"脱炭酸酵素Aの存在下、超臨界状態の二酸化炭素中でアセトアルデヒドに二酸化炭素を付加させることを特徴とするピルビン酸の製造方法。脱炭酸酵素Aがピルビン酸デヒドロゲナーゼである請求項1記載の製造方法。本発明は、高収率かつ高生産性のピルビン酸の製造方法を提供することを目的とするものである。本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、本発明に至った。即ち、本発明は、脱炭酸酵素Aの存在下、超臨界状態の二酸化炭素中でアセトアルデヒドに二酸化炭素を付加させることを特徴とするピルビン酸の製造方法である。本発明の製造方法は生産性に優れ、ピルビン酸を高収率かつ安価に製造できる。以下、本発明を詳細に説明する。本発明は、脱炭酸酵素Aの存在下、超臨界状態の二酸化炭素中でアセトアルデヒドに二酸化炭素を付加させることを特徴とするピルビン酸の製造方法である。本発明に用いられる脱炭酸酵素Aとしては、カルボン酸から二酸化炭素を脱離させる反応を触媒する酵素が挙げられ、具体例としては次のケト酸脱炭酸酵素類A1、アミノ酸脱炭酸酵素A2及び芳香族カルボン酸脱炭酸酵素A3等が挙げられる。これらは1種類を単独で用いても2種類以上を併用してもよい。ケト酸脱炭酸酵素類A1としては、例えばピルビン酸デカルボキシラーゼ、シュウ酸デカルボキシラーゼ、オキサロ酢酸デカルボキシラーゼ、アセト酢酸デカルボキシラーゼ、アセト乳酸デカルボキシラーゼ、アコニット酸デカルボキシラーゼ、ベンゾイルぎ酸デカルボキシラーゼ、2-オキソグルタル酸デカルボキシラーゼ、分岐鎖-2-オキソ酸デカルボキシラーゼ、3-オキソラウリン酸デカルボキシラーゼ、ウラシル-5-カルボン酸デカルボキシラーゼ、酒石酸デカルボキシラーゼ、4-オキサロクロトン酸デカルボキシラーゼ及びアセチレンジカルボン酸デカルボキシラーゼが挙げられる。アミノ酸脱炭酸酵素A2としては、例えばアスバラギン酸-1-デカルボキシラーゼ、バリンデカルボキシラーゼ、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、リシンデカルボキシラーゼ、アルギニンデカルボキシラーゼ、ヒスチジンデカルボキシラーゼ、チロシンデカルボキシラーゼ、フェニルアラニンデカルボキシラーゼ及びメチオニンデカルボキシラーゼが挙げられる。芳香族カルボン酸脱炭酸酵素A3としては、例えば安息香酸脱炭酸酵素、没食子酸デカルボキシラーゼ、プロトカテキユ酸デカルボキシラーゼ、4-ヒドロキシ安息香酸デカルボキシラーゼ及び4-ヒドロキシフェニル酢酸デカルボキシラーゼが挙げられる。これらのの内、反応活性の観点からケト酸脱炭酸酵素類A1が好ましく、更に好ましいのはピルビン酸デヒドロゲナーゼである。脱炭酸酵素Aに加えて、補酵素を併用してもよい。補酵素の具体例としては、チアミン、チアミン二リン酸、コカルボキシラーゼ、ピリドキサールリン酸及びビオチン等が挙げられる。これらの内、反応活性の観点からビオチンが好ましい。本発明の製造方法では、脱炭酸酵素Aは、必要に応じて適当な担体に固定化した状態で使用してもよい。脱炭酸酵素Aを担体に固定化して使用すると、製造終了後の酵素の回収が容易になり、また酵素の再利用が可能になるという利点がある。本発明の製造方法は、超臨界状態の二酸化炭素中で反応を行うことを特徴とする。超臨界流体は、物質に固有の気液臨界温度及び圧力を超えた非凝縮性流体と定義され、二酸化炭素の場合、31.0°C、7.4MPaを超える温度及び圧力下にて超臨界状態となる。超臨界状態の二酸化炭素は熱運動が激しく、また高密度であるため、反応性が高いという特徴がある。反応時の温度は、二酸化炭素が超臨界状態で存在しうる範囲であり、脱炭酸酵素活性の観点から31~80°Cが好ましく、更に好ましくは32から70°Cである。反応時の圧力は、二酸化炭素が超臨界状態で存在しうる範囲であり、取り扱いやすさの観点から7.4~70MPaであり、更に好ましくは7.5~50MPaである。反応時間は、反応温度や用いる脱炭酸酵素A及び補酵素の種類や使用量に応じて調製すればよいが、生産性の観点から0.1~48時間が好ましく、更に好ましくは0.2~24時間である。本発明の製造方法において、超臨界状態の二酸化炭素中に公知の溶媒等を添加することもできる。添加する溶媒としては、水、アルコール類メタノール、エタノール、イソプロパノール、n-ブタノール、t-ブタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、ジエチレングリコール及びエチレングリコールモノメチルエーテル等、エーテル類ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン、1,3-ジオキソラン及びジメトキシエタン等、ケトン類アセトン、メチルエチルケトン及びシクロヘキサノン等、炭化水素類ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、オクタン、デカン、トルエン、キシレン及びデカヒドロナフタレン等、エステル類酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ベンジル及びγ-ブチロラクトン等、アミド類ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド及びN-メチルピロリドン等、カーボネート類エチレンカーボネート、プロピレンカーボネート、ジメチルカーボネート及びエチルメチルカーボネート等、スルホキシド類ジメチルスルホキシド、ジメチルスルホン及びスルホラン等が挙げられる。これらの溶媒の使用量は特に制限されず、超臨界状態の二酸化炭素と均一に混合した状態で使用してもよいし、互いに分離した二層系で使用してもよい。反応混合物からピルビン酸を取り出す方法としては、公知の方法が使用でき、例えば抽出法や蒸留法、逆相クロマトグラフィー法等により高純度のピルビン酸を得ることができる。以下、実施例により本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。尚、以下におけるピルビン酸の収率は、下記条件で高速液体クロマトグラフィー分析を行い、予め測定したピルビン酸の検量線から測定した。カラム:WakosilC-18AR和光純薬製、4.0×150mm溶離液:0.05重量トリフルオロ酢酸水溶液温度:25°C流速:1mL/分<実施例1>攪拌装置、循環槽及び調温装置を備えた耐圧反応槽に二酸化炭素200g、アセトアルデヒド20g、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ1ユニット及びチアミン0.02gを仕込み、攪拌下、温度40°C、圧力10MPaを保ち1時間反応させた。反応生成液に1M塩酸20gを加えた後、高速液体クロマトグラフィーにて分析をしたところ、ピルビン酸の収率は71であった。<実施例2>反応時間を1時間から2時間に変える以外は実施例1と同様にして、ピルビン酸の合成反応を行った。ピルビン酸の収率は82であった。<比較例1>攪拌装置を備えた反応槽にpH11の0.5M炭酸ナトリウム緩衝液200g、アセトアルデヒド20g、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ1ユニット及びチアミン0.02gを仕込み、攪拌下、温度を25°Cに保ち常圧で4時間反応させた。反応生成液に1M塩酸20gを加えた後、高速液体クロマトグラフィーにて分析をしたところ、ピルビン酸の収率は27であり、70の未反応アセトアルデヒドが検出された。以上の結果から、本発明の実施例1及び2の製造方法では、比較例1の製造方法と比較して短い反応時間でピルビン酸を高収率で得られることがわかる。"