塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列を有し、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する前記塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、前記疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成するペプチド鎖を有する核酸キャリアと前記2本鎖核酸分子とを接触させ、前記塩基性アミノ酸の側鎖とリン酸基との静電相互作用および前記2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖との間の水素結合の一方または双方を介して、前記2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖とを結合させ核酸複合体を形成する工程と、前記核酸複合体を細胞に導入する工程とを有することを特徴とする細胞への核酸導入方法。前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リジンおよびオルニチンからなる群より選択され、前記疎水性アミノ酸が、ロイシン、イソロイシン、バリンおよびトリプトファンからなる群より選択されることを特徴とする請求項1記載の細胞への核酸導入方法。前記ペプチド鎖がRLnおよびLRnのいずれか一方で表されるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項1または2記載の細胞への核酸導入方法。なお、Rはアルギニン残基、Lはロイシン残基をそれぞれ表し、nは5以上20以下の自然数を表す。前記核酸複合体を形成する工程において、前記2本鎖核酸分子と核酸キャリアのモル比が1:4~1:30であることを特徴とする請求項1から3のいずれか1項記載の細胞への核酸導入方法。前記2本鎖核酸分子がsiRNAであることを特徴とする請求項1から4のいずれか1項記載の細胞への核酸導入方法。前記核酸複合体が標的細胞および/またはその特定の部位に対する局在化活性を有することを特徴とする請求項1から5のいずれか1項記載の細胞への核酸導入方法。前記核酸複合体に含まれる前記2本鎖核酸分子または前記核酸キャリアの少なくとも一部に、標的細胞および/またはその特定の部位に対する局在化活性を有するシグナルペプチドが結合していることを特徴とする請求項6記載の細胞への核酸導入方法。前記シグナルペプチドが、下記の配列番号1から配列番号13のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項7記載の細胞への核酸導入方法。QAKKKKLDK[配列番号1]SPQPKKKP[配列番号2]RQARRNRRRRWR[配列番号3]GPKKKRKV[配列番号4]NSAAFEDLRVLS[配列番号5]RQIKIWFQNRRMKWKKEN[配列番号6]GRKKRRQRRRPPQG[配列番号7]LPPLERLTL[配列番号8]ALQKKLEELELDE[配列番号9]LALKLAGLDI[配列番号10]SLEGAVSEISLRD[配列番号11]LPVLENLTL[配列番号12]LASLMNLGMS[配列番号13]前記シグナルペプチドの末端が、前記核酸キャリアに含まれるペプチド鎖または前記2本鎖核酸の末端に結合していることを特徴とする請求項7または8記載の細胞への核酸導入方法。塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列を有し、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する前記塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、前記疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成するペプチド鎖を有する核酸キャリアと2本鎖核酸分子とが、前記核酸キャリアのペプチド鎖に含まれる塩基性アミノ酸の側鎖と、前記2本鎖核酸分子のリン酸基との静電相互作用を介して結合していることを特徴とする核酸複合体。前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リジンおよびオルニチンからなる群より選択され、前記疎水性アミノ酸が、ロイシン、イソロイシン、バリンおよびトリプトファンからなる群より選択されることを特徴とする請求項10記載の核酸複合体。前記ペプチド鎖がRLnおよびLRnのいずれか一方で表されるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項10または11記載の核酸複合体。なお、Rはアルギニン残基、Lはロイシン残基をそれぞれ表し、nは5以上20以下の自然数を表す。前記2本鎖核酸分子がsiRNAであることを特徴とする請求項10から12のいずれか1項記載の核酸複合体。前記2本鎖核酸分子またはそれに結合した前記核酸キャリアの少なくとも一部に、標的細胞および/またはその特定の部位に対する局在化活性を有するシグナルペプチドが結合していることを特徴とする請求項10から13のいずれか1項記載の核酸複合体。前記シグナルペプチドが、下記の配列番号1から配列番号13のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項14記載の核酸複合体。QAKKKKLDK[配列番号1]SPQPKKKP[配列番号2]RQARRNRRRRWR[配列番号3]GPKKKRKV[配列番号4]NSAAFEDLRVLS[配列番号5]RQIKIWFQNRRMKWKKEN[配列番号6]GRKKRRQRRRPPQG[配列番号7]LPPLERLTL[配列番号8]ALQKKLEELELDE[配列番号9]LALKLAGLDI[配列番号10]SLEGAVSEISLRD[配列番号11]LPVLENLTL[配列番号12]LASLMNLGMS[配列番号13]前記シグナルペプチドの末端が、前記核酸キャリアに含まれるペプチド鎖または前記2本鎖核酸の末端に結合していることを特徴とする請求項14または15記載の核酸複合体。上述のとおり、これまでに様々な核酸キャリアおよび細胞への核酸の導入方法が開発されているが、未だ確立されたものはない。また、その多くがDNAをターゲットとするものであるため、低分子量であり、DNAよりも反応性の高いsiRNAの細胞への導入には必ずしも好適ではない。本発明はかかる事情に鑑みてなされたもので、siRNA等の2本鎖核酸分子を標的細胞に高効率で導入可能であり、2本鎖核酸分子にヌクレアーゼへの高い耐性をもたらすことが可能であり、かつ細胞毒性による副作用のリスクが低い細胞への核酸導入方法、核酸キャリアおよび核酸複合体を提供することを目的とする。前記目的に沿う本発明の第1の態様は、下記の1~9に記載の細胞への核酸導入方法を提供することにより上記課題を解決するものである。1塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列を有し、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する前記塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、前記疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成するペプチド鎖を有する核酸キャリアと前記2本鎖核酸分子とを接触させ、前記塩基性アミノ酸の側鎖とリン酸基との静電相互作用および前記2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖との間の水素結合の一方または双方を介して、前記2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖とを結合させ核酸複合体を形成する工程と、前記核酸複合体を細胞に導入する工程とを有する細胞への核酸導入方法。2前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リジンおよびオルニチンからなる群より選択され、前記疎水性アミノ酸が、ロイシン、イソロイシン、バリンおよびトリプトファンからなる群より選択される1記載の細胞への核酸導入方法。3前記ペプチド鎖がRLnおよびLRnのいずれか一方で表されるアミノ酸配列を有する1または2記載の細胞への核酸導入方法。なお、Rはアルギニン残基、Lはロイシン残基をそれぞれ表し、nは5以上10以下の自然数を表す。4前記核酸複合体を形成する工程において、前記2本鎖核酸分子と核酸キャリアのモル比が1:4~1:30である1から3のいずれかに記載の細胞への核酸導入方法。5前記2本鎖核酸分子がsiRNAである1から4のいずれかに記載の細胞への核酸導入方法。6前記核酸複合体が標的細胞および/またはその特定の部位に対する局在化活性を有する1から5のいずれかに記載の細胞への核酸導入方法。7前記核酸複合体に含まれる前記2本鎖核酸分子または前記核酸キャリアの少なくとも一部に、標的細胞および/またはその特定の部位に対する局在化活性を有するシグナルペプチドが結合している6記載の細胞への核酸導入方法。8前記シグナルペプチドが、下記の配列番号1~13のいずれかで表されるアミノ酸配列を有する7記載の細胞への核酸導入方法。QAKKKKLDK[配列番号1]SPQPKKKP[配列番号2]RQARRNRRRRWR[配列番号3]GPKKKRKV[配列番号4]NSAAFEDLRVLS[配列番号5]RQIKIWFQNRRMKWKKEN[配列番号6]GRKKRRQRRRPPQG[配列番号7]LPPLERLTL[配列番号8]ALQKKLEELELDE[配列番号9]LALKLAGLDI[配列番号10]SLEGAVSEISLRD[配列番号11]LPVLENLTL[配列番号12]LASLMNLGMS[配列番号13]9前記シグナルペプチドの末端が、前記核酸キャリアに含まれるペプチド鎖または前記2本鎖核酸の末端に結合している7または8記載の細胞への核酸導入方法。本発明の第2の態様は、下記の10~16に記載の核酸複合体を提供することにより上記課題を解決するものである。10塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列を有し、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する前記塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、前記疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成するペプチド鎖を有する核酸キャリアと2本鎖核酸分子とが、前記核酸キャリアのペプチド鎖に含まれる塩基性アミノ酸の側鎖と、前記2本鎖核酸分子のリン酸基との静電相互作用を介して結合している核酸複合体。11前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リジンおよびオルニチンからなる群より選択され、前記疎水性アミノ酸が、ロイシン、イソロイシン、バリンおよびトリプトファンからなる群より選択される10記載の核酸複合体。12前記ペプチド鎖がRLnおよびLRnのいずれか一方で表されるアミノ酸配列を有する10または11記載の核酸複合体。なお、Rはアルギニン残基、Lはロイシン残基をそれぞれ表し、nは5以上20以下の自然数を表す。13前記2本鎖核酸分子がsiRNAであることを特徴とする10から12のいずれかに記載の核酸複合体。14前記2本鎖核酸分子またはそれに結合した前記核酸キャリアの少なくとも一部に、標的細胞および/またはその特定の部位に対する局在化活性を有するシグナルペプチドが結合している10から13のいずれかに記載の核酸複合体。15前記シグナルペプチドが、上記の配列番号1から配列番号13のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有する14記載の核酸複合体。16前記シグナルペプチドの末端が、前記核酸キャリアに含まれるペプチド鎖または前記2本鎖核酸の末端に結合している14または15記載の核酸複合体。本発明の核酸キャリアは、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成するペプチド鎖を有している。β-シート構造を形成するペプチドは、2本鎖DNA等の2本鎖核酸分子と、2本鎖核酸分子とペプチドとの間の水素結合等を介して結合し、複合体を形成しうることが報告されている例えば、ProcNatlAcadSciUSAvol74p14581462参照。本発明の核酸キャリアに含まれるペプチド鎖において、塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んでいるため、β-シート構造を形成した際に、正電荷を有する塩基性アミノ酸の側鎖が約7nmの間隔でβ-シート構造の片面側に配置される。この間隔は、ヌクレオチド鎖におけるリン酸基間の間隔とほぼ一致する。したがって、本発明の核酸キャリアは、β-シート構造を形成したペプチド鎖部分で、塩基性アミノ酸の側鎖とリン酸基との静電相互作用および2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖との間の水素結合の一方または双方を介して、2本鎖RNA、2本鎖DNA等の2本鎖核酸分子と強く結合することにより、これらの2本鎖核酸分子のヌクレアーゼ耐性を大幅に向上させることができると共に、疎水性アミノ酸の側鎖が複合体の外面に露出するため、脂質二分子膜からなる細胞膜の透過性が向上し、細胞への2本鎖核酸分子の導入効率を高めることができる。また、ペプチド鎖部分のアミノ酸配列を適宜選択することにより、核酸キャリアの2本鎖核酸分子への親和性や塩基配列特異性を増大させることもできる。また、本発明の核酸キャリアはポリペプチドをベースとしているため細胞毒性が低く、遺伝子治療や遺伝子製剤に応用する場合の副作用を軽減できる。さらに、シグナルペプチドで修飾すること等により細胞内における局在化の制御や細胞特異性の増大を図ることもでき、核酸導入効率の増大、遺伝子治療における副作用の軽減等の種々の機能を付与することができる。本発明の細胞への核酸の導入方法では、上記のような特徴を有する核酸キャリアを用いて2本鎖核酸分子を標的細胞に導入するため、siRNA等の2本鎖核酸分子を標的細胞に高効率で導入可能であり、2本鎖核酸分子にヌクレアーゼへの高い耐性をもたらすことが可能であり、かつ細胞毒性による副作用のリスクが低いという効果を有する。また、本発明の核酸複合体は、高効率で標的細胞内にsiRNA等の2本鎖核酸分子を導入できると共に、ヌクレアーゼへの高い耐性を有している。さらに、ポリペプチドをベースとしているため細胞毒性が低く、遺伝子治療や遺伝子製剤に応用する場合の副作用を軽減でき、これらの用途に好適に用いることができる。続いて、本発明を具体化した実施の形態につき説明し、本発明の理解に供する。本発明の第1の実施の形態に係る細胞への核酸導入方法以下、細胞への核酸導入方法または本方法と略称する場合がある。は、塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列を有し、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成するペプチド鎖を有する核酸キャリアと2本鎖核酸分子とを接触させ、塩基性アミノ酸の側鎖とリン酸基との静電相互作用および2本鎖核酸分子とペプチド鎖との間の水素結合の一方または双方を介して、2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖とを結合させ核酸複合体を形成する工程と、核酸複合体を細胞に導入する工程とを有する。まず、本方法に用いられる核酸キャリア以下、核酸キャリアと略称する場合がある。および本発明の第2の実施の形態に係る核酸複合体以下、核酸複合体または複合体と略称する場合がある。についてより詳細に説明する。1核酸キャリア核酸キャリアは、塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列を有し、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成するペプチド鎖を有している。上述のとおり、β-シート構造をとるポリペプチド鎖は2本鎖DNAdsDNA等の2本鎖核酸分子と複合体を形成することができるが、特に、ペプチド鎖が、正電荷を有する塩基性アミノ酸の側鎖がシート構造の片面側に、疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されるような二次構造をとると、塩基性アミノ酸の側鎖とリン酸基との静電相互作用および2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖との間の水素結合の一方または双方を介して、両者の間で強い結合を形成することができる。このようにして形成された核酸複合体において、疎水性アミノ酸の側鎖は外側を向くため、複合体の脂質二分子膜からなる細胞膜に対する親和性が増大し、細胞内への導入効率が向上する。ペプチド鎖のアミノ酸配列は、上記の条件、すなわち、塩基性アミノ酸と疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列を有し、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有する塩基性アミノ酸の側鎖が片面側に、疎水性アミノ酸の側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成し、塩基性アミノ酸の側鎖とリン酸基との静電相互作用および2本鎖核酸分子と前記ペプチド鎖との間の水素結合の一方または双方を介して、両者の間で強い結合を形成することができるという条件を満たす限りにおいて、特に制限されない。また、β-シート構造は、上記の条件を満たす限りにおいて、平行β-シートおよび逆平行β-シート構造のいずれであってもよい。β-シート構造の形成は、円偏光二色性CDスペクトル等の任意の公知の方法を用いて確認することができる。ペプチド鎖の好ましいアミノ酸配列としては、アルギニン、リジンおよびオルニチンからなる群より選択される塩基性アミノ酸と、ロイシン、イソロイシン、バリンおよびトリプトファンからなる群より選択される疎水性アミノ酸とが交互に並んだアミノ酸配列が挙げられる。塩基性アミノ酸および疎水性アミノ酸の種類は、複合体を形成する2本鎖核酸分子の種類や構造等に応じて適宜選択される。また、ポリペプチド鎖の長さは、複合体を形成する2本鎖核酸分子の鎖長、すなわち2本鎖核酸分子の有するリン酸基負電荷の数等に応じて適宜選択される。2本鎖核酸分子に対してポリペプチド鎖が短すぎると、安定な複合体が形成されないと共に、ヌクレアーゼから2本鎖核酸分子を保護する効果が得られなくなる。一方、2本鎖核酸分子に対してポリペプチド鎖が長すぎると、塩基性アミノ酸残基の有する正電荷により、細胞への核酸複合体の導入効率が低下する。より好ましいペプチド鎖のアミノ酸配列としては、RLnおよびLRnのいずれか一方で表されるアミノ酸配列が挙げられる。なお、Rはアルギニン残基、Lはロイシン残基をそれぞれ表す。アルギニンR残基は、塩基性の基としてグアニジル基を有しているが、下記の化学式で表されるように、リン酸基と強く相互作用することができるため、安定な複合体を形成する上で好ましい。また、nは、RLまたはLRの繰り返し回数を表す自然数であり、複合体を形成する2本鎖核酸分子の鎖長、すなわち2本鎖核酸分子の有するリン酸基負電荷の数等に応じて適宜選択される。二本鎖核酸がsiRNAの場合、nは、例えば、5以上、好ましくは5以上20以下、より好ましくは7以上10以下の自然数である。nが5を下回ると2本鎖核酸分子と安定な結合を形成することが困難になり、一方、nが大きくなりすぎると、細胞毒性が発現したり、リン酸基の負電荷を完全に中和することが困難になったりする等の問題が生じるおそれがある。核酸キャリアは、標的細胞および標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラ細胞内小器官の一方または双方に対する局在化活性を有していることが好ましい。核酸複合体の局在化の対象となる標的細胞、あるいは標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラについては、標的細胞内に導入しようとする2本鎖核酸分子の種類およびその細胞内における機能等に応じて適宜選択される。局在化活性を付与する手段は、核酸複合体の局在化の対象となる標的細胞、あるいは標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラに応じて、任意の公知の手段を用いることができる。例えば、標的細胞に対する局在化活性を付与するための手段の具体例としては、その標的細胞に特異的に存在する受容体に対するリガンドを核酸キャリアに結合させることが挙げられる。また、標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラに対する局在化活性を付与するための手段の具体例としては、標的細胞および/またはその特定の部位に対する局在化活性を有するシグナルペプチドを核酸キャリアに結合させることが挙げられる。結合させることができるシグナルペプチドの具体例としては、各種の核局在化シグナルNLSおよび核外輸送シグナルNES等が挙げられる。核内への局在化は、NLSに運搬タンパク質であるインポーチンとGTP結合タンパク質の一種であるRanが結合し、これを核孔複合体が認識して細胞質から核内に通過させることにより達成される。NLSの具体例としては、下記の配列番号1~7のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。QAKKKKLDK[配列番号1]ヌクレオプラスミン由来NLS配列SPQPKKKP[配列番号2]ヒトp53由来NLS配列RQARRNRRRRWR[配列番号3]HIV1Revタンパク由来NLS配列GPKKKRKV[配列番号4]SV40T抗原由来NLS配列NSAAFEDLRVLS[配列番号5]インフルエンザウィルスヌクレオプラスミン由来NLS配列RQIKIWFQNRRMKWKKEN[配列番号6]アンテナペディアペネトラチン由来NLS配列GRKKRRQRRRPPQG[配列番号7]HIV1Tatタンパク由来NLS配列核内から細胞質への移送は、NESに運搬タンパク質であるCRM1とGTP結合タンパク質の一種であるRanが結合し、これを核孔複合体が認識して核から細胞質に通過させることにより達成される。NESの具体例としては、下記の配列番号8~13のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。LPPLERLTL[配列番号8]HIV1Revタンパク由来NES配列ALQKKLEELELDE[配列番号9]MAPKK由来NES配列LALKLAGLDI[配列番号10]PKIα由来NES配列SLEGAVSEISLRD[配列番号11]Dsk1由来NES配列LPVLENLTL[配列番号12]TFIIIA由来NES配列LASLMNLGMS[配列番号13]Matrin3由来NES配列これらのシグナルペプチドは、複合体の形成および細胞内への導入を阻害しない限りにおいて、核酸キャリア分子内の任意の位置、例えば、2本鎖核酸分子と結合を形成するポリペプチド鎖のN-末端側またはC-末端側、あるいはβ-シート構造の発現を阻害しない限りにおいて側鎖に結合させることができ、シグナルペプチドのN-末端側およびC-末端側のどちら側が2本鎖核酸分子と結合していてもよいが、シグナルペプチドのC-末端が、2本鎖核酸分子と結合を形成するペプチド鎖のN-末端に結合しているのが好ましい。2本鎖核酸分子と結合を形成するポリペプチド鎖とシグナルペプチドとは、直接結合していてもよく、適当なスペーサー分子を介して結合していてもよい。スペーサー分子の具体例としては、アルキレン基、ポリオキシエチレン基、オリゴペプチド等が挙げられる。核酸キャリアには、標的細胞上の受容体に対するリガンドやシグナルペプチド以外の機能性分子が結合していてもよい。機能性分子の具体例としては、細胞膜に対する親和性を向上させるために長鎖アルキル基、脂質分子等が挙げられる。核酸キャリアは、ポリペプチドを主な構成要素とするものであるため、カチオン系リポソーム等の従来の核酸キャリアに比べ細胞毒性が低く、遺伝子治療や遺伝子製剤に応用する場合の副作用を軽減でき、これらの用途に好適に用いることができる。核酸キャリアの細胞毒性は、標的細胞へ導入し、所定時間経過後の細胞生存率により評価することができる。2核酸複合体核酸キャリア中の塩基性アミノ酸の側鎖と、2本鎖核酸分子中のリン酸基との静電相互作用を介して両者を結合させることにより、核酸複合体が得られる。複合体の形成に用いられる2本鎖核酸分子としては、DNA、RNAのいずれでもよく、細胞内への導入の目的についても、例えば、所望のタンパク質を産生させること、2本鎖DNAの配列を認識する転写因子などをおとりの短鎖核酸でトラップすることデコイ法、あるいはRNA干渉法RNAi等の任意のものであってよい。したがって、2本鎖核酸分子としては、細胞内で発現させようとするタンパク質をコードする2本鎖DNA、デコイ核酸、siRNA等が挙げられる。2本鎖核酸分子の塩基長および塩基配列は、核酸複合体の細胞への導入目的、標的細胞、治療の対象となる疾患の種類等に応じて異なるが、siRNAの場合、塩基数は、9~50塩基、好ましくは15~30塩基、より好ましくは18~28塩基である。ヒトの場合、塩基数が17以上であれば、得られるポリヌクレオチドの総数417=1.7×1010がヒトの遺伝子総数6×109を上回るため、特定遺伝子のみの発現の阻害が統計的には可能になる。塩基配列については、発現対象となるタンパク質のアミノ酸配列または標的遺伝子の塩基配列が既知の場合には、GenBank、EMBL、PDB、DDBJ等のデータベースから得られた配列データを元に、任意の公知の方法を用いて標的細胞に導入する2本鎖核酸分子を設計することができる。あるいは、任意の公知の方法により単離した標的タンパク質のアミノ酸配列またはそれをコードするmRNAの塩基配列を任意の公知の方法により決定し、それらに基づいて2本鎖核酸分子を設計することもできる。導入しようとする2本鎖核酸分子と相補的な塩基配列を有する標的核酸の発現を阻害する機構としては、1RNADNAハイブリッド鎖のRNA鎖を特異的に加水分解するリボヌクレアーゼHによるmRNAポリヌクレオチド複合体の分解、2リボソーム複合体による翻訳の阻害、3ポリヌクレオチドがイントロンとエキソンの境界部を標的とする場合には、mRNAのスプライシングの阻害、4RNA干渉によるmRNAの塩基配列特異的な加水分解、5デコイ核酸による転写制御因子の阻害等が挙げられる。核酸複合体は、標的細胞および標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラ細胞内小器官の一方または双方に対する局在化活性を有していることが好ましい。核酸複合体の局在化の対象となる標的細胞、あるいは標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラについては、標的細胞内に導入しようとする2本鎖核酸分子の種類およびその細胞内における機能等に応じて適宜選択される。局在化活性を付与する手段は、核酸複合体の局在化の対象となる標的細胞、あるいは標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラに応じて、任意の公知の手段を用いることができる。例えば、標的細胞に対する局在化活性を付与するための手段の具体例としては、上述のように、その標的細胞に特異的に存在する受容体に対するリガンドを核酸キャリアに結合させること、あるいは該リガンドを2本鎖核酸分子に結合させることが挙げられる。また、標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラに対する局在化活性を付与するための手段の具体例としては、上述のように、シグナルペプチドを核酸キャリアの少なくとも一部に結合させること、あるいは該シグナルペプチドを2本鎖核酸分子に結合させることが挙げられる。なお、核酸複合体へのシグナルペプチドの導入量が多すぎると、核酸複合体の疎水性の低下による細胞導入効率の低下等を招くおそれがあるため、核酸複合体へのシグナルペプチドの導入量は、2本鎖核酸分子の分子量、標的細胞内の特定の部位もしくはオルガネラ、シグナルペプチドの分子量および親水性等に応じて適宜調節される。好ましくは、シグナルペプチドのN-末端またはC-末端が、2本鎖核酸分子の5’-末端または3’-末端と結合している。核酸キャリアまたは2本鎖核酸分子に結合させることができるシグナルペプチドの具体例については、上述の場合と同様であるため、詳しい説明を省略する。3細胞への核酸導入方法核酸複合体の調製は、任意の公知の方法を用いて行うことができるが、例えば、2本鎖核酸分子と核酸キャリアとを所定のpHの緩衝溶液に溶解、混合し、所定の温度で所定時間例えば、室温で30分間放置することにより調製することができる。2本鎖核酸分子と核酸キャリアの混合比モル比は、確実に複合体が形成されるように後者が過剰となるようにするのが好ましい。好ましい2本鎖核酸分子と核酸キャリアの混合比は、1:4~1:30、好ましくは1:10~1:30、より好ましくは1:15~1:20である。必要に応じて、過剰の核酸キャリアを除去するために、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー等の任意の公知の方法を用いて核酸複合体を精製してもよい。標的細胞への核酸複合体の導入についても、任意の公知の方法を用いて行うことができる。培養細胞へのinvitroでの核酸遺伝子の導入では、例えば、標的細胞を含む培地または培養液中に核酸複合体を添加し、所定温度で所定時間インキュベートすることにより行うこともでき、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法、超音波照射法等の他の公知の方法を用いて行うこともできる。invivoでの標的細胞への核酸複合体は、注射、点滴等の方法を用いた全身投与または局所投与等により行うことができる。細胞への導入効率は、蛍光標識を付した2本鎖核酸分子を用い、蛍光顕微鏡観察等により行うことができる。核酸複合体の導入対象となる標的細胞に特に制限はなく、外因性の核酸を導入することにより遺伝子の発現を制御できる限りにおいて任意の細胞を標的細胞とすることができる。本発明により提供される細胞への核酸の導入方法、核酸キャリアおよび核酸複合体は、細胞内において欠損している遺伝子を補ったり、異常遺伝子を持っているため機能不全に陥っている細胞の欠陥を修復または修正したりすることにより疾患を治療する遺伝子治療等に適用することができる。次に、本発明の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。[実験操作]1核酸キャリア本実施例で使用した核酸キャリアは、下記の表1に示すとおりである。なお、表1のアミノ酸配列は1文字略号を用いて表されている。また、表1において、C18はN-末端がオクタデシル基で修飾されたペプチドを表し、CholicAは、N-末端にアミド結合を介してコール酸が結合したペプチドを表し、AcはN-アセチルアミドを表す。下記の表1に示した核酸キャリア下記のエントリー1~21との比較のために、カチオン性リポソーム系核酸キャリアであるRNAiFectキアーゲン社を使用した。2標的細胞急性リンパ芽球性白血病細胞であるJurkat細胞、慢性随性白血病細胞であるK562細胞、および子宮頸がん細胞であるHela細胞を標的細胞として使用した。32本鎖核酸分子Jurkat細胞およびHela細胞に対しては、hTERTヒトテロメラーゼ逆転写酵素:がん細胞の不死化に関与している。遺伝子に対するsiRNA21塩基対を2本鎖核酸分子として使用した。Jurkat細胞およびHela細胞のhTERT遺伝子に対するsiRNAの塩基配列は、それぞれ、下記の配列番号32および33に示すとおりである。5GGAGCAAGUUGCAAAGCAUTT3[配列番号32]5AUGCUUUGCAACUUGCUCCTT3[配列番号33]K562細胞に対しては、Bcrabl9番染色体上のabl遺伝子と22番染色体上のbcr遺伝子が融合して生じるキメラ遺伝子であるフィラデルフィア染色体に存在する慢性随性白血病の原因遺伝子であり、細胞増殖シグナルを異常に亢進させ、白血病細胞を無秩序に増殖させる。遺伝子に対するsiRNA21塩基対を2本鎖核酸分子として使用した。使用したsiRNAの塩基配列は、下記の配列番号34および35に示すとおりである。5GCAGAGUUCAAAAGCCCUUTT3[配列番号34]5AACGGCUUUUGAACUCUGCTT3[配列番号35]4核酸複合体の調製200μMペプチド水溶液10μLと、20μMsiRNA水溶液10μLを室温で混合し、37°Cで30分間インキュベートした。5標的細胞への導入標的細胞の培養液または培地に、上記4で調製した核酸複合体を添加した。添加量は、100nM、200nM、または400nMのいずれかである。核酸複合体を添加後、37°Cで所定時間インキュベートした。インキュベート時間は、Jurkat細胞およびK562細胞の場合24時間、HeLa細胞の場合48時間である。6標的細胞への核酸複合体の導入効率の評価標的細胞への核酸複合体の導入効率は、蛍光ラベルで標識した2本鎖核酸分子を用いて調製した核酸複合体とインキュベートした後の標的細胞の蛍光顕微鏡観察により評価を行った。7半減期の評価37°Cの10FBS中における核酸複合体に含まれるsiRNAの分解率の経時変化より、核酸複合体に含まれるsiRNAの半減期を求めた。siRNAの分解率は、核酸複合体を加熱後単離したsiRNAのホルムアルデヒド変性アガロースゲル電気泳動法により求めた。8細胞毒性の評価核酸キャリアの細胞毒性は、核酸キャリアと共にインキュベートした標的細胞の生存率の経時変化より求めた。9RNAiによる標的遺伝子のサイレンシング効果の検討RNAiによる標的遺伝子のサイレンシング効果は、インキュベート後の細胞を溶解させ、RTPCR法を用いて標的遺伝子を増幅後、β-アクチン遺伝子を内部標準として発現量の変化を定量的に求めることにより検討した。[結果]1核酸複合体における核酸キャリアのコンホメーション核酸複合体の調製に用いたsiRNA、アミノ酸配列RL7からなる核酸キャリア3表1中のエントリー番号。以下同じ。、およびこれらより得られた核酸複合体の円偏光二色性CDスペクトルを図1に示す。核酸キャリア3単独ではランダムコイル構造に由来するCDスペクトルが観測されたのに対し、核酸複合体においては、217nmに、β-シート構造に特有の強い負のCotton効果が観測された。これらの結果より、核酸キャリア3は、二重らせん構造を有する2本鎖核酸分子の存在下で、正電荷を有するアルギニンRの側鎖が片面側に、疎水性のロイシンLの側鎖が反対面側にそれぞれ配置されたβ-シート構造を形成していることがわかる。また、アミノ酸配列の異なるペプチドについては、2本鎖核酸との複合体形成およびβ-シート構造の発現が観測されないことから、アルギニンのグアニジル基とリン酸基との静電相互作用および2本鎖核酸分子と核酸キャリア3のペプチド鎖との間の水素結合の一方または双方を介して、両者の間で強い結合が形成されていることが示唆される。2標的細胞への核酸複合体の導入効率塩基性アミノ酸であるアルギニンと疎水性アミノ酸であるロイシンとが交互に並んだアミノ酸配列RLn5≦n≦10からなる核酸キャリア1~6について、JurkatへのhTERTに対する蛍光標識siRNAの導入効率を検討した結果を図2に示す。比較のためRNAiFectを用いた場合の結果を合わせて示す。これらの結果より、siRNA単独では細胞内部に侵入することができないが、RNAiFect、およびnが7以上の核酸キャリア3~6を用いると、siRNAを細胞内部に導入できることが確認された。アミノ酸配列RL7からなる核酸キャリア3を用いて、siRNAに対する核酸キャリア3のモル比がJurkat細胞へのsiRNAの導入効率に及ぼす効果を併せて検討した。結果を図3に示す。これらの結果より、Jurkat細胞へのsiRNAの導入効率を十分に確保するためには、siRNAに対する核酸キャリア3のモル比が1:6以上、より好ましくは1:10以上である必要があることが確認された。核酸キャリア3および4への疎水性基またはシグナルペプチドNLSの導入がJurkat細胞へのsiRNAの導入効率に及ぼす効果を図4に示す。これらの結果より、核酸キャリア3とJurkat細胞との組み合わせ核酸キャリア12において、N-末端へのオクタデシル基およびHIV1Revタンパク質由来NLSの導入により、Jurkat細胞へのsiRNAの導入効率が大幅に向上することが確認された。同様の実験をHeLa細胞について行った結果を図5および図6に示す。図5の結果より、HeLa細胞へのsiRNAの導入効率を十分に確保するためには、siRNAに対する核酸キャリア3のモル比が1:15以上である必要があることが確認された。また、図6の結果より、HeLa細胞へのsiRNAの導入については、核酸キャリア3にHIV1Revタンパク質由来NES配列核酸キャリア16、Dsk1由来NES配列核酸キャリア19、およびMatrin3由来NES配列核酸キャリア21を導入した場合に、siRNAの導入効率が増大することが確認された。3核酸複合体に含まれるsiRNAの半減期10FBS中でのsiRNAおよび核酸複合体に含まれるsiRNAの分解率の経時変化をゲル電気泳動でモニタした結果を図7、図8、下記の表2および3に示す。図7の結果より、siRNAは10FBS中で速やかに半減期2時間程度で分解するが、核酸キャリア3~6と核酸複合体を形成させることにより、半減期が数倍~20倍程度に増大することが確認された。また、細胞へのsiRNAの導入効率の増大が観測されなかった核酸キャリア1および2については、このような半減期の増大が観測されなかったことから、10FBS中での半減期の増大は核酸複合体の形成によるものであると考えられる。また、RNAiFectについては、複合体の形成による半減期の増大は観測されなかった。また、図8に示すように、NES配列を導入した核酸キャリア16~21についても半減期の増大が観測され、特に核酸キャリア16について顕著な効果が見られた。4細胞毒性Jurkat細胞およびK562細胞について、核酸キャリア1~6およびRNAiFectの存在下でインキュベートした場合の生存率の経時変化を検討した。24時間後の生存率を図9および9に示す。図9に示すように、Jurkat細胞に対しては、核酸キャリア1~6の全てが殆ど細胞毒性を示さないことがわかった。一方、K562細胞に対しては、図10に示すように、核酸キャリア2~5を高濃度で添加した場合に24時間後の生存率の低下が観測された。しかし、実際に使用される1~2μM程度の濃度では、核酸キャリア1~6の全てが90以上と、RNAiFectよりもはるかに高い細胞生存率を示した。特に、核酸キャリア1および6は、K562細胞に対しても殆ど細胞毒性を示さないことがわかった。5核酸複合体を用いたRNAiによるJurkat細胞hTERT遺伝子のサイレンシング効果Jurkat細胞のhTERT遺伝子に対するsiRNA21塩基対:配列番号32と核酸キャリア3との複合体の存在下でJurkat細胞をインキュベート48時間した場合におけるhTERT遺伝子の発現量の測定結果を下記の表4に示す。この結果より、核酸キャリア3は、RNAiFectと同程度の核酸導入効率を示すことが確認された。6核酸複合体を用いたRNAiによるHeLa細胞hTERT遺伝子のサイレンシング効果HeLa細胞のhTERT遺伝子に対するsiRNA21塩基対:配列番号33と核酸キャリア3との複合体の存在下でHeLa細胞をインキュベート48時間した場合におけるhTERT遺伝子の発現量の測定結果を下記の表5に示す。この結果より、核酸キャリア3は、RNAiFectを用いた場合よりも少ないsiRNAの添加量で、RNAiFectと同程度のサイレンシング効果を示すことが確認された。7核酸複合体を用いたRNAiによるK562細胞Bcrabl遺伝子のサイレンシング効果K562細胞のbcrabl遺伝子に対するsiRNArevNESコンジュゲート100nM配列番号34で表される塩基配列を有するsiRNAの5’-末端に、配列番号8で表されるアミノ酸配列を有するHIV1revタンパクNES配列のN-末端が直接共有結合している。と核酸キャリア310当量または核酸キャリアLRALLRALLRALLRALLRALLRAL配列番号36、10当量との複合体の存在下にK562細胞をインキュベート48時間した場合におけるbcrabl遺伝子の発現量の測定結果を下記の表6に示す。これらの結果より、K562細胞の場合には、シグナルペプチドを結合させたsiRNAを用いて調製された核酸キャリアを用いることにより、核酸の細胞への導入効率およびK562細胞Bcrabl遺伝子のサイレンシング効果が大幅に向上することが確認された。