"a配列番号:7のCDR-L1配列と、b配列番号:8のCDR-L2配列と、c配列番号:9のCDR-L3配列と、d配列番号:10のCDR-H1配列と、e配列番号:11のCDR-H2配列と、f配列番号:12のCDR-H3配列とからなる群から選択される少なくとも1のCDR配列を含む単離された抗体。抗体断片である、請求項1に記載の抗体。キメラ又はヒト化の抗体である、請求項1に記載の抗体。増殖抑制剤にコンジュゲートされている、請求項1に記載の抗体。細胞障害性剤にコンジュゲートされている、請求項1に記載の抗体。細胞障害性剤が、毒素、抗生物質、放射性同位体及び核酸分解酵素からなる群から選択される、請求項5に記載の抗体。細胞障害性剤が毒素である、請求項5に記載の抗体。毒素が、メイタンシノイド、カリケアマイシン及びアウリスタチンからなる群から選択される、請求項7に記載の抗体。毒素がメイタンシノイドである、請求項7に記載の抗体。アウリスタチンがモノメチルアウリスタチンEMMAEである、請求項8に記載の抗体。細菌内で産生される、請求項1に記載の抗体。CHO細胞内で産生される、請求項1に記載の抗体。結合する細胞の死を誘導する、請求項1に記載の抗体。結合する細胞の増殖を抑制する、請求項1に記載の抗体。前記細胞がヒトメラノーマ癌細胞である、請求項13又は14に記載の抗体。検出可能に標識されている、請求項1に記載の抗体。配列番号:5又は15に示すいずれかのVL配列を含む単離された抗体。配列番号:6、16又は17に示すいずれかのVH配列を含む単離された抗体。配列番号:3又は13に示すいずれかの軽鎖配列を含む単離された抗体。配列番号:4又は14に示すいずれかの重鎖配列を含む単離された抗体。配列番号:15のVL配列と配列番号:16のVH配列とを含む単離された抗体。配列番号:15のVL配列と配列番号:17のVH配列とを含む単離された抗体。請求項1に記載の抗体を産生する細胞。請求項1に記載の抗体をコードする単離された核酸。第二抗体が結合するTAT419抗原性エピトープに結合する第一抗体を同定する方法であって、このとき該第二抗体が請求項1に記載の抗体であり、該第二抗体のTAT419ポリペプチドへの結合をブロックする該第一抗体の能力を決定することを含み、このとき該第二抗体の該TAT419ポリペプチドへの結合を少なくとも40そして等しい抗体濃度でブロックする該第一抗体の能力が、該第一抗体が該第二抗体が結合するエピトープに結合することができることを示す、方法。TAT419ポリペプチドを発現する細胞の増殖を抑制する方法であって、請求項1に記載の抗体に細胞を接触させることを含み、このとき該抗体の該TAT419ポリペプチドへの結合により該細胞の増殖が抑制される、方法。前記TAT419ポリペプチドが、配列番号:2のアミノ酸配列又はその細胞外ドメインを含む、請求項26に記載の方法。前記細胞がヒトメラノーマ癌細胞である、請求項26に記載の方法。TAT419ポリペプチドを発現する細胞を含む癌性腫瘍を有する哺乳動物を治療する方法であって、請求項1に記載の抗体の治療上の有効量を該哺乳動物に投与することを含み、これによって該哺乳動物を有効に治療する、方法。前記TAT419ポリペプチドが、配列番号:2のアミノ酸配列又はその細胞外ドメインを含む、請求項29に記載の方法。前記細胞がヒトメラノーマ癌細胞である、請求項29に記載の方法。TAT419タンパク質を含むことが予測される試料においてTAT419タンパク質の存在を決定する方法であって、請求項1に記載の抗体に該試料を曝すことと、該試料における該抗体の該タンパク質への結合を決定することを含み、このとき抗体の該タンパク質への結合が、該試料における該タンパク質の存在を示す、方法。前記試料が前記タンパク質を発現することが予測される細胞を含む、請求項32に記載の方法。前記細胞がヒトメラノーマ癌細胞である、請求項33に記載の方法。前記抗体が検出可能に標識されている、請求項32に記載の方法。哺乳動物における癌の存在を診断する方法であって、該哺乳動物から得た組織細胞の試験試料、及び、同じ組織起源の既知の正常細胞のコントロール試料においてTAT419ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを決定することを含み、このとき、コントロール試料と比較して、試験試料でのTAT419ポリペプチドの発現レベルが高いことが、試験試料を得た哺乳動物での癌の存在を示す、方法。前記ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを決定する工程が、インサイツハイブリダイゼーション又はRT-PCR分析にオリゴヌクレオチドを用いることを含む、請求項36に記載の方法。前記ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを決定する工程が、免疫組織化学法又はウェスタンブロット分析に抗体を用いることを含む、請求項36に記載の方法。前記癌がヒトメラノーマ癌である、請求項36に記載の方法。前記TAT419ポリペプチドが、配列番号:2のアミノ酸配列又はその細胞外ドメインを含む、請求項36に記載の方法。哺乳動物における癌の存在を診断する方法であって、請求項1に記載の抗体を哺乳動物から得た組織細胞の試験試料に接触させることと、試験試料における該抗体とTAT419タンパク質との複合体の形成を検出することとを含み、このとき複合体の形成が該哺乳動物での癌の存在を示す、方法。前記の組織細胞の試験試料が、癌を有することが予測される個体から得られる、請求項41に記載の方法。前記癌がヒトメラノーマ癌である、請求項42に記載の方法。前記TAT419タンパク質が、配列番号:2のアミノ酸配列又はその細胞外ドメインを含む、請求項41に記載の方法。TAT419ポリペプチドを発現する細胞へ細胞障害性剤又は診断用試薬を送達する方法であって、TAT419ポリペプチドに結合する抗体にコンジュゲートした細胞障害性剤又は診断用試薬を提供して、抗体-薬剤コンジュゲートを形成することと、該抗体-薬剤コンジュゲートに該細胞を曝すこととを含む、方法。本発明の詳細な説明I.定義ここで使用されるTATポリペプチド及びTATという用語は、直後に数値表示がある場合には種々のポリペプチドを指し、完全な表示つまり、TAT/数字は、ここに記載する特定のポリペプチド配列を意味する。数字という用語がここでは実際の数的表示として提供されているTAT/数字ポリペプチド及びTAT/数字という用語には、天然配列ポリペプチド、ポリペプチド変異体及び天然配列ポリペプチドとポリペプチド変異体の断片ここでさらに定義されるを包含する。ここに記載されているTATポリペプチドは、ヒト組織型又は他の供給源といった種々の供給源から単離してもよく、あるいは組換え又は合成法によって調製してもよい。TATポリペプチドという用語は、ここに記載の各個々のTAT/数字ポリペプチドを指す。TATポリペプチドを指すこの明細書の全ての開示は、各ポリペプチドを個々に指すと同時に集合的に指す。例えば、調製、精製、誘導、抗体の形成、TAT結合オリゴペプチドの形成、TAT結合有機分子の形成、投与、含有する組成物、疾患の治療等の記載は、本発明の各ポリペプチドに関している。TATポリペプチドという用語は、また、ここに記載のTAT/数字ポリペプチドの変異体を含む。ある実施態様では、TAT419ポリペプチド配列は配列番号:2に示す。天然配列TATポリペプチドには、天然由来のTATポリペプチドに対応する同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。このような天然配列TATポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換え又は合成手段により生成することもできる。天然配列TATポリペプチドという用語には、特に、特定のTATポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態、自然に生じる変異形態及びそのポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明のある実施態様では、ここに開示される天然配列TATポリペプチドは、添付図に示される完全長アミノ酸配列を含む成熟又は完全長天然配列ポリペプチドである。開始及び停止コドン示されているならばは、図において太字及び下線で示した。添付図にN又はXで示した核酸残基は、任意の核酸残基である。しかし、添付図に開示したTATポリペプチドは、図面においてアミノ酸位置1としてここに表示されたメチオニン残基で始まるように示されているが、図面におけるアミノ酸位置1の上流又は下流に位置する他のメチオニン残基をTATポリペプチドの開始アミノ酸残基として用いることも考えられるし、可能でもある。TATポリペプチド細胞外ドメイン又はECDは、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないTATポリペプチドの形態を意味する。通常、TATポリペプチドECDは、それらの膜貫通及び/又は細胞質ドメインを1未満、好ましくはそのようなドメインを0.5未満しか持たない。本発明のTATポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインの何れかの末端から約5アミノ酸を越えない可能性が高い。場合によっては、従って、TATポリペプチドの細胞外ドメインは、実施例又は明細書で同定されるように膜貫通ドメイン/細胞外ドメインの境界の何れかの側から約5を越えないアミノ酸を含んでもよく、シグナルペプチドを伴う又は伴わない、それらのポリペプチド及びそれらをコードする核酸は、本発明で考慮される。ここに開示する種々のTATポリペプチドのシグナルペプチドのおおよその位置は、本明細書及び/又は添付図に示されうる。しかし、シグナルペプチドのC末端境界は変化しうるが、ここで最初に定義したようにシグナルペプチドC末端境界の何れかの側で約5アミノ酸未満である可能性が最も高く、シグナルペプチドのC末端境界は、そのような型のアミノ酸配列成分を同定するのに日常的に使用される基準に従って同定しうることに留意される例えば、Nielsen等ProtEng1016及びvonHeinje等NuclAcidsRes1446834690。更に、幾つかの場合には、分泌ポリペプチドからのシグナル配列の切断は完全に均一ではなく、一つ以上の分泌種をもたらすことも認められる。シグナルペプチドがここに同定されるシグナルペプチドのC末端境界の何れかの側の約5アミノ酸未満内で切断されるこれらの成熟ポリペプチド、及びそれらをコードするポリヌクレオチドは、本発明で考慮される。TATポリペプチド変異体とはTATポリペプチド、好ましくは、ここに開示するような完全長天然配列TATポリペプチド配列、ここで開示するようなシグナルペプチドを欠くTATポリペプチド配列、ここに開示するようなシグナルペプチドを有する又は有しないTATポリペプチドの細胞外ドメイン又はここに開示する完全長TATポリペプチド配列の任意の他の断片例えば、完全長TATポリペプチドの完全なコード配列の一部のみを示す核酸によってコードされるものと少なくとも約80のアミノ酸配列同一性を有するここで定義するような活性なTATポリペプチドを意味する。このようなTATポリペプチド変異体には、例えば、完全長天然アミノ酸配列のN末端又はC末端において一又は複数のアミノ酸残基が付加、もしくは欠失されたTATポリペプチドが含まれる。通常、TATポリペプチド変異体は、ここに開示する完全長天然配列TATポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠くTATポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するTATポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長TATポリペプチド配列の任意の具体的に定義した他の断片に対して、少なくとも約80のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、又は99のアミノ酸配列同一性を有している。通常、TAT変異体ポリペプチドは、少なくとも約10アミノ酸長、あるいは少なくとも約20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600アミノ酸長、又はそれ以上である。場合によっては、TAT変異体ポリペプチドは、天然TATポリペプチド配列に比較して一つ以下の保存的アミノ酸置換、あるいは天然TATポリペプチド配列に比較して2、3、4、5、6、7、8、9、又は10以下の同類アミノ酸置換を有するにすぎない。ここで同定したTATポリペプチド配列に関するパーセントアミノ酸配列同一性とは、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした後の、特定のTATポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST2、ALIGN、又はMegalignDNASTARソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、アミノ酸配列同一性値は、ALIGN2プログラム用の完全なソースコードが米国特許第7160985号出典明記によってここに援用されるに提供されている配列比較コンピュータプログラムALIGN2を使用することによって得られる。ALIGN2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、下記の表1に示したソースコードは米国著作権庁ワシントンDC20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号TXU510087で登録されている。ALIGN2プログラムはジェネンテック社、サウスサンフランシスコカリフォルニアから公的に入手可能であり、ソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN2プログラムは、UNIX登録商標オペレーティングシステム、好ましくはデジタルUNIX登録商標V4.0Dでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN2プログラムによって設定され変動しない。アミノ酸配列比較にALIGN2が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Aの、与えられたアミノ酸配列Bへの、それとの、又はそれに対するアミノ酸配列同一性は次のように計算される:分率X/Yの100倍ここで、Xは配列アラインメントプログラムALIGN2のA及びBのプログラムアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、YはBの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと異なる場合、AのBに対するアミノ酸配列同一性は、BのAに対するアミノ酸配列同一性とは異なると認識されるであろう。TAT変異体ポリヌクレオチド又はTAT変異体核酸配列とは、ここで定義されるように、TATポリペプチド、好ましくは活性TATポリペプチドをコードし、ここに開示する完全長天然配列TATポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠いた完全長天然配列TATポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するTATポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長TATポリペプチド配列の他の任意の断片をコードする核酸配列完全長TATポリペプチドの完全なコード化配列の一部分のみを表す核酸によってコードされたと、少なくとも約80の核酸配列同一性を有する核酸分子を意味する。通常、TAT変異体ポリヌクレオチドは、ここに開示する完全長天然配列TATポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠く完全長天然配列TATポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するTATポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する完全長TATポリペプチド配列の任意の他の断片をコードする核酸配列と、少なくとも約80の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、又は99の核酸配列同一性を有している。変異体は、天然ヌクレオチド配列を含まない。通常、TAT変異体ポリヌクレオチドは、少なくとも約5ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、又は1000ヌクレオチド長であり、この文脈の約という用語は、表示ヌクレオチド配列長にその表示長の10を加えるか又は減じたものを意味する。ここで同定されるTATコード化核酸配列に対するパーセント核酸配列同一性は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、対象のTAT核酸配列のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセントとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の知る範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST2、ALIGN又はMegalignDNASTARソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。ここでの目的のためには、核酸配列同一性値は、ALIGN2プログラム用の完全なソースコードが米国特許第7160985号出典明記によってここに援用されるに提供されている配列比較コンピュータプログラムALIGN2を使用することによって得られる。ALIGN2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、そのソースコードは米国著作権庁ワシントンDC,20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号TXU510087の下で登録されている。ALIGN2プログラムはジェネンテック社、サウスサンフランシスコカリフォルニアから公的に入手可能であり、ソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN2プログラムは、UNIX登録商標オペレーティングシステム、好ましくはデジタルUNIX登録商標V4.0Dでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN2プログラムによって設定され変動しない。核酸配列比較にALIGN2が用いられる状況では、与えられた核酸配列Cの、与えられた核酸配列Dとの、又はそれに対する核酸配列同一性あるいは、与えられた核酸配列Dと、又はそれに対して或る程度の核酸配列同一性を持つ又は含む与えられた核酸配列Cと言うこともできるは次のように計算される:分率W/Zの100倍ここで、Wは配列アラインメントプログラムALIGN2のC及びDのアラインメントによって同一であると一致したスコアのヌクレオチドの数であり、ZはDの全ヌクレオチド数である。核酸配列Cの長さが核酸配列Dの長さと異なる場合、CのDに対する核酸配列同一性は、DのCに対する核酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。他の実施態様では、TAT変異体ポリヌクレオチドとは、TATポリペプチドをコードする核酸分子であり、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、ここに記載の完全長TATポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とハイブリダイゼーションすることができる。TAT変異体ポリペプチドは、TAT変異体ポリヌクレオチドによってコードされているものであり得る。TATポリペプチドをコードする核酸に関して使用される場合の完全長コード領域なる用語は、添付図において開始及び停止コドンの間でしばしば示される本発明の完全長TATポリペプチドをコードするヌクレオチドの配列を指す。ATCC寄託核酸に関して使用される場合の完全長コード領域なる用語は、添付図において開始及び停止コドンの間でしばしば示されるATCCに寄託されたベクター中に挿入されているcDNAのTATポリペプチドコード部分を指す。ここに開示される種々のTATポリペプチドを記載するために使用される単離とは、自然環境の成分から同定され及び分離及び/又は回収されたポリペプチドを意味する。その自然環境の汚染成分とは、そのポリペプチドの診断又は治療への使用を典型的には妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様では、ポリペプチドは、スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも15残基のN末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに充分なほど、あるいは、クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でSDSPAGEにより均一になるまで精製される。単離されたポリペプチドには、TATポリペプチドの自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツのポリペプチドが含まれる。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチドは少なくとも一つの精製工程により調製される。単離されたTATポリペプチドをコードする核酸又は他のポリペプチドコード化核酸は、同定され、ポリペプチドをコードする核酸の天然源に通常付随している少なくとも一つの汚染核酸分子から分離された核酸分子である。単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、天然に見出される形態あるいは設定以外のものである。故に、単離されたポリペプチドをコードする核酸分子は、天然の細胞中に存在する特異的なポリペプチドをコードする核酸分子とは区別される。しかし、ポリペプチドをコードする単離された核酸分子には、例えば、核酸分子が天然細胞のものとは異なった染色体位置にあるポリペプチドを通常は発現する細胞に含まれるポリペプチドをコードする核酸分子が含まれる。コントロール配列という用語は、特定の宿主生物において作用可能に結合したコード配列を発現するために必要なDNA配列を指す。例えば原核生物に好適なコントロール配列は、プロモーター、場合によってはオペレータ配列と、リボソーム結合部位を含む。真核生物の細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに作用可能に結合している。例えば、プレ配列あるいは分泌リーダーのDNAは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されているなら、そのポリペプチドのDNAに作用可能に結合している;プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に結合している;又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にあるなら、コード配列と作用可能に結合している。一般的に、作用可能に結合しているとは、結合したDNA配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。結合は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、従来の手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターあるいはリンカーが使用される。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーは、当業者によって容易に決定され、一般的にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングに必要な温度が高くなり、プローブが短くなるとそれに必要な温度は低くなる。ハイブリダイゼーションは、一般的に、相補鎖がその融点より低い環境に存在する場合に、変性DNAの再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイゼーション配列の間で所望される相同性の程度が高くなればなるほど、用いることができる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をよりストリンジェントにすることになり、低い温度はストリンジェントを低下させることになる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーの更なる詳細及び説明については、Ausubel等CurrentProtocolsinMolecularBiologyWileyIntersciencePublishers1995を参照のこと。ここで定義されるストリンジェント条件又は高度のストリンジェンシー条件は、1洗浄に低イオン強度及び高温度を用いる、例えば、50°Cで、0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1のドデシル硫酸ナトリウム;2ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤を用いる、例えば、42°Cで、50v/vホルムアミドと0.1ウシ血清アルブミン/0.1フィコール/0.1のポリビニルピロリドン/50mMのpH6.5のリン酸ナトリウムバッファー、及び750mMの塩化ナトリウム、75mMクエン酸ナトリウム;又は342°Cで、50ホルムアミド、5×SSC0.75MのNaCl、0.075Mのクエン酸ナトリウム、50mMのリン酸ナトリウムpH6.8、0.1のピロリン酸ナトリウム、5×デンハード液、超音波処理サケ精子DNA50μg/ml、0.1SDS、及び10の硫酸デキストラン溶液中で終夜ハイブリダイゼーション、42°Cで、0.2×SSC塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム中にて10分間の洗浄、ついで55°Cで、EDTAを含む0.1×SSCからなる10分間の高ストリンジェンシー洗浄を用いるものによって同定される。中程度のストリンジェント条件は、Sambrook等MolecularCloningALaboratoryManualに記載されているように同定され、上記のストリンジェントより低い洗浄溶液及びハイブリダイゼーション条件例えば、温度、イオン強度及びSDSの使用を含む。中程度のストリンジェント条件は、20ホルムアミド、5×SSC150mMのNaCl、15mMのクエン酸三ナトリウム、50mMリン酸ナトリウムpH7.6、5×デンハード液、10硫酸デキストラン、及び20mg/mlの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中にて37°Cでの終夜インキュベーション、次いで1×SSC中にて約37-50°Cでのフィルターの洗浄といった条件である。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させる必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかを認識する。エピトープタグなる用語は、ここで用いられるときは、タグポリペプチドと融合したTATポリペプチド又は抗TAT抗体を含んでなるキメラポリペプチドを意味する。タグポリペプチドは、その抗体が産生され得るエピトープを提供するのに十分な残基を有し、その長さは融合するポリペプチドの活性を阻害しないよう充分に短い。また、タグポリペプチドは、好ましくは抗体が他のエピトープと実質的に交差反応をしないようにかなり独特である。適切なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも6のアミノ酸残基、通常は約8~50のアミノ酸残基を有する。ここでの目的に対する活性な又は活性とは、天然又は天然に生じるTATの生物学的及び/又は免疫学的活性を保持するTATポリペプチドの形態を意味し、その中で、生物学的活性とは、天然又は天然発生TATが保持する抗原性エピトープに対する抗体の生成を誘発する能力以外の、天然又は天然発生TATによって引き起こされる生物機能阻害又は刺激を意味し、免疫学的活性とは、天然又は天然発生TATが保持する抗原性エピトープに対する抗体の生成を誘発する能力を意味する。アンタゴニストなる用語は最も広い意味で用いられ、そしてここに開示した天然TATポリペプチドの生物学的活性を部分的又は完全にブロック、阻害、又は中和する任意の分子が含まれる。同じように、アゴニストという用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然TATポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子が含まれる。適切なアゴニスト又はアンタゴニスト分子には、特にアゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、断片、又は天然TATポリペプチドのアミノ酸配列変異体、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小有機分子等が含まれる。TATポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法は、TATポリペプチドと候補アゴニスト又はアンタゴニスト分子を接触させ、そして通常はTATポリペプチドに関連している一又は複数の生物学的活性の検出可能な変化を測定することが含まれ得る。治療する又は治療又は緩和とは、治療上の処置及び予防的療法又は防護的療法の双方を称し、その目的は、標的である病的症状又は疾患を防ぐか又は衰え小さくさせることである。治療を必要とするものには、疾患に罹りやすいものと同時に疾患に既に罹っているもの、又は疾患が予防されるべきものを含む。本発明の方法に従って抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子の治療量を投与された後に、患者が次の一又は複数のものについて観察可能な及び/又は測定可能な減少又は消失を示したならば、被検体又は哺乳動物は、TATポリペプチド発現癌に関して成功裏に治療されたことになる:癌細胞の数の減少、又は癌細胞の消失;腫瘍の大きさの減少;軟部組織及び骨への癌の広がりを含む、末梢器官への癌細胞の浸潤の阻害すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止;腫瘍転移の阻害すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止;腫瘍成長のある程度の阻害;及び/又は特定の癌に関連している一又は複数の症状のある程度の軽減;疾病率及び死亡率の減少、及び生命問題の質の改善。ある程度、抗TAT抗体又はTAT結合オリゴペプチドは、生存癌細胞の成長を防ぐ及び/又は死滅させることができ、それは、細胞増殖抑制及び/又は細胞障害性であり得る。これらの兆候又は症状の低減は、また、患者が感じることができる。疾患における成功裏の治療及び改善を評価することに関する上記のパラメーターは、医師にとってよく知られている日常的手法によって容易に測定が可能である。癌治療では、有効性は、例えば、病気の進行までの時間TTPの算定及び/又は反応速度RRを確かめることによって測定できる。転移は、ステージング試験によって、骨のスキャン及び骨への広がりを確かめるためのカルシウムレベル及び他の酵素に関する試験によって確かめることができる。CTスキャンは、また、領域の骨盤及びリンパ節への広がりを探索することで行うことができる。胸のX線、及び既知の方法による肝臓の酵素レベルの測定を、それぞれ肺及び肝臓への転移を探索するために用いる。疾患をモニタリングする他の常套的方法には、経直腸的超音波断層法TRUS及び経直腸的針生検TRNBが含まれる。慢性投与とは、初期の治療効果活性を長期間にわたって維持するようにするために、急性態様とは異なり連続的な態様での薬剤の投与を意味する。間欠投与とは、中断無く連続的になされるのではなく、むしろ本質的に周期的になされる処理である。癌の治療、症状の緩和又は診断のための哺乳動物とは、哺乳動物に分類される任意の動物を意味し、ヒト、家畜用及び農場用動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む。好ましくは、哺乳動物はヒトである。一又は複数の更なる治療薬と組み合わせた投与とは、同時同時期及び任意の順序での連続した投与を含む。ここで用いられる担体は、製薬的に許容されうる担体、賦形剤、又は安定化剤を含み、用いられる服用量及び濃度でそれらに曝露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。生理学的に許容されうる担体は、水性pH緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容されうる担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩のバッファー;アスコルビン酸を含む酸化防止剤;低分子量約10残基未満ポリペプチド;タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン;疎水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン;アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン;グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物;EDTA等のキレート剤;マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール;ナトリウム等の塩形成対イオン;及び/又は非イオン性界面活性剤、例えば、TWEEN登録商標、ポリエチレングリコールPEG、及びPLURONICSを含む。固相又は固体支持体とは、本発明の抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子が接着できる非水性マトリクスを意味する。ここに包含される固相の例は、部分的又は全体的にガラス例えば、径の調整されたガラス、ポリサッカリド例えばアガロース、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシリコーンで形成されたものを含む。或る実施態様では、前後関係に応じて、固相はアッセイ用プレートのウェル;その他では精製用カラム例えばアフィニティークロマトグラフィーカラムを含むことができる。また、この用語は、米国特許第4275149号に記載されたような別々の粒子の不連続な固相も含む。リポソームは、哺乳動物への薬物例えばTATポリペプチド、それらに対する抗体又はTAT結合オリゴペプチド輸送に有用な、脂質、リン脂質及び/又は界面活性剤を含む種々のタイプの小胞体である。リポソームの成分は、通常は細胞膜の脂質配向に類似した2層構造に配列される。ここで定義されている小分子又は小有機分子とは、約500ダルトン未満の分子量である。ここに開示するポリペプチド、抗体、TAT結合オリゴペプチド、TAT結合有機分子、又はそのアゴニスト又はアンタゴニストの有効量とは、特に述べた目的を実施するために十分な量のことである。有効量は、述べられた目的に関連して、経験的及び常套的な形で決定することができる。治療的有効量という用語は、患者又は哺乳動物の疾患又は疾病を治療するのに効果的な抗体、ポリペプチド、TAT結合オリゴペプチド、TAT結合有機分子又は他の薬剤の量を指す。癌の場合、治療的に有効量の薬は癌細胞の数を減じ;腫瘍の大きさを減じ;末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害すなわち、ある程度まで減速、好ましくは停止し;腫瘍転移を阻害すなわち、ある程度まで減速及び好ましくは停止し;腫瘍成長をある程度まで阻害し;及び/又は癌に関連する一又は複数の症状をある程度まで緩和する。治療するのここでの定義を参照せよ。薬が存在する癌細胞の成長を妨げ及び/又は死滅させる程度まで、それは、細胞分裂停止及び/又は細胞障害性であり得る。抗TAT抗体、TATポリペプチド、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子の増殖阻害量は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞の成長をインビトロ又はインビボで阻害できる量である。腫瘍性細胞成長の阻害の目的のための抗TAT抗体、TATポリペプチド、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子の成長阻害量は、経験的及び常套的な形で決定することができる。抗TAT抗体、TATポリペプチド、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子の細胞障害性量は、細胞、特に腫瘍、例えば癌細胞をインビトロ又はインビボで破壊できる量である。腫瘍性細胞成長の阻害の目的のための抗TAT抗体、TATポリペプチド、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子の細胞障害性量は、経験的及び常套的な形で決定することができる。抗体という用語は最も広い意味において使用され、例えば、単一の抗TATモノクローナル抗体、多エピトープ特異性を持つ抗TAT抗体組成物、ポリクローナル抗体、一本鎖抗TAT抗体、及び所望する生物学的又は免疫学的活性を示す限りは抗TAT抗体の断片下記を参照を包含する。免疫グロブリンIgという用語は、ここでの抗体と相互に置き換え可能に用いられる。単離された抗体とは、その自然環境の成分から同定され分離され及び/又は回収されたものを意味する。その自然環境の汚染成分とは、抗体の診断又は治療への使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様では、抗体は、ローリー法によって定量して95重量以上の、最も好ましくは99重量以上の抗体まで、2スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも15のN末端あるいは内部アミノ酸配列の残基を得るのに充分な程度まで、あるいはクーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた還元又は非還元条件下でのSDSPAGEによる均一性まで精製される。単離された抗体には、組換え体細胞内のインサイツの抗体が含まれるが、これは抗体の自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないからである。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも一つの精製工程により調製される。基本的な4鎖抗体ユニットは2つの同一の軽鎖と2つの同一の重鎖から構成されるヘテロ四量体の糖タンパクである。IgGの場合、4鎖ユニットは一般的に約150000ダルトンである。それぞれのL鎖は1つの共有ジスルフィド結合によってH鎖に結合するが、2つのH鎖はH鎖のアイソタイプに応じて一又は複数のジスルフィド結合により互いに結合している。それぞれのH及びL鎖はまた規則的な間隔を持った鎖内ジスルフィド結合を持つ。それぞれのH鎖は、α及びγ鎖の各々に対しては3つの定常ドメインが、μ及びεアイソタイプに対しては4つのCHドメインが続く可変ドメインをN末端に有する。それぞれのL鎖は、その他端に定常ドメインが続く可変ドメインをN末端に有する。VLはVHと整列し、CLは重鎖の第一定常ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。VLとVHは共同して対になって、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性は、例えばBasicandClinicalImmunology8版DanielPStitesAbbaITerrandTristramGParslowAppletonLangeNorwalkCT199471頁及び6章を参照のこと。任意の脊椎動物種からのL鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる2つの明確に区別される型の一つを割り当てることができる。また、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンには異なったクラス又はアイソタイプを割り当てることができる。IgA、IgD、IgE、IgG及びIgMという免疫グロブリンの5つの主要なクラスがあり、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる重鎖を有する。さらにγ及びαのクラスは、CH配列及び機能等の比較的小さな差異に基づいてサブクラスに分割され、例えば、ヒトにおいては次のサブクラス:IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2が発現する。可変という用語は、可変ドメインのある部分が抗体の間で配列が広範囲に異なることを意味する。Vドメインは抗原結合性を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定める。しかし、可変性は可変ドメインの110アミノ酸スパンを通して均等には分布されていない。代わりに、V領域は、それぞれ9-12アミノ酸長である高頻度可変領域と称される極度の可変性を有するより短い領域によって分離された15-30アミノ酸のフレームワーク領域と呼ばれる比較的不変の伸展からなる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメイン各々は、大きなβシート配置をとり、3つの高頻度可変領域により接続された4つのFR領域を含み、それはループ状の接続を形成し、βシート構造の一部を形成することもある。各鎖の高頻度可変領域はFRにより他の鎖からの高頻度可変領域とともに極近傍に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与しているKabat等SequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEDPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMD。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接は関係ないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞障害における抗体の寄与を示す。ここで使用されるモノクローナル抗体という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する、すなわち、集団に含まれる個々の抗体が、少量で存在しうる自然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、一つの抗原部位に対している。さらに、異なる決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と比べて、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体によって汚染されずに合成される点で有利である。モノクローナルとの修飾詞は、抗体を何か特定の方法で生成しなければならないことを意味するものではない。例えば、本発明において有用なモノクローナル抗体は、最初にKohler等Nature256495により記載されたハイブリドーマ法によって作ることができ、あるいは組換えDNA法によって、細菌、真核細胞動物又は植物細胞から作ることができる。またモノクローナル抗体は、例えばClackson等Nature352624628、及びMarks等JMolBiol222581597に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。ここで、モノクローナル抗体は、重鎖及び/又は軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体、あるいは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同性があり、鎖の残りの部分が他の種由来の抗体、あるいは他の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同であるキメラ抗体、並びにそれが所望の生物的活性を有する限りこのような抗体の断片を特に含む。ここで対象のキメラ抗体には、非ヒト霊長類から由来する可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含むプリマタイズ抗体を含む。インタクトな抗体は、抗原結合部位、並びにCL及び少なくとも重鎖定常ドメイン、CH1、CH2及びCH3を含むものである。定常ドメインは天然配列定常ドメイン又はそれらのアミノ酸配列変異体であってよい。好ましくは、インタクトな抗体は一又は複数のエフェクター機能を有する。抗体断片は、無傷の抗体の一部、好ましくは無傷の抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Fab、Fab’、F2、及びFv断片;ダイアボディ;直鎖状抗体米国特許第5641870号、実施例2;Zapata等ProteinEng8105710621995;単鎖抗体分子;及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。抗体のパパイン消化は、Fab断片と呼ばれる2つの同一の抗体結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して命名された残留Fc断片を産生する。Fab断片は全長L鎖とH鎖の可変領域ドメイン、及び一つの重鎖の第一定常ドメインからなる。各Fab断片は抗原結合性に関して一価である、すなわち単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により、単一の大きなF2断片が生じ、これは2価の抗原結合部位を持つ2つのジスルフィド結合されたFab断片にほぼ対応し、抗原を交差結合させることができるものである。Fab断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含むCH1ドメインのカルボキシ末端に幾つかの残基が付加されていることによりFab断片と相違する。FabSHは、ここでは定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を持つFabを表す。F2抗体断片は、通常はFab断片の対として生成され、それらの間にヒンジシステインを有する。抗体断片の他の化学的結合も知られている。Fc断片はジスルフィドにより一緒に保持されている双方のH鎖のカルボキシ末端部位を含む。抗体のエフェクター機能は、Fc領域の配列により決定され、その領域は、所定の型の細胞に見出されるFcレセプターによって認識される部位である。Fvは、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、密接に非共有結合した1本の重鎖と1本の軽鎖の可変領域の二量体からなる。これら2つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する6つの高頻度可変ループが生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン又は抗原に特異的な3つのCDRのみを含んでなるFvの半分でさえ、結合部位全体よりは低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を持つ。sFv又はscFvとも略称される単鎖Fvは、単一のポリペプチド鎖内に結合したVH及びVL抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、sFvポリペプチドはVH及びVLドメイン間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それはsFVが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。sFvの概説については、PluckthuninThePharmacologyofMonoclonalAntibodiesvol113Rosenburg及びMoore編SpringerVerlagNewYorkpp269315;Borrebaeck1995以下を参照のこと。ダイアボディという用語は、鎖間ではなく鎖内でVドメインを対形成させ、結果として二価の断片、すなわち2つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、VHとVLドメインとの間に、短いリンカーを持つsFv断片前の段落を参照を構築することにより調製される小型の抗体断片を意味する。二重特異性ダイアボディは2つの交差sFv断片のヘテロダイマーであり、そこでは2つの抗体のVH及びVLドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する。ダイアボディは、例えば、欧州特許第404097号;国際公開93/11161号;及びHollinger等ProcNatlAcadSciUSA9064446448により十分に記載されている。非ヒト抗体のヒト化形とは、非ヒト抗体から得られた最小配列を含むキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような所望の抗体特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種の高頻度可変領域の残基によって置換されたヒト免疫グロブリンである。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は抗体の特性をさらに洗練するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、全て又はほとんど全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのものに一致し、全て又はほとんど全てのFRがヒト免疫グロブリン配列である、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、状況に応じて免疫グロブリン定常領域、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む。さらなる詳細は、Jones等Nature321522525;Riechmann等Nature332323329;及びPrestaCurrOpStructBiol2593596を参照のこと。種依存性抗体、例えば哺乳動物抗ヒトIgE抗体は、二番目の哺乳動物種からの抗原の相同体に対して有している結合親和性よりも、一番目の哺乳動物種からの抗原に対してより強力な結合親和性を有する抗体である。通常、種依存性抗体は、ヒト抗原すなわち、約1×10-7M以下、好ましくは約1×10-8以下、最も好ましくは約1×10-9M以下の結合親和性Kd値を有すると特異的に結合するが、そのヒト抗原に対する結合親和性よりも、少なくとも約50倍、又は少なくとも約500倍、又は少なくとも約1000倍弱い、二番目の非ヒト哺乳動物種からの抗原の相同体に対する結合親和性を有する。種依存性抗体は、上にて定義した種々の型の抗体のいずれでもあることが可能だが、好ましくはヒト化又はヒト抗体である。Kabatに記載の可変ドメイン残基番号付け又はKabatに記載のアミノ酸位番号付けなる用語およびその異なる言い回しは、Kabat等SequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMDの抗体の編集の軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインに用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを用いると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのFR又はCDR内の短縮又は挿入に相当する2、3のアミノ酸又は付加的なアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインには、重鎖FR残基82の後に挿入された残基と、H2の残基52の後に単一アミノ酸の挿入を含んでもよい。残基のKabat番号は、標準のKabat番号付け配列によって抗体の配列の相同領域でアライメントすることによって与えられる抗体について決定してもよい決定した。ここで用いる実質的に類似、実質的に同じなる句は、当業者が2つの数値の差異に、該値によって測定される生物学的性質上わずかに又は全く生物学的及び/又は統計学的有意差がないと認められるほど、2つの数値が十分に高く類似していることを意味する。前記2つの値間の差異は、参照/比較抗体の値の好ましくは約50以下、好ましくは約40以下、好ましくは約30以下、好ましくは約20以下、好ましくは約10以下である。一般的に結合親和性は、分子の単一結合部位とその結合パートナーとの間の非共有結合的な相互作用の総合的な強度を意味する。特に明記しない限り、結合親和性は、結合対のメンバー間の1:1相互作用を反映する内因性結合親和性を意味する。一般的に、分子XのそのパートナーYに対する親和性は、解離定数として表される。親和性は、本明細書中に記載のものを含む当業者に公知の共通した方法によって測定することができる。低親和性抗体は抗原にゆっくり結合して素早く解離する傾向があるのに対し、高親和性抗体は抗原により密接により長く結合したままとなる。結合親和性の様々な測定方法が当分野で公知であり、それらの何れかを本発明のために用いることができる。以下に具体的な例示的実施態様を記載する。一実施態様では、本発明のKd又はKd値は、段階的な力価の非標識抗原の存在下で、最小濃度の標識抗原にてFabを均衡化して、抗Fab抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するFabの溶液結合親和性を測定する以下のアッセイで示されるようなJMolBiol293865881、所望の抗体のFab型とその抗原を用いて実行される放射性標識した抗原結合アッセイで測定される。アッセイの条件を決めるために、ミクロタイタープレートを5μg/mlの捕獲抗Fab抗体を含む50mM炭酸ナトリウムにて一晩コートして、その後2のウシ血清アルブミンを含むPBSにて室温で2~5時間、ブロックする。非吸着プレートに、100pM又は26pMの[125I]抗原を段階希釈した所望のFabと混合するCancerRes5745934599の抗VEGF抗体、Fab12の評価と一致する。ついで所望のFabを一晩インキュベートする;しかし、インキュベーションは確実に平衡状態に達するまでに長時間かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温でインキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを0.1のTween20を含むPBSにて8回洗浄する。プレートが乾燥したら、150μl/ウェルの閃光物質を加え、プレートをTopcountγ計測器にて10分間計測する。最大結合の20か又はそれ以下濃度のFabを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。他の実施態様によると、~10反応単位の固定した抗原CM5チップを用いて25°CのBIAcoreTM2000又はBIAcoreTM3000にて表面プラズモン共鳴アッセイを行ってKd又はKd値を測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップを、提供者の指示書に従ってNエチルNカルボジイミド塩酸塩及びNヒドロキシスクシニミドで活性化した。抗原を10mM酢酸ナトリウムで5μg/mlに希釈し、結合したタンパク質の反応単位がおよそ10になるように5μl/分の流速で注入した。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、2倍の段階希釈したFabを25°C、およそ25μl/分の流速で0.05Tween20を含むPBSに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデルを用いて、会合速度と解離速度を算出した。平衡解離定数をKoff/Kon比として算出した。例として、ChenYらJMolBiol293865881を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が106M-1S-1を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計又は撹拌キュベットを備えた8000シリーズSLMAminco分光光度計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、PBS、25°Cの、20nMの抗抗原抗体の蛍光放出強度における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。また、本発明の結合速度又は会合の速度又は会合速度又はkonは、~10反応単位の固定した抗原CM5チップを用いて25°CのBIAcoreTM2000又はBIAcoreTM3000を用いた前述と同じ表面プラズモン共鳴アッセイにて測定される。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップを、提供者の指示書に従ってNエチルNカルボジイミド塩酸塩及びNヒドロキシスクシニミドで活性化した。抗原を10mM酢酸ナトリウムで5μg/mlに希釈し、結合したタンパク質の反応単位がおよそ10になるように5μl/分の流速で注入した。その後、反応しない群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入した。反応しない群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、2倍の段階希釈したFabを25°C、およそ25μl/分の流速で0.05Tween20を含むPBSに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデルを用いて、会合速度と解離速度を算出した。平衡解離定数をKoff/Kon比として算出した。例として、ChenYらJMolBiol293865881を参照。しかし、上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が106M-1S-1を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計又は撹拌キュベットを備えた8000シリーズSLMAminco分光光度計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、PBS、25°Cの、20nMの抗抗原抗体の蛍光放出強度における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定するのが好ましい。一実施態様における本発明のKd又はKd値は、段階的な力価の非標識抗原の存在下で、最小濃度の標識抗原にてFabを均衡化して、抗Fab抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するFabの溶液結合親和性を測定する以下のアッセイで示されるようなJMolBiol293865881、抗体のFab型とその抗原分子を用いて実行される放射性標識した抗原結合アッセイで測定される。アッセイの条件を決めるために、ミクロタイタープレートを5μg/mlの捕獲抗Fab抗体を含む50mM炭酸ナトリウムにて一晩コートして、その後2のウシ血清アルブミンを含むPBSにて室温で2~5時間、ブロックする。非吸着プレートに、100pM又は26pMの[125I]抗原を段階希釈した所望のFabと混合するCancerRes5745934599の抗VEGF抗体、Fab12の評価と一致する。ついで所望のFabを一晩インキュベートする;しかし、インキュベーションは確実に平衡状態に達するまでに長時間かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温で1時間インキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを0.1のTween20を含むPBSにて8回洗浄する。プレートが乾燥したら、150μl/ウェルの閃光物質を加え、プレートをTopcountγ計測器にて10分間計測する。最大結合の20か又はそれ以下濃度のFabを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。他の実施態様によると、~10反応単位の固定した抗原CM5チップを用いて25°CのBIAcoreTM2000又はBIAcoreTM3000にて表面プラズモン共鳴アッセイを行ってKd又はKd値を測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップを、提供者の指示書に従ってNエチルNカルボジイミド塩酸塩及びNヒドロキシスクシニミドで活性化した。抗原を10mM酢酸ナトリウムで5μg/mlに希釈し、結合したタンパク質の反応単位がおよそ10になるように5μl/分の流速で注入した。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、2倍の段階希釈したFabを25°C、およそ25μl/分の流速で0.05Tween20を含むPBSに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデルを用いて、会合速度と解離速度を算出した。平衡解離定数をKoff/Kon比として算出した。例として、ChenYらJMolBiol293865881を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が106M-1S-1を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計又は撹拌キュベットを備えた8000シリーズSLMAminco分光光度計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、PBS、25°Cの、20nMの抗抗原抗体の蛍光放出強度における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。一実施態様では、本発明の結合速度又は会合の速度又は会合速度又はkonは、~10反応単位の固定した抗原CM5チップを用いて25°CのBIAcoreTM2000又はBIAcoreTM3000を用いた前述と同じ表面プラズモン共鳴アッセイにて測定される。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップを、提供者の指示書に従ってNエチルNカルボジイミド塩酸塩及びNヒドロキシスクシニミドで活性化した。抗原を10mM酢酸ナトリウムで5μg/mlに希釈し、結合したタンパク質の反応単位がおよそ10になるように5μl/分の流速で注入した。その後、反応しない群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入した。反応しない群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、2倍の段階希釈したFabを25°C、およそ25μl/分の流速で0.05Tween20を含むPBSに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデルを用いて、会合速度と解離速度を算出した。平衡解離定数をKoff/Kon比として算出した。例として、ChenYらJMolBiol293865881を参照。しかし、上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が106M-1S-1を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計又は撹拌キュベットを備えた8000シリーズSLMAminco分光光度計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、PBS、25°Cの、20nMの抗抗原抗体の蛍光放出強度における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定するのが好ましい。ここで用いる実質的に減弱した、又は実質的に異なるという表現は、当業者が2つの数値の差異に、前記値によって測定される生物学的性質の上で統計学的に有意な差異を認める程度に、2つの数値の差が有意に大きいことを意味する。前記2つの値の差異は、参照/対照抗体の値の好ましくは約10以上、好ましくは約20以上、好ましくは約30以上、好ましくは約40以上、好ましくは約50以上である。抗原は、抗体が選択的に結合しうる予め決められた抗原である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン又は他の天然に生じる化合物又は合成化合物であってもよい。標的抗原はポリペプチドであることが望ましい。本願明細書における目的のためのアクセプターヒトフレームワークは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られるVL又はVHフレームワークのアミノ酸配列を含有するフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られるアクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含有するか、又は既存のアミノ酸配列変化を含有してもよい。既存のアミノ酸変化が存在する場合、好ましくは5つのみ、好ましくは4つ以下、又は3つ以下の既存のアミノ酸変化が存在する。既存のアミノ酸変化がVH中に存在する場合、好ましくは、それらの変化は位置71H、73Hおよび78Hの内の3つ、2つ又は1つのみである、例えば、それらの位置のアミノ酸残基は、71A、73Tおよび/または78Aであってよい。一実施態様では、VLアクセプターヒトフレームワークは、VLヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。本発明の抗体は、第二の抗体が結合するエピトープと同じエピトープへの結合について競合できる。標準的なインビトロ抗体競合結合分析において、同じ濃度で、一つのモノクローナル抗体が、他の同抗体の結合を40以上ブロックする場合、これらモノクローナル抗体は同じエピトープを共有すると考えられる。ヒトコンセンサスフレームワークは、ヒト免疫グロブリンVL又はVHフレームワーク配列の選別において、最も共通して生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。通常、ヒト免疫グロブリンVL又はVH配列は、可変ドメイン配列のサブグループから選別する。通常、Kabat等によると、配列のサブグループはサブグループである。一実施態様では、VLについて、Kabat等によると、前記サブグループはサブグループκIである。一実施態様では、VHについて、Kabat等によると、前記サブグループはサブグループIIIである。VHサブグループIIIコンセンサスフレームワークは、Kabat等の可変重鎖サブグループIIIのアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含有する。VLサブグループIコンセンサスフレームワークは、Kabat等の可変軽鎖κサブグループIのアミノ酸配列から得られたコンセンサス配列を含んでなる。非修飾ヒトフレームワークは、アクセプターヒトフレームワーク、例えばアクセプターヒトフレームワーク中の非ヒトアミノ酸置換に対して欠如しているヒトフレームワークと同じアミノ酸配列を有するヒトフレームワークである。本明細書の目的に関して変更された高頻度可変領域という場合、その中に一又は複数のアミノ酸置換を含有する高頻度可変領域を意味する。本願明細書の目的に関して非修飾高頻度可変領域という場合、それが得られた非ヒト抗体と同じアミノ酸配列を有する高頻度可変領域、すなわち一又は複数のアミノ酸置換がないものである。本願明細書において、用いられる高頻度可変領域、HVR、HV又はCDRという用語は、配列中の高頻度に可変であるおよび/または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。通常、抗体は、VHの3つと、VLの3つからなる計6つの高頻度可変領域を含んでいる。多くの高頻度可変領域が描写されており、本願明細書に包含される。Kabat相補性決定領域は、配列多様性に基づいており、最も一般的に用いられるものである。Chothiaは、代わりに構造的ループの位置を指す。接触高頻度可変領域は、入手可能な複雑な結晶構造の分析に基づくものである。これら高頻度可変領域各々の残基を以下に示す。特に断らない限り、Kabatのナンバリングを利用する。高頻度可変領域の位置は、通常、アミノ酸24-34CDR-L1、アミノ酸49-56CDR-L2、アミノ酸89-97CDR-L3、アミノ酸26-35ACDR-H1、アミノ酸49-65CDR-H2、及びアミノ酸93-102CDR-H3である。高頻度可変領域は、以下の伸展した高頻度可変領域を含有してもよい:VLのアミノ酸24-36、及びアミノ酸46-56。可変ドメイン残基には、これらの定義の各々にあるように上掲のKabat等に従って番号を付けた。本願明細書に定義されるフレームワーク又はFR残基は、高頻度可変領域残基以外の、それらの可変ドメイン残基である。ヒト抗体は、ヒトにより生成される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するもの、及び/又は本明細書中に開示したヒト抗体をつくるためのいずれかの技術を使用してつくられたものである。ヒト抗体のこのような定義から、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特別に除く。親和性成熟抗体は、その1つ以上のCDRに1つ以上の変更を有する抗体であって、そのような変更を有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性を向上させる。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル単位の、さらにはピコモル単位の親和性を有する。親和成熟抗体は、当技術分野において既知の方法により生産できる。Marks他は、BioTechnology10779783において、VHドメインとVLドメインのシャフリングによる親和成熟を開示している。CDRおよび/またはフレームワーク残基のランダムな突然変異誘発が、Barbas他、ProcNatAcadSciUSA9138093813;Schier他、Gene169147155;Yelton他、JImmunol15519942004;Jackson他JImmunol15433109;およびHawkins他JMolBiol226889896に開示されている。ブロッキング抗体又はアンタゴニスト抗体は、結合する抗原の生物学的活性を阻害するか、減弱するものである。好適なブロッキング抗体又はアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にないしは完全に阻害する。TAT結合オリゴペプチドはここで記載される様なTATポリペプチドに好ましくは特異的に結合するオリゴペプチドである。TAT結合オリゴペプチドは、既知のオリゴペプチド合成方法論を用いて化学的に合成することができ、あるいは組み換え技術を用いて調製及び精製することができる。TAT結合オリゴペプチドは通常、少なくとも約5のアミノ酸長であり、或いは少なくとも約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99又は100のアミノ酸長以上であり、このようなオリゴペプチドはここに記載される様なTATポリペプチドに対して好ましくは特異的に結合する能力がある。TAT結合オリゴペプチドは、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定することができる。この点において、ポリペプチド標的に特異的に結合する能力のあるオリゴペプチドのオリゴペプチドライブラリーを検索する技術は当分野でよく知られていることを注記する例えば、米国特許第5556762号、同第5750373号、同第4708871号、同第4833092号、同第5223409号、同第5403484号、同第5571689号、同第5663143号;PCT公開第WO84/03506号、及びWO84/03564号;Geysen等ProcNatlAcadSciUSA8139984002;Geysen等ProcNatlAcadSciUSA82178182;Geysen等inSyntheticPeptidesasAntigens130149;Geysen等JImmunolMeth102259274;Schoofs等JImmunol140611616CwirlaSE等ProcNatlAcadSciUSA876378;LowmanHB等Biochemistry3010832;ClacksonT等Nature352624;MarksJD等JMolBiol222581;KangAS等ProcNatlAcadSciUSA888363、及びSmithGPCurrentOpinBiotechnol2668参照。TAT結合有機分子とは、ここに記載されるようなTATポリペプチドに、好ましくは特異的に、結合する、ここに定義されるようなオリゴペプチド又は抗体以外の有機分子である。TAT結合有機分子は既知の方法例えばPCT公開第WO00/00823号及びWO00/39585号参照を用いて同定され、化学的に合成されうる。TAT結合有機分子は通常、約2000ダルトン未満の大きさであり、あるいは約1500、750、500、250又は200ダルトン未満の大きさであり、ここに記載される様なTATポリペプチドに、好ましくは特異的に結合する能力のあるこのような有機分子は、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定されうる。この点において、ポリペプチド標的に結合する能力のある分子の有機分子ライブラリーを検索する技術は当分野でよく知られていることを注記する例えばPCT公開第WO00/00823号及びWO00/39585号参照。対象の抗原、例えば腫瘍関連ポリペプチド抗原標的と結合する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、その抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子がその抗原を発現している細胞又は組織を標的とする診断及び/又は治療剤として有用であり、他のタンパク質と有意には交差反応しないように十分な親和性でその抗原と結合するものである。そのような実施態様では、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の非標的タンパク質との結合の程度は、蛍光標示式細胞分取器FACS分析又は放射免疫沈降RIAによって定量して、その特定の標的タンパク質との抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合の約10よりも低い。標的分子への抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の結合に関して、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープと特異的に結合又は特異的に結合する、又はそれに対して特異的であるという用語は、非特異的な相互作用とは測定して異なる結合を意味する。特異的な結合は、例えば、一般に結合活性を持たない類似した構造の分子であるコントロール分子の結合性と比較して、分子の結合性を定量することによって測定することができる。例えば、特異的な結合性は、標的、例えば過剰の非標識標的に類似したコントロール分子とも競合にとって定量することができる。この場合、プローブに対する標識標的の結合が過剰の非標識標的によって競合的に阻害されるならば、特異的結合が表示される。ここで使用される特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープと特異的に結合又は特異的に結合する、又はそれに対して特異的であるという用語は、例えば標的に対して少なくとも約10-4M、あるいは少なくとも約10-5M、あるいは少なくとも約10-6M、あるいは少なくとも約10-7M、あるいは少なくとも約10-8M、あるいは少なくとも約10-9M、あるいは少なくとも約10-10M、あるいは少なくとも約10-11M、あるいは少なくとも約10-12M、あるいはそれ以上のKdを持つ分子によって示されうる。一実施態様では、特異的に結合するという用語は、如何なる他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープへ実質的に結合することなく分子が特定のポリペプチド又は特定のポリペプチドのエピトープに結合する結合を意味する。TATポリペプチドを発現する腫瘍細胞の成長を阻害する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子、又は増殖阻害抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、適切なTATポリペプチドを発現又は過剰発現する癌細胞の測定可能な程の成長阻害を引き起こすものである。TATポリペプチドは、癌細胞の表面上に発現される膜貫通ポリペプチドであることができ、癌細胞によって産生され分泌されるポリペプチドであり得る。好ましい成長阻害抗TAT抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、一般的には、試験された抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子で処理されていない腫瘍細胞であるコントロールである、適切なコントロールと比較して、20より多く、好ましくは約20から約50、そしてさらに好ましくは50よりも多く例えば、約50から約100でTAT発現腫瘍細胞の成長を阻害する。一実施態様では、成長阻害は、細胞培養で約0.1から30μg/ml又は約0.5nMから200nMの抗体濃度で測定することができ、抗体への腫瘍細胞の曝露の後、成長阻害を1-10日で確かめる。インビボでの腫瘍細胞の成長阻害は、下記の実験実施例に記載しているような種々の方法で確かめることができる。約1μg/kgから約100mg/kg体重の抗TAT抗体の投与が、最初の抗体の投与から約5日から3ヶ月内、好ましくは約5から30日内に腫瘍の大きさ又は腫瘍細胞増殖に減少を引き起こす場合、抗体はインビボで成長阻害性である。アポトーシスを誘発する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、アネキシンVの結合、DNAの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、及び/又は膜小胞の形成等により決定されるようなプログラム細胞死を誘発するものである。細胞は、通常、TATポリペプチドを過剰発現しているものである。好ましくは、細胞は腫瘍細胞、例えば前立腺、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、肺、腎臓、結腸、膀胱細胞である。アポトーシスに伴う細胞のイベントを評価するために種々の方法が利用できる。例えば、ホスファチジルセリン転位置をアネキシン結合により測定することができ;DNA断片化はDNAラダーリングにより評価することができ;DNA断片化に伴う細胞核/クロマチン凝結は低二倍体細胞の何らかの増加により評価することができる。好ましくは、アネキシン結合アッセイにおいて、アポトーシスを誘発する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、未処理細胞の約2~50倍、好ましくは約5~50倍、最も好ましくは約10~50倍のアネキシン結合を誘発するという結果を生じるものである。抗体のエフェクター機能とは、抗体のFc領域天然配列Fc領域又はアミノ酸配列変異体Fc領域に帰する生物学的活性を意味し、抗体のアイソタイプにより変わる。抗体のエフェクター機能の例には、C1q結合及び補体依存性細胞障害;Fcレセプター結合性;抗体依存性細胞媒介性細胞障害;貪食作用;細胞表面レセプター例えば、B細胞レセプターのダウンレギュレーション;及びB細胞活性化が含まれる。抗体依存性細胞媒介性細胞障害又はADCCとは、ある種の細胞障害細胞と結合した分泌Igにより、これらの細胞障害エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて細胞毒により標的細胞を死滅させることを可能にする細胞障害性の形態を意味する。抗体は細胞障害細胞を備えており、これはこのような死滅には絶対に必要なものである。ADCCを媒介する主要な細胞NK細胞はFcγRIIIのみを発現するのに対し、単球はFcγRI、FcγRII及びFcγRIIIを発現する。造血細胞でのFcRの発現は、RavetchandKinetAnnuRevImmunol945792の464頁の表3に要約されている。対象の分子のADCC活性をアッセイするために、米国特許第5500362号又は同第5821337号に記載されているようなインビトロADCCアッセイを実施することができる。このようなアッセイにおいて有用なエフェクター細胞には、末梢血液単核細胞PBMC及びナチュラルキラー細胞NK細胞が含まれる。代わりとして、もしくは付加的に、対象の分子のADCC活性は、例えば、Clynes等95652656において開示されているような動物モデルにおいて、インビボで評価することが可能である。Fcレセプター又はFcRは、抗体のFc領域に結合するレセプターを記載するものである。好適なFcRは天然配列ヒトFcRである。さらに好適なFcRは、IgG抗体ガンマレセプターと結合するもので、FcγRI、FcγRII及びFcγRIIIサブクラスのレセプターを含み、これらのレセプターの対立遺伝子変異体、選択的にスプライシングされた形態のものも含まれる。FcγRIIレセプターには、FcγRIIA活性型レセプター及びFcγRIIB阻害型レセプターが含まれ、主としてその細胞質ドメインは異なるが、類似のアミノ酸配列を有するものである。活性型レセプターFcγRIIAは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター活性化モチーフimmunoreceptortyrosinebasedactivationmotifITAMを含んでいる。阻害型レセプターFcγRIIBは、細胞質ドメインにチロシン依存性免疫レセプター阻害性モチーフimmunoreceptortyrosinebasedinhibitionmotifITIMを含んでいるDaeronAnnuRevimmunol15203234を参照。FcRsに関しては、RavetchandKinetAnnuRevImmunol9457492Capel等Immunomethods42534及びdeHaas等JLabClinMed12633041に概説されている。将来的に同定されるものも含む他のFcRsはここでのFcRという言葉によって包含される。また、該用語には、母性IgGsが胎児に受け継がれる要因となっている新生児性レセプターFcRnGuyer等JImmunol117587Kim等JImmunol24249も含まれる。ヒトエフェクター細胞とは、一又は複数のFcRsを発現し、エフェクター機能を実行する白血球のことである。その細胞が少なくともFcγRIIIを発現し、ADCCエフェクター機能を実行することが望ましい。ADCCを媒介するヒト白血球の例として、末梢血液単核細胞PBMC、ナチュラルキラーNK細胞、単球、細胞障害性T細胞及び好中球が含まれるが、PBMCとNK細胞が好適である。エフェクター細胞は天然源、例えば血液から単離してもよい。補体依存性細胞障害もしくはCDCは、補体の存在下で標的を溶解することを意味する。典型的な補体経路の活性化は補体系の第1補体が、同族抗原と結合した抗体に結合することにより開始される。補体の活性化を評価するために、CDCアッセイを、例えばGazzanoSantoro等JImmunolMethods202163に記載されているように実施することができる。癌及び癌性という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか記述する。癌の例には、これらに限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ様悪性腫瘍が含まれる。このような癌のより特定の例には、扁平細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平癌腫を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃又は腹部癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿道癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓又は腎癌、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫及びB細胞リンパ腫、脳、並びに頭部及び頸部の癌、及び関連した転移が含まれる。細胞増殖性疾患及び増殖性疾患という用語は、ある程度の異常な細胞増殖を伴う疾患を意味する。一実施態様では、細胞増殖性疾患は癌である。ここで用いられる腫瘍は、悪性又は良性に関わらず、全ての腫瘍形成細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を意味する。細胞死を誘導する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、生細胞を生育不能にするものである。細胞は、TATポリペプチドを発現するもの、好ましくは、同じ組織型の正常細胞と比較してTATポリペプチドを過剰発現する細胞である。TATポリペプチドは、癌細胞の表面上で発現される膜貫通ポリペプチドであることができ、癌細胞により生成され分泌されるポリペプチドであり得る。好ましくは、その細胞は癌細胞、例えば、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓又は膀胱細胞である。インビトロ細胞死は、抗体依存性細胞媒介細胞障害ADCC又は補体依存性障害CDCによって誘導される細胞死を識別するために、補体及び免疫エフェクター細胞の無い状態で確かめてもよい。従って、細胞死に関するアッセイは、熱不活性化血清すなわち、補体の無いを用いて、免疫エフェクター細胞が無い状態でおこなってもよい。抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子が細胞死を誘導するか否かを確かめるために、ヨウ化プロピジウムPI、トリパンブルーMoore等Cytotechnology17111又は7AADの取り込みによって評価した膜整合性の損失を、未処理細胞と関連して評価することができる。好ましい細胞死を誘導する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子は、BT474細胞でのPI取り込みアッセイで、PI取り込みを誘導するものである。TAT発現細胞は、細胞の表面上に又は分泌形態で内因性又は形質移入されたTATポリペプチドを発現する。TAT発現癌は、細胞表面上に存在するTATポリペプチドを有する、又はTATポリペプチドを生成し分泌する細胞を含む癌である。任意には、TAT発現癌は、その細胞の表面上に十分なレベルのTATポリペプチドを生成し、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子はそれへ結合することができ、癌に関して治療的効果を有する。他の実施態様では、任意にはTAT発現癌は、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子アンタゴニストが結合することができ、癌に対して治療的有効量を有するように十分なレベルのTATポリペプチドを産生及び分泌する。後者に関して、アンタゴニストは腫瘍細胞による分泌TATポリペプチドの産生及び分泌を減少、抑制又は阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。TATポリペプチドを過剰発現する癌は、同じ組織型の非癌性細胞と比較して、その細胞表面に顕著により高いレベルのTATポリペプチドを有する、或いは産生及び分泌するものである。そのような過剰発現は、遺伝子増幅又は増大した転写又は翻訳によって生じ得る。TATポリペプチド過剰発現は、診断又は予後アッセイにおいて、細胞の表面上に存在する、あるいは細胞により分泌されるTATタンパク質の増大したレベルを評価することによって定量されうる例えば、TATポリペプチドをコードする単離された核酸から、組み換えDNA技術を用いて調製することができる単離されたTATポリペプチドに対して調製した抗TAT抗体を用いた免疫組織化学アッセイを介して;FACS分析など。あるいは、又は付加的に、例えば、TATコード化核酸又はその相補鎖と一致する核酸ベースプローブを使用する蛍光インサイツハイブリダイゼーション;FISH;1998年10月公開の国際公開98/45479を参照せよ、サザンブロッティング、ノーザンブロッティング、又はポリメラーゼ連鎖反応PCR技術、例えばリアルタイム定量PCRRTPCRを介して、細胞のTATポリペプチドコード化核酸又はmRNAのレベルを測定してもよい。また、例えば、抗体ベースアッセイを用いて、血清のような生物学的体液中に流れている抗原を測定することによって、TATポリペプチド過剰発現を研究してもよい同じく、例えば、1990年6月12日に発行の米国特許第4933294号;1991年4月18日に公開の国際公開91/05264;1995年3月28日に発行の米国特許第5401638号;Sias等JImmunolMethods1327380を参照せよ。上記のアッセイとは別に、種々のインビボアッセイは、熟練技術者に入手可能である。例えば、患者の体の中にある細胞を、例えば、放射活性アイソトープのような検出可能な標識で場合によって標識した抗体に曝してもよく、患者の細胞への抗体の結合は、例えば、放射活性の外部スキャンニングによって、又は以前に抗体へ曝した患者から取り出した生検を分析することによって評価することができる。ここで用いられているように、イムノアドヘシンという用語は、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能を持つ異種タンパク質アドヘシンの結合特異性を付与した抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは抗体の抗原認識及び結合部位以外の所望の結合特異性を持つアミノ酸配列即ち異種と免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物である。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む近接アミノ酸配列を含む。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4サブタイプ、IgAIgA1及びIgA2を含む、IgE、IgD又はIgMなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。標識という語は、ここで用いられる場合、標識化抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子を作製するために、抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子に直接的又は間接的に結合させる検出可能な化合物又は組成物を意味する。標識はそれ自身によって検出可能でもよく例えば、放射性同位体標識又は蛍光標識、あるいは、酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変換を触媒してもよい。ここで用いられる細胞障害性剤という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び/又は細胞破壊を生ずる物質を指す。この用語は、放射性同位体例えば、At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32及びLuの放射性同位体、化学治療薬、酵素及びその断片、例えば核溶解性酵素、抗生物質、及び毒素、例えばその断片及び/又は変異体を含む小分子毒素又は細菌、糸状菌、植物又は動物起源の酵素的に活性な毒素、そして下記に開示する種々の抗腫瘍又は抗癌剤を含むように意図されている。他の細胞障害性薬が下記に記載されている。殺腫瘍性剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。化学療法剤は、癌の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミドのようなアルキル化剤;ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類;ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパのようなアジリジン類;アルトレートアミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチローロメラミンを含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類;アセトゲニン及びブラタシノン;δ9テトラヒドロカンナビノール;βラパコン;ラパコール;コルヒチン;ベツリン酸;カンプトセシン、CPT11、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び9アミノカンプトテシンを含む;ブリオスタチン;カリスタチン、カルゼレシン及びバイゼレシン合成類似体を含む;ポドフィリン;ポドフィリン酸;テニポシド;クリプトフィシン、チョロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード;ニトロスレアス、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン;エネジイン抗生物質等の抗生物質例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ1I及びカリケアマイシンオメガI1、例えば、AgnewChemIntlEdEngl33:183186を参照のこと;ダイネミシンA抗生物質発光団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシンドキソルビシン、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン;メトトレキセート及び5フルオロウラシル、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセートのような葉酸類似体;フルダラビン、6メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体;アンシタビン、アザシチジン、6アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジンのようなピリミジン類似体;カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンのようなアンドロゲン類;アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤;フロリン酸のような葉酸リプレニッシャー;アセグラトン;アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;エニルウラシル;アムサクリン;ベストラブシル;ビサントレン;エダトラキセート;デフォファミン;デメコルシン;ジアジコン;エルフォルニチン;酢酸エリプチニウム;エポチロン;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダイニン;メイタンシン及びアンサマイトシンのようなメイタンシノイド;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダンモール;ニトラエリン;ペントスタチン;フェナメット;ピラルビシン;ロソキサントロン;2エチルヒドラジド;プロカルバジン;PSK多糖類複合体;ラゾキサン;リゾキシン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テニュアゾン酸;トリアジコン;222トリクロロトリエチルアミン;トリコテセン、ロリデンA及びアングイデン;ウレタン;ビンデシン、FILDESIN;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン;アラビノシドAraC;チオテパ;タキソイド、例えばタキソールパクリタキセル、BristolMyersSquibbOncologyPrincetonNJ、ABRAXANETMクレモフォールを含まない、アルブミン設計のナノ粒子形状のパクリタキセル及びタキソテアゲンシタビン;6チオグアニン;メルカプトプリン;メトトレキセート;シスプラチン及びカルボプラチンのようなプラチナ類似体;ビンブラスチン;プラチナ;エトポシド;オキサリプラチン;ロイコボリン;NAVELBINEビノレルビン;ノバントロン;エダトレキセート;ダウノマイシン;アミノプテリン;イバンドロナート;トポイソメラーゼインヒビターRFS2000;ジフルオロメチロールニチン;レチノイン酸などのレチノイド類;カペシタビン;上述したものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体;並びに、上記のうちの2以上の組合せ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニソロンの併用治療の略記号であるCHOP、及び5FUとロイコボリンと組み合わされるオキサリプラチンによる治療投薬計画の略記号であるFOLFOXが含まれる。また、癌の成長を促進しうるホルモンの影響を調節、低減、阻止又は阻害するように作用し、たびたび全身性、又は全身治療の形態にある抗ホルモン剤もこの定義に含まれる。これらはホルモン類自体でもよい。例として、抗卵胞ホルモン類及び、選択的なエストロゲンレセプターモジュレータ類、例えば、タモキシフェンタモキシフェン、EVISTAラロキシフェン、ドロロキシフェン、4ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストン及びFARESTONトレミフェン、抗プロゲステロン類、エストロゲンレセプター下方制御因子、卵巣を抑制するか又は一時停止させるように機能する薬剤、例えば、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、例えば、LUPRON及びELIGARD酢酸ロイプロリド、ゴセレリンアセテート、ブセレリンアセテート及びトリプトレリン、他の抗アンドロゲン類、例えばフルタミド、ニルタミド及びビカルタミド、及び、副腎のエストロゲン産生を制御する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害薬、例として、例えば4イミダゾール、アミノグルテチミド、MEGASEメゲストロールアセテート、AROMASINエキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、RIVISORボロゾール、FEMARAレトロゾール及びARIMIDEXアナストロゾールなどがある。加えて、化学療法剤のこのような定義には、ビスホスホネート、例えばクロドロン酸又はOSTAC、DIDROCALエチドロン酸、NE58095、ZOMETAゾレドロン酸/ゾレドロネート、FOSAMAXアレンドロネート、AREDIAパミドロン酸、SKELIDチルドロン酸又はACTONEL、リセドロン酸、並びにトロキサチタビン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関係するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するもの、例として、例えばPKCα、Raf、HRas及び上皮性成長因子レセプター、ワクチン、例えばTHERATOPEワクチン及び遺伝子治療ワクチン、例えばALLOVECTINワクチン、LEUVECTINワクチン及びVAXIDワクチン、LURTOTECANトポイソメラーゼ1インヒビター、ABARELIXrmRH、ラパチニブジトシラート、及び、上記の何れかの薬学的に受容可能な塩類、酸又は誘導体が含まれる。ここで用いられる際の増殖阻害性剤は、細胞、特にTAT発現癌細胞の成長をインビトロ又はインビボの何れかで阻害する化合物又は組成物を意味する。よって、増殖阻害性剤は、S期でTAT発現細胞の割合を有意に減少させるものである。増殖阻害性剤の例は、細胞周期の進行をS期以外の位置で阻害する薬剤、例えばG1停止又はM期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なM期ブロッカーは、ビンカスビンクリスチン及びビンブラスチン、タキサン類、及びトポイソメラーゼII阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンを含む。またG1停止させるこれらの薬剤は、S期停止にも波及し、例えば、DNAアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、5フルオロウラシル、及びアラCである。更なる情報は、TheMolecularBasisofCancerMendelsohn及びIsrael編Chapter1表題CellcycleregulationoncogeneandantineoplasticdrugsMurakami等、特に13頁に見出すことができる。タキサン類パクリタキセル及びドセタキセルは、共にイチイに由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセルTAXOTERE登録商標、ローンプーランローラーは、パクリタキセルTAXOL登録商標、ブリストルマイヤースクウィブの半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。ドキソルビシンはアントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンの完全な化学名は、10オキシ7,8,9,10テトラヒドロ6,8,11トリヒドロキシ81メトキシ5,12ナフタセンジオンである。サイトカインなる用語は、一つの細胞集団から放出され、他の細胞に細胞間メディエータとして作用するタンパク質の一般用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、及び伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Nメチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン;副甲状腺ホルモン;チロキシン;インシュリン;プロインシュリン;レラキシン;プロレラキシン;糖タンパク質ホルモン、例えば濾胞刺激ホルモンFSH、甲状腺刺激ホルモンTSH、及び黄体化ホルモンLH;肝臓成長因子;線維芽成長因子;プロラクチン;胎盤ラクトゲン;腫瘍壊死因子α及びβ;ミューラー阻害因子;マウス生殖腺刺激ホルモン関連ペプチド;インヒビン;アクチビン;血管内皮成長因子;インテグリン;トロンボポエチンTPO;NGFβ等の神経成長因子;血小板成長因子;TGFα及びTGFβ等のトランスフォーミング成長因子TGFs;インシュリン様成長因子I及びII;エリスロポエチンEPO;骨誘発因子;インターフェロンα、β、及びγ等のインターフェロン;コロニー刺激因子CSFs、例えばマクロファージCSFMCSF;顆粒球マクロファージCSFGMCSF;及び顆粒球CSFGCSF;インターロイキンILs、例えばIL1、IL1a、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL11、IL12;腫瘍壊死因子、例えばTNFα及びTNFβ;及びLIF及びキットリガンドKLを含む他のポリペプチド因子である。ここで用いられる際、用語サイトカインには、天然供給源から、又は組換え細胞培養からのタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。パッケージ挿入物という用語は、効能、用途、服用量、投与、配合禁忌及び/又はその治療薬の用途に関する警告についての情報を含む、治療薬の商業的包装を慣習的に含めた指示書を指す。II.本発明の組成物及び方法A.抗TAT抗体一実施態様では、本発明は、ここで治療及び/又は診断薬としての用途が見出され得る抗TAT抗体を提供する。例示的な抗体には、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性及びヘテロコンジュゲート抗体が含まれる。1.ポリクローナル抗体ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原とアジュバントを複数回皮下又は腹腔内注射することにより、動物に産生される。それは、免疫化されるべき種において免疫原性であるタンパク質へ、関連する抗原特に、合成ペプチドが用いられる場合を結合させるために有用である。例えば、この抗原を、キーホールリンペットヘモシアニンKLH、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又は大豆トリプシンインヒビターへ、二重官能性又は誘導体形成剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル、Nヒドロキシスクシンイミド、グルタルアルデヒド、及び無水コハク酸、SOCl2、又はR及びR1が異なるアルキル基であるR1N=C=NRを用いて結合させることができる。動物を、例えばタンパク質又はコンジュゲート100μg又は5μgそれぞれウサギ又はマウスの場合を完全フロイントアジュバント3容量と併せ、この溶液を複数部位に皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート、又は誘導体に対して免疫する。1ヶ月後、該動物を、完全フロイントアジュバントに入れた初回量の1/5から1/10のペプチド又はコンジュゲートを用いて複数部位に皮下注射することにより、追加免疫する。7から14日後に動物を採血し、抗体価について血清を検定する。動物は、力価がプラトーに達するまで追加免疫する。コンジュゲートはまた、タンパク融合として組換え細胞培養中で調製することができる。また、ミョウバンのような凝集化剤が、免疫反応の増強のために好適に使用される。2.モノクローナル抗体モノクローナル抗体は、Kohler等Nature256495により最初に記載されたハイブリドーマ法、又は組換えDNA法によって作成することができる。ハイブリドーマ法においては、マウス又はその他の適当な宿主動物、例えばハムスターを上記のように免疫し、免疫化に用いられたタンパク質と特異的に結合する抗体を産生する、又は産生することのできるリンパ球を導き出す。別法として、リンパ球をインビトロで免疫することもできる。免疫化の後、リンパ球を単離し、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成させる。このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞融合のパートナーとも呼ばれるの増殖または生存を阻害する一又は複数の物質を好ましくは含む適当な培地に蒔き、増殖させる。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼを欠失するならば、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、HGPRT-欠失細胞の増殖を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含有するであろう。好ましい融合のパートナーである骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの発現を支援し、融合しない親細胞に対して選択する選択培地に対して感受性である細胞である。これらの中でも、好ましい骨髄腫株化細胞は、マウス骨髄腫ライン、例えば、ソークインスティテュートセルディストリビューションセンター、サンディエゴ、カリフォルニア、USAより入手し得るMOPC21およびMPC11マウス腫瘍、及び、アメリカンタイプカルチャーコレクション、マナッサス、バージニア、USAより入手し得るSP2又はX63Ag8653細胞から誘導されるものである。ヒト骨髄腫及びマウス-ヒトヘテロ骨髄腫株化細胞もまたヒトモノクローナル抗体の産生のために開示されているKozborJImmunol1333001;Brodeur等MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications5163頁、。ハイブリドーマ細胞が生育している培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生について検定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合検定、例えばラジオイムノアッセイ又は酵素結合免疫吸着検定によって測定する。例えば、モノクローナル抗体の結合親和性は、Munson等AnalBiochem107220のスキャッチャード分析によって測定することができる。所望の特異性、親和性、及び/又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が確定された後、そのクローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる。この目的に対して好適な培地は、例えば、DMEM又はRPMI1640培地を包含する。また、このハイブリドーマ細胞は、動物の腹水症腫瘍として、例えばマウスへの細胞の腹腔内注射によって、インビボで増殖させることができる。サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えばアフィニティークロマトグラフィー例えばプロテインA又はプロテインGセファロースを用いる又はイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析等のような常套的な抗体精製法によって、培地、腹水、又は血清から上手く分離される。モノクローナル抗体をコードするDNAは、常法を用いて即座に分離されて、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなDNAの好ましい供給源となる。ひとたび分離されたならば、DNAを発現ベクター中に入れ、ついでこれを、この状況以外では抗体タンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、又は骨髄腫細胞のような宿主細胞中に形質移入し、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を獲得することができる。抗体をコードするDNAの細菌での組み換え発現に関する概説論文には、Skerra等CurrOpinioninImmunol5256262及びPluckthunImmunolRevs130151188が含まれる。更なる実施態様では、抗体又は抗体断片は、McCafferty等Nature348552554に記載された技術を使用して産生される抗体ファージライブラリーから分離することができる。Clackson等Nature352624628及びMarks等JMolBiol222581597は、ファージライブラリーを使用したマウス及びヒト抗体の分離を記述している。続く刊行物は、鎖シャフリングによる高親和性のヒト抗体の生成、並びに非常に大きなファージライブラリーを構築するための方策としてコンビナトリアル感染とインビボ組換えを記述している。従って、これらの技術はモノクローナル抗体の分離に対する伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ法に対する実行可能な別法である。抗体をコードするDNAは、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインCH及びCLの配列を、相同的マウス配列に代えて置換することによって、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチド異種ポリペプチドのコード配列の全部又は一部を共有結合させることによって修飾してキメラ又は融合抗体ポリペプチドを生成することができる。非免疫グロブリンポリペプチド配列は、抗体の定常ドメインと置き代わることができるか、又は抗体の1つの抗原結合部位の可変ドメインが置換されて、抗原に対する特異性を有する1つの抗原結合部位と異なる抗原に対する特異性を有するもう一つの抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を作り出す。3.ヒト及びヒト化抗体本発明の抗TAT抗体は、さらにヒト化抗体又はヒト抗体を含む。非ヒト抗体のヒト化形とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種のCDRの残基によって置換されたヒト免疫グロブリンを含む。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたCDRもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般的に、ヒト化抗体は、全て又はほとんど全てのCDR領域が非ヒト免疫グロブリンのものに一致し、全て又はほとんど全てのFR領域がヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列である、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含む[Jones等Nature321522525Riechmann等Nature332323329及びPrestaCurrOpStructBiol2593596]。非ヒト抗体をヒト化する方法はこの分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入される。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には移入可変ドメインから得られる移入残基と称される。ヒト化は基本的にウィンター及び共同研究者[Jones等Nature321522525;Riechmann等Nature332323327;Verhoeyen等Science23915341536]の方法に従って、齧歯類CDR又はCDR配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施される。よって、このようなヒト化抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのCDR残基及び場合によっては幾つかのFR残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。抗体がヒトの治療用途を意図している場合、抗原性及びHAMA反応を低減するには、ヒト化抗体を生成する際に使用するヒトの軽重両方のヒト可変ドメインの選択が非常に重要である。いわゆるベストフィット法では、齧歯動物抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。次に齧歯動物のものと最も近いヒトVドメイン配列を同定し、その中のヒトフレームワークFRをヒト化抗体のために受け入れる;Chothia等JMolBiol196901。他の方法では、軽又は重鎖の特定のサブグループのヒト抗体全てのコンセンサス配列から誘導される特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用できる;Presta等JImmunol1512623。更に、抗体を、抗原に対する高結合親和性や他の好ましい生物学的性質を保持してヒト化することが重要である。この目標を達成するべく、好ましい方法では、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析工程を経てヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推測三次元立体配座構造を図解し、表示するコンピュータプログラムは購入可能である。これら表示を見ることで、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の分析、すなわち候補免疫グログリンの抗原との結合能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、例えば標的抗原に対する親和性が高まるといった、望ましい抗体特性が達成されるように、FR残基をレシピエント及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般的に、高頻度可変領域残基は、直接かつ最も実質的に抗原結合性に影響を及ぼしている。ヒト化抗TAT抗体の種々の形態が考えられる。例えばヒト化抗体は、免疫結合体を生成するために、状況に応じて一又は複数の細胞傷害剤と結合していてもよい抗体断片、例えばFabであってもよい。また、ヒト化抗体は無傷抗体、例えば無傷IgG1抗体であってもよい。ヒト化の別法として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、現在では、免疫化することで、内因性免疫グロブリンの産生がなく、ヒト抗体の全レパートリーを産生することのできるトランスジェニック動物を作ることが可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞系突然変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域遺伝子のホモ接合体欠失によって、結果として内因性抗体産生の完全な阻害が起こることが説明されてきた。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子配列の、このような生殖細胞系突然変異体マウスへの転移によって、結果として抗原投与時にヒト抗体の産生がおこる。Jakobovits等ProcNatlAcadSciUSA902551;Jakobovits等Nature362255258Bruggeman等YearinImmuno733;米国特許第5545806号、同5569825号、同5591669号全てジェンファーム;同5545807号;及び国際公開第97/17852号を参照されたい。別法として、ファージディスプレイ技術を使用して、非免疫化ドナーの免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を産出させることができる。この技術によれば、抗体Vドメイン遺伝子を、フレーム単位で、繊維状バクテリオファージ、例えばM13又はfdの大きい又は小さいコートタンパク質遺伝子のどちらかでクローンし、ファージ粒子の表面で機能的抗体断片として表示させる。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖DNAコピーを含むので、抗体の機能特性に基づいた選択に基づいても、結果としてこれらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択が成される。よって、このファージはB細胞のいくつかの特性を模倣している。ファージディスプレイは多様な形式で行うことができる;例えばJohnsonKevinS及びChiswellDavidJCurrentOpinioninStructuralBiology3:564571を参照せよ。V遺伝子セグメントのいくつかの供給源を、ファージディスプレイのために使用できる。Clackson等Nature352:624628は、免疫化したマウス脾臓由来のV遺伝子の小さいランダムなコンビナトリアルライブラリーから、多様で多くの抗オキサゾロン抗体を単離した。非免疫化ヒトドナーのV遺伝子のレパートリーが構成可能であり、多様で多くの抗原に対する抗体は、Marks等JMolBiol222:581597、又はGriffith等EMBOJ12:725734に記載の技術にそのまま従うことで単離することができる。また、米国特許第5565332号及び同5573905号を参照のこと。上述したように、ヒト抗体はインビトロで活性化したB細胞により産生することができる。4.抗体断片ある状況下では、抗体全体よりも、抗体断片を用いることに利点がある。より小さな大きさの断片によって迅速なクリアランスが可能となり、固形腫瘍への接近の改良につながり得る。抗体断片を産生するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク分解性消化によって誘導された及びBrennan等Science22981を参照されたい。しかし、これらの断片は、現在は組換え宿主細胞により直接産生することができる。Fab、Fv及びScFv抗体断片は、すべて大腸菌で発現させ分泌させることができ、従って、大量のこれら断片の産生が容易となった。抗体断片は、上で論じた抗体ファージライブラリーから単離することができる。別法として、FabSH断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合させてF2断片を形成することができる。他のアプローチ法では、F2断片を組換え宿主細胞培養から直接分離することができる。インビボ半減期が増した、サルベージレセプター結合性エピトープ残基を含むFab及びFab’2が、米国特許第5869046号に記載されている。抗体断片を生成するのための他の方法は、当業者には明らかであろう。他の実施態様では、選択する抗体は単鎖Fv断片である。国際公開93/16185号;米国特許第5571894号;及び米国特許第5587458号を参照のこと。Fv及びsFvは、定常領域を欠く無傷の連結部位を有する唯一の種である;従って、インビボで使用している間の減少した非特異的結合に適している。sFv融合タンパク質は、sFvのアミノ又はカルボキシ末端のどちらかで、エフェクタータンパク質の融合体が生成されるように構成されてもよい。上掲のAntibodyEngineeringBorrebaeck編を参照のこと。また、抗体断片は、例えば米国特許第5641870号に記載されているような直鎖状抗体であってもよい。そのような直鎖状抗体断片は単一特異性又は二重特異性であってもよい。5.二重特異性抗体二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、TATタンパク質の2つの異なるエピトープに結合しうる。他のこのような抗体では他のタンパク質に対する結合部位とTAT結合部位とが結合しうる。あるいは、抗TATアームは、TAT発現細胞に細胞防御メカニズムを集中させ局在させるように、FcγRI、FcγRII及びFcγRIII等のIgGに対するFcレセプター、又はT細胞レセプター分子等の白血球上のトリガー分子に結合するアームと結合しうる。また、二重特異性抗体はTATを発現する細胞に細胞障害剤を局在化するためにも使用されうる。これらの抗体はTAT結合アーム及び細胞障害剤、抗インターフェロンα、ビンカアルカロイド、リシンA鎖、メトトレキセート又は放射性同位体ハプテンと結合するアームを有する。二重特異性抗体は完全長抗体又は抗体断片2二重特異性抗体として調製することができる。国際公開第96/16673号には、二重特異性抗ErbB2/抗FcγRIII抗体が記載されており、米国特許第5837234号には、二重特異性抗ErbB2/抗FcγRI抗体が開示されている。二重特異性抗ErbB2/Fcα抗体は国際公開第98/02463号に示されている。米国特許第5821337号は、二重特異性抗ErbB2/抗CD3抗体を教示するものである。二重特異性抗体を作成する方法は当該分野において既知である。完全長二重特異性抗体の伝統的な産生は二つの免疫グロブリン重鎖軽鎖対の同時発現に基づき、ここで二つの鎖は異なる特異性を持っている。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖が無作為に取り揃えられているため、これらのハイブリドーマは10個の異なる抗体分子の可能性ある混合物を産生し、そのうちただ一つが正しい二重特異性構造を有する。通常、アフィニティークロマトグラフィー工程により行われる正しい分子の精製は、かなり煩わしく、生成物収率は低い。同様の方法が国際公開第93/08829号及びTraunecker等、EMBOJ1036553659に開示されている。異なったアプローチ法では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。該融合は好ましくは、少なくともヒンジの一部、CH2及びCH3領域を含むIg重鎖定常ドメインである。軽鎖の結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域を、融合の少なくとも一つに存在させることが望ましい。免疫グロブリン重鎖の融合、望まれるならば免疫グロブリン軽鎖をコードしているDNAを、別個の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物に同時トランスフェクトする。これにより、組立に使用される三つのポリペプチド鎖の等しくない比率が所望の二重特異性抗体の最適な収率をもたらす態様において、三つのポリペプチド断片の相互の割合の調節に大きな融通性が与えられる。しかし、少なくとも二つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又はその比率が所望の鎖の結合にあまり影響がないときは、2または3個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。この手法の好ましい実施態様では、二重特異性抗体は、第一の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖軽鎖対とからなる。二重特異性分子の半分にしか免疫グロブリン軽鎖がないと容易な分離法が提供されるため、この非対称的構造は、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することを容易にすることが分かった。このアプローチ法は、国際公開第94/04690号に開示されている。二重特異性抗体を産生する更なる詳細については、例えばSuresh等MethodsinEnzymology121210を参照されたい。米国特許第5731168号に記載された他の手法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して組換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーのパーセントを最大にすることができる。好適な界面はCH3ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第1抗体分子の界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖と置き換えられる。大きな側鎖と同じ又は類似のサイズの相補的キャビティを、大きなアミノ酸側鎖を小さいものと置き換えることにより第2の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモダイマーのような不要の他の最終産物に対してヘテロダイマーの収量を増大させるメカニズムが提供される。二重特異性抗体は、架橋した又はヘテロコンジュゲート抗体もまた含む。例えば、ヘテロコンジュゲートの抗体の一方はアビジンに結合され、他方はビオチンに結合され得る。そのような抗体は、例えば、不要の細胞に対する免疫系細胞をターゲティングするため。ヘテロコンジュゲート抗体は、あらゆる簡便な架橋法を用いて作製することができる。好適な架橋剤は当該分野において良く知られており、幾つかの架橋技術と共に米国特許第4676980号に開示されている。抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennan等Science22981は無傷の抗体をタンパク分解性に切断してF2断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤、亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。産生されたFab断片はついでチオニトロベンゾアート誘導体に変換される。FabTNB誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりFabチオールに再変換し、他のFabTNB誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。最近の進歩により、大腸菌からのFabSH断片の直接の回収が容易になり、これは化学的に結合して二重特異性抗体を形成することができる。Shalaby等JExpMed175217225は完全にヒト化された二重特異性抗体F2分子の製造を記述している。各Fab断片は大腸菌から別個に分泌され、インビトロで定方向化学共役を受けて二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、正常なヒトT細胞、及びErbB2レセプターを過剰発現する細胞に結合可能で、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞障害性リンパ球の細胞溶解活性の誘因となる。組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作成し分離する様々な技術もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生成されている。Kostelny等JImmunol14815471553。Fos及びJunタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のFab部分に結合させる。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた抗体ホモダイマーの生成に対して使用することができる。Hollinger等ProcNatlAcadSciUSA9064446448により記述されたダイアボディ技術は二重特異性抗体断片を作成する別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の2つのドメイン間の対形成を可能にするには十分に短いリンカーによりVLにVHを結合してなる。従って、一つの断片のVH及びVLドメインは他の断片の相補的VL及びVHドメインと強制的に対形成させられ、よって2つの抗原結合部位を形成する。単鎖Fvダイマーの使用により二重特異性抗体断片を製造する他の方策もまた報告されている。Gruber等JImmunol1525368を参照されたい。二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tutt等JImmunol14760。6.ヘテロコンジュゲート抗体ヘテロコンジュゲート抗体もまた本発明の範囲に入る。ヘテロコンジュゲート抗体は、2つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため[米国特許第4676980号]及びHIV感染の治療のために[国際公開第91/00360;国際公開第92/200373;欧州特許第03089号]提案されている。この抗体は、架橋剤に関連したものを含む合成タンパク化学における既知の方法を使用して、インビトロで調製することができると考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用するか又はチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素を作成することができる。この目的に対して好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル4メルカプトブチルイミダート、及び例えば米国特許第4676980号に開示されたものが含まれる。7.多価抗体多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により、二価抗体よりも早くインターナリゼーションされうる。本発明の抗体は、3又はそれ以上の結合部位を有する多価抗体であり得、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現により容易に生成することができる。多価抗体は二量化ドメインと3又はそれ以上の抗原結合部位を有する。好ましい二量化ドメインはFc領域又はヒンジ領域を有する。このシナリオにおいて、抗体はFc領域と、Fc領域のアミノ末端に3又はそれ以上の抗原結合部位を有しているであろう。ここで、好ましい多価抗体は3から8、好ましくは4の抗原結合部位を有する。多価抗体は少なくとも1つのポリペプチド鎖を有し、ポリペプチド鎖は2又はそれ以上の可変ドメインを有する。例えば、ポリペプチド鎖はVD1nVD2nFcを有し、ここでVD1は第1の可変ドメインであり、VD2は第2の可変ドメインであり、FcはFc領域のポリペプチド鎖の一つであり、X1及びX2はアミノ酸又はポリペプチドを表し、nは0又は1である。例えば、ポリペプチド鎖は:VHCH1柔軟なリンカーVHCH1Fc領域鎖;又はVHCH1VHCH1Fc領域鎖を有し得る。ここで多価抗体は、好ましくは少なくとも2つの軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに有する。ここで多価抗体は、例えば約2~約8の軽鎖可変ドメインポリペプチドを有する。ここで考察される軽鎖可変ドメインポリペプチドは軽鎖可変ドメインを有し、場合によってはCLドメインを更に有する。8.エフェクター機能の加工本発明の抗体をエフェクター機能について改変し、例えば抗体の抗原依存細胞媒介細胞障害性ADCC及び/又は補体依存細胞障害性CDCを向上させることは望ましい。これは、抗体のFc領域で一又は複数のアミノ酸置換を誘導することによりなされうる。あるいは又はさらに、システイン残基をFc領域に導入し、それにより、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成するようにしてもよい。そのようにして生成された同種二量体抗体は、向上したインターナリゼーション能力及び/又は増加した補体媒介細胞殺傷及び抗体-依存細胞性細胞障害性ADCCを有する可能性がある。Caron等JExpMed17611911195及びShopesBJImmunol14829182922参照。また、向上した抗腫瘍活性を持つ同種二量体抗体は、Wolff等CancerResearch5325602565に記載されている異種二官能性架橋を用いて調製することができる。あるいは、抗体は、2つのFc領域を有するように加工して、それにより補体溶解及びADCC能力を向上させることもできる。Stevenson等AntiCancerDrugDesign3219230参照。抗体の血清半減期を増大させるために、例えば米国特許第5739277号に記載のように、抗体へサルベージレセプター結合エピトープを導入してもよい。ここで使用される場合のサルベージレセプター結合エピトープなる用語は、IgG分子のインビボ血清半減期を増加させる原因であるIgG分子のFc領域のエピトープを意味する。9.イムノコンジュゲートまた、本発明は、化学治療薬、増殖阻害性剤、毒素例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素、又はその断片などの細胞障害性剤、あるいは放射性同位体即ち、放射性コンジュゲートと抱合している抗体を含む免疫複合体に関する。このような免疫複合体の生成に有用な化学治療薬を上に記載した。用いることのできる酵素活性毒素及びその断片には、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、緑膿菌からの外毒素A鎖、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデクシンA鎖、アルファサルシン、アレウリテスフォーディタンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカアメリカーナタンパク質PAPI、PAPII、及びPAPS、モモルディカチャランチアインヒビター、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリスインヒビター、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンが含まれる。放射性コンジュゲート抗体の生成には、様々な放射性ヌクレオチドが利用可能である。例としては、212Bi、131I、131In、90Y及び186Reが含まれる。抗体及び細胞障害性薬の複合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Nスクシンイミジル3プロピオナートSPDP、イミノチオランIT、イミドエステルの二官能性誘導体ジメチルアジピミデートHCL等、活性エステルジスクシンイミジルスベレート等、アルデヒドグルタルアルデヒド等、ビスアジド化合物ビスヘキサンジアミン等、ビスジアゾニウム誘導体ビスエチレンジアミン等、ジイソシアネートトリエン2,6ジイソシアネート等、及びビス活性フッ素化合物1,5ジフルオロ2,4ジニトロベンゼン等を用いて作成できる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等Science2381098に記載されているように調製することができる。カーボン14標識1イソチオシアナトベンジル3メチルジエチレントリアミン五酢酸MXDTPAは、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のためのキレート剤の例である。国際公開94/11026参照。抗体のコンジュゲートと一又は複数の小分子毒素、例えばカリケアマイシン、メイタンシノイド、トリコセン及びCC1065、及び毒性活性を有するこれらの毒素の誘導体が、ここで考察される。メイタンシン及びメイタンシノイド好ましい一実施態様では、本発明の抗TAT抗体は一又は複数のメイタンシノイド分子と結合している。メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害するように作用する分裂阻害剤である。メイタンシンは、最初、東アフリカシラブMaytenusserrataから単離されたものである。その後、ある種の微生物がメイタンシノイド類、例えばメイタンシノール及びC3メイタンシノールエステルを生成することが発見された。合成メイタンシノール及びその誘導体及び類似体は、例えば米国特許第4137230号;同4248870号;同4256746号;同4260608号;同4265814号;同4294757号;同4307016号;同4308268号;同4308269号;同4309428号;同4313946号;同4315929号;同4317821号;同4322348号;同4331598号;同4361650号;同4364866号;同4424219号;同4450254号;同4362663号;及び同4371533号に開示されており、その開示は出典を明示してここに取り込まれる。メイタンシノイド-抗体コンジュゲート治療指標を改善する試みにおいて、メイタンシン及びメイタンシノイドは、腫瘍細胞抗原に特異的に結合する抗体と結合している。メイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲート及びそれらの治療用途は、例えば米国特許第5,208,020号、同5,416,064号、欧州特許第0425235B1号に開示されており、その開示は出典を明示してここに取り込まれる。Liu等ProcNatlAcadSciUSA93:86188623には、ヒト結腸直腸癌に対するモノクローナル抗体C242に結合するDM1と命名されたメイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲートが記載されている。前記コンジュゲートは培養された結腸癌細胞に対して高い細胞障害性を有することが見出されており、インビボ腫瘍成長アッセイにおいて抗腫瘍活性を示す。Chari等CancerResearch52:127131には、メイタンシノイドが、ジスルフィド結合を介して、ヒト結腸癌株化細胞の抗原に結合するマウス抗体A7、又はHER2/neuオンコジーンに結合する他のマウスモノクローナル抗体TA1に結合している免疫コンジュゲートが記載されている。TA1メイタンシノイドコンジュゲートの細胞障害性はヒト乳癌株化細胞SKBR3におけるインビトロで試験され、細胞当たり3×105HER2表面抗原が発現した。薬剤コンジュゲートにより、遊離のメイタンシノイド剤に類似した細胞障害度が達成され、該細胞障害度は、抗体分子当たりのメイタンシノイド分子の数を増加させることにより増加する。A7メイタンシノイドコンジュゲートはマウスにおいては低い全身性細胞障害性を示した。抗TATポリペプチド抗体メイタンシノイドコンジュゲート抗TAT抗体メイタンシノイドコンジュゲートは、抗体又はメイタンシノイド分子のいずれの生物学的活性もほとんど低減することなく、メイタンシノイド分子に抗TAT抗体を化学的に結合させることにより調製される。1分子の毒素/抗体は、裸抗体の使用において細胞障害性を高めることが予期されているが、抗体分子当たり、平均34のメイタンシノイド分子が結合したものは、抗体の機能又は溶解性に悪影響を与えることなく、標的細胞に対する細胞障害性を向上させるといった効力を示す。メイタンシノイドは当該技術分野でよく知られており、公知の技術で合成することも、天然源から単離することもできる。適切なメイタンシノイドは、例えば米国特許第5208020号、及び他の特許、及び上述した特許ではない刊行物に開示されている。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノール、及び種々のメイタンシノールエステル等の、メイタンシノール分子の芳香環又は他の位置が修飾されたメイタンシノール類似体である。例えば、米国特許第5208020号又は欧州特許第0425235B1号、Chari等CancerResearch52:127131、及び2004年10月8日出願の米国特許出願番号第10/960602号ここで参照することにより開示内容を本明細書に包含するに開示されているもの等を含む、抗体メイタンシノイドコンジュゲートを作製するために、当該技術で公知の多くの結合基がある。リンカー成分SMCCを含む抗体-メイタンシノイドコンジュゲートは、2004年10月8日出願の米国特許出願番号第10/960602号に開示されているようにして調整することができる。結合基には、上述した特許に開示されているようなジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、光不安定性基、ペプチターゼ不安定性基、又はエステラーゼ不安定性基が含まれるが、ジスルフィド及びチオエーテル基が好ましい。更なる結合基をここに開示及び例示する。抗体とメイタンシノイドとのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばNスクシンイミジル3プロピオナート、スクシンイミジル4シクロヘキサン1カルボキシラート、イミノチオラン、イミドエステル類の二官能性誘導体、活性エステル類、アルデヒド類、ビスアジド化合物ヘキサンジアミン、ビスジアゾニウム誘導体エチレンジアミン、ジイソシアネート、及び二活性フッ素化合物を使用して作製することができる。特に好ましいカップリング剤には、ジスルフィド結合により提供されるNスクシンイミジル4ペンタノアート及びNスクシンイミジル3プロピオナートが含まれる。リンカーは結合の種類に応じて、種々の位置でメイタンシノイド分子に結合し得る。例えば、従来からのカップリング技術を使用してヒドロキシル基と反応させることによりエステル結合を形成することができる。反応はヒドロキシル基を有するC3位、ヒドロキシメチルで修飾されたC14位、ヒドロキシル基で修飾されたC15位、及びヒドロキシル基を有するC20位で生じる。好ましい実施態様において、結合はメイタンシノール又はメイタンシノールの類似体のC3位で形成される。アウリスタチン及びドロスタチン一部の実施態様では、免疫複合体は、ドラスタチン又はドラスタチンのペプチド類似体及び誘導体である、アウリスタチン米国特許第5635483号、同第5780588号にコンジュゲートした本発明の抗体を含む。ドラスタチン及びアウリスタチンは、微小管の動態、GTP加水分解、核分裂、及び細胞分裂を妨害することが判明しておりWoyke等、AntimicrobAgentsandChemother4535803584、抗癌活性米国特許第5663149号及び抗真菌活性Pettit等、AntimicrobAgentsChemother4229612965を有する。ドラスチン又はアウリスタチンの薬剤成分は、ペプチド剤成分のNアミノ末端又はCカルボキシル末端で抗体に付着させることができるWO02/088172。例示的なアウリスタチンの実施態様には、Senter等、ProceedingsoftheAmericanAssociationforCancerResearchVolume45AbstractNumber623、2004年3月28日に開示された、N末端にリンクしたモノメチルアウリスタチン薬剤成分DE及びDF即ちMMAE及びMMAFが含まれる。前記文献の開示内容の全体を、参照により本明細書に包含する。一般的に、ペプチドに基づく薬剤成分は、2以上のアミノ酸及び/又はペプチド断片の間にペプチド結合を形成することにより調整することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野で周知の液相合成法ESchroder及びKLubkeThePeptidesvolume1pp761361965AcademicPress参照に従って調整することができる。アウリスタチン/ドラスタチン薬剤成分は、米国特許第5635483号、同第5780588号、Pettit等、JAmChemSoc11154635465、Pettit等、AntiCancerDrugDesign13243277、PettitGR等、Synthesis1996719725、Pettit等、JChemSocPerkinTrans15859863、及びDoroninaNatBiotechnol21778784に記載の方法に従って調製することができる。カリケアマイシン対象の他の免疫コンジュゲートには、一又は複数のカリケアマイシン分子と結合した抗TAT抗体が含まれる。抗生物質のカリケアマイシンファミリーはサブピコモルの濃度で二重鎖DNA破壊を生じることができる。カリケアマイシンファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第5712374号、同5714586号、同5739116号、同5767285号、同5770701号、同5770710号、同5773001号、同5877296号を参照のこと。使用可能なカリケアマイシンの構造類似体には、限定するものではないが、γ1I、α2I、α3I、Nアセチルγ1I、PSAG及びθI1、Lode等CancerResearch58:29252928及び上述したAmericanCyanamidの米国特許が含まれる。抗体が結合可能な他の抗腫瘍剤は、葉酸代謝拮抗薬であるQFAである。カリケアマイシン及びQFAは双方共、細胞内に作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。よって抗体媒介性インターナリゼーションによるこれらの薬剤の細胞への取込により、細胞障害効果が大きく向上する。他の細胞障害剤本発明の抗TAT抗体と結合可能な他の抗腫瘍剤には、BCNU、ストレプトゾイシン、ビンクリスチン及び5フルオロウラシル、米国特許第5053394号、同5770710号に記載されており、集合的にLLE33288複合体として公知の薬剤のファミリー、並びにエスペラマイシンが含まれる。使用可能な酵素活性毒及びその断片には、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素A鎖、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシンA鎖、アルファサルシン、アレウライツフォルディイプロテイン、ジアンシンプロテイン、フィトラッカアメリカーナプロテイン、モモルディカキャランティアインヒビター、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリスインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコセセンスが含まれる。例えば、1993年10月28日公開の国際公開第93/21232号を参照のこと。本発明は、抗体と核酸分解活性を有する化合物との間に形成される免疫コンジュゲートをさらに考察する。腫瘍を選択的に破壊するため、抗体は高い放射性を有する原子を含有してよい。放射性コンジュゲートした抗TAT抗体を生成するために、種々の放射性同位体が利用される。例には、At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及びLuの放射性同位体が含まれる。コンジュゲートが診断用に使用される場合、それはシンチグラフィー研究用の放射性原子、例えばtc99m又はI123、又は核磁気共鳴映像用のスピン標識、例えばヨウ素123、ヨウ素131、インジウム111、フッ素19、炭素13、窒素15、酸素17、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含有し得る。放射又は他の標識が、公知の方法でコンジュゲートに導入される。例えば、ペプチドは生物合成されるか、又は水素の代わりにフッ素19を含む適切なアミノ酸前駆体を使用する化学的なアミノ酸合成により合成される。標識、例えばtc99m又はI123、Re186、Re188及びIn111は、ペプチドのシステイン残基を介して結合可能である。イットリウム90はリジン残基を介して結合可能である。IODOGEN法BiochemBiophysResCommun80:4957は、ヨウ素123の導入に使用することができる。他の方法の詳細は、MonoclonalAntibodiesinImmunoscintigraphyに記載されている。抗体と細胞障害剤のコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばNスクシンイミジル3プロピオナート、スクシンイミジル4シクロヘキサン1カルボキシラート、イミノチオラン、イミドエステル類の二官能性誘導体、活性エステル類、アルデヒド類、ビスアジド化合物ヘキサンジアミン、ビスジアゾニウム誘導体エチレンジアミン、ジイソシアネート、及び二活性フッ素化合物を使用して作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等Science2381098に記載されているようにして調製することができる。炭素14標識1イソチオシアナトベンジル3メチルジエチレントリアミン五酢酸が抗体に放射性ヌクレオチドをコンジュゲートするためのキレート剤の例である。国際公開第94/11026号を参照されたい。リンカーは細胞中の細胞障害剤の放出を容易にするための切断可能リンカーであってよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカーが使用され得る;米国特許第5208020号。本発明の化合物として、例えば米国イリノイ州ロックフォードのPierceBiotechnologyIncより市販のクロスリンカー試薬、即ちBMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、スルホ-EMCS、スルホ-GMBS、スルホ-KMUS、スルホ-MBS、スルホ-SIAB、スルホ-SMCC、及びスルホ-SMPB、及びSVSBサクシニミジル-4-ビニルスルホン安息香酸を用いて調製したADCを特に考慮するが、これに限定されない。20032004ApplicationsHandbookandCatalogの467-498頁を参照のこと。別法として、抗TAT抗体及び細胞障害剤を含有する融合タンパク質は、例えば組換え技術又はペプチド合成により作製される。DNAの長さは、コンジュゲートの所望する特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域により離間しているか、又は互いに隣接しているコンジュゲートの2つの部分をコードする領域をそれぞれ含有する。他の実施態様において、腫瘍の事前ターゲティングに利用するために、レセプターに抗体をコンジュゲートし、ここで抗体レセプターコンジュゲートを患者に投与し、続いて清澄剤を使用し、循環から未結合コンジュゲートを除去し、細胞障害剤にコンジュゲートするリガンドを投与する。10.免疫リポソームここで開示されている抗TAT抗体は、免疫リポソームとして処方することもできる。リポソームは、哺乳動物への薬物輸送に有用な、脂質、リン脂質及び/又は界面活性剤を含む種々のタイプの小胞体である。リポソームの成分は、通常は生物膜の脂質配向に類似した2層構造に配列される。抗体を含有するリポソームは、例えばEpstein等ProcNatlAcadSciUSA823688;Hwang等ProcNatlAcadSciUSA774030;及び米国特許第4485045号及び同4544545号;及び1997年10月23日に公開の国際公開97/38731に記載されているように、当該分野において既知の方法により調製される。循環時間が増したリポソームは米国特許第5013556号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミンを含有する脂質組成物を用いた逆相蒸発法により作製することができる。リポソームは孔径が定められたフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体のFab断片は、ジスルフィド交換反応を介して、Martin等JBiolChem257286288に記載されているようにしてリポソームにコンジュゲートすることができる。場合によっては、化学療法剤はリポソーム内に包含される。Gabizon等JNationalCancerInst811484を参照されたい。B.TAT結合オリゴペプチド本発明のTAT結合オリゴペプチドはここで記載される様なTATポリペプチドに、好ましくは特異的に、結合するオリゴペプチドである。TAT結合オリゴペプチドは、既知のオリゴペプチド合成法を用いて化学的に合成することができ、あるいは組換え技術を用いて調製及び生成することができる。TAT結合オリゴペプチドは通常、少なくとも約5のアミノ酸長であり、或いは少なくとも約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99又は100のアミノ酸長以上であり、このようなオリゴペプチドはここに記載される様なTATポリペプチドに対して好ましくは特異的に結合する能力がある。TAT結合オリゴペプチドは、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定することができる。この点において、ポリペプチド標的に特異的に結合する能力のあるオリゴペプチドのオリゴペプチドライブラリーを検索する技術は当分野でよく知られていることを注記する例えば、米国特許第5556762号、同第5750373号、同第4708871号、同第4833092号、同第5223409号、同第5403484号、同第5571689号、同第5663143号;PCT公開第WO84/03506号、及びWO84/03564号;Geysen等ProcNatlAcadSciUSA8139984002;Geysen等ProcNatlAcadSciUSA82178182;Geysen等inSyntheticPeptidesasAntigens130149;Geysen等JImmunolMeth102259274;Schoofs等JImmunol140611616CwirlaSE等ProcNatlAcadSciUSA876378;LowmanHB等Biochemistry3010832;ClacksonT等Nature352624;MarksJD等JMolBiol222581;KangAS等ProcNatlAcadSciUSA888363、及びSmithGPCurrentOpinBiotechnol2668参照。この点において、バクテリオファージファージディスプレイは、大きなオリゴペプチドライブラリーを検索して、ポリペプチド標的に特異的に結合する能力のあるこれらライブラリーのメンバーを同定することを可能にするよく知られた技術の一つである。ファージディスプレイは、様々なポリペプチドがバクテリオファージ粒子の表面上のコートタンパク質に融合タンパク質として表示されることによる技術であるScottJK及びSmithGPScience249386。ファージディスプレイの有用性は、選択的にランダム化されたタンパク質変異体又はランダムクローンcDNAの大きなライブラリーを標的分子に高い親和性で結合するこれらの配列について素早く効果的に分類することができる点にある。ファージでのペプチドCwirlaSE等ProcNatlAcadSciUSA876378又はタンパク質LowmanHBらBiochemistry3010832ClacksonTらNature352624MarksJD等JMolBiol222581KangAS等ProcNatlAcadSciUSA888363ライブラーリのディスプレイは、特異的に結合する特性を有するものについて無数のポリペプチド又はオリゴペプチドをスクリーニングするために使用されているSmithGPCurrentOpinBiotechnol2668。ランダム突然変異体のファージライブラリーの分類は、多数の変異体を構築して増殖させる方法、標的レセプターを用いた親和性精製の方法、及び結合増強の結果を評価する手段を必要とする。米国特許第5223409号、同第5403484号、同第5571689号、及び同第5663143号。ほとんどのファージディスプレイ法は繊維状ファージを使用していたが、λファージディスプレイシステムWO95/34683;米国特許第5627024号、T4ファージディスプレイシステムRen等Gene215439Zhu等CancerResearch5832093214Jiang等InfectionImmunity6547704777Ren等Gene195303311RenProteinSci51833Efimov等VirusGenes10173及びT7ファージディスプレイシステムSmith及びScottMethodsinEnzymology217228257米国特許第5766905号も知られている。現在、基礎的なファージディスプレイ構想の多くの他の改良及び変形が開発されている。これらの改良は、選択された標的分子への結合についてペプチドライブラリーをスクリーニングするための、及びこれらのタンパク質が所望の特性をスクリーニングする潜在能力で機能性タンパク質をディスプレイするためのディスプレイシステムの能力を増強する。ファージディスプレイ反応のための組み換え反応手段について記載がありWO98/14277及びファージディスプレイライブラリーは二分子相互作用WO98/20169;WO98/20159及び拘束性へリックスペプチドの特性WO98/20036を分析及び制御するために使用されている。WO97/35196は、リガンドが標的分子に結合しうる第一の溶液、及び親和性リガンドが標的分子に結合しない第二の溶液とファージディスプレイライブラリーを接触させて結合リガンドを選択的に単離する、親和性リガンドの単離方法を記載する。WO97/46251は、親和性精製抗体でランダムファージディスプレイライブラリーをバイオパニングし、次いで結合ファージを単離し、続いてマイクロプレートのウェルでマイクロパニングして高親和性結合ファージを単離する方法を記載する。黄色ブドウ球菌Staphlylococcusaureusタンパク質Aの親和性タグとしての使用も報告されているLi等MolBiotech9187。WO97/47314は、ファージディスプレイライブラリーでもよいコンビナトリアルライブラリーを用いて酵素特異性を識別するための基質サブトラクションライブラリーの使用を記載している。ファージディスプレイに用いる洗浄剤における使用に適した酵素を選択する方法はWO97/09446に記載される。特異的に結合するタンパク質を選択する更なる方法は、米国特許第5498538号、同第5432018号、及びWO98/15833に記載されている。ペプチドライブラリーの作製及びこれらのライブラリーのスクリーニングの方法は、米国特許第5723286号、同第5432018号、同第5580717号、同第5427908号、同第5498530号、同第5770434号、同第5734018号、同第5698426号、同第5763192号、及び同第5723323号に記載される。C.TAT結合有機分子TAT結合有機分子とは、ここに記載されるようなTATポリペプチドに、好ましくは特異的に結合する、ここに定義されるようなオリゴペプチド又は抗体以外の有機分子である。TAT結合有機分子は既知の方法例えばPCT公開第WO00/00823及びWO00/39585号参照を用いて同定され、化学的に合成されうる。TAT結合有機分子は通常、約2000ダルトンの大きさ未満であり、あるいは約1500、750、500、250又は200ダルトンの大きさであり、ここに記載される様なTATポリペプチドに、好ましくは特異的に結合する能力のあるこのような有機分子は、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定されうる。この点において、ポリペプチド標的に結合する能力のある分子の有機分子ライブラリーを検索する技術は当分野でよく知られていることを注記する例えばPCT公開第WO00/00823及びWO00/39585号参照。TAT結合有機分子は、例えばアルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、一級アミン、二級アミン、三級アミン、N置換ヒドラジン、ヒドラジド、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバミン酸塩、炭酸塩、ケタール、チオケタール、アセタール、チオアセタール、ハロゲン化アリール、アリールスルホン酸、ハロゲン化アルキル、アルキルスルホン酸、芳香族化合物、複素環化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、チアゾリン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアン酸塩、塩化スルホニル、ジアゾ化合物、酸塩化物等であり得る。D.所望する特性を有する抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド及びTAT結合有機分子のスクリーニングTATポリペプチドに結合する抗体、オリゴペプチド及び有機分子を生成する技術を、上記にて記載した。所望するような、所定の生物学的特性を有する抗体、オリゴペプチド又は有機分子をさらに選択することができる。本発明の抗TAT抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子の成長阻害効果を、例えば、内因的又はTAT遺伝子によるトランスフェクション後のいずれかでTATポリペプチドを発現する細胞を用いる当該分野で周知の方法によって評価することができる。例えば、適切な腫瘍細胞株及びTAT形質移入細胞は、数日間例えば、2-7、種々の濃度の本発明の抗TATモノクローナル抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子で処理し、クリスタルバイオレット又はMTTで染色、又は幾つかの他の比色アッセイによって分析し得る。増殖を測定するその他の方法は、本発明の抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子の存在又は非存在下で処理した細胞の3Hチミジン取り込みを比較することによる。処理の後、細胞を収集し、DNAへ取り込まれた放射能をシンチレーションカウンターで定量化した。適切なポジティブコントロールには、細胞株の成長を阻害することが知られている成長阻害抗体でその選択した細胞株を処理することが含まれる。インビボでの成長阻害は、当該分野で知られている種々の方法で確かめることができる。好ましくは、腫瘍細胞は、TATポリペプチドを過剰発現するものである。好ましくは、抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子は、ある実施態様では約0.5から30μg/mlの抗体濃度で、未処理腫瘍細胞と比べて約25-100、より好ましくは約30-100、そしてさらにより好ましくは約50-100又は70-100のTAT発現腫瘍細胞の増殖をインビトロ又はインビボで阻害する。成長阻害は、細胞培養で、約0.5から30μg/ml又は0.5nMから200nMの抗体濃度で測定することができ、その成長阻害は、抗体への腫瘍細胞の曝露後110日で確かめられる。約1μg/kgから約100mg/kg体重での抗TAT抗体の投与が、抗体の最初の投与から約5日から3ヶ月、好ましくは約5から30日以内に腫瘍の大きさの減少又は腫瘍細胞増殖の減少を引き起こすならば、抗体はインビボで成長阻害作用がある。細胞死を誘発する抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子を選択するために、例えばヨウ化プロピジウムPI、トリパンブルー又は7AADの取込みにより示される膜インテグリティの損失度合いを対照と比較して求める。PI取込みアッセイは、補体及び免疫エフェクター細胞の不在下で行われる。TATポリペプチド発現細胞腫瘍細胞を、培地のみ、又は適切な抗TAT抗体例えば約10μg/ml、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子を含有する培地でインキュベートする。細胞を3日間インキュベートする。各処理に続いて、細胞を洗浄し、細胞凝塊除去のために35mmのストレーナキャップ付き12×75チューブに等分する。次いで、チューブへPI10μg/mlを与える。サンプルをFACSCANソフトウエアを使用して分析してもよい。PI取込みによって測定されるような、統計的に有意なレベルの細胞死を誘発する抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子は、細胞死誘発抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子として選択することができる。関心のある抗体が結合したTATポリペプチド上のエピトープに結合する抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子をスクリーニングするために、AntibodiesALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryEdHarlow及びDavidLane編に記載されているような通常の交差ブロッキングアッセイを実施することができる。既知の抗TAT抗体のように、試験抗体、オリゴペプチド又は他の有機分子が同じ部位又はエピトープと結合するならば、このアッセイを確定するために用いることができる。あるいは、又は付加的に、エピトープマッピングを、当該分野で周知の方法によって行うことができる。例えば、接触残基を同定するために、例えばアラニンスキャンニングによって抗体配列を変異させることができる。この変異体抗体は、適切なフォールディングを確かめるために、最初にポリクローナル抗体との結合について試験される。異なる方法では、TATポリペプチドの異なる領域と一致するペプチドを、試験抗体群又は試験抗体及び特徴付けられた又は既知のエピトープを有する抗体による競合アッセイで用いることができる。E.抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ治療法また、本発明の抗体は、プロドラッグを活性な抗癌剤へ変換するプロドラッグ活性化酵素へ抗体をコンジュゲートすることによって、ADEPTにおいて使用することができる。例えば国際公開88/07378及び米国特許第4975278号を参照されたい。ADEPTに有用な免疫コンジュゲートの酵素成分には、より活性な細胞毒形態に変換するようにプロドラッグへ作用し得る任意の酵素が含まれる。限定するものではないが、この発明の方法に有用な酵素には、ホスファート含有プロドラッグを遊離の薬剤に変換するのに有用なアルカリ性ホスファターゼ;スルファート含有プロドラッグを遊離の薬剤に変換するのに有用なアリールスルファターゼ;非毒性5フルオロシトシンを抗癌剤5フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ;プロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシンで、ペプチド含有プロドラッグを遊離の薬剤に変換するのに有用なもの;Dアミノ酸置換基を含有するプロドラッグの変換に有用なDアラニルカルボキシペプチダーゼ;炭水化物切断酵素、例えばグリコシル化プロドラッグを遊離の薬剤に変換するのに有用なノイラミニダーゼ及びβガラクトシダーゼ;βラクタムで誘導体化された薬剤を遊離の薬剤に変換させるのに有用なβラクタマーゼ;及びペニシリンアミダーゼ、例えばそれぞれフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基で、それらのアミン性窒素において誘導体化された薬剤を遊離の薬剤に変換するのに有用なペニシリンVアミダーゼ又はペニシリンGアミダーゼが含まれる。あるいは、アブザイムとしてもまた公知の酵素活性を有する抗体を、遊離の活性薬剤に本発明のプロドラッグを変換させるために使用することもできるを参照。抗体アブザイムコンジュゲートは、ここで記載されているようにして、腫瘍細胞個体群にアブザイムを送達するために調製することができる。この発明の酵素は、当該分野においてよく知られている技術、例えば上で検討したヘテロ二官能性架橋試薬を使用することにより、抗TAT抗体に共有的に結合させることができる。あるいは、本発明の抗体の少なくとも抗原結合領域を本発明の酵素の少なくとも機能的に活性な部位に結合せしめてなる融合タンパク質を、当該技術においてよく知られている組換えDNA技術を使用して作成することができる。F.完全長TATポリペプチド本発明は、本出願でTATポリペプチドと呼ばれるポリペプチドをコードする新規に同定され単離された核酸配列を提供する。特に下記の実施例でさらに詳細に説明するように、種々のTATポリペプチドをコードするcDNA部分及び完全長が同定され単離された。下記の実施例に開示するように、種々のcDNAクローンがATCCに寄託されている。これらのクローンの正確なヌクレオチド配列は、この分野で日常的な方法を用いて寄託されたクローンを配列決定することにより容易に決定することができる。予測されるアミノ酸配列は、ヌクレオチド配列から常套的技量を用いて決定できる。ここに記載したTATポリペプチド及びコード化核酸について、本出願人は、現時点で入手可能な配列情報と最も良く一致するリーディングフレームであると考えられるものを同定した。G.抗TAT抗体及びTATポリペプチド変異体ここに記載した抗TAT抗体及び完全長天然配列TATポリペプチドに加えて、抗TAT抗体及びTATポリペプチド変異体も調製できると考えられる。抗TAT抗体及びTATポリペプチド変異体は、コード化DNAに適当なヌクレオチド変化を導入することによって、及び/又は所望の抗体又はポリペプチドを合成することによって調製できる。当業者は、アミノ酸変化がグリコシル化部位の数又は位置の変化あるいは膜固着特性の変化などの抗TAT抗体の翻訳後プロセス又はTATポリペプチドの翻訳後プロセスを変え得るのを理解するであろう。ここに記載した抗TAT抗体及びTATポリペプチドの変異は、例えば、米国特許第5364934号に示す保存的及び非保存的変異に関する技術及び指針のいずれかを用いて作成することができる。変異は、結果として天然配列抗体又はポリペプチドと比較してアミノ酸配列の変化を生じる、抗体又はポリペプチドをコードする一又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入であってもよい。場合によっては、変異は、抗TAT抗体又はTATポリペプチドの一つ又は複数のドメインにおける、少なくとも一つのアミノ酸の他の任意のアミノ酸との置換による。どのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を与えることなく挿入、置換又は欠失され得るかを確かめる指針は、抗TAT抗体又はTATポリペプチドの配列を既知の相同タンパク質分子の配列と比較し、相同性の高い領域内で生じたアミノ酸配列変化の数を最小にすることによって見出される。アミノ酸置換は、一のアミノ酸を類似した構造及び/又は化学特性を持つ他のアミノ酸で置換すること、例えばロイシンのセリンでの置換、即ち保存的アミノ酸置換の結果であるとすることができる。挿入及び欠失は、場合によっては1から5のアミノ酸の範囲内であり得る。許容され得る変異は、配列にアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に作成し、生じた変異体を完全長又は成熟天然配列によって示される活性に関して試験することによって確かめられる。抗TAT抗体及びTATポリペプチド断片がここで提供されている。そのような断片は、例えば完全長天然抗体又はタンパク質と比較した時に、N末端又はC末端で切断しているか、又は内部残基を欠いている可能性がある。ある断片は、抗TAT抗体又はTATポリペプチドの所望される生物学的活性にとって必修ではないアミノ酸残基を欠く。抗TAT抗体及びTATポリペプチド断片は、多くの従来技術のいずれかによって調製してもよい。所望のペプチド断片は化学合成してもよい。代替的方法には、酵素的消化、例えば特定のアミノ酸残基で確定した部位でタンパク質を切断することが知られた酵素によってタンパク質を処理することで、又は適当な制限酵素でDNAを消化して所望の断片を単離することによって抗体又はポリペプチド断片を生成することが含まれる。さらにその他の好適な技術には、ポリメラーゼ連鎖反応PCRによって、所望の抗体又はポリペプチド断片をコードするDNA断片を単離し増幅することが含まれる。DNA断片の所望の末端を確定するオリゴヌクレオチドは、PCRの5’及び3’プライマーで用いられる。好ましくは、抗TAT抗体及びTATポリペプチド断片は、ここに開示した天然抗TAT抗体又はTATポリペプチドと少なくとも1つの生物学的及び/又は免疫学的活性を共有する。特定の実施態様では、対象とする保存的置換を、好ましい置換の項目で表6に示す。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表1に例示的置換と名前を付けた又は以下にアミノ酸分類でさらに記載するように、より実質的な変化が導入され生成物がスクリーニングされる。抗TAT抗体又はTATポリペプチドの機能又は免疫学的同一性の実質的修飾は、a置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又は螺旋配置、b標的部位の電荷又は分子疎水性、又はc側鎖の嵩を維持しながら、それらの効果において有意に異なる置換基を選択することにより達成される。天然に生じる残基は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる:1疎水性:ノルロイシンMetAlaValLeuIle2中性の親水性:CysSerThrAsnGln3酸性:AspGlu4塩基性:HisLysArg5鎖配向に影響する残基:GlyPro及び6芳香族:TrpTyrPhe。非保存的置換は、これらの分類の1つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。また、そのように置換された残基は、保存的置換部位、又はより好ましくは、残された非保存部位に導入されうる。変異は、オリゴヌクレオチド媒介部位特異的突然変異誘発、アラニンスキャンニング、及びPCR突然変異誘発等のこの分野で知られた方法を用いてなすことができる。部位特異的突然変異誘発[Carter等NuclAcidsRes134331Zoller等NuclAcidsRes106487]、カセット突然変異誘発[Wells等Gene34315]、制限的選択突然変異誘発[Wells等PhilosTransRSocLondonSerA317415]又は他の知られた技術をクローニングしたDNAに実施して、抗TAT抗体又はTATポリペプチド変異体DNAを作成することもできる。また、隣接配列に沿って一又は複数のアミノ酸を同定するのにスキャンニングアミノ酸分析を用いることができる。好ましいスキャンニングアミノ酸は比較的小さく、中性のアミノ酸である。そのようなアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、及びシステインを含む。アラニンは、ベータ炭素を越える側鎖を排除し変異体の主鎖構造を変化させにくいので、この群の中で典型的に好ましいスキャンニングアミノ酸である[Cunningham及びWellsScience24410811085]。また、アラニンは最もありふれたアミノ酸であるため典型的には好ましい。さらに、それは埋もれた及び露出した位置の両方に見られることが多い[CreightonTheProteinsChothiaJMolBiol1501]。アラニン置換が十分な量の変異体を生じない場合は、アイソテリックアミノ酸を用いることができる。抗TAT抗体又はTATポリペプチドの適切なコンフォメーションを維持することに関与していない任意のシステイン残基も、分子の酸化的安定性を向上させ、異常な架橋を防ぐために、概してセリンと置換され得る。逆に、抗TAT抗体又はTATポリペプチドの安定性特に、抗体がFv断片のような抗体断片を向上させるために、それにシステイン結合複数でもを加えてもよい。特に好ましい型の置換変異体は、親抗体例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体の一又は複数の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的に、更なる開発のために得られた変異体は、それらが生成された親抗体と比較して向上した生物学的特性を有している。そのような置換変異体を生成する簡便な方法には、ファージディスプレイを使用する親和性成熟がふくまれる。簡潔に言えば、高頻度可変領域部位例えば、6-7部位を変異させて各部位における全ての可能なアミノ酸置換を生成させる。このように生成された抗体変異体は、繊維状ファージ粒子から、各粒子内に充填されたM13の遺伝子III産物への融合物として一価形態で表示される。ファージ表示変異体は、ついで、ここに開示されるようなそれらの生物学的活性例えば、結合親和性についてスクリーニングされる。改変の候補となる高頻度可変領域部位を同定するために、アラニンスキャンニング突然変異誘発を実施し、抗原結合に有意に寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。あるいは、又はそれに加えて、抗原抗体複合体の結晶構造を分析して抗体とヒトTATポリペプチドとの接点を同定するのが有利である場合もある。このような接触残基及び隣接残基は、ここで詳しく記述した技術による置換の候補である。そのような変異体が生成されたら、変異体のパネルにここに記載するようなスクリーニングを施し、一又は複数の関連アッセイにおいて優れた特性を持つ抗体を更なる開発のために選択することができる。抗TAT抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当該分野で周知の種々の方法によって調製される。これらの方法には、限定されるものではないが、オリゴヌクレオチド媒介又は部位特異的突然変異誘発、PCR突然変異誘発、そして抗TAT抗体の早期に調製した変異体又は非変異体形のカセット突然変異誘発による、天然ソースからの単離天然発生アミノ酸配列変異体の場合又は調製が含まれる。H.抗TAT抗体及びTATポリペプチドの修飾抗TAT抗体及びTATポリペプチドの共有結合的修飾は本発明の範囲内に含まれる。共有結合的修飾の一型には、抗TAT抗体又はTATポリペプチドの標的とするアミノ酸残基を、抗TAT抗体又はTATポリペプチドの選択された側鎖又はN又はC末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることが含まれる。二官能性試薬による誘導体化は、例えば抗TAT抗体又はTATポリペプチドを、抗TAT抗体の精製方法で用いる水不溶性支持体マトリクス又は表面と架橋させるために有用であり、その逆も同じである。通常用いられる架橋剤には、例えば、11ビスジアゾアセチル2フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Nヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば4アジドサリチル酸を有するエステル、33ジチオビススクシンイミジルプロピオネート等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビスNマレイミド18オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル3ジチオ]プロピオイミダート等の試薬が含まれる。他の修飾には、グルタミニル及びアスパラギニル残基の各々対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミノ化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のαアミノ基のメチル化TECreightonProteinsStructureandMolecularPropertiesWHFreemanCoSanFranciscopp7986、N末端アミンのアセチル化、及び任意のC末端カルボキシル基のアミド化を含む。本発明の範囲内に含まれる抗TAT抗体又はTATポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、抗体又はポリペプチドの天然グリコシル化パターンの変更を含む。ここで意図される天然グリコシル化パターンの変更とは、天然配列抗TAT抗体又はTATポリペプチドに見られる一又は複数の炭水化物部分を欠失させること内在するグリコシル化部位を取り除くことによって、又は化学及び/又は酵素的手法でグリコシル化を欠失させることのいずれか、及び/又は天然配列抗TAT抗体又はTATポリペプチドに存在しない一又は複数のグリコシル化部位の付加を意味する。更には、この語句には、存在する種々の炭水化物部分の性質及び特性の変化を含む、天然タンパク質のグリコシル化における定性的な変化が含まれる。抗体及び他のポリペプチドのグリコシル化とは、典型的にはN結合又はO結合のいずれかである。N結合とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付与を指す。トリペプチドは、Xがプロリンを除く任意のアミノ酸である、アスパラギンXセリン及びアスパラギンXスレオニンの配列であり、アスパラギン側鎖への炭水化物部分が酵素的に付与される認識部位である。従って、ポリペプチドのこれらトリペプチド配列のいずれかの存在によって、潜在的なグリコシル化部位が作り出される。O結合グリコシル化とは、5ヒドロキシプロリン又は5ヒドロキシリジンも用いられるが、殆どの場合にはセリン又はスレオニンへNアセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースのうちの一つの糖をヒドロキシアミノ酸へ付与することを指す。抗TAT抗体又はTATポリペプチドへのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を改変して、それが上記に記載のトリペプチド配列N結合グリコシル化部位についての一つ又は複数を含むようにすることによって簡便に完遂できる。この改変は、また、最初の抗TAT抗体又はTATポリペプチドの配列へ一つ又は複数のセリン又はスレオニン残基を付加、又は置換することによって生成されるO結合グリコシル化部位について。抗TAT抗体又はTATポリペプチドアミノ酸配列は、DNAレベルでの変化を通して、特に、コドンが所望するアミノ酸へ翻訳される、あらかじめ選択した塩基での抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードするDNAを変異させることによって、場合によっては改変され得る。抗TAT抗体又はTATポリペプチド上に炭水化物部分の数を増加させる他の手段は、グリコシドのポリペプチドへの化学的又は酵素的結合による。そのような方法は、この技術分野において、例えば、1987年9月11日に発行された国際公開87/05330、及びAplin及びWristonCRCCritRevBiochempp259306に記載されている。抗TAT抗体又はTATポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に、あるいはグルコシル化の標的として提示されたアミノ酸残基をコードするコドンの変異的置換によってなすことができる。化学的脱グリコシル化技術は、この分野で知られており、例えば、Hakimuddin等ArchBiochemBiophys25952によって、そしてEdge等AnalBiochem118131によって記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakura等MethEnzymol138350に記載されているように、種々のエンド及びエキソグリコシダーゼを用いることにより達成される。抗TAT抗体又はTATポリペプチド共有結合的修飾の他の型は、抗体又はポリペプチドを種々の非タンパク質様ポリマーの1つ、例えばポリエチレングリコールPEG、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンへ、米国特許第4640835号;第4496689号;第4301144号;第4670417号;第4791192号又は第4179337号に記載された方法で結合させることをを含む。また、抗体又はポリペプチドは、例えばコアセルベーション法によって又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリマイクロカプセルに、コロイド状薬物送達系又はマクロエマルションで捕捉することができる。このような技術はRemingtonsPharmaceuticalSciences16版AOslo編に開示されている。また、本発明の抗TAT抗体又はTATポリペプチドは、その他の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列と融合した抗TAT抗体又はTATポリペプチドを含むキメラ分子が形成される方法で修飾されてもよい。一実施態様では、このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合できるエピトープを提供するタグポリペプチドと抗TAT抗体又はTATポリペプチドとの融合を含む。エピトープタグは、一般的には抗TAT抗体又はTATポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に位置する。このような抗TAT抗体又はTATポリペプチドのエピトープタグ形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出することができる。また、エピトープタグの提供は、抗タグ抗体又はエピトープタグに結合する他の型の親和性マトリクスを用いたアフィニティ精製によって抗TAT抗体又はTATポリペプチドを容易に精製できるようにする。種々のタグポリペプチド及びそれら各々の抗体はこの分野で良く知られている。例としては、ポリ-ヒスチジンポリHis又はポリ-ヒスチジン-グリシンpolyhisglyタグ;fluHAタグポリペプチド及びその抗体12CA5[Field等MolCellBiol821592165];cmycタグ及びそれに対する8F9、3C7、6E10、G4、B7及び9E10抗体[Evan等MolecularandCellularBiology536103616];及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質DgDタグ及びその抗体[Paborsky等ProteinEngineering3547553]を含む。他のタグポリペプチドは、フラッグペプチド[Hopp等BioTechnology612041210];KT3エピトープペプチド[Martin等Science255192194];αチューブリンエピトープペプチド[Skinner等JBiolChem2661516315166];及びT7遺伝子10タンパク質ペプチドタグ[LutzFreyermuth等ProcNatlAcadSciUSA8763936397]を含む。それに換わる実施態様では、キメラ分子は抗TAT抗体又はTATポリペプチドの免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定領域との融合体を含んでもよい。キメラ分子の二価形態イムノアドヘシンとも呼ばれるについては、そのような融合体はIgG分子のFc領域であり得る。Ig融合体は、好ましくはIg分子内の少なくとも1つの可変領域に換えて抗TAT抗体又はTATポリペプチドの可溶化膜貫通ドメイン欠失又は不活性化形態を含む。特に好ましい実施態様では、免疫グロブリン融合体は、IgG分子のヒンジ、CH2及びCH3、又はヒンジ、CH1、CH2及びCH3領域を含む。免疫グロブリン融合体の製造については、1995年6月27日発行の米国特許第5428130号を参照のこと。I.抗TAT抗体及びTATポリペプチドの調製以下の説明は、主として、抗TAT抗体及びTATポリペプチドコード化核酸を含むベクターで形質転換又は形質移入された細胞を培養することにより抗TAT抗体及びTATポリペプチドを産生させる方法に関する。勿論、当該分野においてよく知られている他の方法を用いて抗TAT抗体及びTATポリペプチドを調製することができると考えられている。例えば、適切なアミノ酸配列、又はその一部分を、固相技術を用いた直接ペプチド合成によって生成してもよい[例えば、Stewart等SolidPhasePeptideSynthesisWHFreemanCoサンフランシスコカリフォルニア;MerrifieldJAmChemSoc8521492154参照]。手動技術又は自動を使用することによってインビトロタンパク質合成を行ってもよい。自動合成は、例えば、アプライドバイオシステムズペプチド合成機フォスターシティーカリフォルニアを用いて、製造者の指示によって実施してもよい。抗TAT抗体又はTATポリペプチドの種々の部分を別々に化学的に合成し、化学的又は酵素的方法を用いて結合させて所望する抗TAT抗体又はTATポリペプチドを生成させてもよい。1.抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードするDNAの単離抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードするDNAは、抗TAT抗体又はTATポリペプチドmRNAを保有していてそれを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製されたcDNAライブラリーから得ることができる。従って、ヒト抗TAT抗体又はTATポリペプチドDNAは、ヒトの組織から調製されたcDNAライブラリーから簡便に得ることができる。また抗TAT抗体又はTATポリペプチドコード化遺伝子は、ゲノムライブラリーから又は公知の合成方法例えば、自動核酸合成により得ることもできる。ライブラリーは、対象となる遺伝子あるいはその遺伝子によりコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブによってスクリーニングできる。選択されたプローブによるcDNA又はゲノムライブラリーのスクリーニングは、例えばSambrook等MolecularCloningALaboratoryManualに記載されている標準的な手順を使用して実施することができる。抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードする遺伝子を単離する他の方法は、PCR法を使用するものである[Sambrook等上掲;Dieffenbach等PCRPrimer:ALaboratoryManual]。cDNAライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該分野で良く知られている。プローブとして選択されたオリゴヌクレオチド配列は、疑陽性が最小化されるよう十分な長さであり、十分に明瞭でなければならない。オリゴヌクレオチドは、スクリーニングされるライブラリー内のDNAとのハイブリダイゼーション時に検出可能であるように標識されていることが好ましい。標識化の方法は当該分野において良く知られており、32P標識ATPのような放射線標識、ビオチン化あるいは酵素標識の使用を含む。中程度のストリンジェンシー及び高度のストリンジェンシーを含むハイブリダイゼーション条件は、上掲のSambrookら,に示されている。このようなライブラリースクリーニング法において同定された配列は、GenBankらの公共データベース又は他の個人の配列データベースに寄託され利用可能となっている他の周知の配列と比較及びアラインメントすることができる。分子の決定された領域内の又は完全長配列に渡ってのアミノ酸又はヌクレオチドレベルのいずれかでの配列同一性は、当該分野で知られた、及びここに記載した方法を用いて決定することができる。タンパク質コード化配列を有する核酸は、初めてここで開示された推定アミノ酸配列を使用し、また必要ならば、cDNAに逆転写されていないmRNAの生成中間体及び先駆物質を検出する上掲のSambrook等に記述されているような従来のプライマー伸展法を使用して、選択されたcDNA又はゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって得られる。2.宿主細胞の選択及び形質転換宿主細胞を、ここに記載した抗TAT抗体又はTATポリペプチド生成のための発現又はクローニングベクターで形質移入又は形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適当に変性された常套的栄養培地で培養する。培養条件、例えば培地、温度、pH等々は、過度の実験をすることなく当業者が選ぶことができる。一般に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実用技術は、MammalianCellBiotechnologyaPracticalApproachMButler編及び上掲のSambrook等に見出すことができる。真核生物細胞形質移入及び原核生物細胞形質転換の方法、例えば、CaCl2、CaPO4、リポソーム媒介及びエレクトロポレーションは当業者に知られている。用いられる宿主細胞に応じて、その細胞に対して適した標準的な方法を用いて形質転換はなされる。前掲のSambrook等に記載された塩化カルシウムを用いるカルシウム処理又はエレクトロポレーションが、一般的に原核生物に対して用いられる。アグロバクテリウムトゥメファシエンスによる感染が、Shaw等Gene23315及び1989年6月29日公開の国際公開89/05859に記載されているように、或る種の植物細胞の形質転換に用いられる。このような細胞壁のない哺乳動物の細胞に対しては、Graham及びvanderEbVirology52456457のリン酸カルシウム沈降法が用いられる。哺乳動物細胞の宿主系形質転換の一般的な態様は米国特許第4,399,216号に記載されている。酵母菌中への形質転換は、典型的には、VanSolingen等JBact130946及びHsiao等ProcNatlAcadSci763829の方法に従って実施される。しかしながら、DNAを細胞中に導入する他の方法、例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、無傷の細胞、又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等を用いる細菌プロトプラスト融合もまた用いることもできる。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の技術については、Keown等MethodsinEnzymology185527537及びMansour等Nature336348352を参照のこと。ここに記載のベクターにDNAをクローニングあるいは発現するために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母菌、又は高等真核生物細胞である。適切な原核生物には、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性微生物、例えば大腸菌のような腸内細菌科が含まれる。種々の大腸菌株が公に利用可能であり、例えば、大腸菌K12株MM294ATCC31446;大腸菌X1776ATCC31537;大腸菌株W3110ATCC27325及びK5772ATCC53635である。他の好ましい原核動物宿主細胞は、大腸菌属、例えば大腸菌Ecoli、エンテロバクター、エルビニア、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ、例えばネズミチフス菌、及び赤痢菌、並びに桿菌、例えばバチルススブチルス及びバチルスリチェニフォルミス例えば、1989年4月12日発行のDD266710に記載されたバチルスリチェニフォルミス41P、シュードモナス、例えば緑膿菌及びストレプトマイセスなどの腸内細菌科を含む。これらの例は限定ではなく例示である。株W3110は、組換えDNA生成物発酵のための共通の宿主株であるので一つの特に好ましい宿主又は親宿主である。好ましくは、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、株W3110を、宿主にとって内因性のタンパク質をコードする遺伝子の遺伝子変異をもたらすように修飾してもよく、そのような宿主の例としては、完全な遺伝子型tonAを有する大腸菌W3110株1A2;完全な遺伝子型tonAptr3を有する大腸菌W3110株9E4;完全な遺伝子型tonAptr3phoAE15argF-lac169degPompTkanrを有する大腸菌W3110株27C7ATCC55,244;完全な遺伝子型tonAptr3phoAE15169degPompTrbs7ilvGkanrを有する大腸菌W3110株37D6;非カナマイシン耐性degP欠失変異を持つ37D6株である大腸菌W3110株40B4;及び1990年8月7日発行の米国特許第4946783号に開示された変異周辺質プロテアーゼを有する大腸菌株を含む。あるいは、クローニングのインビトロ法、例えばPCR又は他の核酸ポリメラーゼ反応が好ましい。完全長抗体、抗体断片、及び抗体融合タンパク質は、治療用の抗体が細胞傷害剤例えば、毒素と結合し、その免疫コンジュゲートそのものが腫瘍細胞の破壊において有効性を示す場合など、特にグリコシル化及びFcエフェクター機能が必要ない場合に、細菌で産生させることができる。完全長抗体は、血液循環でより長い半減期を有する。大腸菌での産生が、より迅速でより費用効率的である。細菌での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第5648237号Carter等、米国特許第5789199号Joly等、及び翻訳開始部位TIR及び発現と分泌を最適化するシグナル配列を記載している米国特許第5840523号Simmons等を参照のこと。これら特許は、ここに参考文献として取り入れられている。発現の後、抗体は、大腸菌細胞ペーストから可溶性分画へ分離し、例えば、アイソタイプによってプロテインA又はGカラムを介して精製することができる。最終精製は、例えば、CHO細胞で発現させた抗体を精製するための工程と同じようにして行うことができる。原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、抗TAT抗体又はTATポリペプチドコード化ベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセスセレヴィシアは、通常用いられる下等真核生物宿主微生物である。他に、シゾサッカロミセスポンベBeach及びNurseNature29014019811985年5月2日公開の欧州特許第139383号;クリュイベロミセス宿主米国特許第4943529号Fleer等BioTechnology9968975、例えばクリュイベロミセスラクチスMW988CCBS683CBS4574Louvencourt等JBacteriol1547377421983、クリュイベロミセスフラギリスATCC12424、クリュイベロミセスブルガリクスATCC16045、クリュイベロミセスウィケラミイATCC24178、クリュイベロミセスワルチイATCC56500、クリュイベロミセスドロソフィラルムATCC36906;VandenBerg等BioTechnology8135、クリュイベロミセステモトレランス及びクリュイベロミセスマルキシアナス;ヤロウィア欧州特許第402226号;ピシアパストリス欧州特許第183070号;Sreekrishna等JBasicMicrobiol282652781988;カンジダ;トリコデルマレーシア欧州特許第244234号;アカパンカビCase等ProcNatlAcadSciUSA76525952631979;シュワニオマイセス、例えばシュワニオマイセスオクシデンタリス1990年10月31日公開の欧州特許第394538号;及び糸状真菌、例えば、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム1991年1月10日公開の国際公開91/00357;及びアスペルギルス宿主、例えばアスペルギルスニダランスBallance等BiochemBiophysResCommun1122842891983Tilburn等Gene262052211983Yelton等ProcNatlAcadSciUSA81147014741984及びアスペルギルスニガーKelly及びHynesEMBOJ44754791985が含まれる。ここで好ましいメチロトロピック酵母は、これらに限られないが、ハンセヌラ、カンジダ、クロエケラ、ピシア、サッカロミセス、トルロプシス、及びロドトルラからなる属から選択されたメタノールで成長可能な酵母を含む。この酵母の分類の例示である特定の種のリストは、CAnthonyTheBiochemistryofMethylotrophs269に記載されている。グリコシル化抗TAT抗体又はTATポリペプチドの発現に適した宿主細胞は、多細胞生物から由来のものである。非脊椎動物細胞の例には、植物細胞、例えば綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト及びタバコの細胞培養と同様に、ショウジョウバエS2及びヨトウSf9等の昆虫細胞が含まれる。多くのバキュロウイルス株及び変異体、及びヨトウガ、ネッタイシマカ、ヒトスジシマカ、キイロショウジョウバエ、及びカイコ等の宿主に対応する許容性昆虫宿主細胞が同定されている。種々のトランスフェクション用のウィルス株、例えばオートグラファカルフォルニカNPVのL-1変異株、カイコNPVのBm5株が公に入手でき、このようなウィルスは、本発明に係るウィルスとして、特に、ヨトウガ細胞のトランスフェクションのために使用してもよい。しかし、最大の関心は脊椎動物細胞に向けられ、培養した脊椎動物細胞の増殖がルーチン作業となった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、SV40で形質転換させたサル腎CV1細胞株;ヒト胚芽腎細胞株;ベビーハムスター腎細胞;チヤイニーズハムスター卵巣細胞/DHFRマウスセルトリ細胞;サル腎細胞;アフリカミドリザル腎細胞;ヒト頚管腫瘍細胞;イヌ腎細胞;バッファローラット肝細胞;ヒト肺細胞;ヒト肝細胞;マウス乳房腫瘍細胞;TRI細胞;MRC5細胞;FS4細胞;及びヒト肝臓癌細胞HepG2である。宿主細胞は、抗TAT抗体又はTATポリペプチド生成のために上述の発現又はクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘発し、形質転換体を選出し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適切に修正した通常の栄養培地で培養される。3.複製可能なベクターの選択及び使用抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードする核酸は、クローニング又は発現のために複製可能なベクター内に挿入される。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態とすることができる。適切な核酸配列が、種々の手法によってベクターに挿入される。一般に、DNAはこの分野で周知の技術を用いて適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。ベクター成分としては、一般に、これらに制限されるものではないが、一又は複数のシグナル配列、複製開始点、一又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列を含む。これらの成分の一又は複数を含む適当なベクターの作成には、当業者に知られた標準的なライゲーション技術を用いる。TATは直接的に組換え手法によって生成されるだけではなく、シグナル配列あるいは成熟タンパク質あるいはポリペプチドのN末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドである異種性ポリペプチドとの融合ペプチドとしても生成される。一般に、シグナル配列はベクターの成分であるか、ベクターに挿入される抗TAT抗体又はTATポリペプチドコード化DNAの一部である。シグナル配列は、例えばアルカリフォスファターゼ、ペニシリナーゼ、lppあるいは熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であってよい。酵母の分泌に関しては、シグナル配列は、酵母インベルターゼリーダー、アルファ因子リーダー及びクリュイベロミセスα因子リーダーを含み、後者は米国特許第5,010,182号に記載されている、又は酸ホスフォターゼリーダー、カンジダアルビカンスグルコアミラーゼリーダー、又は1990年11月15日に公開された国際公開90/13646に記載されているシグナルであり得る。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列は、同一あるいは関連種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列並びにウイルス分泌リーダーのようなタンパク質の直接分泌に使用してもよい。発現及びクローニングベクターは共に一又は複数の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。そのような配列は多くの細菌、酵母及びウイルスについてよく知られている。プラスミドpBR322に由来する複製開始点は大部分のグラム陰性細菌に好適であり、2μプラスミド開始点は酵母に適しており、様々なウイルス開始点は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。発現及びクローニングベクターは、典型的には、選べるマーカーとも称される選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートあるいはテトラサイクリンのような抗生物質あるいは他の毒素に耐性を与え、栄養要求性欠陥を補い、又は複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードしており、例えばバシリのDアラニンラセマーゼをコードする遺伝子がある。哺乳動物細胞に適切な選べるマーカーの例は、DHFRあるいはチミジンキナーゼのように、抗TAT抗体又はTATポリペプチドコード化核酸を取り込むことのできる細胞成分を同定することのできるものである。野生型DHFRを用いた場合の好適な宿主細胞は、Urlaub等によりProcNatlAcadSciUSA774216に記載されているようにして調製され増殖されたDHFR活性に欠陥のあるCHO株化細胞である。酵母菌中での使用に好適な選択遺伝子は酵母プラスミドYRp7に存在するtrp1遺伝子である[Stinchcomb等Nature282:39;Kingsman等Gene7:141;Tschemper等Gene10:157]。trp1遺伝子は、例えば、ATCC番号44076あるいはPEP41のようなトリプトファンで成長する能力を欠く酵母菌の突然変異株に対する選択マーカーを提供する[JonesGenetics8512]。発現及びクローニングベクターは、通常、抗TAT抗体又はTATポリペプチドコード化核酸配列に作用可能に結合し、mRNA合成を方向付けるプロモーターを含む。種々の有能な宿主細胞により認識されるプロモーターが知られている。原核生物宿主との使用に適したプロモーターはβラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系[Chang等Nature275615;Goeddel等Nature281544]、アルカリフォスファターゼ、トリプトファンプロモーター系[GoeddelNucleicAcidsRes84057欧州特許第36,776号]、及びハイブリッドプロモーター、例えばtacプロモーター[deBoer等ProcNatlAcadSciUSA802125]を含む。細菌系で使用するプロモーターもまた抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードするDNAと作用可能に結合したシャインダルガーノ配列を有する。酵母宿主との使用に適したプロモーター配列の例としては、3ホスホグリセラートキナーゼ[Hitzeman等JBiolChem2552073]又は他の糖分解酵素[Hess等JAdvEnzymeReg7149;HollandBiochemistry17:4900]、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース6リン酸イソメラーゼ、3ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオセリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが含まれる。他の酵母プロモーターとしては、成長条件によって転写が制御される付加的効果を有する誘発的プロモーターであり、アルコールデヒドロゲナーゼ2、イソチトクロムC、酸フォスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域がある。酵母菌での発現に好適に用いられるベクターとプロモーターは欧州特許第73657号に更に記載されている。哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからの抗TAT抗体又はTATポリペプチド転写は、例えば、ポリオーマウィルス、伝染性上皮腫ウィルス、アデノウィルス、ウシ乳頭腫ウィルス、トリ肉腫ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、B型肝炎ウィルス及びサルウィルス40のようなウィルスのゲノムから得られるプロモーター、異種性哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター、及び熱衝撃プロモーターから得られるプロモーターによって、このようなプロモーターが宿主細胞系に適合し得る限り制御される。より高等の真核生物による抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードするDNAの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強され得る。エンハンサーは、通常は約10から300塩基対で、プロモーターに作用してその転写を増強するDNAのシス作動要素である。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている。しかしながら、典型的には、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製開始点の後期側のSV40エンハンサー、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、抗TAT抗体又はTATポリペプチドコード化配列の5’又は3’位でベクター中にスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから5’位に位置している。また真核生物宿主細胞に用いられる発現ベクターは、転写の終結及びmRNAの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物又はウィルスのDNA又はcDNAの通常は5’、時には3’の非翻訳領域から取得できる。これらの領域は、抗TAT抗体又はTATポリペプチドをコードするmRNAの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。組換え脊椎動物細胞培養での抗TAT抗体又はTATポリペプチドの合成に適応化するのに適切な他の方法、ベクター及び宿主細胞は、Gething等Nature293620625Mantei等Nature2814046欧州特許第117060号;及び欧州特許第117058号に記載されている。4.宿主細胞の培養本発明の抗TAT抗体又はTATポリペプチドを生成するために用いられる宿主細胞は種々の培地において培養することができる。市販培地の例としては、ハムのF10、最小必須培地シグマ、RPMI1640及びダルベッコの改良イーグル培地シグマが宿主細胞の培養に好適である。また、Ham等MethEnz5844Barnes等AnalBiochem102255米国特許第4767704号;同4657866号;同4927762号;同4560655号;又は同5122469号;国際公開第90/03430号;国際公開第87/00195号;又は米国特許再発行第30985号に記載された任意の培地も宿主細胞に対する培養培地として使用できる。これらの培地はいずれも、ホルモン及び/又は他の成長因子、塩類、バッファー、ヌクレオシド、抗生物質、微量元素及びグルコース又は同等のエネルギー源を必要に応じて補充することができる。任意の他の必要な補充物質もまた当業者に知られている適当な濃度で含まれてもよい。培養条件、例えば温度、pH等々は、発現のために選ばれた宿主細胞について以前から用いられているものであり、当業者には明らかであろう。5.遺伝子増幅/発現の検出遺伝子の増幅及び/又は発現は、ここで提供された配列に基づき、適切に標識されたプローブを用い、例えば、従来よりのサザンブロット法、mRNAの転写を定量化するノーザンブロット法[ThomasProcNatlAcadSciUSA7752015205]、ドットブロット法、又はインサイツハイブリダイゼーションによって、直接的に試料中で測定することができる。あるいは、DNA二本鎖、RNA二本鎖、及びDNA-RNAハイブリッド二本鎖又はDNAタンパク二本鎖を含む、特異的二本鎖を認識することができる抗体を用いることもできる。ついで、抗体を標識し、アッセイを実施することができ、ここで二本鎖は表面に結合しており、その結果、表面での二本鎖の形成の時点でその二本鎖に結合した抗体の存在を検出することができる。あるいは、遺伝子の発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量化する免疫学的な方法、例えば細胞又は組織切片の免疫組織化学的染色及び細胞培養又は体液のアッセイによって、測定することもできる。試料液の免疫組織化学的染色及び/又はアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の哺乳動物で調製することができる。簡便には、抗体は、天然配列TATポリペプチドに対して、又はここで提供されるDNA配列をベースとした合成ペプチドに対して、又はTATDNAに融合し特異的抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製され得る。6.抗TAT抗体及びTATポリペプチドの精製抗TAT抗体及びTATポリペプチドの形態は、培地又は宿主細胞の溶菌液から回収することができる。膜結合性であるならば、適切な洗浄液を用いて又は酵素的切断により膜から引き離すことができる。抗TAT抗体及びTATポリペプチドの発現に用いられる細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤などの種々の化学的又は物理的手段によって破壊することができる。抗TAT抗体及びTATポリペプチドは、組換え細胞タンパク又はポリペプチドから精製することが望ましい。適切な精製手順の例である次の手順により精製される:すなわち、イオン交換カラムでの分画;エタノール沈殿;逆相HPLC;シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばDEAEによるクロマトグラフィー;クロマトフォーカシング;SDSPAGE;硫酸アンモニウム沈殿;例えばセファデックスG75を用いるゲル濾過IgGのような汚染物を除くプロテインAセファロースカラム;及び抗TAT抗体及びTATポリペプチドのエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。この分野で知られ、例えば、DeutscherMethodsinEnzymology182;ScopesProteinPurificationPrinciplesandPracticeSpringerVerlagNewYorkに記載された多くのタンパク質精製方法を用いることができる。選ばれる精製過程は、例えば、用いられる生成方法及び特に生成される特定の抗TAT抗体又はTATポリペプチドの性質に依存する。組換え技術を使用する場合、抗体は細胞内、細胞膜周辺腔内に生成されるか、又は培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内に生成される場合、第1工程として、粒状屑、宿主細胞又は溶菌断片を、例えば遠心分離又は超遠心分離にかけて取り除く。Carter等BioTechnology10163167は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順について記載している。簡単に述べると、細胞ペーストを酢酸ナトリウム、EDTA、及びフェニルメチルスルホニルフロリドの存在下で、30分以上かけて解凍する。細胞屑は遠心分離により除去することができる。抗体が培地へ分泌されている場合、そのような発現系からの上清は、一般的には、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばAmicon又はMilliporePelliconの限外濾過ユニットを用いて最初に濃縮する。PMSFなどのプロテアーゼ阻害剤を上記の任意の工程に含めてタンパク質分解を阻害してもよく、抗生物質を含めて外来性の汚染物の成長を防止してもよい。細胞から調製した抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製でき、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。アフィニティリガンドとしてのプロテインAの適合性は抗体に存在する免疫グロブリンFc領域の種及びアイソタイプに依存する。プロテインAは、ヒトγ1、γ2、又はγ4重鎖に基づく抗体の精製に用いることができるLindmark等JImmunolMeth621131983。プロテインGは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ3に推奨されているGuss等EMBOJ5156715751986。アフィニティリガンドが結合されるマトリクスはアガロースであることが最も多いが、他の材料も使用可能である。孔制御ガラスやポリベンゼン等の機械的に安定なマトリクスは、アガロースで達成できるものより早い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がCH3ドメインを含む場合、BakerbondABX樹脂JTBakerPhillipsburgNJが精製に有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相HPLC、シリカ上のクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂ポリアスパラギン酸カラム上でのヘパリンHAROSEクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、SDSPAGE、及び硫酸アンモニウム沈殿などの他のタンパク質精製技術も、回収される抗体に応じて利用可能である。任意の予備精製工程に続いて、対象とする抗体と汚染物とを含む混合物に、約2.5-4.5のpHでの溶離バッファーを用いて、低pH疎水性相互作用クロマトグラフィーを施してもよく、好ましくは低い塩濃度例えば、約0-0.25M塩で実施される。J.製薬製剤本発明に係る抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド、TAT結合有機分子及び/又はTATポリペプチドの治療的製剤は、所望される程度の純度を持つ抗体、ポリペプチド、オリゴペプチド又は有機分子を凍結乾燥製剤又は水性溶液の形態で、最適な製薬上許容される担体、賦形剤又は安定化剤と混合することにより調製され保存されるRemingtonsPharmaceuticalSciences16th版OsolA編1980。許容される担体、賦形剤、又は安定化剤は、用いられる用量及び濃度で受容者に非毒性であり、酢酸、Tris、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液;アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤;防腐剤オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド;ヘキサメトニウムクロライド;ベンズアルコニウムクロライド、ベンズエトニウムクロライド;フェノール、ブチル又はベンジルアルコール;メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3ペンタノール;及びmクレゾールなど;低分子量約10残基未満ポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質;ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン等のアミノ酸;グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物;EDTA等のキレート剤;トレハロース及び塩化ナトリウムなどのトニシファイヤー;スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖;ポリソルベート等の界面活性剤;ナトリウムなどの塩形成対イオン;金属錯体例えば、Znタンパク質錯体;及び/又はトゥイーン登録商標、プルロニクス登録商標、又はポリエチレングリコールPEG等の非イオン性界面活性剤を含む。抗体は、好ましくは5-200mg/mlの間、好ましくは10-100mg/mlの間の濃度の抗体で構成される。ここでの製剤は、また、治療すべき特定の徴候の必要に応じて一以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものも含んでよい。例えば、抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子に加えて、1つの製剤に、例えば、TATポリペプチド上の異なるエピトープと結合する第二抗TAT抗体、又は特定の癌の成長に影響を与える成長因子のような何らかの他の標的に対する抗体を含めることは望ましい。あるいは、又はさらに、この組成物は、更に化学療法剤、細胞障害性剤、サイトカイン、増殖阻害性剤、抗ホルモン剤、及び/又は心臓保護剤を含んでもよい。このような分子は、意図する目的にとって有効な量の組み合わせで適切に存在する。また、活性成分は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリメタクリル酸メチルマイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系例えば、リポソーム、アルブミン小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル中、又はマイクロエマルション中に包括されていてもよい。これらの技術は、RemingtonsPharmaceuticalSciences16theditionOsolAEdに開示されている。徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは成形された物品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形状である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル例えば、ポリ又はポリ乳酸グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドの注射可能な小球などの分解性乳酸グリコール酸コポリマー、ポリ3ヒドロキシブチル酸が含まれる。インビボ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。K.抗TAT抗体、TAT結合オリゴペプチド又はTAT結合有機分子を用いる診断及び治療癌におけるTAT発現を定量するために、種々の診断アッセイが利用可能である。一実施態様では、TATポリペプチド過剰発現は、免疫組織化学IHCによって分析される。腫瘍生検からのパラフィン包埋組織切片をIHCアッセイへ供してもよいし、次のようなTATタンパク質染色強度基準と合致させてもよい:スコア0染色が観察されないか、又は膜染色が腫瘍細胞の10未満で観察される。スコア1わずかに/弱く認知できる程度の膜染色が腫瘍細胞の10を越えて検出される。細胞はそれらの膜の一部のみが染色される。スコア2弱いないしは中程度の完全な膜染色が腫瘍細胞の10を越えて観察される。スコア3中程度から強い完全な膜染色が腫瘍細胞の10を越えて観察される。TATポリペプチド発現に関して0又は1スコアの腫瘍は、TATが過剰発現していないことを特徴としうるものであるのに対し、2又は3スコアの腫瘍はTATが過剰発現していることを特徴としうる。別に、又は付加的に、FISHアッセイ、例えばINFORM登録商標又はPATHVISION登録商標を、ホルマリン固定、パラフィン包埋された腫瘍組織で実施して、腫瘍におけるTAT過剰発現の程度を測定してもよい。TAT過剰発現又は増幅は、インビボ診断アッセイを使用して評価することができ、例えば検出される分子に結合し、検出可能な標識が付けられた分子を投与し、標識の局在化について患者を外部スキャニングする。上に記載したように、本発明の抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子には、種々の非治療的用途がある。本発明の抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、TATポリペプチドを発現している癌の診断及び染色にとって有用である例えば、ラジオイメージングで。他の細胞の精製の工程として、混合細胞の集団からTAT発現細胞を死滅させて除去するために、この抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、また、例えば、ELISA又はウエスタンブロットにおいて、インビトロでTATポリペプチドの検出及び定量化のために、細胞からTATポリペプチドを精製又は免疫沈降するのに有用である。現在、癌の段階に応じて、癌の治療には、次の治療:外科手術による癌組織の除去、放射線治療、及び化学治療の一つ、又はそれらを組合せたものが含まれる。抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子による治療は、特に、化学治療における副作用や毒素に対する耐性がない老年の患者、及び放射線治療の有用性に限界がある転移性疾患において所望されている。本発明の腫瘍標的化抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、疾患の初期診断時及び再発中におけるTAT発現癌の緩和に有用である。治療用途に関しては、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、単独で、あるいは例えば、ホルモン、抗血管形成、又は放射標識された化合物と共に、又は外科手術、寒冷療法、及び/又は放射線治療と組み合わせてもよく、使用してもよい。抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子による治療は、従来的治療の前又は後のいすれかに連続させて、他の形態の従来的治療と共に実施することができる。化学療法剤、例えばタキソテレ、タキソール、エストラムスチン及びミトキサントロンは、癌、特に危険性の少ない患者の癌治療に使用される。癌を治療又は緩和するための本発明の方法において、上述した一又は複数の化学療法剤による治療と組合せて、癌患者に抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を投与することができる。特に、パリクタキセル及び改変誘導体との組合せ治療が考えられる。抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子は治療的有効量の化学療法剤と共に投与されるであろう。他の実施態様では、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子は化学療法剤、例えばパクリタキセルの活性及び効力を高めるための化学治療と組合せて投与される。医師用卓上参考書には、種々の癌治療に使用されるこれらの薬剤の用量が開示されている。治療的に有効な上述の化学療法剤の投薬計画及び用量は、治療される特定の癌、疾患の程度、及び当該技術分野の医師によく知られている他の因子に依存し、医師が決定することができる。特定の一実施態様では、細胞障害剤に結合した抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含有する毒素コンジュゲートを患者に投与する。好ましくは、TATタンパク質に結合した免疫コンジュゲートは細胞によりインターナリゼーションし、結果として、それが結合した癌細胞の殺傷性における免疫コンジュゲートの治療的効果が向上する。好ましい実施態様では、細胞障害剤は、癌細胞内の核酸を標的とするか、又はこれに干渉する。このような細胞障害剤の例は、上述されており、メイタンシノイド、カリケアマイシン、リボヌクレアーゼ及びDNAエンドヌクレアーゼを含む。抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子又はその免疫コンジュゲートは、公知の方法、例えばボーラス、もしくは一定時間にわたる連続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、くも膜下腔内、経口、局所的、又は吸入経路により、ヒトの患者に投与される。抗体、オリゴペプチド又は有機分子の静脈内又は皮下投与が好ましい。他の治療計画を抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子の投与と組合せてもよい。組合せ投与には、別々の製剤又は単一の医薬製剤を使用する同時投与、及び好ましくは両方活性剤が同時にその生物学的活性を働かせる時間があるいずれかの順での連続投与が含まれる。このような組合せ治療により、結果として相乗的治療効果が生じることが好ましい。また、特定の癌に関連した他の腫瘍抗原に対する抗体の投与と共に、抗TAT抗体又は抗体類、オリゴペプチド又は有機分子の投与を組合せることが望ましい。他の実施態様では、本発明の治療方法は、異なる化学療法剤の混合物の同時投与を含む、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子と一又は複数の化学療法剤又は増殖阻害性剤との組合せ投与を含む。化学療法剤には、リン酸エストラムスチン、プレドニムスチン、シスプラチン、5フルオロウラシル、メルファラン、シクロホスファミド、ヒドロキシ尿素及びヒドロキシ尿素タキサン類及び/又はアントラサイクリン抗生物質が含まれる。このような化学療法剤の調製及び投与スケジュールは製造者の注意書きに従い使用されるか、又は熟練した実務者により経験的に決定される。このような化学療法の調製及び投与スケジュールは、ChemotherapyService編MCPerryWilliamsWilkinsBaltimoreMDにも記載されている。抗体、オリゴペプチド有機分子は、抗ホルモン化合物;例えばタモキシフェン等の抗エストロゲン化合物;抗プロゲステロン、例えばオナプリストン;又は抗アンドロゲン、例えばフルタミドを、このような分子に対して既知の用量で組合せてもよい。治療される癌がアンドロゲン非依存性癌である場合、患者は予め抗アンドロゲン治療を受け、癌がアンドロゲン非依存性になった後、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を患者に投与してもよい。しばしば、心臓保護剤又は一又は複数のサイトカインを患者に同時投与することも有益なことである。上述した治療摂生に加えて、抗体、オリゴペプチド又は有機分子治療の前、同時又は治療後に、外科的に癌細胞を取り除くか、及び/又は放射線治療を施してもよい。上述した任意の同時投与される薬剤の適切な用量は現在使用されている量であり、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子と薬剤の組合せ作用に応じてより少なくしてもよい。疾患の予防又は治療のための投与量及び方式は、公知の基準に従い、医師により選択されるであろう。抗体、オリゴペプチド又は有機分子の適切な用量は、上記のような治療される疾患の種類、疾患の重症度及び過程、抗体、オリゴペプチド又は有機分子を予防目的で投与するのか治療目的で投与するのか、過去の治療、患者の臨床歴及び抗体、オリゴペプチド又は有機分子の応答性、手当てをする医師の裁量に依存するであろう。抗体、オリゴペプチド又は有機分子は一度に又は一連の処置にわたって患者に適切に投与される。好ましくは、抗体、オリゴペプチド又は有機分子は静脈注入又は皮下注射により投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一又は複数の別個の投与又は連続注入のいずれであれ、体重1kg当たり約1μgから50mgの抗体を患者への最初の投与量の候補とすることができる。投薬計画は、約4mg/kgの初期負荷量、続いて1週間に約2mg/kgの維持用量の抗TAT抗体を投与することからなってよい。しかしながら、他の投薬計画も有効であろう。上述した因子に応じて、典型的な一日の投与量は約1μg/kgから100mg/kgあるいはそれ以上の範囲である。数日間又はそれ以上の繰り返し投与の場合、状態によっては、疾患の徴候の望ましい抑制が生じるまで処置を維持する。この治療の進行状態は、医師又は他の当業者に公知の基準をベースにした通常の方法やアッセイで容易にモニターされる。抗体タンパク質の患者への投与の他に、本出願は遺伝子治療による抗体の投与を考察する。抗体をコードする核酸の投与は抗体を治療的有効量で投与するという表現に含まれる。例えば、遺伝子治療を用いた細胞内抗体の産生に関する、1996年3月14日に公開された国際公開第96/07321号を参照のこと。核酸場合によってはベクター内に含まれたものを患者の細胞に入れるために:インビボ及びエキソビボという2つの主要な方法がある。インビボ送達では、核酸は、通常は抗体が必要とされている部位に直接注入される。エキソビボ処理では、患者の細胞を取り出し、核酸をこれらの単離された細胞に導入し、修飾された細胞を患者に、直接、又は例えば患者に埋め込まれる多孔性膜にカプセル化して投与する米国特許第4892538号及び第5283187号参照。核酸を生細胞に導入するために利用可能な種々の技術がある。これらの技術は、核酸が培養された細胞にインビトロで移入されるか、又は対象とする宿主にインビボで移入されるかによって異なる。哺乳動物細胞にインビトロで核酸を移入するのに適した技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、DEAEデキストラン、リン酸カルシウム沈降法などの使用を含む。遺伝子のエキソビボ送達に通常用いられるベクターはレトロウイルスベクターである。現在好まれているインビボ核酸移入技術は、ウイルスベクター例えば、アデノウイルス、単純ヘルペスIウイルス、又はアデノ関連ウイルス、及び脂質ベースの系例えば、遺伝子の脂質媒介移入に有用な脂質は、DOTMA、DOPE、及びDCCholであるでの形質移入を含む。現在知られている遺伝子マーキング及び遺伝子治療プロトコールの概説については、Anderson等Science256808813を参照のこと。また、国際公開第93/25673号及びそこに引用された参考文献も参照。本発明の抗TAT抗体は、ここでの抗体の定義により包含される様々な形態であってよい。よって、抗体には、完全長又は無傷抗体、抗体断片、天然配列抗体又はアミノ酸変異体、ヒト化、キメラ又は融合抗体、免疫コンジュゲート、及びそれらの機能的断片が含まれる。融合抗体において、抗体配列は異種ポリペプチド配列に融合している。抗体はFc領域が修飾されて、所望のエフェクター機能を提供することができる。以下の段落に詳細に記載されるように、適切なFc領域と共に、細胞表面に結合したそのままの抗体は、例えば抗体依存性細胞障害を介して又は補体依存性細胞障害において補体を補充することにより、又は他のいくつかのメカニズムにより、細胞障害性を誘発し得る。また、副作用及び治療による合併症を最小にするようにエフェクター機能を除去又は低減することが望ましい場合には、所定の他のFc領域が使用される。一実施態様では、抗体は、本発明の抗体と同じエピトープとの結合に関して競合するか、又はこれに実質的に結合する。また、本発明の抗TAT抗体の生物学的特徴を有する抗体、特にインビボ腫瘍ターゲティング及び任意の細胞増殖阻害又は細胞障害特性を含むものが考察される。上述した抗体の産生方法をここで詳細に記載する。本抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、哺乳動物におけるTAT発現癌の治療又は一又は複数の癌の徴候の緩和に有用である。このような癌には、前立腺癌、尿道癌、肺癌、乳癌、結腸癌及び卵巣癌、特に前立腺癌腫、腎細胞癌腫、結腸直腸腺癌、肺腺癌、肺細胞の扁平癌腫、及び胸膜中皮腫が含まれる。癌には、上述した任意の転移性癌が含まれる。抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、哺乳動物においてTATポリペプチドを発現している癌細胞の少なくとも一部に結合可能である。好ましい実施態様では、抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、インビボ又はインビトロで細胞のTATポリペプチドに結合して、TAT発現腫瘍細胞を破壊又は死滅させるか、又はこのような腫瘍細胞の成長を阻害するのに効果的である。このような抗体には、裸の抗TAT抗体が含まれる。細胞傷害性又は細胞成長阻害特性を有するネイキッド抗体は、細胞障害剤と併用すると、より強く腫瘍細胞を破壊することが可能である。例えば細胞障害剤と抗体とを結合させ、以下に記載するような免疫コンジュゲートを形成させることによって、細胞障害特性を抗TAT抗体に付与することができる。この細胞障害剤又は増殖阻害性剤は、好ましくは小分子である。毒素、例えばカリケアマイシン又はメイタンシノイド、及びそれらの類似物又は誘導体が好ましい。本発明は、本発明の抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子と担体を含有する組成物を提供する。癌の治療のために、組成物はその治療の必要性に応じて患者に投与することができ、ここで組成物は免疫コンジュゲート又は裸の抗体として存在する一又は複数の抗TAT抗体を含有し得る。さらなる実施態様においては、組成物は、他の療法剤、例えば化学療法剤を含む増殖阻害性剤又は細胞障害剤とこれらの抗体、オリゴペプチド又は有機分子を組合せて含有することもできる。また本発明は、本発明の抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子と担体を含有する製剤も提供する。一実施態様では、製剤は製薬的に許容可能な担体を含有する治療用製剤である。本発明の他の態様は、抗TAT抗体をコードする単離された核酸分子である。H及びL鎖、特に高頻度可変領域残基をコードする核酸、天然配列抗体及び変異体をコードする鎖、該抗体の修飾体及びヒト化形態を含む。本発明は、抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を治療的有効量、哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるTATポリペプチド発現癌の治療又は癌の一又は複数の徴候を緩和するのに有用な方法を提供する。抗体、オリゴペプチド又は有機分子治療組成物は、医師の指示通りに、短い期間又は慢性的に、又は間欠的に投与することができる。また、TATポリペプチド発現細胞の成長を阻害し、該細胞を殺傷する方法も提供される。本発明は少なくとも一つの抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含有するキット又は製造品も提供する。抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含有するキットは、例えばTAT細胞殺傷アッセイ、細胞からのTATポリペプチドの精製又は免疫沈降における用途が見出されている。例えば、TATの単離及び精製のためには、キットはビーズに結合した抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含有することができる。インビトロにおけるTATの検出及び定量化、例えばELISA又はウエスタンブロットにおける抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含有するキットを提供することもできる。検出に有用なこのような抗体、オリゴペプチド又は有機分子は、蛍光又は放射標識などの標識が付されて提供され得る。L.製造品及びキット本発明の他の実施態様は、抗TAT発現癌の治療に有用な物質を含有する製造品である。この製造品は容器と容器に付与又は添付されるラベル又はパッケージ挿入物を含んでなる。好適な容器は、例えば、ビン、バイアル、シリンジ等を含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの多様な材料から形成されてよい。容器は、癌の状態の治療に有効な組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい。組成物中の少なくとも一つの活性剤は本発明の抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子である。ラベル又はパッケージ挿入物は、組成物が癌の治療のために使用されることを示す。ラベル又はパッケージ挿入物は、癌患者に抗体、オリゴペプチド又は有機分子組成物を投与する際の注意書きをさらに含む。製造品はさらに、製薬的に許容可能なバッファー、例えば注射用の静菌水、リン酸緩衝塩水、リンガー液及びデキストロース溶液を含む第2の容器を具備してもよい。さらに、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む商業的及び使用者の見地から望ましい他の材料を含んでもよい。種々の目的、例えばTAT発現細胞殺傷アッセイ、細胞からのTATポリペプチドの精製又は免疫沈降に有用なキットも提供される。TATポリペプチドの単離及び精製において、キットはビーズに結合した抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含むことが可能である。インビトロにおけるTATポリペプチドの検出及び定量化、例えばELISA又はウエスタンブロットのための抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含むキットを提供することもできる。製造品と同様、キットも容器と容器に付与又は添付されるラベル又は能書を含んでなる。容器には少なくとも1つの本発明の抗TAT抗体、オリゴペプチド又は有機分子を含有する組成物が収容されている。希釈液及びバッファー、コントロール抗体等を収容する付加的な容器を具備していてもよい。ラベル又は能書は、組成物についての記載、並びに意図するインビトロ又は診断での使用に関する注意書きを提供するものである。M.TATポリペプチド及びTATポリペプチドコード核酸の用途TATポリペプチドをコードする核酸配列又はそれらの相補鎖は、ハイブリダイゼーションプローブとしての使用を含む分子生物学の分野において、染色体及び遺伝子マッピングにおいて、及びアンチセンスRNA及びDNAプローブの生成において種々の用途を有している。また、TATコード化核酸は、ここに記載される組換え技術によるTATポリペプチドの調製に有用であり、これらTATポリペプチドは、例えば、ここで記載の抗TAT抗体の調製において用途を見出し得る。完全長天然配列TAT遺伝子又はその一部は、完全長TATcDNAの単離又はここに開示した天然TAT配列に対して所望の配列同一性を持つ更に他のcDNA例えば、TATの天然発生変異体又は他の種からのTATをコードするものの単離のために、cDNAライブラリ用のハイブリダイゼーションプローブとして使用できる。場合によっては、プローブの長さは約20~約50塩基である。このハイブリダイゼーションプローブは、少なくとも部分的に完全長天然ヌクレオチド配列の新規な領域から誘導してもよく、それらの領域は、過度の実験をすることなく、天然配列TATのプロモーター、エンハンサー成分及びイントロンを含むゲノム配列から判定され得る。例えば、スクリーニング法は、TAT遺伝子のコード化領域を周知のDNA配列を用いて単離して約40塩基の選択されたプローブを合成することを含む。ハイブリダイゼーションプローブは、32P又は35S等の放射性ヌクレオチド、又はアビディン/ビオチン結合系を介してプローブに結合したアルカリホスファターゼ等の酵素標識を含む種々の標識で標識され得る。本発明のTAT遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識されたプローブは、ヒトcDNA、ゲノムDNA又はmRNAのライブラリーをスクリーニングし、そのライブラリーの何れのメンバーにプローブがハイブッド形成するかを決定するのに使用できる。ハイブリダイゼーション技術を、以下の実施例において更に詳細に記載する。本出願に開示されている任意のEST配列は、ここに開示している方法を利用して、同じようにプローブとして用い得る。TATコード核酸の他の有用な断片には、標的TATmRNAセンス又はTATDNAアンチセンス配列と結合できる一本鎖核酸配列RNA又はDNAのいずれかを含むアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。本発明によると、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、TATDNAのコード化領域の断片を含む。そのような断片は、一般的には少なくとも約14ヌクレオチド、好ましくは約14から30ヌクレオチドを含む。与えられたタンパク質をコードするcDNA配列に基づいて、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを得る能力は、例えば、Stein及びCohenCancerRes4826591988及びvanderKrol等BioTechniques69581988に記載されている。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への結合は二重鎖の形成をもたらし、それは、二重鎖の分解の促進、転写又は翻訳の未熟終止を含む幾つかの方法の一つ、又は他の方法により、標的配列の転写又は翻訳を阻止する。そのような方法は、本発明に含まれている。よって、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、TATタンパク質の発現を阻止するのに用いられ、それらTATタンパク質は、哺乳動物での癌の誘導を担い得る。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖-ホスホジエステル骨格又は他の糖結合、国際公開91/06629に記載のもの等を有するオリゴヌクレオチドを更に含み、そのような糖結合は内因性ヌクレアーゼ耐性である。そのような耐性糖結合を持つオリゴヌクレオチドは、インビボで安定であるがつまり、酵素分解に耐えうるが、標的ヌクレオチド配列に結合できる配列特異性は保持している。アンチセンス結合の好適な遺伝子内部位には、遺伝子のオープンリーディングフレームORFの翻訳開始/開始コドン5AUG/5ATG又は終結/停止コドン5UAA、5UAG及び5UGA/5TAA、5TAG及び5TGAを含む領域が含まれる。これらの領域は翻訳開始又は終結コドンから何れかの方向つまり5又は3に約25から約50の近接ヌクレオチドを包含するmRNA又は遺伝子の一部を意味する。アンチセンス結合のための他の好適な領域には、イントロン;エキソン;イントロンエキソン接合部;翻訳開始コドンと翻訳終結コドンの間の領域であるオープンリーディングフレームORF又はコード領域;55トリホスフェート結合を介してmRNAの5-最末端残基に結合したN7メチル化グアノシン残基を含み、5キャップ構造自体と同様にキャップに隣接する最初の50ヌクレオチドを含むmRNAの5キャップ;翻訳開始コドンから5方向のmRNAの部分で、mRNA又は遺伝子上の対応するヌクレオチドの翻訳開始コドンと5キャップ部位の間のヌクレオチドを含む5の未翻訳領域5UTR;及び翻訳終結コドンから3方向のmRNAの部分で、mRNA又は遺伝子上の対応するヌクレオチドの3末端と翻訳停止コドンの間のヌクレオチドを含む、3未翻訳領域3UTRが含まれる。TATタンパク質の発現を阻害するのに有用な好適なアンチセンス化合物の特定の例には、修飾骨格又は非天然ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドが含まれる。修飾された骨格を有するオリゴヌクレオチドには骨格にリン原子を保持しているものと骨格にリン原子を有していないものが含まれる。この明細書の目的のために、また当該分野でしばしば引用されるように、そのヌクレオシド間骨格にリン原子を持たない修飾オリゴヌクレオチドはまたオリゴヌクレオシドであると考えることができる。好適な修飾オリゴヌクレオチド骨格には、例えばホスホロチオネート、キラルホスホロチオネート、ホスホロジチオネート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及び他のアルキルホスホネートで、3アルキレンホスホネート、5アルキレンホスホネート及びキラルホスホネートを含むもの、ホスフィネート、ホスホルアミデートで、3アミノホスホルアミデート及びアミノアルキルホスホルアミデートを含むもの、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスフェート及びボラノホスフェートで通常の35結合を持つもの、これらの25結合類似体、及び一又は複数のヌクレオチド間結合が3から3、5から5又は2から2結合である逆転された極性を持つものが含まれる。逆転した極性を持つ好適なオリゴヌクレオチドは単一の3から3結合を最も3側のヌクレオチド間結合、つまり、非塩基性でありうる単一の逆転ヌクレオシド残基核酸塩基がないか、又はその代わりにヒドロキシル基を有するを含む。様々な塩、混合された塩及び遊離の酸形態がまた含まれる。リン含有結合の調製を教唆する代表的な米国特許には、限定されるものではないが、米国特許3687808;4469863;4476301;5023243;5177196;5188897;5264423;5276019;5278302;5286717;5321131;5399676;5405939;5453496;5455233;5466677;5476925;5519126;5536821;5541306;5550111;5563253;5571799;5587361;5194599;5565555;5527899;5721218;5672697及び5625050が含まれ、その各々は出典明示によりここに取り込まれる。リン原子をそこに含まない好適な修飾オリゴヌクレオチド骨格は短鎖アルキル又はシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子及びアルキル又はシクロアルキルヌクレオシド間結合、又は一又は複数の短鎖ヘテロ原子又は複素環ヌクレオシド間結合によって形成される骨格を有する。これらには、モルホリノ結合ヌクレオシドの糖部分から部分的に形成されるを有するもの;シロキサン骨格;スルフィド、スルホキシド及びスルホン骨格;ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格;メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格;リボアセチル骨格;アルケン含有骨格;スルファメート骨格;メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格;スルホネート及びスルホンアミド骨格;アミド骨格;及び混合N、O、S及びCH2成分部分を有する他のものが含まれる。このようなオリゴヌクレオチドの調製を教唆する代表的な米国特許には、限定されるものではないが、米国特許5034506;5166315;5185444;5214134;5216141;5235033;5264562;5264564;5405938;5434257;5466677;5470967;5489677;5541307;5561225;5596086;5602240;5610289;5602240;5608046;5610289;5618704;5623070;5663312;5633360;5677437;5792608;5646269及び5677439が含まれ、その各々は出典明示によりここに取り込まれる。他の好適なアンチセンスオリゴヌクレオチドでは、糖とヌクレオシド間結合の双方、つまりヌクレオチド単位の骨格が新規な基と置換される。ベース単位は適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。一つのそのようなオリゴマー化合物である、優れたハイブリダイゼーション特性を持つことが示されているオリゴヌクレオチド擬態体はペプチド核酸PNAと呼ばれる。PNA化合物では、オリゴヌクレオチドの糖骨格はアミド含有骨格、特にアミノエチルグリシン骨格と置き換えられている。核酸塩基は保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子に直接又は間接に結合している。PNA化合物の調製を教唆する代表的な米国特許には、限定されるものではないが、米国特許5539082;5714331;及び5719262が含まれ、その各々は出典明示によりここに取り込まれる。PNA化合物の更なる教示はNielsen等Science199125414971500に見出すことができる。好適なアンチセンスオリゴヌクレオチドはホスホロチオネート骨格及び/又はヘテロ原子骨格、特にCH2NHOCH2、CH2NOCH2[メチレン又はMMI骨格として知られる]、CH2ONCH2、CH2NNCH2、及び上で参照した米国特許第5489677号に記載されたONCH2CH2[ここで天然ホスホジエステル骨格はOPOCH2と表される]及び上で参照された米国特許第5602240号のアミド骨格を含む。また好ましいものは上で参照した米国特許第5034506号のモルホリノ骨格構造を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドである。修飾オリゴヌクレオチドはまた一又は複数の置換糖部分を含みうる。好適なオリゴヌクレオチドは2位に次のものの一つを含む:OH;F;Oアルキル、Sアルキル、又はNアルキル;Oアルケニル、Sアルケニル又はNアルケニル;Oアルキニル、Sアルキニル又はNアルキニル;又はOアルキルOアルキルを含み、ここでアルキル、アルケニル及びアルキニルは置換又は非置換C1~C10アルキル又はC2~C10アルケニル及びアルキニルでありうる。特に好ましいものはOnOmCH3、OnOCH3、OnNH2、OnCH3、OnONH2、及びOnONnCH32であり、ここでn及びmは1から約10である。他の好適なアンチセンスオリゴヌクレオチドは2位に次のものの一つを含む:C1~C10低級アルキル、置換低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Oアルカリル又はOアラルキル、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、RNA切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的性質を改善する基、オリゴヌクレオチドの薬理的性質を改善する基、及び同様な性質を持つ他の置換基。好適な修飾は2メトキシエトキシ又は2MOEとしても知られている2OCH2CH2OCH3Martin等HelvChimActa199578486504、つまりアルコキシアルコキシ基を含む。更に好適な修飾は、以下の実施例に記載されているように2ジメチルアミノオキシエトキシ、つまり2DMAOEとしても知られているO2ON2基、及び2ジメチルアミノエトキシエトキシ2Oジメチルアミノエトキシエチル又は2DMAEOEとしても知られている、つまり2OCH2OCH2Nを含む。更に好適な修飾は、2ヒドロキシル基が糖環の3又は4炭素原子に結合され二環糖部分を形成する固定核酸を含む。結合は好ましくはnが1又は2である2酸素原子と4炭素原子を架橋するメチレンCH2n基である。LNAs及びその製造方法は国際公開98/39352及び国際公開99/14226に記載されている。他の好適な修飾は2メトキシ、2アミノプロポキシ、2アリル、2Oアリル及び2フルオロを含む。2修飾はアラビノ上位置又はリボ下位置においてでありうる。好適な2アラビノ修飾は2Fである。同様の修飾はまたオリゴヌクレオチドの他の位置、特に3末端ヌクレオチドの糖の3位又は2-5結合オリゴヌクレオチド及び5末端ヌクレオチドの5位になすことができる。オリゴヌクレオチドはまたペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分のような糖擬態体を有しうる。そのような修飾糖構造の調製を教唆する代表的な米国特許には、限定されるものではないが、米国特許4981957;5118800;5319080;5359044;5393878;5446137;5466786;5514785;5519134;5567811;5576427;5591722;5597909;5610300;5627053;5639873;5646265;5658873;5670633;5792747;及び5700920が含まれ、その各々は出典明示により全体がここに取り込まれる。オリゴヌクレオチドにはまた核酸塩基当該分野ではしばしば単に塩基と称されるの修飾又は置換が含まれうる。ここで使用される場合、未修飾の又は天然の核酸塩基にはプリン塩基アデニンA及びグアニンG及びピリミジン塩基チミンT、シトシンC及びウラシルUが含まれる。修飾核酸塩基には、他の合成及び天然核酸塩基、例えば5メチルシトシン5meC、5ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2アミノアデニン、6メチル及び他のアデニン及びグアニンのアルキル誘導体、2プロピル及び他のアデニン及びグアニンのアルキル誘導体、2チオウラシル、2チオチミン及び2チオシトシン、5ハロウラシル及びシトシン、5プロポニルC≡CCH3又はCH2C≡CHウラシル及びシトシン及び他のピリミジン塩基のアルキル誘導体、6アゾウラシル、シトシン及びチミン、5ウラシルプソイドウラシル、4チオウラシル、8ハロ、8アミノ、8チオール、8チオアルキル、8ヒドロキシル及び他の8置換アデニン類及びグアニン類、5ハロ、特に5ブロモ、5トリフルオロメチル及び他の5置換ウラシル類及びシトシン類、7メチルグアニン及び7メチルアデニン、2Fアデニン、2アミノアデニン、8アザグアニン及び8アザアデニン、7デアザグアニン及び7デアザアデニン及び3デアザグアニン及び3デアザアデニンが含まれる。更なる修飾核酸塩基には、三環系ピリミジン類、例えばフェノキサジンシチジンオン、フェノチアジンシチジンオン、Gクランプ、例えば置換フェノキサジンシチジン例えば9Hピリミド54b14ベンゾキサジン2オン、カルバゾールシチジン、ピリドインドールシチジンが含まれる。修飾核酸塩基にはまたプリン又はピリミジン塩基が他の複素環で置き換えられているもの、例えば7デアザアデニン、7デアザグアノシン、2アミノピリジン及び2ピリドンが含まれうる。更なる核酸塩基には米国特許第3687808号に開示されているもの、TheConciseEncyclopediaOfPolymerScienceAndEngineering858859頁KroschwitzJI編JohnWileySons1990に開示されているもの、及びEnglisch等AngewandteChemieInternationalEdition199130613に開示されているものが含まれる。これらの核酸塩基のある種のものは本発明のオリゴマー化合物の結合親和性を増大させるのに特に有用である。これらには、5置換ピリミジン、6アザピリミジン及びN2、N6及びO6置換プリンで、2アミノプロピルアデニン、5プロピニルウラシル及び5プロピニルシトシンを含むものが含まれる。5メチルシトシン置換は0.6-1.2°Cだけ核酸二重安定性を増大させることが知られておりSanghvi等AntisenseResearchandApplicationsCRCPressBocaRaton1993pp276278、より詳細には2Oメトキシエチル糖修飾と組み合わせた場合には、好適な塩基置換である。修飾核酸塩基の製造を教唆する代表的な米国特許には、限定されるものではないが、米国特許3687808;並びに米国特許4845205;5130302;5134066;5175273;5367066;5432272;5457187;5459255;5484908;5502177;5525711;5552540;5587469;5594121;5596091;5614617;5645985;5830653;5763588;6005096;5681941及び5750692が含まれ、その各々は出典明示によりここに取り込まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの他の修飾は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布又は細胞取り込みを亢進する一又は複数の部分又はコンジュゲートをオリゴヌクレオチドに化学的に結合させる。本発明の化合物は第1級又は第2級ヒドロキシル基のような官能基に共有結合したコンジュゲート基を含みうる。本発明のコンジュゲート基には、介入物インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴマーの薬理的性質を増強する基、及びオリゴマーの薬物動態学的性質を増強する基が含まれる。典型的なコンジュゲート基には、コレステロール、脂質、カチオン脂質、リン脂質、カチオン性リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸塩、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び染料が含まれる。この発明の文脈における薬理学的性質を増強する基には、オリゴマー取り込みを改善し、分解に対するオリゴマーの耐性を亢進し、及び/又はRNAとの配列特異的ハイブリダイゼーションを補強する基が含まれる。この発明の文脈における薬物動態学的性質を増強する基には、オリゴマー取り込み、分散、代謝又は排出を改善する基が含まれる。コンジュゲート部分には限定されるものではないが、脂質分子、例えばコレステロール部分Letsinger等ProcNatlAcadSciUSA19898665536556、コール酸Manoharan等BioorgMedChemLet1994410531063、チオエーテル、例えばヘキシルSトリチルチオールManoharan等AnnNYAcadSci1992660306309Manoharan等BioorgMedChemLet1993327652770、チオコレステロールOberhauser等NuclAcidsRes199220533538、脂肪族鎖、例えばドデカンジオール又はウンデシル残基SaisonBehmoaras等EMBOJ19911011111118Kabanov等FEBSLett1990259327330Svinarchuk等Biochimie1993754954、リン脂質、例えばジヘキサデシルracグリセロール又はトリエチルアンモニウム12ジOヘキサデシルracグリセロ3HホスホナートManoharan等TetrahedronLett19953636513654Shea等NuclAcidsRes19901837773783、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖Manoharan等NucleosidesNucleotides199514969973、又はアダマンタン酢酸Manoharan等、TetrahedronLett19953636513654、パルミチル部分Mishra等BiochimBiophysActa19951264229237、又はオクタデシルアミン又はヘキシルアミノカルボニルオキシコレステロール部分が含まれる。本発明のオリゴヌクレオチドはまた活性な薬物物質、例えばアスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン、235トリヨード安息香酸、フルフェナム酸、フォリン酸、ベンゾチアジド、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメチシン、バルビツレート、セファロスポリン、サルファ剤、抗糖尿病剤、抗菌剤又は抗生物質にコンジュゲートすることができる。オリゴヌクレオチド薬剤コンジュゲート及びその製造方法は米国特許出願第09/334130号1999年6月15日出願及び米国特許4828979;4948882;5218105;5525465;5541313;5545730;5552538;5578717;5580731;5580731;5591584;5109124;5118802;5138045;5414077;5486603;5512439;5578718;5608046;4587044;4605735;4667025;4762779;4789737;4824941;4835263;4876335;4904582;4958013;5082830;5112963;5241136;5082830;5112963;5214136;5245022;5254469;5258506;5262536;5272250;5292873;5317098;5371241;5391723;5416203;5451463;5510475;5512667;5514785;5565552;5567810;5574142;5585481;5587371;5595726;5597696;5599923;5599928及び5688941に記載され、その各々は出典明示によりここに取り込まれる。与えられた化合物の全ての位置を一様に修飾する必要はなく、実際、一を超える上述の修飾を単一化合物中に又はオリゴヌクレオチド内の単一ヌクレオシドにさえ導入することができる。本発明はまたキメラ化合物であるアンチセンス化合物を含む。本発明の文脈におけるキメラアンチセンス化合物又はキメラは、それぞれが少なくとも一のモノマー単位、つまりオリゴヌクレオチド化合物の場合にはヌクレオチドからなる2以上の化学的に区別される領域を含むアンチセンス化合物、特にオリゴヌクレオチドである。これらのオリゴヌクレオチドは典型的にはオリゴヌクレオチドにヌクレアーゼ分解に対する増大した耐性、増大した細胞性取り込み、及び/又は標的核酸に対する増大した結合親和性を付与するようにオリゴヌクレオチドが修飾されている少なくとも一の領域を含む。オリゴヌクレオチドの更なる領域はRNA:DNA又はRNA:RNAハイブロッドを切断可能な酵素の基質となりうる。例を挙げると、RNアーゼHはRNA:DNA二本鎖のRNA鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。故に、RNアーゼHの活性化はRNA標的の開裂を生じ、遺伝子発現のオリゴヌクレオチド阻害の効果を大きく向上させる。従って、同じ標的領域にハイブリダイズするホスホロチオネートデオキシオリゴヌクレオチドと比較して、キメラオリゴヌクレオチドが使用される場合、より短いオリゴヌクレオチドで同等の結果をしばしば得ることができる。本発明のキメラアンチセンス化合物は上述の二以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド及び/又はオリゴヌクレオチド擬態体の複合構造体として形成されてもよい。好適なキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ耐性を付与するために3末端に少なくとも一の2修飾糖好ましくは2O2OCH3とRNアーゼH活性を付与するために少なくとも4の隣接した2H糖を持つ領域を含む。このような化合物はまた当該分野においてハイブリッド又はギャプマーとも呼ばれている。好適なギャプマーは少なくとも4の隣接した2H糖を持つ少なくとも一の領域で分離した3末端と5末端2修飾糖好ましくは2O2OCH3の領域を持ち、好ましくはホスホロチオネート骨格結合を含む。このようなハイブリッド構造の調製を教示する代表的な米国特許には、限定されるものではないが、米国特許第5013830;5149797;5220007;5256775;5366878;5403711;5491133;5565350;5623065;5652355;5652356;及び5700922が含まれ、これらのそれぞれが出典明示によりここに取り込まれる。本発明において使用されるアンチセンス化合物は固相合成のよく知られた技術によって簡便かつ常套的に製造することができる。そのような合成のための装置は、例えばAppliedBiosystemsを含む幾つかのメーカーによって販売されている。当該分野で知られているそのような合成のための任意の他の手段を付加的に又は別に使用してもよい。オリゴヌクレオチド、例えばホスホロチオネート及びアルキル化誘導体を調製するために類似の技術を使用することはよく知られている。本発明の化合物は、また、取り込み、分散及び/又は吸収を補助するための他の分子、分子構造又は化合物混合物、例えばリポソーム、レセプター標的分子、経口、直腸、局所適用又は他の製剤と、混合、カプセル化、コンジュゲート又はその他、組み合わされてもよい。そのような取り込み、分散及び/又は吸収を補助する製剤の調製を教示する代表的な米国特許には、限定されるものではないが、米国特許第5108921;5354844;5416016;5459127;5521291;5543158;5547932;5583020;5591721;4426330;4534899;5013556;5108921;5213804;5227170;5264221;5356633;5395619;5416016;5417978;5462854;5469854;5512295;5527528;5534259;5543152;5556948;5580575;及び5595756が含まれ、これらのそれぞれが出典明示によりここに取り込まれる。センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドの他の例は、国際公開90/10048に記載されているもののような、有機部分、及びオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への親和性を向上させる他の部分、例えばポリに共有結合したオリゴヌクレオチドを含む。さらにまた、エリプチシン等の挿入剤及びアルキル化剤又は金属錯体をセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させ、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的ヌクレオチド配列への結合特異性を改変してもよい。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、CaPO4媒介DNAトランスフェクション、エレクトロポレーションを含む任意の遺伝子転換方法により、又はエプスタインバーウイルスなどの遺伝子転換ベクターを用いることにより、標的核酸配列を含む細胞に導入される。好ましい方法では、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、適切なレトロウイルスベクターに挿入される。標的核酸配列を含む細胞は、インビボ又はエキソビボで組換えレトロウイルスベクターに接触させる。好適なレトロウイルスベクターは、これらに限られないが、マウスレトロウイルスMMuLVから誘導されるもの、N2MMuLVから誘導されたレトロウイルス、又はDCT5A、DCT5B及びDCT5Cと命名されたダブルコピーベクター国際公開90/13641参照を含む。また、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、国際公開91/04753に記載されているように、リガンド結合分子との複合体の形成により標的ヌクレオチド配列を含む細胞に導入してもよい。適切なリガンド結合分子は、これらに限られないが、細胞表面レセプター、成長因子、他のサイトカイン、又は細胞表面レセプターに結合する他のリガンドを含む。好ましくは、リガンド結合分子の複合体形成は、リガンド結合分子がその対応する分子又はレセプターに結合する、あるいはセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその複合体の細胞への侵入を阻止する能力を実質的に阻害しない。あるいは、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、国際公開90/10448に記載されたように、オリゴヌクレオチド-脂質複合体の形成により標的核酸配列を含む細胞に導入してもよい。センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド-脂質複合体は、好ましくは内因性リパーゼにより細胞内で分解される。アンチセンス又はセンスRNA又はDNA分子は、通常は少なくとも約5ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、又は1000ヌクレオチド長であり、この文脈の約という用語は、参照ヌクレオチド配列長にその参照長の10を加えるか又は減じたものを意味する。また、プローブをPCR技術に用いて、密接に関連したTATコード化配列の同定のための配列のプールを作成することができる。また、TATをコードするヌクレオチド配列は、そのTATをコードする遺伝子のマッピングのため、及び遺伝子疾患を持つ個体の遺伝子分析のためのハイブリダイゼーションプローブの作成にも用いることができる。ここに提供されるヌクレオチド配列は、インサイツハイブリダイゼーション、既知の染色体マーカーに対する連鎖分析、及びライブラリーでのハイブリダイゼーションスクリーニング等の周知の技術を用いて、染色体及び染色体の特定領域にマッピングすることができる。TATのコード化配列が他のタンパク質に結合するタンパク質をコードする場合例えば、TATがレセプターである場合、TATは、結合相互作用に関わっている他のタンパク質又は分子を同定するためのアッセイに使用することができる。このような方法により、レセプター/リガンド結合性相互作用の阻害剤を同定することができる。また、このような結合性相互作用に含まれるタンパク質は、ペプチド又は小分子阻害剤又は結合性相互作用のアゴニストのスクリーニングに用いることができる。また、レセプターTATは関連するリガンドの単離に使用できる。スクリーニングアッセイは、天然TAT又はTATのレセプターの生物学的活性を模倣するリード化合物を見出すために設計してよい。このようなスクリーニングアッセイは、化学的ライブラリーの高スループットスクリーニングを施すことができるアッセイを含み、それらアッセイを特に小分子薬剤候補を同定することに適したものにする。考慮される小分子は、合成有機又は無機化合物を含む。アッセイは、この分野で良く特徴付けられているタンパク質タンパク質結合アッセイ、生物学的スクリーニングアッセイ、免疫検定及び細胞ベースのアッセイを含む種々の型式で実施される。また、TAT又はその修飾型をコードする核酸は、トランスジェニック動物又はノックアウト動物のいずれかを産生することに使用でき、これらは治療的に有用な試薬の開発やスクリーニングに有用である。トランスジェニック動物とは、出生前、例えば胚段階で、その動物又はその動物の祖先に導入された導入遺伝子を含む細胞を有する動物である。導入遺伝子とは、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノムに組み込まれたDNAである。一実施態様では、TATをコードするcDNAは、TATをコードするDNAを発現する細胞を含むトランスジェニック動物を作製するために使用するゲノム配列及び確立された技術に基づいて、TATをコードするゲノムDNAをクローン化するために使用することができる。トランスジェニック動物、特にマウス又はラット等を産生する方法は、当該分野において常套的になっており、例えば米国特許第4736866号や第4870009号に記述されている。典型的には、特定の細胞を組織特異的エンハンサーでのTAT導入遺伝子の導入の標的にする。胚段階で動物の生殖系列に導入されたTATをコードする導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物はTATをコードするDNAの増大した発現の影響を調べるために使用できる。このような動物は、例えばその過剰発現を伴う病理学的状態に対して保護をもたらすと思われる試薬のテスター動物として使用できる。本発明のこの態様においては、動物を試薬で治療し、導入遺伝子を有する未治療の動物に比べ病理学的状態の発症率が低ければ、病理学的状態に対する治療上の処置の可能性が示される。あるいは、TATの非ヒト相同体は、動物の胚性細胞に導入されたTATをコードする変更ゲノムDNAと、TATをコードする内在性遺伝子との間の相同的組換えによって、TATをコードする欠陥又は変更遺伝子を有するTATノックアウト動物を作成するために使用できる。例えば、TATをコードするcDNAは、確立された技術に従い、TATをコードするゲノムDNAのクローニングに使用できる。TATをコードするゲノムDNAの一部を欠失させたり、組み込みをモニターするために使用する選択性マーカーをコードする遺伝子等の他の遺伝子で置換することができる。典型的には、ベクターは無変化のフランキングDNAを数キロベース含む[例えば、相同組換えベクターについてはThomas及びCapecchiCell51503を参照のこと]。ベクターを胚幹細胞株に導入し、導入されたDNAが内在性DNAと相同的に組換えられた細胞を選択する[例えば、Li等Cell69915参照]。選択された細胞は次に動物の胚盤胞内に注入されて集合キメラを形成する[例えば、BradleyTeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsAPracticalApproachEJRobertson編pp113152参照のこと]。その後、キメラ胚を適切な偽妊娠の雌性乳母動物に移植し、期間をおいてノックアウト動物を作り出す。胚細胞に相同的に組換えられたDNAを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたDNAを含む動物を繁殖させることができる。ノックアウト動物は、TATポリペプチドの欠乏によるある種の病理的状態及びその病理的状態の進行に対する防御能力によって特徴付けられる。また、TATポリペプチドをコードする核酸は遺伝子治療にも使用できる。遺伝子治療用途においては、例えば欠陥遺伝子を置換するため、治療的に有効な遺伝子産物のインビボ合成を達成するために遺伝子が細胞内に導入される。遺伝子治療とは、1回の処理により継続的効果が達成される従来の遺伝子治療と、治療的に有効なDNA又はmRNAの1回又は繰り返し投与を含む遺伝子治療薬の投与の両方を含む。アンチセンスRNA及びDNAは、ある種の遺伝子のインビボ発現を阻止する治療薬として用いることができる。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドを、細胞膜による制限された取り込みに起因する低い細胞内濃度にもかかわらず、それが阻害剤として作用する細胞中に移入できることは既に示されているZamecnik等ProcNatlAcadSciUSA83414341461986。オリゴヌクレオチドは、それらの負に荷電したリン酸ジエステル基を非荷電基で置換することによって取り込みを促進するように修飾してもよい。生細胞に核酸を導入するための種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸が培養細胞にインビトロで、あるいは意図する宿主の細胞においてインビボで移入されるかに応じて変わる。核酸を哺乳動物細胞にインビトロで移入するのに適した技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、DEAEデキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などを含む。現在好ましいインビボ遺伝子移入技術は、ウイルス典型的にはレトロウイルスベクターでのトランスフェクション及びウイルス被覆タンパク質リポソーム媒介トランスフェクションであるDzau等TrendsinBiotechnology11205210。幾つかの状況では、核酸供給源を、細胞表面膜タンパク質又は標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンド等の標的細胞を標的化する薬剤とともに提供するのが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスを伴って細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の細胞型向性のキャプシドタンパク質又はその断片、サイクルにおいてインターナリゼーションを受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を向上させるタンパク質が、標的化及び/又は取り込みの促進のために用いられる。レセプター媒介エンドサイトーシス技術は、例えば、Wu等JBiolChem26244294432及びWagner等ProcNatlAcadSciUSA8734103414によって記述されている。遺伝子作成及び遺伝子治療のプロトコールの概説については、Anderson等Science256808813を参照のこと。ここに記載したTATポリペプチド又はその断片をコードする核酸分子は、染色体の同定に有用である。この点において、実際の配列データに基づく染色体マーキング試薬は殆ど利用可能ではないため、目下のところ新規な染色体マーカーの同定の必要である。本発明の各TAT核酸分子は染色体マーカーとして使用できる。また、本発明のTATポリペプチド及び核酸分子は組織タイピングの診断に使用でき、本発明のTATポリペプチドは、その他の組織と比較して1つの組織において、好ましくは同じ組織型の正常組織に比較して疾患性組織において特異的に発現する。TAT核酸分子には、PCR、ノーザン分析、サザン分析及びウェスタン分析のプローブ生成のための用途が見出されるであろう。この発明は、TATポリペプチドアゴニストを模倣、又はTATポリペプチドアンタゴニストの効果を防ぐものを同定するための化合物をスクリーニングする方法を含む。アンタゴニスト薬候補に関するスクリーニングアッセイは、ここで同定された遺伝子によってコードされたTATポリペプチドと結合又は複合化する、さもなければコードされているポリペプチドと他の細胞タンパク質の相互作用を妨害する化合物、例えば、細胞からのTATポリペプチドの発現を阻害するものを含む化合物を同定するように設計されている。そのようなスクリーニングアッセイには、化学的ライブラリの高スループットスクリーニングを施すことができるアッセイが含まれ、それらアッセイを特に小分子薬剤候補の同定に適したものにする。このアッセイは、タンパク質タンパク質結合アッセイ、生化学スクリーニングアッセイ、免疫アッセイ、そして細胞ベースアッセイを含む、当該分野で良く特徴付けられている種々の形式で行うことができる。アンタゴニストに関する全てのアッセイは、薬候補をここで同定された核酸によってコードされているTATポリペプチドと、これら両成分が相互作用するのに十分な条件下及び時間にわたって接触させることを必要とする点で共通である。結合アッセイにおいて、相互作用は結合であり、形成された複合体は単離されるか、又は反応混合物中で検出される。特別な実施態様では、ここに同定された遺伝子にコードされるTATポリペプチド又は薬候補が、共有又は非共有結合により固相、例えばマイクロタイタープレートに固定化される。非共有結合は、一般的に固体表面をTATポリペプチドの溶液で被覆し乾燥させることにより達成される。あるいは、固定化すべきTATポリペプチドに特異的な固定化抗体、例えばモノクローナル抗体を固体表面に固着させるために用いることができる。アッセイは、固定化成分、例えば固着成分を含む被覆表面に、検出可能な標識で標識されていてもよい非固定化成分を添加することにより実施される。反応が完了したとき、未反応成分を例えば洗浄により除去し、固体表面に固着した複合体を検出する。最初の非固定化成分が検出可能な標識を有している場合、表面に固定化された標識の検出は複合体形成が起こったことを示す。最初の非固定化成分が標識を持たない場合は、複合体形成は、例えば、固定化された複合体に特異的に結合する標識抗体の使用によって検出できる。候補化合物が相互作用するがここに同定した遺伝子によってコードされる特定のTATポリペプチドと結合しない場合、そのポリペプチドとの相互作用は、タンパク質-タンパク質相互作用を検出するために良く知られた方法によってアッセイすることができる。そのようなアッセイは、架橋、同時免疫沈降、及び勾配又はクロマトグラフィーのカラムを通す同時精製などの伝統的な手法を含む。さらに、タンパク質タンパク質相互作用は、Chevray及びNathansProcNatlAcadSciUSA8957895793に開示されているようにして、Fields及び共同研究者等[Fiels及びSongNature340245246Chien等ProcNatlAcadSciUSA8895789582]に記載された酵母菌ベースの遺伝子系を用いることにより監視することができる。酵母菌GAL4などの多くの転写活性化剤は、2つの物理的に別個のモジュラードメインからなり、一方はDNA結合ドメインとして作用し、他方は転写活性化ドメインとして機能する。以前の文献に記載された酵母菌発現系一般に2ハイブリッド系と呼ばれるは、この特性の長所を利用して、2つのハイブリッドタンパク質を用い、一方では標的タンパク質がGAL4のDNA結合ドメインに融合し、他方では、候補となる活性化タンパク質が活性化ドメインに融合している。GAL1lacZリポーター遺伝子のGAL4活性化プロモーターの制御下での発現は、タンパク質タンパク質相互作用を介したGAL4活性の再構成に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、βガラクトシダーゼに対する色素生産性物質で検出される。2ハイブリッド技術を用いた2つの特定なタンパク質間のタンパク質タンパク質相互作用を同定するための完全なキットMATCHMAKERは、Clontechから商業的に入手可能である。この系は、特定のタンパク質相互作用に含まれるタンパク質ドメインのマッピング、並びにこの相互作用にとって重要なアミノ酸残基の特定にも拡張することができる。ここで同定されたTATポリペプチドをコードする遺伝子と他の細胞内又は細胞外成分との相互作用を阻害する化合物は、次のように試験できる:通常は反応混合物は、遺伝子産物と細胞内又は細胞外成分を、それら2つの生成物が相互作用及び結合する条件下及び時間で調製される。候補化合物の結合阻害能力を試験するために、反応は試験化合物の不存在及び存在下で実施される。さらに、プラシーボを第3の反応混合物に添加してポジティブコントロールを提供してもよい。混合物中に存在する試験化合物と細胞内又は細胞外成分との結合複合体形成は上記のように監視される。試験化合物を含有する反応混合物ではなくコントロール反応における複合体の形成は、試験化合物が試験化合物とその反応パートナーとの相互作用を阻害することを示す。アンタゴニストを検定するために、TATポリペプチドを、特定の活性についてスクリーニングされる化合物とともに細胞に添加してもよく、TATポリペプチド存在下で対象とする活性を阻害する当該化合物の能力が、当該化合物がTATポリペプチドのアンタゴニストであることを示す。あるいは、アンタゴニストは、TATポリペプチド及び潜在的アンタゴニストを、膜結合TATポリペプチドレセプター又は組換えレセプターと、競合的阻害アッセイに適した条件下で結合させることにより検出してもよい。TATポリペプチドは、放射活性等で標識でき、レセプターに結合したTATポリペプチド分子の数を潜在的アンタゴニストの有効性を決定するのに使用できる。レセプターをコードする遺伝子は、当業者に知られた多くの方法、例えばリガンドパニング及びFACSソーティングにより同定できる。Coligan等CurrentProtocolsinImmun1Chapter5。好ましくは発現クローニングが用いられ、そこではポリアデニル化RNAがTATポリペプチドに反応性の細胞から調製され、このRNAから生成されたcDNAライブラリがプールに分配され、COS細胞又は他のTATポリペプチドに反応性でない細胞の形質移入に使用される。スライドガラスで成長させた形質移入細胞を、標識したTATポリペプチドへ曝露する。TATポリペプチドは、ヨウ素化又は部位特異的タンパク質キナーゼの認識部位の包含を含む種々の手段で標識できる。固定及びインキュベーションの後、スライドにオートラジオグラフ分析を施す。ポジティブプールを同定し、対話型サブプール化及び再スクリーニング法を用いてサブプールを調製して再形質移入し、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生成する。レセプター同定の代替的方法として、標識したTATポリペプチドをレセプター分子を発現する細胞膜又は抽出調製物に光親和性結合させることができる。架橋材料をPAGEで分離し、X線フィルムに曝す。レセプターを含む標識複合体を励起し、ペプチド断片に分離し、タンパク質マイクロシークエンシングを施してよい。マイクロシークエンシングから得たアミノ酸配列は、推定レセプターをコードする遺伝子を同定するcDNAライブラリをスクリーニングするディジェネレートオリゴヌクレオチドプローブの組の設計に用いられる。アンタゴニストの他の検定では、レセプターを発現する哺乳動物細胞又は膜調製物を、候補化合物の存在下で標識TATポリペプチドとともにインキュベートする。次いで、この相互作用を促進又は阻止する化合物の能力を測定する。潜在的なアンタゴニストのより特別な例は、免疫グロブリンとTATポリペプチドとの融合体に結合するオリゴヌクレオチド、特に、限られないが、ポリ及びモノクローナル抗体及び抗体断片、一本鎖抗体、抗イディオタイプ抗体、及びこれらの抗体又は断片のキメラ又はヒト化形態、並びにヒト抗体及び抗体断片を含む抗体を含んでいる。あるいは、潜在的アンタゴニストは、密接に関連したタンパク質、例えば、レセプターを認識するが効果を与えず、よってTATポリペプチドの作用を競合的に阻害するTATポリペプチドの変異形態であってもよい。他の潜在的なTATポリペプチドアンタゴニストは、アンチセンス技術を用いて調製されたアンチセンスRNA又はDNAコンストラクトであり、例えば、アンチセンスRNA又はDNA分子は、標的mRNAにハイブリダイゼーションしてタンパク質翻訳を妨害することによりmRNAの翻訳を直接阻止するように作用する。アンチセンス技術は、三重螺旋形成又はアンチセンスDNA又はRNAを通して遺伝子発現を制御するのに使用でき、それらの方法はともに、ポリヌクレオチドのDNA又はRNAへの結合に基づく。例えば、ここでの成熟TATポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の5コード化部分は、約10から40塩基対長のアンチセンスRNAオリゴヌクレオチドの設計に使用される。DNAオリゴヌクレオチドは、転写に含まれる遺伝子の領域に相補的であるように設計され三重螺旋-Lee等NuclAcidRes63073Cooney等Science241456Dervan等Science2511360参照、それによりTATポリペプチドの転写及び生成を防止する。アンチセンスRNAオリゴヌクレオチドはインビボでmRNAにハイブリダイゼーションしてmRNA分子のTATポリペプチドへの翻訳を阻止するアンチセンス-OkanoNeurochem56560OligodeoxynucleotidesasAntisenseInhibitorsofGeneExpression。また上記のオリゴヌクレオチドは、細胞に輸送され、アンチセンスRNA又はDNAをインビボで発現させて、TATポリペプチドの産生を阻害することもできる。アンチセンスDNAが用いられる場合、翻訳開始部位、例えば標的遺伝子ヌクレオチド配列の-10から10位置の間から誘導されるオリゴデオキシリボヌクレオチドが好ましい。潜在的アンタゴニストは、TATポリペプチドの活性部位、レセプター結合部位、又は成長因子又は他の関連結合部位に結合し、それによりTATポリペプチドの正常な生物学的活性を阻止する小分子を含む。小分子の例は、これらに限られないが、小型ペプチド又はペプチド様分子、好ましくは可溶性ペプチド、及び合成非ペプチド有機又は無機化合物を含む。リボザイムは、RNAの特異的切断を触媒できる酵素的RNA分子である。リボザイムは、相補的標的RNAへの配列特異的ハイブリダイゼーション、次いでヌクレオチド鎖切断的開裂により作用する。潜在的RNA標的内の特異的リボザイム切断部位は、既知の技術で同定できる。更なる詳細は、例えば、RossiCurrentBiology4469471及びPCT公報、国際公開97/335511997年9月18日公開を参照。転写阻害に用いられる三重螺旋形成における核酸分子は一本鎖でデオキシヌクレオチドからなる。これらのオリゴヌクレオチドの基本組成は、フーグスティン塩基対則を介する三重螺旋形成を促進するように設計され、それは一般に二重鎖の一方の鎖上のプリン又はピリミジンのかなり大きな伸張を必要とする。さらなる詳細は、例えば、上掲のPCT公報、国際公開97/33551を参照。これらの小分子は、上記で議論したスクリーニングアッセイの一又は複数の任意のものにより及び/又は当業者に良く知られた他の任意のスクリーニング技術により同定できる。単離されたTATポリペプチドコード化核酸は、ここに記載されているような当該分野で良く知られている技術を用いて、組み換え的にTATポリペプチドを生成するために、ここで用いることが可能である。次に、生成されたTATポリペプチドは、ここに記載されているような当該分野で良く知られている技術を用いて、抗TAT抗体を生成するために用いることが可能である。ここで同定されるTATポリペプチドに特異的に結合する抗体、並びに上記に開示したスクリーニングアッセイによって同定された他の分子は、種々の疾患の治療のために、製薬組成物の形態で投与することができる。TATポリペプチドが細胞内にあり、全抗体が阻害剤として用いられる場合、取り込める抗体が好ましい。しかし、リポフェクション又はリポソームも抗体、又は抗体断片を細胞に搬送するために使用できる。抗体断片が用いられる場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持したペプチド分子が設計できる。このようなペプチドは、化学的に合成でき、及び/又は組換えDNA技術によって生成できる。例えば、Marasco等ProcNatlAcadSciUSA9078897893参照。ここでの製剤は、治療すべき特定の徴候に必要な場合に1つ以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものも含んでよい。あるいは、又はそれに加えて、組成物は、細胞障害性薬、サイトカイン、化学療法剤、又は増殖阻害性剤のようなその機能を高める薬剤を含んでもよい。これらの分子は、適切には、意図する目的に有効な量の組み合わせで存在する。以下の実施例は例示するためにのみ提供されるものであって、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。本明細書で引用した全ての特許及び参考文献の全体を、出典明示によりここに取り込む。実施例に挙げた市販の試薬は、特に明記しない限りは、製造業者の指示に従って用いた。ATCC受託番号により以下の実施例及び明細書全体の中で特定されている細胞の供給源はアメリカンタイプカルチャーコレクション、マナッサス、バージニアである。実施例1:GeneExpress登録商標を用いた組織発現プロファイリング他のヒト腫瘍及び/又は正常ヒト組織に比べて対象となる特定のヒト腫瘍組織において発現が顕著に且つ検出可能に上方制御されるポリペプチド及びそれをコードする核酸を同定するために、遺伝子発現情報を含む専有データベースGeneExpress登録商標、GeneLogicInc.、米国メリーランド州ゲイサーズバーグを分析した。具体的に言うと、GeneExpress登録商標データベースの分析は、GeneLogicInc.米国メリーランド州ゲイサーズバーグから入手できるGeneExpress登録商標データベースで使用するソフトウエア、またはGeneExpress登録商標データベースで使用する、ジェネンテック社で作成され、開発された専有ソフトウエアを用いて行った。分析のポジティブヒットの評価は、例えば、正常基本組織及び/又は正常増殖性組織における組織特異性、腫瘍特異性及び発現レベルなどを含むいくつかの基準に基づく。このmRNAの発現分析を用いて、TAT419ポリペプチドをコードするmRNAが、ヒトメラノーマ癌組織において、対応する正常なヒト皮膚組織に比べて、顕著に、再現可能に、且つ検出可能に過剰発現することが決定された。実施例2:インサイツハイブリダイゼーションインサイツハイブリダイゼーションは、細胞又は組織調製物内での核酸配列の検出及び局在化のための強力で多用途の技術である。それは、例えば、遺伝子発現部位の同定、転写物の組織分布の分析、ウイルス感染の同定と局在化、特定のmRNA合成における変化の追跡及び染色体マッピングにおける補助に有用である。インサイツハイブリダイゼーションは、Lu及びGillettCellVision1169176のプロトコールの最適化バージョンに従って、PCR生成32P標識リボプローブを用いて実施した。簡単に述べると、ホルマリン固定、パラフィン包埋ヒト組織を切片化し、脱パラフィンし、プロテイナーゼK20g/mlで15分間37°Cで脱タンパクし、さらに上掲のLu及びGillettに記載されたようにインサイツハイブリダイゼーションした。UTP標識アンチセンスリボプローブをPCR産物から生成し、55°Cで終夜ハイブリダイゼーションした。スライドをKodakNTB2核トラックエマルションに浸漬して4週間露光した。32Pリボプローブ合成6.0μl125mCiの32PUTPAmershamBF1002,SA<2000Ci/mmolをスピード真空乾燥させた。乾燥32PUTPを含む各チューブに以下の成分を添加した:2.0μlの5×転写バッファー、1.0μlのDTT100mM、2.0μlのNTP混合物2.5mM各10μlの10mMGTP、CTP及びATP10μlのH2O、1.0μlのUTP50μM、1.0μlのRNasin、1.0μlのDNAテンプレート1μg、1.0μlのH2O、1.0μlのRNAポメラーゼPCR産物についてT3=AS、T7=S、通常。チューブを37°Cで1時間インキュベートした。1.0μlのRQ1DNaseを添加し、ついで37°Cで15分間インキュベートした。90μlのTE10mMトリスpH7.6/1mMのEDTApH8.0を添加し、混合物をDE81紙にピペットした。残りの溶液をMicrocon-50限外濾過ユニットに充填し、プログラム10を用いてスピンさせた6分間。濾過ユニットを第2のチューブに変換し、プログラム2を用いて遠心した3分間。最終回収遠心の後、100μlのTEを添加した。1μlの最終生成物をDE81紙にピペットし6mlのBIOFLUORIIで計数した。プローブをTBE/尿素ゲル上で実行した。1-3μlのプローブ又は5μlのRNAMrkIIIを3μlのローディングバッファーに添加した。95°Cの加熱ブロック上で3分間加熱した後、プローブを即座に氷上に置いた。ゲルのウェルを流し、試料を充填し、180-250ボルトで45分間実行した。ゲルをサランラップでラップし、-70°Cの冷凍機内で補強スクリーンを持つXARフィルムに1時間から終夜露光させた。32PハイブリダイゼーションA.凍結切片の前処理スライドを冷凍機から取り出し、アルミニウムトレイに配置して室温で5分間解凍した。トレイを55°Cのインキュベータに5分間配置して凝縮を減らした。スライドを蒸気フード内において4パラホルムアルデヒド中で10分間固定し、0.5×SSCで5分間室温で洗浄した25ml20×SSC975mlSQH2O。0.5μg/mlのプロテイナーゼK中で、37°Cで10分間の脱タンパクの後250mlの予備加熱RNase無しRNaseバッファー中に10mg/mlストック12.5μl、切片を0.5×SSCで10分間室温で洗浄した。切片を、70、95、100エタノール中、各2分間脱水した。B.パラフィン包埋切片の前処理スライドを脱パラフィンし、SQH2O中に配置し、各々2xSSCに室温で5分間、2回洗い流した。切片を20μg/mlのプロテイナーゼK250mlのRNase無しRNaseバッファー中に10mg/mlを500μl;37°C、15分間-ヒト胚、又は8×プロテイナーゼK250mlのRNaseバッファー中に100μl、37°C、30分間-ホルマリン組織で脱タンパクした。続く0.5×SSCでの洗い流し及び脱水は上記のように実施した。C.プレハイブリダイゼーションスライドをBoxバッファー4×SSC、50ホルムアミド-飽和濾紙を列にしたプラスチックボックスに並べた。D.ハイブリダイゼーションスライド当たり1.0×106cpmのプローブ及び1.0μlのtRNA50mg/mlストックを95°Cで3分間加熱した。スライドを氷上で冷却し、スライド当たり48μlのハイブリダイゼーションバッファーを添加した。ボルテックスの後、50μlの32P混合物をスライド上のプレハイブリダイゼーション50μlに添加した。スライドを55°Cで終夜インキュベートした。E.洗浄洗浄は、2×10分間、2×SSC、EDTAで室温で実施し400mlの20×SSC16mlの0.25MEDTA、Vf=4L、次いでRNaseA処理を37°Cで30分間行った250mlRNaseバッファー中に10mg/mlを500μl=20μg/ml。スライドを2×10分間、2×SSC、EDTAで室温において洗浄した。ストリンジェントな洗浄条件は次の通りである:55°Cで2時間、0.1×SSC、EDTA20mlの20×SSC16mlのEDTA、Vf=4L。F.オリゴヌクレオチドここに開示した様々なDNA配列についてインサイツ分析を実施した。これらの分析に用いたオリゴヌクレオチドは添付図に示した核酸又はその相補鎖に相補的であるように得られた。G.結果TAT419に関して、試験した主な正常組織において弱い発現が観察されるか、又は観察可能な発現が見られなかった。これに対して、試験した主なヒトメラノーマ細胞および組織において、強いか又は量的に再現性のあるTAT419発現が観察された。実施例3:癌性腫瘍におけるTATポリペプチドの発現上方制御を検出するためのマイクロアレイ分析多くの場合何千もの遺伝子配列を含む核酸マイクロアレイは、正常な相対物と比較して疾患組織に異なって発現する遺伝子の同定に有用である。核酸マイクロアレイを使用することによって、試験及びコントロール組織試料由来の試験及びコントロールmRNA試料を、cDNAプローブ生成のために逆転写し、標識する。次いでcDNAプローブを、固体支持体に固定化された核酸のアレイにハイブリダイズさせる。アレイの各部位の配列と位置がわかるようにアレイを構築する。例えば、特定の疾患状態において発現されることが知られている選択された遺伝子を、固体支持体にアレイすることができる。標識されたプローブと特定のアレイ部位とのハイブリッド形成は、そのプローブが由来する試料がその遺伝子を発現することを示す。試験疾患組織試料由来のプローブのハイブリッド形成シグナルが、コントロール正常組織試料由来のハイブリッド形成シグナルよりも大きい場合に、疾患組織に過剰発現する遺伝子又は複数の遺伝子が同定される。この結果の意味するところは、疾患組織に過剰発現するタンパク質が疾患状態の存在の診断マーカーとしてのみでなく、疾患状態の治療の治療標的としても有用だということである。核酸ハイブリッド形成の方法論及びマイクロアレイ技術は当分野でよく知られている。本発明の例における、ハイブリッド形成及びプローブのための核酸の特異的調整、スライド、及びハイブリッド形成条件はすべて、2001年3月30日出願のPCT/US01/10482に詳述されており、出典明記によりこの明細書に援用する。本実施例では、異なる種類の組織由来の癌性腫瘍及び/又は非癌性ヒト組織に関連する遺伝子発現の上方制御について、様々なヒト組織から採取した癌性腫瘍を研究することにより、特定の癌性腫瘍に過剰発現するポリペプチドの同定を試みた。一部の実験では、多くの場合同一患者由来の同じ種類の組織の癌性ヒト腫瘍組織及び非癌性ヒト腫瘍組織を採取し、TATポリペプチドの発現について分析した。加えて、様々な異なるヒト腫瘍の任意のものから癌性ヒト腫瘍組織を採取し、肝臓、腎臓及び肺を含む上皮起源の非癌性ヒト組織をプールすることにより調製した汎用性上皮コントロール試料と比較した。プールした上皮組織から単離したmRNAは、種々の異なる上皮組織由来の発現遺伝子産物の混合物を示し、よって上皮由来の腫瘍における遺伝子発現レベルを定量的に比較するための良好なネガティブコントロールとした。プールしたコントロール試料を用いたマイクロアレイハイブリッド形成実験は、2色分析に線形プロットを生成した。次いで、2色分析において生成された線の勾配を使用して、各実験の試験:コントロール検出比を標準化した。次いで様々な実験から導いた標準化比を比較して、遺伝子発現のクラスタリングに使用した。従って、プールした汎用性コントロール試料は、単純に2つの試料を比較することによる相対的な遺伝子発現の決定を効果的に行うことを可能にするだけでなく、複数の実験にわたる多試料の比較を可能にする。本実験では、本明細書に開示するTATポリペプチド-コード化核酸配列由来の核酸プローブをマイクロアレイの形成に使用し、様々な腫瘍組織由来のRNAをそれに対するハイブリッド形成に使用した。実験比に対する正規化した比に基づく値をカットオフ比と呼ぶ。このカットオフ比を超える値だけを有意な値とした。比の有意性は、各実験に関連するノイズ又はばらつきの量に基づいて推定されたが、対応する正常な組織及び/又はプールされた正常な上皮の汎用コントロールと比べ、腫瘍試料に相対的に過剰発現した候補遺伝子の同定には、一般に1.8~2倍以上のカットオフ比を用いた。腫瘍試料の方に過剰発現したとして、このようにして同定される遺伝子の比は、2~40倍以上であった。比較として行なわれた、同じRNAがそれぞれの色に標識され、それ自体に対してハイブリダイズされているコントロール実験では、バックグラウンド以上のシグナルを有するほぼ全ての遺伝子について観察された比は1.8倍より有意に小さかった。これにより、1.8倍の比を超える実験上のノイズは極端に低いこと、及び1.8倍という比の変化又はこれより大きな比が観察される場合、分析及び比較される試料間において、実際に、検出可能且つ再現可能な発現の差異があると予想されることが示唆される。これらの実験のデータは、TAT419ポリペプチドは、正常な対応するヒト組織ないし細胞及び/又はプールした正常上皮コントロール組織と比較して、ヒトメラノーマ腫瘍組織及び由来する細胞株において、有意に、検出可能且つ再現可能に過剰発現されることを示した。上記のように、これらデータは、本発明のTAT419ポリペプチドは、ヒトの一又は複数の癌性腫瘍の存在についての診断用マーカーとして有用なだけでなく、TAT419ポリペプチドを過剰発現するそれら癌性腫瘍の治療のための治療標的として役立つことを示す。実施例4:TAT419ポリペプチドに結合する抗体の調製この実施例は、TAT419を特異的に結合できるモノクローナル抗体の調製を例示する。モノクローナル抗体の生産のための技術は、この分野で知られており、例えば、上掲のGodingに記載されている。使用することができる免疫原には、精製TAT、TATを含む融合タンパク質、及び細胞表面上に組換えTATを発現する細胞が含まれる。免疫原の選択は、当業者が過度の実験を行うことなくなすことができる。Balb/c等のマウスを、完全フロイントアジュバントに乳化して皮下又は腹腔内に1-100マイクログラムで注入したTAT免疫原で免疫化する。あるいは、免疫原をMPL-TDMアジュバントRibiImmunochemicalResearh,Hamilton,MTに乳化し、動物の後足蹠に注入してもよい。免疫化したマウスは、次いで10から12日後に、選択したアジュバント中に乳化した付加的免疫源で追加免疫する。その後、数週間、マウスをさらなる免疫化注射で追加免疫する。抗TAT抗体の検出のためのELISAアッセイで試験するために、レトロオービタル出血からの血清試料をマウスから周期的に採取してもよい。適当な抗体力価が検出された後、抗体にポジティブ陽性な動物に、TATの静脈内注射の最後の注入をすることができる。3から4日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を取り出した。次いで脾臓細胞を35ポリエチレングリコールを用いて、ATCCから番号CRL1597で入手可能なP3X63AgU.1等の選択されたマウス骨髄腫株化細胞に融合させた。融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、次いで、HATヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン培地を含む96ウェル組織培養プレートに蒔き、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、及び脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害した。ハイブリドーマ細胞は、TATに対する反応性についてのELISAでスクリーニングされる。TATに対する所望のモノクローナル抗体を分泌するポジティブ陽性ハイブリドーマ細胞の決定は、技術常識の範囲内である。陽性ハイブリドーマ細胞を同系のBalb/cマウスに腹腔内注入し、抗TATモノクローナル抗体を含む腹水を生成させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコ又はローラーボトルで生育させることもできる。腹水中に生成されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈降、それに続くゲル排除クロマトグラフィ-を用いて行うことができる。あるいは、抗体のプロテインA又はプロテインGへの親和性に基づくアフィニティクロマトグラフィーを用いることもできる。上記の技術を使用して、それぞれがTAT419ポリペプチドに結合するモノクローナル抗体を産生する別々の異なるハイブリドーマ細胞株を生成した。これらのハイブリドーマ株によって生産されるモノクローナル抗体は、周知かつ慣例的に用いられる技術、例えばウエスタンブロット、ELISA分析、TAT419ポリペプチドを発現している細胞のFACS分類分析細胞表面上にTAT419ポリペプチドを発現するように形質移入された細胞、及びTAT419ポリペプチドを発現する特定のヒトメラノーマ腫瘍細胞株の両方及び/又は免疫組織化学分析を用いて、TAT419ポリペプチドに結合することが示されている点において機能的である。実施例5:抗TAT419ネズミ科モノクローナル抗体5E9の軽鎖及び重鎖及び可変軽鎖及び可変重鎖の分子クローニング上記のように生成した抗TAT419ネズミ科モノクローナル抗体の一つをここでは5E9と称する。この実施例は、ネズミ科抗TAT419モノクローナル抗体5E9の可変領域をコードするcDNA分子の調製を示す。フォワードPCRプライマーは、ネズミ科モノクローナル抗体5E9のVL及びVH領域のヌクレオチド配列の始まりをコードするmRNAに対して特異的となるように設定した。フォワードプライマーは、最初の8~9のN末端アミノ酸に起こりうるコドンの多くがPCRプライマーにハイブリダイズするように設定した。抗TAT419ネズミ科モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマ細胞は、上記のオリゴヌクレオチドプライマーと共に抗体mRNAの供給源として用いた。ChomczynskiandSachhi1987AnalBiochem162156に記載される手順を用いて、全RNAを1×108細胞から単離した。可変軽鎖VL及び可変重鎖VHドメインは、上記の変性N末端プライマーと、種間で保存性の高い定常軽鎖CL及び定常重鎖ドメイン1CH1内の領域にアニールするように設定したリバースプライマーとを用いたPT-PCRにて増幅した。フォワードプライマーはVLおよびVH領域のN末端アミノ酸配列に特異的であった。それぞれ、LCおよびHCリバースプライマーは、消化して、種間で保存性の高い定常軽鎖CLおよび定常重鎖ドメイン1CH1内の領域にアニールさせた。挿入物のポリヌクレオチド配列は慣例的な配列決定法を用いて決定した。ネズミ科5E9モノクローナル抗体の完全長軽鎖配列番号:3及び完全長重鎖配列番号:4の配列をそれぞれ図3及び4に示す。ネズミ科5E9モノクローナル抗体のVL配列番号:5及びVH配列番号:6の配列をそれぞれ図3及び4に示す。これらアミノ酸配列の更なる特徴は、ネズミ科抗TAT4195E9モノクローナル抗体の様々なCDR領域について以下のアミノ酸配列を示した。CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2、及びCDRH3。次いで、抗体軽鎖及び重鎖の増幅したVL及びVHのcDNAをpRK哺乳動物細胞発現ベクターにクローニングした。。増幅した可変軽鎖VLcDNAは、EcoRV及びKpnIの部位を用いてヒトκ定常ドメインを含むpRK哺乳動物細胞発現ベクターにクローニングした。増幅した可変重鎖VHcDNAは、BsiWI及びApaIの部位を用いて、完全長ヒトIgG1定常ドメインをコードするpRK哺乳動物細胞発現ベクターに挿入した。実施例6:免疫組織化学分析TAT419に対する抗体を上述のように調製し、以下のように免疫組織化学分析に用いた。まず組織切片をアセトン/エタノール凍結又はパラフィン包埋中で5分間固定した。次いで切片をPBSで洗浄し、その後アビジン及びビオチンVectorKitでそれぞれ10分間遮断した後、PBSで洗浄した。次いで切片を10の血清で20分間遮断し、その後ブロッティングにより過剰量を取り除いた。その後切片に10μg/mlの濃度で1時間にわたり一次抗体を添加し、その後PBSで洗浄した。次いでビオチン標識した二次抗体抗一次抗体を切片に添加して30分置き、その後切片をPBSで洗浄した。次に切片をVectorABCキットの試薬に30分間曝し、その後PBSで洗浄した。さらに切片をジアミノベンジジンPierceに5分間曝し、その後PBSで洗浄した。次いでMayersのヘマトキシリンを用いて切片を対比染色し、カバーガラスで覆って可視化した。また、Sambrook等、MolecularCloninngALaboratoryManualNewYorkColdSpringHarborPress1989及びAusubel等、CurrentProtocolsofMolecularBiologyUnit316JohnWiley及びSonsに記載のようにして、免疫組織化学分析を行うこともできる。これらの分析の結果、この分析に用いたモノクローナル抗体は、試験したすべての個々の原発性ヒトメラノーマ癌試料のおよそ90に観察可能なTAT419発現が見られた。このうち、およそ65は中程度2から高い3TAT419ポリペプチド発現を示した。実施例7:ネズミ科モノクローナル抗体のヒト化この実施例はネズミ科抗体5E9をTAT419に対してヒト化する方法の適用性を示す。TAT419の細胞外ドメインが大腸菌非グリコシル化で及びCHOでグリコシル化イムノアドヘシンFc融合として発現され、定法で精製された。抗体5E9を発現するネズミ科ハイブリドーマは、大腸菌由来の組換えTAT419細胞外ドメインでマウスを免疫して得られ、ELISAによりTAT419コートプレートへの結合能により同定した。ネズミ科5E9可変ドメインのクローニング全RNAを標準的な方法を用いて5E9を産生するハイブリドーマ細胞から抽出した。可変軽鎖及び可変重鎖ドメインは、重鎖及び軽鎖に対する変性プライマーを用いたRTPCRにより増幅した。フォワードプライマーはVLおよびVH領域のN末端アミノ酸配列に特異的であった。それぞれ、LCおよびHCリバースプライマーは、消化して、種間で保存性の高い定常軽鎖CLおよび定常重鎖ドメイン1CH1内の領域にアニールさせた。挿入物のポリヌクレオチド配列は慣例的な配列決定法を用いて決定した。アクセプターヒトコンセンサスフレームワークへの直接高頻度可変領域移植この作業に用いたファジミドは一価性Fab-g3ディスプレイベクターであって、単一phoAプロモーターの制御下の2つのオープンリーディングフレームからなる。第一オープンリーディングフレームは、stIIシグナル配列とそれに融合したアクセプター軽鎖のVL及びCH1ドメインからなり、第二オープンリーディングフレームは、stIIシグナル配列とそれに融合したアクセプター重鎖のVH及びCH1ドメインと、それに続くマイナーファージコートタンパク質P3からなる。ネズミ科5E9のVL及びVHドメインを、ヒトVLκIhuKI及び、ヒトVHサブグループIIIhuIIIのコンセンサス配列と配列比較した。CDR移植片を作製するために、5E9の高頻度可変領域を、huKI及びhuIIIコンセンサスアクセプターフレームワークに移植し、5E9-移植片、直接的CDR移植片を生成した。VLドメインでは、以下の領域:24-34L1、50-56L2および89-97L3を、ヒトコンセンサスアクセプターに移植した。VHドメインでは、26-35H1、49-65H2及び93-102H3を移植した。MacCallumetalは抗体及び抗原の複合体結晶構造を解析し、重鎖の位置49及び93がコンタクト領域の一部であることを見いだしたので、抗体をヒト化する場合に、これらの位置をCDR-H2及びCDR-H3の定義に含めることは合理的であるようだ。5E9移植片は、各高頻度可変領域について別個のオリゴヌクレオチドを用いて、LC及びHC発現ベクターのキュンケル突然変異誘発によってIgGとして生成した。親和性又は安定性を増加させるアミノ酸の改変もまたキュンケル突然変異誘発を用いて行なった。正しいクローンはDNA配列決定法によって識別した。高頻度可変領域のランダム化ネズミ科の高頻度可変領域配列に対するバイアスを維持するソフトランダム化法を用いて、5E9移植片の各々の高頻度可変領域に、配列多様性を別々に導入した。これは、GallopetalJMedChem3712331251に最初に記載されたポイズンオリゴヌクレオチド合成方策を用いて達成された。変異させる高頻度可変領域内の所定の位置について、野生型のアミノ酸をコードするコドンを、各々の位置について平均50の変異率となるように70-10-10-10のヌクレオチド混合物でポイズン化した。ソフトランダム化オリゴヌクレオチドは、ネズミ科高頻度可変領域配列にならって作製され、直接高頻度可変領域移植によって定められる同じ領域を包含した。VHドメインのH2の初めのアミノ酸位は、コドンRGCを用いてA、G、S又はTに配列多様性を限定した。野生型CDR移植配列の再選択を避けるために、停止コドンTAAをキュンケル突然変異誘発によって5E9移植片の各CDRの中央に導入し、異なるCDR内に停止コドンが導入された6つの異なる鋳型を得た。ランダム化されたオリゴヌクレオチドを用いて、多様性を導入すると同時に対応する鋳型内の停止コドンを修復した。ファージライブラリの生成上述の各々の高頻度可変領域に多様性を導入するように設定したランダム化オリゴヌクレオチドプールを、660ngオリゴヌクレオチド、50mMトリスpH7.5、10mMMgCl2、1mMATP、20mMDTT及び、5Uポリヌクレオチドキナーゼを含む20μlの反応溶液中で、37°Cで1時間かけて別々にリン酸化した。単一のCDR内に多様性を導入するための各リン酸化オリゴヌクレオチドプールを、対応する停止コドンを含有する20μgのキュンケル鋳型と混合した。反応は、鋳型に対するオリゴヌクレオチドの比が3となるように、終容量500μlの50mMトリスpH7.5、10mMMgCl2中で行った。混合物は、90°Cで4分間、50°Cで5分間アニーリングし、その後氷上で冷ました。次いで、アニールした鋳型250μlを、1μlの100mMATP、10μlの25mMdNTP、15μlの100mMDTT、25μlの10×TMバッファ、2400UのT4リガーゼ、及び30UのT7ポリメラーゼを添加して充填し、室温に3時間置いた。Sidhu等MethodsinEnzymology328333363に記載されるように、充填された生成物を精製し、SS320細胞に電気穿孔して、M13/KO7ヘルパーファージ存在下にて増殖させた。ライブラリサイズは、1~2×109の別々のクローンとした。開始ライブラリからのランダムなクローンを配列決定し、ライブラリの質を評価した。ファージ選別ファージ選別のために、CHO由来TAT419細胞外ドメイン2μg/mlをPBSにてMaxiSorpマイクロタイタープレート上に4°Cで終夜をかけて固定した。プレートはカゼインブロッカーを用いて少なくとも1時間ブロックした。ファージを培養液上清から回収し、0.5BSA及び0.05Tween20を含有するPBSに懸濁した。ファージ選別後、マイクロタイターウェルは、0.05Tween20を含有するPBSにて広範に洗浄し、結合したファージを、ウェルを100mMHClにて30分間インキュベートすることによって溶出した。ファージは、1MトリスpH8にて中和して、XL1ブルー細胞及びM13/KO7ヘルパーファージを用いて増幅させ、2YT、50μg/mlカルバネシリン中で37°Cで終夜生育させた。標的含有ウェルから溶出したファージの力価を、非標的含有ウェルから回収したファージの力価と比較して、濃縮を評価した。Fab及びIgG産生親和性測定のためにFabタンパク質を発現させるため、停止コドンを、ファージディスプレイベクターの重鎖とg3の間に導入した。クローンを大腸菌34B8細胞内に形質転換して、完全CRAP培地中で30°Cで生育させた。細胞を遠心分離によって回収して、PBS、100uMPMSF、100uMベンズアミジン、2.5mMEDTAに懸濁して、マイクロフルイダイザーを用いて破壊した。FabはプロテインGアフィニティクロマトグラフィにて精製した。スクリーニングの目的のために、IgG変異体は最初に293細胞中で産生した。VLおよびVH25μgをコードするベクターは、FuGeneシステムを使用して293細胞にトランスフェクトした。500μlのFuGeneはFBSを含まないDMEM培地の4.5mlと混合し、室温で5分間インキュベートした。各鎖25μgをこの混合物に添加し、室温で20分間インキュベートし、ついで5本のT150フラスコへ移し5CO2中で37°Cで一晩トランスフェクトした。翌日、トランスフェクション混合物を含む培地を除去し、0.1ml/L微量元素A0934と10mg/LインスリンA0940を含むPS04培地23mlと置換する。細胞は更に5日間インキュベートし、その後培地は5分間、1000rpmにて回収し、0.22μmの低タンパク質結合フィルターを用いて無菌濾過した。試料は、125mlの培地毎に2.5mlの0.1PMSFを添加した後に、4°Cで貯蔵することが可能であった。IgGはプロテインG親和性クロマトグラフィーを用いて精製した。親和性決定親和性の決定はスキャッチャード分析及びBIAcoreTM2000又はA100を用いた表面プラズモン共鳴により行った。Biacore2000TAT419細胞外ドメイングリコシル化は固定化されCM5センサーチップ上で10mM酢酸ナトリウム、pH4.8中、約100-400RU、5E9抗体変異体が検体として働いたPBST中で4から1000nMの2倍の段階希釈物を使用して、流量30μL/分で注入。各試料は4分間の会合及び10分間の解離で分析した。各々の注入後、チップは10mMグリシンpH1.7を使って再生させた。結果及び検討ヒト化に使用したヒトアクセプターフレームワークはコンセンサスヒトカッパIのVLドメイン、及びコンセンサスヒトサブグループIIIのVHドメインに基づく。5E9のVL及びVHドメインは、ヒトカッパI及びサブグループIIIドメインと整列させ、それぞれの相補性決定領域CDRが同定され、ヒトアクセプターフレームワークに移植して、IgG抗体5E9-グラフトとして発現されうるCDRグラフトを生成した。5E9グラフトの各CDRに別々に多様性を導入し、CHO由来のTAT419細胞外ドメインに対してパニングしたFabディスプレイファージライブラリを生成した。第2ラウンドの後に、6つすべてのライブラリに濃縮が観察された。ラウンド6の後、DNA配列分析のために各ライブラリからクローンをピックアップし、6つのCDR各々で標的とした配列変化を確認した。ライブラリから同定された配列変化は、結合が改善された変異体となる変化を表しているかもしれないし、又は単にTAT419細胞外ドメイン結合に対して影響しない位置でのアミノ酸変化を示すかもしれない。様々な選択クローンがFabとして発現され、BiacoreによってTAT419細胞外ドメインへの結合について特徴付けられた。すべてのクローンが細胞の表面上のTAT419に結合し、ほとんどのクローンが5E9グラフトと比較して顕著に改善した親和性を持って結合した。図5に示す完全長軽鎖アミノ酸配列配列番号:13、図6に示す完全長重鎖アミノ酸配列配列番号:14、図5に示すVLアミノ酸配列配列番号:15、及び図6に示すVHアミノ酸配列配列番号:16を有する、ここでhu5E9.v1と称するヒト化抗TAT419抗体は、ネズミ科5E9よりも高い親和性で細胞の表面上のTAT419に結合することが示され、更なる開発のためのリード候補として選択した。hu5E9.v1の様々なCDR配列は以下の通りである。CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2、及びCDRH3。また、hu5E9.v1と同じVL配列配列番号:15と図7に示すVHアミノ酸配列配列番号:17とを有する、ここでhu5E9.v2と称する第二のヒト化抗TAT419抗体も同定された。実施例8:結合分析とTAT419エピトープマッピングファルマシアBIAcore3000を用いた表面プラスモン共鳴法によって、室温で、様々な抗TAT419抗体の結合親和性を測定することができるMethodsinEnzymology295268294。様々な抗TAT419抗体を、一次アミン基を介してセンサチップに固定した。0.025MNヒドロキシスクシンイミド及び0.1MNメチルNカルボジイミドの混合物20mlを5ml/分で注入することによって、カルボキシメチル化したセンサチップ表面基質を活性化した。10mM酢酸ナトリウム、pH4.5中に10mg/mlの抗TAT419抗体を含む溶液5~10mlを5ml/分で注入した。カップリングの後、チップ上のカップリングしなかった部位を、20mlの1MエタノールアミンpH8.5を注入してブロックした。ランニングバッファは、0.05ポリソルベート20を含有するPBSとした。動態学的な測定値のために、ランニングバッファにて2倍に段階希釈した様々な抗TAT419抗体を、フローセルに対して30ml/分の流量で3分間注入し、結合した材料を20分間解離させた。20mlの10mMグリシンHClを注入することによって、結合表面を再生した。活性化されるが、固定した抗体を持たないフローセル1を対照セルとして用いた。フローセル1に対する物質の有意な非特異的結合はなかった。見かけの結合親和性を算出するために、データを、広域フィッティングを用いた1:1結合モデルによって、分析した。結合速度定数及び解離速度定数は、同時にフィッティングした。様々なモノクローナル抗体に結合したTAT419エピトープを、標準的な競合的結合分析により決定した。交差阻害研究は、蛍光を定量化するPANDEXTMスクリーン機を用いて、TAT419を発現するように操作したインタクト細胞上で直接蛍光検定することにより、抗体で実施される。それぞれのモノクローナル抗体は、確立した方法SanFranciscoWJFreemanCoを用いて、フルオレセインイソチオシアネートとコンジュゲートした。TAT419発現細胞の集密的なコンフルエントな単層を、トリプシン処理し、1回洗浄し、0.5ウシ血清アルブミン及び0.1NaN3を含有する冷却PBS中に、1.75×106細胞mlで再懸濁した。終濃度1のラテックス粒子をPANDEXTMプレート膜の目詰まりを減少させるために追加した。懸濁液中の細胞、20μl、及び20μlの精製モノクローナル抗体をPANDEXTMプレートのウェルに加え、30分間氷上でインキュベートした。FITC標識モノクローナル抗体の所定希釈物20μLを各ウェルに加え、30分間インキュベートし、洗浄し、蛍光をPANDEXTMスクリーン機にて定量した。モノクローナル抗体は、それぞれが第二のモノクローナル抗体と同等にその結合をブロックした場合にのみエピトープを共有するとみなした。この実験では、ここで5E9及び3C3と称するネズミ科モノクローナル抗体を、細胞表面発現TAT419ポリペプチド上の異なるエピトープに割り当てた。このアッセイを使用して、当業者は、上記のエピトープと同じエピトープと結合する他のモノクローナル抗体を同定することができる。また、結合分析を行って、エピトープのおよその位置を同定した。様々なTAT419由来のペプチド変異体が293細胞に発現された。ここに記載の様々なネズミ科抗TAT419モノクローナル抗体を用いてウェスタンブロットを行った。これら分析の結果は、5E9ネズミ科抗TAT419抗体は完全長TAT419ポリペプチドを発現する293細胞を認識して、結合したのに対して、第二の異なるネズミ科抗TAT419モノクローナル抗体はそのN末端部分が欠失しているTAT419ポリペプチドを発現する293細胞を認識せず結合もしなかったことを示した。このことは、2つの異なる別々のエピトープが同定されたことを示唆する。より具体的には、ここで試験したあるネズミ科抗TAT419モノクローナル抗体は、ここで配列番号:2として示すTAT419配列の27番目と64番目の間に位置するエピトープ又は複数のエピトープに結合することが示された。さらに、他のネズミ科抗TAT419モノクローナル抗体ネズミ科5E9モノクローナル抗体、及びその様々なヒト化バージョンを含むは、ここで配列番号:2として示すTAT419ポリペプチド配列の65番目と101番目の間に位置するエピトープ又は複数のエピトープに結合することが示された。実施例9:TAT419ポリペプチドを発現する細胞によって内部移行される抗TAT419抗体抗TAT419抗体の細胞内部移行を、その表面上にTAT419を発現する細胞によって調査した。TAT419に結合される抗体の運命を調査するために、TAT419発現メラノーマ細胞株の試料を、様々な抗TAT419抗体と共に氷上で1時間インキュベートし、次いで第二抗体による染色のために固定した。第二抗体は、試験した5E9ネズミ科モノクローナル抗体及び他の抗TAT419ネズミ科モノクローナル抗体のためには抗ネズミ科Cy3、又は、ネズミ科モノクローナル抗体のキメラバージョンのためには抗ヒトCy3のいずれかとした。逆重畳デコンボリューション顕微鏡を用いたTAT419発現細胞に、ネズミ科モノクローナル抗体によってプラズマメンブランの有意な染色が観察された。これは抗体-細胞表面タンパク質複合体が形成されたことを示す。続く方法については、PolsonetalBlood11061623の618頁のInternalizationstudiesを参照のこと。逆重畳顕微鏡拡大率60倍を用いて可視化した場合、免疫蛍光法は細胞表面染色と内部移行を示した。TAT419を発現しないコントロール細胞はプラズマメンブラン染色を示さなかった。これらの所見を、1時間氷上に置いた後に37°Cに2時間置いた細胞と比較した。TAT419発現細胞とネズミ科5E9及び3C3抗TAT419抗体を用いた場合に顕著なプラズマメンブラン染色と細胞内部染色が観察された。これは、抗体-細胞表面タンパク質複合体の細胞への輸送を示す。終夜インキュベートした後に、更なる抗体/TAT419複合体の取り込みが観察された。4°Cで1時間インキュベートして5E9によるプラズマメンブラン染色を行い、次いで、細胞を固定して、二次抗体Cy3マウスにて処理した。37°Cで2時間又は終夜インキュベートし、その後固定し、二次抗体にて処理した後に、内部移行が観察された。8ウェルのチャンバースライドに細胞を播きおよそ100000細胞/ウェル、37°C/5CO2で24~48時間インキュベートした。成長培地に、2~5μg/mlの抗TAT419抗体を添加し、プロテアーゼインヒビター50μg/mlロイペプチド及び5μg/mlペプスタチンと共に終夜又は2時間培養した。これらのプロテアーゼインヒビターは、一次抗体の分解を妨げ、リソソーム中での抗体の検出を可能とする。生体標識livelabellingのために、細胞を抗体と共に室温で45分間インキュベートした。次いで、すべての細胞を洗浄し、3ホルムアルデヒドに10分かけて固定し、0.05サポリンにて5~10分かけて透過処理し、非特異的抗体結合部位をPBS1BSAにて室温で20分かけてブロックした。次いで、細胞をAlexa488にて標識した二次抗体と共に37°Cで1時間インキュベートし、洗浄し、次いでチャンバーインサートを取り除いて、ガラススライドを細胞に曝した。スライドは、VectaShieldにDAPIをアプライして核を標識することによりマウントし、次いで、カバーガラス下に置き、透明な爪光沢剤にて封入した。これらの分析の結果は、ここに記載の様々な抗TAT419抗体ネズミ科5E9モノクローナル抗体、その様々なヒト化バージョンを含むが生きている細胞の表面上のTAT419ポリペプチドに結合し、細胞内にすぐさま内部移行し、細胞に抗体を添加して20時間以内には細胞のリソソームに位置することを示した。よって、ここに記載の抗TAT419抗体は、TAT419ポリペプチドを発現する腫瘍に対する毒素コンジュゲート腫瘍治療の優れた候補である。実施例10:TAT419に結合する、毒素をコンジュゲートした抗体の調整細胞障害性又は細胞分裂停止性の薬剤、すなわち癌治療において腫瘍細胞を殺すか又は阻害するための薬剤の局部運搬に抗体-薬剤コンジュゲートADC、つまり免疫複合体を用いるとCancerCell3207212Syrigos及びEpenetosAnticancerResearch19605614NiculescuDuvaz及びSpringerAdvDrgDelRev26151172;米国特許第4975278号、腫瘍への薬剤成分の標的とする運搬とそこでの細胞内集積が可能となり、この非コンジュゲート薬物作用剤の全身性投与により正常細胞並びに除去しようとする腫瘍細胞への毒性が容認できないレベルとなりうるLancetpp60305ThorpeAntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapyAReviewinMonoclonalAntibodies84BiologicalAndClinicalApplicationsAPincheraらpp475506。これによって、最小限の毒性で最大限の効果が求められる。ADCを設定して精製するために、モノクローナル抗体の選択性並びに薬剤結合特性及び薬剤放出特性に注目した。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体は共に、この方策に有用であるとして報告されているCancerImmunolImmunother2118387。この方法に用いる薬物には、ダウノマイシン、ドキソルビジン、メトトレキサート及びビンデジンが含まれる、上掲。抗体-毒素コンジュゲートに用いる毒素には、ジフテリア毒素などの細菌性毒素、リシンなどの植物毒素、ゲルダナマイシンJoftheNatCancerInst9215731581;MandlerらBioorganicMedChemLetters1010251028;MandlerらBioconjugateChem13786791、メイタンシノイドProcNatlAcadSciUSA9386188623、及びカリケアマイシンCancerRes582928;HinmanらCancerRes5333363342などの小分子毒素が含まれる。本発明の抗体薬剤コンジュゲートにおいて、抗体を、リンカーを介して、一つ以上の薬剤部分、例えば抗体につき約1~約20の薬剤部分にコンジュゲートする。式:Ab-pを有するADCはいくつかの手段、当業者に公知の有機化学反応、状態および試薬を用いて調製されうる:共有結合の後に薬剤部分Dと反応してAbLを形成するための、二価のリンカー試薬を用いた抗体の求核基の反応;及び共有結合の後に抗体の求核基と反応してDLを形成するための、二価のリンカー試薬を用いた薬剤部分の求核基の反応、が含まれる。ADCを調製するための更なる方法は本願明細書中に記載される。リンカーは、一つ以上のリンカー成分から成ってもよい。例示的なリンカー成分は、6マレイミドカプロイル、マレイミドプロパノイル、バリンシトルリン、アラニンフェニルアラニン、pアミノベンジルオキシカルボンイル、Nスクシンイミジル4ペンタノエート、Nスクシンイミジル4シクロヘキサン1カルボキシレート、及びNスクシンイミジルアミノ安息香酸エステルを含む。更なるリンカー成分は当分野で公知であり、そのいくつかは本願明細書において記述される。いくつかの実施態様では、リンカーはアミノ酸残基を含みうる。例示的なアミノ酸リンカー成分には、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドなどがある。例示的なジペプチドは、バリンシトルリン、アラニンフェニルアラニンを含む。例示的なトリペプチドは、グリシンバリンシトルリン及びグリシングリシングリシンを含む。アミノ酸リンカー成分を含んでなるアミノ酸残基は、天然に生じるもの、並びに微量のアミノ酸及び非天然に生じるアミノ酸類似体、例えばシトルリンを含む。アミノ酸リンカー成分は設定され、特に酵素、例えば腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンB、C及びD又はプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断の選択性に最適化できる。抗体上の求核基には、限定するものでなく、以下のものを含む:N末端アミン基、側鎖アミン基、例えばリシン、側鎖チオール基、例えばシステイン、および抗体がグリコシル化される糖水酸基又はアミノ基。アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸エステルおよびアリールヒドラジド基は、求核であり、反応して、リンカー部分上の求電子性の群およびリンカー試薬により共有結合を形成することができる:活性エステル、例えばNHSエステル、HOBtエステル、ハロギ酸および酸ハロゲン化物;アルキルおよびベンジルハライド、例えばハロアセトアミド;アルデヒド、ケトン、カルボキシルおよびマレイミド群、が含まれる。特定の抗体は、還元しうる鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体は、還元剤、例えばDTTによる処置によって、リンカー試薬を用いたコンジュゲート反応を行ってもよい。ゆえに、各々のシステイン架橋は、理論的には、2の反応性のチオール求核基を形成する。チオールにアミンを転換させる2イミノチオランを用いてリシンを反応させることによって抗体に付加的な求核基を導入することができる。反応性のチオール基は、1、2、3、4又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって抗体に導入されてもよい。また、本発明の抗体薬剤コンジュゲートは、抗体を修飾して求電子性の部分を導入することによって生成してもよい。グリコシル化された抗体の糖質を、例えば過ヨウ素酸塩酸化剤を用いて酸化して、リンカー試薬又は薬剤部分のアミン基と反応するアルデヒド又はケトン基を形成させてもよい。生じたイミンシッフ塩基群が安定結合を形成するか、又は例えば安定アミン結合を形成させるホウ化水素試薬によって、還元してもよい。一実施態様では、ガラクトースオキシダーゼ又はナトリウムメタ過ヨウ素酸塩の何れかによるグリコシル化抗体の炭水化物部分の反応により、薬剤上の適当な基と反応することができるタンパク質のカルボニル基が生じうる。他の実施態様では、N末端セリン又はスレオニン残基を含んでいるタンパク質はナトリウムメタ過ヨウ素酸塩と反応して、第一のアミノ酸の代わりにアルデヒドを生成するBioconjugateChem3138146;米国特許第5362852号。このようなアルデヒドは、薬剤部分又はリンカー求核基と反応することができる。別法として、抗体及び細胞障害剤を含有する融合タンパク質は、例えば組換え技術又はペプチド合成により作製される。DNAの長さは、コンジュゲートの所望する特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域により離間しているか、又は互いに隣接しているコンジュゲートの2つの部分をコードする領域をそれぞれ含有する。他の実施態様において、腫瘍の事前ターゲティングに利用するために、レセプターに抗体をコンジュゲートし、ここで抗体レセプターコンジュゲートを患者に投与し、続いて清澄剤を使用し、循環から非結合コンジュゲートを除去し、細胞障害剤にコンジュゲートするリガンドを投与する。毒素を精製した抗体に連結することによって抗体薬剤コンジュゲートを生産するための技術には周知のものがあり、当分野で慣例的に用いられる。例えば、毒素DM1への精製されたモノクローナル抗体のコンジュゲートは、以下の通りに達成されうる。精製された抗体は、ジチオピリジル基を導入するために、Nスクシンイミジル4ペンタノエートによって、誘導体化される。NaCl及びEDTAを含有する44.7mLの50mMリン酸カリウムバッファ中の抗体を、SPPにて処理した。室温、アルゴン下にて90分間インキュベートした後、抗応混合物を、35mMのクエン酸ナトリウム、154mMNaCl、2mMEDTAにて平衡化したSephadexG25カラムにゲル濾過する。抗体含有分画をプールして、アッセイした。抗体SPPPyを上記の35mMクエン酸ナトリウムバッファ、pH6.5にて希釈して、およそ2.5mg/mLの終濃度にした。次いで、DM1を含む3.0mMのジメチルアセトアミドを抗体溶液に添加する。およそ20時間、室温、アルゴン下にて反応を行う。反応物を、35mMクエン酸ナトリウム、154mMNaCl、pH6.5にて平衡化したセファクリルS300ゲル濾過カラムに流す。流速は5.0mL/分、65の分画を回収する。分画をプールし、分析した。この分析において、抗体分子当たりの結合されるDM1薬剤分子の数は、252nm及び280nmの吸光度を測定して決定する。また、例示として、毒素DM1への精製されたモノクローナル抗体のコンジュゲートは、以下の通りに達成されうる。精製された抗体は、シクロヘキサン1カルボキシレートで誘導体化して、SMCCリンカーを導入する。50mMリン酸カリウム/50mM塩化ナトリウム/2mMEDTA、pH6.5中で、7.5モル等量のSMCCにて20mg/mLの抗体を処理した。室温のアルゴン下で2時間撹拌した後に、反応混合物を、50mMリン酸カリウム/50mM塩化ナトリウム/2mMEDTA、pH6.5にて平衡化したSephadexG25カラムにてろ過する。抗体を含有する分画をプールして、アッセイする。次いで、抗体SMCCを、50mMリン酸カリウム/50mM塩化ナトリウム/2mMEDTA、pH6.5で希釈して、最終濃度およそ10mg/mlとし、10mMのDM1を含むジメチルアセトアミド溶液にて反応させる。反応は、16.5時間、室温、アルゴン下にて撹拌して行う。コンジュゲート反応混合物は、pH6.5の1×PBSによるSephadexG25ゲル濾過カラムに濾過する。次いで、DM1/抗体の比を252nmと280nmの吸光度にて測定する。さらに、選択した抗体の遊離システインを、ビスマレイミド試薬BM4にて修飾して、抗体の表面上の反応していないマレイミド基を除去する。これは、BM4を50のエタノール/水混合液に10mMの濃度になるまで溶解して、およそ1.6mg/mlの濃度でリン酸緩衝食塩水に抗体を含有する溶液に10倍のモル過剰量を加え、1時間反応させることによって達成される。過剰なBM4は、30mMクエン酸塩、pH6と150mMNaClバッファによるゲル濾過にて除去した。およそ10倍のモル過剰DM1を、ジメチルアセトアミドに溶解して、抗体BMPEO中間生成物に加える。また、ジメチルホルムアミドを用いて薬剤成分試薬を溶解してもよい。反応混合物を終夜反応させて、PBSでゲル濾過又は透析を行って反応していない薬剤を取り除く。PBS中のS200カラムによるゲル濾過を用いて、高分子量凝集塊を取り除いて、精製された抗体BMPEODM1コンジュゲートに供給する。典型的に、細胞毒性剤は、抗体の多数になりうるリジン残基により抗体にコンジュゲートされている。対象の抗体に存在するか、又は対象の抗体中に操作したチオール基によるコンジュゲートもまた達成されている。例えば、システイン残基は遺伝子工学技術によってタンパク質内に導入されて、リガンドの共有結合的付着部位を形成しているJBiolChem1396449650;Bernhard等BioconjugateChem5126132;Greenwood等TherapeuticImmunology1247255;Tu等ProcNatlAcadSciUSA9648624867;Kanno等JofBiotechnology76207214;Chmura等ProcNatAcadSciUSA9884808484;米国特許第6248564号。一旦遊離システイン残基が対象の抗体の中に存在すると、毒素はその部位に連結されうる。例えば、薬剤リンカー試薬であるマレイミドカプロイルモノメチルアウリスタチンE、すなわちMCMMAE、マレイミドカプロイルモノメチルアウリスタチンF、すなわちMCMMAF、MCvalcitPABMMAE又はMCvalcitPABMMAFをDMSOに溶解して、濃度がわかっているアセトニトリルと水にて希釈して、冷やしたシステイン誘導体化抗体を含むリン酸緩衝生理食塩水に添加する。およそ1時間後に、過剰量のマレイミドを添加して反応を止め、反応していない抗体チオール基を覆った。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、毒素コンジュゲート抗体を精製して、PBS中のG25樹脂による溶出によって脱塩して、無菌条件下で0.2mのフィルターにて濾過して、保存のために凍結した。さらに、本発明の抗TAT419抗体は、以下の技術を用いてアウリスタチン及びドロスタチン毒素にコンジュゲートされうる。抗体は、pH8.0の500mMホウ酸ナトリウムと500mM塩化ナトリウムに溶解して、過剰量の100mMジチオトレイトールで処理した。37°Cでおよそ30分インキュベートした後、SephadexG25樹脂で溶出することによって、バッファを交換して、1mMDTPAを含むPBSにて溶出した。溶液の280nmの吸光度とDTNBと反応させて412nmの吸光度の測定によるチオール濃度から、還元した抗体濃度を決定することによって、チオール/Ab値を調べる。PBSに溶解した還元型抗体を氷上で冷やす。薬剤リンカー試薬であるマレイミドカプロイルモノメチルアウリスタチンE、すなわちMCMMAE、MCMMAF、MCvalcitPABMMAE又はMCvalcitPABMMAFをDMSOに溶解して、濃度がわかっているアセトニトリルと水にて希釈して、冷やした還元型抗体をPBSに添加する。およそ1時間後に、過剰量のマレイミドを添加して反応を止め、反応していない抗体チオール基を覆った。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、コンジュゲートした抗体を精製して、PBS中のG25樹脂による溶出によって脱塩して、無菌条件下で0.2mのフィルターにて濾過して、保存のために凍結した。ここに記載の毒素コンジュゲート抗TAT419抗体は、記載したように調製し、標準的なFACS分析を用いて試験し、毒素へのコンジュゲートが、TAT419発現細胞の表面上のTAT419ポリペプチドに結合する抗体の能力に影響したか否かを決定した。これらの分析の結果は、抗体の毒素へのコンジュゲートにより、TAT419ポリペプチドへの結合の欠失は観察されなかったことを示した。実施例11:インビトロでの腫瘍細胞死滅アッセイ対象のTAT419ポリペプチドを発現する哺乳動物細胞を、標準的な発現ベクター及びクローニング技術を使用して得てよい。あるいは、対象のTAT419ポリペプチドを発現する多くの腫瘍細胞株は、例えばATCCから公的に入手可能であり、標準的なELISA又はFACS分析法を使用して常套的に同定することができる。ついで抗TAT419ポリペプチドモノクローナル抗体及びその毒素コンジュゲート誘導体をアッセイに用いて、TAT419ポリペプチド発現細胞を死滅させるインビトロでの抗体の能力を定量してよい。例えば、対象のTAT419ポリペプチドを発現する細胞を上述のようにして得て、96ウェルの皿に蒔く。一分析例では、抗体/毒素コンジュゲート又はネイキッド抗体を4日間の細胞インキュベートの間、含ませる。第二の別の分析例では、細胞を抗体/毒素コンジュゲート又はネイキッド抗体と共に1時間インキュベートし、ついで洗浄して、4日間、抗体/毒素コンジュゲートの不存在下でインキュベートする。さらに他の別の分析例では、細胞表面上にTAT419ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作した細胞及びTAT419ポリペプチドを発現しないコントロール細胞を、毒素コンジュゲート抗TAT419抗体にて処理し、比較した。ついで、細胞生存率を、PromegaのCellTiterGloLuminescentCellViabilityAssayカタログ番号G7571を使用して測定する。未処理細胞をネガティブコントロールとした。第一の実験では、特に本発明に関し、特定の抗TAT419抗体ネズミ科5E9ネズミ科モノクローナル及びhu5E9.v1及びhu5E9.v2ヒト化バージョンを含むの、様々な濃度のADCMC-vc-PAB-MMAE毒素コンジュゲートを、TAT419ポリペプチド発現メラノーマ細胞株、526mel、537mel、888mel、928mel、1300mel、A375、A2058、COLO829、G361、Hs-294-T、Malme3m、SK23、SKmel5、SKmel5-RC、SKmel28、WM-266-4、UACC257、及びUACC257-NCI60に結合し、死滅させる能力について試験した。より具体的には、TAT419発現細胞を、PBSネガティブコントロール、TAT419ポリペプチドに結合しないコントロール抗体のMC-vc-PAB-MMAE毒素コンジュゲートネガティブコントロール、又は抗TAT419-MC-vc-PAB-MMAE毒素コンジュゲート抗体のいずれかにてインビトロで処理した。これらの分析の結果は、試験したすべての毒素コンジュゲート抗TAT419抗体5E9、hu5E9.v1及びhu5E9.v2を含むは、細胞表面上にTAT419ポリペプチドを発現する細胞のTAT419標的特異的細胞死滅を有意に誘導することができるのに対して、いずれのネガティブコントロールにも特異的な細胞死滅は観察されなかったことを示した。この試験の結果の例示として、UACC257X2.2細胞その細胞表面上にTAT419ポリペプチドを発現するを、様々な濃度のPBS、TAT419ポリペプチドに結合しないコントロール抗体のMC-vc-PAB-MMAE毒素コンジュゲートCtrl-vc-MMAE、及び上記の5E9-MC-vc-PAB-MMAE毒素コンジュゲート抗体5E9-vc-MMAEのいずれかにてインビトロで処理した。これらの分析のデータを図8に示し、5E9-vc-MMAE毒素コンジュゲート抗体がその細胞の表面のTAT419を発現する細胞を死滅することができることを示す。細胞表面上に異なる量のTAT419ポリペプチドを発現する異なる細胞株により得られた比較データは、細胞死滅の効果は細胞表面上でのTAT419の発現量に比例していることを示す。これらのデータは、これらのアッセイに用いた様々な抗TAT419抗体5E9、hu5E9.v1及びhu5E9.v2を含むは、細胞表面上のTAT419ポリペプチドへ結合し、抗体が結合した細胞の死を誘導することができることを示す。実施例12:インビボでの腫瘍細胞死滅アッセイ腹腔内ヒト異種移植片腫瘍モデル抗体-薬剤コンジュゲートのインビボ効力は、移植ヒト腫瘍異種移植片というを持つNCRヌードマウスの処置により測定することができる。これらの試験は、腫瘍試料を移植することによってマウスに播種したヒト腫瘍及びヒトメラノーマ細胞株を用いた。この試験では、メラノーマ腫瘍およそ100~200mm3を持つ、1群あたり10匹のマウスに、3mg/kgの用量を尾静脈からIV処置し、3週間目に再度処置した。腫瘍の測定は試験期間中行い、腫瘍試料を採取し、TaqMan分析並びに組織学的試験のためにホルマリン固定又はsnap凍結した。ヒトメラノーマ細胞株とヌードマウスでの連続継代された腫瘍及びヒトメラノーマ細胞株を皮下に移植し、試験中成長を測定した。腫瘍が適当なサイズに達したら、マウスの処置群に抗体-薬剤コンジュゲートを投薬する。ベヒクルコントロール又はコントロール抗体と比較した異種移植片腫瘍増殖の遅延は、効果の特徴である。概して、これらの結果は、インビボ腫瘍増殖モデルにおける抗TAT419薬剤コンジュゲートの特異性と有効性を示す。腫瘍体積は、注入後0、2、7、10、13、17、20、24及び27日後に各マウスで測定し、腫瘍体積の低減における各処置の効果を測定した。さらに、処置後およそ30日にわたって毎日動物生存率を測定した。これらのインビボ分析の結果は、ベヒクル単独又は非TAT419特異的毒素コンジュゲート抗体にて処置したマウスは処置後の腫瘍増殖の観察可能な低減をほとんど示さなかったことを示す。この結果は、TAT419ポリペプチドに結合しない抗体は、たとえ毒素とコンジュゲートしていても、特異的な又は非特異的な治療効果を示さないことを示す。それに対して、vc-MMAE-コンジュゲート抗TAT419抗体5E9、hu5E9.v1及びhu5E9.v2を含むにて処置した場合、試験群のほとんどの動物は処置後に腫瘍増殖の有意かつ明らかな再生可能な低減を示した。これは、抗TAT419抗体薬剤コンジュゲートは、TAT419ポリペプチドを発現する腫瘍を有する動物に特異的なインビボ治療効果を示すことを示す。より具体的には、図9は、hu5E9.v1ヒト化抗体のvc-MMAEコンジュゲートのインビボ治療効果を分析した実験から得られたデータを示す。UACC257X2.2ヒトメラノーマ細胞株細胞表面上にTAT419ポリペプチドを発現する細胞由来の異種移植片を上記のようにヌードマウス内で増殖させ、次いで、上記のように、ベヒクル単独、TAT419ポリペプチドに結合しないMMAE-コンジュゲートコントロール抗体、又は様々な量のhu5E9.v1-vc-MMAEにてマウスを処置した。これらの分析のデータは、hu5E9.v1-vc-MMAE毒素コンジュゲート抗体がその細胞の表面のTAT419を発現する細胞を死滅することができることを示す。他のデータも、他の毒素コンジュゲート抗TAT419抗体5E9及びhu5E9.v2を含むが、標的特異性及び用量依存様式で、多くの異なるTAT419発現メラノーマ細胞株由来のヌードマウス内の異種移植片腫瘍の増殖を抑制することができたことを示した。このデータは、明らかに、抗TAT419抗体-薬剤コンジュゲートが、TAT419ポリペプチドを発現する腫瘍の治療のために特異的、有意且つ再生可能なインビボ治療効果を示すことを示す。上記の明細書は、当業者が本発明を実施するために十分であると考えられる。寄託した実施物は、本発明のある態様の一つの例示を意図し、機能的に等価なあらゆる構築物がこの発明の範囲内にあるため、寄託された構築物により、本発明の範囲が限定されるものではない。ここでの物質の寄託は、ここに含まれる文書による説明が、そのベストモードを含む、本発明の任意の態様の実施を可能にするために不十分であることを認めるものではないし、それが表す特定の例証に請求の範囲が制限されるものと解釈されるものでもない。実際、ここに示し記載したものに加えて、本発明を様々に改変することは、先の記載から当業者にとっては明らかなものであり、添付の特許請求の範囲内に入るものである。"