させる方法、一旦水酸化物とした上でアニオンを含む酸で中和する方法が挙げられる。イオン液体は高純度であることが好ましい。セルロースを糖化する方法本発明のセルロースを糖化する方法は、1セルロース含有材料を上記イオン液体で処理する工程、および2工程1で得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程を含む。1セルロース含有材料を上記イオン液体で処理する工程この工程では、セルロース含有材料を上記イオン液体に浸漬する、さらに分散する、さらに懸濁する、あるいはセルロース含有材料に上記イオン液体を噴霧する。この工程では、セルロースが糖化し、グルコースやセロビオースなどの還元糖が生成する。また、イオン液体がセルロース含有材料に浸透し、セルロースの構造が緩和される。この工程で用いるイオン液体のカチオン種は、好ましくは1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウムまたは1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムである。イオン液体の量は、特に限定されず、例えば、セルロース含有材料1質量部に対して、2~50質量部、好ましくは4~20質量部である。この工程では、通常、セルロース含有材料とイオン液体とを加熱する。加熱温度は、特に限定されないが、好ましくは40°C以上、より好ましくは50°C以上、さらに好ましくは60°C以上、さらにより好ましくは80°C以上である。加熱によりセルロースの糖化を促進することができる。また、好ましくは150°C以下、より好ましくは140°C以下、さらに好ましくは120°C以下である。150°Cを超えるとセルロースの過分解が生じ、40°C未満ではほとんど糖化しない。この工程では、ほかにセルロース含有材料をイオン液体中でプレスする処理、粉砕する処理、超音波に曝す処理などを伴ってもよいし、これらの処理を適宜組み合わせてもよい。この工程の時間は、特に限定されないが、好ましくは10分間~3時間、より好ましくは10分間~1時間、さらに好ましくは30分間~1時間である。2工程1で得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程上記工程1で得られた処理液には、セルロースが糖化して生成したグルコースやセロビオースなどの還元糖のほかに、未分解のセルロースも含まれている。処理液中に含有されるセルロース残量から算出される糖化率は、好ましくは1を超えている。上記工程1で、セルロース含有材料をイオン液体で処理することによって、セルロースが加水分解を受けるほか、イオン液体がセルロース含有材料に浸透し、セルロースの構造が緩和されているため、セルロースはセルラーゼのアタックを受けやすい状態になっている。この工程で用いるセルラーゼは、酵素製剤であってもよいし、セルラーゼを分泌または表層提示するように形質転換されたセルラーゼ発現微生物に由来するものであってもよいし、両方を組み合わせたものであってもよい。セルラーゼを分泌または表層提示するように形質転換されたセルラーゼ発現微生物としては、例えば、以下で詳述するセルロース含有材料からエタノールを生産する方法の工程cで好ましく用いられる、セルラーゼを分泌または表層提示するように形質転換されたセルラーゼ発現微生物が挙げられる。このようなセルラーゼ発現微生物をそのままあるいは固定化処理して用いてもよいし、セルラーゼ発現微生物から調製したセルラーゼを用いてもよい。酵素製剤のセルラーゼの量は、特に限定されず、例えば、セルロース1質量部に対して、1~20FPU、好ましくは5~10FPUである。なお、FPUFilterPaperUnitとは、国際純正応用化学連合IUPACInternationalUnionofPureandAppliedChemistryが定めた方法により測定される濾紙分解活性であり、セルラーゼ活性の効力単位を示す。反応液の量は、特に限定されないが、好ましくはイオン液体1質量部に対して、2.5~100質量部、より好ましくは3~50質量部である。反応液の量が、イオン液体1質量部に対して、2.5質量部未満では、セルラーゼの活性がイオン液体により阻害を受けるため、酵素反応が進まない。セルラーゼを反応させる温度は、特に限定されず、例えば、10~70°C、好ましくは30~50°Cである。この工程の時間は、特に限定されず、セルロース含有材料の大きさ、形状、由来などに応じて適宜調整すればよい。例えば、10分間~10時間、好ましくは10分間~3時間である。セルロース含有材料からエタノールを生産する方法セルロース含有材料からエタノールを生産する方法は、aセルロース含有材料を上記イオン液体で処理する工程、b工程aで得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程、およびc工程bで得られた反応液とエタノール生産微生物とを混合し、該微生物を培養する工程を含む。aセルロース含有材料を上記イオン液体で処理する工程この工程は、上記のセルロースを糖化する方法における同工程と同様である。すなわち、この工程では、セルロース含有材料を上記イオン液体に浸漬する、さらに分散する、さらに懸濁する、あるいはセルロース含有材料に上記イオン液体を噴霧する。この工程では、セルロースが糖化し、グルコースやセロビオースなどの還元糖が生成する。また、イオン液体がセルロース含有材料に浸透し、セルロースの構造が緩和される。この工程で用いるイオン液体のカチオン種は、好ましくは1-n-ブチル-3-メチルピリジニウム、N-n-ヘキシルピリジニウムまたは1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムである。イオン液体の量は、特に限定されず、例えば、セルロース含有材料1質量部に対して、2~50質量部、好ましくは4~20質量部である。この工程では、通常、セルロース含有材料とイオン液体とを加熱する。加熱温度は、特に限定されないが、好ましくは40°C以上、より好ましくは50°C以上、さらに好ましくは60°C以上、さらにより好ましくは80°C以上である。加熱によりセルロースの糖化を促進することができる。また、好ましくは150°C以下、より好ましくは140°C以下、さらに好ましくは120°C以下である。150°Cを超えるとセルロースの過分解が生じ、40°C未満ではほとんど糖化しない。この工程では、ほかにセルロース含有材料をイオン液体中でプレスする処理、粉砕する処理、超音波に曝す処理などを伴ってもよいし、これらの処理を適宜組み合わせてもよい。この工程の時間は、特に限定されないが、好ましくは10分間~3時間、より好ましくは10分間~1時間、さらに好ましくは30分間~1時間である。b工程aで得られた処理液にセルラーゼを反応させる工程上記工程aで得られた処理液には、セルロースが糖化して生成したグルコースやセロビオースなどの還元糖のほかに、未分解のセルロースも含まれている。処理液中に含有されるセルロース残量から算出される糖化率は、好ましくは1を超えている。上記工程aで、セルロース含有材料をイオン液体で処理することによって、セルロースが加水分解を受けるほか、イオン液体がセルロース含有材料に浸透し、セルロースの構造が緩和されているため、セルロースはセルラーゼのアタックを受けやすい状態になっている。この工程で用いるセルラーゼは、酵素製剤であってもよいし、以下の工程cで用いる微生物に由来するものであってもよいし、両方を組み合わせたものであってもよい。微生物に由来する場合、該微生物は、セルラーゼを分泌または表層提示するように形質転換されたセルラーゼ発現微生物である。セルラーゼ発現微生物については、以下の工程cで詳述する。酵素製剤のセルラーゼの量は、特に限定されず、例えば、セルロース1質量部に対して、1~20FPU、好ましくは5~10FPUである。反応液の量は、特に限定されないが、好ましくはイオン液体1質量部に対して、2.5~100質量部、より好ましくは3~50質量部である。反応液の量が、イオン液体1質量部に対して、2.5質量部未満では、セルラーゼの活性がイオン液体により阻害を受けるため、酵素反応が進まない。セルラーゼを反応させる温度は、特に限定されず、例えば、10~70°C、好ましくは30~50°Cである。この工程の時間は、特に限定されず、セルロース含有材料の大きさ、形状、由来などに応じて適宜調整すればよい。例えば、10分間~10時間、好ましくは10分間~3時間である。c工程bで得られた反応液とセルラーゼ発現微生物とを混合し、該微生物を培養する工程上記工程bで得られた反応液には、イオン液体およびセルラーゼの作用によってセルロースが糖化して生成したグルコースやセロビオースなどの還元糖が高濃度で含まれており、未分解のセルロースもわずかに含まれている。この工程では、糖化により生成したグルコースを炭素源としてエタノール生産微生物を培養することによってエタノール発酵が行われる。また、エタノール生産微生物がセルラーゼ発現微生物の場合、エタノール生産微生物が表層提示するセルラーゼまたは分泌するセルラーゼが、未分解のセルラーゼに作用してさらに糖化を進め、さらにセロビオースをグルコースに分解して、エタノール発酵のための炭素源であるグルコースの濃度を高める。混合するエタノール生産微生物の量は、特に限定されない。培地の量は、特に限定されないが、好ましくはイオン液体1質量部に対して20~100質量部である。培地の量が、イオン液体1質量部に対して、20質量部未満では、エタノール生産微生物がイオン液体により阻害を受けるため、発酵が進まない。培地中のイオン液体の濃度は、通常500mM以下、好ましくは300mM以下、より好ましくは200mM以下である。500mMを超えると、エタノール生産微生物がイオン液体により阻害を受けるため、発酵が進まない。培地の組成は、エタノール生産微生物が十分に増殖し、エタノール発酵できる限り、特に限定されない。培地は、工程bで得られた反応液に含まれるグルコースのほかに炭素源を含有していてもよい。エタノール生産微生物としては、特に限定されず、例えば、酵母、エタノール生産糸状菌、エタノール生産細菌が挙げられる。好ましくは、酵母である。酵母としては、特に限定されず、例えば、サッカロマイセスセレビジエSaccharomycescerevisiaeなどのサッカロマイセス属の酵母、シゾサッカロマイセスポンベSchizosaccharomycespombeなどのシゾサッカロマイセス属の酵母、カンジダクルゼイCandidakrusei、キャンディダシェハーテCandidashehataeなどのキャンディダ属の酵母、ピヒアパストリスPichiapastoris、ピヒアスティピティスPichiastipitisなどのピヒア属の酵母、ハンセヌラHansenula属の酵母、トリコスポロンTrichosporon属の酵母、ブレタノマイセスBrettanomyces属の酵母、パチソレンPachysolen属の酵母、ヤマダジマYamadazyma属の酵母、クルイベロマイセスマーキシアヌスKluyveromycesmarxianus、クルイベロマイセスラクティスKluveromyceslactisなどのクルイベロマイセス属の酵母が挙げられる。なかでも、工業的利用性などの観点からサッカロマイセス属酵母が好ましく、サッカロマイセスセレビジエがより好ましい。エタノール生産糸状菌としては、特に限定されず、例えば、ケカビMucor属の糸状菌が挙げられる。エタノール生産細菌としては、特に限定されず、例えば、ザイモモナスモビリスZymomonasmobilis、エタノールを生産するように形質転換された遺伝子組換え大腸菌が挙げられる。エタノール生産微生物が発現するセルラーゼは、上記セルラーゼと同様である。例えば、セルラーゼを酵母の細胞外に分泌させるには、公知の分泌シグナルペプチドをセルラーゼに付与したものを酵母で発現するように酵母を形質転換すればよい。また、例えば、セルラーゼを酵母の細胞表面に表層提示するには、表層タンパク質であるα-アグルチニンまたはそのレセプターなどの酵母表層提示システムを利用することができる。例えば、分泌シグナルに加えて凝集性タンパク質であるα-アグルチニンC末端側の320アミノ酸残基からなるペプチドを利用する。所望のタンパク質を細胞表層に提示するためのポリペプチドや手法は、WO01/79483号公報や、特開2003-235579号公報、WO2002/042483号パンフレット、WO2003/016525号パンフレット、特開2006-136223号公報、藤田らの文献藤田ら,2004ApplEnvironMicrobiol7012071212および藤田ら2002ApplEnvironMicrobiol6851365141、村井ら1998ApplEnvironMicrobiol6448574861に開示されている。エタノール生産微生物の形質転換に用いるセルラーゼ遺伝子はデータベースに登録されている既知のセルラーゼの塩基配列などに基づいて取得できる。すなわち、所定の生物から抽出したDNA、各種cDNAライブラリーまたはゲノムDNAライブラリーなどを鋳型としたPCR増幅やハイブリダイゼーションにより核酸断片として得ることができる。あるいは、化学合成法などにより、核酸断片として合成してもよい。エタノール生産微生物の形質転換は、各微生物に応じて適宜実施することができる。例えば、酵母の形質転換のための組換えベクターの作製などの一般的な操作は、例えば、T.Maniatis,JSambrookらの実験書MolecularCloningALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratory、19821989、2001などを参照して適宜実施することができる。酵母に対する組換えベクターの導入などの操作は、例えば、MolecularCloningALaboratoryManualsecondeditionManiatisetalColdSpringHarborLaboratorypress1989など参照して適宜実施することができる。ベクターの導入方法としては、例えば、リン酸カルシウム法、トランスフォーメーション法や、トランスフェクション法、接合法、プロトプラスト法、エレクトロポレーション法、リポフェクション法、酢酸リチウム法が挙げられる。ベクターを導入して得られた形質転換酵母は、マーカー遺伝子や活性発現を利用して適宜選抜することができる。エタノール生産微生物の培養条件は、特に限定されない。培養器を振盪してもしなくてもよい。通気条件としては、嫌気条件、微好気条件、好気条件など適宜選択することができる。培養温度も、特に限定されず、例えば25°C~55°Cである。培養時間も必要に応じて適宜設定される。通常、数時間~150時間程度である。培地のpHも適宜調整される。培養には、必要に応じてアンピシリン、テトラサイクリンなどの抗生物質を添加することができる。本発明の方法により製造されたエタノールは培地から適宜、回収、精製することができる。本発明の方法は、セルロース含有材料の前処理が簡単であるため、エタノールの製造コストを大幅に低減することができる。以下に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。実施例および参考例で用いたイオン液体は、1-n-ブチル-3-メチルピリジニウムクロリド以下、[Bmpy][Cl]:式II、N-n-ヘキシルピリジニウムクロリド以下、[Hpy][Cl]:式III、1-n-ヘキシル-3-メチルピリジニウムクロリド以下、[Hmpy][Cl]:式IV、1-n-ヘキシル-3-メチルイミダゾリウムクロリド以下、[Hmim][Cl]:式V、1-n-ブチル-3-メチルイミダゾリウムクロリド以下、[Bmim][Cl]:式VI、および1-エチル-3-メチルイミダゾリウムジエチルホスフェート以下、[Emim][DEP]:式VIIである。参考例1:セルロース含有材料のイオン液体による処理1:イオン種の影響サンプル瓶内のイオン液体[Bmpy][Cl]、[Hpy][Cl]、[Bmim][Cl]、または[Emim][DEP]1gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社50mgを添加し、それぞれ120°Cにて10分間、30分間または1時間加熱攪拌した。40°Cに冷却したそれぞれのサンプル瓶に40°Cの100mMクエン酸緩衝液4000μLを加え、ボルテックスにて攪拌後、それぞれのサンプル瓶から分析用試料を採取した。試料中の還元糖の生成を調べるために、試料10μLに4-アミノ安息香酸エチルエステルABEE誘導体化試薬ABEE165mg、メタノール350μL、氷酢酸41μL、シアン水素化ホウ素ナトリウム35mg40μLを反応させ、生成したABEE誘導体化還元糖をHPLCにて分析した。結果を図1に示す。HPLC分析条件は次のとおりである。<HPLC分析条件>カラム:HonenpakC18株式会社J-オイルミルズ移動相:0.02TFA水溶液/アセトニトリル=85/15検出器:紫外可視吸光光度計305nm図1から明らかなように、結晶性セルロースをピリジニウム系イオン液体で処理すると、セルロースが分解し、グルコースやセロビオースを生成した。特に、[Hpy][Cl]を用いると顕著に生成した。一方、イミダゾリウム系イオン液体で処理してもセルロースは分解しなかった。すなわち、ピリジニウム系イオン液体は、セルロースを糖化できることがわかった。参考例2:セルロース含有材料のイオン液体による処理2:温度の影響サンプル瓶内のイオン液体[Hpy][Cl]1gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社50mgを添加し、それぞれ80°C、90°C、100°C、110°Cまたは120°Cにて30分間加熱攪拌した。40°Cに冷却したそれぞれのサンプル瓶に40°Cの100mMクエン酸緩衝液4000μLを加え、ボルテックスにて攪拌後、それぞれのサンプル瓶から分析用試料を採取した。参考例1と同様にして、試料中の還元糖の生成を調べた。結果を図2に示す。図2から明らかなように、イオン液体[Hpy][Cl]で処理する温度を高くすると、セルロースが分解して生成したグルコースやセロビオースの量が増加した。120°Cにて30分間処理すると約30の糖が生成した。参考例3:セルロース含有材料のイオン液体による処理3:量比の影響サンプル瓶内のイオン液体[Hpy][Cl]1gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社50mg、250mgまたは500mgを添加し、それぞれ120°Cにて30分間加熱攪拌した。40°Cに冷却したそれぞれのサンプル瓶に40°Cの100mMクエン酸緩衝液4000μLを加え、ボルテックスにて攪拌後、それぞれのサンプル瓶から分析用試料を採取した。参考例1と同様にして、試料中の還元糖の生成を調べた。結果を図3に示す。図3から明らかなように、イオン液体[Hpy][Cl]に対し、処理するセルロースの量を多くすると、セルロースが分解して生成したグルコースやセロビオースの量は増加したが、糖化率は30程度で一定であった。参考例4:イオン液体で処理したセルロース含有材料の構造分析1:FT-IR分析サンプル瓶内のイオン液体[Bmpy][Cl]、[Hpy][Cl]、[Bmim][Cl]、または[Emim][DEP]1gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社50mgを添加し、それぞれ120°Cにて1時間加熱攪拌した。40°Cに冷却したそれぞれのサンプル瓶にMilli-Q水5mLを加え、ボルテックスにて攪拌後、スパーテルでセルロースを破砕した。Milli-Q水5mLで共洗いしながらセルロースを遠心用チューブに移し、遠心分離した8000rpm、25°C、20分間。上清を捨て、Milli-Q水5mLを加え、ボルテックスにて攪拌して、沈殿物を洗浄した後、遠心分離8000rpm、25°C、20分間を行った。この操作を3回繰り返し、上清を捨て、凍結乾燥させた試料をFT-IR分析に供した。結果を図4に示す。図4から明らかなように、[Hpy][Cl]による処理では、セルロースII型のピークが観察され、セルロース鎖が部分切断されていることが示唆された。参考例5:イオン液体で処理したセルロース含有材料の構造分析2:SEM観察サンプル瓶内のイオン液体[Hpy][Cl]、[Hmpy][Cl]、[Hmim][Cl]、または[Emim][DEP]2gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社100mgを添加し、それぞれ80°Cまたは120°Cにて30分間加熱攪拌した。80°C処理では、イオン液体に代えてMilli-Q水日本ミリポア株式会社製を含むサンプル瓶をコントロールとした。室温に冷却したそれぞれのサンプル瓶にMilli-Q水5mLを加え、ボルテックスにて攪拌後、スパーテルでセルロースを破砕した。Milli-Q水5mLで共洗いしながらセルロースを遠心用チューブに移し、遠心分離した8000rpm、25°C、20分間。上清を捨て、Milli-Q水5mLを加え、ボルテックスにて攪拌して、沈殿物を洗浄した後、遠心分離8000rpm、25°C、20分間を行った。この操作を3回繰り返し、上清を捨て、凍結乾燥させた試料を、カーボンシールを貼ったサンプル台に少量添加し、その上に白金を蒸着させた。試料中のセルロースの構造を走査型電子顕微鏡SEMにより観察した。結果を図5に示す。図5Aから明らかなように、未処理のセルロースは粒径50μmほどの粒子を含み、1000倍の拡大像では、表面が波打っていた。コントロールも未処理のものと同様であった。イミダゾリウム系イオン液体で処理したセルロースでは、凝集した像しか観察できなかった。ピリジニウム系イオン液体で処理したセルロースには、未処理のものと比較して平滑な表面または繊維状の表面を有するものが観察された。これは、ピリジニウム系イオン液体によるセルロースの結晶構造の緩和を示しているものと考えられる。図5Bから明らかなように、120°C処理では、ピリジニウム系イオン液体で処理したセルロースでは、明らかに未処理のセルロースと異なる像が得られた。ピリジニウム系イオン液体で処理したセルロースは、細かなセルロース片が集まったような微細構造を形成していた。これは、ピリジニウム系イオン液体により切断され、短くなったセルロース鎖が集まっているものと推察され、直接観察からもピリジニウム系イオン液体によるセルロース鎖の切断が示唆された。一方、イミダゾリウム系イオン液体で処理したセルロースでは、80°Cの場合と同様に、平滑な表面が観察され、細かなセルロース片の集まりは見られなかった。イオン液体のカチオン種の違いにより、セルロース鎖に及ぼす影響が異なることがSEM観察からも明らかとなった。また、処理温度によっても影響は異なり、ピリジニウム系イオン液体では高温であるほどセルロース鎖の切断が促進されるものと考えられる。参考例6:イオン液体で処理したセルロース含有材料の構造分析3:還元末端の定量サンプル瓶内のイオン液体[Hpy][Cl]、[Hmpy][Cl]、[Hmim][Cl]、または[Emim][DEP]200mgに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社10mgを添加し、それぞれ120°Cにて30分間加熱攪拌した。イオン液体を含まないサンプル瓶をコントロールとした。室温に冷却したそれぞれのサンプル瓶にMilli-Q水0.8mLを加え、ボルテックスにて撹拌した。ジニトロサリチル酸DNS試薬3,5-ジニトロサリチル酸、酒石酸カリウムナトリウム塩、フェノール、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム3mLを添加し、100°Cにて5分間反応させた。これをMilli-Q水にて10倍に希釈後、540nmの吸収を測定することにより還元末端を定量した。結果を図6に示す。図6から明らかなように、ピリジニウム系イオン液体では、未処理の2倍以上の還元末端量であった。これは、ピリジニウム系イオン液体によるセルロース鎖の切断をより定量的に示している。また、[Hpy][Cl]よりも[Hmpy][Cl]の方が還元末端量が多い結果となったが、この温度による処理では[Hpy][Cl]による過分解が生じている可能性がある。[Hpy][Cl]および[Hmpy][Cl]で処理したセルロースは、未処理のセルロースやイミダゾリウム系イオン液体で処理したセルロースと比比較して、還元末端量を増加させる効果が確認され、ある程度の長さにセルロース鎖を切断していることが示唆された。実施例1:セルロース含有材料のイオン液体およびセルラーゼによる処理1サンプル瓶内のイオン液体[Bmpy][Cl]、[Hpy][Cl]、[Bmim][Cl]、または[Emim][DEP]1gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社50mgを添加し、それぞれ120°Cにて10分間、30分間または1時間加熱攪拌した。イオン液体を含まないサンプル瓶をコントロールとした。40°Cに冷却したそれぞれのサンプル瓶に40°Cの100mMクエン酸緩衝液3500μLを加え、ボルテックスにて攪拌後、混合セルラーゼNovoCelluclastSIGMA社25μLおよびNovo188SIGMA社5μLを含有する水溶液100mMクエン酸緩衝液500μLを加え、40°Cにて加熱攪拌した。1時間後および24時間後にそれぞれのサンプル瓶から分析用試料を採取した。参考例1と同様にして、試料中の還元糖の生成を調べた。結果を図7に示す。図7から明らかなように、イオン液体による処理時間を長くすると、より短時間でセルラーゼによるセルロースの糖化が進んだ。特に、ピリジニウム系イオン液体による処理では、セルラーゼによる処理時間が1時間でも、糖化率が大きく上昇した。実施例2:セルロース含有材料のイオン液体およびセルラーゼによる処理2サンプル瓶内のイオン液体[Hpy][Cl]、[Hmpy][Cl]、または[Hmim][Cl]1gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社50mgを添加し、それぞれ80°Cまたは120°Cにて30分間加熱攪拌した。80°C処理では、イオン液体に代えてMilli-Q水を含むサンプル瓶をコントロールとし、120°C処理では、イオン液体を含まないサンプル瓶をコントロールとした。40°Cに冷却したそれぞれのサンプル瓶に40°Cの100mMクエン酸緩衝液3500μLを加え、ボルテックスにて攪拌後、混合セルラーゼNovoCelluclastSIGMA社25μLおよびNovo188SIGMA社5μLを含有する水溶液100mMクエン酸緩衝液500μLを加え、40°Cにて加熱攪拌した。0時間後、1時間後、3時間および24時間後にそれぞれのサンプル瓶から分析用試料を採取した。参考例1と同様にして、試料中の還元糖の生成を調べた。結果を図8に示す。図8から明らかなように、[Hpy][Cl]および[Hmpy][Cl]による処理では、処理時間が1時間でも、糖化率が大きく上昇した。これらの結果は、より低温での処理が可能なピリジニウム系イオン液体の有用性を示す。実施例3:セルロース含有材料のイオン液体およびセルラーゼによる処理3サンプル瓶内のイオン液体[Bmpy][Cl]1gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社50mgを添加し、それぞれ120°Cにて10分間、30分間または1時間加熱攪拌した。40°Cに冷却したそれぞれのサンプル瓶に40°Cの100mMクエン酸緩衝液3500μLを加え、ボルテックスにて攪拌後、混合セルラーゼNovoCelluclastSIGMA社25μLおよびNovo188SIGMA社5μLを含有する水溶液100mMクエン酸緩衝液500μLを加え、40°Cにて加熱攪拌した。0時間後、1時間後、3時間後および24時間後にそれぞれのサンプル瓶から分析用試料を採取した。参考例1と同様にして、試料中の還元糖の生成を調べた。結果を図9に示す。図9から明らかなように、[Bmpy][Cl]による処理では、処理時間を長くすると、より短時間でセルラーゼによるセルロースの糖化が進んだ。また、処理時間を長くすると、最終糖化率が低下することから、最適な処理時間が存在することが示された。実施例4:イオン液体およびセルラーゼで処理したセルロース含有材料からのエタノール発酵1試験管内のイオン液体[Bmpy][Cl]0.74gに結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社100mgを添加し、試験管をChemiStation東京理化器械株式会社にセットした。十字型テフロン登録商標攪拌子を用いて120°Cにて30分間攪拌した。室温に冷却した試験管に200mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.05mLを加え、1時間静置した。次いで、試験管に野生型酵母またはセルラーゼ表層提示酵母δW株の培養液OD600nm=805mL、4×YP培地5mLおよび脱イオン水4.26mLを添加して、全量を20mLとしたセルラーゼ無添加。一部の試験管では、さらに混合セルラーゼCellicCTec2Novozymes社20μLおよびCellicHTec2Novozymes社5μLを添加して、全量を20mLとしたセルラーゼ添加。注射針を通したシリコン栓で試験管に封をし、30°Cにて200rpmで攪拌しながら培養を開始した。培養液から24時間毎に分析用試料を採取し、試料をガスクロマトグラフィーにて分析してエタノール濃度を定量した。結果を図10に示す。図10のAvicel-ありなどのありは、セルラーゼ添加を示し、Avicel-なしなどのなしは、セルラーゼ無添加を示す。ガスクロマトグラフィー分析条件は次のとおりである。<ガスクロマトグラフィー分析条件>システム:GC2010株式会社島津製作所製カラム:DB-FFAPAgilenttechnologies社製;内径0.25mm、長さ60m、膜厚0.5μmカラム温度:40→170°C10°C分キャリアガス:ヘリウム検出器:FID酵母の培養液は、以下のように調製した。最小培地SD選択プレート上のコロニーをSD選択液体培地30mLへ植菌し、30°C、150rpmで24時間培養した。この培養液を、SD培地に終濃度で20g/Lとなるようにカザミノ酸を添加した培地SDC選択培地400mLにOD=0.05となるように加え、30°C、150rpmで96時間培養した。遠心分離により菌体を回収し、脱イオン水で2回洗浄した。なお、セルラーゼ表層提示酵母は、セロビオヒドラーゼ、エンドグルカナーゼ、βグルコシダーゼが細胞表層に提示されるように形質転換された遺伝子組換え酵母であるApplEnvironMicrobiol7012071212SynergisticSaccharificationandDirectFermentationtoEthanolofAmorphousCellulosebyUseofanEngineeredYeastStrainCodisplayingThreeTypesofCellulolyticEnzymeYasuyaFujitaJunjiItoMitsuyoshiUedaHidekiFukudaandAkihikoKondo。図10から明らかなように、イオン液体として[Bmpy][Cl]を用い、セルロース含有材料としてAvicelを用いると、セルラーゼを添加してエタノール発酵した場合、発酵開始6時間以内に理論収率2.5g/Lの802g/Lを超えるエタノールが得られた。セルラーゼを添加しない場合も、セルラーゼ表層提示酵母を用いると、発酵開始6時間以内に理論収率の601.5g/Lを超えるエタノールが得られた。実施例5~7:イオン液体およびセルラーゼで処理したセルロース含有材料からのエタノール発酵2~4セルロース含有材料として結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社に代えてバガス粉末粒径4mm程度に粉砕処理したもの:実施例5、ユーカリ実施例6またはスギ実施例7を用いたこと以外は、実施例4と同様に実験を行った。結果を図10に示す。図10から明らかなように、イオン液体として[Bmpy][Cl]を用い、セルロース含有材料として実バイオマスのバガス、ユーカリおよびスギを用いると、セルラーゼを添加してエタノール発酵した場合、いずれも発酵開始6時間以内に理論収率2.5g/Lの401g/Lを超えるエタノールが得られた。実施例8:イオン液体およびセルラーゼで処理したセルロース含有材料からのエタノール発酵5イオン液体として[Bmpy][Cl]0.74gに代えて[Hpy][Cl]0.80gを用いたこと、および120°Cのほかに80°Cまたは100°Cにて30分間攪拌したこと以外は、実施例4と同様に実験を行った。結果を図11に示す。図11の、例えば、80の80はイオン液体処理を80°Cで行ったことを示し、はセルラーゼ添加を示す。例えば、80-の80はイオン液体処理を80°Cで行ったことを示し、-はセルラーゼ無添加を示す。図11から明らかなように、イオン液体として[Hpy][Cl]を用い、セルロース含有材料としてAvicelを用いると、セルラーゼを添加してエタノール発酵した場合、発酵開始6時間以内に理論収率2.5g/Lの601.5g/Lを超えるエタノールが得られた。実施例9:イオン液体およびセルラーゼで処理したセルロース含有材料からのエタノール発酵6セルロース含有材料として結晶性セルロースAvicelPH-101,Fluka社に代えてバガス粉末粒径4mm程度に粉砕処理したものを用いたこと以外は、実施例8と同様に実験を行った。結果を図12に示す。図12から明らかなように、イオン液体として[Hpy][Cl]を用い、セルロース含有材料としてバガスを用いると、セルラーゼを添加してエタノール発酵した場合、発酵開始6時間以内に理論収率2.5g/Lの240.6g/Lを超えるエタノールが得られた。"