"放射性化合物を投与した被検者の試料に含まれる前記放射性化合物の放射性代謝物を分析することを含む薬物代謝機能の測定方法。薬物代謝機能がシトクロムP450による薬物代謝機能である請求項1記載の方法。放射性化合物が放射性アミノ酸である請求項1記載の方法。放射性アミノ酸が天然アミノ酸及び/又は非天然アミノ酸の放射性標識体である請求項3記載の方法。薬物の適正投与量を決定するために行う請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。被検者の代謝異常を検査するために行う請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。被検者の試料が血液、血清又は血漿から得られる試料である請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミンもしくはその塩、又はこれらの標識体を含有するシトクロムP450による薬物代謝機能を測定するための検査薬。本発明の課題は、代謝物の構造等が不明であっても適用でき、かつ適用範囲が広い薬物代謝機能測定方法を提供することである。本発明の要旨は以下のとおりである。1放射性化合物を投与した被検者の試料に含まれる前記放射性化合物の放射性代謝物を分析することを含む薬物代謝機能の測定方法。2薬物代謝機能がシトクロムP450による薬物代謝機能である前記1に記載の方法。3放射性化合物が放射性アミノ酸である前記1に記載の方法。4放射性アミノ酸が天然アミノ酸及び/又は非天然アミノ酸の放射性標識体である前記3に記載の方法。5薬物の適正投与量を決定するために行う前記1~4のいずれかに記載の方法。6被検者の代謝異常を検査するために行う前記1~4のいずれかに記載の方法。7被検者の試料が血液、血清又は血漿から得られる試料である前記1~6のいずれかに記載の方法。8N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミンもしくはその塩、又はこれらの標識体を含有するシトクロムP450による薬物代謝機能を測定するための検査薬。本発明の薬物代謝機能測定方法は、代謝物の構造等が不明であっても適用でき、かつ適用範囲が広い。本発明の薬物代謝機能の測定方法に用いる放射性化合物としては、生体内で代謝され、放射性代謝物を生じるものであれば、特に制限はなく、例えば、シトクロムP450により代謝され、放射性代謝物を生じるもの、天然アミノ酸及び/又は非天然アミノ酸の放射性標識体が挙げられる。前記シトクロムP450により代謝され、放射性代謝物を生じる放射性化合物としては、例えば、脳血流診断薬として市販されている123I-N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン123I-IMP又はその塩、例えば塩酸塩が挙げられる。また、シトクロムP450CYPの各分子種について、基質となりうる化合物が知られているので、これらの化合物に対応する放射性化合物を常法により合成して用いることができる。CYPの各分子種と基質となりうる化合物との具体例を以下に示す。CYP1A2amitriptylinecaffeineclomipramineclozapinecyclobenzaprineestradiolfluvoxaminehaloperidolimipraminemexiletinenaproxenolanzapineondansetronacetaminophenpropranololriluzoleropivacainetacrinetheophyllinetizanidineverapamilRwarfarinzileutonzolmitriptanCYP2B6bupropioncyclophosphamideefavirenzifosphamidemethadonesorafenibCYP2C8amodiaquinecerivastatinpaclitaxelrepaglinidesorafenibtorsemideCYP2C9非ステロイド性抗炎症薬:diclofenacibuprofenlornoxicammeloxicamSnaproxenpiroxicamsuprofen経口血糖降下剤tolbutamideglipizideアンジオテンシンII阻害薬:losartanirbesartanスルホニル尿素系薬剤:glyburideglibenclamideglipizideglimepiridetolbutamideその他:amitriptylinecelecoxibfluoxetinefluvastatinglyburidenateglinidephenytoin4OH2rosiglitazonetamoxifentorsemideSwarfarinCYP2C19プロトンポンプ阻害薬:lansoprazoleomeprazolepantoprazolerabeprazole抗てんかん剤:diazepamphenytoinSmephenytoinphenobarbitoneその他:amitriptylinecarisoprodolcitalopramchloramphenicolclomipramineclopidogrelcyclophosphamidehexobarbitalimipramineindomethacinRmephobarbitalmoclobemidenelfinavirnilutamideprimidoneprogesteroneproguanilpropranololteniposideRwarfarinCYP2D6tamoxifenβ遮断薬:carvedilolSmetoprololpropafenonetimolol抗うつ薬:amitriptylineclomipraminedesipraminefluoxetineimipramineparoxetine抗精神病薬:haloperidolperphenazinerisperidonethioridazinezuclopenthixolその他:alprenololamphetaminearipiprazoleatomoxetinebufuralolchlorphenimipraminechlorpromazinecodeinedebrisoquinedexfenfluraminedextromethorphandonepezilduloxetineencainideflecainidefluvoxaminelidocainemetoclopramidemethoxyamphetaminemexiletineminaprinenebivololnortriptylineondansetronoxycodoneperhexilinephenacetinphenforminpromethazinepropranololsparteinetramadolvenlafaxineCYP2E1麻酔薬:enfluranehalothaneisofluranemethoxyfluranesevofluraneその他:acetaminophenanilinebenzenechlorzoxazoneethanolNNdimethylformamidetheophyllineCYP3A4,5,7マクロライド系抗生物質:clarithromycinerythromycin抗不整脈薬:quinidineベンゾジアゼピン系薬物:alprazolamdiazepammidazolamtriazolam免疫調節剤:cyclosporinetacrolimus抗HIV薬:indinavirnelfinavirritonavirsaquinavir消化管運動改善薬:cisapride抗ヒスタミン薬:astemizolechlorpheniramineterfenadineカルシウム拮抗薬:amlodipinediltiazemfelodipinelercanidipinenifedipinenisoldipinenitrendipineverapamilHMG-CoA還元酵素阻害薬:atorvastatincerivastatinlovastatinsimvastatinステロイド類:estradiolhydrocortisoneprogesteronetestosteroneその他:alfentanilaprepitantaripiprazoleboceprevirbuspironecaffeinecilostazolcocainedapsonedexamethasonedextromethorphandocetaxeldomperidoneeplerenonefentanylfinasteridegleevechaloperidolimipramineirinotecanLAAMlidocainemethadonenateglinideondansetronpimozidepropranololquetiapinequininerisperidonesalmeterolsildenafilsirolimussorafenibsunitinibtamoxifentaxoltelaprevirterfenadinetoriseltrazodonevincristinezaleplonziprasidonezolpidem天然アミノ酸は代謝されやすく、非天然アミノ酸は代謝を受けにくい。したがって、天然アミノ酸及び/又は非天然アミノ酸の放射性標識体を投与した被検者の試料に含まれる放射性代謝物を分析することにより、薬物代謝機能を測定することができ、薬物の適正投与量を決定したり、被検者の代謝異常を検査することができる。本発明の薬物代謝機能の測定方法においては、目的に応じて、基質となる放射性化合物を1種又は2種以上を用いる。分析対象物である放射性代謝物の形態としては、有機物、無機物、イオンのいずれでもよいが、分析の容易性の点で有機物が好ましい。本発明における放射性アミノ酸の代謝物には、当該放射性アミノ酸が組み込まれたタンパクも包含される。本発明の測定方法に用いる放射性化合物を合成するために用いる放射性核種としては、例えばトリチウム3H、11-炭素11C、14-炭素14C、15-酸素15O、18-フッ素18F、32-リン32P、59-鉄59Fe、67-銅67Cu、67-ガリウム67Ga、81m-クリプトン81mKr、81-ルビジウム81Rb、89-ストロンチム89Sr、90-イットリウム90Y、99m-テクネチウム99mTc、111-インジウム111In、123-ヨード123I、125-ヨード125I、131-ヨード131I、133-キセノン133Xe、117m-スズ117mSn、153-サマリウム153Sm、186-レニウム186Re、188-レニウム188Re、201-タリウム201Tl、212-ビスマス212Bi、213-ビスマス213Bi及び211-アスタチン211Atが挙げられる。本発明における放射性化合物の投与経路としては、静脈内、皮内、皮下、経口、経粘膜、及び直腸投与などが挙げられる。被検者の試料としては、例えば血液、血清、血漿、尿、唾液又はその他体液、好ましくは血液、血清、血漿が挙げられる。放射性化合物の投与形態としては、投与経路に適した剤形であれば、注射剤、液剤、錠剤等から適宜選択すればよく、本発明の作用及び効果を損なわない限り、薬学的に許容される担体、又は剤形によって当該技術分野において一般的に使用される添加剤を更に含んでもよい。添加剤として、例えば、着色剤、保存剤、風味剤、香り改善剤、呈味改善剤、甘味剤、又は安定剤、その他薬学的に許容される添加剤を含有することができる。放射性化合物の投与量は、投与方法、投与する化合物ならびに患者の年齢、性別及び体重によって、適宜決定すればよい。本発明の測定方法においては、放射性化合物を投与した被検者の試料に含まれる前記放射性化合物の放射性代謝物を分析する。前記放射性代謝物の分析は、例えば、親化合物未変化体の放射性化合物と前記放射性代謝物とを分離して、前記放射性代謝物の放射能を測定することにより行うことができる。脂溶性の放射性化合物は、代謝されることにより水溶性の放射性代謝物を生じることが多く、このような場合には、例えばオクタノール抽出法により親化合物未変化体の放射性化合物と前記放射性代謝物とを分離することができる。また、薄層クロマトグラフィー、ペーパークロマトグラフィー等によっても、親化合物未変化体の放射性化合物と前記放射性代謝物とを分離することができる。本発明の測定方法によれば、一般的な放射性診断薬においては夾雑物されている放射性代謝物を解析することにより、各種代謝異常、例えばCYPの異常を見つけることができ、また、代謝物を見ることにより、CYP分子種ごとの遺伝子を調べることなく、CYPファミリー全体として代謝プロファイルができ、また薬物の適正投与量を決定できる。本発明の測定方法は、放射性代謝物を分析するので、非標識代謝物を分析する場合に比較して、非常に低い投与量でも十分な効果を発揮することができ、更に、内因性の代謝物と容易に区別することもできる。N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミンIMPはCYP2C19により選択的に代謝される。したがって、IMPもしくはその塩、又はこれらの標識体は、CYP、特にCYP2C19による薬物代謝機能を測定するための検査薬として用いることができる。前記したように低い投与量で十分な効果が得られ、また脳血流診断薬として市販されているように、安全性が確認されている点から、123I-N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン123I-IMP又はその塩を用いることが好ましい。IMP又は123I-IMPの塩としては、薬学的に許容される塩が好ましく、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、ピロ硫酸、メタリン酸等の無機酸、又はクエン酸、安息香酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、スルホン酸例えば、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸等の有機酸との塩が挙げられる。IMPの標識体に用いる標識としては、例えば、前記の放射性核種による標識の他、同位体、蛍光等による標識が挙げられる。以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。実施例1N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン塩酸塩のCYP2C19による代謝物の分析目的123I-N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン塩酸塩123I-IMPは、臨床において単光子放射断層撮影SPECTによる脳血流の診断に用いられている。123I-IMPはヒトの体内で代謝を受ける希な診断薬である。代謝の第1段階は123I-p-ヨードアンフェタミンの生成であること、また引き続いて123I-p-ヨード安息香酸、更に123I-p-ヨード馬尿酸へと代謝されることが報告されている。しかしながらこれまでにこれらの代謝反応に関与する薬物代謝酵素についての知見はない。そこで本実験ではIMPの代謝におけるチトクロームP450CYPの関与を調べた。方法N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン塩酸塩IMP及びp-ヨード安息香酸の非標識体を使用した。ヒト肝ミクロゾームを酵素源とし、IMPからp-ヨード安息香酸への代謝がNADPH依存的に起こるか否かを調べた。このときIMPの消失の有無及びその程度も調べた。組み換えヒトCYP1A1、1A2、1B1、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1、3A4及び3A5を用いて、IMPの代謝における各CYP分子種の寄与を調べた。I.試薬リン酸水素二ナトリウム12水和光純薬リン酸二水素カリウム和光純薬EDTA2Na和光純薬Glucose6phosphate和光純薬β-NADP和光純薬Glucose6phosphatedehydrogenase和光純薬MgCl26H2O和光純薬過塩素酸60和光純薬p-クロロ安息香酸和光純薬アセトニトリル和光純薬ジブチルアミンフォスフェート溶液D4試薬WatersBDウルトラプール150ドナープールドヒト肝ミクロゾーム日本ベクトンディッキンソン特級グリセリン和光純薬II.試薬調製1.ミクロゾーム納品時にミクロゾームは250mMスクロースに懸濁され、蛋白濃度は20mg/mLである。一度融解してミクロゾーム500μLに対しグリセリンを125μL添加した蛋白濃度は16mg/mLとなる。エッペンに分注して-80°Cに保存し、反応時に必要量を融解して使用した。2.0.167mMEDTA/0.33MNaKリン酸緩衝液pH7.410.5Mリン酸水素二ナトリウム水溶液MW:358.14、179.07g/1000mLに0.5Mリン酸二水素カリウム水溶液MW136.09、34.02g/500mLを加え、0.5MNaKリン酸緩衝液pH7.4を調製した。20.5mMEDTA水溶液を調製したMW372.24、37.22mg/200mL。30.5mMEDTA水溶液:0.5MNaKリン酸緩衝液pH7.4=1:2の割合で混合し、0.167mMEDTA/0.33MNaKリン酸緩衝液pH7.4とした。3.NADPH生成系用時調製11MMgCl2水溶液を調製MW:203.30、10.17g/50mLした。2Glucose6phosphate18.2mgを精製水536μLに溶解した。3β-NADP4.5mgを精製水482.4μLに溶解した。42の溶解したGlucose6phosphateと3のβ-NADPを混合し、1の1MMgCl2水溶液53.6μL及びGlucose6phosphatedehydrogenase1000U/1mL10.72μLを添加しNADPH生成系とした。III.実験方法1.親化合物IMP減少を指標とした方法反応溶液は0.05mMEDTA、100mMNaKリン酸緩衝液pH7.4、0.64mg/mL蛋白相当のグリセリン添加ヒト肝ミクロゾーム、NADPH生成系0.5mMβ-NADP、5mMGlucose6phosphate、1U/mLGlucose6phosphatedehydrogenase、5mMMgCl2及び0.5μMIMPを混合し250μLとなるようにしたi。対照は、NADPH生成系を精製水に置き換え行ったものii、ミクロゾーム及びNADPH生成系を精製水に置き換え行ったものiiiを実施した。IMP添加で反応を開始し37°Cで反応後、50μL過塩素酸水溶液を加え反応を停止させた。反応時間を10、20、60分間とした。反応停止後、内部標準物質の20μMp-クロロ安息香酸水溶液を30μL添加し15000rpm、20°Cで5分間遠心した。その上清100μLを液体クロマトグラフィーにて分析した。1検体あたりの組成及び操作を表1に示す。分析条件を以下に示す。カラム:CAPCELLPAKC18SG120,4.6×250mm資生堂製カラム温度:40°C移動相Aはアセトニトリル330mL、水670mLを混ぜ、ジブチルアミンフォスフェート溶液D4試薬10mLを加えた。移動相Bはアセトニトリル900mL、水100mLを混ぜ、ジブチルアミンフォスフェート溶液D4試薬10mLを加えた。溶離条件:移動相A:移動相B=100:0→78:220min.→16min.グラディエント、その後移動相A:移動相B=100:0で9分平衡化した。流量:0.8mL/min.検出UV:IMPは232nm、代謝物p-ヨード安息香酸は248nm、内部標準物質p-クロロ安息香酸は235nmで検出した。本条件で約6.3分にIMP、約15.6分に代謝物p-ヨード安息香酸、約12.6分に内部標準物質p-クロロ安息香酸が検出された。2.代謝物p-ヨード安息香酸の増加を指標とした方法反応溶液は0.05mMEDTA、100mMNaKリン酸緩衝液pH7.4、0.64mg/mL蛋白相当のグリセリン添加ヒト肝ミクロゾーム、NADPH生成系0.5mMNADP、5mMGlucose6phosphate、1U/mLGlucose6phosphatedehydrogenase、5mMMgCl2及び1000μMIMPを混合し250μLとなるようにした。対照は、実験方法1.と同様に行った。IMP添加で反応を開始し37°Cで反応後、50μL過塩素酸水溶液を加え反応を停止させた。反応時間を10、60、120分間とした。反応停止以降の操作、分析方法は、実験方法1.と同じである。1検体あたりの組成は、実験方法1.の5μMIMPを10mMIMPとし、他は同様に行った。結果考察IMP0.5又は1μMをヒト肝ミクロゾーム及びNADPHの存在下においてインキュベートしたところ、p-ヨード安息香酸の生成は認められなかった。IMPの濃度は、NADPHの存在下において反応時間依存的に減少し図1、IMPがヒト肝ミクロゾーム中の酵素によりNADPH依存的に代謝されることを明らかにした。組み換えヒトCYPを用いた実験により、IMPはCYP2C19により独占的に代謝されることを見いだした図2及び3。CYP2C19によるIMPの消失反応のKmは8.6μM、Vmaxは9.7nmol/min/nmolCYPであった。CYP2C19を欠損するヒト肝ミクロゾームCYP2C192/2を用いた場合、IMPの消失速度は野生型のCYP2C19を発現するヒト肝ミクロゾームを用いた場合の約50であり図4、IMPの代謝がCYP2C19の遺伝子多型に依存することを明らかにした。IMPがCYP2C19によって代謝された結果、未知ピークがHPLCクロマトグラムで検出された。ピーク面積はIMPピークの減少に比例して反応時間依存的に増加した。結論以上、IMPはCYP2C19により代謝されることがわかった。したがって、IMP又はその標識体を用いることにより、シトクロムP450による薬物代謝機能を測定できることがわかった。実施例2125I-N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン塩酸塩のCYP2C19による代謝物の分析N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン塩酸塩IMPの代わりに125I-N-イソプロピル-p-ヨードアンフェタミン塩酸塩125I-IMPを用いた以外は実施例1と同様にして実験を行った。結果を表2及び図5に示す。125I-IMPもIMPと同様に、CYP2C19により代謝されることがわかった。したがって、125I-IMPを用いることにより、シトクロムP450による薬物代謝機能を測定できることがわかった。実施例3放射性ヨウ素標識アミノ酸の放射性代謝物の分析1放射性ヨウ素標識チロシンの調製125I-3-ヨード-D-チロシン125I-D-MIT及び125I-3-ヨード-L-チロシン125I-L-MITを以下のようにして調製した。125I-NaIは、Amersham社より購入した。125I-D-MIT及び125I-L-MITは、D-及びL-チロシンを原料としてchloramine-T法によりそれぞれ作製した。即ち、chloramine-T2.0×10-8moleAldrich社を溶解した0.05Mリン酸緩衝溶液pH6.210μlを、標識原料のアミノ酸1.0×10-8moleと無担体125I-NaI7,4~37MBqを食む35μlの0.4Mリン酸緩衝溶液pH6.2に加えた。反応液を2分間放置し、飽和ピロ亜硫酸ナトリウム水溶液の10倍希釈液を加え、反応を止めた。放射性ヨウ素標識MITの精製は、SephadexLH-20Pharmacia社カラムクロマトグラフィー10×200mm、溶出液;酢酸エチル:メタノール:2Nアンモニア水=40:10:4により行なった。溶出した標識アミノ酸画分を集め、減圧下、溶媒を完全に留去した後、生理食塩水に溶解し、以下の実験に用いた。2マウス組織ホモジネートを用いた脱ヨウ素化反応体重約25gのddY系雄性マウス2匹を屠殺解剖した後、即座に肝臓及び腎臓を摘出し、一定量の組織に水冷したKrebs-Ringerリン酸緩衝溶液pH7.4を加えてホモジナイズした。氷冷した各ホモジネート100μlに125I-D-MIT又は125I-L-MITを20μl1.1×10-13mole、7.4kBq加えて、37°Cあるいは4°Cにてインキュベートし、5分後、トリクロロ酢酸を最終濃度が5になるように加えた。遠心分離した後、その上清をシリカゲル薄層クロマトグラフィーMerck社Art.5553、展開溶媒;メタノール:酢酸=100:1,メタノール:10酢酸アンモニア水=10:1にて分析した。インキュベート5分後の結果を表3に示す。125I-D-MITは、37°C及び4°Cのいずれの温度条件においてもほとんど脱ヨウ素化を受けなかった。一方、125I-L-MITは37°Cでインキュベートすると、ほとんど脱ヨウ素化された。3マウス体内分布実験と代謝物の分析125I-D-MIT及び125I-L-MITのそれぞれの生理食塩溶液0.1ml1.6×10-13mole、11.1kBqを体重約25gのddY系雄性マウス2匹に尾静脈より投与し、一定時間後にエーテル麻酔にて屠殺した。ヘパリン処理注射器を用いて心臓穿刺により採血した後、肝臓、腎臓を摘出した。各組織50mgを精秤し、重炭酸緩衝溶液450μlを加え、ホモジナイズした。この一定量を1.9mlに希釈し、100トリクロロ酢酸溶液0.1mlを加え、混和した。遠心分離した後、その上清をシリカゲル薄層クロマトグラフィーMerck社Art.5553、展開溶媒;メタノール:酢酸=100:1,メタノール:10酢酸アンモニア水=10:1にて分析した。インキュベート10分後の結果を表4に示す。いずれの組織においても、125I-D-MITに比較して、125I-L-MITは容易に代謝酵素的脱ヨウ素化され、放射性代謝物である遊離ヨウ素が多量に検出された。この傾向は尿中ではより顕著であった。以上のように、125I-D-MIT及び125I-L-MITは代謝のしやすさが大きく異なり、これらの傾向を利用し、個体差、病態の変化による放射性代謝物の量の相違を測定することにより、薬物代謝機能を測定が可能であることがわかった。実施例4放射性天然/非天然アミノ酸の放射性代謝物の分析5週齢ddY系雄性マウスに標識L-/D-メチオニンMetを尾静脈注し、10分後にマウスを屠殺した後、膵臓、肝臓、腎臓を摘出した。摘出臓器に重炭酸緩衝液を加えホモジナイズした。このホモジネートに最終濃度5となるように100トリクロロ酢酸Nacalaitesqueを加え、混和した。この沈殿画分をグラスフィルターGC-50、Toyoに捕集し、氷冷5トリクロロ酢酸で洗浄した後、150°C、1時間加熱処理することによりタンパクを固定し、その放射能を測定したものをタンパク画分への組み込み率として評価した。また、前記のトリクロロ酢酸を加えたホモジネートを遠心分離し、上清を薄層クロマトグラフィーにスポット後、展開溶媒ブタノール:酢酸:水=4:1:1で展開し、イメージングプレートBAS-SR2025,FujiFilmに露光後、BAS5000FujiFilmを用いて解析したものを酸可溶性画分における未変化体残存率として評価した。D-Metについて、膵臓においては、体内分布実験の膵臓を分析したため、ダブルトレーサー用の3H体を用いた。また、肝臓、腎臓に関しては酸可溶性画分における代謝安定性の評価に14C専用イメージングプレートを用いたために、[S-methyl-14C]-D-Met14C-D-Met;AmericanRadiolabeledChemicalsを用いた。したがって、放射性代謝物分析におけるD-Metの表記は14C-/3H-D-Metとする。トレーサー投与後10分のマウス膵臓、肝臓、腎臓における14C-L-Met及び14C-/3H-D-Metのタンパクへの組み込み率を図6に示した。14C-L-Metは組織集積率の約25~50のタンパク組み込み率を示したのに対し、14C-/3H-D-Metでは約3と14C-L-Metと比較し顕著に低下した。また、図7に代表的な代謝性組織である肝臓、腎臓の組織集積率を100としたときの14C-L-Met及び14C-D-Metの組織内放射性代謝物の存在比を示す。14C-D-Metにおいては約80が未変化体として存在していたのに対し、14C-L-Metにおいては未変化体は約40以下しか存在しておらず、約25~50はタンパク画分に、約25~50は放射性代謝物として存在していることを確認した。"