単一アミノ酸ラセミ化を有するポリペプチドの2つの形態を分離するための方法であって、溶出条件下で、ラセミ化されたアミノ酸残基のpKaから1pHユニット以下であるpHで塩濃度を増大することによる溶出を含むイオン交換クロマトグラフィープロセスであることを特徴とする方法。2つのポリペプチドAXおよびAXを分離するための方法であって、式中、Xは、Lアミノ酸であり、AXは、アミノ酸Xを含むポリペプチドであり、Xは、XのD異性体であり、AXは、アミノ酸Xを含むが、その他はAXと同一であるポリペプチドであり、前記方法は、溶出条件下で、XのpKaから1pHユニット以下であるpHで塩濃度を増大することによる溶出を含むイオン交換クロマトグラフィープロセスであることを特徴とする方法。単一アミノ酸ラセミ化を有する2つのポリペプチドAXおよびAXを分離するための方法であって、式中、Xは、Lアミノ酸であり、AXは、アミノ酸Xを含むポリペプチドであり、Xは、XのD異性体であり、AXは、アミノ酸Xを含むが、その他はAXと同一であるポリペプチドであり、前記方法は、溶出条件下で、XのpKaから1pHユニット以下であるpHで塩濃度を増大することによる溶出を含むイオン交換クロマトグラフィープロセスであることを特徴とする方法。前記方法が、前記ポリペプチドを調製用スケールで分離するためのものである、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。溶出が、結合のために使用されるpHと実質的に同様であるpHで行われる、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。ポリペプチドの結合が、溶出条件下で、XのpKaから約05pHユニット以下であるpHで行われる、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。前記溶出が、前記ポリペプチドの等電点より高いpHで行われる、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。前記ポリペプチドが、約10kDa未満の分子量を有する、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。溶出剤が有機モディファイアーを含む、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。溶出剤が、前記ポリペプチドを可溶性に保つために十分な濃度で有機モディファイアーを含む、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。前記有機モディファイアーがエタノールである、請求項9~10のいずれか1項に記載の方法。前記有機モディファイアーが2プロパノールである、請求項9~10のいずれか1項に記載の方法。前記有機モディファイアーがアセトニトリルである、請求項9~10のいずれか1項に記載の方法。前記有機モディファイアーがメタノール、1プロパノール、およびヘキシレングリコールからなる群より選択される、請求項9~10のいずれか1項に記載の方法。前記有機モディファイアーの濃度が、約20~約70または約30~約65など、約10~約80である、請求項9~14のいずれか1項に記載の方法。前記塩が、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、および酢酸カリウムからなる群より選択される、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。XがN末端またはC末端アミノ酸残基である、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。XがLヒスチジンである、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。Xがヒスチジンのアミノ酸類似体である、請求項1~17のいずれか1項に記載の方法。Xが脱アミノヒスチジン、2アミノヒスチジン、βヒドロキシヒスチジン、ホモヒスチジン、αフルオロメチルヒスチジン、およびαメチルヒスチジンからなる群より選択される、請求項19に記載の方法。Xが、N末端アミノ酸残基である、請求項19または20に記載の方法。Xが、Lフェニルアラニンである、請求項1~17のいずれか1項に記載の方法前記ポリペプチドがグルカゴン様ペプチドである、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。前記ポリペプチドが、グルカゴン、グルカゴン類似体、グルカゴンの誘導体、またはグルカゴン類似体の誘導体である、前述の請求項のいずれか1項に記載の方法。前記ポリペプチドが、GLP1、GLP1類似体、GLP1の誘導体、またはGLP1類似体の誘導体である、請求項23に記載の方法。前記GLP1類似体が、Arg34GLP1737、Gly8GLP1736アミド、Gly8GLP1737、Val8GLP1736アミド、Val8GLP1737、Val8Asp22GLP1736アミド、Val8Asp22GLP1737、Val8Glu22GLP1736アミド、Val8Glu22GLP1737、Val8Lys22GLP1736アミド、Val8Lys22GLP1737、Val8Arg22GLP1736アミド、Val8Arg22GLP1737、Val8His22GLP1736アミド、Val8His22GLP1737、Val8Trp19Glu22GLP1737、Val8Glu22Val25GLP1737、Val8Tyr16Glu22GLP1737、Val8Trp16Glu22GLP1737、Val8Leu16Glu22GLP1737、Val8Tyr18Glu22GLP1737、Val8Glu22His37GLP1737、Val8Glu22Ile33GLP1737、Val8Trp16Glu22Val25Ile33GLP1737、Val8Trp16Glu22Ile33GLP1737、Val8Glu22Val25Ile33GLP1737、Val8Trp16Glu22Val25GLP1737、これらの類似体、およびこれらのいずれかの誘導体からなる群より選択される、請求項25に記載の方法。請前記GLP1の誘導体またはGLP1類似体の誘導体が、1つのリジンなどのリジン残基を有し、親油性置換基が、任意にスペーサーを介して前記リジンのイプシロンアミノ基に付着されている、請求項25に記載の方法。前記親油性置換基が、8~40炭素原子、好ましくは8~24炭素原子、たとえば12~18炭素原子を有する、請求項27に記載の方法。前記スペーサーが存在し、かつアミノ酸、たとえばβAla、LGlu、またはアミノブチロイルから選択される、請求項27~28のいずれか1項に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、DPPIV保護されたグルカゴン様ペプチドである、請求項23~29のいずれか1項に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、血漿安定グルカゴン様ペプチドである、請求項23~30のいずれか1項に記載の方法。前記GLP1類似体の誘導体が、Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737である、請求項25に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、22~40アミノ酸残基、好ましくは26~36アミノ酸残基、さらに好ましくは29~33アミノ酸残基を有する、請求項24~32のいずれか1項に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、GLP2、GLP2類似体、GLP2の誘導体、またはGLP2類似体の誘導体である、請求項23に記載の方法。前記GLP2の誘導体またはGLP2類似体の誘導体が、1つのリジンなどのリジン残基を有し、かつ親油性置換基が、任意にスペーサーを介して前記リジンのイプシロンアミノ基に付着されている、請求項34に記載の方法。前記親油性置換基が、8~40炭素原子、好ましくは8~24炭素原子、たとえば12~18炭素原子を有する、請求項35記載の方法。前記スペーサーが存在し、かつアミノ酸、たとえばβAla、LGlu、アミノブチロイルから選択される、請求項35~36のいずれか1項に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、27~39アミノ酸残基、好ましくは29~37アミノ酸残基、さらにより好ましくは31~35アミノ酸残基を有する、請求項34~37のいずれか1項に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、Lys17Arg30GLP2133またはArg30Lys17NεβAlaNαヘキサデカノイルGLP2133である、請求項23または34に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、Gly2GLP2133である、請求項23または34に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドが、exendin4、前exendin4類似体、exendin4誘導体、またはexendin4類似体の誘導体である、請求項23に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドがexendin4である、請求項41に記載の方法。前記グルカゴン様ペプチドがZP10、すなわちHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKKNH2である、請求項41に記載の方法。前記exendin4の誘導体またはexendin4類似体の誘導体が、アシル化されたペプチドまたはペグ化されたpegylatedペプチドである、請求項41に記載の方法。前記exendin4の誘導体またはexendin4類似体の誘導体が、1つのリジンなどのリジン残基を有し、かつ親油性置換基が、任意にスペーサーを介して前記リジンのイプシロンアミノ基に付着されている、請求項41に記載の方法。前記親油性置換基が、8~40炭素原子、好ましくは8~24炭素原子、たとえば12~18炭素原子を有する、請求項45に記載の方法。前記スペーサーが存在し、かつアミノ酸、たとえばβAla、LGlu、アミノブチロイルから選択される、請求項45~46のいずれか1項に記載の方法。前記ポリペプチドがインスリンペプチドである、請求項1~22のいずれか1項に記載の方法。前記インスリンペプチドが、ヒトインスリン、ヒトインスリン類似体、ヒトインスリンの誘導体、またはヒトインスリン類似体の誘導体である、請求項48に記載の方法。前記インスリンペプチドがヒトインスリンである、請求項49に記載の方法。前記ヒトインスリン類似体が、AspB28ヒトインスリン、LysB28ProB29ヒトインスリン、LysB3GluB29ヒトインスリン、GlyA21ArgB31ArgB32ヒトインスリン、およびdesB30ヒトインスリンからなる群より選択される、請求項49記載の方法。前記ヒトインスリンの誘導体または前記ヒトインスリン類似体の誘導体が、1つのリジンなどのリジン残基を有し、かつ親油性置換基が、任意にスペーサーを介して前記リジンのイプシロンアミノ基に付着されている、請求項49に記載の方法。前記親油性置換基が、8~40炭素原子、好ましくは8~24、たとえば12~18炭素原子を有する、請求項52に記載の方法。前記スペーサーが存在し、かつアミノ酸、たとえばβAla、LGlu、アミノブチロイルから選択される、請求項52~53のいずれか1項に記載の方法。前記ヒトインスリン類似体の誘導体が、NεB29テトラデカノイルdesB30ヒトインスリンまたはNεB29リトコロイルγグルタミルdesB30ヒトインスリンである、請求項52~54のいずれか1項に記載の方法。XがインスリンペプチドのB鎖の位置1のLフェニルアラニンである、請求項48~55のいずれか1項に記載の方法。以下の工程を含む方法によって製造されるポリペプチド産物:a請求項1~56のいずれか1項に記載の方法を使用してポリペプチドを精製する工程と、および、b前記ポリペプチドを単離して生じるポリペプチド産物を得る工程。以下の工程を含む方法によって調製される薬学的組成物:a最初に、請求項1~56のいずれか1項に記載の方法を使用してこれらのポリペプチドまたは前駆体を精製する工程と、b次いで、前記ポリペプチド乾燥する工程と、および、c最後に、薬学的に許容される賦形剤と混合する工程。実施例1Arg34GLP1737は、他に記載されているとおりに国際公開公報第9808871号従来の組換え技術によって酵母Scerevisiaeで発現した。次いで、発酵ブロス中のArg34GLP1737を従来の逆相クロマトグラフィーによって精製し、その後ペプチドの等電pHで、すなわちpH54で沈殿した。沈殿を遠心分離によって単離した。もう一つのRPLC精製工程および等電沈殿に続いて、Arg34GLP1737ペプチドを国際公開公報第0055119号に記載されたとおりにアシル化し、GLP1誘導体Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737を得た。05g/LのArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の混合物をpH80で調製した。ポリペプチドの純度は、約90であった約5のDHis変異体ヒスチジンの位置7、すなわちペプチドのN末端がDヒスチジン残基にラセミ化されたDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737、と5はその他の不純物。混合物を、陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して精製する。0005カラム体積CVの混合物を、10CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciences陰イオン交換体カラムに加えた。カラムを3CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、20CVにわたって0~20mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて10CVにわたって20~50mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって40CV/hおよび温度25°Cであった。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例220gLγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH8の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製した。06CVの混合物を5CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80で平衡化した47mlのPoros20HQPerseptiveBiosystems陰イオン交換体カラムに加えた。カラムを6CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、12CVにわたって0~50mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて20CVにわたって50~80mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって90CV/hおよび温度40°Cであった。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例305gLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製する。01CVの混合物を、10CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciences陰イオン交換体カラムに加える。カラムを3CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、20CVにわたって0~20mMのNaCl、20mMのHEPES、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて10CVにわたって20~50mMのNaCl、20mMのHEPES、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって20CV/hおよび温度25°Cである。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例405gLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製する。01CVの混合物を、10CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciences陰イオン交換体カラムに加える。カラムを3CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、20CVにわたって0~20mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて10CVにわたって20~50mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって80CV/hおよび温度25°Cである。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例505gLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製する。01CVの混合物を、10CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciences陰イオン交換体カラムに加える。カラムを3CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、20CVにわたって0~20mMの酢酸ナトリウム、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて10CVにわたって20~50mMのCH3COOH、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって40CV/hおよび温度25°Cである。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例605gLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製する。01CVの混合物を、10CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciences陰イオン交換体カラムに加える。カラムを3CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、20CVにわたって0~10mMのNa2SO4、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて10CVにわたって10~20mMのNa2SO4、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって80CV/hおよび温度25°Cであった。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例720gLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製した。その後、試料を約13DHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737でスパイクした。0015カラム床体積CVの混合物を、5CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciences陰イオン交換体カラムに加えた。溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、12CVにわたって0~20mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて8CVにわたって20~50mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって48CV/hおよび温度25°Cであった。クロマトグラムを図1に示してある。実施例845ggLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製した。07CVの混合物を20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80を5CVで平衡化した152mlのSource30QPerseptiveBiosystems陰イオン交換体カラムに加えた。カラムを2CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、12CVにわたって0~23mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第1の勾配、続いて20CVにわたって23~30mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH80の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって20CV/hおよび温度25°Cであった。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例950ggLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製した。06CVの混合物を5CVの20mMのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH75で平衡化した118mlのSource30QPerseptiveBiosystems陰イオン交換体カラムに加えた。カラムを1CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、12CVにわたって0~20mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH75の第1の勾配、続いて20CVにわたって20~40mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH75の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって20CV/hおよび温度25°Cであった。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例1050gLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製した。06CVの混合物を5CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70で平衡化した118mlのSource30QPerseptiveBiosystems陰イオン交換体カラムに加えた。カラムを1CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、12CVにわたって0~15mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70の第1の勾配、続いて20CVにわたって15~40mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって20CV/hおよび温度25°Cであった。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例1150gLArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737のpH80の混合物は、実施例1に記載したとおりに調製した。06CVの混合物を5CVの20mmのトリヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH85で平衡化した118mlのSource30QPerseptiveBiosystems陰イオン交換体カラムに加えた。カラムを1CV平衡溶液で洗浄し、溶出は、2種の直線的な塩濃度勾配、12CVにわたって0~20mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH85の第1の勾配、続いて20CVにわたって20~40mMのNaCl、20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH85の第2の勾配で行った。フローは、実験の全体にわたって20CV/hおよび温度25°Cであった。実験の間に、カラムからの溶出液を分画し、各々の画分を、それぞれDHis7Arg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737およびArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の含量について解析した。データは、ペプチドのDHis変異体がArg34Lys26NεγGluNαヘキサデカノイルGLP1737の前に溶出し、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例12LHis1Exendin4およびDHis1Exendin4は、固相合成によって調製した。2つの混合物は、1g/Lの濃度にpH92で10mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタンにペプチドを溶解することによって調製した。1CVのこの混合物を、10CVの10mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciences陰イオン交換カラムに充填した。カラムを1CVの10mMトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70で洗浄し、20CVにわたって10mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70でアイソクラチカルにisocratically溶出を行った。フローは、実験の全体にわたって138CV/hおよび温度25°Cであった。溶出図3は、Exendin4のLHis形態が、Exendin4のDhis形態よりも早く溶出され、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。実施例13L17KK30RGLP2133は、GLP1ペプチドについて国際公開公報第9808871号に記載されたものと同じ方法で従来の組換技術によって酵母Scerevisiaeに発現させた。次いで、発酵ブロス中のL17KK30RGLP2133を従来のインイオン交換および逆相クロマトグラフィーによって精製し、その後、ペプチドの等電pHで、すなわちpH4で沈殿させた。沈殿物を遠心分離によって単離した。DHisL17KK30RGLP2133は、固相合成によって調製した。2つの混合物は、1g/Lの濃度にpH92で10mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタンにペプチドを溶解することによって調製した。1CVのこの混合物を、5CVの20mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70で平衡化した1mlのモノQAmershamBiosciencesアニオン交換カラムに充填した。カラムを1CVの20mMトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70で洗浄し、溶出は、20CVにわたって0~63mMまでのNaClの20mMトリスヒドロキシメチルアミノメタン、63w/wエタノール、pH70溶液の勾配とした。フローは、実験の全体にわたって138CV/hおよび温度25°Cであった。溶出は、L17K、K30RGLP2133のDHis形態は、L17KK30RGLP2133のLhis形態よりも早く溶出され、したがって、ペプチドの2つの形態を分離することができることを示した。