"S1Pの異常なレベルと関係する疾病または疾患を罹患していることが判明したかまたは疑われる患者に対して、第1の組成物と第2の組成物を投与する方法であって、前記第1の組成物は、抗S1P抗体を含み、前記第2の組成物は、スフィンゴ脂質代謝経路に関与する酵素のモジュレータを含む、ことを特徴とする方法。前記患者体内の生物的に利用可能なS1Pのレベルを低下させる、請求項1に記載の方法。異常なレベルのS1Pと関係する疾病または疾患を治療することを意図する、請求項1に記載の方法。前記抗S1P抗体はLT1009であり、前記モジュレータはSPHK阻害剤である、請求項1に記載の方法。本発明は、S1Pに対するヒト化モノクローナル抗体を用いて患者を治療することにより、患者の血液、血清および/または血漿中のS1Pの絶対レベルが投与量に依存した形態で増加するただし、生物的に利用可能な生物活性のある遊離したS1Pの量はそうではないという驚くべき観察結果に基づく。抗S1P抗体または抗S1P抗体フラグメントの投与後に投与量に依存した絶対S1Pレベルの増加を低減または回避することが望ましい場合があるため、本発明による方法を用いれば、以下に詳述するように、S1Pレベルのその後の増加を回避または低減することが可能となる。1.抗S1P抗体化合物本発明による方法は、抗S1P剤特に抗S1P抗体および抗体フラグメントを含む組成と、スフィンゴ脂質代謝経路の酵素のモジュレータを含む組成との組み合わせを投与することを含み、これにより、異常なS1Pレベルと相関する疾病または疾患が判明しているかまたは疑われる患者中のS1Pの有効濃度を低減させる。A.抗体の調製まず、抗S1P抗体および抗体フラグメントについて説明する。当該分野において既知のように、抗体分子すなわち、免疫グロブリンは、分子量がおよそ150kDaの大きな糖タンパク質分子であり、通常は2つの重鎖ポリペプチドおよび2つの軽鎖ポリペプチドからなる。各重鎖Hはおよそ50kDaである。各軽鎖Lはおよそ25kDaである。各免疫グロブリン分子は通常、2つの重鎖および2つの軽鎖からなる。これら2つの重鎖は、ジスルフィド結合によって相互に連結し、その数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各軽鎖は、1つの共有結合ジスルフィド結合により、重鎖に連結される。任意の所与の天然抗体分子において、2つの重鎖および2つの軽鎖は同一であり、2つの同一の抗原結合部位を有し、そのため、二価すなわち、同一の分子2つに同時に結合する能力を有するであるといわれる。任意の脊椎動物種からの抗体分子の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、2つの明確に異なる種類であるカッパkおよびラムダlのうちの1つに割り当てることができる。2種類の軽鎖の比は、種によって異なる。一例として、平均k/l比は、マウスの場合に20:1であり、ヒトの場合に2:1であり、ウシの場合に1:20である。任意の脊椎動物種からの抗体分子の重鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、アイソタイプと呼ばれる5つの明瞭に異なる種類のいずれかを割り当てることができる。いくつかのアイソタイプは、数種のサブタイプを有する。5つの主要な免疫グロブリンクラスは、免疫グロブリンMIgM、免疫グロブリンDIgD、免疫グロブリンGIgG、免疫グロブリンAIgA、および免疫グロブリンEIgEである。IgGは、最も多いアイソタイプであり、数種のサブクラスヒトでは、IgG1、2、3および4を有する。Fcフラグメントおよびヒンジ領域は、異なるアイソタイプの抗体において異なり、その機能特性を決定づける。しかしながら、これらのドメインの全体的な構成は全てのアイソタイプにおいて類似している。本発明の方法の実施に適した抗S1P抗体は、任意の適切な方法によって生成することができる。特に好適な抗体として、モノクローナル抗体がある特に、ヒト化されたものまたは完全ヒト抗体とみなされるもの。本発明では、組み換え技術を用いて生成された抗S1P抗体または抗体フラグメントが好適に用いられる。任意の適切な発現システムが利用可能であり、その後抗体が精製される。抗S1P抗体をヒト化するには、非ヒト抗S1P抗体を先ず生成することが多い。例えば、マウス抗S1Pモノクローナル抗体LT1002は以下の文献に記載のように生成された:米国特許出願シリアル番号第11/924,890号、12/258,337号、12/258,346号、12/258,353号、12/258,355号、12/258,383号、12/690,033号、および12/794,668号。簡単に言うと、抗S1Pモノクローナル抗体は、以下のようにして作製することができる。まず、誘導体化S1Pを担体タンパク質と結合させる。その結果得られた免疫原を用いて、マウスを免疫化する。抗体力価が上昇し平衡になった後、Kohler,etal.,Nature,256:4951975により初めて記載されたハイブリドーマ法を用い、または組換えDNA法を含む他の好適な方法例えば、米国特許第4,816,567号参照を用いて、S1Pに対するモノクローナル抗体を生成する。抗S1P抗体を生成するマウスリンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマを形成する。その後、S1Pに対するモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマ細胞成長培地をアッセイする。好適には、多様なモノクローナル抗体種の結合特異性は、免疫沈降またはinvitro結合アッセイ例えば、ラジオイムノアッセイRIAまたは酵素結合免疫吸着アッセイELISAにより、判定する。多様なモノクローナル抗体種の結合親和性が決定可能である。所望の特異性、親和性および/または活性の抗S1P抗体を産生するハイブリドーマ細胞を特定した後、クローンを制限希釈法によってサブクローニングし、標準的な方法Goding、MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59~103AcademicPress、1986年により、増殖させることができる。サブクローンにより分泌されるモノクローナル抗体は、通常の免疫グロブリン精製手順例えば、プロテインA―セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィーにより、培養培地、腹水または血清から適宜分離される。モノクローナル抗体をコードするDNAは、通常の手順例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより、容易に単離および配列決定される。単離後、免疫グロブリン重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を発現ベクター内に移入することができ、次にこれを、通常は免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞例えば、大腸菌E.coli細胞、シミアンCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞または骨髄腫細胞へトランスフェクトする。その後、組み換え抗S1Pモノクローナル抗体の産生を行って、所望の量の抗体種を産生する。抗S1Pモノクローナル抗体LT1002は、このような組み換え抗S1P抗体の生成の特に好適な例である。抗S1Pモノクローナル抗体例えば、LT1002を得た後、ヒト投与用に抗体をさらに最適化することができる。抗体のヒト化の一般的な方法については、例えば以下の文献に記載されている:US5861155、US19960652558、US6479284、US20000660169、US6407213、US19930146206、US6639055、US20000705686、US6500931、US19950435516、US5530101、US5585089、US19950477728、US5693761、US19950474040、US5693762、US19950487200、US6180370、US19950484537、US2003229208、US20030389155、US5714350、US19950372262、US6350861、US19970862871、US5777085、US19950458516、US5834597、US19960656586、US5882644、US19960621751、US5932448、US19910801798、US6013256、US19970934841、US6129914、US19950397411、US6210671、US6329511、US19990450520、US2003166871、US20020078757、US5225539、US19910782717、US6548640、US19950452462、US5624821、およびUS19950479752。多様なヒト化抗S1P抗体例えば、LT1009を生成するための方法について、米国特許出願シリアル番号第11/924,890、12/258,337、12/258,346、12/258,353、12/258,355、12/258,383、12/690,033、および12/794,668に記載がある。ヒト化のほかに選択可能な方法として、ヒト抗S1P抗体も生成できる。例えば、今では、免疫されると、内在性免疫グロブリンを産生することなく、ヒト抗体の完全なレパートリーを生じることができるトランスジェニック動物例えば、マウスを作成することが可能である。例えば、キメラおよび生殖細胞系突然変異マウスにおける抗体重鎖接合領域JH遺伝子の同形接合性が欠如すると、内在性の抗体産生の完全な阻害が発生することが、記載されている。このような生殖細胞系突然変異マウスにおいてヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイを移入すると、抗原投与時にヒト抗体の産生が起こる。例えば、JakobovitsらProc.Natl.Acad.Sci.USA,90:25511993;Jakobovitsら、Nature、362:255-2581993;Bruggermannら、YearinImmuno.、7:331993;および米国特許第5,591,669号、第5,589,369号および第5,545,807号を参照されたい。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーに由来してもよいHoogenboomら、J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksら、J.Mol.Biol.,222:581-5971991;および米国特許第5,565,332号および同第5,573,905号。上述のように、ヒト抗体は、invitroで活性化されたB細胞例えば、米国特許第5,567,610号および同第5,229,275号を参照または他の好適な方法によっても、作製可能である。特定の実施形態において、前記抗S1P抗体は、抗体フラグメントである。抗体フラグメントの作製のために、多様な技術が開発されている。従来、これらのフラグメントは、完全抗体のタンパク質加水分解性消化によって得られてきた例えば、Morimotoら、JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-1171992;およびBrennanら、Science229:811985を参照。しかし、これらのフラグメントは、今や、組換え宿主細胞によって直接生産することができる。例えば、Fab-SHフラグメントは大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合させてFab2フラグメントを形成させることができるCarterら、Bio/Technology10:163-1671992。別の実施形態において、Fab2は、Fab2分子のアセンブリを促進するように、ロイシンジッパーGCN4を用いて形成される。別のアプローチによれば、Fv、FabまたはFab2フラグメントは、組換え宿主細胞培地から直接単離することができる。抗体フラグメントの生産のための他の技術が、当業者にとって明らかである。いくつかの実施形態において、少なくとも2つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する多重特異性例えば、二重特異性ヒト化または変異体抗S1P抗体を作製することが望ましい場合がある。例示的な二重特異性抗体は、スフィンゴ脂質の2つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメント例えばFab2二重特異性抗体として、作製することができる。また、二価を超える抗体も意図される。例えば、三重特異性抗体が作製可能である。Tuttetal.,J.Immunol.147:601991。1アームにつき1以上の結合部位を含む抗S1P抗体またはそのフラグメントは、本明細書において多価抗体と呼ばれる。例えば、本発明の二価抗体は、Fabまたはそのフラグメント当たり2つの結合部位を含み、本発明の三価ポリペプチドはFabまたはそのフラグメントにつき3つの結合部位を含む。本発明の多価ポリマーにおいて、Fab当たり2以上の結合部位は、同じまたは異なる抗原と結合する可能性がある。例えば、本発明の多価ポリペプチドにおける2以上の結合部位は、同じ抗原、例えば、該抗原の同じ部分もしくはエピトープ、または該抗原の2以上の同じもしくは異なる部分もしくはエピトープに向けられてもよく、かつ/または異なる抗原に向けられてもよく、あるいはそれらの組合せであってもよい。よって、例えば本発明の二価ポリペプチドは2つの同じ結合部位を含んでもよく、抗原の第一の部分もしくはエピトープに向けられた第一の結合部位と、該抗原の同じ部分もしくはエピトープに、または該抗原の別部分もしくはエピトープに向けられた第二の結合部位を含んでなり得るか、あるいは抗原の第一の部分もしくはエピトープに向けられた第一の結合部位と、異なる抗原に向けられた第二の結合部位を含み得る。しかしながら、以上の記載から明らかなように、本発明の多価ポリペプチドが同じまたは異なる抗原に向けられるいずれかの数の結合部位を含み得るという点で、本発明は上記に限定されない。抗S1P抗体のその他の修飾が利用可能である。例えば、本発明はまた、トキシン例えば、細菌、真菌、植物、動物由来の酵素活性を有するトキシン、またはそれらのフラグメントのような細胞毒剤、あるいは放射性同位元素例えば、放射性コンジュゲートにコンジュゲートされた本明細書に記載の抗体を含む免疫コンジュゲートに関連する。コンジュゲートは、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオールプロピオン酸塩SPDP、イミノチオランIT、イミドエステルの二機能性誘導体ジメチルアジプイミダート塩酸塩など、活性エステル類ジスクシイミジルスベリン酸塩など、アルデヒド類グルタルアルデヒドなど、ビスアジド化合物ビスp-アジドベンゾイルヘキサンジアミンなど、ビス-アゾニウム誘導体ビス-p-ジアゾニウムベンゾイル-エチレンジアミンなど、ジイソシアン酸塩トリエン2,6-ジイソシアナートなど、ビス-活性フッ素化合物1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼンなどのような様々な二機能性タンパク質カップリング剤を用いて作成される。例えば、標的組織および細胞への浸透性を増強するために、完全抗体ではなく抗体フラグメントを用いる方が望ましい場合がある。この場合、その血清半減期を延長するために、抗体フラグメントを修飾することが望ましい場合がある。これは、例えば、抗体フラグメントへのサルベージ受容体結合エピトープの組み込みにより例えば、抗体フラグメントの適当な領域の突然変異によるか、または例えば合成DNAまたはペプチドによるペプチドタグにエピトープを組み込んだ後にいずれかの末端または中間部において抗体フラグメントと融合させことにより、達成可能である例えば、米国特許第6,096,871号参照。前記抗S1P抗体またはそのフラグメントの共有結合修飾も、本発明の範囲内に含まれる。前記抗S1P抗体またはそのフラグメントの共有結合修飾は、適用可能であれば、化学合成によりまたは抗体の酵素的または化学的切断により、作製され得る。前記抗体またはそのフラグメントの他のタイプの共有結合的修飾は、抗体の標的アミノ酸残基を、選択された側鎖またはNもしくはC末端残基と反応し得る有機誘導体化剤と反応させることにより、分子に導入される。ポリペプチドの共有結合的修飾の例は、米国特許第5,534,615号に記載されており、本明細書中、同文献を参考のため特に援用する。好適な種類の抗体の共有結合修飾は、米国特許第4,640,835号、同第4,496,689号、同第4,301,144号、同第4,670,417号、同第4,791,192号または同第4,179,337号に示される方法により、多様な非タンパク質性ポリマー例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンのうちの1つに抗体を結合させることを含む。B.医薬製剤抗S1P抗体または抗体フラグメントの治療製剤は、所望の純度を有する抗体と任意の生理学上許容される担体、賦形剤または安定化剤例えば、Remington’sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol,A.Ed.1980を参照を、凍結乾燥製剤または水溶液の形で混合することにより、保存向けに調製される。許容される担体、賦形剤または安定化剤は用いる用量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、リン酸、クエン酸およびその他の有機酸などの緩衝剤;アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤;保存剤オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム;塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール;メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;およびm-クレゾールなど;低分子量約10残基未満ポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質;ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸;グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖類、二糖類およびその他の炭水化物;EDTAなどのキレート剤;スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類;ナトリウムなどの塩形成対イオン;金属錯体例えば、Zn-タンパク質錯体;および/またはTWEEN商標、PLURONICS商標またはポリエチレングリコールPEGなどの非イオン性界面活性剤が含まれる。本明細書の製剤はまた、処置される特定の処方の必要に応じて1を超える有効化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補足的活性を有するものを含んでもよい。このような分子は、意図した目的に効果的な量の組合せで適切に存在する。有効成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によるか、または界面重合により調製されたマイクロカプセル、それぞれ例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン-マイクロカプセルおよびポリ-メチルメタクリレートマイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセルまたはマクロエマルションとして捕捉してもよい。このような技術はRemington’sPharmaceuticalSciences,16thedition,Osol,A.Ed.1980に開示されている。インビボ投与に用いる製剤は無菌でなければならない。これは、例えば無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。徐放性製剤が調製され得る。徐放性製剤の好適な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、例えばフィルムまたはマイクロカプセルなどの成型品の形である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル例えば、ポリ2-ヒドロキシエチル-メタクリレート、またはポリビニルアルコール、ポリラクチド米国特許第3,773,919号、L-グルタミン酸とγ-エチル-L-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、例えば、LupronDepot商標乳酸-グリコール酸コポリマーと酢酸ロイプロリドからなる注射可能なマイクロスフェアおよびポリ-D---3-ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン-酢酸ビニルおよび乳酸-グリコール酸などのポリマーは100日以上分子の放出が可能であるが、ある特定のヒドロゲルはより短い期間だけタンパク質を放出する。カプセル化された抗体が体内に長時間留まる場合、それらは37°Cで水分に曝される結果として変性または凝集する場合があり、その結果、生物活性の低下および免疫原性の変化を招く可能性がある。関与する機構に応じて安定化のための合理的な戦略を考案することができる。例えば、凝集機構がチオ-ジスルフィド相互作用を介した分子間S-S結合の形成であることが見出されれば、安定化は、スルフヒドリル残基を修飾すること、酸性溶液から凍結乾燥させること、水分含量を制御すること、適当な添加剤を使用すること、および特殊なポリマーマトリックス組成物を開発することによって達成することができる。本発明において用いられる抗体の全身投与の好適な製剤について、米国特許出願シリアル番号第12/418,597号中に開示がある。上記および他の抗S1P抗体製剤は、多様な用途において有用である例えば、疾病、疾患または外傷の治療。本発明の1つ以上のヒト化抗スフィンゴ脂質抗体を含む医薬組成物は、このような治療のためのキットおよび医療デバイスに取り入れることができる。医療デバイスを用いて、必要としている患者に対して本発明の医薬組成物を投与することができ、本発明の一実施形態によれば、このようなデバイスを含むようにキットが提供される。このようなデバイスおよびキットは、本発明の医薬組成物の日常投与例えば、自己投与用に設計され得る。このようなデバイスおよびキットはまた、緊急用途例えば、救急車または救急治療室、または外科手術用、または負傷の可能性があるが万全な医学治療を迅速に得ることが不可能な場所における活動例えば、ハイキングおよびキャンピング、または戦闘状態用に設計することもできる。2.スフィンゴ脂質代謝経路阻害剤S1P産生を低減するために、スフィンゴ脂質代謝経路図1の1つ以上の酵素の阻害剤を抗S1P抗体または抗体フラグメントと組み合わせて投与する。簡単に言うと、デノボスフィンゴ脂質合成は、セリンパルミトイルトランスフェラーゼによる3-ケト-ジヒドロスフィンゴシンの合成から始まる。その後、これが還元されて、ジヒドロスフィンゴシンが形成される。ジヒドロスフィンゴシンは、ジヒドロ-セラミド合成酵素CerSまたはCSとも呼ぶによってアシル化されて、ジヒドロセラミドが形成される。これが不飽和化されて、セラミドが形成される。その後、セラミドがセラミドキナーゼによってリン酸化されて、セラミド-1-リン酸が形成される。あるいは、グリコシルセラミドシンターゼまたはガラクトシルセラミドシンターゼによって、セラミドがグリコシル化される場合もある。さらに、スフィンゴミエリンシンターゼによるホスホリルコリン頭部の付加により、セラミドがスフィンゴミエリンに変換される。最後に、セラミドは、セラミダーゼの基質として機能してスフィンゴシンを形成することもできる。前記スフィンゴシンをスフィンゴシンキナーゼがリン酸化することにより、S1Pが形成される。S1Pを脱リン酸化することにより、スフィンゴシンが再形成されうる。サルベージ経路により、これらの代謝産物がセラミドに復帰されうる。例えば、複雑なグリコスフィンゴ脂質が加水分解されることにより、グリコシルセラミドおよびガラクトシルセラミドとなる。その後、グリコシルセラミドおよびガラクトシルセラミドがベータグルコシダーゼおよびベータガラクトシダーゼによって加水分解され、セラミドが再生されうる。同様に、スフィンゴミエリンはスフィンゴミエリナーゼによって分解されてセラミドを形成することができる。スフィンゴ脂質はスフィンゴシン-1-リン酸リアーゼによって、非スフィンゴ脂質へと変換されうる。スフィンゴシン-1-リン酸リアーゼは、エタノールアミンフォスフェイトおよびヘキサデセナールの形成を触媒する。上述したように、スフィンゴシンキナーゼSPHKは、スフィンゴ脂質代謝経路中の酵素であり、スフィンゴシンからスフィンゴシン-1-リン酸S1Pへのリン酸化を触媒する。2つのSPHKアイソフォームSPHK1およびSPHK2が報告されており、それぞれ別個の機能を示す。SPHK1は、細胞成長および生存を促進させる。その発現は、癌例えば、白血病においてアップレギュレートされ、癌進行と関連付けられる。一方、SPHK2が過剰発現した場合、反対の結果となる。SPHK1は主要酵素であり、S1P/セラミドレオスタットを調節する。S1PおよびSPHK1は、白血病細胞および白血病細胞株双方において、一般的に用いられる細胞毒性薬に起因するアポトーシスに対する耐性と関連することが報告されている。S1Pの前駆体であるスフィンゴシンおよびセラミドは成長停止およびアポトーシス誘発と関連付けられ、S1Pは、癌進行例えば、細胞成長および生存において多数の重要なプロセスを調節する。よって、これらの相互交換型スフィンゴ脂質代謝産物間のバランスは、細胞運命を決定する細胞レオスタットとしてみなされている。スフィンゴシンキナーゼ阻害剤2SPHKI2;4-[[4-4-クロロフェニル-2-チアゾリル]アミノ]-フェノール;CASno.312636-16-1;分子式:C15H11ClN2OS;分子量:302.8;米国特許出願シリアル番号第10/462,954号、公開番号第20040034075A1は、抗増殖活性を備えたSPHK1の効果的な選択的阻害剤であるFrenchら2003CancerRes.,vol.63:5962-5969。SPHKI2は、0.5μMのIC50で、ヒト組み換えGST-SPHK1の非ATP拮抗阻害を示すことが報告されており、60μMまでの濃度でERK2、PI3-キナーゼまたはPKCαに対する阻害は無い。SPHKI2もまた、いくつかのヒト癌細胞株T-24、MCF-7、NCI/ADR、およびMCF-7/VPの増殖を阻害することが報告されており、そのIC50値は、低μMの範囲内0.9~4.6μMであるFrenchら、上記参照。Paughら2008Blood,vol.112、no.4:1382-1391;米国特許出願シリアル番号第12/387,228号、公開番号第20100035959A1により、スフィンゴシン類似体である2R、3S、4E-N-メチル-5-4’-ペンチルフェニル-2-アミノペント-4-エン-1、3-ジオールSK1-IBML-258が、水溶性で、かつS1Pレベルの低減だけでなく、プロアポトーシス前駆体であるセラミドのレベルの増加も可能にするSPHK1のアイソザイムに特異的で、かつ有力な阻害剤として同定されている。報告によれば、SK1-Iは、SPHK2、PKCまたは多数の他のタンパク質キナーゼを阻害しない。また、ヒト白血病U937およびJurkat細胞の成長および生存の低減と、Bcl-2の切断およびアポトーシスの向上を可能にすることも報告されている。さらに、SK1-Iは、健常な末梢血単核白血球を許容しつつ、急性骨髄性白血病患者から単離された白血病芽細胞中のアポトーシスを有効に発生させることが報告されている。また、AML異種移植腫瘍の成長も大幅に低下させることが報告されているPaughら、上記参照。FTY720フィンゴリモド;2-アミノ-2[2-4-オクチルフェニルエチル]プロパン-1、3-ジオール塩酸塩例えば、米国特許第6,004,565号参照は、合成スフィンゴシン類似体であり、免疫抑制特性を有する。FTY720は、セラミド合成酵素阻害剤としての機能も有することが報告されている。FTY720は、インビボでリン酸化されると考えられ、いくつかのS1P受容体を通じてS1Pと同様の効果を示す。ヒト肺動脈内皮細胞において、FTY720は、セラミドシンターゼ2を阻害することが報告されており、その結果、ジヒドロセラミド、セラミド、スフィンゴシンおよびS1Pの細胞レベルが低下し、SPHK1活性によって媒介されるジヒドロスフィンゴシンおよびジヒドロスフィンゴシン-1-リン酸DHS1Pのレベルが増加する。そのため、FTY720を用いることで、セラミドシンターゼを通じて、シグナル伝達スフィンゴ脂質の細胞内バランスの調節が可能となる。セラミドシンターゼは、セラミドのデノボ合成に関与する酵素である。Berdyshevら、2009、J.Biol.Chem.、vol.284:5467-5477。非アイソザイム-非特異的SPHK阻害剤例えば、L-トレオ-ジヒドロスフィンゴシンサフィンゴールおよびN、N-ジメチルスフィンゴシンDMSは、白血病細胞に対して細胞毒性作用を有する。スフィンゴ脂質代謝経路の酵素の上記および他の阻害剤を抗S1P抗体または抗体フラグメントと共に用いることにより、本発明の方法を実行することができる。これらの阻害剤およびS1P抗体または抗体フラグメントは、医薬組成物典型的には液体形態として送達される。前記医薬組成物は、適切な生理的に受容可能な担体、賦形剤および/または安定剤を含む例えば、Remington’sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol,A.Ed.1980参照。特定の患者へのこのような組成の投与量は、多くの要素に応じて異なり、治療対象患者の絶対S1Pレベルの安定化好ましくは低減を達成するために、担当医師の裁量に任される。3.用途S1Pの活性または有効濃度あるいは前駆体または代謝産物を変化させるための薬剤は、異常S1Pレベルまたは活性と相関する疾病および疾患の治療において有用である。これらの薬剤例えば、抗体は、このような望ましくない生物活性脂質の有効濃度を変化させることにより、機能する。例えばS1Pの有効濃度を低下させることとは、S1Pまたはその望ましくない効果下流作用を含むを中和することであると言うことができる。ここで、S1Pが望ましくないとは、例えばシグナル伝達分子として疾患過程に関与すること、または過剰に存在する場合に疾患に寄与することを指す。特定の理論に縛られることを望むものではないが、S1Pおよび/またはその代謝産物または下流エフェクターの不適切な濃度は、様々な疾患および障害の発症を引き起こすかまたは関与し得ると考えられる。本発明の組成物および方法は、S1Pのinvivo有効濃度を低下させることによって、これらの疾患および障害を処置するために使用することができる。特に、本発明の組成物および方法は、少なくとも部分的に、異常な新血管新生、脈管形成、繊維形成、線維症、瘢痕化、炎症および免疫応答を特徴とする疾患を処置するのに有用であると考えられる。生物活性脂質に対する抗体によって治療され得る数種の疾患の例を以下に記載する。例えば、米国特許出願シリアル番号第11/924,890号、12/258,337号、12/258,346号、12/258,353号、12/258,355号、12/258,383号、ならびに米国特許出願シリアル番号第11/925,173号および12/446,723号を参照されたい。患者体内の望ましくないスフィンゴ脂質の量を制御するための1つの方法として、1つ以上のスフィンゴ脂質に結合する1つ以上のヒト化抗スフィンゴ脂質抗体を含む組成物を提供し、これにより前記組成物を望ましくない遊離スフィンゴ脂質のレベルを低下させるための治療スポンジとして機能させる方法がある。化合物が遊離していると表現した場合、その化合物は、その望ましくない効果を及ぼすサイトに到達するのに何ら制限を受けていない状態を意味する。典型的には、遊離化合物は血液および組織中に存在し、これらの血液および組織のいずれか自身が遊離化合物によって作用を受けるサイトを含むか、あるいは、これらの血液および組織から化合物が遊離して作用するサイトへと移動することができる。遊離化合物は、化合物を望ましくない化合物へと変換させる任意の酵素による作用を受ける際にも、利用可能であり得る。任意の特定の理論に縛られることを望むものではないが、特定の疾病状態において、S1Pあるいはその代謝産物または前駆体の量が望ましくないレベルまで増加した場合、心臓および心筋疾病および疾患の発症の原因となるかまたはそのような発症に寄与すると考えられている。スフィンゴ脂質は肝組織の線維成長および創傷治癒、血管の創傷治癒、ならびに他の疾病または疾患例えば、癌、血管形成、過度の線維症および炎症に関与する多様な眼球疾病にも寄与するため、本開示の組成および方法を用いて、これらの疾病および疾患ならびに心臓および心筋疾病および疾患を治療することが可能である。スフィンゴ脂質に基づいた治療の1つの形態において、望ましくない毒性スフィンゴ脂質の実際のインビボ濃度、相対的インビボ濃度および/または利用可能なインビボ濃度を低下させるように、スフィンゴ脂質代謝経路を操作する。本発明によって提供される組成および方法によれば、ヒト化抗スフィンゴ脂質抗体を患者に投与して望ましくない毒性スフィンゴ脂質例えば、S1Pまたはその代謝産物と結合させることにより、疾病、疾患または外傷を治療または予防する。4.投与方法本明細書に記載されている疾患および症状の処置は、種々の製剤およびデバイスを用いる様々な経路によって本発明の薬剤および組成物を投与することにより行うことができる。好適な薬学上許容される希釈剤、担体および賦形剤は当技術分野でよく知られている。当業者ならば、任意の特定の処置プロトコールで投与すべき量を容易に決定できるとことが分かるであろう。抗S1P抗体の好適な量は、10μg/用量~10g/用量の範囲内、好ましくは10mg/用量~1g/用量の範囲内にある。薬剤物質は、限定されるものではないが全身、皮下、皮内、粘膜吸入によるものを含むおよび局所投与を含む当技術分野で既知の技術によって投与することができる。粘膜は、身体の内腔をつなぐ上皮組織を指す。例えば、粘膜は、口、食道、胃、腸および肛門を含む消化管;鼻腔、気管、気管支および肺を含む気道;および性器を含む。本明細書では、粘膜には、眼の外表面、すなわち角膜および結膜も含まれる。局所投与は潜在的な全身性副作用を制限でき、治療効果もなお認められるので、全身投与に対して局所投与が有利であり得る。本発明において用いられる医薬組成物は、限定されるものではないが、溶液、エマルションおよびリポソーム含有製剤を含む。これらの組成物は、限定されるものではないが、既製の液体、自己乳化固体および自己乳化半固体を含む多様な成分から調製することができる。本発明に用いられる医薬製剤は、製薬業で周知の従来技術に従って調製することができる。このような技術には、有効成分を医薬担体または賦形剤と会合させるステップを含む。好ましい担体は、特に該組成物がヒトの治療的使用を意図したものである場合には、薬学上許容されるものを含む。非ヒト治療例えば、愛玩動物、家畜、魚または家禽の処置では、獣医学上許容される担体も使用することができる。一般に、該製剤は、有効成分を液体担体または微粉固体担体または双方と、均一かつ緊密に会合させた後、必要であればその生成物を成形することによって調製される。本発明の組成物は、限定されるものではないが、錠剤、カプセル、液体シロップ、ソフトゲル、坐剤および浣腸などの多くの可能な投与形のいずれかへ製剤化することができる。また、本発明の組成物は、水性、非水性または混合媒体中の懸濁液として製剤化することもできる。水性懸濁液は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび/またはデキストランを含む懸濁液の粘度を高める物質をさらに含有し得る。該懸濁液はまた安定化剤を含んでもよい。一実施形態では、該医薬組成物は、泡沫として製剤化および使用することができる。医薬泡沫は、限定されるものではないが、エマルション、ミクロエマルシン、クリーム、ゼリーおよびリポソームなどの製剤を含む。基本的には、これらの製剤は最終生成物の成分およびコンシステンシーにおいて様々である。このような組成物および製剤の調製に対するノウハウは、製薬および調剤分野の技術者には一般に知られており、本発明の組成物の製剤に適用することができる。一実施形態において、本発明の実行において用いられる組成物は、例えば、局所用点滴剤または軟膏、眼周囲の注射を介して眼へ、体腔内的に埋め込みデポ剤を介して、前房または硝子体中へ、または全身的に注射もしくは経口投与により送達することができる。抗体および阻害剤の使用量は、当業者によって容易に決定することができる。治療薬を眼へ送達する従来のアプローチとしては、局所適用、全身投与後の眼への再分布または直接的な眼球内/眼周囲の注射が含まれる[Sultana,etal.2006,CurrentDrugDelivery,vol3:207-217;GhateandEdelhauser2006,ExpertOpinion,vol3:275-287;およびKaurandKanwar2002,DrugDevelopIndustrialPharmacy,vol28:473-493]。抗S1Pまたは他の抗生物活性脂質抗体治療薬は、これらのいずれの方法とも併用可能であるが、全て、利点と欠点がある程度認識されている。局所点滴剤は便利であるが、鼻涙排液で洗い流されるため、主として前眼部へは適用した薬剤の5未満、後眼部へはそれよりさらに少ない量しか送達できないことが多い。点眼剤に加え、スプレー剤は、局所投与のための別の様式を与える。3つめの様式は、製剤と眼球表面との接触時間を長くするために使用され得る眼用軟膏またはエマルションであるが、視野のぼやけ、瞼のもつれが問題となり得る。眼球障害を処置するための治療剤の全身投与は、全身を薬剤の潜在毒性に曝すおそれがあるので、このような局所的アプローチが依然として好ましい。加齢性黄斑変性、糖尿病性網膜症、後部ブドウ膜炎および緑内障が米国および他の先進国で視力喪失の主因であるため、後眼部の処置は医学上重要である。Myles,etal.2005,AdvDrugDelivRev;57:2063-79。後眼部への薬剤送達の最も有効な様式は、扁平部を介した硝子体内注射である。しかしながら、直接的注射は、該送達を達成するために熟練した医療従事者を必要とし、多くの患者において処置を制限する懸念が生じる。眼周囲注射、すなわち結膜下、眼球裏、眼球周辺および後部テノン嚢下注射を含むアプローチは、硝子体内注射よりもいくぶん侵入性が小さい。反復的および長期の硝子体内注射は硝子体出血、網膜剥離または眼内炎などの合併症を引き起こし得る。本発明の実行において有用な医薬組成物の投与は、より新しい眼球送達系の1つを用いて行ってもよく[Sultana,etal.2006,CurrentDrugDelivery,vol3:207-217;およびGhateandEdelhauser2006,ExpertOpinion,vol3:275-287]、これにはa眼球インサート可溶性、浸食性、非浸食性またはヒドロゲル系、角膜シールド、例えば、眼に対する薬剤の制御送達を提供するコラーゲンに基づく眼帯およびコンタクトレンス、b眼内でゲル形態に変換される点滴剤として投与の簡易性を提供し、これにより眼内の薬剤のある程度の徐放効果を提供するinsituゲル化系、c標的化送達、生体適合性および視力のぼやけがないという利点を提供するリポソーム、ニオソームniosomes/ディスコームdiscomesなどの小胞系、d眼内への良好な保持を提供する粘膜付着系、eプロドラッグ、f浸透促進剤、g凍結乾燥担体系、h微粒子、iサブミクロンエマルション、jイオン泳動、kデンドリマー、l生体接着性マイクロスフェアを含むマイクロスフェア、mナノスフェアおよび他のナノ粒子、nコラソームcollasomeおよびo相加的またはさらには相乗的な、有益な効果を提供するために1以上の上述の系を組み合わせる薬剤送達系などの徐放性または制御放出系が含まれる。これらのアプローチの大部分は、前眼部を標的とし、前眼部の疾患を標的とするのに有効であり得る。しかしながら、比較的低分子量の脂質は眼内での移動がかなり許容されるようであるので、これらの1以上のアプローチは後眼部の生物活性脂質の濃度に影響を与えるのにやはり有用であり得る。さらに、Fabフラグメントなどのより低分子量の抗体変異体で製造されれば、前眼部に導入された抗体も、眼全域に拡散することができる可能性がある。認可されたものや開発中のものなど前掲の参照文献を参照、後眼部に対する徐放性薬剤送達系も使用可能である。従前に述べたように、後部網膜、脈絡膜および黄斑の疾患の処置は、医学上極めて重要である。これに関して、経強膜的イオン泳動[Eljarrat-BinstockandDomb2006,ControlRelease,110:479-89]は重要な前進であり、後眼部に抗体を送達する効果的な方法を提供し得る。また、療法の性能を改良するために製剤化した抗体に添加することができる様々な賦形剤は、この療法をより便利にするか、または製剤化した抗体がその意図し、認可された目的のためにのみ使用されることを担保する。賦形剤の例としては、pHを制御する化学物質、抗菌薬、抗体効力の失効を防ぐための保存剤、眼球使用専用の製剤であることを識別するための染料、製剤中の抗体の濃度を高めるための可溶化剤、浸透促進剤および浸透圧および/または粘度を調節するための薬剤が挙げられる。例えばプロテアーゼの阻害剤は、抗体の半減期を延長するために加えることができる。一実施形態では、抗体は、眼に好適なpHでリン塩緩衝生理食塩水を含む溶液として硝子体内注射によって眼に送達される。また、抗S1P剤例えば、ヒト化抗体および/またはスフィンゴ脂質代謝経路阻害剤は、上記した製剤またはデバイスの1つで投与されるプロドラッグが得られるように化学的に修飾することもできる。その後、内在酵素の作用によって活性型の抗体が放出される。本願で考えられる、可能性のある眼球酵素としては、種々のシトクロムp450、アルデヒドレダクターゼ、ケトンレダクターゼ、エステラーゼまたはN-アセチル-β-グルコサミダーゼである。抗体に対する他の化学修飾はその分子量を増加させ、結果として眼における抗体の滞留時間を延長させることができる。このような化学修飾の例としては、ペグ化HarrisandChessNatRevDrugDiscov221421、ジスルフィド[Shaunakら、2006,NatChemBiol;2:312-3]またはチオール[Dohertyら、2005,BioconjugChem;16:1291-8]などの官能基に一般的なまたは特異的な処理であり得る。5.治療での使用治療用途のための抗S1P抗体およびスフィンゴ脂質経路阻害剤は、上記に記載のような薬学的に許容される剤形で、哺乳類好ましくはヒトに投与される。剤形には、ボーラスとして静脈内投与、または一定期間にわたって持続注入、あるいは筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、くも膜下腔内、経口、局所、吸入ルートによってヒトに投与し得るものも含む。疾患の予防または治療のための適切な投与量は、上記に定義するような、治療される疾患のタイプ、疾患の重症度と経過、抗体が予防または治療目的で投与されるか否か、過去の治療、患者の既往歴と抗体に対する応答、担当医師の判断に基づいて決めることになる。抗体および阻害剤を含む組成物は、一回または一連の治療にわたって、患者に適宜投与される。疾患のタイプと重症度に基づき、例えば、1回以上の個別の投与または持続注入による、抗体約1μg/kg~約50mg/kg例えば、0.1~20mg/kgが、患者への投与のための初回の候補投与量である。典型的な日毎または週毎の用量は、上記に言及する理由に基づき、約1μg/kg~約50mg/kgまたはそれ以上の範囲である。数日間またはそれ以上にわたる反復投与については、症状によって、疾患症状の所望する抑止が起こるまで治療が反復される。しかしながら、他の投与計画も有益であり得る。この治療の進行は、例えば、X線撮影を含む、従来の技術またはアッセイによって容易にモニターされる。本発明の別の実施形態によれば、疾患の予防または治療における抗体の有効性は、抗体を連続的に、または例えば化学療法的抗癌薬など、その目的に有効である別の薬剤と組み合わせて投与することにより改良することができる。このような他の薬剤は投与される組成物中に存在してもよいし、あるいは別に投与してもよい。抗体は連続的に、または他の薬剤と組み合わせて適宜投与される。6.製品本発明の別の局面において、本発明の方法の実行に有用な材料を含む製品が提供される。当該製品は、1つ以上の容器を含む。この1つ以上の容器は、抗S1P抗体含有組成物、スフィンゴ脂質代謝経路中の酵素のモジュレータ好適には阻害剤、およびラベルを含む。好適な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジおよび試験管が含まれる。これらの容器はガラスまたはプラスチックなどの種々の材料からなってよい。これらの容器は、症状を処置するのに有効な組成物を収容し、無菌アクセスポートを有し得る例えば、この容器は静脈溶液バッグまたは皮下注射針が貫通可能なストッパーを備えたバイアルであり得る。好ましくは、容器は、内容物の安全な保存および輸送に適した箱または包装材に収納される。そして、容器または包装材には、ラベルが添付される。製品はさらに、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などの薬学上許容されるバッファーを含む第二の容器を含み得る。それはさらに、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジおよび使用説明の添付文書を含む、商業的および使用者の立場から望ましい他の物を含んでもよい。本発明は、下記の実施例を参照すればより良く理解できる。これらの実施例は単に現在本発明の実施に関して知られている最良の形態を例示することを意図したものである。本発明の範囲は、これに限定されるものではない。実施例1:低S1PキャリーオーバーのLT1009抗体の精製臨床前使用または臨床使用のために純度が高くかつ高品質の抗体を生産することは、治療薬開発において極めて重要である。細胞性タンパク質、DNAおよびウィルスが無いだけでなく、抗体が完全に活性でありかつ患者投与時にその標的に結合できるようにするために、調製抗体中にはいかなる抗原も含まれるべきではない。一般的に、抗体の精製および製剤により抗原は除去されるが、特に哺乳動物細胞発現系で抗体が生成された場合、抗スフィンゴシン-1-リン酸S1Pモノクローナル抗体であるLT1009の精製後、有意なレベルのS1Pキャリーオーバーが何度か精製抗体から確認された。これは、S1Pが、哺乳動物細胞例えば、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞によって合成される生物活性脂質であるからである。例えばトランスフェクトされたCHO細胞株LH1275ATCCアクセス番号第PTA―8422からのLT1009生産時において、通常の細胞内シグナル伝達の結果かつ/または細胞死亡後の細胞破裂の結果、S1Pの細胞内プールが培地中に放出されうる。細胞馴化培地上清内に発現されたLT1009抗体は、このS1Pに結合することができる。培養が進むにつれ、より多くのS1Pが放出され得、LT1009との複合体として上清中に蓄積し得る。理論に縛られることは望まないものの、培地中での抗体とS1Pとの接触回数が多くなるほど、その細胞外S1PがLT1009に結合し、調製抗体中にキャリーオーバーすると考えられる。CHO細胞で生成された場合、LT1009抗体調製物は、抗体モルあたり0.5モル50モルパーセント、molの余分なS1Pを含み得る。そのため、S1Pキャリーオーバー量を低減するため、上流および下流処理双方において、粗製採取物中のS1P量の最小化および精製時のS1Pの除去の促進のための工程を設ける必要がある。S1P定量化方法:LT1009抗体の多様な調製中のS1Pの濃度を、WindRoseAnalyticaを用いてRP-HPLC-MS-MS法によって測定した。質量分析は高速かつ高感度であり、適切に適用した場合、分析物量をピコグラム単位で定量化することができる。この分析方法においてとられるアプローチは、逆相液体クロマトグラフィーRPCにより、S1Pをエレクトロスプレー質量分析計源内に導入することである。このRPC工程において、タンパク質、塩および他の夾雑物からS1Pが分離される。クロマトグラフィー工程後、S1Pを前記源中でイオン化し、イオントラップ質量分析計に送る。適切な質量対電荷比m/z=380のイオンを除く全イオンがトラップから排出される。残りのイオンはイオントラップ中でフラグメント化され、特異的な娘イオンm/z=264を監視する。その結果から、三次元分析RPC保持時間、m/z380の親イオン、およびm/z264の娘イオンによって、サンプルの同一性が確認される。これら3つの基準を満たす他の任意の化合物は無い可能性が高い。さらに、MS-MS工程により、信号対雑音が最大化され、そのため感度が有意に上昇する。抽出工程は不要であるため、内部標準は不要である。さらに、サンプルをHPLC-MS中に直接注入すると、回復および感度が上昇し、複雑度および分析時間が低減する。比較のため、選択された抗体調製物からの抽出物中のS1P濃度を、S1P定量化ELISAを用いて決定した。4倍量の過度の1:2クロロホルム:メタノールを1mg/mlの抗体サンプルに加えて、S1Pを抽出した。水/有機溶液に対し広範なボルテックスおよび超音波処理を行って抗体脂質複合体を崩壊させ、氷上でインキュベートした。遠心分離後、スピードバックを用いて可溶性画分を蒸発させ、乾燥したS1Pを脱脂ヒト血清に再懸濁した。再懸濁サンプル中のS1P濃度を、抗S1P抗体およびS1Pコーティングコンジュゲートを用いて競合ELISAによって決定した。このコーティングコンジュゲートは、共有結合で結合したS1P‐BSAであり、化学合成チオール化S1Pとマレイミド活性化BSAとを結合させることにより、作製した。S1P標準として、1BSA含有PBS137mMNaCl、2.68mMKCl、10.1mMNa2HPO4、1.76mMKH2PO4;pH7.4中に単原子層S1Pを超音波処理によって可溶化させて、10μMS1PS1P‐BSA複合体を調製した。このS1P‐BSA複合体溶液を、適切な濃度まで2μMまで脱脂ヒト血清によってさらに希釈した。0.1M炭酸ナトリウムバッファーpH9.5で希釈したS1Pコーティング材料で、マイクロタイターELISAプレートCostar、高結合プレートを、37°Cで1時間コーティングした。プレートをPBSで洗浄し、PBS/1BSA/0.1Tween―20で室温で1時間ブロッキングした。一次インキュベーションのため、0.4μg/mLビオチン標識抗S1P抗体、指定量のS1P‐BSA複合体および試験対象サンプルを、ELISAプレートのウェルに加えた。室温で1時間インキュベーションを行った後、プレートを洗浄し、その後、室温で1時間、各ウェルあたり100μlで、HRPコンジュゲートストレプトアビジン1:20,000希釈でプレートをインキュベートした。洗浄後、TMB基質でペルオキシダーゼ反応を行い、1MH2SO4の付加によって反応を停止させた。ThermoMultiskanEXを用いて、450nmの光学密度を測定した。S1Pの最小化のための上流処理:血清中には汚染S1Pが含まれており、CHO細胞そのものによって生成された汚染S1Pが血清に付加される可能性があるため、上流処理のためには、無血清培地Invitrogen、カタログ番号10743―029中でのCHO細胞の培養は必須である。無血清培地の使用に加えて、広範囲の細胞死亡の前にバイオリアクターから抗体を回収すると、S1Pの細胞内プールが培地に放出されるのが回避される。さらに、回収後すぐに下流処理を開始すると、S1Pの存在下にLT1009がおかれる時間と、最終調製物にキャリーオーバーされる脂質の量とが最小化される。上流処理時のS1Pレベルを最小化する試みにも拘わらず、粗製採取物内に有意なS1Pが残留することが多く、典型的には、抗体のモルあたり0.1~0.2モル比10~20molの結合S1Pが残留する。そのため、S1Pキャリーオーバーレベルが極めて低いLT1009材料を生成するために、抗体調製物から脂質を除去するための下流の方法を開発した<0.4molをHPLC-MS-MSによって測定。S1Pを減少させる下流処理:従来、培養上清または腹水からの抗体精製では、アフィニティークロマトグラフィーが用いられる。このワンステップ方法では、高度に架橋されたアガロースGEhealthcare、カタログ番号No17‐5199‐04に共有結合的に結合した組換えプロテインAが用いられる。プロテインAは、モノクローナル抗体のFcドメインのリガンドとして機能する。プロテインAおよびS1P結合部位は別個であるため、LT1009がプロテインA樹脂と結合した場合、S1Pは解離しない。LT1009に対する高親和性および水溶性バッファーへの低溶解性により、高塩濃度バッファーでの広範囲洗浄下記を参照を行った後でも、LT1009と結合したS1Pが確実に残留する。そのため、従来の抗体精製プロセスでは、プロテインAクロマトグラフィー、低pHウイルス不活化の後、中和、陰イオン交換Qクロマトグラフィー、ウイルスナノろ過および最終限外ろ過/ダイアフィルトレーションを行っても、同時精製されたLT1009に結合したS1Pは除去されなかった。LT1009に結合したS1Pを分離するために、結合機構の特殊な特徴が利用できる。研究によれば、LT1009のS1P結合活性は、pH<4.0またはpH>8.5において低減することが分かった。しかし、結合S1Pの低減のために、pH<4.0においてプロテインAクロマトグラフィーを実行することは不可能である。なぜならば、このような低いpHにおいては抗体はプロテインA樹脂に結合しないからである。そのため、LT1009に結合したS1Pを低減させるために、高塩濃度とpH8.5での洗浄工程をプロテインAクロマトグラフィーにおいて採用した。さらに研究を進めたところ、高塩濃度バッファー650mMのNaClおよび50mMリン酸ナトリウムバッファーpH8.5では、LT1009から有効にS1Pを除去できなかった。塩濃度をさらに0.65Mから1MpH8.5へと増加し、高塩濃度洗浄工程をカラム容量4個からカラム容量5個に増やしても、残留S1Pのより少ない生成物は得られなかった。S1P除去のための金属キレーターの使用:開発されたキレーティング方法においては、CHO細胞バイオリアクターキャンペーンから作製された2体積量の未精製LT1009抗体回収物と、50mMリン酸カリウム、1MNaCl、2mMEDTAおよび5グリセロールpH8.0を含む1体積量のプロテインAIgG結合バッファーPierce結合バッファー、PierceProteinResearchProducts、ThermoFisherScientific、RockfordILとを事前混合した。この方法では、プロテインAカラムをPierce結合バッファーにより平衡化し、事前混合された粗製採取物をロードし、10カラム容量の同一結合バッファーで洗浄した。その結果得られた精製LT1009中のS1Pの含有量を、定量化ELISAによって測定したところ、モルパーセントで2倍以上少なかった。金属キレーター例えば、EDTAは、LT1009抗体調製物中のS1Pキャリーオーバーの有効な低減において重要またはさらには必須であると現在考えられている。実際、二価金属カチオンをキレート化するEDTA存在下でLT1009の力価測定を行うと、S1P結合が抑制されることが分かる。このようなLT1009からS1Pを分離するEDTAの能力は、LT1009精製時におけるS1Pの除去を促進すると考えられる。結合バッファーおよび洗浄バッファー中に2mMEDTAを付加したところ、抗体溶出画分中のS1Pキャリーオーバーが2倍有効に低減した。本研究における初期S1Pのレベルは比較的低いが、EDTAを採用することで、初期S1Pレベルが高い場合でもサンプル中の脂質キャリーオーバーが大幅に減少するはずである点に留意されたい。以下の例に限定されることなく、他の金属キレーター例えば、EGTA、ヒスチジン、リンゴ酸およびフィトケラチンも、S1Pの抗体からの分離に有用であり得る。EGTAおよびEDTAは、現在、抗S1P抗体からS1Pを分離するための好適な二価金属キレーターである。これらの結果に基づいて、新規の高塩濃度バッファーが、Lpath社によって開発された。この新規の高塩濃度バッファーは、Pierceバッファーに匹敵するpHおよび伝導率を有しており、このバッファーを用いる新規の事前混合工程を、LT1009の製造プロセスに採用した。下流精製プロセスを以下に挙げる:■0.182LKPi高塩濃度EDTAバッファーに対して2Lの粗製採取物の比で、粗製採取物と、4Xカリウム高塩濃度EDTAバッファー200mMKPi、4MNaCl、8mMEDTA、20グリセロール、pH8.0との事前混合。この工程は、S1PのLT1009への結合防止、およびS1PのLT1009からの分離のためのものである。■粗製採取物および高塩濃度バッファーの混合物のプロテインAカラムへの捕獲と、S1P除去のための、10カラム容量の高塩濃度EDTAバッファーによるカラム洗浄。■低pH3.6~3.8での、プロテインA樹脂からのLT1009の溶出。■ウイルス不活化のため、プロテインA溶出液の低pH3.6~3.8での保持の後、溶出液の中性pHへの中和。■残留宿主細胞のタンパク質およびヌクレオチドならびに浸出プロテインAの除去のための、Sartobind陰イオン交換Qクロマトグラフィー。■ウイルス除去のためのさらなる工程として、VirosartCPVナノフィルターを用いたナノろ過。■タンパク質濃度調整および最終製剤のための最終UF/DFろ過。S1P除去のための低pHおよびC8樹脂の使用:精製時の金属キレーター例えば、EDTAの使用に加えて、S1Pの疎水性を利用して、精製抗体調製物から脂質を除去することも可能である。この方法では、下記のツーステッププロセスが用いられる:1抗体からの脂質の分離、および2水溶性環境からの脂質の物理的分離。抗体調製物からの分離を促進するための容易かつロバストな方法として、pH誘導脂質除去pHiL処理を用いる。抗体は一般的には、低pHにおいて、顕著に低減した抗原結合親和性を示す。リン脂質例えば、S1PおよびLPAに対して生成された抗体は、特定の抗体および脂質によっては、pH3.0~3.5では脂質と結合しない。解離を促進するための正確なpHを決定する際、結合を抑制しかつインタクトなIgGを維持できるpHを決定するために、pH滴定実験を行う必要がある。これにより、pH増加後に結合活性を回復できる。換言すれば、抗体は不可逆的に不活性化されない。このpHが決定された後、4°Cにおいて臨界pH例えば、50mM酢酸ナトリウム、pH3.0~3.5を下回るまで、抗体をバッファーに対して透析する。これらの条件下において、脂質および抗体はどちらとも、溶液中に解離した成分として存在する。透析された溶液を、材料例えば、C8シリカ樹脂例えば、SepPakカートリッジ、Waters、カタログ番号WAT036775に通す。この材料は、脂質と結合し、脂質フリーのタンパク質の分離を促進する。その結果、遊離脂質が疎水性樹脂に不可逆的に結合しC8シリカ樹脂の場合、抗体は有意な損失無く通過する収率~90。脂質のほとんどは、カートリッジを1回通過させれば除去でき、さらに通過させることで、脂質除去を小幅に増加させることができる下記表1。上述した金属キレート化およびpHiL法は、単一の精製手順に容易に採用することができる。EDTAは、ほとんどのバッファーと適合可能であり、抗体安定性、溶解性またはプロテインA結合に悪影響を与えない。精製時において、大量のEDTA含有バッファーによって結合IgGを洗浄すると、S1Pの一部がS1P-LT1009複合体から除去され、他の金属依存性抗原-抗体複合体も強力に分離される。EDTA洗浄で脂質を十分に除去できない場合、プロテインAカラムからの溶出液をpHiL法を用いて処理することができる。プロテインAからの結合IgGの溶出は典型的には、低pHバッファーpH<3.0を用いて達成される。抗脂抗体を脂質結合の臨界pHまたはこれを下回るpHでカラムから溶出した場合、サンプルをC8シリカ樹脂に付加するだけで、脂質を除去できる。必要ならば、樹脂に付加する前に、pHを容易に調節することができる。実施例2:LT1009を含有する製剤1.序論以下の実施例では、S1Pに特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体LT1009を含むいくつかの製剤の安定性を評価するための実験について説明する。LT1009は、2本の同一な軽鎖と2本の同一な重鎖を含む工学設計された完全長のIgG1kアイソタイプ抗体であり、約150kDaの総分子量を有する。軽鎖と重鎖の相補性決定領域CDRは、S1Pに対して産生されたマウスモノクローナル抗体に由来し、さらにCDRの1つにCysからAlaへの置換を含んでいる。LT1009では、ヒトフレームワーク領域が、抗体の総アミノ酸配列の約95を占めており、高い親和性と特異性でS1Pに結合する。本実施例に記載の試験の目的は、LT1009の安定性と生理活性を長期間維持可能であり、全身投与に適する好ましい製剤を1つ以上開発することであった。公知のように、分子の高次構造の維持すなわち安定性は、少なくとも部分的にはタンパク質の分子環境および保存条件に依存する。好適な製剤は、抗体を安定させるのみならず、注射された際に患者によって忍容されなければならない。そのため、この試験では、試験された多様な製剤は、11mg/mLまたは42mg/mLのLT1009、さらに異なるpH、塩、および非イオン系界面活性剤の濃度を含んだ。さらに、3つの異なる保存温度5°C、25°C、および40°Cで調査したそれぞれ、実際の条件、加速条件、および温度ストレス条件に対応。安定性は、5つの異なる時点で、多様な製剤から得た代表的サンプルを用いて評価された:試験開始時および2週間後、1ヵ月後、2ヵ月後、および3ヵ月後。各時点において、試験は、目視検査、注射針通過性性30ゲージ注射針を通して吸入した場合、およびサイズ排除高速液体クロマトグラフィーSE-HPLCを含んだ。また、ある一定の温度以上では、タンパク質は変性し、いくらかの凝集体形成が生じるため、タンパク質の安定性を評価するために、円二色性CD分光測定法も使用した。観察された遷移は、見かけの変性または融解温度Tmと呼ばれ、タンパク質の相対的安定性を示す。2.材料および方法a.LT1009製剤サンプル各~0.6mLは、24mMリン酸ナトリウム、148mMNaCl、pH6.5中にLT1009を42mg/mL含有する水性ストック溶液から生成した。24mMリン酸ナトリウム、148mMNaCl、pH6.5溶液を用いて水性ストック溶液を所望する濃度に希釈することにより、LT1009を11mg/mL含有するサンプルを調製した。異なるpH値を有するサンプルを調製するために、LT100911mg/mLおよび42mg/mLの各濃度のpHを、0.1MHClまたは0.1MNaOHをそれぞれ使用して、当初の6.5の値から、6.0または7.0に調整した。異なるNaCl濃度を有するサンプルを調製するために、塩濃度を、当初の148mMから300mMまたは450mMに上げるために、5MNaClをサンプルに添加した。異なる非イオン系界面活性剤濃度を有するサンプルを調製するために、最終濃度が200ppmまたは500ppmとなるように、ポリソルベート-80をサンプルに添加した。サンプルを全て、0.22μmのPVDF膜シリンジフィルターに通し、滅菌済みの発熱物質を取り除いた10mLの血清バイアル内に無菌的に濾過した。その後、バイアルをそれぞれ、低剥離性のPTFEで裏打ちされたストッパーで密封した。このストッパーは、キャップにクリンプされることで、所定位置に固定され、汚染物から保護されている。安定性チャンバーに置く前に、バイアルを短時間2~8°Cで保管し、その後、下記の3つの指定保存条件のうちの1つに合わせて調節した安定性チャンバー内に垂直に配置した。40°C±2°C/75±5相対湿度RH、25°C±2°C/60±5RH、または5°C±3°C/大気RH。試験された製剤の変量の概要を以下の表2に示す。b.サンプルの取り出し各製剤のサンプルを、以下の表3に記載のスケジュールに従って分析した。全時点について、各保存条件についてバイアル1瓶を使用した。サンプルを取り出す日に、バイアルを各安定性チャンバーから取り出して、150μLの各サンプルをそれぞれ対応するラベルがついた別のバイアルに移して、試験前に1時間ベンチの上に静置した。試験対象の分注を抜き取った後、元のバイアルは、すぐに定められた安定性チャンバーに戻した。c.分析手順所定の時点について、各サンプルからの分注を使って、目視観察、注射針通過性、pH、SDS-PAGE還元および非還元条件の両方、SE-HPLC、およびIEFを含む一連の標準分析を実施した。タンパク質濃度は、UV分光測定法によって測定したOD-280。円二色性CD試験も実施した。円二色性分光測定法は、製剤試験とは別に行った。Aviv202CD分光光度計を使用して、分析を実施した。近紫外部CDスペクトルは、400~250nmの範囲で収集した。この領域では、ジスルフィドおよび芳香族側鎖が、CDシグナルに寄与する。遠紫外波長領域250~190nmにおいて、スペクトルは、ペプチド骨格に起因する。βシートタンパク質に通常使用される波長である、205nmの観察によって、温度変性曲線を作成した。25°C~85°Cまで加熱しながら、サンプル0.1mg/mlを使って、データを収集した。データは、1°Cのインクリメントで集めた。そのような変性スキャンに要した合計時間は、70~90分であった。平均時間は2秒であった。3.結果と考察分析した全サンプルについて、目視による外観に経時的な変化はなかった。同様に、注射適性検査により、サンプルは、30ゲージ注射針を備えたシリンジに問題なく吸入されることが実証された。多様な分析検査の結果は一貫しており、SE-HPLCは、LT1009の優れた安全性評価法であることが明らかになった。これらの結果は、塩濃度が上昇すると、凝集物の生成と小さな非凝集不純物の生成のどちらも減少することを示した。また、pHを低下させると、凝集物と不純物形成が低下することも発見された。さらに、ポリソルベート-80の濃度を200ppmよりも高く上昇させても、LT1009がそれ以上は安定しないことも、明らかになった。11mg/mLのLT1009を含むサンプルに対してSE‐HPLC実験を行い、42mg/mLのLT1009を含むサンプルについて得られた結果と同様の結果が得られたが、LT1009の濃度が低い方が、高濃度と比較して凝集物形成の可能性が低いことを示し、これは、全ての試験条件下で、高濃度の抗体の安定性が僅かに低いようであることを示している。円二色性試験から、LT1009は、水溶液中では、TyrおよびTrp両残基周辺が秩序正しい環境であり、明確な三次構造をとることが発見された。また、抗体分子中の少なくともいくつかのジスルフィドは、結合に幾分かの負荷を有しているが、これは、鎖内および鎖間ジスルフィドが存在する場合には、稀なことではない。LT1009の二次構造は、これと言って目立ったところはなく、βシート構造に一貫する遠紫外CDスペクトルを提示することが発見された。観察された遷移は、見かけの変性または融解温度Tmと呼ばれる。加熱によって、LT1009は、pH7.2では、約73°Cの見かけTmを示した。見かけのTmは、pH6.0では約77°Cまで上昇した。これらの結果は、僅かに酸性のpHは、LT1009の水性製剤の長期的安定性を増強することを示す。NaClおよび/またはポリソルベート-80の添加もまた、更なる安定性を与えた。合わせて、これらの実験データは、LT1009は、抗体濃度とは無関係に、pH6および450mMNaCl周辺で最も安定性があることを示す。実際、SE-HPLC試験は、ポリソルベート-80の濃度を200ppmに維持しながら、塩濃度を450mMまで増加させ、pHを6.0まで下げると、LT1009の安定性に極めて有益な効果があることを示した。ポリソルベート-80を200ppm以上含ませても、凝集体形成に対する更なる緩和効果がなかったが、これは恐らくは、200ppmにおいて既に臨界ミセル濃度を超えていたためである。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、試験条件下ではLT1009の凝集体形成が塩濃度の上昇に伴って低下した事実は、凝集体形成は、少なくとも部分的には、疎水的相互作用よりむしろ分子間のイオン相互作用により深く基づいていることを示している可能性がある。pHを7から6に下げると凝集体形成が減少するという観察は、低pHにおけるアミノ酸ヒスチジンの疎水性の低下によって説明できる。最後に、LT1009濃度上昇時に観察された凝集体形成の傾向の増大は、分子が適切な場所で、適切な時間に互いにぶつかり合う機会が増えて凝集体を形成することにより、簡単に説明され得る。これらの実験によって示されるように、好適な水性LT1009製剤は、24mMリン酸、450mMNaCl、200ppmポリソルベート-80、pH6.1を有するものである。この医薬品は、患者に投与する前に、おそらく多量のPBSを含む輸液バッグ中に注入することによって希釈されるため、本製剤の比較的高い浸透圧は、全身投与について問題をもたらすことはないであろう。実施例3:抗S1Pモノクローナル抗体からのFabフラグメントの分離精製全IgG調製物をプロテアーゼパパインで処理することにより、可変ドメインおよびCkおよびCh1定常ドメイン双方からなるFabフラグメントを、一対のCh2およびCh3ドメインを含むFcドメインから分離した。このFabフラグメントは、1つの可変領域全体を保持しているため、抗体とエピトープの1:1相互作用の生化学的探求のための有用なツールとして機能する。さらに、Fabフラグメントは柔軟性に欠け、また一般的に天然精製全IgGに固有のグリコシル化にも欠けるため、Fabフラグメントは、一般的には、単結晶x線回折による構造研究のための優秀なプラットホームである。精製されたインタクトな抗S1PIgGを、37°Cで2時間、消化バッファー50mMリン酸ナトリウムpH7.2、2mMEDTA中で、100:1LT1009:パパイン中で、活性化パパイン5.5mMシステイン―HCL、1mMEDTA、70μM2―メルカプトエタノール中で、37°Cで0.5時間インキュベートされた10mg/mlパパインによって処理した。その後、プロテアーゼ反応を50mMヨードアセトアミドでクエンチし、20mMTrispH9で透析し、2x5mlHiTrapQカラムにロードした。直線勾配20mMのTrispH8、0.5MNaClにより結合タンパク質を溶出させ、4ml画分中に収集した。抗S1PFabフラグメントを含む画分をプールし、20mMTrispH8で平衡化されたプロテインAカラムにロードした。Fabフラグメントがフロースルー画分中に存在する一方、インタクトな抗体およびFcフラグメントは樹脂に結合した。Fabフラグメントをcentricon―YM30遠心濃縮器Millipore、カタログ番号4209を用いて濃縮し、25mMHEPESpH7で透析し、4°Cで保存した。実施例4:分析方法この実施例では、本発明との関連において有用ないくつかの分析方法について詳述する。a.定量的ELISAヤギ抗ヒトIgG-Fc抗体BethylA80-104A、1mg/mlを炭酸緩衝液100mMNaHCO3、33.6mMNa2CO3、pH9.5にて1:100希釈した。37°Cで1時間100μl/ウェルのコーティング溶液でインキュベートすることによりプレートをコーティングした。プレートをTBS-T50mMTris、0.14MNaCl、0.05tween-20、pH8.0で4回洗浄し、37°Cで1時間200μl/ウェルTBS/BSA50mMTris、0.14MNaCl、1BSA、pH8.0でブロッキングした。試料および標準は、2回検定しても十分な量を、非結合型プレートにて調製した。標準はヒト標準血清BethylRS10-110、4mg/mlをTBS-T/BSA50mMTris、0.14NaCl、1BSA、0.05Tween-20、pH8.0で次の濃度に希釈することにより調製した:500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml、62.5ng/ml、31.25ng/ml、15.625ng/ml、7.8125ng/ml、0.0ng/ml。試料の吸光度ODが標準曲線の範囲内になるようにTBS-T/BSAで適切に希釈することによって、試料を調製した。最も線形の範囲は125ng/ml~15.625ng/mlであった。プレートをTBS-Tで4回洗浄した後、100μlの標準/試料調製液を各ウェルに添加し、37°Cで1時間インキュベートした。次にプレートをTBS-Tで4回洗浄し、100μl/ウェルのTBS-T/BSAで1:150,000に希釈したHRP-ヤギ抗ヒトIgG抗体BethylA80-104P、1mg/mlによって37°Cで1時間インキュベートした。プレートをTBS-Tで4回洗浄し、4°Cに冷却した100μl/ウェルのTMB基質を用いて発色した。7分後に1MH2SO4100μl/ウェルで反応を停止した。ODを450nmで測定し、データをGraphpadPrizmソフトウェアで分析した。b.直接結合ELISA37°Cで1時間、0.1M炭酸緩衝液pH9.5にて希釈した脱脂ウシ血清アルブミンBSAでコンジュゲートしたS1Pで、マイクロタイターELISAプレートCostarCorningIncLowellMACatNo3361を一晩コーティングした。プレートをPBS137mMNaCl、2.68mMKCl、10.1mMNa2HPO4、1.76mMKH2PO4、pH7.4で洗浄し、室温で1時間または4°Cで一晩PBS/BSA/tween-20によりブロッキングした。一次インキュベーション室温で1時間として、抗体の希釈系列0.4μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL、0.0125μg/mL、0μg/mLをミクロプレートウェル当たり100mlに添加した。プレートを洗浄し、ウェル当たり100μlの1:20,000に希釈したHRPコンジュゲート化ヤギ抗ヒトHL抗体JacksonImmunoresearch、カタログ番号109-035-003で1時間室温でインキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼをテトラメチルベンジジン基質Sigma、カタログ番号T0440で発色させ、1MH2SO4を添加することにより停止した。ThermoMultiskanEXを用いて450nmで吸光度ODを測定した。生データをGraphpadPrismソフトウェアへ転送し、飽和結合曲線の4パラメータ非線形最小二乗法により、半最大結合濃度EC50および最大結合吸収度Vmaxを求めた。c.脂質競合アッセイ溶液中で、多様な脂質が特定の抗体または抗体フラグメントがS1Pに直接結合するのを阻害する能力を、ELISAアッセイフォーマットを用いて試験した。0.1M炭酸緩衝液pH9.5で希釈したS1Pで、マイクロタイターELISAプレートCostar、カタログ番号3361を1時間、37°Cでコーティングした。プレートをPBS137mMNaCl、2.68mMKCl、10.1mMNa2HPO4、1.76mMKH2PO4、pH7.4で洗浄し、PBS/BSA/Tween-20により室温で1時間または4°Cで一晩ブロッキングした。一次培養のため、0.4μg/mLの抗体および指定量の脂質を前記ELISAプレートのウェルに添加し、室温にて1時間培養した。プレートを洗浄し、1ウェルにつき100μlのHRPコンジュゲートヤギ抗マウス抗体1:20,000希釈Jackson、カタログ番号115―035―003またはHRPコンジュゲートヤギ抗ヒトHL抗体1:50,000希釈Jackson、カタログ番号109―035―003で、室温で1時間インキュベートした。洗浄後、テトラメチルベンジジン基質でペルオキシダーゼ反応を行って発色し、1MのH2SO4を加えることにより、反応を停止させた。光学密度ODを、ThermoMultiskanEXを用いて450nmにおいて測定した。Excelソフトウェアを用いたLineweaver-Burkeプロットの線形回帰分析により、最大結合吸収度Vmaxおよび阻害パーセントを計算した。d.表面プラズモン共鳴結合データは全て、ProteOn光学バイオセンサBioRad、HerculesCAで収集した。チオール化脂質をマレイミド修飾GLCセンサーチップカタログ番号176-5011に結合した。まず、GLCチップをスルホNHS/EDCの同量混合で7分間活性化し、次いでエチルジアミンによる7分間のブロッキングを実施した。次に、HBSランニングバッファー10mMHEPES、150mMNaCl、0.005tween-20、pH7.4中で、スルホMBSPierceCoRockford、IL、カタログ番号22312を、0.5mMの濃度で表面に流した。チオール化脂質をHBSランニングバッファー中で10、1、および0.1μMの濃度に希釈して7分間注入し、異なる脂質密度の表面を得た~100、~300および~1400RU。次に、最高濃度として25nMから開始した3倍希釈系列を使用して、WTおよび変異体抗体の結合データを収集した。100mMHClの10秒のパルスによって表面を復元した。データはすべて25°Cで収集した。対照は、標準表面およびブランク注入とした。結合パラメータを抽出するために、1サイトモデルおよび2サイトモデルを用いて、データにグローバルフィッティングを行った。上記および他の分析方法の利用を通じて、LT1009は、親和性が約8~50nMであるS1P受容体よりも、S1Pに対してより高い結合親和性100pM未満を有することが判明した。さらにLT1009は、70種類の生物活性脂質種に対して交差反応をしないことが判明した。したがってLT1009は、S1Pに対して非常に特異的である。実施例5:LT1009の第一相ヒト臨床試験結果この実施例では、多中心非盲検単一アーム第一相投与量増加試験をSonepcizumabLT1009について行った結果のうちいくつかを記述する。この試験においては、単一治療薬としてSonepcizumabLT1009を、毎週静脈内に注入することによって、進行した難治性の固形腫瘍腎臓腫瘍、結腸直腸腫瘍、前立腺腫瘍、乳腫瘍、メラノーマ腫瘍および唾液腺腫瘍に罹患している30人の患者に対して投与した。本試験の目的には、Sonepcizumabの安全性、耐性、および用量制限毒性ただし、存在する場合を明らかにすることが含まれる。試験投与量は、1、3、10、17、および24mg/kgであった。Sonepcizumabの投与は、サイクル1では、1日目、15日目、22日目および29日目に行い、その後の全サイクルでは毎週行った1サイクル=4週。初期、Sonepcizumabの点滴は90分かけて行い、その後投与時間を短縮することを容認した。患者サンプルからのS1Pの逐次測定、絶対リンパ球カウントの経時的評価、および一連のバイオマーカーVEGF、MMP-2、MMP-9、IL-6、IL-8、およびPIGF-1の定期的測定により、薬力学作用を評価した。本試験に登録した前記30人の患者のうち、28人が処置を受け、21人が試験を完了した。試験中、重篤な悪影響は観察されず、投与量低減は不要であった。最高投与量24mg/kgを9人の患者に投与した際の点滴関連反応の結果、投与中断が2回発生した。しかし、これらの反応は、予防的治療および/または毎週の点滴継続と共に改善した。ごく一部の患者において他の悪影響が見られた下痢3人の患者、嘔吐3人の患者、および貧血1人の患者。患者に24mg/kgの投与量で投与した後1~24時間以内に、絶対リンパ球カウントが平均で48急激に低下した。これらの患者において、7日間でリンパ球カウントが少なくとも部分的に回復した。これより低い投与量の患者については、1~24時間後のリンパ球カウントの評価は行わなかった。その代わりに、リンパ球カウントを毎週平均として評価した。その結果、投与量に依存したリンパ球カウントの低下がみられた。タンパク質バイオマーカーVEGF、MMP-2、MMP-9、IL-6、IL-8、およびPIGF-1を投与後7日間測定した。その結果、試験時におけるどの時点においても、いずれのマーカについても顕著な差はみられなかった。合計すなわち絶対S1Pは、投与量に依存して顕著に増加した図2上を参照。しかし、投与量が変化しても、生物活性の、すなわち遊離したS1Pの量に顕著な変化はみられなかった図2下を参照。スフィンゴ脂質代謝経路の酵素のモジュレータの併用治療により、投与量に依存した絶対S1Pレベルの増加を低減または軽減させることができるであろう。この試験から、SonepcizumabLT1009は全般的に極めて耐性が高く、また毎週のスケジュールで良好に投与できることが分かった。意義深いことに、臨床効果の証拠も観察された。例えば、1人のカルチノイド腫瘍患者に対して毎週3mg/kgの投与を行ったところ、2008年9月の初期治療から安定した病態を示した。多くの他の患者においても、安定した病態が長期にわたってみられた例えば、腺様嚢胞がん患者において12ヶ月、メラノーマが進行した患者6ヶ月において4~6ヶ月、乳がん、直腸癌および腎臓癌患者4ヶ月において4~6ヶ月。本明細書において記載し、主張する組成物および方法の全ては、本開示内容に照らして過度の実験を行うことなく、作り、実行することができる。本発明の組成物および方法について、好ましい実施形態を記載してきたが、該組成物および方法に変形を加えてもよいことは当業者には明らかである。添付の特許請求の範囲によって定義されるように、当業者に明白な同様の代替物および改変の全ては、本発明の精神および範囲内であると考えられる。本明細書に記載した全ての特許、特許出願および刊行物は、本発明が属する分野の技術者のレベルを示している。全ての特許、特許出願および刊行物優先権または別の利益を主張するものを含むは、個々の刊行物が具体的かつ個別に引用することにより本明細書の一部とされることが示されたのと同程度に引用することにより本明細書の一部とされる。本明細書において例示的に記載した本発明は、本明細書において具体的に開示されていない任意の要素の不在下でも適切に実施し得る。よって、例えば、本明細書におけるいずれの場合においても、用語含んでなる、から本質的になるおよびからなるはいずれも、残る2つの用語のいずれかと置き換えてよい。使用した用語および表現は、限定ではなく説明の言葉とし用いられ、かかる用語および表現の使用において、示しまたは記載した特徴の均等物またはその一部分を排除する意図はなく、主張した本発明の範囲内で様々な改変が可能であることが認識される。従って、本発明を好ましい実施形態に従って具体的に開示してきたが、当業者ならば本明細書に開示した概念の任意選択の特徴、改良および変形を用い得ること、そしてかかる改良および変形は、添付の特許請求の範囲によって定義されるように、本発明の精神および範囲内であると考えられることを理解すべきである。"