"本願明細書に記載された発明。従って、本発明の広範な目的は、精子の生存率を維持または増強するための精液または精子細胞の収集、操作、移送、分離のための装置または方法を提供することであり得る。本発明の別の広範な目的は、精子の生存率を維持または増強するための精液または精子細胞ウマ、ウシ、ネコ、ヒツジ、イヌ、バッファロー、雄ウシ、ヘラジカ、またはブタを含むがこれらに限定されない種々の哺乳動物種から収集された;または、ある哺乳動物種の獲物個体、絶滅寸前個体、または希少個体から収集された;または動物標本から収集されたを収集、操作、移送、保存、または分離の装置または方法を提供することであり得る。本発明の別の重要な目的は、ウマの哺乳動物から得られた精子細胞を操作および移送するための装置または方法を提供することであり得る。別の本発明の重要な目的は、フローソーティングプロセス全体にわたって哺乳動物精子細胞のより高い生存率を維持し得る精子細胞を分離する装置または方法を提供することであり得る。本発明の別の重要な目的は、哺乳動物の様々な種例えば、上記における人工受精のため、またはそのような精子細胞が、豊富なX染色体保有精子細胞または豊富なY染色体保有精子細胞へと分離されるにせよ、分離されないにせよ、このような人工受精の手順において使用される精子細胞の一般的な数または典型的な数と比較し少ない精子細胞数または減じた精子細胞数を用いる人工受精ため、より高い生存率で精子細胞を維持する装置または方法を提供することであり得る。本発明の別の重要な目的は、それより上では精子細胞の膜脂質が液相からゲル相へと転移する温度で精子細胞をインキュベートする方法を提供することであり得る。本発明の別の重要な目的は、精子細胞のフローソーティングによる分離前に種馬精液の移送のための装置または方法を提供することであり得る。例えば、本願発明は以下の項目を提供する。項目1精子細胞を分離する方法であって、該方法は、以下:a.哺乳動物の一種のオスから精液複数の精子細胞を含むを獲得する工程、b.精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上で該精液をインキュベートする工程、c.複数の該精子細胞の精子細胞形質を決定する工程、d.該精子細胞形質に基づいて該精子細胞を分離する工程、およびe.分離した精子細胞を収集する工程、を包含する、方法。項目2前記温度精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上において、精子細胞の膜脂質がゲル相へと転移する温度以上で前記精液をインキュベートする工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目3前記温度精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上において、該精子細胞の膜脂質を該液体に維持する温度で前記精液をインキュベートする工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目4精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上の温度で前記精液をインキュベートする前記工程は、該精液をおよそ5°Cとおよそ25°Cとの間の温度でインキュベートする工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目5前記温度は、およそ5°C、およそ6°C、およそ7°C、およそ8°C、およそ9°C、およそ10°C、およそ11°C、およそ12°C、およそ13°C、およそ14°C、およそ15°C、およそ16°C、およそ17°C、およそ18°C、およそ19°C、およそ20°C、およそ21°C、およそ22°C、およそ23°C、およそ24°C、および、およそ25°Cからなる群より選択される、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目6前記哺乳動物の一種は、哺乳動物のウシの一種、哺乳動物のウマの一種、哺乳動物のヒツジの一種、哺乳動物のブタの一種、哺乳動物のイヌの一種、哺乳動物のネコの一種、哺乳動物のシカの一種、哺乳動物のヘラジカの一種、および哺乳動物の海洋の種からなる群より選択される、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目7前記哺乳動物の一種は、ウシの一種を含み、かつ精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上の温度で前記精液をインキュベートする前記工程は、該精液をおよそ17°Cとおよそ19°Cとの間の温度でインキュベートする工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目8前記哺乳動物の一種は、ウシの一種を含み、かつ精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上の温度で前記精液をインキュベートする前記工程は、該精液をおよそ17°Cの温度でインキュベートする工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目9前記哺乳動物の一種は、ウマの一種を含み、かつ精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上の温度で前記精液をインキュベートする前記工程は、該精液をおよそ15°Cの温度でインキュベートする工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目10精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上で前記精液をインキュベートする前記工程は、該精液を該温度精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上で、およそ1時間とおよそ18時間との間インキュベートする工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目11精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上で前記精液をインキュベートする前記工程の間に、第一の位置から第二の位置へ該精液を移動させる工程をさらに包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目12精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上で前記精液をインキュベートする前記工程の前に、該精液に対して抗生物質を添加する工程をさらに包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目13前記精液内の複数の精子細胞の精子細胞形質を決定する前記工程は、該精子細胞の性形質を決定する工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目14前記精子細胞形質に基づいて該精子細胞を分離する前記工程は、前記性形質に基づいて該精子細胞を分離する工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目15KMTおよびINRA96からなる群より選択される増量剤を用いて精液を増量する工程をさらに包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目16精漿の一部を取除くことにより前記精子細胞を濃縮する工程をさらに包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目17前記精子細胞を染色する工程をさらに包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目18前期精子細胞を染色する前記工程は、該精子細胞内に含まれるDNAを染色する工程を包含する、項目17に記載の精子細胞を分離する方法。項目19前記精子細胞内に含まれるDNAを染色する前記工程は、Hoechst33342染色を用いて該精子細胞内の該DNAを染色する工程を包含する、項目18に記載の精子細胞を分離する方法。項目20Hoechst33342染色を用いて前記精子細胞内の前記DNAを染色する前記工程は、およそ30分とおよそ1時間との間Hoechst33342と共に該精子細胞をインキュベートする工程を包含する、項目19に記載の精子細胞を分離する方法。項目21前記精子細胞形質に基づいて該精子細胞を分離する前記工程は、フローサイトメーター、およびセルソーターからなる群より選択される装置を使用して該精子細胞を分離する工程を包含する、項目1に記載の精子細胞を分離する方法。項目22人工受精サンプルであって以下:a.人工受精装置、b.精子細胞増量剤、およびc.哺乳動物の一種のオスから獲得した精液複数の精子細胞を含むであって、該精液は精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上で1時間と18時間との間の期間インキュベートされており、該複数の精子細胞は性形質に基づいて分離され、該分離した精子細胞の一部が、該精子細胞増量剤内に確立され、かつ該精子細胞増量剤内に確立した該分離した該精子細胞の一部は、該人工受精装置内に収容される、精液、を含む、人工授精サンプル。項目23前記精子細胞増量剤は、卵黄増量剤を含む、項目22に記載の人工受精サンプル。項目24前記精子細胞増量剤は、卵黄-TRIS増量剤を含む、項目22に記載の人工受精サンプル。項目25前記精子細胞増量剤は、実質的に等量の前記卵黄-TRIS増量剤および卵黄-TRIS増量剤/12グリセロールを含む、項目22に記載の人工受精サンプル。項目26前記精子細胞増量剤は、およそ0.1mlと2.0mlとの間の容量を有する、項目23、24、または25に記載の人工受精サンプル。項目27前記人工受精装置は、人工受精ストローを備える、項目22に記載の人工受精サンプル。項目28前記精子細胞増量剤内に確立した前記分離した精子細胞の一部は、およそ100,000とおよそ25,000,000との間の分離した精子細胞を含む、項目22に記載の人工受精サンプル。項目29前記人工受精装置内に収容される、前記精子細胞増量剤中で確立した、前記分離した精子細胞の一部は、凍結されている、項目28に記載の人工受精サンプル。項目30前記人工受精装置内に収容される、前記精子細胞増量剤中で凍結されている前記分離した精子細胞の一部が、解凍される、項目29に記載の人工受精サンプル。項目31人工受精サンプルを産生する方法であって、該方法は以下の工程:a.哺乳動物の一種のオスから精液複数の精子細胞を含むを獲得する工程、b.精子細胞の膜脂質が液体相からゲル相へと転移する温度以上で該精液をインキュベートする工程、c.該複数の精子細胞の性形質を決定する工程、d.該性形質に基づいて該複数の精子細胞を分離する工程、およびe.該哺乳動物の該種のメスの内部の少なくとも一つの卵子と受精することが可能な分離した精子細胞を含む人工受精サンプルを確立する工程、を包含する、方法。項目32哺乳動物を受精させる方法であって、該方法は以下の工程:a.哺乳動物の一種のオスから精液複数の精子細胞を含むを獲得する工程、b.精子細胞の膜脂質がゲル相へと転移する温度以上で該精液をインキュベートする工程、c.該複数の精子細胞の性形質を決定する工程、d.該性形質に基づいて該複数の精子細胞を分離する工程、e.該哺乳動物の該種のメスの内部の少なくとも一つの卵子と受精することが可能な分離した精子細胞を含む人工受精サンプルを確立する工程、f.該哺乳動物の該種のメスの内部へ、該受精サンプルの一部を挿入する工程、および、g.該哺乳動物の該種のメスの内部の少なくとも一つの卵子と受精させる工程、を包含する、方法。項目33哺乳動物の子孫を産生する方法であって、該方法は以下の工程:a.哺乳動物の一種のオスから精液複数の精子細胞を含むを獲得する工程、b.精子細胞の膜脂質がゲル相へと転移する温度以上で該精液をインキュベートする工程、c.該複数の精子細胞の性形質を決定する工程、d.該性形質に基づいて該複数の精子細胞を分離する工程、e.該哺乳動物の該種のメスの内部の少なくとも一つの卵子と受精することが可能な分離した精子細胞を含む人工受精サンプルを確立する工程、f.該哺乳動物の該種のメスの内部へ該受精サンプルの一部を挿入する工程、g.該哺乳動物の該種のメスの内部の少なくとも一つの卵子と受精させる工程、およびh.哺乳動物の子孫を産生する工程、を包含する、方法。発明を実施するための形態種々の収集手順、操作手順、保存手順、輸送手順、分離手順または受精手順の状況において精子細胞の生物学的性質、化学的性質、物理的性質、生理学的性質もしくは機能的性質を維持または高めるための精液または精子細胞操作システム。実施例1精液は、受精可能な3頭の種馬から収集し、タイロードベースのスキムミルク-グルコース増量剤に1mLごとに約25×106精子となるよう希釈し、そして18時間、約5°Cまたは約15°Cのいずれかにて保存した。保存の後、精子spermatozoaを、遠心分離し精漿を取り除き、そして精子spermを濃縮し、Hoechst33342Hoechstで染色し、そしてSXMoFlo登録商標精子ソーターを用いてDNA含有量に基づいて富化されたX染色体保有集団とY染色体保有集団とに選別した。300μlの容積での約20×106のフローソートflow-sorted精子を、全て受精のために使用した。2齢から12齢の35頭の雌ウマの発情期を、同調化した。直径35mm以上の優性小胞が現れた場合、ヒト絨毛性ゴナドトロピンhCG;3000IU,iv;Chorulon登録商標,Intervet,Millsboro,DE,USAを投与し、そして雌ウマは、hCG投与後約30時間で受精した。受精の際、雌ウマは、3つの処置群に1頭割り当てた:115°Cで精子を保存しビデオ内視鏡の技術を用いて受精させた;25°Cで精子を保存し、またビデオ内視鏡の方法を用いて受精させた;および35°Cで精子を保存し、直腸誘導技術rectallyguidedtechniqueを用いて受精させた。雌ウマを、ブトルファノール4mg,iv;Torbugesic登録商標,Ft.DodgeCo.,FortDodge,IA,USAおよびデトミジン6mg,iv;Dormosedan登録商標,Pfizer,LeesSummit,MO,USAを用いて受精直前に落ち着かせた。雌ウマを、排卵について毎日評価し、受精後48時間以内に排卵している雌ウマのみを結果に含めた。妊娠を、排卵後12日から14日で超音波診断により決定した。雌ウマは、2周期後の使用のため、排卵後16日にプロスタグランジンF2αを投与した。15°Cで保存されたソート精子を用いて子宮鏡hysteroscopicallyにより受精させた雌ウマ間の受精率は、表1に示されるように約72であり、また5°Cで保存された精子を用いた受精率は、約55であった。保存されたソート精子を受精させた場合、子宮鏡受精55と比較して直腸誘導受精38をした後、妊娠する雌ウマはより少ないという傾向P=0.12があった。より多い数の雌ウマが、5°Cと比較して、選別前に15°Cで保存されたソート精子を用いて受精をした後、妊娠した。受精率としてのこの効果は、5°Cと比較し、選別の前に15°Cで18時間保存された後の種馬と一致した。標準的な方法5°C、12時間から72時間により輸送された1×109種馬精子による受精後の予想される妊娠率は、65である。本研究において得られた妊娠率72は、目覚しいものであり、簡便な技術を使用して18時間保存されたフローソート精子細胞を用いて得られた妊娠率35を超える劇的な改善を示す。この受精率の増加は、フローサイトメトリー前の精子操作に影響し得る。全ての受精した雌ウマの妊娠率が、極めて低い本発明を適用する間の二日間を除いたとしても、本研究の妊娠率は、より高い。子宮鏡受精は、深部-子宮deeputerine受精よりも高い妊娠率を生じた。これは、Rigbyら彼らは、輸送された精子を使用した場合、ビデオ内視鏡受精と直腸誘導受精との間の妊娠率は、類似していると報告したと対照的である。しかし、これらの結果は、子宮鏡受精に対する12パーセンテージポイントの利点を示さなかった。その研究と対照的に、本試行では、フローソート精子細胞受精能獲得前の状態にあることが公知であるを利用した。要約すると、優れた妊娠率は、18時間保存されたフローソート精子細胞spermatozoaの子宮鏡受精を用いて得られた。5°Cと比較した場合、約15°Cで精子が維持された場合、全3頭の種馬について妊娠率は、より高かった。15°Cで保存された精子を用いた子宮鏡受精は、5°Cで保存された精子の直腸誘導受精よりも、高い妊娠率を得た。従って、本発明の精子細胞操作システムは、哺乳動物の一種のオスから精子細胞を得ること、哺乳動物のこのような種のこのようなメスのより高い妊娠率を生じる5°Cと25°Cとの間の範囲内で選択される温度で、哺乳動物の種のメスの人工受精の前に哺乳動物のオス種から得た精子細胞を維持することを包含し得る。ウマの種に関して、および特に開示されたウマの種に関して、ウマのオスから得た精子細胞が、妊娠率を高めるために本発明に従って維持される温度は、約10°C~約20°Cとの間であり得、具体的には約15°Cであり得る。ウマを含む用途についての以下の実施例を参照のこと。また、ヘラジカの一種のオスから得た精子細胞は、メスヘラジカの受精の前に約20°Cで維持される本発明の用途を示している以下の実施例8を参照のこと。本発明の精子細胞操作システムは、本発明に従う温度で維持された哺乳動物の一種のオスから得た精子細胞の輸送をさらに含み得る。このような輸送は、一時間より少ない限定された期間を有し得るか、または約1時間と約72時間との間でより延長された期間を有し得るか、または記載されるように約18時間の期間であり得る。本発明は、上記のように、哺乳動物のこのような種のこのようなメスの最高の妊娠率を生じる温度で維持された哺乳動物の一種のオスから得た精子細胞を染色する工程をさらに包含し得る。本発明は、哺乳動物のその種のそのメスの子宮鏡人工受精または直腸誘導人工受精をさらに含み得る。特に、本明細書中に含まれる参考文献による援用により記載されるように、精子細胞を用いたウマ哺乳動物の子宮鏡受精が、性別事前選択のために選別されこれは、本発明に従って取り扱われ得、そしてさらに哺乳動物の特定種ウマ哺乳動物を含むがそれに限定されないのメスを受精させるために代表的に使用される精子細胞の数と比較して少ない数の精子細胞をさらに含み得る。実施例28頭の種馬由来の精液を、表2に示すように4つの輸送shipping増量剤の各々の中に約25×106精子/mlとなるように希釈した。18時間の模擬輸送の間、サンプルを、15°Cで保存されたINRA96内に希釈されたサンプルを除き、周囲温度20°Cから24°Cに保った。保存後、サンプルを10分間600×gで遠心分離し、ペレットを400×106精子/mlまで希釈した。1時間19°C~24°Cでインキュベーションし、そして200×106精子/mlまで希釈した後、精子細胞を、224μMのHoechst33342を用いて1時間、34°Cで染色し、次いでKMT中で100×106精子/mlまで希釈した。選別条件をシュミレートするため、精子を、BSAを含まないHBGM-3に700,000精子/mlとなるように希釈し、20分間850×gで遠心分離する前に1.5時間周囲温度で維持した。運動性を、表2で示されるように、4つの化学的環境で評価した。表2に示されたデータから理解され得るように、KMTおよびINRA96は、特定の精子細胞操作工程を通してより高い運動性を維持した。本発明の精子細胞操作システムは、哺乳動物の一種のオスから得た精子細胞をKMTに増量する工程をさらに包含し得、特に哺乳動物のウマの一種のオスから得た精子細胞に関して、KMTは、精子細胞の運動性を有意に増加し得る。本発明の精子細胞操作システムは、哺乳動物の一種のオスから得た精子細胞をINRA96に増量する工程をさらに包含し、特に哺乳動物のウマの一種のオスから得た精子細胞に関して、INRA96は、精子細胞の運動性を有意に増加し得る。実施例38頭の種馬からの精液を、KMTに25×106精子細胞/mlまで希釈し、40mlのアリコートを、18時間5°C、10°C、15°C、20°C、および25°Cで配置した。サンプルを次いで、実施例2の方法と同様に操作した。運動性を、刺激物として2mMのカフェインを用いておよびカフェインを用いることなく両方評価した。死数のフローサイトメトリー評価を、プロピジウムヨウ化物染色を用いて行った。表3に示されるように、KMTの使用は、5°C、10°C、または15°Cの保存温度または輸送温度に関して運動性の差異を減少させ得る。従って、本発明の精子細胞操作システムは、Hoechst染色剤を用いてこのような精子細胞を染色する前におよびこのような精子細胞のフローソートの前に哺乳動物の一種のオスから得たこのような精子細胞をこのようなKMT濃度で希釈する工程または維持する工程をさらに含み得る。実施例43頭の種馬からの精液中の精子細胞を、始めに、容量、濃度、および運動性について評価した。残りの射精の一部を、0のさらなる精子細胞のプラズマまたは10の精子細胞のプラズマのいずれかを用いてKMTまたはEZ混合液のいずれかを用いて、以下の精子細胞/染色剤濃度:50×106精子/mL、2.6μlHoechst;50×106精子/mL、3.9μlHoechst;150×106精子/mL、7.8μlHoechst;または450×106精子/mL、23.4μlHoechstとなるような濃度で希釈し、そして室温にて、直ちに、または18時間の保存の後に処理する。染色した精子細胞サンプルを次いで、フローサイトメトリー分析により、融解または死数について評価し、そして運動性を、140μlのEZ混合液またはKMTを用いて20μlの染色した精子細胞の各サンプルをさらに希釈することにより評価した。図1をここで主に参照すると、染色濃度が増加するにつれて、精子細胞特にウマの精子細胞の総合的運動性および直進性運動性は減少し、精子細胞の死数は増加し、そしてフローサイトメトリー技術のY染色体保有精子細胞からX染色体保有精子細胞を分離する能力は高まる。本発明の精子細胞操作システムは、特定の種から得た精子細胞に関する一般的な技術において使用される染色濃度の範囲、または開示されているような染色濃度の他の範囲と比較して、染色した精子細胞の総合的運動性または直進性運動性の増強、フローソートの間のY染色体保有精子細胞からX染色体保有精子細胞の分離の増強;または精子細胞の死数における減少を提供する染色濃度の範囲を含み得る。特に本発明のウマの用途について、総合的運動性または直進性運動性の増強、フローソートの間のY染色体保有精子細胞からX染色体保有精子細胞の分離の増強;または染色した精子細胞サンプルにおける精子細胞の死数の減少を提供し得る染色濃度の範囲は、約50×106精子/mL、2.6μlHoechst;50×106精子/mL、3.9μlHoechstとの間であり得る。他方、結果があまり好ましくない染色濃度の範囲は、150×106精子/mL、7.8μlHoechst~約450×106精子/mL、23.4μlHoechstまでの間であり得る。図2をここで主に参照すると、KMT中で希釈された精子細胞は、新鮮な精子サンプルおよび室温でしばらく保存された例えば、室温で18時間精子サンプルの両者に対してより運動性が残っていることが理解され得る。本発明はさらに、新鮮な精子細胞、しばらく保存した例えば、18時間までまたはそれより長く精子細胞、あるいは、第一の場所例えば、精子細胞をオス哺乳動物から得た場所から第二の場所または複数の場所オス哺乳動物から得た精子細胞をさらに操作する場所精子細胞の計算、Y染色体保有精子細胞からX染色体保有精子細胞の分離、もしくは人工受精のための精子のストロー製品を含むがこれに限定はされない製品を含む精子細胞の調整選別されるか、または選別されないが生ずる場所あるいは第二の場所または複数の場所哺乳動物のメスの一種の受精が生ずる場所、卵子がインビトロで受精する場所、などへ移動または輸送した精子細胞の総合的運動性および直進性運動性を高めるために、増量剤としてKMTの使用をさらに含み得る。実施例5三頭の種馬からの射精液内の精子細胞を始めに、容量、濃度、および運動性について調べた。各射精液の一部の残りは、25×106精子細胞/mLとなるようにKMT内に希釈し、そして18時間室温で保存した。保存した射精液は、600gで10分間遠心することによりペレット化した。ペレット化した精子細胞は、Hoechstを伴うKMT内に400×106精子細胞/mL、12.4μlHoechstの精子細胞サンプルとなるように再懸濁し、7.1pHまたは7.9pHのいずれかに調製し、次いで34°Cで30分間または60分間のいずれかの間インキュベートした。染色した精子細胞サンプルは、1.5μl/mLの5赤食用色素を伴う1mLKMT;2.0μl/mLの5赤食用色素を伴う1mLKMT;2.5μl/mLの5赤食用色素を伴う1mLKMT;または3.0μl/mLの2赤食用色素を伴う1mLKMTのいずれかを用いて希釈した。精子細胞サンプルを次いで、フローサイトメトリー分析により、死数および分離について調べ、ならびに運動性について、処理されたサンプルをさらに140μlKMT:20μl精子細胞;140μlKMT2mMカフェイン:20μl精子細胞;140μlKMT、2.5mMNaPyruvate:20μl精子細胞のいずれかに希釈することにより調べた。図3をここで主に参照すると、高いpHで染色している精子細胞は、フローサイトメトリー分析により調べた際の死精子細胞を減少させ得ることが理解され得る。図4をここで主に参照すると、精子細胞を染色するためのインキュベーション時間を一般的な時間の60分間から30分間へと短縮させることは、死精子細胞を減少させ得、ならびにフローサイトメトリーの間におけるY染色体保有精子細胞からX染色体保有精子細胞の分離能を高め得ることが理解され得る。図5をここで主に参照すると、刺激物例えば、約2mMの濃度のカフェインを添加することは、精子細胞における運動性を刺激し得、ならびに特にストレスを与えたウマ精子細胞を刺激することにおいて効果的であり得ることが理解され得る。従って、本発明はさらに、その溶液内で哺乳動物の一種のオスから収集した精子細胞を蛍光色素例えば、Hoechstを用いて染色を行う、その溶液のpHを調整する工程を包含し得る。染色溶液のpHは、特定の精子細胞サンプルにとって望ましいpHまたは染色した精子細胞サンプルの特定のタイプにおける死数が減少または最小となるpHを選択するため、約7.2pH~8.0pHの間まで高められ得る。特に、ウマ雄から収集した精子細胞に関しては、染色溶液のpHは、約7.5pH~8.0pHの間まで高められ得ならびに特に染色した精子細胞サンプルにおける死ウマ精子細胞を減少させるため7.9pHであり得る。本発明はさらに、精子細胞を、染色した精子細胞サンプルにおける死数を減少させるために、または運動性を増加させるために、またはフローソートまたは他のDNA含有量に基づいて選別する際、Y染色体保有精子細胞からX染色体保有精子細胞の分離能を高めるために、染色溶液の中でインキュベートする時間を短縮させる工程を包含し得る。本発明において使用した用途に依存して、精子細胞を染色溶液に曝すか、染色溶液内でインキュベートするか、または、そうでなければ染色溶液内に懸濁する時間を、実質的に短縮させ得る。この時間の短縮率は、一般的に使用される時間量から10、20、30、40、50、またはそれ以上であり得;またはフローソート中の分離能を有意に減少させることなく、蛍光色素を用いて染色することによる死精子細胞数を減少させる時間の減少であり得;または染色したサンプルにおける精子細胞の死数が有意に増加することなくフローソート中の分離能を高める結果を生ずる時間の短縮であり得る。ウマ精子細胞サンプルが、例えば、Hoechstの染色溶液内でインキュベートされる上記時間の量は、より大きなフローソートする分離能を得るため、または精子細胞の死数を減少させるため、約25分間~約50分間との間であり得、そして特に30分間であり得る。実際の時間の短縮は、染色する直前の精子細胞の集団内における運動性、精子細胞の死数、および流動選別分解能との間に望ましいバランスを与えるために決定され得る。本発明はさらに、精子細胞サンプルに刺激物を加える工程を包含し得る。この刺激物は、カフェイン、またはカフェインに類似する刺激物、または精子細胞の運動性もしくは他の精子細胞機能もしくは性質力学的または生理学的いづれにせよを高める刺激物であり得る。刺激物は、精子細胞を操作工程例えば、保存、輸送、希釈、流動選別、受精、等に曝す前または曝した後に添加され得る。特に、約1mMと約5mMとの間の濃度のカフェインを使用し得、そして特にウマ精子細胞に関しては、2mM濃度のカフェインを使用し得る。実施例6十頭の種馬からの射精液を始めに、容量、精子細胞濃度、および運動性について調べた。各射精液の一部の残りは、Na2H2PO4KMTを用いて調製したKMTまたはNaH2PO4KMT-mod.を用いて調製したKMTのいずれかに25×106精子細胞/mLとなるように希釈し、そして18時間、5°C、10°C、15°C、20°C、25°Cで保存した。操作する精子細胞の100μlのアリコートは次いで、100μlのKMTまたは100μlのKMT、4mMのカフェインを用いて希釈し、そして精子細胞の運動性を調べた。各サンプルの操作する精子細胞の一部の残りを、600gで10分間遠心した。その上澄みを約0.75ml吸引し、そしてペレット化した精子細胞を、その容量に再懸濁した。遠心後、操作する精子細胞の運動性を、520μlのKMTまたは520μlのKMT、2mMのカフェインのいずれかを用いて、各サンプルの20μlを希釈した後、調べた。7.1pHに調製された各操作群の200×106精子細胞/mL、12.4μlHoechstであるアリコートを、34°Cで60分間インキュベートした。染色した精子細胞サンプルは、1.5μl/mLの5赤食用色素を伴う1mLのKMTを用いて希釈した。希釈度が大きいサンプルは次いで、3mLのKMTまたは3mLのKMT-mod.および22mLの5mMHBGM-3を175μlの染色した精子100×106精子細胞/mLに加えることにより調製した。操作する精子細胞サンプルを次いで、フローサイトメトリー分析により、死数および分離について調べ、そして運動性について、操作するサンプルをさらに140μlKMT:20μl精子細胞;または140μlKMT2mMカフェイン:20μl精子細胞へ希釈することにより調べた。図6をここで主に参照すると、精子細胞の総合的な運動性および直進性の運動性は、NaH2PO4を用いて調製された改変したKMTの使用により生じた結果を示す。図7をここで主に参照すると、操作工程例えば、流動選別するために染色することおよび精子細胞を希釈する工程の後の精子細胞の総合的な運動性および直進性の運動性は、精子細胞を刺激物例えば、カフェインに曝しても、曝さなくても、NaH2PO4を用いて調製された改変したKMTの使用により、増加し得ないことが理解され得る。図8をここで主に参照すると、温度は、総合的な運動性および直進性の運動性を高めるために、哺乳動物の一種のオスからから得た精子細胞の保存、操作、移動、または輸送に合わせて調節され得ることが理解され得る。哺乳動物の特定種由来のいくつかの精子細胞に関しては、約15°Cで、保存、操作、移動、または輸送することは、精子細胞または刺激した精子細胞の総合的な運動性または直進性の運動性の最も高いレベルを維持し得る。図9をここで主に参照すると、精子細胞を、染色プロトコールの前に移動、保存、または操作する上記温度を、精子細胞、または刺激した精子細胞、またはカフェインを用いて刺激した精子細胞の総合的運動性または直進性運動性を増加させるため調節し得ることが理解され得る。本発明の特定の実施形態ウマ精子細胞を操作、保存、移動または輸送することを含むに関して、約5°C~約25°Cの間である温度は、精子細胞の総合的な運動性および直進性の運動性を高め得る。さらに、本発明に従って処理した刺激した精子細胞ウマ精子細胞を、カフェインを用いて刺激するか、操作するか、保存するか、または移動させることを含む、本発明の実施形態を含むに関しては、5°C~約20°Cとの間である温度はまた、総合的な運動性および直進性の運動性を高め得る。特に、刺激したウマ精子細胞を操作するために使用される本発明の実施形態は、刺激したウマ精子細胞の操作、保存、または移動を行うため約10°C~約15°Cとの間の温度を含む。図10をここで主に参照すると、精子細胞を、染色プロトコールの前に移動、保存、または操作する上記温度が、染色プロトコールの後、精子細胞、または刺激した精子細胞、またはカフェインを用いて刺激した精子細胞の総合的運動性または直進性運動性を増加させるため調節され得るということを理解し得る。本発明の特定の実施形態ウマ精子細胞を操作、保存、移動または輸送することを含むに関しては、約5°Cから約20°Cとの間である温度は、染色プロコールの後の精子細胞の総合的な運動性および直進性の運動性を高め得る。さらに、本発明に従って処理した刺激した精子細胞ウマ精子細胞を、カフェインを用いて刺激するか、操作するか、保存するか、または移動させることを含む、本発明の実施形態を含むに関しては、5°C~約20°Cとの間である温度はまた、総合的な運動性および直進性の運動性を高め得る。特に、刺激したウマ精子細胞を操作するために使用される本発明の実施形態は、刺激したウマ精子細胞の操作、保存、または移動を行うため約10°C~約15°Cとの間の温度を含む。図11をここで主に参照すると、染色後の精子細胞の死数上記が、15°Cで精子細胞を保存または輸送することにより減少し得ることを理解し得る。実施例7十二頭の種馬からの射精液を始めに、容量、精子細胞濃度、および運動性について調べた。各射精液の一部の残りを、KMT内に25×106精子細胞/mLとなるように希釈し、そして18時間、15°Cで保存した。保存後の運動性を、次いで100μlのKMT、4mMのカフェインを用いて希釈する操作する精子細胞の100μlのアリコートを使用することにより調べた。各サンプルの操作する精子細胞の一部の残りを、600gで10分間遠心した。その上澄みを約1.50mLになるまで吸引し、そしてペレット化した精子細胞を、その容量に再懸濁した。操作する精子細胞は、400×106精子細胞/mLとなるように希釈し、アリコートは以下の操作:1.200×106精子細胞/mL、8.68μlHoechst7.1pH、34°Cで60分間インキュベートする2.200×106精子細胞/mL、10.54μlHoechst7.1pH、34°Cで60分間インキュベートする3.200×106精子細胞/mL、12.44μlHoechst7.1pH、34°Cで60分間インキュベートする4.200×106精子細胞/mL、8.68μlHoechst7.1pH、34°Cで60分間インキュベートする5.200×106精子細胞/mL、10.54μlHoechst7.1pH、34°Cで30分間インキュベートする6.200×106精子細胞/mL、12.44μlHoechst7.1pH、34°Cで30分間インキュベートする7.100×106精子細胞/mL、4.34μlHoechst7.1pH、34°Cで60分間インキュベートする8.100×106精子細胞/mL、5.27μlHoechst7.1pH、34°Cで60分間インキュベートする9.100×106精子細胞/mL、6.22μlHoechst7.1pH、34°Cで60分間インキュベートする10.100×106精子細胞/mL、4.34μlHoechst7.1pH、34°Cで30分間インキュベートする11.100×106精子細胞/mL、5.27μlHoechst7.1pH、34°Cで30分間インキュベートする12.100×106精子細胞/mL、6.22μlHoechst7.1pH、34°Cで30分間インキュベートするのために染色チューブに移動させた。各染色した精子細胞のサンプルを、KMT、0.75μl/mL5赤食用色素を用いて75×106精子細胞/mLとなるように希釈した。高い希釈のサンプルは次いで、3mLKMTおよび22mL5mMHBGM-3を234μlの染色した精子細胞サンプル75×106精子細胞/mLに加えることにより調製した。各染色した精子細胞サンプルを次いで、フローサイトメトリー分析により死数および分離について調べ、そして運動性を、KMTおよびKMT、2mMカフェイン内で調べた。高希釈サンプルを次いで、3mLKMTおよび22mL5mMHBGM-3を234μlの染色した精子細胞サンプル75×106精子細胞/mLに加えることにより調製し、室温で約1.5時間インキュベートした。高希釈精子細胞サンプルを次いで、KMTおよびKMT、4mMカフェイン内の運動性について評価した。図12をここで主に参照すると、染色中の精子細胞濃度が、約100M/mL対200M/mLであるとき、精子細胞は、分離で損失することなく、より生存し続けることを理解し得る。精子細胞操作システムの発明の特定の実施形態はさらに、精子細胞を減じる、最小化する、または染色後のサンプル内の死数が、精子細胞の希釈のさらなる増加で減少しない精子細胞の濃度を得るために約75M/mlと200M/mlとの間となるように一種の哺乳動物のオスから収集した精子細胞を希釈する工程を包含し得る。特に、本発明のいくつかの実施形態に関して、精子細胞の濃度は、上記染色手順に続くフローサイトメトリーにより調べた際に死数を減少させるため、200M/ml未満であり得ならびにウマ精子細胞に関しては、約100M/mlであり得る。図13をここで主に参照すると、染色濃度を高めるにつれて、より少数の精子細胞が生存し、ならびに分離能は増加することを理解し得る。図14をここで主に参照すると、染色時間が、フローサイトメトリーにより評価するX染色体保有精子細胞集団およびY染色体保有精子細胞集団との間の分離能を損失することなく、実質的に短縮され得ることを理解し得る。従って、本発明の実施形態はさらに、染色した精子細胞サンプル内の死数が実質的にさらに減少しなくなるまで、上記染色プロトコール内で使用する染色濃度を減少させる工程を含み、そしてさらにY染色体保有流動細胞からX染色体保有精子細胞の分離能が、60未満の純度;または必要なまたは望ましくは、例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、または98未満の純度;またはオス哺乳動物のその種由来の精子細胞のために達成し得る濃度未満の選別された精子細胞;あるいは約500選別/秒から約1000選別/秒との間、約750選別/秒から約1250選別/秒との間、約1000選別/秒から約1500選別/秒との間;約1250選別/秒から約1750選別/秒との間;約1500選別/秒から約2000選別/秒との間;約1750選別/秒から約2250選別/秒との間;約2000選別/秒から約2500選別/秒との間;約2250選別/秒から約2750選別/秒との間;約2500選別/秒から約3000選別/秒との間;約2750選別/秒から約3250選別/秒との間;約3000選別/秒から約3500選別/秒との間;約3250選別/秒から約3750選別/秒との間;約3500選別/秒から約4000選別/秒との間;約3750選別/秒から約4250選別/秒との間;約4000選別/秒から約4500選別/秒との間;約4250選別/秒から約4750選別/秒との間;約4500選別/秒から約5000選別/秒との間以上の選別速度で、X染色体保有するものまたは、Y染色体保有するものの内一つまたは両方を別のものから選別する流れ以上を、生じるまで使用する染色濃度を減少させる工程を含み得る。実施例8.雌雄識別し凍結した精液を用いた雌ヘラジカの受精コロラドおよびミネソタの3齢から6齢の雌ヘラジカを、12日から14日の間、膣へのプロゲストロンCIDRの挿入により、9月に発情期を同調させた。CIDRを除去し、eCGの200IUを、筋肉内に投与し、そしてヘラジカを、60時間後に時間を合わせ、受精させた。新鮮な精液を、5齢の雄ヘラジカから電気-射精を介して収集し、そして純射精液として、精子-選別研究室への輸送のため約20°Cまで4時間をかけてゆっくりと冷却した。射精液は、15,000×gで10秒間、1.5mlのアリコートを遠心することにより、染色するために1×109精子/mlまで濃縮した。精液を、112μMHoechst33342内、200×106精子細胞/mlでTALP培地内において34°Cで45分間、インキュベートし、次いで選別するために100×106/mlまで希釈した。精子を、X染色体保有精子およびY染色体保有精子のDNA含有量の違いに基づいて選別した。X染色体保有ヘラジカ精子は、Y染色体保有精子よりも3.8多いDNAを含んだ。精子を、TRIS-ベースのシース液を用いて50psiでMoFlo登録商標SXオペレーティングを使用し、4時間にわたってフローソートした。アルゴンレーザーの351および364バンド150mWを放出し、Hoechst33342色素を励起するを、DNAに対し結合させた。X染色体保有精子およびY染色体保有精子の両者を収集したDNAに対し超音波操作した精子アリコートを再分析することにより約92の純度として確認したものを、20卵黄-TRIS増量剤を2ml含むチューブへ、約4,700精子/秒で収集した。選別した15mlの容量を連続的に収集した。各性別の約110×106精子を選別し、90分間にわたって5°Cまで冷却した。増量剤を含む等量のグリセロール12を、選別する容量とするために5°Cで加えた。30mlを含む選別した精子アリコートを、850×gで20分間、4°Cで遠心することにより濃縮した。精子ペレットを、貯蔵し、21.7×106精子細胞/mlとなるように調整し、そして0.25mlのストローにロードした。5×106全精子を含む各ストローを、液体窒素の蒸気内で凍結した。コントロールとして、同じ射精液由来の5×106全精子を、性識別した精子と同様に、同時に0.25mlのストロー内で凍結した。37°Cで30秒間解凍した後、精子の65および60コントロールおよび性識別したもの、それぞれは、目測により決定される運動性を徐々に有した。3つの異なる場所および3つの異なる管理計画で雌ヘラジカを、慣用的な経-子宮頸部trans-cervical精液沈着を用いて子宮体内で受精させた。妊娠を、妊娠-特異的プロテインBBioTracking,Moscow,Idahoについて血液を分析することにより受精後40日に決定した。一つの場所における10頭の雌ヘラジカを、受精の時に貧状態とし、そして妊娠は、性識別した精子およびコントロールの精子のいずれを用いても、達成しなかった。性識別した精子を用いた他の位置における妊娠率61;11/18は、コントロールの受精における妊娠率50;3/6と類似した。これらの妊娠率性識別した精子およびコントロールの精子は、一般的なヘラジカの人工授精において使用するよりもより少量の精子より生じた。11頭中9頭82の性識別された子ヘラジカは、予測された性別であった。本発明はさらに、任意の上記本発明の実施形態に基づいて産生された哺乳動物を含み得、または本発明の様々な実施形態X染色体保有精子細胞の富化された集団または、Y染色体保有精子細胞の富化された集団を有する精子細胞人工授精サンプル、または哺乳動物の特定種を用いる受精に対して使用する一般的な数と比較して少数の精子細胞を含む精子細胞受精サンプルを使用する本発明の任意の実施形態に基づいて産生された哺乳動物、または、上記のような本発明に基づいて産生されたヘラジカ子孫を提供するに基づく哺乳動物の性別の事前決定を含み得る。前述から容易に理解され得るように、本発明の基本的な概念は、様々な方法で具体化され得る。それは、精子細胞操作を成し得る技術および装置の両方含んでいる両精子細胞操作システムを含む。本出願において、様々な精子細胞操作技術を、記載した様々な装置により達成されることを示す結果の一部として、および本来的に利用するための工程として開示する。それらは単に、意図したようにおよび記載したように装置を利用したことによる当然の結果である。さらに、いくつかの装置を、開示する一方で、これらは特定の方法により達成されるだけではなく、複数の方法に変化し得るものであると理解すべきである。重要なことは、前述の全てに対するのと同様に、これらの一面の全ても、この開示により包含されると理解すべきである。この非暫定的な用途を含む議論が、基本的な記載として役立つことを意図する。読者は、特定の議論が可能な全ての実施形態を明確に記載したものではないかもしれないことに気づくべきである;多くの代替方法を、潜在的に含む。また、本発明の全ての性質を完全に説明しておらず、ならびに、いかに各特徴またはエレメントが実際に、幅広い機能または非常に様々な代替方法または等価のエレメントを表すものであるか明確に示していないかもしれない。さらに、これらは、暗黙的に本明細書中の開示内に含まれる。本発明を、装置-優先の用語で記載する場合、装置の各エレメントは、暗黙的に機能を果たす。装置の請求項は、記載した装置を含むだけではなく、方法およびプロセスの請求項も、本発明および各エレメントが果たす機能を扱うため含まれ得る。概要および用語を、請求の範囲に限定することを意図しない。さらに、本発明の様々な各エレメントおよび特許請求の範囲また、多様な様式により達成し得る。本開示は、そのような各バリエーションを含むものとして理解すべきであり、任意の装置実施形態、方法実施形態またはプロセス実施形態のバリエーション、または単にさらにこれらの任意のエレメントのバリエーションの実施形態のはずである。特に、開示が本発明のエレメントに関する場合、各エレメントに対する言葉は、等価な装置の用語または等価な方法の用語たとえ機能または結果のみが、同一であってもにより表現され得る。そのような等価な用語、幅広い用語、またはより一般的でさえある用語は、各エレメントまたは作用の記載内に含まれると考えるべきである。そのような用語は、本発明が権利化されたところに内在する広い範囲を明らかにすることが望まれた場合に置換され得る。一つの例として、全ての作用は、作用を獲得するための手段として、または作用を生じるエレメントとして表現され得ると理解すべきである。同様に、開示した各物理学的なエレメントは、物理学的なエレメントが容易にする作用の開示を含むと理解すべきである。この最終の局面に関しては、一つの例として、フローソーターの開示は、フローソートflow-sortingの作用の開示を含むと理解すべきであり明確に討議されようとされまいと、逆に、フローソートの作用の効果的な開示があり、そのような開示は、フローソーターおよびフローソートの手段さえの開示を含むと理解されるべきである。そのような変更および代替的な用語は、記載内に明確に含まれるものと理解されるべきである。本特許出願内で述べる任意の原理、規則、調節、もしくは法則の作用、または本特許出願内で述べる特許、刊行物、もしくは他の参考文献は、参考として本明細書中に援用する。さらに、各用語の使用に関して、本出願中その用語の利用が、そのような解釈に矛盾しない場合は、一般的な辞書の定義が、各用語、ならびに参考として、本明細書中に援用され、全ての定義、代替用語、および同意語例えば、theRandomHouseWebster’sUnabridgedDictionary,第二版に含まれるが参考として援用されるものとして理解すべきであると、理解すべきである。そのため、出願人は、少なくとも、i本明細書中に開示しおよび記載したような各精子細胞操作装置、ii開示しおよび記載した関連方法、iii各これら装置および方法の類似物、等価物およびさらに黙示のバリエーション、iv開示しおよび記載したように示した各機能を果たすそれら代替的な設計、v開示しおよび記載した機能を果たすように黙示された各機能を達成するそれら代替的な設計および方法、vi別個の発明および独立の発明として示した各特徴、構成要素、および工程、vii開示した様々なシステムまたは構成要素により高められる用途、viii前記システムまたは構成要素により産生する結果産物、およびix実質的に本明細書中前記したようなおよび任意の付随的な実施例を参照した方法および装置、x開示した各エレメントの様々な組み合わせおよび様々な置換、およびxi提示した各独立した請求項もしくは概念および全ての独立した請求もしくは概念に依存するような潜在的に従属的な各請求項もしくは概念を特許請求するとして理解すべきである。これに関して、実際的理由からおよび潜在的な数百の請求項を加えることを回避するために、出願人は、初めに従属するものだけを伴う請求項を最終的に請求し得るものと理解すべきである。支持は、任意の他の独立の請求項または概念の下、従属するものまたはエレメントとして、一つの独立の請求項または概念の下、提示した任意の様々な従属するものまたは他のエレメントの付加を認める新規事項の法律欧州特許条約法1232および米国特許法35USC132または他のそのような法が挙げられるがそれらに限定されないの下必要とされる程度まで存在するものと理解すべきである。さらに、移行句含むcomprisingの使用使用された場合、または使用された時は、従来の特許請求の範囲の解釈に基づいて、本明細書中の追加設定型open-end請求項を維持するために使用する。そのため、文脈上他の意味を求める場合を除き、用語含むcompriseまたはバリエーション例えば、comprisesもしくはcomprisingは、任意の他のエレメントまたは工程またはエレメントの群または工程の群を排除せず、明確に規定されたエレメントまたは工程またはエレメントの群または工程の群を含むことを意図すると理解すべきである。そのような用語は、出願人に法律的に認められ得る最も広い適用範囲が与えられるように、最も広範な様式で解釈すべきである。"