"基本培地、L-アスコルビン酸2-リン酸、牛胎児血清、塩基性線維芽細胞成長因子、非必須アミノ酸、インスリン、N-アセチル-L-システイン、塩化カルシウム及びヒドロコルチゾンを含有する間葉幹細胞培養用の培地組成物。前記基本培地は、DMEM-HG、DefinedKeratinocyte-SFM、及びこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする請求項1に記載の間葉幹細胞培養用の培地組成物。0.05~1mMのアスコルビン酸2-リン酸、2~20の牛胎児血清、1~100ng/mLの塩基性線維芽細胞成長因子、1~100μL/mLの非必須アミノ酸、0.1~100μg/mLのインスリン、0.2~20mMのN-アセチル-L-システイン、0.01~1mMの塩化カルシウム、及び5ng/mL~1μg/mLのヒドロコルチゾンを含有することを特徴とする請求項1に記載の間葉幹細胞培養用の培地組成物。前記非必須アミノ酸は、グリシン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン及びセリンからなることを特徴とする請求項1または請求項3に記載の間葉幹細胞培養用の培地組成物。前記非必須アミノ酸は、750mg/Lのグリシン、890mg/Lのアラニン、1,320mg/Lのアスパラギン、1,330mg/Lのアスパラギン酸、1,470mg/Lのグルタミン酸、1,150mg/Lのプロリン、及び1,050mg/Lのセリンからなることを特徴とする請求項4に記載の間葉幹細胞培養用の培地組成物。前記間葉幹細胞は、羊膜由来の間葉幹細胞であることを特徴とする請求項1に記載の間葉幹細胞培養用の培地組成物。請求項1~3のいずれか一項に記載の培地組成物において羊膜由来幹細胞を培養することを特徴とする間葉幹細胞の培養方法。前記間葉幹細胞は、羊膜由来の間葉幹細胞であることを特徴とする請求項5に記載の間葉幹細胞の培養方法。本発明の目的は、分化能を維持しながらも高い細胞増殖率を持つ間葉幹細胞培養用培養培地を提供することにある。本発明の他の目的は、前記培養培地を利用して、間葉幹細胞を培養する方法を提供することにある。前記目的を達成するために、本発明は、基本培地、L-アスコルビン酸2-リン酸、牛胎児血清、塩基性線維芽細胞成長因子、非必須アミノ酸、インスリン、N-アセチル-L-システイン、塩化カルシウム及びヒドロコルチゾンを含有する間葉幹細胞培養用の培地組成物を提供する。さらに本発明は、前記培地組成物において羊膜由来幹細胞を培養することを特徴とする間葉幹細胞の培養方法を提供する。本発明の他の特徴及び具現例は、以下の詳細な説明及び添付された特許請求範囲からより一層明白になる。一観点において、本発明は、基本培地、L-アスコルビン酸2-リン酸、牛胎児血清、塩基性線維芽細胞成長因子、非必須アミノ酸、インスリン、N-アセチル-L-システイン、塩化カルシウム及びヒドロコルチゾンを含有する間葉幹細胞培養用の培地組成物に関する。本発明において、前記基本培地は、DMEM-HG、DefinedKeratinocyte-SFM、及びこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする。本発明において、前記各培地成分の含有量は、0.05~1mMのアスコルビン酸2-リン酸、2~20の牛胎児血清、1~100ng/mLの塩基性線維芽細胞成長因子、1~100μL/mLの非必須アミノ酸、0.1~100μg/mLのインスリン、0.2~20mMのN-アセチル-L-システイン、0.01~1mMの塩化カルシウム、及び5ng/mL~1μg/mLのヒドロコルチゾンであることを特徴とする。本発明において、前記非必須アミノ酸は、グリシン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン及びセリンからなることを特徴とし、前記非必須アミノ酸は、750mg/Lのグリシン、890mg/Lのアラニン、1,320mg/Lのアスパラギン、1,330mg/Lのアスパラギン酸、1,470mg/Lのグルタミン酸、1,150mg/Lのプロリン、及び1,050mg/Lのセリンからなることを特徴とする。本発明において、前記間葉幹細胞は、羊膜由来の間葉幹細胞であることを特徴とする。他の観点において、本発明は、前記培地組成物において羊膜由来幹細胞を培養することを特徴とする間葉幹細胞の培養方法に関する。本発明において、前記間葉幹細胞は、羊膜由来の間葉幹細胞であることを特徴とする。本発明の一様態において用いられる羊膜由来間葉幹細胞は、胎盤から分離した羊膜組織全体から抽出される種々の細胞を用いるのではなく、羊膜間葉幹細胞だけを抽出して分離して用いた。本発明の一様態において、羊膜由来間葉幹細胞を分離する方法は、分娩時に集められた胎盤組織から、羊膜組織を分離し、分離した羊膜組織を滅菌生理食塩水で洗浄した後、外科用はさみでできる限り細切した。細切した組織にコラゲナーゼ溶液を入れてよく混合した後、フラスコに入れて、フラスコを37°C、5CO2インキュベーターで90分間反応させて組織を溶解させた。溶解した組織をセルストレーナーCellstrainerでろ過し、遠心分離した。遠心分離後、上澄み液を取り除いて、DMEM-Pで細胞沈殿物を懸濁させT-フラスコに播いた後、37°C、5CO2インキュベーターで3~4日間インキュベーションさせ培養容器に付着した間葉幹細胞だけを取得した。本発明の一様態で、用いられた羊膜由来間葉幹細胞は、DMEM-P培地とKSFM-P培地を各々単独で用いて培養した場合より、DMEM-P培地とKSFM-P培地を混合した培地で細胞増殖率が優秀で、特に、DMEM-P培地とKSFM-P培地を66:33で混合した培地で最も高い増殖率を示した。以下、本発明を実施例を挙げて詳述する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に制限されないことは当分野において通常の知識を有する者にとって自明である。《実施例1:羊膜組織から間葉幹細胞の分離》実験に必要な羊膜組織は胎盤から分離し、分離した組織は抗生剤が含まれている生理食塩水、またはDMEMDulbeccomodifiedEaglemedium培地に入れて研究室まで運搬した。クリーンベンチ内で羊膜組織を5g定量して2回滅菌生理食塩水で洗浄して、ペトリ皿に洗浄された羊膜組織を外科用はさみでできる限り細切した。細切された組織にコラゲナーゼ溶液を入れてよく混合した後、フラスコに入れて、フラスコを37°C、5CO2インキュベーターで90分間反応させて、組織の溶解を確認した。溶解した組織を50mLチューブに予め準備して置いたセルストレーナーでろ過し、遠心分離した。遠心分離後、上澄み液を取り除いて、DMEM-Pで細胞沈殿物を懸濁させてT-フラスコに播いた後、37°C、5CO2インキュベーターで3~4日間インキュベーションさせ培養容器に付着した間葉幹細胞のみ得た。《実施例2:分離した羊膜間葉幹細胞のDMEM-P及びKSFM-P混合培地における培養》前記取得した羊膜由来間葉幹細胞を、DMEM-P表1及びKSFM-P表3培地の混合培地を表4に記載された混合比で混合した培地を用いて、T175フラスコに1.0×106細胞を分株して37°Cで4日間培養を行い、培地は二日に一回ずつ交換した。培養3日及び4日目の細胞写真を各々図1及び図2に示した。培養4日目に、培養された羊膜由来間葉幹細胞をHBSSバッファーで洗浄した後、TrypLE-ExpressGibco、または0.25Trypsin-EDTAを入れて、37°Cで10分間反応させた。FBSが含まれた培地を入れてトリプシンを不活性化させた後、取得した羊膜由来間葉幹細胞の細胞数を測定した。その結果、表4、図1及び図2に示したように、DMEM-P培地とKSFM-P培地を単独で用いた培地でより、DMEM-P培地とKSFM-P培地を混合した培地で培養された場合、羊膜由来幹細胞がずっと速く、培養4日目の細胞数においても、顕著に多いことが確認された。表5に示したように、グループ2のDMEM-P培地とKSFM-P培地を66:33で混合した培地で最も高い増殖率を示し、前記混合比の混合培地を以後継代培養に用いた。《実施例3:混合培地で培養された羊膜由来間葉幹細胞の免疫学的特性》表面抗原発現の柔細胞分析Flowcytometryanalysis実施例2で混合培地で培養された羊膜由来間葉幹細胞を表面CDシリーズ抗原マーカーでキャラクタライゼーションした。CD29単核球マーカー、CD31内皮細胞及び幹細胞マーカー、CD34造血幹細胞マーカー、CD44、CD45PTPR,ASV,Leukocytemarker、CD73をFACS分析に適用した。実施例1で取得した羊膜由来間葉幹細胞をPBSで洗浄し、トリプシン処理した後、細胞を回収して5分間1500rpmで遠心分離した。上澄み液を捨てた後、ブロッキングバッファー溶液5血清正常ヤギ血清正常ウマ血清を入れて、4°Cで60分間反応させた後、1500rpmで5分間遠心分離した。上澄み液を捨てた後、細胞をPBSに浮遊させて、陰性対照及びCD抗原マーカーの数に、1×105cellを分株した。各ウェルに抗体R-phycoerythrinPE/FITCFluoresceinIsothiocyanate-標識マウス抗ヒトモノクローナル抗体を入れて、4°Cで40分間インキュベーションした。インキュベーション後に1500rpmで3分間遠心分離した。上澄み液を取り除いた後、PBSで洗浄し、1500rpmで3分間遠心分離した。そして、再度前記上澄み液を取り除いた後、PBSで洗浄し、1500rpmで3分間遠心分離する過程を繰り返した。上澄み液を取り除いた後、フローサイトメーターFlowCytometerを利用して分析した。その結果、各グループの羊膜由来間葉幹細胞はいずれもCD29、CD44、及びCD73に対し陽性の免疫学的特性を示し、CD31、CD34、及びCD45に対し陰性の免疫学的特性を示した図3~図8。《実施例4:混合培地で継代培養された羊膜由来間葉幹細胞の増殖能比較》実施例1で培養された細胞を各々1.0×106細胞/T175フラスコ濃度で継代培養して、P1及びP2世代の増殖能を確認した。培養は、実施例1の培養方法と同様の条件で行った。その結果、DMEM-P単独培地で培養した群グループ1のP1は、5日培養後、細胞数を計測した時、5.4×106細胞であるのに対して、DMEM-PとKSFM-P培地を66:33で混合した群グループ2のP1は、4日だけ培養して細胞数を計測しても、1.25×107細胞となり顕著に高い細胞増殖能を示した図9。P2の場合は、DMEM-P単独培地で培養した群グループ1は、4日培養後計測した時、3.4×106細胞に増殖した細胞数がP1に比べて減少し、DMEM-PとKSFM-P培地を66:33で混合した群グループ2の場合は、1.38×107細胞となりP1に比べて増殖能が却って増加した図10。《実施例5:混合培地で継代培養された羊膜由来間葉幹細胞の免疫学適性比較》実施例2と同様の方法で、DMEM-P培地を単独で用いて継代培養したP1及びP2と、DMEM-PとKSFM-P培地を66:33で混合した培地を利用して継代培養したP1及びP2の免疫学的特性を確認した結果、各グループの羊膜由来間葉幹細胞はいずれもCD29、CD44、CD73、CD90、CD105及びHLA-ABCに対して陽性の免疫学的特性を示し、CD31、CD34、CD45及びHLA-DRに対して陰性の免疫学的特性を示した。《実施例6:混合培地で培養された羊膜由来間葉幹細胞の骨分化定量》実施例1で取得したDMEM-P単独培地、及びDMEM-P/KSFM-P混合培地で培養された羊膜由来間葉幹細胞を骨形成誘導培地NonhematopoieticOsteoDiffMedium、MiltenyiBiotecで18日間培養37°C、5CO2、培地交換周期:3~4日して、間葉幹細胞を骨細胞に分化誘導させ、2日毎に分化培地を新しく取り換えた。骨細胞への分化は正常酸素状態及び低酸素状態1~5に分けて実施し、各分化条件を表6に示した。培養開始後18日目に、アリザリンレッドS染色法を利用して、羊膜由来間葉幹細胞が骨形成細胞に分化したことを確認し、DMEM-P単独培地で培養された細胞より、混合培地グループ2で培養された細胞の方が、高い骨細胞分化率を示し、培養時に過酸素状態で培養された細胞M-H-Nがさらに高い分化能を示した図11及び図12。"