"hTRAIL95よりも小さくない位置のアミノ酸で始まる可溶性hTRAILタンパク質配列の機能的フラグメント、またはそれに対して少なくとも70の相同性を有する配列である、ドメインa;および内因性のアポトーシス経路を介してアポトーシス促進作用をもたらす、アポトーシス促進性エフェクターペプチドの配列であるドメインb、ここで、ドメインbの配列は、ドメインaのC末端および/またはN末端において結合する、を含む、融合タンパク質。ドメインaが、可溶性hTRAILタンパク質配列のフラグメントであって、該フラグメントは、hTRAIL95~hTRAIL121を含めた範囲のアミノ酸で始まり、hTRAIL281のアミノ酸で終わる、請求項1に記載の融合タンパク質。ドメインaが、hTRAIL114281配列番号27、hTRAIL119281配列番号28、hTRAIL121281配列番号29、hTRAIL116281およびhTRAIL120281からなる群より選択される、請求項1または2に記載の融合タンパク質。ドメインaが配列hTRAIL95281である、請求項1に記載の融合タンパク質。ドメインbが:-配列番号30のBaxタンパク質のBH3ドメインのフラグメント;-配列番号31のBidタンパク質のフラグメント;-配列番号32のリボヌクレアーゼA;-配列番号33のチトクロムC;-配列番号34のグランザイムB;-配列番号35のNur77タンパク質のフラグメント;-配列番号36のBakタンパク質のBH3ドメイン;-配列番号37のPUMABBC3タンパク質のBH3ドメイン;-配列番号38のPUMABBC3タンパク質;-配列番号39のSMACDiabloタンパク質のフラグメント;-配列番号40のブフォリンA;-配列番号41のオンコナーゼ;-配列番号42のMdm2タンパク質のフラグメント;-配列番号43のMdm2に結合するペプチド;-配列番号44のルナシンのフラグメント;-配列番号45のBikタンパク質のBH3ドメイン;-配列番号46のプロテアソームのペプチド阻害剤;-配列番号47のUIMモチーフに結合するプロテアソームを含むドメイン;-配列番号151のアズリンから誘導されたペプチド;-配列番号152の全長アズリンペプチド;-配列番号153のaPPタンパク質とBaxタンパク質のBH3ドメインとから設計されたペプチド;-配列番号154のaPPタンパク質とBaxタンパク質のBH3ドメインとから設計されたペプチド;-配列番号155のレティキュロンRTN1Cから誘導されたペプチド;-配列番号156の全長ヒトレティキュロン3;-配列番号157の改変された構成的に活性なカスパーゼ-3;-配列番号158のPar4タンパク質のSACドメイン;-配列番号159のNoxaタンパク質;-配列番号160のNoxaタンパク質のMTDCKPフラグメント;-配列番号161の短いハイブリッドペプチドAntpTPR;-配列番号162のStat3タンパク質のSH2ドメインのペプチド阻害剤;-配列番号163のBakタンパク質のBH3ドメインから誘導されたペプチド;-配列番号164のBadタンパク質のBH3ドメインから誘導されたペプチド;-配列番号165のBfl1タンパク質からのペプチドATAPからなる群より選択される、請求項1~4のいずれか一項に記載の融合タンパク質。ドメインaとドメインbとの間に、ドメインcを含み、該ドメインcは、メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列、ウロキナーゼuPAにより認識される配列、フューリンにより認識される配列、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、腫瘍細胞環境において存在するプロテアーゼにより認識されるプロテアーゼ切断部位を含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の融合タンパク質。メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列が、配列番号51、配列番号171または配列番号173であり、ウロキナーゼuPAにより認識される配列が、配列番号52であり、フューリンにより認識される配列が、配列番号53または配列番号172である、請求項6に記載の融合タンパク質。ドメインcが、互いに隣接して配置されたメタロプロテアーゼMMPにより認識される配列とウロキナーゼuPAにより認識される配列との組合せである、請求項6または7に記載の融合タンパク質。ドメインcが、フューリンにより認識される配列である、請求項6または7に記載の融合タンパク質。ドメインbがさらに:-d1小胞体指向性の配列、-d26、7、8または9個のArg残基を含む、細胞膜を通して輸送するポリアルギニン配列、-d3配列番号54または配列番号176から選択されるPseudomonasaeruginosaの転位ドメイン;-d4膜輸送ドメイン、-d5核局在化ドメイン、および-d6ミトコンドリア標的化ドメイン、およびそれらの組み合わせ、からなる群より選択される輸送ドメインdと連結している、請求項1~9のいずれか一項に記載の融合タンパク質。小胞体指向性の配列d1が、KEDL配列番号55またはKDEL配列番号56である、請求項10に記載の融合タンパク質。小胞体指向性の配列d1が、融合タンパク質のC末端に位置する、請求項10または11に記載の融合タンパク質。ポリアルギニン配列d2が、融合タンパク質のC末端に位置する、請求項10に記載の融合タンパク質。ポリアルギニン配列d2が、ドメインbとcとの間に位置する、請求項10に記載の融合タンパク質。Pseudomonasaeruginosaの転位ドメインd3が、ドメインaとcとの間に位置する、請求項10に記載の融合タンパク質。さらに、ドメインa、b、cおよび/またはdの間にグリシン-セリン可橈性立体リンカーのドメインeを含む、請求項1~15のいずれか一項に記載の融合タンパク質。グリシン-セリンリンカーが、GGSG配列番号57、GGGS配列番号58、GGGGS配列番号59、GGSGG配列番号60、GGGSGG配列番号61、GGGSGGG配列番号62、GGGSGGGS配列番号63、GGGSGGGGS配列番号64、ASGG配列番号65、GGGSASGG配列番号66、GGSHG配列番号182、SGCGS配列番号169、GGGGSGGGG配列番号180、SGGCGGS配列番号183およびAACAA配列番号184からなる群より選択される、請求項16に記載の融合タンパク質。配列番号1;配列番号2;配列番号3;配列番号4;配列番号5;配列番号6;配列番号7;配列番号8;配列番号9;配列番号10;配列番号11;配列番号12;配列番号13;配列番号14;配列番号15;配列番号16;配列番号17;配列番号18;配列番号19;配列番号20;配列番号21;配列番号22;配列番号23;配列番号24;配列番号25;配列番号26;配列番号93;配列番号94;配列番号95;配列番号96;配列番号97;配列番号98;配列番号99;配列番号100;配列番号101;配列番号102;配列番号103;配列番号104;配列番号105;配列番号106;配列番号107;配列番号108;配列番号109;配列番号110;配列番号111;配列番号112;配列番号113;配列番号114;配列番号115;配列番号116;配列番号117;配列番号118;配列番号119;配列番号120および配列番号121からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、請求項1に記載の融合タンパク質。組み換えタンパク質である、請求項1~18のいずれか一項に記載の融合タンパク質。さらにそのC末端部分において、配列hTRAIL95121と、それに先行するそのコンストラクトからの切断を可能にするプロテアーゼ切断部位の配列とを含む、請求項1~19のいずれか一項に記載の融合タンパク質。請求項1~20のいずれか一項において定義される融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド配列。Ecoliにおける遺伝子発現のために最適化された、請求項21に記載のポリヌクレオチド配列。配列番号67;配列番号68;配列番号69;配列番号70;配列番号71;配列番号72;配列番号73;配列番号74;配列番号75;配列番号76;配列番号77;配列番号78;配列番号79;配列番号80;配列番号81;配列番号82;配列番号83;配列番号84;配列番号85;配列番号86;配列番号87;配列番号88;配列番号89;配列番号122;配列番号123;配列番号124;配列番号125;配列番号126;配列番号127;配列番号128;配列番号129;配列番号130;配列番号131;配列番号132;配列番号133;配列番号134;配列番号135;配列番号136;配列番号137;配列番号138;配列番号139;配列番号140;配列番号141;配列番号142;配列番号143;配列番号144;配列番号145;配列番号146;配列番号147;配列番号148;配列番号149;および配列番号150からなる群より選択される、請求項22に記載のポリヌクレオチド配列。請求項21~23のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。請求項24において定義される発現ベクターを含む、宿主細胞。Ecoli細胞である、請求項25に記載の宿主細胞。活性成分として請求項1~19のいずれか一項において定義される融合タンパク質を、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて含む、医薬組成物。ヒトを含む哺乳動物における癌性疾患の処置のための、請求項1~19のいずれか一項において定義される融合タンパク質の使用。ヒトを含む哺乳動物における癌性疾患の処置の方法であって、それを必要とする対象に、請求項1~19のいずれか一項において定義される融合タンパク質または請求項27において定義される医薬組成物の抗癌有効量を投与することを含む、前記方法。発明の詳細な説明本発明は、hTRAIL95よりも小さくない位置のアミノ酸で始まる、可溶性hTRAILタンパク質配列の機能的フラグメントであるドメインa、および、内因性アポトーシス経路を介してアポトーシス促進作用をもたらす、アポトーシス促進性エフェクターペプチドの配列であるドメインb、ここで、ドメインbの配列は、ドメインaのC末端および/またはN末端において結合している、を含む、融合タンパク質に関する。用語可溶性hTRAILの配列の機能的可溶性フラグメントとは、アポトーシスシグナルを誘導する任意の、かかる可溶性hTRAILのフラグメントを表わすものと理解されるはずである。また、TRAILの70相同性の存在が当該分野において公知であることは、当業者により理解されるであろう。用語ペプチドは、本発明により、ペプチド結合を通して一緒に連結された複数のアミノ酸から構築された分子として理解されるはずである。したがって、用語ペプチドは、本発明により、オリゴペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質を含む。本発明の融合タンパク質におけるエフェクターペプチドのドメインbは、hTRAILタンパク質でもhTRAILタンパク質の一部でもないことが理解されるはずである。本発明において、ペプチドのアミノ酸配列は、当該分野において受け入れられた従来の様式において、ペプチドのN末端N終末からそのC末端C終末へ向かう方向において、表わされるであろう。任意の配列が、したがって、そのN末端を左側に、C末端を右側に有するであろう。本発明の融合タンパク質は、エフェクターペプチドの単一のドメインbを、ドメインaのC末端またはN末端に結合して、含んでもよい。本発明の融合タンパク質はまた、エフェクターペプチドの2つのドメインbを含んでもよく、この場合、ドメインbの一方は、ドメインaのC末端に結合し、もう一方は、ドメインaのN末端に結合している。本発明の融合タンパク質がエフェクターペプチドの2つのドメインbを含む場合、これらのドメインは、同一であっても異なっていてもよい。好ましくは、この場合において、ドメインbは異なっている。特定の態様において、ドメインaは、hTRAIL配列の、hTRAIL114~hTRAIL121を含めた範囲のアミノ酸で始まり、アミノ酸hTRAIL281で終わるフラグメント、または、GenBankにおいてアクセッション番号P50591において公開されるhTRAIL配列の他の機能的フラグメントである。特に、ドメインaは、hTRAIL114281配列番号27、hTRAIL119281配列番号28およびhTRAIL121281配列番号29、hTRAIL116281およびhTRAIL120281に対応する配列からなる群より選択される。別の態様において、ドメインaは、配列hTRAIL95281であってよい。そのアポトーシス活性を内因性アポトーシス経路を介して細胞内で発揮するドメインbのアポトーシス促進性エフェクターペプチドは、アポトーシスのミトコンドリア経路のシグナルカスケード成分を活性化することにより、または、細胞内でのミトコンドリアによるアポトーシスの直接誘導により、直接的にアポトーシスを誘導し得る。本発明の融合タンパク質の一態様において、エフェクターペプチドは、内因性アポトーシス経路を介して作用するペプチドであって、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、および配列番号47、または配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号154、配列番号155、配列番号156、配列番号157、配列番号158、配列番号159、配列番号160、配列番号161、配列番号162、配列番号163、配列番号164、配列番号165および配列番号166からなる群より選択される。上記の群の配列番号30のエフェクターペプチドは、抗アポトーシス因子を阻害するBaxタンパク質のBH3ドメインから誘導されるペプチドであり、具体的には、により表わされる16アミノ酸のペプチドである。Baxタンパク質のBH3ドメインの配列に基づくペプチドは、抗アポトーシスタンパク質Bcl2およびBclXLに効率的に結合することができると考えられる。Bcl2およびBclXLタンパク質の抗アポトーシス活性は、アポトーシスの開始の原因である因子Bax、Bak、Badおいて存在するBH3ドメインとのそれらの相互作用に基づく。BH3ドメインの結合は、タンパク質Bcl2およびBclXLのそれらの天然のリガンドとの相互作用の防止、ならびにそれらの活性の阻害をもたらし、それによりアポトーシスの促進の開始に寄与する。上記の群の配列番号31のエフェクターペプチドは、により表わされる、Bidタンパク質のBH3ドメインを含む15アミノ酸のペプチドである。Bidタンパク質は、Bcl2ファミリーに属し、とりわけアポトーシス促進因子であるBaxの活性化の原因である。本発明の融合タンパク質に組み込まれたBidタンパク質のBH3ドメインを含む16アミノ酸のペプチドは、アポトーシスを効率的に誘導すると考えられる。上記の群の配列番号32のエフェクターペプチドは、により表わされる、リボヌクレアーゼARNaseAのペプチドホモログである。リボヌクレアーゼは、潜在的な抗悪性腫瘍特性を有する小さなタンパク質であり、これは、負に荷電した細胞膜に結合することにより、エンドサイトーシスを介して細胞に侵入し、次いでサイトゾル中に漏出し、ここでこれらは酵素として作用し、RNAの分解を引き起こす。10nMの濃度から開始して、これらは、細胞周期を停止させ、アポトーシスを引き起こす。上記の群の配列番号33のエフェクターペプチドは、により表わされる、チトクロムc分子である。ミトコンドリアから細胞質へのチトクロムcの放出は、いわゆるミトコンドリア経路を介してアポトーシスを誘導する主要なシグナルの一つである。当該タンパク質は、アポトーシス複合体の一部であり、これはカスパーゼ9を活性化する。上記の群の配列番号34のエフェクターペプチドは、により表わされる、グランザイムBである。文献においてはフラグメンチンとも称されるグランザイムは、Tcリンパ球およびNK細胞の細胞粒性cellulargranularityに典型的なセリンプロテアーゼである。ヒトにおいては、5つの異なるグランザイムが同定されている:A、B、H、KトリプターゼおよびMメチオニナーゼ。研究により、これらの酵素は、リンパ球により標的細胞に対して発揮される細胞傷害性反応の要素であることが確認されている。これらの酵素は、細胞膜に孔を生じさせてそれにより細胞傷害性応答を媒介するタンパク質であるパーフォリンを活性化することが示されている。さらに、これらの酵素は、標的細胞におけるアポトーシスの誘導に直接的に関与していると考えられている。グランザイムBは、選択されたプロカスパーゼを活性化形態例えばカスパーゼ3へと活性化し、また、Bidタンパク質Bcl2タンパク質ファミリーに属するタンパク質の活性化形態を、タンパク質分解を介して放出させ、これは、ミトコンドリア膜中への組み込みおよび膜における孔の発生と、その後のアポトーシス誘導因子チトクロムc、カスパーゼ9、Apafの放出により、アポトーシスの細胞内経路を開始させる。ヒストンへの結合により、グランザイムBはまた、クロマチン構造の弛緩にも関与し得、これは、その弛緩を引き起こし、DNAのエンドヌクレアーゼへのアクセスを増大させる。上記の群の配列番号35のエフェクターペプチドは、により表わされるNur77タンパク質のフラグメントである。核受容体Nur77は、非常に強力なアポトーシスの誘導因子である。その作用の機構の一つは、重要な抗アポトーシス因子であるBcl2タンパク質に結合する能力である。この相互作用は、Bcl2の構造の立体構造変化を引き起こし、これをアポトーシスの誘導因子へと変換する。上に表わされるフラグメントは、Bcl2の結合および変換ならびに細胞におけるアポトーシスの誘導の原因であると同定された、Nur77の配列からの9アミノ酸の領域であるKolluriら、CancerCell14285298、2008年。上記の群の配列番号36のエフェクターペプチドは、により表わされる、Bakタンパク質のBH3ドメインを含む15アミノ酸のペプチドである。本発明の融合タンパク質中に組み込まれたこの短いペプチドは、アポトーシスを効率的に誘導すると考えられる。上記の群の配列番号37のエフェクターペプチドは、により表わされる、タンパク質PUMABBC3のBH3ドメインである。PUMABBC3p53により上方調節されるアポトーシス/Bcl2結合コンポーネント3のモジュレーターは、Bcl2タンパク質ファミリーBH3のみのサブファミリーのメンバーである。これは、p53に非依存的および依存的な様式の両方において、アポトーシスを媒介する。全て公知の生存促進性Bcl2タンパク質によるPUMABBC3の直接的活性化は、それらの不活化、ミトコンドリアの機能不全、ならびにそれによるカスパーゼの活性化および細胞死を引き起こす。PUMAはまた、BakおよびBaxなどの分子のアポトーシス促進活性の回復に間接的に影響を及ぼす。BH3ドメインは、PUMAの、生存促進性タンパク質との結合の原因である。上記の群の配列番号38のエフェクターペプチドは、により表わされる、タンパク質PUMABBC3である。タンパク質PUMABBC3およびそのBH3ドメインの両方が、本発明の融合タンパク質に組み込まれた場合に、アポトーシスシグナルを誘導すると考えられる。上記の群の配列番号39のエフェクターペプチドは、により表わされる、タンパク質SMACDiabloの8アミノ酸のフラグメントである。SMACDIABLO第2のミトコンドリア誘導性のカスパーゼのアクチベーターSecondmitochondriaderivedactivatorofCaspase/低PI直接IAP結合タンパク質DirectIAPBindingProteinwithLowPIは、ミトコンドリアから放出されるカスパーゼのアクチベーターである。そのN末端モチーフは、IAPタンパク質に競合的に結合し、それらのBIR2およびBIR3ドメインがカスパーゼを不活化することを妨害する。この短いペプチドは、本発明の融合タンパク質に組み込まれた場合に、効率的にアポトーシスを誘導すると考えられる。上記の群の配列番号40のエフェクターペプチドは、により表わされる、ブフォリンIIbペプチドである。ブフォリンIIbは、ヒストンH2Aから誘導されるペプチドであって、細胞膜に非依存的に浸透することができ、抗菌特性を有するParkら、BiochemBiophysResCommun244253257、1998年。その抗癌剤としての有用性についての研究は、それが、多数の癌細胞に選択的に結合し、細胞に浸透し、核中に蓄積し、ミトコンドリア経路を介してアポトーシスを誘導することができることを示したLeeら、CancerLetters27147552008。上記の群の配列番号41のエフェクターペプチドは、により表わされる、オンコナーゼペプチドである。オンコナーゼまたはP30は、元々は、ヒョウガエルRanapipiens卵母細胞のライセートから誘導された。これは、12kDaの質量を有する一本鎖のタンパク質であり、RNaseAの構造アナログである。このタンパク質についての研究は、これが、腫瘍細胞に対して顕著な細胞傷害活性を有することを示したYWu、SMMikulski、WArdelt、SMRybakおよびRJYoule、TheJournalofBiologicalChemistry2681068610693。オンコナーゼの活性の機構についての研究は、これは内部移行のプロセスにより細胞内に侵入し、ここで、28Sおよび18SリボソームrRNAの分解プロセスを行い、これが、タンパク質合成の阻害および細胞死をもたらすことを示した。上記の群の配列番号42のエフェクターペプチドは、により表わされる、p14ARFタンパク質の20アミノ酸のN末端フラグメントであり、これは、生存促進性Mdm2タンパク質の阻害剤である。P14ARFは、Mdm2タンパク質の活性を調節するタンパク質である。Mdm2タンパク質は、腫瘍抑制因子p53に結合し、その分解の原因であり、したがって癌化細胞の生存の可能性の原因である。P14ARFタンパク質は、Mdm2への結合により、そのp53との相互作用を妨害する。p14ARFから誘導された短いペプチドは、Mdm2とp53との間の相互作用を遮断し、後者の分解を妨害するために十分であることが報告されるMidgleyら、Oncogene1923122323、2000年。上記の群の配列番号43のエフェクターペプチドは、により表わされる、Mdm2に結合する11アミノ酸のペプチドである。上記のペプチドは、p53の配列に対する配列相同性、およびMdm2p53相互作用の阻害の著しい有効性を示しBoettgerら、Oncogene1321412147、1996年、それによりp53の分解を妨害する。上記の群の配列番号44のエフェクターペプチドは、により表わされる、ルナシンペプチドの17アミノ酸のフラグメントである。ルナシンは、大豆Glycinemaxから誘導される43アミノ酸のペプチドであり、抗癌効力が証明されている。この分子の作用の一般的機構は、ヒストンアセチル化の阻害にある。デアセチラーゼ活性を有する分子が、転写プロセスの共抑制因子としても作用することは知られているLeongら、CancerLett184248、2007年。上記の群の配列番号45のエフェクターペプチドは、により表わされる、Bikタンパク質のBH3ドメインである。Bikタンパク質は、生存シグナル例えばBcl2を開始する細胞およびウイルスの因子と相互作用し、それによりアポトーシスを刺激する。多くの他のアポトーシス促進性タンパク質と同様に、これは、Bcl2との相互作用に必要なBH3ドメインを含む。このタンパク質から誘導されるBH3ドメインを含むペプチドは、他のアポトーシス促進性タンパク質を活性化することにより、または抗アポトーシスタンパク質を阻害することにより、アポトーシスを開始させ得るDelGaizoMooreVら、Blond111230023092008年。上記の群の配列番号46のエフェクターペプチドは、により表わされる、合成ペプチド-プロテアソーム阻害剤である。このペプチドは、一連のGlyおよびAla残基の反復からなり、TRAIL受容体DR5の過剰発現の誘導によりTRAIL誘導性アポトーシスを増強することができるプロテアソーム阻害剤である。上記の群の配列番号47のエフェクターペプチドは、により表わされる、プロテアソームS5aのC末端フラグメントのドメインである。プロテアソームS5aフラグメントからのこのドメインは、ユビキチン結合に直接的に関与するUIMsモチーフを含み、したがってアポトーシスを誘導する能力を有する。上記の群の配列番号151のエフェクターペプチドは、アズリンから誘導されるペプチドである。銅含有酸化還元タンパク質であり、病原性細菌Pseudomonasaeruginosaにより放出されるアズリンは、多くの癌細胞株に対して高度に細胞傷害性である。これは、サイトゾルに侵入し、核へと移動する。その活性は、癌細胞における活性形態のp53の存在に厳密に依存的である。アズリンは、p53に結合して、転写後にp53およびBaxのレベルを増大させることが示されている。Mdm2p53機能的相互作用に関してのこの一見拮抗性の作用は、p53に対するアズリンの結合が、Mdm2p53の関係を妨害し、したがってp53の分解を妨害する可能性があることを示唆する。結合により、これはミトコンドリアのチトクロムcのサイトゾル中への放出を誘発する。このプロセスは、カスパーゼのカスケードを活性化しカスパーゼ-9およびカスパーゼ-7を含む、それによりアポトーシスプロセスを開始させるPunjVら、Oncogene2004年3月25日;23236778、FunariGら、JMolRecognit2010年7~8月2334351。アズリン配列から誘導されたペプチドの活性の詳細な分析により、28アミノ酸の領域が効果的な細胞浸透およびアポトーシスの誘発の原因であることを明らかにしたYamadaiwspCellMicrobiol7141814312005。上記の群の配列番号152のエフェクターペプチドは、全長アズリンペプチドである。上記の群の配列番号153のエフェクターペプチドは、aPPタンパク質およびBaxタンパク質のBH3ドメインから設計されたペプチドである。aPPタンパク質と再設計されたアポトーシス促進性Bakタンパク質とのキメラは、ヒトBcl2およびBclXについての高度に強力であり特異性が高いリガンドとしてEP1309680において報告されたまた、ChinJWSchepartzADesignandevolutionofaminiatureBcl2bindingproteinAngewChemIntEdEngl2001年10月15日;4038063809を参照。上記の群の配列番号154のエフェクターペプチドは、aPPタンパク質とBaxタンパク質のBH3ドメインとから設計された別のペプチドである。上記の群の配列番号155のエフェクターペプチドは、レティキュロンRTN1Cから誘導されたペプチドである。RTN1Cタンパク質はERにおいて局在する膜タンパク質であり、神経系において発現し、その生物学的役割は完全には明らかとなっていない。RTN1Cの残基186~208に対応するC末端領域は、核酸と結合することができ、ヒストンデアセチラーゼHDAC酵素と相互作用してその活性を低下させることができる。上記の群の配列番号156のエフェクターペプチドは、ヒトレティキュロン3アイソフォームaの全長である。レティキュロンRTNは、他の既知のアポトーシス関連ドメインと相補性を有さない膜内在性タンパク質の群を形成する。レティキュロン3アイソフォームは、腫瘍細胞株において過剰発現し、それらをTRAIL媒介性のアポトーシスに対して感受性になるように変化させる。上記の群の配列番号157のエフェクターペプチドは、修飾された構成的に活性なカスパーゼ-3一本鎖であるSrinivasulaSMAhmadMMacFarlaneMLuoZHuangZFernandesAlnemriTAlnemriESGenerationofconstitutivelyactiverecombinantcaspase3and6byrearrangementoftheirsubunitsJBiolChem1998年4月24日;2731010711。上記の群の配列番号158のエフェクターペプチドは、Par4タンパク質前立腺アポトーシス応答タンパク質par4からのSACドメインである。Par4は、アポトーシス促進機能を有する腫瘍抑制因子タンパク質である。Par4の癌特異的なアポトーシス促進活性は、その中心に位置するSACドメインに帰する。当該分子の機能は、二つの異なる手段により達成される:細胞死機構の分子成分の活性化FasおよびFasLの細胞膜への転位、および生存促進性因子NFκB経路の阻害ZhaoYRangnekarVMApoptosisandtumorresistanceconferredbyPar4CancerBiolTher2008年12月;7186774、電子出版、2008年12月8日、概説。上記の群の配列番号159のエフェクターペプチドは、Noxaタンパク質である。Noxaは、Bcl2ファミリーのタンパク質のBcl2相同ドメイン3BH3のみのメンバーをコードする。このメンバーは、BH3領域を含むが、他のBHドメインを含まない。Noxaは、p53依存性アポトーシスのメディエーターであり、BH3モチーフ依存的にミトコンドリアに局在化し、抗アポトーシス性のBcl2ファミリーメンバーと相互作用し、カスパーゼ-9の活性化をもたらす。上記の群の配列番号160のエフェクターペプチドは、ミトコンドリアでの局在に必要とされるNoxaタンパク質の10AAKLLNLISKLFのフラグメントであるMTDミトコンドリア標的化ドメインまたはCKP細胞殺傷ペプチドCellKillingPeptide。これは、WO2006001582において、およびYoungWooSeoらTheJournalofBiologicalChemistry第278巻第48号、11月28日発行分、pp4829248299、2003年において記載される。上記の群の配列番号161のエフェクターペプチドは、WO2010055929において記載される短いハイブリッドペプチドAntpTPRである。AntpTPRは、Hsp90を標的とする操作されたハイブリッドペプチドであり、これは、HopのTPR2AドメインとのHsp90の相互作用の阻害に起因する、癌細胞に対する選択的な細胞傷害活性を有する。上記の群の配列番号162のエフェクターペプチドは、Stat3タンパク質のSH2ドメインのペプチド阻害剤である。Statタンパク質のSH2ドメインは、増殖因子およびサイトカインに対する応答における正常なSTATシグナルを介して細胞の増殖および分化をもたらす、一連の事象の原因である。上記の群の配列番号163のエフェクターペプチドは、Bakタンパク質Bcl2ファミリーのBH3ドメインから誘導されたペプチドGQVGRQLAIIGDDINRであるCastelliM、ReinersJJ、KesselDAmechanismfortheproapoptoticactivityofursodeoxycholicacideffectsonBcl2conformationCellDeathDiffer2004年8月;1190614。Bakタンパク質は、Bcl2ファミリーのアポトーシス促進性のメンバーであり、アポトーシスの開始に関与する。上記の群の配列番号164のエフェクターペプチドは、Badタンパク質Bcl2ファミリーのBH3ドメインから誘導されたペプチドKNLWAAQRYGRELRRMSDEFEGSFKGLであるWangJL、ZhangZJ、ChoksiS、ShanS、LuZ、CroceCM、AlnemriES、KorngoldR、HuangZCellpermeableBcl2bindingpeptidesachemicalapproachtoapoptosisinductionintumorcellsCancerRes2000年3月15日;601498502。上記の群の配列番号165のエフェクターペプチドは、Bfl1タンパク質からのペプチドATAPである。ATAP両親媒性のテイルアンカーペプチドBfl1からの残基147~175、二官能性Bcl2ファミリータンパク質は、ミトコンドリアを特異的に標的とし、BaxまたはBakを必要としないカスパーゼ依存的なアポトーシスを引き起こす。上記の群の配列番号166のエフェクターペプチドは、Bfl1タンパク質からの別のATAPペプチドである。ATAPタンパク質は、HCCS1からのMTSドメインに融合しているKoJK、ChoiKH、PanZ、LinP、WeislederN、KimCW、MaJThetailanchoringdomainofBfl1andHCCS1targetsmitochondrialmembranepermeabilitytoinduceapoptosisJCellSci2007年8月15日120291223電子出版、2007年7月31日。本明細書において上で記載されるように、ドメインbのアポトーシス促進性エフェクターペプチドの第1のバリアントは、内因性アポトーシス経路を介して細胞内そのアポトーシス活性を発揮するペプチドであってよく、これは、アポトーシスのミトコンドリア経路のシグナルカスケード成分を活性化するか、または細胞におけるミトコンドリア性アポトーシスの直接誘導により、直接的にアポトーシスを誘導する。第1のバリアントの一態様において、内因性経路を介してその活性を発揮するドメインbのアポトーシス促進性エフェクターペプチドの一群は、抗アポトーシスタンパク質Bcl2およびBclXLなどの細胞内抗アポトーシス因子または生存促進因子に結合することによりそれらを阻害および/または調節するペプチドであってよい。上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例1の融合タンパク質中に存在する配列番号30、例11および47の融合タンパク質中に存在する配列番号37、例21の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号45、例42および43の融合タンパク質中に存在する配列番号158、ならびに例44の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号159により代表されるペプチドである。この第1のバリアントの別の態様において、内因性経路を介してその活性を発揮するドメインbのアポトーシス促進性エフェクターペプチドの一群は、細胞内において直接的な破壊的効果を発揮して細胞周期を停止させるペプチドであってよい。前記の細胞内におけるミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果は、エフェクターペプチドにより、細胞死をもたらすカスパーゼカスケードの様々なレベルにおいて開始させることができる。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の例は、核酸の分解、特にホールセルRNAまたはDNA、および分解性ヌクレアーゼの誘導である。かかる効果は、例えば、ヒト膵臓RNAseを含む膵臓RNAseAのスーパーファミリーのリボヌクレアーゼ、ヒトアンジオゲニンリボヌクレアーゼ5、hAng、ヒト好酸球由来ニューロトキシンEDN、およびウシリボヌクレアーゼなどのリボヌクレアーゼ、ならびにそれらのホモログおよびバリアントにより発揮され得る。RNAseホモログの例は、RanacatesbianaおよびRanajaponicaから単離されたリボヌクレアーゼであるオンコナーゼである。核酸の分解により作用する上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例3、4および27の融合タンパク質中に存在する配列番号32、例16、17および46の融合タンパク質中に存在する配列番号41、ならびに例41の融合タンパク質中に存在する配列番号157により代表されるペプチドである。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、カスパーゼの活性化である。かかる効果は、例えば、例5および6の融合タンパク質中に存在するチトクロムc配列番号33、例7および8の融合タンパク質中に存在するグランザイムB配列番号34例14、21、33、34および35の融合タンパク質中に存在するタンパク質SmacDIABLOから誘導されるタンパク質配列番号39により発揮され得る。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、p53の機能の回復によるアポトーシス促進性タンパク質の安定化の影響に起因する、プロテアソーム阻害である。プロテアソーム阻害により作用する上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例22の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号46、および例23の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号47により代表されるペプチドである。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、p53の機能の回復によるアポトーシス促進性タンパク質の発現の影響の増強に起因する、ヒストンタンパク質の調節である。ヒストンタンパク質の調節により作用する上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例15の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号40により代表されるブフォリンIIb、例20の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号44により代表されるルナシンである。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、p53の機能の回復その分解の阻害によるものなどである。p53の分解の防止は、murinedoubleminute2MDM2などのp53のネガティブレギュレーターを阻害してその負の調節を阻害することにより達成することができる。これは、銅含有酸化還元タンパク質であるアズリン、細胞周期調節因子p14ARF、またはSuperTIPチオレドキシンインサートタンパク質ThioredoxinInsertprotein、細菌のチオレドキシンタンパク質の活性部位ループ内のmdm2結合ペプチド、またはそれらのフラグメントなどの、p53に結合することについてMDM2と競合するMDM2結合ペプチドにより達成することができる。p53の機能の回復により作用する上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例18の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号42、例19の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号43、例29、30および31の融合タンパク質中に存在する配列番号151、ならびに例32の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号152により代表されるペプチドである。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、タンパク質Bax、Bak、Bok、Bid、Bim、Bad、Bmf、Hrk、Noxa、Puma、Bik、BNIP3およびSpikeなどのBcl2タンパク質ファミリー、とりわけBid、Bim、Bad、Bmf、Hrk、Noxa、Puma、Bik、BNIP3およびSpikeを含むBH3のみのタンパク質ファミリーに影響を及ぼす、すなわちこれを活性化、阻害または調節することである。特に、Bcl2ファミリーメンバーのBH3ドメインのフラグメントは、有利なエフェクターペプチドとなるであろう。エフェクターペプチドの他の群は、例えば核受容体Nur77などの核受容体RXRレチノイドX受容体のファミリーのフラグメントである。Bcl2タンパク質ファミリーに影響を及ぼすことにより作用する上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例1の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号30、例2、4および8の融合タンパク質中に存在する配列番号31、例3の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号32、例9の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号35、例10の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号36、例11および47の融合タンパク質中に存在する配列番号37、例12および13の融合タンパク質中に存在する配列番号38、例44の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号159、例45の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号160、例51の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号163、例52および53の融合タンパク質中に存在する配列番号164、例54の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号165、ならびに例55の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号166により代表されるペプチドである。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、TRAIL受容体へのTRAILの結合により誘導されたアポトーシスシグナルを、特にカスパーゼの活性化により、転換することである。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、アポトソームの形成を促進することである。アポトソームの形成を促進することにより作用する上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例1の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号30、例2の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号31、例5および6の融合タンパク質中に存在する配列番号33、例9の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号35、例10の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号36、例47の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号37、例33、34および35の融合タンパク質中に存在する配列番号39、例14の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号40、例21の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号45、例36および37の融合タンパク質中に存在する配列番号153、例38の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号154、例41の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号157、例42および43の融合タンパク質中に存在する配列番号158、例44の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号159、例45の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号160、例51の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号163、ならびに、例52および53の融合タンパク質中に存在する配列番号164により代表されるペプチドである。前記のエフェクターペプチドのミトコンドリア系の内因性経路における直接的な破壊的効果の別の例は、ミトコンドリア外膜MOMPの透過化を促進することであり、これに起因して、ミトコンドリアにより放出されるタンパク質がカスパーゼ活性化レベルに対して作用することができる。MOMPの透過化を促進することにより作用する上記の群の例示的なエフェクターペプチドは、例1の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号30、例2および48の融合タンパク質中に存在する配列番号31、例5および6の融合タンパク質中に存在する配列番号33、例14、33、34および35の融合タンパク質中に存在する配列番号39、例15の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号40、例46の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号41、ならびに、例21の融合タンパク質中に組み込まれる配列番号45により代表されるペプチドである。本明細書において上に記載されるとおり、本発明のドメインbのアポトーシス促進性エフェクターペプチドの第2のバリアントは、外因性経路を介して細胞外で作用するアポトーシス促進性エフェクターペプチドの群であり、これは、その効果のために、癌細胞の表面上に存在する受容体に結合することを必要とする。細胞外で作用するペプチドとしての以下のTNFリガンドTNF-腫瘍壊死因子またはTNFアナログは、競合的なエフェクターペプチドとして使用した:配列番号48により代表されるデカペプチドは、JP60226816においてTNFのアナログ/アゴニストとして記載されている。配列番号49により代表されるヘキサカペプチドは、TNFから誘導され、DE3841768において記載されている。配列番号50により代表されるセプタペプチドは、5アミノ酸のペプチドであって、TNFサイトカインの一部であり、このサイトカインとその細胞受容体:TNFR55およびTNFR75との相互作用の表面から誘導され、2つのシステイン残基によりC末端およびN末端において挟まれている。システイン残基は、アミノ酸の間のスルフィド架橋の形成を介してペプチドの環化を安定化させる。環化の目的は、ペプチドの安定化およびその活性の改善である。癌細胞の表面上のTRAIL受容体への結合により、融合タンパク質は、二重の効果を発揮する。TRAILの機能的フラグメントであるドメインaは、その既知のアゴニスト活性発揮する、すなわち、細胞表面上のデスレセプターに結合し、アポトーシスの外因性経路を活性化する。細胞内で作用するアポトーシス促進性ペプチドを含む融合タンパク質のエンドサイトーシスを介した内在化の後で、ドメインbは、TRAILドメインの活性と並行して、その作用を細胞内で潜在的に発揮することができる。このようにして、TRAILの抗癌活性を、他の要素およびアポトーシスの機構の活性化により増強することができる。細胞外で作用するアポトーシス促進性ペプチドを組み込む比較上の融合タンパク質は、TRAIL受容体以外のアポトーシス促進性受容体に結合してこれを活性化することにより、アポトーシス経路を潜在的に付加的に開始させるはずである。本発明の一態様において、融合タンパク質のドメインaおよびbは、互いに直接的に連結していてもよい。別の態様において、ドメインaおよびドメインbは、細胞環境において、特に腫瘍細胞の環境において、プロテアーゼにより認識される、切断部位の配列を含むドメインcにより連結されていてもよい。プロテアーゼ切断部位は、以下から選択することができる:-メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列、特に、配列-ウロキナーゼuPAにより認識される配列、特に、RVVR配列配列番号52、および-フューリンにより認識される配列、特に、配列RKKR配列番号53、または配列RKKRVKR配列番号172、ならびにそれらの組み合わせ。特に、プロテアーゼ切断部位は、任意の順序で互いに隣接して配置された、メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列と、ウロキナーゼuPAにより認識される配列との組合せである。一態様において、ドメインcは、MMP/uPAの組み合わせ、配列番号51/配列番号52、すなわち配列PLGLAGRVVR、またはuPA/MMPの組み合わせ、配列番号52/配列番号51、すなわち配列RVVRPLGLAGである。プロテアーゼ類、メタロプロテアーゼMMP、ウロキナーゼおよび/またはフューリンは、腫瘍環境において過剰発現される。プロテアーゼにより認識される配列の存在は、コンストラクトの内在化の際の、ドメインbからのドメインaの切断、すなわち機能的ドメインbの放出を可能にし、したがってその活性化を可能にする。プロテアーゼ切断部位の存在は、エフェクターペプチドを迅速に放出させることにより、細胞内に存在するプロテアーゼによる融合ペプチドのランダムな分解が起こる前に、ペプチドをその作用の場所へと輸送する機会を増加させる。さらに、本発明の融合タンパク質のエフェクターペプチドのドメインbに対して、輸送ドメインdが結合していてもよく、これは、以下からなる群より選択される:d1小胞体指向性の配列、d26、7、8または9個のArg残基からなる、細胞膜を通して輸送するポリアルギニン配列、d3Pseudomonasaeruginosaの転位ドメイン配列番号54、d4膜輸送ドメイン、d5核局在化ドメイン、およびd6ミトコンドリア標的化ドメイン、およびそれらの組み合わせ。ドメインd1、d2およびd3の組み合わせは、特に、d1/d2、d1/d3またはd1/d2/d3の組み合わせを含んでもよい。ドメインd1、d2、d3、d4およびd5の組み合わせは、特にまた、d1/d2、d1/d3、d1/d4、d1/d5およびd1/d2/d3、d3/d5、d2/d5、d1/d3/d5、d2/d3/d6の組み合わせを含んでもよい。さらに、ドメインd1、d2、d3、d4およびd5の組み合わせは、互いに隣接して配置され、ドメインbの一方の末端に連結するドメイン、および/またはドメインbの様々な末端に結合するドメイン複数を含んでもよい。融合タンパク質が、ドメインbに結合した輸送ドメインと、ドメインaとbとの間の切断部位のドメインcとの両方を有する場合は、コンストラクトの切断の後で、輸送ドメインdがドメインbに結合したままの様式で、ドメインcは位置することが理解される。言い換えると、融合タンパク質が輸送ドメインdと切断部位ドメインcとの両方を含む場合、ドメインdは、ドメインbとドメインcとの間に位置するか、または、ドメインbのドメインdの結合の位置とは反対の末端に位置する。本発明は、ドメインdが、ドメインcとドメインaとの間に位置するようなバリアント、すなわち、コンストラクトの切断の後で輸送ドメインがTRAILドメインに結合したままとなる場合は含まない。輸送配列は、ドメインbのN末端において結合していても、C末端において結合していてもよい。一部の態様において、輸送配列はまた、ドメインaおよびbの結合の様式に依存して、全コンストラクトのC末端部分またはN末端部分などの末端部分であってよい。Pseudomonasaeruginosaの転位ドメインは、リソソーム膜を通した細胞質中への転位置が可能であり、エフェクターペプチドを腫瘍細胞コンパートメントへ導入するために用いることができる。Pseudomonasaeruginosaの転位ドメインの配列は周知であり、により表わされる。小胞体指向性の配列d1は、当該分野において公知の任意の小胞体指向性シグナル配列、例えば、非限定的に、KDEL、HDEL、RDEL、DDEL、ADEL、SDEL、KEDLなどであってよい。配列d1は、好ましくは、配列KDEL配列番号55およびKEDL配列番号56から選択される。好ましくは、標的化配列d1は、本発明の融合タンパク質のC末端において配置され、そのC末端部分を形成する。膜輸送ドメインd4は、細胞膜を通して輸送する当該分野において公知の任意のシグナル配列、例えば、非限定的に、KPRRPYまたはKPRRPYRなどであってよい。核局在化配列d5は、核中へ標的化する当該分野において公知の任意のシグナル配列、例えば、非限定的に、などであってよい。ミトコンドリア標的化ドメインd6は、ミトコンドリアへ標的化する当該分野において公知の任意のシグナル配列、例えば、非限定的に、またはオルニチントランスカルバミラーゼリーダーペプチドであってよい。融合タンパク質の主要な機能的エレメント、輸送ドメインおよび切断部位ドメインの他に、本発明の融合タンパク質は、ドメインe、すなわち、三量体の安定化を促進するポリシステインモチーフ、例えば非限定的になどを含んでもよい。さらに、ポリシステインドメインeは、ドメインbの一方の末端に結合していてもよく、および/またはドメインbの様々な末端複数に連結していてもよい。融合タンパク質がドメインbに結合したポリシステインドメインeと、ドメインaとbとの間の切断部位のドメインcとの両方を有する場合、ドメインcは、コンストラクトの切断の後で、ポリシステインドメインeがドメインaに結合したままの様式で位置することが理解されるはずである。言い換えると、融合タンパク質がポリシステインドメインeと切断部位ドメインcとの両方を含む場合、ドメインeは、ドメインaとドメインcとの間に位置するか、ドメインaのドメインdの結合の位置とは反対の末端に位置する。本発明は、ドメインeがドメインcとドメインbとの間に位置するようなバリアント、すなわち、コンストラクトの切断の後でポリシステインドメインがエフェクターペプチドドメインに結合したままである場合は含まない。融合タンパク質の機能的エレメント、輸送ドメインおよび切断部位ドメインの他に、本発明の融合タンパク質は、アラニン、グリシン、グルタミン、システイン、ヒスチジンおよびセリン残基からなる中性の配列/可橈性の立体リンカースペーサーの配列を含んでもよい。かかるリンカー/スペーサーは周知であり、文献において記載される。融合タンパク質の配列中へのそれらの組み込みは、宿主細胞中でのその過剰発現のプロセスにより生成されるタンパク質の正しい折りたたみを提供することを意図する。特に、可橈性の立体リンカーは、からなる群より選択することができる。態様の一つにおいて、ドメインaとドメインbとの間には、さらに、f本発明の融合タンパク質に対するPEGの結合に適した配列のドメインPEGリンカーが存在する。かかるリンカーは、付属の配列表において配列番号170として設計される、公知の配列AlaSerGlyCysGlyProGlu一文字変換においてはASGCGPEであってもよい。PEGリンカーはまた、付属の配列表においてそれぞれ配列番号178、配列番号177および配列番号179として設計される、AlaAlaCysAlaAlaAACAA、SerGlyGlyCysGlyGlySerSGGCGGSおよびSGCGS、の中から選択してもよい。別の態様において、ドメインa、b、c、d、eおよびfは、さらに、特にグリシンおよびグルタミンからなる群より選択されるアミノ酸残基から形成される3アミノ酸までの残基により分離されていてもよい。さらに、一部の態様において、融合タンパク質は、全コンストラクトのC末端部分として、配列hTRAIL95121などのhTRAILの非機能的フラグメントを、そのコンストラクトからの切断を可能にする配列、有利にはプロテアーゼ切断部位、好ましくはトロンビンにより認識される配列の後ろに含んでもよい。hTRAILのかかる小さな非機能的フラグメントの組み込みは、全コンストラクトに対してより大きな親水性を与え、したがって発現プロセスの間のタンパク質の可溶性を改善する。精製段階の後で、hTRAIL95121はトロンビンにより切断される。かかる場合において、hTRAIL95121は、医薬組成物の調製のために用いられる融合タンパク質中には存在しない。トロンビンにより認識される当該分野において公知の任意の配列、特に、配列LVPRGS配列番号174を用いてもよい。かかる付加的なhTRAIL95121配列は、親水性エフェクターペプチドの場合において、および、ドメインaが、全TRAILの配列においてアミノ酸114およびそれより上から始まる場合に、特に有利である。本発明の融合タンパク質の特定の態様は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号108、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号112、配列番号113、配列番号114、配列番号115、配列番号116、配列番号117、配列番号118、配列番号119、配列番号120および配列番号121により代表されるタンパク質からなる群より選択される、細胞外で作用するアポトーシス促進性ペプチドを含む融合タンパク質である。本発明の融合タンパク質の他の特定の態様は、配列番号24、配列番号25および配列番号26により代表されるタンパク質からなる群より選択される、細胞外で作用するアポトーシス促進性ペプチドを含む融合タンパク質である。上述の代表的な融合タンパク質の構造の詳細な記載は、図1~5および9~13において、ならびに本明細書において以下に示される例において示される。本発明によれば、融合タンパク質により、1または2以上のタンパク質またはそのフラグメントを含む単一のタンパク質分子が、ペプチド結合を介して各ペプチド鎖内で、さらなる化学リンカーなしで、共有結合していることが意味される。融合タンパク質はまた、タンパク質コンストラクトまたはキメラタンパク質として、代替的に記載することができる。本発明によれば、用語コンストラクトまたはキメラタンパク質とは、用いられる場合、上記の融合タンパク質を指すものとして理解されるはずである。当業者にとって、このようにして定義された融合タンパク質が、ペプチドおよびタンパク質の化学合成の公知の方法により合成し得ることは、明らかであろう。融合タンパク質は、化学的なペプチド合成の方法により、特に好適な樹脂をキャリアとして用いる固相におけるペプチド合成の技術を用いて、合成することができる。かかる技術は、慣用的であり、当該分野において公知であり、特に、例えばBodanszkyおよびBodanszky、ThePracticeofPeptideSynthesis、1984年、SpringerVerlag、NewYork、Stewartら、SolidPhasePeptideSynthesis、第2版。1984年、PierceChemicalCompanyなどの研究書において記載される融合タンパク質は、ペプチドの化学合成の方法により、連続的なタンパク質として合成することができる。あるいは、タンパク質の個別のフラグメントドメインを別々に合成して、次いで、1つのペプチドフラグメントのアミノ末端の第2のペプチドのカルボキシル末端からの縮合により、ペプチド結合を介して一緒に1つの連続的なペプチドに組み合わせてもよい。かかる技術は、慣用的であり、周知である。生じるペプチドの構造の検証のために、ペプチドの分子量を決定するための高分解能質量分析技術などの、ペプチドのアミノ酸組成の分析の公知の方法を用いてもよい。ペプチドの配列を確認するために、タンパク質シークエンサーを用いてもよい。これは、逐次的にペプチドを分解して、アミノ酸配列を同定する。好ましくは、しかし、本発明の融合タンパク質は、組み換えタンパク質であり、宿主細胞における融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の遺伝子発現の方法により生成される。本発明のさらなる側面は、ポリヌクレオチド配列、特に上で定義される融合タンパク質をコードするDNA配列である。好ましくは、本発明による上で定義される融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列、特にDNAは、Ecoliにおける発現のために最適化された配列である。本発明の別の側面はまた、ポリヌクレオチド配列、特に上で定義される本発明のDNA配列を含む発現ベクターである。本発明の別の側面はまた、上で定義される発現ベクターを含む宿主細胞である。本発明の融合タンパク質の発現のための好ましい宿主細胞は、Ecoli細胞である。融合タンパク質を含む組み換えタンパク質の生成のための方法は、周知である。簡単に述べると、この技術は、ポリヌクレオチド分子、例えば標的タンパク質のアミノ酸配列をコードし、宿主における標的タンパク質の発現を指揮するDNA分子の生成にある。次いで、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子を、ポリペプチドの効率的な発現を保証する適切な発現ベクター中へ組み込む。組換え発現ベクターを、次いで、トランスフェクション/形質転換のために、宿主細胞中に導入し、その結果として、形質転換された宿主細胞が提供される。その後、形質転換細胞を培養し、標的タンパク質を過剰発現させ、得られたタンパク質を精製し、随意に、タンパク質の発現または精製のために用いられたタグ配列を切断により切り取る。好適な発現および精製の技術は、例えば、研究書Goeddel、GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185AcademicPressSanDiegoCAおよびAStaronら、AdvancesMikrobiol、2008年、第47巻第2号、19831995において記載される。宿主細胞におけるDNA配列の導入および複製のための発現ベクターとして、コスミド、プラスミドまたは改変ウイルスを用いることができる。代表的には、プラスミドを発現ベクターとして用いる。好適なプラスミドは、周知であり、市販されている。本発明の発現ベクターは、本発明の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子、ならびに好適な宿主細胞中に組み込まれたコード配列の転写および翻訳のために必要な調節配列を含む。調節配列の選択は、宿主細胞の型に依存し、当業者により容易に行われることができる。かかる調節配列の例は、転写開始シグナルを含みコード配列の前に挿入される、転写プロモーターおよびエンハンサーまたはRNAポリメラーゼ結合配列、リボソーム結合配列、ならびにコード配列の後に挿入される転写終結配列である。さらに、用いられる宿主細胞およびベクターに依存して、複製起点、さらなるDNA制限酵素切断部位、エンハンサー、および転写の誘導を可能にする配列などの他の配列を発現ベクター中に導入してもよい。発現ベクターはまた、遺伝子配列のマーカーを含み得、これは、形質転換細胞に対して既定の表現型を付与し、形質転換細胞の特異的選択を可能にする。さらに、ベクターはまた、挿入された標的タンパク質のコード配列を含む組換えプラスミドで形質転換された細胞を、インサートなしのプラスミドを取り込んだものから区別することを可能にする第2のマーカー配列を含んでもよい。より頻繁には、代表的な抗生剤耐性を用いるが、しかし、細胞におけるinvivoでのその存在がオートラジオグラフィー技術、分光分析または生物および化学発光を用いて容易に決定し得る、当該分野において公知の任意の他のレポーター遺伝子を用いてもよい。例えば、宿主細胞に依存して、β-ガラクトシダーゼ、β-グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼまたは緑色蛍光タンパク質などのレポーター遺伝子を用いることができる。さらに、発現ベクターは、適切な細胞コンパートメント、例えば折りたたみが促進される周辺質へ、タンパク質を輸送するシグナル配列を含んでもよい。さらに、N末端に結合したHisタグまたはC末端に結合したGSTなどの標識/タグをコードする配列が存在してもよく、これは、その後の生成されたタンパク質のアフィニティーの原理を用いてニッケルカラム上でのアフィニティークロマトグラフィーを介した精製を促進する。宿主細胞中でのタンパク質分解に対してタンパク質を保護するさらなる配列、ならびにその可溶性を増大させる配列もまた存在してよい。標的タンパクの配列に結合した補助エレメントは、その活性を遮断するか、または別の理由により、例えば毒性に起因して、有害である場合がある。かかるエレメントは、取り除かれなければならず、これは、酵素的または化学的切断により達成することができる。特に、アフィニティークロマトグラフィータンパク質精製を可能にする、6ヒスチジンタグHisタグまたはこの型の他のマーカーは、その可溶性TRAILタンパク質の肝臓毒性について記載されている効果のため、取り除かれるべきである。原核細胞:EscherichiacoliまたはBacillussubtilisなどの細菌、SaccharomycescervisiaeまたはPichiapastorisなどの酵母、および真核細胞株昆虫、哺乳動物、植物を含む、多様な周知の宿主細胞に基づく異種性発現系を用いることができる。好ましくは、培養および遺伝子操作の容易性、ならびに得られる生成物が大量であるために、Ecoli発現系を用いる。したがって、本発明の融合タンパク質をコードする標的配列を含むポリヌクレオチド配列は、Ecoliにおける発現のために最適化される。すなわち、それは、コード配列において、技術水準において公知の可能な配列バリアントから選択されるEcoliにおける発現に最適なコドンを含む。さらに、発現ベクターは、コード配列に結合した、Ecoliに好適な上記のエレメントを含む。したがって、本発明の好ましい態様において、本発明の融合タンパク質をコードする配列を含む、Ecoliにおける発現のために最適化されたポリヌクレオチド配列は:配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号77、配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87、配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91、配列番号92、配列番号122、配列番号123、配列番号124、配列番号125、配列番号126、配列番号127、配列番号128、配列番号129、配列番号130、配列番号131、配列番号132、配列番号133、配列番号134、配列番号135、配列番号136、配列番号137、配列番号138、配列番号139、配列番号140、配列番号141、配列番号142、配列番号143、配列番号144、配列番号145、配列番号146、配列番号147配列番号148、配列番号149および配列番号150からなるポリヌクレオチド配列の群から選択され、それらは、それぞれ、アミノ酸配列:配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97、配列番号98、配列番号99、配列番号100、配列番号101、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号106、配列番号107、配列番号108、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号112、配列番号113、配列番号114、配列番号115、配列番号116、配列番号117および配列番号118、配列番号119、配列番号120および配列番号121からなる群より選択されるアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する融合タンパク質をコードする。好ましい態様において、本発明はまた、上で示される配列番号67~配列番号92および配列番号122~配列番号150のポリヌクレオチド配列の群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、Ecoliの形質転換に好適な発現ベクター、ならびにかかる発現ベクターにより形質転換されたEcoli細胞を提供する。形質転換、すなわち、細菌宿主細胞、特にEcoli中へのDNA配列の導入は、通常は、例えば低温4°Cにおけるカルシウムイオンによる処置とその後に熱ショック37~42°Cに供することにより、またはエレクトロポレーションにより、DNAを取り込むように調製された、コンピテント細胞に対して行われる。かかる技術は周知であり、通常は、発現系の製造者により決定される。Ecoli発現系における本発明の融合タンパク質の過剰発現の手法は、以下にさらに記載される。本発明はまた、活性成分としての上で定義されたとおりの本発明の融合タンパク質、ならびに好適な薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤および慣用的な補助成分を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、本発明の融合タンパク質の有効量および薬学的に受容可能な補助成分を、キャリアまたは希釈剤中に溶解または分散して含み、好ましくは、単位投与形態または複数の用量を含む処方物において処方された医薬組成物の形態である。医薬形態およびそれらの処方、ならびに他の成分、キャリアおよび希釈剤は、当業者に公知であり、文献において記載される。例えば、それらは、研究書、RemingtonsPharmaceuticalSciences、第20版、2000年、MackPublishingCompany、Easton、USA。用語薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤および補助成分とは、当該分野において公知の任意の溶媒、分散媒、界面活性剤、抗酸化剤、安定化剤、保存剤例えば、抗生剤、抗真菌剤、等張化剤を含む。本発明の医薬組成物は、経口、非経口、吸入、局所のための液体、固体およびエアロゾル形態などの、選択された投与の経路および所望の投与形態、ならびに選択された形態が注射によるものなどの投与経路のために無菌でなければならないか否かに依存して、多様な型のキャリア、希釈剤および賦形剤を含んでもよい。本発明による医薬組成物の好ましい投与経路は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、腫瘍内などの注射経路を含む非経口、または単一または持続的な静脈内注入である。一態様において、本発明の医薬組成物は、腫瘍に直接的に注射することにより投与することができる。別の態様において、本発明の医薬組成物は、静脈内注射することができる。さらに別の態様において、本発明の医薬組成物は、皮下または腹腔内で投与することができる。非経口投与のための医薬組成物は、薬学的に受容可能な水性または非水性の、適切なpHに緩衝化され、必要である場合は体液と等張な、媒体中での溶液または分散であってよく、また、組成物をレシピエントの組織または血液に適合性にする抗酸化剤、緩衝化剤、静菌剤および可溶性物質を含んでもよい。組成物中に含まれ得る他の成分は、例えば、水、エタノールなどのアルコール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなどのポリオール、トリグリセリド、植物油、リポソームなどの脂質である。適切な流動性および物質の粒子サイズは、レシチンなどのコーティング物質およびヒドロキシプロピルセルロースポリソルベートなどの界面活性剤により提供することができる。液体の非経口用組成物のための好適な等張化剤は、例えば、ブドウ糖などの糖および塩化ナトリウムおよびそれらの組み合わせである。あるいは、注射または注入による投与のための医薬組成物は、使用の直前に例えば無菌のパイロジェンフリー水などの好適なキャリア中で再構成するための凍結乾燥粉末などの、粉末の形態におけるものであってもよい。非経口投与のための本発明の医薬組成物はまた、溶液、スプレーまたはエアロゾルを含む鼻投与の形態を有してもよい。好ましくは、鼻内投与のための形態は、水溶液であり、鼻の分泌物と類似の特徴を維持するように、等張であるか、またはpH約5.5~約6.5に維持するために緩衝化されている。さらに、それは、周知の鼻内用調製物中のもののような保存剤または安定化剤を含む。組成物は、1または2以上の成分の酸化を遅延させる多様な抗酸化剤を含んでもよい。さらに、微生物の作用を防止するために、組成物は、例えば非限定的にパラベン類、クロロブタノール、チメロサール、ソルビン酸、およびこの型の類似の公知の物質を含む多様な抗菌剤および抗真菌剤を含んでもよい。一般に、本発明の医薬組成物は、例えば少なくとも約0.01wtの活性成分を含んでもよい。とりわけ、組成物は、活性成分を、組成物の単位の1~75重量、または例えば25~60重量において含むことができるが、示した値に限定されるものではない。ヒトを含む患者に投与される本発明による組成物の用量の実際の量は、体重、状態の重篤度、処置される疾患の型、先のまたは併用の治療的介入、患者および投与の経路などの、物理的および生理学的要因により決定される。好適な単位用量、全用量および組成物中の活性成分の濃度は、処置する医師により決定されるべきである。組成物は、例えば、患者の体重1kgあたり約1マイクログラム~約1000mgの用量において、例えば体重1kgあたり5mg~100mgの範囲において、または体重1kgあたり5mg~500mgの範囲において、投与することができる。融合タンパク質およびそれを含む組成物は、抗癌性または抗腫瘍性を発揮し、癌性疾患の処置のために用いることができる。本発明はまた、上で定義されるような本発明の融合タンパク質の、ヒトを含む哺乳動物における癌性疾患を処置するための使用を提供する。本発明はまた、ヒトを含む哺乳動物における癌性疾患を処置する方法を提供し、該方法は、かかる処置を必要とする対象に、上で定義されたような本発明の抗癌性の融合タンパク質の有効量を、随意に適切な医薬組成物の形態において、投与することする。本発明の融合タンパク質は、白血病、肉芽種症、ミエローマおよび他の血液系悪性腫瘍などの血液系悪性腫瘍の処置のために用いることができる。融合タンパク質はまた、乳癌、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、腎臓癌、脳腫瘍など固形腫瘍の処置のために用いることができる。癌の処置における融合タンパク質の適切な投与の経路は、特に、本発明の融合タンパク質を注射または注入の形態においてこの投与経路に適切な組成および形態において投与することからなる、非経口投与である。本発明は、以下の一般的手法および具体的な融合タンパク質の例において、より詳細に記載される。融合タンパク質の過剰発現のための一般的手法プラスミドの調製標的の融合タンパク質のアミノ酸配列を鋳型として用いて、それをコードし、Escherichiacoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNA配列を生成した。かかる手法により、Escherichiacoliにおける標的タンパク質の合成のさらなる段階の効率を増大させることができる。生じたヌクレオチド配列を、次いで、自動合成した。さらに、生じた標的タンパク質をコードする遺伝子に、制限酵素NdeIの切断部位リード鎖の5’末端においておよびXhoIの切断部位リード鎖の3’末端においてを追加した。これらを用いて、遺伝子をベクターpET28aNovagen中にクローニングした。それらをまた、他のベクターにタンパク質をコードする遺伝子をクローニングするためにも用いた。このコンストラクトから発現される標的タンパク質は、N末端においてポリヒスチジンタグ6個のヒスチジンを備え前にトロンビンにより認識される部位を有する、これはその後、アフィニティークロマトグラフィーを介したその生成に役立った。生じたコンストラクトの正確性を、第1に、単離したプラスミドの酵素NdeIおよびXhoIを用いた制限酵素分析により確認し、その後、標的タンパク質のリーディングフレーム全体の自動シークエンシングにより確認した。シークエンシングのために用いたプライマーは、ベクター中に存在するT7プロモーター5’TAATACGACTCACTATAGG3’およびT7ターミネーター5’GCTAGTTATTGCTCAGCGG3’の配列に相補的である。生じたプラスミドを用いて、製造業者の推奨に従って形質転換した市販のEcoli株において、標的の融合タンパク質を過剰発現させた。選択培地LB寒天、カナマイシン50μg/ml、1ブドウ糖上で得られたコロニーを用いて、カナマイシン50μg/mlおよび1ブドウ糖を添加したLB液体培地中で、一晩培養物を調製した。シェイカーインキュベーターにおける約15hの増殖の後で、培養物を用いて、適切な培養物に播種した。融合タンパク質の過剰発現および精製-一般的手法Aカナマイシン30μg/mlおよび100uMの硫酸亜鉛を含むLB培地に、一晩培養物を播種した。培養物を、600nmでの光学密度ODが0.60~0.80に達するまで37°Cでインキュベートした。次いで、IPTGを、0.25~1mMの範囲の最終濃度まで添加した。25°Cで振盪してのインキュベーション3.5~20hの後で、培養物を25分間、6,000gで遠心分離した。細菌ペレットを50mMのKH2PO4、0.5MのNaCl、10mMのイミダゾールを含むpH7.4の緩衝液中で再懸濁した。懸濁液を氷上で8分間超音波処理した40の振幅、15秒パルス、10sのインターバル。生じた抽出物を、40分間、20.000g、4°Cにおける遠心分離により清澄化した。Ni-セファロースGEHealthcare樹脂を、緩衝液での平行化により前処理し、これを、細菌細胞抽出物の調製のために用いた。樹脂を、次いで、抽出物の遠心分離の後で得られた上清と共に一晩4°Cでインキュベートした。次いで、それをクロマトグラフィーカラム中へロードし、15~50容積の緩衝液50mMのKH2PO4、0.5MのNaCl、20mMのイミダゾール、pH7.4で洗浄した。得られたタンパク質を、0.5MのNaClを含む50mMのKH2PO4緩衝液pH7.4中のイミダゾール勾配を用いてカラムから溶出させた。得られた画分をSDS-PAGEにより分析した。適切な画分を組み合わせて、4°Cで、50mMのTris緩衝液pH7.2、150mMのNaCl、500mMのL-アルギニン、0.1mMのZnSO4、0.01のTween20に対して一晩透析し、同時に、Hisタグをトロンビン1:50で切断した。切断の後で、ベンズアミジンセファロース商標樹脂を用いて、トロンビンを標的の融合タンパク質から分離した。生成物の純度を、SDS-PAGE電気泳動により分析したManiatisら、MolecularCloning、ColdSpringHarbor、NY、1982年。融合タンパク質の過剰発現および精製-一般的手法Bカナマイシン30μg/mlおよび100μMの硫酸亜鉛を含むLB培地に、一晩培養物を播種した。培養物を、600nmでの光学密度ODが0.60~0.80に達するまで37°Cでインキュベートした。次いで、IPTGを、0.5~1mMの範囲の最終濃度まで添加した。25°Cで振盪しての20hのインキュベーションの後で、培養物を25分間、6,000gで遠心分離した。過剰発現後の細菌細胞を、フレンチプレスにおいて、50mMのKH2PO4、0.5MのNaCl、10mMのイミダゾール、5mMのベータ-メルカプトエタノール、0.5mMのPMSFフッ化フェニルメチルスルホニルを含む緩衝液pH7.8中で破壊した。生じた抽出物を、50分間、8,000gでの遠心分離により清澄化した。Ni-セファロース樹脂を、一晩、得られた上清と共にインキュベートした。次いで、タンパク質が結合した樹脂を、クロマトグラフィーカラム中へ充填した。未結合のタンパク質を含む画分を洗い流すために、カラムを15~20容積の緩衝液50mMのKH2PO4、0.5MのNaCl、10mMのイミダゾール、5mMのベータ-メルカプトエタノール、0.5mMのPMSFフッ化フェニルメチルスルホニルpH7.8で洗浄した。次いで、特異的にベッドに結合しているタンパク質の大部分を洗い流すために、カラムを、50mMのKH2PO4、0.5MのNaCl、500mMのイミダゾール、10グリセロール、0.5mMのPMSFを含む緩衝液pH7.5で洗浄した。得られた画分を、SDS-PAGEにより分析したManiatisら、MolecularCloning、ColdSpringHarbor、NY、1982年。標的タンパク質を含む画分を組み合わせて、トロンビンタンパク質4mgあたり1U、8h、16°Cでで切断し、ポリヒスチジンタグを除去した。次いで、画分を、処方緩衝液500mMのL-アルギニン、50mMのTris、2.5mMのZnSO4pH7.4に対して透析した。2-D電気泳動を用いた融合タンパク質の特徴づけ得られたタンパク質をさらに特徴づけるために、およびクロマトグラフィーの条件を正確に選択するために、タンパク質の等電点を決定した。この目的のために、以下のスケジュールに従って、2段階において、2次元電気泳動2-D方法を用いた。ステップ1.pH勾配および変性条件におけるタンパク質の等電点分離。1~2mg/mlの濃度でのタンパク質調製物を、アセトン中に10のトリクロロ酢酸および0.07のベータ-メルカプトエタノールを含む沈殿溶液と1:1の比において混合することにより沈殿させた。混合物を、30分間20°Cでインキュベートし、ついで、25分間、15,000g、4°Cにおいて遠心分離した。上清を除去し、ペレットを0.07のベータ-メルカプトエタノールを含む冷たいアセトンで2回洗浄した。次いで、アセトンの残りを、検出可能な匂いがなくなるまで蒸発させた。タンパク質ペレットを、その後に用いるストリップstripに依存して、250mlの再水和緩衝液8Mの尿素、、1のCHAPS、15mMのDTT、0.5の両性電解質GEHealthcare、pH3~11または6~11のプロフィールを有する中で懸濁した。タンパク質溶液を、等電点分離のためのセラミックチャンバー内に入れ、その後、適切なpHプロフィール3~11または6~11を有する13cmのDryStripGEHealthcareを入れた。全体を鉱物油の層で被覆した。チャンバーをEttanIPGphorIII装置内に置き、ここで、ストリップおよびpHプロフィールの次元に割り当てられた以下のプログラムに従って、等電点分離を行った。16hの20°Cでの脱水。固定pH勾配での電場における分離focusing次いで、分離されたタンパク質を含むストリップを、1分間、脱イオン化水中で洗浄し、クーマシーブリリアントで染色し、次いで、脱色して、タンパク質の位置をマークするために画像として記録した。脱色されたストリップを、2×15分間、以下の組成の緩衝液で平行化した:50mMのTris-HClpH8.8、6M尿素、1DTT、2SDS、30グリセロール。ステップ2.SDS-PAGEによる第2方向における分離。ストリップを、1標準物質サイズあたり1ウェルを含む12.5ポリアクリルアミドゲル上に置き、次いで、SDS-PAGEのための装置において200Vの電圧で3時間、分離を行った。ゲルをクーマシーブリリアントで染色し、次いで、適用されるスケールで記録した。タンパク質を、その重量をサイズの標準に基づいて決定することにより同定し、そのIPIを、製造者GEHealthcareにより提供される曲線陽極としてマークされた末端からのストリップの長さのに対するpHの比に基づいて6~11のスケールについて、または、等電点分離較正キットGEHealthcareにより実験的に決定された曲線に基づいて3~11のスケールについて、読み取った。本発明の融合タンパク質の代表的な例を以下に記載する。例1.配列番号1の融合タンパク質配列番号1のタンパク質は、194アミノ酸の長さおよび22.7kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のN末端において、Baxタンパク質のBH3ドメインから誘導された16アミノ酸のペプチド配列番号30がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの16アミノ酸の配列のC末端において、7個のArgR残基のポリアルギニン配列が結合している。ポリアルギニン配列は、細胞膜の浸透および融合タンパク質の細胞内への輸送を補助する。ポリアルギニン配列とTRAILドメインとの間に、互いに連続的に、ウロキナーゼuPAにより認識される配列配列番号52およびメタロプロテアーゼMMPにより認識される配列配列番号51が組み込まれており、これにより、融合タンパク質の内在化の際に、エフェクターペプチドが腫瘍環境において切断される。融合タンパク質の構造を、図1において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号1および配列番号67である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、一般的手法Aに従って、Ecoli株BL21DE3およびTunerDE3pLysSいずれもNovagen製を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的手法に従って、電気泳動により分離した。例2.配列番号2の融合タンパク質配列番号2の融合タンパク質は、193アミノ酸の長さおよび22.5kDaの質量を有するタンパク質であり、ここで、121281TRAIL配列のN末端において、Bidタンパク質から誘導された16アミノ酸のペプチド配列番号31がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、エフェクタータンパクのC末端に、7個のArg残基からなるポリアルギニン配列が結合している。ポリアルギニン配列は、細胞膜の浸透および融合タンパク質の細胞内への輸送を補助する。ポリアルギニン配列とTRAILの配列との間に、メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列配列番号51およびウロキナーゼuPAにより認識される配列配列番号52が互いの隣に連続して組み込まれており、これにより、融合タンパク質の内在化に際して、エフェクターペプチドが腫瘍環境において切断される。融合タンパク質の構造を、図1において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号2および配列番号68である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例3.配列番号3の融合タンパク質配列番号3の融合タンパク質は、303アミノ酸の長さおよび34.2kDaの質量を有するタンパク質であり、ここで、121281TRAIL配列のC末端において、リボヌクレアーゼRNaseAのホモログ配列番号32がエフェクターペプチドとして結合している。ポリアルギニン配列とTRAILの配列との間に、メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列配列番号51およびウロキナーゼuPAにより認識される配列配列番号52が、互いの隣に連続して組み込まれており、これにより、融合タンパク質の内在化に際して、エフェクターペプチドが腫瘍環境において切断される。タンパク質はまた、TRAILドメイン配列と切断部位の配列との間に、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSG配列番号57を含む。さらに、エフェクターペプチドのC末端において、タンパク質は、小胞体指向性の配列KEDL配列番号56を含み、これもまたコンストラクト全体のC末端部分である。融合タンパク質の構造を、図1において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号3および配列番号69である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例4.配列番号4の融合タンパク質配列番号4の融合タンパク質は、293アミノ酸の長さおよび33.2kDaの質量を有する融合タンパク質であり、TRAIL121281配列のC末端において、リボヌクレアーゼRNaseAのホモログ配列番号32がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドとTRAILの配列との間に、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGSGGGS配列番号63が存在する。融合タンパク質の構造を、図1において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号4および配列番号70である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Stratagene製のEcoli株BL21DE3pLysSRILおよびNovagen製のTunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例5.配列番号5の融合タンパク質配列番号5の融合タンパク質は、283アミノ酸の長さおよび31kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、121281TRAIL配列のC末端において、チトクロムcの配列配列番号33がエフェクターペプチドとして結合している。TRAILドメインの配列とエフェクタータンパク質の配列との間に、メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列配列番号51およびウロキナーゼuPAにより認識される配列配列番号52が、互いの隣に連続して組み込まれており、これにより、融合タンパク質の内在化に際して、エフェクターペプチドが腫瘍環境において切断される。タンパク質はまた、TRAILドメインの配列と切断部位の配列との間に、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSG配列番号57を含む。さらに、エフェクターペプチドのC末端において、タンパク質は、小胞体指向性の配列KEDL配列番号56を含み、これは、コンストラクト全体のC末端部分である。融合タンパク質の構造を、図1において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号5および配列番号71である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例6.配列番号6の融合タンパク質配列番号6の融合タンパク質は、407アミノ酸の長さおよび45.2kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、121281TRAIL配列のC末端において、チトクロムcの配列配列番号33がエフェクターペプチドとして結合している。TRAILドメインの配列とエフェクターペプチドの間に、フューリンにより認識される配列配列番号53およびPseudomonasaeruginosaからの転位ドメイン配列番号54が存在する。タンパク質はまた、可橈性のリンカーを含む:TRAIL配列とフューリンにより認識される配列との間に、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGS配列番号58、フューリンにより認識される配列とPseudomonasaeruginosaからの転位ドメインとの間に、可橈性のグリシン-セリンリンカーASGG配列番号65、転位ドメインの配列とチトクロムcの配列との間に、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGSGGG配列番号62が存在する。さらに、エフェクターペプチドドメインのC末端において、タンパク質は、小胞体指向性の配列KEDL配列番号56を含み、これは、コンストラクト全体のC末端部分である。融合タンパク質の構造を、図2において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号6および配列番号72である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例7.配列番号7の融合タンパク質配列番号7の融合タンパク質は、409アミノ酸の長さおよび46.1kDaの質量を有する融合物であり、ここで、TRAIL114281の配列のN末端において、グランザイムBの配列配列番号34がエフェクターペプチドとして結合している。TRAILドメインの配列とエフェクターペプチドグランザイムBの配列との間に、フューリン切断部位の配列配列番号53が存在し、これはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGGS配列番号59により挟まれている。融合タンパク質の構造を、図2において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号7および配列番号73である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例8.配列番号8の融合タンパク質配列番号8の融合タンパク質は、405アミノ酸の長さおよび45.7kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、121281TRAIL配列のC末端において、グランザイムBの配列配列番号34がエフェクターペプチドとして結合している。TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、フューリン切断部位の配列配列番号53が存在し、これはさらに、グランザイムBおよびTRAILの両方の配列から、それぞれ、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGS配列番号58およびGGGGS配列番号59により分離している。さらに、エフェクターペプチドのC末端において、タンパク質は、小胞体指向性の配列KDELを含み、これは、コンストラクト全体のC末端部分である。融合タンパク質の構造を、図2において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号8および配列番号74である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3pLysSを用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例9.配列番号9の融合タンパク質配列番号9の融合タンパク質は、187アミノ酸の長さおよび21.9kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のN末端において、Nur77タンパク質から誘導された9アミノ酸のペプチド配列番号35がエフェクターペプチドとして結合しており、7個のArg残基からなるポリアルギニン配列がさらにエフェクターペプチドのC末端に結合している。エフェクターペプチドとTRAILの配列との間に、メタロプロテアーゼMMPのための切断部位の配列配列番号51およびウロキナーゼuPAのための切断部位の配列配列番号52が存在する。融合タンパク質の構造を、図2において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号9および配列番号75である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株RosettaDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例10.配列番号10の融合タンパク質配列番号10の融合タンパク質は、193アミノ酸の長さおよび22.4kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のN末端において、Bakタンパク質のBH3ドメインを含む16アミノ酸のペプチド配列番号36がエフェクターペプチドとして結合しており、膜を透過する7個のArg残基からなるポリアルギニン配列が、さらにエフェクターペプチドのC末端に結合している。エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、メタロプロテアーゼMMPについての切断部位の配列配列番号51およびウロキナーゼuPAについての切断部位の配列配列番号52が存在する。融合タンパク質の構造を、図2において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号10および配列番号76である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3およびTunerDE3pLysSを用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例11.配列番号11の融合タンパク質配列番号11の融合タンパク質は、204アミノ酸の長さおよび24.3kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281の配列のN末端において、PUMABBC3分子のBH3ドメイン配列番号37がエフェクターペプチドとして結合しており、9個のArg残基を含むポリアルギニン配列が、さらにエフェクターペプチドのC末端に結合している。エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、コンストラクトは、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51を含む。融合タンパク質の構造を、図3において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号11および配列番号77である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3およびTunerDE3pLysSを用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例12.配列番号12の融合タンパク質配列番号12の融合タンパク質は、372アミノ酸の長さおよび41kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281の配列のC末端において、PUMAタンパク質配列番号38がエフェクターペプチドとして結合している。TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、メタロプロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびウロキナーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が存在し、これはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSGG配列番号60により、TRAILの配列から分離されている。さらに、C末端において、エフェクターペプチドは、小胞体指向性のKEDL配列配列番号56を含み、コンストラクト全体のC末端を形成する。融合タンパク質の構造を、図3において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号12および配列番号78である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株B21DE3、Stratagene製のBL21DE3pLysSRILを用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例13.配列番号13の融合タンパク質配列番号13の融合タンパク質は、493アミノ酸の長さおよび53.4kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、121281TRAILのC末端において、PUMAタンパク質の配列配列番号38がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、TRAILの配列とPUMAタンパク質の配列との間に、Pseudomonasaeruginosaからの転位ドメインの配列配列番号54が存在し、これはさらに、連続した配列:可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGGS配列番号59、フューリン切断部位配列番号53および可橈性のアラニン-グリシン-セリンリンカーASGG配列番号65によりTRAILの配列から、ならびに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSGG配列番号60によりPUMAタンパク質の配列から分離されている。さらに、エフェクターペプチドのC末端において、融合タンパク質は、小胞体指向性の配列KEDL配列番号56を含み、これは、コンストラクト全体のC末端部分である。融合タンパク質の構造を、図3において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号13および配列番号79である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3およびStratagene製のBL21DE3pLysSRILを用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例14.配列番号14の融合タンパク質配列番号14の融合タンパク質は、186アミノ酸の長さおよび21.5kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、配列TRAIL121281のN末端において、タンパク質SMACDiabloの8アミノ酸のフラグメント配列番号39がエフェクターペプチドとして結合しており、7個のArgからなるポリアルギニン配列がさらにエフェクターペプチドのC末端に結合している。さらに、ポリアルギニン配列とTRAILの配列との間に、タンパク質は、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51を含む。融合タンパク質の構造を、図3において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号14および配列番号80である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3またはTunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例15.配列番号15の融合タンパク質配列番号15の融合タンパク質は、191アミノ酸の長さおよび22.2kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、配列TRAIL121281のN末端において、ブフォリンIIb配列番号40がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、エフェクターペプチドとTRAILの配列との間に、タンパク質は、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51を含む。融合タンパク質の構造を、図3において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号15および配列番号81である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例16.配列番号16の融合タンパク質配列番号16の融合タンパク質は、279アミノ酸の長さおよび31.7kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のC末端において、タンパク質オンコナーゼ配列番号41がエフェクターペプチドとして結合している。TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が存在し、これはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGS配列番号58によりTRAILの配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図4において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号16および配列番号82である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例17.配列番号17の融合タンパク質配列番号17の融合タンパク質は、274アミノ酸の長さおよび31kDaの質量とを有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281の配列のC末端において、タンパク質オンコナーゼ配列番号41がエフェクターペプチドとして結合しており、エフェクターペプチドの配列は、さらに、可橈性のグリシン-セリンリンカー、GGGGSGGGGS配列番号64によりTRAILの配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図4において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号17および配列番号83である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例18.配列番号18の融合タンパク質配列番号18の融合タンパク質は、197アミノ酸の長さおよび23.2kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のN末端において、タンパク質p14ARFのN末端ドメインを含む20アミノ酸のペプチド配列番号42がエフェクターペプチドとして結合しており、6個のArg残基からなるポリアルギニン配列がエフェクターペプチドのC末端においてさらに結合している。さらに、ポリアルギニン配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼ切断部位uPAの配列配列番号52およびMMPの配列配列番号51が存在する。融合タンパク質の構造を、図4において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号18および配列番号84である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例19.配列番号19の融合タンパク質配列番号19の融合タンパク質は、189アミノ酸の長さおよび22.3kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のN末端において、Mdm2に結合している11アミノ酸のペプチド配列番号43ががエフェクターペプチドとして結合しており、7個のArg残基からなるポリアルギニン配列が、エフェクターペプチドのC末端においてさらに結合している。さらに、ポリアルギニン配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が存在する。融合タンパク質の構造を、図4において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号19および配列番号85である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3またはTunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例20.配列番号20の融合タンパク質配列番号20の融合タンパク質は、195アミノ酸の長さおよび22.9kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のN末端において、ルナシンから誘導されるペプチド配列番号44がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドとTRAILの配列との間に、所与の順序において、7個のArg残基からなるポリアルギニン配列ならびにプロテアーゼuPAのための切断部位の配列配列番号52およびMMPのための切断部位の配列配列番号51が存在する。融合タンパク質の構造を、図4において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号20および配列番号86である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3またはTunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例21.配列番号21の融合タンパク質配列番号21の融合タンパク質は、218アミノ酸の長さおよび25.5kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281配列のN末端において、エフェクターペプチドとして、8アミノ酸のタンパク質SmacDiabloのフラグメント配列番号39が結合しており、そのC末端に、7個のArg残基からなるポリアルギニン配列が結合している。さらに、TRAIL121281配列のC末端に、第2のエフェクターペプチドとして、Bikタンパク質のBH3ドメインを含むペプチド配列番号45が結合しており、第2のエフェクターペプチドは、そのN末端に結合した7個のArg残基からなるポリアルギニン配列を有する。TRAILの配列と、ポリアルギニン配列が結合した両方のエフェクターペプチドとの間に、メタロプロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびウロキナーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が存在する。融合タンパク質の構造を、図4において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号21および配列番号87である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株RosettaDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例22.配列番号22の融合タンパク質配列番号22の融合タンパク質は、199アミノ酸の長さおよび22.3kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL121281の配列のC末端において、エフェクターペプチドとして、Gly、Alaの反復からなる合成ペプチド配列配列番号46が結合しており、また、そのC末端に結合した8個のArg残基からなるポリアルギニン配列を有し、後者はまた、コンストラクト全体のC末端部分を形成する。さらに、エフェクターペプチドとTRAILの配列との間に、メタロプロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびウロキナーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が存在する。融合タンパク質の構造を、図4において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号22および配列番号88である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3またはTunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例23.配列番号23の融合タンパク質配列番号23の融合タンパク質は、289アミノ酸の長さおよび32.6kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、121281のTRAIL配列のC末端において、プロテアソームのUIMsモチーフを含むコンポーネントS5aのC末端ドメイン配列番号46がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、フューリン切断部位の配列配列番号53が存在し、これは、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGSGG配列番号61によりTRAIL配列から分離されており、およびエフェクターペプチドのC末端において、小胞体指向性のKEDL配列配列番号56が配置されており、後者は、コンストラクト全体のC末端部分である。融合タンパク質の構造を、図5において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号23および配列番号89である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Bに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3またはTunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例24.配列番号24の融合タンパク質比較用配列番号24の融合タンパク質は、183アミノ酸の長さおよび21kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、119281のTRAIL配列のN末端において、TNFリガンドから誘導されたデカペプチド配列番号48がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が存在する。融合タンパク質の構造を、図5において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号24および配列番号90である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株BL21DE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例25.配列番号25の融合タンパク質比較用配列番号25の融合タンパク質は、179アミノ酸の長さおよび20.7kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL119281の配列のN末端において、TNFから誘導された6アミノ酸のペプチド配列番号49がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が存在する。融合タンパク質の構造を、図5において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号25および配列番号91である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例26.配列番号26の融合タンパク質比較用配列番号26の融合タンパク質は、180アミノ酸の長さおよび20.8kDaの質量を有する融合タンパク質であり、ここで、TRAIL119281配列のN末端において、エフェクターペプチドとして、TNFサイトカインの5アミノ酸のフラグメント配列番号50が結合しており、これはさらに1個のCys残基をそのC末端およびN末端の両方に有する。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が存在する。融合タンパク質の構造を、図5において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号26および配列番号92である。上に表わされるアミノ酸配列を鋳型として用いて、上に表わされるそのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例27.配列番号93の融合タンパク質配列番号93の融合タンパク質は、459アミノ酸の長さおよび50.4kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281配列のC末端において、全長ヒトRNAseA配列番号32がエフェクターペプチドとして結合しており、これは、そのC末端において小胞体指向性の配列KDELにより、そのN末端において可橈性のグリシン-セリンリンカー配列番号175により、挟まれている。さらに、三量体構造を安定化させるために、TRAILの配列は、そのN末端において結合したポリシステインリンカー配列番号179を有し、これはそのN末端において、グリシン残基により挟まれている。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、所与の順序において、可橈性のグリシン-セリンリンカー配列番号59、ペグ化のためのリンカー配列番号170、フューリンにより認識される切断部位の配列配列番号53、可橈性のグリシン-セリンリンカー配列番号65、および改変したPseudomonasaeruginosaの転位ドメインヘリックスF欠失helixFdeletion配列番号176が配置されている。融合タンパク質の構造を、図6において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号93および配列番号122である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例28.配列番号94の融合タンパク質配列番号94の融合タンパク質は、213アミノ酸の長さおよび24.7kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281配列のN末端において、Nur77から誘導されたペプチド配列番号35がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのN末端において結合した、7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が存在する。融合タンパク質の構造を、図6において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号93および配列番号122である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例29.配列番号95の融合タンパク質配列番号95の融合タンパク質は、204アミノ酸の長さおよび23.1kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAILの配列116281のN末端において、アズリンから誘導されるペプチド配列番号151がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が存在する。融合タンパク質の構造を、図6において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号95および配列番号124である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例30.配列番号96の融合タンパク質配列番号96の融合タンパク質は、205アミノ酸の長さおよび23.3kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL120281の配列のC末端において、アズリンから誘導されるペプチド配列番号151がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、フューリンプロテアーゼにより認識される切断部位の配列配列番号172が存在し、これはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGS配列番号58によりTRAIL配列から分離されている。エフェクターペプチドのC末端は、小胞体指向性の配列KEDL配列番号56により挟まれており、これは、コンストラクト全体のC末端部分を形成する。融合タンパク質の構造を、図6において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号96および配列番号125である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例31.配列番号97の融合タンパク質配列番号97の融合タンパク質は、207アミノ酸の長さおよび23.1kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL120281の配列のC末端において、アズリンから誘導されるペプチド配列番号151がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置され、これらはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGSGGG配列番号62によりTRAILの配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図6において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号97および配列番号126である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例32.配列番号98の融合タンパク質配列番号98の融合タンパク質は、327アミノ酸の長さおよび36.2kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL120281の配列のC末端において、全長アズリンペプチド配列番号152がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置され、これはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGSGGG配列番号62によりTRAILの配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図7において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号98および配列番号127である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例33.配列番号99の融合タンパク質配列番号99の融合タンパク質は、199アミノ酸の長さおよび22.9kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL114281の配列のN末端において、SmacDIABLOから誘導された8量体ペプチド配列番号39がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した、7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が位置する。融合タンパク質の構造を、図7において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号99および配列番号128である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例34.配列番号100の融合タンパク質配列番号100の融合タンパク質は、221アミノ酸の長さおよび25.2kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のN末端において、SmacDIABLOから誘導された8量体ペプチド配列番号39がエフェクターペプチドとして結合している。TRAILの配列は、そのN末端において結合した、その3量体構造を安定化するためのポリシステインリンカー配列番号177を有する。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。融合タンパク質の構造を、図7において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号100および配列番号129である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例35.配列番号101の融合タンパク質配列番号101の融合タンパク質は、212アミノ酸の長さおよび24.5kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のN末端において、SmacDIABLOから誘導された8量体ペプチド配列番号39がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した、7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。融合タンパク質の構造を、図7において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号101および配列番号130である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例36.配列番号102の融合タンパク質配列番号102の融合タンパク質は、212アミノ酸の長さおよび24.5kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL121281の配列のN末端において、aPPタンパク質とBaxタンパク質のBH3ドメインとから設計されたペプチド配列番号153がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した、6個のArg残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が位置する。融合タンパク質の構造を、図7において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号102および配列番号131である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例37.配列番号103の融合タンパク質配列番号103の融合タンパク質は、247アミノ酸の長さおよび28.1kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のN末端において、aPPタンパク質とタンパク質のBH3ドメインとから設計されたペプチド配列番号153がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した、6個のArg残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。TRAILの配列は、そのN末端において結合した、その3量体構造を安定化させるためのポリシステインリンカー配列番号177を有する。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。融合タンパク質の構造を、図8において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号103および配列番号132である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例38.配列番号104の融合タンパク質配列番号104の融合タンパク質は、212アミノ酸の長さおよび24.4kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL114281の配列のC末端において、aPPタンパク質とタンパク質のBH3ドメインとから設計されたペプチド配列番号153がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置されている。融合タンパク質の構造を、図8において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号104および配列番号133である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例39.配列番号105の融合タンパク質配列番号105の融合タンパク質は、221アミノ酸の長さおよび24.8kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL120281の配列のN末端において、レティキュロンRTN1Cから誘導されたペプチド配列番号155がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した、核局在化配列配列番号168を有する。さらに、その3量体構造を安定化させるために、TRAILの配列は、そのN末端において結合した、ポリシステインリンカー配列番号179を有し、これは、それぞれそのN末端およびC末端において2個および3個のグリシン残基により挟まれている。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。融合タンパク質の構造を、図8において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号105および配列番号134である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例40.配列番号106の融合タンパク質配列番号106の融合タンパク質は、435アミノ酸の長さおよび48kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL119281の配列のN末端において、レティキュロンRTN1Cから誘導されたペプチド配列番号156がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した、8個のArg残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、その3量体構造を安定化させるために、TRAILの配列は、そのN末端において結合したポリシステインリンカー配列番号178を有する。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されており、この切断部位の配列は、N末端およびC末端においてそれぞれ、リンカー配列GGSGG配列番号60により挟まれている。融合タンパク質の構造を、図8において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号106および配列番号135である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例41.配列番号107の融合タンパク質配列番号107の融合タンパク質は、580アミノ酸の長さおよび65kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL121281の配列のC末端において、構成的に活性なカスパーゼ-3一本鎖配列番号157がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、Pseudomonasから誘導された輸送ドメイン配列番号176が配置されている。輸送ドメインおよびエフェクターペプチドの配列は、可橈性のリンカーGGGSGGG配列番号62を介して連結されている。輸送ドメインは、フューリンにより認識される切断部位の配列配列番号53によりTRAILの配列から分離されており、この切断部位の配列は、そのNおよびC末端においてそれぞれ2つのリンカー配列GGGGS配列番号59およびASGG配列番号65によって挟まれている。融合タンパク質の構造を、図8において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号107および配列番号136である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例42.配列番号108の融合タンパク質配列番号108の融合タンパク質は、247アミノ酸の長さおよび28.5kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL119281の配列のN末端において、Par4からのSACドメイン配列番号158がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、TRAILの配列は、そのN末端において結合した可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSGG配列番号60を有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号173が配置されている。融合タンパク質の構造を、図9において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号108および配列番号137である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例43.配列番号109の融合タンパク質配列番号109の融合タンパク質は、247アミノ酸の長さおよび28.5kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL119281の配列のN末端において、Par4からのSACドメイン配列番号158がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを、そのN末端において、Oct6転写因子からのNLS核局在化シグナル配列配列番号168を有する。TRAILの配列は、そのN末端において結合した可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSGG配列番号60を有する。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号173が配置されている。融合タンパク質の構造を、図9において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号109および配列番号138である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例44.配列番号110の融合タンパク質配列番号110の融合タンパク質は、270アミノ酸の長さおよび30.8kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のC末端において、Noxaタンパク質配列番号159がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのN末端において結合した7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、その3量体構造を安定化させるために、TRAILの配列は、そのC末端において結合したポリシステインリンカー配列番号177を有し、これは、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSG配列番号57によりTRAILの配列から分離されている。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置されている。融合タンパク質の構造を、図9において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号110および配列番号139である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例45.配列番号111の融合タンパク質配列番号111の融合タンパク質は、207アミノ酸の長さおよび23.7kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL114281の配列のC末端において、Noxaタンパク質から誘導されたMTDCKPペプチド配列番号160がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのN末端において結合した7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。その3量体構造を安定化させるために、TRAILの配列は、そのC末端において結合したポリシステインリンカー配列番号177を有し、このリンカーは、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSG配列番号57によりTRAILの配列から分離されている。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置されている。融合タンパク質の構造を、図9において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号111および配列番号140である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例46.配列番号112の融合タンパク質配列番号112の融合タンパク質は、311アミノ酸の長さおよび35kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のN末端において、ペプチドオンコナーゼ配列番号41がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されており、これはさらに、2つの可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGGS配列番号59によりTRAILの配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図9において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号112および配列番号141である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例47.配列番号113の融合タンパク質配列番号113の融合タンパク質は、230アミノ酸の長さおよび27kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のN末端において、PUMAタンパク質からのBH3ドメイン配列番号37がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した、9個のArg残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。融合タンパク質の構造を、図10において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号113および配列番号142である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例48.配列番号114の融合タンパク質配列番号114の融合タンパク質は、225アミノ酸の長さおよび25.7kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のC末端において、Bidタンパク質から誘導された短いペプチド配列番号31がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した輸送ドメインKPRRPY配列番号167を有する。その3量体構造を安定化させるために、TRAILの配列は、そのC末端において結合したポリシステインリンカー配列番号177を有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置されている。融合タンパク質の構造を、図10において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号114および配列番号143である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例49.配列番号115の融合タンパク質配列番号115の融合タンパク質は、234アミノ酸の長さおよび26.7kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のC末端において、短いハイブリッドペプチドAntpTPR配列番号161がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置されており、これはさらに、その3量体構造を安定化させるために、ポリシステインリンカー配列番号177により、およびその後ろの2個のグリシン残基により、TRAIL配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図10において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号115および配列番号144である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例50.配列番号116の融合タンパク質配列番号116の融合タンパク質は、216アミノ酸の長さおよび24.3kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL120281の配列のN末端において、Stat3タンパク質のSH2ドメインのペプチド阻害剤配列番号162がエフェクターペプチドとして結合している。さらに、その3量体構造を安定化させるために、TRAILの配列のN末端において、ポリシステインリンカー配列番号179が結合しており、リンカーは、N末端およびC末端においてそれぞれ3個のグリシン残基およびGSCモチーフにより挟まれている。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。融合タンパク質の構造を、図10において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号116および配列番号145である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例51.配列番号117の融合タンパク質配列番号117の融合タンパク質は、194アミノ酸の長さおよび22.8kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL121281の配列のN末端において、Bakタンパク質のBH3ドメインから誘導されたペプチド配列番号163がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。融合タンパク質の構造を、図10において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号117および配列番号146である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例52.配列番号118の融合タンパク質配列番号118の融合タンパク質は、257アミノ酸の長さおよび30kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL121281の配列のN末端において、Badタンパク質のBH3ドメインから誘導されたペプチド配列番号164がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのC末端において結合した8個のArg残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されている。TRAIL121281の配列のC末端において、可橈性のリンカーGGSHG配列番号182が存在し、その後ろに、トロンビンプロテアーゼにより認識される切断部位の配列配列番号174およびコンストラクト全体のC末端部分としてTRAILの配列95121が続く。融合タンパク質の構造を、図11において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号118および配列番号147である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例53.配列番号119の融合タンパク質配列番号119の融合タンパク質は、236アミノ酸の長さおよび27.5kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL95281の配列のC末端において、Badタンパク質のBH3ドメインから誘導されたペプチド配列番号164がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのN末端において結合した7個のアルギニン残基からなるポリアルギニン輸送ドメインを有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置されており、TRAIL95281の配列のC末端は、GGS残基からなるリンカーにより、切断部位の配列と分離されている。融合タンパク質の構造を、図11において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号119および配列番号148である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例54.配列番号120の融合タンパク質配列番号120の融合タンパク質は、216アミノ酸の長さおよび24.7kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL121281の配列のC末端において、Bfl1タンパク質からのATAPペプチド配列番号165がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのN末端において結合した、膜輸送ドメインKPRRPYR配列番号181を有する。さらに、TRAILの配列とエフェクターペプチドの配列との間に、プロテアーゼMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51およびuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52が配置されており、これはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGGGSGGGG配列番号180によりTRAILの配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図11において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号120および配列番号149である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。例55.配列番号121の融合タンパク質配列番号120の融合タンパク質は、237アミノ酸の長さおよび27kDaの質量を有する融合タンパク質であって、ここで、TRAIL121281の配列のN末端において、Bfl1タンパク質からのATAPペプチド配列番号165がエフェクターペプチドとして結合している。エフェクターペプチドの配列は、そのN末端において結合した、ミトコンドリア標的化配列配列番号166を有する。さらに、エフェクターペプチドの配列とTRAILの配列との間に、プロテアーゼuPAにより認識される切断部位の配列配列番号52およびMMPにより認識される切断部位の配列配列番号51が配置されており、これはさらに、可橈性のグリシン-セリンリンカーGGSGG配列番号60によりTRAILの配列から分離されている。融合タンパク質の構造を、図11において模式的に表わし、そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現のために最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ、以下に示す配列番号121および配列番号150である。上記の構造のアミノ酸配列を鋳型として用いて、そのコードDNA配列を生成した。上記の一般的な手法に従って、DNAのコード配列を含むプラスミドを生成し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現を、一般的な手法Aに従って、Novagen製のEcoli株TunerDE3を用いて行った。タンパク質を、上記の一般的な手法に従って電気泳動により分離した。融合タンパク質の抗腫瘍活性の試験融合タンパク質の抗腫瘍活性の試験を、腫瘍細胞株においてinvitroで、マウスにおいてinvivoで行った。比較を目的として、hTRAIL114281タンパク質本明細書において以下また単純にTRAILと称されるを用いた。1.細胞株におけるinvitroでの試験細胞株ヒト大腸癌Colo205ATCCCCL222、小細胞肺癌A549ATCCCCL185、膵臓癌BxPC3ATCCCRL1687、前立腺癌DU145ATCCHTB81およびPC3ATCCCRL1435、ならびにヒト大細胞肺癌NCIH460Luc2Caliper124316の細胞を、10ウシ胎児血清を添加したRPMI1640培地HycloneLoganUTUSAにおいて維持した。ヒト卵巣癌細胞OVCAR3ATCCHTB161を、20ウシ胎児血清および0.01mg/mlインシュリンを添加したRPMI1640培地HycloneLoganUTUSAにおいて維持した。膀胱癌細胞UMUC3ATCCCRL1749、肺癌細胞SKMES1ATCCHTB58、乳癌細胞MCF7ATCCHTB22、HT1080結合組織癌細胞ATCCCCL121、肝臓ヘパトーマHepG2細胞ATCCHB8065を、10ウシ胎児血清HycloneLoganUTUSAを添加したMEM培養培地HycloneLoganUTUSAにおいて維持した。結合組織腫瘍細胞HT1080はまた、実験の間、これらの細胞の2日間の通常培養から採取した条件培地においても維持した。ヒト大腸癌HCT116ATCCCCL247およびHT29HTB38、卵巣癌SKOV3ATCCHTB77、子宮癌MESSAATCCCRL1976およびドキソルビシンに対して耐性であるそのクローンMESSADx5ATCCCRL1977の細胞を、10ウシ胎児血清を添加したMcCoy培地HycloneLoganUTUSAにおいて維持した。膀胱癌細胞SW780ATCCCRL2169、乳癌細胞MDAMB231ATCCHTB26およびヒト膵臓癌上皮細胞様細胞株PANC1、CLSCellLinesService300228の細胞を、10ウシ胎児血清を添加したDMEMHycloneLoganUTUSAにおいて維持した。臍帯静脈からのHUVEC細胞ATCCCRL1730を、20ウシ胎児血清、増殖因子0.02mg/mlのECGSSigma、0.1mg/mlのヘパリンSigmaを添加したM199培地HycloneLoganUTUSAにおいて維持し、これらの細胞を、0.1ゼラチンでコートした培地上で増殖させた。MCF10A胸部細胞ATCCCRL10317を、5ウマ血清、0.5mg/mlのヒドロコルチゾン、10μg/mlのインシュリン、20ng/mlの増殖因子EGF全てSigma、USAを添加したDMEM:F121:1SigmaUSAにおいて維持した。全ての培地に、さらに、2mMのL-グルタミンおよび抗生物質100U/mlのペニシリンおよび100mg/mlのストレプトマイシンHycloneLoganUTUSAを添加した。細胞を、増殖培地RPMI、MEM、McCoyおよびDMEM:F12の場合は、37°Cで5CO2/空気中で、DMEMの場合は10CO2/空気中で維持した。細胞は、マイコプラズマの存在について、キットVenor登録商標GeMマイコプラズマPCR検出キットを用いるPCR技術MinervaBiolabsBerlinGermanyにより、ルーチン的にチェックした。MTT細胞傷害性試験MTTアッセイは、細胞増殖を測定するために用いられる比色アッセイである。その本質は、ミトコンドリア中に存在する酵素コハク酸-テトラゾリウムレダクターゼによる、黄色のテトラゾリウム塩MTT4,5-ジメチル-2-チアゾリル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドの、非水溶性の紫色の色素ホルマザンへの分解にある。MTTの還元は、生細胞においてのみ起こる。データ分析の本質は、処置された集団において対照細胞と比較して細胞の数の50の減少が起こる、タンパク質のIC50濃度をng/mlにおいて決定することにある。結果は、GraphPadPrism50を用いて分析した。試験は、文献の記載に従って行ったCelisJECellBiologyaLaboratoryHandbooksecondeditionAcademicPressSanDiegoYangYKohLWTsaiJHInvolvmentofviralandchemicalfactorswithoralcancerinTaiwanJpnJClinOncol34176183。細胞培養培地を、既定濃度100μlあたり104~105細胞まで希釈した。次いで、100μlの適切に希釈された細胞懸濁液を、96ウェルプレートに、3個の複製において、適用した。このようにして調製した細胞を、24時間、37°Cで、用いた培地に依存して5または10CO2中でインキュベートし、次いで、細胞に100μlの培地中で、さらに、多様な濃度の試験されるタンパク質を含む100μlの培地を添加した。細胞を、試験されるタンパク質と共に次の72時間これは3~4回の細胞分裂と等しいにわたりインキュベートし、その後、試験されるタンパク質を含む培地に、20mlのMTTの希釈標準溶液[5mg/ml]を添加し、3時間、37°Cで、5CO2中でインキュベートした。次いで、MTTの溶液を含む培地を除去し、100μlのDMSOを添加することによりホルマザン結晶を溶解した。混合した後、吸光度を570nmで測定した参照フィルター690nm。invitro細胞傷害性試験の結果を、表1、1a、1bおよび表2において、溶媒のみと共にインキュベートされた対照細胞の50のレベルにおいて融合タンパク質の細胞傷害性効果が観察されるタンパク質濃度に対応する、IC50値として要約する。各々の実験は、少なくとも2回の独立した実験を3個の複製において行った平均値を表わす。タンパク質調製物の活性の不在の基準として、2000ng/mlのIC50限度を採用した。2000より上のIC50値を有する融合タンパク質は、不活性であるとみなした。この試験のための細胞を、天然でTRAILタンパク質に対して耐性である腫瘍細胞株TRAILに対する天然の耐性の基準:TRAILタンパク質についてのIC50>2000、TRAILタンパク質に対して感受性である腫瘍細胞株、および、従来の抗癌薬に対して耐性の癌株としてドキソルビシンに対して耐性の株MESSADX5を含むように選択した。非癌細胞に対する融合タンパク質の影響/毒性の評価のための健康な対照細胞株として、未分化HUVEC細胞株を用いた。得られた結果は、TRAILに対して天然に耐性を有する細胞への本発明の特定の融合タンパク質の投与により、細胞株のTRAILに対する耐性を克服する能力を確認した。TRAILに対して感受性の細胞中に本発明の融合タンパク質を投与した場合、一部の例において、明らかかつ強力な、TRAILの活性の効力の増強が観察され、これは、TRAIL単独についてのIC50と比較して融合タンパク質のIC50値が低下したことにおいて表わされる。さらに、本発明の融合タンパク質の細胞傷害活性は、古典的な抗癌薬ドキソルビシンに対して耐性の細胞において得られ、一部の例においては、TRAILの活性よりも強力であった。非癌細胞株について得られた2000よりも高いIC50値は、健康な細胞に対しての本発明のタンパク質の使用に関連する毒性効果の不在を示し、これは、当該タンパク質の全身毒性が低い可能性を示す。2.選択されたタンパク質調製物の広範な腫瘍細胞株のパネルに対する細胞傷害活性の分析表2は、選択された本発明の融合タンパク質についての、殆どの一般的な広範囲の癌に対応する様々な器官からの腫瘍細胞の広範なパネルに対するinvitroでの細胞傷害活性の結果を表わす。得られたIC50値は、融合タンパク質の高い細胞傷害活性を確認し、したがって、癌の処置におけるそれらの潜在的な有用性を確認する。3.異種移植片に対する融合タンパク質のinvivoでの抗腫瘍有効性タンパク質調製物の抗腫瘍活性を、ヒト結腸癌Colo205、ヒト大細胞肺癌NCIH460Luc2、ヒト肺癌A549、およびヒト膵臓癌PANC1のマウスモデルにおいて試験した。細胞Colo205細胞ATCCCCL222を、10ウシ胎児血清および2mMのグルタミンを添加したOptiMEMInvitrogenCat22600134と1:1の比において混合したRPMI1640培地HycloneLoganUTUSAにおいて維持した。マウス移植の日に、細胞をトリプシンInvitrogenで洗浄することにより、細胞を支持体から剥離し、次いで、細胞を1300rpm、4°Cで、8分間、遠心分離し、HBSS緩衝液Hanks培地中に懸濁し、計数して、28.57×106細胞/mlの濃度まで希釈した。次いで、細胞にMatrigelBDBiocsciencesCat354248を、最終細胞濃度25×106細胞/mlまで添加した。H460Luc2細胞を、10ウシ胎児血清および2mMのグルタミンを添加したRPMI1640培地HyCloneLoganUTUSAにおいて維持した。マウス移植の日に、細胞をトリプシンInvitrogenで洗浄することにより、細胞を支持体から剥離し、次いで、細胞を1300rpm、4°Cで、8分間、遠心分離し、HBSS緩衝液Hanks培地中に懸濁し、計数して、50×106細胞/mlの濃度まで希釈した。A549細胞を、10ウシ胎児血清および2mMのグルタミンを添加したRPMI1640培地HyCloneLoganUTUSAにおいて維持した。マウス移植の日に、細胞をトリプシンInvitrogenで洗浄することにより、細胞を支持体から剥離し、次いで、細胞を1300rpm、4°Cで、8分間、遠心分離し、HBSS緩衝液Hanks培地中に懸濁した。ヒト膵臓癌PANC1細胞を、10ウシ胎児血清および2mMのグルタミンを添加したDMEM培地HyCloneLoganUTUSAにおいて維持した。マウス移植の日に、細胞をトリプシンInvitrogenで洗浄することにより、細胞を支持体から剥離し、次いで、細胞を1300rpm、4°Cで、8分間、遠心分離し、HBSS緩衝液Hanks培地中に懸濁した。マウス本発明のタンパク質の抗腫瘍活性の試験を、HarlanUKLtdShawsFarmBicesterUKから入手した7~9週齢のNODSCIDマウスに対して行った。A549、NCIH460Luc2およびPANC1細胞の場合、本発明のタンパク質の抗腫瘍活性の試験を、CharlesRiverGermanyから入手した4~5週齢のCrlSHOPrkdcscidHrhrマウスに対して行った。マウスを、特定の病原体フリー条件下に維持し、食餌および脱ミネラル水への自由なアクセスを与えた。動物に対する全ての実験は、ガイドライン:NewYorkAcademyofSciences’AdHocCommitteeonAnimalResearchにより発行されたInterdisciplinaryPrinciplesandGuidelinesfortheUseofAnimalsinResearchMarketingandEducation、に従って行い、ワルシャワにおけるIV地域の動物実験についての倫理委員会により承認されたNo712009。実験の経過および評価第0日において、マウスに、右側において皮下scで、0.15mlのHBSS緩衝液および0.05mlのMatrigel中に懸濁した5×106個のColo205細胞を、0.5×25mmの針Bogmarkを備えた注射器により移植した。腫瘍が約90~140mm3のサイズに達した場合第11日に、マウスを無作為化して、約115mm3の腫瘍の群の平均サイズを得、処置群に振り分けた。処置群に、本発明の融合タンパク質の調製物を、比較としてTRAIL114281を投与した。調製物は、腹腔内ipで毎日10日間qdx10、第11~20日において投与した。治療群が約2000mm3の平均腫瘍サイズに達した場合、マウスを脊髄の破壊により安楽死させた。対照群には、TRAIL114281を与えた。H460の場合、第0日において、マウスに、右側において皮下scで、0.1mlのHBSS緩衝液中に懸濁した5×106個のNCIH460Luc2細胞を、0.5×25mmの針Bogmarkを備えた注射器により移植した。腫瘍が約100~120mm3のサイズに達した場合第11日に、マウスを無作為化して、処置群に振り分けた。処置群に、本発明の融合タンパク質の調製物を、比較としてTRAIL114281を投与した。調製物は、静脈内i.v.で、1日6回、2日毎に投与した。実験の29日目に、マウスを脊髄の破壊により安楽死させた。対照群には、TRAIL114281を与えた。A549の場合、第0日において、マウスに、右側において皮下scで、0.1mlの、3:1の比において混合されたHBSS緩衝液:Martigel中に懸濁された7×106個のA549細胞を、0.5×25mmの針Bogmarkを備えた注射器により移植した。腫瘍が約100~120mm3のサイズに達した場合第17日、マウスを無作為化して、処置群に振り分けた。処置群に、本発明の融合タンパク質の調製物を、比較としてTRAIL114281を投与した。調製物は、静脈内i.v.で、1日6回、2日毎に投与した。実験の34日目に、マウスを脊髄の破壊により安楽死させた。対照群には、TRAIL114281を与えた。PANC1の場合、第0日において、マウスに、右側において皮下scで、0.1mlの、3:1の比において混合されたHBSS緩衝液:Martigel中に懸濁された7×106個のPANC1細胞を、0.5×25mmの針Bogmarkを備えた注射器により移植した。腫瘍が約95mm3のサイズに達した場合第27日、マウスを無作為化して、処置群に振り分けた。処置群に、本発明の融合タンパク質の調製物を、比較としてTRAIL114281を投与した。調製物は、静脈内i.v.で、1日6回、2日毎に投与した。実験の43日目に、マウスを脊髄の破壊により安楽死させた。対照群には、TRAIL114281を与えた。電気キャリパーelectroniccalliperを用いて、腫瘍のサイズを測定し、腫瘍の容積を、式:a2×b/2を用いて計算した。ここで、aは、腫瘍の短い対角mmであり、bは、腫瘍の長い対角mmである。腫瘍の増殖の阻害は、式:TGI[]腫瘍増殖阻害=WT/WC×100-100を用いて計算した。ここで、WTは、処置群における平均腫瘍容積を指し、WCは、対照群における平均腫瘍容積を指す。実験結果を、平均値±上旬偏差SDとして表わす。全ての計算およびグラフは、プログラムGraphPadPrism50を用いて準備した。実験結果を図12および13において、Colo205結腸癌による負荷を与えられ、本発明の融合タンパク質により、および比較としてTRAIL114281により処置されたマウスSCIDNODにおける腫瘍容積の変化の図として示す。図12および13においてグラフにおいて表わされる実験の結果は、本発明の例1および例14の融合タンパク質の投与が、腫瘍Colo205の増殖阻害を引き起こし、TGIは、実験の29日目において、対照に対して、それぞれ39および32であったことを示す。参照調製物として用いられたTRAIL114281について、対照と比較して、腫瘍細胞の増殖に対する僅かな阻害効果が得られ、そのTGIは9のレベルであった。したがって、本発明の融合タンパク質は、TRAILと比較して遥かに強力な効果を発揮する。試験された融合タンパク質は、マウスの体重の減少により表わされる著しい副作用を引き起こさなかったすなわち、基線の体重の10未満。このことは、当該タンパク質の低い全身性毒性を示す。図14および15において表わされる実験結果は、NCIH460ヒト大細胞肺癌による負荷を与えられ、本発明の融合タンパク質で処置し、比較としてTRAIL114281で処置した、マウスCrlSHOPrkdcscidHrhrにおける腫瘍容積の変化の図を示す。例14および例2の本発明の融合タンパク質を投与することにより、NCIH460腫瘍の増殖の阻害が得られ、TGIは、実験の29日目において対照と比較して、それぞれ82および81であったことが示され得る。参照調製物として用いたTRAIL114281について、腫瘍細胞の増殖に対する僅かな阻害効果が対照と比較して得られ、TGIは75のレベルであった。したがって、本発明の融合タンパク質は、TRAILと比較して、この癌細胞に対して、はるかにより強力な効果を発揮する。試験した融合タンパク質は、マウスの体重の減少により表わされる著しい副作用を引き起こさなかったすなわち、基線の体重の10未満。このことは、当該タンパク質の低い全身性毒性を示す。図16および17において表わされる実験結果は、A549ヒト肺癌による負荷を与えられ、本発明の融合タンパク質で処置し、比較としてTRAIL114281で処置した、マウスCrlSHOPrkdcscidHrhrにおける腫瘍容積の変化の図を示す。例14および例2の本発明の融合タンパク質を投与することにより、A549腫瘍の増殖の阻害が得られ、TGIは、実験の29日目において対照と比較して、それぞれ48および45.5であったことが示され得る。参照調製物として用いたTRAIL114281について、腫瘍細胞の増殖に対する僅かな阻害効果が対照と比較して得られ、TGIは20.7のレベルであった。したがって、本発明の融合タンパク質は、TRAILと比較して、この癌細胞に対して、はるかにより強力な効果を発揮する。図18および19において表わされる実験結果は、PANC1ヒト膵臓癌による負荷を与えられ、本発明の融合タンパク質で処置し、比較としてTRAIL114281で処置した、マウスCrlSHOPrkdcscidHrhrにおける腫瘍容積の変化の図を示す。例14および例2の本発明の融合タンパク質を投与することにより、PANC1腫瘍の増殖の阻害が得られ、TGIは、実験の43日目において対照と比較して、それぞれ41.5および49.8であったことが示され得る。参照調製物として用いたTRAIL114281について、腫瘍細胞の増殖に対する僅かな阻害効果が対照と比較して得られ、TGIは32のレベルであった。したがって、本発明の融合タンパク質は、TRAILと比較して、この癌細胞に対して、はるかにより強力な効果を発揮する。試験した融合タンパク質は、マウスの体重の減少により表わされる著しい副作用を引き起こさなかったすなわち、基線の体重の10未満。このことは、当該タンパク質の低い全身性毒性を示す。円二色性-本発明の融合タンパク質の調製物の二次構造内容の決定融合タンパク質の調製物の構造の、それらの構造に関する質を、円二色性CDを用いる二次構造の分析により決定した。CD法は、光の偏光の平面を回転させる上で明らかになるタンパク質構造の光学活性、および楕円偏光の様子を用いる。遠紫外線UVにおけるタンパク質のCDスペクトルは、主要なポリペプチド鎖の立体構造についての正確なデータを提供する。例1、例2、例14、例24、例51および例42の後において調製されたタンパク質の試料を、50mMのTris-HClpH8,0、100mMのNaCl、10グリセロール、0.1mMのZnCl2、80mMのサッカロース、5mMのDTTからなる緩衝液中に処方し、透析バッグSigmaAldrich中で、12kDaのカットオフで透析した。透析を、タンパク質調製物を含む緩衝液の100倍の過剰量v/vに対して、撹拌しながら、数時間、4°Cで行った。透析が完了した後、各調製物を遠心分離し25000rpm、10分間、4°C、適切な上清を回収した。このようにして得られた試料におけるタンパク質濃度を、ブラッドフォード法により決定した。0.1~2.7mg/mlの範囲の濃度におけるタンパク質の円二色性の測定を、JascoJ710分光偏光計において、0.2mmまたは1mmの光路を備えた石英キュベット中で行った。195~250nmの範囲の波長における測定の実施を可能にする7L/分の窒素の流れにおいて、測定を行った。測定のパラメーター:スペクトルの解像度-1nm;光放射の半幅1nm;感受性20mdeg、1波長の平均時間-8s、スキャン速度10nm/分。結果を、3回の測定の平均値として表わす。例1、例2、例14、例24、例51および例42によるタンパク質についての円二色性スペクトルを、図20において表わす。得られたスペクトルを、CDProパックを用いて、193~250nmの範囲において数値的に分析した。光電子倍増管における電圧が700Vを超える点は、この波長の範囲におけるシグナル対ノイズ比が低すぎるため、無視した。得られたデータは、CDProプログラムパッケージを用いて分析されたタンパク質における特定の二次構造の内容の計算のために役立てた表4。対照rhTRAIL114281は、主にβ-シート構造型を有するタンパク質についての特徴的なCDスペクトル最小波長220nmにおいてはっきりと輪郭づけられた楕円を明らかにした。このことは、僅かな数のα-ヘリックスエレメントを示唆する二次構造成分の計算を確認した。得られた結果はまた、ベータエレメントがその組成部の半分より多くを構成するという、TRAILタンパク質の結晶構造からのデータと一致した。例1および例42のハイブリッドタンパク質の場合、円二色性スペクトルは、アルファ/ベータの混合二次構造型を有するタンパク質についての特徴である。波長208および220nmにおける2つの最小値により特徴づけられた。このことは、分析されたキメラタンパク質における二次構造の混合型の性質例42について、スペクトルの質が低いことに起因して、それはより明確でないから、これらの存在を確認し得るように、恐らくは、アルファ-ヘリックス型構造を形成するドメイン例えばBaxからのBH3のTRAILへの結合に起因する。例2、例51、例14および例24の調製物について、ならびにTRAILタンパク質について、ベータ型構造の顕著な内容が見出された。このことは、恐らくは、結合した短いペプチドが最初にベータ構造を有するか、または構造が定まらずunstructuralizedしたがってそれらの組成に顕著な影響を及ぼさないという事実に起因する。例2のタンパク質の場合、アルファ構造の僅かな増大がまた観察された。例1のタンパク質と同様に、これは、狭い波長の範囲に起因して類似の形態をとるBH3ドメインの存在に起因する可能性がある遠UVにおける高いレベルのノイズが読み取りを除外する。分析されたスペクトルの領域におけるはっきりと輪郭づけられた180~200nmの範囲の不在は、α-ヘリックス構造の過剰含有を引き起こし得る。"