以下を含む薬学的組成物であって:水性キャリアと;以下のa~dの01mgml~20mgmlの薬学的に許容される塩の組成物と:aiヒトモノクローナル抗DNA166Id抗体の重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域CDR内に見いだされるアミノ酸配列、もしくは、iiマウスにおいて全身性エリテマトーデスSLE様の疾患反応を誘導する病原性の抗DNAモノクローナル抗体の重鎖または軽鎖の相補性決定領域CDR内に見いだされるアミノ酸配列、に対応する配列を有する少なくとも12および多くても30の連続したアミノ酸で含むペプチド、または、b以下の配列iTGYYX1X2X3X4X5QSPEKSLEWIGSEQIDNO:11式中、X1は、Met、Ala、またはValであり;X2は、Gln、Asp、Glu、またはArgであり;X3は、TrpまたはAlaであり;X4は、ValまたはSerであり;およびX5は、Lys、Glu、またはAlaであるペプチド、または、iiEINPSTGGX6X7X8X9X10X11X12KAKATSEQIDNO:12、式中、X6およびX7は、それぞれのThr、Val、またはAlaであり;X8は、TyrまたはPheであり;X9は、AsnまたはAspであり;X10は、GlnまたはGluであり;X11は、LysまたはGluであり、およびX12は、PheまたはTyrであり;iiiYYCARX13X14X15X16PYAX17X18YWGQGSSEQIDNO:13式中、X13は、Ph、Thr、またはGlyであり;X14は、Leu、Ala、またはSerであり;X15は、TrpまたはAlaであり;X16は、GluまたはLysであり;X17は、MetまたはAlaであり、およびX18は、Asp、Lys、またはSerであり;ivGYNX19X20X21X22X23X24SHGX25X26LEWIGSEQIDNO:14式中、X19は、MetまたはAlaであり;X20は、Asn、Asp、またはArgであり;X21は、TrpまたはAlaであり;X22は、ValまたはSerであり;X23は、LysまたはGluであり;X24は、GlnまたはAla;X25は、LysまたはGluであり、およびX26は、SerまたはAlaであり;vYYCARX27X28X29YGX30X31X32GQTLSEQIDNO:15式中、X27は、SerまたはPheであり;X28は、GlyまたはAlaであり;X29は、Arg、Ala、またはGluであり;X30は、AsnまたはAspであり;X31は、TyrまたはPheであり、およびX32は、Trp、His、またはAlaであり;viX33YYWSWIX34QX35PX36X37GX38EWIGSEQIDNO:16式中、X33は、GlyまたはThrGlyであり;X34は、ArgまたはLysであり;X35は、ProまたはSerであり;X36は、GlyまたはGluであり;X37は、LysまたはAspであり;およびX38は、Glu、Leu、またはSerであり;viiYYCARX39LLX40X41X42X43X44DVDYX45GX46DVSEQIDNO:17式中、X39は、GlyまたはPheであり;X40は、ArgまたはAlaであり;X41は、GlyまたはAlaであり;X42は、GlyまたはAlaであり;X43は、TrpまたはAlaであり;X44は、AsnまたはAlaであり;X45は、TyrまたはTrpであり;X46は、MetまたはGlnであり;viiiFSGYYWSSEQIDNO:8;ixEINHSGSTNYKTSLKSSEQIDNO:9;または、xGLLRGGWNDVDYYYGMDVSEQIDNO:10、を有する連続したアミノ酸を含むペプチド、または、caおよびb、もしくはai、aii、およびbi~bxの配列のうちの少なくとも2つのいずれかの配列を有する連続したアミノ酸を含むペプチド、または、dai、aii、およびbi~bxに含まれる少なくとも2つの同一の配列を含む配列を有する連続したアミノ酸を含むペプチドと;並びに、ジメチルアセトアミド、ポリエチレングリコール、ポリオキシル化されたヒマシ油、Nメチル2ピロリドン、1エテニル2ピロリジノン、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、および置換されたβシクロデキストリンからなる群から選択される溶解度エンハンサーと、を含み、前記ペプチドおよび前記溶解度エンハンサーは、両方とも水性キャリアに溶解され;かつ、前記組成物は、4~9の間のpHを有する薬学的組成物。前記組成物の少なくとも05mgmlが、薬学的に許容される前記ペプチドの塩である、請求項1に記載の薬学的組成物。前記ペプチドが、以下からなる群より選択される配列を有する、請求項1または2に記載の薬学的組成物:NH2ThrGlyTyrTyrMetGlnTrpValLysGlnSerProGluLysSerLeuGluTrpIleGlyCOOHSEQIDNO1NH2GluIleAsnProSerThrGlyGlyThrThrTyrAsnGlnLysPheLysAlaLysAlaThrCOOHSEQIDNO2NH2TyrTyrCysAlaArgPheLeuTrpGluProTyrAlaMetAspTyrTrpGlyGlnGlySerCOOHSEQIDNO3NH2GlyTyrAsnMetAsnTrpValLysGlnSerHisGlyLysSerLeuGluTrpIleGlyCOOHSEQIDNO4NH2TyrTyrCysAlaArgSerGlyArgTyrGlyAsnTyrTrpGlyGlnThrLeuCOOHSEQIDNO5NH2GlyTyrTyrTrpSerTrpIleArgGlnProProGlyLysGlyGluGluTrpIleGlyCOOHSEQIDNO6NH2TyrTyrCysAlaArgGlyLeuLeuArgGlyGlyTrpAsnAspValAspTyrTyrGlyMetAspValCOOHSEQIDNO7NH2PheSerGlyTyrTyrTrpSerCOOHSEQIDNO8NH2GluIleAsnHisSerGlySerThrAsnTyrLysThrSerLeuLysSerCOOHSEQIDNO9および、NH2GlyLeuLeuArgGlyGlyTrpAsnAspValAspTyrTyrTyrGlyMetAspValCOOHSEQIDNO10。請求項1に記載の薬学的組成物であって、前記ペプチドは、X33YYWSWIX34QX35PX36X37GX38EWIGSEQIDNO:16式中、X33は、Gly、またはThrGlyであり;X34はArgまたはLysであり;X35は、Pro、またはSerであり;X36は、GlyまたはGluであり;X37は、LysまたはAspであり;およびX38は、Glu、Leu、またはSerである配列を有する連続したアミノ酸を含む薬学的組成物。前記溶解度エンハンサーが、置換されたβシクロデキストリンである、請求項1~4のいずれか1項に記載の薬学的組成物。前記置換されたβシクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル、スルホブチルエーテル、またはスルホプロピルエーテル置換されたβシクロデキストリンである、請求項5に記載の薬学的組成物。置換されたβシクロデキストリンが、置換されたスルホブチルエーテルβシクロデキストリンである、請求項6に記載の薬学的組成物。前記溶液中のペプチドの濃度が少なくとも1mgmlである、請求項1~7のいずれか1項に記載の薬学的組成物。前記溶液中のペプチドの濃度が、少なくとも25mgmlである、請求項1~7のいずれか1項に記載の薬学的組成物。前記組成物が65~85の間のpHを有する、請求項1~9のいずれか1項に記載の薬学的組成物。前記組成物が75~85の間のpHを有する、請求項10に記載の薬学的組成物。前記薬学的に許容される塩が酢酸塩である、請求項1~11のいずれか1項に記載の薬学的組成物。請求項5に記載の薬学的組成物であって、前記薬学的に許容される塩は、酢酸塩であり、かつ置換されたβシクロデキストリンは、ヘプタスルホブチルエーテルβシクロデキストリンである薬学的組成物。ヒト被験者の全身性エリテマトーデスSLEの症状を軽減する方法であって、前記ヒト被験者に対して、請求項1~13のいずれか1項に記載の薬学的組成物を、前記ヒト被験者のSLEの症状を軽減するために有効な量で投与することを含む方法。ヒト被験者のSLEの治療に使用するための、請求項1~13のいずれか1項に記載の薬学的組成物。請求項1~13のいずれか1項に記載の薬学的組成物を製造するための方法であって、以下のe~hの工程を含み:eジメチルアセトアミド、ポリエチレングリコール、ポリオキシル化されたヒマシ油、Nメチル2ピロリジノン、1エテニル2ピロリドン、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、または置換されたβシクロデキストリンの水性キャリア溶液を、予め定められた濃度で調製することと;f予め定められた量の以下の1~4の薬学的に許容される塩を添加することと、1以下の配列iヒトモノクローナル抗DNA166Id抗体の重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域CDR内に見いだされるアミノ酸配列、もしくは、iiマウスにおいて全身性エリテマトーデスSLE様の疾患反応を誘導する病原性の抗DNAモノクローナル抗体の重鎖または軽鎖の相補性決定領域CDR内に見いだされるアミノ酸配列、に対応する配列を有する少なくとも12および多くても30の連続したアミノ酸を含むペプチド、または、2以下の配列iTGYYX1X2X3X4X5QSPEKSLEWIGSEQIDNO:11式中、X1は、Met、Ala、またはValであり;X2は、Gln、Asp、Glu、またはArgであり;X3は、TrpまたはAlaであり;X4は、ValまたはSerであり;およびX5は、Lys、Glu、またはAlaであるペプチド、または、iiEINPSTGGX6X7X8X9X10X11X12KAKATSEQIDNO:12、式中、X6およびX7は、それぞれThr、Val、またはAlaであり;X8は、TyrまたはPheであり;X9は、AsnまたはAspであり;X10は、GlnまたはGluであり;X11は、LysまたはGluであり、およびX12は、PheまたはTyrであり;iiiYYCARX13X14X15X16PYAX17X18YWGQGSSEQIDNO:13式中、X13は、Ph、Thr、またはGlyeであり;X14は、Leu、Ala、またはSerであり;X15は、TrpまたはAlaであり;X16は、GluまたはLysであり;X17は、MetまたはAlaであり、およびX18は、Asp、Lys、またはSerであり;ivGYNX19X20X21X22X23X24SHGX25X26LEWIGSEQIDNO:14式中、X19は、MetまたはAlaであり;X20は、Asn、Asp、またはArgであり;X21は、TrpまたはAlaであり;X22は、ValまたはSerであり;X23は、LysまたはGluであり;X24は、GlnまたはAla;X25は、LysまたはGluであり、およびX26は、SerまたはAlaであり;vYYCARX27X28X29YGX30X31X32GQTLSEQIDNO:15式中、X27は、SerまたはPheであり;X28はGly、またはAlaであり;X29は、Arg、Ala、またはGluであり;X30は、AsnまたはAspであり;X31は、TyrまたはPheであり、およびX32は、Trp、His、またはAlaであり;viX33YYWSWIX34QX35PX36X37GX38EWIGSEQIDNO:16式中、X33は、GlyまたはThrGlyであり;X34は、ArgまたはLysであり;X35は、ProまたはSerであり;X36は、GlyまたはGluであり;X37は、LysまたはAspであり;およびX38は、Glu、Leu、またはSerであり;viiYYCARX39LLX40X41X42X43X44DVDYX45GX46DVSEQIDNO:17式中、X39は、GlyまたはPheであり;X40は、ArgまたはAlaであり;X41は、GlyまたはAlaであり;X42は、GlyまたはAlaであり;X43は、TrpまたはAlaであり;X44は、AsnまたはAlaであり;X45は、TyrまたはTrpであり;X46は、MetまたはGlnであり;viiiFSGYYWSSEQIDNO:8;ixEINHSGSTNYKTSLKSSEQIDNO:9;または、xGLLRGGWNDVDYYYGMDVSEQIDNO:10、を有する連続したアミノ酸を含むペプチド、または、3aおよびb、もしくはai、aii、およびbi~bxの配列のうちの少なくとも2つのいずれかの配列を有する連続したアミノ酸を含むペプチド、または、4ai、aii、およびbi~bxに含まれる少なくとも2つの同一の配列を含む配列を有する連続したアミノ酸を含むペプチド、g前記溶液に前記ペプチドが溶解するまで前記工程bの溶液のpHを調整することと;並びに、h必要に応じて、前記工程cの溶液のpHを4~9のpHに合わせることと、を含み、これにより薬学的組成物を製造する方法。前記ペプチドの予め定められた量が、少なくとも01mg/mlの、薬学的組成物中のペプチドの終濃度を生じるような量である、請求項16に記載の方法。記ペプチドの予め定められた量が、少なくとも05mg/mlの、薬学的組成物中のペプチドの終濃度を生じるような量である、請求項16に記載の方法。前記ペプチドの予め定められた量が、25mgml、20mgml、10mgml、05mg/ml、または01mgmlの、薬学的組成物中のペプチドの終濃度を生じるような量である、請求項16、17、または18に記載の方法。工程bが、前記溶液を1時間混合することをさらに含む、請求項16~19のいずれか1項に記載の方法。工程cにおいて、前記pHは、10NのHClまたはNaOHを使用して調整される、請求項16~20のいずれか1項に記載の方法。酢酸セルロースフィルターを通して前記工程dの溶液を濾過することをさらに含む、請求項16~21のいずれか1項に記載の方法。請求項16に記載の方法であって、前記ペプチドの予め定められた量は、25mgml、20mgml、10mgml、05mg/ml、または01mgmlで薬学的組成物中のペプチドの終濃度を生じるような量であり;工程bは、前記溶液を1時間混合することをさらに含み;および、工程cにおいて、pHは、10NのHClまたはNaOHを使用して調整され、酢酸セルロースフィルターを通して前記工程dの溶液を濾過することをさらに含む方法。請求項16~23のいずれか1項に記載の方法によって調製される組成物。以下のa~dの01mgml~20mgmlの薬学的に許容される塩の組成物と:a以下の配列iヒトモノクローナル抗DNA166Id抗体の重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域CDR内に見いだされるアミノ酸配列、もしくは、iiマウスにおいて全身性エリテマトーデスSLE様の疾患反応を誘導する病原性の抗DNAモノクローナル抗体の重鎖または軽鎖の相補性決定領域CDR内に見いだされるアミノ酸配列、に対応する配列を有する少なくとも12および多くても30の連続したアミノ酸で含むペプチド、または、b以下の配列iTGYYX1X2X3X4X5QSPEKSLEWIGSEQIDNO:11式中、X1は、Met、Ala、またはValであり;X2は、Gln、Asp、Glu、またはArgであり;X3は、TrpまたはAlaであり;X4は、ValまたはSerであり;およびX5は、Lys、Glu、またはAlaであるペプチド、または、iiEINPSTGGX6X7X8X9X10X11X12KAKATSEQIDNO:12、式中、X6およびX7は、それぞれのThr、Val、またはAlaであり;X8は、TyrまたはPheであり;X9は、AsnまたはAspであり;X10は、GlnまたはGluであり;X11は、LysまたはGluであり、およびX12は、PheまたはTyrであり;iiiYYCARX13X14X15X16PYAX17X18YWGQGSSEQIDNO:13式中、X13は、Ph、Thr、またはGlyeであり;X14は、Leu、Ala、またはSerであり;X15は、TrpまたはAlaであり;X16は、GluまたはLysであり;X17は、MetまたはAlaであり、およびX18は、Asp、Lys、またはSerであり;ivGYNX19X20X21X22X23X24SHGX25X26LEWIGSEQIDNO:14式中、X19は、MetまたはAlaであり;X20は、Asn、Asp、またはArgであり;X21は、TrpまたはAlaであり;X22は、ValまたはSerであり;X23は、LysまたはGluであり;X24は、GlnまたはAla;X25は、LysまたはGluであり、およびX26は、SerまたはAlaであり;vYYCARX27X28X29YGX30X31X32GQTLSEQIDNO:15式中、X27は、SerまたはPheであり;X28はGly、またはAlaであり;X29は、Arg、Ala、またはGluであり;X30は、AsnまたはAspであり;X31は、TyrまたはPheであり、およびX32は、Trp、His、またはAlaであり;viX33YYWSWIX34QX35PX36X37GX38EWIGSEQIDNO:16式中、X33は、GlyまたはThrGlyであり;X34は、ArgまたはLysであり;X35は、ProまたはSerであり;X36は、GlyまたはGluであり;X37は、LysまたはAspであり;およびX38は、Glu、Leu、またはSerであり;viiYYCARX39LLX40X41X42X43X44DVDYX45GX46DVSEQIDNO:17式中、X39は、GlyまたはPheであり;X40は、ArgまたはAlaであり;X41は、GlyまたはAlaであり;X42は、GlyまたはAlaであり;X43は、TrpまたはAlaであり;X44は、AsnまたはAlaであり;X45は、TyrまたはTrpであり;X46は、MetまたはGlnであり;viiiFSGYYWSSEQIDNO:8;ixEINHSGSTNYKTSLKSSEQIDNO:9;または、xGLLRGGWNDVDYYYGMDVSEQIDNO:10、を有する連続したアミノ酸を含むペプチド、または、caおよびb、もしくはai、aii、およびbi~bxの配列のうちの少なくとも2つのいずれかの配列を有する連続したアミノ酸を含むペプチド、または、dai、aii、およびbi~bxに含まれる少なくとも2つの同一の配列を含む配列を有する連続したアミノ酸を含むペプチドと;並びに、ジメチルアセトアミド、ポリエチレングリコール、ポリオキシル化されたヒマシ油、Nメチル2ピロリドン、1エテニル2ピロリジノン、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、および置換されたΒシクロデキストリンからなる群から選択される溶解度エンハンサーと、を含む凍結乾燥された薬学的組成物。前記組成物の少なくとも05mgmlが、前記ペプチドの前記薬学的に許容される塩である、請求項25に記載の凍結乾燥された薬学的組成物。請求項1~13のいずれか1項に記載の薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、以下の工程:f40°Cまで薬学的組成物の温度を下げることと;g所定の時間40°Cに温度を保持することと;h20°Cに前記溶液の温度を上げることと;i所定時間20°Cに温度を保持することと;および、j減圧して、所定時間20°Cに温度を保持することと、を含み、これにより、薬学的組成物を凍結乾燥する方法。工程aが2時間以内で行われる、請求項27に記載の方法。工程bが3時間以内で行われる、請求項27に記載の方法。工程cが13時間以上行われる、請求項27に記載の方法。工程cが110μバールの圧力で行われる、請求項27に記載の方法。工程dが13時間以上行われる、請求項27に記載の方法。工程dが110μバールの圧力で行われる、請求項27に記載の方法。工程eにおいて、前記圧力が10μバールに減少される、請求項27に記載の方法。工程eが5時間以上行われる、請求項27に記載の方法。請求項27に記載の方法であって、工程aは2時間以内で行われ;工程bは3時間以内で行われ;工程cは13時間以上で、110μバールの圧力で行われ;工程dは13時間以上で、110μバールの圧力で行われ;および、工程eは5時間にわたって行われ、圧力は10μバールに減少される方法。請求項27~36のいずれか1項に記載の方法によって調製される凍結乾燥された薬学的組成物。請求項1~13のいずれか1項に記載の薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、以下の工程:f45°Cまで薬学的組成物の温度を下げることと;g所定時間45°Cに温度を保持することと;h20°Cに溶液の温度を上げることと;i25°Cに溶液の温度を上げることと;および、j所定時間25°Cに温度を保持することと、を含み、これにより薬学的組成物を凍結乾燥する方法。工程aが6時間以内で行われる、請求項38に記載の方法。工程bが3時間以内で行われる、請求項38に記載の方法。工程cが19時間以上行われる、請求項38に記載の方法。工程cが150μバールの圧力で行われる、請求項38に記載の方法。工程dが13時間以上行われる、請求項38に記載の方法。工程dが、150μバールの圧力で行われる、請求項38に記載の方法。工程eが8時間以上行われる、請求項38に記載の方法。工程eが150μバールの圧力で行われる、請求項38に記載の方法。請求項38に記載の方法であって、工程aは6時間行われ;工程bは3時間行われ;工程cは19時間以上で、150μバールの圧力で行われ;工程dは13時間以上で、150μバールの圧力で行われ;および、工程eは8時間以上で、150μバールの圧力で行われる方法。請求項38~47のいずれか1項に記載の方法によって調製される凍結乾燥された薬学的組成物。前記組成物の水含有量が5未満である、請求項48に記載の凍結乾燥された薬学的組成物。前記組成物の水含有量が40未満である、請求項49に記載の凍結乾燥された薬学的組成物。前記組成物の水含有量が35未満である、請求項50に記載の凍結乾燥された薬学的組成物。以下から構成されるパックされた薬学的組成物:パッケージ材;および、予め定められた量の請求項37または48に記載の凍結乾燥された薬学的組成物。実験の詳細ペプチドI~Vの合成および動物モデルにおいてSLEを治療するために合成されたペプチドの効果を示す試験は、PCT国際公開番号WO9630057に記載されている。さらなる動物試験は、PCT国際公開番号WO02067848に記載されている。実施例1:化合物1のための製剤の開発本出願のペプチドは、2002年9月6日に発表されたPCT国際公開番号WO02067848に記載されており、当該技術分野において周知方法によって調製することができるたとえばPeptidesSynthesisStructureandApplicationsedbyBGutteAcademicPress1995PeptideSynthesisProtocolsedByMPenningtonandBDunnHumanaPress1994SchnolzerMetalInsituneutralizationinBocchemistrysolidphasesynthesisRapidHighyieldassemblyofdifficultsequencesIntJPeptProteinRes199240180193を参照されたい。化合物1は、19アミノ酸で構成される合成ポリペプチドである。これは、酢酸塩として提供される。本ペプチドの水溶解度は、05mgml未満であることが決定された。図1は、酢酸塩としての化合物1を示す。2mgmlを越える好ましくは10mgmlまでのペプチド濃度を有する製剤をするために、いくつかの溶解度エンハンサーで実験を行った。予備実験では、2mgmlの濃度は容易に達成することができないことが示された。また、皮下注射のための製剤を開発するために、pHが4~9の範囲であること、および溶液が等浸透圧であることが望ましい。広範な文献調査に基づいて、最大の溶解度を有する製剤を産生するために少数の主要なアプローチを採用した。考えられる因子は、以下の通りであった:pH調整および緩衝液溶媒共溶媒Cosolvent溶解剤。方法化合物1を、選択した溶解度エンハンサー溶液に、その他の賦形剤とは別々に、またはこれと共に溶解し、溶液を少なくとも1時間撹拌した。必要に応じてpHを調整した。溶液を視覚的に検査して溶解度を推定し、解析アッセイ法での決定のために送った。選択した製剤のいくつかについては、生物活性も試験した。結果表1は、製剤の開発のために使用した溶解度エンハンサーのタイプを示す。表2および3には、種々の溶解度エンハンサーで行った実験を要約してある。表2は、5~10mgmlの範囲のペプチド濃度で行った最初のスクリーニングを要約してある。次いで、高いペプチド濃度で行った実験研究をより低い用量で繰り返した表3を参照されたい。最初の試験では、化合物1が、酸性および塩基性の両方で、所望のpHレベルの限界でより可溶性であったが、塩基性のpH範囲ではあまり安定ではなかったことを示した。従って、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、および炭酸ナトリウムを含むいくつかの緩衝液およびpH調整薬剤を試験した。初めに試験した緩衝液では、いずれも所望のペプチド溶解度レベルを達成しなかった。pH92以上およびpH30以下でのみ2mgmlの溶解度レベルが観察された。それにもかかわらず、最初の段階では、酢酸緩衝液およびクエン酸緩衝液を緊張剤としてのマンニトールと共に有する製剤を最初の毒物学研究のために選択した。これらの製剤を生物活性について試験して活性であるとことを証明した。エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、クレモフォアChremophore、およびこれらの組み合わせなどの非水性溶媒を試験したが、化合物1の溶解度を増大しなかった表1を参照されたい。30のDMAジメチルアセトアミド溶液では、所望の範囲5~9mgmlの溶解度を得たが、その毒性プロフィールのために薬学的製剤には適していなかった。また、溶解度の改善は、30w/wPEG4005~9mgmlを使用しても観察された。この後者の製剤を毒物学研究のために選択したが、両方ともバイオアッセイにおいて不活性であることが判明し、マウス毒性研究においていくらかの副作用を引き起こしてしまったのかもしれない。従って、さらにこの製剤を追跡しないことに決定した。予備実験からみて、非水溶性溶媒を本製剤に使用しなかった。Lアルギニン、Lグルタミン酸、Lグリシン、およびLリジンを含むいくつかのアミノ酸表1を参照されたいを、タンパク質溶解度を改善するために試験した。Lアルギニンのペプチドの溶解度は、所望のレベルであったが、生じるpHは9を超えた。pHを減少させるか、またはアルギニンHCl塩の使用を試みると、ペプチドの沈澱を生じた。また、ヒト血清アルブミンを試験して、低いペプチド濃度1mgmlでペプチドの溶解度を改善した表3を参照されたい。しかし、その潜在的免疫原性および低いペプチド溶解度のために、さらなる実験にはこれを利用しなかった。マンニトール、ソルビトール、およびデキストランを含む充填剤表1を参照されたいを単独で、およびその他の賦形剤と組み合わせて試験したが、溶液中のペプチドの溶解度を改善しなかった。ポリソルベート20およびポリソルベート80を含む共存溶媒表1を参照されたいを単独で、およびその他の賦形剤と組み合わせて試験した。より低濃度のポリソルベート6まででは、ペプチドの溶解度を改善しなかったが、より高濃度10まで表2を参照されたいでは、2mgmlまでペプチドの溶解度を改善した。しかし、このような高濃度のポリソルベートは、薬学的製剤に不適当であると考えられた。また、シクロデキストリンの2つのタイプ:ヒドロキシプロピルβシクロデキストリンおよびスルホブチルエーテルβシクロデキストリンカプチソール両方とも市場に出された非経口的製品に使用することが承認されているを試験した。両方とも、著しくペプチドの溶解度を増大したヒドロキシプロピルβシクロデキストリンについて10mgmlおよびカプチソールについて25のレベルの濃度。2つのシクロデキストリン製剤の生物活性を試験して、ペプチド単独での活性が同等であることを見いだした。カプチソールCAPTISOL:登録商標は、商業的に入手可能な、ブチルエーテルスペーサ基またはスルホブチルエーテルSBEによって疎水性の空洞から分離されたスルフォン酸ナトリウム塩によるポリ陰イオン性シクロデキストリン誘導体である。カプチソール登録商標は、CyDex社のヘプタ置換スルホブチルエーテルβシクロデキストリンSBE7βCD製剤の商品名であるwwwcaptisolcom。カプチソール登録商標の構造は、薬物分子を疎水性の空洞に適合させることができ、これにより水性溶媒から薬物分子を単離することができる。カプチソール登録商標の外面は親水性であるため、これにより複合体を形成した薬物分子の溶解度が増強される。薬物分子の溶解度を増強するためのシクロデキストリンの使用は、米国特許番号第5134127号および第5376645号に開示されており、これらの全ての内容は、参照により本明細書に援用される。CyDex社の文献によれば、カプチソール登録商標は、非経口的に投与したときに安全であり、βシクロデキストリンに付随する腎毒性を示さない。βシクロデキストリンと比較して、カプチソールは、匹敵するか、またはより高い複合体形成の特徴および90grams100mlを上回る優れた水溶性を-50倍の改善を提供する。結論いくつかの溶解度エンハンサーは、所望の溶解度範囲に合致することが見いだされた:DMA、PEG400、ジメチルアセトアミド、ポリエチレングリコール、ポリオキシル化されたヒマシ油、Nメチル2ピロリジノン、1エテニル2ピロリドン、ポリソルベート20、ポリをルベート80、ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン、およびスルホブチルエーテルβシクロデキストリンカプチソール登録商標。これらの溶解度エンハンサーの中で、両シクロデキストリンが、溶解度、生物活性、および安定性に関して優れていることが証明された。従って、実施例5の製剤に使用するための溶解度エンハンサーとしてカプチソール登録商標を選択すること、およびさらに両方のシクロデキストリン製剤を研究することに決定した。実施例5の臨床研究のための最終的な製剤は:120mgmlのカプチソールの所望の量のペプチド05、10、または25mgmlを有する水溶液およびpH調整のためのHClおよびNaOH。表1:化合物1の製剤の開発のために使用した溶解度エンハンサー表2。化合物1のペプチド製剤において評価した共溶媒および安定剤の一覧。表3:低いペプチド濃度での化合物1の製剤実施例2:化合物1のカプチソール登録商標溶液のための調製プロトコル乾燥した化合物1と乾燥したカプチソール登録商標を水中で混合するか、またはカプチソール登録商標と水の調製された溶液に化合物1を添加するなどの標準的溶解法では、所望の濃度で完全に溶解されなかった。化合物1およびカプチソール登録商標の両方のいくつかの異なる濃度を種々のpHレベルで試験した。しかし、化合物1のカプチソール登録商標溶液を作製するため以下の方法では、所望の濃度で完全に溶解された。材料:カプチソール登録商標、化合物1、および水方法:1適切な量のカプチソール登録商標の重さを量り、120mg/mlの終濃度を得る。280の終量の水を添加し、10分間マグネチックスターラで混合する。3化合物1の重さを量り、25mgml、20mg/ml、10mg/ml、05mgml、または01mgmlの終濃度を得る。4ペプチドをカプチソール登録商標溶液に添加する。1時間混合する。5pHを上げて透明溶液を得る20mgmlの製剤では、わずかにpH9以上に上げることが必要であろう。pHは、10NHClおよび10NNaOHを使用して調整すべきである。10分間混合する。6必要に応じて、pHを75~85の範囲に修正するHClまたはNaOH10Nを使用する。7最終体積に水を添加する。802μの酢酸セルロースフィルターを通して溶液を濾過する。9最終pHを記録する。10一定分量に分けて、適当な温度で貯臓する。実施例3:化合物1およびカプチソール登録商標溶液の凍結乾燥通常、凍結乾燥製品は5~10の間の固体を含むが、本製剤中の固体の割合は高い12という点で、今回の凍結乾燥プロセスは、その他の凍結乾燥製品とは異なる。設備使用した凍結乾燥機は、EdwardslyophilizerLyoflex06であった。プロセスの開発の前に品質保証によるコンプライアンスについて、設備のIQ/OQを行い点検した。化合物1とカプチソール登録商標の溶液を05mgml、10mgml、および25mgmlの濃度の化合物1で調製した。充填容積は、1mlに調整した105gr。主な生産工程:1凍結する2保持する低温で3減圧下において2段階で乾燥する:31一次乾燥保持温度よりも高く棚を加熱し、保持レベルよりも高く棚温度を制御する。32二次乾燥保持棚温度よりも高い温度で圧力を最小値に減圧する。バッチ1~3凍結凍結は、2時間以内に室温から40°Cにした。棚を40°Cで3時間保持した。乾燥乾燥は、110μbar圧力で行った。棚温度を13時間以上で20°Cに増大させて、さらに13時間その温度で保持した。全工程の時間は、31時間であった。結果:水含量の結果は:バッチno1:38バッチno2:40およびバッチno3:49であった。バッチ4および5バッチ1、2、および3に至る方法の水含量の結果は、所望の値よりも高かったので、同じ温度で、および低圧で二次乾燥工程を加えることを決定した。乾燥乾燥は、110μbar圧力で行った。棚温度を13時間以上で20°Cに増大させて、さらに13時間バッチ4または8時間バッチ5その温度で保持した。さらに5時間、圧力を10μbarに減圧した。全工程の時間は、36時間であった。結果:水含量の結果は:バッチ4:プラセボ:30、1mgml:39。バッチ5:プラセボ:41。結論図示したとおり、カプチソール登録商標での化合物1の満足な凍結乾燥法が開発された。高割合の固体で、それ故圧縮ケーキであるために、開発された方法は、現在ペプチドのために利用できる凍結乾燥サイクルよりも長く、さらに二次乾燥段階を示す。表4に開発された方法を要約する。実施例4凍結乾燥された化合物溶液のインビボでの生物活性の調査DP、1mg/バイアル、12のカプチソール登録商標生物活性は、2つの濃度の、凍結乾燥した化合物溶液、すなわち製剤drugproductDPを皮下sc処置した後に、化合物1の参照標準RS特異的T細胞からのIL2分泌の阻害によってモニターした。処置結果を化合物1RSのリン酸緩衝食塩水PBS溶液で処置したマウスと比較する。結果は、下記の表に、および図2に示してある。実験デザイン:1免疫化0日CFAで乳状化した化合物1のRS、4つの足蹠全てに2処置0日sc首の後ろに、200μlの溶液で3以下によるインビトロでの活性化:10日a0;05;1;25;5;10;25;50、および100μmlの濃度の化合物1のRSb化合物1と逆順位のアミノ酸を有するペプチドネガティブ対照。cコンカナバリンAポジティブ対照。4加湿した5CO2インキュベーター中で37°Cにおいて20時間の培養液のインキュベーション。5ELISAによるIL2の測定。実験群の表:実施例5:治療のための最適な用量の評価以下の略語を以下の明細書に使用した:CFA完了するフロイントアジュバントConAコンカナバリンADP製剤DS原体EM1濃縮DCCM1培地EM3濃縮RPMI1640ウシ胎児血清培地FCSウシ胎仔血清IFNγインターフェロンガンマLNリンパ節PBSリン酸緩衝食塩水RS参照標準sc皮下TBトリパンブルーTGFβトランスフォーミング成長因子βWFI注射用水。導入20匹のマウス群には、50μg/マウスの化合物1RSを免疫した。免疫マウスは、以下の通りに5つの処置群に割り当てた:プラセボ、25、50、100、および200μgマウスの化合物1DP皮下投与。免疫および処置の10日後、LNを抽出し、単個細胞浮遊液を調製した。次いで、いくつかの濃度の化合物1RSでの活性化に応答する培養細胞によるインビトロでのIFNγおよびTGFβの分泌を測定した。実験デザイン1免疫化0日2化合物1DPでの処置0日3処置マウスからのLN細胞のインビトロでの活性化10日4培地の収集IFNγの測定のため12日5培地の収集TGFβの測定のため13日6IFNγのELISA7TGFβのELISA表7:実験群材料および試薬動物マウス:20匹の雌のBALB/cマウス、HarlananimalsbreedingcenterRehovotによって供給。免疫時の年齢週日:10実験に含めたマウスの平均重量:1901gr。一般試薬70エタノールは、精製H2Oで希釈することによって96エタノール調製した。免疫のための化合物1溶液の調製CFA化合物1RSエマルジョン500μgml、50μgマウスは、以下の通りに調製した:11874mgの化合物を187mlのWFIに溶解して1mgmlの溶液を得た。2溶液をpH指示薬一片でテストしてpH5を有することを見いだした。315mlの溶液を15mlのCFAで乳状化し、500μgmlの終濃度にした。処置のための溶液の調製処置は、200μlの溶液のsc注射によって行った。12カプチソール溶液の調製12grカプチソール登録商標を10mlのWFIに溶解し、12カプチソール登録商標溶液を得た実験法免疫化の前にマウスの重量を測定した平均マウス重量:1901±097gr。免疫化免疫化は、100マイクロリットルそれぞれの後足蹠へ50マイクロリットルの免疫化エマルジョンを注射して行った。処置免疫化工程の後、マウスには、指定された化合物1DPまたは12カプチソール登録商標処置溶液から200μlのsc注射により、これらの首の後ろに処置した。インビトロ培養マウスを頚椎脱臼によって屠殺した。後肢からLNを抽出し、約5mLのRPMIを含む無菌のシャーレへ移した。200マイクロメートルのメッシュステンレス鋼ネットに対して組織を穏やかに押し出すことによって細胞を抽出した。細胞を収集し、RTで10分間300Gで遠心した。それぞれの実験群のプールされたLNから単個細胞浮遊液を調製した。25および5000000細胞/mlウェルの懸濁液をEM1中で化合物1RS0~100μgmlと共に培養した。細胞反応の指標としてのIFNγおよびTGFβの分泌は、培地のELISAによって決定したIFNγについて48時間およびTGFβについて72時間。表8:インビトロでの実験群細胞懸濁液の調製表9:細胞カウントの結果および細胞懸濁液の調製10×106ml細胞懸濁液の調製5×106ml10×106細胞mlの懸濁液を5mlのEM1を5mlの細胞懸濁液に添加することによって12に希釈した。48ウェルプレートでのLN細胞培養のインキュベーション3つの組織培養プレートを調製した。以下をそれぞれのプレートに添加した。バックグラウンド対照細胞を培地と共にインキュベートした05mlの細胞懸濁液05mlの培地EM1。系のポジティブ対照ConAで刺激した細胞05mlの細胞懸濁液05mlのConA5μgmlのEM1溶液終濃度25μgウェル。細胞を化合物1活性化溶液と共にインキュベートした試料05mlの細胞懸濁液05mlの化合物1RS625~200μgml終濃度3125~100μgmlウェル。96ウェルプレートでのLN細胞培養液のインキュベーション48ウェルプレートを調製後、細胞懸濁液からの100μlと活性化溶液からの100μlを適用することによって96ウェルプレートを調製した。培養プレートを37°Cで加湿した5CO2インキュベーター内で48または72時間インキュベートした。上清の収集培養したプレートをRTで10分間300gで遠心した。上清それぞれのウェルから850μlを艶板またはチューブに移した。次いで、繰り返し試料の凍結/融解を回避するために、上清を実験用の一定分量に分けた200μlの2つの一定分量および450μlの1つの一定分量。それぞれのチューブには、以下の詳細をラベルした:1実験コードおよびインキュベーション後の時間。2群および試料番号3活性化因子および濃度。4上清収集の日付。上清は、ELISAのために使用するまで、20°Cで貯蔵した。結果表10:群の概要表11A:最終サイトカイン濃度最終サイトカインpgml2500000細胞/ウェル表11B:最終サイトカイン濃度最終サイトカインpgml5000000細胞/ウェル結果は、図3~4にも示してある。知見IFNγ分泌1プラセボ群において、化合物1の活性化の直線状の用量応答がインビトロで示された。このグラフは、同じ免疫化用量50μgマウスおよび培地EM1でのエキソビボモデルについて得られたグラフに似ている。2インビトロでの化合物1の活性化による用量応答は、全ての試験群にあった。3有意なIFNγ分泌の阻害が、処置に使用した全ての用量で見られた25g/マウスの処置用量で平均95阻害。処置および阻害に役立つ用量の間の逆相互関係は、主に5×106細胞/ウェルを使用したときに見いだすことができる。25×106細胞/ウェルを使用したときは、50μg/マウスでの動物の処置では、100または200μgよりも良好な阻害がなされた。25μgの点は抜けている細胞不足。42×106細胞/ウェルの代わりに5×106細胞/ウェルを使用したときは、より良好な阻害が見られた。5グラフの直線範囲では、阻害のSDは低かった。625×106細胞/ウェルを使用したときは、ConAによる技術的問題が明らかである。TGFβの分泌1プラセボ群、化合物1でのインビトロでの活性化による用量応答は見られなかった。TGFβの分泌レベルは、全ての他の処置群でELISAの検出限界以下であった。実施例6:注射0、05、10、および25mg/バイアルのための化合物1およびカプチソール登録商標を有する凍結乾燥サイクルの最適化目的この研究の目的は、注射のための化合物1およびカプチソール登録商標に関して、凍結乾燥サイクルを最適化し、凍結乾燥ケークの形状を改善して、圧壊および割れを回避するすることである。したがって、凍結乾燥サイクルを改善して最適化することに決定した。プロセスの最適化このサイクルでは、第一相バッチを製造するための生成物を凍結乾燥器に移す。05mgml、10mgml、25mgmlの濃度のペプチド、およびプラセボのバッチを調製して、数回の凍結乾燥サイクルを行った。使用した凍結乾燥機は、Edwards凍結乾燥器Lyoflex06であった。溶解度、含水量、およびケーキの出現を試験した。得られた結果に従って、化合物1のための新たな凍結乾燥サイクルを選択した。固体が高割合12であり、それ故ケーキが濃縮されたために、新たな方法では、実施例3の凍結乾燥サイクルよりもより長く、さらなる一次乾燥段階を示す。表12には、プロセス間での相違を要約する。実施例7:SLEを起こしやすいNZBxNZWF1雌マウスにおける狼蒼症状に対する化合物1カプチソール登録商標中で投与したの効果臨床試験に参加している患者には、賦形剤としてカプチソール登録商標スルホブチルエーテルβシクロデキストリンナトリウム化合物1で処置した。この理由のために、カプチソール登録商標に与えられた化合物1の製剤によるNZBxNZWF1マウスの処置では、このマウス株を化合物1のPBS溶液で処置したときに観察されるものと同様に狼蒼症状に対して有益効果を有するかどうかを決定することが重要であった。この目的で、NZBxNZWF1雌マウス約8月齢を3つの群に分けて、カプチソール登録商標単独、またはカプチソール登録商標中の25もしくは50μg/マウスの化合物1で、週に一度10週間、皮下に処置したそれぞれ、n9および10。従来の研究では、SLE症を改善する際にこの範囲の用量が試験したより高用量のもの100および200μg/マウスよりも有効なことを示したので、これらの用量を選択した。同じバッチの原体をこの研究において、および化合物1による第1相臨床試験において使用した。マウスを抗二本鎖DNA抗体ついて、およびタンパク尿について経過観察した。マウスを屠殺したときに、腎臓のICD強度を決定した。図5で分かるように、10回の処置注射後の二本鎖DNA特異抗体のレベルに、群間の有意差を観察することはできない。また、表13は、化合物1での処置の有益効果は、5回目の注射から観察することができ、10回の注射まで持続したことを示す。カプチソール登録商標対照群のタンパク尿の平均レベルは、化合物1処置群のものよりも一貫して高かった。また、表13は、ICD強度の減少が両方の化合物1用量群の腎臓で観察されたことを示す。これらのマウスの臨床症状を減少させる際に、低用量25μg/マウスでは、高用量50μg/マウスよりも有効であったことを示する全体の傾向があった。表1325または50μg/マウスの化合物1カプチソール登録商標中で処置したNZBxNZWF1マウスのSLEの臨床症状aICD免疫複合体沈着。ICD強度規模:0なし;1中程度;2重篤;3重篤非常に強い。b高レベルのタンパク尿による1匹の動物の死が低い群の平均に生じたcp<005カプチソール登録商標処置した対象マウスと比較;MannWhitney。図6は、それぞれの処置群からの1つの腎臓の代表的な切片を示す。最上列の切片は、カプチソール登録商標処置したマウスに由来し、中央列の切片は、50μg/マウスの化合物1で処置したマウスに由来し、および下列の切片は、25g/マウスの化合物1で処置したマウスに由来する。いずれの服用レベルにおいても、化合物1カプチソール登録商標に溶解で処置したマウスの腎臓切片で観察される免疫複合体沈着の強度は、対照群で観察されたものよりも低かったことが分かる。実施例8:第一相臨床研究化合物1のカプチソール登録商標溶液のSLE被検者の皮下注射の耐容性および安全性を評価するための、第一相の、多施設の、無作為化した、二重盲検、プラセボ対象の、単一用量の、4腕研究。これは、フランスにおいて行われた、ヒトにおける化合物1のカプチソール登録商標溶液での最初の臨床研究であった。その主な目的は、SLE被験者に対する単一のsc注射として投与した化合物1のカプチソール登録商標溶液の耐容性および安全性を評価することである。その第2の目的は、これらの被検者において化合物1のカプチソール登録商標溶液の単一のsc用量に続く免疫応答を評価することである。3636人の被検者が研究に参加した。研究の参加条件を満たすためには、SLE患者は、米国リウマチ学会により狼蒼の診断のために使用される少なくとも4つの基準を満たさなければならなかった。また、患者は、安定な、軽度/中程度の疾患を有し、かつ同等~10以下のSLE疾患活性示数SLEDiseaseActivityIndexSLEDAIスコアでなければならなかった。それぞれの患者には、以下の群譲渡に従って、注射のための再構成された化合物1の単一のsc注射か、またはそのマッチングプラセボカプチソール登録商標を受けさせた:群A:プラセボカプチソール登録商標群B:05mg化合物1のカプチソール登録商標溶液群C:1mgの化合物1のカプチソール登録商標溶液群D:25mgの化合物1のカプチソール登録商標溶液。臨床検査のためのに血液および採尿を含む、安全試験の標準的な組を、投薬の間に投薬後24時間に、および投薬後2、4、および8週にスクリーニングを行った。投薬前に、および予定される引き続いての来診時に、血液サンプルをSLEに関連した免疫学的検査、抗化合物1抗体、およびPBL増殖アッセイ法のために採取した。以下の免疫学試験を行った:Coombs直接的および間接的C3、C4、およびCH50総IgG、IgM、およびIgAANA、抗dsDNAファーアッセイ法、抗ssDNA抗ENA抗La、抗Ro、抗RNP、抗Smを含む抗カルジオリピン抗体VDRLFTA抗体リウマチ因子。被検者群における化合物1のカプチソール登録商標溶液の安全性および耐容性は、以下の基準に基づいて評価した:SLE発赤を含むAEの発生生命徴候理学的検査の変化ルーチンの臨床検査試験SLEDAIスコア免疫学的試験の結果。第1a相の臨床研究の詳細研究主任研究員およびそれぞれの研究場所:フランスの66つの研究センター:ProfJeanCharlesPietteHopitalLaPitieSalpetriereParisProfOliverMeyerHopitalBichatParisProfJeanRevuzHopitalHenriMondorCreteilProfLoicGuillevinHopitalAvicenneBobignyProfEricHachullaHopitalClaudeHuriezLilleCedexProfXavierMarietteHopitalBicetreKremlinBicetre。化合物1のカプチソール登録商標溶液、プラセボ、注射アンプルのための水、投与の用量および様式:化合物1のカプチソール登録商標溶液のバイアル120mg/バイアルを以下の用量で被検者につき単一用量として皮下注射した:05mg化合物1バイアルのカプチソール登録商標溶液、1mg化合物1カプチソール登録商標溶液、および25mgの化合物1カプチソール登録商標溶液。化合物1のためのプラセボ:120mgカプチソール登録商標/バイアル外観上は化合物1のカプチソール登録商標のバイアルと同一。方法これは、化合物1またはプラセボの単一の皮下注射を使用する多施設の、ランダム化した;二重盲検の、プラセボ対象の、4腕研究であった。SLE患者をベースライン手順の前に21日間スクリーニングした。それぞれの資格のある被検者は、4つの処置群:05、1、または25mgの化合物1またはそのマッチするプラセボの皮下注射のうちの1つにランダムにわけた。全ての被検者は、投与日前にクリニックに入院した。それぞれの被検者には、上記の一覧表に記載された処置のうちの1つの単一用量を受けさせた。被検者は、投薬の24時間後にクリニックから退院した。被検者は、投薬後2、4、および8週にさらにモニターした。安全臨床検査のための血液サンプル血清および全血をスクリーニング時、投与日投与前、2日投与後、2、4、および8週最後の訪問に採取した。免疫学的検査のための血液サンプルは、スクリーニング時、投与日投与前、並びに4および8週に採取した。末梢血リンパ球PBL増殖は、投与日投与前および2、4、および8週で評価した。被験者数合計およびそれぞれの処置について:3636人の被験者を以下の通りにこの研究においてランダム化した;05mgの処置群に9人の被検者、1mgの処置群へ9人の被検者、25mgの処置群へ10人の被検者、およびプラセボ処置群へ8人の被検者。診断および主な包含基準:この研究の資格のある被検者は、米国リウマチ学会ACRの少なくとも4つの診断基準を満たしたSLE患者であった。これらの疾患症状は、安定な、軽度/中程度の疾患を有し、かつ2000年に更新された同等~10以下のSLE疾患活性示数のスコアSLEDAI2Kでなければならなかった。研究スクリーニングより前の6月の間に、不安定なまたは重篤な喘息、脳卒中、急性心筋梗塞症、不安定狭心症、脳溢血、および肺塞栓症を報告したSLE患者は、参加から除外した。何らかの臨床的に有意もしくは不安定な医学的または外科的な症状、糖尿病、肝疾患肝硬変、活性な肝炎、門脈圧高進、または腹水、臨床的に有意な高血圧、何らかの悪性の病歴、透析、または慢性障害肺疾患COPDを有するSLE患者は、研究への参加から除外した。また、血漿分離交換法を受けたか、またはスクリーニングの3月前の間に下記の薬物一覧表に記載されたうちの1つで治療されたSLE患者は、研究への参加から除外した:プレドニゾン30mg/日以上または、別の副腎皮質ステロイドの同等物の投与、静脈内副腎皮質ステロイド、静脈内免疫グロブリンGIgG、経口抗凝血薬、および何らかの細胞障害性薬剤たとえば、アザチオプリン、クロランブシル、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキサートmethothrexate、タクロリムス。加えて、副スクリーニング前の最後の3月間に、腎皮質ステロイド10mg/日以上プレドニゾン、または別の副腎皮質ステロイドの同等物の投与または抗マラリア薬での治療を開始するSLE患者も、研究から除外した。研究の全期間にわたって、ベースラインSLE医療を保持する努力がなされたが、それにもかかわらず、研究者は、寛容な福祉を維持および最適化するために、研究の間いつでも参加者の医療を変更することができる。評価基準安全性:以下の安全性パラメーターをスクリーニング時、入院の間、および最終来診を含む引き続く来診時に評価した:生命徴候収縮期血圧、最小血圧、パルス、酸素飽和度、温度、および重量、12導出ECG12leadECG、理学的検査の変化、および臨床的ルーチンの研究室安全性試験。有害事象は、投与日およびその後の来診時のそれぞれで記録した。免疫学:SLEに関連した免疫学的検査をスクリーニング時、入院の間、および最終来診を含む引き続く来診時に行った。薬物に関連した免疫応答は、投与日および最終来診を含む引き続く来診時にPBL増殖アッセイ法および抗化合物1抗体アッセイ方を使用して行った。疾患活性:2000年に更新されたSLE病の活性度指数スコアSLEDAI2Kを使用する疾患活性評価をスクリーニング時、入院の間、および解除契約来診を含む引き続く来診時に評価した。統計方法:SAS登録商標バージョン90ソフトウェアを使用してこの研究の間に収集したデータを解析し、提出するために用いた。検定力の算出は行っておらず、また、形式的仮説検定は、このIa相の研究に対して行わなかった。有害な経験有害な経験の発生率および頻度は、SystemOrganClassおよび好ましいMedDRA辞書版50に従った用語法によって示した。データを処置群によって表にしてある。臨床的実験室データスクリーニング時、1日投与前、2日、2、4、および8週について決定された観察の数、平均、標準偏差、最低値、および最大値を含む研究室値の記述的統計を処置群によって示してある。ベースラインからそれぞれの時点来診時への変化も、治療割り当てによってそれぞれの来診について示してある。異常な結果のパーセント低いおよび高い、適用可能な場合を処置群および来診時/時点によってパラメーターに基づいて示してある。ベースラインから投与後24時間までおよびベースラインから最終来診までの変化の解析を行った。生命徴候スクリーニング時、1日投与前、投与後、およびそれぞれの時点、2日、2、4、および8週について決定された観察の数、平均、標準偏差、中央値、最低値、および最大値を含む生命徴候のための記述的統計を来診および割り当てられた処置によって表にしてある。ベースラインからそれぞれの時点/来診時までの変化を来診および割り当てられた処置によって提示してある。重量ベースライン、最終、およびベースラインからの変化の重量kgの記述的統計を処置群によって提示してある。ECGベースライン、最終、およびベースラインからの変化のECGパラメーターの記述的統計を提示してある。変化の解析をベースラインから最終までの変化の表として、正常/異常または存在/不存在のECGパラメーターの間で示してある。潜在的に臨床的に有意なPCSQTcBazett測定を所定の基準に従って同定した。PCSと非PCSの間の絶対QTcAbsoluteQTcBazett変化解析の表およびベースラインから任意の来診までのQTcBazettのPCS変化の発生率の表を示してある。身体検査身体検査の結果は、ベースラインおよび最終来診時のそれぞれの体の系について異常または正常な知見を有する被検者の発病率によって解析する。正常から異常の間および逆の変化の解析も適用した。ベースラインからの変化が生じないときは、その他として定義した。化合物1に関する免疫学的検査免疫学的パラメーターについては、観察の数、平均、標準偏差、中央値、最低限、および最大値を含む記述統計学を算出し、処置群および来診によって示してある。ベースラインからそれぞれの経過観察来診まで変化を処置群によって示してある。該当する場合には、ネガティブポジティブな結果を有する被検者の数およびパーセントを処置群および来診によって示してある。SLEDAI2K平均、標準偏差、中央値、、最小値、および最大値を含む、SLEDAI2Kの記述的統計を示してあるIa相臨床研究の結果:被検者の割り付けおよびSLEの特徴プロトコルにつき3636人の研究被検者でこの研究を始めて完了した。全ての処置群の被検者34の大多数は、女性944および白人30、833であった。全ての処置群についての平均年齢は、356才32才から39才までの平均の範囲であった。大部分の被検者917は、4~6の米国リウマチ学会空港監視レーダ診断基準および21~41の範囲のSLEDAI2Kスコアの平均群を有した。安全性の結果研究薬物処置群とプラセボ群の間にAEの発病率に顕著な違いはなかった。全ての群において最も一般的なAEは、頭痛であり、穏やかまたは適度な性質として分類され、注射部位の反応は穏やかな性質として分類された。用量応答は調べなかった。重篤な有害事象SAE、または重篤と分類されるAEは、研究の間に生じなかった。研究の薬物に起因する臨床的に有意な効果は、血液学、生化学、または検尿値については見られなかった。研究の薬物に起因する臨床的に有意な効果は、生命徴候パラメーター収縮期血圧、最小血圧、パルス、酸素飽和度については見られなかった。研究の薬物に起因する臨床的に有意な効果は、温度および重量については見られなかった。分類上のECG測定およびデジタル化したECGパラメーターについては、化合物1処置群とプラセボの間で臨床的に有意な相違は見られなかった。PCSQTc絶対値およびベースライン>60msecからのQTc変化は示されなかった。化合物1処置した群およびプラセボ群において同数の被検者が30~60msecの間のベースラインからのQTcB変化を有した。身体検査での化合物1の臨床的に有意な効果は注目されなかった。免疫学結果全ての被検者からの血清試料の評価は、05、1、および25mg/患者の服用レベルでの化合物1の単一皮下投与では、抗化合物1特異的抗体の発生を誘導しないことを示した。7人の被検者では、カットオフ以上の化合物1に対する反応を有した。これらの抗体レベルの上昇は、投与前にすでに存在した。抗体レベルの増加は、研究の再調査期間2月において観察されなかった。これらの被検者の血清を反応性抗体のアイソタイプについて解析した。被検者のうちの2人の反応は、IgMアイソタイプと関係しており、その他の2人ではIgGアイソタイプと関係した。7人のいずれも、特異的なIgE抗体を有しなかった。末梢血リンパ球PBLアッセイ法では、被検者18の50が全ての処置群と同様の分布をもつ応答者SI>2として分類されることを示した。T細胞応答は、相対的に低く、研究薬物の単一SC用量だけが投与されたことを考慮にすると、アッセイ法に使用した化合物1の処置用量または濃度と応答者非応答者の状態の間の関連性を検出することはできなかった。また、全時間にわたって応答者の状態の発病率増大の徴候は、観察されなかった。安全性の対象としての役割を果たす破傷風トキソイドTTXアッセイ法では、TTXへの反応が全ての処置群の研究期間の全体を通じて維持されたことを示し、化合物1のカプチソール登録商標溶液は、TTX復活抗原recallantigenに対する免疫応答を変化しなかったことを示す。免疫学的な知見は、研究薬物の化合物1の単一用量だけの投与の結果である。疾患活性の結果膿尿症の検尿を基礎としたベースラインと4週の間で2~10ポイントのSLEDAIスコアの変化が記録された05mgの処置群の1人の被検者以外、研究の間にSLEDAIスコア≧3の変化、≦12ポイントに対する化合物1の臨床的に有意な効果は、注目されなかった。この検尿での知見では、研究者によってプロトコル定義あたりの狼蒼炎とは確認されず、治療の変化なしで解決した。結論このIa相研究では、05、1、または25mgの化合物1の120mgのカプチソール登録商標溶液の単一皮下注射用量が安全かつ十分に通用することを示し、Ib相の多回投与研究に継続することができる。実施例9:第Ib相の臨床研究化合物1のカプチソール登録商標溶液のSLE被検者の皮下注射の耐容性および安全性を評価するための、第一相の、多施設の、二国の、無作為化した、二重盲検、プラセボ対象の、単一用量の、4腕研究この研究は、SLE患者に対する化合物1の反復sc投与の安全性および耐容性を評価するために行われる。本研究の第2の目的は、被験者における化合物1のカプチソール登録商標溶液の反復sc投与に続く免疫応答を評価することである。化合物1は、05、10、または25mgの用量のカプチソール登録商標溶液で与えられる。研究の製品は、合計12回のsc注射の間一日おきに週末を除く、すなわち4週間で1週につき3用量が投与される。投薬の開始後、2、4、8、および12週で予定されている来診予定で被検者をモニターする。安全性および耐容性は、上記の第Ia相臨床研究に記載したのと同様の試験を使用して評価する。結果この第Ib相研究では、05、1、または25mgの化合物1の120mgのカプチソール登録商標溶液の複数皮下注射用量は、安全で、かつ十分に耐容性あることを示す。実施例10:SLE患者および健常対照者におけるペプチドIa、IIa、およびIIIaに対する抗体、並びに抗1616Id抗の検出。ヒトSLE患者32人の患者の血液を抜き、彼らの血清を、これらがペプチドIa、IIa、およびIIIa、対象ペプチドp195212PCT公開番号WO9400148に記載されている筋無力症myasthogenicのペプチド、またはmAb5G12に結合する能力をELISAによって試験した。抗体の検出は、10μg/mlのペプチドIa、IIa、IIIa、p195212、またはmAb5G12で被覆したプレート上で、PBS中において2時間行い、洗浄して、1卵白アルブミンのPBS溶液でさらに2時間ブロックした。ELISAは、ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトIgGポリクローナル抗体を使用してPCT国際公開番号9630057の実施例2の遮断の後の記載の通りに続けた。図7に示したとおり、SLE患者は、健常対照者と比較してペプチドIa白四角、IIa白ダイヤモンド、IIIa白丸、またはmAb5G12白三角のいずれかと結合する抗体の優位に高いレベルを示したペプチドIa健常者黒ダイヤモンド;ペプチドIIa健常者場交差した丸;ペプチドIIIa健常者逆さ白三角;5G12健康者半分が黒い四角。患者または対照者の血清のいずれにかを関係ないペプチド195212で被覆したプレート上で試験したときは、結合を観察することができなかったp195212SLE交差した正方形;p195212健康者半分黒いダイヤモンド。結果は、全部の抗体分子とCDRに基づいたペプチドとの間に抗体価レベルでの相互関係を示す。実施例11:ヒト166IdmAbおよびペプチドの存在下におけるSLE患者および健常対照者からのPBLの増殖末梢血液リンパ球PBLをSLE患者または健常対照者の血液からフィコール勾配を使用して単離した。その後、試料をIL2測定のために採取したときに、PBLを種々の濃度のペプチドIaIIa、またはIIIa、またはヒト166IdmAbの存在下において24時間インキュベートした。アッセイは、合計7日間連続して行い、3Hチミジンを最後の16時間添加した。増殖は、細胞のDNAに組み込まれた放射能の量を読み込んで検出した。表14に見られるように、SLE患者から採取されたPBLでは、健常対照者と比較したときに、より低い比率がペプチドと、または166IdmAbと反応した。結果は、応答者の割合第1ラインの34および実際の患者数32人のうちの11人:1132で現してある。次の実施例に示すように、ペプチドまたは166IdmAbの存在下においてPBLによって産生されるIL2のレベルを試験したときに、同様の結果が得られた。表14。mAb166IdおよびペプチドIaIIIaの存在下におけるSLE患者および健常対照者に由来するPBLの増殖。実施例12。mAb166Idおよびペプチドの存在下におけるSLE患者および健常対照者のPBLによるIL2の生産。PBLをSLE患者または健常対照者の血液からフィコール勾配を使用して単離し、実施例11に記載のようにインキュベートした。50μlの試料をアッセイ開始から24時間後に取り除き、IL2感受性細胞CTLDの存在下において24時間インキュベートし、その後に3Hチミジンを16時間添加して、プレートを集めてβカウンターで計数した。表14のように、表15からも、SLE患者から採取したPBLでは、健常対照者と比較したときに、より低い比率がペプチドと、または166IdmAbと反応したことを見ることができ、したがって、ペプチドに対する反応は、病原性のヒト自己抗体に対する患者のT細胞のものに対応することを示している。表15:mAb166IdおよびペプチドIaIIIaの存在下におけるSLE患者および健常対照者のPBLによる産生。実施例13ヒトペプチドhCDR1およびhCDR3の合成。ヒトhCDR1SEQIDNO:6およびhCDR3SEQIDNO:7を以下に示してある。GYYWSWIRQPPGKGEEWIGhCDR1YYCARGLLRGGWNDVDYYGMDVhCDR3。ペプチドは、当該技術分野において周知の方法によって、たとえばtブチルオキシカルボニルtBoc、フルオレニルメトキシカルボニルFmoc、または本質的に記載されていたとおりのその他のαアミノ酸保護基法に関する製造業者のプロトコルを用いて、自動化されたシンセサイザを使用して化学的固相または溶液相合成によって調製したたとえば、PeptidesSynthesisStructureandApplicationsedByBGutteAcademicPress1995PeptideSynthesisProtocolsedbyMPenningtonandBDunnHumanaPress1994SchnolzerMetalInsituneutralizationinBocchemistrysolidphasepeptidesynthesisRapidhighyieldassemblyofdifficultsequencesIntJPeptProteinRes401801931992を参照されたい。実施例14ペプチドhCDR1およびhCDR3は、ヒト166IdmAbに対するSLE患者のPBLの増殖反応を阻害する。SLEを伴った62人の患者、9人の男性145および53人の女性855が研究に参加した。診断時の平均年齢は、3295±1292範囲12~61歳であり、平均追跡調査期間は、1098±1076範囲132年であった。全ての患者は、米国リウマチ学会ACRのSLEに関する改正診断基準のうちの少なくとも4つを満たしたTanEMetalArthritisRheum251271771982。患者は、3か所のsraeliMedicalCentersKaplanRehovotIchilovTelAvivAsafHarofehRishonLezionから動員した。疾患活性は、SLEDAI狼蒼活性度指数に従って決定したBombardierCetalArthritisRheum35630401992。36人の性および年齢がマッチした健常対照者ボランティアの対照群もSLE患者と同時に研究した。研究は、医療センターの倫理委員会によって承認された。ヒト166IdmAbのCDR1およびCDR3に基づいたペプチドhCDR1およびhCDR3が、ヒト166IdmAbに対するSLE患者のPBLの特異的な増殖反応を阻害することができるかどうかを調査することに興味が持たれた。この目的のためには、本発明者らは、最初に、ヒト166IdmAbによって刺激されて増殖することができるPBL応答者の患者を同定しなければならなかった。従って、62人の継続性SLE患者のPBLをヒト166Idの存在下において培養し、これらの増殖反応およびIL2を分泌する能力を判定した。試験したSLE患者の合計6239のうち24人のPBLおよび5542の人のうちの23人のPBLが、それぞれ増殖によってSI≧2、2~56の範囲、およびIL2分泌によってSI≧2、2~60の範囲応答した。SLE患者群の応答者の頻度は、対象として試験した健常なドナー群で観察されるよりも低かった。従って、合計3658の人の健常なドナーのうちの21人のPBLが、166Idに対する増殖によって応答した。増殖の範囲SIレベルは、166Idに応答したSLE患者および健常対照者について同様であった。しかし、図8に示すように、対照ドナーのPBLの166Idに対する最適な反応は、SLE患者と比較してより高い濃度の166Idで観察された。166Idに応答したSLE患者の性および年齢と非応答者の患者群との間の相違は、証明することができなかった。しかし、PBLが166Idに応答して増殖した患者は、より短い期間だけ病気であった応答者および非応答者について、それぞれ平均9788±836年、対1173±1206年;P0036。表16には、SLE患者の166Id応答者および非応答者群の臨床的な特性付けを要約してある。表で分かるように、両群とも、大部分のSLEに関連した臨床症状が同様であった。SLE病活性スコアSLEDAIおよびSLE診断基準の数も2つの群において同様であった。それにもかかわらず、非応答者の群と比較して、より高い頻度の神経病学的発作および精神病および血液学的な関与およびより低い割合の腎臓の関与が、患者の応答者群において示された。しかし、おそらく関連したサブグループの患者数が少ないために、上記の違いは、統計学的有意差に達しなかった。そのうえ、研究時にステロイドまたは細胞障害性薬剤で処置したものの間は、比較的少ない応答者患者で決定した。今までにステロイドを受けていなかった患者が、非応答者群と比較して166Idに応答したことは、注目に値する54対21;P0023。166Idに対する健常なドナーのPBLの増殖反応を阻害するCDRに基づいたペプチドの有効性が、SLE患者のPBLについて観察されたものよりも低かったことは、注目に値する図示せず。表16。SLE患者の臨床的および検査上の特性付け。臨床関与がACR改訂基準にしたがって定義された。抗核抗体ANAおよび抗dsDNA抗体は、それぞれHep2細胞およびクリチジアルシリアエCrithidialuciliaeによって決定した。抗リン脂質の抗体APLAは、以下の1つまたは複数のアッセイ法の活性として定義した:偽陽性VDRL、狼蒼抗凝固薬LAC、または抗カルジオリピン抗体に対するELISA。†抗マラリア薬のヒドロキシクロロキンは、200~400mg/日の用量で使用し;ステロイド治療は、1日量:5mgプレドニゾンとして定義し;使用した細胞障害性薬剤は、シクロホスファミド075~10g/m2;月、またはアザチオプリン100~150mg/日であった。‡応答者および非応答者のSLE患者の2つの群の違いに対して傾向が観察された観察されたパラメーター。ペプチドhCDR1およびhCDR3がヒト166IdmAbに対するSLE患者のPBLの増殖反応を阻害する能力を試験するために、SLE患者のPBL2×105/ウェルをインビトロにおいて種々の濃度の01~20μg/ウェル166IdmAbで3回、ペプチドhCDR1およびhCDR350または100μg/ウェルの非存在下または存在下で刺激した。インキュベーションの6日後、3Hチミジン05μCiの5Cimmolをそれぞれのウェルに添加し、さらに18時間インキュベーションした。次いで、細胞を集めて、βカウンターで放射活性を計数した。結果は、3回の培養の平均毎分放射能数cpmとして現した。次いで、刺激指数166Idのない平均cpmに対する最適濃度の166Idを伴った時の平均cpmの比率を算出した。刺激指数SI>2を養成と見なした。合計62人39のSLE患者のうちの24人のPBLでは、166IdmAbに対する増殖が見いだされた。ペプチドhCDR1およびhCDR3が166Id自己抗体の全分子に対する増殖反応を阻害する能力を19人の応答者SLE患者のPBLで試験した。表17は、これらの実験の結果を示す。増殖能力の50以上の阻害を養成と見なした。表は、それぞれのペプチドについて最も養成の阻害能力を表す。試験した19人の応答者の中で、ヒトhCDR1およびhCDR3がそれぞれ1619842および1519789のPBLの増殖を阻害したことが分かる。両方のペプチドとも、試験した応答者の181995のPBLの増殖を阻害した。また、表において、阻害の大きさが両ペプチドで同じであったことが分かる。従って、ヒト166IdmAbのCDR1およびCDR3に基づくペプチドは、ヒト166IdmAbに対するSLE患者のPBLの増殖の効率的な阻害剤であると結論づけることができる。表17ペプチドhCDR1およびhCDR3によるSLE患者のPBLの増殖の阻害。実施例15hCDR1およびhCDR3の阻害能力の特異性hCDRに基づいたペプチドの阻害作用は、SLEに関連した反応に特異的であることを証明することが重要である。このために、ペプチドhCDR1またはhCDR3を分裂促進因子の植物性血球凝集素PHA、2μgmlで刺激したSLE患者のPBLの培養液に添加した。1人のSLE患者のPBLで行ったこのような実験の結果を図9に示してある。ペプチドhCDR1およびhCDR3は、分裂促進因子PHAに対するPBLの増殖反応cpmで現してあるを阻害することができず、増殖反応は、hCDR1またはhCDR3のいずれかの非存在下黒いカラムまたは存在下においても同様に高かった。別の実験では、SLE患者のPBLの培養液をヒト166IdmAbで刺激してヒトペプチドhCDR1またはhCDR3と共に、または対照としてペプチドIIIaと共にインキュベートした。1人のSLE患者のPBLによって行ったこのような実験の結果を図10に示してある。図10に示すように、ヒト自己抗体を主成分としたペプチドhCDR1およびhCDR3は、ヒト166IdmAbに対するPBLの増殖反応を効率的に阻害したが、マウスの抗体のCDR3に基づくペプチドmCDR3すなわちペプチドIIIaは、増殖を阻害しなかった。2つのさらなる対照ペプチド、すなわち逆向きで合成したペプチドのIaおよびIIIaプチドをこれらの実験に使用し、結果を図11に示してある。2つの逆向きのペプチドは、ヒト166IdmAbに対するSLE患者のPBLの増殖反応を有意に阻害することができなかったが、hCDR1およびhCDR3は、効率的に増殖を阻害することが分かり、ヒトhCDRに基づいたペプチドによる増殖の阻害がペプチドに対して、およびSLEに関連したT細胞応答に対して特異的であることを証明している。実施例16ペプチドhCDR1およびhCDR3Itの存在下におけるSLE患者のPBLによるIL2の分泌のダウンレギュレーションhCDRペプチドが、ヒト166IdmAbによる刺激に続くSLE患者のPBLによるIL2分泌を阻害することができるかどうかを見いだすことは興味が持たれた。また、このような阻害は、ヒトCDRに基づいたペプチドがIL2分泌をダウンレギュレートすることによって部分的に少なくとも166IdmAbに対する増殖反応を阻害することを示唆するかもしれない。この目的のために、SLE患者のPBLをペプチドhCDR1またはhCDR3の非存在下または存在下でヒト166IdmAbと共にインキュベートした。培養上清を48時間のインキュベーション後に収集した。上清中のIL2のレベルを決定するためのアッセイ法は、CTLLIL2依存的な株を使用して行った。簡単には、CTLL株化細胞2×104/ウェルを種々の上清の存在下において24時間インキュベートし、さらに18時間インキュベーション期間のための3Hチミジンを添加した。次いで、細胞を集め、放射活性をβカウンターを使用して計数した。結果は、標準として使用した組換えヒトIL2に基づいて算出した。ヒト166Idによって刺激した23人の応答者のPBLのIL2分泌をペプチドが阻害する能力を試験した。結果は、表18に要約してあり、hCDR1およびhCDR3は、それぞれ2123および1923の患者のPBLによるIL2の分泌を阻害した。PBLの増殖反応の阻害は、CDRに基づいたペプチドによるIL2阻害と直接相関した。従って、IL2分泌の阻害は、増殖の阻害を判定した全例において観察された。図12に示した1人のSLE患者のPBLで得られた結果IL2の分泌は、pgmlで現してあるは、hCDR1およびhCDR3の両者が、ヒト166IdmAbによってトリガーされるSLE患者のPBLによるIL2分泌を100阻害したことを示す。表18。hCDR1およびhCDR3によるIL2分泌の阻害実施例17CDRに基づいたペプチドによる免疫抑制性サイトカインTGFβ分泌のアップレギュレーションヒトCDRに基づいたペプチドがヒトモノクローナル抗DNA166Id抗体に対する増殖反応を阻害する機構についての光を注ぐための試みとして、細胞培養上清中の免疫抑制性サイトカインTGFβのレベルを決定した。これらの実験の陰にある正当性は、ヒト抗DNA166IdmAbで誘導されたか、またはマウスCDRに基づいたペプチドでの処置後の自然発生的なNZBxNZWF1マウスSLEとのマウス脾細胞の培養における高レベルのTGFβの本発明者らの以前の知見に基づいているEilatEetalProcNatlAcadSciUSA9811482001。TGFβレベルの上昇は、処置マウスの疾患徴候の改善と相関した。このために、ペプチドhCDR1もしくはhCDR3の非存在下または存在下でヒト166IdmAbと48時間インキュベーションした後に上清を種々のSLE患者のPBLの培養液から取り出した。TGFβの存在は、製造業者の説明書に従ってELISAによって決定した。簡単には、MaxisorbプレートNuncをPBS100ng/mlに希釈した組換えヒトTGFβsRII/FcキメラRDSystemsでを被覆した。ブロッキング後に、細胞上清を添加した。18時間のインキュベーション後に、検出用ビオチン化抗ヒトTGFβ抗体RDSystemsを添加した。使用した基質溶液は、TMBColourReagentHelixDiagnosticsであり、酵素活性は、MRXELISAリーターによって570nmおよび630nmフィルターを使用して評価した。結果を表19に要約してある。図13の結果は、ペプチドhCDR1およびhCDR3が、病原性ヒト166IdmAbで刺激された1人の代表的なSLE患者のPBLによるTGFβの分泌pgmlで現したの有意なアップレギュレーションをトリガーしたことを証明する。表19hCDR1およびhCDR3ペプチドでの、SLE患者のPBLの166Id誘導刺激のTGFβ分泌のアップレギュレーション。実施例18MMP9の活性はしかし、MMP2ではなく、SLE患者の血清において上昇する本実施例では、本発明者らは、40人のSLE患者の血清中のMMP9およびMMP2レベルを決定し、本発明者らは、MMP9しかし、MMP2ではない活性は、健常対照者と比較してSLE患者の血清において有意に上昇していることを証明する。高いMMP9活性は、円板状の発疹の存在、レーノー現象、間質性肺炎、粘膜の潰瘍、および抗リン脂質抗体APLAの存在と相関した。加えて、MMP9レベルの上昇は、男性患者群のSLE活性と相関した。材料および方法患者。SLEの32人の女性および8人の男性の40人の患者がこの研究に参加した。全ての患者は、米国リウマチ学会ACRのSLEに関する改正診断基準のうちの少なくとも4つを満たしたTanEMetalArthritisRheum251271771982。25人の性および年齢がマッチした健常ボランティアは、本発明者らの研究の対照群として仕えた。診断時の患者の平均年齢は、29±97範囲15~48歳であり、平均追跡調査期間は11±10範囲1~32年であった。疾患活性は、SLEDAI狼蒼活性度指数Bombardieretal1992およびBILAG指数HayEMetalQJMed86447581993に従って決定した。研究は、カプラ医療センターKaplanMedicalCenterRehovotIsraelの倫理委員会によって承認された。活性アッセイ法キットによるMMP2およびMMP9の測定。MMP2およびMMP9の活性は、特異的なBiotrakMMP2またはMMP9活性アッセイキットによって、製造業者の説明書に従って測定したAmershamPharmaciaBiotechUKLimitedUK。MMP2およびMMP9活性の決定のために、血清をそれぞれ1:100および1:32に希釈した。適切な標準をそれぞれのアッセイ法に加えた。MMPsの総含量を測定するために、MMPsのプロ形態の活性化をpアミノ酢酸フェニル水銀アセテートAPMAを使用して行った。MMP2およびMMP9活性のゲル酵素電気泳動法による測定。MMP2およびMMP9活性は、ゼラチン酵素電気泳動法によって試験した。5μlの血清試料を1mgmlのゼラチンと重合した8のSDSPAGEゲルによって分離した。ゲルを25のトリトンX100中で30分間一度洗浄してSDSを除去し、50mMのトリスHCl、200mMのNaCl、10mMのNaCl2、および002w/vのBrij35pH75を含む反応緩衝液中の30分間一度洗浄した。反応緩衝液を新しいものに交換、ゲルを37°Cで24時間インキュベートした。05のクーマシーブリリアントブルーで染色することによってゲラチン融解活性をゲルを視覚化し、濃度測定によって定量化した。統計解析。データは、カイ二乗またはフィッシャー正確試験Fisherexacttests、不対t検定、および両側P値を使用して評価した。ピアソン、スピアマン、および多変量解析も使用した。実施例18iMMP9の活性は、SLEで上昇するが、MMP2では上昇しない上記およびPCT国際公開番号WO02067848に記載されているように、MMP9は、いくつかの自己免疫疾患に、並びにSLEの動物モデルに関与していることが示された。従って、本発明者らは、MMP9がまた、SLE患者の血清中で上昇するかどうかを研究することに興味を持たれた。このために、本発明者らは、40人のSLE患者の血清、および25人の健常対照者の血清を、MMP9およびMMP2活性を視覚化することができるゲル酵素電気泳動法によって検査した。代表的なゲルを図14に示してある。この図で分かるように、MMP9レベルは、健常対照者と比較したときに、SLE患者の血清で上昇する。40人のSLE患者および25人の健常対照者の血清の酵素電気泳動像での濃度測定の解析では平均MMP9活性は、、SLE患者について109±56濃度測定ユニットであり、健常対照者について765±42濃度測定ユニットP00001であった。85濃度測定ユニット以上の活性値を高いとみなした健常対照者2seの平均。結果は、SLE患者の68において高活性レベルのMMP9を示した。3の健常対照者のみが、高いMMP9活性を示したP0001。同じ血清試料中のMMP2レベルの濃度測定の解析により、SLE患者と健常対照者の血清間のMMP2活性の違いが有意であることが明らかとなった。したがって、健常対照者およびSLE患者について、それぞれ109±7および123±5を決定した平均活性の濃度測定ユニット±seP00531。さらに血清中のMMP9およびMMP2の活性レベルを定量化するために、本発明者らは、活性アッセイキットを使用した。図15は、MMP9の活性が健常対照者の血清と比較してSLE患者の血清において三倍に上昇すること、およびこの上昇は、統計学的に有意であることP00302を示す。対照的に、2つの群間のMMP2のレベルの相違は有意ではないP01254。本発明者ら、並びにその他EbiharaIetalAmJKidneyDis32544501998EbiharaIetalNephron831691999は、おそらく酵素の保持によるために、非SLE慢性腎不全たとえば、糖尿病、高血圧症の患者の血清中に高MMP9レベルを検出し、本発明者らは、MMP9のレベルと試験したSLE患者群の腎機能との間の相互関係を解析した。クレアチニン濃度とMMP9レベルの間に相互関係は観察されずr2001、SLE患者での高レベルのMMP9は、じん臓機能障害による酵素の保持の結果ではなかったことを示している。実施例18ii臨床的および検査上のパラメーターとMMP9活性の相関SLE患者の血清中のMMP9の活性レベルの上昇は、臨床的および検査上のパラメーターと血清MMP9レベルとの間に相互関係がある可能性があるように本発明者らには見えた。それぞれの臨床症状表20について高いおよび正常なMMP9レベルを有する患者数を調査することによって、並びに一定の臨床症状の有し、または有さない患者について実際のMMP9の平均活性レベルを考慮することによって、統計解析カイ二乗またはフィッシャー正確試験を行った。結果は、両解析で同じであった。全ての臨床症状について、MMP9レベルが上昇した患者のパーセントが、健常対照者の群におけるよりも高いことは、注目に値する。MMP9のレベルは、性、疾患の期間、またはその発症年齢と相関しなかったピアソン、スピアマン。表20は、SLE患者の、これらのMMP9活性レベルより低い、または健常対照者正常と同等に従った臨床的および検査上の特徴を示す。高レベルのMMP9は、レイノー現象P00138およびAPLAP0041の存在と有意に相関した。間質性肺炎、円板状の発疹、神経疾患、および粘膜の潰瘍で強い相互関係を観察することができた。しかし、後の徴候を有する患者の数は、統計解析を行うには少なすぎた。多変量解析により、レイノー現象および低い補体C3、C4レベルが高いMMP9レベルと明らかに相関されることが明らかになったそれぞれ、P00001および00137。対照的に、感光性、関節炎、および血液疾患は、MMP9活性レベルとネガティブに相関するそれぞれ、P00381、00014、および00065。表20高いおよび正常なMMP9活性を有するSLE患者の、彼らのMMP9レベルに従った臨床的特徴付け臨床的関与は、ACRの改訂基準に従って定義したWinchester、1996。抗核抗体ANAおよび抗dsDNA抗体は、それぞれHep2細胞およびクリチヂアルシリエCrithidialucilieを使用して決定した。抗リン脂質の抗体APLAは、以下のアッセイ法の1つまたは複数との反応性として定義した:偽陽性VDR、狼蒼抗凝固薬LAC、または抗カルジオリピン抗体に対するELISA。また、本発明者らは、男性図16Aおよび女性患者図16BのSLEDAIとMMP9活性の間の相互関係の可能性を調べた。面白いことに、相関係数は、男性に有意であり、ポジティブであったがr206333、女性に対しては、有意ではなく、ネガティブであったr200571。BILAGスコアリング系を使用しても、同様の結果が得られた。従って、MMP9活性とBILAGスコアとの間のポジティブな相関係数は、男性について観察されたがr206442、女性については有意でなかった。また、患者による種々の治療様式の使用とMMP9活性の間に相互関係が存在するかどうかを決定することも興味がもたれた。表21Aで分かるように、患者の現在の治療とMMP9活性との間に有意な相互関係はなかった。しかし、本発明者らは、彼らの疾病経過の間いつでも患者の治療に注目すると表21B、高いMMP9レベルは、細胞障害性薬82の使用と関連があった。表21SLE患者の彼らのMMP9レベルに従った治療様式実施例18iii種々の時点で個々のSLE患者から採取した血清試料中のMMP9活性の変動疾患活性は時間とともに変化するので、本発明者らは、4~6年の追跡調査の間に試料を採取した個々患者の血清中のMMP9およびMMP2の活性レベルを測定した。種々の時点で採取した9人の患者の血清を解析した。MMP2のレベルは、患者と健常対照者との間で有意な変化はなかった。試験した9人の患者農地の5人において、時間と共に個々の患者の血清試料中のMMP9活性の変化を観察することができる。2人の代表的なSLE患者の結果を図17ABに示してある。分かるとおり、MMP9活性はしかし、MMP2活性ではない、同じ患者において時間とともに変化していた。これらの変化は、SLEDAIまたはBILAG系によって定まる疾患活性指標との関連はなかった。MMP9活性の変化は、種々の時点データ示ずでサンプルを採取した5人の健常対照者の血清においては検出されなかった。その他の4人のSLE患者では、MMP9またはMMP2活性の実質的変化は観察されず、およびMMP9活性レベルは、個々患者に応じて高または低いままであった。考察本研究は、初めてヒトSLEにおけるMMP9の関与を証明する。本発明者らは、それを示すMMP9の活性しかし、MMP2ではないが、健常対照者と比較して、68のSLE患者の血清において有意に上昇する。高いMMP9レベルは、レイノー現象、間質性肺炎、神経疾患、円板状の頻出、およびAPLAの存在と相関される。MMP9活性の変化は、疾患の異なる段階で、同じ患者の血清で観察された。MMP9活性レベルは、女性患者では疾患活性度指数SLEDAI、BILAGと相関しなかったが、男性患者の群ではSLE活性と相関した。本研究は、MMP2の活性レベルがSLE患者の血清中で有意に上昇しないことを示す。これらの結果は、MMP2レベルは、SLEにおいて増大されなかったという以前の報告と適合するZuckerSJRheumatol26781999。また、MMP2のレベルは、MMP9のレベルがに健常対照者と比較した上昇したその他の病状視神経炎および多発性硬化症などにおいて恒常的かつ不変であったGijbelsKetalJNeuroimmunol4129341992PaemenLetalEurJNeurol155631994。MMP3は、SLE患者の血清においてかなり増大されたので、さらなるMMP、すなわちMMP3の関与がSLEの発症において示唆された。KotajimaLetalClinExpRheum164094151998。本実施例で示した高いMMP9活性のSLE患者の頻度68は、SLE76における、およびRA82患者における高いMMP3について報告された頻度と似ているKotajimaetal1998。さらに、MMP3転写物は、NZBxNZWF1マウスの腎炎の進行と共に増大することが示されたNakamura、Tetal、Clin科学85:2953011993。SLE患者の血清中の高いMMPsの起源は、既知でない。MMP9は、T細胞、好中球、およびマクロファージなどの末しょう血液細胞によって分泌されることが示された総説についてはGoetzlEJetalJImmunol156141996を参照されたい。患者のMMP9活性レベルと末しょう血液細胞の数との間に相互関係が見いだされたでなかったという事実は、MMP9が末梢血免疫細胞によって分泌されるのではなく、むしろ腎臓または肺/胸膜などのSLEによる影響を受ける器官によって分泌されることを示唆するであろう。間質性肺炎を伴った全てのSLE患者が高いMMP9レベルを示したという観察は、高いMMP9活性の供与源としての病気にかかった肺を示唆するであろう。そのうえ、SLEに関連した器官障害の重篤さを表す細胞障害性の治療と血清中の高レベルのMMP9との間の関連も、病気の器官がSLE患者におけるMMP9活性の供与源であるという概念を支持する。それにもかかわらず、より少ない末梢血リンパ球が、より高いMMP9の活性レベルを分泌したという可能性もなおも存在する。TNFαおよびIL1は、両方ともヒト疾患におけるSLEの病原において重要な役割をはたすことが示されたDeanGSetalAnnRheumDis59243512000、およびマウスのモデルにおいて、SegalRetalJImmunol1583009161997TheofilopoulosANetalAnnRheumDis58suppl149551999Eilatetal2001。これらのサイトカインがMMP9生産を誘導することが、いくつかの系において示されておりGuedezLetalCritRevOncogenesis72052251996、したがって、後者のMMPの誘導は、SLEにおけるこれらのサイトカインの病原性の効果の一部であるのかもしれない。健康な個体の末梢血単球によって自発的に分泌されるMMP9のレベルは、TNFαおよびIL1に対する暴露によってアップレギュレートされることが報告されたSarenPetalJImmunol1574159651996。加えて、T細胞およびマクロファージのMMPは、膜結合型の形態の切断によって分泌型のTNFαを促進するGearingAJHetalNature37055571994。従って、これらの実施例は、炎症誘発性のサイトカインに対するMMPの相互の調整効果およびその逆を証明する。それにもかかわらず、数人の患者の血清では、MMP9の活性レベルが追跡期間の間にも正常範囲のままであったが、高い活性レベルのMMP9が大部分の患者の血清で測定されたという事実は、後者の調節に遺伝的要因が関与することを示唆しているであろう。本明細書の結果は、MMP9がSLEの発生において役割を果たすかもしれないこと、およびMMP9活性を妨げる薬物によって治療された患者をモニターするときに、このメタロプロテイナーゼの血漿/血清の活性レベルの測定が重要な情報を提供するであろうことを示す。