"ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物を少なくとも含有する粘膜アジュバント組成物。前記組成物が赤血球凝集素を有効成分として含有する請求項1記載の粘膜アジュバント組成物。経粘膜感染症に対するワクチンと、請求項1記載の粘膜アジュバント組成物とを少なくとも含有する経粘膜感染症予防用の粘膜ワクチン製剤。前記経粘膜感染症が犬パラインフルエンザウイルス、犬アデノウイルス、犬コロナウイルス、犬パルボウイルス、犬ジステンパーウイルス、犬ヘルペスウイルス、レオウイルス、ニューモウイルスのいずれか又は複数の感染を少なくとも含むものである請求項3記載の経粘膜感染症予防用の粘膜ワクチン製剤。前記経粘膜感染症が犬伝染性気管気管支炎である請求項3記載の経粘膜感染症予防用の粘膜ワクチン製剤。経粘膜感染症に対する単独又は混合のワクチンと、ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物を少なくとも含有する粘膜アジュバント組成物とを投与する非ヒト動物経粘膜感染症予防方法。ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物の、粘膜アジュバント組成物製造のための使用。ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物を調製する手順を少なくとも含む粘膜アジュバント組成物製造方法。受託番号FERMBP-11415のボルデテラブロンキセプティカKR001-A01株。本発明は、経粘膜感染症などに対するワクチンの新規粘膜アジュバントを提供することなどを目的とする。本発明者らは、ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物が、経粘膜感染症などに対するワクチンによる、粘膜面における免疫反応を有効に増強することを新規に見出した。そこで、本発明では、ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物を少なくとも含有する粘膜アジュバント組成物を提供する。この粘膜アジュバント組成物を非ヒト動物などの粘膜面に投与することにより、粘膜面における免疫を増強できる。従って、例えば、経粘膜感染症に対するワクチンとこの粘膜アジュバント組成物とを非ヒト動物に投与することにより、経粘膜感染症に対する予防効果を増大できる。上述の通り、粘膜ワクチンの場合、IgG抗体による応答のみでなく、分泌型IgA抗体などによる免疫応答も誘導するため、経粘膜感染症に対し、通常の注射ワクチンよりも有効な免疫効果が得られる場合がある一方、抗原を単独で粘膜に投与しても充分な免疫を誘導できないことが多いという課題があった。それに対し、本発明では、単独で粘膜へ投与した場合には疾患予防効果が低かったワクチンにこの粘膜アジュバント組成物を混合することにより、それらの疾患を有効に予防できた。従って、本発明は、それらのワクチンを粘膜ワクチンとして利用できるようにするという点で有利性がある。また、これにより、例えば、不活化ワクチンなどでも有効に粘膜免疫を行うことができるようになるので、弱毒生ワクチンを投与する場合よりも、毒性復帰などの危険性を回避でき、安全性をより高くできる。その他、本発明に係る免疫増強効果により、ワクチン自体の投与量を少なくでき、製造コスト販売コストなどを低く抑えることができる。本発明により、粘膜面における免疫を増強できる。従って、例えば、経粘膜感染症などに対するワクチンの粘膜アジュバントとして有効である。<本発明に係る粘膜アジュバント組成物及びその製造方法について>本発明は、ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量30~500kDaの組成物であり、粘膜アジュバント活性を有するものを少なくとも含有する粘膜アジュバント組成物を全て包含する。本発明に係る粘膜アジュバント組成物の製造方法は特に限定されない。この粘膜アジュバント組成物は、例えば、ボルデテラブロンキセプティカを培養し、その培養上清から限外ろ過などにより30~500kDaの組成物を精製することにより取得できる。ボルデテラブロンキセプティカの菌株については、特に限定されないが、例えば、KR001-A01株寄託機関:独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター、所在地:日本国茨城県つくば市東1-1-1つくばセンター中央第6、受託番号FERMBP-11415、受託日:2010年7月9日、日本において採取された菌株を好適に用いることができる。ボルデテラブロンキセプティカの培養方法については、液体培地を用いた公知の培養手段を採用できる。例えば、ボルデテラブロンキセプティカの公知の増殖用培養液を用いて、30~40°C好適には37°Cで1~7日間培養した後、その培養液を遠心分離ろ過などし、培養上清を取得する。その培養上清を、例えば、分画分子量30~500kDaの限外ろ過フィルターで精製し、粘膜アジュバント組成物の原液を得る。この原液のタンパク質濃度は0.05~5.0mg/mLが好適である。また、HA価は16~2,048倍が好適である。この原液を適宜希釈調製し、アジュバントとして用いる。この粘膜アジュバント組成物の希釈倍率は特に限定されないが、例えば、一回一頭当たりの投与量をタンパク質重量で1~500μg好適には12~160μg、HA単位で1~400単位好適には8~120単位になるように希釈する。本発明に係る粘膜アジュバント組成物は、分子量30~500kDaの複数成分の混合物であるが、その中にHAHaemagglutinin;ヘマグルチニン又は赤血球凝集素、約180kDa、以下同じを含み、これがアジュバント効果の有効成分の一つであると推測する。従って、この粘膜アジュバント組成物は、HAを主な有効成分として含有することが好ましい。即ち、分子量100~300kDaであることが好適であり、分子量150~220kDaであることがより好適である。HAのみを精製する場合は、公知の精製手段により行う。その他、目的用途などに応じて、この粘膜アジュバント組成物に、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜添加してもよい。緩衝剤の好適な例として、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液などを用いることができる。等張化剤の好適な例として、例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、D-マンニトールなどを用いることができる。無痛化剤の好適な例として、例えば、ベンジルアルコールなどを用いることができる。防腐剤の好適な例として、例えば、チメロサール、パラオキシ安息香酸エステル類、フェノキシエタノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などを用いることができる。抗酸化剤の好適な例として、例えば、亜硫酸塩、アスコルビン酸などを用いることができる。その他、この薬剤には、補助成分、例えば、保存効能の助剤となる光吸収色素リボフラビン、アデニン、アデノシンなど、安定化のためのキレート剤還元剤ビタミンC、クエン酸など、炭水化物ソルビトール、ラクトース、マンニトール、澱粉、シュークロース、グルコース、デキストランなど、カゼイン消化物、各種ビタミンなどを含有させてもよい。また、目的用途などに応じて、この粘膜アジュバント組成物に他の既知のアジュバントを適宜添加してもよい。添加アジュバントとしては、例えば、水酸化アルミニウムミョウバン、水酸化ナトリウムなどの沈降性アジュバント、流動パラフィンなどの油性アジュバント、コレラ毒素、大腸菌易熱性毒素などの殺菌微生物などが挙げられる。なお、本発明は、上述の組成物の粘膜アジュバント組成物製造のための使用、及び、該組成物を調製する手順を少なくとも含む粘膜アジュバント組成物製造方法についても、全て包含する。<本発明に係る経粘膜感染症予防用ワクチン製剤などについて>本発明に係る経粘膜感染症予防用ワクチン製剤は、経粘膜感染症に対するワクチンと、上述の粘膜アジュバント組成物とを少なくとも含有するものをすべて包含する。ワクチンは、経粘膜感染症に対するワクチンであればよく、特に限定されない。例えば、生ワクチン、不活化ワクチン、トキソイドなどと上述の粘膜アジュバント組成物を併用できる。安全性の観点、及び、本発明により免疫効果を増進できる点などから不活化ワクチンが好適である。また、ワクチンは、単独の疾患に対するものでもよく、複数の疾患に対する混合ワクチンであってもよい。本発明に係るアジュバント組成物が特に粘膜面において免疫効果を増進することなどから、ワクチンとしては、経粘膜投与の可能なワクチン粘膜ワクチンが好適であり、上述の安全性の観点などを加味すると、不活化粘膜ワクチンが最も好適である。但し、本発明に係る粘膜アジュバント組成物を用いることにより免疫効果を増進できるので、例えば、従来、経粘膜投与では免疫効果が不充分であったワクチンであっても、この粘膜アジュバント組成物と併用することにより、充分な免疫効果が得られる可能性がある。従って、本発明における粘膜ワクチンには、粘膜面へ投与可能なワクチンがすべて包含され、粘膜アジュバント組成物との併用により初めて粘膜ワクチンとして有効になるワクチンも広く包含される以下同じ。その他、ワクチンとこの粘膜アジュバント組成物を併用することにより、免疫持続期間を延長でき、また、ワクチンの投与量投与回数を減らすことができるため、結果としてワクチンの製造量を減量できる。このワクチン製剤の剤型などについては、公知のものを採用でき、特に限定されない。例えば、ワクチンと粘膜アジュバント組成物を含有する液体製剤として用いてもよいし、凍結乾燥などにより両者をペレット状にし、使用時に精製水などで溶解する形態を採用してもよい。その他、目的用途などに応じて、上記と同様、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜添加してもよい。<本発明に係る経粘膜感染症予防方法について>例えば、経粘膜感染症に対する単独又は混合のワクチンと、上述の粘膜アジュバント組成物とを同時に又は個別に投与することにより、非ヒト動物経粘膜感染症を有効に予防できる。ワクチン及び粘膜アジュバント組成物は、上記と同様のものを用いることができる。また、ワクチン及び粘膜アジュバント組成物の投与タイミング投与方法などは、動物の種類、年齢、体重などに応じて、適宜設定でき、特に限定されない。例えば、経粘膜感染症に対するワクチンと上述の粘膜アジュバント組成物とを少なくとも含有する経粘膜感染症予防用ワクチン製剤を、単数回又は1~60日間隔を開けて複数回、動物の粘膜面に投与し、免疫してもよい。また、ワクチン投与の1~30日前に粘膜アジュバント組成物を動物の粘膜面に単数回又は複数回投与して粘膜面における免疫を増強してから、ワクチンを単数回又は複数回投与して免疫してもよい。ワクチンと粘膜アジュバント組成物を個別に投与する場合、ワクチンの投与方法は、目的種類などにあわせ、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、経粘膜投与などから適宜選択でき、経粘膜投与の場合のみにせまく限定されない。但し、本発明に係る粘膜アジュバント組成物が、特に粘膜面において免疫効果を増進するため、経粘膜投与の可能なワクチン粘膜ワクチンを投与することが最も好適であると考える。粘膜面への投与は、公知の方法を採用できる。例えば、鼻粘膜へ投与する場合は、スポイトや注射筒などを用いて鼻腔の粘膜面に直接投与してもよいし、また、鼻腔の粘膜面に噴霧して投与してもよい。その他の粘膜面についても同様である。ワクチンの投与量は、種類などに応じて、また、粘膜アジュバント組成物を併用することを考慮して投与量を適宜設定する。例えば、一般的なワクチンの投与量として、106~109TCID50/mLのウイルスを含むワクチンを0.05~3.0mL投与してもよい。一方、粘膜アジュバント組成物の投与量は、例えば、一回一頭当たりの投与量をタンパク質重量で1~500μg好適には12~160μg、HA単位で1~400単位好適には8~120単位に設定することができる。粘膜面への投与量は、例えば犬に鼻腔投与する場合、0.05~3.0mL好適には0.2~1.0mLが適量である。他の動物の場合も、動物の大きさなどを考慮して適宜設定できる。本発明の適用動物は、ヒト以外であればよく、特に限定されない。例えば、犬、猫、ミンク、ラット、モルモット、ウサギ、フェレット、マウスなどの感染症予防に適用でき、犬及び猫が好適である。適用疾患については、粘膜を介して侵入する感染症であればよく、特に限定されない。粘膜を介した病原微生物の侵入経路としては、例えば、経鼻経気道、経口、経泌尿生殖器などがある。なお、本発明に係る粘膜アジュバント組成物は、経鼻経気道から侵入する病原微生物に対するワクチンと併用するのが、最も好適である。犬の経粘膜感染症として、例えば、犬伝染性気管気管支炎ケンネルコフ;KennelCough、犬ジステンパー、犬パルボウイルス感染症、犬コロナウイルス感染症、犬ヘルペスウイルス感染症などがある。犬伝染性気管気管支炎は、犬アデノウイルス2型、犬パラインフルエンザウイルス、ボルデテラブロンキセプティカなどが主な病原であり、犬アデノウイルス1型、犬ヘルペスウイルス、レオウイルス、ニューモウイルスなども病原となりうる。本発明では、犬パラインフルエンザウイルス、犬アデノウイルス、犬コロナウイルス、犬パルボウイルス、犬ジステンパーウイルス、犬ヘルペスウイルス、レオウイルス、ニューモウイルスのいずれか又は複数の感染を少なくとも含む犬の経粘膜感染症への適用が最も好適である。猫の経粘膜感染症として、例えば、猫伝染性気管気管支炎、猫汎白血球減少症、猫伝染性腹膜炎猫腸コロナウイルス感染症、猫白血病、猫免疫不全ウイルス感染症などがある。猫伝染性気管気管支炎は、猫カリシウイルス、猫ヘルペスウイルスが主な病原であり、クラミドフィラフェリス、ボルデテラブロンキセプティカなども病原となりうる。ミンクの経粘膜感染症として、例えば、ミンクアリューシャン病、ミンクウイルス性腸炎などがある。ラットの経粘膜感染症として、例えば、センダイウイルス病、唾液腺涙腺炎、パルボウイルス病、肺炎球菌病、パスツレラ症などが、モルモットの経粘膜感染症として、例えば、パスツレラ症、レンサ球菌病などが、ウサギの経粘膜感染症として、例えば、センダイウイルス病、パスツレラ症などが、それぞれある。その他、フェレット、マウスなどにも各種経粘膜感染症が存在する。実施例1では、本発明に係る粘膜アジュバント組成物の調製を行った。ボルデテラブロンキセプティカKR001-A01株受託番号FERMP-21984、以下同じを37°Cで3日間培養した。増殖用培地には、ボルデテラブロンキセプティカ用の公知の増殖用液体培地を用いた。培養液を遠心分離16,000×g、30分、4°Cして培養上清を取得し、その培養上清を分画分子量30~500kDaの限外ろ過フィルターで精製し、粘膜アジュバント組成物の原液を得た。この原液のタンパク質濃度は1.2mg/mL、HA価は256倍であった。この原液について、4~20SDS-PAGEポリアクリルアミドゲル電気泳動、以下同じを行った。結果を図1に示す。図1は、粘膜アジュバント組成物のSDS-PAGEの結果を表わす写真である。図1中、レーン1及びレーン4は分子量マーカーを、レーン2は培養上清を電気泳動した場合の結果を、レーン3は得られた粘膜アジュバント組成物の原液を電気泳動した場合の結果である。図1中、各数字は分子量単位:kDaを表す。図1に示す通り、粘膜アジュバント組成物の原液を電気泳動した場合レーン3、180kDa付近にバンドが観察された図中、矢印参照。このバンドは、HAのバンドであると推測される。実施例2では、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンと本発明に係るアジュバントを犬の鼻粘膜に投与し、その疾患に対する予防効果を調べた。供試ワクチンとして、犬パラインフルエンザウイルス由来の不活化抗原不活化前力価:107.5、TCID50を用いた。アジュバントとして、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物を用いた。犬パラインフルエンザウイルス抗体陰性のビーグル犬n=3の鼻腔内に、ワクチンとアジュバントを混合したものを0.6mL投与し、その2週間後に同様に追加投与した。次に、その1週間後に、各個体の鼻腔に、犬パラインフルエンザウイルス攻撃株のウイルス液108.6、TCID50/mLを0.6mL投与し、犬パラインフルエンザウイルスを感染させた。犬パラインフルエンザウイルス攻撃株投与の3、5、6、7日後に、各個体からそれぞれ鼻腔スワブを採取した。鼻腔スワブ液をMDCK細胞に接種培養した後、モルモット血球に対する赤血球凝集反応でウイルス感染を判定し、ウイルス力価を測定した。結果を図2に示す。図2は、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンと実施例1で調製したアジュバントを投与した場合における犬パラインフルエンザウイルスの感染抑制効果を示すグラフである。図2のグラフ中、縦軸はウイルス力価単位:Log10TCID50を、横軸は犬パラインフルエンザウイルスによる攻撃感染後の日数を、それぞれ表わす。グラフ中の3種類のバーは、左からそれぞれ、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンと実施例1で調製したアジュバントを投与した群CPIVBb、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンのみを同量投与した群CPIV、n=3、無投与群Control、n=3におけるウイルス力価を表わす。図2に示す通り、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンと実施例1で調製したアジュバントを投与した場合、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンのみを投与した場合と比較して、犬パラインフルエンザウイルスによる攻撃の5日後でウイルス力価が減少し、6日後ではウイルス力価がほぼ0になった。一方、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンのみを投与した場合、投与しなかった場合対照群と比較して、ほとんど差はみられず、犬パラインフルエンザに対する免疫効果はほとんど観察されなかった。この結果は、犬パラインフルエンザウイルス不活化ワクチンに本発明に係るアジュバントを混合して粘膜投与することにより、顕著な免疫効果が発揮されること、即ち、本発明に係る粘膜アジュバント組成物が、特に、粘膜アジュバントとして、顕著な免疫増強作用を有することを示す。なお、実施例1及び本実施例の結果を勘案すると、粘膜アジュバント組成物にはHAが多く含有しており、これがアジュバント効果の主要な有効成分の一つであると推測する。従って、この粘膜アジュバント組成物は、HAを主な有効成分として含有することが好ましい。即ち、この粘膜アジュバント組成物は、分子量100~300kDaであることが好適であり、分子量150~220kDaであることがより好適である以下同じ。実施例3では、犬アデノウイルス不活化ワクチンと本発明に係るアジュバントを犬の鼻粘膜に投与し、その疾患に対する予防効果を調べた。供試ワクチンとして、犬アデノウイルス2型由来の不活化抗原不活化前力価:108.4、TCID50を用いた。アジュバントとして、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物を用いた。犬アデノウイルス抗体陰性のビーグル犬n=3の鼻腔内に、ワクチンとアジュバントを混合したものを0.6mL投与し、その2週間後に同様に追加投与した。次に、その1週間後に、各個体の鼻腔に、犬アデノウイルス2型攻撃株のウイルス液108.5、TCID50/mLを0.25mL投与し、犬アデノウイルス2型を感染させた。犬アデノウイルス2型攻撃株投与の3、4、5、6日後に、各個体からそれぞれ鼻腔スワブを採取した。鼻腔スワブ液をMDCK細胞に接種し、培養した後、細胞変性効果CPE:Cytopathiceffectでウイルス感染を判定し、ウイルス力価を測定した。結果を図3に示す。図3は、犬アデノウイルス2型不活化ワクチンと実施例1で調製したアジュバントを投与した場合における犬アデノウイルス2型感染症の感染抑制効果を示すグラフである。図3中、縦軸はウイルス力価単位:Log10TCID50を、横軸は犬アデノウイルスによる攻撃感染後の日数を、それぞれ表わす。グラフ中の3種類のバーは、左からそれぞれ、犬アデノウイルス不活化ワクチンと本発明に係るアジュバントを投与した群CAVBb、犬アデノウイルス不活化ワクチンのみを同量投与した群CAV、n=3、無投与群Control、n=3のウイルス力価を表わす。図3に示す通り、犬アデノウイルス2型不活化ワクチンと実施例1で調製したアジュバントを投与した場合、犬アデノウイルス2型不活化ワクチンのみを投与した場合と比較して、犬アデノウイルス2型による攻撃の4日後からウイルス力価が顕著に減少した。一方、犬アデノウイルス2型不活化ワクチンのみを投与した場合、投与しなかった場合無処置群と比較して、6日後以外ではあまり差はみられなかった。この結果は、犬アデノウイルス2型不活化ワクチンに本発明に係るアジュバントを混合して粘膜投与することにより、顕著な免疫効果が発揮されること、即ち、実施例2と同様、本発明に係る粘膜アジュバント組成物が、特に、粘膜アジュバントとして、顕著な免疫増強作用を有することを示す。以上のように、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物は、動物などの呼吸器疾患に対する粘膜ワクチン予防接種を行う際に、アジュバントとして用いることにより、顕著な免疫増強効果を奏する。また、この粘膜アジュバント組成物は、複数の呼吸器疾患に対するワクチンに対しアジュバント効果を奏するので、犬伝染性気管気管支炎など、混合呼吸器感染症に対するワクチン製剤にも有効である。実施例4では、ボルデテラブロンキセプティカのワクチンとしての効果を調べた。供試ワクチンとして、実施例1で調製したアジュバント組成物の原液をPBSリン酸緩衝液、以下同じで希釈したものを用いた。供試ワクチンの濃度を、0.5mL中16HA単位になるように調製した。供試犬として、ボルデテラ赤血球凝集阻止抗体陰性の4週齢のビーグル犬を、4頭用いた。供試犬は、アイソレーター内で、餌に市販のドライフードを与え、自由給水で飼育した。供試犬n=2の鼻腔内にワクチンを0.5mL投与し、その2週間後に同様に追加投与した。次に、その1週間後に、各個体の鼻腔に、攻撃菌として、ボルデテラブロンキセプティカKR001-A01株の菌液を1mL投与し、ボルデテラブロンキセプティカを感染させた。同菌の生菌数は、ボルデジャング培地を用いて測定した場合、1×109CFU/mLであった。なお、対照群n=2では、ワクチン投与の際に、代わりにPBS0.5mLを経鼻投与した。ボルデテラブロンキセプティカによる攻撃後、21日間、各犬の一般臨床観察を行い、その臨床症状をスコア化した。臨床スコアは、観察期間中、毎日、下記の基準で症状を点数化し、それらを加算して算出した。1体温直腸温が40.0°C以上の場合3点、39.6~39.9°Cの場合2点、39.2~39.5°Cの場合1点、2元気消失が観察された場合1点、3重度の食欲減退が観察された場合2点、軽度の食欲減退が観察された場合1点、4下痢が観察された場合1点、5嘔吐が観察された場合1点、6脱水症状が観察された場合1点、7眼部に流涙又は眼脂が観察された場合1点、8重度の膿性鼻汁が観察された場合3点、軽度の膿性鼻汁が観察された場合2点、水様性鼻汁が観察された場合1点、9重度の頻発性発咳が観察された場合3点、軽度の頻発性発咳が観察された場合2点、発咳が時々観察された場合1点、10くしゃみが頻発する場合2点、くしゃみが時々観察された場合1点、11呼吸音異常が観察された場合1点、12死亡した場合100点。その結果、対照群では、ボルデテラブロンキセプティカによる攻撃後、観察期間中、ほぼ毎日発咳鼻汁排出眼脂などの異常所見が認められたのに対し、ワクチン投与群では、一過性の下痢及び体温の軽微な上昇が認められたのみで、他の臨床的な異常は観察されなかった。また、ワクチン投与群では、犬伝染性気管気管支炎に特徴的な上部呼吸器疾患症状はほぼ観察されなかった。総臨床スコアは、対照群ではそれぞれ41点及び51点群平均値は46点であったのに対し、ワクチン投与群では4点及び3点群平均値は3.5点であった。以上の通り、実施例1で調製したアジュバント組成物をワクチンとして2回経鼻投与した場合、16HA単位と少量の投与にもかかわらず、ボルデテラブロンキセプティカによる上部呼吸器疾患症状の発症を防御できた。この結果は、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物が、経粘膜感染症に対するワクチンの粘膜アジュバントとして有効であることに加え、ボルデテラブロンキセプティカ感染症に対する粘膜ワクチンとしても有効であることを示す。例えば、犬猫などでは、上述の通り、種々のウイルスなどに加え、ボルデテラブロンキセプティカ自体も経粘膜感染症の病原となる。特に、犬伝染性気管気管支炎は、上述の通り、犬アデノウイルス2型、犬パラインフルエンザウイルスに加え、ボルデテラブロンキセプティカ自体が主な病原の一つである。それに対し、本結果は、例えば、ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物と、犬アデノウイルス2型、犬パラインフルエンザウイルスなどの経粘膜感染症のワクチンとを混合することより、それらの経粘膜感染症に対する予防効果を増大できることに加え、ボルデテラブロンキセプティカ感染症自体も予防できることを示唆する。実施例5では、実施例1で調製した組成物の粘膜アジュバント活性を、モルモットへの経鼻免疫試験で確認した。供試抗原として、OVAOvalbumin;卵白アルブミン、以下同じをPBSで5mg/mLに溶解したものを用いた。アジュバントとして、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物を用いた。供試動物として、ボルデテラ赤血球凝集阻止抗体陰性のHartley系モルモット体重約300gを用いた。供試モルモットは、自由給餌及び自由給水で群飼した。OVA終濃度1mg/mLとアジュバント終濃度HA価64倍を混合し、供試モルモットn=3の鼻腔内にその混合液を1匹当たり200μLずつ投与し、その14日後に、同じ混合液を追加投与した。なお、対照群n=3では、OVA及びアジュバントの代わりにPBSを同量投与した。また、アジュバント未添加群n=3では、アジュバントの代わりにPBSを同量混合したものを投与した。初回投与時に供試モルモットから血液及び直腸スワブを採取した。また、初回投与の28日後試験終了時に供試モルモットから血液、唾液、直腸スワブ、糞便を採取した。唾液採取の際には、前処置として、ピロカルピン塩酸塩4mg/mL含有溶液を1匹当たり4mL腹腔内注射した。採取した血液については、血清分離後非働化処理を施したものを試料として用いた。採取した直腸スワブについては、採取後直ちに保存液1mLに浸漬し、よく懸濁したものを試料として用いた。採取した唾液については、保存液を等量混合したものを試料として用いた。採取した糞便については、保存液で20懸濁液を調製した後、遠心分離により上清を回収したものを試料として用いた。なお、保存液には、10スキムミルク加PBSとプロテアーゼインヒビターカクテルRoche製を等量混合したものを用いた。調製した各試料について、ELISA法Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssayにより、抗OVA抗体価を測定した。96穴マイクロプレートに固相化抗原溶液を100μLずつ分注し、4°Cで一晩静置した。固相化抗原溶液には、OVAをPBSで10mg/mLに溶解した後、0.05mol/L炭酸緩衝液pH9.6で規定濃度に希釈したものを用いた。血清を試料とした場合、固相化抗原量を96穴マイクロプレート1穴当たり0.3μgとし、直腸スワブ、唾液、糞便を試料とした場合、同1μgとした。PBS-T0.1Tween20添加PBS、以下同じで3回洗浄した後、ブロックエース原液を100μLずつ分注し、37°Cで60分間静置し、ブロッキングした。ブロックエース原液には、ブロックエースDSファーマバイオメディカル株式会社製4gを精製水100mLで溶解したものを用いた。PBS-Tで3回洗浄した後、調製した試料を一次抗体として100μLずつ2穴に分注し、30分間反応させた。PBS-Tで3回洗浄した後、二次抗体液を100μLずつ分注し、30分間反応させた。二次抗体には、ペルオキシダーゼ標識抗モルモットIgG羊抗体AbDSerotec社製又はペルオキシダーゼ標識抗モルモットIgA羊血清イムノロジーコンサルタンツラボラトリー社製を用いた。血清を試料とした場合、この二次抗体をPBS-Tで30,000倍に希釈して用い、直腸スワブ又は唾液を試料とした場合、同じく3,000倍に希釈して用い、糞便を試料とした場合、同じく10,000倍に希釈して用いた。PBS-Tで3回洗浄した後、基質溶液を100μLずつ分注し、室温又は25°Cで15~20分間反応させ、2M硫酸を50μL加えて反応を停止させ、波長450nmの吸光度を測定した。基質溶液には、0.1M酢酸ナトリウムpH5.511mL、テトラメチルベンチジン6mg/mLDMSO110μL、3過酸化水素水11μLの組成で調製した溶液を用いた。各測定値から試料無添加ブランクの測定値を減じて補正した後、試料ごとに相加平均を算出し、これを抗体価とした。結果を表1及び表2に示す。表1は抗OVA-IgG抗体価の群平均値を示し、表2は抗OVA-IgA抗体価の群平均値を示す。両表中、血清、唾液、直腸スワブ、糞便は、採取した試料の種類を、初回投与時は抗原とアジュバントの混合物又はその比較対照溶液の初回投与の直前に採取した試料を用いた場合における結果を、試験終了時は初回投与の28日後に採取した試料を用いた場合における結果を、それぞれ表す。両表中、対照群はOVA及びアジュバントを投与しなかった場合における結果を、アジュバント未添加群はOVAのみ投与し、アジュバントを投与しなかった場合における結果を、アジュバント添加群はOVA及びアジュバントを投与した場合における結果を、それぞれ表す。表1に示す通り、抗OVA-IgG抗体価の群平均値について、対照群及びアジュバント未添加群では、試験終了時においても抗体価の上昇はほとんど認められなかった。それに対し、アジュバント添加群では試験終了時における値が1.521であり、初回投与時の0.002の値と比較して明らかな抗体価の上昇が確認された。また、表2に示す通り、抗OVA-IgA抗体価の群平均値についても、対照群及びアジュバント未添加群では、ほとんど抗体価の上昇が認められなかったのに対し、アジュバント添加群では、唾液中の抗OVA-IgA抗体価が0.678、試験終了時における直腸スワブ中の同抗体価が0.595、糞便中における同抗体価が1.228と、いずれの試料においても明らかな抗体価の上昇が確認された。これらの結果は、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物が、経粘膜投与した抗原に対する免疫応答を増強し、抗体誘導能を高めること、即ち、その組成物が粘膜アジュバント活性を有することを示す。表1では、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物を経鼻投与することにより、血中における抗OVA-IgG抗体価が上昇した。この結果は、この組成物が、全身的な免疫応答の誘導を惹起できることを示す。表2では、実施例1で調製した粘膜アジュバント組成物を経鼻投与することにより、唾液、直腸スワブ、糞便の抗OVA-IgA抗体価が上昇した。この結果は、この組成物が、口腔直腸など、投与部位以外の粘膜部位における分泌型IgA抗体の誘導を惹起できることを示す。以上の通り、本実施例の結果は、ボルデテラブロンキセプティカの菌体又はその培養液から得られた分子量100~300kDaの組成物が、粘膜免疫の活性化作用を有し、かつ異所粘膜及び全身における免疫増強作用をも有することを示す。"