"式Iの化合物または薬学的に許容可能なその塩:I式中、Aは、―CH=CHR、―CH=CH―CH=CHR又は―CH2CH2Rであり、ここで、Rは、―CH3、―CH2SH、―CH2S―Cn式中、nは1、2、3、4、5又は6である、―CH2―カルボキシル、カルボキシル、式中、R10はC1―C6アルキルである、又は、式中、R11=C1―C6アルキルであるである;Bは、-CH2CH3、1―ヒドロキシエチル、イソプロピル又はn―プロピルであり;Cは、イソブチル、2―ヒドロキシイソブチル又は1―メチルプロピルであり;Dは、―CH3又は―CH2OHであり;R1及びR2は、同一若しくは異なるものであり、これらは、水素若しくはC1―C4アルキルをそれぞれ表すか、又は、合わせてC3―C7シクロアルキルを表し;Xは、硫黄、又は、―SOn式中、nは1若しくは2であるであり;R3は、水素、直鎖又は分枝のC1―C6アルキル、直鎖又は分枝のC2―C6アルケニル、直鎖又は分枝のC2―C6アルキニル、C3―C7シクロアルキル、窒素、酸素及び硫黄から選択される1から3個のヘテロ原子を有するC4―C7ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、CHR’m―NH―CNH2NH、CHR’m―COOH、CHR’m―NHR、CHR’m―NHCOR式中、mは、1、2、3、4、5又は6であって、それぞれのR’は、独立して、水素、直鎖若しくは分枝のC1―C6アルキル、直鎖若しくは分枝のC2―C6アルケニル、直鎖若しくは分枝のC2―C6アルキニル、C3―C7シクロアルキル、窒素、酸素及び硫黄から選択される1から3個のヘテロ原子を有するC4―C7ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、又は、不在であって、Rは、-CHR’pNCH32、-CHR’pNHCOC、-CHR’pNHCOOHであり、式中pは、0、1、2、3、4、5又は6であるであり、ここで、R3は、C1―C6アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシカルボニル、カルボキシル、シクロアルキル、または、飽和又は部分的に不飽和の、窒素、酸素及び硫黄から選択された1から3個のヘテロ原子を有する5から6員ヘテロシクリルの、同一又は異なる1つ以上の基によって置換されてもよく、このヘテロシクリルは、C1―C6アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミジノ、グアニジン又はウレアの1つ以上の基によって、置換されていてもよい。[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―4―ピリジルエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―メチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―ペンチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―アミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{R―2―アミノ―2―カルボメトキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―ジメチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―4―メチルピペリジニルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―モルホリノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―カルボメトキシメチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―カルボメトキシエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{S―2―アミノ―2―カルボメトキシ―1,1―ジメチル―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{R―2―アミノ―2―カルボヒドロキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―カルボヒドロキシメチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{S―2―アミノ―2―カルボヒドロキシ―1,1―ジメチル―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―カルボヒドロキシエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―グアニジノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[メチレン―Sar]3シクロスポリンA、[ジヒドロ―MeBmt]1[メチレン―Sar]3シクロスポリンA、[メチレン―Sar]3シクロスポリンD、[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[ジヒドロ―MeBmt]1[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンD、[S―2―4―ピリジルエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―メチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―ペンチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―アミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{R―2―アミノ―2―カルボメトキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―ジメチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2-4―メチルピペリジニルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―モルホリノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―カルボメトキシメチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{S―2―アミノ―2―カルボメトキシ―1,1―ジメチル―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―N―イミダゾリルエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―N―ピラゾリルエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―ジエチルアミノ―1,1―ジメチル―エチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―モルホリノ―1,1―ジメチル―エチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―3―ジエチルアミノプロピルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―3―モルホリノ―プロピルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―メルカプトメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―アリルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{R―2―アミノ―2―カルボヒドロキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―カルボヒドロキシメチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―{S―2―アミノ―2―カルボヒドロキシ―1,1―ジメチル―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―カルボヒドロキシエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―グアニジノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンAヒドロクロリド、[S―2―ジエチルアミノエチル―1―スルフィニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[ジヒドロ―MeBmt]1[S―2―ジエチルアミノエチル―1―スルフィニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―3―ジエチルアミノプロピル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―3―モルホリノプロピル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―4―メチルピペリジニル―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―ジエチルアミノ―1,1―ジメチル―エチル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―モルホリノ―1,1―ジメチル―エチル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―3―4―オキシ―モルホリン―4―イル―プロピル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―3―カルボキシプロピオニルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―4―カルボキシブチリルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―アセチルアミノ―アセチルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、[S―2―ジメチルアミノ―アセチルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンA、及び、任意の前記化合物の薬学的に許容しうるこれらの塩からなる群から選択される、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは1―ヒドロキシエチルであり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bはイソプロピルであり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bはn―プロピルであり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cは1―メチルプロピルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH2OHである、請求項1に記載の化合物。Aは―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cは2―ヒドロキシイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項1に記載の化合物。R3が、CHR’m―NH―CNH2NH、CHR’m―COOH、CHR’m―NHR、またはCHR’m―NHCOR式中、mは、1、2、3、4、5又は6であり、からなる群から選択され、それぞれのR’は、独立して、水素、直鎖若しくは分枝のC1―C6アルキル、直鎖若しくは分枝のC2―C6アルケニル、直鎖若しくは分枝のC2―C6アルキニル、C3―C7シクロアルキル、窒素、酸素及び硫黄から選択される1から3個のヘテロ原子を有するC4―C7ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、又は、不在であり、Rは、-CHR’pNCH32、-CHR’pNHCOC又は-CHR’pNHCOOH式中、pは、0、1、2、3、4、5又は6であるである、からなる群から選択される、請求項3から9のうちのいずれかに記載の化合物。mは1、2又は3であり、それぞれのR’は、独立して、水素又は不在であり、Rは、pが0、1又は2の、-CHR’pNCH32、-CHR’pNHCOC又は-CHR’pNHCOOHである、請求項10に記載の化合物。化合物が、単独、又は、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされて存在する、請求項1から10のうちのいずれか一項に記載の化合物の少なくとも1つを含む医薬組成物。化合物が、単独、又は、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされて存在する、請求項1から10のうちのいずれか一項に記載の化合物の少なくとも1つを含む医薬組成物であって、前記組成物中の前記化合物の濃度が、約0.01から約0.05重量である、医薬組成物。ドライアイ、眼瞼炎、マイボーム腺疾患、アレルギー結膜炎、アトピー性角結膜炎及び春季カタル、翼状頸、対宿主性移植片病の眼の症状、眼アレルギー、アトピー性角結膜炎、春季カタル、ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、ベーチェット病、スティーブンスジョンソン症候群、眼部瘢痕性類天疱瘡、ウイルス感染によって引き起こされる慢性眼表面炎症、単純ヘルペス角膜炎、眼酒さ及び結膜脂肪斑から選択される症状を治療するため、角膜移植拒絶反応を防止するため、および角膜又は眼の他の表面の手術により損なわれた角膜感度を回復するため、の方法であって、請求項1から10のうちのいずれか一項に記載の化合物を哺乳類に投与すること、及び、請求項11又は12に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。前記哺乳類がヒトである、請求項13に記載の方法。式IIIの化合物、あるいは薬学的に許容可能なその塩:III式中、Aは、―CH=CHR、又は―CH2CH2Rを表し;ここで、Rは、―CH3、-CH2S-Cn’、―CH2SH式中、nは1から6である、―CH2―カルボキシル、カルボキシル、アルコキシカルボニル又は―CH2―アルコキシカルボニルを表し;Bは、-CH2CH3、1―ヒドロキシエチル、イソプロピル又はn―プロピルを表し;Cは、イソブチル、2―ヒドロキシイソブチル又は1―メチルプロピルを表し;Dは、―CH3又は―CH2OHを表す。Aは、―CH=CHCH3であり、Bは―CH2CH3であり、Cはイソブチルであり、及び、Dは―CH3である、請求項13に記載の化合物。式IIIの化合物の製造方法であって、III式中、Aは、―CH=CHRまたは―CH2CH2Rを表し、ここで、Rは、―CH3、―CH2SH、CH2S-Cn’式中、nは1から6である、―CH2―カルボキシル、カルボキシル、アルコキシカルボニル又は―CH2―アルコキシカルボニルを表し;Bは、-CH2CH3、1―ヒドロキシエチル、イソプロピル又はn―プロピルを表し;Cは、イソブチル、2―ヒドロキシイソブチル又は1―メチルプロピルを表し;Dは、―CH3又は―CH2OHを表す、前記方法が、式IIの化合物:II式中、A、B、C及びDは、上で定義した通りであるを、―78°Cから―70°Cの範囲の温度で、強塩基と反応させ、続いて―70°Cから15°Cの間で二酸化炭素ガス流下で処理し、―50°Cから室温の間で過剰クロロぎ酸クロロメチルによって処理し、その後0°Cから室温で該反応混合物を酢酸により反応停止させて、式IIIの化合物を生成することを含む、製造方法。前記強塩基が、リチウムジイソプロピルアミドである、請求項16に記載の方法。本発明は、以下の式Iの新規化合物及び薬学的に許容しうるこれらの塩に関する。I請求項に記載の式Iの新規化合物は、Cs骨格の3位アミノ酸サルコシンのα炭素への修飾の結果として生じ、Cs骨格は、本明細書で使用するとき、1つ以上の置換基A、B、C及びDの性質が互いに異なるシクロスポリン例えば、CsA、CsC、CsD、等を意味する。換言すると、Cs骨格は、3位アミノ酸のα炭素での部分を除いた、式Iの新規化合物を意味する。A、B、C及びDは、以下の通り、定義される。Aは、―CH=CHR、―CH=CH―CH=CHR又は―CH2CH2Rを表し、式中、Rはa―CH3、b―CH2SH、c―CH2S―Cn、式中n=16、d―CH2―カルボキシル、すなわち、eカルボキシル、すなわち、fアルコキシカルボニル、すなわち、式中、R10=C1―C6アルキル、又はg―CH2―アルコキシカルボニル、すなわち、式中、R11=C1―C6アルキル、を表す。Bは、-CH2CH3、又は、1―ヒドロキシエチル、すなわち、イソプロピル、すなわち、若しくは、n―プロピル、すなわち、を表す。Cは、イソブチル、すなわち、2―ヒドロキシイソブチル、すなわち、又は、1―メチルプロピル、すなわち、を表す。Dは、―CH3又は―CH2OHを表す。本発明の一実施形態では、式IAで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。IA別の実施形態では、式IBで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは1―ヒドロキシエチル、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。IB別の実施形態では、式ICで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bはイソプロピル、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。IC別の実施形態では、式IDで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bはn―プロピル、Cはイソブチル、及び、Dは―CH3である。ID別の実施形態では、式IEで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cは1―メチルプロピル、及び、Dは―CH3である。IE一実施形態では、式IFで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cはイソブチル、及び、Dは―CH2OHである。IF一実施形態では、式IGで以下に示されるように、Aは―CH=CHCH3、Bは―CH2CH3、Cは2―ヒドロキシイソブチル、及び、Dは―CH3である。IG別の実施形態では、可変部分が、以下にまとめたようになる。式Iでは、さまざまなタイプのシクロスポリン骨格のアミノ酸に、1から11までの数字で表したラベルがつけられる。一実施形態では、本発明の修飾は、Cs骨格の位置3のアミノ酸3位のサルコシンのα炭素で生じる。この修飾は、式Iの一部の、位置3のアミノ酸のα炭素での、水素原子の置換を一般に含み、式中、R1及びR2は、同一若しくは異なる、水素若しくはC1―C4アルキルをそれぞれ表し、又は、合わせてC3―C7シクロアルキルを表す;Xは、硫黄、又は、―SOnを表し、ここでnは1若しくは2である;R3は、水素、直鎖又は分枝のC1―C6アルキル、直鎖又は分枝のC2―C6アルケニル、直鎖又は分枝のC2―C6アルキニル、C3―C7シクロアルキル、窒素、酸素及び硫黄から選択される1から3個のヘテロ原子を有するC4―C7ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、CHR’m―NH―CNH2NH、CHR’m―COOH、CHR’m―NHR、CHR’m―NHCORを表し、式中、mは、1、2、3、4、5又は6であり、それぞれのR’は、独立に、H、直鎖若しくは分枝のC1―C6アルキル、直鎖若しくは分枝のC2―C6アルケニル、直鎖若しくは分枝のC2―C6アルキニル、C3―C7シクロアルキル、窒素、酸素及び硫黄から選択される1から3個のヘテロ原子を有するC4―C7ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、又は、不在このような場合、-CHR’mは―CH―CHなどの不飽和部分を表すことができるであり;Rは、pが0、1、2、3、4、5又は6の、-CHR’pNCH32、-CHR’pNHCOC、-CHR’pNHCOOHであり;R3は、C1―C6アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシカルボニル、カルボキシル、シクロアルキル、飽和又は部分的に不飽和の、窒素、酸素及び硫黄から選択された1から3個のヘテロ原子を有する5から6員ヘテロシクリルの、同一又は異なる1つ以上の基によって置換されていてもよく、このヘテロシクリルは、C1―C6アルキル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミジノ、グアニジン又はウレアの1つ以上の基によって、置換されていてもよい。化合物の実施例式Iの実施形態としては、以下の式Iの化合物位置3のアミノ酸のα炭素の部分のみが示される波線は式IのCs化合物の残りを表すが挙げられるが、これらに限定されない。本発明は、また、式Iの化合物調製のために有用な新規中間体に関する。新規中間体は、以下の式IIIの化合物である。III式中のA、B、C及びDは、上記の通り、定義される。以下は、式IIIの非限定的な実施形態である。式III化合物の実施例1[メチレン―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1214.8、MNa1236.8すべてのNMRデータは、選択された診断用のプロトンを示す。1HNMRCDCl3、ppmδ4.98d、1H、オレフィンCH2、5.25d、1H、オレフィンCH2、7.17d、1H、アミドNH、7.52d、1H、アミドNH、7.59d、1H、アミドNH、7.85d、1H、アミドNH。13CNMRCDCl3、ppmδ143.96オレフィンC、108.09オレフィンCH2。本発明は、また、式IIIの化合物の製造方法に関する。この方法には、式IIの化合物を、II式中、A、B、C及びDは、上で定義した通りである、強塩基例えば、リチウムジイソプロピルアミド又は他の強塩基と、―78°Cから―70°Cの範囲の温度で反応させて、続いて―70°Cと15°Cの間で二酸化炭素ガス流下で処理し、―50°Cと室温の間で過剰クロロぎ酸クロロメチルによって処理してから、0°Cから室温で酢酸によって反応混合物を急冷することにより、式IIIの化合物を生成するステップが含まれる。定義アルキルとは、1から6個の炭素原子を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、メチル、エチル、プロピル例えば、1―プロピル、イソプロピル、ブチル例えば、1―ブチル、イソブチル、sec―ブチル、tert-ブチル、ペンチル例えば、1―ペンチル、ネオペンチル及びヘキシル例えば、3―ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニルとは、2から6個の炭素原子及び1つ以上の二重結合を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、エテニル、プロペニル及びブテニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニルとは、2から6個の炭素原子及び1つ以上の三重結合を有する一価の直鎖又は分枝鎖状の炭化水素基を意味する。例としては、エチニル、プロピニル及びブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキルとは、3から6個の炭素原子を有する一価の飽和又は部分的に不飽和な、環状の炭化水素基を意味する。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクリルとは、3から6個の環原子を有する一価の飽和又は部分的に不飽和な、環状の炭化水素基を意味し、環原子の少なくとも1つが、窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子である。ラジカルは、炭素又はヘテロ原子にある。例としては、モルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラニル及びピラゾリニルが挙げられるが、これらに限定されない。アリールとは、一価の5から7員芳香族炭化水素基を意味する。例としては、フェニルが挙げられるが、これに限定されない。ヘテロアリールとは、窒素、硫黄及び酸素から選択される1つ以上のヘテロ原子を有した一価の5から7員芳香族炭化水素基を意味する。例としては、イミダゾリル、ピリジニル、フリル、ピリミジニル及びピラジニルが挙げられるが、これらに限定されない。前記のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリール基は、本明細書で説明される1つ以上の置換基によって、独立して置換されてもよい。アミノとは、―NH2又はアミドゲン基を意味する。モノアルキルアミノとは、―NHR ́基を意味し、式中、R ́は本明細書で定義されるアルキル、アルケニル、アルキニル及びシクロアルキルを表す。ジアルキルアミノとは、―NRR ́基を意味し、式中、R及びR ́は、独立して、本明細書で定義されるアルキル、アルケニル、アルキニル及びシクロアルキルを表す。ハロゲンとは、ブロモ、クロロ、フルオロ又はヨードを意味する。ヒドロキシルとは、―OH基を意味する。カルボキシとは、以下の基を意味する。アルコキシカルボニルとは、以下の基を意味する。式中、Rは、本明細書で定義されるアルキルを表す。アミジノとは、以下の基を意味する。グアニジノとは、以下の基を意味する。ウレアとは、以下の基を意味する。薬学的に許容しうる塩とは、化合物に対する生物学的効果を保持した、毒性がないか又はその反対に薬学的な使用に対して有害な、本出願で請求される化合物の任意の塩を意味し、これらの塩は、当該技術分野において公知の有機及び無機対イオンから誘導可能である。合成実施例本発明を以下の非限定的な合成実施例によって説明する。特記に明記しない限り、以下の化学的な略語が、合成例で使用される。DMF:ジメチルホルムアミドDIPEA:ジイソプロピルエチルアミンMe:メチルTHF:テトラヒドロフランi―Pr:イソプロピルn―Bu:n―ブチル請求される、式Iの化合物のための、Cs骨格を備えた出発物質は、当該技術分野において利用可能な合成スキーム及び試薬を使用して調製することができ、商業的な供給業者から獲得してもよい。本発明の新規化合物の合成のために使用する試薬も、商業的な供給業者から獲得することができる。実施例1:[メチレン―Sar]3シクロスポリンAジイソプロピルアミン11.2ml、80mmolの乾燥THF240ml溶液に、窒素雰囲気下―78°Cで、n―ブチルリチウムヘキサン中2.5M、32ml、80mmolを滴加し、―78°Cで60分間攪拌した。乾燥シクロスポリンA2×40mlのトルエンと共に共沸によって乾燥させ、続いてP2O5の存在下でデシケータに保たれた9.6g、8.0mmolの乾燥THF40ml溶液を加え、同じ条件で2時間攪拌した。温度を―50°Cへ増加させながら、二酸化炭素流を、30分間、反応混合物に通気した。得られる混合物を、2時間かけて15°Cに昇温させて、その後再度―50°Cまで冷却し、その後、クロロぎ酸クロロメチル7.1ml、80mmolを添加した。該反応混合物を、一晩室温まで温めた後、0°Cに冷却して、酢酸5ml、88mmolを添加した。混合物を、室温に昇温させて、溶媒を蒸発させてから、酢酸エチルとブラインの間を分配した。有機相を、分離して、乾燥させNa2SO4、濃縮して、黄色油を得た。100ジエチルエーテル→96ジエチルエーテル/4メタノールの溶媒勾配を使用したMPLCクロマトグラフィによって、粗生成物を精製し、[メチレン―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1214.8、MNa1236.81HNMRCDCl3、ppmδ4.98d、1H、オレフィンCH2、5.25d、1H、オレフィンCH2、7.17d、1H、アミドNH、7.52d、1H、アミドNH、7.59d、1H、アミドNH、7.85d、1H、アミドNH。13CNMRCDCl3、ppmδ143.96オレフィンC、108.09オレフィンCH2。同様の手段で、以下の化合物が調製された。[ジヒドロ―MeBmt]1[メチレンSar]3シクロスポリンAESMSMH1216.8、MNa1238.81HNMRCDCl3、ppmδ7.18d、1H、アミドNH、7.52d、1H、アミドNH、7.57d、1H、アミドNH、7.75d、1H、アミドNH[メチレン―Sar]3シクロスポリンD。ESMSMH1228.8、MNa1250.81HNMRCDCl3、ppm7.17d、1H、アミドNH、7.59d、1H、アミドNH、7.63d、1H、アミドNH、7.89d、1H、アミドNH。実施例2:[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA[メチレン―Sar]3シクロスポリンA0.232g、0.19mmolのアセトニトリル15ml溶液に、炭酸カリウム0.523g、3.8mmolを加え、白色懸濁液に、窒素を1時間通気した後に、ジエチルアミノエチルチオ塩酸塩0.322g、1.9mmolを添加した。溶媒を蒸発させながら、一晩窒素を反応混合物に通気した。アセトニトリル15mlを加え、白色懸濁液を硫酸ナトリウムパッドで濾過した後、濃縮して315mgの無色油を得た。超音波条件下、ヘキサンで粉砕し、溶液のデカンテーションをして、240mgの白色固体を得た。100ジエチルエーテル→95ジエチルエーテル/5メタノール、それから100ジエチルエーテルの溶媒勾配、続いて、100ジエチルエーテル→90ジエチルエーテル/10の水性のアンモニア0.88を含有した10メタノールの第2溶媒勾配を使用したMPLCクロマトグラフィによる精製により、[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAを獲得した。ESMSMH1347.91HNMRCDCl3、ppmδ0.693H、d0.77―1.0743H、m1.093H、d、1.18―1.4110H、m、1.41―1.8210H、m、1.93―2.185H、m、2.33―2.462H、m、2.534H、q、2.60―2.726H、m、2.992H、brd、3.103H、s、3.183H、s、3.276H、s、3.503H、s、NMe、3.581H、brd、3.671H、q、4.521H、m、4.601H、t、4.821H、m、4.93―5.084H、m、5.101H、d、5.26―5.393H、m、5.511H、dd、5.691H、dd、7.161H、d、アミドNH、7.361H、d、アミドNH、7.681H、d、アミドNH、8.131H、d、アミドNH。同様の手段で、以下の化合物が調製された。[ジヒドロ―MeBmt]1[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1350.01HNMRCDCl3、ppmδ7.171H、d、アミドNH、7.371H、d、アミドNH、7.711H、d、アミドNH、8.101H、d、アミドNH。[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンDESMSMH1361.91HNMRCDCl3、ppmδ7.161H、d、アミドNH、7.491H、d、アミドNH、7.721H、d、アミドNH、8.161H、d、アミドNH。実施例3:[S―2―4―ピリジルエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1354.01HNMRCDCl3、ppmδ7.14d、2H、ピリジン、7.18d、1H、アミドNH、7.31d、1H、アミドNH、7.70d、1H、アミドNH、8.17d、1H、アミドNH、8.54d、2H、ピリジン。実施例4:[S―メチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1262.8、MNa1284.81HNMRCDCl3、ppmδ2.20s、3H、SMe、7.18d、1H、アミドNH、7.36d、1H、アミドNH、7.70d、1H、アミドNH、8.15d、1H、アミドNH。実施例5:[S―ペンチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1318.6、MNa1340.61HNMRCDCl3、ppmδ7.15d、1H、アミドNH、7.37d、1H、アミドNH、7.67d、1H、アミドNH、8.15d、1H、アミドNH。実施例6:[S―2―アミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1291.71HNMRCDCl3、ppmδ7.18d、1H、アミドNH、7.35d、1H、アミドNH、7.67d、1H、アミドNH、8.15d、1H、アミドNH。実施例7:[S―{R―2―アミノ―2―カルボメトキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1349.61HNMRCDCl3、ppmδ3.78s、3H、COOMe、7.15d、1H、アミドNH、7.33d、1H、アミドNH、7.69d、1H、アミドNH、8.15d、1H、アミドNH。実施例8:[S―2―ジメチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1319.561HNMRCDCl3、ppmδ2.25s、6H、NMe2、7.17d、1H、アミドNH、7.35d、1H、アミドNH、7.68d、1H、アミドNH、8.15d、1H、アミドNH。実施例9:[S―2―4―メチルピペリジニルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1345.61HNMRCDCl3、ppmδ2.29s、3H、NMe、7.17d、1H、アミドNH、7.33d、1H、アミドNH、7.69d、1H、アミドNH、8.17d、1H、アミドNH。実施例10:[S―2―モルホリノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1361.81HNMRCDCl3、ppm7.17d、1H、アミドNH、7.35d、1H、アミドNH、7.69d、1H、アミドNH、8.19d、1H、アミドNH。実施例11:[S―カルボメトキシメチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1320.41HNMRCDCl3、ppmδ3.78s、3H、COOMe、7.17d、1H、アミドNH、7.32d、1H、アミドNH、7.69d、1H、アミドNH、8.15d、1H、アミドNH。実施例12:[S―カルボメトキシエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1335.051HNMRCDCl3、ppmδ3.71s、3H、COOMe、7.17d、1H、アミドNH、7.34d、1H、アミドNH、7.69d、1H、アミドNH、8.15d、1H、アミドNH。実施例13:[S―{S―2―アミノ―2―カルボメトキシ―1,1―ジメチル―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1377.41HNMRCDCl3、ppmδ3.70s、3H、COOMe、7.15d、1H、アミドNH、7.33d、1H、アミドNH、7.68d、1H、アミドNH、8.08d、1H、アミドNH。[S―2―N―イミダゾリルエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1342.71HNMRCDCl3、ppmδ6.89s,1H、イミダゾール、7.00s,1H、イミダゾール、7.10d、1H、アミドNH、7.24d、1H、アミドNH、7.48のs,1H、イミダゾール、7.60d、1H、アミドNH、8.11d、1H、アミドNH。[S―2―N―ピラゾリルエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1342.91HNMRCDCl3、ppmδ6.26dd、1H、ピラゾール、7.17d、1H、アミドNH、7.31d、1H、アミドNH、7.46d、1H、ピラゾール、7.51d、1H、ピラゾール、7.70d、1H、アミドNH、8.11d、1H、アミドNH。[S―2―ジエチルアミノ―1,1―ジメチル―エチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1375.91HNMRCDCl3、ppmδ7.161H、d、アミドNH、7.391H、d、アミドNH、7.681H、d、アミドNH、8.111H、d、アミドNH。[S―2―モルホリノ―1,1―ジメチル―エチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1389.61HNMRCDCl3、ppm7.18d、1H、アミドNH、7.38d、1H、アミドNH、7.69d、1H、アミドNH、8.14d、1H、アミドNH。[S―3―ジエチルアミノプロピルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1362.01HNMRCDCl3、ppmδ7.191H、d、アミドNH、7.371H、d、アミドNH、7.681H、d、アミドNH、8.131H、d、アミドNH。[S―3―モルホリノ―プロピルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1375.71HNMRCDCl3、ppmδ7.181H、d、アミドNH、7.331H、d、アミドNH、7.701H、d、アミドNH、8.161H、d、アミドNH。[S―メルカプトメチル―Sar]3シクロスポリンA[S―{S―2―アミノ―2―カルボメトキシ―1,1―ジメチル―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.028g、0.02mmolのメタノール3ml溶液を、19日間、50°Cまで加熱した。SCXカラム/メタノールで精製し、[S―メルカプトメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1247.91HNMRCDCl3、ppmδ7.20d、1H、アミドNH、7.26d、1H、アミドNH、7.70d、1H、アミドNH、8.24d、1H、アミドNH。[S―アリルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA[S―メルカプトメチル―Sar]3シクロスポリンA0.074g、0.06mmolのジメチルホルムアミド溶液1.5mlに、炭酸カリウム0.021g、0.15mmol及び臭化アリル0.036g、0.3mmolを加えた。懸濁液を室温で一晩攪拌し、炭酸カリウム0.021g、0.15mmol及び臭化アリル0.036g、0.3mmolを追加してから、2日をかけて攪拌した。濃縮し、ジクロロメタン存在下で残渣を超音波処理してから、続いて濾過した。ジクロロメタンを蒸発させ、100ジクロロメタン→95ジクロロメタン/5メタノールの溶媒勾配を使用したMPLCクロマトグラフィによって、残渣を精製し、[S―アリルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1288.61HNMRCDCl3、ppmδ7.18d、1H、アミドNH、7.35d、1H、アミドNH、7.70d、1H、アミドNH、8.13d、1H、アミドNH。実施例14:[S―{R―2―アミノ―2―カルボヒドロキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA[S―{R―2―アミノ―2―カルボメトキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.033g、0.024mmolのテトラヒドロフラン溶液2mlに、水酸化リチウム一水和物0.0043g、0.098mmol水溶液0.3mlを加えた。溶液を、3時間室温で攪拌した。塩酸2N、0.05ml0を加え、続いて、濃縮した。0.035Mアンモニアのメタノール溶液から0.175Mアンモニアのメタノール溶液の勾配を使用したSCXカラムで精製し、20mgの[S―{R―2―アミノ―2―カルボヒドロキシ―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1335.71HNMRCDCl3、ppmδ7.19d、1H、アミドNH、7.32d、1H、アミドNH、7.69d、1H、アミドNH、8.2d、1H、アミドNH。同様の手段で、以下の化合物が調製された。実施例15:[S―カルボヒドロキシメチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1306.61HNMRCDCl3、ppmδ7.18d、1H、アミドNH、7.35d、1H、アミドNH、7.70d、1H、アミドNH、8.17d、1H、アミドNH。実施例16:[S―{S―2―アミノ―2―カルボヒドロキシ―1,1―ジメチル―エチル}チオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1363.51HNMRCDCl3、ppmδ7.17d、1H、アミドNH、7.30d、1H、アミドNH、7.68d、1H、アミドNH、8.18d、1H、アミドNH。実施例17:[S―カルボヒドロキシエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1320.61HNMRCDCl3、ppmδ7.20d、1H、アミドNH、7.36d、1H、アミドNH、7.70d、1H、アミドNH、8.18d、1H、アミドNH。実施例18:[S―2―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA[S―2―アミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.129g、0.1mmolのクロロホルム2mlアセトン0.1ml混合溶液に、テトラメチルアンモニウムトリアセトキシボロヒドリド0.066mg、0.25mmolを加え、17時間室温で攪拌した。反応混合物を、ジクロロメタンと水に分けた。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させてからNa2SO4、白色固体を獲得するために濃縮した。100ジエチルエーテル→95ジエチルエーテル/5メタノール、それから100ジエチルエーテルの溶媒勾配、続いて、100ジエチルエーテル→96ジエチルエーテル/10の水性のアンモニア0.88を含有した4メタノールの第2溶媒勾配を使用したMPLCクロマトグラフィによる精製により、[S―2―イソプロピルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1333.01HNMRCDCl3、ppmδ1.05d、6H、2XCH3、2.84m、1H、CH、7.18d、1H、アミドNH、7.38d、1H、アミドNH、7.72d、1H、アミドNH、8.19d、1H、アミドNH。実施例19:[S―2―グアニジノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンAヒドロクロリド[S―2―アミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.055g、0.042mmolの、ジイソプロピルエチルアミン0.0072ml含有ジメチルホルムアミド0.6ml溶液に、1H―ピラゾール―1―カルボキサミジンヒドロクロリド0.0055mg、0.042mmolを加え、22時間室温で攪拌した。濃縮し、ジエチルエーテルで残渣を粉砕してから、上清のデカンテーションをして、白色固体を得た。ジクロロメタンと水に分け、続いて、有機相の分離及び濃縮をして、[S―2―グアニジノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンAヒドロクロリドを得た。ESMSMH1334.51HNMRCDCl3、ppmδ7.12d、1H、アミドNH、7.43d、1H、アミドNH、7.67d、1H、アミドNH、8.31d、1H、アミドNH。[S―2―ジエチルアミノエチル―1―スルフィニルメチル―Sar]3シクロスポリンA[S―2―ジエチルアミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.147g、0.11mmolを、トリフルオロ酢酸0.0089ml含有ジクロロメタン1mlに溶解した。5分後、溶液を濃縮してから、白色固体をアセトニトリル6mlに再溶解した。過ヨウ素酸ナトリウム0.058gの水溶液2mlを加え、懸濁液を一晩室温で攪拌した。濾過して、固体をメタノールで洗浄してから、濾液を濃縮した。残渣をトリエチルアミン0.255ml含有ジクロロメタン10mlに溶解し、続いて、1時間超音波処理した。混合物を相分離カートリッジで濾過した。有機相を濃縮し、188mgの白色固体を獲得した。100ジクロロメタン→96ジクロロメタン/10の水性のアンモニア0.88を含有した4メタノールの溶媒勾配を使用したMPLCクロマトグラフィによる精製により、[S―2―ジエチルアミノエチル―1―スルフィニルメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1363.81HNMRCDCl3、ppmδ7.191H、d、アミドNH、7.381H、d、アミドNH、7.691H、d、アミドNH、8.281H、d、アミドNH。同様の手段で、以下の化合物が調製された。[ジヒドロ―MeBmt]1[S―2―ジエチルアミノエチル―1―スルフィニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1366.81HNMRCDCl3、ppmδ7.201H、d、アミドNH、7.401H、d、アミドNH、7.711H、d、アミドNH、8.301H、d、アミドNH。[S―3―ジエチルアミノプロピル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンA[S―3―ジエチルアミノプロピルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.035g、0.026mmolを、トリフルオロ酢酸0.0021ml含有ジクロロメタン2mlに溶解した。5分後、溶液を濃縮してから、白色固体をジクロロメタン2mlに再溶解した。テトラブチルアンモニウムオキソン0.109gを加え、一晩室温で攪拌した。トリエチルアミン0.017mlで処理し、続いて、90分間攪拌してから濃縮した。100ジクロロメタン→95ジクロロメタン/10の水性のアンモニア0.88を含有した5メタノールの溶媒勾配を使用したMPLCクロマトグラフィで残渣を精製し、[S―3―ジエチルアミノプロピル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1393.91HNMRCDCl3、ppmδ7.151H、d、アミドNH、7.201H、d、アミドNH、7.651H、d、アミドNH、8.291H、d、アミドNH。同様の手段で、以下の化合物が調製された。[S―3―モルホリノプロピル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1407.51HNMRCDCl3、ppmδ7.221H、d、アミドNH、7.271H、d、アミドNH、7.751H、d、アミドNH、8.411H、d、アミドNH。[S―4―メチルピペリジニル―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1377.431HNMRCDCl3、ppmδ7.221H、d、アミドNH、7.291H、d、アミドNH、7.741H、d、アミドNH、8.401H、d、アミドNH。[S―2―ジエチルアミノ―1,1―ジメチル―エチル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1407.81HNMRCDCl3、ppmδ7.191H、d、アミドNH、7.371H、d、アミドNH、7.721H、d、アミドNH、8.301H、d、アミドNH。[S―2―モルホリノ―1,1―ジメチル―エチル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1421.61HNMRCDCl3、ppmδ7.211H、d、アミドNH、7.311H、d、アミドNH、7.751H、d、アミドNH、8.421H、d、アミドNH。[S―3―4―オキシ―モルホリン―4―イル―プロピル―1―スルフォニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1423.71HNMRCDCl3、ppmδ7.211H、d、アミドNH、7.251H、d、アミドNH、7.731H、d、アミドNH、8.351H、d、アミドNH。[S―2―3―カルボキシプロピオニルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンA攪拌した[S―2―アミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.30g、0.23mmolのジクロロメタン25ml溶液に、トリエチルアミン0.05ml、0.23mmol、続いて、スクシニルクロリド0.05ml、0.23mmolを加え、16時間室温で攪拌した。水20mlで希釈し、有機層を分離してから、乾燥しMgSO4、濾過そして真空下で濃縮した。得られた黄色固体を、溶離液としてメタノールを使用した5gのSCXカートリッジを通過させることによって、続いて、100ジクロロメタン→95ジクロロメタン/10の水性のアンモニア0.88を含有した5メタノールの極性勾配を使用したMPLCクロマトグラフィによって、精製し、[S―2―3―カルボキシプロピオニルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1391.81HNMRCDCl3、ppmδ7.191H、d、アミドNH、7.351H、d、アミドNH、7.711H、d、アミドNH、8.211H、d、アミドNH。同様の手段で、以下の化合物が調製された。[S―2―4―カルボキシブチリルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1405.81HNMRCDCl3、ppmδ7.181H、d、アミドNH、7.351H、d、アミドNH、7.691H、d、アミドNH、8.211H、d、アミドNH。[S―2―アセチルアミノ―アセチルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンA攪拌した[S―2―アミノエチルチオメチル―Sar]3シクロスポリンA0.10g、0.078mmolのジクロロメタン25ml溶液に、アセツル酸0.01g、0.084mmol及びトリエチルアミン0.01ml、0.084mmol、続いて、WSC.HCl0.022g、0.084mmolを加え、16時間室温で攪拌した。水20mlで希釈し、有機層を分離してから、乾燥しMgSO4、濾過そして真空下で濃縮した。得られた黄色固体を、溶離液としてメタノールを使用した2gのSCXカートリッジを通過させることによって、続いて、100ジクロロメタン→95ジクロロメタン/10の水性のアンモニア0.88を含有した5メタノールの勾配を使用したMPLCクロマトグラフィによって、精製し、[S―2―アセチルアミノ―アセチルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンAを得た。ESMSMH1390.821HNMRCDCl3、ppm7.201H、d、アミドNH、7.351H、d、アミドNH、7.711H、d、アミドNH、8.211H、d、アミドNH。同様の手段で、以下の化合物が調製された。[S―2―ジメチルアミノ―アセチルアミノエチル―1―スルファニルメチル―Sar]3シクロスポリンAESMSMH1376.891HNMRCDCl3、ppmδ7.19d、1H、アミドNH、7.36d、1H、アミドNH、7.71d、1H、アミドNH、8.18d、1H、アミドNH。式Iの化合物のCypA阻害力及び免疫抑制可能性を示すデータデータを得るために進められた基本手順プロテアーゼ不含PPlaseアッセイプロテアーゼ不含PPIaseアッセイは、酵素シクロフィリンAによって触媒されたペプチド基質のシスからトランスへの変換率を測定する。阻害剤の添加が触媒される速度を遅らせ、Ki値が獲得される。材料アッセイ緩衝液:0.2μmフィルタで濾過した、pH7.8のHEPES、35mM。50MのDTTを毎日使用前に加え、緩衝液を氷蔵した。酵素:ヒト組換えCypASigma社C3805酵素を、酵素希釈緩衝液pH7.8のHEPES20mM、40のグリセロール、50MのDTT及び1μMのBSAを用いて1Mに希釈し、―20°Cで保存した。基質:0.5Mのトリフルオロエタノール中のLiClで調製したSUC―AAPF―pNABachemAG社、L―140020mg/ml。方法攪拌されるキュベットの温度を10.0±0.1°Cに維持するために、キュベットホルダ、攪拌機及びチラーからなるAgilent8453Spectrophotometerを用いて、すべての測定値を獲得した。温度は、温度プローブを用いてモニターされる。検査化合物のUV劣化を防止するために、光路にガラススライドを使用して、290nm未満の光を遮断した。1.5mlのアッセイ緩衝液を3ml石英キュベットに入れ、攪拌活発だが、キャビテーションを生成するほど高速ではないしながら10.0の±0.1°Cに冷却した。阻害剤を、100のDMSOで希釈して、続いて、DMSOの最大最終濃度が分析物中0.5となるまで、分析物に添加した。空試験のスペクトルを獲得し、その後3μLの酵素を添加2nMの最終濃度してから、3μLの基質を添加60μMの最終濃度した。空試験用に、300s又は500sの間、330nmで吸光度を測定した注:混合誤差を最小にするため、1回の素早い注入で基質を添加し、直ちに測定が開始されなければならない。反応速度定数を得るために、一次反応速度式を、阻害剤のそれぞれの濃度に対する吸光度データと適合させた混合により、曲線の最初の誤差が生じるので、最初の10から15秒を除外した。触媒反応速度を、酵素反応速度定数バックグラウンド反応速度定数で算出した。阻害剤濃度に対する触媒反応速度定数を使用して、指数曲線を作成し、阻害剤に対するKi値を得た。カルシニューリンフォスファターゼCaNアッセイカルシニューリンは、活性化すると活性化T細胞の核因子NFATを脱リン酸化する、セリン―スレオニンタンパク質ホスファターゼであり、Tリンパ球の活性化において重要である。シクロフィリンACypAに結合したCsAは、カルシニューリン活性を阻害し、結果として免疫抑制効果をもたらす。CypAに結合した場合にCsAがカルシニューリンを阻害するだけでなく、いくつかのCsAアナログは、CypAの不在下でカルシニューリンを結合する。シクロスポリンアナログである、式Iの例示的な化合物の免疫抑制可能性を調べるために、カルシニューリンの活性を阻害する能力を、CypAの存在下及び不在下で測定した。使用されるCaNアッセイキットは、カルシニューリンフォスファターゼの活性を測定するための比色アッセイに基づいており、市販されているEnzoLifeScience社及びCalbiochem社。カルモジュリンもまたカルシニューリンの活性のために必要とされ、RIIリンペプチドはカルシニューリンに効力のあるペプチド基質として使用される。阻害剤との1:1の複合体にCypAを添加してCypA依存性及びCypA非依存性のカルシニューリン阻害の測定を可能にするために、我々は方法を改変した。放出された遊離リン酸塩の検出は、標準的なマラカイトグリーンアッセイに基づく。使用した材料EnzoLifeScience社、CaNアッセイキット:BML―AK8042Xアッセイ緩衝液:pH7.5のトリス100mM、200mMのNaCl、12mMのMgCl2、1mMのDTT、0.05のNP―40、1mMのCaCl2マラカイトグリーン:BIOMOLGreen商標試薬カルモジュリンヒト、組換え体:氷上で解凍して、2Xアッセイ緩衝液と1:50で希釈してから、氷蔵した。カルシニューリン:素早く解凍し、直ちに氷蔵してから、1Xアッセイ緩衝液と1:12.5で希釈し、続いて氷蔵した。RII基質:915μLの超純水UPWを、1.5mgのバイアル基質に添加して、0.75mMの最終濃度とした。阻害剤:100のDMSO中に2.5mMの阻害剤。CypA:組換え体ヒトCypASigma社C3805、1mg/ml。方法阻害剤希釈:阻害剤化合物を、ポリプロピレン低結合性96穴プレートにおいて、UPWによって、最終アッセイ濃度5xで希釈した。CypAなし試料用として、10、1、01及び0.01μMの最終アッセイ濃度を得るために、阻害剤の4点希釈列を2連で調整した。CypAあり試料用として、CypAと1:1の阻害剤の複合体を得るために、7点希釈列、つまり、10、3.33、1.11、0.37、0.12、0.04、0.014μMの阻害剤とCypAの最終アッセイ濃度を調整した。また、CsA阻害剤コントロールを、10μMのCypAありとなしで、10μMのCsAの最終濃度を得るために調整した。キットに付属の96穴プレートの半分のエリアを使用して、10μlのUPWを2つの穴に添加して、非阻害コントロールを提供する。10μlの阻害剤又は阻害剤/CypA複合体を、適切な試料用穴に加えた。25μlのCaMを有する2xアッセイ緩衝液をすべての穴に加えて、その後、5μlの1xアッセイ緩衝液を加えたカルシニューリンなしブランクの2つの穴を除く全ての穴穴当たり40Uの最終濃度に5μlのCaNを加えた。反応温度を平衡化するために、30°Cで15分間オーブンにアッセイプレートを置いた。10μlのRII―ペプチド0.15mMの最終濃度を添加して、反応を開始した。反応が線形である約60分間30°Cにて反応を進めた。続いて、100μlのマラカイトグリーン試薬を加えることによって、反応を終了させた。室温で15分から30分間で発色させた後、プレートリーダMolecularDevices―SpectraMaxM5を使用して、620nmの吸光度を測定した。すべての吸光度の記録からカルシニューリンなしブランクを減算し、Log10阻害剤濃度に対するバックグラウンド修正吸光度をプロットすることによって、データを分析した。GraphPadPrismSoftwareを使用して、データをS字応答曲線に当てはめた。混合リンパ球反応MLRアッセイMLRアッセイは、検査化合物の免疫抑制可能性を推定する別の手段である。生後6週間から8週間目のC57BL/6及びBALB/c雌マウスを、国立癌研究所のFrederickCancerResearchandDevelopmentフレデリック、メリーランド州から手に入れた。脾臓をすべてのマウスから無菌で採取して、すりガラススライドを用いて細胞を分解し、破片を沈殿させて、完全培地を用いて細胞を2回洗浄することによって、単個細胞浮遊液を調製した。完全培地は、10の熱不活化ウシ胎児血清FBS;AtlantaBiologicals社、ローレンスヴィル、ジョージア州、100μg/mLストレプトマイシン、100U/mLペニシリンG、0.25μg/mLアンフォテリシンBHyClone社、2mMのLグルタミンジペプチドHyClone社及び2×105Mの2―メルカプトエタノールシグマ社を添加した25mMのHEPES緩衝液HyClone社、ローガン、ユタ州を含有しているRPMI1640培地からなる。細胞を2回洗浄し、完全培地で再懸濁した。BeckmanCoulterZー1粒子計数器フラートン、カリフォルニア州を使用して、細胞数を計測した。細胞生存度は、AccuriC6フローサイトメーターアナーバー、ミシガン州を使用したヨウ化プロピジウムPI染色によって、決定した。C57BL/6H―2b及びBALB/cH―2dの脾細胞を、キラーR及び刺激S細胞として、それぞれ使用した。それぞれの穴が2×105個のR及び8×105個のS細胞を含有するように、細胞を、3連で96穴平底ミクロタイタープレートCostar社、ケンブリッジ、マサチューセッツ州にて培養した。該培養物を、さまざまな濃度の検査化合物、CsA又は培地の存在又は不在下で、37°Cで5日間、湿気を含む5のCO2においてインキュベートして、培養の最後の16時間、3H―チミジン3H―TdRでパルスラベルしてから、Brandel96穴細胞ハーベスタゲイザースバーグ、メリーランド州を使用して収集した。増殖は、Wallac1450MicrobetaTriLuxシンチレーションカウンタトゥルク、フィンランドのフィルターマット上の放射活性を計算することにより測定された。X線照射による効果的な失活を提示するためのコントロールは、2×105細胞/穴で5μg/mLのPHAと共にS細胞を培養することにより実施された。これらのコントロールの培養を、MLRのために説明された条件と同じ条件で3日間行った。つまり、リンパ球増殖を、上記した方法と同様に決定した。治療方法本発明の組成物は、ドライアイに苦しんでいる患者を治療するため、眼瞼炎及びマイボーム腺疾患を治療するため、角膜又は眼の他の表面の手術により損なわれた角膜感度を回復するため、アレルギー結膜炎並びにアトピー性角結膜炎及び春季カタルを治療するため、翼状頸、対宿主性移植片病の眼の症状、眼アレルギー、アトピー性角結膜炎、春季カタル、ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、ベーチェット病、スティーブンスジョンソン症候群、眼類天疱瘡、ウイルス感染によって引き起こされる慢性眼表面炎症、単純ヘルペス角膜炎、眼酒さ及び結膜脂肪斑を治療するため、および角膜移植拒絶反応を防止するために用いられてもよい。国際ドライアイワークショップDEWSは、ドライアイを不安、視覚障害、及び、眼表面への潜在的損害を伴う涙液膜の不安定の症状を引き起こす、涙液及び眼表面の多因子病。涙液膜の増加したモル浸透圧濃度及び眼表面の炎症を伴うと定義する。涙液の欠乏又は涙液の過度の蒸発によって引き起こされる乾性角結膜炎などの状態も含まれる。眼瞼炎は、皮膚、それと関係した構造毛髪及び皮脂腺、粘膜皮膚移行部及びマイボーム腺を含んだ、上及び下まぶた辺縁の炎症を引き起こす慢性疾患である。進行期には、結膜、涙液膜及び角膜面に影響を及ぼすことも可能で、ドライアイと関連する場合がある。眼瞼の睫毛を支える領域に影響を及ぼしている上部、及び、主としてマイボーム腺開口部に影響を及ぼしている下部を有する、上部又は下部眼瞼炎に、眼瞼炎は一般に分類される。マイボーム腺疾患は、ほとんどの場合、一次性マイボーム腺炎、二次性マイボーム腺炎及びマイボーム脂漏症の、3つの形のうちの1つとして生じる。マイボーム脂漏症は、炎症のない、過度のマイボーム分泌によって特徴づけられる分泌過剰マイボーム腺疾患。一次性マイボーム腺炎は、対照的に、停滞して濃化したマイボーム分泌によって特徴づけられる閉塞性分泌過剰マイボーム腺疾患。二次性マイボーム腺炎は、マイボーム腺が上部蓋辺縁眼瞼炎から二次的に、炎症を斑状に起こす限局性炎症反応を表す。角膜感度障害は、多くの場合、光反応角膜整形手術、レーザーアシスト上皮下角膜曲率形成術LASEK、EPI―LASEK、カスタマイズされた経上皮非接触切除又は角膜神経が切断される他の方法などの、屈折矯正手術の後に生じる。角膜感度障害は、HSV―1、HSV―2及びVZVウイルスなどによる、ウイルス感染の後生じる場合もある。角膜感度障害を有する患者は、涙液産生及び蒸発が正常な場合であっても、眼が乾燥すると感じると多くの場合訴える。これは、角膜神経が手術によって切断されるか又はウイルス感染の後炎症を起こす場合に生じるこのような患者の乾燥が、実際に角膜神経障害の場合があることを示唆している。アレルギー結膜炎は、1つ以上のアレルゲンに対する過敏症から生じる結膜の炎症である。これは、急性、間欠性又は慢性の場合がある。これは、季節的に、つまり年の一定の時にだけ生じるか、又は、絶え間なく、つまり年の全体にわたって慢性的に生じる。季節的及び永続的なアレルギー結膜炎の症状としては、結膜の炎症に加えて、催涙、流涙、結膜血管の拡張、痒み、乳頭状過形成、結膜水腫、眼瞼の浮腫及び眼からの分泌が挙げられる。分泌は、一晩の睡眠の後、眼の上に痂皮を形成する場合がある。アトピー性角結膜炎は、アレルギー結膜炎の慢性、重度な形で、多くの場合視覚的な障害をもたらす。症状としては、痒み、灼熱感、疼痛、発赤、異物感、光感受性及び視界不良が挙げられる。特に一晩の睡眠から目ざめると、多くの場合、分泌をし、この分泌は、粘状、糸状そして粘液状となり得る。下結膜は、多くの場合、上結膜より顕著に影響を受ける。結膜は、蒼白色、浮腫状及び特徴のない状態から、乳頭増殖、上皮下の繊維増多、結膜嚢短縮、逆さ睫毛、眼瞼内反及び睫毛禿といった、進行疾患の特徴を有する場合まで変化する。患者によっては、斑点状上皮糜爛、角膜血管新生及び視野を損なう可能性のある角膜症の他の特性にまで、疾患は進行する。通常は、結膜の杯状細胞増殖、上皮偽管形成、並びに、増加した上皮の脱顆粒した好酸球及び肥満細胞が認められる。CD25Tリンパ球、マクロファージ及び樹状細胞HLA―DR.sup.、HLA―CD1が、角膜固有質において著しく上昇する。アトピー性角結膜炎のように、春季カタルは、アレルギー結膜炎の重度な形であるが、下結膜より上結膜に顕著に影響を及ぼす傾向にある。それは、2つの型で生じる。眼瞼型では、四角で、硬質な、平らに、密接して詰め込まれた乳頭突起が現れる。眼球角膜輪部型では、角膜周囲の結膜が、肥大し、灰色がかる。両方の型とも、多くの場合、粘液様分泌物を伴う。疼痛及び羞明、場合によっては中央の角膜プラーク及びトランタス斑点を伴って、角膜上皮の喪失が生じる場合がある。ブドウ膜炎ブドウ膜の炎症は、米国の視覚障害の約10の原因となる。水晶体過敏性眼内炎は、ヒト自己免疫性疾患である。全ブドウ膜炎は、眼のすべてのブドウ膜血管層の炎症を意味する。後部ブドウ膜炎は網脈絡膜炎を一般に意味し、前部ブドウ膜炎は虹彩毛様体炎を意味する。これらの炎症の炎症産物すなわち、細胞、フィブリン、過剰タンパク質は、眼の場合には、流体空間内、すなわち、前房、後房及び硝子体空間内に一般に見いだされ、炎症反応に密に関係した組織を浸潤する。ブドウ膜炎は、眼に対する外科手術又は外傷による傷害後に、関節リウマチ、ベーチェット病、強直性脊椎炎、サルコイドーシスなどの、自己免疫疾患の構成要素として、既知の病因に関連していない、扁平部炎、虹彩毛様体炎などの、孤立した免疫介在性眼疾患として、そして、抗体抗原複合体をブドウ膜組織内に堆積させる以下の一定の全身性疾患後に、生じ得る。これらの疾患は、合わせて、非伝染性ブドウ膜炎を表す。水晶体アナフィラキシーは、水晶体が原因抗原であるブドウ膜炎の重度の形である。水晶体タンパク質は、一般に、出生前から水晶体嚢によって隔離されている。これらのタンパク質が、損傷若しくは手術によって、又は、稀に白内障発症のときに眼内に放出された場合、これらのタンパク質は抗原性が激しくなり、自己免疫反応を刺激し得る。反応が中程度である場合、慢性ブドウ膜炎とみなされる。反応が非常に早く進行する場合、眼は、すべての部分において重度の炎症を起こす。この後者の反応が、水晶体アナフィラキシーと呼ばれている。ブドウ膜炎は、ベーチェット病の顕著な特徴で、口腔及び生殖器潰瘍、皮膚、血管、関節及び神経の兆候によっても特徴づけられる多系統炎症性疾患である。酒さは、特定の原因又は治療法のない、慢性及び一般的な外皮疾患である。酒さの発生は、複数の要因があると考えられる。可能性のある要因としては、ニキビダニとの接触、胃腸疾患又は血管拡張疾患、及び、食餌又は日光などの他のトリガが挙げられる。患者は、炎症性丘疹、浮腫、毛細血管拡張、鼻瘤及び眼の症状といった、さまざまな症状を呈する。酒さの眼の兆候としては、前部眼瞼炎といった眼瞼炎、結膜炎、虹彩炎、虹彩毛様体炎、角膜炎、マイボーム腺機能不全、毛細血管拡張、紅斑、霰粒腫、麦粒腫、眼瞼間充血、結膜充血、毛様体充血、眼球充血、痂皮、スリーブ及び表面的で断続的な角膜症が挙げられる。眼の症状は非特異的で、灼熱感、流涙、涙液分泌の低下、発赤、及び、異物感又はざらつき感又は乾燥感、刺激、痒み、霧視、光線過敏、涙目、充血した眼、灼熱感、毛細血管拡張、眼瞼縁の不規則性並びにマイボーム腺機能不全が挙げられる。結膜脂肪斑は、結膜に生じる、良性の、黄褐色の増殖成長である。結膜脂肪斑は、眼の刺激及び痒み、ドライアイ、結膜の炎症を引き起こし、眼の外見に影響を与える場合がある。炎症を起こした結膜脂肪斑は、眼の刺激を引き起こすか又は見苦しくなり、外科的な除去を必要とする場合もある。しかしながら、術後の瘢痕は結膜脂肪斑と同じように美容的に好ましくなく、外科的な除去後に結膜脂肪斑再生物が生じる場合がある。同種骨髄移植BMTは、悪性及び非悪性血液病のための確立した治療で、何万もの患者に毎年実施される。幹細胞移植片中の成熟したドナーT細胞は、有益な免疫効果の主要な媒介物であるが、移植片対宿主病GVHDの誘発、BMT患者の罹患率及び死亡率の大きな原因ともなる。寛容する抗原提供細胞によって発現されたタンパク質を、移植されたドナー由来T細胞が認識するときに、GVHDは生じる。したがって、この認識は、ドナーT細胞の活性化、増殖及び分化を誘発し、結果として寛容する標的組織への細胞性及び炎症性の攻撃をもたらす。皮膚炎、腸炎及び肝炎をもたらす急性又は慢性GVHDが、BMT後100日以内に、生じる。眼の症状としては、視覚不良、異物感、灼熱感、重度の光過敏、慢性結膜炎、ドライアイ及び眼痛が挙げられる。医薬組成物本発明は、また、少なくとも1つの一般式Iの化合物を含む医薬組成物に関する。この化合物は、単独、又は、1つ以上の薬学的に許容される賦形剤と混合して存在する。薬学的に許容される賦形剤は、組成物の有効成分と両立し、医薬組成物を投与される人に有害でないものである。このような好適な賦形剤が2つ以上の混合物が、使用されてもよい。局所的な眼での適用のために、有効成分として、治療上有効量の本発明の化合物、又は、薬学的に許容されるこれらの塩を、従来の眼科学的に許容できる医薬品賦形剤と組み合わせて、局所的な眼での使用に適したユニット剤形での調製により、医薬組成物を調製することができる。治療上有効量は、通常、液体製剤中約00001から5w/vの間、好ましくは約0001から10w/vである。本発明の有効な化合物の有効量は、特定の化合物、及び、治療される状態に依存する。適切な量の選択は、十分に、当業者の知識の範囲内である。米国特許第5,474,979号は、そのすべての内容が参照により本明細書に組み込まれるが、眼科学的に許容できる医薬品賦形剤の例を提供する。この特許は、Allergan社によって製造されたRestasis登録商標、シクロスポリンA0.05で使用される賦形剤を開示する。請求される医薬組成物の治療上有効量は、式Iの化合物の不在の場合を除いて、医薬組成物と同一のプラセボ組成物と比較して治療効果を観察するために有用な濃度である。"