"毛髪損傷の種類又は原因を標識タンパク質フラグメントと相関させる方法であって、a2つの全く同じ毛髪試料試料A及び試料Bを生成する工程と、b損傷を及ぼす組成物又は処理を試料Aに適用し、損傷を及ぼす組成物又は処理を試料Bには適用しない工程と、c好適な溶媒試料を用いて試料A及び試料Bのそれぞれから不安定なタンパク質を抽出する工程と、dMALDI-MSを用いて試料A及び試料Bからの前記タンパク質フラグメント試料を分析する工程と、e試料A及び試料Bからの前記MALDI-MSの結果を比較する工程と、f試料Bには存在せず試料Aに存在する特有の修飾パターンを識別することによって前記標識タンパク質フラグメントを識別する工程とを含む、方法。酵素によるタンパク質分解の後に前記MALDI-MSを行う、請求項1に記載の方法。前記酵素によるタンパク質分解をせずに前記MALDI-MSを行う、請求項1に記載の方法。毛髪損傷の種類又は原因を示す方法であって、a好適な溶媒を用いて毛髪試料から前記不安定なタンパク質を抽出する工程と、bMALDI-MSによって前記タンパク質フラグメント試料を分析し、タンパク質フラグメントの結果を得る工程と、c前記タンパク質フラグメントの結果を特定の損傷の標識タンパク質フラグメントのリストと比較することによって毛髪損傷を識別する工程とを含む、方法。前記MALDI-MSでのタンパク質フラグメントの結果が、次の構造を有する前記タンパク質フラグメントのN末端に28及び71の修飾を含む、請求項4に記載の方法。本開示は概して、毛髪から抽出されたタンパク質フラグメントを毛髪損傷の種類と相関させることによって毛髪損傷の種類を検出するためのシステム及び方法に関する。毛髪損傷の種類又は原因を標識タンパク質フラグメントと相関させる方法であって、この方法は、2つの全く同じ毛髪試料、すなわち試料A及び試料Bを生成する工程と、損傷を及ぼす組成物又は処理を試料Aに適用し、損傷を及ぼす組成物又は処理を試料Bには適用しない工程と、好適な溶媒を用いて試料A及び試料Bのそれぞれから不安定なタンパク質を抽出する工程と、MALDI-MSを用いて試料A及び試料Bからのタンパク質フラグメント試料を分析する工程と、試料A及び試料BからのMALDI-MSの結果を比較する工程と、試料Bには存在せず試料Aに存在する特有の修飾パターンを識別することによって標識タンパク質フラグメントを識別する工程とを含む。毛髪損傷の種類又は原因を示す方法であって、この方法は、好適な溶媒を用いて毛髪試料から不安定なタンパク質を抽出する工程と、MALDI-MSを用いてタンパク質フラグメント試料を分析する工程と、タンパク質フラグメントの結果を得る工程と、タンパク質フラグメント結果を特定の損傷の標識タンパク質フラグメントのリストと比較することによって毛髪損傷を識別する工程とを含む。本明細書で使用するとき、毛髪は、頭髪又はまつげのような、人又は動物由来のケラチン繊維を意味する。更に、本明細書で使用するとき、ケラチンタンパク質という用語は、毛髪に存在するタンパク質を意味するものと理解される。本明細書で使用するとき、タンパク質フラグメントという用語は、損傷されケラチンタンパク質構造体から剥がれたアミノ酸及びアミノ酸より大きいタンパク質であるが、静電相互作用、又は弱い水素結合マトリックスのタンパク質及び脂質、あるいはケラチンタンパク質構造体への組み込みを含まないその他の任意の力によって、毛髪構造体内に保持されているものを意味する。本明細書で使用するとき、標識タンパク質は、特定の毛髪損傷の種類及び/又は損傷を及ぼす処置と相関しているタンパク質フラグメントを意味する。本明細書で使用するとき、溶出する、溶出しているなどは、還元剤又は抽出剤を一切添加せずに水溶液と毛髪を接触させることによって、ケラチンタンパク質構造を変更せずに、かつ毛髪試料に存在する静電相互作用、弱い水素結合マトリックスのタンパク質及び脂質、又はケラチンタンパク質構造体への組み込みを含まないその他の任意の力による結合以外の化学結合を破壊若しくは還元せずに、毛髪からタンパク質を取り出すことを意味する。本明細書で使用するとき、溶出可能とは、毛髪試料に存在するタンパク質フラグメントが、還元剤又は抽出剤を一切添加せずに水溶液において毛髪構造体から取り出されることが可能なことを意味する。更に、溶出可能は、タンパク質が、本質的に水からなる水溶液において、静電相互作用、弱い水素結合マトリックスのタンパク質及び脂質、又はケラチンタンパク質構造体への組み込みを含まないその他の任意の力による結合以外のケラチンタンパク質構造体に存在する化学結合の破壊又は還元を伴わずに、毛髪構造体から運び出すことができることを意味する。ケラチンタンパク質構造を変更せずに毛髪からタンパク質フラグメントを抽出するために水溶液を用いて毛髪損傷を検出し示すための方法が開発されてきた。そのような方法の1つは、2010年5月17日付で出願された特許出願第61/345,321号に記載されいる。毛髪から抽出されたタンパク質フラグメントを分析する。タンパク質フラグメントの分析を基に、毛髪に及んだ損傷の種類を特定すること、特に毛髪に及んだ損傷の原因を決定することが可能である。そのような特定の標識タンパク質フラグメントとしては、毛髪が漂白されたときに生成される標識タンパク質フラグメントが挙げられる。毛髪試料を検査し、タンパク質フラグメントを抽出し、抗体に基づく検出及び/又は質量分析法を用いて、得られたタンパク質フラグメントの試験を行うことができる。一実施形態では、MALDI-TOF質量分析法すなわちMALDI-MSとしても知られているマトリックス支援レーザー脱着イオン化法MALDIを用いてタンパク質フラグメントの評価を行う。この技法は質量分析法で用いられるソフトイオン化法である。MALDI-MSは、ペプチド及びタンパク質のような生体分子、並びにポリマーのような大きい有機分子の分析に用いることができる。MALDIでは、α-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸CHCAのような紫外線吸収性マトリックスで検体を最初に共結晶化してからパルスレーザーYAG又は窒素レーザー放射線に曝す。これは検体/マトリックス結晶の蒸発/脱着を引き起こし、質量分析質に伝達されて検出されるイオンを生成する。MALDI-TOFでは飛行時間質量分析質が用いられる。MALDI-TOFデータは、分子量の情報を生成するためにMSモード例えばペプチドで収集してもよく、MS/MSモード例えばペプチド配列/構造情報で収集してもよい。典型的なMALDI質量スペクトル収集は1分未満で行われるので、関心のある試料の分子種の高速スクリーニングに使用することができる。未処置の毛髪及び漂白された毛髪のような異なる条件下で処置された試料で得られた質量スペクトルの比較によって、変化及び分子標識を検出することができる。MALDI-MSは、酵素によるタンパク質の分解とともに行っても、それを用いずに行ってもよい。次いで、タンパク質フラグメントの試験結果を既知の標識タンパク質フラグメントのライブラリと比較して毛髪損傷の種類を識別し、場合によっては毛髪損傷の発生源すなわち漂白を識別する。これは損傷のフィンガープリンティングを可能にする。すなわち、毛髪試料を試験し、その結果に特定の標識タンパク質フラグメントが含まれていれば、それは毛髪試料が特定の原因によって損傷されていることを意味する。タンパク質フラグメントを評価するための更なる方法としては、液体クロマトグラフィー電気スプレー質量分析が挙げられただしこれに限定されず、タンパク質フラグメントに対する抗体を生成することができ、ELISA検定を開発することができる。更に、iTRAQ法で、AppliedBiosystemsカリフォルニア州Carlsbadから入手可能な試薬を使用して、タンパク質フラグメントの各リシン側鎖及び遊離N末端基に対するアイソバリックタグの共有結合アミン連鎖を確立することができる。これは、MALDIMSによって同時に複数の試料の試験を実行することを可能にする。複数の試料の試験をMALDIMSで同時に実行することは、試験のばらつきによる試験データの変動を最小限にする。多様な異なる組成物又は処置によって毛髪見本を損傷して、得られたタンパク質フラグメントを損傷されていない同様の毛髪見本と比較分析することによって、これらの標識タンパク質フラグメントのライブラリを生成できる。毛髪が受けた損傷の種類に基づいて同じ標識タンパク質の結果が見出されるであろうと考えられるので、MALDI-MSによって標識タンパク質フラグメントを識別できる。これは、標識タンパク質フラグメントが毛髪損傷の種類又は原因の指標となることを意味する。例えば、漂白による毛髪損傷は特定の標識タンパク質フラグメントをもたらし、紫外線による毛髪損傷は特定の標識タンパク質フラグメントをもたらすなどである。漂白による損傷を受けた毛髪は、次の構造を有するタンパク質フラグメントのN末端に28及び71の修飾をもたらすと考えられる。例えば図1に示したように、漂白された毛髪からは、損傷されていない未処置の毛髪試料には存在しない特定のフラグメントのセットが放出され、水を用いて抽出されている。MSピークのセットは、2つの修飾されていないタンパク質のピーク966及び1568と、修飾されていないタンパク質のピーク28ダルトン96628=994及び156828=1596の分子量に相当するピークとからなる。追加的なピークはフラグメントのアミン末端での化学修飾による。この特徴的なピークに相当するタンパク質フラグメントの配列を表1に示す。タンパク質の配列の記述に用いる文字は1文字アミノ酸コードを指すすなわちE=グルタミン酸、I=イソロイシンなど。これらのタンパク質への更なる修飾としては、メチオニン、システイン、及びトリプトファン残基の酸化が挙げられ、アスパラギン及びグルタミン残基での脱アミド化も検出される場合がある。タンパク質フラグメントはケラチン31に位置し、これはこのタンパク質が毛幹の漂白により劣化していることを示唆する。加えて、この方法を使用して個人の毛髪が処置に対して正常な反応を有するかどうかを示すこともできる。例えば、特定の毛髪疾患を有する個人の場合、その人からの毛髪試料は正常な反応を有する人からのものと同じ標識タンパク質フラグメントを生成しない可能性がある。毛髪疾患を有する人は、正常な反応によって示されるより多い、少ない、及び/又は場合によってはそれと異なる標識タンパク質フラグメントを生成する可能性がある。毛髪疾患反応ライブラリもまた、上述のような損傷に関する標識タンパク質フラグメントのライブラリと同様に作製できる。したがって、この毛髪疾患用の検査には、個人の毛髪を特定の損傷を及ぼす処置に曝露し、次いでその損傷を及ぼす処置から生成された標識タンパク質フラグメントによって毛髪疾患を識別することが含まれ得る。この毛髪タンパク質損失検査法の一実施形態では、可溶性タンパク質フラグメントと不溶性タンパク質フラグメントを別々に分析する。可溶性タンパク質フラグメントと不溶性タンパク質フラグメントを別々に分析することは、タンパク質フラグメントの検出の感度を高めることができる。加えて、これらのタンパク質フラグメントを別々に分析することは、毛髪損傷の場所の決定を改善し得る。可溶性タンパク質フラグメントと不溶性タンパク質フラグメントを別々に測定するために、毛髪繊維を取り出した後、水中の試料を遠心分離するか、又は可溶性部分から不溶性の部分を沈殿させることができる。実施例A:1.毛髪を漂白し、漂白による損傷の示す標識タンパク質フラグメントを生成する。毛髪試料は以下のプロトコルを用いて漂白した。プロトコル1:水酸化アンモニウム2、EDTA四ナトリウム0.2酢酸でpHを10.3に調整、及び過酸化水素6からなる漂白液を調製した。毛房茶色及び天然白色を漂白液に浸し、40°Cの炉内に入れた。30分後及び90分後に毛房を漂白液から取り出し、DI水道水で2分間洗い、乾燥した。プロトコル2:過酸化水素H2O2を漂白液に含まないことを除き、プロトコル1と同じ。プロトコル3:EDTA四ナトリウムC10H12N2O8Na4を漂白液に含まないことを除き、プロトコル1と同じ。2.漂白後の毛房のタンパク質損失分析毛髪からの合計タンパク質損失を測定することにより、漂白処置の結果としての毛房の総合的なタンパク質損傷量を評価した。要約すると、各毛房からの0.2~0.3gの毛髪を5cm2インチの部分に切り分け、ガラスシンチレーションバイアルに加えた。毛髪0.1gに対してDI水1.0mLの比率でDI水を加え、ボルテックスプラットホームで2500rpmで60分間試料を物理的に攪拌した。水抽出物の合計タンパク質濃度をLowryタンパク質定量検定によって分析した。結果を表2に要約する。3.漂白後の毛房のMALDI-TOF分析漂白処理の結果として毛房が受けた特定のタンパク質損傷を、MALDI-TOF分析によって上述の水抽出物を分析して決定した。水抽出物をMALDIマトリックス溶液80:20:0.1の比率のアセトニトリル:水:トリフルオロ酢酸溶液1mLに5mgのα-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸CHCAを溶解したものと直接混合1:1した。それぞれ約1μLの試料をMALDIプレートに付け、MALDI-TOF/TOF4800プラスシステムAB-Sciexで分析した。漂白された毛髪の水抽出物中に検出された毛髪損傷のタンパク質標識は、m/z994/1037、1596/1639、1204、1278などのピークを含む。ピーク1038は1037の脱アミド化された形態であり、ピーク994/1037及び1596/1639などでのデルタ質量は43Daであることに留意されたい。標識1037及び1204の結果を表1にまとめた。4.漂白された毛髪からのタンパク質損傷標識のシークエンシングMALDI-TOF分析で観察された標識タンパク質の識別及び配列のために、漂白水抽出物を逆相HPLS2mm×15cm、Jupiter、C4、300Aカラム、HP1100システムで分離し、画分を手作業で収集し、凍結乾燥した。各画分を0.02のトリフルオロ酢酸TFA水溶液に20μLに再溶解し、MALDIマトリックスと1:1で混合し、MALDIプレートに付けて、MALDIシークエンシングを行った。タンパク質の/それらの損傷標識のほかに水抽出物中のタンパク質をより完全に識別するために、漂白された毛髪の別の水抽出物を真空下で乾燥し、50mMのNH4Ac緩衝液pH8に再び溶解した。トリプシン0.25μg/μL水溶液10μLを緩衝液に加え、37°Cで4時間培養した。そのトリプシン分解物を真空下で乾燥し、0.02TFA/水50μLに再び溶解してから、HPLC分離を行った。LC画分を収集及び乾燥し、MALDIシークエンシングにより分析した。ProteinPilotソフトウェアAB-Sciexを用いて、非トリプシンとトリプシンのLC画分の両方から収集されたMALDIの生データをタンパク質データベースに照合して検索した。結果は以下にまとめられる。トリプシンによる分解後、漂白された毛髪の水抽出物に多くの異なる形態の毛髪ケラチンが検出された。主なケラチンとしては、81、85、31、86、33a、33b、及び83が挙げられる。Met、Cys及びTrpでの酸化、Asn及びGlnでの脱アミド、N末端のホルミル化修飾されていない配列に28da及び未知の修飾71da更に特定されるを含む修飾が検出された。デルタ質量43daを有するいくつかのタンパク質対として例えば水抽出物中の994/1037及び1596/1639、並びに漂白された毛髪のトリプシン含有水抽出物中の1513/1556、1954/1997などが観察された。これらの対はおそらくタンパク質のN末端でのホルミル化28Da及び未知の形成formation71Daによる修飾の結果であろう。これらの可能な修飾の正確な反応化学は不明である。これらのピーク及び対パターンを毛髪損傷の標識として使用することができる。xは標識が存在することを示す。信号強度xxx>xx>x実施例B機械的特性の損失、形態的な損傷、及びタンパク質の損失を含む紫外線曝露による毛髪繊維の損傷を記録した。毛髪に対する紫外線損傷のペプチド標識を識別するために、紫外線によって引き起こされる特定のタンパク質の分解を以下のプロセスによって調査した。1.紫外線による損傷を示す標識タンパク質フラグメントを生成するための毛髪の紫外線UV曝露プロトコル:AtlasCi3000XenonArcFade-Ometerにおいて放射照度の設定を420nmで1.48W/m2とし、チャンバ温度35°C、相対湿度80で毛房一般人の茶色の毛髪を最高75時間まで紫外線に曝した。製造業者AtlasMaterialTestingTechnologyLLCにより提供されているOutdoortoXenonRadiantEnergyConversionプログラムを用いて行った計算によると、これらの条件下での1時間の紫外線曝露はフロリダ州で7.5時間の屋外日光曝露にほぼ相当する。2.紫外線後の毛房のタンパク質損失分析注記:これは漂白した毛髪を使ったものと同じプロトコルである毛髪からの合計タンパク質損失を測定することにより、紫外線曝露の結果としての毛房の総合的なタンパク質損傷量を評価した。端的に述べると、各毛房からの0.2~0.3gの毛髪を5cm2インチの部分に切り分け、ガラスシンチレーションバイアルに加えた。毛髪0.1gに対してDI水1.0mLの比率でDI水を加え、ボルテックスプラットホームで2500rpmで60分間試料を物理的に攪拌した。水抽出物の合計タンパク質濃度をLowryタンパク質定量検定によって分析した。結果を表3に要約する。3.紫外線後の毛房のMALDI-TOF分析紫外線曝露の結果として毛房が受けた特定のタンパク質損傷を、MALDI-TOF分析によって上述の水抽出物を分析して決定した。水抽出物をMALDIマトリックス溶液80:20:0.1の比率のアセトニトリル:水:トリフルオロ酢酸1mLに5mgのα-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸CHCAを溶解したものと直接混合1:1した。約1μlの各試料をMALDIプレートに付け、MALDI-TOF/TOF4800プラスシステムAB-Sciexで分析した。水抽出物では、紫外線による毛髪損傷のタンパク質標識m/z1278が検出された。漂白した毛髪の抽出物にもこの標識は低レベルで検出されたが、この標識は紫外線損傷後により多く、毛髪の紫外線照射後に見つかった優勢な低分子量の画分である。この標識は、消費者に関連する曝露範囲内での毛髪への紫外線曝露量に比例して増加することも見出されている表3。本明細書に開示した寸法及び値は、記述された正確な数値に厳しく限定されるものと理解すべきでない。むしろ、特に言及しない限り、そのようなそれぞれの寸法は、記述された値と、その値の周辺の機能的に同等の範囲との両方を意味することを意図する。例えば、40mmとして開示された寸法は、約40mmを意味することを意図する。相互参照されるか又は関連するすべての特許又は特許出願を含む、本願に引用されるすべての文書を、特に除外すること又は限定することを明言しないかぎりにおいて、その全容にわたって本願に援用するものである。いずれの文献の引用も、こうした文献が本願で開示又は特許請求されるすべての発明に対する先行技術であることを容認するものではなく、また、こうした文献が、単独で、あるいは他のすべての参照文献とのあらゆる組み合わせにおいて、こうした発明のいずれかを参照、教示、示唆又は開示していることを容認するものでもない。更に、本文書において、用語の任意の意味又は定義の範囲が、参考として組み込まれた文書中の同様の用語の任意の意味又は定義と矛盾する場合には、本文書中で用語に割り当てられる意味又は定義に準拠するものとする。本発明の特定の実施形態が例示され記載されてきたが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を実施できることが、当業者には自明であろう。したがって、本発明の範囲内にあるそのようなすべての変更及び修正を添付の特許請求の範囲で扱うものとする。"