"特異的な炭素源上で乳酸菌を培養することにより乳酸菌の免疫調節効果を増大させる方法。抗炎症性乳酸菌の抗炎症性効果を増大させることを含み、グルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、及び1,2-プロパンジオールからなる群から選ばれる特異的な炭素源を含む培地で該乳酸菌を培養することを含む、請求項1記載の方法。前記抗炎症性乳酸菌がラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの抗炎症性株からなる、請求項2記載の方法。前記ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株がATCCPTA6475である、請求項3記載の方法。前記ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株がATCCPTA5289である、請求項3記載の方法。請求項1~5のいずれか一項に記載の方法により製造された製品。疾患の治療に使用するための、請求項6に記載の製品。個体における炎症の低減に使用するための、請求項6に記載の製品。患者のTNFα産生を阻害するための方法であって、aグルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、及び1,2-プロパンジオールからなる群から選ばれる炭素源を含む培地でラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの抗炎症性株を培養し、bステップaで培養した株を患者に経口投与される製品に添加し、及びc該製品を投与して患者の炎症を減少させることを含む、上記方法。個体のTNFα産生の阻害及び/又は炎症の減少のための製品であって、グルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、及び1,2-プロパンジオールからなる群から選ばれる特定の炭素源とともに抗炎症性乳酸菌株を含む、上記製品。前記特異的な炭素源がカプセル化されている、請求項10記載の製品。前記抗炎症性乳酸菌株が抗炎症性ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株である、請求項10又は11記載の製品。前記ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株がATCCPTA6475である、請求項12記載の方法。前記ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株がATCCPTA5289である、請求項12記載の方法。請求項6及び10~14のいずれか一項に記載の製品を含み、任意にさらに薬学的に許容できる添加剤を含む、経口投与に適した薬剤組成物。しかしこれまで、培養基中の特定の炭素源がTNFα産生を制御できることを示した者はなかった。それ故、本発明の一つの目的は、例えばホストにおけるTNFα産生の低下によって見られるように、L.reuteriの既に抗炎症性の株の抗炎症効果を増大させることである。本発明のさらなる目的は、該株を含む製品を提供することであり、これはヒトへの投与のための炎症誘発剤により誘発された炎症の治療又は予防のための薬剤、並びに該株が増殖する馴化培地及びそのタンパク質含有抽出物も包含する。本発明の他の目的は、シンバイオティック製品を得るために、特定の炭素源とともに該株を含む製品を提供することである。本発明の更なる目的は、乳酸菌の抗炎症性株で既にコロニー形成された個体による消費用の糖のような特定の炭素源を提供することである。他の目的及び効果は以下の開示及び添付の特許請求の範囲によりさらに十分に明らかになるであろう。本発明はここに特定の炭素源を加えた培養基を用いて乳酸菌株の免疫調節特性を改良するための具体的方法を提供するものであり、これには特定の培養条件を使用することにより非病原性の抗炎症性菌株の抗炎症性効果を増大させる方法も包含される。本発明の主要な目的は、特定の培養条件を使用することにより乳酸菌の特定の菌株の、哺乳類における免疫調節効果を増大させることである。培養基中の炭素源の選択によりL.reuteriの抗炎症性株の抗炎症性効果を増大させることももう一つの目的である。本発明の他の目的は、培養基中に主要炭素源としてグルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、1,2-プロパンジオール、又はフルクトオリゴ糖のようなプレバイオティックとともに、抗炎症性L.reuteri株の抗炎症性効果を、TNF-α産生の低下が見られる哺乳類において、増大させることである。本発明の更なる目的は、該株を含む製品を提供することである。本発明の更なる目的は、シンバイオティック製品を得るために、該株を特定の炭素源と共に含む製品を提供することである。本発明の他の目的は、L.reuteriの抗炎症性株で既にコロニー形成された個体による消費用のプレバイオティックのような、胃腸管で消化されないように特定の炭素源を提供することである。従って本発明は、乳酸菌を特定の炭素源で培養することにより乳酸菌の免疫調節効果を増大させる方法を提供する。一つの態様では、その方法は抗炎症性乳酸菌の抗炎症性効果を増大させることを含み、グルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、及び1,2-プロパンジオールからなる群から選ばれる特定の炭素源を含む培地で乳酸菌を培養することを含む。好ましい態様では、特定の炭素源を含む培地で培養された抗炎症性乳酸菌は、Lactobacillusreuteriの抗炎症性株からなる。より好ましくは、L.reuteri株はATCCPTA6475又はATCCPTA5289である。本発明はまた、上記方法により製造された製品を提供する。一つの態様では、その製品は疾病の治療に使用するためのものであり、例えば個体における炎症の低減に使用するためのものである。本発明は更に、患者のTNFα産生を阻害するための方法であって、aグルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、及び1,2-プロパンジオールからなる群から選ばれる炭素源を含む培地でラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの抗炎症性株を培養し、bステップaで培養した株を患者に経口投与するための製品に添加し、及びc該製品を投与して患者の炎症を低減することを含む、上記方法を提供する。本発明は更に、個体のTNFα産生の阻害及び/又は炎症の低減のための製品であって、グルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、及び1,2-プロパンジオールからなる群から選ばれる特定の炭素源とともに抗炎症性乳酸菌株を含む、上記製品を提供することである。一つの態様では、該特定の炭素源はカプセル化されている。その製品において、抗炎症性乳酸菌株は好ましくは抗炎症性Lactobacillusreuteri株であり、より好ましくはLactobacillusreuteri株はATCCPTA6475又はATCCPTA5289である。本発明はまた、上記の製品を含み、任意にさらに薬学的に許容できる添加剤を含む、経口投与に適した薬剤組成物を提供する。本発明の他の目的及び効果は読者に明らかになるであろうし、これらの目的及び効果は本発明の範囲内に入ることを意図されている。ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriはヒト及び動物の消化管に天然に宿るヘテロ発酵型の乳酸菌種である。特定のプロバイオティックなL.reuteri株はヒトTNFα産生を強く抑制するが、他のプロバイオティックなL.reuteri株はヒトTNFα産生を増大させる。様々な炭素源で培養したL.reuteriの抗炎症性株がTNFα産生に如何に影響を与えるかを示すために、L.reuteriATCC5289を唯一の炭素源として様々な糖とともに特定の培地中で後期静止期にまで嫌気的に培養した。驚くべきことに、炭素源としてグルコースで培養するとショ糖で培養した場合に比べてTNFαの産生が有意に減少したのである。結果を図1に示す。L.reuteriの様々な株の培養基中のグルコースとショ糖がTNFα産生に如何に影響を与えるかを同定するために研究を行った。TNF阻害性ATCCPTA6475及びATCCPTA5289であるか、又はTNF刺激性ATCC55730及びCF483Aであることが既に知られているL.reuteriの株を唯一の炭素源としてグルコース又はショ糖とともに特定の培地中で後期静止期24~28時間にまで嫌気的に培養した。これらの結果は、例えばL.reuteriATCCPTA-6475株及びL.reuteriATCCPTA-5289株で主要炭素としてショ糖を用いて培養すると、グルコースでの培養に比べて、ヒト細胞においてLPS刺激TNFαの産生を有意に増加させた図2。図2に示す結果はまた、例えば培養基によりL.reuteriの前炎症性株に影響を与える、即ち該株をより炎症性にする可能性があるという概念を想起させる。炎症性の増大は特定の疾患状態、例えば癌やアレルギーの防止において有用でありうる。他の炭素源の効果も研究した。L.reuteriATCCPTA6475、DSM17938をグルコース、1,2-プロパンジオール又はデンプンを唯一の炭素源とする規定の培地で嫌気性条件化で後期静止期まで培養した。これらの結果から、DSM17938は唯一の炭素源として1,2-プロパンジオール又はデンプンで培養するとTNF阻害性になり、ATCCPTA6475は3種類のすべての炭素源について同様の結果を示したことを示している図3。さらにこのTNF阻害効果の増大は、L.reuteriが唯一の炭素源としてラクトースやフルクトースで規定した培地で培養した時も観察されたデータとしては示さず。グルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン又は1,2-プロパンジオールで規定された培地で培養し、TNFα産生を減少させることのできるL.reuteriの株は、ATCCPTA6475、ATCCPTA5289、ATCC4659、JCM1112、及びDSM20016を包含しているが、これらに限定されるものではない。L.reuteriにTNFα産生を減少させるように影響を与える炭素源のリストは図4に示すことができる。TNFα産生を減少させることができる株又は馴化培地を含む製品は、シンバイオティック製品を得るために、凍結乾燥後に例えばグルコースのような特定の炭素源で栄養補充することができる。乳酸菌と一緒にTNFα産生を減少させることができる炭素源は好ましくは、グルコース、ラクトース、フルクトース、デンプン、1,2-プロパンジオール、又は異なる重合度を有するフルクトオリゴ糖例えば、Synergy1登録商標フルクトオリゴ糖とイヌリン、Oraftiの混合物のようなプレバイオティックであるが、これらに限定されない。製品は好ましくは錠剤又はカプセルに製剤化されるが、これらに限定されない。炭素源は胃腸管では消化されないように製品中に一体化される。例えば、グルコースは錠剤又はカプセルに一体化される前に、選択されたLactobacillus株とともに、当業界で知られるようにマイクロカプセルに別々にカプセル化することができる。カプセル化されたグルコースのような特定の炭素源は抗炎症性株、例えばL.reuteriで既にコロニー形成されていることが知られている個体によって消費される。当業者にとって多くの修飾や変更が容易になされるので、本発明を示され記載されたままの構成や操作に限定することを望むものではなく、従ってあらゆる適切な修飾や等価物は本発明の範囲に再分類され、また範囲内に入るものである。実施例1様々な糖源で培養したL.reuteriATCC5289を含む馴化培地はTNFα阻害に影響を与えるTHP-1細胞を馴化培地CMと一緒にL.reuteriATCC5289の培養からインキュベートした。馴化培地は、唯一の炭素源として一つの特定の糖で栄養補給したLDMIIIS.Jones及びJ.Versalovic,BMCMicrobiol.2009;9:35で培養したL.reuteriATCC5289の24時間培養物からの無細胞上清である。THP-1細胞は対照培地又はE.coli由来のLPS通常の炎症反応においてTNFαの発生へと導く又はPCKで3.5時間のインキュベーションの間、刺激し、その後で細胞を取り除き、上清を当業界で知られるELISA法を用いてTNFαレベルについてアッセイした。材料と方法主要な試薬、菌株及び哺乳類細胞系L.reuteri株をdeMan、Rogosa,SharpeMRS;Difco,FranklinLakes,NJ又はLDMIIIpH6.5で、LDM培地組成については単一糖源以下の使用糖源のリスト参照で培養した。10CO2、10H2及び80N2の混合物を供給した嫌気性のチェンバー1025嫌気システム、FormaScientific,Waltham,MAをラクトバチルスの嫌気性培養に用いた。バイオガイア社BiogaiaAB,Raleigh,NCはL.reuteri株ATCCPTA5289を提供した。THP-1細胞ATCCTIB-202を10ウシ胎児血清Invitrogen、Carlsbad,CAを補給したRPMI1640で37°C、5CO2で維持した。すべての化学試薬は特に断りのない限り、Sigma-AldrichStLouis,MOから得たものである。バイオフィルム及び組織培養実験のためにポリスチレン96穴又は24穴のプレートをCorning社Corning、NYから得た。ポリビニリデンフルオリド膜のフィルター0.22mm孔径Millipore,Bedford,MAを滅菌に用いた。LDMIII培地に使用した糖源D-グルコースG8270,>99.5グルコース,Sigmaショ糖S9378,99.9ショ糖,SigmaD-ガラクトースG0750,>99ガラクトース,SigmaラフィノースR0260,>98ラフィノース,Sigmaフルクトオリゴ糖、ラフチローズRaftilose、Orafti登録商標P95、平均重合度=11、92フルクトオリゴ糖、8グルコース、フルクトース及びショ糖、BeneoOraftiフルクトオリゴ糖とイヌリンの1:1混合物Orafti登録商標Synergy1、92フルクトオリゴ糖及びイヌリン、8グルコース、フルクトース及びショ糖、BeneoOrafti免疫修飾実験のためのL.reuteri培養物由来の無細胞上清の調製免疫修飾実験のために、単一炭素源のLDMIIIの10mLをL.reuteri培養物とともにインキュベートしMDSブロスで一晩16~18時間培養、OD600=0.1に調整した。次いで細菌を嫌気性条件下37°Cで24時間インキュベートした。最終的なOD600を測定し、異なる糖源での増殖偏差の可能性を考慮して、LDMをすべての試料について同じODになるまで希釈した。細胞をペレット化し4000xg、室温、10分、捨てた。上清をフィルターで滅菌した0.22μm孔径。アリコートを真空乾燥し、RPMIを用いて元の体積にまで再懸濁した。TNF阻害実験先に記載されているようにLinら、2008、L.reuteriの浮遊細胞5v/v及びE.coliO127:B8LPS100ng/mLの無細胞上清をヒトTHP-1細胞およそ5x104細胞に加えた。プレートを37°C、5CO2で3.5時間インキュベートし、THP-1細胞をペレット化し1500xg、5分、4°C、単球細胞上清中のTNF量を定量的ELISARDSystems、Minneapolis,MNにより定量した。RPMIと培地Mediaはともに対照として用いた典型的にはRPMI95、Media=LDM5。結果1Synergy1BENEO-OraftiInc.2740Route10WestMorrisPlains,NJ07950,USA;2グルコース;3ラフチローズ;4ガラクトース;5ラフィノース;及び6ショ糖の存在下でTHP-1細胞にLPSを添加したところ、3.5時間のインキュベーション時間の間、それぞれ、1TNFα145.3pg/ml、2TNFα104.3pg/ml、3TNFα204.3pg/ml、4TNFα260pg/ml、5TNFα517.8pg/ml、及び6TNFα347.9pg/mlの生成を見た。CM添加について対照として作用する培養基RPMI及びLDMの添加により、それぞれ396pg/mlと352pg/mlのTNFαの生成を見た。この結果は、唯一の炭素源としてのグルコース及び/又はSynergy1は、RPMI及びLDM対照と比較してTNFα産生を50超阻害したことを示している。これは株をショ糖又はラフィノースで培養した時には見られなかったことである。その結果を図1に示す。株のないLDM各糖のみも試みて、糖がTNF応答の変化の直接の原因ではないことを確認した結果は示さず。実施例2TNF阻害性ATCCPTA6475及びATCCPTA5289又はTNF刺激性ATCC55730及びCF483Aであることが既に知られ、異なる糖源でL.reuteriの株を培養した馴化培地はTNFα阻害に影響を与えるTHP-1細胞を、グルコースで培養した選択されたL.reuteri株、L.reuteriATCCPTA-6475、L.reuteriATCCPTA-5289、L.reuteriATCC55730及びL.reuteri株CF48-3A、並びにショ糖で培養した同じ株複数の培養由来の馴化培地CMと一緒にインキュベートした。THP-1細胞を3.5時間インキュベーションの間、対照培地LDMIII又はE.coli由来LPSで刺激し、その後細胞を除去し、上清をELISA法を用いてTNFαレベルについてアッセイした。グルコースをショ糖で置き換えたLDMIIIを対照として使用した。材料と方法は実施例1と同じにした。結果結果図2参照は、2種の抗炎症性株L.reuteriATCCPTA-6475及びL.reuteriATCCPTA-5239のL.reuteri馴化培地が、LDMIIIにおいてグルコースをショ糖で置き換えると、TNFα産生を増加させることを示している。実施例3唯一の炭素源としてグルコースで培養したL.reuteriATCCPTA-5289の馴化培地の処方実施例1の方法を用いて、効率的にTNFαを減少させる一つの株由来の馴化培地を選択した。この実施例では、唯一の炭素源としてグルコースで培養したL.reuteriATCCPTA-5289由来の培地を選択した。この培地は、deMan,Rogosa,SharpeMRSDifco,Spark,MDで株を培養することにより、より大きなスケールで生産した。ラクトバチルスの終夜培養物を1.0のOD600にまで希釈し約109細胞/ml、さらに1:10に希釈し、更に24時間培養した。細菌細胞のない馴化培地を4°Cで10分間8500rpmで遠心分離により収集した。馴化培地を細胞ペレットから分離し、次いで0.22μm孔フィルターユニットMillipore,Bedford,Mass.で濾過した。馴化培地を次いで凍結乾燥し、標準的な方法を用いて処方して錠剤を作った。実施例4凍結乾燥L.reuteriATCCPTA-5289粉末の標準法による処方凍結乾燥後グルコースで補充発酵培地組成デキストロース一水和物60g/l酵母抽出液KAV20g/lペプトン型PSブタ起源20g/lクエン酸水素二アンモニウム5g/l酢酸ナトリウムx3H2O4.7g/lリン酸水素二カリウム2g/lTween800.5g/lシリビオンSilibione制泡0.14g/l硫酸マグネシウム0.10g/l硫酸マンガン0.03g/l硫酸亜鉛七水和物0.01g/l水適量遠心分離媒体PeptonO-24Orthanaブタ起源抗凍結剤ラクトースウシ起源33ゼラチン加水分解物ウシ起源22グルタミン酸ナトリウム22マルトデキストリン11アスコルビン酸11凍結乾燥乳酸菌粉末の製造工程1.20mlの培地をワーキングセルバンクのバイアルから凍結乾燥乳酸菌粉末の0.6mlとともにインキュベートする。発酵はボトルの中で37°Cで18~20時間、攪拌やpH調整をすることなく、即ち静止状態で行う。2.1リットルのフラスコ2本の培地をリットルあたり9mlの細胞スラリーでインキュベートする。発酵は37°Cで20~22時間、攪拌やpH調整をすることなく、即ち静止状態で行う。3.工程2で得られた1リットルの細胞スラリー2つを600リットルの容器に接種する。発酵は37°Cで13時間、攪拌やpH調整とともに行う。発酵の開始時のpHは6.5である。pHが5.4を下回ると20水酸化ナトリウム溶液を用いてpH調整を開始する。pH調整はpH5.5に設定する。4.4回目と最終の発酵工程を、工程3で得た接種物を用いて15000リットルの容器で行う。発酵は37°Cで9~12時間、攪拌やpH調整とともに行う。発酵の開始時のpHは6.5である。pHが5.4を下回ると20水酸化ナトリウム溶液を用いてpH調整を開始する。pH調整はpH5.5に設定する。発酵は培養物が静止相に到達すると終了し、これは水酸化ナトリウム溶液の添加が減少することによって知ることができる。およそ930リットルの水酸化ナトリウム溶液を、発酵の間に10200リットルの培地と600リットルの接種物に添加する。5.最終発酵で得られた細胞スラリーを10°Cで二度AlfaLavalから連続遠心で分離する。最初の遠心分離の後、細胞スラリーの体積をおよそ11730リットルから1200リットルに減じる。この体積を3000リットル容器中で1200リットルのペプトンPeptonO-24、Orthana溶液で洗浄し、抗凍結剤と混合する前に再び分離する。ペプトンでの洗浄工程は凍結乾燥プロセスでの凍結点降下を防止するために行う。6.二度目の遠心分離の後、細胞スラリーの体積を495リットルに減じる。この体積を156kgの抗凍結剤溶液と混合し、およそ650リットルの細胞スラリーとする。7.細胞スラリーを1000リットルの容器にポンプで汲み上げる。次いで容器を凍結乾燥プラントに移す。8.凍結乾燥プラントで、正確に2リットルの細胞スラリーを凍結乾燥機内の各プレートに注ぐ。凍結乾燥機の最大キャパシティは600リットルであり、過剰な細胞スラリ体積はすべて廃棄する。9.Lactobacillusreuteriの細胞スラリーは18の乾燥物含量を有し、4~5日間凍結乾燥する。10.凍結乾燥プロセスの間、プロセス中の圧力は0.176mbarと0.42mbarの間である。真空ポンプは圧力が0.42mbarに到達したときに開始する。PRT加圧試験を用いてプロセスが終了した時を決定する。もしPRT又は圧力の増加が120秒後に0.02mbar未満であれば、プロセスは停止する。凍結乾燥Lactobacillusreuteriを次いでグルコースで補充し、標準的な方法を用いて、例えば実施例6に記載したように処方して錠剤又はカプセルを作った。実施例5凍結乾燥L.reuteriATCCPTA-5289の唯一の炭素源としてショ糖との処方これは、発酵の間デキストロースの代わりに唯一の炭素源としてショ糖を用いた以外は実施例4に記載されたようにして行った。凍結乾燥L.reuteriを次いで、標準的な方法を用いて、例えば実施例6に記載したように処方して錠剤又はカプセルを作ったただしグルコースの添加は行わなかった、段落4。実施例6選択された株を含む製品の製造この実施例では、錠剤に株を添加するために、L.reuteriATCCPTA-5289を一般的に優れた抗炎症特性とTNF-阻害特性に基づいて選択する。L.reuteri株を、実施例4から読めるように工業的にLactobacillusを培養するために標準的な方法を用いて、培養し、凍結乾燥する。カプセル化したグルコースを含めた後に、選択した株を含む錠剤を製造するプロセスの一例の工程を行うただし、当業界で知られているような添加剤、充填剤、香味料、カプセル剤、潤滑剤、アンチケーキング剤、甘味料、及び錠剤製品の他の成分を製品の効果に影響を与えることなしに用いてもよい。。1融解。容器内でSOFTISAN登録商標154SASOLGMBM,BadHomburg,Germanyを融解し、70°Cに加熱し、結晶構造を完全に破壊する。次いで52~55°Cに冷却する凝固点のすぐ上。2顆粒。Lactobacillusreuteri凍結乾燥粉末をDiosna高剪断力混合機/造粒機、又はその等価物に移す。およそ1分の間に、融解したSOFTISAN登録商標154をLactobacillusreuteri粉末にゆっくりと添加する。添加の間はチョッパーを用いる。3湿潤篩い分け。造粒後ただちに、顆粒をTornadoミルを用いて1mm篩網に通す。篩い分けされた顆粒をPVCコートアルミホイルからなるアルポウチに包み、乾燥ポウチとともにヒートシーラーで密封してポウチを形成し、混合するまで冷蔵保存する。顆粒のバッチを2つの錠剤バッチに分ける。4当業界で知られている標準的なマイクロカプセル化方法を用いてカプセル化されたカプセル化D-グルコースG2870、>99.5グルコース、Sigmaを添加する。糖の量はL.reuteriの添加粉末の全CFUに依存し、標準的なレベルは細菌の1x108の全CFU当たり1グラムの糖であってもよいが、下は0.1グラム又は0.01グラム、上は10グラム、更には100グラムの糖まで変化してもよい。5混合。全内容物を混合機で均一ブレンドになるまで混合する。6圧縮。最終的なブレンドを回転錠剤プレスのホッパーに移し、Kilianコンプレッサーで765mgの全重量で錠剤を圧縮する。7バルクパッケージング。錠剤をモレキュラーシーブの乾燥ポウチと一緒にアルバッグalu-bagsにパックする。アルパックをプラスチックバケツに入れ、最終パッケージの前に少なくとも一週間冷所に保存する。SOFTISAN登録商標、加水分解ヤシ油の使用によりLactobacillus細胞を脂肪の中にカプセル化し、環境的に保護することが可能になる。上述のように、本発明の製品は錠剤以外の形態であってもよく、当業界で知られているような基本的な製品を調製する標準的な方法を、選択したL.reuteri培養物を含む本発明の製品を調製するために有益に用いることができる。実施例7大腸炎に罹患した女性患者を実施例4で製造した製品で治療する。患者は朝と夜、一日に二度処置を受ける。2週間後、大腸の炎症は有意に減少する。L.reuteri治療を中止すると、状態は元に戻るが、L.reuteriの定期的な投与により抑制される。本発明を具体的な実施例により記載したが、多くの変更、修飾及び態様が可能であり、従ってすべてのそのような変更、修飾及び態様は本発明の精神と範囲の内にあるとみなされるべきである。"