"肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロの診断及び/又は予後のための方法であって、前記方法は:a.検査中の患者から生体サンプルを得る工程;b.工程aにおいて得られた生体サンプルにおいて全身性及び/又は肝臓内の鉄貯蔵のレベルを評価する工程;c.工程bの全身性及び/又は肝臓内の鉄貯蔵のレベルを、参照サンプルから得られた全身性または肝臓内の鉄貯蔵のレベルまたは予め決められた閾値のいずれかと比較することによって、検査中の肝移植患者の寛容または非寛容の状態を評価する工程を含むことを特徴とする方法。前記全身性及び/又は肝臓内の鉄貯蔵のレベルが、非寛容性の肝移植レシピエントと比較して寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことを特徴とする、請求項1に記載の方法。肝移植を受けた患者の前記寛容状態の前記インビトロの診断及び/又は予後が:a.検査中の患者の肝臓同種移植片から生体サンプルを得る工程;b.工程aで得られた生体サンプルにおいて、以下の遺伝子:TFRC、CDHR2、HMOX1、MIF、HAMP、IFNG、PEBP1、SLC5A12、ADORA3およびDAB2の少なくとも1つの発現レベルまたはそれらの組み合わせを測定する工程;c.工程bの遺伝子の少なくとも1つ又はそれらの組み合わせの発現レベルを、参照サンプルから得られた、同じ遺伝子又はそれらの組み合わせの発現レベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記参照サンプルが、健康な非移植肝臓組織から得られたRNAのプール;市販の参照RNA;または事前に定量化した数のRNA分子を含むサンプルに存在する絶対参照RNAの中から選択されるRNAサンプルであることを特徴とする、請求項3に記載の方法。参照RNAサンプルから得られた同じ遺伝子の発現レベルと比較して、寛容性の肝移植レシピエントにおいて、遺伝子TFRCおよびMIFがダウンレギュレートされ、遺伝子CDHR2、HMOX1、HAMP、IFNG、PEBP1、SLC5A12、ADORA3およびDAB2もアップレギュレートされることを特徴とする、請求項3に記載の方法。以下の遺伝子:LC5A12、VNN3、SOCS1、TTC3、RBM23、SH2D1B、NCR1、TFRC、TUBA4A、TAF15、TIPARP、MOX1、MCOLN1、EBP1、DHR2およびAB2の少なくとも1つの発現レベルを測定する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項3に記載の方法。以下の遺伝子の組合せ:LC5A12、VNN3、TFRC、SOCS1、MIF、TTC3、RBM23、PEBP1、SH2D1B、NCR1、DAB2およびADORA3;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、HAMP、TUBA4A、TTC3、HMOX1、VNN3、NCR1、ADORA3、TAF15、IFNG、SOCS1およびTIPARP;MOX1、CDHR2、MIF、PEBP1、TFRC、SLC5A12、SOCS1、HAMP、VNN3およびIFNG;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、SLC5A12、HAMP、SOCS1、IFNGおよびHMOX1;TFRC、IFNG、CDHR2、ADORA3、HAMP、MIF、PEBP1、VNN3、SOCS1、HMOX1およびDAB2;TFRC、DAB2、MIF、PEBP1、IFNG、HAMP、SLC5A12、SOCS1、VNN3、ADORA3、CDHR2、MCOLN1およびHMOX1;TFRC、IFNG、HMOX1、MCOLN1、MIF、HAMP、ADORA3、CDHR2、PEBP1およびSOCS1;EBP1、TFRC、HMOX1、IFNG、MCOLN1、SOCS1、MIF、CDHR2、HAMPおよびADORA3;TFRC、PEBP1、IFNG、CDHR2、ADORA3、VNN3、HMOX1、DAB2、SOCS1、MIFおよびHAMP;DHR2、ADORA3、IFNG、TFRC、VNN3、HMOX1、PEBP1、MIF、SLC5A12、HAMP、SOCS1およびMCOLN1;LC5A12、TFRC、IFNG、MIF、DAB2、HMOX1、CDHR2、SOCS1、HAMP、PEBP1、VNN3、ADORA3およびMCOLN1;TFRC、SOCS1、HMOX1、PEBP1、VNN3、CDHR2、HAMP、IFNG、DAB2、MCOLN1、ADORA3およびMIF;TFRC、PEBP1、VNN3、SOCS1、MIF、HMOX1、DAB2、HAMP、IFNG、CDHR2、ADORA3およびMCOLN1;LC5A12、MIF、CDHR2、TFRC、IFNG、ADORA3、HAMP、VNN3、SOCS1、MCOLN1、PEBP1およびHMOX1;TFRC、IFNG、CDHR2、ADORA3、PEBP1、VNN3、MIF、HMOX1、MCOLN1、SOCS1、SLC5A12、DAB2およびHAMP;TFRC、VNN3、HAMP、CDHR2、SLC5A12、HMOX1、SOCS1、PEBP1およびMIF;AB2、TFRC、MIF、CDHR2、PEBP1、VNN3、TTC3、HMOX1およびSOCS1;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、VNN3、IFNG、MCOLN1およびSOCS1;TFRC、PEBP1、MIF、SOCS1およびCDHR2;ADORA3、CDHR2、MIF、PEBP1、TAF15およびTFRC;CDHR2、MIF、PEBP1、SLC5A12、SOCS1、TAF15およびTFRC;ADORA3、CDHR2、HAMP、MIF、PEBP1、SOCS1、TAF15およびTFRC;CDHR2、HAMP、IFNG、MCOLN1、MIF、PEBP1、SOCS1、TFRCおよびVNN3の少なくとも1つの発現レベルを測定する工程を含むことを特徴とする、請求項6に記載の方法。TFRC、IFNGおよびCDHR2から成る遺伝子組合せの発現レベルが測定されることを特徴とする、請求項3に記載の方法。肝移植を受けた患者の寛容状態の診断及び/又は予後が、a.検査中の患者の肝臓同種移植片から生体サンプルを得る工程;b.工程aで得られた生体サンプルにおいて、肝臓内の鉄貯蔵のレベルを測定する工程;c.工程bの肝臓内の鉄貯蔵のレベルを、参照サンプルから得られた肝臓内の鉄貯蔵のレベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記肝臓内の鉄貯蔵のレベルが、非寛容性の肝移植レシピエントと比較して寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことを特徴とする、請求項9に記載の方法。肝移植を受けた患者の寛容状態の診断及び/又は予後が、a.検査中の該者の血清から生体サンプルを得る工程;b.工程aにおいて得られた生体サンプルにおいて、タンパク質フェリチンのレベルを測定する工程;c.工程bのフェリチンのレベルを、参照サンプルから得られた同じタンパク質のレベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記フェリチンの血清レベルが、非寛容性の肝移植レシピエントにおけるよりも寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことを特徴とする、請求項11に記載の方法。肝移植を受けた患者の寛容状態の診断及び/又は予後が、a.検査中の患者の肝臓同種移植片から生体サンプルを得る工程;b.工程aにおいて得られた生体サンプルにおいて、ホスホ-Stat3のタンパク質レベルを測定する工程;c.工程bのホスホ-Stat3のタンパク質レベルを、参照サンプルから得られた同じタンパク質のタンパク質レベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記ホスホ-Stat3の血清レベルが、非寛容性の肝移植レシピエントにおけるよりも寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことを特徴とする、請求項13に記載の方法。肝移植を受けた患者の寛容状態の診断及び/又は予後が、a.検査中の患者の血清から生体サンプルを得る工程;b.工程aにおいて得られた生体サンプルにおいて、ヘプシジンのタンパク質レベルを測定する工程;c.工程bのヘプシジンのタンパク質レベルを、参照サンプルから得られた同じタンパク質のタンパク質レベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。ヘプシジンの血清レベルが、非寛容性の肝移植レシピエントにおけるよりも寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことを特徴とする、請求項15に記載の方法。肝移植を受けた患者の寛容状態の診断及び/又は予後に有用な少なくとも1つの追加のパラメーターを決定する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項1乃至16のいずれかに記載の方法。前記追加のパラメーターが、年齢及び/又は移植後時間であることを特徴とする、請求項17に記載の方法。結論として、肝移植患者における寛容性を予測することができる且つそれ故前記患者への免疫抑制薬の投与が免除され得ることを示唆することができる有効な方法の提供が、課題のままである。それ故、本発明は、検査中の患者から得られた生体サンプルにおいて全身性及び/又は肝臓内のレベルを評価することによって、およびそれを参照サンプルの鉄貯蔵のレベル、または予め決められた閾値のいずれかと比較することによって、寛容性の肝移植レシピエントを識別する、インビトロinvitroの方法を提供することによって、上記に述べられた課題を解決することを目標とする。これは、全身性及び/又は肝臓内の鉄貯蔵のレベル遊離鉄として、あるいは伝達タンパク質またはフェリチンなどのタンパク質と結合した、身体に存在する鉄の総量が、非寛容性の肝移植レシピエントと比較して寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いという事実に基づく。本発明の好ましい実施形態において、全身性及び/又は肝臓内の鉄貯蔵のレベルの評価は、肝移植患者における寛容性の予測が可能な信頼できるバイオマーカーである、鉄代謝に直接関係する遺伝子の特異的な群の発現特性の、検査中の患者の肝生検における評価の手段によって実行される。したがって、免疫抑制療法を中止し得る肝臓レシピエント寛容と、免疫抑制薬の維持を必要とする肝臓レシピエント非寛容との間の発現レベル特性の統計的有意差を示す、これらの遺伝子を識別する目的のため、肝生検の組織サンプルは、免疫抑制薬の離脱の予期される臨床試験に登録された、免疫抑制療法の維持下での、安定した肝移植レシピエントの群から集められた。発現特性は、当業者に既知の任意の技術によって決定され得る。特に、各遺伝子の発現レベルは、ゲノム及び/又は核及び/又はタンパク質のレベルで測定され得る。好ましい実施形態において、発現特性は、各遺伝子の核酸転写物の量を測定することによって決定される。別の実施形態において、発現特性は、遺伝子の各々によって生成されたタンパク質の量の測定することによって決定される。核酸転写物の量は、当業者に既知の任意の技術によって測定され得る。特に、測定は、抽出されたメッセンジャーRNAmRNAサンプル上で、または当該技術分野に周知の技術によって抽出されたmRNAから調製された、レトロ転写したretrotranscribed相補的DNAcDNA上で直接実行され得る。mRNAまたはcDNAのサンプルから、核酸転写物の量は、核のマイクロアレイ、定量的PCR、および標識プローブを用いたハイブリダイゼーションを含む、当業者に既知の任意の技術を使用して測定され得る。本発明の範囲を限定するものとして見なされるべきではない、特定の実施形態において、これらの生検の発現特性の決定は、p値<0.01および偽発見率FDR<25を有する遺伝子を識別する、IlluminaBeadchipの全ゲノム発現マイクロアレイを使用することによって行われた表1。マイクロアレイ結果および免疫寛容の実験動物モデルにおいて行われた多くの研究に基づいて、その後、表2にリストされた1セットの104の遺伝子を、定量的リアルタイムPCRを利用する実証validationのために選択された。リアルタイムPCRによって行った実験の結果は、表3にリストされる遺伝子が、免疫抑制薬を安全に放棄することができる寛容肝移植患者から取られた生検と、免疫抑制薬が中止されるときに拒絶反応を受ける非寛容患者との間の発現の統計的有意差を示すことを明らかにした。表3に示すように、非寛容性の肝移植レシピエントと比較して寛容性の肝移植レシピエントでは、遺伝子TFRCおよびMIFはダウンレギュレートされ、遺伝子CDHR2、HMOX1、HAMP、IFNG、PEBP1、SLC5A12、ADORA3およびDAB2はアップレギュレートされる。肝移植患者から取られた生検が、参照RNAサンプルと比較されると、同一の結果を得ることができるこれは、健康な非移植肝臓組織から得られたRNAのプール、Ambionからの市販のHumanLiverTotalRNAなどの参照RNA、または事前に定量化した数のRNA分子を含むサンプルに存在する絶対参照であり得る。表3に含まれる遺伝子が、鉄代謝の調節に関係するため、機能的経路を共有することを留意することは重要である。事実、図1Aに示されるように、うまく免疫抑制の投薬を中止することができる寛容性の患者の生検は、より多くの鉄の蓄積を示した。さらに、肝臓内の鉄含量のこれらの違いは、免疫抑制療法の移植またはタイプがベースラインで利用されてからの時間などの、任意の臨床的パラメーターとは無関係であった図1B。遺伝子TFRC、HAMP、IFNGおよびHMOX1が、細胞の鉄代謝の制御に直接関係することが知られている。特に、全身性の鉄欠乏の状況において、TFRC発現は典型的に増加されるが、一方で、HAMP発現は減少される。我々の実験において、鉄代謝の調節における寛容性と非寛容性の患者の間で差次的に発現することが分かっている遺伝子の関与は、TFRC、HAMP、CDHR2、MIF、SLC5A12、ADORA3、HMOX1、IFNGおよびDAB2が、肝臓内の鉄の沈着と有意に相互に関連付けられるという観察によってさらに示されたScheuerの変更された方法または合計の鉄スコア方法totalironscoremethodによって測定された;図2を参照。そのため、表3に含まれる遺伝子の発現特性が、非寛容性の患者図2と比較した寛容性の患者における、著しく高いレベルの全身性及び/又は肝臓内の鉄貯蔵の存在の明確な指標であり、それ故、結果的に寛容性の肝移植レシピエントの識別のための信頼できるバイオマーカーであることが明言できる。より具体的には、これらの結果は、鉄代謝の前記調節に関係する遺伝子の発現レベルが、本発明による方法の考案に特に関連するはずであることを示す。故に、肝臓内レベルでの鉄代謝の調節に属する遺伝子の任意の発現特性は、記載される且つ請求される本発明において、同等の発現特性、またはパターンと見なされるべきである。したがって、肝臓における鉄代謝の前記調節に属する任意の遺伝子の発現は、本発明に記載される遺伝子の機能的な同等物と見なされるべきである。それ故、本発明の好ましい実施形態は、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための方法に言及し、該方法は:a.検査中の患者の肝臓同種移植片から生体サンプルを得る工程;b.以下の遺伝子:TFRC、CDHR2、HMOX1、MIF、HAMP、IFNG、PEBP1、SLC5A12、ADORA3およびDAB2、あるいはそれらの組み合わせ又は同等物の少なくとも1つの発現レベルを測定する工程;c.工程bの遺伝子の少なくとも1つの移植片内の発現レベルを、肝生検を得たサンプルにおいて、参照RNAサンプルから得た同じ遺伝子の発現レベルと比較することによって、移植した肝臓同種移植片に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含む。参照サンプルは、健康な移植されていない被験体の肝臓組織の生体サンプルから得られた予め決められた発現特性である。それは、RNAのプール、Ambionからの市販のHumanLiverTotalRNAなどの参照RNA、または事前に定量化した数のRNA分子を含むサンプルに存在する絶対参照であり得る。表4で以下に示されるように、表3に含まれる遺伝子の各々の発現レベルの測定は、拒絶反応を受けることなく寛容性安全に免疫抑制の投薬をすべて中止することができる患者の識別に有用である。それ故、この表4は、免疫抑制の投薬が中止されるときに拒絶反応を示すレシピエントから、免疫抑制療法の欠如下で移植肝臓に寛容性のある患者を統計的に識別する、そこにリストされた個々の遺伝子の能力を示す。しかしながら、表3または4に引用された遺伝子は、個々に予測能力を有するが、できるだけ正確に予測的方法を識別する目的で、前記遺伝子のいくつかの組み合わせから逸脱して、異なるクラスターが作られた。さらに、表3または4にリストされた遺伝子はまた、独立して得られるようなそれ自体では予測値を示さなかった他の遺伝子、例えば:LC5A12、VNN3、SOCS1、TTC3、RBM23、SH2D1B、NCR1、TFRC、TUBA4A、TAF15、TIPARP、MOX1、MCOLN1、EBP1、DHR2、およびAB2とともにグループ化された。それ故、好ましい実施形態において、本発明は、以下の遺伝子の少なくとも1つの発現レベルを測定することをさらに含む:表3または4にリストされた遺伝子の少なくとも1つと組み合わせた、LC5A12、VNN3、SOCS1、TTC3、RBM23、SH2D1B、NCR1、TFRC、TUBA4A、TAF15、TIPARP、MOX1、MCOLN1、EBP1、DHR2、およびAB2。肝移植における免疫抑制薬の離脱の結果の診断において最良の性能を有する遺伝子発現バイオマーカーの組み合わせ複数可を識別するために、線形判別分析および誤分類罰則付き事後分類misclassificationpenalizedposteriorMiPPソフトウェアにおいて実施されたロジスティク回帰アルゴリズムを利用する予測モデルの徹底的な調査を行った。最初に、HospitalClinicBarcelonaに登録された患者から収集した肝臓サンプルの群18が寛容および31が非寛容上で10倍交差検定の工程を実行した。次に、診断用モデルのランダムに分割する交差検定を、外部モデル確認のために訓練事例2/3および独立したテスト事例1/3へと繰り返し分割することによって、Barcelonaからの56のサンプルおよびRomeおよびLeuvenからの21の追加サンプルを含む全体的なデータセット上で行った。さらに、訓練事例で識別された各モデルに関して、寛容性の最適確率のカットオフcut-offを、ROC受信者動作曲線分析を利用して計算した。モデルの性能が中央依存center-dependentではなかったことを実証するために、その後、SN、SP、NPV、PPVおよびBarcelonaから収集されたサンプルおよびRomeおよびLeuvenから得られたサンプルに関する全体的なエラー率を計算した。重要なことに、すべての遺伝子発現の測定を、免疫抑制投薬が中止される前に得られたサンプル上で実行した。それ故、識別された遺伝マーカーが、免疫抑制薬の離脱の成功を予測することができることを結果は示している。上に引用されるように、このタイプの分析は、差次的に発現された遺伝子表3であると分かったこれらの遺伝子だけでなく、独立して得られるように、統計的に差次的発現されていないが、表3の遺伝子と組み合わせて診断を最適化することの一因となる遺伝子をも考慮に入れる。表5は、リアルタイムPCRによって測定された遺伝子の肝生検での発現に基づいた予測モデルの設計および評価のために利用されるサンプルの群を示す。重要なことに、Barcelonaのレシピエントから収集されたサンプルは、マイクロアレイとqPCR実験の両方のために利用されたが、一方でRomeおよびLeuvenから得られたサンプルはどれも、マイクロアレイ実験で利用されなかった。したがって、表6は、遺伝子の発現が、qPCR発現の測定の結果による非寛容性または寛容性のカテゴリーへと患者を最適に分類する、遺伝子の組み合わせを示す。学習群において15未満および実証群において15未満の分類エラーを、最も正確で、臨床的に有用なモデルを選択するために、恣意的に選択した。本発明の1つの実施形態は、以下の遺伝子の少なくとも1つ又はそれらの組み合わせの使用に言及する:肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための方法における、TFRC、CDHR2、HMOX1、MIF、HAMP、IFNG、PEBP1、SLC5A12、ADORA3およびDAB2。好ましい実施形態において、本発明の方法は、以下の遺伝子の少なくとも1つと、上記の引用された遺伝子の少なくとも1つとの組み合わせを使用して実行される:LC5A12、VNN3、SOCS1、TTC3、RBM23、SH2D1B、NCR1、TFRC、TUBA4A、TAF15、TIPARP、MOX1、MCOLN1、EBP1、DHR2およびAB2。特に好ましい実施形態において、本発明の方法は、以下の遺伝子の組合せの1つを使用して実行される:LC5A12、VNN3、TFRC、SOCS1、MIF、TTC3、RBM23、PEBP1、SH2D1B、NCR1、DAB2およびADORA3;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、HAMP、TUBA4A、TTC3、HMOX1、VNN3、NCR1、ADORA3、TAF15、IFNG、SOCS1およびTIPARP;MOX1、CDHR2、MIF、PEBP1、TFRC、SLC5A12、SOCS1、HAMP、VNN3およびIFNG;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、SLC5A12、HAMP、SOCS1、IFNGおよびHMOX1;TFRC、IFNG、CDHR2、ADORA3、HAMP、MIF、PEBP1、VNN3、SOCS1、HMOX1およびDAB2;TFRC、DAB2、MIF、PEBP1、IFNG、HAMP、SLC5A12、SOCS1、VNN3、ADORA3、CDHR2、MCOLN1およびHMOX1;TFRC、IFNG、HMOX1、MCOLN1、MIF、HAMP、ADORA3、CDHR2、PEBP1およびSOCS1;EBP1、TFRC、HMOX1、IFNG、MCOLN1、SOCS1、MIF、CDHR2、HAMPおよびADORA3;TFRC、PEBP1、IFNG、CDHR2、ADORA3、VNN3、HMOX1、DAB2、SOCS1、MIFおよびHAMP;DHR2、ADORA3、IFNG、TFRC、VNN3、HMOX1、PEBP1、MIF、SLC5A12、HAMP、SOCS1およびMCOLN1;LC5A12、TFRC、IFNG、MIF、DAB2、HMOX1、CDHR2、SOCS1、HAMP、PEBP1、VNN3、ADORA3およびMCOLN1;TFRC、SOCS1、HMOX1、PEBP1、VNN3、CDHR2、HAMP、IFNG、DAB2、MCOLN1、ADORA3およびMIF;TFRC、PEBP1、VNN3、SOCS1、MIF、HMOX1、DAB2、HAMP、IFNG、CDHR2、ADORA3およびMCOLN1;LC5A12、MIF、CDHR2、TFRC、IFNG、ADORA3、HAMP、VNN3、SOCS1、MCOLN1、PEBP1およびHMOX1;TFRC、IFNG、CDHR2、ADORA3、PEBP1、VNN3、MIF、HMOX1、MCOLN1、SOCS1、SLC5A12、DAB2およびHAMP;TFRC、VNN3、HAMP、CDHR2、SLC5A12、HMOX1、SOCS1、PEBP1およびMIF;AB2、TFRC、MIF、CDHR2、PEBP1、VNN3、TTC3、HMOX1およびSOCS1;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、VNN3、IFNG、MCOLN1およびSOCS1;TFRC、PEBP1、MIF、SOCS1およびCDHR2;ADORA3、CDHR2、MIF、PEBP1、TAF15およびTFRC;CDHR2、MIF、PEBP1、SLC5A12、SOCS1、TAF15およびTFRC;ADORA3、CDHR2、HAMP、MIF、PEBP1、SOCS1、TAF15およびTFRC;CDHR2、HAMP、IFNG、MCOLN1、MIF、PEBP1、SOCS1、TFRCおよびVNN3。いくつかの臨床的な変化は、ヒトにおける肝移植後の操作上の寛容性の発達に影響を与え得る。特に、より長期間での移植であるほど又はより高齢であるほどレシピエントは、より高い可能性で免疫抑制の投薬をうまく中止することができる。遺伝子発現の測定に関するこれらの2つの臨床的な変化の生じうる交絡的影響を排除するために、追加のロジスティク回帰分析を行った。表3または4に表された遺伝子のうち、以下の遺伝子は、レシピエントの年齢および移植後の時間の影響を排除した後に統計的に有意であることが分かった表7。臨床的な変化から独立した遺伝的な予測因子を発達させるために、表7に示される遺伝子上で、ロジスティク回帰およびMiPPソフトウェアを利用した。以下のモデルは、患者の学習群と実証群の両方における最良の予測因子であることが分かった表8。したがって、本発明のさらなる実施形態は、以下の組み合わせの遺伝子の遺伝子発現を測定することによる、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための方法に言及する:TFRC、IFNGおよびCDHR2。本発明による方法の特定の実施形態において、前記方法はさらに、診断及び/又は予後に有用な少なくとも1つの追加のパラメーターを決定する工程を含み得る。このような診断に有用なパラメーターは、診断のために単独では使用できないが、寛容性の被験体と、明らかに免疫抑制療法を必要とする被験体との間の著しく異なる値を示すように記載されてきたパラメーターであり、そのため、本発明による上に記載される方法に従って診断を洗練及び/又は確認するためにも使用され得る。それ故、本発明のさらなる実施形態は、上に記載されるような方法であり、該方法は、患者の年齢及び/又は移植後時間の決定をさらに含む。本発明の別の実施形態は、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後の方法を実行するためのキットに言及し、該キットは、i対応する遺伝子の遺伝子発現レベルを測定するための手段、およびii参照RNAサンプルから得られた同じ遺伝子の発現レベルより上または下の前記遺伝子発現レベルを相互に関連付けるための説明書を含む。前記参照サンプルは、健康な非移植肝臓組織から得られたRNAのプール、Ambionからの市販のHumanLiverTotalRNAなどの参照RNA、または事前に定量化した数のRNA分子を含むサンプルに存在する絶対参照であり得る。好ましい実施形態において、手段は、核酸プローブを含むマイクロアレイまたは遺伝子チップを含み、前記核酸プローブは、マイクロアレイ分析を実行するための試薬とともに、対応する組の遺伝子の転写物に特異的にハイブリッド形成する配列を含む。本発明の別の好ましい実施形態において、キットは、定量的な逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を実行するための、オリゴヌクレオチドプライマーすなわち遺伝子TFRCのためのHS02559818s1または遺伝子VNN3のためのHs01125168m1を含み、前記プライマーは、対応する組の遺伝子の転写物に由来する相補的DNAに特にハイブリッド形成する配列を含む。その上、本発明のキットは、固体支持体solidsupportを含み得、ここで、対応する組の遺伝子の転写物に特にハイブリッド形成する配列を含む核酸プローブが、その上で示される。別の実施形態において、手段は、モノクローナル抗体またはそのフラグメントなどの、特異的結合部分を含むマイクロアレイまたはタンパク質チップを含む。1つの実施形態において、本発明のキットは、以下の遺伝子の少なくとも1つ又はそれらの組み合わせの発現を測定する:肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための、TFRC、CDHR2、HMOX1、MIF、HAMP、IFNG、PEBP1、SLC5A12、ADORA3およびDAB2。好ましい実施形態において、本発明のキットは、上記の引用された遺伝子の少なくとも1つと、以下の遺伝子の少なくとも1つとの組み合わせの遺伝子発現を測定する:LC5A12、VNN3、SOCS1、TTC3、RBM23、SH2D1B、NCR1、TFRC、TUBA4A、TAF15、TIPARP、MOX1、MCOLN1、EBP1、DHR2およびAB2。特に好ましい実施形態において、本発明のキットは、以下の遺伝子の組合せの遺伝子発現を測定する:LC5A12、VNN3、TFRC、SOCS1、MIF、TTC3、RBM23、PEBP1、SH2D1B、NCR1、DAB2およびADORA3;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、HAMP、TUBA4A、TTC3、HMOX1、VNN3、NCR1、ADORA3、TAF15、IFNG、SOCS1およびTIPARP;MOX1、CDHR2、MIF、PEBP1、TFRC、SLC5A12、SOCS1、HAMP、VNN3およびIFNG;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、SLC5A12、HAMP、SOCS1、IFNGおよびHMOX1;TFRC、IFNG、CDHR2、ADORA3、HAMP、MIF、PEBP1、VNN3、SOCS1、HMOX1およびDAB2;TFRC、DAB2、MIF、PEBP1、IFNG、HAMP、SLC5A12、SOCS1、VNN3、ADORA3、CDHR2、MCOLN1およびHMOX1;TFRC、IFNG、HMOX1、MCOLN1、MIF、HAMP、ADORA3、CDHR2、PEBP1およびSOCS1;EBP1、TFRC、HMOX1、IFNG、MCOLN1、SOCS1、MIF、CDHR2、HAMPおよびADORA3;TFRC、PEBP1、IFNG、CDHR2、ADORA3、VNN3、HMOX1、DAB2、SOCS1、MIFおよびHAMP;DHR2、ADORA3、IFNG、TFRC、VNN3、HMOX1、PEBP1、MIF、SLC5A12、HAMP、SOCS1およびMCOLN1;LC5A12、TFRC、IFNG、MIF、DAB2、HMOX1、CDHR2、SOCS1、HAMP、PEBP1、VNN3、ADORA3およびMCOLN1;TFRC、SOCS1、HMOX1、PEBP1、VNN3、CDHR2、HAMP、IFNG、DAB2、MCOLN1、ADORA3およびMIF;TFRC、PEBP1、VNN3、SOCS1、MIF、HMOX1、DAB2、HAMP、IFNG、CDHR2、ADORA3およびMCOLN1;LC5A12、MIF、CDHR2、TFRC、IFNG、ADORA3、HAMP、VNN3、SOCS1、MCOLN1、PEBP1およびHMOX1;TFRC、IFNG、CDHR2、ADORA3、PEBP1、VNN3、MIF、HMOX1、MCOLN1、SOCS1、SLC5A12、DAB2およびHAMP;TFRC、VNN3、HAMP、CDHR2、SLC5A12、HMOX1、SOCS1、PEBP1およびMIF;AB2、TFRC、MIF、CDHR2、PEBP1、VNN3、TTC3、HMOX1およびSOCS1;TFRC、PEBP1、MIF、CDHR2、VNN3、IFNG、MCOLN1およびSOCS1;TFRC、PEBP1、MIF、SOCS1およびCDHR2;ADORA3、CDHR2、MIF、PEBP1、TAF15およびTFRC;CDHR2、MIF、PEBP1、SLC5A12、SOCS1、TAF15およびTFRC;ADORA3、CDHR2、HAMP、MIF、PEBP1、SOCS1、TAF15およびTFRC;CDHR2、HAMP、IFNG、MCOLN1、MIF、PEBP1、SOCS1、TFRCおよびVNN3。本発明の好ましい実施形態の1つは、遺伝子の以下の組み合わせの遺伝子発現を測定する、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のためのキットに言及する:TFRC、IFNGおよびCDHR2。本発明によるキットは、マイクロアレイ分析を行うための試薬、及び/又は固体支持体をさらに含み得、ここで、対応する組の遺伝子の転写物に特にハイブリッド形成する配列を含む核酸プローブが、その上で示される。本発明の別の実施形態は、上記の開示された方法またはキットの使用により肝臓レシピエントの寛容状態を評価することによって、免疫療法処置プロトコルを選択する又は変更するためのキットに言及する。本発明の最後の実施形態は、肝臓移植を受けた患者の免疫抑制療法を適応させる方法に言及し、前記方法は、上記の開示された方法およびキットの使用を含む。先行技術は、寛容性の肝臓レシピエントを識別する方法として、本発明で提示されるものとは異なる遺伝子の群KLRF1、PTGDR、NCALD、CD160、IL2RB、PTCH1、ERBB2、KLRB1、NKG7、KLRD1、FEZ1、GNPTAB、SLAMF7、CLIC3、CX3CR1、WDR67、MAN1A1、CD9、FLJ14213、FEM1C、CD244、PSMD14、CTBP2、ZNF295、ZNF267、RGS3、PDE4B、ALG8、GEMIN7の発現の末梢血サンプルにおける測定を含むBenitezCetal.,Abstract517,AmericanTransplantCongress,SanDiego,CA,May3May5,2010。本発明の一部を形成する遺伝子が、末梢血における以前に開示された遺伝子と比較して、より高い弁別力を有するかどうかを測定するために、比較アッセイを行った実施例10を参照。肝臓の組織サンプル中の本発明に含まれる遺伝子の発現の測定は、移植に対して寛容性があるため免疫抑制の投薬をうまく断つことができる肝臓レシピエントを識別するために、末梢血中の先行技術に含まれる遺伝子の測定よりも少なくとも正確であるasleastasaccuratethanように結論付けられる。その上、本発明は、肝臓同種移植片に対する操作上の寛容性の獲得における鉄代謝の役割を支持する更なる証拠を提案する:Scheuerの変更された方法または合計の鉄スコア方法のいずれかを利用するPerlの染色後の半定量的な方法で測定された、肝臓鉄含量肝臓内の鉄貯蔵は、非寛容性の肝臓レシピエントにおけるよりも寛容性の肝臓レシピエントにおいて著しく多い図1を参照。実際、HAMPによってコード化される、全身性の鉄ホメオスタシスの調節に最も重要なホルモンである、ヘプシジンの血清レベルは、非寛容性の肝臓レシピエントにおけるよりも寛容性の肝臓レシピエントにおいて著しく高い図3および実施例9を参照。これは、鉄欠乏の状況での生理反応がヘプシジンの生成を減少させると仮定すれば、鉄貯蔵が非寛容性の肝臓レシピエントにおけるよりも寛容性の肝臓レシピエントにおいてより多いという観察と一致している。全身の鉄蓄積の最も正確なマーカーの1つである、フェリチンの血清レベルは、非寛容性の肝臓レシピエントにおけるよりも寛容性の肝臓レシピエントにおいて著しく高い図4AおよびBと実施例11を参照;肝臓組織ホスホ-Stat3のタンパク質レベルは、非寛容性のレシピエントにおけるよりも寛容性のレシピエントにおける方が著しく高い図5および実施例12を参照。これは、ヘプシジンがStat3をリン酸化し、それ故、例えば鉄欠乏の結果としてヘプシジンの欠如下では、ホスホ-Stat3のレベルが減少するという観察と一致している。まとめると、これらの結果は、全身性および肝臓内のレベルでの鉄代謝の調節が、転写因子Stat3の活性化の移植片内の調節による肝移植中の同種免疫反応の制御において役割を果たすことを示す。同様に、肝臓内の鉄レベル、血清ヘプシジンおよび血清フェリチンの定量化もまた、本発明に記載される遺伝子の機能的な同等物と見なされるべきである。それ故、本発明の別の実施形態は、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための方法に言及し、該方法は:検査中の患者の肝臓同種移植片から生体サンプルを得る工程、前記サンプル中で肝臓内の鉄貯蔵のレベルを測定する工程、および上に引用されるように、肝臓内の鉄貯蔵のレベルが、非寛容性の肝移植レシピエントと比較して寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことが分かっているため、肝臓内の鉄貯蔵のレベルを、参照サンプルから得られた肝臓内の鉄貯蔵のレベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含む。肝臓内の鉄貯蔵のレベルの評価は、先行技術に公知の任意の手段によって、例えば非徹底的なリスト:鉄特異的な染色例えばPerlのプルシアンブルーを用いて肝生検スライドliverbiopsyslidesの直接的な染色によって、原子吸光分析を利用する肝臓組織の生検からの鉄の定量化によって、または肝臓全体の磁気共鳴画像法によって、行うことができる。この場合、参照値は、図1に示されるような寛容性の肝移植患者と非寛容性の肝移植患者との間で観察される差に基づいて予め定義された、閾値である。本発明の別の実施形態は、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための方法に言及し、該方法は:検査中の患者の血清から生体サンプルを得る工程、前記サンプルにおいてタンパク質フェリチンのレベルを測定する工程、および上に引用されるように、フェリチンの血清レベルが、非寛容性の肝移植レシピエントにおけるよりも寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことが分かっているため、フェリチンのレベルを、参照サンプルから得られた同じタンパク質のレベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含む。タンパク質フェリチンのレベルの評価は、先行技術に公知の任意の手段によって、例えば非徹底的なリスト:ELISAおよび放射免疫定量法によって行うことができる。この場合、参照値は、図4に示されるような寛容性の肝移植患者と非寛容性の肝移植患者との間で観察される差に基づいて予め定義された、閾値である。本発明の別の実施形態は、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための方法に言及し、該方法は:検査中の患者の肝臓同種移植片から生体組織サンプルを得る工程、前記サンプルにおいてホスホ-Stat3のタンパク質レベルを測定する工程、および上に引用されるように、ホスホ-Stat3の肝臓組織レベルが、非寛容性の肝移植レシピエントにおけるよりも寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことが分かっているため、ホスホ-Stat3のレベルを、参照サンプルから得られた同じタンパク質のタンパク質レベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含む。肝臓組織ホスホ-Stat3のレベルの評価は、先行技術に公知の任意の手段によって、例えば非徹底的なリスト:免疫組織化学、免疫蛍光法およびウェスタンブロットによって行うことができる。この場合、参照値は、上に引用されるように、肝臓内のホスホ-Stat3のレベルが、図5に示されるように非寛容性の肝移植レシピエントと比較して寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことが分かっているため、予め定義された閾値または参照サンプルである。本発明の別の実施形態は、肝移植を受けた患者の寛容状態のインビトロinvitroの診断及び/又は予後のための方法に言及し、該方法は:検査中の患者から生体サンプルを得る工程、前記サンプルにおいてヘプシジンのタンパク質レベルを測定する工程、および上に引用されるように、ヘプシジンの血清レベルが、非寛容性の肝移植レシピエントにおけるよりも寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことが分かっているため、ヘプシジンのタンパク質レベルを、参照サンプルから得られた同じタンパク質のタンパク質レベルと比較することによって、肝移植に対する、検査中の患者の寛容性または非寛容性を評価する工程を含む。ヘプシジンのレベルの評価は、先行技術に公知の任意の手段によって、例えば非徹底的なリスト:質量分析法とELISAによって行うことができる。この場合、参照サンプルは、ヘプシジンの血清レベルが、図3に示されるように非寛容性の肝移植レシピエントにおけるよりも寛容性の肝移植レシピエントにおける方が著しく高いことが分かっているため、既知濃度を有するヘプシジンアナログに存在する。<実施例>実施例1.患者集団および研究設計。血液および肝生検の標本を、肝移植における免疫抑制薬の離脱の予期されるEuropeanCommissionに支持されたマルチセンター臨床試験に登録された肝移植レシピエントの群から収集した名称:SearchfortheimmunologicalSignatureofOperationalToleranceinLiverTransplantation;clinicaltrials.govidentificationNCT00647283。包含基準は以下の通りであった:1移植後3年より長い;2包含前12か月間で、肝機能が安定しており、拒絶反応の発症がない。3自己免疫性肝疾患の病歴がない。4有意な異常のない肝生検を事前に包含しているBanff基準による急性または慢性の拒否反応の徴候がない;門脈路の>50において門脈の炎症がない;中心静脈の>50において中心細静脈centralperivenulititsがない;架橋の線維症または硬変症がない。登録されたレシピエントにおいて、免疫抑制薬を、6-9か月の期間にわたって完全に中止するまで徐々に遠ざけ、その後、さらなる12か月のフォローアップを行った。拒絶反応の発症が研究の全期間の間に生じず、有意な組織学的変化が、12か月のフォローアップ期間の最後に得られた肝生検において示されなかった場合、患者を寛容性であると見なした。研究の間に急性拒絶反応を受ける患者を、非寛容性として見なした。試験に登録した102のレシピエントのうち、79のレシピエント33は寛容性であり、46は非寛容性であるを、今回の研究に含んだ。非寛容性のレシピエントn=14からの拒絶反応の時に、および寛容性のレシピエントn=4における研究の終わりに、免疫抑制薬が寛容性TOL、n=33および非寛容性非TOL、n=46の両方のレシピエントから中止される前に、研究に利用可能な血液と肝生検の標本を得た。さらに、肝臓組織サンプルも以下の患者群から得た:a再発性C型肝炎ウイルス感染による慢性肝炎を有する肝移植レシピエントHEPC、n=12;b移植後早期に起こる典型的な急性細胞性拒絶を有する肝移植レシピエントREJ、n=9;c移植後1年の正常な肝機能および正常な肝臓組織学的検査を有する免疫抑制の維持下の肝移植レシピエントCONT-Tx、n=8;およびd結腸直腸の肝転移の手術を受けている、移植されていない患者CONT、n=10。参加するレシピエントは、HospitalClinicBarcelona、UniversityTorVergataRomeおよびUniversityHospitalsLeuvenから登録された。研究は、3つの参加する機関の施設内治験審査委員会によって認可され、書面のインフォームドコンセントは、すべての研究患者から得られた。研究に含まれる患者の臨床的および人口統計的特性は、表1に要約され、研究設計の概要は図1に表される。患者集団の詳細な記載および免疫抑制離脱の臨床試験の臨床結果は、別途報告される。実施例2.肝生検標本および組織学的評価。肝生検を、局所麻酔下で皮膚を通して実行した。針生検肝臓シリンダーの2-3mmの部分を、RNAlater試薬Ambion,Austin,USAにすぐに保存し、4°Cで24時間維持し、その後、RNAlater試薬の除去後に液体窒素中に凍結保存した。残りのシリンダーを、ホルマリン固定し、パラフィン包理した。CONT患者において、非腫瘍肝臓の外科的な肝生検を得て、以前に記載されたように処理した。組織学的評価のために、3μmの厚さのスライドを、結合組織分析のために、三色のヘマトキシリン-エオシンおよびマソン3色を使用して染色した。組織学的検査を、すべての臨床的および生物学的なデータを知らされていなかった同じ病理学者によって実行した。以下の組織病理学的事項を、半定量的に評価し採点した:1完全な門脈路の数;2中心静脈の数;3全体的な柔組織的アーキテクチャー;4小葉性炎症;5中心細静脈;6門脈路炎症;7胆管病変;8胆管損失;9門脈分岐の存在;9門脈線維症;10類洞周囲線維症。実施例3.RNAの抽出および処理。総RNA抽出のために、凍結保存された肝臓組織サンプルを、乳棒およびヌクレアーゼのない1.5mlの反応チューブAmbionを使用して、TRIzol試薬Invitrogen,SanDiego,CA,USA中で均質化した。その後、総RNAを、製造業者ガイドラインに従って抽出し、その性質を、Agilent2100BioanalyzerAgilentTechnologies,SantaClara,USAによって評価した。実施例4.Illuminaのマイクロアレイ実験。105の肝臓RNAサンプル20のTOL、32の非TOL、14の非TOL-Rej、12のHEPC、9のREJ、8のCONT-Txおよび10のCONT;それらのすべてはHospitalClinicBarcelonaからを、cRNAへと処理し、25,000の注釈された遺伝子に相当する48,771のプローブを含む、IlluminaHumanHT-12ExpressionBeadChips上でハイブリッド形成したIllumina,Inc.SanDiego,CA,USA。発現データを、BeadStudioのデータ分析ソフトウェアIllumina,Inc.を使用して計算し、続いて、Lumiのバイオコンダクターパッケージ[6]を使用する四分位の正常化を利用して処理した。次に、5の変動率を有するこれらのプローブを除いて、保存的なプローブフィルタリング工程を実行し、結果として、48,771の元のセットから合計33,062のプローブを選択した。実施例5.アフィメトリックスのマイクロアレイ実験。10のTOLおよび10の非TOLのレシピエントの選択された群において、マイクロアレイ実験を、市販の核酸プローブを含む、54,675のプローブによって、47,000の注釈された遺伝子を包含するAffymetrixHumanGenomeU133Plus2.0のアレイ上で複製したAffymetrix,Inc,SantaClara,CA,USA。さらなるアフィメトリックスの実験を、4のTOL-Postの肝臓サンプルまた、完全な薬物の離脱の12か月後に得られた肝生検組織が利用可能であった10のTOLレシピエントのうち4から抽出したRNAを利用する際に行った。遺伝子発現データを、プローブ配列情報を組み込むプローブ強度から発現値を計算する、グアニジン-シトシン含量を調整したロバストなマルチアレイのアルゴリズムを使用して標準化した。その後、少なくとも1つのサンプル中で5のlog2発現値に達してないプローブを除いた保存的なプローブフィルタリング工程を利用し、結果として、54,675の元のセットから合計18,768のプローブを選択した。実施例6.マイクロアレイの遺伝子発現データ分析。異なるマイクロアレイ研究群の間で差次的に発現された遺伝子を識別するために、SignificantAnalysisofMicroarrayを利用した。SAMは、データセットおよび補正係数を有する各遺伝子に対して改変したt検定統計量を使用することで、t値を計算し、それによって、各遺伝子に対する非現実的に低い標準偏差を制御する。さらに、SAMは、実際の試験結果と、試験した群の重複置換から得た結果との間の差に対する閾値を選択することによって、偽発見率FDRの制御を可能にする。今回の研究に関して、FDR<10および1000の置換を使用してSAM選択を行った。異なる研究群の間のグローバルな遺伝子発現差をグラフ式に表わすために、フィルター処理したfilteredプローブリスト全体を使用して、made4パッケージに含まれるグループ間分析BGAの機能において実施されるような対応分析を行ったCulhaneAC,etal.Bioinformatics2005。この方法は、楕円によって区切られた領域が、第1および第2の軸においてサンプルスコアの推測された従法線分布の95を表わす、2Dグラフ中の多重遺伝子の発現測定などの、高次元データを視覚化することができる。対象の遺伝子の群が、臨床的結果拒絶反応に対する寛容性、臨床的な変化ドナーおよびレシピエントの年齢、性別、免疫抑制療法のタイプ、移植後の時間および組織学的特徴鉄含量に有意に関係したかどうかを測定するために、Globaltestソフトウェアを利用したGoeman,etal.Bioinformatics2004。このソフトウェア内のシンタックスも、寛容性のレシピエントと非寛容性のレシピエントとの間で統計的に異なると分かった、妨害の臨床的な共変量nuisanceclinicalcovariatesの生じうる交絡影響に関する遺伝子発現と臨床結果との間で見られる関連性を修正するために利用した。実施例7.定量的リアルタイムPCRqPCR実験。マイクロアレイ発現の結果を実証するために、104の標的遺伝子および3のハウスキーピング遺伝子補足の表1の群の発現パターンを、48のレシピエントのサブグループ18のTOLおよび31の非TOL;それらのすべてはHospitalClinicBarcelonaから上で、市販のオリゴヌクレオチドプライマーを含む、ABI7900SequenceDetectionSystemおよびTaqManLDAマイクロ流体プレートAppliedBiosystems,Carlsbad,USAを利用して測定した。さらに、qPCR実験を、UniversityTorVergataRomeおよびUniversityHospitalsLeuvenによって提供された、10のTOLおよび11の非TOLのレシピエントの独立した群において行った。該実験からのマイクロアレイデータは入手できなかった。標的遺伝子を、次のものに基づいて選択した:1Illuminaおよびアフィメトリックスのマイクロアレイ実験結果;2肝臓の操作上の寛容性M.Martinez-Llordellaetal.JClinInvest2008に関係しているとして我々のグループによって以前に記載された血液の転写バイオマーカー;および、3文献に記載された顕著な免疫制御遺伝子。DNAを、TurboDNAfreeDNAse処置Ambionを使用して、総RNA調製物から取り除き、RNAを、ReverseTranscriptionKitを使用して、cDNAへと逆転写した。転写レベルを定量化するために、標的遺伝子のCt値を、ハウスキーピング遺伝子に標準化し、ΔCt値を生成した。その後、結果を、標的サンプルのcDNAと、ΔΔCt方法による較正されたサンプルとの間の相対的な発現として計算した。以下の3つのサンプルを較正物質calibratorsとして利用した:18CONT-TxサンプルからのプールRNA;210CONTサンプルからのプールRNA;および3市販の肝臓RNAHumanLiverTotalRNA,Ambion。実施例8.遺伝子分類子の識別および確認。我々が行なった免疫抑制の離脱の成功を予測する生検ベースのqPCR遺伝子発現の分類子を発達させるために、線形判別分析および誤分類罰則付き事後分類MiPPソフトウェアにおいて実施されたロジスティク回帰アルゴリズムを利用する予測モデルの徹底的な調査を行った。MiPPは、最も簡潔な診断用モデルの発見のための段階的な漸進的分類のモデリングincrementalclassificationmodellingに基づき、二重交差検定の方策を利用する。最初に、大きなスクリーニング調査の落とし穴を回避しながら最適なモデルを得るために、HospitalClinicBarcelonaからの18のTOLおよび31の非TOLの肝臓レシピエントの訓練事例上で10倍交差検定の工程を行った。次に、診断用モデルのランダムに分割する交差検定を、外部モデル確認のために訓練事例2/3および独立したテスト事例1/3へと繰り返し分割することによって、Barcelonaからの56のサンプルおよびRomeおよびLeuvenからの21のサンプルを含む全体的なデータセット上で行った。訓練事例で識別された各モデルに関して、寛容性の最適確率のカットオフを、ROC分析を介して計算した。テストおよび訓練の事象の多数のランダム分割の使用によって、診断の正確性に対する信頼限界を得ることが可能となった。これらの信頼限界に基づいて、診断性能および平均の誤分類のエラー率を、候補分類子の各々に関して得た。モデルの性能が中央依存ではなかったことを実証するために、その後、SN、SP、NPV、PPVおよびBarcelonaから収集されたサンプルおよびRomeおよびLeuvenから得られたサンプルに関する全体的なエラー率を計算した。実施例9.血清ヘプシジンの測定。血清サンプルを、BDバキュテーナーSSTIIBDBioscience,FranklinLakes,USAを使用して、ベースラインで64の登録された肝臓レシピエントから得て、-80°Cで貯蔵した。定量的血清ヘプシジンの測定を、弱い陽イオン交換クロマトグラフィーおよび飛行時間型質量分析TOFMSの組み合わせによって行った。定量化に関して、ヘプシジンアナログ合成ヘプシジン-24;PeptideInternationalInc.を、内部標準として利用した。ペプチドスペクトルを、MicroflexLTのマトリックス強化したレーザー脱離/イオン化TOFMSのプラットフォームBrukerDaltonics上で生成した。血清ヘプシジン-25濃度を、nmol/Lとして表した。この方法の検出の下限は、0.5nMであり;平均変動率は、2.7intra-runおよび6.5inter-runであった。血清ヘプシジン-25の中間の参照レベルは、4.2nM0.5-13.9nMの範囲である。図3に示されるように、ヘプシジン遺伝子HAMPによってコード化されたペプチドの血清レベルは、非寛容性の肝臓レシピエントと比較して寛容性のレシピエントにおいて著しく増加され、それ故、ヘプシジンのレベルは、肝移植を受ける患者の寛容状態の診断及び/又は予後のための貴重なマーカーである。実施例10.先行技術に含まれる肝移植における寛容性の診断のための方法と本発明の方法との間の比較アッセイ。先行技術の方法は、本発明で提示されるものとは異なる遺伝子の群KLRF1、PTGDR、NCALD、CD160、IL2RB、PTCH1、ERBB2、KLRB1、NKG7、KLRD1、FEZ1、GNPTAB、SLAMF7、CLIC3、CX3CR1、WDR67、MAN1A1、CD9、FLJ14213、FEM1C、CD244、PSMD14、CTBP2、ZNF295、ZNF267、RGS3、PDE4B、ALG8、GEMIN7の発現の末梢血サンプルにおける測定を含む。その上、本実施例は、本発明の方法がより高い弁別力を有していることを示す。先行技術の方法は以下の結果を生む:AFEM1CとIL8の組み合わせ:Sn=63;Sp=80.77;ER=7.08;PPV=77.68;NPV=72.41BKLRF1とSLAMF7の組み合わせSn=27.7、SP=92.31、ER=37.5、PPV=73.68、NPV=72.41CKLRF1とIL2RBの組み合わせSn=50、SP=84.62、ER=31.25、PPV=73.33、NPV=66.67Sn:感受性SP:特異性ER:エラー率PPV:陽性的中率NPV:陰性的中率しかしながら、同じ48の患者3つの最良モデルをこの比較アッセイのために選択したの肝臓組織中の表3、4および6に含まれる遺伝子の測定に基づいた本発明の方法は、以下の結果につながった:ATFRC、CDHR2、HMOX1、MIF、HAMP、IFNG、PEBP1、SLC5A12、ADORA3の組み合わせ:Sn=77.27、SP=96.15、ER=12.5、PPV=94.44、NPV=83.33BTFRC、PEBP1、MIF、ADORA3の組み合わせSN=90.91、SP=84.62、ER=12.5、PPV=83.33、NPV=91.67CTFRC、IFNG、HAMP、CDHR2の組み合わせSn=77.27、SP=88.46、ER=16.67、PPV=85、NPV=82.14Sn:感受性SP:特異性ER:エラー率PPV:陽性的中率NPV:陰性的中率それ故、肝臓の組織サンプル中の本発明に含まれる遺伝子の発現の測定は、移植に対して寛容性があるため免疫抑制の投薬をうまく断つことができる肝臓レシピエントを識別するために、末梢血中の先行技術に含まれる遺伝子の測定より少なくとも正確であるように結論付けられる。実施例11.血清フェリチンの測定。血清サンプルを、BDバキュテーナーSSTIIBDBioscience,FranklinLakes,USAを使用して、ベースラインで64の登録された肝臓レシピエントから得て、-80°Cで貯蔵した。血清フェリチンの測定を、自動化したエリザ法によって行った。フェリチン血清レベルは、血清ヘプシジンと相互に関連付けられた。したがって、フェリチン血清レベルは、非寛容性非TOLのレシピエントにおけるよりも寛容性TOLのレシピエントにおける方が著しく高かった図4A。鉄貯蔵の欠如血清フェリチン<12ng/mL、鉄欠乏の高度に特異的な指標を、非TOLのレシピエントの間で専ら観察した図4B。ヘプシジンまたはフェリチンのいずれかと寛容性との間の関連性は、ロジスティク回帰の多変量解析におけるそれらの独立した予測値によって実証されるように、レシピエントの年齢、移植からの時間またはベースラインの免疫抑制療法によって混同されることはなかった。図4に示されるように、フェリチンの血清レベルが、非寛容性の肝臓レシピエントと比較して寛容性のレシピエントにおける方が著しく増加されるため、フェリチンのレベルは、肝移植を受ける患者の寛容状態の診断及び/又は予後のための貴重なマーカーである。実施例12.ホスホ-Stat3の免疫染色。転写3Stat3の転写因子シグナルのトランスデューサーおよび活性化因子を活性化する、ヤヌスキナーゼ2Jak2のリン酸化を介したヘプシジンの能力を考慮してDeDomenicoetal.JClinInvest2010、12の寛容性TOLの患者および13の非寛容性非TOLの患者からの肝生検のサブセットにおいてリン酸化されたStat3を定量化した。パラフィン包理した肝生検切片を、脱パラフィンし、抗原回復を、1mMのEDTApH8.0中で15分間沸騰させることによって行った。続いて、切片を、供給者の説明書に従って、バックグラウンドの還元剤backgroundreducingreagentsによって処理しDAKO,Glostrup,Denmark、ホスホ-STAT3Tyr705ラビット単クローン抗体CellSignallingTechnology,Danvers,MA,USAによって染色した。免疫染色を、DAB基質DAKOを使用して発展させ、ヘマトキシリンを使用して逆染色した。Immagesを、NikonEclipseE600顕微鏡およびanalySISソフトウェアを使用して評価し、ブルーチャンネルの閾値操作された減少によってImageJSoftwareを使用して分析し、その後、残りの染色されたピクセルの2値化および測定が続いた。強力なホスホ-Stat3染色は、生検切片に沿って無作為に分散された焦点に密集したclusteredin肝細胞核においてほぼ例外なく顕著であった。対照的に、染色は、浸潤性の単核性白血球、マクロファージおよび内皮細胞の核においてわずかであり、それほど頻繁にはなかった。非寛容性の患者非TOLのサンプルと比較して、寛容性の患者TOLの肝生検は、著しく増加した肝細胞ホスホ-Stat3染色を示した図5。そのため、ホスホ-Stat3のレベルは、肝移植を受ける患者の寛容状態の診断及び/又は予後のための貴重なマーカーである。実施例13.肝臓の鉄含量の評価。肝臓内の鉄貯蔵の規模を推定するために、Perlの染色によって3μmの厚さの肝臓スライドを染色した。鉄含量を、記載されるようなScheuerの変更された且つTotalIronScoreのスコアリングシステムの両方を利用して、半定量的に評価したDeugnieretal.Hepatology1993;Scheueretal.JPatholBacteriol1962。さらに、肝細胞および間充織内皮細胞およびクッパー細胞の鉄染色を別々に採点した。軽度の門脈周囲性肝細胞の鉄沈着は、寛容性TOLの患者から収集した大多数の肝臓サンプルにおいて顕著であった。対照的に、肝生検において非寛容性非TOLのレシピエントから染色可能な鉄は観察されなかった図1A。これらの差は、専ら、間充織の鉄蓄積ではなく、むしろ肝細胞が原因であった。TOLと非TOLとの間の鉄貯蔵の違いは、移植後経過した時間または投与された免疫抑制薬のタイプにかかわらず、患者の2つの群を区別するために使用され得る図1B。図1に示されるように、肝臓の鉄含量が、免疫抑制療法をうまく断ち得る寛容性の患者TOLの肝臓における方が、それが不可能な非寛容性の患者非TOLの肝臓におけるよりも著しく高いため、鉄のレベルは、肝移植を受ける患者の寛容状態の診断及び/又は予後のための貴重なマーカーとして使用され得る。"