"明細書中に記載の発明。発明の要旨本発明は、インターフェロン種をコードする組換えベクターの使用によって、インターフェロン耐性腫瘍を処置するための方法を提供する。特に、組換えベクターによって提供されるインターフェロン種が、入手可能な組換え産生されたインターフェロンタンパク質と関連しない性質を有することが注目される。本発明は、インターフェロンをコードする組換えベクターを使用して、インターフェロン耐性腫瘍の処置において有用な組成物を、さらに提供する。例えば、本発明は、以下を提供する。項目1インターフェロン耐性腫瘍を、インターフェロンをコードする組換えベクターと接触させる工程によって、該腫瘍を処置する方法。項目2前記組換えベクターは、アデノウイルスである、項目1に記載の方法。項目3前記アデノウイルスは、複製欠損性である、項目2に記載の方法。項目4前記インターフェロンは、インターフェロンαである、項目3に記載の方法。項目5前記インターフェロンαは、インターフェロンα2b、インターフェロンα2a、およびインターフェロンα2α1からなる群より選択される、項目4に記載の方法。項目6前記腫瘍は、腫瘍性膀胱細胞からなる、項目5に記載の方法。項目7前記腫瘍細胞は、増強剤に曝露されている、項目6に記載の方法。項目8前記増強剤は、Syn3である、項目7に記載の方法。項目9前記ベクターおよび前記増強剤は、膀胱上皮に対して膀胱内に注入される、項目8に記載の方法。項目10前記インターフェロンは、インターフェロンα2bである、項目9に記載の方法。発明の詳細な説明および好ましい実施形態本発明は、インターフェロン耐性腫瘍を、インターフェロンをコードする組換えベクターと接触させる工程によって、その腫瘍を処置する方法を提供し、その結果、そのベクターによって形質導入された腫瘍細胞は、そのベクターによってコードされるインターフェロンを発現する。本明細書中で使用される場合、用語インターフェロン耐性腫瘍とは、従来のインターフェロン処置プロトコルに従うインターフェロンタンパク質の投与による処置に対して難治性である腫瘍をいう。膀胱癌の場合において、腫瘍が、約1時間の曝露時間で、約100,000,000ユニットのIntronAの6週までの週に1回の投与の膀胱内投与の治療の過程において縮小しない場合、その腫瘍は、インターフェロン処置に対して難治性とみなされる。悪性黒色腫の場合において、腫瘍が、4週間誘導期で1週あたり連続して5日間、約20MIU/m2のIntronAの静脈内投与、続いて、48週までの維持期maintenancephase間、1週あたり3回の約10MIU/m2の用量での静脈内投与を含む処置レジメン後に応答しない場合、その腫瘍は、インターフェロン処置に対して難治性であるとみなされる。広汎性の疾患例えば、リンパ腫および白血病の場合において、概して、局在化した腫瘍塊は存在しないが、むしろそれは、腫瘍性の白血球によって特徴付けられる全身性疾患である。本発明の目的のために、腫瘍性に形質転換された細胞は、腫瘍とみなされ得る。濾胞性リンパ腫の場合において、個体が、18ヶ月までの間、1週間あたり3回の5MIUのIntronAの皮下投与を含む処置レジメンに対して応答しない場合、その腫瘍は、インターフェロン処置に対して難治性とみなされる。Ph陽性慢性骨髄性白血病CMLの場合において、個体が、5ヶ月から長くても18ヶ月までの処置期間、約9MIUのRoferonの毎日の筋肉内注射または皮下注射からなる処置レジメンに対して応答しない場合、その腫瘍は、処置に対して難治性とみなされる。従来のインターフェロンタンパク質治療に対する臨床評価および応答の代替として、腫瘍は、従来のインビトロアッセイ手順に従ってインビトロで決定される場合、インターフェロンタンパク質の投与に対して難治性であると同定され得る。インターフェロン耐性腫瘍としての腫瘍の特徴付けは、本明細書中の実施例6に記載したMTTアッセイに実質的に従って決定される場合、少なくとも100,000ユニットのIntronAタンパク質との接触による増殖阻害に対して耐性である腫瘍を含むインターフェロン耐性腫瘍細胞の曝露によって決定され得る。用語腫瘍とは、腫瘍性細胞の集団をいう。用語腫瘍性細胞とは、正常な細胞増殖制御に依存しないことによって特徴付けられる異常な増殖表現型を示す細胞をいう。腫瘍性細胞は、任意の所定の時点において必ずしも複製しないので、用語、腫瘍性細胞は、活発に複製してもよく、または一時的に非複製的な休止状態G1またはG0であってもよい細胞を包含する。局在化した腫瘍性細胞の集団とは、新生物または腫瘍をいうこれらの用語は、交換可能とみなされる。上に記したように、本明細書中で使用される場合、用語、腫瘍とはまた、実質的に局在化した腫瘍塊が存在しない広汎性の腫瘍性疾患例えば、白血病をいってもよい。新生物または腫瘍は、悪性であっても、良性であってもよい。悪性腫瘍とはまた、癌もいう。好ましい実施形態において、上記腫瘍は、上皮癌例えば、胸、肺、前立腺、結腸直腸、腎臓、胃、膀胱または卵巣、あるいは胃腸管の任意の癌である。ほとんどの腫瘍は、概して、発生源において単クローン性であるが、単クローン性起源由来の腫瘍は、時間が経てば分化し得る。従って、腫瘍広汎性の腫瘍を含むは、インターフェロン耐性である個々の細胞または細胞小集団、およびインターフェロン処置に感受性のある細胞または細胞小集団を保有してもよい。用語、インターフェロン耐性腫瘍とは、本明細書中の実施例6に記載したMTTアッセイに従って決定される場合、腫瘍を含む細胞の十分な集団すなわち、少なくとも20の細胞が、インターフェロン耐性である腫瘍をいう。本明細書中で使用される場合、用語処置とは、腫瘍性細胞を含む目的の組織を、インターフェロンに曝露する目的のために、患者に対するインターフェロンをコードする核酸の導入をいうことを意図する。従って、例えば、癌性組織とは、1つ以上の細胞が、癌性、悪性、腫瘍状、前癌性、形質転換されると分類されるか、あるいは腺腫もしくは癌腫、または、通常、これらの状態に関する分野において使用される他の同義語として分類される組織をいうことを意図する。処置が、腫瘍が存在する被験体の生理的状態または精神状態の改善を示す場合、その処置は、治療とみなされ得る。上記状態の改善は、種々の手段減少した全身腫瘍組織量、腫瘍進行の減少、腫瘍進行の減速化、生存の増加、腫瘍退縮、全身腫瘍組織量疲労、食欲不振、疼痛、鬱病、好中球減少および認知機能障害が挙げられるが、これらに限定されないに関連した改善症状を含むによって、測定され得る。本明細書中で使用される場合、用語インターフェロンIFNと省略されるとは、集合的に、1型インターフェロンおよび2型インターフェロンそれらの欠失改変体、挿入改変体または置換改変体、生物学的に活性なフラグメント、および対立遺伝子形態を含むをいう。本明細書中で使用される場合、用語、インターフェロンIFNと省略されるとは、集合的に、1型インターフェロンおよび2型インターフェロンをいう。1型インターフェロンとしては、インターフェロン-α、インターフェロン-β、およびインターフェロン-ωならびにそれらのサブタイプが挙げられる。ヒトインターフェロン-αは、少なくとも14種の同定されたサブタイプを有するが、インターフェロン-βは、3種の同定されたサブタイプを有する。特に、好ましいインターフェロン-αとしては、ヒトインターフェロンαサブタイプα-1GenBank登録番号NP076918、α-1bGenBank登録番号AAL35223、α-2、α-2aGenBank登録番号NP000596、α-2bGenBank登録番号AAP20099、α-4GenBank登録番号NP066546、α-4bGenBank登録番号CAA26701、α-5GenBank登録番号NP002160およびCAA26702、α-6GenBank登録番号CAA26704、α-7GenBank登録番号NP066401およびCAA26706、α-8GenBank登録番号NP002161およびCAA26903、α-10GenBank登録番号NP002162、α-13GenBank登録番号NP008831およびCAA53538、α-14GenBank登録番号NP002163およびCAA26705、α-16GenBank登録番号NP002164およびCAA26703、α-17GenBank登録番号NP067091、α-21GenBank登録番号P01568およびNP002166、ならびにStabinsky、1996年、7月30日に発行された米国特許第5,541,293号、Stabinsky、1990年、1月30日に発行された米国特許第4,897,471号、およびStabinsky、1987年、9月22日に発行された米国特許第4,695,629号それらの教示は、参考として本明細書中に援用されるに記載されたようなコンセンサスインターフェロンconsensusinterferon、ならびにGoeddelら、1983年、11月8日に発行された米国特許第4,414,150号その教示は、本明細書中に援用されるに記載されたようなハイブリッドインターフェロンhybridinterferonが挙げられるが、これらに限定されないが挙げられる。2型インターフェロンとは、インターフェロンγEP77,670AおよびEP146,354Aおよびサブタイプをいう。ヒトインターフェロンγは、少なくとも5種の同定されたサブタイプインターフェロンω1GenBank登録番号NP002168を有する。発現のためのインターフェロンをコードするDNA配列の構築は、上に参照した周知のアミノ酸配列およびGoeddelら、2002年、11月19日に発行された米国特許第6,482,613号その教示は、本明細書中に参考として援用されるに記載されたような周知のアミノ酸配列に基づいて、従来の組換えDNA技術によって、達成され得る。インターフェロンの生物学的に活性なフラグメントは、当該分野における周知の技術例えば、Openakkerら、前出;Mossman、J.Immunol.Methods、65:551983を参照のことによって測定される場合、任意の抗腫瘍活性または抗増殖性活性を有すると認められ得、そして、IFNレセプター媒介機構を介してIFN応答性遺伝子を活性化させる。溶解性のIFN-αタンパク質およびIFN-βタンパク質は、一般に、1型IFNレセプター複合体GenBank登録番号NP000865と会合すると認められ、類似の細胞内のシグナル伝達経路を活性化させる。IFN-γは、一般に、II型IFNレセプターと会合すると認められる。両方のIFNレセプターの型のリガンド誘導会合は、Janusキナーゼによって、そのレセプターのリン酸化を生じ、続いて、STATシグナルトランスデューサーおよび転写の活性化因子タンパク質およびIFN誘導性遺伝子に存在するIFN応答エレメントに結合するIFN誘導性転写因子の形成を導くさらなるリン酸化の現象を活性化させる。1型IFNレセプターおよび/または2型IFNレセプターと会合後、IFN経路を活性化させると認められるポリペプチドは、本発明の目的のためのインターフェロンとみなされる。用語組換えベクターとは、従来の組換えDNA技術を用いて調製されているインターフェロン発現カセットを含むウイルス性ベクターおよび非ウイルス性ベクターをいう。用語インターフェロン発現カセットとは、細胞中のインターフェロンの転写および翻訳を生じるために、配列をコードするインターフェロンに作動可能に連結された調節性エレメントを含むヌクレオチド配列を定義するために本明細書中で使用される。用語調節性エレメントとは、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位などをいう。上記発現カセットはまた、インターフェロン遺伝子の発現および/または分泌を援助する他の配列を含んでもよい。調節性エレメントは、特定の細胞型においてのみ、インターフェロンの発現を可能、増強または促進するために、配置され得る。例えば、上記発現カセットは、インターフェロンが、誘導性プロモーター、組織特異的プロモーター、または腫瘍特異的プロモーター、あるいは一時性のプロモーターの制御下であるように設計され得る。一般に、インターフェロンは、機能的発現のための適切な間隔で連続して連結される以下のエレメント:プロモーター、転写のための開始部位、3’非翻訳領域、5’mRNAリーダー配列、インターフェロンポリペプチドをコードする核酸配列、およびポリアデニル化シグナルを含む発現ベクター中に提供される。用語作動可能に連結されたとは、機能的関係におけるポリヌクレオチドエレメントの連結をいう。核酸配列は、別の核酸配列と機能的関係に置かれる場合、作動可能に連結される。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、コード配列の転写に影響する場合、コード配列に作動可能に連結される。作動可能に連結されたとは、連結されるヌクレオチド配列が、代表的に隣接することを意味する。しかし、エンハンサーは、一般に、プロモーターから数キロベース離れた場合に機能し、イントロン配列は、可変長であってもよく、いくつかのポリヌクレオチドエレメントは、作動可能に連結され得るが、直接的に隣接し得ず、異なる対立遺伝子または染色体からトランスにおいてさえ機能し得る。用語誘導性プロモーターとは、好ましくはまたは単に特定の条件下および/または外部の化学刺激もしくは他の刺激に応答して、インターフェロン導入遺伝子の転写を促進するプロモーターをいう。誘導性プロモーターの例は、科学文献例えば、Yoshidaら、Biochem.Biophys.Res.Comm.、230:426-4301997;Iidaら、J.Virol.、709:6054-60591996;Hwangら、J.Virol.、719:7128-71311997;Leeら、Mol.Cell.Biol.179:5097-51051997;およびDreherら、J.Biol.Chem.、27246:29364-293711997を参照のことにおいて公知である。放射線誘導プロモーターの例としては、EGR-1プロモーターが挙げられるBoothmanら、第138巻、補遺、S68-S71ページ1994。組織特異的プロモーターおよび腫瘍特異的プロモーターは、当該分野において周知であり、それらとしては、平滑筋において優先的に活性なプロモーターα-アクチンプロモーター、膵臓特異的Palmiterら、Cell、50:4351987、肝臓特異的Rovetら、J.Biol.Chem.267:207651992;Lemaigneら、J.Biol.Chem.、268:198961993;Nitschら、Mol.Cell.Biol.、13:44941993、胃特異的Kovarikら、J.Biol.Chem.、268:99171993、下垂体特異的Rhodesら、GenesDev.、7:9131993、前立腺特異的Hendersonら、1997年、12月16日に発行された米国特許第5,698,443号などが挙げられる。用語一時性のプロモーターとは、応答エレメントの発現を制御するプロモーターに関連するウイルス性サイクルの後の点で、インターフェロン導入遺伝子の転写を促進するプロモーターをいい、それは、ウイルス性ベクター系と併せて使用される。そのような一時性の調節されたプロモーターの例としては、アデノウイルス主要後期プロモーターMLP、および他の後期プロモーターが挙げられる。単純ヘルペスウイルスに関して、一時性プロモーターの例としては、潜在的な活性化されたプロモーターが挙げられる。用語非ウイルス性ベクターとは、自発的に複製する染色体外の環状DNA分子をいい、正常なゲノムと区別されて、標的細胞において配列をコードするインターフェロンの発現に影響し得る非選択的条件下で、細胞生存のために必要不可欠でない。プラスミドは、細菌の生成を促進するために、細菌中で自発的に複製するが、配列をコードするインターフェロンを含むそのようなプラスミドが、治療効果を達成するために、標的細胞中で複製する必要はない。さらなる遺伝子例えば、薬剤耐性をコードする遺伝子が、組換えベクターの存在に関しての選択またはスクリーニングを可能にするために、含まれ得る。そのようなさらなる遺伝子としては、例えば、ネオマイシン耐性、多剤耐性、チミジンキナーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ジヒドロ葉酸還元酵素DHFR、およびクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子が挙げられ得る。特定の組織または器官へのインターフェロン遺伝子の送達を促進するために、細胞標的化を促進する非ウイルス性送達システムにエレメントを組み込むことが、有益であり得る。例えば、液体のカプセル化された発現プラスミドは、標的化を促進するために、改変された表面細胞レセプターリガンドを組み込み得る。単独のリポソーム処方物が投与され得るが、本発明の所望の組成物で充填または装飾されたいずれかのリポソームは、全身に送達され得るか、または目的の組織に方向付けられ得、次いで、そのリポソームは、選択された治療的/免疫原性ペプチド組成物を送達する。そのようなリガンドの例としては、抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、キメラ抗体またはそれらの機能的フラグメントFv、Fab、Fab’が挙げられる。あるいは、非ウイルス性ベクターは、Wuら、1992年、11月24日に発行された米国特許第5,166,320号、およびWuら、1997年、6月3日に発行された米国特許第5,635,383号それらの教示は、本明細書中に参考として援用されるに記載されるように、標的部分にポリリシン部分を介して連結され得る。用語ウイルスベクターおよびウイルスとは、本明細書中で交換可能に使用され、タンパク質合成機構もエネルギー生成機構を有さない任意の偏性細胞内寄生物をいう。ウイルス性ゲノムは、脂質膜のタンパク質のコーティングされた構造を含むRNA、またはDNAであってもよい。用語、ウイルスおよびウイルス性ベクターは、本明細書中で交換可能に使用される。本発明の実施に有用なウイルスとしては、組換え改変されたエンベロープDNAウイルスおよびエンベロープRNAウイルスまたは非エンベロープDNAウイルスおよび非エンベロープRNAウイルスが挙げられ、好ましくは、バキュロウイルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科picornoviridiae、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、またはアデノウイルス科から選択される。上記ウイルスは、天然に存在するウイルスであってもよく、またはそれらのウイルスゲノムは、外因性の導入遺伝子の発現を含むように組換えDNA技術によって改変されてもよく、複製欠損性条件付きで、複製または複製可能であるように操作されてもよい。親ベクターの性質の各々の有利なエレメントを利用するキメラウイルスベクター例えば、Fengら、NatureBiotechnology、15:866-8701997を参照のこともまた、本発明の実施において有用であり得る。ウイルス骨格が、ウイルスベクターのパッケージングのために必要な配列のみを含み、必要に応じて、導入遺伝子発現カセットを含み得る最小のベクター系は、本発明の実施に従って、産生され得る。一般に、処置される種由来のウイルスを使用することが好ましいが、いくつかの場合において、好ましい病原菌特性を有する異なる種由来のベクターを使用することが有益であり得る。例えば、ヒト遺伝子治療のためのウマヘルペスウイルスベクターは、1998年、8月5日に公開されたPCT国際公開番号WO98/27216に記載されている。上記ベクターは、ウマウイルスが、ヒトに対して病原性がないので、ヒトの処置のために有用であると記載されている。同様に、ヒツジのアデノウイルスベクターもまた、ヒト遺伝子治療において使用され得、それらは、ヒトアデノウイルスベクターに対する抗体を回避すると主張されている。そのようなベクターは、1997年、4月10日に公開されたPCT国際公開番号WO97/06826に記載されている。用語複製欠損とは、野生型の哺乳動物細胞において複製に関して非常に弱められるベクターをいう。多数のそのようなベクターを産生する為に、一般に、プロデューサー細胞株が、ヘルパーウイルスを用いた同時トランスフェクションによって作製されるか、または機能性を欠く相補体にゲノム的に改変される。例えば、HEK293細胞は、相補体アデノウイルスE1欠失に操作されており、293細胞においてE1を欠失した複製欠損アデノウイルスベクターの増殖を可能にする。用語複製コンピテントウイルスベクターとは、感染、DNA複製、パッケージング、および感染した細胞の溶解をし得るウイルスベクターをいう。用語条件付きで複製するウイルスベクターとは、特定の細胞型における選択的発現を達成するために設計される複製コンピテントベクターをいうために本明細書中で使用される。そのような条件付きの複製は、作動的に組織特異的、腫瘍特異的または細胞型特異的、あるいは他の選択的に誘導された調節性コントロール配列を、初期遺伝子例えば、アデノウイルスベクターのE1遺伝子に結合することによって、達成され得る。細胞型特異的または細胞型標的化はまた、ウイルスエンベロープタンパク質の改変によって特徴的に広範な感染性を有するウイルス由来のウイルスベクターにおいて達成され得る。例えば、固有の細胞表面レセプターと特異的な相互作用を有する修飾されたノブknobドメインおよびファイバードメインの発現を達成するために、ウイルスゲノムノブおよびファイバーコード配列の選択的な修飾による細胞標的化は、アデノウイルスベクターを用いて達成された。そのような修飾の例は、Wickhamら、J.Virol.、7111:8221-82291997アデノウイルスファイバータンパク質へのRGDペプチドの組み込み;Arnbergら、Virology、227:239-2441997眼および生殖管に対する向性を達成するためのアデノウイルスファイバー遺伝子の修飾;Harrisら、TIG、1210:400-4051996;Stevensonら、J.Virol.716:4782-47901997;Michaelら、GeneTherapy、2:660-6681995アデノウイルスファイバータンパク質へのガストリン放出ペプチドフラグメントの組み込み;およびOhnoら、NatureBiotechnology、15:763-7671997シンドビスウイルスへのタンパク質A-IgG結合ドメインの組み込みに記載されている。細胞特異的標的化の他の方法は、エンベロープタンパク質への抗体または抗体フラグメントの結合によって達成された例えば、Michaelら、J.Biol.Chem.、268:6866-68691993、Watkinsら、GeneTherapy、4:1004-10121997;Douglasら、NatureBiotechnology、14:1574-15781996を参照のこと。あるいは、特定の部分が、標的化を達成するために、ウイルス表面に結合され得る例えば、Nilsonら、GeneTherapy、3:280-2861996レトロウイルスタンパク質へのEGFの結合を参照のこと。ベクターの標的化はまた、Murphy、2003年、10月21日に発行された米国特許第6,635,476号その教示は、本明細書中に参考として援用されるの教示に従って達成され得る。これらの標的化修飾は、ウイルスゲノムに対する他の修飾に加えて、またはそれと組み合わせて本発明のウイルスベクター内に導入され得る。標的化修飾は、複製欠損、複製コンピテントまたは従来の複製ウイルスを用いて使用され得る。あるいは、ウイルスベクターを用いる細胞型標的化は、ウイルス複製のリプレッサーを駆動する経路応答性プロモーターの使用を介して達成され得る。用語経路応答性プロモーターとは、正常細胞において、特定のタンパク質に結合し、そして付近の遺伝子をこのタンパク質の結合に転写的に応答させるDNA配列をいう。そのようなプロモーターは、転写因子が結合する配列である応答性エレメントを組み込むことによって作製され得る。そのような応答は一般に、誘導性であるが、増加するタンパク質レベルが転写を減少させるいくつかの場合がある。経路応答性プロモーターは、天然に存在するかまたは合成であり得る。経路応答性プロモーターは代表的に、標的である機能的タンパク質の経路に関して構築される。例えば、天然に存在するp53経路応答性プロモーターは、機能的p53例えば、p21プロモーターまたはbaxプロモーターの存在によって活性化される転写制御エレメントを含む。あるいは、最小プロモーター例えば、SV40TATAボックス領域の上流にp53結合部位を含む合成プロモーターが、合成経路応答性プロモーターを作製するために使用され得る。合成経路応答性プロモーターは一般的に、コンセンサス結合モチーフに適合する配列の1つ以上のコピーから構築される。そのようなコンセンサスDNA結合モチーフは、容易に決定され得る。そのようなコンセンサス配列は一般的に、直接反復または数塩基対隔てられた頭-尾反復として配置される。頭-頭反復を含むエレメントは、パリンドロームまたは逆方向反復と呼ばれ、そして尾-尾反復を有するものは外翻everted反復と呼ばれる。本発明の好ましい実施において、上記ウイルスベクターは、アデノウイルスである。用語アデノウイルスは、用語アデノウイルスベクターと同義語synonomousであり、アデノウイルス科の属のウイルスをいう。用語、アデノウイルス科とは、ヒト、ウシ、ヒツジ、ウマ、イヌ、ブタ、マウスおよびサルのアデノウイルス亜属を含むが、これらに限定されない、マストアデノウイルス属の動物のアデノウイルスを集合的にいう。詳細には、ヒトアデノウイルスとしては、A-F亜属ならびにその個々の血清型が挙げられ、個々の血清型およびA-F亜属は、ヒトアデノウイルス1型、2型、3型、4型、4a型、5型、6型、7型、8型、9型、10型、11型Ad11AおよびAd11P、12型、13型、14型、15型、16型、17型、18型、19型、19a型、20型、21型、22型、23型、24型、25型、26型、27型、28型、29型、30型、31型、32型、33型、34型、34a型、35型、35p型、36型、37型、38型、39型、40型、41型、42型、43型、44型、45型、46型、47型、48型、および91型を含むが、これらに限定されない。用語、ウシアデノウイルスは、ウシアデノウイルス1型、2型、3型、4型、7型および10型を含むがこれらに限定されない。用語、イヌアデノウイルスは、イヌ型1CLL株、Glaxo株、RI261株、Utrect株、Toronto26-61株および2型を含むがこれらに限定されない。用語、ウマアデノウイルスは、ウマ1型および2型を含むがこれらに限定されない。用語、ブタアデノウイルスは、ブタ3型および4型を含むがこれらに限定されない。用語、ウイルスベクターは、複製欠損ウイルスベクター、複製コンピテントウイルスベクター、および条件付きで複製するウイルスベクターを含む。ヒトアデノウイルス2型および5型に由来するベクターが、より好ましい。それらのベクターは、それらの治療的能力を高めるために特定の改変に組み込まれ得る。例えば、上記ベクターは、E1a遺伝子およびE1b遺伝子の欠失を含み得る。特定の他の領域が、特定の機能を提供するために増強され得るか、または欠失され得る。例えば、E3領域のアップレギュレーションは、ヒト被検体に投与されるヒトアデノウイルスベクターに関する免疫原生を減少させると記載されている。E4領域は、CMVプロモーターからの導入遺伝子の発現に重要に関係しているが、しかしE4orf6タンパク質は、E1b大タンパク質の存在下で標的細胞におけるp53の分解をもたらすと記載されているSteegengaら、Oncogene、16:345-3471998。従って、アデノウイルスベクターのそのような配列の除去が、好ましい。本発明の1つの実施形態において、インターフェロン遺伝子を送達するために、複製コンピテントベクターを使用する場合、E1aCR3ドメインのトランス活性化機能を保持しているが、p300タンパク質およびRbタンパク質に結合するためのE1a遺伝子産物の能力を減少させるために、E1A領域の特定の欠失を含むアデノウイルスベクターを使用することが、好ましい。本発明のベクターは、E1aコード配列の欠失を有し、13Sコード配列においてp300結合部位およびp105-Rb結合部位が除去される。本発明の1つの好ましい実施形態において、p300結合の欠失は、アミノ酸ほぼ4~ほぼ25、またはアミノ酸ほぼ36~49の欠失により示される。本発明の1つの好ましい実施形態において、Rb結合の欠失は、アミノ酸ほぼ111~127、好ましくはアミノ酸ほぼ111~123の除去により示される。より好ましくは、E1a-p300結合ドメインの欠失が、アデノウイルスE1a遺伝子産物のアミノ酸4~25についてのコドンの欠失を含む、ベクターである。より好ましくは、E1a-Rb結合ドメインの欠失が、アデノウイルスE1a遺伝子産物のアミノ酸111~123についてのコドンの欠失を含む、ベクターである。あるいは、pRb結合は、E1A289Rタンパク質および243Rタンパク質のアミノ酸124~127を除去するような変異の導入によって除去され得る。本明細書中に例示されるような本発明の最も好ましい実施形態において、上記ベクターは、E1a13S遺伝子産物のアミノ酸4~25およびアミノ酸111~123の欠失を含む。さらに、E1a289Rタンパク質のアミノ酸ほぼ219~289およびE1A243Rタンパク質のアミノ酸ほぼ173~243の除去が、導入され得る。例えば、ヒトAd5ゲノムの1131位に対応する位置での点変異の導入すなわち、シトシン1131をグアニンに変化することにより、終止コドンを作製する。この変異は、E1a289Rタンパク質のアミノ酸219~289およびE1A243Rタンパク質のアミノ酸173~243の除去を生じる。この変異は、上記のRb結合およびp300結合における欠失に加えて、必要に応じて作製される。本発明の実施は、上記腫瘍を、インターフェロンをコードする組換えベクターと接触させる工程を包含する。上記腫瘍細胞の接触は、組換えベクターと腫瘍細胞の曝露によって達成され、その結果、上記腫瘍細胞は、上記ベクターによってコードされるインターフェロンを発現するベクターによって形質導入される。上記腫瘍を、上記ベクターに接触させる特定の手段は、そのベクターが送達される腫瘍の性質に依存して異なる。本発明のいくつかの実施形態において、本発明の組成物は、注射によって組織内に直接か、または目的の組織に供給される血管に投与され得る。本発明のさらなる実施形態において、局所投与が好ましいが、上記腫瘍部位への物理的接近を得ることが難しい場合、上記組成物は、離れた目的の組織例えば、内部器官への接近を可能にするために、カテーテルまたは他のデバイスを介して投与される。本発明の組成物はまた、その組成物のゆっくりとした放出または除放を可能にするために、貯蔵型デバイス、ポンプ、移植物、または処方物で投与され得る。本発明のさらなる実施形態において、本発明の組成物は、移動領域的にlocoregionallyすなわち、膀胱内、病巣内、および/または局所内に投与される。本発明の他の実施形態において、特に、広汎性の腫瘍例えば、白血病または転移性疾患を処置する場合、本発明の組成物は、静脈内投与経路または動脈内投与経路によって全身的に投与され得る。本発明の実施を実証するために、ヒトアデノウイルス5型ウイルス由来の組換えベクターを、インターフェロン種をコードするために使用した。IFNα遺伝子を含む2種のアデノウイルスベクターを、これらの研究において評価した。1つのベクターは、ヒトインターフェロンα2b遺伝子Ad-IFNα2bを含み、もう一方は、ヒトα1C-末端に結合したヒトα2N-末端からなるキメラヒトハイブリッドインターフェロン遺伝子Ad-IFNα2α1を含んだ。IFN活性は、一般に、限定された種であるが、上記ハイブリッドインターフェロン別名ユニバーサルuniversalまたはIFNA/Dは、マウスおよびヒトを含む種々の哺乳動物種由来の細胞上で活性である。これらの2種のインターフェロンベクターは、ヒト腫瘍についての組換えIFNαベクター効果、ならびにマウスモデルにおいて存在するヒト腫瘍のマウス細胞および異種移植細胞の両方の細胞において応答を誘発し得るハイブリッドインターフェロンの広範な効果の評価を可能にした。膀胱内のIFN遺伝子に対する応答およびタンパク質治療を評価するために、ヌードマウスにおける垂直向性膀胱腫瘍モデルを使用した。上記モデルは、Watanabeら、CancerGeneTherapy、7:1575-15802000およびZhouら、CancerGeneTherapy、9:681-6862002に記載されている。処置後21日に得た膀胱の組織学的部分に見出される腫瘍の量は、画像化によって計算された全身腫瘍組織量と非常に相関していた。膀胱内処置の前に、各マウスの膀胱内のKU7細胞の全身腫瘍組織量を、上記癌細胞を、Watanabeらの教示に従って注入した後、2週間、画像化して、定量した。膀胱内注入のために、上記ベクターを、Syn3とともに投与した実施例1。次いで、上記マウスに、本明細書中の実施例に記載したように、2日間連続して1時間、種々の膀胱内処置を与えた。3週間後、膀胱を、全身腫瘍量の変化のために再び画像化した。添付の図面の図1に示したように、Ad-IFNα2α1/Syn3またはAd-IFNα2b/Syn3のいずれかを使用した場合、顕著な腫瘍退縮を観察したP<0.0024。対照的に、腫瘍は、コントロールAd-βgal/Syn3、Ad-IFNα2α1、またはSyn3単独での処置後、急速に増殖した。これらの結果は、Syn3が、IFNαをコードするアデノウイルスベクターの効果を著しく高めたことを示す。膀胱内のIFNαタンパク質を、表在性膀胱癌のための臨床試験において、単独またはBCGと組み合わせて使用するので、インターフェロンタンパク質治療に対するAd-IFNの活性の差異をさらに詳細にするために実験を行った。ハイブリッドインターフェロンタンパク質の効果を、上記の同所性腫瘍モデルにおけるAd-IFNα2α1と比較した。200,000ユニット2MIU/mlのIFNα2α1タンパク質を、2日間連続して1時間、膀胱内に与えた場合、有意な腫瘍退縮は示さなかった。IFNα2α1タンパク質を、1日、7日および14日に注入した場合、いずれも抗腫瘍効果を検出せず、最初の処置後、21日に全身腫瘍組織量を評価した。これらの結果は、図1に示したようなAd-IFNα2α1/Syn3治療後に観測された効果に対して対照的である。尿路上皮は、最初の腫瘍細胞付着を促進するために必要とされる尿路上皮の最初のトリプシン処理に関連した軽度の過形成を含む、全ての処置群において同様であるようであった。膀胱内のAdIFNα/Syn3後、インターフェロン発現のレベルおよび期間を評価するために、前述の効果の研究のために利用したAd-IFNα2b/Syn3の同じ濃度を用いて、腫瘍を持たない胸腺欠損マウスを使用して一連の実験を行い、2日連続の1時間曝露に対する単一の膀胱内処置を比較した。膀胱組織中のIFNタンパク質を、処置後、種々の時間におけるマウスの膀胱を得ることによって評価して、ELISAアッセイを用いて組織ホモジネートに存在するIFNタンパク質についてアッセイした。処置後1日、膀胱は、約50,000pg/mgのIntronAを含み、それは、添付の図面の図2、パネルAに示すように7日目までに5,000-10,000pg/mgにゆっくりと減少した。2回目のAd-IFNα2b/Syn3処置を与えたマウスにおいて、組織濃度は、100,000pg/mgに達し、単一の曝露と比較して7日間にわたって高いままであった。対照的に、200,000IUのIFNタンパク質を注入した場合、処置後、1時間の組織ホモジネートにおいて測定したIFN濃度は、1000pg/mgより低く、その後の時間にIFNタンパク質を検出しなかった。IFNタンパク質の高濃度を、Ad-IFNα2α1/Syn3処置またはAd-IFNα2b/Syn3処置のいずれかの後、2日間の免疫組織化学的分析によって、多数の尿路上皮細胞において見出した図2、パネルB。同様の染色が、多くの隣接したヒト腫瘍細胞において見られた図2、パネルB。非近交系のBalb/Cマウスにおいて、強いIFN染色もまた、Ad-IFNα2α1/Syn3またはAd-IFNα2b/Syn3のいずれかを用いて2日間連続した処置後5日間に、多くの尿路上皮細胞において見ることができた図2、パネルC。さらに、膀胱は、組織学的試験に対して局所毒性の形跡をほとんど示さないように見えた図2、パネルC。このことは、上記ハイブリッドIFNが、マウス細胞において活性であるため、Ad-IFNα2α1/Syn3で処置したマウスにおいて特に重要である。インターフェロン耐性腫瘍の処置においてインターフェロンをコードするベクターの効果をより完全に示すために、一連の実験を、インターフェロン耐性腫瘍細胞株においてインターフェロンをコードするベクターを評価するために行った。いくつかのヒト膀胱癌細胞株は、本明細書中に記載したMTTアッセイに従って、100,000IU/mlより多いインビトロでのIFNαまたはIFNαタンパク質のいずれかに曝露した後でさえ、細胞死を誘発するインターフェロンに対して耐性である。特定の細胞インターフェロン耐性腫瘍細胞株としては、KU7細胞前述の効果研究において使用したおよび253JB-V細胞が挙げられる。インターフェロンをコードする組換えベクターに曝露した場合、これらのインターフェロン耐性腫瘍細胞株は、Ad-IFNα処置に対して感受性を示した。例えば、50MOIのAd-IFN-α2α1またはAd-IFN-α2bを用いたKU7細胞または253J-BV細胞の形質導入は、IFNタンパク質について免疫細胞化学染色によって決定した場合、細胞の約50において向上したIFNα発現を生じた。多くの場合の強い核周囲のIFN染色が、形態的変化例えば、サイズの増加および有糸分裂の数の顕著な減少に伴って見られた図3、パネルA。これは、G2/Mにおいて有意な細胞周期の停止図3、パネルBおよびC、DNA断片化特性のアポトーシス図3、パネルBおよびC、および細胞性塞栓図3、パネルDを生じる。Ad-IFNへの曝露後のこれらのインターフェロン耐性腫瘍細胞株の細胞死の誘導の根底にある機構mechanismまたはmechanismsをより完全に明らかにするための、アポトーシスのための独立マーカーとしてのカスパーゼ-3活性化に対するAd-IFNαの効果。Ad-IFNαを用いた形質導入は、両方の細胞株におけるカスパーゼ-3の著しい活性化を刺激した図4、パネルAおよびB。カスパーゼ-3染色が、高レベルのIFN-α発現を示す細胞ならびにIFN-α発現の形跡を示さなかった多くの隣接した細胞において見られた図4a。さらに、カスパーゼ-3陽性細胞の割合を、同様の50MOIでAd-IFN処置後、72時間の253J-BV細胞株およびKU7細胞株の両方において定量すると、70を超える細胞が、カスパーゼ-3陽性であった図4、パネルB。Ad-IFNαへの曝露は、長期間にわたって培養した場合、細胞集団が再生しなかったため、かなりの量の細胞毒性を生じた。これらの結果は、IFNαタンパク質に対して耐性である全ての細胞株を含む、評価した膀胱癌細胞株において同様であった。そのような変化は、同様のMOIで100,000IU/mlまでのIFNαタンパク質またはAd-βgalを用いた処置後、これらの細胞株において見られなかった。50以下の細胞が、このMOIで形質導入されるため、このことはまた、巻き添え効果を誘発した強いAd-IFNを支持するためのさらなる証拠を提供した。時間に対するAd-IFNによる培養で作製されるIFNタンパク質の量を調べるために、KU7細胞および253JB-V細胞の両方を、2.5時間、50MOIおよび100MOIのAd-IFNα2bまたは100,000IU/mlのIntronAを用いて処理した。上清におけるIFNタンパク質の濃度は、IntronA約4pg/IU処理後、約400,000pg/mlで一定のままであったが、50MOIのAd-IFNα2bを用いた処理後、濃度は6日間でほとんど10,000,000pg/ml約2,500,000IUに達し、同様のレベルを、100MOIのAd-IFNα2bへの曝露後、2日までに記録した図5、パネルA。これらの結果に基づいて、2,500,000IU/mlのIntronAの添加後の効果を、48時間および72時間での50MOIのAd-IFNα2bを用いた処理後に見られる効果と比較した。サブジプロイド細胞の数の増加が、特に感染後72時間で、以前に示したようなAd-IFN処理細胞において見出されたが、一方で、増加は、そのような高濃度に対するIntronA曝露後の細胞において見出されなかった図5、パネルB。同様に、形態的変化またはIFN染色が、コントロール細胞と比較して、IntronA曝露後、48時間および72時間の細胞において見られなかったが、一方で、代表的な形態的変化およびIFN染色が、Ad-IFN処理細胞において見出された図5、パネルC。それにもかかわらず、IntronA処理後、48時間および72時間でG2/M細胞の割合の有意な増加が存在して、これは、Ad-IFN曝露後に見られる変化と同等であった。例えば、KU7細胞において、コントロール群、IntronA群およびAd-IFN群についての処理後、48時間でG2/M集団は、それぞれ9.7、23.4および33.4、ならびに72時間で7.4、21.3および19.5であった。IFNα2bおよびハイブリッドインターフェロンの両方をコードするベクターは、膀胱内のAd-IFNαが、強力な抗腫瘍活性を有することを明らかに示す。全身腫瘍組織量を、処置前と処置後に比較した場合、Syn3処方物においてAd-IFNα2α1またはAd-IFNα2bのいずれかを受けた腫瘍は、腫瘍サイズの著しい減少を示したが、膀胱の腫瘍は、Ad-β-gal/Syn3ならびにAd-IFNα2α1、Syn3またはIFNα2α1タンパク質単独で処置したマウスにおいて急速に増殖した。最小の局所毒性をまた、任意の処置で観測した。本発明のインビボでの実験に使用したKU7細胞を含む、種々の膀胱癌細胞株は、培養物中の高レベルのIFNαタンパク質自体に耐性であったが、それらは、50以下の細胞のみの形質導入を生じる粒子濃度でのカスパーゼ依存様式におけるAd-IFNαによって細胞培養物中で均一に死滅した。これらの結果は、インターフェロン種例えば、Ad-IFNαをコードするベクターが、強い巻き添え効果およびIFNタンパク質に対する耐性を克服する能力を有することを確かにする。要約すると、上記の実験は、インターフェロンを送達された組換えベクターが、市販の組換えIFNタンパク質とは異なる独自の性質を有すること、そしてIFNをコードするベクターが、IFNタンパク質に対する耐性を克服し得ることを示す。膀胱癌に関して、研究は、連続した日で1時間、Ad-IFN-α2α1/Syn3またはAd-IFN-α2b/Syn3の膀胱内の注入が、処置後3週間に全身腫瘍組織量を測定した場合、胸腺欠損マウスにおけるヒト表在性膀胱腫瘍の増殖において顕著な退縮を引き起こすことを、はっきりと示す。1日あたり200,000IUのIFN-α2α1タンパク質を用いた同様の処置は、任意の長期のIFN組織レベルを生じず、腫瘍の増殖への影響がなかった。Ad-IFN-α2α1/Syn3およびAd-IFN-α2b/Syn3は、インビトロでの細胞毒性およびインビボでの腫瘍退縮を引き起こす際に同程度であるため、IFNの持続性発現の直接的な効果は、このモデルにおける腫瘍の微環境に対するその効果というよりむしろ、腫瘍退縮における実質的な要因であった。なぜなら、IFNα2bは、マウス細胞およびヒト細胞の両方において産生され得るが、ヒト細胞においてインターフェロンシグナル伝達経路のみを活性化するからである。上記データはまた、Ad-IFNαが、高濃度のIFNタンパク質に対して耐性のある膀胱癌細胞においてカスパーゼ依存細胞毒性を誘発し得ることを示す。アポトーシスは、免疫化学的染色によって高い細胞内レベルのIFNαを示す膀胱癌細胞においてだけではなく、IFNα発現を示さなかった隣接した細胞においても現れた。これらの結果は、Ad-IFNαを用いる処置が、Ad-IFNαによる感染を免れた腫瘍細胞を標的とし得る隣接した細胞において強い巻き添え効果を引き起こし得ることを示す。任意の薬剤の臨床適用への潜在的な懸念は、その潜在的な毒性副作用である。しかし、これらの研究は、上記ベクターによって産生された高く、持続性のあるインターフェロンレベルが存在したとしても、インターフェロンをコードする組換えベクターの投与に関連した毒性がないことをはっきりと示す。上記の研究からの結果は、胸腺欠損マウスを、Ad-IFNα2α1/Syn3処置後、3週間調べた場合、正常な尿路上皮において有意な形態的変化がないことを示した。さらに、腫瘍を持たない正常な非近交系マウスを、Ad-IFNα2α1/Syn3を用いて同様に処置して、曝露後、21日まで膀胱における急性の病変について調べた場合、有意な変化を、膀胱の組織学的検査において確認しなかった。さらに、ラットにおけるパイロット実験は、インターフェロン導入遺伝子発現が、ラットの尿において高かったが、血清濃度は、膀胱内Ad-IFN処置後、低い全身曝露を表して、最小であったことを示した。これらの初期の結果および毒性は、Ad-IFNα2b/Syn3が、十分に許容されるという示唆に帰着する。本発明はさらに、本発明のベクターを含有する薬学的処方物を提供する。本発明の組成物は、哺乳動物の被検体、好ましくはヒトへの投与のために受容可能な当該分野において公知の様式による投与のために処方される。特に、送達システムは、筋肉内投与、静脈内投与、注入物質貯蔵型デバイス投与または局所投与のために処方され得る。非ウイルス遺伝子送達システムを使用する場合において、インターフェロン遺伝子を含む発現プラスミドが、リポソーム中にカプセル化され得る。リポソームとしては、エマルジョン、泡、ミセル、不溶性の単層、液晶、リン脂質分散物、ラメラ層などが挙げられる。リポソームキャリアを使用する標的細胞へのDNA配列の送達は、当該分野において周知である。種々の方法が、例えば、Szokaら、Ann.Rev.Biophys.Bioeng.、9:4671980、Szokaら、1983年、7月19日に発行された米国特許第4,394,448号ならびに米国特許第4,235,871号、同第4,501,728号、同第4,837,028号、および同第5,019,369号それらは本明細書中に参考として援用されるに記載されるように、リポソームを調製するために利用可能である。本発明の実施に有用なリポソームは、一般に、中性で負に荷電したリン脂質およびステロール例えば、コレステロールを含む、1つ以上の標準的な小胞形成脂質から形成され得る。そのような小胞形成脂質の例としては、米国特許第5,650,096号に開示されるような、DC-chol、DOGS、DOTMA、DOPE、DOSPA、DMRIE、DOPC、DOTAP、DORIE、DMRIE-HP、n-スペルミジンコレステロールカルバメート、および他のカチオン脂質が挙げられる。脂質の選択は、一般に、例えばリポソームサイズ、酸不安定性および血流中でリポソームの安定性を考慮して導かれる。血清半減期を増加させるために、さらなる成分例えば、1991年、5月7日に発行された米国特許第5,013,556号、および1993年、5月25日に発行された同第5,213,804号に記載されるようなポリエチレングリコールコーティングPEG化といわれるが、リポソーム処方物に添加され得る。本発明の組成物は、哺乳動物の被験体、好ましくはヒトへの投与のために受容可能な当該分野において公知の様式による投与のために処方される。本発明のいくつかの実施形態において、本発明の組成物は、注射によって組織内に直接か、または目的の組織に供給される血管に投与され得る。本発明のさらなる実施形態において、本発明の組成物は、移動領域的にlocoregionallyすなわち、膀胱内、病巣内、および/または局所的に投与される。本発明の他の実施形態において、本発明の組成物は、注射、吸入、坐剤、経皮送達などによって全身的に投与される。本発明のさらなる実施形態において、上記組成物は、離れた目的の組織例えば、内部器官への接近を可能にするために、カテーテルまたは他のデバイスを介して投与される。本発明の組成物はまた、その組成物のゆっくりとした放出または持続性放出を可能にするために、局所的な処方物またはポリマーマトリックス、ヒドロゲルマトリックス、ポリマーインプラント、あるいはカプセル化された処方物で投与され得る。上記送達システムが、溶液または懸濁液として処方される場合、その送達システムは、受容可能なキャリア、好ましくは水性キャリア中である。種々の水性キャリア例えば、水、緩衝化水、0.8生理食塩水、0.3グリシン、ヒアルロン酸などが、使用され得る。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術により滅菌され得るか、または滅菌濾過され得る。得られた水性溶液は、そのままでの使用のためにパッケージングされ得るか、または凍結乾燥され得、この凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌溶液と組み合わせられる。上記組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる場合、薬学的に受容可能な補助物質例えば、pH調節および緩衝化剤、張度調節剤、湿潤剤など例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエートなどを含み得る。上記薬学的処方物中の本発明の組成物の濃度は、広範に変化し得すなわち、約0.1重量未満から通常は、約2重量または少なくとも2重量から多くとも20重量から50重量またはそれ以上、そして液体の容量、粘度などによって、選択される投与の特定の様式に従って主に選択される。いくつかの適用において、上記標的細胞へのインターフェロンをコードする核酸の転移を促進する増強剤と併せて上記組換えベクターを投与することが好ましい。そのような送達増強剤の例としては、界面活性剤detergent、アルコール、グリコール、界面活性剤surfactant、胆汁酸塩、ヘパリンアンタゴニスト、シクロオキシゲナーゼインヒビター、高張性塩溶液およびアセテートが挙げられる。アルコールとしては例えば、脂肪族アルコール例えば、エタノール、N-プロパノール、イソプロパノール、ブチルアルコール、アセチルアルコールが挙げられる。グルコールとしては、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよび他の低分子量グリコール例えば、グリセロールおよびチオグリセロールが挙げられる。アセテート例えば、酢酸、グルコン酸、および酢酸ナトリウムは、送達増強剤のさらなる例である。1MNaClのような高張性塩溶液もまた、送達増強剤の例である。胆汁酸塩例えば、タウロコール酸塩、タウロ-デオキシコール酸ナトリウムsodiumtauro-deoxycholate、デオキシコール酸塩、ケノデオキシコール酸塩、グリココール酸、グリコケノデオキシコール酸および他の収斂薬例えば、硝酸銀が使用され得る。第4級アミン例えば、硫酸プロタミンのようなヘパリン-アンタゴニストもまた、使用され得る。アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤もまた、遺伝子の転移を増強するために使用され得る。例示的な界面活性剤としては、タウロコレート、デオキシコレート、タウロデオキシコレート、セチルピリジウム、ベナルコニウムクロライドbenalkoniumchloride、両性洗浄剤3-14界面活性剤、CHAPS3-[3-コラミドプロピルジメチルアンモニオール]-1-プロパンスルホン酸水和物、BigCHAP、DeoxyBigCHAP、Triton-X-100界面活性剤、C12E8、オクチル-B-D-グルコピラノシド、PLURONIC-F68界面活性剤、Tween20界面活性剤およびTWEEN80界面活性剤CalBiochemBiochemicalsが挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい増強剤および方法は、Englerら、2001年、11月6日に発行された米国特許第6,312,681号、Englerら、2000年、12月26日に発行された米国特許第6,165,779号、およびEnglerら、2002年、5月21日に発行された米国特許第6,392,069号それらの全教示は、本明細書中に参考として援用されるに記載されている。本発明の実施に有用な特に好ましい増強剤は、式I:のSyn3と呼ばれる化合物である。本発明の実施に有用なさらなる増強剤としては、式II、式III、式IV、および式V:の化合物ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられるが、これらに限定されない。アデノウイルスベクターを使用して尿路上皮を形質導入するための最初の試みは、感染に対して防御する抗付着性バリアの存在に一部起因して、限定的な成果を有したPagliaroら、J.Clin.Oncol.、15:2247-22532003。尿路上皮のアデノウイルスの形質導入を劇的に増加させる賦形剤のSyn3が、確認されているConnorら、GeneTher.、8:41-82001;Yamashitaら、CancerGeneTherapy、9:687-6912002。動物モデルにおいて、Syn3処方物におけるアデノウイルスベクターの膀胱内投与は、正常な尿路上皮および表在性膀胱腫瘍の両方において顕著に導入遺伝子の発現を増加させた。Syn3の増強効果は、約1時間の時間帯にわたって持続する。従って、本発明の組換えベクターは、Syn3と併せて使用される場合、同時および概して、Syn3に対する膀胱の曝露後、約1時間以内に投与されることが好ましい。本発明は、インターフェロンをコードする組換えベクターを含む薬学的処方物を、哺乳動物生物体に投与する工程によって、腫瘍を含む哺乳動物生物体を処置する方法をさらに提供する。用語哺乳動物生物体としては、ヒト、ブタ、ウマ、ウシ、イヌおよびネコが挙げられるが、これらに限定されない。上記ベクターが、組換えアデノウイルスベクターである場合、好ましくは、処置される哺乳動物の型に内在性のアデノウイルスベクターが使用される。処置されるべき種由来のウイルスを使用することが一般に好ましいが、いくつかの場合において、有利な病原性特性を有する異なる種から誘導されたベクターを用いることが有利であり得る。例えば、ヒトアデノウイルスベクターの免疫応答特性を最小限にするために、ウシのアデノウイルスベクターが、ヒト遺伝子治療において使用され得ることが報告されている1997年、4月10日に公開されたPCT国際公開番号WO97/06826。初期の免疫応答を最小限にすることにより、ベクターの迅速な全身的クリアランスが回避され、そのベクターのより長い作用持続時間を生じる。ウイルスベクターのインビボでの反復投与に対する、前から存在するか、または誘導された免疫学的応答は、多数の投与過程を介して全身的に投与されるウイルスベクターの減少された治療効果に関連している。これは、投薬量の調節によって克服され得るが、また、免疫抑制剤と組み合わせて本発明のベクターを投与され得る。免疫抑制剤の例としては、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロホスファミド、リンパ球免疫グロブリン、CD3複合体に対する抗体、副腎皮質ステロイド、スルファサラジンsulfasalzaine、FK-506、メトキサレン、およびサリドマイドが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、抗ウイルス抗体の一時的な除去が、LaFaceら、2002年、10月15日に発行された米国特許第6,464,976号その教示は本明細書中に参考として援用されるの教示に従って達成され得る。疾患の処置のための最適な投薬レジメンの決定は、主治医の医療介護提供者の思慮内である種々の要因例えば、処置時の疾患の進行、年齢、体重、性別、用いられるベクターの型、送達増強剤とともに処方されるか否か、投与の頻度などに基づく。しかし、組換えアデノウイルスベクターは、数週間の期間にわたる複数回投与レジメンにおいて一用量あたり1×105と1×1012との間のウイルス粒子の投薬範囲で、ヒトにおいて安全でかつ効果的であることが実証されている。従って、インターフェロンをコードする組換えアデノウイルスベクターの投与は、そのような投薬範囲において使用され得る。ヒトにおける表在性膀胱癌の処置のための本発明の好ましい実施において、処置過程は、約100mlの容積においてインターフェロンα2bをコードする1×1010/ml~1×1012/ml最も好ましくは約1×1011/mlの組換えアデノウイルス粒子の用量が、約1時間の期間、膀胱内に注入される工程を包含する。代わりの処置過程は、約100mlの容積においてインターフェロンα2bをコードする1×1010/ml~1×1012/ml最も好ましくは約1×1011/mlの組換えアデノウイルス粒子の用量が、約1時間の期間、膀胱内に注入され、続いて2回目に、最初の投与の後、7日以内、5日以内、4日以内、3日以内、2日以内または連続した日に実質的に等価な用量が注入される工程を包含する。各処置過程は反復可能であり、疾患進行の過程に依存している。膀胱癌の処置のために、膀胱内に投与された組換えベクターの場合において、最適なインターフェロン遺伝子発現は概して、処置過程が少なくとも14日、より好ましくは約30日、および最も好ましくは約90日、間隔をあけている場合に観測される。ヒトにおける肝細胞癌の処置のための本発明の好ましい実施において、投薬レジメンは、細胞内のインターフェロン種を発現する約1×1010~1×1012粒子の複製欠損組換えアデノウイルスベクターを、腫瘍内または5日~7日連続した期間、肝臓動脈を経由して投与する工程を包含する。この投薬レジメンは、約3週間~6週間の治療過程にわたって反復され得る。肝細胞癌を罹患するヒト被験体における肝細胞癌の処置のための特に好ましい投薬レジメンは、約5日間連続して、AFPプロモーターの制御下でインターフェロンα2bを発現する約1×1010~1×1012の粒子の複製欠損組換えアデノウイルスベクターの肝臓内の動脈投与を提供する。最も好ましくは、この投薬レジメンは、他の化学療法レジメンと並行して行われる。上記ベクターが、複製コンピテントベクターである状況において、上記投薬レジメンは、減少され得る。例えば、複製コンピテントアデノウイルスベクターが構築され得、その複製は、例えばAFPプロモーターを用いることによって、肝細胞癌の細胞に実質的に制限されて、天然のE1プロモーターの代わりにE1タンパク質の発現を駆動する。そのようなベクターは、腫瘍細胞において優先的に複製し、インターフェロンを発現し、そして周囲の細胞に分散させるための所望の能力を有し、治療効果を広げて、減少された投薬量またはより短い処置期間を可能にする。本発明の組成物および方法は、単独あるいは従来の化学療法剤または処置レジメンと組み合わせて実施され得る。そのような化学療法剤の例としては、プリン合成のインヒビター例えば、ペントスタチン、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、メトトレキサートまたはピリミジン合成のインヒビター例えば、Pala、アザリビンazarbine、リボヌクレオチドからデオキシリボヌクレオチドへの変換のインヒビター例えば、ヒドロキシ尿素、dTMP合成のインヒビター5-フルオロウラシル、DNA損傷因子例えば、照射、ブレオマイシン、エトポシド、テニポシド、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ミトザントロン、アルキル化剤、マイトマイシン、シスプラチン、プロカルバジン、ならびに微小管機能のインヒビター例えば、ビンカアルカロイドおよびコルヒチンが挙げられる。化学療法処置レジメンとは、放射線療法のような新生物細胞を除去するために設計された非化学的な手順を主にいう。これらの化学療法剤は、別々に投与され得るか、または同時投与のために本発明の処方物とともに含まれ得る。本発明はまた、従来の免疫療法処置レジメン例えば、表在性膀胱癌の場合におけるBCGと組み合わせて実施され得る。以下の実施例は、本発明の実施の例示とみなされ、それらの範囲に制限されるとみなされるべきではない。実施例1.細胞株、ベクターおよび試薬膀胱癌細胞株として、KU7/GFPクローン6および253J-B-Vを、これらの研究のために使用した。KU7/GFPクローン6を、緑色蛍光タンパク質で、安定にトランスフェクトして、全てのインビボでの研究のために使用した。これらの細胞株は、Watanabeら、CancerGeneTherapy、7:1575-15802000に記載されている。上記細胞を、10FCSを補充した改変した最小必須培地中で増殖させ、5CO2および95空気中で37°Cにてインキュベーションした。インターフェロンα2α1をコードする組換えアデノウイルスベクターを、Ahmedら、InterferonCytokineRes.、216:399-4082001の教示に実質的に従って調製した。IFN-α2bおよびβ-ガラクトシダーゼβ-galをコードする組換えアデノウイルスベクターを、Ahmedら、Hum.GeneTher.、101:77-81999の教示に実質的に従って調製し、そしてそれらはまた、Gregoryら、2001年、4月3日に発行された米国特許第6,210,939号その全教示は、本明細書中に参考として援用されるに記載されている。IntronAタンパク質インターフェロンα-2b組換え体は、ScheringCorporationから市販されている。Syn3を、前に援用したEnglerら、米国特許第6,392,069号の教示に実質的に従って調製した。実施例2.表在性腫瘍形成、処置および画像化胸腺欠損マウスにおける表在性KU7-GFPヒト膀胱腫瘍を増殖させるための方法およびそれらの画像化を、Izawaら、Clin.CancerRes、8:1258-12702002およびZhouら、CancerGeneTherapy、9:681-6862002において以前に記載したように実施した。つまり、上記腫瘍細胞を注入後、2週間、膀胱をGFP含有腫瘍の存在について画像化した。次いで、マウスに1時間、100μlのAd-IFN-α2α1/Syn3、Ad-IFN-α2b/Syn3、Ad-IFN-α2α1、Ad-β-gal/Syn3、Syn3またはIFN-α2α1タンパク質のいずれかの膀胱内注入を与えた。巾着縫合糸で尿道の周りを縛り、上記手順の間、確実に保持した。ウイルス、Syn3およびインターフェロンタンパク質の濃度は、それぞれ、1×1011P/ml、1mg/mlおよび2×105IU/100μlであった。それぞれ14匹と16匹のマウスを処置したAd-IFN-α2α1/Syn3およびAd-IFN-α2α1の群を除いて、1つの群あたり6匹と8匹との間のマウスを処置した。最初の処置後、3週間に膀胱を再曝露して画像化した。安楽死後、続いて各々の膀胱に、100μlの10ホルマリンを膀胱内に注入して、尿道を縫合した。次いで、膀胱を除去し、10ホルマリンで固定して、パラフィンブロック内に包埋した。次いで、腫瘍の存在または非存在を立証するため、ならびにその腫瘍画像化を、腫瘍の組織学的証拠と関連付けるために、HE染色のための切片を、膀胱全体から得た。実施例3.ホモジネート遺伝子発現研究雌性胸腺欠損マウスを麻酔し、カテーテル処置して、単一の100μlのIntronA2×106IU/mlの膀胱内投与または上記のように1時間、Ad-IFN/Syn31×1011P/ml:1mg/mlを用いて1~2日の処置のいずれかを与えた。種々の間隔で、膀胱を収集して凍結した。後で、膀胱を解凍して溶解緩衝液Promegaに移した。サンプルを20秒間ホモジナイズしたFastPrep、Q-BIOgene。次いで、上記ホモジネートを、ELISAEndogenを使用して、ヒトインターフェロンαタンパク質濃度に関してアッセイした。インターフェロンタンパク質濃度を、pgIFN/mg膀胱組織として表した。実施例4.免疫化学的分析インビボでの研究のために、インターフェロン免疫組織化学を、上記のIzawaらの教示に実質的に従って実施した。陽性反応が、茶色の染色によって示された。同様に、培養物中の細胞についてのインターフェロン染色を、使用した主要な抗体が、ヒトインターフェロンαHu-IFN-α、PBLに対するウサギのポリクローナル抗体の1:500の希釈であった以外は、Xuら、Oncogene、4:807-8121989の教示に実質的に従って実施した。実施例5.統計分析統計分析を、Windows登録商標用のImage-Pro登録商標Plusバージョン4.0ソフトウェアMediaCybernetics、Inc.、8484GeorgiaAvenue、Suite200、SilverSpring、MD20910-5611USAから市販されるを用いて実施して、処置前の膀胱領域、処置前のGFP領域、処置後の膀胱領域および処置後のGFP領域の画素を計算した。続いて、処置前の膀胱領域に対する処置前のGFP領域、および処置後の膀胱領域に対する処置後のGFP領域の割合を計算した。本発明者らは、ノンパラメトリック検定Kruskal-Wallis検定を行い、KruskalおよびWallis、JournaloftheAmericanStatisticalAssociation、47:583-621、ConoverWJ、PracticalNonparametricStatistics.第3版、JohnWileySons、Inc.、NewYork1952に記載されるように7つの処置の間で、腫瘍サイズの割合の変化の差異を評価した。本発明者らは、試験のためのp値を決定するために、Monte-Carloシミュレーションを使用した。本発明者らが、各処置を他の処置と比較するために、多くの試験を実施しているという事実を調整するために、本発明者らは、Bonferroni補正を使用して、これらの試験の各々についての有意なレベルを調べた0.05/21=0.0024。MTTの結果に関して、上記分析を、GeneralLinealModelsoftheStatisticaソフトウェアStatSoft、Inc.、2300East14thStreet、Tulsa、OK74104から市販されるを使用して行った。実施例6.上清におけるMTT、フローサイトメトリー、カスパーゼ活性、およびIFNの測定MTTアッセイを、Zhangら、CancerRes.、63:760-7652003の教示に実質的に従って実施した。つまり、膀胱腫瘍細胞を、2.5時間、50MOIおよび100MOIにて所定のアデノウイルスで感染させた。異なる時点において、上記培地を除去して、1mg/mlMTTを含んでいる200μlの培地を添加した。3時間後、この反応を200μlのN,N-ジメチルホルムアミド溶解緩衝液で停止させ、得られた溶液を、マイクロプレートリーダーを用いてA595にて読み取った。さらに60mmのディッシュを、同様またはIntronAを用いて処理して、フローサイトメトリーおよびカスパーゼ活性のために収集した。複製ディッシュからの上清を、Ad-IFN-α2bまたはIntronAに暴露された細胞についてのIFNの濃度を測定するために毎日得た。細胞周期分析として、サブジプロイド細胞およびカスパーゼ活性の割合を、Williamsら、Mol.CancerTher.、2:835-8432003の教示に実質的に従って決定した。IntronAの濃度を、製造業者の説明書に実質的に従ってPierceBiotechnology、Inc.、P.O.Box117,3747N.MeridianRoad、Rockford、IL61105から提供されるカタログ番号EHIFNAとして市販のEndogenBrandHumanIFNaELISAキットを用いてFujisawaら、J.InterferonCytokineResearch、16:555-55919996の教示に従ってELISAを使用して測定した。実施例7.活性カスパーゼおよびIFN局在化に関する共焦点顕微鏡分析ならびに核の形態的変化とのそれらの関係ヒト膀胱細胞株を、10ウシ胎仔血清を補充したDMEM中のカバーガラス上で培養して、次いで50MOIおよび100MOIにてAd-α-gal、IFN-α2α1またはAd-IFN-α2bで感染させた。感染後36時間、氷冷したメタノール中で細胞を固定し、次いで、PBS中の10ヤギ血清中でブロックし、そして一晩、それぞれ、1:1,000と1:500の希釈にて抗活性カスパーゼ-3モノクローナルウサギResearchDiagnosticsInc.、PleasantHillRoad、FlandersNJ07836から提供されるカタログ番号RDI-CASP3ACTabRmとして市販されていると抗IFN-αモノクローナルマウスPBLBiomedicalLaboratories、131EthelRoadWest、Suite6、Piscataway、NJ08854から提供されるカタログ番号31101-1として市販されているの抗体とともにインキュベーションした。次いで、Alexa-488標識化したヤギ抗ウサギおよびAlexa-546標識化したヤギ抗マウス抗体MolecularProbes、29851WillowCreekRoad、Eugene、OR97402から提供され、それぞれ、カタログ番号11101および11010として市販されているを、もう1時間、DNA色素、633-Topro-3MolecularProbesから市販されていると一緒に添加した。検鏡板に取り付けたmountedスライドを、共焦点顕微鏡ZeissモデルLSM-510を使用して画像化し、適切な光学フィルターを備えたArgonおよびHe/Neレーザーを使用して各チャネルにおいて画素を分析した。この画像化を、各条件について分析した少なくとも10個の顕微鏡視野について表した。各実験を、2連で実施して、少なくとも3回繰り返した。"