"女性の卵巣癌の診断方法であって、女性から採取した尿中のメソセリン/巨核球可能化因子族MMPFFペプチドの発生を査定することを含んで構成され、それにより尿中のMMPFFペプチドの発生が女性の卵巣癌にかかっていることの示唆とすることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、前記卵巣癌は上皮卵巣癌であることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、前記卵巣癌は間質卵巣癌であることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、前記卵巣癌は幹細胞卵巣癌であることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、尿中におけるMMPFFペプチドの発生は特にMMPFFペプチドと結合する第1抗体と尿を接触させ、MMPFFペプチドが前記第1抗体と結合したかどうかを査定することによって査定することを特徴とする方法。請求項5に記載の方法であって、尿を第1抗体と接触させる前に尿を遠心分離機にかけて沈殿物があればそれをそこから殆ど取り除くことを特徴とする方法。請求項5に記載の方法であって、第1抗体は担体と結合していることを特徴とする方法。請求項7に記載の方法であって、前記担体はプラスチック容器であることを特徴とする方法。請求項8に記載の方法であって、前記容器はマルチウエルプレートであることを特徴とする方法。請求項9に記載の方法であって、前記プレートはロボット装置による自動分析に適合するようになっているものであることを特徴とする方法。請求項5に記載の方法であって、MMPFFペプチドと第1抗体との結合は、尿と前記第1抗体の接触の後、特にMMPFFペプチドと結合する第2抗体と第1抗体を接触させ、第1と第2の抗体が一緒に局在しているかを査定することによって査定することを特徴とする方法。請求項11に記載の方法であって、前記尿は、第1抗体と第2抗体の接触前少なくとも10分間第1抗体と接触していることを特徴とする方法。請求項11に記載の方法であって、前記尿は、第1抗体と第2抗体の接触前少なくとも60分間第1抗体と接触していることを特徴とする方法。請求項11に記載の方法であって、第2抗体は検出可能にラベル付けしてあることを特徴とする方法。請求項14に記載の方法であって、前記第2抗体は酵素、放射性核種、発蛍光団、及び発色団を構成する群から選択された化合物と連接していることを特徴とする方法。請求項11に記載の方法であって、第2抗体は配位子に連接しており、第1及び第2抗体の局在が、第2抗体と配位子と結合する受容体とii検出可能ラベル、から構成される化合物との接触によって査定されることを特徴とする方法。請求項16に記載の方法であって、前記ラベルは酵素、放射性核種、発蛍光団、及び発色団を構成する群から選択されていることを特徴とする方法。請求項16に記載の方法であって、前記配位子はビオチンであり前記受容体はアビジンであることを特徴とする方法。請求項18に記載の方法であって、前記アビジンはストレプタビジンであることを特徴とする方法。請求項19に記載の方法であって、前記ラベルは酵素であることを特徴とする方法。請求項20に記載の方法であって、前記酵素は西洋わさびペルオキシダーゼであることを特徴とする方法。請求項21に記載の方法であって、第1及び第2抗体の局在は3、3’、5、5’-テトラメチルベンジジンであることを特徴とする方法。請求項5に記載の方法であって、第1抗体と尿を接触させた後に、第1抗体と第1抗体をラベル付けした担体とを接触させ、尿と接触させた第1抗体と結合するラベル付けした配位子の量と、尿と接触させなかった等量の第1抗体と結合するラベル付けした配位子の量を比較することを特徴とする方法。請求項23に記載の方法であって、ラベル付けした配位子はMMPFFペプチドと同じアミノ酸配列を有していることを特徴とする方法。請求項24に記載の方法であって、ラベル付けした配位子のグリコシル化状態はMMPFFペプチドのグリコシル化状態と同じであることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、MMPFFペプチドはグリコシル化されていることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、MMPFFペプチドのアミノ酸配列は、配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列の少なくとも10の連続する残基から構成されていることを特徴とする方法。請求項27に記載の方法であって、MMPFFペプチドのアミノ酸配列は、配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列の少なくとも20の連続する残基から構成されていることを特徴とする方法。請求項27に記載の方法であって、MMPFFペプチドのアミノ酸配列は、配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列の少なくとも50の連続する残基から構成されていることを特徴とする方法。請求項27に記載の方法であって、MMPFFペプチドのアミノ酸配列は、配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列の少なくとも200の連続する残基から構成されていることを特徴とする方法。請求項27に記載の方法であって、MMPFFペプチドのアミノ酸配列は、配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列から構成されていることを特徴とする方法。請求項27に記載の方法であって、MMPFFペプチドのアミノ酸配列は、配列ID番号4の少なくとも10の連続的残基から構成されていることを特徴とする方法。請求項27に記載の方法であって、MMPFFペプチドのアミノ酸配列は、配列ID番号5の少なくとも10の連続的残基から構成されていることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、MMPFFペプチドは、少なくとも20の連続アミノ酸残基の部分からなり、その部分のアミノ酸配列は配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列の20の連続残基に対し少なくとも90同じであることを特徴とする方法。請求項34に記載の方法であって、MMPFFペプチドは、少なくとも20の連続アミノ酸残基の部分からなり、その部分のアミノ酸配列は配列ID番号4と5よりなる群から選択された1つの配列の20の連続残基に対し少なくとも90同じであることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、更に、女性の尿中の第2卵巣癌マーカーの発生の査定を含んで構成され、尿中の前記第2マーカーの発生もまた女性が卵巣癌にかかっていることの示唆であることを特徴とする方法。請求項36に記載の方法であって、前記第2の卵巣癌マーカーは尿ゴナドトロピンペプチドurinarygonadotropinpeptide、システインプロテイナーゼ、ネオプテリン、及び腫瘍関連トリプシン抑制剤よりなる群から選択されたものであることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法であって、更に、女性の血清中の第2卵巣癌マーカーの発生の査定を含んで構成され、血清中の前記第2マーカーの発生もまた女性が卵巣癌にかかっていることの示唆であることを特徴とする方法。請求項38に記載の方法であって、前記第2卵巣癌マーカーはCA125、癌性胎児抗原、CD44スプライス変形体splicevariants、抗マリグニン抗体、乳酸脱水素酵素lactatedehydrogenase、アルファーヒドロキシ酪酸脱水素酵素、CA19-9、組織ポリペプチド抗原、及びシアリルTNよりなる群から選択されたものであることを特徴とする方法。請求項38に記載の方法であって、前記第2の卵巣癌マーカーはCA125であることを特徴とする方法。請求項1に記載の方法はさらに女性の血清中のMMPFFペプチドの発生の査定を含んで構成され、血清中の前記MMPFFペプチドの発生もまた女性が卵巣癌にかかっていることの示唆であることを特徴とする方法。女性が卵巣癌になった可能性を査定する方法であって、その方法は女性から採取した尿中のメソセリン/巨核球可能化因子族MMPFFペプチドの発生を査定することを含んで構成され、尿中にMMPFFペプチドが発生するということは、その女性が、尿中にMMPFFの発生がなくその他では同じ女性に較べてより卵巣癌になりやすいことを示唆するものであることを特徴とする方法。女性の卵巣癌の治療の効果を査定する方法であって、治療後の女性から採取した尿中のメソセリン/巨核球可能化因子族MMPFFペプチドの量を査定し、その量と手術前その女性から採取した尿中のMMPFFペプチドの量を比較することから構成され、手術後の尿中のMMPFFペプチドの量がより少なくなっていれば手術が効果的であったことを示していることを特徴とする方法。女性から採取した尿中のメソセリン/巨核球可能因子族MMPFFペプチドの発生を査定するキットであって、そのキットは配列ID番号3から5よりなる群から選定された一つの配列の少なくとも10の連続する残基を含んで構成されるMMPFFペプチドと結合するための第1薬剤と、尿を浄化する装置と、浄化した尿と前記第1薬剤を接触することを記述する使用説明書から構成されていることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、前記第1薬剤は抗体であることを特徴とするキット。請求項45に記載のキットであって、前記抗体は薄い金属フィルムに結合されていることを特徴とするキット。請求項46に記載のキットであって、前記フィルムは表面プラズモン共鳴装置内の分析に用いられることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、更に、MMPFFペプチドが前記第1薬剤との結合を査定するための第2薬剤を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項48に記載のキットであって、前記第2薬剤は前記第1薬剤の検出可能にラベルをつけた配位子であることを特徴とするキット。請求項49に記載のキットであって、前記第1薬剤は抗体で前記配位子はMMPFFペプチドであることを特徴とするキット。請求項49に記載のキットであって、前記配位子は酵素、放射性核種、発蛍光団、及び発色団よりなる群から選択された化合物でラベル付けされていることを特徴とするキット。請求項48に記載のキットであって、前記第2薬剤は検出可能にラベル付けした抗体であることを特徴とするキット。請求項52に記載のキットであって、前記抗体はビオチン化した抗体であることを特徴とするキット。請求項52に記載のキットであって、前記抗体は酵素、放射性核種、発蛍光団、及び発色団よりなる群から選択された化合物でラベル付けされていることを特徴とするキット。請求項48に記載のキットであって、前記第1薬剤は検出可能にラベル付けされている抗体と結合するエピトープとは異なるMMPFFのエピトープと結合する抗体であることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、前記装置は女性から採取した尿サンプルを遠心分離する装置であることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、前記第1薬剤は担体に結合されていることを特徴とするキット。請求項57に記載のキットであって、前記担体はプラスチックの容器であることを特徴とするキット。請求項58に記載のキットであって、前記容器はマルチウエルプレートであることを特徴とするキット。請求項59に記載のキットであって、前記プレートはロボット装置による自動分析に適合するように作製されたものであることを特徴とするキット。請求項58に記載のキットであって、前記第1薬剤は抗体であることを特徴とするキット。請求項61に記載のキットであって、前記第2薬剤は第2抗体であることを特徴とするキット。請求項62に記載のキットであって、前記第2抗体は配位子に連接されていることを特徴とするキット。請求項63に記載のキットであって、更に、i前記配位子と結合する受容体とii検出可能なラベルを含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項64に記載のキットであって、ラベルは酵素、放射性核種、発蛍光団、及び発色団よりなる群から選択された化合物でラベル付けされていることを特徴とするキット。請求項65に記載のキットであって、前記配位子はビオチンであり、前記受容体はアビジンであることを特徴とするキット。請求項66に記載のキットであって、前記アビジンはストレプタビジンであることを特徴とするキット。請求項67に記載のキットであって、前記ラベルは酵素であることを特徴とするキット。請求項68に記載のキットであって、前記酵素は西洋からしペルオキシダーゼであることを特徴とするキット。請求項69に記載のキットであって、更に、3、3’、5、5’-テトラメチルベンジジンを含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、更に、対照例としてのMMPFFペプチドを含んで構成され、対照例ペプチドのアミノ酸配列は配列ID番号3から5よりなる群から選ばれたひとつの配列の少なくとも10の連続する残基を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項71に記載のキットであって、対照例ペプチドのアミノ酸配列は配列ID番号3から5よりなる群から選ばれたひとつの配列の少なくとも20の連続する残基を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項71に記載のキットであって、対照例ペプチドのアミノ酸配列は配列ID番号3から5よりなる群から選ばれたひとつの配列の少なくとも50の連続する残基を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項71に記載のキットであって、対照例ペプチドのアミノ酸配列は配列ID番号3から5よりなる群から選ばれたひとつの配列の少なくとも200の連続する残基を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項71に記載のキットであって、対照例ペプチドのアミノ酸配列は配列ID番号3から5よりなる群から選ばれたひとつの配列を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項71に記載のキットであって、対照例ペプチドのアミノ酸配列は配列ID番号4の少なくとも10の連続する残基を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項71に記載のキットであって、対照例ペプチドのアミノ酸配列は配列ID番号5の少なくとも10の連続する残基を含んで構成されていることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、更に、少なくとも20の連続するアミノ酸残基の部分を含んで構成される対照例ペプチドを含み、その部分のアミノ酸配列は配列ID番号3から5よりなる群から選択された配列の20の連続する残基と少なくとも90同一であることを特徴とするキット。請求項78に記載のキットであって、前記対照例ペプチドは少なくとも20の連続するアミノ酸残基の部分を含んで構成され、その部分のアミノ酸配列は配列ID番号4と5よりなる群から選択された配列の20の連続する残基と少なくとも90同一であることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、更に、女性の尿中の第2卵巣癌マーカーの発生を査定する試薬を含んで構成されることを特徴とするキット。請求項80に記載のキットであって、前記第2の卵巣癌マーカーは尿ゴナドトロピンペプチドurinarygonadotropinpeptide、システインプロテイナーゼ、ネオプテリン、腫瘍関連トリプシン抑制剤よりなる群から選択されたものであることを特徴とするキット。請求項44に記載のキットであって、更に、女性の血清中の第2卵巣癌マーカーの発生を査定する試薬を含んで構成されることを特徴とするキット。請求項82に記載のキットであって、前記第2卵巣癌マーカーはCA125、癌性胎児抗原、CD44スプライス変形体splicevariants、抗マリグニン抗体、乳酸脱水素酵素lactatedehydrogenase、アルファーヒドロキシ酪酸脱水素酵素、CA19-9、組織ポリペプチド抗原、及びシアリルTNよりなる群から選択されたものであることを特徴とするキット。請求項83に記載のキットであって、前記第2の卵巣癌マーカーはCA125であることを特徴とするキット。本発明はメソセリン、巨核球可能化因子MPF、及びMPFの可溶性変形物を含むタンパク質族と類似な重要なアミノ酸配列を有する1つ又はそれ以上のポリペプチドが卵巣癌にかかっている女性の尿の中に存在しているという発見に関係してる。これらの尿ポリペプチドはその族のタンパク質に対して産生される抗体と特異的に結合する。患者の尿中にこれらのポリペプチドが存在しているということはその患者が卵巣癌にかかっているという診断である。ポリペプチドの量は卵巣癌の効果的な治療によって減少する。このように、尿ポリペプチドは抗卵巣癌治療の効果を査定するのにも用いられる。定義ここに用いられるように、次の用語の各々はこの章内でそれと関連する意味を有している。メソセリン/巨核球可能化因子族ペプチドMMPFFペプチドはi配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列の少なくとも10の連続的な残基からなるか、2フラグメントが含まれている。ポリクローナルおよびモノクローナルの一方又は両方の抗体がここに記載される方法とキットに用いられる。モノクローナル抗体という語は特定のエピトープと免疫学的に反応することのできる抗原結合部位の一種のみを含む抗体分子の集団をいう。標識したという語は抗体またはペプチドに関するもので、検出可能物質をペプチド又は抗体にカップリング即ち物理的に結合するすることによって直接ペプチド又は抗体を標識することと、ペプチド又は抗体を直接標識されている他の試薬とカップリングすることによってペプチド又は抗体を間接的に標識することを含んでいる。間接標識の例には蛍光標識した二次抗体を用いて、および蛍光標識したストレプトアビジンで検出できるようペプチドをビオチンで末端標識して、一次抗体を検出することを含んでいる。使用説明書というのは刊行物、記録、図表、又はここに記載されているキットをどのように使うかを伝達するのに用いることが出来るその他の表現媒体と、卵巣癌に関係するものとして尿中のMMPFFの発生を解釈するための情報、またはその両者である。本発明のキットについての使用説明書は例えば本発明のキットを含む容器に添付されるか、キットをいれた容器と一緒に出荷することができる。代わりに、使用説明書は容器と別に出荷することが出来るが意図としては使用説明書とキットを受取人が一緒に使うようにということである。詳細な記載タンパク質族とかなりのアミノ酸配列類似性を有する1つまたはそれ以上のポリペプチドメソセリン/巨核球可能化因子族;MMPFFが卵巣癌にかかった女性の尿に発生する。これらの尿ペプチドは、例えばMMPFFのタンパク質に対抗する抗体で検出される。患者の尿にこのようなペプチドが発生することは、患者が卵巣癌にかかっていることを示すものである。卵巣癌の多様性、個々のなかでの遺伝子的多様性や他の要因により、MMPFFペプチドは卵巣癌にかかった全患者の尿中には現れにくく、殆ど同じ型の卵巣癌にかかった個々に対して異なった量で現れやすいのである。これらの変化を考慮にいれても、女性の尿中のMMPFFペプチドの1つ又はそれ以上の発生があれば、その女性は卵巣癌にかかっていることを示している。都合のよいことには、卵巣癌にかかった女性の尿にMMPFFペプチドが発生することは卵巣癌だと判る段階に依存しないようである。そのため、MMPFFペプチドの尿での発生は早期段階での卵巣癌の診断に用いることが出来て、治療が無駄となるか、無駄に近い病状段階に達する前に癌の効果的な治療が可能となるのである。ここに開示されたキットと方法の他の利点は卵巣癌患者の尿中のMMPFFペプチドの量と濃度が腫瘍の状態を示すものであることである。そのため、尿MMPFFペプチド発生の査定は卵巣癌の治療のための養生法の効果を査定するのに用いることが出来る。養生で腫瘍の収縮、後退がおこる分だけMMPFFペプチドの尿中濃度が減少することが期待される。同様に、卵巣癌治療の間に尿中のMMPFFペプチドが徐々にスムースに増加していることは、治療のための養生が腫瘍の成長を抑制していないことを示している。ここに記載されているキットや方法は種々の卵巣癌型の発生、進行を査定するのに用いることが出来る。ひとつの重要な実施形態では、キットと方法が最も普通の卵巣癌のなかの上皮卵巣癌の発生または進行を査定するのに用いられる。その他の実施形態では、このキットや方法は間質卵巣腫瘍や生殖細胞卵巣腫瘍の発生や進行を査定するのに用いられる。診断方法本発明は女性の卵巣癌の診断方法を含むものである。その方法は女性から採取した尿のなかのメソセリン/巨核球可能化因子族MMPFFペプチドの発生を査定することを含んで構成されることを特徴としている。尿中のMMPFFペプチドの発生は女性が卵巣癌にかかったことを示唆するものである。種々の型の卵巣癌例えば上皮卵巣癌、程度、段階がこの方法を用いて診断される。この方法はまた種々の細胞の型例えば血清細胞、粘液細胞、子宮細胞、明細胞、及び区別できない卵巣腫瘍によって特徴づけられる卵巣癌の診断に用いることが出来る。女性の尿中のMMPFFペプチドの発生を査定するのに用いられるこの方法は決定的なものではない。どんな方法でもペプチドの有無を査定するのに用いられればその方法でよいのである。尿中のMMPFFペプチドの量例えば濃度を査定できる方法がいくつかの実施形態では好ましく、特に、比較のために時間の経過とともになされる査定の場合に好ましい例えば、抗癌治療の養生効果の査定の場合。ひとつの実施形態において、患者の尿中でのMMPFFペプチドの存在が、特異的にMMPFFペプチドと結合する抗体と尿の接触により、そしてMMPFFペプチドが第1抗体と結合したかを査定することによって査定される。この分野では多くのMMPFF結合抗体が知られている。例えば米国特許第5,320,956に記載され、受入番号HB10570としてATCCに預託されたハイブリドーマによって分泌される抗体を使うことが出来る。その抗体はチャングほか1996、プロック.ナショナル.アカデミ.サイエンス.USA93:136-140ChungetalProcNatlAcadSciUSA93136140に記載のように、特異的にメソセリンタンパク質の約40キロダルトン部と結合する。他の好適な抗体についてはショラーほか1999、プロック.ナショナル.アカデミ.サイエンス.USA9620:11531-11536ScholleretalProcNatlAcadSciUSA961153111536及びPCT公報WO00/50900に記載され、そのような抗体はOV569,4H3,3G3,及び1A6と呼ばれている。2つの抗MMPFFペプチド抗体を用いる診断用キットと方法において、2つの抗体は同じエピトープとの結合を競合しないことが好ましい。例を挙げれば、ショラーほかによってOV569と呼ばれる抗体は4H3,3G3,及び1A6と呼ばれる抗体に結合されたエピトープと異なるエピトープの所で結合する。このように、例えばOV569を基質と結合させて患者の尿中に存在するMMPFFペプチドと適当な抗体結合条件のもとで結合する捕獲抗体として用いることが出来、抗体4H3,3G3,及び1A6のひとつを検出可能に標識して、捕獲抗体と患者の尿の接触後、捕獲抗体と接触させることができる。検出可能に標識された抗体と捕獲抗体との結合はMMPFFペプチドが患者の尿に存在していたことを示している。捕獲抗体と共局在している検出可能な標識の量の分析から存在していたペプチドの量を示すことが出来る。ここに記載されているように、MMPFFペプチドの幾つかの部分は重要なアミノ酸配列相同を共有している。図1から3は少なくとも3つのMMPFFタンパク質のアミノ酸配列の少なくともある部分を示している。図4と5はこれらの配列の直線性を示し、これらのタンパク質のなかの最大配列相同の領域を示している。これらの図から、図6Aおよび6Bそれぞれ配列ID番号4と5に示される配列がMMPFFペプチドの有用な部分をあらわしている。これらの配列のいずれかの全部分又は一部分例えば、10、20、50、又は200の連続残基に対抗する抗体は特に卵巣癌患者の尿中に発生するものを含むのMMPFFペプチドの広い範囲と結合することが期待される。MMPFF例えばここに記載されたもの又は従来技術の中に記載されているもの又はその一部が多クーロン及び単クーロン抗体作製のための標準技術を用いて抗体を発生させるための免疫抗原として用いることが出来る。全長MMPFFの断片は免疫抗原として用いられる場合には配列ID番号1から5までのいずれかのアミノ酸配列か他のMMPFFメンバーのアミノ酸配列の少なくとも10のアミノ酸残基好ましくは12、15、20、50、100か200またはそれ以上からなることが望ましい。ここに記載されたキットと方法に有用な抗体の発生に適切なMMPFFペプチドは、配列ID番号1から5よりなる群から選択された1つの配列の20の連続する残基と少なくとも90好ましくは少なくとも95或いは100は同一である少なくとも20の連続したアミノ酸残基の部分から構成されているものである。抗体発生方法は既知でありここに簡単に要約のみを記載する。一般に免疫抗原はウサギ、ヤギ、ねずみ、その他の哺乳動物又は脊髄動物のような適当な対象即ち免疫担当を免疫化することによって抗体を作製するのに用いられる。好適な免疫抗原作製には例えば遺伝子組み換えと表現された、又は化学的に合成されたポリペプチドを含めることが出来る。その作製は更にフロインドの完全又は不完全補助薬又は同じ免疫活性化試薬のような補助薬を含めることが出来る。多クーロン抗体は免疫抗原として本発明のポリペプチドを用いて適当な対象を免疫化することによって上述のように作製することが出来る。免疫化した対象中の抗体タイターは固定したポリペプチドを用いた酵素結合免疫吸着剤査定法ELISAのような標準技法によって時間の経過とともに監視することが出来る。望むなら、抗体分子はその対象から収穫され又は分離され例えば、対象の血液、血清から、タンパク質Aクロマトグラフィーのような既知の技法によって精製されIgG留分を得ることができる。免疫化後適切なときに、例えば、特定の抗体タイターが最高のとき、抗体生産細胞を対象から収穫し、元来はコーラーとミルスタイン1975ネイチャー256:495-497KohlerandMilsteinNature256495497に記載されたハイブリドーマ技法、人のB細胞ハイブリドーマ技法コツボーほか1983イムノル.トゥデイ4:72KozboretalImmunolToday472、EBVハイブリドーマ技法コールほか1985モノクロナルアンチボディアンドキャンサーテラピー、アランR.リスインクpp77-96Coleetal81985MonoclonalAntibodiesandCancerTherapyAlanRLissIncpp7796又はトリオーマ技法のような標準技法によって単クーロン抗体を作製するのに用いることが出来る。ハイブリドーマを生産する技術はよく知られているカレントプロトコルインイムノロジー1994コリガンほかEdsジョンウイリーサン、インク.、ニューヨーク、NYColiganetalJohnWileySonsIncNewYorkNY本発明の単クーロン抗体を生産するハイブリドーマ細胞は、問題のポリペプチドと結合する抗体用ハイブリドーマ培養菌の上澄みを、例えば標準ELISA査定を用いて、スクリーニングすることによって検出される。単クーロン抗体分泌ハイブリドーマの作製の代わりに、本発明のポリペプチドに対抗する単クーロン抗体は組み換え組み合わせ免疫性グロブリンライブラリー例えば抗体ファージ展示ライブラリを問題のポリペプチドでスクリーニングすることで同定され分離される。ファージ展示ライブラリを発生させスクリーニングするためのキットは市販で入手可能である。例えば、ファーマシアリコンビナントファージアンチボディシステムのカタログ番号27-9400-01PharmaciaRecombinantPhageAntibodySystemCatalogNo27940001;とストラータジーンSURFZAPTMファージディスプレイキットカタログ番号240612BioTechnology913701372ヘイほかフム.アンチボド.ハイブリドマス3:81-85HumAntibodHybridomas38185フュースほか1989サイエンス246:1275-1281Science24612751281グリフィスほか1993EMBOJ.12:725-734EMBOJ12725734人間的な部分と非人間的な部分の両方からなる標準的な組み換えDNA技法を用いた空想的且つ人間的単クーロン抗体組み換え抗体は本発明の範囲内にあるものである。そのような空想的且つ人間的単クーロン抗体はこの分野で既知の組み換えDNA技法によって造られるが、PCT公報番号WO87/02671;ヨーロッパ特許番号184,187;ヨーロッパ特許番号171,496;ヨーロッパ特許番号173,494;PCT公報番号WO86/01533;米国特許番号4,816,567;ヨーロッパ特許番号125,023;ベターほか.1988サイエンス240;1041-1043BetteretalScience24010411043リューほか.1987プロック.ナット.アカド。サイエンス.USA84:3439-3443ProcNatlAcadSciUSA8434393443リューほか.1987J.イムノル.39:3521-3526LiuetalJImmunol13935213526サンほか.1987プロック.ナット.アカド。サイエンス.USA84:214-218ProcNatlAcadSciUSA84214218ニシムラほか.1987キャンサーレス.47:999-1005CancerRes479991005ウッドほか.1985ネイチャー314:446-449WoodetalNature314446449ショウほか.1988Jナット.キャンサーインスト.80:1553-1559ShawetalJNatlCancerInst8015531559モリソン1985サイエンス229:1202-1207MorrisonScience22912021207オーイほか.1986バイオ/テクニーク4:214BioTechniques4214米国特許番号5,225,539;ジョンほか.1986ネイチャー321:552-525JonesetalNature321552525バーホーヤン1988サイエンス239:1534Science2391534バイドラほか.1988J.イムノル.141:4053-4060BeidleretalJImmunol14140534060。抗MMPFFペプチド抗体を患者から採取した尿と接触させる実施形態において、尿はその自然に分泌された状態で用いられるか使用前に部分的に精製するか浄化することが出来る。例えば、尿は標準の方法を用いて遠心分離され、その尿を抗体と接触させる前に沈殿物を実質上除いてもよい。代わりに、尿はその量を減らすか大きな不純物を除くために濾過または限外濾過してもよい。尿中に存在するMMPFFペプチドは10,000から100,000ダルトンの範囲の分子量をもつポリペプチドであると思われるので、MMPFFペプチドが検出前に除かれてしまうのを防ぐために適切な濾過又は限外濾過の選定が必要である。例をあげれば、比較的大きな孔のフィルター例えば、250,000から百万ダルトンの分子量を有する球状粒子の通過を許す様なものが尿から粒状物質を除くのに用いることが出来て、約5000ダルトンよりも大きな分子量をもつタンパク質の通過を除外するような膜を装備した限外濾過装置が濾液を濃縮するのに用いることが出来る。この実施例では、限外濾過装置のなかの残留物のなかのMMPFFの存在を査定できる。MMPFFペプチドは卵巣癌患者の尿中に比較的多量に存在することが多く、ここに記載された多くの方法例えば免疫学的方法は比較的感度がよいので、通常卵巣癌患者の尿中のMMPFFペプチドの発生を検出するのに尿の濃縮は必要としない。尿の浄化が必要とされる場合、遠心分離が好ましい。何故なら、限外濾過を使えば尿中に存在するMMPFFペプチドが濾過媒体と結合したり絡まったりする可能性がないからである。女性の尿中のMMPFFペプチドの存在を査定する1つの好ましい方法は通常[サンドイッチELISA]アッセイとして知られる処理法であるELISAは酵素免疫測定法の略称である。この方法では、抗体はガラスビーズやプラスチックのマルチウエルアッセイプレートの底面のような基質に結合される。この抗体は捕獲抗体と呼ばれる。尿中に存在するいかなるMMPFFペプチドも特異的に捕獲抗体と結合するように、女性からの未処理の、或いは浄化したり精製した尿を、種々の条件のもと例えば、塩および洗浄剤の濃度が低くタンパク質変性でない条件で基質と接触させる。基質は任意にはMMPFFペプチドを含まない液体で洗浄して残りの尿及び結合していないMMPFFを除く。次いで基質は捕獲抗体が結合しているエピトープの所と異なるエピトープの所でMMPFFペプチドと特異的に結合する第2抗体と接触させる。第2抗体はリガンド又はリガンドの受容体のいずれかと検出可能に標識されるか結合する。どちらにせよ、基質を第2抗体を含まない液体で洗浄した後に第2抗体の結合が検出されかつ任意で定量される。第2抗体の検出はMMPFFペプチドの尿中での存在を示している。第2抗体の量が定量されれば、次いで尿中のMMPFFペプチドの量が定量できる。例えば、既知量のMMPFFを含む対照試料を用いて行った測定で検出した第2抗体の量を比較することによって定量できる。抗体検出は抗体を検出可能物質とカップリングすることによって容易にすることができる。検出可能な物質の例には種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、及び放射性物質がある。好適な酵素の例には西洋わさびペルオキシダーゼhorseradishperoxidase、アルカリホスフォターゼ、ベータガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼを含み、好適な補欠分子族複合体の例はストレプトアビジン/ビオチンとアビジン/ビオチンを含み、好適な蛍光物質の例はウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセン、塩化ダンシル又はフィコエリトリンを含み、発光物質の例はルミノールを含み、生体発光性物質の例はルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンで、好適な放射性物質の例は125I、131I、35S、又は3Hを含む。標準化したアッセイ装置を使用することでここに記載された方法の自動化ができるようになる。例えば、24、48、96、384のウエルのあるプラスチックプレートのような多くの異なった標準化したアッセイ用容器が知られている。これらの容器をロボット装置に収容されるように適合させた場合、試料の自動分析が達成でき、比較的短い時間で多くの試料を高処理量でスクリーニングできる。コンピュータ制御アッセイに使用するように適合した自動アッセイ装置と容器はこの分野で既知でありここに記載されたキットや方法に容易に適合されている。女性から採取された尿中のMMPFFペプチドの存在を査定するのに用いることの出来る免疫学的アッセイについての他のタイプは普通競合アッセイと呼ばれる。このアッセイでは、特異的にMMPFFペプチドと結合する抗体が基質に固定される。尿中に存在するいかなるMMPFFペプチドも抗体と結合するように、未処理の尿、浄化又は精製された尿を好ましくは数分又は数時間の間基質に接触させる。特異的に抗体と結合する標識リガンド例えば、同じMMPFFペプチド又は別のMMPFFペプチドの標識されたのものが次いで基質と接触される好ましくは数分又は数時間の間。標識または標識リガンドを含まない液体で基質を洗浄した後、基質と結合した標識リガンドの量が査定される。基質と結合した標識の量が、患者の尿とは接触していないが他の点では同様に処理された基質に結合した標識の量と比較される。結合した標識のこの2つの量の差が基質に結合したMMPFFペプチドの量を示すものであり、基質に適用された尿サンプル中に存在したMMPFFペプチドの量を示唆するものである。免疫学的競合アッセイが用いられると、基質と結合した抗体の標識リガンドは患者の尿中に存在していると判っているか又は存在していると思われるMMPFFペプチドと出来るだけ同じでなければならない。例えば、そのリガンドとそのMMPFFペプチドは同じアミノ酸配列を有するか含んでいなければならない。同様に患者の尿中に存在するMMPFFペプチドがグリコシル化されたものと思われる場合、リガンドも同様に同じ位置で同じ程度にグリコシル化されていなければならない。このように、リガンドに対する抗体とMMPFFペプチドに対する抗体の親和性の差は最小にする事が出来て競合アッセイの精度を改善することが出来る。ここに記載されるキットや方法は人間の患者の尿のなかにあるMMPFFペプチドの発生の査定のみに用いることが出来るもので、そのような発生が女性が卵巣癌にかかっていることを示すものである。併し、もし卵巣癌の1つ以上のマーカーの発生が女性のなかで査定されれば、多くの卵巣癌が検出できて卵巣癌の診断における大きな確信が得られるのである。その他の卵巣癌マーカーも普通尿のなかで発見されるマーカーでありうるし、通常血液のなかで発見されるマーカーでありうるし、又は尿及び血液の両方で発見されるマーカーでありうる。例をあげれば、MMPFFペプチドは卵巣癌にかかった患者の血清のなかに見つかるショラーほか、1999、プロック.ナショナル.アカデミ.サイエンス.USA9620:11531-11536Scholleretal1999ProcNatlAcadSciUSA961153111536。このように、尿中のMMPFFペプチドの発生の査定用にここに記載されたキットや方法は、血清中の同じ又は別のMMPFFペプチドの検出のためのキットや方法と関連付けて用いることが出来る。尿中に発生することが知られている他の卵巣癌マーカーには尿グナドトロピンペプチドurinarygonadotropinpeptide55515557システインプロテイナーゼ291294ネオプテリン359364及び腫瘍関連トリプシン抑制剤10511054ハリラほか、1988、BrJキャンサー、573:304-307304307がある。血清中に発生することが知られている他の卵巣癌マーカーにはCA125ハリラほか、1987、BrJキャンサー、562:153-156HalilaetalBrJCancer56153156癌性胎児抗原259271、血管内皮成長因子vascularendothelialgrowthVEGF;キャンディドドスレイスほか、2002、ジネコルオブステットインベスト543:132-136VEGFCandidoDosReisetalGynecolObstetInvest54132136、腫瘍関連トリプシン抑制剤10511054ハリラほか、1988、BrJキャンサー、573:304-307304307CD44スプライス変形体CD44splicevariants400406抗マリグニン抗体ボゴッホほか1991、ランセット337:927BogochetalLancet337927乳酸脱水素酵素lactatedehydrogenaseLDH、アルファーヒドロキシ酪酸脱水素酵素TPA,シアリルTNSTNクドーほか1999、ジネコルオブステットインベスト471;52-57Kudohetal1999GynecolObstetInvest475257がある。血液及び又は尿中のこれら既知のマーカーの組み合わせのいずれかを査定するためのキットや方法は、それが少なくとも尿中のMMPFFペプチドの発生を査定するキットや方法であるかぎり本発明に含むものである。女性から採取した尿中のMMPFFペプチドの発生を査定するためのここに記載したキットや方法は、女性が卵巣癌にかかる可能性を査定するのに使うことが出来る。女性の尿中のMMPFFペプチドの発生の検出は他の点では同じであるがその尿のなかにMMPFFが発生していない女性にくらべて一層卵巣癌にかかっているらしいことを示している。卵巣腫瘍、腫瘍成長の早期段階、腫瘍形成の初期、及び卵巣腫瘍形成の可能性の増大、との間の差が殆ど区別できないということは認められていることである。それでもなお、これらの進行各々の結果は女性の健康が傷ついてしまう卵巣腫瘍の展開発展なのである。この理由から、ここに開示されているキットや方法を用いたこれらの段階のいずれかを査定することが有用なのである。抗MMPFFペプチド抗体は臨床テストの手順の一部として、例えば、行った卵巣癌治療の養生の効果を測定するために尿中のMMPFFのレベルを診断的に又は予後診断的に監視するのに用いることが出来る。ここに記載されたキットや方法はひとつの薬剤例えばアゴニスト、アンタゴニスト、ペプチドミメティック、タンパク質、ペプチド、核酸、小さい分子、または他の薬物候補品は卵巣癌を緩和、抑制、後退、又は予防するために患者に与えることが出来るかどうかを決定するために用いることが出来る。例えば、そのような方法は、卵巣癌患者が特定の薬剤、または特定の種類の薬剤を用いれば効果的に治療されるかどうかを決定するのに用いられる。尿MMPFFペプチド発生の査定のためのキット本発明は哺乳類例えば女性から採取された尿サンプル中のMMPFFの存在を検出するためのキットも含んでいる。そのキットはMMPFFペプチドと結合する第1の薬剤、そのMMPFFペプチドとその薬剤との結合を査定するための第2の薬剤、尿と第1の薬剤を接触させることを記載した使用説明書を含む。これらのキットは患者が卵巣癌に罹患しているか発症の危険が高まっているかを決定するために用いることが出来る。例えば、キットは尿サンプル中のMMPFFペプチドを検出可能な標識化合物又は薬剤を含むことが出来る。そのキットは又、或いはその代わりに、サンプル中のMMPFFペプチドの量を決定する手段を含むことができる。キットはMMPFFペプチドの量が正常レベル例えば、実施例1の方法を用いて450ナノメータでの吸光度測定値が少なくとも0.2の上か下であるとき検査した患者が卵巣癌にかかっているか発症のリスクを負っているかを査定するための説明書を含むものである。抗体をベースにしたキットに関し、そのキットは、例えば、1特異的にMMPFFペプチドと結合する第1抗体例えば、固形支持体に付けられたとオプションとして、2特異的にMMPFFペプチド例えば、第1抗体が結合しているところのエピトープと別のエピトープのところか第1抗体のどちらかと結合し検出可能な薬剤と結合している第2の別の抗体を含むことができる。代わりに、そのキットは第1抗体とその第1抗体の標識リガンドを含むことが出来る。その第1抗体と女性の尿サンプルを接触させた後、標識リガンドと第1抗体の結合がここで記載されたような競合型アッセイで査定することができる。そのキットは更に試薬、及び又は、女性の尿又は血清中に女性の卵巣癌の発生を示唆する他のマーカーの発生を査定するための指導書を含んで構成できる。本発明は次の実施例をもとにここに記載される。これらの実施例は説明の目的のためにのみ提供するものであって、本発明はこれらの実施例に限定されるものではなく、ここに提供された教示の結果として明らかなすべての変形を含むものである。実施例1試料中のMMPFFを査定するためのサンドウィッチELISA査定尿中のMMPFFを検出するために用いられる代表的査定についてここに記載する。査定は、予め単クーロン抗体4H3ショラーら1999、プロック.ナショナル.アカデミ.サイエンス.USA9620:11531-11536Scholleretal1999ProcNatlAcadSciUSA961153111536とPCT公報WO00/50900に記載されたようなが塗布してある、96のウエルのある、すっきりしたミクロ滴低定プレートのなかで行われる。ウエルの底には、炭酸塩-重炭酸塩バファーpH9.61ミリリッター当たり3マイクログラムの抗体からなる懸濁液50マイクロリッターが個々のウエルに加えられることによって、抗体が塗られる。そのプレートがまわされて、ウエルの底面が塗布され次いで4°Cで一夜乾燥される。個々のウエルをウシ血清アルブミンBSAの3w/v懸濁液で満たし、2時間室温に保ち、その後BSA懸濁液をその個々のウエルから取り除く。人間のIg配列をエンコードしたベクトルを用いてイムノグロブリンIg定常領域に溶融したMPFアミノ酸配列即ち、44kDaメンブラン結合領域の部分からなる溶融タンパク質ショラーら1999、プロック.ナショナル.アカデミ.サイエンス.USA9620:11531-11536Scholleretal1999ProcNatlAcadSciUSA961153111536に記載されたようにを用いて標準カーブがつくられるPCT公報番号WO00/50900及びホーレンバウほか、1995、Jイムノル.メス.188:1-7Hollenbaughetal1995JImmunolMeth18817に記載のように。この溶融たんぱく質はhIgGと呼ばれる。標準カーブについて、溶融タンパク質がミリリッター当たり1.0マイクログラム、ミリリッター当たり0.1マイクログラム、及びその4連続5倍希釈液即ち、1:5、1:25、1125、1:625の濃度で査定される。用いられた希釈剤はBSAの7w/v懸濁液であった。アッセイを行うために、hIgG融合タンパク質希釈液、対照、又は尿サンプル、又は希釈尿サンプルの50マイクロリッターが個々のウエルに加えられた。そのプレートを1時間常温でインキュベートし、ウエルは0.05v/vトゥイーン登録商標20界面活性剤を含むトリス緩衝した食塩水pH7.8から8で洗浄した。ビオチン化モノクローナル抗体OV569ショラーら1999、プロック.ナショナル.アカデミ.サイエンス.USA9620:11531-11536Scholleretal1999ProcNatlAcadSciUSA961153111536及びPCT公報番号WO00/50900に記載のリッター当たり200ナノグラム懸濁液50マイクロリッターが個々のウエルに加えられた。常温で1時間プレートをインキュベートし、そのあと0.05v/vトゥイーン登録商標20界面活性剤を含むトリス緩衝した食塩水pH7.8から8で各ウエルを洗浄した後、ストレプトアビジン-西洋わさびペルオキシダーゼアラバマ州バーミンガムのサウザーンバイオテクノロジーアソシエートインクのカタログ番号7100-05から得たSouthernBiotechnologyAssociatesIncBirminghamAlcatalogno710005の15000希釈液50マイクロリッターを個々のウエルに加え、そのプレートを常温で1時間インキュベートした。50マイクロリッターの3、3’、5、5’-テトラメチルベンジジンTMB;西洋わさびペルオキシダーゼhorseradishperoxidase用発色基質;メリーランド、ガイサースブルグ、キルクガードペリーラボラトリー、インクKirkegaardPerryLaboratoriesIncGaithersburgMDから得られるを個々のウエルに加えて信号を発生する。そのプレートを常温で15分インキュベートし50マイクロリッタのTMBストップ液0.1規定硫酸;メリーランド、ガイサースブルグ、キルクガードペリーラボラトリー、インクKirkegaardPerryLaboratoriesIncGaithersburgMDから得られるを加えてペルオキシダーゼ反応を停止した。ペルオキシダーゼのTMBへの反応により出来た青色をモレキュラーディバイセススペクトラマックス登録商標プラス384MolecularDevicesSpectraMaxPlus384分光光度プレートリーダーを用いて450ナノメータでの吸光度を測定した。実施例2卵巣癌患者から得られた尿サンプル中のMMPFFの検出卵巣癌にかかった25人の患者から尿サンプルを得た。個々の尿サンプルを15分13000rpm約15,700患者から得られた尿サンプルは31サンプルのうち8サンプルにのみ高レベルのMMPFFペプチドが示された。良性の婦人病にかかっている女性から得られた3つの尿サンプル中には高いMMPFFペプチドレベルは検出されなかった。総合すると、56の非卵巣癌患者のうち8の尿サンプルのみしか高いMMPFFペプチドレベルを示さず、一方卵巣癌患者からの25の尿サンプルのうち22が高いMMPFFペプチドを示した。これらのデータは卵巣癌のこの査定法は正診86であることを示している。実施例5尿MMPFFペプチドレベルと卵巣癌の段階との相関実施例2において尿サンプルが分析された25人の卵巣癌患者の各々について、その癌の段階についての情報が集められた。4つの段階の各々についての卵巣癌を有する患者が代表とされた。患者の癌の段階と患者の尿中に検出されたMMPFFペプチドの量には明らかな相関はなかった。ここに記載された尿MMPFFペプチド査定法は早期段階卵巣癌の発生の査定に後期段階卵巣癌と同じように効果的に使用することが出来ることがこの観察から言える。実施例6尿MMPFFペプチドレベルに対する卵巣癌治療の効果実施例2に記載の25人の卵巣癌患者のうち4患者に対する卵巣癌治療のMMPFFペプチドレベルについての効果が査定され、CA125と呼ばれる卵巣癌腫瘍マーカーの血清レベルと比較した。4患者のそれぞれから得られた血清サンプルにおけるCA125が治療前、治療後でCA125IITMペンシルバニア、マルヴァーンフジレバイオダイアグノスティックス、インク.FujirebioDiagnosticsIncMalvernPA査定と本質的に同じ免疫性査定法を用いて査定された。尿MMPFFペプチドレベルは実施例1及び2に記載の方法を用いて4患者の各々について治療前後で査定された。尿MMPFFペプチドレベルの治療前後での変化は図7に説明されているように4人の患者のそれぞれにおいて血清CA125レベルの変化にほぼ比例していた。何故ならCA125は卵巣癌進行の代理マーカーとしてこの分野では受け入れられており、これらのデータは尿のMMPFFペプチドレベルと疾病進行とは相関関係があることを示している。これらのデータはこのテストの臨床的価値と卵巣癌治療効果を監視する非侵襲性方法として使える可能性を立証している。実施例7MMPFFペプチドの尿レベルと血清レベルの間の相関実施例2で査定された尿サンプルを提供した25人の患者の各々から血液を採取した。実施例1に記載の作業標準を用いてこれらの血液サンプルの血清MMPFFペプチドレベルを測定した。血清と尿サンプルは個々の患者から同じ日に集められたものである。MMPFFペプチドが、いくつかの例では非常に低いレベルであったとはいえ、すべての患者から尿と血清の両方のサンプルに検出されている。尿サンプルのテストに0.2吸光度単位450ナノメータでをカットオフ値として用いた場合、テストした25サンプルのうち2288はMMPFFは陽のテスト結果であった。血清サンプルのテストに0.1吸光度単位450ナノメータでをカットオフ値として用いた場合、テストした25サンプルのうち16のみ64がMMPFFは陽のテスト結果であった。これらのデータから、MMPFFペプチドレベルは卵巣癌患者の血清と尿の両方において上昇することを示している。併し、尿中のMMPFFペプチドの検出はより感度が高いようで、それだけ大きい診断的価値を有しているといえよう。実施例8尿CA125レベルの査定CA125レベルが実施例2に記載された25の尿サンプルの各々についてCA125IITMテストキットを用いて査定された。上記査定の背景強度を超える結果は尿サンプルからは全くでなかった。これらの結果からCA125はこれらの患者の尿には存在していないことを示している。これらのデータは、CA125のような血清腫瘍マーカーは、血清の中には発生していてもその患者の尿中には必ずしも存在しないことを立証している。ここに記載された個々の特許、特許申請書、公報で開示されたものはすべて参照文献としてここに組み込まれる。本発明は特定の実施形態を参照に開示されたが本発明の他の実施形態や変形が当業者によって本発明の真の精神と範囲から逸脱することなく案出しうることは明らかである。添付の請求の範囲はそのような実施形態や相当する変形の全てを含むものである。"