"グリコシルヒドロラーゼのアミノ酸配列が配列番号2に示される配列と少なくとも30の同一性を有するアミノ酸配列;好ましくは、配列番号2と少なくとも40の同一性を有するアミノ酸配列;より好ましくは、配列番号2と少なくとも50の同一性を有するアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも60の同一性を有するアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも70の同一性を有するアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも80の同一性を有するアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなること、または7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼのアミノ酸配列が、配列番号2のアミノ酸配列における1または数個のアミノ酸残基の置換、欠失または付加により配列番号2から誘導され、かつ、配列番号2のアミノ酸残基配列と同じ活性を有するタンパク質であることを特徴とする、グリコシルヒドロラーゼ。請求項1に記載のグリコシルヒドロラーゼをコードするヌクレオチド配列。ヌクレオチド配列が、配列番号1または配列番号3と少なくとも30の同一性を有するヌクレオチド配列;好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも40の同一性を有するヌクレオチド配列;より好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも50の同一性を有するヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも60の同一性を有するヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも70の同一性を有するヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも80の同一性を有するヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも90の同一性を有するヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも95の同一性を有するヌクレオチド配列;または配列番号1もしくは配列番号3に示されるDNAの全部もしくは一部と、または配列番号1もしくは配列番号3に示される配列と相補的なDNAの全部もしくは一部とストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ、7-キシロシルタキサンからキシロシル基を加水分解する活性を有するタンパク質をコードする、糸状菌由来の遺伝子を含んでなることを特徴とする、請求項2に記載のヌクレオチド配列。請求項2~3に記載のヌクレオチド配列を含んでなる組換えプラスミド。請求項2~3に記載のヌクレオチド配列を含んでなる宿主細胞。宿主細胞が配列番号2に示される配列と少なくとも30の同一性を有するアミノ酸配列を生成することができる同種生産株であっても、または異種宿主細胞であってもよい、請求項5に記載の宿主細胞。宿主細胞が細菌、放線菌、酵母、糸状菌、植物細胞または動物細胞から選択されることを特徴とする、請求項6に記載の宿主細胞。細菌がエシェリキア種、バチルス種から選択され;放線菌がストレプトミセス種から選択され;酵母がサッカロミセス種、ピキア種およびシゾサッカロミセス種から選択され;糸状菌がアスペルギルス種、トリコデルマ種、ペニシリウム種、トリコローマ種、レンチヌラ種およびアガリクス種から選択され;植物細胞が双子葉植物から選択され;動物細胞が昆虫細胞から選択されることを特徴とする、請求項7に記載の宿主細胞。エシェリキア種が好ましくは大腸菌であり;バチルス種が好ましくは枯草菌であり;ストレプトミセス種が好ましくは、S.リブダンスであり;サッカロミセス種が好ましくは、サッカロミセスセレビシエであり;ピキア種が好ましくはP.パストリスであり;シゾサッカロミセス種が好ましくは、シゾサッカロミセスポンベであり;アスペルギルス種が好ましくはA.ニガー、A.オリザエおよびA.ニデュランスであり;トリコデルマ種が好ましくはT.リーゼイおよびT.ビリデであり;ペニシリウム種が好ましくはペニシリウムクロソゲナムであり;トリコローマ種が好ましくはトリコローマモンゴリクムであり;レンチヌラ種が好ましくはL.エドデスであり;アガリクス種が好ましくはアガリクスビスポラスであり;双子葉植物が好ましくはシロイヌナズナであり;昆虫細胞が好ましくはヨトウガSf9細胞であることを特徴とする、請求項8に記載の宿主細胞。基質を加水分解してキシロシル基を除去することおよび/または加水分解によりグルコシル基を除去することにおける、請求項1に記載のグリコシルヒドロラーゼの使用。基質を加水分解してキシロシル基を除去することおよび/または加水分解によりグルコシル基を除去することにおける、請求項5~9のいずれか一項に記載の宿主細胞の使用。前記基質がグリコシド化合物であることを特徴とする、請求項11に記載の使用。前記グリコシド化合物が、キシロシル残基を含んでなる化合物またはグルコシル残基を含んでなる化合物から選択されることを特徴とする、請求項12に記載の使用。前記キシロシル残基を含んでなる化合物がタキサン-キシロシド化合物から選択されることを特徴とする、請求項13に記載の使用。前記タキサン-キシロシド化合物が7-キシロシルタキサン化合物から選択されることを特徴とする、請求項14に記載の使用。前記7-キシロシルタキサン化合物が7-キシロシルタキソール、7-キシロシル-10-デアセチルタキソール、7-キシロシルセファロマンニン、7-キシロシル-10-デアセチルセファロマンニン、7-キシロシルタキソールC、7-キシロシル-10-デアセチルタキソールC、7-キシロシルバッカチンIII、7-キシロシル-10-デアセチルバッカチンIIIから選択されることを特徴する、請求項15に記載の使用。グリコシルヒドロラーゼを用いた7-キシロシルタキサンの加水分解によりキシロシル基を除去した後に得られる生成物が、パクリタキセル、10-デアセチルタキソール、セファロマンニン、10-デアセチルセファロマンニン、タキソールC、10-デアセチルタキソールC、バッカチンIII、10-デアセチルバッカチンIIIから選択される7-ヒドロキシルタキサン化合物であることを特徴とする、請求項10~16のいずれか一項に記載の使用。前記7-キシロシルタキサン材料がキシロシル含有タキサンの混合物から選択されることを特徴とする、請求項15に記載の使用。前記タキサン混合物がイチイ属の植物組織、イチイ属植物の細胞培養または7-キシロシルタキサン化合物を生成することができる微生物の細胞培養からのものであることを特徴とする、請求項18に記載の使用。前記イチイ属植物がヨーロッパイチイ、タイヘイヨウイチイ、ヒマラヤイチイ、メディアイチイ、チュウゴクイチイ、ウンナンイチイおよびイチイから選択されることを特徴とする、請求項19に記載の使用。前記イチイ属の植物組織が根、針葉、樹皮または実生全体から選択されることを特徴とする、請求項19に記載の使用。7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼの加水分解反応に使用される溶媒が、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、n-ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、N,N-ジメチルホルムアミドDMFまたはジメチルスルホキシドDMSOから選択されることを特徴とする、請求項10に記載の使用。パン生地の特性の改良、動物飼料の特性の改良、D-キシロースの生産または再生紙のインク除去における、請求項1に記載のグリコシルヒドロラーゼの使用。リグノセルロースの加水分解により単糖類を得るための、リグノセルラーゼおよび/またはヘミセルラーゼとともに使用される、請求項1に記載のグリコシルヒドロラーゼの使用。従来技術に存在する上述の問題を鑑みて、本発明の目的は、7-キシロシルタキサンからキシロシル基を特異的に海水分解することができる新規かつ有効なヒドロラーゼならびにその遺伝子配列を提供することである。上述の技術的問題を解決するために、本発明者らは多くの検討を行った。まず、7-キシロシルタキサンの特異的グリコシルヒドロラーゼGHを、特異的β-キシロシダーゼ活性を示し7-キシロシルタキサンを7-ヒドロキシルタキサンに変換することができた真菌M95.33から精製した。精製された酵素に対してLC-MS/MSデノボシーケンシングを行い、数種のオリゴペプチドのアミノ酸配列を得た。これらのオリゴペプチドのアミノ酸配列に基づき、一連の縮重プライマーを設計した。前記酵素のcDNAおよび構造遺伝子を、ネステッドPCR、RACEおよびゲノムウォーキングを含む分子生物学的技術によってクローニングした。このような酵素をコードするオープンリーディングフレームORFのcDNA断片を好適な発現ベクターに連結して組換えプラスミドを構築し、これを、増殖が速く高密度発酵に使用可能なピキアパストリスなどの、対応する宿主細胞に導入した。この組換え株は、7-キシロシルタキサンのグリコシル加水分解反応を高効率で触媒して7-ヒドロキシルタキサンを生産することができた。本発明者らはまた、この酵素が、加水分解によりグルコシドからグルコース残基を除去することができる二機能性酵素であることも発見した。このヌクレオチド配列は、GenBankに登録されている他のヌクレオチド配列とほぼ全く相同性を示さず、最も近い配列は大抵の場合、仮説タンパク質遺伝子配列であり、それらの間のカバー率は3~7に過ぎない。ヌクレオチド配列から推定されるアミノ酸配列は、トウモロコシ黒穂病菌の仮説タンパク質配列GenBank受託番号:XP_760179に最も近く、比較可能な領域において43の同一性および59類似性を示す。本発明は以下の内容を含む。7-キシロシルタキサンの新規なグリコシルヒドロラーゼ本明細書ではLXYL-P1と表記が提供される。本発明の第二の目的は、前記酵素をコードするヌクレオチド配列を提供することである。本発明の第三の目的は、前記ヌクレオチド配列を含む組換えプラスミドを提供することである。本発明の第四の目的は、このような組換えプラスミドまたはヌクレオチド配列を含む宿主細胞を提供することである。本発明の第五の目的は、このような酵素の使用を提供することである。本発明の目的を実現するために、以下の技術的解決法を採用する。本発明は、7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼ二機能性β-キシロシダーゼ-β-グルコシダーゼ本明細書ではLXYL-P1と表記を提供する。7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼLXYL-P1のアミノ酸配列は、配列番号2に示される配列と少なくとも30の同一性を示すアミノ酸配列;好ましくは、配列番号2と少なくとも40の同一性を示すアミノ酸配列;より好ましくは、配列番号2と少なくとも50の同一性を示すアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも60の同一性を示すアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも70の同一性を示すアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも80の同一性を示すアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも90の同一性を示すアミノ酸配列;さらに好ましくは、配列番号2と少なくとも95の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなる。または、前記酵素は、配列番号2のアミノ酸配列における1または数個のアミノ酸残基の置換、欠失または付加により配列番号2から誘導され、かつ、配列番号2のアミノ酸残基配列と同じ活性を有するタンパク質である。本発明はまた、7-キシロシルタキサンの前記グリコシルヒドロラーゼLXYL-P1をコードするヌクレオチド配列またはコード遺伝子Lxyl-P1と表記も提供する。前記ヌクレオチド配列は、配列番号1または配列番号3に示されるヌクレオチド配列と少なくとも30の同一性を示すヌクレオチド配列;好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも40の同一性を示すヌクレオチド配列;より好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも50の同一性を示すヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも60の同一性を示すヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも70の同一性を示すヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも80の同一性を示すヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも90の同一性を示すヌクレオチド配列;さらに好ましくは、配列番号1または配列番号3と少なくとも95の同一性を示すヌクレオチド配列を含んでなる。または、本発明は、配列番号1もしくは配列番号3に示されるDNAの全部もしくは一部と、または配列番号1もしくは配列番号3に示される配列と相補的なDNAの全部もしくは一部とストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ、7-キシロシルタキサンからキシロシル基を加水分解する活性を有するタンパク質をコードする、糸状菌由来の遺伝子を提供する。本発明はまた、ヌクレオチド配列を含み、LXYL-P1をコードする組換えプラスミドを提供する。前記プラスミドは適切な宿主細胞に導入することができる。本発明はさらに、配列番号1または配列番号3に示されるものと少なくとも30の同一性を示すヌクレオチド配列を含んでなるLxyl-p1遺伝子配列を担持し得る適切な宿主細胞を提供する。前記宿主生物は、配列番号2に示されるものと少なくとも30の同一性を示すアミノ酸配列を含んでなるペプチドLXYL-P1の同種生産宿主であってもよいし、または異種宿主細胞であってもよい。好適な宿主生物は、細菌、放線菌、酵母、糸状菌、植物細胞または動物細胞から選択される。好ましい細菌はエシェリキア種、バチルス種から選択され;好ましい放線菌はストレプトミセス種から選択され;好ましい酵母はサッカロミセス種、ピキア種およびシゾサッカロミセス種から選択され;好ましい糸状菌はアスペルギルス種、トリコデルマ種、ペニシリウム種、トリコローマ種、レンチヌラ種およびアガリクス種から選択され;好ましい植物細胞は双子葉植物から選択され;好ましい動物細胞は昆虫細胞から選択される。好ましいエシェリキア種は好ましくは大腸菌であり;好ましいバチルス種は好ましくは枯草菌であり;好ましいストレプトミセス種は好ましくはS.リブダンスであり;好ましいサッカロミセス種は好ましくはサッカロミセスセレビシエであり;好ましいピキア種は好ましくはP.パストリスであり;好ましいシゾサッカロミセス種は好ましくはシゾサッカロミセスポンベであり;好ましいアスペルギルス種は好ましくは、A.ニガー、A.オリザエおよびA.ニデュランスであり;好ましいトリコデルマ種は好ましくはT.リーゼイおよびT.ビリデであり;好ましいペニシリウム種は好ましくはペニシリウムクロソゲナムであり;好ましいトリコローマ種は好ましくはトリコローマモンゴリクムであり;好ましいレンチヌラ種は好ましくはL.エドデスであり;好ましいアガリクス種は好ましくはアガリクスビスポラスであり;好ましい双子葉植物は好ましくはシロイヌナズナであり;好ましい昆虫細胞は好ましくは、ヨトウガSf9細胞である。本発明はまた、本発明のヌクレオチド配列、本発明の7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼ、および本発明のヌクレオチド配列を含んでなる宿主細胞の使用を提供する。特に、前記の使用は以下のように記載される:好適な宿主細胞が当技術分野の従来法によって前記DNAで形質転換されており、種々の基質、特にグリコシド化合物が、形質転換後に組換え細胞により生産された組換え酵素によって加水分解される。基質として使用される好ましいグリコシド化合物は、キシロシル残基を含んでなる化合物またはグルコシル残基を含んでなる化合物から選択され、すなわち、本発明の使用は、加水分解によってこれらのグリコシド化合物からキシロシル基および/またはグルコシル基を除去することである。キシロシル残基を有する好ましい化合物はタキサン-キシロシド化合物から選択され、基質は好ましくは、7-キシロシル残基を含むタキサン化合物、すなわち、7-キシロシルタキサンであり、これは天然にまたは非天然に、例えば、化学合成、生合成または半合成の手段によって形成され得る。本発明における7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼの適用として、それは好ましくは7-ヒドロキシルタキサンを製造するための7-キシロシルタキサンの生物変換または生物触媒において使用される。基質として使用される7-キシロシルタキサンは、限定されるものではないが、以下の化合物:7-キシロシル-10-デアセチルタキソール、7-キシロシル-10-デアセチルセファロマンニン、7-キシロシル-10-デアセチルタキソールC、7-キシロシル-10-デアセチル-バッカチンIII、7-キシロシルタキソール、7-キシロシルセファロマンニン、7-キシロシルタキソールC、7-キシロシルバッカチンIIIを含んでなる。加水分解により、キシロシル基を除去した後に得られる生成物は、限定されるものではないが、以下の化合物:10-デアセチルタキソール、10-デアセチルセファロマンニン、10-デアセチルタキソールC、10-デアセチル-バッカチンIII、パクリタキセル、セファロマンニン、タキソールCおよびバッカチンIIIを含んでなる。これらの基質は単独で、または互いに組み合わせて、または他のタキサンとの混合物として使用され得る。本明細書に記載の基質は、キシロシル含有タキサン化合物の混合物から選択され得る。この混合物は、限定されるものではないが、好ましくはヨーロッパイチイ、タイヘイヨウイチイ、ヒマラヤイチイ、メディアイチイ、チュウゴクイチイ、ウンナンイチイおよびイチイから選択されるイチイ属の植物組織、またはこれらの植物の細胞培養、または7-キシロシルタキサン生産微生物の細胞培養を含む。本明細書に記載の植物組織は、前記植物の根、針葉、樹皮および実生全体を含む。本発明において提供される方法により製造されるパクリタキセルまたはその類似体生成物および使用する場合にはC-7-キシロシルタキサン材料基質の構造的特徴を式Iに示す。基質を溶解させるのに用いる溶媒は、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、n-ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、N,N-ジメチルホルムアミドDMFおよびジメチルスルホキシドDMSOから選択され得る。本発明の適用はまた、本発明のグリコシルヒドロラーゼがパン生地の特性の改良、動物飼料の特性の改良、キシリトールの製造のためのD-キシロースの生産および再生紙のインク除去のために使用されることも含む。本発明のグリコシルヒドロラーゼはさらに、エタノールおよびブタノールなどの生物燃料のさらなる製造向けの単糖類を得ることを目的にリグノセルロースを加水分解するためにセルラーゼおよびヘミセルラーゼと組み合わせて使用してもよい。本発明のグリコシルヒドロラーゼはさらに、他のグリコシド化合物から生物活性分子を遊離させるために使用してもよく、これを製薬分野で適用することができる。本発明はまた、パクリタキセルおよびその類似体の製造のための生物変換法を提供し、7-キシロシルタキサンを出発材料として用い、該出発材料のキシロシル基を、本発明の遺伝子配列を含む宿主細胞によるかまたは該宿主細胞により生産される酵素による加水分解によって除去してパクリタキセルまたはその類似体を得る。好ましい宿主細胞はキシメジ科の真菌または組換え株であり、より好ましい宿主細胞はピキア属のピキアパストリスの酵母細胞である。まとめると、本発明により提供される二機能性グリコシルヒドロラーゼのアミノ酸配列は、配列番号2に示される配列と少なくとも30の同一性を示すアミノ酸配列を含む。本発明により提供される機能性GHは、7-キシロシルタキサンまたはその他のグリコシド化合物からキシロシル残基またはグルコシル残基を除去するために使用することができる。本発明はまた、いずれも上記のようなヌクレオチド配列を含む組換えプラスミドおよび宿主細胞に関する。さらに、本発明は、加水分解によるキシロシル基および/またはグルコシル基の除去における、7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼまたは7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼを含む宿主細胞の適用に関する。β-キシロシダーゼ-β-グルコシダーゼの明確なアミノ酸配列および二機能性特性を有する、本発明により提供される7-キシロシルタキサンのグリコシルヒドロラーゼは、キシメジ科の真菌レンチヌラエドデスM95.33により、または該酵素のコード遺伝子を含む組換え細胞により生産される。該酵素は細胞内に存在しても細胞外に分泌されてもよく、7-キシロシルタキサンのパクリタキセルまたはその類似体への変換に使用することができる。本発明のグリコシルヒドロラーゼをコードするヌクレオチド配列は完全なオープンリーディングフレームORFを含み、これは真菌原株もしくは他の真菌宿主に導入することができる、または原核細胞大腸菌、放線菌を含む、植物細胞および動物細胞などの宿主細胞に導入することができる、多種の組換え発現プラスミドを構築するために使用可能である。これらの宿主は、グリコシルヒドロラーゼ遺伝子の発現による7-キシロシルタキサンの7-ヒドロキシルタキサンへの加水分解能を獲得することができる。このような組換え宿主は他の糖含有化合物の生体変換にも使用可能である。本発明の適用はまた、本発明のグリコシルヒドロラーゼがパン生地の特性の改良、動物飼料の特性の改良、キシリトールの製造のためのD-キシロースの生産および再生紙のインク除去のために使用されることも含む。さらに、本発明により提供されるグリコシルヒドロラーゼは、エタノールおよびブタノールなどの生物燃料のさらなる製造向けの単糖類を得ることを目的にリグノセルロースを加水分解するためにセルラーゼおよびヘミセルラーゼなどと組み合わせて使用してもよい。さらに、本発明のグリコシルヒドロラーゼは、他のグリコシド化合物から生物活性分子を遊離させるために使用してもよく、これを製薬分野で適用することができる。本発明は、7-キシロシルタキサンから7-ヒドロキシルタキサンを特異的に触媒し得るグリコシルヒドロラーゼをコードする遺伝子を初めてクローニングし、異種発現させ、このような酵素の活性を有する生物工学的操作株を構築し、このようにして7-ヒドロキシルタキサンの大規模生産の新規かつ有効な方法を提供する。用語および省略形CDS:開始コドンから停止コドンまでのタンパク質のコード配列発明の詳細な説明本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、これらの実施例は例示に過ぎず、本特許請求の範囲を何ら限定するものではない。実施例1:L.エドデスのβ-キシロシダーゼ-β-グルコシダーゼLXYL-P1の精製真菌M95.33の培養培養後の菌糸スラントから採取した約1cm2の菌叢を植え込み、100mlの無菌小麦ふすま液体培地[1リットル当たり50.00gの小麦ふすま適当量の水を加え、30分煮沸した後、濾過して固体残留物を除去、20.00gのペプトン、1.50gのKH2PO4、0.75gのMgSO4、そのままのpHは約6.3]中、オービタルシェーカーにて160rpm、25~26°Cで6~8日間増殖させた。グリコシルヒドロラーゼの単離、精製および分析菌糸を濾過により採取した。液体窒素を用いて摩砕した後、3~5容量の50mMTris-HCl細胞溶解バッファーpH8.0を加え、その後、得られたものに氷上で5分間、超音波処理を施した130W、10秒間隔で各10秒。遠心分離12000rpm、10分後に上清を回収し、これをさらなる単離および精製のための粗酵素溶液として用いた。β-キシロシダーゼ活性を有するタンパク質を、特的発色基質としてp-ニトロフェニル-β-D-キシロピラノシドPNP-Xylを用いることでモニタリングした。酵素1単位は、基質としてPNP-Xylを用い、50°CおよびpH5.0にて1分間に、触媒作用により1ナノモルのp-ニトロフェノールを生産するのに必要な酵素量と定義した。上記の粗酵素溶液各80~90mlを、Tris-HClバッファー50mM、pH8.0で平衡化したDEAEセファロースFF陰イオン交換カラム1.6cm×20cmに適用した。溶出は、50mMTris-HClバッファーpH8.0で、0、0.1、0.25および2.0MNaClの勾配にて行った流速2ml/分。酵素活性を有する0.1~0.25MNaCl溶出剤の画分を回収し、次に続くクロマトグラフィーのために1MNH42SO4を加えた。上記の工程で溶出した画分を、1MNH42SO4を含有する50mMTris-HClバッファーpH8.0で平衡化したフェニルセファロース疎水性カラム1.6cm×20cmに適用した。溶出は、1.0~0MNH42SO4の直線勾配のTris-HClバッファー50mM、pH8.0で行った流速2ml/分。酵素活性を有する画分を回収し、Tris-HClバッファー50mM、pH8.0で透析した。この透析溶液をDEAEセファロースFF陰イオン交換カラム1.6cm×20cm、50mMTris-HClバッファー、pH8.0で平衡化に適用した。溶出は、Tris-HClバッファー50mM、pH8.0中、0.1~0.25MNaClの直線勾配にて流速2ml/分で行った。最高の酵素活性を有する画分を回収し、濃縮し、セファクリルS200HRモレキュラーシーブクロマトグラフィーカラム[1.6cm×60cm、0.1MNaClを含有するTris-HClバッファー50mM、pH8.0で平衡化]に適用した。溶出は、Tris-HClバッファー50mM、pH8.0中、0.1MNaClにて、流速0.5ml/分で行った。最高の酵素活性を有する画分を回収した。最後に、精製酵素を得た。上記の精製の手順は下記のように概説される。P1に関する各精製工程の結果を表1にまとめる。β-キシロシダーゼ活性を示す2つに分かれたピーク[それぞれLXYL-P1またはP1およびLXYL-P2またはP2と呼称]が、フェニルセファロース疎水性カラムを用いた直線勾配での溶出により得られた。P1およびP2は双方とも7-キシロシル-10-デアセチルタキソールXDTを10-デアセチルタキソールDTへ加水分解できた図1に示される通り。図1において、パネルAはクロマトグラフィーにより得られた酵素活性ピークを示し、パネルBは、それぞれ酵素的に活性なサンプルP1およびP2による基質XDT変換の薄層クロマトグラフィーTLCを示した。パネルBでは、1はXDT対照;2はDT対照;3はP1によるXDT変換;および4はP2によるXDT変換であった。LC-MS/MSデノボシーケンシングの結果は、P1およびP2は同じアミノ酸残基配列を持っているが、グリコシル化形態が異なることを示唆した。XDTがDTおよびキシロースへ加水分解されることを示す反応式は次のように表される。実施例2:LXYL-P1またはP1タンパク質による種々のグリコシド基質の加水分解に対する特異性試験β-キシロシダーゼ活性、特に、7-キシロシルタキサンを加水分解する活性の他、他のグリコシド基質に対するLXYL-P1またはP1の特異性も、4種類の発色基質:p-ニトロフェニル-β-D-グルコピラノシドPNP-Glc、p-ニトロフェニル-β-D-ガラクトピラノシドPNP-Gal、p-ニトロフェニル-α-L-アラビノピラノシドPNP-Araおよびp-ニトロフェニル-β-D-キシロピラノシドPNP-Xyl、対照として使用を用いることによって試験した。これらの各発色基質は、50mM酢酸バッファーで5mM溶液pH5.0となるように調製した。実施例1で得られた精製P1タンパク質希釈液25μlに対して各100μlの発色基質を加えた。反応は50°Cで20分間行い、2mlのホウ酸ナトリウム飽和溶液で停止させた。p-ニトロフェノールの放出吸光度を405nmで測定した。結果は、P1タンパク質はPNP-GlcおよびPNP-Xylを加水分解できるが、PNP-GalおよびPNP-Araは加水分解できないことを示した。これらの結果を表2に示す。実施例3:グリコシルヒドロラーゼLXYL-P1のコード遺伝子Lxyl-p1のクローニング実施例1で得られたLXYL-P1に対してSDS-PAGE電気泳動を行い図2参照、還元処理後に約110kDaの見かけの分子量を有する電気泳動バンドを回収し、LC-MS/MS分析を行った。最大のピークを有する5つのオリゴペプチドを選択し、デノボシーケンシングを行ったところ、以下のようにこれらの5つのオリゴペプチドのアミノ酸残基配列が得られた。1LPWTWGK2QSGSLPLQHPQR3HWLAYEQETSR4DLPVGDSAVVTYPPR5TLTPLEALQK配列中、IとL、KとQは識別不能これら5つのオリゴペプチドの相対的位置を評価するためにバイオインフォマティクス的アプローチを適用したところ、LXYL-P1上のその順序は3、2、5、1、4であると決定された。フォワードおよびリバース縮重プライマーを、それぞれオリゴペプチド3および5について次のように設計した。3F1CTTGCGTACGAGCARGARAC3F2CACTGGCTTGCGTAYGARCA3F3CACTGGCTTGCNTAYG5R1AGCCTCCAGTGGCGTNAGNGT5R2CTGCAGAGCCTCCAGNGGNGT5R3TTCTGCAGAGCCTCNAGNGG真菌M95.33からの全RNAを鋳型として用い、上記のような縮重プライマーを用いてネスト-PCRを行った。これらのPCR産物はオリゴペプチド3、2および5のコード配列を含んでいることが確認された。次に、上述の5つのオリゴペプチドのコード領域を含むcDNA断片を得るために、両末端の伸長にRACE技術を適用した。この断片は803のアミノ酸をコードする2412bpのオープンリーディングフレームORF、またはCDSとも呼ばれる、Lxyl-p1と呼称を含む。cDNA配列配列番号3およびこのcDNA配列によりコードされるアミノ酸配列配列番号2を配列表に示す。PCR増幅プロセスを図8に示す。このcDNA配列に従って特異的プライマーを設計し、鋳型として真菌M95.33由来のゲノムDNAを用い、PCR増幅およびゲノムウォーキング技術によりLXYL-P1の構造遺伝子配列G-Lxyl-p1を得た。ゲノムレベルにおいて、本明細書の遺伝子は19のエキソンと18のイントロンからなり、開始コドンATGから停止コドンTGAまで3608bpの長さであった。ヌクレオチド配列配列番号1を配列表に示す。実施例4:組換えプラスミドの構築および組換え酵母のスクリーニング実施例3で得られたP1コード領域のORFLxyl-p1の5’末端および3’末端のそれぞれにPCRによりSnaBI制限酵素部位およびNotI制限酵素部位を導入した。SnaBI/NotIで消化した後、得られたものを、これもまたSnaBI/NotIで消化したピキアパストリス発現ベクターpPIC9K分泌型発現ベクターまたはpPIC3.5K非分泌型発現ベクターに連結し、組換え発現プラスミドpPIC9K-P1-2またはpPIC3.5K-P1-2を得た。この組換えプラスミドをSacI制限酵素により線状化した後、エレクトロポレーション形質転換法により、ピキアパストリスのGS115コンピテント細胞に形質転換した。同時に対照として、ヌルベクターpPIC9KまたはpPIC3.5Kもそれぞれ同じ方法によりピキアパストリスのGS115コンピテント細胞に導入した。形質転換酵母細胞をMDプレート[1リットル当たり20.00gのグルコース、13.40gのYNBアミノ酸不含酵母窒素基本培地、0.4mgのビオチン、15.00gの寒天を含む]に拡げ、28°Cで2~3日間インキュベートした。単一コロニーを採取し、YPD-ジェネティシン登録商標耐性プレート1リットル当たり10.00gの酵母抽出物、20.00gのペプトン、20.00gのグルコース、15.00gの寒天、≦4.00gのG418を含むに植え込み、培養をさらに2~3日間続けて耐性コロニーをスクリーニングした。耐性コロニーに対してコロニーPCR同定を行った。ここでは形質転換体pPIC9KおよびpPIC9K-P1-2の例を示す図3。PCRプライマーはAOX1配列と、pPIC9Kベクターのクローニング部位の両側で一致する。フォワード5GACTGGTTCCAATTGACAAGC3リバース5GGCAAATGGCATTCTGACATCC3ヌルベクターpPIC9Kで形質転換した株では492bpの増幅断片が得られたが、組換えプラスミドpPIC9K-P1-2とその形質転換株では双方とも2910bpの増幅断片が得られた。図3において、1はヌルベクターpPIC9Kが導入された対照組換え酵母ゲノムの増幅結果を示し、2はpPIC9K-P1-2が導入された組換え酵母ゲノムの増幅結果を示し、3は対照組換えプラスミドpPIC9K-P1-2の増幅結果を示した。BMGY培地1リットル当たり10.00gの酵母抽出物、20.00gのペプトン、100mMのリン酸カリウムバッファー、pH6.0、10mlのグリセロールを含むおよびBMMY培地炭素源として、BMGY培地の10mlのグリセロールを10mlのメタノールに置き換えるを組換え酵母のそれぞれシード培養および発酵培地として用いた。スクリーニングによって得られた株を10mlのシード培養培地に植え込み、30°C、220rpmで18時間インキュベートした。これらの培養物を遠心分離により2回洗浄し、細胞ペレットを50mlの発酵培地に移した。細胞を30°C、220rpmで培養し、組換えタンパク質の発現を誘導するために1メタノールを24時間おきに加えた。その間、組換え株の酵素活性を定期的に検出した。これらのサンプルを蒸留水で遠心分離により2回洗浄し、細胞ペレットを同容量の蒸留水に懸濁させた。50μlの細胞懸濁液に、100μlの5mMPNP-Xylを加え、30~55°Cで20分間反応させた。組換え株は基質PNP-Xylを加水分解する能力を有するが、ヌルベクターで形質転換された対照株はそのような能力を示さないことを見て取ることができた図4参照。さらに、組換え株の発酵液の上清では明らかな酵素活性は検出されず、この組換え酵素は主として細胞内に存在していたことが示唆される。実施例5:組換え酵母による7-キシロシル-10-デアセチルタキソールXDTの加水分解実施例4で得られた組換え酵母GS115-9K-P1-2組換え発現プラスミドpPIC-9K-P1-2の形質転換体を培養し、実施例4の方法で5日間誘導を行った。細胞を遠心分離し、回収および洗浄した後、そのまま、または凍結乾燥後に50mM酢酸バッファーまたはリン酸バッファー65mg湿潤細胞/mlまたは16mg乾燥細胞/ml、pH3.5~7.5に懸濁させ、加水分解反応溶液として用いた。この細胞反応溶液20mlに、7-キシロシル-10-デアセチルタキソールXDT溶液0.5mlを加えて、XDTの終濃度を0.625mg/mlとした。得られたものを振盪式ウォーターバスにて30~55°Cで12時間インキュベートした。反応が完了した後、酢酸エチルで抽出を行った。TLC分析は、基質が完全に変換されたことを示した。HPLC[条件:カラム:AgilentEclipseXDB-C184.6×150mm、5μm、移動相:アセトニトリル38~52、流速:1ml/分、カラム温度:28°C、検出波長:230nm]を用いて抽出物中のXDT基質およびDT生成物の含量を分析したところ、変換率は98.80であることが示された。組換え酵母によるXDT加水分解反応結果のHPLC分析を図5に示し、Aは返還前、Bは変換後である。実施例6:組換え酵母による7-キシロシルタキサン混合物の加水分解実施例4で得られた組換え酵母GS115-3.5K-P1-2組換え発現プラスミドpPIC3.5K-P1-2の形質転換体を以下の生物変換反応に適用した。この場合、変換される基質は7-キシロシルタキサン混合物であり、その主成分には62.12の7-キシロシル-10-デアセチルタキソール、12.75の7-キシロシル-10-デアセチルセファロマンニン、17.04の7-キシロシル-10-デアセチルタキソールC、および8.09のその他の成分が含まれた。組換え株の培養方法は実施例5と同様であった。16mlの7-キシロシルタキサン混合物濃度100mg/mlを200mlの組換え株反応溶液に加え、7-キシロシルタキサン混合物の終濃度を約8mg/ml過飽和とした。ヌルベクターを導入した組換え酵母を陰性対照とした。この溶液を、30~55°Cで24時間磁気撹拌することにより混合した。反応が完了した後に実施例5の方法と同様に、変換系の基質および生成物の含量をHPLC分析を用いて分析したところ図6、以下の変換率:7-キシロシル-10-デアセチルタキソールXDT92.45;7-キシロシル-10-デアセチルセファロマンニンXDC93.60;および7-キシロシル-10-デアセチルタキソールCXDTC92.00を示した。3つの主生成物の収率:10-デアセチルタキソールDT:3.27mg/ml;10-デアセチルセファロマンニンDC:0.74mg/ml;および10-デアセチルタキソールCDTC:0.92mg/ml。3つの主生成物の総収率は4.93mg/mlであったが、対照は上記の活性を示さなかった図6。図6において、Aは混合基質対照を示し、Bはヌルベクターを導入した組換え酵母混合基質対照を示し、CはLxyl-p1遺伝子を導入した組換え株混合基質を示した。1は7-キシロシル-10-デアセチルセファロマンニンであり;2は7-キシロシル-10-デアセチルタキソールであり;3は7-キシロシル-10-デアセチルタキソールCであり;1’、2’および3’はそれぞれ対応する7-キシロシルタキサンの生成物であった。実施例7:組換え酵母による7-キシロシル-バッカチンIIIXDBの加水分解株は実施例6のものと同じであり、基質は7-キシロシル-10-デアセチルバッカチンIIIXDBであった。1.5mlの細胞反応溶液には、16mg/mlの乾燥細胞と8mg/mlのXDBが含まれた。混合物を振盪式ウォーターバスにて30~55°Cで24時間インキュベートした。HPLC分析結果は、XDBの変換率は86.54であり、生成物10-デアセチルバッカチンIIIDBの収率は5.57mg/mlであることを示した図7。"