"人工多能性幹細胞の樹立効率の改善方法であって、体細胞の核初期化工程において、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6Kからなる群より選択される1以上のタンパク質の活性化型のレベルを増大させることを含む、方法。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を体細胞に接触させることを含む、請求項1記載の方法。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、請求項2記載の方法。RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、請求項2又は3記載の方法。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項3又は4記載の方法。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、請求項3又は4記載の方法。PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする請求項3記載の方法。AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、請求項2又は3記載の方法。AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項3又は8記載の方法。p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を体細胞に接触させることを更に含む、請求項2記載の方法。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される因子を含有してなる、人工多能性幹細胞の樹立効率改善剤。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、請求項11記載の剤。RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、請求項11又は12記載の剤。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項12又は13記載の剤。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、請求項12又は13記載の剤。PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする請求項12記載の剤。AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、請求項11又は12記載の剤。AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項12又は17記載の剤。p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を更に含有する、請求項11記載の剤。体細胞に核初期化物質と、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子とを接触させることを含む、人工多能性幹細胞の製造方法。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、請求項20記載の方法。RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、請求項20又は21記載の方法。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項21又は22記載の方法。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、請求項21又は22記載の方法。PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする請求項21記載の方法。AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、請求項20又は21記載の方法。AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項21又は26記載の方法。p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を体細胞に接触させることを更に含む、請求項20記載の方法。核初期化物質が、Octファミリーのメンバー、Soxファミリーのメンバー、Klf4ファミリーのメンバー、Mycファミリーのメンバー、Linファミリーのメンバー及びNanog、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される、請求項20記載の方法。核初期化物質がOct34、Klf4及びSox2、又はそれらをコードする核酸である、請求項20記載の方法。核初期化物質がOct34、Klf4、Sox2並びにcMyc若しくはLMyc及び/又はNanog及び/又はLin28若しくはLin28B、或いはそれらをコードする核酸である、請求項20記載の方法。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される因子と、核初期化物質とを含有してなる、人工多能性幹細胞の誘導剤。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、請求項32記載の剤。RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、請求項32又は33記載の剤。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項33又は34記載の剤。RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、請求項33又は34記載の剤。核初期化物質が、Octファミリーのメンバー、Soxファミリーのメンバー、Klf4ファミリーのメンバー、Mycファミリーのメンバー、Linファミリーのメンバー及びNanog、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される、請求項32記載の剤。PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする請求項33記載の剤。AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、請求項32又は33記載の剤。AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、請求項33又は38記載の剤。p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を更に含有する、請求項32記載の剤。核初期化物質がOct34、Klf4及びSox2、又はそれらをコードする核酸である、請求項32記載の剤。核初期化物質がOct34、Klf4、Sox2並びにcMyc若しくはLMyc及び/又はNanog及び/又はLin28若しくはLin28B、或いはそれらをコードする核酸である、請求項32記載の剤。Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1又はS6Kをコードする外来性核酸を含む、人工多能性幹細胞。前記外来性核酸がゲノムに組み込まれている、請求項44記載の細胞。下記の工程:請求項20~31のいずれか1項に記載の方法により人工多能性幹細胞を製造する工程、及び上記工程で得られた人工多能性幹細胞に分化誘導処理を行い、体細胞に分化させる工程、を含む、体細胞の製造方法。人工多能性幹細胞の樹立効率改善のための、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子の使用。人工多能性幹細胞の製造のための、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子の使用であって、該因子を核初期化物質とともに体細胞に接触させることを特徴とする、使用。体細胞の製造における、請求項44又は45記載の人工多能性幹細胞の使用。体細胞の製造における細胞ソースとしての、請求項44又は45記載の人工多能性幹細胞。本発明の目的は、iPS細胞の樹立効率を改善する手段を提供することであり、それを用いた効率的なiPS細胞の製造方法を提供することである。本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、体細胞の核初期化工程において、活性化型のRasファミリーメンバー、その標的因子又はその関連因子であるPI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1若しくはS6Kの活性化型分子のレベルを増大させることにより、iPS細胞の樹立効率を顕著に増大させ得ることを明らかにした。また、種々の活性化型変異体を用いた実験から、Rasタンパク質による、PI3キナーゼを介するシグナル伝達経路PI3キナーゼ経路、RalGEFを介するシグナル伝達経路Ral経路及びAKT経路の活性化が、iPS樹立効率の改善に大きく寄与していることを明らかにし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の通りのものである。1人工多能性幹細胞の樹立効率の改善方法であって、体細胞の核初期化工程において、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6Kからなる群より選択される1以上のタンパク質の活性化型のレベルを増大させることを含む、方法。2Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1およびS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を体細胞に接触させることを含む、上記1記載の方法。3Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、上記2記載の方法。4RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、上記2又は3記載の方法。5RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記3又は4記載の方法。6RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、上記3又は4記載の方法。7PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする上記3記載の方法。8AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、上記2又は3記載の方法。9AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記3又は8記載の方法。10p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を体細胞に接触させることを更に含む、上記2記載の方法。11Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される因子を含有してなる、人工多能性幹細胞の樹立効率改善剤。12Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、上記11記載の剤。13RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、上記11又は12記載の剤。14RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記12又は13記載の剤。15RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、上記12又は13記載の剤。16PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする上記12記載の剤。17AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、上記11又は12記載の剤。18AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記12又は17記載の剤。19p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を更に含有する、上記11記載の剤。20体細胞に核初期化物質と、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子とを接触させることを含む、人工多能性幹細胞の製造方法。21Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、上記20記載の方法。22RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、上記20又は21記載の方法。23RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記21又は22記載の方法。24RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、上記21又は22記載の方法。25PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする上記21記載の方法。26AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、上記20又は21記載の方法。27AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記21又は26記載の方法。28p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を体細胞に接触させることを更に含む、上記20記載の方法。29核初期化物質が、Octファミリーのメンバー、Soxファミリーのメンバー、Klf4ファミリーのメンバー、Mycファミリーのメンバー、Linファミリーのメンバー及びNanog、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される、上記20記載の方法。30核初期化物質がOct34、Klf4及びSox2、又はそれらをコードする核酸である、上記20記載の方法。31核初期化物質がOct34、Klf4、Sox2並びにcMyc若しくはLMyc及び/又はNanog及び/又はLin28若しくはLin28B、或いはそれらをコードする核酸である、上記20記載の方法。32Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される因子と、核初期化物質とを含有してなる、人工多能性幹細胞の誘導剤。33Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー及びS6Kが恒常的活性化型である、上記32記載の剤。34RasファミリーメンバーがERas、HRas、NRas及びKRasからなる群より選択される、上記32又は33記載の剤。35RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路から選択される1以上のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記33又は34記載の剤。36RasファミリーメンバーがPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化する、上記33又は34記載の剤。37核初期化物質が、Octファミリーのメンバー、Soxファミリーのメンバー、Klf4ファミリーのメンバー、Mycファミリーのメンバー、Linファミリーのメンバー及びNanog、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される、上記32記載の剤。38PI3キナーゼがAKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化することを特徴とする上記33記載の剤。39AKTファミリーメンバーがAKT1AKT2及びAKT3からなる群より選択される、上記32又は33記載の剤。40AKTファミリーメンバーがmTOR経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化する、上記33又は39記載の剤。41p53阻害薬、GLISファミリーメンバー、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子を更に含有する、上記32記載の剤。42核初期化物質がOct34、Klf4及びSox2、又はそれらをコードする核酸である、上記32記載の剤。43核初期化物質がOct34、Klf4、Sox2並びにcMyc若しくはLMyc及び/又はNanog及び/又はLin28若しくはLin28B、或いはそれらをコードする核酸である、上記32記載の剤。44Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1又はS6Kをコードする外来性核酸を含む、人工多能性幹細胞。45前記外来性核酸がゲノムに組み込まれている、上記44記載の細胞。46下記の工程:上記20~31のいずれかに記載の方法により人工多能性幹細胞を製造する工程、及び上記工程で得られた人工多能性幹細胞に分化誘導処理を行い、体細胞に分化させる工程、を含む、体細胞の製造方法。47人工多能性幹細胞の樹立効率改善のための、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子の使用。48人工多能性幹細胞の製造のための、Rasファミリーメンバー、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1及びS6K、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される1以上の因子の使用であって、該因子を核初期化物質とともに体細胞に接触させることを特徴とする、使用。49体細胞の製造における、上記44又は45記載の人工多能性幹細胞の使用。50体細胞の製造における細胞ソースとしての、上記44又は45記載の人工多能性幹細胞。核初期化の際にRasタンパク質、その標的因子であるPI3キナーゼ、RalGEF若しくはRaf、又はその関連因子であるAKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1若しくはS6Kの活性化型分子のレベルを増大させると、iPS細胞の樹立効率を顕著に向上させることができるので、従来樹立効率の低かったcMycを除く3因子によるiPS細胞誘導などに特に有用である。本発明は、体細胞の核初期化工程において、活性化型のRasタンパク質、活性化型のその標的因子、活性化型のRasの標的因子の下流シグナル因子又はそのシグナルの活性化因子の細胞内レベルを増大させることによる、iPS細胞の樹立効率の改善方法を提供する。活性化型のRasタンパク質、活性化型のその標的因子、活性化型のRasの標的因子の下流シグナル因子又はそのシグナルの活性化因子の細胞内レベルを増大させる手段は特に制限されないが、例えば、Rasファミリーのメンバーであるタンパク質、その標的因子であるPI3キナーゼ、RalGEF若しくはRaf、Rasの標的因子の下流シグナル因子又はそのシグナルの活性化因子であるAKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1若しくはS6K、又はそれらをコードする核酸、或いはRasタンパク質を活性化型に変換させる反応を促進する物質又はRasタンパク質を不活性化型に変換させる反応を阻害する物質を、体細胞に接触させる方法などが挙げられる。ここで体細胞の核初期化は、体細胞に核初期化物質を導入することにより行われるので、本発明はまた、体細胞に上記物質と核初期化物質とを接触させることによる、iPS細胞の製造方法を提供する。尚、本明細書では、核初期化物質のみではiPS細胞が樹立できず、活性化型のRasタンパク質レベル等を増大させることによりiPS細胞が樹立される場合も、樹立効率の改善に該当するものとして取り扱う。体細胞ソース本発明においてiPS細胞作製のための出発材料として用いることのできる体細胞は、哺乳動物例えば、ヒト、マウス、サル、ウシ、ブタ、ラット、イヌ等由来の生殖細胞以外のいかなる細胞であってもよく、例えば、角質化する上皮細胞例、角質化表皮細胞、粘膜上皮細胞例、舌表層の上皮細胞、外分泌腺上皮細胞例、乳腺細胞、ホルモン分泌細胞例、副腎髄質細胞、代謝貯蔵用の細胞例、肝細胞、境界面を構成する内腔上皮細胞例、I型肺胞細胞、内鎖管の内腔上皮細胞例、血管内皮細胞、運搬能をもつ繊毛のある細胞例、気道上皮細胞、細胞外マトリックス分泌用細胞例、線維芽細胞、収縮性細胞例、平滑筋細胞、血液と免疫系の細胞例、Tリンパ球、感覚に関する細胞例、桿細胞、自律神経系ニューロン例、コリン作動性ニューロン、感覚器と末梢ニューロンの支持細胞例、随伴細胞、中枢神経系の神経細胞とグリア細胞例、星状グリア細胞、色素細胞例、網膜色素上皮細胞、及びそれらの前駆細胞等が挙げられる。細胞の分化の程度や細胞を採取する動物の齢などに特に制限はなく、未分化な前駆細胞であっても、最終分化した成熟細胞であっても、同様に本発明における体細胞の起源として使用することができる。ここで未分化な前駆細胞としては、たとえば神経幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、歯髄幹細胞等の組織幹細胞体性幹細胞が挙げられる。体細胞を採取するソースとなる哺乳動物個体は特に制限されないが、得られるiPS細胞がヒトの再生医療用途に使用される場合には、拒絶反応が起こらないという観点から、患者本人又はHLAの遺伝子型が同一若しくは実質的に同一である他人から体細胞を採取することが特に好ましい。ここでHLAの遺伝子型が実質的に同一とは、免疫抑制剤などの使用により、該体細胞由来のiPS細胞から分化誘導することにより得られた細胞を患者に移植した場合に移植細胞が生着可能な程度にHLAの遺伝子型が一致していることをいう。たとえば主たるHLA例えばHLAA、HLAB及びHLADRの3遺伝子座、或いはさらにHLACを加えた4遺伝子座の遺伝子型がすべて同一である場合などが挙げられる以下同じ。また、ヒトに投与移植しない場合、例えば、患者の薬剤感受性や副作用の有無を評価するためのスクリーニング用の細胞のソースとしてiPS細胞を使用する場合には、同様に患者本人又は薬剤感受性や副作用と相関する遺伝子多型が同一である他人から体細胞を採取することが望ましい。哺乳動物から分離した体細胞は、核初期化工程に供するに先立って、細胞の種類に応じてその培養に適した自体公知の培地で前培養することができる。そのような培地としては、例えば、約5~20の胎仔ウシ血清を含む最小必須培地MEM、ダルベッコ改変イーグル培地DMEM、RPMI1640培地、199培地、F12培地などが挙げられるが、それらに限定されない。核初期化物質及び活性化型Rasタンパク質のレベルを増大させる物質さらに必要に応じて、後述する他のiPS細胞の樹立効率改善物質との接触に際し、例えば、カチオニックリポソームなど導入試薬を用いる場合には、導入効率の低下を防ぐため、無血清培地に交換しておくことが好ましい場合がある。Rasタンパク質、その標的因子の活性化型分子、Ras標的因子の下流シグナル因子又はそのシグナルの活性化因子のレベルを増大させる物質本明細書において活性化型Rasタンパク質のレベルを増大させる物質とは、Rasファミリーに属する1以上のタンパク質において、活性化型GTP結合型として存在するタンパク質レベルを増大させることができるものであれば、いかなる物質であってもよい。すなわち、Rasタンパク質やそれをコードする核酸自体や、Rasタンパク質を不活性化型GDP結合型から活性化型に変換させる反応GDPGTP交換反応を促進するか、或いはRasタンパク質を活性化型から不活性化型に変換させる反応GTP加水分解反応を阻害することにより、結果的に活性化型のRasタンパク質レベルを増大させる物質も、本明細書における活性化型Rasタンパク質のレベルを増大させる物質に含まれる。本明細書において活性化型のRasタンパク質標的因子のレベルを増大させる物質とは、PI3キナーゼ、RalGEF及びRafの3つのRasタンパク質標的因子のうちの1以上の因子、好ましくは1若しくは2因子、より好ましくはPI3キナーゼ及び/又はRalGEFの活性化型の細胞内レベルを増大させることができるものであれば、いかなる物質であってもよい。すなわち、PI3キナーゼ、RalGEF若しくはRaf又はそれをコードする核酸自体や、細胞内のこれら標的因子を細胞膜にリクルートする局在化因子、例えば活性化型のRasタンパク質も、本明細書における活性化型のRasタンパク質標的因子のレベルを増大させる物質に含まれる。本明細書においてRas標的因子の下流シグナル因子又はそのシグナルの活性化因子のレベルを増大させる物質とは、Rasタンパク質標的因子のさらに下流シグナルの因子もしくはこのシグナルの活性化因子であるAKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1若しくはS6Kであり、好ましくはAKTファミリーメンバーの活性化型、Rheb、TCL1若しくはS6Kの活性化型の細胞内レベルを増大させることができるものであれば、いかなる物質であってもよい。すなわち、AKTファミリーメンバー、Rheb、TCL1若しくはS6K又はそれをコードする核酸自体や、細胞内のAKTファミリーメンバーを細胞膜にリクルートする局在化因子、例えば活性化型のPI3キナーゼも、本明細書における活性化型のRasタンパク質関連因子のレベルを増大させる物質に含まれる。以下、Rasタンパク質、その標的因子又はRas標的因子の下流シグナル因子の活性化型分子およびそのシグナルの活性化因子のレベルを増大させる物質を包括して、本発明の樹立効率改善因子という場合がある。Rasファミリーメンバー本明細書におけるRasファミリーメンバーとは、癌原遺伝子として同定されたHRas、KRas、NRasとの一次構造上の相同性により同定されたRasサブファミリータンパク質のうち、Raf、PI3キナーゼ及びRalGEFから選ばれる1以上の分子、好ましくはPI3キナーゼ及び/又はRalGEFを標的因子とし、活性化型Rasタンパク質の作用により上記因子の下流のシグナル伝達経路即ち、RafMAPキナーゼ経路MAPキナーゼ経路、PI3キナーゼ経路、Ral経路を活性化しうるタンパク質を意味する。好ましいRasファミリーメンバーの例としては、HRas、KRas、NRas、ERas等が挙げられるが、これらに限定されない。HRasタンパク質の好ましい例としては、例えば、配列番号:2で表されるアミノ酸配列からなるマウスHRasRefSeqAccessionNoNP032310、配列番号:4で表されるアミノ酸配列からなるヒトHRasRefSeqAccessionNoNP001123914、或いは他の哺乳動物におけるそのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のHRasを用いることが望ましいが、異種HRasを用いることもできる。KRasタンパク質の好ましい例としては、例えば、配列番号:6で表されるアミノ酸配列からなるマウスKRasRefSeqAccessionNoNP067259、配列番号:8で表されるアミノ酸配列からなるヒトKRasRefSeqAccessionNoNP203524、或いは他の哺乳動物におけるそのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のKRasを用いることが望ましいが、異種KRasを用いることもできる。NRasタンパク質の好ましい例としては、例えば、配列番号:10で表されるアミノ酸配列からなるマウスNRasRefSeqAccessionNoNP035067、配列番号:12で表されるアミノ酸配列からなるヒトNRasRefSeqAccessionNoNP002515、或いは他の哺乳動物におけるそのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のNRasを用いることが望ましいが、異種NRasを用いることもできる。ERasタンパク質の好ましい例としては、例えば、配列番号:14で表されるアミノ酸配列からなるマウスERasRefSeqAccessionNoNP853526、配列番号:16で表されるアミノ酸配列からなるヒトERasRefSeqAccessionNoNP853510、或いは他の哺乳動物におけるそのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアントなどがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のERasを用いることが望ましいが、異種ERasを用いることもできる。Rasタンパク質のアミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムNCBIBLASTNationalCenterforBiotechnologyInformationBasicLocalAlignmentSearchToolのblastpプログラムを用い、以下の条件期待値10;ギャップを許す;マトリクスBLOSUM62;フィルタリングOFFにて計算することができる。上記条件下でヒトHRasとマウスHRasとは100、ヒトKRasとマウスKRasとは約89、ヒトNRasとマウスNRasとは約99のアミノ酸同一性を示す。Rasタンパク質はN末端から164アミノ酸の領域が極めて高度に保存されており、当該領域ではヒトKRasとマウスKRasとは約98、ヒトNRasとマウスNRasとは100のアミノ酸同一性を示す。また、当該領域におけるヒトHRasとヒトKRasとのアミノ酸同一性は約95、ヒトHRasとヒトNRasとのアミノ酸同一性は約92である。当該領域の中でも、グアニンヌクレオチドとの結合に関与する5つのドメインG1~G5、標的因子との結合に関与するエフェクタードメインは特によく保存されている。さらに、多様性に富むC末端側配列の中でも、C末端の4アミノ酸残基はCaaxモチーフCシステイン、a脂肪族アミノ酸、x任意のアミノ酸配列番号17と呼ばれて高度に保存されており、翻訳後修飾を受けてシステイン残基にファルネシル基が付加され、続いて末端3アミノ酸の切断、新たに露出したC末端システインのメチルエステル化が起こる。かかる脂質修飾によりRasタンパク質は細胞膜の内表面と強く結合する。HRas、KRas、NRasなどの多くのRasタンパク質は、通常GDPが結合した不活性化型として存在し、上流からのシグナルを受けるとGTPが結合した活性化型に変換されるが、種々のがん細胞から恒常的に活性化されたRas変異体が単離されており、恒常的な活性化に寄与する数多くのアミノ酸置換が報告されている。このようなRasタンパク質の恒常的活性化変異体を体細胞へ導入すれば、効率よく活性化型のRasタンパク質レベルを増大させることができる。例えば、H、K及びNRasの12番目のグリシンがバリンに置換された変異体は、Rasの下流の3つのシグナル伝達経路PI3キナーゼ経路、Ral経路、MAPキナーゼ経路のすべてを活性化する恒常的活性化型変異体である。また、上記変異に加えてさらに35番目のスレオニンがセリンに置換された二重変異体、37番目のグルタミン酸がグリシンに置換された二重変異体及び40番目のチロシンがシステインに置換された二重変異体は、それぞれMAPキナーゼ経路、Ral経路及びPI3キナーゼ経路を選択的に活性化する恒常的活性化型変異体である。ヒト及びマウスERasは、HRasと全体では40程度の相同性であるが、Rasの機能に必須なG1~G5及びエフェクタードメイン、膜局在化に必要なCaaxモチーフは保存されている。H、K及びNRasの12番目のグリシン、59番目のアラニン及び63番目のグルタミン酸のうち、1つでも他のアミノ酸に置換されると恒常的活性化型となるが、ヒトERasでは2つ、マウスERasでは3つのアミノ酸が他のRasとは異なっており、Rasの下流の3つのシグナル伝達経路のうちPI3キナーゼ経路を恒常的に活性化することが知られている。本発明で用いられる恒常的活性化型のRasタンパク質は、Rasの下流の3つのシグナル伝達経路PI3キナーゼ経路、Ral経路、MAPキナーゼ経路の少なくとも1つを恒常的に活性化し得るものであれば特に制限はないが、好ましくはPI3キナーゼ経路、Ral経路及びMAPキナーゼ経路のうちの1つもしくは2つのシグナル伝達経路を恒常的に活性化するものであり、より好ましくはPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化するものである。PI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を恒常的に活性化するRasタンパク質の具体例として、ERasや、H、K又はNRasの12番目のグリシンがバリンに置換され、かつ37番目のグルタミン酸がグリシンに置換されるか、40番目のチロシンがシステインに置換された二重変異体などが挙げられるが、これらに限定されない。また、本発明で用いられるRasタンパク質は、Rasの下流の3つのシグナル伝達経路のいずれもが恒常的に不活性化されない限り、好ましくはPI3キナーゼ経路及びRal経路のいずれもが恒常的に不活性化されない限り、上記のいずれかのRasタンパク質のアミノ酸配列において、1又は2以上、好ましくは1~20個、より好ましくは1~10個、さらに好ましくは1~数5432個のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよい。或いは、上記のいずれかのRasタンパク質のアミノ酸配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよい。好ましくは、膜局在化に必要なCaaxモチーフが保存され、かつRasの機能に必須なG110~17番目のアミノ酸、G232~36番目のアミノ酸、G357~60番目のアミノ酸、G4116~119番目のアミノ酸、G5145~147番目のアミノ酸ドメイン、及びエフェクタードメイン26~45番目のアミノ酸が保存されているか、或いは恒常的な活性化をもたらすように変異されているものが挙げられる。Rasの標的因子エフェクター本発明で用いられるRasの標的因子エフェクターとしては、PI3キナーゼ、RalGEF及びRafが挙げられる。本発明におけるPI3キナーゼは、Rasの標的因子となるクラスIAPI3キナーゼであり、p110触媒サブユニットα、β及びδの3つのアイソフォームがあると調節サブユニットp85α、p85β、p55γ及びそれらのスプライシングバリアントがあるとからなる。このうち、Rasとの結合に関与するドメイン及びホスファチジルイノシトール45二リン酸PIP2からホスファチジルイノシトール345三リン酸PIP3へのリン酸化反応を触媒するキナーゼドメインを有するp110を、本発明の樹立効率改善因子として好ましく用いることができる。p110タンパク質の好ましい例としては、例えば、配列番号:19で表されるアミノ酸配列からなるマウスp110αRefSeqAccessionNoNP032865、配列番号:21で表されるアミノ酸配列からなるヒトp110αRefSeqAccessionNoNP006209、マウスp110βRefSeqAccessionNoNP083370、ヒトp110βRefSeqAccessionNoNP006210、マウスp110δRefSeqAccessionNoNP0010250058、ヒトp110δRefSeqAccessionNoNP005017、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のp110を用いることが望ましいが、異種p110を用いることもできる。RalGEFタンパク質の好ましい例としては、例えば、配列番号:23で表されるアミノ酸配列からなるマウスRalGDSRefSeqAccessionNoNP033084、配列番号:25で表されるアミノ酸配列からなるヒトRalGDSRefSeqAccessionNoNP006266、マウスRglRefSeqAccessionNoNP058542、ヒトRglRefSeqAccessionNoNP055964、マウスRlfRgl2RefSeqAccessionNoNP033085、ヒトRlfRgl2RefSeqAccessionNoNP004752、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のRalGEFを用いることが望ましいが、異種RalGEFを用いることもできる。Rafタンパク質の好ましい例としては、例えば、配列番号:27で表されるアミノ酸配列からなるマウスcRafRefSeqAccessionNoNP084056、配列番号:29で表されるアミノ酸配列からなるヒトcRafRefSeqAccessionNoNP002871、マウスARafRefSeqAccessionNoNP033833、ヒトARafRefSeqAccessionNoNP001645、マウスBRafRefSeqAccessionNoNP647455、ヒトBRafRefSeqAccessionNoNP004324、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のRafを用いることが望ましいが、異種Rafを用いることもできる。PI3キナーゼ、RalGEF、RafなどのRas標的因子は、活性化型Rasとの結合を介して細胞膜の内表面に局在化することにより活性化され、下流のシグナル伝達経路を活性化する。従って、これら標的因子の恒常的活性化型変異体を体細胞へ導入すれば、効率よく活性化型の該Ras標的因子のレベルを増大させることができる。例えば、Ras標的因子は膜に局在化することにより活性化されるので、該標的因子のN末端若しくはC末端に膜局在化シグナル配列を付加することにより、該標的因子の恒常的活性化型変異体を作製することができる。例えば、該標的因子のN末端にミリストイル化シグナル配列例えば、cSrc由来のミリストイル化シグナル配列を付加するか例、実施例3のMyrPI3K等、或いはC末端にCaaxモチーフを付加することにより例、実施例3のPI3KCaaX、実施例4のRalGDSCaax、RafCaaX等、膜局在性の恒常的活性化型変異体とすることができる。その他の恒常的活性化型変異体として、例えば、p110αの1047番目のヒスチジンがアルギニンに置換されたPI3キナーゼ変異体、p110αの545番目のグルタミン酸がリジンに置換されたPI3キナーゼ変異体、p110αの227番目のリジンがグルタミン酸に置換されたPI3キナーゼ変異体、p110のN末端側の108アミノ酸調節サブユニット結合ドメインを欠失したPI3キナーゼ変異体、cRafのN末端側の305アミノ酸Ras結合ドメインを含むを欠失したRaf変異体、BRafの600番目のバリンがグルタミン酸に置換されたRaf変異体、cRafの340番目のチロシンがアスパラギン酸に置換されたRaf変異体などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明で用いられる恒常的活性化型のRas標的因子は、好ましくはPI3キナーゼp110又はRalGEFの恒常的活性化変異体であり、具体的には、後記実施例で用いられるMyrPI3K、PI3KCaaX、RalGDSCaaX等が挙げられる。本発明で用いられる恒常的活性化型のPI3キナーゼは、AKT経路のシグナル伝達経路を恒常的に活性化するものである。また、本発明で用いられるRas標的因子は、該標的因子の下流のシグナル伝達経路が恒常的に不活性化されない限り、上記のいずれかのRas標的因子のアミノ酸配列において、1又は2以上、好ましくは1~20個、より好ましくは1~10個、さらに好ましくは1~数5432個のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよい。或いは、上記のいずれかのRasタンパク質のアミノ酸配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよい。Rasの標的因子エフェクターの下流シグナル因子およびそのシグナルの活性化因子本発明で用いられるRasの標的因子エフェクターの下流シグナル因子としては、AKTファミリーメンバー、Rheb及びS6Kが挙げられ、Rasの標的因子エフェクターの下流シグナルの活性化因子としては、TCL1が挙げられる。本明細書におけるAKTファミリーメンバーとは、ウイルス性癌遺伝子であるvAktの相同遺伝子として同定され、その下流にあるmTORの活性化へとシグナルを伝達し得るタンパク質である。好ましいAKTファミリーメンバーの例としては、AKT1、AKT2、AKT3等が挙げられるが、これには限定されない。AKTタンパク質の好ましい例としては、例えば配列番号:35で表わされるアミノ酸配列からなるマウスAkt1RefSeqAccessionNoNP001159366、配列番号:37で表わされるアミノ酸配列からなるヒトAKT1RefSeqAccessionNoNP001014432、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント例えば、RefSeqAccessionNoNP033782、RefSeqAccessionNoNP001014431、RefSeqAccessionNoNP005154など、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のAKTファミリーメンバーを用いることが望ましいが、異種AKTファミリーメンバーを用いることもできる。Rhebタンパク質の好ましい例としては、例えば配列番号:39で表わされるアミノ酸配列からなるマウスRhebRefSeqAccessionNoNP444305、配列番号:41で表わされるアミノ酸配列からなるヒトRHEBRefSeqAccessionNoNP005605、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のRhebを用いることが望ましいが、異種Rhebを用いることもできる。TCL1タンパク質の好ましい例としては、例えば配列番号:43で表わされるアミノ酸配列からなるマウスTcl1RefSeqAccessionNoNP033363、配列番号:45で表わされるアミノ酸配列からなるヒトTCL1ARefSeqAccessionNoNP001092195、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント例えば、RefSeqAccessionNoNP068801など、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のTCL1を用いることが望ましいが、異種TCL1を用いることもできる。S6Kタンパク質の好ましい例としては、例えば配列番号:47で表わされるアミノ酸配列からなるS6KRefSeqAccessionNoNP001107806、配列番号:49で表わされるアミノ酸配列からなるヒトS6K1RefSeqAccessionNoNP003152、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント例えば、RefSeqAccessionNoNP082535など、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のS6Kを用いることが望ましいが、異種S6Kを用いることもできる。AKTファミリーメンバーは、活性化型RasやPI3キナーゼ等との結合を介して細胞膜の内表面に局在化することにより活性化され、下流のシグナル伝達経路を活性化する。従って、AKTファミリーメンバーの恒常的活性化型変異体を体細胞へ導入すれば、効率よく下流シグナル因子のレベルを増大させることができる。例えば、AKTファミリーメンバーは膜に局在化することにより活性化されるので、該標的因子のN末端若しくはC末端に膜局在化シグナル配列を付加することにより、該標的因子の恒常的活性化型変異体を作製することができる。例えば、該標的因子のN末端にミリストイル化シグナル配列例えば、cSrc由来のミリストイル化シグナル配列を付加することにより例、実施例8のMyrAKT1等、膜局在性の恒常的活性化型変異体とすることができる。その他の恒常的活性化型変異体として、例えば、AKT1の40番目のグルタミン酸がリシンに置換されたPI3キナーゼ変異体E40KAKT1、AKT1の17番目のグルタミン酸がリジンに置換されたPI3キナーゼ変異体E17KAKT1などが挙げられるが、これらに限定されない。また、S6Kタンパク質は、通常389番目のトレオニンがリン酸化されることで活性化型に変換されるが、この389番目をグルタミン酸へ変換することで、恒常的に活性化することが報告されている。このようなS6Kタンパク質の恒常的活性化変異体を体細胞へ導入すれば、効率よく活性化型のS6Kタンパク質レベルを増大させることができる。また、本発明で用いられるRasの標的因子エフェクターの下流シグナル因子およびこのシグナルの活性化因子は、さらなる下流のシグナル伝達経路が恒常的に不活性化されない限り、上記のいずれかのRasの標的因子エフェクターの下流シグナル因子およびこのシグナルの活性化因子のアミノ酸配列において、1又は2以上、好ましくは1~20個、より好ましくは1~10個、さらに好ましくは1~数5432個のアミノ酸が置換、欠失、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよい。或いは、上記のいずれかのAKTファミリーメンバー、Rheb、S6K及びTCL1タンパク質のアミノ酸配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上の同一性を有するアミノ酸配列を含むタンパク質であってもよい。本発明で用いられる恒常的活性化型のRasの標的因子エフェクターの下流シグナル因子およびこのシグナルの活性化因子は、好ましくはAKTファミリーメンバー又はS6Kの恒常的活性化変異体であり、具体的には、後記実施例で用いられるMyrAKT1、MyrAKT2、MyrAKT3、S6K1T389E等が挙げられる。Ras活性化因子受容体チロシンキナーゼが増殖因子などの細胞外シグナルの刺激を受けて活性化されると自己リン酸化を起こし、これを認識するGrb2やShcなどのアダプタータンパク質を介してRasGEFであるSos、RasGRF、RasGRF2、RasGRP、SmgGDS、Vav、C3G等が細胞膜にリクルートされ、それによって細胞膜に局在するRasタンパク質が活性化される。従って、RasGEFやアダプタータンパク質を体細胞に導入することによっても、Rasタンパク質の活性化を介してiPS細胞の樹立効率を改善することができる。Sosタンパク質の好ましい例としては、マウスSos1RefSeqAccessionNoNP033257、ヒトSos1RefSeqAccessionNoNP005624、マウスSos2RefSeqAccessionNoXP127051、ヒトSos2RefSeqAccessionNoNP008870、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のSosを用いることが望ましいが、異種Sosを用いることもできる。人工の活性化型変異体の例としては、前記したC末端にCaaxモチーフを付加するか、N末端にミリストイル化シグナルを付加した膜局在性変異体が挙げられる。RasGRF、RasGRF2、RasGRP、SmgGDS、Vav、C3G等の他のRasGEFタンパク質のアミノ酸配列は公知であり、それらの多型バリアント、スプライシングバリアントも知られている。また、これらのタンパク質の活性化型変異体の例としては、前記したC末端にCaaxモチーフを付加するか、N末端にミリストイル化シグナルを付加した膜局在性変異体が挙げられる。Grb2タンパク質の好ましい例としては、マウスGrb2RefSeqAccessionNoNP032189、ヒトGrb2RefSeqAccessionNoNP002077、或いは他の哺乳動物におけるそれらのオルソログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体や多型バリアント、スプライシングバリアント、天然及び人工の活性化型変異体などがあげられる。導入対象である体細胞の動物種に応じて、これと同種のGrb2を用いることが望ましいが、異種Grb2を用いることもできる。人工の活性化型変異体の例としては、前記したC末端にCaaxモチーフを付加するか、N末端にミリストイル化シグナルを付加した膜局在性変異体が挙げられる。~のタンパク質本発明のタンパク性樹立効率改善因子という場合もあるは、例えば、ヒトもしくは他の哺乳動物の細胞組織[例えば、胸腺、骨髄、脾臓、脳、脊髄、心臓、骨格筋、腎臓、肺、肝臓、膵臓もしくは前立腺の細胞組織、これら細胞の前駆細胞、幹細胞または癌細胞など]から自体公知のタンパク質分離精製技術を用いて単離することもできるが、好ましくは、上記細胞組織から常法に従ってcDNAをクローニングし、適当な宿主細胞で発現させて組換えタンパク質として調製される。上記の種々の活性化型変異体は、自体公知の遺伝子組換え技術により、点変異を導入したり、あるいは末端に膜局在化シグナル配列を付加することにより作製することができる。本発明のタンパク性樹立効率改善因子の体細胞への導入は、自体公知の細胞へのタンパク質導入方法を用いて実施することができる。そのような方法としては、例えば、タンパク質導入試薬を用いる方法、タンパク質導入ドメインPTDもしくは細胞透過性ペプチドCPP融合タンパク質を用いる方法、マイクロインジェクション法などが挙げられる。タンパク質導入試薬としては、カチオン性脂質をベースとしたBioPOTERProteinDeliveryReagentGeneTherapySystmes、ProJectTMProteinTransfectionReagentPIERCEおよびProVectinIMGENEX、脂質をベースとしたProfect1TargetingSystems、膜透過性ペプチドをベースとしたPenetrainPeptideQbiogeneおよびChariotKitActiveMotif、HVJエンベロープ不活化センダイウイルスを利用したGenomONE石原産業等が市販されている。導入はこれらの試薬に添付のプロトコルに従って行うことができるが、一般的な手順は以下の通りである。本発明のタンパク性樹立効率改善因子を適当な溶媒例えば、PBS、HEPES等の緩衝液に希釈し、導入試薬を加えて室温で515分程度インキュベートして複合体を形成させ、これを無血清培地に交換した細胞に添加して37°Cで1ないし数時間インキュベートする。その後培地を除去して血清含有培地に交換する。PTDとしては、ショウジョウバエ由来のAntP、HIV由来のTATGreenMLoewensteinPMCell55117988、Penetratin、BuforinII、Transportan、MAP、KFGF、Ku70、Prion、pVEC、Pep1、Pep7、SynBl、HNI、HSV由来のVP22等のタンパク質の細胞通過ドメインを用いたものが開発されている。PTD由来のCPPとしては、11Rや9R等のポリアルギニンが挙げられる。本発明のタンパク性樹立効率改善因子をコードするcDNAとPTD配列もしくはCPP配列とを組み込んだ融合タンパク質発現ベクターを作製して組換え発現させ、融合タンパク質を回収して導入に用いる。導入は、タンパク質導入試薬を添加しない以外は上記と同様にして行うことができる。マイクロインジェクションは、先端径1μm程度のガラス針にタンパク質溶液を入れ、細胞に穿刺導入する方法であり、確実に細胞内にタンパク質を導入することができる。その他、エレクトロポレーション法、セミインタクトセル法KanoFetalMethodsinMolecularBiologyVol322357365、Wrtペプチドによる導入法KondoEetalMolCancerTher316231630などのタンパク質導入法も用いることができる。タンパク質導入操作は1回以上の任意の回数例えば、1回以上10回以下、または1回以上5回以下等行うことができ、好ましくは導入操作を2回以上たとえば3回または4回繰り返して行うことができる。導入操作を繰り返し行う場合の間隔としては、例えば6~48時間、好ましくは12~24時間が挙げられる。本発明のタンパク性樹立効率改善因子をコードする核酸本発明のタンパク性樹立効率改善因子Rasファミリーメンバー、Rasの標的因子エフェクター、Rasの標的因子エフェクターの下流シグナル因子、そのシグナルの活性化因子及びRas活性化因子をコードする核酸本発明の核酸性樹立効率改善因子という場合もあるは、上記した本発明におけるRasファミリーメンバー例、HRas、KRas、NRas、ERas等、Rasの標的因子エフェクター例、PI3キナーゼ、RalGEF、Raf等、Rasの標的因子エフェクターの下流シグナル因子例、AKT1、AKT2、AKT3、Rheb、S6K等、Rasの標的因子エフェクターの下流シグナルの活性化因子例、TCL1等又はRas活性化因子例、RasGEF、受容体チロシンキナーゼアダプタータンパク質等をコードするものであれば特に制限はない。該核酸はDNAであってもRNAであってもよく、あるいはDNARNAキメラであってもよい。好ましくはDNAが挙げられる。また、該核酸は二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖DNA、二本鎖RNAまたはDNARNAのハイブリッドでもよい。本発明の核酸性樹立効率改善因子は、例えば、ヒトもしくは他の哺乳動物の細胞組織[例えば、胸腺、骨髄、脾臓、脳、脊髄、心臓、骨格筋、腎臓、肺、肝臓、膵臓もしくは前立腺の細胞組織、これら細胞の前駆細胞、幹細胞または癌細胞など]由来のcDNAから、常法に従ってクローニングすることができる。HRasをコードする核酸としては、例えば、配列番号:1もしくは3で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:1もしくは3で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつRasの下流の3つのシグナル伝達経路の少なくとも1つ、好ましくはPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。KRasをコードする核酸としては、例えば、配列番号:5もしくは7で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:5もしくは7で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつRasの下流の3つのシグナル伝達経路の少なくとも1つ、好ましくはPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。NRasをコードする核酸としては、例えば、配列番号:9もしくは11で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:9もしくは11で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつRasの下流の3つのシグナル伝達経路の少なくとも1つ、好ましくはPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。ERasをコードする核酸としては、例えば、配列番号:13もしくは15で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:13もしくは15で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつRasの下流の3つのシグナル伝達経路の少なくとも1つ、好ましくはPI3キナーゼ経路及び/又はRal経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。PI3キナーゼの触媒サブユニットp110をコードする核酸としては、例えば、配列番号:18もしくは20で表される塩基配列を含有するp110αをコードする核酸、または配列番号:18もしくは20で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、PI3キナーゼ経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。あるいは、マウスp110βRefSeqAccessionNoNM029094、ヒトp110βRefSeqAccessionNoNM006219、マウスp110δRefSeqAccessionNoNM001029837、ヒトp110δRefSeqAccessionNoNM005026のcDNA配列を含有する核酸、または該cDNA配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、PI3キナーゼ経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。RalGEFをコードする核酸としては、例えば、配列番号:22もしくは24で表される塩基配列を含有するRalGDSをコードする核酸、または配列番号:22もしくは24で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、Ral経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。あるいは、マウスRglRefSeqAccessionNoNM016846、ヒトRglRefSeqAccessionNoNM015149、マウスRlfRgl2RefSeqAccessionNoNM009059、ヒトRlfRgl2RefSeqAccessionNoNM004761のcDNA配列を含有する核酸、または該cDNA配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、Ral経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。Rafをコードする核酸としては、例えば、配列番号:26もしくは28で表される塩基配列を含有するcRafをコードする核酸、または配列番号:26もしくは28で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、MAPキナーゼ経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。あるいは、マウスARafRefSeqAccessionNoNM009703、ヒトARafRefSeqAccessionNoNM001654、マウスBRafRefSeqAccessionNoNM139294、ヒトBRafRefSeqAccessionNoNM004333のcDNA配列を含有する核酸、または該cDNA配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、MAPキナーゼ経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。Sosをコードする核酸としては、例えば、マウスSos1RefSeqAccessionNoNM009231、ヒトSos1RefSeqAccessionNoNM005633、マウスSos2RefSeqAccessionNoXM127051、ヒトSos2RefSeqAccessionNoNM006939のcDNA配列を含有する核酸、または該cDNA配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、Rasタンパク質を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。RasGRF、RasGRF2、RasGRP、SmgGDS、Vav、C3G等の他のRasGEFのcDNA配列は公知であり、それらの多型バリアント、スプライシングバリアントも知られている。Grb2をコードする核酸としては、例えば、マウスGrb2RefSeqAccessionNoNM008163、ヒトGrb2RefSeqAccessionNoNM002086のcDNA配列を含有する核酸、または該cDNA配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつ受容体チロシンキナーゼを認識して結合し、RasGEFを細胞膜にリクルートしてRasタンパク質を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。AKTファミリーメンバーの一例としてAKT1をコードする核酸としては、例えば、配列番号:34もしくは36で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:34もしくは36で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつAKT経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。Rhebをコードする核酸としては、例えば、配列番号:38もしくは40で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:38もしくは40で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつ下流のmTOR経路を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。TCL1をコードする核酸としては、例えば、配列番号:42もしくは44で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:42もしくは44で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつAKT1タンパク質を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。S6Kをコードする核酸としては、例えば、配列番号:46もしくは48で表される塩基配列を含有する核酸、または配列番号:46もしくは48で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る塩基配列を含有し、かつS6Kタンパク質を活性化し得るタンパク質をコードする核酸が挙げられる。各配列番号で表される塩基配列の相補鎖配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸としては、各配列番号で表される塩基配列と約80以上、好ましくは約90以上、さらに好ましくは約95以上の同一性を有する塩基配列を含有する核酸が用いられる。ストリンジェントな条件としては、例えば、CurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySons6316361999に記載される条件、例えば、6×SSCsodiumchloridesodiumcitrate/45°Cでのハイブリダイゼーション、次いで02×SSC/01SDS/50~65°Cでの一回以上の洗浄等が挙げられるが、当業者であれば、これと同等のストリンジェンシーを与えるハイブリダイゼーションの条件を適宜選択することができる。本発明のタンパク性樹立効率改善因子は、好ましくは、Rasタンパク質の恒常的活性化型分子、Rasの標的因子エフェクターの恒常的活性化型分子、Rasの標的因子の下流シグナル因子の恒常的活性化型分子、Rasの標的因子の下流シグナルの活性化分子並びにRas活性化因子の恒常的活性化型分子である。従って、本発明の核酸性樹立効率改善因子は、好ましくは、上記の恒常的活性化型分子をコードする核酸である。当該核酸は、上述のようにして得られる野生型分子をコードする核酸に、部位特異的変異誘発により目的のアミノ酸置換を導入したり、あるいは、膜局在化シグナル配列をコードするオリゴヌクレオチドを、リガーゼやPCRを用いて、その末端に付加することにより調製することができる。本発明の核酸性樹立効率改善因子の体細胞への導入は、自体公知の細胞への遺伝子導入方法を用いて実施することができる。Rasタンパク質、Ras標的因子、Rasの標的因子の下流シグナル因子、そのシグナルの活性化因子またはRas活性化因子をコードする核酸は、宿主となる体細胞で機能し得るプロモーターを含む適当な発現ベクターに挿入される。発現ベクターとしては、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、センダイウイルスなどのウイルスベクター、動物細胞発現プラスミド例、pA111,pXT1,pRcCMV,pRcRSV,pcDNAINeoなどが用いられ得る。用いるベクターの種類は、得られるiPS細胞の用途に応じて適宜選択することができる。例えば、アデノウイルスベクター、プラスミドベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクターなどが使用され得る。発現ベクターにおいて使用されるプロモーターとしては、例えばEF1αプロモーター、CAGプロモーター、SRαプロモーター、SV40プロモーター、LTRプロモーター、CMVサイトメガロウイルスプロモーター、RSVラウス肉腫ウイルスプロモーター、MoMuLVモロニーマウス白血病ウイルスLTR、HSVTK単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーターなどが用いられる。なかでも、EF1αプロモーター、CAGプロモーター、MoMuLVLTR、CMVプロモーター、SRαプロモーターなどが好ましい。発現ベクターは、プロモーターの他に、所望によりエンハンサー、ポリA付加シグナル、選択マーカー遺伝子、SV40複製起点などを含有していてもよい。選択マーカー遺伝子としては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子等が挙げられる。Rasタンパク質、Ras標的因子、Rasの標的因子の下流シグナル因子、そのシグナルの活性化因子またはRas活性化因子をコードする核酸は、単独で発現ベクター上に組み込んでもよいし、1以上の初期化遺伝子とともに1つの発現ベクターに組み込んでもよい。遺伝子導入効率の高いレトロウイルスやレンチウイルスベクターを用いる場合は前者が、プラスミド、アデノウイルス、エピソーマルベクターなどを用いる場合は後者を選択することが好ましい場合があるが、特に制限はない。上記において、Rasタンパク質、Ras標的因子、Rasの標的因子の下流シグナル因子、そのシグナルの活性化因子またはRas活性化因子をコードする核酸と、1以上の初期化遺伝子とを、1つの発現ベクターに組み込む場合、これら複数の遺伝子は、好ましくはポリシストロニック発現を可能にする配列を介して発現ベクターに組み込むことができる。ポリシストロニック発現を可能にする配列を用いることにより、1種類の発現ベクターに組み込まれている複数の遺伝子をより効率的に発現させることが可能になる。ポリシストロニック発現を可能にする配列としては、例えば、口蹄疫ウイルスの2A配列PLoSONE3e25322008、StemCells2517072007、IRES配列USPatentNo4937190など、好ましくは2A配列を用いることができる。Rasタンパク質、Ras標的因子、Rasの標的因子の下流シグナル因子、そのシグナルの活性化因子またはRas活性化因子をコードする核酸を含む発現ベクターは、ベクターの種類に応じて、自体公知の手法により細胞に導入することができる。例えば、ウイルスベクターの場合、該核酸を含むプラスミドを適当なパッケージング細胞例、PlatE細胞や相補細胞株例、293細胞に導入して、培養上清中に産生されるウイルスベクターを回収し、各ウイルスベクターに応じた適切な方法により、該ベクターを細胞に感染させる。例えば、ベクターとしてレトロウイルスベクターを用いる具体的手段がWO200769666、Cell126663676およびCell131861872に開示されており、ベクターとしてレンチウイルスベクターを用いる場合については、Science31819171920に開示がある。iPS細胞を再生医療のための細胞ソースとして利用する場合、Rasタンパク質、Ras標的因子、Rasの標的因子の下流シグナル因子、そのシグナルの活性化因子またはRas活性化因子の発現再活性化またはそれらの外来性核酸が組み込まれた近傍に存在する内因性遺伝子の活性化は、iPS細胞由来の分化細胞から再生された組織における発癌リスクを高める可能性があるので、Rasタンパク質、Ras標的因子またはRas活性化因子をコードする核酸は細胞の染色体に組み込まれず、一過的に発現することが好ましい。かかる観点からは、染色体への組込みが稀なアデノウイルスベクターの使用が好ましい。アデノウイルスベクターを用いる具体的手段は、Science322945949に記載されている。また、アデノ随伴ウイルスも染色体への組込み頻度が低く、アデノウイルスベクターと比べて細胞毒性や炎症惹起作用が低いので、別の好ましいベクターとして挙げられる。センダイウイルスベクターは染色体外で安定に存在することができ、必要に応じてsiRNAにより分解除去することができるので、同様に好ましく利用され得る。センダイウイルスベクターについては、JBiolChem2822738327391や特許第3602058号に記載のものを用いることができる。レトロウイルスベクターやレンチウイルスベクターを用いる場合は、いったん導入遺伝子のサイレンシングが起こったとしても、後に再活性化される可能性があるので、例えば、CreloxPシステムを用いて、不要となった時点でRasタンパク質、Ras標的因子またはRas活性化因子をコードする核酸を切り出す方法が好ましく用いられ得る。即ち、該核酸の両端にloxP配列を配置しておき、iPS細胞が誘導された後で、プラスミドベクターもしくはアデノウイルスベクターを用いて細胞にCreリコンビナーゼを作用させ、loxP配列に挟まれた領域を切り出すことができる。また、LTRU3領域のエンハンサー-プロモーター配列は、挿入突然変異によって近傍の宿主遺伝子を上方制御する可能性があるので、当該配列を欠失、もしくはSV40などのポリアデニル化配列で置換した3’自己不活性化SINLTRを使用して、切り出されずゲノム中に残存するloxP配列より外側のLTRによる内因性遺伝子の発現制御を回避することがより好ましい。CreloxPシステムおよびSINLTRを用いる具体的手段は、SoldneretalCell136964977、ChangetalStemCells2710421049などに開示されている。一方、非ウイルスベクターであるプラスミドベクターの場合には、リポフェクション法、リポソーム法、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム共沈殿法、DEAEデキストラン法、マイクロインジェクション法、遺伝子銃法などを用いて該ベクターを細胞に導入することができる。ベクターとしてプラスミドを用いる具体的手段は、例えばScience322949953等に記載されている。プラスミドベクターやアデノウイルスベクター等を用いる場合、遺伝子導入は1回以上の任意の回数例えば、1回以上10回以下、または1回以上5回以下など行うことができる。2種以上の発現ベクターを体細胞に導入する場合には、これらの全ての種類の発現ベクターを同時に体細胞に導入することが好ましいが、この場合においても、導入操作は1回以上の任意の回数例えば、1回以上10回以下、または1回以上5回以下など行うことができ、好ましくは導入操作を2回以上繰り返して行うことができる。尚、アデノウイルスやプラスミドを用いる場合でも、導入遺伝子が染色体に組み込まれることがあるので、結局はサザンブロットやPCRにより染色体への遺伝子挿入がないことを確認する必要がある。そのため、上記CreloxPシステムのように、いったん染色体に導入遺伝子を組み込んだ後に、該遺伝子を除去する手段を用いることは好都合であり得る。別の好ましい一実施態様においては、トランスポゾンを用いて染色体に導入遺伝子を組み込んだ後に、プラスミドベクターもしくはアデノウイルスベクターを用いて細胞に転移酵素を作用させ、導入遺伝子を完全に染色体から除去する方法が用いられ得る。好ましいトランスポゾンとしては、例えば、鱗翅目昆虫由来のトランスポゾンであるpiggyBac等が挙げられる。piggyBacトランスポゾンを用いる具体的手段は、KajiKetalNature458771775、WoltjenetalNature458766770に開示されている。別の好ましい非組込み型ベクターとして、染色体外で自律複製可能なエピゾーマルベクターが挙げられる。エピゾーマルベクターを用いる具体的手段は、YuetalScience324797801に開示されている。必要に応じて、エピソーマルベクターの複製に必要なベクター要素の5’側および3’側にloxP配列を同方向に配置したエピソーマルベクターに、Rasタンパク質、Ras標的因子またはRas活性化因子をコードする核酸を挿入した発現ベクターを構築し、これを体細胞に導入することもできる。該エピゾーマルベクターとしては、例えば、EBV、SV40等に由来する自律複製に必要な配列をベクター要素として含むベクターが挙げられる。自律複製に必要なベクター要素としては、具体的には、複製開始点と、複製開始点に結合して複製を制御するタンパク質をコードする遺伝子であり、例えば、EBVにあっては複製開始点oriPとEBNA1遺伝子、SV40にあっては複製開始点oriとSV40largeTantigen遺伝子が挙げられる。また、エピゾーマル発現ベクターは、Rasタンパク質、Ras標的因子、Rasの標的因子の下流シグナル因子、そのシグナルの活性化因子またはRas活性化因子をコードする核酸の転写を制御するプロモーターを含む。該プロモーターとしては、前記と同様のプロモーターが用いられ得る。また、エピゾーマル発現ベクターは、前記と同様に、所望によりエンハンサー、ポリA付加シグナル、選択マーカー遺伝子などをさらに含有していてもよい。選択マーカー遺伝子としては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子等が挙げられる。本発明で使用されるloxP配列としては、バクテリオファージP1由来の野生型loxP配列配列番号:31の他、導入遺伝子の複製に必要なベクター要素を挟む位置に同方向で配置された場合に、組換えを起こしてloxP配列間の配列を欠失させ得る任意の変異loxP配列が挙げられる。変異loxP配列としては、例えば、5’側反復配列に変異のあるlox71配列番号:32、3’側反復配列に変異のあるlox66配列番号:33、スペーサー部分に変異のあるlox2272やlox511などが挙げられる。該ベクター要素の5’側および3’側に配置される2つのloxP配列は、同一であっても異なっていてもよいが、スペーサー部分に変異のある変異loxP配列の場合は同一のもの例、lox2272同士、lox511同士が用いられる。好ましくは、5’側反復配列に変異のある変異loxP配列例、lox71と3’側反復配列に変異のある変異loxP配列例、lox66との組合せが挙げられる。この場合、組換えの結果染色体上に残るloxP配列は5’側および3’側の反復配列に二重変異を有するため、Creリコンビナーゼに認識されにくく、不必要な組換えにより染色体の欠失変異を起こすリスクが低減される。lox71とlox66とを用いる場合、前記ベクター要素の5’側および3’側にいずれの変異loxP配列を配置してもよいが、変異部位がloxP配列の外端に配置されるような向きで変異loxP配列を挿入する必要がある。2つのloxP配列は、導入遺伝子の複製に必要なベクター要素即ち、複製開始点、または複製開始点に結合して複製を制御するタンパク質をコードする遺伝子配列の5’側および3’側に、同方向に配置される。loxP配列が挟むベクター要素は、複製開始点、または複製開始点に結合して複製を制御するタンパク質をコードする遺伝子配列のいずれか一方だけであってもよいし、両方であってもよい。エピソーマルベクターは、例えばリポフェクション法、リポソーム法、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム共沈殿法、DEAEデキストラン法、マイクロインジェクション法、遺伝子銃法などを用いて該ベクターを細胞に導入することができる。具体的には、例えばScience324797801等に記載される方法を用いることができる。iPS細胞から導入遺伝子の複製に必要なベクター要素が除去されたか否かの確認は、該ベクター要素内部および/またはloxP配列近傍の塩基配列を含む核酸をプローブまたはプライマーとして用い、該iPS細胞から単離したエピソーム画分を鋳型としてサザンブロット分析またはPCR分析を行い、バンドの有無または検出バンドの長さを調べることにより実施することができる。エピソーム画分の調製は当該分野で周知の方法と用いて行えばよく、例えば、Science324797801等に記載される方法を用いることができる。核初期化物質本発明において核初期化物質とは、体細胞に導入することにより、あるいは本発明の樹立効率改善因子と共に体細胞に接触させることにより、該体細胞からiPS細胞を誘導することができる物質群であれば、タンパク性因子またはそれをコードする核酸ベクターに組み込まれた形態を含む、あるいは低分子化合物等のいかなる物質から構成されてもよい。核初期化物質がタンパク性因子またはそれをコードする核酸の場合、好ましくは以下の組み合わせが例示される以下においては、タンパク性因子の名称のみを記載する。Oct34Klf4cMycOct34Klf4cMycSox2ここで、Sox2はSox1Sox3Sox15Sox17またはSox18で置換可能である。また、Klf4はKlf1Klf2またはKlf5で置換可能である。さらに、cMycはT58A活性型変異体LMycで置換可能である。Oct34Klf4cMycSox2Fbx15NanogERasTclIOct34Klf4cMycSox2TERTSV40LargeTantigen以下、SV40LTOct34Klf4cMycSox2TERTHPV16E6Oct34Klf4cMycSox2TERTHPV16E7Oct34Klf4cMycSox2TERTHPV6E6HPV16E7Oct34Klf4cMycSox2TERTBmil以上、WO2007069666を参照但し、上記の組み合わせにおいて、Sox2からSox18への置換、Klf4からKlf1もしくはKlf5への置換については、NatureBiotechnology26101106を参照。Oct34Klf4cMycSox2の組み合わせについては、Cell126663676、Cell131861872等も参照。Oct34Klf2またはKlf5cMycSox2の組み合わせについては、NatCellBiol11197203も参照。Oct34Klf4cMycSox2hTERTSV40LTの組み合わせについては、Nature451141146も参照。Oct34Klf4Sox2NatureBiotechnology26101106を参照Oct34Sox2NanogLin28Science31819171920を参照Oct34Sox2NanogLin28hTERTSV40LTStemCells2619982005を参照Oct34Klf4cMycSox2NanogLin28CellResearch600603を参照Oct34Klf4cMycSox2SV40LTStemCells2619982005も参照Oct34Klf4Nature454646650、CellStemCell2525528を参照Oct34cMycNature454646650を参照Oct34Sox2WO2008118820を参照Oct34Sox2NanogOct34Sox2Lin28Oct34Sox2cMycEsrrbを参照Oct34Sox2Esrrbを参照Oct34Klf4LMycを参照Oct34NanogOct34、Nature08436doi101038publishedonlineOct34Klf4cMycSox2NanogLin28SV40LTScience324797801を参照上記において、Oct34に代えて他のOctファミリーのメンバー、例えばOct1A、Oct6などを用いることもできる。また、Sox2またはSox1、Sox3、Sox15、Sox17、Sox18に代えて他のSoxファミリーのメンバー、例えばSox7などを用いることもできる。さらに上記においてcMycまたはLin28を核初期化物質として含む場合、cMycまたはLin28に代えてそれぞれLMycまたはLin28Bを用いることもできる。また、上記には該当しないが、それらのいずれかにおける構成要素をすべて含み、且つ任意の他の物質をさらに含む組み合わせも、本発明における核初期化物質の範疇に含まれ得る。また、核初期化の対象となる体細胞が上記のいずれかにおける構成要素の一部を、核初期化のために十分なレベルで内在的に発現している条件下にあっては、当該構成要素を除いた残りの構成要素のみの組み合わせもまた、本発明における核初期化物質の範疇に含まれ得る。これらの組み合わせの中で、Oct34Sox2Klf4cMycもしくはLMycNanogLin28もしくはLin28BおよびSV40LTから選択される少なくとも1つ、好ましくは2つ以上、より好ましくは3つ以上が、好ましい核初期化物質の例として挙げられる。とりわけ、得られるiPS細胞を治療用途に用いることを念頭においた場合、cMycを用いない初期化因子の組み合わせが好ましい。例えばOct34Sox2およびKlf4の3因子の組み合わせ即ち、上記、Oct34Sox2Klf4およびLMycの4因子の組み合わせ即ち、上記、またはこれらの組み合わせを含みかつcMycを含まない組み合わせを例示することができる。一方、iPS細胞を治療用途に用いることを念頭に置かない場合例えば、創薬スクリーニング等の研究ツールとして用いる場合などは、Oct34Sox2およびKlf4の3因子、Oct34Sox2Klf4およびLMycの4因子のほか、Oct34Sox2Klf4およびcMycの4因子、Oct34Sox2Klf4cMycLMycおよび/またはNanogおよび/またはLin28Lin28Bの5または6因子、さらにSV40LargeTを加えた6または7因子などを例示することができる。上記の各タンパク性因子のマウス及びヒトcDNA配列情報は、WO2007069666に記載のNCBIaccessionnumbersを参照することにより取得することができNanogは当該公報中ではECAT4との名称で記載されている。尚、Lin28、Lin28B、Esrrb、Esrrg、LMycのマウス及びヒトcDNA配列情報は、それぞれ下記NCBIaccessionnumbersを参照することにより取得できる。、当業者は容易にこれらのcDNAを単離することができる。遺伝子名マウスヒトLin28NM145833NM024674Lin28bNM001031772NM001004317EsrrbNM011934NM004452EsrrgNM011935NM001438LMycNM008506NM001033081核初期化物質としてタンパク性因子自体を用いる場合には、得られたcDNAを適当な発現ベクターに挿入して宿主細胞に導入し、該細胞を培養して得られる培養物から組換えタンパク性因子を回収することにより調製することができる。一方、核初期化物質としてタンパク性因子をコードする核酸を用いる場合、得られたcDNAを、上記本発明の核酸性樹立効率改善因子の場合と同様にして、ウイルスベクター、エピゾーマルベクターもしくはプラスミドベクターに挿入して発現ベクターを構築し、核初期化工程に供される。必要に応じて、上記CreloxPシステムやpiggyBacトランスポゾンシステムを利用することもできる。尚、核初期化物質として2以上のタンパク性因子をコードする核酸を細胞に導入する場合、各核酸を別個のベクターに担持させてもよいし、複数の核酸をタンデムに繋いでポリシストロニックベクターとすることもできる。後者の場合、効率的なポリシストロニック発現を可能にするために、口蹄疫ウイルスの2Aselfcleavingpeptideを各核酸の間に連結することが望ましいScience3229499532008など参照。核初期化物質の体細胞への接触は、該物質がタンパク性因子である場合、上記本発明のタンパク性樹立効率改善因子と同様にして、該物質がのタンパク性因子をコードする核酸である場合、上記本発明の核酸性樹立効率改善因子と同様にして、それぞれ実施することができる。他のiPS細胞の樹立効率改善物質従来iPS細胞の樹立効率が低いために、近年、その効率を改善する物質が種々提案されている。よって前記本発明の樹立効率改善因子に加え、他の樹立効率改善物質を体細胞に接触させることにより、iPS細胞の樹立効率をより高めることが期待できる。他のiPS細胞の樹立効率改善物質としては、例えば、ヒストンデアセチラーゼHDAC阻害剤[例えば、バルプロ酸VPA、トリコスタチンATSA、酪酸ナトリウムCellStemCell7651655、MC1293、M344等の低分子阻害剤、HDACに対するsiRNAおよびshRNA例、HDAC1siRNASmartpool、HuSH29mershRNAConstructsagainstHDAC1等等の核酸性発現阻害剤など]、DNAメチルトランスフェラーゼ阻害剤例えば5’azacytidineNatBiotechnol26795797、G9aヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤[例えば、BIX01294等の低分子阻害剤、G9aに対するsiRNAおよびshRNA例、G9asiRNA等等の核酸性発現阻害剤など]、Lchannelcalciumagonist、p53阻害剤例えばp53に対するsiRNA、shRNA、ドミナントネガティブ体などNature46011321135、WntSignaling例えばsolubleWnt3aCellStemCell3132135、2iLIF22372247、ES細胞特異的miRNA例えば、miR302367クラスター、miR30214110、miR2913pmiR294およびmiR295、3’phosphoinositidedependentkinase1acitvator例、PS48など、GLISファミリーメンバー例、GLIS1、WO2010098419など等が挙げられるが、それらに限定されない。前記で核酸性の発現阻害剤はsiRNAもしくはshRNAをコードするDNAを含む発現ベクターの形態であってもよい。尚、前記核初期化物質の構成要素のうち、例えばSV40largeT等は、体細胞の核初期化のために必須ではなく補助的な因子であるという点において、iPS細胞の樹立効率改善物質の範疇にも含まれ得る。核初期化の機序が明らかでない現状においては、核初期化に必須の因子以外の補助的な因子について、それらを核初期化物質として位置づけるか、あるいはiPS細胞の樹立効率改善物質として位置づけるかは便宜的であってもよい。即ち、体細胞の核初期化プロセスは、体細胞への核初期化物質およびiPS細胞の樹立効率改善物質の接触によって生じる全体的事象として捉えられるので、当業者にとって両者を必ずしも明確に区別する必要性はないであろう。iPS細胞の樹立効率改善物質の体細胞への接触は、該物質がタンパク性因子である場合、該タンパク性因子をコードする核酸である場合に応じて、本発明の樹立効率改善因子についてそれぞれ上記したと同様の方法により、実施することができる。一方、該物質が低分子化合物である場合、該物質の体細胞への接触は、該因子を適当な濃度で水性もしくは非水性溶媒に溶解し、ヒトまたは他の哺乳動物より単離した体細胞の培養に適した培地例えば、最小必須培地MEM、ダルベッコ改変イーグル培地DMEM、RPMI1640培地、199培地、F12培地改善因子としてKSRを用いない場合は、約5~20の胎仔ウシ血清を含んでもよいなど中に、該溶液を因子濃度が上記の範囲となるように添加して、細胞を一定期間培養することにより実施することができる。接触期間は体細胞の核初期化が達成されるのに十分な時間であれば特に制限はないが、例えば、陽性コロニーが出現するまで培地に共存させておくこともできる。本発明の樹立効率改善因子を含む、iPS細胞の樹立効率改善物質は、該物質の非存在下と比較して体細胞からのiPS細胞樹立効率が有意に改善される限り、核初期化物質と同時に体細胞に接触させてもよいし、また、どちらかを先に接触させてもよい。一実施態様において、例えば、核初期化物質がタンパク性因子をコードする核酸であり、iPS細胞の樹立効率改善物質が化学的阻害物質である場合には、前者は遺伝子導入処理からタンパク性因子を大量発現するまでに一定期間のラグがあるのに対し、後者は速やかに細胞に作用しうることから、遺伝子導入処理から一定期間細胞を培養した後に、iPS細胞の樹立効率改善物質を培地に添加することができる。別の実施態様において、例えば、核初期化物質とiPS細胞の樹立効率改善物質とがいずれもウイルスベクターやプラスミドベクターの形態で用いられる場合には、両者を同時に細胞に導入してもよい。培養条件による樹立効率の改善体細胞の核初期化工程において低酸素条件下で細胞を培養することにより、iPS細胞の樹立効率をさらに改善することができるCellStemCell5237241WO2010013845を参照。本明細書において低酸素条件とは、細胞を培養する際の雰囲気中の酸素濃度が、大気中のそれよりも有意に低いことを意味する。具体的には、通常の細胞培養で一般的に使用される510CO29590大気の雰囲気中の酸素濃度よりも低い酸素濃度の条件が挙げられ、例えば雰囲気中の酸素濃度が18以下の条件が該当する。好ましくは、雰囲気中の酸素濃度は15以下例、14以下、13以下、12以下、11以下など、10以下例、9以下、8以下、7以下、6以下など、または5以下例、4以下、3以下、2以下などである。また、雰囲気中の酸素濃度は、好ましくは01以上例、02以上、03以上、04以上など、05以上例、06以上、07以上、08以上、095以上など、または1以上例、11以上、12以上、13以上、14以上などである。細胞の環境において低酸素状態を創出する手法は特に制限されないが、酸素濃度の調節可能なCO2インキュベーター内で細胞を培養する方法が最も容易であり、好適な例として挙げられる。酸素濃度の調節可能なCO2インキュベーターは、種々の機器メーカーから販売されている例えば、Thermoscientific社、池本理化学工業、十慈フィールド、和研薬株式会社などのメーカー製の低酸素培養用CO2インキュベーターを用いることができる。低酸素条件下で細胞培養を開始する時期は、iPS細胞の樹立効率が正常酸素濃度20の場合に比して改善されることを妨げない限り特に限定されず、体細胞への本発明の樹立効率改善因子および核初期化物質の接触より前であっても、該接触と同時であっても、該接触より後であってもよいが、例えば、体細胞に本発明の樹立効率改善因子および核初期化物質を接触させた直後から、あるいは接触後一定期間例えば、1ないし10例、2345678または9日おいた後に低酸素条件下で培養することが好ましい。低酸素条件下で細胞を培養する期間も、iPS細胞の樹立効率が正常酸素濃度20の場合に比して改善されることを妨げない限り特に限定されず、例えば3日以上、5日以上、7日以上または10日以上で、50日以下、40日以下、35日以下または30日以下の期間等が挙げられるが、それらに限定されない。低酸素条件下での好ましい培養期間は、雰囲気中の酸素濃度によっても変動し、当業者は用いる酸素濃度に応じて適宜当該培養期間を調整することができる。また、一実施態様において、iPS細胞の候補コロニーの選択を、薬剤耐性を指標にして行う場合には、薬剤選択を開始する迄に低酸素条件から正常酸素濃度に戻すことが好ましい。さらに、低酸素条件下で細胞培養を開始する好ましい時期および好ましい培養期間は、用いられる核初期化物質の種類、正常酸素濃度条件下でのiPS細胞樹立効率などによっても変動する。iPS細胞の選択および確認本発明の樹立効率改善因子と核初期化物質および他のiPS細胞の樹立効率改善物質とを接触させた後、細胞を、例えばES細胞の培養に適した条件下で培養することができる。マウス細胞の場合、通常の培地に分化抑制因子としてLeukemiaInhibitoryFactorLIFを添加して培養を行う。一方、ヒト細胞の場合には、通常、LIFの代わりに塩基性線維芽細胞増殖因子bFGFおよび/または幹細胞因子SCFを添加することが望ましい。しかしながら、本発明の樹立効率改善因子を体細胞に接触させた場合、bFGFの非存在下でもbFGF存在下と同程度のヒトiPS細胞コロニーを得ることができる。また通常、細胞は、フィーダー細胞として、放射線や抗生物質で処理して細胞分裂を停止させたマウス胎仔由来の線維芽細胞MEFの共存下で培養される。MEFとしては、通常STO細胞等がよく使われるが、iPS細胞の誘導には、SNL細胞McMahonAPBradleyACell6210731085等がよく使われている。フィーダー細胞との共培養は、本発明の樹立効率改善因子および核初期化物質の接触より前から開始してもよいし、該接触時から、あるいは該接触より後例えば110日後から開始してもよい。iPS細胞の候補コロニーの選択は、薬剤耐性とレポーター活性を指標とする方法と目視による形態観察による方法とが挙げられる。前者としては、例えば、分化多能性細胞において特異的に高発現する遺伝子例えば、Fbx15、Nanog、Oct34など、好ましくはNanogまたはOct34の遺伝子座に、薬剤耐性遺伝子および/またはレポーター遺伝子をターゲッティングした組換え体細胞を用い、薬剤耐性および/またはレポーター活性陽性のコロニーを選択するというものである。そのような組換え体細胞としては、例えばFbx15遺伝子座にβgeoβガラクトシダーゼとネオマイシンホスホトランスフェラーゼとの融合タンパク質をコードする遺伝子をノックインしたマウスTakahashiYamanakaCell126663676由来のMEFやTTF、あるいはNanog遺伝子座に緑色蛍光タンパク質GFP遺伝子とピューロマイシン耐性遺伝子を組み込んだトランスジェニックマウスOkitaetalNature448313317由来のMEFやTTF等が挙げられる。一方、目視による形態観察で候補コロニーを選択する方法としては、例えばTakahashietalCell131861872に記載の方法が挙げられる。レポーター細胞を用いる方法は簡便で効率的ではあるが、iPS細胞がヒトの治療用途を目的として作製される場合、安全性の観点から目視によるコロニー選択が望ましい。選択されたコロニーの細胞がiPS細胞であることの確認は、上記したNanogもしくはOct34レポーター陽性ピューロマイシン耐性、GFP陽性などおよび目視によるES細胞様コロニーの形成によっても行い得るが、より正確を期すために、アルカリフォスファターゼ染色や、各種ES細胞特異的遺伝子の発現を解析したり、選択された細胞をマウスに移植してテラトーマ形成を確認する等の試験を実施することもできる。Rasタンパク質、Ras標的因子またはRas活性化因子をコードする核酸を体細胞に導入した場合、得られるiPS細胞は、当該外来性核酸を含む点で、従来公知のiPS細胞とは異なる新規細胞である。特に、当該外来性核酸がレトロウイルスやレンチウイルス等を用いて体細胞に導入された場合、当該外来性核酸は通常、得られるiPS細胞のゲノム中に組み込まれているので、外来性核酸を含むという形質は安定に保持される。iPS細胞の用途このようにして樹立されたiPS細胞は、種々の目的で使用することができる。例えば、ES細胞などの多能性幹細胞で報告されている分化誘導法例えば、神経幹細胞への分化誘導法としては、特開2002291469、膵幹様細胞への分化誘導法としては、特開2004121165、造血細胞への分化誘導法としては、特表2003505006に記載される方法などがそれぞれ例示される。この他にも、胚葉体の形成による分化誘導法としては、特表2003523766に記載の方法などが例示される。を利用して、iPS細胞から種々の細胞例、心筋細胞、血液細胞、神経細胞、血管内皮細胞、インスリン分泌細胞等への分化を誘導することができる。したがって、患者本人やHLAの型が同一もしくは実質的に同一である他人から採取した体細胞を用いてiPS細胞を誘導すれば、そこから所望の細胞即ち、該患者が罹病している臓器の細胞や疾患に対する治療効果を発揮する細胞などに分化させて該患者に移植するという、自家移植による幹細胞療法が可能となる。さらに、iPS細胞から分化させた機能細胞例、肝細胞は、対応する既存の細胞株よりも実際の生体内での該機能細胞の状態をより反映していると考えられるので、医薬候補化合物の薬効や毒性のinvitroスクリーニング等にも好適に用いることができる。以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明がこれらに限定されないことは言うまでもない。実施例1:RasファミリーがヒトiPS細胞樹立に及ぼす効果の検討RasファミリーNras、Hras、Kras及びErasがiPS細胞の樹立に効果を及ぼすか否かを検討した。成人白人女性、73歳の皮膚由来線維芽細胞HDF:細胞名1503に対して、TakahashiKらCell131861872に記載の方法に従い、レンチウイルスを用いて、マウスエコトロピックウイルスレセプターSlc7a1遺伝子を発現させた。この細胞1×105個well、6wellplateに対して、TakahashiKらCell131861872に記載の方法に従い、以下の遺伝子をレトロウイルスで導入し、生じたiPS細胞コロニー数を4遺伝子Oct34Sox2Klf4cMyc導入の場合と比較した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycNras2ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycHras3ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycKras4ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycEras5ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV126ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSVLS7ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSSVA8ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycN17ここでV12とはHRasの12番目のグリシンをバリンに置換したHRasの恒常的活性型変異体を指す。V12はRasの3つのシグナル伝達経路であるMAPキナーゼ経路、PI3キナーゼ経路、及びRal経路RalGEF経路のいずれの経路も活性化することが知られている。またSVLSとはHRasのC末端4アミノ酸CVLSをSVLSに置換したことにより細胞膜への局在が不能となった不活性型変異体であり、SSVAとはERasのC末端4アミノ酸CSVAをSSVAに置換したことにより細胞膜への局在が不能となった不活性型変異体である。またN17とはHRasの17番目のセリンをアスパラギンに置換した不活性型変異体ドミナントネガティブ変異体である。ウイルス感染から7日後に細胞を回収し、フィーダー細胞上への蒔き直しを行った25×105個100mmディッシュ。フィーダー細胞にはマイトマイシンCで処理して、細胞分裂を止めたSNL細胞McMahonAPBradleyACell6210731085を用いた。感染10日後から霊長類ES細胞培養用培地に4ngmlの組換えヒトbFGFWAKOを加えた培地で培養を行った。感染から24日目にiPS細胞コロニー数を測定し、4遺伝子導入により得られたコロニー数を1とした場合図中Redの倍率変化Foldchangeを図1に示す。図1は3回の実験の平均値である。4遺伝子にErasを加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数が劇的に増加した。ErasはPI3キナーゼ経路を活性化することが知られていることから、Rasのシグナル伝達経路の中でも特にPI3キナーゼ経路の活性化がiPS細胞の樹立促進に寄与していることが示唆された。また他のRasNras、Hras、Krasを加えた場合も、ErasほどではないがヒトiPS細胞コロニー数の増加が認められた。実施例2:Rasのシグナル伝達経路がヒトiPS細胞樹立に及ぼす効果の検討Rasのシグナル伝達経路であるMAPキナーゼ経路、PI3キナーゼ経路、及びRal経路RalGEF経路の3つの経路のうち、いずれのシグナル伝達経路の活性化がiPS細胞樹立に効果を及ぼすのか検討を行った。実験は以下の組み合わせを用い、実施例1と同様の手法で行った。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycNras2ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycHras3ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycKras4ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycEras5ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV126ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12T35S7ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12E37G8ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12Y40CここでV12T35SとはHRasの12番目のグリシンをバリンに置換し、かつ35番目のスレオニンをセリンに置換することにより、MAPキナーゼ経路が選択的に恒常的活性化された変異体である。またV12E37GとはHRasの12番目のグリシンをバリンに置換し、かつ37番目のグルタミン酸をグリシンに置換することにより、Ral経路が選択的に恒常的活性化された変異体である。またV12Y40CとはHRasの12番目のグリシンをバリンに置換し、かつ40番目のチロシンをシステインに置換することにより、PI3キナーゼ経路が選択的に恒常的活性化された変異体である。ウイルス感染から7日後に細胞を回収し、フィーダー細胞上への蒔き直しを行った25×105個100mmディッシュ。感染10日後から霊長類ES細胞培養用培地に4ngmlの組換えヒトbFGFWAKOを加えた培地で培養を行った。感染から24日目にiPS細胞コロニー数を測定し、4遺伝子導入により得られたコロニー数を1とした場合図中Redの倍率変化Foldchangeを図2に示す。図2は3回の実験の平均値である。実施例1と同様に4遺伝子にErasを加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数が劇的に増加した。またV12E37G又はV12Y40Cを加えた場合も、同様にヒトiPS細胞コロニー数の劇的な増加が認められた。V12T35Sを加えた場合は効果は低かった。以上の結果より、PI3キナーゼ経路及びRal経路の活性化がiPS細胞の樹立促進に寄与していることが示された。実施例3:異なる細胞に対する効果の検討6歳の日本人女性の皮膚由来線維芽細胞細胞名:TIG120及び68歳の日本人女性の皮膚由来線維芽細胞細胞名:1616を用いて、前記実施例と同様の実験を以下の組み合わせで行った。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycEras2ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12Y40Cヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycMyrPI3K図3では単にMPI3Kと表記4ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycPI3KCaaX図3では単にCPI3Kと表記5ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12E37Gに4ngmlの組換えヒトbFGFWAKOを加えた培地で培養を行った。感染から24日目のiPS細胞コロニー数を図3に示す。図3は3回の実験の平均値である。実施例2と同様に4遺伝子にEras、V12Y40CY40C又はV12E37GE37Gを加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数の増加が認められた。またPI3キナーゼの恒常的活性体を加えた場合も、同様にコロニー数の増加が認められた。以上の結果より、PI3キナーゼ経路及びRal経路の活性化がiPS細胞の樹立促進に寄与することが確認され、またHDF1503以外の細胞にも同様の効果を示すことが確認された。実施例4:Rasのシグナル伝達経路がヒトiPS細胞樹立に及ぼす効果の検討Rasの各シグナル伝達経路の活性化がiPS細胞樹立に及ぼす効果につき、前記実施例と同様の実験を以下の組み合わせで検討した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycNras2ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycHras3ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycKras4ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycEras5ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12T35S6ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12E37G7ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycRafCaaX8ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycRalGDSCaaXここでRafCaaXとはMAPキナーゼ経路に存在するMAPキナーゼキナーゼキナーゼのC末端にCaaxモチーフ配列を付加したことにより膜局在性となった恒常的活性化体である。またRalGDSCaaxとはRasサブファミリーに属するG蛋白であるRalを活性化する、Rasの標的タンパク質のC末端にCaaxモチーフ配列を付加したことにより膜局在性となった恒常的活性化体である。ウイルス感染から7日後に細胞を回収し、フィーダー細胞上への蒔き直しを行った25×105個100mmディッシュ。感染10日後から霊長類ES細胞培養用培地に4ngmlの組換えヒトbFGFWAKOを加えた培地で培養を行った。感染から24日目にiPS細胞コロニー数を測定し、4遺伝子導入により得られたコロニー数を1とした場合図中Redの倍率変化Foldchangeを図4に示す。図4は3回の実験の平均値である。実施例2及び3と同様に4遺伝子にV12E37Gを加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数が劇的に増加し、またRal活性化因子であるRalGDSの恒常的活性化体を加えた場合も同様の効果が認められたことから、Ral経路の活性化がiPS細胞の樹立促進に寄与することが確認された。一方、V12T35SやRafの恒常的活性化体を加えた場合は効果が低かったことから、MAPキナーゼ経路はiPS細胞の樹立にあまり寄与していないことが示唆された。実施例5:Rasのシグナル伝達経路がヒトiPS細胞樹立に及ぼす効果の検討Rasの各シグナル伝達経路の活性化がiPS細胞樹立に及ぼす効果につき、前記実施例と同様の実験を以下の組み合わせで検討した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12図5ではHRasV12と表記2ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycN17ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12T35S図5ではHRasV12S35と表記4ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12E37G図5ではHRasV12G37と表記5ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycV12Y40C図5ではHRasV12C40と表記6ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycRafCaaX7ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycRalGDSCaaX8ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycPI3KCaaX図5ではp110CaaXと表記ウイルス感染から7日後に細胞を回収し、フィーダー細胞上への蒔き直しを行った25×105個100mmディッシュ。感染8日後から霊長類ES細胞培養用培地に4ngmlの組換えヒトbFGFWAKOを加えた培地で培養を行った。感染から24日目のiPS細胞コロニー数を図5に示す。図5は3回の実験の平均値である。実施例1~4と同様に、4遺伝子にV12E37G、V12Y40C、RalGDSCaaXまたはPI3KCaaXを加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数の顕著な増加が認められた。以上の結果より、PI3キナーゼ経路およびRal経路の活性化がiPS細胞の樹立促進に寄与することが確認され、一方MAPキナーゼ経路はiPS細胞の樹立にあまり寄与していないことが示唆された。実施例6:Rasの各シグナル伝達経路の関連性の検討iPS細胞の樹立において、PI3キナーゼ経路、Ral経路およびMAPキナーゼ経路がそれぞれ相互に関連しているのか、それとも独立した経路であるのかを検討した。実験は実施例5と同様の方法で行った。結果を図6に示す。図6は3回の実験の平均値である。ERasにV12Y40Cを加えた場合図6中ERasHRasV12C40は、いずれもPI3キナーゼ経路を活性化する因子であることから相加効果増強効果は認められなかった。一方、ERasにV12E37Gを加えた場合図6中ERasHRasV12G37、およびV12E37GにV12Y40Cを加えた場合図6中HrasV12G37C40は、いずれも相加効果増強効果が認められたことから、Ral経路とPI3キナーゼ経路は、別々の独立した作用によりiPS細胞樹立促進に関与していることが示された。実施例7:bFGF非存在下での効果の検討bFGF非存在下でのRafCaaX、RalGDSCaaXおよびPI3KCaaXの効果を検討した。実験は実施例5や6と同様にして行った。結果を図7に示す。4遺伝子にRalGDSCaaXを加えた場合に、bFGF非存在下でもbFGF存在下と同程度のコロニー数が観察された。実施例8:AKTがヒトiPS細胞樹立に及ぼす効果の検討PI3Kの下流シグナルとしてのAKTがiPS細胞の樹立に効果を及ぼすか否か、およびAKTによるiPS細胞の樹立にcMYCまたはGSK3βが影響を及ぼすか否かを検討した。前記実施例1と同様にヒト皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616、Cellapplications社から購入へ以下の遺伝子を導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mock2ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT13ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNA4ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNA5ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1GSK3βS9AここでMyrAKT1とは、N末端にミリストイル化シグナル配列を付加したことにより膜に局在する恒常的活性型のAKT1である。またcMYCshRNAとは、cMYCを標的としたshRNAであり、ここでは、Addgene社より購入したpRetrosuperMycshRNAPlasmid15662を用いた。またGSK3βS9Aとは、GSK3βの9番目のセリンをアラニンに置換することにより、プロテアーゼにより分解されない恒常活性型の変異体である。感染から32日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図8Aに示す。MyrAKT1を加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数が有意に増加した。また、この効果は、cMYCのshRNAを加えることでなくなったことから、AKT1の活性化によるiPS細胞の樹立促進にはcMYCが必須であることが示された。一方、GSK3βS9Aでは影響を受けていないことから、AKT1の下流シグナルとしてGSK3βのリン酸化は関与していないことが示された。また、培養条件を変え5×105個well、同じくヒト皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616、Cellapplications社から購入へ以下の遺伝子を導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mock2ヒト由来のOct34Sox2Klf4p110Caax3ヒト由来のOct34Sox2Klf4p110KD4ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT15ヒト由来のOct34Sox2Klf4AKT1KD6ヒト由来のOct34Sox2Klf4PTENshRNA7ヒト由来のOct34Sox2Klf4TCL1ここでp110Caaxとは、前述したPI3KCaaXと同等物である。またp110KDとは、キナーゼドメインを欠損させた変異体である不活性化型PI3Kである。またAKT1KDとは、キナーゼドメインを欠損させた変異体である不活性化型AKT1である。またPTENshRNAとは、PI3K経路を抑制するPTENphosphataseandtensinhomologに対するshRNAであり、ここでは、Addgene社より購入したpMKO1puroPTENshRNAPlasmid10669を用いた。感染から7日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図8Bに示す。先の実験と同様に、MyrAKT1を加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数が有意に増加した。また、AKT1の活性化因子であるTCL1を加えることでも同様の効果が認められたことから、iPS細胞の樹立促進にはAKT1の活性化が関与していることが示唆された。実施例9:AKT関連のシグナルがヒトiPS細胞樹立に及ぼす効果の検討AKT関連のシグナルPDK1、GSK3β、WntがiPS細胞の樹立効率に及ぼす影響を検討した。前記実施例1と同様に皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616へ以下の遺伝子を各低分子化合物の存在下で導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4PS482ヒト由来のOct34Sox2Klf4CHIR990213ヒト由来のOct34Sox2Klf4Wnt3aここでPS48とは、PDK1のPIF結合ポケット部位に選択的に結合し、PDK1を活性化する薬剤である。本実験では、10μMを培地へ添加した。Sigma社から購入し使用した。またCHIR99021とは、GSK3βに対する高度な選択性を示す阻害剤である。本実験では、1μMを培地へ添加したStemgent社から購入し使用した。またWnt3aは、RDsystems社より購入し、10ngmlを培地へ添加した。感染から32日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図9に示す。PS48およびWnt3aを加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数が有意に増加した。一方、CHIR99021を加えた場合は、iPS細胞コロニー数が減少傾向であった。以上より、PI3Kシグナルの下流であるPDK1およびWntシグナルは、iPS細胞の樹立促進へ関与するが、GSK3βのリン酸化の阻害はiPS細胞の樹立へ関与していないことが示された。実施例10:AKTファミリーおよびmTORシグナルがヒトiPS細胞樹立に及ぼす効果の検討前記実施例1と同様に皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616へ以下の遺伝子を導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mock2ヒト由来のOct34Sox2Klf4p110Caax3ヒト由来のOct34Sox2Klf4PTENshRNA4ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT15ヒト由来のOct34Sox2Klf4AKT1K179M6ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT127ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT28ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT39ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrSGK110ヒト由来のOct34Sox2Klf4SGK1K127M11ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrILK12ヒト由来のOct34Sox2Klf4ILKE359K13ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrPDK114ヒト由来のOct34Sox2Klf4GSK3S9A15ヒト由来のOct34Sox2Klf4Rheb16ヒト由来のOct34Sox2Klf4S6K1T389E17ヒト由来のOct34Sox2Klf4FKBP12ここでp110Caaxとは、前述したPI3KCaaXと同等物である。またPTENshRNAとは、PI3K経路を抑制するPTENphosphataseandtensinhomologに対するshRNAであり、ここでは、Addgene社より購入したpMKO1puroPTENshRNAPlasmid10669を用いた。またMyrAKT12とは、MyrAKT1とは基本骨格のプラスミドが異なる恒常活性化型のAKT1である。またAKT1K179Mとは、キナーゼ領域が変異した不活性型のドミナントネガティブAKT1のことである。またMyrAKT2とは、N末端にミリストイル化シグナル配列を付加したことにより膜に局在する恒常的活性型のAKT2である。またMyrAKT3とは、N末端にミリストイル化シグナル配列を付加したことにより膜に局在する恒常的活性型のAKT3である。またMyrSGK1とは、mTORC2SGK1経路において重要な制御因子でありインスリン情報伝達系におけるプロテインキナーゼであるSGK1SerumglucocorticoidregulatedkinaseのN末端にミリストイル化シグナル配列を付加したことにより膜に局在する恒常的活性型のSGK1である。またSGK1K127Mとは、SGK1の127番目のリジンをメチオニンに置換することにより、キナーゼ領域が変異したドミナントネガティブ型のSGK1である。またMyrILKとは、PI3KシグナルにおいてAKTの上流に位置するセリンスレオニンキナーゼであるILKIntegrinLinkedKinase:インテグリン結合キナーゼのN末端にミリストイル化シグナル配列を付加したことにより膜に局在する恒常的活性型のILKである。ILKはAKTの上流にあるPDKと結合することで、PI3KAKT経路を阻害する。またILKE359Kとは、ILKの359番目のグルタミン酸をリジンに置換することにより、キナーゼ領域が変異したドミナントネガティブ型のILKである。またMyrPDK1とは、PDKサブファミリー内に含まれるPDK1のN末端にミリストイル化シグナル配列を付加したことにより膜に局在する恒常的活性型のPDK1である。またS6K1T389Eとは、S6K1の389番目のスレオニンをグルタミン酸に置換することにより、恒常活性型のS6K1変異体である。感染から32日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図10に示す。実施例3と同様に、p110Caaxを加えることでiPS細胞コロニー数の増加が認められた。同様に、PTENshRNAでもiPS細胞コロニー数の増加が認められたことから、PI3KはiPS細胞の樹立促進に重要であることが示された。実施例8と同様に、MyrAKT1ではiPS細胞コロニー数の増加が認められ、AKTファミリーである、AKT2およびAKT3でも同様の結果が得られた。また、Rheb、S6K1T389Eを加えることにより、ヒトiPS細胞コロニー数が劇的に増大した。Rhebは、mTORを活性化する因子であり、一方でS6K1はmTORの下流因子であることから、mTORシグナル経路の活性化が、iPS細胞の樹立促進に寄与していることが示唆された。実施例11:mTORシグナル関連遺伝子のヒトiPS細胞樹立に及ぼすcMYCの検討前記実施例1と同様に皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616へ以下の遺伝子を導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mock2ヒト由来のOct34Sox2Klf4MockcMYCshRNA3ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT14ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNA5ヒト由来のOct34Sox2Klf4Rheb6ヒト由来のOct34Sox2Klf4RhebcMYCshRNA7ヒト由来のOct34Sox2Klf4S6K1T389E8ヒト由来のOct34Sox2Klf4S6K1T389EcMYCshRNA感染から32日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図11Aに示す。いずれの場合でも、cMYCshRNAを加えることでiPS細胞の樹立促進効果がなくなることから、これらの遺伝子によるiPS細胞の樹立促進にはcMYCが必須であることが示された。さらに、皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616へMock、MyrAKT1、Rheb、S6K1T389Eおよびp53shRNA導入して7日後の細胞内タンパク質を定法により回収し、WesternblotによりcMYC、pAKT、AKT、pS6K1、S6K1、pTSC2およびTSC2の発現量を確認した。ここでp53shRNAは、p53に対するshRNAであり、HongHetalNature46011321135に記載の配列を用いた。結果を図11Bに示す。MyrAKT1、RhebおよびS6K1T389Eの導入によりcMYCの発現量が上昇したことが確認された。このことより、MyrAKT1、RhebおよびS6K1T389EはcMYCの発現上昇を介してiPS細胞の樹立促進を行っている機序が示唆された。また、p53shRNAの導入によりリン酸化型のAKTが増加している。HongHらはp53の阻害によりiPS細胞の樹立促進をすることを示していることから、p53の阻害はAKTのリン酸化を介してiPS細胞の樹立を促進していることが示唆された。実施例12:p53の阻害およびGLIS1の導入によるヒトiPS細胞樹立促進に及ぼすAKT1の効果の検討前記実施例1と同様にヒト皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616へ以下の遺伝子を導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mock2ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mockp53shRNA3ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT14ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1p53shRNA5ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNA6ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNAp53shRNA7ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNA8ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNAp53shRNA感染から32日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図12Aに示す。MyrAKT1およびp53shRNAを同時に加えることで、iPS細胞コロニー数の増加が認められた。従って、p53shRNAとAKT1の導入はiPS細胞の樹立促進の相乗効果を有することが示された。また、cMYCshRNAによりいずれの場合でも、iPS細胞コロニー数が減少したことから、これらの効果はcMYCを介した作用であることが示唆された。さらに、ヒト皮膚細胞由来線維芽細胞HDF:細胞名1616へ以下の遺伝子を導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mock2ヒト由来のOct34Sox2Klf4MockGLIS13ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT14ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1GLIS15ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNA6ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNAGLIS17ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNA8ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNAGLIS1感染から32日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図12Bに示す。MyrAKT1およびGLIS1を同時に加えることで、iPS細胞コロニー数の増加が認められた。従って、GLIS1とAKT1の導入はiPS細胞の樹立促進の相乗効果を有することが示された。また、cMYCshRNAによりいずれの場合でも、iPS細胞コロニー数が減少したことから、これらの効果はcMYCを介した作用であることが示唆された。さらに、他の細胞株において、同様の効果を調べるため、ヒト歯髄細胞DP:細胞名DP31へ以下の遺伝子を導入した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4MockMock2ヒト由来のOct34Sox2Klf4Mockp53shRNA3ヒト由来のOct34Sox2Klf4MockGLIS14ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1Mock5ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1p53shRNA6ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1GLIS17ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNAMock8ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNAp53shRNA9ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMYCshRNAGLIS110ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNAMock11ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNAp53shRNA12ヒト由来のOct34Sox2Klf4MyrAKT1cMYCshRNAGLIS1感染から32日目に、iPS細胞コロニー数を測定した結果を図12Cに示す。上記の結果と同様に、MyrAKT1およびp53shRNA又はMyrAKT1およびGLIS1を同時に加えることで、iPS細胞コロニー数の増加が認められた。これより、体細胞種に関わらずAKT1の導入およびp53の阻害又はAKT1およびGLIS1の導入によるiPS細胞の樹立促進の相乗効果を有することが示された。"