ステビオシドをCYTOLACL5登録商標酵素製剤と接触させるステップと、ステビオールを回収するステップとを含んでなる、ステビオールを製造する方法。前記ステビオシドが植物抽出物中に存在する、請求項1に記載の方法。前記植物抽出物がステビア種steviasp.の抽出物である、請求項1または2に記載の方法。前記ステビアstevia抽出物が多量のステビオシドを含有する、請求項3に記載の方法。前記ステビオシドをCYTOLALC5登録商標酵素製剤と接触させるステップが、ステビオールが培養液中で生成される条件下で、培養液中の生酵母培養物の存在下で実施される、請求項1~4の何れか一項に記載の方法。上昇する温度条件下で、前記培養液中で残留ステビオシドの少なくとも一部を加水分解して、ステビオールに富んだ培養液を生成するステップをさらに含んでなる、請求項5の何れかに記載の方法。前記CYTOLALC5登録商標酵素製剤が、アスペルギルス種Aspergillussp.からのペクチナーゼもまた含んでなる、請求項1~6の何れか一項に記載の方法。aCYTOLACL5登録商標およびカタツムリHelixpomatiaからのグルクロニダーゼHP2SigmaG7017;bCYTOLACL5登録商標およびカタツムリHelixpomatiaからのグルクロニダーゼタイプH2SIGMAG0876;およびcカタツムリHelixpomatia由来酵素、およびペクチナーゼまたはCYTOLACL5登録商標のどちらかからなる群から選択される酵素製剤。[実施例][実施例1]様々な酵素および酵素製剤集合的に酵素と称されるを、ステビオシドとレバウジオシドAを切断してステビオールを生成する、それらの能力について評価した。5mlの緩衝液pH4.10.1mol/lH3PO4NaOH中で可溶化した50mgのステビア抽出物RV140-5419レバウジオシドA、19ステビオシド[w]、50μlの酵素溶液または10mgの凍結乾燥粉末;40°Crem1。結果を下の表1に示す。いずれの酵素もレバウジオシドAを切断できなかったので、出発原料として使用するのに好ましいステビア抽出物は、ステビオシドのレベルが高く、レバウジオシドAの含有量が低くあるべきである。[実施例2][ステビオシドの酵素的加水分解によるステビオール]3000mlの水、108mlのCYTOLACL5登録商標、およびカタツムリHelixpomatiaからの12mlのグルクロニダーゼHP2SigmaG7017;16.5gのカリウムリン酸二水素Fluka、120gのステビオシド95DAEPyungの溶液を55°Cで約1.6mlオルトリン酸1mol/lの添加によってpH=4.2に調節した。混合物を55°Cで4日間撹拌した。HPLCは、ステビオシドのステビオールへのほぼ完全な加水分解を示した。ステビオールの微細スラリーの温度を40°Cに低下させ、2.0gの乾燥酵母乾燥パン酵母を添加した。二酸化炭素の発生がほぼ収まるまで、混合物を40°Cで24時間撹拌した。混合物を55°Cに加熱し、pHを約16mlの水酸化カリウム1mol/lの添加によってpH=4.2に調節した。この混合物に、120gのステビオシド95DAEPyungを添加した。ベージュ色のスラリーを55°Cで6日間撹拌した。HPLCは、ステビオシド1および中間体5、6、7のステビオール3へのほぼ完全な加水分解を示した。白色スラリーを周囲温度に冷却し、ブフナー漏斗によって濾過した。湿潤な濾過ケークを3L反応フラスコ内で、3000mlの酢酸エチルに周囲温度で1時間懸濁した。エマルションを濾過して200mlの酢酸エチルFluka45760で洗浄した。有機相を3L反応フラスコ内で、7.5gの炭NoritCA1と共に周囲温度で45分間撹拌した。黒色スラリーを濾過した。残渣を100ml酢酸エチルで洗浄した。濃厚なスラリーが得られるまで、透明濾液を真空内でRotavaporで濃縮した。懸濁液を濾過した。濾液に対して同手順を反復した。濾過ケークを合わせて、真空内で18時間乾燥させた。72.1gのステビオール、白色軽量結晶、含有量:98[a]を得た。[実施例3][ステビオシドの酵素的加水分解によるステビオール]500mlの水、36mlのCYTOLACL5登録商標、および20gのステビオシド95DAEPyungの溶液。混合物を55°Cで4日間撹拌した。HPLCは、ステビオシドのステビオールへのほぼ完全な加水分解を示した。ステビオール沈殿物を濾過して、水で洗浄した。残渣を真空乾燥させた。含有量91のステビオール7.29gを得た。[実施例4][グルクロニダーゼH2CytolasePCL5酵素混合物1:4によるステビオシドの加水分解]条件:100mgのステビオシド、含有量=98;20μlのβ-グルクロニダーゼタイプH2カタツムリHelixpomatiaSIGMAG0876;80μlのCYTOLACL5登録商標;緩衝液0.01mmol/lリン酸pH=4.2;48時間;45°C酵素は生成物グルコースによって阻害される。グルコース除去なしのグルコースによる酵素の阻害は、反応時間を長期化して最大濃度を制限する。[実施例5][酵母の影響、グルコース除去]条件:100mgステビオシド、含有量=98;40ylβ-グルクロニダーゼタイプH-2カタツムリHelixpomatiaSIGMAG0876;160ylCYTOLACL5登録商標;緩衝液0.01mmol/lリン酸pH=4.2;35°Cで24時間;50°Cで71時間ステビオシドの切断によって形成されたグルコースは、酵素によるさらなる切断を阻害する。乾燥パン酵母は、酵素による加水分解に影響を与えることなく、グルコースを成功裏に除去した。酵母は45°Cでは数時間内に不活性化されるので、酵母による処理は≦40°Cで実施した。グルコースの二酸化炭素およびエタノールへの変換後に、酵素は完全な活性を取り戻した。40°Cでは、全体的反応速度は逐次法55°Cで6日間の加水分解および40°Cで1日間の発酵の場合よりも低いが、同時の切断およびグルコース発酵が可能である。データを下の表3に示す。