"ポリペプチドであって、aCH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む細胞外部分、及びb非免疫グロブリン膜貫通部を含むポリペプチド。免疫グロブリン重鎖定常領域がさらに、少なくともヒンジ領域の一部を含む、請求項1に記載のポリペプチド。免疫グロブリン重鎖定常領域がFc領域を含む、請求項1又は2に記載のポリペプチド。免疫グロブリン重鎖定常領域がIgA,IgD,IgE,IgG、IgM抗体又はそれらの任意のサブタイプである、請求項1~3のいずれか一項に記載のポリペプチド。免疫グロブリン重鎖定常領域がIgG1又はIgG2である、請求項1~4のいずれか一項に記載のポリペプチド。免疫グロブリン重鎖定常領域がヒト免疫グロブリン重鎖定常領域である、請求項1~5のいずれか一項に記載のポリペプチド。免疫グロブリン重鎖定常領域がマウス免疫グロブリン重鎖定常領域である、請求項1~5のいずれか一項に記載のポリペプチド。免疫グロブリン重鎖定常領域が、配列番号2、配列番号4、配列番号6、又は配列番号8を含む、請求項1~5のいずれか一項に記載のポリペプチド。膜貫通部が、CD4,CD8、クラスIMHC、クラスIIMHC、CD19、T細胞受容体α鎖及びβ鎖、CD3、zeta鎖、ICAM1CD54、ICAM2、ICAM3、ICAM4、ICAM5、CD28、CD79a、CD79b、及びCD2から成る群から選択される、膜貫通ドメインの少なくとも一部を含む、請求項1~8のいずれか一項に記載のポリペプチド。膜貫通部が配列番号13又は配列番号16を含む、請求項1~9のいずれか一項に記載のポリペプチド。膜結合性であり、免疫グロブリン重鎖領域が細胞表面上に発現される、請求項1~10のいずれか一項に記載のポリペプチド。抗原結合部位を有しない、請求項1~11のいずれか一項に記載のポリペプチド。第2のポリペプチドを有するヘテロ二量体分子を形成することができる、請求項1~12のいずれか一項に記載のポリペプチド。第2のポリペプチドが、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、請求項13に記載のポリペプチド。第2のポリペプチドが免疫グロブリンFc領域を含む、請求項13又は14に記載のポリペプチド。第2のポリペプチドが、無作為抽出されたポリペプチドを含む、請求項13~15のいずれか一項に記載のポリペプチド。第2のポリペプチドが免疫グロブリン重鎖を含む、請求項13に記載のポリペプチド。免疫グロブリン重鎖が免疫グロブリン軽鎖と結合する、請求項17に記載のポリペプチド。第2のポリペプチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンを含む、請求項13~18のいずれか一項に記載のポリペプチド。第2のポリペプチドと少なくとも1つのジスルフィド結合を形成することができる、請求項13~19のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヘテロ二量体抗体分子を形成する免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアと、少なくとも1つのジスルフィド結合を形成することができる、請求項1~12のいずれか一項に記載のポリペプチド。ヘテロ二量体抗体分子が1つの抗原結合部位を含む、請求項13~21のいずれか一項に記載のポリペプチド。分泌抗体と結合しない、請求項1~22のいずれか一項に記載のポリペプチド。配列番号10、配列番号12、配列番号22、配列番号23、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号31、又は配列番号32に対し少なくとも80相同的な配列を含むポリペプチド。配列番号10、配列番号12、配列番号22、配列番号23、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号31、又は配列番号32を含むポリペプチド。配列番号30、配列番号31、又は配列番号32に対し少なくとも80相同的な配列を含むポリペプチド。配列番号30、配列番号31、又は配列番号32を含むポリペプチド。本質的に配列番号30、配列番号31、又は配列番号32から成るポリペプチド。配列番号9、配列番号11、配列番号24、配列番号25、配列番号27、又は配列番号29によりコードされる配列を含むポリペプチド。請求項1~29のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む抗体分子。請求項30の抗体分子であって、a免疫グロブリン重鎖、及びb免疫グロブリン軽鎖をさらに含む、抗体分子。ポリペプチドが、免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアのFc領域と少なくとも1つのジスルフィド結合を形成する、請求項30又は31に記載の抗体分子。単一の抗原結合部位を含む、請求項30~32のいずれか一項に記載の抗体分子。請求項1~29のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。配列番号9、配列番号11、配列番号24、配列番号25、配列番号27、又は配列番号29に対し少なくとも80相同的である配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離されたポリヌクレオチド。配列番号9、配列番号11、配列番号24、配列番号25、配列番号27、又は配列番号29のポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。請求項34~36のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。請求項34~37のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又はベクターを含む宿主細胞。請求項1~33のいずれか一項に記載のポリペプチド又は抗体分子を含む宿主細胞。請求項34~37のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又はベクターで細胞を形質移入することを含む、宿主細胞の製造方法。形質移入された細胞がポリペプチドを発現する、請求項40に記載の方法。細胞が一時的に形質移入される、請求項40又は41に記載の方法。細胞が安定的に形質移入される、請求項40又は41に記載の方法。ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが細胞のゲノムに統合された、請求項40に記載の方法。ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが安定的に発現される、請求項40、41、43、又は44のいずれか一項に記載の方法。ポリペプチドが細胞の表面に発現される、請求項40~45のいずれか一項に記載の方法。細胞の表面上のポリペプチド発現を検出することを含む、請求項40~46のいずれか一項に記載の方法。細胞の表面上にポリペプチドを発現する細胞を単離することを含む、請求項40~47のいずれか一項に記載の方法。細胞が哺乳動物細胞である、請求項40~48のいずれか一項に記載の方法。細胞がマウス細胞である、請求項40~49のいずれか一項に記載の方法。細胞がヒト細胞である、請求項40~49のいずれか一項に記載の方法。細胞が融合パートナー細胞株である、請求項40~51のいずれか一項に記載の方法。細胞が、Sp2/0、Sp2/0-Ag14、YB2/0、K6H6/B5、NS-1、FO、Y3/Ag1.2.3、P3X63Ag8.653、HEK-293、293T、及びCHOから成る群から選択される、請求項40~48のいずれか一項に記載の方法。請求項40~53のいずれか一項に記載の方法により作製される宿主細胞。請求項34~37に記載のポリヌクレオチド又はベクターを含む宿主細胞。請求項1~33のいずれか一項に記載のポリペプチド又は抗体分子を含む宿主細胞。請求項1~33のいずれか一項に記載のポリペプチド又は抗体分子を発現する宿主細胞。少なくとも1つの追加ポリペプチドをさらに含む、請求項54~57のいずれかに記載の宿主細胞。少なくとも1つの追加ポリペプチドが、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、請求項58に記載の宿主細胞。少なくとも1つの追加ポリペプチドが免疫グロブリンFc領域を含む、請求項58に記載の宿主細胞。少なくとも1つの追加ポリペプチドが免疫グロブリン重鎖を含む、請求項58に記載の宿主細胞。少なくとも1つの追加ポリペプチドが免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項58~61のいずれか一項に記載の宿主細胞。少なくとも1つの追加ポリペプチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体を含む、請求項58に記載の宿主細胞。少なくとも1つの追加のポリペプチドが抗体である、請求項58~63のいずれか一項に記載の宿主細胞。ポリペプチドが第2のポリペプチドと少なくとも1つのジスルフィド結合を形成し、ヘテロ二量体分子を形成する、請求項58~64のいずれか一項に記載の宿主細胞。ポリペプチドが免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアと少なくとも1つのジスルフィド結合を形成し、ヘテロ二量体抗体分子を形成する、請求項58~65のいずれか一項に記載の宿主細胞。免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアが単一抗原結合部位を形成する、請求項66に記載の宿主細胞。ヘテロ二量体分子が細胞表面上に発現し、単一抗原結合部位を含む、請求項65~67のいずれか一項に記載の宿主細胞。ヘテロ二量体分子が分泌抗体と結合しない、請求項65~68のいずれか一項に記載の宿主細胞。請求項54~57のいずれか一項に記載の細胞を抗体産生細胞と融合することを含む、ハイブリドーマ細胞の製造方法。融合された細胞が細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する、請求項70に記載の方法。抗体産生細胞が抗体産生細胞集団である、請求項70又は71に記載の方法。抗体産生細胞が免疫化動物由来である、請求項70~72のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞が未処理動物由来である、請求項70~72のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞が、B細胞、プラズマ細胞、ハイブリドーマ、骨髄腫及び組換え細胞から成る群から選択される、請求項70~74のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞がマウス細胞である、請求項70~75のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞がヒト細胞である、請求項70~75のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞が複数のポリヌクレオチドを含む、請求項70~77のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項78に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが免疫グロブリン軽鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項78又は79に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項78又は79に記載の方法。複数のポリヌクレオチドがDNAライブラリーを含む、請求項78~81のいずれか一項に記載の方法。DNAライブラリーが免疫化動物の細胞から生成される、請求項82に記載の方法。DNAライブラリーが未処理ライブラリーである、請求項82に記載の方法。DNAライブラリーがcDNAライブラリーである、請求項82~84のいずれか一項に記載の方法。融合細胞が、複数のヘテロ二量体抗体分子を発現するハイブリドーマ細胞集団を含む、請求項70~85のいずれか一項に記載の方法。請求項70~86のいずれかに記載の方法により作製されるハイブリドーマ又はハイブリドーマライブラリー。請求項54~57のいずれか一項に記載の細胞を、複数のポリペプチドをコードする複数のポリヌクレオチドで形質移入することを含む細胞ライブラリーの製造方法。形質移入された細胞がヘテロ二量体分子を発現する、請求項88に記載の方法。ヘテロ二量体分子が形質移入された細胞の表面上に発現される、請求項89に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む複数のポリペプチドをコードする、請求88~90のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリンFc領域を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項88~90のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項88~90のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン軽鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項88~93のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項88~90のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが複数のポリペプチドをコードし、各ポリペプチドにa免疫グロブリンFc領域及びb無作為抽出されたポリペプチドが含まれる、請求項88~90のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドがDNAライブラリーを含む、請求項88~96のいずれか一項に記載の方法。DNAライブラリーが免疫化動物の細胞から生成される、請求項97に記載の方法。DNAライブラリーが未処理ライブラリーである、請求項97に記載の方法。DNAライブライブラリーがcDNAライブラリーである、請求項97~99のいずれか一項に記載の方法。DNAライブラリーが無作為抽出のポリペプチドライブラリーをコードする、請求項97に記載の方法。請求項88~101のいずれか一項に記載の方法により作製された細胞ライブラリー。ハイブリドーマ細胞集団を生成するため、請求項54~57のいずれか一項に記載の細胞を抗体産生細胞と融合させることを含む、特異的抗体を生成する細胞の同定方法。ハイブリドーマ細胞が、細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する、請求項103に記載の方法。ハイブリドーマ細胞集団を検出分子に接触させることを含む、請求項103又は104に記載の方法。検出分子と結合するハイブリドーマ細胞を同定することを含む、請求項105に記載の方法。検出分子に結合するハイブリドーマ細胞を単離することを含む、請求項105又は106に記載の方法。抗体産生細胞が抗体産生細胞集団である、請求項103~107のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞が免疫化動物由来である、請求項103~108のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞が未処理動物由来である、請求項103~108のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞が、B細胞、プラズマ細胞、ハイブリドーマ、骨髄腫及び組換え細胞から成る群から選択される、請求項103~110のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞がマウス細胞である、請求項103~111のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞がヒト細胞である、請求項103~111のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞が、複数のポリヌクレオチドを含む、請求項103~113のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項114に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン軽鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項114又は115に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項114に記載の方法。複数のポリヌクレオチドがDNAライブラリーを含む、請求項114~117のいずれか一項に記載の方法。DNAライブラリーが免疫化動物の細胞から生成される、請求項118に記載の方法。DNAライブラリーが未処理ライブラリーである、請求項118に記載の方法。DNAライブラリーがcDNAライブラリーである、請求項118~120のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞により作られる抗体が、組換え抗体、モノクロナール抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、又は抗体の断片である、請求項103~121のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞により作られる抗体が、モノ特異的抗体又は二重特異的抗体である、請求項103~122のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞により作られる抗体が一価抗体である、請求項103~122のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞により作られる抗体が、IgA,IgD,IgE,IgG若しくはIgM抗体又はそのサブタイプである、請求項103~124のいずれか一項に記載の方法。抗体産生細胞により作られる抗体が、IgG1抗体又はIgG2抗体である、請求項103~124のいずれか一項に記載の方法。検出分子がタンパク質又はその断片である、請求項105~126のいずれか一項に記載の方法。検出分子が対象の抗原である、請求項105~127のいずれか一項に記載の方法。検出分子が標識化されている、請求項105~128のいずれか一項に記載の方法。検出分子が蛍光団、発色団又は磁気化合物で標識化される、請求項129に記載の方法。検出分子と結合する細胞の同定はフローサイトメトリにより行われる、請求項106~130のいずれか一項に記載の方法。検出分子と結合する細胞の単離はFACSにより行われる、請求項107~131のいずれか一項に記載の方法。少なくとも1つのポリペプチドをコードする少なくとも1つのポリヌクレオチドで、請求項54~57のいずれか一項に記載の細胞を形質移入することを含む特異的抗体を生成する細胞の同定方法。形質移入された細胞が細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する、請求項133に記載の方法。形質移入された細胞を検出分子に接触させることを含む、請求項133又は134に記載の方法。検出分子と結合する細胞を同定することを含む、請求項135に記載の方法。検出分子と結合する細胞を単離することを含む、請求項135又は136に記載の方法。ポリヌクレオチドの少なくとも1つが、複数のポリペプチドをコードする複数のポリヌクレオチドを含む、請求項133~137のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項138に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン軽鎖を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項138又は139に記載の方法。複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子を含む複数のポリペプチドをコードする、請求項138~140のいずれか一項に記載の方法。複数のポリヌクレオチドがDNAライブラリーを含む、請求項138~141のいずれか一項に記載の方法。DNAライブラリーが免疫化動物の細胞から生成される、請求項142に記載の方法。DNAライブラリーが未処理ライブラリーである、請求項142に記載の方法。DNAライブラリーがcDNAライブラリーである、請求項142~144のいずれか一項に記載の方法。少なくとも1つのポリヌクレオチドが、組換え抗体、モノクロナール抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、又は抗体の断片であるポリペプチドをコードする、請求項133~145のいずれか一項に記載の方法。少なくとも1つのポリヌクレオチドが、モノ特異的抗体又は二重特異的抗体であるポリペプチドをコードする、請求項133~146のいずれか一項に記載の方法。少なくとも1つのポリヌクレオチドが、一価抗体であるポリペプチドをコードする、請求項133~146のいずれか一項に記載の方法。少なくとも1つのポリヌクレオチドが、IgA,IgD,IgE,IgG若しくはIgM抗体又はそのサブタイプであるポリペプチドをコードする、請求項133~148のいずれか一項に記載の方法。少なくとも1つのポリヌクレオチドが、IgG1抗体又はIgG2抗体であるポリペプチドをコードする、請求項133~149のいずれか一項に記載の方法。検出分子がタンパク質又はその断片である、請求項135~150のいずれか一項に記載の方法。検出分子が対象の抗原である、請求項135~151のいずれか一項に記載の方法。検出分子が標識化されている、請求項135~152のいずれか一項に記載の方法。検出分子が蛍光団、発色団又は磁気化合物で標識化されている、請求項153に記載の方法。検出分子と結合する細胞の同定をフローサイトメトリで行う、請求項136~154のいずれか一項に記載の方法。検出分子と結合する細胞の単離をFACSで行う、請求項137~155のいずれか一項に記載の方法。請求項34~37のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又はベクターで、抗体産生細胞を含む細胞ライブラリーを形質移入することを含む、特異的抗体を生成する細胞の同定方法。形質移入された細胞が細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する、請求項157に記載の方法。形質移入された細胞を検出分子と接触させることを含む、請求項157又は158に記載の方法。検出分子と結合する細胞を同定することを含む、請求項159に記載の方法。検出分子と結合する細胞を単離することを含む、請求項159又は160に記載の方法。細胞ライブラリーが、B細胞、プラズマ細胞、ハイブリドーマ、骨髄腫、及び組換え細胞から成る群から選択される、請求項151~161のいずれか一項に記載の方法。細胞ライブラリーがハイブリドーマライブラリーである、請求項151~162のいずれか一項に記載の方法。細胞ライブラリーがマウス細胞を含む、請求項151~163のいずれか一項に記載の方法。細胞ライブラリーがヒト細胞を含む、請求項151~163のいずれか一項に記載の方法。請求項103~165のいずれかに記載の方法により同定される細胞により生成される抗体。請求項107~132、137~156、又は161~165のいずれかに記載の方法により単離される細胞により生成される抗体。細胞ライブラリーであって、各細胞には、a請求項1~29のいずれか一項に記載の第1ポリペプチド、及びb2本のポリペプチドがヘテロ二量体分子を形成し得る、免疫グロブリン重鎖を含む第2ポリペプチドが含まれる、細胞ライブラリー。ヘテロ二量体分子が細胞表面上に発現される、請求項168に記載の細胞ライブラリー。各細胞がさらに免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項168又は169に記載の細胞ライブラリー。第2のポリペプチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子を含む、請求項168又は169に記載の細胞ライブラリー。ヘテロ二量体分子が単一抗原結合部位を含む、請求項168~171のいずれか一項に記載の細胞ライブラリー。細胞ライブラリーであって、各細胞には、a請求項1~29のいずれか一項に記載の第1ポリペプチド、及びb2本のポリペプチドがヘテロ二量体分子を形成し得る、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む第2ポリペプチド、が含まれる、細胞ライブラリー。ヘテロ二量体分子が細胞表面上に発現される、請求項173に記載の細胞ライブラリー。第2のポリペプチドに免疫グロブリンFc領域が含まれる、請求項173又は174に記載の細胞ライブラリー。第2のポリペプチドに、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子を含む、請求項173又は174に記載の細胞ライブラリー。第2のポリペプチドにさらに無作為抽出ポリペプチドが含まれる、請求項173に記載の細胞ライブラリー。請求項168~177のいずれか一項に記載の細胞ライブラリーを検出分子と接触させることを含む、細胞ライブラリーのスクリーニング法。検出分子と結合する細胞を同定することを含む、請求項178に記載の方法。検出分子と結合する細胞を単離することを含む、請求項178又は179に記載の方法。検出分子がタンパク質又はその断片である、請求項178~180のいずれか一項に記載の方法。検出分子が対象の抗原である、請求項178~181のいずれか一項に記載の方法。検出分子が細胞表面受容体、リガンド、抗体又はその断片である、請求項178~182のいずれか一項に記載の方法。検出分子は小分子である、請求項178~180のいずれか一項に記載の方法。検出分子は標識化されている、請求項178~184のいずれか一項に記載の方法。検出分子と結合する細胞の同定がフローサイトメトリで行われる、請求項179~185のいずれか一項に記載の方法。検出分子に結合する細胞の単離がFACSで行われる、請求項180~186のいずれか一項に記載の方法。請求項178~187のいずれか一項に記載の方法により同定される細胞。請求項178~187のいずれかに記載の方法により単離される細胞。a免疫グロブリンをコードするDNA、及びb無関係DNAの過剰量を宿主細胞に形質移入することを含む、宿主細胞の表面上のヘテロ二量体抗体分子の発現調節方法。免疫グロブリンをコードするDNAの無関係DNAに対する割合が、1:10~1:1,000,000である、請求項190に記載の方法。免疫グロブリンをコードするDNAがプラスミドDNAであり、無関係DNAがプラスミドDNAである、請求項190~191に記載の方法。宿主細胞が請求項1~29に記載のポリペプチド又は請求項34~36に記載のポリヌクレオチドを含む、請求項190~192のいずれか一項に記載の方法。免疫グロブリンが免疫グロブリン重鎖を含む、請求項190~193のいずれか一項に記載の方法。抗体が免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項190~193のいずれか一項に記載の方法。免疫グロブリンが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子である、請求項190~195のいずれか一項に記載の方法。免疫グロブリンをコードするDNAがDNAライブラリーである、請求項190~195のいずれか一項に記載の方法。DNAライブラリーが免疫化動物の細胞から生成される、請求項197に記載の方法。DNAライブラリーが未処理動物の細胞から生成される、請求項197に記載の方法。DNAライブラリーがcDNAライブラリーである、請求項197~199のいずれか一項に記載の方法。宿主細胞を検出分子と接触させることをさらに含む、請求項190~200のいずれか一項に記載の方法。検出分子と結合する宿主細胞を同定することを含む、請求項201に記載の方法。検出分子と結合する宿主細胞を単離することを含む、請求項201及び202に記載の方法。ヘテロ二量体分子であって、ai第1の二量体形成ドメインを含む細胞外部分、及びii膜貫通部の両者を含んだ第1ポリペプチド、並びにb第2の二量体形成ドメインを含む第2ポリペプチドが含まれる。第1の二量体形成領域が免疫グロブリン定常領域である、請求項204に記載のヘテロ二量体分子。第1の二量体形成ドメインが免疫グロブリン重鎖定常領域である、請求項204又は205に記載のヘテロ二量体分子。第2の二量体形成ドメインが免疫グロブリン定常領域である、請求項204~206のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。第2の二量体形成ドメインが免疫グロブリン重鎖定常領域である、請求項204~207のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。第1のポリペプチドが請求項1~29のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む、請求項204に記載のヘテロ二量体分子。第2のポリペプチドが免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、請求項204~209のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。第2のポリペプチドが免疫グロブリンFc領域を含む、請求項204~210のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。第2のポリペプチドが免疫グロブリン重鎖を含む、請求項204~211のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。免疫グロブリン重鎖が免疫グロブリン軽鎖と結合する、請求項212に記載のヘテロ二量体分子。第2のポリペプチドが免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンを含む、請求項204~213のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。第1のポリペプチドが第2のポリペプチドと少なくとも1つのジスルフィド結合を形成する、請求項204~214のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。1つの抗原結合部位を含む、請求項204~215のいずれか一項に記載のヘテロ二量体分子。本発明は、細胞の表面上にヘテロ二量体分子を形成し得るポリペプチド類を含む、新規の膜結合性ポリペプチド類を提供する。また、関連するポリペプチド類及びポリヌクレオチド類、並びにポリペプチド類及びポリヌクレオチド類を含む細胞及び細胞ライブラリーも提供される。ポリペプチド類を含む宿主細胞の製造方法及び特定の個別細胞を同定及び単離するためのこれら細胞の利用方法がさらに提供される。また、細胞により生成される抗体、又は本方法により生成、単離、及び/若しくは同定される抗体も提供される。膜MabmIgG1、膜MabhIgG2、及び膜MabhIgG2-GFPを含む、新規の膜結合性ポリペプチド類をコードするヌクレオチドを含むコンストラクトが生成された実施例1。新規の膜結合性ポリペプチド類を発現する細胞が産生された。細胞株SP2/0-MTは、膜MAbmIgG1コンストラクトをSP2/0-Ag14細胞、すなわちマウス融合パートナー細胞株に形質移入することにより生成された実施例2。細胞株293-hMTは、膜MabhIgG2-GFPコンストラクトをHEK293細胞、すなわちヒト胚腎臓由来細胞株に形質移入することにより生成された実施例5。SP2/0-MT細胞は、細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現するハイブリドーマライブラリーを生成する免疫化動物由来の細胞と融合させるのに使用された。これらの膜結合性抗体分子は、標的抗原に特異的に結合する抗体を生成する細胞を検出し、単離するために使用された実施例3。新規のポリペプチド膜MabmIgG1をコードするポリヌクレオチドは、確立されたハイブリドーマライブラリーに形質移入され、得られた細胞は、その表面上のヘテロ二量体抗体分子を発現するために提示された。膜結合性抗体分子が、標的抗原に特異的に結合する抗体を生成する細胞を検出し、単離するために使用された実施例4。ハイブリドーマ融合法と形質移入法の両方を用いて、膜MAb技法を行った結果、無作為に選択されたクローンプラス0.6及び8と比較して、単離された抗原特異的正のクローンの割合プラス91及び84が劇的に増加した。膜MabhIgG2-GFPコンストラクトを、抗DLL4抗体をコードするDNAでHEK293細胞に形質移入した。フローサイトメトリの解析により、DLL4抗原に結合する形質移入された細胞の表面上にヘテロ二量体分子が存在することが示された実施例7。膜MAb技法を用いた検証試験により、抗DLL4抗体を含むヘテロ二量体分子を発現する細胞は、異なる抗体が大量の過剰物に発現される細胞集団から選択され得ることが示された実施例9。I.定義本発明の理解を促進するために、以下にいくつかの用語と表現を定義する。本明細書で使用する抗体という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも1つの抗原認識部位又は抗原結合部位を通じて、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又はそれらの組み合わせ等の標的を認識し、特異的に結合する免疫グロブリン分子を指している。本明細書で使用される抗体という用語には、インタクトなポリクロナール抗体、インタクトなモノクロナール抗体、抗体断片例えば、Fab、Fab、Fab2及びFv断片、単鎖FvscFv突然変異体、全体にわたり免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖が含まれる単鎖免疫グロブリン分子、少なくとも2つのインタクト抗体から生成される二重特異的抗体等の多重特異的抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原認識部位を含む融合タンパク質、及び抗体が所望の生物活性を示す限り抗原認識部位を含む、任意の他の修飾免疫グロブリン分子が包含される。さらに、抗体という用語には、ただ1つの結合部位を有する一価抗体分子が含まれる。抗体は、免疫グロブリンの主要な5種類のクラス、すなわち、IgA、IgD、IgE、IgG及びIgM抗体又はそのサブタイプ例えば、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及びIgA2のいずれかであり得、それぞれα、Δ、ε、γ、及びμと称される各抗体の重鎖定常ドメインの同一性に基づいている。本明細書で使用するFc領域という用語は、免疫グロブリン重鎖のC末端領域を指している。Fc領域は、ネイティブ配列Fc領域又はFc可変領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のFc領域の境界は可変的であってもよいが、免疫グロブリンのFc領域には通常、2つの定常ドメイン、すなわちCH2ドメイン及びCH3ドメイン、及び少なくともヒンジ領域の一部が含まれる。抗体断片という用語は、インタクト抗体の一部、及びインタクト抗体の抗原決定可変領域を指している。抗体断片の例として、Fab、Fab、Fab2及びFv断片、直線抗体、scFv抗体、及び抗体断片から形成される多重特異的抗体が含まれるが、これに限定されない。抗体の可変領域という用語は、抗体軽鎖の可変領域又は抗体重鎖の可変領域で、いずれか片方又はそれら組み合わせを指している。重鎖及び軽鎖の可変領域は、高度可変領域としても知られている、3つの相補性決定領域CDRsによりつながる4つの枠組み領域から成る。各鎖のCDRsは、枠組み領域により近接した位置に置かれ、他の鎖のCDRsと共に、抗体の抗原結合性部位の形成に寄与する。決定性CDRsには少なくとも2つの技法が存在する。すなわち、1種間配列変異性に基づく方式すなわち、Kabatら、1991、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国国立衛生研究所、メリーランド州ベテスダ、及び2抗原抗体複合体の結晶学研究に基づく方式Al-Lazikaniら、1997、分子生物学誌J.Molec.Biol.273:927-948である。さらに、CDRs決定を行う当技術分野において、これら二つの方式を組み合わせて使用することもできる。モノクロナール抗体という用語は、高度特異的認識に関与する均質な抗体集団及び単一の抗原決定基又はエピトープの結合を指している。これは、通常、異なる抗原決定基に対し向けられる異なる抗体の混合物を含むポリクローナル抗体と対照的である。モノクロナール抗体という用語は、インタクトなモノクロナール抗体及び全長モノクロナール抗体の双方、並びに、抗体断片Fab、Fab、Fab2及びFv断片、scFv変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。モノクロナール抗体は、ハイブリドーマ生成、ファージ選択、組換え発現、及び形質移入動物を含むがこれに限定されない、任意の数の技法により作製される抗体のことを指している。ヒト化抗体という用語は、最小限非ヒト例えば、マウスの配列を含む特異的免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、又はその断片である、非ヒト例えば、マウスの抗体のフォームを指している。ヒト抗体という用語は、ヒトにより生成される抗体、又は当技術分野で知られている任意の技法を用いて作製される、ヒトが生成する抗体に相応するアミノ酸配列を有する抗体を指している。ヒト抗体に関するこの定義には、インタクト抗体若しくは全長抗体、その断片、及び/又は少なくとも1つのヒト重鎖ポリペプチド及び/若しくはヒト軽鎖ポリペプチド、例えば、マウス軽鎖ポリペプチド及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体等の抗体が含まれる。キメラ抗体という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が、2又はそれ以上の種由来である抗体を指している。典型的には、軽鎖と重鎖双方の可変領域は、所望の特異性、近似性、及び/又は機能性を有する1種類の哺乳動物例えば、マウス、ラット、ラビット由来の抗体の可変領域に相応し、一方、定常領域は、種における免疫反応の誘導を避けるために、別の種通常はヒト由来の抗体の配列と相同である。エピトープ及び抗原決定基は、本明細書においては同義で使用され、特定の抗体により認識され、特異的に結合することができる抗原の部分を指している。抗原がポリペプチドの場合、エピトープは、連続するアミノ酸しばしば直線エピトープと称されるとタンパク質の三次フォールディングしばしばコンフォメーション性エピトープと称されるにより並置される非連続アミノ酸の双方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、タンパク質変性の際に保持されるが、三次フォールディングにより形成されるエピトープは、典型的にはタンパク質変性時に消失する。エピトープには、典型的には、独自の空間コンフォメーションの中の少なくとも3個のアミノ酸、より通常としては、少なくとも5個又は8~10個のアミノ酸が含まれる。本明細書で使用される非免疫グロブリンという用語は、抗体免疫グロブリン鎖ではないポリペプチドを指している。本明細書で使用される非免疫グロブリンには、免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーも包含される。特異的結合及び特異的に結合することという用語は、結合剤又は抗体が、無関係のタンパク質等の代替物質とよりも頻繁に、より迅速に、より長い間、より類似して、又はこれらの幾つかの組み合わせで、エピトープ又はタンパク質と反応又は結合するという意味である。ある実施形態では、特異的結合とは、例えば、抗体が約0.1mM又はそれ以下のKDを有するタンパク質と結合する、だが、より通常としては、約1μM未満のKDを有するタンパク質と結合するという意味である。ある実施形態では、特異的結合とは、抗体が、少なくとも約0.1μM若しくはそれ以下、少なくとも約0.01μM若しくはそれ以下、又は少なくとも約1nM若しくはそれ以下のKDを有するタンパク質に結合するという意味である。異種の相同なタンパク質間の配列同一性の故に、特異的に結合することには、1より多くの種例えば、マウスFZD及びヒトFZDにおける特定のタンパク質を認識する抗体が含まれ得る。同様に、ポリペプチド配列の特定の領域における異なるタンパク質間の相同性の故に、特異的に結合することには、1より多くのタンパク質例えば、ヒトFZD5及びヒトFZD8を認識する抗体又は他のポリペプチド若しくは薬品が含まれ得る。第1の標的に特異的に結合する抗体又は結合部分は、第2の標的に特異的に結合するかもしれないし、しないかもしれないことが理解される。そのように、特異的に結合することは、排他的結合、すなわち、単一の標的への結合が含まれ得るとしても必ずしも求められるわけではない。よって、抗体は、ある実施形態では、1より多くの標的と特異的に結合してもよい。ある実施形態では、複数の標的が、抗体上の同じ抗原結合部位と結合することもあり得る。例えば、抗体は、ある実施形態では、2つの同一の抗原結合部位を含み、それぞれ2又はそれ以上のタンパク質上の同じエピトープと特異的に結合することもある。一般に、結合という表現は特異的に結合するという意味であるが、必ずしもそうではない。ポリペプチド及びペプチド及びタンパク質という用語は、本明細書において同義に使用されており、任意の長さのアミノ酸ポリマーを指している。ポリマーは、直線状でも分枝状でもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸により介在されてもよい。用語はまた、天然に修飾されたアミノ酸ポリマー又は介在により修飾されたアミノ酸ポリマー、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識化合物との結合等、他の任意の操作若しくは修飾を包含する。また、例えば、1又はそれ以上のアミノ酸類似体例えば、非天然アミノ酸を含む含有ポリペプチド、並びに当技術分野で知られている他の修飾物も定義内に含まれる。本発明のポリペプチドの少なくとも一部は抗体に基づいているため、ある実施形態では、ポリペプチドは単鎖又は結合鎖として発生し得ると理解される。ポリヌクレオチド及び核酸という用語は、本明細書では同義に使用され、任意の長さのヌクレオチドポリマーを指しており、DNA及びRNAを含む。ヌクレオチド類は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基、及び/若しくはこれらの類似体、又はDNA若しくはRNAポリメラーゼによりポリマーにより組み入れられ得る任意の基板であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びその類似体等の修飾ヌクレオチドを含んでもよい。ヌクレオチド構造への修飾は、もしあれば、ポリヌクレオチド集合の前又は後に取り入れてもよい。ヌクレオチド類の配列は、非ヌクレオチド成分により介在されてもよい。ポリヌクレオチドは、標識成分との結合等により、集合後にさらに修飾されてもよい。高度ストリンジェンシー条件は、以下により同定されてもよい。すなわち、1洗浄のための低イオン強度及び高温度、例えば、50°Cで0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1の硫酸ドデシルナトリウムを使用する;2ハイブリダイゼーションの間、ホルムアミド等の変性剤を使用する。例えば、0.1のウシ血清アルブミン/0.1フィコール/0.1ポリビニルピロリドンを含む50v/vホルムアミド/750mM塩化ナトリウム、75mMクエン酸ナトリウムを含み、pH6.5の50mMリン酸ナトリウムバッファを42°Cで使用する;又は342°Cで50のホルムアミド、5xSSC0.75M塩化ナトリウム、0.075Mクエン酸ナトリウム、50mMリン酸ナトリウムpH6.8、0.1ピロリン酸ナトリウム、5xデンハート液、超音波処理サケ精子DNA50μg/ml、0.1SDS、及び10デキストラン硫酸を用い、0.2xSSC塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウムの中で42°Cで洗浄し、55°Cで50ホルムアミドで洗浄し、その後、55°CでEDTAを含有する0.lxSSCから成る高度ストリンジェンシー洗浄を行った。2又はそれ以上の核酸又はポリペプチドとの関係で使われる同一性又は同一性割合という用語は、配列の同一性の一部として任意の保存的アミノ酸置換を考慮せずに最大一致性と比較及び調節必要であればギャップを導入するにあたり、同一のヌクレオチド類又はアミノ酸残基と同じ、又は特定の割合を有する2又はそれ以上の配列又は部分配列を指している。同一性の割合は、配列比較ソフトウェア若しくはアルゴリズムを使って、又は目視により測定してもよい。アミノ酸配列又はヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用され得る様々なアルゴリズム及びソフトウェアは、当業者に周知である。これらには、BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、及びGCGプログラムが含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の2つの核酸又はポリペプチドは実質的に同一であり、つまり、配列比較アルゴリズムを使って、又は目視により測定し、最大一致性と比較及び調節した場合、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、またいくつかの実施形態では、少なくとも95、96、97、98、99のヌクレオチド又はアミノ酸残基が同一であるという意味である。いくつかの実施形態では、少なくとも約10、少なくとも約20、少なくとも約40~60、少なくとも約60~80長の残基又はそれらの間の任意の整数値である配列の領域にまたがって同一性が存在する。いくつかの実施形態では、少なくとも約90~100残基等60~80残基よりも長い領域にまたがって同一性が存在し、いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列のコード領域等、比較対象の配列全長にわたり、配列は実質的に同一である。保存的アミノ酸置換とは、1つのアミノ酸残基を類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基と置換することである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野において同定されており、例えば、塩基性側鎖例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、酸性側鎖例えば、アスパラ酸、グルタミン酸、非電荷極性側鎖例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、非極性側鎖例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、β分岐側鎖例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン及び芳香族側鎖例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン等が含まれる。例えば、チロシンのフェニルアラニンの置換は、保存的置換と考えられる。ポリペプチド及び本発明の抗体の配列における保存的置換は、ポリペプチド又はアミノ酸配列を含む抗体の抗原への結合、すなわち、ポリペプチド又は抗体が結合する1又はそれ以上のタンパク質への結合を排除しないことが好ましい。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換の同定方法は、当技術分野において周知である。ベクターという用語は、宿主細胞の1又はそれ以上の対象遺伝子又は対象配列を送達でき、好ましくは発現できるコンストラクトを指している。ベクターの例として、ウイルスベクター、裸のDNA若しくはRNA発現ベクター、プラスミド、コスミド若しくはファージベクター、陽イオン濃縮剤と結合するDNA若しくはRNA発現ベクター、及びリポソームにカプセル化されたDNA若しくはRNA発現ベクターであるが、これに限定されない。本明細書で使用する形質移入という用語は、細胞による異質DNAの取り込みを表すために使われる。外因性DNAが細胞膜内に導入された時、細胞は形質移入された。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物とは、天然では見つからないフォームのポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物のことである。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物には、もはや天然で見つからないフォームになるまで精製されたものが含まれる。ある実施形態では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、又は組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用する実質的に純粋という用語は、少なくとも50純粋すなわち、不純物がない、より好ましくは少なくとも90純粋、より好ましくは少なくとも95純粋、より好ましくは少なくとも98純粋、より好ましくは少なくとも99純粋である物質を指している。本明細書で使用する動物は、マウス、ラット、ハムスター、他の齧歯類、ラビット、ヤギ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、ヒト等の任意の動物例えば、哺乳動物を指しているが、これに限定されない。本明細書でA及び/又はB等の表現に使用される及び/又はという用語は、A及びBの両方、Aのみ及びBのみを含むことを意図している。本開示及び特許請求の範囲で使用する、単数形a、an、及びtheには、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の言及が含まれる。本明細書において、実施形態がを含むcomprisingという用語で記載される場合は常に、から成るconsistingof及び/又は本質的に~から成るconsistingessentiallyofに関して記載されるその他の類似の実施形態もまた提供されると理解される。II.ポリペプチド類及びポリヌクレオチド類本発明は、膜結合性であり及び細胞の表面上に発現する細胞外部分を含む新規のポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、a二量体形成ドメインを含む細胞外部分、及びb膜貫通部が含まれる。本明細書で使用される二量体形成ドメインは、2つのポリペプチド間の相互作用を促進することができる任意のドメインである。好適な二量体形成ドメインには、疎水性基が通常の間隔で存在し、各タンパク質の疎水性基との相互作用により二量体の形成を可能とする、両親媒性αへリックスを有するタンパク質のものが含まれる。好適な二量体形成ドメインには、ジスルフィド結合形成を通じて二量体形成を可能とするシステイン残基を有するタンパク質のも含まれる。二量体形成ドメインには、免疫グロブリン定常領域、ロイシンジッパー、イソロイシンジッパー、及びGCN4ジッパーが含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドにはa免疫グロブリン重鎖定常領域を含む細胞外部分、及びb膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、a二量体形成領域を含む細胞外部分、及びbGPIアンカー部分が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、a免疫グロブリン重鎖定常領域を含む細胞外部分、及びbGPIアンカー部分が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域には、CH2、CH3及び/又はCH4から選択される少なくとも1つの定常ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域には、少なくともヒンジ領域の一部が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域には、CH2ドメイン及びCH3ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域には、ヒンジ領域、CH2及びCH3が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域にはFc領域が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域には、IgA、IgD、IgE、IgG、IgM抗体又はそのサブタイプから得られる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域は、IgG1又はIgG2から得られる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域は、IgG2から得られる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域から得られる。他の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域は、マウス免疫グロブリン重鎖定常領域から得られる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには抗体可変領域は含まれない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには抗原結合部位が含まれない。ポリペプチドは、ポリペプチド又はGPI膜アンカーの膜貫通部により、細胞膜に、少なくとも部分的にアンカーされる。いくつかの実施形態では、膜貫通部は、タイプI膜貫通タンパク質から得られる。タイプI膜貫通タンパク質は、N末端が膜の外に存在するよう配置されている。タイプI膜貫通タンパク質はシングルパスでもよく、つまり、膜貫通タンパク質は1度だけ膜を貫通するという意味であり、又はマルチパスでもよく、つまり膜貫通タンパク質が複数回膜を貫通するという意味である。膜貫通部は、免疫グロブリンタンパク質及び非免疫グロブリンタンパク質を含むがこれに限定されない、多様なソースから得てもよい。いくつかの実施形態では、膜貫通部は、CD4、CD8、クラスIMHC、クラスIIMHC、CD19、T細胞受容体α及びβ鎖、CD3、zeta鎖、ICAM1CD54、ICAM2、ICAM3、ICAM4、ICAM5、CD28、CD79a、CD79b、及びCD2等を含むがこれに限定されない、免疫グロブリンスーパーファミリーの一部であるタンパク質から採取される。いくつかの実施形態では、膜貫通部は、ヒトタンパク質から得られる。いくつかの実施形態では、膜貫通部はマウスタンパク質から得られる。いくつかの実施形態では、膜貫通部はヒトCD4から得られる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドにはさらに、少なくとも細胞内領域の一部が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、膜貫通部の採取元と同じタンパク質から得られる。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、膜貫通部の採取元のタンパク質とは異なるタンパク質から得られる。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは修飾される。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、ドメインの正常な機能が除去される又は不活性化されるよう修飾される。修飾には、タンパク質結合部位の除去、活性部位の除去又は阻害、及びリン酸化部位の除去又は阻害が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、ヒトCD4由来の膜貫通部及び細胞内ドメイン領域が含まれる。他の実施形態では、ポリペプチドには、ヒトCD4由来の膜貫通部及び細胞内ドメイン領域が含まれ、細胞内ドメインは修飾されている。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、lckタンパク質結合部位を除去するよう修飾されている。いくつかの実施形態では、膜貫通部又は細胞内ドメインを有する膜貫通部は、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、及び配列番号17から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインを有する膜貫通部は、配列番号15である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドはGPI膜アンカーにより細胞膜にアンカーされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、典型的な疎水性C末端アミノ酸残基がプロペプチドから切断され、ポリペプチドのC末端がグリコシルホスファチジルイノシトールと共有結合的に結合しているGPIリンクにより、細胞膜にアンカーされる。GPIの疎水性脂質部分は、細胞膜でポリペプチドを保有する。いくつかの実施形態では、GPIリンクを担う分子の疎水性C末端は、CD52、CD55、CD58、CD59、及びその他の類似のタンパク質から得られる。本発明のポリペプチド類は膜結合性であり、細胞の表面上に発現される免疫グロブリン重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは第2のポリペプチドと結合し、ヘテロ二量体分子を形成することができる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには免疫グロブリン重鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、単鎖分子として、免疫グロブリン長鎖及び免疫グロブリン軽鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖は免疫グロブリン重鎖と結合する。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、免疫グロブリン長鎖-軽鎖のペアが含まれる。本明細書で使用する免疫グロブリン長鎖-軽鎖のペアには、1つのポリペプチドに免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖の両方を含む単鎖免疫グロブリンが含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアには、単一の抗原結合部位が含まれる。いくつかの実施形態では、膜結合性ポリペプチドは免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアと結合し、1つの抗原結合部位を含むヘテロ二量体抗体分子を形成する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体分子は一価抗体である。本発明のポリペプチド類は、非共有結合性結合又は共有結合性結合を含むがこれに限定されない、任意の数の手段により、第2のポリペプチドと結合してもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、イオン性結合等、非共有結合性結合により第2のポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ジスルフィド結合等、共有結合性結合により第2のポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、第2のポリペプチドと少なくとも1つのジスルフィド結合を形成する。他の実施形態では、ポリペプチドは、第2のポリペプチドと2つのジスルフィド結合を形成する。他の実施形態では、ポリペプチドは、第2のポリペプチドと3又は4のジスルフィド結合を形成する。他の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアの免疫グロブリン重鎖定常領域と少なくとも1つのジスルフィド結合を形成し、ヘテロ二量体抗体分子を形成することができる。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは第2ポリペプチドとジスルフィド結合を形成し、ヘテロ二量体分子を形成することができる。設計により、ポリペプチドは通常、すでにヘテロ二量体分子又はホモ二量体分子の一部であるポリペプチドとジスルフィド結合を形成することができる。ポリペプチドは通常、分泌された抗体分子とジスルフィド結合を形成することができない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは分泌された抗体とジスルフィド結合を形成しない。いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドを含むヘテロ二量体分子は、抗体と結合しない。ある実施形態では、本発明のポリペプチドを含むヘテロ二量体分子は、分泌された抗体と結合しない。いくつかの実施形態では、本発明は、aCH2及びCH3を含む免疫グロブリン重鎖定常領域、及びb膜貫通部の両者を含んだポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では。ポリペプチドには、aCH2及びCH3を含むヒトIgG2重鎖定常領域、及びbヒトCD4膜貫通部が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、aCH2及びCH3を含む免疫グロブリン重鎖定常領域、b膜貫通部、及びc蛍光分子が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、aCH2及びCH3を含む免疫グロブリン重鎖定常領域、bCD4膜貫通部、及びc蛍光分子が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、aCH2及びCH3を含むヒトIgG2重鎖定常領域、bヒトCD4膜貫通部、及びc蛍光分子が含まれる。ある実施形態では、蛍光分子はGFPである。いくつかの実施形態では、本発明は、a配列番号2、配列番号4、配列番号6、又は配列番号8を含む免疫グロブリン重鎖定常領域、及びb配列番号13又は配列番号16を含む膜貫通部を含んだポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号2を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号16を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号2を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号17を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号2を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号13を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号2を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号15を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号4を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号16を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号4を含む免疫グロブリン及び配列番号17を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号4を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号13を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号4を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号15を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号6を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号16を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号6を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号17を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号6を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号13を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号6を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号15を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号8を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号16を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号8を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号17を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号8を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号13を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号8を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び配列番号15を含む膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号2、配列番号4、配列番号6、又は配列番号8に対して少なくとも約80の配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、又は配列番号17に対して少なくとも80の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。ある実施形態では、ポリペプチドには、配列番号2、配列番号4、配列番号6、又は配列番号8に対して、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、又は少なくとも約99の配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、又は配列番号17に対して少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、又は少なくとも約99の配列同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号2に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号14又は配列番号15に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号4に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸、及び配列番号14又は配列番号15に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号6に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸、及び配列番号14又は配列番号15に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには、配列番号8に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸、及び配列番号14又は配列番号15に対して少なくとも約95の同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、配列番号10、配列番号12、又は配列番号28に対して少なくとも約80の配列同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、配列番号10、配列番号12、又は配列番号28に対して少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、又は少なくとも約99の配列同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号10、配列番号12、又は配列番号28を含むポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチド類には、タンパク質の輸送を指示するシグナル配列が含まれる。シグナル配列シグナルペプチド又はリーダー配列とも称されるは、初期ポリペプチドのN末端に位置している。それらは、小胞体に対するポリペプチドを標的とし、タンパク質は、目的地、例えば、細胞小器官の内空、内膜、細胞の外膜、又は細胞分泌物等の目的地別に分別される。シグナル配列の多くは、タンパク質が小胞体に輸送された後に、シグナルペプチダーゼによりタンパク質から切断される。シグナル配列のポリペプチドからの切断は、通常アミノ酸配列の特定の部位において発生し、またシグナル配列内のアミノ酸残基に依存する。通常は、1つの特定の切断部位が存在するが、2つ以上の切断部位が、シグナルペプチダーゼにより認識及び/又は使用されることもあり、その結果、ポリペプチドのN末端が不相同となる。例えば、シグナル配列内の異なる切断部位を利用することで、その結果、異なるN末端アミノ酸で発現されるポリペプチドが生成され得る。従って、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドには、異なるN末端を有するポリペプチドの混合物が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、N末端の長さは、アミノ酸が1個、2個、3個、4個、又は5個であることにより異なる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは実質的に相同、すなわち、ポリペプチドが同じN末端を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドシグナル配列には、1又はそれ以上の例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10等アミノ酸置換及び/又は欠失が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのシグナル配列には、1つの切断部位が優位となるようにすることができ、よって1種類のN末端を有する実質的に相同なポリペプチドを生じる、アミノ酸置換及び/又は欠失が含まれる。シグナルペプチダーゼ切断部位を予測する様々なアルゴリズム及びソフトウェアは、当技術分野において知られており、また一般に利用可能である例えば、SignalPソフトウェア。ある実施形態では、ポリペプチドには、配列番号22、配列番号23、又は配列番号26に対して少なくとも80の配列同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、配列番号22、配列番号23、又は配列番号26に対して少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、又は少なくとも約99の配列同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、シグナル配列切断前のポリペプチドには、配列番号22、配列番号23、又は配列番号26が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、配列番号30、配列番号31、又は配列番号32に対して少なくとも80の配列同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。ある実施形態では、ポリペプチドには、配列番号30、配列番号31、又は配列番号32に対して、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、又は少なくとも約99の配列同一性を有するアミノ酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには配列番号32が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、本質的に配列番号32から成る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには配列番号30が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、本質的に配列番号30から成る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドには配列番号31が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは本質的に配列番号31から成る。あるアミノ酸配列から本質的に成る、又はあるアミノ酸配列から本質的に成っているポリペプチドには、1又はそれ以上の例えば、1、2、3、4又はそれ以上追加アミノ酸が含まれる。但し、追加アミノ酸は、ポリペプチドの機能に物質的影響を与えない。あるアミノ酸から本質的に成る、又はあるアミノ酸から本質的に成っているポリペプチドは、いくつかの実施形態では、1又はそれ以上の例えば、1、2、3、4又はそれ以上のアミノ酸により還元されてもよい。但し、欠失アミノ酸は、ポリペプチドの機能に物質的影響を与えない。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の任意のポリペプチドを含む抗体分子を提供する。いくつかの実施形態では、抗体分子はさらに、免疫グロブリン重鎖を含む第2のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗体分子にはさらに免疫グロブリン軽鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体分子にはさらに、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンを含む第2のポリペプチドが含まれる。ある実施形態では、抗体には、単一の抗体結合部位すなわち、一価抗体が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の任意のポリペプチドを含むヘテロ二量体分子を提供する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子にはさらに、二量体形成ドメインを含む第2のポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには免疫グロブリン定常領域が含まれる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには免疫グロブリン重鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには免疫グロブリン軽鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンが含まれる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子には、単一の抗体結合部位すなわち、一価抗体が含まれる。ある実施形態では、本発明は、a二量体形成ドメインを含む細胞外部分、及び膜貫通部を含んだ第1のポリペプチド、並びにb二量体形成ドメインを含む第2のポリペプチドの両者を含んだヘテロ二量体分子を提供する。ある実施形態では、第1及び第2の二量体形成ドメインは同じである。ある実施形態では、第1及び第2の二量体形成ドメインは異なる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子には、ai第1の二量体形成ドメインを含む細胞外部分及びii膜貫通部の両者を含んだ第1のポリペプチド、並びにb第2の二量体形成ドメインを含む第2のポリペプチドの両者が含まれる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子には、免疫グロブリン定常領域を有する第1の二量体形成ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子には、免疫グロブリン重鎖定常領域である第1の二量体形成ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子には、免疫グロブリン定常領域である第2の二量体形成ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子には、免疫グロブリン重鎖定常領域である第2の二量体形成ドメインが含まれる。ある実施形態では、ヘテロ二量体分子には、本明細書に記載の任意のポリペプチドを含む第1のポリペプチドが含まれる。本明細書に記載のポリペプチドは、当技術分野で知られている好適な任意の方法により生成され得る。係る方法は、直接タンパク質合成法からポリペプチド配列をコードするDNA配列の構成及び好適な宿主における配列の発現にまで及ぶ。いくつかの実施形態では、DNA配列は、対象のワイルドタイプタンパク質をコードするDNA配列を単離又は合成することにより、組換え技術を使って構成され得る。任意選択的に、配列を部位特異的変異誘発により変異誘発させ、その機能変異体を提供することもできる。いくつかの実施形態では、対象のポリペプチドをコードするDNA配列は、オリゴヌクレオチド合成機を用いて化学合成により構成してもよい。オリゴヌクレオチド類は、所望のポリペプチドのアミノ酸配列に基づき、また対象の組換えポリペプチドが生成される宿主において好まれるコドンを選択することにより設計され得る。標準方法を適用して、対象のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を合成することができる。例えば、完全アミノ酸配列を利用して、逆翻訳された遺伝子を構成することができる。いくつかの実施形態では、特定のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むDNAオリゴマーを合成することができる。例えば、所望のポリペプチドの部分をコードする複数の小オリゴヌクレオチドを合成し、その後結紮することができる。個別オリゴヌクレオチドは、典型的には、相補的集合の5又は3オーバーハングを含んでいる。組み換え技術、化学合成、又はその他の方法によりいったん集合すると、対象の特定のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、発現ベクターに挿入され、所望の宿主におけるポリペプチドの発現に適切な発現制御配列に作動可能に連結され得る。ヌクレオチド配列、マッピング制限、及び/又は好適な宿主における生物活性ポリペプチドの発現により、妥当な集合であることが確認され得る。当技術分野において知られているように、宿主の形質移入遺伝子の高度な発現レベルを得るためには、遺伝子は、選択された発現宿主において機能的な転写及び翻訳発現制御配列に作動可能に連結されていなければならない。ある実施形態では、組換え発現ベクターは、本明細書に記載のポリペプチドをコードするDNAを増幅及び発現するために使用される。例えば、組換え発現ベクターは、ポリペプチドをコードし、哺乳類、微生物、ウイルス又は昆虫遺伝子由来の好適な転写又は翻訳制御要素と作動可能に連結している合成的又はcDNA由来のDNA断片を有する複写可能なDNAコンストラクトであり得る。転写ユニットには、通常、1遺伝子発現の役割を担う制御要素又は要素類、例えば、転写プロモーター及び/又はエンハンサー、2mRNAに転写され、タンパク質に翻訳される構造的配列又はコード配列、及び3適切な転写及び翻訳開始配列及び終了配列の集合が含まれる。制御要素には、転写を制御するためのオペレーター配列が含まれ得る。通常は、複写元が与える宿主における複写能力、及び形質転換体の認識を促進するための選択遺伝子を追加的に組み入れることもできる。DNA領域は、互いに機能的に関連している場合、作動可能に連結されている。例えば、単一のペプチド分泌リーダーに対するDNAは、もしポリペプチド分泌に関与する前駆体として発現されるなら、DNAと作動可能に連結されている。もし配列の転写を制御するならば、プロモーターはコード配列に作動可能に連結している。又は、もし翻訳を許可するよう位置づけられているなら、リボソーム結合部位はコード配列に作動可能に連結されている。酵母発現系での利用を意図された構造的要素には、宿主細胞による翻訳後タンパク質の細胞外分泌を可能とするリーダー配列が含まれる。代替的に、組換えタンパク質がリーダー配列又は輸送配列なしに発現される場合、それにはN末端メチオニン残基が含まれ得る。この残基はその後、最終生成物を提供するために、発現組換えタンパク質から任意選択的に切断され得る。発現ベクター及び制御要素の選択は、宿主の選択に依存する。多様な発現宿主/ベクター組換えを利用することが可能である。真核性宿主に有益な発現ベクターには、例えば、SV40、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス及びサイトメガロウイルスの発現制御配列を含むベクターが含まれる。バクテリア宿主に有益な発現ベクターには、pCR1、pBR322、pMB9並びにそれらの誘導体を含む大腸菌由来のプラスミド等の既知のバクテリアプラスミド、及びM13並びに他の繊維状一本鎖DNAファージ等のより広範な宿主のプラスミドが含まれる。真核性宿主の発現ベクターの中には、宿主ゲノムに統合される能力を有するものもあり、また、真核性宿主の発現ベクターの中には、染色体外存在物として核に固着するものもある。いくつかの実施形態では、エピソームベクターには、1細胞につき複数の複製を形質移入し、その結果、対象のポリヌクレオチドは高度に発現し、及び/又は形質移入はより効率的となる等の利点がある。本明細書に記載のポリペプチドの発現に好適な宿主細胞には、適切なプロモーターの制御下にある原核生物、酵母、又は昆虫や高等真核細胞が含まれる。原核生物には、グラム陰性又はグラム陽性生物体、例えば、大腸菌又は桿菌が含まれる。より高度な真核性細胞には、下記の哺乳動物由来の樹立細胞株が含まれる。無細胞翻訳系を利用することも可能である。様々な哺乳動物又は昆虫細胞の培養系を利用して、組換えポリペプチドを発現させる。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞の組換えタンパク質の発現が好まれる。なぜなら、係るタンパク質は通常正しく折りたたまれ、適切に修飾され、完全に機能的であるからだ。好適な哺乳動物宿主細胞株の例として、COS-7サル腎臓由来、L-929マウス線維芽細胞由来、C127マウス乳腺腫瘍由来、3T3マウス線維芽細胞由来、CHOチャイニーズハムスター卵巣由来、HEK-293ヒト胎児腎臓由来、HeLa細胞ヒト癌由来の子宮頸部及びBHKハムスター腎線維芽細胞由来細胞株が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞株の変異体を使用してもよい。例えば、293T細胞は、SV40複製起点を含む形質移入されたプラスミドのエピソーム複製を可能にする、SV40ラージT-抗原を発現するHEK-293細胞である。哺乳動物の発現ベクターには、複製起点、発現する遺伝子に接続する好適なプロモーター及びエンハンサー、並びに他の5又は3隣接の非転写配列等の非転写要素、並びに、必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、並びに転写終結配列等の5又は3非翻訳配列が含まれる。いくつかの実施形態では、バキュロウイルス系が、昆虫細胞における異種タンパク質の生成に使用される。これら方法及び技法は当業者の間で周知である例えば、LuckowとSummers、1988、バイオテクノロジーBio/Technology、6:47を参照のこと。ある実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは単離されている。ある実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは実質的に純粋である。宿主細胞により発現させられるタンパク質は、任意の好適な方法に従って生成され得る。係る方法には、クロマトグラフィー例えば、イオン交換カラムクロマトグラフィー、アフィニティカラムクロマトグラフィー、サイズ排除カラムクロマトグラフィー、遠心分離、溶解度差、又は任意のその他の標準的なタンパク質精製技術が含まれる。ヘキサ-ヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザコート配列及びグルタチオン-S-トランスフェラーゼ等の親和性タグは、適切なアフィニティーカラムに通すことによって容易に精製できるタンパク質に結合し得る。単離されたタンパク質はまた、タンパク質分解、高速液体クロマトグラフィーHPLC、核磁気共鳴及びX線結晶構造解析等の技法を用いて物理的に特徴付けることができる。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質を培養培地に分泌する発現系の上清は、まず、市販のタンパク質濃縮度フィルタ、例えば、アミコン又はミリポア社製Pellicon限外濾過ユニットを用いて濃縮することができる。濃縮工程に続いて、濃縮物を好適な精製マトリックスに適用させることができる。いくつかの実施形態では、陰イオン交換樹脂、例えば、ペンダントジエチルアミノエチルDEAE基を有するマトリックス又は基質を用いることができる。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、又はその他一般的にタンパク質精製に用いられるタイプであり得る。いくつかの実施形態では、陽イオン交換ステップを用いることができる。好適な陽イオン交換体には、スルホプロピル基又はカルボキシメチル基を含む様々な不溶性マトリックスが含まれる。いくつかの実施形態では、セラミックハイドロキシアパタイト等のハイドロキシアパタイトCHT媒体を利用することもできるがこれに限定されない。いくつかの実施形態では、疎水性のRP-HPLC媒体、例えば、ペンダントメチル又は他の脂肪族基を有するシリカゲルを利用した、1つ又は複数の逆相HPLCステップを、タンパク質をさらに精製するために用いることができる。上記の精製手順の一部又は全てを様々な組み合わせで利用し、均一な組換えタンパク質を提供することができる。ある実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖定常領域及び膜貫通部を含んだポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。ある実施形態では、本発明は、免疫グロブリン重鎖定常領域及びGPI膜部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドという表現には、ポリペプチドのコード配列のみを含むポリヌクレオチド、並びに追加のコード配列及び/又は非コード配列を含むポリヌクレオチドが包含される。本発明のポリヌクレオチドは、RNA形式又はDNA形式であり得る。DNAには、cDNA、ゲノムDNA、及び合成DNAが含まれ、二本鎖又は一本鎖であり得、及び一本鎖であれば、コード鎖又は非コードアンチセンス鎖であり得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号10を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号12を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号28を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号22、配列番号23、又は配列番号26を含むポリペプチドをシグナル配列有り又は無しでコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号30を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号31を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号32を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号30のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号31のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号32のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号9、配列番号11、又は配列番号29のポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号24、配列番号25、又は配列番号27のポリヌクレオチドが含まれる。ある実施形態では、ポリヌクレオチドには、配列番号9、配列番号11、配列番号24、配列番号25、配列番号27、又は配列番号29のポリヌクレオチドに対して、少なくとも80の同一性、少なくとも85の同一性、少なくとも約90の同一性、少なくとも約95の同一性、及びいくつかの実施形態では、少なくとも96、97、98、又は99の同一性を有する配列を持つポリヌクレオチドが含まれる。また、配列番号9、配列番号11、配列番号24、配列番号25、配列番号27、又は配列番号29に対しハイブリダイズするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、ハイブリダイゼーションは、高度ストリンジェンシー条件下で行われる。ある実施形態では、ポリヌクレオチドには、例えば、宿主細胞由来のポリペプチドの発現及び/又は分泌を支援するポリヌクレオチドに対する同じ読み枠で融合された成熟ポリペプチドのコード配列が含まれる。例えば、リーダー又はシグナル配列は、細胞表面へのポリペプチド輸送制御の配列として機能し、もしポリペプチドが分泌タンパク質であるなら、細胞からの分泌物として機能する。リーダー配列又はシグナル配列を有するポリペプチドはプレタンパク質であり、ポリペプチドの成熟形態を生成するために宿主細胞により切断されたリーダー配列を有する。ポリヌクレオチドはまた、成熟タンパク質に加え、追加の5アミノ酸残基であるプロタンパク質をコードすることができる。プロ配列を有する成熟タンパク質がプロタンパク質であり、タンパク質の不活性形態である。いったんプロ配列が切断されると、活性成熟タンパク質が残る。ある実施形態では、ポリヌクレオチドには、例えば、発現ポリペプチドの精製及び/又は同定を可能にするマーカー又はタグ配列と同じ読み枠に融合された成熟ポリペプチドのコード配列が含まれる。いくつかの実施形態では、バクテリア宿主が使用される場合、マーカー配列は、成熟ポリペプチドの精製を行うためにpQE-9ベクターにより供給されるヘキサ-ヒスジンタグであり得る。他の実施形態では、哺乳動物宿主が用いられる場合例えば、COS-7細胞マーカー配列は、インフルエンザ血球凝集素タンパク質由来のヘマグルチニンHAタグであり得る。いくつかの実施形態では、マーカー配列はFLAG、すなわち、他のアフィニティタグと組み合わせて使用し得るペプチド配列DYKDDDDK配列番号17である。本発明はさらに、例えば、ポリペプチド類の断片、類似体、及び/又は誘導体をコードする前記のポリヌクレオチド類の変異体に関する。ある実施形態では、本発明は、本明細書に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して、少なくとも80の同一性、少なくとも85の同一性、少なくとも90の同一性、少なくとも95の同一性、及びいくつかの実施形態では、少なくとも96、97、98又は99の同一性を有するヌクレオチド配列を持つポリヌクレオチド類を含むポリヌクレオチド類を提供する。本明細書で使用する、参照のヌクレオチド配列に対して、例えば、少なくとも95同一性であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドという表現は、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列に対して同一であることを意味するよう意図されている。但し、この場合、ポリヌクレオチド配列には、参照ヌクレオチド配列のヌクレオチド100個毎に最大5つの点突然変異を含み得るとする。言い換えれば、参照ヌクレオチド配列に対し少なくとも95同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るとは、参照配列のヌクレオチドの最大5までは、欠失若しくは他のヌクレオチドとの置換が可能であり、又は参照配列の合計ヌクレオチドのうち最大5までは参照配列に挿入できるということである。参照配列のこのような突然変異は、参照ヌクレオチド配列の5末端又は3末端部又はそれらの間のいずれかで、参照配列のヌクレオチド間で個別に、又は参照配列内の1又はそれ以上の近接基のいずれかに散在して、発生し得る。ポリヌクレオチド変異体は、コード領域、非コード領域、又はそれら両方にオルタネーションを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体には、サイレント置換、挿入又は欠失を生じさせるオルタネーションが含まれるが、コードされたポリペプチドの特性又は活性を変えることはない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド変異体には、遺伝子コードの縮重のためサイレント置換が含まれる。ポリヌクレオチド変異体は、多様な理由により、例えば、特定の宿主のコドン発現を最適化する例えば、ヒトmRNAのコドンを大腸菌等のバクテリア宿主に好まれるコドンに変更するために生成され得る。ある実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは単離されている。ある実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞もまた提供される。いくつかの実施形態では、発現ベクターには、ポリヌクレオチド分子が含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、ポリヌクレオチド分子を含む発現ベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、ポリヌクレオチド分子が含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、ポリヌクレオチド分子によりコードされたポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ポリヌクレオチド分子によりコードされたポリペプチドを生成する。III.細胞本発明はまた、本明細書に記載のポリペプチドを発現する細胞を提供し、細胞を生成する方法を提供する。本明細書に記載の細胞を作るために使用される細胞例えば、宿主細胞には、全哺乳動物の細胞、細胞株及び細胞培養が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は、マウス、ラット若しくはその他の齧歯動物、又はヒト若しくはサル等の霊長類由来である。いくつかの実施形態では、細胞はマウスの細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はヒトの細胞である。他の実施形態では、細胞は哺乳動物の生殖細胞又は全身細胞である。他の実施形態では、細胞は初代細胞培養又は不死化細胞株である。哺乳動物の細胞は、典型的には細胞培養で成長させられる。いくつかの実施形態では、細胞は堅い表面に付着する。他の実施形態では、細胞は懸濁液中で成長させられる。多様な宿主細胞に関して、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド及び/又はベクターで形質移入してもよい。いくつかの実施形態では、細胞は、SP2/0、SP2/0-Agl4、NS/0、YB2/0、K6H6/B5、NS-1、FO、Y3/Ag1.2.3、P3X63Ag8.653、他の骨髄腫、ハイブリドーマ、チャイニーズハムスター卵巣細胞CHO、HeLa細胞、ベビーハムスター腎細胞BHK、CV-1細胞、3T3細胞、L細胞、TC7細胞、及びヒト胎児腎臓細胞HEK-293と293Tを含むがこれに限定されない、不死化真核細胞となる。いくつかの実施形態では、細胞は、融合パートナー細胞株として知られている。いくつかの実施形態では、細胞は、効率的に融合し、抗体の高度発現を支援し、及び選択媒体に対して感受的である、不死化細胞株である。これらの細胞株には、Sp2/0、SP2/0-Agl4、YB2/0、K6H6/B5、NS-1、FO、Y3/Ag1.2.3、及びP3X63Ag8.653が含まれ得るが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞は免疫グロブリンを発現しない骨髄腫である。いくつかの実施形態では、細胞は、ハイブリドーマ又はハイブリドーマライブラリーである。ある実施形態では、細胞はヒト細胞である。ある実施形態では、細胞は、HEK-293細胞又はその変異体例えば、293T細胞である。ある実施形態では、細胞はCHO細胞である。ある実施形態では、細胞はマウス細胞である。ある実施形態では、細胞はSP2/0又はその変異体例えば、SP2/0-Ag14である。本発明のポリペプチドを発現する細胞は、当業者に知られている多様な方法により製造してもよい。本明細書に記載のポリヌクレオチド、ベクター及び/又はコンストラクトは、多様な方法により好適な宿主細胞に導入してもよい。一般に、本発明のポリペプチドを発現する哺乳動物細胞を得るためには、ベクターによる形質移入又は感染が用いられる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、形質移入により細胞に導入される。いくつかの実施形態では、形質移入は一時的発現であり、通常は限られた期間に形質移入されたポリペプチドを発現する。他の実施形態では、形質移入は安定的な形質移入であり、形質移入されたポリペプチドを恒常的に発現する。いくつかの実施形態では、安定的な形質移入は、インプットDNAの細胞ゲノムへの統合に付随する。いくつかの実施形態では、安定的な形質移入は、インプットDNAのエピソーム維持及び複製を生じさせる。DNAは、従来の形質移入の技法により真核性細胞に導入され得る。形質移入という用語は、当業者の間で周知の、宿主細胞に異質なポリヌクレオチド例えば、DNAを導入するための多様な技法を指している。これら技法には、リン酸カルシウム又は塩化カルシウム共沈殿、DEAE-デキストラン媒介トランスフェクション、リポソーム媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、及びマイクロインジェクションが含まれるが、これに限定されない。宿主を形質移入するこれらの方法及びその他の方法については、多くの標準的研究マニュアルに記載されている。いくつかの実施形態では、細胞は、リポソーム媒介トランスフェクション、又はリポフェクションを用いて、形質移入することができる。リポフェクションは、脂質ベースの形質移入技術であり、核酸が脂質ベースの形質移入試薬と結合し、その結果、核酸を凝縮し保護する。リポフェクションの主な長所は、高度な効率性、全てのタイプの核酸を広範囲の細胞タイプに形質移入し得る能力、使用の容易性、再現性及び低い毒性である。さらに、リポフェクションには、一時的形質移入、安定的形質移入、同時形質移入、連続的形質移入、又は複数の形質移入が含まれるが、これに限定されない全ての形質移入の適用に適している。いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書に記載のポリペプチドを発現するポリヌクレオチドで安定的に形質移入される。哺乳類動物細胞の安定的形質移入に関しては、使用される発現ベクター及び形質移入技術次第では、DNAをゲノムに統合するのは細胞の小断片のみである場合がある。哺乳動物細胞をエピソームベクターで形質移入すれば、細胞のより大きな断片であってもDNAを組み入れ、維持するかもしれない。これら細胞を同定し、選択するために、選択可能なマーカー例えば、抗生物質耐性をコードする遺伝子は、通常、対象の遺伝子複数を含むと共に、宿主細胞に導入される。様々な選択可能なマーカーには、G418、ハイグロマイシン及びメトトレキサート等の薬剤への耐性を与えるものが含まれる。選択可能なマーカーをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドをコードするのと同じベクターで宿主細胞に導入され得るか、又は別のベクターで導入され得る。導入されたポリヌクレオチドで安定的に形質移入された細胞は、薬剤選択により同定され得る例えば、選択可能なマーカーの遺伝子を組み入れた細胞は生存するが、一方で、他の細胞は死滅する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ベクターにより細胞に導入される。ベクターは、染色体外要素として独立して複製されてもよく又はされないかもしれない、ビリオン又はウイルス様粒子を収量するウイルスゲノム由来であり得る。所望のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むビリオン粒子は、感染により宿主細胞の中に導入され得る。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは細胞ゲノムに統合される。哺乳動物細胞の形質転換を導くウイルスベクターには、SV40ベクター、及びパピローマウイルス、アデノウイルス、エプスタイン-バーウイルス、ワクシニアウイルス、並びにラウス肉腫ウイルス等のレトロウイルスに基づくベクター、又はモロニーマウス白血病ウイルス等のマウス白血病ウイルスが含まれるが、これに限定されない。また、本明細書に記載のポリペプチドを発現する細胞を生成する方法が提供される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド又は本明細書に記載のポリペプチドをコードするベクターで細胞を形質移入することが含まれる、細胞産生方法が本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、形質移入された細胞はポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、細胞は一時的に形質移入される。いくつかの実施形態では、細胞は安定的に形質移入される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、細胞のゲノムに統合される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードする形質移入されたポリヌクレオチドは、細胞内で安定的に発現する。他の実施形態では、ポリペプチドは、形質移入された細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、本方法にはさらに、ポリペプチドの発現を検出することが含まれる。形質移入された細胞は、当技術分野において知られている任意の方法により、ポリペプチドの発現をアッセイし得る。使用されるアッセイには、Biacore分析、フローサイトメトリ、FACS解析、免疫蛍光法、免疫細胞化学、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、ELISA、サンドイッチイムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体などの技術を使用して、アッセイ、免疫ラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、及びプロテインAイムノアッセイ等の技法を用いた競争的及び非競争的アッセイ系が含まれるが、これに限定されない。係るアッセイは、当技術分野においては日常的に行われており、周知のことである例えば、Ausubelら編、1994、CurrentProtocolsinMolecularBiology第1巻、JohnWileySons,Inc.NewYorkを参照のこと。いくつかの実施形態では、本方法には、細胞表面上のポリペプチド発現を検出することが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は検出分子と接触する。いくつかの実施形態では、検出分子は、免疫グロブリン重鎖定常領域に対する抗体である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、検出分子は、蛍光団又は発色団で標識化されている。いくつかの実施形態では、本方法には、フローサイトメトリを用いたポリペプチドの発現を検出することが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、フローサイトメトリを用いた検出分子と結合する細胞を同定することが含まれる。本明細書で使用されている検出分子という表現には、検出分子集団が含まれるがこれに限定されない。例えば、検出分子は抗体の溶液、又はタンパク質若しくはタンパク質断片の溶液でもよい。同様に、検出分子により結合された細胞という表現には、多数の検出分子と結合する細胞が含まれるが、これに限定されない。フローサイトメトリ及びFACSは、当業者の間で知られている技法である。フローサイトメトリは、細胞から特定のマルチパラメータデータを生成させるため、光散乱、蛍光色素分子の光励起及び発光の原則を利用する。1つ1つの細胞がセンシングポイントを介してストリームの中を流れる時、機器が細胞の測定を行う。フローサイトメトリを用いて、蛍光活性化細胞選別又はFACSにより細胞集団の精製又は個別細胞の単離を行うことができる。いくつかの実施形態では、細胞は、毎秒10~20,000個の速さで分析される。いくつかの実施形態では、細胞は、毎秒1,000~10,000個の速さで分析される。いくつかの実施形態では、細胞は、毎秒100~1000個の速さで分析される。いくつかの実施形態では、約1×106~1×108個の細胞が分析される。いくつかの実施形態では、約1×106個の細胞が分析される。ある実施形態では、約5×106個の細胞が分析される。いくつかの実施形態では、約1×107個の細胞が分析される。いくつかの実施形態では、約2.5×107個の細胞が分析される。いくつかの実施形態では、細胞は分析され、ソートされる。いくつかの実施形態では、約2.5×107個の細胞が、FACS機器にかけられ、解析され得る。標的細胞を約8つの96ウェルプレートのウェルにソートし、600~700の個別クローンを単離することは可能である。よって、フローサイトメトリの利用により、大量の細胞を迅速にスクリーニングすることができる。同様に、FACSを利用することで、大量の細胞を検出及びソートすることが可能となり、個別の細胞を迅速に単離することができる。いくつかの実施形態では、細胞製造法には、本明細書に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はベクターで細胞を形質移入することが含まれる。いくつかの実施形態では、形質移入された細胞は、ポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、本方法には、細胞表面上のポリペプチド発現を検出することが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、ポリペプチドを発現する細胞を選択することが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は検出分子と接触する。いくつかの実施形態では、検出分子は、免疫グロブリン重鎖定常領域に対する抗体である。いくつかの実施形態では、検出分子は対象の標的例えば、タンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、検出分子は、蛍光団及び発色団で標識化されている。いくつかの実施形態では、本方法には、フローサイトメトリにより検出分子と結合する細胞を同定することが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、FACSにより検出分子と結合する細胞を単離することが含まれる。よって、本発明は、本明細書に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は本明細書に記載の任意の方法で生成される。いくつかの実施形態では、細胞には、本明細書に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞には、本明細書に記載のポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞には、免疫グロブリン重鎖定常領域及び非免疫グロブリン膜貫通部を含んだポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは膜結合性であり、細胞の表面上に発現する。本発明はまた、ヘテロ二量体分子を生成する細胞を提供する。ヘテロ二量体分子は膜結合性であり、細胞の表面で発現し、細胞から分泌されない。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子には、本明細書に記載のポリペプチドが含まれ、さらに少なくとも1つの追加ポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、追加ポリペプチドには、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域が含まれる。いくつかの実施形態では、追加ポリペプチドには、免疫グロブリンFc領域が含まれる。いくつかの実施形態では、追加のポリペプチドには、免疫グロブリン重鎖が含まれる。ある実施形態では、少なくとも1つの追加ポリペプチドには、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖が含まれる。ある実施形態では、少なくとも1つの追加ポリペプチドには、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンが含まれる。いくつかの実施形態では、追加ポリペプチドは抗体である。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子は、共有結合的に第2のポリペプチドと結合する膜結合性ポリペプチドであり、膜結合性ポリペプチドには、a免疫グロブリン重鎖定常領域、及びb膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、膜結合性ポリペプチドは、ジスルフィド結合を形成することにより第2のポリペプチドと結合する。いくつかの実施形態では、膜結合性ポリペプチドは、第2のポリペプチドと少なくとも1つのジスルフィド結合を形成し、ヘテロ二量体分子を形成する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子は免疫グロブリン重鎖と共有結合的に結合する膜結合性ポリペプチドであり、膜結合性ポリペプチドには、a免疫グロブリン重鎖定常領域、及びb膜貫通部が含まれる。いくつかの実施形態では、膜結合性ポリペプチドは、ジスルフィド結合を形成することにより免疫グロブリン重鎖と結合する。いくつかの実施形態では、膜結合性ポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖と少なくとも1つのジスルフィド結合を形成する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域と軽鎖可変領域が単一の抗原結合部位を形成するよう、免疫グロブリン重鎖は免疫グロブリン軽鎖とペアになる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖は、免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖双方を有する単一の免疫グロブリンの一部である。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子は、一価の抗体分子である。いくつかの実施形態では、細胞表面上に発現するヘテロ二量体分子は、分泌抗体と結合しない。よって、いくつかの実施形態では、細胞には、aCH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び非免疫グロブリン膜貫通部の両者を含んだポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びb少なくとも1つの追加ポリペプチドをコードする少なくとも1つの追加ポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの追加ポリペプチドには、免疫グロブリン重鎖、及び/又は免疫グロブリン軽鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの追加ポリペプチドには、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンが含まれる。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの追加ポリペプチドは抗体である。いくつかの実施形態では、追加ポリペプチドは、細胞から分泌され得る抗体である。ある実施形態では、細胞の表面に発現する本発明のポリペプチド類は、分泌抗体と結合しない。本発明はまた、本明細書に記載のポリペプチド及び/又はヘテロ二量体分子を発現するハイブリドーマ細胞及びハイブリドーマ製造方法を提供する。いくつかの実施形態では、ハイブリドーマ細胞の製造方法には、本発明のポリペプチドを発現する細胞を抗体産生細胞と融合させることが含まれる。いくつかの実施形態では、融合されたハイブリドーマ細胞は、細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する。抗体産生細胞は、B細胞、プラズマ細胞、骨髄腫、ハイブリドーマ、及び組換え細胞を含むがこれに限定されない、抗体分子を生成することができる、又は生成している任意の細胞である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により、細胞が発現するポリペプチドでヘテロ二量体分子を形成する免疫グロブリン重鎖が融合細胞に寄与することとなる。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により、抗原結合部位を形成するために免疫グロブリン重鎖と結合する免疫グロブリン軽鎖が融合細胞に寄与することとなる。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有し、発現するポリペプチドでヘテロ二量体分子を形成する単鎖免疫グロブリンが、融合細胞に寄与することとなる。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞はマウス細胞である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、抗体産生細胞集団である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、免疫化動物から単離された細胞である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、未処理動物から単離された細胞である。他の実施形態では、抗体産生細胞には、複数のポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは免疫グロブリン軽鎖を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンを含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリペプチドには、DNAライブラリーが含まれる。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、免疫化動物の細胞から生成される。他の実施形態では、DNAライブラリーは、未処理ライブラリーである。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、cDNAライブラリーである。いくつかの実施形態では、本方法により、複数のヘテロ二量体抗体分子を発現するハイブリドーマ細胞集団例えば、ライブラリーが製造される。本明細書に記載の方法により製造されるハイブリドーマ又はハイブリドーマライブラリーもまた提供される。本発明はまた、本明細書に記載のポリペプチドを含むヘテロ二量体分子を発現する細胞ライブラリーの製造方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞ライブラリーの製造方法には、複数のポリペプチドをコードする複数のポリヌクレオチドで、本発明のポリペプチドを発現する細胞を形質移入することが含まれる。いくつかの実施形態では、形質移入された細胞はヘテロ二量体分子を発現する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子は、形質移入された細胞の表面上に発現する。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドが、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリンFc領域を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドが、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンを含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドが、複数のポリペプチドをコードし、各ポリペプチドには、a免疫グロブリンFc領域、及びb無作為抽出ポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドにはDNAライブラリーが含まれる、いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、免疫化動物の細胞から生成される。他の実施形態では、DNAライブラリーは、未処理動物の細胞から生成される。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは未処理ライブラリーである。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、cDNAライブラリーである。ある実施形態では、DNAライブラリーは、無作為抽出ポリペプチドライブラリーをコードする。本明細書に記載の任意の方法により作られる細胞ライブラリーもまた提供される。本発明はまた、本発明の新規ポリペプチドを発現する細胞を提供し、また抗体を生成する。本発明のポリペプチド、抗体、及び/又は本明細書に記載のヘテロ二量体分子を発現するこれら細胞の製造方法もまた提供される。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、本明細書に記載の任意の新規ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドで形質移入される。いくつかの実施形態では、形質移入された細胞は、細胞表面上にヘテロ二量体分子を発現する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子にはポリペプチド及び免疫グロブリン重鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖は免疫グロブリン軽鎖と結合し、単一の抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン重鎖は単鎖免疫グロブリンの一部である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞はハイブリドーマライブラリーである。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞はハイブリドーマである。本発明はまた、本明細書に記載の新規ポリペプチドを含む細胞ライブラリーを提供する。いくつかの実施形態では、細胞ライブラリーの各細胞には、aCH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び膜貫通部の両者を含んだ第1のポリペプチド、並びにb免疫グロブリン重鎖を含む第2のポリペプチドが含まれ、これら2つのポリペプチドはヘテロ二量体分子を形成することができる。いくつかの実施形態では、これら2つのポリペプチドは、共有結合的に結ばれている。いくつかの実施形態では、これら2つのポリペプチドは、少なくとも1つのジスルフィド結合を形成する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子は細胞表面上で結合する。いくつかの実施形態では、各細胞はさらに免疫グロブリン軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドは単鎖免疫グロブリンである。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体分子は単一の抗原結合部位を含む。本発明はまた、抗体ではないポリペプチドを同定及び/又は選択する方法を提供する。ポリペプチドには、細胞表面受容体若しくはその断片、可溶性受容体又はその断片、細胞表面リガンド又はその断片、及び可溶性リガンド又はその断片が含まれるが、これに限定されない。ポリペプチドは、タンパク質が変異誘発したもの又は誘導体化したものが含まれ得る。ポリペプチドには、無作為抽出ポリペプチド、例えば、無作為抽出されたポリペプチドライブラリーが含まれ得る。いくつかの実施形態では、細胞ライブラリーの各細胞には、aCH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域を含む第1のポリペプチド、及びb第2のポリペプチドが含まれる。ある実施形態では、これら2つのポリペプチドが共有結合的につながる。いくつかの実施形態では、これら2つのポリペプチドは、少なくとも1つのジスルフィド結合を形成する。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む免疫グロブリン重鎖定常領域が含まれ、これら2つのポリペプチドはヘテロ二量体分子を形成することができる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、免疫グロブリンFc領域が含まれる、いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンが含まれる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、無作為抽出ポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、第2のポリペプチドには、a免疫グロブリンFc領域及びB無作為抽出ポリペプチドが含まれる。無作為抽出ポリペプチド又は無作為ポリペプチドライブラリー及びそれらをコードするポリヌクレオチドは、完全に無作為抽出であるか、又は無作為化による偏向を生じているかのいずれかである。ヌクレオチド及び/又はペプチドの化学合成を含むがこれに限定されない、当業者に周知の任意の方法を用いて、無作為抽出ポリペプチド又は無作為ペプチドライブラリ―を生成することができる例えば、米国特許出願第2003/0170753号及び国際出願第WO00/20574号を参照のこと。本明細書に記載の細胞ライブラリーは、特定のポリペプチドを生成する細胞からスクリーンされ得る。よって、本明細書に記載の細胞ライブラリーを検出分子と接触させることを含む細胞ライブラリーのスクリーニング法も、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、本方法にはさらに、検出分子と結合する細胞を同定することも含まれる。いくつかの実施形態では、本方法にはさらに、検出分子と結合する細胞を単離することも含まれる。検出分子には、タンパク質、炭水化物、小分子、及びその変異体が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、検出分子はタンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子には対象の抗原が含まれる。いくつかの実施形態では、検出分子は、細胞の細胞表面受容体、抗体、リガンド又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、検出分子は、蛍光団、発色団又は磁気化合物である。いくつかの実施形態では、検出分子と結合する細胞は、フローサイトメトリにより同定される。いくつかの実施形態では、検出分子と結合する細胞は、FACSにより単離される。IV.抗体又はポリペプチドを同定、選択及び/又は単離する方法対象の抗原に対するモノクロナール抗体を生成するハイブリドーマ細胞の同定は、典型的には、細胞上清のELISAスクリーニングにより達成される。上清は、単一細胞制限希釈クローニング技法により単離される無作為細胞により生成され得る。又は、上清はハイブリドーマライブラリー由来のハイブリドーマ細胞のプールにより生成され得、それにより任意のELISAポジティブプール由来の細胞は、単一細胞クローニングによりサブクローンされ、単離されなければならない。これらの方法には多くの限界が存在する。まず第一に、ELISAポジティブクローンを見つけるために、単一細胞培養液を含む大量のプレートをスクリーンしなければならない。ハイブリドーマプールスクリーニングの場合、対象のハイブリドーマの純粋クローンを単離するために、各ELISAポジティブクローンをさらに制限希釈クローンにより分離しなければならない。これら両方法とも非常な労力を要し、時間がかかる。さらに、いくつかの実施形態では、ハイブリドーマライブラリーのうち所望のクローンが占める割合は極端に低く、そのため希少クローンの同定が困難である。その上、ELISAスクリーニング方式は、単一の抗原への結合活動を同定する。個別ハイブリドーマクローンが、2以上の抗原、複数、連続的ELISAと結合できるモノクロナール抗体を生成するかどうかを評価する必要がある。本発明の新規ポリペプチド、細胞、及び細胞ライブラリーは、対象の抗原又は標的に特異的な抗体を生成する細胞を同定及び単離する方法において用いられ得る。いくつかの実施形態では、特異的抗体を生成する細胞を同定する方法には、本明細書に記載の新規ポリペプチドを含む細胞を、ハイブリドーマ細胞集団を生成する抗体産生細胞と融合させることが含まれる。いくつかの実施形態では、ハイブリドーマ細胞は、細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する。いくつかの実施形態では、本方法には、ハイブリドーマ細胞集団を検出分子と接触させることが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合するハイブリドーマ細胞を同定することが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合する細胞を単離することが含まれる。いくつかの実施形態では、検出分子は対象の標的である。いくつかの実施形態では、検出分子は、タンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、抗体分子を生成するハイブリドーマ細胞は、当業者の間でパニングとして知られているアフィニティ選択の形式を用いて同定される。細胞を検出分子例えば、対象の抗原でインキュベートし、検出分子により同定された細胞を単離する。単離された細胞由来の免疫グロブリンDNAを増幅し、細胞に再導入する。再び細胞を検出分子でインキュベートし、検出分子と結合した細胞を単離する。1又はそれ以上の選択ラウンドにより、対象の標的に対する所望の特異性を有する抗体又はその断片を選択、濃縮することができる。よって、所望の抗体分子を発現する希少細胞を、大量かつ高度に多様化した集団から選択することが可能である。本明細書に記載の通り、いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドには、CH2及びCH3を含む免疫グロブリン重鎖定常領域及び膜貫通部の両者が含まれる。ポリペプチドは、抗体産生細胞が発現する免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアと共有結合的に連結し、細胞表面に発現されるヘテロ二量体抗体分子を形成することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体分子は、単一の抗原結合部位を含み及び一価抗体である。個別細胞上にあるヘテロ二量体分子の単一の抗原結合部位は、個別細胞により生成及び分泌された抗体の結合特異性を表している。よって、対象の特異的抗原に結合するヘテロ二量体抗体分子を有する細胞を同定することにより、同じ結合特異性を有する分泌抗体をも生成する細胞の単離が可能となる。抗体産生細胞は、天然で抗体例えば、B細胞を生成する細胞であろうと、又は、組換え手段例えば、形質移入された細胞により抗体を作る細胞であろうと、抗体を産生する細胞であればいかなる細胞であってもよい。よって、いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、B細胞、プラズマ細胞、骨髄腫、又は組換え細胞である。いくつかの実施形態では、抗体性細胞は、マウス細胞である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、抗体産生細胞集団である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、免疫化動物由来である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞は、未処理動物由来である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞には、複数のポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン軽鎖をさらに含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンを含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドには、DNAライブラリーが含まれる。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、免疫化動物の細胞から生成される。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、未処理動物の細胞から生成される。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、未処理ライブラリーである。他の実施形態では、DNAライブラリーは、cDNAライブラリーである。本明細書で提供される方法では、抗体産生細胞により生成される抗体のタイプは制限されない。よって、いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により作られる抗体は、組換え抗体、モノクロナール抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、又は抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により作られる抗体は、モノ特異的抗体又はマルチ特異的抗体例えば、二重特異的抗体である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により作られる抗体は、IgA、IgD、IgE、IgG若しくはIgM抗体又はそのサブタイプである。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により作られる抗体は、IgG1又はIgG2抗体である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により作られる抗体は、IgG2抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はマウス抗体である。いくつかの実施形態では、抗体産生細胞により作られる抗体は、ヒト化抗体である。他の実施形態では、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態では、特異的抗体を生成する細胞の同定方法には、少なくとも1つの追加ポリペプチドをコードする少なくとも1つのポリヌクレオチドを有する、本明細書に記載の新規のポリペプチドを含む細胞を形質移入することが含まれる。いくつかの実施形態では、形質移入された細胞は、細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する。いくつかの実施形態では、本方法には、形質移入された細胞を検出分子と接触させることが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合する形質移入された細胞を同定することが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合する細胞を単離することが含まれる。いくつかの実施形態では、検出分子は対象の標的である。いくつかの実施形態では、検出分子は、タンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドには、複数のポリペプチドをコードする複数のポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン重鎖を含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン軽鎖をさらに含む複数のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖免疫グロブリンを含む複数及び/又はポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、複数のポリヌクレオチドには、DNAライブラリーが含まれる。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、免疫化動物の細胞から生成される。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、未処理動物の細胞から生成される。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは未処理ライブラリ―である。他の実施形態では、DNAライブラリ―は、cDNAライブラリーである。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドは、組換え抗体、モノクロナール抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、又はその断片である。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドは、モノ特異的抗体又はマルチ特異的抗体例えば、二重特異的抗体であるポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドは、IgA、IgD、IgE、IgG若しくはIgM抗体又はそのサブタイプであるポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドは、IgG1又はIgG2抗体であるポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドは、IgG2抗体であるポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドは、マウス抗体であるポリペプチドをコードする。少なくとも1つのポリヌクレオチドは、ヒト化抗体であるポリペプチドをコードする。他の実施形態では、少なくとも1つのポリヌクレオチドは、ヒト抗体であるポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、特異的抗体を生成する細胞の同定方法には、本明細書に記載の任意の新規ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はベクターで、抗体産生細胞を含む細胞ライブラリーを形質移入することが含まれる。いくつかの実施形態では、形質移入された細胞は、細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子を発現する。いくつかの実施形態では、本方法には、形質移入された細胞を検出分子に接触させることが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合する形質移入された細胞を同定することが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合する形質移入された細胞を単離することが含まれる。いくつかの実施形態では、検出分子は対象の標的である。いくつかの実施形態では、検出分子は、タンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、細胞ライブラリーは、B細胞、プラズマ細胞、ハイブリドーマ、骨髄腫、又は組換え細胞である。いくつかの実施形態では、細胞ライブラリーは、ハイブリドーマライブラリーである。いくつかの実施形態では、細胞ライブラリーにはマウス細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞ライブラリーにはヒト細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、特異的抗体を分泌するが、細胞表面上にも分泌抗体の結合特異性を表す単一の抗原結合部位を含む一価のヘテロ二量体抗体分子を発現する、細胞又はハイブリドーマを生成する。このヘテロ二量体抗体分子、従って抗体産生細胞は、検出分子を用いて同定され得る。いくつかの実施形態では、検出分子は対象の抗原である。いくつかの実施形態では、検出分子は、タンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、検出分子は、蛍光団、発光団又は磁気化合物で標識化されている。いくつかの実施形態では、検出分子と結合する細胞は、フローサイトメトリで同定される。いくつかの実施形態では、検出分子と結合する細胞は、FACSにより単離される。本発明の新規ポリペプチド、細胞、及び細胞ライブラリーは、対象の抗原又は標的に特異的な抗体のスクリーニング法で使用され得る。いくつかの実施形態では、特異的抗体のスクリーニング法には、本明細書に記載の細胞又は細胞ライブラリーをスクリーニングすることが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞例えば、細胞ライブラリーは、細胞表面上にヘテロ二量体分子を発現する。本明細書に記載の通り、細胞表面上に発現するヘテロ二量体分子には、細胞により生成される抗体の結合部位と同じ結合部位が含まれる。いくつかの実施形態では、特異的抗体のスクリーニング法には、細胞を検出分子と接触させることが含まれる。検出分子と結合するヘテロ二量体分子を発現する細胞は、検出分子に特異的な抗体分子を発現する。いくつかの実施形態では、スクリーニング法には、検出分子に結合する細胞を同定することが含まれる。いくつかの実施形態では、スクリーニング法には、検出分子と結合する細胞を単離することが含まれる。いくつかの実施形態では、スクリーニング法には、検出分子と結合する細胞によって生成される抗体を単離することが含まれる。いくつかの実施形態では、検出分子は対象の標的である。いくつかの実施形態では、検出分子はタンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、検出分子は標識化されている。いくつかの実施形態では、膜MAb技法を用いた特異的抗体のスクリーニングには、増幅後の反復的な選択ラウンドが含まれる。例えば、細胞例えば、293-hMT細胞又は293T-hMT細胞は、ライブラリーDNAで形質移入される。任意の1つの形質移入に用いられるDNAの量及び細胞の数は、ライブラリー及び/又はライブラリーの多様性に依存する。いったん形質移入されたら、細胞は、24~48時間インキュベートされ、培養される。その後、細胞を収穫し、洗浄し、標的分子例えば、対象の抗原でスクリーンする。スクリーニング分子は、直接標識化される場合もあり、又は標識化された第2の分子により検出される場合もある。標識化された細胞は、当業者に周知の方法、例えば、FACS又は磁気ビーズを用いることで、解析及び/又はソートされる。ソートされた細胞由来のプラスミドDNAは、抽出され、増幅される。プラスミドDNAは、任意の周知の方法により抽出、精製されてもよい。例えば、フェノール/クロロホルム混合物と、その後エタノール沈殿を用いて、プラスミドDNAを抽出することができる。その後、精製されたプラスミドを用いて、バクテリアを形質転換し、単離されたDNAを増幅することができる。又は、DNAを細胞から単離し、当業者に周知のPCR法により特定の領域を増幅してもよい。PCR生成物を、バクテリアを形質転換し、プラスミドを増幅するために用いられる宿主プラスミドに戻しサブクローン化する。いずれかの方法を用いて得られた、第1選択から増幅されたライブラリアウトプットを用いて、新鮮な細胞例えば、293-hMT又は293T-hMT細胞を形質移入し、その後、同じ標的又は抗原を使って選択ラウンドを実施する。このようにして、対象の標的又は抗原に特異的に結合する抗体集団が濃縮されるまで、複数回の選択ラウンドを行う。いったんライブラリーが特異的抗体分子集団を濃縮すると、DNAは単離され、バクテリアを形質転換するために用いられる。単一のコロニーが選ばれ、プラスミドDNAが単離される。可溶性抗体の生成のため、クローンプラスミドを用いて、哺乳動物細胞例えば、親HEK-293又は親293T細胞の形質移入が行われる。その結果得られた抗体は、その後、ELISA、FACS及び/又はBiacoreにより所望の標的に特異的に結合するかどうか試験される。プラスミドで哺乳動物細胞を一時的に形質移入すると、通常は、細胞毎にプラスミドの複製が複数生じる。細胞毎の複製数は、100~10,000の範囲であり得る。細胞毎の絶対数は、トランスフェクションプロトコル、トランスフェクション試薬、プラスミドの品質、プラスミドのサイズ、及び細胞密度等の多様な要素に依存するが、これに限定されない。細胞表面に表示された抗体のライブラリーを生成するにあたり、細胞内に導入された抗体コードプラスミド又はAbライブラリープラスミドの量を調節することが望ましい。いくつかの実施形態では、細胞のAbライブラリープラスミドのプラスミド複製数を調節するために、別の担体プラスミドを使用してもよい。担体プラスミドをAbライブラリープラスミドと混ぜ合わせ、利用可能なプラスミドスペースplasmidspaceの一部を利用する。よって、いくつかの実施形態では、細胞により利用されるAbライブラリープラスミドの数を調節するために、担体プラスミドをAbライブラリープラスミドと異なる割合で混ぜ合わせ、その後、細胞に形質移入する。いくつかの実施形態では、宿主細胞の表面上のポリペプチド発現を調節する方法には、aポリペプチドをコードするDNA、及びb無関係DNAの過剰量を宿主細胞に形質移入することが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ヘテロ二量体抗体分子である。よって、いくつかの実施形態では、宿主細胞の表面上のヘテロ二量体抗体分子の発現を調節する方法には、aDNAコード免疫グロブリン、及びb無関係DNAの過剰量を宿主細胞に形質移入することが含まれる。いくつかの実施形態では、無関係DNAに対し免疫グロブリンをコードするDNAの割合は、1:10~1:1,000,000である。いくつかの実施形態では、無関係DNAに対し免疫グロブリンをコードするDNAの割合は、1:10、1:100、1:1000、1:10,000、1:100,000、1:1,000,000、又はこれらの間の任意の割合である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンをコードするDNAは、プラスミドDNAであり、無関係DNAは、プラスミドDNAである。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、本明細書に記載の任意のポリペプチド又はポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンには、免疫グロブリン重鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体には、免疫グロブリン軽鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンは、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を有する単鎖抗体分子である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンをコードするDNAは、DNAライブラリーである。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、免疫化動物の細胞から生成される。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、未処理動物の細胞から生成される。いくつかの実施形態では、DNAライブラリーは、cDNAライブラリーである。いくつかの実施形態では、本方法にはさらに、宿主細胞を検出分子と接触させることが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合する宿主細胞を同定することが含まれる。いくつかの実施形態では、本方法には、検出分子と結合する宿主細胞を単離することが含まれる。本発明はまた、本明細書に記載の任意の方法により同定、選択、及び/又は単離された細胞により精製される抗体も提供する。本発明はまた、本明細書に記載の任意の方法により単離された細胞により精製された抗体も提供する。V.抗体本明細書に記載の通り、本発明の新規のポリペプチド及び細胞は、対象の標的例えば、抗原を特異的に結合させる抗体を同定、選択及び/又は単離するために用いてもよい。いくつかの実施形態では、細胞表面上に発現するヘテロ二量体抗体分子には、単一の抗原結合部位を形成する免疫グロブリン重鎖-軽鎖のペアが含まれる。単一の抗原結合部位は、細胞により生成、分泌される抗体の抗原結合部位と同一であり、及び/又はそれを表している。本明細書で提供するポリペプチド、細胞及び方法は、生成する抗体のタイプに制限されない。いくつかの実施形態では、抗体はモノクロナール抗体である。モノクロナール抗体は、当業者に周知のハイブリドーマ法を用いて製造することができる例えば、KohlerとMilstein、1975、ネイチャーNature256:495を参照のこと。いくつかの実施形態では、マウス、ハムスター、又は他の適切な宿主動物は、関連抗原を複数の皮下注射、腹腔内注射又は静脈内注射により免疫する例えば、精製されたペプチド断片、全長組換えタンパク質、融合タンパク質等。抗原は、キーホールリンペットヘモシアニンKLH、又は血清アルブミン等の担体タンパク質に、任意選択的に結合させることができる。抗原は担体タンパク質の有無に関わらず、滅菌生理食塩水で希釈され、通常は、安定なエマルジョンを形成するためのアジュバント例えば、完全又は不完全フロイントアジュバントと組み合わされる。いくつかの実施形態では、免疫抗原はヒトタンパク質又はその一部であり得る。いくつかの実施形態では、免疫抗原はマウスタンパク質又はその一部であり得る。いくつかの実施形態では、マウスはヒト抗原で免疫化されている。いくつかの実施形態では、マウスはマウス抗原で免疫化されている。いくつかの実施形態では、単離されたリンパ球はinvitroで免疫化され得る。いくつかの実施形態では、単離されたリンパ球は非特異的に活性化される。いくつかの実施形態では、単離されたリンパ球は、マウスリンパ球である。いくつかの実施形態において、単離されたリンパ球はヒトリンパ球である。免疫化及び/又は活性化に続き、ハイブリドーマを生成するために、例えば、ポリエチレングリコールを用いて、好適な細胞株でリンパ球を単離及び融合する。ハイブリドーマを生成するために使用される細胞株には、本明細書に記載の新規のポリペプチドを発現する任意の細胞株が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、ハイブリドーマ細胞は、当業者の間で知られている特別な媒体を利用して選択する。いくつかの実施形態では、選択された抗原に対抗するモノクロナール抗体を生成するハイブリドーマは、免疫沈降、イムノブロッティング、及びinvitro結合アッセイ例えば、フローサイトメトリーFACS、酵素免疫測定法ELISA、ラジオイムノアッセイRIA等の多様な技法により同定してもよいが、これに限定されない。他の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の任意の方法を用いて、ヘテロ二量体抗体分子の一部として細胞表面上に発現する抗原結合部位に基づき直接選択される。ハイブリドーマは、標準的な方法を用いたinvitro培養でGoding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,AcademicPress社、1986、又は動物の腹水としてinvivoのいずれかで増殖することができる。モノクロナール抗体は、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析等、当分野における標準的方法に従って、培養培地又は腹水から精製され得るが、これらに限定されない。代わりに、当業者に知られている組換えDNA技法を用いて、モノクロナール抗体を製造することもできる米国特許第4,816,567号を参照のこと。いくつかの実施形態では、モノクロナール抗体をコードするポリヌクレオチドは、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたRT-PCR等の技法を使って、成熟したB細胞又はハイブリドーマ細胞から単離される。単離されたポリヌクレオチドの配列は、従来のシークエンシング技法を使って決定され得る。重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドは、好適な発現ベクターにクローンされ得る。これら発現ベクターは、大腸菌、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、ヒト胎児腎臓細胞HEK、又は、別の手段では免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞等の宿主細胞に形質移入される場合、モノクロナール抗体を生成する。いくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドは、CH2ドメイン及びCH3ドメイン及び膜貫通部を含む免疫グロブリン重鎖含有ポリペプチドを発現する、本発明の細胞に形質移入される。組換えモノクロナール抗体、又はその断片もまた、所望の種のCDRsを発現するファージディスプレイライブラリーから単離され得る例えば、McCaffertyら、1990,ネイチャーNature、348:552-554;Clacksonら、1991、ネイチャーNature、352:624-628;及びMarksら、1991、J.Mol.Biol、222:581-597を参照のこと。モノクロナール抗体をコードするポリヌクレオチドをさらに組換えDNA技法を用いて修飾し、代替抗体を生成することができる。いくつかの実施形態では、例えば、マウスモノクロナール抗体の軽鎖及び重鎖の定常ドメインを、1例えば、ヒト抗体のこれら領域と置換しキメラ抗体を生成する、又は2非免疫グロブリンポリペプチドと置換し融合抗体を生成することは可能である。いくつかの実施形態では、定常領域はトランケート又は除去され、モノクロナール抗体の所望の抗体断片を生成する。可変領域の部位特異的又は高密度突然変異誘発を使用して、モノクローナル抗体の特異性、親和性及び/又は他の生物学的特性を最適化することができる。いくつかの実施形態では、CDRsの部位特異的な変異誘発を使用して、モノクローナル抗体の特異性、親和性及び/又は生物学的特性を最適化することができる。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。典型的に、ヒト化抗体は、相補性決定領域CDRsの残基を、当業者に知られている方法を用いて、所望の特異性、親和性及び/又は機能性を有する非ヒト種例えば、マウス、ラット、ラビット、ハムスターのCDRsの残基で置換したヒト免疫グロブリンである。いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンのFv枠組み領域FR残基を、所望の特異性、親和性及び/又は機能性を有する非ヒト免疫グロブリンの相応する枠組み領域残基で置換する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はさらに、Fv枠組み領域において、及び/又は特異性、親和性及び/又は機能性を精錬し、最適化する、置換された非ヒト残基内において、追加の残基置換基で修飾され得る。一般に、ヒト化抗体には、非ヒト免疫グロブリンに相応するCDRsの全て、又は実質的に全てを含む、少なくとも1つ、典型的には2つ又は3つの可変ドメインの実質的に全てが含まれ、一方で、枠組み領域の全て、又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のそれである。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体にはまた、免疫グロブリン定常領域又はドメインFcの少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれが含まれる。ある実施形態では、係るヒト化抗体は治療的に利用される。その理由は、ヒト対象に投与する時、抗原性及びHAMAヒト抗マウス抗体反応を低下させる場合があるためである。当業者であれば、既知の技法に従って、免疫原性の低下した機能性ヒト化抗体を得ることができる例えば、米国特許第5,225,539号、第5,585,089号、第5,693,761号、及び第5,693,762号を参照のこと。ある実施形態では、抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で知られている様々な技法を使って直接製造することができる。標的抗原に対抗する抗体を生成する、invitroで免疫化された又は免疫化された個体から単離された、不死化ヒトBリンパ球を生成することが可能である。代わりに、ヒト抗体を、ヒト抗体を発現するファージライブラリから選択することもできる例えば、Vaughanら、1996、ネイチャーバイオテクノロジーNat.Biotech.、14:309-314;Sheetsら、1998,米国科学アカデミー紀要PNAS、95:6157-6162;HoogenboomとWinter,1991、分子生物学誌JMol.Biol、227:381;及びMarksら、1991、分子生物学誌JMol.Biol、222:581を参照のこと。抗体ファージライブラリの生成及び利用の技法についてはまた、米国特許第5,969,108号、第6,172,197号、第5,885,793号、第6,521,404号、第6,544,731、第6,555,313号、第6,582,915号、第6,593,081号、第6,300,064号、第6,653,068号、第6,706,484号、及び第7,264,963号、並びにRotheら、2008、分子生物学誌J.Mol.Bio.、376:1182-1200に記載されている。親和性成熟戦略及び鎖シャッフリング戦略については、当技術分野で知られており、これらを高度親和性ヒト抗体を生成するために利用してもよいMarksら、1992、バイオテクノロジーBio/Technology、10:779-783。ヒト抗体はまた、予防接種時に、内因性免疫グロブリン産生不在下でヒト抗体の全レパートリーを生成できる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスで製造され得る。この方式は、米国特許第5,545,807号、第5,545,806号、第5,569,825号、第5,625,126号、第5,633,425号、及び第5,661,016号に記載されている。ある実施形態では、抗体は二重特異的抗体である。二重特異的抗体は、少なくとも2つの異なるエピトープを特異的に認識し、結合することができる。異なるエピトープは、同じ分子内か、また異なる分子上のいずれかに存在し得る。ある実施形態では、抗体は、第1抗原標的を発現する細胞に対する細胞防衛メカニズムに集中するため、白血球上のエフェクター分子例えば、CD2、CD3、CD28、又はB7、又はFc受容体例えば、CD64、CD32、又はCD16等の第1抗原標的並びに第2抗原標的を特異的に認識し、結合する。いくつかの実施形態では、抗体を用いて、細胞傷害性薬物を特定の標的抗原を発現する細胞に向かわせることができる。これらの抗体は、抗原結合アーム、及び細胞傷害性薬物又はEOTUBE、DPTA、DOTA、若しくはTETA等の放射性核種のキレート剤を保有する。二重特異性抗体の製造技法は、当業者の間で知られており、例えば、Millstemら、1983、ネイチャーNature、305:537-539;Brennanら、1985、サイエンスScience、229:81;Sureshら、1986、酵素学の方法MethodsinEnzymol、121:120;Trauneckerら、1991、欧州生物学機構誌EMBOJ.、10:3655-3659;Shalabyら、1992、実験医学誌J.Exp.Med.、175:217-225;Kostelnyら、1992、米国免疫学誌J.Immunol、148:1547-1553;Gruberら、1994、米国免疫学誌J.Immunol.、152:5368;及び米国特許第5,731,168号を参照のこと。二重特異性抗体は、インタクトな抗体又は抗体断片であり得る。2より多くの原子価を有する抗体も考慮される。例えば、三重特異性抗体を産生することも可能であるTuttら、1991、米国免疫学誌J.Immunol.、147:60。よって、ある実施形態では、抗体は多重特異的である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、単一の遺伝子コンストラクトから生成される単鎖免疫グロブリンである例えば、Leeら、1999、分子免疫学誌MolecularImmunology、36:61-71を参照のこと。単鎖免疫グロブリンには、その全体にわたり、免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖の両方が含まれる。例えば、軽鎖のカルボキシル末端を、Gly-Serリンカーペプチドを介して、重鎖のアミノ酸末端に接合させる。その中で、軽鎖には可変領域及び定常領域が含まれ、重鎖には可変領域及びCH1、CH2及びCH3が含まれる。これらの単鎖免疫グロブリンは、二量体抗体分子を形成する。ある実施形態では、本明細書に記載の抗体又は他のポリペプチドは、モノ特異的であってもよい。ある実施形態では、抗体は抗体断片である。抗体断片は、インタクト抗体とは異なる機能又は能力を有する場合がある。例えば、抗体断片の腫瘍浸透が増加することもあり得る。抗体断片の生成として、インタクト抗体のタンパク質分解消化を含むがこれに限定されない、様々な技法が知られている。いくつかの実施形態では、抗体断片には、抗体分子のペプシン消化により生成されるFab2断片が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体断片には、Fab2断片のジスルフィド架橋を還元することにより生成されるFab断片が含まれる。他の実施形態では、抗体断片には、パパイン及び還元剤で抗体分子を処理することにより生成されるFab断片が含まれる。ある実施形態では、抗体断片は、組換えで生成される。いくつかの実施形態では、抗体断片には、Fv又は単鎖FvscFv断片が含まれる。Fab、Fv及びscFv抗体断片は、大腸菌又はその他の宿主からの発現、分泌が可能であり、そのため断片の大量生成が可能となる。いくつかの実施形態では、抗体断片は、本明細書に記載の抗体ファージライブラリーから単離する。例えば、本方法を用いてFab発現ライブラリーを構成しHuseら、1989、サイエンスScience、246:1275-1281、タンパク質又は誘導体、断片、類似体又はその相同体に対し所望の特異性を有するモノクロナールFab断片を迅速かつ有効的に同定できるようにする。いくつかの実施形態では、抗体断片は、米国特許第5,641,870号に記載の直線抗体断片である。ある実施形態では、抗体断片は、モノ特異的又は二重特異的である。ある実施形態では、抗体は、scFvである。所定の標的抗原に特異的な単鎖抗体の生成に、多様な技法を用いることができる例えば、米国特許第4,946,778号を参照のこと。半減期の血清を増加させるためには、特に抗体断片の場合には、抗体を修飾することがさらに望ましくなり得る。これは、例えば、エピトープに結合するサルベージ受容体を、抗体断片の適切な領域の突然変異による抗体断片に組み入れることにより、又は、エピトープをペプチドタグに組み入れて後、抗体断片の末端又は中間のいずれかに融合させることにより例えば、DNA又はペプチド合成によって達成され得る例えば、米国特許第6,096,871号及び第6,121,022号を参照のこと。本発明の目的のためには、修飾抗体又はその断片には、それが結合する特異的抗原との結合をもたらす任意のタイプの可変領域が含まれ得ると理解されるべきである。この点に関して、可変領域は、体液性応答をマウントし、所望の抗原に対する免疫グロブリンを生成するために誘導され得る、任意の哺乳動物タイプ由来であってもよい。それゆえ、修飾抗体の可変領域は、例えば、ヒト、マウス、非ヒト霊長類例えば、カニクイザル、アカゲザル等又はラビットオリジンのものであり得る。いくつかの実施形態では、修飾された免疫グロブリンの可変及び定常領域双方ともヒトである。他の実施形態では、互換性のある抗体の可変領域通常は、非ヒトのソースから抽出は、結合特性を改善するために、又は分子の免疫原性を低減するために、設計又は特異的に仕立てることが可能である。この点において、本発明に有益な可変領域はヒト化され、そうでなければ、インポートされたアミノ酸配列を含めることにより変更される。ある実施形態では、重鎖及び軽鎖双方における可変領域は、1又はそれ以上のCDRsの少なくとも部分的置換により、及び、必要であれば部分的枠組み領域置換及び配列修飾により変更される。CDRsは、枠組み領域由来の抗体と同じクラス又はサブクラスも含め、それら抗体から得てもよいが、CDRsは、異なるクラスの抗体、好ましくは、異種の抗体由来となると想定される。1つの可変ドメインの抗原結合能力を別のドメインに移すために、全CDRsをドナー可変領域の全CDRsと置き換える必要性はない場合がある。むしろ、抗原結合部位の活性を維持するのに必要なこれら残基を移すことだけが必要であると言える。可変領域の変更にも関わらず、当業者であれば、本発明の修飾抗体には、未処理又は未変更の定常領域を含むほぼ同様の免疫原性の抗体と比較して、腫瘍局在の増加、腫瘍浸透の増加、血清半減期の減少、又は血清半減期の増加等、所望の生化学特性を提供するために、1又はそれ以上の定常領域の少なくとも一部が削除され、そうでなければ変更される抗体例えば、全長抗体又はその抗原結合性断片が含まれると理解するであろう。いくつかの実施形態では、修飾抗体の定常領域には、ヒト定常領域が含まれる。定常領域に対する修飾には、1又はそれ以上のドメインの1又はそれ以上のアミノ酸の追加、欠失又は置換が含まれる。本明細書で開示される修飾抗体には、3つの重鎖定常ドメインCH1、CH2若しくはCH3のうち1若しくはそれ以上、及び/又は軽鎖定常ドメインCLに対する変更若しくは修飾が含まれ得る。いくつかの実施形態では、1又はそれ以上のドメインは、修飾抗体の定常領域から部分的に又は全体が削除される。いくつかの実施形態では、CH2ドメイン全体が除去されるΔCH2コンストラクト。いくつかの実施形態では、省略された定常領域ドメインは、定常領域が無い場合典型的に分子柔軟性を一部もたらす、短いアミノ酸スペーサー例えば、10aa残基に置き換えられる。ある実施形態では、修飾抗体は、CH3ドメインを抗体のヒンジ領域に直接融合させるよう設計されている。他の実施形態では、ペプチドスペーサーは、ヒンジ領域と修飾されたCH2ドメイン及び/又はCH3ドメインの間に挿入される。例えば、コンストラクトは、CH2ドメインが削除され、残りのCH3ドメイン修飾又は未修飾が5~20個のアミノ酸スペーサーでヒンジ領域に接合するよう発現されてもよい。定常ドメインの制御因子はフリーかつアクセス可能のままであり、又はヒンジ領域は柔軟なままであるよう、係るスペーサーを追加してもよい。しかし、アミノ酸スペーサーは免疫原性であり、コンストラクトに対して望ましくない免疫反応を誘発する場合のあることに留意されたい。従って、ある実施形態では、コンストラクトに追加する任意のスペーサーは、修飾抗体の所望の生物学的品質を維持するよう、比較的に非免疫原性的となる。いくつかの実施形態では、修飾抗体は、定常領域の部分的欠失、又は単一の場合も含め、少数のアミノ酸の置換のみを有するのでもよい。例えば、CH2ドメインの選択された領域における単一アミノ酸の突然変異は、Fc結合を実質的に低減し、よって、腫瘍局在及び/又は腫瘍浸透を増加させるのに十分である。同様に、調節対象の特異的エフェクター機能例えば、相補的C1q結合を制御する、1又はそれ以上の定常領域ドメインの一部を単純に除去することが望ましい場合もある。定常領域の係る部分的除去は、対象の定常領域ドメインインタクトに関連する、抗体の選択特性血清半減期を改良する可能性がある。さらに、先にも示唆したように、開示された抗体の定常領域を、結果的に得られるコンストラクトのプロファイルを強化する1又はそれ以上のアミノ酸の突然変異又は置換を介して修飾してもよい。この点に関して、修飾抗体の配置及び免疫病原性プロファイルを実質的に維持しながら、保存的結合部位例えば、Fc結合により提供される活動を破壊できる場合もある。ある実施形態では、修飾抗体には、エフェクター機能の低減又は増加等、所望の特性を強化するために、又はより多くの細胞毒若しくは炭水化物付着部位を提供するために、定常領域に対する1又はそれ以上のアミノ酸の追加が含まれる。定常領域はいくつかのエフェクター機能を媒介することは、当技術分野で知られている。例えば、抗原に結合したIgG抗体又はIgM抗体のFc領域に対する補体C1コンポーネントの結合は、補体系を活性化する。補体の活性化は、細胞の病原体のオプソニン化及び溶解において重要である。補体の活性化はまた炎症反応を刺激し、自己免疫過敏症にも関与し得る。さらに、抗体のFc領域は、Fc受容体FcRを発現する細胞に結合し得る。IgG抗体γ受容体、IgEε受容体、IgAα受容体及びIgMμ受容体を含む異なるクラスの抗体に特異的なFc受容体が多数存在する。細胞表面上で抗体がFc受容体に結合することで、貪食、抗体被覆粒子の破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆された標的細胞の溶解ADCC、炎症媒介物の放出、胎盤通過、及び免疫グロブリン産生の制御等を含む、数多くの重要かつ多様な生物反応を引き起こす。ある実施形態では、抗体は、逆に、投与された抗体の生物学的プロファイルに影響を与える、変更されたエフェクター機能を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、点突然変異又はその他の手段を介した定常領域ドメインの除去又は不活性化は、循環修飾抗体のFc受容体への結合を低減し、よって、腫瘍局在及び/又は浸透を増加させる場合がある。他の実施形態では、定常領域修飾が、抗体の血清半減期を増加又は低減する。いくつかの実施形態では、ジスルフィド連結又はオリゴ糖部分を削除し、強化された腫瘍局在及び/又は浸透を可能にするために、定常領域は修飾される。ある実施形態では、抗体は1又はそれ以上のエフェクター機能を有しない。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞毒性ADCC活動及び/又は補体依存性細胞毒性CDC活動を有しない。ある実施形態では、抗体は、Fc受容体及び/又は補体要因に結合しない。ある実施形態では、抗体はエフェクター機能を有しない。本発明はさらに、本明細書に記載のキメラ抗体、ヒト化及びヒト抗体、又はそれらの断片と実質的に相同な変異体及び等価物を包含する。これらは、例えば保存的置換突然変異、すなわち類似のアミノ酸による1つ又はそれ以上のアミノ酸の置換を含み得る。実施例1免疫グロブリン定常領域CD4コンストラクトの生成コンストラクトは、単一の配列、FLAGエピトープタグ、マウスIgG1のヒンジ領域及びCH2とCH3ドメイン、並びに膜MAbmIgG1と称されるヒトCD4の膜貫通ドメインTM及び細胞内ドメインICDを含むようデザインされた。第2のコンストラクトは、シグナル配列、FLAGエピトープタグ、ヒトIgG2のヒンジ領域及びCH2とCH3ドメイン、並びに膜MAbhIgG2と称されるヒトCD4の膜貫通ドメインTM及び細胞内ドメインICDを含むようデザインされた。第3のコンストラクトは、単一の配列、FLAGエピトープタグ、ヒトIgG2のヒンジ領域及びCH2とCH3ドメイン、ヒトCD4の膜貫通ドメインTM及び細胞内ドメインICD、並びに膜MAbhIgG2-GFP図6Aと称されるC末端の緑蛍光タンパク質GFPを含むようデザインされた。各コンストラクトで使用されるヒンジ領域の部分は、軽鎖のペアリングに関与するシステインの残基C末端を含むようデザインされた。膜MAbmIgG1コンストラクトは、シグナル配列-FLAG-mIgG1ヒンジ-CH2-CH3-hCD4TM/ICDの順番でデザインされた。これらは、配列番号24ヌクレオチド配列及び配列番号22シグナル配列を有するアミノ酸配列に示されている。膜MAbhIgG2コンストラクトは、シグナル配列-FLAG-hIgG2ヒンジ-CH2-CH3-hCD4TM/ICDの順番でデザインされた。これらは、配列番号25ヌクレオチド配列及び配列番号23シグナル配列を有するアミノ酸配列に示されている。膜MAbhIgG2-GFPコンストラクトは、シグナル配列-FLAG-hIgG2ヒンジ-CH2-CH3-hCD4TM/ICD-GFPの順番でデザインされた。これらは、配列番号27ヌクレオチド配列及び配列番号26シグナル配列を有するアミノ酸配列に示されている。膜MAbhIgG2コンストラクト及び膜MAbhIgG2-GFPコンストラクトは、lckタンパク質結合部位を除去するために、CD4細胞内ドメインに修飾部を有するようデザインされた。コンストラクトは、化学合成により生成され、標準的技法により哺乳動物の発現ベクタープラスミドヘクローンされた。実施例2細胞株の生成マウスのハイブリドーマ融合パートナー細胞株SP2/0-Ag14を、実施例1に記載の膜MAbmIgG1コンストラクトで形質移入した。2×106SP2/0細胞を、Amaxa登録商標NucleofectionキットVLonza社を用いて、製造者によるプログラムL-013のマニュアルに従って、2μgの膜MAbmIgG1で形質移入した。24時間後、細胞を、0.8mg/mlのG418選択の下に置き、培養液で増殖した。形質移入から2週間後に、膜MAbmIgG1コンストラクトの細胞表面発現のFACS解析により細胞の特徴が明らかにされた。これらの細胞は、指定されたSP2/0-MTであった。5×106の形質移入された細胞を蛍光標識化抗FLAG抗体又はアイソタイプ負の制御抗体10μg/mlで、30分間氷上でインキュベートした。細胞は洗浄され、DMEM/10FBSに再懸濁され、フローサイトメトリで解析された。図2Aは、負の制御抗体左のパネルを伴ったフローサイトメトリの結果、及び抗FLAG抗体右のパネルで検出した膜MAbmIgG1ポリペプチドを発現する細胞の数を示している。膜MAbmIgG1コンストラクトを発現する細胞をFACSでソートし、ウェル毎に1つの細胞を入れ、全部で96のウェルプレートに入れ、0.5mg/mlのG418による選択の下で、培養液で増殖した。10日後、各ウェルの細胞クローンを、先に記載のフローサイトメトリで、膜MAbmIgG1コンストラクトの発現について解析し、5個のサブクローンを選択した。図2Bに示す通り、サブクローンSP2/0-MT.3が、膜MAbmIgG1コンストラクトの最も高い発現レベルを有していたことが観察された。実施例3ハイブリドーマを単離するための膜MAb技法の利用マウスFrizzled5FZD5及びマウスFrizzled8FZD8のfriドメインの組換えポリペプチド断片が、抗体生成の抗原として利用するために生成された。標準的DNA組換え技術を使用して、FZD5配列番号19のアミノ酸27~157及びFZD8配列番号20のアミノ酸28~158をコードするポリヌクレオチドを単離した。ポリヌクレオチドをN末端ヒスチジンタグとインフレームで連結させ、昆虫細胞のバキュロウイルス媒介発現のための転送プラスミドベクターにクローンした。形質移入、感染、及び細胞培養の標準的プロトコールを用いて、相応するFZDポリペプチドを発現する組換え昆虫細胞を生成した。マウスn=3を、標準的技法を用いて、FZD5及びFZD8抗原タンパク質双方で免疫化した。抗原認識のための最初の免疫化から約70日後に、ELISA及びFACS解析を用いて、個別マウス由来の血液をスクリーンした。最後の抗原ブーストに、最も高い抗体力価を有する2匹の動物を選択し、その後、脾臓細胞を単離した。単離された脾細胞は、標準的なハイブリドーマ融合技術を用いて、実施例2に記載されたSP2/0-MT細胞株と融合させた。その結果得られたハイブリドーマライブラリーを54L1と名付けた。ライブラリー54L1を、標識化FZD5ポリペプチド及び標識化FZD8ポリペプチドでスクリーンした。標識化FZD5に関しては、製造者Invitrogen社/MolecularProbes社のマニュアルに従って、染料対タンパク質の割合を15:1で、マウスHisタグ化friドメインFZD5をAlexaFluor商標488染料に結合した。標識化されたFZD8に関しては、製造者Invitrogen社/MolecularProbes社のマニュアルに従って、染料対タンパク質の割合を15:1で、マウスHisタグ化friドメインFZD8をAlexaFluor商標647染料に結合した。1×107細胞/mlの割合のハイブリドーマ細胞を、室温で30分間、AlexaFluor商標488標識化FZD510μg/ml及びAlexaFluor647標識化FZD810μg/mlでインキュベートした。細胞を洗浄し、DMEM/10FBSで再懸濁し、フローサイトメトリで解析した図3。AlexaFluor488標識化FZD5及びAlexaFluor647標識化FZD8の両方に結合した個別ハイブリドーマ細胞をFACSによりソートし、ウェル毎に1つの細胞を入れ、全部で96のウェル組織培養プレートに入れた。対照として、54L1ライブラリー由来の個別細胞を無作為にソートし、ウェル毎に1つの細胞を入れ、全部で96のウェル組織培養プレートに入れた。プレートを10日間インキュベートし、ハイブリドーマ細胞を増殖させ、FZD5タンパク質とFZD8タンパク質双方に結合できる抗体の存在について、各ウェルの上清をスクリーンした。FACSによるスクリーニングに関して、HEK-293細胞を、FZD5又はFZD8の全長cDNAクローンをコードする発現ベクター及びトランスフェクションマーカーGFPで同時形質移入した。形質移入の24~48時間後、HEK-293細胞を回収し、抗FZD5/8ハイブリドーマ上清又は制御IgGで氷上インキュベートした。細胞を洗浄し、結合された一次抗体を、蛍光発色団と結合する抗マウス第二次抗体で検出した。その後、未処理のFZD5及び/又はFZD8の細胞表面発現を特異的に認識する抗体を同定するために、標識化された細胞をFACSで解析した。SP2/0-MT融合パートナー細胞株及び膜MAb技法を利用した結果、FZD5及びFZD8を結合できた576個のクローンのうち526個91を選択した。その一方、無作為抽出したクローンの対照ライブラリースクリーニングの結果、FZD5及びFZD8を結合できた1705個のクローンのうちわずか11個を選択した0.6表1を参照のこと。よって、膜MAb技法を利用した結果、FZD5及びFZD8に特異的なハイブリドーマの同定が劇的に増加した。図3で示すように、ライブラリー54L1のごくわずかな細胞のみが、FZD5、FZD8、又はFZD5及びFZD8の両方と結合した状態で表された。膜MAb技法により、FZD5及びFZD8双方と結合する抗体を生成する細胞を直接同定、選択することができる。FZD5のみ又はFZD8のみと結合する抗体を生成する細胞もまた膜MAb技法により選択され得ることは、当業者には明確であるはずだ。実施例4ハイブリドーマを単離するための膜MAb技法の利用ヒトDDR2の細胞外ドメインの組換えポリペプチド断片は、抗体生成の抗原として利用するために生成された。標準的なDNA組換え技術を利用して、DDR2のアミノ酸1~399配列番号21をコードするポリヌクレオチドを単離した。このポリヌクレオチドをN末端のヒスチジンタグにインフレームで連結し、昆虫細胞のバキュロウイルス媒介発現のための転送プラスミドベクターにクローンした。標準的な形質移入、感染、細胞培養プロトコールを利用して、相応するDDR2ポリペプチドを発現する組換え昆虫細胞を生成した。マウスn=3を、標準的技法を用いて、精製されたDDR2抗原タンパク質で免疫化した。抗原認識のための最初の免疫化から約70日後に、ELISA及びFACS解析を用いて、個別マウス由来の血液をスクリーンした。最後の抗原ブーストに、最も高い抗体力価を有する2匹の動物を選択し、その後、脾臓細胞を単離し、標準的なハイブリドーマ融合技術により、DDR2ハイブリドーマライブラリーを生成するために使用された。DDR2ライブラリーの一部を膜MAbmIgG1コンストラクト実施例1に記載で形質移入した。ライブラリーを、Amaxa登録商標NucleofectionキットVLonza社を用いて、製造者のプログラムL-013用マニュアルに従い形質移入した。3×107個の細胞を、30μgの膜MAbmIgG1コンストラクト膜MAbライブラリーで形質移入した。24時間後、形質移入された細胞を、標識化されたDDR2ポリペプチドでスクリーンした。標識化DDR2に関しては、上記で製造されたDDR2ポリペプチドを、製造者Invitrogen社/MolecularProbes社のマニュアルに従って、AlexaFluor商標488カルボン酸スクシンイミジルエステル染料に、染料対タンパク質の割合を15:1で結合させた。1×107細胞/mlの膜MAbライブラリーを、AlexaFluor488標識化DDR220μg/ml及びPE標識化抗FLAG抗体10μg/mlで、30分間氷上でインキュベートした。細胞を洗浄し、DMEM/10FBSで再懸濁し、フローサイトメトリで解析した。図4に示されているように、ライブラリーのごくわずかな細胞のみが、DDR2及び抗FLAG抗体と結合した状態で表された。AlexaFluor488標識化DDR2及びPE標識化抗FLAG抗体と結合した個別ハイブリドーマ細胞をFACSによりソートし、ウェル毎に1つの細胞を入れ、全部で96のウェル組織培養プレートに入れた。対照として、同じライブラリーから無作為抽出した個別細胞を96ウェル組織培養プレートのウェルに入れた。これらのプレートを10日間インキュベートし、ハイブリドーマ細胞を増殖させ、その後、全長DDR2タンパク質と結合できる抗体の存在について、各ウェルの上清をスクリーンした。FACSによるスクリーニングに関しては、HEK-293細胞を、DDR2の全長cDNAクローン及びトランスフェクションマーカーGFPをコードする発現ベクターで同時形質移入した。形質移入の24~48時間後に、HEK-293細胞を回収し、抗DDR2ハイブリドーマ上清又は制御IgGで、氷上インキュベートした。細胞を洗浄し、結合された一次抗体を、蛍光発色団と結合する抗マウス第二次抗体で検出した。その後、未処理のDDR2の細胞表面発現を特異的に認識する抗体を同定するために、標識化された細胞をFACSで解析した。膜MAb技法を利用した結果、DDR2と結合できた168個のクローンのうち141個84を選択した。一方、無作為に抽出したクローンの対照ライブラリーをスクリーンした結果、DDR2と結合できた202個のクローンのうちわずか16個を選択した8表2を参照のこと。よって、膜MAb技法を利用した結果、抗原特異的抗体を生成する細胞の同定が劇的に増加した。実施例5293-hMT細胞株の生成膜MAbhIgG2-GFPポリペプチドを安定的に発現する細胞株を生成させるために実施例1に記載、図6Cに表示、HEK-293細胞を膜MAbhIgG2-GFPコンストラクトで安定的に形質移入した。5×106個のHEK-293細胞を、FuGENEトランスフェクション試薬Roche、インディアナポリス、インディアナ州を用いて、製造者のマニュアルに従い、8μgの膜MAbhIgG2-GFPコンストラクトで形質移入した。24時間後、細胞を0.8mg/mlのG418選択の下に置き、培養液で増殖した。形質移入から2週間後に、膜MAbhIgG2-GFPコンストラクト発現のFACSにより細胞の特徴が明らかにされた。形質移入された細胞のサブクローンもGFP発現についてスクリーンし、図5が示すように、フローサイトメトリの結果10個のクローンが明らかになった。実施例6単一の遺伝子抗体コンストラクト及びライブラリー抗体軽鎖の定常領域のカルボキシル末端が、GGGGS6ペプチドリンカーを介して重鎖可変領域のアミノ末端と連結している、単一タンパク質又は単一鎖抗体scAbコンストラクトとして、親抗体スキャフォールドを設計した。ヒンジ領域のシステイン残基を保有し、2つの重鎖間又は1つの重鎖と膜MAbコンストラクトの間のジスルフィド結合を可能とした。単一の遺伝子抗体の軽鎖は、可変領域とヒト定常領域をコードする。単一の遺伝子抗体の重鎖は、可変領域並びにヒトIgGCH1、CH2及びCH3ドメインをコードする。発現ベクターは、単鎖抗体を生成するよう構成されており、本明細書ではMAbLibコンストラクトと称される。ベクターは、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域が、各軽鎖可変領域及び/又は重鎖可変領域の除去と新たな別の可変領域の挿入を可能にする、独自の制限部位に互いに隣接するように図6Bに表示設計された。MAbLibコンストラクトを用いて、多様な単鎖抗体scAbライブラリーを生成し得る。軽鎖及び重鎖可変領域を、当業者に周知の方法により、ヒトcDNAからPCRで増幅した。制限部位EcoRv又はBsiWIを含むプライマーを用いて、軽鎖可変領域にPCR反応を生じさせた。制限部位MfeI又はBlpIを含むプライマーを用いて、重鎖可変領域にPCR反応を生じさせた。軽鎖可変領域を含むPCR生成物を精製し、EcoRv及びBsiWIで消化させ、同様に消化された親MAbLibベクター上記のにクローンした。このようにして、多様な軽鎖可変領域を有するscAbライブラリーが作られた。その後、重鎖可変領域を含むPCR生成物を精製し、MfeI及びBlpIで消化させ、多様な重鎖可変領域を含む、同様に消化されたscAbライブラリーにクローンした。このようにして、多様な軽鎖可変領域及び重鎖可変領域双方を有するscAbライブリーが作られた。軽鎖可変領域を挿入する前に、重鎖可変領域を親MAbLibベクターに挿入してもよいことは、当業者には周知のことであると思われる。実施例7HEK-293細胞の表面上のヘテロ二量体抗体分子発現細胞表面上にヘテロ二量体抗体分子が形成されることを検証するために、HEK-293細胞を、抗DLL4単鎖抗体をコードするDNA及び膜MAbhIgG2-GFPタンパク質をコードするDNAで形質移入した。21M18軽鎖、GGGGS6リンカー、21M18可変重鎖、及びCH1領域をコードする合成ポリヌクレオチドがデザインされた。ポリヌクレオチドを、DNA2.0MenloPark社、カリフォルニア州により合成し、上記実施例6に記載の単鎖21M18抗体sc21M18をコードするベクターを生成するためにsc21M18配列番号33、ヌクレオチド配列;配列番号34、アミノ酸配列、MAbLibにクローンした。抗hDLL4抗体21M18については、先に、米国特許第7,750,124号に記載されている。sc21M18プラスミドDNAを様々な濃度25、250、2500及び25000ng/mlで形質移入し、48時間後に細胞を収穫した。対照として、細胞をsc21M18DNAのみで形質移入-▲-、膜MAbhIgG2-GFPDNAのみで形質移入-■-、又は形質移入しなかった-◆-。細胞表面上の機能性抗DLL4抗体分子の検出に関しては、形質移入された細胞をhDLL4-rFc融合タンパク質でインキュベートした。結合されたhDLL4-rFcを、PE標識化抗ラビットFc抗体で検出した。FACSで細胞を解析し、細胞集団の平均蛍光強度MFIを決定した。図7に示す通り、抗DLL4sc21M18DNA及び膜MAbhIgG2DNA-X-で形質移入された細胞のみが、DLL4-rFcタンパク質に特異的に結合する機能性結合部位を有する膜結合分子を発現した。実施例8抗体分子のディスプレイを調節する担体プラスミドの利用プラスミドを有する哺乳動物細胞を一時的に形質移入すると、通常、細胞毎にプラスミドを多数複製する。細胞毎の複製数は、100~10,000個の範囲であり得る。細胞毎の絶対数は、トランスフェクションプロトコル、トランスフェクション試薬、プラスミドの品質、プラスミドのサイズ、及び細胞濃度を含む多様な要因に依存するが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞表面にディスプレイされた抗体のライブラリーを生成するにあたり、細胞に導入される抗体コードプラスミド又はAbライブラリープラスミドの量を調節することが望ましい。細胞のAbライブラリープラスミドのプラスミド複製数を調節するために、別の担体プラスミドを使用する。担体プラスミドをAbライブラリープラスミドと混ぜ合わせ、利用可能なプラスミドスペースplasmidspaceの一部を利用する。細胞が利用するAbライブラリープラスミドの数を調節するために、担体プラスミドをAbライブラリープラスミドと異なる割合で混ぜ合わせ、その後、細胞に形質移入する。Abコードプラスミドのトランスフェクション及びディスプレイに対する担体プラスミドの効果を試験した。上記の単鎖抗DLL4抗体sc21M18を、様々な割合の担体プラスミドで形質移入した。本研究において、担体プラスミドは、無関係の単一タンパク質抗体をコードしたsc18R5。細胞はまた、膜MAbhIgG2-GFPコンストラクトで形質移入された。細胞のAbライブラリープラスミドの濃度は、抗DLL4抗体分子の表面発現のレベルから推測され得た。約5×106個のHEK-293細胞をプラスミドDNAで形質移入し、48時間後に収穫した。プラスミドDNAは、sc21M18とsc18R5の混合物であり、sc21M18のsc18R5に対する割合は、sc18R5の1~10,000倍過剰の範囲1、10、100、1000又は10,000倍過剰である。細胞表面の機能性抗DLL4抗体分子の検出に関しては、形質移入された細胞を、hDLL4-rFc融合タンパク質でインキュベートした。結合されたhDLL4-rFcは、PE標識化抗ラビットFc抗体で検出した。抗DLL4抗体を発現する細胞の割合は、FACS解析により決定した。細胞はまた、制御抗原でhJag-rFc、-■-又はPE標識化抗ラビットFc抗体のみ-▲-でインキュベートされた。図8に示すように、担体プラスミドDNAの量は、形質移入された細胞の表面上に抗DLL4抗体を発現する細胞の割合に明らかに影響を与えていた。実施例9抗体ライブラリーのスクリーニング法膜Mab技法及び選択方法を検証するため、本研究は、抗DLL4抗体sc21M18プラスミドDNAを用いて行われた。sc21M18プラスミドDNAを、sc18R5DNAが100,000倍過剰である、無関係の抗体sc18R5プラスミドDNAと混ぜ合わせた。HEK-293細胞を、7.5×l0-6μgのsc21Ml8プラスミドDNA、0.75μgのscl8R5プラスミドDNA、14.3μgの担体プラスミドカナマイシンプラスミド、及び膜MAbhIgG2-GFPをコードする15μgのプラスミドで形質移入した。細胞は、48時間後に収穫された。細胞表面上の機能性抗DLL4抗体の検出に関しては、形質移入された細胞をhDLL4-rFc融合タンパク質でインキュベートした。結合されたhDLL4-rFcをPE標識化抗ラビットFc抗体で検出した。細胞を発現する抗DLL4抗体を同定し、単離するために、標識化された細胞をFACSで解析し、ソートした。抗原が抗DLL4抗体により認識されないため、hJag-rFcを対照として使用した。FACSによりソートされた細胞からプラスミドDNAを単離し、バクテリアで増幅した。増幅されたプラスミドDNA担体プラスミド及びプラスミドをコードする膜MAbhIgG2-GFPと結合してを用いて、新鮮なHEK-293細胞を形質移入し、別の選択ラウンドを行った。この増幅及び選択方法を4回繰り返した。FACSの結果は、図9に示されている。表3には、各選択ラウンド後の抗DLL4抗体の発現に対しポジティブな細胞の割合を示している。本研究は、sc21M18DNAが無関係の抗体DNAを背景にして高度に希釈されたという事実にも関わらず、4ラウンド超の選択を通じて、抗DLL4抗体を発現する細胞を同定し、濃縮したことを示している。実施例10抗VEGF抗体ライブラリーの生成及び293-hMT細胞株への形質移入抗体ライブラリーを、上記の実施例6及び7で述べた所sc21M18を発現するMAbLibコンストラクト、並びにヒト血管内皮細胞成長因子hVEGFで免疫化したマウス由来の免疫グロブリンcDNAを用いて生成した。3つのBalb/cマウスをhVEGFの腹腔内注射により免疫化した。最初の注射では、完全フロイントアジュバントにhVEGFが含まれていた。その後の注射には、不完全フロイントアジュバントにhVEGFが含まれていた。合計4回の腹腔内注射が、3カ月にわたって行われた。マウスは、静脈の尾静脈注射によりPBSでhVEGFの最後の注射を受けた。最後の注射の1週間後、免疫化されたマウスから脾臓とリンパ節が回収された。RNAを単離し、cDNAを生成した。マウス重鎖可変領域をコードするDNAをPCRで増幅し、単離し、精製した。PCR生成物を、MfeI及びBlpIで消化し、同様に消化されたsc21M18コンストラクトにクローンし、よって、配列番号33の重鎖可変領域を、hVEGF免疫化マウス由来の複数のマウス重鎖可変領域と置き換えた。このライブラリーに関しては、21M18軽鎖は定常に保たれた。21M18軽鎖を、複数のヒトカッパ鎖可変領域と取り換えること以外は、本明細書に記載のライブラリーと同様に第2のVEGFライブラリーを構成した。ヒトカッパ鎖可変領域を、ヒトカッパ鎖特異的プライマーを用いて、プールされたヒトcDNAからPCRで増幅した。PCR生成物を単離し、生成し、EcoRV及びBsiWIで消化し、第1VEGFライブラリー由来の、同様に消化されたプラスミドDNAにクローンし、よって、21M18軽鎖可変領域を取り替えた。293-MT細胞を、2つの抗VEGF抗体ライブラリーで形質移入した。本明細書に記載の実施例及び実施形態は例示のみを目的としており、その観点から、本技術分野の当業者に対して、様々な修正又は変更に関する提言がなされるであろうこと、またそれらは、本発明の精神及び範囲において含まれるべきであることを理解されたし。よって、本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願は、各刊行物、特許又は特許出願があたかも具体的かつ個別的に引用により含まれるべきと示しているのと同程度に、全ての目的のためにその全体を、引用により含めるものとする。"