次の一般式で表される化合物およびその薬学的に許容可能な塩:[式中、は、次の式:のうちの1つで表される基であり;は、グリシン、またはBが式NR20CHであるLαアミノ酸の残基であるか、または後に定義する基A1~A69のうちの1つのエナンチオマーであり;は、次の式:のうちの1つで表される基でありR1は、H低級アルキルまたはアリール低級アルキルでありR2は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR3は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR4は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82psCOOR57psCONR58R59psPO2psSO2R62またはosC6H4R8でありR5は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR6は、HアルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR7は、アルキルアルケニルqsOR55qsNR33R34qsOCONR33R75qsNR20CONR33R82rsCOOR57rsCONR58R59rsPO2rsSO2R62またはrsC6H4R8でありR8は、HClFCF3NO2低級アルキル低級アルケニルアリールアリール低級アルキルosOR55osSR56oNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosCOR64でありR9は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR10は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR11は、HアルキルアルケニルmsOR55msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR12は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82rsCOOR57rsCONR58R59rsPO2rsSO2R62またはrsC6H4R8でありR13は、アルキルアルケニルqsOR55qsSR56qsNR33R34qsOCONR33R75qsNR20CONR33R82qsCOOR57qsCONR58R59qsPO2qsSO2R62またはqsC6H4R8でありR14は、HアルキルアルケニルmsOR55msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82qsCOOR57qsCONR58R59qsPO2qsSOR62またはqsC6H4R8でありR15は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR16は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR17は、アルキルアルケニルqsOR55qsSR56qsNR33R34qsOCONR33R75qsNR20CONR33R82qsCOOR57qsCONR58R59qsPO2qsSO2R62またはqsC6H4R8でありR18は、アルキルアルケニルpsOR55psSR56psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82psCOOR57psCONR58R59psPO2psSO2R62またはosC6H4R8でありR19は、低級アルキルpsOR55psSR56psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82psCOOR57psCONR58R59psPO2psSO2R62またはosC6H4R8でありまたはR18とR19は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR20は、Hアルキルアルケニルまたはアリール低級アルキルでありR21は、HアルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR22は、HアルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR23は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR24は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR25は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR26は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありまたはR25とR26は一緒になって26rOrrSrまたはrNR57rを形成していてもよくR27は、HアルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osCOOR57osCONR58R59osOCONR33R75osNR20CONR33R82osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR28は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR29は、アルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR30は、Hアルキルアルケニルまたはアリール低級アルキルでありR31は、HアルキルアルケニルpsOR55psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR32は、H低級アルキルまたはアリール低級アルキルでありR33は、HアルキルアルケニルmsOR55msNR34R63msOCONR75R82msNR20CONR78R82osCOR64osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR34は、H低級アルキルアリール、またはアリール低級アルキルでありR33とR34は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR35は、HアルキルアルケニルmsOR55msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82psCOOR57psCONR58R59psPO2psSO2R62またはpsC6H4R8でありR36は、HアルキルアルケニルosOR55psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82psCOOR57psCONR58R59psPO2psSO2R62またはosC6H4R8でありR37は、HFBrClNO2CF3低級アルキルpsOR55psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR38は、HFBrClNO2CF3アルキルアルケニルpsOR55psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR39は、Hアルキルアルケニルまたはアリール低級アルキルでありR40は、Hアルキルアルケニルまたはアリール低級アルキルでありR41は、HFBrClNO2CF3アルキルアルケニルpsOR55psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR42は、HFBrClNO2CF3アルキルアルケニルpsOR55psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR43は、HアルキルアルケニルmsOR55msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59osPO2osSO2R62またはosC6H4R8でありR44は、アルキルアルケニルrsOR55rsSR56rsNR33R34rsOCONR33R75rsNR20CONR33R82rsCOOR57rsCONR58R59rsPO2rsSO2R62またはrsC6H4R8でありR45は、HアルキルアルケニルosOR55osSR56osNR33R34osOCONR33R75osNR20CONR33R82osCOOR57ssCONR58R59ssPO2ssSO2R62またはssC6H4R8でありR46は、HアルキルアルケニルまたはopC6H4R8でありR47は、HアルキルアルケニルまたはosOR55でありR48は、H低級アルキル低級アルケニルまたはアリール低級アルキルでありR49は、HアルキルアルケニルsCOOR57sCONR58R59sPO2sSOR62またはsC6H4R8でありR50は、H低級アルキルまたはアリール低級アルキルでありR51は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59opPO2psSO2R62またはpsC6H4R8でありR52は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59opPO2psSO2R62またはpsC6H4R8でありR53は、HアルキルアルケニルmsOR55msSR56msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82osCOOR57osCONR58R59opPO2psSO2R62またはpsC6H4R8でありR54は、HアルキルアルケニルmsOR55msNR33R34msOCONR33R75msNR20CONR33R82oCOOR57osCONR58R59またはosC6H4R8でありR55は、H低級アルキル低級アルケニルアリール低級アルキルmsOR57msNR34R63msOCONR75R82msNR20CONR78R82osCOR64oCOOR57またはosCONR58R59でありR56は、H低級アルキル低級アルケニルアリール低級アルキルmsOR57msNR34R63msOCONR75R82msNR20CONR78R82osCOR64またはosCONR58R59でありR57は、H低級アルキル低級アルケニルアリール低級アルキルまたはヘテロアリール低級アルキルでありR58は、H低級アルキル低級アルケニルアリールヘテロアリールアリール低級アルキルまたはヘテロアリール低級アルキルでありR59は、H低級アルキル低級アルケニルアリールヘテロアリールアリール低級アルキルまたはヘテロアリール低級アルキルでありまたはR58とR59は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR60は、H低級アルキル低級アルケニルアリールまたはアリール低級アルキルでありR61は、アルキルアルケニルアリールヘテロアリールアリール低級アルキルヘテロアリール低級アルキルmOR55mNR33R34mOCONR75R82mNR20CONR78R82oCOOR37oNR58R59またはoPO2でありR62は、低級アルキル低級アルケニルアリールヘテロアリールまたはアリール低級アルキルでありR63は、H低級アルキル低級アルケニルアリールヘテロアリールアリール低級アルキルヘテロアリール低級アルキルCOR64COOR57CONR58R59SO2R62またはPO2でありR34とR63は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR64は、H低級アルキル低級アルケニルアリールヘテロアリールアリール低級アルキルヘテロアリール低級アルキルpsOR65psSR66またはpsNR34R63PsOCONR75R82PsNR20CONR78R82でありR65は、H低級アルキル低級アルケニルアリールアリール低級アルキルヘテロアリール低級アルキルCOR57COOR57またはCONR58R59でありR66は、H低級アルキル低級アルケニルアリールアリール低級アルキルヘテロアリール低級アルキルまたはCONR58R59でありmは、2~4でありoは、0~4でありpは、1~4でありqは、0~2でありrは、1または2でありsは、0または1でありZは、n個のαアミノ酸残基からなる鎖であり、nは12または18の整数であり、該鎖中のアミノ酸残基の位置はN末端アミノ酸から出発して数え、そして鎖中の位置に応じてアミノ酸残基はGly、NMeGly、ProもしくはPipであるか、または式ACOもしくは式BCOもしくは以下のタイプ:CNR20CHCODNR20CHCOENR20CHCOFNR20CHCOならびにHNR20CH47CHNR20NR20CHpSSpCHNR20NR20CHpNR20COpCHNR20およびNR20CHpNR20CONR20pCHNR20INR86CH2COのうちのいずれか1つであり;R71は、低級アルキル低級アルケニルpsOR75psSR75psNR33R34psOCONR33R75psNR20CONR33R82osCOOR75pCONR58R59pPO2pSO2R62またはoC6R67R68R69R70R76でありR72は、H低級アルキル低級アルケニルpsOR85またはpsSR85でありR73は、oR77rOoR77rSoR77またはrNR20oR77でありR74は、pNR78R79pNR77R80pCNR78R79pCNR78R79pCNR78R79pNR80CNR78R79pNCNR79R80pC6H4NR78R79pC6H4NR77R80pC6H4CNR78R79pC6H4CNR78R79pC6H4CNR78R79pC6H4NR80CNR78R79pC6H4NCNR79R80rOmNR78R79rOmNR77R80rOpCNR78R79rOpCNR78R79rOpCNR78R79rOmNR80CNR78R79rOmNCNR79R80rOpC6H4CNR78R79rOpC6H4CNR78R79rOpC6H4CNR78R79rOpC6H4CNR78R79rOpC6H4NR80CNR78R79rSmNR78R79rSmNR77R80rSpCNR78R79rSpCNR78R79rSpCNR78R79rSmNR80CNR78R79rSmNCNR79R80rSpC6H4CNR78R79rSpC6H4CNR78R79rSpC6H4CNR78R79rSpC6H4CNR78R79rSpC6H4NR80CNR78R79pNR80COR64pNR80COR77pNR80CONR78R79pC6H4NR80CONR78R79またはpNR20COuXtCH3、ここでXはO;NR20、またはSuは1~3、およびtは1~6、でありR75は、低級アルキル低級アルケニルまたはアリール低級アルキルでありR33とR75は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR75とR82は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR76は、H低級アルキル低級アルケニルアリール低級アルキルoOR72oSR72oNR33R34oOCONR33R75oNR20CONR33R82oCOOR75oCONR58R59oPO2pSO2R62またはoCOR64でありR77は、C6R67R68R69R70R76であるかまたは以下の式:のうちの1つで表されるヘテロアリール基でありR78は、H低級アルキルアリールまたはアリール低級アルキルでありR78とR82は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR79は、H低級アルキルアリールまたはアリール低級アルキルでありまたはR78とR79は一緒になって272O2または2NR572であってもよくR80は、Hまたは低級アルキルでありR81は、H低級アルキルまたはアリール低級アルキルでありR82は、H低級アルキルアリールヘテロアリールまたはアリール低級アルキルでありR33とR82は一緒になって262O22S2または2NR572を形成していてもよくR83は、H低級アルキルアリールまたはNR78R79でありR84は、msOHPCOOR80msSHpCONR78R79pNR80CONR78R79pC6H4CONR78R79またはpC6H4NR80CONR78R79でありR85は、低級アルキルまたは低級アルケニルでありR86は、R74oR77oCHR33R75またはuXtvNR78R79またはuXtvCNR78R79、ここでXはONR20SまたはOCOOuは13tは16およびvは13でありただし、n個のアミノ酸残基からなる鎖Zにおいて、nが12である場合、1位~12位のアミノ酸残基は:P1タイプCの、またはタイプDの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はProもしくはPipでありP2タイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGly、NMeGly、ProもしくはPipでありP3タイプEの、またはタイプFでありP4タイプCの、またはタイプDの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGlyもしくはNMeGlyでありP5タイプEの、またはタイプDの、またはタイプCの、またはタイプFの、または式ACOで表されるアミノ酸残基であるか、または残基は、Gly、NMeGly、ProもしくはPipでありP6タイプEの、またはタイプFの、または式BCOで表されるアミノ酸残基であるか、または残基は、GlyもしくはNMeGlyでありP7タイプCの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP8タイプDの、またはタイプCのアミノ酸残基であるか、または残基は、ProまたはPipでありP9タイプCの、またはタイプDの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGlyもしくはNMeGlyでありP10タイプDの、またはタイプCのアミノ酸残基であるか、または残基は、ProもしくはPipでありP11タイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGlyもしくはNMeGlyであり且つP12タイプCの、またはタイプDの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基は、ProもしくはPipでありあるいはP4とP9および/またはP2とP11は、一緒になってタイプHの基を形成していてもよく、且つP4、P6およびP9はD異性体も可能であることを条件としnが18である場合、1位~18位のアミノ酸残基は:P1タイプDの、またはタイプEの、またはタイプCの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP2タイプEの、またはタイプFの、またはタイプDのアミノ酸残基でありP3タイプCの、またはタイプDでありP4タイプEの、またはタイプDの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP5タイプDの、またはタイプCの、またはタイプEのアミノ酸残基でありP6タイプCの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP7タイプCの、またはタイプDの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP8タイプFの、またはタイプEのアミノ酸残基であるか、または残基はGlyもしくはNMeGlyでありP9タイプCの、またはタイプDの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP10タイプCの、またはタイプEの、または式ACOで表されるアミノ酸残基であるか、または残基は、ProもしくはPipでありP11タイプCの、またはタイプEの、または式BCOで表されるアミノ酸残基であるか、または残基はGly、NMeGly、ProもしくはPipでありP12タイプDの、またはタイプCの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP13タイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGlyまたはNMeGlyでありP14タイプCの、またはタイプDの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP15タイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP16タイプDの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP17タイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP18タイプCの、またはタイプDの、またはタイプEの、またはFのアミノ酸残基でありあるいはP4とP17および/またはP6とP15および/またはP8とP13は、一緒になってタイプHの基を形成していてもよく、且つP10、P11およびP12はD異性体も可能であることを条件とする]。が式以外の基でありR74が、pNR20COuXtCH3以外の基であり、nが12であり1位~12位のアミノ酸残基は:P1タイプCの、またはタイプDの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はProでありP2タイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGlyでありP3タイプEの、またはタイプFでありP4タイプCの、またはタイプDの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP5タイプEの、またはタイプDの、またはタイプCの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGly、もしくはProでありP6タイプEの、またはタイプFの、または式BCOで表されるアミノ酸残基であるか、または残基はGlyでありP7タイプCの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP8タイプDの、またはタイプCのアミノ酸残基であるか、または残基はProでありP9タイプCの、またはタイプDの、またはタイプFのアミノ酸残基でありP10タイプDの、またはタイプCのアミノ酸残基であるか、または残基は、ProでありP11タイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はGlyであり且つP12タイプCの、またはタイプDの、またはタイプEの、またはタイプFのアミノ酸残基であるか、または残基はProでありあるいはP4とP9および/またはP2とP11は、一緒になってタイプHの基を形成していてもよく、且つP6はD異性体も可能である請求項1に記載の化合物およびその薬学的に許容可能な塩。が式またはの基である、請求項1または2に記載の化合物。Aが、式A1~A69のうちの1つで表される基でありR1が、水素または低級アルキルでありR2が、H低級アルキル低級アルケニルmOR55mSR56mNR33R34262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるmOCONR33R75262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるmNR20CONR33R82262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoNCOR64oCOOR57oCONR58R59262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoPO2oSO2R62またはqC6H4R8でありR3が、H低級アルキル低級アルケニルmOR55mSR56mNR33R34262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるmOCONR33R75262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるmNR20CONR33R82262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoNCOR64oCOOR57oCONR58R59262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoPO2oSO2R62またはqC6H4R8でありR4が、H低級アルキル低級アルケニルmOR55mSR56mNR33R34262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるmOCONR33R75262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるmNR20CONR33R82262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるmNCOR64oCOOR57oCONR58R59262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoPO2oSO2R62またはqC6H4R8でありR5が、低級アルキル低級アルケニルoOR55oSR56oNR33R34262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoOCONR33R75262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoNR20CONR33R82262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoNCOR64oCOOR57oCONR58R59262O22S2または2NR572を形成している式中、R57は、Hまたは低級アルキルであるoPOOR61ペプチド合成第1の保護アミノ酸残基の樹脂へのカップリング05gの2クロロトリチルクロライド樹脂を乾燥させたフラスコに充填した。その樹脂をCH2Cl2中に懸濁し、一定の撹拌下、30分間室温にて膨潤させた。その樹脂を第1の適切に保護したアミノ酸残基0415mMol、およびCH2Cl2に溶解したジイソプロピルエチルアミン284μLで処理し、その混合物を4時間、25°Cで振盪した。樹脂の色は紫色に変化したが、溶液は帯黄色のままであった。樹脂を30mL中で30分間振盪し、次いで、CH2Cl2、DMF、CH2Cl2、MeOH、CH2Cl2、MeOH、CH2Cl2、Et2Oの順で洗浄し、減圧下で6時間乾燥させた。ローディングは、一般に06~07mMolgであった。予めローディングさせた以下の樹脂を調製した:FmocProOクロロトリチル樹脂、FmocDProOクロロトリチル樹脂、およびFmocSProOクロロトリチル樹脂。完全に保護したペプチド断片の合成合成は、24~96の反応槽を用いてSyroペプチド合成機で実施した。各容器に上記の樹脂60mgを入れた。以下の反応サイクルを設定し、実行した。工程試薬時間1CH2Cl2、洗浄および膨潤3×1分2DMF、洗浄および膨潤1×5分340ピペリジンDMF1×5分4DMF、洗浄5×2分55当量Fmocアミノ酸DMF5当量HBTU5当量HOBt5当量DIEA1×120分6DMF、洗浄4×2分7CH2Cl2、洗浄3×2分工程3~6を繰り返し、各アミノ酸を添加した。22エトキシ酢酸および2酢酸による側鎖アミノ官能基のPeg化ペプチドを含有する樹脂を、新たに蒸留した5mLのCH2Cl2中で30分間膨潤させ、次いでパラジウム触媒Pd4、14mg、03当量を加え、次いでPhSiH3、08mmol、20当量を加えた。樹脂を2時間振盪し、反応溶液を濾別した。同じ量の試薬を用いて同じ反応を再度繰り返し、2時間後に樹脂をCH2Cl2およびDMF、そして最後にEt2Oで洗浄した。樹脂を再び、新たに蒸留したCH2Cl2中で30分間膨潤させ、溶媒を濾別し、次いで樹脂をDMF中で1時間膨潤させた。1mLのDMF中のDIPEAを加え、次いで22エトキシ酢酸または2酢酸を加え、最後に1mLのDMF中のHATUの溶液を加えた。樹脂を3時間振盪し、反応溶液を濾別した。同じ量の試薬を用いて同じ反応を再度繰り返し、3時間後に樹脂をCH2Cl2およびDMF、そして最後にEt2Oで洗浄した。完全保護ペプチド断片の合成が終結した後、場合によりpeg化処理を行い、次いで、以下に記載する手順A、手順Bまたは手順Cを行うが、架橋結合またはジスルフィドβ鎖結合またはラクタムβ鎖結合を形成させるか否かに応じて採用する手順が決まる。手順A主鎖環化ペプチドの環化と後処理完全保護ペプチド断片の切断合成終了後、樹脂を3分間、CH2Cl2に溶解した1TFA1mLに懸濁し、濾過し、その濾液をCH2Cl2に溶解した20DIEA1mLで中和した。この手順を2回繰り返し、切断を確実に完了させた。濾液を蒸発乾固し、その生成物を完全に脱保護し、25水および25トリイソプロピルシランを含む切断混合物、逆相HPLCおよびESIMSにより分析し、線状ペプチド合成の効率をモニターした。線状ペプチドの環化完全保護線状ペプチド100mgをDMFに溶解した。次いで、HATUを418mg、HOAtを149mg、およびDMFに溶解した10DIEAを1mL添加し、16時間、20°Cにてその混合物をボルテックスし、続いて、高真空下で濃縮した。残渣をCH2Cl2とH2OCH3CNの間に分配した。CH2Cl2層を蒸発させ、完全保護環状ペプチドを得た。環状ペプチドの脱保護および精製得られた環状ペプチドを95トリフルオロ酢酸、25水および25トリイソプロピルシランを含有する切断混合物1mL中に溶解した。その混合物を25時間、20°Cにて放置し、次いで、真空下で濃縮した。残渣をH2O酢酸の溶液中に溶解し、前記混合物をジイソプロピルエーテルで抽出した。水層を真空下で乾燥し、次いで、分取逆相HPLCによって生成物を精製した。凍結乾燥後、生成物を白色粉末として得、ESIMSで分析した。分取HPLCおよびESIMS後の純度を含む分析データを表1、2、および3に示す。解析方法I:分析HPLC保持時間は、VYDAC218MS5215カラムを使用し、下記の溶媒AおよびBを用い、下記のグラジエントを用いて測定した0分92A、8B8分62A、38B9~12分0A、100B。解析方法II分析HPLC保持時間は、EXカラムを使用し、下記の溶媒AおよびBを用い、下記のグラジエントを用いて測定した0分95A、5B8分30A、70B9分0A、100B9~12分95A、5B。手順Bジスルフィドβ鎖結合を有する主鎖環化ペプチドの環化と後処理ジスルフィドβ鎖結合の形成合成の完了後、樹脂を3mLの乾燥DMF中で1時間膨潤させた。次いで、DMF中の10当量のヨウ素溶液を反応器に加え、次いで15時間撹拌した。樹脂を濾過し、DMF中のヨウ素の新鮮な溶液を加え、次いでさらに3時間撹拌した。樹脂を濾過してDMFとCH2Cl2で洗浄した。ペプチドの主鎖環化、切断および精製ジスルフィドβ鎖結合の形成後、樹脂をCH2Cl2中の1TFA、1mLに3分間懸濁し、濾過し、濾過物をCH2Cl2中の20DIEA、1mLで中和した。この手順を2回繰り返して切断の完了を確実にした。揮発物を除去し、チューブに乾燥DMFを6mL加えた。次いで、乾燥DMF中の2当量のHATU、および乾燥DMF中の4当量のDIPEAをペプチドに加え、次いで16時間撹拌した。揮発物を蒸発させて乾固させた。粗製の環化ペプチドを7mLのCH2Cl2に溶解させ、水中の10アセトニトリルで3回抽出した。CH2Cl2層を乾燥するまで蒸発させた。ペプチドを完全に脱保護するために切断カクテルTFATISH2Oを3mL加え、混合物を25時間放置した。揮発物を蒸発させて乾固させ、粗製ペプチドを水中の20AcOHに溶解し、イソプロピルエーテルで3回抽出した。水層を回収し、蒸発乾固させ、残留物を分取逆相HPLCで精製した。凍結乾燥後、生成物を白い粉末として得、ESIMS解析方法IまたはIIで解析した。分取HPLCおよびESIMS後の純度を含む分析データを表1、2、および3に示す。手順Cラクタムβ鎖結合を有する主鎖環化ペプチドの環化と後処理ラクタムβ鎖結合の形成0036mmolの樹脂を反応器に入れ、乾燥DMF中で1時間膨潤させた。これに4160mgのPd4および0133mLのPhSiH3を加え、一晩撹拌した。樹脂を濾過し、DCMおよびDMFで完全に洗浄した。樹脂を再び乾燥DMF中で1時間膨潤させた。これに、1mLのDMF中のDIPEA溶液を加え、次いで1mLのDMF中のHATU溶液を加え、反応溶液の最終容量を7mLとして一晩撹拌した。樹脂をDMF、CH2Cl2、DMF、CH2Cl2で完全に洗浄した。ペプチドの主鎖環化、切断および精製ペプチドを、DCM中の1TFAで樹脂から切断し、蒸発乾固させ、チューブに8mLの乾燥DMFを加えた。乾燥DMF中の2当量のHATUおよび乾燥DMF中の4当量のDIPEAをペプチドに加え、16時間撹拌した。揮発物を蒸発させて乾固させた。粗製環化ペプチドを7mLのDCMに溶解し、H2O中の10アセトニトリルで3回抽出した。DCM層を蒸発乾固させた。粗製環化ペプチドを7mLのCH2Cl2に溶解し、H2O中の10アセトニトリルで3回抽出した。CH2Cl2層を蒸発乾固させた。ペプチドを完全に脱保護するために切断カクテルTFATISH2Oを3mL加え、混合物を25時間放置した。揮発物を蒸発させて乾固させ、粗製ペプチドを水中の20AcOHに溶解し、イソプロピルエーテルで3回抽出した。水層を回収し蒸発乾固させ、残留物を分取逆相HPLCで精製した。凍結乾燥後、生成物を白い粉末として得、ESIMS解析方法IまたはIIで解析した。分取HPLCおよびESIMS後の純度を含む分析データを表1、2、および3に示す。実施例1~6および8~11を表1に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDProP12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成し、手順Aに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法Iを用いて測定した:Ex1Ex2Ex3Ex4Ex5Ex6Ex8Ex9Ex10Ex11。実施例7および12~14を表1に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDProP12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成し、その後、ジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法Iを用いて測定した:Ex7Ex12Ex13Ex14。実施例15~50を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDProP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成し、その後、これらを手順Aに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法Iを用いて測定した:Ex15Ex16Ex17Ex18Ex19Ex20Ex21Ex22Ex23Ex24Ex25Ex26Ex27Ex28Ex29Ex30Ex31Ex32Ex33Ex34Ex35Ex36Ex37Ex38Ex39Ex40Ex41Ex42Ex43Ex44Ex45Ex46Ex47Ex48Ex49Ex50。は正しいMSを示す二重ピークである。実施例51~115、117~141、143~148を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDProP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成し、その後、ジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を、実施例Ex51~53、138~139については上記のようなグラジエント方法Iを、実施例Ex54~115、117~137、140~141、143~148については上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex51Ex52Ex53Ex54Ex55Ex56Ex57Ex58Ex59Ex60Ex61Ex62Ex63Ex64Ex65Ex66Ex67Ex68Ex69Ex70Ex71Ex72Ex73Ex74Ex75Ex76Ex77Ex78Ex79Ex80Ex81Ex82Ex83Ex84Ex85Ex86Ex87Ex88Ex89Ex90Ex91Ex92Ex93Ex94Ex95Ex96Ex97Ex98Ex99Ex100Ex101Ex102Ex103Ex104Ex105Ex106Ex107Ex108Ex109Ex110Ex111Ex112Ex113Ex114Ex115Ex117Ex118Ex119Ex120Ex121Ex122Ex123Ex124Ex125Ex126Ex127Ex128Ex129Ex130Ex131Ex132Ex133Ex134Ex135Ex136Ex137Ex138Ex139Ex140Ex141Ex143Ex144Ex145Ex146Ex147Ex148。は正しいMSを示す二重ピークである。実施例116を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂は、FmocSProPクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂SProDProP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いで、22エトキシ酢酸を用いてpeg化処理を行い、結果的にDProA842をテンプレートとして得た。次いでジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を、上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex116。実施例142を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDProP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いで、22エトキシ酢酸を用いてpeg化処理を行った。次いで、ジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex142。実施例149を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDGlnP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いでジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex149。実施例150を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸DProから出発して合成した。出発樹脂はFmocDProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂DProGlyP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いでジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex150。実施例151を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDProP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いでペプチドを手順Aに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex151。実施例152~153を表2に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProDProP14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いでラクタム架橋を形成させ、ペプチドを手順Cに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex152Ex153。は正しいMSを示す二重ピークである。実施例154~155を表3に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸DProから出発して合成した。出発樹脂はFmocDProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂DProGlyP18P17P16P15P14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いで以下の手法を用いてジスルフィド架橋を形成させた位置P4とP17でのジスルフィド架橋の形成のために、保護された環状ペプチドを乾燥DMF中で1時間膨潤させた。DMFを排出し、アルゴン雰囲気下で2mLのNMPと444μLのトリnブチルホスフィンで置き換えた。樹脂を2時間振盪させた。溶媒を除去し、樹脂を5mLのNMPで1回洗浄した。その後、樹脂を再びアルゴン雰囲気下で2mLのNMPと444μLのトリnブチルホスフィンと共に2時間振盪させた。樹脂をDMFで洗浄し、90mLのDMFを用いて250mLフラスコに移し換えた。10mLの水中の1mmolのK3Fe6を加え、懸濁物を25°Cで一晩、暗所で穏やかに撹拌した。樹脂を反応器に移し換え、7mLの水で1回洗浄し、5mLのDMFで2回洗浄した。位置P8とP13での第2のジスルフィド架橋の形成のために、ペプチドを6mLの乾燥DMF中の9当量のヨウ素で2時間処理した。樹脂をDMFで1回洗浄し、6mLの乾燥DMF中の9当量のヨウ素での処理を繰り返した。樹脂を5mLのDMFで3回洗浄し、次いで5mLのCH2Cl2で洗浄した。次いでペプチドを手順Bに示すように樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex154Ex155。純度分取HPLC後の化合物の純度Ex154Ex155。マスM3H3Ex154Ex155。実施例156~157を表3に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸DProから出発して合成した。出発樹脂はFmocDProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂DProGlyP18P17P16P15P14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いでジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex156Ex157。純度分取HPLC後の化合物の純度Ex156Ex157。マスM3H3Ex156Ex157。実施例158~159を表3に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸Proから出発して合成した。出発樹脂はFmocProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂ProGlyP18P17P16P15P14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いでジスルフィド架橋を形成させ、ペプチドを手順Bに示すようにして樹脂から切断し、環化し、脱保護し、精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex158Ex159。純度分取HPLC後の化合物の純度Ex158Ex159マスM3H3Ex158Ex159実施例160を表3に示す。ペプチドを、樹脂にグラフトさせたアミノ酸DProから出発して合成した。出発樹脂はFmocDProOクロロトリチル樹脂であり、これは上記のようにして調製した。下記の配列樹脂DProGlyP18P17P16P15P14P13P12P11P10P9P8P7P6P5P4P3P2P1、の線状ペプチドを上記の手順にしたがって固相担体上で合成した。次いで以下の手法を用いたペプチド36μmolをCH2Cl2中の1TFAで樹脂から切断した。乾燥するまで蒸発させた後、8mLの乾燥DMFをチューブに加えた。次いで乾燥DMF中の2当量のHATUおよび乾燥DMF中の4当量のDIPEAを加え、16時間撹拌した。揮発物を蒸発させて乾固させた。粗製環化ペプチドを7mLのDCMに溶解し、H2O中の10アセトニトリルで3回抽出した。有機層を蒸発乾固させた。ペプチドを完全に脱保護するために、切断カクテルTFATISH2Oを3mL加え、混合物を3時間放置した。揮発物を蒸発させて乾固させ、粗製ペプチドを水中の20酢酸に溶解し、イソプロピルエーテルで3回抽出した。水層を水で200mLまで希釈した。pHを水酸化アンモニウム水溶液でpH8に調節した。反応混合物を24時間振盪させた。溶液を酢酸でpH5まで酸性化し、蒸発乾固させてHPLCで精製した。HPLC保持時間を上記のようなグラジエント方法IIを用いて測定した:Ex160。純度分取HPLC後の化合物の純度Ex160。マスM3H3Ex160。2生物学的方法21ペプチドの調製特に断らない限り、凍結乾燥ペプチドはMicrobalanceで秤量し、最終濃度1mMとなるように滅菌水に溶解させた。ストック溶液は遮光して4°Cで保存した。22Ca2アッセイ:ペプチドのCXCR4拮抗活性手法11測定当たり3~4個のMioCXCR4トランスフェクト済みプレB細胞を、5mMのDグルコースを含有する200μLMSBピペラジン1エタンスルホン酸、136mMNaCl、48mMKCLおよび1mMCaCl2に懸濁し、075μLの1mMFura2アセトキシメチルエステルを37°Cで17分間ローディングした。血小板遠心によりFura2AMを含まないよう細胞を洗浄し、5mMのDグルコースを含有する800μLのMSBに再懸濁した。与えるべきペプチドを、MSB02PPL中で100倍の最終濃度に希釈し、8μLを注入した。ペプチドを用いた1回の刺激または連続刺激に応答したCa2i依存性蛍光変化を、340nMの励起波長と510nMの終端発光波長で蛍光計で記録した。測定は、37°Cで連続的に撹拌しながら行った。シグナル強度を、3mMCaCl21mMイオノマイシンおよび10μLMnCl2でキャリブレートし、Ca2i変化をfura2アセトメチルエステル飽和で表した。Ca2i変化の速度を、初期Ca2i変化に基づいて計算し、ケモカイン濃度に依存してプロットし、シグモイド型曲線を得てIC50値を決定した。MBS20mMHEPES、136mMNaCl、48mMKCl、1mMCaCl22H2O、pH74浸透圧H2OまたはPBSで調整された、NaOHまたはHClで調整した310mOsmMBSplusMSB中に5mMDグルコースFura2アセトキシメチルエステルDMSO中の1mMストック溶液手法2細胞内カルシウムの増加をFlexstation384を用いてモニターすることにより、ヒトCXCR4で安定的にトランスフェクトしたマウスプレB細胞系30019におけるペプチドのCXCR4拮抗性をアッセイした。細胞は、アッセイバッファー中でCalcium3AssayKitを用いてバッチごとに室温で1時間ローディングし、次いで標識した200000個の細胞を黒色の96ウェルアッセイプレートに分配した。アッセイバッファー中のペプチドの20倍濃縮溶液を細胞に加え、プレート全体を遠心して細胞をウェルの底に沈降させた。10nM間質誘導因子1により誘導されるカルシウム動員を、Flexstation384で90秒間測定した。ベースラインより上の蛍光応答の最大変化を用いて、拮抗活性を計算した。用量応答曲線のデータを、SoftmaxPro46MolecularDevicesを用いて4パラメータロジッスティック方程式に当てはめ、そこからIC50値を計算した。23FIGSAssayアッセイは下記の文献5に従って行った。ペプチドを10mMTrisHCl中に室温で溶解することによりペプチドのストック希釈液を調製した。ストック溶液は4°Cで遮光して保存した。作業用希釈液は、リン酸緩衝生理食塩水に連続希釈することによりその場で調製し、10μLの最終容量で細胞培養物に直接加えた。48時間の共培養後、培養物をPBSですすぎ、次いでPBS中のグルタルアルデヒド/ホルムアルデヒドに5分間曝露した。光度測定的定量化のために、固定した培養物をその後、βガラクトシダーゼ基質としてのoニトロフェニルガラクトピラノシドと共にインキュベートしたところ、この基質は酵素的に発色団oニトロフェノールに変換された。iEMS96ウェルプレートリーダーでウェルの405nmでの光学密度を測定することにより直接読み取った。24細胞毒性アッセイMTT還元アッセイを用いて、HELA細胞およびCOS7細胞に対するペプチドの細胞毒性を測定した。簡潔に述べると、この方法は以下のようなものであった。HELA細胞およびCOS7細胞をそれぞれ70×103および45×103個ウェルで播種し、96ウェルマイクロタイタープレートで5CO2、37°Cで24時間増殖させた。この時点で、MTT還元によりタイムゼロを決定した。残ったウェルの上清を廃棄し、ウェルに新鮮な培地およびペプチドの125、25および50μMの連続希釈物をピペットで加えた。各ペプチド濃度を三回反復実験でアッセイした。細胞のインキュベーションを5CO2、37°Cで48時間続けた。次いでウェルをPBSで1回洗浄し、その後100μLのMTT試薬をウェルに加えた。これを37°Cで2時間インキュベートし、その後培地を吸引し、各ウェルに100μLのイソプロパノールを加えた。可溶化した生成物の595nmでの吸光度を測定した。各濃度について、三回反復実験から平均値を計算した。増殖の百分率を以下のように計算し、各ペプチド濃度についてプロットした/×100。各ペプチドのLC50値は、濃度、対応する増殖百分率、および50値についてEXCELのTrendline関数を用いることにより決定した。各ペプチドのGI50濃度は、濃度、対応する百分率、および50値についてTrendline関数を用いることにより算出した。25細胞培養CCR5細胞は、50UmLペニシリンおよび50μgmLストレプトマイシンを補充した、4500mgmLグルコース、10ウシ胎仔血清を含むDMEM培地で培養した。Hut43細胞は、ペニシリン/ストレプトマイシンおよび10mMHEPESを補充した、10FBSを含むRPMI培地で維持した。HELA細胞およびCCRFCEM細胞は5FBS、ペニシリン/ストレプトマイシンおよび2mMLグルタミンを補充したRPMI1640で維持した。Cos7細胞は、10FCS、ペニシリン/ストレプトマイシンおよび2mMLグルタミンを補充した、4500mgmLグルコースを含むDMEM培地で増殖させた。全ての細胞系は、37°C、5CO2で増殖させた。細胞培地、培地補充物、PBSバッファー、HEPES、ペニシリン/ストレプトマイシン、Lグルタミンおよび血清はGibco社から購入した。全てのファインケミカルはMerck社DarmstadtGermanyから購入した。26溶血ペプチドのヒト赤血球細胞に対する溶血活性を試験した。新鮮なhRBCを10分間、2000xgで遠心分離することにより、リン酸緩衝液で3回洗浄した。100μMの濃度のペプチドを20のhRBCとともに1時間、37°Cでインキュベートした。最終的な赤血球の濃度は約09x109個mLであった。0または100細胞溶解値はPBSのみおよび01TritonX100水溶液をhRBCと共にインキュベートすることにより測定した。サンプルを遠心分離し、上清をPBS緩衝液で20倍希釈してから540nmにおけるサンプルの光学密度を測定した。100溶解値はOD約13~18を与える。溶血率は次式により計算した×100。27化学走化性アッセイ間質細胞誘導因子1αの勾配に対するCCRFCEM細胞の化学走化性応答は、Neuroprobeからの使い捨てアッセイプレートを用いて、製造業者の使用説明書およびそこに記載の文献に従って測定した。簡潔に述べると、175cm2のフラスコをダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水で1回洗浄し、10分間または細胞が浮遊するまでトリプシン処理した。血清を含有する新鮮な培地を加えることによりトリプシンを中和し、細胞をペレット化し、DPBSで1回洗浄し、05ウシ血清アルブミンを含むRPMIに1~05×107個mLで再懸濁した。細胞懸濁物45μLを、同じアッセイ媒体で希釈した10倍濃縮PEMペプチド5μLと混合した。この混合物35μLをアッセイフィルターの上部にアプライした。細胞を1nMSDF1を含有するアッセイプレートのボトムチャンバーへと移動できるようにした。4時間後、フィルターを取り除き、移動した細胞にMTTを加えて最終濃度05mgmLとし、さらに4時間インキュベートした。MTTで標識した後、全ての媒体を除去し、イソプロパノール10mMHCl、100μLを細胞に添加した。595nmでの吸光度を、TecanGeniosプレートリーダーとMagellanソフトウェアを用いて読み取った。移動した細胞の数は、ABS595値を、アッセイプレート中の既知数の細胞を用いて作成した標準曲線に対して比較することにより決定し、SDF1濃度に対してプロットしてシグモイド型曲線を得て、IC50値を決定した。IC50の値は、MicrosoftExcelのTrendline関数を用いて、平均化したデータポイントに対数曲線を当てはめることにより決定した。28血漿安定性405μLの血漿/アルブミン溶液をポリプロピレンPPチューブに入れ、135μLのPBSおよび15μLの1mMペプチドPBSpH74から誘導された、100μM溶液Bからの化合物45μLを加えた。150μLアリコートを10kDaフィルタープレートの個々のウェルに移した。0分対照として、PBS270μLをPPチューブに入れ、30μLのストック溶液Bを加えてボルテックス混合した。150μLの対照溶液をフィルタープレートの1つのウェルに加えて濾過対照とした。さらに、150μLの対照溶液を受け器ウェルに直接入れ、非濾過対照とした。蒸発蓋を含むプレート全体を37°Cで60分間インキュベートした。血漿サンプルを4300rpm、15°Cで少なくとも2時間遠心して、100μLの濾液を得た。血清アルブミンサンプルについては、約1時間の遠心で十分であった。受け器PPプレート中の濾液は以下のようにLCMSで分析したカラムJupiterC18、移動相水中の01ギ酸およびBアセトニトリル、勾配2分で5~100、エレクトロスプレーイオン化、MRM検出。ピーク面積を求め、三回反復測定値を平均化した。結合は、100により、対照1および2のパーセントとして表される。次いでこれらの値からの平均値を計算する。29薬物動態研究1回の静脈内および腹腔内投与の後の薬物動態研究を、実施例51の化合物について行った。CharlesRiverLaboratoriesDeutschlandGmbHから取得した30グラムのオスCD1マウスを研究に用いた。ビヒクルである生理食塩水を加えて、化合物の最終濃度を1mgmLとした。ivについては2mLkg、ipについては10mLkgの容量とし、ペプチドEx51を、最終腹腔用量が10mgkgおよび最終静脈用量が2mgkgとなるように注入した。約250~300μLの血液を、軽度のイソフルレン麻酔下で、後部眼窩静脈叢から所定の時間間隔で採血し、ヘパリン処理したチューブに加えた。血漿を遠心によりペレット化細胞から分離し、HPLCMS解析の前まで80°Cで冷凍した。血漿キャリブレーションサンプルの調製未処理の動物からのブランクマウス血漿を用いた。10~5000nMの範囲の9個の血漿キャリブレーションサンプルを取得するために、02mLの血漿の各アリコートに、50ngのプロプラノロール、HLBカートリッジでの固相抽出によりサンプル調製および既知量のEX51を加えた。HLBカートリッジは、メタノール1mLで、次いで1NH3水溶液で状態調整した。次いでサンプルを1NH3水溶液700μLで希釈し、装填した。プレートをメタノール/1NH3水溶液5/951mLで洗浄した。溶出はメタノール中の01TFA、1mLを用いて行った。溶出物を含有するプレートを濃縮システムに導入し、乾燥状態にした。残留物を01ギ酸/アセトニトリル95/5、100μLに溶解し、勾配溶出を用いた逆相分析カラム上のHPLCMSで分析した。血漿サンプルの調製抽出に必要な容積を得るために、動物処理からのサンプルをプールした。得られた全容積が02mL未満の場合、適当な量のブランクマウス血漿を加えてマトリックスをキャリブレーション曲線と同一に保持した。次いでサンプルにISを加え、キャリブレーション曲線について記載したように処理した。薬物動態の評価PK解析は、ソフトウェアのPKsolutions20を用いて、プールされたデータについて行った。曲線下面積AUCは、線形台形公式により計算した。AUCは、Ctbとして推定した。AUCは、AUCおよびAUCの和である。排出半減期は、排出期における少なくとも3つのデータ点についての線形回帰から計算した。半減期測定のために選択した時間間隔は、相関係数で評価したが、これは少なくとも085を上回り、最も好ましくは096を上回るべきである。静脈内投与の場合、tZEROでの初期濃度は、最初の2つの時間点を通る曲線の外挿により決定した。最後に、腹腔内投与後のバイオアベイラビリティは、静脈内投与に対する腹腔内投与の後の正規化AUCの割合から計算した。30結果上記22~27に記載した実験の結果を、以下の表4に示す。Ca2アッセイにおけるIC50値の決定は、Ex1~53については方法1を用い、Ex54~155については方法2を用いた。細胞毒性値の決定のために、Ex1~53についてはLC50計算を用い、Ex54~160についてはGI50計算を用いた。Ca2アッセイにおけるIC50値の決定は、Ex1~53については方法1を用い、Ex54~160については方法2を用いた。上記28に記載した実験の結果を、以下の表5に示す。上記29に記載した実験の結果を、以下の表6、7および8に示す。2mgkg体重の用量レベルでEx51を静脈内投与した後、Ex51は静脈内速度論特性に従った。PK解析から、Ex51は、28594ngmLの外挿されたCinitial、および5分で1461ngmLの観察されたCmaxを示した。血漿レベルは、15分および1時間でそれぞれ、328ngmLおよび80ngmLに急速に減少した。1時間から3時間までの血漿レベルは28時間の排出半減期で減少し、3時間で49ngmLになった。AUCおよびAUCは、それぞれ1704nghmLおよび1905nghmLになった。10mgkg体重の用量レベルでの腹腔内投与後、Ex51の血漿レベルは、最初の2時間はほぼ線形に増加し、2時間で3160ngmLのCmaxを示した。2時間から8時間までの血漿レベルは、25時間の排出半減期で減少し、8時間で519ngmLになった。AUCおよびAUCは、それぞれ11112nghmLおよび12948nghmLであった。吸収されたEx51の静脈内投与後の正規化AUC値と比較して、腹腔内投与後には、腹腔内投与後の45倍低い正規化Cmaxで136に達した。100を上回る値は、一部には点の数が制限されていることに起因する損なわれた信頼性を反映するのかもしれない。引用文献1OberlinEAmaraABachelerieFBessiaCVirelizierJLArenzanaSeisdedosFSchwartzOHeardJMClarkLewisILeglerDFLoetscherMBaggioliniMMoserBNature19963828338352LoetscherMGeiserTOReillyTZwalenRBaggioliniMMoserBJBiolChem19942692322373DApuuoMRolinkALoetscherMHoxieJAClarkLewisIMelchorsFBaggioliniMMoserBEurJImmunol199727178817934vonTscharnerVProdhomBBaggioliniMReuterHNature1986324369725HamyFFelderERHeizmannGLazdinsJAboulelaFVaraniGKarnJKlimkaitTProcNatlAcadSci199794354835536MossmanTJImmunolMeth19836555637BerridgeMVTanASArchBiochemBiophys19933034744828FrevertCWWongVAGoodmanRVGoodwinRMartinTRJImmunolMeth199821341529SinghRChangSYTalorLCRapidCommunMassSpectrom19961010191026