"単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、配列番号1のアミノ酸26~33CDR1、配列番号1のアミノ酸51~58CDR2、配列番号1のアミノ酸97~103CDR3またはその2つもしくは3つの組み合わせを含み、該抗体は、ヒトエンドプラスミンに特異的に結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。前記抗体が、配列番号2のアミノ酸27~32CDR1、配列番号2のアミノ酸50~52CDR2、配列番号2のアミノ酸89~97CDR3またはその2つもしくは3つの組み合わせを含む、請求項1に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記抗体の重鎖可変ドメインが、配列番号1のアミノ酸26~33CDR1、配列番号1のアミノ酸51~58CDR2、配列番号1のアミノ酸97~103CDR3を含み、該抗体の軽鎖の可変ドメインが、配列番号2のアミノ酸27~32CDR1、配列番号2のアミノ酸50~52CDR2および配列番号2のアミノ酸89~97CDR3を含む、請求項1~2のいずれか1項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記抗体の重鎖が、配列番号1を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記抗体の軽鎖が、配列番号2を含む、請求項1~4のいずれか1項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記抗体の重鎖が、配列番号1を含み、該抗体の軽鎖が、配列番号2を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記抗原結合フラグメントが、Fabフラグメント、Fab’フラグメント、Fab’2フラグメント、単鎖Fvタンパク質scFvまたはジスルフィド安定化Fvタンパク質dsFvである、請求項1~6のいずれかに記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記抗体がscFvである、請求項7に記載のヒトモノクローナル抗体の単離された抗原結合フラグメント。前記抗体がIgGである、請求項1~8のいずれか1項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記抗体が標識されている、請求項1~9のいずれか1項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。前記標識が、蛍光標識、酵素標識または放射性標識である、請求項10に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメント。請求項1~11のいずれか1項に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメントおよび薬学的に許容され得るキャリアを含む、組成物。エフェクター分子に連結された請求項1~9のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントを含む、単離された免疫結合体。前記エフェクター分子が、シュードモナスPseudomonas外毒素PEまたはそのバリアントもしくはフラグメントである、請求項13に記載の単離された免疫結合体。請求項14に記載の単離された免疫結合体および薬学的に許容され得るキャリアを含む、組成物。エンドプラスミンを発現するがんを有すると診断された被験体を処置する方法であって、治療有効量の請求項12または請求項15に記載の組成物を該被験体に投与し、それによって、該被験体内のエンドプラスミンを発現するがんを処置する工程を包含する、方法。前記がんが、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、卵巣がん、膀胱がんまたは膵臓腺癌である、請求項16に記載の方法。前記被験体を処置する工程が、転移の数またはサイズを減少させる工程を包含する、請求項17に記載の方法。被験体においてがんを検出するかまたはがんの診断を確認する方法であって:請求項1~11のいずれか1項に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントと該被験体由来のサンプルとを接触させる工程;および該サンプルへの該単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントの結合を検出する工程を包含し、ここで、コントロールサンプルへの該単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合の結合と比べた、該サンプルへの該単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントの結合の増加は、該被験体においてがんを検出するか、または該被験体におけるがんの診断を確認する、方法。前記単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントが、直接標識されている、請求項19に記載の方法。前記単離されたヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントに特異的に結合する二次抗体と前記サンプルとを接触させる工程、および該二次抗体の結合を検出する工程をさらに包含し、コントロールサンプルへの該二次抗体の結合と比べた、該サンプルへの該二次抗体の結合の増加は、該被験体におけるがんを検出するか、または該被験体におけるがんの診断を確認する、請求項19または20に記載の方法。前記がんが、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんである、請求項19~21のいずれかに記載の方法。前記コントロールサンプルが、がんを有しない被験体由来のサンプルである、請求項19~22のいずれかに記載の方法。前記サンプルが、血液、尿、バイオプシー、血清、痰、血漿または脳脊髄液サンプルである、請求項19~23のいずれかに記載の方法。前記がんが転移性である、請求項19~24のいずれか1項に記載の方法。請求項1~11のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントをコードする、単離された核酸分子または組換え核酸分子。前記ヒトモノクローナル抗体のVHドメインが、配列番号3のヌクレオチド配列またはその縮重バリアントを含む、請求項26に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子。前記ヒトモノクローナル抗体のVLドメインが、配列番号4のヌクレオチド配列またはその縮重バリアントを含む、請求項26または請求項27に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子。異種プロモーターに作動可能に連結された、請求項26~28のいずれか1項に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子。請求項26~29のいずれか1項に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子を含む、発現ベクター。請求項25~28のいずれか1項に記載の核酸分子または請求項30に記載の発現ベクターで形質転換された、単離された宿主細胞。治療有効量の化学療法因子を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、請求項16に記載の方法。前記化学療法因子が、5-フルオロウラシル、シクロパミン、放射線照射またはそれらの組み合わせである、請求項32に記載の方法。前記エフェクター分子が、サイトカイン、ケモカイン、化学療法因子または放射性ヌクレオチドである、請求項13に記載の免疫結合体。前記エフェクター分子が、サイトカインまたはケモカインである、請求項34に記載の免疫結合体。要旨エンドプラスミンGrp94に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体およびこれらの抗体の抗原結合フラグメントが、本明細書中に開示される。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、完全ヒト抗体である。これらの抗体は、ヒトエンドプラスミンendoplaminに対して高親和性を有し、がんを処置するためおよび/または診断するために使用され得る。1つの例において、そのモノクローナル抗体は、scFvである。いくつかの実施形態において、開示される抗体は、エンドプラスミンを発現する腫瘍例えば、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんを検出するために有用である。他の実施形態において、開示される抗体は、腫瘍例えば、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんを処置するために有用である。これらの抗体をコードする組換え核酸、これらの核酸を含む発現ベクター、およびこれらの発現ベクターで形質転換された宿主細胞もまた、本明細書中に開示される。前述のおよび他の特徴および利点は、添付の図を参照して進むいくつかの実施形態の以下の詳細な説明からより明らかになるだろう。配列表添付の配列表に列挙される核酸配列およびアミノ酸配列は、37C.F.R.1.822に規定されているように、ヌクレオチド塩基に対する標準的な文字の省略形、およびアミノ酸に対する3文字コードを用いて示される。各核酸配列の片方の鎖だけが示されるが、相補鎖は、表示される鎖に対する任意の参照によって含められると理解される。配列表は、ASCIIテキストファイル[Sequence_Listing.txt、2011年6月15日、19.4KB]として提出されており、それは、本明細書中に参考として援用される。配列番号1は、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体の重鎖のアミノ酸配列である。配列番号2は、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体の軽鎖のアミノ酸配列である。配列番号3は、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体の重鎖をコードする核酸配列である。配列番号4は、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体の軽鎖の核酸配列である。配列番号5は、ヒトエンドプラスミンのアミノ酸配列である。配列番号6は、ヒトエンドプラスミンをコードする核酸配列である。配列番号7および8は、エンドプラスミンポリペプチドのアミノ酸配列である。詳細な説明I.省略形5-FU:フルオロウラシルADCC:抗体依存性細胞媒介性細胞傷害Ag:抗原ALDHbright:アルデヒドデヒドロゲナーゼbrightアネキシンV:アネキシンA5β-カテニン:カドヘリン結合タンパク質B-Raf:セリン/トレオニン-タンパク質キナーゼB-RafCDC:補体依存性細胞傷害CDR:相補性決定領域C-Raf:RAF癌原遺伝子セリン/トレオニン-タンパク質キナーゼDEAB:4-ジエチルアミノベンズアルデヒドDMEM:ダルベッコ改変イーグル培地ER:小胞体ERK1/2:細胞外シグナル制御キナーゼ1/2FAK:接着斑キナーゼFBS:ウシ胎児血清FR:フレームワーク領域GLI1:神経膠腫関連癌遺伝子ホモログ1Grp:グルコース調節タンパク質Gy:グレイHRP:西洋ワサビペルオキシダーゼIg:免疫グロブリンmAb:モノクローナル抗体MEK:マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼMet:c-MetO.D.:光学濃度PBS:リン酸緩衝食塩水p-ERK1/2:リン酸化細胞外シグナル制御キナーゼ1/2p-FAK:リン酸化phosphoryalted接着斑キナーゼPI:ヨウ化プロピジウムRAS:RAt肉腫scFv:VHとVLの両方の単鎖可変領域SHH:ソニックヘッジホッグホモログVH:可変重鎖領域VL:可変軽鎖領域。II.用語別段述べられない限り、専門用語は、慣例的用法に従って使用される。分子生物学における一般的な用語の定義は、BenjaminLewin,GenesV,OxfordUniversityPressによる出版,1994ISBN0-19-854287-9;Kendrewらeds.,TheEncyclopediaofMolecularBiology,BlackwellScienceLtd.による出版,1994ISBN0-632-02182-9;およびRobertA.Meyersed.,MolecularBiologyandBiotechnology:aComprehensiveDeskReference,VCHPublishers,Inc.による出版,1995ISBN1-56081-569-8に見られ得る。本開示の様々な実施形態の検討を容易にするために、特定の用語の説明が以下に提供される:抗体:抗原例えば、エンドプラスミンまたはそのフラグメントのエピトープを特異的に認識し、それに特異的に結合する、少なくとも軽鎖免疫グロブリン可変領域または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドリガンド。抗体は、重鎖および軽鎖から構成され、その各々が、可変重鎖VH領域および可変軽鎖VL領域と呼ばれる可変領域を有する。まとめると、VH領域およびVL領域は、抗体によって認識される抗原への結合に関与する。抗体には、インタクトな免疫グロブリンおよびバリアントが含まれる。エンドプラスミンなどの抗原に特異的に結合する抗体の機能的フラグメント抗原結合フラグメント例えば、標的抗原に特異的に結合する、Fabフラグメント、Fab’フラグメント、Fab’2フラグメント、単鎖Fvタンパク質scFvおよびジスルフィド安定化Fvタンパク質dsFvは、当該分野で周知である。scFvタンパク質は、免疫グロブリンの軽鎖可変領域および免疫グロブリンの重鎖可変領域がリンカーによって結合された融合タンパク質であり、それらの鎖は、dsFvでは、それらの鎖の会合を安定化するジスルフィド結合を導入するように変異されている。この用語は、遺伝的に操作された形態例えば、キメラ抗体例えば、ヒト化マウス抗体、ヘテロ結合体抗体例えば、二重特異性抗体も包含する。PierceCatalogandHandbook,1994-1995PierceChemicalCo.,Rockford,IL;Kuby,J.,Immunology,3rdEd.,W.H.FreemanCo.,NewYork,1997もまた参照のこと。機能的フラグメントは、ヒトエンドプラスミンなどの標的抗原に特異的に結合するので、抗原結合フラグメントとも呼ばれる。通常、天然に存在する免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によって相互接続された重H鎖および軽L鎖を有する。軽鎖には2つのタイプ、ラムダλおよびカッパーκが存在する。抗体分子の機能活性を決定する5つの主要な重鎖クラスまたはアイソタイプ:IgM、IgD、IgG、IgAおよびIgEが存在する。重鎖および軽鎖の各々が、定常領域および可変領域を含むそれらの領域は、ドメインとしても知られる。重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、一体となって抗原に特異的に結合する。軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、相補性決定領域またはCDRとも呼ばれる3つの超可変領域によって中断されたフレームワーク領域を含む。フレームワーク領域およびCDRの範囲は、定義されているKabatら、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,1991本明細書によって参考として援用されるを参照のこと。現在、Kabatデータベースが、オンラインで維持されており、CDR配列が決定され得る例えば、インターネット上で利用可能なIMGT/V-QUESTプログラムバージョン:3.2.18.,2011年3月29日、およびBrochet,X.ら、Nucl.AcidsRes.36,W503-508,2008を参照のこと。種々の軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、ヒトなどの種内で比較的保存されている。構成要素である軽鎖および重鎖の組み合わされたフレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、3次元空間にCDRを配置し、整列させるように働く。CDRは、主に、抗原のエピトープへの結合に関与する。各鎖のCDRは、通常、N末端から順番にナンバリングされたCDR1、CDR2およびCDR3と称され、また、代表的には、特定のCDRが位置する鎖によって特定される。したがって、VHCDR3は、それが見られる抗体の重鎖の可変ドメインに位置するのに対し、VLCDR1は、それが見られる抗体の軽鎖の可変ドメインのCDR1である。エンドプラスミンに結合する抗体は、一般に、特異的なVH領域配列およびVL領域配列、ひいては、特異的なCDR配列を有し得る。異なる特異性すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位を有する抗体は、異なるCDRを有する。CDRは、抗体ごとに異なるが、CDR内の限られた数のアミノ酸位置だけが、抗原結合に直接関わる。これらのCDR内の位置は、特異性決定残基SDRと呼ばれる。VHまたはVHに対する言及は、Fv、scFv、dsFvまたはFabの可変領域を含む、免疫グロブリン重鎖の可変領域のことを指す。VLまたはVLに対する言及は、Fv、scFv、dsFvまたはFabの可変領域を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域のことを指す。モノクローナル抗体は、Bリンパ球の単一クローンまたは単一抗体の軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞によって産生される抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、ミエローマ細胞と免疫脾臓細胞との融合によってハイブリッド抗体を形成する細胞を作製することによって、作製される。モノクローナル抗体には、ヒト化モノクローナル抗体が含まれる。キメラ抗体は、ヒトなどの1つの種由来のフレームワーク残基、およびエンドプラスミンに特異的に結合するマウス抗体などの別の種由来のCDR一般に抗原結合性を付与するを有する。ヒト抗体完全ヒト抗体とも呼ばれるは、ヒトフレームワーク領域、およびヒト免疫グロブリン由来のすべてのCDRを含む抗体である。1つの例において、フレームワークおよびCDRは、同じ起源のヒト重鎖および/または軽鎖アミノ酸配列に由来する。しかしながら、1つのヒト抗体のフレームワークは、異なるヒト抗体のCDRを含むように操作され得る。ヒト化免疫グロブリンは、ヒトフレームワーク領域、および非ヒト例えば、マウス、ラットまたは合成免疫グロブリンの1つ以上のCDRを含む免疫グロブリンである。CDRを提供する非ヒト免疫グロブリンは、ドナーと呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、アクセプターと呼ばれる。1つの実施形態において、そのすべてのCDRが、ヒト化免疫グロブリンにおいてドナー免疫グロブリン由来である。定常領域は、存在する必要はないが、存在する場合は、ヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約85~90例えば、約95またはそれ以上同一でなければならない。ゆえに、ヒト化免疫グロブリンのすべての部分おそらくCDRを除くが、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。ヒト化抗体は、CDRを提供するドナー抗体と同じ抗原に結合する。ヒト化免疫グロブリンまたはヒト化抗体のアクセプターフレームワークは、ドナーフレームワークから得られたアミノ酸による限られた数の置換を有し得る。ヒト化モノクローナル抗体または他のモノクローナル抗体は、抗原結合性または他の免疫グロブリンの機能に対して実質的に影響しない追加の保存的アミノ酸置換を有し得る。ヒト化免疫グロブリンは、遺伝子操作を用いて構築され得る例えば、米国特許第5,585,089号を参照のこと。抗原:抗体の産生または動物におけるT細胞応答を刺激し得る化合物、組成物または物質動物に注射されるかまたは吸収される組成物を含む。抗原は、特異的な体液性免疫または細胞性免疫の生成物異種の免疫原によって誘導されるものを含むと反応する。例示的な抗原は、エンドプラスミンである。用語抗原は、関係する抗原性エピトープのすべてを含む。エピトープまたは抗原決定基とは、B細胞および/またはT細胞が反応する抗原上の部位のことを指す。エピトープは、連続するアミノ酸、またはタンパク質の三次フォールディングによって並置される連続しないアミノ酸の両方から形成され得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは、通常、変性溶媒に曝露された際にも保持されるのに対し、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、通常、変性溶媒で処理されると失われる。エピトープは、通常、独特の空間的コンフォメーションにおいて少なくとも3個、より一般的には、少なくとも5個または8~10個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的コンフォメーションを決定する方法としては、例えば、X線結晶構造解析および2次元核磁気共鳴が挙げられる。抗原は、組織特異的抗原または疾患特異的抗原であり得る。組織特異的抗原は、疾患特異的抗原でもあり得るので、これらの用語は、排他的ではない。組織特異的抗原は、単一の組織などの限られた数の組織において発現される。組織特異的抗原の特定の非限定的な例は、メラノーマ特異的抗原、または神経膠腫、乳房、肺、前立腺、腎臓もしくは膀胱に特異的な抗原である。疾患特異的抗原は、疾患プロセス例えば、メラノーマまたは別のタイプのがんと一致して発現される。疾患特異的抗原の特定の非限定的な例は、その発現が腫瘍の形成例えば、メラノーマおよび/もしくは神経膠腫ならびに/または別のタイプのがんと相関するかまたはそれを予測する抗原例えば、エンドプラスミンである。疾患特異的抗原は、T細胞またはB細胞によって認識される抗原であり得る。増幅:核酸分子例えば、DNAまたはRNA分子の増幅とは、試料中の核酸分子のコピー数を増加させる手法の使用のことを指す。増幅の例は、被験体から回収された生物学的サンプル中の核酸鋳型へのプライマーのハイブリダイゼーションを可能にする条件下でオリゴヌクレオチドプライマー対とそのサンプルとを接触させる、ポリメラーゼ連鎖反応である。それらのプライマーは、好適な条件下で伸長され、鋳型から解離され、次いで、再アニールされ、伸長され、解離されることにより、その核酸のコピー数を増幅する。増幅産物は、標準的な手法を用いる、電気泳動、制限エンドヌクレアーゼ切断パターン、オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションもしくはライゲーションおよび/または核酸配列決定によって特徴づけられ得る。増幅の他の例としては、米国特許第5,744,311号に開示されているような鎖置換増幅;米国特許第6,033,881号に開示されているような転写を含まない等温増幅;WO90/01069に開示されているような修復連鎖反応増幅;EP-A-320308に開示されているようなリガーゼ連鎖反応増幅;米国特許第5,427,930号に開示されているようなギャップ充填リガーゼ連鎖反応増幅;および米国特許第6,025,134号に開示されているようなNASBATMRNA転写を含まない増幅が挙げられる。動物:生存している多細胞脊椎動物であり、例えば、哺乳動物および鳥類を含むカテゴリー。哺乳動物という用語は、ヒトと、非ヒト霊長類を含む非ヒト哺乳動物の両方を含む。同様に、用語被験体は、ヒト被験体と動物被験体の両方を含む。結合親和性:抗原に対する抗体の親和性。1つの実施形態において、親和性は、Frankelら、Mol.Immunol.,16:101-106,1979に記載されたScatchard法の変法によって計算される。別の実施形態において、結合親和性は、抗原/抗体の解離速度によって測定される。別の実施形態において、高結合親和性は、競合ラジオイムノアッセイによって測定される。別の実施形態において、結合親和性は、ELISAによって測定される。抗体は、高親和性でエンドプラスミンなどの抗原に特異的に結合し、他の無関係の抗原に有意に結合しない。乳がん:良性または悪性であり得る、乳房組織の新生物の状態。乳がんの最も一般的なタイプは、乳管癌腫である。非浸潤性乳管癌は、乳管の非侵襲性の新生物の状態である。小葉癌腫は、侵襲性の疾患ではないが、癌腫が発症し得る指標である。乳房の浸潤性悪性癌腫は、ステージI、IIA、IIB、IIIA、IIIBおよびIVに分けることができる。化学療法因子:異常な細胞成長を特徴とする疾患の処置における治療上の有用性を備えた任意の化学因子。そのような疾患としては、腫瘍、新生物およびがん、ならびに乾癬などの肥厚成長を特徴とする疾患が挙げられる。いくつかの実施形態において、化学療法因子は、乳房、メラノーマおよび/または神経膠腫の処置において有用な薬剤である。1つの実施形態において、化学療法因子は、放射性化合物である。当業者は、有用な化学療法因子を容易に識別することができる例えば、Harrison’sPrinciplesofInternalMedicine,14theditionにおけるSlapakandKufe,PrinciplesofCancerTherapy,Chapter86;Abeloff,ClinicalOncology2nded.,著作権2000ChurchillLivingstone,IncにおけるPerryら、Chemotherapy,Ch.17;BaltzerL,BerkeryReds:OncologyPocketGuidetoChemotherapy,2nded.St.Louis,Mosby-YearBook,1995;FischerDS,KnobfMF,DurivageHJeds:TheCancerChemotherapyHandbook,4thed.St.Louis,Mosby-YearBook,1993を参照のこと。併用化学療法は、がんを処置するための2つ以上の薬剤の被験体への投与例えば、放射性化合物または化学的化合物と併用されるエンドプラスミンに特異的に結合する抗体の投与である。キメラ抗体:2つの異なる抗体代表的には、異なる種であるに由来する配列を含む抗体。最も代表的には、キメラ抗体は、ヒト抗体ドメインおよびマウス抗体ドメイン、一般に、ヒト定常領域、ならびにマウス可変領域、マウスCDRおよび/またはマウスSDRを含む。cDNA相補DNA:内部の非コードセグメントイントロンおよび転写を決定する制御配列を欠くDNAの小片。cDNAは、細胞から抽出されたメッセンジャーRNAからの逆転写によって研究室において合成される。化学療法因子:異常な細胞成長を特徴とする疾患の処置における治療上の有用性を備えた因子例えば、抗腫瘍薬。そのような疾患としては、腫瘍、新生物およびがん、ならびに乾癬などの肥厚成長を特徴とする疾患が挙げられる。1つの実施形態において、化学療法因子は、固形腫瘍などの新生物の処置において有用な薬剤である。化学療法因子は、タンパク質または非タンパク質の薬剤例えば、小分子薬、抗体、ペプチド、タンパク質および免疫調節物質であり得る。1つの実施形態において、化学療法因子は、放射性分子である。当業者は、化学療法因子を容易に識別することができる例えば、Harrison’sPrinciplesofInternalMedicine,14theditionにおけるSlapakandKufe,PrinciplesofCancerTherapy,Chapter86;Abeloff,ClinicalOncology2nded.,著作権2000ChurchillLivingstone,IncにおけるPerryら、Chemotherapy,Ch.17;BaltzerL,BerkeryReds:OncologyPocketGuidetoChemotherapy,2nded.St.Louis,Mosby-YearBook,1995;FischerDS,KnobfMF,DurivageHJeds:TheCancerChemotherapyHandbook,4thed.St.Louis,Mosby-YearBook,1993を参照のこと。保存的バリアント:保存的アミノ酸置換は、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体の親和性に実質的に影響しないかまたはその親和性を低下させない置換である。例えば、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体は、多くとも約1個、多くとも約2個、多くとも約5個、多くともmost約10個、または多くとも約15個の保存的置換を含み得、元のエンドプラスミンポリペプチドに特異的に結合し得る。保存的変更conservativevariationという用語は、抗体がエンドプラスミンに特異的に結合するのであれば、置換されていない親アミノ酸の代わりに、置換されたアミノ酸を使用することも含む。非保存的置換は、活性またはエンドプラスミンへの結合性を低下させる置換である。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的アミノ酸置換表は、当業者に周知である。以下の6つの群が、互いに保存的置換であると考えられるアミノ酸の例である:1アラニンA、セリンS、トレオニンT;2アスパラギン酸D、グルタミン酸E;3アスパラギンN、グルタミンQ;4アルギニンR、リジンK;5イソロイシンI、ロイシンL、メチオニンM、バリンV;および6フェニルアラニンF、チロシンY、トリプトファンW相補性決定領域CDR:天然のIg結合部位の天然のFv領域の結合親和性および特異性を一体となって規定するアミノ酸配列。Igの軽鎖および重鎖の各々は、それぞれL-CDR1、L-CDR2、L-CDR3およびH-CDR1、H-CDR2、H-CDR3と命名された3つのCDRを有する。接触:直接的な物理的会合の配置;固体の形態と液体の形態での両方を含む。細胞傷害性:生物の残りの部分の細胞とは対照的に、標的化されるように意図された細胞に対する、免疫毒素などの分子の毒性。1つの実施形態において、対照的に、用語毒性は、免疫毒素の標的化部分によって標的化されるように意図された細胞である細胞以外の細胞に対する免疫毒素の毒性のことを指し、用語動物毒性は、免疫毒素によって標的化されるように意図された細胞以外の細胞に対する免疫毒素の毒性による動物に対する免疫毒素の毒性のことを指す。縮重バリアント:遺伝暗号の結果として縮重した配列を含む、エンドプラスミンポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。天然のアミノ酸は20種存在し、そのほとんどが、2つ以上のコドンによって指定される。それゆえ、縮重ヌクレオチド配列によってコードされるエンドプラスミンポリペプチドのアミノ酸配列が変更されない限り、そのヌクレオチド配列のすべてが、本開示に含まれる。診断:病理学的状態例えば、メラノーマ、卵巣がん、乳がんまたは神経膠腫であるがこれらに限定されないの存在または性質を特定すること。診断方法は、その感度および特異性が異なる。診断アッセイの感度は、検査で陽性と出る罹患個体のパーセンテージ真陽性のパーセントである。診断アッセイの特異性は、1-偽陽性率であり、ここで、偽陽性率は、検査で陽性と出る疾患を有しない個体の割合と定義される。特定の診断方法は、ある状態の確定診断を提供しない可能性があるが、その方法が、診断に役立つ陽性の指標を提供する場合、その方法で十分である。予後は、がんまたは転移などの病理学的状態の発生の確率例えば、重症度である。エフェクター分子:キメラ分子が標的としている細胞に対して所望の効果を有するように意図されたキメラ分子の一部。エフェクター分子は、エフェクター部分EM、治療薬もしくは診断薬、または類似の用語としても知られる。治療薬には、核酸、タンパク質、ペプチド、アミノ酸または誘導体、糖タンパク質、放射性同位体、脂質、炭水化物または組換えウイルスのような化合物が含まれる。核酸の治療用部分および診断用部分は、アンチセンス核酸、一本鎖または二重鎖DNAとの共有結合性架橋のための誘導体化オリゴヌクレオチド、および三重鎖形成オリゴヌクレオチドを含む。あるいは、抗エンドプラスミン抗体などの標的化部分に連結された分子は、被包系例えば、治療用組成物例えば、薬物、核酸例えば、アンチセンス核酸または循環器系への直接的な露出から保護され得る別の治療部分を含むリポソームまたはミセルであり得る。抗体に付着されたリポソームを調製する手段は、当業者に周知である例えば、米国特許第4,957,735号;およびConnorら、Pharm.Ther.28:341-365,1985を参照のこと。診断用薬剤または診断用部分は、放射性同位体および他の検出可能な標識を含む。そのような目的のために有用な検出可能な標識もまた、当該分野で周知であり、それらとしては、放射性同位元素例えば、35S、11C、13N、15O、18F、19F、99mTc、131I、3H、14C、15N、90Y、99Tc、111Inおよび125I、フルオロフォア、化学発光剤および酵素が挙げられる。エピトープ:抗原決定基。これらは、抗原性である、すなわち、特定の免疫応答を誘発する、分子上の特定の化学基またはペプチド配列である。抗体は、ポリペプチド上の特定の抗原性エピトープに特異的に結合する。エピトープは、連続するアミノ酸、またはタンパク質の三次フォールディングによって並置される連続しないアミノ酸の両方から形成され得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは、通常、変性溶媒に曝露された際にも保持されるのに対し、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、通常、変性溶媒で処理されると失われる。エピトープは、通常、独特の空間的コンフォメーションにおいて少なくとも3個、より一般的には、少なくとも5個または8~10個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的コンフォメーションを決定する方法としては、例えば、X線結晶構造解析および2次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,Vol.66,GlennE.Morris,Ed1996を参照のこと。エピトープは、グリコシル化され得る。したがって、抗体は、グリコシル化された形態またはグリコシル化されていない形態のタンパク質に特異的に結合し得る。エンドプラスミン:熱ショックタンパク質90Hsp90ファミリーの小胞体ER常在メンバーであるグルコース調節タンパク質Grp94Grp94としても知られるタンパク質。インビボでは、hsp90およびエンドプラスミンは、クライアントタンパク質と相互作用し、それらをユビキチン依存性のプロテアソーム分解から保護するように機能する。エンドプラスミンタンパク質は、すべての細胞型において恒常的に発現されるが、その発現は、低グルコースレベル、細胞外の低pH、変異タンパク質の発現およびウイルス感染を含む様々なストレス条件下においてアップレギュレートされる。熱ショックタンパク質は、細胞保護機能を有し、アポトーシスを直接または間接的に調節する。エンドプラスミンの細胞表面発現が、肝細胞癌種、結腸直腸癌腫および肺がん細胞を含む腫瘍細胞において増加すること、ならびにエンドプラスミンが、一部の腫瘍細胞に対して抗アポトーシス作用を有することが示されている。さらに、慢性B型肝炎ウイルスHBV感染が、肝硬変および肝細胞癌種HCCに進行するときに、高レベルのエンドプラスミンが観察された。Hsp90およびエンドプラスミンのインヒビター例えば、ゲルダナマイシンgeldanamycinGAおよびその低毒性誘導体17-AAGが、がんの処置における有効性について研究されている。エンドプラスミンGrp94をコードする例示的な核酸としては:GENBANK登録商標アクセッション番号NM_003299、BC066656ヒト;NM_011631マウス;NM_001045763:XenopusSiluranatropicalis;NM_214103SusscrofaNM_98210Daniorerio;NM_001012197Rattusnorvegicus;NM_001134101:Pongoabelii;NM_001003327Canislupusfamiliaris熱ショックタンパク質90kDaベータGrp94;NM_204289Gallusgallusが挙げられるが、これらに限定されない。発現調節配列:作動可能に連結された異種核酸配列の発現を制御する核酸配列。発現調節配列が、核酸配列の転写、適切な場合においては翻訳を支配し、制御するとき、その発現調節配列は、その核酸配列に作動可能に連結されている。したがって、発現調節配列は、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、タンパク質をコードする遺伝子の前に存在する開始コドンすなわち、ATG、イントロンに対するスプライシングシグナル、mRNAの適正な翻訳を可能にするその遺伝子の正しい読み枠の維持、および終止コドンを含み得る。用語調節配列は、その存在が発現に影響し得、また、その存在が有益である追加の構成要素例えば、リーダー配列および融合パートナー配列を含み得る、構成要素を最低限含むように意図されている。発現調節配列は、プロモーターを含み得る。プロモーターは、転写を指示するのに十分な最小配列である。プロモーター依存的な遺伝子発現を細胞型特異的、組織特異的または外部シグナルもしくは外部の物質による誘導性となるように調節可能にするのに十分なプロモーターエレメントもまた含まれる;そのようなエレメントは、その遺伝子の5’または3’領域に配置され得る。構成的プロモーターと誘導性プロモーターの両方が含まれる例えば、Bitterら、MethodsinEnzymology153:516-544,1987を参照のこと。例えば、細菌系におけるクローニングの際、誘導性プロモーター例えば、バクテリオファージラムダのpL、plac、ptrp、ptacptrp-lacハイブリッドプロモーターなどが使用され得る。1つの実施形態において、哺乳動物細胞系におけるクローニングでは、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター例えば、メタロチオネインプロモーターまたは哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター例えば、レトロウイルス末端反復配列;アデノウイルス後期プロモーター;ワクシニアウイルス7.5Kプロモーターが使用され得る。組換えDNA法または合成法によって作製されたプロモーターもまた、核酸配列の転写を提供するために使用され得る。発現調節配列:作動可能に連結された異種核酸配列の発現を制御する核酸配列。発現調節配列が、核酸配列の転写、適切な場合においては翻訳を支配し、制御するとき、その発現調節配列は、その核酸配列に作動可能に連結されている。したがって、発現調節配列は、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、タンパク質をコードする遺伝子の前に存在する開始コドンすなわち、ATG、イントロンに対するスプライシングシグナル、mRNAの適正な翻訳を可能にするその遺伝子の正しい読み枠の維持、および終止コドンを含み得る。用語調節配列は、その存在が発現に影響し得、また、その存在が有益である追加の構成要素例えば、リーダー配列および融合パートナー配列を含み得る、構成要素を最低限含むように意図されている。発現調節配列は、プロモーターを含み得る。プロモーターは、転写を指示するのに十分な最小配列である。プロモーター依存的な遺伝子発現を細胞型特異的、組織特異的または外部シグナルもしくは外部の物質による誘導性となるように調節可能にするのに十分なプロモーターエレメントもまた含まれる;そのようなエレメントは、その遺伝子の5’または3’領域に配置され得る。構成的プロモーターと誘導性プロモーターの両方が含まれる例えば、Bitterら、MethodsinEnzymology153:516-544,1987を参照のこと。例えば、細菌系におけるクローニングの際、誘導性プロモーター例えば、バクテリオファージラムダのpL、plac、ptrp、ptacptrp-lacハイブリッドプロモーターなどが使用され得る。1つの実施形態において、哺乳動物細胞系におけるクローニングでは、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター例えば、メタロチオネインプロモーターまたは哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター例えば、レトロウイルス末端反復配列;アデノウイルス後期プロモーター;ワクシニアウイルス7.5Kプロモーターが使用され得る。組換えDNA法または合成法によって作製されたプロモーターもまた、核酸配列の転写を提供するために使用され得る。発現:核酸からタンパク質への翻訳。タンパク質は、発現されて、細胞内に残留し得るか、細胞表面膜の構成要素になり得るか、または細胞外マトリックスもしくは細胞外の媒質中に分泌され得る。フレームワーク領域:CDR間に挿入されるアミノ酸配列。フレームワーク領域には、可変軽鎖フレームワーク領域および可変重鎖フレームワーク領域が含まれる。フレームワーク領域は、抗原結合にとって適切な配向でCDRを保持するように働く。神経膠腫:任意の発生状態における神経膠から構成される腫瘍。神経膠腫は、脳および脊髄のすべての内因性の新生物例えば、星状細胞腫、上衣腫および乏突起膠腫を含む。低悪性度神経膠腫は、十分に分化している未分化でない;これらは、良性であり、患者に対してより良好な予後の前兆になる。高悪性度神経膠腫は、分化していないか、または未分化である;これらは、悪性であり、より不良な予後をもたらす。グリコシル化:抗原などのタンパク質への炭水化物の共有結合的付着。グリコシル化には、N結合型グリコシル化、O結合型グリコシル化およびC結合型グリコシル化が含まれる。HAMAヒト抗マウス抗体応答:ヒト被験体に投与されたマウス抗体の可変領域および定常領域に対するその患者における免疫応答。抗体の反復投与によって、患者の血清からその抗体がクリアランスされる速度が増大し得、また、患者においてアレルギー反応が誘発され得る。宿主細胞:ベクターが伝播され得、そのDNAが発現され得る、細胞。その細胞は、原核生物または真核生物の細胞であり得る。この用語は、対象の宿主細胞の任意の子孫も含む。複製中に生じる変異が存在し得るので、すべての子孫が、親細胞と同一でない可能性があることが理解される。しかしながら、用語宿主細胞が使用されるとき、そのような子孫も含まれる。免疫応答:刺激に対する免疫系の細胞例えば、B細胞、T細胞または単球の応答。1つの実施形態において、その応答は、特定の抗原に特異的である抗原特異的応答。1つの実施形態において、免疫応答は、T細胞応答例えば、CD4応答またはCD8応答である。別の実施形態において、その応答は、B細胞応答であり、特定の抗体の産生をもたらす。免疫結合体:目的の抗原例えば、ヒトエンドプラスミンendoplasmに特異的に結合する抗体またはその機能的フラグメントへのエフェクター分子の共有結合。そのエフェクター分子は、検出可能な標識、免疫毒素、サイトカインまたはケモカインであり得る。毒素の特定の非限定的な例としては、アブリン、リシン、シュードモナスPseudomonas外毒素PE、例えば、PE35、PE37、PE38およびPE40、ジフテリア毒素DT、ボツリヌス毒素もしくはそれらの改変された毒素、または直接もしくは間接的に細胞の成長を阻害するかもしくは細胞を殺滅する他の毒性物質が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、PEおよびDTは、代表的には、肝臓毒性によって死をもたらす、高度に毒性の化合物である。しかしながら、PEおよびDTは、その毒素の天然の標的化構成要素例えば、PEのドメインIaおよびDTのB鎖を除去し、それを抗体などの異なる標的化部分で置き換えることによって、免疫毒素として使用するための形態に改変され得る。キメラ分子は、エフェクター分子に結合体化連結された、リガンドまたは抗体などの標的化部分である。用語結合体化されたまたは連結されたとは、2つのポリペプチドを1つの連続したポリペプチド分子にすることを指す。1つの実施形態において、抗体は、エフェクター分子に接続される。別の実施形態において、エフェクター分子に接続された抗体は、体内での半減期を延長するために、タンパク質またはペプチドに対して脂質または他の分子とさらに接続される。その連結は、化学的手段または組換え手段によるものであり得る。1つの実施形態において、その連結は、化学的であり、ここで、抗体部分とエフェクター分子との反応は、それらの2つの分子間に形成される共有結合を作製することにより、1つの分子を形成する。ペプチドリンカー短いペプチド配列が、必要に応じて、抗体とエフェクター分子との間に含められ得る。本来、免疫結合体は、別個の機能性を備える2つの分子例えば、抗体およびエフェクター分子から調製されたので、それらは、時折、キメラ分子とも称される。ゆえに、用語キメラ分子は、本明細書中で使用されるとき、エフェクター分子に結合体化連結された、リガンドまたは抗体などの標的化部分のことを指す。免疫原性ペプチド:対立遺伝子特異的モチーフまたはN末端反復などの他の配列を含むペプチドそのペプチドは、MHC分子に結合し、免疫原性ペプチドが由来する抗原に対する細胞傷害性Tリンパ球CTL応答またはB細胞応答例えば、抗体産生を誘導する。1つの実施形態において、免疫原性ペプチドは、配列モチーフまたは他の方法例えば、当該分野で公知の、ニューラルネット判定または多項式判定を用いて同定される。代表的には、ある特定の親和性で結合する高確率をもたらし、免疫原性であり得るスコアを有するペプチドを選択するために、ペプチドの結合閾値を決定するアルゴリズムが使用される。そのアルゴリズムは、特定の位置における特定のアミノ酸のMHC結合性に対する作用、特定の位置における特定のアミノ酸の抗体結合性に対する作用、またはモチーフ含有ペプチドにおける特定の置換の結合に対する作用に基づく。免疫原性ペプチドの状況の中で、保存された残基は、ランダムな分布によって予想される頻度よりも有意に高い頻度でペプチド内の特定の位置に出現する残基である。1つの実施形態において、保存された残基は、MHC構造が免疫原性ペプチドとの接触点を提供し得る残基である。1つの特定の非限定的な例において、免疫原性ポリペプチドは、エンドプラスミンの領域またはそのフラグメントを含み、ここで、そのポリペプチドは、完全長エンドプラスミンポリペプチドを発現する宿主細胞の細胞表面上に発現される。免疫原性組成物:エンドプラスミンポリペプチドを発現している細胞に対して測定可能なCTL応答を誘導するかまたはエンドプラスミンポリペプチドに対して測定可能なB細胞応答例えば、抗体の産生を誘導するポリペプチド例えば、エンドプラスミンポリペプチドを含む組成物。免疫原性組成物は、サイトカインの産生も誘導し得る。それはさらに、エンドプラスミンポリペプチドを発現するために使用され得るひいては、このポリペプチドに対する免疫応答を誘発するために使用され得るエンドプラスミンポリペプチドをコードする単離された核酸のことを指す。インビトロで使用する場合、免疫原性組成物は、単離されたタンパク質またはペプチドエピトープからなり得る。インビボで使用する場合、免疫原性組成物は、通常、薬学的に許容され得るキャリア中のタンパク質もしくは免疫原性ペプチド、および/または他の薬剤を含み得る。特定の任意のペプチド例えば、エンドプラスミンポリペプチドまたはそのポリペプチドをコードする核酸は、当該分野において認められたアッセイによってCTL応答またはB細胞応答を誘導する能力について容易に試験され得る。免疫原性組成物は、当業者に周知のアジュバントを含み得る。免疫学的に反応性の条件:特定のエピトープに対して産生された抗体が、実質的にすべての他のエピトープに対する結合よりも検出可能に高い程度に、および/または実質的にすべての他のエピトープに対する結合を実質的に除外する程度にそのエピトープに結合するのを可能にする条件に対する言及を含む。免疫学的に反応性の条件は、抗体結合反応の形式に依存し、代表的には、イムノアッセイプロトコルにおいて利用される条件またはインビボで遭遇する条件である。イムノアッセイの形式および条件の説明については、HarlowLane,前出を参照のこと。それらの方法において使用される免疫学的に反応性の条件は、通常、生存している哺乳動物内または哺乳動物細胞内の条件例えば、温度、オスモル濃度およびpHに対する言及を含む生理学的条件である。一部の器官が、極端な条件に供されることが認識されるが、生物体内および細胞内の環境は、通常、およそpH7すなわち、pH6.0~pH8.0、より代表的には、pH6.5~7.5にあり、主要な溶媒として水を含み、0°Cより高く50°Cより低い温度である。オスモル濃度は、細胞の生存能および増殖を支援する範囲内である。単離:単離された生物学的構成要素例えば、核酸、タンパク質抗体を含むまたは細胞小器官は、その構成要素が天然に存在する環境例えば、細胞内の他の生物学的構成要素、すなわち、他の染色体のおよび染色体外のDNAおよびRNA、タンパク質ならびに細胞小器官から実質的に分離されているか、または精製されている。単離された核酸およびタンパク質には、標準的な精製方法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。この用語は、宿主細胞内の組換え発現によって調製された核酸およびタンパク質ならびに化学的に合成された核酸も包含する。標識:その分子の検出を容易にするために別の分子例えば、抗体またはタンパク質に直接または間接的に結合体化される検出可能な化合物または組成物。標識の特定の非限定的な例としては、蛍光タグ、酵素の連結および放射性同位元素が挙げられる。1つの例において、標識された抗体とは、抗体における別の分子の組み込みのことを指す。例えば、標識は、検出可能なマーカー例えば、放射標識されたアミノ酸の組み込み、または標識されたアビジン例えば、光学的方法または比色法によって検出され得る蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジンによって検出され得るビオチニル部分とポリペプチドとの付着である。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法は、当該分野で公知であり、それらを使用してよい。ポリペプチドに対する標識の例としては、以下:放射性同位体または放射性ヌクレオチド例えば、35S、11C、13N、15O、18F、19F、99mTc、131I、3H、14C、15N、90Y、99Tc、111Inおよび125I、蛍光標識例えば、フルオレセインイソチオシアネートFITC、ローダミン、ランタニド燐光体、酵素標識例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体のための結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグまたは磁性物質例えば、ガドリニウムキレートが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、標識は、潜在的な立体障害を減少させるために様々な長さのスペーサーアームによって付着される。リンカー:ある場合には、リンカーは、可変重鎖と可変軽鎖とを間接的に結合するように働く抗体結合フラグメント例えば、Fvフラグメント内のペプチドである。リンカーは、抗体などの標的化部分を、細胞毒または検出可能な標識などのエフェクター分子に連結するように働くペプチドのことも指し得る。用語結合体化する、接続する、結合するまたは連結するとは、2つのポリペプチドを1つの連続したポリペプチド分子にすること、またはscFvなどのポリペプチドに放射性核種もしくは他の分子を共有結合的に付着することを指す。特定の文脈において、それらの用語は、抗体部分などのリガンドをエフェクター分子に接続することに対する言及を包含する。その連結は、化学的手段または組換え手段による連結であり得る。化学的手段とは、抗体部分とエフェクター分子との間の反応それにより、それらの2つの分子の間に共有結合が形成されて1つの分子が形成されるのことを指す。哺乳動物:この用語は、ヒトと非ヒト哺乳動物の両方を包含する。同様に、用語被験体は、ヒト被験体と動物被験体の両方を包含する。主要組織適合遺伝子複合体MHC:ヒト白血球抗原HLAをはじめとした、種々の種において報告されている組織適合性抗原系を包含するように意図された総称。用語モチーフとは、特定のMHC対立遺伝子によって認識される、明確な長さのペプチド、通常、約8~約11アミノ酸における残基のパターンのことを指す。そのペプチドモチーフは、代表的には、各MHC対立遺伝子によって異なり、高度に保存された残基および結合陰性negativebinding残基のパターンが異なる。メラノーマ:メラノサイトメラニン色素を産生する細胞から起こるがんの一形態。メラノサイトは、主に皮膚に見られるが、腸および眼にも存在する。皮膚におけるメラノーマとしては、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、末端部黒子様黒色腫および悪性黒子メラノーマが挙げられる。上記タイプのいずれもが、メラニンを産生し得るか、またはメラニン欠乏であり得る。同様に、任意のサブタイプが、高悪性度の挙動、および局所的な再発の傾向のマーカーである線維形成神経親和性を有する高密度線維反応を示し得る。他のメラノーマとしては、明細胞肉腫、粘膜黒色腫mucosalmelanomaおよびブドウ膜黒色腫が挙げられる。予後に影響する特徴は、ミリメートル単位の腫瘍の厚さブレスロー深さBreslow’sdepth、皮膚構造に関係する深さクラークレベル、メラノーマのタイプ、潰瘍化の存在、リンパ/神経周囲の浸潤の存在、腫瘍浸潤リンパ球の存在存在する場合、予後はより良好である、病変の位置、衛星病巣の存在、および局所転移または遠隔転移の存在である。メラノーマが、リンパ節に広がっているとき、最も重要な因子の1つは、悪性病変を有する結節の数である。結節内の悪性病変の程度もまた重要であり;悪性病変が単に微視的である微小転移は、マクロ転移よりも好ましい予後を有する。遠隔転移が存在するとき、5年生存率は、10パーセント未満であり;生存期間の中央値は、6~12ヶ月である。皮膚および肺への転移は、より良好な予後を有する。脳、骨および肝臓への転移は、より不良な予後を伴う。メラノーマは、以下のとおりステージ分けstagedされ得る:ステージ0:上皮内黒色腫クラークレベルI、100生存ステージI/II:浸潤性メラノーマ、85~95生存T1a:1.00mm未満の原発性、潰瘍化なし、クラークレベルII~IIIT1b:1.00mm未満の原発性、潰瘍化ありまたはクラークレベルIV~VT2a:1.00~2.00mmの原発性、潰瘍化なしステージII:高リスクメラノーマ、40~85生存T2b:1.00~2.00mmの原発性、潰瘍化ありT3a:2.00~4.00mmの原発性、潰瘍化なしT3b:2.00~4.00mmの原発性、潰瘍化ありT4a:4.00mm以上の原発性、潰瘍化なしT4b:4.00mm以上の原発性、潰瘍化ありステージIII:領域転移、25~60生存N1:1つの陽性リンパ節N2:2~3つの陽性リンパ節、または領域皮膚/イントランジット転移N3:4つの陽性リンパ節、またはリンパ節および領域皮膚/イントランジット転移ステージIV:遠隔転移、9~15生存M1a:遠隔皮膚転移、正常な乳酸デヒドロゲナーゼLDHM1b:肺転移、正常なLDHM1c:他の遠隔転移または高LDHを伴う任意の遠隔転移モノクローナル抗体:Bリンパ球の単一クローン、単一抗体の軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞、または抗体ライブラリー内の特定のファージによって産生される抗体そのモノクローナル抗体は、明確なセットのCDRを含み、かつ目的の標的抗原に特異的に結合する。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えばこれらに限定されないがミエローマ細胞と免疫脾臓細胞との融合によってハイブリッド抗体形成細胞を作製することによって、または抗体配列のファージディスプレイライブラリーから選択することによって、作製される。モノクローナル抗体には、ヒト化モノクローナル抗体および完全ヒトモノクローナル抗体が含まれる。本明細書中で使用されるとき、モノクローナル抗体の機能的フラグメントには、そのモノクローナル抗体に対する標的タンパク質抗原結合に特異的に結合する抗体フラグメント例えば、scFv、Fv、dsRvまたはFabであるがこれらに限定されないが含まれる。モノクローナル抗体は、グリコシル化されたエピトープなどの抗原性エピトープに特異的に結合する。モノクローナル抗体には、二官能性抗体ここで、1つ以上のCDRセットが、エンドプラスミンなどの標的抗原に特異的に結合するならびにエフェクター機能が増強されたFcおよび他のグリコール操作抗体が含まれる。新形成、悪性病変、がんまたは腫瘍:細胞の異常かつ制御されない成長の結果。新形成、悪性病変、がんおよび腫瘍は、しばしば交換可能に使用される。個体内の腫瘍の量は、その腫瘍の数、体積または重量として測定され得る腫瘍量である。転移しない腫瘍は、良性と称される。周囲の組織を浸潤し、かつ/または転移し得る腫瘍は、悪性と称される。血液学的腫瘍の例としては、白血病急性白血病例えば、11q23陽性急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、ならびに骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性および赤白血病を含む、慢性白血病例えば、慢性骨髄性顆粒球性白血病、慢性骨髄性白血病および慢性リンパ性白血病、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫緩徐進行型および高悪性型、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリーセル白血病および骨髄形成異常が挙げられる。肉腫および癌腫などの固形腫瘍の例としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫および他の肉腫、滑膜腫synovioma、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、リンパ系悪性腫瘍、膵がん、乳がん基底乳癌腫basalbreastcarcinoma、乳管癌腫および小葉乳癌腫lobularbreastcarcinomaを含む、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌腫、扁平上皮癌、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、甲状腺髄様癌腫、甲状腺乳頭癌腫、褐色細胞腫、皮脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭状腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、ヘパトーマ、胆管癌腫、絨毛癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌腫およびCNS腫瘍例えば、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫craniopharyogioma、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫menangioma、メラノーマ、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が挙げられる。いくつかの例において、腫瘍は、メラノーマ、乳がん、腎がん、神経膠腫または扁平上皮癌例えば、頭頸部がんである。核酸:ホスホジエステル結合によって連結されたヌクレオチド単位リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらの関連する天然に存在する構造的バリアントおよび合成の天然に存在しないアナログ、それらの関連する天然に存在する構造的バリアントおよび天然に存在しない合成アナログから構成されるポリマー。したがって、この用語は、ヌクレオチドおよびそれらの間の結合が、天然に存在しない合成アナログ例えば、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル-メチルホスホネート、2-O-メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸PNAなどであるがこれらに限定されないを含む、ヌクレオチドポリマーを包含する。そのようなポリヌクレオチドは、例えば、自動DNA合成装置を用いて、合成され得る。用語オリゴヌクレオチドは、代表的には、一般に約50ヌクレオチドより大きくない、短いポリヌクレオチドのことを指す。ヌクレオチド配列が、DNA配列すなわち、A、T、G、Cによって表されるとき、これは、TをUが置き換えるRNA配列すなわち、A、U、G、Cも含むと理解されるだろう。ヌクレオチド配列を記載するために、従来の表示法が本明細書中で使用される:一本鎖ヌクレオチド配列の左端は、5’末端であり;二本鎖ヌクレオチド配列の左方向が、5’方向と称される。新生RNA転写物にヌクレオチドが5’から3’に付加される方向は、転写方向と称される。mRNAと同じ配列を有するDNA鎖は、コーディング鎖と称され;DNAから転写されたmRNAと同じ配列を有し、RNA転写物の5’末端に対して5’に配置されるDNA鎖上の配列は、上流配列と称され;RNAと同じ配列を有し、コーディングRNA転写物の3’末端に対して3’に存在するDNA鎖上の配列は、下流配列と称される。cDNAとは、一本鎖または二本鎖の形態において、mRNAと相補的であるかまたは同一であるDNAのことを指す。コードするとは、規定のヌクレオチド配列すなわち、rRNA、tRNAおよびmRNAまたは規定のアミノ酸の配列を有する、生物学的プロセスにおいて他のポリマーおよび高分子の合成のために鋳型として働くポリヌクレオチド例えば、遺伝子、cDNAまたはmRNA中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性、およびそれらに起因する生物学的特性のことを指す。したがって、遺伝子は、その遺伝子によって生成されるmRNAの転写および翻訳が、細胞または他の生体系においてタンパク質を生成する場合、タンパク質をコードする。コーディング鎖そのヌクレオチド配列は、mRNA配列と同一であり、通常、配列表に提供されると非コーディング鎖遺伝子またはcDNAの転写のための鋳型として使用されるの両方が、タンパク質、またはその遺伝子もしくはcDNAの他の産物をコードすると称され得る。別段明記されない限り、アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする、すべてのヌクレオチド配列を包含する。タンパク質およびRNAをコードするヌクレオチド配列は、イントロンを含み得る。組換え核酸とは、天然では共に接続されていないヌクレオチド配列を有する核酸のことを指す。これは、好適な宿主細胞を形質転換するために使用され得る、増幅されたまたは組み立てられた核酸を含む核酸ベクターを包含する。組換え核酸を含む宿主細胞は、組換え宿主細胞と称される。次いで、その遺伝子は、組換え宿主細胞において発現されることにより、組換えポリペプチドなどを産生する。組換え核酸は、非コード機能例えば、プロモーター、複製起点、リボソーム結合部位なども果たし得る。その配列が第1配列であるポリヌクレオチドが、その配列が第2配列であるポリヌクレオチドと特異的にハイブリダイズする場合、その第1配列は、第2配列に対してアンチセンスである。2つ以上のヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間の配列の関係性を記載するために使用される用語としては、参照配列、から選択される、比較範囲comparisonwindow、同一、配列同一性のパーセンテージ、実質的に同一、相補的および実質的に相補的が挙げられる。核酸配列を配列比較する場合、通常、1つの配列は、試験配列と比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用するときは、試験配列および参照配列をコンピュータに入力し、必要であれば部分配列の座標を指定し、配列アルゴリズムのプログラムパラメータを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを使用する。比較のために配列をアラインメントする方法は、当該分野で周知である。比較するための配列の最適なアラインメントは、例えば、SmithWaterman,Adv.Appl.Math.2:482,1981のローカルホモロジーアルゴリズム、NeedlemanWunsch,J.Mol.Biol.48:443,1970のホモロジーアラインメントアルゴリズム、PearsonLipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA85:2444,1988の類似性検索法、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実行WisconsinGeneticsSoftwarePackage,GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.,Madison,WIにおけるGAP、BESTFIT、FASTAおよびTFASTAまたは手作業によるアラインメントおよび目視検査例えば、CurrentProtocolsinMolecularBiologyAusubelら、eds1995supplementを参照のことによって行われ得る。有用なアルゴリズムの1つの例は、PILEUPである。PILEUPは、FengDoolittle,J.Mol.Evol.35:351-360,1987のプログレッシブアラインメント法の簡便法を使用する。使用される方法は、HigginsSharp,CABIOS5:151-153,1989に記載された方法に似ている。PILEUPを用いるとき、パーセント配列同一性の関係性を決定するために、以下のパラメータを用いて、参照配列が他の試験配列と比較される:デフォルトのギャップウェイト3.00、デフォルトのギャップ長ウェイト0.10および重み付けされたエンドギャップ。PILEUPは、GCG配列解析ソフトウェアパッケージ例えば、バージョン7.0Devereauxら、Nuc.AcidsRes.12:387-395,1984から入手することができる。パーセント配列同一性および配列類似性を測定するのに適した別のアルゴリズムの例は、Altschulら、J.Mol.Biol.215:403-410,1990およびAltschulら、NucleicAcidsRes.25:3389-3402,1977に記載されている、BLASTおよびBLAST2.0アルゴリズムである。BLAST解析を行うためのソフトウェアは、NationalCenterforBiotechnologyInformationhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/を介して公的に入手可能である。BLASTNプログラムヌクレオチド配列用は、デフォルトとして11というワード長W、50というアラインメントB、10という期待値E、M=5、N=-4および両鎖の比較を使用する。BLASTPプログラムアミノ酸配列用は、デフォルトとして3というワード長Wおよび10という期待値EならびにBLOSUM62スコア行列HenikoffHenikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915,1989を参照のことを使用する。オリゴヌクレオチド:最大約100ヌクレオチド塩基長の直鎖状のポリヌクレオチド配列。オープンリーディングフレームORF:いかなる終止コドンもなくアミノ酸をコードするひと続きのヌクレオチドトリプレットコドン。これらの配列は、通常、ペプチドに翻訳可能である。作動可能に連結される:第1の核酸配列が、第2の核酸配列と機能的関係性で配置されるとき、第1の核酸配列は、第2の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、異種プロモーターなどのプロモーターは、そのプロモーターがコード配列の転写または発現に影響する場合、そのコード配列に作動可能に連結されている。一般に、作動可能に連結されるDNA配列は、2つのタンパク質コード領域を接続する必要がある場合、同じ読み枠において連続している。医薬品:被験体または細胞に適切に投与されたときに、所望の治療効果または予防効果を誘導することができる化学的化合物または組成物。薬学的に許容され得るキャリア:薬学的に許容され得る有用なキャリアは、従来のキャリアである。E.W.MartinによるRemington’sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCo.,Easton,PA,15thEdition,1975には、本明細書中に開示される融合タンパク質の薬学的送達に適した組成物および製剤が記載されている。一般に、キャリアの性質は、使用される特定の投与様式に依存し得る。例えば、非経口用の製剤は、通常、薬学的かつ生理的に許容され得る流体例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなどをビヒクルとして含む注射可能な流体を含む。固体組成物例えば、散剤、丸剤、錠剤またはカプセルの形態の場合、従来の無毒性固体キャリアとしては、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムが挙げられ得る。投与される薬学的組成物は、生物学的に中性のキャリアに加えて、少量の無毒性補助物質例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤およびpH緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含み得る。ポリヌクレオチド:ポリヌクレオチドまたは核酸配列という用語は、ヌクレオチドの少なくとも10塩基長の多量体型のことを指す。組換えポリヌクレオチドは、それが由来する生物の天然に存在するゲノムでは直接連続する2つのコード配列が直接連続しない一方が5’末端、もう一方が3’末端に存在するポリヌクレオチドを含む。それゆえ、この用語は、例えば、ベクター;自己複製プラスミドもしくはウイルス;または原核生物もしくは真核生物のゲノムDNAに組み込まれた組換えDNA、あるいは他の配列から独立した別個の分子例えば、cDNAとして存在する組換えDNAを包含する。そのヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、またはいずれかのヌクレオチドの改変された形態であり得る。この用語は、一本鎖および二本鎖の形態のDNAを包含する。ポリペプチド:長さまたは翻訳後修飾例えば、グリコシル化またはリン酸化に関係ない、アミノ酸の任意の鎖。1つの実施形態において、ポリペプチドは、エンドプラスミンポリペプチドである。残基とは、アミド結合またはアミド結合模倣物によってポリペプチドに組み込まれたアミノ酸またはアミノ酸模倣物のことを指す。ポリペプチドは、アミノ末端N末端およびカルボキシ末端C末端を有する。疾患を予防する、処置するまたは回復させる:疾患を予防するとは、疾患の完全な発症を阻害することを指す。処置するとは、疾患または病理学的状態が発症し始めた後に、それらの徴候または症状を回復させる治療的介入例えば、腫瘍量の減少、または転移の数もしくはofサイズの減少のことを指す。回復させるとは、がんなどの疾患の徴候または症状の数または重症度の減少のことを指す。プローブおよびプライマー:プローブは、検出可能な標識またはレポーター分子に付着された、単離された核酸を含む。プライマーは、短い核酸、好ましくは、DNAオリゴヌクレオチド、15ヌクレオチドまたはそれ以上の長さである。プライマーは、核酸ハイブリダイゼーションによって相補的な標的DNA鎖にアニールされることにより、プライマーと標的DNA鎖とのハイブリッドを形成し得、次いで、DNAポリメラーゼ酵素によって標的DNA鎖に沿って伸長され得る。プライマー対は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応PCRまたは当該分野で公知の他の核酸増幅法による、核酸配列の増幅のために使用され得る。当業者は、特定のプローブまたはプライマーの特異性がその長さに伴って高まることを認識するだろう。したがって、例えば、20個連続したヌクレオチドを含むプライマーは、わずか15ヌクレオチドの対応するプライマーよりも高い特異性で標的にアニールし得る。したがって、より高い特異性を得るために、20、25、30、35、40、50またはそれ以上連続したヌクレオチドを含むプローブおよびプライマーが選択され得る。プロモーター:プロモーターは、核酸の転写を指示する一連の核酸調節配列である。プロモーターは、必要な核酸配列を転写開始部位付近に含む例えば、ポリメラーゼIIタイププロモーターの場合、TATAエレメント。プロモーターは、必要に応じて、転写開始部位から数千塩基対も離れて配置され得る遠位エンハンサーまたはリプレッサーエレメントも含む。構成的プロモーターと誘導性プロモーターの両方が含まれる例えば、Bitterら、MethodsinEnzymology153:516-544,1987を参照のこと。プロモーターの特定の非限定的な例としては、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター例えば、メタロチオネインプロモーターまたは哺乳動物ウイルス由来のプロモーター例えば、レトロウイルス末端反復配列;アデノウイルス後期プロモーター;ワクシニアウイルス7.5Kプロモーターが挙げられ、それらが使用され得る。組換えDNA法または合成法によって作製されたプロモーターもまた使用され得る。ポリヌクレオチドは、宿主の挿入された遺伝子配列の効率的な転写を促進するプロモーター配列を含む発現ベクターに挿入され得る。発現ベクターは、代表的には、複製起点、プロモーター、ならびに形質転換された細胞の表現型選択を可能にする特定の核酸配列を含む。精製:精製という用語は、絶対的な純度を要求しない;むしろ、それは、相対的な用語として意図されている。したがって、例えば、精製された核酸は、その核酸が、細胞内のその天然の環境における核酸よりも濃縮されている核酸である。同様に、精製されたペプチド調製物は、そのペプチドまたはタンパク質が、細胞内のその天然の環境におけるペプチドまたはタンパク質よりも濃縮されているペプチド調製物である。実質的な精製は、他のタンパク質または細胞成分からの精製のことを表す。1つの実施形態において、ある調製物は、タンパク質またはペプチドが、その調製物の総ペプチド含有量または総タンパク質含有量の少なくとも50例えば、70、80、90、95、98または99であるがこれらに限定されないに相当するように、精製されているまたは単離されている。本明細書中に開示されるエンドプラスミンポリペプチドは、当該分野で公知の任意の手段によって精製され得るおよび/または合成され得る例えば、GuidetoProteinPurification,ed.Deutscher,Meth.Enzymol.185,AcademicPress,SanDiego,1990;およびScopes,ProteinPurification:PrinciplesandPractice,SpringerVerlag,NewYork,1982を参照のこと。組換え:組換え核酸は、天然に存在しない配列を有するか、または2つの別途分断された配列のセグメントの人工的な組み合わせによって作製された配列を有する、核酸である。この人工的な組み合わせは、化学的合成によって、またはより一般的には、単離された核酸のセグメントの人工的な操作によって、例えば、遺伝子操作法によって、達成されることが多い。組換え毒素:細胞標的化部分が毒素に融合されたキメラタンパク質Pastanら、Science,254:1173-1177,1991。細胞標的化部分が、抗体のFv部分である場合、その分子は、組換え免疫毒素と呼ばれるChaudharyら、Nature,339:394-397,1989。その毒素部分は、ほとんどの正常細胞上に存在する毒素レセプターに結合できないように遺伝的に変更されている。組換え免疫毒素は、抗原結合ドメインによって認識される細胞を選択的に殺滅する。これらの組換え毒素および免疫毒素は、がん、例えば、エンドプラスミンを発現しているがんを処置するために使用され得る。選択的にハイブリダイズする:関係のないヌクレオチド配列を排除する中程度または高度にストリンジェントな条件下のハイブリダイゼーション。核酸ハイブリダイゼーション反応では、特定のレベルのストリンジェンシーを達成するために使用される条件は、ハイブリダイズされる核酸の性質に応じて変動し得る。例えば、その核酸のハイブリダイズ領域の長さ、相補性の程度、ヌクレオチド配列の組成例えば、GC対AT含有量および核酸タイプ例えば、RNA対DNAが、ハイブリダイゼーション条件を選択する際に考慮され得る。追加の考慮すべき点は、核酸の一方が、例えば、フィルター上に、固定化されているか否かである。漸進的に高くなるストリンジェンシー条件の特定の非限定的な例は、以下のとおりである:ほぼ室温での2×SSC/0.1SDSハイブリダイゼーション条件;ほぼ室温での0.2×SSC/0.1SDS低ストリンジェンシー条件;約42°Cでの0.2×SSC/0.1SDS中程度のストリンジェンシー条件;および約68°Cでの0.1×SSC高ストリンジェンシー条件。当業者は、これらの条件に対するバリエーションを容易に決定することができる例えば、MolecularCloning:ALaboratoryManual,2nded.,vol.1-3,ed.Sambrookら、ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989。これらの条件のうちの1つだけ、例えば、高ストリンジェンシー条件を用いて洗浄が行われ得るか、またはそれらの条件の各々が、列挙された工程のいずれかまたはすべてを繰り返しつつ、例えば、上に列挙された順序で各10~15分にわたって用いられ得る。しかしながら、上で述べたように、最適条件は、関わる特定のハイブリダイゼーション反応に応じて変動し得、経験的に決定され得る。配列同一性:アミノ酸配列間の類似性は、別途、配列同一性と称される、配列間の類似性に関して表現される。配列同一性は、パーセンテージ同一性または類似性もしくは相同性に関して測定されることが多い;そのパーセンテージが高いほど、その2つの配列は似ている。エンドプラスミンポリペプチドのホモログまたはバリアントは、標準的な方法を用いてアラインメントされたとき、比較的高い程度の配列同一性を有し得る。比較するために配列をアラインメントする方法は、当該分野で周知である。様々なプログラムおよびアラインメントアルゴリズムが:SmithandWaterman,Adv.Appl.Math.2:482,1981;NeedlemanandWunsch,J.Mol.Biol.48:443,1970;PearsonandLipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444,1988;HigginsandSharp,Gene73:237,1988;HigginsandSharp,CABIOS5:151,1989;Corpetら、NucleicAcidsResearch16:10881,1988;およびPearsonandLipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444,1988に記載されている。Altschulら、NatureGenet.6:119,1994には、配列アラインメント法および相同性の計算に関する詳細な考察が提供されている。NCBIベーシックローカルアラインメントサーチツールBLASTAltschulら、J.Mol.Biol.215:403,1990は、配列解析プログラムblastp、blastn、blastx、tblastnおよびtblastxと関連して使用するために、いくつかの供給源NationalCenterforBiotechnologyInformationNCBI,Bethesda,MDおよびインターネット上を含むから入手可能である。どのようにしてこのプログラムを用いて配列同一性を決定するのかの説明は、インターネット上のNCBIのウェブサイトにおいて入手可能である。エンドプラスミンポリペプチドのホモログおよびバリアントは、代表的には、デフォルトのパラメータに設定されたNCBIBlast2.0,gappedblastpを用いたエンドプラスミンのアミノ酸配列との完全長のアラインメントに対してカウントされるとき、少なくとも75、例えば、少なくとも80の配列同一性を有することを特徴とする。約30アミノ酸より長いアミノ酸配列を比較する場合、デフォルトのパラメータ11というギャップ存在コストgapexistencecostおよび1という1残基当たりのギャップコストperresiduegapcostに設定されたデフォルトのBLOSUM62行列を用いて、Blast2配列関数が使用される。短いペプチドおよそ30アミノ酸未満をアラインメントするとき、そのアラインメントは、デフォルトのパラメータオープンギャップ9、伸長ギャップ1ペナルティに設定されたPAM30行列を使用するBlast2配列関数を用いて行われるべきである。参照配列に対してさらにより高い類似性を有するタンパク質は、この方法によって評価されるとき、高いパーセンテージ同一性例えば、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも98または少なくとも99の配列同一性を示し得る。全体の配列より小さい配列が、配列同一性のために比較されるとき、ホモログおよびバリアントは、代表的には、10~20アミノ酸という狭い範囲にわたって少なくとも80の配列同一性を有し得、参照配列との類似性に応じて、少なくとも85または少なくとも90または95の配列同一性を有し得る。そのような狭い範囲に対して配列同一性を測定するための方法は、インターネット上のNCBIウェブサイトにおいて利用可能である。当業者は、これらの配列同一性の範囲が、単に指針として提供されることを認識するだろう;提供される範囲に入らない非常に有意なホモログを得ることができることも全く可能である。特異的結合物質:規定された標的にしか実質的に結合しない物質。したがって、エンドプラスミン特異的結合物質は、実質的にエンドプラスミンポリペプチドに結合する物質である。1つの実施形態において、特異的結合物質は、エンドプラスミンに特異的に結合するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。扁平上皮癌:皮膚、眼、様々な内部器官の表面、ならびにいくつかの腺の中空器官および管の裏打ちを形成する薄い平らな細胞である扁平上皮細胞から起こる、がんの1タイプ。扁平上皮癌は、類表皮癌腫とも称される。扁平上皮癌の1タイプは、頭頸部headandneckhead扁平上皮癌HNSCCである。頭頸部扁平上皮癌には、鼻腔、洞、口唇、口腔、唾液腺、のどおよび喉頭のがんが含まれる。HNSCCは、以下のとおりステージ分けされ得る:ステージ0:腫瘍のエビデンスなし。ステージI:腫瘍の最大径は、2cm以下である;領域リンパ節転移または遠隔転移のエビデンスなし。ステージII:腫瘍は、2cmより大きいが4cm以下である;領域リンパ節転移または遠隔転移のエビデンスなし。ステージIII:腫瘍は、4cmより大きい;場合によっては、腫瘍は、リンパ節に広がっている;遠隔転移のエビデンスなし。ステージIV:腫瘍は、リンパ節に広がっている;場合によっては、遠隔転移が存在する。被験体:ヒト被験体と動物被験体ヒトおよび非ヒト哺乳動物を含むの両方を含むカテゴリーである、生存している多細胞脊椎動物。T細胞:免疫応答に絶対必要な白血球。T細胞としては、CD4T細胞およびCD8T細胞が挙げられるが、これらに限定されない。CD4Tリンパ球は、分化クラスター4CD4として知られるマーカーを表面上に保持する免疫細胞である。ヘルパーT細胞と呼ばれることが多いこれらの細胞は、抗体応答ならびにキラーT細胞応答を含む免疫応答を指揮するのを助ける。CD8T細胞は、分化クラスター8CD8マーカーを保持する。1つの実施形態において、CD8T細胞は、細胞傷害性Tリンパ球である。別の実施形態において、CD8細胞は、サプレッサーT細胞である。治療有効量:処置される被験体において所望の効果を達成するのに十分な特定の物質の量。例えば、これは、腫瘍の成長を阻害するかまたは抑制するのに必要な量であり得る。1つの実施形態において、治療有効量は、腫瘍を排除するかまたは転移の数もしくはサイズを減少させるのに必要な量である。被験体に投与されたときに、所望のインビトロ効果を達成すると示された標的組織濃度例えば、腫瘍においてを達成し得る投与量が一般に使用され得る。毒素:細胞に対して細胞傷害性である分子。毒素には、アブリン、リシン、Pseudomonas外毒素PE、ジフテリア毒素DT、ボツリヌス毒素、サポリン、レストリクトシンrestrictocinもしくはゲロニンgeloninまたはそれらの改変された毒素が含まれる。例えば、PEおよびDTは、代表的には、肝臓毒性によって死をもたらす、高度に毒性の化合物である。しかしながら、PEおよびDTは、その毒素の天然の標的化構成要素例えば、PEのドメインIaまたはDTのB鎖を除去し、それを抗体などの異なる標的化部分で置き換えることによって、免疫毒素として使用するための形態に改変され得る。形質導入:形質導入された細胞は、分子生物学の手法によって核酸分子を導入された細胞である。本明細書中で使用されるとき、形質導入という用語は、核酸分子をそのような細胞に導入し得るすべての手法ウイルスベクターによるトランスフェクション、プラスミドベクターによる形質転換、ならびにエレクトロポレーション、リポフェクションおよびパーティクルガン法particlegunaccelerationによる裸のDNAの導入を含むを包含する。ベクター:宿主細胞に導入され、それにより、形質転換された宿主細胞をもたらす、核酸分子。ベクターは、宿主細胞においてその複製を可能にする核酸配列例えば、複製起点を含み得る。ベクターは、1つ以上の選択可能なマーカー遺伝子および当該分野で公知の他の遺伝的エレメントも含み得る。別段説明されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者が通常理解する意味と同じ意味を有する。単数形の用語a、anおよびtheは、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、単語またはは、文脈が明らかに他のことを示さない限り、およびを含むと意図される。核酸またはポリペプチドに対して与えられたすべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量または分子質量の値が、近似値であり、説明のために提供されていることが、さらに理解されるべきである。本明細書中に記載される方法および材料と類似または等価の方法および材料が、本開示の実施または試験において使用され得るが、好適な方法および材料が、下記に記載される。用語含むcomprisesは、含むincludesを意味する。本明細書中で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献の全体が、参考として援用される。矛盾する場合、用語の説明を含む本明細書が支配するものとする。さらに、その材料、方法および例は、単なる例示であって、限定すると意図されない。III.エンドプラスミンに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体完全ヒトモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体を含む、エンドプラスミンGrp94に特異的に結合する抗体が作製された。これらの抗体および/またはその抗原結合antigen-bidingフラグメントは、エンドプラスミンを単離するために使用され得、エンドプラスミンを発現する腫瘍例えば、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がんまたは膵がんであるがこれらに限定されないを検出するためおよび/または処置するために使用され得る。これらの抗体は、検出可能な標識またはエフェクター分子に結合体化され得る。1つの実施形態において、上記抗体は、グリコシル化されたエンドプラスミンに特異的に結合する。したがって、この実施形態において、それらの抗体は、グリコシル化されていないエンドプラスミンまたは関係のない抗原に特異的に結合しない。エンドプラスミンに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体およびその抗原結合フラグメントが本明細書中に開示される。1つの例において、ヒトエンドプラスミンは、以下に示されるようなアミノ酸配列を有する:配列番号5、本明細書中に参考として援用される、2010年6月16日において入手可能なGENBANK登録商標アクセッション番号NM_003299も参照のこと。別の例では、エンドプラスミンは、以下に示されるような核酸配列によってコードされる:配列番号6、本明細書中で参考として援用される、GENBANK登録商標アクセッション番号NM_003299、2010年6月16日も参照のこと。当業者Onceofskillintheartは、分子生物学における標準的な方法を用いてエンドプラスミンなどのポリペプチドを作製するために核酸配列を容易に使用することができる例えば、MolecularCloning:ALaboratoryManual,2nded.,vol.1-3,ed.Sambrookら、ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989を参照のこと。本明細書中に記載される治療薬および抗体を用いて、当業者は、機能的に等価な核酸例えば、配列が異なるが同じEMまたは抗体配列をコードする核酸を含む種々のクローンを容易に構築することができる。したがって、本発明は、抗体ならびにその結合体および融合タンパク質をコードする核酸を提供する。グリコシル化されたエンドプラスミンなどのヒトエンドプラスミンに特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体およびそのフラグメントが本明細書中に記載される。いくつかの実施形態において、そのヒトモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントは、scFvである。提供されるヒトモノクローナル抗体またはその機能的フラグメントヒトエンドプラスミンに特異的に結合するおよび薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物も記載される。これらの抗体をコードする核酸、これらの核酸を含む発現ベクター、およびその核酸を発現する単離された宿主細胞もまた提供される。ヒトエンドプラスミンに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む免疫結合体もまた本明細書中に記載される。その免疫結合体は、任意の治療薬、毒素または他の部分を含み得る。1つの例において、その毒素は、PEまたはそのバリアントもしくはフラグメントである。その免疫結合体を含む組成物も記載される。エンドプラスミンに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物は、スクリーニング、研究、検出および治療の目的のために使用され得る。例えば、そのヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、競合イムノアッセイなどにおいて、エンドプラスミンに特異的に結合する他の抗体を識別するために使用され得る。エンドプラスミンに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物は、がん例えば、正常細胞と比べてエンドプラスミンの高発現を示すがんと診断された被験体を処置するために使用され得る。例えば、その抗体は、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんを処置するために使用され得る。メラノーマには、拡散性メラノーマ、結節性黒色腫、末端部黒子様黒色腫および悪性黒子メラノーマが含まれる。扁平上皮細胞癌腫としては、頭頸部扁平上皮細胞癌腫および肺の扁平上皮細胞癌が挙げられるが、これらに限定されない。上記エンドプラスミン抗体を含む組成物は、転移を予防するため、または微小転移の数例えば、領域リンパ節への微小転移を減少させるためにも使用され得る。そのエンドプラスミン抗体を含む免疫結合体は、がんを有すると診断された患者を処置するためにも使用され得る。そのヒトモノクローナル抗体は、被験体におけるがんを診断するため転移の検出を含むにも使用され得る。例えば、そのヒトモノクローナル抗体は、高レベルのエンドプラスミンを検出するために、患者由来のサンプル例えば、血清サンプルと接触され得る。本明細書中に提供される抗体および組成物は、被験体におけるがんを検出するため、または患者におけるがんの診断を確認するためにも使用され得る。ヒトエンドプラスミンに特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体およびエンドプラスミンに特異的に結合するその機能的フラグメント抗原結合フラグメントが本明細書中に開示される。マウスモノクローナル抗体を臨床で使用する際の主な限界は、その処置を受けた患者においてヒト抗マウス抗体HAMA応答が生じることである。HAMA応答は、アレルギー反応および投与された抗体が血清からクリアランスされる速度の上昇を含み得る。親モノクローナル抗体の抗原結合親和性を維持するように試みつつ、HAMA応答を最小にする様々なタイプの改変モノクローナル抗体が開発されている。改変モノクローナル抗体の1タイプは、マウス抗原結合可変領域がヒト定常ドメインに連結されたヒト-マウスキメラであるMorrisonandSchlom,ImportantAdvancesinOncology,Rosenberg,S.A.Ed.,1989。改変モノクローナル抗体の第2のタイプは、相補性決定領域CDRが移植されたまたはヒト化されたモノクローナル抗体であるWinterandHarris,Immunol.Today14:243-246,1993。しかしながら、本明細書中に開示される抗体は、完全ヒト抗体であり;フレームワーク領域とCDRの両方が、ヒト配列に由来する。したがって、これらの抗体がヒト被験体に投与されるとき、HAMAは誘導されない。いくつかの実施形態において、上記ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号1として示される重鎖アミノ酸配列の可変鎖の少なくとも一部を含み、エンドプラスミンに特異的に結合する。例えば、そのヒトモノクローナル抗体は、SDR特異性決定残基、CDRまたは可変領域を含み得る。下記に示されるアミノ酸配列において、定常領域は太字であり、CDRには、下線が引かれている:いくつかの実施形態において、上記ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号1として示される重鎖アミノ酸配列の少なくとも一部を含み、エンドプラスミンに特異的に結合する。いくつかの例において、その抗体の軽鎖のCDRの少なくとも1つは、配列番号1のアミノ酸26~33CDR1、配列番号1のアミノ酸51~58CDR2および配列番号1のアミノ酸97~103CDR3として示されるアミノ酸配列のうちの1つ以上を含む。追加の例において、その抗体の重鎖は、配列番号1のアミノ酸26~33CDR1、配列番号1のアミノ酸51~58CDR2および配列番号1のアミノ酸97~103CDR3として示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの例において、その抗体の重鎖の可変領域は、配列番号1のアミノ酸1~113を含み得るか、またはそれからなり得る。その抗体の重鎖は、配列番号1を含み得るか、またはそれからなり得る。いくつかの実施形態において、上記ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号2として示される軽鎖アミノ酸配列の可変領域の少なくとも一部を含み、エンドプラスミンに特異的に結合する。下記に示されるアミノ酸配列において、定常領域は太字であり、CDRには、下線が引かれている:いくつかの例において、その抗体の軽鎖のCDRのうちの少なくとも1つは、配列番号2のアミノ酸27~32CDR1、配列番号2のアミノ酸50~52CDR2および配列番号2のアミノ酸89~97CDR3として示されるアミノ酸配列のうちの1つ以上を含む。追加の例において、その抗体の軽鎖は、配列番号2のアミノ酸アミノ酸27~32CDR1、配列番号2のアミノ酸50~52CDR2および配列番号2のアミノ酸89~97CDR3を含む。その抗体の軽鎖の可変領域は、配列番号2のアミノ酸1~107を含み得るか、またはそれからなり得る。その抗体の軽鎖は、配列番号2を含み得るか、またはそれからなり得る。いくつかの実施形態において、上記ヒトモノクローナル抗体は、標識されている。いくつかの例において、その標識は、蛍光標識、酵素標識または放射性標識である。上記モノクローナル抗体は、任意のアイソタイプであり得る。そのモノクローナル抗体は、例えば、IgA、IgMまたはIgG抗体例えば、IgG1またはIgG2であり得る。エンドプラスミンに特異的に結合する抗体のクラスは、別のクラスにスイッチされ得る。1つの態様において、VLまたはVHをコードする核酸分子は、それぞれ軽鎖または重鎖の定常領域をコードするいかなる核酸配列も含まないように、当該分野で周知の方法を用いて単離される。次いで、VLまたはVHをコードする核酸分子は、異なるクラスの免疫グロブリン分子由来のCLまたはCHをコードする核酸配列に作動可能に連結される。これは、当該分野で公知であるように、CLまたはCH鎖を含むベクターまたは核酸分子を用いて達成され得る。例えば、本来IgMだったエンドプラスミンに特異的に結合する抗体が、IgGにクラススイッチされ得る。クラススイッチは、1つのIgGサブクラスを別のサブクラスに例えば、IgG1からIgG2に変換するために使用され得る。完全ヒトモノクローナル抗体は、ヒトフレームワーク領域を含む。そのヒトフレームワーク領域は、配列番号1または配列番号2これらの配列は、CDR配列ならびにフレームワーク配列を含むの一方または両方に開示されるフレームワーク領域を含み得る。しかしながら、それらのフレームワーク領域は、別の起源由来であることもできる。使用され得るフレームワーク配列の追加の例としては、本明細書中に参考として援用されるPCT公開番号WO2006/074071例えば、配列番号1~16を参照のことに開示されている重鎖および軽鎖のアミノ酸フレームワーク配列が挙げられる。重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、エンドプラスミン上のエピトープ決定基に結合する抗体フラグメント例えば、Fab、Fab’2、scFvおよびFvが、本開示によって包含される。これらの抗体フラグメントは、その抗原、すなわち、ヒトエンドプラスミンに特異的に結合する能力を保持し、ゆえに、それは、抗原結合フラグメントである。これらのフラグメントとしては:1Fab抗体分子の一価の抗原結合フラグメントを含み、ホール抗体をパパイン酵素で消化することによって作製され、インタクトな軽鎖および一方の重鎖の一部をもたらすことができる、フラグメント;2Fab’この抗体分子のフラグメントは、ホール抗体をペプシンで処理した後、還元することにより得られ、インタクトな軽鎖および重鎖の一部をもたらすことができる;抗体分子1つあたり2つのFab’フラグメントが得られる;3Fab’2ホール抗体をペプシン酵素で処理することによってその後の還元は行わない得ることができる、抗体のフラグメント;Fab’2は、2つのジスルフィド結合によって保持される2つのFab’フラグメントの二量体である;4Fv2本の鎖として発現される軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む遺伝的に操作されたフラグメント;および5単鎖抗体例えば、scFv遺伝的に融合された一本鎖分子として、好適なポリペプチドリンカーによって連結された軽鎖の可変領域、重鎖の可変領域を含む、遺伝的に操作された分子として定義される6単鎖抗体の二量体scFV2scFVの二量体として定義され、これはミニ抗体とも呼ばれるが挙げられる。これらのフラグメントを作製する方法は、当該分野で公知である例えば、HarlowandLane,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork,1988を参照のこと。実施形態のさらなる群において、上記抗体は、代表的には、約25kDaであり、各重鎖および各軽鎖あたり3つのCDRとともに完全な抗原結合部位を含む、Fv抗体である。これらの抗体を作製するために、VHおよびVLは、宿主細胞において2つの個別の核酸構築物から発現され得る。VHおよびVLは、隣接せずに発現される場合、Fv抗体の鎖は、代表的には、非共有結合性の相互作用によって保持される。しかしながら、これらの鎖は、希釈されると解離する傾向があるので、グルタルアルデヒド、分子間ジスルフィドまたはペプチドリンカーによってそれらの鎖を架橋する方法が開発されている。したがって、1つの例において、Fvは、ジスルフィド安定化FvdsFvであり得、ここで、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、ジスルフィド結合によって化学的に連結されている。追加の例において、Fvフラグメントは、ペプチドリンカーによって接続されたVH鎖およびVL鎖を含む。これらの単鎖抗原結合タンパク質scFvは、オリゴヌクレオチドによって接続されたVHドメインおよびVLドメインをコードするDNA配列を含む構造遺伝子を構築することによって調製される。その構造遺伝子は、発現ベクターに挿入され、それは、続いて大腸菌などの宿主細胞に導入される。その組換え宿主細胞は、2つのVドメインを橋渡しするリンカーペプチドを有する単一のポリペプチド鎖を合成する。scFvを作製するための方法は、当該分野で公知であるWhitlowら、Methods:aCompaniontoMethodsinEnzymology,Vol.2,97頁,1991;Birdら、Science242:423,1988;米国特許第4,946,778号;Packら、Bio/Technology11:1271,1993;およびSandhu,前出を参照のこと。単鎖抗体の二量体scFV2もまた企図される。抗体フラグメントは、抗体のタンパク分解性加水分解によって、またはそのフラグメントをコードするDNAの大腸菌内での発現によって、調製され得る。抗体フラグメントは、従来の方法によるホール抗体のペプシン消化またはパパイン消化によって得ることができる。例えば、抗体フラグメントは、ペプシンによる抗体の酵素的切断によって生成され、それにより、Fab’2と表される5Sフラグメントがもたらされ得る。このフラグメントは、チオール還元剤、および必要に応じて、ジスルフィド結合の切断から生じるスルフヒドリル基に対する保護基を用いてさらに切断され、それにより、3.5SFab’一価フラグメントがもたらされ得る。あるいは、ペプシンを用いた酵素的切断は、2つの一価Fab’フラグメントおよびFcフラグメントを直接生成する米国特許第4,036,945号および米国特許第4,331,647号ならびにそれらに含まれている参考文献;Nisonhoffら、Arch.Biochem.Biophys.89:230,1960;Porter,Biochem.J.73:119,1959;Edelmanら、MethodsinEnzymology,Vol.1,422頁,AcademicPress,1967;ならびにColiganらの2.8.1-2.8.10および2.10.1-2.10.4項を参照のこと。それらのフラグメントが、インタクトな抗体によって認識される抗原に結合する限り、抗体を切断する他の方法例えば、一価の軽鎖-重鎖フラグメントを形成する重鎖の分離、フラグメントのさらなる切断、または他の酵素的、化学的もしくは遺伝的手法も使用してよい。当業者は、ヒトエンドプラスミンに特異的に結合する抗体の保存的バリアントが作製され得ることを了解するだろう。dsFvフラグメントまたはscFvフラグメントなどの抗体フラグメントにおいて使用されるそのような保存的バリアントは、正しいフォールディングおよびVH領域とVL領域との間の安定化のために必要とされる不可欠なアミノ酸残基を保持し、その分子の低pIおよび低毒性を保つために残基の電荷特性を保持する。収率を高めるために、アミノ酸置換例えば、多くとも1つ、多くとも2つ、多くとも3つ、多くとも4つ、または多くとも5つのアミノ酸置換が、VHおよびVL領域において行われ得る。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的アミノ酸置換表は、当業者に周知である。以下の6つの群が、互いに保存的置換であると考えられるアミノ酸の例である:1アラニンA、セリンS、トレオニンT;2アスパラギン酸D、グルタミン酸E;3アスパラギンN、グルタミンQ;4アルギニンR、リジンK;5イソロイシンI、ロイシンL、メチオニンM、バリンV;および6フェニルアラニンF、チロシンY、トリプトファンW。IV.治療用部分および診断用部分における使用ヒトエンドプラスミンに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその機能的フラグメントは、治療方法および診断方法例えば、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんの処置および検出のための方法において使用され得る。治療的に使用する場合、それらの方法は、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がん例えば、膵臓腺癌の処置などのために、エンドプラスミンに特異的に結合する治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを被験体に投与する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、治療薬に結合体化され得る。免疫結合体としては、抗体への治療薬の共有結合が存在する分子が挙げられるが、これらに限定されない。治療薬は、特定の標的分子または標的分子を有する細胞に向けられた特定の生物学的活性を有する薬剤である。当業者は、治療薬が、様々な薬物例えば、ビンブラスチン、ダウノマイシンなど、細胞毒例えば、天然のまたは改変されたPseudomonas外毒素またはジフテリア毒素、それ自体が薬理学的組成物を含む被包剤例えば、リポソーム、放射性物質例えば、125I、32P、14C、3Hおよび35Sならびに他の標識、標的部分およびリガンドを含み得ることを認識するだろう。本明細書中に記載されるエンドプラスミン特異的ヒトモノクローナル抗体およびその抗原結合フラグメントと共に毒素を使用することにより、免疫毒素が作製され得る。例示的な毒素としては、リシン、アブリン、ジフテリア毒素およびそのサブユニット、ならびにボツリヌス毒素A~Fが挙げられる。これらの毒素は、商業的供給源例えば、SigmaChemicalCompany,St.Louis,MOから容易に入手可能である。企図される毒素には、本明細書中に記載される毒素のバリアントも含まれる例えば、米国特許第5,079,163号および同第4,689,401号を参照のこと参照のこと。1つの実施形態において、毒素は、Pseudomonas外毒素PE米国特許第5,602,095号である。本明細書中で使用されるとき、Pseudomonas外毒素とは、天然の天然に存在する完全長PEまたは改変されたPEのことを指す。そのような改変としては、ドメインIaの除去、ドメインIb、IIおよびIIIにおける様々なアミノ酸欠失、単一アミノ酸置換、ならびにカルボキシル末端における1つ以上の配列の付加が挙げられ得るが、これらに限定されない例えば、Siegallら、J.Biol.Chem.264:14256-14261,1989を参照のこと。1つの実施形態において、PEの細胞傷害性フラグメントは、天然のPEの少なくとも50、少なくとも75、少なくとも90または少なくとも95の細胞傷害性を保持する。いくつかの例において、その細胞傷害性フラグメントは、天然のPEよりも毒性である。天然のPseudomonas外毒素APEは、真核細胞におけるタンパク質合成を阻害する、Pseudomonasaeruginosaによって分泌される極めて活性な単量体タンパク質分子量66kDである。PEの作用方法は、伸長因子2EF-2のADP-リボシル化の不活性化である。その外毒素は、細胞傷害性を引き起こすように協調する3つの構造ドメインを含む。ドメイン1aは、細胞結合を媒介する。ドメインIIは、サイトゾルへの移行に関与し、ドメインIIIは、伸長因子2のADPリボシル化を媒介する。ドメインIbの機能は、不明である。本明細書中に記載されるモノクローナル抗体とともに使用されるPEには、天然の配列、天然の配列の細胞傷害性フラグメント、ならびに天然のPEの保存的に改変されたバリアントおよびその細胞傷害性フラグメントが含まれ得る。PEの細胞傷害性フラグメントには、標的細胞におけるその後のタンパク分解性プロセシングまたは他のプロセシングありまたはなしで細胞傷害性であるフラグメントが含まれる。PEの細胞傷害性フラグメントには、PE40、PE38およびPE35が含まれる。PEおよびそのバリアントのさらなる説明については、例えば、米国特許第4,892,827号;同第5,512,658号;同第5,602,095号;同第5,608,039号;同第5,821,238号;および同第5,854,044号;PCT公開番号WO99/51643;Paiら、Proc.NatlAcad.Sci.USA88:3358-3362,1991;Kondoら、J.Biol.Chem.263:9470-9475,1988;Pastanら、Biochim.Biophys.Acta1333:C1-C6,1997これらの各々が、本明細書中で参考として援用されるを参照のこと。本明細書中に記載される抗体およびその抗原結合フラグメントは、任意の数の異なる診断用化合物または治療用化合物を、表面上にエンドプラスミンを発現している細胞に標的化するためにも使用され得る。したがって、本開示の抗体は、細胞表面エンドプラスミンを発現している細胞に直接送達されるべき薬物に直接またはリンカーを介して付着され得る。治療薬としては、核酸、タンパク質、ペプチド、アミノ酸もしくは誘導体、糖タンパク質、放射性同位体、脂質、炭水化物または組換えウイルスのような化合物が挙げられる。核酸の治療用部分および診断用部分には、アンチセンス核酸、一本鎖または二重鎖DNAとの共有結合性架橋用の誘導体化オリゴヌクレオチド、および三重鎖形成オリゴヌクレオチドが含まれる。あるいは、抗エンドプラスミン抗体に連結される分子は、被包系例えば、治療用組成物例えば、薬物、核酸例えば、アンチセンス核酸を含むリポソームまたはミセル、または好ましくは循環器系への直接的な露出を遮蔽された別の治療用部分であり得る。抗体に付着されたリポソームを調製する手段は、当業者に周知である例えば、米国特許第4,957,735号;Connorら、Pharm.Ther.28:341-365,1985を参照のこと。本明細書中に開示される抗体は、さらなる治療薬に結合体化され得、そして/または連続投与もしくは同時投与を用いて追加の薬剤additionagentとともに使用され得る。特定の治療薬の選択は、特定の標的分子または標的細胞、および所望の生物学的作用に依存する。したがって、例えば、その治療薬は、特定の標的細胞の死をもたらすために使用される細胞毒であり得る。逆に、非致死性の生物学的応答の惹起が望まれる場合、その治療薬は、非致死性の薬理学的物質、または非致死性の薬理学的物質を含むリポソームに結合体化され得る。上記治療薬は、サイトカインまたはケモカインでもあり得る。サイトカインは、細胞間のメディエーターとして別の細胞に作用する、1つの細胞集団によって放出されるタンパク質またはペプチドのクラスである。サイトカインは、免疫調節物質として作用し得る。サイトカインの例としては、リンフォカイン、モノカイン、成長因子および従来のポリペプチドホルモンが挙げられる。したがって、実施形態は、インターフェロン例えば、IFN-α、IFN-βおよびIFN-γ;腫瘍壊死因子スーパーファミリーTNFSFメンバー;ヒト成長ホルモン;チロキシン;インスリン;プロインスリン;レラキシン;プロレラキシン;卵胞刺激ホルモンFSH;甲状腺刺激ホルモンTSH;黄体形成ホルモンLH;肝臓成長因子;プロスタグランジン、線維芽細胞成長因子;プロラクチン;胎盤性ラクトーゲン、OBタンパク質;TNF-α;TNF-β;インテグリン;トロンボポエチンTPO;NGF-βなどの神経成長因子;血小板成長因子;TGF-α;TGF-β;インスリン様成長因子-Iおよび-II;エリトロポイエチンEPO;マクロファージ-CSFM-CSFなどのコロニー刺激因子CSF;顆粒球-マクロファージ-CSFGM-CSF;ならびに顆粒球-CSFG-CSF;インターロイキンIL-1~IL-21、kit-リガンドもしくはFLT-3、アンジオスタチン、トロンボスポンジンまたはエンドスタチンを利用する。これらのサイトカインには、天然の起源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質、および天然配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。ケモカインもまた、本明細書中に開示される抗体に結合体化され得る。ケモカインは、主に化学誘引物質および特定の白血球細胞サブタイプのアクチベーターとして作用する小型およそ約4~約14kDaの誘導性の分泌型炎症促進性サイトカインのスーパーファミリーである。ケモカインの産生は、炎症性サイトカイン、成長因子および病原性の刺激によって誘導される。ケモカインタンパク質は、保存されたアミノ酸配列モチーフに基づいてサブファミリーアルファ、ベータおよびデルタに分けられ、アミノ末端に隣接する最初の2つのシステインの位置に基づいて4つの高度に保存された群CXC、CC、CおよびCX3Cに分類される。現在までに、50を超えるケモカインが発見されており、少なくとも18個のヒト7回膜貫通ドメイン7TMケモカインレセプターが存在する。有用なケモカインとしては、RANTES、MCAF、MCP-1およびフラクタルカインが挙げられるが、これらに限定されない。上記治療薬は、化学療法因子であり得る。1つの実施形態において、その化学療法因子は、放射性分子である。当業者は、有用な化学療法因子を容易に特定することができる例えば、Harrison’sPrinciplesofInternalMedicine,14theditionにおけるSlapakandKufe,PrinciplesofCancerTherapy,Chapter86;Abeloff,ClinicalOncology2nded.,著作権2000ChurchillLivingstone,IncにおけるPerryら、Chemotherapy,Ch.17;BaltzerL.,BerkeryR.eds:OncologyPocketGuidetoChemotherapy,2nded.St.Louis,Mosby-YearBook,1995;FischerDS,KnobfMF,DurivageHJeds:TheCancerChemotherapyHandbook,4thed.St.Louis,Mosby-YearBook,1993を参照のこと。化学療法因子には、当業者に公知であるもの5-フルオロウラシル5-FU、アザチオプリン、シクロパミン、シクロホスファミド、代謝拮抗物質例えば、フルダラビン、抗悪性腫瘍薬例えば、エトポシド、ドキソルビシン、メトトレキサートおよびビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、テモゾロマイド、PARPインヒビターおよびタキサン例えば、タキソールが挙げられるがこれらに限定されないが含まれる。ラパマイシンもまた、化学療法因子として使用されている。エフェクター分子例えば、放射性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカインおよび化学療法因子であるがこれらに限定されないは、当業者に公知の任意の数の手段を用いて、目的の抗体に連結され得る。共有結合性の付着手段と非共有結合性の付着手段の両方を使用してよい。エフェクター分子を抗体に付着するための手順は、エフェクターの化学構造に応じて変化する。ポリペプチドは、代表的には、抗体上の好適な官能基との反応のために利用可能な種々の官能基;例えば、カルボン酸COOH、遊離アミン-NH2またはスルフヒドリル-SH基を含み、それにより、エフェクター分子の結合がもたらされる。あるいは、抗体は、さらなる反応性の官能基を露出するためにまたは付着するために誘導体化される。その誘導体化は、いくつかのリンカー分子例えば、PierceChemicalCompany,Rockford,ILから入手可能なもののうちのいずれかの付着を含み得る。そのリンカーは、抗体をエフェクター分子に接続するために使用される任意の分子であり得る。そのリンカーは、抗体とエフェクター分子の両方と共有結合を形成することができる。好適なリンカーは、当業者に周知であり、それらとしては、直鎖もしくは分枝鎖の炭素リンカー、複素環式炭素リンカーまたはペプチドリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。抗体およびエフェクター分子がポリペプチドである場合、リンカーは、その側基を介して例えば、システインとのジスルフィド結合を介して、構成要素であるアミノ酸に、または末端のアミノ酸のアルファ炭素アミノ基およびカルボキシル基に、接続され得る。いくつかの状況では、免疫結合体がその標的部位に達したときに、エフェクター分子が抗体から取り除かれることが望ましい。それゆえ、これらの状況では、免疫結合体は、標的部位の近傍で切断可能な結合を含み得る。抗体からエフェクター分子を放出するリンカーの切断は、酵素活性、または免疫結合体が標的細胞内もしくは標的部位の近傍において供される条件によって促され得る。種々の放射性診断化合物、放射性治療化合物、標識例えば、酵素または蛍光分子薬物、毒素、ポリペプチドおよび他の物質を抗体に付着するために報告されている多数の方法に照らして、当業者は、所与の物質を抗体または他のポリペプチドに付着するために適した方法を決定することができる。本明細書中に開示されるエンドプラスミンに特異的に結合する抗体または抗体フラグメントは、誘導体化され得るか、または別の分子例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結され得る。一般に、それらの抗体またはその一部は、エンドプラスミンへの結合が誘導体化または標識によって悪影響を受けないように、誘導体化される。例えば、その抗体は、1つ以上の他の分子実体例えば、別の抗体例えば、二重特異性抗体またはダイアボディ、検出物質、医薬品、および/またはその抗体もしくは抗体部分と別の分子例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグとの会合を媒介し得るタンパク質もしくはペプチドに機能的に連結され得る化学的結合、遺伝的融合、非共有結合性会合またはその他によって。誘導体化抗体の1タイプは、2つ以上の抗体二重特異性抗体を作製するような、同じタイプまたは異なるタイプの抗体を架橋することによって作製される。好適な架橋剤としては、適切なスペーサーによって分断された2つの明確に反応性の基を有するヘテロ二官能性である架橋剤例えば、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、またはホモ二官能性である架橋剤例えば、ジスクシンイミジルスベレートが挙げられる。そのようなリンカーは、PierceChemicalCompany,Rockford,Illから入手可能である。エンドプラスミンを検出するための方法エンドプラスミンを発現している細胞例えば、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんの細胞を検出するための方法を含むが、本明細書中に提供される。これらの方法は、被験体由来のサンプルを、本明細書中に開示されるようなエンドプラスミンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程を包含し得る。その方法は、原発腫瘍を検出するために使用され得るか、または転移を検出するために使用され得る。いくつかの実施形態において、被験体におけるがんを検出するためまたはがんの診断を確認するための方法が提供される。その方法は、被験体由来の生物学的サンプルを、エンドプラスミンに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程、および単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントとサンプルとの結合を検出する工程を包含する。単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントとコントロールサンプルとの結合と比較したときの、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントとサンプルとの結合の増加は、その被験体におけるがんを検出するか、またはその被験体におけるがんの診断を確認する。そのコントロールは、がんを有しないと判明している被験体由来のサンプル、または標準的な値であり得る。上記サンプルは、任意のサンプルであり得、それらとしては、バイオプシー、オートプシーおよび病理検体由来の組織が挙げられるがこれらに限定されない。生物学的サンプルには、組織の切片、例えば、組織学的目的のために採取された凍結切片も含まれる。生物学的サンプルには、さらに、血液、血清、血漿、痰および髄液などの体液が含まれる。いくつかの実施形態において、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体一次抗体firstantibodyは、標識されておらず、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体に結合し得る二次抗体または他の分子が、標識されている。当業者に周知であるように、特定の種およびクラスの一次抗体に特異的に結合できる二次抗体が選択される。例えば、一次抗体がヒトIgGである場合、二次抗体は、抗ヒトIgGであり得る。抗体に結合し得る他の分子としては、プロテインAおよびプロテインGこの両方ともが商業的に入手可能であるが挙げられるがこれらに限定されない。エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な部分で標識され得る。有用な検出物質としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、5-ジメチルアミン-1-ナフタレンスルホニルnapthalenesulfonylクロリド、フィコエリトリン、ランタニド燐光体などをはじめとした蛍光性の化合物が挙げられる。ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質GFP、黄色蛍光タンパク質YFPなどの生物発光マーカーもまた有用である。抗体は、検出に有用な酵素例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼなどでも標識され得る。抗体が検出可能な酵素で標識されるとき、識別され得る反応産物を産生するためにその酵素が使用する追加の試薬を加えることによってその抗体は検出され得る。例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼという物質が存在するとき、過酸化水素およびジアミノベンジジンを加えることにより、視覚的に検出可能な有色の反応産物がもたらされる。抗体は、ビオチンでも標識され得、そしてそれは、アビジンまたはストレプトアビジンの結合を間接的に測定することによって検出され得る。アビジン自体が、酵素または蛍光標識で標識され得ることに注意すべきである。抗体は、ガドリニウムなどの磁性物質で標識され得る。抗体は、ランタニド例えば、ユウロピウムおよびジスプロシウムおよびマンガンでも標識され得る。超常磁性酸化鉄などの常磁性粒子もまた、標識として有用である。抗体は、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグでも標識され得る。いくつかの実施形態において、標識は、潜在的な立体障害を減少させるために様々な長さのスペーサーアームによって付着される。抗体は、放射標識されたアミノ酸でも標識され得る。その放射標識は、診断目的と治療目的の両方のために使用され得る。例えば、その放射標識は、X線、発光スペクトル、磁気共鳴画像MRI、コンピュータcommuted断層撮影CTスキャン、ポジトロン放出断層撮影PETまたは他の診断法によって、エンドプラスミンを検出するために使用され得る。ポリペプチドに対する標識の例としては、以下の放射性同位体または放射性ヌクレオチド:35S、11C、13N、15O、18F、19F、99mTc、131I、3H、14C、15N、90Y、99Tc、111Inおよび125Iが挙げられるが、これらに限定されない。また、抗体は、化学基例えば、ポリエチレングリコールPEG、メチル基もしくはエチル基または炭水化物基を用いて誘導体化され得る。これらの基は、その抗体の生物学的特徴を改善するため例えば、血清半減期を延長するため、または組織結合性を高めるために有用であり得る。また、本明細書中に記載される抗体は、検出可能な標識に共有結合的または非共有結合的に連結され得る。そのように使用するのに適した検出可能な標識には、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的または化学的な手段によって検出可能な任意の組成物が含まれる。有用な標識としては、磁気ビーズ、蛍光色素例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン、緑色蛍光タンパク質など、放射標識例えば、3H、125I、35S、14Cまたは32P、酵素例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびELISAにおいて通常使用されるその他のものおよび比色標識例えば、コロイド金または色ガラス、またはプラスチック例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなどのビーズが挙げられる。これらの抗体は、蛍光励起細胞分取FACS、免疫組織化学、放射免疫アッセイRIAおよび酵素結合免疫吸着測定法enzyme-linkedimmunosorbantassaysELISAをはじめとした種々のイムノアッセイにおいて使用され得る。そのような標識を検出する手段は、当業者に周知である。したがって、例えば、放射標識は、写真フィルムまたはシンチレーションカウンターを用いて検出され、蛍光マーカーは、光検出器を用いて検出されることにより、放射された照度が検出され得る。酵素標識は、代表的には、その酵素に基質を提供し、その基質に対する酵素の作用によって産生された反応産物を検出することによって検出され、比色標識は、単純に有色の標識を可視化することによって検出される。1つの実施形態において、血液サンプルなどの生物学的サンプル中のエンドプラスミンを検出するためのキットが提供される。ポリペプチドを検出するためのキットは、代表的には、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体例えば、本明細書中に開示される抗体のいずれかを備え得る。いくつかの実施形態において、Fvフラグメントなどの抗体フラグメントが、そのキットに含められる。インビボで使用するために、その抗体は、scFvフラグメントであり得る。さらなる実施形態において、その抗体は、標識されている例えば、蛍光標識、放射標識または酵素標識で。1つの実施形態において、キットは、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体を使用する手段を開示している指示材料を備える。その指示材料は、書面、電子的形態例えば、コンピュータディスケットまたはコンパクトディスク、または視覚によるもの例えば、ビデオファイルであり得る。そのキットは、そのキットが意図されている特定の用途を容易にする追加の構成要素も備え得る。したがって、例えば、そのキットは、標識を検出する手段例えば、酵素標識に対する酵素基質、蛍光標識を検出するためのフィルターセット、二次抗体などの適切な二次標識などをさらに備え得る。そのキットは、特定の方法を実施するために日常的に使用される緩衝液および他の試薬をさらに備え得る。そのようなキットおよび適切な内容物は、当業者に周知である。1つの実施形態において、診断キットは、イムノアッセイを含む。イムノアッセイの詳細は、使用される特定の形式によって変化し得るが、生物学的サンプル中のエンドプラスミンを検出する方法は、通常、免疫学的に反応性の条件下でエンドプラスミンと特異的に反応する抗体とその生物学的サンプルとを接触させる工程を包含する。その抗体は、免疫学的に反応性の条件下で特異的に結合することが可能になることで免疫複合体を形成し、その免疫複合体結合した抗体の存在が、直接または間接的に検出される。V.エンドプラスミン抗体のポリヌクレオチドおよびポリペプチド本明細書中に提供されるポリペプチド抗体、その抗原結合フラグメント、免疫結合体および融合タンパク質を含むがこれらに限定されないをコードする核酸分子ポリヌクレオチドとも称されるは、本明細書中に提供されるアミノ酸配列、当該分野において入手可能な配列および遺伝暗号を用いて、当業者によって容易に作製され得る。さらに、当業者は、機能的に等価な核酸例えば、配列が異なるが同じエフェクター分子または抗体配列をコードする核酸を含む種々のクローンを容易に構築することができる。したがって、抗体、結合体および融合タンパク質をコードする核酸が、本明細書中に提供される。いくつかの実施形態において、エンドプラスミンヒトモノクローナル抗体は、配列番号3を含むヌクレオチド配列によってコードされるVHドメインを有する。いくつかの実施形態において、エンドプラスミンヒトモノクローナル抗体は、配列番号4を含むヌクレオチド配列によってコードされるVLドメインを有する。例示的な核酸配列は、下記に提供される:エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはエンドプラスミンに特異的に結合するその抗原結合フラグメントをコードする核酸配列は、例えば、適切な配列のクローニング、またはNarangら、Meth.Enzymol.68:90-99,1979のホスホトリエステル法;Brownら、Meth.Enzymol.68:109-151,1979のホスホジエステル法;Beaucageら、Tetra.Lett.22:1859-1862,1981のジエチルホスホルアミダイト法;例えば、Needham-VanDevanterら、Nucl.AcidsRes.12:6159-6168,1984に記載されているように、例えば自動合成装置を用いた、BeaucageCaruthers,Tetra.Letts.2220:1859-1862,1981に記載されている固相ホスホルアミダイトトリエステル法;および米国特許第4,458,066号の固体支持体法などの方法による直接的な化学的合成を含む任意の好適な方法によって調製され得る。化学的合成は、一本鎖のオリゴヌクレオチドを生成する。これは、相補的な配列とのハイブリダイゼーション、またはその一本鎖を鋳型として使用してDNAポリメラーゼを用いた重合によって二本鎖DNAに変換され得る。当業者は、DNAの化学的合成が、通常、約100塩基の配列に限定されるが、それより長い配列は、より短い配列のライゲーションによって得られる場合があることを認識するだろう。エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはエンドプラスミンに特異的に結合するその機能的フラグメントをコードする例示的な核酸は、クローニング法によって調製され得る。適切なクローニング法および配列決定法の例、ならびに多くのクローニングの実施を通じて当業者を導くのに十分な指示は、Sambrookら、前出、BergerandKimmeleds.,前出およびAusubel,前出に見られる。生物学的試薬および実験機器の製造者からの製品情報もまた、有用な情報を提供する。そのような製造者としては、SIGMAChemicalCompanySaintLouis,MO、RDSystemsMinneapolis,MN、PharmaciaAmershamPiscataway,NJ、CLONTECHLaboratories,Inc.PaloAlto,CA、ChemGenesCorp.、AldrichChemicalCompanyMilwaukee,WI、GlenResearch,Inc.、GIBCOBRLLifeTechnologies,Inc.Gaithersburg,MD、FlukaChemica-BiochemikaAnalytikaFlukaChemieAG,Buchs,Switzerland、InvitrogenCarlsbad,CAおよびAppliedBiosystemsFosterCity,CAならびに当業者に公知の他の多くの商業的供給源が挙げられる。天然のエフェクター分子EMまたは抗エンドプラスミン抗体をコードする核酸は、本開示のEM、抗体または免疫結合体を形成するために改変され得る。部位特異的突然変異誘発による改変が、当該分野で周知である。核酸は、増幅法によっても調製され得る。増幅法としては、ポリメラーゼ連鎖反応PCR、リガーゼ連鎖反応LCR、転写ベースの増幅系TAS、自家持続配列複製法3SRが挙げられる。多種多様のクローニング法、宿主細胞およびインビトロ増幅法が、当業者に周知である。1つの実施形態において、免疫結合体は、ヒトエンドプラスミン特異的モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするcDNAを、EMをコードするcDNAを含むベクターに挿入することによって調製される。その挿入は、その抗体およびEMが、機能的な抗体領域および機能的なEM領域を含む1つの連続したポリペプチドとしてインフレームで読まれるように、行われる。1つの実施形態において、EM、標識または酵素をコードするcDNAは、そのEM、標識または酵素が抗体のカルボキシル末端に配置されるように、その抗体にライゲートされる。別の実施形態において、そのEM、標識または酵素は、抗体のアミノ末端に配置される。別の例では、EM、標識または酵素をコードするcDNAは、そのEM、標識または酵素が重鎖可変領域のカルボキシル末端に配置されるように、抗体の重鎖可変領域にライゲートされる。続いて、その重鎖可変領域は、ジスルフィド結合を用いてその抗体の軽鎖可変領域にライゲートされ得る。なおも別の例では、EM、標識または酵素をコードするcDNAは、そのEM、標識または酵素が軽鎖可変領域のカルボキシル末端に配置されるように、抗体の軽鎖可変領域にライゲートされる。続いて、その軽鎖可変領域は、ジスルフィド結合を用いてその抗体の重鎖可変領域にライゲートされ得る。いったん、EM、抗エンドプラスミン抗体、その抗原結合フラグメントまたは免疫結合体をコードする核酸が単離され、クローニングされると、組換え的に操作された細胞例えば、細菌、植物、酵母、昆虫および哺乳動物の細胞において所望のタンパク質が発現され得る。当業者は、大腸菌、他の細菌宿主、酵母および様々な高等真核細胞例えば、COS、CHO、HeLaおよびミエローマ細胞株を含む、タンパク質の発現のために利用可能な数多くの発現系に精通していると予想される。上記抗体またはそのフラグメントをコードする1つ以上のDNA配列は、好適な宿主細胞にDNAを移行させることによってインビトロにおいて発現され得る。その細胞は、原核生物または真核生物の細胞であり得る。その用語は、対象の宿主細胞の任意の子孫も包含する。複製中に生じる変異が存在し得るので、すべての子孫が親細胞と同一でない可能性があることが理解される。安定的な移行外来DNAが宿主において持続的に維持されることを意味するの方法は、当該分野で公知である。目的の抗体を発現するハイブリドーマもまた、本開示によって包含される。本明細書中に記載される単離された抗体および抗体フラグメントをコードする核酸の発現は、DNAまたはcDNAを異種プロモーター構成的または誘導性であるに作動可能に連結した後、それを発現カセットに組み込むことによって達成され得る。それらのカセットは、原核生物または真核生物における複製および組み込みに好適であり得る。代表的な発現カセットは、上記タンパク質をコードするDNAの発現の制御に有用な特定の配列を含む。例えば、その発現カセットは、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーターおよび翻訳ターミネーター、開始配列、タンパク質をコードする遺伝子の前に存在する開始コドンすなわち、ATG、イントロンに対するスプライシングシグナル、mRNAの適正な翻訳を可能にするその遺伝子の正しい読み枠の維持、および終止コドンを含み得る。クローニングされた遺伝子の高レベルの発現を得るために、転写を指示する強力なプロモーター、翻訳開始のためのリボソーム結合部位、および転写/翻訳ターミネーターを最低限含む発現カセットを構築することが望ましい。大腸菌の場合、これは、プロモーター例えば、T7、trp、lacまたはラムダプロモーター、リボソーム結合部位、および好ましくは転写終結シグナルを含む。真核細胞の場合、調節配列は、例えば、免疫グロブリン遺伝子、SV40またはサイトメガロウイルスに由来する、プロモーターおよび/またはエンハンサー、ならびにポリアデニル化配列を含み得、さらにスプライスドナー配列およびアクセプター配列を含み得る。上記カセットは、周知の方法例えば、大腸菌の場合は形質転換またはエレクトロポレーション、および哺乳動物細胞の場合はリン酸カルシウム処理、エレクトロポレーションまたはリポフェクションによって、選択された宿主細胞に移入され得る。それらのカセットによって形質転換された細胞は、そのカセットに含まれる遺伝子例えば、amp、gpt、neoおよびhyg遺伝子によって付与された抗生物質に対する耐性によって選択され得る。宿主が真核生物であるとき、上記のようなリン酸カルシウム共沈物としてのDNAのトランスフェクションの方法、従来の機械的手順例えば、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソームに包まれたプラスミドの挿入またはウイルスベクターが使用され得る。また、真核細胞は、抗体、標識された抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列と、選択可能な表現型をコードする第2の外来DNA分子例えば、単純ヘルペスチミジンキナーゼ遺伝子とで同時形質転換され得る。別の方法は、真核生物ウイルスベクター例えば、サルウイルス40SV40またはウシパピローマウイルスを使用することにより、真核細胞を一過性に感染させるかまたは形質転換し、タンパク質を発現させる例えば、EukaryoticViralVectors,ColdSpringHarborLaboratory,Gluzmaned.,1982を参照のこと。当業者は、発現系例えば、高等真核細胞例えば、COS、CHO、HeLaおよびミエローマ細胞株を含む細胞においてタンパク質を産生する際に有用なプラスミドおよびベクターを容易に使用することができる。本明細書中に記載されるポリペプチドすなわち、ヒトエンドプラスミン特異的モノクローナル抗体またはその抗体を含む免疫結合体をコードする核酸に対して、その生物学的活性を低下させずに、改変が行われ得る。いくつかの改変は、標的化分子のクローニング、発現または融合タンパク質への組み込みを促進するように行われ得る。そのような改変は、当業者に周知であり、それらとしては、例えば、終止コドン、開始部位を提供するためにアミノ末端に付加されるメチオニン、好都合に配置される制限酵素認識部位を作製するためにいずれかの末端に配置される追加のアミノ酸、または精製工程において役立つ追加のアミノ酸例えば、ポリHisが挙げられる。組換え法に加えて、本開示の免疫結合体、エフェクター部分および抗体は、当該分野で周知の標準的なペプチド合成法を用いることによっても、全体的にまたは部分的に構築され得る。組換え免疫結合体、抗体および/またはエフェクター分子は、いったん発現されると、当該分野の標準的な手順硫安塩析、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィーなどを含むに従って精製され得るR.Scopes,PROTEINPURIFICATION,Springer-Verlag,N.Y.,1982を広く参照のこと。その抗体、免疫結合体およびエフェクター分子は、100純粋である必要はない。いったん、要望どおり部分的にまたは均一に治療的に使用される場合精製されると、そのポリペプチドは、エンドトキシンを実質的に含むべきでない。大腸菌などの細菌から単鎖抗体を発現するための方法および/または適切な活性型単鎖抗体を含むにリフォールディングする方法は、報告されており、周知であり、本明細書中に開示される抗体に適用可能である。Buchnerら、Anal.Biochem.205:263-270,1992;Pluckthun,Biotechnology9:545,1991;Huseら、Science246:1275,1989およびWardら、Nature341:544,1989すべてが本明細書中で参考として援用されるを参照のこと。しばしば、大腸菌または他の細菌由来の機能的な異種タンパク質が、封入体から単離されるが、それは、強力な変性剤を用いた可溶化およびその後のリフォールディングを必要とする。当該分野で周知であるように、ジスルフィド結合を引き離すためには、可溶化工程中に還元剤が存在しなければならない。還元剤を含む例示的な緩衝液は:0.1MTrispH8、6Mグアニジン、2mMEDTA、0.3MDTEジチオエリトリトールである。ジスルフィド結合の再酸化は、Saxenaら、Biochemistry9:5015-5021,1970本明細書中で参考として援用されるに記載されているように、また、特に、Buchnerら、前出に記載されているように、還元型および酸化型の低分子量チオール試薬の存在下において生じ得る。再生は、代表的には、変性され還元されたタンパク質をリフォールディング緩衝液に希釈すること例えば、100倍によって達成される。例示的な緩衝液は、0.1MTris,pH8.0、0.5ML-アルギニン、8mM酸化型グルタチオンGSSGおよび2mMEDTAである。2本鎖抗体twochainantibody精製プロトコルに対する変法として、重鎖領域および軽鎖領域は、別々に可溶化され、還元され、次いで、リフォールディング溶液中で混和される。これらの2つのタンパク質が、一方のタンパク質が他方に対して5倍モル濃度過剰であることを超えないようなモル比で混合されるとき、例示的な収量が得られる。酸化還元シャフリングが完了した後、過剰な酸化型グルタチオンまたは他の低分子量の酸化化合物が、リフォールディング溶液に加えられ得る。組換え法に加えて、本明細書中に開示される抗体、標識抗体およびそれらの抗原結合フラグメントは、標準的なペプチド合成法を用いることによっても、全体的にまたは部分的に構築され得る。約50アミノ酸長未満のポリペプチドの固相合成は、その配列のC末端のアミノ酸を不溶性の支持体に付着した後、その配列における残りのアミノ酸を連続的に付加することによって、達成され得る。固相合成のための手法は、BaranyMerrifield,ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology.Vol.2:SpecialMethodsinPeptideSynthesis,PartA.pp.3-284;Merrifieldら、J.Am.Chem.Soc.85:2149-2156,1963およびStewartら、SolidPhasePeptideSynthesis,2nded.,PierceChem.Co.,Rockford,Ill.,1984に記載されている。より長いタンパク質は、より短いフラグメントのアミノ末端とカルボキシル末端との縮合によって合成され得る。カルボキシル末端の活性化によってペプチド結合を形成する方法例えば、結合試薬N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドdicylohexylcarbodimideを使用することによる方法は、当該分野で周知である。VI.組成物および治療方法キャリア、およびエンドプラスミンに特異的に結合する抗体またはエンドプラスミンに特異的に結合するその抗原結合フラグメントの1つ以上を含む組成物が本明細書中に提供される。免疫結合体または免疫毒素を含む組成物も提供される。それらの組成物は、被験体に投与するための単位剤形で調製され得る。投与の量およびタイミングは、所望の目的を達成するために、処置している医師の判断による。その抗体は、全身性投与または局所例えば、腫瘍内投与のために製剤化され得る。1つの例において、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体は、静脈内投与などの非経口投与のために製剤化される。投与するための組成物は、水性キャリアなどの薬学的に許容され得るキャリアに溶解された、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体またはエンドプラスミンに特異的に結合するその機能的フラグメントの溶液を含み得る。種々の水性キャリア、例えば、緩衝食塩水などが使用され得る。これらの溶液は、滅菌されており、通常、望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌法によって滅菌され得る。それらの組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる薬学的に許容され得る補助物質、例えば、pH調整剤および緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含み得る。これらの製剤における抗体の濃度は、広く変動し得、選択される特定の投与様式および被験体の要望に従って、主に液量、粘度、体重などに基づいて選択され得る。静脈内投与用の代表的な薬学的組成物は、1日あたり被験体1人あたり約0.1~10mgの抗体を含む。特に、その薬剤が隔離された部位に投与される場合、および循環系またはリンパ系例えば、体腔または器官の管腔に投与されない場合、1日あたり被験体1人あたり0.1から約100mgまでの投薬量が使用され得る。投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に公知であるかまたは明らかであり、Remington’sPharmaceuticalScience,19thed.,MackPublishingCompany,Easton,PA1995のような刊行物に詳細に記載されている。抗体は、凍結乾燥された形態で提供され得、投与前に滅菌水で再水和され得るが、それらは、既知濃度の滅菌された溶液としても提供される。次いで、その抗体溶液は、0.9塩化ナトリウム,USPを含む輸液バッグに加えられ、そして代表的には、0.5~15mg/kg体重の投与量で投与される。1997年のRITUXAN登録商標の承認以来、米国で販売されている抗体薬の投与について当該分野においてかなりの経験が入手可能である。抗体は、静脈内プッシュまたはボーラスではなく緩徐な注入によって投与され得る。1つの例において、より多い負荷用量が投与され、続いて、低レベルの維持用量が投与される。例えば、4mg/kgという最初の負荷用量が、およそ90分間にわたって注入された後、先の用量が十分に許容されていた場合、4~8週間にわたって1週間に1回、2mg/kgという維持用量が、30分間にわたって注入され得る。エンドプラスミンに特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそれらの免疫結合体は、がん細胞などの細胞の成長を遅延させるためまたは阻害するために投与され得る。これらの用途において、治療有効量の抗体が、がん細胞の成長、複製もしくは転移を阻害するのに十分な量、またはがんの徴候もしくは症状を阻害するのに十分な量で被験体に投与される。いくつかの実施形態において、それらの抗体は、転移の発生を阻害するためもしくは予防するために、または転移metasases例えば、微小転移、例えば、領域リンパ節への微小転移のサイズもしくは数を減少させるために、被験体に投与されるGotoら、Clin.CancerRes.1411:3401-3407,2008。好適な被験体には、エンドプラスミンを発現するがん例えば、メラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんであるがこれらに限定されないと診断された被験体が含まれ得る。ヒトエンドプラスミン特異的抗体の治療有効量は、その疾患の重症度および患者の全体的な健康状態に依存し得る。その抗体の治療有効量は、症状の主観的な軽減、または臨床医もしくは他の資格のある観察者が注目したときに客観的に識別可能な改善を提供する量である。これらの組成物は、別の化学療法因子と併せて、同時にまたは連続的に投与され得る。現在、多くの化学療法因子が当該分野で公知である。1つの実施形態において、その化学療法因子は、有糸分裂インヒビター、アルキル化剤、抗代謝産物、挿入性抗生物質、成長因子インヒビター、細胞周期インヒビター、酵素、トポイソメラーゼインヒビター、抗生存剤anti-survivalagents、生物学的応答変更物質、抗ホルモン剤、例えば、抗アンドロゲン剤、および抗血管新生剤からなる群から選択される。抗血管新生剤例えば、MMP-2マトリックス-メタロプロテイナーゼ2インヒビター、MMP-9マトリックス-メタロプロテイナーゼ9インヒビターおよびCOX-IIシクロオキシゲナーゼIIインヒビターが、本発明の化合物とともに使用され得る。有用なCOX-IIインヒビターの例としては、CELEBREXTMセレコキシブalecoxib、バルデコキシブおよびロフェコキシブが挙げられる。有用なマトリックスメタロプロテイナーゼインヒビターの例は、PCT公開番号WO96/331721996年10月24日公開、PCT公開番号WO96/275831996年3月7日公開、欧州特許出願番号97304971.11997年7月8日出願、欧州特許出願番号99308617.21999年10月29日出願、PCT公開番号WO98/076971998年2月26日公開、PCT公開番号WO98/035161998年1月29日公開、PCT公開番号WO98/349181998年8月13日公開、PCT公開番号WO98/349151998年8月13日公開、PCT公開番号WO98/337681998年8月6日公開、PCT公開番号WO98/305661998年7月16日公開、欧州特許公開606,0461994年7月13日公開、欧州特許公開931,7881999年7月28日公開、PCT公開番号WO90/057191990年5月31日公開、PCT公開番号WO99/529101999年10月21日公開、PCT公開番号WO99/528891999年10月21日公開、PCT公開番号WO99/296671999年6月17日公開、PCT国際出願番号PCT/IB98/011131998年7月21日出願、欧州特許出願番号99302232.11999年3月25日出願、米国特許第5,863,949号1999年1月26日発行、米国特許第5,861,510号1999年1月19日発行および欧州特許公開780,3861997年6月25日公開に記載されている。1つの例において、上記MMPインヒビターは、投与しても関節痛を誘導しない。別の例では、上記MMPインヒビターは、他のマトリックス-メタロプロテイナーゼ例えば、MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12およびMMP-13と比べてMMP-2および/またはMMP-9を選択的に阻害する。有用なMMPインヒビターのいくつかの特定の例は、AG-3340、RO32-3555、RS13-0830、3-[[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニル]-1-ヒドロキシカルバモイル-シクロペンチル-アミノ]-プロピオン酸;3-エキソ-3-[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニルアミノ]-8-オキサ-ビシクロ[3.2.1]オクタン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド;2R,3R1-[4-2-クロロ-4-フルオロ-ベンジルオキシ-ベンゼンスルホニル]-3-ヒドロキシ-3-メチル-ピペリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド;4-[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロ-ピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミド;3-[[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニル]-1-ヒドロキシカルバモイル-シクロブチル-アミノ]-プロピオン酸;4-[4-4-クロロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロ-ピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミド;R3-[4-4-クロロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロ-ピラン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド;2R,3R1-[4-4-フルオロ-2-メチル-ベンジルオキシ-ベンゼンスルホニル]-3-ヒドロキシ-3-メチル-ピペリジン-2-カルボン酸ヒドロキシアミド;3-[[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニル]-1-ヒドロキシカルバモイル-1-メチル-エチル-アミノ]-プロピオン酸;3-[[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニル]-4-ヒドロキシカルバモイル-テトラヒドロ-ピラン-4-イル-アミノ]-プロピオン酸;3-エキソ-3-[4-4-クロロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニルアミノ]-8-オキサビシクロoxaicyclo[3.2.1]オクタン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド;3-エンド-3-[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニルアミノ]-8-オキサ-ビシクロicyclo[3.2.1]オクタン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド;およびR3-[4-4-フルオロ-フェノキシ-ベンゼンスルホニルアミノ]-テトラヒドロ-フラン-3-カルボン酸ヒドロキシアミド;ならびに前記化合物の薬学的に許容され得る塩および溶媒和化合物である。エンドプラスミンに特異的に結合する抗体はまた、シグナル伝達インヒビター例えば、EGF-R上皮成長因子レセプター応答を阻害し得る物質、例えば、EGF-R抗体、EGF抗体、およびEGF-Rインヒビターである分子;VEGF血管内皮成長因子インヒビター、例えば、VEGFレセプターおよびVEGFを阻害し得る分子;ならびにerbB2レセプターインヒビター、例えば、erbB2レセプターに結合する有機分子または抗体、例えば、HERCEPTINTMGenentech,Inc.とともに使用され得る。EGF-Rインヒビターは、例えば、PCT公開番号WO95/199701995年7月27日公開、WO98/144511998年4月9日公開、WO98/024341998年1月22日公開および米国特許第5,747,498号1998年5月5日発行に記載されている。EGFR阻害物質としては、モノクローナル抗体C225および抗EGFR22MabImCloneSystemsIncorporated、ABX-EGFAbgenix/CellGenesys、EMD-7200MerckKgaA、EMD-5590MerckKgaA、MDX-447/H-477MedarexInc.およびMerckKgaA、ならびに化合物ZD-1834、ZD-1838およびZD-1839AstraZeneca、PKI-166Novartis、PKI-166/CGP-75166Novartis、PTK787Novartis、CP701Cephalon、レフルノミドPharmacia/Sugen、Cl-1033WarnerLambertParkeDavis、Cl-1033/PD183,805WarnerLambertParkeDavis、CL-387,785Wyeth-Ayerst、BBR-1611BoehringerMannheimGmbH/Roche、NaamidineABristolMyersSquibb、RC-3940-IIPharmacia、BIBX-1382BoehringerIngelheim、OLX-103MerckCo.、VRCTC-310VentechResearch、EGF融合毒素SeragenInc.、DAB-389Seragen/Lilgand、ZM-252808ImperialCancerResearchFund、RG-50864INSERM、LFM-A12ParkerHughesCancerCenter、WHI-P97ParkerHughesCancerCenter、GW-282974Glaxo、KT-8391KyowaHakkoおよびEGF-RVaccineYorkMedical/CentrodeImmunologiaMolecularCIMも挙げられるが、これらに限定されない。VEGFインヒビター、例えば、SU-5416およびSU-6668SugenInc.、SH-268ScheringならびにNX-1838NeXstarもまた、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体とともに使用され得る。VEGFインヒビターは、例えば、PCT公開番号WO99/244401999年5月20日公開、PCT国際出願PCT/IB99/007971999年5月3日出願、PCT公開番号WO95/216131995年8月17日公開、PCT公開番号WO99/614221999年12月2日公開、米国特許第5,834,504号1998年11月10日発行、PCT公開番号WO98/503561998年11月12日公開、米国特許第5,883,113号1999年3月16日発行、米国特許第5,886,020号1999年3月23日発行、米国特許第5,792,783号1998年8月11日発行、PCT公開番号WO99/103491999年3月4日公開、PCT公開番号WO97/328561997年9月12日公開、PCT公開番号WO97/225961997年6月26日公開、PCT公開番号WO98/540931998年12月3日公開、PCT公開番号WO98/024381998年1月22日公開、WO99/167551999年4月8日公開およびPCT公開番号WO98/024371998年1月22日公開に記載されている。いくつかの特定のVEGFインヒビターの他の例は、IM862CytranInc.;Genentech,Inc.の抗VEGFモノクローナル抗体;ならびにRibozymeおよびChiron製の合成リボザイムであるアンギオザイムangiozymeである。これらのおよび他のVEGFインヒビターが、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体とともに使用され得る。ErbB2レセプターインヒビター例えば、GW-282974GlaxoWellcomepicならびにモノクローナル抗体AR-209AronexPharmaceuticalsInc.および2B-1Chiron、例えば、PCT公開番号WO98/024341998年1月22日公開、PCT公開番号WO99/351461999年7月15日公開、PCT公開番号WO99/351321999年7月15日公開、PCT公開番号WO98/024371998年1月22日公開、PCT公開番号WO97/137601997年4月17日公開、PCT公開番号WO95/199701995年7月27日公開、米国特許第5,587,458号1996年12月24日発行および米国特許第5,877,305号1999年3月2日発行に示されているものは、本発明の化合物とさらに併用され得る。有用なErbB2レセプターインヒビターは、1999年1月27日出願の米国仮出願番号60/117,341および1999年1月27日出願の米国仮出願番号60/117,346にも記載されている。エンドプラスミンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、サイトカインもしくはケモカインとともに使用され得、そして/またはそれらに結合体化され得るか、あるいはサイトカインもしくはケモカインに結合体化され得る。例示的なサイトカインとしては、インターフェロンIFN例えば、IFN-α、IFN-βおよびIFN-γ;腫瘍壊死因子スーパーファミリーTNFSFメンバー;ヒト成長ホルモン;チロキシン;インスリン;プロインスリン;レラキシン;プロレラキシン;卵胞刺激ホルモンFSH;甲状腺刺激ホルモンTSH;黄体形成ホルモンLH;肝臓成長因子;プロスタグランジン、線維芽細胞成長因子;プロラクチン;胎盤性ラクトーゲン、OBタンパク質;腫瘍壊死因子tumornecrosisfactionTNF-α;TNF-β;インテグリン;トロンボポエチンTPO;神経成長因子NGF、例えば、NGF-β;血小板成長因子;トランスフォーミング成長因子TGF-α;TGF-β;インスリン様成長因子-Iおよび-II;エリトロポイエチンEPO;コロニー刺激因子CSF、例えば、マクロファージ-CSFM-CSF;顆粒球-マクロファージ-CSFGM-CSF;および顆粒球-CSFG-CSF;インターロイキンIL-1~IL-21、kit-リガンドまたはFLT-3、アンジオスタチン、トロンボスポンジンならびにエンドスタチンが挙げられるが、これらに限定されない。好適なケモカインとしては、RANTES、MCAF、MCP-1およびフラクタルカインが挙げられるが、これらに限定されない。メラノーマなどのがんを処置する場合、本明細書中に開示される抗体は、外科的処置、または別の治療薬ダカルバジンDTICとも呼ばれる、テモゾロマイド、PARPインヒビターまたはインターロイキン-2IL-2もしくはインターフェロン、例えば、インターフェロンIFN、あるいはこれらの薬剤の組み合わせを含むとともに使用され得る。表在型メラノーマの処置の場合、それらの抗体は、イミキモドとともに使用され得る。頭頸部扁平上皮癌の処置の場合、本明細書中に提供される抗体は、外科術、放射線治療、化学療法、他の抗体例えば、セツキシマブおよびベバシズマブまたは小分子治療薬例えば、エルロチニブとともに使用され得る。上記組成物の単回投与または複数回投与は、患者が必要とし、許容する投与量および頻度に応じて投与される。いかなる事象においても、その組成物は、患者を効率的に処置するのに十分な量の本明細書中に開示される少なくとも1つの抗体またはその抗原結合フラグメントを提供するべきである。その投与量は、1回投与され得るが、治療結果が達成されるまでまたは副作用が治療の中止の根拠となるまで周期的に適用され得る。1つの例において、ある用量の抗体が、1日おきに30分間注入される。この例では、約1~約10用量が、投与され得る例えば、3または6用量が1日おきに投与され得る。さらなる例では、約5~約10日間にわたって持続注入が行われる。所望の治療結果が達成されるまで、被験体は、毎月などの一定間隔で処置され得る。一般に、その用量は、患者に対して許容できない毒性をもたらさずに、疾患の症状または徴候を処置するかまたは回復させるのに十分である。制御放出の非経口製剤が、埋没物、油性注射または微粒子系として作製され得る。タンパク質送達系の概観については、本明細書中で参考として援用されるBanga,A.J.,TherapeuticPeptidesandProteins:Formulation,Processing,andDeliverySystems,TechnomicPublishingCompany,Inc.,Lancaster,PA,1995を参照のこと。微粒子系には、ミクロスフェア、微小粒子、マイクロカプセル、ナノカプセル、ナノスフェアおよびナノ粒子が含まれる。マイクロカプセルは、細胞毒または薬物などの治療用タンパク質を中央のコアとして含む。ミクロスフェアでは、治療薬は、粒子全体に分散されている。約1μmより小さい粒子、ミクロスフェアおよびマイクロカプセルは、一般にそれぞれナノ粒子、ナノスフェアおよびナノカプセルと称される。毛細血管は、およそ5μmの直径を有するので、ナノ粒子だけが静脈内に投与される。微小粒子は、代表的には、直径がおよそ100μmであり、皮下または筋肉内に投与される。例えば、Kreuter,J.,ColloidalDrugDeliverySystems,J.Kreuter,ed.,MarcelDekker,Inc.,NewYork,NY,pp.219-3421994;およびTiceTabibi,TreatiseonControlledDrugDelivery,A.Kydonieus,ed.,MarcelDekker,Inc.NewYork,NY,pp.315-339,1992その両方が本明細書中で参考として援用されるを参照のこと。本明細書中に開示される抗体組成物のイオン制御放出のために、ポリマーが使用され得る。制御された薬物送達において使用するための様々な分解可能および分解不可能な重合体マトリックスが当該分野で公知であるLanger,AccountsChem.Res.26:537-542,1993。例えば、ブロック共重合体であるポロキサマーpolaxamer407は、低温では粘稠性であるが流動性の液体として存在するが、体温では半固体のゲルを形成する。それは、組換えインターロイキン-2およびウレアーゼの製剤化および持続性送達にとって有効なビヒクルであると示されているJohnstonら、Pharm.Res.9:425-434,1992;およびPecら、J.Parent.Sci.Tech.442:58-65,1990。あるいは、ヒドロキシアパタイトは、タンパク質の制御放出のためのマイクロキャリアとして使用されているIjntemaら、Int.J.Pharm.112:215-224,1994。さらに別の態様では、リポソームは、脂質のカプセルに入っている薬物の制御放出ならびに薬物標的化のために使用されるBetageriら、LiposomeDrugDeliverySystems,TechnomicPublishingCo.,Inc.,Lancaster,PA1993。治療用タンパク質の制御された送達のためのさらなる系が数多く知られている米国特許第5,055,303号;米国特許第5,188,837号;米国特許第4,235,871号;米国特許第4,501,728号;米国特許第4,837,028号;米国特許第4,957,735号;米国特許第5,019,369号;米国特許第5,055,303号;米国特許第5,514,670号;米国特許第5,413,797号;米国特許第5,268,164号;米国特許第5,004,697号;米国特許第4,902,505号;米国特許第5,506,206号;米国特許第5,271,961号;米国特許第5,254,342号および米国特許第5,534,496号を参照のこと。エフェクター分子に共有結合的に連結された、エンドプラスミンに特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、放射免疫療法または放射免疫ガイド下手術をはじめとした種々の目的のために使用され得る。例えば、エンドプラスミン抗体は、放射性同位元素に連結され得、そしてエンドプラスミンを発現している腫瘍を処置する免疫療法において使用され得る。放射性同位元素に共有結合的に連結されたヒトエンドプラスミン抗体は、放射免疫ガイド下手術において腫瘍の位置を突き止めるために有用であり、その結果、その腫瘍を外科的に除去することができる。1つの実施形態において、約10mCiの放射標識されたヒトエンドプラスミンモノクローナル抗体が、被験体に投与される。他の実施形態において、約15mCi、約20mCi、約50mCi、約75mCiまたは約100mCiの放射標識されたヒトエンドプラスミンモノクローナル抗体が、被験体に投与される。他の実施形態において、約100mCi~約100mCiの放射標識されたradiolabledヒトエンドプラスミンモノクローナル抗体が、被験体に投与される。被験体における腫瘍をインビボで検出する方法は、放射性同位元素などのエフェクター分子と複合体化された、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメントの投与を包含する。投与された放射標識抗体が腫瘍の位置を突き止めるのを可能にするのに十分な時間が経過した後、その腫瘍は検出される。1つの特定の非限定的な例において、放射標識された免疫複合体は、手持ち式のガンマ検出プローブを用いて検出される。いくつかの実施形態において、その腫瘍は、MRI、CTスキャンまたはPETスキャンによって検出される。エンドプラスミンを発現している原発腫瘍、転移した腫瘍または細胞が検出され得る。例えば、放射性同位元素などのエフェクター分子と複合体化されたヒトエンドプラスミンモノクローナル抗体が、外科術または処置の前に被験体に投与される。1つの特定の実施形態において、検出工程が外科術の前に行われることにより、腫瘍の位置が突き止められる。別の実施形態において、検出工程は、放射免疫ガイド下手術におけるように、外科術中に行われることにより、例えば、腫瘍の位置が検出された後、除去される。放射性同位元素などのエフェクター分子と複合体化されたヒトエンドプラスミンモノクローナル抗体は、外科術または処置の後にも被験体に投与され得、それにより、その処置の有効性が判定される例えば、腫瘍の完全な除去が保証されるか、または腫瘍の再発が検出される。したがって、それらの抗体は、治療薬として例えば、腫瘍に対する免疫療法の場合、または放射免疫ガイド下手術を行うために、有用である。VI.診断方法およびキットエンドプラスミンの発現をインビトロで検出するための方法が本明細書中に提供される。1つの例において、エンドプラスミンの発現は、生物学的サンプルにおいて検出される。そのサンプルは、任意のサンプルであり得、それらとしては、バイオプシー、オートプシーおよび病理検体由来の組織が挙げられるがこれらに限定されない。生物学的サンプルには、組織の切片、例えば、組織学的目的のために採取された凍結切片も含まれる。生物学的サンプルには、さらに、血液、血清、血漿、痰、髄液または尿などの体液が含まれる。いくつかの実施形態において、悪性病変例えば、扁平上皮癌種例えば、頭頸部扁平上皮癌、メラノーマ、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんを検出するための方法が提供される。エンドプラスミンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、被験体内のがんを検出するため、または被験体におけるがんの診断を確認するために、被験体由来の血清サンプル中のエンドプラスミンを検出するために使用され得る。それらの抗体は、転移性の病変の最初の病変を特定するためにも使用され得る。本開示は、生物学的サンプル中のエンドプラスミンを検出するための方法を提供し、ここで、その方法は、エンドプラスミンに結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメントと生物学的サンプルとを、免疫複合体の形成をもたらす条件下で接触させる工程、およびその免疫複合体を検出することにより、その生物学的サンプル中のエンドプラスミンを検出する工程を包含する。1つの例において、サンプル中のエンドプラスミンの検出は、被験体が悪性病変を有することを示唆する。別の例では、サンプル中のエンドプラスミンの検出は、被験体におけるがんの診断を確認するものである。さらなる例では、エンドプラスミンの検出は、転移の存在を確認するかまたは検出するものである。いくつかの実施形態において、エンドプラスミンに特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、被験体内の腫瘍の検出または診断例えば、被験体における腫瘍の診断の確認のために使用される。他の実施形態において、エンドプラスミンに特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、治療の有効性を検出するために使用される。例えば、エンドプラスミンを発現すると知られる悪性病変を有する被験体に治療薬が投与される。その方法は、エンドプラスミンに結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメントと生物学的サンプルとを、免疫複合体の形成をもたらす条件下で接触させる工程、およびその免疫複合体を検出することにより、生物学的サンプル中のエンドプラスミンを検出する工程を包含し得る。処置前の被験体由来のサンプルまたは対照基準などのコントロールと比較したときのエンドプラスミンの量の減少は、その治療薬がその悪性病変の処置に有効であることを示唆する。いくつかの例において、コントロールと比較したときのエンドプラスミンの量の増加は、その治療薬がその悪性病変の処置に有効でないことを示唆する。いくつかの実施形態において、検出は、インビボにおける検出であり得る。エンドプラスミンに特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、放射性同位元素と複合体化され得る。投与された放射標識抗体が腫瘍の位置を突き止めるのを可能にするのに十分な時間が経過した後、その腫瘍は、MRI、CTスキャンまたはPETスキャンなどによって検出される上記を参照のこと。1つの実施形態において、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識で直接標識される。別の実施形態において、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメント一次抗体は、標識されず、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体に結合し得る二次抗体または他の分子が、標識される。当業者に周知であるように、特定の種およびクラスの一次抗体に特異的に結合することができる二次抗体が選択される。例えば、一次抗体が、ヒトIgGである場合、二次抗体は、抗ヒトIgGであり得る。抗体に結合し得る他の分子としては、プロテインAおよびプロテインGこの両方ともが商業的に入手可能であるが挙げられるがこれらに限定されない。上記抗体または二次抗体に適した標識は、上に記載されており、それらとしては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、磁性物質および放射性材料が挙げられる。好適な酵素の非限定的な例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。好適な補欠分子族複合体の非限定的な例としては、ストレプトアビジン/ビオチンおよびアビジン/ビオチンが挙げられる。好適な蛍光材料の非限定的な例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが挙げられる。非限定的かつ例示的な発光材料は、ルミノールであり;非限定的かつ例示的な磁性物質は、ガドリニウムであり、非限定的かつ例示的な放射性標識としては、35S、11C、13N、15O、18F、19F、99mTc、131I、3H、14C、15N、90Y、99Tc、111Inおよび125Iが挙げられる。代替の実施形態において、エンドプラスミンは、検出可能な物質で標識されたエンドプラスミン標準物質およびエンドプラスミンに特異的に結合する標識されていないヒト抗体を利用する競合イムノアッセイによって、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このアッセイでは、生物学的サンプル、標識されたエンドプラスミン標準物質およびエンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメントが混合され、標識されていない抗体に結合した標識されたエンドプラスミン標準物質の量が測定される。生物学的サンプル中のエンドプラスミンの量は、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントに結合した標識されたエンドプラスミン標準物質の量に反比例する。本明細書中に開示されるイムノアッセイおよび方法は、いくつかの目的のために使用され得る。1つの実施形態において、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞培養物中の細胞内のエンドプラスミンの産生を検出するために使用され得る。別の実施形態において、その抗体は、生物学的サンプル中のエンドプラスミンの量を検出するために使用され得る。エンドプラスミンの高発現は、いくつかのタイプのがんメラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんが挙げられるがこれらに限定されないに関連する。1つの実施形態において、生物学的サンプル例えば、血清サンプルまたは組織サンプル中のエンドプラスミンを検出するためのキットが提供される。例えば、被験体におけるがんの診断を確認するために、組織学的検査用の組織サンプルを得るためにバイオプシーが行われ得る。あるいは、エンドプラスミンタンパク質の存在を検出するために、血清サンプルを得てもよい。ポリペプチドを検出するためのキットは、代表的には、エンドプラスミンに特異的に結合するヒト抗体例えば、本明細書中に開示される抗体のいずれかを備え得る。いくつかの実施形態において、抗体フラグメント例えば、FvフラグメントもしくはscFvまたはFabがそのキットに含められる。さらなる実施形態において、その抗体は、標識される例えば、蛍光標識、放射性標識または酵素標識で。1つの実施形態において、キットは、エンドプラスミンに特異的に結合する抗体を使用する手段を開示している指示材料を備える。その指示材料は、書面、電子的形態例えば、コンピュータディスケットまたはコンパクトディスク、または視覚によるもの例えば、ビデオファイルであり得る。そのキットは、そのキットが意図されている特定の用途を容易にする追加の構成要素も備え得る。したがって、例えば、そのキットは、標識を検出する手段例えば、酵素標識に対する酵素基質、蛍光標識を検出するためのフィルターセット、二次抗体などの適切な二次標識などをさらに備え得る。そのキットは、特定の方法を実施するために日常的に使用される緩衝液および他の試薬をさらに備え得る。そのようなキットおよび適切な内容物は、当業者に周知である。1つの実施形態において、診断キットは、イムノアッセイを含む。イムノアッセイの詳細は、使用される特定の形式によって変化し得るが、生物学的サンプル中のエンドプラスミンを検出する方法は、通常、免疫学的に反応性の条件下でエンドプラスミンポリペプチドと特異的に反応する抗体または抗体フラグメントとその生物学的サンプルとを接触させる工程を包含する。その抗体は、免疫学的に反応性の条件下で特異的に結合することが可能になることで免疫複合体を形成し、その免疫複合体結合した抗体の存在が、直接または間接的に検出される。上記抗体が、被験体におけるがんを検出するためまたはがんの診断を確認するために使用されるとき、その診断に関する情報は、電子媒体または紙媒体などの表現媒体上に表示され得る。電子媒体としては、例えば、コンピュータデータベース、ディスプレイモニターまたは電子的医療記録が挙げられ得る。紙媒体としては、例えば、研究室または臨床医によって記録された検査結果または紙の記録が挙げられる。いくつかの実施形態において、いったん腫瘍例えば、メラノーマの診断が行われたら、被験体は、その腫瘍例えば、メラノーマについて処置される。例えば、その処置は、原発性もしくは転移性の病変の外科的切除、および/またはその疾患を処置するための化学療法レジメンの投与を含み得る。細胞表面マーカーの存在または非存在を判定する方法は、当該分野で周知である。例えば、上記抗体が、他の化合物酵素、磁気ビーズ、コロイド状の磁気ビーズ、ハプテン、蛍光色素、金属化合物、放射性化合物または薬物を含むがこれらに限定されないに結合体化され得る。その抗体は、イムノアッセイ例えば、ラジオイムノアッセイRIA、酵素結合免疫吸着測定法ELISAまたは免疫組織化学的アッセイであるがこれらに限定されないにおいても利用され得る。その抗体は、蛍光顕微鏡観察または蛍光励起細胞分取FACSのためにも使用され得る。FACSは、細胞を分離するためまたは分取するために、他の洗練された検出レベル中でも複数のカラーチャネル、低角度光散乱検出チャネルおよび鈍角光散乱検出チャネル、ならびにインピーダンスチャネルを使用する米国特許第5,061,620号を参照のこと。本明細書中に開示されるようなエンドプラスミンに特異的に結合するいずれのヒト抗体も、これらのアッセイにおいて使用することができる。したがって、それらの抗体は、従来のイムノアッセイELISA、RIA、FACS、組織免疫組織化学、ウエスタンブロットまたは免疫沈降を含むがこれらに限定されないにおいて使用され得る。別段説明されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者が通常理解する意味と同じ意味を有する。単数形の用語a、anおよびtheは、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、単語またはは、文脈が明らかに他のことを示さない限り、およびを含むと意図される。核酸またはポリペプチドに対して与えられたすべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量または分子質量の値が、近似値であり、説明のために提供されていることが、さらに理解されるべきである。本明細書中に記載される方法および材料と類似または等価の方法および材料は、本開示の実施または試験において使用され得るが、好適な方法および材料が、下記に記載される。用語含むcomprisesは、含むincludesを意味する。本明細書中で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献の全体が、参考として援用される。矛盾する場合、用語の説明を含む本明細書が支配するものとする。さらに、その材料、方法および例は、単なる例示であって、限定すると意図されていない。本開示は、以下の非限定的な実施例によって例証される。有力な臨床エビデンスから、抗体ベースの免疫療法が、血液学的悪性腫瘍および固形腫瘍の処置において有効であり得ることが示された。開発された抗体の特異性に対する腫瘍抗原の免疫原性の影響を排除するために、合成ファージ一本鎖可変領域scFvライブラリーを使用して、悪性細胞上でアップレギュレートされる細胞表面分子を認識するヒト抗体が単離された。エンドプラスミンに特異的に結合する抗体が単離された。ヒトメラノーマ細胞株WM1158を用いた合成ファージscFvライブラリーのパニングによって、大パネルのヒト細胞株と高反応性を示すW9という名称のscFvフラグメントが単離された。細胞株からscFvW9によって免疫沈降された抗原のSDS-PAGE解析によって、94KDaの構成要素が同定された。その抗原の発現が、ツニカマイシンとインキュベートされた細胞上では著しく減少したので、scFvW9によって認識される決定基は、炭水化物を含む。様々な細胞株からscFvW9によって免疫沈降されたバンドの質量分析ベースの解析によって、90KDa分子シャペロンファミリーのメンバーであるエンドプラスミンとして94KDaの構成要素が同定された。この結論は、ヒトエンドプラスミンGrp94とアミノ酸配列において98.5の相同性を示すエンドプラスミンGrp94組換えイヌタンパク質に対するscFvW9の反応性によって裏づけられた。scFvW9によって認識される決定基は、正常細胞上には発現されない。その抗体は、アポトーシスの誘導に有効であり、がん細胞の成長を阻害した。したがって、本明細書中に開示される結果は、scFvW9などのエンドプラスミンに特異的に結合する抗体が、悪性疾患の免疫療法にとって有用であることを実証する。これらの抗体は、悪性疾患を検出するためにも使用され得る。実施例1材料および方法下記の実施例では、以下の材料および方法を使用した:細胞株:ヒトメラノーマ細胞株WM1158、MV3、COLO38、SK-MEL-28、M14およびFO-1、ヒト乳癌腫細胞株SUM149、MDA-MB-435s、MCF-7、T47D、ヒト頭頸部がん細胞株PCI-13、ヒト膵臓細胞株Panc2.03、Panc3.27、Panc10.05、ヒト結腸がん細胞株40-16、ヒト腎がん細胞株SLR21、ヒト前立腺がん細胞株Du145、ヒト卵巣がん細胞株OVCAR3、ヒト神経膠腫がん細胞株U-138、ヒト子宮頸がん細胞株HeLa、ならびにヒトBリンパ系細胞株LG2を、10ウシ胎児血清FBS:BioWhittaker,Walkersville,MD,USAおよび2mML-グルタミンBioWhittakerが補充されたRPMI1640培地Cellgro,Mediatech,Washington,DC,USA中で維持した。ヒト膀胱がん細胞株T24、ヒト肺がん細胞株A549、ヒト類表皮腫がん細胞株A431、ヒト神経膠腫がん細胞株A-172およびヒト293細胞株を、10FBSが補充されたDMEM培地Lonza,Verviers,Belgium中で増殖させた。細胞は、5CO2雰囲気中、37°Cにおいて培養した。モノクローナル抗体、scFv抗体および試薬:C-myc腫瘍性タンパク質特異的マウスmAb9E10Evan,ら、MolCellBiol,1985Dec;512:3610-6およびHLA-クラスI抗原特異的マウスmAbTP25.99D’Ursoら、JClinInvest.1991January;871:284-292は、以前に報告されている。抗抗idscFv119Wangら、1997.Theanti-idiotypicapproachtoactivespecificimmunotherapyofmalignantmelanoma.InidiotypesinMedicine:Autoimmunity,InfectionandCancer.Y.Shoenfeld,R.Kennedy,andS.Ferrone,eds.Elsevier,Amsterdam,p.523は、抗idmAbMK2-23を用いたパニングによって、合成scFvライブラリー1Nissimら、1994.EmboJ13:692-698から単離された。マウスmAbは、連続的な硫酸アンモニウム沈殿およびカプリル酸沈殿Temponiら、1989,Hybridoma8:85-95によって腹水から精製された。mAb調製物の純度および活性は、それぞれSDS-PAGEおよび結合アッセイにおいて対応する抗原を用いた試験によって評価された。HRP-抗マウスIgGFc抗体は、JacksonImmunoResearchLaboratories,Inc.,WestGrove,PA,USAから購入した。ヤギ抗マウスIg抗体のR-フィコエリトリンRPEで標識されたFab’2フラグメントは、BDPharmingenSanDiego,CA,USAから購入した。エンドプラスミンGrp94組換えイヌタンパク質は、StressgenBiothecnologyCorporationVictoria,BritishColumbia,Canadaから購入した。ファージディスプレイライブラリー:ヒト単鎖FvscFv抗体の半合成ファージライブラリーを、Nissimら、1994,EmboJ13:692-698に記載されているように構築した。ファージディスプレイscFv抗体の選択:メラノーマ細胞に結合するファージディスプレイscFv抗体を、以前に報告されたようにNoronhaら、1998,JImmunol161:2968-2976ファージディスプレイscFv抗体ライブラリーから単離した。簡潔には、ファージ粒子1×103を、1×107個のWM1158メラノーマ細胞が入ったポリプロピレン培養チューブに加えた。R/Tで90分間インキュベートした後、細胞をPBSで6回洗浄することによって、結合していないファージを除去した。200μlの0.1Mグリシン-HClpH=2.2を加えることによって、結合したファージを溶出した。4回パニングを行った後、単離されたクローンを、ヒトBリンパ系細胞であるLG-2に吸着させることにより、ヒトメラノーマ細胞とリンパ系細胞によって共有されるAgに結合しているファージを除去した。結合アッセイ:腫瘍細胞株およびエンドプラスミンGrp94組換えイヌタンパク質と可溶性scFvW9抗体との反応性を試験するELISAを、記載されているようにNoronhaら、1998,JImmunol161:2968-2976行った。結果は、450nmにおける光学濃度O.D.の吸光度として表現される。免疫沈降実験:WM1158細胞3×107を洗浄し、ペレットにし、プロテアーゼインヒビターを含む1.5mlの溶解緩衝液1mmol/Lフッ化フェニルメチルスルホニルphenylmethylsulfonylflurideを含む、50mmol/LTris、4mmol/LEDTA、150mmol/LNaCl、0.5NP40中で溶解した。氷上で30分間インキュベートした後、細胞溶解産物を13,000×g、4°Cで30分間遠心した。上清を回収し、PG-SepharoseAmershamPharmaciaBiotechAB,Uppsala,Swedenとインキュベートすることによって事前に精製し、15μgのmAb9E10およびscFvW9の周辺質調製物ならびに119ネガティブコントロールを事前に備えさせた15μlの充填プロテインGSepharoseが入ったチューブに移した。4°Cで2時間インキュベートした後、ビーズをPBSで4回、高塩緩衝液350mmol/LNaCl、1mmol/LEDTA、10mmol/LTris、0.1ウシ血清アルブミン、1NP40で2回、および溶解緩衝液で2回洗浄した。沈殿したタンパク質を、SDSサンプル緩衝液中に溶出し、還元12Tris-HClSDS-ポリアクリルアミドゲルで分離し、クマシーブルーで染色した。ツニカマイシン処理:COLO38細胞を、0.5μg/mlのツニカマイシンMPBiomedicals,Solon,OH,USAの存在下、5CO2雰囲気、37°Cにおいて72時間培養した。DMSOだけを含む培地中でインキュベートされた細胞をコントロールとして使用した。トランスフェクション:Amaxaヌクレオフェクション法を製造者の指示書Amaxa,Cologne,Germanyに従って使用して、293細胞を3μgのGrp94HSP90B1cDNAクローンOrigeneでトランスフェクトした。ヌクレオフェクターnucleofectorプログラムQ-001を使用した。トランスフェクションの後、直ちに細胞を、10FBSが補充された500μlの予め温めておいたDMEM培養液に懸濁し、加湿された37°Cの5CO2恒温器内において24時間、6ウェルプレートにプレーティングした。トランスフェクション効率を、GFPのフローサイトメトリー解析によって測定した。pCMV6-XL4ベクターをコントロールとして使用した。Lipofectamine2000Invitrogen,Carlsbad,CA,USAを用いたトランスフェクションを、製造者の指示書に従って行った。エンドプラスミンGrp94siRNAおよびコントロールsiRNAフルオレセイン結合体-ASantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA,USAによる細胞のトランスフェクションを、製造者の指示書に従って行った。以下の材料および方法も使用した実施例5および9を参照のこと:細胞株、細胞溶解産物および組織。ヒトメラノーマ細胞株M21、MV3およびSK-MEL-5、ヒト膵臓腺癌細胞株MiaPaCa-2およびPANC1、ヒト神経膠腫細胞株U1338MG、ヒト乳癌腫細胞株SUM149およびMDA-MB-231、ヒト中皮腫細胞株Phi、ヒト結腸がん細胞株RKO、ヒト卵巣がんOVCAR3、ヒト肉腫細胞株HT1080、ヒト多発性骨髄腫細胞株MM.8、ヒトBリンパ系細胞株RAJI、ならびにマウスミエローマ細胞株NSOを、2mML-グルタミンCellgroおよび10ウシ胎児血清FBSPAALaboratoriesIncが補充されたRPMI1640培地中で維持した。細胞は、5CO2雰囲気中、37°Cにおいて培養された。細胞溶解産物は、記載されているようにDesaiら、CancerRes1998;5811:2417-25調製した。動物。C.B-17SCIDマウス8~10週齢を、TaconicFarms,Incから入手した。モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体、scFv抗体および試薬。HLAクラスI抗原特異的マウスmAbTP25.99Desaiら、JImmunol2000;1656:3275-83、カルネキシン特異的mAbTO-5充填コントロールして使用を開発し、記載されているようにOginoら、TissueAntigens62:385-393,2003特徴付けした。精製されたヒト免疫グロブリンは、Sigma-Aldrichから購入した。FAKおよびリン酸化FAKTyr397ならびにERK1/2およびリン酸化44/42ERK1/2、AKTおよびリン酸化473AKT、METリン酸化MET、PKC、β-カテニン、Ras、B-Raf、C-Raf、切断型カスパーゼ-3、切断型カスパーゼ-7、SHh、GLI1およびβ-アクチンに特異的な抗体は、BDBioscienceおよびCellsignalingtechnologyから購入した。ラット抗エンドプラスミンGrp94抗体は、StressGenから購入した。マウスmAbは、連続的な硫酸アンモニウム沈殿およびカプリル酸沈殿Temponiら、Hybridoma1989;81:85-95.によって腹水から精製された。mAb調製物の純度および活性は、それぞれSDS-PAGEおよび結合アッセイにおいて対応する抗原を用いた試験によって評価された。HRP-抗マウス、-ウサギおよびラット抗体、ならびにヤギ抗ヒトIgGFcγ抗体のRPEで標識されたFab’2フラグメントは、JacksonImmunoResearchLaboratoriesIncから購入した。ヤギ抗マウスIg抗体のRPEで標識されたFab’2フラグメントは、BDPharmingenから購入した。完全ヒトmAbW9の構築。scFvW9可変軽鎖VLおよび可変重鎖VH領域をコードする遺伝子を、PCRによって増幅し、DNAライゲーションキットMIGHTYMIX登録商標TAKARABioUSAを製造者の指示書に従って使用して、それぞれpFUSE2-CLIg-hkおよびpFUSE-CHIg-hG1InvivoGenにクローニングした。完全ヒトmAbW9の発現および精製。エレクトロポレーションGENEPULSER登録商標IIElectroporationSystemBio-Radを製造者の指示書に従って使用して、発現プラスミドpFUSE2-CLIg-hkおよびpFUSE-CHIg-hG1を、マウスミエローマ細胞株NSOに同時トランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を、10FCS、ゼオシン50μg/mLおよびブラストサイジンS10μg/mLが補充されたRPMI1640培地中で選択した。次いで、ゼオシンおよびブラストサイジンSに耐性の細胞を、限界希釈によって単一細胞にサブクローン化した。サブクローン化された細胞から放出されたspent上清を、ヒトFcおよびFab’2の発現ならびに対応する抗原との反応性についてELISAによってスクリーニングした。HITRAP登録商標プロテインGHPカラムGEhealthcareを製造者の指示書に従って使用して、放出された培養上清またはマウス腹水から完全ヒトmAbW9を精製した。精製されたmAbW9の純度および活性を、それぞれSDS-PAGEおよび抗原結合アッセイによって測定した。エンドプラスミンGrp94の脱グリコシル化deglycosaylation。Grp94MIAPaCa-2細胞5×105を、50μlのRPMI1640培地中、2μlのPNGaseF、2μlのO-グリコシダーゼおよび2μlのα-23,6,8.9-ノイラミニダーゼEnzymaticProteinDegylcosylationKit,Sigmaありまたはなしで37°Cにおいて24時間インキュベートした。次いで、処理された細胞をmAbW9で染色し、フローサイトメトリーCyan,BeckmanCoulterで解析した。フローサイトメトリー解析。細胞2×105を、2μg/mlのmAbW9総体積100μlの2BSA-PBSに希釈されたものとともに4°Cで30分間インキュベートした。次いで、細胞を0.5BSA-PBSで2回洗浄し、最適量のヤギ抗ヒトIgGFcγ抗体のRPE標識Fab’2フラグメントJacksonImmunoResearch,Incとともに4°Cで30分間インキュベートした。細胞を3回洗浄した後、2ホルムアルデヒド中で固定し、CYANTMADPLX9ColorフローサイトメーターDakoで解析した。mAbTP25.99およびヒト免疫グロブリンをコントロールとして使用した。がん始原細胞結合アッセイのために、製造者の指示書に従ってALDEFLUOR登録商標StemCellTechnologiesで細胞を予め染色した。免疫組織化学。外科的に取り出されたヒト膵臓腺癌病変および正常な膵臓組織の凍結切片を、室温において20分間、4ホルムアルデヒド/PBSで固定した。scFv-FcC21によるTMAスライドのIHC染色を、報告されているようにWangら、Curr.Mol.Med2010行った。染色された組織マイクロアレイスライドの像を、概観のために×200の倍率でOLYMPUS登録商標BX51顕微鏡OLYMPUSUKLtdを用いて取得した。細胞増殖アッセイおよびMTTアッセイ。96ウェルプレートに1ウェルあたり1×104の密度で細胞を播種し、1FCSが補充された培地中でmAbW95μg/mlとともに3日間インキュベートした。1ウェルあたり10μlのテトラゾリウム構成要素メチルチアゾリルジフェニル-テトラゾリウムブロミドSigma-Aldrich,Inc.StLouis,MOを加えることによって、種々の時点において生細胞数を計測し、その混合物を37°Cでおよそ3~4時間インキュベートした。代謝的に活性な生細胞は、MTTを有色のホルマザン生成物分光光度的マイクロプレートリーダーMTXLabSystem,Inc,Vienna,VAにおいて540nmで測定されるに変換した。結果は、PBSのみとインキュベートされた生細胞の数を100基準として使用して、生細胞のパーセント阻害として表現された。アポトーシス。mAbW950μg/mLとともに6時間インキュベートした後のアポトーシスおよびネクローシスのMV3およびMIAPaca-2細胞のフローサイトメトリー解析を、製造者の仕様書のとおり、アネキシンV-FTICおよびヨウ化プロピジウムPI染色キットBDPharMingenによって行った。ウエスタンブロット。細胞溶解産物中のタンパク質を、8ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGEによって分離し、0.45μmポアサイズPVDF膜Millipore上に転写した。4°Cにおいて一晩、5脱脂粉乳2BSAでブロッキングした後、膜を、適切な濃度の一次抗体とともに4°Cにおいて一晩、およびHRPで標識されたそれぞれの2次抗体とともに室温において45分間、連続的にインキュベートした。高感度化学発光系GELifeScienceを用いてバンドを可視化し、バンド密度をFOTO/Analyst登録商標InvestigatorEclipseシステムFotodyneIncorporateを用いて読み出した。カルネキシン特異的mAbTO-5およびβ-アクチン特異的mAbを、充填コントロールとして使用した。免疫沈降。MV3細胞3×107を洗浄し、ペレットにし、プロテアーゼインヒビターを含む1.5mlの溶解緩衝液1mmol/Lフッ化フェニルメチルスルホニルを含む、50mmol/LTris、4mmol/LEDTA、150mmol/LNaCl、0.5NP40中で溶解した。氷上で30分間インキュベートした後、細胞溶解産物を13,000×g、4°Cで30分間遠心した。上清を回収し、PG-SepharoseAmershamPharmaciaBiotechAB,Uppsala,Swedenとインキュベートすることによって事前に精製し、10μgのmAbmAbW9を事前に備えさせた10μlの充填プロテインGSepharoseが入ったチューブに移した。4°Cで2時間インキュベートした後、ビーズをPBSで4回、高塩緩衝液350mmol/LNaCl、1mmol/LEDTA、10mmol/LTris、0.1ウシ血清アルブミン、1NP40で2回、および溶解緩衝液で2回洗浄した。沈殿したタンパク質を、SDSサンプル緩衝液中に溶出し、還元12Tris-HClSDS-ポリアクリルアミドゲルで分離し、0.45μmポアサイズPVDF膜Millipore上に転写した。そのブロッティングは、先に記載したように行った。ADCC:MV3細胞を、50μCiの51CrPerkinElmerで標識し、0.4×106細胞/mlの密度で再懸濁した。51Crで標識された細胞を、96ウェル組織培養U底アッセイプレートBD.FalconにおいてmAbW9と混合した50、10およびμg/ml50μl/ウェル。ヒト免疫グロブリンをコントロールとして使用した。4°Cで30分間インキュベートした後、PBMC40:1エフェクター対標的E:Tを加え、CO2恒温器内において37°Cで4時間インキュベートした。PackardTOPCOUNTTMMicroplateScintillationCounterConroeを使用して、細胞を含まない上清をカウントすることによって、51Crの放出を測定した。この実験を、3つ組で2回行った。CDC。標的細胞MV3を、50μCiの51Crで標識し、1×106細胞/mlの密度で再懸濁した。MV3細胞を、RPMI1640、10mMHEPES、0.1BSAで4倍希釈されたヒト血清補体Quidelの存在下において、mAbW9とインキュベートした50、10およびμg/ml50μl/ウェル。ヒト免疫グロブリンをコントロールとして使用した。CO2恒温器内において37°Cで2時間インキュベートした後、PackardTOPCOUNTTMMicroplateScintillationCounterを使用して、細胞を含まない上清をカウントすることによって、51Crの放出を測定した。この実験を、3つ組で2回行った。確立されたヒトメラノーマ細胞由来の肺転移を有するマウスの処置。8週齢の雌SCIDマウスの静脈内i.v.にヒトメラノーマMV3細胞を注射した1.4×108細胞/マウス。細胞をi.v.注射した15日後、マウスを13匹のマウスずつ2つの群にランダムに分けた。一方の群のマウスに、48時間ごとに合計3回、mAbW9100μg/マウスをi.v.注射した。他方の群のマウスには、同じスケジュールを用いてヒト免疫グロブリンをi.v.注射した。25日目に、マウスを屠殺し、肺を回収し、FFPEに供した。HE染色された肺組織切片を、転移について顕微鏡で検査した。統計解析。試験された群において得られた結果の差の統計的有意性を、スチューデントのt検定を用いて解析した。生存統計をMEDCALC登録商標ソフトウェアMariakerke,Belgiumを用いて解析した。実施例2メラノーマ細胞に結合するscFvフラグメントの単離合成ファージscFvライブラリー1を、WM1158細胞を用いて4回のパニングに供した。単離されたファージを、培養されたヒトLG-2Bリンパ系細胞に吸収させることにより、ヒト細胞と共有されるAgに結合しているファージを除去した。可溶性scFvを、80個のクローンから作製し、メラノーマ細胞との反応性について細胞ELISAにおいて試験した。試験されたクローンのうち、W9と命名されたscFvは、WM1158細胞株と強く反応した。LG-2細胞との反応性は検出されなかったので、その反応性は特異的だった。関連性のない抗原を認識するscFv119を、ネガティブコントロールとして使用した図1。実施例3scFvW9の反応性ヒト細胞株のパネルを用いるELISAによって試験したとき、可溶性scFvW9は、メラノーマMV3、COLO38、SK-MEL-28、M14、FO-1、基底乳がんSUM149、MDA-MB-435s、頭頸部がん細胞株PCI-13、膵がん細胞株PANC2.03、PANC3.27、PANC10.05、膀胱がん細胞株T24、肺がん細胞株A549、類表皮腫がん細胞株A431、子宮頸がん細胞株HeLa、腎がん細胞株SLR21、卵巣がん細胞株OVCAR3および神経膠腫がん細胞株U-138、A-172と反応した。そのscFvフラグメントは、乳管がん細胞株MCF-7、T47D、結腸がん細胞株40-16、前立腺がん細胞株Du145およびBリンパ系細胞株LG-2とは反応しなかった図2。正常組織に対するscFvW9の免疫反応性の免疫組織化学的解析の結果を下記に示す。結果は、試験された少なくとも2人の患者のバイオプシーに関する陽性。scFvW9による免疫組織化学的染色は、エンドプラスミンGrp94が、汗腺および腺房上皮だけによって発現されるが、種々の正常組織によっては発現されないことを示した。mAbW9による免疫組織化学的染色は、エンドプラスミンGrp94エピトープが、正常組織では限られた分布を有し、また、膵臓腺癌病変において発現されることを示した図11。その免疫組織化学的解析は、mAbW9によって認識されるエピトープが、正常組織では限られた分布を有することを示した。さらに、mAbW9は、外科的に取り出されたヒト膵臓腺癌病変だけを染色したが、同じ患者由来の正常な膵臓組織を染色しなかった。さらに、MDA-MB-231およびMV3細胞株に由来する異種移植片はそれぞれ、mAbW9によって強く染色されたが、MCF-7では染色は検出されなかった図12。実施例4scFvW9の特異性の免疫化学的解析およびタンデム質量分析によるGrp94の同定WM1158aから得られた全細胞溶解産物の、scFvW9を用いた免疫沈降によって、およそ100KDaにおける独特のバンドが同定された図3。scFv119をネガティブコントロールとして使用した。MV3メラノーマ、SUM149基底乳がん、T24膀胱がんおよびSLR21腎がん細胞株の溶解産物を使用したとき、同じ結果が得られた。種々の細胞溶解産物からの、scFvW9によって免疫沈降された100KDaの特異的なバンドを切り出し、トリプシンでゲル内消化した。得られたトリプシン処理ペプチドの液体クロマトグラフィ-タンデム質量分析による解析から、エンドプラスミンGrp94のみに由来する2つのトリプシン処理ペプチドELISNASDALDK配列番号7およびGVVDSDDLPLNVSR配列番号8が同定された図4。mAbW9によって認識されるエピトープと腫瘍細胞との反応性が、ノイラミニダーゼとのインキュベート後に無くなったが、他のグリコシダーゼによって影響されなかったので、そのエピトープは、シアル酸残基に大きく依存している図9。これらの実験のために、ヒト膵臓腺癌MIAPaCa-25×105を、50μlのRPMI1640培地中、2μlのα-23,6,8.9-ノイラミニダーゼありまたはなしで、5CO2恒温器内、37°Cにおいて24時間インキュベートした。次いで、処理された細胞をmAbW9で染色し、フローサイトメトリーによって解析した。mAbTP25.99で処理された細胞をコントロールとして使用した。ヒト膵臓腺癌MIAPaCa-2細胞を、ALDH活性を検出するためにALDEFLUOR登録商標とインキュベートし、mAbW9で染色した。ALDEFLUOR登録商標DAEBインヒビターとインキュベートされ、mAbW9で染色された細胞を参照として使用したコントロール。ヒトIgHIgをコントロールとして使用した。ALDHbright細胞と同定されたがん始原細胞のパーセンテージが示される。フロー解析は、mAbW9が、同定されたALDHbright細胞集団に結合したので、同じ抗体によって認識されるエピトープが、がん始原細胞によって発現されていることを示した図10。実施例5scFvW9によって認識される決定基の発現に対するツニカマイシンの影響およびそのエピトープのさらなる特徴づけscFvW9が、糖タンパク質のN-グリコシル化のインヒビターであるツニカマイシンで処理されたCOLO38細胞と反応しなかったので、このscFvフラグメントによって認識されるエンドプラスミンGrp94上のエピトープの発現にグリコシル化が関与する図4。DMSOだけを用いたときは、阻害は観察されなかった。さらに、同じ条件下でのTP25.99mAbコントロールの場合も、阻害は観察されなかった。これらのデータから、scFvW9によるエンドプラスミンGrp94の認識には炭水化物が不可欠であることが示唆される。mAbW9によって認識されるエピトープと腫瘍細胞との反応性が、ノイラミニダーゼとのインキュベート後に無くなったが、他のグリコシダーゼによって影響されなかったので、そのエピトープは、シアル酸残基に大きく依存している図9。実施例6エンドプラスミンGrp94イヌ組換えタンパク質とscFvW9の反応性BSAを用いたときは結合が検出されなかったのでネガティブコントロール、図5B、scFvW9は、エンドプラスミンendoplasmintGrp94イヌ組換えタンパク質RC-Grp94と用量依存的様式で特異的に反応した図5A。さらに、RC-Grp94は、COLO38細胞とscFvW9との結合に用量依存的様式で特異的に影響した。β2-ミクログロブリンmicroglobulineネガティブコントロールが、阻害効果を示さなかったので、上記阻害は、用量依存的かつ特異的だった図6。実施例7scFvW9の結合に対するエレクトロポレーションの影響エレクトロポレーションされる293細胞を、エンドプラスミンGrp94完全長cDNAまたはベクター単独pCMV-XL4、ネガティブコントロールで一過性にトランスフェクトした。トランスフェクション効率94をGFP発現によって評価した。トランスフェクションの24時間後に回収した細胞を、scFvW9およびmAb9E10とインキュベートした後、FITC-ヤギ抗マウスIgG抗体とインキュベートした。細胞をフローサイトメトリーによって解析した。トランスフェクトされていない細胞をコントロールとして使用した。エンドプラスミンendoplamsinGrp94図7Aおよびプラスミド単独図7Bで処理された細胞において、scFvW9の結合の大幅な増加が観察された。これらのデータから、scFvの結合が、エレクトロポレーションによって増加したこと、および熱ショックが、scFvW9によって認識される抗原の発現を制御することが示唆される。実施例8scFvW9の結合に対するエンドプラスミンGrp94に標的化されたshRNAの影響FO-1細胞に、エンドプラスミンGrp94のノックダウンを行うためのshRNA、またはコントロールとしてABCB5shRNAを形質導入した。形質導入の72時間後に、細胞を回収し、scFvW9およびmAb9E10とインキュベートした後、FITC-ヤギ抗マウスIgG抗体とインキュベートした。細胞をフローサイトメトリーによって解析した。Grp94shRNA図8Aは、コントロールshRNA図8Bと比べて、scFvW9の結合を有意に阻害した。実施例9がん細胞に対するmAbW9の影響がん細胞に対するmAbW9の影響を評価した。具体的には、MTT解析は、mAbW9が、試験されたすべてのエンドプラスミン陽性Grp94腫瘍細胞株の成長を有意に阻害したことを示した。しかしながら、Grp94-Raji細胞株では影響は観察されなかった。成長の阻害が、コントロールとして使用されたヒト免疫グロブリンを用いたときは観察されなかったので、抗増殖効果は、特異的だった図13。したがって、mAbW9は、がん細胞の増殖を阻害した。フロー解析は、mAbW9が、ヒトメラノーマMV3細胞および膵がんMIAPaCa-2細胞においてアポトーシスを誘導したことを示したそれぞれ48.90および53.56のアポトーシス。さらに、ウエスタンブロット解析は、mAbW9で処理された細胞における、切断型カスパーゼ-3および切断型PARPの発現の有意な増加を示した図14、15および16。したがって、mAbW9は、がん細胞においてアポトーシスを誘導した。しかしながら、mAbW9は、標的細胞の細胞依存性溶解も補体依存性溶解も媒介しなかった図17および18。さらに、mAbW9は、ヒト膵臓腺癌MIAPaCa-2がん始原細胞の増殖を阻害した。フロー解析は、mAbW9で処理された細胞において、ALDHbright細胞と定義されるがん始原細胞のパーセンテージが、ヒト免疫グロブリンを用いたときネガティブコントロールと比べて50減少したことを示した図19。mAbW9で処理された細胞は、低レベルのRas、C-Raf、PCKα、β-カテニンおよびBcl-2を有した。さらに、mAbW9処理は、Akt、Erk、Mek、FakおよびMetの活性化を阻害した図20~22。mAbW9を用いたプルダウンアッセイにおいて、エンドプラスミンendoplsminGrp94は、Met、RasおよびC-Rafと共免疫沈降された図23。HE染色された組織切片を、OLYMPUS登録商標BX51顕微鏡OLYMPUS登録商標UKLtd.を用いて、ランダムに選択された5つの200×視野/切片に存在する転移結節の累積面積について解析した。SPOTIMAGINGSOFTWARE登録商標AdvancedDiagnosticInstruments,Inc.を用いることにより、各群に対する平均腫瘍面積を測定し、算出し、MV3腫瘍に対するこれらの値を、棒グラフに±SDで提供する。mAbW9で処置されたマウスは、アイソタイプコントロール抗体で処置されたマウスと比べて、転移の面積を統計学的に有意に約50減少させた図24。エンドプラスミンGrp94の発現は、化学療法因子によって増大した。フロー解析は、5-フルオロウラシルFU、シスプラチンおよびパクリタキセルによる処置が、エンドプラスミンGrp94の表面発現を増加させたことを示した。その影響は特異的だった図25。MTTの結果は、5-FUおよびシクロパミンと併用されたmAbW9がそれぞれ、膵臓腺癌細胞の成長の阻害において、各薬剤単独よりも有効であることを示した図26。フロー解析は、mAbW9によるがん始原細胞の成長の阻害が、シクロパミンおよび5-FUによって増強されることも示した。mAbW9、シクロパミンおよび5-FUとのインキュベート後に、ALDHbright細胞のおよそ90の成長阻害が検出された。対照的に、その阻害は、mAbW9またはシクロパミンと個別にインキュベートされた培養物ではわずか50、5-FUとインキュベートされた培養物では20、およびシクロパミンまたは5-FUと併用してmAbW9とインキュベートされた培養物では70だった図27。フロー解析は、mAbによるアポトーシスの誘導がシクロパミンおよび5-FUによって増強されたことも示した。アポトーシスは、シクロパミンおよび5-FUと併用されたmAbW9によって、細胞の70において誘導された。しかしながら、アポトーシスは、5-FU、シクロパミンまたは5-FUとシクロパミンとの組み合わせで処理された細胞の35未満でしか誘導されなかった図28。フロー解析は、mAbW9によるがん始原細胞の成長の阻害が、放射線照射およびシクロパミンによって増強されたことも示した。ALDHbright細胞のおよそ90の成長阻害が、放射線照射およびシクロパミンと併用してmAbW9で処理した後に検出された。対照的に、阻害は、mAbW9またはシクロパミンで個別に処理された培養物においておよそ50であり、放射線照射だけで処理された培養物では30未満だった図29。フロー解析は、mAbによるアポトーシスの誘導が、放射線照射およびシクロパミンによって増強されたことを示した。アポトーシスは、放射線照射およびシクロパミンと併用したmAbW9によって、73.87の細胞において誘導されたが、mAbW9単独では25未満の細胞でしか誘導されなかった図30。RasおよびC-Rafタンパク質レベルに対するmAbW9処理の影響も調べた。RasおよびC-Rafレベルは、シクロパミンおよび5-FUによって増大した。Mek、ErkおよびAktの活性化の阻害において、相乗効果が見られた図31。RasおよびGLI1タンパク質レベル、ならびにErkおよびAktの活性化の阻害におけるmAbW9処理の影響は、放射線照射およびシクロパミンによって増強された図32。実施例10がんを処置するためのエンドプラスミン特異的モノクローナル抗体この実施例には、エンドプラスミンの過剰発現を示すがん本明細書中でエンドプラスミン陽性がんと称されるメラノーマ、乳がん、頭頸部扁平上皮癌、腎がん、肺がん、神経膠腫、膀胱がん、卵巣がんまたは膵がんが挙げられるがこれらに限定されないを処置するためのエンドプラスミン特異的ヒトモノクローナル抗体の使用が記載される。エンドプラスミン陽性がんを有すると診断された患者は、当該分野において標準的な手順に従って処置され得る。一般に、処置の選択肢としては、外科術、放射線治療、化学療法、免疫療法またはインターフェロン療法が挙げられる。この実施例では、エンドプラスミン陽性メラノーマと診断された患者に、Pseudomonas外毒素PEに連結されたエンドプラスミン特異的ヒトモノクローナル抗体を含む免疫結合体が投与される。PE免疫結合体の調製法は、報告されている例えば、米国特許第7,081,518号および付与前の米国公開番号2005/0214304これらは本明細書中で参考として援用されるを参照のこと。一部の患者では、その免疫結合体は、静脈内ボーラス注射によって1日おきに合計3~6回投与される。他の患者では、その免疫結合体は、10日間にわたって連続的な静脈内注入によって投与される。患者に投与される免疫結合体の用量は、患者の体重および性別、ならびに投与の様式および時間経過に応じて変動する。処置の後、がんの進行腫瘍の成長および転移を含むおよび疾病の他の臨床的徴候について患者を評価する。患者は、免疫結合体単独で、または1つ以上の標準的ながん処置法と併用して、処置され得る。例えば、メラノーマを除去する外科術を受けた患者は、続けて、免疫結合体で処置され得る。記載された方法または組成物の正確な詳細は、記載された本発明の精神から逸脱することなく変更され得るかまたは改変され得ることが明らかであろう。本発明者らは、下記の請求項の範囲内および精神内に入るそのような改変およびバリエーションのすべてを特許請求する。"