"明細書に記載の発明。II.発明の要旨この発明の目的にもとづいて、本明細書で具体化かつ一般的に説明されるように、この発明は、一態様では、CR2を標的とした補体活性調節因子に関する。本発明のさらなる利点は、以下の説明に部分的に記載され、その説明から部分的に明らかであるか、もしくは本発明を実施することによって知ることができる。本発明の利点は、添付された特許請求の範囲に詳しく開示された構成要素および組み合わせによって、実現かつ達成される。前述の一般的説明と後述の詳細な説明との両方が典型的かつ説明的なだけであって、クレームされたように、本発明を限定するものではないことが、理解される。例えば、本発明は以下の項目を提供する。項目1構築物を含む組成物であって、該構築物がCR2と補体活性の調節因子とを含む、組成物。項目2前記構築物が融合タンパク質である、項目1に記載の組成物。項目3前記融合タンパク質が補体を阻害する、項目2に記載の組成物。項目4前記補体活性の調節因子は補体インヒビターを含む、項目1~3のいずれかに記載の組成物。項目5前記補体インヒビターが崩壊促進因子DAFである、項目4に記載の組成物。項目6前記組成物が配列番号10を含む、項目5に記載の組成物。項目7前記組成物が配列番号6を含む、項目5に記載の組成物。項目8前記補体インヒビターがヒトCD59である、項目4に記載の組成物。項目9前記組成物が配列番号12を含む、項目8に記載の組成物。項目10前記組成物が配列番号8を含む、項目8に記載の組成物。項目11前記補体インヒビターがCR1である、項目4に記載の組成物。項目12前記補体インヒビターが配列番号14を含む、項目11に記載の組成物。項目13前記補体インヒビターがMCPである、項目4に記載の組成物。項目14前記補体インヒビターが配列番号16を含む、項目13に記載の組成物。項目15前記補体インヒビターがCrryである、項目4に記載の組成物。項目16前記補体インヒビターが配列番号17を含む、項目15に記載の組成物。項目17前記補体インヒビターがマウスCD59である、項目4に記載の組成物。項目18前記融合タンパク質が補体を活性化する、項目2に記載の組成物。項目19前記補体活性の調節因子が補体活性化因子を含む、項目18に記載の組成物。項目20前記補体活性化因子がヒトIgG1である、項目19に記載の組成物。項目21前記補体活性化因子が配列番号18を含む、項目20に記載の組成物。項目22前記組成物が配列番号21を含む、項目19に記載の組成物。項目23前記補体活性化因子がヒトIgMである、項目19に記載の組成物。項目24前記補体活性化因子が配列番号19である、項目23に記載の組成物。項目25前記補体活性化因子がマウスIgG3である、項目19の組成物。項目26前記補体活性化因子が配列番号22を含む、項目25に記載の組成物。項目27前記補体活性化因子がCVFである、項目19に記載の組成物。項目28前記補体活性化因子が配列番号24を含む、項目27に記載の組成物。項目29前記構築物が免疫結合体である、項目1に記載の組成物。項目30被験体の補体によって影響を受けた状態を処置する方法であって、項目1~29のいずれかの組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。項目31前記状態が癌である、項目30に記載の方法。項目32前記癌が、リンパ腫ホジキンおよび非ホジキン、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、顆粒球性白血病、白血病、菌状息肉腫、癌腫、中実組織の癌腫、有棘細胞癌腺癌、肉腫、膠腫、芽腫、神経芽細胞腫、プラスマ細胞腫、組織球腫、黒色腫、腺腫、低酸素腫瘍、骨髄腫、エイズ関連のリンパ腫または肉腫、転移性癌、膀胱癌、脳癌、神経系癌、頭頸部の有棘細胞癌、神経芽細胞腫/膠芽腫、卵巣癌、皮膚癌、肝癌、黒色腫、口腔の有棘細胞癌、咽頭、喉頭、および肺、結腸癌、子宮頸癌、子宮頸癌、乳癌、上皮癌、腎臓癌、尿生殖器の癌、肺癌、食道癌、頭頸部癌、造血癌、精巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、または膵癌からなる群から選択される、項目31に記載の方法。項目33前記状態がウイルス感染である、項目30に記載の方法。項目34前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス1型、単純ヘルペスウイルス2型、サイトメガロウイルス、EBウィルス、水痘‐帯状疱疹ウイルス、ヒトヘルペスウイルス6、ヒトヘルペスウイルス7、ヒトヘルペスウイルス8、天然痘ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、インフルエンザウイルスA、インフルエンザウイルスB、はしかウィルス、ポリオーマウイルス、ヒトパビローマウイルス、呼吸系発疹ウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デング熱ウイルス、耳下腺炎ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ニワトリ肉腫ウイルス、黄熱病ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウィルス、ラサ熱ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウィルス、セントルイス脳炎ウイルスマレイバレー熱ウイルス、西ナイルウイルス、リフトバレー熱ウィルス、ロタウイルスA、ロタウイルスB、ロタウイルスC、シンドビスウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒトT細胞白血病ウイルス1型、ハンタウイルス、風疹ウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス1型、およびヒト免疫不全症ウイルス2型からなる群から選択される、項目30に記載の方法。項目35前記状態が細菌感染である、項目30の方法。項目36前記細菌感染が、ヒト型結核菌、ウシ型結核菌、ウシ型結核菌BCG株、BCG亜株、マイコバクテリウムアビウム鳥型結核菌、マイコバクテリウムイントラセルラーレ、マイコバクテリウムアフリカヌム、カンサスマイコバクテリウム、マイコバクテリウムマリナム、マイコバクテリウムウルセランス、マイコバクテリウムアビウム亜種パラ結核菌、ノカルジアアステロイデス、他のノルカジア種、レジュネラニューモフィラ、他のレジオネラ種、チフス菌、他のサルモネラ種、シゲラ種、ペスト菌、パスツレラヘモリチ、動物パスツレラ症病原菌パスツレラムルトシダ、他のパスツレラ種、アクチノバシラスプレロニューモニアエ、リステリアモノサイトゲネ、リステリアイバノビイ、ブルセラアボルツス、他のブルセラ種、コードリアルミナンチウム、クラミジアニューモニアエ、トラコーマクラミジア、オウム病クラミジア、コキシエラバーネッティ、他のリケチア種、エーリキア種、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、ストレプトコッカスアガラクティエ、バシラスアンスラシス、大腸菌、コレラ菌、カンピロバクター種、髄膜炎菌、ナイセリア淋菌、緑膿菌、他のシュードモナス種、インフルエンザ菌、軟性下疳菌、他のヘモフィルス種、破傷風菌、他のクロストリジウム種、エルシニアエンテロリチカ、および他のエルシニア種からなる群から選択される、項目35の方法。項目37前記状態が寄生虫感染である、項目30に記載の方法。項目38前記寄生虫感染が、トキソプラズマ、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア、四日熱マラリア原虫、他のプラスモディウム種、トリパノソーマブルーセイ、クルーズトリパノソーマ、森林型熱帯リーシュマニア、他のリーシュマニア種、マンソン住血吸虫、他の住血吸虫種、および赤痢アメーバからなる群から選択される、項目37に記載の方法。項目39前記状態が真菌性感染症である、項目30に記載の方法。項目40前記真菌性感染症が、鵞口瘡カンジダ、クリプトコックス‐ネオフォルマンス、ヒストプラズマカプスラタム、アスペルギルスフミガーツス、コクシジオイデスイミティス、ブラジルパラコクシジオイデス、ブラストミセスデルマチチジス、ニューモシスティスカリニ、アオカビ、およびアルテルナリアアルテルナータからなる群から選択される、項目39に記載の方法。項目41前記状態が炎症状態である、項目30に記載の方法。項目42前記炎症状態が、喘息、全身性エリテマトーデス、腎炎、関節リウマチ、反応性関節炎、多発性関節炎、全身脈管炎、インシュリン依存性糖尿病、多発性硬化症、実験的アレルギー性脳脊髄炎、シェーグレン症候群、対宿主性移植片病、クローン病を含む炎症性大腸疾患、潰瘍性大腸炎、および強皮症からなる群から選択される、項目41に記載の方法。項目43前記被験体が哺乳動物である、項目30に記載の方法。項目44前記被験体がヒトである、項目43に記載の方法。項目45前記被験体がマウスである、項目43に記載の方法。項目46補体介在障害を減少させる方法であって、項目1~17または29のいずれかの組成物を被験体に投与する、方法。項目47補体介在障害を強める方法であって、項目1、2、または18~29のいずれかの組成物を被験体に投与する、方法。発明の詳細な説明本発明は、本発明の好ましい実施形態および好ましい実施形態に包括される実施例に関する以下の詳細な説明と、図面ならびに図面に関する先の説明および以下の説明とを参照することによってより容易に理解されうる。本化合物、組成物、物質、装置、および/または方法を開示および説明するに当たって、特に明記しない限り、この発明が特定の合成方法、特定の組換え生物工学方法、または特定の試薬に限定されるものではなく、当然ながら多様でありうることが理解されたい。本明細書で用いられる用語は、特定の実施形態のみを説明する目的で用いられたものであり、限定することを意図したものではないということも理解されたい。A.定義明細書および付随する請求項の記載で用いられるように、単数形1つのaまたはan、および該theは、文脈において明らかに他のことが述べられているのではないかぎり、複数形の指示対象を包括する。したがって、例えば、1つの医薬担体apharmaceuticalcarrierに言及することによって、2つ以上のそのような担体等の混合物が含まれる。範囲は、およその約about1つの特定の値からの範囲として、かつ/またはおよそのabout別の特定の値までの範囲として本明細書で表記されうる。そのような範囲が表記される場合、別の実施形態は、1つの特定の値からの範囲および/または他の特定の値までの範囲を含む。同様に、値が先行詞約aboutを用いて近似値として表記される場合、特定の値は、別の実施形態を形成することが理解されるであろう。さらに、複数の範囲の各々の終点が、それ以外の終点と関連して有意である場合とそれ以外の終点から独立して有意である場合とがあることが理解されるであろう。この明細書内およびそれに続く請求項の記載内では、以下の意味を持つように定義される多数の用語について言及するすなわち、任意のoptionalまたは任意でoptionallyは、以降に記載される事象または情況が生じる場合と生じない場合とがあることを意味し、その記載が該事象または情況が生じた場合の例と生じない場合の例とを含むことを意味する。処置treatmentまたは処置するtreatingとは、ある状態の被験体に組成物を投与することを意味し、この際、該状態は、いずれの病態、自己免疫疾患、癌、または炎症状態でもありうる。被験体への組成物の投与の作用は、限定はされないが、状態の症状の低減、状態の重度の低減、または状態の完全な除去の作用を持つことができる。本明細書では、阻害inhibitionまたは阻害するinhibitとは、活性を低減させることを意味する。阻害は、活性のわずかな低減から全ての活性の完全な除去までを意味することができることが理解される。インヒビターinhibitorは、活性を低減させるいずれのものでもありうる。本明細書では、活性化activationまたは活性化するactivateとは、活性を増加させることを意味する。活性化は、既存の活性の増加と、新たな活性の誘導とを意味することができることが理解される。活性化因子activatorとは、活性を増加させるいずれのものでもありうる。B.補体阻害構築物および補体活性化構築物CR2および補体活性調節因子を含む構築物を含む組成物を開示する。CR2は、ショートコンセンサスリピートSCRとして知られる15または16の繰り返し単位からなる細胞外部分からなる。アミノ酸1~20は、リーダーペプチドを含み、アミノ酸23~82は、SCR1を含み、アミノ酸91~146は、SCR2を含み、アミノ酸154~210は、SCR3を含み、アミノ酸215~271は、SCR4を含む。活性部位C3dg連結部位は、SCR1~2最初の2個のN末端SCRに位置する。SCR単位は、スペーサーとして働く可変長の短い配列によって隔てられている。活性部位を含有する任意の数のSCRを用いることができることが理解される。一実施形態では、構築物は、4つのN末端SCR単位を含有する。別の実施形態では、構築物は、最初の2個のN末端SCRを含む。別の実施形態では、構築物は、最初の3個のN末端SCRを含む。開示するペプチド、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質フラグメント、および組成物に対して、種および株変異が存在することが理解される。開示するペプチド、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質フラグメント、および組成物に対する全ての種および株変異を明確に開示する。構築物が融合タンパク質である組成物も開示される。本明細書では、融合タンパク質fusionproteinとは、作用自在に連結したペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質を含む2つ以上の構成要素を意味する。CR2は、アミノ酸連結配列によって補体インヒビターまたは活性化因子に連結することができる。リンカーの例は、当該技術分野で公知である。リンカーの例としては、限定はされないが、Gly4Ser3G4S、Gly3Ser4G3S、SerGly4、およびSerGly4SerGly4が挙げられる。連結配列は、ヒトまたはマウスタンパク質内のSCRユニット間で見出される天然のnatural連結配列、例えば、ヒトCR2のSCR2とSCR3との間の連結配列であるVSVFPLEからなることもできる。連結配列を用いずに融合タンパク質を構築することもできる。融合タンパク質が補体を阻害する、本発明の組成物も開示する。補体活性調節因子が補体インヒビターを含む、本発明の組成物も開示する。例えば、補体インヒビターが崩壊促進因子DAF配列番号1ヌクレオチドおよび配列番号2アミノ酸である、本発明の組成物も開示する。例えば、DAFは、グリコホスファチジルアンカーおよびセリン-スレオニンリッチ領域を持たず、4つのSCRドメインを含む可溶性ヒトDAFでありうる。DAFは、4つのSCRドメインおよびセリン-スレオニンリッチ領域を含むがグリコホスファチジルアンカーは持たない可溶性ヒトDAFでもありうる。DAF細胞外領域は、N末端の4つのSCR単位と、それに続くセリン/スレオニンS/Tリッチ領域とからなる。アミノ酸1~34は、リーダーペプチドを含み、アミノ酸35~95は、SCR1を含み、アミノ酸97~159は、SCR2を含み、アミノ酸162~221は、SCR3を含み、アミノ酸224~284はSCR4を含み、アミノ酸287~356は、S/T領域を含む。本発明の一実施形態では、本発明の組成物は、4つのSCR単位全てを含む。本発明の別の実施形態では、組成物は、DAFのSCR2~4を含む。補体インヒビターがCD59と別の補体インヒビターとの間に融合タンパク質を含む、本発明の組成物を開示し、該別の補体インヒビターは、DAF、MCP、Crry、およびCR1からなる群から選択される。補体インヒビターが2つ以上の補体インヒビターの融合タンパク質である、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質がCR2-DAF配列番号6を含む、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質が配列番号5を含むヌクレオチドにコードされる、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質がDAF-CR2配列番号10を含む、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質が配列番号9を含むヌクレオチドにコードされる、本発明の組成物も開示する。補体インヒビターがヒトCD59配列番号3ヌクレオチドおよび配列番号4アミノ酸である、本発明の組成物も開示する。ヒトCD59は、グリコホスファチジルアンカーを持たずに成熟タンパク質を含む可溶性ヒトCD59でありうる。融合タンパク質がCR2-ヒトCD59配列番号8を含む、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質が配列番号7を含むヌクレオチドにコードされる、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質がヒトCD59-CR2配列番号12を含む、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質が配列番号10を含むヌクレオチドにコードされる、本発明の組成物も開示する。補体インヒビターがC5に対する抗体である、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質がCR2-抗C5抗体を含む、本発明の組成物も開示する補体インヒビターがCR1配列番号13ヌクレオチドおよび配列番号14アミノ酸である、本発明の組成物も開示する。CR1の細胞外領域は、30のSCR単位を含むことができる。本発明の一実施形態では、組成物がCR1の完全な細胞外領域を含むことができる。本発明の別の実施形態では、組成物は、CR1の1つの活性部位複数の活性部位を含む。CR1の活性部位は、リーダーペプチドを含むアミノ酸1~46、SCR1~4C4b結合部位、C3bに対してより低い親和性を含むアミノ酸47~300、SCR8~11C3b結合部位、C4bに対してより低い親和性を含むアミノ酸497~750、SCR15~18C3b結合部位、C4bに対してより低い親和性を含むアミノ酸947~1200、およびC1q結合部位を含むアミノ酸1400~1851である。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の組成物は、CR1の活性部位のいずれかの組み合わせまたはいずれか1つあるいはCR1活性部位の全てを含むことができる。補体インヒビターがCR1の活性部位を含む、本発明の組成物を開示するとともに、この際、1つの活性部位複数の活性部位がさらに、アミノ酸6~46を含むリーダーペプチド、SCR1~4C4b結合部位、C3bに対してより低い親和性を含むアミノ酸47~300、SCR8~11C3b結合部位、C4bに対してより低い親和性を含むアミノ酸497~750、SCR15~18C3b結合部位、C4bに対してより低い親和性を含むアミノ酸947~1200、およびC1q結合部位を含むアミノ酸1400~1851を含む。本発明のさらに別の実施形態では、本発明の組成物は、CR1の活性部位のいずれかの組み合わせまたはいずれか1つあるいはCR1の活性部位の全てを含むことができる。補体インヒビターがMCP配列番号15ヌクレオチドおよび配列番号16アミノ酸である、本発明の組成物も開示する。細胞外領域は、4つのSCR単位と、それに続くser/thr領域とからなる。アミノ酸1~34は、リーダーペプチドを含み、アミノ酸35~95は、SCR1を含み、アミノ酸96~158は、SCR2を含み、アミノ酸159~224は、SCR3を含み、アミノ酸225~285は、SCR4を含み、アミノ酸286~314は、S/T領域を含む。補体インヒビターがCrry配列番号17である、本発明の組成物も開示する。Crryは、膜貫通領域を持たずに5つのN末端SCRドメインを含む可溶性マウスCrryでありうる。補体インヒビターがマウスCD59である、本発明の組成物も開示する。マウスCD59は、グリコホスファチジルアンカーを持たずに成熟タンパク質を含む可溶性マウスCD59でありうる。融合タンパク質が補体を活性化する、本発明の組成物を開示する。したがって、補体活性調節因子が補体活性化因子を含む、本発明の組成物を開示する。補体活性化因子がヒトIgG1Fc配列番号18である、本発明の組成物を開示する。補体活性化因子がCR2-ヒトIgG1Fc配列番号20を含む、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質が配列番号21を含むヌクレオチドにコードされる、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質がヒトIgM配列番号19である、本発明の組成物を開示する。融合タンパク質がCR2-ヒトIgMFcを含む、本発明の組成物も開示する。補体活性化因子がマウスIgG3配列番号22である、本発明の組成物を開示する。融合タンパク質がCR2-マウスIgG3Fcを含む、本発明の組成物も開示する。融合タンパク質がCR2-マウスIgMFcを含む、本発明の組成物も開示する。補体活性化因子が、組成物のFc部分を介して抗体依存性細胞媒介性細胞傷害活性ADCCも増加することについても明確に考察する。ADCCは、ナチュラルキラーNK細胞上のFc領域およびFc受容体の認識および接触を介したNK細胞による標的細胞の破壊である。これは、IgG1FcまたはIgG3FcのFcγRIII認識の形態でありうる。FcとのFc受容体の接触に続いて、NK細胞は、パーフォリンおよびグランザイムを用いることによって標的細胞を溶解する。この機構は、腫瘍増殖を制御する上で重要である。CR2-Fc融合タンパク質が免疫原性ではない、本発明の組成物を開示する。免疫原性ではないすなわち、免疫応答を誘出しない組成物は、被験体自身の免疫応答によって攻撃および不活性化されにくいということが理解される。CR2-Fc免疫原性の消失が期待されることにより、抗体がヒト化されていたとしても抗CM抗体を上回る潜在的な利点となる。本発明の一実施形態では、CR2と融合したFc領域は、mu尾部部分mu-tailpieceを含有するヒトまたはマウスIgGアイソタイプ、ヒトまたはマウスIgM、あるいは任意のヒトまたはマウスIgGアイソタイプに由来しうる。mu尾部部分は、IgM由来の18アミノ酸C末端領域であり、IgGFc配列のC末端に付加されると、補体を効率的に活性化するとともにFc受容体に対する親和性が増強しているIgGの重合形態IgMに類似のの生成を生じる。融合は、組成物のFc部分のヒンジ領域で生じうる。mu尾部部分を持つIgMまたはIgGFc領域のいずれかを含有するCR2融合タンパク質は、CR2-IgGFc融合タンパク質を上回る利点を持つことができる。IgMまたはIgG-muFc領域は、最大で6つのFcと12のCR2部位までを持つ重合融合体タンパク質を生じる。これらの構築物は、C3リガンドに対する活性の増強およびエフェクター機能補体活性化およびFc受容体結合の増強ができる。補体活性化因子がCVF配列番号23ヌクレオチドおよび配列番号24アミノ酸である、本発明の組成物も開示する。本発明の一実施形態では、CVFを可溶性CR2と連結することができる。CVFはB因子と結合し、CVFBbすなわち、補体阻害タンパク質によって不活性化されないC3/C5コンベルターゼを形成することによって補体の代替経路を活性化することが理解される。CVFBbの半減期は、生理学的代替経路コンベルターゼC3bBbの半減期が約1分であるのに対して、約7時間である。本発明の一実施形態では、CVFを可溶性CR2に化学的に結合することができる。構築物がベクターである、本発明の組成物を開示する。本発明のベクターを含む細胞を開示する。構築物が免疫結合体である組成物も開示する。本明細書では、免疫結合体immunoconjugateとは、化学的クロスリンカーによって作用自在に連結したペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質を含む2つの以上構成要素を意味する。免疫結合体の構成要素の連結は、該構成要素の反応基上で生じうる。クロスリンカー用いて標的とされうる反応基としては、1級アミン、スルフヒドリル、カルボニル、糖質、およびカルボン酸が挙げられ、あるいは活性基をタンパク質に付加することができる。化学的リンカーの例は、当該技術分野で公知であり、限定はされないが、MBS、スルホ-MBS、SMPB、スルホ-SMPB、GMBS、スルホ-GMBS、EMCS、スルホ-EMCS等のビスマレイミドヘキサン、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、NHS-エステル-マレイミドクロスリンカー;DMA、DMP、DMS、DTBP等のイミドエステルクロスリンカー;EDC[1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドハイドロクロライド]、[2-4-ヒドロキシフェニルエチル]-4-N-マレイミドメチル-シクロヘキサン-1-カルボキサミド、DTME:ジチオ-ビス-マレイミドエタン、DMAジメチルアジパミド2HCl、DMPジメチルピメリミデート2HCl、DMSジメチルスベリミデート2HCl、DTBPジメチル3,3’-ジチオビスプロピオンイミデート2HCl、MBS、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホ-MBSm-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホ-SMPBスルホスクシンイミジル4-[p-マレイミドフェニル]ブチラート、GMBSN-[マレイミドブチリルオキシ]スクシンイミドエステル、EMCSN-[マレイミドカプロイルオキシ]スクシンイミドエステル、およびスルホ-EMCSN-[マレイミドカプロイルオキシ]スルホスクシンイミドエステルを挙げることができる。C.組成物を用いる方法各種の補体阻害タンパク質が、生体非適合性に関連する炎症疾患および症状の治療法として現在検討中である。治療的に特徴付けられたヒト補体インヒビターの最善2つは、補体レセプター1の可溶性形態sCR1および抗C5モノクローナル抗体である。これらの全身的に活性のある阻害タンパク質は、種々の疾患動物モデルにおいて、より近年には臨床試験において効力を示した1~5、6:1037、インビボ効力および臨床結果の教示に関して、本明細書に援用する。被験体の補体によって影響を受けた状態を処置する方法を開示し、該方法は、本発明の組成物を該被験体に投与することを含む。被験体への組成物の投与は、限定はされないが、状態の症状の低減、状態の重度の低減、または状態の完全な除去の作用を持つことができる。1.補体を阻害する組成物を用いる方法被験体の補体によって影響を受けた状態を処置する方法を開示し、該方法は、本発明の組成物を該被験体に投与することを含み、この際、該組成物は補体活性を阻害する。被験体への組成物の投与の作用は、限定はされないが、状態の症状の低減、状態の重度の低減、または状態の完全な除去の作用を持つことができることが理解される。補体媒介性障害を減少させる方法を開示し、該方法は、補体を阻害する本発明の組成物を被験体に投与することを含む。処置される状態が炎症状態である、本発明の方法を開示する。炎症状態が、喘息、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、反応性関節炎、脊椎炎、全身脈管炎、インシュリン依存性糖尿病、多発性硬化症、実験アレルギー性脳脊髄炎、シェーグレン症候群、対宿主性移植片病、クローン病を含む炎症性大腸疾患、潰瘍性大腸炎、乏血再潅流傷害、心筋梗塞、アルツハイマー病、移植拒絶反応同種異系および異種、熱傷、任意の免疫結合体誘導炎症、糸球体腎炎、重症筋無力症、脳ループス、ギヤン‐バレー症候群、脈管炎、全身性硬化症、過敏性、カテーテル反応、アテローム、不妊性、甲状腺炎、ARDS、ポストバイパス症候群、血液透析、若年性リウマトイド、ベーチェット症候群、溶血性貧血、ペンフィグス、水疱性類天疱瘡、脳卒中、アテローム性動脈硬化、および強皮症からなる群から選択されうる、本発明の方法も開示する。状態がウイルス感染である、本発明の方法も開示する。ウイルス感染が、インフルエンザウイルスA、インフルエンザウイルスB、呼吸系発疹ウイルス、デング熱ウイルス、黄熱病ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウィルス、ラサ熱ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレイバレー熱ウイルス、西ナイルウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルスA、ロタウイルスB、ロタウイルスC、シンドビスウイルス、ハンタウイルスからなるウイルスの群から選択されうる、本発明の方法も開示する。状態がウイルスベクターに対する炎症応答である、本発明の方法を開示する。ウイルスベクターは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、修飾ワクシニアアンカラウイルス、およびサイトメガロウイルスからなるウイルスの群から選択されうる。他のウイルスベクターもワクチン送達のために用いられることが理解される。当該技術分野で公知のあらゆるウイルスベクターが明確に開示される。カンジダ属がCR2と類似の結合特性を持つCR3様タンパク質を発現することは当該技術分野で理解されている。CR3様タンパク質は、病因に関与すると思われる。したがって、本発明の一実施形態は、真菌性感染症に罹患する被験体を処置することであり、本発明の組成物を被験体に投与することを含む処置は、真菌-CR3機能を遮断するとともに、補体を阻害する。補体インヒビターがアポトーシスにもとづく療法例えば、Fasリガンドを発現するアデノウイルスを用いる遺伝子療法の結果を高める、本発明の方法を開示する。正常の発生中に生じるアポトーシスは、非炎症性であり、免疫寛容の誘導に関与する。アポトーシス性細胞死は、それがどのよう活性化されるかによって、かつどの細胞型例えば、Fasと連結する治療因子は炎症を誘導することができるであるかによって炎症性でありうるが、壊死性細胞死は、放出された細胞内用物と、刺激された食細胞によって放出される炎症誘発性サイトカインとによって媒介される持続的かつ強力な炎症応答を生じる。アポトーシス細胞および小胞は、正常には、食細胞によって除去されるので、細胞溶解の炎症誘発性の結果を防ぐ。この文脈では、アポトーシス細胞およびアポトーシス小体は、直接、補体を固定することと、補体は、アポトーシス細胞のオプソニン作用および増強された食作用が原因で抗炎症応答を持続することができることとが示される。炎症は、先天性および適応性の免疫応答に影響しうる免疫細胞の非特異的な動員に関与する。アポトーシスにもとづく腫瘍療法中に補体活性化を変調してアポトーシス細胞/小体の食作用性取り込みを阻害することは、腫瘍環境内の炎症性/先天性免疫応答を増強する。さらに、アポトーシス細胞は、免疫原性自己抗原のソースでありえ、除去されたアポトーシス小体は、自己免疫化を生じうる。増強された免疫刺激環境を作り出すことに加えて、腫瘍細胞を誘導してアポトーシスを受けさせる部位で補体を変調することは、さらに、宿主が正常には寛容する腫瘍に対して特異的な免疫を増大または誘発する。本発明の開示する組成物は、CR2およびCR3アンタゴニストとして作用する。CR2阻害を介して補体活性を阻害する方法を開示し、該方法は、本発明の組成物を被験体に投与することを含む。CR3の阻害を介して補体活性を阻害する方法も開示し、該方法は、本発明の組成物を被験体に投与することを含む。CR2アンタゴニストは、免疫応答を変調することができるので、CR3アンタゴニストは、CR3が内皮ICAM1に結合するインテグリンであることから第2の抗炎症作用機構を持つことができる。ICAM1は、炎症部位で発現し、白血球接着および血管外遊出に関与する。さらに、ICAM1発現は、補体活性化産物に上方制御される。2.補体を活性化する組成物を用いる方法被験体の補体によって影響を受けた状態を処置する方法を開示し、該方法は、本発明の組成物を被験体に投与することを含み、この際、該組成物は補体を活性化する。被験体への組成物の投与は、限定はされないが、状態の症状の低減、状態の重度の低減、または状態の完全な除去の作用を持つことができることが理解される。補体媒介性障害を増強する方法を開示し、該方法は、補体を活性化する本発明の組成物を被験体に投与することを含む。状態が癌である、本発明の方法も開示する。癌は、リンパ腫ホジキンおよび非ホジキン、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、骨髄性白血病、白血病、菌状息肉腫、癌腫、中実組織の癌腫、有棘細胞癌、腺癌、肉腫、膠腫、芽腫、神経芽細胞腫、プラスマ細胞腫、組織球腫、黒色腫、腺腫、低酸素腫瘍、骨髄腫、エイズ関連のリンパ腫または肉腫、転移性癌、膀胱癌、脳癌、神経系癌、頭頸部の有棘細胞癌、神経芽細胞腫/膠芽腫、卵巣癌、皮膚癌、肝癌、黒色腫、口腔、咽喉、喉頭、および肺の有棘細胞癌、大腸癌、子宮頸癌、子宮頸癌、乳癌、上皮癌、腎臓癌、尿生殖器の癌、肺癌、食道癌、頭頸部癌、造血癌、精巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、または膵癌からなる群から選択されうる。本発明の一実施形態では、CR2は、抗腫瘍抗体を投与した結果として、または正常には効果のない体液性免疫応答の結果として腫瘍細胞に堆積した補体を標的とすることができる。したがって、本補体活性化組成物を、抗腫瘍抗体と組み合わせて投与することができる。そのような抗腫瘍抗体の例は、周知であり、抗PSMAモノクローナル抗体J591、PEQ226.5、およびPM2P079.1Fracasso,G.etal.,2002Prostate531:9-23;抗Her2抗体hu4D5Gerstner,R.B.,etal.,2002J.Mol.Biol.3215:851-62;抗腎細胞癌抗体として用いることができる抗ジシアロシルGb5モノクローナル抗体5F3ItoA.etal.,2001Glycoconj.J.186:475-485;抗MAGEモノクローナル抗体57BAntonescu,C.R.etal.,2002Hum.Pathol.332:225-9;抗癌モノクローナル抗体CLN-IgKubo,O,etal.,2002NipponRinsho.603:497-503;抗ダルトンのリンパ腫関連抗原DLAAモノクローナル抗体DLABSubbiah,K.etal.,2001IndianJ.Exp.Biol.3910:993-7が挙げられる。抗腫瘍抗体が腫瘍に存在する時間中に本組成物が腫瘍に存在するかぎり、抗腫瘍抗体の投与前、投与と同時に、または投与後に投与することができる。開示される組成物を用いて処置することができる癌の代表的な非限定的な群は以下のものである。すなわち、リンパ腫、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、菌状息肉腫、多発性骨髄腫、ホジキン疾患、骨髄性白血病、膀胱癌、脳癌、神経系癌、頭頸癌、頭頸部の有棘細胞癌、腎臓癌、肺小細胞癌および非小細胞肺癌等の肺癌、尿路上皮癌、腺癌、肉腫、膠腫、悪性膠腫、芽腫、神経芽細胞腫、プラスマ細胞腫、組織球腫瘍、腺腫、低酸素腫瘍、骨髄腫、エイズ関連のリンパ腫または肉腫、転移性癌、神経芽細胞腫/膠芽腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、皮膚癌、肝癌、黒色腫、口腔、咽喉、喉頭、および肺の有棘細胞癌、大腸癌、子宮頸癌、子宮頸癌、乳癌、上皮癌、腎臓癌、尿生殖器の癌、肺癌、食道癌、頭頸部癌、大腸癌、造血癌、精巣癌、結腸直腸癌、胃癌、前立腺癌、ヴァルデンストレーム疾患、または膵癌である。本明細書で開示する補体活性化組成物を用いて、頸部および肛門の形態異常、他の形態異常、重度異形成、過形成、非典型的過形成、および新形成等の前癌状態を処置することもできる。状態が前癌状態である、本発明の方法を開示する。組成物は、前癌細胞の表面上で過剰発現する抗原を認識することが理解される。本発明の補体活性化組成物を用いてウイルス感染症を処置する方法を開示する。ウイルス感染症は、単純ヘルペスウイルス1型、単純ヘルペスウイルス2型、サイトメガロウイルス、EBウイルス、水痘‐帯状疱疹ウイルス、ヒトヘルペスウイルス6、ヒトヘルペスウイルス7、ヒトヘルペスウイルス8、天然痘ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、インフルエンザウイルスA、インフルエンザウイルスB、はしかウイルス、ポリオーマウイルス、ヒトパピローマウイルス、呼吸系発疹ウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デング熱ウイルス、耳下腺炎ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ニワトリ肉腫ウイルス、黄熱病ウイルス,エボラウイルス、マールブルグウィルス、ラサ熱ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレイバレー熱ウイルス、西ナイルウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルスA、ロタウイルスB、ロタウイルスC、シンドビスウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒトT細胞白血病ウイルス1型、ハンタウイルス、風疹ウイルス、サル免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス1型、およびヒト免疫ウイルス2型からなるウイルスの群から選択されうる。本発明の補体活性化組成物を用いて細菌感染を処置する方法を開示する。細菌感染が、ヒト型結核菌、ウシ型結核菌、ウシ型結核菌BCG株、BCG亜株、マイコバクテリウムアビウム鳥型結核菌、マイコバクテリウムイントラセルラーレ、マイコバクテリウムアフリカヌム、カンサスマイコバクテリウム、マイコバクテリウムマリナム、マイコバクテリウムウルセランス、マイコバクテリウムアビウム亜種パラ結核菌、ノカルジアアステロイデス、他のノルカジア種、レジュネラニューモフィラ、他のレジオネラ種、チフス菌、他のサルモネラ種、シゲラ種、ペスト菌、パスツレラヘモリチ、動物パスツレラ症病原菌パスツレラムルトシダ、他のパスツレラ種、アクチノバシラスプレロニューモニアエ、リステリアモノサイトゲネ、リステリアイバノビイ、ブルセラアボルツス、他のブルセラ種、コードリアルミナンチウム、クラミジアニューモニアエ、トラコーマクラミジア、オウム病クラミジア、コキシエラバーネッティ、他のリケチア種、エーリキア種、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、ストレプトコッカスアガラクティエ、バシラスアンスラシス、大腸菌、コレラ菌、カンピロバクター種、髄膜炎菌、ナイセリア淋菌、緑膿菌、他のシュードモナス種、インフルエンザ菌、軟性下疳菌、他のヘモフィルス種、破傷風菌、他のクロストリジウム種、エルシニアエンテロリチカ、および他のエルシニア種からなる細菌の群から選択されうる、本発明の方法も開示する。本発明の補体活性化組成物を用いて寄生虫感染を処置する方法を開示する。寄生虫感染が、トキソプラズマ、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア、四日熱マラリア原虫、他のプラスモディウム種、トリパノソーマブルーセイ、クルーズトリパノソーマ、森林型熱帯リーシュマニア、他のリーシュマニア種、マンソン住血吸虫、他の住血吸虫種、および赤痢アメーバからなる群から選択されうる本発明の方法も開示する。本発明の補体活性化組成物を用いて真菌性感染症を処置する方法を開示する。真菌性感染症が、鵞口瘡カンジダ、クリプトコックス‐ネオフォルマンス、ヒストプラズマカプスラタム、アスペルギルスフミガーツス、コクシジオイデスイミティス、ブラジルパラコクシジオイデス、ブラストミセスデルマチチジス、ニューモシスティスカリニ、アオカビ、およびアルテルナリアアルテルナータからなる群から選択されうる、本発明の方法も開示する。本発明の方法では、被験体は哺乳動物でありうる。例えば、哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類動物、マウス、ラット、ブタ、イヌ、ネコ、サル、ウシ、またはウマでありうる。3.研究ツールとして組成物を用いる方法開示する組成物を研究ツールとして種々の方法で用いることができる。例えば、開示する組成物を用いて、補体活性化のインヒビターを研究することができる。開示する組成物を、癌、ウイルス感染症、細菌感染、寄生虫感染、および真菌性感染症等の補体活性化に関連する疾患に対する診断ツールとして用いることができる。CR2融合タンパク質は、補体活性化部位を標的とし、標識したCR2融合タンパク質は、補体活性化に関連する状態を診断することができる。例えば、腫瘍反応性抗体は、腫瘍細胞上の補体を活性化し、その後、CR2が該補体を標的とする。標識したCR2-Fcは、その後、抗体ターゲティングに続くシグナルを増幅することが可能である。D.組成物開示する組成物を調製するために用いられる構成要素と、本明細書に開示する方法に用いられる組成物自体とを開示する。これらの物質および他の物質を本明細書に開示する。これらの物質の組み合わせ、サブセット、相互作用、群等を開示する際、これらの化合物の様々な個々の、かつ集合的な組み合わせおよび入れ替えの各々に対して明確に言及してはいないが、各々が本明細書において明確に考慮および説明されることが理解される。例えば、特定のCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVFについて説明する場合、ならびに/あるいはそれらの特定の組み合わせについて説明および議論される場合、ならびに/あるいはCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、および/またはそれらの組み合わせを含む多数の分子になされうる多数の修飾について議論される場合、そうでない場合が明確に示されていない限りCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、またはそれらの組み合わせおよび可能な修飾のあらゆる組み合わせおよび入れ替えが明確に考慮される。したがって、分子A、B、およびCのクラスと、分子D、E、およびFのクラスと、組み合わせ分子A-Dの例とが開示される場合、各々が個々に、かつ集合的に組み合わせを意味すると各々に対して個々に詳述されていないとしても、A-E、A-F、B-D、B-E,B-F、C-D、C-E、およびC-Fが開示されていると考えられる。同様に、これらの任意のサブセットまたは組み合わせも開示する。したがって、例えば、A-E、B-F、およびC-Eのサブグループが開示されていると考えられる。この概念を、限定はされないが、開示する組成物を作製および使用する方法でのステップを含むこの出願の全ての態様に適用する。したがって、実行することができる種々の付加的なステップがある場合、これらの付加的なステップの各々を、開示する方法の任意の特定の実施形態および実施形態の組み合わせで実行することができることが理解される。1.配列類似性本明細書で論じられるように、用語相同性homologyおよび同一性identityの使用は、類似性と同じものを意味することが理解される。したがって、例えば、用語相同性が2つの非天然の配列間で用いられる場合、これは、必ずしも、これらの2つの配列間に進化上の関連があることを示しているわけではなく、むしろ、それらの核酸配列間の類似性または関連性を見ている。2つの進化上で関連する分子間の相同性を決定する方法の多くは、日常的に、それらが進化上で関連しているか否かに関係なく配列類似性を測定する目的で任意の2つ以上の核酸またはタンパク質に適用される。一般に、本明細書に開示する遺伝子およびタンパク質の任意の既知の変異体および誘導体または生じる可能性があるものを定義する一方法は、特定の既知の配列に対する相同性の観点から変異体および誘導体を定義することを介するものであることが理解される。本明細書に開示する特定の配列のこの同一性は、本明細書の他の箇所でも論じられる。例えば、配列番号25は、CR2の特定の配列を説明し、配列番号26は、配列番号25にコードされるタンパク質、すなわちCR2タンパク質の特定の配列を説明する。これらの遺伝子および他の遺伝子ならびに本明細書に開示するタンパク質の変異体を明確に開示し、それらは、規定の配列に対して少なくとも70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99パーセント相同性を持つ。当業者は、2つのタンパク質または遺伝子等の核酸の相同性をどうように決定するかを理解する。例えば、2つの配列を、相同性がその最高レベルになるようにアラインした後、相同性を算出することができる。相同性を算出する別の方法を、公開されるアルゴリズムによって実行することができる。比較に対する配列の最適アラインメントを、SmithandWatermanAdv.Appl.Math.2:4821981の局所的相同性アルゴリズムによって、NeedlemanandWunsch,J.MoLBiol.48:4431970の相同性アラインメントアルゴリズムによって、PearsonandLipman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:24441988の類似性方法のための探索によって、これらのアルゴリズムのコンピューター化インプリメンテーションtheWisconsinGeneticsSoftwarePackage,GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.,Madison,WI中のGAP、BESTFIT、FASTA、およびTFASTAによって、または検定によっておこなうことができる。例えば、Zuker,M.Science244:48-52,1989,Jaegeretal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:7706-7710,1989,Jaegeretal.MethodsEnzymol.183:281-306,1989少なくとも核酸アラインメントに関連する物質に対して、本明細書に援用するに開示されるアルゴリズムによって、同じ種類の相同性を核酸のために得ることができる。通常、上記方法のいずれも用いることができることと、特定の例では、これらの種々の方法の結果は異なりうることとが理解されるが、当業者は、同一性がこれらの方法の少なくとも1つを用いて見出される場合、配列が規定の同一性を持ち、本明細書に開示されることを理解する。例えば、本明細書で用いるように、別の配列に対して特定のパーセント相同性を持つとして詳述される配列とは、上記の算出方法の任意の1つ以上によって算出されるような詳述した相同性を持つ配列を指す。例えば、第1の配列が、Zuker算出方法を用いて第2の配列に対して80パーセント相同性を持つと算出される場合、第1の配列が任意の他の算出方法で算出されると第2の方法に対して80パーセント相同性を持たないとしても、本明細書で定義するように、第1の配列は、第2の配列に対して80パーセント相同性を持つ。別の例としては、第1の配列が、Zuker算出方法およびPearsonandLipman算出方法両方を用いて第2の配列に対して80パーセント相同性を持つと算出される場合、第1の配列がSmithandWaterman算出方法、NeedlemanandWunsch算出方法、Jaeger算出方法、または任意の他の算出方法で算出されると第2の方法に対して80パーセント相同性を持たないとしても、本明細書で定義するように、第1の配列は、第2の配列に対して80パーセント相同性を持つ。さらに別の例としては、第1の方法が、算出方法の各々を用いて第2の配列に対して80パーセント相同性を持つと算出される実際には、多くの場合、異なる算出方法で算出される相同性パーセント値は異なる結果になる場合、本明細書で定義するように、第1の配列は、第2の配列に対して80パーセント相同性を持つ。2.核酸CR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CDS9、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-抗C5、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVFをコードする核酸と、種々の機能的核酸とを含む核酸ベースである、本明細書で開示する種々の分子がある。開示する核酸は、例えば、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、またはヌクレオチド置換体で構成される。これらの分子および他の分子の非限定的な例を本明細書で論じる。例えば、ベクターが細胞で発現する際、発現したmRNAは、通常、A、C、G、およびUで構成されることが理解される。同様に、例えば、アンチセンス分子が、例えば外因性送達によって細胞または細胞環境に導入される場合、アンチセンス分子は、細胞環境中でアンチセンス分子の分解を減少させるヌクレオチドアナログで構成されることが有利であることが理解される。aヌクレオチドおよび関連分子ヌクレオチドは、塩基部分、糖部分およびリン酸部分を含有する分子である。ヌクレオチド同士を、ヌクレオシド間リンケージを作り出すそれらのリン酸部分および糖部分を介して連結することができる。ヌクレオチドの塩基部分は、アデニン-9-イルA、シトシン-1-イルC、グアニン-9-イルG、ウラシル-1-イルU、およびチミン-1-イルTでありうる。ヌクレオチドの糖部分は、リボースまたはデオキシリボースである。ヌクレオチドのリン酸部分は、5価リン酸である。ヌクレオチドの非限定的な例は、3’-AMP3’-アデノシンモノリン酸または5’-GMP5’-グアノシンモノリン酸である。ヌクレオチドアナログは、塩基、糖、またはリン酸部分のいずれかに対するある種の修飾を含むヌクレオチドである。塩基部分に対する修飾としては、A、C、G、およびT/Uの天然および合成の修飾と、異なるプリンまたはプリミジン塩基例えば、ウラシル-5-イル.psi.、ヒポキサンチン-9-イルI、および2-アミノアデニン-9-イルとが挙げられる。修飾された塩基としては、限定はされないが、5-メチルシトシン5-me-C、5-ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2-アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの6-メチル誘導体および他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの2-プロピル誘導体および他のアルキル誘導体、2-チオウラシル、2-チオチミン、および2-チオシトシン、5-ハロウラシルおよび5-ハロシトシン、5-プロピニルウラシルおよび5-プロピニルシトシン、6-アゾウラシル、6-アゾシトシンおよび6-アゾチミン、5-ウラシル偽ウラシル、4-チオウラシル、8-ハロ、8-アミノ、8-チオール、8-チオアルキル、8-ヒドロキシル、および他の8-置換アデニンおよび8-置換グアニン、5-ハロ、特に5-ブロモ、5-トリフルオロメチル、および他の5-置換ウラシルおよび5-置換シトシン、7-メチルグアニンおよび7-メチルアデニン、8-アザグアニンおよび8-アザアデニン、7-デアザグアニンおよび7-デアザアデニンならびに3-デアザグアニンおよび3-デアザアデニンが挙げられる。付加的な塩基修飾は、例えば、米国特許第3,687,808号、Englischetal.,AngewandteChemie,InternationalEdition,1991,30,613およびSanghvi,Y.S.,Chapter15,AntisenseResearchandApplications,pages289-302,Crooke,S.T.andLebleu,B.ed.,CRCPress,1993で見出される。特定のヌクレオチドアナログ、例えば5-置換ピリミジン、6-アザピリミジン、ならびにN-2、N-6、およびO-6置換プリン2-アミノプロピルアデニン、5-プロピニルウラシル、および5-プロピニルシトシンを含む、5-メチルシトシンは、二重鎖形成の安定性を増加することができる。しばしば、塩基修飾は、例えば2’-O-メトキシエチル等の糖修飾と組み合わせて、増加された二重鎖安定性等の特有の特徴を達成することができる。様々な塩基修飾を詳述および説明する第4,845,205号、第5,130,302号、第5,134,066号、第5,175,273号、第5,367,066号、第5,432,272号、第5,457,187号、第5,459,255号、第5,484,908号、第5,502,177号、第5,525,711号、第5,552,540号、第5,587,469号、第5,594,121、第5,596,091号、第5,614,617号、および第5,681,941号等の多数の米国特許がある。これらの特許を本明細書に援用する。ヌクレオチドアナログは、糖部分の修飾を含むこともできる。糖部分に対する修飾としては、リボースおよびデオキシリボースの天然の修飾と、合成の修飾とが挙げられる。糖修飾としては、限定はされないが、2’位置での以下の修飾が挙げられる。すなわち、OH;F;O-、S-、またはN-アルキル;O-、S-、またはN-アルケニル;O-、S-、またはN-アルキニル;あるいはO-アルキル-O-アルキルであり、この際、アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換または非置換C1~C10アルキルまたはC2~C10アルケニルおよびアルキニルでありうる。2’糖修飾としては、限定はされないが、-O[CH2nO]mCH3、-OCH2nOCH3、-OCH2nNH2、-OCH2nCH3、-OCH2n-ONH2、および-OCH2ON[CH2nCH3]2も挙げられ、この際、nおよびmは1~10である。2’位置での他の修飾としては、限定はされないが、C1~C10低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリール、アラルキル、O-アルカリール、またはO-アラルキル、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、RNA切断基、レポーター基、インタカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善する基またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善する基および類似の特性を持つ他の置換基が挙げられる。類似の修飾を糖上の他の位置、特に、3’末端ヌクレオチド上の糖の3’位置または2’-5’連結オリゴヌクレオチド内、および5’末端ヌクレオチドの5’位置でおこなうことができる。修飾された糖としては、CH2およびS等の架橋環酸素での修飾を含むものも挙げられる。ヌクレオチド糖アナログは、ペントフラノシル糖の代わりのシクロブチル部分等の糖模倣体を持つことができる。第4,981,957号、第5,118,800号、第5,319,080号、第5,359,044号、第5,393,878号、第5,446,137号、第5,466,786号、第5,514,785号、第5,519,134号、第5,567,811号、第5,576,427号、第5,591,722号、第5,597,909号、第5,610,300号、第5,627,053号、第5,639,873号、第5,646,265号、第5,658,873号、第5,670,633号、および第5,700,920号これら特許の各々の全体を本明細書に援用する等の、そのような修飾された糖構造の調製を教示する多数の米国特許がある。ヌクレオチドアナログは、リン酸部分で修飾することもできる。修飾されたリン酸部分としては、限定はされないが、2つのヌクレオチド間のリンケージがホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、3’-アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、3’-アミノホスホルアミデ-トおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含むホスホルアミデ-ト、チオホスホルアミデ-ト、チオアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにボラノホスフェートを含有するように修飾されうるものが挙げられる。2つのヌクレオチド間のこれらのリン酸または修飾されたリン酸リンケージは、3’-5’リンケージまたは2’-5’リンケージを介するものでありえ、該リンケージは、3’-5’~5’-3’または2’-5’~5’-2’等の反転極性を含有することができることが理解される。種々の塩、混合塩、および遊離酸形態も包括される。修飾されたリン酸を含有するヌクレオチドの作製および使用方法を教示する多数の米国特許としては、限定はされないが、第3,687,808号、第4,469,863号、第4,476,301号、第5,023,243号、第5,177,196号、第5,188,897号、第5,264,423号、第5,276,019号、第5,278,302号、第5,286,717号、第5,321,131号、第5,399,676号、第5,405,939号、第5,453,496号、第5,455,233号、第5,466,677号、第5,476,925号、第5,519,126号、第5,536,821号、第5,541,306号、第5,550,111号、第5,563,253号、第5,571,799号、第5,587,361号、および第5,625,050号これらの特許の各々を本明細書に援用するが挙げられる。ヌクレオチドアナログは、単一の修飾を含むことのみを必要とするが、1つの部分内または異なる部分の間に複数の修飾を含むこともできることが理解される。ヌクレオチド置換体は、ペプチド核酸PNA等の、ヌクレオチドと類似の機能特性を持つがリン酸部分を含有しない分子である。ヌクレオチド置換体は、ワトソン-クリックまたはフーグステン様式で核酸を認識するが、リン酸部分以外の部分を介して互いに連結する分子である。ヌクレオチド置換体は、適当な標的核酸と相互作用する際、二重らせん型構造に同調することができる。ヌクレオチド置換体は、リン酸部分および/または糖部分が置換されたヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログである。ヌクレオチド置換体は、標準的なリン原子を含有しない。リン酸に対する置換体は、例えば、短鎖アルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間リンケージ、混合ヘテロ原子およびアルキルまたはシクロアルキルヌクレオオシド間リンケージ、あるいは1つ以上の短鎖ヘテロ原子またはヘテロ環ヌクレオシド間リンケージでありうる。これらは、モルホリノリンケージヌクレオシドの糖部分から部分的に形成される;シロキサン主鎖;スルフィド、スルホキシド、およびスルホン主鎖;ホルムアセチルformacetylおよびチオホルムアセチルthioformacetyl主鎖;メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖;アルカン含有主鎖;スルファメート主鎖;メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ主鎖;スルホネートおよびスルホンアミド主鎖;アミド主鎖;ならびに混合N、O、S、およびCH2成分部分を持つ他のものを持つものを含む。多数の米国特許は、これらの種類のリン酸置換の作製および使用方法を開示しており、限定はされないが、第5,034,506号、第5,166,315号、第5,185,444号、第5,214,134号、第5,216,141号、第5,235,033号、第5,264,562号、第5,264,564号、第5,405,938号、第5,434,257号、第5,466,677号、第5,470,967号、第5,489,677号、第5,541,307号、第5,561,225号、第5,596,086号、第5,602,240号、第5,610,289号、第5,602,240号、第5,608,046号、第5,610,289号、第5,618,704、第5,623,070号、第5,663,312号、第5,633,360号、第5,677,437号、第および5,677,439号これらの特許の各々を本明細書に援用するが挙げられる。ヌクレオチド置換体中では、ヌクレオチドの糖およびリン酸部分両方が、例えば、アミド型リンケージアミノエチルグリシンに置換されうるPNAことも理解される。米国特許第5,539,082号、第5,714,331号、および第5,719,262号これら特許の各々を本明細書に援用するは、PNA分子の作製および使用方法について教示するNielsenetal.,Science,1991,254,1497-1500も参照せよ。他の種類の分子複合体をヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログに連結して、例えば、細胞内取り込みを増強することも可能である。複合体を、ヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログに化学的に連結することができる。そのような複合体としては、限定はされないが、コレステロール部分Letsingeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86,6553-6556、コール酸Manoharanetal.,Bioorg.Med.Chem.Let.,1994,4,1053-1060、チオエーテル、例えば、ヘキシル-S-トリチルチオールManoharanetal.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1992,660,306-309;Manoharanetal.,Bioorg.Med.Chem.Let.,1993,3,2765-2770、チオコレステロールOberhauseretal.,Nucl.AcidsRes.,1992,20,533-538、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基Saison-Behmoarasetal.;EMBOJ.,1991,10,1111-1118;Kabanovetal.,FEBSLett.,1990,259,327-330;Svinarchuketal.,Biochimie,1993,75,49-54、リン脂質、例えば、ジ-ヘキサデシル-rac-グリセロールまたはトリエチルアンモニウム1,2-ジ-O-ヘキサデシル-rac-グリセロ-3-H-ホスホネートManoharanetal.,TetrahedronLett.,1995,36,3651-3654;Sheaetal.,Nucl.AcidsRes.,1990,18,3777-3783、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖Manoharanetal.,NucleosidesNucleotides,1995,14,969-973、あるいはアダマンタン酢酸Manoharanetal.,TetrahedronLett.,1995,36,3651-3654、パルミチル部分Mishraetal.,Biochim.Biophys.Acta,1995,1264,229-237、あるいはオクダデシルアミンまたはヘキシルアミノ-カルボニル-オキシコレステロール部分Crookeetal.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277,923-937等の脂質分が挙げられる。多数の米国特許は、そのような複合体の調製について教示しており、限定はされないが米国特許第4,828,979号、第4,948,882号、第5,218,105号、第5,525,465号、第5,541,313号、第5,545,730号、第5,552,538号、第5,578,717号、第5,580,731号、第5,580,731号、第5,591,584号、第5,109,124号、第5,118,802号、第5,138,045号、第5,414,077号、第5,486,603号、第5,512,439号、第5,578,718号、第5,608,046号、第4,587,044号、第4,605,735号、第4,667,025号、第4,762,779号、第4,789,737号、第4,824,941号、第4,835,263号、第4,876,335号、第4,904,582号、第4,958,013号、第5,082,830号、第5,112,963号、第5,214,136号、第5,082,830号、第5,112,963号、第5,214,136号、第5,245,022号、第5,254,469号、第5,258,506号、第5,262,536号、第5,272,250号、第5,292,873号、第5,317,098号、第5,371,241号、第5,391,723号、第5,416,203号、第5,451,463号、第5,510,475号、第5,512,667号、第5,514,785号、第5,565,552号、第5,567,810号、第5,574,142号、第5,585,481号、第5,587,371,号、第5,595,726号、第5,597,696号、第5,599,923号、第5,599,928号、および第5,688,941号これら特許の各々を本明細書に援用するが挙げられる。ワトソン-クリック相互作用は、ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、またはヌクレオチド置換体のワトソン-クリック面との少なくとも1つの相互作用である。ヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、またはヌクレオチド置換体のワトソン-クリック面としては、プリンベースのヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド置換体のC2、N1、およびC6位置と、ピリミジンベースのヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、ヌクレオチド置換体のC2、N3、C4位置が挙げられる。フーグステン相互作用は、二重鎖DNAの主溝中にさらされるヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログのフーグステン面で起こる相互作用である。フーグステン面としては、プリンヌクレオチドのN7位置とC6位置の反応基NH2またはOとが挙げられる。b配列例えば、本明細書に開示されるような配列または文献で入手できる配列を持つCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-R2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVF遺伝子に関連する種々の配列がある。これらの配列および他の配列全体と、そこに含まれる個々の部分列とを本明細書に援用する。1つの特定の配列は、開示する組成物および方法を例示する例として、本明細書で用いられる配列番号25で詳述される。この配列に関連する記載は、特に明記されない限り、CR2、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVFに関連する任意の配列に適用可能であることが理解される。当業者は、配列不一致よび差異を解消する方法と、他の関連配列CR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVFの配列に、特定の配列に関連する組成物および方法を調整する方法とを理解する。プライマーおよび/またはプローブを、本明細書に開示される情報および当該技術分野で公知の情報を与えられている任意のCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVF配列に対して設計することができる。3.細胞への組成物の送達本融合タンパク質組成物、免疫結合体組成物、および核酸組成物を細胞にインビトロまたはインビボで送達するために用いることができる多数の組成物および方法がある。本発明の組成物を、薬学的に許容される担体中で被験体に好適に投与する。適当な担体およびそれらの配合物は、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy19thed.ed.A.R.Gennaro,MackPublishingCompany,Easton,PA1995に記載される。通常、適当な量の薬学的に許容される塩を配合物中で用いて、配合物を等張にする。薬学的に許容される担体の例としては、限定はされないが、生理食塩水、水:油エマルジョン、油:水エマルジョン、水:油:水エマルジョン、ならびにリンガー溶液およびブドウ糖溶液が挙げられる。溶液のpHは、好ましくは、約5~約8であり、より好ましくは、約7~約7.5である。さらに、担体は、抗体を含有する固形疎水性ポリマーの半透性マトリクッス等の徐放性配合物を含み、このマトリックスは、成型物の形態、例えば、膜、リポソーム、または微小粒子である。特定の担体が、例えば、投与経路および投与される抗体の濃度に応じてより好ましいことが当業者には自明である。本発明の組成物を、注射例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内によって、あるいは効果的な形態で血流に組成物の送達を確実にする注入等の他の方法によって被験体、患者、または細胞に投与することができる。局所的または静脈内注射が好ましい。本発明の組成物を投与するための効果的な投与量およびスケジュールを経験的に決定することができ、そのような決定をなすことは当該技術分野の技術内である。当業者は、投与しなければならない本発明の組成物の投与量が、例えば、該組成物を受ける被験体、投与経路、用いられる特定の種類の組成物、および投与される他の薬物に応じて変わることを理解する。単独で用いられる本発明の組成物の通常の1日投与量は、上記の要因に応じて、1日に体重1kg当たり約1μg~100mgの範囲である。a核酸にもとづく送達系インビトロまたはインビボのどちらかで、核酸を細胞に送達するために用いることができる多数の組成物および方法がある。これらの方法および組成物は、おおまかに2つのクラスに分けることができる。すなわち、ウイルスにもとづく送達系および非ウイルスにもとづく送達系である。例えば、核酸を、電気穿孔、リポフェクション、リン酸カルシウム沈降、プラスミド、ウイルスベクター、ウイルス核酸、ファージ核酸、ファージ、コスミド等の多数の直接送達系を介して、あるいはカチオンリポソーム等の細胞または担体中の遺伝物質の輸送を介して送達することができる。ウイルスベクター、化学的トランスフェクタントを含むトランスフェクションのための適当な手段またはDNAの電気穿孔および直接拡散等の物理力学的方法については、例えば、Wolff,J.A.,etal.,Science,247,1465-1468,1990;およびWolff,J.A.Nature,352,815-818,1991に記載される。そのような方法は、当該技術分野で公知であり、本明細書に開示する組成物および方法とともに用いるために容易に適応できる。特定の場合では、該方法を改変して、巨大DNA分子とともに特異的に機能する。さらに、これらの方法を用いて、担体のターゲティング特性を用いることによって特定の疾患および細胞集団を標的とすることができる。輸送ベクターは、細胞中に遺伝子を送達するために用いられる任意のヌクレオチド構造物例えば、プラスミド、あるいは遺伝子を送達するための一般的戦略の部分、例えば、組換え型レトロウイルスまたはアデノウイルスの部分でありうるRametal.CancerRes.53:83-88,1993本明細書で用いられるように、プラスミドまたはウイルスベクターは、配列番号25等の開示する核酸を分解せずに細胞中に輸送し、かつ該核酸が送達される細胞中で遺伝子の発現を生成するプロモーターを含む因子である。いくつかの実施形態では、CR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVFは、ウイルスまたはレトロウイルスのどちらかに由来する。ウイルスベクターは、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、エイズウイルス、神経栄養性ウイルス、シンドビス、およびHIV主鎖を有する、これらのウイルスを含む他のRNAウイルスである。ベクターとして適当に用いられるようにするこれらのウイルスの特性を共有する任意のウイルスファミリーも好ましい。レトロウイルスとしては、マウスモロニ―白血病ウイルスMMLVと、ベクターとしてMMLVの望ましい特性を発現するレトロウイルスとが挙げられる。レトロウイルスベクターは、他のウイルスベクターより大きな遺伝的ペイロード、すなわちトランスジーンまたはマーカー遺伝子を運搬することができ、この理由のために一般的に用いられる。しかし、レトロウイルスは、非増殖細胞中では有用ではない。アデノウイルスベクターは、比較的安定であり、扱いが容易であり、高力価を持ち、エアロゾル配合物中で送達することができ、さらに非増殖細胞をトランスフェクトすることができる。ポックスウイルスベクターは、大きく、遺伝子を導入するための複数の部位を持つ。ポックスウイルスベクターは、熱安定性であり、室温で保存できる。ウイルス抗原によって誘出される宿主生物の免疫応答を阻害するように操作されたウイルスベクターが好ましい実施形態である。この種類の好ましいベクターは、インターロイキン8または10に対するコーディング領域を保持する。ウイルスベクターは、細胞に遺伝子を導入する化学的または物理的方法より高い処理能力遺伝子を導入する能力を持つことができる。通常、ウイルスベクターは、非構造初期遺伝子、構造後期遺伝子、RNAポリメラーゼIII転写物、複製およびキャプシド形成に必要な逆方向末端リピート、ならびにウイルスゲノムの転写および複製を制御するプロモーターを含有する。ベクターとして操作される際、ウイルスは、通常、1つ以上の早期遺伝子が除去され、遺伝子または遺伝子/プロモーターカセットが、除去されたウイルスDNAの代わりにウイルスベクターに挿入される。この種類の構築物は、約8kbまでの外来遺伝物質を輸送することができる。除去された早期遺伝子の必要な機能は、通常、輸送中に早期遺伝子の遺伝子産物を発現するように操作された細胞系によって供給される。1レトロウイルスベクターレトロウイルスは、任意の種類、サブファミリー、属、または親和性を含むレトロウイルス科のウイルスファミリーに属する動物ウイルスである。レトロウイルスベクターは、概ね、Verma,I.M.,Retroviralvectorsforgenetransfer.InMicrobiology-1985,AmericanSocietyforMicrobiology,pp.229-232,Washington,1985本明細書に援用するに記載される。遺伝子療法のためにレトロウイルスベクターを用いる方法の例は、米国特許第4,868,116号および第4,980,286号、PCT出願WO90/02806およびWO89/07136、ならびにMulliganScience260:926-9321993これらの教示を本明細書に援用するに記載される。レトロウイルスは、本質的に、核酸カーゴに詰め込まれたパッケージである。核酸カーゴは、それとともに、複製された娘分子がパッケージ外被内に効率的にパッケージングされることを確実にするパッケージングシグナルを輸送する。パッケージシグナルに加えて、複製と複製されたウイルスのパッケージングとのためにシス中に必要とされる多くの分子がある。通常、レトロウイルスゲノムは、タンパク質外被の作製に関与するgag、pol、およびenv遺伝子を含有する。gag、pol、およびenv遺伝子は、外来遺伝子が標的細胞に輸送されると外来DNAによって通常置換される。レトロウイルスベクターは、通常、パッケージ外被への組み込みのためのパッケージングシグナルと、gag転写単位の開始を合図する配列と、逆転写のtRNAプライマーに結合するプライマー結合部位を含む逆転写に必要なエレメントと、DNA合成中にRNA鎖の転換を導く末端リピート配列と、DNA合成の第2の鎖の合成のためのプライミング部位として働くプリンリッチ配列5’から3’方向LTRと、レトロウイルスのDNA状態の挿入物が宿主ゲノムに挿入することを可能にするLTR末端近くの特異的配列とを含有する。gag、pol、およびenv遺伝子の除去は、約8kbの外来配列がウイルスゲノムに挿入され、逆転写され、複製された上で新しいレトロウイルス粒子中にパッケージングされることを可能にする。この量の核酸は、各転写物の大きさに応じて1つ~多数の遺伝子の送達に十分である。挿入配列中に他の遺伝子とともに陽性または陰性どちらかの選択可能なマーカーを含むことが好ましい。大部分のレトロウイルスベクター中の複製機構およびパッケージングタンパク質が除去されているgag、pol、およびenvので、ベクターは、通常、該ベクターをパッケージング細胞系に置くことによって生成される。パッケージング細胞系は、複製およびパッケージング可動部は含むが任意のパッケージングシグナルを持たないレトロウイルスでトランスフェクトまたは形質転換された細胞系である。選択されたDNAを輸送するベクターをこれらの細胞系にトランスフェクトすると、対象遺伝子を含有するベクターは、複製され、ヘルパー細胞によってシス性にincisに与えられる機構によって新しいレトロウイルス粒子中にパッケージングされる。この機構のためのゲノムはパッケージングされない。この理由は、該ゲノムは、必要なシグナルを持たないためである。2アデノウイルスベクター複製欠損アデノウイルスの構築について記載されているBerkneretal.,J.Virology61:1213-12201987;Massieetal.,Mol.Cell.Biol.6:2872-28831986;Haj-Ahmadetal.,J.Virology57:267-2741986;Davidsonetal.,J.Virology61:1226-12391987;ZhangGenerationandidentificationofrecombinantadenovirusbyliposome-mediatedtransfectionandPCRanalysisBioTechniques15:868-8721993。これらのウイルスをベクターとして用いる利点は、該ウイルスは初期の感染細胞内で複製することができるが、新たな感染性ウイルス粒子を形成することができないので、他の細胞型に拡散することができる程度に制限されていることにある。組換え型アデノウイルスを用いると、気道上皮、肝細胞、血管内皮、CNS実質、および多数の他の組織部位への直接のインビボ送達後に高効率の遺伝子輸送を達成することが示されているMorsy,J.Clin.Invest.92:1580-15861993;Kirshenbaum,J.Clin.Invest.92:381-3871993;Roessler,J.Clin.Invest.92:1085-10921993;Moullier,NatureGenetics4:154-1591993;LaSalle,Science259:988-9901993;Gomez-Foix,J.Biol.Chem.267:25129-251341992;Rich,HumanGeneTherapy4:461-4761993;Zabner,NatureGenetics6:75-831994;Guzman,CirculationResearch73:1201-12071993;Bout,HumanGeneTherapy5:3-101994;Zabner,Cell75:207-2161993;Caillaud,Bur.J.Neuroscience5:1287-12911993;およびRagot,J.Gen.Virology74:501-5071993。組換え型アデノウイルスは、特異的な細胞表面レセプターに結合し、その後に該ウイルスがレセプター媒介エンドサイトーシスによって野生型または複製欠損ウイルスと同様に内部移行することによって遺伝子形質導入を達成するChardonnetandDales,Virology40:462-4771970;BrownandBurlingham,J.Virology12:386-3961973;SvenssonandPersson,J.Virology55:442-4491985;Seth,etal.,1.Virol.51:650-6551984;Seth,etal.,Mol.Cell.Biol.4:1528-15331984;Vargaetal.,J.Virology65:6061-60701991;Wickhametal.,Cell73:309-3191993。ウイルスベクターは、E1遺伝子が除去されたアデノウイルスにもとづくものでありえ、これらのウイルス粒子は、ヒト293細胞系等の細胞系で生成される。別の好ましい実施形態では、E1遺伝子およびE3遺伝子両方をアデノウイルスゲノムから除去する。3アデノ随伴ウイルスベクターウイルスベクターの別の種類は、アデノ随伴ウイルスAAVにもとづく。この欠損パルボウイルスは、多くの細胞型に感染することができヒトに対して非病原性であることから好ましいベクターである。AAV型ベクターは、約4~5kbを輸送することができ、野生型AAVは、染色体19に安定に挿入されることが知られている。この部位特異的組み込み特性を含むベクターが好ましい。この種類のベクターの特に好ましい実施形態では、Avigen,SanFrancisco,CAによって生産されているp4.1Cベクターであり、このベクターは、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子、HSV-tk、および/または緑色蛍光タンパク質GFPをコードする遺伝子等のマーカー遺伝子を含有することができる。別の種類のAAVウイルスでは、該AAVは、異種遺伝子に作用自在に連結する細胞特異的発現を導くプロモーターを含有する少なくとも1つのカセットにフランキングする逆方向末端リピートITRの対を含有する。この文脈において、異種heterologousとは、AAVまたはB19パルボウイルスに対してネイティブではない任意のヌクレオチド配列または遺伝子を指す。通常、AAVおよびB19コーティング領域は、欠失されており、その結果安全な非細胞傷害性ベクターとなる。AAVITRまたはその改変物は、感染力および部位特異的組み込みを付与するが、細胞傷害性は付与せず、そのプロモーターは、細胞特異的発現を導く。AAVベクターに関連する物質に対して、米国特許第6,261,834号を本明細書に援用する。したがって、本発明のベクターは、実質的に毒性なしで哺乳類染色体に組み込まれることができるDNA分子を与える。ウイルスおよびレトロウイルス中に挿入された遺伝子は、通常、所望の遺伝子産物の発現を制御するのに役立つプロモーターおよび/またはエンハンサーを含有する。プロモーターは、概ね、転写開始部位に対して比較的固定された位置にある際に機能するDNAの配列または配列群である。プロモーターは、RNAポリメラーゼおよび転写因子の基本的な相互作用に必要となるコアエレメントを含有し、上流エレメントと応答エレメントを含有することができる。4大ペイロードウイルスベクター大きなヒトヘルペスウイルスを用いる分子遺伝実験によって、大きな異種DNAフラグメントを、ヘルペスウイルスによる感染を許容する細胞中でクローニング、増殖、および樹立することができる手段が与えられたSunetal.,Naturegenetics8:33-41,1994;CotterandRobertson,.CurrOpinMolTher5:633-644,1999。これらの大きなDNAウイルス単純ヘルペスウイルスHSVおよびEVウイルスEBVは、150kbより大きいヒト異種DNAフラグメントを特異的な細胞に送達する潜在能力を持つ。EBV組換え体は、感染B細胞中で、エピソームDNAとしてDNAの大きな断片を維持することができる。個々のクローンは、ゲノム挿入配列を330kbまでは保持し、遺伝学的に安定であると思われる。これらのエピソームの維持は、EBVによる感染中に構成性に発現する特異的なEBV核タンパク質EBNA1を必要とする。さらに、これらのベクターをトランスフェクションのために用いることができ、ここで、多量のタンパク質をインビトロで一時的に生成することができる。ヘルペスウイルスアンプリコン系も、220kbより大きいDNAの断片をパッケージングするため、かつ細胞を感染させるために用いられており、エピソームとしてDNAを安定に維持することができる。他の有用な系としては、例えば、複製および宿主制限非複製ワクシニアウイルスベクターが挙げられる。b非核酸にもとづく系開示する組成物を、種々の方法で標的細胞に送達することができる。例えば、組成物を、電気穿孔、リポフェクション、またはリン酸カルシウム沈降を介して送達することができる。選択される送達機構は、部分的に、標的される細胞型と、送達が、例えば、インビボまたはインビトロで起こっているかとに依存する。したがって、組成物は、開示するCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVF、あるいはベクターに加えて、例えば、リポソーム、カチオン性リポソーム例えば、DOTMA、DOPE、DC-コレステロール、またはアニオン性リポソーム等の脂質を含むことができる。リポソームは、所望であれば、さらにタンパク質を含んで、特定の細胞を標的とすることを容易にすることができる。化合物およびカチオン性リポソームを含む組成物を、標的器官対して求心性の血液に投与することができ、あるいは気道に吸入して気道の細胞を標的とすることができる。リポソームに関しては、例えば、Brighametal.Am.JResp.Cell.Mol.Biol.1:95-1001989;Felgneretal.Proc.Natl.Acad.SciUSA84:7413-74171987;米国特許第4,897,355号を参照せよ。さらに、化合物を、マクロファージ等の特定の細胞型を標的とすることができるマイクロカプセルの構成要素として投与することができる。あるいは、マイクロカプセルからの化合物の拡散または化合物の送達を特定の割合または投与量に対して設計する場合に、化合物をマイクロカプセルの構成要素として投与することができる。被験体の細胞への外因性DNAの投与および取り込みすなわち、遺伝子形質導入またはトランスフェクションを含む上記の方法では、細胞への組成物の送達は、種々の機構を介するものでありうる。一例としては、送達は、LIPOFECTIN、LIPOFECTAMINEGIBCO-BRL,Inc.,Gaithersburg,MD、SUPERFECTQiagen,Inc.Hilden,Germany、およびTRANSFECTAMPromegaBiotec,Inc.,Madison,WI等の市販のリポソーム製剤と、当該技術分野で標準的な手順に従って開発された他のリポソームとを用いてリポソームを介するものでありうる。さらに、この発明の核酸またはベクターを、Genetronics,Inc.SanDiego,CAから入手可能な技術である電気穿孔と、SONOPORATION機ImaRxPharmaceuticalCorp.,Tucson,AZとによってインビボで送達することができる。物質は、溶液、懸濁液例えば、微小粒子、リポソーム、または細胞中に組み込まれる中に存在することができる。これらは、抗体、レセプター、またはレセプターリガンドを介して、特定の細胞型を標的とすることができる。以下の参考文献は、この技術を用いて、腫瘍組織に特異的なタンパク質を標的とする例であるSenter,etal.,BioconjugateChem.,2:447-451,1991;Bagshawe,K.D.,Br.J.Cancer,60:275-281,1989;Bagshawe,etal.,Br.J.Cancer,58:700-703,1988;Senter,etal.,BioconjugateChem.,4:3-9,1993;Battelli,etal.,CancerImmunol.Immunother.,35:421-425,1992;PieterszandMcKenzie,Immunolog.Reviews,129:57-80,1992;およびRoffler,etal.,Biochem.Pharmacol,42:2062-2065,1991。これらの技術を、他の特定の細胞型に用いることができる。ステルスstealth等の媒体および他の抗体複合リポソーム大腸癌を標的とする脂質媒介薬剤を含む、細胞特異的リガンドを介したDNAのレセプター媒介ターゲティング、リンパ球指向性腫瘍ターゲティング、ならびにインビボでのマウス神経膠腫の高特異性治療的レトロウイルスターゲティングがある。以下の参考文献は、腫瘍組織に特異的なタンパク質を標的とするこの技術を用いる例であるHughesetal.,CancerResearch,49:6214-6220,1989;およびLitzingerandHuang,BiochimicaetBiophysicaActa,1104:179-187,。一般に、レセプターは、構成性またはリガンド誘導性エンドサイトーシスの経路に関与する。クラスリン被覆ピット中のこれらのレセプタークラスタは、クラスリン被覆小胞を介して細胞に進入し、レセプターが分類される酸性化エンドソームを通過し、その後、細胞表面へ再循環されるか、細胞内に保存されるか、またはリソソーム中で分解されるかのいずれかである。内部移行経路は、栄養素取り込み、活性化タンパク質の除去、巨大分子の除去、ウイルスおよび毒素の日和見性進入、リガンドの解離および分解、ならびにレセプターレベルの調節等の種々の機能を果たす。多くのレセプターは、細胞型、レセプター濃度、リガンドの種類、リガンド結合価、およびリガンド濃度に応じて1つより多い細胞内経路に従う。レセプター媒介エンドサイトーシスの分子機構および細胞機構については概説されているBrownandGreene,DNAandCellBiology10:6,399-4091991。宿主ゲノムに組み込まれるべき細胞に送達される核酸は、通常、組み込み配列を含有する。これらの配列は、しばしば、特にウイルスにもとづく系が用いられる場合ウイルス関連配列である。これらのウイルス組み込み配列を、核酸に組み込むこともでき、該核酸を、リポソーム等の非核酸にもとづく送達系を用いて、該送達系に含まれる核酸が宿主ゲノムに組み込まれることができるように送達する。宿主ゲノムへの組み込みのための他の一般的技術としては、例えば、宿主ゲノムを用いて相同組換えを促進するように設計された系が挙げられる。これらの系は、通常、宿主ゲノム内の標的配列に対して十分な相同性を持つ発現すべき核酸にフランキングする配列に依存し、ベクター核酸と標的核酸との組換えが起こり、送達された核酸が宿主ゲノムに組み込まれる。これらの系および相同組換えを促進するために必要な方法は当業者に既知である。cインビボ/エキソビボ上述のように、組成物を、医薬的許容される担体中で投与することができ、当該技術分野で公知の種々の機構例えば、裸DNAの取り込み、リポソーム融合、遺伝子銃を介したDNAの筋肉内注射、エンドサイトーシス等によって被験体の細胞にインビボおよび/またはエキソビボで送達することができる。細胞外exvivo方法を用いる場合、当該技術分野で公知の標準的プロトコールにしたがって、細胞または組織を除去して、体外で維持する。組成物を、例えば、リン酸カルシウム媒介遺伝子送達、電気穿孔、マイクロインジェクション、または蛋白リポソーム等の任意の遺伝子輸送機構を介して細胞中に導入することができる。形質移入された細胞を、その後、細胞または組織型に標準的な方法を介して、被験体中に注入例えば、医薬的に許容される担体中でまたはホモトピカルに移植して戻す。被験体への種々の細胞の移植または注入に対する標準的な方法は既知である。4.発現系細胞に送達される核酸は、通常、発現制御系を含有する。例えば、ウイルスおよびレトロウイルス中に挿入された遺伝子は、通常、所望の遺伝子産物の発現を制御するのに役立つプロモーターおよび/またはエンハンサーを含有する。プロモーターは、概ね、転写開始部位に対して比較的固定された位置にある際に機能するDNAの配列または配列群である。プロモーターは、RNAポリメラーゼおよび転写因子の基本的な相互作用に必要となるコアエレメントを含有し、上流エレメントと応答エレメントを含有することができる。aウイルスプロモーターおよびエンハンサー哺乳類宿主細胞中でベクターからの転写を制御する好ましいプロモーターを、種々のソース、例えば、ポリオーマ、サルウイルス40SV40、アデノウイルス、レトロウイルス、B型肝炎ウイルス、および最も好ましくはサイトメガロウイルス等のウイルスのゲノムから、あるいは異種哺乳類プロモーター、例えば、ベータアクチンプロモーターから得ることができる。SV40ウイルスの初期プロモーターおよび後期プロモーターは、SV40ウイルス複製起点も含有するSV40制限フラグメントとして簡便に得られるFiersetal.,Nature,273:1131978。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、HindIIIE制限フラグメントとして簡便に得られるGreenway,P.J.etal.,Gene18:355-3601982。当然、宿主細胞または関連種由来のプロモーターも本明細書で有用である。エンハンサーは、概ね、転写開始部位から一定でない距離だけ離れて機能するDNAの配列を指し、転写部位に対して5’Laimins,L.etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.78:9931981または3’Lusky,M.L.,etal.,Mol.CellBio.3:11081983でありうる。さらに、エンハンサーは、イントロン内にあるBanerji,J.L.etal.,Cell33:7291983とともに、コーディング配列自体内にあるOsborne,T.F.,etal.,Mol.CellBio.4:12931984。エンハンサーは、通常10~300bp長であり、シス性で機能する。エンハンサーが機能して、すぐ近くのプロモーターから転写を増加させる。エンハンサーは、しばしば、転写の調節を媒介する応答エレメントも含有する。プロモーターも、転写の調節を媒介する応答エレメントを含有する。エンハンサーは、しばしば、遺伝子の発現の調節を決定する。多くのエンハンサー配列が、現在、哺乳類遺伝子から既知であるグロビン、エラスターゼ、アルブミン、-フェトプロテイン、およびインシュリン一方で、通常、一般的な発現のために真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが用いられる。好ましい例には、複製起点の後期側上のSV40エンハンサー100~270bp、サイトメガロウイルス早期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側上のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーがある。プロモーターおよび/またはエンハンサーを、光か、それらの機能を誘発する特異的な化学的事象かによって特異的に活性化することができる。系を、テトラサイクリンおよびデキサメタゾン等の試薬によって調節することができる。これらは、ガンマ照射等の照射にさらすことによって、またはアルキル化化学療法薬剤によってウイルスベクター遺伝子発現を増強する方法でもある。特定の実施形態では、プロモーターおよび/またはエンハンサー領域は、構成性プロモーターおよび/またはエンハンサーとして作用して、転写すべき転写単位の領域の発現を最大にすることができる。特定の構築物では、プロモーターおよび/またはエンハンサー領域は、特定の時間に特定の細胞型で発現するのみであったとしても、全ての真核細胞型で活性である。この種類の好ましいプロモーターは、CMVプロモータ650塩基である。他の好ましいプロモーターは、SV40プロモーター、サイトメガロウイルス完全長プロモーター、およびレトロウイルスベクターLTFである。全ての特異的な調節エレメントをクローニングして、メラノーマ細胞等の特定の細胞型中で選択的に発現する発現ベクターを構築することができることが示されている。グリア線維性酸性タンパク質GFAPプロモーターは、グリア起源の細胞中で遺伝子を選択的に発現させるために用いられている。真核宿主細胞酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または有核細胞中で用いられる発現ベクターは、mRNA発現に影響を与えうる転写の終止に必要な配列を含有することができる。これらの領域は、組織因子タンパク質をコードするmRNAの非翻訳部分中のポリアデニル化セグメントとして転写される。3’非翻訳領域もまた転写終結部位を含み得る。転写単位は、ポリアデニル化領域も含有することが好ましい。この領域の1つの利点は、該領域が、転写された単位がプロセッシングされmRNAのように輸送される可能性を増加することである。発現構築物中でのポリアデニル化シグナルの同定および使用は、十分に確立されている。相同なポリアデニル化シグナルをトランスジーン構築物中で用いることが好ましい。特定の転写単位では、ポリアデニル化領域は、SV40早期ポリアデニル化シグナルに由来し、約400の塩基からなる。転写された単位は、他の標準的な配列を、単独で、または上記の配列と組み合わせて含有し、構築物由来の発現または構築物の安定性を向上することが好ましい。bマーカーウイルスベクターは、マーカー産物をコードする核酸配列を含むことができる。このマーカー産物を用いて、遺伝子が細胞に送達されたかどうか、さらに送達されたとしたら発現されたかどうかを決定する。好ましいマーカー遺伝子は、13-ガラクトシダーゼをコードする大腸菌lacZ遺伝子、および緑色蛍光タンパク質である。いくつかの実施形態では、マーカーは、選択可能なマーカーでありうる。哺乳類細胞に適した選択可能なマーカーの例は、ジヒドロ葉酸換言酵素DHFR、チミジンキナーゼ、ネオマイシン、ネオマイシンアナログG418、ハイドロマイシン、およびピューロマイシンである。そのような選択可能なマーカーの哺乳類細胞中への輸送が成功した際は、形質転換された哺乳類宿主細胞は、選択圧下に置かれる場合生存することができる。選択制度の広く用いられている異なるカテゴリーは2つある。第1のカテゴリーは、細胞の代謝と、添加培地から独立して増殖する能力を持たない突然変異細胞系の使用とにもとづく。2つの例がある。すなわち、CHODHFR-細胞およびマウスLTK-細胞である。これらの細胞は、チミジンおよびヘポキサンチン等の栄養素の添加がないと増殖する能力を持たない。これらの細胞は、完全なヌクレオチド合成経路に必要な特定の遺伝子を持たないので、該細胞は、欠けているヌクレオチドが添加培地中で与えられなければ生存することができない。培地に添加することの代替は、インタクトなDHFRまたはTK遺伝子をそれぞれの遺伝子を持たない細胞に導入し、その結果それらの増殖要件を変更することである。DHFRまたはTk遺伝子で形質転換されなかった個々の細胞は、非添加培地中で生存することができない。第2のカテゴリーは、任意の細胞型で用いられる選択スキームであり、突然変異細胞系の使用を必要としない優性選択である。これらのスキームは、通常、薬剤を使用して、宿主細胞の増殖を阻止する。新規の遺伝子を持つそれらの細胞は、薬剤耐性を伝えるタンパク質を発現し、選択を乗り切る。そのような優性選択の例は、薬剤ネオマイシンSouthernP.andBerg,P.,J.Molec.Appl.Genet.1:3271982、ミコフェノール酸Mulligan,R.C.andBerg,P.Science209:14221980、またはハイグロマイシンSugden,B.etal.,Mol.Cell.Biol.5:410-4131985を用いる。この3つの例は、真核細胞制御下で細菌遺伝子を用いて、適当な薬剤G418、あるいはネオマイシンジェネテシン、xgptミコフェノール酸、またはハイグロマイシンに耐性をそれぞれ伝える。他のものとしては、ネオマイシンアナログG418およびピューロマイシンが挙げられる。5.ペプチドaタンパク質変異体本明細書に記載したように、既知および本発明で検討されるCR2、DAF、CD59、CRl、MCP、Crry、IgGl、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、およびCR2-CVFタンパク質の変異体が数多く存在する。また、既知の機能的CR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgG1、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CRl-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgGlFcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、およびCR2-CVF株変異体に対して、CR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgGl、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CR1、CR1-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgG1Fcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、およびCR2-CVFタンパク質これらは開示された方法および組成物でも機能的であるの変異体が存在する。タンパク質変異体および誘導体は、当業者に十分理解されており、アミノ酸配列順序の修飾を含むことができる。例えば、アミノ酸配列修飾は、概して3つのクラスの一つ以上にあてはまる。すなわち、置換、挿入、または欠失の変異体である。挿入は、単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入と同様にアミノおよび/またはカルボキシ末端の融合を含む。挿入は、通常、アミノまたはカルボキシ末端の融合よりも少ない挿入例えば、約1~4残基である。免疫原融合タンパク質誘導体例えば、実施例に記載のものは、インビトロで架橋させることによって標的配列に免疫原性を与えるために十分に大きいポリペプチドを溶解させることによって、または融合をコードしているDNAで形質転換される組換え型の細胞培養によって作られる。欠失は、タンパク質配列から1個以上のアミノ酸残基の除去によって特徴づけられる。概して、2~6個の残基を超えることなく、タンパク質分子内の任意の部位が欠失される。これらの変異体は、通常、タンパク質をコードしているDNAで、ヌクレオチドの部位特異的突然変異誘起によって調製され、それによって変異体をコードするDNAが生じ、その後、組換え型細胞の培養液中でDNAが発現される。既知の配列を持つDNAの所定の部位での置換突然変異を作るための技術は、周知であり、例えばM13プライマー突然変異誘起およびPCR突然変異誘起がある。アミノ酸置換は、典型的に一つの残基であるが、一度に多数の異なる位置で起こることができる。すなわち、挿入は約1~10アミノ酸程度であり、欠失は約1~30残基の範囲である。欠失および挿入は、好ましくは隣接した対で起こる。すなわち、2残基の欠失または2残基の挿入である。置換、欠失、挿入、またはそれらのいかなる組合せでも、それについて、最終的な構築物に到達するために組み合わせることができる。突然変異はリーディングフレームからはずれた配列を配置してはならなくて、望ましくは、メッセンジャーRNAの二次構造を生成することができる相補性領域を作らない。置換の変異体は少なくとも1つの残基が除去され、異なる残基がそのところに挿入される。そのような置換は、一般に以下の表1および2に従ってなされて、保存的置換と呼ばれる。機能的または免疫学的同一性での実質的な変化は、表2に示すものよりも保守性が低い置換を選択することによって、すなわち、a置換領域でのポリペプチド主鎖の構造、例えばシートまたはらせん構造、b標的部位での分子の疎水性もしくは帯電性、またはc側鎖の嵩、を保つ上での作用によりいっそう著しく異なる残基を選択することで、なされる。タンパク質の特性に最も大きい変化を与えることは、a親水性残基例えばセリルまたはトレオニルが疎水性残基例えばロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリルまたはアラニンに対して、またはそれによって、置換されること、bシステインまたはプロリンが他の残基に対してまたはそれによって置換されること、c陽電気を帯びた側鎖例えばリジル、アルギニルまたはヒスチジルを持つ残基が、電気陰性の残基に対してまたはそれによって例えばグルタミルまたはアスパルチルと置換されること、dまたは、大きな側鎖例えばフェニルアラニンを持つ残基は、側鎖例えばグリシンを持っていないものに対してまたはによって置換されることであり、この場合、e硫酸化および/または糖鎖形成に対する部位数の増加による。例えば、1つのアミノ酸残基が、生物学的におよび/または化学的に類似している別のアミノ酸残基によって置換されることは、保存的置換として当業者に知られている。例えば、保存的置換とは一方の疎水性残基が別のものと置換されること、あるいは一方の極性残基が別のものと置き換えられることである。置換は、例えば、Gly、Ala;Val、Ile、Leu;Asp、Glu;Asn、Gln;Ser、Thr;Lys、Arg;およびPhe、Tyr等の組み合わせを含むことが可能である。各々明確に開示された配列のそのような保守的に置換される変異体は、本明細書中に提供されるモザイクポリペプチドに含まれる。置換または欠失突然変異誘起は、N-糖鎖形成Asn-X-Thr/SerまたはO-糖鎖形成SerまたはThrのための部位を挿入するために用いることができる。システインまたは他の不安定な残基の欠失も、望ましい。潜在的なタンパク質分解部位例えば、Argの欠失または置換は、例えば、塩基性残基の1つを欠失することで、またはグルタミン残基またはヒスチジン残基で置換することで達成される。特定の翻訳後の誘導体化は、発現されたポリペプチドの組換え型の宿主細胞の作用の結果である。グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、しばしば、対応するグルタミル残基およびアスパリル残基の翻訳後、脱アミドされる。あるいは、これらの残基は弱酸性の状況の下で脱アミドされる。他の翻訳後修飾として、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化を含む、セリルまたはトレオニン残基の水酸基のリン酸化、リジン、アルギニンおよびヒスチジン側鎖のo-アミノ基のメチル化T.E.Creighton,Proteins:StructureandMolecularProperties,W.H.FreemanCo.,SanFranciscopp79-86[1983]、N末端アミンのアセチル化、場合によっては、C末端カルボキシルのアミド化が挙げられる。本明細書中に開示されたタンパク質の変異体と誘導体とを定義する一つの方法が、特異的な既知の配列に対する相同/同一性に関して、変異体と誘導体を定義することを通してあると理解される。例えば、配列番号26はCR2の特定の配列を記述し、配列番号2はDAFタンパク質の特定の配列を記述する。これらの変異体と本明細書中に開示される他のタンパク質とは、述べた配列に対して、少なくとも70または75または80または85または90または95相同性を有する。当業者は、容易に、2つのタンパク質の相同を決定する方法を理解する。例えば、相同性がその最高のレベルにあるように、相同性は2つの配列を整列配置した後に算出すことができる。相同を算出するもう一つの方法は、発表されたアルゴリズムによって実行されることができる。比較のための配列の最適配列は、SmithandWatermanAdv.Appl.Math.2:4821981による局所相同性アルゴリズムによって、NeedlemanandWunsch,J.MoLBiol.48:4431970による相同性アライメントアルゴリズムによって、、PearsonandLipman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:24441988による類似性探索方法によって、それらのアルゴリズムのコンピュータ化インプリメンテーションGAP,BESTFIT,FASTA,およびTFASTA、WisconsinGeneticsSoftwarePackage,GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.,Madison,WIによって、あるいは目視検査によって、おこなうことができる。同一タイプの相同性が、例えば、Zuker,M.Science244:48-52,1989,Jaegeretal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:7706-7710,1989,Jaegeretal.MethodsEnzymol.183:281-306,1989に開示されたアルゴリズムによって、核酸に関して得ることができる。これらの文献は、核酸アラインメントに関連した少なくとも1種類の材料に関して本明細書中で援用する。保存的突然変異の説明と相同性の説明とを任意の組合せ例えば変異体が保存的突然変異である特定の配列に少なくとも70の相同を持つ実施形態で一緒に組み合わせることができると理解される。この明細書が種々のタンパク質およびタンパク質配列を開示することから、これらのタンパク質配列をコードすることができる核酸もまた開示されると理解される。これは、特異的なタンパク質配列に関連した全ての縮退配列を含むもので、すなわち、全ての核酸と同様に1つの特定のタンパク質配列をコードする配列を持っている全ての核酸、タンパク質配列の開示された誘導体または変異体をコードする縮退核酸を含む。このように、各々の特定の核酸配列が本明細書中に書かれる可能性はないが、開示されたタンパク質配列を通して、どの配列も実際に開示されて本明細書中に記載されると理解される。例えば、配列番号26に記されたタンパク質配列をコードすることができる多くの核酸配列のうちの1つは、配列番号25で述べられる。加えて、例えば、配列番号26の開示された保守的誘導体は配列番号29で示される。ここで、位置9のイソロイシンIはバリンVに変えられる。この突然変異に関しては、開示された配列のいずれかの特定の誘導体をコードする核酸配列の全ても開示されていると理解される。また、生物体内で、どの特定のDNA配列がタンパク質開示されたタンパク質の特定の変異体が本明細書で開示されるをコードするかということをアミノ酸配列は示さないが、上記タンパク質が生ずるタンパク質をコードする既知の核酸配列もまた知られており、本明細書で開示および記述されていると理解される。6.抗体a抗体一般抗体antibodyという用語は、本明細書では広い意味で使われ、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方が含まれる。完全な免疫グロブリン分子に加えて、抗体という用語がさらに意味するものは、該免疫グロブリン分子のフラグメントまたはポリマー、および免疫グロブリン分子またはそのフラグメントのヒトまたはヒト化バージョンである。抗体は、本明細書で説明するインビトロアッセイを用いて、または類似の方法によって、該抗体の所望の活性が試験され、その後、インビボで治療および/または予防的な活性が既知の臨床試験方法に基づいて試験される。本明細書で用いられるように、抗体antibodyは、限定されるものではないが、任意のクラスの免疫グロブリン全体すなわち、完全抗体を包含する。天然の抗体は、一般にヘテロ四量体のグリコプロテインであり、2つの等しい軽L鎖と2つの等しい重H鎖とから構成される。一般に、各軽鎖は、1つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に結合されるが、ジスルフィド結合の数は、免疫グロブリンイソタイプが異なる重鎖間で変わる。各々の重鎖および軽鎖もまた、規則的に離間した鎖間ジスフィルド架橋を有する。各重鎖は、一端に可変領域VHを有し、その後にいくつかの定常領域が続く。各軽鎖は、一端に可変領域VLを有し、他端に定常領域を有する。軽鎖の定常領域は、重鎖の第一の定常領域と一列に並べられており、軽鎖可変領域は重鎖の可変領域と一列に並べられている。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変領域と重鎖可変領域とのあいだの接点を形成すると考えられている。脊椎動物のいずれかの種に由来する抗体の軽鎖は、定常領域のアミノ酸配列にもとづいてカッパkおよびラムダlと呼ばれる2つの明らかに異なったタイプのうちの1つに当てはまる。重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。ヒト免疫グロブリンには5つの主要なクラスすなわち、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMがあり、さらにそれらのいくつかはサブクラスイソタイプ例えば、IgG-1、IgG-2、IgG-3、およびIgG-4;IgA-1およびIgA-2に分けることができる。相当するクラスがマウスにあることが当業者にも理解されよう。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれアルファ、デルタ、エプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。可変variableという用語は、抗体間で配列が異なり、かつ各々の特定の抗体の特定抗原に対する結合および特異性に用いられる可変領域の一定の部分を表現するために、本明細書では用いられる。しかし、可変性は、抗体の可変領域全体にわたって、通常均一に行き渡っているものではない。一般に両領域とも軽鎖および重鎖の可変領域にある相補性決定領域CDRまたは超可変領域と呼ばれる3つのセグメントに集中している。可変領域のより高度に保存された部分は、フレームワークFRと呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変領域の各々は、4つのFR領域を含み、主にbシート立体配置とり、3つのCDRが接続しており、該配置はループ結合を形成し、また、いくつかの例では一部分、bシート構造が形成される。各鎖のCDRは、FR領域によって近接した状態に保たれており、他の鎖からCDRによって、抗体の抗原結合部位の形成に関与するKabatE.A.etal,SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.1987。定常領域は、抗原に対する抗体の結合に直接関与するのではなく、種々のエフェクター機能例えば抗体依存型細胞毒性への抗体の関与を示す。本明細書で用いられるように、抗体またはそのフラグメントという用語は、キメラ抗体およびハイブリッド抗体、二重または多重の抗原もしくはエピトープ特異性を持つもの、ハイブリッドフラグメントを含むフラグメント例えば、scFv、sFv、Fab’2、Fab’、およびFabなどを包含する。したがって、特異的抗原に対する結合能を保持する抗体のフラグメントが提供される。例えば、補体結合活性を保つ抗体のフラグメントは、抗体またはそのフラグメントという表現の意味に含まれる。そのような抗体およびフラグメントの作製は、当業者に公知の技術によっておこなうことができ、またそのような抗体およびフラグメントを、抗体の産生と特性および活性についてのスクリーニングとに関する一般的方法HarlowandLane.Antibodies,ALaboratoryManual.ColdSpringHarborPublications,NewYork,1988を参照せよならびに実施例で述べられる方法にもとづいて、特性および活性についてスクリーニングにすることができる。抗体またはそのフラグメントの意味にさらに含まれるものは、抗体フラグメントおよび抗原結合蛋白単一鎖抗体の複合体であり、例えば米国特許第4,704,692号この特許の開示内容を本明細書で援用に記載されたものである。本明細書で用いられるように、抗体という用語は、ヒト抗体および/またはヒト化抗体のこともいう。多くの非ヒト抗体例えば、マウス、ラット、またはウサギ由来のものは、ヒトでは自然に抗原性を呈するので、ヒトに投与した場合に望ましくない免疫応答を生ずる可能性がある。したがって、本発明の方法でヒト抗体または非ヒト抗体を用いることは、ヒトに投与した抗体が望ましくない免疫応答を起こすという可能性の低減に役立つ。任意に、ヒトへの投与を目的として抗体を他の種で産生し、そしてヒト化する。非ヒト例えば、マウス抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖またはフラグメント例えば、Fc、scFv、sFv、Fv、Fab、Fab’、Fab’2、または抗体の他の抗原結合配列であり、これらは非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含む。ヒト抗体として、ヒト免疫グロブリンレシピエント抗体が挙げられ、レシピエントの相補性決定領域CDR由来の残基が、所望の特異性、親和性、およびキャパシティを持つマウス、ラット、またはウサギ等の非ヒト種ドナー抗体のCDR由来の残基によって、置換される。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク残基が対応非ヒト残基よって置換される。ヒト抗体は、レシピエント抗体または取り込まれたCDRもしくはフレームワーク配列のいずれにも見いだされない残基を含むこともできる。一般に、ヒト化抗体は、実質的に、少なくとも1つ、一般的に2つの可変ドメイン全てを有し、全てもしくは実質的に全てのCDR領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、かつ全てもしくは実質的に全てのFR領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は、最適なかたちで、免疫グロブリン定常領域Fcの少なくとも一部通常はヒト免疫グロブリンのものを含むことができるJonesetal.,Nature,321:522-5251986;Riechmannetal.,Nature,332:323-3271988;およびPresta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-5961992。非ヒト抗体をヒト化する方法は、周知である。一般に、ヒト抗体は、非ヒトである供給源由来の抗体に1つ以上のアミノ酸残基が組込まれる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしばインポート残基であると言われ、一般にインポート可変領域から取り出されている。ヒト化は、齧歯類のCDRまたはCDR配列をヒト抗体の対応配列に置き換えることで、Winterとその共同研究者たちとによる方法Jonesetal.,Nature,321:522-5251986;Riechmannetal.,Nature,332:323-3271988;Verhoeyenetal.,Science,239:1534-15361988の方法に従って基本的におこなうことができる。したがって、そのようなヒト化抗体はキメラ抗体米国特許第4,816,567号であって、実質的に決して、完全なヒト可変領域が非ヒト種由来の対応配列によって置換されているわけではない。実際には、非ヒト抗体は概してヒト抗体であり、いくつかのCDR残基と、おそらくいくつかのFR残基とが、齧歯類抗体の相同部位に由来する残基によって、置換されている。ヒト化抗体作製で使用されるヒト可変領域重鎖および軽鎖の両方の選択は、抗原性を減らす上で重要である。最良適合方法にもとづいて、齧歯類抗体可変ドメインの配列が、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングされる。次に、齧歯類の配列に最も近いヒト配列を、ヒト化抗体のヒトフレームワークFRとして受容するSimsetal.,J.Immunol.,151:22961993およびChothiaetal.,J.Mol.Biol.,196:9011987。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全ヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークを、いくつかの異なる非ヒト抗体に用いることができるCarteretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:42851992;Prestaetal.,J.Immunol.,151:26231993。さらに重要なことは、抗体が抗原に対する高い親和性と他の好ましい生物学的性質とを保ちながらヒト化されることである。この目的を達成するために、好ましい方法にもとづいて、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを用いて、親配列と種々の概念上のヒト化産物とを分析するプロセスによって、ヒト化抗体が調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者によく知られている。コンピュータプログラムは利用可能であり、該プログラムによって選択された候補免疫グロブリン配列の有望な三次元立体構造が例示かつ表示される。このような表示を調べることは、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の有望な役割の分析すなわち、抗原を結合させる候補免疫グロブリンの能力に影響を及ぼす残基の分析を可能とさせる。このように、FR残基は、標的抗原に対する親和性の増大等、所望の抗体特性が達成されるように、コンセンサス配列およびインポート配列から選択および組み合わせることができる。一般に、CDR残基は直接的かつ最も実質的に、抗原結合への影響に関与しているWO94/04679、1994年3月3日公表。抗体消化で産生されるFabフラグメントもまた、軽鎖の定常領域と重鎖の第1の定常領域とを含む。Fab’フラグメントは、抗体ヒンジ領域の1つ以上のシステインを含む重鎖ドメインのカルボキシル基末端でいくつかの残基の付加が生ずることで、Fabフラグメントとは異なる。Fab’2フラグメントは、ヒンジ領域でジスフィルド架橋によって連結した2つのFab’フラグメントを含む二価のフラグメントである。Fab’-SHは、定常領域のシステイン残基が遊離のチオール基を持つFab’に対してなされた本明細書での呼称である。抗体フラグメントは、本来はFab’フラグメントの対該フラグメント間にヒンジとなるシステインを有するとして産生された。抗体フラグメントの他の化学結合も知られている。単離された免疫原的に特異的な抗体パラトープまたは抗体フラグメントも提供される。抗体の特異的免疫原エピトープを、分子の化学的または機械的崩壊によって抗体全体から単離することができる。本明細書に教示する方法によって、このように得られる精製フラグメントを調べてその免疫原性および特異性を決定することができる。抗体の免疫反応パラトープは、任意に、直接合成される。免疫反応性フラグメントとは、抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも2~5つの連続的なアミノ酸のアミノ酸配列として、定義される。本発明の抗体を含むタンパク質を生産する1つの方法は、2つ以上のペプチドまたはポリペプチドをタンパク質化学技術によって連結することである。例えば、Fmoc9-フルオレニルメチルオキシカルボニルまたはBoct-ブチルオキシカルボノイル化学物質のいずれかを用いて、現在利用可能な実験装置を用いて、ペプチドまたはポリペプチドを化学合成することができるAppliedBiosystems,Inc.,FosterCity,CA。当業者は、本発明の抗体に対応するペプチドまたはポリペプチドを例えば一般的な化学反応によって合成することができることを、容易に理解することができる。例えば、ペプチドまたはポリペプチドを合成することはできるが、その合成樹脂から切り出すことはできない。一方、抗体の他のフラグメントを合成して樹脂から切り出すことができ、それよって他のフラグメント上に機能的にブロックされている末端基が露出される。ペプチド縮合反応によって、これら2つのフラグメントがカルボキシル末端およびアミノ末端で、それぞれペプチド結合を介して共有結合して、抗体またはそのフラグメントを形成することができるGrantGA1992SyntheticPepetides:AUserGuide.W.H.FreemanandCo.,N.Y.1992;BodanskyMandTrostB.,Ed.1993PrinciplesofPeptideSynthesis.Springer-VerlagInc.,NY.。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドは、先に述べたようにインビボでそれぞれ別々に合成される。ひとたび単離すると、これらの別々のペプチドまたはポリペプチドを連結して、類似のペプチド縮合反応を経て抗体またはそのフラグメントを形成することができる。例えば、クローン化ペプチドセグメントまたは合成ペプチドセグメントの酵素連結反応によって、相対的に短いペプチドフラグメントが結合してより大きなペプチドフラグメント、ポリペプチド、またはタンパク質ドメイン全体生ずることが可能であるAbrahmsenLetal.,Biochemistry,30:41511991。あるいは、合成ペプチド固有の化学的連結反応を用いることで、短いペプチドフラグメントから大きなペプチドまたはポリペプチドを化学的に構成することができる。この方法は、二段階化学反応からなるDawsonetal.SynthesisofProteinsbyNativeChemicalLigation.Science,266:776-7791994。第一段階は、保護されていない合成ペプチド-アルファ-チオエステルとアミノ末端Cys残基を含む保護されていない別のペプチドセグメントとの官能基選択的反応であり、最初の共有結合生成物としてるチオエステル結合連結された中間体を生じる。反応条件を変えることなく、この中間体は自然発生的な素早い分子内反応を起こして連結部位に天然ペプチド結合を形成する。この天然化学的連結反応の方法をタンパク質の全合成に適用することは、ヒトインターロイキン8IL-8の合成で例示されているBaggioliniMetal.1992FEBSLett.307:97-101;Clark-LewisIetal.,J.Biol.Chem.,269:160751994;Clark-LewisIetal.,Biochemistry,30:31281991;RajarathnamKetal.,Biochemistry33:6623-301994。あるいは、保護されていないペプチドセグメントを化学的に連結する。ここでは、化学的連結反応の結果としてペプチドセグメント間に形成された結合が非天然非ペプチド結合であるSchnolzer,Metal.Science,256:2211992。この技術は、完全な生物学的活性を持つ比較的純度の高い大量のタンパクと同様に、タンパク質ドメインのアナログを合成するのに、用いられるdeLisleMiltonRCetal.,TechniquesinProteinChemistryIV.AcademicPress,NewYork,pp.257-2671992。本発明もまた、生理活性を持つ抗体のフラグメントを提供する。本発明のポリペプチドフラグメントは、アデノウイルスまたはバキュロウイルス発現系等、ポリペプチドフラグメントを産生することが可能な発現系でポリペプチドをコードする核酸をクローニングすることによって得られる組換えタンパク質である。例えば、抗体とFcレセプターとの相互作用に関連する生理作用を生ずることができる特異的ハイブリドーマから抗体の活性ドメインを決定することができる。例えば、アミノ酸は、抗体の活性にも結合特異性にも結合親和性にもいずれにも貢献しないと分かったアミノ酸残基は、それぞれの活性を損なうことなく欠失され得る。例えば、種々の実施形態で、アミノ末端またはカルボキシル末端のアミノ酸が天然もしくは修飾非免疫グロブリン分子または免疫グロブリン分子から連続的に取り除かれ、それぞれの活性が多くの利用可能なアッセイの1つによって分析される。別の例では、抗体のフラグメントは、修飾抗体を含むもので、少なくとも1つのアミノ酸が、特定の位置で、天然に生ずるアミノ酸と置換されており、アミノ末端またはカルボキシル末端のアミノ酸の一部分または抗体の中央領域の一部分さえも、修飾抗体の精製を促進することができるポリペプチドフラグメントまたは他の部分、例えばビオチンと置換されている。フラグメントは、他の配列に結合しているかどうかにかかわらず、非修飾抗体または抗体フラグメントと比較してフラグメントの活性が著しく変わったり、損なわれないという条件で、特定の領域または特定のアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、または他の修飾を含む。これらの修飾によっていくつかの特性、例えば、ジスルフィド結合可能なアミノ酸の除去もしくは付加、寿命の増加、および分泌特性の変化という特性が付加される。いずれにせよ、フラグメントは生理活性特性例えば、結合活性、および結合領域の結合の調節をもたなければならない。抗体の機能領域または活性領域は、タンパク質の特定領域を変異させた後、発現および発現ポリペプチドの試験をおこなうことで、同定することができる。そのような方法は、当業者に容易に理解されるもので、抗原をコードする核酸の部位特異的突然変異を含むことができるZollerMJetal.Nucl.AcidsRes.10:6487-5001982。種々のイムノアッセイのフォーマットを用いて、特定のタンパク質、変異体、またはフラグメントに選択的に結合する抗体を選択することができる。例えば、固相ELISAイムノアッセイは、タンパク質、変異体、またはそのフラグメントに対して選択的な免疫反応性を示す抗体を選択するするために、日常的に用いられる。免疫アッセイフォーマットおよび条件の記述については、HarlowandLane.Antibodies,ALaboratoryManual.ColdSpringHarborPublications,NewYork,1988を参照せよ。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munsonetal.,Anal.Biochem.,107:2201980のスキャチャード解析によって、決定することができる。また、本発明のモノクローナル抗体またはそのフラグメントの容器と、Fcレセプター分子に対する抗体またはそのフラグメントの結合を検出するための1種類以上の試薬とを含む抗体試薬キットを提供する。試薬として、例えば、蛍光タグ、酵素タグ、または他のタグが挙げられる。試薬として、さらに二次もしくは三次抗体、または酵素反応のための試薬を挙げることができ、酵素反応によって視覚化可能な産物を精製する。bヒト抗体この発明のヒト抗体は、あらゆる技術を用いて生成可能である。ヒトモノクローナル抗体の生成技術の例としては、Coleetal.MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,p.77,1985およびBoerneretal.J.Immunol.,1471:86-95,1991によって記述されたものが挙げられる。この発明のヒト抗体およびこれらのフラグメントは、ファージディスプレイライブラリーHoogenboometal.,J.Mol.Biol.,227:381,1991;Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:581,1991を用いても生成可能である。この発明のヒト抗体は遺伝形質転換動物から採取可能でもある。例えば、免疫化に反応して全範囲のヒト抗体を生成する能力を有する遺伝形質転換型の突然変異マウスが記述されてきた例えば、Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551-2551993;Jakobovitsetal.,Nature,362:255-2581993;Bruggermannetal.,YearinImmunol.,7:331993参照。詳細には、キメラかつ生殖細胞系突然変異マウスにおける抗体重鎖結合領域JH遺伝子の同型接合欠失は、内因性抗体生成を完全に阻害することになり、上記生殖細胞系突然変異マウスへのヒト生殖細胞系抗体遺伝子アレイの首尾のよい移入は、抗原攻撃時にヒト抗体を生成することになる。所望の活性を有する抗体は、本明細書に記述されているように、Env-CD4-コレセプター複合体を用いて選択される。c抗体の投与この発明の抗体は、好ましくは薬学的に受容可能な担体で被験者に投与される。適切な担体およびそれらの処方は、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy19thed.ed.A.R.Gennaro,MackPublishingCompany,Easton,PA1995に記述されている。典型的には、薬学的に受容可能な塩の適正量は、等張性処方を示す処方箋に使用される。薬学的に受容可能な担体の例としては、生理食塩水、リンゲル液、およびデキストロース液が挙げられるが、これらに限定されるものではない。上記液のpHは、好ましくは約5~約8までとされ、より好ましくは約7~約7.5までとされる。他の担体としては、抗体を含む固形疎水性ポリマーからなる半浸透性マトリックス等の徐放性製剤が挙げられ、上記マトリックスは例えばフィルム、リポソームあるいは微小粒子のような、形作られた物品の形態とされる。より好ましくは、特定の担体が例えば投与される抗体の投与経路および濃度に依存してもよいことは、この技術分野における当業者にとって明白なはずである。上記抗体は、注射例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、あるいは有効な形態で血流への上記抗体の送出を保証する注入等の他の方法によって被験者、患者、あるいは細胞に投与可能である。局所あるいは静脈内注射は好適である。上記抗体を投与するための有効量およびスケジュールは、経験的に決定可能であり、このような決定はこの技術分野における当業者によって行われる。この技術分野における当業者は、投与されなければならない上記抗体の投与量が、例えば抗体を受け入れる被験者、投与経路、使用された特定タイプの抗体、および投与される他の薬剤に依存して異なることは理解されるはずである。抗体の適切な投与量を選択するガイダンスは、抗体の治療用途に関する文献、例えばHandbookofMonoclonalAntibodies,Ferroneetal.,eds.,NogesPublications,ParkRidge,N.J.,1985ch.22およびpp.303-357;Smithetal.,AntibodiesinHumanDiagnosisandTherapy,Haberetal.,eds.,RavenPress,NewYork1997pp.365-389.中に見出される。抗体単独で用いられる場合における抗体の典型的な1日の投与量は、上述した因子に依存して、体重に対して、約1μg/kgから100mg/kgまでの範囲とされてもよい。ヒト免疫不全ウィルス感染の治療、阻害あるいは予防用の抗体投与に続けて、治療用の抗体の有効性が熟練開業医に周知な種々の方法で評価可能である。例えば、この技術分野における当業者の1人は、この発明の抗体がウィルス負荷を減らすか、あるいはウィルス負荷の更なる増加を防止することを観察することによって、被験者におけるヒト免疫不全ウィルス感染を治療あるいは阻害するのにこの発明の抗体が有効であると理解するはずである。ウィルス負荷は、この技術分野において公知である方法、例えば被験者あるいは患者からのサンプル例えば血液、これに限定されないが中に、ヒト免疫不全ウィルス核酸の存在を検出するポリメラーゼ連鎖反応検定法あるいはヒト免疫不全ウィルス蛋白質の存在を検出する抗体検定法を用いて、あるいは患者内の抗ヒト免疫不全ウィルス抗体の循環レベルを測定することによって測定可能である。また、抗体治療の有効性は、ヒト免疫不全ウィルスに感染した患者中のCD4T細胞数を測定することによって確認可能である。ヒト免疫不全ウィルス陽性の被験者すなわち患者中のCD4T細胞数の初期あるいはその後の減少を阻害するか、あるいはヒト免疫不全ウィルス陽性の被験者中のCD4T細胞数を増加することになる抗体治療は、有効な抗体治療である。d抗体送達のための核酸アプローチこの発明の組成物も、患者あるいは被験者自身の細胞が核酸を取り上げかつコード化された組成物例えば、CR2-DAF,DAF-CR2,CR2-CD59,CD59-CR2,CR2-CRI,CRI-CR2,CR2-MCP,MCP-CR2,CR2-Crry,Crry-CR2,CR2-IgGlFcヒト,CR2-IgMFc,CR2-IgG3Fcマウス,あるいはCR2-CVFを生成および分泌するように、上記抗体あるいは抗体フラグメントをコード化する核酸調製物例えばデオキシリボ核酸あるいはリボ核酸として患者あるいは被験者に投与可能である。e核酸の送達被験者の細胞への外因性デオキシリボ核酸の投与および摂取すなわち、遺伝子トランスダクションあるいはトランスフェクションを含む上述の方法において、この発明の核酸はありのままのデオキシリボ核酸あるいはリボ核酸の形態をとることができるか、あるいは核酸は、核酸を上記細胞に送出するベクター内に配することができ、これにより、抗体コード化デオキシリボ核酸フラグメントは、この技術分野における当業者の1人によって十分に理解されるように、プロモータの転写調節下に置かれる。上記ベクターは、アデノウィルスベクターQuantumBiotechnologies,Inc.Laval,Quebec,Canada等の市販の調製物とすることができる。核酸あるいはベクターの細胞への送達は、種々の機序を経由してなすことができる。一例として、送出は、LIPOFECTIN,LIPOFECTAMINEGIBCO-BRL,Inc.,Gaithersburg,MD,SUPERFECTQiagen,Inc.Hilden,GermanyおよびTRANSFECTAMPromegaBiotec,Inc.,Madison,WI等の市販のリポソーム調製物、並びにこの技術分野における標準的な手順に従って開発された他のリポソームを使用して、リポソームを経由してなすことができる。さらに、この発明の核酸あるいはベクターは、電気穿孔法によって生体内に送出可能であり、その技術は、Genetronics,Inc.SanDiego,CA並びにSONOPORATION機械ImaRxPharmaceuticalCorp.,Tucson,AZによって入手可能である。一例として、ベクター送出は、組換え型レトロウィルスゲノム例えば、Pastanetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:4486,1988;Milleretal.,Mol.Cell.Biol.6:2895,1986参照を一括することができるレトロウィルスベクター系等のウィルス系を経由してなすことができる。上記組換え型レトロウィルスは、その後に感染に使用することができ、これにより感染細胞に、この発明の広く無力化する抗体あるいはこれらの活性フラグメントをコード化する核酸を送出することができる。変更した核酸を哺乳類の細胞に導入する厳格な方法は、勿論、レトロウィルスベクターの使用に限定されるものではない。他の技術は、アデノウィルスベクターMitanietal.,Hum.GeneTher.5:941-948,1994、アデノ随伴ウイルスAAVベクターGoodmanetal.,Blood84:1492-1500,1994、レンチウイルスベクターNaidinietal.,Science272:263-267,1996偽性型pseudotypedレトロウイルスベクターAgrawaletal.,Exper.Hernatol.24:738-747,1996の使用を含む手順を広く利用することができる。リポソーム送出およびレセプター媒介性機序および他のエンドシトーシス機序例えば、Schwartzenbergeretal.,Blood87:472-478,1996参照等の物理的なトランスダクション技術も使用可能である。この発明は、あらゆる、あるいは他の一般的な遺伝子転写方法と共に使用可能である。一例として、仮にこの発明の補体調節構造をコード化する核酸がアデノウィルスベクターで被験者の細胞に送出される場合には、ヒトへのアデノウィルスの投与量が注射当たり約107~109プラーク形成単位pfuの範囲とすることができるが、注射当たり1012pfu程度に高くすることができるCrystal,Hum.GeneTher.8:985-1001,1997;AlvarezandCuriel,Hum.GeneTher.8:597-613,1997。被験者は、単回の注射を受けることができるか、あるいは仮に追加の注射が必要な場合には、それらの注射は不定期の期間において6ケ月間隔あるいは、熟練開業医によって決定されるような他の適切な間隔、および/または治療の有効性が確立されるまで反復可能である。この発明の上記核酸あるいはベクターの非経口的投与は、仮にこれが使用される場合には、注射によって概ね特徴付けられる。注射は、溶液あるいは懸濁液のいずれかのような従来の形状、注射前に液状の懸濁液に適した固形、あるいは乳剤で調製可能である。近時の非経口的投与のために改良されたアプローチは、一定の投与が維持されるように緩放性あるいは徐放性系の使用を含むものである。例えば、米国特許第3,610,795号参照されたい。この文献は本明細書で援用されるものである。適切な処方に関する追加的議論および治療化合物の種々の投与経路に関しては、例えばRemington:TheScienceandPracticeofPharmacy19thed.ed.A.R.Gennaro,MackPublishingCompany,Easton,PA1995を参照されたい。7.薬理学的担体/薬理学的生成物の送達上述したように、上記組成物も、薬学的に受容可能な担体で生体内に投与可能である。薬学的に受容可能なとは、生物学的でなく、あるいは他の容認できないものでもない材料、すなわち核酸あるいはベクターと共に被験者に投与できるが、あらゆる許容できない生物学的効果を生じることなく、あるいは有害な方法で、この材料が含まれる薬理学的組成物の他のいずれの成分とも相互作用することない材料を意味する。上記担体は、この技術分野における当業者の1人にとって周知であるように、あらゆる活性成分の分解を最小にしかつ上記被験者におけるあらゆる逆効果を最小にするために、自然に選択される。上記組成物は、経口的に、非経口的例えば、静脈内注射に、筋肉内注射によって、腹腔内注射によって、経皮的に、体外的に、局所的あるいはこれと同様に、投与可能であるが、局所的鼻腔内投与または吸入薬による投与が典型的で好ましい。本明細書で使用されているように、局所的鼻腔内投与とは、1つまたは双方の鼻孔を経由する鼻および鼻通路への上記組成物の送達を意味しかつ噴霧機構あるいは点滴機構によって、あるいは核酸あるいはベクターのエアロゾールによって送出するステップで構成することができる。後者は、多くの動物が同時に治療される場合に有効である。吸入薬による上記組成物の投与は、鼻あるいは口腔を経由して、噴霧機構あるいは点滴機構による送達によって行うことができる。送出は、挿管法によって呼吸系例えば肺のあらゆる領域に対して直接行うこともできる。必要な上記組成物の精確な量は、被験者の種、年齢、体重、および全身状態、治療されるアレルギー性疾患の重篤度、使用される特定の核酸あるいはベクター、その投与モード、およびこれらと同様のものに依存して、被験者によって異なるはずである。したがって、各組成物の正確な量を規定することは可能ではない。しかしながら、適量は、本明細書に与えられた実験ルーチンのみを用いて、この技術分野における当業者の1人によって決定可能である。上記組成物の非経口的投与は、仮にこれが使用される場合には、注射によって概ね特徴付けられる。注射は、溶液あるいは懸濁液のいずれかのような従来の形状、注射前に液状の懸濁液に適した固形、あるいは乳剤で調製可能である。近時の非経口的投与のために改良されたアプローチは、一定の投与が維持されるように緩放性あるいは徐放性系の使用を含むものである。例えば、米国特許第3,610,795号参照されたい。この文献は本明細書で援用されるものである。上記材料は、溶液、懸濁液例えば、微小粒子、リポソーム、あるいは細胞に組み込まれる中に含めることができる。これらの材料は、抗体、レセプター、あるいはレセプタリガンドを経由して特定細胞型を標的とすることができる。次の文献は、腫瘍組織に対して特異的な蛋白質を標的とする上記技術の使用例であるSenter,etal.,BioconjugateChem.,2:447-451,1991;Bagshawe,K.D.,Br.J.Cancer,60:275-281,1989;Bagshawe,etal.,Br.J.Cancer,58:700-703,1988;Senter,etal.,BioconjugateChem.,4:3-9,1993;Battelli,etal.,CancerImmunol.Immunother.,35:421-425,1992;PieterszandMcKenzie,Immunolog.Reviews,129:57-80,1992;およびRoffler,etal.,Biochem.Pharmacol,42:2062-2065,1991。ビヒクルは、例えば、ステルス、および他の抗体複合化リポソーム結腸癌を標的とする脂質媒介剤を含む、細胞特異性リガンドを経由したDNAのレセプター媒介性標的化、リンパ球定向腫瘍標的化、およびマウス生体内グリオーマ細胞の高特異性治療用レトロウィルス性の標的化である。次の文献は、腫瘍組織に対して特異的な蛋白質を標的とする上記技術の使用例であるHughesetal.,CancerResearch,49:6214-6220,1989;およびLitzingerandHuang,BiochimicaetBiophysicaActa,1104:179-187,1992。一般に、レセプターは、構成あるいは誘導リガンドのいずれかのエンドシトーシス経路に含まれている。これらのレセプターは、クラスリン被覆穴に集まり、クラスリン被覆ベシクルを経由して細胞に入り、上記レセプターが選別される酸性化エンドソームを通過し、その後に、細胞表面へ循環し、細胞内に蓄積されるか、あるいはリソソーム内で分解される。内在化経路は、栄養摂取、活性化蛋白質の除去、巨大分子の浄化、ウィルスおよび毒素の日和見的侵入、リガンドの解離および分解、およびレセプターレベルの調節等の種々の機能に役立つものである。多くのレセプターは、細胞型、レセプター濃度、リガンドタイプ、リガンド価、およびリガンド濃度に依存して、1以上の細胞内経路を伴うものである。レセプター媒介エンドシトーシスの分子および細胞の機構は調査されてきたBrownandGreene,DNAandCellBiology10:6,399-4091991。a薬学的に受容可能な担体抗体を含む上記組成物は、薬学的に受容可能な担体と組み合わせて使用可能である。薬理学的な担体は、この技術分野における当業者にとって公知である。これらの最も典型的な担体は、ヒトに対して薬剤を投与するための標準的な担体であり、この担体としては殺菌水、生理食塩水、および生理学的なpHを有する緩衝液等の溶液が挙げられる。上記組成物は筋肉内あるいは皮下的に投与可能である。他の化合物は、この技術分野における当業者によって使用された標準的な手順に従って投与されることになる。上記薬理学的組成物としては、選択分子に加えて、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝液、保存剤、界面活性剤、およびこれらと同様なものを挙げることができる。上記薬理学的組成物としては、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤、およびこれらと同様なもの等の1つまたはそれ以上の活性成分をも挙げることができる。上記薬理学的組成物は、局所的あるいは全身的な治療が望ましいか否かによって、および治療されるべき領域によって多くの方法で投与可能である。投与は、局所的眼、膣、直腸、鼻腔内を含む、経口的、吸入薬によって、あるいは非経口的に、例えば静脈内滴注、皮下注射、腹腔内注射、あるいは筋肉内注射によって行うことが可能である。開示された抗体は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、キャビティー内、あるいは経皮的に投与可能である。非経口的投与用の調製物としては、殺菌液あるいは非水性溶液、懸濁液、および乳剤が挙げられる。非水性溶媒の例は、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注入可能な有機エステル類である。水性担体としては、水、アルコール性/水性溶液、乳剤あるいは懸濁液が挙げられ、生理食塩水および緩衝性溶媒を含むものである。非経口的な賦形剤としては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、あるいは固定油が挙げられる。静脈内賦形剤としては、流体、および栄養補充液、電解補充液リンゲルデキストロース系の補充液等、およびこれらと同様のものが挙げられる。保存剤および他の添加剤は、例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガス、およびこれらと同様のものなどを存在させることもできる。局所的投与用の処方としては、軟膏、洗浄剤、クリーム、ゲル、ドロップ、坐薬、スプレイ、リキッド、およびパウダーが挙げられる。従来の薬理学的担体、水性、パウダーあるいは油系の増粘剤、およびこれらと同様のものは、必須あるいは好適であってもよい。経口的投与用の組成物としては、パウダーあるいは顆粒、懸濁液あるいは、水性あるいは非水性溶媒、カプセル、サッシェ、あるいはタブレットが挙げられる。増粘剤、香料、希釈剤、乳化剤、分散剤あるいは結合剤は好適に使用可能である。いくつかの組成物は、薬学的に受容可能な酸あるいは塩基の追加塩として投与可能であり、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、リン酸のような無機酸、および蟻酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、およびフマル酸等の有機酸との反応によって形成され得るか、あるいは水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム等の無機塩基、およびモノ-、ジ-、トリアルキルおよびアリールアミン類および置換エタノールアミン類等の有機塩基との反応によって形成可能である。b治療用途上記組成物の投与量の範囲は、症害の混乱をもたらす所望の効果を生じるのに十分な量とされる。投与量は、望ましくない交叉反応、アナフィラキシー反応、およびこれらと同様な反応等の有害な副作用を引き起こすような多量であるべきではない。一般に、投与量は、患者の年齢、症状、性別、および疾患の進行度で異なり、この技術分野における当業者の1人によって決定可能である。上記投与量は、逆の徴候を示す状況において個々の外科医によって調節可能である。投与量は変更可能であり、1日あるいは数日間にわたって、1日に1回あるいはそれ以上の回数で投与可能である。8.コンピュータ読み取り可能媒体開示された核酸とタンパク質とをアミノ酸のヌクレオチドからなる配列として表現できることが理解される。これらの配列を表示する種々の方法があり、例えばヌクレオチドのグアノシンは、Gまたはgで表される。同様に、アミノ酸のバリンは、ValまたはVで表される。当業者は、任意の核酸またはタンパク質配列を、種々の既知の方法でどのように表示および表現するかを理解する各々が開示されて本明細書で検討される。本明細書で具体的に考察することは、コンピュータ読み取り可能媒体上でのこれらの配列の表示であり、例えば該媒体として市販のフロッピー登録商標ディスク、テープ、チップ、ハードドライブ、コンパクトディスク、およびビデオディスク、さらに他のコンピュータ読み取り可能媒体が挙げられる。また、開示された配列のバイナリーコードによる表示も開示される。当業者は、コンピュータ読み取り可能媒体を理解する。したがって、コンピュータ読み取り可能媒体上に、核酸またはタンパク質配列が記録、格納、または保存される。本明細書中に述べられている配列および該配列に関する情報を含むコンピュータ読み取り可能媒体を開示する。本明細書中に述べられている配列および該配列に関する情報を含み、該配列は配列番号37、38、39、40、41、および42を含まないコンピュータ読み取り可能媒体を開示する。9.開示された組成物によるスクリーニングによって同定された組成物aコンピュータ支援医薬設計開示された組成物を任意の分子モデリング技術の標的として用いることで、その開示された化合物の構造の同定または該開示組成物と所望の方法で相互作用する潜在的もしくは実際の分子、例えば低分子の同定をおこなう。本明細書に開示された核酸、ペプチド、および関連分子を、任意の分子モデリングプログラムまたはアプローチで標的として用いることができる。モデリング技術で開示された組成物を使用する場合、特定かつ所望の性質例えば阻害もしくは刺激または標的分子の機能を持つ分子例えば、高分子が同定されると理解される。開示された組成物、例えばCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgGl、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CRI、CRI-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgGIFcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVFを使用する場合に同定および単離される分子も開示される。したがって、開示された組成物、例えばCR2、DAF、CD59、CR1、MCP、Crry、IgGl、IgM、IgG3、CVF、CR2-DAF、DAF-CR2、CR2-CD59、CD59-CR2、CR2-CRI、CRI-CR2、CR2-MCP、MCP-CR2、CR2-Crry、Crry-CR2、CR2-IgGIFcヒト、CR2-IgMFc、CR2-IgG3Fcマウス、またはCR2-CVFを必要とする分子モデリングアプローチを用いて生産される産物ももまた、検討されて本明細書で開示されている。したがって、このように、選択分子に結合する分子を単離する1つの方法は、合理的な設計を通してである。このことは、構造的情報とコンピュータモデリングとを通して達成される。コンピュータモデリング技術は、選択された分子の三次元原子構造と、分子と相互に作用する新化合物の合理的な設計の視覚化とを、可能にする。三次元構築物は、一般に、選択された分子のX線結晶解析またはNMRイメージングから得られたデータに依存する。分子動力学は、力場データを必要とする。コンピュータグラフィックスシステムは、新規化合物がどのようにして標的分子と連結するかの予測を可能にし、化合物および標的分子の構造を実験的に操作することが、結合特異性を完全にすることを可能にする。小さな変化が一方または両方で生ずる場合に分子と化合物との相互作用がどのようなものであるかの予測は、分子力学ソフトウェアと計算処理上インテンシブなコンピュータとを必要とし、通常、分子設計プログラムとユーザとのあいだのユーザフレンドリーな、メニュー方式のインタフェースと連結されている。分子モデリングシステムの実施例は、CHARMmおよびQUANTAプログラムPolygenCorporation,Waltham,MAである。CHARMmは、エネルギー最小化および分子動力学関数を実行する。QUANTAは、分子構造の構築、グラフィックモデリング、および分析を実行する。QUANTAは、互いの分子挙動の相互作用的な構造、修飾、視覚化、および分析を可能にするいくつかの論文が特定のタンパク質と相互作用する薬剤のコンピュータモデリングを概説しており、該論文は、例えば、Rotivinen,etal.,1988ActaPharmaceuticaFennica97,159-166;Ripka,NewScientist54-57June16,1988;McKinalyandRossmann,1989Annu.Rev.Pharmacol.Toxiciol.29,111-122;PerryandDavies,OSAR:QuantitativeStructure-ActivityRelationshipsinDrugDesignpp.189-193AlanR.Liss,Inc.1989;LewisandDean,1989Proc.R.Soc.Lond.236,125-140and141-162;さらに、核酸成分のためのモデル酵素に関して、Askew,etal.,1989J.Am.Chem.Soc.111,1082-1090である。化学物質をスクリーニングしたり、グラフィック表示するための他のコンピュータプログラムは、以下の会社から市販されている。すなわち、例えば、BioDesign,Inc.,Pasadena,CA.,Allelix,Inc,Mississauga,Ontario,Canada、およびHypercube,Inc.,Cambridge,Ontarioである。これらは、主に特定のタンパク質に対して特異的な薬剤への適用のために設計されるにもかかわらず、一旦DNAまたはRNAの特異的な領域が同定されると、特にその領域と相互作用する分子の設計に適応され得る。結合を変えうる化合物の設計および生成に関して上記されているにもかかわらず、基質結合または酵素活性を変える化合物について、既知の化合物のライブラリーをスクリーニングすることができ、該化合物として、天然産物もしくは合成化学物質、および生物活性物質、例えばタンパク質が挙げられる。10.キット本明細書に開示された方法を実施するために使用できる試薬に適用されるキットが、本明細書に開示される。このキットは、任意の試薬または本明細書に開示された試薬の組み合わせを含むものであり、開示された方法を実施する上で必要または有益であると理解される。例えば、キットは、上記方法のいくつかの実施形態で議論される増幅反応を実施するためのプライマー、同様に目的どおりにプライマーを使用するために必要とされる緩衝液および酵素とを包含することもあり得る。例えば、被験体のリスクを評価するキットが開示され、該リスクとして、癌、喘息、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、反応性関節炎、脊椎関節炎、全身脈管炎、インシュリン依存性糖尿病、多発性硬化症、実験アレルギー性脳脊髄炎、シェーグレン症候群、対宿主性移植片病、クローン病を含む炎症性大腸疾患、潰瘍性大腸炎、乏血再潅流傷害、心筋梗塞、アルツハイマー病病、移植拒絶反応同種および異種、熱傷、免疫結合体によって誘発されるいっさいの炎症、糸球体腎炎、重症筋無力症、多発性硬化症、脳ループス、ギヤン‐バレー症候群、脈管炎、全身性硬化症、過敏症、カテーテル反応、アテローム、不妊性、甲状腺炎、ARDS、ポストバイパス症候群、血液透析、若年性リウマチ様、ベーチェット症候群、溶血性貧血、ペンフィグス、水疱性類天疱瘡、脳卒中、アテローム性動脈硬化、および強皮症が挙げられる。11.類似の機能を持つ組成物本明細書中に開示される組成物は、特定の機能、例えば補体活性の修飾またはCR2、CR3、もしくはC3bの結合を有する。開示された機能を実行する特定の構造的必要条件は、本明細書中に開示され、同じ機能を実行することができる種々の構造があると理解される。そのような機能は、開示された構造に関連し、これらの構造は最終的に同じ結果例えば補体活性の刺激または阻害を達成する。E.組成物を作る方法本明細書中に開示される組成物と、開示された方法を実行するのに必要な組成物とは、特に指定しない限り、その特定の試薬または化合物のために当業者に公知の任意の方法を用いて作ることができる。構築物を含む組成物を作る方法が開示され、ここで、その構築物はCR2および補体の調節因子を含む。また、組成物を作る方法が開示され、該組成物は本発明の組成物である。1.ペプチド合成開示されたタンパク質例えば配列番号6を生成する1つの方法は、タンパク質化学技術によって2つ以上のペプチドまたはポリペプチドを連結させることである。例えば、ペプチドまたはポリペプチドは、Fmoc9-フルオレニルメチルオキシカルボニルまたはBoct-ブチロキシカアルボノイル化学物質を使用して、現在利用可能な実験装置を使用して、化学的に合成されるAppliedBiosystems,Inc.,FosterCity,CA。当業者は、例えば、開示されたタンパク質に対応しているペプチドまたはポリペプチドが標準の化学反応によって合成できると、直ちに理解することができる。例えば、ペプチドまたはポリペプチドを合成することはできるが、合成樹脂から切り出すことはできない。一方、ペプチドまたはタンパク質の他のフラグメントを合成することができ、続けて樹脂から切り出すことができ、それによって他のフラグメント上の機能的にブロックされる末端基が露出される。ペプチド縮合反応によって、それら2つのフラグメントをカルボキシル末端およびアミノ末端でペプチド結合を介して共有結合させることができ、抗体またはそのフラグメントが形成されるGrantGA1992Syntheticpeptids:AUserGuide.W.H.FreemanandCo.,N.Y.1992;BodanskyMandTrostB.,Ed.1993PrinciplesofPeptideSynthesis.Springer-VerlagInc.,NY少なくともペプチド合成に関連した材料に関しては、本明細書で援用する。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドは、本明細書に記載されているようにインビボでそれぞれに合成される。ひとたび単離すると、これらの別々のペプチドまたはポリペプチドを連結して、類似のペプチド縮合反応を経てペプチドまたはそのフラグメントを形成することができる。例えば、クローン化ペプチドセグメントまたは合成ペプチドセグメントの酵素連結反応によって、相対的に短いペプチドフラグメントが結合してより大きなペプチドフラグメント、ポリペプチド、またはタンパク質ドメイン全体生ずることが可能であるAbrahmsenLetal.,Biochemistry,30:41511991。あるいは、合成ペプチド固有の化学的連結反応を用いることで、短いペプチドフラグメントから大きなペプチドまたはポリペプチドを合成的に構成することができる。この方法は、二段階化学反応からなるDawsonetal.SynthesisofProteinsbyNativeChemicalLigation.Science,266:776-7791994。第一段階は、保護されていない合成ペプチド-チオエステルとアミノ末端Cys残基を含む保護されていない別のペプチドセグメントとの官能基選択的反応であり、開始の共有結合生成物としてチオエステル連結された中間体を生じる。反応条件を変えることなく、この中間体は自然発生的な素早い分子内反応を起こして連結部位に天然ペプチド結合を形成するBaggioliniMetal.1992FEBSLett.307:97-101;Clark-LewisIetal.,J.Biol.Chem.,269:160751994;Clark-LewisIetal.,Biochemistry,30:31281991;RajarathnamKetal.,Biochemistry33:6623-301994。あるいは、保護されていないペプチドセグメントを化学的に連結する。ここでは、化学的連結反応の結果としてペプチドセグメント間に形成された結合が非天然非ペプチド結合であるSchnolzer,Metal.Science,256:2211992。この技術は、完全な生物学的活性を持つ比較的純度の高い大量のタンパクと同様に、タンパク質ドメインのアナログを合成するのに、用いられるdeLisleMiltonRCetal.,TechniquesinProteinChemistryIV.AcademicPress,NewYork,pp.257-2671992。2.組成物を作るためのプロセス組成物に至る中間体を作るのと同様に、組成物を作る方法がを開示する。例えば、配列番号5の核酸を開示する。これらの組成物を作るために使用しうる種々の方法、例えば合成化学的方法および標準的な分子生物学的方法がある。これらの組成物および他の開示された組成物を作製する方法が具体的に開示されていると、理解される。配列番号25に記述した配列を含む核酸と、核酸の発現を制御する配列とを有効なかたちinanoperativewayで連結させることを含むプロセスによって生産される核酸分子を、開示する。配列番号25に記載の配列と80同一の配列を含む核酸と、該核酸の発現を制御する配列とを有効なかたちで連結することを含むプロセスによって生産される核酸も、開示する。本明細書で開示された核酸分子のいずれかによって動物体内で細胞をトランスフェクションさせるプロセスによって生産される動物を開示する。本明細書で開示された核酸分子のいずれかによって動物体内で細胞をトランスフェクションさせるプロセスによって生産され、哺乳類である動物を開示する。本明細書で開示された核酸分子のいずれかによって動物体内で細胞をトランスフェクションさせるプロセスによって生産され、マウス、ラット、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、または霊長類である動物も開示する。本明細書で開示される細胞のいずれかを動物に加えるプロセスによって生産される動物も開示する。この出願の全体を通じて、種々の刊行物が参照されている。これらの刊行物の開示内容は、本発明が関係する技術の状態をより完全に説明するために、参考のためこの明細書に援用する。開示される参考文献は、参照が根拠とするセンテンスで述べられている参照文献に含まれる材料として本明細書で個々に、かつ具体的に援用される。種々の修正変更が本発明の範囲または精神から逸脱することなく本発明でなされることができることは、当業者にとって明らかである。本発明の別の実施形態は、本明細書中に開示される発明の詳細および実施によって当業者によって明らかである。本明細書および実施例は例示のみを考慮し、本発明の真の範囲および精神は以下の特許請求の範囲にあることが意図されている。F.実施例以下の実施例は、本明細書で請求される化合物、組成物、物品、装置、および/または装置が作製されそして評価される方法の完全な説明および記述を、当業者に提供する。実施例は、単に本発明を例示するためのもであって、Tomlinson博士が発明として考えるものの範囲に制限を加えるものではない。努力は、数例えば、量、温度等に関して精度を確実にするために、なされたが、いくつかの誤差および偏差が含められるはずである。別途示されない限り、部は重量部であり、温度は°C、または外界温度であり、さらに圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。1.実施例1補体レセプター2CR2が媒介する補体インヒビターの補体活性化部位に対するターゲティングa方法1細胞株およびDNADNA操作は全て、マウスIgG1Fcコード領域を欠失したp118-mIgG130由来の哺乳類発現ベクターPBM中で実施した。チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞を使用してタンパク質を発現させ、10FCSを追加したダルベッコDulbeccoの改変イーグル培地DMEMGIBCOInvitrogen社、カールズバッド、CAで維持した。G418の存在下、安定して形質移入したCHO細胞クローンを培養し、組み換え型タンパク質発現のため、FCSGIBCO非存在下、CHO-S-SFMII中の懸濁液内で細胞を培養した。RPMIGIBCO、10FCS中でU937細胞を培養した。2抗体、試薬および血清CHO細胞膜に対するウサギ抗血清、精製されたヒトDAFおよびCD59を標準的な技術31により調製した。マウス抗DAFmAb1H432、ラット抗CD59mAbYTH53.133およびマウス抗ヒトCR2mAb171SCR1-2に結合34につき述べている。抗ヒツジ赤血球IgMをResearchDiagnosticInc.フランダースFlanders、NJから入手した。二次抗体は全てSigma社セントルイス、MOから購入した。精製された組み換え型sCD59はB.P.モーガン博士ウェールズ大学、カーディフ、UKから寄贈を受けた。C6欠乏ヒト血清をQuidel社サンディエゴ、CAから購入し、研究室の健康なボランティアの血液から正常なヒト血清NHSを得た。3発現プラスミドの作製およびタンパク質発現調製した前記組み換え型融合タンパク質および可溶性補体インヒビターを図1に示す。cDNA構築物は、前記4つのN末端SCRユニット成熟したタンパク質、Swissprotアクセッション番号P20023、の1番目~250番目の残基をコードしている前記CR2配列をDAFまたはCD59の細胞外領域をコードしている配列と接合することにより調製された。前記補体インヒビター配列はコードされた成熟したDAFタンパク質配列Swissprotアクセッション番号P08174の1番目~249番目の残基および成熟したCD59タンパク質配列Swissprotアクセッション番号P13987の1番目~77番目の残基を用いた。CR2を補体インヒビター配列に接合するため、CR2をC末端およびN末端それぞれに含む融合タンパク質について、SSGGGGS3およびGGGS2をコードしているリンカー配列を用いた。標準的なPCR法35により遺伝子構築物を調製した。クローニングステップは全て前記PBMベクター中で実施した。前記PBMベクターはタンパク質発現30にも利用される。発現のため、製造業者の指示に従ってGIBCOlipofectamineを用い、CHO細胞中にプラスミドを形質移入した。文献30に述べられているように、希釈を制限することにより安定して形質移入したクローンを選択した。また、クローンのタンパク質発現をELISAにより定量した。4ELISAおよびタンパク質アッセイ標準的なELISA技術31を用いて、組み換え型タンパク質を検出し、培養上清中の相対タンパク質濃度を測定した。どのタイプの組み換え型タンパク質をアッセイするかに応じて、前記キャプチャー抗体は抗DAFmAb1H4または抗CD59mAbYTH53.1のどちらかとなる。一次検出抗体は抗DAFまたは抗CD59ウサギポリクローナル抗体のどちらかである。ELISAの中には、抗CR2mAbA-3も一次検出抗体として使うものがあり、感度は低いが似たような結果を得ることができる。前記組み換え型タンパク質のタンパク質濃度は、UV吸光度またはBCAタンパク質アッセイキットPierceChemicalCompany,RockfordIIIにより測定した。5タンパク質精製アフィニティークロマトグラフィーにより培養上清から組み換え型タンパク質を精製した。製造業者が述べている通りに、抗DAF1H4mAbまたは抗CD59YTH53.1mAbのいずれかをHiTrapNHS活性化アフィニティーカラムPharmaciaBiotech、ニュージャージー、USAにカップリングしてアフィニティーカラムを調製した。組み換え型タンパク質を含む培養上清をpH8.0に調節し、アフィニティーカラムに0.5ml/分の流速で送液した。前記カラムを6~8カラム量のPBSにより洗浄し、組み換え型タンパク質を2~3カラム量の0.1Mグリシン、pH2.4により溶出した。前記融合タンパク質を含む画分は、1Mトリス緩衝液、pH8.0を含むチューブに収集し、PBS透析した。6SDS-PAGEおよびウェスタンブロッティング精製された組み換え型タンパク質は、非還元条件下のSDS-PAGE10アクリルアミドゲルBio-RadLifeScience、ハーキュリーズ、CA中で分離した。ゲルはクマーシーブルー染色した。ウェスタンブロッティングのため、標準的な手順に従った31。ごく簡単に、分離タンパク質をポリフッ化ビニリデン膜に転移し、前記転移タンパク質を抗DAFmAb1H4または抗CD59mAbYTH53.1のいずれかの方法により検出した。膜はECL検出キットAmershamBiosciences、Piscataway、NJにより展開した。CR2-CD59もまた、グリカナーゼ処理の後、SDS-PAGEにより解析した。CR2-CD592mgは、0.1SDS、10mM2-メルカプトエタノールおよび5mMEDTAを含むリン酸ナトリウム緩衝液pH7.5、15mMの中で、95°Cで3分加熱した。冷却後、CR2-CD59は1ノニデットP40および0.3mMPMSFの存在下、3UのFlavobacteriummeningosepticumN-グリカナーゼEC3.5.1.52、Sigmaでインキュベーとした。7フローサイトメトリー組み換え型融合タンパク質のC3オプソニン化細胞への結合はフローサイトメトリーで測定した。CHO細胞を、10抗CHO抗血清30分/4°C中でインキュベートし、洗浄して10C6欠乏NHS45分/37°C中でインキュベートした。次に前記C3オプソニン化細胞を洗浄し、1μM組み換え型タンパク質60分/4°Cでインキュベートした。洗浄後、抗DAFmAb1H4または抗CD59mAbYTH53.1のいずれか10μg/ml30分/4°C、続けてFITC-複合体二次抗体1:100,30分/4°Cで適切に細胞をインキュベートした。その後、細胞を洗浄し、PBS中で2パラホルムアルデヒドにより固定してFACScanフローサイトメーターBectonDickinsonImmunocytometrySystems、サンホセ、CAにより解析した。インキュベーションおよび洗浄は全てDMEM中で実施した。8C3リガンドに結合するCR2融合タンパク質の解析BIAcore3000装置を用いた表面プラズモン共鳴SPR測定により、前記CR2融合タンパク質とC3dg-ビオチンとの相互作用の動態解析を実行した。前記チップの1つのフローセル表面上に2μl/分で20分、C3dg-ビオチン50μg/mlを注入することにより、文献36で述べている通りに調製したヒトC3dg-ビオチンをBIAcoreストレプトアビジンSAセンサーチップ表面に結合した。前記フロー緩衝液は0.5XPBS0.05Tween20である。キャプチャーしたC3dgからの前記SPRシグナルにより、250~500の範囲のBIAcore反応単位を生じた。コントロールのストレプトアビジンにコーティングされたフローセルはタンパク質がない状態で稼動させた。結合は、0.5XPBS、0.05Tween20中の25°C、流速25μl/分におけるCR2融合タンパク質濃度15.6-500nMにわたる範囲により評価した。kinjectコマンドを用いて、CR2融合タンパク質サンプルを50μl分割量注入した。前記融合タンパク質と前記リガンドとの関連を120秒モニターした。その後は、前記複合体は緩衝液だけでさらに120秒経つと分離することができる。50μl/分で200mM炭酸ナトリウムpH9.5の10秒パルスにより、異なる融合タンパク質濃度での解析を行う間に前記結合表面を再構築した。CR2融合タンパク質断片のC3dで固定されたフローセルへの結合はコントロールのフローセル結合で補正した。BIAevaluationVersion3.1ソフトウェアBIAcoreを用いて結合データを1:1ラングミュア結合モデルに近似させ、小剰余値およびχ2値による最良適合により評価した。得た前記動的分離プロファイルは、前記BIAevaluationVersion3.1プログラムを用いてオン速度およびオフ速度kaおよびkdならびにアフィニティー係数KDの算出するのに利用した。実験と実験の合間に、50μl/分で50mM水酸化ナトリウムpH9.5の60秒パルスにより前記ストレプトアビジン表面を再構築し、上述の通りにC3dg-ビオチンを再び適用した。9補体溶解アッセイ60~80集密したCHO細胞をヴェルセンGIBCOで脱着し、2回洗浄して106/mlDMEMに再懸濁した。細胞に10ウサギ抗CHO細胞膜抗血清を加え30分/4°C、細胞を補体に感作させた。次に抗血清を除去し、DMEMで希釈したNHS中に細胞を再懸濁した。最終的なアッセイ容量は50または100μlのいずれかである。37°Cで45分後、トリパンブルーエクスクルージョン生細胞および死細胞をどちらも数えるまたは51Crリリースのいずれかにより細胞の生存を測定した37。いずれのアッセイからも似た結果を得ている。組み換え型タンパク質の補体インヒビター活性をアッセイするため、CHO細胞に添加する前に前記タンパク質をDMEMで希釈してNHSに加えた。10NHSの最終的な濃度として、無防備の抗体が感作したCHO細胞がおよそ90溶解する濃度を採用した。抗体に感作したヒツジ赤血球EAAdvancedResearchTechnologies、サンディエゴ、CAを用いて、補体による溶血の阻害を測定した。最終的な容量が300μlのゼラチンベロナール緩衝液GVBAdvancedResearchTechnologies中で溶血アッセイを実施した。前記ゼラチンベロナール緩衝液は2.5X107EA、最終的な希釈倍率が1/300となるようなNHSおよび付加的な融合タンパク質濃度を含む。37°Cで60分、反応混合物をインキュベートし、10mMEDTAを含む300μlPBSを加えて反応を止めた。遠心分離により細胞を取り除き、413nmで上清中のヘモグロビンについて分光光度的に定量することにより細胞溶解をアッセイした。10U937細胞の赤血球への接着文献38に述べられている通りに、C3オプソニン化赤血球へのCR3依存性接着のアッセイを効果的に実施した。簡便に、GVBAdvancedResearchTechnologies内に37°Cで30分、測定前凝集量に近いウサギ抗SRBCIgMでヒツジの新鮮な赤血球SRBCを感作した。2回洗浄した後、GVB120分/37°Cで等容量の1:2希釈したC6欠乏ヒト血清でIgMに感作したSRBCをインキュベートすることによりC3bオプソニン化SRBCを調製した。細胞を2回洗浄し、ペレットをGVBに再懸濁した。血清中ではC3bの半減期が短くなるため、この処理後に赤血球に結合するC3の大多数はiC3bまたはC3dの分解産物CR2リガンドの形式である。U937細胞200μl中に4X10^5細胞を50μlのC3オプソニン化SRBC2X106細胞に加え、前記混合物を遠心分離4分/40xgして室温で90分静置した。次に細胞を位相差顕微鏡で検査し、赤血球に接着しているU937細胞数を測定した。少なくとも1サンプルあたり100赤血球につきスコアリングし、赤血球に結合しているU937細胞数の平均を算出した。実施した各実験では、3重に測定した。実験の中には、収集前に50ng/mlホルボールミリスチン酸酢酸塩PMA存在下でU937細胞を3日間培養しており、処理の結果CR3を上方制御したものがいくつかある39、40。IgMでコーティングされたSRBCのみとインキュベートした細胞、またはC6欠乏ヒト血清と直接インキュベートしたSRBCをコントロールとして用いた。11体内分布研究続けて注入した放射性標識タンパク質の組織分布を測定する標準的な手順41、42を実施した。簡便に、34週齢のメスのNZB/NZWF1マウスJacksonLabs、バーハーバー、ME尾静脈に1.7μgの125I標識したCR2-DAF4.20x106cpm/mgまたはsDAF4.84x106cpm/mgを注入した。24時間後、血液サンプルを採取し、主要な器官を除去してから細かく切って10mMEDTAを含むPBSで洗浄し、計量カウントした。組織グラムあたりの注入量パーセンテージによりターゲティング特異性を評価した。製造業者PierceChemicalCo.の指示に従い、ヨードジェン法iodogenを用いてタンパク質をヨウ素化した。12免疫蛍光顕微鏡CR2-DAFまたはsDAF270μgを24週齢MRL/lprマウスの尾静脈に注入した。24時間後、腎臓を除去してスナップ冷凍snapfrozenした。冷凍腎臓から調製したクリオスタット切片5μmをアセトンにより固定し、間接型免疫蛍光顕微鏡用に処理した。抗マウスIgGFc特異的FITC-複合体二次抗体F4143、Sigma-Aldrichとともに、マウス抗ヒトDAF1A10および1H6mAbの等モル混合物を一次検出抗体最終濃度、10μg/mlとして用いた。続けて、前記マウス腎臓に接着した免疫結合体により起こる可能性が最も高いバックグラウンド染色を削減するため、前記二次FITC標識抗体を1:800推奨されている希釈の10倍に希釈することを除けば、標準的な手順49、抗体染色技術の教示するところを本明細書で援用を実施した。デジタル画像を取り込み、同じ設定でAdobePhotoshopにより最適化した。b結果1構築物設計、発現、および精製組み換え型融合タンパク質は、4つのヒトCR2N末端SCRユニットを含み、N末端またはC末端の可溶性ヒトCD59またはDAF図1に示す構築物のいずれかに連結された。組み換え型タンパク質は、安定して移入したCHO細胞クローンの培養上清から100~200μg/lの間の収量で精製された。精製された組み換え型タンパク質をSDS-PAGEおよびウェスタンブロットにより解析することにより、予想される分子量の範囲図2内のタンパク質が明らかとなり、CR2-CD59を除いて、タンパク質は全て単一のバンドとして移動することがわかった。CR2-CD59でバンドが2つ観察されるのは、グリコシル化の違いによる。なぜならば、CR2-CD59はグリカナーゼ処理の後では単一のバンドとして移動するからである。2融合タンパク質の補体オプソニン化細胞へのターゲティングCR2に対するC3リガンドを、補体活性化抗体およびC6欠乏血清MAC形成および細胞溶解を防ぐためでCHO細胞をインキュベートすることによりCHO細胞に沈着した。CR2を含む融合タンパク質は全て、sCD59またはsDAFは異なるが、C3でコーティングされたCHO細胞図3に結合する。3融合タンパク質とC3dgリガンドとの間の相互作用の動態解析前記CR2リガンドC3dgに対して異なる組み換え型融合タンパク質のアフィニティーを表面プラズモン共鳴測定により測定して比較した。キャプチャーしたC3dg-ビオチンおよそ2000反応ユニットを含むBiacoreストレプトアビジンチップ上に種々の濃度の前記融合タンパク質を通して前記実験を行った。グローバル適合パラメータにより、前記データの動態解析は1:1ラングミュア結合相互作用モデルに対して最良適合を示した図4.N末端にCR2をもつ融合タンパク質CR2-DAFおよびCR2-CD59はどちらも似たような速い会合および速い解離速度をもつ結合プロファイルを示した。対照的に、C末端へのCR2の融合タンパク質の結合DAF-CR2およびCD59-CR2は遅い会合および解離速度を示した図4、表1。しかしながら、前記N末端がCR2の融合タンパク質は最も高いアフィニティーで結合している表1。CD59融合タンパク質はDAF融合タンパク質よりも高いアフィニティーで結合する。可溶性のDAFおよびsCD59は固定化したC3dgには結合しない。4融合タンパク質の補体インヒビター活性補体が媒介するCHO細胞および赤血球の両方の溶解に対するこれら補体インヒビターの効果を測定することにより、標的化および非標的化補体インヒビターの補体インヒビター活性を解析した。これら実験では、無防備な細胞が90~100溶解する濃度のヒト血清中で抗体感作細胞および組み換え型タンパク質をインキュベートした。どちらの細胞タイプでも、前記標的化補体インヒビターはその対応する非標的化タンパク質よりも、補体媒介性溶解を阻害することにおいて、有意により有効であった。標的DAFタンパク質は、標的化CD59よりも有効なインヒビターであった図5および図6。DAFおよびCD59のいずれかのN末端と連結しているCR2を含む融合タンパク質は、C末端CR2融合タンパク質より有効なインヒビターである。最も可能性を秘めた補体溶解インヒビターはCR2-DAFである。CR2-DAFは、CHO細胞溶解を50阻害するのに濃度18nMを要する。対照的に、非標的化sDAFはCHO細胞溶解を50阻害するのに濃度375nMを要し、20倍の開きがある図5a。sCD59は特に貧弱な補体インヒビターであり、テストした中で最高の濃度である500nMでCHO細胞溶解からわずか25しか保護しなかった。しかしながらCR2-CD59は102nMでCHO細胞溶解を50阻害し、非標的化sDAFよりも有効であった図6a。表4は前記の異なる組み換え型補体インヒビターインヒビター活性の比較である。N末端CR2融合タンパク質の高い補体インヒビター活性はこれらタンパク質がC3dgリガンドに対して示す高いアフィニティーと関連している表3。補体が媒介するCHO細胞および赤血球の溶解を保護するための相対的な有効性は、前記補体インヒビターの間でいくらか異なる。これは特に前記DAFインヒビターであてはまる。標的化DAFの方がずっと有効ではあるが、sDAFはCHO細胞よりも赤血球を保護するのにずっと有効である。また、でより有意に補体を阻害する。赤血球が補体溶解の標的細胞である場合は、CR2-DAFおよびDAF-CR2のインヒビター活性にほとんど違いはない。5細胞接着に対するCR2融合タンパク質の効果補体レセプター3は、内皮接着および血管外遊出ならびに前記細胞溶解メカニズム食作用および脱顆粒の活性化に関与する白血球受容体である。CR2およびCR3同じiC3b補体リガンドを共有しているため、CR2融合タンパク質はCR3が媒介する細胞結合を阻害するかどうかを決定した。これら実験のため、CR3依存性メカニズムでiC3bにコーティングされた赤血球に結合する特徴がよくわかっている前単球細胞株CR2-、CR3、U937を用いた40。前記CR2融合タンパク質は全て、sDAFまたはsCD59を除き、U937細胞のC3オプソニン化ヒツジ赤血球への結合を有意P<0.01に阻害した。各CR2融合タンパク質は濃度500nMでU937結合を同程度阻害した図7。PMAで刺激したU937細胞を用いた、CR3の上方制御をもたらす処理をする実験でも似たようなデータが得られている。39、40。赤血球の補体オプソニン化では、補体を活性化するためにIgMを用いた。なぜなら、IgGは前記赤血球に沈着する際にU937細胞上に発現されるFcγレセプターに会合するからである。U937細胞はまた、前記iC3bリガンドを共有する第3のレセプターである、CR4p150、CD11c/CD18を発現する。しかしながら、おそらくCR4と細胞骨格との関連および膜上での不動性のため、U937細胞のC3オプソニン化赤血球への結合はCR4非依存型である40。6CR2-DAFの腎炎マウス腎臓へのターゲティングCR2融合タンパク質が補体活性化部位およびインビボ疾患部位を標的とするかどうかを測定するため、メスのNZB/WF1マウス中のCR2-DAFおよびsDAFの体内分布研究を実施した。NZB/WF1マウスでは自然発症の自己免疫性疾患が発達している。この自己免疫性疾患はヒト全身性エリトマトーデスSLEと似ており、自己抗体の産生および補体沈着関連の免疫結合体が媒介する重症の糸球体腎炎が26~28週齢で発達する4、52。34週齢NZB/WF1マウスにおける[125I]CR2-DAFおよび[125I]sDAFの体内分布は注入後24時間および48時間に測定した。尾静脈に[125I]CR2-DAFを注入して24時間すると、検定した他の器官と比べ、有意に高い割合の放射能が腎臓に局在した図25a。[125I]CR2-DAFを注入して48時間後、24時間後と同程度の放射能が腎臓にあるが、肝臓および脾臓の放射能が増加し、血液中の放射能は減少した図25b。肝臓および脾臓は免疫結合体クリアランス部位であり、[125I]CR2-DAFのターゲッティングがこれら器官では後になって増加したことが説明できる。[125I]sDAFは腎臓またはその他器官で優先的な結合を示さなかった図25、aおよびb。8週齢の腎炎罹患前NZB/WF1マウスでは、[125I]CR2-DAFの腎臓へのターゲティングの証拠はなかった図25c。さらに興味深いことに、[125I]sDAFは[125I]CR2-DAFよりも循環器からずっと早く除去されることから、前記CR2部分は前記融合タンパク質の循環半減期を延ばす機能があることを示している。しかしながら、より若いマウスの[125I]CR2-DAF血液レベルは、24時間ではより高齢のマウスで記録したレベルの約半分である。[125I]CR2-DAFの長い循環器における半減期は、部分的には循環免疫結合体への結合の結果と考えられる。CR2-DAFの腎臓沈着補体へのターゲティングについてもまた、腎臓切片を直接検査することによりもう1つのSLEマウスモデルを検査した。メスのNZB/WF1マウスと同様、MRL/lprマウスは、糸球体の免疫沈着と関連して53、このマウスモデルを教示するため本明細書で引用、24週齢までに補体沈着とともに重症の増殖性糸球体腎炎が発達する。CR2-DAFおよびsDAFを24週齢のMRL/lprマウス尾静脈に注入し、ヒトDAF免疫反応性について蛍光顕微鏡により腎臓切片を24時間後に解析した。CR2-DAFを注入したマウスの腎臓切片は、免疫結合体で観察されたパターンと同様に糸球体に優先的に局在する傾向とともに高レベルのDAF染色を示した。sDAFを注入されたマウスの糸球体では、DAF染色は全く明らかでなかった図26。c結論この研究は、補体活性化部位に対して標的化されるタンパク質を含む可溶性ヒトDAFおよびCD59の生成および特徴付けを説明する。標的化タンパク質は、補体を阻害することで、それらの非標的化相対物よりかなり強力だった。CD59およびDAFの標的化は、補体C3活性化産物と結合するヒトCR2のフラグメントにインヒビターを連結させることによって達成された。CR2に対するC3リガンドは、比較的寿命が長く、しばしば多量に、補体活性化の部位に共有結合する。このように、補体阻害のCR2によって媒介される標的化は、数多くの補体関連疾患または症状に対して治療上の利点がある。この仮説と整合して、CR2-DAFは腎炎NZB/WF1マウスの腎臓を標的とすることが示された。これらのマウスは、補体活性化および付着2、43をもたらす腎臓での結果として生ずる免疫結合体の形成と付着によって自己抗体を産生する。ヒトCR2は、類似の親和性44でヒトおよびマウスC3リガンドに結合し、生体内分布の研究によってCR2融合タンパク質がインビボで標的機能を保持することが確認される。本研究は、ヒト補体阻害のためにこのアプローチの実現可能性を確立する。標的化アプローチは、可溶性CR1等の補体活性化の他のインヒビターに対しても効果的であり、それは臨床試験で効果的であり、さらにインビトロ9でDAFよりも強力な補体のインヒビターである。異なるCR2融合タンパク質のC3dgに対する相対的親和性は、C3dgに対するCR2のSCR1-2およびCR2のSCR1-15の親和性を暗示する。C3dgとのCR2SCR1-2およびCR2SCR1-15相互作用についてのKD値は類似しているが、CR2SCR1-2はより速く結合および解離した。このことは、全体的な親和性36に対する付加的なSCRドメインの貢献が示された。別のSCR含有タンパク質H因子の溶液構造の分析は、SCRドメインがそれ自身上で折り畳まって、SCRドメイン間の相互作用がC3リガンド結合特性45を調節しうることが示された。SCR領域間の立体配置的可変性は、異なる天然のリンカー長から生じると予想され、より長いリンカーはより大きな立体配置的柔軟性を提供する。この文脈において、CR2およびDAFのSCR領域は比較的長いser-glyリンカーで連結し、このことは融合パートナーが互いに折り重なりあってCR2結合親和性を調節することができるSCR-SCR相互作用をもたらすことを可能とする。標的として抗体感作CHO細胞またはヒツジ赤血球を使用して、補体媒介性溶解分析をおこなった。補体媒介性溶解と異なる細胞を保護する点で、補体インヒビターのいくつかの相対的活性に、著しい差があった。DAF、DAF-CR2、およびCD59-CR2は、補体媒介性溶解からヒツジ赤血球を保護する点で、CHO細胞よりかなり活性が高かった。赤血球とは異なり、有核細胞の補体媒介性溶解が、完全に膠質浸透性の調節解除に起因するというわけではなく、形質膜での複数のMACの付着が必要である46-48。可溶性非標的化補体インヒビターの阻害活性を調べている大部分の前の研究は、補体媒介性溶解の標的細胞として、赤血球を使用して実行された。しかし、CHO細胞はインビトロ実験に対するより生理学的に関連した標的となる可能性がある。補体媒介性障害の異なる機構は、異なる疾患状況に関係しており、異なる疾患は経路内の異なる点で作用する阻害戦略から恩恵を受けることができる。例えば、疾患に適用できるならば、経路における遅いステップで補体をブロックする特定の利点は宿主防御機能、および補体の免疫ホメオスタシス機構は完全なままであることである。このように、CD59をベースとするインヒビターは、末期細胞溶解性経路が主に原因に関係する疾患で、補体活性化のインヒビターに勝る利点を提供する。可溶性CD59はインビトロでのその非常に劣った活性により治療的な利点を持ちそうにないが、CD59のCR2によって媒介される標的化が有意にその補体阻害活性を増加させることが本明細書で示された。実際に、CR2-CD59はsDAFより補体媒介性溶解を阻害する活性が高く、インビボでsDAFは治療効力を示した8。CR2-CD59の齧歯類アナログは、疾患の病因における初期の補体活性化産物対MAC形成の相対的な役割を分析するための有用な手段でもある。多くの症状での異なる補体活性化産物の組織損傷に対する相対的寄与は、あまり理解されておらず、議論の余地がある。CR2融合タンパク質は、C3オプソニン化赤血球に対するU937細胞の結合を阻害した。CR2およびCR3は両方ともiC3bを結合し、このデータは、C3-オプソニン化赤血球に対するU937結合がCR3依存型40であることから、CR2-融合タンパク質がCR3アンタゴニストとして作用することを示す。接着分子として、CR3は、細胞間接着分子‐1ICAM-1との高親和性相互作用を介して、炎症部位での内皮癒着と漏出性出血を媒介する。補体レセプターとして、CR3はiC3bとの相互作用を経て貪食作用および脱顆粒を促進および強化する。ICAM-1およびiC3bは、CR3Rossの総説を参照上で、オーバーラップしている抗原決定基と結合する。したがって、CR3は、炎症部位で細胞媒介性組織障害を促進する点で重要な決定因子となりえる。また、CR3をブロックする抗体はいくつかの炎症状態で作用を示したRossの総説を参照。したがって、CR3結合に対するCR2の拮抗作用は、補体阻害と相乗的に作用するCR2補体インヒビター融合タンパク質の作用の第2の抗炎症機構を示す。補正活性化部位および疾患部位に対する標的化補体インヒビターは、それらの効力をかなり強化することができる。実際、CD59をベースとする治療から利益を受ける症状にとって、補体活性化部位に対するCD59の標的化は、必要条件である。他の標的化アプローチ例えば抗体によって媒介される標的化に対するCR2媒介性標的化の利点は、CR2部分が任意のアクセス可能な補体活性化部位を標的化し、広範囲な治療用途を持つことである。CR2融合タンパク質は、CR3アンタゴニストとして作用することもでき、このことは第2の重要な治療的な利点を示すことができる。ヒトCR2-補体インヒビター融合タンパク質は、抗体可変部を含む組換え型のインヒビターよりも免疫原である可能性も低い。低レベルの全身性阻害を有する、有効な局所濃度を与える補体活性化の標的化インヒビターの予測された能力もまた、特に長期にわたる全身性補体阻害これはC59をベースとするインヒビターにとってさほど重要な問題ではないを伴って、宿主防御機構を危うくする可能性を減衰させる。CR2標的化インヒビターは、補体を活性化させる感染因子を標的とすることができる。2.実施例2:標的化補体阻害および活性化a補体インヒビター炎症/生体非適合性補体インヒビターは、多くの自己免疫疾患および炎症性疾患および生体非適合性に関係した症状の治療のために、かなり有望である。補体に対する安全かつ活性のある薬理学的インヒビターは、現在利用できない。研究は、主に宿主膜結合型補体-調節タンパク質に基づく可溶性インヒビターを開発することに集中した。可溶性CRl、MCP、DAF、およびCrryの組換え型の形状は膜連結領域の除去によって作られ、さらに全てのタンパク質は疾患の種々のモデルで、炎症および補体媒介性組織障害を減少させる点で活性があることが示された。補体タンパク質C5の機能をブロックする可溶性CR1抗体は、臨床試験中である。しかし、全身投与した可溶性補体インヒビターの臨床使用に関して、深刻な疑問が存在する。補体は、先天性および適応性免疫において、重要な役割を果たし、C3bの生成は、多くの病原細菌の白血球媒介クリアランスとオプソニン化とにとってクリティカルである。加えて、液相補体活性化産物C5aは感染を制御する際に重要であることが示され、循環流動からの病原性物質のクリアランスにとってで重要である。補体の全身阻害は、したがって、感染を制御する能力に関して、宿主にとって深刻な結果をもたらす可能性がある。補体は、免疫結合体の活発な異化にとっても重要であり、このことは自己免疫および免疫性複合体病の処置にとって補体インヒビターの使用に特に重要な問題である。補正活性化部位および疾患部位に対する補体インヒビターの標的化は、非常に低い活性血清中濃度を可能にすることができ、有意に全身補体阻害のレベルを低下させることができる。増加した効力は標的化補体インヒビターの重要な利点であり、標的化は循環流動での可溶性組換え補体インヒビターの短い半減期の問題に対処することもできる。補体インヒビターの標的化に関する上記の考慮すべき問題に加えて、補体経路を選択的にブロックしている異なる部分は、有益な補体活性化産物の生成を可能にすることができるが、疾患原因に関係する補体活性化産物の生成を阻害する。例えば、補体活性化インヒビター例えば、CR1、DAF、およびCrryは、C3b、C5a、およびC5b-9生成を阻害する。C5に対する抗体は、C5aおよびC5b-9生成を阻害する。一方では、CD59をベースとするインヒビターはC3bおよびC5a生成に影響することなく、C5b-9形成のみをブロックする図8参照。終端の補体経路およびC5b-9生成は、炎症を促進する際に重要であることが示され、腎臓例えば免疫結合体性糸球体腎炎のいくつかの疾患の進行に特に関係する。このように、特定の疾患に対して、CD59をベースとするインヒビターは、初期の補体活性化産物の生成を妨げることなく、疾患原因を阻害することができる。初期の補体活性化産物の生成は、宿主防御および免疫結合体クリアランスにとって重要である。しかし、可溶性CD59は補体活性化DAF、CRI、MCP、またはCrryのインヒビターとは異なるの有効なインヒビターでなく、またいかなる臨床応用を持つこともなさそうである。しかし、細胞標的化CD59は、実行可能な療法を示すことができる。CD59の抗体媒介性標的化Zhangetal.,1999,J.Clin.lnvest.,103,55-61を用いるデータおよびCD59のCR2媒介性標的化によって本明細書に表されるデータは、細胞膜に対して標的化されたCD59が可溶性の非標的化CD59よりも著しく活性が高い。b補体活性化因子癌癌免疫療法薬剤としてモノクローナル抗体を活性化させる抗腫瘍補体の当初の予想は、実現されなかった。これの1つの理由は、腫瘍細胞補体インヒビターは、腫瘍細胞上でしばしば上方制御されるの補体阻害タンパク質の発現である。このように、特定の抗体がヒトで腫瘍を標的として、腫瘍細胞表面上で補体を活性化させることが示されたにもかかわらず、腫瘍細胞は補体媒介性破壊を阻止する。抗体療法に耐性の腫瘍での補体インヒビターの重要な役割を示しているインビトロ実験から、多くの証拠が存在する。また、報告Caragine,etal.,2002,CancerRes,62,1110-15;Chenetal.,2000,CancerRes.,60,3013-18;Baranyietal.,1994,Immunology,82,522-8によれば、生体内に腫瘍細胞の表面で発現される補体インヒビターには補体付着および腫瘍化に関して機能的な影響力があると確認された。腫瘍細胞の上で補体付着を強化することで、腫瘍細胞のより活性の高い免疫媒介クリアランスを可能とし、補体活性化抗腫瘍抗体を用いる良好な免疫療法の見通しが改善される。強化された補体活性化は、腫瘍細胞発現された補体阻害タンパク質を圧倒する。c結果-11標的化補体インヒビター融合タンパク質前述のようにインビトロでの補体阻害機能について評価され、かつ標的化に対して、発現、生成、および特徴付けされたヒト融合タンパク質の例として、CR2-DAF、CR2-CD59、DAF-CR2、およびCD59-CR2が挙げられる。成熟ヒト融合タンパク質のヌクレオチド配列および予測アミノ酸配列を、図8-11に示す。2発現および精製融合タンパク質をコードしている相補DNAプラスミド構築物コンストラクトを、CHO細胞にトランスフェクトし、安定に発現しているクローンを単離した。最も高レベルで融合タンパク質を発現しているクローンを選択した。選択されたクローンをバイオリアクターで増殖させ、融合タンパク質を親和性クロマトグラフィーによって培養液上清から単離した。親和性カラムの調製は、セファロースに結合した抗DAFおよび抗CD59抗体複合体を使用しておこなった。組換えタンパク質の分析は、SDS-PAGEおよびウエスタンブロット図2によっておこなった。3C3リガンドに対する融合タンパク質の結合aフローサイトメトリーフローサイトメトリー実験を前述のとおり実施した。フローサイトメトリー図12によって分析されるように、CR2含有融合タンパク質の全てがC3被覆CHO細胞と結合した。sDAFおよびsCD59は、C3被覆CHO細胞と結合しなかった。bELISA酵素結合免疫測定法ELISA実験を前述のとおり実施した。酵素結合免疫測定法実験では、CR2を含有する構築物を、精製されたC3dgでおおわれているウェルに添加した。結合の検出は、抗補体インヒビター抗体と酵素に結合した二次抗体とによって、おこなった。構築物を含む全てのCR2がC3dに結合したが、CD59およびsDAFは結合しなかった。c表面プラズモン共鳴ビオチン化C3dgCR2リガンドを、ストレプトアビジン被覆BIAコアチップに結合させ、CR2含有融合タンパク質の結合反応速度を測定した図13-16。sDAFおよびsCD59は、捕捉C3dgと結合しなかった。N末端にCR2を持つ融合タンパク質は、最も高い親和性で結合した。CD59含有融合タンパク質は、対応のDAF含有融合タンパク質よりも高い親和性で結合した。4融合タンパク質の補体阻害機能融合タンパク質および可溶性非標的化補体インヒビターの機能的活性を、補体媒介性細胞溶解に対するタンパク質の作用を測定することによって、分析した。チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞図17および18およびヒツジ赤血球E図19および20を使用するアッセイを用いた。標的化補体インヒビターは、可溶性非標的化補体インヒビターよりも補体媒介からのかなり大きい防御を提供した。N末端にCR2を持つ融合タンパク質は、DAF含有融合タンパク質およびCD59含有融合タンパク質の両方に対して最も有効であった。N末端CR2融合タンパク質も、BIAcore実験上記参照でC末端CR2融合タンパク質よりも高い親和性で、C3dと結合した。CR2-DAFは、これらのアッセイで補体媒介性溶解からの防御を提供するという点で、CR2-CD59よりもずっと有効であった。しかし、注目すべきことは、非標的sCD59は、高濃度であっても補体阻害活性が非常に弱かったsDAFとは異なる。また、細胞表面に対するCD59の標的化は、CD59機能の必要条件である。CHO細胞およびEに対する標的化補体インヒビターと非標的化補体インヒビターとのあいだの相対的活性は、異なる。しかし、赤血球は、1回のヒットすなわち、単一MACの形成がE溶解をもたらすによって溶解する。ところが、有核細胞例えばCHO細胞は、付加的な耐性機構例えば、MACのキャッピングおよび分断を有し、溶解のために複数のMACの付着を必要とする。これらの違いは、溶解阻害データが異なることを説明可能であり、CHO細胞はインビトロ実験でそれらに対するより生理学的に関連した標的を示す可能性がある。d結果-21標的化補体活性融合/複合体化タンパク質ヒトCR2-IgG1のFcを発現および精製し、該フラグメントがインビトロでC3オプソニン化細胞を適切に標的化することを示した。ヒトおよびマウスsCR2CVFとの接合のためとマウス融合タンパク質とをコードする配列を持つ発現プラスミドを調製した。成熟ヒト融合タンパク質のヌクレオチド配列および予測アミノ酸配列を図21に示す。2発現および精製CR2の最初の4つのSCRをコードするcDNAを、ヒトIgG1のFc領域をコードするゲノム配列に連結した。融合タンパク質をコードするプラスミドをCHO細胞にトランスフェクトさせ、安定に発現するクローンを単離した。融合タンパク質の発現が最も高レベルであるクローンを選択した。選択されたクローンをバイオリアクターで増殖させ、プロテインA親和性クロマトグラフィーによって、培養液上清から融合タンパク質を単離した。組換えタンパク質は、SDS-PAGE図22およびウエスタンブロットによって分析した。タンパク質は、還元および非還元条件で期待される分子量で移動したCR2-Fcはジスルフィド結合ダイマー。CR2-マウスIgG3をコードするマウスプラスミド構築物を構築した。3C3リガンドに対する融合タンパク質の結合aフローサイトメトリーフローサイトメトリーで分析したように、C3被覆CHO細胞に対してCR2-Fcが結合した図23。bELISAELISA実験では、精製C3dgに被覆されたウエルに、CR2-Fcを添加した。結合は、抗ヒトFc抗体および酵素結合二次抗体とによって、検出した。CR2-FcはC3dに結合した。c表面プラズモン共鳴ビオチン化C3dgCR2リガンドをストレプトアビジン被覆BIAコアチップに結合させ、CR2-Fcの結合を示した図24。3.実施例3a急性尿細管間質性損傷のラットモデルの抗体標的化補体インヒビター:よく特徴づけられたマウス抗ラット腎臓モノクローナル抗体のパネルが、使われた49、50、これらの抗体および該抗体の配列に関するそれらの教示について本明細書に援用する。合計5つの抗体からの可変部DNAを、標準のPCR技術によって単離した35、PCRに関する教示のために参照によって本明細書に援用。全てがうまくクローン化され、いくつかが単一鎖抗体として発現された。全ての単一鎖抗体は、インビトロで上皮性ラット腎臓または内皮細胞系を認識した。mAbsK9/9のうちの1つは、上皮細胞表面で同定された糖タンパク質と結合して、インビトロで糸球体毛細血管壁および近位尿細管に対する特異性を持つ49。この抗体は、急性尿細管間質性損傷のラットモデルで、標的とされたCrryおよびCD59によって媒介される補体阻害の検討のために、標的化ビヒクルとして選択された。K9/9mAbが前の検査49において、糸球体障害を誘発することが示されたにもかかわらず、フロイントアジュバントと共に投与される場合、抗体は病原性を示すだけであった。実際に、K9/9mAbアジュバントとともにの病原性は、再現されなかった。タンパク尿症と進行性腎臓障害とのあいだに関連があり、データがタンパク尿症自体が間質性線維症と炎症に帰着するという仮説を支持する。タンパク尿症が腎毒性損傷をもたらす機構は、知られていない。しかし、補体が重要な役割を演ずるという証拠があり、しかもMACは、タンパク尿症による尿細管間質性損傷の主要な媒体である。尿細管間質性損傷の補体およびタンパク尿症の役割は、最近調べられている51、52。既になされたK9/9mAb49より上にわかるの特徴付けが示唆することは、タンパク尿症によって誘導されるラットモデル尿細管間質性損傷において、mAbが標的化補体インヒビターの治療的使用に対する調査に対して適当に標的することである。特異的にMAC形成をブロックすることができるインヒビターの有効性は、臨床的に関連した状態のもとで、尿細管間質性損傷でMACの役割の評価を可能にする。ラットCrryまたはラットCD59に連結した単鎖のK9/9抗体をコードするプラスミド構築物を調製した図27に示す。可溶性ラットCrrysCrryと単鎖K9/9標的化ビヒクルのみとを発現する構築物も調製した。全ての組換えタンパク質は、15リットルのNewBrunswikファーメターでのピチア発酵により、15mg/リットル以上で培地に発現された。組換えタンパク質を、上記したようにインビトロでの標的化および補体阻害活性についてラット上皮細胞系統を標的細胞として、特徴付けした。単鎖のK9/9、K9/9-Crry、およびK9/9-CD59は、特にインビトロでラット上皮細胞に結合した。sCrryおよびK9/9-Cnyは補体付着および溶解を阻害し、さらにK9/9-CD59は補体媒介性溶解を阻害した。標的化補体インヒビターsCrryおよびK9/9両方の単鎖抗体を、ラットピューロマイシンアミノヌクレオシドPANネフローゼモデル53、sCrryおよびK9/9に関する教示のため本明細書に援用する非標的化CD59がかなり劣った補体阻害活性54のみを持つことから、sCD59は評価されなかったで特徴づけした。最初に、K9/9融合タンパク質の腎臓標的化を確認するために、インビボの結合特異性を、上記したように、ヨウ素化タンパク質の生体内分布によって決定した54、41。単一鎖K9/9およびK9/9融合タンパク質しかし、Crryでないは、特異的にラット腎臓を標的とし、投与後48時間検出可能であった図28。投与後24時間での生体内分布は類似しており、24時間で血中に残る放射標識がみとめられなかった。治療上の研究において、4匹のラットからなる群に0日目にPAN150mg/kg投与し、PBSまたは補体インヒビター40mg/kgを4、7、および10日目に投与した。尿代謝ケージおよび血液を回収し、動物を11日目に犠牲にした。PAN処理によって、クレアチンクリアランス図29、左から2番目の棒によって測定されたように、腎臓機能を著しく損ねた。しかし、sCrry治療を受けているラットの腎臓機能に顕著な改善はない。しかし、クレアチンクリアランスは標的化されたCrryまたはCD59の治療を受けているPAN処置されたラットで、かなり改良されたp<0.01。対照非タンパク尿ラットと標的化インヒビターのいずれかを投与されたPAN処理ラットとのあいだのクリアチンクリアランスに関して著しい差は、みとめられなかった図29。期待どおりに、補体インヒビターで処理を受けたかどうかにかかわりなく、PAN誘導タンパク尿は全てのマウスで高レベルであった表1。PAN処理を受けたラットおよび治療を受けていないラットから調製した腎臓切片は、刷子縁図30b参照、また添付物においての損失によって評価されるように、それは尿細管内腔の膨張ならびに尿細管変性および上皮細胞変性を示した。最小限の改善は、sCrry療法図30dで理解できた。対照的に、尿細管膨張と変性は、標的化されたCrryおよびCD59図30cはK9/9-Crryを示す、しかし、組織学的にはK9/9-CD59と見分けがつかなかったの投与を受けたPAN治療をうけているラットで、かなり阻害された。これらのデータは、このモデルでは補体阻害の効果を示し、標的対非標的補体阻害の著しい利点を示し、またタンパク尿によって誘発された尿細管間障害でのMAC媒介障害に対しての重要な役割を示す。sCD59は有効なインヒビターでなく、本研究は適切に標的化されたCD59がインビボでMACの特異的阻害を可能にすることを証明する。別の実験では、ヨウ素標識組換えタンパク質の循環半減期を、記載されているようにして測定した54、41、教示されている技術に関して本明細書では援用。タンパク質の半減期t1/2は、以下の通りである。すなわち、sCrry;19分、K9/9-Crry;23分、K9/9-CD59、29分、単一鎖K9/9;21分であった。全身性補体阻害に対する組換えタンパク質の効果を決定するために、ラットに対して40mg/kgでタンパク質を注射し、1、3、5、および7xt1/2によって決められた時間で血液の回収をおこなう。血清での補体阻害活性は、溶血性活性感作ヒツジ赤血球で測定した。期待されるように、K9/9-CD59は、血清非標識アッセイシステム図31で、最小の阻害活性を持った。sCrryおよびK9/9-Crryの注射後約3時間7xtl/2まで、血清中に残っている最小の補体阻害活性があった。標的および非標的インヒビター生体内分布データとともにの短いt1/2と、sCrryが保護的ではないという事実とが、腎臓結合補体インヒビターが補体を局所的および長時間にわたって、補体を阻害するという点で有効であることを示す。これらのデータはインビボでの標的化補体インヒビターの使用を確立して、疾患のモデルで、非標的化された全身補体阻害に対する標的化全身補体阻害の重要な利点を示す。異なる標的化ビヒクルが本研究抗体フラグメントで使われるにもかかわらず、同じ原理は他の標的化ビヒクル例えばCR2に対して適用される。4.実施例4本明細書中に教示に従って作られる本発明の構築物の例は、本明細書中に開示される。使用する用語は、以下のような意味を持つ。すなわち、SCR=ショートコンセンサスリピート、LP=リーダーペプチドである。構築物は、全てCR2-リンカー-補体調節因子または補体調節因子-リンカー-CR2の基本式を持つ。括弧内の表記は、組成物に関する特定のセクションで具体的に説明される。例えば、完全とは成熟タンパク質全体が構築物として利用されることで、一方SCR2-4はSCR1が構築物の一部ではないことを示している。リンカーがキメラリンカー、天然のリンカーペプチド、またはアミノ酸連結配列例えば、Gly4Ser3である。このリストが限定されるものではなく、本出願で開示された構築物のいくつかの例を提供するだけであると、理解される。CR2完全-Gly4Ser3-DAFCR2完全-Gly4Ser3-ヒトCD59CR2完全-Gly4Ser3-MCPCR2完全-Gly4Ser3-CRICR2完全-Gly4Ser3-CrryCR2完全-Gly4Ser3-マウスCD59CR2完全-Gly4Ser3-ヒトIgGIFcCR2完全-Gly4Ser3-ヒトIgMFcCR2完全-Gly4Ser3-マウスIgG3FcCR2完全-Gly4Ser3-マウスIgMFcCR2完全-Gly4Ser3-CVFCR2完全-Gly3Ser4-DAFCR2完全-Gly3Ser4-ヒトCD59CR2完全-Gly3Ser4-MCPCR2完全-Gly3Ser4-CR1CR2完全-Gly3Ser4-CrryCR2完全-Gly3Ser4-マウスCD59CR2完全-Gly3Ser4―ヒトIgGIFcCR2完全-Gly3Ser4-ヒトIgMFcCR2完全-Gly3Ser4-マウスIgG3FcCR2完全-Gly3Ser4-マウスIgMFcCR2完全-Gly3Ser4-CVFCR2完全-Gly4Ser3-DAFSCR2-4CR2完全-Gly3Ser4-DAFSCR2-4CR2完全-Gly4Ser3-CRILP-SCRI-4-SCR8-11-SCR15-18CR2完全-Gly4Ser3-Crry5N末端SCRCR2完全-VSVFPLE-DAFCR2完全-VSVFPLE-ヒトCD59CR2完全-VSVFPLE-MCPCR2完全-VSVFPLE-CR1CR2完全-VSVFPLE-CrryCR2完全-VSVFPLE-マウスCD59CR2完全-VSVFPLE-ヒトIgGlFcCR2完全-VSVFPLE-ヒトIgMFcCR2完全-VSVFPLE-マウスIgG3FcCR2完全-VSVFPLE-マウスIgMFcCR2完全-VSVFPLE-CVFCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-DAFCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒト-CD59CR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-MCPCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステルCRICR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CrryCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウス-CD59CR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgGlFcCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgMFcCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ネズミIgG3FcCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスIgMPCCR2完全-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CVFCR2完全-ビスマレイミドヘキサン-DAFCR2完全-ビスマレイミドヘキサン-ヒトCD59CR2完全-ビスマレイミドヘキサン-MCPCR2完全-ビスマレイミドヘキサン-CR1CR2完全-ビスマレイミドヘキサン-CrryCR2完全-ビスマレイミドヘキサン-マウスCD59CR2完全-ビスマレイミドヘキサン-ヒトIgGlFcCR2完全-ビスマレイミドヘキサンヒト1gMFCCR2完全-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgG3FcCR2完全-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgMFcCR2完全-ビスマレイミドヘキサン-CVFCR2SCR1-2-G1y4Ser3-DAFCR2SCR1-2-G1y4Ser3-ヒトCD59CR2SCR1-2-G1y4Ser3-MCPCR2SCR1-2-G1y4Ser3-CRICR2SCR1-2-G1y4Ser3-CrryCR2SCR1-2-G1y4Ser3-マウスCD59CR2SCR1-2-G1y4Ser3-ヒトIgGlFcCR2SCR1-2-G1y4Ser3-ヒトIgMFcCR2SCR1-2-G1y4Ser3-マウスIgG3FcCR2SCR1-2-G1y4Ser3-マウスIgMFcCR2SCR1-2-G1y4Ser3-CVFCR2SCR1-2-G1y3Ser4-DAFCR2SCR1-2-Gly3Ser4-ヒトCD59CR2SCR1-2-Gly3Ser4-MCPCR2SCR1-2-Gly3Ser4-CR1CR2SCR1-2-Gly3Ser4-CrryCR2SCR1-2-Gly3Ser4-マウスCD59CR2SCR1-2-Gly3Ser4-ヒトIgGlFcCR2SCR1-2-Gly3Ser4-ヒトIgMFcCR2SCR1-2-Gly3Ser4-マウスIgG3FcCR2SCR1-2-Gly3Ser4-マウスIgMFcCR2SCR1-2-Gly3Ser4-CVFCR2SCR1-2-G1y4Ser3-DAFSCR2-4CR2SCR1-2-Gly3Ser4DAFSCR2-4CR2SCR1-2-Gly4Ser3-CRILP-SCR1-4-SCR8-11-SCR15-18CR2SCR1-2-Gly4Ser3-Crry5N末端SCRCR2SCR1-2-VSVFPLE-DAFCR2SCR1-2-VSVFPLE-ヒトCD59CR2SCR1-2-VSVFPLE-MCPCR2SCR1-2-VSVFPLE-CR1CR2SCR1-2-VSVFPLE-CrryCR2SCR1-2-VSVFPLE-マウスCD59CR2SCR1-2-VSVFPLE-ヒトIgG1FcCR2SCR1-2-VSVFPLE-ヒトIgMFcCR2SCR1-2-VSVFPLE-マウスIgG3FcCR2SCR1-2-VSVFPLE-マウスIgMFcCR2SCR1-2-VSVFPLE-CVFCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-DAFCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトCD59CR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-MCPCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステルCR1CR2SCRI-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CrryCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスCD59CR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgG1FcCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgMFcCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスIgG3FcCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスIgMFcCR2SCR1-2-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステルCVFCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-DAFCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-ヒトCD59CR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-MCPCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-CR1CR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-CrryCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-マウスCD59CR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-ヒトIgGIFcCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-ヒトIgMFcCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgG3FcCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgMFcCR2SCR1-2-ビスマレイミドヘキサン-CVFCR2SCR1-3-G1y4Ser3-DAFCR2SCR1-3-G1y4Ser3ヒトCD59CR2SCR1-3-G1y4Ser3-MCPCR2SCR1-3-G1y4Ser3-CR1CR2SCR1-3-G1y4Ser3-CrryCR2SCR1-3-G1y4Ser3-マウスCD59CR2SCR1-3-G1y4Ser3-ヒトIgG1FcCR2SCR1-3-G1y4Ser3-ヒトIgMFcCR2SCR1-3-G1y4Ser3-マウスIgG3FcCR2SCR1-3-G1y4Ser3-マウスIgMFcCR2SCR1-3-G1y4Ser3-CVFCR2SCR1-3-G1y3Ser4-DAFCR2SCR1-3-G1y3Ser4-ヒトCD59CR2SCR1-3-G1y3Ser4-MCPCR2SCR1-3-G1y3Ser4-CR1CR2SCR1-3-G1y3Ser4-CrryCR2SCR1-3-G1y3Ser4-マウスCD59CR2SCR1-3-G1y3Ser4-ヒトIgGlFcCR2SCR1-3-G1y3Ser4-ヒトIgMFcCR2SCR1-3-G1y3Ser4-マウスIgG3FcCR2SCR1-3-G1y3Ser4-マウスIgMFcCR2SCR1-3-G1y3Ser4-CVFCR2SCR1-3-Gly4Ser3-DAFSCR2-4CR2SCR1-3-G1y3Ser4-DAFSCR2-4CR2SCR1-3-Gly4Ser3-CR1LP-SCR1-4-SCR8-11-SCR15-18CR2SCR1-3-Gly4Ser3-Crry5N末端SCRCR2SCR1-3-VSVFPLE-DAFCR2SCR1-3-VSVFPLE-ヒトCD59CR2SCR1-3-VSVFPLE-MCPCR2SCR1-3-VSVFPLE-CR1CR2SCR1-3-VSVFPLE-CrryCR2SCR1-3-VSVFPLE-マウスCD59CR2SCR1-3-VSVFPLE-ヒトIgG1FcCR2SCR1-3-VSVFPLE-ヒトIgMFcCR2SCR1-3-VSVFPLE-マウスIgG3FcCR2SCR1-3-VSVFPLE-マウスIgMFcCR2SCR1-3-VSVFPLE-CVFCR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-DAFCR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトCD59CR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-MCPCR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステルCR1CR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CrryCR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスCD59CR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgG1FcCR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgMFcCR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスIgG3FcCR2SCR1-3-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスIgMFcCR2SCR1-3-nr-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CVFCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-DAFCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-ヒトCD59CR2SCRI-3-ビスマレイミドヘキサン-MCPCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサンCR1CR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-CrryCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-マウスCD59CR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサンヒトIgG1FcCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-ヒトIgMFcCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgG3FcCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgMFcCR2SCR1-3-ビスマレイミドヘキサン-CVFCR2SCR1-4-Gly4Ser3-DAFCR2SCR1-4-Gly4Ser3-ヒトCD59CR2SCRI-4-Gly4Ser3-MCPCR2SCR1-4-Gly4Ser3-CR1CR2SCR1-4-Gly4Ser3-CrryCR2SCR1-4-Gly4Ser3-マウスCD59CR2SCR1-4-Gly4Ser3-ヒトIgGIFcCR2SCR1-4-Gly4Ser3-ヒトIgMFcCR2SCR1-4-Gly4Ser3-マウスIgG3FcCR2SCR1-4-Gly4Ser3-マウスIgMFcCR2SCR1-4-Gly4Ser3-CVFCR2SCR1-4-Gly3Ser4-DAFCR2SCR1-4-Gly3Ser4-ヒトCD59CR2SCR1-4-Gly3Ser4-MCPCR2SCR1-4-Gly3Ser4-CR1CR2SCR1-4-Gly3Ser4-CrryCR2SCR1-4-Gly3Ser4-マウスCD59CR2SCR1-4-Gly3Ser4-ヒトIgG1FcCR2SCR1-4-Gly3Ser4-ヒト1gMFcCR2SCR1-4-Gly3Ser4-マウスIgG3FcCR2SCR1-4-Gly3Ser4-マウスIgMFcCR2SCR1-4-Gly3Ser4-CVFCR2SCR1-4-Gly4Ser3-DAFSCR2-4CR2SCR1-4-Gly3Ser4DAFSCR2-4CR2SCR1-4-Gly4Ser3-CR1LP-SCRI-4-SCR8-11-SCR15-18CR2SCR1-4-Gly4Ser3-Crry5N末端SCRCR2SCR1-4-VSVFPLE-DAFCR2SCR1-4-VSVFPLE-ヒトCD59CR2SCR1-4-VSVFPLE-MCPCR2SCR1-4-VSVFPLE-CR1CR2SCR1-4-VSVFPLE-CrryCR2SCR1-4-VSVFPLE-マウスCD59CR2SCR1-4-VSVFPLE-ヒトIgG1FcCR2SCR1-4-VSVFPLEヒトIgMFcCR2SCR1-4-VSVFPLE-マウスIgG3FcCR2SCR1-4-VSVFPLE-マウスIgMFcCR2SCR1-4-VSVFPLE-CVFCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-DAFCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトCD59CR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-MCPCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CRICR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CrryCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスCD59CR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgG1FcCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-ヒトIgMFcCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスIgG3FcCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-マウスIgMFcCR2SCR1-4-m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドキシスクシニミドエステル-CVFCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-DAFCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-ヒトCD59CR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-MCPCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-CR1CR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-CrryCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-マウスCD59CR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-ヒトIgGlFcCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-ヒトIgMFcCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgG3FcCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-マウスIgMFcCR2SCR1-4-ビスマレイミドヘキサン-CVFH.配列1.DAFヌクレオチド配列は、配列番号1に対応する。アミノ酸配列は、配列番号2に対応する。2.CD59ヌクレオチド配列は、配列番号3に対応する。アミノ酸配列は、配列番号4に対応する。3.CR2-DAFヌクレオチド配列は、配列番号5に対応する。アミノ酸配列は、配列番号6に対応する。4.CR2-ヒトCD59ヌクレオチド配列は、配列番号7に対応する。アミノ酸配列は、配列番号8に対応する。5.DAF-CR2ヌクレオチド配列は、配列番号9に対応する。アミノ酸配列は、配列番号10に対応する。6.ヒトCD59-CR2ヌクレオチド配列は、配列番号11に対応する。アミノ酸配列は、配列番号12に対応する。7.CR1ヌクレオチド配列は、配列番号13に対応する。アミノ酸配列は、配列番号14に対応する。8.MCPヌクレオチド配列は、配列番号15に対応する。アミノ酸配列は、配列番号16に対応する。9.マウスCrryアミノ酸配列は、配列番号17に対応する。10.ヒトIgG1Fcアミノ酸配列は、配列番号18に対応する。11.ヒトIgMFcアミノ酸配列は、配列番号19に対応する。12.CR2-ヒトIgG1Fcヌクレオチド配列は、配列番号20に対応する。アミノ酸配列は、配列番号21に対応する。13.マウスIgG3Fcアミノ酸配列は、配列番号22に対応する。14.コブラ毒因子ヌクレオチド配列は、配列番号23に対応する。アミノ酸配列は、配列番号24に対応する。15.ヒトCR2ヌクレオチド配列は、配列番号25に対応する。アミノ酸配列は、配列番号26に対応する。16.マウスCR2ヌクレオチド配列は、配列番号27に対応するアミノ酸配列は、配列番号28に対応する。17.ヒトCR2アミノ酸配列は、配列番号29に対応する。配列表"