"サンプル中の異形成またはがん腫細胞を検出するキットであって、サンプル中の異常な前がんまたはがん細胞の検出に使用するために、容器中の5,10,15,20-テトラキスカルボキシフェニルポルフィンおよび指図書を含有するキット。8.5~12.0のpHにおける50~90アルコールのアルコール水溶液中に溶解された5,10,15,20-テトラキスカルボキシフェニルポルフィンを含有する組成物を含有する、請求項1のキット。a細胞のサンプルを収集するための構成要素;b固形支持体にサンプルを付着させるための構成要素;c既知のがん、異形成、化生または正常状態の対照細胞サンプル;およびd5,10,15,20-テトラキスカルボキシフェニルポルフィン蛍光を定量するための構成要素:の1つ以上をさらに含む、請求項1のキット。TCPPを用いる前がんおよびがん細胞の検出のためのガラススライドアッセイこの実施例は、PAP染色された喀痰スライドの標準の細胞形態学的解析をとおして達成された診断結果を、TCPPで処理され、そして蛍光検鏡法によって解析されたスライドに対して比較する。結果は、本発明のTCPP検出技術が、新形成細胞インサイチューの異形成およびがん腫および真性がん腫の検出において慣用の喀痰細胞法と同等であることを示している。また結果は、当該技術分野における習熟した者が、組織サンプルに存在する異形成の程度を評価するために、単純な分類法則と同時に本方法を使用することができることを示している。方法モノレアースライドの作成において使用される喀痰処理操作.この研究における解析のために選ばれたすべてのモノレアースライドは、早朝、自然な咳きの手段を行う患者を通じて収集された喀痰サンプルから作成された。具体的には、患者が、リファンピンrifampin0.03-0.05mg/mlを含有する50アルコール/50Saccomanno液中2Carbowaxからなる固定液で満たされた容器中に3日連続の朝に咳きをしていかなるものでも吐き出すよう教育された。リファンピンは、M.チュバキュローシスM.tuberculosisを保持している患者またはN.メニンギチスN.meningitisの無症候性のキャリヤーであるかもしれない患者に対する予防薬剤として役立つよう固定液に添加された。2Carbowax溶液は、50エタノール98mlに融解Carbowax1502mlを添加し、そして30分間混合することによって作成された。溶液を作成するために使用されるガラス容器は、不正確な計量を引き起こす作成中の表面上のワックスの固化を予防するために暖め続けた。Carbowaxは、TCPP実行溶液にさらす前に、少なくとも15分間95アルコール中に浸漬して除去された。リファンピン溶液3mg/mlは、エチルアルコール100ml中にリファンピンの300mgカプセル剤を溶解し、そしてWaringブレンダーにおいて高速で混合することによって作成された。この溶液1mlがSaccomanno溶液各30mlに添加されるかまたはSaccomanno溶液1リットル当たり20ml添加され、そして十分に混合された。Saccomanno溶液の調製は、細胞学の分野の技術者には周知の標準方法にしたがった。2枚のthin-prep顕微鏡スライドおよび50mlプラスチック遠心管1本が患者の情報について標識された。喀痰標本が50mlプラスチック遠心管に注入され、そして必要ならば容積を50mlにするために、さらなる50エチルアルコール溶液が添加された。遠心管の内容物が250ml容Eberbachセミミクロブレンダー容器に注入され、そしてその標本および粘液様内容物の肉眼検査に応じて10~60秒間ホモジナイズされた。濃い粘液様標本は、ある場合には、より長い混合時間を要した。標本が遠心管に再び注入され、そして1850rpmで10分間遠心された。上澄液がデカントされ、遠心管中に1~2mlを残して沈降物遠心物と混合された。チューブは回転ミキサー上で約10秒間撹拌された。沈殿物の1~3滴がPreservCytバイアルCytycCorporation,Marlborough,MA中に入れられた。標本は5分間インキュベートされて、全微生物およびウイルス生物を失活させた。サンプルの単細胞層が、ThinprepProcessorCytycCorporation,Marlborough,MAを用いて製造者の指示にしたがってスライド上に固定された。ThinprepProcessorにおいて、細胞がポリカーボネートフィルター孔径0.5mm上に回収され、そしてガラススライドに移された。次いで、ThinprepProcessorが、直ちに、95エタノールを含有する固定液浴中にスライドを沈めた。TCPP保存溶液.重炭酸ナトリウム400mgを50イソプロパノール約90mlに添加し50mM重炭酸ナトリウム、そして完全に溶解するまで混合して塩基性50イソプロパノールを作成した。TCPP100mgをこの塩基性50イソプロパノール50mM重炭酸ナトリウムに徐々に添加し、そして溶解するまで3~5分間混合した。TCPP溶液は塩基性50イソプロパノールにより容積100mlにされ、よく混合し、そして冷蔵庫内にフォイルで覆った褐色試薬瓶に保存した。保存溶液中のTCPPの最終濃度は1mg/mlであった。TCPP実行溶液.新鮮なTCPP実行溶液は各日に調製された。濃度1mg/mlのTCPP保存溶液約10mlを室温にもたらした。TCPP保存溶液1mg/mlの8mlを200ml容メスフラスコに入れ、そしてMESバッファー約100mlを徐々に添加した。溶液を静かに混合した。さらなるMESバッファーを添加して溶液を容積200mlにした。溶液を3~5分間混合し、そして褐色びん中2-4°Cで保存した。実行溶液におけるTCPPの最終濃度は40μg/mlであった。TCPP暴露操作.スライドを95アルコール中、室温で30分間固定した。スライドを固定後直ちに、または3日後までにTCPPに暴露した。スライドを40μg/mlのTCPP溶液に36°Cで10分間浸漬し、次いで100mMMESバッファー中で3回、各1分、室温で撹拌しつつ洗浄した。スライドを1時間以上24時間未満後に観察した。顕微鏡情報.TCPP処理した喀痰細胞スライドの観察に利用した顕微鏡は、反射光蛍光顕微鏡測定のために載物台下の照明装置と台上の水銀ランプをもつOlympusmodelBH-1顕微鏡であった。水銀ランプは365nm,405nm,436nmおよび545nmにおける1次発光線を有した。蛍光フィルターアッセンブリーは2つのジクロティックキューブdichroticcubeからなった。グリーンキューブ490nmは、400-490nmを透過する励起フィルターと500nm以上の発光を透過する遮蔽フィルターをもつフィルターシステムを含有した。改変PAP染色技術による喀痰スライド染色操作.操作配列no.、試薬および時間分:秒は次のとおりであった:195アルコール15:00;2水道水1:00;3gil-ihemotox2:30;4水道水1:00;5青染色bluing試薬:30;6水道水1:00;795アルコール:10;8og-61:30;995アルコール:10;1095アルコール:10;11ea-501:15;1295アルコール:20;1395アルコール:30;14100アルコール1:00;15100アルコール1:00;16100アルコール1:30;17キシレン1:00;18キシレン1:00;および19キシレン1:00。Papanicolaou染色したスライドの日常の細胞形態学的解析の方法.PAP染色したスライドを半定量的細胞形態学的評価にかけた。1異形成および新形成細胞を伝統的な形態学的基準の使用により同定し、そして2肺性炎症の7つの基本的指標肺胞のマクロファージ、好中球、柱状細胞、粘液、粘膜螺線mucousspiral、着色マクロファージ、化生細胞の発現レベルを定量した。これらの炎症指標を定量化する方法は、既に文献で議論されているRobyetal.,1989,ActaCytol34:147-154;Robyetal.,1990,ActaCytol34:140-146;Schumannetal.,1989,AmRevResprDis139:601-603。PAP染色した細胞を用いて細胞形態を決定するために使用される基準が以下に議論される。有意な異常性なし.次の基準が満たされた場合、細胞は有意な異常性をもたないと同定された:1.炎症細胞のほかにグレード1-2の色素をもつマクロファージと混じり合った好塩基性の繊毛のある上皮細胞;2.基礎的に定位置にある上皮の丸い核;3.平均に分散した染色質;4.不明瞭な核膜;5.不明瞭な核小体;および6.化生細胞および異形成細胞の不在。扁平上皮化生異形成なし.次の基準が満たされた場合、細胞は異形成のない扁平上皮化生と同定された:1.繊毛のない好塩基性細胞の集塊;2.均一な細胞および核の大きさ;3.低い核/細胞質N/C比;4.細かく顆粒状の核染色質;および5.小さい丸い核小体通常1個が存在することがある。軽度の異形成扁平上皮異型.次の基準が満たされた場合、細胞は軽度の異形成と同定された:1.化生細胞より小さい;2.凝集した塊、または単独で見られる;3.細胞は両核と細胞質をはっきりと平らにシート状に存在している;4.細胞は大きさにおいて変化は少ない;5.細胞質は好エオシン性または好塩基性である;6.鋭い細胞質の縁;7.細胞は大きさにおいて変化は少なく、通常は丸ないし卵形、分割の場合、核の2つの半分は鏡像的であり、N/C比は変化が少ない;8.核膜は平滑;9.細かく顆粒状の核染色質やや増加、場合によっては染色中心;および10.繊維状細胞、広がった細胞質と核膜の明瞭な核をもつ長い細胞-細かい網目状ないし顆粒状細胞質は通常明るい黄橙色-角質化して単独、は、ケラチンの中心コアの回りに渦巻きを形成して上皮パールを形成することがある。中等度の異形成扁平上皮異型.次の基準が満たされた場合、細胞は中等度の異形成と同定された:1.大きさにおいて変化があり、通常は比較的大きいが軽度の異形成より小さいこともある;2.形状およびN/C比において軽度異形成よりも変化がある:3.細胞質は濃く、好酸性成分が著しく多い;非定型細胞数の増大;4.核は半分ずつ等しくないこともある鏡像的ではない;5.核の小葉、間隙および小節が存在する;6.核質nuclearmaterialは多くの点彩を伴う過染色性を示す-染色質パターンに類似;重度の異形成顕著な扁平上皮異型.次の基準が満たされた場合、細胞は重度の異形成と同定された:1.細胞は大きさおよび形状において著しく変化する;2.通常は中等度異形成よりやや大きい細胞サイズ;3.N/C比は高いが変化しうる極端に:4.単独の細胞が著しく多い;核はCISより中心的である;5.核は細胞質の形状にしたがうことがある;核はCISより少ないゆがみを示す;6.核の多形性は、存在する粗い染色質および核エンベロープに沿った濃厚さとともに増大する;7.パラクロマチン、大きい核、集中的に厚くなったマルチ-ヌクラスタードmulti-nuclustered核膜;8.細胞は顕著に好酸性細胞質を示す。扁平上皮内がんCIS、非浸潤性.次の基準が満たされた場合、細胞は扁平上皮内がんであると同定された:1.単独または凝集体塊の細胞;2.細胞の大きさは変化する-顕著な異形成細胞より小さいか大きい通常は浸潤性扁平上皮がんよりも小さい;3.細胞は対称に位置する核とともに大きく、丸い;4.細胞の退化が存在する;5.乏しい細胞質、核の周囲は分散して均一に角質化しているかまたは同心的に角質化していないorangeophilicまたは好塩基性;6.N/C比は変化しうる-正常より高いか低い:7.粗い濃い核染色質顆粒は明瞭なゾーンによって隔離されている;8.核膜の起伏をもつ均一に厚くなった染色質の縁;9.核の小葉が見られる;10.cannibalismが見られるが、常にではない;11.多核細胞が存在することもある;12.核内に核小体なし;有糸分裂細胞が存在することがある;および13.きれいなバックグラウンド。扁平上皮がん十分に分化した角質化タイプ-浸潤性.次の基準が満たされた場合、細胞は扁平上皮がんであると同定された:1.通常は単独のorangeophilicであるが、集塊で存在することもあり、そして退化した細胞;2.細胞は大きいか小さい、角がある、よく保存された核と明確な細胞境界を有する;3.細胞はインサイチューよりも通常は大きいそして多形で、大きさと形状とも広範囲;4.パール形成が見られるがんパール;5.異常なテーリング浸潤と合致するを有する適当量の細胞質;異様な細胞形状-オタマジャクシ、星、紡錘型;過染色性を有する予測できない凝集および明確なパラクロマチンおよび明確に定まった染色質、パラクロマチン境界面を有する角ばった核染色質;6.染色質は、特に核膜に沿って粗く凝集している;7.核は、存在する場合大きくそして好酸性である;8.核膜自体は厚く、そして不規則である;核染色質縁の厚さの不規則性;9.N/C比は非常に高い:10.形状、サイズ、数において顕著な核小体の不規則性娘核小体;異常有糸分裂、多核化;11.cannibalismおよび多核化が普通;および12.壊死性バックグラウンド物質が共通している。結果60サンプルを試験したブラインド研究では、結果は、異常細胞軽度、中等度もしくは重度の異形成またはがん性がPAP染色操作に比較してTCPP検出操作により正確に検出できることを示している表1。TCPP暴露細胞の2-3が蛍光性であった場合は、サンプルは少なくとも軽度に異形成の診断と確実に相関した。標準の細胞形態学的PAP染色操作によって軽度に異形成ないしがん性であると決定された50の喀痰中50が、また、TCPP検出によって異常であると同定された。PAP染色操作に基づいて正常もしくは化生であると特徴付けられた10サンプル中、4サンプルが、TCPP法を用いて同じ形態を例証した。正常と診断されたサンプルは、TCPPの最少の取り込みを示したかまたは取り込みを示さなかった。細胞形態学的にネガティブまたは化生であると決定された細胞におけるTCPPの取り込みは、認識可能な、そして診断できる特徴的な蛍光強度とパターンを有した。表2は、それぞれPAP染色細胞形態学およびTCPP技術によって決定される細胞形態と蛍光の間の比較を提示している。TCPP処置サンプルにおける蛍光強度とパターンに基づいて、細胞は、形態的記述に関する14の可能な数字分類の1つに分類された。細胞が、TCPP決定を用いてクラス11であり、そしてスライド上の細胞の2-3以下がバックグラウンドレベル以上の蛍光性であった場合、その時は、サンプルは化生であり、そして異形成ではないと決定された。化生細胞は、ほとんど見ることができない細胞膜によるそれらの適度の蛍光によって正常細胞とは容易に区別された。PAP染色によってネガティブもしくは化生であると決定された10の細胞サンプルについて6つは、TCPP蛍光に基づいてクラス11の細胞記述により指定された。クラス11の指定をもつ6TCPP細胞については、また3つが核デブリからの蛍光を示しすなわち、クラス13もしくは14、そして2つがクラス11の指定を示した核のみからの蛍光。表2に示されたその他のパターンは、数字で示した分類6-不規則な不同の細胞、低~中間レベルの蛍光に関する。比較的わずかな異形成細胞だけがこの分類に指名されたのに対して、ほとんどのがん腫細胞は分類6を得たことは注目される。それ故、この分類は、本発明の方法を用いて異形成からがん腫を区別する上で特に重要性をもつと期待される。表2において示されたその他の重要な観察は、正常から重度のがん腫へと進行した細胞形態につれて、各試験された細胞に割り当てられた数字分類の総数もまた増大したことである。具体的に示せば、ネガティブまたは化生形態をもつ細胞は、2という数字分類の平均を割り当てられたのに対して、腺がん、扁平上皮細胞および小細胞がん腫を示す細胞は、5という数字分類の平均を割り当てられた。数字分類が異なる種類の細胞の異常性の記述を含有するので、異形成もしくはがん腫の程度と、細胞において観察された異なる異常性の数字との間のポジティブな相関関係は合理的である。しかしながら、そのような相関関係は、従来、細胞のサンプルにおける前がんおよびがん症状を診断するために、体系化されていなかったし、そして使用されていなかった。TCPPを用いる前がんおよびがん細胞の検出および分離のための懸濁液アッセイこの実施例は、喀痰サンプル中に見いだされる細胞の異常を検出するために、細胞形態学的スライド検鏡法と組み合わせて、蛍光フローサイトメトリーと同時のTCPP染色の使用を開示する。TCPP染色の特異性のために、フローサイトメトリーとそれに続くスライド検鏡法の組み合わせは、特に威力があり、細胞形態学的なスライドの比較に関して内面的対照を提供する。方法懸濁液およびモノレアースライドの作成において使用される喀痰処理操作.すべての懸濁液およびモノレアースライドは、早朝、自然な咳きの手段を行う患者を通じて収集された喀痰サンプルから作成された。具体的には、患者は、リファンピン0.03-0.05mg/mlを含有する50アルコール/50Saccomanno液中2Carbowaxからなる固定液で満たされた容器中に3日連続の朝に咳きをしていかなるものでも吐き出すよう教育される。リファンピンは、M.チュバキュローシスを保持している患者またはN.メニンギチスの無症候性のキャリヤーであるかもしれない患者に対する予防薬剤として役立つよう固定液に添加される。2Carbowax溶液は、50エタノール98mlに融解Carbowax1502mlを添加し、そして30分間混合することによって作成される。溶液を作成するために使用されるガラス容器は、不正確な計量を引き起こす作成中の表面上のワックスの固化を防ぐために暖め続ける。Carbowaxは、TCPP実行溶液にさらす前に、少なくとも15分間95アルコール中に浸漬して除去された。リファンピン溶液3mg/mlは、エチルアルコール100ml中にリファンピンの300mgカプセル剤を溶解し、そしてWaringブレンダーにおいて高速で混合することによって作成された。この溶液1mlがSaccomanno溶液各30mlに添加されるかまたはSaccomanno溶液1リットル当たり20ml添加され、そして十分に混合された。Saccomanno溶液の調製は、細胞学の分野の技術者には周知の標準方法にしたがった。喀痰標本が50mlプラスチック遠心管に注入され、そして必要ならば容積を50mlにするために、さらなる50エチルアルコール溶液が添加された。遠心管の内容物が250ml容Eberbachセミミクロブレンダー容器に注入され、そしてその標本および粘液様内容物の肉眼検査に応じて10~60秒間ホモジナイズされた。濃い粘液様標本は、ある場合には、より長い混合時間を要した。標本が遠心管に再び注入され、そして低速で10分間遠心された。上澄液がデカントされ、遠心管中に1~2mlを残して細胞ペレットと混合された。チューブは回転ミキサー上で約10秒間撹拌された。サンプルは100mMMESバッファー、pH~6.15中に再懸濁される。細胞が回転され、そして100mMMESバッファーを用いて2回以上洗浄され、最後に、細胞を再懸濁するために遠心管中に~1mlを残す。次いで、細胞は、室温で~20°Cで30分間静かに撹拌しながら95エタノール5100mMMESバッファー中に再懸濁される。次いで、遠心管を低速で10分間遠心する。上澄液の全部1-2mlを除去する。TCPP保存溶液.重炭酸ナトリウム400mgを50イソプロパノール約90mlに添加し50mM重炭酸ナトリウム、そして完全に溶解するまで混合して塩基性50イソプロパノールを作成した。TCPP100mgをこの塩基性50イソプロパノール50mM重炭酸ナトリウムに徐々に添加し、そして溶解するまで3~5分間混合する。TCPP溶液は塩基性50イソプロパノールにより容積100mlにして、よく混合し、そして冷蔵庫内にフォイルで覆った褐色試薬瓶に保存した。保存溶液中のTCPPの最終濃度は1mg/mlである。TCPP実行溶液.新鮮なTCPP実行溶液は各日に調製された。濃度1mg/mlのTCPP保存溶液約10mlを室温にもたらした。TCPP保存溶液1mg/mlの8mlを200ml容メスフラスコに入れ、そしてMESバッファー約100mlを徐々に添加した。溶液を静かに混合した。さらなるMESバッファーを添加して溶液を容積200mlにした。溶液を3~5分間混合し、そして褐色びん中2-4°Cで保存した。実行溶液におけるTCPPの最終濃度は40μg/mlである。TCPP暴露操作.予め、室温で30分間95アルコールにさらされた懸濁液細胞を、固定後直ちにまたは3日後までにTCPPに暴露する。細胞を40μg/mlのTCPP溶液に36°Cで10分間、静かに撹拌しながら再懸濁し、次いで室温の100mMMESバッファー20mlを用いて3回、10分内に細胞をゆるいペレットにする最低速度の遠心を用いて洗浄する。洗浄した細胞ペレットをMESバッファー15-10mlに再懸濁する。これらの懸濁液、またはその一定分量を、蛍光フローサイトメトリー装置を通過させる。蛍光フローサイトメトリー.第1回通過.最少10,000個の細胞を、細胞選別能をもつフローサイトメーターを通過させる。フローサイトメーターは、約390nm~490nmの光線を透過させるフィルターを有する、約415nmにおいて放射する光源を備えてなければならない。蛍光発光は約630nm~730nm645nm~706nmで発光最大においてモニターすべきである。500nm以上の光線を透過する遮蔽フィルターが満足できる。第1回通過において、個々の細胞がカウントされ、そしてそれらの特定の蛍光が測定される。平均蛍光が算出され、そして平均からの標準偏差が算出される。また、中央値が決定される半分がその値より小さく、そして半分がその値より大きい特定の蛍光値。細胞選別を伴う蛍光フローサイトメトリー.第2回通過.最少100,000個の細胞を、第1回通過と同様に装備された細胞選別能をもつ蛍光フローサイトメーターを通過させる。中央値の蛍光未満の蛍光平均値からの標準偏差1.3を有する細胞細胞の約90が、操作上、低い蛍光を有すると定義され、そして1つの試験管に保存され、そして中央値の蛍光を超えるかまたは等しい特定の蛍光平均値からの標準偏差1.3を有する細胞細胞の約10が、操作上、高い蛍光を有すると定義され、そしてその他の試験管に保存される。あるいはまた、細胞は、第1回の通過において見い出された中央値の特定の蛍光に関して、それらの蛍光にしたがってチューブ中に選別することもできる。中央値の特定の蛍光の2倍未満をもつ細胞は正常または低い蛍光であり、次いで、細胞は、中央値の蛍光の2-4倍、4-6倍、および中央値の蛍光の6倍超とともにプールすることができる。より高い強度の蛍光プールの各々は、異常な細胞に非常に富んでいることが予測できる。細胞の2-3以上が中央値の蛍光の3倍以上を保持する場合は、少なくとも進行した前がん症状の予測を支持できる。モノレアースライドの作成.低および高蛍光細胞サンプルを低いrpmで10分間遠心して細胞を沈降させる。上澄液を除去し、遠心管中に1~2mlを残して細胞ペレットと混合する。チューブを回転ミキサー上で約10秒間撹拌する。沈殿物の1~3滴をPreservCytバイアルCytycCorporation,Marlborough,MA中に入れる。標本を5分間インキュベートして、全微生物およびウイルス生物を失活させる。サンプルの単細胞層が、ThinprepProcessorCytycCorporation,Marlborough,MAを用いて製造者の指示にしたがってスライド上に固定される。ThinprepProcessorにおいて、細胞がポリカーボネートフィルター孔径0.5mm上に回収され、そしてガラススライドに移される。次いで、ThinprepProcessorが、直ちに、95エタノールを含有する固定液浴中にスライドを沈める30分間維持。改変PAP染色技術による喀痰スライド染色操作.操作配列no.、試薬および時間分:秒は次のとおりである:195アルコール15:00;2水道水1:00;3gil-ihemotox2:30;4水道水1:00;5青染色bluing試薬:30;6水道水1:00;795アルコール:10;8og-61:30;995アルコール:10;1095アルコール:10;11ea-501:15;1295アルコール:20;1395アルコール:30;14100アルコール1:00;15100アルコール1:00;16100アルコール1:30;17キシレン1:00;18キシレン1:00;および19キシレン1:00。Papanicolaou染色したスライドの日常的細胞形態学的解析の方法.PAP染色したスライドを半定量的細胞形態学的評価にかける。1異形成および新形成細胞を伝統的な形態学的基準の使用により同定し、そして2肺性炎症の7つの基本的指標肺胞のマクロファージ、好中球、柱状細胞、粘液、粘膜螺線、着色マクロファージ、化生細胞の発現レベルを定量する。これらの炎症指標を定量化する方法は、既に文献で議論されているRobyetal.,1989,ActaCytol34:147-154;Robyetal.,1990,ActaCytol34:140-146;Schumannetal.,1989,AmRevResprDis139:601-603。PAP染色した細胞を用いて細胞形態を決定するために使用される基準が以下に議論される。有意な異常性なし.次の基準が満たされた場合、細胞は有意な異常性をもたないと同定される:1.炎症細胞のほかにグレード1-2の色素をもつマクロファージと混じり合った好塩基性の繊毛のある上皮細胞;2.基礎的に定位置にある上皮の丸い核;3.平均に分散した染色質;4.不明瞭な核膜;5.不明瞭な核小体;および化生細胞および異形成細胞の不在。扁平上皮化生異形成なし.次の基準が満たされた場合、細胞は異形成のない扁平上皮化生と同定される:1.繊毛のない好塩基性細胞の集塊;2.均一な細胞および核の大きさ;3.低い核/細胞質N/C比;4.細かく顆粒状の核染色質;および5.小さい丸い核小体通常1個が存在することがある。軽度の異形成扁平上皮異型.次の基準が満たされた場合、細胞は軽度の異形成と同定される:1.化生細胞より小さい;2.凝集した集塊、または単独で見られる;3.細胞には両核と細胞質がはっきりと平らにシート状に存在している;4.細胞は大きさにおいて変化は少ない;5.細胞質は好エオシン性または好塩基性である;6.鋭い細胞質の縁;7.細胞は大きさにおいて変化は少なく、通常は丸ないし卵形、分割の場合、核の2つの半分は鏡像的であり、N/C比は変化が少ない;8.核膜は平滑;9.細かく顆粒状の核染色質やや増加、場合によっては染色中心;および10.繊維状細胞、広がった細胞質と核膜の明瞭な核をもつ長い細胞-細かい網目状ないし顆粒状細胞質は通常明るい黄橙色-角質化して単独、は、ケラチンの中心コアの回りに渦巻きを形成して上皮パールを形成することがある。中等度の異形成扁平上皮異型.次の基準が満たされた場合、細胞は中等度の異形成と同定される:1.大きさにおいて変化があり、通常は比較的大きいが軽度の異形成より小さいこともある;2.形状およびN/C比において軽度異形成よりも変化がある:3.細胞質は濃く、好酸性成分が著しく多い;非定型細胞数の増大;4.核は半分ずつ等しくないこともある鏡像的ではない;5.核の小葉、間隙および小節が存在する;および6.核質は多くの点彩を伴う過染色性を示す-染色質パターンに類似;重度の異形成顕著な扁平上皮異型.次の基準が満たされた場合、細胞は重度の異形成と同定される:1.細胞は大きさおよび形状において著しく変化する;2.通常は中等度異形成よりやや大きい細胞サイズ;3.N/C比は高いが変化しうる極端に:4.単独の細胞が著しく多い;核はCISより中心にある;5.核は細胞質の形状にしたがうことがある;核はCISより少ないゆがみを示す;6.核の多形性は、存在する粗い染色質および核エンベロープに沿った濃厚さとともに増大する;7.パラクロマチン、大きい核、集中的に厚くなったマルチ-ヌクラスタードmulti-nuclustered核膜;8.細胞は顕著に好酸性細胞質を示す。扁平上皮内がんCIS、非浸潤性.次の基準が満たされた場合、細胞は扁平上皮内がんであると同定される:1.単独または凝集体集塊の細胞;2.細胞の大きさは変化する-顕著な異形成細胞より小さいか大きい通常は浸潤性扁平上皮がんよりも小さい;3.細胞は対称に位置する核とともに大きく、丸い;4.細胞の退化が存在する;5.乏しい細胞質、核の周囲は分散して均一に角質化しているかまたは同心的に角質化していないorangeophilicまたは好塩基性;6.N/C比は変化しうる-正常より高いか低い:7.粗い濃い核染色質顆粒は明瞭なゾーンによって隔離されている;8.核膜の起伏をもつ均一に厚くなった染色質の縁;9.核の小葉が見られる;10.cannibalismが見られるが、常にではない;11.多核細胞が存在することもある;12.核内に核小体なし;有糸分裂細胞が存在することがある;および13.きれいなバックグラウンド。扁平上皮がん十分に分化した角質化タイプ-浸潤性.次の基準が満たされた場合、細胞は扁平上皮がんであると同定される:1.細胞は、通常単独のorangeophilicであるが、集塊で存在することもあり、そして退化している;2.細胞は大きいか小さい、角がある、よく保存された核と明確な細胞境界を有する;3.細胞はインサイチューよりも通常は大きいそして多形で、大きさと形状とも広範囲;4.パール形成が見られるがんパール;5.異常なテーリング浸潤と合致するを有する適当量の細胞質;異様な細胞形状-オタマジャクシ、星、紡錘型;過染色性を有する予測できない凝集および明確なパラクロマチンおよび明確に定まった染色質、パラクロマチン境界面を有する角ばった核染色質;6.染色質は、特に核膜に沿って粗く凝集している;7.核は、存在する場合大きくそして好酸性である;8.核膜自体は厚く、そして不規則である;核染色質縁の厚さの不規則性;9.N/C比は非常に高い:10.形状、サイズ、数において顕著な核小体の不規則性娘核小体;異常有糸分裂、多核化;11.cannibalismおよび多核化が普通;および12.壊死性バックグラウンド物質が共通している。細胞病理学的解析.喀痰サンプルは、互いに点々と配置された肺における多くの場所からの細胞を含有しているので、特定の細胞薄層切片染色とは異なりの正常性または異常性を判定するための背景はほとんどない。低蛍光細胞のコレクションの利用性は、高い蛍光TCPP染色細胞と比較するために、正常もしくは正常に近い患者の細胞の内部対照サンプルを提供する。標準PAP染色を用いて、当該分野に習熟した細胞病理学者は、分画されてないモノレアーと比較して異常細胞について10倍集積されている高い蛍光TCPP細胞の異常性の程度を容易に決定することができる。本発明は、先に記述され、そして例示された実施態様に限定されるものではなく付随する請求項の範囲内で変更および修飾をすることが可能である。以下に本発明の主な特徴と態様を列挙する。1.細胞サンプルが、異形成またはがん腫細胞を含有しているか否かを決定する方法であって、aいずれかが存在していれば、異常な前がんまたはがん細胞の成分へのTCPPの結合を可能にする条件下で、サンプルをTCPP溶液と接触させ;b未結合のTCPPをサンプルから除去し;そしてcサンプルにおけるTCPP蛍光を検出して、TCPP蛍光の存在が、サンプルが異形成またはがん腫細胞を含有することを表す:段階を含む、方法。2.サンプルが、喀痰サンプル、頸部スワブ、気管支洗液、甲状腺および乳腺の微細針吸引およびコア生検、膀胱洗液、尿、口腔洗液、便サンプル、血液もしくはその画分、リンパ液、脳脊髄液、骨および骨髄からなる群から選ばれる、上記1の方法。3.サンプルが、ホルムアルデヒド、メタノール、エタノール、イソプロパノールおよびそれらのすべての組み合わせ液からなる群から選ばれる固定液中で固定される、上記1の方法。4.固定液が95エタノールである、上記3の方法。5.サンプルが固形支持体に付着される、上記1の方法。6.固形支持体が顕微鏡スライドである、上記5の方法。7.サンプルが液体中に懸濁される、上記1の方法。8.TCPPの溶液が、塩基性アルコール中に予め溶解され、そしてバッファー水溶液中に希釈されたTCPPを含有する、上記1の方法。9.TCPPの溶液がpH約5.8~約6.7に緩衝化される、上記8の方法。10.溶液が、バックグラウンドの蛍光を減少させ、TCPPの酸化を防止するか、またはTCPP蛍光の消光を防止する1種以上の試薬をさらに含有する、上記8の方法。11.サンプルにおけるTCPPの濃度が約4~約100μg/mlである、上記1の方法。12.サンプルが約0.2分~約2時間TCPPと接触される、上記1の方法。13.接触の間、サンプルが温度約23°C~約42°Cにおいて維持される、上記1の方法。14.サンプルにおけるTCPP蛍光が肉眼的に検出される、上記5の方法。15.サンプルにおけるTCPP蛍光がスライドリーダーにより検出される、上記5の方法。16.TCPP蛍光が蛍光フローサイトメーターにより検出される、上記7の方法。17.検出段階が、除去段階後約1時間~約24時間に実施される、上記1の方法。18.TCPP-蛍光性であるサンプル中の細胞のパーセントを決定する段階をさらに含む、上記1の方法。19.約1以上の蛍光細胞を含有するサンプルが、異常な前がんまたはがん細胞を含有するとして分類される、上記18の方法。20.TCPP-蛍光性であるサンプル中の細胞のパーセントを決定する段階が、TCPPを含有しているサンプル中の細胞のパーセントと蛍光強度を相関させる方式で、サンプル中のTCPP蛍光強度を定量することを含む、上記18の方法。21.TCPP蛍光が、サンプル中のすべての細胞に結合している検出可能なマーカーとサンプルを接触させ、未結合の検出可能なマーカーを除去し、そしてサンプルにおけるTCPP蛍光と検出可能なマーカー量の比率を確定することによって定量される、上記20の方法。22.検出可能なマーカーが蛍光化合物である、上記21の方法。23.サンプルにおけるTCPP蛍光を検出することにより、化生、異形成もしくはがん腫について蛍光細胞を特徴決定することをさらに含む、上記1の方法。24.特徴決定が、蛍光細胞の蛍光強度を分類し、そして蛍光強度を細胞の化生、異形成もしくはがん腫状態と相関させることを含む、上記23の方法。25.特徴決定が、細胞形状、細胞の大きさ、細胞の集塊、細胞もしくは細胞集塊の変性量、核の数、核の大きさ、細胞膜の可視性および核破片の存在からなる群から選ばれる1つ以上の形態学的特徴について蛍光細胞を分類し、そして形態学的特徴を細胞の化生、異形成もしくはがん腫状態と相関させることを含む、上記23の方法。26.特徴決定が、蛍光強度について、ならびに細胞形状、細胞の大きさ、細胞の集塊、細胞もしくは細胞集塊の変性量、核の数、核の大きさ、細胞膜の可視性および核破片の存在からなる群から選ばれる1つ以上の形態学的特徴について蛍光細胞を分類し、そして蛍光強度および形態学的特徴を細胞の化生、異形成もしくはがん腫状態と相関させることを含む、上記23の方法。27.蛍光細胞によって示される形態学的特徴と蛍光強度の総数が、化生、異形成もしくはがん腫について蛍光細胞を特徴決定する際のファクターとして使用される、上記26の方法。28.形態学的特徴と蛍光強度のパターンが、化生、異形成もしくはがん腫について蛍光細胞を特徴決定する際のファクターとして使用される、上記26の方法。29.サンプル中の蛍光細胞が、同じサンプルまたは同じ患者由来の第2のサンプルからの非蛍光細胞と比較される、上記23の方法。30.蛍光細胞が、蛍光フローサイトメトリーによって非蛍光細胞から分離される、上記29の方法。31.選ばれた組織もしくは器官の早期がんまたは前がん症状について患者を診断する方法であって、a選ばれた組織もしくは器官から細胞のサンプルを得て;そしてb細胞のサンプルが異常な前がんもしくはがん細胞を含有しているか否かを上記1の方法によって決定して、その陽性の決定が、患者の選ばれた組織もしくは器官の早期がんまたは前がん症状の陽性診断を表す:ことを含む方法。32.がん治療に対する患者の応答の予後を判定する方法であって、a治療の前に、がんについて治療される患者の組織もしくは器官からの細胞のサンプルにおいて上記1の方法を実施し;b治療中一定間隔でおよび治療に続いて、がんについて治療されている患者の組織もしくは器官からの細胞の別のサンプルにおいて上記1の方法を実施し;そしてc治療中および治療後に試験されたサンプルにおける異常な前がんまたはがん細胞のパーセントが、治療前に試験されたサンプルと比較して低下されたか否かを決定して、低下が、がん治療に対する患者の応答の予後を判定する:ことを含む方法。33.蛍光フローサイトメトリーによって細胞を、正常細胞を含有する集団と異常な前がんおよびがん細胞を含有する集団とに分別することをさらに含む、上記32の方法。34.がん治療に対する患者の応答の予後を判定する方法であって、a治療の前に、がんについて治療される患者の組織もしくは器官からの細胞の非固定サンプルにおいて上記1の方法を実施し;b蛍光フローサイトメトリーによって細胞を、低い蛍光または非蛍光集団は正常または化生、高い蛍光集団は異形成またはがん腫である、低い蛍光または非蛍光の集団と高い蛍光集団とに分離し;c分離した細胞集団を可能性のあるがん治療剤によってインビトロで処理し;そしてd2つの細胞集団の各々において薬剤の効果を観察して、薬剤が、異形成またはがん腫細胞集団では所望のネガティブ効果を発揮し、そして正常細胞では効果を発揮しないか、または低い量において発揮するという観察が、がん治療に対する患者の応答の予後を判定する:段階を含む方法。35.患者の選ばれた標的組織において異形成またはがん腫細胞を検出する方法であって、aいずれかが存在していれば、異形成またはがん腫細胞の成分へのTCPPの結合を可能にする条件下で、TCPP溶液を標的組織中に導入し;b未結合のTCPPを標的組織から除去し;そしてc標的組織の細胞におけるTCPP蛍光を検出して、そこでのTCPP蛍光の存在が、標的組織が異形成またはがん腫細胞を含有することを表す:段階を含む、方法。36.標的組織が、肺、乳腺、前立腺、頸部、咽喉、膀胱、口腔咽頭、皮膚および胃腸管からなる群から選ばれる、上記35の方法。37.pH約8.5~約pH12.0における、約50~約90のアルコールを含有するアルコール水溶液中にTCPPを溶解することを含む、TCPP溶液を作成する方法。38.アルコールがイソプロパノールである、上記37の方法。39.pHが重炭酸ナトリウムもしくは水酸化アンモニウムにより調整される、上記37の方法。40.溶解されるTCPPが約2mg/ml以下である、上記37の方法。41.約8.5~約12.0のpHにおける約50~約90アルコールのアルコール水溶液中に溶解されたTCPPを含有する組成物。42.溶液中のTCPPの濃度が約2mg/ml以下である、上記41の組成物。43.アルコールがイソプロパノールである、上記41の組成物。44.重炭酸ナトリウムもしくは水酸化アンモニウムにより調整されるpHを有する、上記41の組成物。45.50イソプロパノールおよび50mM重炭酸ナトリウム中にTCPP1mg/mlを含有する、上記41の組成物。46.サンプル中の異形成またはがん腫細胞を検出するキットであって、サンプル中の異常な前がんまたはがん細胞の検出に使用するために、容器中のTCPPおよび指図書を含有するキット。47.上記41の組成物を含有する、上記46のキット。48.a細胞のサンプルを収集するための構成要素;b固形支持体にサンプルを付着させるための構成要素;c既知のがん、異形成、化生または正常状態の対照細胞サンプル;およびdTCPP蛍光を定量するための構成要素:の1つ以上をさらに含む、上記46のキット。"