"核酸ブラシが固定化された細胞培養基材。前記核酸はストレプトアビチン-ビオチン結合、アビチン-ビオチン結合、共有結合、水素結合、配位結合、イオン結合、物理吸着の単独もしくは複合によって細胞培養基材の基底に固定化したことを特徴とする前記1に記載の細胞培養基材。前記核酸ブラシがヌクレアーゼによって分解され、固体基板上から切断することができることを特徴とする前記1に記載の細胞培養基材。前記のいずれか1項に記載の細胞培養基材を用いる細胞培養方法であって、前記核酸ブラシ表面に細胞を播種、接着させ培養する工程、続いてヌクレアーゼを反応させ、細胞を基板からはがし、回収する工程を含む細胞培養方法。従来、継代によって培養した細胞を培養基材から剥離する際に、トリプシン-EDTA溶液を用いているが、タンパク質分解酵素であるトリプシンは細胞の接着性タンパク質を分解するだけでなく、細胞表層にあるタンパク質も加水分解してしまうため、細胞そのものにダメージを与える。iPS細胞やES細胞においては通常の継代のときの生存率は数パーセントとかなり小さいことが知られている。そこで、細胞表層のタンパク質を分解しない細胞の剥離技術の開発が求められていた。本発明は、ヌクレアーゼによって細胞を剥離しうる核酸ブラシ、核酸ブラシからなる細胞培養基材の製造方法と細胞の剥離方法を提供することを目的とする。本発明者らは、上記課題を解決するために、トリプシンを用いない剥離法として核酸ブラシを固定化した培養基材を考えた。核酸ブラシ表面で細胞を培養し、トリプシンではなくヌクレアーゼを作用させ、核酸ブラシ部分のみを加水分解することにより、容易に細胞を剥離することが可能になる。細胞表層には核酸は提示されていないことからヌクレアーゼが細胞にダメージを与えることは無いと期待され、高い生存率が得られる。本発明は、以下の構成により達成される。1.核酸ブラシが固定化された細胞培養基材。2.前記核酸ブラシが1本鎖、2本鎖、3本鎖、4本鎖を特徴とする前記1に記載の細胞培養基材。3.前記核酸ブラシがストレプトアビチン-ビオチン結合、アビチン-ビオチン結合、共有結合、水素結合、配位結合、イオン結合、物理吸着の単独もしくは複合によって細胞培養基材の基底に固定化したことを特徴とする前記1に記載の細胞培養基材。4.前記核酸ブラシに細胞の接着性を向上することを目的とした細胞接着性ペプチド、コレステロール、カルキシル基、アミノ基などを有することを特徴とする前記1に記載の細胞培養基材。5.前記核酸ブラシ表面に細胞の接着性を向上することを目的としたコラーゲン、ポリリシン、ゼラチン、フィブロネクチンなどをコートしたことを特徴とする前記1に記載の細胞培養基材。6.前記核酸ブラシがヌクレアーゼによって分解され、固体基板上から切断することができることを特徴とする前記1に記載の細胞培養基材。7.前記のいずれか1項に記載の細胞培養基材を用いる細胞培養方法であって、前記核酸ブラシ表面に細胞を播種、接着させ培養する工程、続いてヌクレアーゼを反応させ、細胞を基板からはがし、回収する工程を含む細胞培養方法。本発明によれば、継代の際に細胞にダメージを与えない新規培養基材を提供できる。以下、本発明の実施例によりさらに具体的に説明する。製造例1ストレプトアビジンコートの96穴プレートReacti-BindTMStreptavidinHighBindingCapacityCoated96-WellPlatesPIERCEと、5’-ビオチン修飾DNA5’-biotin-GTCCT2CGAGTCCT2CCCCCCCCCC-3’33merシステムサイエンス10-7Mを用いて、バッファー10mMTris-HCl,0.2MNaCl中で30分反応させた。反応後バッファーで洗浄し、核酸ブラシを作製した。製造例2製造例1において、5’-ビオチン修飾DNA5’-biotin-GTCCT2CGAGTCCT2CCCCCCCCCC-3’33merシステムサイエンスと相補鎖DNA5’-GGGGGGGGGG-3’10merシステムサイエンスの等モル量を用いて核酸ブラシを得た。製造例3製造例1において、5’-ビオチン修飾DNA5’-biotin-GTCCT2CGAGTCCT2CCCCCCCCCC-3’33merシステムサイエンスと5’-コレステロール基修飾DNA5’-cholesteryl-GGGGGGGGGG-3’10merシステムサイエンスの等モル量を用いて核酸ブラシを得た。製造例4製造例1において、得られた核酸ブラシ上をコラーゲンでコートして核酸ブラシを得た。実施例1製造例1で得られた培養基材にHeLa細胞を3000cells/well播種し、72時間培養した。このとき用いた培地はDULBECCO’SMODIFIEDEAGLE’SMEDIUMSIGMA-ALDRICH、ペニシリン-ストレプトマイシンinvitrogen、およびFetalBovineSerumGibcoを用いた。24時間ごとに観察を行い、培養後、DNAヌクレアーゼであるRecombinantDNaseITaKaRaを反応させ、培養基材上の核酸ブラシを切断し、細胞を剥離した。回収後、35mmディッシュIWAKIに再播種し、同様に48時間後に観察を行った。製造例1で得られた培養基材にHeLa細胞を播種したところ、核酸ブラシ上に細胞が接着し、増殖が確認できた。また、培養後のヌクレアーゼ反応ではほぼすべての細胞が剥離し、かつ剥離した細胞の生存が確かめられた。実施例2実施例1において製造例2で得られた培養基材にHeLa細胞を播種し、72時間培養した。前記同様に観察を行い、核酸ブラシ上に細胞が接着し、増殖が確認できた。DNAヌクレアーゼ反応ではほぼすべての細胞が剥離した。回収した細胞を再播種し、48時間後に再び観察し細胞の生存が確かめられた。実施例3実施例1において製造例3で得られた培養基材にHeLa細胞を播種し、72時間培養した。前記同様に観察を行い、核酸ブラシ上に細胞が接着し、増殖が確認できた。核酸ブラシが修飾されていても同様な結果が得られた。DNAヌクレアーゼ反応ではほぼすべての細胞が剥離し、回収した細胞を再播種、48時間後に再び観察し細胞の生存が確かめられた。実施例4実施例1において製造例4で得られた培養基材にNIH3T3細胞を3000cells/well播種し、48時間培養した。前記同様に観察を行い、核酸ブラシ上に細胞が接着し、増殖が確認できた。核酸ブラシ上にコートした基材でも前記同様の結果が得られ、また細胞腫が異なっていても接着、増殖したことが確認された。DNAヌクレアーゼ反応ではほぼすべての細胞が剥離した。回収した細胞を再播種し、48時間後に再び観察し細胞の生存が確かめられた。"