"一般式:L-CH2m-COOH式中、Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16であり、-CH2m-の末端のC原子を含まない-CH2CH2-は、-MR3-で置き換えられていてもよく、Mは、O、SまたはNR4であり、R3は、置換されていてもよい炭素数1~5のアルキレン基、芳香族炭化水素基または芳香族複素環基を示し、R4は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基である、で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16である、請求項1に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。LがR1R2N-である、請求項1または2に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。R1が、置換されていてもよいフェニルであり、R2が、置換されていてもよいピリジニルである、請求項3に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。11ウンデカン酸NCG74、12ドデカン酸NCG75、10デカン酸NCG85、9ノナン酸NCG86、10デカン酸NCG87、10デカン酸NCG88、10デカン酸NCG89、10デカン酸NCG97、10デカン酸NCG98、10デカン酸NCG99、10デカン酸NCG100、10デカン酸NCG101、12ドデカン酸NCG102、12ドデカン酸NCG103、12ドデカン酸NCG104、12ドデカン酸NCG105、12デカン酸NCG106、13トリデカン酸NCG107、14テトラデカン酸NCG108、12ドデカン酸NCG109、12ドデカン酸NCG110、12ドデカン酸NCG111、12フェニルアミノドデカン酸NCG112、12ドデカン酸NCG113、12アミノドデカン酸NCG114、12ドデカン酸NCG115、12ドデカン酸NCG116、12ドデカン酸NCG117、12ドデカン酸NCG118、12ドデカン酸NCG119、12ジフェニルアミノドデカン酸NCG120、12ドデカン酸NCG121、12フェニルアミノドデカン酸NCG122、12フェノキシドデカン酸NCG123、12ドデカン酸NCG124、12ドデカン酸NCG125、12ドデカン酸NCG126、12ドデカン酸NCG127、12ドデカン酸NCG128、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG129、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG130、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG131、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG132、34フェニルプロピオン酸NCG133、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG134、34フェニルプロピオン酸NCG135、および、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG136からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。Gタンパク質共役型レセプターが、GPR40を含む、請求項1~5のいずれか一項に記載のGタンパク質共役型レセプター作動剤。GPR40特異的である、請求項6に記載のGタンパク質共役型レセプター作動剤。請求項1~7のいずれかに記載のGタンパク質共役型レセプター作動剤を有効成分として含有する、GPR40が関与する疾患の治療または予防のための医薬組成物。GPR40が関与する疾患が、糖尿病である、請求項8に記載の医薬組成物。一般式:L-CH2m-COOH式中、Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16であり、-CH2m-の末端のC原子を含まない-CH2CH2-は、-MR3-で置き換えられていてもよく、Mは、O、SまたはNR4であり、R3は、置換されていてもよい炭素数1~5のアルキレン基、芳香族炭化水素基または芳香族複素環基を示し、R4は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基である、で表される化合物またはその塩。Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16である、請求項10に記載の化合物またはその塩。LがR1R2N-である、請求項10または11に記載の化合物またはその塩。R1が、置換されていてもよいフェニルであり、R2が、置換されていてもよいピリジニルである、請求項12に記載の化合物またはその塩。11ウンデカン酸NCG74、12ドデカン酸NCG75、10デカン酸NCG85、9ノナン酸NCG86、10デカン酸NCG87、10デカン酸NCG88、10デカン酸NCG89、10デカン酸NCG97、10デカン酸NCG98、10デカン酸NCG99、10デカン酸NCG100、10デカン酸NCG101、12ドデカン酸NCG102、12ドデカン酸NCG103、12ドデカン酸NCG104、12ドデカン酸NCG105、12デカン酸NCG106、13トリデカン酸NCG107、14テトラデカン酸NCG108、12ドデカン酸NCG109、12ドデカン酸NCG110、12ドデカン酸NCG111、12フェニルアミノドデカン酸NCG112、12ドデカン酸NCG113、12アミノドデカン酸NCG114、12ドデカン酸NCG115、12ドデカン酸NCG116、12ドデカン酸NCG117、12ドデカン酸NCG118、12ドデカン酸NCG119、12ジフェニルアミノドデカン酸NCG120、12ドデカン酸NCG121、12フェニルアミノドデカン酸NCG122、12フェノキシドデカン酸NCG123、12ドデカン酸NCG124、12ドデカン酸NCG125、12ドデカン酸NCG126、12ドデカン酸NCG127、12ドデカン酸NCG128、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG129、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG130、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG131、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG132、34フェニルプロピオン酸NCG133、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG134、34フェニルプロピオン酸NCG135、および、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG136からなる群から選択される化合物またはその塩。本発明の課題は、これまで知られていない新規な化合物をスクリーニングし、さらにその特徴付けをおこない、Gタンパク質共役型レセプターGPCRの作動剤として有用な新規化合物を提供することにある。本発明者らは、これまでGタンパク質共役型レセプターの作動剤として、十分に検討されてこなかった化合物群に対し、GPR40およびGPR120のそれぞれに対してスクリーニングを行ったところ、ある特定の一般式で表される化合物群が作動剤として作用することを見出し、さらに研究を進め、本発明を完成するに至った。したがって、本発明は、以下の[1]~[14]に示す化合物、該化合物を含むGタンパク質共役型レセプターGPCRの作動剤、該作動剤を含む医薬組成物などに関する。[1]一般式:L-CH2m-COOH式中、Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16であり、-CH2m-の末端のC原子を含まない-CH2CH2-は、-MR3-で置き換えられていてもよく、Mは、O、SまたはNR4であり、R3は、置換されていてもよい炭素数1~5のアルキレン基、芳香族炭化水素基または芳香族複素環基を示し、R4は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基である、で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。[2]Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16である、[1]に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。[3]LがR1R2N-である、[1]または[2]に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。[4]R1が、置換されていてもよいフェニルであり、R2が、置換されていてもよいピリジニルである、[3]に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。[5]11ウンデカン酸NCG74、12ドデカン酸NCG75、10デカン酸NCG85、9ノナン酸NCG86、10デカン酸NCG87、10デカン酸NCG88、10デカン酸NCG89、10デカン酸NCG97、10デカン酸NCG98、10デカン酸NCG99、10デカン酸NCG100、10デカン酸NCG101、12ドデカン酸NCG102、12ドデカン酸NCG103、12ドデカン酸NCG104、12ドデカン酸NCG105、12デカン酸NCG106、13トリデカン酸NCG107、14テトラデカン酸NCG108、12ドデカン酸NCG109、12ドデカン酸NCG110、12ドデカン酸NCG111、12フェニルアミノドデカン酸NCG112、12ドデカン酸NCG113、12アミノドデカン酸NCG114、12ドデカン酸NCG115、12ドデカン酸NCG116、12ドデカン酸NCG117、12ドデカン酸NCG118、12ドデカン酸NCG119、12ジフェニルアミノドデカン酸NCG120、12ドデカン酸NCG121、12フェニルアミノドデカン酸NCG122、12フェノキシドデカン酸NCG123、12ドデカン酸NCG124、12ドデカン酸NCG125、12ドデカン酸NCG126、12ドデカン酸NCG127、12ドデカン酸NCG128、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG129、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG130、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG131、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG132、34フェニルプロピオン酸NCG133、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG134、34フェニルプロピオン酸NCG135、および、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG136からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含むGタンパク質共役型レセプター作動剤。[6]Gタンパク質共役型レセプターが、GPR40を含む、[1]~[5]のいずれか一項に記載のGタンパク質共役型レセプター作動剤。[7]GPR40特異的である、[6]に記載のGタンパク質共役型レセプター作動剤。[8][1]~[7]のいずれかに記載のGタンパク質共役型レセプター作動剤を有効成分として含有する、GPR40が関与する疾患の治療または予防のための医薬組成物。[9]GPR40が関与する疾患が、糖尿病である、[8]に記載の医薬組成物。[10]一般式:L-CH2m-COOH式中、Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16であり、-CH2m-の末端のC原子を含まない-CH2CH2-は、-MR3-で置き換えられていてもよく、Mは、O、SまたはNR4であり、R3は、置換されていてもよい炭素数1~5のアルキレン基、芳香族炭化水素基または芳香族複素環基を示し、R4は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基である、で表される化合物またはその塩。[11]Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16である、[10]に記載の化合物またはその塩。[12]LがR1R2N-である、[10]または[11]に記載の化合物またはその塩。[13]R1が、置換されていてもよいフェニルであり、R2が、置換されていてもよいピリジニルである、[12]に記載の化合物またはその塩。[14]11ウンデカン酸NCG74、12ドデカン酸NCG75、10デカン酸NCG85、9ノナン酸NCG86、10デカン酸NCG87、10デカン酸NCG88、10デカン酸NCG89、10デカン酸NCG97、10デカン酸NCG98、10デカン酸NCG99、10デカン酸NCG100、10デカン酸NCG101、12ドデカン酸NCG102、12ドデカン酸NCG103、12ドデカン酸NCG104、12ドデカン酸NCG105、12デカン酸NCG106、13トリデカン酸NCG107、14テトラデカン酸NCG108、12ドデカン酸NCG109、12ドデカン酸NCG110、12ドデカン酸NCG111、12フェニルアミノドデカン酸NCG112、12ドデカン酸NCG113、12アミノドデカン酸NCG114、12ドデカン酸NCG115、12ドデカン酸NCG116、12ドデカン酸NCG117、12ドデカン酸NCG118、12ドデカン酸NCG119、12ジフェニルアミノドデカン酸NCG120、12ドデカン酸NCG121、12フェニルアミノドデカン酸NCG122、12フェノキシドデカン酸NCG123、12ドデカン酸NCG124、12ドデカン酸NCG125、12ドデカン酸NCG126、12ドデカン酸NCG127、12ドデカン酸NCG128、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG129、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG130、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG131、122ピリジニルアミノドデカン酸NCG132、34フェニルプロピオン酸NCG133、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG134、34フェニルプロピオン酸NCG135、および、343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG136からなる群から選択される化合物またはその塩。本発明の化合物は、それ自体がGタンパク質共役型レセプターGPCRのリガンドとしての機能を有するか、および/または該リガンドを製造するための中間体化合物として利用できる。本発明の化合物は一態様において、Gタンパク質共役型レセプターGPCRの作動剤agonistとして機能する。従来、リガンドである脂肪酸による活性化以外には、GPR40に関していくつかの化合物が作用するという報告はあるが、GPR40とGPR120とのそれぞれに対して選択性を有するアゴニストを見出した例は僅少であるところ、本発明の化合物はGPR40に対して特異的に作用することが明らかとなった。とくに、GPR40とGPR120の2種類の受容体は、非常に類似した脂肪酸をリガンドとするところ、本発明におけるGPR40に選択的な化合物は、GPR120に対する作用は弱く、GPR40にのみ特異的に作用する。その結果、GPR120が発現する他組織には作用せず、膵臓のGPR40に対してのみ作用し、膵臓β細胞からのインスリン分泌を促進することにより糖尿病の治療効果および予防効果が期待される。また、従来のリガンドよりも比較的構造が簡単であるため、本発明の化合物は、簡単な製造方法によって提供することができる。したがって本発明は、脂肪酸受容体GPR40に対する選択的アゴニストを新規に見出したもので、これにより脂肪酸受容体の機能を特異的に制御できる新規の医薬品、食品等が比較的簡単な製造方法によって提供することができる可能性があり、きわめて有益である。本発明の化合物は、一般式:L-CH2m-COOH式中、Lは、R1R2N-またはR1O-であり、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、R1およびR2は、一緒に環を形成していてもよく、mは、4~16であり、-CH2m-の末端のC原子を含まない-CH2CH2-は、-MR3-で置き換えられていてもよく、Mは、O、SまたはNR4であり、R3は、置換されていてもよい炭素数1~5のアルキレン基、芳香族炭化水素基または芳香族複素環基を示す、で表される化合物として記載することができる。ここで、芳香族炭化水素基とは、単環または縮合環から構成される炭素数6~14のアリール基を意味し、例えば、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基、アントリル基、インデニル基、アズレニル基、フルオレニル基、フェナントリル基などが挙げられる。該アリール基は、場合により、部分的に飽和されていてもよい。部分的に飽和されたアリール基としては、例えばジヒドロインデニル、テトラヒドロナフチルなどが挙げられる。好適には、炭素数6~10のアリール基であり、さらに好適には、ビフェニル基、フェニルまたはナフチル基であり、最も好適には、フェニル基である。芳香族炭化水素基が置換されていてもよいとは、例えば、ハロゲン、炭素数1~6のアルキル基、炭素数1~6のアルコキシ基、フェニル基などによって置換されていてもよいことを意味する。したがって、置換されていてもよい芳香族炭化水素基としては、とくに限定されないが、例えば、フェニル、フルオロフェニル、クロロフェニル、トリル、メトキシフェニル、N,N-ジメチルアミノフェニル、ビフェニル、フェノキシフェニル、ターシャリーブチルフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ナフチルなどが挙げられ、好ましくは、フェニル、4位が置換されたフェニルであり、とくに好ましくは、フェニルである。また、芳香族複素環基とは、単環または縮合環から構成される芳香族性を有する炭素原子以外のヘテロ原子例えば、窒素原子、硫黄原子、酸素原子を環の構成元素として有する官能基を意味する。ここで、ヘテロ原子は、1個または2個以上含まれ得るが、2個以上含まれる場合のヘテロ原子は互いに同種または異種の原子であってもよい。本発明の化合物においては、とくに限定されないが、例えば、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、1,3,5-トリアジニル基、ピロリル基、ピラゾリル基、イミダゾリル基、1,2,4-トリアゾリル基、テトラゾリル基、チエニル基、フリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、チアジアゾリル基、キノリル基、ベンゾチアゾリル基などが挙げられ、好ましくは、ピリジル基、チアゾリル基であり、とくに好ましくは、ピリジル基である。芳香族複素環基が置換されていてもよいとは、例えば、ハロゲン、炭素数1~6のアルキル基、炭素数1~6のアルコキシ基、フェニル基などによって置換されていてもよいことを意味する。したがって、置換されていてもよい芳香族複素環基としては、とくに限定されないが、例えば、ピリジニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリニルなどが挙げられ、好ましくは、2-ピリジニルである。置換されていてもよいアルキル基とは、アルキル基における1個または2個以上の水素原子が、例えば、ハロゲン、炭素数1~6のアルキル基、炭素数1~6のアルコキシ基、フェニル基などによって置換されていてもよいことを意味する。置換されていてもよいアルキレン基とは、アルキレン基における1個または2個以上の水素原子が、例えば、ハロゲン、炭素数1~6のアルキル基、炭素数1~6のアルコキシ基、フェニル基などによって置換されていてもよいことを意味する。ここでハロゲンとは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素原子などを示し、好ましくは、フッ素原子または塩素原子である。本発明の化合物において、R1とR2とは、互いに独立しており、同じであっても異なっていてもよい。また、R1およびR2は、一緒に環を形成していてもよく、一緒に環を形成する場合、かかる環は、とくに限定されないが、例えば、カルバゾイル、ピリドインドイル、フェノキサジニル、フェノチアジニルが挙げられ、好ましくは、9-カルバゾイル、9-ピリド[2,3-b]インドイル、10-フェノキサジニル、10-フェノチアジニルである。また、前記一般式において、mは4~16、好ましくは7~14、とくに好ましくは9~11である。本発明の化合物は、常法によって、適宜、塩または薬学的に許容し得る塩に調製することができる。ここで薬学的に許容し得る塩とは、人体に投与しても無害な塩のことをいい、典型的には、カリウム塩、ナトリウム塩や、酸付加塩などが挙げられる。酸付加塩としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸や、酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、グルクロン酸またはガラクツロン酸などのウロン酸、乳酸、クエン酸、グルコン酸または酒石酸などのα-ヒドロキシ酸、アスパラギン酸またはグルタミン酸などのアミノ酸、安息香酸またはケイ皮酸などの芳香族酸、p-トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸またはベンゼンスルホン酸などのスルホン酸、その他各種の有機酸の塩が挙げられる。本発明の化合物をリガンド製造の中間体化合物として用いる場合、その塩は、とくに薬学的に許容し得る塩ではなく、人体に投与すると有害な塩であってもよく、最終的に薬学的に許容し得る塩とできれば、とくに限定されない。本発明の化合物は、GPCR作動剤、とくにGPR40特異的な作動剤として作用する。したがって本発明は、一態様において、前記化合物またはその薬学的に許容し得る塩を有効成分として含むGタンパク質共役型レセプター作動剤であり、とくにGPR40の機能を作動亢進させる。GPR40は膵臓β細胞に存在し、GPR40の作動によりインスリン分泌が促進される。したがって、本発明のGPR40作動性化合物は、i膵臓β細胞からのインスリン分泌促進による糖尿病治療薬、iiβ細胞またはその前駆細胞の分化増殖促進による、高血糖、インスリン抵抗性、肥満などから糖尿病に移行することを予防する糖尿病予防剤としての使用が可能である。また、β細胞移植時の移植細胞の生着率向上のための医薬としての使用も可能である。本発明の化合物を有効成分として含有するGPCRの作動剤は、上記したような薬効を有しており、例えば、次のようにして製剤化できる。本発明のGPCRの作動剤は、静脈内、経口への投与を含む、治療上適切な投与経路に適合するように製剤化される。静脈内への投与に使用される溶液または懸濁液には、限定はしないが、注射用の水などの滅菌的希釈液、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒、ベンジルアルコールまたは他のメチルパラベンなどの保存剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなどの無痛化剤、エチレンジアミンテトラ酢酸EDTAなどのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝剤、塩化ナトリウムまたはデキストロースなど浸透圧調製のための薬剤を含んでもよい。pHは塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整することができる。非径口的標品はアンプル、ガラスもしくはプラスチック製の使い捨てシリンジまたは複数回投与用バイアル中に収納される。注射に適する製剤とするには、滅菌された注射可能な溶液または分散媒であって、使用時に調製するための滅菌水溶液水溶性のまたは分散媒および滅菌されたパウダー凍結乾燥されたタンパク質、核酸などを含むが含まれる。静脈内の投与に関し、適切な担体には生理食塩水、静菌水、CREMOPHOREL登録商標。BASFParsippanyNJ、またはリン酸緩衝化生理食塩水PBSが含まれる。注射剤として使用する場合、GPCR作動剤は滅菌されており、また、シリンジを用いて投与されるために十分な流動性を保持していなくてはならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオールグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど、および適切な混合物を含む溶媒または分散媒培地を使用することができる。例えば、レクチンなどのコーティング剤を用い、分散媒においては必要とされる粒子サイズを維持し、界面活性剤を用いることにより適度な流動性が維持される。種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、およびチメロサールなどは、微生物のコンタミネーションを防ぐために使用可能である。また、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコールおよび塩化ナトリウムのような等張性を保つ薬剤が組成物中に含まれてもよい。吸着を遅らせることができる組成物には、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの薬剤が含まれる。滅菌的な注射可能溶液は、必要な成分を単独でまたは他の成分と組み合わせた後に、適切な溶媒中に必要量の活性化合物を加え、滅菌することで調製される。一般に、分散媒は、基本的な分散培地および上述したその他の必要成分を含む滅菌的媒体中に活性化合物を取り込むことにより調製される。滅菌的な注射可能な溶液の調製のための滅菌的なパウダーの調製方法には、活性な成分および滅菌溶液に由来する何れかの所望な成分を含むパウダーを調製する真空乾燥および凍結乾燥が含まれる。経口用の製剤とする場合には、不活性な希釈剤または体内に取り込んでも害を及ぼさない担体が含まれる。経口用製剤は、例えば、ゼラチンのカプセル剤に包含されるか、加圧されて錠剤化される。経口的治療のためには、活性化合物は賦形剤と共に取り込まれ、錠剤、トローチまたはカプセル剤の形態で使用される。また、経口用製剤は、流動性担体を用いて調製することも可能である。さらに、薬剤的に適合する結合剤、および/またはアジュバント物質などが包含されてもよい。錠剤、丸薬、カプセル剤、トローチ剤およびその類似物は、以下の成分または類似の性質を持つ化合物の何れかを含み得る。微結晶性セルロースのような賦形剤、アラビアゴム、トラガントまたはゼラチンなどの結合剤;スターチまたはラクトース、アルギン酸、PRIMOGEL、またはコーンスターチなどの膨化剤;ステアリン酸マグネシウムまたはSTRROTESなどの潤滑剤;コロイド性シリコン二酸化物などの滑剤;スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤;またはペパーミント、メチルサリシル酸またはオレンジフレイバーなどの香料添加剤。全身投与用の製剤とする場合には、経粘膜的または経皮的に行うことができる。経粘膜的または経皮的投与について、標的のバリアーを透過することができる浸透剤が選択される。経粘膜浸透剤は界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。経鼻スプレーまたは坐薬は経粘膜的な投与に対して使用することができる。経粘膜的投与に対して、活性化合物はオイントメント、軟膏、ジェルまたはクリーム中に製剤化される。また、本発明医薬組成物は、直腸への送達に対して、坐薬例えば、ココアバターおよび他のグリセリドなどの基剤と共にまたは滞留性の浣腸の形態で調製することもできる。制御放出製剤とする場合には、体内から即時に除去されことを防ぎ得る担体を用いて調製することができる。例えば、エチレンビニル酢酸塩、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの、生物分解性、生物適合性ポリマーを用いることができる。このような材料は、ALZACorporationおよびNOVAPharmaceuticalsIncから入手することが可能で、また、当業者によって容易に調製することもできる。また、リポソームの懸濁液も薬学的に受容可能な坦体として使用することができる。有用なリポソームは、限定はしないが、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびPEG誘導ホスファチジルエタノールPEG-PEを含む脂質組成物として、使用に適するサイズになるように、適当なポアサイズのフィルターを通して調製され、逆相蒸発法によって精製される。例えば、抗体のFab’断片などは、ジスルフィド交換反応を介して、リポソームに結合させてもよいMartinおよびPapahadjopoulos1982。詳細な調製方法は、例えば、Eppstein等1985Hwang等1980中の記載を参照。本発明のGPCR作動剤の投与量は、特定の疾患の治療または予防において、投与される患者人または動物の状態、投与方法等に依存するが、当業者であれば容易に最適化することが可能である。例えば、注射投与の場合は、例えば、一日に患者の体重あたり約0.1μg/kgから500mg/kgを投与するのが好ましく、一般に一回または複数回に分けて投与され得るであろう。好ましくは、投与量レベルは、一日に約0.1μg/kgから約250mg/kgであり、より好ましくは一日に約0.5~約100mg/kgである。経口投与の場合は、好ましくは1.0から1000mgの活性成分を含む錠剤の形態で提供される。好ましくは治療されるべき患者人または動物に対する有効活性成分の投与量は、0.01~100mg/kgである。化合物は一日に1~4回の投与計画で、好ましくは一日に一回または二回投与される。本発明の化合物は、適宜、公知の方法を用いることにより製造することができるが、以下、その代表的な製造方法の例について述べる。なお、本発明の化合物の合成方法は、下記合成例に限定されるものではない。合成例本発明の化合物は、以下の工程1~3を含む製造方法によって合成し得る。工程1式1R1X1R2NH2→R1R2NH工程1は、R1R2NHの製造工程であり、R1R2NHは、R1X1を溶媒中、塩基の存在下、R2NH2と加熱下に反応を行うことにより得ることができる。前記溶媒としては、例えば、NNジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルなどの極性非プロトン性溶媒;ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル系溶媒;トルエン、キシレンなどのベンゼン系溶媒;ジクロロメタン、クロロホルムなどのハロゲン系溶媒;酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル系溶媒等が挙げられ、好ましくは、トルエン、キシレンなどである。前記塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウムなどの無機塩基、ナトリウムエトキシド、ナトリウムtertブトキシドなどのアルコキシド系塩基、トリエチルアミン、ジアザビシクロウンデセンなどの有機塩基が挙げられ、好ましくは、ナトリウムtertブトキシドである。ここで、R1X1は、例えば、クロロピリジン、ブロモピリジン、ヨードピリジンであり、好ましくは、ヨードピリジン、ブロモピリジンである。また、R2NH2は、例えば、アニリンなどの芳香族アミン、nブチルアミンなどの脂肪族アミンであり、好ましくは、アニリンなどの芳香族アミンである。反応温度は、40°C~100°Cで行うことができ、好ましくは50°C~80°Cである。また反応時間は、5~100時間であり、好ましくは24~50時間である。また、かかる製造工程において、適宜、トリスジベンジリデンアセトンジパラジウム、22’ビスジフェニルホスフィノ11’ビナフチルなどの触媒を用い得る。工程1’式1’X2CH2mCOOHRXOH→X2CH2mCOORX工程1’は、工程2において、工程1で得られたR1R2NHと反応させるX2CH2mCOORXの製造工程であり、X2CH2mCOOHとRXOHとを反応させて、エステルを得る。かかるエステル化については、常法に従い、当業者が適宜なし得る。ここで、RXは、好ましくは、メチル、エチル、tertブチル、ベンジルなどである。工程2式2R1R2NHX2CH2mCOORX→R1R2NCH2mCOORX工程2は、R1R2NCH2mCOORXの製造工程であり、R1R2NCH2mCOORXは、R1R2NHを溶媒中、塩基の存在下、X2CH2mCOORXと加熱下に反応を行うことにより得ることができる。前記溶媒としては、例えば、N,N-ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリルなどの極性非プロトン性溶媒;ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル系溶媒;トルエン、キシレンなどのベンゼン系溶媒;ジクロロメタン、クロロホルムなどのハロゲン系溶媒;酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル系溶媒等が挙げられ、好ましくは、トルエン、N,N-ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフランなどである。前記塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウムなどの無機塩基、ナトリウムエトキシド、ナトリウムtertブトキシドなどのアルコキシド系塩基、トリエチルアミン、ジアザビシクロウンデセンなどの有機塩基が挙げられ、好ましくは、水素化ナトリウムである。ここで、R1R2NHは、例えば、Nフェニルピリジン2アミンなどのジアリルアミン、Nブチルピリジン2アミンなどのアルキルアリルアミンであり、好ましくは、Nフェニルピリジン2アミンなどのジアリルアミンである。また、X2CH2mCOORXは、例えば、9ブロモノナン酸エチルエステル、11ブロモウンデカン酸メチルエステル、12ブロモドデカン酸メチルエステルなどのハロアルキル酸アルキルエステルであり、好ましくは、12ブロモドデカン酸メチルエステルである。反応温度は、40°C~100°Cで行うことができ、好ましくは50°C~80°Cである。また反応時間は、5~100時間であり、好ましくは24~50時間である。また、かかる製造工程において、適宜、ヨウ化カリウムなどの触媒を用い得る。工程3式3R1R2NCH2mCOORX→R1R2NCH2mCOOH工程3は、R1R2NCH2mCOOHの製造工程であり、R1R2NCH2mCOORXを脱エステル化することにより得ることができる。かかる脱エステル化については、常法に従い、当業者が適宜なし得る。上記式中、R1は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基または置換されていてもよい芳香族複素環基であり、R2は、置換されていてもよい芳香族炭化水素基、置換されていてもよい芳香族複素環基、水素原子または置換されていてもよい炭素数1~10の直鎖状または分枝状のアルキル基である。また、mは、4~16である。X1、X2は、夫々、同一または異なっていてもよく、典型的にはハロゲン、炭素数1~6のアルキル基、炭素数1~6のアルコキシ基、フェニル基であり、好ましくは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、とくに好ましくは、臭素原子である。以下に、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。1.化合物の合成実施例1スキーム111ウンデカン酸化合物2、NCG74の製造工程1:Nフェニルピリジン2アミン化合物1の製造2ブロモピリジン31g、アニリン56gをトルエン40mLに溶解し、トリスジベンジリデンアセトンジパラジウム370mg、22’ビスジフェニルホスフィノ11’ビナフチル490mg、ナトリウムtertブトキシド27gを加え、80°Cで終夜攪拌した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、水100mLで洗浄した。有機層を2N塩酸100mLで抽出し、酢酸エチル100mLで洗浄した。水層に2N水酸化ナトリウム水溶液150mLを加えアルカリ性にした後、酢酸エチル200mLで抽出した。有機層を飽和食塩水200mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルで洗浄し、表題化合物13g、収率37を得た。1HNMR821749740730706688673661工程2:11ウンデカン酸メチルエステルの製造工程1で得られたNフェニルピリジン2アミン化合物1670mgをNNジメチルホルムアミド4mLに溶解し、水素化ナトリウム60230mgを加え、室温で20分攪拌した。反応液にヨウ化カリウム330mg、11ブロモウンデカン酸メチルエステル11gのNNジメチルホルムアミド4mL溶液を加え、80°Cで2時間攪拌した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、水100mL、飽和食塩水100mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=8:1で精製し、表題化合物210mg、収率17を得た。1HNMR819739726721654634393365229165154135122工程3:11ウンデカン酸化合物2、NCG74の製造前工程で得られた11ウンデカン酸メチルエステル200mgをメタノール2mL、テトラヒドロフラン2mLに溶解し、2N水酸化ナトリウム水溶液08mLを加え、室温で終夜攪拌した。反応液に2N塩酸08mLを加え、濃縮後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=2:1で精製し、表題化合物157mg、収率81を無色結晶として得た。mp7677°C1HNMR821740727721656633390233166159135120MSmz354HRMScalcdforC22H30N2O2354230found354230AnalcalcdforC22H30N2O2C7454H853N790FoundC7447H854N803実施例2スキーム212ドデカン酸化合物4、NCG75の製造工程1:12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3の製造12ブロモドデカン酸10gをメタノール30mLに溶解し、濃硫酸1mLを加え、15時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、酢酸エチル100mLを加え、水100mL、飽和食塩水100mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=16:1で精製し、表題化合物092g、収率88を得た。1HNMR366340230185161142135123工程2、工程3:12ドデカン酸化合物4、NCG75の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに前工程で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3470mgを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物292mg、収率35を無色結晶として得た。mp7677°C1HNMR821740727721656633391234166159134121MSmz368HRMScalcdforC23H32N2O2368246found358247AnalcalcdforC23H32N2O2C7496H875N760FoundC7507H895N752実施例310デカン酸NCG85の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率11を無色油状物として得た。1HNMR821741728721656633390233168156133123MSmz340HRMScalcdforC21H28N2O2340215found340216AnalcalcdforC21H28N2O215H2OC7331H832N814FoundC7320H837N814実施例49ノナン酸NCG86の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに9ブロモノナン酸エチルエステルを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率41を無色結晶として得た。mp6566°C1HNMR821740727721656633391233165160135125MSmz326HRMScalcdforC20H26N2O2326199found326199AnalcalcdforC20H26N2O2C7496H875N760FoundC7507H895N752実施例510デカン酸NCG87の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、アニリンの代わりに4クロロアニリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率76を無色結晶として得た。mp7980°C1HNMR821736730716660637387233165156135124MSmz374376HRMScalcdforC21H27N2O235Cl374177found374176calcdforC21H27N2O237Cl376174found376173AnalcalcdforC21H27N2O2ClC6728H726N747FoundC6701H729N774実施例610デカン酸NCG88の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、アニリンの代わりに4フルオロアニリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率37を無色結晶として得た。mp7172°C1HNMR817725720717709655625388228165159134125MSmz358HRMScalcdforC21H27N2O2F358205found358206AnalcalcdforC21H27N2O2FC7037H759N782FoundC7020H752N782実施例710デカン酸NCG89の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、アニリンの代わりに4アニシジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率32を無色結晶として得た。mp7879°C1HNMR819724713696653620391381228166150138124MSmz370HRMScalcdforC22H30N2O3370225found370226AnalcalcdforC22H30N2O317H2OC7083H818N751FoundC7081H829N732実施例810デカン酸NCG97の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、アニリンの代わりに4トルイジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率29を無色結晶として得た。mp6566°C1HNMR819726721710653627386237230166160128124MSmz354HRMScalcdforC22H30N2O2354230found354230AnalcalcdforC22H30N2O213H2OC7330H853N777FoundC7330H836N777実施例910デカン酸NCG98の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、アニリンの代わりにNNジメチルアミノ4フェニレンジアミンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率25を茶色結晶として得た。mp125126°C1HNMR817720707677649619382298234166161131124MSmz383HRMScalcdforC23H33N3O2383257found383258AnalcalcdforC23H33N3O215H2OC7136H870N1085FoundC7124H852N1069実施例1010デカン酸NCG99の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、2ブロモピリジンの代わりに4ブロモビフェニルを、アニリンの代わりに2アミノピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率55を無色結晶として得た。mp8081°C1HNMR823762745735731728394233166160131126MSmz416HRMScalcdforC27H32N2O2416246found416246AnalcalcdforC27H32N2O2C7785H774N673FoundC7751H774N660実施例1110デカン酸NCG100の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、アニリンの代わりに4フェノキシアニリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率41を無色結晶として得た。mp117118°C1HNMR820736728717713708703656629387234166160129124MSmz432HRMScalcdforC27H32N2O3432241found432241AnalcalcdforC27H32N2O3C7497H746N648FoundC7475H749N649実施例1210デカン酸NCG101の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに10ブロモデカン酸メチルエステルを、アニリンの代わりに4ターシャリーブチルアニリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率23を無色結晶として得た。mp117118°C1HNMR820741724714654630386233165154134134121MSmz396HRMScalcdforC25H36N2O2396278found396277AnalcalcdforC25H36N2O2C7572H915N706FoundC7544H929N685実施例1312ドデカン酸NCG102の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに4クロロアニリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率19を無色結晶として得た。mp8687°C1HNMR821736730717660637388234166160127124MSmz402404HRMScalcdforC23H31N2O235Cl402207found402207calcdforC23H31N2O237Cl404204found404203AnalcalcdforC23H31N2O2Cl16H2OC6805H778N690FoundC6837H792N651実施例1412ドデカン酸NCG103の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに4フルオロアニリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率37を無色結晶として得た。mp7980°C1HNMR821728725720710656624386234166156128125MSmz385HRMScalcdforC21H27N2O2F385241found385241AnalcalcdforC21H27N2O2FC7147H808N725FoundC7114H797N736実施例1512ドデカン酸NCG104の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに4トルイジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率15を無色結晶として得た。mp8081°C1HNMR820726720711653627387237234165161132122MSmz381HRMScalcdforC24H34N2O2381266found381266AnalcalcdforC24H34N2O215H2OC7465H898N725FoundC7478H894N725実施例1612ドデカン酸NCG105の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに4ターシャリーブチルアニリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率20を無色結晶として得た。mp92°C1HNMR820741724714653630387234166160134134121MSmz367HRMScalcdforC27H40N2O2367238found367237AnalcalcdforC27H40N2O2C7637H950N660FoundC7613H963N652実施例1712デカン酸NCG106の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに4ブロモビフェニルを、アニリンの代わりに2アミノピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率60を無色結晶として得た。mp6566°C1HNMR824762746736732728659646394233169160137124MSmz444HRMScalcdforC29H36N2O2444277found444275AnalcalcdforC29H36N2O2C7834H816N630FoundC7796H822N622実施例1812ドデカン酸NCG109の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例3の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに4アニシジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率30を無色結晶として得た。mp9091°C1HNMR819723714695652619386383234166156133120MSmz398HRMScalcdforC24H34N2O3398256found398256AnalcalcdforC24H34N2O3C7233H860N703FoundC7198H883N720実施例1912ドデカン酸NCG110の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例3の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに4ブロモトリフルオロメチルベンゼンを、アニリンの代わりに2アミノピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率3を無色結晶として得た。mp9091°C1HNMR826760738731166159136122MSmz436HRMScalcdforC24H31N2O2F3436234found436233AnalcalcdforC24H31N2O2F3C6604H716N642FoundC6578H700N644実施例2012アミノドデカン酸NCG114の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに2クロロベンゾチアゾールを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率22を淡黄色結晶として得た。mp4243°C1HNMR759748745739737727703403233173159139122MSmz424HRMScalcdforC25H32N2O2S424218found424218AnalcalcdforC25H32N2O2SC6784H774N633FoundC6756H737N623実施例2112ドデカン酸NCG115の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに2クロロベンゾオキサゾールを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率82を無色結晶として得た。mp6162°C1HNMR733721713703696689389230185159145125MSmz408HRMScalcdforC25H32N2O3408241found408241AnalcalcdforC25H32N2O317H2OC7304H792N681FoundC7314H815N657実施例2212ドデカン酸NCG116の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりにカルバゾールを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率66を無色結晶として得た。mp102104°C1HNMR809746740722429234186166158141120MSmz365HRMScalcdforC24H31NO2365235fornd365235AnalcalcdforC24H31NO2C7886H855N383FoundC7850H842N379実施例2312ドデカン酸NCG118の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに1ナフタレンアミンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率43を無色結晶として得た。mp8991°C1HNMR825792786778756751749739714653586231170159136120MSmz418HRMScalcdforC27H34N2O2418262found418262AnalcalcdforC27H34N2O2C7748H819N669FoundC7751H830N646実施例2412ドデカン酸NCG119の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに2ブロモナフタレンを、アニリンの代わりに2アミノピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率24を無色結晶として得た。mp8788°C1HNMR824787784778768749745735726659641402232171159136121MSmz418HRMScalcdforC27H34N2O2418261found418261AnalcalcdforC27H34N2O2C7748H819N669FoundC7712H817N666実施例2512ジフェニルアミノドデカン酸NCG120の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりにジフェニルアミンを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率46を無色油状物として得た。1HNMR726723698692366234168159135120MSmz367HRMScalcdforC24H33NO2367251found367251実施例2612ドデカン酸NCG121の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりに22’ジピリジニルアミンを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率36を無色結晶として得た。mp3637°C1HNMR835751705685414233171159136122MSmz369HRMScalcdforC22H31N3O2369242found369241AnalcalcdforC22H31N3O2C7151H846N1137FoundC7139H855N1160実施例2712フェニルアミノドデカン酸NCG122の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに4ブロモアニソールを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率84を無色油状物として得た。1HNMR715707688673669381359234166159136124MSmz397HRMScalcdforC25H35NO3397261found397262実施例2812ドデカン酸NCG124の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりにフェノキサジンを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率52を淡緑色結晶として得た。mp8587°C1HNMR679678664660645345235168159143126MSmz381HRMScalcdforC24H31NO3381230found381230AnalcalcdforC24H31NO317H2OC7505H821N365foundC7504H831N387実施例2912ドデカン酸NCG125の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりにフェノチアジンを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率30を桃色結晶として得た。mp122123°C1HNMR794763741723721422232162152142137128MSmz397HRMScalcdforC24H31NO2S397207found397207AnalcalcdforC24H31NO2SH2OC6936H800N337foundC6918H762N374実施例3012ドデカン酸NCG126の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに3アミノピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率24を無色結晶として得た。mp8889°C1HNMR857843823761738734667648392233168159137120MSmz369HRMScalcdforC22H31N3O2369241found369241AnalcalcdforC22H31N3O214H2OC7065H849N1114foundC7050H836N1074実施例3112ドデカン酸NCG127の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに2クロロキノリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率87を無色結晶として得た。mp137138°C1HNMR146930787780764759754745728645466235182175165153135122MSmz418HRMScalcdforC27H34N2O2418262found418262AnalcalcdforC27H34N2O225CHCl3C7057H744N601foundC7043H737N613実施例3212ドデカン酸NCG128の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、2ブロモピリジンの代わりに1クロロイソキノリンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率10を黄色油状物として得た。1HNMR829772767749733722715689681405230222172160152138131129117MSmz418HRMScalcdforC27H34N2O2418262found418262AnalcalcdforC27H34N2O235H2OC7552H826N652foundC7540H809N633実施例33122ピリジニルアミノドデカン酸NCG129の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに2アミノ5フルオロピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率49を無色結晶として得た。mp4748°C1HNMR831822750731727712693680408232169159136120MSmz387HRMScalcdforC22H30N3O2F387231found397232AnalcalcdforC22H30N3O2FC6819H780N1084foundC6792H784N1050実施例34122ピリジニルアミノドデカン酸NCG130の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに2アミノ5クロロピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率49を無色結晶として得た。mp4546°C1HNMR837825756743707701690410233168159135122MSmz403405HRMScalcdforC22H30N3O235Cl403203found403202calcdforC22H30N3O237Cl405198found405199AnalcalcdforC22H30N3O2ClC6541H749N1040foundC6520H751N1038実施例35122ピリジニルアミノドデカン酸NCG131の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに2アミノ5メチルピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率11を無色結晶として得た。mp5759°C1HNMR830823744739704689676409233228169159136121MSmz383HRMScalcdforC23H33N3O2383257found383257AnalcalcdforC23H33N3O2C7203H867N1096foundC7177H865N1082実施例36122ピリジニルアミノドデカン酸NCG132の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、アニリンの代わりに2アミノ5トリフルオロメチルピリジンを用い、実施例1と同様の方法により表題化合物収率53を無色結晶として得た。mp5859°C1HNMR851847768759721706694415234170159135121MSmz437HRMScalcdforC23H30N3O2F3437229found437229AnalcalcdforC23H30N3O2F3C6314H691N960foundC6290H656N950実施例37スキーム313トリデカン酸化合物8、NCG107の製造工程1:トリデカンジオン酸1メチルエステル化合物5の製造トリデカンジオン酸113ジメチルエステル22gをメタノール30mL、テトラヒドロフラン30mLに溶解し、2N水酸化ナトリウム48mLを加え、室温で終夜攪拌した。反応液に2N塩酸48mLを加え、濃縮後、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=3:1で精製し、表題化合物11g、収率53を得た。1HNMR366234230165161135125工程2:13ヒドロキシトリデカン酸メチルエステル化合物6の製造前工程で得られたトリデカンジオン酸1メチルエステル511gをテトラヒドロフラン14mLに溶解し、ボランジメチルスルフィド錯体のテトラヒドロフラン溶液20M132mLを加え、室温で4時間攪拌した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水100mL、飽和食塩水100mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=4:1で精製し、表題化合物799mg、収率77を得た。1HNMR366366362230165149135122工程3:13ブロモトリデカン酸メチルエステル化合物7の製造前工程で得られた13ヒドロキシトリデカン酸メチルエステル化合物6799mgをトルエン3mLに溶解し、四臭化炭素13gを加え、室温で25分間攪拌した。そこにトリフェニルホスフィン10gを加え室温で4時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=6:1で精製し、表題化合物202mg、収率20を得た。1HNMR366340230188182164158145138137124工程4、工程5:13トリデカン酸化合物8、NCG107の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに前工程で得られた13ブロモトリデカン酸メチルエステル化合物7を用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率24を無色結晶として得た。mp8182°C1HNMR821741730722656633391234168159138120MSmz382HRMScalcdforC24H34N2O2382261found382262AnalcalcdforC24H34N2O212H2OC7362H901N715FoundC7355H880N701実施例3814テトラデカン酸NCG108の製造トリデカンジオン酸113ジメチルエステルの代わりにテトラデカンジオン酸114ジメチルエステルを用い、実施例37と同様の方法により表題化合物収率24を無色結晶として得た。mp7172°C1HNMR811744736727724660389217158145138120MSmz396HRMScalcdforC25H36N2O2396278found396277AnalcalcdforC25H36N2O2C7572H915N706FoundC7547H906N687実施例39スキーム412ドデカン酸化合物10、NCG111の製造工程1:12アミノドデカン酸メチルエステル塩酸塩化合物9の製造塩化チオニル3mLをメタノール75mLにゆっくりと加え、10°Cで10分攪拌した。そこに12アミノドデカン酸30gを加え、室温で終夜攪拌した。反応液を減圧濃縮後、残渣をメタノール50mLに溶解し、ジエチルエーテル80mLを加え、析出物をジエチルエーテルで洗浄し、表題化合物32g、収率86を得た。1HNMR363287230165155141129工程2:12ドデカン酸メチルエステルの製造前工程で得られた12アミノドデカン酸メチルエステル塩酸塩化合物927g、2ブロモピリジン520mgをトルエン15mLに溶解し、トリスジベンジリデンアセトンジパラジウム61mg、22’ビスジフェニルホスフィノ11’ビナフチル84mg、ナトリウムtertブトキシド14gを加え、80°Cで終夜攪拌した。反応液をろ過後、減圧濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=2:1で精製し、表題化合物150mg、収率15を得た。mp9091°C1HNMR807741654637449366309231164158142135134125工程3:12ドデカン酸化合物10、NCG111の製造11ウンデカン酸メチルエステルの代わりに前工程で得られた12ドデカン酸メチルエステル150mgを用い、実施例1の工程3と同様の方法により表題化合物102mg、収率71を無色結晶として得た。mp7879°C1HNMR782751653643316233168162147133MSmz292HRMScalcdforC17H28N2O2292215found292216AnalcalcdforC17H28N2O2C6983H965N958FoundC7011H964N942実施例4012フェニルアミノドデカン酸NCG112の製造2ブロモピリジンの代わりにブロモベンゼンを用い、実施例39と同様の方法により表題化合物収率11を無色結晶として得た。mp100101°C1HNMR12070365264855294218155144137131130123MSmz291HRMScalcdforC18H29NO2291219found291219AnalcalcdforC18H29NO2C7418H1003N481FoundC7386H968N492実施例41スキーム512ドデカン酸化合物12、NCG113の製造工程1:フェニル2チアゾリルアミン化合物11の製造1フェニル2チオウレア30gおよびブロモアセトアルデヒドジエチルアセタール39gを酢酸50mLに溶解させ、2時間還流した。反応液を減圧濃縮後、残渣に酢酸エチル100mLを加え、水100mL、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液100mL、飽和食塩水50mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=4:1で精製し、表題化合物128g収率37を無色固体として得た。1HNMR857740730731707664工程2、工程3:12ドデカン酸化合物12、NCG113の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3を、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりに前工程で得られたフェニル2チアゾリルアミン化合物11を用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物収率78を淡黄色結晶として得た。mp6667°C1HNMR745735731723640391233169160137122MSmz374HRMScalcdforC21H30N2O2S374202found274202AnalcalcdforC21H30N2O2SC6739H807N748FoundC6727H797N743実施例42スキーム612ドデカン酸化合物15、NCG117の製造工程1:3ブロモNフェニル2ピリジンアミン化合物13の製造2ブロモピリジンの代わりにヨードベンゼン42gを、アニリンの代わりに3ブロモ2アミノピリジン30gを、22’ビスジフェニルホスフィノ11’ビナフチルの代わりに11’ビスジフェニルホスフィノフェロセン910mgを用い、実施例1の工程1と同様の方法により表題化合物22g、収率61を得た。1HNMR812811794763728698675工程2:9Hピリド23bインドール化合物14の製造前工程で得られた3ブロモNフェニル2ピリジンアミン化合物1322gをNNジメチルホルムアミド25mLに溶解し、ジアセトキシパラジウム200mg、炭酸ナトリウム13gを加え3日加熱還流した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、水100mL、飽和食塩水50mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=1:1で精製し、表題化合物264mg、収率17を得た。1HNMR887847834807752746719工程3、工程4:12ドデカン酸化合物15、NCG117の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3296mgを、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりに前工程で得られた9Hピリド23bインドール化合物14168mgを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物124mg、収率34を無色結晶として得た。mp123124°C1HNMR856833808753748728718447237188166145124MSmz366HRMScalcdforC23H30N2O2366230found366231AnalcalcdforC23H30N2O215H2OC7464H828N757FoundC7471H817N754実施例43スキーム712フェノキシドデカン酸化合物16、NCG123の製造工程1:12フェノキシドデカン酸メチルエステルの製造フェノール100mgをテトラヒドロフラン2mLに溶解し、実施例2の工程1で得られた12ブロモドデカン酸メチルエステル化合物3890mgのテトラヒドロフラン3mL溶液、炭酸セシウム430mgを加え、80°Cで終夜攪拌した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、水100mL、飽和食塩水100mLで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=9:1で精製し、表題化合物23mg、収率25を得た。1HNMR729725693686395366236183168137122工程2:12フェニルオキシドデカン酸化合物16、NCG123の製造11ウンデカン酸メチルエステルの代わりに前工程で得られた12フェニルオキシドデカン酸メチルエステル23mgを用い、実施例1の工程3と同様の方法により表題化合物20mg、収率92を無色結晶として得た。mp8283°C1HNMR729726694688395235177163145137126MSmz292HRMScalcdforC18H28O3292203found292203AnalcalcdforC18H28O3C7393H965N000FoundC7422H936N018実施例44スキーム834フェニルプロピオン酸化合物19、NCG133の製造工程1:34フェニルプロピオン酸メチルエステル化合物17の製造34ヒドロキシフェニルプロピオン酸メチルエステル360mgをアセトニトリル3mLに溶解し、炭酸カリウム370mg、3ブロモプロパノール288mgのアセトニトリル3mL溶液、ヨウ化カリウム175mgを加え、60°Cで3時間攪拌した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、水100mL、飽和食塩水100mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=2:1で精製し、表題化合物314mg、収率65を得た。1HNMR711683410387366289259207202工程2:34フェニルプロピオン酸メチルエステル化合物18の製造前工程で得られた34フェニルプロピオン酸メチルエステル化合物17200mgをジクロロメタン10mLに溶解し、デスマーチンペルヨージナン530mgを加えて室温で2時間攪拌した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、2N水酸化ナトリウム100mL、飽和食塩水100mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=4:1で精製し、表題化合物143mg、収率72で得た。1HNMR986711683428366287283259工程3:34フェニルプロピオン酸メチルエステルの製造前工程で得られた34フェニルプロピオン酸メチルエステル化合物18100mgをジクロロメタン1mLに溶解し、アニリン44mgのジクロロメタン3mL溶液、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム135mgを加え、室温で終夜攪拌した。反応液に酢酸エチル100mLを加え、水100mL、飽和食塩水100mLで洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー展開溶媒nヘキサン:酢酸エチル=4:1で精製し、表題化合物64mg、収率48を得た。1HNMR808740710406366350289259213226工程4:34フェニルプロピオン酸化合物19、NCG133の製造11ウンデカン酸メチルエステルの代わりに前工程で得られた34フェニルプロピオン酸メチルエステル64mgを用い、実施例1の工程3と同様の方法により表題化合物51mg収率83を茶色結晶として得た。mp9496°C1HNMR717712684669662406334290265211207MSmz299HRMScalcdforC18H21NO3299153found299152AnalcalcdforC18H21NO3C7222H707N468FoundC7209H719N473実施例45343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG134の製造アニリンの代わりに2アミノピリジンを用い、実施例44と同様の方法により表題化合物収率26を得た。mp132134°C1HNMR786752709686655649407342275246211205MSmz300HRMScalcdforC17H20N2O3300147found300147AnalcalcdforC17H20N2O3C6798H671N933FoundC6778H675N906実施例46スキーム934フェニルプロピオン酸化合物21、NCG135の製造工程1:34フェニルプロピオン酸メチルエステル化合物20の製造3ブロモプロパノールの代わりに13ジブロモプロパン3mLを用い、実施例44の工程1と同様の方法により表題化合物15g、収率50を得た。1HNMR711683407366360289259233226工程2、工程3:34フェニルプロピオン酸化合物21、NCG135の製造11ブロモウンデカン酸メチルエステルの代わりに前工程で得られた34フェニルプロピオン酸メチルエステル化合物19450mgを、Nフェニルピリジン2アミン化合物1の代わりにジフェニルアミン250mgを用い、実施例1の工程2、工程3と同様の方法により表題化合物73mg、収率15を無色結晶として得た。mp121123°C1HNMR725711699691682400387274250246200194MSmz375HRMScalcdforC24H25NO3375184found375183AnalcalcdforC24H25NO315H2OC7604H675N370FoundC7608H676N378実施例47343プロポキシフェニルプロピオン酸NCG136の製造ジフェニルアミンの代わりに22’ジピリジニルアミンを用い、実施例46と同様の方法により表題化合物収率11を無色固体として得た。mp5355°C1HNMR829762714705694672426395265210260201MSmz377HRMScalcdforC22H23N3O3377172found377173AnalcalcdforC22H23N3O325CHCl3C6328H555N988FoundC6326H544N994試験例1細胞外シグナル制御キナーゼERKアッセイによるGPR40およびGPR120のリガンドスクリーニング1.蛋白質回収1本実験には、FLAGhGPR40遺伝子を組み込んだ誘導発現細胞株およびFLAGhGPR120遺伝子を組み込んだ誘導発現細胞株の2細胞株を用い、それぞれ、35mmディッシュに細胞数5×105dishになるよう播種した。ディッシュへの定着を確認した後、ドキシサイクリンdoxycyclin処理10μgmlドキシサイクリンを細胞溶液に加えるし、その28時間後にスタベーションstarvationFBS培地に置き換えるを行い、更にその20時間後にアッセイした。なお、FLAGは受容体に付けたエピトープを意味し、hはヒトhumanのコンストラクトであることを示す。またGPR40およびGPR120はそれぞれの受容体を意味する。また、FLAGhGPR40遺伝子およびFLAGhGPR120遺伝子は、上記細胞株中において、ドキシサイクリン処理によって安定的にGPR40およびGPR120をそれぞれ発現するように設計された発現ベクターによって組み込まれている。2リガンドとして、NCG74、NCG75、NCG85、NCG86、NCG87、NCG88、NCG89、NCG97、NCG98、NCG99、NCG100、NCG101、NCG102、NCG103、NCG104、NCG105、NCG106、NCG107、NCG108、NCG109、NCG110、NCG111、NCG112、NCG113、NCG114、NCG115、NCG116、NCG117、NCG118、NCG119、NCG120、NCG121、NCG122、NCG123、NCG124、NCG125、NCG126、NCG127、NCG128、NCG129、NCG130、NCG131、NCG132、NCG133、NCG134、NCG135およびNCG136の47種の化合物を用いた。これらの化合物の構造式について、図1-1~図1-4にその一覧を示す。これらの化合物を、それぞれ、DMSOdimethylsulfoxideに溶解して調製し、培地で10倍に希釈して、全量100μlとした。また、ネガティブコントロールとしてDMSOを、ポジティブコントロールとしてPMAPhorbol12myristate13acetateを用いた。3細胞のディッシュから培地を除き、全液量を09mlとした。4リガンド溶液を細胞の溶液の上からポタポタと垂らすように加え、軽くディッシュを揺すって拡散させ、室温で反応させた。55分間の反応の後、培地を捨て、ディッシュに残った培地は氷上にてアスピレータで除去した。6150μlLysisbuffer組成:50mMHEPES150mMNaCl10glycerol1NonidetP402mMMgCl21mMEDTA100mMNaF10mMSodiumphosphate1mMNa3VO420mMβglycerophosphateProteinaseInhibitorを入れ、CellScraperで細胞を回収した。7回収した液は150μl等量の1×SDSSampleBuffer組成:50mMTrisHCl2SDS6Mercaptoethanol10glycerolBPBと混合し、以下のウェスタンブロッティングに使用、または20°Cで保存した。2.SDSPAGE1SDSSampleBufferに混合した粗酵素液は、超音波ホモジナイザーsonifierを用いて超音波破砕した後、90°Cで5minインキュベートした。2ボルテックスにかけて遠心15000rpm、5min、4°Cした。3泳動槽に1×SDSPAGERunningBuffer組成:25mMTris02MGlycine1SDSを満たし、2枚の75アクリルアミドゲルをセットし、サンプル遠心後の上清をアプライした。泳動は40mAの定電流で行った。約80~90min3.ブロッティングBlottingSemiDry法1PVDFPolyVinylideneDiFluorideメンブレンはゲルの大きさにあわせて切り、メタノールに約15sec浸した後、TransferBufferCsolution組成:25mMTris002SDS2methanol40mM6aminohexanoicacid中で、15min振盪室温して膨潤させた。ブロッティングに使用する濾紙は、10cm×10cmの大きさに切った。2ブロッティング装置に、Asolution組成:03MTris002SDS2methanolに浸した濾紙2枚、Bsolution組成:25mMTris002SDS2methanolに浸した濾紙2枚の順に重ね、その上にメンブレンを乗せた。更にその上に泳動終了後のゲルを乗せ、最後に、Csolutionに浸らせた濾紙2枚を重ねてふたをした。315Vで30分間Transferを行った。4.ブロッキングBlocking1以下の作業はすべて室温で行った。Transfer終了後のメンブレンを、1×TTBS組成:02MTris15MNaCl02Tween20を入れたケースに移し、15分間洗浄した。2TTBSを除き、ブロッキング液BlockAceを約10mlを加えて1時間振盪してブロッキングした。5.一次抗体1一次抗体p4442MAPKinaseAntibodyおよびPhosphop4442MAPKinaseAntibodyは、それぞれTTBSで1000倍希釈して用いた。2ブロッキング終了後、ブロッキング液を除き、一次抗体溶液を入れて1時間振盪して反応させた。6.二次抗体1二次抗体AntirabbitIgHorseradishPeroxidaselinkednF2fragmentは、TTBSで5000倍希釈して用いた。2一次抗体溶液を除き、TTBS中で5~10分間振盪し洗浄した。洗浄は3回行った。3TTBSを除き、二次抗体溶液を入れて1時間振盪した。7.検出1氷上にて、ECLkit中のDetectionReagent1とDetectionReagent2それぞれ2mlずつを混合した。2二次抗体反応終了後のメンブレンから、二次抗体溶液を除き、TTBS中で5分間振盪し洗浄した。洗浄は3回行った。3メンブレンを、しっかり水を切ってパック内へ入れ、1枚のメンブレンにつき2mlのDetectionReagent混合液をかけた。4カセット内でメンブレンとフィルムとを1分~5分間接触させ、自動現像機で現像した。8.解析1フィルムをスキャンしてパソコンに取り込み、ImageJのアプリケーションImageJ1345NationalInstitutesofHealthから公開されているフリーソフトを用いてバンドを数値化した。2DMSOおよびPMAにより正規化normalizeし、薬物間の値を比較した。FLAGhGPR40およびFLAGhGPR120細胞株に対し、下記の各薬物を、10μMと100μMの濃度で反応させた。シグナルは数値化し、PMAにより正規化した。FLAGhGPR40およびFLAGhGPR120の結果を、それぞれ図2および図3に示す。GPRの組み込まれていない細胞株MockおよびDoxycycline処理を行っていない細胞Doxをネガティブコントロールとして並べ、Doxycycline処理を行ったものについて化合物のERK活性を比較した。9.考察hGPR40について、NCG75、NCG109、NCG112、NCG121は、GPR40を誘導発現した細胞に対して、特異的に反応していた。すなわち、上記の4種の化合物は、GPR40作動剤として好適に用いられることがわかった。とくに、NCG75は、GPR40を強く作動し、GPR120を作動させる活性は弱かった。試験例2細胞内カルシウムイオン濃度Ca2の変化によるスクリーニングおよび評価1.細胞播種試験例1と同様に、GPR40発現細胞株およびGPR120発現細胞株を用いた。コラーゲン処理された96穴プレートに細胞数2×105well50μlになるように、無血清培地を用いて各細胞を播種した。2.細胞内へのカルシウムイオン感受性色素の導入CalciumAssayKitMolecularDevices社をマニュアル記載の2倍濃度でFLIPRbufferに溶解した。その溶液50μlwellを播種後21時間の細胞に添加しCalciumAssayKitの濃度が所定の最終濃度となった状態で1時間室温で暗所に静置することにより、細胞内へカルシウムイオン感受性色素を導入した。3.被検化合物調製被検化合物は、DMSOに溶解し上記FLIPRbufferで希釈して各化合物濃度が15×104M、DMSO濃度が15となるように調製した。ネガティブコントロールとして同濃度のDMSOを、ポジティブコントロールとしてGPR120とGPR40に対する既知のリガンドであるαLinolenicacidを被検化合物と同様に調製して使用した。4.細胞内カルシウムイオン濃度変化の測定カルシウムイオン感受性色素の導入を終えた細胞および96穴プレートへ分注した調製済の各リガンド溶液を、MolecularDevices社の測定装置FLIPRFluorometricImagingPlateReaderへ設置し、被検化合物添加刺激に伴う細胞内カルシウムイオン濃度の変化アゴニスト活性を、カルシウムイオン感受性色素の蛍光強度変化として測定し、LAに対する応答の比として表示した。リガンド溶液は全体の1/5量を添加した。リガンド被検化合物およびLAとDMSOの最終濃度はそれぞれ3×105M、03である。スクリーニングの結果を表1にまとめる。なお、表1中、-は、反応が極めて弱かったことを示し、nodataは、データを取得していないことを示す。GPR40とGPR120とのそれぞれへのNCG75、LAおよびAMGEN1の作用をカルシウム反応で容量依存性的に詳細に比較した結果を図4および図5並びに表2および表3に示す。5.考察GPR40およびGPR120発現細胞を用いて、被検化合物の細胞内カルシウムイオン濃度の変化を指標としたスクリーニングの結果、GPR40に対して、EC50が10μM以下の化合物が見出された。GPR120に対して、GPR40に対するEC50が小さい、すなわちGPR40に対して選択性を有する化合物として、NCG75を詳細に評価した。内因性のリガンドとしてLA、既報の化合物としてAMGEN1と比較して、NCG75が、GPR40に対して選択性が高いことが示された。試験例3MIN6インシュリン分泌アッセイ1.試験方法以下の培養条件および実験手順で、被検化合物のアッセイを行った。培養条件:MIN6細胞は、DMEMに10FBS、100Umlペニシリン、100μgmlストレプトマイシン、60μMβメルカプトエタノールを添加した培地中37°C、5CO2条件下で培養。実験手順:MIN6細胞を4×104cell100μlずつ96ウェルプレートへまき直し、24時間、37°C、5CO2でインキュベートする。そして培地を取り除いた後、gulucosefreeのKrebs10mMbuffer100μlで2回洗浄し、培地を25mMglucose添加Krebsbuffer100μlに置き換え、1時間プレインキュベートする。その後、同様にKrebsbufferで2回洗浄を行い、培地を低濃度5mMまたは高濃度glucoseと各濃度の化合物を添加したKrebsbuffer100μlに置き換え2時間37°C、5CO2でインキュベートした後、上清を回収、20°Cで保存する。また、上清を回収した後の各wellには01NNaOH50μlを加えピペッティング、細胞の溶解液を回収、CBBタンパク質アッセイBradford法によりタンパク量を決定する。回収した上清中のインシュリン濃度はレビスインスリンマウスTELISAキットシバヤギを用いて決定した。化合物は、PMAPhorbol12myristate13acetate500nM、α-リノレン酸αLA10μMまたは100μM、NCG7510μMまたは100μM、GW950810μMまたは100μMを用いた。GW9508は、GPR40アゴニストBrJPharmacol2006Jul14861928Epub2006May15PMID16702987参照である。また、PMAおよびαLAはポジティブコントロールであり、DMSOはネガティブコントロールである。結果を図6に示す。2.考察膵臓β細胞のモデルとして、培養細胞株であるmin6を用いたインスリンの分泌を検討したところ、NCG75は、用量依存的かつ細胞外のグルコース濃度に依存的なインスリン分泌を引き起こした。既知のGPR40作動薬であるGW9508と比較しても同程度の作用が認められた。"