"可溶性E-カドヘリンsEcadの第二、第三、第四または第五のサブドメインそれぞれEC2、EC3、EC4およびEC5の1以上を特異的に標的とするが、sEcadの第一のサブドメインEC1は標的としない治療的有効量の作用物質を患者に投与することを含んでなる、癌を有する患者を治療する方法。前記作用物質が、EC4および/またはEC5を特異的に標的とする、請求項1に記載の方法。前記作用物質がEC4を特異的に標的とする、請求項2に記載の方法。前記作用物質がEC5を特異的に標的とする、請求項2に記載の方法。前記作用物質がタンパク質骨格である、請求項1に記載の方法。前記タンパク質骨格が、sEcadのEC2、EC3、EC4またはEC5サブドメインの1以上中のアミノ酸残基を含むが、sEcadのEC1サブドメイン中のものは含まないエピトープに特異的に結合する抗体またはその断片である、請求項5に記載の方法。前記抗体が、ヒト化、キメラまたはヒト抗体である、請求項6に記載の方法。前記抗体が1本鎖抗体である、請求項6に記載の方法。前記抗体が、モノクローナルまたはポリクローナル抗体である、請求項6に記載の方法。前記抗体が、免疫グロブリンGIgGクラスまたは免疫グロブリンMIgMクラスのものである、請求項6に記載の方法。前記作用物質が検出可能に標識される、請求項1に記載の方法。前記作用物質が、悪性のE-カドヘリン発現細胞を死滅させるが、非悪性の細胞は死滅させない、請求項1に記載の方法。前記作用物質が、プログラムされた細胞死、増殖停止、アノイキス、壊死またはオートファジーによって悪性のE-カドヘリン発現細胞を死滅させる、請求項12に記載の方法。前記作用物質が、細胞毒性量の何らかの賦形剤を含まない製剤処方で投与される、請求項1に記載の方法。前記作用物質が、a患者への投与時に、前記作用物質の血清レベルが約1から10mg/kgとなるか、またはb細胞培養への添加時に、前記作用物質の濃度が、細胞培養液に対して約1から500μg/mLとなる、製剤処方で送達される、請求項1に記載の方法。医薬品が、患者において血清レベルを約1から5mg/kgとするか、または細胞培養液中の濃度を約1から400μg/mLとする、請求項15に記載の方法。前記作用物質が、経口投与、静脈内投与、鼻腔もしくは吸入投与、筋肉内投与、腹腔内投与、経粘膜投与または経皮投与により製剤処方中で送達される、請求項1に記載の方法。患者から生体試料を提供し、前記試料が、レベル上昇したsEcadまたは癌に対する別の予測バイオマーカーを含むか否かを判定する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。前記生体試料が、尿、唾液、脳脊髄液、血液または生検試料である、請求項18に記載の方法。前記工程が、前記作用物質を投与する前に行われ、sEcadレベル上昇が、前記患者が前記治療に対する適した候補であることを示す、請求項18に記載の方法。前記工程が、前記作用物質を投与した後に、1回以上行われ、sEcadレベル低下が、前記患者が前記治療に良好に反応していることを示す、請求項18に記載の方法。第二の癌治療を行う工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。前記第二の癌治療が、化学療法剤の投与、放射線治療、抗体による治療または手術を含む、請求項22に記載の方法。前記癌が上皮化組織内である、請求項1に記載の方法。前記癌が、消化管、中枢神経系、乳房、皮膚、生殖系、肺または泌尿器の癌である、請求項1に記載の方法。前記消化管の癌が、口腔、咽喉、食道、胃、腸、直腸または肛門の癌である、請求項25に記載の方法。前記皮膚癌が扁平上皮癌またはメラノーマである、請求項25に記載の方法。前記生殖系の癌が、子宮頸癌、子宮癌、卵巣癌、外陰もしくは陰唇癌、前立腺癌、精巣腫瘍または男性生殖器の癌である、請求項25に記載の方法。治療的有効量の、asEcadのEC2-EC5サブドメインの1以上からのアミノ酸配列を含むがEC1サブドメインを除く抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体、またはb前記抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体をコードする核酸配列を含む発現ベクターを対象に投与することを含んでなる、対象が癌を発症する可能性を低下させる方法。前記抗原性ポリペプチドが、EC4および/またはEC5からのアミノ酸配列を含む、請求項29に記載の方法。前記抗原性ポリペプチドが、EC4からのアミノ酸配列を含む、請求項29に記載の方法。前記抗原性ポリペプチドが、EC5からのアミノ酸配列を含む、請求項29に記載の方法。前記抗原性ポリペプチドが、sEcadに特異的に結合するが、対象において非悪性の細胞により発現されるE-カドヘリンには結合しない抗体の産生を誘発する、請求項29に記載の方法。前記抗原性ポリペプチドまたは前記発現ベクターが、経口投与、静脈内投与、鼻腔もしくは吸入投与、筋肉内投与、腹腔内投与、経粘膜投与または経皮投与によって製剤処方中で送達される、請求項29に記載の方法。前記癌が上皮化組織内である、請求項29に記載の方法。前記癌が、消化管、中枢神経系、乳房、皮膚、生殖系、肺または泌尿器の癌である、請求項29に記載の方法。前記消化管の癌が、口腔、咽喉、食道、胃、腸、直腸または肛門の癌である、請求項36に記載の方法。前記皮膚癌が扁平上皮癌またはメラノーマである、請求項36に記載の方法。前記生殖系の癌が、子宮頸癌、子宮癌、卵巣癌、外陰もしくは陰唇癌、前立腺癌、精巣腫瘍または男性生殖器の癌である、請求項36に記載の方法。治療的有効量の、asEcadのEC2、EC3、EC4またはEC5サブドメインの1以上内であるが、sEcadのEC1サブドメイン内ではないアミノ酸残基を含むエピトープに特異的に結合する抗体;bsEcadのEC2-EC5サブドメインの1以上からのアミノ酸配列を含むがEC1サブドメインを除く抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体;またはc前記抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体をコードする核酸配列を含む発現ベクター、を含んでなる、医薬的に許容可能な組成物。sEcad中のエピトープを同定するための方法であって、asEcadまたはその断片もしくは他の変異体を含むポリペプチドを提供し;b前記ポリペプチドを動物に投与し:c前記ポリペプチドに反応して前記動物により産生される抗体を単離し;d上記から生成された前記抗体またはモノクローナル抗体に癌性細胞を曝露することを含み、前記癌性細胞の死滅は、前記ポリペプチドが、癌治療、予防またはイメージングにおいて標的化され得るかまたは作用物質として使用され得るsEcadのエピトープを含むことを示す、前記方法。前記ポリペプチドが、sEcadのEC2、EC3、EC4またはEC5サブドメインの1以上からのアミノ酸配列を含むが、sEcadのEC1サブドメインからのアミノ酸配列を除外する、請求項41に記載の方法。前記ポリペプチドが、EC4またはEC5の1以上からのアミノ酸配列を含んでなる、請求項42に記載の方法。前記ポリペプチドが、EC4に限定されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項43に記載の方法。前記ポリペプチドが、EC5に限定されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項43に記載の方法。sEcadレベルは癌患者の尿または血清中で上昇し、正常細胞でアポトーシスが起こると上昇するが、この切断タンパク質の生物学的活性はよく分かっていない。多くの研究から、sEcadが正常な上皮細胞-細胞接着を妨害し、上皮細胞の散乱を誘導し、腫瘍細胞増殖、移動および浸潤を促進することが明らかになっているGiletal.,GynecolOncol.1082:361-3692008;Maretzkyetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA10226:9182-91872005;Marambaudetal.,EMBOJ.21.8:1948-19562002;Najyetal.,J.Biol.Chem.28326:18393-184012008;Noeetal.,J.CellSci.114:111-1182001;Ryniersetal.,Biol.Chem.383:159-1652002;およびSymowiczetal.,CancerRes.675:2030-20392007。これらの生物学的機能を調節するシグナル伝達経路は今も尚明らかとなっていない。SKBr3乳癌細胞株を使用した研究から、精製細胞外融合タンパク質Fc-sEcadを外から添加することによってsEcad-HER2複合体が誘導され、それにより細胞外シグナル調節キナーゼERKが活性化されることが分かったNajyetal.,J.Biol.Chem.28326:18393-184012008。ヒトEGF受容体は、多くの上皮腫瘍において過剰発現されるかまたは制御不能となる受容体チロシンキナーゼのErbBまたはHERファミリーに属するMendelsohnおよびBaselga,Oncogene19:6550-65652000;Burgess,GrowthFactors26:263-2742008。この受容体ファミリーは、ERKなどの下流シグナル伝達分子を活性化し、次に細胞増殖、移動、浸潤および血管形成を含む一連の癌細胞挙動を活性化するHanahanおよびWeinberg,Cell100:57-702000;Shieldsetal.,TrendsCellBiol.10:147-1542000。したがって、多くの抗EGF療法が開発されてきた。これらは、低分子チロシンキナーゼ阻害剤、モノクローナル抗体および癌ワクチンを含むFukuokaetal.,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.21:292aAbs11882002;Lageetal.,Ann.Med.35:327-3362003;Mateoetal.,Immunotechnology3:71-811997;Slamonetal.,N.Engl.J.Med344:783-7922001;およびYuetal.,J.Clin.Invest.110:289-2942002。これらの治療ストラテジーは、一部の腫瘍のみが、規定の成熟段階において特異的な受容体/抗原を発現し、ある一定の組織構造およびステージの腫瘍全てが標的受容体/抗原を過剰発現するわけではない乳癌の20から50のみがEGF受容体を過剰発現する。という点において、限定的である。したがって、これらのタイプの薬物に対する奏効率は低いままであるMendelsonおよびBaselga,Oncogene19:6550-65652000;Ortegaetal.,CancerControl171:7-152010。さらに、最初はこれらの薬物に反応性がある腫瘍が抵抗性を獲得するJackmanetal.,Clin.CancerRes.,12:3908-39142006;Ortegaetal.,CancerControl171:7-152010;およびRielyetal.,Clin.CancerRes.12:839-8442006。本発明は、部分的に、E-カドヘリンのEC2-EC5サブドメインの1以上内のエピトープを標的とした結果、相当程度例えば、何らかの臨床的に有害な程度、上皮由来腫瘍細胞を死滅させるが、正常な健常上皮細胞または、内皮細胞および線維芽細胞を含む非上皮細胞は死滅させないという、発明者らの発見に基づく。したがって、本発明の組成物は、E-カドヘリンのEC2-EC5サブドメインの1以上およびその生物学的に活性のある変異体のアミノ酸配列を有するポリペプチド;このようなポリペプチドを発現させるための発現ベクターおよび細胞;およびEC2-EC5サブドメインを標的とする作用物質例えば抗体を含む。本発明の方法は、E-カドヘリンのEC2-EC5サブドメインの1以上のアミノ酸配列を有するポリペプチドまたは生物学的に活性のあるその変異体を同定し、作製する方法;これらのポリペプチドを標的とする抗体などの作用物質を作製する方法;および、上皮癌を治療するかまたはそれらの発生もしくは再発リスクを低下させるために、このような作用物質を投与するかまたはインビボでそれらの産生を誘導する方法を含む。読み易くするために、発明者らは、一々生物学的に活性のある変異体に言及しないが、天然のE-カドヘリンのEC2、EC3、EC4,およびEC5サブドメインの1以上で見られるアミノ酸配列を有するポリペプチドが本明細書中に記載のように作製され、使用され得る場合、そのポリペプチドの生物学的に活性のある変異体も作製され、使用され得ることを理解されたい。抗E-カドヘリン抗体が投与される方法は、用量特異的療法を包含し、これらの療法は、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌および皮膚癌ならびに他の上皮癌および外胚葉由来の組織例えば、中枢神経系、眼のレンズ、脳神経節および知覚神経節および神経、および頭部の結合組織の癌を選択的に対象とするかまたはこれらに対して細胞毒性であり得る。他の細胞毒性療法例えば、化学療法、ホルモン療法、放射線療法および抗体を利用した治療法例えば、モノクローナル抗EGF抗体療法と結びつけて、本明細書中に記載の治療および予防法を遂行することができる。したがって、ある態様において、本発明は、とりわけ、可溶性E-カドヘリンsEcadの第二、第三、第四または第五のサブドメインそれぞれEC2、EC3、EC4およびEC5の1以上を特異的に標的とするが、sEcadの第一のサブドメインEC1は標的としない作用物質の治療的有効量を、患者に投与することによる、癌を有する患者を治療する方法を特色とする。本薬剤は、EC4および/またはEC5を特異的に標的とし得る。1個のサブドメイン例えばEC4またはEC5が標的とされる場合、本作用物質は、そのドメインに限定されるアミノ酸残基に結合し得る。本作用物質は、sEcadのEC2、EC3、EC4またはEC5サブドメインの1以上中のアミノ酸残基を含むがsEcadのEC1サブドメイン中のものは含まないエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片もしくは他の変異体などの、タンパク質骨格であり得る。本作用物質が抗体である場合、抗体は、ヒト化、キメラ、マウスまたはヒト抗体であり得る。本作用物質または抗体は1本鎖抗体でもあり得、本作用物質または抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体でもあり得る例えば、IgGまたはIgMクラスの免疫グロブリン。本作用物質の正確な性質にかかわらず、本作用物質は、検出可能に標識され得る例えば、蛍光または化学発光タグ。生物細胞への影響に関して、本作用物質は、何らかの顕著なまたは相当な程度、悪性のE-カドヘリン発現細胞を死滅させるが、非悪性の細胞を死滅させないものとして特徴付けられ得る。プログラムされた細胞死、増殖停止、アノイキス、壊死、オートファジーまたは、細胞死をもたらす別の状態を誘導することによって、死滅が達成され得る。細胞毒性量の賦形剤または他の不活性成分を含まない製剤処方または製剤として本発明の薬剤を製剤化することができる。より具体的には、経口投与、静脈内投与、鼻腔もしくは吸入投与例えば吹送、筋肉内投与、腹腔内投与、経粘膜投与例えば、直腸または膣の内側の粘膜組織への投与用に製剤化または経皮投与による患者への送達のために、医薬組成物または医薬的に許容可能な組成物を製剤化することができる。発明者らは、下記でさらに投与量を論じるが、本作用物質が、約1μg/mLから約400μg/mLの本作用物質例えば、約4μg/mLから約20μg/mLの本作用物質を含有する製剤処方で送達され得ることをここで述べる。投与量はまた、患者への投与時に、患者の活性医薬品の血清レベルが約1から10mg/kg例えば約1から5mg/kgとなるようなものであり得る。細胞培養において使用される場合、投与量は、培地に添加したときに、活性医薬品が細胞培養液に対して約1から500μg/mL例えば、約1から400μg/mL存在するようなものであり得る。当技術分野で認められるように、投与量は、様々な調合において変動し得、本製剤処方または製剤内の投与量は、例えば、製造者により供給される製剤中の添加物の有無または相対量に依存して変動し得る。したがって、本発明の方法は、本作用物質が、a患者への投与時に、本作用物質の血清レベルが約1から10mg/kg例えば約1から5mg/kgとなるか、またはb細胞培養への添加時に、本作用物質の濃度が、細胞培養液に対して約1から500μg/mL1から400μg/mLとなる、製剤処方で送達されるものを包含する。sEcad標的化物質が投与される本発明の方法の何れかにおいて、本方法は、患者からの生体試料を提供し例えば、標的化物質を投与する前および/または標的化物質を投与した後のいくつかの時点、その試料がレベル上昇したsEcadまたは癌に対する別の予測バイオマーカーを含むか否かを判定する工程を含み得る。この生体試料は、例えば、尿、唾液、脳脊髄液、血液または生検試料であり得る。このような工程が本作用物質を投与する前に行われる場合、sEcadのレベル上昇は患者が本治療に対する適した候補であることを示し得る。このような工程が、本作用物質の投与後、1回以上行われる場合、sEcadレベル低下は、患者がその治療に良好に反応していることを示し得る。本発明の方法の何れかにおいて、第二の癌治療薬も投与し得る。例えば、化学療法剤、放射線治療、抗体による治療すなわち、癌の治療において有用であり、sEcad以外の標的に特異的に結合する抗体または手術による介入を行い得る。治療に敏感に反応する患者としては、上皮化組織内の癌を有する者が挙げられる。この癌は、消化管例えば、口腔、咽喉、食道、胃、腸、直腸または肛門、中枢神経系、乳房、皮膚例えば、扁平上皮癌またはメラノーマ、生殖系例えば、子宮頸癌、子宮癌、卵巣癌、外陰もしくは陰唇癌、前立腺癌、精巣腫瘍または男性生殖器の癌、肺または泌尿器の癌であり得る。本方法は、治療用または予防用であり得る。したがって、別の態様において、本方法は、対象が癌を発現する可能性を低下させる方法を特色とする。これらの方法は、治療的有効量の、asEcadのEC2-EC5サブドメインの1以上からのアミノ酸配列を含むがEC1サブドメインを除く抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体または、b抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体をコードする核酸配列を含む発現ベクターを対象に投与することによって行い得る。本抗原性ポリペプチドは、EC4内に限定されるか、EC5内に限定されるか、またはEC4およびEC5の両方からの配列を包含するアミノ酸配列を含み得る。本抗原性ポリペプチドは、sEcadに特異的に結合するが対象において非悪性の細胞により発現されるE-カドヘリンには結合しない抗体の産生を誘導し得る。これらの方法で使用される抗原性ポリペプチドおよび発現ベクターは、上述の製剤と同じであるかまたは類似であるように製剤化され得る。例えば、これらは、経口投与、静脈内投与経口投与が好ましいものであり得る、鼻腔もしくは吸入投与例えば吹送、筋肉内投与、腹腔内投与、経粘膜投与または経皮投与により送達され得る。対象が直面するリスクは、本明細書中に記載の何らかのタイプの癌を発現するリスクであり得る。リスクは、集団における一般発生率に基づく平均的リスクであり得るか、または、癌の遺伝的素因もしくは癌の早期発症によるリスク上昇であり得る。例えば、上皮化組織内の癌、消化管例えば、口腔、咽喉、食道、胃、腸、直腸または肛門、中枢神経系、乳房、皮膚例えば、扁平上皮癌またはメラノーマ、生殖系例えば、子宮頸癌、子宮癌、卵巣癌、外陰もしくは陰唇癌、前立腺癌、精巣腫瘍または男性生殖器の癌、肺または泌尿器の癌の発症または再発のリスクを低下させるために、抗原性ポリペプチドまたはそれらをコードするベクターを対象に投与することができる。本発明の方法は、薬品の調製に関連して表現できる。したがって、本発明は、薬品の調製における本明細書中に記載の作用物質および組成物の使用を包含する。ある実施形態において、本作用物質および組成物の使用は、癌本明細書中に記載のタイプの癌を含むの治療のための薬品の調製に及ぶ。本発明の組成物は、治療的有効量の、asEcadのEC2、EC3、EC4またはEC5サブドメインの1以上中のアミノ酸残基を含むが、sEcadのEC1サブドメイン中のものは含まないエピトープに特異的に結合する抗体;bsEcadのEC2-EC5サブドメインの1以上からのアミノ酸配列を含むが、EC1サブドメインのアミノ酸配列を除外する抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体;またはc抗原性ポリペプチドまたは抗原的に活性のあるその断片もしくは他の変異体をコードする核酸配列を含む発現ベクターを含んでなる、医薬的に許容可能な組成物を含む。さらに別の態様において、本発明は、sEcad中のエピトープを同定するための方法を特色とする。これらの方法は、とりわけ、asEcadまたはその断片もしくは他の変異体を含むポリペプチドを提供し;b動物にこのポリペプチドを投与し;cこのポリペプチドに反応して動物により産生される抗体を単離し;dそこから産生された抗体またはモノクローナル抗体に癌性細胞を曝露することによって行われ得る。癌性細胞の死滅は、本ポリペプチドが、癌治療、予防またはイメージングにおいて作用物質として標的化され得るかまたは使用し得るsEcadのエピトープを含むことを意味する。本発明の他の態様におけるように、本ポリペプチドは、sEcadのEC2、EC3、EC4またはEC5サブドメインの1以上からのアミノ酸配列を含み得るが、sEcadのEC1サブドメインからのアミノ酸は除外する。例えば、本ポリペプチドは、EC4および/またはEC5例えば、EC4に限定されるアミノ酸配列またはEC5に限定されるアミノ酸配列の1以上からのアミノ酸配列を含み得る。癌治療を開発する際の最大の難関の1つは、癌性細胞と正常な健常組織とを区別し得る治療剤を発見することにある。現在利用可能な化学療法剤の多くは、非選択的に細胞毒性であり、治療指標が狭く、その結果、患者を衰弱させ、全体的な患者死亡率を上昇させる全身的な薬物毒性がもたらされる。したがって、新しい癌療法の非常に望まれる特性は、正常な健常細胞および組織に悪影響を与えることなく癌細胞を選択的に標的とする能力である。本発明の組成物はシグナル伝達経路の何らかの特定の点において細胞に影響を与えるものに限定されるものではないが、発明者らの期待は、本発明の治療組成物が、HER2受容体の上流で作用し、HER2標的療法よりも多岐にわたる下流標的を捕捉することである。添付の図面および下記の記載において、本発明の1以上の実施形態の詳細を述べる。本記載および図面ならびに特許請求の範囲から、本発明の他の特性、目的および長所が明らかとなろう。下記でさらに述べるように、発明者らは、上皮癌細胞および非癌性細胞の両方のパネルにおいて、Espadaetal.J.CellPhysiol.219:84-932009、Fouquetetal.J.Biol.Chem.27941:43061-430692004およびGalazetal.J.CellPhysiol.2051:86-962005により使用されたDECMA-1抗体を含む、E-カドヘリンの細胞外ドメインを標的とする様々な市販のモノクローナルおよびポリクローナル抗体の有効性を試験した。発明者らがこれらの実験を繰り返した際、発明者らは、40μg/mLという低い濃度でこの抗体を適用することによって、驚くべきことに、癌細胞すなわち、MCF-7、SCC12b、SCC13、CRL-1555、PAM212、SP308およびKLN205細胞ならびに対照として使用した非癌性細胞すなわち、ヒト乳房上皮細胞およびPHKおよびPMK細胞の両方において細胞死が誘導されることが分かった。さらに、同じ濃度40μg/mLで対照IgGアイソタイプ抗体によってこれらの癌および非癌性細胞を処理した場合も、両タイプの細胞において同じレベルの細胞死を誘導した。これらのデータから、抗体の適用後の細胞死の非特異的な誘導が示唆される。発明者らの研究室において、E-カドヘリンの細胞外ドメインEC2-EC5を標的とする抗体の希釈度のより高い溶液を適用することによって10から20μg/mLの低用量、癌細胞でのみ、明らかにアポトーシスによって細胞死が誘導された。発明者らは、非癌性細胞において有害な効果は全く認めなかった。さらに、10から20μg/mLの濃度で非癌性細胞へ対照IgGアイソタイプを適用した場合、一般的に、細胞生存能への検出可能な影響はなかった。これらの10から20μg/mLの濃度は、Espadaetal.J.CellPhysiol.219:84-932009、Fouquetetal.J.Biol.Chem.27941:43061-430692004およびGalazetal.J.CellPhysiol.2051:86-962005により使用された濃度よりも約20から50倍低い。したがって、発明者らが期待するのは、低用量の製剤例えば、先行研究でEspadaらにより示唆されたものよりも低い用量として、本製剤処方および調合物を製造し、使用することができるということである。上述のように、E-カドヘリンのEC2-EC5サブドメインに対する10から20μg/mLの抗体モノクローナルまたはポリクローナルの外部からの添加によって、ヒトおよびマウス腫瘍細胞株の代表的パネルを選択的に死滅させた。発明者らはまた、このような抗体が、HT29ヒト結腸細胞株、NCI-H292ヒト肺細胞株およびKLN205マウス肺癌細胞株に対して細胞毒性を有することを示すデータも有している。さらに、発明者らは、正常ヒト乳房上皮細胞、正常ヒトおよびマウス角化細胞、マウス3T3線維芽細胞およびヒト内皮細胞を含む非癌性細胞では、低濃度で上記のサブドメインを標的とする抗体を用いた発明者らの分析において影響がないままであることを明らかにした。上皮由来腫瘍細胞において、E-カドヘリンのEC2-EC5細胞外ドメインの標的とする様々な組み合わせが細胞死を誘導するが、その分子経路はまだ明らかになっていない。しかし、発明者らは、癌細胞の死滅が、プロアポトーシス性のマーカーp53を上方制御することを明らかにし、EC2-EC5E-カドヘリンドメインに対する抗体処理後、MCF-7乳癌、マウスSCCおよびマウスKLN205肺癌細胞株において、この上方制御を観察した。上述のように、本発明の組成物は、sEcadのEC2、EC3、EC4およびEC5の1以上EC1ではないを特異的に標的とする作用物質を含む。これらの作用物質は、続いてsEcadを阻害し得るか、または、腫瘍細胞微小環境において、細胞生存受容体などの別の標的に結合するか、これを阻害するかまたは封鎖し得る。本組成物は、何らかの特定の機構によりその効果を発揮するものに限定されるものではないが、発明者らの作業仮説では、本発明の作用物質は、癌細胞に有益であるsEcadのシグナル提供能を妨害するということである。例えば、発明者らは、癌細胞が、微小環境にsEcadを分泌し、それが、その微小環境で、正常な細胞-細胞接触を模倣する機能的骨格を提供するという仮説を立てた。したがって、実際にまたは効果的に腫瘍微小環境からsEcadを除去することによって、腫瘍細胞が接着し、生存し続ける能力が撹乱される。他の例において、本発明の作用物質は、別の細胞標的例えばHER-2と相互作用するsEcad上のエピトープへの結合によってsEcad活性を阻害し得、それにより、細胞生存、細胞増殖,細胞移動および/または浸潤に関与する下流のシグナル伝達事象を変化させる。あるいは、またはさらに、作用物質は、sEcadシグナル伝達に必要である特異的なエピトープに結合し得ないが、代わりに、破壊のためにそれを封鎖、タグ付加または標的とするようにsEcadに結合し得、それによって腫瘍微小環境でのその濃度が低下し、細胞-細胞相互作用の模倣または細胞受容体への結合にそれが利用できなくなる。例えば、本作用物質および組成物は、例えばE-カドヘリンへの結合および切断部位の遮断または、さもなくばsEcad放出の遮断または阻害により、切断されるsEcadを減少させ得る。したがって、本明細書中に記載のように、組成物または作用物質は、EC2-EC5サブドメインの1以上を特異的に標的とし得、特異的なエピトープを遮断するかまたは実際にsEcadレベルを低下させることによって、sEcadがシグナルの1以上を提供するのを効果的に阻止する。読み易くするために、発明者らは、sEcadのEC2-EC5サブドメインの1以上におけるものであってsEcadの第一のサブドメインEC1のものではないアミノ酸残基を特異的に標的とする作用物質を、より簡単に、標的物質と呼ぶ。本発明の標的物質は、sEcadのEC2-EC5サブドメインの1以上におけるアミノ酸残基に特異的に結合するしかし、sEcadのEC1には結合しない。、改変フィブロネクチンドメインまたは免疫グロブリンまたはその断片もしくは他の変異体などのタンパク質骨格であり得る。この作用物質がタンパク質例えば、タンパク質骨格または抗原性ポリペプチドであるか、またはこれらを含む場合、発明者らは、この作用物質をタンパク質に基づく治療剤と呼び得る。発明者らは、より長いアミノ酸ポリマーを指すのにタンパク質という用語を使用する傾向があり、より短い配列または、より大きい分子もしくは複合体内のアミノ酸残基の鎖を指すのに、ポリペプチドという用語を使用する傾向がある。しかし、両用語とも、翻訳後修飾例えば、アミド化、リン酸化またはグリコシル化とは無関係に、2以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸類似体または他のペプチド模倣物全体を述べるものとする。ペプチド結合または例えばエステルもしくはエーテル結合などの他の結合によって、サブユニットアミノ酸残基を連結することができる。アミノ酸およびアミノ酸残基という用語は、天然および/または非天然または合成アミノ酸を指し、これは、D-またはL-型の光学異性体であり得る。抗sEcad抗体は、様々な構造が可能であり、実質的に免疫グロブリン遺伝子によりコードされる1以上のポリペプチドからなるタンパク質を包含し得る。インタクト抗体、抗体マルチマーまたは抗体の機能的な抗原-結合領域を含むその抗体断片もしくは他の変異体を含め、多様な抗体構造の何れか1つを使用することができる。発明者らは、抗体と同意語として免疫グロブリンという用語を使用し得る。抗体は、元来、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体の起源にかかわらず、適切な抗体としては、インタクト抗体、例えば、2本の重H鎖および2本の軽L鎖を有するIgG四量体、1本鎖抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、相補性決定領域CDRグラフト抗体ならびに抗体断片、例えば、Fab、Fab’、Fab’2、scFv、Fvおよびこのような断片由来の組み換え抗体、例えば、キャメルボディcamelbodies、ミクロ抗体、ダイアボディおよび二特異性抗体が挙げられる。インタクト抗体は、抗原-結合可変領域VHおよびVLならびに軽鎖定常ドメインCLおよび重鎖定常ドメイン、CH1、CH2およびCH3を含むものである。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン例えばヒトネイティブ配列定常ドメインまたはそのアミノ酸配列変異体であり得る。当技術分野で周知であるように、VHおよびVL領域は、より保存性の高いフレームワーク領域FRが散在する、相補性決定領域CDRと呼ばれる超可変性の領域にさらに分けられる。FRおよびCDRの範囲は定められているKabatetal.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242、1991andChothia,etal.,J.Mol.Biol.196:901-9171987を参照。抗体のCDRは通常、ネイティブ免疫グロブリン結合部位の天然Fv領域の結合親和性および特異性を共に規定するアミノ酸配列を含む。抗sEcad抗体は、何らかのクラスの免疫グロブリン、例えば、IgA、IgG、IgE、IgD、IgMならびにそのサブタイプ例えば、IgG1、IgG2、IgG3およびIgG4由来であり得、免疫グロブリンの軽鎖は、カッパまたはデルタタイプであり得る。認識されているヒト免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファIgA1およびIgA2、ガンマIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。免疫グロブリンまたは抗体の抗原-結合部分という用語は、一般的に、標的、この場合は、sEcadの第二から第五のサブドメインの1以上内または1以上間の例えば、第四と第五のサブドメイン内またはこれらの間のアミノ酸残基を含むエピトープに特異的に結合する免疫グロブリンの一部分を指す。したがって、免疫グロブリンの抗原-結合部分は、1以上の免疫グロブリン鎖が全長ではないが、細胞標的に特異的に結合する分子である。抗原-結合部分または断片の例としては:iFab断片、VLC、VHC、CLおよびCH1ドメインからなる一価断片;iiFab’2断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結される2個のFab断片を含む二価断片;iii抗体のシングルアームのVLCおよびVHCドメインからなるFv断片およびv例えば可変領域の抗原結合部分に特異的に結合するのに十分なフレームワークを有する単離CDRが挙げられる。軽鎖可変領域の抗原結合部分および重鎖可変領域の抗原結合部分、例えば、Fv断片の2つのドメイン、VLCおよびVHCは、組み換え法を用いて、それらをVLCおよびVHC領域が対になって一価分子1本鎖FvscFvとして知られる;例えば、Birdetal.,Science242:423-4261988;およびHustonetal.,Proc.NatlAcad.Sci.USA85:5879-58831988を参照を形成する1本のタンパク質鎖にすることができる合成リンカーによって、連結することができる。このようなscFvは、本発明の標的物質であり得、抗体の抗原結合部分という用語によって包含される。Fv断片は、完全な抗原認識および結合部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、強固な共有結合された状態の1つの重鎖および1つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この配置において、各可変ドメインの3個の超可変領域が相互作用して、VH-VL二量体の表面上で抗原-結合部位が定められる。6個の超可変領域が抗原-結合特異性を付与する一方、結合部位全体よりも親和性は低いものの、1個の可変ドメインまたは抗原に特異的な3個の超可変領域のみを含むFvの半分さえも抗原を認識し、これに結合する能力を有する。安定性を向上させるために、VH-VLドメインをGly4Ser3などのフレキシブルペプチドリンカーにより結合して、1本鎖FvまたはscFV抗体断片を形成させ得るし、または、フレームワーク領域において2個のシステイン残基を導入することによって、ジスルフィド結合を形成させるように改変して、ジスルフィド安定化FvdsFvを得ることもできる。別掲のとおり、他の有用な抗体型としては、ダイアボディ、ミニボディおよび二特異性抗体が挙げられる。ダイアボディは、短いペプチドリンカー約5アミノ酸以下により共有結合されるscFvのホモ二量体である。短かすぎて同じ鎖の2個のドメイン間で対形成できないリンカーを使用することによって、ドメインを別の鎖の相補性ドメインと強制的に対形成させ、2個の抗原-結合部位を生成させることができる例えば、ダイアボディに関するさらなる情報については、EP404,097およびWO93/11161を参照。本組成物および方法において有用なダイアボディ変異体、dsFv2または直鎖状抗体は、抗原結合領域の対を形成する縦に並んだFdセグメントの対VH-CH1-VH-CH1を含む例えば、Zapataetal.,Prot.Eng.8:10571995を参照。有用なミニボディは、SCFV-CH3融合タンパク質のホモ二量体である。ミニボディ変異体、Flexミニボディにおいて、scFvをIgG1のヒンジ領域に融合させ、次にこれを10アミノ酸リンカーによりCH3領域に連結させる。2個の異なるエピトープを認識する二特異性抗体もまた、一方のアームが本明細書中に記載のようなsEcadに特異的に結合する限り、使用することができる。様々な異なる二特異性抗体型が開発されてきた。例えば、有用な二特異性抗体は、クアドローマ、すなわち、各H-L対が異なる抗体由来であるインタクト抗体であり得る。通常、クアドローマは、2個の異なるB細胞ハイブリドーマを融合させ、その後、その融合細胞callsをスクリーニングして、両セットのクローン型免疫グロブリン遺伝子の発現を維持するものを選択することにより作製される。あるいは、二特異性抗体は、組み換え抗体であり得る。二特異性抗体に対する代表的な型としては、異なる特異性の2本の1本鎖がペプチドリンカーを介して連結されるタンデムscFv、ダイアボディおよび1本鎖ダイアボディが挙げられるが、これらに限定されない。抗体の断片は、全長抗体の所望の特異性および/または癌細胞の生存、増殖または転移を阻害するのに十分な特異性を保持する限り、本発明が提供する方法での使用に適切である。したがって、本明細書中に記載のような抗sEcad抗体の断片は、列挙されるサブドメインへのインタクト抗体の結合能を保持し得る。これらの抗体部分は、当業者にとって公知の従来の技術を用いて得ることができ、インタクト抗体が抗癌剤としてスクリーニングされる場合と同じようにして有用性についてスクリーニングすることができる。抗体断片を調製するための方法は当技術分野で周知であり、生化学的方法例えばインタクト抗体のタンパク質分解性消化その後、化学的架橋が行われ得るおよび所望の断片の合成を行うために免疫グロブリン配列が遺伝子改変される、組み換えDNAに基づく方法の両方を包含する。代表的な生化学的方法は、米国特許第5,855,866号;同第5,877,289号;同第5,965,132号;同第6,093,399号;同第6,261,535号;および同第6,004,555号に記載されている。連続するポリペプチドを作製するために、キメラまたはヒト化鎖をコードする核酸を発現させることができる。例えば、Cabillyetal.,米国特許第4,816,567号;Cabillyetal.,欧州特許第0,125,023B1号;Bossetal.,米国特許第4,816,397号;Bossetal.,欧州特許第0,120,694B1号;Neubergeretal.,WO86/01533号;Neubergeretal.,欧州特許第0,194,276B1号;Winter、米国特許第5,225,539号;およびWinter、欧州特許第0,239,400B1号を参照のこと。また、CDRグラフト抗体に関しては、Newmanetal.,BioTechnology10:1455-14601992を、1本鎖抗体についてはLadneretal米国特許第4,946,778号およびBirdetal.,Science242:423-4261988も参照のこと。非特異的なチオールプロテアーゼであるパパインによる免疫グロブリン全体のタンパク質分解によって、抗体断片を得ることができる。パパイン消化によって、それぞれが1個の抗原-結合部位を有するFab断片と呼ばれる、2個の同一である抗原-結合断片が得られ、残りはFc断片である。様々な分画をプロテインA-セファロースまたはイオン交換クロマトグラフィーによって分離することができる。ウサギおよびヒト起源のIgGからFab’2断片を調製する通常の手順は、酵素ペプシンによる限定的なタンパク質分解である。インタクト抗体のペプシン処理によって、2個の抗原連結部位を有するFab’2断片が得られ、これは、依然として抗原を架橋することができる。Fab断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一の定常ドメインCH1を含有する。Fab’断片は、抗体ヒンジ領域からの1以上のシステインを含む、重鎖CH1ドメインのカルボキシル末端での数個の残基の付加によって、Fab断片とは異なる。Fab’2抗体断片は、元来、それらの間でヒンジシステインを有するFab’断片の対として作製された。抗体断片の他の化学的カップリングは公知である。例えばsEcadの第二、第三、第四または第五のサブドメインにまたはこれらのサブドメインの2以上におけるアミノ酸残基を含むエピトープに特異的に結合させることによってsEcadを標的とする標的物質例えば抗体またはその抗原-結合断片もしくは他の変異体を作製する方法も本発明の範囲内にある。例えば、免疫グロブリン鎖をコードするDNA配列を変更するためにPCR突然変異誘発法を用いて例えば、ヒト化免疫グロブリンを作製するために使用される方法を用いて;例えば、Kanunanetal.,Nucl.AcidsRes.17:54041989;Satoetal.,CancerResearch53:851-8561993;Daughertyetal.,NucleicAcidsRes.199:2471-24761991;およびLewisandCrowe、Gene101:297-3021991を参照可変領域を構築することができる。これらまたは他の適切な方法を用いて、変異体を容易に作製することもできる。例えば、ある実施形態において、クローン化可変領域を突然変異誘発させることができ、所望の特異性を有する変異体をコードする配列を選択することができる例えばファージライブラリから;例えば、Krebberetal.,米国特許第5,514,548号;およびHoogenboometal.,WO93/06213を参照。本明細書中に記載のような細胞標的を特異的に認識する免疫グロブリンを作製または単離する他の適切な方法としては、例えば、ヒト抗体の全レパートリーを生成することが可能なトランスジェニック動物例えばマウスの免疫付与に依存する方法が挙げられる例えば、Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:2551-25551993;Jakobovitsetal.,Nature362:255-2581993;Lonbergetal.,米国特許第5,545,806号;およびSuranietal.,米国特許第5,545,807号を参照。当技術分野で周知であるように、モノクローナル抗体は、抗体産生細胞の単一クローンにより産生される同一抗原特異性の均質な抗体であり、ポリクローナル抗体は一般に、同じ抗原上の様々なエピトープを認識し、抗体産生細胞の複数のクローンにより産生される。各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。モノクローナルという修飾語は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示すものであり、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、最初にKohleretal.Nature256:4951975により記載されたハイブリドーマ法によってまたは組み換えDNA法例えば、米国特許第4,816,567号を参照によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えばClacksonetal.Nature352:624-6281991およびMarksetal.J.Mol.Biol.222:581-5971991に記載の技術を用いてファージ抗体ライブラリからも単離され得る。本明細書中のモノクローナル抗体は、キメラ抗体、すなわち、一般に、特定の種由来であるかまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるかまたは相同の重鎖および/または軽鎖の一部分を有する抗体を含み、一方で、この鎖の残りの部分は、所望の生物学的活性を示す限り、別の種由来であるかまたは別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体ならびにこのような抗体の断片の対応する配列と同一もしくは相同である米国特許第4,816,567号;およびMorrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-68551984。目的のキメラ抗体としては、非ヒト霊長類例えば、類人猿、旧世界ザル、新世界ザル、原猿由来の可変ドメイン抗原-結合配列およびヒト定常領域配列を含む、霊長類化抗体が挙げられる。モノクローナル抗体mAbを作製するための様々な方法が当技術分野で周知である。例えば、参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第4,196,265号に記載の方法を参照。最も標準的なモノクローナル抗体作製技術は、一般的に、通常、ポリクローナル抗体を調製するためのものと同じ系列に沿って開始されるAntibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.1988。通常、抗体産生細胞を刺激するするために、選択された免疫原で適切な動物に免疫付与することができる。マウスおよびラットなどのげっ歯類は代表的な動物であるが、ウサギ、ヒツジ、カエルおよびニワトリを使用することもできる。マウスは特に有用であり得る例えば、BALB/cマウスは日常的に使用され、一般的に、より高い割合の安定融合が得られる。。免疫付与後、MAb作製および不死の骨髄腫細胞の細胞、一般的には免疫付与した動物と同種のうち1つとの融合で使用するために、所望の抗体を産生する可能性のある体細胞、具体的にはBリンパ球B細胞を選択することができる。ハイブリドーマ作製融合手順の使用に適した骨髄腫細胞株は一般に非抗体産生であり、融合効率が高く、酵素欠損があるので、所望の融合細胞ハイブリドーマだけの増殖を支持するある一定の選択培地中では増殖できなくなっている。当業者にとって公知であるように、多くの骨髄腫細胞の何れか1つを使用することができる。例えば、免疫付与動物がマウスである場合、P3-X63/Ag8、X63-Ag8.653、NS1/1.Ag41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG1.7およびS194/5XX0Bulを使用することができ、ラットの場合は、R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F、4B210または上記で列挙したマウス細胞株のうち1つを使用することができる。U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2およびUC729-6は全て、ヒト細胞融合に関して有用であり得る。この培養から、特異的なハイブリドーマの選択を可能にするハイブリドーマ集団が提供され、続いて連続希釈を行い、抗体産生のために無期限に増殖可能な個別の抗体産生株へのクローニングを行うことができる。モノクローナル抗体を作製するための方法には、精製段階が含まれ得る。例えば、通常、ろ過、遠心および様々なクロマトグラフィー法、例えばHPLCまたは親和性クロマトグラフィーなどこれらは全て当業者にとって周知の技術であるを使用して、抗体をさらに精製することができる。これらの精製技術はそれぞれ、混合物の他の成分から所望の抗体を分離するための分画化を含む。抗体調製に特に適した分析法としては、例えば、プロテインA-セファロースおよび/またはプロテインG-セファロースクロマトグラフィーが挙げられる。本発明の抗sEcad抗体は、ヒトまたは非ヒト起源からのCDRを含み得る。ヒト化抗体は通常、ヒト定常および/または可変領域ドメインまたは特異的な改変を有する、マウス、ラット、ハムスター、ウサギまたは他の種からのキメラまたは変異モノクローナル抗体である。いわゆるヒト化抗体を作製するための技術は当業者にとって周知である。免疫グロブリンのフレームワークは、ヒト、ヒト化または非ヒト例えばヒトでの抗原性を低下させるように改変されたマウスフレームワーク、または合成フレームワーク例えばコンセンサス配列であり得る。ヒト化免疫グロブリンは、ヒト生殖細胞系列配列およびCDRに対応するフレームワーク残基が、VDJ組み換えおよび体細胞突然変異から生じるものである。しかし、ヒト化免疫グロブリンはまた、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン核酸配列においてコードされないアミノ酸残基例えば、エクスビボでのランダムまたは部位特異的突然変異誘発により導入される突然変異も含み得る。ヒト可変遺伝子のインビボ体細胞突然変異の結果、フレームワーク残基の突然変異が起こることが明らかになっているNatureImmunol.2:5372001を参照。このような抗体は、フレームワーク突然変異にもかかわらず、その起源からして、ヒトと呼ばれる。マウス抗体可変ドメインはまた、フレームワーク残基において体細胞突然変異も含有するSem.Immunol.8:1591996を参照。それゆえに、ヒトIg遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスは、それらが、平均で4.5個のフレームワーク突然変異を保持するけれども、一般的に完全ヒトと呼ばれる免疫グロブリンを産生するNatureGenet.15:146-561997。したがって、一般に認められた語法から、生殖細胞系列配列に基づくが、例えばインビボ体細胞突然変異プロセスにより導入されたフレームワーク突然変異を保持する抗体可変ドメイン遺伝子は、ヒトと呼ばれることが示される。ヒト化抗体は、例えば1ヒトフレームワークおよび定常領域上へ非ヒト相補性決定領域CDRを移植するか当技術分野でヒト化と呼ばれるプロセスまたは、あるいは2非ヒト可変ドメイン全体を移植するが、表面残基の置換によってそれらにヒト様の表面を提供すること当技術分野でベニアリングveneeringと呼ばれるプロセスを含め、当技術分野で公知の様々な方法により改変され得る。ヒト化抗体は、ヒト化およびベニア化veneered抗体の両方を含み得る。同様に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物、例えば内因性免疫グロブリン遺伝子が一部または完全に不活性化されているマウスに導入することによって、ヒト抗体を作製することができる。抗原投与時、ヒト抗体産生が観察され、これは、遺伝子再編成、アセンブリー,および抗体レパートリーを含め、全ての点でヒトにおいて見られるのと非常に類似している。このアプローチは、例えば、米国特許第5,545,807号;同第5,545,806号;同第5,569,825号;同第5,625,126号;同第5,633,425号;同第5,661,016号,および次の科学出版物:Marksetal.,Bio/Technology10:779-7831992;Lonbergetal.,Nature368:856-8591994;Morrison、Nature368:812-131994;Fishwildetal.,NatureBiotechnology14:845-511996;Neuberger、NatureBiotechnology14:8261996;LonbergおよびHuszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-931995;Jonesetal.,Nature321:522-5251986;Morrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci、USA,81:6851-68551984;MorrisonおよびOi,Adv.Immunol,44:65-921988;Verhoeyeretal.,Science239:1534-15361988;Padlan、Molec.Immun.28:489-4981991;Padlan,Molec.Immunol.313:169-2171994;およびKettleborough,C.A.etal.,ProteinEng.47:773-831991に記載されている。キメラおよびヒト化抗体に加えて、完全ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウス由来例えば、米国特許第6,075,181号;同第6,091,001号;および同第6,114,598号を参照またはヒト免疫グロブリン遺伝子のファージディスプレイライブラリ由来例えばMcCaffertyetal.,Nature348:552-5541990;Clacksonetal.,Nature352:624-6281991およびMarksetal.,J.Mol.Biol.222:581-5971991を参照であり得る。いくつかの実施形態において、当技術分野で公知の標準的方法を使用して、scFv-ファージディスプレイライブラリによって、抗体を作製し、同定し得る。抗原結合親和性、そのエフェクター機能またはその薬物動態を調節するために、抗sEcad抗体を改変し得る。特に、CDRおよび、親和性がより高い、および/または特異性がより高い抗体を同定するためにスクリーニングされた産生物において、ランダム突然変異を行い得る。このような突然変異誘発および選択は、抗体の技術分野において日常的に実施されている。このような置換変異体を作製するための一つの便利な方法は、ファージディスプレイを用いた親和性成熟である。例えば本明細書中で提供される抗体とともにCDRシャッフリングおよび移植技術を使用することができる。CDRシャッフリングは、CDR配列を特異的なフレームワーク領域に挿入するJirholtetal.,Gene215:4711988。CDR移植技術によって、1つのマスターフレームワークへのCDR配列のランダムな組み合わせが可能となるSoderlindetal.,Immunotechnol.4:2791999;およびSoderlindetal.,NatureBiotechnol.18:8522000。このような技術を用いて、例えば抗sEcad抗体のCDR配列に対して突然変異を生じさせ、複数の異なる配列を生成させることができ、これを骨格配列に組み込み、所望の特徴、例えばより高い親和性などについて、得られた抗体変異体をスクリーニングすることができる。いくつかの実施形態において、当技術分野で公知であるように、T細胞エピトープの存在について、抗sEcad抗体の配列を調べることができる。次に、T細胞エピトープを除去するために、すなわち抗体を脱免疫化するために、下線を付した配列を変化させることができる。例えばファージミド技術を用いた組み換え技術によって、一連の抗体をコードする組み換え遺伝子から所望の特異性を有する抗体を調製することが可能となる。ある種の組み換え技術は、免疫付与した動物の脾臓から単離されたRNAから調製されるコンビナトリアル免疫グロブリンファージ発現ライブラリの免疫学的スクリーニングによる抗体遺伝子の単離を含むMorrisonetal.,Mt.SinaiJ.Med.53:1751986;WinterおよびMilstein,Nature349:2931991;Barbasetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:44571992。このような方法に関して、免疫付与した動物の脾臓から単離されるRNAからコンビナトリアル免疫グロブリンファージミドライブラリを調製することができ、抗原を発現する細胞および対照細胞を用いてパンニングすることによって、適切な抗体を発現するファージミドを選択することができる。従来のハイブリドーマ技術を凌ぐこのアプローチの長所には、1回でおよそ104倍という多くの抗体を作製し、スクリーニングすることができること、およびHおよびL鎖の組み合わせにより新しい特異性を生成させることができることであり、これは、さらに、生成される適切な抗体の割合を上昇させることができる。細菌における多様な抗体分子の大きなレパートリーを作製するための一つの方法は、ベクターとしてバクテリオファージラムダを利用するHuseetal.,Science246:12751989。ラムダベクターを用いた抗体の作製は、個別の出発ベクターへ、DNA配列の重鎖および軽鎖集団をクローニングすることを含む。続いて、ベクターを無作為に組み合わせて、抗体断片を形成させるように、重鎖および軽鎖の同時発現を方向付ける単一ベクターを形成させることができる。糸状ファージディスプレイのための一般的な技術が記載されている米国特許第5,658,727号。最も一般的な意味において、本方法は、単一ベクター系を用いて、抗体遺伝子レパートリーから、予め選択されたリガンド-結合特異性を同時クローニングおよびスクリーニングするための系を提供する。予め選択されたリガンド-結合能に関してライブラリの単離メンバーをスクリーニングすることによって、発現された抗体分子の結合能と便利な手段との相関関係を用いて、ライブラリからそのメンバーをコードする遺伝子を単離することが可能となる。ファージミドライブラリをスクリーニングするためのさらなる方法が記載されている米国特許第5,580,717号;同第5,427,908号;同第5,403,484号;および同第5,223,409号。全体的または部分的な合成抗体組み合わせ部位またはパラトープの大規模ライブラリの作製およびスクリーニングのための一つの方法は、M13、flまたはfdなどの糸状ファージ由来のディスプレイベクターを利用する参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第5,698,426号。ファージミドと呼ばれる糸状ファージディスプレイベクターは、多様で新規の免疫特異性を有するモノクローナル抗体の大きなライブラリを産み出す。この技術は、糸状ファージ複製のアセンブリ段階中、遺伝子産物および遺伝子をつなぐための手段として、糸状ファージコートタンパク質膜アンカードメインを使用し、コンビナトリアルライブラリから抗体をクローニングおよび発現させるために使用されているKangetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:43631991;およびBarbasetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:79781991。標準的な親和性単離手順によって、ノイラミニダーゼ分子に結合する特異的なFab断片に関して、表面発現ライブラリをスクリーニングする。ファージ集団の増幅後に、ポリペプチドをコードする核酸の配列決定を行うことによって、選択したFab断片の特徴を調べることができる。抗体の多様なライブラリを作製し、所望の結合特性についてスクリーニングするための一つの方法が記載されている米国特許第5,667,988号および同第5,759,817号。この方法は、免疫グロブリン可変重鎖および軽鎖可変ドメインのCDR領域へ縮重を組み込むために、変性オリゴヌクレオチドおよびプライマー伸長反応を用いて、ファージミドライブラリの形態で、ヘテロ二量体免疫グロブリン分子のライブラリを調製すること、およびファージミド表面で突然変異誘発ポリペプチドを提示することを含む。その後、予め選択された抗原への結合能について、提示タンパク質をスクリーニングする。抗体の多様なライブラリを作製し、所望の結合特異性についてスクリーニングするためのこの方法のさらなる変法が記載されている参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第5,702,892号。この方法においては、重鎖配列のみを使用し、CDRIまたはCDRIII超可変領域の何れかをコードする全てのヌクレオチド位置で重鎖配列を無作為化し、何ら生物学的プロセスに依存せずに、CDRにおける遺伝的多様性を作り出すことができる。上記で開示されたコンビナトリアル免疫グロブリンファージ発現ライブラリに加えて、一つの分子クローニングアプローチは、ヒト抗体ライブラリを含有するトランスジェニックマウスから抗体を調製することである。このような技術が記載されている参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第5,545,807号。単一アイソタイプ、より具体的にはB細胞成熟に必須であるアイソタイプ、例えばIgMおよび場合によりIgDなどのヒト抗体を作製するために、このようなトランスジェニック動物を使用することができる。ヒト抗体を作製するための別の方法は、B細胞発生に必要とされるアイソタイプから他のアイソタイプへの変換が可能なトランスジェニック動物について記載する、米国特許第5,545,806号;同第5,569,825号;同第5,625,126号;同第5,633,425号;同第5,661,016号;および同第5,770,429号に記載されている。グリコシル化を減少させるかまたはなくすために、抗sEcadグロブリンを改変し得る。グリコシル化を欠く免疫グロブリンは、全くグリコシル化されていないか、完全にはグリコシル化されていないか、または非定型的にグリコシル化されているすなわち、突然変異体に対するグリコシル化パターンが、対応する野生型免疫グロブリンのグリコシル化パターンとは異なる免疫グロブリンであり得る。IgGポリペプチドは、グリコシル化を減弱させる1以上例えば、1、2または3以上の突然変異、すなわち、結果としてIgGCH2ドメインがグリコシル化を欠くかまたは完全にはグリコシル化されていないかまたは非定型的にグリコシル化されている突然変異を含む。ヒトIgG1のアミノ酸297でのアスパラギン残基の突然変異は、このような突然変異の例である。例えばフソースfusose部分をN結合型グリカンから削除することによって、オリゴ糖構造を改変することもできる。インビボでの抗体の安定性およびまたは溶解性を向上させるために、非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエチレングリコールに複合化することによって、抗体を修飾することもできる。抗sEcad抗体がsEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインへの選択的結合能を保持する限り、どのようなPEG化方法でも使用することができる。得られるポリペプチドが、標的、すなわち、sEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインに対して特異的である少なくとも1つの結合領域を含む限り、多岐にわたる抗体/免疫グロブリンフレームワークまたは骨格を使用することができる。このようなフレームワークまたは骨格は、ヒト免疫グロブリンまたはそれらの断片の5つの主要イディオタイプを含み本明細書中の他所で開示されるものなど、好ましくはヒト化側面を有する他の動物種の免疫グロブリンを含む。ラクダで同定されたものなどの1本重鎖抗体はこの点で特に興味深い。sEcad抗体のCDRが移植され得る非免疫グロブリン骨格を用いて、非免疫グロブリンベースの抗体を作製することができる。フレームワークまたは骨格が、標的に対する特異的な結合領域を含む限り、当業者にとって公知のどのような非免疫グロブリンフレームワークや骨格でも使用し得る。免疫グロブリン様分子は、免疫グロブリンとある特定の構造特性例えばβ-シート二次構造を共有するタンパク質を含む。非免疫グロブリンフレームワークまたは骨格の例としては、アドネクチンフィブロネクチン、アンキリン、ドメイン抗体およびAblynxnv、リポカリン、小モジュール免疫薬TrubionPharmaceuticalsInc.,Seattle、WA、マキシボディAvidia、Inc.,MountainView、CA、プロテインAおよびアフィリンγ-クリスタリンまたはユビキチンScilProteinsGmbH,Halle,Germanyが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗sEcad抗体は、sEcadの第二、第三、第四または第五サブドメイン上のエピトープに特異的に結合するしかし、EC1のエピトープには結合しない。エピトープは、パラトープによって特異的に結合される標的上の抗原性決定基、すなわち、抗体の結合部位を指す。エピトープ性決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グルーピングからなり、一般に特異的な三次元構造特性ならびに特異的な荷電特性を有する。エピトープは通常、約4から約10個の連続アミノ酸連続的エピトープまたは、特定の構造を規定する一連の非連続アミノ酸であり得る例えばコンフォメーションエピトープ。したがって、エピトープは、少なくとも4、少なくとも6、少なくとも8、少なくとも10および少なくとも12個のこのようなアミノ酸から構成され得る。アミノ酸の空間コンフォメーションを決定する方法は当技術分野で公知であり、例えばx線結晶学および2次元核磁気共鳴が含まれる。抗体が結合し得る他の可能性あるエピトープを予測する方法は当技術分野で周知であり、Kyte-Doolittle分析KyteおよびDolittle,J.Mol.Biol.157:105-1321982、HoppおよびWoods分析HoppおよびWoods,Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:3824-38281981;HoppおよびWoods,Mol.Immunol.20:483-4891983;Hopp,J.Immunol.Methods88:1-181986.Jameson-Wolf分析JamesonおよびWolf,Comput.Appl.Biosci.4:181-1861988およびEmini分析Eminietal.,Virology140:13-201985が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、理論的細胞外ドメインを決定することによって、可能性あるエピトープが同定される。このような予測を行うために、TMpredHofmannおよびStoffel,Biol.Chem.374:1661993を参照またはTMHMMKroghetal.,J.Mol.Biol.,3053:567-5802001などの分析アルゴリズムを使用することができる。シグナルペプチドの存在を予測するために、およびそれらのペプチドがどこで全長タンパク質から切断されるかを予測するために、SignalP3.0Bednstenetal.,J.Mol.Biol.3404:783-7952004などの他のアルゴリズムを使用することができる。細胞の外側のタンパク質部分は抗体相互作用の標的ととして機能し得る。本発明の組成物は、1結合活性の閾値レベルを示す、および/または2公知の関連ポリペプチド分子と顕著には交差反応しない抗体を含む。当業者は、例えばScatchard分析Scatchard,Ann.NYAcad.Sci.51:660-6721949によって、抗体の結合親和性を容易に決定することができる。いくつかの実施形態において、本抗sEcad抗体は、それらの標的エピトープまたは模倣デコイと、標的であるsEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインに対して、sEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインとある程度の相同性を有すると予測される他のタンパク質よりも、少なくとも1.5倍、2倍、5倍、10倍、100倍、103倍、104倍、105倍、106倍以上、結合し得る。いくつかの実施形態において、抗sEcad抗体は、10-4M以下、10-7M以下、10-9M以下の高い親和性でまたはサブナノモルの親和性0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1nMまたはさらにそれ未満で結合する。いくつかの実施形態において、sEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインに対する抗体の結合親和性は、少なくとも1x106Kaである。いくつかの実施形態において、sEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインに対する抗体の結合親和性は、少なくとも5x106Ka、少なくとも1x107Ka、少なくとも2x107Ka、少なくとも1x108Ka、またはそれ以上である。抗体はまた、sEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインに対する結合親和性の点でも記載または特定され得る。いくつかの実施形態において、結合親和性は、Kdが、5x10-2M、10-2M、5x10-3M、10-3M、5x10-3M、10-4M、5x10-5M、10-5M、5x10-6M、10-6M、5x10-7M、10-7M、5x10-8M、10-8M、5x10-9M、5x10-10M、10-10M、5x10-11M、10-11M、5x10-12M、10-12M、5x10-13M、10-13M、5x10-14M、10-14M、5x10-15M未満または10-15M以下であるものを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、既知の関連ポリペプチド分子に結合せず、例えば、sEcadポリペプチドの第二、第三、第四または第五サブドメインに結合するが、既知の関連ポリペプチドには結合しない。sEcadポリペプチドの第二、第三、第四または第五サブドメインに特異的に結合する抗体集団を単離するために、既知の関連ポリペプチドへの抗体をスクリーニングし得る。例えば、sEcadポリペプチドの第二、第三、第四または第五サブドメインに特異的な抗体は、適切な緩衝液条件下で不溶性マトリックスに接着させられたsEcadポリペプチドの第二、第三、第四または第五サブドメイン関連タンパク質sEcadポリペプチドの第二、第三、第四または第五サブドメインを除く。を含むカラムを通過していく。このようなスクリーニングによって、密接に関連のあるポリペプチドと非交差反応性であるポリクローナルおよびモノクローナル抗体の単離が可能となるAntibodies:ALaboratoryManual,HarlowandLaneeds.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988;CurrentsoProtocolsinImmunology,Cooliganetaleds.,NationalInstitutesofHealth,JohnWileyandSons,Inc.,1995。特異的な抗体のスクリーニングおよび単離は当技術分野で周知であるFundamentalImmunology,Pauleds.,RavenPress,1993;Getzoffetal.,Adv.inImmunol.43:1-981988;MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,Goding,J.W.eds.,AcademicPressLtd.,1996;Benjaminetal.,Ann.Rev.Immunol.2:67-101,1984を参照。このようなアッセイの代表例としては、同時免疫電気泳動concurrentImmunoelectrophoresis、ラジオイムノアッセイRIA、放射性免疫沈降、酵素結合免疫測定法ELISA、ドットブロットまたはウエスタンブロットアッセイ、阻害または競合アッセイおよびサンドイッチアッセイが挙げられる。悪性e-カドヘリン発現細胞を選択的に死滅させる特定の抗体の能力は、例えば本明細書中の実施例で開示される方法を用いて評価することができる。抗sEcad抗体は、タグを含み得、このタグはまた、レポーターまたはマーカー例えば検出可能なマーカーとも呼ばれ得る。検出可能なマーカーは、タグ付加ペプチドの発現または活性の定性的および/または定量的評価を可能とする抗sEcad抗体または、生物学的に活性なその断片に共有結合される何らかの分子であり得る。活性は、生物学的活性、物理化学的活性またはそれらの組み合わせを含み得る。標識される抗体が生物学的活性を保持する限り、検出可能なマーカーの形態および位置は多様であり得る。多くの様々なマーカーを使用し得、特定のマーカーの選択は、所望の適用に依存する。例えば、生体試料、例えば、尿、唾液、脳脊髄液、血液または生検試料中のsEcadのレベルを評価するために、または、sEcadペプチド療法に対する臨床反応を評価するために、標識化抗sEcad抗体を使用し得る。適切なマーカーとしては、例えば、酵素、光親和性リガンド、放射性同位体および蛍光または化学発光化合物が挙げられる。検出可能なマーカーをペプチドに導入する方法は当技術分野で周知である。合成中または合成後にマーカーを付加することができる。形質転換細胞を増殖させる培地への標識前駆体例えば放射性標識アミノ酸の添加によって、組み換え抗sEcad抗体または生物学的に活性なその変異体を標識することもできる。いくつかの実施形態において、検出可能なマーカーの組み込みを促進するために、ペプチドの類似体または変異体を使用することができる。例えば、いずれかのN末端フェニルアラニン残基を、125Iで容易に標識され得る非常に類似した芳香族アミノ酸、例えばチロシンで置換することができる。いくつかの実施形態において、効果的な標識をサポートするさらなる官能基を抗sEcad抗体の断片または生物学的に活性のあるその変異体に付加することができる。例えば、ネイティブ構造のN-末端に3-トリブチルスズベンゾイル基を付加し得、続いてトリブチルスズ基を125Iで置換することにより、放射性標識ヨードベンゾイル基が生成される。抗体または抗体様の治療剤それ自体を投与する代わりに、本方法はまた、インビボでの抗sEcad抗体の産生を誘発するタンパク質を投与することによっても遂行することができる。したがって、本発明の組成物は、EC2-EC5サブドメインにおけるE-カドヘリンの細胞外ドメインの抗原性断片を含む図1Aおよび図1Bを参照。免疫原性融合タンパク質を作製するために、これらのポリペプチドを異種ポリペプチドに融合させ得る。例えば、米国特許第7,262,270号に記載のように、インフルエンザウイルスHA2ヘマグルチニンタンパク質の断片にsEcadポリペプチドを融合させることができる。E-カドヘリンの発現を阻害するために使用することができる核酸例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは、RNA干渉に介在するオリゴヌクレオチドも本発明の範囲内である。インビボまたはエクスビボで例えば細胞または組織培養においてsEcadの抗原性断片を発現させるために、核酸コンストラクトを使用することもできる。核酸およびポリヌクレオチドという用語は、本明細書中で同義語として使用され得、cDNA、ゲノムDNA、合成DNAおよび、核酸類似体を含有するDNAまたはRNAを含め、RNAおよびDNAの両方を指す。ポリヌクレオチドは、何らかの三次元構造を有し得る。核酸は、二本鎖または1本鎖すなわち、センス鎖またはアンチセンス鎖であり得る。ポリヌクレオチドの非限定例としては、遺伝子、遺伝子断片、エクソン、イントロン、メッセンジャーRNAmRNAおよびその一部、トランスファーRNA、リボソームRNA、siRNA、ミクロRNA、リボザイム、cDNA、組み換えポリヌクレオチド、分岐型ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、あらゆる配列の単離DNA、あらゆる配列の単離RNA、核酸プローブおよびプライマー、ならびに核酸類似体が挙げられる。本発明の内容において、核酸は、例えば、抗体、突然変異抗体もしくはその断片またはsEcadもしくはその断片をコードし得る。単離核酸は、例えば天然のDNA分子またはそれらの断片であり得るが、ただし、天然のゲノムにおいて通常はそのDNA分子のすぐ隣で見出される少なくとも1つの核酸配列が除去されているかまたは存在しないものとする。したがって、単離核酸としては、他の配列と独立に個別の分子として存在するDNA分子例えば、化学合成核酸またはcDNAまたは、ポリメラーゼ連鎖反応PCRもしくは制限エンドヌクレアーゼ処理により生成されるゲノムDNA断片が挙げられるが、これらに限定されない。単離核酸はまた、ベクター、自己複製プラスミド、ウイルス、または原核生物もしくは真核生物のゲノムDNAに組み込まれるDNA分子も指す。さらに、単離核酸は、ハイブリッドまたは融合核酸の一部であるDNA分子など、改変核酸を含み得る。例えば、cDNAライブラリまたはゲノムライブラリまたはゲノムDNA制限消化を含有するゲルスライス片内の多くの例えば数十または数百から数百万その他の核酸の中に存在する核酸は単離核酸ではない。標準的技術によって、単離核酸分子を作製することができる。例えば、本明細書中に記載のポリペプチド即ち改変タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含め、本明細書中に記載のヌクレオチド配列を含有する単離核酸を得るために、ポリメラーゼ連鎖反応PCR技術を使用することができる。トータルゲノムDNAまたはトータル細胞性RNAからの配列を含め、DNAならびにRNAから特異的な配列を増幅させるために、PCRを使用することができる。例えば、PCRPrimer:ALaboratoryManual,DieffenbachandDveksler,eds.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1995に様々なPCR法が記載されている。一般的に、増幅させようとする鋳型の逆鎖と配列が同一であるかまたは類似しているオリゴヌクレオチドプライマーを設計するために、関心のある領域の末端またはそれ以上からの配列情報を使用する。部位特異的なヌクレオチド配列修飾を鋳型核酸に導入し得る様々なPCRストラテジーも使用可能である必要に応じて、例えば改変タンパク質、例えば抗体、突然変異抗体もしくはそれらの断片または融合タンパク質もしくはそれらの断片を作製する場合。1つの核酸分子として例えば、自動化DNA合成を用いて、3’から5’方向でホスホールアミダイト技術を用いてまたは一連のオリゴヌクレオチドとしての何れかで、単離核酸を化学的に合成することもできる。例えば、オリゴヌクレオチド対がアニーリングされる際に2本鎖が形成されるように、所望の配列を含有する長いオリゴヌクレオチド例えば>50-100ヌクレオチドの1以上の対を、各対が相補性のある短いセグメント例えば約15ヌクレオチドを含有するように、合成することができる。DNAポリメラーゼを使用してオリゴヌクレオチドを伸長させ、オリゴヌクレオチド1対あたり1つの2本鎖核酸分子を得て、次に、これをベクターにライゲーションすることができる。本発明の単離核酸は、例えば改変タンパク質コードDNAの天然部分の突然変異誘発によって得ることもできる。本明細書中に記載の核酸およびポリペプチド例えばsEcadの抗原性断片は、外来性と呼ばれ得る。外来性という用語は、核酸またはポリペプチドが、組み換え核酸コンストラクトの一部であるかもしくはこれによりコードされているか、またはその天然の環境にはないことを示す。例えば、外来性核酸は、別の種に導入される1つの種からの配列、すなわち異種核酸であり得る。一般に、組み換え核酸コンストラクトを介して他の種にこのような外来性核酸を導入する。外来性核酸は、生物に対してネイティブである、およびその生物の細胞に再導入されている配列でもあり得る。ネイティブ配列を含む外来性核酸は、外来性核酸に連結される非天然配列、例えば組み換え核酸コンストラクトにおいてネイティブ配列に隣接する非ネイティブ制御配列の存在により、天然の配列とは区別され得ることが多い。さらに、安定的に形質転換された外来性核酸は一般に、ネイティブ配列が見出される位置以外の位置に組み込まれる。組み換えコンストラクトも本明細書中で提供され、ポリペプチド、例えば抗体、突然変異抗体もしくはそれらの断片またはsEcadもしくはそれらの断片を発現させるために細胞を形質転換するため、使用され得る。組み換え核酸コンストラクトは、例えば、改変タンパク質、例えば抗体、突然変異抗体もしくはその断片またはsEcadもしくはその断片を発現させるのに適切な制御領域に操作可能に連結される、本明細書中に記載のような、抗体、突然変異抗体もしくはその断片またはsEcadもしくはそれらの断片をコードする核酸を含む。いくつかの場合において、組み換え核酸コンストラクトは、RNAのアンチセンス鎖が転写されるように、アンチセンス方向に、コード配列、遺伝子またはコード配列もしくは遺伝子の断片を含む核酸を含み得る。当然のことながら、多くの核酸が、特定のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。ゲノムコードの縮重は当技術分野で周知である。多くのアミノ酸で、アミノ酸のコドンとなるヌクレオチドトリプレットが複数ある。例えば、特定の生物における最適な発現が得られるように、その生物に対する適切なコドンバイアステーブルを用いて、抗体のある一定の断片、突然変異抗体もしくはその断片または融合タンパク質もしくはその断片のコード配列におけるコドンを修正することができる。本明細書中に記載の核酸などの核酸を含有するベクターも提供される。ベクターは、挿入セグメントを複製するために別のDNAセグメントが挿入されるレプリコン、例えばプラスミド、ファージまたはコスミドなどである。発現ベクターには、プラスミドベクター、ウイルスベクターおよび、米国特許出願第2006/0239970号本明細書によって参照により本明細書中に組み込まれるに記載のような、HSV単位複製配列粒子が含まれる。一般的に、ベクターは、的確な制御エレメントと連結される場合、複製可能である。適切なベクター骨格には、例えば、プラスミド、ウイルス、人工染色体、BAC、YACまたはPACなど、当技術分野で日常的に使用されるものが含まれる。ベクターという用語は、クローニングおよび発現ベクターならびにウイルスベクターおよび組み込みベクターを含む。発現ベクターは、制御領域を含むベクターである。適切な発現ベクターとしては、プラスミドおよび、例えば、バクテリオファージ、バキュロウイルスおよびレトロウイルス由来のウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。NovagenMadison,WI、ClontechPaloAlto,CA、StratageneLaJolla,CAおよびInvitrogen/LifeTechnologiesCarlsbad,CAのような会社から、非常に多くのベクターおよび発現系が市販されている。本明細書中で提供されるベクターはまた、例えば、複製開始点、骨格付着領域SARおよび/またはマーカーも含み得る。マーカー遺伝子は、宿主細胞において選択可能な表現型を与え得る。例えば、マーカーは、抗生物質例えば、カナマイシン、G418、ブレオマイシンまたはハイグロマイシンに対する抵抗性など、殺生物剤抵抗性を与え得る。上記のように、発現ベクターは、発現されたポリペプチドの操作または検出例えば、精製または局在化を促進するために設計されたタグ配列を含み得る。緑色蛍光タンパク質GFP、グルタチオンS-トランスフェラーゼGST、ポリヒスチジン、c-myc、ヘマグルチニンまたはFlag商標タグKodak,NewHaven,CT配列などのタグ配列は一般に、コードされたポリペプチドとの融合物として発現される。このようなタグは、カルボキシルまたはアミノ末端の何れかを含め、ポリペプチドのあらゆる場所に挿入され得る。ベクターは制御領域も含み得る。制御領域という用語は、転写または翻訳開始および速度および、転写または翻訳産物の安定性および/または可動性に影響を与えるヌクレオチド配列を指す。制御領域としては、プロモーター配列、エンハンサー配列、反応エレメント、タンパク質認識部位、誘導性エレメント、タンパク質結合配列、5’および3’非翻訳領域UTR、転写開始部位、終結配列、ポリアデニル化配列およびイントロンが含まれるが、これらに限定されない。本明細書中で使用される場合、操作可能に連結されるという用語は、転写されるべき配列の転写または翻訳に影響を与えるために、核酸の制御領域および転写されるべき配列を配置することを指す。例えば、コード配列をプロモーターの調節下に置くために、ポリペプチドの翻訳リーディングフレームの翻訳開始部位は一般に、プロモーターの1から約50ヌクレオチド下流の間に配置される。しかし、プロモーターは、翻訳開始部位の約5,000ヌクレオチド程度上流または転写開始部位の約2,000ヌクレオチド程度上流に配置され得る。プロモーターは一般に、少なくともコア基礎プロモーターを含む。プロモーターはまた、少なくとも1つの調節エレメント、例えばエンハンサー配列、上流エレメントまたは上流活性化領域UARも含み得る。含められるべきプロモーターの選択は、いくつかの因子に依存し、その因子には、効率、選択可能性、誘導性、所望の発現レベルおよび細胞または組織選択的発現が含まれるが、これらに限定されない。コード配列に対してプロモーターおよび他の制御領域を適切に選択し、配置することによって、コード配列の発現を調節することは、当業者にとって日常的なことである。宿主細胞も本明細書中で提供される。宿主細胞は、例えば、本発明のポリペプチドを発現する、原核生物、例えばE.コリ大腸菌などの細菌または真核生物、例えば、酵母、昆虫もしくは哺乳動物細胞であり得る。sEcadを阻害する本明細書中に記載の作用物質は、生理学的に許容可能であるすなわち、本明細書中に記載の治療および予防法において使用するのに十分に無毒性医薬組成物中に含まれ得る。したがって、本発明は、経皮送達sEcad阻害剤用の局所クリーム日焼け止めに組み込まれる。および持続放出パッチを含め、様々な製剤を特色とする。他の実施形態において、本医薬組成物は、含嗽液、ジェルもしくはエマルションとして、または直腸溶液、縣濁液もしくはエマルションとして製剤化され得る。当業者にとって当然のことながら、治療されている癌のタイプに基づき、具体的な製剤を選択し得る。例えば、口腔、咽喉、食道または胃の癌を治療するために、含嗽液、ジェルまたはエマルションを使用し得、直腸または結腸の癌を治療するために、直腸液、縣濁液またはエマルションを使用し得る。患者への投与用に、本発明の治療剤例えば、sEcadを阻害する、抗sEcad抗体および他のタンパク質または核酸に基づく作用物質のインビボでの安定性を向上させる材料、および/または制御的放出もしくは持続放出させる材料とともに、本発明の治療剤を製剤化することができる。したがって、本発明は、sEcad特異的な作用物質が微小粒子例えば、ポリマー性微小粒子、例えばポリラクチド-コ-グリコリド微小粒子またはナノ粒子例えば、リポソーム、ポリマー性炭水化物ナノ粒子、デンドリマーおよび炭素ベースのナノ粒子とともに製剤化される送達システムを包含する。その他の製剤には、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内または肺内投与用の製剤が含まれる。別掲のとおり、持続放出インプラントを作製し、使用することもできる。本発明の治療または予防法は、いずれも、治療前または治療の進行とともに、患者を評価する工程を含み得る。上述のように、乳房、皮膚、肺、前立腺、胃および結直腸癌ならびに他の上皮悪性腫瘍がある患者の尿および/または血清においてsEcadが上昇することは、十分に裏付けられている。発明者らのデータは、sEcadレベルに対する先行研究と一致しており、sEcadが、正常上皮細胞の表面から低レベルで、およびヒト皮膚癌細胞、ヒト乳癌細胞およびマウス肺癌細胞からはるかに高レベルで切断されることを明らかにしている。したがって、本方法は、対象から得られた試料例えば、尿または血液試料からsEcadレベルが決定される工程を含み得る。レベル上昇は、本明細書中に記載のような治療に対して対象が望ましい候補であることの指標であり、治療進行とともにsEcadをモニタリングすることにより、最適な投与およびスケジュール化が容易になり、転帰を予想することができる。例えば、抵抗性の発現を検出し、無反応の患者から反応性のある患者を迅速に区別するために、モニタリングを使用することができる。抵抗性または無反応性の兆候がある場合、医師は、腫瘍がさらなる回避機構を発現する前に、代替法または補助薬剤を選択することができる。癌に罹患しているかまたは罹患し易いヒトまたは哺乳動物に、sEcadの第二、第三、第四または第五サブドメインの1以上を特異的に標的とする2以上の作用物質を含む組成物を投与し得る。本抗sEcad抗体は、別の治療剤、例えば細胞毒性剤、または癌化学療法剤とともに投与することもできる。2以上の治療剤の同時投与は、治療剤がそれらの治療効果を発揮している間重複している限り、同時にまたは同経路で投与される必要はない。同時投与または、異なる日または週での投与のような連続投与が企図される。本発明の医薬組成物はまた、さらに、sEcad標的物質に加えて、別の治療用抗体または複数の抗体例えば、sEcad以外の細胞性標的または複数の標的を認識する抗体も含み得る。代表的な免疫グロブリンを以下に列挙する。各免疫グロブリンは、その正しい名称およびその商標により識別される。DBで始まる丸括弧内の数字は、UniversityofAlbertaで利用可能なTheDrugBankデータベース上の各抗体の識別子を指す。TheDrugBankデータベースは、sEcadのworldwidewebwww.drugbank.ca上でWishartetal.,Nucl.AcidsRes.36:D901-9062008において記載されている。有用な免疫グロブリンとしては、アブシキシマブレオプロ商標DB00054、キメラヒト-マウスモノクローナル抗体7E3のFab断片、EP0418316A1およびWO89/11538A1に記載されている合成物;アダリムマブヒュミラ商標DB00051、腫瘍壊死因子αTNF-αに結合し、その同種受容体へのTNF-αの結合を阻止する完全ヒトモノクローナル抗体;アレムツズマブキャンパス商標DB00087、慢性リンパ球性白血病CLL、皮膚T細胞リンパ腫CTCLおよびT細胞リンパ腫の治療で使用される成熟リンパ球の表面上に存在するタンパク質であるCD52を標的とするヒト化モノクローナル抗体;バシリキシマブシムレクト商標DB00074、IL-2受容体のアルファ鎖CD25に対するキメラマウス-ヒトモノクローナル抗体;ベバシズマブアバスチン商標DB00112、血管内皮増殖因子VEGFを認識し、ブロックするヒト化モノクローナル抗体、血管形成を刺激する化学的シグナル、その合成はPrestaelal.,CancerRes.,57:4593-45991997に記載されている;セルツキシマブcertuximabアービタックス商標DB00002、上皮成長因子受容体EGFRに結合し、阻害するキメラマウス/ヒトモノクローナル抗体、その合成は、米国特許第6,217,866号に記載されている;セルトリズマブペゴルシムジア商標、ヒト化TNF阻害剤モノクローナル抗体のPEG化Fab’断片;ダクリズマブゼナパックス商標DB00111、IL-2受容体のαサブユニットに対するヒト化モノクローナル抗体;エクリズマブソリリス商標、ヒトC5補体タンパク質に結合するヒト化モノクローナル抗体;エファリズマブラプチバ商標DB00095、CD11aに結合するヒト化モノクローナル抗体;ゲムツズマブマイロターグ商標DB00056細胞毒性剤に連結されているCD33に対するモノクローナル抗体、そのアミノ酸配列は、J.Immunol.148:11491991およびCaronetal.,Cancer.733Suppl:1049-10561994に記載されている;イブリツモマブチウキセタンゼヴァリン商標DB00078、キレート剤チウキセタンおよび放射性同位体イットリウム90またはインジウム111と組み合わせられたモノクローナルマウスIgG1抗体イブリツモマブ;インフリキシマブレミケード商標DB00065、腫瘍壊死因子αTNF-αに結合するキメラマウス-ヒトモノクローナル抗体、その合成は、米国特許第6,015,557号に記載されている;ムロモナブ-CD3オルソクローンOKT3商標、T細胞受容体-CD3複合体に結合するマウスモノクローナルIgG2a抗体;ナタリズマブチサブリ商標DB00108、細胞接着分子α4-インテグリンに対するヒト化モノクローナル抗体、その配列は、Legeretal.,Hum.Antibodies81:3-161997に記載されている;オマリズマブゾレア商標DB00043、ヒト免疫グロブリンEIgEに選択的に結合するヒト化IgG1kモノクローナル抗体;パリビズマブシナジス商標DB00110、呼吸器合胞体ウイルスRSVのFタンパク質のA抗原性部位のエピトープに対するヒト化モノクローナル抗体IgG、そのアミノ酸配列は、Johnsonetal.,J.Infect.Dis.1765:1215-12241997に記載されている;パニツムマブべクチビックス商標、上皮成長因子受容体EGF受容体、EGFR、ErbB-1およびヒトのHER1としても知られているに対して特異的な完全ヒトモノクローナル抗体;ラニビズマブルセンティス商標、ベバシズマブアバスチン商標と同じ親マウス抗体由来である親和性成熟抗VEGF-Aモノクローナル抗体断片;リツキシマブリツキサン商標、マブセラ商標DB00073、主にB細胞表面上で見られるタンパク質CD20に対するキメラモノクローナル抗体;トシツモマブベキサール商標DB00081、13Iが共有結合している抗CD20マウスモノクローナル抗体;またはトラスツズマブハーセプチン商標DB00072、HER2タンパク質に選択的に結合するヒト化モノクローナル抗体が挙げられる。本抗体は、承認済み抗体または市販抗体生物学的類似物の生物学的同等物を含み得る。生物学的類似物は、例えば、市販抗体と同じ一次アミノ酸配列を有する、現在知られている抗体であり得るが、市販抗体とは異なる細胞型または異なる生成、精製または製剤法により生成され得るものである。一般的に、あらゆる寄託物を使用することができる。本医薬組成物はまた、例えば細胞機能を阻害または阻止する物質など、細胞毒性剤も含み得るかまたは細胞毒性剤と一緒に投与され得、および/または細胞の破壊を引き起こす。代表的な細胞毒性剤としては、放射性同位体例えば、131I、125I、90Yおよび186Re、化学療法剤および毒素、例えば細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素活性毒素または合成毒素、またはそれらの断片が挙げられる。非細胞傷害剤は、細胞の機能を阻害または阻止せず、および/または細胞の破壊を引き起こさない物質を指す。非細胞傷害剤は、細胞傷害性となるように活性化され得る作用物質を含み得る。非細胞傷害剤は、ビーズ、リポソーム、マトリックスまたは粒子を含み得る例えば、本明細書中で参照により組み込まれる、米国特許公開第2003/0028071号および第2003/0032995号を参照。このような作用物質は、本明細書中で開示される抗体または他の標的作用物質と複合化、カップリング、結合またはそれに随伴され得る。本明細書中で開示される組成物とともに、従来の抗癌剤を投与することができる。有用な薬品としては、抗血管形成剤、すなわち、生存に必要な新しい血管成長を刺激するという腫瘍の能力を阻止する薬剤である。当技術分野で公知のあらゆる抗血管形成剤を使用することができ、これには、血管内皮増殖因子VEGFの機能を阻止するベバシズマブアバスチン登録商標、Genentech,Inc.などの薬剤が含まれる。他の例としては、ダルテパリンフラグミン登録商標、スラミン、ABT-510、コンブレタスタチンA4ホスフェート、レナリドマイド、LY317615エンザスタウリン、ダイズイソフラボンゲニステイン;大豆タンパク質単離物、AMG-706、抗VEGF抗体、AZD2171、Bay43-9006トシル酸ソラフェニブ、PI-88、PTK787/ZK222584バタラニブ、SU11248リンゴ酸スニチニブ、VEGF-Trap、XL184、ZD6474、サリドマイド、ATN-161、EMD121974シレニグチドCilenigtideおよびセレコキシブセレブレックス登録商標が挙げられるが、これらに限定されない。他の有用な治療剤としては、DNA損傷、例えば、癌細胞の細胞性DNAにおける2本鎖の破壊を促進する薬剤が挙げられる。当業者にとって公知のあらゆる形態のDNA損傷剤を使用することができる。DNA損傷は、一般に、放射線療法および/または化学療法により生じ得る。放射線療法の例としては、外照射療法および内部照射療法小線源療法とも呼ばれる。が挙げられるが、これらに限定されない。外照射療法のためのエネルギー源としては、x線、ガンマ線および粒子ビームが挙げられ、内部照射療法で使用されるエネルギー源としては、放射性ヨウ素ヨウ素125またはヨウ素131,およびストロンチウム89またはリン、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸塩またはコバルトの放射性同位体からのものが挙げられる。放射線療法を行う方法は当業者にとって周知である。DNA損傷性の化学療法薬の例としては、ブスルファンミレラン、カルボプラチンパラプラチン、カルムスチンBCNU、クロラムブシルリューケラン、シスプラチンプラチノール、シクロホスファミドシトキサン、ネオサール、ダカルバジンDTIC-Dome、イホスファミドイフェックス、ロムスチンCCNU、メクロレタミン窒素マスタード、ムスタルゲン、メルファランアルケランおよびプロカルバジンマチュレーンが挙げられるが、これらに限定されない。他の標準的な癌化学療法薬としては、アルキル化剤、例えばカルボプラチンおよびシスプラチン;窒素マスタードアルキル化剤;ニトロソウレアアルキル化剤、例えばカルムスチンBCNU;代謝拮抗物質、例えばメトトレキサート;葉酸;プリン類似体代謝拮抗剤、メルカプトプリン;ピリミジン類似体代謝拮抗剤、例えばフルオロウラシル5-FUおよびゲムシタビンジェムザール登録商標;ホルモン性抗新生物薬、例えばゴセレリン、ロイプロリドおよびタモキシフェン;天然抗新生物薬、例えばアルデスロイキン、インターロイキン-2、ドセタキセル、エトポシドVP-16、インターフェロンアルファ、パクリタキセルタキソール登録商標およびトレチノインATRA、抗生物質天然抗新生物薬、例えばブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ダウノマイシンおよびミトマイシンCを含むミトマイシン類;およびビンカアルカロイド天然抗新生物薬、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン;ヒドロキシ尿素;アセグラトン、アドリアマイシン、イホスファミド、エノシタビン、エピチオスタノール、アクラルビシン、アンシタビン、ニムスチン、プロカルバジン塩酸塩、カルボコン、カルボプラチン、カルモフール、クロモマイシンA3、抗腫瘍多糖類、抗腫瘍血小板因子、シクロホスファミドシトキシンCytoxin登録商標、シゾフィラン、シタラビンシトシンアラビノシド、ダカルバジン、チオイノシン、チオテパ、テガフール、、ドラスタチン類、ドラスタチン類似体、例えばアウリスタチン、CPT-11イリノテカン、ミトザントロン、ビノレルビン、テニポシド、アミノプテリン、カルミノマイシン、エスペラマイシン類例えば、米国特許第4,675,187号を参照、ネオカルジノスタチン、OK-432、ブレオマイシン、フルツロン、ブロクスウリジン、ブスルファン、ホンバン、ペプロマイシン、ベスタチンウベニメクス登録商標、インターフェロン-β、メピチオスタン、ミトブロニトール、メルファラン、ラミニンペプチド、レンチナン、カワラタケCoriolusversicolor抽出物、テガフール/ウラシル、エストラムスチンエストロゲン/メクロレタミンが挙げられるが、これらに限定されない。癌患者に対する治療剤として使用され得るさらなる薬剤としては、EPO、G-CSF、ガンシクロビル;抗生物質、ロイプロリド;メペリジン;ジドブジンAZT;突然変異体および類似体を含むインターロイキン1から18;インターフェロンまたはサイトカイン類、例えばインターフェロンα、βおよびγホルモン類、例えば黄体形成ホルモン放出ホルモンLHRHおよび類似体および、ゴナドトロピン放出ホルモンGnRH;成長因子、例えば形質転換増殖因子-βTGF-β、線維芽細胞増殖因子FGF、神経成長因子NGF、成長ホルモン放出因子GHRF、上皮増殖因子EGF、線維芽細胞増殖因子相同因子FGFHF、肝細胞増殖因子HGFおよびインスリン増殖因子IGF;腫瘍壊死因子-αおよびβTNF-αおよびβ;浸潤阻害因子-2IIF-2、骨形成タンパク質1-7BMP1-7;ソマトスタチン;サイモシンα-1;γ-グロブリン;スーパーオキシドジスムターゼSOD;補体因子;および抗血管形成因子が挙げられる。有用な治療剤としては、プロドラッグ、例えば、親薬物と比較して、腫瘍細胞に対して細胞毒性が低いかまたは細胞毒性がなく、酵素により活性化可能であるかまたは活性のあるもしくはより活性が高い親形態に変換可能な、医薬的に活性のある物質の前駆体または誘導体型である。例えば、Wilman,BiochemicalSocietyTransactions,14:375-3821986andStellaetal,Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery,DirectedDrugDelivery,Borchardtetal.,ed.,pp.247-267,HumanaPress1985を参照のこと。プロドラッグとしては、リン酸含有プロドラッグ、チオリン酸含有プロドラッグ、硫酸含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、D-アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、b-ラクタム含有プロドラッグ、場合によっては置換されていてもよいフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは場合によっては置換されていてもよいフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、5-フルオロシトシンおよび、より活性が高い細胞毒性のない薬物に変換され得る他の5-フルオロウリジンプロドラッグが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で使用可能なプロドラッグ型に誘導体化され得る細胞毒性薬の例としては、上述の化学療法剤が挙げられるが、これらに限定されない。特定の反応が誘導されるか否かを調べる場合、当業者にとって公知の方法であればいずれの方法でも使用できる。反応が誘導されるか否かを調べるのに、特定の疾患状態の程度を評価する臨床方法を使用することができる。反応を評価eveluateするために使用される特定の方法は、患者の障害の性質、患者の年齢および性別、投与されている他の薬物および担当医師の判断に依存する。実施例1:sEcadの封鎖は、インビトロで悪性乳房上皮細胞においてアポトーシスを誘発するが、正常ヒト乳房上皮細胞ではアポトーシスを誘発しない。E-カドヘリン細胞外ドメイン切断は最初に、MCF-7乳癌細胞の培地中に可溶性の80kDa断片を検出した、Wheelocketal.J.CellBiochem.34:187-2021987により記載された。それ以来、このsEcad断片の切断は、悪性の乳房、皮膚、卵巣、前立腺、食道、結腸、肺および脳細胞を含め、インビトロでいくつかの異なる悪性細胞型について記載されてきたDaviesetal,Clin.CancerRes.710:3289-32972001;Giletal.,Gynecol.Oncol.1082:361-3692008;Itoetal.,Oncogene1850:7080-70901999;KantakおよびKramer,1998;Noeetal.,J.CellSci.114:111-1182001;Ryniersetal.,Biol.Chem.383:159-1652002;Symowiczetal.,CancerRes.675:2030-20392007。良性と悪性細胞との間でE-カドヘリンの局在化および構成的切断に違いがあるか否かを調べるために、発明者らは、E-カドヘリンを視覚化する目的で、免疫蛍光顕微鏡によって、正常MCF-10A乳房上皮細胞およびMCF-7乳癌細胞を染色した。4ウェルチャンバースライドNunc上、10FBSを補給したDMEM中で、コンフルエントになるまで両細胞型を増殖させた。100メタノール中で細胞を固定し、E-カドヘリンを免疫染色し、免疫蛍光顕微鏡x20倍率により調べた。ヒストンH1赤SantaCruzを使用して、核を標識した。発明者らはまた、切断されたE-カドヘリン細胞外ドメインについて上清supernantantsもELISAにより分析した。コンフルエントのMCF-10AおよびMCF-7細胞から馴化培地を回収し、製造者の説明書に従い、ELISARDSystemsによってsEcadレベルを分析した。ヒトE-カドヘリンサブドメインEC1SHE78-7、Zymedに対して特異的なモノクローナル抗体への曝露後、発明者らは、細胞-細胞接触部位において、しかも最も注目すべきことに、両細胞株における細胞のクラスター内で、細胞間境界に沿って、E-カドヘリン免疫染色を観察した。対照的に、正常MCF-10A細胞およびMCF-7癌細胞の両方の馴化培地中で、切断された可溶性E-カドヘリン細胞外ドメインが検出されたが、MCF-7癌細胞株では顕著に上昇していた。sEcadレベルは、MCF-10AとMCF-7細胞との間で有意に異なった。次に、E-カドヘリンの細胞外ドメインに対する抗体DECMA;20μg/mLまたは免疫前血清IgG;20μg/mLの存在下または非存在下で、コンフルエントMCF-10A細胞およびMCF-7細胞を48時間培養し、製造者の説明書に従い、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼビオチン-dUTPニックエンド標識TUNELキットPromegaを用いて、アポトーシスについて分析した。抗sEcad抗体に曝露した正常MCF-10A細胞と未処理またはアイソタイプ対照細胞との間では、アポトーシスに関して特記すべき差はなかった。対照的に、抗sEcad処理したMCF-7癌細胞では、細胞アポトーシスの顕著な増加を示し、未処理細胞ではそれは明らかではなかった。これらの知見をさらに確認するために、発明者らは、細胞質ヒストン結合DNA断片モノヌクレオソームおよびオリゴヌクレオソームを測定するアポトーシス特異的ELISAアッセイを使用した。製造者の説明書に従い、細胞質ヒストン結合DNA断片に対するアポトーシス特異的ELISAを用いて、20μg/mLの抗sEcadAbまたはIgGの存在下または非存在下で48時間培養したMCF-10AおよびMCF-7の細胞溶解液をアポトーシスについて分析したCellDeathDetectionELISAPLUS,BoehringerMannheim,Mannheim,Germany。その結果、抗sEcad処理はMCF-7細胞においてアポトーシスを劇的に誘導したが、MCF-10A細胞においては特記するような効果がなかったことが明らかになった。何れの細胞株でも壊死レベルは抗sEcad処理により影響を受けなかった。まとめると、これらの結果から、切断されたE-カドヘリン細胞外ドメインを細胞環境から阻害または封鎖することによって、乳癌細胞においてアポトーシスが選択的に誘導され、その一方で正常な健常乳房上皮細胞では回避されることが示される。p53の活性化は、腫瘍形成の抑制にとって重要な遺伝子の転写制御へと導かれ、その特異的な作用は主にアポトーシスの惹起を通じて発揮されるのでFusteretal.,TrendsMol.Med.135:192-1992007、発明者らは、次に、p53がこの抗sEcad-誘導性アポトーシスに関与するか否かを調べたいと考えた。ウエスタンブロッティングおよびp53に対する抗体を用いて、発明者らは、MCF-7細胞におけるこのプロアポトーシス性タンパク質の発現への抗sEcadの効果を調べた。簡潔に述べると、50μgの細胞溶解液を4-15勾配ゲル上で電気泳動にかけBioRad、ポリビニリデンジフルオリドPVDFメンブレンに移し、抗p53SantaCruz;1:400を用い、続いてペルオキシダーゼ結合二次抗体1:3,000および増感化学発光EC1検出で免疫ブロッティングを行った。G3PDH染色により等量のタンパク質を検証した。20μgの抗sEcadでの処理では、p53は24時間から増加し始め、48時間までに最大レベルに到達した。対照的に、未処理細胞またはアイソタイプ対照で処理した細胞はp53発現を欠いた。腫瘍におけるp53の存在は化学療法への良好な反応と相関し、低レベルのp53は癌細胞において薬物抵抗性をもたらすので、発明者らは、腫瘍環境におけるsEcadの阻害によって細胞毒性が促進され、現在の化学療法ストラテジーで発現する抵抗性が低下し得ると考える。実施例2:ヒト皮膚扁平上皮細胞癌細胞では、抗sEcad抗体処理後アポトーシスが起きるが、正常成人ヒト角化細胞ではアポトーシスが起きない。sEcadの構成的切断が、ヒト扁平上皮細胞癌SCCと正常上皮角化細胞培養との間で異なるか否かを直接調べるために、発明者らは、正常初代ヒト皮膚角化細胞PHKおよび2種類の異なるヒトSCC細胞株SCC12bおよびSCC13においてsEcadレベルを評価した。PHK、SCC12bおよびSCC13細胞を約80コンフルエントになるまで増殖させ、ウエスタン免疫ブロッティングにより、培養上清supernantantsにおけるsEcadレベルを調べた。簡潔に述べると、各細胞株から得た60μLの馴化培地を4-15勾配ゲルBioRad上で電気泳動にかけ、ポリビニリデンジフルオリドPVDFメンブレンに移し、抗E-カドヘリンSantaCruz;1:600を用い、続いてペルオキシダーゼ結合二次抗体1:3,000および増感化学発光ECL検出で免疫ブロッティングを行った。さらに、PHK、SCC12bおよびSCC13細胞からの馴化培地を回収し、製造者の説明書に従い、ELISAによりsEcadレベルについて分析した。発明者らは、ウエスタンブロッティングによって、両方のSCC細胞株で、sEcadの発現上昇を観察した。これは、ELISAに基づいて、SCC12bおよびSCC13細胞株のsEcadレベルが、非癌性PHK細胞よりも3倍超増加したことに対応した。抗sEcad抗体が上記のMCF-7乳癌細胞以外の上皮癌細胞においてアポトーシスを誘導し得るか否かを調べるために、発明者らは、抗sEcad20μg/mL、DECMA;Sigmaまたは免疫前血清IgG;アイソタイプ対照の存在下または非存在下で48時間、PHKD033、SCC12bおよびSCC13細胞をコンフルエントになるまで培養し、製造者の説明書に従い、TUNELアッセイを用いて、アポトーシスについて細胞を分析した。SCC12bおよびSCC13細胞は、抗sEcadに曝露された場合、アポトーシスの顕著な増加を示したが、この阻止抗体で正常PHKを処理した場合には、検出可能なプロアポトーシス性の影響は示されなかった。アポトーシス特異的ELISAアッセイを用いて、発明者らは、同じ用量の抗sEcadでPHKを処理してもアポトーシスに影響がなかったことをさらに確認した。まとめると、このデータは、抗sEcad処理が、2種類の異なるヒト皮膚癌細胞株で選択的にアポトーシスを誘導するが、正常初代ヒト角化細胞皮膚培養物では誘導しないことを示す。実施例3:マウスSCCは、抗sEcad誘導性アポトーシスを起こし易い。扁平上皮細胞癌などの疾患プロセスを効果的に調べるためには、ヒトモデルと動物モデルの両方のアプローチを使用することが賢明である。したがって、発明者らは、SCCマウス細胞株において抗sEcad処理がアポトーシスを選択的に誘導するか否かを調べたいと考えた。そうであるならば、マウスモデル系を用いてインビボで、抗sEcad剤の有効性および毒性のさらなる試験が可能になる。発明者らは、最初に、ELISAによって、コンフルエントの初代マウス角化細胞PMKおよびマウスSCC細胞株PAM212の馴化培地におけるsEcadのレベルを調べた。予想されるように、PAM212細胞株におけるsEcadレベルは、対照PMK培養物よりも2倍近く高かった。ウエスタンブロッティングによってこれらのレベルを確認したが、sEcadの相対レベルはPAM212細胞株で2倍から3倍高かった。したがって、乳癌およびヒト皮膚癌細胞と同様に、E-カドヘリンの細胞外ドメインの構成的切断は、非癌性の健常上皮細胞よりもマウスSCCにおいて統計学的に高いことが明らかである。抗sEcad処理が、マウスSCCに対して選択的に細胞毒性であることを確認するために、E-カドヘリンの細胞外ドメインに対する抗体20μg/mLDECMA;Sigmaまたは免疫前血清IgGの存在下または非存在下で48時間、PMKおよびPAM212細胞をコンフルエントになるまで培養し、TUNELアッセイを用いて、アポトーシスについて分析した。発明者らは、本阻止抗体との温置後、SCC細胞株において、TUNEL-陽性細胞で顕著な上昇を観察したが、PMK培養物では特記すべき相違はなかった。アポトーシス特異的なELISAアッセイtheCellDeathDetectionELISAPLUSBoehringerMannheimによってこれらの結果を確認したが、抗sEcad処理したPAM212細胞株においてアポトーシスが2倍を超えて上昇し、PMK培養物において特記すべき細胞死がないことが示された。対照的に、細胞型に関係なく、試験した条件全てにおいて壊死レベルは不変であった。発明者らは既に20μg/mLの抗sEcad抗体へ曝露されたMCF-7細胞におけるp53レベル上昇を明らかにしたので、次に、この阻止抗体または免疫前血清IgGの存在下または非存在下で24時間および48時間培養したPAM212細胞において同様のp53上昇があるか否かを調べた。簡潔に述べると、50μgの細胞溶解液を4-15勾配ゲルBioRad上で電気泳動にかけ、ポリビニリデンジフルオリドPVDFメンブレンに移し、抗p53SantaCruz;1:400を用い、続いてペルオキシダーゼ結合二次抗体1:3,000および増感化学発光ECL検出により、免疫ブロッティングを行った。G3PDH染色により等量のタンパク質を検証した。ウエスタンブロッティングにより、抗sEcad処理後24時間および48時間までにp53レベルの著しい上昇があるが、未処理またはアイソタイプIgG対照ではバンドがないことが証明された。抗sEcad誘導p53発現のこのタイミングは、既に記載のMCF-7細胞株で見られたものと同じである。したがって、この抗sEcad誘導性癌細胞死はp53依存性経路を介するものであると思われるが、正確な下流の因子はまだ明らかになっていない。実施例4:他の非癌性細胞においてsEcadの阻止はアポトーシスを誘導しない。抗sEcadAbまたは免疫前血清IgGの存在下または非存在下で24-48時間、3T3マウス線維芽細胞およびヒト内皮細胞HUVECを培養し、TUNELによって、および上述のアポトーシス特異的なELISAアッセイにより、アポトーシスについて分析した。本阻止抗体の存在下で、TUNELアッセイを使用した3T3細胞は殆どまたは全くアポトーシス性の核を示さず、アポトーシス特異的なELISAアッセイによっても、アポトーシスに変化は見られなかった。同様に、抗sEcadで処理したHUVEC細胞は、両ストラテジーを使用した結果、アポトーシスに特記すべき差は示さなかった。さらに、3T3およびHUVEC細胞は、本E-カドヘリン阻止抗体においてこれらの細胞を示さなかった。実施例5:抗sEcadmAb療法は、インビボで、腫瘍の発症を遅延させ、腫瘍負担を防ぎ、腫瘍グレードを低下させる。この試験において、触診可能な乳癌腫瘍の急速な発現肺への転移を伴う侵襲性の強い腺癌へ進行するを特徴とする処女雌MMTV-PyMTトランスジェニックマウスを使用したGuyetal.,1992;Buggeetal.,1998。48日齢で開始し、sEcadのEC-5ドメインを標的とするモノクローナル抗体α-sEcad;DECMA-1、SigmaAldrich、20μg/200μL食塩水/マウスまたは生理食塩水で、i.p.注射により、マウスを週に2回処置した。このマウスを90日齢で屠殺した。全ての食塩水処置対照MMTV-PyMTマウスが、50から60日までに触診可能な腫瘍を発現したが、処置マウスにおいては、腫瘍発症の統計学的に有意な遅延が観察された81から85日;図2Aを参照。90日齢のEC5mAb処置マウスでは、組織病理学的に中程度に分化していると判定された総腫瘍は、より少なかった構造的グレードIIおよび核グレードI;図2Bを参照。対照的に、90日食塩水処置マウスにおける腫瘍の分化度は全て低かった構造的グレードIIIおよび核グレードIII;図2Cを参照。mAb処置マウスではまた、総腫瘍重量および体積も低下した。要するに、これらの結果は、様々な上皮癌細胞株乳房、皮膚および肺において抗sEcad抗体治療により細胞死が誘発される一方で、隣接する正常な健常上皮細胞、線維芽細胞および内皮細胞では誘導されないことを明らかに示している。発明者らは、癌細胞が、正常な細胞-細胞接触を擬似的に模倣し、機能的骨格を隣接する近隣細胞に提供するため、微小環境においてsEcadを分泌している、ということを提案する。したがって、腫瘍微小環境からsEcadを除去することによって、腫瘍細胞環境のこの養育能が阻害され、プログラムされた細胞死に関与するp53依存性分子経路が活性化される。本発明の多くの実施形態を記載してきた。そうではあるものの、本発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な変更が為され得ることを理解されたい。したがって、他の実施形態が次の特許請求の範囲内に含まれる。"