以下の一般式を持つ化合物であり、ここでXとX’は独立してO又はSであり、Aは非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から5までのHハロ;ニトロ;シアノ;ヒドロキシ;アミノ;アルキルアミノアルキルnNRaRb;アルキル;ハロアルキル;シアノアルキル;ヒドロキシアルキル;アルコキシ;フェノキシ;ハロアルコキシ;アルコキシアルキル;アルケニルオキシアルキル;アルコキシアルコキシ;アルカノイルオキシアルキル;ハロ、シアノ、アルキル、又はアルコキシで選択的に置換したアルケニル;ハロ又はアルキルで選択的に置換したアルキニル;フォルミル;カルボキシ;アルキルカルボニル;ハロアルキルカルボニル;ベンゾイル;アルコキシカルボニル;ハロアルコキシカルボニル;アルカノイルオキシ;カルボキシアミド;アミド;アルコキシカルボニルアミノ;アルキルアミノカルボニルアミノ;メルカプト;アルキルチオ;アルキルスルホニル;アルキルスルホニルアルキル;アルキルスルホキシドRa;アルキルスルホキシドアルキルnSRa;フルファミド;‐SO3H;又は非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から3までのハロ、ニトロ、アルコキシ、アルキル、又はアミノ;あるいはフェニル環の隣接する2つの位置の1つ又は両方が置換される場合、付着している原子は、、O、、CH2O、、、3‐、、、、、、及び4からなるグループから選ばれた連結のフェニル結合末端を形成する場合があり、Bは、非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から5までのHハロ;ニトロ;シアノ;ヒドロキシ;アミノ;アルキルアミノアルキルnNRaRb;アルキル;ハロアルキル;シアノアルキル;ヒドロキシアルキル;アルコキシ;フェノキシ;ハロアルコキシ;アルコキシアルキル;アルケニルオキシアルキル;アルコキシアルコキシ;アルカノイルオキシアルキル;ハロ、シアノ、アルキル、又はアルコキシで選択的に置換したアルケニル;ハロ又はアルキルで選択的に置換したアルキニル;フォルミル;カルボキシ;アルキルカルボニル;ハロアルキルカルボニル;ベンゾイル;アルコキシカルボニル;ハロアルコキシカルボニル;アルカノイルオキシ;カルボキシアミド;アミド;アルコキシカルボニルアミノ;アルキルアミノカルボニルアミノ;メルカプト;アルキルチオ;アルキルスルホニル;アルキルスルホニルアルキル;アルキルスルホキシドRa;アルキルスルホキシドアルキルnSRa;フルファミド;‐SO3H;又は非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から3までのハロ、ニトロ、アルコキシ、アルキル、又はアミノ;あるいはフェニル環の隣接する2つの位置の1つ又は両方が置換される場合、付着している原子は、、O、、CH2O、、、3‐、、、、、、及び4‐からなるグループから選ばれた連結のフェニル結合末端を形成する場合があり;13窒素原子及び35核炭素原子を持つ非置換6員環ヘテロサイクル又は置換6員環ヘテロサイクルで、置換体は1から3までの同じ又は異なるハロ;ニトロ;ヒドロキシ;アルキル;アルコキシ;チオアルコキシ;カルボキシ;アルコキシカルボニル;カルボキシアルキル;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つアルコキシカルボニルアルキル;‐CONRaRb;アミノ;アルキルアミノ;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つジアルキルアミノ;‐CF3を含むハロアルキル;‐CNNHCNRaRb;又は‐CNNHCCNRaRb;あるいは5-ベンズイミダゾリル;1-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;3-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;1Hインダゾール‐3‐イル;1‐トリチル‐1H‐インダゾール‐3‐イル;又は1‐アルキル‐1H‐インドール‐2‐イル;Eは非置換又は置換側鎖アルキルであり、置換体は独立に1-4シアノ;ハロ;シクロアルキル;フェニル;アルケニル;ヒドロキシ;アルコキシ;カルボキシ;アルコキシカルボニル;アルカノイルオキシ;フォルミル;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つトリアルキルシリルオキシ;‐CNORa;‐CNRd;‐CNNHCNRaRb;又は‐CNNHCCNRaRb;ここで、Ra、Rb、及びRcは独立にH、アルキル、又はフェニルであり;Rdはヒドロキシアルキル;及びn=14;そしてGはH又はCN;もし、1Eが非置換又は置換側鎖アルキルで、置換体が独立に14シアノ;ハロ;アルケニル;カルボキシ;又はアルコキシカルボニルの場合、Bは、少なくとも1つの‐CNNHCNRaRb又は‐CNNHCCNRaRbグループを持つ置換フェニル;少なくとも1つのハロアルキルグループを持ち、13窒素原子及び35核炭素原子を有する置換6員環へテロサイクル;又は5-ベンズイミダゾリル;1-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;3-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;1Hインダゾール‐3‐イル;1‐トリチル‐1H‐インダゾール‐3‐イル;又は1‐アルキル‐1H‐インドール‐2‐イル;ここで、Ra、Rbは独立にH、アルキル、又はフェニルであり;あるいは2Eがフェニル、ヒドロキシ、アルコキシ、又はフォルミルのうち少なくとも1つを有する置換側鎖アルキルの場合、Bは、少なくとも1つのCNNHCNRaRb又は‐CNNHCCNRaRbグループを持つ置換フェニル;13窒素原子及び35核炭素原子を有する置換又は非置換の6員環へテロサイクル;又は5-ベンズイミダゾリル;1-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;3-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;1Hインダゾール‐3‐イル;1‐トリチル‐1H‐インダゾール‐3‐イル;又は1‐アルキル‐1H‐インドール‐2‐イル;ここで、Ra、Rbは独立にH、アルキル、又はフェニルである、化合物請求項1に記載の化合物であり、XとX’がO、GはHである、化合物。請求項2に記載の化合物であり、前記化合物は35ジメチル安息香酸N’Nヒドラジド、酢酸2NN’ヒドラジノ2メチルプロピルエステル、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3NHNCH5メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3CNHNCH5メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2メトキシ6トリフルオロメチルニコチン酸NtertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2メトキシニコチン酸NN’ヒドラジド、1Hベンゾイミダゾール5カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジド、1トリチル1Hベンゾイミダゾール5カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジド、1Hインダゾール3カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジド、1トリチル1Hインダゾール3カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジド35ジメチル安息香酸N211ジメチルエチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸N’N211ジメチルエチルヒドラジド、35ジメチル安息香酸NNHNC2CN’ヒドラジド、及び35ジメチル安息香酸NCNHNC2CN’ヒドラジド、から構成されるグループから選らばれる、化合物。宿主細胞に於いて標的遺伝子の発現を調節する方法であり、前記宿主細胞は、iトランスアクティベーションドメイン、iiDNA結合ドメイン、及びiiiグループH核受容体リガンド結合ドメイン、を含む、第1ポリペプチドをコード化する第1ポリヌクレオチドを含む第1遺伝子発現カセット、並びにi前記DNA結合ドメインに結合できる応答要素、ii前記トランスアクティベーションドメインにより活性化されるプロモーター、及びiii前記標的遺伝子、を含む、第2遺伝子発現カセットを含み、前記方法は、前記宿主細胞と、1以下の式の化合物、ここでXとX’は独立してO又はSであり、Aは非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から5までのHハロ;ニトロ;シアノ;ヒドロキシ;アミノ;アルキルアミノアルキルnNRaRb;アルキル;ハロアルキル;シアノアルキル;ヒドロキシアルキル;アルコキシ;フェノキシ;ハロアルコキシ;アルコキシアルキル;アルケニルオキシアルキル;アルコキシアルコキシ;アルカノイルオキシアルキル;ハロ、シアノ、アルキル、又はアルコキシで選択的に置換したアルケニル;ハロ又はアルキルで選択的に置換したアルキニル;フォルミル;カルボキシ;アルキルカルボニル;ハロアルキルカルボニル;ベンゾイル;アルコキシカルボニル;ハロアルコキシカルボニル;アルカノイルオキシ;カルボキシアミド;アミド;アルコキシカルボニルアミノ;アルキルアミノカルボニルアミノ;メルカプト;アルキルチオ;アルキルスルホニル;アルキルスルホニルアルキル;アルキルスルホキシドRa;アルキルスルホキシドアルキルnSRa;フルファミド;‐SO3H;又は非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から3までのハロ、ニトロ、アルコキシ、アルキル、又はアミノ;あるいはフェニル環の隣接する2つの位置の1つ又は両方が置換される場合、付着している原子は、、O、、CH2O、、、3‐、、、、、、及び4からなるグループから選ばれた連結のフェニル結合末端を形成する場合があり、Bは、非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から5までのHハロ;ニトロ;シアノ;ヒドロキシ;アミノ;アルキルアミノアルキルnNRaRb;アルキル;ハロアルキル;シアノアルキル;ヒドロキシアルキル;アルコキシ;フェノキシ;ハロアルコキシ;アルコキシアルキル;アルケニルオキシアルキル;アルコキシアルコキシ;アルカノイルオキシアルキル;ハロ、シアノ、アルキル、又はアルコキシで選択的に置換したアルケニル;ハロ又はアルキルで選択的に置換したアルキニル;フォルミル;カルボキシ;アルキルカルボニル;ハロアルキルカルボニル;ベンゾイル;アルコキシカルボニル;ハロアルコキシカルボニル;アルカノイルオキシ;カルボキシアミド;アミド;アルコキシカルボニルアミノ;アルキルアミノカルボニルアミノ;メルカプト;アルキルチオ;アルキルスルホニル;アルキルスルホニルアルキル;アルキルスルホキシドRa;アルキルスルホキシドアルキルnSRa;フルファミド;‐SO3H;又は非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から3までのハロ、ニトロ、アルコキシ、アルキル、又はアミノ;あるいはフェニル環の隣接する2つの位置の1つ又は両方がC、N、O、又はSで置換される場合、これらの原子は、、O、、CH2O、、、3‐、、、、、、及び4‐からなるグループから選ばれた連結のフェニル結合末端を形成する場合があり;13窒素原子及び35核炭素原子を持つ非置換6員環ヘテロサイクル又は置換6員環ヘテロサイクルで、置換体は1から3までの同じ又は異なるハロ;ニトロ;ヒドロキシ;アルキル;アルコキシ;チオアルコキシ;カルボキシ;アルコキシカルボニル;カルボキシアルキル;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つアルコキシカルボニルアルキル;‐CONRaRb;アミノ;アルキルアミノ;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つジアルキルアミノ;‐CF3を含むハロアルキル;‐CNNHCNRaRb;又は‐CNNHCCNRaRb;あるいは5-ベンズイミダゾリル;1-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;3-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;1Hインダゾール‐3‐イル;1‐トリチル‐1H‐インダゾール‐3‐イル;又は1‐アルキル‐1H‐インドール‐2‐イル;Eは非置換又は置換側鎖アルキルであり、置換体は独立に1-4シアノ;ハロ;シクロアルキル;フェニル;アルケニル;ヒドロキシ;アルコキシ;カルボキシ;アルコキシカルボニル;アルカノイルオキシ;フォルミル;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つトリアルキルシリルオキシ;‐CNORa;‐CNRd;‐CNNHCNRaRb;又は‐CNNHCCNRaRb;ここで、Ra、Rb、及びRcは独立にH、アルキル、又はフェニルであり;Rdはヒドロキシアルキル;及びn=14;そしてGはH又はCN;もし、Eが第三級の炭素を含むアルキル、又は第三級の炭素を含むシアノアルキルである場合、Bは、置換フェニルで、置換体は独立して1から5までのHハロ;ニトロ;シアノ;ヒドロキシ;アミノ;アルキルアミノアルキルnNRaRb;アルキル;ハロアルキル;シアノアルキル;ヒドロキシアルキル;アルコキシ;フェノキシ;ハロアルコキシ;アルコキシアルキル;アルケニルオキシアルキル;アルコキシアルコキシ;アルカノイルオキシアルキル;ハロ、シアノ、アルキル、又はアルコキシで選択的に置換したアルケニル;ハロ又はアルキルで選択的に置換したアルキニル;フォルミル;カルボキシ;アルキルカルボニル;ハロアルキルカルボニル;ベンゾイル;アルコキシカルボニル;ハロアルコキシカルボニル;アルカノイルオキシ;カルボキシアミド;アミド;アルコキシカルボニルアミノ;アルキルアミノカルボニルアミノ;メルカプト;アルキルチオ;アルキルスルホニル;アルキルスルホニルアルキル;アルキルスルホキシドRa;アルキルスルホキシドアルキルnSRa;フルファミド;‐SO3H;又は非置換又は置換フェニルで、置換体は独立して1から3までのハロ、ニトロ、アルコキシ、アルキル、又はアミノ;あるいはフェニル環の隣接する2つの位置の1つ又は両方が置換される場合、付着している原子は、、O、、CH2O、、、3‐、、、、、、及び4‐からなるグループから選ばれた連結のフェニル結合末端を形成する場合があり、そして少なくとも1つのヒドロキシ、ニトロ、‐CNOH、アセトキシ、カルボキシ、-SCH3、-CNNHCNRaRb、又は-CNNHCCNRaRbを持っており、あるいはフェニル環の隣接する2つの位置がOで置換され、これらの原子が連結のフェニル結合末端を形成する場合があり、13窒素原子及び35核炭素原子を持つ非置換6員環ヘテロサイクル又は置換6員環ヘテロサイクルで、置換体は1から3までの同じ又は異なるハロ;ニトロ;ヒドロキシ;アルキル;アルコキシ;チオアルコキシ;カルボキシ;アルコキシカルボニル;カルボキシアルキル;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つアルコキシカルボニルアルキル;‐CONRaRb;アミノ;アルキルアミノ;各アルキルグループに独立に定まった数の炭素原子を持つジアルキルアミノ;‐CF3を含むハロアルキル;‐CNNHCNRaRb;又は‐CNNHCCNRaRb;あるいは5-ベンズイミダゾリル;1-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;3-トリチル‐5-ベンズイミダゾリル;1Hインダゾール‐3‐イル;1‐トリチル‐1H‐インダゾール‐3‐イル;又は1‐アルキル‐1H‐インドール‐2‐イル;ここで、Ra及びRbは独立にH、アルキル、又はフェニルであり;あるいは、以下の化合物、4クロロ安息香酸N’ベンゾイルNtertブチルヒドラジド、4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、35ジクロロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3クロロ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2クロロ3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3クロロ2メチル安息香酸N’N’tertブチルヒドラジド、4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド4シアノメチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、4ブロモ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2メチル3ニトロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、23ジメチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、23ジメチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、23ジメチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3クロロ4エチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3ジメチルアミノ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3アセチル2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、酢酸3N’tertブチルN’ヒドラジノカルボニル2メチルフェニルエステル、3ヨード2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’N’tertブチルヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’N’tertブチルヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2メチル3トリフルオロメトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ4メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2クロロ4フルオロ安息香酸N’Ntertブチルヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3エチル2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、34ジエチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2クロロ6メチルイソニコチン酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2ヨード3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’N’tertブチルヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、ベンゾ13ジオキソール5カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジド、4フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸N’Ntertブチルヒドラジド、3クロロ5メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸N’Ntertブチルヒドラジド、4クロロ2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸N’Ntertブチルヒドラジド、2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、4フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、236トリフルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3ブロモ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、23ジフルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3フルオロ5トリフルオロメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、3シアノ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、24ジクロロ5フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2NN’ヒドラジノ2メチルプロピオン酸エチルエステル、2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸N’Nヒドラジド、35ジメチル安息香酸N’Nヒドラジド、2アミノ3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、酢酸3NtertブチルN’ヒドラジノカルボニル5メチルベンジルエステル、酢酸2NN’ヒドラジノ2メチルプロピルエステル、3ヒドロキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3ヒドロキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3ヒドロキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3ヒドロキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3ヒドロキシ2メチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、24ジクロロ5フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、24ジクロロ5フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2フルオロ5メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、5メチルクロマン6安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、25ジフルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、234トリフルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2345テトラフルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、4フルオロ3トリフルオロメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、26ジクロロイソニコチン酸NtertブチルN’ヒドラジド、2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、24ジクロロ5フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、4クロロ2フルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、酢酸3N’tertブチルN’ヒドラジノカルボニル2メチルフェニルエステル、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4クロロ2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、5クロロ2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、5メチルクロマン6カルボン酸N’tertブチルN’ヒドラジド、ベンゾ125オキサジアゾール5カルボン酸N’tertブチルN’ヒドラジド、2クロロ5ニトロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、4クロロ2メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、35ジメトキシ4メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、3メトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、5クロロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’5メトキシ2ベンゾイルヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、4エチル2フルオロ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド、2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジド、22ジフルオロベンゾ13ジオキソール5カ[実施例]一般的方法00219本出願で使用される標準の組み換えDNA及び分子クローニング技術は業界では良く知られており、次のような記述がある:サムブルックJ、フリッチュEF、及びマニアティスT、分子クローニング:実験室マニュアル;コールドスプリングハーバーラボラトリープレス:コールドスプリングハーバー、ニューヨーク、及びTJシルヘイビー、MLベンナン、及びLWエンクイスト、遺伝子融合の実験、コールドスプリングハーバーラボラトリー、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク、及びアウスベルFM等、分子生物学に於ける現在のプロトコール、グリーンパブリッシングアソシエーション及びワイリーインターサイエンス。00220細菌培養の維持と生長に適した材料及び方法は業界では良く知られている。以下の実施例で使用されるのに適した技術は、次に見出される:一般細菌学の方法マニュアル、RGEマレイ、ラルフNコスティロウ、ユージンWネスター、ウィリスAウッド、ノエルRクリーグ及びGブリッグスフィリップス版、マイクロバイオロジー米国協会、ワシントンDC、あるいはトーマスDブロック、バイオテクノロジー:産業用マイクロバイオロジーのテキスト、第2版、シナウアアソシエーツインク、マサチューセッツ州サンダーランド。宿主細胞の生長及び維持に用いられる試薬、制限酵素、及び材料は全て、別の表記がない限り、アルドリックケミカルス、DIFCOラボラトリーズ、GIBCOBRL、あるいはシグマケミカルカンパニーから入手した。00221遺伝子配列の操作は、ジェネティックスコンピューターグループインク、ウィスコンシン州マジソンから入手可能なプログラムを使って行なわれた。GCGプログラムのPileupが使われる時は、ギャップ作成デフォルト値12及びギョップ拡張デフォルト値14が使用される。GCGのGap又はBestfitプログラムが使われる時は、デフォルトギャップ作成ペナルティ50及びデフォルトギャップ拡張ペナルティ3が使用される。いずれの場合も、GCGプログラムのパラメーターが指示されていない場合は、他のGCGプログラムを含めて、デフォルト値が使用される。00222略語の意味は次の通りである:hは時間、minは分、secは秒、dは日、μLはマイクロリットル、mLはミリリットル、Lはリットル、μMマイクロモル-、mMはミリモル-、Mはモル-、molは-モル、mmolは-ミリモル、μgはマイクログラム、mgはミリグラム、Aはアデニン又はアデノシン、Tはチミン又はチミジン、Gはグアニン又はグアノシン、Cはシチジン又はシトシン、xgは重力を掛ける、ntはヌクレオチド、aaはアミノ酸、bpは塩基対、kbはキロベース、kはキロ、μはマイクロ、°Cは摂氏の温度、Cは化学式の中では摂氏、THFはテトラヒドロフラン、DMEはジメトキシエタン、DMFはジメチルフォルムアミド、NMRは核磁気共鳴、psiは平方インチ当たりのポンド、及びTLCは薄層クロマトグラフィーを意味する。実施例1:化合物の調製00223本発明の化合物は、以下のような合成経路に従って製造できる。1135ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製002243ネックの2L丸底フラスコに、300mLの乾燥塩化メチレンに溶解した17371gの2アミノ2メチル1プロパノールを加えた。フラスコには磁気撹拌棒と温度計を付け、ドライアイスアセトン浴槽に置き、0°Cに冷却した。反応温度を5°C未満に維持しながら、分離漏斗から300mLの塩化メチレンに溶解した4エチルベンゾイル塩化物溶液を徐々に加えた。混合物は室温で一夜撹拌した。固体のプロパノールアミンHClを濾過除去し、濾塊は塩化メチレンで洗浄した。合わせた塩化メチレン抽出物は回転式蒸発装置で部分的に濃縮してから、直接次のステップで使用した。最初のステップで生成した中間体のアミド溶液は氷の浴槽で冷やし、DMFを加えた。反応温度を05°Cに保ちながら、50mLの塩化メチレンに溶かした125gのSOCl2を添加速度をコントロールしながら分離漏斗から滴下した。反応物は室温で更に23時間撹拌した。反応混合物は氷の浴槽で冷やし、25のNaOHを加えて水溶液層をアルカリ性にした。混合物は大型の分離漏斗へ移し、塩化メチレン層を分離し、水溶液層はクロロホルムで2回抽出した。合わせた有機層を乾燥し、蒸発させると、201gの黄色い粘性のある油である244ジメチル45ジヒドロオキサゾールが得られた。1HNMRδ787240882681375124002254エチルフェニルオキサゾリンを60°Cの真空オーブンで23時間乾燥し、50mLの乾燥THFに溶解し、温度計、窒素取り入れ口、そして磁気撹拌棒の付いた300mLの丸底フラスコに移した。混合物は窒素中、ドライアイスアセトン浴槽で‐70°Cに冷却した。ブチルリチウムヘキサン溶液を2度に分けて加え、2時間かけて‐25°Cまで温めた。混合物は再び‐65°Cに冷やし、Nフルオロベンゼンスルホンイミドを3度に分けて加えた。混合物は室温まで温め、一夜撹拌した。反応混合物には100mLの飽和NH4Clを加え、エチルエーテル洗浄液と一緒に分離漏斗へ移した。25のNaOHを徐々に加え、水溶液層がpH10になるまで混合した。水溶液層はエーテルで抽出し、そのエーテルは少量の水で洗浄した。エーテル抽出物はMgSO4上で乾燥し、蒸発させると、茶色の油である251gの244ジメチル45ジヒドロオキサゾールが得られた。第2の実験では、70のフッ素化が達成され、反応物の構成比はオキサゾリン:BuLi:Nフルオロベンゼンスルホンイミド=1:15:15であった。1HNMRδ7077841271391200226DMSOとCH3Iを丸底フラスコ内のオキサゾリン231gに加え、混合物を室温で一夜撹拌した。ヨウ化メチルを回転式蒸発装置を用い真空中で除去した。KOH水溶液を加え、混合物を8時間還流した。反応混合物と洗浄水は分離漏斗へ移し、中性成分はクロロホルム抽出で除去した。水溶液の混合物は6NHClでpH12になるまで酸性化し、エーテルで抽出した。エーテル抽出物はMgSO4上で乾燥し、蒸発させると、12gの白色固体である2フルオロ4エチル安息香酸と4エチル安息香酸が得られた。混合生成物はKOHに溶解し、pH=7になるよう2NHClで調製した。混合物は激しく撹拌し、pHメーターで慎重にモニターしながら、01NHClでpH5に酸性化した。4エチル安息香酸がまず沈殿したので、それをワットマン濾紙541で濾過し、01NHClでpH49まで酸性化を続け、pH43になるまで01ずつ上げていき、01上がる毎にワットマン濾紙541で固形物を濾過した。最終的に、混合物はpH25まで酸性化し、濾過した。酸性度が上がる毎に沈殿物に含まれる2フルオロ4エチル安息香酸の量は増えていき、最後の2つの画分には98100の目的の生成物が含まれていた。残りの水溶液層をエーテルで抽出すると、2フルオロ4エチル安息香酸が更に回収された。生成物は空気乾燥した。真空オーブンでの乾燥は、揮発性の故に、生成物を大量に損失するからである。1HNMRδ79571702711274エチル安息香酸:1HNMRδ817327112700227131gの塩化チオニル、1滴のDMF、そして10gの酸を撹拌しながら30mLのトルエンに加えた。混合物は4時間還流した。その後、トルエンと未反応の塩化チオニルは蒸留で除去した。その結果生じた2フルオロ4エチルベンゾイル塩化物は、精製せずに使用した。002280150gの35ジメチル安息香酸Ntertブチルヒドラジド、及び0110mLの2フルオロ4エチルベンゾイル塩化物を秤量し、1オンスの小瓶に入れた。小さい撹拌棒を入れ、その後2mLの塩化メチレンを加えた。混合物はヒドラゾンが溶解するまで撹拌した。撹拌を止め、2mLの1M炭酸カリウム溶液を加えた。混合物は一夜撹拌した。その後、1mLの水と1mLの塩化メチレンを加えた。水溶液層は除去し、有機層を1Mの炭酸カリウム溶液で2度洗浄した。有機層は除去し、硫化マグネシウム上で乾燥した。有機層は塩基アルミナパッドを通して濾過し、溶媒は除去した。生成物である35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドは、エーテル:ヘキサンを使って粉砕法で精製した。1HNMRδ7776702623211511125クロロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸の調製002295クロロと7クロロ異性体をシリカゲルカートリッジクロマトグラフィーで分離した。混合物をCHCl3CH3OHに溶解し、大型カートリッジの上部に加えた。5クロロ異性体がエーテル:ヘキサンで溶出し、7クロロ異性体はエーテル:ヘキサンで溶出を開始し、ニートエーテルで溶出を完了した。1HNMRδ7756955349132フルオロ4ヒドロキシ安息香酸の調製00230160mLの水に溶解した2フルオロ4ヒドロキシベンゾニトリル溶液を撹拌しながら、5の水酸化ナトリウム水溶液を加えた。混合物は加熱し4時間還流してから、室温まで冷やし、氷冷した濃塩酸に注ぎ、エーテルで抽出した。生成物は飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、エーテル層は廃棄した。水溶液抽出物は濃塩酸で酸性化し、エーテルで抽出した。有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、蒸発させると、白色固体である2フルオロ4ヒドロキシ安息香酸が得られた。収率100。1HNMRδ98078767766619FNMRδ10813。2フルオロ4ヒドロキシベンゾニトリル1HNMRδ76168158019FNMRδ10882145フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸、メチルエステル及び6フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン7カルボン酸、メチルエステルの調製0023116gのメチル2フルオロ4ヒドロキシ安息香酸塩、0157gのpトルエンスルホン酸、50mLのトルエン、そして12gのパラホルムアルデヒドを混合し、3時間還流した。その後、TLCにより、出発物質の不在が示された。時々反応を冷却し、反応フラスコの壁から未反応のパラホルムアルデヒドを掻き落とす必要がある。反応フラスコは排気装置を使って換気した。混合物を濾過し固体のパラホルムアルデヒドを除去した後、その固体は100mLのトルエンで2度洗浄した。トルエン洗浄液は濾液と合わせた。有機溶液は75mLの5NaOH水溶液で3度洗浄した。有機層に50mLのメタノールを加え、溶媒を回転式蒸発装置で除去すると、粘度の高いシロップ状の物質が得られたが、それは次第に少々粘着性のある白色の固体となった。陽子及び19FNMRにより、2つの異性体が約7:3の割合で存在する事が示された。この異性体は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを使って慎重に行なえば、ヘキサン85ヘキサン15エーテルのグラジエント法で分離が可能である。目的の34メチレンジオキシ2フルオロ安息香酸メチルエステルがまず白色固体として溶出した。1HNMRδ38548552066078019FNMR115Rf040023245メチレンジオキシ異性体もその後白色固体として溶出した。1HNMRδ39048552566576019FNMR108Rf032155フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸、及び6フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン7カルボン酸の調製002335フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸メチルエステル、水、メタノール、そして水酸化ナトリウムを冷却器及び磁気撹拌棒の付いたフラスコに加えた。撹拌を開始し、混合物を2時間還流した。この時点で、TLCは、出発物質であるエステルが存在していない事を示していた。溶媒を除去すると、白色の固体が残った。その固体を水に入れ、水の層を50mLのエーテルで3度洗浄した。水溶液の層は希塩酸で酸性化すると、白色の沈殿物が生じた。この白色の固体を焼結ガラス製の濾過用漏斗に集め、脱イオン化した水で良く洗浄した。この固体は、真空下60°Cで一夜乾燥し、精製しないで次の反応に使用した。165フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸N’tertブチルヒドラジド、及び5フルオロ4H13ジオキシン7カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製0023416gの5フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸、30mLのトルエン、そしてDMF1滴を磁気撹拌棒、スクラッパ、そして冷却器の付いた100mLフラスコに入れた。059mLの塩化チオニルを加え、混合物を加熱し、4時間還流を続けた。その後、混合物を僅かばかり冷やし、冷却器を蒸留装置に置き換えた。過剰の塩化チオニルは蒸留で除去した。混合物は20°Cに冷やし、回転式蒸発装置を使ってトルエンを除いた。注:トルエン除去の際は注意が必要。温度が27°Cを超えると、真空下で、5フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボニル塩化物の蒸留が始まる。50NaOHを3mLの水に溶解し、磁気撹拌棒及び試薬添加用のゴム製隔壁の付いた反応フラスコに加えた。100gのtertブチルヒドラジンHClを加えた。混合物は室温で5分撹拌してから‐5°Cに冷やした。5フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボニル塩化物を25mLのジクロロメタンに溶解し、3mLの水に溶かした0648gの50NaOHと一緒に加えた。添加中、反応温度は‐2°C未満に維持した。混合物は‐5°C乃至‐2°Cで30分撹拌した。その後、混合物を室温まで温め、30分撹拌した。50mLのジクロロメタンと50mLの水を反応混合物に加えた。有機層はMgSO4上で乾燥し、濾過した。溶媒を除去すると、24gの黄色いシロップが得られた。NMR分析によれば、目的生成物の約85であると思われた。精製された生成物である5フルオロ4Hベンゾ13ジオキシン6カルボン酸N’tertブチルヒドラジドは、4:1ジクロロメタン酢酸エチルグラジエント法を使ったシリカゲルカラムクロマトグラフィーを慎重に行なうことにより、淡黄色の固体として単離された。1HNMRδ085458490640750and77019FNMRδppm。Rf035172ブロモメチル3メトキシ安息香酸メチルエステルの調製002352Lの3ネック丸底フラスコに75gの2メチル3メトキシメチル安息香酸塩、500mLのCCl4、801gのNBS、そして1gのAIBNを加えた。混合物は撹拌し、2時間徐々に還流した。反応混合物は冷却し、約600mLのCH2Cl2と500mLの水を加えた。混合物は撹拌して浮かんでいる固形物を溶解し、2Lの分離漏斗へ移し振盪した。有機層は分離し、水の層をCH2Cl2で抽出した。水溶液の層は廃棄し、有機層を400500mLの水で抽出しNBSを除去した。水抽出を繰り返し、有機層はMgSO4と木炭上で乾燥し、溶媒は2度蒸発させ、メチル3メトキシ2ブロモメチル安息香酸塩を得た。TLC:RF=058、単一のスポット。1HNMRδ7573705506394393184メトキシ3Hイソベンゾフラン1オン00236500mLの丸底フラスコに1515gの2ブロモメチル3メトキシメチル安息香酸塩、293gのCaCO3、150mLのジオキサン、そして150mLの水を加えた。フラスコは油の浴槽に入れ、混合物は撹拌しながら85°Cで35乃至4時間加熱した。CaCO3は濾過除去し、酢酸エチルと水で洗浄した。濾液に酢酸エチルと水を加え、混合物は分離漏斗で振盪した。水の層は酢酸エチルで2度抽出した。酢酸エチル抽出物は一緒にし、水で1度抽出し、MgSO4上で乾燥し、蒸発させた。その結果、92gの白色結晶である7メトキシベンゾールアクトンが得られた。1HNMRδ7571526393TLCRf046。192シアノメチル3メトキシ安息香酸の調製00237500mLの3ネック丸底フラスコに10gの2ブロモメチル3メトキシメチル安息香酸塩、40gのNaCN、030gのNaI、100mLのCH3CN、そして50mLのDMFを加えた。反応混合物は加熱し、10時間還流した。沈殿物は濾過除去し、溶液は蒸発装置で濃縮した。300mLの水と200mLのエーテルを加え、分離漏斗で振盪した。水の層は100mLのエーテルで2度抽出した。エーテル画分をMgSO4上で乾燥し、濃縮すると、メチル3メトキシ2シアノメチル安息香酸塩が得られた。このエステルを100mLのCH3OH中で激しく撹拌した。Ba2H2Oを加え、混合物を室温で一夜撹拌した。CH3OHは回転式蒸発装置で除去した。150mLの水、200mLのCH2Cl2、そして50mLの6NHClを加え、フラスコ内で撹拌し、残渣を全て溶解した。混合物は分離漏斗へ移し、6NHClでpH12まで酸性化した。CH2Cl2層は分離し、水溶液の層を50mLのCH2Cl2で2度抽出した。CH2Cl2抽出物は一緒にし、MgSO4及び木炭上で乾燥し、濾過し、蒸発させると、88gの白色の固体である2シアノメチル3メトキシ安息香酸が得られた。00238メチル3メトキシ2シアノメチル安息香酸塩:1HNMRδ7674714183943926TLC055002392シアノメチル3メトキシ安息香酸:1HNMRδ755745734121391TLC、Rf036条線1103メトキシ2メチルスルファニルメチル安息香酸、及びペンタフルオロフェニル23メトキシ安息香酸塩の調製00240メチル2ブロモメチル3メトキシ安息香酸塩を102当量のナトリウムメチルメルカプチドと一緒に、メタノール中、室温で撹拌した。GC分析に基づけば30分後に反応は完了した。混合物は水に注ぎ、酢酸エチルで2度抽出した。合わせた有機層を真空処理すると、メチル23メトキシ安息香酸塩が淡黄色の油として残った。GC:DB5、30分、フィルム:025umtinit100T120280C20CminRt630area981HNMRδ746726703418390389204。00241メチル23メトキシ安息香酸塩を10の水溶性メタノールに溶解した15当量のNaOHと一緒に、15時間加熱還流した。溶液は過剰の10硫酸に滴下した。沈殿物は濾過し、空気乾燥すると、収率約92で23メトキシ安息香酸が得られた。TLCは、単一スポットを示していた。0024223メトキシ安息香酸を酢酸エチルに溶解し、11当量のペンタフルオロフェノール11当量のジシクロヘキシカルボジイミドの酢酸エチル溶液に加えた。1時間後、混合物を濾過し、母液は真空処理した。黄色の油状残渣はヘキサンを使って結晶化し、生成物であるペンタフルオロフェニル23メトキシ安息香酸塩を得た。収率100。TLCは、単一スポットを示していた。1113メトキシ2メトキシメチル安息香酸の調製0024350mLのCH3OHに溶解した101gのメチル2ブロモメチル3メトキシ安息香酸塩を入れた100mLのフラスコに、19gのNaOMe25重量溶液を加えた。反応物は室温で2時間撹拌し、回転式蒸発装置で蒸発させてCH3OHを除去した。約200mLの水を残渣に加え、その結果得られた溶液をCHCl3で抽出した。CHCl3抽出物を乾燥し、蒸発させると、627gの粗メチル3メトキシ2メトキシメチル安息香酸塩を得た。1HNMRδ774478338973864337627gのメチル3メトキシ2メトキシメチル安息香酸塩を20のKOH水溶液と一緒に、油の浴槽中、50°Cで45時間、次に室温で16時間撹拌した。反応混合物は3NHClでpH2まで酸性化し、CH2Cl2で抽出した。CHCl3抽出物を乾燥し、蒸発させると、535gの3メトキシ2メトキシメチル安息香酸が得られた。1HNMRδ765740710483388346112N’tブチル3メトキシ2メトキシメチルフェニルヒドラジドの調製00244丸底フラスコに入った430gの3メトキシ2メトキシメチル安息香酸の50mL酢酸エチル溶液に、888gのペンタフルオロフェニルフェノール50重量溶液、次に2191mLのDCC溶液を加えた。室温で2時間撹拌後、TLCは、目的のペンタフルオロフェニルエステル生成物のスポットをRf=064に、出発物質である酸のスポットをRf039に示していた。00245少量の酢酸エチルと茶匙量の無水MgSO4を加え、濾過してDCC及びDCUを除去した。濾液を蒸発させると、94gの生成物が得られた。1HNMRδ339390481出発物質のNMR分析は次のスペクトルを示していた:1HNMRδ4833883400246残りのDCC及びDCUはシリカゲルカラムクロマトグラフィーで除去した。生成物は6及び8の酢酸エチルヘキサン画分で溶出した。収量708gには、ある量のDCC及びDCUが含まれていた。708gのペンタフルオロフェニルエステルを含む60mLのCH2Cl2溶液を367gのtブチルヒドラジン、及び12gのK2CO3を含む60mLの水と一緒に、室温で一夜撹拌した。60mLのCH2Cl2と50mLの水を加え、分離漏斗で振盪した。有機層をMgSO4上で乾燥し、蒸発させると、56gのtブチルヒドラジドが得られた。1HNMRδ74704627387434651184。TLC:、Rf016。生成物はヘキサンを使った粉砕法で更に精製可能である。1133メトキシ2メトキシメチル安息香酸の調製0024710gのラクトンを20mLの75NaOH及び20mLのCH3OHと一緒に、7時間還流させた。メタノールは回転式蒸発装置で除去した。ディーンスタークを設定し、トルエン中で還流させて水を共沸で除去した。トルエンは真空除去し、残渣は真空オーブンで乾燥した。1HNMRδ37444769717200248カルボン酸ナトリウムを15mLのDMFに溶解し、次にCH3Iを加え、混合物を室温で一夜撹拌した。反応を鎮めるため、50mLの飽和NH4CLを加えた。250mLの水を加え、エーテルで抽出して中性及び塩基性の物質を除去した。残りの水溶液は3NHClでpH2まで酸性化し、目的のカルボン酸をエーテルで抽出した。エーテル抽出物を乾燥し、蒸発させると、055gの3メトキシ2ヒドロキシメチル安息香酸塩と3メトキシ2メトキシメチル安息香酸が得られた。1HNMRδ3456388448327174761142アリルオキシメチル3メトキシ安息香酸の調製0024910gの3メトキシ2ヒドロキシメチル安息香酸ナトリウム塩を168gのヨウ化アリル及び50mLのジオキサンと一緒に200mLのフラスコに入れ、2時間還流した。混合物は室温で一夜撹拌した。水を加え、5のNaOH水溶液でpH1011にし、混合物をエーテルで抽出した。エーテルを蒸発させると、ジアリル生成物が得られた。1HNMRは、芳香族の陽子の他に、複雑なアリルシグナルを示していた。水溶液を3NHCLで酸性化し、100mLのエーテルで2度抽出すると、3メトキシ2アリルオキシ安息香酸とアリル3メトキシ2アリルオキシ安息香酸塩が得られた。1HNMRδ3879411535960。TLC::ジアリル、Rf060.モノアリル、Rf031、条線。115メチル3メトキシ2アリルオキシメチル安息香酸塩の調製0025025mLの丸底フラスコに、096gのアリルアルコールと3mLのDMFを加えた。氷の浴槽でフラスコを冷やしながら、磁気撹拌しつつ、080gの60分散NaHを加えた。反応混合物は室温で45分撹拌した。フラスコは氷の浴槽へ置き、2gのDMF及び389gのメチル2ブロモメチル3メトキシ安息香酸塩を少量ずつ加えた。反応物は室温で45時間撹拌した。反応物は150mLのエチルエーテル及び50mLの水と一緒に分離漏斗へ移した。反応混合物を振盪し、エーテル層を分離し、水の層はもう一度50mLのエーテルで抽出した。エーテル層を水で抽出し、MgSO4上で乾燥し、濃縮すると、27gの淡黄色の油が得られた。1HNMRδ73705960515348402390388TLC、Rf0581162アリルオキシメチル3メトキシ安息香酸の調製00251540gの3メトキシ2アリルオキシメチル安息香酸塩の入った200mLの丸底フラスコに、40mLのメチルアルコールを加えた。磁気撹拌しながら、650gの水酸化バリウム一水和物を加えた。反応物は水浴中、45°Cで4時間撹拌した。反応フラスコは回転式蒸発装置へ移し、メタノールを真空除去した。フラスコ内の残渣に150mLの水を加え、残渣の大半が溶解するまで混合物を撹拌した。反応混合物は、水と一緒に大型ビーカーへ移した。反応混合物は塩析を行い、100mLの酢酸エチルで3度抽出した。酢酸エチル抽出物を乾燥し、蒸発させると、438gの粘着性のある生成物、2アリルオキシメチル3メトキシ安息香酸が得られた。1HNMRδ75574071605954524874103878TLCRf038。117ペンタフルオロフェニル2アリルオキシメチル3メトキシ安息香酸塩の調製00252200mLの丸底フラスコに、66gの2アリルオキシメチル3メトキシ安息香酸と40mLの酢酸エチルを加えた。撹拌しながら、2405gの25ペンタフルオロフェノール酢酸エチル溶液を加えた。反応フラスコを水浴中に入れ、撹拌しながら、DCCを少しずつ加えた。撹拌は室温で一夜継続した。反応物はワットマン濾紙541で2度濾過し、DCU沈殿物を除去した。酢酸エチル溶液を濃縮すると、128gが得られ、DCCとDCUの存在を示していた。この点は、Rf値072の他に極性の劣る化合物の存在を示すTLCにより確認された。1HNMRδ77745715605953514884834063901182アリルオキシメチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルヒドラジドの調製00253189gのペンタフルオロフェニルエステルを含む50mLのCH2Cl2溶液の入った丸底フラスコに、91gのtブチルヒドラジンHCl、次に2016gのK2CO3を含む50mLの水溶液を加えた。混合物を室温で24時間撹拌した。50mLの水を加え、CH2Cl2層を分離し、水の層を100mLのCH2Cl2で2度抽出した。CH2Cl2画分をMgSO4上で乾燥し、濃縮すると、975gのN2アリルオキシメチル3メトキシフェニルN’tブチルヒドラジドが得られた。1HNMRδ11513874124685155355197074TLC:Rf02511935ジメチル安息香酸N’Ntertブチルヒドラジドの調製002542gの2アリルオキシメチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルヒドラジドを溶解した15mLのCH2Cl2を含むフラスコに、127gの35ジメチルベンゾイル塩化物を含む10mLのCH2Cl2溶液と284gのK2CO3を含む30mLの水溶液を加えた。混合物は室温で24時間撹拌した。反応混合物は希釈し、分割し、有機層は乾燥して溶媒を真空除去した。生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。25の酢酸エチル:ヘキサン画分で溶出すると、240gの精製された35ジメチル安息香酸N’Ntertブチルヒドラジドが得られた。1HNMRδ727170569559525345393802245154712035ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製00255157gのアリルエーテルを50mLのCH3OHに溶解した。600mgのPdC及び20滴の1HClO4H2Oを加え、4時間還流した。CH2Cl2と茶匙一杯の無水MgSO4を加え、濾過した。濾液を蒸発乾固すると、162gの粗ベンジルアルコールが得られた。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。5060の酢酸エチルヘキサンで溶出すると、125gの白色固体である35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドが得られた。1HNMRδ71705698696542379223157TLCRf02012135ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製0025650mLの丸底フラスコに、400mgの塩化オキサリルと5mLのCH2Cl2を加えた。混合物は撹拌し、アセトンドライアイス浴槽で‐70°Cに冷却した。616620mgのDMSOを含む5mLのCH2Cl2溶液を徐々に加え、‐70°Cで30分間撹拌した。405mgのRG115371を含む4mLのCH2Cl2溶液を加え、‐70°Cで30分間撹拌した。ドライアイスの浴槽を除き、混合物を30分かけて室温まで温めた。混合物は再び‐70°Cまで冷却し、160gのトリエチルアミンを加えてから、室温まで温めた。反応を鎮めるため6mLの水を加えた。CH2Cl2をフラスコに加え、合計100mLのCH2Cl2と一緒に分離漏斗へ移した。50mLの水を加え、水溶液の層はもう一度CH2Cl2で抽出した。CH2Cl2抽出物は希HClH2Oで抽出し、Et3NとDMSOを除去した。CH2Cl2抽出物を乾燥し、濃縮すると、約044gの生成物が得られた。TLC:Rf047。生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使い、35-40の酢酸エチルヘキサン溶液で溶出すれば精製できる。1HNMRδ806972635454138522815912235ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製00257400mgのRG115490を含む50mLのフラスコに、10mLのCH3CN、1mLのDMF、そして100mgのNaIを加えた。混合物は4時間還流した。反応物は、分離漏斗に入っている250mLのエーテル及び75mLの水に注いだ。混合物は激しく振盪し、エーテル層を約50mLの水で抽出した。エーテル抽出物はMgSO4及び木炭上で乾燥し、濾過し、溶媒を除去すると、250mgの黄色の固体が得られた。TLCRf=050。1HNMRδ697363434238822816212335ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製00258300mgのRG115490を15mLのジオキサンに溶解した溶液を含む小さいフラスコに、CH3NH2ジオキサン溶液を加えた。反応物は2時間還流した。溶媒はrotovap上で除去し、CH2Cl2に再度溶解し、濾過し、CH2Cl2可溶物質を濃縮した。メチルアミンは、カラムクロマトグラフィーを使い、まず酢酸エチルで溶出し、次に02のトリエチルアミンを含む4:1酢酸エチル:ヘキサンをカラムに流した後、約02のトリエチルアミンを含む9:1酢酸エチル:メタノールで溶出する事により得られた。生成物の全収量は183mg。TLC:Rf023。1HNMRδ736938036282422815912435ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製00259250mgのRG115490を20mLの小瓶に加えた。更に3mLのTHF及び031mLの2MジメチルアミンTHF溶液を加えた。混合物は室温で4時間撹拌した。溶媒はrotovap上で除去し、固体は室温で撹拌しながら、ヘキサンで細かく砕いた。35ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジド:1HNMRδ716939326825422416112535ジメチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製00260200mgのRG115371を含む4mLの無水CH2Cl2の入った20mLの小瓶に、200mgのEt3Nと10mgのCH3COClを加えた。混合物は室温で一夜撹拌した。TLCは反応が未完了である事を示していた。100mgの塩化アセチルと適量のピリジンを加え、1時間還流した。反応混合物はCH2Cl2に注ぎ、希釈したK2CO3水溶液、次に希塩酸水溶液で抽出した。CH2Cl2抽出物を乾燥し、濃縮すると、粗酢酸塩が得られた。物質はシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使い、1:1酢酸エチル:ヘキサンで溶出する事により精製した。1HNMRδ73696448463795232031581262メタンスルフィニルメチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジドの調製002613メトキシ2メチルスルファニルメチル安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジドのCH2Cl2溶液を10当量のmクロロ過安息香酸と一緒に、室温で撹拌した。反応は5分以内に完了し、TLCで確認された。反応混合物は飽和NaHCO3で洗浄し、有機層を真空処理した。残渣は12mLの1:1エーテル:ヘキサンと混ぜ、溶液はピペットで除き、生成物を真空乾燥した。1272メタンスルホニルメチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルN’ヒドラジドの調製00262RG115172を二塩化エチレンに溶解した。12当量のmクロロ過安息香酸を加え、混合物を加熱還流した。反応は、混合物が還流を始める時までに完了していた。溶液は、周囲の温度まで冷却した後、飽和NaHCO3で洗浄した。有機層は真空処理した。残渣は12mLのエーテルと混合し、溶液はピペットで除き、生成物を真空乾燥した。128246トリメチルピリジン1オキシドの調製00263磁気撹拌装置と温度計を付けた500mLの丸底フラスコに、367gの773クロロ過安息香酸と200mLの塩化メチレンを加えた。このスラリー状の物質は5°Cに冷やし、温度を5-10°Cに維持しながら、166gのコリジンを50mLの塩化メチレンに溶解した溶液を30分かけて加えた。混合物は1時間かけて室温まで温めてから、一夜撹拌した。粗反応混合物は200gの塩基アルミナを含むビーカーに徐々に移した。その時混合物の温度が僅かに上昇した。混合物は撹拌し、濾過し、アルミナは300mLの2:1CHCl3:CH3OHと混合した。溶媒は回転式蒸発装置を使い、室温で除去した。アルミナをエーテルで洗浄し、溶媒を除くと、247gの透明な液体となり、それはやがて白色ワックス状の固体となった。ある種の塩が存在しているので、収量は僅かに高目であった。TLCは、小さいスポットの他に単一の大きいスポットを示していた。大きいスポットは目的のNオキシドであった。1HNMRδ6962519and228小さいスポットは出発物質であるコリジンに対応している。1HNMRδ678248and226129メタノールの調製00264窒素雰囲気中、分子ふるい上で乾燥させた200mLの塩化メチレンに181gのコリジンNオキシドを溶解した。混合物は5°Cに冷やした。トリフルオロ無水酢酸を少しずつ滴下し、反応混合物を5-10°Cに維持した。トリフルオロ無水酢酸を加えた後、混合物は室温まで温め、それから室温で一夜撹拌した。その後のTLCにより、出発物質であるNオキシドが不在である事が示された。溶媒を除去すると、黄色のワックス状の固体である酢酸塩生成物が得られた。1HNMRδ2528565and745混合物は氷の浴槽で冷やし、10のKOHメタノール溶液100mLを加えた。溶液のpHをチェックし、もし溶液が塩基性であれば、追加のKOHを加えて溶液を塩基性にした。溶液は10-15°Cで30分撹拌し、室温で更に6時間撹拌した。溶媒を除去すると、74gの黄色茶色のシロップが得られた。アルコール生成物は、シリカゲルクロマトグラフィーを使い酢酸エチルクロロホルムで注意して溶出すれば、精製可能である。TLC:Rfは、メタノール酢酸エチルで展開したシリカゲルで055であった。1HNMRδ667467250and231殆どの場合、粗アルコールは、以後の酸化反応にそのまま使用可能なほど十分精製されている。13046ジメチル2ピリジンカルボン酸の調製0026546ジメチル2ピリジンメタノールを100mLの水に加え、05°Cで撹拌した。温度を510°Cに維持しながら、53gの過マンガン酸カリウムの100mL水溶液を30分かけて少しずつ加えた。その結果、黒色の固体が生じた。混合物は更に30分、510°Cで撹拌し、それから室温で30分間撹拌した。混合物は濾過し、二酸化マンガンをメタノールで洗浄した。メタノール洗浄液は水抽出物と合わせ、溶媒は除去した。その結果生じた黄褐色の固体は水に再び溶解し、クロロホルムで洗浄した。水の層は分離し、水を除去すると、54gの46ジメチル2ピリジンカルボン酸が得られた。生成物はHPLCMSで特徴が表れた。131ピラジン2カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製0026620mLの小瓶を使い、0120gのNaHを6mLのDMFと混ぜた混合物を撹拌し、それに0238gの2エチル3メトキシ安息香酸N’tertブチルヒドラジドを徐々に加えた。反応物は室温で1時間撹拌した。0278gのペンタフルオロフェニルエステルピラジン2カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステルのDMF溶液2mLを徐々に加えた。反応物は24時間撹拌した。反応物は、酢酸エチルを使い、100mLの水と100mLのエチルエーテルの入った分離漏斗に移した。反応混合物は振盪し、有機層をMgSO4上で乾燥し、濃縮乾固すると、ピラジン2カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドが得られた。1HNMRδ:の収率が得られる。それ以下、例えば1:2の場合の収率は70である。DMFはDMSOより優れた溶媒である。反応の進行度合いは、1HNMRの-OCH3シグナルの強度を調べる事によりモニターした。1HNMR1HNMRδppm905868458471696453824195162095ピラジン2カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステル:1HNMRδppm9498958871321Hインダゾール3カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製0026710mLの丸底フラスコに、0328gのインダゾール3カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステル、0244gのトリフェニルメタン、0227gの23ジクロロ‐56ジシアノ‐14ベンゾキノン、及び4mLの乾燥トルエンを加えた。反応混合物は78時間還流した。反応混合物は酢酸エチルで分離漏斗に洗い込み、水で洗浄した。有機層を乾燥し、濃縮すると、045gの1トリチル1Hインダゾール3カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステルが得られた。NMRは生成物の存在を示していたが、TLCは出発物質であるペンタフルオロフェニルエステルと生成物の存在を示していた。生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使い、5の酢酸エチルヘキサンで溶出する事により精製した。精製された生成物030gを得た。1HNMRδ82747065200268017gの1トリチル1Hインダゾール3カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステルのCH2Cl2溶液3mLを、2のTFAと1の水を含む100mLのフラスコに、20mLのCH2Cl2と一緒に加えた。反応物は室温で90分撹拌した。TLCは50の反応を示していた。更に15mLのTFAH2OCH2Cl2を加え、1時間撹拌を継続した。反応物は分離漏斗に移し、約05MのK2CO3H2Oで洗浄した。CH2Cl2層を乾燥し濃縮すると、粗1Hインダゾール3カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドが得られた。TLC:生成物、Rf=033;出発物質、Rf068。生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使い、45の酢酸エチルヘキサンで溶出する事により精製した。1HNMRδ86827472716967380242016520851333Hベンゾイミダゾール5カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製00269約120mgの3トリチル3Hベンゾイミダゾール5カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドを35mLのCH3OHに溶解し、氷酢酸2滴と020gのPdCと一緒に水素添加瓶に加えた。水素添加は、瓶を6時間振盪し、その後16時間水素圧の下に置く事により行った。PdCは濾過して除去し、メタノールは蒸発装置を使って除去した。残渣はCH2Cl2と一緒に撹拌し、CH2Cl2はデカントで除去した。CH2Cl2を蒸発させると、固体生成物が得られ、NMRでトリフェニルメタンと同定された。残渣は希KOHH2Oと一緒に撹拌し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを乾燥し、回転式蒸発装置で濃縮すると、生成物である3Hベンゾイミダゾール5カルボン酸NtertブチルN’ヒドラジドを得た。生成物のNMR分析は、メトキシグループとtブチルグループの吸収が、出発物質の377と159に対し、369及び161で起きている事を示していた。134N’2エチル3メトキシベンゾイルNtertブチルNヒドラジドの調製00270N’2エチル3メトキシベンゾイルNtブチルヒドラジドを2mLのDMFに溶解した。それにtブトキシドカリウムを加え、5分間磁気を使って撹拌した。Nメチルインドール2カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステルを加え、混合物を100°Cに加熱した。3時間後、TLCが示すように、反応は完了した。混合物は周囲の温度まで冷やし、10mLの水に注いだ。塩化メチレンによる2度の抽出物を合わせ、蒸発させた。残渣は約2mLの1:1エチルエーテル:ヘキサンと混合した。母液はピペットで除去し、残渣は真空乾燥した。生成物は黄褐色の固体で、重量は140mgであった。LCMS分析は構造を確定し、精製度が91であると推定した。13526ジメトキシニコチン酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製0027120gの26ジメトキシイソニコチン酸を100mLのトルエンに溶解し、1滴のジメチルフォルムアミドを加えた。155gの塩化チオニルを加え、溶液を4時間還流した。トルエンと過剰の塩化チオニルは真空除去し、26ジメトキシイソニコチノイル塩化物は精製なしで使用した。00272撹拌棒の付いた1オンスの小瓶に1mLの1MK2CO3を加えた。0250gの5メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸N’tertブチルヒドラジドを2mLの塩化メチレンに溶解し、その水溶液に加えた。26ジメチルイソニコチノイル塩化物を加え、混合物は室温で一夜撹拌した。水溶液の層を除き、有機層を2mLの1MK2CO3溶液、次に2mLの水で2度洗浄した。水の層を除き、有機層をMgSO4上で乾燥した。有機層を濾過し、除去した。生成物である26ジメトキシニコチン酸NtertブチルN’ヒドラジドは、1:1エーテル:ヘキサンを使った粉砕法、あるいは’クロマトグラフィーで精製した。1HNMRδ16193942626777831364ヒドロキシ35ジメトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドの調製002734アセトキシ35ジメトキシ安息香酸を3mLのジメトキシエタン中の塩化チオニルと一緒に加熱した。15時間後、混合物を真空処理すると、16gの4アセトキシ35ジメトキシベンゾイル塩化物が油として残った。1HNMRδ226389734002744アセトキシ35ジメトキシベンゾイル塩化物と5メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸N’tertブチルヒドラジドを3mLのジクロロメタンに溶解し、15mLの1M炭酸ナトリウム水溶液と一緒に、周囲の温度で撹拌した。2時間後、層を分離し、有機層を蒸発させた。固体の残渣を1:1エーテル:ヘキサンで洗浄すると、360mgの酢酸4NtertブチルN’ヒドラジノカルボニル26ジメトキシフェニルエステルが残った。1HNMRδ1602062323774260866367400275酢酸4NtertブチルN’ヒドラジノカルボニル26ジメトキシフェニルエステルを28の水性アンモニアを含むメタノールに溶解した。混合物は周囲の温度で、週末中撹拌した。沈殿物を濾過すると、110mgの白色固体である4ヒドロキシ35ジメトキシ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドが得られた。1HNMRδ1592023854215657622658681137化合物RG115613及びRG115429の調製00276250gの2エチル3メトキシベンゾイルN’tertブチルヒドラジドを含む100mLの丸底フラスコに、15mLの塩化メチレン、260gの3ブロモメチル5メチルベンゾイル塩化物の塩化メチレン溶液5mL、そして276gの炭酸カリウム水溶液15mLを加えた。反応混合物は室温で一夜撹拌し、20mLの塩化メチレンで希釈してから分離漏斗へ移した。塩化メチレン層を分離、乾燥し、溶媒を真空除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して、401gのNNtertブチルN’ヒドラジドを得た。1HNMRδ7417170260826084413782423122516010100277250mLの丸底フラスコに入った400gのNNtertブチルN’ヒドラジドに、40mLのジオキサン、40mLの水、そして434gの炭酸カルシウムを加えた。反応フラスコは85°Cの油の浴槽に入れ、反応物は18時間加熱撹拌した。反応混合物を冷やし、酢酸エチルと一緒に大型フラスコへ移した。ジオキサンの大半は蒸発していた。反応混合物は約100mLの酢酸エチルと一緒に振盪し、濾過した。酢酸エチル層は分離し、水溶液の層を酢酸エチルで2度抽出した。酢酸エチル抽出物を乾燥し、蒸発させると、207gのNNtertブチルN’ヒドラジドが得られた。1HNMRδ7787174696686084533772352322216009600278250mLの丸底フラスコに入った200gのNNtertブチルN’ヒドラジドに、100mLの塩化メチレンと116gのクロロクロム酸ピリジニウムを加えた。反応混合物は約1時間還流した。その時点で、TLCは生成物の形成を示していた。反応混合物は約20mLに濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーを使い、3035の酢酸エチルヘキサン溶液で溶出すると、175gの3フォルミル5メチル安息香酸NtertブチルN’ヒドラジドが白色固体として得られた。1HNMRδ99376787068261937724223201620900027920mLの小瓶に入った100mgのNNtertブチルN’ヒドラジドに、2mLのメタノール、112mgのセミカルバジドHCl、02gのトリエチルアミン、そして1滴の氷酢酸を加えた。反応混合物は50°Cに調節したホットプレート上で約3時間、それから室温で48時間、磁気を使って撹拌した。溶媒は窒素流で蒸発させ、その結果得られた残渣は20mLのクロロフホルムに溶解し、希塩酸で抽出した。クロロホルム抽出物は乾燥し、溶媒は真空除去し、残渣を60°Cの真空オーブンで乾燥した。残渣は冷却し、ヘキサンで細かく砕くと、NNtertブチルN’ヒドラジドのセミカルバジドが81mg得られた。1HNMRδ8986737570368638376326241951570950028020mLの小瓶に入った100mgのNNtertブチルN’ヒドラジドに、2mLのメタノール、103mgのオキサミックヒドラジドHCL、そして1滴の氷酢酸を加えた。反応混合物は50°Cに調節したホットプレート上で約3時間、それから室温で48時間、磁気撹拌した。溶媒は窒素流で蒸発させ、その結果得られた残渣は60°Cの真空オーブンで乾燥した。残渣は冷却し、ヘキサンで細かく砕くと、NNtertブチルN’ヒドラジドのオキサミックヒドラゾンが70mg得られた。1HNMRδ8586797557573706953732223519515108013835ジクロロ4フルオロ安息香酸の調製00281N’N’tertブチルヒドラジンは、米国特許5530028に従って調製できる。要するに、実施例8の生成物と35ジクロロ4フルオロベンゾイル塩化物は実施例9に従って調製し、その結果、N’N’tertブチルヒドラジンを生成できる。0028235ジクロロ4フルオロベンゾイル塩化物は、次の方法で調製可能である:10NaOH水溶液トラップを通したチッソパージ付き丸底フラスコに、35ジクロロ4フルオロベンゾ三フッ化物、濃硫酸、そして最後にクロロスルホン酸を加えた。反応物は直ちに泡立ちを開始した。泡立ちが治まった後、混合物を80°Cで1時間加熱し、室温まで冷やし、それから撹拌している氷水に注意して加える。これを塩化メチレンで2度抽出した。合わせた抽出物は水と塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、蒸発させると、白色の固体である35ジクロロ4フルオロ安息香酸が得られた。収率49。1HNMRδ7950028335ジクロロ4フルオロ安息香酸を1当量を超える塩化チオニル、及び1滴のDMFニートと一緒に又はCHCL3の溶液として、還流した。溶媒と揮発性の副産物を真空除去すると、35ジクロロ4フルオロベンゾイル塩化物が得られた。13935ジメトキシ4メチル2ニトロ安息香酸NtブチルN’ヒドラジドの調製0028435ジメトキシ4メチル安息香酸を27当量の無水酢酸及び005モル当量の濃硫酸ジクロロメタン溶液と一緒にして、スラリー状にした。10°Cに冷やした後、温度を15°C未満に維持しながら、105当量の70硝酸を滴下した。30分後、混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで2度抽出した。合わせた有機層は、密度の高いスラリー状になるまで、濃縮した。スラリーは濾過し、固体は氷冷ジクロロメタンで洗浄した。更に母液を濃縮すると、2番目の収穫物が得られた。35ジメトキシ4メチル2ニトロ安息香酸の全収率は約80であった。1HNMRδ73440038522300285周囲の温度で、反応が完了するまで、35ジメトキシ4メチル2ニトロ安息香酸を11当量の塩化チオニルと一緒に、ジメトキシエタン中で撹拌した。溶媒と過剰の塩化チオニルは大気圧下で蒸留し、残渣はジクロロメタンに溶解した。この溶液を1M炭酸カリウム水溶液と5メチルベンゾ14ジオキサン6安息香酸N’tブチルヒドラジドの混合物のジクロロメタン溶液に加えた。3時間後、水とジクロロメタンを加えた。有機層を除去し、真空処理した。残渣を1:1エーテル:ヘキサンで細かく砕くと、35ジメトキシ4メチル2ニトロ安息香酸NtブチルN’ヒドラジドが得られた。TLCは、単一スポットを示していた。1HNMRδ78470268668261139037921616014035ジメチル安息香酸N’Nヒドラジドの調製00286tブチルカルバジン酸塩と200mLのCH2Cl2を丸底フラスコに加えた。350mLの水に溶解した炭酸カリウムをそのフラスコに加え、混合物を氷で冷却しながら15分間撹拌した。約200mLのCH2Cl2に入った23ジメチルベンゾイル塩化物を500mLの分離漏斗から30分かけて滴下した。反応物は一夜撹拌し、反応混合物は1Lの分離漏斗に注ぎ、CH2Cl2層を分離した。次に150mLの水を加え、混合物は150mLのCHCl3で2度抽出した。合わせた有機層は100mLの水、それから1NHClで逆抽出し、ヒドラジドを除いた。有機層を乾燥し、木炭と一緒に撹拌し、溶媒を真空除去すると、明るい黄褐色の固体であるN’ヒドラジンカルボン酸tertブチルエステルを得た。1HNMRδ7772271785235231500287N’ヒドラジンカルボン酸tertブチルエステルを500mLの丸底フラスコに入れた。徐々に撹拌しながら、200mLのトリフルオロ酢酸を徐々に加えると、ガスが激しく発生した。反応混合物を室温で2時間撹拌した。混合物に水を徐々に加えた。徐々に撹拌しながら、2Lビーカーに入っている1Lの冷却2MK2CO3溶液に混合物を徐々に加えた。約200mLの10NaOH溶液と250mLのCH2Cl2を加えた。反応混合物は大型の分離漏斗に移し、徐々に振盪した。水溶液の層はCHCl3で抽出し、抽出物を乾燥し、蒸発させると、白色の固体が得られた。それを50°Cの真空オーブンで乾燥すると、3172gの23ジメチル安息香酸ヒドラジドを得た。1HNMRδ773400227100288200mLの丸底フラスコを使って、790gの23ジメチル安息香酸ヒドラジドを60mLのメタノールに溶解し、3滴の氷酢酸を加えた。反応混合物に600gの22ジメチルペンタン3オンを加え、反応物を室温で24時間撹拌した。生成物であるヒドラゾンは単離されなかったが、直接還元を行った。反応混合物に氷酢酸とシアノボロハイドライドナトリウムを加え、室温で24時間撹拌した。約50mLの10NaOH水溶液を加え、CH3OHの大半を回転式蒸発装置で除去した。反応物は水で希釈し、生成物をCH2Cl2で抽出した。有機層を乾燥し、蒸発させると、1187gの23ジメチル安息香酸N’ヒドラジドが得られた。1HNMRδ707323222961713116TLC:Rf057は90以上精製されている事を示していた。更に精製する場合は、シリカゲルクロマトグラフィーを使い、20の酢酸エチルヘキサン溶液で溶出する。0028923ジメチル安息香酸N’ヒドラジドを小型丸底フラスコに入った15mLのCH2Cl2に溶解した。K2CO3水溶液を加えた。10mLのCH2Cl2に溶解した35ジメチルベンゾイル塩化物を加え、反応混合物は室温で24時間撹拌した。反応混合物を分離漏斗へ移し、CH2Cl2で抽出した。。抽出物を乾燥し、蒸発させると、約1gの白色の固体が得られた。これをシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。15の酢酸エチルヘキサン溶液で溶出すると、精製された生成物である35ジメチル安息香酸N’Nヒドラジドを得た。1HNMRδ=69574461222418116181310814135ジメチル安息香酸NN’ヒドラジドの調製002901034gの3メトキシ2メチル安息香酸ヒドラジドを100mLのメタノールに溶解し、撹拌した。980gの22ジメチル3ペンタノン、次に3滴の氷酢酸を加えた。混合物を48時間撹拌した。粗混合物はpH3にした。384gのNaCVBH3を加えた。スラリー状の物質を室温で一夜撹拌し、それからメタノールを除去した。100mLの10NaOHと100mLの塩化メチレンを加えた。混合物は振盪し、塩化メチレン層は除去した。水溶液の層を75mLの塩化メチレンで2度洗浄した。塩化メチレン層は一緒にして乾燥した。溶媒を除去すると、目的生成物である淡黄色の液体が得られた。この生成物は、10のPdCでヒドラジドを還元しても得られた。精製は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを使い、3:2ヘキサン:エーテルで溶出する事により行なった。1HNMRδ10111215213849667072TLC:Rf=045。0029162gの3メトキシ2メチル安息香酸ヒドラジドを35mLの酢酸エチルに溶解し、0°Cに冷やした。74mLの1NK2CO3水溶液を加え、混合物を撹拌した。56gの35ジメチルベンゾイル塩化物を40mLの酢酸エチルに溶解し、この溶液を15分かけてヒドラジド混合物に加えた。混合物を室温まで温め、一夜撹拌した。水溶液の層は除き、有機層を75mLの1NK2CO3水溶液、次に100mLの水で洗浄した。水の層は除き、有機層を乾燥し、除去すると、オフホワイトの固体が得られた。この物質を25mLの1:1ヘキサン:エーテルで3度粉砕すると、987精製された最終生成物を得た。1HNMRδ071521376871TLC:Rf062。14235ジメトキシ4メチル安息香酸NN’ヒドラジドの調製0029220mLの小瓶に、161mgの35ジメトキシ4メチルベンゾイル塩化物、5mLの3メトキシ2メチル安息香酸N’ヒドラジド溶液、そして15mLの25K2CO3水溶液を加えた。反応混合物は室温で24時間撹拌した。反応混合物をCH2Cl2を使って分離漏斗へ移し、希NaHCO3水溶液と一緒に振盪した。有機層を乾燥、濃縮し、シリカクロマトグラフィーを使い、25の酢酸エチルヘキサンで溶出すると、100mgの精製された生成物である35ジメトキシ4メチル安息香酸NN’ヒドラジドを得た。1HNMRδ6672625463839521191613091214322ジメチルヘプタン3オールの調製00293600mLのTHFに溶解した20gのpivaldehydeを磁気撹拌棒、温度計、ゴム製ストッパーの付いた2Lの3ネック丸底フラスコに加えた。容器を窒素下に保った。反応混合物はドライアイスアセトンの浴槽で‐65°Cに冷却した。温度を‐55°C未満に保ちながら、112mLの25MBuLiヘキサン溶液を20mLのガラス製シリンジで5mLずつ徐々に加えた。反応物は‐60°Cで1時間撹拌してから、1時間かけて‐5°Cまで温めた。反応物は再度‐60°Cまで冷却し、温度を‐50°C未満に維持しながら、NH4ClH2O溶液で徐々に鎮めていった。100mLの水を加え、反応物を室温まで温めた。THFは、油が観察されるまで、25°Cの浴槽で回転式蒸発装置を使って除去した。生成物はエチルエーテルで抽出し、エーテルを乾燥し、注意して蒸発させると、310gの22ジメチルヘプタン3オールが得られた。この物質は以後の酸化反応に直接使用した。1HNMRδ32121709308914422ジメチルヘプタン3オンの調製00294磁気撹拌棒付きの500mL丸底フラスコを使って、22ジメチルヘプタン3オールを350mLのCH2Cl2に溶解した。フラスコは氷で部分的に冷却した。激しく撹拌しながら、766gのクロロクロム酸ピリジニウムを加えた。反応物は黒色に変わり、僅かに温度が上昇した。反応混合物は室温で24時間撹拌した。溶液は黒色の沈殿物からデカントで除き、沈殿物はヘキサンで洗浄した。有機抽出物は一緒にし、直接シリカゲルクロマトグラフィーを使用した。。CH2Cl2ヘキサン、次に10の酢酸エチルヘキサン画分で溶出すると、生成物である22ジメチルヘプタン3オンが2919g得られた。収率88。1HNMRδ2481541281130901453メトキシ2メチル安息香酸N’ヒドラジドの調製00295284gの22ジメチルヘプタン3オン、360gの2メチル3メトキシ安息香酸ヒドラジド、20滴の氷酢酸、そして40mLの100エチルアルコールを4時間還流し、それから室温で24時間撹拌した。TLCは、僅か35の反応である事を示していた。従って、反応混合物を更に6時間還流した。TLCは、約80の反応である事を示した。反応混合物に35mLの氷酢酸と189gのNaCNBH3を加えた。混合物を室温で2時間撹拌し、1時間還流した。50mLの水を加え、反応混合物が塩基性を示すまで、15NaOHを加えた。アルコールの大半を回転式蒸発装置で除去し、生成物をCHCl3で抽出すると、428gの粗物質が得られた。TLCは、RF054に生成物であるヒドラジドの存在を示していた。シリカグラジエントクロマトグラフィーで精製した。2540の酢酸エチルヘキサン画分で溶出すると303gの生成物が得られた。55°Cの真空オーブンで乾燥し、揮発性物質を除去すると、269gの3メトキシ2メチル安息香酸N’ヒドラジドが得られた。1HNMRδ7270569493842523121809709200296250mLのフラスコで、1785gの4メトキシベンジルカルバジン酸塩を50mLのCH2Cl2に溶解し、氷水で冷却した。80mLの水に溶解した2142gの炭酸カリウムを加えた。反応混合物を氷の浴槽で撹拌しながら、170gの5メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボニル塩化物のCH2Cl2溶液60mLを徐々に加えた。反応混合物は室温で一夜撹拌し、それから200mLのCH2Cl2と200mLの水で分離漏斗へ移した。振盪後、浮かんでいる白い沈殿物を濾過除去し、水で洗浄し、真空オーブンで乾燥すると、291gのN’ヒドラジン安息香酸4メトキシベンジルエステルが得られた。CH2Cl2溶液を乾燥し、濃縮すると、519gの残渣が得られた。残渣には、最初の酸塩化物である4メトキシベンジルカルバジン酸塩と生成物がいくらか含まれていた。TLCRf038。1HNMRδ746751394279381230300297500mLのフラスコで、186gのN’ヒドラジン安息香酸4メトキシベンジルエステル、72mLの濃塩酸、そして108mLのジオキサンを混合した。フラスコは80°Cの油浴に入れ、2時間機械的に撹拌した。反応混合物は氷水で冷やし、氷水に注いでから、分離漏斗へ移した。この反応混合物‐水溶液は150mLのCH2Cl2で2度抽出し、酸と中性物質を除去した。水溶液の層は20のNaOH溶液で塩基性にし、150mLの酢酸エチルで4度抽出した。酢酸エチル抽出物をMgSO4上で乾燥し、濃縮すると、45gの5メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸ヒドラジドが得られた。1HNMRδ7068567442827811465メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸N’ヒドラジドの調製00298086gの5メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸ヒドラジド、114gの22ジメチルペンタン3オン、30mLのエチルアルコール、そして20滴の氷酢酸を6時間還流した。TLCは、約60が5メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸ヒドラジドに変わっている事を示していた。反応混合物は冷却し、3mLの氷酢酸、次に063gのシアノボロハイドライドナトリウムを加え、反応物は室温で3時間撹拌した。アルコールの大半は回転式蒸発装置で除去した。30mLの水を加え、反応混合物が塩基性を示すまで、10のNaOHH2Oを加えた。混合物は酢酸エチルで何度も抽出した。酢酸エチル抽出物を乾燥し、蒸発させると、12gの粗物質が得られた。生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを使い、2030の酢酸エチルヘキサンで溶出する事により精製した。約046gの精製された5メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸N’ヒドラジドが得られた。TLC:Rf046。1HNMRδ7168567148429425242291713115098147RG11585835ジメチル安息香酸N’Nヒドラジドの調製00299250mLの丸底フラスコを使い、238gのtブチルカルバジン酸塩を50mLのCH2Cl2に溶解し、0°Cに冷やした。K2CO3水溶液を調製し、反応混合物に加え、反応混合物は再び0°Cに冷やした。363gの5エチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボニル塩化物を40mLのCH2Cl2に溶解し、分離漏斗から15分かけて滴下した。反応混合物は室温で3日間撹拌した。反応混合物はCH2Cl2と水を使って分離漏斗へ移した。水の層はCH2Cl2で十分に抽出した。CH2Cl2抽出物は05NHClで抽出し、乾燥し、蒸発させた。残渣を真空オーブンで更に乾燥すると、515gの黄褐色の固体であるN’ヒドラジン安息香酸tertブチルエステルが得られた。TLCはRf043に単一のスポットを示し、NMRは極めて精製された生成物である事を示していた。1HNMRδ75706754282761511800300515gのN’ヒドラジン安息香酸tertブチルエステルを200mLの丸底フラスコに入れた。約20mLのトリフルオロ酢酸を加え、反応混合物を室温で24時間撹拌した。約40mLの水を加え、撹拌しながら、酸が中和されるまで、10の冷NaOHH2Oを徐々に加えた。反応混合物は分離漏斗へ移し、徐々に振盪しながら、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を乾燥し、蒸発させると、粘着性のある黄色の半固体が得られた。この物質を50°Cの真空オーブンに約1時間入れると、462gの5エチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸ヒドラジドが得られた。TBoc開裂はニートトリフルオロ酢酸を使うと最も効率が良かった。補助溶媒の使用は、収率を必ず極端に下げる結果となった。1HNMRδ706836714282761611700301112gの5エチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸ヒドラジド、137gの22ジメチルペンタノン3、30mLのエタノール、そして20滴の氷酢酸を6時間還流し、5エチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸ヒドラジドを生成し、それをそのまま使用した。冷やした反応混合物に3mLの氷酢酸と063gのNaCNRH3を加えた。反応物は室温で24時間撹拌した。25mLの水を加え、アルコールの大半は回転式蒸発装置で除去した。次に、反応混合物が塩基性になるまで、10のNaOHH2Oを加えた。生成物は酢酸エチルで抽出し、それを乾燥し、蒸発させると、161gの残渣が残った。精製された5エチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸N’ヒドラジドは、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを使い、25の酢酸エチルヘキサンで溶出して得た。TLC:Rf=053、11酢酸エチル:ヘキサン。1HNMRδ7168674272824171312115097003020214gの5エチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸N’ヒドラジド、151mgの35ジメチルベンゾイル塩化物、7mLの25のK2CO3H2O、そして7mLのCH2Cl2を20mLの小瓶に加え、室温で24時間撹拌した。反応混合物は分離漏斗へ移し、希NaHCO3とCH2Cl2を加えた。CH2Cl2層は分離し、水の層をCH2Cl2で2度抽出した。CH2Cl2抽出物をMgSO4上で乾燥し、蒸発させると、059gの白色の残渣を得た。カラムクロマトグラフィーを使い、15mLの20酢酸エチルヘキサンで溶出すると、約350mgの35ジメチル安息香酸N’Nヒドラジドが得られた。1HNMRδ70570666274654252923201551712509120900303以下の化合物は同様の方法で調製した。0030435ジメトキシ4メチル安息香酸NN’ヒドラジド。TLC:Rf=045、3:2。00305RG115851、35ジメチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ777227170870687628473782281813161211095095TLC:Rf=056。00306RG115852、35ジメトキシ4メチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ70570685665625473893782101861316106099094TLC:Rf=055。0030735ジメチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ705706663464252251851518131012TLC:Rf=052。0030835ジメトキシ4メチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ6866266627464253843782118716130912TLC:Rf=045。0030935ジメチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ705706663474223181317111150950031035ジメトキシ4メチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ675662666254742537838428523720718613170031135ジメトキシ4メチル安息香酸N’Nヒドラジド。1HNMRδ68665666254642537938429235211319131113094TLCRf048。0031235ジメチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ70570659618474274252852321131811115095TLCRf053。0031335ジメトキシ4メチル安息香酸NN’ヒドラジド。1HNMRδ6756626662474253843782419521121811095095TLC054;TLC:Rf=054。148RG115665の調製00314カルバジン酸ベンジルを丸底フラスコ内のDMF50mLに溶解した。溶液は95100°Cに加熱した。2つの分離した追加漏斗から、エチル2ブロモイソブチレートとピリジンを別々に、しかも同時に、30120分かけて滴下した。反応の完了に必要であれば、加熱を継続した。反応はTLCでモニターした。混合物は冷却してから、氷水に注いだ。水溶液の混合物はエチルエーテルで抽出し、溶媒は真空除去した。22メチルプロピオン酸エチルエステルが単離された。シリカゲルクロマトグラフィーを使っても良い。1HNMRδ7366651542131251HNMR分析だけでは、反応の進行度合いを確認するのは不十分である。0031522メチルプロピオン酸エチルエステルを50mLのCH2Cl2に溶解し、氷で冷却した。207gのK2CO3を含む水溶液30mLを加えた。温度を05°Cに維持しながら、35ジメチルベンゾイル塩化物のCH2Cl2溶液50mLを1時間かけて滴下した。混合物を氷の浴槽上で1時間、それから室温で一夜撹拌した。TLCは反応が完了した事を示していた。水溶液の層は分離漏斗に入れて除去し、有機層を水、それから塩水で洗浄し、MgSO4上で乾燥した。溶媒は回転式蒸発装置で除去した。残渣はヘキサンでスラリー状にし、濾過し、それから空気乾燥した。2N’ベンジルオキシカルボニルNヒドラジノ2メチルプロピオン酸エチルエステルが、白色固体として得られた。TLCは単一のスポットを示していた。1HNMRδ7473715717052504222517816412800316500mLの丸底フラスコに、2062gの2N’ベンジルオキシカルボニルNヒドラジノ2メチルプロピオン酸メチルエステルと200mLの乾燥TMFを加えた。混合物は撹拌し、フラスコはドライアイスで冷却し、それから室温で撹拌しながら、087gのLiBH4を加えた。反応混合物は冷蔵庫に入れ、更にLiBH4を加え、反応物を2日間冷蔵庫に保管した。反応混合物を室温にまで温め、100mLのエーテルを加え、全混合物を分離漏斗に入っている150mLの水に徐々に注いだ。泡立ちが治まった後、混合物を激しく振り、それから徐々に振盪した。エーテル層を分離し、水の層を100mLのEt2Oで2度抽出した。全エーテル抽出物を水で抽出し、塩水で洗浄し、蒸発させると、2004gの生成物が得られた。生成物はクロマトグラフィーで精製した。生成物を3035の酢酸エチルヘキサンで溶出すると、116gのN’N’ヒドラジンカルボン酸ベンジルエステル、1HNMRδ73695149414136225148141及び4gの未反応の出発物質を得た。00317丸底フラスコに400gのN’N’ヒドラジンカルボン酸ベンジルエステル、327gのイミダゾール、そして20mLのDMFを加えた。フラスコは氷の浴槽で冷やし、それから温度を25°C未満に維持しながら、408gのtブチルジメチルシリル塩化物を徐々に加えた。氷の浴槽を除き、反応物を室温で一夜撹拌した。反応混合物は200mLの水に注ぎ、100mLのエーテルで3度抽出した。エーテル抽出物を水で洗浄し、MgSO4上で乾燥し、濃縮すると、712gの生成物を得た。生成物はカラムクロマトグラフィーで精製した。生成物を20100のCH2Cl2ヘキサンで溶出すると、513gのN’211ジメチルエチルN’ヒドラジンカルボン酸ベンジルエステルが得られた。1HNMRδ736750413421515412508200100318200mLの丸底フラスコに、462gのN’211ジメチルエチルN’ヒドラジンカルボン酸ベンジルエステル、100mLの乾燥CH2Cl2、25gのEt3N、そして166gのEt3SiHを加えた。反応混合物は氷の浴槽で冷やしてから、100mgの酢酸パラジウムを3度に分け、30分かけて加えた。反応物は室温まで温めた。TLCは、生成物がない事、出発物質だけである事を示していたので、熱線銃で徐々に温め、それから室温で30分撹拌した。TLCは生成物の存在を示していた。00319反応混合物を適量のMgSO4と一緒に撹拌し、濾過した。濾塊はCH2Cl2で洗浄した。全CH2Cl2画分を飽和NH4Cl、それから水と一緒に振盪した。CH2Cl2層を乾燥し、蒸発させると、378gの35ジメチル安息香酸N211ジメチルエチルヒドラジドを得た。生成物はカラムクロマトグラフィーを使い、510の酢酸エチルヘキサンで溶出する事により精製した。生成物の画分は一緒にし、濃縮し、温かい真空オーブンに入れると、296gの35ジメチル安息香酸N211ジメチルエチルヒドラジドが得られた。1HNMRδ706938022314008200800320250mLの丸底フラスコに、371gの35ジメチル安息香酸N211ジメチルエチルヒドラジド、及び50mLのCH2Cl2を加えた。211gの2エチル3メトキシベンゾイル塩化物とK2CO3水溶液を加えた。反応混合物は室温で一夜撹拌した。反応混合物は分離漏斗へ移し、水溶液の層を50mLのCH2Cl2で2度抽出した。有機層を乾燥し、濃縮すると、552gのシロップ状の生成物が得られた。更に精製するため、生成物をヘプタンで粉砕し、混合物を冷凍庫に入れ、それから黄色の溶液をデカントで破棄するか、あるいはより望ましい方法として、冷やしたブフナーフィルターで12時間急速濾過する事により、白色固体である2エチル3メトキシ安息香酸N’211ジメチルエチルN’ヒドラジドを得た。1HNMRδ70686241369352191621400907600321278gの2エチル3メトキシ安息香酸N’211ジメチルエチルN’ヒドラジドを24mLのTHFに溶解した。混合物を氷の浴槽で冷却し、60mLの1Mテトラブチルアンモニウムフッ化物のTHF溶液を加えた。反応物は室温で56時間撹拌し、それから100mLのEt2Oを加え、反応混合物を分離漏斗に入っている氷水に注いだ。水溶液の層は更に25mLのEt2Oで2度抽出し、全エーテル層を乾燥し、濃縮した。生成物のTLCは、ある出発物質の下部に新しい生成物の存在を示していた。生成物は、クロマトグラフィーを使って精製した。4050の酢酸エチルヘキサンで溶出して、142gの精製された35ジメチル安息香酸N’1ビニルNヒドラジドを得た。TLC:Rf020。1HNMRδ7168604337835242292215614510000322109gの35ジメチル安息香酸N’1ビニルNヒドラジドを100mLのCH2Cl2に溶解し、180gのクロロクロム酸ピリジニウムを加えた。反応混合物は2時間還流した。冷却後、全反応混合物をシリカクロマトグラフィーのカラム上に注ぎ、生成物である35ジメチル安息香酸NN’1ビニルヒドラジドを得た。白色の結晶性固体は、3035の酢酸エチルヘキサンで溶出した。TLCは高純度を示していた、Rf046。1HNMRδ96715716963380623042224157614291010032320mLの小瓶に、55mgの35ジメチル安息香酸N’1ビニルNヒドラジド、2mLのCH2Cl2、そして200mgのEt3Nを加えた。反応混合物は撹拌し、それから17mgの塩化アセチルを加えた。室温で2時間撹拌後、反応物を40°Cで30分間温めた。冷却後、更にCH2Cl2を加え、それから分離漏斗へ移し、希K2CO3と一緒に振盪した。CH2Cl2層はMgSO4で乾燥した。TLCはRf38に主なスポットを示していた。生成物はクロマトグラフィーで精製した。溶出には30の酢酸エチルヘキサン溶液を用いた。その結果、約40mgの酢酸2NN’1ビニルヒドラジノ2メチルプロピルエステルが得られた。1HNMRδ71686147443792292121751490980032415gの2N’ベンジルオキシカルボニルNヒドラジノ2メチルプロピオン酸エチルエステルの入ったフラスコに、20mLの乾燥CH2Cl2、15mLのEt3N、そして127gのEt3SiHを加えた。撹拌しながら、全量0010gのPd2を少しずつ加え、反応物を室温で2時間撹拌した。Pd生成物の濾過及び除去を助けるため、この反応混合物に100mLのCH2Cl2と適量のMgSO4を加えた。CH2Cl2溶液を飽和NH4CLと一緒に振盪し、CH2Cl2を乾燥し、蒸発させると、161gの2Nヒドラジノ2メチルプロピオン酸エチルエステルが得られた。生成物はクロマトグラフィーで精製した。溶出には2124の酢酸エチルヘキサン溶液を用いた。1HNMRδ704570442324223614870032516gの2Nヒドラジノ2メチルプロピオン酸エチルエステルのCH2Cl2溶液30mLを含むフラスコに、35gのEt3Nと120gの2エチル3メトキシベンゾイル塩化物を加えた。反応混合物は3時間還流し、それから蒸発乾固した。残渣は100mLのCH2Cl2に再度溶解し、50mLの希K2CO3水溶液で2度抽出した。CH2Cl2抽出物は乾燥し、蒸発させると残渣が残った。これを6のEt2Oヘキサン溶液で細かく砕いた。白色の固体である2NN’ヒドラジノ2メチルプロピオン酸エチルエステルを濾過し、温かい真空オーブンで乾燥した。TLC:生成物、Rf040、出発物質、Rf035、11酢酸エチル:ヘキサン。1HNMRδ7707268624238012422911882155712911036003262NN’ヒドラジノ2メチルプロピオン酸は、2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドロジドをKMnO4で酸化する事により調製した。対応するエステルは、40のNaOHCH3OH又は50のNaOHEtOH水溶液で還流しても、上述の酸には鹸化されなかった。0032750mgの2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジドを秤量し、20mLの小瓶に入れた。05mLのCH3OHに溶解した20mgのヒドロキシルアミンHClを加えた。40mgのトリエチルアミンを加え、反応混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物はN2を使って濃縮乾固し、5mLのCH2Cl2と5mLの01NHClH2Oに再度溶解した。CH2Cl2層を分離した。TLCは、生成物である2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジドのRfが027で、純度が約85である事を示していた。1HNMRδ7168623792291761650980032850mgの2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジド、40mgのセミカルバジド、40mgのEt3N、そして2mLのCH3OHを2時間還流し、濃縮乾固し、CH2Cl2に再度溶解し、HClで希釈した。CH2Cl2抽出物を乾燥し、蒸発させると、2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジドのセミカルバジドが得られた。1HNMRδ746862376722031717147409130032950mgの2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジドアルデヒド、2mLのCH3OH、CH3OHと26mgのオキサミックヒドラジドを含む05氷酢酸溶液05mL、そして40mgのEt3Nを2時間還流した。溶媒は蒸発装置上で除去し、残渣はCH2Cl2と水で再度溶解した。CH2Cl2抽出物を乾燥し、蒸発させた。TLCは生成物である2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジドのオキサミックカルバジドの存在を示していた。一方、出発物質であるアルデヒドのRfは074であった。1HNMRδ817168613667232192001581151108020033050mLの2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジドを45gのアミノエタノールのCH3OH溶液2mLと一緒に、20mLのフラスコへ加え、2時間還流した。冷却後、CH3OHを蒸発装置で除去し、残渣をクロマトグラフィーで精製した。生成物である35ジメチル安息香酸N’1ビニルNヒドラジドが、40の酢酸エチルヘキサンで溶出された。1HNMRδ72694138337275233813612118700331094gのメチルエーテルN’N’ヒドラジンカルボン酸ベンジルエステルの入ったフラスコに、10mLのCH2Cl2、087gのEt3SiH、010gの酢酸パラジウム、そして1gのEt3Nを加えた。反応混合物は室温で10時間以上撹拌した。更にCH2Cl2を加え、混合物は濾過してパラジウムを除去した。茶色のCH2Cl2溶液をMgSO4及び木炭で処理し、濾過し、蒸発させた。その結果、087gの赤い油状の固体を得た。TLCは、生成物の存在を示していた。生成物はクロマトグラフィーで精製した。1920の酢酸エチルヘキサンで溶出すると、401mgの35ジメチル安息香酸Nヒドラジド生成物が得られた。1HNMRδ717036823377231914950033290mgの35ジメチル安息香酸Nヒドラジド1462の入った20mLの小瓶に、2mLのCH2Cl2、145mgの2エチル3メトキシベンゾイル塩化物、そして05K2CO3水溶液3mLを加えた。反応物は室温で一夜撹拌した。反応混合物は10mLのK2CO3及び50mLのCH2Cl2と一緒に、分離漏斗へ移した。CH2Cl2抽出物は乾燥し、蒸発乾固した。生成物である2エチル3メトキシ安息香酸N’N’ヒドラジドは、クロマトグラフィーで精製した。25の酢酸エチルヘキサン溶液で溶出すると、105mgの生成物が得られた。TLC:Rf044。1HNMRδ78716862403843773387227242117281503098149化合物RG101494の調製00333NN’N’ヒドラジンは、米国特許番号5530028に従って調製できる。要するに、実施例17の生成物は、実施例5の方法、その後実施例8の方法で処理する。その結果生じる生成物は、実施例9の方法に従い、3メチル5クロロベンゾイル塩化物で処理するKノエベナゲルChemischeBerichte28:2045;スルートメーカースPJベルビアルストRBullSocChmBelg77:273285。150化合物RG102240の調製00334NN’N’tertブチルヒドラジンは、米国特許番号5530028の実施例12に従って調製できる。151化合物RG102317の調製00335NN’N’ヒドラジンは、米国特許番号5530021の実施例3に従って調製できる。152化合物RG115092の調製00336NN’N’ヒドラジンは、米国特許番号5117057の実施例802及び809に直接類似の方法で調製できるが、N5メチル14ベンゾジオキサン6カルボヒドラジン、及び35メトキシ4メチルベンゾイル塩化物を使用。153化合物RG115575の調製00337345トリフルオロ安息香酸NtertブチルN’ヒドラジンは、米国特許番号5530021の実施例11に類似の方法で調製できるが、345トリフルオロベンゾイル塩化物を使用。154化合物RG115637の調製003385メチル23ジヒドロベンゾ14ジオキシン6カルボン酸N’tertブチルN’ヒドラジドは、米国特許番号5530021の実施例3に類似の方法で調製できるが、35ジメトキシ4メチルベンゾイル塩化物を使用。実施例2:物理的特性及び移動特性の決定21LClogPの決定00339logP標準セットの各々、及び各試験化合物のために1000ppm溶液が調製する。液体クロマトグラフィーの保持時間は、以下の条件を使って、各物質について測定される。線形方程式は、RTとlogPとの関係から導かれ、logP標準のデータから展開される。試験化合物のlogPは、logP保持時間の方程式から計算される。22ClogPの決定00340ClogPは、業界の技術者に知られている標準の計算方法により計算できる。QSARの探求:化学及び生物学に於ける基礎及び応用、コーウィンハンシュ、アルベリーレオ、米国化学協会、ワシントンDC、1995。23水溶解度の決定00341水溶液は以下の方法で3重に調製される:メタノール又はDMSO中の物質の10000ppm溶液50μlを18オンス又はそれより小さい磁気撹拌装置付き小瓶中の脱イオン水1mLに加える。周囲の温度で、一夜撹拌を継続する。スラリーはルアーチップ型シリンジに入れる。内容物は、新しい13mm02μMのアクロディスクフィルターを通して、オートサンプラー瓶に移す。較正標準溶液の調製:10000ppm溶液の希釈は、10、5、1、05、及び02ppmで調製した。大半のジアシルヒドラジンの水溶解性はこの濃度範囲に該当する。更に溶解性の高い物質に関しても、サンプルの希釈は、較正範囲を増大するよりもこの範囲の方が望ましい。非線形的なレスポンスにより、較正曲線が余り役に立たなくなるからである。しかし、溶解度の極めて低い化合物に関しては、較正標準の範囲の変更が要求される。00342次にサンプルのクロマトグラフィーを行なった。大半のジアシルヒドラジンでは、以下のような条件が測定に適切であった。他のカラムやグラジエントも適宜代替可能である。00343試験サンプルの分析は次のように行なった:溶解性試験は各々2重に分析される。適切な分析方法ならばどれでも容認できるが、結果は、SIMを使ったエレクトロスプレイ負イオンモードで、LCMSのマイクロマスプラットフォームIIにより入手した。標準曲線は、標準物質の重複注入により得られる。基質の濃度は、濃度とレスポンスに関係する式の計算から決定される。24細胞浸透係数00344細胞浸透係数の決定方法は、業界の技術者には良く知られている。MIQSAR:膜相互関係QSAR分析を用いた有機分子のCaco2細胞浸透係数の予測。クルカルニ、アミット;ハン、イー;ホプフィンガーAJ;化学情報及びコンピューターサイエンスジャーナル42:331342。表2は、本発明の化合物の物理的特性及び移動特性を表している。25水溶液の溶解度00345平衡溶解度はpH74の水緩衝液中で測定される。緩衝液は、NaH2PO4の007M溶液のpHを10NNaOHでpH74に調節する事により調製した。緩衝液は015のイオン強度を有している。≧1mgml混合物にするため、少なくとも1mgの粉末を1mLの緩衝液と組み合わせた。サンプルは2時間以上振盪し、室温で一夜放置した。次にサンプルは、そのサンプルで初めて飽和される045μmナイロン製シリンジフィルターで濾過した。濾液は連続2度サンプルとして使用した。濾液はHPLCでアッセイを行い、メタノール調製の標準物質と比較した。26分配係数00346水飽和1‐オクタノールとpH74緩衝液間の分配係数Logが、試験化合物に関して決定された。緩衝液はセクション2で記述された方法で調製した。060mLのオクタノールと060mLの緩衝液を含む小瓶に、室温で、10mMのDMSO保存液のうち12μlを導入した。内部コントロールとして、100μMの最終濃度に、テストステロンも加えた。溶液は60分間撹拌し、10000rpmで10分間遠心分離した。有機層と水溶液の層は分離した。有機層の連続希釈を50のメタノールで行なった。水溶液の層の連続希釈はpH74の緩衝液で行なった。希釈サンプルは、化合物及びテストステロンに関して、LCMSでアッセイを行なった。ピーク領域レスポンスの割合を対数計算し、Logを得た。テストステロンの通常のLogは3033である。27二方向性透過度、CACO20034712のウェルを持つコスタートランスウェルプレートに於いて、コラーゲンで覆ったミクロポアのポリカーボネート膜に集まるように、Caco2単層を成長させた。プレートとその検定の詳細は以下に示してある。透過性アッセイ用の緩衝液は、10mMHEPESと15mMグルコースを含む平衡塩ハンク溶液で、pH70±02である。投与溶液の濃度は、アッセイ緩衝液中10μMであった。各時間点、すなわち1及び2時間毎に、200μLを受け器室から取り、新鮮なアッセイ緩衝液で置き換えた。細胞には先端側あるいは基底外側で投与し、5のCO2及び90の相対湿度の条件下、37°Cで培養した。測定は2度ずつ行なった。重要な実験パラメーターは以下に示してある。無細胞膜は、非特異的結合、及び化合物が装置を自由に拡散する度合いを測定する目的で調査した。ルシファーイエローの流れも、フラックス期間中に細胞の単層に損傷がない事を確認するため、試験化合物に投与後、各単層毎に測定した。00348サンプルは全て、エレクトロスプレイイオン化を使ってLCMSでアッセイした。通常のLCMS条件は以下の通りである。見掛けの透過度、PaPP、回収は以下の方法で計算された:PappxVr回収100xここで、dCrdtは受け器室の蓄積濃度対時間Vrは受け器室の容積Vdはドナー室の容積Aは細胞単層の面積Coは投与溶液の濃度Crfinalは培養期間終了時点の受け器蓄積濃度Cdfinalは培養期間終了時点のドナー蓄積濃度実施例3:化合物の生物学的試験00349本発明のリガンドは、遺伝子療法、関心のある蛋白質の宿主内での発現、遺伝子導入された有機体の生産、細胞ベースのアッセイなど種々の応用に有効である。2763アッセイ遺伝子発現カセット00350GAL4DBDCfEcRVP16ADβRXREFLmUSPEF:ハマキガ科のガの幼虫であるChoristoneurafumiferanaEcRの野生型DE及びFドメインはGAL4DNA結合ドメインと融合させ、ホスホグリセレートキナーゼプロモーターのコントロール下に置かれた。ヒトRXRβのEFドメインのへリックス1から8まで、及びバッタLocustamigratoriaウルトラスパイラクル蛋白質のEFドメインのヘリックス9から12までは、VP16のトランスアクティベーションドメインと融合し、延長因子1αプロモーターのコントロール下に置かれた。5つのコンセンサスGAL4応答要素結合サイトは合成TATA最小プロモーターと融合し、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流に置かれた。安定細胞株00351CHO細胞は、単一のプラスミド上で偏在的に活性な細胞プロモーターがコントロールするGAL4DBDCfEcR及びVP16ADβRXREFLmUSPEFの転写カセットで一時的に形質移入された。安定的に形質移入された細胞は、ゼオシン耐性により選択された。個別に分離されたCHO細胞のクローンは、GAL4REルシフェラーゼレポーターで一時的に形質移入された。2763のクローンが、ハイグロマイシンを使って選択された。リガンド処理00352細胞はトリプシン化され、25x104細胞mLの濃度に希釈された。100μLの細胞懸濁液が96ウェルプレートの各ウェルに置かれ、5CO2の下、37°Cで24時間培養された。リガンド株の溶液はDMSOで調製され、全ての処理で300倍に希釈された。用量応答試験は、33μMから001μMの8つの濃度で構成された。レポーター遺伝子アッセイ00353ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現は、プロメガのブライトグロルシフェラーゼアッセイシステムを使った細胞処理の48時間後に測定された。発光は、ダイネックスMLXのミクロタイタープレートルミノメーターを使って、室温で検出された。Z3アッセイ安定細胞株00354サールSTギルEBセヌートMCゲイジFHProcNatilSciUSA957999804に述べられているように、DrFゲイジは、CVBEと6XEcREを含む安定的に形質転換した細胞集団を提供した。HEK293とも呼ばれるヒトの293腎臓細胞は、まずスイッチコンストラクトCVBE、その後レポーターコンストラクト6XEcRELacZをコード化するレトロウィルスベクターで連続的に感染させた。スイッチコンストラクトは、VP16トランスアクティベーションドメインのフレーム及び下流に挿入された蚕EcRのアミノ酸26546をコード化する配列を含んでいた。合成ATG開始コドンは、サイトメガロウィルスの即初期プロモーターのコントロール下に置かれ、長い末端リピートの横に配置された。レポーターコンストラクトは、LacZの上流に置かれ、両側にLTR配列を有するエクジソン応答要素結合部位を6コピー含んでいた。00355希釈クローニングを使い個々のクローンを分離した。クローンは、450ugmLG418及び100ngmLのピューロマイシンを使って選定した。個々のクローンは、試験リガンドの存在及び不在への反応に基づいて評価した。クローンZ3は、スクリーニング及びSAR目的で選定された。00356CVBEと6XEcRELacZで安定的に形質転換したヒトの293腎臓細胞は、10FBS、450ゴムG418、30234CR、そして100ゲノムプロミシング、P7255を含む最低必須培地、10010CVに、5のCO2を含む大気の下、37°Cで保存し、75に達した時点で二次培養を行なった。リガンド処理00357Z3細胞をウェル当たり25X103細胞濃度で96ウェル組織培養プレートに接種し、5CO2下、37°Cで24時間培養した。リガンドの保存溶液はDMSOで調製した。リガンドの保存溶液は培地で100倍に希釈し、この希釈したリガンド溶液のうち50μLを細胞に加えた。DMSOの最終濃度はコントロールも処理の場合も003に維持した。レポーター遺伝子アッセイ00358レポーター遺伝子発現は細胞処理の48時間後に評価し、βガラクトシダーゼ活性はトロピックスのGalScreenTM生物発光レポーター遺伝子アッセイシステムを使って測定した。誘導倍数活性は、リガンド処理細胞の相対発光量をDMSO処理細胞のRLUで割る事により算出した。発光は、ダイネックスMLXマイクロタイタプレート光度計を使って、室温で検出した。00359スイッチコンストラクトCVBEとレポーターコンストラクト6XEcRELacZの概念図は図1に示してある。両コンストラクトの両側には長い末端リピートがあり、G418とピューロマイシンは選択可能なマーカーであり、CMVはサイトメガロウィルスプロモーターで、VBEはVP16トランスアクティベーションドメインの下流に挿入された蚕EcRのアミノ酸26546をコード化する配列であり、6XEcREはエクジソン応答要素の6つのコピーで、lacZはレポーター酵素βガラクトシダーゼをコード化している。13B3アッセイ遺伝子発現カセット00360GAL4DBDCfEcRVP16ADMmRXRE:ハマキガ科のガの幼虫であるChoristoneurafumiferanaEcRの野生型DE及びFドメインはGAL4DNA結合ドメインと融合させ、pMベクター、カリフォルニア州パロアルトのSV40eプロモーターのコントロール下に置いた。ハツカネズミRXRはVP16のトランスアクティベーションドメインと融合させ、pVP16ベクター、カリフォルニア州パロアルトのSV40eプロモーターのコントロール下に置いた。安定細胞株00361CHO細胞は、GAL4DBDCfEcR、及びSV40eプロモーターによりコントロールされるVP16ADMmRXRE用の転写カセットで一時的に形質移入された。安定的に形質移入された細胞はヒグロマイシンを使って選択した。個別に分離されたCHO細胞のクローンは、GAL4REルシフェラーゼレポーター、カリフォルニア州ラホラで一時的に形質移入された。13B3クローンはゼオシンを使って選択した。リガンド処理00362細胞はトリプシン化され、25x104細胞mLの濃度に希釈された。100μLの細胞懸濁液が96ウェルプレートの各ウェルに置かれ、5CO2の下、37°Cで24時間培養された。リガンド株の溶液はDMSOで調製され、全ての処理で300倍に希釈された。用量応答試験は、33μMから001μMの8つの濃度で構成された。レポーター遺伝子アッセイ00363ルシフェラーゼレポーター遺伝子発現は、プロメガのブライトグロルシフェラーゼアッセイシステムを使った細胞処理の48時間後に測定された。発光は、ダイネックスMLXのミクロタイタープレートルミノメーターを使って、室温で検出された。00364アッセイの結果は表7及び8に示してある。各アッセイは2つのウェルで行い、その値を平均した。誘導倍数はリガンド処理細胞の相対発光量をDMSO処理細胞のRLUで割る事により算出した。EC50sは、3パラメーター算定モデルを使って、用量応答データから計算された。相対最大FIは、ある濃度で観察されるGSTMEリガンドヒドラジドの最大誘導倍数に対するその濃度で観測される試験リガンドの最大誘導倍数として決定された。実施例4:化合物の生物学的試験00365本出願者のリガンドは、遺伝子療法、関心のある蛋白質の宿主内での発現、遺伝子導入された有機体の生産、細胞ベースのアッセイなど種々の応用に有効である。本発明の種々のリガンドを持ったレポーター酵素のインビボ誘導は、遺伝子スイッチを含むC57BL6マウスモデルシステムで評価された。遺伝子発現カセット00366ハマキガ科のガの幼虫であるChoristoneurafumiferanaEcRの野生型DE及びFドメインを変異させV107→1107及びY127→E127、GAL4DNA結合ドメインと融合させた。ヒトRXRβのEFドメインのへリックス1から8まで、及びバッタLocustamigratoriaウルトラスパイラクル蛋白質のEFドメインのヘリックス9から12までは、VP16のトランスアクティベーションドメインと融合させた。そのドメインはレポーター遺伝子ヒト分泌アルカリ性ホスファターゼを調節するが、6xGAL4応答要素及びトランスサイレチンプロモーターのコントロール下に置かれた。遺伝子スイッチの各要素は、異なるプラスミド上に置かれた。受容体発現はCMVプロモーターのコントロール下に置かれた。誘導性はリガンドの存在下に発現したレポーター蛋白質の量により評価した。遺伝子スイッチのエレクトロポレーション00367マウス血清に於けるSEAPの発現の評価は、遺伝子スイッチをエレクトロポレーションでマウスの大腿四頭筋へ挿入した後行った。マウスの麻酔にはケタミンとキシラジンの混合液2μlgを使った。麻酔後、毛を剃り、2x50μLポリグルタミン酸中のDNAベクターを筋肉に注射し、電極導電ゲルを塗り、電極を後脚に設定した。筋肉は200Vcm及び20ミリ秒パルスの条件下、1秒間隔で8度電気穿孔した。パルスの半分を与えた後、横電場方向を逆転させた。エレクトロポレーションは、BTXモレキュラーデリバリーシステムのECM830エレクトロポレーターを使った。リガンド処理00368ある実験では、遺伝子スイッチのエレクトロポレーションの3日後に、DMSO50μLに溶かした26μmolのリガンドをマウスの腹膜内に注射した。別の実験では、リガンド濃度を26nmolDMSO50μマウスに減らした。SEAP発現はリガンド投与の211日後に評価した。食事は、2gのリガンドを20mLのアセトンに溶解し、それをプリナミルズ製のLabDiet5010オートクレーブ可能食事1kgに加えた。ホバートミキサーで良く混合し、クロスブレンドミキサーで更に15分間混合した。マウスには1日、2日、又は3日間、無制限に食事が与えられた。値は全て4匹のマウスの平均値である。ベクターだけ、つまりリガンドなしで処理されたマウスの血清中SEAPは011ngmL血清であった。レポーターアッセイ00369マウスの血清は血液の遠心分離により得た。血液はガラス製の毛細管チューブを使い、RetroorbitalBleeding法により採取した。SEAPの定量は、クロンテクグレートエスケープ化学発光キットを使い、クロンテクのSEAP標準と比較する事により決定した。00370表9:変異エクジソン受容体ベースの遺伝子スイッチのリガンド媒介誘導に関するインビボ評価。マウス血清中のSEAP発現の評価は、遺伝子発現カセットをエレクトロポレーションでマウスの大腿四頭筋に挿入した後行った。リガンド26μmolのIP注射は、エレクトロポレーションの3日後に行った。SEAP発現はリガンド投与の211日後に評価した。各用量グループは4匹のマウスで構成されていた。GSTMEリガンド誘導の割合は、4匹のマウスのSEAP発現を平均し、それをGSTMEリガンドで誘導されるSEAP発現の平均値で割り、それに100を掛ける事により決定した。00371表10:低濃度のリガンドを持つ遺伝子スイッチ発現の誘導。マウス血清中のSEAP発現の評価は、遺伝子発現カセットをエレクトロポレーションでマウスの大腿四頭筋に挿入した後行った。リガンド26nmol又は130nmolGSTMEリガンドのIP注射は、エレクトロポレーションの3日後に行った。SEAP発現はリガンド投与の27日後に評価した。値は4匹のマウスの平均値である。00372表11:げっ歯類の餌に投与されたGSTMEリガンド又はRG103309によるC57BL6マウスのSEAP誘導。マウス血清中のSEAP発現の評価は、遺伝子発現カセットをエレクトロポレーションでマウスの大腿四頭筋に挿入した後行った。GSTMEリガンド又はRG103309は、エレクトロポレーションの3日後、餌に混ぜてマウスに与えた。マウスには1日、2日、又は3日間、無制限に食事が与えられた。一定間隔毎に、リガンド処理した餌を除き、未処理の餌をマウスに与えた。値は4匹のマウスの平均値である。00373更に、業界の通常の技術を持っている人なら予測できる事であるが、本出願で開示されているリガンドは、グループH及びグループB核受容体に基づく遺伝子発現システムを使って、上述の種々の細胞タイプで、遺伝子発現の調節も行なう。スイッチコンストラクトCVBEとレポーターコンストラクト6XEcRELacZの概念図である。スイッチコンストラクトCVBE及びレポーターコンストラクト6XEcRELacZ。両コンストラクトの側面には、長い末端リピートが位置している。G418とピューロマイシンは選択可能マーカー、CMVはサイトメガロウィルスプロモーターであり、VBEはVP16トランスアクティベーションドメインの下流に挿入された蚕のアミノ酸26-546のコード化配列である。6XEcREはエクジソン応答要素の6つのコピーであり、lacZはレポーター酵素βガラクトシダーゼをコード化している。