"以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物;b古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;c非古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびd細胞接着を乱す化合物のうちの少なくとも3つの各々から選択される1つ以上の化合物を含む組成物。前記組成物が、以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物;b古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびc非古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物のうちの各々から選択される1つ以上の化合物を含む、請求項1に記載の組成物。前記組成物が、以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物;b古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;c非古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびd細胞接着を乱す化合物のうちの各々から選択される1つ以上の化合物を含む、請求項1に記載の組成物。前記組成物が、aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物、ならびに以下の群:b古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;c非古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびd細胞接着を乱す化合物のうちの少なくとも2つの各々から選択される1つ以上の化合物を含む、請求項1に記載の組成物。前記bの化合物が、内因性Wntインヒビターを阻害することによって、古典的Wnt経路のシグナル伝達を脱抑制する、請求項1に記載の組成物。前記bの化合物が、DKKまたはSFRPファミリーメンバーを阻害することによって、古典的Wnt経路のシグナル伝達を脱抑制する、請求項1に記載の組成物。前記組成物が、DKKファミリーメンバーを阻害する第1の化合物およびSFRPファミリーメンバーを阻害する第2の化合物を含む、請求項1に記載の組成物。前記組成物が、DKK1を阻害する第1の化合物およびSFRP1を阻害する第2の化合物を含む、請求項1に記載の組成物。前記aの化合物が、TGFベータタンパク質を含む、請求項1に記載の組成物。前記cの化合物が、Wnt/Ca2経路を刺激する、請求項1に記載の組成物。前記cの化合物が、Wnt5aまたはWnt16タンパク質を含む、請求項1に記載の組成物。前記dの化合物が、アドヘレンスジャンクションまたはタイトジャンクションの形成または維持を乱す、請求項1に記載の組成物。前記dの化合物が、E-カドヘリンを阻害する、請求項1に記載の組成物。TGF-ベータ1、Wnt5a、DKKインヒビター、SFRPインヒビターおよびE-カドヘリンインヒビターを含む、請求項1に記載の組成物。TGF-ベータ1、Wnt5a、DKK1インヒビター、SFRP1インヒビターおよびE-カドヘリンインヒビターを含む、請求項1に記載の組成物。前記化合物が、細胞を遺伝的に改変しない、請求項1に記載の組成物。前記化合物が、抗体または小分子を含む、請求項1に記載の組成物。BMP経路のシグナル伝達を阻害する化合物をさらに含む、請求項1に記載の組成物。前記化合物が、EMTを起こすように上皮細胞を誘導するのに有効な濃度で存在する、請求項1に記載の組成物。細胞培養培地をさらに含む、請求項1に記載の組成物。哺乳動物細胞をさらに含む、請求項1に記載の組成物。上皮細胞をさらに含む、請求項1に記載の組成物。乳腺上皮細胞をさらに含む、請求項1に記載の組成物。形質転換していない上皮細胞をさらに含む、請求項1に記載の組成物。細胞ベースの治療を必要とする被験体に由来する形質転換していない上皮細胞をさらに含む、請求項1に記載の組成物。上皮間葉転換EMTを起こすように上皮細胞を誘導する方法であって、a上皮細胞を提供する工程;およびb該細胞を請求項1~19のいずれかに記載の組成物と接触させる工程を包含する、方法。前記細胞を、間葉系の表現型の安定的な誘導を引き起こすのに十分な時間にわたって前記組成物と接触させる、請求項26に記載の方法。上皮細胞から前駆細胞を調製するための方法であって、該方法は:a上皮細胞の集団を提供する工程;およびb請求項26に記載の方法によって該上皮細胞の集団においてEMTを誘導し、それにより、前駆細胞が該集団において産生される工程を包含する、方法。EMTを誘導した後に前記集団から前駆細胞を単離する工程をさらに包含する、請求項28に記載の方法。前記前駆細胞のうちの少なくとも一部を目的の細胞型に分化するように誘導する工程をさらに包含する、請求項28に記載の方法。細胞の集団を得る方法であって、該方法は:a乳腺組織を提供する工程;b該乳腺組織から基底細胞を単離する工程;およびcTGF-ベータシグナル伝達経路またはWntシグナル伝達経路を混乱させる条件下で該細胞を維持する工程を包含する、方法。前記工程cの条件が、TGF-ベータシグナル伝達経路およびWntCa2シグナル伝達経路を混乱させる、請求項31に記載の方法。前記工程cの条件が、TGFベータインヒビター、Wntインヒビターまたはその両方と前記細胞を接触させることを含む、請求項31に記載の方法。前記cの細胞を目的の細胞型に分化させるように誘導する工程をさらに包含する、請求項31に記載の方法。上皮細胞におけるEMTを阻害する方法であって、該方法は、以下の群:a古典的および/または非古典的Wnt経路のインヒビター;bBMP経路を刺激する化合物;ならびにcTGFbインヒビターのうちの少なくとも2つの各々から選択される少なくとも1つの化合物と該細胞を接触させる工程を包含する、方法。前記組成物が、TGFbインヒビター、ならびに古典的および/または非古典的Wnt経路のインヒビターを含む、請求項35に記載の方法。前記組成物が、TGFbインヒビターおよびBMPアゴニストを含む、請求項35に記載の方法。前記組成物が、WntインヒビターおよびBMPアゴニストを含む、請求項35に記載の方法。前記Wntインヒビターが、複数のWntファミリーメンバーに結合する、請求項35に記載の方法。前記Wntインヒビターが、内因性Wntインヒビターを含む、請求項35に記載の方法。前記Wntインヒビターが、古典的Wntシグナル伝達と非古典的Wntシグナル伝達の両方を阻害する、請求項35に記載の方法。前記BMP経路を刺激する化合物が、BMP2、4、5、6、7、9または10を含む、請求項35に記載の方法。Wntインヒビターが、内因性Wntアンタゴニストを含み、前記BMPアゴニストが、BMP2、4、5、6、7、9または10を含む、請求項35に記載の方法。Wntインヒビターが、SFRPファミリーメンバーを含む、請求項35に記載の方法。前記BMP経路を刺激する化合物が、BMP2またはBMP4を含む、請求項35に記載の方法。前記方法が、インビトロで行われる、請求項35に記載の方法。EMTの阻害を必要とする被験体においてEMTを阻害する方法であって、該方法は:以下の群:a古典的および/または非古典的Wnt経路のインヒビター;bBMP経路を刺激する化合物;ならびにcTGFbインヒビターのうちの少なくとも2つの各々から選択される少なくとも1つの化合物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。前記組成物が、TGFbインヒビター、ならびに古典的および/または非古典的Wnt経路のインヒビターを含む、請求項47に記載の方法。前記組成物が、TGFbインヒビターおよびBMPアゴニストを含む、請求項47に記載の方法。前記組成物が、WntインヒビターおよびBMPアゴニストを含む、請求項47に記載の方法。前記Wntインヒビターが、複数のWntファミリーメンバーに結合する、請求項47に記載の方法。前記Wntインヒビターが、内因性Wntインヒビターを含む、請求項47に記載の方法。前記Wntインヒビターが、古典的Wntシグナル伝達と非古典的Wntシグナル伝達の両方を阻害する、請求項47に記載の方法。前記BMPアゴニストが、BMP2、4、5、6、7、9または10を含む、請求項47に記載の方法。Wntインヒビターが、内因性Wntアンタゴニストを含み、前記BMP経路を刺激する化合物が、BMP2、4、5、6、7、9または10を含む、請求項47に記載の方法。Wntインヒビターが、SFRPファミリーメンバーを含む、請求項47に記載の方法。前記BMP経路を刺激する化合物が、BMP2またはBMP4を含む、請求項47に記載の方法。前記被験体が、腫瘍の処置を必要とする、請求項47に記載の方法。前記被験体が、腫瘍の処置を必要とし、前記組成物が、化学療法剤と組み合わせて投与されるか、または放射線治療とともに使用される、請求項47に記載の方法。前記被験体が、腫瘍の処置を必要とし、前記組成物が、該腫瘍の部位に局所的に投与される、請求項47に記載の方法。前記被験体が、腫瘍転移の有意なリスクがあるかを決定する工程をさらに包含する、請求項47に記載の方法。前記腫瘍が、癌腫である、請求項59~61のいずれかに記載の方法。発明の要旨本発明は、上皮間葉転換の調節に有用な組成物および方法を提供する。1つの態様において、本発明は、以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物;b古典的canonicalWnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;c非古典的non-canonicalWnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびd細胞接着を乱す化合物のうちの少なくとも3つの各々から選択される1つ以上の化合物を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、その組成物は、これらの4つの群のうちの各々からの少なくとも1つの化合物を含む。別の態様において、本発明は、以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を阻害する化合物;b古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する化合物;c非古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する化合物;およびdBMPシグナル伝達を刺激する化合物のうちの少なくとも3つの各々から選択される1つ以上の化合物を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、その組成物は、これらの4つの群の各々からの少なくとも1つの化合物を含む。他の態様において、本発明は、例えば本発明の組成物を用いて、EMTを誘導するまたは阻害する方法を提供する。当該分野の技術範囲内である、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、微生物学、組換え核酸例えば、DNA技術、免疫学などのある特定の従来の手法が、本発明の態様において有用であり得る。これらの手法のうちのある特定のものの非限定的な説明は、以下の刊行物:Ausubel,F.ら編,CurrentProtocolsinMolecularBiology、CurrentProtocolsinImmunology、CurrentProtocolsinProteinScienceおよびCurrentProtocolsinCellBiology,すべてJohnWileySons,N.Y.,2008年現在の版;Sambrook,Russell,andSambrook,MolecularCloning:ALaboratoryManual,3rded.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,2001;Harlow,E.andLane,D.,Antibodies-ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,1988;Burns,R.,ImmunochemicalProtocolsMethodsinMolecularBiologyHumanaPress;3rded.,2005,Monoclonalantibodies:apracticalapproachP.ShepherdandCDean編,OxfordUniversityPress,2000;Freshney,R.I.,CultureofAnimalCells,AManualofBasicTechnique,5thed.,JohnWileySons,Hoboken,NJ,2005;Cancer:PrinciplesandPracticeofOncologyV.T.DeVitaら編,J.B.LippincottCompany,8thed.,2008に見られる。癌に関するさらなる情報は、TheBiologyofCancer,Weinberg,RAら、GarlandScience,2006にも見られ得る。本明細書中で言及されるすべての特許、特許出願、ウェブサイト、データベース、科学論文および他の刊行物は、それらの全体が本明細書中で参考として援用される。発明の詳細な説明I.概要本発明は、オートクリンおよびパラクリンシグナル伝達経路が、EMTの誘導、ならびにEMTを経たことに関連する間葉系状態および幹細胞SC様状態の維持において重要な役割を果たすという発見に関する。本発明のある特定の実施形態に係るこれらのシグナル伝達経路の調節は、EMTを起こすように上皮細胞を誘導する手段ならびに/またはEMTを起こした細胞の間葉系およびSC様の状態を維持する手段を提供する。本発明の他のある特定の実施形態に係るこれらのシグナル伝達経路の調節は、上皮細胞がEMTを起こすのを阻害する手段ならびに/または間葉系およびSC様の状態における細胞がその状態を維持するのを阻害する手段をもたらす。当該分野で公知であるように、上皮細胞は、それらの側面の膜において細胞間接着複合体例えば、タイトジャンクション、アドヘレンスジャンクション、デスモソーム、ギャップジャンクションによって密着しており、代表的にはクラスターとしてまたはシート状で成長する傾向があり、E-カドヘリンなどの特徴的なマーカーを発現し、そして間葉系マーカー例えば、N-カドヘリン、フィブロネクチンおよびビメンチンを低発現するかまたは全く発現しない。目的のいくつかの実施形態において、上皮細胞は、CD44低および/またはCD24高である。上皮細胞とは対照的に、間葉系細胞例えば、EMTを起こした細胞は、細胞間結合を欠き、細長い形状を示すことおよびクラスターとしてではなく単一細胞として存在する高い傾向を示すことが多い。それらは、特徴的なマーカー例えば、ビメンチン、フィブロネクチン、N-カドヘリンおよびα-平滑筋アクチンを発現し、代表的には、上皮マーカー例えば、E-カドヘリン、α-カテニン、β-カテニンおよびγ-カテニンを低発現するか、または全く発現せず、上皮細胞と比べて遊走能が高いことが多い。例えば、間葉系細胞は、例えばインビトロにおいて、遊走アッセイを評価したとき、上皮細胞よりも少なくとも5倍高い遊走能を有し得る。いくつかの実施形態において、遊走は、少なくとも10、20、50、100倍以上高められる。間葉系細胞の特徴的な特性を示す細胞は、間葉系状態にあるかまたは間葉系表現型を示すと本明細書中で称され得る。幹細胞は、他の特徴の中でも、様々な細胞型を生じ得る未分化細胞である。本発明では、正常な幹細胞は、a比較的未分化であり;b同様に未分化な娘細胞娘を産生することができ;c幾多の継続的な成長分裂サイクルを通じて自身を複製することができるそのような娘の系列を産生することができ;かつdそのような細胞が、哺乳動物の身体の1つまたは別の機能性組織の特殊化された形質を獲得するのを可能にする分化プログラムを適切な条件下で開始することができる娘を産生することができる、正常な非新生物の細胞と定義される。癌幹細胞CSCは、機能的には、二次性腫瘍を、例えば高効率で、播種するおよび生成する能力を有する、腫瘍内の細胞と定義される。したがって、癌幹細胞は、通常の幹細胞に関連する特徴例えば、自己複製能、および特定の癌に見られる複数の細胞型を生じる能力を有する。通常の幹細胞または癌幹細胞の特性を有する細胞は、幹細胞SC様細胞、または幹細胞SC様状態にある、または前駆細胞と本明細書中で称され得る。いくつかの実施形態において、SC様細胞は、1つ以上の特徴的なマーカーの高レベルの発現もしくは局在化を示すか、または分化細胞型に特徴的なある特定のマーカーの発現を欠く。種々の細胞外シグナルWntおよびTGF-ベータリガンド、Notch、SonicHedgehogならびにEGFを含むが、様々な細胞型においてEMTを誘導し得る。これらの状況シグナルcontextualsignalsに応答して、ある特定の多面発現性の転写因子TF例えば、Twist、Snail、Slug、Zeb1およびZeb2の発現が誘導される。次いで、これらのTFは、EMTプログラムを取り仕切るように作用する。EMTはまた、例えば遺伝子操作アプローチによって、上皮細胞がTF例えば、Twist、Snail、Slug、Zeb1、Zeb2、Goosecoid、FoxC2およびE47を発現することによっても生じ得る。本発明では、少なくともいくつかの上皮細胞型においてEMTを誘導し得るTFは、EMTTFと称される。正常細胞および腫瘍細胞においてEMTプログラムを誘導し、それに続いてEMT関連特性を維持する、オートクリンおよびパラクリン機構を特徴付けるために、本発明者らは、そのような細胞によって産生される分子例えば、成長因子および細胞外で作動する他のシグナル伝達分子に注目した。EMTを起こした乳腺上皮細胞MECとEMTを起こしていないコントロール細胞との、分泌型タンパク質の発現プロファイルおよび遺伝子発現プロファイルを比較することを含むアプローチを用いたとき、オートクリンおよびパラクリンシグナル伝達経路と、EMTの誘導ならびにその結果として生じる間葉系およびSC様の状態の維持に関わる分子とが同定された。用語オートクリンシグナル伝達は、しばしば、ある細胞がその細胞に作用する物質オートクリン物質を分泌してその細胞を変化させるシグナル伝達のことを指すために使用される。パラクリンシグナル伝達は、代表的には、ある細胞がその細胞の環境内の他の細胞に作用する物質を分泌してそれらの細胞を変化させるシグナル伝達のことを指す。例えば、培養中の細胞によって分泌された物質は、同じ培養容器内の他の細胞に作用し得、インビボにおいてある細胞によって分泌された物質は、代表的には同じ組織または器官内の、それが拡散し得る他の細胞に作用し得る。オートクリン物質およびパラクリン物質は、タンパク質、小分子、脂質などであり得、それらとしては、種々の異なる成長因子およびホルモンが挙げられる。それらは、分泌されるものであることが多いが、細胞表面に結合した分子も包含される。代表的には、オートクリン物質またはパラクリン物質は、その物質が作用する細胞によって発現されているレセプターに結合して、下流のシグナル伝達事象その詳細は、関わる特定の物質、レセプターおよび/またはシグナル伝達経路によって異なるをもたらすことによって、その効果を発揮する。本発明では、パラクリンシグナル伝達経路は、別段示されない限り、通常、ホモタイプの、すなわち、同じタイプの細胞間のシグナル伝達に関わると想定される。用語オートクリンおよびパラクリンは、本明細書中で交換可能に使用され、オートクリンおよびパラクリンシグナル伝達経路は、しばしば本明細書中でオートクリンシグナル伝達経路とひとまとめにして称され得る。本明細書中の目的のオートクリンシグナル伝達経路には、TGF-βシグナル伝達経路、BMPシグナル伝達経路およびWntシグナル伝達経路が含まれる。本発明の理解を促す目的で、これらの経路およびそれらのある特定の分子構成要素が、簡潔に説明され得る。当業者は、これらの経路に関するさらなる詳細を承知しているだろう。当業者はまた、これらの経路に関与するタンパク質の配列、ならびにそれらをコードするゲノム配列およびmRNA配列を、公的に利用可能なデータベース例えば、NationalCenterforBiotechnologyInformationNCBI;www.ncbi.nlm.nih.govにおいて利用可能なデータベース、例えば、Gene、GenBank、Proteinsなどから容易に得ることもできるだろう。例えば、Geneデータベースは、配列および機能情報を提供しており、それらは、例えば、目的の遺伝子またはタンパク質の名称または遺伝子IDについて検索することによって得ることができる。表1および2は、本明細書中の目的のある特定のヒト遺伝子の遺伝子名および遺伝子IDを提供している。当業者は、他の目的の生物における対応する遺伝子の遺伝子IDを容易に得ることができるだろう。TGF-βスーパーファミリーsuperfamilyのタンパク質は、多種多様のプロセスにおいて重要な役割を果たす。TGF-βスーパーファミリーには、TGFβTGFβ1、TGFβ2およびTGFβ3およびBMPBMP2、BMP3a、BMP3bGDF-10、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP8b、BMP9GDF-2およびBMP10、BMP11GDF-11、BMP12GDF-7、BMP13GDF-6、BMP14GDF-5およびBMP15を含む、GDF-1、GDF-3、GDF-15、インヒビンA、インヒビンB、インヒビンCおよびインヒビンEが含まれる。TGFβスーパーファミリーリガンドは、二量体化し、そして細胞表面上のI型およびII型レセプターセリン/トレオニンキナーゼに結合してそれらを1つにすることによって、シグナル伝達を惹起する。ヒトのレセプターセリン/トレオニンキナーゼファミリーには、TGF-βシグナル伝達に関わる7つのI型および5つのII型レセプターが含まれる。I型レセプターアクチビンレセプター様キナーゼALKとしても知られるには、ALK1、ALK2ActR-Iとしても知られる、ALK3BMPR-IAとしても知られる、ALK4ActR-IBとしても知られる、ALK5TGFβR-Iとしても知られる、ALK6BMPR-IBとしても知られるおよびALK7が含まれる。II型レセプターには、TGFβR-II、BMPR-II、ACTR-IIA、ACTR-IIBおよびAMHR-IIが含まれる。異なるTGFβスーパーファミリーのメンバーが、これらのレセプターの異なるサブセットを含む複合体を形成する。例えば、TGFβは、I型レセプターのALK1および/またはALK5ならびにII型レセプターのTGFβR-IIと複合体を形成する一方で、BMPは、I型レセプターのALK2、ALK3および/またはALK6ならびにII型レセプターのBMPII-R、ACTR-IIAおよび/またはACTR-IIBと複合体を形成する。TGFβとBMPの両方のシグナル伝達経路において、II型レセプターは、I型レセプターをリン酸化し、次いでそれは、レセプター制御型SMADR-SmadTGFbシグナル伝達に対するSmad2およびSmad3、ならびにBMPシグナル伝達に対するSmad1、5および8を含むをリン酸化して活性化する。活性化されたR-Smadは、共通のパートナーSmadであるSmad4と相互作用する。R-SMAD/Smad4複合体は、核に移行し、そこでそれらは転写因子として作用し、標的遺伝子の特異性を与えるのを助ける種々の転写補助因子との相互作用を含むプロセスである、標的遺伝子の発現の制御に関わる。BMPは、細胞外の空間においてBMPに結合することによりBMPがそのレセプターに結合するのを妨げることによってBMPシグナル伝達のアンタゴニストとして機能する種々の内因性分泌型タンパク質による制御に供される。この文脈における内因性とは、その分子を含むおよび/または産生する細胞または生物にとって天然のものであり、かつ、人間の手によって直接または間接的に導入されていない、分子のことを指す。例えば、それを産生するかもしくはそれが見られる細胞または生物のゲノムによってすなわち、遺伝子操作またはゲノムに影響する他の操作の結果としてではなく天然にコードされる核酸またはタンパク質は、その細胞または生物にとって内因性であると考えられる。本発明では、用語内因性は、ある分子をコードする異種核酸をそのような細胞または生物またはそれらの祖先に導入することを必要とせず、本明細書中の目的の細胞または生物例えば、EMTを誘導することまたは阻害することが望まれる細胞または生物のゲノムにおいてコードされる分子、例えば、RNAまたはタンパク質のことを指すために使用されることが多い。本明細書中で明らかになるように、用語内因性は、代表的には、動物によって天然に産生され、かつそれを産生する生物においてTGFb、BMPおよび/またはWnt経路を制御する際に役割を果たす、ある特定の分子のことを指すために使用される。内因性分子は、インビトロおよび/またはインビボの多種多様の状況のいずれにおいても使用され得ること、ならびに任意の好適な方法を用いて例えば、任意の好適な細胞型において組換えDNA技術を用いて産生され得るかまたは得ることができることが認識されるだろう。用語内因性は、これらの点に限定されないと意図される。内因性BMPインヒビタータンパク質としては、とりわけ、Gremlin、PRDCDanおよびCerberusに関するタンパク質、時折gremlin-2とも称される、Chordin、Chordin様1、Chordin様2、Crossveinless2、Noggin、Dan、Cerberus、Coco、TwistedGastrulationおよびSclerostin、USAG-1、Tsukushi、BrorinならびにBrorin様が挙げられる。BMPアンタゴニストは、システインノットモチーフcysteineknotmotifを含み、この領域の差異に基づいていくつかのサブファミリーに分けられ得る。これらには、CANCerberusおよびDanファミリー8員環、TwistedGastrulation9員環ならびにChordinおよびNoggin10員環が含まれるAvsian-KretchmerO.andHsuehA.J.,Mol.Endocrinol.18,1-12,2004。BMP3およびBMP15は、ある特定の状況において、他のBMPのアンタゴニストとして機能し得る。Wntシグナル伝達は、細胞運命決定、細胞遊走および器官形成をはじめとした多種多様の細胞プロセスを制御する。Wntは、FrizzledFzレセプターファミリーのメンバーの細胞外ドメインに結合する分泌型糖タンパク質である。19個のヒトWnt遺伝子が存在する。いくつかのWntでは、場合によっては異なるタンパク質アイソフォーム例えば、Wnt16v1およびWnt16v2をコードする、複数の転写物バリアントtranscriptvariantsが存在する。多くの事例において、Wntシグナル伝達の媒介にはコレセプターが関わっている。例えば、低密度リポタンパク質関連レセプタータンパク質5/6LRP5/6は、Fzに対するコレセプターとして作用し得る。Wntがそのレセプター複合体に結合した後、Wntによって媒介されるシグナルは、細胞質タンパク質DishevelledDshに伝達される。Wntシグナル伝達経路は、Dshの段階においていくつかの異なる経路に分かれる。古典的経路は、アドヘレンスジャンクションタンパク質β-カテニンの蓄積およびその核への移行を引き起こす。Wntシグナル伝達の非存在下では、細胞質β-カテニンは、他のタンパク質の中でもグリコーゲンシンターゼキナーゼ3GSK3を含むβ-カテニン破壊複合体によって分解される。GSK3によるβ-カテニンのリン酸化は、それをユビキチン化およびその後の破壊の標的にする。Wntとそのレセプター複合体との結合によって、β-カテニン破壊複合体が混乱することによりβ-カテニンが蓄積する。β-カテニンは核に移行し、そこでいくつかの種々のパートナーに結合して転写コアクチベーターとして機能することによって、遺伝子転写を制御する。非古典的Wntシグナル伝達経路非β-カテニン依存性経路とも称されるは、β-カテニンを介した遺伝子の転写に影響しないが、その代わりに、単量体RhoファミリーGTPase平面内細胞極性planarcellpolarity経路、JunN末端キナーゼJNKをはじめとした他の様々な分子、および細胞内カルシウムレベルの変化Wnt/Ca2経路を介して効果を発揮する。Wnt/Ca2経路では、Wnt/Fzシグナル伝達によって小胞体ERから細胞内にCa2が放出され、それにより、いくつかのCa2感受性タンパク質タンパク質キナーゼCPKCおよびカルシウム/カルモジュリン依存性キナーゼIIを含むがGタンパク質依存的様式で活性化される。ほとんどのWntタンパク質が、主として古典的経路を介してシグナル伝達すると考えられているが、いくつかの異なるWntWnt4、Wnt5a、Wnt11およびWnt16を含むは、主に非古典的Wnt経路を介してシグナル伝達する。例えば、Wnt5aは、非古典的経路を活性化し得、細胞内Ca2放出を刺激し得るが、β-カテニンの安定化を活性化しない。対照的に、Wnt11は、ある特定の状況において、古典的経路を介しても作用し得る。Wntシグナル伝達は、細胞外の環境においてWntに結合し、Fzおよび/もしくはコレセプターとの相互作用を阻害する、ならびに/またはそのレセプター/コレセプターに結合することによって、Wntシグナル伝達のアンタゴニストとして作用する、種々の内因性分泌型タンパク質によって制御される。これらのインヒビターには、DikkopfDKKファミリータンパク質そのうち、ヒトでは4種存在する、可溶性Frizzled関連タンパク質SRFP、そのうち、ヒトでは4種存在する:SFRP1、SFRP2、SFRP3正式名称はfrizzled関連タンパク質Frzbである、SFRP4およびSFRP5およびWntインヒビタータンパク質1WIF1が含まれる。WntおよびWntシグナル伝達経路に関するかなりの情報が、以下のウェブサイト:www.stanford.edu/~rnusse/wntwindow.htmlにおいて入手可能である。本発明は、TGFβ経路ならびに古典的および非古典的Wnt経路のオートクリン刺激、ならびにBMP経路のシグナル伝達の制限が、EMTの誘導ならびにその結果として生じる間葉系およびSC様の状態の維持において共同して働き得るという認識を包含する。本発明のある特定の実施形態によると、これらの経路は、EMTを亢進させるためまたは阻害するために、種々の異なるアプローチを用いて調節され得る。例えば、本発明のいくつかの実施形態において、上皮細胞がEMTを起こす性質は、TGFβおよびWntシグナル伝達経路が刺激される方法、ならびに/またはEMTを誘導するおよび/もしくは維持する内因性物質によってBMPシグナル伝達が阻害される方法を模倣することによって亢進される。いくつかの実施形態において、間葉系および/またはSC様の状態の維持は、そのような細胞を間葉系およびSC様の状態で維持する傾向がある1つ以上のオートクリンシグナル伝達経路を模倣することもしくは増強することによって、ならびに/またはそのようなシグナル伝達経路が作動性であることに許容的な細胞外の環境を提供することによって、促進される。いくつかの実施形態において、上皮細胞は、そのような細胞がEMTを起こすように別途誘導し得る1つ以上のオートクリンシグナル伝達経路を干渉することによって、EMTを起こすのを阻害される。いくつかの実施形態において、間葉系および/またはSC様の状態の維持は、SC様の状態を別途維持し得る1つ以上のオートクリンシグナル伝達経路を妨害することによって阻害される。そのようなアプローチは、例えば細胞治療において使用するための、幹細胞の形成または分化を誘導する方法において有用であり得る。いくつかの実施形態において、EMTの誘導または維持は、TGFβおよびWnt経路の刺激とともに、細胞接着を乱すことによって、例えば、アドヘレンスジャンクションの形成または維持を乱すことによって、促進される。実施例でさらに詳細に記載されるように、間葉系mesechymalおよびSC様の状態の乳腺細胞は、乳腺上皮細胞と比較して、ある特定のTGFβ、BMPおよびWnt経路リガンドならびに内因性アンタゴニストの分泌において種々の差異を示すと見出された。これらの差異は、TGFβシグナル伝達の活性化、BMPシグナル伝達の制限、古典的Wntシグナル伝達の脱抑制、および非古典的Wntシグナル伝達の活性化をもたらす。これらのオートクリン経路は、正常細胞と形質転換した細胞の両方において、EMTの誘導および間葉系状態の維持において共同して働く。例えば、EMTを起こした細胞が、EMTを起こしていないコントロール細胞と比較して、TGFβ1の多い分泌、ならびにSmadレポータープラスミドの高い活性および高いSmad2リン酸化活性なTGFβシグナル伝達の指標を示すことが発見された。したがって、オートクリンTGF-ベータシグナル伝達は、EMTを起こしていないコントロール細胞と比べて、EMTを起こした細胞において活性だった。さらに、EMTを起こした細胞は、1BMPリガンド産生の減少および2分泌されるBMPアンタゴニストのアップレギュレーションを介してBMPシグナル伝達を制限する細胞外のシグナル伝達の環境を示すと見出された。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、BMPシグナル伝達の制限によって、オートクリンTGFβシグナル伝達に許容的な細胞外の環境が作られ、それによってEMTの誘導が促進され、その維持に寄与する可能性がある。また、内因性Wntアンタゴニストの分泌が、EMTを起こしていないコントロール細胞と比べてEMTを起こした細胞においてダウンレギュレートされることも発見された。このダウンレギュレーションは、内因性インヒビターのダウンレギュレーションに依存する古典的Wntシグナル伝達の増大例えば、β-カテニン/TCF-LEFレポーターの活性の増大によって証明されるようなを伴った。さらに、EMTを起こしたMECは、関連する下流の非古典的シグナル伝達経路の活性の増大例えば、活性化されたタンパク質キナーゼCPKCタンパク質、ならびにJNKおよびその下流の標的であるc-Junのリン酸化の増加によって証明されるようなを伴う、ほとんどの非古典的Wntリガンドのアップレギュレーションを示した。特に、内因性WntインヒビターであるSFRP1およびDKK1の分泌は減少したが、非古典的Wntタンパク質であるWnt5a、Wnt16v1およびWnt16v2の分泌は、コントロール細胞と比べて、EMTを起こした細胞では増加した。本発明は、これらの発見に少なくとも部分的に基づく種々の組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、インビトロですなわち、生物の身体の外で、例えば、細胞培養容器内で行われる。他の実施形態において、本発明の方法は、インビボで、例えば、1つ以上の化合物または組成物を被験体に投与することによって、行われる。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、少なくとも部分的にインビトロで行われ、例えば、細胞を、インビトロで組成物と接触させ、その後、その細胞を、例えば、実験または治療の目的のために、被験体に導入する。したがって、別段示されないかまたは別段文脈から明らかでない限り、本発明のいずれの方法も、インビトロおよびインビボでの実施形態を包含し、本発明のいずれの組成物も、インビトロまたはインビボにおいて使用され得ることが理解されるべきである。本発明のいくつかの実施形態において、本発明の方法は、乳腺細胞に適用されるおよび/または乳腺細胞を使用する。乳腺組織mammarytissueに由来する細胞が本明細書中で例証されるが、本発明は、様々な実施形態において、他の組織に由来する細胞を包含することが理解されるだろう。特定の内因性TGF、Wntおよび/もしくはBMPリガンド、ならびに/またはオートクリンTGF、Wntおよび/もしくはBMPシグナル伝達経路において作動性のアンタゴニストに関するある特定の詳細が、他のいくつかの細胞型では異なり得ることが認識されるだろう。当業者は、実施例に記載されるプロファイリングアプローチを適用することにより、特定のTGF、Wntおよび/もしくはBMPリガンド、ならびに/またはEMTを誘導するもしくは阻害するように作用するアンタゴニストならびに/または間葉系およびSC様の状態で細胞を維持するもしくはその維持に対抗するように作用するアンタゴニストを同定し得るか、あるいは目的の細胞型においてこれらの経路に関わるタンパク質を調べることにより、差次的に分泌されるおよび/または発現されるタンパク質を同定し得る。用語リガンドとは、細胞レセプターなどの別の化学物質例えば、分子または複合体に結合する化学物質例えば、分子または複合体のことを指すことが理解されるだろう。例えば、BMPリガンドは、BMPレセプターに結合する。用語アゴニストとは、細胞レセプターまたはレセプター複合体に結合し、かつその細胞による応答を引き起こす例えば、シグナル伝達経路を刺激する化学物質例えば、分子または複合体のことを指す。アンタゴニストは、アゴニストの活性を阻止するかまたはそれに別途拮抗する化合物である。例えば、アンタゴニストは、アゴニストと同じレセプターまたはコレセプターに結合し得るが、代表的には、そのアゴニストによって引き起こされる応答を誘発しないかつ、そのような結合はアゴニストの結合を干渉するか、またはアンタゴニストは、アゴニストに結合して、そのアゴニストがレセプターに結合するのを妨げ得る。別段特定されないかまたは文脈から明らかでない限り、本明細書中で称されるリガンドは、通常、アゴニストである。本発明の組成物および方法が、他のシグナル伝達経路例えば、Notch経路、Hedgehog経路、チロシンキナーゼレセプター例えば、Met、FGF、IGF、EGF、HGF、VEGFおよび/またはPDGFレセプターファミリーメンバーを介したシグナル伝達、NFkB経路、低酸素誘導因子HIF経路および/またはマイクロRNA制御性経路の操作とともに使用され得ることも予想される。本発明の組成物および方法において使用するための、ならびに/または本発明の方法が適用され得る、上皮細胞または他の細胞は、多種多様の起源のいずれかから得ることができるか、またはある特定のインビボでの用途の場合、種々の組織もしくは器官に存在し得る。それらの細胞は、様々な実施形態において、初代細胞、細胞株の細胞、形質転換していない細胞、形質転換した細胞、遺伝的に改変された細胞、または遺伝的に改変されていない細胞であり得る。例えば、細胞は、ヒトまたは他の哺乳動物の被験体細胞ベースの治療の意図されるレシピエントもしくはその親類または無関係のドナーであり得るから得ることができ、廃棄される外科手術上のサンプルもしくは被験体由来の細胞サンプルまたは増殖された細胞株から得られる場合もある。乳腺組織は、細胞の有用な起源である。例えば、初代ヒト乳腺上皮細胞MECSは、機械的分離によって新鮮な乳房縮小組織乳房縮小術から得ることができ、所望であれば、蛍光励起細胞分取FACSなどの方法によってさらに精製され得る。そのような初代MECSまたは他の上皮細胞型の培養物は、様々な遺伝的エレメント例えば、不死化細胞株を作製するためのヒトテロメラーゼホロ酵素hTERTの触媒サブユニットをコードするベクター例えば、レトロウイルスベクターを導入することによって、遺伝的に改変され得る。そのような細胞株は、例えば、サルウイルス40SV40、ラージT抗原およびhaRAS癌遺伝子をコードするベクター例えば、レトロウイルスベクターによる感染を介して、さらに遺伝的に改変され、形質転換され得る。いくつかの実施形態では、短ヘアピンRNAshRNA、マイクロRNAmiRNAまたはmiRNA前駆体、miRNAスポンジなどを発現するように細胞を遺伝的に改変することによって、遺伝子発現が低下される。種々の異なる癌遺伝子および/または癌抑制遺伝子が、細胞を遺伝的に改変するために使用され得ることが認識されるだろう。当業者は、哺乳動物細胞の一過性のまたは安定的なトランスフェクションに適したベクター例えば、ウイルス、プラスミドおよび遺伝的エレメント例えば、プロモーター、エンハンサーのような調節エレメントなどを承知しているだろう。いくつかの実施形態において、制御可能な例えば、誘導可能なおよび/または抑制可能な発現調節領域例えば、プロモーターが、細胞における目的のRNAまたはタンパク質の制御可能な発現を達成するために使用される。別の実施形態において、目的のタンパク質、およびホルモンレセプター、例えば、エストロゲンレセプターなどのステロイドホルモンレセプター、または被験体の体内に通常存在しない化合物に選択的に応答し得るそのバリアント例えば、選択的なエストロゲンレセプター調節因子のリガンド結合ドメインを含む融合タンパク質を使用することによって、活性が制御される。さらに、ヒトおよびマウスの乳癌由来の樹立細胞株例えば、MCF7、MDA-MB-231および4T1細胞が使用され得る。当業者は、本発明の実施形態において使用され得る他の細胞株例えば、他の癌のタイプに由来するものを承知しているだろう。代表的には、EMTを誘導する本発明の方法が、間葉系とSC様の両方の状態にある細胞を産生すること、およびEMTを阻害する本発明の方法が、そのような細胞の産生を阻害することが認識されるだろう。句間葉系および/またはSC様の状態における用語および/またはは、本発明がそのように限定するとみなされるべきでないことを指摘するために使用される。例えば、間葉系細胞または幹細胞に特徴的であると考えられる表現型例えば、上に記載された表現型は、本発明の使用に関するある特定の実施形態において特に興味深い場合がある。II.EMTの誘導または間葉系および/もしくはSC様の状態の維持いくつかの態様において、本発明は、EMTを起こすように上皮細胞を誘導するために有用または間葉系および/もしくはSC様の状態で細胞を維持するために有用な組成物ならびに方法を提供する。本発明は、EMTを誘導する方法を提供し、その方法は、以下のプロセス:aTGF-β経路のシグナル伝達の刺激;b古典的Wnt経路のシグナル伝達の刺激;c非古典的Wnt経路のシグナル伝達の刺激;およびd細胞接着を乱すことのうちの少なくとも3つが起きる培養条件に上皮細胞を供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上皮細胞は、これらのプロセスの4つすべてが起きる条件下で培養される。本発明はさらに、間葉系および/またはSC様の状態で細胞を維持する方法を提供し、その方法は、以下のプロセス:aTGF-β経路のシグナル伝達の刺激;b古典的Wnt経路のシグナル伝達の刺激;c非古典的Wnt経路のシグナル伝達の刺激;およびd細胞接着を乱すことのうちの少なくとも3つが起きる培養条件にSC様状態の細胞を供する工程を包含する。いくつかの実施形態において、それらの細胞は、これらのプロセスの4つすべてが起きる条件下で培養される。いくつかの実施形態において、間葉系および/またはSC様の状態の細胞は、EMTを起こした上皮細胞に由来する。いくつかの実施形態において、それらの細胞は、本発明の方法に従って、EMTを起こすように誘導された。本発明の様々な態様のいくつかの実施形態において、非古典的Wnt経路の刺激は、Wnt/Ca2経路またはJNK/c-Jun経路の刺激を含む。本発明は、EMTを起こすようにならびに/または間葉系およびSC様の状態で細胞を維持するようにTGFβアゴニストが上皮細胞を誘導する能力をBMPシグナル伝達が阻害するように作動し得るという認識を包含する。本発明のいくつかの実施形態において、TGF-β経路のシグナル伝達の刺激は、TGF-βシグナル伝達に許容的な細胞外の環境を提供することを含む。いくつかの実施形態において、TGF-βシグナル伝達に許容的な環境は、BMP経路のシグナル伝達が阻害される環境である。したがって、本発明は、TGFβアゴニストがEMTを起こすように上皮細胞を誘導する能力を亢進する方法を提供し、ここで、その細胞は、それがTGFβアゴニストに曝露される環境に存在し、その方法は、BMP経路のシグナル伝達が阻害されるようにその細胞の環境を改変する工程を包含する。本発明はさらに、TGFβアゴニストが間葉系および/またはSC様の状態で細胞を維持する能力を亢進する方法を提供し、その方法は、TGFβアゴニストを含む環境に細胞を曝露する工程を包含し、BMP経路のシグナル伝達が、阻害される。いくつかの実施形態において、BMP経路のシグナル伝達の阻害は、別途BMPシグナル伝達を刺激し得る1つ以上の内因性BMPリガンドの合成のダウンレギュレートまたはBMPアンタゴニストの提供を包含する。いくつかの態様において、本発明は、細胞による内因性Wntアンタゴニストの分泌が、上皮細胞がEMTを起こすのを阻害し得るという認識に関する。本発明のいくつかの実施形態において、Wnt経路のシグナル伝達の刺激は、1つ以上の内因性Wntインヒビターを阻害することによるWnt経路のシグナル伝達の脱抑制を包含する。Wntアンタゴニストの阻害は、Wntシグナル伝達を脱抑制し得、それによって、EMTが促進され、そして/または間葉系および/もしくはSC様の状態の維持が促進される。1つの態様において、本発明は、EMTを起こすように細胞を誘導する方法を提供し、ここで、その細胞は、細胞の集団のメンバーであり、その集団内の少なくともいくつかの細胞は、内因性Wntアンタゴニストを分泌し、その方法は、その集団内の細胞によって分泌されるWntアンタゴニストを阻害する工程を包含する。別の態様において、本発明は、EMTを起こすように細胞を誘導する方法を提供し、ここで、その細胞は、細胞の集団のメンバーであり、その集団内の少なくともいくつかの細胞は、Wntアンタゴニストを分泌し、その方法は、それらの細胞を、Wntアンタゴニストを阻害する物質と接触させる工程を包含する。本発明のいくつかの実施形態において、その方法は、SFRPファミリーメンバーおよびDKKファミリーメンバーを阻害する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、上記の方法は、上述の経路またはプロセスの1つ以上を刺激するまたは阻害する化合物と上皮細胞を接触させる工程を包含する。例えば、本発明は、EMTを誘導する方法を提供し、その方法は、以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物;b古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;c非古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびd細胞接着を乱す化合物のうちの少なくとも3つの各々から選択される1つ以上の化合物を含む組成物と上皮細胞を接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、その組成物は、上述の4つの群の各々からの1つ以上の化合物を含む。EMTを誘導するため、ならびに/または間葉系および/もしくはSC様の状態で細胞を維持するために有用な組成物は、本明細書中でEMT誘導組成物またはEMT誘導カクテルと称され得る。本発明のEMT誘導組成物は、BMPシグナル伝達を阻害する化合物をさらに含み得る。例示的な化合物を下記でさらに論じる。いくつかの態様において、本発明は、間葉系および/またはSC様の状態を誘導するための方法を提供し、その方法は、上皮細胞を本発明のEMT誘導組成物と接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞がEMTを起こし、続いて、その培養培地にEMT誘導組成物のいずれの構成要素も加える必要なく長期間にわたって間葉系およびSC様の状態を維持するのに十分な時間にわたって、接触される。いくつかの実施形態において、長期間とは、少なくとも10継代のことを指す。本発明では、所与のセットの条件下で少なくとも10継代にわたって持続する状態が、安定と考えられる。いくつかの実施形態において、長期間とは、少なくとも12継代約36の集団倍増、15、20、25またはそれ以上の継代のことを指す。いくつかの実施形態において、上皮細胞は、少なくとも約14日間にわたってEMT誘導組成物と接触される。当然のことながら、細胞は、それよりも長い期間にわたって、例えば、約20、25もしくは30日間またはそれ以上にわたって、EMT誘導組成物と接触され得る。当業者は、EMTの安定的な誘導に必要な最短時間が、例えば、EMT誘導カクテルの特定の構成要素、それらが使用される濃度、および上皮細胞のタイプに左右され得ることを認識するだろう。さらに、当業者は、所望であれば、特定の上皮細胞のタイプに対して上記方法を最適化するために、特定の構成要素および濃度を容易に変更し得る。いくつかの態様において、本発明は、TGFβアゴニストがEMTを起こすように上皮細胞を誘導する能力を高める方法を提供し、その方法は:a上皮細胞およびTGFβアゴニストを含む組成物を提供する工程;ならびにbBMPシグナル伝達を阻害する化合物とその細胞を接触させる工程を包含する。本発明はさらに、TGFβアゴニストが間葉系および/またはSC様の状態で細胞を維持する能力を高める方法を提供し、その方法は:a間葉系細胞およびTGFβアゴニストを含む組成物を提供する工程;ならびにbBMPシグナル伝達を阻害する化合物とその細胞を接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、本発明のEMT誘導カクテルと接触した細胞は、例えば、インビトロにおいて、遊走または浸潤アッセイを評価したとき、EMT誘導カクテルと接触していないコントロール細胞よりも少なくとも5倍高い遊走能または浸潤能を有する。いくつかの実施形態において、遊走および/または浸潤は、少なくとも10、20、50、100倍またはそれ以上高められる。遊走または浸潤に対する化合物または組成物の効果は、当該分野で公知の任意の方法を用いて評価され得る。例えば、ValsterAら、Methods,372:208-15,2005および実施例を参照のこと。そのような多くのアッセイが、フィルターで隔離された、培地で満たされた2つの区画からなるチャンバー例えば、Boydenチャンバーを含み、それは、様々な構成要素、例えば、ECM構成要素例えば、マトリゲルを通過して浸潤する能力を評価するために、そのような構成要素でコーティングされ得る。細胞懸濁液が、その区画のうちの1つに入れられ、インキュベートされる。細胞は、その区画からフィルターの細孔を通ってフィルターの反対側に遊走し、次いで、定量される。所望であれば、被験物質は、例えば、そのような物質の遊走/浸潤に対する効果を評価するために、いずれかの区画における培地中に含められ得、かつ/または細胞は、その細胞をチャンバーに導入する前に被験物質に曝露され得る。いくつかの実施形態において、本発明のEMT誘導カクテルに接触した細胞は、EMT誘導カクテルと接触していないコントロール細胞と比べて、高い自己複製能を有する。例えば、EMT誘導カクテルと接触した細胞は、EMT誘導カクテルと接触していないコントロール細胞よりも、少なくとも2倍または少なくとも5倍高い自己複製能を有し得る。いくつかの実施形態において、自己複製能は、少なくとも10、20、50、100倍またはそれ以上高められる。自己複製能に対する化合物または組成物の効果は、当該分野で公知の任意の方法を用いて評価され得る。例えば、一次もしくは二次マンモスフィア形成またはツモールスフィアの形成の阻害が評価され得る。いくつかの実施形態において、本発明のEMT誘導カクテルと接触した形質転換した細胞は、EMT誘導カクテルと接触していないコントロール細胞よりも少なくとも2倍または少なくとも5倍高い腫瘍開始能を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍開始能は、少なくとも10、20、50、100倍またはそれ以上高められる。腫瘍開始能は、当該分野で公知の方法を用いて、例えば、非ヒト動物宿主、例えば、免疫無防備状態の非ヒト宿主に細胞を導入することによって、評価され得る。代表的には、その宿主は、哺乳動物、例えば、げっ歯類、例えば、マウスまたはラットである。免疫無防備状態のげっ歯類の系統は、当該分野で公知である。例えば、SCID、NOD-SCID、ヌードマウスまたはラットが使用され得る。別の実施形態において、胸腺が外科的に除去されているか、または例えば放射線照射もしくは化学剤などの手段によって非機能性にされているか、あるいは薬物または遺伝的操作例えば、免疫系の発達および/または機能において重要な分子をコードする1つ以上の遺伝子のノックダウンまたはノックアウトによって免疫系が抑制されている動物が使用される。例えば、Rag1および/またはRag2ノックアウト動物が使用され得る。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、EMTを誘導するためおよび/または維持するための本発明の方法は、いくつかの利点を提供し得る。いくつかの実施形態において、EMTを誘導するおよび/または維持する本発明の方法は、正常な状態および/または病理学的状態においてインビボで生じるものに似ており、正常なおよび/もしくは病理学的なEMTの研究のため、またはEMTを変更例えば、阻害または促進し得るさらなる物質の同定もしくは特徴づけのために、生理的に関連性のある状況を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、上皮細胞の遺伝的改変を必要とすることなく、EMTの誘導および/または維持を可能にする。例えば、下記でさらに記載されるように、後に細胞ベースの治療のために使用される予定の前駆細胞を産生するためにEMTが使用されるとき、遺伝的改変の回避が望ましい場合がある。III.EMTの誘導ならびに/または間葉系および/もしくはSC様の状態の維持の阻害いくつかの態様において、本発明は、EMTの誘導の阻害ならびに/または細胞による間葉系および/もしくはSC様の状態の維持の阻害に有用な組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、EMTを起こすように上皮細胞を誘導するように、ならびに/または間葉系および/もしくはSC様の状態で細胞を維持するように、別途作動し得る1つ以上のシグナル伝達経路を混乱させる干渉する工程を包含する。1つの態様において、本発明は、上皮細胞がEMTを起こすのを阻害する方法を提供し、その方法は、その細胞の古典的および/もしくは非古典的Wnt経路シグナル伝達経路を阻害する工程、ならびに/またはその細胞のBMP経路シグナル伝達経路を刺激する工程を包含する。いくつかの実施形態において、その方法は、1つ以上の古典的および/または非古典的Wntシグナル伝達経路pathaysを阻害する工程ならびにその細胞のBMPシグナル伝達経路を刺激する工程を包含する。いくつかの実施形態において、Wnt経路を阻害する工程およびBMPシグナル伝達を刺激する工程は、相加効果または相乗効果を有する。本発明はさらに、EMTを阻害する方法を提供し、その方法は、古典的および/もしくは非古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する1つ以上の化合物ならびに/またはBMP経路のシグナル伝達を刺激する1つ以上の化合物と上皮細胞を接触させる工程を包含する。本発明の様々な態様のいくつかの実施形態において、非古典的Wnt経路を阻害する工程は、Wnt/Ca2経路またはJNK/c-Jun経路を阻害する工程を包含する。いくつかの実施形態において、本発明のその方法は、TGFβ経路が刺激された状況において例えば、TGFbアゴニストの存在下において有用であり、ここで、そのTGFβ経路の刺激は、別途EMTを促進し得る。いくつかの実施形態において、その方法はさらに、その細胞のTGFβシグナル伝達経路を阻害する工程を包含する。理論に拘束されることを望むものではないが、BMPシグナル伝達を制限することによってTGFβシグナル伝達に許容的な環境が提供されるという発見は、BMPシグナル伝達の刺激が、TGFβリガンドがEMTを誘導する能力ならびに/または間葉系および/もしくはSC様の状態で細胞を維持する能力を限定し得ることを示唆する。いくつかの実施形態において、上記方法は、WntインヒビターおよびBMPアゴニストと上皮細胞を接触させ、それによりEMTが阻害される工程を包含する。本発明はさらに、細胞が間葉系および/またはSC様の状態を維持するのを阻害する方法を提供し、その方法は、その細胞の古典的および/もしくは非古典的Wnt経路シグナル伝達経路を阻害する工程、ならびに/またはその細胞のBMP経路シグナル伝達経路を刺激する工程を包含する。本発明はさらに、細胞が間葉系および/またはSC様の状態を維持するのを阻害する方法を提供し、その方法は、古典的および/もしくは非古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する1つ以上の化合物ならびに/またはBMP経路のシグナル伝達を刺激する1つ以上の化合物と細胞を接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、本発明のその方法は、TGFβ経路が刺激された状況において有用であり、ここで、そのTGFβ経路の刺激は、間葉系および/またはSC様の状態で細胞を維持することに別途寄与し得る。したがって、いくつかの実施形態において、本発明のその方法は、TGFbシグナル伝達が刺激された例えば、TGFbアゴニストの存在下の環境における細胞に適用され、ここで、TGFbシグナル伝達経路の刺激は、間葉系および/またはSC様の状態で細胞を維持するように別途作動し得る。別の態様において、本発明は、上皮細胞がEMTを起こすのを阻害する方法を提供し、その方法は、以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を阻害する化合物;b古典的および/または非古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する化合物;cBMP経路のシグナル伝達を刺激する化合物のうちの少なくとも2つの各々から選択される1つ以上の化合物を含む組成物と上皮細胞を接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、その組成物は、上述の3つの群の各々からの1つ以上の化合物を含む。EMTを阻害するためならびに/または間葉系および/もしくはSC様の状態の維持を阻害するために有用な組成物は、本明細書中でEMT阻害組成物またはEMT阻害カクテルと称され得る。いくつかの実施形態において、その組成物は、古典的および非古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する少なくとも1つの化合物を含む。いくつかの実施形態において、その組成物は、古典的および非古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する少なくとも1つの化合物、ならびにBMP経路のシグナル伝達を刺激する少なくとも1つの化合物を含む。いくつかの実施形態において、本発明の任意の組成物または方法においてBMPシグナル伝達を刺激する化合物は、BMPアゴニストを含む。いくつかの実施形態において、本発明の任意の組成物または方法においてBMPシグナル伝達を刺激する化合物は、例えば、内因性BMPアンタゴニストを阻害することによって、BMPシグナル伝達を脱抑制する化合物を含む。例示的な化合物を下記でさらに論じる。いくつかの実施形態において、上皮細胞は、約12時間~約10日間の範囲の時間にわたって、EMT阻害組成物と接触される。いくつかの実施形態において、上皮細胞は、少なくとも約10日間にわたってEMT阻害組成物と接触される。当然のことながら、細胞は、それよりも長い期間にわたって、例えば、約15、20、25もしくは30日間またはそれ以上にわたって、例えば、EMTを起こした細胞において、例えば、EMTの阻害ならびに/または間葉系および/もしくはSC様の状態の維持の阻害が望まれるだけの長さにわたって、その組成物と接触され得る。当業者は、EMT阻害組成物の特定の構成要素およびそれらが使用される濃度が変動し得ること認識するだろう。所望であれば、当業者は、特定の細胞型に対して上記方法を最適化するために、特定の構成要素および濃度を容易に変更し得る。いくつかの態様において、本発明は、TGFβアゴニストがEMTを起こすように上皮細胞を誘導する能力を低下させる方法を提供し、その方法は:a上皮細胞およびTGFβアゴニストを含む組成物を提供する工程;ならびにbBMPシグナル伝達を刺激する化合物および/または古典的もしくは非古典的Wntシグナル伝達を阻害する化合物と細胞を接触させる工程を包含する。いくつかの態様において、本発明は、TGFβアゴニストが、細胞による間葉系および/またはSC様の状態の維持を促進する能力を低下させる方法を提供し、その方法は;a間葉系および/またはSC様の状態の細胞ならびにTGFβアゴニストを含む組成物を提供する工程;ならびにbBMPシグナル伝達を刺激する化合物および/または古典的もしくは非古典的Wntシグナル伝達を阻害する化合物とその細胞を接触させる工程を包含する。本発明はさらに、上皮細胞がEMTを起こすのをTGFβインヒビターが阻害する能力を亢進する方法を提供し、その方法は:a上皮細胞およびTGFβインヒビターを含む組成物を提供する工程;ならびにbBMPシグナル伝達を刺激する化合物および/または古典的もしくは非古典的Wntシグナル伝達を阻害する化合物とその細胞を接触させる工程を包含する。本発明はさらに、細胞による間葉系および/またはSC様の状態の維持をTGFβインヒビターが阻害する能力を亢進する方法を提供し、その方法は:a上皮細胞およびTGFβインヒビターを含む組成物を提供する工程;ならびにbBMPシグナル伝達を刺激する化合物および/または古典的もしくは非古典的Wntシグナル伝達を阻害する化合物とその細胞を接触させる工程を包含する。いくつかの実施形態において、その細胞は、BMPシグナル伝達を刺激する少なくとも1つの化合物および古典的または非古典的Wntシグナル伝達を阻害する少なくとも1つの化合物と接触される。いくつかの実施形態において、BMPシグナル伝達を刺激する化合物および/または古典的もしくは非古典的Wntシグナル伝達を阻害する化合物と細胞を接触させる工程は、同程度の、EMTの阻害ならびに/または間葉系および/もしくはSC様の特性の阻害を達成しつつ、より少量またはより低濃度のTGFβインヒビターの使用を可能にする。いくつかの実施形態において、本発明のEMT阻害組成物の1つ以上の構成要素と接触した細胞は、例えばインビトロにおいて、遊走または浸潤アッセイを用いて評価されたとき、EMT阻害カクテルと接触していないコントロール細胞よりも低い、遊走能または浸潤能を有する。いくつかの実施形態において、遊走および/または浸潤は、本発明のEMT阻害組成物の1つ以上の構成要素と接触した細胞において、少なくとも10、20、50、100倍またはそれ以上低下される。いくつかの実施形態において、本発明のEMT阻害組成物の1つ以上の構成要素と接触した細胞は、そのように接触していないコントロール細胞よりも低い自己複製能を有する。いくつかの実施形態において、自己複製は、本発明のEMT阻害組成物の1つ以上の構成要素と接触した細胞において、少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90またはそれ以上阻害される。いくつかの実施形態において、本発明のEMT阻害カクテルと接触した形質転換した細胞は、EMT阻害カクテルと接触していないコントロール細胞よりも低い腫瘍開始能を有する。例えば、EMT阻害組成物と接触した形質転換した細胞の腫瘍開始能は、EMT阻害カクテルと接触していないコントロール細胞と比べて、少なくとも20、30、40、50またはそれ以上、例えば、少なくとも2倍、5倍、10倍またはそれ以上低下され得る。いくつかの実施形態において、本発明のEMT阻害カクテルと接触した腫瘍原性細胞は、EMT阻害組成物と接触していないコントロール細胞と比べて、低い転移能を有する。例えば、転移能は、EMT阻害組成物と接触していないコントロール細胞と比べて、少なくとも20、30、40、50またはそれ以上、例えば、少なくとも2倍、5倍、10倍低下され得る。転移または腫瘍形成は、当該分野で公知であるようなインビボ転移アッセイを用いて測定され得る。例えば、転移を測定するために、腫瘍原性細胞を動物宿主に例えば、同所位または皮下に埋め込み得、そして好適な時間が経過した後、第2の位置例えば、肝臓、肺における転移巣の数を評価し得る。病巣の数を、原発腫瘍の重量に基づいて正規化し得る。腫瘍形成能を測定するために、腫瘍原性細胞を、動物宿主に例えば、同所位または皮下に埋め込み得、そして好適な時間が経過した後、形成している腫瘍の数を評価し得る。いくつかの実施形態において、EMTを阻害する方法は、例えば、細胞ベースの治療において使用するための目的の細胞型への幹細胞の定方向分化において、間葉系および/またはSC様の状態からの脱却を促進するために有用である。IV.TGFベータ、BMPもしくはWntシグナル伝達経路を調節する際または細胞接着を乱す際に使用するための化合物一般に、種々の好適な任意の化合物物質とも称されるが、本発明に従って、TGFβ、Wntおよび/またはBMPシグナル伝達経路を調節するために使用され得る。化合物は、例えば、タンパク質この用語は、本明細書中でポリペプチドと交換可能に使用される、小分子、核酸などを含み得る。小分子は、本明細書中で使用されるとき、約2キロダルトンKDa未満の質量の有機分子である。いくつかの実施形態において、小分子は、約1.5KDa未満または約1KDa未満である。いくつかの実施形態において、小分子は、約800ダルトンDa、600Da、500Da、400Da、300Da、200Daまたは100Da未満である。しばしば、小分子は、少なくとも50Daの質量を有する。いくつかの実施形態において、小分子は、非重合体である。いくつかの実施形態において、小分子は、アミノ酸ではない。いくつかの実施形態において、小分子は、ヌクレオチドではない。いくつかの実施形態において、小分子は、サッカライドではない。いくつかの実施形態において、小分子は、複数の炭素-炭素結合を含み、タンパク質との構造上の相互作用例えば、水素結合にとって重要な1つ以上のヘテロ原子および/または1つ以上の官能基、例えば、アミン、カルボニル、ヒドロキシルまたはカルボキシル基を含み得、いくつかの実施形態では、少なくとも2つの官能基を含み得る。小分子は、上記官能基の1つ以上で必要に応じて置換される、1つ以上の環状炭素もしくは複素環式の構造、および/または芳香族もしくは多環芳香族の構造を含むことが多い。本明細書中の目的のポリペプチドは、標準的なアミノ酸天然においてタンパク質中に最もよく見られる20種のL-アミノ酸を含むことが多い。しかしながら、当該分野で公知の例えば、天然に見られるかまたは天然に存在しない他のアミノ酸および/またはアミノ酸アナログも、本発明のある特定の実施形態において使用され得る。ポリペプチド中のアミノ酸例えば、NもしくはC末端または側鎖におけるものの1つ以上が、例えば、アルキル基、炭水化物基、リン酸基、脂質、リンカーなどのような部分の付加、例えば、共有結合によって、改変され得る。ポリペプチドは、例えば、そのポリペプチドの安定性を高めるため、半減期を延長するため、または他の特性を望ましく改変するために、例えば、ポリエチレングリコールなどの部分の付加PEG化によって改変され得る。いくつかの実施形態において、核酸この用語は、ポリヌクレオチドと交換可能に使用されるは、標準的なヌクレオチドA、G、C、T、Uと省略されるを含む。他の実施形態において、核酸は、1つ以上の非標準的なヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、1つ以上のヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログである。核酸は、化学的または生物学的に改変された塩基例えば、メチル化された塩基、改変された糖2’-フルオロリボース、アラビノースまたはヘキソース、改変されたリン酸基例えば、ホスホロチオエートまたは5’-N-ホスホルアミダイト結合、ロックトlocked核酸またはモルホリノを含み得る。いくつかの実施形態において、核酸は、ホスホジエステル結合によって連結されたヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、少なくともいくつかのヌクレオシドは、非ホスホジエステル結合によって連結される。核酸は、一本鎖、二本鎖または部分的に二本鎖であり得る。少なくとも部分的に二本鎖の核酸は、1つ以上のオーバーハング、例えば、5’および/または3’オーバーハングを有し得る。研究目的または治療目的のためのRNA干渉RNAi、アプタマーまたはアンチセンスベースの分子の状況において有用である、当該分野で公知の核酸の改変例えば、ヌクレオシドおよび/または骨格の改変、非標準的なヌクレオチド、送達ビヒクルおよびアプローチなどは、本発明の様々な実施形態において使用するために企図されている。例えば、Crooke,ST編Antisensedrugtechnology:principles,strategies,andapplications,BocaRaton:CRCPress,2008;Kurreck,J.編Therapeuticoligonucleotides,RSCbiomolecularsciences.Cambridge:RoyalSocietyofChemistry,2008を参照のこと。抗体は、免疫グロブリン、および抗原に結合することができる免疫グロブリンドメインを含むその誘導体を包含する。抗体は、哺乳動物または鳥類の種、例えば、ヒト、げっ歯類例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ニワトリなどを起源とし得るか、またはファージディスプレイなどの手法を用いてエキソビボで作製され得る。抗体は、本発明のある特定の実施形態において有用である。抗体は、様々な免疫グロブリンクラス、例えば、IgG、IgM、IgA、IgD、IgEまたはそれらのサブクラス例えば、IgG1、IgG2などのメンバーを含み、様々な実施形態では、抗体フラグメントまたは分子例えば、抗原結合部位を保持している、Fab’、Fab’2、scFv一本鎖可変部分を包含し、1つ以上の可変ドメインVHまたはVLを含む組換え分子を包含する。抗体は、様々な実施形態において、一価、二価または多価であり得る。その抗体は、キメラまたはヒト化抗体であり得る。抗体は、ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい場合がある。RNA干渉intereferenceRNAiは、当該分野で公知であるような種々の方法で、真核細胞、例えば、脊椎動物細胞において発現を阻害するために使用され得る。本明細書中で使用されるとき、用語RNAi物質は、真核細胞においてRNAiを達成するために使用され得る核酸を包含する。例示的なRNAi物質は、低分子干渉RNAsiRNAおよび短ヘアピンRNAshRNAである。当該分野で公知であるように、siRNAは、代表的には、互いにハイブリダイズして二重鎖を形成する2本の別個の核酸鎖を含む。それらは、例えば、標準的な核酸合成法を用いて、または例えばRNaseIIIもしくはダイサーなどのRNaseIII様酵素によるより長いdsRNAの切断によって、インビトロで合成され得る。ある特定の実施形態において、siRNAまたはshRNAは、約15~29ヌクレオチドnt長、例えば、17~25nt長、例えば、19~23nt長の二重鎖部分を含み、ここで、いずれかまたは両方の鎖が、デオキシリボヌクレオチドから構成され得る1~5ヌクレオチド長例えば、2ヌクレオチドの3’オーバーハングを必要に応じて有する。いくつかの実施形態において、それらの鎖は、その二重鎖部分では完全に相補的であるが、他の実施形態では、二重鎖部分は、1つ以上のミスマッチのヌクレオチド対またはバルジを含み得る。いくつかの実施形態において、siRNAの各鎖は、15~29ヌクレオチド長、例えば、19~25nt長、例えば、21~23nt長である。shRNAは、主に自己相補的でない領域によって分断された2つの相補的部分を含む単一の核酸鎖を含む。その相補的部分は、ハイブリダイズして二重鎖構造を形成し、自己相補的でない領域は、その二重鎖の一方の鎖の3’末端と他方の鎖の5’末端とが接続されたループを形成する。shRNAは、細胞内プロセシングを受けてsiRNAを生成し得る。RNAi物質には、マイクロRNAmiRNAおよびmiRNA前駆体も含まれる。本明細書中で使用されるとき、miRNAおよびmiRNA前駆体は、天然に存在する核酸、および天然に存在するmiRNAと類似の様式で機能する人工的に設計された核酸を包含する。ある特定の実施形態において、RNAi物質は、siRNA例えば、互いにハイブリダイズし得る2本の別個の鎖、shRNAまたはマイクロRNA前駆体の転写のための鋳型を含むベクターである。そのようなベクターは、その鋳型を脊椎動物細胞、例えば、哺乳動物細胞に導入するために使用され、siRNA、shRNAまたはmiRNA前駆体の一過性のまたは安定的な発現をもたらし得る。本発明のいくつかの実施形態において、化合物は、天然に存在するポリペプチドを含む。本発明では、ポリペプチドは、それが、天然に見られるポリペプチドのアミノ酸配列を有する場合、天然に存在すると言われる。例えば、天然に見られるポリペプチドと配列が同一である組換え的に産生されたポリペプチドは、天然に存在するポリペプチドであると言われる。TGFb、Wntおよび/またはBMPレセプターの天然に存在するアゴニストは、本発明のある特定の実施形態において、それぞれTGFb、Wntおよび/またはBMP経路を介したシグナル伝達を刺激するために使用され得る。Wntおよび/またはBMPタンパク質の天然に存在するアンタゴニストは、本発明のある特定の実施形態において、それぞれWntおよび/またはBMP経路を介したシグナル伝達を阻害するために使用され得る。いくつかの実施形態において、シグナル伝達経路を刺激する化合物は、不活性なオートクリン物質をプロセシングすることによってそれを活性型に変換するかまたは細胞表面もしくは細胞外マトリックスに結合されるオートクリン物質を放出するプロテアーゼ、あるいはその経路の内因性インヒビターを切断して不活性化するプロテアーゼを含む。例えば、成熟TGF-βが、潜在型の二量体の形態で細胞によって分泌され得ることここで、潜在型は、アミノ末端のプロドメインLAP潜在型関連latency-associatedタンパク質によって引き起こされる、および細胞外マトリックスに結合する潜在型TGF-β1結合タンパク質LTBPに結合され得ることが認識されるだろう。いくつかの実施形態において、ECMからのLAPの除去および/または成熟TGF-Bの放出に関わるプロテアーゼは、TGFbシグナル伝達を刺激する。用語インヒビターは、目的の分子もしくは複合体標的の発現を阻害するおよび/またはそれらの1つ以上の活性を阻害する化合物を包含する。例えば、標的の1つ以上の活性が、ある化合物の存在下においてもしくはそれを使用した結果として、その化合物の非存在下と比べて低下する場合、および/またはその標的のレベルもしくは量が、その化合物の存在下においてもしくはそれを使用した結果として、その化合物の非存在下と比べて減少する場合、その化合物は、標的のインヒビターである。ある特定の実施形態では、インヒビターが標的と物理的に相互作用するという点において、そのインヒビターは、その標的に対して直接作用する。他の実施形態において、インヒビターは、例えば、その標的の合成または活性にとって必要な第2の分子を阻害することによって、間接的に作用する。いくつかの実施形態において、インヒビターは、アンタゴニストである。阻害する方法は、標的の量を減少させる方法および標的の1つ以上の機能を干渉する方法を包含する。いくつかの実施形態において、標的は、その発現または翻訳後プロセシングを阻害するかまたは干渉することによって阻害され、その結果、減少した量の機能性の標的が生成される。本明細書中で使用されるとき、発現は、ポリペプチドの産生に関わる細胞プロセスを包含し、それには、転写、mRNAプロセシングおよび輸送真核細胞の場合ならびにmRNA翻訳が含まれる。発現を阻害するためまたは干渉するために有用な種々の方法が、本発明の実施形態において適用され得る。通常、そのような方法は、mRNAおよび/またはポリペプチドの合成の減少、ならびに結果として、存在する活性の総レベルの低下がもたらされる。他の阻害手段としては、適切な局在化、分泌、または翻訳と同時もしくは翻訳後のプロセシングを干渉すること、あるいは分解の増大を促進することが挙げられる。活性を阻害する方法は、標的またはその標的に対するレセプターもしくはコレセプターに結合し、それにより、その標的が、そのレセプターまたはその標的の活性に必要な他の分子と相互作用するのを阻止することを包含し得る。他の阻害手段としては、酵素の活性部位または触媒残基または基質結合部位に結合すること、二量体化または他のタンパク質間相互作用を阻止することなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、シグナル伝達経路のインヒビターは、その経路のアゴニストを分解するプロテアーゼを含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達経路のインヒビターは、その経路のアゴニストの発現を阻害するかまたはその経路において機能するレセプターの生成を阻害するRNA干渉を介して作用する物質RNAi物質、例えば、siRNAまたはshRNAを含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達経路のインヒビターは、その経路のアゴニストの発現を阻害するかまたはその経路において機能するレセプターの生成を阻害するアンチセンス機構を介して作用する物質を含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達経路のインヒビターは、その経路のアゴニストに結合してそれを阻害するか、またはその経路において機能するレセプターに結合してそれを阻害する、抗体またはアプタマーを含む。本発明において有用なある特定の化合物に関するさらなる詳細は、下記に提供される。当業者は、本発明を実施する際に使用され得る他の化合物を承知しているだろう。TGFbシグナル伝達は、天然に存在するTGFbポリペプチドTGFb1、TGFb2またはTGFb3を用いて刺激され得る。他の実施形態において、TGFシグナル伝達を刺激するために、小分子またはペプチドが使用される。例えば、PCT/US2008/011648WO/2009/051660では、TGFベータシグナル伝達を活性化すると報告されている小分子が開示されている。TGFbシグナル伝達は、種々の任意の化合物およびアプローチを用いて阻害され得る。いくつかの実施形態において、TGFベータインヒビターは、II型TGF-βレセプターの可溶性部分を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、前記ポリペプチドは、異種部分、例えば、Fcドメイン、例えば、可溶性II型TGF-βレセプター:Fc融合タンパク質を含む。別の実施形態において、TGFベータインヒビターは、TGFベータ、例えば、TGFベータに結合する抗体を含み、TGFベータがそのレセプターと相互作用するのを妨げる。例えば、CAT-192およびGC1008は、活性なTGFベータ1に結合するモノクローナル抗体である。別の実施形態において、TGFベータインヒビターは、TGFβレセプターに結合する抗体を含み、TGFベータがそれに結合するのを妨げる。別の実施形態では、TGFbシグナル伝達を阻害するため、例えば、細胞によるTGFまたはTGFβレセプターの産生を阻害するために、核酸例えば、RNAi物質またはアンチセンス物質が使用される。例えば、AP12009は、アンチセンス物質であるTGF-b2インヒビターである。他の実施形態において、TGFベータインヒビターは、小分子である。例えば、その小分子は、TGFベータレセプター、例えば、I型TGFベータレセプター例えば、ALK1またはALK5および/またはII型TGFベータレセプターに結合してそれを阻害し得る。例えば、そのような化合物は、TGFベータI型レセプターキナーゼのATP結合部位または基質結合部位を干渉し得る。いくつかのそのような分子が、当該分野で公知である。例としては、例えば、A83-01、SB431542、SM-16およびLY2109761IおよびII型レセプターの二重のインヒビターおよび構造上関連する化合物が挙げられる。当業者は、他のTGFbインヒビターを承知しているだろう。BMPシグナル伝達は、内因性BMPアンタゴニストまたはその機能性バリアントもしくはフラグメントを用いて阻害され得る。BMPシグナル伝達を阻害する他の化合物が、本発明のある特定の実施形態において使用され得る。例えば、ドルソモルフィンおよびドルソモルフィン誘導体例えば、LDN-193189は、BMPシグナル伝達を阻害する小分子である例えば、Cuny,GDら、BioorganicMedicinalChemistryLetters,18:4388-4392,2008およびその中の参考文献、ならびにPCT/US2009/001606WO2009/114180を参照のこと。他の実施形態において、1つ以上のBMPリガンドおよび/またはI型もしくはII型BMPレセプターの発現は、RNAiまたはアンチセンスアプローチを用いて阻害される。例えば、shRNAまたはsiRNAが、ALK2、ALK3、ALK6、BMPII-R、ACTR-IIAおよび/またはACTR-IIBを阻害するために使用され得る。BMPシグナル伝達は、BMPタンパク質例えば、BMP2、BMP4またはそれらの機能性バリアントを用いて刺激され得る。BMPシグナル伝達はまた、例えば、潜在的にはTribble3のアップレギュレーションに関わる機序によってBMPシグナル伝達を刺激すると報告されているアミロライド誘導体フェナミルなどの小分子を用いても活性化され得るParkKW,Mol.Cell.Biol.29:3905-3914,2009。同様の効果を有するフェナミルの誘導体が合成され得ると予想されることは、当然のことであろう。他の実施形態において、BMPシグナル伝達は、内因性BMPアンタゴニストのインヒビターを用いて刺激される。例えば、そのようなBMPアンタゴニストに対する抗体が使用され得る。1つの実施形態において、Chordin様2またはGremlinに対する抗体が使用される。他の実施形態において、1つ以上の天然に存在するBMPアンタゴニストの合成は、RNAiまたはアンチセンス分子を用いて阻害される。Wntシグナル伝達は、種々のアプローチを用いて阻害され得る。本発明のある特定の実施形態によると、複数のWntファミリーメンバーを阻害することが望ましい場合がある。いくつかの実施形態において、Wnt阻害組成物は、例えば、2つのWntから、目的の細胞または生物によって発現されるWntタンパク質の全構成要素までにわたる、複数のWntタンパク質を阻害することができる化合物を含む。いくつかの実施形態において、Wntシグナル伝達は、1つ以上の内因性Wntアンタゴニスト例えば、SFRPまたはDKKタンパク質を用いて阻害される。例えば、SFRP1が使用され得る。いくつかの実施形態において、少なくとも1つのSFRPファミリーメンバーおよび少なくとも1つのDKKファミリーメンバー、例えば、SFRP1およびDKK1が使用される。Wntを阻害する他のアプローチとしては、複数のWntの翻訳と同時もしくは翻訳後のプロセシング例えば、グリコシル化、脂質化、分泌および/または破壊に関わるタンパク質、あるいは複数のWntと別途相互作用してその活性を促進するタンパク質を阻害することが挙げられる。例えば、ポーキュパインporcupineは、Wntの活性を促進し、そして/またはその活性に必要な、Wntの脂質修飾に関わる小胞体常在性アシルトランスフェラーゼである。したがって、ポーキュパインのインヒビターは、複数のWntタンパク質および経路を阻害し得る。ポーキュパインを阻害するある特定の小分子の説明については、例えば、ChenBら、NatChemBiol.52:100-7,2009を参照のこと。Axinは、Wntの負の制御因子として機能する。Axin複合体を安定化するかまたはその活性を促進する小分子が、古典的Wnt経路を阻害するために使用され得る。Axinを阻害するある特定の小分子の説明については、例えば、LuJら、BioorgMedChemLett,1914:3825-7,2009およびChen,前出を参照のこと。EvennessinterruptedEvi;WntlessWlsおよびSprinterとしても知られるは、特に複数のWntの分泌に必要とされる膜タンパク質であるBaenzigerCら、Cell,1253:509-22,2006。したがって、Wntlessのインヒビターは、複数のWntタンパク質および経路を阻害し得る。当業者は、阻害され得るかまたは複数のWntを阻害するように刺激され得る他のタンパク質を承知しているだろう。Wntシグナル伝達は、種々の異なる方法によって刺激され得る。いくつかの実施形態において、Wntシグナル伝達は、1つ以上の内因性Wntアンタゴニスト例えば、上に記載されたものを阻害することによって活性化される。これらの内因性アンタゴニストは、Wntシグナル伝達を阻害するように機能するので、このアプローチは、脱抑制とも称される。内因性Wntインヒビターは、そのインヒビターに結合してそれがWntレセプターと効率的に相互作用するのを妨げる、抗体、アプタマーまたは小分子などの物質を用いて阻害され得る。他の実施形態において、内因性Wntアンタゴニストの合成および/または分泌は、RNAi物質またはアンチセンスアプローチを用いて阻害される。いくつかの実施形態において、SFRP1は、WAY-316606などのジアリールスルホンスルホンアミドを用いて阻害される。例えば、Moore,WJら、JMedChem.521:105-16,2009を参照のこと。他の実施形態において、SFRP1は、イミノオキソチアゾリジンを用いて阻害される。例えば、ShiMら、BioorgMedChemLett.1922:6337-9,2009を参照のこと。他の実施形態において、Wntシグナル伝達は、必要に応じて細胞を内因性Wntアンタゴニストのインヒビターと接触させることとともに、細胞を1つ以上のWntタンパク質と接触させることによって活性化され得る。可溶性の生物学的に活性なWntタンパク質は、当該分野で公知の方法を用いて精製された形態で調製され得る。例えば、米国特許公開番号20040248803およびWillert,K.ら、Nature.423;448-52,2003を参照のこと。ある特定の実施形態において、その可溶性の生物学的に活性なWntタンパク質は、Wnt5aまたはWnt16Wnt16v1またはWnt16v2である。他の実施形態において、Wntシグナル伝達経路の1つ以上の工程に関わるタンパク質に作用する小分子が使用され得る。例えば、GSK3インヒビターが、古典的Wntシグナル伝達を活性化するために使用され得る。現在、GSK3の多くの強力かつ選択的な小分子インヒビターが同定されているWagmanAS,JohnsonKW,BussiereDE,CurrPharmDes.,1010:1105-37,2004。有用な例示的なGSK3インヒビターとしては、以下が挙げられる;1BIO:強力で可逆性、かつATP競合性のGSK-3インヒビターである、2’Z,3’E-6-ブロモインジルビン-3’-オキシム.6-ブロモインジルビン-3’-オキシムPolychronopoulos,P.ら、J.Med.Chem.47,935-946,2004。2AR-AO14418;N-4-メトキシベンジル-N’-5-ニトロ-1,3-チアゾール-2-イル尿素。AR-A014418は、ATP競合的様式でKi=38nMGSK3を阻害するIC50=104nM。AR-A014418は、cdk2もしくはcdk5IC50>100μΜまたは他の26個のキナーゼを有意に阻害しないことから、GSK3に対する高い特異性が示されるBhat,R.ら、J.Biol.Chem.278,45937-45945,2003。3SB216763:3-2.4-ジクロロフェニルV4-1-メチル-1H-インドール-3-vlV1H-ピロール-2.5-ジオン。例えば、Smith,D.G.ら、Bioorg.Med.Chem.Lett.11,635-639,2001およびCross,D.A.ら、J.Neurochem.77,94-102,2001を参照のこと。4SB415286:3-[3-クロロ-4-ヒドロキシフェニルアミノ]-4-2-ニトロフェニル-1H-ピロール-2,5-ジオン。SB415286は、Smith,D.G.ら、Bioorg.Med.Chem.Lett.11,635-639,2001およびCoughlan,M.P.ら、Chem.Biol.10,793-803,2000に記載されている。5TDZD-8:4-ベンジル-2-メチル-1,2,4-チアジアゾリジン-3,5-ジオン。この化合物は、チアジアゾリジノン誘導体であり、GSK-3βの非ATP競合性インヒビターである、GSK-3の選択的インヒビターであるIC50=2μΜ。これは、>100μMでは、Cdk-1/サイクリンB、CK-II、PKAまたはPKCを阻害しない。GSK-3βのキナーゼ部位に結合すると提唱されているMartinezら、J.Med.Chem.45,1292-1299,2002;CHIR-911およびCHIR-837それぞれCT-99021およびCT-98023とも称されるChironCorporationEmeryville,Calif.ならびに関連化合物が、有用である。塩化リチウム、バルプロ酸ナトリウムおよびGSK3インヒビターIICalbiochemは、他の有用なGSK3インヒビターである。さらなるGSK3インヒビターは、米国特許第6,057,117号および同第6,608,063号;米国特許出願公開20040092535、20040209878、20050054663に記載されている。他の有用なGSK3インヒビターは、WO/2003/049739;WO/2002/085909;WO/2003/011287;WO/2005/039485、および/またはWO/2006/091737に記載されている。Wntシグナル伝達を刺激する有用な化合物および方法の考察については、WO/2009/032194もまた参照のこと。当業者は、複数のWntを刺激するように阻害され得るかまたは刺激され得る、Wntの翻訳と同時もしくは翻訳後のプロセシング、分泌または破壊に関わるタンパク質も承知しているだろう。本発明の方法において化合物が使用される濃度、例えば、細胞培養培地にそのような化合物を加えた後にその中にそれが存在する濃度は、様々であり得る。例えば、好適な範囲は、0.1ng/ml~50,000ng/ml、例えば、1ng/ml~10,000ng/ml、例えば、10ng/ml~2,500ng/mlなどであり得る。特定の濃度は、その物質の効力および独自性、それと併用して使用される他の物質、ならびに所望の結果に依存し得る。ある特定の化合物に対するいくつかの非限定的な濃度は、実施例に提供される。例示的で非限定的な範囲は、様々な実施形態において、そのような濃度の0.1倍~10倍、例えば、0.2倍~5倍または0.5倍~2倍に及び得る。当業者は、TGFβ、WntおよびBMP経路を制御する際、例えば、刺激する際または阻害する際に関わる特定の内因性分子が、種々の細胞型において異なり得ることを認識するだろう。例えば、種々の上皮細胞のタイプが、天然に種々の内因性Wntインヒビターを発現し得る。当業者は、そのような細胞においてEMTを誘導するために、それらのインヒビターから適切なインヒビターを選択し得る。例えば、細胞が、SFRP1ではなく主にSFRP2を発現する場合、SFRP2に対する抗体が、EMTの誘導ならびに/または間葉系およびSC様の状態の維持を促進するように、Wntシグナル伝達を脱抑制するために使用され得る。非古典的経路、例えば、WntCa2経路において、または本発明のある特定の実施形態において、Wntの下流で機能する1つ以上の分子も阻害することもできるだろうし、代わりにそれを阻害することもできるだろう。例えば、JNK/c-Jun経路は、非古典的Wnt経路例えば、Wnt5aの下流およびTGFβの下流で機能する。PKCは、非古典的Wnt経路における下流例えば、Wnt5aの下流で機能する。これらのタンパク質の数多くの小分子インヒビターが、当該分野で公知であり、EMT阻害組成物中で使用され得る。例えば、SP60025およびBI-78D3は、小分子JNKインヒビターである。PKC412およびCGP41251は、小分子PKCインヒビターである。本発明のある特定の方法は、細胞接着を乱す工程を含む。上で述べたように、上皮細胞は、タイトジャンクションおよびアドヘレンスジャンクションなどの細胞間接着複合体によって互いに接着している。本発明のある特定の実施形態において、そのような複合体の形成および/または維持を乱すことは、EMTを促進し、かつ/または間葉系および/もしくはSC様の状態で細胞を維持することを助ける。接着複合体の形成および/または維持は、そのような接着複合体の構成要素であるタンパク質例えば、その細胞外ドメインに結合する抗体と細胞を接触させることによって、乱され得る。例えば、E-カドヘリンアドヘレンスジャンクションタンパク質またはOccludin、Claudin1もしくはClaudin2細胞外ドメインを有するタイトジャンクションタンパク質に結合する抗体が、いくつかの実施形態において使用され得る。接着複合体タンパク質に結合する他の物質例えば、アプタマーも、ある特定の実施形態において使用され得る。これらのタンパク質の1つ以上の産生を阻害するために、RNAiまたはアンチセンス分子が使用され得る。他の実施形態において、接着複合体タンパク質を切断するプロテアーゼが使用される。例えば、マトリクスメタロプロテアーゼまたはカルパインが、いくつかの実施形態において使用され得る。上で論じられたように、本発明のいくつかの実施形態において、天然に存在するポリペプチドが、本発明の組成物および/または方法において使用される。本発明のいくつかの実施形態において、天然に存在するポリペプチドのバリアントが、使用される。ポリペプチドのバリアントには、そのポリペプチドpolypeptodeと比べて1つ以上のアミノ酸の置換、付加または欠失によって異なるポリペプチドが含まれる。例えば、天然に存在するポリペプチドのポリペプチドバリアントには、天然に存在するポリペプチドと比べて1つ以上のアミノ酸の置換、付加または欠失によって異なるポリペプチドが含まれる。付加は、ポリペプチド内への挿入またはNもしくはC末端における付加であり得る。いくつかの実施形態において、置換、欠失または付加されたアミノ酸の数は、例えば、約1~30個、例えば、約1~20個、例えば、約1~10個、例えば、約1~5個、例えば、1、2、3、4または5個であり得る。特定のタンパク質に対する参照配列の天然に存在する対立遺伝子バリアントが、その集団内に存在し得ること、およびそのようなバリアントが、本発明のある特定の実施形態において使用され得ることが認識されるだろう。本明細書中に包含されるスプライスバリアントが存在し得ることも認識されるだろう。いくつかの実施形態において、ポリペプチドバリアントは、その配列が、少なくとも50アミノ酸、少なくとも100アミノ酸、少なくとも150アミノ酸にわたって、またはそのポリペプチドの全長にわたって、そのポリペプチドの配列と相同であるが、そのポリペプチドの配列と同一ではないポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドバリアントは、そのポリペプチドの少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99または100にわたって、そのポリペプチドと少なくとも70、75、80、85、90、95、96、97、98、99またはそれ以上同一であるポリペプチドを含む。例えば、いくつかの実施形態において、ポリペプチドバリアントは、その配列が、少なくとも50アミノ酸、少なくとも100アミノ酸、少なくとも150アミノ酸にわたって、または天然に存在するポリペプチドの全長にわたってその天然に存在するポリペプチドの配列と相同であるが、その天然に存在するポリペプチドの配列と同一ではないポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドバリアントは、その天然に存在するポリペプチドの少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99または100にわたって、その天然に存在するポリペプチドと少なくとも70、75、80、85、90、95、96、97、98、99またはそれ以上同一であるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチドのフラグメントを含むか、またはそれからなる。フラグメントは、天然に存在するポリペプチドよりも短く、かつそのフラグメントの長さにわたって天然に存在するポリペプチドと同一である。いくつかの実施形態において、フラグメントは、天然に存在するポリペプチドの少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98または99の長さである。いくつかの実施形態において、天然に存在するポリペプチドのC末端における1つ以上のアミノ酸が、欠失されている。いくつかの実施形態において、N末端における1つ以上のアミノ酸が欠失されている。目的の配列Aと第2の配列Bとの間の同一性パーセントは、それらの配列をアラインメントし、同一性が最大になるようにギャップを導入し、向かい側で同一残基である残基ヌクレオチドまたはアミノ酸の数を決定し、TGAおよびTGBここで、TGAおよびTGBは、アラインメントしたときの配列AおよびBにおける残基および内部のギャップの位置の数の合計であるの最小数で除して、100を乗じることによって、計算され得る。特定の同一性パーセントを達成するために必要な同一の残基の数を計算するとき、端数は、最も近い整数に丸める。当業者は、配列のアラインメントおよび/または同一性パーセントの決定のために使用され得る種々のコンピュータプログラムを承知しているだろう。例えば、BLAST2、BLASTN、BLASTP、GappedBLASTなどのようなコンピュータプログラムが、アラインメントを生成する。KarlinandAltschul,Proc.Natl.AcadSci.USA90:5873-5877,1993におけるように改変されたKarlinおよびAltschulのアルゴリズムKarlinandAltschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:22264-2268,1990は、AltschulらAltschulら、J.Mol.Biol.215:403-410,1990のNBLASTおよびXBLASTプログラムに組み込まれている。いくつかの実施形態において、比較する目的でギャップが挿入されたアラインメントを得るために、GappedBLASTが、AltschulらAltschulら、NucleicAcidsRes.25:3389-3402,1997に記載されているように利用される。BLASTおよびGappedBLASTプログラムを利用するとき、それぞれのプログラムのデフォルトのパラメータが使用され得る。URLwww.ncbi.nlm.nih.govを有するウェブサイトを参照のこと。他の好適なプログラムとしては、CLUSTALWThompsonJD,HigginsDG,GibsonTJ,NucAcRes,22:4673-4680,1994およびGAPGCGVersion9.1;これはNeedlemanWunsch,1970アルゴリズムNeedlemanSB,WunschCD,JMolBiol,48:443-453,1970を実装しているが挙げられる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドバリアントは、機能性バリアントであり、すなわち、このバリアントは、目的の天然に存在するポリペプチドまたは天然に存在しないポリペプチドの少なくとも1つの生物学的活性を少なくとも部分的に保持している。いくつかの実施形態において、機能性バリアントは、そのポリペプチド、例えば、天然に存在するポリペプチドの活性の少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、96、97、98、99またはそれ以上の活性、例えば、ほぼ等しい活性を保持する。いくつかの実施形態において、機能性バリアントは、天然に存在するポリペプチドよりも高い活性を有し得る。当業者は、本明細書中の目的のポリペプチドの機能性バリアントまたはフラグメントを容易に作製し得る。例えば、活性にとって重要な様々な残基およびドメインの同定、ならびに活性を有意に低下させずに変更され得る様々な残基に関する情報、ならびに他のポリペプチドとのアラインメントおよび場合によっては構造の情報が入手可能である。そのような情報がまだ利用可能でない場合、同様の解析が、他のタンパク質に対して容易に行われ得る。その情報は、機能性バリアントおよびフラグメントを設計するために使用され得る。多くのタンパク質が複数のドメインを含み、それらのドメインの1つ以上が、目的の生物学的活性に関与し得ることが認識されるだろう。当業者は、例えば、欠失解析を用いて、またはキメラタンパク質を作製して特定の活性が2つ以上の異なるタンパク質間で異なる場合、そのようなドメインを容易に同定し得る。したがって、例えば、完全長ポリペプチドではなく、機能性ドメインを含むポリペプチドが、使用され得る。例えば、特定の標的への結合に関与するドメインが、ある特定の実施形態において、その標的に結合する目的のために使用され得る。いくつかの実施形態において、バリアントは、天然に存在するポリペプチドと比べて、1つ以上の保存的なアミノ酸置換を含む。保存的置換は、関わる残基の側鎖サイズ、極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および/または両親媒性の性質の類似性に基づいて行われ得る。当該分野で公知であるように、そのような置換は、一般に、非保存的置換と比べて活性を保持するバリアントをもたらす可能性が高い。1つの実施形態において、アミノ酸は、以下の通り分類される:特別:C中性および小型:A、G、P、S、T極性および比較的小型:N、D、Q、E極性および比較的大型:R、H、K非極性および比較的小型:I、L、M、V非極性のおよび比較的大型:F、W、Y特別:C。例えば、Zhang,J.J.Mol.Evol.50:56-68,2000を参照のこと。いくつかの実施形態において、プロリンPは、第2の特別なアミノ酸としてそれ自体の群に入れられると考えられる。特定の群の中で、ある特定の置換、例えば、イソロイシンによるロイシンまたはその逆、トレオニンによるセリンまたはその逆またはグリシンによるアラニンまたはその逆の置換が、特に興味深い場合がある。当然のことながら、非保存的置換も同様に、機能の保持と両立可能であることが多い。いくつかの実施形態において、置換または欠失は、活性にとって重要であると当該分野で公知のアミノ酸を変更しないかまたは欠失させない。いくつかの実施形態において、変更は、種々の哺乳動物種間で高度に保存されていないアミノ酸において行われる。いくつかの実施形態において、置換は、あるアミノ酸を、種々の種において対応する位置に存在するアミノ酸に変更させる。いくつかの実施形態において、機能性バリアントは、例えば、天然に存在するポリペプチドの全長の少なくとも70、75、80、85、90、95、96、97、98、99または100にわたって、その天然に存在するポリペプチドと少なくとも95、96、97、98、99または100同一のポリペプチドを含む。所望であれば、ポリペプチドバリアントは、任意の好適な方法を用いて活性を評価するために、無細胞アッセイおよび/もしくは細胞ベースのアッセイにおいて、またはインビボで、試験され得る。例えば、結合活性を評価する数多くの方法が、当該分野で公知である。天然に存在する特定のタンパク質が、本明細書中に記載されるおよび/または特許請求される本発明の組成物および/または方法において言及される場合、そのような組成物および/または方法は、別段示されない限り例えば、特定の配列番号またはアクセッション番号を列挙することによってまたは別段文脈から明らかでない限り、そのようなタンパク質例えば、SequeneIDNOまたはアクセッション番号によって定義されるものが使用される実施形態、およびそのようなタンパク質の機能性バリアントが使用される実施形態を包含することも理解されるべきである。本出願人は、請求項を、任意の範囲のバリアントおよび/または任意の特定の配列に限定する権利を留保している。いくつかの実施形態において、天然に存在するポリペプチドのバリアントは、異種ポリペプチド部分を含む。その異種部分は、天然に存在するポリペプチドに存在しないかまたはそれと相同でない配列を有することが多い。異種部分は、例えば、5~約5,000アミノ酸長またはそれ以上であり得る。それは、5~約1,000アミノ酸長であることが多い。いくつかの実施形態において、異種部分は、異なるポリペプチドに見られる配列、例えば、機能ドメインを含む。いくつかの実施形態において、異種部分は、ポリペプチドを精製するため、発現させるため、可溶化するためおよび/または検出するために有用な配列を含む。いくつかの実施形態において、異種部分は、ポリペプチドタグ、例えば、親和性タグまたはエピトープタグを含む。例えば、そのタグは、親和性タグ例えば、HA、TAP、Myc、6XHis、Flag、GST、蛍光または発光タンパク質例えば、EGFP、ECFP、EYFP、Cerulean、DsRed、mCherry、溶解性向上タグ例えば、SUMOタグ、NUSAタグ、SNUTタグ、またはバクテリオファージT7のOcrタンパク質の単量体変異体であり得る。例えば、EspositoDandChatterjeeD.CurrOpinBiotechnol.;174:353-82006を参照のこと。いくつかの実施形態において、タグは、複数の機能を果たし得る。タグは、比較的小さい例えば、数アミノ酸から約100アミノ酸長までの範囲であることが多い。いくつかの実施形態において、タグは、100アミノ酸長より長い、例えば、約500アミノ酸長まで、またはそれ以上である。いくつかの実施形態において、タグは、NまたはC末端に、例えば、NまたはC末端融合物として、配置される。上記ポリペプチドは、複数のタグを含み得る。いくつかの実施形態において、6XHisタグおよびNUSタグが、例えば、N末端に、存在する。いくつかの実施形態において、タグは、切断可能であり、例えば、プロテアーゼによってポリペプチドから除去され得る。いくつかの実施形態において、これは、タグをコードする配列とそのポリペプチドの残りの部分をコードする配列との間にプロテアーゼ切断部位をコードする配列を含めることによって達成される。例示的なプロテアーゼとしては、例えば、トロンビン、TEVプロテアーゼ、Xa因子、PreScissionプロテアーゼなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、自己切断型タグが使用される。例えば、PCT/US05/05763を参照のこと。タグをコードする配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して5’または3’またはその両方に配置され得る。いくつかの実施形態において、タグまたは他の異種配列は、ポリペプチドリンカーによってポリペプチドの残りの部分と分断される。例えば、リンカーは、短いポリペプチド例えば、15~25アミノ酸であり得る。リンカーは、小型のアミノ酸残基例えば、セリン、グリシンおよび/またはアラニンから構成されることが多い。異種ドメインは、膜貫通ドメイン、分泌シグナルドメインなどを含み得る。いくつかの実施形態において、異種ドメインは、ポリペプチドの安定性を高めるか、またはそのインビボ半減期を延長する。例示的な相同ドメインとしては、例えば、アルブミン、アルブミン結合ペプチド、免疫グロブリンのFcドメインなどが挙げられる。他の実施形態において、バリアントは、内因性アンタゴニストによる阻害に対して低い感受性を有し得る。例えば、内因性WntまたはBMPアンタゴニストと天然に存在するWntまたはBMPとの結合において役割を果たすアミノ酸に変更を有するWntまたはBMPバリアントが作製され得る。一般に、TGFβ、BMPおよび/もしくはWntシグナル伝達経路を調節するため、または細胞接着を乱すために有用な化合物は、任意の好適な方法を用いて作製され得るか、または得ることができる。いくつかの実施形態では、本発明において有用なタンパク質は、組換えDNA技術を用いて作製される。天然に存在するポリペプチドをコードする核酸は、例えば、そのポリペプチドを発現する細胞から例えば、PCRもしくは他の増幅方法によって、またはクローニングによって、または公知のポリペプチド配列に基づく合成によって、容易に得ることができる。代表的には、その核酸を、好適なベクター例えば、プラスミドまたはウイルスに挿入し、次いでそれを適切な宿主細胞様々な実施形態において、原核生物または真核生物であり得るに導入する。その宿主細胞を、そのポリペプチドの産生に適した条件下で維持する。グリコシル化などの修飾を受けるタンパク質の場合、当業者は、適切な修飾を行う宿主細胞を選択し得る。例えば、哺乳動物細胞または他の真核細胞が使用され得る。当業者は、遺伝暗号の縮重に起因して数多くの異なる核酸配列が所望のポリペプチドをコードし得ることを知っているだろう。必要に応じて、最適な宿主細胞における発現のために、配列がコドン最適化される。特定のバリアントをコードする核酸nucleicは、例えば、部位特異的突然変異誘発を用いてまたは他の標準的な方法によって、例えば、天然に存在する配列を改変することによって、容易に作製され得る。いくつかの実施形態において、所望のタンパク質は、所望のタンパク質を分泌する天然にまたは遺伝的改変の結果として細胞を培養するために使用された細胞培養培地などの起源から少なくとも部分的に精製される。化学合成、タンパク質ライゲーションなどのような他のタンパク質作製方法が、ある特定の実施形態において使用され得る。通常、本明細書中の目的の化合物または細胞は、精製され得る。精製とは、天然において関連する構成要素の大部分から分離されたときまたは初めから生成されたときの物質または実体例えば、化合物のことを指す。一般に、そのような精製は、人間の手による実行を含む。精製された物質または実体は、部分的に精製されていてもよいし、実質的に精製されていてもよいし、純粋であってもよい。そのような物質または実体は、例えば、少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99または99超純粋であり得る。いくつかの実施形態において、核酸またはポリペプチドは、それらが、調製物中に存在するそれぞれ全核酸材料または全ポリペプチド材料の少なくとも75、80、85、90、95、96、97、98、99またはそれ以上を構成するように、精製される。純度は、例えば、乾燥重量、クロマトグラフィーによる追跡におけるピークのサイズ、分子の存在量、ゲル上のバンドの強度、もしくは分子の存在量と相関する任意のシグナルの強度、または当該分野で認められている任意の定量方法に基づき得る。いくつかの実施形態において、水、緩衝液、イオンおよび/または小分子例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸などの前駆体が、必要に応じて、精製された調製物中に存在し得る。精製された分子は、それを他の物質例えば、他の細胞材料から分離することによって、または所望の純度を達成するような様式でそれを生成することによって、調製され得る。いくつかの実施形態において、精製された分子または組成物とは、当該分野で認められている任意の精製方法を用いて調製された分子または組成物のことを指す。いくつかの実施形態において、部分的に精製されたは、細胞によって産生された分子が、もはやその細胞内に存在しないこと、例えば、その細胞が、溶解され、必要に応じて、その細胞材料例えば、細胞壁、細胞膜、細胞小器官の少なくともいくらかが除去されたことを意味する。細胞を含む組成物の状況では、様々な実施形態において、それらの細胞の少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99または99超が、特定のタイプであり得、かつ/または特定のマーカー発現プロファイル、表現型の特徴などを有し得る。本明細書中の化合物および組成物が、所望の生物学的効果および/または治療効果を達成するのに有効な量で本発明の方法において使用され得ることが理解されるだろう。V.培養培地およびキット本発明はさらに、本発明のEMT誘導組成物または本発明のEMT阻害組成物を含む組成物を提供し、ここで、その組成物はさらに、細胞培養培地または少なくともいくつかの細胞培養培地構成要素を含む。種々の細胞培養培地のうちのいずれかが使用され得る。例示的な細胞培養培地としては、例えば、MEGM、DMEM、Ham’sF-12およびそれらの混合物が挙げられる。当業者は、そのような培養培地の構成要素例えば、栄養分例えば、糖およびアミノ酸、ビタミン、微量元素、イオン、脂質、ホルモン、成長因子および他の標準的な細胞培養培地成分などおよびそれを調製するための方法を承知しているだろう。例えば、Freshney,前出を参照のこと。当業者は、細胞培養培地の様々な構成要素の多くの正確な量が、その培養培地が細胞の成長を助ける能力に悪影響を及ぼさずに、変更され得ることを認識するだろう。例えば、培養培地は、様々な実施形態において、0.1~100倍の濃度の任意の1つ以上の構成要素を含み得る。いくつかの実施形態において、培養培地は、目的の上皮細胞型の培養に適している。したがって、本発明は、EMTの誘導のために上皮細胞を培養すること、および/または間葉系細胞を間葉系の状態で維持するためにそのような細胞を培養することに適した細胞培養培地を提供する。本発明は、種々のキットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書中に記載されるようにEMTを誘導するためおよび/または維持するために有用な物質の一群を備える。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書中に記載されるようにEMTを阻害するために有用な物質の一群を備える。任意の物質の組み合わせが、提供され得る。簡潔にする目的で、その様々な組み合わせは、個別に列挙されない。それらの物質は、個別の容器、例えば、チューブに包装され得る。所望であれば、適合する物質を、同じ容器内に一緒に包装してもよい。いくつかの実施形態において、そのキットの一部として、またはそのキットとともにinconjuctionwith、細胞が提供される。他のキット構成要素としては、例えば、上皮細胞に特徴的または間葉系細胞もしくはSC様細胞に特徴的な1つ以上のマーカーの発現を検出するために有用な試薬例えば、抗体、レポータープラスミド、プローブ、プライマーが挙げられ得る。上記のいずれのキットも、使用するための指示書を備え得る。VI.用途本明細書中に記載される組成物および/または方法は、種々の異なる用途において使用法が見出されており、その用途は、本発明の態様である。例示的かつ非限定的な用途が、この項に記載される。1.スクリーニング法本発明に従ってEMTを起こすように誘導された細胞は、化合物を同定するためおよび/または特徴付けるための種々の異なる方法において使用され得る。例えば、細胞を、EMT誘導組成物またはEMT阻害組成物の構成要素のすべてではないがいくつかおよび被験化合物と接触し得る。その被験化合物が、組成物から取り除かれた化合物の活性を提供する能力が、評価される。このように、EMTを誘導するためまたは阻害するために有用な追加の化合物が同定され得る。いくつかの態様において、本発明は、EMTを促進する化合物を同定する方法を提供する。いくつかの実施形態において、その方法は、i以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物;bBMP経路のシグナル伝達を阻害する化合物;c古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;d非古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびe細胞接着を乱す化合物のうちの少なくとも2つ、またはいくつかの実施形態では少なくとも3つ、またはいくつかの実施形態では少なくとも4つの各々から選択される1つ以上の化合物ならびに被験化合物と単離された上皮細胞とを接触させる工程;ならびにiiそれらの細胞をEMTの証拠について評価する工程を包含し、ここで、それらの細胞が、好適なコントロールと比べて、EMTを起こしたという強い証拠を示す場合、その化合物は、EMTを促進する化合物と同定される。このように、例えば、EMTを誘導するのに寄与する化合物例えば、小分子が同定され得る。いくつかの態様において、本発明の方法は、TGFβシグナル伝達を刺激する、BMPシグナル伝達を阻害する、古典的Wntシグナル伝達を刺激する例えば、脱抑制する、非古典的Wntシグナル伝達を活性化する、細胞接着を阻害する例えば、アドヘレンスジャンクションの形成を阻止する、および/または他の機構によって作用する、物質を同定する。そのような化合物は、いったん同定されると、TGFβシグナル伝達を刺激すること、BMPシグナル伝達を阻害すること、古典的Wntシグナル伝達を刺激する例えば、脱抑制すること、非古典的Wntシグナル伝達を活性化すること、および/またはアドヘレンスジャンクションの形成を阻止することが望まれる他の方法において使用され得る。他の態様において、本発明は、EMTを阻害する化合物を同定する方法を提供する。いくつかの実施形態において、その方法は、i以下の群:aTGF-ベータ経路のシグナル伝達を刺激する化合物;bBMP経路のシグナル伝達を阻害する化合物;c古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;d非古典的Wnt経路のシグナル伝達を刺激する化合物;およびe細胞接着を乱す化合物のうちの少なくとも2つ、またはいくつかの実施形態では少なくとも3つ、またはいくつかの実施形態では少なくとも4つの各々、またはいくつかの実施形態ではその各々から選択される1つ以上の化合物ならびに被験化合物と単離された上皮細胞とを接触させる工程;ならびにiiそれらの細胞をEMTの証拠について評価する工程を包含し、ここで、それらの細胞が、好適なコントロールと比べて、EMTを起こしたという弱い証拠を示す場合、その化合物は、EMTを阻害する化合物と同定される。いくつかの実施形態において、上皮細胞は、工程iの他の化合物と接触する前に、被験化合物で前処理される。被験化合物は、上記細胞が他の化合物と接触する際に存在してもよいし、しなくてもよい。いくつかの実施形態において、この方法は、TGF-ベータ経路のシグナル伝達を阻害する化合物、BMP経路のシグナル伝達を刺激する、古典的および/もしくは非古典的Wnt経路のシグナル伝達を阻害する、細胞接着を促進する、ならびに/または他の機構によって作用する化合物を同定し得る。そのような化合物は、いったん同定されると、特定の活性が望まれる他の方法において使用され得る。上記方法または本発明の他の方法においてEMTの証拠について細胞を評価するために、例えば、EMTTF例えば、Zeb1、Zeb2、Twistなどおよび/または間葉系マーカー例えば、N-カドヘリン、ビメンチンなどの誘導が調べられ得る。例えば、いくつかの実施形態では、被験化合物を含む化合物の組み合わせと接触した細胞の集団において、好適なコントロールと比べて、少なくとも1つのEMT関連TFの、例えば、少なくとも5倍、10倍、20倍、50倍または100倍のアップレギュレーションは、その化合物がEMTを促進することを示唆する。いくつかの実施形態では、被験化合物を含む化合物の組み合わせと接触した細胞の集団において、好適なコントロールと比べて、少なくとも1つのEMT関連TFの、例えば、少なくとも5倍、10倍、20倍、50倍または100倍のダウンレギュレーションは、その化合物がEMTを阻害することを示唆する。その代わりにまたはさらに、EMTを起こした細胞において高められた運動性または自己複製能などの特性が調べられ得る。その代わりにまたはさらに、細胞が上皮の特徴の変化減少または増加を示す程度が測定され得る。例えば、EMTを起こした細胞は、マーカー例えば、E-カドヘリン、上皮サイトケラチンなどの発現の低下を示す。いくつかの実施形態において、マーカーの発現は、少なくとも5倍、10倍、20倍またはそれ以上減少する。本発明のいくつかの実施形態において、上皮細胞は、CD44低かつCD24高である一方、EMTを起こした細胞は、CD44高かつCD24低である。細胞のマーカーパターンは、細胞蛍光励起細胞分取および免疫組織化学などのような手法によって、容易に測定され得ることが認識されるだろう。理解されるundertoodように、細胞マーカーおよびその発現レベルに関して、neg-とは、そのマーカーの発現がないこともしくは無視できるほどであることまたは低レベルであることを指し、posとは、強い発現のことを指す。細胞マーカーの発現がnegからposに変化することは、発現していない状態または低レベルの発現から、高レベルまたはより高いレベルの発現に変化することを表す。したがって、低とは、低レベルを指し、高とは、容易に検出可能なレベルおよび高レベルの発現を指し、低発現と高発現との差異、および/または低発現レベルから高発現レベルへ、もしくは高発現レベルから低発現レベルへの変化は、容易に当業者に明らかであろう。上記方法に対する好適なコントロールは、例えば、EMTを起こした証拠が、被験化合物の非存在下においてまたは有意に少ない量の被験化合物の存在下において工程iの同じ組み合わせの化合物と接触した同じタイプの細胞によって示される程度であり得る。いったん、被験化合物の非存在下において生じ得るEMTのレベルが確立されると、被験化合物のスクリーニングと平行してその方法をコントロール細胞において行う必要がない可能性があると理解されるだろう。EMTを阻害する化合物は、例えば、EMTに関連する状態例えば、本明細書中で論じられる状態および/または当該分野で公知の状態の処置において、種々の使用法を有する。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、EMTの誘導および/または維持に関わる1つ以上のオートクリンシグナル伝達経路を混乱させる化合物は、そのような目的のために特に効果的であり得る。これらの経路の少なくとも1つを混乱させる化合物の各々は、組み合わせて使用されるとき、EMTの阻害において相乗効果を有し得る。いくつかの実施形態において、本発明のEMT誘導方法を用いてEMTを起こすように誘導された細胞は、癌幹細胞CSCを標的とする化合物を同定するスクリーニングにおいて使用される。例えば、PCT/US2009/002254WO/2009/126310を参照のこと。例えば、本発明は、化合物が癌幹細胞の成長および/または生存を阻害する能力を試験するための方法を提供し、その方法は、a1つ以上の被験細胞をその化合物と接触させる工程ここで、その1つ以上の被験細胞は、本発明に従って誘導されたEMTを起こしているならびにbその化合物による1つ以上の被験細胞の成長および/または生存の阻害のレベルを検出する工程を包含する。いくつかの実施形態において、被験細胞は、上皮細胞、例えば、形質転換した上皮細胞である。いくつかの実施形態において、上記方法はさらに、1つ以上のコントロール細胞を上記化合物と接触させる工程、ならびにその化合物による1つ以上のコントロール細胞の成長および/または生存の阻害のレベルを検出する工程を包含する。いくつかの実施形態において、その1つ以上のコントロール細胞は、EMTを起こしていない上皮細胞、例えば、本発明のEMT誘導組成物と接触していないかまたは別途EMTを起こすように誘導されていない細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記方法は、a1つ以上の被験細胞および1つ以上のコントロール細胞を化合物と接触させる工程ここで、その1つ以上の被験細胞は、本発明に従って誘導された上皮から間葉系への転換を起こしており、1つ以上のコントロール細胞は、EMTを起こしていない、bその化合物による1つ以上の被験細胞およびコントロール細胞の成長および/または生存の阻害のレベルを検出する工程;ならびにcその化合物が、被験細胞の成長および/または生存に対してコントロール細胞よりも大きな抑制効果を有する場合、その化合物をCSC選択的化学療法剤候補と同定する工程を包含する。多種多様の被験化合物が、本発明の方法において使用され得る。例えば、被験化合物は、小分子、ポリペプチド、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、脂質、炭水化物またはハイブリッド分子であり得る。化合物は、自然源から得ることができるか、または合成的に作製することができる。化合物は、少なくとも部分的に純粋であり得るか、または抽出物中もしくは他のタイプの混合物中に存在し得る。抽出物またはその画分は、例えば、植物、動物、微生物、海洋生物、発酵ブロス例えば、土壌、細菌または真菌の発酵ブロスなどから生成され得る。いくつかの実施形態において、化合物コレクションライブラリーが試験される。そのライブラリーは、例えば、100~500,000種の化合物またはそれ以上を含み得る。化合物は、マルチウェルmultwellプレートに整列されていることが多い。それらは、溶媒例えば、DMSOに溶解され得るか、または乾燥した形態で例えば、粉末または固体として提供され得る。合成、半合成および/または天然に存在する化合物の一群が試験され得る。化合物ライブラリーは、構造的に関係するか、構造的に異なるかまたは構造的に無関係の化合物を含み得る。化合物は、人工的な人間によって発明され、天然では見られない構造を有するものであってもよいし、天然に存在するものであってもよい。いくつかの実施形態において、ライブラリーは、他の創薬プログラムにおいてヒットもしくはリードと同定された少なくともいくつかの化合物および/またはそれらの誘導体を含む。化合物ライブラリーは、天然物、および/または非特異的non-directedもしくは特異的なdirected有機合成化学を用いて生成された化合物を含み得る。化合物ライブラリーは、小分子ライブラリーであることが多い。興味深い他のライブラリーとしては、ペプチドまたはペプトイドライブラリー、cDNAライブラリーおよびオリゴヌクレオチドライブラリーが挙げられる。ライブラリーは、絞り込まれている場合がある例えば、主に、同じコア構造を有するか、同じ前駆体に由来するか、または少なくとも1つの共通の生化学的活性を有する化合物から構成されている場合がある。化合物ライブラリーは、いくつかの商業的供給業者例えば、TocrisBioscience、Nanosyn、BioFocusおよび行政機関から入手可能である。例えば、U.S.NationalInstitutesofHealthNIHMolecularLibrariesProgramの構成機関であるMolecularLibrariesSmallMoleculeRepositoryMLSMRは、例えばハイスループットスクリーニングHTSアッセイにおいて使用するための、既知および未知の生物学的活性を有する>300,000種の化学的に異なる化合物のコレクションを同定するため、取得するため、維持するため、および配布するために計画されたhttps://mli.nih.gov/mli/を参照のこと。NIHClinicalCollectionNCCは、ヒト臨床試験において有用な履歴を有するおよそ450種の小分子のプレーティングされたアレイである。これらの化合物は、公知の安全性プロファイルで、非常に薬物に似ている。そのNCCコレクションは、6枚の96ウェルプレートに整列されている。50μlの各化合物が、100DMSO中のおよそ10mM溶液として、供給されている。いくつかの実施形態において、承認されたヒト用薬物を含む化合物の一群が試験される。承認されたヒト用薬物は、政府の規制当局例えば、USFoodandDrugAdministration、EuropeanMedicinesEvaluationAgency、またはそれらの販売が可能になる前に少なくともその治療薬の安全性の評価に関与する同様の機関によってヒトを処置する際の使用が承認された化合物である。被験化合物は、例えば、抗新生物薬、抗菌薬、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗原虫薬、抗寄生虫薬、抗うつ薬、抗精神病薬、麻酔薬、抗狭心症薬、抗高血圧薬、抗不整脈薬、抗炎症薬、鎮痛薬、抗血栓薬、制吐薬、免疫調節剤、抗糖尿病薬、脂質もしくはコレステロール低下薬例えば、スタチン、抗痙攣薬、抗凝固薬、抗不安薬、催眠薬睡眠導入薬、ホルモン薬または抗ホルモン薬などであり得る。いくつかの実施形態において、化合物は、少なくともいくらかの前臨床もしくは臨床開発を経ているか、または薬物様の特性を有すると判断されているかもしくは予測されている、化合物である。例えば、被験化合物は、第I相治験または非ヒト動物における少なくとも前臨床試験を完了しており、安全性および耐容性の証拠が示されている場合がある。いくつかの実施形態において、被験化合物は、その化合物が投与され得る生物の細胞またはその化合物が試験され得る細胞にとって、使用される濃度において、またはいくつかの実施形態では、使用される濃度よりも最大10倍、100倍もしくは1,000倍高い濃度において、実質的に無毒性である。例えば、細胞の生存率および/もしくは増殖に対して統計学的に有意な影響がない可能性があるか、または生存率もしくは増殖の減少は、様々な実施形態において、わずか1、5もしくは10であり得る。細胞傷害性および/または細胞増殖に対する影響は、種々の任意のアッセイを用いて評価され得る。例えば、細胞代謝アッセイ例えば、AlamarBlue、MTT、MTS、XTTおよびCellTitreGloアッセイ、細胞膜完全性アッセイ、ATPベースの細胞生存能力アッセイ、ミトコンドリアレダクターゼ活性アッセイ、BrdU、EdUまたはH3-チミジン取り込みアッセイが、使用され得る。他の実施形態において、少なくともいくらかの細胞傷害性が、許容可能であり得るか、またはいくつかの実施形態では、望ましいだろう。例えば、非癌性細胞と比べて癌幹細胞に対して差次的な細胞傷害性を示す化合物が、著しく興味深いだろう。いくつかの実施形態において、被験化合物は、当該分野において公知であるかもしくは使用されている細胞培養培地中、例えば、脊椎動物、例えば、哺乳動物の細胞の培養に適した培養培地中に見られる化合物ではないか、またはその被験化合物が、当該分野において公知であるかもしくは使用されている細胞培養培地中に見られる化合物である場合、その被験化合物は、本発明の方法において使用される際、異なる濃度、例えば、より高い濃度で使用される。本発明の化合物のスクリーニングおよび/または特徴づけの任意の方法のいくつかの態様において、被験化合物は、所定の用量で被験細胞および必要に応じてコントロール細胞と接触される。1つの実施形態において、その用量は、最大約1nMであり得る。別の実施形態において、その用量は、約1nM~約100nMであり得る。別の実施形態において、その用量は、約100nM~約10μMであり得る。別の実施形態において、その用量は、10μM以上、例えば、10μM~100μMであり得る。適切な時間、必要に応じて所定の時間にわたってインキュベートした後、その被験細胞における目的のパラメーターparamterに対する化合物または組成物の作用が、当業者に公知の、例えば、本明細書中に記載されるような、適切な方法によって測定される。細胞は、様々な時間にわたって化合物と接触され得る。ある特定の実施形態において、細胞は、12時間~20日間、例えば、1~10日間、2~5日間またはその間の任意の範囲もしくは特定の値にわたって接触される。細胞は、一過性にまたは持続的に接触され得る。所望であれば、その化合物は、細胞に対する作用を評価する前に除去され得る。2.前駆細胞の調製および使用いくつかの態様において、本発明は、前駆細胞を調製する方法を提供し、その方法は、上に記載されたようなEMTを起こすように上皮細胞を誘導する工程を包含する。1つの態様において、前駆細胞は、上皮細胞の少なくともいくつかがEMTを起こすように十分な時間にわたってそれらの細胞を本発明のEMT誘導組成物と接触させることにより前駆細胞を産生することによって、産生される。その方法はさらに、EMTを起こし、かつ前駆細胞の特性を示す細胞を、EMTを起こしていない細胞から、例えばマーカーの発現に基づいて、分離する工程を包含し得る。本明細書中に記載されるように調製される前駆細胞は、本発明の一態様であり、種々の使用法を有する。そのような使用法としては、正常な上皮細胞に由来する前駆細胞またはそのような前駆細胞に由来する分化細胞が被験体に移植されるかまたは埋め込まれる例えば、さらに下記に記載されるように細胞ベースの治療、治療的な分子または生物学的に活性な分子の生物学的活性を前駆細胞において評価するためもしくはスクリーニングするための方法、前駆細胞の成長、維持および/もしくは分化において使用するための新しいおよび/または改善された手順および化合物を同定するための方法、ならびに/または前駆細胞に由来する産物例えば、内因性タンパク質、組換えタンパク質、ペプチド、融合ポリペプチドなどの製造を含む生成のための方法が挙げられる。治療的な分子または生物学的に活性な分子の生物学的活性を評価するためまたはスクリーニングするための方法例えば、新しいリード化合物を同定するスクリーニング、ならびに前駆細胞から特定の細胞系列への分化に有利である物質および条件を同定することは、前駆細胞の他の使用法の例である。前駆細胞およびその使用法に関する非限定的な考察については、例えば、PCT/US2006/025589WO/2007/005611を参照のこと。他の実施形態において、EMT阻害組成物またはEMT誘導組成物は、当該分野で公知の任意の方法を用いて得られる幹細胞とともに使用され得る。例えば、EMT阻害組成物は、そのような細胞から所望の細胞型または細胞系列への分化を促進するために有用であり得る。別の非限定的な例では、EMT誘導組成物は、増殖中にそのような細胞の幹細胞状態を維持するために有用であり得る。3.処置方法およびそのための組成物本発明は、被験体を処置する種々の方法を提供する。本発明はさらに、その方法の実施に適した組成物、例えば、薬学的組成物を提供する。被験体は、代表的にはヒトであるが、他の哺乳動物種も本発明の方法を用いて処置され得る。例えば、被験体は、非ヒト霊長類、げっ歯類例えば、マウス、ラット、ウサギ、有蹄動物例えば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ヤギの種、イヌおよびネコであり得る。いくつかの実施形態において、動物は、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ヤギまたはヒツジである。上記のある特定の方法は、EMTの阻害を必要とする被験体においてEMTを阻害する工程を含む。他の本発明の方法は、前駆細胞またはそれらから分化した細胞を用いた細胞治療を包含し、ここで、その前駆細胞は、本明細書中に記載されるようにEMTを誘導することによって産生される。処置するTreat、処置するtreatingおよび類似の用語は、被験体の医学的および/または外科的な管理を提供することを指す。処置としては、被験体への化合物または組成物例えば、薬学的組成物の投与が挙げられ得るが、これに限定されない。処置は、代表的には、被験体にとって有益な様式で、疾患、障害または望ましくない状態の経過を変化させる試みとして着手される。処置の効果には、通常、そのような用語が適用される疾患、障害もしくは状態またはそのような疾患、障害もしくは状態の1つ以上の症状もしくは徴候を後退させること、緩和すること、それらの重症度を低下させること、それらの発症を遅延させること、治癒すること、それらの進行を阻害すること、および/またはそれらの発生もしくは再発の可能性を低下させることが含まれ得る。本発明の組成物は、疾患もしくは状態を発症している被験体または一般集団のメンバーと比べて発症するリスクの高い被験体に投与され得る。本発明の組成物は、予防的に、すなわち、ある状態の任意の症状または症候を発症する前に、投与され得る。代表的には、この場合、被験体は、その状態を発症するリスクがあり得る。例えば、本発明の組成物は、被験体が感染物質に曝露される前または病原となる事象が生じる前に投与され得る。予防するとは、その疾患もしくは状態が生じる可能性を低下させるために、またはその疾患もしくは状態が生じた場合にはその重症度を低下させるために、その疾患または状態をまだ発症していない被験体に、化合物または組成物例えば、薬学的組成物を投与することを指し得る。その被験体は、その疾患または状態を発症するリスクがある例えば、その集団の他の多くのほとんどのメンバーと比べて高いリスクがある、またはその疾患を発症する可能性を高める危険因子を有すると同定され得る。本発明の方法に従って産生された前駆細胞が使用され得る細胞ベースの治療は、多種多様の疾患および状態の処置を包含する。例としては、神経性の疾患または神経系に影響する他の状態例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、脊髄損傷、外傷性脳損傷および脳卒中が挙げられる。外傷性損傷例えば、組織損傷、骨折、熱傷、心臓疾患例えば、種々の任意の異なる原因に起因する心筋症、糖尿病例えば、インスリンを産生するベータ細胞の喪失lossosを伴うI型糖尿病、禿頭症、視力喪失および失明、歯の脱落、変形性関節症、腱および靭帯の損傷、骨軟骨症ならびに筋ジストロフィは、細胞ベースの治療によって利益を享受し得る他の状態である。骨、筋肉例えば、心筋、骨格筋、平滑筋、皮膚、軟骨、神経および脳が、前駆細胞ベースの治療が標的とし得る細胞および組織である。当業者は、前駆細胞を所望の細胞系列または目的の細胞型に分化させるのに有用な組成物および方法を承知しているだろう。所望の細胞型は、細胞選別、樹脂またはマトリックスへの結合などのような方法を用いて、他の細胞から分離され得る。そのような分離は、例えば、目的の細胞型に特徴的なマーカーの発現、またはそのような細胞型に特徴的でないマーカーの発現がないことに基づき得る。前駆細胞または分化した子孫は、不全の器官例えば、心臓にその機能を増強するために埋め込まれ得る。いくつかの実施形態において、前駆細胞または分化した子孫は、整形外科術、泌尿器外科術、婦人科外科術、形成外科術、結腸直腸外科術および/または耳鼻咽喉科外科術、ヘルニア修復術などの状況において、組織の再建または封鎖を助けるために使用され得る。さらに、前駆細胞および/またはその分化した子孫は、組織または器官例えば、皮膚、軟部組織、血管、腎臓、肝臓、膀胱などのエキソビボおよび/またはインビボにおける構築において使用され得ると構想される。ある特定の実施形態において、細胞は、所望であれば、天然に存在する材料および/または合成材料例えば、生体適合性、必要に応じて生分解性のポリマー、ポリペプチドなどを含む、適切な足場またはマトリックスと併用され得る。いくつかの実施形態において、前駆細胞が被験体に導入される場合、インビボにおいてそのような細胞の分化を促進する物質が投与され得る。いくつかの実施形態において、細胞治療において使用するための前駆細胞を得るために使用される上皮細胞は、意図されるレシピエントである被験体から得られる。いくつかの実施形態において、その上皮細胞は、異なる個体、代表的には、同じ種のメンバーから得られる。他の実施形態において、所望であれば、細胞は、その組織適合性histocompabilityを改善するように改変され得、そして/または適合性のドナーが、選択され得る。本発明のいくつかの実施形態において、EMT誘導組成物の構成要素は、インビボでEMTを誘導するために被験体に投与される。いくつかの実施形態において、それらの構成要素は、組み合わせて投与される。句組み合わせては、併用処置に関して本明細書中で使用されるとき、第1および第2の化合物の投与について、i直前に投与された第1の薬剤の用量の90超が不活性型に代謝されるかもしくは身体から排出される前に、ある用量の第2の化合物が投与されるように;またはii第1および第2の化合物の用量が、互いの48時間以内に投与されるように、またはiiiそれらの薬剤が、重複した時間の間に投与されるように例えば、連続的または断続的な注入によって;またはiv前述のものの任意の組み合わせであるように行われる投与を意味する。すべての化合物が上述の基準を満たす場合、またはいくつかの実施形態では、各化合物が、その組み合わせの他の少なくとも1つの化合物に対して第2の化合物と考えられ得る場合、複数の化合物が組み合わせて投与されると考えられる。それらの化合物は、単一の組成物の構成要素として一緒に投与されてもよいが、そのように投与される必要はない。いくつかの実施形態において、それらは、実質的に同時にこれは、互いの10分未満を意味する個別に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、それらは、互いに対して短時間以内にこれは、3時間未満、時折、1時間未満だけ離れていることを意味する個別に投与されてもよい。それらの化合物は、同じ投与経路で投与されてもよいが、そのように投与される必要はない。任意の順序での複数の化合物の投与が包含される。第2の化合物と組み合わせて投与されるとき、特定の生物学的応答を誘発するために必要とされる第1の化合物の有効量は、第2の化合物の非存在下において投与されるときの第1の化合物またはその逆の有効量よりも少なくてもよいし多くてもよく、それによって、一方の化合物が他方の非存在下において投与される場合に必要とされる量と比べていずれかまたは両方の薬剤の用量の調整が可能になる。例えば、本発明の化合物が組み合わせて投与されるとき、それらの化合物のいずれかの治療量以下の投与量、またはその両方の治療量以下の投与量が、処置を必要とする被験体の処置において使用され得る。いくつかの実施形態において、2つの化合物が組み合わせて使用されるとき、いくつかの実施形態では、望ましい治療結果をもたらすために、第2の化合物が、治療量以下の量で投与され得る。治療量以下の量は、本明細書中で使用されるとき、他方の化合物の非存在下において投与された場合に被験体において治療結果をもたらすと予想され得る量より少ない量、例えば、推奨量より少ない量のことを指す。複数の化合物の効果は、相加的または相乗的であり得るが、そうである必要はない。それらの化合物の1つ以上が、複数回投与され得る。いくつかの実施形態において、後に投与されるTGFベータアゴニストに許容的な環境をもたらすために、BMPインヒビターが投与される。いくつかの実施形態において、それらの化合物は、互いの2、4、8、12、24または48時間以内に少なくとも1回投与される。インビボでEMTを誘導することは、細胞ベースの治療が有用である様々な疾患および状態において有益であり得る。例えば、インビボでEMTを誘導することによって、損傷したまたは欠陥のある器官または組織を修復するための多数の幹細胞が提供され得る。そのために、EMTを誘導する化合物が、組織または器官の損傷しているまたは欠陥のある部位にまたはその部位付近に、局所的に投与され得る。別の態様において、本発明は、EMTの阻害を必要とする被験体においてEMTを阻害する方法を提供し、その方法は、その被験体に、本発明のEMT阻害組成物の構成要素を組み合わせて投与する工程を包含する。その被験体は、EMTがインビボで生じるおよびその状態の1つ以上の病理的特徴に関与する状態のリスクがあるか、またはその状態に苦しんでいる可能性がある。本発明のいくつかの実施形態において、EMT阻害組成物は、WntアンタゴニストおよびBMPアゴニストを含む。例えば、そのような組成物の1つは、SFRP1およびBMP4を含む。いくつかの実施形態において、TGFbインヒビターと組み合わせた、被験体へのBMP経路アクチベーターの投与は、所与の用量のTGFbインヒビターの治療効果を高める。本発明のいくつかの実施形態において、TGFbインヒビターと組み合わせた、被験体へのBMP経路アクチベーターの投与は、より少量のTGFbインヒビターが少なくとも等価な治療効果で使用されることを可能にする。いくつかの実施形態において、被験体は、癌の処置を必要とする。当該分野で公知であるように、癌は、コントロールされないまたは異常にコントロールされた細胞増殖および他の悪性細胞の特性を特徴とする疾患である。EMTプロセスによって、細胞が遊走特性を獲得することが可能となり、それにより、癌細胞の播種および転移が促される。さらに、EMTを起こした癌細胞は、癌幹細胞に特徴的な特性である、高い自己複製能および腫瘍開始能を示す。本発明のいくつかの実施形態において、EMTを誘導するおよび/または維持するオートクリンシグナル伝達ループを本発明に従って干渉することによって、腫瘍の転移および/または腫瘍の再燃もしくは再発が減少する。EMTを誘導するおよび/または維持するオートクリンシグナル伝達ループを本発明に従って干渉することによって、治療例えば、化学療法剤に対する抵抗性を低下させること、および癌細胞を免疫介在性の内因性の防御機構に対してより感受性にすることが助けられ得る。いくつかの実施形態において、それらの癌はまた、化学療法、放射線照射および/または外科術を用いて処置される。EMT阻害組成物が、局所的に、例えば、腫瘍部位に、例えば、外科術または放射線照射の前、最中および/または後に投与され得ることが企図される。例えば、非限定的な実施形態において、EMT阻害組成物は、外科術の前の4週間以内に少なくとも1回、および/または外科術後の4週間以内に少なくとも1回投与され得る。別の非限定的な実施形態では、EMT阻害組成物は、放射線照射処置を開始する前の4週間以内に少なくとも1回、および/または放射線照射処置の過程が完了した後の4週間以内に少なくとも1回、ならびに必要に応じて、放射線照射処置間に1回以上、投与され得る。1つの態様において、本発明は、癌の処置を必要とする被験体を処置する方法を提供し、その方法は、本発明のEMT阻害組成物の構成要素をその被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、EMT阻害組成物の構成要素は、局所的に、腫瘍の近傍に、または腫瘍が外科的に除去された部位もしくは腫瘍が放射線照射される部位に、投与される。本明細書中で使用されるとき、癌という用語は、以下のタイプの癌に限定されないがこれらを包含する:乳癌;胆管癌;膀胱癌;神経膠芽腫および髄芽腫を含む脳腫瘍;子宮頸癌;絨毛癌;結腸癌;子宮体癌;食道癌;胃癌;急性リンパ性および骨髄性白血病を含む血液学的新生物;T細胞急性リンパ芽球性白血病/リンパ腫;ヘアリーセル白血病;慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫;AIDS関連白血病および成人T細胞白血病/リンパ腫;ボーエン病およびパジェット病を含む上皮内新生物;肝臓癌;肺癌;ホジキン病およびリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫;神経芽細胞腫;扁平上皮癌腫を含む口腔癌;上皮細胞、ストローマ細胞、生殖細胞および間葉系細胞から生じる癌を含む卵巣癌;膵癌;前立腺癌;直腸癌;平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、ユーイング肉腫および骨肉腫を含む肉腫;メラノーマ、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫、基底細胞癌腫および扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌;胚腫瘍germinaltumors例えば、セミノーマ、非セミノーマ奇形腫、絨毛癌、間質腫瘍および胚細胞性腫瘍を含む精巣癌;甲状腺腺癌および髄様癌腫を含む甲状腺癌;ならびに腺癌およびウィルムス腫瘍を含む腎癌。いくつかの実施形態において、癌は、結腸癌腫、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌腫、子宮頸癌、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝細胞癌腫、胆管癌腫、絨毛癌、セミノーマ、胎児性癌腫、ウィルムス腫瘍または精巣腫瘍である。1つの実施形態において、癌は、肺癌腫である。1つの実施形態において、癌は、乳癌腫である。いくつかの実施形態において、癌は、上皮起源であると考えられる。いくつかの実施形態において、癌は、不明な細胞起源であるが、上皮細胞に関連する分子または組織学的な特徴例えば、E-カドヘリン、サイトケラチンまたは細胞間橋の産生を有する。例えば、癌を処置するための本明細書中に開示される方法において有用であり得る形質転換学療法薬の非限定的な例としては、アルキル化剤およびアルキル化様剤例えば、ナイトロジェンマスタード例えば、クロラムブシル、クロルメチン、シクロホスファミド、イホスファミドおよびメルファラン、ニトロソ尿素例えば、カルムスチン、フォテムスチンFotemustine、ロムスチンおよびストレプトゾシン、白金剤すなわち、アルキル化様剤例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、BBR3464およびサトラプラチンSatraplatin、ブスルファン、ダカルバジン、プロカルバジン、テモゾロマイド、チオテパ、トレオスルファンTreosulfanおよびウラムスチン;代謝拮抗物質例えば、葉酸例えば、アミノプテリン、メトトレキサート、ペメトレキセドPemetrexedおよびラルチトレキセドRaltitrexed;プリン例えば、クラドリビン、クロファラビンClofarabine、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチンおよびチオグアニン;ピリミジン例えば、カペシタビン、シタラビン、フルオロウラシル、フロクスウリジンおよびゲムシタビン;紡錘体毒/有糸分裂インヒビター例えば、タキサン例えば、ドセタキセル、パクリタキセルおよびビンカ例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン;細胞傷害性/抗腫瘍性抗生物質例えば、アントラサイクリン例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ピクサントロンおよびバルルビシンValrubicin、Streptomyces属の様々な種によって天然に産生される化合物例えば、アクチノマイシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、プリカマイシンおよびヒドロキシ尿素;トポイソメラーゼインヒビター例えば、カンプトテカCamptotheca例えば、カンプトテシン、トポテカンおよびイリノテカンおよびポドフィルムPodophyllums例えば、エトポシド、テニポシド;癌免疫療法用のモノクローナル抗体例えば、抗レセプターチロシンキナーゼ例えば、セツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブ、抗CD20例えば、リツキシマブおよびトシツモマブおよびその他のもの、例えば、アレムツズマブ、ベバシズマブおよびゲムツズマブ;光増感剤例えば、アミノレブリン酸、アミノレブリン酸メチル、ポルフィマーナトリウムおよびベルテポルフィン;チロシンキナーゼインヒビター例えば、セジラニブCediranib、ダサチニブDasatinib、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブLapatinib、ニロチニブ、ソラフェニブSorafenib、スニチニブSunitinibおよびバンデタニブVandetanib;セリン/トレオニンキナーゼインヒビター例えば、Abl、c-Kit、インスリンレセプターファミリーメンバー、EGFレセプターファミリーメンバー、mTOR、Rafキナーゼファミリー、ホスファチジルイノシトールPIキナーゼ例えば、PI3キナーゼ、PIキナーゼ様キナーゼファミリーメンバー、サイクリン依存性キナーゼファミリーメンバー、オーロラキナーゼファミリーのインヒビター、成長因子レセプターアンタゴニストおよびその他のもの例えば、レチノイド例えば、アリトレチノインおよびトレチノイン、アルトレタミンAltretamine、アムサクリン、アナグレリド、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ例えば、ペガスパルガーゼPegaspargase、ベキサロテン、ボルテゾミブ、デニロイキンジフチトクス、エストラムスチン、イクサベピロンIxabepilone、マソプロコールMasoprocol、ミトタンおよびテストラクトン、Hsp90インヒビター、プロテアソームインヒビター、HDACインヒビター、血管新生インヒビター、例えば、抗血管内皮成長因子剤例えば、ベバシズマブ、マトリックスメタロプロテアーゼインヒビター、アポトーシス促進物質例えば、アポトーシス誘導物質、抗炎症剤などが挙げられる。他の実施形態において、インビボでEMTを阻害する方法は、線維症この用語は、例えば、修復プロセスまたは復古プロセスとしての、器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発生のことを指すを特徴とする疾患および状態の処置において使用される。例えば、筋線維芽細胞が、EMTを通じて生じて、罹患組織に蓄積し得、その組織でそれらは、コラーゲンなどのECM構成要素を分泌する。線維症は、例えば、特定の物質例えば、種々の医薬を含む化学剤、感染物質への曝露によって、炎症の結果として引き起こされ得るか、または特発性であり得る。例えば、肺線維症は、処置の結果として、またはとりわけ、様々な化学療法薬例えば、メトトレキサート、シクロホスファミド;心臓の不整脈および他の心臓血管の問題を処置するために使用される医薬例えば、アミオダロン、プロプラノロール;ならびにいくつかの抗生物質例えば、ニトロフラントイン、スルファサラジンへの曝露の結果として生じ得る。線維症は、外傷後または外科術後に生じ得る。線維症は、種々の器官および組織例えば、腎臓、肺、肝臓、心臓hear、皮膚、腸、骨髄、眼例えば、水晶体、網膜、後腹膜、縦隔、腸間膜、脈管系、リンパ系、筋骨格系例えば、筋肉、関節などに影響し得る。線維症は、全身性でもあり得、複数の組織および器官に影響し得る。線維症は、潜在的には、正常な組織を少なくとも部分的に置き換え、その機能を損ない、そして/または損傷した組織の適切な修復例えば、外科術、外傷、熱傷の後のを干渉して、そのような器官および組織の機能に悪影響を及ぼし得る。例えば、心筋線維症、腎線維症および肺線維症は、消耗性であり得、致死的であり得る。本発明の実施形態によると、EMT阻害組成物は、EMTを誘導するプロセスおよび/または線維症に関与する状態で細胞を維持するプロセスを阻害するために使用され得る。そのような組成物は、線維性組織の蓄積を阻害するためおよび/または後退させるために使用され得る。本発明の処置方法は、目的の疾患または状態、例えば、EMTを阻害するかまたは誘導することが望ましい状態に苦しんでいるかまたはそのリスクがある被験体を同定するかまたは提供する工程を包含し得る。~のリスクがあるは、そのような被験体が、その被験体の1つ以上の状況、状態もしくは特質の非存在下において有し得るリスクと比べて、および/またはその集団の平均的な健常のメンバーが有し得るリスクと比べて、および/またはその被験体が以前に有していたリスクと比べて、高いリスクがあることを含意する。いくつかの実施形態において、被験体は、疾患または状態を発症する少なくとも20高いリスク1.2倍高いリスクがある。被験体をリスクがあるとし得る状態の例は、特定の疾患または状態に応じて様々であり得、それらとしては、その疾患または状態の家族歴;その疾患または状態を発症するリスクを高めると当該分野において公知であるかまたは考えられている特定の物理的または化学的な物質への曝露または曝露の可能性例えば、職業、習慣などに起因して;変異または遺伝的多型を有しない一般的集団の他のメンバーと比べてその疾患を発症するかまたは有する高いリスクに関連する、そのような変異、遺伝的多型、遺伝子もしくはタンパク質の発現プロファイルおよび/または血液中の特定の物質の存在;免疫抑制;他の疾患もしくは状態の存在、年齢、外科術または他の外傷;症状の存在;あるいは被験体の医療提供者の判断および技術の範囲内の、その被験体を高いリスクにする他の任意の状態が挙げられ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、被験体は、例えば、1つ以上の危険因子、および代表的には、ある疾患または状態の1つ以上の症状または徴候を有する結果として、その疾患または状態を有すると疑われる。本発明に係る処置を必要とする被験体を同定するために、任意の好適な方法が使用され得る。例えば、そのような方法としては、症状、病歴入手可能な場合、理学的検査、臨床検査、画像研究、免疫診断アッセイ、核酸ベースの診断法などに少なくとも部分的に基づく臨床診断が挙げられ得る。いくつかの実施形態において、診断は、血清学例えば、その疾患に関連するマーカーと特異的に反応する抗体の検出に少なくとも部分的に基づき得る。いくつかの実施形態において、被験体は、癌または癌の再発のリスクがある。癌のリスクがある被験体は、例えば、癌と診断されていないが、例えば同じ性別の、同年齢のコントロールと比べて癌を発症する高いリスクを有する被験体であり得る。例えば、その被験体は、対応するコントロールのリスクの少なくとも1.2倍のリスクを有し得る。例えば、i被験体が、変異または遺伝的多型を有しない一般的集団の他のメンバーと比べて癌を発症するかまたは有する高いリスクに関連するそのような変異、遺伝的多型、遺伝子もしくはタンパク質の発現プロファイル、および/または血液中の特定の物質の存在を有する場合;ii被験体が、癌の家族歴を有すること、突然変異原、発癌性物質または腫瘍を促進する物質もしくは状態例えば、アスベスト、タバコの煙、アフラトキシン、放射線照射、慢性感染症/炎症などに曝露されていること、高齢などの1つ以上の危険因子を有する場合、その被験体は、癌を発症するリスクがあると考えられ得る。いくつかの実施形態において、被験体は、癌の1つ以上の症状を有するが、その疾患と診断されておらず、例えば、被験体は、癌を有すると疑われ得る。本明細書中に開示されるおよび/または本明細書中に記載される方法を用いて同定される化合物および組成物は、任意の好適な手段によって例えば、経口的に、鼻腔内に、皮下に、筋肉内に、静脈内に、動脈内に、非経口的に、腹腔内に、鞘内に、気管内に、眼に、舌下に、膣に、直腸に、経皮的に、または吸入によって、例えば、エアロゾルとして投与され得る。処置される疾患状態のタイプに応じて、本発明の化合物は、例えば、吸入され得るか、経口摂取され得るか、局所的に投与され得るか、または全身経路によって投与され得る。したがって、種々の投与様式または投与経路が利用可能である。当然のことながら、選択される特定の様式は、選択される特定の化合物、処置される特定の状態および治療効果に必要な投与量に左右され得る。複数の化合物が投与される場合、それらは、様々な実施形態において、同じまたは異なる経路を用いて投与され得る。本発明の方法は、概して、医学的または獣医学的に許容され得る任意の投与様式これは、臨床的に許容できない例えば、医学的または獣医学的に許容できない有害作用を引き起こすことなく、許容され得る効力レベルをもたらす任意の様式を意味するを用いて実施され得る。いくつかの実施形態において、投与経路は、非経口であり、それには、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、骨内intraosseusおよび胸骨内への注射または注入の手法が含まれる。いくつかの実施形態において、投与経路は、経口である。いくつかの実施形態において、化合物または組成物は、罹患しているまたは損傷している腫瘍の部位にまたは部位付近に送達され得る。いくつかの実施形態において、吸入される医薬が有用である。そのような投与は、例えば、肺癌または肺線維症の処置を必要とする被験体における、肺への直接的な送達を可能にするが、そのような投与は、ある特定の化合物の全身性送達を達成するためにも使用され得る。通常、いくつかのタイプの定量吸入器が、吸入による投与のために使用される。これらのデバイスのタイプとしては、定量吸入器MDI、呼吸作動式MDI、乾燥粉末吸入器DPI、スペーサー/保持チャンバーを備えたMDI、および噴霧器が挙げられる。他の実施形態において、例えば、中枢神経系の腫瘍を有する被験体では、鞘内または頭蓋内投与が有用であり得る。治療薬を投与するための他の適切な経路およびデバイスは、当業者に明らかであろう。1つ以上の化合物例えば、本発明のEMT阻害組成物またはEMT誘導組成物の構成要素の好適な調製物、例えば、実質的に純粋な調製物は、被験体への投与に適した適切な薬学的組成物を生成するために1つ以上の薬学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤などと組み合され得る。そのような薬学的に許容され得る組成物は、本発明の一態様である。用語薬学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤とは、組成物の活性成分の生物学的活性または有効性を有意に干渉せず、それが使用されるまたは投与される濃度において宿主にとって過度に毒性でない、キャリアこの用語は、キャリア、媒質、希釈剤、溶媒、ビヒクルなどを包含するまたは賦形剤のことを指す。他の薬学的に許容され得る成分も同様に、その組成物中に存在し得る。薬学的に活性な化合物の製剤化に適した物質およびその使用は、当該分野で周知である薬学的に許容され得る物質および様々なタイプの薬学的組成物を調製する方法のさらなる考察のために、例えば、Remington’sPharmaceuticalSciences,E.W.Martin,19thEd.,1995,MackPublishingCo.:Easton,PA、およびそのより最近の版またはバージョン例えば、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy.21stEdition.Philadelphia,PA.LippincottWilliamsWilkins,2005これらは、その全体が本明細書中で参考として援用されるを参照のこと。さらに、本発明の化合物および組成物は、目的の特定の疾患または状態を処置するために当該分野において使用される任意の化合物または組成物と組み合わせて使用され得る。薬学的組成物は、代表的には、意図される投与経路と適合するように製剤化される。例えば、非経口投与用の調製物としては、滅菌された水性または非水性の溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。水性キャリアとしては、水、アルコール性/水性の溶液、エマルジョンまたは懸濁液食塩水および緩衝媒質、例えば、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンガーを含むが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステル、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒;保存剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤;アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤;エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤;酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤、ならびに塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度を調整するための物質である。pHは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調整され得る。そのような非経口調製物は、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または反復投与用バイアルに封入され得る。そのような組成物において使用するための薬学的組成物および化合物は、規制当局によって定められた規格、基準またはガイドラインを満たす条件下で製造され得る。例えば、そのような組成物および化合物は、GoodManufacturingPracticesGMPに従って製造され得、かつ/またはヒトに投与される医薬品にとって適切な品質管理手順に供され得る。被験体に投与される細胞およびそれらを含む組成物は、適用可能な規格、基準またはガイドラインに従って、そのような目的にとって適切であるように、維持され得、取り扱われ得る。経口投与の場合、化合物は、活性な化合物を当該分野で周知の薬学的に許容され得るキャリアと組み合わせることによって、容易に製剤化され得る。そのようなキャリアは、本発明の化合物が、処置される被験体による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとして製剤化されるのを可能にする。経口剤形に適した賦形剤は、例えば、糖ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む;セルロース調製物例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび/またはポリビニルピロリドンPVPなどの充填剤である。所望であれば、崩壊剤例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩例えば、アルギン酸ナトリウムを加えてもよい。必要に応じて、経口製剤はまた、体内の酸性条件を中和するために食塩水または緩衝液において製剤化され得るか、またはいかなるキャリアも用いずに投与され得る。糖衣錠のコアは、好適なコーティングを伴って提供される。このために、濃縮された糖溶液必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコールおよび/または二酸化チタンを含み得る、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または有機溶媒混合物が使用され得る。識別のため、または活性な化合物の用量の種々の組み合わせを特徴付けるために、それらの錠剤または糖衣錠コーティングに染料または色素を加えてもよい。経口的に使用され得る医薬品には、ゼラチン製の押し込み型カプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤例えば、グリセロールまたはソルビトールから作られた軟らかい密封カプセルが含まれる。その押し込み型カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および/またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ならびに必要に応じて安定剤とともに、活性成分を含み得る。軟カプセルでは、活性な化合物は、好適な液体例えば、脂肪油、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールに溶解され得るかまたは懸濁され得る。さらに、安定剤が加えられてもよい。経口投与用に製剤化されるミクロスフェアも使用され得る。そのようなミクロスフェアは、当該分野において十分に定義されている。経口送達用の製剤は、消化管内での安定性を改善する物質および/または吸収を高める物質を組み込み得る。吸入による投与の場合、本発明の組成物は、好適な噴霧剤、例えば、二酸化炭素、フルオロカーボンなどのガスを含む加圧容器もしくはディスペンサーからのエアロゾルスプレーまたは噴霧器の形態で送達され得る。液体または乾燥エアロゾル例えば、乾燥粉末、大きな多孔性粒子などが使用され得る。本発明は、点鼻薬または他の経鼻投与の形態を用いた組成物の送達も企図する。局所適用の場合、薬学的組成物は、そのような組成物comporisitionの使用に適した1つ以上の薬学的に許容され得るキャリアに懸濁されたまたは溶解された活性な構成要素を含む好適な軟膏、ローション、ゲルまたはクリームとして製剤化され得る。眼への局所的送達の場合、薬学的に許容され得る組成物は、例えば、点眼液または軟膏として使用するために、等張性のpH調整された滅菌食塩水における、溶液または微粒子化された懸濁液として製剤化され得る。薬学的組成物は、経粘膜的または経皮的送達のために製剤化され得る。経粘膜的または経皮的投与の場合、浸透すべきバリアにとって適切な浸透剤がその製剤において使用され得る。そのような浸透剤は、通常、当該分野で公知である。本発明の薬学的組成物は、直腸送達のために、坐剤例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどの従来の坐剤用基剤を含むまたは停留浣腸として製剤化され得る。組織、例えば、疾患の部位例えば、腫瘍部位または腫瘍部位付近への直接的な投与は、例えば、注射によって、またはその組織内に徐放インプラントを埋め込むことによって、達成され得る。いくつかの実施形態において、上記化合物の少なくとも1つが、埋め込まれた徐放デバイスからの放出、浸透圧ポンプまたは他の薬物送達デバイスによる放出によって、投与される。徐放インプラントは、任意の好適な部位に埋め込まれ得る。いくつかの実施形態において、徐放インプラントは、再発癌を発症するリスクまたは慢性状態例えば、代表的には、少なくとも6ヶ月およびしばしば数年または無期限に続く状態を有するリスクのある被験体の予防的処置のために使用される。いくつかの実施形態において、徐放インプラントまたは薬物送達デバイスは、治療レベルの活性な薬剤を少なくとも30日間、例えば、少なくとも60日間、例えば、最大3ヶ月間、6ヶ月間またはそれ以上、送達する。化合物は、粒子、例えば、微小粒子、マイクロカプセルまたはナノ粒子に被包され得るか、または組み込まれ得る。生分解性で生体適合性のポリマー例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、PLGA、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリエーテルおよびポリ乳酸が使用され得る。そのような製剤を調製するための方法は、当業者に明らかであろう。限定ではないが、例えば、いくつかの粒子ベースの送達系が、siRNAの送達のために当該分野で公知である。本発明は、そのような組成物の使用を企図する。リポソームまたは他の脂質ベースの粒子もまた、薬学的に許容され得るキャリアとして使用され得る。薬学的に許容され得る塩、エステル、そのようなエステルの塩、プロドラッグ、活性な代謝産物、または投与を必要とする被験体に投与されると化合物を直接または間接的に提供することができる任意の誘導体が、ある特定の実施形態において使用され得ることが認識されるだろう。用語薬学的に許容され得る塩とは、まっとうな医学的判断の範囲内において、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応などなしに、ヒトおよび/またはそれより下等動物の組織と接触して使用するのに適しており、かつ合理的なベネフィット/リスク比に見合った、塩のことを指す。多種多様の薬学的に許容され得る適切な塩が、当該分野で周知である。薬学的に許容され得る塩としては、好適な無機酸および有機酸ならびに無機塩基および有機塩基から得られる塩が挙げられるが、これらに限定されない。血漿半減期を延長するため、クリアランスを減少させるため、または所望であれば、化合物、例えば、ポリペプチドの特性を別途改変するために、種々のアプローチを使用することができる。これらのアプローチのいくつかを論じている概説については、例えば、WerleMら、Strategiestoimproveplasmahalflifetimeofpeptideandproteindrugs.AminoAcids304351-67,2006およびJevsevarSら、PEGylationofTherapeuticProteins,BiotechnologyJournal,51:113-128,2010を参照のこと。本発明の薬学的組成物は、被験体に投与されるとき、好ましくは、それが投与される疾患または状態を処置するのに十分な時間にわたって、かつそのような十分な量で、投与される。活性な薬剤の治療効果および毒性は、細胞培養物または実験動物において標準的な薬学的手順によって評価され得る。細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトまたは他の被験体における使用に適したある範囲の投与量を製剤化する際に使用され得る。ヒトに投与するための種々の用量が、当該分野で公知であるように、ヒトにおける臨床試験でさらに試験され得る。使用される用量は、最大耐用量またはそれよりも少ない用量であり得る。薬学的組成物中の活性な薬剤の治療的に有効な用量は、約0.001~約100mg/kg体重、約0.01~約25mg/kg体重、約0.1~約20mg/kg体重、約1~約10mg/kgの範囲内であり得る。他の例示的な用量としては、例えば、約1μg/kg~約500mg/kg、約100μg/kg~約5mg/kgが挙げられる。いくつかの実施形態において、単回用量が投与されるが、他の実施形態では、複数回用量が投与される。当業者は、任意の特定の状況における適切な用量が、使用される薬剤の効力に依存し、必要に応じて特定のレシピエントに対して調整され得ることを認識するだろう。ある被験体専用の用量レベルは、種々の因子使用される特定の薬剤の活性、特定の疾患または状態およびその重症度、その被験体の年齢、体重、全般的な健康状態などを含むに依存し得る。同様に、細胞ベースの治療において投与される細胞の数も、そのような考慮すべき事柄、投与される細胞のタイプなどに基づいて当業者によって決定され得、それはしばしば、数十から数十万、数百万であり得る。薬学的組成物、特に、経口または非経口組成物用のものを、投与を容易にするためおよび投与量を均一にするために単位剤形で製剤化することが望ましい場合がある。単位剤形は、この用語が本明細書中で使用されるとき、処置される被験体に対する単位投与量として適した物理的に別個の単位のことを指し;各単位は、適切な薬学的に許容され得るキャリアと併せて、所望の治療効果をもたらすと算出された所定量の活性な薬剤を含む。治療レジメンが、数日間、数週間、数ヶ月または数年に及び得る期間にわたる複数の単位剤形の投与を含み得ることが理解されるだろう。いくつかの実施形態において、例えば、予防を達成するためまたは慢性疾患の場合に、処置は、無期限に継続され得る。被験体は、1日に1回以上の投薬を受けてもよいし、処置期間中、1日おきにまたはそれよりも低い頻度で投薬を受けてもよい。実施例1:不死化ヒト乳腺上皮細胞細胞から単離された間葉系亜集団の特徴づけ本発明者らは、本発明者らが不死化ヒトMEC本明細書中以後、HMLE細胞と称される,実験手順から単離した細胞の少数亜集団の特性を調べた。TwistTFの異所性発現によるEMTを通じて駆動されたHMLE細胞HTwist細胞;Yangら、2004と同様に、これらの細胞は、間葉系の形態を示し、間葉系亜集団にちなんでMSPと名付けられた図1A。これらのMSP細胞は、最初に、HMLE細胞の単層培養物の培養培地上清に浮遊している細胞の集団として単離された。本発明者らは、解析のために、親のHMLE培養物からごく少数の間葉系細胞それはCD44高/CD24低-陰性の細胞表面プロファイルを示すと示されているManiら、2008を取り出すことを望んだ。MACS磁石活性化細胞分離法Magnet-ActivatedCellSeparationを用いて、上皮状態のMECと密接に関連するマーカーであるCD24を発現しているHMLE細胞をポジティブ選択することにより、精製された上皮HMLE24集団を得た。様々な解析を通じて、本発明者らは、HMLE24細胞と比較して、MSP細胞では上皮マーカーがダウンレギュレートされ;その代わりに、それらは、間葉系マーカーおよびHTwist細胞と類似のEMTプログラムの構成要素を発現することに注目した図1B~D。こうして、本発明者らは、Twistの内因性mRNAレベルが、HMLE24細胞と比べてMSPでは10倍アップレギュレートされることを見出した。さらに、MSPおよびHTwist細胞は、Zeb1、Zeb2、FoxC2およびSnailというEMTを誘導するTFを高レベルで発現した図1B~D。注目すべきことに、EMT-TFであるSlugのタンパク質発現の増加は、MSP細胞だけで見出された図1B。懸濁培養においてクローン密度clonaldensityでプレーティングされたときMECが増殖してマンモスフィアを形成する能力は、マウスおよびヒトの乳腺上皮前駆細胞およびSC集団の存在と関連したDontuら、2003;Peceら、2010;Yuら、2007。ゆえに、本発明者らは、HMLE24、HTwistおよびMSP細胞のマンモスフィア形成能を比較した。HMLE24細胞と比べて、マンモスフィア形成能は、HTwist細胞では30倍高く、独立して得られた2つのMSP細胞株では10~20倍高かった図1E。腫瘍開始細胞について濃縮された患者由来のヒト乳癌細胞集団と同様にAl-Hajjら、2003、H-RAS癌遺伝子によって形質転換されたHTwist細胞は、CD44高/CD24低-陰性プロファイルを示すと以前に示されたHTwist-RASと命名された、Maniら、2008。同様に、RASによって形質転換されたMSP細胞MSP-RASの98が、CD44高/CD24低-陰性プロファイルを示した図1F。対照的に、これらの細胞の一部が、CD24高/CD44低-陰性状態にあるバルクである、RASによって形質転換されたHMLE24細胞集団の2未満を構成した。HTwist-RAS細胞は、HMLE-RAS細胞と比べて高効率で腫瘍を産生したManiら、2008。ゆえに、本発明者らは、MSP-RAS細胞の腫瘍開始能をHMLE24-RAS集団と比べて試験した。以前に公開された結果Maniら、2008と一致して、皮下での腫瘍形成のためには1×105個のHMLE24-RAS細胞の埋め込みが必要だったのに対し、HTwist-RASおよびMSP-RAS集団は、腫瘍開始細胞について少なくとも2桁濃縮された図1G。あわせると、これらのデータから、MSP細胞は、HTwist細胞と同様に、正常なSCおよび腫瘍開始細胞の形質転換した誘導体のある特定の特性を示すと示唆された。Twistの発現は、乳癌発病のマウスモデルにおいて転移に必要であると示されているYangら、2004。これらの知見によって、本発明者らは、RASによって形質転換された独立して単離された2つのMSP細胞株MSP、MSP-IIの浸潤能および転移能を調べた。HMLE24-RAS細胞と比べて、両方のMSP-RAS細胞株が、インビトロにおいて20倍の浸潤性増加を示した図1H。マウスの乳房脂肪パッドに埋め込まれたGFPで標識されたMSP-RASおよびMSP-II-RAS細胞は、転移性の低いHMLE24-RAS細胞と比べて、肺において転移巣を播種するそれぞれ10および5倍高い能力を有する腫瘍を生じた図1I。まとめると、これらの観察結果は、MSP細胞が、間葉系および運動性の形質ならびに正常なSCを含む細胞集団に関連する特性を示すことを特徴とする細胞状態にあることを示唆した;それらの形質転換した誘導体であるMSP-RAS細胞は、EMTを経ることに関連する形質を発現し続け、ある特定のSCの形質および腫瘍を開始する形質の獲得を伴った。それゆえ、MSPは、HTwist細胞と表現型的に似ている。しかしながら、それらの細胞状態の最初の誘導は、自然に生じるが故に、導入された実験的に予め決定された遺伝因子によって誘発されなかった。実施例2:HMLE、HTwistおよびMSP細胞におけるオートクリンシグナル伝達の状態の比較プロファイリング本発明者らは、EMTを経たことに関連する間葉系およびSC様の状態の維持が、オートクリンシグナル伝達ループの活性化に依存し得ると推測した。本発明者らが推論したそのようなオートクリンループの性質は、MECがEMTを経る前および経た後にそのMECによって培養培地中に放出される因子を比較することによって明らかにされ得る。この考えを試験するために、本発明者らは、抗体アレイを用いて、HMLE24およびHTwist細胞の分泌型タンパク質プロファイルを特徴付けた図S1A。HTwist細胞において差次的に制御される分泌型タンパク質を同定するために、本発明者らは、希釈系列にわたって一貫した変化を示す上位10のタンパク質をヒートマップにおける可視化のために選択した図S1B。本発明者らはまた、ELISAによっていくつかのタンパク質の差次的な分泌を検証した図S1C。そのアレイ上の抗体の機能的分類に基づくと、このEMT分泌型タンパク質プロファイルが、主に、血管新生促進因子、Wnt、TGF-ベータおよびFGFシグナル伝達経路において作用するタンパク質、ケモカインおよびサイトカイン、ならびに本発明者らが機能群に割り当てることができなかった他のタンパク質を含むと見出された表3。本発明者らは、EMT分泌型タンパク質プロファイルにおける因子のいくつかがヘテロタイプのパラクリンシグナル伝達チャネルを介して作動する可能性があると結論付けた。例えば、いくつかのアンギオポエチン様成長因子は、HTwistにおいてアップレギュレートされるタンパク質の中に含まれた;そのような因子は、正常組織および腫瘍組織の脈管構造を構成する内皮細胞に影響し得る。しかしながら、本発明者らの最初の研究では、本発明者らは、オートクリン様式で機能する可能性がある因子に注目することを望んだ。このため、下に記載される研究では、分泌型タンパク質プロファイルに含まれる構成要素を含む他のシグナル伝達経路を重要視した。EMT分泌型タンパク質プロファイルに含まれる3つのうち2つのFGFリガンドが、ダウンレギュレートされたので、本発明者らは、その残りの2つの機能群であるWntおよびTGF-ベータシグナル伝達をより詳細に調べた。分泌型タンパク質の変化と下流の経路の活性化とを結びつけるため、およびアレイ上の抗体の提示によってもたらされる偏りを克服するために、本発明者らは、HMLE、HMLE24、HTwist、SnailTFを発現しているHMLE細胞HSnail、および独立して得られた3つのMSP細胞株のマイクロアレイ遺伝子発現プロファイリングによる上記の解析を企図して、EMT遺伝子発現プロファイルを生成した図S1D。これらの細胞集団のすべてのEMTプログラムに共通して関わる経路を見つけるために、本発明者らは、EMT発現プロファイルを遺伝子セット濃縮解析GSEAに供した。2つの遺伝子セットの両方が、HTwist、HSnailおよびMSP細胞において有意な濃縮を示した:これらは、カルシニューリン/NFATシグナル伝達経路一般にカルシウムシグナル伝達および遊走表現型を示唆するJauliacら、2002;Yoeli-Lernerら、2005ならびにTGF-ベータシグナル伝達によってアップレギュレートされる遺伝子を包含した図S1D。まとめると、このEMT分泌型タンパク質および遺伝子発現プロファイルは、Wnt、カルシウムシグナル伝達およびTGF-ベータ経路が、HTwistおよびMSP細胞において特異的に調節され得るといういくらかの示唆を提供した。発生と腫瘍の両方の状況でのEMTの誘導におけるTGF-ベータの十分に認識されている役割Zavadilら、2001は、本発明者らの実験アプローチを確証する1つの手段として役立った。実施例3;EMTに関連するオートクリンシグナル伝達:TGF-ベータの活性化およびBMPシグナル伝達の制限上記の知見を受けて、本発明者らは、はじめに、HMLE24、HTwistおよびMSP細胞におけるTGF-ベータシグナル伝達の活性化状態に着目した。本発明者らは、HMLE24細胞に比べて、HTwistおよびMSP細胞によってTGF-ベータ-1タンパク質が多く分泌されることに注目したELISAによって、それぞれ2倍および3~4倍、図2A。本発明者らはまた、Smad-レポータープラスミドSBE4-luc、図2Bの高い活性1.5~2倍も観察した。最後に、活性なTGF-ベータシグナル伝達の指標であるSmad2のリン酸化は、上皮HMLE24細胞ではほとんど存在しなかったが、MSP細胞では容易に検出された図2C。すべての成長因子が枯渇した培養培地中でMSP細胞を増殖したとき、Smad2のリン酸化は、強いままだったことから、TGF-ベータシグナル伝達のオートクリン起源に対する裏づけがもたらされた図2D。まとめると、これらの結果から、オートクリンTGF-ベータシグナル伝達が、HTwistおよびMSP細胞では活性であるが、この経路は、親のHMLE24細胞では比較的不活性であることが示唆された。EMT分泌型タンパク質および発現プロファイルが、2つの分泌型BMPアンタゴニストであるChordin様2およびGremlinのアップレギュレーションを明らかにしたので、本発明者らの関心は、BMPシグナル伝達にも向かった。これは、親のHMLE24細胞集団と比較した、MSPおよびHTwist細胞におけるRT-PCR解析によって確かめられた図2E。本発明者らは、BMPリガンドの発現状態を調べた。本発明者らは、劇的かつ予期しない結果を認めた:いくつかのBMPリガンドが、HTwistおよびMSP細胞においてダウンレギュレートされたBMP2、4、5、6、7、9、10について>10倍、図S2A。まとめると、これらの観察結果は、HTwistおよびMSP細胞が、1BMPリガンドを産生しないこと、ならびに2分泌型BMPアンタゴニストChordin様2およびGremlinのアップレギュレーションを介してBMPシグナル伝達を制限する細胞外のシグナル伝達環境を示すという示唆を提供した。本発明者らは、協力して作用するこれらの変化が、オートクリンTGF-ベータシグナル伝達に許容的な細胞外の環境を作り出すと結論付けた。実施例4:EMTに関連するオートクリンシグナル伝達;古典的および非古典的Wntシグナル伝達はWntアンタゴニストのダウンレギュレーションによって促進されたEMT分泌型タンパク質および遺伝子発現プロファイルにWntおよびカルシウムシグナル伝達経路が存在することを考慮して、本発明者らは、HTwistおよびMSP細胞においてさらなるオートクリンシグナル伝達経路が、TGF-ベータシグナル伝達と共同して働き得るか否かを判定することを望んだ。HTwistおよびMSP細胞における分泌型Wntアンタゴニストの2クラスのダウンレギュレーションは、本発明者らの関心をWntシグナル伝達経路に向けた。はじめに、EMT発現プロファイルにおいて、分泌型Frizzled関連タンパク質-1SFRP1のmRNAレベルがダウンレギュレートされた。その後のRT-PCR解析から、HMLE24と比べてHTwist細胞ではSFRP1mRNAが5倍ダウンレギュレーションされること、およびMSP細胞株ではその発現がほとんどないことが確かめられた図2F。重要なことには、SFRP1は、MSP細胞と比べてHMLE24細胞において有意なレベルで発現される唯一のSFRPアイソフォームだった図S2B。機能的には、SFRP1は、細胞外の空間において古典的Wntリガンドと非古典的Wntリガンドの両方に結合する分泌型デコイレセプターとして作用するGalliら、2006。さらに、EMT分泌型タンパク質プロファイルにおいて、Dickkopf-1DKK1がダウンレギュレートされており、このことを本発明者らは、HTwist細胞とMSP細胞の両方においてELISAによって確かめたそれぞれ8および5倍、図2G。DKK1は、レセプター複合体形成を乱すことによって、主に古典的Wnt経路を阻害すると考えられているBaficoら、2004。本発明者らはまた、Wntリガンドの産生が、EMTを経ると変化するか否かも調べた。実際に、非古典的Wnt5aリガンドの発現は、EMT発現プロファイルにおいてアップレギュレートされており、このことは、免疫ブロット法によって確かめられた図2H。残りの21個のWntリガンドのRT-PCR解析は、HTwistおよびMSP細胞において非古典的Wntリガンドである16v1および16v2のアップレギュレーション両方10倍を明らかにしたのに対し、他のWntリガンドは、同様のレベルで発現されWnt2、2bおよび6、その他のすべてがダウンレギュレートされた5~100倍、図S2D。HTwist細胞とMSP細胞の両方においてWnt5a、Wnt16v1および16v2非古典的リガンドのアップレギュレーションが認められたことを考慮して、本発明者らは、関連する下流のシグナル伝達経路の活性を解析した。非古典的FrizzledレセプターへのWnt5aの結合は、タンパク質キナーゼCPKCアイソフォームに収束するカルシウムシグナル伝達を活性化すると示されており、メラノーマ細胞の浸潤性に必要であるDissanayakeら、2007。実際に、pan-ホスホPKC抗体を用いて、本発明者らは、HTwistおよびMSP細胞において有意なレベルの活性化されたPKCを認めたが、HMLE24細胞では認められなかった図2F。さらに、JNKシグナル伝達は、乳癌浸潤の必須の構成要素としてのWnt5aによって活性化されると示されているPukropら、2006。本発明者らは、親のHMLE24細胞と比べてHTwistおよびMSP集団において、JNKおよびその下流の標的であるc-Junのリン酸化の増加を見出した図2H。外因的に加えられたWntリガンドが培養培地中に存在しなかったので、これらの結果は、オートクリン非古典的Wntシグナル伝達が、HTwistおよびMSP細胞において活性であり、PKCおよびJNKタンパク質が関わる少なくとも2つの下流の経路を介して作用することが示唆された。ベータ-カテニン依存性の古典的Wntシグナル伝達の活性の変化を測定するために、本発明者らは、TOPFlashレポーターアッセイVeemanら、2003を利用した。これらの解析は、HTwist細胞におけるFOP活性変異したTCF-LEF結合部位を有するコントロールプラスミドと比べて5倍高いTOPベータ-カテニン/TCF-LEFレポーター活性、およびその2つのMSP株における10~20倍高いTOP/FOP活性を明らかにした図2I。対照的に、ベータ-カテニン/TCF-LEF転写活性は、HMLE24細胞において検出不可能だった。これらの観察結果は、ベータ-カテニン依存性の古典的Wntシグナル伝達が、HTwistおよびMSP細胞では活性であるが、HMLE24細胞では活性でないことを証明した。観察されたWntアンタゴニストのダウンレギュレーションは、ベータ-カテニン/TCF-LEF転写活性にとって必要であるとみられる:組換えDKK1またはSFRP1を加えることにより、HTwistまたはMSP細胞においてTOPFlashレポーター活性がそれぞれ1.5~2倍減少した図2J。実際に、DKK1およびSFRP1の発現は、ある特定の乳癌細胞株においてオートクリンWntシグナル伝達の律速の決定因子であると示されているBaficoら、2004;Suzukiら、2004。本発明者らのここまでの観察結果とまとめると、これらの実験から、古典的および非古典的Wnt経路ならびにTGF-ベータ経路を介したオートクリンシグナル伝達が、HTwistおよびMSP細胞において、これらの3つの経路の分泌型アンタゴニストの有意なダウンレギュレーションを少なくとも部分的に介して可能になると示唆された図S2D。実施例5:オートクリンシグナル伝達はHTwistおよびMSP細胞の遊走およびマンモスフィア形成をコントロールするWntおよびTGF-ベータ経路を介したオートクリンシグナル伝達は、HTwistおよびMSP細胞において活性だったが、これらの経路を介した進行中のオートクリンシグナル伝達が、これらの細胞の機能特性を維持するために必要とされているか否かは不明なままだった。したがって、本発明者らは、EMTに関連する2つの細胞生物学的形質の継続した発現が、そのようなオートクリンシグナル伝達に依存するか否かを判定した:遊走能およびマンモスフィア形成能。後者の形質は、足場非依存性の生存および成長ならびに自己複製のインビトロにおける基準として役立つDontuら、2003;Peceら、2010;Yuら、2007。このために、本発明者らは、培養されたHTwistおよびMSP細胞培養物に、HMLE24細胞と比べてこれらの細胞においてダウンレギュレートされると本発明者らが見出した分泌型の抑制因子のいくつかを再度加えた。HTwistおよびMSP細胞と比べて、HMLE24細胞は、インビトロにおいて10倍低い遊走能を示した。組換えDKK1またはSFRP1タンパク質を加えたとき、この周縁の運動性は、さらに減少しなかった図3A。対照的に、DKK1またはSFRP1をHTwistおよびMSP細胞の培養培地に加えることによって、その遊走が用量依存的様式で阻害された図3AおよびB。最高濃度において、組換えDKK1は、遊走を10倍減少させた一方で、SFRP1は、これらの細胞の運動性を20倍減少させた図3AおよびB。組換えBMP4は、遊走に対してそれほど強力な効果を有しなかったHTwistまたはMSP細胞において最高2倍の減少を誘導した図3C。重要なことには、HMLE24、HTwistおよびMSP細胞の接着性培養物の増殖は、これらの組換えタンパク質のいずれの存在によっても影響されず、これらの物質の一般的な細胞分裂抑制作用および細胞傷害作用は排除された図S3A。本発明者らは、HTwistおよびMSP細胞においてDKK1、SFRP1およびBMP4がマンモスフィア形成を阻害するそれぞれの能力も試験した。組換えDKK1は、これらの培養物を最初に播種したときから開始して5日間にわたって毎日加えたとき、形成されるマンモスフィアの数を、HTwistでは40およびMSP細胞では20減少させた図3D。最初に形成されたマンモスフィアからの細胞を分離して、さらなるDKK1処理なしの二次マンモスフィア培養に再導入したとき、本発明者らは、両方の細胞株が、二次スフィア形成能の25の減少を示すことを見出した図3E。二次マンモスフィアが、さらなる処理の非存在下において播種されたので、これらの結果は、自己複製能を有する細胞の亜集団における有意であるが中程度の減少を示唆した。SFRP1は、一次および二次マンモスフィア形成に対してDKK1よりも強力な効果を有した:加えられたSFRP1タンパク質は、HTwistおよびMSP細胞の一次マンモスフィア形成をそれぞれ50および40、二次スフィア形成を90および80減少させた図3DおよびE。組換えBMP4は、一次マンモスフィア形成を60減少させ、二次スフィア形成を90阻害した図3DおよびE。まとめると、これらのデータは、SFRP1およびBMP4ならびにそれほどではないにせよDKK1が、マンモスフィア培養物において、遊走と自己複製の両方を阻害することを示唆した。DKK1またはSFRP1をBMP4と組み合わせてHTwist細胞に加えることにより、遊走に対して相加効果を有した個別に加えたときの3、5および2倍と比べて、それぞれ8および7倍、図S3B。一次マンモスフィア形成において、本発明者らは、DKK1またはSFRP1がBMP4とともに加えられたとき、スフィア形成効率の74の低下を認めた図S3C。これは、DKK1およびSFRP1が個々に加えられたときの40の減少、ならびにBMP4が個々に加えられたときの64の減少に匹敵した図S3C。これらの応答は、それらの3つの物質が少なくとも部分的に、異なる下流の経路を介して働くこと、ならびに遊走能および自己複製能の維持が、オートクリンWntシグナル伝達経路の活性化と連続的なシグナル伝達との組み合わせ、ならびにBMPシグナル伝達の不活性化に依存するという考えを強化することを示唆した。本発明者らは、TGF-ベータレセプターI型に特異的なインヒビターA83-01およびSB431542によるオートクリンTGF-ベータシグナル伝達の阻害が、HTwistおよびMSP細胞の遊走およびマンモスフィア形成を、BMP4タンパク質を加えたときと同様の程度に減弱させたことに注目する図S3DおよびS3E。しかしながら、これらの2つの物質の組み合わせは、相加効果を有しなかった図S3DおよびEことから、BMP4が、TGF-ベータシグナル伝達を干渉することによってその抑制効果の大部分を発揮すると示唆される。まとめると、これらのデータは、HTwistおよびMSPにおける進行中のオートクリンTGF-ベータシグナル伝達による遊走能および自己複製能の維持が、BMPシグナル伝達の同時の減少に依存することを示唆した。実施例6:オートクリンシグナル伝達はMSP-RAS細胞の腫瘍原性および転移をコントロールする不死化された非腫瘍原性MSP細胞の遊走能および自己複製能をコントロールする際のオートクリンシグナル伝達に対する役割を確立した後、本発明者らは、それらの形質転換した誘導体であるMSP-RAS細胞が、同様の制御ループを用いて腫瘍原性および転移性の挙動を維持するか否かを判定することを望んだ。MSP-RAS細胞は、その不死化された対応物と同様に、SFRP1またはBMP4による遊走およびツモールスフィア形成の阻害に対して感受性のままだった後者の形質は、クローン密度における形質転換した細胞の足場非依存性増殖を評価する。MSP-RAS細胞を組換えSFRP1に曝露することによって、運動性がインビトロにおいて9倍減少した一方で、BMP4処理によって、遊走が4倍阻害された図4A。これらの細胞をSFRP1およびBMP4で組み合わせて処理することによって、遊走が相乗的に30倍阻害された図4A。重要なことには、MSP-RAS細胞の増殖は、これらの組換えタンパク質の存在によって影響されず、再度、非特異的な細胞分裂抑制作用および細胞傷害作用が排除された図S4。MSP-RAS細胞を、一次ツモールスフィアの形成中に組換えSFRP1およびBMP4で処理すると、一次スフィア形成と二次スフィア形成の両方が、単独で加えられた各因子によって40減少し、SFRP1およびBMP4が組み合わせて加えられると60減少した図4B。二次ツモールスフィアの形成の阻害は、SFRP1およびBMP4で処理した際の長期間にわたる自己複製能の喪失を示唆した。まとめると、これらのデータは、オートクリンシグナル伝達が、ツモールスフィアの形成によって判断されるように、RAS癌遺伝子による形質転換後のMSP細胞において遊走能および自己複製能をコントロールし続けることを示唆した。MSP-RASのこれらの特性は、その不死化された形質転換されていない前駆体と同様に、それらを天然に存在する分泌型シグナル伝達アンタゴニストに曝露することによって乱され得る。観察されたツモールスフィア形成の減弱が、腫瘍開始細胞に特徴的な細胞表面マーカーAl-Hajjら、2003の発現の喪失と相関したか否かを試験するために、本発明者らは、フローサイトメトリーを行うことにより、MSP-RAS一次ツモールスフィアのCD44/CD24細胞表面マーカープロファイルを解析した。本発明者らは、MSP-RASコントロールツモールスフィアが、少数のCD24陽性細胞しか含まず6.4,図4C、大部分が、腫瘍開始能について濃縮された細胞集団に関連するCD44高/CD24低-陰性プロファイルを示すことを見出した。対照的に、SFRP1またはBMP4の存在下において形成されたより少数の一次ツモールスフィアでは、本発明者らは、SFRP1とBMP4の両方で処理された細胞において、6.4から40および43までのCD24陽性細胞の増加を認めた図4C。しかしながら、これらの細胞のほとんどが、CD44を発現し続け、少数しかCD44低-陰性/CD24陽性プロファイルに変化しなかった。それゆえ、処理された際のこれらの細胞表面マーカーの発現の変化は、分化様プロセスの可能性を示唆したが、ツモールスフィアの阻害の程度と緊密に相関しなかった。本発明者らはまた、インビトロでのSFRP1およびBMP4への曝露によって、その後のインビボでのMSP-RAS細胞の挙動が影響を受けるか否かを判定することも望んだ。このために、本発明者らは、SFRP1、BMP4もしくはその両方の組み合わせによる5日間のインビトロ処理中に形成された一次コントロールMSP-RASツモールスフィアまたは残りのツモールスフィアから単一細胞懸濁液を調製した。これらの集団をマウスの乳房脂肪パッドに注射した後、本発明者らは、エキソビボでSFRP1、BMP4またはその両方の組み合わせに曝露されたMSP-RAS細胞のマンモスフィアを起源とする腫瘍の重量が、平均して3倍減少したことに注目した図4D。しかしながら、本発明者らは、BMP4および組み合わせで処理された群については腫瘍発生率の中程度の減少しか認めなかった30、図4D。これらのデータから、十分な数の腫瘍開始細胞が、処理されたツモールスフィア内に残存していることにより腫瘍が生じることが示唆されたが、しかしながら、腫瘍の重量が減少したことによって示唆されるように、その腫瘍開始細胞は、インビボにおいて活発に増殖するおよび/または生存する能力が損なわれていた。さらに、本発明者らは、コントロール細胞と比較したときの、エキソビボで処理された細胞の同所注射後の肺および肝臓転移の有意な減少に注目した図4EおよびF。負荷された原発腫瘍の差を説明するために、本発明者らは、肺および肝臓の表面上において計数された転移巣の数を、対応する原発腫瘍の重量で正規化した。この尺度を用いたとき、本発明者らは、SFRP1処理群における肺転移の2倍の減少、BMP4における7.5倍の減少および組み合わせ処理群における4.5倍の減少を認めた図4EおよびF。インビトロにおける遊走に対する影響と同調して、SFRP1およびBMP4との組み合わせ処理は、肝臓における転移巣の数の平均>10倍の減少に対して相乗効果を有したそれに対して、SFRP1およびまたはBMP4のいずれか単独でエキソビボにおいて処置されたマウスでは2.5および5倍の減少。本発明者らは、実際の腫瘍開始において組換えSFRP1およびBMP4が存在することが、本発明者らが以前に行ったエキソビボ前処理と比べて、MSP-RAS細胞に対してより強い効果を発揮し得ると推測した。このために、本発明者らは、SFRP1、BMP4およびその両方の組み合わせとともに、MSP-RAS細胞を限界希釈物としてマウスの皮下に埋め込んだ図4G。さらに、20μlのPBSまたは記載の用量で組換えタンパク質を含むPBSを、MSP-RAS細胞を埋め込んだ1、2、3および7日後に、腫瘍周囲に注射した。それを行ったことにより、SFRP1、BMP4または組み合わせ処置に対して腫瘍発生率が少なくとも1桁低下した図4Gことから、腫瘍開始においていずれかのタンパク質が存在することが、MSP-RAS細胞の腫瘍原性を乱すのに十分であることが示唆される。要約すると、BMP4およびSFRP1によるMSP-RAS細胞のエキソビボ処理は、これらの細胞がインビボにおいて活発に増殖する能力、および続いて同所埋め込み部位から転移を生じる能力を乱した。さらに、BMP4およびSFRP1のインビボ送達は、MSP-RAS細胞が腫瘍を開始する能力を減弱させた。ここまでの観察結果とまとめると、これらのデータから、進行中のオートクリンシグナル伝達が、間葉系およびSC様の状態にある不死化された非腫瘍原性細胞の生物学的特性ならびにそれらの形質転換した誘導体の対応する形質の維持において重要な役割を果たすと示唆された。実施例7:許容的な細胞外の環境を作ることによって、TGF-ベータはEMTを開始することが可能になる本発明者らは、WntおよびTGF-ベータ経路が関わるシグナル伝達チャネルが遊走能および自己複製能を維持するためだけに働くのか、またはそれらが、上皮細胞が間葉系およびSC様の状態に初めて入るのを誘導するためにも機能し得るのかを判定することを望んだ。はじめに、本発明者らは、HTwistおよびMSP細胞においてオートクリン様式で機能する同じタンパク質リガンドが、EMTを誘導するためにHMLE24細胞に適用され得るかを検討した。EMTプログラムの活性化に対する初期のおよび特異的な読み出しとして、本発明者らは、Zeb1およびZeb2EMT-TFの発現をモニターした。なぜなら、それらのmRNA発現は、親のHMLE24細胞ではほとんど存在しなかったが、HTwistおよびMSP細胞では高度にアップレギュレートされたからである図1A。対照的に、他のEMT-TFは、HMLE24細胞では有意なレベルですでに発現されていたかTwist、または翻訳後に制御されていたSnail、Slug、図1B~D。さらに、本発明者らは、間葉系マーカーであるN-カドヘリンその発現は、本発明者らによってHMLE24細胞ではほとんど存在しないと見出されていたの発現を測定した図1BおよびD。はじめに、本発明者らは、本発明者らの以前の実験によってEMT関連特性の維持と結びつけられた3つのシグナル伝達因子のうちの1つであるTGF-ベータに曝露することによってHMLE24細胞においてEMTを誘導することを試みた。TGF-ベータは、EMTを誘導すると報告された歴史的に最初の細胞外因子だったがOftら、1998、3日間にわたって組換えTGF-ベータ1でHMLE24細胞を処理しても、N-カドヘリン、Zeb1またはZeb2の有意な誘導はもたらされなかった図5A。注目すべきことに、後者は、TGF-ベータシグナル伝達の標的として記載されているShirakiharaら、2007。HMLE24細胞をTGF-ベータで処理したとき、Smad-レポーターアッセイは、活性の中程度のアップレギュレーションを証明したので1.5倍、図S5A、上記の応答性の欠如は、TGF-ベータシグナルを処理できないことに起因しなかった。さらに、これらのデータは、BMPリガンドからの任意の抑制シグナルを圧倒するのに十分なTGF-ベータの添加量が、HMLE24細胞によって正常に産生されることを示唆した。EMT誘導に対する、共同して働くさらなるシグナル伝達経路の寄与を調査するために、本発明者らは、単独でまたはHMLE24細胞と組み合わせて加えられる以下の調節因子の効果を検討した:1HMLE24細胞におけるオートクリンWntシグナル伝達の脱阻止Unblocking。SFRP1中和抗体は入手可能でなかったので、本発明者らは、小ヘアピンshRNAを発現するレンチウイルスベクターを用いて、HMLE24細胞においてSFRP1をコードするmRNAの発現をノックダウンした図S5BおよびC。このWnt阻害の減少を補完するために、本発明者らは、それらのshRNAと組み合わせて抗DKK1中和抗体を使用した。2Wnt5aの添加。Wnt5aは、HTwistおよびMSP細胞においてアップレギュレートされる3つの非古典的Wntリガンドの中に入っていたので、本発明者らは、組換えWnt5aをHMLE24細胞の培養物に加えた。3細胞散乱の促進。おそらく、上皮島の外縁の細胞は、すべての面において細胞間ジャンクションを形成できないので、以前に本発明者らおよびその他の者は、それらの細胞が、上皮の特徴のいくつかを失っていることに注目していたGodarら、2008;Savagnerら、2005;Zavadilら、2001。ゆえに、さらなる潜在的なEMT誘導シグナルとして、本発明者らは、その培養細胞に抗E-カドヘリンモノクローナル抗体を加えることによって、アドヘレンスジャンクションの形成を阻止した。単一の因子または様々な組み合わせと比較して、これらの物質の効果を要約するために図5A、これらのEMTを誘導する構成要素のすべてをTGF-ベータとともに加えることだけで、Zeb16倍とZeb225倍の両方ならびにN-カドヘリンのRNA発現9倍、図5Aが有意に誘導された。ゆえに、古典的Wnt経路の脱抑制、非古典的Wntシグナル伝達の活性化、およびアドヘレンスジャンクション形成の乱れは、TGF-ベータ経路と共同して働くことにより、EMT-TFの発現を誘導する。本明細書中以後、本発明者らは、SFRP1発現の同時ノックダウンにおいて使用されるこの誘導カクテルのことをiEMTと称する。実施例8:WntおよびTGF-ベータ経路の同時刺激によって、HMLE24細胞は間葉系およびSC様の状態に入ることが可能になるiEMTカクテルによって引き起こされるEMTプログラムが、安定的に間葉系およびSC様の状態に入る細胞をもたらすか否かは不明なままである。この可能性を検討するために、本発明者らは、HMLE24-shGFP細胞の2つの培養物を独立してTGF-ベータだけで、およびHMLE24-shSFRP1細胞の2つの培養物をiEMTカクテルで、14日間にわたって処理した。本発明者らは、それらの応答を、未処理のHMLE24-shGFPおよび-shSFRP1コントロール細胞と比較した。最初の処理の3日後に、上皮島の明白な細胞の散乱および分散が、iEMT培養物だけで観察された図S5D。14日間にわたって、これらの細胞は、前後の極性を示す単一の細胞を特徴とする間葉系の形態を獲得した図S5D。これらの14日間の後のさらなる処理の休止後、iEMT細胞は、組織培養におけるその後の少なくとも12継代約36の集団倍増にわたって、上皮の表現型に戻らなかった図5B、図S5D。これらの表現型的にphenoypically安定したiEMT細胞において、本発明者らは、E-カドヘリン発現からN-カドヘリン発現への切り替えを認めた図5CおよびD、ThieryandChopin,1999。対照的に、TGF-ベータだけで処理された細胞TGF-ベータ細胞は、N-カドヘリンのほんのわずかのアップレギュレーションを示したが、E-カドヘリンレベルは、強いままだった図5CおよびD。E-カドヘリンの抑制は、ある特定のEMTの誘導に対する律速段階であると示されているOnderら、2008。EMT-TFであるZeb1、Zeb2およびTwistのRT-PCR解析は、iEMTで処理された細胞が、安定的に間葉系状態に移ったというさらなる証拠を提供した:これらのすべてが、未処理のコントロールおよびTGFb細胞と比べて>100倍アップレギュレートされた図5C。さらに、進行中のオートクリンTGF-ベータシグナル伝達を示すように、本発明者らは、Smad-レポーター活性の3~4倍の増加図S5EおよびiEMT細胞における容易に検出可能なSmad2のリン酸化を認めたすべてがコントロールおよびTGF-ベータ処理細胞と比べて図5D。本発明者らはまた、これらの細胞におけるオートクリンの非古典的Wntシグナル伝達を示唆する、PKCおよびJNKのリン酸化の増加と平行して生じる高レベルのWnt5aも検出した図5D。本発明者らは、古典的Wntシグナル伝達を示唆する、ベータ-カテニン/TCF-LEFレポーター活性の4倍の上昇を測定した図S5E。本発明者らは、EMTの安定的な維持が、EMTに入るのを以前に引き起こした同じ因子が関わるオートクリンシグナル伝達ループの確立と同時に起こると結論付けた。本発明者らはまた、間葉系表現型の安定的な誘導が自己複製能の獲得と同時に起きるか否かも調べた。未処理コントロール細胞と比べて、iEMT細胞は、70倍多いマンモスフィアを形成し、遊走能は、50倍高かった図5E。対照的に、TGF-ベータ細胞は、マンモスフィア形成効率の有意であるがより小さい増加10倍を示したが、運動性の増加を示さなかった。これらの結果と同調して、本発明者らは、iEMT処理細胞では98がCD44高/CD24低-陰性細胞を示したことに比べて、TGF-ベータ処理細胞ではCD44高/CD24低-陰性細胞の割合が比較可能な程度に小さく0.2から1.5に増加したことを認めた図5F。重要なことには、これらの作用は、iEMT細胞、TGF-ベータ細胞とコントロール細胞との間の増殖率の差異に起因すると考えることができなかった;実際には、接着性単層培養物における増殖率は、TGF-ベータ細胞またはiEMT細胞において安定的により低かった図S5G。注目すべきことに、iEMT細胞は、オートクリン環境の乱れに対して感受性のままだった:組換えSFRP1、BMP4またはその両方の組み合わせによるこれらの細胞の処理は、遊走およびマンモスフィア形成を、HTwistおよびMSP細胞のそれに匹敵する程度に阻害した図5G。本発明者らはまた、iEMTカクテルで処理された細胞の間葉系およびSC様の状態が、そのような細胞が細胞形質転換のプロセスを経た後に維持されるという証拠も得た。したがって、これらの様々な細胞集団がRAS癌遺伝子によって形質転換されたとき、マウスの乳房脂肪パッドに埋め込まれたiEMT細胞だけが、MSP-RAS細胞と類似の高頻度で肺転移巣を生じた。対照的に、RASによって形質転換されたコントロールHMLE細胞および対応するTGF-ベータ処理集団は、単なる弱い転移性だった図5H。まとめると、これらの知見は、間葉系およびSC様の状態の維持に関わる同じ因子が、その誘導物質としても働き得、以前にこれらの機能的特質を非常に低レベルで示した集団から遊走およびSC様の特性を有する細胞を取り出すことができることを示唆した。それらの結果はまた、これらの応答を誘発する際の高効率が、2つ以上の因子を使用することによって得られることも証明する。実施例9:ヒト乳腺から単離された基底細胞集団は間葉系マーカーおよびEMT-TFを発現するHTwist、MSPおよびHMLE24-iEMT細胞の遊走および自己複製の形質が、正常な乳腺の範囲内のある特定の細胞集団の特性を反映するか否かを明らかにするために、本発明者らは、HMLE細胞ならびにそれらの様々な間葉系およびSC様の誘導体と表現型的に類似のMEC集団をヒト乳腺から同定しようと試みた。それを行うために、本発明者らは、最近報告された細胞表面マーカーを用いて、乳房縮小術組織から調製された2つの異なる細胞集団を単離し、培養して増殖させた。FACS解析によって、本発明者らは、これらの集団を、CD49fの発現が高いことおよびEpCAMの発現が低いかまたはないことに基づいて基底細胞と分類し、そしてCD49fの発現および高レベルのEpCAMに基づいて管腔系列に限定される細胞と分類した図6A、Eirewら、2008;Limら、2009;Stinglら、2001。幹細胞および二分化能bi-potentの前駆細胞の存在は、基底細胞に限定されると見出されているEirewら、2008;Stinglら、2001。本発明者らはさらに、以前に記載された種々の系列マーカーStingl,2009;Visvader,2009に概説されているによって、本発明者らのソーティングされた集団を特徴付けた。予想通り、ソーティングされた管腔細胞は、系列マーカーであるサイトケラチン8、18およびMUCIを発現したのに対し、ソーティングされた基底細胞は、それらを発現しなかった図6C。逆に、ほとんどの基底細胞が、サイトケラチン14を発現した一方で、いくつかのクラスターを除く管腔細胞の大部分が、それを発現しなかった図6D。重大なことに、基底細胞だけが、重層化した上皮における基底細胞集団および幹細胞集団の機能的マーカーであるSenooら、2007高レベルの核p63を示した図6D。注目すべきことに、本発明者らは、基底培養物内で、成熟筋上皮細胞のマーカーであるアルファ-平滑筋アクチンをもっぱら発現しているいくつかの細胞も認めた図6D。要約すると、本発明者らは、本発明者らの細胞ソーティングおよびその後の単層培養における増殖によって、適切なマーカーを発現し続ける基底細胞および管腔細胞の高度に精製された集団が得られると結論付けた。本発明者らは、基底細胞集団が主に、前後の極性を示す単一の細胞からなるのに対し、管腔細胞が、堅固に密集した上皮島を形成することに注目した図6B。本発明者らはまた、上皮および間葉系のマーカーの発現も測定した:実際に、基底細胞は、間葉系マーカーであるビメンチンを高レベルで発現したが、それらは、ZO-1を含むタイトジャンクション図6Eも、低レベルのE-カドヘリンによって判断されるようなアドヘレンスジャンクションも形成しなかったそれらのほとんどが原形質膜に局在化しなかった図S6A。著しく対照的に、管腔細胞は、細胞膜に局在化する高レベルのZO-1およびE-カドヘリンその両方が、分化した上皮細胞に関連するを発現した図6E、S6A。本発明者らがEMT関連形質の誘導および維持に関連づけたシグナル伝達経路具体的にはWntおよびTGF-ベータ経路の活性化と基底細胞の間葉系特性が相関するか否かを判定することに進んだ。実際に、基底細胞は、活性なWntシグナル伝達を示唆する、細胞質および核のベータ-カテニン発現を示した。対照的に、管腔細胞では、ベータ-カテニン発現は、原形質膜にほぼ完全に限局された図6E。さらに、本発明者らは、基底細胞が、TGF-ベータシグナル伝達を示唆する高レベルの核Smad2、ならびにEMT-TFであるZEB1およびTwistを発現すると見出した図6F。これらの3つのタンパク質の発現レベルは、管腔細胞においてより低く、細胞質におけるものだった図6F。これらのデータから、基底細胞が、より間葉系の状態にあり、以前に研究されたHTwist、MSPおよびHMLE24-iEMT細胞と同様のEMT-TFを発現すると示唆された。基底集団は、幹細胞および筋上皮系列と管腔系列の両方を生じる二分化能の前駆細胞を含むと報告されているのでEirewら、2008;Stinglら、2001、本発明者らのデータは、乳腺上皮幹細胞および前駆細胞集団が、管腔に限定される細胞に分化する際に間葉系上皮転換MET様のプロセスを起こし得ることを示唆した。実施例10:初代MECにおける遊走および自己複製の特性は、HTwistおよびMSP細胞と類似のシグナル伝達機構によってコントロールされる次に、本発明者らは、本発明者らが単離した基底細胞が、HTwistおよびMSP細胞の機能特性と同様の、間葉系およびSC様の状態の機能特性を示すか否かを試験することを望んだ。はじめに、本発明者らは、マンモスフィアアッセイを用いて、前駆細胞またはSCの存在について試験した。本発明者らのもとでは、ソーティングされていないバルクMEC集団は、0.15というマンモスフィア形成頻度を示したのに対し、10倍の濃縮に対応する上記基底細胞の1~2が、マンモスフィアを形成した図7A。対照的に、管腔細胞のわずか0.09が、概してより小さいサイズのマンモスフィアを生じた図7A。著しいことに、一次スフィアが分離されて二次スフィア形成のためにマンモスフィアアッセイに再導入されたとき、本発明者らは、基底細胞においてマンモスフィア形成効率の5倍上昇を認め、このことから、スフィア形成細胞の増殖が示唆された図7A。ソーティングされていない細胞では、本発明者らは、マンモスフィア形成効率の2倍上昇を認めた。しかしながら、管腔細胞によって形成される小さいマンモスフィアは増殖しなかった。これらのデータから、基底細胞がマンモスフィアアッセイにおいて自己複製することが示唆され、それらが前駆細胞およびSCについて濃縮されるという見解が増強される。HMLEモデル系において、本発明者らは、EMTを経ることによって、遊走特性と自己複製特性の両方がもたらされることを認めており、それにより、本発明者らは、ソーティングされた初代MECの運動性の測定を促された。実際に、基底細胞は、高度に運動性であり、ソーティングされていないバルクMECと比べて、インビトロにおいて20倍高い遊走能を示した。対照的に、管腔細胞のほとんどが遊走しなかったバルクMECよりも2倍低い運動性に対応した図7B。まとめると、これらのデータから、HTwistおよびMSP細胞と同様に、初代基底細胞が、自己複製能と遊走能の両方について濃縮されることが証明される。本発明者らは、HTwistおよびMSP細胞において作動しているオートクリンループが、基底MECの自己複製能および遊走能の維持を可能にするか否かを試験することも試みた。組換えBMP4は、初代MECに対して強い抗増殖作用を発揮したのでデータ示さず、本発明者らは、その代わりに、TGF-ベータI型レセプターに特異的な薬理学的インヒビターA83-01およびSB431542を使用することによって直接、TGF-ベータシグナル伝達を阻害した。さらに、本発明者らは、組換えSFRP1を適用することによって、オートクリンWntシグナル伝達を阻止した。単層培養物において両方のTGF-ベータインヒビターまたはSFRP1で5日間にわたって毎日処理した後、基底細胞において、さらなる処理なしの遊走アッセイおよびマンモスフィアアッセイを行った。重要なことには、これらの処理は、単層培養物において基底細胞の増殖を減少させなかったことから、任意の通常の細胞傷害cytoxic作用が排除された図S7A。注目すべきことに、TGF-ベータインヒビターで処理された基底細胞は、より上皮の形態を示した図S7B。著しいことに、TGF-ベータインヒビターまたはSFRP-1での前処理によって、マンモスフィア形成が80~90減少した図7C。さらに、本発明者らは、TGF-ベータインヒビターでの前処理によって運動性の完全な阻害およびSFRP1での前処理によって3倍の減少を認めた図7D。WntおよびTGF-ベータリガンドが外因的に加えられなかったので、これらのデータは、基底細胞が、HTwistおよびMSP細胞と同様に、オートクリンTGF-ベータおよびWntシグナル伝達経路を使用して、自己複製能と遊走能の両方を維持したことを示唆する。HMLE24細胞を用いた本発明者らの実験と類似して、本発明者らは、類似のEMT誘導カクテルWnt5a、抗E-カドヘリンおよび抗DKK1抗体とともにTGF-ベータからなるを介して管腔細胞において遊走能および自己複製能が誘導され得るか否かを判定することを望んだiEMT-II、図7E。本発明者らは、iEMT処理中に上皮島の明白な細胞の散乱および分散を認めたが、他の培養物では認められなかった図S7D。しかしながら、HMLE24細胞とは対照的に、これらの管腔細胞の初代培養物において、本発明者らは、単一の薬剤としてTGF-ベータで5日間処置した後に運動性細胞とマンモスフィア形成細胞の両方の有意な増加を認めたそれぞれ8倍および3倍、図7EおよびFことから、初代管腔細胞が、HMLE24細胞よりもTGF-ベータに対して応答性であると示唆される。しかしながら、そのiEMTカクテルを加えることによって、20倍超の運動性促進と5倍のマンモスフィア形成効率との相加効果がもたらされた図7EおよびF。注目すべきことに、コントロール管腔細胞のアッセイにおけるこれらの特性のベースラインレベルは、最小だった平均して、0.0003の細胞が遊走し、0.03がマンモスフィアを生じた。本発明者らはまた、マンモスフィアアッセイとは対照的に、単層での増殖では、TGF-ベータおよびiEMTで処理された管腔培養物が有意に減少したことも認め、このことから、これらの細胞が、TGF-ベータの成長抑制作用deWinterら、1997に応答すると示唆される。まとめると、これらの結果から、ヒト乳腺組織から単離された基底MECが、不死化HTwist、MSPおよびiEMT集団と類似の遊走および自己複製の特性について濃縮されることが示唆された。新たに単離された基底細胞におけるこれらの特性の維持は、間葉系/SC様の状態にある不死化されたHMLE細胞と形質転換したHMLE細胞の両方において作動しているオートクリンループと同一ではないとしても同様のオートクリンループに依存するとみられる。重要なことには、これらのオートクリン因子は、先の実験において証明されたようなHMLE細胞におけるEMTの誘導と同様に、遊走および自己複製の特性を誘導するために管腔細胞に適用され得る。まとめると、これらのデータから、HMLE細胞株においてEMTを経ることが、基底MECに天然に存在する特性の採用を反映すると示唆される。実施例1~10に対する材料および実験手順細胞株。ヒト乳腺上皮細胞株HMLEを、記載されているように作製し、標準的なプロトコルElenbaasら、2001に従ってMEGM培地Lonza中で増殖させた。細胞株の詳細な説明を下に提供する。初代乳腺上皮細胞の培養。以前に記載されたようにStinglら、2001、閉経前の女性の乳房縮小術から初代ヒト乳腺上皮細胞MECの単一細胞の懸濁液を作製した。3人のドナーからのデータが本研究に含められている。初代MECを、4O2、5CO2の加湿雰囲気において、1ウシ胎児血清が補充されたMEGM培地Lonza中、コラーゲンIコーティングプレートMillipore上で培養した。遊走および浸潤アッセイ。遊走アッセイの場合、2×104個の細胞を、8μmの細孔を有する24ウェル細胞培養インサートBoydenChambers,BDFalconに播種した。浸潤アッセイの場合、マトリゲルでコーティングされたインサートBDFalconを使用した。12~48時間後、そのフィルターの上の面の細胞を綿棒で除去した。可視化のために、フィルターの下の面の細胞を固定し、Diff-Quick染色キットDadeBehringで染色した。マンモスフィアおよびツモールスフィアアッセイ。以前に記載されたDontuら、2003ものから改変を加えてアッセイを行った:20ng/mlEGF、10ng/mlbFGF両方ともSigmaおよびB27Gibcoが補充された1.3メチルセルロースStemCellTechnologiesを含むMEGM培地の入った96ウェル超低接着プレートCorningに1000個の細胞/ウェルを播種した。一次スフィアを、トリプシン処理によって分離し、二次スフィア形成に向けて5~7日後に再度プレーティングした。動物試験。研究に関わるすべての動物が、MITCommitteeonAnimalCareによって承認されたプロトコルに従った。腫瘍原性研究の場合、PBSに1:4希釈された100μLのマトリゲルBDBiosciences中の記載の細胞数を、同齢の雌のヌードnu/nuマウスの側腹部の両側に皮下注射した。10週間後、マウスを屠殺し、剖検した。同所性注射の場合、PBSに懸濁された1×105個の細胞を、同齢の雌NOD-SCIDマウスの2つの鼠径部の乳腺の各々に注射した。10週間後または腫瘍が直径>1cmに達したら、マウスを屠殺した。検体単離から3時間以内に肺表面への転移を、蛍光顕微鏡を用いて数えた。免疫ブロット。タンパク質を、RIPA溶解緩衝液を用いて抽出し、濃度をLowryアッセイBioradによって測定した。タンパク質溶解産物を、4~12Bis-Trisゲル上で分離し、PVDF膜に転写し、HRPに連結された二次抗体GEHealthcareでプロービングし、ECL試薬ThermoScientificで可視化した。免疫蛍光法。細胞をLabtekII-CC2チャンバースライドNunc上で生育し、4パラホルムアルデヒドで固定し、0.2Triton-X-100/PBSで透過処理した後、10ヤギ血清Caltagでブロッキングした。二次抗体は、Alexa-488または-594Invitrogenに結合されたヤギ抗マウスまたはヤギ抗ウサギだった。細胞の核をDAPISigmaで可視化した。スライドをSlowFadeGoldアンチフェード試薬Invitrogenでマウントした。蛍光励起細胞選別FACSおよびフローサイトメトリー。標準的なプロトコルに従って細胞を調製し、FACSの前に氷上で0.1FBS/PBSに懸濁した。7-AADBDBiosciencesを使用して、死細胞を除外した。サンプルをBDFACSAriaSORPにおいてソーティングし、BDLSRIIにおいてBDFACSDivaSoftwareBDBiosciencesを用いて解析した。抗体アレイ。HMLE24およびHTwist細胞の培養培地を48時間インキュベートした後に回収し、20μmのメッシュBDFalconで濾過した。各サンプルをビオチン化し、3つの希釈率でLシリーズ500-抗体アレイRaybiotechとハイブリダイズした。各アレイにおいて、タンパク質強度値に対してバックグラウンドサブトラクションを行い、内部標準で補正しscaled、1単位未満を切り捨てたflooredat1unit。各希釈率において、3つ組のアレイに対するt検定のp値を用いてタンパク質をランク付けし、異なる方向の変化を示す抗体を除外した。上位10とアッセイされたタンパク質を、3つの希釈率にわたる平均ランクによって選択した。ELISA。培養培地を48時間インキュベートした後に回収し、20μmのメッシュBDFalconで濾過した。すべてのELISAを、商業的に入手可能なキットを製造者の指示書に従って使用して行った。DKK1、ペントラキシン3、TGF-ベータ1、VEGF-cおよびuPAに対しては、キットおよび補助的製品をRDsystemsから購入した。すべてのELISAの読み出した結果を細胞数で正規化した。マイクロアレイハイブリダイゼーション、データ収集および解析。HMLE、HTwistおよびHSnail細胞に対する3つの独立した培養プレートから、ならびにHMLE24および独立して作製された3つのMSP細胞株の2つの独立したプレートから、RNeasyMiniキットQiagenを用いて全RNAを抽出した。cRNAの合成、およびマイクロアレイのハイブリダイゼーション/スキャニングは、AffymetrixGeneChip製品を用いて、GeneChipのマニュアルに記載されているように行った。生データCELのファイルを正規化し、Bioconductorを使用してRMAを用いてプローブセットの値にサマライズしたIrizarryら、2003。Subramanianら、2005に記載されているように、マイクロアレイのデータをGeneSetEnrichmentAnalysisGSEAに供した。このために、MolecularSignatureDatabaseMSigDB、http://www.broadinstitute.org/gsea/msigdb/からの990種のキュレートされたcurated遺伝子セットを照会した。細胞株。ヒト乳腺上皮細胞株HMLEは、記載されたように作製され、ヒトテロメラーゼ酵素の触媒サブユニット、hTERTおよびSV-40ラージT抗原を発現するレトロウイルスベクターを用いて不死化されたElenbaasら、2001。HMLE細胞は、標準的なプロトコルに従って、MEGM培地Lonza中で増殖された。CD24陽性HMLEHMLE24細胞は、製造者の指示書に従うCD24抗体BDBiosciencesによるポジティブ選択のために、マウスIgG用のCellectionKitInvitrogenを用いてMACSによって精製された。間葉系亜集団MSP細胞は、HMLE細胞のコンフルエントな単層培養物において自由に浮遊している細胞の少数集団として検出された。これらのMSP集団は、HMLE培養物から取り出されると、新しい培養皿に再度接着し、その後、単層培養物として増殖された。プラスミド、ウイルス産生および標的細胞の感染。HMLE細胞は、pBABE-Twistまたは-Snailベクターに感染することにより、以前に記載されたようにManiら、2008;Yangら、2004HTwistおよびHSnail細胞を産生する細胞だった。腫瘍原性タンパク質および緑色蛍光タンパク質GFPを発現するHMLE、HTwistおよびMSP細胞を作製するために、細胞にpBabe-V12H-RASElenbaasら、2001およびpRRL-GFPベクターを感染させた。SFRP1を安定的にノックダウンするために、pLKO1小ヘアピン発現ベクターをOpenBiosystemsから購入したshSRP1_a、クローンIDTRCN0000062168、shSFRP1_b、クローンIDTRCN00000621672。標的細胞の作製および感染は、以前に記載されたStewartら、2003。感染した細胞は、2μg/mLピューロマイシン、200μg/mLハイグロマイシンおよび200μg/mLネオマイシンで選択した。ルシフェラーゼアッセイ。レポータープラスミドは、以前に記載された:Super8xTOPFlash、対応するFOPFlashコントロールプラスミドVeemanら、2003およびSBE4-lucZawelら、1998。Fugene6トランスフェクション試薬Rocheを用いて、5.0×104個の細胞を、500ngの記載のホタルルシフェラーゼレポータープラスミドおよび50ngのpGL-SV40-ウミシイタケルシフェラーゼノーマライゼーションコントロールプラスミドでコトランスフェクトした。トランスフェクションの24~48時間後に溶解産物を回収し、ホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼ活性をDual-LuciferaseReporterSystemPromegaで測定した。組換えタンパク質およびインヒビター。組換えヒトDKK1、SFRP1およびマウスWnt5aは、RDSystemsから購入した。組換えBMP4は、Stemgentから入手した。小分子インヒビターは、Tocris製A83-01,Tojoら、2005およびSigma製SB431542,Lapingら、2002だった。抗DKK1抗体は、RDSystemsから、抗E-カドヘリン抗体HECD-1は、Invitrogenから入手した。抗体免疫ブロット法:ベータ-アクチン、Snail、TwistAbeam;E-カドヘリン、N-カドヘリンBDTransduction;ZEB1BethylLabs;ホスホ-SAPK/JNKT183/Y185,クローンG9、JNK、ホスホ-c-JUNS63、JUN、ホスホ-PKCpan,ベータII/Ser660、SlugCl9G7、ホスホ-smad2、smad2/3CellSignaling;Wnt5aRDSystems。免疫蛍光法:E-カドヘリン、smad2/3、Twist、ZEB1,免疫ブロット法を参照のこと;アルファ-平滑筋アクチン-Cy3Sigma、ベータ-カテニン、すべてBDTransduction、サイトケラチン8TROMA-1,DevelopmentalStudiesHybridomaBank、サイトケラチン14AF64,Covance、サイトケラチン18DC10,NeoMarkers、MUC-1HMPV,BDPharmingen、pan-サイトケラチンBiogenex、p634A4,SantaCruz、ビメンチンV9,Sigma、ZO-1Invitrogen。FACS:EpCAM-FITCStemCellTechnologies、CD24-FITCBDPharmingen、CD31-APCWM59,BDPharmingen、CD44-APCBD-PharmingenCD45-V450BDHorizon、CD49f-PEBDPharmingen。RNAの調製およびRT-PCR解析。RNeasyMicroキットQiagenを用いて全RNAを単離した。SuperscriptIIIFirstStrandSynthesisキットInvitrogenを用いて逆転写を行った。SYBRGreenMixIRocheDiagnosticsを増幅のために使用し、サンプルをLightcycler-IIInstrumentRocheDiagnosticsにおいて泳動した。解析は、以前に記載されたYangら、2004。プライマーのリストを下に提供する。増殖アッセイ。細胞の成長速度を測定するために、1000個の細胞を96ウェルプレート上に3つ組で播種した。細胞の生存率を、CellTiter-GloPromegaを製造者の指示書に従って使用して測定した。統計解析。データは、平均値/-SEMとして表される。別段示されない限り、スチューデントt検定両側を用いて、2群を比較したp<0.05を有意であると考えた。当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するかまたは単なる通常の実験を用いて確かめることができる。本発明の範囲は、説明またはその中で示される詳細に限定されないと意図されている。a、anおよびtheなどの冠詞は、それと反対のことが示されないかまたは文脈から別段明らかでない限り、1つまたは1つより多いことを意味し得る。本発明の方法の多くが、細胞の集団を用いて、例えば、インビトロまたはインビボにおいて実施されることが多いことが理解されるだろう。したがって、細胞acellという言及は、その細胞が、細胞の集団例えば、実質的に遺伝的に同一の細胞を含むかまたはそれらからなる集団のメンバーである実施形態を包含すると理解されるべきである。しかしながら、本発明は、本発明の方法が個別の細胞に適用される実施形態を包含する。したがって、細胞cellsという言及は、細胞の集団内の個別の細胞に適用可能な実施形態および単離された個別の細胞に適用可能な実施形態を包含すると理解されるべきである。ある群の1つ以上のメンバーの間にまたはを含む請求項または記載は、それと反対のことが示されないかまたは文脈から別段明らかでない限り、その群の1つ、1つより多いまたはすべてのメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、それらにおいて使用されるか、またはそれらと別途関連性があることを満たしていると考えられる。本発明は、その群の厳密に1つのメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、それらにおいて使用されているか、またはそれらと別途関連性がある実施形態を包含する。本発明はまた、その群の2つ以上またはすべてのメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、それらにおいて使用されているか、またはそれらと別途関連性がある実施形態を包含する。本明細書中に記載されるすべての実施形態が、本発明のすべての異なる態様に適用可能であることが企図される。適切なときは常に、それらの実施形態のいずれもが他のそのような1つ以上の実施形態と自由に組み合され得ることも企図される。さらに、本発明は、1つ以上の請求項当初の請求項であるかその後加えられた請求項であるかを問わずからの1つ以上の限定、エレメント、節、記述用語などが、別の請求項当初の請求項であるかその後加えられた請求項であるかを問わずに導入された、すべてのバリエーション、組み合わせおよび順列を包含することが理解されるべきである。例えば、別の請求項に従属している任意の請求項が、同じ基本請求項に従属している他の任意の請求項に見られる1つ以上のエレメントまたは限定を包含するように改変され得、異なる請求項に存在するエレメントのことを言及している任意の請求項が、そのような請求項と同じ基本請求項に従属している他の任意の請求項に見られる1つ以上のエレメントまたは限定を包含するように改変され得る。さらに、請求項が組成物を述べている場合、本発明は、例えば、本明細書中に開示される方法に従って、その組成物を生成する方法、および例えば、本明細書中に開示される目的のために、その組成物を使用する方法を提供する。請求項が方法を述べている場合、本発明は、その方法を行うために適した組成物およびその組成物を生成する方法を提供する。また、請求項が組成物を生成する方法を述べている場合、別段示されない限り、または矛盾もしくは不一致が生じ得ると当業者が認識しない限り、本発明は、本発明の方法に従って生成される組成物およびその組成物を使用する方法を提供する。エレメントがリストとして、例えば、マーカッシュ群形式で示される場合、それらのエレメントの各部分群もまた開示され、任意のエレメントが、その群から除去され得る。簡潔さのために、これらの実施形態のうちのいくつかだけが、本明細書中で具体的に述べられてきたが、本発明は、そのような実施形態のすべてを包含する。通常、本発明または本発明の態様が、特定のエレメント、特徴などを含むと言及される場合、本発明のある特定の実施形態または本発明の態様は、そのようなエレメント、特徴などからなるか、またはそれらから本質的になることも理解されるべきである。本明細書中で数値範囲が述べられる場合、本発明は、その終点を含む実施形態、両方の終点が除外される実施形態、および一方の終点が含められ、他方が除外される実施形態を包含する。別段示されない限り、両方の終点が含められると想定されるべきである。さらに、別段示されないかまたは文脈および当業者の理解から別段明らかでない場合、範囲として表現される値は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、その範囲の下限の単位の10分の1までの、本発明の種々の実施形態において述べられる範囲内の任意の特定の値または部分的な範囲を想定し得る。X未満、X超または少なくともXなどの句が使用される場合ここで、Xは、数またはパーセンテージである、その範囲の下限または上限として任意の妥当な値が選択され得ると理解されるべきである。数値のリストが本明細書中で述べられる場合少なくともが前に置かれるか否かを問わず、本発明が、それらの間の任意の値またはそのリスト内の任意の2つの値によって定義される範囲に関する実施形態を包含すること、および最も小さい値が、最小値と見なされ得、かつ最も大きい値が、最大値と見なされ得ることも理解される。さらに、数、例えば、パーセンテージのリストの前に少なくともが置かれる場合、その用語は、そのリスト内の各数に適用される。数値の前に約またはおよそが置かれている本発明の任意の実施形態に対して、本発明は、その厳密な値が列挙されている実施形態を包含する。数値の前に約またはおよそが置かれていない本発明の任意の実施形態に対して、本発明は、その値の前に約またはおよそが置かれている実施形態を包含する。およそまたは約は、別段述べられないかまたは別段文脈から明らかでない限り例えば、そのような数が、可能性のある値の100を許されないほど超え得る場合、通常、ある数の1またはいくつかの実施形態では5またはいくつかの実施形態では10のいずれかの方向のその数より多いまたは小さい範囲内に入る数を包含する。さらに、本発明の任意の特定の実施形態、態様、エレメント、特徴など、例えば、任意の化合物、細胞型、条件、疾患などは、明確に除外され得る。"