カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも210mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも約150mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても41mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも210mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも41mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも50を、または、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも75を含んでなる、請求項16に記載の方法。陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質が量または活性によって測定される、請求項17に記載の方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該工程は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも210mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても41mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも210mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも41mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程、を含んでなり;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。溶出液収集が、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも50を、または、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも75を含んでなる、請求項914に記載の方法。陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子は、量または活性によって測定される、請求項914に記載の方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程、を含んでなり;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程、を含んでなり;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cクロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても52mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも52mScmである場合に溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。溶出液収集が、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも50を含んでなり、または、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも75を含んでなる、請求項1722に記載の方法。陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質が、量または活性によって測定される、請求項1722に記載の方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、単回の溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cクロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても52mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、単回の溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも52mScmである場合に溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。溶出液収集が、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも50を含んでなり、または、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも75を含んでなる、請求項2530に記載の方法。陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子が、量または活性によって測定される、請求項2530に記載の方法。タンパク質が組換え型タンパク質である、請求項18及び請求項1724に記載の方法。タンパク質が、生物体又は遺伝子組み換え生物からのタンパク質である、請求項18及び請求項1724に記載の方法。タンパク質が、血液タンパク質である、請求項33または34に記載の方法。血液タンパク質が、血液凝固タンパク質である、請求項33または34に記載の方法。血液タンパク質が、ADAMTS13、α1抗プラスミン、α2抗プラスミン、抗トロンビン、抗トロンビンIII、癌前凝固剤、エリスロポエチン、第II因子、第V因子、第VI因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第X因子、第XI因子、第XII因子、第XIII因子、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ヘパリンコファクターII、高分子量のキニノーゲン、筋肉内免疫グロブリン、静脈内免疫グロブリン、プラスミノーゲン、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター1、プラスミノーゲンアクチベータインヒビター2、プレカリクレイン、プロテインC、プロテインS、タンパク質Z、プロタインZに関連するプロテアーゼインヒビター、組織因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ又はフォンビルブラント因子である、請求項3336に記載の方法。緩衝液が、2エタンスルホン酸、イミノ二酢酸、ジメチルアルシン酸、ピペラジンNNビス、N2アミノエタンスルホン酸、コラミンクロリド、NNビス2アミノエタンスルホン酸、3プロパンスルホン酸、2トリスメチルアミノエタンスルホン酸、NピペラジンN、ピペラジンNNビス、Nトリスメチルグリシン、トリスメチルアミンアセトアミドグリシン、NNビスグリシン、Nトリスメチル3アミノプロパンスルホン酸、3アミノ2ヒドロキシプロパンスルホン酸、32ヒドロキシ1プロパンスルホン酸又は31プロパンスルホン酸を含んでなる、請求項137に記載の方法。緩衝液が、電解質を含んでなる、請求項138に記載の方法。電解質が、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、塩化物イオン、水素ホスフェートイオン、炭酸水素塩イオン又はそのいかなる組み合わせを含んでなる、請求項39に記載の方法。緩衝液が、ノニオン性界面活性剤を含んでなる、請求項140に記載の方法。非イオンの界面活性剤が、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、ポロキサマー、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル、グルコシドアルキルエーテル、ドデカオキシエタノール、ポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテル、ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル、グリセロールアルキルエステル、ソルビタンアルキルエステル、ココアミドエタノールアミン、スクロースモノラウレート、ドデシルジメチルアミンオキシド、ナトリウムコール酸塩又はそのいかなる組み合わせである、請求項41に記載の方法。線形関数、シグモイド関数、対数関数又は指数関数によって導電率グラディエントが規定される、請求項142に記載の方法。方法が閉端系として実行される、請求項143に記載の方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:aカラムへタンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、約190mScmから約300mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、約340mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:aカラムへタンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、少なくとも16mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、多くても57mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:aカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、約190mScmから約300mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、約340mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程:aカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、多くとも58mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;を含んでなり、ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる、方法。カラムが充填層クロマトグラフィーカラム又は拡張層吸着クロマトグラフィーカラムである、請求項4548に記載の方法。充填層クロマトグラフィーカラムが、イオン交換クロマトグ発明の詳細な説明015イオン交換クロマトグラフィーは、帯電した分子の化学分析および分離に広く用いられるクロマトグラフィー的な方法である。イオン交換は可逆的な化学反応であり、ここで、サンプルに含まれている化合物からのイオンは、固定相の不動のイオン交換樹脂に付着している、同様に電荷を帯びたイオンと交換される。応用の重要な領域は生物学的に生成された物質、例えばアミノ酸、タンパク質、DNA及びRNAの様なポリヌクレオチド分子、の抽出および精製である。016イオン交換カラムは固定相、および移動相を含む。017固定相はイオン交換樹脂を含んでなる。イオン交換樹脂は通常、約1mmから直径約2mmまでの小さなビーズの形をした不溶性マトリックスである。樹脂は、イオンを容易に捕捉し及び放出するイオン交換サイトとして役立つ表面気孔を高度に発達させた構造を持つ。イオンの捕捉は他のイオンを同時の遊離することでのみ生じる;したがって、その方法はイオン交換と呼ばれる。イオン交換樹脂は、正に帯電した移動性イオンを交換に利用可能にしておく陽イオン交換体および交換イオンが負に帯電している陰イオン交換体として分類される。陰イオン及び陽イオン樹脂の両方は同一の有機ポリマー、例えばポリスチレンから製造される。それらは炭化水素網目に付けられたイオン化可能な基において異なる。樹脂の化学的な挙動を決定するのはこの官能基である。樹脂は、広く強酸又は弱酸陽イオン交換体、又は強塩基又は、弱塩基陰イオン交換体として分類することができる。例えば、強酸性の陽イオン樹脂は典型的にはスルフォン酸基を含有する、例えばポリスチレンスルホン酸ナトリウム又はpolyAMPS;強塩基性陰イオン樹脂は、トリメチルアンモニウム基又はトリメチルベンジルアンモニウム基、例えばpolyAPTACの様な第四級アミノ基を含む;弱酸性陽イオン樹脂はカルボン酸基を含有する;及び、弱塩基性陰イオン樹脂は1級、2級、およびまたは3級のアミノ基、例えばポリエチレンアミンを含む。018最も典型的なイオン交換樹脂は架橋有機ポリマー、例えばポリスチレンに基づく。必要な官能基は、重合の後に導入することができ、又は、置換された単量体を用いることができる。例えば架橋は、重合工程で約05から約25のジビニルベンゼンをスチレンへ添加することにより多くの場合達成される。架橋は、樹脂のイオン交換容量を減少させて、イオン交換方法を遂行するための所要時間を延長する。しかしながら、、非橋架重合体は、それらがそれほど安定していないので単に例外的に用いられる。粒度はさらに樹脂パラメーターに影響を及ぼす;より小さな粒子は外表面が大きい。しかし、その粒子は、カラムプロセスでより大きなヘッドロスを引き起こす。019移動相は緩衝液を含んでなる。いかなる緩衝剤も、結果として生じる緩衝液がここに開示した方法を実行するのに有用であるという条件付きで用いられてもよい。緩衝液は当業者によって適切なように変えることができ、一般的に、移動相に対して所望されたpH値、溶出されるタンパク質および採用される導電率値に部分的に依存する。したがって、この実施形態の態様は随意に、例えば、2エタンスルホン酸、イミノ二酢酸、ジメチルアルシン酸、ピペラジンNNビス、N2アミノエタンスルホン酸、コラミンクロリド、NNビス2アミノエタンスルホン酸、3プロパンスルホン酸、2トリスメチルアミノエタンスルホン酸、NピペラジンN、ピペラジンNNビス、Nトリスメチルグリシン、トリスメチルアミンアセトアミドグリシン、NNビスグリシン、Nトリスメチル3アミノプロパンスルホン酸、3アミノ2ヒドロキシプロパンスルホン酸、32ヒドロキシ1プロパンスルホン酸および31プロパンスルホン酸、酢酸塩緩衝液、例えば、酢酸マグネシウム、酢酸カリウム、トリスアセテート;ホウ酸塩緩衝液;クエン酸塩緩衝液;リン酸緩衝液、例えばカリウムリン酸緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液;塩性の緩衝液、例えばリン酸緩衝食塩水、HEPES緩衝生食水、及びトリ緩衝剤食塩水、塩性のクエン酸ナトリウム水;普遍的な緩衝液、例えば、緩衝液はクエン酸およびカリウムホスフェート、BrittonRobinson緩衝液、Carmody緩衝液など、又はそのいかなる組み合わせ、を含んでもよい。特別の緩衝液を作り及び用いる方法の非限定的例は、例えばMOLECULARCLONINGALABORATORYMANUALに述べられている。020ここに必要に応じて開示した緩衝液のpHを調節するために酸または塩基を用いることができることは、理解される。この実施形態の側面において、ここに開示した有効なpHレベルの緩衝液は、例えば、少なくとも約pH50、少なくとも約pH55、少なくとも約pH60、少なくとも約pH65、少なくとも約pH70又は約pH75である。この実施形態の別の側面において、ここに開示した有効なpHレベルの緩衝液は、例えば、たかだか約pH50、たかだか約pH55、たかだか約pH60、たかだか約pH65、たかだか約pH70又はたかだか約pH75である。さらにこの実施形態の別の側面において、ここに開示した有効なpHレベルの緩衝液は、例えば約pH50から約pH80、有効なpHレベルは約pH50から約pH70であり、有効なpHレベルは約pH50から約pH60であり、約pH55から約pH80であり、有効なpHレベルは約pH55から約pH70であり、有効なpHレベルは約pH55から約pH50であり、約pH55から約pH75であり、有効なpHレベルは約pH55から約pH65である。021ここに開示した緩衝液は、濃度がここに開示した方法を実行するのに有用であるという条件付きで、いかなる濃度であってもよい。ここに開示した方法で用いられる緩衝液濃度は、当業者によって適切なように変えることができ、及び、通常、用いられている特別の緩衝液の緩衝能、溶出されているタンパク質および採用されている導電率値に部分的に依存する。この実施形態の側面において、緩衝液の濃度は、例えば少なくとも01mM、少なくとも02mM、少なくとも03mM、少なくとも04mM、少なくとも05mM、少なくとも06mM、少なくとも07mM、少なくとも08mM、少なくとも09mMである。この実施形態の他の態様において、緩衝液の緩衝剤濃度は、例えば少なくとも10mM、少なくとも20mM、少なくとも30mM、少なくとも40mM、少なくとも50mM、少なくとも60mM、少なくとも70mM、少なくとも80mM、少なくとも90mMである。この実施形態のまだ他の態様において、緩衝液の濃度は、例えば少なくとも10mM、少なくとも20mM、少なくとも30mM、少なくとも40mM、少なくとも50mM、少なくとも60mM、少なくとも70mM、少なくとも80mM、少なくとも90mMである。この実施形態のさらに別の側面において、緩衝液の濃度は、例えば少なくとも100mM、少なくとも200mM、少なくとも300mM、少なくとも400mM、少なくとも500mM、少なくとも600mM、少なくとも700mM、少なくとも800mM、少なくとも900mMである。022この実施形態の他の側面において、緩衝液の濃度は、例えばたかだか01mM、たかだか02mM、たかだか03mM、たかだか04mM、たかだか05mM、たかだか06mM、たかだか07mM、たかだか08mM、たかだか09mMである。この実施形態のさらに他の側面において、緩衝液の濃度は、例えば、たかだか10mM、たかだか20mM、たかだか30mM、たかだか40mM、たかだか50mM、たかだか60mM、たかだか70mM、たかだか80mM、又はたかだか90mMである。この実施形態のさらに他の側面において、緩衝液の濃度は、例えば、たかだか10mM、たかだか20mM、たかだか30mM、たかだか40mM、たかだか50mM、たかだか60mM、たかだか70mM、たかだか80mM、又はたかだか90mMである。この実施形態の更なる側面において、緩衝液の濃度は、例えば、たかだか100mM、たかだか200mM、たかだか300mM、たかだか400mM、たかだか500mM、たかだか600mM、たかだか700mM、たかだか800mM、又はたかだか900mMである。023この実施形態の他の側面において、緩衝液の濃度が、例えば、約01mM~約900mM、01mM~約500mM、01mM~約100mM、01mM~約90mM、01mM~約50mM、10mM~約900mM、10mM~約500mM、10mM~約100mM、10mM~約90mM又は10mM~約50mMの間にある。024本明細書の側面は部分的に、導電率グラディエントを開示する。緩衝液の導電率は電気を通すその能力の指標である。導電率のSI単位はメーター当たりジーメンスである。典型的には、導電率に一定の及び漸進的な増加があるという点で、導電率グラディエントは連続的か又は直線的である。導電率の一定の及び漸進的な増加は、それらの見かけの実効電荷によるカラムに結合されたタンパク質の漸進的な溶出に導く。陽イオン交換クロマトグラフィーにとって、低い陽性の見かけの実効電荷を有するタンパク質が最初に溶出し、一方、高い陽性の見かけの実効電荷を有しているタンパク質は最後に溶出するであろう。陰イオン交換クロマトグラフィーにとって、低い陰性の見かけの実効電荷を有するタンパク質が最初に溶出し、一方、高い陰性の見かけの実効電荷を有しているタンパク質は最後に溶出するであろう。025いかなる導電率グラディエントも、設定している導電率グラディエントがここに開示した方法を実行するのに有用であるという条件で用いられてもよい。一般的に、急な傾斜を有する導電率グラディエントは、狭いピークを有する溶出プロフィルの結果になるであろうし、したがって、開始および停止の導電率値は、互いにより接近するであろう。反対に、緩慢な傾斜を有する導電率グラディエントは、幅の広いピークを有する溶出プロフィルの結果になるであろうし、したがって、開始および停止の導電率値は、更に離れるであろう。典型的には、導電率グラディエントは、例えば、線形関数、シグモイド関数、多項式機能、n次のルート関数又は有理関数の様な代数関数;指数関数、双曲線関数又は対数関数の様な超越関数;べき関数;又は周期関数の様な数学関数によって規定することができる、。多数のサブ導電率グラディエントがある導電率グラディエントも採用されてもよい。例えば、直線的な導電率グラディエントが、約5mScmから約40mScmへの範囲で設定することが出来、次に約40mScmから約90mScmまでの指数関数的な導電率グラディエントへ遷移する。遷移は即時であってよい、又は、、例えば40mScmの定常的な移動相を含んでいてもよい。導電率グラディエントはさらにステップグラディエントであってよい、ここで、カラムは低い導電率、例えば約1mScmから約15mScm、を有する移動相で洗浄され、次に、タンパク質は例えば約25mScmから約35mScmの様な導電率を有する移動相を用いて溶出され、最終的には、カラムは一般的に、例えば、約80mScmから約90mScmの様な高導電性を有する移動相で洗浄して再生される。026導電率グラディエントは、開始する導電率がここに開示した方法を実行するのに有用な導電率グラディエントを設定するという条件付きで、いかなる開始導電率も有することができる。この実施形態の側面において、導電率グラディエントは、例えば約1mScm約2mScm約3mScm約4mScm約5mScm約6mScm約7mScm約8mScm約9mScmまたは、約10mScmの開始導電率を有する。この実施形態の他の側面において、導電率グラディエントは、例えば少なくとも1mScm、少なくとも2mScm、少なくとも3mScm、少なくとも4mScm、少なくとも5mScm、少なくとも6mScm、少なくとも7mScm、少なくとも8mScm、少なくとも9mScm、又は少なくとも10mScmの開始導電率を有する。この実施形態のまだ他の側面において、導電率グラディエントは、例えば約1mScmから約3mScm約1mScmから約5mScm約2mScmから約4mScm約2mScmから約6mScm約3mScmから約5mScm約3mScmから約7mScm、約4mScmから約6mScm約4mScmから約8mScm約5mScmから約7mScm約5mScmから約9mScm約6mScmから約8mScm約6mScmから約10mScm約7mScmから約9mScm約7mScmから約11mScm約8mScmから約10mScm約8mScmから約12mScm約9mScmから約11mScmor約9mScmから約13mScmの間で開始導電率を有する。027導電率グラディエントは、終了導電率がここに開示した方法を実行するのに有用な導電率グラディエントを設定するという条件付きで、いかなる終了導電率も有することができる。この実施形態の側面において、導電率グラディエントは、例えば約50mScm約55mScm約60mScm約65mScm約70mScm約75mScm約80mScm約85mScm約90mScm約95mScmまたは約100mScmの終了導電率を有する。この実施形態の他の側面において、導電率グラディエントは、例えば少なくとも50mScm、少なくとも55mScm、少なくとも60mScm、少なくとも65mScm、少なくとも70mScm、少なくとも75mScm、少なくとも80mScm、少なくとも85mScm、少なくとも90mScm、少なくとも95mScm、又は少なくとも100mScmの終了導電率を有する。この実施形態のまだ他の側面において、導電率グラディエントは例えば約50mScm~約60mScm約50mScm~約70mScm約60mScm~約70mScm約60mScm~約80mScm約70mScm~約80mScm約70mScm~約90mScm約80mScm~約90mScmor約80mScm~約100mScmの終了導電率を有する。028この実施形態の側面において、導電率グラディエントは、例えば、以下を有する:約1mScmから約5mScmまでの開始導電率、及び約50mScmから約80mScmまでの終了導電率、約2mScmから約6mScmまでの開始導電率、及び約55mScmから約85mScmまでの終了導電率、約3mScmから約7mScmまでの開始導電率、及び約55mScmから約85mScmまでの終了導電率、約4mScmから約8mScmまでの開始導電率、及び約55mScmから約85mScmまでの終了導電率、約5mScmから約9mScmまでの開始導電率、及び約60mScmから約90mScmまでの終了導電率、約6mScmから約10mScmまでの開始導電率、及び約60mScmから約90mScmまでの終了導電率、約7mScmから約11mScmまでの開始導電率、及び約65mScmから約95mScmまでの終了導電率、約8mScmから約12mScmまでの開始導電率、及び約65mScmから約95mScmまでの終了導電率、または、約9mScmから約13mScmまでの開始導電率、及び約65mScmから約95mScmまでの終了導電率。029この実施形態の他の側面において、導電率グラディエントは、例えば、以下を有する:約2mScmから約6mScmまでの開始導電率、及び約55mScmから約75mScmまでの終了導電率、約4mScmから約8mScmまでの開始導電率、及び約60mScmから約80mScmまでの終了導電率、約6mScmから約10mScmまでの開始導電率、及び約65mScmから約85mScmまでの終了導電率、約8mScmから約12mScmまでの開始導電率、及び約70mScmから約90mScmまでの終了導電率、または、約10mScmから約14mScmまでの開始導電率、及び約75mScmから約95mScmまでの終了導電率。030この実施形態の他の側面において、導電率グラディエントは、例えば、以下の開始導電率を有する:約4mScm~約70mScm;約4mScm~約80mScm約4mScm~約90mScm約6mScm~約70mScm;約6mScm~約80mScm約6mScm~約90mScm約8mScm~約70mScm;約8mScm~約80mScm約8mScm~約90mScm約10mScm~約70mScm;約10mScm~約80mScm約10mScm~約90mScm約12mScm~約70mScm;約12mScm~約80mScmor約12mScm~約90mScm。031導電率グラディエントは、ここに開示されるように、緩衝液中の電解質の濃度を変えることにより設定される。本明細書で使用されるように、用語電解質は、物質を導電性にするフリーイオンを含んでいるいかなる物質をも指す。最も典型的な電解質はイオン溶液である。電解質の非限定的例は例えば、ナトリウムカリウムカルシウムマグネシウムクロライド水素ホスフェート及び炭酸水素イオンを含む。032電解質溶液は、通常、塩が溶媒に入れられ、各々の成分が溶媒和と呼ばれるプロセスで溶媒及び溶質の分子間の熱力学的な相互作用により解離する場合に形成される。本明細書で使用されるように、用語塩は、酸及び塩基の中和反応から生じ得るイオン化合物を指す。生成物が電気的に中性であるように、塩は、陽イオンおよび陰イオンを含んでなる。これらの成分イオンはクロライドの様な無機でもよく、同様にアセテートの様な有機でもよく、及び、フルオライドの様な単原子イオンでもよく、同様に硫酸塩の様な多原子イオンでもよい。溶解された塩を含んでいる溶融塩及び溶液は、それらが電気を通すことができるので、電解質と呼ばれる。導電率グラジュエント設定で用いられる塩は、当業者によって適切なように変えることができ、及び、通常、溶出されるタンパク質および採用される導電率値に部分的に依存する。033塩のいくつかの種類がある。水に溶解されたときに、加水分解して水酸化物イオンを生成する塩は塩基性塩である。そして、水中で加水分解してヒドロニウムイオンを製造する塩は酸性塩である。中性塩は酸性塩でも塩基性塩でもないものである。双性イオンは同一の分子中に陰イオン性中心および陽イオン性中心を含んでいるが、塩であるとは考えられない。一般的な塩を生ずる陽イオンは、制限なしで、アンモニウム、カルシウム、鉄、マグネシウム、カリウム、ピリジニウム、4級アンモニウムおよびナトリウムを含む。一般的な塩を生ずる陰イオンは、制限なしで、アセテート、カーボネート、クロライド、クエン酸塩又は2、シアニド、ヒドロキシド、ニトラート、亜硝酸塩、オキシド、ホスフェートPO43、及びスルファートを含む。034導電率グラディエントは、同一の緩衝塩およびpHを有するが異なる塩濃度のために異なる導電率を有する2つの緩衝液を混合することにより設定されてもよい。混合は、典型的には、2つのバルブ、一つは低塩濃度を有する緩衝液を含有する容器に接続され、およびもう一つは高塩濃度を有する緩衝液を含有するる容器に接続されたバルブ、を含んでなるミキシングシステムによってインラインで、達成される。導電率グラディエントは、混合中に塩の高濃度を有する緩衝液の割合を同時に増加する一方で、塩の低濃度を有する緩衝液の割合を次第に減少させることにより設定される。このように、移動相の塩濃度は増加し、それに比例して導電率グラディエントが設定される。塩濃度の比例した増加は典型的には線形であるが、及び、数学関数に基づいた比例した増加は、比例した増加がイオン交換樹脂からの着目したポリペプチドを溶出するのに十分であるという条件で用いることができる。数学関数の非限定的例は以下を含む:線形関数、多項式関数、n次のルート関数又は有理関数の様な代数関数;指数関数、双曲線関数又は対数関数の様な超越関数;べき関数;又は周期関数。典型的には2つの緩衝液を用いて設定されるが、導電率グラディエントは又、2つを超える緩衝液の混合により設定されてもよい。035導電率グラディエントを設定する際に、開始する電解質又は塩濃度は、濃度がここに開示した方法を実行するのに有用な導電率グラディエントを設定するという条件付きで、いかなる濃度にもなり得る。この実施形態の側面において、導電率グラディエントは、例えば約0mM、約01mM、約02mM、約03mM、約04mM、約05mM、約06mM、約07mM、約08mM、又は約09mMの開始塩濃度を有する。この実施形態の他の側面において、導電率グラディエントは、例えば約01mM、約02mM、約03mM、約04mM、約05mM、約06mM、約07mM、約08mM、又は約09mMの開始塩濃度を有する。この実施形態の更なる他の側面において、導電率グラディエントは、例えば約10、mM、約20mM、約30mM、約40mM、約50mM、約60mM、約70mM、約80mM、又は約90mMの開始塩濃度を有する。036この実施形態の側面において、導電率グラジュエントは、例えば少なくとも01mM、少なくとも02mM、少なくとも03mM、少なくとも04mM、少なくとも05mM、少なくとも06mM、少なくとも07mM、少なくとも08mM、少なくとも09mMの開始電解質又は塩の濃度を有する。この実施形態の他の側面において、導電率グラジュエントは、例えば少なくとも10mM、少なくとも20mM、少なくとも30mM、少なくとも40mM、少なくとも50mM、少なくとも60mM、少なくとも70mM、少なくとも80mM、又は少なくとも90mMの開始塩濃度を有する。この実施形態の更に他の側面において、導電率グラジュエントは、例えば少なくとも10mM、少なくとも20mM、少なくとも30mM、少なくとも40mM、少なくとも50mM、少なくとも60mM、少なくとも70mM、少なくとも80mM、又は少なくとも90mMの開始塩濃度を有する。037この実施形態の他の側面において、導電率グラディエントは、例えばたかだか01mM、たかだか02mM、たかだか03mM、たかだか04mM、たかだか05mM、たかだか06mM、たかだか07mM、たかだか08mM、又は、たかだか09mMの開始電解質又は塩濃度を有する。この実施形態のさらに他の側面において、導電率グラディエントは、例えば、たかだか10mM、たかだか20mM、たかだか30mM、たかだか40mM、たかだか50mM、たかだか60mM、たかだか70mM、たかだか80mM、又はたかだか90mMの開始塩濃度を有する。この実施形態の更に他の側面において、導電率グラジュエントは、例えば、たかだか10mM、たかだか20mM、たかだか30mM、たかだか40mM、たかだか50mM、たかだか60mM、たかだか70mM、たかだか80mM、又はたかだか90mMの開始塩濃度を有する。038この実施形態の他の側面において、導電率グラディエントが、例えば、約0mM~約10mM、約0mM~約50mM、約0mM~約100mM、約01mM~約10mM、約01mM~約50mM、約01mM~約10mM、約01mM~約50mM、約01mM~約100mM、約10mM~約10mM、約10mM~約50mM、約10mM~約100mM、約10mM~約50mM又は約10mM~約100mMの間に開始電解質又は塩濃度を有する。039導電率グラディエントを設定する際に、最終電解質又は塩濃度は、濃度がここに開示した方法を実行するのに有用な導電率グラディエントを設定するという条件付きで、いかなる濃度にもなり得る。この実施形態の側面において、導電率グラディエントは、例えば約100mM、約200mM、約300mM、約400mM、約500mM、約600mM、約700mM、約800mM、約900mM、約1000mM、約1100mM、約1200mM、約1300mM、約1400mM、又は約1500mMの最終塩濃度を有している。040この実施形態の側面において、導電率グラディエントは、例えば少なくとも100mM、少なくとも200mM、少なくとも300mM、少なくとも400mM、少なくとも500mM、少なくとも600mM、少なくとも700mM、少なくとも800mM、少なくとも900mM、少なくとも1000mM、少なくとも1100mM、少なくとも1200mM、少なくとも1300mM、少なくとも1400mM、又は少なくとも1500mMの最終電解質又は塩濃度を有している。040この実施形態の側面において、導電率グラディエントは、例えばたかだか100mM、たかだか200mM、たかだか300mM、たかだか400mM、たかだか500mM、たかだか600mM、たかだか700mM、たかだか800mM、たかだか900mM、たかだか1000mM、たかだか1100mM、たかだか1200mM、たかだか1300mM、たかだか1400mM、又はたかだか1500mMの最終電解質又は塩濃度を有している。042この実施形態のまだ他の側面において、導電率グラディエントは、例えば、約100mM~約500mM、約100mM~約700mM、約100mM~約900mM、約300mM~約500mM、約300mM~約700mM、約300mM~約900mM、約300mM~約1100mM、約500mM~約700mM、約500mM~約900mM、約500mM~約1100mM、約500mM~約1300mM、約700mM~約900mM、約700mM~約1100mM、約700mM~約1300mM、約700mM~約1500mM、約900mM~約1100mM、約900mM~約1300mM、又は約900mM~約1500mMの最終電解質又は塩濃度を有する。043この実施形態の更に他の側面において、導電率グラディエントは、例えば約0mM~約100mMの開始塩濃度および約700mM~約1300mMの最終塩濃度、約60mM~約80mMの開始塩濃度および約900mM~約1100mMの最終塩濃度、又は約0mM~約10mMの開始塩濃度および約700mM~約800mMの最終塩濃度を有する。この実施形態の更なる側面において、導電率グラディエントは、例えば多くとも10mMの開始塩濃度および少なくとも700mMの最終塩濃度、多くとも50mMの開始塩濃度および少なくとも700mMの最終塩濃度、多くとも90mMの開始塩濃度および少なくとも700mMの最終塩濃度、多くとも10mMの開始塩濃度および少なくとも900mMの最終塩濃度、多くとも50mMの開始塩濃度および少なくとも900mMの最終塩濃度、多くとも90mMの開始塩濃度および少なくとも900mMの最終塩濃度、又は多くとも10mMの開始塩濃度および少なくとも500mMの最終塩濃度を有する。044移動相はさらに界面活性剤を含有してもよい。界面活性剤は液体の表面張力を低下させる化合物であり、液体のより容易な展延を可能にし、および2つの液体、又は液体及び固体間の界面張力を低下させる。単一の界面活性剤はここに開示した緩衝液と混合されてよい。又は、複数の界面活性剤がここに開示した緩衝液と混合されてもよい。有用な界面活性剤は、制限なしで、イオン性界面活性剤、双性イオンの界面活性剤、非イオン性界面活性剤又はそれらのいかなる組み合わせをも含む。ここに開示した方法で用いられる界面活性剤は、当業者によって適切なように変えることができ、及び、通常、用いられている特別の緩衝液の緩衝能、溶出されているタンパク質および採用されている導電率値に部分的に依存する。045イオン性界面活性剤は、安定性のある陰イオン又はpH依存性の陰イオンに基づいた陰イオン界面活性剤を含む。陰イオン界面活性剤は、非限定的に以下を含む:アンモニウムラウリルサルフェートの様なアルキルサルフェートおよびラウリルサルフェートナトリウム塩;ナトリウムラウレス硫酸塩およびナトリウムミレス硫酸塩の様なアルキルエーテル硫酸塩;ジオクチルソジウムスルホサクシネートの様なドクセート;パーフルオロスルホナートおよびパーフルオロブタンスルホナートの様なスルフォナートフッ素界面活性剤;アルキルベンゼンスルホナート;アルキルアリールエーテルホスフェート;アルキルエーテルホスフェート;脂肪酸塩及びステアリン酸ナトリウムの様なアルキルカルボキシラート;ナトリウムラウロイルサルコシネート;及びパーフルオロナノアート及びパーフルオロオクタノアートの様なカルボキシラートフッ素界面活性剤。046イオン性界面活性剤は、さらに安定性のある又はpH依存性の陽イオンに基づいた陽イオン界面活性剤を含む。陽イオン界面活性剤は、非限定的に、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドおよびセチルトリメチルアンモニウムクロライドの様なアルキルトリメチルアンモニウム塩;セチルピリジニウムクロライド;ポリエトキシル化牛脂アミン;ベンザルコニウムクロライド;ベンゼトニウムクロライド;5ブロモ5ニトロ13ジオキサン;ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロライド;及びジオクタデシルジメチルアンモニウムブロマイドを含み、同様に、界面活性剤の様なpH依存性の1級、2級又は3級のアミンを含む。047双性イオン性界面活性剤は、スルフォナート、カルボキシラート又はホスフェートを有する、1級の、2級又は3級アミン又は4級アンモニウム陽イオンに基づく。双性イオン性界面活性剤は、非限定的に、3ジメチルアンモニオ1プロパンスルホナート;コカミドプロピルコカミドプロピルサルタインの様なサルタイン;コカミドプロピルベタインの様なベタイン;又はレシチンを含む。048非イオン性の界面活性剤はより性質を変えておらず、蛋白質間相互作用を保持する一方で膜蛋白質及び脂質を可溶性にするのに有用である。界面活性剤の非限定的例は、以下を含む:ポリソルベート20ソルビタンモノオレエート20、ポリソルベート40ソルビタンモノオレエート40、ポリソルベート60ソルビタンモノオレエート60、ポリソルベート61ソルビタンモノオレエート61、ポリソルベート65ソルビタンモノオレエート65、ポリソルベート80ソルビタンモノオレエート80およびポリソルベート81ソルビタンモノオレエート81の様なポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル;ポロキサマーL44、ポロキサマーL61、ポロキサマーL62、ポロキサマーL64、ポロキサマーF68、ポロキサマーF87、ポロキサマーL108、ポロキサマー407F127338237188184182181124の様なポロキサマー30およびBRIJ35の様なポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル;2ドデカオキシエタノール;ポリオキシエチレンptオクチルフェノールX45の様なポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテルおよびポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルX100;ノノキシノール9の様なポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル;ノニルフェノキシポリエトキシルエタノールおよびオクチルフェノキシポリエトキシルエタノールの様なフェノキシポリエトキシルエタノール;オクチルグルコピラノシドの様なグルコシドアルキルエーテル;ドデシルマルトピラノサイドの様なマルトース配糖体アルキルエーテル;ヘプチルチオグリコピラノシドの様なチオグリコシドアルキルエーテル;ジギトニン;グリセリルラウレートの様なグリセロールアルキルエステル;アルキルアリルポリエーテル硫酸塩;アルコールスルフォナート;ソルビタンアルキルエステル;ココアミドモノエタノールアミンおよびココアミドジエタノールアミンの様なココアミドエタノールアミン;スクロースモノラウレート;ナトリウムコール酸塩およびドデシルジメチルアミンオキシド。ここに開示した方法中に有益な界面活性剤の他の非限定的例は、以下に見いだすことができる:例えば、WinslowetalMethodsandCompositionsforSimultaneouslyIsolatingHemoglobinfromRedBloodCellsandInactivatingVirusesUS20080138790;PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems;Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy;GoodmanGilmansThePharmacologicalBasisofTherapeutics;及びHandbookofPharmaceuticalExcipients。049界面活性剤のいかなる濃度も、その濃度がここに開示した方法を実行するのに有用であるという条件付きで用いられてもよい。この実施形態の側面において、界面活性剤は以下の濃度で用いられる、例えば約001約005約0075約01約02約03約04約05約06約07約08約09約10約20約30約40約50約60約70約80約90or約100。この実施形態の他の側面において、界面活性剤は以下の濃度で用いられる、例えば少なくとも001少なくとも005少なくとも0075少なくとも01少なくとも025少なくとも05少なくとも075少なくとも10少なくとも25少なくとも50少なくとも75又は少なくとも100。この実施形態の側面において、界面活性剤は以下の濃度で用いられる、例えば約01~約05約01~約10約02~約05約02~約10約02~約20約05~約10約05~約50or約10~約100。050溶出液収集は、カラムから溶出液の収集を開始する導電率値、およびカラムからの溶出液の収集を終了する導電率値によって規定される。溶出液収集は、単一の開始および単一の停止導電率値を有する単一の溶出液収集として実行されてもよく、または、各フラクションが開始及び停止導電率値を有する複数の溶出液フラクションを含有してもよい。複数の溶出液フラクションのすべて、又はその部分は、続いて単一の溶出液収集へプールすることができる。この実施態様の側面において、溶出液収集は、例えば2つ以上の溶出液画分、5つ以上の溶出液画分、10以上の溶出液画分、15以上の溶出液画分、20以上の溶出液画分、25以上の溶出液画分を含むことができる。他の実施態様の側面において、溶出液収集は、例えば2つ以上の連続した溶出液画分、5つ以上の連続した溶出液画分、10以上の連続した溶出液画分、15以上の連続した溶出液画分、20以上の連続した溶出液画分、25以上の連続した溶出液画分を含むことができる。051移動相について測定された導電率値が固定相のイオン交換樹脂から溶出されているタンパク質の所望の量または活性を示すとき、溶出液収集を開始することができる。導電率の基準は、がカラムセットアップのどの点でも生じる場合がある。例えば、移動相がカラムに入る前のいかなるフロントエンドポイント、カラム内のいかなるポイント、または、移動相がカラムを出た後のいかなるバックエンドポイントなどである。導電率は、定量的に導電率を検知することができるあらゆるセンサーを使用して、測定することができる。例えば電位差計センサー、誘導性センサー、または電流中断技術センサーのような電流測定センサーなどである。052この実施態様の側面において、導電率値が移動相について測定した時、例えば、約150mScm約200mScm約250mScm約300mScmor約350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。他の実施態様の側面において、移動相について測定された導電率値が、例えば、少なくとも150mScm、少なくとも200mScm、少なくとも250mScm、少なくとも300mScm、または少なくとも350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の更に他の側面において、移動相について測定した導電率値が、例えば、約150mScmから約250mScm約150mScmから約300mScm約150mScmから約350mScm約200mScmから約300mScmor約200mScmから約350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。053この実施態様の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、約200mScm約210mScm約220mScm約230mScm約240mScm約250mScm約260mScm約270mScm約280mScm約290mScm約300mScm約310mScm約320mScm約330mScm約340mScmor約350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。他の実施態様の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、少なくとも200mScm少なくとも210mScm少なくとも220mScm少なくとも230mScm少なくとも240mScm少なくとも250mScm少なくとも260mScm少なくとも270mScm少なくとも280mScm少なくとも290mScm少なくとも300mScm少なくとも310mScm少なくとも320mScm少なくとも330mScm少なくとも340mScmor少なくとも350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、約200mScm~約220mScm約210mScm~約230mScm約220mScm~約240mScm約230mScm~約250mScm約240mScm~約260mScm約250mScm~約270mScm約260mScm~約280mScm約270mScm~約290mScm約280mScm~約300mScm約290mScm~約310mScm約300mScm~約320mScm約310mScm~約330mScm約320mScm~約340mScmor約330mScm~約350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。054この実施態様の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから溶出する移動相について測定した出口導電率値が、例えば、約150mScm約160mScm約170mScm約180mScm約190mScm約200mScm約210mScm約220mScm約230mScm約240mScm約250mScm約260mScm約270mScm約280mScm約290mScmまたは約300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の他の側面において、出口導電率値が陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、少なくとも150mScm少なくとも160mScm少なくとも170mScm少なくとも180mScm少なくとも190mScm少なくとも200mScm少なくとも210mScm少なくとも220mScm少なくとも230mScm少なくとも240mScm少なくとも250mScm少なくとも260mScm少なくとも270mScm少なくとも280mScm少なくとも290mScmまたは少なくとも300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の更に他の側面において、出口導電率値が陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、多くとも150mScm多くとも160mScm多くとも170mScmたかだか180mScm多くとも190mScm多くとも200mScm多くとも210mScm多くとも220mScm多くとも230mScm多くとも240mScm多くとも250mScm多くとも260mScm多くとも270mScm多くとも280mScm多くとも290mScm又は多くとも300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の更に他の側面において、出口導電率値が陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、約150mScm~約170mScm約160mScm~約180mScm約170mScm~約190mScm約180mScm~約200mScm約190mScm~約210mScm約200mScm~約220mScm約210mScm~約230mScm約220mScm~約240mScm約230mScm~約250mScm約240mScm~約260mScm約250mScm~約270mScm約260mScm~約280mScm約270mScm~約290mScm又は約280mScm~約300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。055この実施態様の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、約200mScm約210mScm約220mScm約230mScm約240mScm約250mScm約260mScm約270mScm約280mScm約290mScm約300mScm約310mScm約320mScm約330mScm約340mScmor約350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。他の実施態様の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、少なくとも200mScm少なくとも210mScm少なくとも220mScm少なくとも230mScm少なくとも240mScm少なくとも250mScm少なくとも260mScm少なくとも270mScm少なくとも280mScm少なくとも290mScm少なくとも300mScm少なくとも310mScm少なくとも320mScm少なくとも330mScm少なくとも340mScmor少なくとも350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、約200mScm~約220mScm約210mScm~約230mScm約220mScm~約240mScm約230mScm~約250mScm約240mScm~約260mScm約250mScm~約270mScm約260mScm~約280mScm約270mScm~約290mScm約280mScm~約300mScm約290mScm~約310mScm約300mScm~約320mScm約310mScm~約330mScm約320mScm~約340mScmor約330mScm~約350mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。056この実施態様の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから溶出する移動相について測定した出口導電率値が、例えば、約150mScm約160mScm約170mScm約180mScm約190mScm約200mScm約210mScm約220mScm約230mScm約240mScm約250mScm約260mScm約270mScm約280mScm約290mScmまたは約300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の他の側面において、出口導電率値が陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、少なくとも150mScm少なくとも160mScm少なくとも170mScm少なくとも180mScm少なくとも190mScm少なくとも200mScm少なくとも210mScm少なくとも220mScm少なくとも230mScm少なくとも240mScm少なくとも250mScm少なくとも260mScm少なくとも270mScm少なくとも280mScm少なくとも290mScmまたは少なくとも300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。更に他の実施態様の他の側面において、出口導電率値が陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、多くとも150mScm多くとも160mScm多くとも170mScm多くとも180mScm多くとも190mScm多くとも200mScm多くとも210mScm多くとも220mScm多くとも230mScm多くとも240mScm多くとも250mScm多くとも260mScm多くとも270mScm多くとも280mScm多くとも290mScm又は多くとも300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。この実施態様の更に他の側面において、出口導電率値が陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、約150mScm~約170mScm約160mScm~約180mScm約170mScm~約190mScm約180mScm~約200mScm約190mScm~約210mScm約200mScm~約220mScm約210mScm~約230mScm約220mScm~約240mScm約230mScm~約250mScm約240mScm~約260mScm約250mScm~約270mScm約260mScm~約280mScm約270mScm~約290mScm又は約280mScm~約300mScmであるときに、溶出液収集は開始することができる。057移動相について測定された導電率値が固定相のイオン交換樹脂から溶出されているタンパク質の望まざる量または活性を示すとき、溶出液収集を停止することができる。058この実施態様の側面において、移動相について測定した時、導電率値が、例えば、約300mScm約350mScm約400mScm約450mScm約500mScm約550mScmor約600mScmであるとき、溶出液収集は停止することができる。他の実施態様の側面において、移動相について測定された導電率値が、例えば少なくとも300mS、少なくとも35mScm、少なくとも400mScm、少なくとも450mScm、少なくとも500mScm、少なくとも550mScm、または少なくとも600mScmであるとき、溶出液収集は停止することができる。更に他の実施態様の側面において、移動相について測定された導電率値が、例えば、多くとも300mS、多くとも35mScm、多くとも400mScm、多くとも450mScm、多くとも500mScm、多くとも550mScm、または多くとも600mScmであるとき、溶出液収集は停止することができる。この実施態様の更に他の側面において、移動相について測定した導電率値が、例えば、約300mScm~約400mScm約300mScm~約450mScm約300mScm~約500mScm約350mScm~約450mScm約350mScm~約500mScmor約350mScm~約600mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。059この実施態様の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、約350mScm約360mScm約370mScm約380mScm約390mScm約400mScm約410mScm約420mScm約430mScm約440mScm約450mScm約460mScm約470mScm約480mScm約490mScmまたは約500mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。他の実施態様の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、少なくとも350mScm少なくとも360mScm少なくとも370mScm少なくとも380mScm少なくとも390mScm少なくとも400mScm少なくとも410mScm少なくとも420mScm少なくとも430mScm少なくとも440mScm少なくとも450mScm少なくとも460mScm少なくとも470mScm少なくとも480mScm少なくとも490mScmまたは少なくとも500mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。他の実施態様の更なる他の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、多くとも350mScm多くとも360mScm多くとも370mScm多くとも380mScm多くとも390mScm多くとも400mScm多くとも410mScm多くとも420mScm多くとも430mScm多くとも440mScm多くとも450mScm多くとも460mScm多くとも470mScm多くとも480mScm多くとも490mScmまたは多くとも500mScmであるとき、溶出液収集は停止することができる。この実施態様の更なる他の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した入口導電率値が、例えば、約350mScm~約370mScm約360mScm~約380mScm約370mScm~約390mScm約380mScm~約400mScm約390mScm~約410mScm約400mScm~約420mScm約410mScm~約430mScm約420mScm~約440mScm約430mScm~約450mScm約440mScm~約460mScm約450mScm~約470mScm約460mScm~約480mScm約470mScm~約490mScm又は約480mScm~約500mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。060この実施態様の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから溶出する移動相について測定した出口導電率値が、例えば、約300mScm約310mScm約320mScm約330mScm約340mScm約350mScm約360mScm約370mScm約380mScm約390mScm約400mScm約410mScmor約420mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施態様の他の側面において、出口導電率値が陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、少なくとも300mScm、少なくとも310mScm、少なくとも320mScm、少なくとも330mScm、少なくとも340mScm、少なくとも350mScm、少なくとも360mScm、少なくとも370mScm、少なくとも380mScm、少なくとも390mScm、少なくとも400mScm、少なくとも410mScmまたは少なくとも420mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施態様の更に他の側面において、出口導電率値が陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、多くとも300mScm、多くとも310mScm、多くとも320mScm、多くとも330mScm、多くとも340mScm、多くとも350mScm、多くとも360mScm、多くとも370mScm、多くとも380mScm、多くとも390mScm、多くとも400mScm、多くとも410mScmまたは多くとも420mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施態様の更に他の側面において、出口導電率値が陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相について測定した時、例えば、約300mScm~約320mScm約310mScm~約330mScm約320mScm~約340mScm約330mScm~約350mScm約340mScm~約360mScm約350mScm~約370mScm約360mScm~約380mScm約370mScm~約390mScm約380mScm~約400mScm約390mScm~約410mScmor約400mScm~約420mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。061この実施形態の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、例えば、約450mScm約460mScm約470mScm約480mScm約490mScm約500mScm約510mScm約520mScm約530mScm約540mScm約550mScm約560mScm約570mScmor約580mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施形態の他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、例えば少なくとも450mScm、少なくとも460mScm、少なくとも470mScm、少なくとも480mScm、少なくとも490mScm、少なくとも500mScm、少なくとも510mScm、少なくとも520mScm、少なくとも530mScm、少なくとも540mScm、少なくとも550mScm、少なくとも560mScm、少なくとも570mScm又は少なくとも580mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施形態の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、例えば多くとも450mScm、多くとも460mScm、多くとも470mScm、多くとも480mScm、多くとも490mScm、多くとも500mScm、多くとも510mScm、多くとも520mScm、多くとも530mScm、多くとも540mScm、多くとも550mScm、多くとも560mScm、多くとも570mScm又は多くとも580mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施形態の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、例えば約450mScmto約470mScm約460mScmto約480mScm約470mScmto約490mScm約480mScmto約500mScm約490mScmto約510mScm約500mScmto約520mScm約510mScmto約530mScm約520mScmto約540mScm約530mScmto約550mScm約540mScmto約560mScm約550mScmto約570mScmor約560mScmto約580mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。062この実施形態の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相に対して測定された出口導電率値が、例えば、約400mScm約410mScm約420mScm約430mScm約440mScm約450mScm約460mScm約470mScm約480mScm約490mScm約500mScm約510mScm約520mScmor約530mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施形態の他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相に対して測定された出口導電率値が、例えば少なくとも400mScm、少なくとも410mScm、少なくとも420mScm、少なくとも430mScm、少なくとも440mScm、少なくとも450mScm、少なくとも460mScm、少なくとも470mScm、少なくとも480mScm、少なくとも490mScm、少なくとも500mScm、少なくとも510mScm、少なくとも520mScm又は少なくとも530mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施形態の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相に対して測定された出口導電率値が、例えば多くとも400mScm、多くとも410mScm、多くとも420mScm、多くとも430mScm、多くとも440mScm、多くとも450mScm、多くとも460mScm、多くとも470mScm、多くとも480mScm、多くとも490mScm、多くとも500mScm、多くとも510mScm、多くとも520mScm又は多くとも530mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。この実施形態の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相に対して測定された出口導電率値が、例えば約400mScm~約420mScm約410mScm~約430mScm約420mScm~約440mScm約430mScm~約450mScm約440mScm~約460mScm約450mScm~約470mScm約460mScm~約480mScm約470mScm~約490mScm約480mScm~約500mScm約490mScm~約510mScm約500mScm~約520mScmor約510mScm~約530mScmであるときに、溶出液収集は停止することができる。063この実施態様の他の側面において、入口導電率値が、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した時、約250mScmから約270mScmまでのときに溶出液収集は開始することができ、入口導電率値が、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定した時、約410mScmから約430mScmまでであるときに停止する。この実施形態の更に別の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合、溶出液収集は開始することができ、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合、停止し、及びここで、導電率グラディエントは、約8mScmから約90mScm迄である。この実施形態の更に別の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合、溶出液収集は開始することができ、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合、停止し、ここで、導電率グラディエントは、約8mScmから約90mScmまでである。そして、溶出されているタンパク質は第VIII因子である。064この実施態様の他の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合、停止することができる。さらにこの実施形態の別の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合、停止することができ、及びここで、導電率グラディエントは、約8mScmから約90mScm迄である。この実施形態の更に他の側面において、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合、停止することができ、ここで、導電率グラディエントは、約8mScmから約90mScmまでである。そして、溶出されているタンパク質は第VIII因子である。065この実施態様の他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合、停止することができる。この実施態様の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合、停止することができ、及びここで、導電率グラディエントは、約4mScmから約80mScm迄である。この実施態様の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相に対して測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合、停止することができ、ここで、導電率グラディエントは、約4mScmから約80mScmまでである。そして、溶出されているタンパク質は第VIII因子である。066この実施態様の他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合、停止することができる。この実施態様の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合、停止することができ、及びここで、導電率グラディエントは、約4mScmから約80mScm迄である。この実施態様の更に他の側面において、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合、溶出液収集は開始し、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを出る移動相に対して測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合、停止することができ、ここで、導電率グラディエントは、約4mScmから約80mScmまでである。そして、溶出されているタンパク質は第VIII因子である。067本明細書の側面は、部分的に、カラムによって保持されるタンパク質およびタンパク質の所望の量又は活性を含んでなる溶出液収集を開示する。ここに開示したタンパク質は、例えば血液凝固タンパク質、アルブミン、およびまたは免疫グロブリンの様な血液タンパク質であり得る。血液タンパク質の非限定的例は、ADAMTS13、α1抗プラスミン、α2抗プラスミン、抗トロンビン、抗トロンビンIII、癌前凝固剤、エリスロポエチン、第II因子、V因子、第VI因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第X因子、第XI因子、第XII因子、第XIII因子、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ヘパリンコファクターII、高い分子量のキニノーゲン、筋肉内免疫グロブリン、静脈内免疫グロブリン、プラスミノーゲン、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター1、プラスミノーゲンアクチベータインヒビター2、プレカリクレイン、プロテインC、プロテインS、タンパク質Z、プロタインZに関連するプロテアーゼインヒビター、組織因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ又はフォンヴィレブランド因子を含む。068ここに開示したタンパク質は、当然タンパク質を発現する生物体から、タンパク質を発現するために遺伝子的に操作された遺伝子組み換え生物から、又は組み換えでタンパク質を製造する細胞株から得られてもよい。生物体の非限定的例は鳥及び哺乳動物、例えばマウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ロバ、雌牛、霊長類、ヒトを含む。遺伝子組み換え生物の非限定的例は、着目したポリペプチドを発現するために遺伝子的に操作された、ここに開示した生物体を含む。生物体又は遺伝子組み換え生物からのここに開示したタンパク質は、当分野において知られている慣例方法を用いて、体液、組織又は、器官抽出物、又は生物体からの他の起源から得られてもよい。例えば、生物体又は遺伝子組み換え生物から血液タンパク質全血を得るは、血清セパレーターチューブで抜くことができる。血液を凝結させる。そして、凝固血はデブリを小球にするために遠心分離機にかけられる。次に、必要であるまで結果として生じる血清サンプルは等分し、およびまたは20°Cで貯蔵することができる。血液収集および血清製剤のための特別のプロトコルの非限定的例は、例えばDiLorenzoandStrasingerBLOODCOLLECTIONINHEALTHCARE;及びDianaGarzaKathleenBecanMcBridePHLEBOTOMYHANDBOOK:BLOODCOLLECTIONESSENTIALSに述べられている。069それに代えて、様々な原始核およびまたは真核発現系もここに開示したタンパク質を組み換えで発現するために採用されてもよい。発現系は、非限定的に、誘導可能な発現、非誘導可能な発現、構成性の発現、組織特異的発現、細胞特異的な発現、ウイルスの媒介した発現、強固に統合された発現および一時的発現を含む様々な特性のうちのいずれかを含むことができる。そのような発現系を作り用いる方法は当分野において知られている。070通常、着目したポリペプチドをコード化するポリヌクレオチドは、発現ベクターへクローニングされる。原始核をもつ発現ベクターは、典型的には、複製開始点、適切なプロモータおよびまたはエンハンサー、及びさらにリボソーム結合、ポリアデニル化および転写の終了に必要なサイトを、5側面に位置する転写されていない配列、及び他の転写されていない遺伝要素と同様に、含有する。典型的な原核生物のベクターはプロモータ、例えばバクテリオファージT7プロモータを用いる、pET及びpRSETを含む。原始核をもつ発現ベクターは、典型的には、複製開始点、適切なプロモータおよびまたはエンハンサー、及びさらにリボソーム結合、ポリアデニル化、スプライシングおよび転写の終了に必要なサイトを、5側面に位置する転写されていない配列、及び他の転写されていない遺伝要素と同様に、含有する。典型的な酵母ベクターは、例えばAOX1AUG1GAPandGAL1の様なプロモータを用いる、pAO、pMET、pPIC、pPICZおよびpYESを含む。典型的な昆虫ベクターは、例えばPH、p10、MT、Ac5、OpIE2、gp64、polhの様なプロモータを用いる、pAc5pBACpIBpMIBpMTを含む。典型的な哺乳類ベクターは、例えばβカゼイン、βラクトグロブリン、乳清酸プロモータ、HSVチミジンキナーゼ、初期および後期シミアンウィルス40、レトロウイルスからのLTRおよびマウスメタロチオネイン1の様なプロモータを用いる、pBPV、pCMV、pCMVTNT、pDNA、pDisplay、pMSG、pOG44、pQBI25、pRcRSV、pSECTag、pSECTag2、pSG、pSV2cat、pSVK3、pSVL、pUCIGMET、pVAX1、pWLneoおよびpXT1を含む。選択マーカーはアンピシリン、クロラムフェニコールトランスフェラーゼ、カナマイシン、ネオマイシンおよびテトラサイクリンを含む。適切な発現ベクターは当分野において知られており市販されている。071互換性のあるベクターを発現することができる細胞は、原核細胞、真核細胞、および原核生物及び真核生物の細胞から誘導された細胞株を含む。原核生物の菌種の非限定的例は、例えば大腸菌、枯草菌、リケニホルミス菌、バクテロイデスfragilis、クロストリジウムガス菌、クロストリジウムディフィシル、カウロバクタークレセンタス、ラクトコッカスラクチス、メチロバクテリウムエキストロクエンス、ナイセリアメニンギルルス、髄膜炎菌、蛍光菌及びネズミチフス菌から誘導されたものを含む。酵母菌株の非限定的例は、誘導されたもの、例えば、ピキアパストリス、ピキアメタノリカ、ピキアオウガスタ、分裂酵母、ビール酵母菌およびヤロウィアリポリティカを含む。植物から誘導された植物細胞及び細胞株は、例えば、例えばトウモロコシの様な単子葉植物種、例えばシロイヌナズナ、パンコムギ、イボウキクサ、コウキクサの様な双子葉植物種、からの細胞を含む。昆虫細胞、および昆虫から誘導された細胞株は、例えばヨトウガ、イラクサギンウワバ、キイロショウジョウバエ、タバコスズメガからの細胞を含む。昆虫細胞株の非限定的例は、ハイファイブ、KC、シュナイダー1級症状ショウジョウバエ細胞株2、SF9およびSF21細胞株を含む。哺乳動物細胞及び哺乳動物細胞から誘導された細胞株は、例えばマウス、ラット、ハムスター、豚、ウシ、ウマ、霊長類及びヒトからの細胞を含む。哺乳動物細胞株の非限定的例は1A33T36E610T12APRTBALB3T3BECBHKBTC6C127CHOCHP3COS1COS7CPAEESK4FB2GH1GH3HeLaHEK293HepG2HL60IMR32L2LLCPK1LMMCF7NB4NBL6NCTCNeuro2ANIE115NG10815NIH3T3PC12PK15SBACSHSY5YSKHepSKNDZSKNF1SKNSHSTSW13およびVV1細胞株を含む。細胞株は、米国培養菌保存施設、ヨーロッパ細胞培養コレクション、および微生物及び細胞培養のドイツコレクションから得られてもよい。072この実施形態の側面において、溶出液収集は、溶出液収集開始の前にイオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の、例えば、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、又は少なくとも95を含んでなる。この実施形態の他の側面において、溶出液収集は、溶出液収集の開始前にイオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の、例えば、約25~約100約30~約100約40~約100約50~約100約60~約100約70~約100約75~約100約80~約100約85~約100約90~約100約25~約95約30~約95約40~約95約50~約95約60~約95約70~約95約75~約95約80~約95約85~約95約90~約95約25~約90約30~約90約40~約90約50~約90約60~約90約70~約90約75~約90約80~約90or約85~約90の間を含んでなる。073この実施形態の側面において、溶離液収集は、溶出液収集開始の前にイオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質量の、例えば、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、又は少なくとも95を含んでなる。この実施形態の他の側面において、溶離液収集は、溶出液収集の開始前にイオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質量の、例えば、約25~約100約30~約100約40~約100約50~約100約60~約100約70~約100約75~約100約80~約100約85~約100約90~約100約25~約95約30~約95約40~約95約50~約95約60~約95約70~約95約75~約95約80~約95約85~約95約90~約95約25~約90約30~約90約40~約90約50~約90約60~約90約70~約90約75~約90約80~約90or約85~約90の間を含んでなる。074この実施形態の側面において、溶離液収集は、溶出液収集開始の前にイオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質活性の、例えば、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、又は少なくとも95を含んでなる。この実施形態の他の側面において、溶離液収集は、例えば、溶出液収集の開始前にイオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質活性の約25~約100約30~約100約40~約100約50~約100約60~約100約70~約100約75~約100約80~約100約85~約100約90~約100約25~約95約30~約95約40~約95約50~約95約60~約95約70~約95約75~約95約80~約95約85~約95約90~約95約25~約90約30~約90約40~約90約50~約90約60~約90約70~約90約75~約90約80~約90or約85~約90の間を含んでなる。075タンパク質の活性の検知は、非限定的に、非特異的なタンパク質アッセイを含んで、モニターされているタンパク質に関連した活性を示す特性を定性的に又は定量的に測定することができるあらゆるアッセイによって遂行されてよい、例えばUV吸収、Bradfordアッセイの様な化学薬品に基づいたアッセイ;又は、例えばインビトロアッセイ、細胞ベースのアッセイ、インビボアッセイの様な特異タンパク質アッセイ等である。ここに開示されるようなタンパク質の活性を検知するために用いられる実際のアッセイは、非限定的に、分析されているタンパク質、流体中にあるタンパク質の量、分析されている特性、および当業者のプレファレンスを含む因子を考慮に入れることによって、当業者によって決定することができる。076例えば、血液凝固カスケードに基づいた色素アッセイは、FVIII活性を検知するために用いることができる。このアッセイにおいて、トロンビンで活性化された第VIII因子は、第IX因子と錯体を形成し、及び、この錯体は続いて第X因子を活性化する。pニトロアニリンの様な色素の群を遊離する色素形成基質の加水分解により、活性化された第X因子活性にアクセスすることができる。pNA放出の初速度は、dODにおいて405nmで測定された1分間当たりの吸光度の変化によって決定されるように、第Xa因子活性、および続いてサンプル中のFVIII活性に比例する。第IX因子及び第X因子の過剰を用いることによって、第X因子の活性化の速度は、サンプル中にあるトロンビンで開裂された第VIII因子の量に単に比例する。代わりに、第VIII因子及び第X因子が過剰であるように条件を変えることによって、第IX因子活性を決定することができる。そして、そういう点で、第IX因子は律速である。同様に、第VIII因子及び第IXa因子が過剰であるように条件を変えることによって、第X因子活性を決定することができる。そして、そういう点で、第X因子は律速である。したがって、第IXa因子および第X因子と同様に第VIII因子活性も血液凝固カスケードに基づいた色素アッセイを用いて検知することができる。077別の実施例として、部分的な活性化部分トロンボプラスチン時間を適用する1段階凝固アッセイは、FVIII活性を検知するために用いることができる。このアッセイにおいて、第VIII因子を含んでなるサンプルは、CaCl2に加えて、凝固を促進するために第VIII因子の不足した血漿に添加される。そして、血漿のAPTT凝固時間に対するこのサンプルの効果は、第VIII因子活性の指標である。未知のサンプルの活性は、観察された第VIII因子活性を既知の第VIII因子活性サンプルから発生された標準曲線と比較することにより計算される。この血液凝固アッセイも、分析されるタンパク質が不足している血漿を用いることにより、血液凝固カスケードに含まれる他のタンパク質に用いられてもよい。078本明細書の側面は部分的に、クローズドシステムを開示する。ここに開示した溶出方法はクローズドシステムと考えられる。なぜならば、それが完全に自動化され、溶出液画分又は多数の溶出液画分の収集、蛋白含有量のための画分の分析、着目したポリペプチドの閾値量を含んでいる画分のアッセイ、及び引き続く処理のための画分のプーリングの点において、オペレーター参加を必要としないからである。それゆえ、ここに開示した溶出方法は、機械的な故障を予防するために収集プロセスを管理する点において、オペレーター労働の量を減らし、プールされる画分の計算に関する、又はそれ自体をプールするマニュアル中のオペレータエラーの可能性を減少させる。079本明細書の態様は、以下のようにも記述することができる:1カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。2カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。3カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。4カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、該移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも210mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。5カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも約150mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても41mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。6カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも21用mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも41mScmである場合に溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。7溶出液収集が、工程の陽イオンオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも50を含んでなり、または、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも75を含んでなる、16に記載の実施形態。8陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質が、量または活性によって測定される、17に記載の実施形態。9カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。10カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。11カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約250mScmから約270mScmまでである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約190mScmから約210mScmまでである場合に溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約410mScmから約430mScmまでである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約345mScmから約365mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。12カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも210mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。13カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても41mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。14カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陽イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも210mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも47mScmである場合に、または、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも41mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。15溶出液収集が、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも50を含んでなり、または、工程の陽イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも75を含んでなる、914に記載の実施形態。16陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子が、量または活性によって測定される、914に記載の実施形態。17カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。18カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。19カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に溶出液収集を停止する工程;ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。20カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。21カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cクロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても52mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。22カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、タンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも52mScmである場合に溶出液収集を停止する工程;ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。23溶出液収集が、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも50を含んでなり、または、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも75を含んでなる、1722に記載の実施形態。24陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持されたタンパク質が、量または活性によって測定される、1722に記載の実施形態。25カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。26カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、単回の溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。27カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約278mScmから約298mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約210mScmから約230mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、約510mScmから約530mScmまでである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、約455mScmから約475mScmまでである場合に溶出液収集を停止する工程;ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。28カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。29カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;cクロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、dクロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くても52mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、単回の溶出液収集は、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。30カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:a陰イオン交換クロマトグラフィーカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;b陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、少なくとも24mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、少なくとも17mScmである場合に溶出液収集を開始する工程;および、d陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに入る移動相について測定された供給口導電率値が、多くとも57mScmである場合に、または、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムから出る移動相について測定された出口導電率値が、多くとも52mScmである場合に溶出液収集を停止する工程;ここで、単回の溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。31溶出液収集が、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも50を含んでなり、または、工程の陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも75を含んでなる、2530に記載の実施形態。32陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子が、量または活性によって測定される、2530に記載の実施形態。33タンパク質が組換え型タンパク質である、18及び請求項1724に記載の実施形態。34タンパク質が、生物体又は遺伝子組み換え生物からのタンパク質である、18及び1724に記載の実施形態。35タンパク質が、血液タンパク質である、33または34に記載の実施形態。36血液タンパク質が、血液凝固タンパク質である、33または34に記載の実施形態。37血液タンパク質が、ADAMTS13、α1抗プラスミン、α2抗プラスミン、抗トロンビン、抗トロンビンIII、癌前凝固剤、エリスロポエチン、第II因子、第V因子、第VI因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第X因子、第XI因子、第XII因子、第XIII因子、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ヘパリンコファクターII、高分子量のキニノーゲン、筋肉内免疫グロブリン、静脈内免疫グロブリン、プラスミノーゲン、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター1、プラスミノーゲンアクチベータインヒビター2、プレカリクレイン、プロテインC、プロテインS、タンパク質Z、プロタインZに関連するプロテアーゼインヒビター、組織因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ又はフォンビルブラント因子である、3336に記載の実施形態。38緩衝液が以下を含んでなる137の実施形態:2エタンスルホン酸、イミノ二酢酸、ジメチルアルシン酸、ピペラジンNNビス、N2アミノエタンスルホン酸、コラミンクロリド、NNビス2アミノエタンスルホン酸、3プロパンスルホン酸、2トリスメチルアミノエタンスルホン酸、NピペラジンN、ピペラジンNNビス、Nトリスメチルグリシン、トリスメチルアミン、アセトアミドグリシン、NNビスグリシン、Nトリスメチル3アミノプロパンスルホン酸、3アミノ2ヒドロキシプロパンスルホン酸、32ヒドロキシ1プロパンスルホン酸又は31プロパンスルホン酸。39緩衝液が、電解質を含んでなる、138に記載の実施形態。40電解質が、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、塩化物イオン、水素ホスフェートイオン、炭酸水素塩イオン又はそのいかなる組み合わせを含んでなる、39に記載の実施形態。41緩衝液が、ノニオン性界面活性剤を含んでなる、140に記載の実施形態。42非イオンの界面活性剤が、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、ポロキサマー、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル、グルコシドアルキルエーテル、ドデカオキシエタノール、ポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテル、ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル、グリセロールアルキルエステル、ソルビタンアルキルエステル、ココアミドエタノールアミン、スクロースモノラウレート、ドデシルジメチルアミンオキシド、ナトリウムコール酸塩又はそのいかなる組み合わせである、41に記載の実施形態。43線形関数、シグモイド関数、対数関数又は指数関数によって導電率グラディエントが規定される、142に記載の実施形態。44方法がクローズドシステムとして実行される、請求項143に記載の方法。45カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:aカラムへタンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、約190mScmから約300mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、約340mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。46カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:aカラムへタンパク質を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによるタンパク質の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、少なくとも16mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、多くても57mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも25を含んでなる。47カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:aカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、約190mScmから約300mScmまでである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、約340mScmから約530mScmまでである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。48カラムから溶出液を収集する方法であって、該方法は次の工程を含んでなる:aカラムへ、第VIII因子を含んでなるサンプルを適用する工程、ここで、該適用はカラムによる第VIII因子の保持を生じさせる;bカラムに移動相を適用する工程、移動相は緩衝液を含んでなり、ここで、移動相の適用は約4mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する;c移動相について測定された導電率値が、少なくとも15mScmである場合に、溶出液収集を開始する工程;および、d移動相について測定された導電率値が、多くとも58mScmである場合に、溶出液収集を停止する工程;ここで、溶出液収集は、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも25を含んでなる。49カラムは充填層クロマトグラフィーカラム又は拡張層吸着クロマトグラフィーカラムである、4548に記載の実施形態。50充填層クロマトグラフィーカラムが、イオン交換クロマトグラフィーカラム、アフィニティークロマトグラフィーカラム、疎水性相互作用クロマトグラフィーカラム又は流動床クロマトグラフィーカラムである、49に記載の実施形態。51イオン交換クロマトグラフィーカラムが、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムである、50に記載の実施形態。52工程において、移動相が約8mScmから約90mScmまでの導電率グラディエントを設定する、51に記載の実施形態。53工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相については測定された供給口導電率値であり、及び、供給口導電率値が約250mScmから約270mScmまでである場合に、溶出液収集が開始する、請求項51に記載の実施形態。54工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相について測定された供給口の導電率値であり、及び、出口導電率値が約410mScmから約430mScmまでである場合、溶出液収集が停止する、51に記載の実施形態。55工程において、測定された導電率値は、カラムから出る移動相については測定された出口の導電率値であり、及び、出口導電率値が約190mScmから約210mScmまでである場合に、溶出液収集が開始する、51に記載の実施形態。56工程において、測定された導電率値は、カラムから出る移動相について測定された出口の導電率値であり、及び、出口導電率値が約345mScmから約365mScmまでである場合、溶出液収集が停止する、51に記載の実施形態。57工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相について測定された供給口導電率値であり、及び、供給口導電率値が少なくとも21mScmである場合に溶出液収集が開始する、51に記載の実施形態。58工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相について測定された供給口導電率値であり、及び、出口導電率値が多くとも47mScmである場合に溶出液収集が停止する、51に記載の実施形態。59工程において、測定された導電率値は、カラムから出る移動相について測定された出口導電率値であり、及び、出口導電率値が少なくとも15mScmである場合に溶出液収集が開始する、51に記載の方法。60工程において、測定された導電率値は、カラムから出る移動相について測定された出口導電率値であり、及び、出口導電率値が多くとも41mScmである場合に溶出液収集が停止する、51に記載の実施形態。61イオン交換クロマトグラフィーカラムが、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムである、請求項50に記載の実施形態。62工程において、移動相が約4mScmから約80mScmまでの導電率グラディエントを設定する、請求項61に記載の実施形態。63工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相については測定された供給口導電率値であり、及び、供給口導電率値が約278mScmから約298mScmまでである場合に、溶出液収集が開始する、62に記載の実施形態。64工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相について測定された供給口の導電率値であり、及び、出口導電率値が約510mScmから約530mScmまでである場合、溶出液収集が停止する、62に記載の実施形態。65工程において、測定された導電率値がカラムから出る移動相について測定された出口の導電率値であり、及び、出口導電率値が約210mScmから約230mScmまでである場合に溶出液収集が開始する、請求項62に記載の実施形態。66工程において、測定された導電率値は、カラムから出る移動相について測定された出口の導電率値であり、及び、出口導電率値が約455mScmから約475mScmまでである場合、溶出液収集が停止する、62に記載の実施形態。67工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相について測定された供給口導電率値であり、及び、供給口導電率値が少なくとも24mScmである場合に溶出液収集が開始する、62に記載の実施形態。68工程において、測定された導電率値は、カラムに入る移動相について測定された供給口導電率値であり、及び、出口導電率値が多くとも57mScmである場合に溶出液収集が停止する、62に記載の実施形態。69工程において、測定された導電率値は、カラムから出る移動相について測定された出口導電率値であり、及び、出口導電率値が少なくとも17mScmである場合に溶出液収集が開始する、62に記載の方法。70工程において、測定された導電率値は、カラムから出る移動相について測定された出口導電率値であり、及び、出口導電率値が多くとも52mScmである場合に溶出液収集が停止する、62に記載の実施形態。71タンパク質が、組換え型タンパク質である、請求項4570に記載の実施形態。72タンパク質が、生物体又は遺伝子組み換え生物からのタンパク質である、請求項4570に記載の実施形態。73タンパク質が、血液タンパク質である、71または72に記載の実施形態。74血液タンパク質が、血液凝固タンパク質である、73に記載の実施形態。75血液タンパク質が、ADAMTS13、α1抗プラスミン、α2抗プラスミン、抗トロンビン、抗トロンビンIII、癌前凝固剤、エリスロポエチン、第II因子、第V因子、第VI因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第X因子、第XI因子、第XII因子、第XIII因子、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ヘパリンコファクターII、高分子量のキニノーゲン、筋肉内免疫グロブリン、静脈内免疫グロブリン、プラスミノーゲン、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター1、プラスミノーゲンアクチベータインヒビター2、プレカリクレイン、プロテインC、プロテインS、タンパク質Z、プロタインZに関連するプロテアーゼインヒビター、組織因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ又はフォンビルブラント因子である、4951に記載の実施形態。764575に記載の実施形態であって、ここで、緩衝液は以下を含んでなる:2エタンスルホン酸、イミノ二酢酸、ジメチルアルシン酸、ピペラジンNNビス、N2アミノエタンスルホン酸、コラミンクロリド、NNビス2アミノエタンスルホン酸、3プロパンスルホン酸、2トリスメチルアミノエタンスルホン酸、NピペラジンN、ピペラジンNNビス、Nトリスメチルグリシン、トリスメチルアミン、アセトアミドグリシン、NNビスグリシン、Nトリスメチル3アミノプロパンスルホン酸、3アミノ2ヒドロキシプロパンスルホン酸、32ヒドロキシ1プロパンスルホン酸又は31プロパンスルホン酸。77緩衝液が、電解質を含んでなる、4576に記載の実施形態。78電解質が、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、塩化物イオン、水素ホスフェートイオン、炭酸水素塩イオン又はそのいかなる組み合わせを含んでなる、77に記載の実施形態。79緩衝液が界面活性剤を含んでなる、4578に記載の実施形態。80界面活性剤が、イオン性界面活性剤、双性イオン界面活性剤又は非イオン性界面活性剤である、79に記載の実施形態。81イオン性界面活性剤が、陰イオン界面活性剤又は陽イオン界面活性剤である、80に記載の実施形態。82陰イオン界面活性剤が、硫酸アルキル、アルキルエーテル硫酸塩、ドクセート、スルフォナートフッ素界面活性剤、アルキルベンゼンスルフォン酸塩、アルキルアリールエーテルホスフェート、アルキルエーテルリン酸エステル塩、アルキルカルボキシラート、ナトリウムラウロイルサルコシネート又はカルボキシラートフッ素界面活性剤である、81に記載の実施形態。83硫酸アルキルが、アンモニウムラウリル硫酸塩又はラウリル硫酸ナトリウムである、82に記載の実施形態。84アルキルエーテル硫酸塩が、ナトリウムラウレス硫酸塩又はナトリウムミレス硫酸塩である、82に記載の実施形態。85ドクセートが、ジオクチルソジウムスルホサクシネートである、82に記載の実施形態。86スルフォナートフッ素界面活性剤が、パーフルオロスルホナート又はパーフルオロブタンスルホナートである、82に記載の実施形態。87アルキルカルボキシラートが、脂肪酸塩又はステアリン酸ナトリウムである、82に記載の実施形態。88カルボキシラートフッ素界面活性剤が、パーフルオロナノアート及びパーフルオロオクタノアートである、82に記載の実施形態。89陽イオン界面活性剤が、アルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化セチルピリジウム、ポリエトキシル化牛脂アミン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、5ブロモ5ニトロ13ジオキサン、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロライド、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロマイド、pH依存性の1級アミン、pH依存性の2級アミン又はpH依存性の3級アミンである、81に記載の実施形態。90アルキルトリメチルアンモニウム塩が、セチルトリメチルアンモニウムブロマイド又はセチルトリメチルアンモニウムクロライドである、89に記載の実施形態。911級アミンがpH10で陽性に帯電されるようになるか、2級アミンが、pH4で帯電されるようになる、89に記載の実施形態。92陽イオン界面活性剤が、オクテニジン二塩化水素化物である、81に記載の実施形態。93両性イオン界面活性剤が、3ジメチルアンモニオ1プロパンスルホナート、サルタイン、ベタイン又はレシチンである、81に記載の実施形態。94サルタインがコカミドプロピルヒドロキシサルタインである、93に記載の実施形態。95ベタインがコカミドプロピルベタインである、93に記載の実施形態。96非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル、ポロキサマー、アルキルフェノールポリグリコールエーテル、ポリエチレングリコールアルキルアリールエーテル、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、2ドデカオキシエタノール、ポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテル、ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル、フェノキシポリエトキシルエタノール、グルコシドアルキルエーテル、マルトース配糖体アルキルエーテル、チオグリコシドアルキルエーテル、ジギトニン、グリセロールアルキルエステル、アルキルアリルポリエーテル硫酸塩、アルコールスルホン酸塩、ソルビタンアルキルエステル、ココアミドエタノールアミン、スクロースモノラウレート、ドデシルジメチルアミンオキシド又はナトリウムコラートである、81に記載の実施形態。97ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステルが、ポリソルベート20ソルビタンモノオレエート20、ポリソルベート40ソルビタンモノオレエート40、ポリソルベート60ソルビタンモノオレエート60、ポリソルベート61ソルビタンモノオレエート61、ポリソルベート65ソルビタンモノオレエート65、ポリソルベート80ソルビタンモノオレエート80、又はポリソルベート81ソルビタンモノオレエート81である、96に記載の実施形態。98ポロキサマーが、ポロキサマーL44、ポロキサマーL61、ポロキサマーL62、ポロキサマーL64、ポロキサマーF68、ポロキサマーF87、ポロキサマー338L108237188184182181124、又はポロキサマー407F127である、96に記載の実施形態。99ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテルが、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、BRIJ30又はBRIJ35である、96に記載の実施形態。100ポリオキシエチレンX45又はポリオキシエチレンX100である、96に記載の実施形態。101ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテルが、ノノキシノール9である、96に記載の実施形態。102フェノキシポリエトキシルエタノールが、ノニルフェノキシポリエトキシルエタノール又はオクチルフェノキシポリエトキシルエタノールである、96に記載の実施形態。103グルコシドアルキルエーテルが、オクチルグルコピラノシドである、96に記載の実施形態。104マルトース配糖体がドデシルマルトピラノシドである、96に記載の実施形態。105チオグリコシドアルキルエーテルがヘプチルチオグリコピラノシドである、96に記載の実施形態。106グリセロールアルキルエステルがグリセリルラウレートである、96に記載の実施形態。107ココアミドエタノールアミンがココアミドモノエタノールアミン又はココアミドジエタノールアミンである、96に記載の実施形態。108線形関数、シグモイド関数、対数関数又は指数関数によって導電率グラディエントが規定される、45107に記載の実施形態。109方法がクローズドシステムとして実行される、45108に記載の実施形態。110溶出液収集が、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも50を含んでなり、または、工程のカラムによって保持されたタンパク質の少なくとも75を含んでなる、45、46、又は49109に記載の実施形態。111カラムによって保持されたタンパク質が、量または活性によって測定される、111に記載の実施形態。112溶出液収集が、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも50を含んでなり、または、工程のカラムによって保持された第VIII因子の少なくとも75を含んでなる、47109に記載の実施形態。113陰イオン交換クロマトグラフィーカラムによって保持された第VIII因子が、量または活性によって測定される、112に記載の実施形態。114溶離液収集が単回の溶離として収集される、45113に記載の実施形態。115溶出液収集が、複数の溶出として収集される、45113に記載の実施形態。116実質的に本明細書に記載されるような、1115に記載の実施形態。117カラムから実質的に本明細書に記載されるように溶出液を収集する方法。080単に、現在思考された代表的な実施形態についてのより完全な理解を促進する説明目的のために、以下の非限定的例を提供する。これらの実施例はカラムから溶出液を収集する方法に関係するものを含む本明細書に記載されている実施形態のうちのいずれをも制限するためには解釈されるべきでない。実施例1陽イオン交換クロマトグラフィーカラムからの溶出081この実施例は、本明細書に開示した伝導性グラディエントを用いて、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムからのタンパク質を溶出することに対して本明細書に開示した方法を示す。082最初に、24の画分収集方法を用いる陽イオン交換クロマトグラフィーカラムからの第VIII因子の約250の溶出プロフィルの遡及的解析を行なった。この解析は、どの画分が所望される閾値量の第VIII因子を含むかを決定した。次に、開始し停止する伝導性値を特定するために、これらの溶出液画分を伝導性グラディエントモデルと比較した。083媒体を収集し細胞破片を除去するためにそれを遠心分離機にかけることにより、細胞培養培地へタンパク質を分泌するCHO細胞株によって製造された組み換えの第VIII因子を採取した。10°Cで、又は10°C以下に維持された冷たい部屋で、採取した上澄液を希釈し、02μmフィルタを通して濾過し、及び、固定されたα第VIII因子マウスモノクローナル抗体を含んでなる免疫アフィニティークロマトグラフィーカラムを通過させ、および、溶出液を収集することにより、第VIII因子を捕捉した。30S陽イオン交換樹脂を含んでなる陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを通して免疫アフィニティークロマトグラフィー溶出液を通すことにより、さらに第VIII因子を処理した。084カラムから第VIII因子を溶出するために、2つの緩衝液を含んでなる溶出溶液をインラインで混合し、一定の流速でカラムに通した。緩衝液SAは、20mMのMES、10mMのCaCl2x2H2O、01のポリソルベート80および70mMのNaClで構成され、低い電気導電率を有する。緩衝液SBは、20mMのMES、10mMのCaCl2x2H2O、01のポリソルベート80および1000mMのNaClで構成され、高い電気導電率を有する。両方の緩衝液は約635のpHがあった。2つのバルブを含んでなるミキシングシステム、一つは緩衝液SAを含む道管に接続され及び他方はSB緩衝液を含む道管に接続されたシステム、で混合を実施する。単一のポンプが必要な流速を達成するのに必要である。インラインの混合中に、同時に緩衝液SBの割合を増加する一方で、次第に緩衝液SAの割合を減少させることにより、線形の伝導性グラディエントを設定する。CITプローブを、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムの前方端部に配置し、伝導性のインライン測定に用いた。溶出溶液の導電率が供給口CITプローブによって約260±1mScmであることを検知したときに、溶出液収集を開始し、及び溶出溶液の導電率が約420±1mScmであることを検知したときに収集を停止した。代わりに、CITプローブを、陽イオン交換クロマトグラフィーカラムの後方端部に配置し、導電率のインライン測定に用いた。この場合、溶出溶液の導電率が出口CITプローブによって約200±1mScmであることを検知したときに、溶出液収集を開始し、及び溶出溶液の導電率が約355±1mScmであることを検知したときに収集を停止した。085培養の後に回収された第VIII因子活性の量を求めてアッセイするために、FVIII活性の色素のアッセイを実施した。濾過された溶媒洗剤に治療された溶液の分割量を、およそ25IUmLまでサンプル稀釈緩衝液80、pH67±02中で予め希釈し、及び、さらに、第VIII因子に消耗された血漿中で1IUmLまで希釈する。次に、第VIII因子が反応の律速の成分であることを保証するために、100μLのあらかじめ薄められたサンプルを、003MのCaCl2、006mMのリン脂質、03のμM第IX因子の100μL、1μM第X因子の100μL、および色素形成基質CH3OCODシクロヘキシルグリシルグリシルアルギニルpニトロアニリドの34μMの500μLと混合する。その混合物を37°Cで90秒間培養し、次に色素形成基質加水分解の速度を決定し、かつpニトロアニリンに放出するために、405nmでなされた分光光度計記録を採取した。得られた結果は、第VIII因子活性の少なくとも83が、ここに開示した方法を用いて溶出の後に回収されたことを示した。086培養の後に回収された第VIII因子活性の量を求めてアッセイするために、FVIII活性の1段階凝固アッセイを実施した。濾過された溶媒洗剤に治療された溶液の分割量を、およそ25IUmLまでサンプル稀釈緩衝液80、pH67±02中で予め希釈し、及び、さらに、第VIII因子に消耗された血漿中で1IUmLまで希釈する。次に、あらかじめ希釈したサンプル100μLを第VIII因子の不足した血漿100μLと混合する。その混合物を間37°Cで3分間培養し、そして、25mMのCaCl2の100μLを、凝集工程を開始するために添加する。APTT凝固時間値を凝固時間対抗血友病因子濃度の2倍の対数プロットを作る計算プログラムを実行する機器によって計算された標準曲線と比較することにより、存在する第VIII因子の量を決定する。凝固アッセイのための凝固分析器および適切な試薬は、生理的範囲における凝固パラメーターの活性を測定する様に設計してある。得られた結果は、第VIII因子活性の少なくとも83が、ここに開示した方法を用いて溶出の後に回収されたことを示した。087繰り返された陽イオン交換クロマトグラフィーカラム精製からの第VIII因子の、再現可能で一貫した溶出プロフィルを達成するために、溶出溶液および時間の固定体積を用いて導電率グラディエントを設定した。実施例2陰イオン交換クロマトグラフィーカラムからの溶出088この実施例は、本明細書に開示した導電率グラディエントを用いて、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムからタンパク質を溶出するために本明細書に開示した方法を示す。089最初に、24の画分収集方法を用いる陰イオン交換クロマトグラフィーカラムからの第VIII因子の約250の溶出プロフィルの遡及的解析を行なった。この解析は、どの画分が所望される閾値量の第VIII因子を含むかを決定した。次に、開始し停止する伝導性値を特定するために、これらの溶出液画分を伝導性グラディエントモデルと比較した。090媒体を収集し細胞破片を除去するためにそれを遠心分離機にかけることにより、細胞培養培地へタンパク質を分泌するCHO細胞株によって製造された組み換え第VIII因子を採取した。10°Cで、又は10°C以下に維持された冷たい部屋で、採取した上澄液を希釈し、02μmフィルタを通して濾過し、及び、固定されたα第VIII因子マウスモノクローナル抗体を含んでなる免疫アフィニティークロマトグラフィーカラムを通過させ、および、溶出液を収集することにより、第VIII因子を捕捉した。負に帯電したスルホネート基を含んでなる陽イオン交換クロマトグラフィーカラムを免疫アフィニティークロマトグラフィー溶出液を通すことにより、さらに第VIII因子を処理した。次に、この交換カラムからの収集された溶出液を、いかなる汚染する外膜ウィルスも不活性化するために、溶媒洗剤方法によって処理した。そして次に、溶媒洗剤で処理した溶出液は、02μmフィルタを通して濾過した。濾液を、MonoQ陰イオン交換樹脂を含んでなる陰イオン交換クロマトグラフィーカラムを通すことにより、第VIII因子をさらに処理した。091カラムから第VIII因子を溶出するために、2つの緩衝液を含んでなる溶出溶液をインラインで混合し、一定の流速でカラムに通した。緩衝液QAは、50mMのTris、5mMのCaCl2x2H2O、01のポリソルベート80で構成され、低い電気導電率を有する。緩衝液QBは、50mMのTris、5mMのCaCl2x2H2O、01のポリソルベート80および750mMのNaClで構成され、高い電気導電率を有する。両方の緩衝液は約67のpHがあった。2つのバルブを含んでなるミキシングシステム、一つは緩衝液QAを含む道管に接続され及び他方はQB緩衝液を含む道管に接続されたシステム、で混合を実施する。単一のポンプが必要な流速を達成するのに必要である。インラインの混合中に、同時に緩衝液QBの割合を増加する一方で、次第に緩衝液BAの割合を減少させることにより、線形の伝導性グラディエントを設定する。CITプローブを、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムの前方端部に配置し、伝導性のインライン測定に用いた。溶出溶液の導電率が供給口CITプローブによって約288±1mScmであることを検知したときに、溶出液収集を開始し、及び溶出溶液の導電率が約520±1mScmであることを検知したときに収集を停止した。代わりに、CITプローブを、陰イオン交換クロマトグラフィーカラムの後方端部に配置し、導電率のインライン測定に用いた。この場合、溶出溶液の導電率が出口CITプローブによって約220±1mScmであることを検知したときに、溶出液収集を開始し、及び溶出溶液の導電率が約465±1mScmであることを検知したときに収集を停止した。092溶出後に回収された第VIII因子活性の量を求めてアッセイするために、FVIII活性の色素のアッセイを、本質的に実施例1に記載したように実施した。得られた結果は、第VIII因子活性の少なくとも83が、ここに開示した方法を用いて溶出の後に回収されたことを示した。093溶出後に回収された第VIII因子活性の量を求めてアッセイをするために、FVIII活性の色素の1段階凝固アッセイを、本質的に実施例1に記載したように実施した。得られた結果は、第VIII因子活性の少なくとも83が、ここに開示した方法を用いて溶出の後に回収されたことを示した。094繰り返された陰イオン交換クロマトグラフィーカラム精製からの第VIII因子の、再現可能で一貫した溶出プロフィルを達成するために、溶出溶液および時間の固定体積を用いて導電率グラディエントを設定した。095終りにおいて、本明細書の側面が特別の実施形態の言及により強調されるが、当業者は容易に、これら開示した実施形態は、本明細書に開示した主題の原理の単なる例示であることを認識するであろうことを、理解されるべきである。したがって、開示された主題が、ここに記述された特別の方法、プロトコル及び又は試薬などに全く制限されいないことは理解されるに違いない。それゆえ、開示した主題の様々な修飾若しくは変更、又は、代替形態は、本明細書の精神から外れずに、教示に従ってここに為すことができる。最後に、ここに用いられる用語は、特別の実施形態のみについて記述するためにあり、本発明の範囲を制限するようには意図されない。本発明の範囲はもっぱら請求項によって規定される。従って、示され記述されるように、本発明は特別の実施形態に正確に制限されていない。096本発明のある実施形態は、発明を行なうことで本発明者に知られていた最良のモードを含んで、ここに記述される。もちろん、これらの記述された実施形態上の変化は、前述の説明を読むことの上の当業者に明白になるであろう。本発明者は、熟練した職人がそのような変化を適切なものとして採用することを予期する。そして、本発明者は、特別にここに記述されたより他に本発明が実行されるつもりである。従って、本発明は、準拠法によって許容されるようにここに添付された請求項で挙げられた主題の変形および均等物をすべて含む。さらに、もし、他の方法でここに指示されず、又は、文脈によって明白に否定されないならば、そのあらゆる変化での上記実施形態のいかなる組み合わせも、発明によって包含される。097本発明の他の実施態様、要素又はステップのグループ分けは、制限として解釈されるべきではない。各グループ構成は、個々に又はここに開示した他のグループ構成とのいかなる組み合わせ中で引用され及びクレームされてもよい。グループの一以上の構成が、便宜およびまたは特許性の理由で、グループに含まれるかもしれないか、削除されてもよいことは予想される。いかなるそのような包含又は削除も生じる場合、明細書は、添付された請求項中で用いられるすべてのマーカッシュグループの記述された説明を満たして、したがって変性されるようなグループを含むと認められる。098もし他の方法で指示されなかったならば、本明細書及び請求項中で用いられる特性、項目、量、パラメーター、特性、用語、などを示す数はすべて、用語約によって変性される全ての場合であることとして理解されるべきである。本明細書で使用されるように、用語約は、その様に規定された特徴、項目、量、パラメーター、特性又は用語は、明示された特性、項目、量、パラメーター、特性又は用語の値以上及び以下プラスまたはマイナス、10パーセントの範囲を包含することを意味する。従って、もしそれと反対に指示されなかったならば、明細書および添付請求項中で述べられた数のパラメーターは一様でないかもしれない近似である。少なくとも、及び請求項範囲への均等論の応用範囲を狭める試みとしてではなく、各数的表示は、少なくとも報告された有効数字の数に照らして、および通常の丸め技術の適用により解釈されるべきである。それにもかかわらず、発明の広い範囲を設定する数的な範囲および値は、近似であり、具体的な実施例において設定された数的な範囲および値は、できるだけ正確に報告される。しかしながら、いかなる数的な範囲又は値も、それぞれの試験測定で見出した標準偏差から必然的に起因するあるエラーを本質的に含んでいる。値の数的な範囲の詳説は、単に範囲以内にある個々の個別の数値を個々に言及する速記方法として役立つようにここに意図される。もし他の方法でここに指示されなかったならば、あたかもそれが個々にここに挙げられるかのように、数的な範囲の個々の値はそれぞれ本明細書へ組み込まれる。099用語aanthe及び、本発明について記述する文脈中で用いられる同様の冠詞は、もし文脈によってここに又は明白に否定されず、他の方法で指示されなかったならば、単数及び複数の両方をカバーするために解釈されるべきである。ここに記述された方法はすべて、もし、他の方法でここに指示されなかったならば、又は、明白に、文脈によって否定されなかったならば、いかなる適切な順に実行することができる。ここに提供される全ての実施例の使用、又は典型的な言語は、単によりよく本発明を明らかにするように意図され、他の方法でクレームされた発明の範囲に対する制限課さない。本明細書における言語は、発明のプラクティスにとって必須のいかなるクレームされていない要素の指示として解釈されるべきでない。0100ここに開示した特別の実施形態は、~を含んでなるまたは本質的に~からなるの文言を使用して、さらに請求項で制限されていてもよい。請求項中で用いられたときに、出願時か補正時に追加されたかどうかに拘わらず、推移用語~からなるは、請求項で特定されないいかなる要素、ステップ又は成分も除外する。推移用語~本質的になるは、請求項の範囲を、特定された材料又はステップ、および実質的に基本的で新規な特徴を冒さないものへ制限する。その様にクレームされた本発明の実施形態は本質的に又は明らかにここに記述され実施可能になる。0101本明細書中で引用され特定されたすべての特許、特許刊行物および他の出版物は、引用によりその内容全体が、例えば、本発明との関係において用いられるかもしれないその様な刊行物中に記載された組成物及び方法論を記述し及び開示する目的で、個々に及び明確に本明細書に組み込まれる。これらの刊行物は本出願の出願日に先立ってもっぱらそれらの開示に提供される。この点に関して、何も、先の発明による、又は他の理由でのそのような開示より以前に起こる、本発明者が資格がないという容認として解釈されるべきでない。日付に関するステートメント又はこれらの文書の内容に関する表現はすべて、出願人に利用可能な情報に基づいており、これらの文書の日付又は内容の正確さに関して容認を構成しない。