"H27位がLにより占有されており、H29位がIにより占有されており、H30位がEにより占有されており、H94位がVにより占有されている、配列番号53に対して少なくとも90同一であるアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、L36位がYにより占有されており、L46位がPにより占有されている、配列番号60に対して少なくとも90同一である成熟軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体。配列番号53の3つのCDRと配列番号60の3つのCDRとを含む、請求項1記載のヒト化抗体。更にH76位がNにより占有されている、請求項1または2記載のヒト化抗体。配列番号53に対して少なくとも95同一であるアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号60に対して少なくとも95同一である成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項1~3のいずれか1項記載のヒト化抗体。該成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合しており、該成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、請求項1~4のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域が、天然ヒト定常領域と比較して低下した、Fcガンマ受容体への結合を示す、該天然ヒト定常領域の突然変異形態である、請求項1~5のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域がIgG1イソタイプのものである、請求項1~6のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域が、配列番号44を含むアミノ酸配列を有し、該軽鎖定常領域が、配列番号42を含むアミノ酸配列を有する、請求項1~5または7のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域が、配列番号46S239Cを含むアミノ酸配列を有し、該軽鎖定常領域が、配列番号42を含むアミノ酸配列を有する、請求項1~7のいずれか1項記載のヒト化抗体。それぞれ配列番号52および60からの、該成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域のCDRにおけるいずれかの相違が、H60~H65位に存在する、請求項1~9のいずれか1項記載のヒト化抗体。該成熟重鎖可変領域が、配列番号52または53で示されるアミノ酸配列を有し、該成熟軽鎖可変領域が、配列番号59または60で示されるアミノ酸配列を有する、請求項1~10のいずれか1項記載のヒト化抗体。該成熟重鎖可変領域が、配列番号53で示されるアミノ酸配列を有し、該成熟軽鎖可変領域が、配列番号60で示されるアミノ酸配列を有する、請求項1~11のいずれか1項記載のヒト化抗体。該抗体が細胞毒性または静細胞物質にコンジュゲート化されている、請求項1~12のいずれか1項記載のヒト化抗体。05~2×109M1の、ヒトまたはカニクイザルLIV1に対する会合定数を有する、請求項1~13のいずれか1項記載のヒト化抗体。H27位がLにより占有されており、H29位がIにより占有されており、H30位がEにより占有されており、H76位がNにより占有されており、H94位がVにより占有されている、配列番号52の3つのKabatカバトCDRを含む成熟重鎖可変領域と、L36位がYにより占有されており、L46位がPにより占有されている、配列番号60の3つのKabatカバトCDRを含む成熟軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体。請求項1~15のいずれか1項記載の成熟重鎖可変領域および/または成熟軽鎖可変領域をコードする核酸。癌または癌のリスクを有する患者の治療方法であって、請求項1~15のいずれか1項記載のヒト化抗体の有効形態を該患者に投与することを含む治療方法。該癌が乳癌、前立腺癌、子宮頸癌またはメラノーマである、請求項17記載の方法。請求項1~5のいずれか1項記載のヒト化抗体を含む医薬組成物。HB配列番号10に対して少なくとも90同一であるアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、LB配列番号5に対して少なくとも90同一である成熟軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体。HBに対して少なくとも95同一であるアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域と、LBに対して少なくとも95同一である成熟軽鎖可変領域とを含む、請求項20記載のヒト化抗体。H29、H30およびH76位がI、EおよびNにより占有されており、L36位がYにより占有されている、請求項20または21記載のヒト化抗体。配列番号10および該成熟重鎖可変領域の可変領域フレームワークにおけるいずれかの相違が、Fにより占有されているH27、Nにより占有されているH28、Iにより占有されているH48、Kにより占有されているH66、Aにより占有されているH67、Aにより占有されているH71、Nにより占有されているH76、Nにより占有されているH93、Vにより占有されているH94、Lにより占有されているL37、Kにより占有されているL39、Kにより占有されているL45、およびLにより占有されているL46からなる群から選択される、請求項20~22のいずれか1項記載のヒト化抗体。該成熟重鎖可変領域の3つのCDRが配列番号10のものであり、該成熟軽鎖可変領域の3つのCDRが配列番号15のものである、請求項20~23のいずれか1項記載のヒト化抗体。該成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合しており、該成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合している、請求項20~24のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域が、天然ヒト定常領域と比較して低下した、Fcガンマ受容体への結合を示す、該天然ヒト定常領域の突然変異形態である、請求項20~25のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域がIgG1イソタイプのものである、請求項20~26のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域が、配列番号6を含むアミノ酸配列を有し、該軽鎖定常領域が、配列番号4を含むアミノ酸配列を有する、請求項20~25または27のいずれか1項記載のヒト化抗体。該重鎖定常領域が、配列番号8S239Cを含むアミノ酸配列を有し、該軽鎖定常領域が、配列番号4を含むアミノ酸配列を有する、請求項20~26のいずれか1項記載のヒト化抗体。それぞれ配列番号10および15からの、該成熟重鎖可変領域および成熟軽鎖可変領域のCDRにおけるいずれかの相違が、H60~H65位に存在する、請求項20~29のいずれか1項記載のヒト化抗体。該成熟重鎖可変領域が、配列番号10を含むアミノ酸配列を有し、該成熟軽鎖可変領域が、配列番号15を含むアミノ酸配列を有する、請求項20~30のいずれか1項記載のヒト化抗体。該抗体が細胞毒性または静細胞物質にコンジュゲート化されている、請求項20~31のいずれか1項記載のヒト化抗体。H29、H30およびH76位がそれぞれI、EおよびNにより占有されている、配列番号10の3つのCDRを含む成熟重鎖可変領域と、L36位がYにより占有されている、配列番号15の3つのCDRを含む成熟軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体。抗体BR214aより大きな、ヒトLIV1に対するアフィニティを有する、請求項20~33のいずれか1項記載のヒト化抗体。05~2×109M1の、ヒトまたはカニクイザルLIV1に対する会合定数を有する、請求項20~33のいずれか1項記載のヒト化抗体。請求項20~35のいずれか1項記載の成熟重鎖可変領域および/または成熟軽鎖可変領域をコードする核酸。癌または癌のリスクを有する患者の治療方法であって、請求項20~35のいずれか1項記載のヒト化抗体の有効形態を該患者に投与することを含む治療方法。該癌が乳癌、前立腺癌、子宮頸癌またはメラノーマである、請求項37記載の方法。請求項1~38のいずれか1項記載のヒト化抗体を含む医薬組成物。三重陰性乳癌またはそのリスクを有する患者の治療方法であって、LIV1に特異的に結合する抗体の有効形態を該患者に投与することを含む治療方法。該抗体が細胞毒性または静細胞物質にコンジュゲート化されている、請求項20記載の方法。残基128が除去されうる配列番号85を含むアミノ酸配列を有する単離されたポリペプチドまたはそれをコードする核酸。定義モノクローナル抗体は、典型的には、単離された形態で提供される。このことは、抗体が、典型的には、阻害タンパク質およびその製造または精製に起因する他の混入物から少なくとも50ww純粋であることを意味し、該モノクローナル抗体が、その使用を促進するように意図された過剰の製薬上許容される担体または他のビヒクルと組合される可能性を除外するものではない。時には、モノクローナル抗体は、阻害タンパク質および製造または精製からの混入物から少なくとも60、70、80、90、95または99ww純粋である。モノクローナル抗体の、その標的抗原への特異的結合は、少なくとも106、107、108、109または1010M1のアフィニティを意味する。特異的結合は、大きさにおいて、より高く検出可能であり、少なくとも1つの無関連標的に対して生じた非特異的結合から区別されうる。特異的結合は特定の官能基の間の結合の形成または特定の空間的嵌合例えば、鍵鍵穴型の結果でありうる。一方、非特異的結合は、通常、ファンデルワールス力の結果である。しかし、特異的結合は、モノクローナル抗体が1つ及び唯一の標的に結合することを、必ずしも示唆するわけではない。基本的な抗体構造単位はサブユニットの四量体である。各四量体は、ポリペプチド鎖の、2つの同一ペアを含み、各ペアは1本の軽鎖約25kDaおよび1本の重鎖約50~70kDaを有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識をもたらす約100~110個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。この可変領域は、まず、切断可能なシグナルペプチドに連結された状態で発現される。該シグナルペプチドを伴わない可変領域は成熟可変領域と称されることもある。したがって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを伴わない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能をもたらす定常領域である。軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロンとして分類され、それぞれIgG、IgM、IgA、IgDおよびIgEとしての抗体のイソタイプを定める。軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は約12個またはそれ以上のアミノ酸のJ領域により連結され、重鎖は約10個またはそれ以上のアミノ酸のD領域をも含む全般的には、FundamentalImmunologyPaulW編2ndedRavenPressNY1989Ch7その全体を全ての目的で参照により本明細書に組み入れることとするを参照されたい。各軽鎖/重鎖ペアの成熟可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、完全抗体は2つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの2つの結合部位は同一である。それらの鎖は全て、相補性決定領域またはCDRとも称される3つの超可変領域により連結された比較的保存されたフレームワーク領域FRの、同じ一般的構造を示す。各ペアの2本の鎖からのCDRはフレームワーク領域により整列されて、特異的エピトープへの結合を可能にする。軽鎖および重鎖は共に、N末端からC末端へと順に、FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3およびFR4のドメインを含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、KabatSequencesofProteinsofImmunologicalInterestまたはChothiaLeskJMolBiol196901917ChothiaらNature342878883に従っている。Kabatはまた、広く用いられている番号づけ規則Kabat番号づけを記載しており、それにおいては、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応残基は同一番号が割り当てられる。抗体なる語は完全抗体およびその結合性フラグメントを含む。典型的には、抗体フラグメントは、それらが由来する完全抗体と、標的への特異的結合に関して競合し、分離した重鎖、軽鎖、Fab、Fab、F2、Fc、ジアボディ、Dab、ナノボディおよびFvを含む。フラグメントは、組換えDNA技術により、または完全免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的分離により製造されうる。抗体なる語はまた、ジアボディホモ二量体FvフラグメントまたはミニボディVLVHCH3、二重特異性抗体などを含む。二重特異性または二官能性抗体は、2つの異なる重鎖/軽鎖ペアおよび2つの異なる結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である例えば、SongsivilaiおよびLachmannClinExpImmunol79315321KostelnyらJImmunol148154753を参照されたい。抗体なる語は、抗体そのもの裸抗体、または細胞毒性もしくは静細胞薬にコンジュゲート化された抗体を含む。エピトープなる語は、抗体が結合する、抗原上の部位を意味する。エピトープは、連続的アミノ酸、または1以上のタンパク質の三次折り畳みにより並置した非連続的アミノ酸から形成されうる。連続的アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒にさらされても保持されるが、三次折り畳みにより形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理されると失われる。エピトープは、典型的には、少なくとも3個、より通常は、少なくとも5個または8~10個のアミノ酸を、特有の空間的コンホメーションで含む。エピトープの空間的コンホメーションを決定する方法は、例えば、X線結晶解析および二次元核磁気共鳴を含む。例えば、EpitopeMappingProtocolsMethodsinMolecularBiologyVol66GlennEMorris編を参照されたい。同一または重複エピトープを認識する抗体は、1つの抗体が標的抗原へのもう1つの抗体の結合と競合する能力を示す簡便なイムノアッセイにおいて特定されうる。抗体のエピトープは、対応抗原に結合した該抗体のX線結晶解析により接触残基を特定することにより定められうる。あるいは、2つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する、抗原内の全てのアミノ酸突然変異が、他方の結合を低減または排除する場合、同一エピトープを有する。2つの抗体は、一方の抗体の結合を低減または排除する幾つかのアミノ酸突然変異が他方の結合を低減または排除する場合、重複エピトープを有する。抗体間の競合は、試験中の抗体が共通抗原への参照抗体の特異的結合を抑制するアッセイにより決定される例えば、JunghansらCancerRes5014951990を参照されたい。過剰な試験抗体例えば、少なくとも2倍、5倍、10倍、20倍または10倍が参照抗体の結合を競合結合アッセイでの測定で少なとも50、好ましくは75、90または99抑制する場合、試験抗体は参照抗体と競合する。競合アッセイにより特定される抗体競合抗体には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、および参照抗体が結合するエピトープに立体障害発生に十分な程度に接近している隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。患者なる語は、予防的または治療的治療を受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を含む。アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的においては、アミノ酸は以下のとおりに分類される:グループI疎水性側鎖metalavalleuileグループII中性親水性側鎖cysserthrグループIII酸性側鎖aspgluグループIV塩基性側鎖asnglnhislysargグループV鎖配向に影響を及ぼす残基glyproおよびグループVI芳香族側鎖trptyrphe。保存的置換は同じクラスのアミノ酸の間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスの1つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することである。配列同一性は、Kabat番号づけ規則により最大限度にアライメントされた抗体配列に関して決定される。アライメント後、対象抗体領域例えば、重鎖または軽鎖の全成熟可変領域が参照抗体の同じ領域と比較されている場合、該対象抗体領域と参照抗体領域との間の配列同一性は、該対象および参照抗体領域の両方において同一アミノ酸により占有されている位置の数を、それらの2つの領域のアライメント位置の総数ギャップは計数されないで割り算し、それに100を掛けて百分率に変換したものである。1以上の列挙要素を含む組成物または方法は、具体的に列挙されていない他の要素を含みうる。例えば、抗体を含む組成物は、該抗体のみ、またはそれと組合される他の成分を含有しうる。ある範囲の値の表示は、該範囲内の又は該範囲を定める全ての整数を含む。抗体エフェクター機能は、IgのFcドメインによりもたらされる機能を意味する。そのような機能は、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害、抗体依存性細胞性食作用または補体依存性細胞傷害を含みうる。そのような機能は、例えば、食作用または細胞溶解活性を有する免疫細胞上のFc受容体へのFcエフェクタードメインの結合により、あるいは補体系の成分へのFcエフェクタードメインの結合によりもたらされうる。典型的には、該Fc結合細胞または補体成分によりもたらされる効果はLIV1標的化細胞の抑制および/または喪失を引き起こす。抗体のFc領域は受容体FcR発現細胞を呼び寄せ、それらを抗体被覆標的細胞と並置させる。FcγRIIICD16、FcγRIICD32およびFcγRIIICD64を含むIgGに対する表面FcRを発現する細胞は、IgG被覆細胞の破壊のためのエフェクター細胞として作用しうる。そのようなエフェクター細胞には、単球、マクロファージ、ナチュラルキラーNK細胞、好中球および好酸球が含まれる。IgGによるFcγRの関与は抗体依存性細胞性細胞傷害ADCCまたは抗体依存性細胞性食作用ADCPを活性化する。ADCCは、膜孔形成性タンパク質およびプロテアーゼの分泌を介して、CD16エフェクター細胞により引き起こされ、一方、食作用はCD32およびCD64エフェクター細胞により引き起こされるFundamentalImmunology4thedPaul編LippincottRavenNY1997Chapters317および30Uchidaら2004JExpMed199165969Akewanlopら2001CancerRes61406165Watanabeら1999BreastCancerResTreat53199207を参照されたい。ADCCおよびADCPに加えて、細胞結合抗体のFc領域は補体古典的経路をも活性化して、補体依存性細胞傷害CDCを惹起しうる。補体系のC1qは、抗体のFc領域に、それらが抗原と複合体を形成すると、結合する。細胞結合抗体へのC1qの結合は、C3コンベルターゼを産生させるC4およびC2のタンパク質分解活性化を含む事象のカスケードを始動しうる。C3コンベルターゼによるC3からC3bへの切断は、C5b、C6、C7、C8およびC9を含む末端補体成分の活性化を可能にする。総合すると、これらのタンパク質は抗体被覆細胞上に膜攻撃複合体孔を形成する。これらの孔は細胞膜の完全性を損なって、標的細胞を殺すImmunobiology6thedJanewayらGarlandScienceNY2005Chapter2を参照されたい。抗体依存性細胞性細胞傷害またはADCCなる語は、細胞溶解活性を有する免疫細胞エフェクター細胞とも称されるとの抗体被覆標的細胞の相互作用に依存する細胞死を誘導するためのメカニズムである。そのようなエフェクター細胞には、ナチュラルキラー細胞、単球/マクロファージおよび好中球が含まれる。該エフェクター細胞は、抗原結合部位を介して標的細胞に結合したIgのFcエフェクタードメインに結合する。エフェクター細胞活性の結果として、抗体被覆標的細胞の死が生じる。抗体依存性細胞性食作用またはADCPなる語は、IgのFcエフェクタードメインに結合する食作用免疫細胞例えば、マクロファージ、好中球および樹状細胞により抗体被覆細胞が全体的または部分的にインターナリゼーションされる過程を意味する。補体依存性細胞傷害またはCDCなる語は、最終的に標的細胞膜に孔を形成する一連の酵素反応を標的結合抗体のFcエフェクタードメインが活性化する、細胞死を誘導するためのメカニズムを意味する。典型的には、抗原抗体複合体例えば、抗体被覆標的細胞上のものが補体成分C1qに結合し、それを活性化し、今度はそれが補体カスケードを活性化して、標的細胞死を招く。補体の活性化は、白血球上の補体受容体例えば、CR3への結合によりADCCを促進する、標的細胞表面上の補体成分の沈着をも引き起こしうる。細胞毒性細胞傷害効果は標的細胞の減少、排除および/または殺傷を意味する。細胞毒性物質は、細胞に細胞毒性効果をもたらす物質を意味する。細胞毒性物質は抗体にコンジュゲート化されることが可能であり、あるいは抗体と共に投与されることが可能である。静細胞効果は細胞増殖の抑制を意味する。静細胞物質は、細胞に静細胞効果をもたらして細胞の特異的サブセットの成長および/または増殖を抑制する物質を意味する。静細胞物質は抗体にコンジュゲート化されることが可能であり、あるいは抗体と共に投与されることが可能である。製薬上許容されるなる語は、動物、より詳しくはヒトにおける使用に関して、連邦政府または州政府の規制機関により承認されている又は承認されうること、あるいは米国薬局方または他の一般的に認識されている薬局方に収載されていることを意味する。製薬上許容される成分なる語は、抗LIV1抗体と共に使用される製薬上許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを意味する。製薬上許容される塩なる語は、抗LIV1抗体もしくはそのコンジュゲートまたは抗LIV1抗体と共に投与される物質の製薬上許容される有機または無機塩を意味する。典型的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸ホスファート、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸塩、酸シトラート、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、二酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、pトルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩すなわち、1,1’メチレンビスが含まれる。製薬上許容される塩は、アセタートイオン、スクシナートイオンまたは他の対イオンのような別の分子の包含を含みうる。該対イオンは、該親化合物上の電荷を安定化するいずれかの有機または無機部分でありうる。更に、製薬上許容される塩はその構造内に2以上の荷電原子を有しうる。複数の荷電原子が、製薬上許容される塩の一部である例は、複数の対イオンを有しうる。したがって、製薬上許容される塩は1以上の荷電原子および/または1以上の対イオンを有しうる。そうでないことが文脈から明らかでない限り、約なる語は、示されている値の標準偏差内の値を含む。詳細な説明I.概括本発明は、LIV1に特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。該抗体は種々の癌の治療および診断ならびにLIV1の検出に有用である。II.標的分子特に示されていない限り、LIV1はヒトLIV1を意味する。典型的なヒト配列にはSwissProtアクセッション番号Q13433が割り当てられている。Q13433は本明細書中には配列番号83として含まれる。3つの変異体アイソフォームおよび1つの多形が公知である。ヒトLIV1タンパク質の第2の形態であるアクセッション番号AAA962582は本明細書中には配列番号84として含まれる。4つの細胞外ドメインは、Q13433のそれぞれ残基29325、377423、679686および746755により、境界が定められる。そうでないことが文脈から明らかでない限り、LIV1に対する言及は該タンパク質の少なくとも細胞外ドメインを、そして通常は、切断可能なシグナルペプチドQ13433のアミノ酸128以外の完全なタンパク質を意味する。III.本発明の抗体A.結合特異性および機能特性本発明は、2つのマウス抗体BR214aおよびBR222aから誘導されたヒト化抗体を提供する。特に示されていない限り、本開示は両方の抗体に関するものである。それらの2つのマウス抗体は、成熟重鎖および軽鎖可変領域において、お互いに対して94および91の配列同一性を示す。それらの2つの抗体はヒトLIV1上の同一または重複エピトープに結合する。しかし、図22に示されているとおり、BR222a抗体は、BR214aより、ヒトLIV1に対する約10倍高いアフィニティ、およびカニクイザルLIV1に対する約3倍高いアフィニティを有する。マウスBR214a抗体のヒト化形態のアフィニティすなわち、Kaは、好ましくは、ヒトLIV1に対するマウス抗体BR214aの場合の5倍5のファクターまたは2倍2のファクター以内である。ヒト化BR214a抗体は、それが由来するマウス抗体と同様、天然形態のおよび/またはCHO細胞から組換え発現されたヒトLIV1に特異的に結合する。好ましいヒト化BR214a抗体は、ヒトLIV1に対するBR214aの場合と同じ又はそれより大きなすなわち、測定誤差の範囲を超えて、より大きな例えば、BR214aのアフィニティの11~5倍、11~3倍、15~3倍、17~23倍または17~21倍、あるいは約2倍のアフィニティを有する。好ましいヒト化BR214a抗体は同じエピトープに結合し、および/またはヒトLIV1への結合に関してBR214aと競合する。好ましいヒト化BR214a抗体はまた、LIV1のシノホモログに結合して、非ヒト霊長類における前臨床試験を可能にする。天然で発現された又はCHO細胞から発現されたヒトLIV1に対するマウスBR222a抗体のヒト化形態のアフィニティすなわち、Kaは、好ましくは、マウス抗体BR222の場合の5倍5のファクターまたは2倍2のファクター以内である。幾つかのヒト化BR222a抗体は、BR222aの場合と実質的に同じすなわち、実験誤差内の会合定数を有する。幾つかのヒト化BR222a抗体はBR222a抗体の会合定数の05~1または05~15倍の範囲内の会合定数を有する。好ましいヒト化BR222a抗体は、5×108M1より大きな、または05~2×109M1の範囲、または約08×109M1測定誤差の、CHO細胞から発現されたヒトLIV1に対する会合定数を有する。この場合、本出願のどこかに記載されているとおり、アフィニティは実施例の方法に従い測定されうる。好ましいヒト化BR222a抗体は同じエピトープに結合し、および/またはヒトLIV1への結合に関してBR222aと競合する。ヒトBR222a抗体は、ヒトLIV1だけでなくLIV1のシノホモログにも結合する。好ましいヒト化BR222a抗体は、共にCHO細胞から発現されたヒトおよびカニクイザルLIV1に、実験誤差内の実質的に同じ会合定数で結合して、非ヒト霊長類における臨床試験を可能にし、該試験の予測精度を高める。培養内で増殖する癌性細胞、動物モデルまたは臨床治験において示されるとおり、好ましい抗体ヒト化BR214aおよびヒト化BR222aの両方は癌例えば、細胞の成長、転移および/または生物の致死性を抑制する。動物モデルは、LIV1発現ヒト腫瘍細胞系を適当な免疫欠損げっ歯類系統例えば、無胸腺ヌードマウスまたはSCIDマウス内に移植することにより作製されうる。これらの腫瘍細胞系は、皮下注射により充実性腫瘍として、または静脈内注射により散在性腫瘍として、免疫欠損げっ歯類宿主内で樹立されうる。宿主内で樹立されると、これらの腫瘍モデルは、実施例に記載されているとおり、抗LIV1抗体またはそのコンジュゲート化形態の治療効力を評価するために適用されうる。B.ヒト化抗体ヒト化抗体は、非ヒトドナー抗体からのCDRがヒトアクセプター抗体配列内にグラフティングされている、遺伝的に操作された抗体である例えば、QueenUS5530101および5585089WinterUS5225539CarterUS6407213AdairUS5859205ならびにFooteUS6881557を参照されたい。該アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、そのような配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列でありうる。重鎖の場合には、好ましいアクセプター配列は、生殖系列VHエキソンVH12該文献においてはHV12とも称されるShinら1991EMBOJ1036413645、そしてヒンジ領域JHの場合にはエキソンJH6Mattilaら1995EurJImmunol2525782582である。軽鎖の場合には、好ましいアクセプター配列はエキソンVK230該文献においてはKV230とも称される、そしてヒンジ領域の場合にはエキソンJκ4Hieterら1982JBiolChem25715161522である。したがって、ヒト化抗体は、ドナー抗体に完全または実質的に由来する一部または全部のCDRと、ヒト抗体配列に完全または実質的に由来する可変領域フレームワーク配列および定常領域存在する場合とを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、ドナー抗体重鎖に完全または実質的に由来する少なくとも1個、2個、および通常は全3個のCDRと、ヒト重鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列に実質的に由来する重鎖可変領域フレームワーク配列および重鎖定常領域存在する場合とを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、ドナー抗体軽鎖に完全または実質的に由来する少なくとも1個、2個、および通常は全3個のCDRと、ヒト軽鎖可変領域フレームワークおよび定常領域配列に実質的に由来する軽鎖可変領域フレームワーク配列および軽鎖定常領域存在する場合とを有する。ナノボディおよびdAbとは異なり、ヒト化抗体はヒト化重鎖およびヒト化軽鎖を含む。ヒト化抗体におけるCDRが非ヒト抗体における対応CDRに実質的に由来すると言えるのは、Kabatにより定められた場合に対応残基の少なくとも60、85、90、95または100がそれぞれのCDR間で同一である場合である。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域がそれぞれヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に実質的に由来すると言えるのは、Kabatにより定められた場合に対応残基の少なくとも85、90、95または100が同一である場合である。ヒト化抗体は、しばしば、マウス抗体に由来する全6個のCDR好ましくはKabatにより定められた場合を含むが、それらは、全CDRより少数例えば、少なくとも3個、4個または5個がマウス抗体由来であることも可能である例えば、PascalisらJImmunol16930762002VajdosらJournalofMolecularBiology3204154282002IwahashiらMolImmunol36107910911999Tamuraら,JournalofImmunology164143214412000。ヒト可変領域フレームワーク残基からの或るアミノ酸は、CDRコンホメーションおよび/または抗原への結合に対するそれらの考えられうる影響に基づいて、置換のために選択されうる。そのような考えられうる影響の考察は、モデル化、特定の位置におけるアミノ酸の特徴の精査、または特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の効果の実験的観察による。例えば、マウス可変領域フレームワーク残基と、選択されたヒト可変領域フレームワーク残基との間でアミノ酸が異なる場合、該アミノ酸が、1抗原に直接的に非共有結合する、2CDR領域に隣接している、3以下の置換をしなければ、CDR領域と相互作用する例えば、CDR領域から約6オングストローム以内である、または4重鎖と軽鎖との間の相互作用を引き起こす、と合理的に予想される場合には、該ヒトフレームワークアミノ酸はマウス抗体からの同等なフレームワークアミノ酸により置換されうる。本発明は、5個の例示されたヒト化重鎖成熟可変領域HA~HEと6個の例示されたヒト化軽鎖成熟可変領域LA~LFとを含む、マウスBR214a抗体のヒト化形態を提供する。最強の結合最低のEC50を示すこれらの鎖の順列はHBLB、HBLF、HCLB、HCLF、HDLB、HDLF、HELEおよびHELFである。これらの順列のうち、HBLBhLIV14としても公知であるが好ましい。なぜなら、それはマウスドナー抗体より約2倍強力な最強の結合を示し、最少の復帰突然変異4個を有するからである。本発明は、ヒト化重鎖成熟可変領域が配列番号10に対して少なくとも90、95または99の同一性を示し、ヒト化軽鎖成熟可変領域が配列番号15に対して少なくとも90、95または99の配列同一性を示す、HBLBヒト化抗体の変異体を提供する。好ましくは、そのような抗体においては、HBLBにおける復帰突然変異の一部または全部が保有される。換言すれば、重鎖のH29、H30およびH76位の少なくとも1個、2個または好ましくは全3個がそれぞれIおよびEおよびNにより占有されている。同様に、L36位は、好ましくは、Yにより占有されている。そのようなヒト化抗体のCDR領域は、好ましくは、マウスドナー抗体のものと同じであるHBLBのCDR領域と実質的に同一である。該CDR領域はいずれかの通常の定義例えば、Chothiaにより定められうるが、好ましくは、Kabatにより定められる。1つの実施形態においては、該ヒト化抗体は、配列番号10の3個のCDRと、配列番号10の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む重鎖を含む。もう1つの実施形態においては、該ヒト化抗体は、配列番号15の3個のCDRと、配列番号15の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む含む軽鎖を含む。もう1つの実施形態においては、該ヒト化抗体は、配列番号10の3個のCDRと、配列番号10の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む重鎖、および配列番号15の3個のCDRと、配列番号15の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む軽鎖を含む。ヒト化抗体が、例示されているHBLBヒト化抗体からのいずれかの変異を示す場合、そのような追加的変異の可能性の1つは可変領域フレームワークにおける追加的な復帰突然変異である。他の例示されているヒト化重鎖または軽鎖成熟可変領域における復帰突然変異した位置のいずれか又は全てにおいても生じうるすなわち、重鎖におけるFにより占有されるH27、Nにより占有されるH28、Iにより占有されるH48、Kにより占有されるH66、Aにより占有されるH67、Aにより占有されるH71、Nにより占有されるH76、Nにより占有されるH93およびVにより占有されるH94の1、2、3、4、5、6、7、8または全9個、ならびに軽鎖におけるLにより占有されるL37、Kにより占有されるL39、Kにより占有されるL45およびLにより占有されるL46の1、2、3、4または全5個。しかし、そのような追加的な復帰突然変異は好ましくない。なぜなら、それらは、一般に、アフィニティを改善せず、より多数のマウス残基の導入は免疫原性のリスクの増大を招きうるからである。本発明は、適当な結合により種々の順列で組合されうる図21を参照されたい、3個の例示されたヒト化重鎖成熟可変領域HE、HFおよびHGと2個の例示されたヒト化軽鎖LFおよびLGとを含む、マウスBR222a抗体のヒト化形態を提供する。これらの順列のうち、HGLGhLIV22としても公知であるが好ましい。なぜなら、それは結合特性実験誤差内でマウスBR222a抗体と実質的に同じと最少の復帰突然変異7個との最良の組合せを有するからである。本発明は、ヒト化重鎖成熟可変領域が配列番号53に対して少なくとも90、95、98または99の同一性を示し、ヒト化軽鎖成熟可変領域が配列番号60に対して少なくとも90、95、98または99の配列同一性を示す、HGLGヒト化抗体の変異体を提供する。好ましくは、そのような抗体においては、HGLGにおける復帰突然変異の一部または全部が保有される。換言すれば、重鎖のH27、H29、H30、H76およびH94位の少なくとも1、2、3、4または好ましくは全5個がL、I、E、NおよびVにより占有されているこの場合、本出願のどこかに記載されているとおり、成熟可変重鎖および軽鎖可変領域における位置を示すためにKabatの番号付けが用いられる。これらの復帰突然変異のうち、H94が結合アフィニティの保持に最も寄与し、H76が最小の寄与を示す。同様に、L36およびL46位は、好ましくは、それぞれYおよびPにより占有されている。そのようなヒト化抗体のCDR領域は、好ましくは、マウスドナー抗体のものと同じであるHGLGのCDR領域と実質的に同一である。該CDR領域はいずれかの通常の定義例えば、Chothiaにより定められうるが、好ましくは、Kabatにより定められる。1つの実施形態においては、該ヒト化抗体は、配列番号53の3個のCDRと、配列番号53の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む重鎖を含む。もう1つの実施形態においては、該ヒト化抗体は、配列番号60の3個のCDRと、配列番号60の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む含む軽鎖を含む。もう1つの実施形態においては、該ヒト化抗体は、配列番号53の3個のCDRと、配列番号53の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む重鎖、および配列番号60の3個のCDRと、配列番号60の可変領域フレームワークに対して少なくとも95の同一性を有する可変領域フレームワークとを含む軽鎖を含む。ヒト化BR222a抗体が、例示されているHGLGヒト化抗体からのいずれかの変異を示す場合、そのような追加的変異の可能性の1つは可変領域フレームワークにおける追加的な復帰突然変異である。他の例示されているヒト化重鎖または軽鎖成熟可変領域における復帰突然変異した位置のいずれか又は全てにおいても生じうるすなわち、重鎖におけるNにより占有されるH28、Iにより占有されるH48、Kにより占有されるH66、Aにより占有されるH67、Aにより占有されるH71、Tにより占有されるH93の1、2、3、4、5または全6個、ならびに軽鎖におけるLにより占有されるL37およびKにより占有されるL45の1または2個。しかし、そのような追加的な復帰突然変異は好ましくない。なぜなら、それらは、一般に、アフィニティを改善せず、より多数のマウス残基の導入は免疫原性のリスクの増大を招きうるからである。もう1つの考えられうる変異は、マウス抗体のCDR内の或る残基が、ヒトCDR配列からの、典型的には、例示されているヒト化抗体の設計において使用されているヒトアクセプター配列のCDRからの対応残基で置換されることである。幾つかの抗体においては、CDRの一部だけ、すなわち、結合に要求されるCDR残基のサブセットSDRと称されるだけが、ヒト化抗体における結合を保持するのに必要とされる。抗原に接触しない及びSDR内に存在しないCDR残基は、従来の研究に基づいて例えば、CDRH12内の残基H60H65は要求されないことが多い、Chothia超可変ループの外部に位置するKabatCDRの領域からChothiaJMolBiol1969011987、分子モデリングおよび/または実験的に、あるいはGonzalesらMolImmunol41863に記載されているとおりに特定されうる。そのようなヒト化抗体においては、1以上のドナーCDR残基が存在しない又は全ドナーCDRが省略されている位置において、該位置を占有するアミノ酸は、アクセプター抗体配列におけるKabatの番号づけによる対応位置を占有するアミノ酸でありうる。含められるべきCDR内のドナーアミノ酸に対するアクセプターのそのような置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映している。そのような置換は、ヒト化抗体内のマウスアミノ酸の数を減少させるのに、そして結果的に潜在的な免疫原性を低下させるのに潜在的に有利である。しかし、置換はアフィニティの変化をも引き起すことがあり、アフィニテイにおける有意な低下は好ましくは回避される。もう1つの変異においては、ヒト化BR222a抗体のCDR内の1以上の残基これらは、そうでなければ、マウスBR222a抗体のCDRと同じであろうはマウスBR214a抗体からのCDRからの対応残基により置換されうるまたは逆も成り立つ。また、CDR内の置換のための位置および置換すべきアミノ酸は実験的に選択されうる。好ましいわけではないが、例えば、CDRと接触しないフレームワーク残基において、または更にはCDR内の幾つかの潜在的CDR接触残基アミノ酸において、他のアミノ酸置換が施されうる。しばしば、変異体ヒト化配列内に施される置換は、置換されるHBLBアミノ酸ヒト化BR214aの場合またはHGLGアミノ酸ヒト化BR222の場合に対して保存的である。好ましくは、HBLBまたはHGLGに対する置換はそれが保存的であるかどうかにかかわらず、ヒト化mAbの結合アフィニティまたは効力、すなわち、ヒトLIV1に結合し癌細胞の成長を抑制するその能力に実質的な影響を及ぼさない。変異体は、典型的には、HBLBhLIV14またはHGLGhLIV22の重鎖および軽鎖成熟可変領域配列とは少数例えば、典型的には、軽鎖または重鎖成熟可変領域のいずれか又は両方において1、2、3、5または10個以下の置換、欠失または挿入において異なる。C.定常領域の選択ヒト化抗体の重鎖および軽鎖可変領域はヒト定常領域の少なくとも一部に連結されうる。定常領域の選択は、1つには、抗体依存性細胞性細胞傷害、抗体依存性細胞性食作用および/または補体依存性細胞傷害のいずれが望まれるのかに左右される。例えば、ヒトイソタイプIgG1およびIgG3は強力な補体依存性細胞傷害を示し、ヒトイソタイプIgG2は弱い補体依存性細胞傷害を示し、ヒトIgG4は補体依存性細胞傷害を欠いている。ヒトIgG1およびIgG3はまた、ヒトIgG2およびIgG4より強力な細胞性エフェクター機能を誘導する。軽鎖定常領域はラムダまたはカッパでありうる。抗体は、2本の軽鎖と2本の重鎖とを含有する四量体として、または分離した重鎖、軽鎖として、またはFab、Fab、F2およびFvとして、または重鎖および軽鎖可変ドメインがスペーサーを介して連結されている一本鎖抗体として発現されうる。ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ変異およびイソアロタイプ変異を示す。すなわち、定常領域は、異なる個体間で、1以上の多形位置において異なりうる。イソアロタイプを認識する血清は1以上の他のイソタイプの非多形領域に結合する点で、イソアロタイプはアロタイプとは異なる。軽鎖および/または重鎖のアミノまたはカルボキシ末端における1つ又は幾つかのアミノ酸例えば、重鎖のC末端リシンは、該分子の一部または全部において、欠失している又は誘導体化されていることが可能である。補体媒介性細胞傷害またはADCCのようなエフェクター機能を低減または増強するために例えば、Winterら米国特許第5624821号Tsoら米国特許第5834597号およびLazarらProcNatlAcadSciUSA10340052006を参照されたい、あるいはヒトにおける半減期を延長させるために例えば、HintonらJBiolChem27962132004を参照されたい、定常領域内に置換が施されうる。典型的な置換には、天然アミノ酸からシステイン残基へのアミノ酸置換が含まれ、これは、アミノ酸位置234、235、237、239、267、298、299、326、330または332位に導入され、好ましくは、ヒトIgG1イソタイプにおけるS239C突然変異US20100158909である。追加的なシステイン残基の存在は鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。そのような鎖間ジスルフィド結合形成は立体障害を引き起こし、それにより、Fc領域FcγR結合相互作用のアフィニティを低減しうる。IgG定常領域のFc領域またはその近傍に導入されたシステイン残基は、治療用物質へのコンジュゲート化すなわち、薬物のマレイミド誘導体のようなチオール特異的試薬を使用する細胞毒性薬のカップリングのための部位としても働きうる。治療用物質の存在は立体障害を引き起こし、それにより、Fc領域FcγR結合相互作用のアフィニティを更に低減しうる。234、235、236および/または237位のいずれかにおける他の置換は、Fcγ受容体、特にFcγRI受容体に対するアフィニティを低減する例えば、US6624821、US5624821を参照されたい。抗体のinvivo半減期もそのエフェクター機能に影響を及ぼしうる。抗体の半減期は、その治療活性を修飾するために、増加または減少されうる。FcRnは、β2ミクログロブリンに非共有結合するMHCクラスI抗原に構造的に類似した受容体である。FcRnはIgGの異化、および組織を横切るそのトランスサイトーシスを調節するGhetieおよびWard2000AnnuRevImmunol18739766GhetieおよびWard2002ImmunolRes2597113。IgGFcRn相互作用はpH60細胞内小胞のpHでは生じるが、pH74血液のpHでは生じない。この相互作用は、IgGが循環へと戻るのを可能にするGhetieおよびWard2000AnnRevImmunol18739766GhetieおよびWard2002ImmunolRes2597113。FcRn結合に関与する、ヒトIgG1上の領域は、マッピングされているShieldsら2001JBiolChem2766591604。ヒトIgG1のPro238、Thr256、Thr307、Gln311、Asp312、Glu380、Glu382またはAsn434位におけるアラニン置換はFcRn結合を増強するShieldsら2001JBiolChem2766591604。これらの置換を含有するIgG1分子は、より長い血清半減期を有する。したがって、これらの修飾IgG1分子は、未修飾IgG1と比較して長い時間にわたって、それらのエフェクター機能を果たし、ひいてはそれらの治療効力をもたらすことが可能でありうる。FcRnへの結合を増強するための他の典型的な置換には、250位のGlnおよび/または428位のLeuが含まれる。定常領域内の全ての位置に関して、EU番号付けが用いられる。保存されたAsn297に共有結合したオリゴ糖は、IgGのFc領域がFcγRに結合する能力に関与しているLundら1996JImmunol157496369WrightおよびMorrison1997TrendsBiotechnol152631。IgG上のこの糖形態の操作はIgG媒介性ADCCを有意に改善しうる。この糖形態への分岐Nアセチルグルコサミン修飾の付加Umanaら1999NatBiotechnol17176180Daviesら2001BiotechBioeng7428894またはこの糖形態からのフコースの除去Shieldsら2002JBiolChem2772673340Shinkawaら2003JBiolChem2786591604Niwaら2004CancerRes64212733は、IgGFcとFcγRとの結合を改善してIg媒介性ADCC活性を増強するIgGFc操作の2つの例である。ヒトIgG1Fc領域の溶媒露出アミノ酸の系統的置換は、改変されたFcγR結合アフィニティを有するIgG変異体を与えているShieldsら2001JBiolChem2766591604。親IgG1と比較した場合、Thr256Ser298、Ser298Glu333、Ser298Lys334またはSer298Glu333Lys334におけるAlaへの置換を含むこれらの変異体のサブセットはFcγRに対する結合アフィニティおよびADCC活性の両方の増強を示しているShieldsら2001JBiolChem2766591604Okazakiら2004JMolBiol336123949。抗体の補体結合活性C1q結合およびCDC活性の両方はLys326およびGlu333における置換により改善されうるIdusogieら2001JImmunol16625712575。ヒトIgG2バックボーン上の同じ置換は、C1qに十分には結合せず補体活性化活性を著しく欠損している抗体イソタイプを、C1qへの結合およびCDCの媒介の両方をもたらしうる抗体イソタイプに変換しうるIdusogieら2001JImmunol166257175。抗体の補体結合活性を改善するために、幾つかの他の方法も適用されている。例えば、IgGのカルボキシ末端へのIgMの18アミノ酸のカルボキシ末端尾部断片のグラフティングはそれらのCDC活性を著しく増強する。これは、検出不可能なCDC活性を通常は有するIgG4においても観察されるSmithら1995JImmunol154222636。また、IgG1重鎖のカルボキシ末端付近に位置するSer444の、Cysでの置換は、単量体IgG1の場合と比較してCDC活性の200倍の増強を伴って、IgG1の尾部尾部二量体化を誘導したShopesら1992JImmunol148291822。また、C1qに対する特異性を有する二重特異性ジアボディ構築物もCDC活性を付与するKontermannら1997NatBiotech1562931。補体活性は、重鎖のアミノ酸残基318、320および322の少なくとも1つを、Alaのような異なる側鎖を有する残基へと突然変異させることにより、低下されうる。それらの3つの残基のいずれかの位置におけるGly、Ile、LeuまたはValのような他のアルキル置換非イオン性残基あるいはPhe、Tyr、TrpおよびProのような芳香族無極性残基もC1q結合を低減または排除する。Ser、Thr、CysおよびMetは、C1q結合活性を低減または排除するために、残基320および322においては使用されうるが、残基318においては使用され得ない。極性残基による318Glu残基の置換はC1q結合活性を修飾しうるが、排除しない。Alaでの残基297Asnの置換は細胞溶解活性の除去をもたらすが、C1qに対するアフィニティをほんの僅かしか低減しない約3倍弱い。この改変は、グリコシル化部位、および補体活性化に要求される炭水化物の存在を破壊する。この部位におけるいずれかの他の置換もグリコシル化部位を破壊する。以下の突然変異およびそれらのいずれかの組合せもC1q結合を低減する:D270A、K322A、P329AおよびP311SWO06036291を参照されたい。ヒト定常領域に対する言及は、いずれかの天然アロタイプを含有する定常領域、または天然アロタイプにおける多形位置を占有する残基のいずれかの順列を含有する定常領域を含む。また、Fcガンマ受容体結合を低減する又はFcRNへの結合を増強するために前記で示されているもののような天然ヒト定常領域に対する1、2、5または10個までの突然変異が存在しうる。D.組換え抗体の発現ヒト化抗体は、典型的には、組換え発現により製造される。組換えポリヌクレオチド構築物は、典型的には、天然で結合している又は異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に機能的に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、該発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトしうるベクターにおける真核プロモーター系である。該ベクターが適当な宿主内に組込まれたら、該宿主は、該ヌクレオチド配列の高レベル発現ならびに交差反応性抗体の収集および精製に適した条件下に維持される。哺乳類細胞は、免疫グロブリンまたはそのフラグメントをコードするヌクレオチド断片を発現させるための好ましい宿主である。WinnackerFromGenestoClonesVCHPublishersNY1987を参照されたい。無傷異種タンパク質を分泌しうる多数の適当な宿主細胞系が当技術分野で開発されており、CHO細胞系例えば、DG44、種々のCOS細胞系、HeLa細胞、HEK293細胞、L細胞および非抗体産生性骨髄腫Sp20およびNS0を含むを包含する。好ましくは、該細胞は非ヒト細胞である。これらの細胞のための発現ベクターは、発現制御配列、例えば複製起点、プロモーター、エンハンサーQueenらImmunolRev8949および必要なプロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、RNAスプライス部位、ポリアデニル化部位および転写終結配列を含みうる。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、SV40、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。CoらJImmunol1481149を参照されたい。抗体は、発現されたら、HPLC精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当技術分野の標準的な方法により精製されうる全般的には、ScopesProteinPurificationを参照されたい。IV.核酸本発明は更に、前記のヒト化重鎖および軽鎖のいずれかをコードする核酸を提供する。典型的には、該核酸は、成熟重鎖および軽鎖に融合したシグナルペプチドをもコードしている。核酸上のコード配列は、該コード配列の発現を保証するための調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナルなどに機能的に連結されうる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、単離された形態で存在することが可能であり、あるいは1以上のベクター内にクローニングされうる。該核酸は、例えば重複オリゴヌクレオチドのPCRまたは固相合成により合成されうる。重鎖および軽鎖をコードする核酸は、例えば発現ベクター内で、1つの連続的核酸として連結されることが可能であり、あるいは分離していることが可能である例えば、それぞれが、それ自身の発現ベクター内にクローニングされうる。V.抗体薬物コンジュゲート抗LIV1抗体は、抗体薬物コンジュゲートADCを得るために、細胞毒性または静細胞部分その製薬上許容される塩を含むにコンジュゲート化されうる。抗体へのコンジュゲート化のための特に適した部分は細胞毒性物質例えば、化学療法剤、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体もしくは化合物または毒素これらの部分は治療用物質と総称されるである。例えば、抗LIV1抗体は、細胞毒性物質、例えば化学療法剤、または毒素例えば、静細胞または殺細胞物質、例えば、アブリン、リシンA、シュードモナス外毒素またはジフテリア毒素にコンジュゲート化されうる。抗LIV1抗体はプロドラッグ変換酵素にコンジュゲート化されうる。該プロドラッグ変換酵素は、公知方法を用いて、該抗体に組換え的に融合されること、またはそれに化学的にコンジュゲート化されることが可能である。典型的なプロドラッグ変換酵素はカルボキシペプチダーゼG2、ベータグルクロニダーゼ、ペニシリンVアミダーゼ、ペニシリンGアミダーゼ、βラクタマーゼ、βグルコシダーゼ、ニトロレダクターゼおよびカルボキシペプチダーゼAである。タンパク質、特に抗体に治療用物質をコンジュゲート化するための技術はよく知られている例えば、ArnonらMonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapyMonoclonalAntibodiesAndCancerTherapyHellstromらAntibodiesForDrugDeliveryControlledDrugDeliveryThorpeAntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapyAReviewMonoclonalAntibodies‘84BiologicalAndClinicalApplicationsAnalysisResultsandFutureProspectiveoftheTherapeuticUseofRadiolabeledAntibodyInCancerTherapyMonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapyおよびThorpeら1982ImmunolRev6211958を参照されたい。例えば、PCT公開WO8912624も参照されたい。該治療用物質は、それが例えば加水分解、抗体分解または切断剤により該抗体から切断されない限り、その活性を低下させる様態でコンジュゲート化されうる。該コンジュゲートが該LIV1発現癌細胞によりインターナリゼーションされると該コンジュゲートが該抗体から切断されるように例えばエンドソーム内、または例えばpH感受性もしくはプロテアーゼ感受性により、またはリソソーム環境中、またはキャベオラ環境中、LIV1発現癌細胞の細胞内環境中の切断には感受性であるが細胞外環境には実質的に感受性でない切断可能なリンカーを使用して、そのような治療用物質は該抗体に結合される。典型的には、該ADCは該治療用物質と該抗LIV1抗体との間にリンカー領域を含む。前記のとおり、典型的には、該リンカーは細胞内条件下で切断可能であり、該リンカーの切断は該細胞内環境中例えば、リソソームまたはエンドソームまたはキャベオラ内で該治療用物質を該抗体から遊離する。該リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含むにより切断されるペプチジルリンカーでありうる。典型的には、該ペプチジルリンカーは少なくとも2アミノ酸長または少なくとも3アミノ酸長である。切断剤には、カテプシンBおよびDならびにプラスミンが含まれうるDubowchikおよびWalker1999PharmTherapeutics8367123。最も典型的なのは、LIV1発現細胞内に存在する酵素により切断可能なペプチジルリンカーである。例えば、癌性組織内で高度に発現されるチオール依存性プロテアーゼであるカテプシンBにより切断可能なペプチジルリンカーが使用されうる例えば、PheLeuまたはGlyPheLeuGlyペプチドを含むリンカー。他のそのようなリンカーは例えば米国特許第6214345号に記載されている。特定の実施形態においては、細胞内プロテアーゼにより切断可能なペプチジルリンカーはValCitリンカーまたはPheLysジペプチドを含む例えば、ValCitリンカーを伴うドキソルビシンの合成を記載している米国特許第6214345号を参照されたい。該治療用物質の細胞内タンパク質分解遊離を利用する1つの利点は、コンジュゲート化されると該物質が典型的には弱化され、該コンジュゲートの血清安定性が典型的には高いことである。該切断可能リンカーは、pH感受性である、すなわち、あるpH範囲での加水分解に感受性であることが可能である。例えば、リソソーム内で加水分解可能な酸不安定性リンカー例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シスアコニット酸アミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなどが使用されうる例えば、米国特許第5122368号、第5824805号、第5622929号DubowchikおよびWalker1999PharmTherapeutics8367123Nevilleら1989BiolChem2641465314661を参照されたい。そのようなリンカーは血液中のような中性pH条件下では比較的安定であるが、pH55または50リソソームのおよそのpH未満では不安定である。ある実施形態においては、該加水分解可能リンカーはチオエーテルリンカー例えば、アシルヒドラゾン結合により治療用物質に結合したチオエーテル例えば、米国特許第5622929号を参照されたいである。他のリンカーは還元条件下で切断可能である例えば、ジスルフィドリンカー。ジスルフィドリンカーには、SATANスクシンイミジルSアセチルチオアセタート、SPDPNスクシンイミジル3プロピオナート、SPDBNスクシンイミジル3ブチラートおよびSMPTNスクシンイミジルオキシカルボニルアルファメチルアルファトルエン、SPDBおよびSMPTを使用して形成されうるものが含まれる例えば、Thorpeら1987CancerRes4759245931WawrzynczakらInImmunoconjugatesAntibodyConjugatesinRadioimageryandTherapyofCancer12991304または3Nアミド類似体Lauら1995BioorgMedChem3130512でありうる。該リンカーはまた、切断不可能なリンカー、例えば、治療用物質例えば、薬物に直接結合しているマレイミドアルキレンまたはマレイミドアリールリンカーでありうる。活性薬物リンカーは該抗体の分解により遊離される。典型的には、該リンカーは細胞外環境に対して実質的に感受性ではない。このことは、該ADCが細胞外環境中例えば、血漿中に存在する場合に、該ADCのサンプル中の該リンカーの約20以下、典型的には約15以下、より典型的には約10以下、より一層典型的には約5以下、3以下、または約1以下しか切断されないことを意味する。リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性でないかどうかは、例えば、a該ADCADCサンプルおよびb等モル量の未コンジュゲート化抗体または治療用物質対照サンプルの両方を、独立して、血漿と共に所定の時間例えば2、4、8、16または24時間インキュベートし、ついで、該ADCサンプル中に存在する未コンジュゲート化抗体または治療用物質の量を、対照サンプル中に存在する量と、例えば高速液体クロマトグラフィーによる測定で比較することにより決定されうる。該リンカーは細胞インターナリゼーションをも促進しうる。該リンカーは、治療用物質にコンジュゲート化された場合すなわち、本明細書に記載されているADCまたはADC誘導体のリンカー治療用物質部分の環境中、細胞インターナリゼーションを促進しうる。あるいは、該リンカーは、治療用物質および抗LIV1抗体の両方にコンジュゲート化された場合すなわち、本明細書に記載されているADCの環境中、細胞インターナリゼーションを促進しうる。本組成物で使用されうる種々のリンカーがWO2004010957に記載されており、式式中、Aは伸長単位である;aは0または1である;各Wは、独立して、アミノ酸単位である;Wは、独立して、0~12の範囲の整数である;Yはスペーサー単位である;およびyは0、1または2であるを有する。代表的な伸長単位は式IaおよびIb;後記を参照されたいの角括弧内に示されており、ここで、A、W、Y、D、wおよびyは前記のとおりであり、R1はC1C10アルキレン、C3C8カルボシクロ、O、アリーレン、C1C10アルキレンアリーレン、アリーレンC1C10アルキレン、C1C10アルキレン、C1C10アルキレン、C3C8ヘテロシクロ、C1C10アルキレン、C1C10アルキレン、rおよびrCH2から選択され、rは1~10の範囲の整数である。Abは抗体である。該薬物ローディングはpにより表され、これは抗体1個当たりの薬物リンカー分子の数である。文脈に応じて、pは抗体1個当たりの薬物リンカー分子の平均数を表すことがあり、これは平均薬物ローディングとも称される。Pは1~20の範囲であり、好ましくは1~8である。幾つかの好ましい実施形態においては、pが平均薬物ローディングを表す場合、pは約2~約5の範囲である。幾つかの実施形態においては、pは約2、約3、約4または約5である。調製物中の抗体1個当たりの薬物の平均数は、通常の手段、例えば質量分析、ELISAアッセイおよびHPLCにより特徴づけられうる。アミノ酸単位Wそれが存在する場合は伸長単位Aをスペーサー単位Yそれが存在する場合に連結し、スペーサー単位が存在しない場合には、伸長単位を細胞毒性または静細胞物質薬物単位;Dに連結する。Wwは、存在する場合には、好ましくは、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチド単位である。スペーサー単位Yは、存在する場合には、アミノ酸単位を薬物単位に連結する。スペーサー単位は、2つの一般型、すなわち、自己犠牲および非自己犠牲のものである。非自己犠牲スペーサー単位は、抗LIV1抗体リンカー薬物コンジュゲートまたは薬物リンカー化合物からのアミノ酸単位の酵素的切断の後にスペーサー単位の一部または全部が薬物単位に結合したままのものである。非自己犠牲スペーサー単位の例には、グリシングリシンスペーサー単位およびグリシンスペーサー単位が含まれる。グリシングリシンスペーサー単位またはグリシンスペーサー単位を含有する抗LIV1抗体リンカー薬物コンジュゲートが腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼによる酵素的切断を受けると、グリシングリシン薬物部分またはグリシン薬物部分はAbAaWwから切断される。該薬物を遊離するためには、該グリシン薬物単位結合を切断するために、独立した加水分解反応が標的細胞内で生じるべきである。あるいは、自己犠牲スペーサー単位を含有する抗LIV1抗体薬物コンジュゲートは、独立した加水分解工程を要することなく、薬物Dを遊離しうる。これらの実施形態の幾つかにおいては、Yは、PAB基の窒素原子を介してWwに連結されておりカルボナート、カルバマートまたはエーテル基を介してDに直接的に連結されたpアミノベンジルアルコールPAB単位である。自己犠牲スペーサーの他の例には、PAB基と電気的に等価である芳香族化合物、例えば2アミノイミダゾール5メタノール誘導体例えば、Hayら1999BioorgMedChemLett92237を参照されたいおよびオルトまたはパラアミノベンジルアセタールが含まれる。アミド結合加水分解に際して容易に環化を受けうるスペーサー、例えば置換および非置換4アミノ酪酸アミドRodriguesら1995ChemistryBiology2223、適当に置換されたビシクロ221およびビシクロ222環系Stormら1972JAmerChemSoc945815ならびに2アミノフェニルプロピオン酸アミドAmsberryら1990JOrgChem555867が使用されうる。グリシンのα位で置換されているアミン含有薬物の除去Kingsburyら1984JMedChem271447も、該抗LIV1抗体リンカー薬物コンジュゲートに適用されうる自己犠牲スペーサー法の例である。あるいは、該スペーサー単位は分枝ビススチレンBHMS単位であり、これは、追加的な薬物を組込むために使用されうる。抗LIV1抗体にコンジュゲート化するための有用なクラスの細胞毒性物質には、例えば、抗チューブリン物質、DNA小溝結合物質、DNA複製インヒビター、化学療法増感剤などが含まれる。他の典型的なクラスの細胞毒性物質には、アントラサイクリン、オーリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシンduocarmycins、エトポシド、メイタンシノイドおよびビンカアルカロイドが含まれる。幾つかの典型的な細胞毒性物質には、オーリスタチン例えば、オーリスタチンE、AFP、MMAF、MMAE、DNA小溝結合物質例えば、エンジインおよびレキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン例えば、パクリタクセルおよびドセタクセル、ビンカアルカロイド、ドキソルビシン、モルホリノドキソルビシンおよびシアノモルホリノドキソルビシンが含まれる。該細胞毒性物質は、化学療法剤、例えばドキソルビシン、パクリタクセル、メルファラン、ビンカアルカロイド、メトトレキセート、マイトマイシンCまたはエトポシドでありうる。該物質はまた、CC1065類似体、カリケアマイシンcalicheamicin、メイタンシン、ドラスタチン10の類似体、リゾキシンまたはパリトキシンでありうる。該細胞毒性物質はまた、オーリスタチンでありうる。該オーリスタチンは、オーリスタチンE誘導体、例えば、オーリスタチンEとケト酸との間で形成されるエステルでありうる。例えば、オーリスタチンEはパラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応して、それぞれAEBおよびAEVBを生成しうる。他の典型的なオーリスタチンには、AFP、MMAFおよびMMAEが含まれる。種々のオーリスタチンの合成および構造は例えばUS20050238649およびUS20060074008に記載されている。該細胞毒性物質はDNA小溝結合物質でありうる例えば、米国特許第6130237号を参照されたい。例えば、該小溝結合物質はCBI化合物またはエンジイン例えば、カリケアマイシンでありうる。該細胞毒性または静細胞物質は抗チューブリン物質でありうる。抗チューブリン物質の例には、タキサン例えば、Taxol登録商標パクリタクセル、Taxotere登録商標ドセタクセル、T67ツラリックTularik、ビンカアルカロイド例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンおよびオーリスタチン例えば、オーリスタチンE、AFP、MMAF、MMAE、AEB、AEVBが含まれる。他の適当な抗チューブリン物質には、例えば、バッカチンbaccatin誘導体、タキサン類似体例えば、エポチロンAおよびB、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルシミド、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、メイタンシノイド、コンブレタスタチンcombretastatin、ジスコデルモリドdiscodermolideおよびエロイテロビンeleutherobinが含まれる。該細胞毒性物質は、もう1つの抗チューブリン物質群であるメイタンシノイドでありうる。例えば、該メイタンシノイドはメイタンシンまたはメイタンシン含有薬物リンカー、例えばDM1またはDM4ImmunoGenIncChariら1992CancerRes52127131も参照されたいでありうる。典型的な抗体薬物コンジュゲートには、以下のとおりのvcMMAEおよびmcMMAF抗体薬物コンジュゲートここで、pおよびAbは本明細書に既に記載されているとおりであるが含まれる。またはその製薬上許容される塩。VI.LIV1に対する他の抗体前記のBR214aおよびBR222a抗体のヒト化形態だけでなく、LIV1の細胞外ドメインに結合する他の抗体も、本発明の方法の幾つかにおいて、特に、三重陰性乳癌の治療において使用されうる。LIV1に対するマウス抗体群がUS20080175839に記載されている。これらの抗体には、11F10、17A4、BR210b、BR211a、BR213a、BR214a、BR215a、BR216a、BR217a、BR218a、BR219a、BR220a、BR221a、BR222a、BR223a、BR224aおよびBR225aが含まれ、これらのうち、BR214aおよびBR222aに加えて、ハイブリドーマATCCアクセッション番号PTA5706により産生されるBR219aまたはハイブリドーマATCCアクセッション番号PTA5707により産生されるBR223aが好ましい。これらの抗体のヒト化、キメラまたはベニア化veneered形態は、以下に要約する通常の方法により製造されうる。LIV1に対する他の抗体は、LIV1またはその1以上の細胞外ドメインで免疫化することによりdenovoで製造されうる。免疫原に対する他の非ヒト例えば、マウス、モルモット、霊長類、ウサギまたはラットモノクローナル抗体の製造は、HarlowLaneAntibodiesALaboratoryManualこれを全ての目的において参照により本明細書に組み入れることとするに記載されているとおりに行われうる。そのような免疫原は、天然源から、またはペプチド合成により、または組換え発現により得られうる。非ヒト抗体のヒト化、キメラまたはベニア化veneered形態は製造可能である。ヒト化抗体を製造するための一般的方法はQueenUS5530101および5585089WinterUS5225539CarterUS6407213AdairUS5859205ならびにFooteUS6881557に記載されている。キメラ抗体は、非ヒト例えば、マウス抗体の軽鎖および重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖および重鎖定常領域と組合されている抗体である。そのような抗体は該マウス抗体の結合特異性を実質的または完全に保有し、約3分の2はヒト配列である。ベニア化抗体は一種のヒト化抗体であり、非ヒト抗体の非ヒト可変領域フレームワークの一部、およびCDRの一部、通常は全部を保有しているが、BまたはT細胞エピトープに寄与しうる他の可変領域フレームワーク残基、例えば露出残基PadlanMolImmunol284891991をヒト抗体配列の対応位置からの残基で置換している。その結果として、該CDRが完全または実質的に非ヒト抗体由来であり、該非ヒト抗体の可変領域フレームワークが、該置換により、よりヒト様にされた抗体が得られる。LIV1に対するヒト抗体は後記の種々の技術により得られうる。ヒト抗体の製造方法には、OestbergらHybridoma2361367Oestberg米国特許第4634664号およびEnglemanら米国特許第4634666号のトリオーマ法ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの使用例えば、LonbergらWO9312227US5877397US5874299US5814318US5789650US5770429US5661016US5633425US5625126US5569825US5545806Nature14815471553NatureBiotechnology14826KucherlapatiWO9110741を参照されたいおよびファージディスプレイ法例えば、DowerらWO9117271ならびにMcCaffertyらWO9201047US5877218US5871907US5858657US5837242US5733743およびUS5565332を参照されたいが含まれる。該抗体のいずれかは、競合結合アッセイなどにより、BR214a抗体のような典型的な抗体と同じ又は重複したエピトープ特異性を有するように選択されうる。VII.治療用途本発明のヒト化抗体は、単独で、またはそのLIV1抗体薬物コンジュゲートとして、癌を治療するために使用されうる。幾つかのそのような癌は、タンパク質例えば、例示されている抗体の1つを使用するイムノアッセイによりまたはmRNAレベルで測定される検出可能なレベルのLIV1を示す。幾つかのそのような癌は、好ましくは同一患者からの、同じ型の非癌性組織と比較して上昇したレベルのLIV1を示す。治療に適した癌細胞上のLIV1の典型的レベルは細胞1個当たりLIV1分子5000~150000個であるが、より高い又はより低いレベルも治療可能である。場合によっては、癌におけるLIV1のレベルは、治療を行う前に測定される。LIV1発現に関連しており治療に適した癌の例には、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頸、肝臓、胃、腎臓および扁平上皮細胞癌例えば、膀胱、頭部、頚部および肺、皮膚癌、例えばメラノーマ、小細胞肺癌または肺カルシノイドが含まれる。該治療は、これらの種類の原発性または転移性腫瘍を有する患者に適用されうる。該治療はまた、通常の治療例えば、ホルモン、タモキシフェン、ヘルセプチンに抵抗性である又はそのような治療に対する応答の後で再発した患者に適用されうる。該方法はまた、三重triple陰性乳癌に用いられうる。三重陰性乳癌は、検出可能なエストロゲンおよびプロゲステロン受容体を欠きHER2neuの過剰発現を欠く実施例に記載されているようなこれらの受容体のいずれかに対する抗体で染色された場合癌を示す専門用語である。染色は、無関係な対照抗体に対して行われることが可能であり、実験誤差内で対照の場合と同じ又は類似した、染色のバックグラウンドレベルから、発現の欠如が示されうる。同様に、過剰発現の欠如は、好ましくは同一患者から得られた、非癌性乳房組織の、実験誤差内で同じ又は類似レベルの染色により示される。代替的または追加的に、三重陰性乳癌は、侵襲性挙動、特徴的な転移パターン、これらの受容体と相互作用するホルモンに対する応答性の欠如により特徴づけられる。LIV1を発現する癌を治療するために、hLIV14抗体が使用されうる。1つの実施形態においては、LIV1発現乳癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現前立腺癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現メラノーマを有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現卵巣癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現子宮内膜癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現子宮頸癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現肝臓癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現胃癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現腎臓癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現扁平上皮細胞癌例えば、膀胱、頭部、頚部および肺癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現乳癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現皮膚癌を有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現小細胞肺癌または肺カルシノイドを有する対象を治療するために、hLIV14抗体が使用される。LIV1を発現する癌を治療するために、hLIV22抗体が使用されうる。1つの実施形態においては、LIV1発現乳癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現前立腺癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現メラノーマを有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現卵巣癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現子宮内膜癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現子宮頸癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現肝臓癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現胃癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現腎臓癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現扁平上皮細胞癌例えば、膀胱、頭部、頚部および肺癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現乳癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現皮膚癌を有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。もう1つの実施形態においては、LIV1発現小細胞肺癌または肺カルシノイドを有する対象を治療するために、hLIV22抗体が使用される。本出願は、メラノーマ細胞の表面上でLIV1タンパク質が発現されるという最初の開示を提供するものである。したがって、LIV1に結合する抗体は、LIV1を発現するメラノーマに罹患した患者を治療するために使用されうる。そのような抗体には、本明細書に開示されている抗体、例えばhLIV14およびhLIV22が含まれるが、本明細書に開示されている抗体に限定されるものではない。ヒト化抗体は、単独で又はそのコンジュゲートとして、癌の発症を遅らせ、重症度を低減し、更なる悪化を抑制し、および/または少なくとも1つの徴候もしくは症状を改善する投与量、投与経路および投与頻度を意味する有効形態で投与される。患者が既に癌に罹患している場合、該形態は治療的有効形態と称されうる。患者が、一般集団と比較して上昇した癌のリスクを有するが、未だ症状を現していない場合、該形態は予防的有効形態と称されうる。幾つかの場合には、同一患者における過去の対照または過去の経験との比較により、個々の患者において治療的または予防的効力が観察されうる。他の場合には、未治療患者の対照集団との比較により、治療患者の集団における前臨床または臨床治験において、治療的または予防的効力が示されうる。モノクローナル抗体の典型的な投与量は、患者の体重1kg当たり01mgkg~50mgkg、より好ましくは1mgkg~30mgkg、1mgkg~20mgkg、1mgkg~15mgkg、1mgkg~12mgkg、または1mgkg~10mgkg、または2mgkg~30mgkg、2mgkg~20mgkg、2mgkg~15mgkg、2mgkg~12mgkg、または2mgkg~10mgkg、または3mgkg~30mgkg、3mgkg~20mgkg、3mgkg~15mgkg、3mgkg~12mgkg、または3mgkg~10mgkgである。モノクローナル抗体またはその抗体薬物コンジュゲートの典型的な投与量は、対象の体重1kg当たり、1mgkg~75mgkg、または2mgkg~75mgkg、または3mgkg~75mgkg、あるいは01~20もしくは05~5mgkg体重例えば、05、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10mgkgまたは一定投与量として10~1500もしくは2001500mgである。幾つかの方法においては、該患者には、少なくとも15mgkg、少なくとも2mgkgまたは少なくとも3mgkgの用量が3週間に1回以上投与される。該投与量は、とりわけ、投与頻度、患者の状態およびこれまでの治療行われた場合に対する応答、該治療が予防的であるか治療的であるか、および該障害が急性であるか慢性であるかに左右される。投与は非経口的、静脈内、経口的、皮下、動脈内、頭蓋内、鞘内、腹腔内、局所的、鼻腔内または筋肉内投与でありうる。投与はまた、腫瘍内に直接的に局在化されうる。静脈内または皮下投与による全身循環内への投与が好ましい。静脈内投与は、例えば、例えば30~90分間の時間にわたる注入、または1回のボーラス注射によるものでありうる。投与頻度は、とりわけ、循環中の該抗体またはコンジュゲートの半減期、患者の状態および投与経路に左右される。該頻度は、患者の状態の変化または治療されている癌の進行に応じて、毎日、毎週、毎月、年4回または不規則な間隔でありうる。静脈内投与の典型的な頻度は治療の連続的経過にわたって週2回~年4回であるが、より多い又はより少ない頻度の投与も可能である。静脈内投与の他の典型的な頻度は治療の連続的経過にわたって毎週~4週に3回であるが、より多い又はより少ない頻度の投与も可能である。皮下投与の場合、典型的な頻度は毎日~毎月であるが、より多い又はより少ない頻度の投与も可能である。投与される用量数は癌の性質例えば、急性症状を示しているのか慢性症状を示しているのかおよび治療に対する症状の応答に左右される。急性障害の場合または慢性障害の急性悪化の場合には、しばしば、1~10用量で十分である。時には、急性障害の場合または慢性障害の急性悪化の場合には、1回のボーラス用量、場合によっては、分割形態のもので十分である。急性障害または急性悪化の再発の場合、治療が繰り返されうる。慢性障害の場合、抗体は規則的間隔で、例えば毎週、隔週、毎月、年4回、6カ月ごとに、少なくとも1、5または10年間あるいは患者の生涯にわたって投与されうる。非経口投与のための医薬組成物は、好ましくは、無菌で、実質的に等張性であり、GMP条件下で製造される。医薬組成物は単位投与形すなわち、1回投与用剤形で提供されうる。医薬組成物は、1以上の生理的に許容される担体、希釈剤、賦形剤または補助剤を使用して製剤化されうる。該製剤化は、選択された投与経路に左右される。注射の場合、抗体は、水溶液、好ましくは生理的に許容されるバッファー、例えばハンクス液、リンガー液または生理食塩水もしくは酢酸バッファー注射部位における不快感を軽減するため中に製剤化されうる。該溶液は、製剤化剤、例えば懸濁化剤、安定剤および/または分散化剤を含有しうる。あるいは、抗体は、使用前に適当なビヒクル、例えば発熱物質非含有無菌水で還元再構成される凍結乾燥形態でありうる。液体製剤中の抗体の濃度は、例えば1~100mgmg、例えば10mgmlでありうる。本発明の抗体での治療は、化学療法、放射線、幹細胞治療、手術、治療されている障害に対して有効なその他の治療と組合されうる。LIV1に対するヒト化抗体と共に投与されうる有用なクラスの他の物質には、例えば、癌性細胞上で発現される他の受容体に対する抗体、抗チューブリン物質例えば、オーリスタチン、DNA小溝結合物質、DNA複製インヒビター、アルキル化剤例えば、白金錯体、例えば、シスプラチン、モノ白金、ビス白金およびトリ核白金錯体ならびにカルボプラチン、アントラサイクリン、抗生物質、抗葉酸剤、代謝拮抗剤、化学療法増感剤、ドュオカルマイシンduocarmycin、エトポシド、フッ素化ピリミジン、イオノホア、レキシトロプシン、ニトロソウレア、プラチノール、前形成preforming化合物、プリン代謝拮抗剤、ピューロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼインヒビター、ビンカアルカロイドなどが含まれる。単独での又は抗体薬物コンジュゲートとしての、場合によっては前記の他の物質または形態のいずれかと組合された、ヒト化抗LIV1抗体での治療は、特に再発性または難治性の腫瘍例えば、乳癌、前立腺癌、メラノーマを有する患者の半無進行生存medianprogressionfreesurvivalまたは全生存時間を、抗LIV1抗体単独またはコンジュゲートとしてを伴わない同じ治療例えば、化学療法と比較して少なくとも30または40、好ましくは50、60~70、更には100またはそれ以上増加させうる。追加的または代替的に、抗LIV1抗体単独またはコンジュゲートとしてを含む治療例えば、標準的な化学療法は、腫瘍を有する患者の完全応答率、部分的応答率または客観的応答率完全部分的を、該抗LIV1抗体を伴わない同じ治療例えば、化学療法と比較して少なくとも30または40、好ましくは50、60~70または更には100増加させうる。典型的には、臨床治験例えば、II相、IIIII相またはIII相治験においては、標準的な療法だけまたはそれに加えてプラセボを受けた患者の対照群と比較した場合の、標準的な療法と該ヒト化抗LIV1抗体とで治療された患者の半無進行生存および/または応答率における前記増加は、例えばp005または001または更には0001の水準で、統計的に有意である。該完全および部分的応答率は、癌に関する臨床治験において一般的に用いられる客観的基準例えば、NationalCancerInstituteおよび/またはFoodandDrugAdministrationにより掲載または受け入れられているものにより決定される。VIII.他の用途該抗LIV1ヒト化抗体は、臨床診断または治療または研究の場合にLIV1を検出するために使用されうる。癌上のLIV1の発現は、該癌が本発明の抗体での治療に適しているという指標を提供する。該抗体は、LIV1を含有する細胞および種々の刺激に対するそれらの応答を検出する際の実験室研究用の研究用試薬として販売されうる。そのような用途においては、モノクローナル抗体は蛍光分子、スピン標識分子、酵素または放射性同位体で標識されることが可能であり、LIV1に関するアッセイを行うための必要な試薬の全てを含むキットの形態で提供されうる。本明細書に記載されている抗体BR214a、BR222a、ならびにそれらのヒト化形態、例えばhLIV14およびhLIV22は、LIV1タンパク質発現を検出するために、および癌がLIV1ADCでの治療に適しているかどうかを判定するために使用されうる。一例として、BR214a、BR222a、ならびにそれらのヒト化形態、例えばhLIV14およびhLIV22は、乳癌細胞、メラノーマ細胞、子宮頸癌細胞または前立腺癌細胞上のLIV1発現を検出するために使用されうる。該抗体は、LIV1を例えばアフィニティクロマトグラフィにより精製するためにも使用されうる。IX.カニクイザルLIV1本発明は更に、シグナルペプチドこれは配列番号85の残基約128を占有するを伴う又は伴わない、配列番号85におけるカニクイザル由来のLIV1CYLIV1のアミノ酸配列、およびそのアミノ酸配列をコードする核酸を提供する。1、2、3、4または5個までの置換、欠失または挿入により異なる変異体も含まれる。ただし、CY変異体は天然ヒトLIV1配列を含まない。ヒトLIV1と同様に、CYLIV1に対する言及は、該タンパク質の少なくとも細胞外ドメイン、通常は、切断可能なシグナルペプチドアミノ酸128以外の完全タンパク質を意味する。本発明は更に、ヒトLIV1への特異的な結合を伴う又は伴わないすなわち、陰性対照無関連抗体のレベルでのヒトLIV1への結合、配列番号85に特異的に結合する抗体を提供する。本発明は更に、ヒトLIV1に対してよりもCYLIV1に対して優先的にまたはその逆結合する抗体を提供する。優先的な結合は、実験誤差より高い、好ましくは少なくとも2、3または4倍高い結合を意味する。本発明は更に、例示されている後記抗体のいずれかと実験誤差内で同じ、ヒトおよびCYLIV1への結合プロファイルを示す抗体を提供する。本発明は更に、CYLIV1に対する抗体の結合を分析する方法を提供する。そのような方法は、抗体をCYLIV1と接触させ、該抗体がCYLIV1に特異的に結合するかどうかを決定し、場合によっては、結合強度の尺度、例えば会合定数を決定することを含む。前記または後記で引用されている全ての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、アクセッション番号などの全体を、それらのそれぞれのものが参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されている場合と同様に、全ての目的において本明細書に組み入れることとする。ある1つの配列の種々の形態が、異なる時点で1つのアクセッション番号に関連づけられている場合、本出願の有効出願日において該アクセッション番号に関連づけられている形態が意味を持つ。該有効出願日は、実際の出願日、または適用可能な場合の、該アクセッション番号に言及している優先権主張基礎出願の出願日のうちの早いほうを意味する。同様に、刊行物、ウェブサイトなどの種々の形態が、異なる時点で公開されている場合、特に示されていない限り、本出願の有効出願日において最も最近に公開された形態が意味を持つ。特に示されていない限り、本発明のいずれかの特徴、工程、要素、実施形態または態様は、いずれかの他のものと組合されうる。本発明は、明瞭化および理解を目的として、例示および具体例により相当詳細に記載されているが、添付の特許請求の範囲の範囲内で或る変更および修飾が行われうることが明らかであろう。実施例I.BR214aのヒト化材料以下の実施例に記載する細胞系を、AmericanTypeCultureCollection、NationalCancerInstituteまたはDeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHBraunschweigGermanyにより特定されている条件に従い、培養内で維持した。細胞培養試薬は、InvitrogenCorpまたは他の供給業者から入手した。方法:飽和結合アッセイ1×105個の抗原発現細胞ヒトLIV1を発現するMCF7細胞ATCC、ヒトLIV1を発現するトランスフェクト化CHO細胞系、またはシノLIV1を発現するトランスフェクト化CHO細胞系を96ウェルv底プレートのウェルごとにアリコート化した。AlexaFluor647標識マウスLIV1mAb、例えばBR214aを066pM~690nMの範囲の濃度で加え、氷上で30分間インキュベートした。細胞をペレット化し、PBSBSAで3回洗浄した。ついで該細胞をペレット化し、125μLのPBSBSAに再懸濁させた。飽和蛍光シグナルに対する百分率を用いて、蛍光をフローサイトメトリーにより分析して、結合率を決定し、ついで見掛けKdを計算した。競合結合アッセイ組換えヒトLIV1を発現する、PBSBSA中のCHO細胞1×105個を氷上の96ウェルV底プレートの各ウェル内にアリコート化した。5nMAlexaFluor647標識親マウスLIV1mAbおよび次第に増加する濃度0038nMから600nMまでの未標識ヒト化LIV1mAb、ヒト化軽鎖LALFとヒト化重鎖HAHEとの組合せと共に、該細胞を1時間インキュベートした。細胞をペレット化し、PBSBSAで3回洗浄した。該細胞をペレット化し、125μLのPBSBSAに再懸濁させた。飽和蛍光シグナルに対する百分率を用いて、蛍光をフローサイトメトリーにより分析して、結合した標識マウスLIV1mAbの百分率を決定し、ついで該データを種々の勾配でS字状用量反応曲線に当てはめることによりEC50を外挿した。LIV1を発現する、PBSBSA中のMCF7細胞1×105個を氷上の96ウェルV底プレートの各ウェル内にアリコート化した。5nMAlexaFluor647標識マウスLIV1mAbおよび次第に増加する濃度0038nMから600nMまでの未標識ヒト化LIV1mAb、ヒト化軽鎖LALFとヒト化重鎖HAHEとの組合せと共に、該細胞を1時間インキュベートした。細胞をペレット化し、PBSで3回洗浄した。該細胞をペレット化し、125μLのPBSBSAに再懸濁させた。飽和蛍光シグナルに対する百分率を用いて、蛍光をフローサイトメトリーにより分析して、結合した標識マウスLIV1mAbの百分率を決定し、ついで該データを種々の勾配でS字状用量反応曲線に当てはめることによりEC50を外挿した。組換えシノLIV1を発現する、PBS中のCHO細胞1×105個を氷上の96ウェルV底プレートの各ウェル内にアリコート化した。5nMAlexaFluor647標識マウスLIV1mAbおよび次第に増加する濃度0038nMから600nMまでの未標識ヒト化LIV1mAb、ヒト化軽鎖LALFとヒト化重鎖HAHEとの組合せと共に、該細胞を1時間インキュベートした。細胞をペレット化し、PBSで3回洗浄した。該細胞をペレット化し、125μLのPBSBSAに再懸濁させた。飽和蛍光シグナルに対する百分率を用いて、蛍光をフローサイトメトリーにより分析して、結合した標識マウスLIV1mAbの百分率を決定し、ついで該データを種々の勾配でS字状用量反応曲線に当てはめることによりEC50を外挿した。定量的フローサイトメトリー分析一次抗体としてのマウスLIV1mAbおよびDAKOQiFiKitフローサイトメトリー間接アッセイを製造業者DAKOASGlostrupDenmarkの説明に従い使用して、細胞表面上のLIV1コピー数の定量を決定し、BectonDickinsonFACScanフローサイトメーターを使用して評価した。細胞傷害性細胞毒性アッセイ腫瘍細胞をLIV1抗体薬物コンジュゲートと共に37°Cで96~144時間インキュベートした。陰性対照として非結合性H00ADCを使用した。最終濃度50μMのレサズリンSigma細胞により生存度を測定した。細胞を37°Cで4~6時間インキュベートした。FusionHT蛍光プレートリーダーPerkinElmerWalthamMAで蛍光シグナルを測定した。結果は、ビヒクル処理細胞対照100と比較した場合に生存度における50の減少をもたらすのに必要な化合物の濃度であるIC50で表されている。抗体薬物コンジュゲートの製造該LIV1抗体の抗体薬物コンジュゲートを、US20050238649に記載されているとおりに製造した。薬物リンカーvcMMAE1006とも称されるおよびmcMMAF1269と称されるは共にUS20050238649に記載されている。IgG1抗体のシステイン突然変異体の製造はUS20100158919に全般的に記載されている。US20050238649およびUS20100158919を全ての目的において参照により本明細書に組み入れることとする。非フコシル化抗LIV1mAbヒト化IgG1抗LIV1モノクローナル抗体HBLBmAbhLIV14を産生するCHODG44細胞系を、125mL振とうフラスコ内で100RPMで振とうしながら、30mLのCHO培地内で37°C、5CO2で30×105細胞mLで培養した。培地をインスリン様増殖因子IGF、ペニシリン、ストレプトマイシンおよび65μM2フルオロフコースペルアセタートSGD2084US20090317869を参照されたいで補足した。第3日に培養に2容量のフィード培地を供給した。第4日に、該培養を新鮮な培地内に14で分割した。第5、7、9および10日に、培養に6容量の生産フィード培地を供給した。第13日に、該培養を02μmフィルターに通過させることにより、馴らし培地を集めた。1×リン酸緩衝食塩水PBSpH74で前平衡化されたプロテインAカラムに該馴らし培地を適用することにより、抗体精製を行った。カラムを20カラム容量の1×PBSで洗浄した後、抗体を5カラム容量のImmunopureIgG溶出バッファーPierceBiotechnologyRockfordILで溶出した。10容量の1MTrispH80を溶出画分に加えた。サンプルを1×PBS中に一晩透析した。抗体依存性細胞性細胞傷害ADCC標準的な51Cr遊離アッセイを用いて、ADCC活性を測定した。簡潔に説明すると、該MCF7標的腫瘍細胞を100μCiのNa51CrO4で標識し、洗浄し、エフェクターナチュラルキラーNK細胞の添加前に試験抗体と共にプレインキュベートした。免疫磁気ビーズEasySepStemCellTechnologiesVancouverBCCanadaを使用して、正常FcγRIIIA158VVドナーLifebloodMemphisTNから得られた非接着性末梢血単核細胞PBMCからNKCD16CD56細胞を調製した。生存可能なNK細胞を標的細胞に、101のエフェクター対標的細胞比で加えた。このアッセイにおける陰性対照として、ヒトIgG1κAncellBayportMNを使用した。4時間のインキュベーションの後、上清を集め、Lumaプレート上で一晩乾燥させた。ついで、細胞溶解されたMCF7細胞から放出されたガンマ線を、TopCountMicroplateScintillationおよびLuminescenceCounterPerkinElmerWalthamMassachusettsを使用して検出した。ADCC活性は特異的細胞溶解として示されている。invivo活性研究ヌードnunuマウス7~8匹群に、培養内で増殖させた以下の腫瘍細胞を移植した:NCIからのMCF725マトリゲル中の5×106細胞、ATCCからのPC325マトリゲル中の25×106細胞およびDSMZからのPC325マトリゲル中の5×105細胞。また、MCF7細胞のinvivo増殖のために、徐放エストロゲンペレット90日間放出を移植することにより、雌マウスにエストロゲン補充を行った。腫瘍が100mm3に達したら、キメラもしくはヒト化LIV1ADCまたは非結合性対照ADC3mgkgの投与を開始したq4d×4腹腔内注射。カリパスを使用して腫瘍体積をモニターし、腫瘍体積が~800mm3に達したら、動物を安楽死させた。1以上の動物を安楽死させるまで、各群に関して腫瘍体積中央値プロットを継続した。全ての動物の取り扱いは、AssociationforAssessmentandAccreditationofLaboratoryAnimalCareにより認められた施設において、InstitutionalAnimalCareandUseCommitteeにより承認されたプロトコールに従い行った。LIV1免疫組織化学的IHC染色方法腫瘍マイクロアレイTMAおよび個々の腫瘍サンプルを商業的入手源から入手した。正常または腫瘍ホルマリン固定およびパラフィン包埋FFPE組織からの組織マイクロアレイはUSBiomaxIncまたはCybrdiから購入した。凍結アレイはBioChainから購入した。単一切片はNDRI、AsterandTissueSolutionまたはCHTNから購入した。転移性ホルモン治療抵抗性前立腺癌対応する骨および軟組織転移部位のパラフィン包埋サンプル25個の一式はRVessella博士UniversityofWashingtonGenitourinaryCancerDepartmentにより提供された。全てのサンプルはBondMax商標自動染色装置Leicaで加工された。FFPE組織のIHC染色:FFPEスライドまたはガラススライド上で切片化されたTMAを、72°CでBond商標Dewax溶液LeicacatAR9222を使用して脱パラフィン化し、再水和させた。一次マウスLIV1mAb1~2μgmlとのインキュベーション25°Cで30~45分間の前に、95~100°Cで20分間、EDTA系Bond商標EpitopeRetrievalSolution2LeicacatAR9640を使用して、抗原回収を行った。イソタイプ合致マウスIgG1SigmacatM5284をバックグラウンド染色に関する陰性対照として使用した。自動IHC染色のために、RefineDABキットまたはアルカリホスファターゼ系検出キット:Bond商標PolymerAPRedDetectionキットLeicacatDS9305を使用した。スライドを、予備的な30分間のタンパク質ブロックDAKOcatX0909を伴って、マウスLIV1mAbに対するマウスモノクローナル一次抗体1μgmlと共に45分間インキュベートした。色素源の現像の後、切片をヘマトキシリンで対比染色し、カバーガラスで覆った。病理学者によりスライドが評価され、スコア化された。ZeissAxiovert200M顕微鏡CarlZeissIncThornwoodNYを使用して、イメージを撮影した。凍結組織のIHC:凍結OCTサンプルの5μm切片を10分間にわたってアセトン固定し、30分間にわたって空気乾燥させ、室温で20分間にわたって1×Morphosaveで前処理した。該スライドをBondMax商標自動染色装置Leica内にローディングし、予備的な30分間のタンパク質ブロックDAKOcatX0909を伴って、一次抗体で45分間染色した。マウスIgG1BDPharmingencat550878を陰性対照として使用した。検出のために、DAB系BondPolymerRefineキットLeicacatDS9800を使用した。色素源の現像の後、切片をヘマトキシリンで対比染色し、カバーガラスで覆った。病理学者によりスライドが評価され、スコア化された。結果1.マウス抗体の結合マウスLIV1モノクローナル抗体BR214a抗体US2004141983のKDを、ヒト乳癌細胞系において内因性タンパク質として又はCHO細胞系において組換えタンパク質として発現されたヒトLIV1に対して決定した。マウスLIV1抗体BR214aのKDを、CHO細胞系において組換えタンパク質として発現されたシノLIV1に対しても決定した。MCF7はヒト乳癌細胞系である。293Fはヒト胚腎細胞系である。表1は、該抗体が、ヒト細胞系から発現された非組換えLIV1に対しては、組換えLIV1に対する場合より約5倍低い解離定数を、ヒト由来hLIV1の場合にもカニクイザル由来cyLIV1の場合にも有していたことを示している。2.ヒト化抗体の設計および試験この実施例におけるヒト化のための出発点、すなわち、ドナー抗体は、ATCCアクセッション番号PTA5705Aを有するハイブリドーマにより製造されるマウス抗体BR214aであり、US2004141983に記載されている。適当なヒトアクセプター配列は、重鎖に関してはVH102およびJH5により、そして軽鎖に関してはVK230およびJk4により提供されるゲノム配列である。該ヒトアクセプター配列は可変領域フレームワークにおけるドナー配列に対して68および85の同一性を示す。ヒトアクセプター配列の軽鎖CDRは、ドナー配列のCDRと同じカノニカル型canonicalのものである。これとは対照的に、ヒトアクセプター配列の重鎖CDRは、それらのカノニカル型において異なっていた該生殖系列は1~3であったが、マウスドナーでは1~2であった。ドナー配列のアライメントは、ヒトアクセプター配列がドナー配列と異なる、重鎖における11個の位置H27H28H29H30H48H66H67H71H76H93およびH94および軽鎖における5個の位置L36L37L45L46およびL39を特定した。これらの位置は、抗原に直接的に接触する結果として抗体結合に影響を及ぼして、CDRのコンホメーションに影響を及ぼし、または重鎖および軽鎖間のパッキングpackingに影響を及ぼしうる。これらの位置の種々の順列において復帰突然変異を含む5個のヒト化重鎖および6個のヒト化軽鎖を作製した図1配列アライメントおよび表2。ついで、ヒト化重鎖および軽鎖のこれらの鎖の各順列30の可能性に相当するヒト化抗体を発現させた。CHO細胞から発現された組換えヒトLIV1に関する結合曲線を図2に示す。EC50を以下の表3に要約する。これらのデータは、試験された30個のヒト化抗体におけるEC50の相当なばらつきを示しており、このうち、HBLBおよびHELEが、その次のヒト化抗体HBLFより少なくとも2倍良好な結合およびそれらのヒト化抗体のほとんどより大きな差マージンを示している。図2の結合曲線は、HBLBおよびHELEが元のマウス抗体より強力な結合をもたらすことを示している。該ヒト化抗体の最良体として、HBLB抗体を選択した。なぜなら、それはHELEと並んで最強の結合をもたらすが、HELEより少数の復帰突然変異を有するHBLBには4個の、そしてHELEには12個の復帰突然変異が存在するからである。CHO細胞上で発現されたヒトLIV1に結合したヒトLIV1mAbに関するEC50を、MCF7細胞系内で天然タンパク質として発現されたヒトLIV1に対して決定した図3。この場合も、LIV1mAbHBLBおよびHELEが最強の結合体であると決定された。MCF7細胞上のヒトLIV1に対するHBLBに関するKdは、幾つかの飽和結合曲線の平均から、15nMであると決定された。一方、該マウス抗体に関するKdは29nMである。換言すれば、HBLB抗体は、該マウス抗体と比較して、天然ヒトLIV1に対する約2倍のアフィニティを有する。図4に示されている飽和結合曲線は代表例である。2つの形態のHBLBを、CHO細胞から組換え発現されたヒトLIV1への結合に関して比較した。一方の形態は、野生型ヒトIgG1およびカッパ定常領域を伴って発現された。他方の形態は、Fcガンマ受容体への該抗体の結合を低減する、IgG1重鎖におけるS239C突然変異EU番号付け以外は同じであったLIV14dまたはHBLBS239Cと称される。マウスドナー抗体と比較された、これらの抗体の結合曲線およびEC50を、図5に示す。両方の形態のHBLBのEC50は互いに類似しており研究の誤差の範囲内、両方とも、該マウス抗体より強力であった。また、ヒト化LIV1mAbHBLBおよびHBLBS239Cに関するEC50を、CHO細胞系内で組換えタンパク質として発現されたシノLIV1に対して決定した。どちらの抗体も、等しいアフィニティマウスLIV1mAbより良好で結合した。LIV1に関する発現データホルマリン固定パラフィン包埋組織を使用する、種々の腫瘍型の免疫組織化学的分析のために、マウスLIV1mAb符合のために少なくとも2つを使用した。本発明者らは、組織マイクロアレイを使用して行った研究においては、大きな組織切片の場合より低いLIV1IHC陽性を観察した。発現における相違は非常に有意であり、このことは、より大きな組織切片におけるLIV1発現の分析が好ましいことを示唆している。少なくとも2つの異なる抗LIV1mAbを使用した場合に、発現の良好な符合が存在した。図6および7はホルモンタモキシフェンまたはアロマターゼインヒビター治療後の乳および前立腺腫瘍における高レベルのLIV1発現を示しており、LIV1ADCを使用してこれらの腫瘍を標的化する強力な論理的根拠を示している。図8は、三重陰性ER、PgR、Her2乳癌組織における、検出可能なLIV1発現を示している。免疫組織化学染色による三重陰性乳癌におけるLIV1発現レベルは、本発明者らがLIV1ADCの抗腫瘍活性を示したPC3動物モデルにおけるレベルに匹敵していた。したがって、三重陰性乳癌、特に、LIV1を発現することが判明している三重陰性乳癌は、可能な標的集団である。ADCおよびエフェクター機能増強mAbSEAとしてのhLIV14mAbのinvitro抗腫瘍活性invitroでのLIV1ADCの抗腫瘍活性を細胞傷害性アッセイ図9および抗体依存性細胞傷害ADCC図10および11の両方を用いて測定した。まず、定量的FACS分析により、種々の細胞系におけるLIV1発現の調査を行った。ATCCからの乳癌細胞系MCF7は、他の起源からのMCF7細胞系と比較して最高レベルのLIV1結合部位/細胞を有していたデータ非表示。invitroでの両方のアッセイに、この細胞系を使用した。図9に関しては、種々のhLIV14ADCvcMMAE1006と称されるまたはmcMMAF1269と称される共にUS20050238649に記載されている小さな分子および/またはリンカーにコンジュゲート化されたHBLB抗体は、非結合性およびマウス対照コンジュゲートmIgG1006、mIgG1269、hIgG1006およびhIgG1269と比較してMCF7細胞の殺傷に非常に有効であった。また、抗体1個当たり平均2個の薬物リンカーを有するシステイン突然変異体LIV14dADCも、細胞傷害性アッセイによる測定で、MCF7細胞の殺傷において非常に有効であった。図10および11に関しては、ADCCアッセイにおいて、フコシル化/野生型WTmAbおよびADCの活性をエフェクター機能増強形態SEAと称される非フコシル化mAbおよびADCと比較した。結果は、エフェクター機能増強LIV1mAbおよびADCが、非エフェクター機能増強mAbまたはADCと比較して、MCF7細胞に対する良好なADCC活性を有することを示した例えば、図10のhLIVSEAvcMMAEをhLIV1vcMMAEと比較されたい。再び図9に関しては、エフェクター機能増強LIV1ADCSEAとして示されているはまた、野生型非フコシル化ADCに類似したレベルの細胞傷害活性を有していたhLIV1SEA1006をhLIV11006と比較されたい。このように、細胞傷害性はエフェクター機能およびコンジュゲート作用の両方により影響を受けうる。hLIV14ADCのinvivo抗腫瘍活性乳癌MCF7および前立腺癌PC3モデルを使用して、LIV1ADC抗体1個当たり平均4個の薬物を有するキメラおよびヒト化HBLBmAbのinvivoでの抗腫瘍活性を測定した図12~15。vcMMAEにコンジュゲート化されたLIV1ADCは、未処理および対照ADCと比較して有意な腫瘍遅延を示した。LIV1vcMMAEを3mgkgで使用した研究の全てにおいて、少なくとも1つの完全退縮CRが観察され、幾つかの動物は、対照と比較して静的な又は遅く成長する腫瘍を有していた。図12に関しては、vcMMAEにコンジュゲート化された親マウス抗体のキメラ形態は7匹中3匹のマウスにおいて完全な退縮を引き起こした。図13に関しては、同じキメラADCは8匹中1匹のマウスにおいて完全な退縮を引き起こした。図14に関しては、vcMMAEにコンジュゲート化されたヒト化ADCHBLBhLIV14vcMMAEは8匹中1匹のマウスにおいて完全な退縮を引き起こした。また、HBLB抗体のシステイン突然変異形態hLIV14dvcMMAEと称される、抗体1個当たり薬物リンカー2個の平均薬物負荷を有するコンジュゲートを与えるように、239位において各重鎖にコンジュゲート化されたvcMMAE薬物リンカーは、該4負荷形態に類似した活性を示した。図15に関しては、vcMMAEにコンジュゲート化されたヒト化ADCHBLBhLIV14vcMMAEは前立腺癌モデルで8匹中1匹のマウスにおいて完全な退縮を引き起こした。これとは対照的に、該2負荷システイン突然変異体の活性はこのモデルにおいては顕著ではなかったhLIV14vcMMAEをhLIV14dvcMMAEと、そしてhLIV14mcMMAFをhLIV14dmcMMAFと比較されたい。要約すると、これらの研究は、LIV1ADCが、乳癌および前立腺癌を含むLIV1発現癌の成長を停止または遅延させうることを示している。II.BR222aのヒト化mAb2と称されることもあるBR222aはイソタイプIgG1カッパのマウスモノクローナル抗体である。方法:以下に特に示さない限り、BR214aのヒト化および試験に関して記載されている方法がBR222にも適用可能である。飽和結合アッセイ1×105個の抗原発現細胞ヒトLIV1を発現するMCF7細胞、ヒトLIV1を発現する293F細胞、ヒトLIV1を発現するトランスフェクト化CHO細胞系またはシノLIV1を発現するトランスフェクト化CHO細胞系を96ウェルv底プレートのウェルごとにアリコート化した。AlexaFluor647標識マウスBR222aを066pM~690nMの範囲の濃度で加え、氷上で30分間インキュベートした。細胞をペレット化し、PBSBSAで3回洗浄した。ついで該細胞をペレット化し、125μLのPBSBSAに再懸濁させた。飽和蛍光シグナルに対する百分率を用いて、蛍光をフローサイトメトリーにより分析して、結合率を決定し、ついで見掛けKdを計算した。競合結合アッセイ組換えLIV1を発現する、PBS中のCHO細胞1×105個を氷上の96ウェルV底プレートの各ウェル内にアリコート化した。5nMAlexaFluor647標識親マウスBR222aおよび次第に増加する濃度0038nMから600nMまでの未標識ヒト化BR222a抗体ヒト化軽鎖LALGおよびヒト化重鎖HAHGの全ての組合せのものと共に、該細胞を1時間インキュベートした。細胞をペレット化し、PBSで3回洗浄した。ついで該細胞をペレット化し、125μLのPBSBSAに再懸濁させた。飽和蛍光シグナルに対する百分率を用いて、蛍光をフローサイトメトリーにより分析して、結合した標識ヒト化BR222a抗体の百分率を決定し、ついで該データを種々の勾配でS字状用量反応曲線に当てはめることによりEC50を外挿した。invivo活性研究ヌードnunuマウス7~8匹群に、培養内で増殖させた以下の腫瘍細胞を移植した:MCF7NCI25マトリゲル中の5×106細胞、ATCCからのPC325マトリゲル中の25×106細胞およびDSMZからのPC325マトリゲル中の5×105細胞。また、MCF7細胞のinvivo増殖のために、徐放エストロゲンペレット90日間放出を移植することにより、雌マウスにエストロゲン補充を行った。腫瘍が100mm3に達したら、キメラもしくはヒト化LIV1ADCまたは非結合性対照ADC3mgkgの投与を開始したq4d×4腹腔内注射。カリパスを使用して腫瘍体積をモニターし、腫瘍体積が~800mm3に達したら、動物を安楽死させた。1以上の動物を安楽死させるまで、各群に関して腫瘍体積中央値プロットを継続した。全ての動物の取り扱いは、AssociationforAssessmentandAccreditationofLaboratoryAnimalCareにより認められた施設において、InstitutionalAnimalCareandUseCommitteeにより承認されたプロトコールに従い行った。結果および考察の要約飽和結合BR222aは、成熟重鎖可変領域においてはBR214aに対して94の同一性を、そして成熟軽鎖可変領域においては91の同一性を示す。BR222aのマウスLiv1に関するKD表5を、ヒト乳癌細胞系、293F細胞において内因性タンパク質として又はCHO細胞系において組換えタンパク質として発現されたヒトLIV1に対して決定した。BR222aに関するKDも、CHO細胞系において組換えタンパク質として発現されたシノLIV1に対して決定した。ヒト化法重鎖にはVH102JH5生殖系列アクセプター配列を、そして軽鎖にはVK230JK4アクセプター配列を使用して、BR222a抗体をヒト化した。これらのアクセプター配列は、BR222A重鎖および軽鎖の成熟可変領域フレームワークに対する最高の配列同一性をそれらが有することに基づいて選択された。まず、5個の変異重鎖を構築した。それぞれはBR222aの重鎖からの3個のKabatCDRを含み、それらの鎖は、0個VAから11個VEまでの復帰突然変異を有する点で異なっていた。まず、6個の変異軽鎖を構築した。それぞれはBR222aの軽鎖からの3個のKabatCDRおよび0個LAから4個LFまでの復帰突然変異を含んでいた。これらの復帰突然変異は、抗原と直接的に相互作用しCDRコンホメーションに影響を及ぼし又は重鎖と軽鎖との間の境界に影響を及ぼす可能性を有する位置を特定するためのBR222A抗体のモデリングの結果として、およびBR214aとBR222aとの間の高い配列同一性によるBR214aのヒト化におけるこれまでの経験に基づいて選択された。実際、重鎖における同じ11個の位置および軽鎖における同じ4個の位置がBR214aおよびBR222aの両方における復帰突然変異に考慮されたL39はBR222aにおいては考慮されなかった。なぜなら、該マウス残基は該ヒト残基と同じだからである。ヒト化BR222aの各変異体に存在する復帰突然変異を以下の表6および7に示す。各変異体の成熟可変領域の完全配列を図16Aおよび16Bに示す。ついで、これらの5個の重鎖および6個の軽鎖の全ての順列を、BR222aと比較される競合アッセイにおいて試験した図17を参照されたい。マウス抗体と比較して改善された結合が僅か4個の復帰突然変異で得られ、それ以上の復帰突然変異は結合アフィニティを必ずしも改善しなかった、BR214a抗体での経験を考慮すると、驚くべきことに、BR222aの場合に近い結合アフィニティを示したヒト化鎖の唯一の組合せは、15個の復帰突然変異を有するHELFであった。その他の順列はLIV1への有意な結合を十分には又は全く示さなかった。これらの種々の順列のEC50を以下の表8に示す。HELFは満足な結合を示しているが、該抗体は、潜在的な免疫原性に関する理想より大きな数字である合計15個の復帰突然変異を含有する。したがって、個々の復帰突然変異の除去の効果を試験するために、HEおよびLF鎖を系統的に変化させた。図18は、試験した変異体を示す。LF1~LF4は、LFに存在する異なる復帰突然変異をそれぞれが欠いている点で、LFとは異なる。同様に、HE1~HE11は、HEに存在する復帰突然変異の1つを欠く。図19はLF1~LF4それぞれHEとペアになっているを比較したものである。LF2およびLF3は、LFグラフにおいてHELF経過対照として示されていると比較して実質的な結合アフィニティを喪失するが、LF1およびLF4は喪失しなかったことを、図19は示している。復帰突然変異L36およびL46は実質的に結合アフィニテイの保持に寄与するが、L37およびL45位の復帰突然変異は、結合に対する有意な効果を伴うことなく生じうる、と結論づけられた。図20は、HE変異体に関する、類似した結合曲線を示す。図20は、HE11がその結合のほとんどを喪失したことを示しており、このことは、H94位の復帰突然変異が、試験された復帰突然変異のうち、結合アフィニティに最大の効果をもたらすことを示している。また、H27、H29およびH30位の復帰突然変異の喪失はアフィニティの有意な喪失を引き起こした。H30の役割は、体細胞突然変異の結果であるマウス残基により合理的に説明されうる。H76位の復帰突然変異の喪失はアフィニティのかなりの喪失を引き起こした。H28、H48、H66、H67、H71およびH93位におけるその他の復帰突然変異は、結合アフィニティに対する効果をほとんど又は全く伴うことなく生じることが可能であった。これらの実験を考慮して、軽鎖LGの場合と同様に、重鎖HFおよびHGを構築した。HFはH27、H29、H30およびH94位に復帰突然変異を含み、HGはこれらの突然変異およびH76位の復帰突然変異を含んでいた。LGはL36およびL46位に復帰突然変異を含有する。HF、HG、LEおよびLFの幾つかの順列を、図21に示されているとおり、競合結合に関して試験し、全てはマウスBR222aの場合の3倍3のファクター以内の結合を示した。この実験を考慮して、結合アフィニティと最少の復帰突然変異との最良の組合せを表すHGLGを、更なる実験のために選択した。以下、この抗体はhLIV22と称される。CHO細胞から発現されたヒトおよびシノLIV1に対するhLIV22の飽和結合アフィニティを、hLIV14の場合と比較して図22に示す。図22は、hLIV22が、hLIV14より約4倍高い、ヒトLIV1に対するアフィニティ解離定数の逆数を有することを示している。更に、ヒトLIV1に対するhLIV22のアフィニティは、シノモルグスLIV1に対するそのアフィニティと、実験誤差内で同じであるが、hLIV14は、シノモルグスLIV1に対しては、ヒトLIV1に対するアフィニティの2倍のアフィニティを示している。ヒトLIV1に対するhLIV22のアフィニティは親マウス抗体BR222aの場合と実験誤差内で同じである。hLIV22ADCのinvitro抗腫瘍活性invitroでのhLIV22ADCの抗腫瘍活性を細胞傷害性アッセイにより測定した。まず、定量的FACS分析により、種々の細胞系におけるLIV1発現の調査を行った。ATCCからの乳癌細胞系MCF7は、他の起源からのMCF7細胞系と比較して最高レベルのLIV1結合部位/細胞を有していたデータ非表示。invitroアッセイに、この細胞系を使用した。種々のhLIV22ADCvcMMAE1006と称されるまたはmcMMAF1269と称される共にUS20050238649に記載されている小さな分子にコンジュゲート化されているは、該invitro細胞傷害性アッセイによる測定で、MCF7細胞の殺傷に非常に有効であることを、本発明者らは観察した。図23および24は、1006または1269にコンジュゲート化されたhLIV22を、1006または1269にコンジュゲート化された非結合性対照抗体と比較している。LIV1ADCのinvivo抗腫瘍活性図25および26に示されているとおり、前立腺癌PC3および乳癌MCF7モデルを使用して、hLIV22ADC抗体1個当たり平均4個の薬物を有するのinvivoでの抗腫瘍活性を測定した。vcMMAEにコンジュゲート化されたhLIV22ADCは、未処理および対照ADCと比較して有意な腫瘍遅延を示した。hLIV22vcMMAEを3mgkgで使用するMCF7の研究において、複数の完全退縮が観察された。また、全ての研究において、幾つかの動物は、対照と比較して静的な又は遅く成長する腫瘍を有していた。これらの研究は、hLIV22ADCが、乳癌および前立腺癌を含むLIV1発現癌の成長を停止または遅延させうることを示している。図27は該MCF7モデルにおけるhLIV22およびhLIV14ADCの活性を比較するものである。どちらの抗体も有効であったが、hLIV22のほうが僅かに有効であった。子宮頸癌のモデルにおいても、hLIV22ADCを試験した。HeLA細胞異種移植片モデルを該アッセイに使用した。腫瘍が適当なサイズに成長した後、vcMMAEにコンジュゲート化されたhLIV22を3mgkgおよび1mgkgで動物に投与した。対照抗体コンジュゲートは、3mgkgで投与した。3mgkgのhLIV22vcMMAEコンジュゲートが投与された動物において、完全退縮および部分的退縮が観察されたデータ非表示。このように、LIV1抗体および抗体薬物コンジュゲートは、LIV1発現子宮頸癌を治療するために使用されうる。III.抗LIV1抗体を使用する皮膚癌の治療メラノーマ腫瘍サンプル上のLIV1タンパク質の発現患者からのメラノーマサンプルを、IHC染色を用いて、LIV1発現に関して評価した。FFPEスライドを、72°CでBond商標Dewax溶液LeicacatAR9222を使用して脱パラフィン化した。100°Cで20分間、EDTA系Bond商標EpitopeRetrievalSolution2LeicacatAR9640を使用して、抗原回収を行った。IHC染色のために、アルカリホスファターゼ系検出キット:Bond商標PolymerRefineRedDetectionkitLeicacatDS9390を使用した。スライドを、予備的な30分間のタンパク質ブロックDAKOcatX0909を伴って、LIV1に対するマウスモノクローナル一次抗体1μgmlBR214aと共に45分間インキュベートした。マウスIgGSigmacatM5284を陰性対照として使用した。色素源の現像の後、切片をヘマトキシリンで対比染色し、カバーガラスで覆った。病理学者によりスライドが評価され、スコア化された。結果を図28に示す。試験されたメラノーマ患者サンプルのうちの722129がLIV1発現に関して陽性であった。このことは、LIV1インヒビター、例えば抗LIV1抗体が、メラノーマ癌を治療するために使用されうることを示している。LIV1ADCのinvivo抗メラノーマ活性ヌードnunuマウス7~8匹群に、培養内で増殖させた10×106個のSKMEL5細胞メラノーマ腫瘍由来細胞系を移植する。腫瘍を、カリパスを使用する測定でそれが100mm3になるまで、invivoで成長させる。ヒト化LIV1ADC、例えばhLIV14またはhLIV22を3mgkgで投与する。薬物コンジュゲートは例えばvcMMAEまたはmcMMAFである。また、対照動物に対照ADCを3mgkgで投与する。ADCは、q4d×4腹腔内注射として投与する。カリパスを使用して腫瘍体積をモニターし、腫瘍体積が~800mm3に達したら、動物を安楽死させる。hLIV14ADCまたはhLIV22ADCの投与は、対照ADCが投与された動物と比較して、動物における腫瘍成長を著しく低下させる。配列表配列番号1配列番号2配列番号3配列番号4配列番号5配列番号6配列番号7配列番号8配列番号9配列番号10配列番号11配列番号12配列番号13配列番号14配列番号15配列番号16配列番号17配列番号18配列番号19DNA配列配列番号20配列番号21配列番号22配列番号23配列番号24配列番号25配列番号26配列番号27配列番号28配列番号29配列番号30配列番号31配列番号32配列番号33配列番号34配列番号35配列番号36配列番号37配列番号38配列番号39配列番号40配列番号41配列番号42配列番号43配列番号44配列番号45配列番号46配列番号47配列番号48配列番号49配列番号50配列番号51配列番号52配列番号53配列番号54配列番号55配列番号56配列番号57配列番号58配列番号59配列番号60DNA配列配列番号61配列番号62配列番号63配列番号64配列番号65配列番号66配列番号67配列番号68配列番号69配列番号70配列番号71配列番号72配列番号73配列番号74配列番号75配列番号76配列番号77配列番号78配列番号79配列番号80配列番号81配列番号82配列番号83CynoLIV1"