エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチド。エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチドが配列番号:1~3からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含むものである、請求項1に記載のペプチド。配列番号:1~3のいずれかに記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入及び/又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであって、エプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を誘導し得る機能を有することを特徴とする、請求項1に記載のペプチド。HLAA0206分子、HLACw0303分子またはHLACw0304分子の拘束性抗原ペプチドであって、HLAA0206分子、HLACw0303分子またはHLACw0304分子との複合体を細胞表面に提示する細胞を特異的に認識しうるT細胞レセプターを有する細胞傷害性T細胞を誘導し得る機能を有することを特徴とする、請求項1~3のいずれかに記載のペプチド。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドをコードする核酸。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドを有効成分として含む、エプスタインバールウイルスの感染を治療又は予防するためのワクチン。請求項5に記載の核酸を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスの感染を治療又は予防するためのワクチン。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスの感染を治療又は予防するためのワクチン。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドもしくは該ペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞により末梢血リンパ球を刺激して得られるエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドから調製した主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血リンパ球とを反応させ、該主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーに細胞傷害性T細胞が結合した結合体を形成させ、該結合体から単離して得られる細胞傷害性T細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドを用いて細胞傷害性T細胞を誘導することを特徴とする、細胞傷害性T細胞の誘導方法。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドと末梢血単核球を、血漿を含む培地中で接触させることにより、エプスタインバールウイルス特異的細胞傷害性T細胞を誘導する、請求項11に記載の誘導方法。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドもしくは該ペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞により末梢血リンパ球を刺激してエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を取得する工程を含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤の製造方法。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドから調製した主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血リンパ球とを反応させ、該主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーに細胞傷害性T細胞が結合した結合体を形成させ、該結合体から単離して得られる細胞傷害性T細胞を取得する工程を含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤の製造方法。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドで末梢血を刺激し、該ウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞を取得し、細胞傷害性T細胞が産生するサイトカイン及び/又はケモカイン及び/又は細胞表面分子を測定することを特徴とする、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量方法。請求項1~4のいずれかに記載のペプチドから主要組織適合性抗原複合体テトラマーを調製し、主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血とを反応させることを特徴とする、該末梢血中のエプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量方法。本発明はこのような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチド、該ペプチドを用いたエプスタインバールウイルスの感染を治療又は予防するワクチン、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤、およびエプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量方法を提供することにある。本発明者らは、上記の課題を解決するために、エプスタインバールウイルス関連蛋白質であるLMP1およびEBNA1のmRNAを抗原提示細胞に導入し、該抗原提示細胞がエプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞CTLを誘導する能力があるかを検討した。その結果、エプスタインバールウイルス関連蛋白質を発現させた抗原提示細胞は、健常人由来のCTLを刺激し、該CTLはEBVが感染しているB細胞の成長を阻害し、EBVが感染しているNKリンパ腫またはNK細胞を溶解することが明らかとなった。さらに、該CTLは、HLAA0206分子、HLACw0303分子またはHLACw0304分子に提示されているエピトープペプチドを認識することが明らかとなった。即ち、本発明者らは、エプスタインバールウイルスに特異的なCTLエピトープペプチドを同定することに成功し、これにより本発明を完成するに至った。本発明は、より具体的には以下の1~16を提供するものである。1エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチド。2エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチドが配列番号:1~3からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含むものである、1に記載のペプチド。3配列番号:1~3のいずれかに記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入及び/又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであって、エプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を誘導し得る機能を有することを特徴とする、1に記載のペプチド。4HLAA0206分子、HLACw0303分子またはHLACw0304分子の拘束性抗原ペプチドであって、HLAA0206分子、HLACw0303分子またはHLACw0304分子との複合体を細胞表面に提示する細胞を特異的に認識しうるT細胞レセプターを有する細胞傷害性T細胞を誘導し得る機能を有することを特徴とする、1~3のいずれかに記載のペプチド。51~4のいずれかに記載のペプチドをコードする核酸。61~4のいずれかに記載のペプチドを有効成分として含む、エプスタインバールウイルスの感染を治療又は予防するためのワクチン。75に記載の核酸を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスの感染を治療又は予防するためのワクチン。81~4のいずれかに記載のペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスの感染を治療又は予防するためのワクチン。91~4のいずれかに記載のペプチドもしくは該ペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞により末梢血リンパ球を刺激して得られるエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤。101~4のいずれかに記載のペプチドから調製した主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血リンパ球とを反応させ、該主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーに細胞傷害性T細胞が結合した結合体を形成させ、該結合体から単離して得られる細胞傷害性T細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤。111~4のいずれかに記載のペプチドを用いて細胞傷害性T細胞を誘導することを特徴とする、細胞傷害性T細胞の誘導方法。121~4のいずれかに記載のペプチドと末梢血単核球を、血漿を含む培地中で接触させることにより、エプスタインバールウイルス特異的細胞傷害性T細胞を誘導する、11に記載の誘導方法。131~4のいずれかに記載のペプチドもしくは該ペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞により末梢血リンパ球を刺激してエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を取得する工程を含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤の製造方法。141~4のいずれかに記載のペプチドから調製した主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血リンパ球とを反応させ、該主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーに細胞傷害性T細胞が結合した結合体を形成させ、該結合体から単離して得られる細胞傷害性T細胞を取得する工程を含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤の製造方法。151~4のいずれかに記載のペプチドで末梢血を刺激し、該ウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞を取得し、細胞傷害性T細胞が産生するサイトカイン及び/又はケモカイン及び/又は細胞表面分子を測定することを特徴とする、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量方法。161~4のいずれかに記載のペプチドから主要組織適合性抗原複合体テトラマーを調製し、主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血とを反応させることを特徴とする、該末梢血中のエプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量方法。本発明により、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチドを同定することに成功した。該ペプチドは、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞を効率的に誘導し得る機能を有する。従って該ペプチド及び該ペプチドをコードする核酸は、エプスタインバールウイルスの感染および同ウイルス陽性の癌を治療又は予防するためのワクチン能動免疫療法剤として有用である。本発明で提供されるエピトープペプチドは、ワクチンとして用いる事で、エプスタインバールウイルス特異的CTLを生体内で誘導し、エプスタインバールウイルス感染に対して免疫力を保持させることができる。生体外において末梢血等の生体試料に対してもエプスタインバールウイルスを感染させる事無く、安全かつ効率的にエプスタインバールウイルス特異的CTLを人為的に誘導増殖させ細胞免疫療法に用いる事ができる。さらに、エプスタインバールウイルスに対する免疫力の有無の診断に用いる事ができ、エプスタインバールウイルス感染症に対して有効な治療法と診断方法を提供する。また、本発明のこれらのエピトープペプチドによって誘導されるCTLは、エプスタインバールウイルス感染細胞を特異的に溶解し、かつ該細胞の成長を阻害する機能を有し、受動免疫療法剤の成分として非常に有用である。さらに、該エピトープペプチドを用いることにより、エプスタインバールウイルスに特異的なCTLを定量することが可能である。エプスタインバールウイルスに特異的なCTLが、ハイリスクの患者の末梢血に存在するか否かを知ることは、抗ウイルス剤や免疫抑制剤の適正な使用を含め、これらの感染症管理の上で重要な情報である。本発明は、エプスタインバールウイルスに特異的に細胞傷害性T細胞を誘導し得る機能を有するT細胞エピトープペプチドに関する。従って本発明は、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチドを提供する。該エピトープペプチドは、本明細書においてエピトープペプチド、あるいは単に本発明のペプチドと記載する場合がある。本発明においてペプチドとは、生理活性を有し、隣接するアミノ酸残基のα-アミノ基とカルボキシル基間のペプチド結合により相互に結合した線状のアミノ酸の分子鎖を意味する。ペプチドは特定長のものを意味するものではなく、種々の長さであり得る。従って、本発明のペプチドには、所謂オリゴペプチド、ポリペプチドも含まれる。また、無電荷又は塩の形態であってもよく、場合によっては、グリコシル化、アミド化、ホスホリル化、カルボキシル化、リン酸化等により修飾されていてもよい。以下に、エピトープの候補ペプチドの選択方法についてその一例を記載する。1.コンピュータを用いた解析本発明のエプスタインバールウイルスに特異的なCTLエピトープペプチドは、エプスタインバールウイルス関連タンパク質のアミノ酸配列について、目的とするHLA分子の各結合モチーフを有する8~11個のアミノ酸よりなるエピトープペプチドを検索し得る、インターネット上に公開されている複数のソフトウェアPingpingGetalNucleicAcidsRes3136213624に照合してCTLエピトープの候補ペプチドを選択する事ができる。本発明において、エプスタインバールウイルス関連タンパク質としては、EBNA1、2、3A、3B、3C、LMP1、LMP2、またはleaderprotein等を挙げることができ、より好ましくは、EBNA1またはLMP1を挙げることが出来る。EBNA1のアミノ酸配列およびDNA配列を配列番号:36および37に、N末端が欠損したLMP1のアミノ酸配列およびDNA配列を配列番号:34および35に示す。2.アンカーモチーフを用いた検討HLAクラスI分子は、主としてHLAA、HLAB、HLACがあり、これらに結合して提示されるエピトープペプチドは、8~11個のアミノ酸からなる。エピトープペプチドのN末端側から2番目と、9あるいは10番目のアミノ酸はHLA分子との結合に対して最も重要なアミノ酸であり、アンカーモチーフと呼ばれている。このアンカーモチーフは、各々のHLA分子の種類によって異なることが報告されている。例えば、HLAA2分子に結合するペプチドとしては、N末端より2番目の位置にLeuが配置され、9あるいは10番目の位置にLeu又はValが配置されたペプチドであって、9~10個のアミノ酸残基からなるペプチドが最も良く知られているSudoTetalJImmunol15547494756。また、日本人を含むアジアの人種に多いHLAA24に結合するペプチドとしては、N末端より2番目の位置にTyr、Phe、Met又はTrpのいずれかが配置され、9あるいは10番目の位置にLeu、Ile、Trp又はPheのいずれかが配置されたペプチドであって、9~10個のアミノ酸からなるペプチドが最もよく知られているKondoAJImmunol15543074312。蛋白質のアミノ酸配列中からこのアンカーモチーフを有する配列を検索し、CTLエピトープの候補ペプチドを選択する事ができる。3.ペプチドライブラリーの作製エプスタインバールウイルス関連タンパク質の蛋白質全体を網羅する20個前後のアミノ酸よりなるペプチドライブラリーを合成する。20個前後のアミノ酸のうち、前後10個程度例えば、78910111213個のアミノ酸は、前後のペプチド配列と重複するようにライブラリーを作製する。これによって、蛋白質全体を網羅的に検索する事ができる。なお、前述の方法にて選択されたエピトープ候補ペプチドは必ずしもCTLエピトープになり得る訳ではなく、以下に示す検討を経て初めてエプスタインバールウイルス特異的CTLエピトープになり得る。以下に、エピトープペプチドの決定方法について記載するが、これらの方法に限定されるものではない。1エピトープペプチド決定方法1エプスタインバールウイルス感染歴がある人から分離した末梢血単核球peripheralbloodmononuclearcells;PBMC、あるいはPBMCから分離したT細胞を適切な培地に01~2×106mLの細胞濃度で浮遊させる。これに同じ人からあらかじめ分離培養しておいたエプスタインバールウイルス感染細胞1×105mLを加え、5炭酸ガスCO2恒温槽にて37°Cで7日間培養する。培養7日後にエプスタインバールウイルス感染細胞とインターロイキン2IL2を添加し、以後、エプスタインバールウイルス感染細胞とIL2による刺激を毎週繰返すことによりCTLを誘導する。このようにして誘導したCTLがエピトープ候補ペプチドに対して特異性があるかどうかの検討は、MHC-テトラマー法、エリスポットアッセイ、クロムリリースアッセイ、細胞内サイトカイン染色法等で判定するCurrentProtocolsinImmunologyEditedbyJohnEColiganAdaMKruisbeekDavidHMarguliesEthanMShevachWarrenStrober619ELISPOTAssaytoDetectCytokineSecretingMurineandHumanCells624DetectionofIntracellularCytokinesbyFlowCytometrypublishedbyJohnWileySonsInc。2エピトープペプチド決定方法2エプスタインバールウイルス感染歴がある人から分離したPBMCを適切な培地に01~2×106mLの細胞濃度で浮遊させ、これにエピトープ候補ペプチドの任意の1種を001~100μg/mLの濃度で加える。5CO2恒温槽にて37°Cで培養し、2日後にIL2を添加する。以後、前記ペプチドとIL2による刺激を週に1度あるいは2週間に1度繰返すことによりCTLを誘導する。このようにして誘導したCTLがエピトープ候補ペプチドに対して特異性があるかどうかの検討は、MHC-テトラマー法、エリスポットアッセイ、クロムリリースアッセイ、細胞内サイトカイン染色法等で判定する。3エピトープペプチド決定方法3エプスタインバールウイルス感染歴がある人から分離したPBMCを適切な培地に01~2×106mLの細胞濃度で浮遊させ、これに合成したペプチドライブラリーを適当な数例えば10種類ずつにプールした物を加える。5CO2恒温槽にて37°Cで培養し、2日後にIL2を添加する。以後、プールペプチドとIL2による刺激を週に1度あるいは2週間に1度繰返すことにより、CTLを誘導する。このようにして誘導したCTLがエピトープ候補ペプチドに対して特異性があるかどうかの検討は、エリスポットアッセイ、クロムリリースアッセイ、細胞内サイトカイン染色法等で判定する。良好な結果を示したプールペプチドに対しては、1種類ずつペプチドを加えて上記実験を繰返せば、CTL誘導能を有するペプチドを選択する事が可能である。反応したペプチドについて順次短くし、基幹のペプチドを得て本発明のエピトープペプチドとする。一般的に、エピトープペプチドは最終的に8~11個のアミノ酸までに短くすることができる。本発明のペプチドとして具体的には、配列番号:1~3のいずれかに記載の塩基配列からなるペプチドを例示することができる。また本発明のペプチドは、配列番号:1~3のいずれかに記載のアミノ酸領域を含むペプチドであってもよい。即ち、本発明のペプチドの好ましい態様としては、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞エピトープペプチドが配列番号:1~3からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含むペプチドである。さらに、本発明のエピトープペプチドは、生理活性及び免疫活性を実質的に改変せず、投与した場合に有害な活性を有するものでない限り、上記のペプチドの改変体であってもよい。即ち本発明の好ましい態様としては、配列番号:1~3のいずれかに記載のアミノ酸配列において、1もしくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入及び/又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであって、改変前の配列番号:1~3のいずれかに記載のペプチドと同等の機能を有するペプチドを挙げることができる。上記同等の機能としては、例えば、1エプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を誘導し得る機能、2ヒト主要組織適合性抗原等、特にHLAA0206分子、またはHLACw0303分子またはHLACw0304分子との複合体を細胞表面に提示する細胞を特異的に認識しうるT細胞レセプターを有する細胞傷害性T細胞を誘導し得る機能、等を挙げることができる。改変されたペプチドが、上記の機能を有するか否かは、例えば、後述の実施例に記載の方法、あるいは該方法を適宜改変した方法によって、評価することが可能である。本発明のペプチドは、天然に存在する状態から修飾されていないもの、及び修飾されているものの双方を含む。修飾としては、アセチル化、アシル化、ADPリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、メチル化、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、Yカルボキシル化、グリコシル化、GPIアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転移RNA媒介付加、ユビキチン化等が含まれる。また、本発明のペプチドは、N末端又はC末端に付加的アミノ酸配列が介在するものであってもよい。また、本発明のペプチドは、糖類、ポリエチレングリコール、脂質等が付加された複合体、放射性同位元素等による誘導体、あるいは重合体等の形態として用いることができる。また、本発明におけるアミノ酸には、所謂アミノ酸アナログが含まれる。該アミノ酸アナログとしては、例えば、種々のアミノ酸のNアシル化物、Oアシル化物、エステル化物、酸アミド化物、アルキル化物等が挙げられる。また、本発明のペプチドと該HLA分子との複合体が、該複合体を細胞表面に提示する細胞を特異的に認識しうるTCRを有するCTLによって認識されるものである限り、本発明のペプチドのN末端や遊離のアミノ基には、ホルミル基、アセチル基、tブトキシカルボニルtBoc基等が結合していてもよく、本発明のペプチドのC末端や遊離のカルボキシル基には、メチル基、エチル基、tブチル基、ベンジル基等が結合していてもよい。また、本発明のペプチドは、生体内への導入を容易にしうる各種修飾を施されたものであってもよい。生体内への導入を容易にしうる各種修飾の例としては、PTProteinTransductionドメインが有名である。HIVhumanimmunodeficiencyvirusのPTドメインは、Tatタンパク質の49~57番目のアミノ酸ArgLysLysArgArgGlnArgArgArg/配列番号:38で構成されたペプチドで、このペプチド配列を目的とするタンパク質あるいはペプチド配列の前後、又はいずれかに付加することで、容易に細胞内に導入できることが報告されているRyuJMolCells16385391KimDTJImmunol15916661668。MHCクラスI分子を介して提示されるほとんどの抗原は、細胞質内のプロテアソームにより分解された後、TAPtransporterinantigenprocessingへと移送され、粗面小胞体内においてTAPに会合しているMHCクラスI分子とβ2ミクログロブリンの複合体と結合し、ゴルジ装置を経てエクソサイトーシスにより細胞表面へと運搬される。これら一連の抗原提示経路にて作用するシャペロンであるHSPheartshockprtein70やHSP90、又はgp96と目的とするペプチドやタンパク質を融合させることで、効果的な抗原提示がなされることが報告されておりBasuSImmunity14303313、本発明のペプチドに上記PTドメインまたはシャペロンを融合させたタンパクは本発明の一態様を成す。また、本発明のペプチドは、従来の各種のペプチド合成方法によって調製され得る。例えば、固相ペプチド合成法等の有機化学的合成法、あるいは、ペプチドをコードする核酸を調製し、組換えDNA技術を用いて調製することも可能である。また、市販の化学合成装置例えば、アプライドバイオシステムズ社のペプチド合成装置による合成も可能である。即ち本発明のペプチドは、そのアミノ酸配列に従って、一般的な化学合成法により製造することが可能であり、該方法には、通常の液相法及び固相法によるペプチド合成法が包含される。該ペプチド合成法は、より詳しくはアミノ酸配列の情報に基づいて、各アミノ酸を1個ずつ逐次合成させて鎖を延長していくステップワイズエロンゲーション法と、アミノ酸数個からなるフラグメントを予め合成し、次いで各フラグメントをカップリング反応させるフラグメントコンデンセーション法を包含し、本発明のペプチドの合成は、いずれの方法を用いてもよい。このようなペプチド合成法にて用いられる縮合法も、各種方法に従って行うことができる。その具体例としては、例えばアジド法、混合酸無水物法、DCC法、活性エステル法、酸化還元法、DPPAジフェニルホスホリルアジド法、ウッドワード法等を例示できる。これら各種方法に利用できる溶媒もまた、一般的に使用されるものを適宜利用することができる。その例としては、例えばジメチルホルムアミドDMF、ジメチルスルホキシドDMSO、ヘキサホスホロアミド、ジオキサン、テトラヒドロフランTHF、酢酸エチル等及びこれらの混合溶媒等を挙げることができる。なお、上記ペプチド合成反応に際して、反応に関与しないアミノ酸及びペプチドにおけるカルボキシル基は、一般にはエステル化により、例えばメチルエステル、エチルエステル、第三級ブチルエステル等の低級アルキルエステル、例えばベンジルエステル、P-メトキシベンジルエステル、P-ニトロベンジルエステルアラルキルエステル等として保護することができる。また、側鎖に官能基を有するアミノ酸、例えばTyrの水酸基は、アセチル基、ベンジル基、ベンジルオキシカルボニル基、第三級ブチル基等で保護されてもよいが、必ずしもかかる保護は必須ではない。また、例えば、Argのグアニジノ基は、ニトロ基、トシル基、2-メトキシベンゼンスルホニル基、メチシレン-2-スルホニル基、ベンジルオキシカルボニル基、イソボルニルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基等の適当な保護基により保護することも可能である。上記のようにして得ることが可能な本発明のペプチドは、通常の方法に従って、例えばイオン交換樹脂、分配クロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーHPLC、向流分配法等のペプチド化学の分野で汎用されている方法に従って、適宜、精製を行うことができる。本発明のペプチドは、本発明のペプチドをコードするDNA核酸分子を合成し、適当な発現ベクターへ導入した後、宿主細胞内において発現させる遺伝子工学的手法によっても取得することができる。一例を示せば、まず配列番号:1~3のいずれかに記載されたアミノ酸配列をコードする核酸を合成する。該方法としては、リン酸トリエステル法やリン酸アミダイト法などの化学合成手段LetsingerRLetalJAmChemSoc894801;LetsingerRLetalJAmChemSoc9133503355;MerrifieldRBetalScience150178185;BeaucageSLandCaruthersMHTetrahedronLett2218591862;McBrideLJandCaruthersMHTetrahedronLett24245及びそれらの組合せ方法などが例示できる。より具体的には、DNAの合成は、ホスホルアミダイト法又はトリエステル法による化学合成により行うこともでき、市販されている自動ポリヌクレオチド合成装置上で行うこともできる。二本鎖断片は、相補鎖を合成し、適当な条件下で該鎖を共にアニーリングさせるか、又は適当なプライマー配列と共にDNAポリメラーゼを用い相補鎖を付加するかによって、化学合成した一本鎖生成物から得ることもできる。本発明のペプチドには、上述のように、本発明者らによって同定されたエピトープペプチド配列番号:1~3と機能的に同等なペプチドが含まれる。あるペプチドと機能的に同等なペプチドを調製するための、当業者によく知られた方法としては、例えばペプチド中のアミノ酸配列に変異を導入する方法が挙げられる。具体的には当業者であれば部位特異的変異誘発法HashimotoGotohTetalGene152271275、ZollerMJandSmithMMethodsEnzymol100468500、KramerWetalNucleicAcidsRes1294419456、KramerWandFritzHJMethodsEnzymol154350367、KunkelTAProcNatlAcadSciUSA82488492、KunkelMethodsEnzymol8527632766などを用いて、配列番号:1~3のいずれかに記載のアミノ酸配列に適宜変異を導入することにより、該ペプチドと機能的に同等なペプチドを調製することができる。また、ペプチド中のアミノ酸の変異は自然に生じることもある。このように、人工的か自然に生じたものかを問わず、本発明者らにより同定されたエピトープペプチド配列番号:1~3のアミノ酸配列において1もしくは複数のアミノ酸配列が変異したアミノ酸配列を有し、該ペプチドと機能的に同等なペプチドは、本発明のペプチドに含まれる。上述のようなアミノ酸の変更改変目的は、例えば、1.HLAとの親和性を高める為の変更RosenbergSAetalNatMed4321327、BerzofskyJAetalNatRevImmunol1209219、2.TCRの認識性を向上させるための変更FongLetalProcNatlAcadSciUSA9888098814RivoltiniLetalCancerRes59301306、3.血清中のペプチド分解酵素等による代謝を回避する為の変更BerzofskyJAetalNatRevImmunol1209219ParmianiGetalJNatlCancerInst94805818BrinckerhoffLHetalIntJCancer83326334、ZollerMJSmithMNucleicAcidsResearch1064876500、WangAetalScience22414311433、DalbadieMcFarlandGetalProcNatlAcadSciUSA7964096413。本発明のペプチドのアミノ酸配列に複数個のアミノ酸残基が付加されたペプチドには、これらペプチドを含む融合ペプチドが含まれる。融合ペプチドは、本発明のペプチドと他のペプチドとが融合したものである。融合ペプチドを作製する方法は、本発明のペプチド例えば、配列番号:1~3に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドと他のペプチドをコードするポリヌクレオチドをフレームが一致するように連結してこれを発現ベクターに導入し、宿主で発現させればよく、当業者に公知の手法を用いることができる。本発明のペプチドとの融合に付される他のペプチドは、CTLの誘導目的以外にも、例えば、該ペプチドの単離精製、あるいは応用研究等の種々の目的に応じて、適宜選択することができる。例えばFLAGHoppTPetalBioTechnology612041210、6個のHisヒスチジン残基からなる6×His、10×His、インフルエンザ凝集素HA、ヒトcmycの断片、VSVGPの断片、p18HIVの断片、T7tag、HSVtag、Etag、SV40T抗原の断片、lcktag、αtubulinの断片、Btag、ProteinCの断片等の公知のペプチドを使用することができる。また、本発明のペプチドとの融合に付される他のタンパク質としては、例えば、GSTグルタチオン-S-トランスフェラーゼ、HAインフルエンザ凝集素、イムノグロブリン定常領域、β-ガラクトシダーゼ、MBPマルトース結合タンパク質等が挙げられる。市販されているこれらペプチド又はペプチドをコードするポリヌクレオチドを本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドと融合させ、これにより調製された融合ポリヌクレオチドを発現させることにより、融合ペプチドを調製することができる。また、本発明のペプチドの融合体を作製する場合、融合箇所にFactorXaエンテロキナーゼまたはトロンビンのようなプロテアーゼ切断部位ペプチド配列を挿入することもできる。このような場合、上記GST、MBP、あるいはFLAGタグのような精製用タグを付加させたペプチド融合体として発現させ、精製した後、必要に応じてペプチド融合体のうち、本発明の目的のペプチド以外の領域を、対応するFactorXaエンテロキナーゼまたはトロンビンのようなプロテアーゼなどにより切断、除去することも可能であり、有用である。また、あるペプチドと機能的に同等なペプチドを調製する当業者によく知られた他の方法としては、ハイブリダイゼーション技術SambrookJetalMolecularCloning2nded947958ColdSpringHarborLabpressを利用する方法が挙げられる。即ち、当業者であれば、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドもしくはその一部をもとに、種々の生物由来例えば、エプスタインバールウイルス由来のポリヌクレオチド試料、あるいは人工的に合成されたペプチドライブラリー等から、これと相同性の高いポリヌクレオチドを単離して、該ポリヌクレオチドから本発明のペプチドと機能的に同等なペプチドを単離することも通常行いうることである。本発明には、本発明の配列番号:1~3に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるペプチドであって、配列番号:1~3に記載のペプチドと機能的に同等なペプチドが含まれる。配列番号:1~3に記載のペプチドと機能的に同等なペプチドをコードするポリヌクレオチドを単離するためのハイブリダイゼーションの条件は、当業者であれば適宜選択することができる。ハイブリダイゼーションの条件としては、例えば、低ストリンジェントな条件が挙げられる。低ストリンジェントな条件とは、ハイブリダイゼーション後の洗浄において、例えば42°C、01×SSC、01SDSの条件であり、好ましくは50°C、01×SSC、01SDSの条件である。より好ましいハイブリダイゼーションの条件としては、高ストリンジェントな条件が挙げられる。高ストリンジェントな条件とは、例えば65°C、5×SSC及び01SDSの条件である。これらの条件において、温度を上げる程に高い相同性を有するDNAが効率的に得られることが期待できる。但し、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響を及ぼす要素としては温度や塩濃度など複数の要素が考えられ、当業者であればこれら要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。また、ハイブリダイゼーションにかえて、遺伝子増幅技術PCRCurrentprotocolsinMolecularBiologyeditAusubeletalPublishJohnWileySonsSection6164を用いて、本発明者のペプチド配列番号:1~3をコードするポリヌクレオチドの一部を基にプライマーを設計し、本発明者らにより同定されたペプチドをコードするポリヌクレオチドと相同性の高いポリヌクレオチド断片を単離し、該ポリヌクレオチドを基に本発明者らにより同定されたペプチドと機能的に同等なペプチドを取得することも可能である。上述のハイブリダイゼーション技術や遺伝子増幅技術により単離されるポリヌクレオチドがコードする、配列番号:1~3に記載のペプチドと機能的に同等なペプチドは、通常、該ペプチドとアミノ酸配列において、通常高い相同性を有する。本発明のペプチドには、配列番号:1~3に記載のペプチドと機能的に同等であり、かつ該ペプチドのアミノ酸配列と高い相同性を有するペプチドも含まれる。高い相同性とは、アミノ酸レベルにおいて、通常、少なくとも50以上の同一性、好ましくは75以上の同一性、さらに好ましくは85以上の同一性、さらに好ましくは95以上例えば、96以上、97以上、98以上、99以上の同一性を指す。ペプチドの相同性を決定するには、文献WilburWJandLipmanDJProcNatlAcadSciUSA80726730に記載のアルゴリズムに従えばよい。アミノ酸配列の同一性は、例えば、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLAST、ProcNatlAcadSciUSA9058735877によって決定することができる。このアルゴリズムに基づいて、BLASTXと呼ばれるプログラムが開発されている。BLASTXによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメーターは例えば、score50、wordlength3とする。BLASTとGappedBLASTプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知である。本発明のペプチドは、当業者に公知の方法により、組み換えペプチドとして、また天然のペプチドとして調製することが可能である。組み換えペプチドであれば、例えば、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを、適当な発現ベクターに組み込み、これを適当な宿主細胞に導入して得た形質転換体を回収し、抽出物を得た後、イオン交換、逆相、ゲル濾過などのクロマトグラフィー、あるいは本発明のペプチドに対する抗体をカラムに固定したアフィニティークロマトグラフィーにかけることにより、または、さらにこれらのカラムを複数組み合わせることにより精製し、調製することが可能である。精製用タグ例えばヒスチジンタグを融合させた組み換えペプチドとして宿主細胞例えば、動物細胞や大腸菌など内で発現させた場合には、発現させた融合ペプチドは、市販の、融合したタグに対応した精製カラムヒスチジンタグの場合ニッケルカラムを用いて精製することができる。天然のペプチドであれば、当業者に周知の方法、例えば本発明のペプチドを発現している組織や細胞の抽出物に対し、本発明のペプチドに結合する抗体が結合したアフィニティーカラムを作用させて精製することにより単離することができる。抗体はポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよい。本発明のペプチドをコードする上記核酸もしくはベクターもまた、本発明に含まれる。本発明の核酸ポリヌクレオチドは、本発明のペプチドをコードし得るものであればいかなる形態でもよい。即ち、mRNAから合成されたcDNAであるか、ゲノムDNAであるか、化学合成DNAであるかなどを問わない。また、本発明のペプチドをコードしうる限り、遺伝暗号の縮重に基づく任意の塩基配列を有するポリヌクレオチドが含まれる。本発明の核酸ポリヌクレオチドは、当業者に公知の方法により取得することができる。例えば、市販の核酸合成装置を用いて、適宜作製することができる。作製したポリヌクレオチドの塩基配列は、公知の方法、例えば、ジデオキシヌクレオチドチェインターミネーション法等により確認することができる。本発明のペプチドをコードする核酸は、例えば、遺伝子組換え技術を用いて、本発明のペプチドを宿主内で産生させる為に重要である。この場合、宿主間でアミノ酸コドンの使用頻度codonusageが異なる為、産生させる宿主のcodonusageに適合するようアミノ酸のコドンを変更することが望ましい。本発明のペプチドをコードする核酸は、ワクチンとしても利用可能で、むき出しの核酸として移送することもできるし、または適切なウイルスもしくは細菌ベクターを用いて移送することもできるBerzofskyJAetalJClinInvest114450462BerzofskyJAetalJClinInvest11315151525。適切な細菌ベクターとしては、サルモネラ属亜種の細菌ベクターを挙げることができる。適切なウイルスベクターとしては、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、センダイウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ワクシニアベクター等を例示することができる。適切なワクシニアベクターの1例は、改変ワクシニアアンカラベクターである。本発明の核酸の好ましい態様としては、本発明のペプチドを発現し得るベクターを例示することができる。該ベクターは、通常、プロモーターの下流に本発明の核酸が機能的に連結された構造のDNA構築物を担持するベクターである。該ベクターとしては、通常、プラスミドもしくはウイルスベクター等が一般的である。当業者においては、所望のDNAを有するベクターを、一般的な遺伝子工学技術によって、適宜、作製することが可能である。通常、市販の種々の発現ベクターを利用することができる。本発明のベクターは、宿主細胞内において本発明のポリヌクレオチドを保持したり、本発明のペプチドを発現させるためにも有用である。本発明の核酸ポリヌクレオチドは、通常、適当なベクターへ担持挿入され、宿主細胞へ導入される。該ベクターとしては、挿入したDNAを安定に保持するものであれば特に制限されず、例えば宿主に大腸菌を用いるのであれば、クローニング用ベクターとしてpBluescriptベクターなどを例示することができる。ベクターへの本発明の核酸の挿入は、常法により、例えば、制限酵素サイトを用いたリガーゼ反応により行うことができる。上記宿主細胞としては特に制限はなく、目的に応じて種々の宿主細胞が用いられる。ペプチドを発現させるための細胞としては、例えば、細菌細胞例:ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸菌、ストレプトミセス、枯草菌、昆虫細胞例:ドロソフィラS2、スポドプテラSF9、動物細胞例:CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK293、Bowesメラノーマ細胞及び植物細胞を例示することができる。宿主細胞へのベクター導入は、例えば、リン酸カルシウム沈殿法、電気パルス穿孔法CurrentprotocolsinMolecularBiologyeditAusubeletalPublishJohnWileySons.Section9199、リポフェクション法GIBCOBRL社製、マイクロインジェクション法などの公知の方法で行うことが可能である。宿主細胞において発現させたペプチドを小胞体の内腔に、細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるために、適当な分泌シグナルを目的のペプチドに組み込むことができる。これらのシグナルは目的のペプチドに対して内因性であっても、異種シグナルであってもよい。上記製造方法におけるペプチドの回収は、本発明のペプチドが培地に分泌される場合は、培地を回収する。本発明のペプチドが細胞内に産生される場合は、その細胞をまず溶解し、その後にペプチドを回収する。組換え細胞培養物から本発明のペプチドを回収し精製するには、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを含めた公知の方法を用いることができる。また、動物の生体内で本発明のポリヌクレオチドを発現させる方法としては、本発明の核酸を適当なベクターに組み込み、例えば、レトロウィルス法、リポソーム法、カチオニックリポソーム法、アデノウイルス法などにより生体内に導入する方法などが挙げられる。これにより、免疫療法を行うことが可能である。用いられるベクターとしては、例えば、レトロウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに制限されない。ベクターへの本発明のDNAの挿入などの一般的な遺伝子操作は、常法に従って行うことが可能であるMolecularCloning561563。生体内への投与は、exvivo法であっても、invivo法であってもよい。本発明のペプチドエプスタインバールウイルス特異的CTLエピトープペプチドは、能動免疫療法においてペプチドワクチンとして用いることができる。即ち、本発明のCTLエピトープペプチドを含んでなるワクチンを健常人あるいは患者に投与し、エプスタインバールウイルスに特異的なCTLを体内で増殖させ、疾患に対する予防あるいは治療に役立てることができる。使用するエピトープペプチドは1種のみの使用であっても、あるいはワクチンの使用目的に応じて2種以上のペプチドを組み合わせ、混合して使用することもできる。従って本発明は、本発明のペプチドもしくは本発明の核酸を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスの感染および同ウイルス陽性の癌を治療又は予防するためのワクチンを提供する。なお、本発明のワクチンは、能動免疫療法剤、免疫治療剤、エプスタインバールウイルス関連疾患治療剤と表現することも可能である。また、本発明において治療剤は、医薬品、医薬組成物、治療用医薬等と表現することもできる。さらに、本発明のCTLエピトープペプチドが提示された抗原提示細胞は、能動免疫療法においてワクチンとして用いることができる。CTLエピトープペプチドが提示された抗原提示細胞とは、1.適当な培養液中で、抗原提示細胞とCTLエピトープペプチドを30分から1時間混合したエピトープペプチドパルス抗原提示細胞、2.CTLエピトープペプチドをコードする核酸を用い、遺伝子導入等で抗原提示細胞にCTLエピトープペプチドを提示された細胞、3.人工的に作製した抗原提示能を有する人工抗原提示細胞、等を意味する。抗原提示細胞とは、例えば、樹状細胞、B細胞、マクロファージ、ある種のT細胞等を示すが、該ペプチドが結合し得るHLAをその表面上に発現する細胞であって、CTL刺激能を有するものを意味する。人工的に作製した抗原提示能を有する人工抗原提示細胞とは、例えば脂質2重膜やプラスティックあるいはラテックス等のビーズにHLAとCTLエピトープペプチドとβ2ミクログロブリンとの3者複合体を固定し、CTLを刺激し得るCD80、CD83、CD86等の共刺激分子を固定するか、もしくは、共刺激分子と結合するT細胞側のリガンドであるCD28に対してアゴニスティックに作用する抗体等を固定することで作製可能であるOelkeMetalNatMed9619624WalterSetalJImmunol17149744978OostenLEetalBlood104224226。従って本発明の好ましい態様としては、本発明のペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞を有効成分とするワクチンを提供する。本発明の核酸は、能動免疫療法においてDNAワクチンや組換えウイルスベクターワクチン等に用いる事ができる。この場合、CTLエピトープペプチドの核酸配列は、組換えワクチンや、組換えウイルスワクチンを産生させる宿主に適合したcodonusageに変更する事が望ましいCasimiroDRetalJVirol7763056313BerzofskyJAetalJClinInvest114450462。本発明のペプチド、又は本発明のペプチドが提示された抗原提示細胞を含んでなるワクチンは、当分野において公知の方法を用いて調製することができる。例えば、かかるワクチンの一例としては、本発明のペプチドを有効成分として含有する注射剤又は固形剤等の薬剤が挙げられる。本発明のペプチドは、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫治療剤の調製に用いることができる。下記のようにして得られたエプスタインバールウイルスに特異的なCTLはヒトアルブミン含有PBS等に懸濁させて、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤とすることができる。受動免疫療法剤に含まれるエプスタインバールウイルスに特異的なCTLは、以下のような調製方法によって得ることができ、CTLの純度を高める為に精製して用いる事も可能である。以下にCTLの調製方法の具体例を記載するが、必ずしもこれらの方法に制限されない。aCTL調製方法1PBMCと、適当な濃度のエプスタインバールウイルス特異的エピトープペプチド-テトラマー試薬を反応させる。エピトープペプチド-テトラマー試薬と結合したエプスタインバールウイルス特異的CTLは標識色素により染色されるので、セルソーター、顕微鏡などを用いて染色されたCTLのみを単離する。このようにして単離されたエプスタインバールウイルスに特異的なCTLは、抗CD3抗体、PHA、IL2等のT細胞刺激薬剤や、X照射あるいはマイトマイシン処理等で増殖能を損失させた抗原提示細胞で刺激増殖させ、受動免疫療法に必要な細胞数を確保する。bCTL調製方法2エプスタインバールウイルス特異的エピトープペプチド-モノマー及び/又はエピトープペプチド-テトラマー試薬を無菌プレートなどに固相化し、PBMCを固相化プレートで培養する。プレートに固相化されたエピトープペプチド-モノマー及び/又はエピトープペプチド-テトラマーに結合したエプスタインバールウイルス特異的CTLを単離するためには、結合せずに浮遊している他の細胞を洗い流した後に、プレート上に残った抗原特異的CTLだけを新しい培地に懸濁する。このようにして単離されたエプスタインバールウイルス特異的CTLは、抗CD3抗体、PHA、IL2等のT細胞刺激薬剤や、X照射あるいはマイトマイシン処理等で増殖能を損失させた抗原提示細胞で刺激増殖させ、受動免疫療法に必要な細胞数を確保する。cCTL調製方法3エプスタインバールウイルス特異的エピトープペプチド-モノマー及び/又はエピトープペプチド-テトラマー試薬と、CD80、CD83、CD86等の共刺激分子か、もしくは、共刺激分子と結合するT細胞側のリガンドであるCD28に対してアゴニスティックに作用する抗体等を無菌プレートなどに固相化し、PBMCを固相化プレートで培養する。2日後にIL2を培地に添加し5CO2恒温槽にて37°Cで7~10日培養する。培養した細胞を回収し新たな固相化プレート上で培養を続ける。この操作を繰り返す事で受動免疫療法に必要な細胞数のCTLを確保する。dCTL調製方法4PBMCあるいはT細胞を本発明のCTLエピトープペプチドで直接刺激するか、該ペプチドをパルスした抗原提示細胞、遺伝子導入した抗原提示細胞、又は人工的に作製した抗原提示能を有する人工抗原提示細胞で刺激する。刺激によって誘導されたCTLを5CO2恒温槽にて37°Cで7~10日培養する。CTLエピトープペプチドとIL2、又は抗原提示細胞とIL2による刺激を週に1度繰り返す事で受動免疫療法に必要な細胞数のCTLを確保する。なお、本発明のペプチドエプスタインバールウイルス特異的CTLエピトープペプチドを使用したエピトープペプチド-モノマー及びエピトープペプチド-テトラマーは、公知の方法USPatentNumber5635363InventorsJDAltmanMGMcHeyzerWilliamsMarkMDavisCompositionsandmethodsforthedetectionquantitationandpurificationofantigenspecificTcellsFrenchApplicationNumberFR9911133InventorMBonnevilleetalMeansfordetectingandforpurifyingCD8TlymphocytepopulationsspecificforpeptidespresentedintheHLAcontextにより調製することができる。タンパク質発現用の遺伝子組換え宿主から精製したHLAクラスI分子、β2-ミクログロブリン及び本発明のCTLエピトープペプチドの複合体である、MHC-モノマーをバッファー内で形成させる。組換えHLAクラスI分子のC末端には予めビオチン結合部位を付加しておき、エピトープペプチド-モノマー形成後この部位にビオチンを付加する。市販の色素標識されたストレプトアビジンとビオチン化エピトープペプチド-モノマーをモル比1:4で混合することによってエピトープペプチド-テトラマーを作製することができる。また、CTL調製方法において、特異的CTLの割合が低い場合は、随時以下の方法を用いる事でCTLを高純度で回収する事が可能である。aエピトープペプチド-テトラマー試薬による精製エプスタインバールウイルス特異的エピトープペプチド-テトラマー試薬と、CTL調製方法にて誘導されたCTLを反応させ、エピトープペプチド-テトラマーを標識している標識色素に対する抗体等を磁気標識した2次抗体を用いて分離する事が可能である。このような磁気標識した2次抗体と、磁気細胞分離装置は例えば、Dynal社やMiltenyiBiotecGmbH社から入手可能である。このようにして単離されたエプスタインバールウイルス特異的CTLは、抗CD3抗体、PHA、IL2等のT細胞刺激薬剤で刺激増殖させ、受動免疫療法に必要な細胞数を確保する。b分泌されるサイトカインによる精製エプスタインバールウイルス特異的CTLが、放出するサイトカイン等を利用して、エプスタインバールウイルスに特異的なCTLを精製する事ができる。例えば、MiltenyiBiotecGmbH社から入手可能なキットを用いる事で、CTLから放出されるサイトカインを細胞表面で特異抗体により補足し、サイトカイン特異的な標識抗体で染色し、続いて磁気標識した標識物質特異的な抗体で染色後、磁気標識細胞分離装置を用いて精製する事も可能である。このようにして単離されたエプスタインバールウイルス特異的CTLは、抗CD3抗体、PHA、IL2等のT細胞刺激薬剤で刺激増殖させ、受動免疫療法に必要な細胞数を確保する。c細胞表面蛋白質特異的抗体を用いた精製特異的CTLの細胞表面では、特異的なペプチドの刺激により発現が増強する細胞表面蛋白質例えばCD107a、CD107b、CD63、CD69などが報告されているBettsMRetalJImmunolMethods2816578TrimbleLAetalJVirol7473207330。このような蛋白質の特異抗体を磁気標識する事で、磁気分離装置等を用いてCTLを精製する事が可能である。また、このような特異抗体に対する抗IgG抗体等を磁気標識する事でも同様にCTLの精製が可能である。あるいは、これら抗体を培養用のプラスティックプレートにコートし、このプレートを用いて刺激を加えたPBMCを培養し、プレートに結合しなかった細胞集団を洗い流す事で特異的なCTLを精製することも可能である。このようにして単離されたエプスタインバールウイルス特異的CTLは、抗CD3抗体、PHA、IL2等のT細胞刺激薬剤で刺激増殖させ、受動免疫療法に必要な細胞数を確保する。本発明は、上述のようにして取得精製された細胞傷害性T細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤免疫治療剤を提供する。なお、本発明の受動免疫療法剤は、免疫治療剤、エプスタインバールウイルス関連疾患治療剤、又はCTL誘導剤と表現することも可能である。本発明の受動免疫療法剤の好ましい態様としては、本発明のペプチド、もしくは該ペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞により末梢血リンパ球を刺激して得られるエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤である。また、別の態様としては、本発明のペプチドから調製した主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血リンパ球とを反応させ、該主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーに細胞傷害性T細胞が結合した結合体を形成させ、該結合体から単離して得られる細胞傷害性T細胞を有効成分として含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤である。本発明の薬剤本発明のワクチンもしくは受動免疫療法剤等は、生理学的に許容される担体、賦形剤、あるいは希釈剤等と混合し、医薬組成物として経口、あるいは非経口的に投与することができる。経口剤としては、顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、溶剤、乳剤、あるいは懸濁剤等の剤型とすることができる。非経口剤としては、注射剤、点滴剤、外用薬剤、あるいは座剤等の剤型を選択することができる。注射剤には、皮下注射剤、筋肉注射剤、あるいは腹腔内注射剤等を示すことができる。外用薬剤には、経鼻投与剤、あるいは軟膏剤等を示すことができる。主成分である本発明の薬剤を含むように、上記の剤型とする製剤技術は公知である。例えば、経口投与用の錠剤は、本発明の薬剤に賦形剤、崩壊剤、結合剤、及び滑沢剤等を加えて混合し、圧縮整形することにより製造することができる。例えば、本発明のペプチドが提示された抗原提示細胞は、製薬上許容され、該ペプチド又は該細胞の活性と相容性を有する賦形剤、例えば、水、食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロール、DMSOdimethylsulphoxide、及びその他のアジュバント等、又はこれらの組み合わせと混合して用いることができる。さらに、必要に応じて、アルブミン、湿潤剤、乳化剤等の補助剤を添加してもよい。崩壊剤としては、炭酸カルシウムやカルボキシメチルセルロースカルシウム等が一般的に用いられる。結合剤には、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、あるいはポリビニルピロリドンが用いられる。滑沢剤としては、タルクやステアリン酸マグネシウム等が公知である。本発明の薬剤を含む錠剤は、マスキングや、腸溶性製剤とするために、公知のコーティングを施すことができる。コーティング剤には、エチルセルロースやポリオキシエチレングリコール等を用いることができる。また注射剤は、主成分である本発明の薬剤を適当な分散剤とともに溶解、分散媒に溶解、あるいは分散させることにより得ることができる。分散媒の選択により、水性溶剤と油性溶剤のいずれの剤型とすることもできる。水性溶剤とするには、蒸留水、生理食塩水、あるいはリンゲル液等を分散媒とする。油性溶剤では、各種植物油やプロピレングリコール等を分散媒に利用する。このとき、必要に応じてパラベン等の保存剤を添加することもできる。また注射剤中には、塩化ナトリウムやブドウ糖等の公知の等張化剤を加えることができる。更に、塩化ベンザルコニウムや塩酸プロカインのような無痛化剤を添加することができる。また、本発明の薬剤を固形、液状、あるいは半固形状の組成物とすることにより外用剤とすることができる。固形、あるいは液状の組成物については、先に述べたものと同様の組成物とすることで外用剤とすることができる。半固形状の組成物は、適当な溶剤に必要に応じて増粘剤を加えて調製することができる。溶剤には、水、エチルアルコール、あるいはポリエチレングリコール等を用いることができる。増粘剤には、一般にベントナイト、ポリビニルアルコール、アクリル酸、メタクリル酸、あるいはポリビニルピロリドン等が用いられる。この組成物には、塩化ベンザルコニウム等の保存剤を加えることができる。また、担体としてカカオ脂のような油性基材、あるいはセルロース誘導体のような水性ゲル基材を組み合わせることにより、座剤とすることもできる。また、本発明のペプチドは、中性又は塩の形態で処方することができ、例えば、薬学上許容され得る塩としては、塩酸、リン酸などの無機塩、又は、酢酸、酒石酸などの有機酸が挙げられる。本発明の薬剤を遺伝子治療剤として使用する場合は、本発明の薬剤を注射により直接投与する方法のほか、核酸が組込まれたベクターを投与する方法が挙げられる。上記ベクターとしては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター等が挙げられ、これらのウイルスベクターを用いることにより効率よく投与することができる。また、本発明の薬剤をリポソームなどのリン脂質小胞体に導入し、その小胞体を投与することも可能である。例えば、本発明のペプチドもしくはベクターを保持させた小胞体をリポフェクション法により所定の細胞に導入する。そして、得られる細胞を例えば静脈内、動脈内等に全身投与する。本発明の薬剤は、非経口投与及び経口投与により投与することができるが、該薬剤がペプチドを主成分とする場合には、一般的に非経口投与が好ましい。非経口投与としては経鼻投与や皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射等の注射剤、座薬等がある。また、経口投与としては、スターチ、マンニトール、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、セルロース等の賦形剤との混合物として調製することができる。本発明のワクチンは、治療上有効な量で投与する。投与される量は、治療対象、免疫系に依存し、必要とする投与量は臨床医の判断により決定される。通常、適当な投与量は、患者一人当たり、本発明のペプチドエピトープペプチドでは1~100mg、エピトープペプチドパルス細胞では106~109個の含有量とする。また、投与間隔は、対象、目的により設定することができる。また本発明の薬剤によって予防もしくは治療効果が期待されるエプスタインバールウイルス関連疾患としては、例えば、バーキットリンパ腫BL、ホジキン病HD、鼻咽頭癌NPC、または移植後リンパ増殖性疾患PTLD等の悪性腫瘍を挙げることができる。本発明の薬剤ワクチン等が接種可能な動物としては、免疫系を有し、かつエプスタインバールウイルスに感染し得る生物であれば特に制限されないが、好ましくは、ヒトである。さらに本発明は、本発明のペプチドを用いて、細胞傷害性T細胞を誘導することを特徴とする、細胞傷害性T細胞の誘導活性化方法を提供する。本発明の誘導方法の好ましい態様としては、本発明のペプチド例えば、HLAA24等拘束性抗原ペプチドと、末梢血単核球を血漿を含む培地中で接触させることにより、エプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を誘導する方法に関する。また、上記方法によって誘導されたエプスタインバールウイルス特異的CTLを検出及び定量する方法もまた本発明に含まれる。また、上述の方法によって誘導されたエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞は、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤の成分となり得る。従って、上述の方法によってエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を誘導し、該T細胞を取得することによって、受動免疫療法剤を製造することが可能である。本発明は、本発明のエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞の誘導方法を用いた受動免疫療法剤の製造方法を提供する。本製造方法の好ましい態様としては、本発明のペプチドもしくは該ペプチドをHLAに提示した抗原提示細胞によって末梢血リンパ球を刺激してエプスタインバールウイルス特異的な細胞傷害性T細胞を取得する工程を含む方法である。また好ましい別の態様においては、本発明のペプチドから調製した主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーと末梢血リンパ球とを反応させ、該主要組織適合性抗原複合体及び/又は主要組織適合性抗原複合体テトラマーに細胞傷害性T細胞が結合した結合体を形成させ、該結合体から単離して得られる細胞傷害性T細胞を取得する工程を含む、エプスタインバールウイルスに対する受動免疫療法剤の製造方法である。上記製造方法には、上述の工程に加えて、必要に応じて、取得される細胞傷害性T細胞へ薬学的に許容される担体を混合する工程を含んでいてもよい。さらに本発明のペプチドを用い作製した、MHC-テトラマー試薬は、特異的なCTLの定量だけでなく細胞内サイトカイン産生細胞定量法や細胞表面蛋白質に対する特異抗体と組み合わせることで、特異的CTLの分化段階や機能性も同時に判定する事が可能である。本発明はさらに、本発明のペプチドを利用したエプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量検出測定方法を提供する。エプスタインバールウイルスに特異的なCTLが、ハイリスクの患者何らかの原因により免疫能が低下した人、先天性免疫不全症患者、又は骨髄移植、造血幹細胞移植、臍帯血移植、固形臓器移植を受けて拒絶予防のために免疫抑制剤の投与を受けている患者、慢性ウイルス感染症患者、エイズ患者、高齢者、幼小児、妊婦等の末梢血に存在するか否かを知ることは、抗ウイルス剤や免疫抑制剤の適正な使用を含め、これらの感染症管理の上で重要な情報である。エプスタインバールウイルスに特異的なCTLの定量は、例えば、本発明のペプチドCTLエピトープペプチドを用いた以下の3つの方法によって行うことができるが、必ずしもこれらの方法に制限されない。a定量方法1本発明のCTLエピトープペプチドを使用して作製したMHC-テトラマー試薬を用いて、末梢血中のエプスタインバールウイルスに特異的なCTLを定量することができる。定量は、例えば、以下のようにして実施することができる。末梢血あるいはPBMCを、適当な濃度のエピトープペプチド-テトラマー試薬と反応させる。該エピトープペプチド-テトラマー試薬と結合したCTLは標識色素により染色されるので、フローサイトメーター、顕微鏡等を用いてカウントする。エピトープペプチド-テトラマー試薬と反応させる時に、エピトープペプチド-テトラマー試薬と異なる色素で標識された抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD8抗体等を反応させる事で、エプスタインバールウイルスに特異的なCTLのT細胞サブセットも同時に判定できる。b定量方法2PBMCを本発明のCTLエピトープペプチドで刺激することによってCTLが産生するIFNIYinterferongamma、TNFtumornecrosisfactor、インターロイキン等のサイトカイン及び/又はケモカインを定量する方法である。以下にIFNYを例にとり具体的に方法を示す。b-1サイトカイン定量による方法1細胞内IFNY産生細胞定量PBMCを適当な培地におよそ2×106mLの細胞濃度で浮遊させ、本発明のCTLエピトープペプチドを加える。さらに細胞内蛋白輸送阻止剤例えば、BrefeldinAやMonensin等を加え、5CO2恒温槽にて37°Cで5~16時間培養する。培養後、T細胞マーカー抗体抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD8抗体あるいは/または、エピトープペプチド-テトラマー試薬と反応させ、細胞を固定後、膜透過処理を行い、色素標識抗IFNY抗体を反応させる。フローサイトメーター等を用いて解析し、全細胞中、T細胞中あるいはエピトープペプチド-テトラマー陽性細胞中のIFNY陽性細胞率を定量する。b-2サイトカイン定量による方法2エリスポットアッセイ抗IFNY抗体を固相化した96穴MultiScreenHAプレートにPBMCをまく。エピトープペプチドを各穴に入れ37°Cの5CO2恒温槽培養器にて20時間培養する。翌日、プレートを洗浄し、抗IFNY抗体、ペルオキシダーゼ標識抗IgG抗体の順で反応させる。さらにペルオキシダーゼの基質を加え、発色によりIFNYスポットを可視化し、実体顕微鏡でカウントする。b-3サイトカイン定量による方法3培養上清中に分泌されたIFNYを定量する方法PBMCを適当な培地におよそ2×106mLの細胞濃度で浮遊させ、本発明のCTLエピトープペプチドを加える。5CO2恒温槽にて37°Cで24~48時間培養する。培養後、上清を回収し、その中に含まれるIFNY濃度を市販のELISAキット例えばMBL社のHUMANIFNgammaELISAを使用して定量する。c定量方法3細胞表面蛋白質特異的抗体を用いて定量を行う。特異的CTLは、特異的なペプチドの刺激により細胞表面に発現が増強する細胞表面蛋白質例えばCD107a、CD107b、CD63、CD69などが報告されている。このような蛋白質を特異的に認識する標識抗体と、ペプチド刺激したPBMC等を混合する事で、標識抗体と結合したCTLは標識色素により染色されるので、フローサイトメーター、顕微鏡等を用いてカウントする。標識抗体と反応させる時に、同時にあるいは、順番に、標識抗体と異なる色素で標識された抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD8抗体等を反応させる事で、エプスタインバールウイルスに特異的なCTLのT細胞サブセットも同時に判定できる。本発明の定量方法の好ましい態様として、具体的には、上述のa~cの定量方法を挙げることができる。従って本発明の定量方法の好ましい態様は、本発明のペプチドで末梢血を刺激し、該ウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞を取得し、細胞傷害性T細胞が産生するサイトカイン及び/又はケモカイン及び/又は細胞表面分子を測定することを特徴とする、エプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量方法に関する。また、MHC-テトラマーまたはモノマーもしくは多量体試薬は、前述のように特異的なCTLの分離精製特異的なCTLの定量だけでなく、特異的なCTLの定量に用いる事ができ、別の態様としては、本発明のペプチドからMHC-テトラマー試薬を調製し、MHC-テトラマー試薬と末梢血とを反応させることを特徴とする、該末梢血中のエプスタインバールウイルスに特異的な細胞傷害性T細胞の定量方法に関する。上記方法においては、被検者から予め取得単離された末梢血試料を用いることができる。以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。実施例1細胞株および樹状細胞の調製本発明者らは、まずEBV関連タンパク質のうち、LMP1に特異的なCTLクローンの誘導を行い、LMP1由来のエピトープの同定を行った。LMP1由来のエピトープの同定に関連する実験実施例1~8に用いられた、細胞株および樹状細胞の調製方法について以下に示す。愛知県がんセンター日本の倫理審査委員会によって承認された研究デザインと目的は、すべてのドナーに十分に説明され、インフォームドコンセントを得た。EBVが感染したLCLを、公知の方法で作製しKuzushimaKetalBlood9430943100、10ウシ胎仔血清、2mMLグルタミン、50UmLのペニシリン、50μgmLストレプトマイシンと50μgmLのカナマイシンを加えたRPMI1640で培養した。EBVを保持しているNK細胞株、SNK6NagataHetalBlood97708713とSNK10ZhangYetalBrJHaematol121805814は清水博士から供与された。別のEBVを保持しているNK細胞株であるHANK1KagamiYetalBrJHaematol103669677は鏡味博士から供与された。この3つの細胞株は当業者に公知の方法で培養したNagataHBlood97708713。HEK293T細胞とPhoenixGALV細胞AkatsukaYetalTissueAntigens59502511を、公知の方法で培養した。HLA遺伝子のレトロウイルスへの導入は、公知の方法で行ったKondoEetalJImmunol16921642171。また、樹状細胞を公知の方法で調製したRomaniNetalJExpMed19941808393SallustoFetalJExpMed199417911091118DauerMetalJImmunol200317040694076。CD8T細胞を、PBMCsからCD8MicroBeadsを用いて分離し、-135°Cで保存した。CD8を除いたPBMCを、5のヒトの血清と2mMのLグルタミン、50UmLのペニシリン、50μgmLのストレプトマイシン、50μgmLのカナマイシンを含む4mLのRPMI1640培地に懸濁し、6ウエルプレートの一つのプレート中で37°C、2時間インキュベートした。非接着性細胞を穏やかにピペッティングすることで取り除き、接着細胞を50ngmLの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子と10ngmLIL4を含むDC培地で培養した。2日目と4日目に、半分の培地を、GMCSFとIL4を含んでいる新鮮なDC培地に交換した。6日目に、樹状細胞を集め、mRNAを導入するため、エレクトロポレーションを行なった。CD40刺激で活性化されたB細胞を、米国ボストン、MAにあるDanaFarber癌研究所のFreeman博士から供与された3T3NIHヒトCD40リガンド細胞を利用して、公知の方法に従って作成したKondoEetalJImmunol16921642171。実施例2欠失変異体ΔLMP1mRNAの作成欠失変異体△LMP1を発現している抗原提示細胞を作製するために、本発明者らは、pcDNAΔLMP1プラスミドからインビトロ転写システムを用いて、欠失変異体ΔLMP1mRNAを産生した。N末から43アミノ酸を削った欠失変異体ΔLMP1GottschalkSBlood10119051912を作製する為に、EBV株B958のcDNAをテンプレート、5AAGCTTGCCACCATGAGTGACTGGACTGGA3配列番号:23をセンスプライマー、5TTGAATTCTTAGTCATAGTAGCTTAGCTGA3配列番号:24をアンチセンスプライマーとして、PCRを行った。欠失変異体ΔLMP1のアミノ酸配列およびDNA配列を、配列番号:34および35に示す。出来上がったDNA断片を、HindIIIとEcoRI制限酵素認識部位を使って、pcDNA31に挿入したpcDNAΔLMP1。ΔLMP1から更にN末端及びC末端のアミノ酸を削った欠失変異体を作るために、切断断片をpcDNAΔLMP1をテンプレートとしてPCRで作製し、pcDNA31に挿入した。幾つかの短いLMP1ペプチド断片をコードするプラスミドを構築するために、各相補的塩基配列オリゴヌクレオチドのペアをアニールし、制限酵素で切断したpcDNA31に挿入した。ΔLMP1と蛍光蛋白EGFPKondoEetalJImmunol16921642171のcDNAをpMSCVpuroというレトロウイルスベクターに挿入し、pMSCVpuroΔLMP1及びpMSCVpuroEGFPを作製した。ショートヘアピンRNA干渉レトロウイルスベクターを、RNAiReadypSIRENRetroQベクターを用いて構築した。レトロウイルス生産細胞を確立するために、pMSCVpuroΔLMP1、pMSCVpuroEGFPとRNAiReadypSIRENRetroQ系の様々なベクターをLipofectamine2000を利用してPT67細胞の中に組み込んだ。LCL細胞を、8mgLpolybreneを含むレトロウイルス培養上清で感染させ、1時間32°C、1000xgで遠心分離し、2日間37°Cで培養した。その後、このLCL細胞を、プロマイシン08μgmLの存在下で更に14日間培養した。EGFPとLMP1の発現をフローサイトメトリーで解析した。実施例3欠失変異体ΔLMP1mRNAの細胞への導入および、細胞におけるΔLMP1の発現確認T7プロモータ領域とΔLMP1をコードする領域を含む断片を、pcDNAΔLMP1をテンプレートとしてPCRで作製した。増幅されたDNAは、5’cappedmRNAのインビトロ転写の際のテンプレートとして利用された。5’cappedmRNAのインビトロ転写を、mMESSAGEmMACHINEキットAmbion米国AustinTXを用いて行った。次に、polyAポリメラーゼを用い3’polyA末端を追加し、RNeasyキットによって精製した。エレクトロポレーションに先立ち、樹状細胞とCD40B細胞を、無血清のRPMI1640を用いて二回洗浄し、最終的に25×107細胞mLとなるように調整した。40μLのRPMI1640培地中で20μgのmRNAと混合した後に、2mmのセルの中に入れElectroSquarePoratorECM830を用いてエレクトロポレーションを行った。条件設定は樹状細胞に対しては450V、500μS、CD40B細胞に対しては350V、350μSに設定した。エレクトロポレーションの後、樹状細胞の場合はIL4とGMCSFを追加したDC培地の中で3時間培養し、成熟させるためにTNFα、IL1βとPGE2を加えた。CD40B細胞を、直ちに放射線照射したNIH3T3ヒトCD40リガンド細胞の上に播いて、3648時間後抗原提示細胞として使用した。LMP1抗原の細胞内染色はわずかな変更以外、公知の方法により行われたGottschalkSetalBlood10119051912。エレクトロポレーションで遺伝子導入された細胞を集め、10分間室温で、4パラホルムアルデヒドを加えたPBS中で固定した。PBSで洗浄してから、細胞はICPermで膜透過処理され、30分間4°CでLMP1のC末端を認識するモノクローン抗体と反応させた。PBSで洗浄した後、細胞はフルオレセインイソチオシアネート標識抗マウスIgGで30分間4°C染色した。染色した細胞を、CellQUESTソフトウェアを使用したFACSCalliburによって分析した。フローサイトメトリーでΔLMP1の発現を解析した結果、樹状細胞とCD40B細胞の両方の70以上がΔLMP1陽性であることが明らかとなった図1A。エレクトロポレーション後3648時間で、生存細胞は8割以上であったデータは示さない。これらの細胞を、抗原提示細胞として、血清反応陽性献血者5人からLMP1特異的なT細胞の誘導を試みた。実施例4ΔLMP1mRNAを導入した樹状細胞を用いた、ΔLMP1特異的CTLクローンの誘導次に、ΔLMP1特異的CTLクローンの誘導を以下の工程により行った。保存されたCD8T細胞を、解凍し洗浄してから、10ヒト血清、2mMLグルタミン、50UmLペニシリン、50μgmLストレプトマイシン、50μgmLカナマイシン、25ngmLIL7と5ngmLIL12を加えたRPMI1640倍地2mLにおいて、5CO2加湿インキュベーターの中で、33Gyの放射線を当てた自己のΔLMP1mRNA導入樹状細胞と共培養した。8日目と15日目に、ΔLMP1mRNAを導入しγ放射線を照射した樹状細胞及びCD40B細胞で、T細胞を再び刺激した。各刺激の1日後に、IL2を20UmLの濃度になるように加えた。T細胞クローンを確立するために、公知の方法でKuzushimaKetalBlood9818721881、96穴丸底ウェルのを用いてポリクローンCTLの限界希釈法を実施した。2週間の培養後、増殖しているウェルを3つに分けて、その中の一部ずつをエフェクター細胞として、それぞれΔLMP1mRNAやEGFPmRNAを導入した自己のCD40B細胞のCTLアッセイに用いた。LMP1mRNAを導入したCD40B細胞の一分あたりの放射カウントが、EGFPmRNAを導入したCD40B細胞の一分あたりの放射カウントの平均の標準偏差の三倍を超えた場合に、そのウェルを陽性として記録した。陽性ウェルをフラスコに移して、公知の方法によって増殖させたKuzushimaKetalBlood9818721881。ΔLMP1mRNAを導入しγ放射線を照射した樹状細胞及びCD40B細胞について3回の刺激の後、T細胞株の特異性を調べる為にELISPOTアッセイを行った。ELISPOTアッセイは、公知の方法によって実施したKuzushimaKetalBlood9430943100KondoEetalJImmunol16921642171KuzushimaKetalBlood9818721881。CD8T細胞を、抗ヒトインターフェロンγモノクローン抗体でコーティングされたMultiscreenHAプレートのウェルの中で、様々な刺激因子と共に培養した。刺激因子として、Lipofectamin2000を用いてプラスミドを導入したHLAA0206陽性あるいは陰性LCL細胞1ウェル当たりに10万細胞、又はHLAA0206を発現するHEK293T細胞を、T細胞を加える48時間前に各ウェルに播いた。ペプチドタイトレーションアッセイを行うために、いくつかの濃度の合成ペプチドを1時間室温でA0206295T細胞にパルスした。抗ウサギIFNγポリクローナル抗体でプローブした後、ペルオキシダーゼ標識抗ウサギIgG抗体と反応させてスポットを視覚化し、プレートを洗浄し乾燥させた。IFNγのスポットを、実体顕微鏡を用いて計測した。上記の結果、5人のドナーのうちの1人由来のポリクローナルなT細胞は、ΔLMP1mRNAを導入した自己のCD40B細胞に反応して、特異的にIFNγを分泌したが、非変異導入CD40B細胞に対してはIFNγを分泌しないことが明らかとなった図1B。バルクCTL株から、限界希釈法を用いて、H7と名前を付けたT細胞クローンを確立した。H7はΔLMP1mRNAを導入した自己のCD40B細胞を溶解したが、EGFPmRNAを導入したCD40B細胞を溶解しなかったデータは示さない。血液ドナーの遺伝子型HLAを調べた所、HLAA0206、A2402、B0702、B4801、Cw0304、およびCw0702であることが明らかになった。CTLエピトープを提示するHLA分子を特定するために、レトロウイルスベクターを用いて各HLA遺伝子を導入し、完全にHLAをミスマッチしたLCLが利用された。H7はHLAA0206を導入したLCLと培養したときに、IFNγスポットを作ったので、HLAA0206がエピトープを提示する分子であることを示している図1C。実施例5LMP1エピトープの同定HLAA2スーパータイプに存在するペプチドYLLEMLWRL配列番号:25を除き、HLAA0206拘束性のLMP1由来エピトープはこれまでに報告されていない。H7はペプチドYLLEMLWRL配列番号:25でIFNγスポットを作らなかったデータは示さないことから、H7が認識するエピトープの同定を行った。C末端側を削ったいくつかのΔLMP1mRNAをエレクトロポレーションで自己のCD40B細胞に導入し、H7に認識されるかどうかをELISPOTアッセイで検討した。図2Aに示されるように、抗原性はアミノ酸残基70と77の間のC末端トランケーションで失われたことから、エピトープのC末端はアミノ酸残基71と77の間に位置することが明らかとなった。プラスミドを導入したA0206293T細胞のほうがCD40B細胞およびmRNAより調製が簡便であることから、以降の検討においては、C末端側を削ったΔLMP1mRNAを含んだプラスミドが導入されたA0206293T細胞を用いた。A0206293T細胞を抗原提示細胞として用いた際には、C末端トランケーションがアミノ酸残基77と88の間に及んだときに、抗原性が失われたデータは示していない。CD40B細胞を使ったデータとの不一致の理由は不明である。ここでは、アミノ酸残基88でC端末を削ったLMP1を使用した。N末端側に更に削除を加えた一連のプラスミドを用意し、分析した図2B。最も短い刺激断片はアミノ酸残基6483と特定された。N末端とC末端を正確に特定する為に、更に近辺のトランケーションを行った。図2Cに示されているように、アミノ酸残基6471IIILIIFI、配列番号:18をコードするプラスミドが最も強い抗原性を示したが、アミノ酸残基64か71を削除すると抗原性は完全に失われた。アミノ酸残基6471はH7の最短エピトープを構成する可能性があるが、発現ベクターのスタートコドンによってコードされるN末端のメチオニンが、63位におけるイソロイシンの代用となり、MHC結合とH7認識のための構造的な必要性を満たしている可能性がある。この点を明確にするために、合成した8アミノ酸ペプチドアミノ酸残基6471:IIILIIFI、配列番号:18と9アミノ酸ペプチドアミノ酸残基6371:IIIILIIFI、配列番号:1をA0206293T細胞にパルスし、H7の反応性をELISPOTアッセイで検討した。その結果、図2Dで示されるように、9アミノ酸ペプチドだけがH7によって認識され、最短のエピトープは位置63のイソロイシンから始まることが示された。実施例6免疫プロテアソームサブユニットipLMP7のLMP16371エピトープの産生における重要性についての検討LMP1導入細胞の抗原処理に関して、ELISPOTアッセイで2つの不一致が観察された。1H7は全長ΔLMP1mRNAを導入したCD40Bを認識した図2Aが、同じ配列を発現しているプラスミドを導入したA0206293T細胞を認識しなかった。2H7はアミノ酸残基44-77をコードするトランケートされたΔLMP1mRNAを導入したCD40Bを認識した図2Aが、同じ配列を発現しているプラスミドを導入したA0206293T細胞を認識しなかった。ここで本発明者らは、抗原処理機構の違いがLMP1エピトープ産生における不一致の原因であるという仮説を立てた。A0206293T細胞では主に標準プロテアソームが発現しているが、CD40B細胞とLCL細胞の場合は免疫プロテアゾームが優勢であるFrisanTetalIntJCancer200088881888MorelSetalImmunity200012107117。標準プロテアゾームは抗原処理経路に重要な役割を持ち、細胞は免疫反応中にIFNγに晒されると、低分子重蛋白2や低分子重蛋白7のような新しく合成されたの免疫プロテアゾームβサブユニットの誘導により、免疫プロテアゾームが構築され、プロテアゾーム活性は量的にも質的にも変化する。免疫プロテアゾームの効果がエピトープ処理に必要であるかどうかを調べるために、免疫プロテアゾームのサブユニットの発現が抑制されているLCL細胞を用いた。ipLMP7とipLMP2は、膜貫通タンパク質例えば、EBVLMP2LautschamGetalJVirol7727572761MAGE3LevitskayaJetalNature375685688のエピトープ産生に関して不可欠な分子として知られているので、この二つをsiRNAの標的として利用した。本発明においては、以下のsiRNA標的を選択した。即ち、ipLMP2については、AAGUGAAGGAGGUCAGGUAUA配列番号:26、ipLMP7についてはAGAUUAACCCUUACCUGCUTT配列番号:27を選択した。shRNA構造物は、その後に5T終止シグナルが続く、センスとアンチセンス配列を分かつTTCAAGAGAループを含んでいる。これらの構造物は、2つの相補的DNAオリゴヌクレオチドとして合成され、アニールされ、ベクターのBamHIとEcoRI制限酵素認識部位の間に挿入された。更に、ネガティブコントロールsiRNAが同じベクターに挿入され、コントロールとして使われた。クローン化された遺伝子は配列を解析してその同一性を確認した。ipLMP2とipLMP7の発現を、公知の方法SchwarzKetalJImmunol165768778TajimaKetalIntJCancer110403412、すなわちウェスターンブロッティング法により評価を行った。その結果、図3Aに示すように、対応するshRNAベクターを導入したLCL細胞では、ipLMP7あるいはipLMP2の発現は有意に減少していた。遺伝子抑制によるLMP1エピトープ産生における遺伝子抑制の効果は、ELISPOTアッセイで評価した。興味深いことに、H7クローンによるIFNγのスポットの産生はipLMP7を発現抑制したLCLで刺激したときには有意に減少したが、ipLMP2の発現抑制はほとんど効果を示さなかった図3B。上記の結果より、LMP1エピトープの処理と提示には、ipLMP7が不可欠であることが明らかとなった。実施例7LMP1特異的CTLクローンのLCL細胞に対して細胞傷害性活性の測定次に、H7のLCLに対する傷害活性を調べた。CTLアッセイは以下の工程により行った。標的細胞を37°Cで15時間50μCiクロムでラベルし洗浄して、指示されたエフェクターと目的の割合になるように96穴プレート中でCTLと混合した。37°Cで4時間または16時間培養した後に、上清の放射活性をγ計測器で数えた。特異的51Cr放出の割合は次のように計算した。:100x標準的なCTLアッセイにより、H7は4時間のインキュベーションではHLAA0206陽性LCL細胞を効果的に溶解できないデータは示さないが、16時間後に自己及びHLAA0206陽性の同種LCL細胞を溶解することが示された図4A。このことは、H7を介した細胞溶解のためのLCLにおけるLMP1の発現が、4時間でのCTLアッセイにおいては、不十分であることを示唆している。そこで、図4Bに示すように、標的細胞としてΔLMP1を強制発現させたLCLで実験を行ったところ、H7は4時間CTLアッセイでΔLMP1を発現させたLCLを特異的に溶解したが、EGFPを発現させたLCLは溶解しなかった。実施例8EBVが感染したNK細胞株に対するLMP1特異的CTLクローンの細胞傷害性活性の検討EBVLMP1は他の蛋白と共に潜伏感染様式IIIとしてLCL細胞に発現され、潜伏感染様式IIとしてNKT細胞に発現されるZhangYetalBrJHaematol121805814。そこで、EBV潜伏感染様式II型の悪性腫瘍の代表として、EBV陽性NK細胞株NagataHetalBlood200197708713ZhangYetalBrJHaematol121805814KagamiYetalBrJHaematol103669677に対するH7細胞の傷害活性を検討した。検討したLMP1を発現している3つのNK細胞株の内、2つはHLAA0206陽性であった。図5Aに示したように、H7細胞は一つのHLAA0206陽性株SNK10を溶解したが、他の細胞SNK6、あるいはHLAA0206陰性株HANK1は溶解しなかった。HLAA0206を導入したHANK1細胞はH7細胞によって特異的に溶解された図5B。エピトープペプチドでパルスされたSNK6細胞はH7によって特異的に溶解された図5Aため、SNK6細胞はLMP1エピトープによって突然変異を生じた可能性が考えられる。さらに、本発明者らはLMP1エピトープに結合するゲノムDNAをシークエンスした。その結果、3つのEBV陽性NK細胞株のすべてがアミノ酸残基5580に影響を与えない同一の突然変異を保有していることが明らかとなったデータは示さない。実施例9細胞株および樹状細胞の調製本発明者らは、次にEBV関連タンパク質のうち、EBNA1に特異的なCTLクローンの誘導を行い、EBNA1由来のエピトープの同定を行った。EBNA1由来のエピトープの同定に関連する実験実施例9~16において用いられた、細胞株および樹状細胞の調製方法について以下に示す。愛知県がんセンター日本の倫理審査委員会によって承認された研究デザインと目的は、すべての献血者に対して十分に説明され、インフォームドコンセントを得た。CD40で活性化されたB細胞は公知の方法に基づいて、献血者のPBMCから産生されたSchultzeJLetalJClinInvest10027572765KondoEetalJImmunol16921642171。簡単に述べると、PBMCを、放射線照射されCD40Lで形質転換したNIH3T3細胞以下tCD40Lと記載する。BostonにあるDanaFarberCancerInstituteのDrGordonFreemanから提供されたものであると、リコンビナントIL4、およびシクロスポリンAと共に培養液中で培養した。増殖したCD40Bに、週に2回刺激を加えた。EBVを保持したLCLは、公知の方法KuzushimaKetalBlood9430943100に基づき、B958細胞培養上清を用いて、PBMCを分化させることによって調製した。そして、10ウシ胎仔血清、2mMLグルタミン、50UmLのペニシリン、50μgmLストレプトマイシンと50μgmLのカナマイシンを含むRPMI1640培地中で培養した。また、樹状細胞を公知の方法で調製したRomaniNetalJExpMed1808393DauerMetalJImmunol17040694076。CD8T細胞を、PBMCsからCD8MicroBeadsを用いて分離し、-135°Cで保存した。CD8を除いたPBMCを、5のヒトの血清と2mMのLグルタミン、50UmLのペニシリン、50μgmLのストレプトマイシン、50μgmLのカナマイシンを含む4mLのRPMI1640培地に懸濁し、6ウェルプレートの一つのプレート中で37°C、2時間インキュベートした。非接着性細胞を穏やかにピペッティングすることで取り除き、接着細胞を50ngmLの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子と10ngmLIL4を含むDC培地で培養した。2日目と4日目に、半分の培地を、GMCSFとIL4を含んでいる新鮮なDC培地に交換した。6日目に、樹状細胞を集め、mRNAを導入するため、エレクトロポレーションを行なった。実施例10全長EBNA1mRNAの作成EBNA1を発現している抗原提示細胞を作製するために、本発明者らは、pcDNAEBNA1プラスミドからインビトロ転写システムを用いて、ポリA鎖を持つ全長EBNA1mRNAを産生した。インビトロで転写されたEBNA1mRNAを作製するために、まずpcDNAEBNA1ベクターを構築した。RNeasyKitを用いて、上記のB958で形質転換したLCLから全てのRNAの抽出し、EBNA1をコードする配列を得た。EBNA1のアミノ酸配列およびDNA配列を配列番号:36および37に示す。そして、逆転写の後に、以下の特異的プライマーを用いたPCR法によってEBNA1cDNAを増幅した。フォワードプライマー5AAGCTTGCCACCATGTCTGACGAGGGGCCAGGTACAG配列番号:28リバースプライマー5GAATTCTCACTCCTGCCCTTCCTCACCCTC配列番号:29全長のEBNA1断片を、HindIIIとEcoRIサイトを用いてpcDNA31InvitrogenCarlsba樹状細胞Aに挿入し、pcDNAEBNA1を構築した。EBNA1が導入されたことを確認するために、配列決定を行った。得られたプラスミドDNAを、mMESSAGEとmMACHINEキットを用いて線状化し、インビトロで転写した。ポリAポリメラーゼを用いて、3末端のポリA鎖をEBNA1mRNAに付加した後、RNeasyキットを用いて精製した。精製したmRNAをReliantRNAゲルシステムを使用して確認した。CappedmRNAの収量は低いことが明らかとなったが、これはおそらくGCを多く含む配列からなるGAr領域が原因であり、反応温度の変化や反応混合物に一本鎖結合タンパク質を加えても、収量の問題は完全には解決できなかった。しかしながら、mRNAの量は十分であり、ゲル上でも単一のバンドとして観察された図6A。実施例11全長EBNA1mRNAの細胞への導入および、細胞におけるEBNA1の発現確認次に、樹状細胞とCD40B細胞に、エレクトロポレーションによって全長EBNA1mRNAを導入した。まず、無血清のRPMI1640を用いて二度洗浄し、最終濃度が25×107細胞mLとなるように懸濁した。40μLのRPMI1640培地中で20μgのmRNAと混合した後に、2mmのセルの中に入れElectroSquarePoratorECM830を用いてエレクトロポレーションを行った。条件設定は樹状細胞に対しては450V、500μS、CD40B細胞に対しては350V、350μSに設定した。エレクトロポレーションの後、樹状細胞の場合はIL4とGMCSFを追加したDC培地の中で3時間培養し、成熟させるためにTNFα、IL1βとPGE2を加えた。CD40B細胞を、放射線照射したNIH3T3ヒトCD40リガンド細胞の上に直ちに播いて、3648時間後抗原提示細胞として使用した。次に、以下の工程でEBNA1の染色を行い、細胞内におけるEBNA1の発現を確認した。EBNA1mRNAを導入したCD40B細胞を集め、10分間室温で4のパラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝生理食塩水に定着させた。PBSで洗浄した後に、細胞を30分間4°Cで05のTween20を含むPBSで浸透化し、抗EBNA1ウサギポリクローナル抗体鶴見達也博士から提供、愛知がんセンター研究所、名古屋、日本と反応させた。PBSで洗浄した後に、細胞をFITC標識したヤギの抗ウサギIgGで30分間4°C染色した。染色した細胞は、CellQUESTソフトウェアを用い、FACSCalliburで分析した。上記の結果、EBNA1の発現は、平均蛍光強度は低いように見えたが、ほとんどのCD40B細胞の上に検出された図6B。樹状細胞は、ドナーのPBMCsから得られた細胞数が限られていたために、本分析では利用できなかった。実施例12EBNA1mRNAを導入した樹状細胞を用いた、EBNA1特異的CTLクローンの誘導健康なドナーの単核球由来の樹状細胞に、全長EBNA1mRNAをエレクトロポレーションによって導入し、炎症性サイトカインの混合物の添加することにより、樹状細胞の成熟化を誘導した。EBNA1特異的CTLクローンの誘導は以下の工程により行った。保存されていたCD8T細胞を解凍し、10ヒト血清、2mMLグルタミン、50UmLペニシリン、50μgmLストレプトマイシン、および50μgmLカナマイシンを含み、さらに5ngmLIL7と5ngmLIL125ngmLを加えた200μLのRPMI1640倍地中で、5CO2濃度の下、湿潤インキュベーターで培養した。8、16、および23日目に、EBNA1mRNAを導入し、γ線を照射した樹状細胞によって、T細胞を刺激した。各再刺激の1日後に、最終的に20UmLの濃度になるように、IL2を加えた。T細胞クローンを確立するため、ポリクローナルなCTLの限界希釈法を実施したKuzushimaKetalBlood20019818721881。多クローンのCD8T細胞を、ガンマ線などを照射された1×105のPBMCs、および2×104LCLsに、CD3特異的なモノクロナール抗体を含むCTL培地を入れた、丸底の96ウェルのプレートの1ウェルに1細胞となるように蒔いた。翌日、IL2を各ウエルに加えた。2週間の培養後、良好に増殖しているウェルを二つに分け、ELISPOTアッセイで自己のEBNA1mRNAで形質転換したCD40B細胞、または自己のLCLに対するエフェクターとして使用した。刺激を三回行った後に、各微量培養液の一定量について、EBNA1mRNAを導入した自己のCD40B細胞と接触させ、ELISPOTアッセイで特異的にIFNγを分泌する能力をテストした。ELISPOTアッセイは、公知の方法で行ったKuzushimaKetalBlood10114601468モノクローナル抗体でコーティングされたMultiscreenHAプレートのウェル中で各種刺激因子と共に培養した。刺激因子として、自己のEBNA1mRNAを導入したCD40B細胞若しくは導入しなかったCD40のB細胞と、自己若しくは同種のLCLを各ウェルに蒔いた。以下に説明するペプチドタイトレーションとオバーラッピングアッセイにおいては、濃度をふった合成ペプチドを室温で1時間、自己のCD40B細胞に加えた。その後、抗ヒトIFNγウサギポリクローナル抗体と反応させた後、ペルオキシダーゼでラベルした抗ウサギの免疫グロブリン抗体と基質を加えて反応後、プレートを洗浄し乾燥させた。IFNγスポットは実体顕微鏡の下で数えた。上記の結果、36のウェルのうち、32ウェルの細胞中にEBNA1特異的CTLが存在したデータ示さず。CTLクローンB5とC6を限界希釈法により樹立した。クローンは抗CD3モノクローナル抗体、照射されたフィーダー細胞およびIL2と供に増殖させた。これらのクローンは、EBNA1mRNAを導入した自己のCD40B細胞とLCLを認識するが、EBNA1mRNAを導入しなかった自己CD40B細胞やHLAが不一致の同種LCLは認識しなかった図7。実施例13抗原を提示しているHLA分子の同定献血者はHLAA2402、A3101、B1507、B3501、およびCw0303として遺伝学的に分類された。抗原を提示しているHLA分子を同定するため、HLAが部分的に一致しているLCLのパネルを、クローンB5若しくはC6を刺激してIFNγを生産するために用いた。自己のLCLに加えて、HLAB3501を発現している同種LCLが、CTLクローンC6によって認識された図8A。そして、HLACw0304または、HLACw0303を持つLCLが、クローンB5図8Bによって認識された。このことは、HLAB3501がクローンC6認識のための推定上の制限因子であり、一方、HLACw0303とHLACw0304はクローンB5の制限因子として働いていることを示している。実施例14EBNA1抗原ペプチドの識別エピトープ領域を特定するために、クローンB5およびC6を、20個のアミノ酸を持つペプチドのセットと共に自己のCD40B細胞において刺激した。本発明に使用されたペプチドは、BioSynthesisIncLewisvilleTXから購入した。GArの一次構造はMHCクラスIエピトープを含みそうにないことから、本発明者らはエピトープソースとしてこの部分を除いた。アミノ酸セットは13残基のオーバーラップによって、GArドメイン除く完全なEBNA1タンパク質配列をカバーしている。上記の結果、ペプチド24はクローンC6によって認識された図9。HLAB3501拘束性のエピトープに関し、HPVGEADYFEY配列番号:30という配列が以前に報告されているBlakeNetalImmunity19977791802。このエピトープ配列はペプチド24の中央に位置していることから図10A、本発明者らは、クローンC6が、HPVGEADYFEY配列番号:30をエピトープペプチドとして認識しているだろうと考えた。クローンB5の場合では、2つの重複するペプチド38と39が、認識され図9、これらは図10Bでアンダーラインを引いた13アミノ酸配列VFVYGGSKTSLYN配列番号:31を共有している。HLACw0303に結合する最適のエピトープを予測するために、プログラムSYFPEITHIを用いた。そして、プログラムSYFPEITHIによる予測に基づき、エピトープとなりうる候補のペプチド、VYGGSKTSL配列番号:22、FVYGGSKTSL配列番号:3、およびVFVYGGSKTSL配列番号:2を合成した。C末端にあるアンカーのロイシンとエピトープの三番目の部分にある補助的アンカーのバリンとチロシンはプログラムで予測されていたことから、発明者らは11merVFVYGGSKTSL、配列番号:2と10merFVYGGSKTSL、配列番号:3図10Bについて調べた。ペプチドを加えた標的細胞のHalfMaximalRecognitionはそれぞれ510nMの10残基ペプチドと15nMの11残基ペプチドで得られた図10C。9残基の最適なエピトープの長さは明らかにならなかったことから、本発明者らは、同じ疑問を解決するのに構造面からのアプローチを用いることに決めた。このために、本発明者らは10残基ペプチドFVYGGSKTSL配列番号:3若しくは11merVFVYGGSKTSL配列番号:2を導入し、蛍光ラベルしたテトラマーを作製した。テトラマーの作製と染色は以下の工程により行った。HLACw0303とCw0304のcDNAクローンは、プライマーであるC03FpLysSでタンパク質発現を最適化するように設計された数個の塩基の置換を含んでいる。PCR産物は、NcoIとBamHIとで切断され、ベクターに組み込まれた。このベクターは、HLA配列の3末端にBirAbiotinylationサイトを含んでいる。組換えHLACw0303とCw0304の分子はβ2ミクログロブリンとペプチドFVYGGSKTSL配列番号:3若しくはVFVYGGSKTSL配列番号:2と共にインビトロで組み込まれた。ゲル濾過で精製された可溶性複合体は、BirA酵素を用いてビオチン化された。フィコエリスリンをラベルされたテトラマーは、PEでラベルされたストレプトアビジンにこれらのビオチン化複合体を混合して作製した。テトラマーでの染色は以下の通りに行われた。CTLクローンを、15分間4°CでFITCラベルした抗CD8モノクローナル抗体と、20μgmLのテトラマーでインキュベートして染色した。二度洗浄した後、染色した細胞を、05のパラホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリーにより分析した。上記の分析の結果、図11に示されるように、これらのテトラマーは特異的にCTLクローンB5に結合した。しかしながら、10残基ペプチドを導入したテトラマーはB5クローンに対して、11残基ペプチドを導入したものより高い親和力を示し、このことは10残基ペプチドFVYGGSKTSL配列番号:3がCTLのための最小の、そして、最適のエピトープであること示唆している。さらに、クローンB5は、結果が図8Aのデータと同様に、10残基を組み込んだHLACw0304テトラマーに強く結合した。実施例16EBNA1特異的CTLsのEBVが感染したB細胞への成長抑制効果の検討クローンのB5とC6は、クロムリリースアッセイにおいては、自己のLCLを溶解しなかった。ここで、これらのEBNA1特異的CTLが、EBNA1を発現しているLCLの長期的成長と生存に影響を及ぼすか否かを検討した。拘束性HLA分子の存在下若しくは非存在下において、自己及び同種のLCLが、反応するCTLの存在下若しくは非存在下において96ウェルプレートに蒔かれた。成長抑制アッセイは、公知の方法を多少修正して実施したLeeSPetalJExpMed19914091420。標的となるLCL細胞は2×104細胞ウェルの濃度で3ウェルずつ丸底の96ウェルのプレートに蒔いた。EBNA1特異的CTLクローン若しくはコントロールとしてのCTL培地を標的細胞の培地に加えた。すべての培地を週ごとに半分を替えることによって維持し、PEcyanin5でラベルされた抗CD19と、PEによってラベルされた抗CD8モノクローナル抗体で染色し、フローサイトメトリーによる分析でB細胞の特性を確認した。さらに、培養液は4週間後にLCLがどれだけ増えたかを確認した。最終的にLCLがどれだけ増えたかを、顕微鏡観察によって評価し、フローサイトメトリーによるCD19の発現で確認した。図12に示されるように、両方のCTLクローンは明確に自己のLCLだけではなく、拘束性HLAを持つ同種のLCLについて増殖を抑制した。このことは、CTLクローンが潜伏タイプIIIであるEBV陽性細胞の成長を阻害する能力を持つことを示唆している。