RNAリガーゼとしての、好ましくは第一のRNA末端の第二のRNA末端への転移のためのHSPC117分子の使用であって、特に好ましくは、当該第一の末端が3リン酸を、好ましくは2’3’環状リン酸を含み、そしてまたは当該第二の末端が5OH終端を含む、HSPC117分子の使用。ストランド間又はストランド内のライゲーションのための、請求項1に記載の使用。前記RNAが二本鎖である、請求項1又は2に記載の使用。RNAスプライシングのための、請求項1~3のいずれか1項に記載の使用。前記RNAがmRNA又はtRNAである、請求項1~4のいずれか1項に記載の使用。前記RNAが、長さが2~3000個のヌクレオチド又は塩基対である、請求項1~5のいずれか1項に記載の使用。前記HSPC117分子が、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23のいずれか1つである、請求項1~6のいずれか1項に記載の使用。少なくとも2つのRNA分子を連結する方法であって、請求項1~7のいずれか1項に記載のHSPC117分子を使用することを含み、好ましくは少なくとも2つのRNA分子を細胞中で当該HSPC117分子と接触させることを含み、又は好ましくは少なくとも2つのRNA分子をインビトロinvitroで当該HSPC117分子と接触させることを含み、特に好ましくは、当該HSPC117分子を、好ましくはスプライセオソーム粒子との複合体で供することをさらに含み、ここで好ましくは当該複合体がDEADボックスヘリカーゼDDX1分子、FAM98B分子、CGI99分子、ASW又はこれらの任意の組合せを含む、方法。HSPC117分子、バッファー成分、及び約0120mM、好ましくは110mM、特に好ましくは、25mMの最終濃度範囲での使用のための、Mg2、Mn2、Ni2又はそれらの混合物から選択される1又は2以上の金属イオンを含むRNAリガーゼ反応バッファー、を含み、任意にはさらに2’3’環状リン酸を有するRNA分子、好ましくは標識をさらに有する当該RNA分子、を含むRNAライゲーションの実施に適した、キット。外因的に発現されるHSPC117分子を、好ましくは誘導プロモーターと共に含む、トランスジェニック細胞。HSPC117ノックアウト細胞、又は内因性HSPC117発現が減少され抑制された細胞。哺乳類細胞である、請求項10又は11に記載の細胞。RNAリガーゼ活性、特に細胞中で、RNApリガーゼ活性を減少する方法であって、HSPC117分子を細胞中で、好ましくはノックアウト又はRNAiによって抑制することを含む、方法。前記抑制が、細胞においてHSPC117分子、好ましくは内因性HSPC117分子の発現を減少することによることを特徴とする、請求項13に記載の方法。前記細胞においてtRNA産生又はプロセシングを減少するための、請求項13又は14に記載の方法。RNAライゲーション又はスプライシング試験のための、好ましくは細胞においてtiRNA量を調節するための、請求項10~12のいずれか1項に記載の細胞の使用。宿主のポリメラーゼに依存的な腫瘍細胞成長又は疾患若しくは感染、例えば、D型肝炎ウイルス感染を減少する方法であって、HSPC117分子阻害剤を細胞へ投与することを含む方法、又は機能障害性tRNAスプライシングと関係した疾患、好ましくは橋小脳発育不全を対象において治療する方法であって、HSPC117分子を当該対象へ投与することを含む方法。よって、本発明の目的は、少なくとも基質として2’3’環状リン酸終結のRNAを使用することもできるRNAリガーゼRNApリガーゼを供することである。斯かる目的は、請求項の主題によって達成される。特に、本発明は、HSPC117分子の、分子生物学ツールとして及び治療におけるRNAリガーゼとしての使用に関する。HSPC117は、配列決定されており例えば、GenbankACCNONP055121又はCAG33456、染色体22orf28C22ORF28に位置する。HSPC117は、未知の機能の高度に保存された領域UPF0027と特有のタンパク質の折り畳み構造とを特徴とする、細菌性古細菌のRtcB遺伝子ファミリーのヒト相同体である。UPF0027タンパク質は、植物又は真菌モデル生物において検出可能な代替のない、オルソロガス遺伝子KOG3833のクラスターを形成する。斯かる系統発生上の違いは、動物及び古細菌においてRNApリガーゼ活性の独占的発生が非常に連想される。HSPC117は本明細書中で、HSPC117C22ORF28又はRtcBHSPC117とも呼ぶ。本明細書において、用語HSPC117分子とは、今日RNAリガーゼ反応を触媒すると同定されている斯かるクラスターにおける任意の相同又はオルソロガス分子を意味する。このようなHSPC117分子の配列の例を、配列番号1~配列番号11として図6に供する。HSPC117分子は全て、配列番号1のC122に相当する触媒のシステイン残基を含むことが分かっている。HSPC117分子及び配列はさらに、例えば、米国特許出願第20070204352号特に、配列番号15、16、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78に記載されるが、その中で本発明の使用は認識されない。米国特許出願第20070204352号は、αsyncleinの集合に潜在的に関与する遺伝子のスクリーニングに関する。米国特許出願第20070204352は段落50において、HSPC117遺伝子の顕著な進化的保存の背景を供しており、HSPC117分子の新規機能が分かっているので斯かるタンパク質は本発明の方法に使用できる。本発明のRNAリガーゼは、第一のRNAの第二のRNAへの転移を触媒するために使用できる。双方のRNAの末端は、リガーゼによって結合することができる。斯かる結合は、通常双方のRNA間のホスホジエステル結合の共有結合である。特に、一方のRNAは、特に、2’3’環状リン酸の形態で、3リン酸を含むことができ、他方は5OH終端を含むことができる。このような末端間で、特に、5OH終端を使用することによって結合を形成する能力は、本発明のHSPC117分子の特有の特徴である。通常、RNAライゲーションは、ストランド間又はストランド内のライゲーションとすることができる。2つの別々のRNA鎖は、3及び5末端上で、それぞれ結合することができる。さらに、ストランド内のライゲーションにおいて、一方のRNA分子の5及び3末端が結合される。本発明のさらなる実施形態において、RNAは二本鎖である。特に、本発明のRNAリガーゼによって結合される第一及び又は第二のRNA分子は、二重鎖部分を含むことができる、又は完全に二重鎖である若しくは一本鎖である。特に好ましくは、RNAリガーゼ反応によって結合される上記の3末端及び他方のRNA末端の5終端は、二本鎖とすることができる。RNA、特に、通常tRNA前駆体の一本鎖3オーバーハングが存在する、RNAスプライシングのさらなる部分は、一本鎖とすることもできる。また、RNAリガーゼ反応によって結合される5及び又は3末端は、tRNA前駆体プロセシングでは通常、一本鎖とすることができる。二本鎖性Doublestrandednessは、第一及び第二のRNA分子間の塩基対合とすることができ、あるいはさらなるRNA鎖への塩基対合とすることができる。特に好ましい実施形態において、本発明のHSPC117分子はRNAスプライシングのために使用する。RNAスプライシング反応において、イントロン部分は、本発明のRNAリガーゼによって結合される2つのエクソン間で除去される。典型的なスプライシング反応は、エクソン1イントロンエクソン2配列の、エクソン1エクソン2への反応である。他のスプライシング反応は、複数のイントロンを、任意にはこれらのイントロン部分間でエクソンもまた除去することができる。RNAリガーゼとしてのHSPC117分子の本発明の使用によって結合されるRNAは、任意の長さとすることができる。RNAの長さは例えば、2~3000ヌクレオチド又は塩基対である。特定の実施形態において、第一のRNA又は第二のRNAは、長さが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、45、50、60、70、80、90以上、又は100以上のヌクレオチド又は塩基対とすることができる。あるいは又はさらに、RNAは、第一のRNA若しくは第二のRNA又は双方とも、長さが最大で3000、2000、1500、1200、1000、900、800、700、600、500、400、300、200、100、80、70、60又は50ヌクレオチド又は塩基対とすることができる。本発明のHSPC117分子は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11のいずれか1つとすることができる。配列は、ヒトHsapiens、ハツカネズミMmusculus、アフリカツメガエルXleavis、アメリカムラサキウニSpurpuratus、キイロショウジョウバエDmelanogaster、シーエレガンスCelegans、コナミドリムシCreinhardtii、メタン生成古細菌Mjannaschii、超好熱古細菌Phorikoshii、サーマスサーモフィラスTthermophilus、又は大腸菌Ecoliの、各々のHSPC117分子の例を供する。さらにHSPC117配列又は配列変異体を、配列番号12~23に開示し、これらはヒトHsapiens、シーエレガンスCelegans、ショウジョウバエDrosophila、ゼブラダニオDaniorerio、ウシ、マウス及びラット由来のさらなる核酸及びアミノ酸配列を供する。本発明のHSPC117分子は、これらの任意の生物から得ることができる。好ましい実施形態において、本発明のHSPC117分子は、動物又は古細菌、特に、哺乳類、例えば、ヒトを含む霊長類等、又はゲッ歯類、特に、マウス又はラット由来である。本発明のHSPC117分子は、1又は2以上のアミノ酸置換又は欠失によってさらに修飾することができる。さらに、本発明のHSPC117分子は、融合タンパク質の一部として表すことができ、さらなるアミノ酸又はポリペプチド配列を含むことができる。特に好ましくは、本発明のHSPC117分子は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23のいずれか1つと、少なくとも45、50、55、60、65、70、75、80、85、90又は少なくとも95の配列同一性を有する。好ましい実施形態において、当該配列同一性は、配列番号1に関する。配列同一性は、通常配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23の全長配列に亘って算出される。当然ながら、このようなHSPC117分子変異体は上記のRNAリガーゼ活性を保持し、本明細書の実施例部分に示すように斯かる活性は標準アッセイによって容易に測定できる。特に、HSPC117分子が触媒的に重要な残基、例えば、配列番号1のシステイン122等を保持することが重要である。本発明のHSPC117分子の変異体は、例えば、米国特許出願第20070204352号特に、その配列番号15、16、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78に記載され、配列番号12~23として参照により本明細書に組み込まれ、本発明の目的のために使用できる。アミノ酸置換の場合、好ましい実施形態において、置換の少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90又は少なくとも95が、保存アミノ酸置換である。保存置換は、アミノ酸基内の突然変異である。アミノ酸は、通常その極性、電荷及び又はサイズに従ってグループ化される。次のグループは注目に値する塩基性アミノ酸アルギニン、ヒスチジン、リジン酸性アミノ酸アスパラギン酸、グルタミン酸極性アミノ酸アスパラギン、グルタミン小分子アミノ酸アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン、グリシン芳香族アミノ酸フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、ヒスチジン疎水性アミノ酸ロイシン、イソロイシン、バリン。システインは通常セリン及び任意の他の極性非荷電の側鎖で保存的に置換することができ逆もまた同様であるので、システインは特例である。グリシンは、任意のアミノ酸のための置換基として使用できる。グリシンは、通常小分子側鎖、例えば、アラニン、セリン、トレオニン等によって置換できる。プロリンは、通常グリシンのための置換基として置換、又は使用することができる。さらなる態様において、本発明は、例えば、上記の少なくとも2つのRNA分子を連結する方法に関し、上記のHSPC117分子を使用することを含む。ここで、表現RNAリガーゼとしての使用とRNA分子を連結する方法とは、互換的に使用される。好ましい実施形態において、本発明の使用又は方法は、細胞中で少なくとも2つのRNA分子をHSPC117分子と接触させることを含むことができる。本発明はまた、組換えHSPC117の使用に関する。組換えHSPC117上記の任意の相同体又はオルソログを含むは、制御DNA配列非相同制御配列とすることができる、宿主細胞における、例えばプロモーター又はエンハンサー等に操作可能に結合される、1又は2以上のHSPC117DNA配列を含む遺伝子コンストラクトの発現によって容易に得ることができる。宿主細胞の例は、細菌性、古細菌、真菌酵母を含む、植物又は動物昆虫又は哺乳類を含む細胞である。このようなコンストラクトにおいて、その設計は通常の実験マニュアルに記載され当業者にとってルーチンであり、制御配列は、HSPC117分子をコードするポリヌクレオチド又はRNAリガーゼ活性を有するその活性変異体に操作可能に結合させることができる。本発明のHSPC117分子は、インビトロinvivoで、例えば細胞中で使用することができ、例えば、その中で人工的に供する又は細胞中で遺伝子組換えで発現させることができる。2つのRNA分子は、本発明の実施形態に従って細胞中で連結させることができる。細胞は、上記の通り任意の細胞とすることができ、好ましくは非ヒト細胞又は単離されたヒト細胞とすることができる。さらなる実施形態において、RNA分子は、例えば、細胞外又は無細胞溶液中等を含むインビトロinvitro又はインサイツinsituでHSPC117分子と接触させることができる。RNA分子は、分離させ、エクスビボexvivoで本発明のHSPC117分子と連結することができる。本発明によれば、HSPC117が天然にもまたインビトロinvivoで複合体に含まれ得る、触媒的に活性のあるタンパク質であることが分かった。よって、本発明のさらなる実施形態によれば、本発明のHSPC117分子はまた、このような複合体で供される。複合体は、例えば、スプライセオソーム粒子であり、例えば、核HeLa細胞抽出物から分離することができるSF3B粒子等とすることができる。他の複合体メンバーは、特に、他の生物の他のHSPC117分子又はその変異体に関して、各生物の細胞抽出物から分離することができる。特に好ましい実施形態において、本発明の複合体はDEADボックスヘリカーゼDDX1、FAM98B分子、CGI99分子、ASW又はこれらの任意の組合せ、特に好ましくは、DDX1及びFAM98B分子との組み合わせを含むことができる。HSPC117分子の複合体中に含まれ得るさらなる複合体メンバーは、実施例5に示す表1及び2のいずれか1つとすることができる。本発明によれば、HSPC117分子、それ自体を供することができる。あるいは、HSPC117分子はキットの成分として使用または供することができる。よって、さらなる態様において、本発明は、HSPC117分子を含むキットに関する。キットはさらに、バッファー成分或いはMg2、Mn2、Ni2又はその混合物から選択される1又は2以上の金属イオンを含む、RNAリガーゼのための反応バッファーを含むことができる。好ましい実施形態において、金属イオンは最終濃度範囲約0120mM、好ましくは110mM、特に好ましくは、25mMの使用量で含まれる。上記の金属イオンに加えて、キットのバッファーは、当技術分野で周知の通常のバッファー成分を含むことができる。このようなバッファーは、例えば、リン酸、ヘペス、トリスHCl成分を含むことができる。好ましくはバッファーは、生理的pH値の範囲、例えば、pH6~pH9の範囲、好ましくはpH7~8の範囲、特に好ましくは約pH74である。バッファーは、約10200mMの範囲のKCl又はNaClである、浸透圧物質tonicsubstance又は塩を含むことができる。さらに、バッファーは非イオン性の浸透圧物質、例えば、グリセロール等を含むことができる。試験キットの形態において、キットはさらに、本発明のHSPC117分子の基質であるRNA分子、特に、2’3’環状リン酸を有するRNA分子を含むことができる。斯かるRNA分子は、例えば、さらに標識、例えば、RNAリガーゼ反応の前後でRNA分子を検出するための放射性標識等を含むことができる。このようなキットは、あらゆる種類の反応及びRNAプロセシング又はハイブリッド形成のモニターに有用である。本発明のHSPC117分子又はキットは、特に、RNAライゲーション又はスプライシング試験に使用することができる。さらなる態様において本発明は、外因的に発現されたHSPC117分子を含むトランスジェニック細胞に関する。細胞は細胞株とすることができ、あるいは動物モデル、特に、非ヒト動物モデルに含むことができる。細胞株は、HSPC117分子を安定して発現するヒト細胞株とすることもできる。外因的に発現されたHSPC117分子の安定した発現は、プロモーター、好ましくは誘導プロモーターの制御下での、細胞へのHSPC117DNAの挿入によって達成される。特定の実施形態において、斯かるDNAは細胞のゲノムに挿入でき、それは従来の方法、例えば、テトラサイクリン誘導系のような市販の系、例えば、tREx系invitrogen等によって達成できる。このような細胞は、2’3’環状リン酸又は5OHと連結できるRNA、特に、2’3’環状リン酸又は5OHを有するRNAと組み合わせて、RNA分子を連結するのに有用である。本発明はさらに、細胞中で、RNAリガーゼ活性、特に、RNApリガーゼ活性を減少する方法に関し、好ましくはノックアウト又はRNAiによって細胞中でHSPC117分子を抑制することを含む。RNApリガーゼ活性は、上記の通り、2’3’環状リン酸終結RNAを基質として使用するRNAリガーゼ反応に関する。このような方法は、細胞中でtRNA産生又はプロセシングを減少するために使用できる。HSPC117の減少は、細胞においてHSPC117を結合、分離又は通常を不活性化するリガンドをHSPC117へ投与する、又はHSPC117発現を抑制することによって達成できる。このような結合阻害剤は、例えば、市販のHSPC117抗体である。HSPC117抗体は、HSPC117を結合する抗体断片、例えば、Fab、Fab2、Fv、又は一本鎖の抗体scAb等を含む、任意の機能等価物及びその誘導体を含む。好ましい実施形態において、斯かる抑制は、細胞においてHSPC117分子、好ましくは内因性HSPC117分子の発現を減少させることによって達成される。HSPC117発現を減少するための適した阻害剤は、RNAiを誘発するHSPCsiRNA分子である。HSPC117発現を抑制する好ましい方法は、ノックアウト又はRNAiである。ノックアウトのために、機能性HSPC117分子の発現、転写又は翻訳を示すようにゲノムHSPC117を修飾する。このような修飾は、触媒中心における、例えば、最大200又はそれ以上のヌクレオチドの大きな伸展欠失又は選択的修飾欠失又は置換を含むことができる。例えば、配列番号1のヒトHSPC117配列の触媒C122における修飾は、機能分子の発現を防止するのに十分である。もちろん、当業者は別の修飾を容易に選択でき、これは分子細胞生物学者のルーチン能力内である。さらに好ましい方法は、RNAiRNA干渉である。拮抗性細胞HSPC117発現に関して、好ましくはsiRNA分子は発現及び機能を低下するために投与される。RNA干渉は、配列特異的態様で遺伝子発現を抑制するための機構である。RNA干渉は、真核細胞における特異的な遺伝子機能の抑制のための非常に有効な方法である。細胞及び生物に適用する場合、RNAiはベクターをコードする低分子干渉RNAsiRNAオリゴ又は低分子ヘアピン型RNAshRNAのトランスフェクションにおいて、標的mRNAの分解を引き起こす。RNAiの様々な方法が記載されており、例えば、米国特許出願第20020162126号及び米国特許出願第20020173478号に記載されるように、これ等は植物細胞、ショウジョウバエ及びヒトメラノーマ細胞において遺伝子発現を変化することが一般的に知られている。本発明の方法及び組成物における使用のためのsiRNAは、HSPC117分子を標的とするために選択される。斯かる態様において、それはHSPC117遺伝子に相当する様々なRNA又はその部分を標的にする。当業者によって、本明細書に記載されるsiRNAは、ハイブリッドDNARNAコンストラクト又はその任意の等価物である改変siRNA、二重鎖RNA、マイクロRNAmiRNA、及びsiRNA型、例えば、siRNA複製、ウイルス性及び非ウイルス性ベクター中の低分子ヘアピン型RNAshRNA並びに担体中のsiRNA又はshRNAもまた含むことができることと理解されたい。さらなる実施形態において、本発明はHSPC117ノックアウト細胞又は減少若しくは抑制されたた内因性HSPC117発現を有する細胞に関する。このような細胞株は、RNAライゲーション又はスプライシング試験において、すなわち、RNAライゲーションの機能を試験するためにさらに使用することができる。内因性HSPC117発現の減少は、2’3’環状リン酸の5OHRNA分子への転換を媒介する、本発明のHSPC117リガーゼのバックグラウンド活性がないという利点も有する。HSPC117が誘導プロモーターの制御下であるトランスジェニック細胞と組み合わせて、これによりRNAリガーゼの特異的なオンオフ試験が可能でありリガーゼ活性を制御するための有用なツールであり、それはスプライシング試験専用又は唯一の細胞生化学工学ツールとなり得る。よって、好ましい実施形態において、本発明は、内因性HSPC117を発現しないが、誘導プロモーターの制御下でさらにHSPC117分子が外因的にトランスフェクトされているHSPC117ノックアウト細胞に関する。好ましい実施形態において、細胞は哺乳類細胞、特に好ましくは霊長類、特に、ヒトの細胞又はゲッ歯類、例えば、マウス細胞である。上記の通りHSPC117発現が増大又は減少された細胞を含むこれらの細胞は、RNAライゲーション又はスプライシング試験に使用できる。さらなる態様において、本発明は、異常tRNAプロセシングが付随する疾患又は増大されたtRNAプロセシングに依存的な疾患の治療に関する。特定の実施形態において、本発明はRNAリガーゼとしてのHSPC117分子の使用又はHSPC117分子を抑制する方法但し、治療によるヒト又は動物の治療方法は除く、又は医薬としての使用のためのHSPC117分子又はHSPC117阻害剤の使用を供する。HSPC117阻害剤は、上記のHSPC117の活性又は発現を減少する任意の分子であり、好ましくはHSPC117抗体又はHSPC117siRNAである。HSPC117分子の抑制は、一部の疾患において治療効果を有することができる。このような疾患は、増殖性疾患、特に、癌を含む。tRNAプロセシングを減少させることにより、増殖性活性を非常に減少させ、減少された細胞成長を生じることができる。よって本発明は、腫瘍細胞成長を減少させる方法を供し、斯かる方法は、HSPC117分子阻害剤を細胞に投与することを含む。腫瘍細胞が異常に高速のポリメラーゼPolIII転写を有することが知られているMarshallWhite、2008。PolIIIはtRNAを合成するので、tRNAリガーゼの標的化は、癌細胞における律速の高tRNA産生となるであろう。増殖に関するtRNAスプライシング成分の重要性は、例えば国際公開第2004087884号に開示される参照により本明細書に組み込まれる。さらなる態様において、本発明は宿主ポリメラーゼに依存的な疾患又は感染、例えば、D型肝炎ウイルス感染等の治療を供し、斯かる治療はHSPC117分子阻害剤の細胞への投与を含む。ヒトD型肝炎ウイルスは、宿主ポリメラーゼを使用してRNAゲノムを複製することが知られる唯一の動物ウイルスである。ウイルスの複製に関与する宿主因子は、特定が困難である。複製中のウイルス性ゲノムの環状化においてリガーゼ宿主因子が関係するReidLazinski、2000。結合プロテオミクスRNAiスクリーンにおいて、100異常のタンパク質がD型肝炎抗原に関係することが確認された。同定されたタンパク質の一部はRNA代謝において役割を有し、それらの1つはHSPC117である。まとめると、これはHSPC117がD型肝炎ウイルス感染の治療に重要な標的であることを示す。さらに、本発明は、機能障害性tRNAスプライシングと関係した疾患に罹患する、特に、RNApによるtRNAライゲーションが欠如した対象、好ましくは橋小脳発育不全の対象における治療方法に関し、斯かる方法はHSPC117分子の対象への投与を含む。tRNAスプライシング経路と橋小脳発育不全との間の関係性が確立されている。斯かる疾患は、出生前の発症を伴う変性常染色体劣性遺伝疾患、小脳の萎縮又は発育不全及び他の運動障害から成る群に属する。機構的に、これらの疾患は、tRNAスプライシング中のイントロンの異常的除去及びエクソンのライゲーションと関係する。よって、機能性HSPC117分子の投与は、正常のスプライシング及びイントロン除去を回復し、疾患を治療することができ、一方で分子レベルでは理解されていないが、tRNA代謝が脳機能へ特別な影響を有することもまた周知である。細胞は、血管新生における周知の役割に加えてリボヌクレアーゼ活性を示す因子であるアンジオゲニンを分泌することによって酸化ストレスに応答する。アンジオゲニンは成熟tRNAをアンチコドンループで切断し、それにより、tRNA由来のストレス誘発性RNAのための、tiRNAとして知られるtRNA断片を産生している。tiRNAの蓄積は、タンパク質合成を損ない、よって、細胞の健康及び機能に有害である。ヒトtRNAリガーゼHSPC117を不活性化することは、培養細胞においてtiRNAの増大につながる。増加されたHSPC117は、アンジオゲニンの切断を戻しtiRNAレベルを低下する。HSPC117はよって、アンジオゲニン切断のtRNAの再結合において異なる役割を有することができる。このアンジオゲニン反応は、HSPC117分子の抑制状態では戻すことができない。よって本発明はまた、例えば、細胞中のHSPC117活性の増大又は減少による、細胞におけるtiRNA量の調節方法に関する。さらなる態様において、本発明は、上記の通り、好ましくは発現ベクター、又はHSPC117分子阻害剤、好ましくは抗体又はsiRNA或いはその変異体の形態の、核酸を発現しているHSPC117分子を含む医薬組成物を供する。このような組成物は、例えば、上記の任意の疾患の治療のための、即使用可能な組成物とすることができる。治療又は予防使用のための医薬組成物又は製剤は、医薬的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤及び又は保存剤を含むことができる。本発明はまた、HSPC117阻害剤又は発現核酸の治療上有効量を含む医薬組成物を供する。用語治療上有効量とは、特定の投与条件及び経路に治療効果を供する量を意味する。組成物は液体又は凍結乾燥形態とすることができ、様々なpH値及びイオン強度を有する希釈剤トリス、酢酸又はリン酸バッファー、可溶化剤、例えば、ツイーン又はポリソルベート等、担体、例えば、ヒト血清アルブミン又はゼラチン等、保存剤、例えば、チメロサール又はベンジルアルコール等、及び抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は二亜硫酸ナトリウム等を含む。特定の組成物の選択は、治療される条件、投与経路及び目的の薬物動態パラメータを含む因子の数に依存的とすることができる。核酸及びsiRNA製剤は、好ましくはリポソーム製剤で投与される。本発明の組成物は、注射によって、皮下、静脈内又は筋肉内に、或いは経口、経鼻、肺性又は直腸投与によって投与できる。最終的に選択される投与経路は、因子の数次第であり、当業者によって確定することができる。本発明は、図及び実施例を参照して、それらに限定されることなく、より詳細に説明できる。実施例1新規生化学的ストラテジーによる哺乳類RNApリガーゼの同定RNApリガーゼを検出するための新規ストラテジーの適用は、潜在的にtRNAリガーゼの同定につながる。3’リン酸化3’P、5’OH二本鎖RNA分子dsRNAがヒト細胞抽出物とのインキュベーションにおいて共有結合していることを、今回思いがけず発見した。これらの抽出物中、3’PdsRNAは、ヒトRNA末端シクラーゼRTCD1によって2’3’環状リン酸終結dsRNAに変換される。よって、我々は特定し難いtRNAリガーゼに関して、3’PdsRNAを安定した代替基質として使用することを決定した。ストランド間ライゲーションは、5’OH相補鎖とアニーリングされた3’P一本鎖のRNAとを必要とする。ATPの存在下でのアルカリホスファターゼAPとのインキュベーションによる3’Pの除去、又はバクテリオファージT4ポリヌクレオチドキナーゼT4Pnkとのインキュベーションによる5’OHのリン酸化反応或いは両者の組み合わせは、ストランド間ライゲーションを抑制した図1B。この結果は、古典活性ガイドタンパク質クロマトグラフィーによってRNApリガーゼを同定することにつながる。ストランド間ライゲーションをモニターしながら、4つの精製ステップを介してRNApリガーゼ活性を追従することができた図1C。ストランド間ライゲーション活性をさらに分画することはできず、最も濃縮されたMonoQ画分に含まれるタンパク質を、溶液中でトリプシン消化によって、続いてタンデム質量分析MSによって同定した。同定した91のポリペプチド表S1の中の1つ、HSPC117C22ORF28は、次の理由のため特に興味深く思われた。第一に、HSPC117が、機能が未知の高度に保存されたドメインUPF0027、及び推定の金属イオン結合部位を含む特有のタンパク質折り畳み構造を特徴とする細菌性古細菌RtcB遺伝子ファミリーのヒト相同体である。興味深いことに、大腸菌EcoliRtcA及びRtcBにおいて、RNA3’P末端シクラーゼは、σ54制御オペロン内に存在するGenschiketal、1998。結果、RtcBHSPC117タンパク質は、RNAプロセシング又は修飾に機能を有することがこれまでに予測されているGalperinandKoonin、2004。第二に、UPF0027タンパク質は、植物及び真菌モデル生物シロイヌナズナArabidopsisthaliana、出芽酵母Saccharomycescerevisiae及び分裂酵母Schizosaccharomycespombeに検出可能な代替のない、オルソロガス遺伝子KOG3833のクラスターを形成する。この系統発生上の違いは、動物及び古細菌におけるRNApリガーゼ活性の特異的な発生を非常に連想させるAbelsonetal、1998。実施例2HSPC117は、ストランド間ライゲーション及びtRNA成熟に必要である。よって、HSPC117が実際にストランド間ライゲーション及びtRNAプロセシングに関与するか否かを試験した。HeLa細胞に、HSPC117又は対照としてのEGFPを標的にする低分子干渉RNAsiRNAをトランスフェクトした。抽出物をこれらの細胞から調製し、ストランド間ライゲーションに関してアッセイした。著しく、RNA干渉RNAiによるHSPC117の欠乏がストランド間ライゲーションに影響した図1D、レーン24とレーン57との比較。3’PdsRNAは単に代替基質として使用し、RNApライゲーションはtRNAのスプライシングに必要であると想定される。次に、サイレンシングHSPC117のtRNA成熟への影響を、インビトロinvitroで試験した。適したtRNA前駆体pretRNA転写物を、HeLa細胞質抽出物において成熟tRNAのために処理するLaskietal、1983。よって、α32PGTP放射標識されたtRNA前駆体転写物が、RNAiによってHSPC117が欠乏した抽出物と共に含まれた図1E。HSPC117のレベルの減少は成熟tRNAの形成を減じ、エクソンのハーフの随伴的な蓄積につながり、これはtRNAエクソンのライゲーションにおける生化学的機能と一致する。抽出物中のHSPC117レベルの効率的な減少は、ウエスタンブロット分析によって確認された図1F。HSPC117のsiRNA媒介欠乏の特異性を、siRNAの異なるセットで及びRNAi表現型のレスキュー図5によって、マウスゲノムDNAに由来するバクテリア人工染色体BACからのHSPC117のRNAi耐性形態の発現で確認した。実施例3HSPC117は、哺乳類RNApリガーゼの触媒成分である。次に、HSPC117がRNApリガーゼ活性と関係するか否かを検討した。よって、安定してトランスフェクトした、cmycタグをつけたマウスHSPC117を発現しているクローンHeLa細胞株を確立した。UPF0027タンパク質図6及び超好熱古細菌Pyrococcushorikoshii由来のRtcBの公開された結晶構造Okadaetal、2006によって導かれる複数の配列アライメントに基づいて、点変異体cmycHSPC117C122Aを発現している安定してトランスフェクトされたクローン細胞株を産生した。RTCD1及びtRNAエンドヌクレアーゼから独立しているtRNAリガーゼ活性を検出するために、適したα32PGTP放射標識されたハイブリッドtRNA前駆体Englert、2005を、メタン生成古細菌MethanocaldococcusjannaschiiMjTSEN由来の組換えスプライシングエンドヌクレアーゼで切断することによって、tRNAエクソンハーフを調製した。cmycHSPC117の親和性精製から、tRNAエクソンハーフを連結することが可能である免疫沈降物IPを得た。一方、点変異体cmycHSPC117C122Aは、RNAリガーゼとして不活性であった図2A、レーン6及び7とレーン8との比較。野生型WT及びC122A変異体cmycHSPC117の等量の比較を、ウエスタンブロットによって確認した図2B、レーン2と3の比較。よって、HSPC117がtRNAリガーゼの触媒成分であることが結論付けられた。実施例4HSPC117は、2’3’環状リン酸及び5’OHRNA終端の直接ライゲーションを触媒する。RNApリガーゼは、その基質終端で5’OHを必要とすることが予測される。3’エクソンの5’OHを5’Pに変換するために、tRNAエクソンハーフをATPの存在下で組換え5’OHRNAキナーゼCLP1と共にプレインキュベートした場合、一貫して、cmycHSPC117IPsにおいてリガーゼ活性を検出することはできなかった図2C、レーン2及び3を比較。その5’OHRNAキナーゼ活性に加えて、T4Pnkが2’3’ホスホジエステラーゼ及び3’ホスファターゼ活性を有することは周知である。cmycHSPC117IPとのライゲーションのための基質としてのATPの不存在下2’3’環状リン酸を除去するため又は存在下2’3’環状リン酸を除去し、さらに5’OHを5’Pに変換するためで、T4Pnkと共にプレインキュベートしたtRNAエクソンハーフを使用した場合、RNApリガーゼに関して予想通り、いずれのリガーゼ活性も検出することができなかった図2C、レーン4及び5。よって、記載のRNApリガーゼによるライゲーションは、5’OH図1Bも参照及び2’3’環状リン酸に有益である。RNApリガーゼによるtRNAエクソンハーフのライゲーションの最も特有の特徴は、カノニカル5’、3’リン酸ジエステル結合における前駆体由来のスプライスジャンクションリン酸を含む成熟tRNAの生成である図1A、分岐下部。cmycHSPC117IPによって触媒されるRNAライゲーションに関してこれが本当かを試験するために、スプライスジャンクションリン酸の隣接分析を実施した図2D。5’エクソンハーフの終端に放射標識された2’3’環状リン酸を有するtRNAエクソンハーフを、組換えスプライシングエンドヌクレアーゼでα32PUTP放射標識されたtRNA前駆体を切断することによって調製した図7。これらのエクソンハーフを、cmycHSPC117IP又は負の対照としてのT4PnkとバクテリオファージT4RNAリガーゼ1T4Rnl1の混合物とのインキュベーションによって連結した。これらの反応物から成熟tRNAを分離し、各グアノシンヌクレオチドのRNA3’を切断し、その基質をグアノシン3’一リン酸Gpによって終結された断片に処理するリボヌクレアーゼT1によって消化した。長さが68ヌクレオチドの範囲の断片を分離し、リボヌクレアーゼT2によって消化し、薄層クロマトグラフィーによって分解されたヌクレオチド3’一リン酸が得られた。斯かる手順に従って、cmycHSPC117によって産生される成熟tRNAに由来するRNA7mersにおいて、放射標識されたGpが唯一検出され、これは前駆体由来のスプライスジャンクションリン酸の保持を示している図2E、レーン3。予想通り、スプライスジャンクションリン酸は、T4Pnk及びT4Rnl1を用いて行われた対照ライゲーションにおいて交換された図2E、レーン4。放射標識されたNTPはいずれのライゲーション反応にも添加しなかったので、成熟、T4Rnl1連結tRNAに由来するリボヌクレアーゼT17mersのリボヌクレアーゼT2消化物において放射標識されたGpは検出することができなかった図2E、レーン4。同様の隣接分析はまた、cmycHSPC117IPによるその環状イントロンへの転換後に、2’3’環状リン酸の末端放射標識された直線状イントロンと共に行った。cmycHSPC117によってT4PnkRnl1によってではない環状化されたイントロンのP1ヌクレアーゼ消化物における放射標識されたウリジン5’一リン酸pUの検出は、スプライスジャンクションリン酸の保持を裏付けた図2F、レーン1及び2を比較する。同定したRNApリガーゼが、カノニカル3’、5’リン酸ジエステル結合において、前駆体由来のスプライスジャンクションリン酸を成熟tRNAに組み込むことによってtRNAエクソンハーフを結合することが結論付けられた。実施例5HSPC117は、安定したヘテロマータンパク質複合体中に存在する。顕著なことに、RNApリガーゼを精製する我々の努力に並行して、これまで機能が未知であった安定且つ非常に均質のHSPC117含有複合体が、核HeLa細胞抽出物から調製されたスプライセオソームSF3B粒子と同時精製されることを発見した。よって、SF3B結合且つ高精製HSPC117複合体がRNApリガーゼ活性を示すか試験した。SF3B結合のHSPC117複合体をSF3B及びU2スプライセオソーム複合体の解離によって、続いてU2の選択的免疫除去によって得た。非結合のSF3B及びHSPC117複合体を、通過画分から回収し、抗SF3B155結合樹脂によって捕捉し、抗体エピトープペプチドで特異的に溶出した図3A。親和性カラムからの溶出後に、SF3B複合体図3B、画分1219及びHSPC117複合体図3B、画分2326を、スペロース6上でサイズ排除クロマトグラフィーによって分離した。cmycHSPC117IPsで得られた最初のデータに一致して、HSPC117複合体を含むSF3Bスプライセオソーム複合体でない画分はtRNAエクソンハーフと直線状イントロンを成熟tRNA及び環状イントロンに各々変換した図3C。さらに、同一の画分は、RNAiによりHSPC117が欠乏した抽出物を欠如したtRNAスプライシングを生化学的にレスキューできた図8。このHSPC117含有複合体で同定したタンパク質を、クーマシーブルー染色ゲルから分離した単一バンドのトリプシン消化によって、続いてMS分析によって分析した。同定したタンパク質はC22ORF28HSPC117に加えて、DEADボックスヘリカーゼDDX1及びFAM98B、さらにニネイン相互作用タンパク質C14ORF166CGI99、並びにASWC2ORF49の準化学量論量を含んだ図3D。このタンパク質のセットは、安定細胞クローン由来のcmycHSPC117の免疫沈降物表2及びMonoQRNApリガーゼ画分において同定したタンパク質図1C及び表1のMS分析結果と重複する。言及のHSPC117のインタラクターのサイレンシングは、mRNAレベルの効率的減少図3Gを除き、ストランド間のライゲーション図3E又はtRNA成熟図3Fに効果を有しなかった。HSPC117、DDX1、CGI99、FAM98B及びCGI99のいずれかが欠乏のタンパク質抽出物のウエスタンブロット分析によって、HSPC117、DDX1及びFAM98Bの効率的欠乏が確認された図3H。著しいことに、HSPC117の欠乏はまた、他の複合体メンバーDDX1及びFAM98Bのタンパク質レベルの低下につながった。同様に、DDX1及びCGI99双方の欠乏は、DDX1とFAM98Bとの欠乏を伴った。興味深いことに、HSPC117含有複合体は、十字型DNA構造に親和性を示すことが報告されたDrewettetal、2001。我々は、十字型DNA対照の二本鎖DNAでないでストランド間ライゲーション図9A及びtRNA成熟図9B双方を抑制することができた。総合すると、これらのデータは、RNApリガーゼ活性を示すHSPC117C22ORF28、DDX1、CGI99C14ORF166及びFAM98Bから構成される安定した複合体の強力な証拠を供する。SF3Bスプライセオソーム粒子及びRNApリガーゼの同時精製は、興味深いカノニカルmRNAスプライシングとRNApリガーゼとの間の関連を明らかにする。実施例6HSPC117は、生細胞においてtRNAライゲーションに関与する。インビトロinvitroでHSPC117がRNA2’3’環状リン酸及び5’OH終端を直接的に結合可能な複合体のメンバーであることを示した後、続いてインビトロinvivoでのRNAライゲーションにおけるHSPC117の役割を検討した。我々はまず、RNAiによるRNA末端シクラーゼRTCD1、HSPC117又は対照遺伝子としてのEGFPが欠乏したHeLa細胞への、5’32PpCp放射標識されたdsRNAのトランスフェクションによって、ストランド間ライゲーションが生細胞で生じうるか否かを試験した図4A。ゲル電気泳動による全RNAの単離及び分析は、放射標識された3’PdsRNAが細胞に取り込まれ、続いて連結されることを示した。インビトロinvivoにおいて、ストランド間ライゲーションは、HSPC117に依存的であり図4A、レーン4及び7と、レーン3及び6とを各々比較、あまり明白でない程度であるがRTCD1に依存的であった図4A、レーン5及び8と、レーン3及び6とを各々比較。RNAi媒介のHSPC117の欠乏の、新規合成のtRNA前駆体のプロセシングへの効果を試験するために、これまでにブルセイトリパノソーマTrypanosomabruceiにおけるtRNAのミトコンドリア移入の試験に適用された系BouzaidiTialietal、2007を使用した。HSPC117、ヒトスプライシングエンドヌクレアーゼサブユニットTSEN2又は対照としてのEGFPを標的とするsiRNAを、テトラサイクリンTet反応性プロモーターの制御下でタグをつけたtRNA前駆体IleTATをコードするレポーターコンストラクトと共に図4B図9、安定してTetリプレッサーを発現しているHeLa細胞中にトランスフェクトした。選択され時点での誘発後図4C、RNAを抽出しノーザンブロットによって分析した。タグをつけたtRNAIleTATの5’エクソンに関するブロットのプロービングプローブI5E、図4Bは、HSPC117及びTSEN2EGFP対照siRNA処理ではないのRNAi媒介の欠乏で、成熟tRNAの形成における明白な遅延を明らかにした図4D及び図4Eの、レーン13をレーン46又は79と各々比較。総合すると、これらのデータは、広範の基質特異性及びtRNAプロセシングにおいて機能を有するHSPC117のRNAリガーゼとしての役割を示す。実施例7ヒトにおいて発見される第一のRNAリガーゼとしてのHSPC117の潜在的機能HSPC117は、ヒトRNAリガーゼ複合体の触媒サブユニットである。周知のATPアーゼ及びヘリカーゼの巻き戻し活性は、tRNAスプライシングを支持するためのATP依存的立体構造変化においてDDX1に関する潜在的役割を示す。実際、DDX1は、DEADboxヘリカーゼとしての作用にATPを必要とすることが示されている、RNApリガーゼ依存的tRNAスプライシング経路と関係する唯一のポリペプチドである。これは、エンドヌクレアーゼRNApリガーゼ反応カスケードにおけるATPの支持的であるが重要でない役割の説明が可能であり、それは機構的にさらなるエネルギーが少しも必要でない。CGI99、FAM98B及びASWの潜在的機能についてはほとんど知られていない。RNAi媒介欠乏に基づく本明細書中のデータは、tRNAハーフのライゲーションに関する非必須の役割を示す図7B及びC。RNApリガーゼ及びT4PnkRnl1様ライゲーション機構はともに、ヒト細胞において検出できるFilipowiczandShatkin、1983。今回、我々はRNApリガーゼ経路の要素を同定した。5’OHキナーゼ及び2’3’ホスホジエステラーゼ回復healing反応並びに最終ホスホトランスフェラーゼステップ斯かる経路に必要を触媒するタンパク質を、ヒトにおいて同定した。さらに今回、インビトロinvivoで、これらのタンパク質が実際にtRNAスプライシング酵素として機能し得ることを酵母におけるヘテロ相補性試験によって示した。以前の研究は、RNApリガーゼ経路が哺乳類において一般的tRNAライゲーション経路であることを示すFilipowiczandShatkin、1983。本明細書に記載のRNApリガーゼ複合体は、RNA終端の事前の回復healingを必要とせず、2’3’環状リン酸と、tRNAエンドヌクレアーゼ反応の5’OH表示生成物の、直接的結合が可能な最初に同定されるRNAリガーゼタンパク質であることを示す。これは、RNA修復経路におけるRNApリガーゼのより一般的な役割を意味する。RNA修復系の示唆的な例は、原核生物から周知である。現在、真核生物におけるRNA修復の役割は、注目が高まっている。RNApリガーゼは、ヒトRNA修復経路及びHSPC117によって媒介される非カノニカルスプライシング事象に関与する。小胞体ストレス応答UPR中のmRNAのストレス誘発性切断及び続くスプライソソーム独立性ライゲーションは、RNAリガーゼを必要とするこのような非カノニカルスプライシング事象を裏付ける。経路は出芽酵母Scerevisiaeで広範囲に検討されており、最終ライゲーションステップにおいて酵母tRNAリガーゼTrl1pと関係する。XBP1mRNAのストレス誘発性の非従来のスプライシングに依存する同様のUPR経路は、ヒト細胞に存在する。しかしながら、関連のリガーゼは、これまで未知であった。以前の研究は、ヒトにおけるT4Pnk様RNAライゲーション経路の潜在的成分であるホスホトランスフェラーゼTPT1が、XBP1mRNAのストレス誘発性スプライシングに重要でないことを示す。HSPC117は、ヒトUPR経路においてRNApリガーゼとして機能する。さらにRNAリガーゼは、ヒトでウイルス複製に関与すると提唱されている。例えば、ヒトにおけるローリングサークル複製中に、宿主コードのリガーゼはD型肝炎ウイルスHDVのRNAゲノムを環状化することが以前に想定されている。本明細書に記載のHSPC117含有リガーゼ複合体が宿主媒介のウイルス性ゲノム環状化に関与すると思われる。近年、HSPC117及びDDX1は共に、ヒト細胞においてHDVの複製に必要であることが報告されている。さらに、記載されるRNApリガーゼ複合体の全メンバーが、マウス脳抽出物中のキネシン結合RNA輸送顆粒と相互作用することが示されている。興味深いことに、RTCD1はまた、これらのRNA輸送顆粒と関係することが分かり、それによりRNA末端リン酸環化とRNAライゲーションとの間の潜在的機能上の関連が確認された。ヒトと大腸菌ほど遠縁の生物においてHSPC117RtcBタンパク質が高度に保存されていることは、斯かるタンパク質ファミリーにおいて普遍的且つ重要な役割を有することを示す。最初の研究によって実際に、HSPC117の哺乳類の発生における必須の機能が確認された。他方、一部の細菌におけるHSPC117RtcB及びRtcAを含むオペロンに割り当てることができる生物学的機能はこれまでなかった。この点で、HSPC117RtcBタンパク質の分子機能が今回解明された。参考文献AbelsonJTrottaCRandLiHtRNAsplicingTheJournalofbiologicalchemistry2731268512688BouzaidiTialiNAebyECharriereFPusnikMandSchneiderAElongationfactor1amediatesthespecificityofmitochondrialtRNAimportinTbruceiTheEMBOjournal2643024312ChanPPandLoweTMGtRNAdbadatabaseoftransferRNAgenesdetectedingenomicsequenceNucleicacidsresearch37D9397DrewettVMolinaHMillarAMullerSvonHeslerFandShawPEDNAboundtranscriptionfactorcomplexesanalysedbymassspectrometrybindingofnovelproteinstothehumancfosSREandrelatedsequencesNucleicacidsresearch29479487EnglertMMechanismusdespretRNASpleiβensStrukturundFunktionpflanzlicherundanimalerRNALigasenInPhDthesisFacultyofChemistryandPharmaceuticspp139FilipowiczWandShatkinAJOriginofsplicejunctionphosphateintRNAsprocessedbyHeLacellextractCell32547557GalperinMYandKooninEVConservedhypotheticalproteinsprioritizationoftargetsforexperimentalstudyNucleicacidsresearch3254525463GenschikPDrabikowskiKandFilipowiczWCharacterizationoftheEscherichiacoliRNA3terminalphosphatecyclaseanditssigma54regulatedoperonTheJournalofbiologicalchemistry2732551625526LaskiFAFireAZRajBhandaryULandSharpPACharacterizationoftRNAprecursorsplicinginmammalianextractsTheJournalofbiologicalchemistry2581197411980OkadaCMaegawaYYaoMandTanakaICrystalstructureofanRtcBhomologproteinfromPyrococcushorikoshiirevealsanovelfoldProteins6311191122ReidCELazinskiDWAhostspecificfunctionisrequiredforligationofawidevarietyofribozymeprocessedRNAsProcNatlAcadSciUSA97424429