"次の式Iの化合物を含んでなるイメージング剤。Z1-Ln-LBP-Z2I式中、LBPは次の式IIのランチビオチックペプチドであり、Cysa-Xaa-Gln-Serb-Cysc-Serd-Phe-Gly-Pro-Phe-Thrc-Phe-Val-Cysb-HO-Asp-Gly-Asn-Thra-LysdII式中、XaaはArg又はLysであり、Cysa-Thra、Serb-Cysb及びCysc-Thrcはチオエーテル結合を介して共有結合しており、Serd-Lysdはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、HO-Aspはβ-ヒドロキシアスパラギン酸である。Z1-Ln-はLBPのCysa及び任意にはXaaにも結合しており、ここでZ1は4以上の金属ドナー原子を有するイメージング剤の放射性金属錯体を含み、Z2はLBPのC末端に結合していて、OH、OBc式中、Bcは生体適合性陽イオンである。又はMIGであり、MIGはLBPペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、Lは式-Am-式中、各Aは独立に-CR2-、-CR=CR-、-C≡C-、-CR2CO2-、-CO2CR2-、-NRCO-、-CONR-、-NRC=ONR-、-NRC=SNR-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CR2OCR2-、-CR2SCR2-、-CR2NRCR2-、C48シクロヘテロアルキレン基、C48シクロアルキレン基、C512アリーレン基又はC312ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコールPEG構成単位であり、各Rは独立にH、C14アルキル、C24アルケニル、C24アルキニル、C14アルコキシアルキル及びC14ヒドロキシアルキルから選択され、mは1~20の値を有する整数である。の合成リンカー基であり、nは0又は1の値を有する整数である。キレート化剤が、6以上のドナー原子を有するアミノカルボキシレートリガンド又はN4ドナーセットを有する四座キレーターである、請求項1記載のイメージング剤。N4ドナーセットがジアミンジオキシムキレーター又はテトラアミンキレーターである、請求項2記載のイメージング剤。Z1がLBPのCysaのみに結合している、請求項1乃至請求項3のいずれか1項記載のイメージング剤。XaaがArgである、請求項1乃至請求項4のいずれか1項記載のイメージング剤。Z2がOH又はOBcである、請求項1乃至請求項5のいずれか1項記載のイメージング剤。nが1であり、Lが式-OCH2CH2x-式中、xは6~18の値を有する整数である。のPEG基を含む、請求項1乃至請求項6のいずれか1項記載のイメージング剤。放射性金属が99mTcである、請求項1乃至請求項7のいずれか1項記載のイメージング剤。次の式IIIのキレーターコンジュゲート。Z3-Ln-LBP-Z2III式中、Z3は4以上の金属ドナー原子を有するキレート化剤であり、L、n、LBP及びZ2は請求項1乃至請求項7のいずれか1項で定義した通りである。請求項1乃至請求項8のいずれか1項記載のイメージング剤の製造方法であって、請求項9記載のキレーターコンジュゲートを適当な溶媒中で所望の放射性金属の供給物と反応させることを含んでなる方法。請求項1乃至請求項8のいずれか1項記載のイメージング剤を、哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物。請求項11記載の放射性医薬組成物を製造するためのキットであって、請求項9記載のキレーターコンジュゲートを無菌固体形態で含んでいる結果、生体適合性キャリヤー中の放射性金属の無菌供給物で再構成すれば溶解が起こって所望の放射性医薬組成物を与える、キット。無菌固体形態が凍結乾燥固体である、請求項12記載のキット。ヒト又は動物の身体をイメージングする方法であって、当該方法はPET又はSPECTを用いて請求項1乃至請求項8のいずれか1項記載のイメージング剤又は請求項11記載の組成物が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含み、前記イメージング剤又は前記組成物は前記身体に予め投与されている、方法。前記身体の一部が、異常なアポトーシスが関与している疾患状態である、請求項14記載の方法。薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターするために繰り返して実施される、請求項14又は請求項15記載の方法であって、前記イメージングは前記薬物による治療前及び治療後に実施され、任意には前記薬物による治療中にも実施される、方法。ヒト又は動物の身体の診断方法における、請求項1乃至請求項8のいずれか1項記載のイメージング剤、請求項11記載の組成物又は請求項12記載のキットの使用。請求項14又は請求項15記載のイメージング方法を含んでなる、ヒト又は動物の身体の診断方法。第1の態様では、本発明は、次の式Iの化合物を含んでなるイメージング剤を提供する。Z1-Ln-LBP-Z2I式中、LBPは次の式IIのランチビオチックペプチドであり、Cysa-Xaa-Gln-Serb-Cysc-Serd-Phe-Gly-Pro-Phe-Thrc-Phe-Val-Cysb-HO-Asp-Gly-Asn-Thra-LysdII式中、XaaはArg又はLysであり、Cysa-Thra、Serb-Cysb及びCysc-Thrcはチオエーテル結合を介して共有結合しており、Serd-Lysdはリシノアラニン結合を介して共有結合しており、HO-Aspはβ-ヒドロキシアスパラギン酸である。Z1-Ln-はLBPのCysa及び任意にはXaaにも結合しており、ここでZ1は4以上の金属ドナー原子を有するイメージング剤の放射性金属錯体を含み、Z2はLBPのC末端に結合していて、OH、OBc式中、Bcは生体適合性陽イオンである。又はMIGであり、MIGはLBPペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、Lは式-Am-式中、各Aは独立に-CR2-、-CR=CR-、-C≡C-、-CR2CO2-、-CO2CR2-、-NRCO-、-CONR-、-NRC=ONR-、-NRC=SNR-、-SO2NR-、-NRSO2-、-CR2OCR2-、-CR2SCR2-、-CR2NRCR2-、C48シクロヘテロアルキレン基、C48シクロアルキレン基、C512アリーレン基又はC312ヘテロアリーレン基、アミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコールPEG構成単位であり、各Rは独立にH、C14アルキル、C24アルケニル、C24アルキニル、C14アルコキシアルキル及びC14ヒドロキシアルキルから選択され、mは1~20の値を有する整数である。の合成リンカー基であり、nは0又は1の値を有する整数である。イメージング剤という用語は、哺乳動物体をイメージングするのに適した化合物を意味する。好ましくは、哺乳動物はインタクトな哺乳動物生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。好ましくは、イメージング剤は最小限に侵襲的なやり方即ち、職業的な医学専門技術の下で実施した場合に哺乳動物被験体に対して実質的な健康リスクのないやり方で哺乳動物体に投与できる。かかる最小限に侵襲的な投与は、好ましくは、局所又は全身麻酔の必要なしに行われる、前記被験体の末梢静脈への静脈内投与である。第1の態様のイメージング剤は、第6の態様下記に記載されるように、アポトーシス及び他の形態の細胞死をイメージングするため特に適している。本明細書中で使用されるインビボイメージングという用語は、哺乳動物被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技法をいう。アミノ酸という用語は、L-又はD-アミノ酸、アミノ酸類似体例えば、ナフチルアラニン或いはアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のもの又は純粋に合成由来のものであってよく、光学的に純粋なもの即ち、単一の鏡像異性体、したがってキラルなものであるか、或いは鏡像異性体の混合物であってよい。本明細書中では、アミノ酸に関する通常の三文字略語又は一文字略語が使用される。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。ペプチドという用語は、ペプチド結合即ち、1つのアミノ酸のアミンを別のアミノ酸のカルボキシルに連結するアミド結合によって連結された上記に定義したような2以上のアミノ酸を含む化合物を意味する。ランチビオチックペプチドという用語は、1以上のランチオニン結合を含むペプチドをいう。ランチオニンはその通常の意味を有し、下記に示す化学構造を有するシスチンのスルフィド類似体をいう。チオエーテル結合を介して共有結合しているという用語は、関連するCys残基のチオール官能基がSer又はThrのヒドロキシル官能基の脱水素によって示されたSer又はThr残基に対するチオエーテル結合として連結されてランチオニン又はメチルランチオニン結合を与えることを意味する。かかる結合は、Willeyetal[Ann.Rev.Microbiol.,61,477-5012007]によって記載されている。リシノアラニン結合という用語は、Lys残基のε-アミン基がSerのヒドロキシル官能基の脱水素によって示されたSer残基に対するアミン結合として連結されて、アミノ酸残基の2つのα-炭素原子を連結する-CH2-NH-CH24-結合を与えることを意味する。放射性金属錯体という用語は、放射性金属とキレーターとの配位菌錯体であって、前記キレーターが式Iのリンカー基Lを介してLBPペプチドに共有結合しているものを意味する。かかる配位錯体は、放射性金属に結合したヒドラジノニコチンアミドHYNICリガンドを含まない。したがって、キレーターは放射性金属に結合する主な化学種であって、単にHYNICに対する補助リガンドというわけではない。キレート化剤という用語はその通常の意味を有し、金属配位後にキレート環好ましくは五員乃至七員のキレート環、さらに好ましくは五員又は六員のキレート環を生じるように配列された2以上の金属ドナー原子をいう。金属ドナー原子は、炭素原子又は非配位ヘテロ原子の非配位主鎖によって共有結合されている。本発明のキレート化剤は4以上の金属ドナー原子好適には4~8の金属ドナー原子を含んでいて、4以上のかかる金属ドナー原子が放射性金属錯体中で放射性金属に結合している。本発明の好適な放射性金属には、99mTc、94mTc、186Re、188Re、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、105Rh、101mRh、111In、89Zr及び45Tiがある。Z1がCysaに結合する場合、それはLBPペプチドのN末端に結合している。Z1がXaaにも結合する場合、それはXaaがLysであることを意味し、Z1はLys残基のε-アミノ基に結合している。Z2基は、LBPの最後のアミノ酸残基のカルボニル基即ち、カルボキシ末端を置換する。したがって、Z2がOHである場合、LBPのカルボキシ末端は最後のアミノ酸残基の遊離CO2H基で終わり、Z2がOBcである場合、その末端カルボキシ基はCO2Bc基としてイオン化されている。生体適合性陽イオンBcという用語は、イオン化して負に帯電した基と共に塩を形成する正に帯電した対イオンを意味する。この場合、前記正に帯電した対イオンも無毒性であり、したがって哺乳動物体特に人体への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの例には、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。代謝阻害基MIGという用語は、カルボキシ末端Z2におけるLBPペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基は当業者にとって公知であり、ペプチドのアミン末端については、好適にはカルボキサミド、tert-ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール及びポリエチレングリコールPEG構成単位から選択される。本発明のLBPペプチドは高いインビボ代謝安定性60分で95を示すことが知られており、したがってZ2は好ましくはOH又はOBcである。好ましい実施形態キレート化剤は、好ましくは、放射性金属との錯体形成後に生じるキレート環が1以上の五員又は六員環、さらに好ましくは2~4のかかる環、最も好ましくは3又は4のかかる環を含むように設計されている。キレート化剤は、好ましくは、6以上のドナー原子を有するアミノカルボキシレートリガンド、及びN3S、N2S2又はN4ドナーセットを有する四座キレーターから選択される。キレート化剤は、さらに好ましくは6以上のドナー原子を有するアミノカルボキシレートリガンド又はN4ドナーセットを有する四座キレーターであり、最も好ましくはN4ドナーセットを有する四座キレーターである。アミノカルボキシレートリガンドという用語はその通常の意味を有し、EDTA、DTPA型のキレート化剤をいう。かかるキレーターのドナー原子は、アミンNドナーとカルボン酸Oドナーとの混合物である。かかるキレーターは、開鎖のもの例えば、EDTA、DTPA又はHBED或いは大環状のもの例えば、DOTA又はNOTAであり得る。好適なかかるキレーターには、DOTA、HBED及びNOTAがある。これらは当技術分野で公知であり、67Ga又は68Ga、111In、銅の放射性同位体、89Zr及び45Tiのような放射性金属に対して好ましい。四座キレーターという用語はその通常の意味を有し、放射性金属が四座キレート化剤の4つの金属ドナー原子によって配位されているキレート化剤をいう。N3Sドナーセットという用語は、四座キレーターの4つの金属ドナー原子が3つの窒素ドナー原子及び1つの硫黄ドナー原子から構成されることを意味する。好適なかかるNドナー原子タイプの例は、アミン特に第一又は第二アミン、アミド又はオキシム、或いはこれらの組合せてある。好適なかかるSドナー原子タイプの例は、チオール及びチオエーテルである。好ましいかかるN3Sキレーターはチオールトリアミドドナーセットを有し、好ましくはMAG3メルカプトアセチルトリグリシンのような開鎖キレーターである。N2S2ドナーセットという用語は、四座キレーターの4つの金属ドナー原子が2つの窒素ドナー原子及び2つの硫黄ドナー原子から構成されることを意味する。好適なかかるN及びSドナー原子は、N3S上記に関して記載した通りである。好ましいかかるN2S2キレーターはジアミンジチオール又はアミドアミンジチオールドナーセットを有し、好ましくはBAT又はN,N’-エチレンジ-L-システイン[InorgChem.,352:404-4141996]のような開鎖キレーターである。N4ドナーセットという用語は、四座キレーターの4つの金属ドナー原子がすべて窒素に基づいていることを意味する。好適なかかるNドナー原子タイプの例は、アミン特に第一又は第二アミン、アミド又はオキシム、或いはこれらの組合せてある。N4ドナーセットは、好ましくはジアミンジオキシム、テトラアミン、アミドトリアミン及びジアミドジアミンから選択される。N4キレーターは、開鎖のもの又は大環状のもの例えば、シクラム、モノオキソシクラム又はジオキソシクラムであり得る。本発明の好ましいN4四鎖キレート化剤はジアミンジオキシム又はテトラアミンドナーセットを有し、さらに好ましくは開鎖ジアミンジオキシム又は開鎖テトラアミンである。好ましいジアミンジオキシムキレーターは次の式を有する。式中、E1~E6は各々独立にR基であり、各Rは独立にH或いはC110アルキル、C310アルキルアリール、C210アルコキシアルキル、C110ヒドロキシアルキル、C110フルオロアルキル、C210カルボキシアルキル又はC110アミノアルキルであるか、或いは2以上のR基がそれに結合した原子と共に炭素環式又は複素環式の飽和又は不飽和環を形成し、Qは式-Jf-式中、fは3、4又は5であり、各Jは-Jf-が-O-又は-NR-である最大1つのJ基を含み得ることを条件にして独立に-O-、-NR-又は-CR2-である。の橋かけ基である。好ましいQ基は下記の通りである。Q=-CH2CHRCH2-即ち、プロピレンアミンオキシム又はPnAO誘導体、Q=-CH22CHRCH22-即ち、ペンチレンアミンオキシム又はPentAO誘導体、及びQ=-CH22NRCH22-。E1~E6は、好ましくはC13アルキル、C24アルコキシアルキル、C13ヒドロキシアルキル、C13フルオロアルキル、C26カルボキシアルキル及びC13アミノアルキルから選択される。最も好ましくは、各E1~E6基はCH3である。Qは、好ましくは-CH2CHRCH2-、-CH22CHRCH22-又は-CH22NRCH22-であり、最も好ましくは-CH2CHRCH22-である。特に好ましいジアミンジオキシムキレーターは次の式を有する。式中、橋頭の第一アミン基はLn即ち、リンカー基及び/又はLBPペプチドにコンジュゲートされる。好ましいテトラアミンキレーターは次の式を有する。式中、橋頭のカルボキシル基はリンカー基及び/又はLBPペプチドにコンジュゲートされる。キレーター2中、[リンカー]は好ましくは式Am1式中、m1は0~6の値を有する整数であり、各Aは独立にCH2又はp-フェニレンであり、1以下のA基がp-フェニレンである。の基である。好ましくは、A基の各々はCH2であり、m1は1~6である。好ましいかかるキレーターは、[リンカー]が-CH2-であるキレーター2Aである。イメージング剤の放射性金属は、好ましくは94mTc又は99mTcであり、さらに好ましくは99mTcである。これらのテクネチウム放射性同位体に関しては、キレーターは好ましくは上記に定義したようなN4ドナーセットを有する四座キレーターである。Z2は、好ましくはOH又はOBcである。第1の態様のイメージング剤では、Z1は好ましくはLBPのCysaのみに結合している。XaaがArgである場合、それはZ1がCysa残基の遊離アミン基の位置でLBPのN末端に結合されることを意味する。XaaがLysである場合、それはiXaa残基のε-アミン基に優先して、Cysa残基の位置でLBPペプチドを選択的に官能化する段階、又はiiCysa及びXaaの両方の位置においてZ1で官能化されたLBPを含む組成物を調製し、次いでXaa官能化化学種を除去する段階が採用されることを意味する。第1の態様のイメージング剤では、Xaaは好ましくはArgである。第1の態様のイメージング剤は、好ましくはリンカー基Lを含んでいる。即ち、式I中のnは好ましくは1である。Lは、好ましくは式-OCH2CH2x-式中、xは6~18、好ましくは8~14、さらに好ましくは10~12の値を有する整数である。のPEG基を含んでいる。かかるリンカー基は、インビボでイメージング剤の肝臓バックグラウンド保持を低減させかつ尿中排泄を増加させる点で有利である。好ましくは、Lは次の式IA又はIBのバイオモディファイアー基を含んでいる。式IAは17-アミノ-5-オキソ-6-アザ-3,9,12,15-テトラオキサヘプタデカン酸であり、ここでpは1~10の整数である。式IA中では、pは好ましくは1、2又は3である。別法として、式IBのプロピオン酸誘導体に基づくPEG様構造を使用することもできる。式中、pは式IAに関して定義した通りであり、qは1~15の整数である。式IB中では、pは好ましくは1又は2、さらに好ましくは1であり、qは好ましくは5~12、さらに好ましくは12である。バイオモディファイアーという用語は、インビボで薬剤の体内分布に対して効果を及ぼす基を意味する。第1の態様のイメージング剤は、第3の態様に記載するようにして得ることができる。第2の態様では、本発明は次の式IIIのキレーターコンジュゲートを提供する。Z3-Ln-LBP-Z2III式中、Z3は4以上の金属ドナー原子を有するキレート化剤であり、L、n、LBP及びZ2は第1の態様で定義した通りである。L、n、LBP及びZ2並びに第2の態様におけるキレート化剤Z3の好ましい態様は、第1の態様上記に記載した通りである。若干のLBPペプチドは商業的に入手できる。即ち、シンナマイシン及びジュラマイシンはSigma-Aldrich社から入手できる。ジュラマイシンは、Streptoverticilliumcinnamoneus由来の菌株D3168Duramycinによって産生される。シンナマイシンは、例えばStreptomycescinnamoneus又はStreptoverticilliumgriseoverticillatum由来の複数の菌株によって生化学的に産生することができる。C.Chatterjeeetal[Chem.Rev.,105,633-6832005]による総説を参照されたい。他のペプチドは、P.Lloyd-Williams,F.AlbericioandE.Girald;ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptidesandProteins,CRCPress,1997に記載されているような固相ペプチド合成によって得ることができる。第2の態様のキレーターコンジュゲートは、以下のようにして得ることができる。キレーターがジアミノジオキシムである場合には、適切なジアミンをi適切なクロロニトロソ誘導体Cl-CR12-CHNOR1と反応させるか、ii式Cl-CR12-C=NOHR1のα-クロロオキシムと反応させるか、或いはiii式Br-CR12-C=OR1のα-ブロモケトンと反応させ、続いてヒドロキシルアミンを用いてジアミンジケトン生成物をジアミンジオキシムに転化させる。経路iは、S.Jurissonetal[Inorg.Chem.,26,3576-821987]によって記載されている。クロロニトロソ化合物は、当技術分野で公知の通り、適切なアルケンを塩化ニトロシルNOClで処理することで得ることができる。クロロニトロソ化合物の合成に関するさらなる詳細は、Ramalingam[Synth.Commun.,255,743-7521995]、Glaser[J.Org.Chem.,613,1047-481996]、Clapp[J.OrgChem.,3681169-701971]、Saito[ShizenKagaku,47,41-491995]及びSchulz[Z.Chem.,2111,404-4051981]によって示されている。経路iiiは、Nowotniketal[Tetrahedron,5029,p.8617-86321994]によって一般的な表現で記載されている。α-クロロオキシムは、対応するα-クロロ-ケトン又はアルデヒドこれらは商業的に入手できる。をオキシム化することで得ることができる。α-ブロモケトンは商業的に入手できる。さらに好ましいテトラアミンキレーターは次の式を有する。式中、L、LBP、n及びZ2は第1の態様で定義した通りであり、Q1~Q6は独立にQ基であり、ここでQはH又はアミン保護基である。保護基という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない程度に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者にとって公知であり、好適にはBocここでBocはtert-ブチルオキシカルボニルである。、FmocここでFmocはフルオレニルメトキシカルボニルである。、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Dde[即ち、1-4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキシリデンエチル]及びNpys即ち、3-ニトロ-2-ピリジンスルフェニルから選択される。場合によっては、保護基の性質は、Q1/Q2基及びQ5/Q6基が共に保護基である即ち、関連するアミン窒素原子上にNH結合が存在しないようなものであり得る。さらに他の保護基の使用は、‘ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis’,4thEdition,TheodoraW.GreeneandPeterG.M.Wuts[WileyBlackwell,2006]に記載されている。好ましいアミン保護基はBoc及びFmocであり、最も好ましくはBocである。Bocを使用する場合、Q1及びQ6は共にHであり、Q2、Q3、Q4及びQ6はそれぞれtert-ブトキシカルボニルである。キレーター3中におけるL、LBP、n及びZ2の好ましい態様は、第1の態様上記に記載した通りである。好ましいキレーター3はLn=Am1を有しており、ここでA及びm1並びにこれらの好ましい態様はキレーター2上記に関して記載した通りである。テトラアミンキレーターは、スキーム1下記に記載したようにして製造できる。アミノ官能化及びカルボキシ官能化テトラアミンキレーターの合成に関するさらなる情報は、Abirajetal[Chem.Eur.J.,16,2115-21242010]によって記載されている。-CH25OH橋頭置換基を有するBoc保護テトラアミン類似体の合成は、Turpinetal[J.Lab.Comp.Radiopharm.,45,379-3932002]によって記載されている。テトラアミンキレーターと生物学的標的化ペプチドとのコンジュゲーションは、Nocketal[Eur.J.Nucl.Med.,302,247-2582003]及びMainaetal[Eur.J.Nucl.Med.,309,1211-12192003]によって記載されている。ペンダント活性エステル基を有する二官能性HBED誘導体は、Ederetal[Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging,35,1878-18862008]によって教示されている。N3S二官能性キレーターは、Sudhakeretal[Bioconj.Chem.,Vol.9,108-1171998]の方法によって製造できる。N2S2二官能性化合物は、Kungetal[Tetr.Lett.,Vol30,4069-40721989]の方法によって製造できる。モノアミドモノアミンビスチオール化合物は、Hansenetal[Inorg.Chem.,Vol38,5351-53581999]の方法によって製造できる。第3の態様では、本発明は、第1の態様のイメージング剤の製造方法であって、第2の態様のキレーターコンジュゲートを適当な溶媒中で所望の放射性金属の供給物と反応させることを含んでなる方法を提供する。第3の態様におけるキレーターコンジュゲート及び放射性金属の好ましい態様は、本発明の第1及び第2の態様上記に記載した通りである。適当な溶媒は通例水性のものであり、好ましくは第4の態様下記で定義されるような生体適合性キャリヤー溶媒である。第4の態様では、本発明は、第1の態様のイメージング剤を、哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでなる放射性医薬組成物を提供する。第4の態様におけるイメージング剤の好ましい態様は、本発明の第1の態様上記に記載した通りである。生体適合性キャリヤーとは、組成物が生理学的に認容され得るようにして即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにしてイメージング剤を懸濁又は好ましくは溶解するための流体特に液体である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、有利には注射用の最終生成物が等張性になるように平衡させ得る食塩水のような水溶液、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液例えば、リン酸緩衝液、或いは1種以上の張度調整物質例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩、糖例えば、グルコース又はスクロース、糖アルコール例えば、ソルビトール又はマンニトール、グリコール例えば、グリセロール又は他の非イオン性ポリオール物質例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどの水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はリン酸緩衝液である。哺乳動物への投与に適した形態でという語句は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害効果を生じる化合物を含まず、生体適合性pHおよそpH4.0~10.5で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じる危険性を有し得る粒状物質を含まないと共に、生物学的流体例えば、血液と接触した際に沈殿が起こらないように製剤化される。かかる組成物はまた、生物学的に適合性の賦形剤のみを含み、好ましくは等張性である。イメージング剤及び生体適合性キャリヤーはそれぞれ、注射器又はカニューレによる溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び/又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス例えば、窒素又はアルゴンの維持を可能にする密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。好ましいかかる容器は、気密クロージャーを通例はアルミニウムからなるオーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。クロージャーは、無菌保全性を維持しながら皮下注射針による1回又は数回の穿刺に適したもの例えば、クリンプ加工した隔壁シールクロージャーである。かかる容器は、例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液のガス抜きのために所望される場合にはクロージャーが真空に耐え得ると共に、酸素又は水蒸気のような外部大気ガスの侵入を許すことなしに減圧のような圧力変化にも耐え得るという追加の利点を有している。好ましい複数用量容器は、複数の患者用量を含む例えば、容積10~30cm3の単一のバルクバイアルからなり、したがって臨床的状況に合わせて製剤の実用寿命中に様々な時間間隔で1回分の患者用量を臨床グレードの注射器中に抜き取ることができる。予備充填注射器は1回分のヒト用量又は単位用量を含むように設計され、したがって好ましくは臨床用に適した使い捨て注射器又は他の注射器である。本発明の医薬組成物は、好ましくは1人の患者用に適した用量を有し、上述したような適当な注射器又は容器に入れて供給される。かかる医薬組成物は、抗菌防腐剤、pH調整剤、フィラー、放射線防護剤、可溶化剤又は重量オスモル濃度調整剤のような追加の任意賦形剤を含むことができる。放射線防護剤という用語は、水の放射線分解から生じる含酸素フリーラジカルのような高反応性フリーラジカルを捕捉することにより、レドックス過程のような分解反応を阻止する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、p-アミノ安息香酸即ち、4-アミノ安息香酸、ゲンチシン酸即ち、2,5-ジヒドロキシ安息香酸及びかかる酸と上記に記載した生体適合性陽イオンとの塩から選択される。可溶化剤という用語は、溶媒に対するイメージング剤の溶解性を高める、組成物中に存在する添加剤を意味する。好ましいかかる溶媒は水性媒質であり、したがって可溶化剤は好ましくは水に対する溶解性を高める。好適なかかる可溶化剤には、C14アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコールPEG、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンポリオキシエチレンブロック共重合体Pluronics商標、シクロデキストリン例えば、α-、β-又はγ-シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル-γ-シクロデキストリン及びレシチンがある。抗菌防腐剤という用語は、潜在的に有害な微生物例えば、細菌、酵母又はかびの増殖を阻止する薬剤を意味する。抗菌防腐剤はまた、使用する用量に応じて多少の殺菌性を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、医薬組成物中におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。しかし、抗菌防腐剤は、任意には投与に先立って前記組成物を製造するために使用されるキットの1種以上の成分中における潜在的に有害な微生物の増殖を阻止するためにも使用できる。好適な抗菌防腐剤には、パラベン類即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌防腐剤はパラベン類である。pH調整剤という用語は、組成物のpHがヒト又は哺乳動物への投与のために許容される範囲およそpH4.0~10.5内にあることを保証するために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。好適なかかるpH調整剤には、トリシン、リン酸塩又はTRIS[即ち、トリスヒドロキシメチルアミノメタン]のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、pH調整剤を任意には独立のバイアル又は容器に入れて供給することができ、その結果としてキットのユーザーは多段操作の一部としてpHを調整することができる。フィラーという用語は、製造及び凍結乾燥中における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適なフィラーには、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性糖又は糖アルコールがある。第2の態様の医薬組成物は、無菌製造条件下で即ち、クリーンルーム内で製造して所望の無菌で非発熱性の生成物を得ることができる。基本構成部分、特に関連する試薬並びにイメージング剤に接触する装置部品例えば、バイアルは無菌であることが好ましい。かかる構成部分及び試薬は、無菌濾過或いは例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は例えば、エチレンオキシドによる化学処理を用いる終末滅菌をはじめとする、当技術分野で公知の方法によって滅菌できる。一部の構成部分を予め滅菌しておけば、最小数の操作を実施すれば済むので好ましい。しかし、予防策として、医薬組成物の製造における最終段階として少なくとも無菌濾過段階を含めることが好ましい。上述の通り、本発明の医薬組成物は好ましくは可溶化剤を含んでいる。その結果、濾材に吸着される放射能の過度の損失なしに無菌濾過段階を使用できる。同様な考察は、可溶化剤を使用しないと吸着によって放射能の損失が引き起こされることのある、臨床グレード注射器中又はプラスチックチューブ使用時における医薬組成物の操作に対しても適用される。本発明の放射性医薬組成物は、以下のような様々な方法によって製造できる。即ち、i放射性金属錯体形成をクリーンルーム環境中で実施する無菌製造技法、ii無菌製造を用いずに放射性金属錯体形成を実施した後、最終段階で滅菌[例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は例えば、エチレンオキシドによる化学処理]を行う終末滅菌方法、並びにiii式IIIのキレーターコンジュゲート及び任意の賦形剤を含む無菌の非放射性キット製剤を所望の放射性金属の供給物と反応させるキット方法。方法iiiが好ましく、この方法で使用するためのキットは第5の実施形態下記に記載される。第5の態様では、本発明は、第4の態様の放射性医薬組成物を製造するためのキットであって、第2の態様のキレーターコンジュゲートを無菌固体形態で含んでいる結果、生体適合性キャリヤー中の放射性金属の無菌供給物で再構成すれば溶解が起こって所望の放射性医薬組成物を与えるキットを提供する。第5の態様におけるキレーターコンジュゲートの好ましい態様は、本発明の第2の態様上記に記載した通りである。キットという用語は、所望の放射性医薬組成物を製造するために必要な化学薬品を使用説明書と共に含んでなる1以上の非放射性医薬品グレード容器を意味する。キットは、所望の放射性金属で再構成することで、最小限の操作でヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。無菌固体形態は、好ましくは凍結乾燥固体である。99mTcに関しては、キットは好ましくは凍結乾燥され、99mTc放射性同位体ジェネレーターからの無菌の99mTc-過テクネチウム酸イオンTcO4で再構成することで、それ以上の操作なしにヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。好適なキットは、遊離塩基又は酸性塩形態のキレーターコンジュゲートを、亜ジチオン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、FeII又はCuIのような生体適合性還元剤と共に収容した容器例えば、隔壁密封バイアルを含んでいる。生体適合性還元剤は、好ましくは塩化第一スズ又は酒石酸第一スズのような第一スズ塩である。別法として、キットは非放射性金属錯体を任意に含むことができる。これは、テクネチウムの添加時にトランスメタレーション即ち、金属交換を受けて所望の生成物を与える。非放射性キットはさらに、上記に記載したようなトランスキレーター、抗菌防腐剤、pH調整剤又はフィラーのような追加成分を任意に含むことができる。第6の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体をイメージングする方法であって、当該方法はPET又はSPECTを用いて第1の態様のイメージング剤又は第4の態様の組成物が分布した前記身体の少なくとも一部の画像を生成する段階を含み、前記イメージング剤又は前記組成物は前記身体に予め投与されている方法を提供する。第6の態様におけるイメージング剤又は組成物の好ましい態様は、本発明のそれぞれ第1及び第4の態様上記に記載した通りである。第6の態様の方法は、好ましくは、身体の一部が異常なアポトーシスが関与している疾患状態である場合に実施される。異常なアポトーシスという用語は、プログラム細胞死PCDのディスレギュレーションを意味する。かかるディスレギュレーションは、癌及び自己免疫障害のようなアポトーシスの阻害に関連するもの、並びに神経変性疾患、血液学的疾患、AIDS、虚血症、同種移植片拒絶及び心臓病心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症及び/又は薬物療法後の心臓毒性のような過活性アポトーシスに関連するものを含む、多数の疾患状態に関係づけられている。したがって、アポトーシスの可視化及び定量化は、かかるアポトーシス関連病態生理学の診断において有用である。第6の態様のイメージング方法は、任意には、薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターするために繰り返して実施できる。この場合、前記イメージングは前記薬物による治療前及び治療後に実施され、任意には前記薬物による治療中にも実施される。これらの疾患に関する治療学的処置は、場合に応じてPCD過程を促進又は抑制することにより、バランスの取れたアポトーシスを回復することを目指している。特に興味深いのは、癌療法の効力の早期モニタリングにより、状態が末期になる前に悪性増殖を確実に制御することである。第7の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体の診断方法における、第1の態様のイメージング剤、第4の態様の組成物又は第5の態様のキットの使用を提供する。第8の態様では、本発明は、第6の態様のイメージング方法を含んでなる、ヒト又は動物の身体の診断方法を提供する。第7及び第8の態様におけるイメージング剤又は組成物の好ましい態様は、本発明のそれぞれ第1及び第4の態様上記に記載した通りである。両態様のヒト又は動物の身体の診断方法は、好ましくは異常なアポトーシスが関与している疾患状態の診断方法である。かかる異常なアポトーシスは、第6の態様上記に記載した通りである。下記に詳述する非限定的な実施例によって本発明を例示する。例1~3は本発明のキレーター1ジアミンジオキシムの合成を示し、例4はキレーター1Aグルタル酸で官能化されたジアミンジオキシムの合成及び対応する活性エステルであるキレーター1A-TFTPエステルの合成を示している。例5はキレーター1Bグルタリル-アミノ-PEG12プロピオン酸で官能化されたジアミンジオキシムの合成を示している。例6はBoc保護テトラアミンキレーターキレーター2Aの合成を示している。例7は比較目的のためのHYNIC-ジュラマイシンコンジュゲート先行技術の合成を示しており、例8はキレーター1Aで官能化されたジュラマイシンコンジュゲート3A及びコンジュゲート3Bの合成を示している。例9はキレーター1Aで官能化されたシンナマイシンコンジュゲート5の合成を示している。例10はキレーター1Bで官能化されたジュラマイシンコンジュゲート6の合成を示している。例11はキレーター1Bで官能化されたシンナマイシンコンジュゲート6の合成を示している。例12はキレーター2Aで官能化されたジュラマイシンコンジュゲート2A及びコンジュゲート2Bの合成を示し、例13はキレーター2Aで官能化されたシンナマイシンコンジュゲート4の合成を示している。例14は放射性金属99mTcによる本発明のキレーターコンジュゲートの放射性標識を示している。99mTc錯体は高いRCPを有する単一の化学種として生成する。これは、HYNIC/ホスフィン/トリシン標識を使用した場合に複数の化学種が生成するHYNICに比べて有利な点である。操作は簡単であって、室温で効率的な標識が行える。RCPは高い放射能濃度でも非常に良好である>500MBq/mLでRCP>90。例15はキレーターのコンジュゲーション部位の決定を示し、例16は、キレーターのコンジュゲーション部位がホスファチジルエタノールアミンに対する結合親和性に顕著な効果を有し、その差は18倍であるKdとして5nM対90nMであることを証明している。これは、N末端式IIのCysaへの放射性金属錯体の結合が式IIのXaaへの結合より好ましいという証拠を提供する。例17のEL4リンパ腫マウス異種移植腫瘍モデルは、化学療法後のアポトーシス応答を模倣するためのモデルとして使用されてきた。療法剤エトポシド/シクロホスファミドで処置したマウスは、ビヒクル対照で処置した動物に比べて4倍の腫瘍アポトーシス増加を示した。例17の体内分布結果は化学療法処置腫瘍における各薬剤の高い取込みを示している一方、相関分析は高レベルのアポトーシスを有する腫瘍ほど結合剤取込みが高い傾向を示唆している。99mTc-[コンジュゲート5]は、99mTc-[コンジュゲート3A]に比べて、同様な腫瘍性能及び改善された肝臓性能を有していた。99mTc-[コンジュゲート2A]は、99mTc-[コンジュゲート5]に比べて、同様な腫瘍性能を示すが、肺性能は劣っている。99mTc-[コンジュゲート5]を用いた反復イメージング試験は、療法後における一貫した腫瘍:筋肉比の増加を示した。例18は、インビボで肝臓バックグラウンドを低減させかつ尿中排泄を増加させる点でPEGリンカー基が有利であることを示している。略語通常の一文字又は三文字アミノ酸略語が使用される。id:パーセント注射量Ac:アセチルAcm:アセトアミドメチルACN:アセトニトリルBoc:tert-ブチルオキシカルボニルBz:ベンジルDCM:ジクロロメタンDIPEA:N-ジイソプロピルエチルアミンDMF:N,N-ジメチルホルムアミドDMSO:ジメチルスルホキシドFmoc:9-フルオレニルメトキシカルボニルGlut:グルタル酸HATU:O-7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートHOAt:7-アザ-1-ヒドロキシベンゾトリアゾールHPLC:高速液体クロマトグラフィーIBX:1-ヒドロキシ-1,2-ベンズヨードキソール-31H-オン-1-オキシドMDP:メチレンジホスホン酸NaPABA:p-アミノ安息香酸ナトリウムNHS:N-ヒドロキシ-スクシンイミドNMM:N-メチルモルホリンNMP:1-メチル-2-ピロリジノンPBS:リン酸緩衝食塩水PEG12:-OCH2CH212-PyAOP:7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートPyBOP:ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートRAC:放射能濃度RCP:放射化学純度tBu:tert-ブチルTFAトリフルオロ酢酸TFTP:テトラフルオロチオフェノールTHF:テトラヒドロフランTIS:トリイソプロピルシランTrt:トリチル例1:1,1,1-トリス2-アミノエチルメタンの合成段階1a:3-メトキシカルボニルメチレングルタル酸ジメチルエステルトルエン600ml中のカルボメトキシメチレントリフェニルホスホラン167g、0.5molを3-オキソグルタル酸ジメチル87g、0.5molで処理し、反応物を窒素雰囲気下において120°Cの油浴上で100°Cに36時間加熱した。次いで、反応物を真空中で濃縮し、油状残留物を40/60石油エーテル/ジエチルエーテル1:1、600mlでトリチュレートした。トリフェニルホスフィンオキシドを沈殿させ、上澄み液をデカント/濾過して除去した。真空中で蒸発させた後の残留物を高真空Bpt0.2トルでオーブン温度180~200°C下でクーゲルロール蒸留することで、3-メトキシカルボニルメチレングルタル酸ジメチルエステル89.08g、53を得た。NMR1HCDCl3:δ3.312H,s,CH2,3.79H,s,3xOCH3,3.872H,s,CH2,5.791H,s,=CH,ppm。NMR13CCDCl3,δ36.56,CH3,48.7,2xCH3,52.09及び52.52xCH2;122.3及び146.16C=CH;165.9,170.0及び170.53xCOOppm。段階1b:3-メトキシカルボニルメチレングルタル酸ジメチルエステルの水素化メタノール200ml中の3-メトキシカルボニルメチレングルタル酸ジメチルエステル89g、267mmolを、水素ガス雰囲気3.5バール下で木炭上10パラジウム:50水9gと共に30時間振盪した。溶液をケイソウ土で濾過し、真空中で濃縮することで、3-メトキシカルボニルメチルグルタル酸ジメチルエステルを油状物として得た。収量84.9g、94。NMR1HCDCl3,δ2.486H,d,J=8Hz,3xCH2,2.781H,hextet,J=8HzCH,3.79H,s,3xCH3。NMR13CCDCl3,δ28.6,CH;37.50,3xCH3;51.6,3xCH2;172.28,3xCOO。段階1c:トリメチルエステルからトリアセテートへの還元及びエステル化窒素雰囲気下で三ツ口の2L丸底フラスコ内において、THF400ml中の水素化リチウムアルミニウム20g、588mmolをTHF200ml中のトリスメチルオキシカルボニルメチルメタン40g、212mmolで1時間かけて注意深く処理した。激しい発熱反応が起こり、溶媒を激しく還流させた。反応物を90°Cの油浴上で3日間加熱還流した。水素の発生が止まるまで酢酸100mlを注意深く滴下することで反応物を脱活した。撹拌した反応混合物を、穏やかな還流が生じる程度の速度で無水酢酸溶液500mlで注意深く処理した。フラスコに蒸留装置を取り付け、撹拌し、次いで90°C油浴温度で加熱してTHFを留去した。追加の無水酢酸300mlを添加し、反応物を還流配置に戻し、140°Cの油浴中で5時間撹拌加熱した。反応物を放冷し、濾過した。酸化アルミニウムの沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、合わせた濾液を真空5mmHg中50°Cの水浴温度でロータリーエバポレーター上で濃縮して油状物を得た。油状物を酢酸エチル500mlに溶解し、飽和炭酸カリウム水溶液で洗浄した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮して油状物を得た。油状物を高真空下でクーゲルロール蒸留することで、トリス2-アセトキシエチルメタン45.3g、95.9を油状物として得た。0.1mmHgで沸点220°C。NMR1HCDCl3,δ1.667H,m,3xCH2CH,2.081H,s,3xCH3;4.16H,t,3xCH2O。NMR13CCDCl3,δ20.9,CH3;29.34,CH;32.17,CH2;62.15,CH2O;171,CO。段階1d:トリアセテートからのアセテート基の除去メタノール200ml中のトリス2-アセトキシエチルメタン45.3g、165mM及び880アンモニア100mlを80°Cの油浴上2日間で加熱した。反応物を追加の880アンモニア50mlで処理し、油浴中80°Cで24時間加熱した。追加の880アンモニア50mlを添加し、反応物を80°Cで24時間加熱した。次いで、反応物を真空中で濃縮し、すべての溶媒を除去して油状物を得た。これを880アンモニア150mlに溶解し、80°Cで24時間加熱した。次いで、反応混合物を真空中で濃縮し、すべての溶媒を除去して油状物を得た。クーゲルロール蒸留によってアセトアミド沸点170~1800.2mmを得た。アセトアミドを含むバルブをきれいに洗浄し、蒸留を続行した。トリス2-ヒドロキシエチルメタン22.53g、92が沸点220°C0.2mmで留出した。NMR1HCDCl3,δ1.456H,q,3xCH2,2.21H,五重線,CH;3.76H,t,3xCH2OH;5.53H,brs,3xOH。NMR13CCDCl3,δ22.13,CH;33.95,3xCH2;57.8,3xCH2OH。段階1e:トリオールからトリスメタンスルホネートへの転化ジクロロメタン50ml中のトリス2-ヒドロキシエチルメタン10g、0.0676molの撹拌氷冷溶液に、ジクロロメタン50ml中の塩化メタンスルホニル40g、0.349molの溶液を温度が15°Cを超えないような速度で窒素下でゆっくり滴下した。次いで、ジクロロメタン50mlに溶解したピリジン21.4g、0.27mol、4当量を発熱反応で温度が15°Cを超えないような速度で滴下した。反応物を室温で24時間撹拌し続け、次いで5N塩酸溶液80mlで処理し、層を分離した。水性層を追加のジクロロメタン50mlで抽出し、有機抽出液を合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮することで、過剰の塩化メタンスルホニルで汚染されたトリス[2-メチルスルホニルオキシエチル]メタンを得た。理論収量は25.8gであった。NMR1HCDCl3,δ4.36H,t,2xCH2,3.09H,s,3xCH3,21H,hextet,CH,1.856H,q,3xCH2。段階1f:1,1,1-トリス2-アジドエチルメタンの製造窒素下にある乾燥DMF250ml中の[段階1eからの、過剰の塩化メチルスルホニルで汚染された]トリス[2-メチルスルホニルオキシエチル]メタン25.8g、67mmol、理論量の撹拌溶液を、アジ化ナトリウム30.7g、0.47モルで少量ずつ15分かけて処理した。発熱が観察され、反応物を氷浴上で冷却した。30分後、反応混合物を50°Cの油浴上で24時間加熱した。反応物は褐色になった。反応物を放冷し、希炭酸カリウム溶液200mlで処理し、40/60石油エーテル/ジエチルエーテル10:13×150mlで3回抽出した。有機抽出液を水2×150mlで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過した。石油/エーテル溶液にエタノール200mlを添加してトリアジドを溶液状態に保ち、真空中で200mlを下回らないように体積を減少させた。エタノール200mlを添加し、真空中で再濃縮して痕跡量の石油を除去することで、200mlを下回らない量のエタノール溶液を得た。トリアジドのエタノール溶液を段階1gで直接使用した。注意:アジドは潜在的に爆発性であるので、すべての溶媒を除去してはならず、常に希薄溶液状態に保つべきである。0.2ml未満の溶液を真空中で蒸発させてエタノールを除去し、この少量の試料に関してNMRを実施した。NMR1HCDCl3,δ3.356H,t,3xCH2,1.81H,七重線,CH,,1.66H,q,3xCH2。段階1g:1,1,1-トリス2-アミノエチルメタンの製造エタノール200ml中のトリス2-アジドエチルメタン15.06g、0.0676mol前反応からの100収率を仮定を木炭上10パラジウム2g、50水で処理し、12時間水素化した。反応器を2時間ごとに排気して反応から生じる窒素を除去し、水素を再充填した。NMR分析のために試料を採取し、トリアジドからトリアミンへの完全な転化を確認した。警告:還元しないアジドは蒸留で爆発することがある。反応物をセライトパッドで濾過して触媒を除去し、真空中で濃縮することで。トリス2-アミノエチルメタンを油状物として得た。これをクーゲルロール蒸留0.4mm/Hgで沸点180~200°Cによってさらに精製して無色の油状物8.1g、トリオールからの総合収率82.7を得た。NMR1HCDCl3,δ2.726H,t,3xCH2N,1.41H,七重線,CH,1.396H,q,3xCH2。NMR13CCDCl3,δ39.8CH2NH2,38.2CH2.,31.0CH。例2:3-クロロ-3-メチル-2-ニトロソブタンの製造2-メチルブト-2-エン147ml、1.4molと亜硝酸イソアミル156ml、1.16molとの混合物を、ドライアイス及びメタノールの浴中で-30°Cに冷却し、オーバヘッドエア撹拌機で激しく撹拌し、温度を-20°C未満に維持するような速度で濃塩酸140ml、1.68molを滴下して処理した。かなりの発熱があり、過熱を防ぐために注意を払う必要があるので、これには約1時間を要する。エタノール100mlを添加して、添加終了時に形成されるスラリーの粘度を低下させ、反応物を-20~-10°Cでさらに2時間撹拌して反応を完了させた。沈殿物を真空下での濾過によって回収し、4×30mlの冷-20°Cエタノール及び100mlの氷冷水で洗浄し、真空中で乾燥することで、3-クロロ-3-メチル-2-ニトロソブタンを白色の固体として得た。エタノール濾液及び洗液を合わせ、水200mlで希釈し、冷却し、-10°Cで1時間放置したところ、3-クロロ-3-メチル-2-ニトロソブタンの追加クロップが晶出した。沈殿物を濾過によって回収し、最小量の水で洗浄し、真空中で乾燥することで、総収量115g0.85mol、73の3-クロロ-3-メチル-2-ニトロソブタンNMRによる純度>98を得た。NMR1HCDCl3,異性体の混合物として異性体1,901.5d,2H,CH3,1.65d,4H,2xCH3,5.85,q,及び5.95,q,共に1H。異性体2,10,1.76s,6H,2xCH3,2.073H,CH3。例3:ビス[N-1,1-ジメチル-2-N-ヒドロキシイミンプロピル2-アミノエチル]-2-アミノエチルメタンキレーター1の合成乾燥エタノール30ml中のトリス2-アミノエチルメタン4.047g、27.9mmolの溶液に、無水炭酸カリウム7.7g、55.8mmol、2当量を窒素雰囲気下で激しく撹拌しながら室温で添加した。3-クロロ-3-メチル-2-ニトロソブタン7.56g、55.8mol、2当量の溶液を乾燥エタノール100mlに溶解し、この溶液75mlを反応混合物にゆっくり滴下した。シリカ上でのTLC[プレートをジクロロメタン、メタノール、濃0.88sgアンモニア100/30/5で展開し、ニンヒドリンを噴霧して加熱することでTLCプレートを発色させた]によって反応を追跡した。モノ-、ジ-及びトリ-アルキル化生成物がその順序で増加するRFで認められた。3アンモニア水中の7.5~75アセトニトリル勾配でRPR逆相カラムを使用して分析HPLCを実施した。反応物を真空中で濃縮してエタノールを除去し、水110ml中に再懸濁した。水性スラリーをエーテル100mlで抽出して一部のトリアルキル化化合物及び親油性不純物を除去し、水層中にモノ及び所望のジアルキル化生成物を残存させた。良好なクロマトグラフィーを保証するため、水溶液を酢酸アンモニウム2当量、4.3g、55.8mmolで緩衝した。水溶液を4°Cで一晩貯蔵した後、自動化分取HPLCによって精製した。収量2.2g、6.4mmol、23。質量スペクトル;正イオン10Vコーン電圧。実測値:344;計算値MH=344。NMR1HCDCl3,δ1.246H,s,2xCH3,1.36H,s,2xCH3,1.25-1.757H,m,3xCH2CH,3H,s,2xCH2,2.584H,m,CH2N,2.882H,tCH2N2,5.06H,s,NH2,2xNH,2xOH。NMR1HCD32SOδ1.14xCH;1.29,3xCH2;2.14H,t,2xCH2;NMR13CCD32SO,δ9.04xCH3,25.82xCH3,31.02xCH2,34.6CH2,56.82xCH2N;160.3,C=N。HPLC条件:25mmPRPカラム[A=3アンモニア溶液比重=0.88/水;B=アセトニトリル]を用いて流量8ml/分。時間B07.51575.02075.0227.5307.5各ランについて3mlの水溶液を装填し、12.5~13.5分の時間窓内で収集する。例4:キレーター1-グルタル酸のテトラフルオロチオフェニルエステルキレーター1A-TFTPエステルの合成a[キレーター1]-グルタル酸キレーター1Aの合成キレーター1100mg、0.29mmolをDMF10mlに溶解し、無水グルタル酸33mg、0.29mmolを撹拌しながら少量ずつ添加した。反応物を23時間撹拌することで、所望生成物への完全な添加を達成した。RP-HPLCの後、純粋な酸が良好な収率で得られた。bキレーター1A-TFTPエステルの合成DMF2ml中のキレーター1A段階aから、300mg、0.66mmolに、HATU249mg、0.66mmol及びNMM132μL、1.32mmolを添加した。混合物を5分間撹拌し、次いでテトラフルオロチオフェノール0.66mmol、119mgを添加した。溶液を10分間撹拌し、次いで反応混合物を20アセトニトリル/水8mlで希釈し、生成物をRP-HPLCによって精製することで、凍結乾燥後に110mgの所望生成物を得た。例5:キレーター1-グルタリル-アミノ-PEG12プロピオン酸キレーター1Bの合成Boc-アミノ-PEG12プロピオン酸Polypure、45mg、0.060mmolをTFA/水19:11mLで30分間処理した。次いで、TFAを真空中で蒸発させ、残留物を真空中で一晩乾燥して52mgの粗アミノ-PEG12プロピオン酸を得た。キレーター1A46mg、0.10mmol及びPyAOP31mg、0.060mmolをNMP1mLに溶解した。DIPEA42μL、0.24mmolを添加し、溶液を5分間振盪し、アミノ-PEG12プロピオン酸0.06mmolに添加した。反応混合物を一晩振盪した。追加のキレーター1A0.03mmolを反応混合物に添加し、1時間後に混合物を水/0.1TFA7mLで希釈し、生成物を分取RP-HPLCによって精製した。精製及び特性決定RP-HPLC勾配:40分で10~30B、tR:34.5分によって精製することで、凍結乾燥後に44mg収率67のキレーター1Bを得た。キレーター1BをLC-MSによって特性決定した勾配:5分で10~40B、tR:2.2分、計算m/z1057.7MH、実測m/z1058.0。例6:キレーター2Aの合成段階a:ジエチル[2-ベンジルオキシエチル]マロネートこの化合物をRamalingametal[Tetrahedron,51,2875-28941995]の方法の変法によって製造した。即ち、ナトリウム1.20gをアルゴン下で無水エタノール25mlに溶解した。マロン酸ジエチル14.00gを添加し、混合物を30分間還流した。ベンジルブロモエチルエーテル10gを添加し、混合物を16時間撹拌還流した。エタノールを回転蒸発で除去し、残留物をエーテル100mlと水50mlとの間に分配した。エーテル層を水3×50mlで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。エーテルを回転蒸発で除去し、残留物を真空中で蒸留した。40~55°Cで留出する画分は廃棄した未反応のマロン酸ジエチル。生成物は140~150°C1mmで留出した[文献沸点138~140°C1mm]。収量は12.60gの無色油状物であった。1HNMR270MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=7.28m,5HC6H5,4.47s,2H,CH2-Ph,4.16m,4H,COOCH2,3.58t,1H,CH,3.50t,2H,O-CH2-CH2,2.21t,2H,O-CH2-CH2,1.20t,6H,COOCH2-CH3。13CNMR67.5MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=169.20CO,138.10,128.60,127.80芳香族,73.00CH2Ph,67.30O-CH2-CH2,61.70COOCH2,49.10CH,28.90O-CH2-CH2,14.10COOCH2CH3。段階b:N,N’-ビス2-アミノエチル-2-2-ベンジルオキシ-エチルマロンアミドジエチル[2-ベンジルオキシエチル]マロネート4.00gをエチレンジアミン30mlに添加し、溶液を室温で2日間撹拌した。過剰のエチレンジアミンを回転蒸発で除去し、残留物を高真空下で2日間乾燥することで、静置後に結晶化する黄色の油状物4.28gを得た。生成物は、NMRスペクトル中に検出される痕跡量のエチレンジアミンを含んでいた。1HNMR270MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=7.74brt,2H,CO-NH,7.32m,5H,C6H5,4.46s,2H,CH2-Ph,3.50t,2H,OCH2-CH2-,3.33t1H,CH,3.23m,4H,CO-NH-CH2,2.74t,4H,CH2-NH2,2.18q,2H,O-CH2-CH2-,1.55brs,4H,NH2。13CNMR67.5MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=171.10CO,138.20,128.30,127.70芳香族,73.00CH2-Ph,67.80O-CH2-CH2,51.40CH,42.40CO-NH-CH2,41.20CH2-NH2,31.90O-CH2-CH2-。段階c:N,N’-ビス2-アミノ-エチル-2-2-ベンジルオキシ-エチル-1,3-ジアミノプロパンN,N’-ビス2-アミノエチル-2-2-ベンジルオキシ-エチルマロンアミド3.80gをTHF20mlに溶解し、フラスコを氷浴中に浸漬した。フラスコをアルゴンでフラッシュし、THFボラン錯体80ml、THF中1Mを注射器で添加した。反応混合物を室温まで放温し、次いで40°Cで2日間撹拌し、1時間還流した。メタノール50mlを滴下し、溶液を40°Cで一晩撹拌した。溶媒を回転蒸発で除去し、残留物をメタノール20mlに溶解した。水酸化ナトリウム15mlの水中に10gを添加し、メタノールを沸騰させて除去した。無色の油状物を分離し、CH2Cl23×50ml中に抽出した。溶液をNa2SO4上で乾燥した。溶媒の除去によって3.40gの無色油状物を得た。1HNMR270MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=7.34m,5H,C6H5,4.49s,2H,CH2-Ph,3.55t,2H,OCH2-CH2-,2.76t,4H,N-CH2,2.63m,8H,N-CH2,1.84m,1H,CH,1.58m,2H,CH-CH2-CH2-O,1.41brs,6H,NH。13CNMR67.5MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=138.60,128.30,127.60aromatic,72.80CH2-Ph,68.70O-CH2-CH2,53.50N-CH2,52.80N-CH2,41.60N-CH236.40CH,31.30CH-CH2-CH2-O。MS-EI:295MH,計算値:295.2。段階d:N,N’-ビス2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-エチル-2-2-ベンジルオキシ-エチル-1,3-ジtert-ブトキシカルボニルアミノプロパンN,N’-ビス2-アミノ-エチル-2-2-ベンジルオキシ-エチル-1,3-ジアミノプロパン3.30gをCH2Cl2100mlに溶解し、トリエチルアミン5.40g及びtert-ブチルジカルボネート10.30gを添加した。反応混合物を室温で2日間撹拌した。混合物を水100ml、クエン酸溶液100ml、水中10及び水2×100mlで洗浄した。有機層をNa2SO4上で乾燥し、溶媒を回転蒸発で除去して黄色の油状物を得、これを高真空下で一定の質量になるまで乾燥した。粗生成物7.70gをシリカゲルカラム250g、230~400メッシュ、CH2Cl2、CH2Cl2-Et2O1:1上で精製することで、6.10g78.3の透明な油状物を得た。1HNMR270MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=7.32m,5H,C6H5,5.12brd,2H,NH,4.47s,2H,CH2-Ph,3.49t,2H,OCH2-CH2-,3.24br,12H,N-CH2,2.14br,1H,CH,1.59m,2H,CH-CH2-CH2-O1.45s,18H,t-Bu,1.42s,18H,t-Bu。13CNMR67.5MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=155.90NH-CO,138.20,128.30127.60,127.50aromatic,79.90,78.90CMe3,72.80CH2-Ph,68.00O-CH2-CH2,50.00br,N-CH2,46.90br,N-CH2,39.20N-CH2,34.40br,CH,29.80CH-CH2-CH2-O,28.30t-Bu。MS-EI:695MH,計算値:695.5。段階e:N,N’-ビス2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-エチル-2-2-ヒドロキシエチル-1,3-ジtert-ブトキシカルボニルアミノプロパンN,N’-ビス2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-エチル-2-2-ベンジルオキシ-エチル-1,3-ジtert-ブトキシカルボニルアミノプロパン3.16gを無水エタノール100mlに溶解し、活性化炭素上のPd1.00g、乾燥、10を添加した。混合物をParr水素化装置において35psiで2日間水素化した。触媒を濾去し、エタノール3×20mlで洗浄した。エタノールを回転蒸発で除去して無色の油状物を得、これを高真空下で一定の質量2.67g、97.1になるまで乾燥した。1HNMR270MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=5.25brd,2H,NH,3.69t,2H,OCH2-CH2-,3.28br,12H,N-CH2,2.71br,OH,2.23br,1H,CH,1.56shoulder,m,2H,CH-CH2-CH2-O1.48s,18H,t-Bu,1.44s,18H,t-Bu。13CNMR67.5MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=156.10NHCO,80.00,79.20CMe3,59.60O-CH2-CH2,49.90br,N-CH2,47.00br,N-CH2,39.34N-CH2,33.80CH,32.30CH-CH2-CH2-O,28.30t-Bu。MS-EI:605MH,計算値:605.4。段階f:N,N’-ビス2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-エチル-2-2-カルボキシメチル-1,3-ジtert-ブトキシカルボニルアミノプロパンBoc保護キレーター2AMazitscheketal[Ang.Chem.Int.Ed.,41,4059-40612002]の方法を使用した。即ち、N,N’-ビス2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-エチル-2-2-ヒドロキシエチル-1,3-ジtert-ブトキシカルボニルアミノプロパン2.60gをDMSO15mlに溶解し、1-ヒドロキシ-1,2-ベンズヨードオキソール-31H-オン-1-オキシドIBX、3.50gを添加した。混合物を室温で1時間撹拌し、次いでN-ヒドロキシスクシンイミド2.50gを添加した。反応混合物を室温で2日間撹拌した。水酸化ナトリウム溶液2M、40mlを添加し、混合物を室温で4時間撹拌した。溶液を氷浴中に浸漬し、2M塩酸でpH2に酸性化した。水性層をエーテル4×100mlで抽出し、合わせたエーテル抽出液を水3×50mlで洗浄した。エーテル層をNa2SO4上で乾燥し、溶媒を回転蒸発で除去することで、生成物及び2-ヨードソ安息香酸を含む黄色の固体残渣を得た。クロロホルム-ヘキサン1:380mlからの結晶化によってヨードソ安息香酸の大部分2.1gを除去した。クロロホルム-ヘキサン母液を蒸発させて黄色の油状物3gを得、これをシリカカラム300g、CH2Cl2-Et2O、1:1上に装填した。残留ヨードソ安息香酸はエーテルで溶出した。生成物はエーテル-メタノール9:1で溶出した。生成物を含む画分を合わせ、溶媒を除去して1.5gの淡黄色油状物を得た。これを再びシリカカラム上でクロマトグラフィー処理した50g、Et2O。生成物をエーテル-酢酸95:5で溶出した。生成物を含む画分を合わせ、溶媒を回転蒸発で除去して油状物を得、これを高真空下で乾燥した。収量は1.10g41.3であった。1HNMR270MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=7.61brs,1H,COOH,5.19brd,2H,NH,3.22br,12H,N-CH2,2.47brm,1H,CH,2.26br,2H,CH-CH2-COOH,1.41s,18H,t-Bu,1.37s,18H,t-Bu。13CNMR67.5MHz,CDCl3,25oC,TMSδ=175.90COOH,156.10NHCO,80.40,79.10CMe3,49.50N-CH2,46.80N-CH2,39.00N-CH2,34.70CH-CH2-COOH,34.20CH-CH2-COOH,28.30,28.20t-Bu。MS-EI:619MH,計算値:619.4。例7:HYNIC-ジュラマイシンコンジュゲート1A及びコンジュゲート1Bの合成ジュラマイシンSigma-Aldrich社、5.0mg、2.5μmol及びN-Boc-HYNICスクシンイミジルエステルABXAdvancedBiochemicalCompounds社、1.0mg、2.8μmolをDMF1mlに溶解し、DIPEA2.0μL、13μmolを混合物に添加した。反応の進行をLC-MS分析によってモニターした。緩慢な反応を促進するため、3時間後にHOAt1.1当量を添加したところ、一晩で約60の生成物が生じた。室温でさらに1日後及び4°Cで3日後に約80のHYNIC-コンジュゲート生成を得るためには、追加のN-Boc-HYNICスクシンイミジルエステル1当量及びHOAt2当量が必要であった。LC-MS分析によれば、ビス-コンジュゲート約35に加えて、モノ-コンジュゲートに対応する2つの基線分離ピークが認められた。精製及び特性決定水/0.1TFA4mlを反応混合物に添加し、2種のモノ-コンジュゲート化生成物を分取RP-HPLC勾配:15分の0B、10分で0~45B、40分で45~60B、tR:47.9分及び49.3分によって精製し、次いでTFA中でBoc脱保護することで、2種のモノ-コンジュゲート化ジュラマイシン異性体をそれぞれ1.7mg及び1.1mgの収量で得た。2種の異性体をLC-MSによって特性決定した勾配:5分で20~40B、tR:2.8分コンジュゲート1A、実測m/z:1074.8、予測MH22:1074.4、tR:2.9分コンジュゲート1B、実測m/z:1074.8、予測MH22:1074.4。例8:[キレーター1A]-ジュラマイシンモノ-コンジュゲートコンジュゲート3A及び[キレーター1A]-ジュラマイシンビス-コンジュゲートコンジュゲート3Bの合成キレーター1A例4、3.0mg、6.6μmol、PyBOP2.6mg、5.0μmol及びDIPEA1.7μL、9.7μmolをNMP0.7mlに溶解した。混合物を5分間振盪し、NMP0.5ml中のジュラマイシンSigma-Aldrich社、5.0mg、2.5μmolの溶液に添加した。反応混合物を40分間振盪し、次いで水/0.1TFA6mlで希釈し、分取HPLCを用いて生成物を精製した。分取HPLC勾配:40分で5~35Bただし、A=H2O/0.1HCOOH及びB=ACN/0.1HCOOHによって精製することで、2.5mgの純粋なコンジュゲート3A収率41及び1.7mgの純粋なコンジュゲート3B収率28を得た。精製コンジュゲート3Aを分析LC-MSによって分析した勾配:5分で25~35B、tR:1.93分、実測m/z:1227.0、予測MH22:1226.6。精製コンジュゲート3Bを分析LC-MSによって分析した勾配:5分で25~35B、tR:2.35分、実測m/z:1446.7、予測MH22:1446.3。2種のモノ-コンジュゲートコンジュゲート3Aの分離は、分析HPLC又は分取HPLCを用いて達成することができなかった。各々の場合において、2種の位置異性体は単一のピークとして溶出した。例9:[キレーター1A]-シンナマイシンコンジュゲートコンジュゲート5の合成シンナマイシンSigma-Aldrich社、2.0mg、1.0μmol、キレーター1A例4、0.9mg、1.5μmol及びDIPEA0.5μL、2.9μmolを、NMP0.2ml、DMF0.2ml及びDMSO0.6mlの溶液に溶解した。反応混合物を一晩振盪した。次いで、混合物を10ACN/水/0.1TFA7mlで希釈し、分取HPLCを用いて生成物を精製した。精製及び特性決定分取HPLC勾配:40分で20~40Bによって精製することで、1.9mgの純粋なコンジュゲート5収率78を得た。精製材料を分析LC-MSによって分析した勾配:5分で20~40B、tR:2.86分、実測m/z:1241.0、予測MH22:1240.6。例10:[キレーター1B]-ジュラマイシンコンジュゲートコンジュゲート6の合成キレーター1B例5、1.6mg、1.5μmol、PyBOP0.4mg、0.8μmol及びDIPEA1μL、5μmolをNMP0.5mLに溶解した。混合物を5分間振盪し、NMP0.5mL中のジュラマイシン3.0mg、1.5μmolの溶液に添加した。反応混合物を30分間振盪した。活性化キレーター1Bのさらに2つのアリコート2×1.6mgを30分間隔で添加した。混合物を水/0.1TFA6mLで希釈し、分取RP-HPLCを用いて生成物を精製した。精製及び特性決定分取HPLC勾配:40分で20~50Bただし、A=水/0.1酢酸アンモニウム及びB=ACNによって精製することで、3.9mgの純粋なコンジュゲート6収率87を得た。精製材料をLC-MSによって分析した勾配:5分で20~40B、tR:2.89分、実測m/z:1526.5、予測MH22:1526.2。例11:[キレーター1B]-シンナマイシンコンジュゲートコンジュゲート7の合成キレーター1B例5、4.8mg、4.4μmol、PyBOP2.1mg、4.0μmol及びDIPEA2.3μL、13.2μmolをDMF0.5mLに溶解した。混合物を5分間振盪し、固形のシンナマイシン4.5mg、2.2μmolに添加した。反応を促進して4時間以内にほぼ完了させるため、2時間後及び3.5時間後に追加の予備活性化キレーター1Bを添加した。混合物を20ACN/水/0.1TFA8mLで希釈し、分取RP-HPLCを用いて生成物を精製した。精製及び特性決定分取RP-HPLC勾配:40分で25~35B、tR:38.6分によって精製することで、3.9mgの精製コンジュゲート7収率58を得た。精製材料をLC-MSによって分析した勾配:5分で20~40B、tR:2.9分、実測m/z:1028.0、予測MH22:1027.5純度約93.5、未反応出発原料約3。例12:[キレーター2A]-ジュラマイシンコンジュゲートコンジュゲート2A及びコンジュゲート2Bの合成ジュラマイシンSigma-Aldrich社、7.5mg、3.8μmol、Boc保護キレーター2A例6、5.0mg、6.9μmol、HOAt1.9mg、8.8μmol及びDIPEA4.1μL、20.0μmolをNMP1.5mlに溶解した。反応混合物を一晩振盪した。次いで、混合物を20ACN/水/0.1TFA6mLで希釈し、分取HPLCを用いて生成物を精製した。精製及び特性決定分取HPLC勾配:10分の0B、5分で0~30B、40分で30~70B、tR:42.4分及び45.0分によって精製し、次いでTFA中でBoc脱保護することで、2種のモノ-コンジュゲート化ジュラマイシン異性体をそれぞれ2.0mg及び0.4mgの収量で得た。2種の異性体をLC-MSによって特性決定した勾配:5分で20~60B、tR:1.7分コンジュゲート2A、実測m/z:1107.5、予測MH22:1107.0、tR:1.6分コンジュゲート2B、実測m/z:1107.5、予測MH22:1107.0。例13:[キレーター2A]-シンナマイシンコンジュゲートコンジュゲート4の合成シンナマイシンSigma-Aldrich社、2.0mg、1.0μmol、Boc保護キレーター2A例6、1.1mg、1.5μmol及びDIPEA0.5μL、2.9μmolをDMF1.0mlに溶解した。反応混合物を一晩振盪した。次いで、混合物を20ACN/水/0.1TFA6mLで希釈し、分取HPLCを用いて生成物を精製した。精製及び特性決定分取HPLC勾配:40分で30~70Bによって精製することで、1.8mgの純粋なBoc保護コンジュゲート4を得た。精製材料をTFA/4水2ml中で45分間Boc脱保護し、50ACN/水から凍結乾燥することで、1.6mgのコンジュゲート4収率73を得た。材料を分析LC-MSによって分析した勾配:5分で10~40B、tR:3.7分、実測m/z:1120.9、予測MH22:1121.0。例14:99mTc標識キレーター-コンジュゲートの製造放射性標識製剤は、i精製せずに高いRACで高いRCPを得ながら、或いはii精製によって非標識LBPペプチドを除去しながら使用した。コンジュゲート3A0.1mg、40nmolをエタノール100mL及び水100mLの混合物に溶解し、可溶化を助けるため超音波浴中に約20分間配置した。溶液を凍結乾燥キットに添加した[処方:SnCl22H2O0.016mg、0.07μmol、MDPH40.025mg,0.14μmol、NaHCO34.5mg、53.6μmol、Na2CO30.6mg、5.66μmol及びNaPABA0.2mg、1.26μmol]。次いで、99Mo/99mTcジェネレーターからの99mTcO4溶出液約1mlを添加し、混合物を室温で約10分間放置した。粗生成物の一部約400μLをHPLCカラム上に注入した下記のHPLC条件を参照されたい。約18分の保持時間を有する放射性ピークを、PBS所望のRACに応じた様々な容量を含むバイアル中にカットし、次いで真空中で乾燥して過剰の移動相を除去した。粗RCP=93±6n=13。製剤化RCPt=0=99±1n=13。製剤化RCPt=120分=97±3n=13。比放射能=3.5±0.5GBq/nmoln=13。RT99mTc-コンジュゲート5=18分。HPLC条件先行技術のHYNIC対応物である99mTc-[コンジュゲート1]のRCPは、78~89粗であった。テトラアミンキレーターのコンジュゲートコンジュゲート1A及び4は、移動相Aとして50mM酢酸アンモニウムの代わりに0.1TFAを使用した点を除き、同様にして製造した。99mTc-[コンジュゲート2A]の保持時間は12.2分であり、99mTc-[コンジュゲート4]の保持時間は12.4分であった。1.0。例15:コンジュゲート2A及び2Bのエドマン分解MS分析技法のみの使用はキレーターのコンジュゲーション部位の決定には適さないことが判明し、LC-MSと組み合わせて手動エドマン分解化学を適用した。修正した文献方法を使用した[Xuetal;PNAS,106,p.19310-193152009、Oniskoetal,J.Am.Soc.MassSpectrom.,18,p.1070-10792007及びHayashietal,JAntibiotics,43,1421-14301990]。得られたデータは、コンジュゲート2AがNα-アミノコンジュゲート化異性体に相当する一方、コンジュゲート2BがLys2Nε-アミノコンジュゲートに相当することを示した。データは第二アミノコンジュゲート式IIのLysdに関して予想される分解生成物に適合せず、この部位がキレートコンジュゲーションのために使用される条件下では反応性を有しないことを示している。しかし、第二アミノ基はエドマン分解サイクル中に使用されるより強力なカップリング条件下でフェニルイソチオシアネートと反応することが注目された。例16:ホスファチジルエタノールアミンに対する親和性Biacore3000GEHealthcare社ウプサラ、スウェーデンにL1チップを取り付けた。POPE/POPC20PEから作製したリポソームを、製造者によって推奨される捕獲技法を用いた親和性試験のために適用した。各ランは、チップ表面の活性化、リポソームの固定化、ペプチドの結合、並びにリポソーム及びペプチドの洗浄除去再生からなっていた。同様な適用例は、Frostell-Karlssonetal[Pharm.Sciences,V.941,2005]に見出すことができる。各サイクル後には、流れる緩衝液による針、チューブ及び液体取扱いシステムの完全な洗浄を実施した。BIACOREソフトウェア:すべての方法インストラクションを含むBIACORE制御ソフトウェアを適用した。プレプログラムドインストラクションに対する完全な制御を得るため、コマンド付きの方法がBIACOREMethodDefinitionLanguageMDLでも書かれていた。センサーグラムを分析するためには、BIACORE評価ソフトウェアを適用した。すべての物質は、ホスファチジルエタノールアミンに対する良好な結合剤であることがわかった。すべての物質に関するKDは100nM未満であった。結果を下記表2に示す。例17:腫瘍取込み試験99mTc-[コンジュゲート2A]、99mTc-[コンジュゲート3A]及び99mTc-[コンジュゲート5]を、EL4マウスリンパ腫異種移植片モデルにおける体内分布によって評価した。簡単に述べれば、C57/B16マウスにおける腫瘍増殖の確立後、動物をi食塩水/DMSO溶液、又はii化学療法剤50食塩水/50DMSO中の67mg/kgエトポシド及び100mg/kgシクロホスファミドで処置した。療法剤又はビヒクルでの処置から24時間後、動物を該当する放射性標識化合物の体内分布に関して評価した。加えて、腫瘍を摘出し、カスパーゼ活性の測定カスパーゼ-Gloアッセイによってアポトーシスのレベルを評価した。次いで、結合剤取込みとカスパーゼ活性との相関関係を様々な時点に関してプロットした。注射から120分後の結果を表3下記に示し、99mTc-[コンジュゲート5]に関する結果を図1及び図2に示す。例18:99mTc標識キレーター-コンジュゲートの体内分布種々の化合物の薬物動態プロファイルを決定するため、ナイーブラットにおける体内分布によって99mTc-コンジュゲートを評価した。次いで、種々の器官/組織における結合剤保持の相関関係を様々な時点に関してプロットした。生成されたデータは、LBP1及びLBP2コンジュゲート中におけるPEGの含有が肝臓保持を低減させることで薬物動態を改善することを示した下記表4を参照されたい。"