好ましくない細胞の死を誘発することおよび/または免疫反応を刺激することを意図する薬物を製造するために、PMLタンパク質および/またはPMLタンパク質の過剰な発現を誘発する薬品と組み合わせた、PMLタンパク質を核体に向けることおよび/またはその安定化を促進する物質、および/またはヒ素化合物と、ヒ素と同じ生物学的特性を有する化合物と、カスパーゼ阻害剤および/または基質とから選択される物質の、少なくとも1種類の物質の使用であって、前記物質の投与、および/またはPMLタンパク質および/またはPMLタンパク質の過剰な発現を誘発する前記薬品の投与が同時または逐次的である、前記使用。前記物質が三酸化ヒ素である、請求項1に記載の使用。前記物質がzVADである、請求項1に記載の使用。PMLタンパク質の過剰な発現を誘発する前記薬品が、インターフェロン、たとえば、α、β、またはγインターフェロンである、請求項1~3のいずれか一項に記載の使用。好ましくない細胞の死を誘発することおよび/または免疫反応を刺激することを意図する薬物を製造するためにインターフェロンと組み合わせた、ヒ素化合物と、ヒ素と同じ生物学的特性を有する化合物と、カスパーゼ阻害剤および/または基質とから選択される少なくとも1種類の物質の使用であって、前記物質の投与、およびインターフェロンの投与が同時または逐次的である、前記使用。好ましくない細胞を、ヒ素化合物と、ヒ素と同じ生物学的特性を有する化合物と、カスパーゼ阻害剤および/または基質とから選択される物質に接触させることを含む、好ましくない細胞の死を誘発するためのインビトロの方法であって、前記物質をPMLタンパク質および/またはPMLタンパク質の過剰な発現を誘発する薬品、好ましくはインターフェロンと組み合わせる、前記方法。1医薬として許容されるビヒクルの存在下で、少なくとも1種類のヒ素化合物またはヒ素と同じ生物学的特性を有する化合物、および/またはPMLタンパク質、および/またはPMLタンパク質の過剰な発現を誘発する少なくとも1種類の薬品、たとえば、インターフェロンと併用された、少なくとも1種類のカスパーゼ阻害剤および/または基質、または2医薬として許容されるビヒクルの存在下で、PMLタンパク質、および/またはPMLタンパク質の過剰な発現を誘発する少なくとも1種類の薬品、たとえば、インターフェロンと組み合わせた、少なくとも1種類のヒ素化合物またはヒ素と同じ生物学的特性を有する化合物、のいずれかを含有する医薬組成物。a1医薬として許容されるビヒクルと組み合わせた、少なくとも1種類のカスパーゼ阻害剤および/または基質を含有する医薬組成物、および/または2医薬として許容されるビヒクルと組み合わせた、少なくとも1種類のヒ素化合物またはヒ素と同じ生物学的特性を有する化合物を含有する医薬組成物、ならびにb3医薬として許容されるビヒクルと組み合わせたPMLタンパク質を含有する医薬組成物、および/または4医薬として許容されるビヒクルと組み合わせた、PMLタンパク質の過剰な発現を誘発する少なくとも1種類の薬品、たとえば、インターフェロンを含有する医薬組成物、を含むキットであって、前記医薬組成物が同時または逐次的に投与されることを意図している、前記キット。好ましくない細胞の死を誘発することおよび/または免疫反応を刺激することを意図する薬物を製造するための、PMLタンパク質を核体に向けることおよび/またはその安定化を促進する、ヒ素化合物以外の少なくとも1種類の物質の使用。好ましくない細胞の死を誘発することおよび/または免疫反応を刺激することを意図する薬物を製造するための、カスパーゼ阻害剤および/または基質から選択された少なくとも1種類の物質の使用。前記物質がzVADである、請求項10に記載の使用。材料および方法プラスミド構築物;マウスのメタロチオネインプロモーターのSacI-BglII断片-69、55塩基対をプラスミドpKSに挿入し、PMLcDNAのBglII-BamHI断片と融合してプラスミドpKSmMT-PMLとした。GFP-PMLの融合のため、同一のPML断片をベクターpEGFP-1ClontechのBglII部位に挿入した。またPMLを発現するレトロウィルスのベクターも、SRαtkneoMuller等、1991のEcoRI部位にPML用の完全長さのcDNAdeThe等、1991を挿入することにより構築した。細胞の培養REFTおよびMEFT細胞は、SV40T発現ベクターにより不死化したラットおよびマウスの胎児性繊維芽細胞である。REFK1細胞はRbを結合しないSV40T変異体により不死化され、F111細胞は自然に不死化した3T3ラットの繊維芽細胞である。クローン生成性試験のために、直径10cmの培養皿で細胞に10μgのSRαtkneo-PMLまたはSRαtkneoをトランスフェクトし、ネオマイシン500μg/mlにより選択した。誘導クローンを得るために、REFT細胞のプールにプラスミドpKSmMT-PMLおよびヒグロマイシン耐性ベクターDSP-Hygroを共トランスフェクトした。耐性コロニーをZnCl2150μMで4時間処理した後、PMLの発現を試験し、限界希釈によりクローニングの第二周期を受けさせた。誘導CHOクローンを同様の方法で構築した。単核細胞はEstaquier等1997の方法に従って調製した。エトポシド100μMで16~24時間用いたはBiomolResearchLaboratoriesから調達し、zVADベンジルオキシカルボニル-Val-Ala-Aspフルオロメチルケトン、250μg/mlで用いたはBachemから販売されており、またラットIFNαはAccessBioMedicalから販売されている。ヒトのαインターフェロンはSchering-Ploughにより提供された。ヒトのPMLタンパク質に対する抗体についてはDaniel等1993による記事の中に記載されている。ラットの内因性PMLタンパク質のウェスタンブロット実験は、ラットのPMLとヒトのPMLの両方を検出するモノクローナル抗体5E10により行なった。細胞死の評価細胞は、熱で不活性化したウシ胎児血清の存在下または不存在下で150μMZnCl2で2時間処理別に指定されない限りし、次いで細胞を洗浄し、ZnCl2を含まない培地でインキュベートした。TUNEL試験は、固定化のステップリン酸塩PBS緩衝液に溶かした4ホルムアルデヒドで10分間を除いては製造元の手引き書BoehringerMannheim、生体内原位置で細胞死を検出するためのキットに従って行なった。細胞DNAの含有量は4°CのRNアーゼA100μg/mlの存在下、ヨウ化プロピジウム50μg/ml中で10分間インキュベートすることにより求めた。細胞膜の外側シート上のホスファチジルセリンの発現分析は、アネキシン-V-フルオスによる標識化BoehringerMannheimおよびローダミン123分子プローブによるミトコンドリアの極性の喪失を用いて、製造元の手引き書に従って行なった。試料はFACScanアナライザーLysisIIソフトウェア、BectonDickinsonで分析した。カスパーゼの基質の開裂には、5×106個の細胞をPBS緩衝液で洗浄し、4°Cの溶解緩衝液10mMHEPESpH7.4、2mMEDTA、2mMDTT、CHAPS0.1200μl中で1時間インキュベートした。遠心分離した後、上澄み液20μlと、反応緩衝液100mMHEPESpH7.4、グリセロール2、5mMDTT、0.5mMEDTA、50μMDEVD-pNABiomolResearchLaboratories180μlとを混合し、37°Cで4時間インキュベートした後、405nmで吸光度を測定した。抗PARPポリクローナル抗体SA-252はBiomolResearchLaboratoriesにより販売されている。実施例1PMLはzVADと無関係に細胞死を誘発する:様々な繊維芽細胞系へのPML発現ベクターpSG5-PMLのトランスフェクションは、細胞増殖巣の形成を実質的に低下させた。PMLはPMLをトランスフェクトされた細胞から得られたクローン中には検出されないので、これらの結果はPMLが細胞周期または細胞の生存のいずれかに主要な阻害効果を発揮することを意味する。この効果の基礎を形成する機構を理解するために、SV40Tで形質転換したラットの胚の繊維芽細胞REFのプールにプラスミドpKSmMT-PMLをトランスフェクトした。そのPMLの発現はマウスのメタロチオネインプロモーターの制御下にある。続いて、得られた3つのREFTPMLクローンを試験し、一方空のベクターを持つ3つのREFTクローンを対照として試験した。PMLタンパク質はZnCl2に2時間暴露した後、ウェスタンブロット法により検出した発現は50μM以上のZnCl2から検出され、150μMのZnCl2で平衡状態を示す図1A。PMLの発現は、50μMのZnCl2に対する48時間から、150μMに対する6時間まで変化する反応速度を有する全細胞集団の同調した細胞死を誘発した。150μMのZnCl2による3時間の誘発の結果、3つのREFTPMLクローンには形態学的変化が観察された。細胞は細胞質の明らかな収縮により集まり図1B、TUNEL試験で陽性になり図1B、次いで皿から徐々に離れた。それにもかかわらず、これらはトリパンブルーを排除する能力を維持した。これらの変化は、適度のサブG1DNA含有量図1B、膜ホスファチジルセリンの外面化図1C、およびミトコンドリアのトランスメンブレンポテンシャルの低下図1Cと関連している。類似の変化は遺伝子毒性物質のエトポシドにより誘発されたアポトーシスに観察されたが、ZnCl2で処理した対照のREFT細胞には全く見られなかった図1BおよびC。エトポシドによる処理とは異なり、PMLにより誘発された細胞死は、細胞死の過程の後期でさえクロマチンの凝縮または核の断片化などのアポトーシスに特有な核の形態学的特徴とは関連がない。DNAの開裂陽性サブG1図1BおよびDNA粘度の低下にもかかわらず、PMLにより誘発された細胞死はインターヌクレオソームのDNA規模とは関連がなく、弱い正のTUNEL信号と一致する図1B。対照REFT細胞はSV40Tにより形質転換された細胞系であるので、PMLにより誘発された細胞死に対するSV40ウィルスの大型T癌遺伝子の寄与を排除するために幾つかの実験を行なった。最初に、PMLの発現はREFTPML細胞中のSV40Tの発現または位置決めに悪影響を及ぼさず、p53、またはSV40ウィルスの大型T癌遺伝子からのp53の放出物も分解させなかった。第二に、融合タンパク質GFP-PMLまたはGFP単独のいずれかを一時的にトランスフェクトされたHeLaまたはCHO細胞において、全てのGFP-PML陽性細胞は、対照のGFP陽性細胞とは異なり次第に皿から離れるようになり死ぬ。第三に、プラスミドpKSmMT-PMLを安定的にトランスフェクトされたCHO細胞において、ZnCl2による誘発はここで再びPMLタンパク質を発現するクローンの死に繋がった。最後に、熱に敏感なSV40T変異体を発現するREF細胞では、SV40Tの39.5°Cにおける分解はPMLにより引き起こされる細胞死に影響しなかった。細胞死の誘発は新たに転写を必要としてもよく、あるいは先在する経路の引金をひくことを考慮してもよい。REFTPML細胞を最初にZnCl2およびシクロヘキシミドと共に2時間インキュベートし、こうして翻訳ではなくPML用のmRNAの合成を可能にする。次いで細胞を洗浄し、mRNAの新合成ではなくPML用のmRNAの翻訳を可能にするために、単独のアクチノマイシンDと共にインキュベートした。この実験において阻害剤なしで細胞死が認められ、これは新たに転写を必要としないことを示している。PMLにより誘発される死は細胞周期のS期に向けて転位を必要とせず、また誘発しない。事実、PMLはアフィジコリンで処理することによりG1/S段階で阻止されてきたREFTPML細胞の死の常に引金になる。さらに、ZnCl2で誘発した後、BrdUに様々な回数暴露した結果、DNAの複製は2時間までは変更されなかったが3時間後に停止したこと、および細胞死は細胞周期の全ての期に存在したことが示された図1B。実施例2ヒ素はPMLにより引き起こされた細胞死を促進する:REFTPML細胞をZnCl2および106MAs2O3で処理した場合、細胞死と関連した形態学的変化が激しく加速されることが認められた。同様の方法でTUNEL試験により判定されるDNAの開裂を増大させたZnCl2単独の場合の45に対して、ZnCl2およびAs2O3で共処理した場合の陽性細胞は117、一方As2O3単独では基底水準に対して少しの増加も誘発しなかった。ヒ素が核体上のPMLの位置決めと同時に細胞死の誘発を増大させるという事実は、核体の近くにPMLを位置決めすることが細胞死にとって重要であることを示唆している。実施例3PMLにより引き起こされる死はカスパーゼの活性化とは関連がない:プログラム化された細胞死の実行は、核および細胞質のタンパク質の開裂によるアポトーシスの表現型変化を誘発するカスパーゼのタンパク質加水分解の活性化を伴うことが知られているSalvesen等、1997。エトポシドにより誘発されるアポトーシスを阻止するカスパーゼ阻害剤zVADは、PMLにより誘発される細胞死を阻害せず図1C、逆説的にそれを加速しさえする正のTUNEL信号はZnCl2単独では45に対して、zVADとZnCl2では71。これらの観察は、zVADに敏感な執行薬品はPMLにより誘発される細胞死にとって必要ではないことを意味する。さらに、CPP32カスパーゼ3すなわちアポトーシスに関わる最も重要なカスパーゼは、その基質の一つであるPARPポリADPリボースポリメラーゼが非開裂性のまま残るので、PMLにより誘発される細胞死の間ずっと活性化されないように見える図2A。エトポシドとは異なり、比色カスパーゼ基質、YVAD-pNaカスパーゼクラス1、BoehringerMannheim、およびDEVD-pNaカスパーゼクラス3、BoehringerMannheimはPMLによる誘発後、著しい開裂を検出することができなかった図2B。実施例4ヒ素およびzVADは、PMLおよびインターフェロンにより誘発される細胞死を増大させる:αインターフェロンに曝された一次単核細胞には段階的な細胞死がもたらされ、7日後に細胞培養物は完全に消滅した図3Aおよび3B。αインターフェロンと共にzVADを添加している間中、インターフェロン単独の場合に認められた核の断片化およびクロマチンの凝縮なしに細胞集団全体の死が24時間以内に認められた図3Aおよび3B。zVAD単独の場合、細胞死は20日間ほとんどの一次培養物8/11においてほとんどまたは全く認められなかった図3Aおよび3B。zVAD単独の場合、11のうち3つの培養物で7日後に一部の培養物の死を誘発したが、この結果は多分インターフェロンの内因性分泌を反映している。同様の結果はDEVDなどの他のカスパーゼ阻害剤でも得られた。下記の表は、TUNEL法により求めたIFNα1000U/mlと、106MのAs2O3またはzVADとで2日間処理したREFTPML細胞の細胞死を表す。REFT細胞において、αインターフェロンとzVAD、またはαインターフェロンとAs2O3のいずれかの間でかなりの相乗作用が見られた正のTUNEL信号はαインターフェロン単独では42、zVADおよびヒ素ではそれぞれ60および63。zVADはPMLの発現レベルを増大させ図4A、またヒ素はその核体との結合を増大させ、一方PMLの総量は低下した。zVADおよびヒ素の相乗作用と、PMLおよびインターフェロンにより引き起こされた細胞死との類似性は、PMLがインターフェロンにより誘発される細胞死に関わっていることを示唆している。さらにαインターフェロンは50μMZnCl2と同様の反応速度をもつ細胞死を誘発し、この2つは同様な量のPMLタンパク質を誘発した図4B。