"aパルボウイルスおよびbヒストン脱アセチル化酵素阻害剤HDACIを含有する医薬組成物。aパルボウイルスおよびbHDCAIを別々の実体として含有する、請求項1に記載の医薬組成物。前記パルボウイルスが、H-1H-1PVまたは関連するげっ歯類パルボウイルスである、請求項1または2に記載の医薬組成物。前記関連するげっ歯類パルボウイルスが、LuIII、マウス微小ウイルスMMV、マウスパルボウイルスMPV、ラット微小ウイルスRMV、ラットパルボウイルスRPVまたはラットウイルスRVである、請求項3に記載の医薬組成物。前記HDACIが、酪酸ナトリウムNaB、トリコスタチンATSA、バルプロ酸VPAまたはスベロイルアニリドヒドロキサム酸SAHAである、請求項1~4のいずれか一項に記載の医薬組成物。癌の治療のためのa医薬組成物類の調製のための、請求項1~5のいずれか一項に定義されるパルボウイルスおよびHDACIの使用。a前記パルボウイルスおよびb前記HDACIが、順次投与される、請求項6に記載の使用。前記パルボウイルスaが、前記HDACIbよりも前に投与される、請求項7に記載の使用。前記癌が、脳腫瘍、子宮頸癌、または膵癌である、請求項6~8のいずれか一項に記載の使用。前記脳腫瘍が、神経膠腫、髄芽細胞腫または髄膜腫である、請求項9に記載の使用。前記神経膠腫が、悪性ヒト神経膠芽腫である、請求項10に記載の使用。前記パルボウイルスが、腫瘍内投与により投与される、請求項6~11のいずれか一項に記載の使用。癌の治療のための方法で使用するための、請求項1~5のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記癌が、脳腫瘍、子宮頸癌、または膵癌である、請求項13に記載の医薬組成物。従って、本発明の目的は、改良されたパルボウイルスに基づく治療法のための手段を提供することである。本発明によれば、これは、特許請求の範囲において定義される主題により実現される。本発明は、パルボウイルスとヒストン脱アセチル化酵素阻害剤HDACIの併用治療により、治療効果が相乗的に改善され得るという出願人の知見に基づく。HDACIsは、構造上不均一な分子の群である。HDACIs、すなわち酪酸ナトリウムNaB、トリコスタチンATSA、バルプロ酸VPAおよびスベロイルアニリドヒドロキサム酸SAHAの致死未満量は、パルボウイルスの抗悪性腫瘍活性を、癌、例えば子宮頸癌由来のHeLaHPV-18陽性、CaSkiおよびSiHaHPV-16陽性および原発子宮頸癌細胞ならびに膵管腺癌PDAC由来のAsPC-1およびCapan-1細胞株において相乗的な方法で強化することが見出された。HDACIsは、癌において発現停止している複数の遺伝子の転写を再活性化し、このようにしてそれらは癌細胞の増殖抑制、分化およびアポトーシスを誘導することができる。HDACIで処理した子宮頸癌細胞ならびに膵管腺癌細胞は、E2F-標的遺伝子p73のアポトーシス促進性イソ型の強い誘導と相関するが、p53の再活性化に依存しないE2Fに媒介されるプロセスによってアポトーシスを受ける。さらに、パルボウイルスの非構造タンパク質NS-1は、HDACIsによりアセチル化され、結果的にパルボウイルスの複製および細胞殺傷活性は高度に改善される。よって、パルボウイルスは、癌、例えば前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎腫瘍、肝腫瘍、リンパ腫、乳腺腫瘍、肝細胞腫または黒色腫および特に脳腫瘍、子宮頸癌、または膵癌を、HDCA阻害剤と併用して、好ましくは2段階プロトコールで治療するのに多大な治療可能性を有する。要約すれば、パルボウイルスH-1PVおよびHDAC阻害剤は、癌、例えば子宮頸癌由来細胞株HeLa、CaSki、SiHaおよび原発腫瘍細胞ならびに膵管腺癌PDAC由来細胞株AsPC-1およびCapan-1を死滅させる際に相乗的に作用することが実証され得る。これら2種類の薬剤間の協同作用は、致死未満量のHDAC阻害剤を用いて起こり、それは正常な組織に対する望ましくない副作用のリスクを低下させる。併用療法は、H-1PVおよびその他の腫瘍溶解性パルボウイルスを低い濃度で、その有効性に影響を及ぼすことなく使用することを可能にし得る。本発明は、aパルボウイルスおよびbHDCA阻害剤を、好ましくは別々の実体として、例えば別々の容器中に含有する医薬組成物を提供する。好ましくは、前記医薬組成物中に、パルボウイルスおよびHDCA阻害剤は、有効量で存在し、製薬上許容される担体と組み合わされている。製薬上許容されるは、有効成分の生物活性の有効性を妨げない、かつ、それを投与する患者に対して毒性のないあらゆる担体を包含することを意味する。適した製薬担体の例は、当技術分野で周知であり、それには、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、乳濁液、例えば油/水乳濁液など、様々な種類の湿潤剤、滅菌溶液などが含まれる。かかる担体は、従来法により処方されてよく、有効量で被験体に投与され得る。用語パルボウイルスは、本明細書において、その野生型または修飾された自己複製能をもつ誘導体、ならびに関連するウイルスあるいは、かかるウイルスまたは誘導体に基づくベクターを含む。適したパルボウイルス、誘導体など、ならびに前記パルボウイルスを活発に産生するために使用される細胞および治療に有用な細胞は、過度の実験労力なしに、本明細書中の開示に基づいて当分野の技術の範囲内で容易に決定できる。有効量とは、疾患の経過および重篤度に影響を及ぼし、かかる病態の減少または緩解をもたらすために十分な有効成分の量をさす。これらの疾患または障害を治療および/または予防するために有用な有効量は、当業者に公知の方法を用いて決定することができる例えば、Fingletal.,ThePharmocologicalBasisofTherapeutics,GoodmanandGilman,eds.MacmillanPublishingCo.,NewYork,pp.1-461975参照。さらなる製薬上適合する担体には、ゲル、生体吸収性マトリックス剤、治療薬を含有する移植エレメント、または任意のその他の適したビヒクル、送達または分配手段または材料類を挙げることができる。化合物の投与は、様々な方法、例えば静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所または皮内投与により達成することができる。投与経路は、当然、治療の種類および医薬組成物中に含まれる化合物の種類に依存する。好ましい投与経路は、静脈内投与である。パルボウイルスおよびHDACIの投与計画は、当分野の技術の範囲内で、主治医により、例えば患者のサイズ、体表面積、年齢、性別、投与する特定のパルボウイルス、HDACIなど、投与の時間および経路、腫瘍の種類および特徴、患者の全体的健康、ならびに患者が受けているその他の薬物治療を含む、患者データ、所見およびその他の臨床要因に基づいて容易に決定できる。本発明に従うHDACIsと併用したパルボウイルスが、血液脳関門を通過する能力をもつ感染性ウイルス粒子を含む場合、治療は、ウイルス、例えばH1ウイルスの静脈注射によって実施するか、少なくとも開始することができる。好ましい投与経路は、腫瘍内投与である。長期の静脈治療は、ウイルスに対する中和抗体の形成の結果として非効率的となることに影響を受けやすいため、初期投与計画の静脈内ウイルス投与の後に様々な投与方法を採用してもよく、またはそのような異なる投与技法、例えば、頭蓋内または腫瘍内ウイルス投与を、パルボウイルス治療の全過程を通じて代わりに用いてもよい。別の具体的な投与技法として、パルボウイルスウイルス、ベクターおよび/または細胞薬剤を、患者に移植された放出源から患者に投与することができる。例として、例えば、シリコーンまたはその他の生体適合性材料のカテーテルを、腫瘍除去の間に、または別個の手順により患者に導入した小型の皮下リザーバRickhamリザーバに接続して、さらなる外科的介入を行わずにパルボウイルス組成物を様々な回数で局所的に注入することができる。パルボウイルスまたは由来ベクターはまた、定位手術法によるかまたはニューロナビゲーションターゲッティング技法により腫瘍に注入することもできる。パルボウイルスの投与は、埋め込まれたカテーテルを通じて低流速で、適したポンプ系、例えば、蠕動式輸液ポンプまたは対流増加送達CEDポンプを用いて、ウイルス粒子またはウイルス粒子を含有する流体の持続注入により実施することもできる。パルボウイルス組成物のさらに別の投与方法は、パルボウイルスを所望の癌組織に分配するよう構築および配置された埋め込み物品からの投与方法である。例えば、パルボウイルス、例えば、パルボウイルスH1を含浸させたウエハを用いることができ、該ウエハは外科的腫瘍切除の終わりに切除腔の端部に取り付けられる。複数のウエハをそのような治療的介入に用いることができる。パルボウイルス、例えば、パルボウイルスH1、またはH1ベクターを活発に産生する細胞を、腫瘍切除後に腫瘍または腫瘍腔に注入することができる。本発明に従う併用療法は、癌、例えば前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎腫瘍、肝腫瘍、リンパ腫、乳腺腫瘍、肝細胞腫または黒色腫、特に脳腫瘍、子宮頸癌、または膵癌の治療に有用であり、前記疾患の予後を著しく改善することができる。パルボウイルスH1感染は、腫瘍細胞の死滅をもたらすが、正常細胞に害を与えるものでなく、そのような感染は、有害な神経学的作用またはその他の副作用なく、腫瘍特異的治療を達成するために、例えば、適したパルボウイルス、例えば、パルボウイルスH1、または関連ウイルスまたはかかるウイルスに基づくベクターの大脳内使用により行うことができる。また、本発明は、癌の治療のためのa医薬組成物類の調製のための、aパルボウイルスおよびbHDACIの使用に関し、この際、好ましくは、aおよびbは、順次にまたは別々に投与される。本発明の1つの好ましい実施形態では、薬剤の併用は、神経膠腫、髄芽細胞腫および髄膜腫などの脳腫瘍、子宮頸癌、または膵癌の治療において利用される。好ましい神経膠腫は、悪性ヒト神経膠芽腫である。本発明のもう一つの好ましい実施形態では、組成物のパルボウイルスには、パルボウイルスH1H-1PVまたは関連パルボウイルス、例えば、LuIII、マウス微小ウイルスMMV、マウスパルボウイルスMPV、ラット微小ウイルスRMV、ラットパルボウイルスRPVまたはラットウイルスRVが含まれる。本発明に従う薬剤の併用により治療可能な患者としては、ヒトならびに非ヒト動物が挙げられる。後者の例としては、それに限定されないが、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、イヌ、およびネコなどの動物が挙げられる。本発明の目的に有用なHDACIsには、腫瘍増殖の阻害に効果的なすべてのHDACIsが含まれる。HDACIの投与は、非経口および腸経路による全身投与を含む、多様な方法上記参照で達成することができる。好ましくは、パルボウイルスおよびHDACIは、別々の化合物として投与する。HDACIおよびパルボウイルスの好ましい投与間隔は、-30日パルボウイルスでの治療の前のHDACIの投与からパルボウイルスでの治療後60日である。2つの薬剤の同時処置も可能である。併用療法に適したHDCAIsの特定の例としては、酪酸ナトリウムNaB、トリコスタチンATSA、スベロイルアニリドヒドロキサム酸SAHAまたはバルプロ酸VPAが挙げられる。下の実施例は、本発明をより詳細に説明する。材料および方法AHDAC阻害剤酪酸ナトリウムNaBおよびトリコスタチンATSAは、SIGMA-Aldrichミュンヘン、ドイツ国より購入し、スベロイルアニリドヒドロキサム酸SAHAおよびバルプロ酸VPAは、AlexisBio-chemicalsEnzoLifeScience,レラハ、ドイツ国より購入した。B乳酸デヒドロゲナーゼアッセイLDHパルボウイルス細胞毒性は、Promegaマンハイム、ドイツ国製のCytoTox96キットを用いて培地中の乳酸デヒドロゲナーゼの放出を評価することにより測定した。感染前日、50μlの培地中の96ウェルプレートに、ウェル当たり2000個の細胞を播種した。24時間後、細胞を、1条件当たり7反復で、50μlのH-1PVを含有する血清フリー培地に感染させるか、またはHDAC阻害剤で処理した。測定当日、7のうちの3つのウェルを、溶解バッファーで30分間インキュベートして、100溶解の条件下での最大LDH放出を見積もった。その後、プレートを遠心し、50μlの上清を基質ミックスsubstratemixと混合した。LDH酵素は、培地中で放出された酵素の量を示す比色反応を触媒する。30分後、反応を停止させ、ElisaリーダーMultiScanを492nmで用いて分析した。Csub-G1細胞集団の測定ウイルス感染細胞または薬物処理細胞を、0.05トリプシン-EDTA溶液で培養皿から収集し、ファルコンチューブに回収した後、PBSで2回洗浄した。次に、細胞を260μlのPBSに再懸濁し、ボルテックス下で滴下した700μlの冷100エタノールで固定し、4°Cで一晩貯蔵した。PBS中で2回洗浄した後、20μg/mlのRNアーゼおよび10μg/mlのヨウ化プロピジウムSigmaを含有するPBS溶液に細胞ペレットを再懸濁した。細胞懸濁液を濾過し、FACSortフローサイトメーターBecton-Dickinsonによって分析した。最小限の20,000イベントを獲得した後、CellQuestソフトウェアBecton-DickinsonSanJose,Californiaで分析した。パルボウイルスH-1PVおよびHDAC阻害剤は、子宮頸癌由来細胞株HeLa、CaSki、SiHaおよび原発腫瘍細胞を死滅させる際に相乗的に作用する。致死未満量のHDACIs、すなわち酪酸ナトリウムNaB、トリコスタチンATSAおよびスベロイルアニリドヒドロキサム酸SAHAは、子宮頸癌由来HeLaHPV-18陽性、CaSkiおよびSiHaHPV-16陽性および原発子宮頸癌細胞においてPV細胞毒性を相乗的に増加させることが見出された。図1は、試験した3種類のHDACIsと組み合わせた様々なH-1PV感染多重度MOI=pfu/細胞を用いる、HeLaおよびSiHa細胞でのLDHアッセイから得た結果を示す。同様の結果は、CaSki細胞データは示さずおよび原発子宮頸癌細胞CxCa図2においても得られ、約80の細胞死をもたらす最大94の相乗作用が、SAHA200nMとH-1PVMOI=100pfu/細胞を組み合わせることによって実現された。上述の癌細胞を死滅させる際の相乗作用は、パルボウイルスを別のHDACI、すなわちVPAと併用しても観察されたデータは示さず。癌細胞を死滅させる際のH-1PVとHDACIsとの間の相乗作用を、HeLaおよびCxCaにおいてフローサイトメトリーにより確認し、2N未満のDNA量を含有する細胞の画分sub-G1細胞集団を、アポトーシスを受けている細胞の共通する特徴である、DNA断片化のマーカーとして分析した。図3は、HeLa細胞で得られた結果を示す。H-1PV感染は、アポトーシスsub-G1細胞集団の増加に関連し、それはNaBの添加によりさらに増強される18から32。図4は、原発子宮頸癌細胞で得られた結果を示す。H-1PVおよびHDAC阻害剤は、アポトーシスの増加26から37により実証されるように、CxCa細胞を死滅させる際に相乗的に作用する。H-1PV/HDACIsの併用が子宮頸癌由来細胞を死滅させる際に最大の相乗作用をもたらす条件を、表1に要約する。パルボウイルスH-1PVおよびHDAC阻害剤は、インビトロaおよびインビボbで子宮頸癌由来細胞株および原発腫瘍細胞を死滅させる際に相乗的に作用する。aインビトロ相乗作用。致死未満量のHDACIs、すなわちバルプロ酸VPA、酪酸ナトリウムNaB、トリコスタチンATSAおよびスベロイルアニリドヒドロキサム酸SAHAは、子宮頸癌細胞株HeLaHPV-18陽性、CaSkiおよびSiHaHPV-16により形質転換および低継代子宮頸癌細胞培養においてH-1PV細胞毒性を相乗的に増強することが見出された。図5は、1mMVPAと併用した、様々な感染多重度MOI、細胞あたりのプラーク形成単位[pfu]で表すのH-1PVを用いる、LDHアッセイ細胞溶解の指標として、培地中の乳酸デヒドロゲナーゼの放出を測定から得た結果を示す。単独で適用した場合、VPAは、使用した濃度での細胞増殖にあまり効果がなかったが、パルボウイルスは、MOI依存的な様式ですべての子宮頸癌細胞培養を死滅させた。致死未満量のVPAは、パルボウイルス誘導性の細胞殺傷を相乗的に後押しし、50~100まで増加させた。これらの結果の確認は、アポトーシスsub-G1細胞集団のフローサイトメトリーによる測定データは示さずにより得た。同様の結果は、H-1PVをNaB、TSAまたはSaHaと組み合わせることによっても得られた表2。bインビボ相乗作用H-1PV/HDACIs相乗作用をインビボで検証するために、HeLa異種移植ヌードラットモデルを使用した。H-1PV単独は、高いウイルス用量を投与した場合に2.5×109pfu/動物、1週間間隔で4回の腫瘍内投与に分割、確立された腫瘍の完全な退縮を実現することができたデータは示さず。それよりも低いウイルス用量の1.25×109pfu/動物、上記と同様に分割では、腫瘍増殖は鈍化し、退縮は起こらなかった、これは、治療効果を得るためには、臨界用量のウイルスが必要であることを示す。100mg/kgの濃度で、VPAは、腫瘍増殖を損なうことができず、これはmock処理対照に匹敵したラットは腫瘍が最大許容サイズの5cm3に達した時に犠牲にした。対照的に、動物にそれよりも低い量のウイルスを注入しVPAと併用処置したco-treated場合には、腫瘍増殖は著しく低下し、最終的に1~3.2cm3のサイズで停止した。最も顕著なことに、すべての併用処置した動物において、この安定化の後に急速な退縮が続き、結果として既存の腫瘍の完全な消失がもたらされた図6。処置動物のいずれにおいても、体重減少またはその他の有害な副作用は記録されなかった。これらの結果は、子宮頸癌の治療のためにH-1PVとHDACIsを併用するという考えをさらに強化する。パルボウイルスH-1PVおよびHDAC阻害剤は、膵管腺癌PDAC由来細胞株APC-1およびCapan-1を死滅させる際に相乗的に作用する。インビトロ相乗作用。致死未満量のHDACIs、すなわちバルプロ酸VPAは、膵管腺癌PDAC由来AP-1およびCapan-1細胞株においてPV細胞毒性を相乗的に増加させることが見出された。図7は、PV細胞毒性に対して非常に抵抗性であることが記載されているDempeetal.,2010AP-1およびCapan-1細胞株での、LDHアッセイから得た結果を示す。細胞を96ウェルプレートに播種し、次に様々な濃度のH-1PVをHDACIバルプロ酸VPAの存在下または不在下で感染させた。72時間後、LDHアッセイによって細胞溶解を測定した。図7に示されるように、実験に使用した濃度での、VPAによる単独処置は、両方の細胞株の増殖に効果がなかった。以前の結果に一致して、H-1PVは、高い多重度で感染した後でさえ、これらの培養に対して限られた細胞毒性しか示さなかった。H-1PVの細胞障害活性は、VPAにより著しく増強された。これらの結果により、様々な腫瘍実体の治療のためにHDACIsとH-1PVを併用することがさらに支持される。"