ヒト患者において治療に対して感受性である腫瘍を同定する方法において、上記腫瘍の試料中の突然変異したEGFR遺伝子又は突然変異したEGFRタンパク質の存在を決定することを含み、上記突然変異がEGFRのエキソン18-21に位置しており、T790M以外の突然変異EGFR遺伝子又は突然変異EGFRタンパク質の存在が、腫瘍が治療に対して感受性であることを示す方法。上記治療が化学療法剤である請求項1に記載の方法。上記化学療法剤が、シタラビン、フルダラビン、5フルオロ2デオキシウリジン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキセート;ブレオマイシン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ミトキサントロン;カンプトセシン、トポテカン;テニポシド;コルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はタモキシフェンの一又は複数である請求項2に記載の方法。上記化学療法剤がカルボプラチン及び/又はパクリタキセルである請求項2に記載の方法。上記治療がEGFR阻害剤である請求項1に記載の方法。上記EGFR阻害剤がセツキシマブ、パニツムマブ、エルロチニブ又はゲフィチニブの一又は複数である請求項5に記載の方法。上記EGFR阻害剤がエルロチニブである請求項5に記載の方法。上記突然変異がEGFRのキナーゼドメインに位置している請求項1に記載の方法。上記突然変異が、G719A、G719C、G719S、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、H773Y、S768I、S784F、L858R、L858P、L861Q、E746-A748del、E746-A750del、E746-R748del、L747-E749del、R748-P753del、L747-S752del、E746V、L747-T751del、L747-P753del、S752-I759del、M766-A767AIins、S768-V769SVAins、P772-H773NSins及びP772-H773Vinsの少なくとも一つである請求項8に記載の方法。上記突然変異が、G719A、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、S768I、L858P、E746-A748del、R748-P753del、M766-A767AIins、S768-V769SVAins及びP772-H773NSinsの少なくとも一つである請求項8に記載の方法。上記突然変異が、2402G>C;2401G>T;2401G>A;2482G>A;2486T>C;2491G>C;2494G>C;2510C>T;2539G>A;2556C>T;2563C>T;2576T>A;2819T>G;2819T>C;2482-2490del;2481-2495del;2482-2490del;2485-2493del;2494G>C;2486-2503del;2485-2502del;2483A>T;2486-2494del;2499-2522del;2544-2545insGCCATA;2554-2555insCCAGCGTGG;2561-2562insGGT;及び2562-2563insAACTCCの少なくとも一つである請求項8に記載の方法。上記突然変異が、2402G>C;2482G>A;2486T>C;2491G>C;2494G>C;2510C>T;2539G>A;2549G>T;2563C>T;2819T>C;2482-2490del;2486-2503del;2544-2545insGCCATA;2554-2555insCCAGCGTGG;及び2562-2563insAACTCCの少なくとも一つである請求項8に記載の方法。試料中のEGFR突然変異を同定する方法において、上記試料からの核酸を、突然変異したEGFRタンパク質をコードする核酸、又は突然変異を含むその断片に特異的にハイブリダイズ可能な核酸プローブと接触させ、上記ハイブリダイゼーションを検出することを含む方法。上記突然変異がEGFRのキナーゼドメインに存在している請求項13に記載の方法。上記EGFR突然変異が、2402G>C;2401G>T;2401G>A;2482G>A;2486T>C;2491G>C;2494G>C;2510C>T;2539G>A;2556C>T;2563C>T;2576T>A;2819T>G;2819T>C;2482-2490del;2481-2495del;2482-2490del;2485-2493del;2494G>C;2486-2503del;2485-2502del;2483A>T;2486-2494del;2499-2522del;2544-2545insGCCATA;2554-2555insCCAGCGTGG;2561-2562insGGT;及び2562-2563insAACTCCの少なくとも一つである請求項13に記載の方法。上記EGFR突然変異が、2402G>C;2482G>A;2486T>C;2491G>C;2494G>C;2510C>T;2539G>A;2549G>T;2563C>T;2819T>C;2482-2490del;2486-2503del;2544-2545insGCCATA;2554-2555insCCAGCGTGG;及び2562-2563insAACTCCの少なくとも一つである請求項13に記載の方法。上記プローブが検出可能に標識される請求項13に記載の方法。上記プローブがアンチセンスオリゴマーである請求項13に記載の方法。上記試料中の上記核酸中のEGFR遺伝子又はその断片が増幅され、上記プローブと接触せしめられる請求項13に記載の方法。EGFR突然変異を有する腫瘍の治療のための医薬の調製における抗癌剤の使用であって、上記腫瘍中の上記EGFR突然変異が、G719A、G719C、G719S、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、H773Y、S768I、S784F、L858R、L858P、L861Q、E746-A748del、E746-A750del、E746-R748del、L747-E749del、R748-P753del、L747-S752del、E746V、L747-T751del、L747-P753del、S752-I759del、M766-A767AIins、S768-V769SVAins、P772-H773NSins及びP772-H773Vinsの少なくとも一つである使用。上記抗癌剤が化学療法剤である請求項20に記載の使用。上記抗癌剤がEGFR阻害剤である請求項20に記載の使用。上記化学療法剤が、シタラビン、フルダラビン、5フルオロ2デオキシウリジン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキセート、ブレオマイシン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、カンプトセシン、トポテカン;テニポシド;コルセミド、コルヒチン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はタモキシフェンの一又は複数である請求項21に記載の使用。上記化学療法剤が、メトトレキセート;ブレオマイシン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はタモキシフェンの一又は複数である請求項21に記載の使用。上記化学療法剤が、セツキシマブ、パニツムマブ、エルロチニブ又はゲフィチニブの一又は複数である請求項22に記載の使用。上記EGFR突然変異が、G719A、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、S768I、L858P、E746-A748del、R748-P753del、M766-A767AIins、S768-V769SVAins及びP772-H773NSinsの少なくとも一つである請求項20に記載の使用。突然変異したEGFRタンパク質をコードする核酸又は突然変異を含むその断片に特異的にハイブリダイズ可能な核酸プローブ。上記プローブが、突然変異したEGFRをコードする上記核酸又はその上記断片に相補的である請求項27に記載のプローブ。約10から約50のヌクレオチド長を有する請求項27に記載のプローブ。検出可能な標識を更に含む請求項27に記載のプローブ。上記突然変異が、G719A、G719C、G719S、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、S768I、L858R、L858P、L861Q、E746-A748del、E746-A750del、E746-R748del、L747-E749del、R748-P753del、L747-S752del、E746V、L747-T751del、L747-P753del、S752-I759del、M766-A767AIins、S768-V769SVAins、及びP772-H773Vinsの少なくとも一つである請求項27に記載のプローブ。上記突然変異が、G719A、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、S768I、H773Y、S784F、T790M、L858P、E746-A748del、R748-P753del、M766-A767AIins、P772-H773NSins及びS768-V769SVAinsの少なくとも一つである請求項27に記載の使用。試料中の突然変異したEGFR遺伝子を検出する方法において、上記EGFR遺伝子のキナーゼドメインに対応する核酸又は突然変異を含むことが疑われるその断片を上記試料から増幅させ、増幅させた核酸の電気泳動移動度を、対応する野生型EGFR遺伝子又はその断片の電気泳動移動度と比較することを含む方法。電気泳動移動度がポリアクリルアミドゲルで測定される請求項33に記載の方法。EGFR阻害剤での治療に対して感受性であるヒト患者における腫瘍を同定する方法であって、i上記腫瘍の試料中の野生型RASタンパク質又は遺伝子の存在を決定し、ここで、野生型RASタンパク質又は遺伝子の存在が、腫瘍がEGFR阻害剤での治療に感受性であることを示し、又はii上記腫瘍の試料中の突然変異したRASタンパク質又は遺伝子の存在を決定し、突然変異したRASタンパク質又は遺伝子の不在が、腫瘍がEGFR阻害剤での治療に感受性であることを示すことを含む方法。上記RAS突然変異が、G12C;G12A;G12D;G12R;G12S;G12V;G13C;G13Dの少なくとも一つである請求項36に記載の方法。腫瘍を有する患者の予後を決定する方法において、上記腫瘍の試料中におけるT790MのEGFR突然変異の有無を決定し、上記T790MのEGFR突然変異の存在が上記T790MのEGFR突然変異がない場合と比較してより乏しい予後を示す方法。EGFR阻害剤での治療に対して耐性がある腫瘍を同定する方法であって、上記腫瘍の試料中においてT790MのEGFR突然変異の有無を決定し、上記突然変異の存在が、腫瘍がEGFR阻害剤での治療に対して耐性であることを示す方法。T790M突然変異を含む突然変異型EGFRタンパク質のシグナル伝達を阻害する化合物のスクリーニング方法であって、リン酸化基質とATPの存在下で上記突然変異型EGFRを試験化合物と接触させ、上記基質のリン酸化量の変化を検出し、コントロールと比較した、又は試験化合物の不在下での基質のリン酸化と比較した上記基質のリン酸化の減少が、上記試験化合物が突然変異型EFGRシグナル伝達の阻害剤であることを示す方法。実施例1スライドの調製-脱パラフィン処理及び染色次の溶液に切片を浸した:1.新鮮なキシレン切片の脱パラフィン処理のため-5分2.新鮮なキシレン-5分3.100エタノール-15秒4.95エタノール-15秒5.70エタノール-15秒6.脱イオン水-15秒7.メイヤーのヘマトキシリン-30秒8.脱イオン水-洗浄×2-15秒9.70エタノール-15秒10.エオシンY-5秒11.95エタノール-15秒12.95エタノール-15秒13.100エタノール-15秒14.100エタノール-15秒15.キシレン切片の脱水を完全にするため-60秒16.およそ2分間空気乾燥させるかエアースプレーを軽く使用してキシレンを完全に除去した。17.ついで、組織はLCMの準備が整った。実施例2レーザ捕獲顕微解剖及びDNA抽出材料:PixCellIILCMシステムCapSureHS又はCapSureMacroLCMキャップExtractSure装置HSのみカミソリの刃工場殺菌0.5ml試験管0.2ml試験管PicoPureDNA抽出キット65°Cインキュベータ手順:1.集められる組織の領域にCapSureキャップを配した2.所望の領域にレーザを当てた2.組織からキャップを持ち上げた3.0.5mlの試験管中にプロテイナーゼKと共に20ulのPicoPure消化バッファーを分配した4.切った材料と共にキャップを試験管中に配して密封シールを形成した5.消化バッファーがキャップを覆うように試験管を逆さにした6.65°Cで24時間インキュベートした7.キャップと共に試験管をスピンさせて消化された材料を試験管の底に集めた8.消化物を0.2mlの細長い試験管に移した9.加熱した蓋を備えたサーモサイクラーで10分間95°CにてプロテイナーゼKを不活化させた10.50ulのPCR反応で1-2ulの試料を使用した。清浄化は必要ではなかった。実施例3PCR増幅PCRプライマー:配列決定をする各エキソンEGFRエキソン18、19、20及び21に対してプライマー対を設計した。プライマー配列は次の通りであった:CAAATGAGCTGGCAAGTGCCGTGTCGAGTTTCCCAAACACTCAGTGAAACGCAATATCAGCCTTAGGTGCGGCTCCATAGAAAGTGAACATTTAGGATGTGCCATGAGTACGTATTTTGAAACTCCATATCCCCATGGCAAACTCTTGCCTAACGTTCGCCAGCCATAAGTCCGCTGCGAGCTCACCCAGAATGTCTGGTGTAAAACGACGGCCAGTCAAGTGCCGTGTCCTGGCACCCAAGCCAGGAAACAGCTATGACCCCAAACACTCAGTGAAACAAAGAGTGTAAAACGACGGCCAGTCCTTAGGTGCGGCTCCACAGCCAGGAAACAGCTATGACCCATTTAGGATGTGGAGATGAGCTGTAAAACGACGGCCAGTGAAACTCAAGATCGCATTCATGCCAGGAAACAGCTATGACCGCAAACTCTTGCTATCCCAGGAGTGTAAAACGACGGCCAGTCAGCCATAAGTCCTCGACGTGGCAGGAAACAGCTATGACCCATCCTCCCCTGCATGTGTTAAACPCR用のKRasオリゴTACTGGTGGAGTATTTGATAGTGCTGTATCAAAGAATGGTCCTGTGTAAAACGACGGCCAGTTAGTGTATTAACCTTATGTGm13rCAGGAAACAGCTATGACCACCTCTATTGTTGGATCATATTCG一次PCR産物のネステッド増幅を、一次PCR産物内に位置しているイントロン特異的プライマー対を使用して実施した。これらのネステッドプライマー対はM13f及びM13rev配列でタグ付けした。PCRの第一回目:PCR反応:DNA0.5から30ngプライマー250nM/各外側プライマーdNTPs各0.2mMロッシュカタログ番号1581295MgCl21.5mM15mM10×バッファー酵素1.5U/RXExpandHighfidelityTaq50ul反応容積サーモサイクラー条件:95°C-3分94°C-30秒35回反復58°C-30秒72°C-1分72°C-8分4°C-永久PCRの第二回目:PCR反応:DNA第一回目のPCR反応から1ulプライマー250nM/各内側プライマーdNTPs各0.2mMロッシュカタログ番号1581295MgCl21.5mM15mM10×バッファー酵素1.5U/RXExpandHighfidelityTaq50ul反応容積サーモサイクラー条件:95°C-3分94°C-30秒30回反復58°C-30秒72°C-1分72°C-8分4°C-永久PCR産物の単離:PCR反応産物を、品質管理のためにEゲル2アガロースゲルInvitrogenカタログ番号G601802に流した。PCR産物は必要に応じてQiaquick96PCR精製キットQiagenカタログ番号28181を使用して直接精製するか又はゲル精製した。ゲル精製では、PCR産物をEゲルから切り取り、DNAをゲル抽出プロトコルQiagenカタログ番号28181でQiaquick96PCR精製キットを使用して精製した。実施例4配列決定タグ付けPCR産物に対してネステッド配列決定プライマー又は標準M13f及びM13rev配列決定プライマーを使用して、精製されたPCR産物の配列決定を行った。配列は次の通りであった:TGTAAAACGACGGCCAGTCAGGAAACAGCTATGACC精製したPCR産物を希釈し、BigDyeターミネーターキットABIFosterCityCAを製造者の指示書に従って使用してサイクル配列決定した。反応混合物:5ulのDNA25-100ngのPCR産物6ulの水水で.25OD/100ulに希釈した1ulプライマーm13f又はm13r又は配列特異的プライマー2ulのBigDyev316ulの希釈バッファーABI5×希釈バッファーの等価物サイクル配列決定:条件:96°C-2.5分-初期変性96°C-10秒50°C-5秒60°C-4分全25から50サイクルを繰り返す反応洗浄:次のものを使用して取り込まれていないヌクレオチドを除去:8セファデックスEdgeBioSystem9ウェルブロック中500ul750gで2分間スピン分析:反応産物を、ABI3700又はABI3730配列決定機器で電気泳動させた。電気泳動図を、Sequencherのような市販の解析プログラムを使用し、また特注ツールを用いて突然変異について解析した。実施例5用量応答この研究に使用したヒト上皮成長因子レセプターEGFR野生型及び変異コンストラクトのN末端にgDの単純ヘルペスウイルスシグナル配列でエピトープタグを付け、内因性EGFRシグナル配列を置換したSchaefer等1999JBiolChem274859866。Cos7細胞を、形質移入の24時間前に通常の成長培地の12ウェル皿に播種した。LipofectAMINE2000を製造者の推奨するプロトコルを用いて発現プラスミドDNApRK5gDEGFR野生型、pRK5gDEGFRL858R、又はpRK5gDEGFRdelを用いてウェル当り0.25ugを形質移入した。形質移入の24時間後、無血清DMEM中で6時間の間、細胞を血清不足にした。刺激の1時間前に、形質移入した細胞を標示濃度のエルロチニブと共にプレインキュベートした。形質移入した細胞を1nMのTGNαで10分間刺激した。還元Laemmliバッファーを使用してウェル中で細胞を直接溶解させた。成長因子刺激によるEDFRレセプター活性化の指標であるレセプターの自己リン酸化を、HRP結合抗ホスホチロシン抗体OncogeneSciencesAB4を使用してウェスタンブロット法によって検出した。形質移入効率をgDエピトープタグに対して特異的な抗体5B6を使用して評価した。レセプター活性化レベルを、NIHイメージソフトウェアを使用してオートラジオグラムから評価した。ついでこれらのデータを用いてグラフを作成し、それから4パラメータフィット関数を使用してIC50を計算した。以下の結果に示すように、エルロチニブは野生型EGFRと比較して変異を含むEGFRに対してより大なる親和性を有している。EGFRコンストラクト阻害WTEGFRgD50nML858REGFRgD20nMdelEGFRgD5nM