"哺乳類細胞を分化転換する方法であって:a細胞の脱分化を引き起こす、脱分化のための有効量の剤と、細胞を接触させて、脱分化細胞を産生する工程、b工程aの脱分化細胞を、脱分化細胞の分化転換を引き起こす、分化転換のための有効量の剤と接触させる工程、c工程bからの細胞を、工程bで産生された細胞の安定化を生じさせる、安定化のための有効量の剤と接触させる工程、およびd安定化分化転換細胞を回収する工程を包含する、前記方法。脱分化工程aが、レチノイドの投与、毒素の投与、細胞外マトリックスの崩壊、機械的または酵素的方法による細胞の物理的分離、および外傷生成からなる群から選択される方法により成し遂げられる、請求項1に記載の方法。分化転換を引き起こす剤が、グアノシン、フェニルチオウレア、12-0-テトラデカノイル-13-ホルボールアセテート、グアノシンモノホスフェート、グアノシンジホスフェート、グアノシントリホスフェート、アデノシン、アデノシンモノホスフェート、アデノシンジホスフェート、アデノシントリホスフェート、ウリジン、ウリジンモノホスフェート、ウリジンジホスフェート、ウリジントリホスフェート、チミジン、チミジンモノホスフェート、チミジンジホスフェート、チミジントリホスフェート、エピネフリンおよびノルエピネフリンからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。安定化を生じさせる剤が、β-カロチン、レチノイド、リボフラビンおよびプテリジンからなる群から選択される請求項1に記載の方法。哺乳類における部分的に破壊されていた構造のレムナント中に発生領域を再生または作製するための方法であって:a構造のレムナントを脱分化する工程、b工程aの構造のレムナントを分化転換する工程、およびc工程bの構造のレムナントを安定化し、それによりレムナント中に発生領域を作製する工程を包含する、前記方法。脱分化が、レチノイドの投与、毒素の投与、細胞外マトリックスの崩壊、機械的または酵素的方法による細胞の物理的分離、および外傷生成からなる群から選択される方法により成し遂げられる、請求項5に記載の方法。分化転換を引き起こす剤が、グアノシン、フェニルチオウレア、12-0-テトラデカノイル-13-ホルボールアセテートホルバールグアノシンモノホスフェート、グアノシンジホスフェート、グアノシントリホスフェート、アデノシン、アデノシンモノホスフェート、アデノシンジホスフェート、アデノシントリホスフェート、ウリジン、ウリジンモノホスフェート、ウリジンジホスフェート、ウリジントリホスフェート、チミジン、チミジンモノホスフェート、チミジンジホスフェート、チミジントリホスフェート、エピネフリンおよびノルエピネフリンからなる群から選択される、請求項5に記載の方法。安定化を生じさせる剤が、β-カロチン、レチノイド、リボフラビンおよびプテリジンからなる群から選択される、請求項5に記載の方法。哺乳類における癌の治療方法であって、良性細胞への癌の分化転換を引き起こすのに有効な量の剤と癌を接触させることを包含する、前記方法。患者における抗体介在性自己免疫疾患の進行を抑制する方法であって:a自己免疫襲撃下にある型の患者から細胞を得る工程と、b細胞を正常表現型に変換するのに有効な量の分化転換剤と細胞を接触させる工程、c変換細胞をinvitroで培養して細胞を増幅させる工程、d血液は進入させるが細胞を保持する膜上に細胞を固定する工程、およびe固定化細胞を患者の血液と接触させ、それにより患者の血液から抗体を除去する工程を包含する、前記方法。損傷により傷害を受けるか、または失われている哺乳類の身体中の組織または器官を再生する方法であって:a脱分化有効量の脱分化剤を投与することにより損傷部位での細胞を脱分化する工程、b分化転換有効量の分化転換剤と細胞を接触させることにより工程aの脱分化細胞を分化転換する工程、およびc安定化有効量の安定剤と細胞を接触させることにより工程bの分化転換細胞を安定化する工程を包含する、前記方法。脱分化が、レチノイドの投与、毒素の投与、細胞外マトリックスの崩壊、機械的または酵素的方法による細胞の物理的分離および外傷生成からなる群から選択される方法によりなされる、請求項11に記載の方法。分化転換を引き起こす剤が、グアノシン、フェニルチオウレア、TPA、グアノシンモノホスフェート、グアノシンジホスフェート、グアノシントリホスフェート、アデノシン、アデノシンモノホスフェート、アデノシンジホスフェート、アデノシントリホスフェート、ウリジン、ウリジンモノホスフェート、ウリジンジホスフェート、ウリジントリホスフェート、チミジン、チミジンモノホスフェート、チミジンジホスフェート、チミジントリホスフェート、エピネフリンおよびノルエピネフリンからなる群から選択される、請求項11に記載の方法。安定化を生じさせる剤が、β-カロチン、レチノイド、リボフラビンおよびプテリジンからなる群から選択される請求項11に記載の方法。幹細胞を産生する方法であって:a患者の皮膚細胞からメラノサイトを得る工程、b産生に有効な時間および濃度で分化転換を引き起こす剤とメラノサイトを接触させる工程、およびc幹細胞を回収する工程を包含する、前記方法。幹細胞が、クッパー細胞である、請求項15に記載の方法。[好適な実施形態の詳細な説明]本発明は、外傷、年齢、代謝的または毒性損傷、疾患、特発性損失または任意のその他の原因のために失われているかあるいは損害された身体組織、器官、構成成分または構造の復位のために分化転換により細胞を産生するのに用いられるということが意図される。別の態様では、分化転換は、外部構造、例えば指、足指またはこのような構造の一部を再生するために用いられる。さらに別の態様では、分化転換は、癌細胞に非悪性表現型をとらせることにより癌の治療のために用いられる。最後に、本発明によれば分化転換は、有害な自己抗体の除去のための自系細胞を提供するために用いられる。理論に結びつけずに考えると、1身体部分の再生、および2組織/細胞の分化転換に関して詳述した本方法は、形態形成領域と呼ばれる生物学的存在物の2つの相補的な、絡み合った、そして不可欠な態様を示す。本明細書中に記載した方法は、形態形成領域の再構成、ならびにいくつかの場合には、創造を生じる。形態形成領域は、それらの性質により、1損失身体部分の再生および2組織学的、細胞化学的、微細構造的および分子的表現型の分化転換だけでなく、3それらの適正位置における部分の内在的認識および復元を可能にする。言い換えれば、形態形成領域は、肢を再生するための本来の前方/後方、腹側/背側および右/左軸を保存する。位置情報または時としては利き手といったように様々に呼ばれるこの特性は、特定の形態形成領域を支配する適切な遺伝プログラムの発現の一機能であるFrenchetalScience1976193969981WolpertJTheorBiol196923147。選択的遺伝子活性化に関するプログラムの進行を示す前記の1および2に関して本明細書中に記載した方法は、特定の形態形成領域例えば右前肢に充当し、したがってその構成成分の正確な位置情報による構造の3復元も内在的に成し遂げる。例えば、肢が右前肢の遠位上腕骨で切断される場合、再生する橈骨および尺骨は、右前肢に関しては適切な位置にあるが、左前肢に関してはそうではない。したがって本明細書中に記載した方法は、形態形成領域の再構成例えば肢再生、そしていくつかの情況においては、創生例えば膵臓レムナントから肝臓を提供する。本発明によれば、分化転換による再生は、その場で例えば外傷または損傷の位置で実施され得る。あるいは、器官または組織はinvitroで分化転換/再生され、次に身体に戻される。したがって、好ましい一実施形態では、7日間供給培地を含入する自己分解性プラスチック容器中に平板培養した細胞培養物中で種々の剤で処理し、次に肝血管に隣接して縫い合わされるとこれが新組織を血管形成し、肝臓にそれを組み入れることにより、ヒト膵臓細胞が再生され、肝細胞に分化転換される。組織および器官の再生のためのinvitro分化転換の使用は移植片の自系性を確保し、そして、医療に用いられる場合には、免疫抑制の必要性をなくし、移植片拒絶の機会を低減することにより、多大の利益を提供する。本発明の好ましい実施形態では、分化転換の方法は、a細胞を脱安定化または脱分化する工程、b脱安定化細胞を分化転換する工程、およびc分化転換細胞を安定化して、それらを分化させる工程を包含する。本発明の実行に際しては、分化転換/再生される組織は、外胚葉、中胚葉、内胚葉、神経堤または外胚膜から得られる。脱安定化/脱分化は、以下により成し遂げられ得るが、これらに限定されない:1.損傷部位のまたは培養中の細胞への剤の投与。脱安定化を誘導するための剤としては、レチノイド例えばレチノイン酸、12-O-テトラデカノイルホルボール-13アセテートTPA、0.1M塩酸pH<5、高張食塩水飽和NaCl、銅キレート化剤例えばトリエチレンテトラミンテトラヒドロクロリドおよび重金属、例えば銅、亜鉛またはカドミウムが挙げられるが、これらに限定されない。投与される毒素の量は、毒素によって変わるが、しかし一般には1~100μg/細胞培養物1mlである。2.細胞外マトリックスの崩壊例えばヒアルロニダーゼまたはコラゲナーゼの投与による。3.機械的または酵素的方法例えばトリプシン処理、EDTA処理または反復的針外傷による細胞の物理的分離。4.外傷下記参照。脱安定化の好ましい方法は、標的組織の許容可能性、細胞外マトリックス構造の性質およびそれを一緒に保持する構成成分に依存している。例えば、皮膚細胞の脱安定化を実施する場合、基底膜のトリプシン処理がしばしば選択される方法である。手術、レーザー、貫通例えば針、化学的、熱、可視的または非可視的例えばUVA光、X線照射、感染、毒素または免疫応答により引き起こされる損傷を含めたあらゆる種類の外傷は、多数の組織において脱安定化を引き起こすのに非常に有効である傾向がある。実際、外傷は、器官および身体部分を自然に再生し得る動物における最も一般的な天然脱安定化因子である例えばトカゲの尾または両生類の肢を切断する捕食者。したがって、外傷は、再生過程の出発段階として用いられ得る。外傷が脱安定化を刺激する様式のいくつかを以下に挙げる:1上皮の外傷は、通常は基底膜を崩壊させて、フィブロネクチンおよびラミニンのような基底膜構成成分の変化を生じる。これらの変化は次に、タンパク質、mRNAおよびDNAの合成に影響を及ぼすことが知られているCellBiologyofExtracellularMatrixHayedPlenumPress1981。2外傷は、成長因子、サイトカイン、免疫グロブリンまたは検討中の細胞の分化状態に影響を及ぼすその他の物質を分泌する隣接細胞に影響を及ぼすことにより、細胞のミクロ環境における変化を生じ、そしてそれを分化させて、おそらくは正常レベルのこれらの因子の非存在下で増殖させ得る。さらに外傷は、それらが普通は接触するようにならない種類の細胞または体液と接触するようにさせ得るが、これは脱安定化も引き起こし得る。細胞のミクロ環境に及ぼすこれらの作用はすべて、細胞内シグナル伝達経路の変化を生じて、タンパク質合成および遺伝子発現における変化を引き起こす。3外傷は、細胞ミクロ環境の変化により、細胞形状の変化例えば平坦化対円形化をもたらして、タンパク質および核酸合成の変化を引き起こしCellBiologyofExtracellularMatrix、同上、したがって細胞の分化状態に影響を及ぼす。細胞形状の変化は、表面例えば細胞膜、細胞外マトリックス、その他の周囲細胞の接着特徴といった因子に依存し得る。4外傷は、脱安定化を引き起こし得る創傷ホルモンと呼ばれる物質の放出を生じ得る。外傷が哺乳類における脱安定化を刺激するために用いられ得る方法のいくつかの例は、下記の例18において提供される本発明によれば、脱安定化後、細胞は有効量の分化転換剤と接触させられる。分化転換剤の例としては、グアノシン、フェニルチオウレアまたはTPAが挙げられるが、これらに限定されない。最後に、細胞は有効量の安定剤および分化剤と接触させられる。例としては、β-カロチン、レチノイド、リボフラビンおよびプテリジンが挙げられるが、これらに限定されない。前記の脱安定化、分化転換および安定化試薬は、商業的に入手可能である例えばSigmaChemicalStLouisMOから。本発明によれば、これらの試薬の有効量は、細胞ミクロ環境例えば細胞培地中で約1~約100μg/mlまたはレシピエント動物の体重当たりで約0.5~約1,000mg/kgの広範な範囲である。invitroでの細胞の分化転換のための試薬はすべて、それらの培地に直接添加されるということに留意すべきである。その場で再生を受ける哺乳類においては、脱安定化および分化転換剤の好ましい投与経路は、局所的である。処置される器官または組織が内部にある場合、直接投与は、針またはカテーテルにより、あるいは全身的になされる。安定化/分化剤は、好ましくは全身的に、最も好ましくは経口的、経腸的に、吸入により、エアゾールにより、直腸的などの形で投与される。本発明の代替的な実施形態では、分化転換剤および安定化/分化剤は、逐次的の変わりに実質的に同時に投与され、例えばグアノシンはβ-カロチンと一緒に投与される。好ましくは2つの剤は、数時間または数日間の間投与される。本発明の別の代替的な実施形態では、同一化合物が、分化転換工程および安定化工程のために用いられる例えば、相対的に多量のレチノイン酸[細胞培養物中10-4M]。この実施形態では、脱分化工程例えば機械的外傷、刃または針突刺しによる切断は、分化転換/安定化剤の添加に先行する。分化転換/再生の過程における各工程は、用いられる剤、その用量、投与方法および標的組織に依存して、完了までに数時間~数日を要する。例えば、哺乳類における肢再生を刺激するために、イモリ用にRoseにより開発された高張食塩水レジメンJExpZool194495149170または25ゲージ針による反復突刺したがって、切断後3日間、1日3回用いられる。本発明によれば、細胞脱安定化期例えば光学顕微鏡を用いて組織学的に、および/または生化学的にモニタリングされ得るは、細胞が、それらの表現型を限定する形態学的および生化学的特徴を失った時に完了すると考えられる。これらの細胞は、再生芽細胞に似てくる即ち、それらは高い核対細胞質比を有し、および/または分化細胞の形態学的特徴を欠く。例えば、切断肢の基部では、このような細胞は、イモリTriturusviridescensでは切断後約2週間観察される。分化転換期は、細胞が、それらの新しい表現型を限定する形態学的および生化学的特徴のいくつかを獲得したときに完了すると考えられる。例えば、特徴的縞表現型が推定筋肉細胞中に認められた時、または軸索および樹状突起が推定ニューロン中に認められた時である。安定化/分化期は、細胞が、それらの最終的に分化した形態学的および生化学的特徴のすべてを獲得した時に例えば顕微鏡的および/または生化学的に、安定化/分化剤、例えばカロチノイド小滴、リボフラビンの堆積物を含有する内部貯蔵細胞小器官、またはプテリノソーム中のプテリジンを検出し得た時、完了すると考えられる。さらに別の実施の形態では、本発明は、分化転換および/または安定化能力を有する新規の化合物の同定方法を提供する。候補化合物に関する好ましいスクリーニング系としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されない:a水晶体に分化転換するイモリまたは哺乳類の眼の眼杯由来網膜色素上皮RPE細胞、b網膜ニューロンに分化転換するイモリまたは哺乳類眼のRPE、c肝細胞に分化転換する膵臓細胞、d別の色素沈着細胞型に分化転換する神経堤由来アホロートル色素胞、およびe別の種類の神経堤誘導体に分化転換する哺乳類最終的分化神経堤由来細胞例えばニューロンへのメラノサイト、骨への頭部結合組織、ニューロンまたは骨へのシュワン細胞等。アホロートルを用いる好ましいスクリーニング系は、下記の例5に示される。種々の系における普遍的分化転換剤として作用するいくつかの前に同定された化合物例えばアホロートル色素胞系における、イモリにおけるおよび哺乳類RPE系におけるグアノシン;哺乳類膵臓-肝細胞および哺乳類RPE系における銅枯渇の能力に基づいて、任意の実験系における分化転換および/または再生を引き起こす任意の剤が、他の組織および他の動物における分化転換および再生を引き起こすための候補である。さらに、細胞例えば神経堤細胞を胚形成中の特定の経路に沿って分化させる剤は、成体における分化転換剤の候補である。したがって一実施形態では、ステージI候補化合物は、成熟成人皮膚メラノサイトを神経幹細胞に変換するそれらの能力に関して検査される。用量応答曲線は、別個のバイアル中で、約10-3μg/ml~約100μg/mlの範囲の濃度半対数単位濃度増大で培養細胞を被験物質とともに同時にインキュベートすることにより生成される。細胞は、1~21日間、被験化合物とともにインキュベートされる。用いられる幹細胞および所望の新細胞型に応じて分化転換の判定規準を用いて、光学および電子顕微鏡、生化学的試験および免疫学的ラベリングにより、細胞は分化転換の証拠に関して検査される。例えば、神経堤幹細胞へのメラノサイトの分化転換は、メラノソームおよびメラニンの損失として観察される。さらに別の実施形態では、ステージIに起因する細胞を最終的分化表現型、例えばニューロン、シュワン細胞、軟骨細胞および繊維芽細胞に変換するそれらの能力に関してステージII候補化合物が試験される。用量応答曲線は、別個のバイアル中で約10-3μg/ml~約100μg/mlの範囲の濃度半対数単位濃度増大で、先に分化転換された培養細胞を第二の被験物質とともに同時にインキュベートすることにより生成される。細胞は、1~21日間、被験化合物とともにインキュベートされる。用いられる幹細胞および所望の新細胞型に応じて分化転換の判定規準を用いて、光学および電子顕微鏡、生化学的試験および免疫学的ラベリングにより、細胞は再分化の証拠に関して検査される。前記の方法によりスクリーニングされ得る化学物質の例としては、プリンおよびピリミジン、ヌクレオシドおよびそれらの誘導体、レチノイド、カロチノイド、ラミニン、フィブロネクチン、成長因子、サイトカイン、オモクロム、チオウレア、キレート化剤および金属例えば亜鉛、銅、カドミウムが挙げられる。培地中に普通に存在する物質の枯渇または補給も、前記の方法によりスクリーニングされ得るBrentetalAmJPathol199913711211142。種々の分化転換系からの前記の実験的証拠、低毒性および良好な溶解性特性に基づいて、グアノシンは、本発明における分化転換剤として用いるための特に好ましい化合物である。したがって、アレチネズミにおいて、下記の例1に示すように、水晶体の外科的除去後のグアノシン分化転換剤とその後のβ-カロチン安定剤の経口投与は、RPEからの水晶体の再生をもたらした。この場合、脱安定化/脱分化因子は、水晶体を除去するために用いた手術により引き起こされた外傷であった、ということに留意すべきである。さらに別の代替的な実施形態では、グアノシンは、グアノシンモノホスフェートGMP、グアノシンジホスフェートGDP、グアノシントリホスフェートGTP、アデノシン、シトシン、チミジン、ウリジンおよびそれらのリン酸塩、あるいはカテコールアミン例えばノルエピネフリンおよびエピネフリンに置換され得る。前記の実験的証拠に鑑みて、銅は、本発明における分化転換剤として用いるためのもう一つの好ましい化合物である。したがって身体中および特定組織中の銅レベルに影響を及ぼす剤は、分化転換剤としての活性も有し得る。銅レベルの変化を引き起こす物質のいくつかの例としては、以下のものが挙げられる:I金属、例えば亜鉛、カドミウムおよび鉄LinderandHazeghAzamAmJClinNutr199663797S811S、II銅キレート化剤、例えばトリエンRaoandReddy、同上、ペニシラミンBrewerCopperTransportandItsDisordersLeoneandMerceredsPlenumPublishers1999、III酢酸亜鉛のような銅の吸収に影響を及ぼす剤Brewer、同上、IV銅の代謝および/またはそれらの補因子としての銅の使用に影響を及ぼす酵素例えばチロシナーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、ヒアルロニダーゼ;銅結合タンパク質例えばセルロプラスミンまたはメタロチエインLinderandHazeghAzam、同上、V銅結合タンパク質/酵素の合成または分解に影響を及ぼす物質例えばレチノイン酸SongandLevensonIntJVitamNutrRes199767141144、VI銅結合非タンパク質様化合物例えばアスコルベートItohandEguchiDevBiol1986115353362DroudinetalFreeRadicBiolMed199621261273、種々のチオウレアMasudaandEguchiCellStructureandFunction198492535、グアノシン、アデノシンMasudaandEguchiInorganicChemistry1990293631、シトシンPalaniandavaretalJChemicalSoc199671333およびそれらのリン酸塩。銅欠乏食YoshidaetalJNeurooncol1993179197および細胞用の銅枯渇培地PercivalandLaydenPatriceJNutr199212224242429は、銅レベルを変えるための他の方法である。銅の脱分化および分化転換作用が引き出されると考えられる一方法は、最終的分化細胞に特徴的な物質を生成する酵素例えば、メラニンの産生を導くチロシナーゼの補因子としてのその作用による。銅は、遊離グアノシンの量に影響を及ぼすことによりTuandFriederichBiochem1968743674372MaskosActaBiochemicaPolonica19782101111、DNAおよびRNAに直接結合しIyengarActaAnat1983115357360WongetalCanJBiochem197452950958SorokinetalJInorgBiochem1996637998、これがそれらの分解をもたらす即ち、鎖切断および断片化;YamafujietalEnzymologia197140107119DowjaretalBioMetals19969327335ことにより分化転換を引き起こすとも考えられる。最後に、銅は血管形成性でありBremetalAmJPathol199013711211142YoshidaetalNeurosurgery199537287293、したがって銅の補給は組織の成長および分化を促進する。したがって、銅と同様の方式で作用する他の物質は分化転換剤の候補であると結論づけられる。本発明の分化転換剤として用いるための好ましい化合物の別の群としては、色素例えばメラニン、オモクロム、ヘモシアニン、カロチノイド、フラボノイドおよびプテリジンを生成する生化学的経路に関与する物質が挙げられる。本発明によれば、これらの化合物を試験するための好ましい実験系は、アホロートル色素胞系、または幹細胞が神経堤誘導体の完全系統に分化するクッパー幹細胞系であるNozueActaAnat1990107188197LabatetalBiomedPharmacother200054146162。本明細書中に開示した方法により同定される新規の脱分化、分化転換および安定化化合物は、それらの有効性および薬学的許容可能性に関してさらに検査され得る。好ましい剤は、以下の判定規準を満たす:1.元のものとほとんど同様に機能する、反復毒性または外傷性損傷から組織/器官を生成または再生する能力例えばアレチネズミにおける水晶体の再生で、これは透明性、幾何学的形状、光を集束し、調節する能力において元のものとほとんど同様である、2.最少局所性および全身性毒性例えばグアノシンおよびβ-カロチン、3.迅速に、かつ相対的に少量で作用する能力、4.易投与性医薬組成物に製造される能力。理論と結びつけずに考えると、動物の再生能力は、それらの食餌に決定的に依存している。大量のプリン、プテリジンおよびカロチノイドまたはこれらの化合物の各々の前駆体を含む食物を摂取する生物体は、分化転換をより容易に受け得る多能性細胞を保持する。分化転換に及ぼす食餌の影響は、幼生草食から成体肉食への両生類の成熟のような再生能力の損失により、そしてカロチノイド含有食物を欠いた食餌を摂る脊椎動物の損失した身体部分を再生する能力の大幅な低減により例示される。したがって、本発明によれば、脊椎動物、特に哺乳類における再生のための最適条件としては、以下のものが挙げられる:6.損傷前に1か月間、9シス異性体、ならびにその他のカロチノイド、例えばルテイン、およびゼアキサンチンを含むβ-カロチン1000mg/kgを補充した食餌。これらの条件下で、高カロテン蓄積体である哺乳類例えばアレチネズミおよびヒトにおいて、最適再生が観察される。大量のカロチノイド含有野菜を消費するヒト患者は、本明細書中に開示した方法のための特に良好な候補である。7.電気的特性を促すための飽和HCl溶液の創傷表面への限局的局所適用による例えば、1日2回、1時間の高張食塩水中への指基部の浸漬による再生の部位の調製、8.再分化工程中のUVスペクトルを含む天然光源を用いた、組織および種に応じて24時間当たり8~16時間の光期間。前記の条件を用いた場合、最適再生は、中手骨-指節骨関節を含めた任意のレベルで事故により切断された幼児の指または足指のような、高密度の色素胞を有する小構造物において観察される。特定の種類の細胞を産生するためには、特定の剤、用量および以下の時期:脱安定化、脱分化、分化転換、安定化の間の各剤の曝露時間を選択する必要がある。適切な処置を選択するために、前記の各因子を系統的に変えることにより、作用のマトリックスが作製される。例えば、特定の種類の脊髄運動ニューロンを生成したい場合には、分化転換のための剤としてレチノイン酸を用いる。レチノイン酸が異なる半対数増分濃度で、例えば10-9モル~10-4モルの範囲で試験され、他の因子は一定に保持されるマトリックスが設定される。これらの培養試験管の各々に関して、安定化期から生じた細胞は、脊髄運動周囲の特徴に関して組織化学的に検査される。このようにして特定濃度のレチノイン酸が選択されれば、本方法は、系統的に増大される曝露時間、例えば1日増分での1日から7日までの用量の曝露時間を有するマトリックスを設定することにより微調整される。脱安定化および安定化期中の剤は、特定の種類の細胞を生じるための真に適正の剤、その用量および曝露時間を選択するよう同様に変えられる。用量の範囲に関して使用するための出発点は、以下のように確定され得る:剤が何らかの種類の細胞培養中で用いられると報告されたことがあった場合、出発容量は文献に報告された用量とほぼ同じである。剤が細胞培養に用いられたことがない場合には、この出発用量は、細胞培養に用いられた文献中に報告された任意の同様の化学物質の用量である。剤が報告されたことがない場合、系統的増分範囲は、モル濃度でまたは重量で、選択される。細胞が特定用量で死亡した場合には、用量が高すぎる。細胞が特定用量で全く作用を示さない場合には、用量が低すぎるので、この方式での結果を一括し、手順を反復することにより、適正用量が選択される。因子が化学物質でない場合、因子は試験過程中は依然として系統的に変更される。例えば、因子がメスの使用により作られた外傷である場合、切開のサイズはマトリックス中で系統的に変更され、他の因子は一定に保持され、その結果生じる細胞型が組織化学的または免疫細胞化学的に同定され、分類される。別の実施形態では、本発明は、良性の最終的な分化細胞への癌細胞例えば黒色腫細胞の分化転換を誘導するそれらの能力を試験することにより抗癌剤をスクリーニングするための方法を提供する。好ましい実施形態では、特定患者由来のinvitro培養癌細胞を用いて、最少毒性および最高効率分化転換剤が先ず選択される。次に選定剤は患者に投与され、標準技法により癌の退行がモニタリングされる。このようにして、最適個別化抗癌治療が達成される。さらに別の実施形態では、本発明は、抗体依存性自己免疫疾患例えば狼瘡および重症筋無力症の進行の抑制方法を提供する。前記の方法は、これらの抗体に反応性のマトリックス含有固定化患者細胞による血液の定期的透析により、自己免疫疾患に罹患した患者の血中に存在する自己反応性抗体の力価を低下させることを包含する。本発明によれば、このような固定化細胞の非限定的供給は、同一患者由来の培養細胞のinvitro分化転換により得られる。これらは患者自身の細胞であるため、新規の望ましくない抗体は生成されず、副作用は最小限にされる。以下の作業例で本発明をさらに説明するが、それらは説明するよう意図されており、本発明の範囲を限定するものではない。例1:アレチネズミにおける水晶体の再生の刺激材料および方法切断レンズの再生の刺激に及ぼすグアノシンおよびβ-カロチンの作用を、モンゴルネズミMerionesunguiculatusで調べた。動物:4週齢モンゴルネズミCharlesRiverLaboratoriesWilmingtonMA一般条件:温度:1~23日目:22°C24日目:26°C25日目:29°C26日目:32°C27~61日目:35°C光期間:12時間明期;12時間暗期表1アレチネズミプロトコール群A=AIN93GDyetsIncBethlehemPAから入手可能な標準齧歯類餌、C=正常銅の30を含有する銅欠乏餌正常銅=6mg/餌1kg;銅欠乏=30正常=1.8mg銅/餌1kg、T=0.5トリエチレンテトラミンテトラヒドロクロリドトリエン、B=通常量の2倍のビタミンKを含有する1Dunaliellaβ-カロチン正常Vit.K=0.75mgVit.K/餌1kg;二倍Vit.K=1.5mg/餌1kg、G=1グアノシン。食餌DyetsIncBethlehemPA製造:通常の食物摂取量に基づいて、動物が摂取するおよその量の化学物質を、以下のように概算する。グアノシンを含有する食餌に関しては、1000mg/kg/日のグアノシンを各動物に消費させた。β-カロチンを含有する食餌に関しては、1000mg/kg/日のβ-カロチンを各動物に消費させた。動物実験室場所:PSLEastBrunswickNJ組織学実験室:ColoradoHistoPrepIncFortCollinsCO実験動物に前記の餌を摂食させて、虹彩上皮の脱分化を強化し、その後、水晶体への虹彩上皮の分化転換を導いた。標準AIN餌を摂食した対照群を含めた。実験を通して、毎日、免許取得獣医が動物を検査した。温度を4日間毎日3度漸増的に上げた後、水晶体の再生を助けると考えられる35°Cの温度に達した時点で手術をした。各群から1匹の動物を27日目に屠殺して、ホルマリン中に保存した。以下の手術プロトコールを各生存動物に関して、28日目に追跡調査した:1.1トロピカミドBauschLombTampaFL1滴を右目に滴下した。2.ケタミンをキシラジンとともにIP注射することにより、動物を麻酔した。3.ダイアモンドナイフAccutomeMalvernPAを用いて、右眼の角膜中で切断を実行し、これをVanas鋏MiltexBethpageNYを用いて拡張し、切開周縁を約180~270°にした。9.手袋をはめた指で眼球上を静かに押して、TyrellLoopMiltexBethpageNYで水晶体を取り出した。10.取り出した水晶体をホルマリン中に保持した。手術後、動物餌を標準AIN餌に変えたが、但し、AGBを摂取していた群は、AB餌を介してβ-カロチンの摂取を続けた。手術後、動物が餌をとるためにワイヤケージの蓋まで来なくてもよいように、いくつかのペレットをケージに入れた。毎週、麻酔をせずに、拡大鏡を用いて動物の眼を検査した。しかしながら、この動物は暗色眼を有するため、詳細はほとんど確かめ得なかった。61日目に、CO2により動物を麻酔して、この動物を断頭した。頭部をデビッドソン固定液中に18時間入れた後、中性緩衝化ホルマリンに切り換えた。体部を中性緩衝化ホルマリン中で固定した。61日目に固定した施術眼すべてを、写真撮影した。実験の最後まで生き残った50匹の動物からの全頭部をColoradoHistoprepに送った。施術眼を切断し、およそ中矢状平面までの連続5μ矢状切片を回転ミクロトームで切断した。全検体に関して、中矢状面積からの少なくとも50の5μ連続切片を調製した。組織学検査のためにルーチンにスライドを処理し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。結果及び結論施術眼は、術後は平坦であった。いくつかの動物の眼は部分的にまたは完全に翌月にわたって閉じられたままであった。しかしながら、いくつかの動物の目は次第に平坦でなくなり、いくつかはほぼ正常に突出するように見えた。注目すべきことに、約40の実験眼が、明らかに再生された水晶体を示した。これらはしばしば、虹彩色素上皮にそれらを連結する柄イモリ水晶体再生で観察されるような、ならびに明らかにメラノソームを含入した個々の水晶体細胞を示したが、これは、それらが色素上皮に由来したと同定する。多数の組織学的切片にわたって拡張されたこれらの水晶体は、発生学的に観察されるような、繊維形成の種々の段階における組織化水晶体細胞を含有する十分に形成された水晶体を示した。それらは一般に、嚢胞性または壊死性物質を伴わなかった。抽出ホルマリン固定全水晶体を検査し、各動物に関する再生水晶体の組織学的知見と比較した場合、実際にすべての場合において、少量の水晶体上皮以外はおそらくほとんど全水晶体が除去されており、再生水晶体は増殖していた残存物質に因るとは考えられなかった。虹彩色素上皮に対する柄、ならびに色素上皮からの誘導を示すメラノソームを含有する個々の細胞は、再生を確証した。施術眼のいくつかは、少しの水晶体物質も全く示さなかった下記参照。他のものは、術後に明らかに保持されていた水晶体物質を示した水晶体上皮の2~3の細胞でさえ残存しないよう全水晶体を取り出すのはしばしば不可能であるということは、ヒト白内障手術、ならびに実験モデルから周知である。これは、残存水晶体上皮が増殖し、水晶体移植片の機能を複雑にすることが知られているため、臨床的に問題である。残存水晶体物質は、それが一般的に壊死性、嚢胞性であり、成熟水晶体繊維を示し、虹彩色素上皮との連結を有さず、2~3枚の連続切片に及ぶだけであったため、そして他の組織学的判定規準により、組織学的に同定され得た。ホルマリン固定抽出水晶体の顕微鏡検査および写真は、ほとんどが全体的に無傷で取り出されたものの、すべてが少なくとも小上皮欠損を有することを示し、このことは、いくつかの上皮組織が後に残されていたことを示唆する。表2.生存動物に関する組織学的観察前記の表から分かるように、6つの生存対照動物群101はどれも再生水晶体を示さなかったが、4つは、増殖していた小残存上皮を示した。合計44匹の生存実験動物群102~108のうちの18匹が、再生水晶体を示した41。再生水晶体の質における群間の明らかな差は認められず、一般的に最も良好全体的構築および細胞学において最大で、最も正常な外見であったのは、群106初期グアノシン餌および群107初期グアノシンおよびβ-カロチン餌からであった。例2:アレチネズミにおける水晶体の再生を刺激するための強化プロトコール1.アレチネズミにおける水晶体の再生を刺激するための改良プロトコールアレチネズミにおける水晶体再生に関する以下の実験を実行して、すべてのさらなる試験のための実験プロトコールを改良し、組織学的および微細構造分析のためのさらなる検体を得た。36匹の3週齢モンゴルネズミをCharlesRiverLaboratoriesWilmingtonMAから入手し、ProductSafetyLaboratoriesEastBrunswickNJ動物管理施設で1週間順化させる。高温35°Cは不必要であると目下考えられているため、温度は、実験中はずっと22°Cに保持する。それらを12時間明期/暗期の光期間に保持し、1週間の順化期間中、PurinaRatChowを摂食させる。各々12匹の3群を用いる。群食餌1食餌210.1酢酸亜鉛AIN21グアノシン1β-カロチン1β-カロチン3対照AIN餌AIN前記のトリエンを有する30銅餌ではなく、酢酸亜鉛を使用する根本理由を以下に示す。酢酸亜鉛は、処方薬ガルジン、LemmonCoSellersvillePAとして入手可能である。さらにそれは副作用が少なく、したがってトリエンを有する銅欠乏餌から観察された死亡率が回避されるはずである。酢酸亜鉛の用量は、全身の銅を低下させるための齧歯類におけるその使用に関して発表済みの研究に基づいて選択されるApprovedPackageforNDA02458GalzinCapsules1997FDARockvilleMD。動物に食餌1を2週間与えて、RPEの脱分化を促す。アレチネズミにおける最も安全で、かつ最も望ましい麻酔であるメトキシフルランを用いて動物を麻酔するNorrisLabAnim198115153155。例1に記載した手法を用いて、水晶体除去術を実施した。動物に食餌2を6週間与える。これは、前記のプロトコールより2週間長く、前記で実証された水晶体再生法の達成を可能にするはずである。食餌1の終了時に、2匹を電子顕微鏡EM用に、そして2匹を組織学検査用に、各群から屠殺する。食餌2の終了時に、EM用に4匹を、組織学用に4匹を、各群から屠殺する。固定方法は、前記と同様である。屠殺動物を断頭する。その検体を組織学実験所に送り、そこで眼を切除する。これは、固定するまでの眼の取扱いを最小限にするので、すぐに眼の切除をするより好ましく、組織学者がブロック上に眼を適正に配向するのに役立つ。2.水晶体再生に用いられる活性化合物の用量調整および投与方式48匹の3週齢モンゴルネズミをCharlesRiverLaboratoriesから入手し、各々6匹の以下の群に分けた。群レジメン1.対照AIN餌2.グアノシン餌中0.053.グアノシン餌中0.104.グアノシン餌中0.505.グアノシン餌中1.006.グアノシンAIN餌;水晶体切除術後に注射されるグアノシンの飽和溶液7.グアノシンAIN餌;水晶体切除術後に注射されるグアノシンの半飽和溶液8.グアノシンAIN餌;水晶体切除術後に挿入されるグアノシンの結晶群1~5は、前に用いられた容量より少ない用量が水晶体再生を刺激するのに適しているか否かを研究者に確定させ得る。実験群6~8は、餌中に提供するのではなく、水晶体切除眼中にグアノシンを単にしみ込ませるのが水晶体再生を刺激するのに適切であるか否かを確定させる。これらの条件は、イモリにおける水晶体への腹側虹彩のグアノシン誘導体媒介性分化転換に関して発表済みのレジメンと同様であるEguchiandWatanabeJEmbryolExpMorphol1973306371。残りのプロトコール即ち、光期間、食餌1の長さ、水晶体切除術等は、前記パート1と同一である。食餌2は、常にこの実験用のAINである。3.水晶体再生実験の標準化本実験の目的は、将来的研究のための段階の標準化シリーズを作製することである。98匹の動物をCharlesRiverLaboratoriesから入手し、2つの等群に分ける。群食餌1食餌21対照AINAIN21グアノシン1β-カロチン1β-カロチン動物に食餌1を2週間、次に食餌2を6週間与える。食餌1期間中、3日毎に、各群から3匹を屠殺する。食餌2の最初の4週間は、3日毎に3匹を各群から屠殺する。食餌2の最後の2週間、毎週、各群から3匹を屠殺する。他の条件は前記と同様である。検体を前記と同様に組織分析用に調製する。例3:マウスおよびラットにおける水晶体再生JacksonLabsからのREJマウスの24匹の3週齢系統を入手する。それらを2つの等群に分ける。群食餌1食餌211グアノシン1β-カロチン1β-カロチン2対照AIN餌AIN温度は、実験中はずっと22°Cに保持する。光期間は、12時間明期/暗期である。動物には食餌1を2週間与える。次にケタミンおよびキシラジンで動物を麻酔した後、アレチネズミに関して前記したのと同様に水晶体切除術を実施する。次に動物に食餌2を6週間与える。食餌1の終了時に、EM用に2匹および組織学用に2匹を、各群から屠殺する。食餌2の終了時に、EM用に4匹および組織学用に4匹を屠殺する。SpragueDawleyラットを用いて、同一プロトコールを反復する。例4:哺乳類アレチネズミにおける網膜再生の刺激イモリおよびその他の両生類は、外傷または実験的網膜剥離後、網膜色素沈着上皮RPEから神経網膜を再生することができるReyerpp309390InHandbookofSensoryPhysiologyVIICrescitelliedSpringerVerlag1977。水晶体を再生できないいくつかの両生類でも、網膜は再生することができるReyer、同上。水晶体再生を可能にした同一プロトコールは、網膜神経網膜、光受容器再生も可能にすると考えられる。68匹の5週齢モンゴルネズミをCharlesRiverLaboratoriesから入手し、2つの等群に分けた。群食餌1食餌211グアノシン1β-カロチン2対照AIN餌対照AIN餌β-カロチンの好ましい供給源は、例えばHenkelCorpLaGrangeILから市販されている緑藻類のDunalielaである。前記のプロトコールと同様に、食餌1を19日間、食餌2を6週間用いる。15日目に、両生類例えば、HasegawaEmbryologia19584132StoneJExpZool1950113932KeefeJExpZool1973184185206または哺乳類例えば、MervinetalAmJOphthalmol1999128155164ChonetalRetina19961613944TakeuchietalInvestOphthalmolVisSci1995361298305に関して発表済みの技法あるいはこれらの技法の変法を用いて、実験的網膜剥離を右目に施す。剥離をもたらした後1日目に4匹を屠殺し、次に4週間、毎週4匹を屠殺する。6週間の終了時に、残りの動物すべてを屠殺する。右目を組織学的分析用に調製する。例5:分化転換剤に関するアホロートルアッセイ系一連の分化転換実験をアホロートルで実行した。これらの実験は、分化転換および/または安定剤を発見し、比較するためのアッセイとしてのこの方法の実用性を実証した。この両生類皮膚アッセイ系において分化転換因子として銅枯渇が作用することを示す、本明細書中に提示した証拠はラット膵臓における肝細胞分化転換系への分化転換因子であると終結的に実証されているのと同様に、1分化転換因子は脊椎動物では普遍的である傾向があり、2あるアッセイ系で同定された因子がすべての脊椎動物において、ならびにいくつかの異なる器官系において作用すると思われる、という以前に標示された記述を補強する。このアッセイ法は、下記のように、GMPグアノシン5’-モノホスフェート、cGMPグアノシン3’,5’-環状モノホスフェートならびに酢酸亜鉛およびイノシトールの分化転換剤としての同定をもたらした。幼生アホロートルは、薄い基底膜上に表皮を有し、その下には厚いコラーゲン層光学顕微鏡用にゴモリトリクロームで染色した場合は緑色が存在する。3種類の細胞のみが真下に存在し、コラーゲン層中にわずかに埋まっている-a繊維芽細胞、これは一般に紡錘形であり、特徴的光学および電子顕微鏡的外観を有し、b黒色素胞、これは、多数の円形または卵形黒色メラノソーム、ならびにいくつかのプレメラノソームを含有し、そしてc黄色素胞、これはプテリノソームとして知られている細胞小器官を含有する。これらは、光学顕微鏡では空胞のように見え、電子顕微鏡では小束状または集束性層化物質を有する空胞のように見える。概して、メラノソームは通常は黒色素胞中にのみ見出され、プテリノソームは黄色素胞中にのみ見出される。Frostが提示し、Bagnaraが再検討した証拠は、グアノシンは、幼生アホロートルに与えると、分化転移剤として作用して、微細構造研究により示されているように、黒色素胞を黄色素胞に変換させる、ということを示した。アホロートルはすべて、実験開始時には体長3~5cmであって、IndianaUniversityAxolotlColonyBlooningtonINから入手した。それらをウシ肝臓下記の例Aまたは魚ペレットIndianaUniversityAxolotlColonyBlooningtonIN下記の例BおよびCで保持した。温度は22°Cで、12時間明期/12時間暗期の光期間を用いた。水は、給餌前に毎日取り換え、給餌の1時間後に動物を取り出した。それらにはほぼ毎日給餌した。1日おきに、実験物質をウシまたは魚ペレットの上にまき散らした。実験試薬はすべて、SigmaStLouisMOから入手した。例Aでは、動物を、底が中央で平坦に盛り上がった0.75クォートステンレススチール皿中に保持した。給餌のために、ウシ肝臓を、一部水中で一部水から出た盛り上がった底に置いた。これにより、水中の餌を動物に感知させるが、ウシ肝臓上に撒かれたcGMPが洗い落とされないようにさせる。例BおよびCに関しては、動物を、個々の280mlプラスチック容器中に保持し、これを週2回取り換えた。給餌のために、動物を、一側に勾配を有する小型プラスチック容器計量カヌーに移した。ペレットを、一部は水中で一部は水から出ている勾配上に置いた。これにより、水中の餌を動物に感知させるが、ペレット上に撒かれたcGMPが洗い落とされないようにさせる。専ら、DeerParkSpringWaterBreingsvillePAを用いた。オリンパスSZ立体顕微鏡下でほぼ毎週、動物を観察し、屠殺前または死亡後すぐに数時間、そのほとんどを写真撮影した。10ホルマリン中で動物を固定し、皮膚の4mmパンチ生検を、CharlesRiverLaboratoriesWilmingtonMAが組織学検査用にルーチンに処理したゴモリトリクローム。オリンパスWoodburyNYBX40顕微鏡でスライドを検査した。3匹の動物対照1匹およびGMP摂取動物2匹を2mmパンチで生検し、Trump固定液で24時間固定し、電子顕微鏡用にルーチンに処理した。それらを2四酸化オスミウム中で後固定し、アルコールシリーズで脱水して、エポン-アラルダイト1:1中に包埋した。処理および写真撮影は、ElectronImagingFacilityRutger’sUniversityPiscatawayNJで実施した。例A前記の方法により22日間、1匹のアホロートルにcGMPを給餌し、その後それは死亡した。ゴモリトリクローム染色皮膚の検査は、いくつかの細胞中でメラノソームおよびプテリノソームの存在を示した。これは、黄色素胞への黒色素胞のcGMPにより引き起こされた分化転換の証拠である。動物は、検査によって、より明色であることもあった。約1週間後に屠殺した対照動物は、両細胞小器官を有するいかなる細胞も示さなかった。例B2匹のアホロートルに67日間、前記と同様にGMPを給餌した。1匹の皮膚の電子顕微鏡検査は、メラノソームおよびプテリノソームの両方が存在する多数の細胞を示した図1。いくつかの細胞は、メラノソームとプテリノソームのハイブリッドと思われる細胞小器官を示した例えば、不規則な空胞構造はプテリノソームと類似するが、しかしメラノソーム中に認められるような暗色物質が存在した図2および図3。このような細胞小器官は、細胞小器官レベルでの分化転換を実証すると考えられる。第2の動物は、ゴモリトリクローム染色光学顕微鏡切片において、プテリノソームとメラノソームの両方を含有する細胞の存在により分化転換の明らかな証拠を示した図4。これらの動物は、検査によって顕著により明るく、黄色の色相を有した。やはり67日目に屠殺した対照動物は、概して、ハイブリッド細胞小器官を有する細胞または両型の細胞小器官を含有する細胞は伴わなかった。例C2匹の動物に、前記と同様に酢酸亜鉛を給餌した。1匹は7日後に死亡し、1匹は12日後に死亡した。対照動物は、2匹目の亜鉛供給動物死亡から1週間後に屠殺した。ゴモリトリクローム染色スライドは、メラノソームおよびプテリノソームの両方を有する細胞を明示し、したがって酢酸亜鉛が黒色素胞の黄色素胞への分化転換を引き起こしたという証拠を提供した。対照動物は、概して、ハイブリッド細胞小器官を有する細胞または両型の細胞小器官を含有する細胞は伴わなかった。動物にミオ-イノシトール、トリエントリエチレンテトラミンテトラヒドロクロリド、グアノシンおよびシトシンを給餌する同様の実験を実施した。肉眼的観察および動物全体の写真に基づいて、グアノシンFrostにより前に報告されたように、トリエンおよびミオ-イノシトールは黒色素胞を黄色素胞に分化転換する剤であるが、一方シトシンは黄色素胞を黒色素胞に分化転換すると思われる。例6:網膜再生の刺激による網膜変性により盲目になったイヌにおける視覚の回復イヌ雄ミニチュアシュナウザー、暦年齢4歳、体重約10kgがしばしば対象物に衝突することに飼い主は気づいた。経験を積んだ眼科獣医は、以下の検査において以下の観察を行った後、突発性網膜変性との診断を下したO’TooleetalVeterinaryRecord1992130157161MilleretalJVetRes199859149152。イヌは全盲として振る舞った。瞳孔は完全に拡張した。緑内障、損傷または代謝性疾患の適応症は認められなかった。犬にグアノシンSigmaStLouisMOを茶さじ1/2杯/日2.5g/日、約250mg/体重1kg/日およびベタテンHenkel、7.5Dunaliellaβ-カロチン茶さじ1/2杯/日2.5g/日、約18.75mg/体重1kg/日の投与を開始した。2週間後の検査は、イヌは依然として臨床的には盲目であるが、しかし瞳孔は、明るい集束光で刺激するとわずかに収縮することを明示した。グアノシンおよびベタテンの投与を続けた。4週間後、イヌを再び検査した。瞳孔反射は前の検査で認められたのと同様であった。眼科医がイヌの2~3フィート前に綿の小片を落とすと、イヌはほとんどの場合それらが床に落ちるのを目で追った。綿は音も臭いもせず、感知もできないので、イヌがそれを見ることができたのは明らかだった。SARDの原因は未知であり、予測的に成功した治療は発表されていない。組織学的には、棒細胞および円錐細胞外部セグメントの急速な損失とその後の網膜層の変性が認められる。文献に出現した多くの遺伝的イヌ網膜変性に対比して、網膜の異なる帯域は同様には影響を受けない。SARDのほとんど見込みのない予後のために、そしてこのイヌの視力の明らかな改善のために、本明細書中に前記した分化転換プロトコールがこのイヌの視力の実証可能な改善に関与したと、眼科獣医は結論した。この例では、網膜の変性はSARDの最終的病因であるものは何でも、脱安定化脱分化因子として働いた。グアノシンは神経網膜へのRPEの分化転換剤として、そしてβ-カロチンベタテン7.5としては安定剤として働いた。したがって、前記の方法は、神経網膜への網膜色素上皮の分化転換を導き、網膜を再生し、網膜変性により盲目になったイヌに、測定可能程度に視力を回復した。4週間後に再びイヌを検査した。明るい光より弱い光でより良好に明らかに見ることができる、と飼い主は確信した。眼科獣医はイヌを検査し、同意した。イヌの前に綿片を落とすと、イヌはほとんどの場合に綿を目で追った。イヌは、標準検査室の光では、弱い光の場合のように高頻度に綿を眼で追うことはなかった。イヌは経口β-カロチンをより高用量で継続することを眼科獣医は示唆した。視覚機能は以前の検査より目に見えて良好になった、と眼科獣医は結論した。例7:ヒト膵臓における島細胞の再生ヒト膵臓からの島細胞を再生させる。ヒト膵臓の一部10gまたはそれ以上を個体から切除する。Githens等InVitroCellDevBiol199430A622635と同様の培養方法を用いて、細胞をinvitroで培養する。次に、レチノイン酸1~10μg/mlの添加により、細胞を脱安定化する。グアノシン1~100μg/mlの添加により、分化転換を成し遂げる。次に安定剤としてカロチノイドを投与するテトラヒドロフラン中1~30μg/ml。その結果生じた島細胞を培養物中で増殖させる。次に、血流または膵臓血管への注射により、島細胞を患者の身体中に再移植する。島細胞の自系性は、免疫抑制の必要性を無くす。好ましくは、5歳以下の併発疾患を有さない幼児または小児が、この手法のための対象である。例8:ヒト肝臓肝細胞の再生肝細胞をヒト膵臓から再生する。ヒト肝臓の一部例えば1~100gを個体から切除する。細胞をinvitroで培養する。次に、レチノイン酸1~100μg/mlの添加により、細胞を脱安定化する。グアノシン1~100μg/mlの添加により、分化転換を成し遂げる。次に安定剤としてカロチノイドを投与するβ-カロチン1~100μg/ml。その結果生じた肝細胞を培養物中で増殖させる。次に、肝細胞を患者の身体中に再移植する。肝細胞の自系性は、免疫抑制の必要性を無くす。好ましくは、5歳以下の併発疾患を有さない幼児または小児が、この手法のための対象である。例9:肝臓中のクッパー幹細胞または器官中の他のマクロファージをinvitroで培養し、種々の剤で処理して、他の細胞型、例えばメラノサイト、骨、結合組織、ニューロンへのそれらの分化転換を促すSicheletalPigmCellRes199710271289Labatetal2000、同上。例10:神経堤由来細胞の分化転換神経堤由来の最終的分化細胞の、1または2段階法による、幹細胞またはその他の神経堤由来最終的分化細胞への分化転換を誘導する。好ましい例としては、メラノサイトまたは松果体細胞のニューロン、骨または筋肉への、頭部結合組織の骨への、シュワン細胞のニューロンまたは骨への分化転換等が挙げられる。細胞を先ずinvitroで分化転換剤、例えばグアノシン、フェニルチオウレアまたはTPA1~100μg/mlと接触させる。次に細胞を分化剤、例えばβ-カロチン、レチノイド、リボフラビンまたはプテリジン0.1~100μg/mlと接触させる。1.ニューロンへのメラノサイトの分化転換によるパーキンソン病の治療パーキンソン病患者を、患者自身のメラノサイトからinvitroで分化転換させた神経細胞の脳移植片を用いて治療する。メラノサイトを収穫し、患者の背中から採取した成人ヒト皮膚の生検から培養する。環状グアノシンモノホスフェートcGMPを20μg/mlの濃度で含有する培地中で1週間のインキュベーションにより、細胞を脱分化させる。1週間の終了時に、細胞はメラノソームおよびメラニンの損失を含めた脱色素沈着の証拠を示す。塩基性繊維芽細胞増殖因子30ng/ml;SigmaStLouisMOを含有する培地中でのインキュベーションにより、細胞を分化転換させ、安定化させる。1週間後、培養中の神経および神経膠細胞の外観を顕微鏡的および/または生化学的および/または免疫学的に確証する。次に神経細胞を収穫し、胚細胞移植片に関して実証された方法BrundinetalBrain200012313801390を用いて、パーキンソン病患者における自系脳移植片のために用いる。2.水晶体へのメラノサイトの分化転換による白内障の治療白内障患者の水晶体細胞を、培養物中で増殖させた分化転換細胞を用いて取り換える。メラノサイトを収穫し、患者の背中から採取した成人ヒト皮膚の生検から培養する。銅枯渇培地中で1週間のインキュベーションにより、細胞を脱分化させる。次に細胞を、アスコルビン酸0.2mMを含有する培地中で1週間のインキュベーションにより、水晶体細胞に分化転換させる。培養中の水晶体細胞の外観をクリスタリンに関して免疫染色により同定する。新しい水晶体細胞を収穫し、白内障のために眼内レンズを必要とする患者における自系移植片のために用いる。3.軟骨細胞へのメラノサイトの分化転換による膝損傷の治療膝軟骨損傷患者の組織を、培養物中で増殖させた分化転換細胞を用いて取り換える。メラノサイトを収穫し、患者の腕から採取した皮膚生検から培養する。細胞を先ず、トリエチレンテトラミンテトラヒドロクロリド1~100μM/lの存在下でそれらを1週間培養することにより、神経堤幹細胞に脱分化させる。次に、トランスフォーミング増殖因子βTGF-β;SigmaStLouisMOを含有する培地中でのインキュベーションにより、細胞を軟骨細胞に分化転換させる。新しい自系軟骨組織を患者に移植する。4.虹色素胞への黒色素胞の分化転換細胞培養中に多量30~100μg/mlのグアノシンを用いる1段階法により、あるいは皮膚への局所適用により、または食餌により、黒色素胞の虹色素胞への形質転換を誘導する。5.ニューロンへの黒色素胞の分化転換中枢神経系のメラノソーム含有色素細胞の分化転換は、中枢神経系における損傷神経の再生を可能にする。グアノシン1~100μg/mlを用いてメラノソーム含有色素細胞を先ず黄色素胞に、次にレチノイン酸供給組織、培養条件および所望のニューロンの種類によって、10-9~10-3Mを用いてニューロンに分化転換させる。例11:良性細胞への悪性細胞の分化転換による癌の治療2段階法により、患者において、悪性細胞の良性の最終的分化細胞への分化転換を誘導することにより、癌例えば黒色腫または肉腫を治療する。患者から得た培養癌細胞を用いて、一群の標準分化転換剤をスクリーニングして、悪性細胞を良性細胞に例えば黒色腫細胞を良性黄色素胞に転換するのにどの剤が最低毒性かつ最も効率的であるか否かを確定する。好ましい方式で、分化転換剤、例えばグアノシンおよびその他のプリン、銅枯渇剤、フェニルチオウレアまたはTPAを、分化剤、例えばカロチノイド例えばβ-カロチン、カンタキサンチン、レチノイド、リボフラビンまたはプテリジンとともに、癌細胞を分化転換し、増殖停止を引き起こすそれらの能力に関して試験する。その結果生じる分化転換細胞の良性表現型を、生化学的および免疫学的方法により、ならびに有糸分裂活性、増殖および転移能力の接触抑制を検定することにより、確証する。次に選定分化転換剤単数または複数を患者の腫瘍に局所的に、注射により、または全身的に適用する。個々の患者の黒色腫はinvitroスクリーニングのために用いられるため、腫瘍の治療は最適化される。例12:哺乳類における肢再生の誘導1.哺乳類の子孫における再生能力を増大するための方法哺乳類新生仔例えば、齧歯類、ウサギにおける高再生能力は、妊娠雌が高レベル4~1,000mg/kgの分化転換および安定化剤、例えばそれぞれグアノシンおよびβ-カロチン各物質に関して4~1,000mg/食餌1kgまたは食餌の1を摂取することにより誘導される。子孫は、それらの再生能力増大を反映する多数の分化転換化またはハイブリッド色素胞を有すると予測される。前記の子孫の再生能力増大を、前記例に記載したその場および/またはinvitro組織再生アッセイ単数または複数を用いて検査し、分化転換および安定化剤を摂取しなかった妊娠雌由来の子孫の再生能力と比較する。2.アレチネズミまたはフェレットにおける切断指の再生主にβ-カロチンをレチノールに転化するよりむしろそれを多量に貯蔵するアレチネズミまたはフェレットでは、1Dunaliellaβ-カロチンHenkelCorpLaGrangeILを有する銅欠乏食餌を1ヶ月間、その後それらの食餌の2のβ-カロチンを含有する銅正常食餌を3ヶ月間、動物に給餌することにより、切断指は再生される。指好ましくは、他の疾患を伴わない動物のを切断すると、数ヶ月内に再成長する。3.小児における切断指の再生切断された指を有した12歳未満の小児最適には他の疾患を有さない幼児は、4mg/kgのβ-カロチンを毎日3ヶ月間消費することにより、失った指を再生する。指基部の先端を先ず局部麻酔下で外科的に切開し脱安定化/分化因子として機能する外傷、指を小室中に35~40°Cで終日保持する。出血を止める。指は6か月で再生する。4.成人における切断付属器官の再生手首で切断された手を有する成人好ましくは青年で、他の疾患、例えば糖尿病を有さないは、失った付属器官を再生する。ウォルフの単細胞皮脂腺を、患者の手掌から採取した生検から単離し、invitroで培養する。これらは、プレメラノソームおよび皮脂小滴の両方を含有する手掌、足裏および瞼の皮膚の基底板中の細胞であるWolffLancet1951888889PelfinetalGItdiDerm197016515。適切な分裂促進剤例えば表皮増殖因子の培地への添加により、細胞を集密増殖させる。グアノシンを軟膏基剤中で腕基部に局所的に適用し、3ヶ月間閉鎖包帯をする。これらの3ヶ月間、患者は300mg/日のβ-カロチンを摂取する。局所麻酔下で再切開した創傷表面に、培養細胞を定期的に高密度で適用する。手が再生する。例13:自己免疫疾患の進行の予防方法重症筋無力症患者の筋肉に対する損害を引き起こすアセチルコリン受容体に対して向けられる血中の抗体の存在により特性化されるの進行は、筋細胞への患者のメラノサイトのinvitro分化転換と、その後の患者の血液から自己抗体を取り除くためのこれら新規生成自系筋細胞の使用により防止される。新しい筋細胞を先ず、血液は進入させるが、細胞を残存させる膜またはメッシュ中に置く。これらの固定化細胞を次に、透析機と同様の滅菌装置に入れる。週1回、患者は透析を受ける。有害抗体は体外筋細胞に付着し、身体に戻らない。このようにして、疾患の進行を防止する。例14:良性表現型への細胞の分化転換による黒色腫の治療材料および方法ヒト黒色腫細胞株G-361を、アメリカ培養細胞コレクションATCCカタログ番号CRL-1424、ManassasVAから凍結保存状態で購入した。受理時に、凍結細胞を含入する試験管を、2分未満の間、試験管の底1/3を渦巻かせて、37°C水浴中で急速解氷した。その後の過程はすべて、滅菌技法の標準的方法を用いて実行した。細胞を、5mlの予備加温McCoyの5A変法培地LifeTechnologiesRockvilleMDを含入するT-25フラスコに移し、加湿CO2インキュベーター中で37°Cでインキュベートした。約24時間後、元の培地を除去し、新鮮な培地と取り換えて、細胞を約70~80集密度に達するまで増殖させ、必要な場合は培地を2~3日毎に取り換えた。この時点で、周知のトリプシン-EDTA継代培養法を用いて、低細胞密度でLeighton管中で細胞を継代培養した。継代培養後、細胞の増殖を48時間再確立させた後、薬剤を投与した。初期ヒト黒色腫培養の顕微鏡観察は、異質細胞集団を明示した。少数の細胞が正常メラノサイト表現型に類似した。検出可能量のメラニンを細胞内に示す細胞は非常に少なかった。大多数の細胞は、形態的に上皮であると思われた。しかしながら、その他の細胞表現型が、繊維芽細胞型細胞、三角形細胞および多核を有する大型細胞を含む少数で観察された。観察された顕微鏡的表現型異質性は、染色体数に関して異質集団を示すATCCにより示された核型分析に匹敵した。その後、テトラヒドロフラン中のβ-カロチンをMcCoyの5A変法培地に添加して、最終濃度を約33mg/ml最終濃度0.5THFとした。非補充培地の除去後、この補充培地をLeighton管に添加し、7日間の実験期間中、2日毎に取り換えた。7日の終了時に、培養物をメタノール中で固定し、カバーガラスをギムザ染色した。結果β-カロチンは、ヒト黒色腫細胞培養に劇的作用を及ぼした。対照培養との比較において、出発集団の多数のセグメントが実験期間中に死んだ。残存した細胞のうち、ほとんどが三角形形態および多数の核を有し、神経細胞と一致し、あるいは紡錘形で、神経膠細胞または神経線維鞘シュワン細胞と一致した。広範な細胞死は、7日の実験期間の初期に起こり、残存細胞は分裂するように見えなかった。残存細胞集団中に有糸分裂像は観察されなかった。結論β-カロチンは、形態学的に良性のニューロンおよび神経膠/神経線維鞘細胞表現型への黒色腫細胞の分化転換および安定化を引き起こすと考えられる。良性表現型に分化転換されなかった悪性細胞は、殺害された。例15:幹細胞の作製ならびにニューロンおよび神経膠または神経線維鞘細胞への分化転換実験I:幹細胞の作製方法:前記の例14に記載した黒色腫細胞株G-361を用いて、グアノシンをMcCoyの5A変法培地に添加して、最終濃度を3mcg/mlとした。この補充培地を、非補充培地の除去後、Leighton管に添加し、7日間の実験期間中、2日毎に取り換えた。7日の終了時に、培養物をメタノール中で固定し、カバーガラスをギムザ染色した。結果:7日の実験期間中、グアノシンは、多数の細胞が核対細胞質比増大を示すような全体的集団における表現型変化を誘導した。神経表現型と一致する三角形細胞、ならびに形態学的に種々の神経膠または神経線維鞘細胞に類似する細胞の数の増大が認められた。2つの樹状角を細胞の一端に、そして長い軸索様突起を他端に有する神経的形態を示す多数の細胞が観察された。7日の実験期間終了までに、これらの細胞は数が増え、容易に観察された。初期培養中に存在するすべての表現型のいくつかの例は、この用量レベルでのグアノシン処理後にも存在した。意義:グアノシンは幹細胞の生成を誘導し、そしてそれはさらに、ニューロンおよび神経膠または神経線維鞘細胞になるようこれらの細胞のいくつかを刺激したと考えられる。幹細胞が作製されたという事実を支持する因子としては、高核対細胞質比を示す細胞数の増大、そして下記のように、グアノシンに、その後β-カロチンに曝露された細胞は形態学的および行動的に、β-カロチンに曝露されただけの細胞とはそして対照黒色腫細胞と比較して多少異なる応答を示したことが挙げられる。実験II:ニューロンおよび神経膠または神経線維鞘細胞への分化転換方法:前記の例14に記載した黒色腫細胞株G-361を用いて、グアノシンをMcCoyの5A変法培地に添加して、最終濃度を3mcg/mlとした。この補充培地を、非補充培地の除去後、Leighton管に添加し、7日間中、2日毎に取り換えた。THF中のβ-カロチンをMcCoyの5A変法培地に添加して、最終濃度を33mcg/ml最終濃度0.5THFとした。グアノシン補充培地の除去後、この補充培地をLeighton管に添加し、さらに7日間の実験期間中、2日毎に取り換えた。14日の終了時に、培養物をメタノール中で固定し、カバーガラスをギムザ染色した。結果:最初の7日間、グアノシンは、前記の実験Iに記載した作用を生じた。しかしながら、その後のβ-カロチン処理は、前記の例14においてβ-カロチン単独で起きたような広範な細胞死を引き起こさなかった。むしろより多数の細胞が残存し、それらのほとんどが神経形態を有し、大核、三角形細胞体ならびに樹状細胞および軸索と一致する突起を有した。厳密な観察は、三角形細胞上に存在する細胞突起がしばしば隣接細胞に対して向けられるか隣接細胞に接触し、神経網目構造に類似する細胞間の緩やかな網目構造のように見えるものを形成することを明示した。意義:グアノシンは幹細胞へのメラノサイト細胞の分化転換を引き起こしたと考えられる。これは、それらの形態的変化だけでなく、より多くの生存に関するその後のβ-カロチンに対するこれらの細胞の応答が、それらの表現型が変化したことを示唆することによっても裏付けられる。理論と結びつけずに考えると、β-カロチンはさらに、ニューロンならびに神経膠および神経線維鞘細胞に幹細胞を分化転換させ、次に、これらの細胞が神経網目構造に類似した相互連結突起の緩い網目構造を確立するよう、これらの表現型を安定化させたことが確信される。例16:ニューロンならびに神経膠および神経線維鞘細胞への正常メラノサイトの分化転換Dupin等ProcNatlAcadSciUSA20009778827887は、エンドテリン3が膠細胞へのメラノサイトの転換を誘導し得ることを示した。本例では、培養中の正常良性ヒトメラノサイトを市販供給元CloneticsWalkersvilleMDから入手する。前記の例14に用いた方法を適用して、ニューロンおよび神経膠または神経線維鞘細胞を得る。その結果生じる細胞の表現型を、電子顕微鏡および免疫細胞化学的方法により確証する。例17:自己移植のための自系ニューロンおよび神経膠または神経線維鞘細胞への正常メラノサイトの分化転換標準的方法を用いて、正常メラノサイトをヒト皮膚生検から単離する。前記例15の手法を適用して、ニューロンおよび神経膠細胞を産生する。その結果生じた細胞の培養物を、注射のための薬理学的に適切なビヒクル中に入れる。その結果生じた細胞を、生検を採取したのと同一個体に注射する。移植は、腰椎穿刺または鞘内による注射脊髄内、あるいは神経組織中の外科的移植による。これらの細胞は、神経堤由来細胞が非常に運動型であるため、ニューロンまたは神経膠またはシュワン細胞を欠く領域に移動し得る。細胞の自系性は免疫学的拒絶を回避し、薬剤またはその他の手段による免疫抑制のいかなる必要性もなくする。この方法は、パーキンソン病およびアルツハイマー病のような疾患を有する哺乳類ヒトを含むの治療に適用可能で、破壊されたニューロンを取り換え、また、多発性硬化症のような脱髄性疾患においては、シュワン細胞および神経膠を取り換える。例18:発生領域の作製および再生I.発生領域の再生のための過程発生領域の再生のための普遍的過程は脱安定化、分化転換および安定化である。ある構造が再生を要する場合、それはその構造が1部分的または2全体的に除去されたためである。1前記の1の場合、腕が肘で切断された場合には、肘の遠位の全素子基部にあるは再生されねばならない。腕が手首で切断された場合には、手全体が再生されねばならない。発生領域の一部を再生するために、基部組織は、例えば新規の外傷により、または化学物質によって脱安定化されねばならない。次に、例えば銅枯渇剤または食餌の局所的または全身的適用により、基部組織の分化転換が成し遂げられねばならない。最後に、例えばβ-カロチンの局所的または全身的適用により、安定化が達成される。基部組織が脱安定化されれば、発生領域は、その性質により、内在的に切断のレベルの遠位性を感知する。それは増殖し、次に、分化転換と共在して、完全発生領域例えば足を回復するのにすべてのレベルに関して適した失われた構造を提供する。2前記の2の場合、眼の水晶体が一例として用いられる。水晶体の完全抽出は、全水晶体が置換され得る同様の組織の基部として役立ち得る水晶体物質を全く残さない。その構造およびその発生領域は、完全に欠けている。しかしながら、水晶体発生領域は眼の発生領域の一構成成分である。この情況では、眼の発生領域は、その形成が水晶体発生領域の形成に経時的に先行し、それが水晶体発生領域を発生学的に生じるため、母発生領域と考えられ得る。眼およびその発生領域の残り部分は、無傷のままである。この情況では、水晶体発生領域の再生は、母発生領域からの組織の脱安定化、分化転換および安定化により成し遂げられる。したがって、眼母発生領域の一部である虹彩の組織は、脱安定化、水晶体細胞への分化転換および水晶体表現型の安定化の過程を受ける。II.発生領域の作製の過程発生領域を作製するのが望ましい一連の情況が存在する。例えば、小児がある器官または特定の身体構造を伴わずに生まれた場合、その構造を作製するのが望ましい。例えば、ある小児は小脳形成不全で生まれ、協調を制御する脳の小脳を欠く。小脳を生じる発生領域は、脳発生領域の一構成成分である。この場合、前記で引用した全発生領域が再生されねばならない場合と同様に、脳領域は母発生領域である。小脳発生領域の作製のための過程は、同様に、脱安定化および分化転換および安定化である。本適用では、脳の後方背部を外科的に曝露させ、少量の組織に外傷を負わせるかまたは脱安定化化学物質に曝露する。次に、分化転換誘導化学薬品を局所的に適用する。最後に、安定化剤、例えばβ-カロチンを食餌中に含入する。この情況は、構造が個体中に元来存在しないため、前記で引用した完全発生領域の再生とは異なる。発生領域を作製するのが望ましい別の情況は、哺乳類における補足的肢の作製の場合である。このような構造は、両生類のような下等動物では容易に誘導し得るGoss1969。例えば結紮がイモリの肢の周囲に配置される場合、機能的であると考えられる完全形成付加的肢は、結紮の位置で出芽する。その過剰構造の形成を誘導するための過程は、母発生領域例えば肢が延びる側腹部の、またはイモリ結紮により生じるような構造自体の発生領域からの組織の脱安定化、分化転換および安定化である。機能的補足構造、例えば器官または四肢の利点は明らかであり、即ち、既存の天然構造に付加的機能的能力を提供する。例19:哺乳類における脱安定化を刺激するための外傷の使用1.飼い主が部分的盲目であるらしいと気づいた遺伝性網膜変性を有するイヌが、獣医の診断を受けた。獣医は、RPEの小レーザー熱焼処置を施した。これは、RPE細胞の脱分化および増殖を刺激することが知られている。次にグアノシンモノホスフェートGMPを1か月間、1g/kg/日で分化転換剤として食物に添加した。GMPを中断した時に、ベタテンHenkelLaGrangeIL、7.5を13.5g/日で食物に添加した。2.未知の病因の網膜変性を有するイヌを、グアノシン1g/kg/日で1か月RPEのための脱安定化および分化転換剤として、ならびに1g/kg/日のβ-カロチン安定剤としてで治療した。盲目に変化は認められなかった。次にイヌにRPEのレーザー熱焼を施し、グアノシンおよびβ-カロチンによる治療を継続した。1か月後、グアノシンを中止した。2か月後、視力は徐々に戻っていることが認められた。3.あるいは、30ゲージ針を角膜縁の真後ろに導入して、RPEに外傷を負わせたそして脱安定化した。4.あるいは、既知のRPE毒素であるヨウ化ナトリウムTheRetinalPigmentEpitheliumFunctionandDiseaseWolfensbergerandMarmoreds1998OxfordUnivPressを30mg/kgで静注した。RPEへのこの毒性注射はRPEの脱安定化および増殖を引き起こした。5.分化状態の基部繊維芽細胞、神経、シュワン細胞およびケラチノサイトの脱安定化を刺激するために、肢切断患者は、前記の分化転換および安定化剤の使用の前に、外科的に切開された肢基部を有する。6.あるいは、20分間、1日2回で5日間の肢基部の飽和高張食塩水浸漬を、表皮およびコラーゲン瘢痕が最初に創面切除された後に実施する。[開示情報]2つの過去の出願が存在する:1.米国特許仮出願第60/146,272号1999年7月29日提出および2.米国特許仮出願第60/168,555号1999年12月2日提出。添付の国際出願は、前記の出願の両方の主題を含む。付加的主題も本出願には付加されており、本明細書を通して見出される。外国通達ライセンスは、本出願の提出と同時に要請されており、35U.S.C.184および37CFR5.11の規定に従う。"