"式:を有する化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、DYEは、発光性色素を表し、RMは、化学的に反応性の高い部分であり、かつ、WSBは、発光性色素の同じ環の2つの巨大な置換基を架橋するため、または発光性色素の2つの異なる環を架橋するためのいずれかに使用される水溶性の橋であり、但し、WSBは少なくとも1つのスルホネートまたはホスホネート基を含有することを特徴とする発光性色素。請求項1に記載の化合物であって、DYEは、シアニン、フルオレセイン、ローダミン、オキサジン、オキサゾール、ボディピー、フタロシアニンまたは金属錯体誘導体であることを特徴とする化合物。前記請求項のいずれかに記載の化合物であって、RMは、アクリルアミド、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、アシルアジド、アシルニトリル、アルデヒド、ハロゲン化アルキル、無水物、ハロゲン化アリール、アジド、アジリジン、ボロネート、ジアゾアルカン、ハロアセトアミド、ハロトリアジン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、反応性白金錯体、ハロゲン化スルホニルまたはソラーレン誘導体であることを特徴とする化合物。前記請求項のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも2つの基を含有することを特徴とする化合物。前記請求項のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、下記の構造またはそれらの類似体:の1つを含有することを特徴とする化合物。式:を有する請求項1に記載の化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R5およびR6は、独立に、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10からR19は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R20およびR21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R10およびR21、R10およびR11、R11およびR12、R12およびR13、R5およびR13、R6およびR15、R15およびR16、R16およびRI7、R17およびR18、またはR18およびR20の1つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;RMは、化学的に反応性の高い部分であり;かつ、nは0から3であることを特徴とする発光性色素。請求項6に記載の化合物であって、RMは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする化合物。請求項6および7のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも2つの基を含有することを特徴とする化合物。請求項6~8のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、RMを含有することを特徴とする化合物。請求項6~9のいずれかに記載の化合物であって、R12およびR16は、独立に、スルホネートまたはホスホネート基であることを特徴とする化合物。式:を有する請求項1に記載の化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、XおよびYは、独立に、O、S、SeまたはCR20R21であり;nは0から3であり;R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10からR19は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R20およびR21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;YおよびR10、R10およびR11、R11およびR12、R12およびR13、XおよびR18、R15およびR16、R16およびR17、またはR17およびR18の1つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;R20およびR21は、独立に、アルキル、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R20およびR21は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキルまたはヘテロ環を形成し;かつ、RMは、化学的に反応性の高い部分であることを特徴とする発光性色素。請求項11に記載の化合物であって、RMは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする化合物。請求項11~12のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも2つの基を含有することを特徴とする化合物。請求項11~13のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、RMを含有することを特徴とする化合物。請求項11~14のいずれかに記載の化合物であって、R11およびR17は、独立に、スルホネートまたはホスホネート基であることを特徴とする化合物。式:を有する請求項1に記載の化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R4からR6は、独立に、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10からR19は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R20は、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R4およびR10、R5およびR10、R10およびR11、R11およびR12、R12およびR13、R6およびR15、R15およびR16、R16およびR17、R17およびR18、またはR18およびR20の1つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;RMは、化学的に反応性の高い部分であり;nは0から3であることを特徴とする発光性色素。請求項16に記載の化合物であって、RMは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする化合物。請求項16~17のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも2つの基を含有することを特徴とする化合物。請求項16~18のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、RMを含有することを特徴とする化合物。請求項16~19のいずれかに記載の化合物であって、R11およびR16は、独立に、スルホネートまたはホスホネート基であることを特徴とする化合物。式:を有する請求項1に記載の化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、R1は、水素、アルキル、アルコキシ、カルボキシまたはスルホであり;R2からR9は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10、R11、R12およびR13は、独立に、アルキル、ハロゲン化アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R8およびR10、またはR7およびR13の1つまたは複数は、組み合わさって、5から8員環を形成し;R6およびR7、またはR8およびR9の1つまたは複数は、組み合わさって、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;かつ、RMは、化学的に反応性の高い部分であることを特徴とする発光性色素。請求項21に記載の化合物であって、RMは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする化合物。請求項21~22のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも2つの基を含有することを特徴とする化合物。請求項21~23のいずれかに記載の化合物であって、R1、R3およびR4は、独立に、カルボキシまたはスルホネート基であることを特徴とする化合物。式:を有する請求項1に記載の化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、Lは、0~30原子の長さのリンカーであり;かつ、RMは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする発光性色素。式:を有する請求項1に記載の化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、R1からR6は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;かつ、RMは、化学的に反応性の高い部分であることを特徴とする発光性色素。請求項26に記載の化合物であって、RMは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする化合物。請求項26~27のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも2つの基を含有することを特徴とする化合物。請求項26~28のいずれかに記載の化合物であって、WSBは、RMを含有することを特徴とする化合物。式:を有する請求項1に記載の化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、Lは、0~30原子の長さのリンカーであり;かつ、RMは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする発光性色素。式:を有する複合体であって、式中、DYEは、発光性色素を表し;WSBは、発光性色素の同じ環の2つの巨大な置換基を架橋するため、または発光性色素の2つの異なる環を架橋するために使用される水溶性の橋であり、かつ、少なくとも1つのスルホネートまたはホスホネート基を含有し;BIOPOLYMERは、1000ダルトンより大きい分子量を有する生物学的物質であり;nは、1~30の整数であり、但し、DYEは、直接的に、またはリンカーLを介して間接的にBIOPOLYMERと共有結合しており;かつ、Lは、0~30原子の長さのリンカーであることを特徴とする複合体。請求項31に記載の複合体であって、DYEは、シアニン、フルオレセイン、ローダミン、オキサジン、オキサゾール、ボディピー、チオフェン、フタロシアニンまたは金属錯体誘導体であることを特徴とする複合体。請求項31~32のいずれかに記載の複合体であって、前記複合体は、式2、3、4、5、6、7または8を有する化学的に反応性の高い発光性色素と、BIOPOLYMERとの反応から誘導されることを特徴とする複合体。請求項31~33のいずれかに記載の複合体であって、BIOPOLYMERは、ペプチド、タンパク質、多糖、オリゴヌクレオチド、核酸、脂質、リン脂質、リポタンパク質、リポ多糖、リポソーム、脂溶性高分子、高分子微粒子、動物細胞、植物細胞、細菌、酵母またはウイルスであることを特徴とする複合体。請求項31~34のいずれかに記載の複合体であって、BIOPOLYMERは抗体であることを特徴とする複合体。試料中における特異的な結合対の相補的メンバーを検出する方法であって、a前記試料に請求項31に記載の複合体を添加し、前記BIOPOLYMERは、前記特異的な結合対の一方のメンバーを含むステップと、b前記複合体が前記試料中において前記相補的メンバーとの錯体を形成するための十分な時間を与え、前記錯体は検出可能な蛍光応答を呈するステップと、c蛍光機器で前記錯体を検出して前記相補的メンバーを位置づけるステップとを含むことを特徴とする方法。前記特異的な結合対の第1のメンバーは、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸高分子または多糖であることを特徴とする、請求項36に記載の方法。前記特異的な結合対の第1のメンバーは、抗体、抗体フラグメント、アビジン、ストレプトアビジン、レクチンまたは酵素を含むことを特徴とする、請求項36に記載の方法。前記相補的メンバーは、細胞、細菌、ウイルスもしくは酵母細胞中に存在する、または高分子、高分子膜もしくは高分子粒子に固定化されることを特徴とする、請求項36に記載の方法。前記蛍光応答を、検出可能に異なる光学特性を有する第2のフルオロフォアの蛍光応答と区別するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項36に記載の方法。前記蛍光応答は、フローサイトメーターを使用して検出され、前記蛍光応答に基づいて前記錯体を分類するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項36に記載の方法。細胞機能をモニターする方法であって、a請求項31に記載の複合体を、細胞を含有する試料に添加し、前記BIOPOLYMERは、特異的な結合対の一方のメンバーを含み、前記細胞は、前記特異的な結合対の他方のメンバーを含有するステップと、b前記試料を、前記複合体が前記特異的な結合対の前記他方のメンバーとの錯体を形成するための十分な時間にわたってインキュベートするステップと、c前記試料を、前記複合体からの蛍光応答を発生させる波長で照射するステップと、d前記複合体からの蛍光応答を検出するステップと、e前記蛍光応答を細胞機能と相関させるステップとを含むことを特徴とする方法。a前記細胞を刺激するステップと、b前記複合体からの前記蛍光応答の強度における変化をモニターするステップと、c前記蛍光強度における前記変化を細胞機能と相関させるステップとをさらに含むことを特徴とする、請求項42に記載の方法。請求項31に記載の複合体と、第2のアッセイ構成要素とを含むことを特徴とする、細胞アッセイを実施するためのキット。前記第2の構成要素は、生物学的緩衝液であることを特徴とする、請求項44に記載のキット。本発明人らは、ベルト緩め効果を解消して標識色素の蛍光量子収率を増大させるだけでなく、それらの水溶性も増大させ、故に疎水性の架橋結合した橋hydrophobiccrosslinkingbridgeを含有する現存する発光性色素でのタンパク質沈殿という欠点を解消する、新たな水溶性架橋剤を発見した。本発明人らは、この水溶性の橋の戦略を使用して、他の種類の発光性色素の標識特性およびスペクトル特性も改善し得ることを見出した。キサンテン色素は、標識タンパク質および他の生物学的分子に主に使用される別のクラスの蛍光性プローブである例えば、Eliuらの特許文献182010、Lamらの特許文献192009、Reddingtonらの特許文献202008、Klaubertらの特許文献212001、Maoらの特許文献222000参照。本発明人らは、キサンテン色素のベルト緩め効果を、それらの水溶性も有意に増大させながら、2つの置換基頭部と新たな水溶性架橋剤との架橋によって解消できることを発見した。同じ原理を使用して、オキサゾール色素-タンパク質複合体および発光性の金属錯体-タンパク質複合体の蛍光量子収率および水溶性を同時に増大させることもできる。本発明人らは、新たなクラスの水溶性の架橋結合した橋が、背景技術の節において論じられている問題を思いがけなく緩和し、構造的に同様に架橋されていない色素または疎水性の橋で架橋されている色素で標識された複合体よりも、タンパク質、核酸および他の生体高分子上で実質的に発光性が高い、色素-高分子複合体をもたらすことを見出した図1、2および3を参照。本発明の色素-生体分子複合体の増強された発光強度および保持された結合親和性は、より卓越したアッセイ感度をもたらす。さらに、本発明の色素は、典型的には約400nmから1000nmの間の吸光度最大値を呈するため、これらの色素を、紫色レーザー405nm、アルゴンレーザー488nm、水銀アーク灯546nm、周波数が2倍のNd-Yagレーザー532nm、Krイオンレーザー568nmおよび647nm、He-Neレーザー543nm、594nmおよび633nmまたは長波長のレーザーダイオードとりわけ635nm以上の主要な輝線に一致するように選択することができる。本発明のいくつかの色素は、極めて長波長の励起少なくとも640nmであるが、約730nmより大きいものもあるおよび発光バンド少なくとも665nmであり、約750nmより大きいものもあるを呈するため、それらの色素は、赤外波長に透明な試料に特に有用である。本発明は、水溶性の橋WSBで架橋されている反応性の高い発光性色素およびその複合体を含む。これらの色素および色素複合体は、試料中における分析物または配位子の相互作用または存在を位置づけるまたは検出するために使用される。そのような色素または色素複合体を組み込んだキットは、そのような方法におけるそれらの使用を容易にする。別の態様において、本発明は、基質と複合されている、水溶性の橋WSBで架橋された本発明の発光性色素の1つまたは複数を含む色素-複合体を提供する。好ましい実施形態において、色素-複合体は、試料中における分析物を検出し、同定し、位置づけし、または定量化するための蛍光性検出試薬として使用される。本発明の好ましい実施形態において、色素-複合体基質は生体高分子であり、この生体高分子を、水溶性の橋WSBで架橋された本発明の発光性色素の1つまたは複数と複合して、蛍光性生体高分子を取得する。本発明の蛍光性生体高分子色素-複合体は、分析物特異的な検出試薬を包含する検出試薬としての、またはその一部としての有用性を有する。有用な生体高分子は、例えば、アミノ酸高分子、核酸高分子、多糖、炭水化物および脂質を包含する。好ましい実施形態において、色素-生体高分子複合体の生体高分子構成要素は、本明細書において広く定義されている通りのアミノ酸高分子である。好ましい実施形態において、生体高分子はモノクローナル抗体である。別の態様において、本発明は、本発明の反応性色素または色素-複合体を含有するキットを提供する。本発明のキットは、他の試薬または緩衝液等、意図されている用途を行うために有用なさらなる構成要素を含有し得る。本発明の色素は、典型的には、式1を有し、式中、DYEは、発光性色素を表し;RMは、後述する化学的に反応性の高いchemicallyreactive部分であり;WSBは、発光性色素の同じ環の2つの巨大な置換基または発光性色素の2つの異なる環のいずれかを架橋するために使用される、水溶性の橋である。本発明の色素は、1RM基と;2発光性色素の同じ環の2つの巨大な置換基または発光性色素の2つの異なる環のいずれかを分子内架橋する水溶性かつ複合されていない橋とを含有する発光性色素を含む。本発明の一実施形態において、第1の環系または第2の環系は、RM基を含有する側鎖によって置換されている。別の実施形態において、WSBはRM基を含有する。本発明の一態様において、本発明の発光性色素は、1回以上スルホン化される。加えて、本発明の色素は、後述する通り、1つまたは複数の化学的に反応性の高い部分RMまたは複合した物質によって置換されている。好ましい実施形態において、本発明の色素は、1つのみのRMによって置換されている。好ましいWSBは、少なくとも1つの負に帯電した基例えば、カルボキシ、スルホネート、ホスフェートおよびホホネートphophonateを組み込んで、水溶性を増大させる。スルホネートが意味するのは、スルホン酸またはスルホン酸の塩スルホネートである。同様に、カルボキシが意味するのは、カルボン酸またはカルボン酸の塩である。ホスフェートは、本明細書において使用される場合、リン酸のエステルであり、ホスフェートの塩を包含する。ホスホネートは、本明細書において使用される場合、ホスホン酸を意味し、ホスホネートの塩を包含する。加えて、スルホネートおよびホスホネートは、それぞれスルホニルおよびホスホニルと交換可能である。本明細書において使用される場合、別段の指定がない限り、アルキル、アルコキシ、アリールアルキル、アリルアミノalylamino、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウムまたはペルフルオロアルキル等、置換基のアルキル部は、任意選択的に飽和、不飽和、直鎖状または分枝鎖状であり、すべてのアルキル、アルコキシ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ置換基は、カルボキシ、スルホネート、アミノまたはヒドロキシによってそれ自体が任意選択的にさらに置換される。別の好ましいWSBは、スルホアルキル、スルホアリール、スルホヘテロアリール、ホスホニルアルキル、ホスホニルアリールまたはホスホニルヘテロアリール基から誘導された少なくとも2つの水溶性部分を含有するペプチドである。別の好ましいWSBは、チオフェン部分を含有する。別の好ましいWSBは、RMを含有する。好ましいDYEは、フルオレセイン、ローダミン、オキサジン、シアニン、オキサゾール、ボディピー、フタロシアニン、チオフェン、ルテルニウムruthernium錯体またはランタニド錯体である。別の好ましい実施形態は、式2の化合物であり、式中、DYEは、発光性色素を表す。RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。別の好ましい実施形態は、式3の化合物であり、式中、DYEは、発光性色素を表す。RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。別の好ましい実施形態は、式4の化合物であり、式中、DYEは、発光性色素を表す。RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。別の好ましい実施形態は、式5の化合物であり、式中、DYEは、発光性色素を表す。RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。別の好ましい実施形態は、式6の化合物であり、式中、DYEは、発光性色素を表す。RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。別の好ましい実施形態は、式7の化合物であり、式中、DYEは、発光性色素を表す。RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。別の好ましい実施形態は、式8の化合物であり、式中、DYEは、発光性色素を表す。RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。別の好ましい実施形態は、式9の化合物であり、式中、R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R5およびR6は、独立に、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10からR19は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R20およびR21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R10およびR21、R10およびR11、R11およびR12、R12およびR13、R5およびR13、R6およびR15、R15およびR16、R16およびR17、R17およびR18、またはR18およびR20の1つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;RMは、後述する化学的に反応性の高い部分であり;nは0から3である。2つの環系の間の複合したポリメチン橋の長さは、色素の吸収特性および発光特性に大きな影響を及ぼす。R1、R2、R3のそれぞれは、存在する場合、独立に、水素、フルオロ、クロロ、1~6個の炭素を有するアルキル、1~6個の炭素を有するアルコキシ、アリール、アリールオキシ、N-ヘテロ芳香族部分またはイミニウムイオンである。あるいは、2つの置換基R1/R2、R2/R3は、組み合わさった場合、非置換であるか、または1~6個の炭素、ハロゲンもしくはカルボニル酸素を有する飽和もしくは不飽和アルキルによって任意選択的に1回以上置換された、4、5または6員の飽和または不飽和の炭化水素環を形成する。典型的には、R1、R2およびR3のそれぞれは、存在する場合、水素である。R1、R2およびR3の1つが非水素である場合、それは、典型的には橋かけおよび複合した二重結合の中心の炭素上の置換基である。同様に、橋かけおよび複合した二重結合が4、5または6員環を組み込んでいる場合、それは、典型的には複合した橋部分の中心で生じる。別の好ましい実施形態は、式10の化合物であり、式中、R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R5およびR6は、独立に、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10からR19は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R20およびR21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R10およびR21、R10およびR11、R11およびR12、R12およびR13、R5およびR13、R6およびR15、R15およびR16、R16およびR17、R17およびR18、またはR18およびR20の1つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;RMは、後述する化学的に反応性の高い部分であり;nは0から3である。別の好ましい実施形態は、式11の化合物であり、式中、R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R5およびR6は、独立に、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10からR19は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R20およびR21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R10およびR21、R10およびR11、R11およびR12、R12およびR13、R5およびR13、R6およびR15、R15およびR16、R16およびR17、R17およびR18、またはR18およびR20の1つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;RMは、後述する化学的に反応性の高い部分であり;nは0から3である。別の好ましい実施形態は、式12の化合物であり、式中、XおよびYは、独立に、O、S、SeまたはCR20R21であり;R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R5およびR6は、独立に、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10からR19は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R20およびR21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R10およびR20、R10およびR21、R10およびR11、R11およびR12、R12およびR13、R15およびR16、R16およびR17、R17およびR18、またはR18およびR20、R18およびR21の1つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し;RMは、後述する化学的に反応性の高い部分であり;nは0から3である。本発明の別の好ましい実施形態は、式13の化合物であり、式中、XおよびYは、独立に、O、S、SeまたはCR30R31であり;nは0から3であり;R1からR3は、独立に、水素、ハロゲン、1~20個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R8からR27は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R30およびR31は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式14の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式15の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式16の化合物であり、式中、R1は、水素、アルキル、アルコキシ、カルボキシまたはスルホであり;R2からR9は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10、R11、R12およびR13は、独立に、アルキル、ハロゲン化アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R6およびR7、R8およびR9、R8およびR10、またはR7およびR13の1つまたは複数は、組み合わさって、5から8員環を形成し;RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式17の化合物であり、式中、R1は、水素、アルキル、アルコキシ、カルボキシまたはスルホであり;R2からR9は、独立に、水素、1~20個の炭素を有するアルキル、1~20個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはRMであり;R10、R11、R12およびR13は、独立に、アルキル、ハロゲン化されたアルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはRMであり;R6およびR7、R8およびR9、R8およびR10、またはR7およびR13の1つまたは複数は、組み合わさって、5から8員環を形成し;RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式18の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式19の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式20の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式21の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式22の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の別の好ましい実施形態は、式23の化合物であり、式中、RMは、後述する化学的に反応性の高い部分である。本発明の化合物の多くの実施形態は、全体的な電子電荷を保有する。そのような電子電荷が存在することが示されている場合、明示的に同定されてもされなくてもよい適正な対イオンの存在によって平衡されていることを理解すべきである。いくつかの用途に好ましい生物学的に適合する対イオンは、生物学的用途において毒性ではなく、生体分子に対して実質的に有害な影響を有さない。本発明の化合物が正に帯電している場合、対イオンは、典型的には、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、アルカンスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、テトラアリールホウ化物tetraarylboride、硝酸塩、および芳香族または脂肪族カルボン酸のアニオンから選択されるがこれらに限定されない。本発明の化合物が負に帯電している場合、対イオンは、典型的には、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、アンモニウム、または置換されているアンモニウムもしくはピリジニウムイオンから選択されるがこれらに限定されない。好ましくは、任意の必要な対イオンは生物学的に適合するものであり、使用される際には毒性でなく、かつ生体分子に対して実質的に有害な影響を有さない。対イオンは、イオン交換クロマトグラフィーまたは選択的沈殿等、当技術分野において周知の方法によって容易に変化する。本発明の色素は、1つのまたは別の特定の電子共鳴構造で描かれてきたことを理解すべきである。本発明のあらゆる態様は、主題の色素上の電子電荷が色素自体の全体にわたって非局在化されているため、他の許容される共鳴構造で形式的に描かれる色素に等しく当てはまる。本明細書において使用される場合、RMと表示される反応性部分は、異なる化合物上の官能基と化学的に反応して共有結合を形成することができる化合物上の部分を指す。本発明の一実施形態において、色素は少なくとも1つのRMを含有し、ここで、RMは、共有結合Lによって色素に付着している反応性部分である。ある特定の実施形態において、色素をRMに付着させる共有結合は、スペーサーとしての役割を果たす複数の介在原子を含有する。RMを有する色素は、適切な反応性を持つ官能基を含有する、または含有するように修飾されている多種多様な有機または無機物質を標識して、複合した物質の化学的付着をもたらす。本明細書において使用される場合、反応性部分RMは、異なる化合物上の官能基と化学的に反応して共有結合を形成することができる化合物上の部分を意味する。典型的には、反応性部分は、それぞれ求核試薬または求電子試薬である対応する官能基への暴露によって共有結合を形成することができる、求電子試薬または求核試薬である。あるいは、反応性部分は光活性化可能な基であり、適正な波長の光による照射の後にのみ化学的に反応性が高くなる。典型的には、反応性色素と複合される物質との間の複合反応は、反応性部分RMの1つまたは複数の原子を組み込んで、複合した物質に色素を付着させる新たな結合Lをもたらす。反応性部分および結合の選択された例を表1に示し、ここで、求電子基と求核基との反応は共有結合を生み出す。色素を、複合される物質に付着させるために使用される反応性部分の選択は、典型的には、複合される物質上の官能基および所望される共有結合の種類または長さによって決まる。典型的には有機または無機物質上に存在する官能基の種類は、アミン、アミド、チオール、アルコール、フェノール、アルデヒド、ケトン、ホスホネート、イミダゾール、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、二置換アミン、ハロゲン化物、エポキシド、カルボキシレートエステル、スルホネートエステル、プリン、ピリミジン、カルボン酸、オレフィン結合、またはこれらの基の組合せを包含するがこれらに限定されない。単一種の反応性部位が物質上で利用可能多糖に典型的となってもよく、または、タンパク質に典型的なように、様々な部位が生じてもよい例えば、アミン、チオール、アルコール、フェノール。複合した物質は、同じであっても異なっていてもよい1つを超える色素と、またはビオチン等のハプテンによってさらに修飾されている物質と複合され得る。若干の選択性は反応条件の慎重な制御によって取得できるが、標識化の選択性は、適正な反応性色素の選択によって最もよく取得される。典型的には、RMは、アミン、チオール、アルコール、アルデヒドまたはケトンと反応することになる。好ましくは、RMは、アミンまたはチオール官能基と反応する。一実施形態において、RMは、アクリルアミド、反応性アミンカダベリンまたはエチレンジアミンを含む、カルボン酸の活性化エステル典型的には、カルボン酸のスクシンイミジルエステル、アシルアジド、アシルニトリル、アルデヒド、ハロゲン化アルキル、無水物、アニリン、ハロゲン化アリール、アジド、アジリジン、ボロネート、カルボン酸、ジアゾアルカン、ハロアセトアミド、ハロトリアジン、ヒドラジンヒドラジドを含む、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、ホスホラミダイト、反応性白金錯体、ハロゲン化スルホニルまたはチオール基である。反応性白金錯体が特に意味するのは、特許文献23、特許文献24、特許文献25において記述されているもの等の化学的に反応性の高い白金錯体である。反応性部分が、アジド、ジアジリニル、アジドアリールまたはソラーレン誘導体等の光活性化可能な基である場合、色素は、適正な波長の光による照射の後にのみ化学的に反応性が高くなる。RMがカルボン酸の活性化エステルである場合、反応性色素は、タンパク質、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドまたはハプテンの色素-複合体を調製するために特に有用である。RMがマレイミドまたはハロアセトアミドである場合、反応性色素は、チオール含有物質との複合に特に有用である。RMがヒドラジドである場合、反応性色素は、過ヨウ素酸塩で酸化された炭水化物および糖タンパク質との複合に特に有用であり、加えて、細胞マイクロインジェクションのためのアルデヒド固定可能な極性トレーサーである。好ましくは、RMは、カルボン酸、カルボン酸のスクシンイミジルエステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、イソチオシアネート、マレイミド基、脂肪族アミン、パーフルオロベンズアミド、アジドパーフルオロベンズアミド基またはソラーレンである。より好ましくは、RMは、カルボン酸のスクシンイミジルエステル、マレイミド、ヨードアセトアミドまたは反応性白金錯体である。上記で述べた特質に基づいて、本発明の適正な反応性色素は、所望の色素-複合体の調製のために選択され、その有利な特性により、それらの色素-複合体は多種多様な用途に有用となる。特に有用な色素-複合体は、中でも、基質がペプチド、ヌクレオチド、抗原、ステロイド、ビタミン、薬物、ハプテン、代謝産物、毒素、環境汚染物質、アミノ酸、タンパク質、核酸、核酸高分子、炭水化物、脂質、イオン錯化部分、ガラスまたは非生物学的高分子である複合体を包含する。あるいは、基質は、細胞、細胞系、細胞断片もしくは細胞内粒子例えば、とりわけ、ウイルス粒子、細菌粒子、ウイルス構成要素、生物学的細胞動物細胞、植物細胞、細菌、酵母または原生生物等、または細胞構成要素である。反応性色素は、典型的には、細胞表面、細胞膜、細胞小器官または細胞質中にある官能基を標識する。典型的には、基質は、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、チラミン、多糖、イオン錯化部分、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ハプテン、ソラーレン、薬物、ホルモン、脂質、脂質集合体、高分子、高分子微粒子、生物学的細胞またはウイルスである。より典型的には、基質は、ペプチド、タンパク質、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチドまたは核酸である。本発明の色素をそのような生体高分子と複合させる場合、1分子当たりより多くの色素を組み込んで蛍光シグナルを増大させることが可能である。例えば、総蛍光を喪失することなく、抗体の分子1個当たりそのような色素の少なくとも3個の分子を組み込むことが可能であるのに対し、スペクトル的に同等のCy5の蛍光ここで、n=2は、抗体1個当たりおよそ2個を超えるCy5色素が組み込まれた場合に強く消光される。これらの結果は、他の文献によって報告されているCy5複合体に関連する問題を裏付けるものである例えば、非特許文献5参照。本発明の最適に標識された複合体は、典型的には、同じ抗体濃度のCy5色素または1,1’-架橋されたCy5の複合体よりもはるかに蛍光性である。一実施形態において、基質は、アミノ酸ホスホネート、炭水化物またはC1からC25カルボン酸によって保護または置換されているものを含むであるか、またはペプチドもしくはタンパク質等のアミノ酸の高分子である。ペプチドの好ましい複合体は、少なくとも5個のアミノ酸を含み、より好ましくは5から36個のアミノ酸を含む。好ましいペプチドは、神経ペプチド、サイトカイン、毒素、プロテアーゼ基質およびタンパク質キナーゼ基質を包含するがこれらに限定されない。好ましいタンパク質複合体は、酵素、抗体、レクチン、糖タンパク質、ヒストン、アルブミン、リポタンパク質、アビジン、ストレプトアビジン、タンパク質A、タンパク質G、フィコビリタンパク質および他の蛍光性タンパク質、ホルモン、毒素、ケモカイン、ならびに成長因子を包含する。1つの好ましい態様において、複合したタンパク質は、アロフィコシアニン、フィコシアニン、フィコエリトリン、アロフィコシアニンB、B-フィコエリトリンおよびフィコエリトロシアニン等のフィコビリタンパク質である例えば、Roedererの特許文献261998参照。特に好ましいのは、R-フィコエリトリンの、およびアロフィコシアニンの、本発明の選択される色素との複合体であり、これらは励起状態のエネルギーアクセプターまたはドナーとしての役割を果たす。これらの複合体において、励起状態のエネルギー移動は、比較的短い波長で励起された場合に、長波長の蛍光発光をもたらす。本発明の一態様において、基質は、抗体無傷の抗体、抗体フラグメントおよび抗体血清等を含む、アミノ酸、アンギオスタチンもしくはエンドスタチン、アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン例えば、アミドビオチン、ビオシチン、デスチオビオチン等、血液構成要素のタンパク質例えば、アルブミン、フィブリノゲン、プラスミノーゲン等、デキストラン、酵素、酵素阻害剤、IgG結合タンパク質例えば、タンパク質A、タンパク質G、タンパク質A/G等、蛍光性タンパク質例えば、フィコビリタンパク質、エクオリン、緑色蛍光性タンパク質等、成長因子、ホルモン、レクチン例えば、コムギ胚芽凝集素、コンコナバリンconconavalinA等、リポ多糖、金属結合タンパク質例えば、カルモデュリン等、微生物もしくはその一部分例えば、細菌、ウイルス、酵母等、神経ペプチドおよび他の生物学的に活性な因子例えば、デルモルフィン、デルトロピンdeltropin、エンドモルフィン、エンドルフィン、腫瘍壊死因子等、非生物学的微粒子例えば、フェロ流体、金、ポリスチレン等のもの、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ペプチド毒素例えば、アパミン、ブンガロトキシン、ファロイジン等、リン脂質結合タンパク質例えば、アネキシン等、低分子薬物例えば、メトトレキサート等、構造タンパク質例えば、アクチン、フィブロネクチン、ラミニン、微小管会合タンパク質、チューブリンtublin等、またはチラミドである、複合した物質である。別の実施形態において、基質は、核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチドまたは核酸高分子であり、アルキニル結合例えば、特許文献27参照、アミノアリル結合例えば、特許文献28参照、またはヘテロ原子置換リンカー例えば、特許文献29参照または他の結合等、本発明の色素の付着のためのさらなるリンカーまたはスペーサーを保有するように修飾されているものを包含する。別の実施形態において、複合した物質は、プリンまたはピリミジン塩基をホスフェートまたはポリホスフェート部分と、非環式スペーサーを経由して結合させる、ヌクレオシドまたはヌクレオチド類似体である。別の実施形態において、色素は、ヌクレオチドまたはヌクレオシドの炭水化物部と、典型的にはヒドロキシル基を経由してであるがさらにチオールまたはアミノ基を経由して複合される例えば、特許文献30、特許文献31、特許文献32参照。典型的には、複合したヌクレオチドは、ヌクレオシド三リン酸またはデオキシヌクレオシド三リン酸またはジデオキシヌクレオシド三リン酸である。ホスフェートまたはポリホスフェート部分への、メチレン部分または窒素もしくは硫黄ヘテロ原子の組み込みも有用である。7-デアザプリン等の非プリンNonpurineおよび非ピリミジンnonpyrimidine塩基例えば、特許文献33参照、ならびにそのような塩基を含有する核酸を、本発明の色素とカップリングしてもよい。脱プリン化した核酸と、アミン、ヒドラジドまたはヒドロキシルアミン誘導体との反応によって調製される核酸付加物は、核酸を標識し、検出するというさらなる意味を提供する例えば、非特許文献9参照。好ましい核酸高分子複合体は、標識された、一本鎖もしくは多重鎖の、天然もしくは合成のDNAもしくはRNA、DNAもしくはRNAオリゴヌクレオチド、またはDNA/RNAハイブリッドであるか、または、モルホリン誘導体化ホスフェート等の珍しいリンカーもしくはN-2-アミノエチルグリシンユニット等のペプチド核酸を組み込んでいる。核酸が合成オリゴヌクレオチドである場合、核酸は、典型的には50個より少ないヌクレオチドを含有し、より典型的には25個より少ないヌクレオチドを含有する。ペプチド核酸PNAの複合体例えば、Nielsenら、特許文献34参照は、それらの概してより高速のハイブリダイゼーション速度のため、いくつかの用途に好ましいことがある。一実施形態において、本発明の複合したオリゴヌクレオチドは、代謝産物、色素、ハプテンまたはタンパク質等の特定の標的分子のためのアプタマーである。すなわち、オリゴヌクレオチドは、標的分子と優先的に結合するために選択されたものである。所与の標的分子のためのアプタマーを調製しスクリーニングするための方法は、既に記述されており、当技術分野において公知である例えば、Goldの特許文献351996参照。別の実施形態において、基質は、典型的にはデキストラン、ヘパリン、グリコーゲン、アミロペクチン、マンナン、イヌリン、デンプン、アガロースおよびセルロース等の多糖である、炭水化物である。あるいは、炭水化物は、リポ多糖である多糖である。好ましい多糖複合体は、デキストランまたはリポ多糖複合体である。イオン錯化部分を有する複合体は、カルシウム、ナトリウム、マグネシウム、亜鉛、カリウム、または他の生物学的に重要な金属イオンの指示薬としての役割を果たす。好ましいイオン錯化部分は、クラウンエーテル例えば、特許文献36参照;1,2-ビス-2-アミノフェノキシエタン-N,N,N’,N’-四酢酸の誘導体BAPTAキレート剤;例えば、特許文献37、特許文献38および特許文献39参照;2-カルボキシメトキシアニリン-N,N-ジ-酢酸の誘導体APTRAキレート剤;例えば、非特許文献10参照;またはピリジンベースおよびフェナントロリンベースの金属イオンキレート剤例えば、特許文献40参照;またはニトリロ三酢酸の誘導体例えば、非特許文献11参照である。好ましくは、イオン錯化部分は、クラウンエーテルキレート剤、BAPTAキレート剤、APTRAキレート剤、またはニトリロ三酢酸の誘導体である。非生物学的材料の他の複合体は、有機もしくは無機高分子、高分子フィルム、高分子ウエハー、高分子膜、高分子粒子、または高分子微粒子磁性および非磁性のミクロスフェア;鉄、金または銀の粒子;伝導性および非伝導性の金属および非金属;ならびに、ガラスおよびプラスチックの表面および粒子の色素-複合体を包含する。複合体は、任意選択的に、高分子を調製する間に、適正な官能性を含有する色素を共重合すること、または適切な化学反応性を持つ官能基を含有する高分子を化学修飾することによって調製される。高分子の色素-複合体を調製するために有用な他の種類の反応は、アルケンの触媒重合または共重合、およびジエンとジエノフィルとの反応、エステル交換またはアミノ基転移を包含する。別の実施形態において、複合した物質は、光ファイバーまたは他の構造に形成され得るガラスまたはシリカである。一実施形態において、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸高分子等の生物学的高分子の複合体はまた、任意選択的に本発明のさらなる色素である少なくとも第2の発光性色素で標識されて、エネルギー移動対を形成する。本発明のいくつかの態様において、標識された複合体は酵素基質として機能し、酵素的加水分解はエネルギー移動を中断させる。本発明の別の実施形態において、本発明の色素を組み込んだエネルギー移動対は、そのヘアピン立体配座において効率的な蛍光消光を見せるオリゴヌクレオチドと複合される例えば、いわゆる分子指標、非特許文献12参照。反応性色素を使用する色素複合体の調製は、文書で十分に立証されている例えば、非特許文献13、非特許文献14、および非特許文献15参照。複合体は、典型的には、適正な反応性色素および複合される物質を、その両方が可溶性である適切な溶媒中で混合することによって得られる。本発明の色素の大多数は、水溶液に易溶性であり、ほとんどの生物学的材料との複合反応を容易にする。光活性化されている反応性色素では、複合には反応性色素を活性化するための反応混合物の照射を要する。合成本発明の発光性色素は、2つの異なる経路を使用して容易に合成できる。1.WSB架橋剤を最初に調製する。WSBリンカーは、標準的な液相化学を使用して作製できる。WSBが3つを超える水溶性の基を有するならば、標準的な固相ペプチド合成によってWSBリンカーを調製することができることもある。WSBを、2つの官能基を含有する発光性色素とカップリングしてよい。この戦略を、図5、7、8および9において例証する。2.WSBを発光性色素前駆体とカップリングし、その後これを凝縮して、所望の色素を得る。この戦略を、図4および6において例証する。発光性色素の合成については、文献において十分に記述されている。これらの基本構造を、合成の最中または後に、任意選択的にさらに置換して、上記で定義した通りの対応する色素置換基を得る。カルボシアニンでは、重要中間体は、フィッシャーのインドール合成に類似する反応によって容易に合成される例えば、非特許文献16、非特許文献17参照。本発明のシアニン色素の合成は、重要なインドリン中間体の最初の調製に依拠する。Lichaら、特許文献412000には、インドリン中間体の典型的な合成systhesisが記述されている。これらの基本構造を、合成の最中または後に、任意選択的にさらに置換して、上記で定義した通りの対応する色素置換基を得る。新規重要中間体は、フィッシャーのインドール合成に類似する反応によって、またはフェニレンジアミンphenylendiamineとカルボニル化合物との縮合によって、容易に合成される。WSB置換カルボシアニンを図4において例証する。本発明のシアニン色素の合成は、結合が橋かけおよび複合した二重結合である場合、ある特定の重要な橋かけ中間体の最初の調製に依拠する。例えば、N,N’-ジフェニルホルムアミジン、トリエチルオルトホルメートマロンアルデヒドビスフェニルイミン塩酸塩、1,1,3-トリメトキシプロパン、1,1,3,3-テトラメトキシプロパンおよびグルタコンアルデヒドジアニル一塩化物が、カルボシカニンの合成において使用される周知の橋かけ中間体である。橋かけおよび複合した二重結合を有する適正なカルボシアニンのさらなる例は、文献において以前に記述されている例えば、Diwuらの特許文献17、Ollmann二世の特許文献421998、Patonayらの特許文献432000、Waggonerの特許文献442000、およびLeeらの特許文献451995、Middendorfらの特許文献461997、Lincolnらの特許文献471975、Simsonらの特許文献481977参照。橋かけおよび複合した炭素原子がRMで置換されているカルボシアニンの典型的な全合成を、図4、5および6において例証する。カルボシアニンの合成のために、適正に置換されているアリールヒドラジン典型的には適正に置換されているフェニルヒドラジンであるを、適正に置換されているメチルケトンと反応させて、3,3-二置換2-メチルインドール誘導体を生み出す。スルホン化フェニルヒドラジン誘導体またはスルホン化ナフチルヒドラジン誘導体を利用して最終色素の溶解性を増大させることが特に適切である。次いで、3,3-二置換-2-メチルインドールを、典型的にはヨウ化エチル等のハロゲン化アルキル、p-トルエンスルホン酸メチル等のスルホン酸アルキル、またはプロパンスルトンもしくはブタンスルトン等の環式スルホネートであるアルキル化剤により、窒素原子上で四級化してインドリウム誘導体とする。典型的には、重要なインドリウムまたはベンゾインドリウム中間体を、四級化の前または後に1回以上スルホン化し、その後ベンザゾリウム部分およびポリメチン部分と縮合して、対象の色素を形成する。ポリメチン橋上の、または色素前駆体のインドリウムもしくはベンゾリウム部上の置換基を生み出す、これらの方法の変形形態が当技術分野において周知である。本発明のアザカルボシアニン色素を同様にして合成することができる例えば、LeungWら、特許文献49、非特許文献18、非特許文献19、非特許文献20、非特許文献21、Fickenらの特許文献501961参照。概して、これらの色素の合成には、3つの前駆体:適正なベンザゾリウムまたはアザベンザゾリウム塩、およびポリメチンスペーサー源を要する。典型的には、各構成要素は、適正な化学置換基、または適正な置換基に変換され得る官能基例えばRMを組み込むように選択される。対象の誘導体のいずれかを生み出すようにこれらの前駆体を調製し組み合わせるために要される化学は、概して当業者によく理解されている。キサンテン色素は、レゾルシノール誘導体フルオレセインを得る、3-アミノフェノールローダミンを得る、またはレゾルシノールと3-アミノフェノールとの組合せロドールを得るから調製される例えば、Eliuらの特許文献182010、Lamらの特許文献192009、Reddingtonらの特許文献202008、Klaubertらの特許文献212001、Maoらの特許文献222000、非特許文献22を参照。オキサゾール色素は、典型的には、酸誘導体例えば、塩化アシル、無水物または活性化エステルと2-アミノケトンとの縮合、続いて脱水により合成され、所望のオキサゾール色素を得る例えば、非特許文献23、非特許文献24、非特許文献25、Bullerらの特許文献51参照。様々なオキサゾール色素を調製するための他の代替的な合成方法も文献において公知である例えば、非特許文献26、非特許文献27、非特許文献28参照。適正に置換されているピロールとカルボニル化合物との縮合、続くBF3錯体形成のためにボディピーを合成し、続いてBF3錯体形成により、所望のボディピー色素を得る例えば、Kangらの特許文献521995、Kangらの特許文献531995、Kangらの特許文献541993、Kangらの特許文献551993、Kangらの特許文献561988参照。これらの基本構造を、合成の最中または後に、任意選択的にさらに置換して、上記で定義した通りの対応する色素置換基を得る。ピロール前駆体の合成は、文献において極めてよく知られている例えば、非特許文献29、非特許文献30参照。金属錯体の合成は、よく研究されているビピリジン誘導体等の配位子に大いに依拠する例えば、Diwuらの特許文献57、Bhalgatらの特許文献58、Autieroらの特許文献59参照。同等の結果を生み出すことができる多くの可能な変形形態があると認められる。金属配位子の合成は、文献において十分に記述されている例えば、非特許文献31、非特許文献32、非特許文献33、非特許文献34、非特許文献35参照。表1において記述されているもの等の様々な反応性部分を含有する色素の合成のための方法は、当技術分野において文書で十分に立証されている。特に有用なのは、カルボン酸の活性化エステル等のアミン反応性色素であり、これは、典型的には、カルボン酸を比較的酸性の脱離基とカップリングすることによって合成される。他の好ましいアミン反応性部分は、PCl5またはPOCl3等のハロゲン化剤を使用してスルホン酸から調製されるハロゲン化スルホニル;ハロゲン化シアヌルとアミンとの反応によって調製されるハロトリアジン;および、アミンとホスゲンまたはチオホスゲンとからそれぞれ調製されるイソシアネートまたはイソチオシアネートを包含する。アミンおよびヒドラジドを含有する色素は、カルボン酸、アルデヒドおよびケトンとの複合に特に有用である。ほとんどの場合、これらは、カルボン酸の活性化エステルまたはハロゲン化スルホニルと、カダベリン等のジアミンとの、またはヒドラジンとの反応によって合成される。あるいは、芳香族アミンは、一般に、芳香族ニトロ化合物の化学的還元によって合成される。アミンおよびヒドラジンは、標準的な方法によるチオール反応性ハロアセトアミドまたはマレイミドの合成に特に有用な前駆体である例えば、非特許文献13、非特許文献15参照。本発明の選択された実施形態を、表2に記す。用途および使用方法本発明の一態様において、本発明の色素化合物は、試料を同定または定量化できるよう、試料を直接的に染色または標識するために使用される。例えば、そのような色素は、生物学的な標的分析物のためのアッセイの一部として、生物学的もしくは非生物学的流体中の検出可能なトレーサー元素として;または、腫瘍細胞および腫瘍組織を選択的に破壊するために着色した試料に放射線照射する、腫瘍の光線力学的療法等の目的のため;または、通常は一重項酸素の光増感生成によって、動脈プラークもしくは細胞を光剥離するために添加され得る。1つの好ましい実施形態において、色素複合体は、複合した物質が特異的な結合対の相補的メンバーである配位子を含む試料を染色するために使用される例えば、表3。典型的には、試料は、液体源から直接的に、または、固体材料有機もしくは無機、もしくは培養するために細胞が導入された成長培地、もしくは評価のために細胞を入れた緩衝溶液か、洗浄液として、取得される。試料が細胞を含む場合、その細胞は、場合により、微生物を包含する単細胞、または多細胞生物、胚、組織、生検、フィラメント、生物膜等を包含する二次元または三次元の層で他の細胞と会合している多細胞である。あるいは、試料は、固体、任意選択的に、スメアもしくはスクレープ、または濾過によって液体もしくは蒸気から除去された残余分である。本発明の一態様において、試料は、尿、脳脊髄液、血液、リンパ液、組織ホモジネート、間質液、細胞抽出物、粘液、唾液、痰、便、生理的分泌物または他の同様の流体等、分離した、もしくは濾過されていない生物学的流体を包含する生物学的流体から取得される。あるいは、試料は、土、水もしくは空気等の環境源から;または、廃水流、水源、供給ラインもしくは製造ロットから採取したもの等の産業発生源から取得される。また別の実施形態において、試料は、固体または半固体マトリックスの上または中に存在する。本発明の一態様において、マトリックスは膜である。別の態様において、マトリックスは、核酸もしくはタンパク質を分離し特徴づけるために使用されるもののような電気泳動ゲルであるか、または電気泳動ゲルから膜への移動によって調製されるブロットである。別の態様において、マトリックスはシリコンチップまたはスライドガラスであり、関心対象の分析物は、チップまたはスライド上に配列して固定化されている例えば、試料はマイクロアレイ中のタンパク質または核酸高分子を含む。また別の態様において、マトリックスはマイクロウェルプレートまたはマイクロ流体チップであり、試料は、自動化法によって、典型的には、薬剤スクリーニング等のハイスループットスクリーニングの種々の方法によって分析される。本発明の色素化合物は、概して、上述した通りの本発明の色素化合物を関心対象の試料と、検出可能な光学的応答を生み出すように選択された条件下で組み合わせることによって利用される。用語色素化合物は、本明細書において、反応性色素および色素複合体の両方を包含する、特許請求されている色素のすべての態様を指すために使用される。色素化合物は、典型的には、試料の元素と共有もしくは非共有結合性の会合もしくは錯体を形成するか、または単純に試料または試料の一部の境界内に存在する。次いで、光学的応答を導出するように選択された波長で試料を照射する。典型的には、試料の染色を使用して、光学的応答を標準的なまたは期待される応答とさらに比較することにより、試料の特定の特徴を決定する。検出可能な光学的応答は、観察によってまたは機器を用いてのいずれかで検出可能な光学的シグナルにおける変化またはその光学的シグナルの発生を意味する。典型的には、検出可能な応答は、強度、蛍光の励起もしくは発光波長分布、蛍光寿命、蛍光偏光、またはそれらの組合せにおける変化等の、蛍光における変化である。染色の程度および/または位置は、標準的なまたは期待される応答と比較して、試料が所与の特徴を保有するか否か、およびどの程度まで保有するかを示す。本発明のいくつかの色素は、蛍光発光をほとんど呈さないことがあるが、発色団色素としては依然として有用である。そのような発色団は、FRET用途におけるエネルギーアクセプターとして、または単純に試料もしくは試料の一部に所望の色を付与するために有用である。生物学的用途では、本発明の色素化合物は、典型的には、水溶液中、ほぼ水溶液中、または当技術分野において概して公知である方法に従って調製された水混和性aqueous-miscible溶液中で使用される。色素化合物の正確な濃度は、実験条件および所望の結果に依存するが、典型的には約1ナノモル濃度から1ミリモル濃度以上までの範囲である。最適濃度は、バックグラウンド蛍光が最小になる満足のいく結果が達成されるまでの体系的変動によって決定される。色素化合物は、試料を生物学的構成要素で染色するために最も有利に使用される。試料は、構成要素の異種混合物無傷細胞、細胞抽出物、細菌、ウイルス、細胞小器官、およびそれらの混合物を含む、または単一の構成要素もしくは構成要素の同種の群例えば、天然もしくは合成アミノ酸、核酸もしくは炭水化物高分子、または脂質膜錯体を含んでもよい。これらの色素は概して、生きている細胞および他の生物学的構成要素に対し、使用濃度内では非毒性である。色素化合物は、色素化合物と関心対象の試料構成要素との間の接触を容易にする任意の手法で試料と組み合わせられる。典型的には、色素化合物、または色素化合物を含有する溶液が、単純に試料に添加される。本発明のある特定の色素、特に1つまたは複数のスルホン酸部分によって置換されているものは、生物学的細胞の膜に非透過性である傾向があり、一旦内部に入ると生存細胞は典型的には十分に保持される。エレクトロポレーション、衝撃療法または高細胞外ATP等、原形質膜を透過化する処理を使用して、選択された色素化合物を細胞に導入することができる。あるいは、選択された色素化合物は、例えば、圧力マイクロインジェクション、スクレープローディング、パッチクランプ法または食作用によって、細胞に物理的に挿入され得る。脂肪族アミンまたはヒドラジン残基を組み込んだ色素を細胞に微量注入することができ、ここで、色素はホルムアルデヒドまたはグルタルアルデヒド等のアルデヒド系固定液によってその場に固定され得る。この固定能力fixabilityは、そのような色素をニューロントレーシング等の細胞内用途に有用なものとする。リン脂質等の親油性置換基を保有する色素化合物は、例えば、膜構造のプローブとして使用するため;またはリポソーム、リポタンパク質、フィルム、プラスチック、親油性ミクロスフェアもしくは同様の材料中への組み込みのため;またはトレーシングのために、脂質集合体中に非共有的に組み込むことになる。親油性色素は、膜構造の蛍光性プローブとして有用である。化学的に反応性の高い色素化合物は、多種多様な材料上の対応する官能基に共有的に付着して、上述した通りの色素複合体を形成する。細胞の表面上、細胞膜中もしくは細胞小器官等の細胞内区画中、または細胞の細胞質中の反応性部位を標識するために色素化合物を使用して、それらの存在もしくは分量、アクセス性、または試料中におけるそれらの空間的および時間的分布の決定が可能になる。光反応性色素を、生物学的細胞の外膜の構成要素を光標識するために、または細胞の光固定可能な極性トレーサーとして、同様に使用することができる。任意選択的に、染色後に試料を洗浄して、残留、過剰または未結合の色素化合物を除去する。試料は、任意選択的に、染色の過程で、洗浄溶液、透過化および/または固定溶液、ならびにさらなる検出試薬を含有する溶液を包含する1つまたは複数の他の溶液と組み合わせられる。さらなる検出試薬は、典型的には、当技術分野において概して公知の方法に従って、特異的な細胞構成要素、細胞内物質または細胞条件の存在による検出可能な応答を生成する。さらなる検出試薬が、主題の色素化合物のものとは異なるスペクトル特性を有する場合、またはその特性を持つ生成物を生み出す場合、多色用途が可能である。これは、さらなる検出試薬が、染色色素のものとは検出可能に弁別的なスペクトル特性を有する本発明の色素または色素-複合体である場合に特に有用である。本発明の色素複合体は、当技術分野において広範囲にわたって知られている方法;例えば、顕微鏡検査法および免疫蛍光アッセイにおける抗体複合体;ならびに、核酸ハイブリダイゼーションアッセイおよび核酸配列決定のためのヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド複合体の使用、によって使用される例えば、Proberらの特許文献601994、Smithらの特許文献611992、Hobbsの特許文献621991、およびMenchenらの特許文献63参照。本発明の複数の独立した色素の色素-複合体は、多色用途のための有用性を保有する。染色の後または最中の任意の時点で、検出可能な光学的応答を得るように選択された光の波長で試料を照射し、光学的応答を検出するための手段で観察する。本発明の色素化合物を照射するのに有用な設備は、携帯型紫外線ランプ、水銀アーク灯、キセノンランプ、レーザーおよびレーザーダイオードを包含するがこれらに限定されない。これらの照射源は、任意選択的にレーザースキャナー、蛍光マイクロプレートリーダー、標準的なもしくは小型の蛍光光度計、またはクロマトグラフ検出器に統合される。本発明の好ましい実施形態は、405nm、488nm、546nm、594nm、633~636nm、647nm、660nm、680nmおよび700nm超の波長またはその付近で励起可能な色素であり、それは、これらの領域が比較的安価な励起源の出力と密接に一致するためである。光学的応答は、任意選択的に、目視検査によって、または下記のデバイス:CCDカメラ、ビデオカメラ、写真フィルム、レーザー走査デバイス、蛍光光度計、フォトダイオード、量子カウンター、落射蛍光顕微鏡、走査型顕微鏡、フローサイトメーター、蛍光マイクロプレートリーダーのいずれかの使用によって、または光電子増倍管等のシグナルを増幅するための手段によって検出される。フローサイトメーターを使用して試料を調査する場合、試料の調査は、任意選択的に、それらの蛍光応答に従って試料の複数部分を分類することを包含する。本発明の一態様は、上述した通りの本発明の色素のいずれかを使用して種々のアッセイの実践を容易にするキットの設計である。本発明のキットは、典型的には、色素-複合体を調製するために有用な化学的に反応性の高い標識として存在するか、または、複合した物質が特異的な結合対のメンバーである色素-複合体、またはヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸高分子、ペプチドもしくはタンパク質として存在するかのいずれかである、本発明の有色色素または発光性色素を含む。キットは、典型的には水溶液として存在する1つまたは複数の緩衝剤を場合によりさらに含む。本発明のキットは、任意選択的に、さらなる検出試薬、得られた標識物質を精製するための精製培地、発光標準物質、酵素、酵素阻害剤、有機溶媒、または本発明のアッセイを行うための説明書をさらに含む。本発明の選択された色素についての合成戦略、複合体および使用方法の例を、以下の実施例において提供する。さらなる修正形態および変更形態permutationsが当業者には明らかとなるであろう。以下の実施例は、本発明の実践を例証するように記されるものである。これらは、本発明の全範囲を限定または定義することを意図するものではない。実施例1.化合物1の調製FMOC-システイン酸トリエチルアミン塩の溶液25mLのDMSO中6gに、O-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート4gを添加し、続いてトリエチルアミン1.4mLを添加する。混合物を室温で1時間撹拌する。溶液をEtOAc250mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc5×50mL、エーテル3×50mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物1を得る。実施例2.化合物2の調製化合物1の溶液15mLのDMSO中6gに、システイン酸トリエチルアミン塩10mLのDMSO中3gを室温で添加する。混合物を室温で12時間撹拌する。溶液をEtOAc250mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc5×50mL、エーテル3×50mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、粗製の化合物2を得る。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗固体を分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物2を生成する。実施例3.化合物3の調製化合物3は、化合物1の手順に従い、化合物2とO-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートとの反応から同様にして調製する。実施例4.化合物4の調製化合物3の溶液15mLのDMF中3gに、FMOCカダベリンHCl塩15mLのDMF中5gを室温で添加し、続いてトリエチルアミン1.5mLを添加する。混合物を室温で12時間撹拌する。溶液をEtOAc250mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc5×50mL、エーテル3×50mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、粗製の化合物4を得る。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗固体を分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物を生成する。実施例5.化合物5の調製化合物4の溶液15mLのDMF中1gに、ピペリジン1.2mLを室温で添加する。混合物を室温で6時間撹拌する。溶液をEtOAc250mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc5×50mL、エーテル3×50mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、粗製の化合物5を得る。粗固体を5HClに溶解し、0.1HClを溶離系として使用するセファデックスLH-20カラム上でさらに精製して、純粋な生成物を得る。実施例6.化合物6の調製化合物6は、化合物4の手順に従い、化合物3とFMOCエチレンジアミンとの反応から同様にして調製する。実施例7.化合物7の調製化合物7は、化合物5の手順に従い、ピペリジンによる化合物6の脱保護から同様にして調製する。実施例8.化合物8の調製化合物8は、化合物2の手順に従い、化合物3とシステイン酸との反応から同様にして調製する。実施例9.化合物9の調製化合物9は、化合物1の手順に従い、化合物8とO-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートとの反応から同様にし実施例10.化合物10の調製化合物10は、化合物4の手順に従い、化合物9とFMOCカダベリンとの反応から同様にして調製する。実施例11.化合物11の調製化合物11は、化合物5の手順に従い、ピペリジンによる化合物10の脱保護から同様にして調製する。実施例12.化合物12の調製化合物12は、化合物4の手順に従い、化合物9とFMOCエチレンジアミンとの反応から同様にして調製する。実施例13.化合物13の調製化合物13は、化合物5の手順に従い、ピペリジンによる化合物9の脱保護から同様にして調製する。実施例14.化合物14の調製DMF100mL中の、Boc-LysBoc-OH10g、N-ヒドロキシスクシンイミド4gおよびDCC7gの混合物を、室温で終夜撹拌する。固体DCUの除去後、濾液[Boc-LysBoc-OSu]を、水50mL中の6-アミノカプリオンaminocaprioic酸4gの溶液に添加し、続いて5MNa2CO3を添加してpHを8~9に調整する。混合物を室温で終夜撹拌する。水500mLで希釈後、混合物を5HCl水溶液でpH3に酸性化し、酢酸エチル5×250mLで抽出する。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させる。溶媒の除去後、残留物[Boc-LysBoc-NHCH25COOH]を1,4-ジオキサン1000mLに溶解し、続いてジオキサン中4MのHCl1000mLを添加する。混合物を6時間撹拌する。溶媒をデカントし、固体を酢酸エチル5×250mLおよびエーテル3×200mLで洗浄する。化合物14のHCl塩を、真空下で乾燥させる。実施例15.化合物15の調製化合物15は、化合物14の手順に従い、Boc-LysBoc-OHと2-アミノメチルチオフェンとの反応から同様にして調製する。実施例16.化合物16の調製化合物151gを濃H2SO45mLに懸濁させる。懸濁液に、20発煙H2SO45mLを添加する。TLCによって示される通り反応が完了するまで、反応混合物を0°Cで撹拌する。冷エーテル200mlに、激しく撹拌しながら反応混合物を滴下添加して、粗製の化合物16を得る。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗材料を分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物16を生成する。実施例17.化合物17の調製化合物17は、化合物14の手順に従い、Boc-LysBoc-OHと2’,4’-ジスルホベンジルアミンとの反応から同様にして調製する。実施例18.化合物18の調製DMF100mL中の、β-2-チエニル-FMOC-L-アラニン10g、N-ヒドロキシスクシンイミド10gおよびDCC15gの混合物を、室温で終夜撹拌する。反応混合物を濾過して不溶性の固体を除去する。濾液に水250mLを添加し、固体を濾過によって収集する。固体を水で洗浄し、高真空下で乾燥させる。粗固体をさらに精製することなく次のステップの反応に直接使用する。実施例19.化合物19の調製化合物145gおよび182gの混合物を、DMF50mLに溶解する。溶液にトリエチルアミン3mLを添加し、室温で終夜撹拌する。反応混合物を水250mLに滴下添加し、濾過して沈殿物を収集する。固体を水で洗浄し、高真空下で乾燥させる。クロロホルム/メタノールの勾配を使用し、粗材料をシリカゲルカラムによってさらに精製して、純粋な化合物19を生成する。実施例20.化合物20の調製化合物19の溶液20mLのDMF中2gに、ピペリジン1.2mLを室温で添加する。混合物を室温で6時間撹拌する。溶液をEtOAc150mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc5×50mL、エーテル3×50mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物20を得る。実施例21.化合物21の調製化合物21は、化合物16の手順に従い、発煙硫酸を使用する化合物20のスルホン化から同様にして調製する。実施例22.化合物22の調製化合物22は、化合物14の手順に従い、Boc-LysBoc-OHと4-アミノ-1-ヒドロキシ-1-ホスホノブチルホスホン酸ナトリウム塩との反応から同様にして調製する。実施例23.化合物23の調製化合物23は、化合物14の手順に従い、Boc-LysBoc-OHと2-2’,4’-ジホスホニルチエニルメチルアミンとの反応から同様にして調製する。実施例24.化合物24の調製化合物24は、化合物14の手順に従い、Boc-LysBoc-OHと1-アミノメチル-2,4-ジホスホニルベンゼンとの反応から同様にして調製する。実施例25.化合物25の調製化合物25は、特許文献172008において記述されている通りに調製する。実施例26.化合物26の調製化合物26は、特許文献172008において記述されている通りに調製する。実施例27.化合物27の調製化合物27は、化合物14の手順に従い、Boc-LysBoc-OHと1-アミノメチル-2-スルホニル-4-ホスホニルベンゼンとの反応から同様にして調製する。実施例28.化合物28の調製化合物28は、特許文献61997において記述されている通りに調製する。実施例29.化合物29の調製化合物29は、特許文献172008において記述されている通りに調製する。実施例30.化合物30の調製酢酸5mLおよび無水酢酸5mL中の化合物281gおよびマロンアルデヒドビスフェニルイミン一塩酸塩0.8gの溶液を、120°Cで2時間加熱する。反応の完了を、メタノール中の吸収スペクトルによってモニターする。アニルanyl中間体の溶液を化合物291.5gと混合し、次いでさらなる無水酢酸5mLおよびピリジン10mLを添加する。反応混合物を、アニル中間体が消失するまで吸収スペクトルによってモニターする30分間加熱する。反応混合物を冷却し、酢酸エチル50mLに注ぎ入れる。粗生成物を遠心分離によって収集し、酢酸エチルで2回洗浄し、水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物30を生成する。実施例31.化合物31の調製DMF10mL中の化合物30300mgおよびO-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート300mgの溶液に、トリエチルアミン0.4mLを添加する。混合物を室温で2時間撹拌する。反応混合物をEtOAc150mLに注ぎ入れる。ジ-スクシンイミジルエステルを遠心分離によって収集し、EtOAc5×50mL、EtOEt5×50mLで洗浄し、真空下で乾燥させる。実施例32.化合物32の調製粗製の化合物31100mgをDMF150mLに溶解し、水25mL中の化合物11100mgの溶液[Na2CO3でpH8.0に中性化したもの]を2時間のあいだにゆっくり添加する。混合物を室温で終夜撹拌する。溶媒の除去後、水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、残留物を分取HPLCによって精製して、純粋な化合物32を生成する。実施例33.化合物33の調製化合物3250mgをメタノール2mLに溶解する。溶液に、0.1MNaOH0.5mLを室温で添加する。混合物を室温で3~6時間撹拌し、1MHClでpH6.0に中性化する。溶媒の除去後、水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、残留物を分取HPLCによって精製して、純粋な化合物33を生成する。実施例34.化合物34の調製DMF0.4mL中の化合物3310mgの溶液に、O-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート4mg、続いてトリエチルアミン0.03mLを添加する。混合物を室温で1時間撹拌する。溶液をEtOAc15mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc3×10mL、エーテル3×10mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物34を得る。実施例35.化合物35の調製DMF20mL中の化合物29のエチルエステル5gの溶液に、炭酸ジN-スクシンイミジル4g、続いてトリエチルアミン4mLを添加する。混合物を室温で1時間撹拌する。溶液をEtOAc150mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc5×100mL、エーテル3×100mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物35を得る。実施例36.化合物36の調製化合物11100mgおよび35500mgの混合物を、DMF50mLに溶解する。溶液にトリエチルアミン3mLを添加し、室温で終夜撹拌する。反応混合物をEtOAc250mLに滴下添加し、濾過して沈殿物を収集する。固体をEtOAcで洗浄し、高真空下で乾燥させる。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗材料を分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物36を生成する。実施例37.化合物37の調製化合物36500mgおよびマロンアルデヒドビスフェニルイミン一塩酸塩300mgを無水酢酸1mLに溶解し、続いてピリジン1mLを添加する。混合物を120°Cに1時間加熱する。室温に冷却後、混合物を酢酸エチルに滴下する。粗色素を遠心分離によって収集し、酢酸エチルで2回洗浄する。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗材料を分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物37を生成する。実施例38.化合物38の調製化合物3720mgをメタノール1mLに溶解する。溶液に、0.1MNaOH0.5mLを室温でゆっくり添加する。混合物を1MHClでpH6.0に中性化する。溶媒の除去後、水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、残留物を分取HPLCによって精製して、純粋な化合物38を生成する。実施例39.化合物39の調製DMF0.4mL中の化合物3810mgの溶液に、O-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート10mg、続いてトリエチルアミン0.1mLを添加する。混合物を室温で1時間撹拌する。溶液混合物をEtOAc15mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc3×10mL、エーテル3×10mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物39を鮮やかな青色の粉末として得る。実施例40.化合物40の調製室温のDMF1mL中の化合物3450mgに、トリエチルアミン0.1mLおよびN-2-アミノエチルマレイミド、トリフルオロ酢酸塩50mgを添加する。混合物を周囲温度で2時間撹拌する。溶液混合物をEtOAc25mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc3×10mL、エーテル3×10mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、粗製の化合物40を得る。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗生成物を分取HPLCによって精製して、純粋な化合物40を生成する。実施例41.化合物41の調製化合物41は、特許文献642008において記述されている通りに調製する。実施例42.化合物42の調製化合物411gを無水DMF50mLに溶解する。化合物41のDMF溶液に、化合物13のNa2CO3-NaHCO3溶液150mL、pH約9.0をゆっくり添加し、室温で終夜撹拌する。反応混合物を約5mLに濃縮し、1:1EtOAc-アセトン250mLに滴下添加し、濾過して沈殿物を収集する。固体をEtOAcで洗浄し、高真空下で乾燥させる。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗材料を分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物42を生成する。実施例43.化合物43の調製DMF0.4mL中の化合物4210mgの溶液に、O-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート10mg、続いてトリエチルアミン0.1mLを添加する。混合物を室温で1時間撹拌する。溶液混合物をEtOAc15mLに注ぎ入れる。固体を遠心分離し、EtOAc3×10mL、エーテル3×10mLで洗浄し、真空下で乾燥させて、化合物43を得る。実施例44.化合物44の調製化合物44は、特許文献652009において記述されている通りに調製する。実施例45.化合物45の調製化合物4420gを1,2-ジクロロベンゼン30mLに懸濁させる。懸濁液に、6-ブロモヘキサン酸メチル30mLを添加する。化合物44がほとんど消費されるまで、反応混合物を約130°Cで加熱する。反応混合物を室温に冷却し、EtOEt500mLに注ぎ入れる。EtOEt懸濁液を遠心分離して沈殿物を収集し、これをEtOEtで洗浄する。クロロホルム/メタノールの勾配を使用し、粗材料をシリカゲルカラムによってさらに精製して、純粋な化合物45を生成する。実施例46.化合物46の調製化合物4510gを濃H2SO45mLに懸濁させる。懸濁液に、20発煙H2SO410mlを添加する。TLCによって示される通り反応が完了するまで、反応混合物を室温で撹拌する。冷エーテル500mlに、激しく撹拌しながら反応混合物を滴下添加して、化合物46とそのモノおよびジエステルとの粗混合物を得る。粗材料を20HClに懸濁させ、モノエステルおよびジエステルがほとんど遊離酸に変換されるまで、約60°Cで加熱する。水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、粗材料を分取HPLCによってさらに精製して、純粋な化合物46を生成する。実施例47.化合物47の調製化合物47は、化合物39の手順に従い、化合物46とO-N-スクシンイミジル-N,N,N’N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートとの反応から同様にして調製する。実施例48.化合物48の調製粗製の化合物474gを無水DMF250mLに溶解し、無水DMF250mL中の化合物213gの溶液[トリエチルアミンでpH8.0に中性化したもの]を8時間のあいだにゆっくり添加する。混合物を室温で終夜撹拌する。溶媒の除去後、水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、残留物を分取HPLCによって精製して、純粋な化合物48を生成する。実施例49.化合物49の調製化合物49は、化合物43の手順に従い、化合物48とO-N-スクシンイミジル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートとの反応から同様にして調製する。実施例50.化合物50の調製化合物50は、特許文献661992において記述されている通りに調製する。実施例51.化合物51の調製化合物51は、化合物14の手順に従い、Boc-LysBoc-OHと2-アミノメチル-5-5’-カルボキシペンチルチオフェンとの反応から同様にして調製する。実施例52.化合物52の調製化合物52は、化合物16の手順に従い、化合物51のスルホン化から同様にして調製する。実施例53.化合物53の調製粗製の化合物501gを無水DMF250mLに溶解し、無水DMF250mL中の化合物52450mgの溶液[トリエチルアミンでpH8.0に中性化したもの]を10時間のあいだにゆっくり添加する。混合物を室温で終夜撹拌する。溶媒の除去後、水中0.1TFA~MeCN中0.1TFA緩衝系を使用し、残留物を分取HPLCによって精製して、純粋な化合物53を生成する。精製された化合物をメタノールに再溶解し、pH7.0に中性化する。溶液の蒸発により、化合物53をナトリウム塩として得る。実施例54.化合物54の調製化合物53を、記述されている通り、EuCl3によりその対応するEu錯体にその場でinsitu変換する例えば、特許文献661992参照。化合物53-Eu錯体10mgおよび炭酸N,N’-ジスクシンイミジル5mgをDMF0.5mlに溶解する。溶液に、4-ジメチルアミノピリジン0.5mgおよび無水ピリジン0.5mlを、乾燥窒素保護下、室温で激しく撹拌しながら添加する。HPLCによって示される通り反応が完了するまで、反応混合物を乾燥窒素保護下、室温で撹拌する。反応混合物をエーテルに注ぎ入れ、結果として得られる沈殿物を濾過によって収集する。固体をエーテルで洗浄して、所望の化合物54を生成する。実施例55.ペプチド-色素複合体の調製DMF0.5mL中のアミノファロイジン5mgおよびスクシンイミジルエステル誘導体化合物3410mgに、N,N-ジイソプロピルエチルアミン25μLを添加する。混合物を室温で3時間撹拌する。この溶液に、5mLのEtOAcを添加する。固体を遠心分離によって収集する。粗生成物を、水で溶離するセファデックスLH-20上で、続いて分取HPLCによって精製して、純粋なファロイジン複合体を得る。生成物は、固定細胞調製物におけるF-アクチンフィラメントのための有効な染色剤である。実施例56.タンパク質-色素複合体の調製ヤギ抗マウスIgGGAM、ヤギ抗ウサギIgGGAR、ストレプトアビジン、トランスフェリン、ならびにR-フィコエリトリンR-PEおよびアロフィコシアニンAPCを包含する他のタンパク質、の一連の色素複合体は、モノ-スクシンイミジルエステルまたはビス-スクシンイミジルエステル化合物を使用し、標準的な手段によって調製される例えば、非特許文献36、非特許文献37、非特許文献38、非特許文献39参照。本発明のスクシンイミジルエステルとのタンパク質複合のための典型的な方法は、次の通りである。色素対タンパク質の比、タンパク質濃度、時間、温度、緩衝液組成および当技術分野において周知である他の変数における変動は、依然として有用な複合体を生成するものであれば可能である。タンパク質の溶液は、0.1M重炭酸ナトリウム中約10mg/mLで調製される。標識試薬を、DMFまたはDMSO等の適切な溶媒に約10mg/mLで溶解する。水は、本発明の多くの色素に適した溶媒である。所定量の標識試薬を、タンパク質溶液に撹拌しながら添加する。10当量の色素対1当量のタンパク質のモル比が典型的であるが、最適な量は、特定の標識試薬、標識されているタンパク質およびタンパク質の濃度に伴って変動し、実験的に決定される。蛍光収率を最適化する場合およびこの明るさに対する置換度DOSの影響を決定する場合、反応性色素対タンパク質の比を数倍の範囲にわたって変動させることが典型的である。反応混合物を、室温で1時間、または氷上で数時間インキュベートする。色素-タンパク質複合体は、典型的には、リン酸緩衝生理食塩水PBSで平衡化したAmershamPD-10樹脂上で等、サイズ排除クロマトグラフィーによって、遊離した未反応の試薬から分離される。タンパク質を含有する最初の有色バンドを収集し、遊離フルオロフォアの減衰係数を使用して、各フルオロフォアの吸光度最大値における吸光度から置換度を決定する。このようにして取得された色素-タンパク質複合体を細分画して、より高い、より低い、またはより均一なDOSを持つ複合体を生成することができる。下記は、化合物34を使用してIgG-色素複合体を調製する具体例である。ステップ1.タンパク質溶液溶液Aを調製する:50μLの1MNaHCO3を450μLのIgGタンパク質溶液4mg/mLと混合して、0.5mLのタンパク質試料溶液を得る。結果として得られる溶液は、pH8.5±0.5を有することとなる。ステップ2.色素溶液溶液Bを調製する:50μLのDMSOに、1mgの化合物34を添加し、化合物が完全に溶解するまで撹拌する。ステップ3.複合反応を実行する:色素溶液Bをタンパク質溶液Aに有効に撹拌または振とうしながら添加し、反応混合物を1~3時間撹拌または振とうし続ける。ステップ4.複合体を精製する:a.10×溶離緩衝液を脱イオン水で希釈して1×溶離緩衝液溶液Cを得、これを使用してPD-10カラムからタンパク質複合体を溶離する;b.プレパックカラム中の液体が上面の直下を流れたらすぐ、カラムに反応混合物ステップ3から、必要ならば濾過したものまたは上清をロードする;c.試料が上部の樹脂表面の直下を流れたらすぐ、1mLの1×溶離緩衝液を添加し;この試料洗浄プロセスを2回繰り返し;さらなる1×溶離緩衝溶液を添加して所望の試料を溶離する;d.通常は所望の標識タンパク質である速い流れのバンドを収集する。通常は遊離または加水分解された色素である遅い流れのバンドを、所望の生成物が同定されるまで保つ。ステップ5.所望の色素-タンパク質複合体を特徴づけする:a.280nmにおけるOD吸光度および色素の最大吸収波長を測定する注記:ほとんどの分光光度計では、OD値が0.1から0.9の範囲内となるように、試料カラム画分からを脱イオン水で希釈する必要がある。280nmにおけるO.D.吸光度は、タンパク質の最大吸収である注記:正確なDOSを取得するためには、複合体に複合されていない色素がないことを確認しなくてはならない;b.下記の方程式を使用して、DOSを算出する。DOS=[色素]/[タンパク質]=Adye×εp/250000A280-CF×Adye[色素]は色素濃度であり、ランベルトベールの法則:A=εdyeC×Lから容易に算出でき;[タンパク質]は標的タンパク質濃度である。この値は、複合効率が十分に高ければ好ましくは70超反応物に添加された重量によって推定するか、またはランベルトベールの法則:A=εproteinC×Lによってより正確に算出するかのいずれでもよい。例えば、IgGは203,000cm-1M-1のε値を有する。CFは色素補正係数であり、OD280nm/ODdyemaximumabsorptionwavelengthの比によって算出される。実施例57.過ヨウ素酸塩で酸化されたタンパク質の蛍光性標識1mLの0.1M酢酸ナトリウム、0.135MNaCl、pH5.5中の各5mgのヤギIgG抗体の2つの試料を、氷上、2.1mgのメタ過ヨウ素酸ナトリウムでそれぞれ1時間および2時間処理する。30μLのエチレングリコールの添加によって反応を停止させる。PBSpH7.2で満たしたセファデックスG25カラム上で抗体を精製する。10分の1の体積の1M重炭酸ナトリウムを添加してpHを上昇させ、化合物102または117を色素対タンパク質のモル比50:1で添加する。反応物を室温で2時間撹拌する。シアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加して10mMの最終濃度とし、反応物を室温で4時間撹拌する。抗体複合体を、透析によって、および上述した通りのセファデックスG25カラム上で精製する。1時間酸化された抗体は、典型的には、IgG1モル当たり色素1モルの置換度を生み出す。2時間酸化された抗体は、典型的には、IgG1モル当たり色素およそ2モルのDOSを生み出す。ゲル中およびブロット上の過ヨウ素酸塩で酸化されたタンパク質を、基本的に記述されている通りに標識することもできる例えば、非特許文献40参照。実施例58.ベータ-ガラクトシダーゼのチオール反応性色素を用いた標識遊離チオール基に富むタンパク質であるβ-ガラクトシダーゼの溶液を、PBS中で調製する400μL中2.0mg。次いで、タンパク質溶液を、DMF中マレイミド誘導体化合物40の20mg/L溶液で処理する。未反応の色素をスピンカラム上で除去する。実施例56において記述されている通りの遊離色素の減衰係数を使用して、色素による置換度を推定する。280nmでの吸光度からタンパク質濃度を推定し、その波長での化合物40の吸光度に対して補正する。実施例59.架橋されていない色素とWSB架橋された色素とから調製されたタンパク質複合体の比較色素-タンパク質複合体を、実施例56において記述されている通りに合成し、種々のDOSでGARと複合する。図1~3は、架橋されていない色素SEから調製されたGAR複合体、疎水性橋で架橋された色素SE、および本発明のWSBで架橋された色素SEの、蛍光特性の直接比較である。WSB架橋corsslinkingは、色素化合物の蛍光性能の有意な改善をもたらしたことが分かる。WSB化合物のより鮮やかな蛍光発光は、試験したDOSのすべてにおいて観察される。実施例60.R-フィコエリトリンおよびアロフィコシアニンの複合体における蛍光エネルギー移動色素SE化合物のR-フィコエリトリンR-PE複合体は、実施例56のように、ドナーの蛍光をほぼ完全に消光するために十分高いDOSDOS約4~8で調製する。得られたフィコビリタンパク質複合体を488nmで励起させ、蛍光発光を、同じ波長で励起させた未修飾のR-フィコエリトリンのものと比較する。高効率のエネルギー移動99超は、タンパク質から蛍光性色素へ生じる。これらの錯体とストレプトアビジンとの複合体は、基本的に記述されている通りに調製される例えば、非特許文献36参照。このストレプトアビジン複合体は、エネルギー移動特性を保持し、励起のためにアルゴンイオンレーザーを利用するフローサイトメーターにおける細胞染色に有用である。アロフィコシアニンと、化合物34または39等、本発明のより長い波長の色素とのタンデム複合も生成することができ、633nm付近で励起された場合、700nmをはるかに超える発光を生み出す。実施例61.培養された哺乳類細胞におけるアクチンの標識ウシ肺動脈細胞BPAECを、ガラス上で30~50の集密まで成長させる。細胞を3.7ホルムアルデヒドで固定し、0.2トリトンX-100で透過化し、6BSAでブロックする。細胞を、実施例55のファロイジン色素-複合体とともにインキュベートする。細胞をブロック緩衝液ですすぎ、PBSpH7.4中でマウントする。染色された細胞は、赤色蛍光で装飾されたアクチンフィラメントを見せる。実施例62.蛍光性チラミドの調製および使用2倍モル過剰の塩酸チラミンを、室温の水溶液中の化合物34に添加し、続いて過剰のトリエチルアミンを添加する。30分後、赤色固体をアセトンで沈殿させ、エーテルで洗浄し、分取HPLCによって精製する。ウシ肺動脈細胞BPAECを、ガラス上で30~50の集密まで成長させる。細胞を3.7ホルムアルデヒドで固定し、0.2トリトンX-100で透過化し、1mg/mLのストレプトアビジンおよび1mMのビオチンでブロックする。洗浄後、細胞を約0.05μg/mLのビオチン化抗シトクロムCオキシダーゼ抗COXに暴露させ、次いで、ストレプトアビジン-HRP複合体とともに室温でインキュベートする。細胞を再度すすぐ。次いで、試料を化合物34のチラミドとともにインキュベートし、蛍光顕微鏡検査法を使用して調査する。実施例63.アミノデキストラン色素-複合体の調製平均13個のアミノ基で誘導体化した70,000MWアミノデキストラン50mgを、10mg/mLで0.1MNaHCO3に溶解する。約10~15の色素/デキストラン比を得るように、色素SE化合物を添加する。6~12時間後、水で溶離するセファデックスG-50上で複合体を精製する。典型的には、4~6モルの色素を70,000MWデキストランと複合する。実施例64.蛍光性色素で標識されたミクロスフェアの調製均一なミクロスフェアを、アミノまたはカルボキシルまたはアルデヒド等の官能基を有するように化学的に修飾する。これらの官能化されたミクロスフェアを、表1に収載されている通りの対応する反応性色素と共有的に複合する。例えば、アミンで修飾されたミクロスフェアは、化合物34、39、49および54等のスクシンイミジルエステルを経由して本発明の色素と容易に複合される。色素で標識されたタンパク質を、エチル3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDACを使用し、そのアミン残基を経由して、高分子のカルボキシレート基と共有的にカップリングする。実施例65.色素-細菌複合体の調製加熱死滅させた大腸菌Escherichiacoliを10mg/mLでpH8~9の緩衝液に懸濁させ、0.5~1.0mg/mLのアミン反応性色素、典型的にはスクシンイミジルエステル誘導体化合物34、39、49および54等とともにインキュベートする。30~60分後、標識された細菌を遠心分離し、緩衝液で数回洗浄して、複合されなかったあらゆる色素を除去する。標識された細菌をフローサイトメトリーによって分析する。実施例66.クレオチド-色素複合体の調製100μLの水中の2mgの5-3-アミノアリル-2’-デオキシウリジン5’-三リン酸SigmaChemicalに、100μLのDMFおよび5μLのトリエチルアミン中の化合物34、39、49または54を添加する。3時間後、溶液を蒸発させ、残留物をHPLCによって精製する。生成物画分を凍結乾燥させて、蛍光性ヌクレオチド複合体を得る。あるいは、デオキシウリジン5’-三リン酸の蛍光性色素-複合体は、5-3-アミノ-1-プロピニル-2’-デオキシウリジン5’-三リン酸から、またはチオール化ヌクレオチドもしくはチオリン酸ヌクレオチドを本発明のチオール反応性色素化合物101等で処理することによって調製される。加えて、2’-または3’-2-アムニノエチルアミノカルボニルアデノシンamninoethylaminocarbonyladenosine5’-三リン酸を、わずかに過剰の化合物34、39、49または54と反応させ、エタノールによる沈殿の後、リボース修飾された生成物を分取HPLCによって精製する。本発明の色素と複合されたさらなるヌクレオチドは、公開されている手順に準拠して当業者によって容易に調製され得る例えば、非特許文献41、非特許文献42参照。実施例67.オリゴヌクレオチド色素-複合体の調製5’-アミンで修飾された18塩基M13プライマー配列約100μgを4μLの水に溶解する。これに、100μLの0.1Mホウ酸ナトリウム、pH8.5中の250μgの化合物34、39、49または54を添加する。16時間後、10μLの5MNaClおよび3体積の冷エタノールを添加する。混合物を-20°Cに冷却し、遠心分離し、上清をデカントし、ペレットをエタノールですすぎ、次いで100μLの水に溶解する。標識されたオリゴヌクレオチドをHPLCによって精製する。所望のピークを収集し、蒸発させて、蛍光性オリゴヌクレオチドを得る。実施例68.RNAプローブのインシチュハイブリダイゼーションマウス線維芽細胞を固定し、標準的な手順を使用して、mRNAインシチュハイブリダイゼーション用に調製する。色素で標識されたRNAプローブは、ファージT3RNAポリメラーゼプロモーターの下流でクローン化されたマウスアクチン構造遺伝子を含有するプラスミドのインビトロ転写によって調製する。標識反応物は、2μLのDNA鋳型1μgのDNA、1μLの各10mMATP、CTPおよびGTP、0.75μLの10mMUTP、2.5μLの1mMアミノアリルで標識されたUTP、2μLの10×転写緩衝液400mMトリス、pH8.0、100mMMgCl2、20mMスペルミジン、100mMNaCl、1μLのT3RNAポリメラーゼ40ユニット/μL、1μLの2mg/mLBSAおよび8.75μLの水を組み合わせて含む。反応物を37°Cで2時間インキュベートする。DNA鋳型を、37°Cで15分間の20ユニットのDNaseIによる処理によって除去する。RNA転写産物を、等体積のフェノール:クロロホルム、1:1での抽出、次いでセファデックスG50上でのクロマトグラフィーによって精製する。標識されたRNAを50°Cで5分間変性させ、次いで標準的な手順を使用してハイブリダイズして、細胞調製物とする。実施例69.アミンで修飾されたDNAおよび本発明のアミン反応性色素を使用するDNAハイブリダイゼーションプローブの調製ニック翻訳は、染色体1ヒトα-サテライトプローブを含有するpUCl.77プラスミドDNAを使用して実施する。微小遠心管に、下記の順序で添加する:23.5μLの水、5μLの10×Nick翻訳緩衝液0.5Mトリス-HCl、50mMMgCl2、0.5mg/mLBSA、pH7.8、5μLの0.1MDTT、4μLのdGACTP混合物0.5mMdATP、0.5mMdCTP、0.5mMdGTP、1μLの0.5mMdTTP、4μLの0.5mMアミノアリル-dUTP、1μLの1μg/μL鋳型DNA、5μLのDNaseI1μg/mL、2000Kunitzユニット/mg、1.5μLのDNAポリメラーゼI10U/μL。該管を15°Cで2時間インキュベートし、次いで水で100μLの最終体積にする。アミン修飾されたDNAを、キアクイックPCR精製キットQiagenを使用して精製する。該アミン修飾されたDNAを5μLの水に再懸濁させる。この溶液に、5μLのDMF中の3μLの25mg/mL重炭酸ナトリウムおよび50μgの化合物34、39、49または54を添加する。反応物を室温、暗所で1時間インキュベートし、反応物に90μLの水を添加し、これを、QiagenPCR精製キットを使用して精製する。標識されたDNA生成物は、その場insituハイブリダイゼーション実験、マイクロアレイ上でのおよびハイブリダイゼーションベースのアッセイにおける蛍光ドナーまたはアクセプターとしての使用に適している。実施例70.タンデム色素で標識されたストレプトアビジンでの細胞の染色ジャーカット細胞を1BSA/PBSで2回洗浄し、1×107細胞/mLの濃度で再懸濁させる。次いで、ジャーカット細胞を氷上で60分間、1×106細胞当たり10μLの推奨濃度のマウス抗ヒトCD4ビオチンとともにインキュベートする。一次抗体とともにインキュベーション後、細胞を1BSA/PBSで洗浄し、氷上で30分間、実施例59の蛍光性ストレプトアビジン-フィコエリトリン複合体とともにインキュベートする。細胞を1BSA/PBSで洗浄し、遠心分離し、400μLの1BSA/PBSで再懸濁する。アルゴンレーザーの488nm線またはHe-Neレーザーの633nm線で励起するBDキャリバーフローサイトメーターで試料を分析し、ロングパスフィルターによって発光を収集する。FSC対SSCドットプロットを使用して生細胞をゲートし、蛍光の幾何平均を測定する。蛍光強度およびシグナル/ノイズ比の両方についてデータを分析する。実施例71.フローサイトメトリーによるCD4、CD8およびCD45複合体の特徴づけEDTA中に収集した正常ヒト血液を、周囲温度で30分間、血液1.1mlにつき1μgの濃度の化合物34、39、43または49のマウス抗ヒトCD4、CD8またはCD45複合体とともにインキュベートする。抗体複合体とともにインキュベーション後、血液を20倍体積2mlのBDFACS溶解溶液に懸濁させ、周囲温度で8~10分間インキュベートする。試料を2~300×gで5分間遠心分離し、上清をデカントし、ペレットを懸濁させ、2mlの0.5BSA/PBSで洗浄する。BDLSRIIフローサイトメーターでの分析のために、上清を再度デカントし、ペレットを0.5mlの0.5BSA/PBSに懸濁させる。試料を、紫色レーザーの405nm線、アルゴンレーザーの488nm線またはHe-Neレーザーの633nm線で励起し、妥当なバンドパスフィルターによって発光を収集するように分析を実施する。FSC対SSCドットプロットを使用してリンパ球をゲートし、蛍光中央値を測定する。図10は、マウス抗ヒトCD4、CD8およびCD45複合体が高度に蛍光性であり、細胞分析に良好な染色シグナルを与えていることを示す。"