下記式若しくは式の化合物、又は、それらの医薬として許容し得る塩であって、それらの任意の互変異性体、又は、トランスとして示されているC26、27のCC結合がシスである、それらの異性体を含み、かつ、C53ケト及びC15ヒドロキシル基及びメタノールの組み合わせによりケタールが形成されている、それらのメタノール付加物を含む、前記化合物、又は、それらの医薬として許容し得る塩式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、独立に、H、F、Cl、Br、C26アルケニル又はC110アルキルを表し、ここで、該アルキル基の1以上の炭素原子は、O、N及びSppは0、1又は2を表す。から選択されるヘテロ原子によって任意に置き換えられており、かつここで、該アルキル基の1以上の炭素原子は、カルボニルによって任意に置き換えられており、かつ該アルキル基は、1以上のハロゲン原子によって任意に置換されていてもよくX1、X2、X3、X4及びX5は、独立に、C又はNを表し、かつこれらの基のうちNを表すものについては、結合される置換基が存在せずただし、R1、R3、R4及びR5が全てHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5が全てCを表す場合、R2はOHを表すことができない。。X1がCを表す、請求項1記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。X2がCを表す、請求項1記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。X3がCを表す、請求項1記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。X4がCを表す、請求項1記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。X5がCを表す、請求項1記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。R1、R3、R4及びR5が、独立に、H、F、Cl、CF3、OH及びC16アルキルから選択される、請求項1~6のいずれか1項記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。R2が、H、F、Cl、CF3、OH、NH2及びC16アルキルから選択される、請求項1~7のいずれか1項記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。R2がOHを表す、請求項8記載の式若しくは式の化合物、又はそれらの医薬として許容し得る塩。以下から選択される、請求項1記載の式若しくは式の化合物であって、それらの任意の互変異性体、又は、トランスとして示されているC26、27のCC結合がシスである、それらの異性体を含み、かつ、C53ケト及びC15ヒドロキシル基及びメタノールの組み合わせによりケタールが形成されている、それらのメタノール付加物を含む、前記化合物、又は、それらの医薬として許容し得る塩:上記式は以下のように表すこともできる。上記式は以下のように表すこともできる。。以下から選択される、請求項1記載の式若しくは式の化合物であって、それらの任意の互変異性体、又は、トランスとして示されているC26、27のCC結合がシスである、それらの異性体を含み、かつ、C53ケト及びC15ヒドロキシル基及びメタノールの組み合わせによりケタールが形成されている、それらのメタノール付加物を含む、前記化合物、又は、それらの医薬として許容し得る塩:。医薬として使用するための、請求項1~11のいずれか1項記載の化合物。HCV若しくはHIV感染などのウイルス感染症、又は、筋ジストロフィーを治療するための医薬として使用するための、請求項1~11のいずれか1項記載の化合物。請求項1~11のいずれか1項記載の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体とともに含む、医薬組成物。請求項1~11のいずれか1項記載の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体とともに含み、さらに第2の又は二次の有効成分を含む、医薬組成物。治療有効量の請求項1~11のいずれか1項記載の化合物を対象に投与することを含む、HCV若しくはHIV感染などのウイルス感染症、又は、筋ジストロフィーの治療方法。治療有効量の請求項1~11のいずれか1項記載の化合物を対象に投与することを含む、炎症性障害の治療方法。炎症性障害を治療するための医薬として使用するための、請求項1~11のいずれか1項記載の化合物。ストレプトマイセス属種などのサングリフェリン産生細菌に、式の化合物:式中、X1、X2、X3、X4、X5、R1、R2、R3、R4及びR5は、請求項1~11のいずれか1項において定義したとおりであり、かつR7は、H又はエステル形成基を表す。又はそれらの塩を供給する工程、及び、変異合成サングリフェリンが産生されるように該細菌を培養する工程を含む、変異合成サングリフェリンの製造方法。前記サングリフェリン産生細菌が、sfaA遺伝子又はsfaA遺伝子のホモログが不活化されているか又は欠失しているストレプトマイセス属種である、請求項19記載の方法。前記変異合成サングリフェリンを単離する工程をさらに含む、請求項19又は20記載の方法。発明の説明本発明は、先に説明した変異合成サングリフェリンアナログ、これらの化合物の製造方法、及び医薬におけるこれらの化合物の使用方法を提供する。一実施態様において、該化合物は、C53ケト及びC15ヒドロキシル基及びメタノールの組み合わせによりケタールが形成されている、それらのメタノール付加物である。別の実施態様において、それはメタノール付加物ではない。いくつかの実施態様において、R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が表すことができるC110アルキル基の炭素原子は、ヘテロ原子によって置き換えられている。CH3がNによって置き換えられている場合、形成される基はNH2である。CH2がNによって置き換えられている場合、形成される基はNHである。CHRがNによって置き換えられている場合、形成される基はNRである。したがって、R1、R2、R3、R4及びR5内の窒素原子は第一級、第二級又は第三級の窒素原子であることができる。CH3がOによって置き換えられている場合、形成される基はOHである。R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が表すことができるC110アルキル基の炭素原子がヘテロ原子によって置き換えられている場合、それは好適には、O、S又はN、特にN又はO、とりわけOによって置き換えられている。R1、R2、R3、R4及びR5のいずれか1つが、基Spを含む場合、変数pは、好適には0又は1を表す。一実施態様において、pは0を表す。別の実施態様において、pは1を表す。別の実施態様において、pは2を表す。R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が表すことができるC110アルキル基が2個以上のヘテロ原子を含む場合、これらは典型的には、2個以上の炭素原子によって隔てられるべきである。好適には、R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が表すことができるC110アルキル基の炭素原子は、ヘテロ原子によって置き換えられていないか、そうでなければ、OH又はNH2を表す。R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が表すことができるC110アルキル基の炭素原子がカルボニルによって置き換えられている場合、該カルボニルは、好適には別の炭素原子又は窒素原子に隣接して配置される。好適には、カルボニル基は硫黄原子又は酸素原子に隣接して配置されない。例えば、R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が、COC13アルキル、例えば、COMeを表すことができる。好適には、R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が表すことができるC110アルキル基の炭素原子は、カルボニルによって置き換えられていない。R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が表すことができるC110アルキル基は、1以上のハロゲン原子によって置換されることができる。例えば、R1、R2、R3、R4及びR5の1以上が、CF3を表すことができる。或いは、1以上のR1、R2、R3、R4及びR5が、1以上のCl又はF原子によって置換されたC110アルキルを表すことができる。好適には、R1、R2、R3、R4又はR5のC110アルキル基は、ハロゲンによって置換されていない。1以上のR1、R2、R3、R4及びR5基がC110アルキル基を表す場合、好適には、該基はC14アルキルを表す。一実施態様において、R1、R2、R3、R4及びR5の1以上は、C16アルキル又はC23アルケニルを表し、例えば、R1、R2、R3、R4及びR5の1以上はメチルを表す。好適には、R1は、H、F、Cl、CF3、OH又はC16アルキルを表す。最も好適には、R1は、H又はF、特にHを表す。好適には、R2は、H、F、Cl、CF3、OH、NH2又はC16アルキルを表す。より好適には、R2は、H、F、OH又はNH2、特にOHを表す。好適には、R3は、H、F、Cl、CF3、OH又はC16アルキルを表す。より好適には、R3は、H、Me又はFを表す。R3は、エチルを表すこともできる。好適には、R4は、H、F、Cl、CF3、OH又はC16アルキルを表す。より好適には、R4は、H又はFを表す。好適には、R5は、H、F、Cl、CF3、OH又はC16アルキルを表す。より好適には、R5は、H又はFを表す。好適には、R1、R2、R3、R4又はR5の1以上、より好適には、2以上は、Hを表さない。好適には、R1、R2、R3、R4又はR5の1以上、例えば、2以上は、Fを表す。好適には、R3若しくはR4又はR3及びR4は、Fを表す。別の実施態様において、R1及びR3は、Fを表す。一実施態様において、X1はNを表す。別のより好ましい実施態様において、X1はCを表す。好適には、X2はCを表す。好適には、X3はCを表す。好適には、X4はCを表す。好適には、X5はCを表す。一実施態様において、前記化合物は、式の化合物である。別の実施態様において、前記化合物は、式の化合物である。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はHを表し、R4はFを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はFを表し、R4はFを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はFを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はMeを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はNH2を表し、R3はHを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はFを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はHを表し、R4はFを表し、R5はHを表し、X1はNを表し、かつX2、X3、X4及びX5はCを表し:上記構造は、以下のように表すこともできる:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はHを表し、R4はFを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はFを表し、R4はFを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はFを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はMeを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はNH2を表し、R3はHを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はFを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はEtを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はFを表し、R2はOHを表し、R3はFを表し、R4はHを表し、R5はHを表し、かつX1、X2、X3、X4及びX5はCを表す:。下記の構造によって表されるように、本発明の好適な実施態様において、R1はHを表し、R2はOHを表し、R3はHを表し、R4はFを表し、R5はHを表し、X1はNを表し、かつX2、X3、X4及びX5はCを表し:上記構造は、以下のように表すこともできる:。いくつかの実施態様において、C26、27位の二重結合サングリフェリンAの構造を参照は、トランス形態ではなく、シス形態であってもよい。一般に、本発明の化合物は、変異合成によって製造される。一般に、式若しくはのいくつかの化合物、又は医薬として許容し得るそれらの塩の製造方法は、以下を含む:サングリフェリン産生株ストレプトマイセス属spA92308110などの培養物、又は、より好ましくは、sfaA遺伝子又はsfaA遺伝子のホモログが不活化されているか又は欠失しているサングリフェリン産生株の培養物を、発酵ブロスに接種すること該発酵ブロスに、式で示されるメタチロシンアナログを供給することサングリフェリンアナログが産生されるまで、発酵を継続させることサングリフェリンアナログを抽出及び単離すること式中、R7は、H又はアルキル基例えば、MeなどのC16アルキルなどのエステル形成基を表す。。式における、好適なX1、X2、X3、X4、X5、R1、R2、R3、R4及びR5基は、式及びの化合物について定義したとおりである。前記供給材料は、式の化合物のラセミ形態又はL形態であることができる。式の化合物は、市販されているか、又は、標準的な有機合成化学技術によって製造される。式の化合物に至る1つの一般的な経路は、以下のスキーム1に示されるとおりである:スキーム1:a式のアルデヒドの好適なフラグメント例えば、2PCHCO2R7とのカップリング、b必要に応じて、水素化及び脱保護。PG保護基。式のアルデヒドは、市販されているか、又は、当業者によって容易に合成され得る。式の化合物から式の化合物を生成する際に、保護及び脱保護化学の利用を要する可能性がある。これらの技術は当業者に公知であり、好適な保護基は、グリーンの有機合成における保護基GreenesProtectiveGroupsinOrganicSynthesisWuts及びGreene、第4版、2007に記載されている。本願明細書において提供される具体的な方法及び参考文献に加えて、当業者は、合成法に関して、ボーゲルの実用有機化学の教科書及びマーチの先端有機化学を含むが、これらに限定されない標準的な教科書を調べることもできる。本発明の変異合成サングリフェリンアナログは、単独又は他の治療剤と組み合わせて投与できる。2種又は、それより多いの薬剤の共投与は、使用されるそれぞれの投与量を低減させ、それにより副作用を低減させる可能性があり、効力の向上をもたらすことができ、そのため、より高いSVR、及び耐性の低減をもたらすことができる。したがって、一実施態様において、前記変異合成サングリフェリンアナログは、標準治療から採用されるHCV感染の治療のための1以上の治療薬複数可とともに共投与される。これは、インターフェロンでもよい。別の実施態様において、変異合成サングリフェリンアナログは、STATCDAAなどの1以上の他の抗ウイルス薬とともに共投与され、該抗ウイルス薬は以下の1以上であってよい:非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、ヌクレオシド若しくはヌクレオチドポリメラーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、SCH503034、TMC435350、MK7009、R7227ITMN191、EA058、EA063又はウイルス侵入阻害剤。製剤は、都合のよいことには、単位剤形で提供することができ、薬学分野で周知の方法のいずれかによって製造することができる。そのような方法は、有効成分を、1種以上の副成分を構成する担体と混合する工程を含む。一般的に、製剤は、有効成分を、液体担体又は微粉砕固体担体又は両方と均一かつ密接に混合し、次いで、必要な場合、生成物を成形することにより製造される。本発明の化合物は、通常、医薬として許容し得る剤形で、任意に非毒性の有機又は無機の酸、又は塩基、付加塩の形態にある有効成分を含む、医薬製剤の形態で経口投与されるだろう。治療すべき障害及び患者、並びに投与経路によって、組成物は種々の投与量で投与され得る。例えば、本発明の化合物は、即放、遅延放出、又は制御放出用途のために、着香剤又は着色剤を含んでいてもよい、錠剤、カプセル剤、オビュール剤ovules、エリキシル剤、液剤又は懸濁剤の形態で、経口的に、頬側的に又は舌下的に投与することができる。そのような錠剤は、以下のものを含み得る:微結晶性セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム及びグリシンなどの賦形剤、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム及び特定の複合シリケートなどの崩壊剤、及びポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、スクロース、ゼラチン及びアカシアなどの造粒結合剤。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、グリセリルベヘネート及びタルクなどの滑沢剤が含まれ得る。類似の種類の固体組成物は、ゼラチンカプセル中の充填剤として利用することもできる。この点において好ましい賦形剤には、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖又は高分子量ポリエチレングリコールがある。水性懸濁剤及び/又はエリキシル剤では、本発明の化合物は、乳化剤及び/又は懸濁化剤とともに、並びに、水、エタノール、プロピレングリコール及びグリセリン、並びにそれらの組み合わせなどの希釈剤とともに、様々な甘味剤若しくは着香剤、着色物質又は色素と組み合わせることができる。錠剤は、任意に1種以上の副成分と共に圧縮又は成型により製造できる。圧縮錠は、好適な機械中で、結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤、界面活性剤又は分散剤と任意に混合された、粉末又は顆粒などの自由流動形態にある有効成分を圧縮することにより製造できる。湿製錠剤は、好適な機械中で、不活性な液体希釈剤により湿らせた粉末状化合物の混合物を成型することにより製造できる。錠剤は任意にコーティング又は溝をつけてもよく、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを種々の比率で利用して有効成分の緩徐放出又は制御放出を与えて所望の放出プロファイルを与えるように製剤できる。経口投与に好適な本発明による製剤は、それぞれ所定量の有効成分を含む、カプセル剤、カシェ剤、若しくは錠剤などの分離した単位として;散剤若しくは顆粒剤として;水性液体若しくは非水性液体の液剤又は懸濁剤として;又は水中油型液体エマルション若しくは油中水型液体エマルションとして提供することができる。有効成分は、ボーラス、舐剤、又はペースト剤として提供することもできる。上記に詳細に言及された成分に加えて、本発明の製剤は、問題とする製剤の種類に関する分野に従来ある他の薬剤を含んでよく、例えば、経口投与に好適なものは着香剤を含んでよいことを理解されたい。好都合なことに、保存剤及び緩衝剤などの薬剤はビヒクル中に溶かすことができる。安定性を増すために、組成物を、バイアルに充填した後に凍結でき、真空下で水が除去される。次いで、凍結乾燥された乾燥散剤をバイアルに密封し、付随する注射用の水のバイアルを供給して、使用前に液体を再構成できる。本発明の化合物の投与すべき用量は、特定の化合物、関与する疾病、対象、及び疾病の性質及び重症度並びに対象の肉体的状態、選択された投与経路により変わるだろう。適切な用量は当業者により容易に決定できる。組成物は、投与の方法により、01重量から、好ましくは5~60、より好ましくは10~30重量の本発明の化合物を含み得る。本発明の化合物の個別の用量の最適量及び間隔が、治療すべき病態の性質及び程度、投与の形態、経路、及び部位、並びに治療される特定の対象の年齢及び病態により決定され、最終的には利用すべき適切な用量を医師が決定するだろうことを当業者は認識するだろう。この用量は、適切なだけ頻繁に繰り返すことができる。副作用が現れた場合、用量の量及び又は頻度を、通常の診療に従って、変更又は低減できる。本発明のさらなる態様は、以下を含む:医薬として使用するための、本発明の化合物HCV又はHIV感染などのウイルス感染を治療するための医薬として使用するための、抗炎症薬として使用するための、又は、臓器移植拒絶反応の予防のための、本発明の化合物本発明の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体とともに含む、医薬組成物本発明の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体とともに含み、第2の又は二次の有効成分、特にHCV若しくはHIV感染などのウイルス感染の治療に適応される有効成分、抗炎症薬として使用するための有効成分、又は、臓器移植拒絶反応の予防のための有効成分をさらに含む、医薬組成物治療有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む、HCV若しくはHIV感染などのウイルス感染の治療方法、抗炎症薬としての使用のための方法、又は、臓器移植拒絶反応の予防方法HCV若しくはHIV感染などのウイルス感染の治療のための医薬、抗炎症薬として使用するための医薬、又は、臓器移植拒絶反応の予防のための医薬の製造のための、本発明の化合物の使用サングリフェリン産生細菌ストレプトマイセス属種などに、式の化合物又はそれらの塩を供給すること、及び、変異合成サングリフェリンが産生されるように該細菌を培養することを含む、変異合成サングリフェリン又はの化合物などの製造方法前記サングリフェリン産生細菌が、sfaA遺伝子又はsfaA遺伝子ホモログが不活化されているか又は欠失しているストレプトマイセス属種である、前項に記載の方法変異合成サングリフェリンを単離する工程をさらに含む、前二項に記載の方法。式の新規化合物の化合物のうちのいずれかの酸及びエステルなど、並びに式の新規化合物も、それらの塩及びエステルを含めて、本発明の態様を形成する。、又はその誘導体BIOT4585などを、オートミール寒天培地、MAM、ISP4、又はISP2上で28°Cで維持する。標準的なストレプトマイセス大腸菌EcoliシャトルプラスミドpKC1139は、英国のJohnInnesCentreから入手したものであり、Biermanらの文献1992及びKieserらの文献2000に記載されている。BIOT4585を、オートミール寒天上で、28°Cで7~10日間増殖させた。寒天板の表面の胞子を、蒸留水中の20wv滅菌グリセロールに回収し、05mlのアリコートで80°Cで保存した。凍結胞子ストックを、シード培地SGS又はSM253の接種に使用した。接種されたシード培地を、50又は25cmの行程で200~300rpmで振盪しながら、27°Cで24時間インキュベートした。発酵培地SGP2又はBT6を25~10のシード培養物により接種し、5又は25cmの行程で200~300rpmで振盪しながら、24°Cで4~5日間インキュベートした。次いで、培養物を抽出のために回収した。メタチロシンアナログメチル2アミノ3プロパノアート、L3アミノフェニルアラニンメチルエステル、L4メチルメタチロシンメチルエステル、L4フルオロメタチロシンメチルエステル及びL45ジフルオロメタチロシンメチルエステルは、Netchem社から購入した。DL3フルオロフェニルアラニン及びLフェニルアラニンは、Sigma社から購入した。DLメタチロシンは、Fluorochem社から購入した。Lメタチロシンは、AlfaAesar社から購入した。DL4フルオロメタチロシン、DL5フルオロメタチロシン、メチル2アミノ3プロパノアート、メチル2アミノ3プロパノアート、メチル2アミノ3プロパノアート及びメチル2アミノ3プロパノアートは、以下のように合成した。DL4フルオロメタチロシン81の乾燥DCM溶液に、BBr3を70°Cで滴加した。該添加の後、該反応混合物を20°Cで3時間撹拌し、氷水を注意深く加え、DCMで抽出した。該有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過して、濃縮した。該残渣をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、所望の化合物82を与えた。82のアセトン溶液に、K2CO3を室温で加えた。該反応混合物を室温で一晩撹拌した。水を加え、アセトンを真空下で除去し、次いでEtOAcで抽出し、該有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過して、濃縮した。該残渣をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、所望の化合物83を与えた。83、馬尿酸、NaOAc及びAc2Oの混合物を80°Cで2時間撹拌した。該黄色の反応混合物を冷却し、冷やしたEtOHを加え、該混合物を氷浴中で15分間冷却し、次いで30mLの氷水に注ぎ入れ、冷却し、該生成物を濾過により回収した。該固体を真空中で乾燥し、84を得た。84及びNaOAcのMeOH溶液を室温で一晩撹拌した。該溶媒を回転蒸発により除去し、該残渣をEtOAc50mL中に溶解し、該EtOAc溶液を水で2回洗浄し、濃縮して85を与えた。85のMeOH溶液を、常圧で20時間、10PdC上で水素化した。濾過により触媒を除去した後、該溶媒を蒸発させて生成物86を与えた。86の3NHCl溶液を24時間還流した。該溶液を濃縮して乾燥させ、該残渣を逆コンビフラッシュにより精製して対象生成物8を与えた。DL5フルオロメタチロシン及びメチル2アミノ3プロパノアート91のテトラヒドロフラン溶液に、nブチルリチウムを78°Cで滴加した。それを30分間撹拌し、NNジメチルホルムアミドをこの温度で加えた。それをさらに30分間撹拌し、冷浴を外した。1時間後、該反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。該有機層を水及び飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し、濾過して、濃縮した。該残渣をシリカ上のクロマトグラフィーにより精製し92を与えた。92の乾燥DCM溶液に、BBr3を70°Cで滴加した。該添加の後、該反応混合物を20°Cで3時間撹拌し、氷水を注意深く加え、DCMで抽出した。該有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過して、濃縮した。該残渣をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の化合物93を与えた。メチル22アセテートのDCM溶液に、室温でDBUを加えた。10分後、93を加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。該溶液をEtOAcで希釈し、分離して該有機層を1NHClで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過して、濃縮した。該残渣をシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、94を与えた。94のMeOH溶液を、常圧で一晩、200mgの10PdC上で水素化した。濾過により触媒を除去した後、該溶媒を蒸発させて、10を与えた。10のEtOH溶液に、NaOH水溶液を加え、該反応物を室温で30分間撹拌した。該溶媒を除去し、該残渣を2NHClでpH6に中和し、形成された白色結晶を濾過により回収し、対象化合物9を与えた。メチル2アミノ3プロパノアート化合物111の50mLDCM溶液に、BBr3を78°Cで滴加した。該添加の後、該反応物を20°Cで4時間撹拌した。次いで、氷水をゆっくり添加し、該層を分離し、該有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発乾固させた。該残渣を、さらに精製することなく次の工程に使用した。メチル22アセテートの100mLDCM溶液に、DBUを室温で加え、10分後、化合物112を加え、室温で2時間撹拌した。次いで、該溶液をDCMで希釈し、1NHClで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発乾固させた。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、113を与えた。化合物113のMeOH中の混合物を、常圧で一晩、50mgの10PdC上で水素化した。濾過により触媒を除去した後、該溶媒を蒸発させて粗生成物を得て、これを逆コンビフラッシュにより精製し、11を白色固体として得た。メチル2アミノ3プロパノアート化合物121の50mLDCM溶液に、BBr3を78°Cで滴加した。該添加の後、該反応物を20°Cで4時間撹拌した。氷水をゆっくり添加した後、該層を分離し、該有機層を水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発乾固させた。該残渣を、さらに精製することなく次の工程に使用した。メチル22アセテートの100mLDCM溶液に、DBUを室温で加え、10分後、化合物122を加え、室温で2時間撹拌した。次いで、該溶液をDCMで希釈し、1NHClで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発乾固させた。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、123を与えた。化合物123のMeOH中の混合物を、常圧で一晩、100mgの10PdC上で水素化した。濾過により触媒を除去した後、該溶媒を蒸発させて粗生成物を得て、これを逆コンビフラッシュにより精製し、所望の化合物12を白色固体として得た。メチル2アミノ3プロパノアート24ジフルオロフェノールの50mLDMF溶液に、K2CO3及びBnBrを0°Cで加えた。該反応物を室温で2時間撹拌した。水及びEAを加え、該有機層を、水及びブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発乾固させた。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、粗製の131を与えた。化合物131の10mLTHF溶液に、nBuLiを78°Cで滴加し、30分間撹拌した。DMFを加え、再度30分間撹拌した。次いで、冷浴を外し、該反応混合物を室温で1時間撹拌し、その後、水でクエンチした。それを酢酸エチルで抽出し、Na2SO4で乾燥し、蒸発乾固させた。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、132を黄色の固体として与えた。メチル22アセテートの20mLDCM溶液に、DBUを室温で加えた。10分後、化合物132を加え、室温で2時間撹拌した。次いで、該溶液をDCMで希釈し、1NHClで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、蒸発乾固させた。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、133を黄色の油として与えた。MeOH中の化合物133を、常圧で一晩、60mgの10PdC上で水素化した。濾過により触媒を除去した後、該溶媒を蒸発させて粗生成物を得て、これを逆コンビフラッシュにより精製し、所望の化合物13を白色固体として得た。培地処方培地の調製に使用した水は、MilliporeElixAnalyticalGradeWaterPurificationSystemを使用して調製した。全般的な発酵方法BIOT4585の凍結保存胞子ストックを室温で解凍した。増殖性培養は、胞子ストック40mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ中のSM25培地400mLに移すことによって調製した。培養は、27°C、250rpmで48時間行った。該種培養から、25mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ中の250mLの産生培地SGP25HP20に移した。24°C、250rpmでの24時間の培養の後、各産生フラスコに、1Mの塩酸中の、所望の前駆体の250mMのラセミ溶液又は125mMの鏡像異性的に純粋な溶液を2mL、及び、250mMのDLピペラジン酸のメタノール溶液を2mL加えて、前駆体のそれぞれの鏡像異性体の最終濃度を1mMとした。24°C、250rpmで、さらに4日間、培養を続けた。及び酢酸エチルを加え、15~30分間混合し、次いで10分間遠心分離する。04mLの有機層を回収し、蒸発乾固させ、次いで020mLのアセトニトリルに再溶解させる。HPLC条件:C18HypercloneBDSC18カラム3μ46mm×150mmPhenomenexAnalyticalC18SecurityGuardCartridgeを備えるカラム温度50°C流速1mL分240nmで紫外モニター20μLアリコートを注入溶媒勾配:0分:55B10分:55B65分:100B100分:100B1005分:55B130分:55B溶媒Aは、水01ギ酸である。溶媒Bは、アセトニトリル01ギ酸である。これらの条件下でSfAは55分に溶離する。これらの条件下でSfBは65分に溶離する。LCMSは、上述のクロマトグラフィー及び溶媒を利用する、ポジティブイオンモードで運転しているBrukerDaltonicsEsquire3000エレクトロスプレー質量分析器と組み合わせた一体型AgilentHP1100HPLCシステムで実施する。を備えるカラム温度50°C流速1mL分210、240、及び254nmで紫外モニター溶媒勾配:0分:10B20分:10B15分:100B17分:100B1705分:10B20分:10B溶媒Aは、水01ギ酸である。溶媒Bは、アセトニトリル01ギ酸である。で運転する。API2000、API4000又はUPLC装置を使用HPLC条件15用ACQUITYUPLCBEHC18化合物5、14、16、17、18、19用UltimateXBC18カラム温度50°C流速06mL分溶媒勾配A102分20B06分95B11分95B115分20B15分停止溶媒Aは、H2O0025FA1mMNH4OACである。溶媒Bは、ACN0025FA1mMNH4OACである。溶媒勾配A203分10B08分95B23分95B231分10B35分停止溶媒Aは、H2O01FAである。溶媒Bは、MeOH01FAである。ネガティブスキャンモードポジティブスキャンモードHCV抗ウイルス活性の評価のためのインビトロレプリコンアッセイ遺伝子型1HCVに対する抗ウイルス効能を下記のように試験できる:試験物質の添加の1日前に、HCV遺伝子型1bI389lucubineoNS3351レプリコンを含み、細胞増殖培地10FCS、1非必須アミノ酸、1ペニシリンストレプトマイシン、及び2ジェネティシンを補ったDMEMInvitrogen社製中で13~14の比で継代し、3~4日間75mLの組織培養フラスコで増殖させたHuh52細胞を回収し、6500細胞ウェルの密度で96ウェル組織培養マイクロタイタープレート中で、アッセイ培地に播種した。マイクロタイタープレートを一晩インキュベートすると、非コンフルエントな細胞単層を生じる。希釈系列を準備する;各希釈系列を少なくとも二連で実施する。アッセイのセットアップ後に、マイクロタイタープレートを72時間インキュベートする。抗代謝効果の評価のために、アッセイ培地を吸引し、フェノールレッド不含培地中の75μLの5MTS溶液と替え、15時間インキュベートする。吸光度を498nmの波長で測定し、光学濃度を、非処理対照のパーセンテージに変換する。抗ウイルス効果の評価には、アッセイ培地を吸引し、細胞単層をPBSにより洗浄する。洗浄バッファを吸引し、25μLのGloLysisBufferを加え、その後室温で5分間溶解を進行させる。その後、50μLのLuciferaseAssaySystemを加え、ルシフェラーゼ発光シグナルを直ちに定量化する。相対発光単位を非処理対照のパーセンテージに変換する。EC50及びEC90は、それぞれ、ウイルス複製の50及び90の阻害が観察される濃度を表す。CC50は、細胞の代謝活性が非処理細胞の代謝活性の50に低下する濃度を表す。選択指数は、化合物の治療域を表すものであるが、CC50EC50として計算する。ある濃度の化合物は、その特定の濃度で抗レプリコン効果が閾値の70を超え、代謝活性の30以下の低減が見られる場合に、HCVレプリコン系における真の抗ウイルス効果を惹起すると考えられる。結果については、実施例12を参照されたい。遺伝子型1a及び2aにおけるHCV抗ウイルス活性の評価のためのインビトロレプリコンアッセイレプリコン細胞及び2aのサブゲノムレプリコンを、ダルベッコ改変基本培地、10ウシ胎仔血清、1ペニシリンストレプトマイシン、1グルタミン、1非必須アミノ酸、250μgmlG418で、5CO2のインキュベーターにおいて37°Cで増殖させる。すべての細胞培養試薬は、Mediatech社から購入できる。該レプリコン細胞をトリプシン処理し、G418を含まない上記培地を備えた96ウェルプレートに、5x103細胞/ウェルで、播種する。その翌日に、前記培地を、5FBSの存在下で連続希釈された化合物を含むDMEMに替える。HCVレプリコン抗ウイルスアッセイは、段階的な化合物希釈液において、化合物の効果を試験する。簡単に言うと、HCVレプリコンを含む細胞を、96ウェルプレートに播種する。試験物質をDMEM5FBSで連続的に希釈する。該希釈された化合物を、前記プレートの適切なウェルに適用する。37°C、72時間のインキュベーションの後、該細胞をプロセシングする。各ウェルからの細胞内RNAを、RNeasy96キットを用いて抽出する。HCVRNAのレベルを、先に説明されたように、TaqMan登録商標OneStepRTPCRMasterMixReagents及びABIPrism7900配列検出システムを用いる、逆転写リアルタイムPCRアッセイにより測定する。細胞傷害性効果は、TaqMan登録商標RibosomalRNAControlReagentsを用いて、細胞数の示度として測定する。次いで、HCVRNA及びリボソームRNAの量を利用して、該当するIC50値を得る。ミクロソーム代謝の評価ミクロソームにおける代謝率は、以下のように分析できるマウス又はヒト肝臓ミクロソームを、緩衝液Cで、25mgmLの濃度まで希釈した。次いで、5μMの化合物添加溶液50μLを、ミクロソーム溶液50μL、緩衝液C110μLに加えることによってミクロソーム安定性試料を調製し、よく混合した。全ての試料を、37°Cでおよそ15分間プレインキュベートした。この後、NADPH溶液40μLを、穏やかにかき混ぜながら加えることにより、反応を開始した。アリコートを、0、15、30、45及び60分で移し、内部標準を含むACNでクエンチした。タンパク質を遠心分離により除去し、LCMSMSにより、試料プレートを化合物濃度について分析した。次いで、分析物の濃度を元々存在していた量と比較する標準法により、半減期を計算した。結果については、実施例13を参照されたい。肝細胞安定性評価予め液体窒素中に保存しておいた凍結保存肝細胞を、37±1°Cの振盪水浴に2分±15秒間置く。次いで、該肝細胞を、10X体積の予め温めておいたKrebsHenseleit重炭酸塩緩衝液に加え、穏やかにかき混ぜ、500rpmで3分間遠心分離する。遠心分離後、該上清を注意深く除去し、10X体積の予め温めておいたKHB緩衝液を加えて細胞ペレットを再懸濁する。これを穏やかにかき混ぜて、500rpmで3分間遠心分離する。次いで、該上清を除去し、廃棄する。次いで、細胞生存率及び収率を、細胞数により決定し、これらの値を利用してヒト肝細胞懸濁液を作成し適切な播種密度にする。2Xの投薬溶液を、予め温めておいたKHB中で調製する20μL、2X投薬溶液KHB990μLに200μM添加溶液10μL。予め温めておいた2X投薬溶液50μLをウェルに添加し、予め温めておいた肝細胞溶液50μLを添加して、計時を開始する。次いで、プレートを37°Cでインキュベートする。内部標準を含むアセトニトリル100μLを、インキュベーション時間の終了後に各ウェルに添加し、穏やかにかき混ぜ、予め温めておいた肝細胞溶液50μLを添加する。インキュベーション終了時に、細胞生存率を測定する。試料を、4°C、4000rpmで15分間遠心分離し、上清を超純水で2倍に希釈し、化合物レベルをLCMSMSにより分析する。のACNと混合する。試料を遠心分離し、次いでLCMSにより分析する。被験化合物を、10mMの濃度でDMSO中のストック溶液として調製する。ストック溶液を、二連で、15mLエッペンドルフチューブ中でpH74のPBSに希釈して、最終DMSO濃度1で100μMの標的濃度にする。次いで、試料チューブを室温で穏やかに4時間振盪する。試料を遠心分離し、未溶解の粒子を沈殿させる。上清を新しいチューブに移し、PBSで希釈するのMeOHと混合する。最後に、試料を、LCMSMS分析用の内部標準ヒドロキシマクロ環、6を含む同体積のACNと混合する。、能動輸送を調べる。LCMSMSを利用して、被験化合物及び標準対照化合物プロパノロール及びアセブトロールなどの両方のレベルを定量化する。及び経口的の両方で試験動物例えば、マウス又はラットに投与し、一定間隔で採血して、薬物の血漿濃度が時間とともに変動する様子を調査する。経時的な血漿濃度の経時変化を利用して、標準モデルを利用して化合物の絶対的なバイオアベイラビリティをパーセンテージとして計算できる。典型的なプロトコルの例を以下に記載する。マウスに、1、10、又は100mgkgの本発明の化合物又は親化合物を、iv又はpoで投薬する。5分、10分、15分、30分、45分、60分、90分、120分、180分、240分、360分、420分、及び2880分に採血し、試料中の本発明の化合物又は親化合物の濃度をHPLCにより決定する。次いで、血漿濃度の経時変化を利用して、血漿濃度時間曲線下面積などのキーパラメーターを得ることができるが、バイオアベイラビリティの正確な決定に利用できる追加の因子には下記がある:化合物の終末半減期、全身クリアランス、定常状態分布容積、及びF。次いで、これらのパラメーターを、非コンパートメント法又はコンパートメント法により分析して、計算されたバイオアベイラビリティのパーセンテージを与えるが、この種類の方法の例に関しては、Egorinら、2002、及び該文献の引用文献を参照されたい。経口及び静脈内薬物動態のインビボ評価サングリフェリンアナログについて、全血を分析する。po投与及びiv投与の両方のために、化合物を5エタノール5クレモフォールEL90食塩水に配合する。3匹の雄CD1マウスのグループに、1mgkgiv又は10mgkgpoで投薬する。血液試料を、投薬前、及び025、05、2、8、及び24時間で、伏在静脈を介して採取し、等量のdH20で希釈し、直ちにドライアイス上に置く。試料は、分析まで70°Cで保管する。試料中の本発明の化合物又は親化合物の濃度を、LCMSにより、以下のように測定する20μLの血液H2OPK試料を、100ngmLの内部標準20μL、標準溶液MeOH20μL及びACN150μLとともに加え、1500rpmで1分間ボルテックスし、12000rpmで5分間遠心分離する。次いで、該上清をLCMSMSにインジェクトする。血中濃度の経時変化をプロットし、それを利用して、全血中濃度時間曲線下面積を得る。可能な場合には、これらの値を利用して、経口バイオアベイラビリティ及び他のPKパラメータを得る。細胞傷害性のインビトロ評価ATCCから入手したHuh7及びHepG2細胞を、10ウシ胎仔血清、1ペニシリンストレプトマイシン及び1グルタミンを含むダルベッコ改変基本培地で増殖させ一方、CEM細胞を、10FBS、1penstrep及び1グルタミンを含むRPMI1640培地で増殖させる。新鮮なヒトPBMCを、少なくとも2人の正常な選別ドナーから入手した全血から単離する。簡単に言うと、末梢血細胞を、低速遠心分離及びPBS中での再懸濁により、2~3回ペレット化洗浄し、混入している血小板を除去する。次いで、該洗浄した血液細胞を、ダルベッコリン酸塩緩衝化食塩水で11に希釈し、50mLの遠心チューブ内のリンパ球分離培地14mL上に層状に重ね、600Xgで30分間遠心分離する。生じた界面からバンド化したPBMCを穏やかに吸引し、その後、低速遠心分離によりPBSで2回洗浄する。最後の洗浄の後、トリパンブルー排除により細胞を計数し、15ウシ胎仔血清、2mMLグルタミン、4μgmLPHAPを補ったRPMI1640中に、1x107細胞mLで再懸濁する。該細胞を、37°Cで48~72時間インキュベートする。インキュベート後、PBMCを遠心分離し、15FBS、2mMLグルタミン、100UmLペニシリン、100μgmLストレプトマイシン、10μgmLゲンタマイシン、及び20UmLリコンビナントヒトIL2を含むRPMI1640に再懸濁する。化合物の細胞傷害性は、上記の細胞に対して、ハーフログ濃度の各化合物を3連で試験することによって評価する。培地のみを含む細胞は、細胞対照となる。Huh7及びHepG2細胞を、5x103細胞/ウェルの濃度で96ウェルプレートに播種する。翌日に、培地を吸引し、5FBSを含む、対応培地100μLを加える。試験薬物の希釈液を、2X濃度でマイクロタイターチューブ内に調製し、各濃度の100μLを、標準的なフォーマットで適切なウェルに配置する。72時間後、細胞を細胞傷害性評価のためにプロセシングする。PBMCを新鮮な培地中で希釈し、96ウェル丸底マイクロプレートの内側ウェルに、5x104細胞ウェルで、100Lの体積で蒔く。同様に、CEM細胞を1x104細胞ウェルで蒔く。次いで、試験薬物の2X調製物100μLを、標準的なフォーマットで適切なウェルに添加する。培養を6~7日間維持し、次いで、細胞傷害性測定のためにプロセシングする。細胞傷害性は、CytoToxONE商標均質膜統合性アッセイキットを利用して測定する。該アッセイは、損傷した膜を有する細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼの放出を、蛍光定量的かつ均質なフォーマットで測定する。培地に放出されるLDHは、レサズリンを蛍光性レゾルフィン生成物に変換する共役酵素アッセイを利用して測定される。生成される蛍光の量は、溶解した細胞の数に比例する。6つの段階希釈濃度の各化合物を該細胞に適用し、適切な場合には、TC50及びTC90値を得る。及びMRP2トランスポーターの阻害及び活性化の評価には、SolvoBiotechnology社のインビトロATPアーゼアッセイが利用できる。化合物を、バナジン酸塩の非存在下と存在下の両方で、MDR1又はMRP2膜小胞と共にインキュベートし、潜在的なATPアーゼ活性化を試験する。さらに、トランスポーターATPアーゼ活性の起こりうる阻害を検出するために、ベラパミルスルファサラジンの存在下で類似のインキュベーションを実施する。ATPアーゼ活性は、無機のリン酸塩を分光測定により定量化して測定する。活性化は、ATPアーゼ活性のバナジン酸感受性増加から計算する。阻害は、ベラパミルスルファサラジンに媒介されるATPアーゼ活性の低下から決定する。実施例1:ストレプトマイセス属spA92308110のsfaA欠失変異体の構築11sfaA欠失コンストラクトの構築sfaAを含むコスミドTL3006の~7kbのEcoRVStuIフラグメントを、EcoRV及びStuIによる消化によって切り取り、得られた単離フラグメントを、予めEcoRVで消化され、エビアルカリホスファターゼで処理されたpKC1139に直接ライゲートした。このプラスミドをpSGK268と命名した。このクローンに含まれるsfaA遺伝子のインフレーム欠失は、GeneBridges社により供給されるRedET組換えキットを使用して行った。2つのオリゴヌクレオチド、SfaA17161f及びSfaA17825rを使用して、KODDNAポリメラーゼを使用するキットで供給されるFRTPGKgb2neoFRTテンプレートDNAから、ネオマイシンマーカーを増幅した。得られた~17kbの増幅産物を、ゲル電気泳動によって単離し、QiaEXレジンで該ゲルから精製した。プラスミドpSGK268を、標準技術を用いて大腸菌DH10Bに形質転換し、アプラマイシンを含むプレート上で選別した。該欠失コンストラクトの導入は、本質的に前記GeneBridges社のキットのプロトコルに従って行った。単一コロニーを2TYアプラマイシン中で一晩増殖させ、pRedETプラスミドで形質転換し、30°Cでアプラマイシン及びテトラサイクリンで選別した。単一コロニーを使用して、この株の一晩培養物を、3mlの2TYアプラマイシン及びテトラサイクリンにおいて30Cで調製した。この培養物05mlを使用して、10mlの2TYアプラマイシン及びテトラサイクリンに30°Cで播種し、OD600nm~05まで増殖させた。この培養物14mlを、2つのエッペンドルフチューブの各々に移し、10アラビノース50μLを一方のチューブに加えて、RedET組換えタンパク質の発現を誘導した。チューブを37°Cで~1時間振盪した。誘導細胞及び非誘導細胞をベンチトップ遠心機でペレット化し、冷却滅菌水で2回洗浄した毎回、再懸濁し、遠心分離して細胞をペレット化する。得られたペレットを約30~40μLの水に懸濁し、氷上に保持した。氷上で、先に単離した17kbの分断フラグメントを前記誘導及び非誘導チューブに加え、1mmのBiorad社製エレクトロキュベットに移した。該試料を電気穿孔し、2TY1mlを加えて混合し、細胞を該キュベットから移した。細胞を、37°Cで~3時間、振盪しながらインキュベートし、その後、アプラマイシン及びカナマイシンを含む2TYプレート上に蒔き、37°Cで一晩インキュベートした。誘導試料プレート由来のコロニーを、50μgmlのカナマイシンを含む2TYプレート上に画線して純化し、カナマイシン耐性カセットの導入を確認した。それぞれの細菌コロニーについてのPCRを利用して該カセットの導入を確認した。これらの培養物からプラスミドを調製し、消化して、期待されるプラスミドpSGK270を確認した。次いで、プラスミドをNsiIで消化して前記マーカーフラグメントを除去し、残部を再ライゲートして、sfaAインフレーム欠失コンストラクト、pSGK271を作製した。12ストレプトマイセス属spA92308110の接合、及び、sfaA欠失の導入プラスミドpSGK271を、標準技術を使用して大腸菌ET12567pUZ8002に形質転換し、アプラマイシン、カナマイシン及びクロラムフェニコールを含む2TYプレート上で選別した。得られた株を、アプラマイシン、カナマイシン及びクロラムフェニコールを含む3mlの液体2TYに播種し、37°C、250rpmで、一晩インキュベートした。この培養液08mlを使用して、アプラマイシン、カナマイシン及びクロラムフェニコールを含む、50mlのファルコンチューブ中の液体2TY10mlに播種し、OD600nmが~05に達するまで、37°C、250rpmでインキュベートした。得られた培養物を、4°C、3500rpmで10分間遠心分離し、2TY培地10mlによる洗浄を、各洗浄の後に遠心分離によって細胞をペレット化しつつ、2回行った。得られたペレットを、2TY05mlに再懸濁し、使用に先立って氷上に保持した。このプロセスのタイミングは、以下に記載のストレプトマイセス胞子の調製の完了に合わせた。ストレプトマイセス属spA92308110の胞子は、1~2週経ったコンフルエントなプレートから、20グリセロール~3mlに再懸濁することにより回収した。胞子を遠心分離し、50mMTES緩衝液で2回洗浄し、その後、50mMTES緩衝液1mlに再懸濁し、2つのエッペンドルフチューブ間で分配した。これらのチューブに、50°Cで10分間、水浴中でヒートショックを施し、その後、2TY05mlを加え、エッペンドルフサーモミキサーコンパクトにおいて、37°Cで4~5時間インキュベートした。調製した大腸菌ET12567pUZ8002pSGK271及びBiot4370を、11及び13の比で混合し、直ちにR6プレート上に拡げ、37°Cのインキュベーターに移した。およそ2時間のインキュベーションの後、これらのプレートを、ナリジクス酸を含む滅菌水2mlで覆い、最終プレート内濃度を25μgLとした。プレートを37°Cのインキュベーターに一晩戻し、その後、アプラマイシンを含む滅菌水2mlで覆い、最終プレート内濃度を20~25μgLとした。~4~7日後に現れる接合完了体コロニーを、アプラマイシン及びナリジクス酸を含むISP4培地にパッチし、37°Cでインキュベートした。十分な菌糸成長が観察されたら、菌株を、アプラマイシンを含むISP4培地に37°Cで再パッチし、胞子形成させた。次いで、ISP4にパッチして、37°Cで3~4日間インキュベートすることにより、菌株を3回継代した。最終的に、菌株をISP4にパッチし、28°Cでインキュベートして十分に胞子形成させた。胞子を回収し、28°CのISP4プレート上に連続希釈して、単一コロニーの選別を可能にした。胞子形成した単一コロニーを、アプラマイシンを含む、又は含まないISP4プレートに二重にパッチして、プラスミドの喪失を確認し、サングリフェリン産生に関する試験の前に、~7日増殖させた。13ファルコンチューブにおけるサングリフェリン産生株のスクリーニングよく胞子形成した菌株の、単一の~7mmの寒天プラグを使用して、滅菌SM253培地7mlに播種し、2インチ行程振盪機において、27°C、200rpmでインキュベートした。48時間の増殖の後、この培養物07mlを、5のHP20樹脂とともにSGP2培地7mlを含む滅菌ファルコンチューブに移した。回収前に、1インチ行程の振盪インキュベーターで、24°C、300rpmで5日間、培養物を増殖させた。細菌培養物08mlを取り出し、等分する前に、培養物全体にわたって樹脂を十分に分散させることを確実に行って、2mlのエッペンドルフチューブに等分した。アセトニトリル08ml及びギ酸15μLを加え、該チューブを約30分間混合した。該混合物を遠心分離によって清澄化し、該抽出物170μLをHPLCバイアルに移して、HPLCにより分析した。14野生型への復帰株又はsfaAフェノタイプ菌株の分析菌株の抽出物をHPLCにより分析した。サングリフェリンA及びBを産生する菌株は、野生型に復帰しているので、それ以上分析しなかった。サングリフェリンA及びB産生が欠如している菌株は、サングリフェリン様発色団を表す、保持時間65分の低レベルのピークを示した。LCMSによる分析によって、このピークは、サングリフェリンの期待されるmz値から16単位の、mz値1073を有することが示された。このピークは、メタヒドロキシチロシン不存在下でのフェニルアラニンの取り込みによるものと推論した。サングリフェリン産生の欠如を示す8菌株を引き続き再増殖させ、潜在的なsfaA変異を化学的に補完して、新規のサングリフェリン類に至る変異合成プロセスを可能にできるかどうかを評価した。菌株をSM253種培地で48時間増殖させ、その後、5樹脂を含むSGP2産生培地に移した。さらに24時間増殖させた後、対照として使用する供給無しの株を伴って、菌株に、2mMDLメタヒドロキシチロシン又は2mMLフェニルアラニンを、3連で供給した。菌株にピペコリン酸も供給し、生成物の収率を高めた。さらに4日増殖させた後、菌株を回収し、抽出してHPLCにより分析した。メタヒドロキシチロシンが前記sfaA変異を完全に補完することが示され、Lフェニルアラニンの添加は、前記の16amuの化合物のレベルを高めた。さらなる調査のために、sfaA欠失変異体として菌株Biot4585を選択した。実施例2:sfaA欠失コンストラクトの構築のための他の方法他の方法を使用して、sfaA欠失変異体を作製することができる。例としては、sfaA挿入不活化変異体の実施例12などが挙げられる。この菌株を、WO2010034243に記載されているように作製し、菌株名BIOT4452を与えた。sfaAの欠失を起こす別の手順において、2つのオリゴヌクレオチド:を利用し、テンプレートとしてのコスミドTL3006及びKODDNAポリメラーゼを使用して、ホモロジーの上流領域を増幅する。該増幅産物をT4ポリヌクレオチドキナーゼで処理し、エビアルカリホスファターゼで処理することにより脱リン酸化してあるpUC18にクローン化する。得られるコンストラクトを制限消化によりチェックし、完全に配列決定して、所望の配列が生成されており、かつポリメラーゼ増幅の間にエラーが導入されていないことを確実にする。このコンストラクトをEcoRI及びNsiIで消化し、該生成物をゲル電気泳動によって分析する。所望の配列を含むバンドを該ゲルから切り取り、標準的な手順を使用して精製する。第2の系列のオリゴヌクレオチド:を利用して、テンプレートとしてのコスミドTL3006及びKODDNAポリメラーゼを使用して、ホモロジーの下流領域を増幅する。該増幅産物をT4ポリヌクレオチドキナーゼで処理し、エビアルカリホスファターゼで処理することによって脱リン酸化してあるpUC18にクローン化する。得られるコンストラクトを制限消化により分析し、完全に配列決定して、所望の配列が生成されており、かつポリメラーゼ増幅の間にエラーが導入されていないことを確実にする。このコンストラクトをHindIII及びNsiIで消化し、該生成物をゲル電気泳動により分析する。所望の配列を含むバンドを該ゲルから切り取り、標準的な手順を使用して精製する。ベクターpKC1139をEcoRI及びHindIIIで消化して、該大きいベクターフラグメントをゲル電気泳動により単離し、標準的な方法により精製する。次いで、単離された上流及び下流のホモロジーフラグメントを、このpKC1139のフラグメントにスリーウェイライゲーションでクローン化して所望のsfaA欠失コンストラクトを作製する。sfaA欠失コンストラクトを作製するためのさらに別の手順において、商業的な遺伝子合成を使用して、所望の配列を含むコンストラクトを作製する。この購入されるコンストラクトをBamHI及びXbaIを使用して消化し、関心対象の配列を切り取り、該生成物をゲル電気泳動により分析する。所望の配列を含むバンドを該ゲルから切り取り、標準的な手順を使用して精製する。ベクターpKC1139をBamHI及びXbaIで消化し、該大きいフラグメントをゲル電気泳動により単離して、標準的な方法により精製する。次いで、該2つの単離フラグメントを、ともにライゲートして、所望のsfaA欠失コンストラクトを作製する。これらの代替的なsfaA欠失コンストラクトを、実施例セクション12の方法を使用して、接合によりストレプトマイセス属spA92308110に導入する。実施例3:sfaA欠失変異体のアレイフィードsfaAが破壊された変異体の胞子ストックを、MAM、ISP4、ISP3又はISP2培地での増殖後に調製し、蒸留水中の20wvグリセロールに保存して、80°Cで保管した。増殖性培養は、胞子ストックを、フォームプラグを備えた50mLの遠心チューブ内の種培地7mLに播種することにより調製した。該培養チューブを、27°C、250rpmで48時間インキュベートした。該種培養から、10を、フォームプラグを備えた50mLの遠心チューブ内の7mLの産生培地SGP2に移した。培養を、24°C、300rpmで実施した。サングリフェリン変異合成アナログの産生のために、フィード化合物の032M溶液005mLを、各チューブに播種後24時間で加え、最終濃度を2mMとした。さらに、ピペラジン酸の032M溶液005mlを、各チューブに24時間で加え、最終濃度を2mMとした。培養を、フィード後さらに4日間続けた。試料は、全ブロスの08mlを2mlのキャッピングされたエッペンドルフチューブに移すことによって抽出した。アセトニトリル08mlを、ギ酸0015mlとともに加えた。次いで、該混合物を、Vibrax上で30分間振盪した。次いで、該チューブを、13000rpmで10分間遠心分離し、上清015mlを、分析用に取り出した。抽出物を、全般的方法に記載したように分析した。表1は、このように供給された変異シントンを、観察されたサングリフェリン変異合成生成物の、LCMSH及びNaアダクト、予想される分子量、及び保持時間とともに示す。サングリフェリンAアナログに関連する主要なピークが示される。全てのケースにおいて、LCMSピークはサングリフェリンBアナログについても見られた。実施例4:63フルオロサングリフェリンAの単離発酵は、メチル2アミノ3プロパノアート及びDLピペラジン酸を前駆体として利用して、全般的方法に記載したように行い、前駆体は両方とも26時間で加えた。回収後、該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、清澄化したブロスから細胞及び樹脂を分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後で廃棄した。該細胞及び樹脂を、マグネチックスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、遠心分離により、又は重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施した。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いで、pH6に調整した。これを、酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させ、最終粗製物を与えた。該粗抽出物を酢酸エチルに溶解し、酢酸エチルでコンディショニングしたシリカゲルカラム上にロードした。該カラムを、酢酸エチルで、次いで、アセトンの段階的な増加で溶出させた。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させた。この物質をメタノールに溶解し、調製用HPLCにより精製した。WatersXterraMSC18カラムを使用し、溶媒を21mL分でポンプ送りした。溶媒Aは水、溶媒Bはアセトニトリルであった。該カラムを、インジェクション後6分間、50Bで均一濃度で流し、その後、30分で100Bとなる勾配で流した。純粋なフラクションをHPLCUVにより同定し、合わせた。これらのフラクションを減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得た。実施例5:6263フルオロサングリフェリンAの単離発酵は、メチル2アミノ3プロパノアート及びDLピペラジン酸を前駆体として利用して、全般的方法に記載したように行い、前駆体は両方とも26時間で加えた。回収後、該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、清澄化したブロスから該細胞及び樹脂を分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後で廃棄した。該細胞及び樹脂を、マグネチックスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、遠心分離により、又は重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施した。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いでpH6に調整した。これを、酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させ、最終粗製物を与えた。該粗抽出物を酢酸エチル2mlに溶解し、酢酸エチル500mlでコンディショニングしたシリカゲルカラム上にロードした。該カラムを、酢酸エチルで、次いで、アセトンの段階的な増加で溶出させた。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させた。この物質をメタノール18mlに溶解し、調製用HPLCにより精製した。WatersXterraMSC18カラムを使用し、溶媒を21mL分でポンプ送りした。溶媒Aは水、溶媒Bはアセトニトリルであった。該カラムを、インジェクション後6分間、50Bで均一濃度で流し、次いで、30分で100Bとなる勾配で流した。これらのフラクションを減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得た。実施例6:62フルオロサングリフェリンAの単離メチル2アミノ3プロパノアート及びDLピペラジン酸前駆体を使用した。前駆体を27時間で加えたことを除き、全般的方法に従って行った。回収後、該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、該清澄化ブロスから該細胞及び樹脂を分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後で廃棄した。該細胞及び樹脂を、マグネチックスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、遠心分離により、又は重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施した。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いで、pH6に調整した。これを、酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させて、最終の油状粗製物を与えた。該粗抽出物を酢酸エチル4mlに溶解し、酢酸エチル500mlでコンディショニングしたシリカゲルカラム上にロードした。該カラムを、酢酸エチルで、次いで、アセトンの段階的な増加で溶出させた。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させた。この物質をメタノール24mlに溶解し、調製用HPLCにより精製した。WatersXterraMSC18カラムを使用し、溶媒を21mL分でポンプ送りした。溶媒Aは水、溶媒Bはアセトニトリルであった。該カラムを、インジェクション後6分間、50Bで均一濃度で流し、次いで、30分で100Bとなる勾配で流した。純粋なフラクションをHPLCUVにより同定し、合わせた。これらのフラクションを、減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得た。実施例7:62メチルサングリフェリンAの単離BIOT4585の凍結保存された胞子ストックを、室温で解凍した。増殖性培養は、胞子ストック04mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ内のSM25培地400mLに移すことにより調製した。培養を、27°C、250rpmで、48時間行った。該種培養から、20mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ内の400mLの産生培地SGP25HP20に移した。24°C、250rpmでの24時間の培養の後、1M塩酸中のメチル2アミノ3プロパノアートの200mM溶液2mL及びDLピペラジン酸の400mMメタノール溶液2mLを、各産生フラスコに加え、前駆体のそれぞれの鏡像異性体の最終濃度を1mMとした。培養を、24°C、250rpmでさらに4日間続けた。該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、該細胞及び樹脂を清澄化ブロスから分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後で廃棄した。該細胞及び樹脂を、オーバーヘッドパドルスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施した。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いで、pH6に調整した。これを、酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させ、最終粗抽出物を与えた。該粗抽出物を酢酸エチル5mlに溶解し、酢酸エチル500mlでコンディショニングしたシリカゲルカラム上にロードした。該カラムを、酢酸エチルで、次いで、アセトンの段階的な増加で溶出させた。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させた。この物質をメタノール24mlに溶解し、調製用HPLCにより精製した。WatersXterraMSC18カラムを使用し、溶媒を21mL分でポンプ送りした。溶媒Aは水、溶媒Bはアセトニトリルであった。該カラムを、インジェクション後6分間、50Bで均一濃度で流し、次いで、30分で100Bとなる勾配で流した。純粋なフラクションを、HPLCUVにより同定し、合わせた。これらのフラクションを減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得た。実施例8:61デスヒドロキシサングリフェリンAの単離BIOT4585の凍結保存された胞子ストックを、室温で解凍した。増殖性培養は、胞子ストック04mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ内のSM25培地400mLに移すことにより調製した。培養を、27°C、250rpmで48時間行った。該種培養から、500mLを、7LのApplikonファーメンター内の45Lの産生培地SGP25HP20に移し、24°C、400rpm、通気25L分及び30DOTで培養した。24時間の培養の後、1M塩酸中の2アミノ3フェニルプロパン酸の667mM溶液75mLを、該ファーメンターに加え、該前駆体の最終濃度を1mMとした。培養を、24°C、400rpm、通気25L分及び30DOTで、さらに4日間続けた。該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、該清澄化ブロスから該細胞及び樹脂を分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後廃棄した。該細胞及び樹脂を、オーバーヘッドパドルスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施したが、該2回目の抽出物は、遠心分離により回収した。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いで、pH6に調整した。これを、酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させ、最終粗製物を与えた。該粗抽出物を、水中の80メタノールに懸濁し、ヘキサン300mlで2回抽出した。対象化合物はメタノール水部分に認められ、これを乾燥させた。この乾燥抽出物を酢酸エチル30mlに溶解し、酢酸エチル1Lでコンディショニングしたシリカゲルカラム上にロードした。該カラムを、酢酸エチルで、次いで、アセトンの段階的な増加で溶出させた。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させた。この物質をメタノールに溶解し、調製用HPLCにより精製した。WatersXterraMSC18カラムを使用し、溶媒を21mL分でポンプ送りした。溶媒Aは水、溶媒Bはアセトニトリルであった。該カラムを、インジェクション後6分間、50Bで均一濃度で流し、次いで、30分で100Bとなる勾配で流した。純粋なフラクションをHPLCUVにより同定し、合わせた。これらのフラクションを減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得た。実施例9:58デス58サングリフェリンAの単離メチル2アミノ3プロパノアート及びDLピペラジン酸前駆体を使用した。増殖性培養の間の前記インキュベーターの行程が25cmであったことを除き、全般的方法に従って行った。該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、該清澄化ブロスから該細胞及び樹脂を分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後廃棄した。該細胞及び樹脂を、オーバーヘッドパドルスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施した。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いで、pH6に調整した。これを、酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させ、最終粗抽出物を与えた。該粗抽出物を酢酸エチル4mlに溶解し、酢酸エチル500mlでコンディショニングしたシリカゲルカラム上にロードした。該カラムを、酢酸エチルで、次いで、アセトンの段階的な増加で溶出させた。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させた。この物質をメタノールに溶解し、調製用HPLCにより精製した。WatersXterraMSC18カラムを使用し、溶媒を21mL分でポンプ送りした。溶媒Aは水、溶媒Bはアセトニトリルであった。該カラムを、インジェクション後6分間、50Bで均一濃度で流し、次いで、30分で100Bとなる勾配で流した。純粋なフラクションをHPLCUVにより同定し、合わせた。これらのフラクションを減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得た。実施例10:61デスヒドロキシ61フルオロサングリフェリンAの単離BIOT4585の凍結保存された胞子ストックを、室温で解凍した。増殖性培養は、胞子ストック04mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ内のSM25培地400mLに移すことにより調製した。培養を、27°C、250rpmで、48時間行った。該種培養から、20mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ内の400mLの産生培地SGP25HP20に移した。24°C、250rpmで24時間培養した後、1M塩酸中の2アミノ3プロパン酸の400mM溶液2mL及びDLピペラジン酸の400mMメタノール溶液2mLを各産生フラスコに加え、該前駆体のそれぞれの鏡像異性体の最終濃度を1mMとした。培養を、24°C、250rpmで、さらに4日間続けた。該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、該清澄化ブロスから該細胞及び樹脂を分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後廃棄した。該細胞及び樹脂を、オーバーヘッドパドルスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施した。3回目の抽出物を、残りの細胞及び樹脂の混合物の遠心分離により得た。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いで、pH6に調整した。これを酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させ、最終粗抽出物を与えた。該粗抽出物を酢酸エチル7mlに溶解し、酢酸エチル500mlでコンディショニングしたシリカゲルカラム上にロードした。該カラムを、酢酸エチルで、次いで、アセトンの段階的な増加で溶出させた。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させた。この物質をメタノールに溶解し、調製用HPLCにより精製した。WatersXterraMSC18カラムを使用し、溶媒を21mL分でポンプ送りした。溶媒Aは水、溶媒Bはアセトニトリルであった。該カラムを、インジェクション後30分間、53Bで均一濃度で流した。純粋なフラクションをHPLCUVにより同定し、合わせた。これらのフラクションを減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得た。実施例11:61デスヒドロキシ61アミノサングリフェリンAの単離BIOT4585の凍結保存された胞子ストックを、室温で解凍した。増殖性培養は、胞子ストック04mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ内のSM25培地400mLに移すことにより調製した。培養を、27°C、250rpmで、48時間行った。該種培養から、20mLを、フォームプラグを備えた2Lのエルレンマイヤーフラスコ内の400mLの産生培地SGP25HP20に移した。24°C、250rpmで24時間培養した後、1M塩酸中のメチル2アミノ3プロパノアートの200mM溶液2mLを、各産生フラスコに加え、該前駆体の最終濃度を1mMとした。培養を、24°C、250rpmで、さらに4日間続けた。該培養ブロスをプールし、ギ酸でおよそpH3に調整し、25分間遠心分離して、該清澄化ブロスから該細胞及び樹脂を分離した。該清澄化ブロスを、対象化合物の存在量が5未満であることを確認したアッセイの後廃棄した。該細胞及び樹脂を、オーバーヘッドパドルスターラーを使用して、2倍体積のアセトニトリルで1時間撹拌した。該アセトニトリル抽出物を、重力下で沈降させることにより回収した。次いで、該細胞及び樹脂の2回目のアセトニトリル抽出を、同じ条件下で実施した。3回目の抽出物を、残りの細胞及び樹脂の混合物の遠心分離により得た。合わせたアセトニトリル抽出物を、減圧下で残留水性ボリュームまで濃縮し、次いで、pH6に調整した。これを酢酸エチルで2回抽出し、合わせた有機化合物を減圧下で乾燥させ、最終粗製物を与えた。該粗抽出物を酢酸エチルに溶解し、シリカゲルカラム上にロードする。該カラムを、有機溶媒で、極性を増大させながら溶出させる。およそ250mLのフラクションを集め、分析用LCにより対象化合物を同定し、合わせて乾燥させる。この物質をメタノールに溶解し、調製用HPLCにより精製する。純粋なフラクションをHPLCUVにより同定し、合わせる。これらのフラクションを減圧下で乾燥させ、対象化合物をオフホワイトの非晶質固体として得る。実施例12:生物学的データレプリコン系におけるHCV抗ウイルス活性のインビトロ評価全般的方法に記載したように、Huh52細胞を用いるレプリコンアッセイで、化合物を分析した。シクロスポリンA、サングリフェリンA、及びヒドロキシマクロ環を、対照として含めた。わかるとおり、14、15、16及び17は全て、該Huh52レプリコンアッセイにおいて非常に強力であり、該株化細胞に対する優れた選択性を有する。先に記載されたサングリフェリンAは、HCV阻害において14、15及び17よりも効力が低く、シクロスポリンAは、効力が低く、1及び5は両方とも、選択指数が乏しい。実施例13:ミクロソーム安定性ヒト及びマウスの肝臓ミクロソームにおける化合物の安定性を、全般的方法に記載したように分析した。サングリフェリンAを対照として含めた。わかるように、本発明の化合物14、15、16、17、18及び19は全て、ヒト肝臓ミクロソームにおける安定性が、サングリフェリンAに比べて高く、また、14、15及び17は全て、マウス肝臓ミクロソームにおいて、より安定である。参考文献本出願において言及される特許及び特許出願を含む全ての参考文献が、引用により最大限に本願明細書に組み込まれる。明細書及び以下の請求項の全体にわたって、文脈から反対の意味が要求されない限り、含むcompriseという言葉並びに含むcomprises及び含むcomprisingなどの変形体は、述べられた整数若しくは工程又は整数の群の包含を意味するが、他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群の排除を意味しないと理解されるだろう。