"式Iの化合物、またはその塩、プロドラッグまたは溶媒和物:式中、Phはフェニルであり;nは、2、3または4であり;R1は、水素およびC1~C6アルキルからなる群から選択され;R2は、式-[[CHR3]m-R4]の基であり、ここで、mは1であり;R3は、水素、フェニルおよびC1~C6アルキルからなる群から選択され;R4は、非置換ヘテロアリール基、置換ヘテロアリール基および置換アリール基からなる群から選択されここで、置換基は、C1~C6アルキル、C7~C11アリールアルキル、フェニル、5員環または6員環のヘテロアリール、F、Cl、Br、I、トリフルオロメチル、シアノ、-NRaRb、-ORc、-SRdまたは-COReここで、Ra、Rb、Rc、Rd、およびReは、独立して、水素、C1~C6アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルから選択されるからなる群から選択され;またはR1および/またはR3が水素ではない場合、R4はまた非置換フェニルであってもよく;またはR1とR2が、これらが結合している窒素原子と一緒になって、置換または非置換のヘテロアリール基ここで、置換基は上に定義したとおりであるを形成するが;ただし、2-[4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニルアミノ-メチル]-フェノール、3-[4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニルアミノ-メチル]-フェノール、5-[4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニルアミノ-メチル]-2-メトキシ-フェノール、4-[4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニルアミノ-メチル]-2,6-ジフルオロ-フェノール、ベンジル-5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-エチル-アミン、6-クロロ-9-4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-9H-プリン、9-4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-9H-プリン-6-イルアミン、および5-4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソオキサゾロ[4,5-c]ピリジン-3-オールは、式Iに含まれない。前記各置換基が、C1~C6アルキル、C7~C11アリールアルキル、フェニル、5員環または6員環のヘテロアリール、F、Br、I、トリフルオロメチル、シアノ、-NRaRb、-ORc、-SRdまたは-COReここで、Ra、Rb、Rd、およびReは、独立して、水素、C1~C6アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルから選択され;Rcは、C1~C6アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルからなる群から選択されるが、ただし、-NRaRbが-NH2ではないからなる群から選択される、請求項1に記載の化合物。式IA:式中、Ph、n、R1、R4は、先行する請求項のいずれかに定義されるとおりであるで表される、先行する請求項のいずれかに記載の化合物、またはその塩、プロドラッグおよび/または溶媒和物。R4が、非置換ヘテロアリールであるか、またはチエニル、フリル、ピリジル、1H-ベンズイミダゾール、9H-プリン、1H-イミダゾールおよび1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジンからなる群から選択される置換ヘテロアリールである、先行する請求項のいずれかに記載の化合物。R4が、式VまたはVIの基であり:式中、AおよびBは、独立して、-CH-および-N-から選択され;Dは、独立して、-O-、-S-および-NH-からなる群から選択され;pは、0、1、2または3からなる群から選択される整数であり;R5はそれぞれ、C1~C3アルキル、フェニル、フェニルメチル、5員環または6員環のヘテロアリール、F、Br、I、トリフルオロメチル、-NRaRb、-SRdまたは-COReここで、Ra、Rb、Rd、およびReは、独立して、水素、C1~C3アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルから選択され、ただし、式Vの化合物において、-NRaRbは-NH2ではないからなる群から選択され;この式VまたはVIの基が、任意の位置において分子の残りの部分と結合している、請求項1~3のいずれか一項に記載の化合物。R1とR2が、これらが結合している窒素原子と一緒になって、1H-ベンズイミダゾール、9H-プリン、1H-イミダゾールおよび1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジンからなる群から選択される基を形成している、請求項1に記載の化合物。R4が式VIIの基であり:式中、R6は、-OCF3、OC1~C3アルキル、F、Cl、Br、Iおよび-CNからなる群から選択され;qは、1、2または3からなる群から選択される整数である、この式VIIの基が、任意の位置において分子の残りの部分と結合している、請求項1に記載の化合物。R1が水素またはメチルである、請求項1~7のいずれか一項に記載の化合物。以下からなる群から選択される、請求項1に記載の化合物、またはその塩、プロドラッグおよび/または溶媒和物。請求項1~9のいずれか一項に定義された式Iの化合物またはその医薬的に許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物と、少なくとも1つの医薬的に許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。医薬として使用するための、請求項1~9のいずれか一項に記載の式Iの化合物またはその医薬的に許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物。炎症性疾患を治療する医薬として使用するための、式Iの化合物、またはその医薬的に許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物:式中、Phはフェニルであり;nは、2、3または4であり;R1は、水素およびC1~C6アルキルからなる群から選択され;R2は、式-[[CHR3]m-R4]の基であり、ここで、mは、1、0または2からなる群から選択される整数であり;R3はそれぞれ、必要な場合には、水素およびC1~C6アルキルからなる群から選択され;R4は、非置換ヘテロアリール基、置換ヘテロアリール基、非置換アリール基および置換アリール基からなる群から選択されここで、置換基は、C1~C6アルキル、C7~C11アリールアルキル、フェニル、5員環または6員環のヘテロアリール、F、Cl、Br、I、トリフルオロメチル、シアノ、-NRaRb、-ORc、-SRdまたは-COReここで、Ra、Rb、Rc、Rd、およびReは、独立して、水素、C1~C6アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルから選択されるからなる群から選択され;またはR1とR2が、これらが結合している窒素原子と一緒になって、置換または非置換のヘテロアリール基ここで、置換基は上に定義したとおりであるを形成する。炎症性疾患が、炎症性腸疾患IBD、関節リウマチRA、良性前立腺過形成、バレット病、喘息、骨格筋および腱の修復、潰瘍性大腸炎、リーシュマニア症および自己免疫疾患、好ましくはクローン病からなる群から選択される、請求項12に記載の式Iの化合物。癌の治療に使用するための請求項12に記載の式Iの化合物。癌が、転移癌、乳癌、食道癌、結腸癌、結腸上皮癌、胃癌、白血病、メラノーマ、子宮上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、前立腺癌、腎臓癌renalcancer、肝臓癌、膵臓上皮癌、腎臓癌kidneycancer、膀胱癌、前立腺癌、精巣癌、骨癌、皮膚癌、肉腫、カポジ肉腫、脳腫瘍、筋肉腫、神経芽細胞腫、リンパ腫および多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項14に記載の化合物。本発明の内容において、下記用語は、以下に示す意味を有する。C1~C6アルキルとの用語は、炭素原子と水素原子からなり、不飽和を含まず、1~6個、好ましくは1~3個の炭素原子を含みC1~C3アルキル、分子の残りの部分に単結合によって接続している直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖基を指し、例えば、非限定的な観点で、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、t-ブチル、n-ペンチルなどが挙げられる。アリールとの用語は、特に断らない限り、6~18個、好ましくは6~10個、さらになお好ましくは6個または10個の炭素原子を含み、炭素-炭素結合によって結合しているか、または縮合した1、2または3個の芳香族核を含む芳香族基を指し、例えば、非限定的な観点で、フェニル、ナフチル、ジフェニル、インデニル、フェナントリルなどを含む。好ましくは、アリールはフェニルを指す。ヘテロアリールは、炭素原子と、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択される1~5個のヘテロ原子とからなる安定な3~10員環の芳香族環基、好ましくは、5員環または6員環の芳香族環を指す。本発明の目的のために、ヘテロアリールは、それぞれが安定な3~10員環の芳香族環基、好ましくは、5員環または6員環の芳香族環であり、炭素原子と、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択される1~5個のヘテロ原子とからなる単環、二環または三環の環系であってもよく、縮合した環系であってもよい。ヘテロアリール基の窒素原子、炭素原子または硫黄原子は、場合により酸化されていてもよく、または、窒素原子は、場合により四級化されていてもよい。このようなヘテロアリールの例としては、限定されないが、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、フラン、ピロール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、イソチアゾール、イミダゾール、インドール、プリン、キノリン、チアジアゾールが挙げられる。好ましくは、ヘテロアリールは、フラン、チオフェン、ピリジン、ベンズイミダゾールを指す。アラルキルは、ベンジルおよびフェネチルのようなアルキル基によって分子の残りの部分に接続したアリール基を指す。ハロゲンとの用語は、ブロモ、クロロ、ヨードまたはフルオロを指す。式Iの化合物好ましい実施形態によれば、置換されたとは、C1~C6アルキル、C7~C11アリールアルキル、フェニル、5員環または6員環のヘテロアリール、F、Br、I、トリフルオロメチル、シアノ、-NRaRb、-ORc、-SRdまたは-COReからなる群から選択される基を指し、ここで、Ra、Rb、Rd、およびReは、独立して、水素、C1~C6アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルから選択され;Rcは、C1~C6アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、ただし、-NRaRbは-NH2ではない。置換された基例えば、アリールまたはヘテロアリールは、これらの自由な位置にあってもよい。本発明の一実施形態では、置換された基は、それらの位置のうち、1位、2位、3位または4位、好ましくは1位または2位で置換される。本発明の一実施形態によれば、置換基は、メチル、イソプロピル、フェニルメチル、フェニル、チオフェン、ピリジン、F、Br、I、トリフルオロメチル、シアノ、アミノ、メトキシ、トリフルオロメトキシおよびチオメトキシからなる群から選択される。本発明の一つの実施形態は、式IAの化合物、またはその塩、プロドラッグまたは溶媒和物に関する:式中、Ph、n、R1、およびR4は、上に定義したとおりである。本発明の一つの実施形態によれば、R4は、チエニル、フリル、ピリジル、1H-ベンズイミダゾール、9H-プリン、1H-イミダゾール、1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジンからなる群から選択されるヘテロアリールであり、それぞれの基は、上に定義したように置換されていてもよい。本発明のさらなる実施形態は、式IまたはIAの化合物またはその塩、プロドラッグまたは溶媒和物であり、ここで、R4は、式VまたはVIの基であり:式中、AおよびBは、独立して、-CH-および-N-から選択され;Dは、独立して、-O-、-S-および-NH-からなる群から選択され;pは、0、1、2または3からなる群から選択される整数であり;各R5は、C1~C3アルキル、フェニル、フェニルメチル、5員環または6員環のヘテロアリール、F、Cl、Br、I、トリフルオロメチル、-NRaRb、-SRdまたは-COReからなる群から選択され;Ra、Rb、Rd、およびReは、独立して、水素、C1~C3アルキル、フェニルおよびトリフルオロメチルから選択され、ただし、式Vの化合物において、-NRaRbは-NH2を表さない、この式VまたはVIの基が、任意の自由な位置において分子の残りの部分と結合している。本発明の一つの実施形態によれば、各R5は、存在する場合には、独立して、メチル、イソプロピル、フェニルメチル、フェニル、チオフェン、ピリジン、F、Cl、Br、I、トリフルオロメチル、シアノ、アミノ、メトキシ、トリフルオロメトキシおよびチオメトキシからなる群から選択される。さらなる実施形態によれば、pは、1または2である。本発明の一つの実施形態によれば、R4は、式VIIの基であり:式中、R6は、-OCF3、OC1~C3アルキル、F、Cl、Br、Iおよび-CNからなる群から選択され;qは、0、1、2または3からなる群から選択される整数である、この式VIIの基が、任意の自由な位置によって分子の残りの部分と結合している。本発明の一つの実施形態によれば、R1とR2が、これらが接続する窒素原子とともに、1H-ベンズイミダゾール、9H-プリン、1H-イミダゾールおよび1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジンからなる群から選択される基を形成する。本発明の一つの実施形態によれば、R1は、水素またはメチルである。本発明の一つの実施形態では、式Iの化合物は、以下のものからなる群またはその塩、プロドラッグおよび/または溶媒和物から選択される。式Iの化合物は、塩、好ましくは医薬的に許容される塩の形態、溶媒和物の形態、またはプロドラッグの形態であってもよい。その医薬的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグとの用語は、受容者に投与すると、ある化合物例えば、本明細書に記載の化合物を直接的または間接的に与えることができる塩、溶媒和物またはプロドラッグに関する。これにかかわらず、医薬的に許容されない塩も、医薬的に許容される塩の調製に有用な場合があるため、本発明の範囲内にあることが見いだされるだろう。塩、プロドラッグおよび誘導体を当該技術分野の技術常識で知られている方法によって調製することができる。医薬的に許容されるは、好ましくは、生理学的に忍容性があり、典型的には、ヒトまたは動物に投与したとき、アレルギー反応または同様の好ましくない反応例えば、胃の障害、めまいなどを引き起こさない分子部分および組成物に関する。医薬的に許容されるとの用語は、政府または州政府の監督機関によって承認されたものを意味するか、または米国薬局方または動物さらに特定的にはヒトに使用するための他の一般的に認識されている薬局方で列挙されている。本発明によれば、溶媒和物との用語は、別の分子ほとんどの場合、極性溶媒であると思われるが非共有結合を介して接続した本発明の活性化合物の任意の形態を意味すると理解すべきである。溶媒和物の例としては、水和物およびアルコラート、例えば、メタノラートが挙げられる。好ましくは、溶媒和物は、医薬的に許容される溶媒和物である。塩および溶媒和物の調製は、当該技術分野で既知の方法によって行うことができる。例えば、本明細書に提供される化合物の医薬的に許容される塩は、1個以上の塩基性部分を含む親化合物から従来の化学方法によって合成される。一般的に、このような塩は、例えば、水中または有機溶媒中、またはこの2種の混合物中、これらの化合物の遊離塩基の形態と、適切な塩基または酸とを反応させることによって調製される。一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水系媒体が好ましい。酸付加塩の例としては、鉱物酸付加塩例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、有機酸付加塩、例えば、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩およびp-トルエンスルホン酸塩が挙げられる。好ましい実施形態では、塩は、塩酸塩またはフマル酸塩である。ある好ましい医薬的に許容される形態は、結晶形態である医薬組成物中の結晶形態を含む。塩および溶媒和物の場合、さらなるイオン性部分および溶媒部分も非毒性でなければならない。本発明の化合物は、異なる多形形態で存在していてもよく、本発明がこのようなあらゆる形態を包含することを意図している。式Iの化合物のプロドラッグである任意の化合物は、本発明の範囲内である。プロドラッグとの用語は、最も広い意味で用いられ、invivoで本発明の化合物に変換される誘導体を包含する。所与の作用を起こす化合物のプロドラッグを製造するよく知られた方法の例は、当業者には知られており、例えば、Krogsgaard-Larsenら、TextbookofDrugdesignおよびDiscovery、TaylorFrancis2002年4月の中に見つけることができる。このような誘導体は、当業者なら容易に思いつくと思われ、分子中に存在する官能基に依存して、限定されないが、親化合物の以下の誘導体が挙げられる。エステル、アミノ酸エステル、リン酸エステル、金属塩、スルホン酸エステル、カルバメート、アミド。本発明の化合物は、1つ以上の同位体を豊富に含む原子が存在することのみが異なる化合物を含むことも意味している。例えば、本発明の構造を有するが、水素を重水素または三重水素に置き換えた化合物、または炭素を13Cまたは14Cを豊富に含む炭素で置き換えたもの、または窒素を15Nを豊富に含む窒素と置き換えたものは、本発明の範囲に含まれる。上に記載した式Iによってあらわされる本発明の化合物は、多重結合の存在に依存するキラル中心または異性体の存在に依存して、エナンチオマーを含んでいてもよい例えば、Z、E。1種類の異性体、エナンチオマーまたはジアスレテレオ異性体およびこれらの混合物は、本発明の範囲に含まれる。式Iの化合物の使用好ましい実施形態によれば、炎症性疾患は、炎症性腸疾患IBD、関節リウマチRA、良性前立腺過形成、バレット病、喘息、骨格筋および腱の修復、潰瘍性大腸炎、リーシュマニア症および自己免疫疾患、好ましくはクローン病から選択される。さらなる実施形態によれば、疾患は、癌であり、例えば、転移癌、乳癌、食道癌、結腸癌、結腸上皮癌、胃癌、白血病、メラノーマ、子宮上皮癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、前立腺癌、腎臓癌renalcancer、肝臓癌、膵臓上皮癌、腎臓癌kidneycancer、膀胱癌、前立腺癌、精巣癌、骨癌、皮膚癌、肉腫、カポジ肉腫、脳腫瘍、筋肉腫、神経芽細胞腫、リンパ腫および多発性骨髄腫からなる群から選択される。治療または治療するためまたは治療することとの用語は、本明細書の内容では、疾患またはこの疾患に関連する1つ以上の症状を予防、軽減するか、またはなくすための本発明の化合物または製剤の投与を意味する。治療は、その疾患の生理学的な後遺症を予防、軽減するか、またはなくすことも包含する。軽減するとの用語は、本明細書の内容では、主観的患者の感覚または客観的測定されるパラメータのいずれかで、治療される患者の状況のなんらかの改善を意味すると理解される。医薬組成物さらなる態様によれば、本発明は、上に定義した式Iの化合物、またはその医薬的に許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物と、少なくとも1つの医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。担体との用語は、活性成分とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。このような医薬担体は、滅菌液例えば、水、および石油、動物由来、植物由来または合成由来、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などを含む油であってもよい。水または生理食塩水溶液およびデキストロース水溶液およびグリセロール溶液は、好ましくは担体として使用され、特に、注射用溶液のための担体として使用される。適切な医薬担体は、E.W.MartinによるRemington’sPharmaceuticalSciences、第21版、2005年;またはHandbookofPharmaceuticalExcipients、RoweC.R.;PaulJ.S.;MarianE.Q.、第16版に記載されている。好ましくは、本発明の担体は、政府または州政府の監督機関によって承認されているか、または米国薬局方、または米国薬局方または動物さらに特定的にはヒトに使用するための他の一般的に認識されている薬局方に列挙されている。本発明の医薬組成物を投与するのに望ましい医薬形態を製造するのに必要な担体および補助物質は、特に、選んだ投与医薬形態によって変わるだろう。このような医薬組成物を投与する医薬形態は、当業者が知っている従来の方法にしたがって製造されるだろう。異なる活性成分投与方法、使用すべき賦形剤、およびこれらを製造する方法の総説は、E.W.MartinによるRemington’sPharmaceuticalSciences、第21版、2005年;またはHandbookofPharmaceuticalExcipients、RoweC.R.;PaulJ.S.;MarianE.Q.、第16版の中に見いだすことができる。医薬組成物の例としては、経口投与、局所投与または非経口投与のための任意の固体錠剤、丸薬、カプセル、顆粒などまたは液体溶液、懸濁物またはエマルションの組成物が挙げられる。好ましい実施形態では、医薬組成物は、経口形態である。経口投与に適切な投薬形態は、錠剤またはカプセルであってもよく、当該技術分野で既知の従来からある賦形剤、例えば、結合剤例えば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントまたはポリビニルピロリドン;フィラー例えば、ラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン;錠剤化滑沢剤例えば、ステアリン酸マグネシウム;崩壊剤例えば、デンプン、ポリビニルピロリドン、ナトリウムデンプングリコラート、または微結晶性セルロース;または医薬的に許容される湿潤剤例えば、ラウリル硫酸ナトリウムを含んでいてもよい。ブレンド、充填または錠剤化といった従来の方法によって固体経口組成物を調製してもよい。大量のフィラーを利用する組成物全体に活性薬剤を分布させるために、ブレンド操作を繰り返してもよい。このような操作は、当該技術分野で従来からある。錠剤を、例えば、湿式または乾式の顆粒化によって調製し、場合により、通常の医薬品実務でよく知られた方法にしたがって、特に、腸溶性コーティングを用いてコーティングしてもよい。また、医薬組成物を非経口投与に合うように、例えば、適切な単位投薬形態の滅菌溶液、懸濁物または凍結乾燥製品になるように調節してもよい。増量剤、緩衝剤または界面活性剤のような適度の賦形剤を使用することができる。上述の製剤は、例えば、スペイン国薬局方および米国薬局方および類似の参考文献に記載されているか、または参照されている標準的な方法を用いて調製される。一般的に、本発明の化合物の有効投与量は、選択した化合物の相対的な効力、治療される障害の重篤度、罹患者の体重によって変わる。しかし、活性化合物は、典型的には、1日に1回以上例えば、1日に1、2、3または4回投与され、典型的な1日の合計投薬量は、0.01~1000mg/kg/日の範囲である。本発明の医薬組成物を、他の活性成分例えば、炎症性疾患の治療に使用するためのさらなる化合物と組み合わせて使用することができる。この組成物は、同時、別個、または順次といった様式で投与するために、各構成要素式Iの化合物またはその医薬的に許容される塩、プロドラッグまたは溶媒和物と、さらなる活性成分の製剤として使用することができる。式Iの化合物の合成本発明の化合物を、利用可能な合成方法によって多段階の連続で合成することができる。例えば、本発明の化合物を、以下に示す一般的なスキーム1にまとめた方法によって調製することができる。具体的な実施形態では、塩基および有機溶媒が存在する状態で、誘導体IIをR1基およびR2基を有するアミンで置換する反応によって式Iの化合物を調製することができる。好ましい実施形態によれば、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸カリウムを塩基として使用する。別の好ましい実施形態によれば、有機溶媒は、アセトニトリルまたはエタノールである。化合物II中に存在する脱離基LGは、好ましくは、ハロゲンおよびスルホネートから選択される。さらに好ましくは、脱離基はブロミドである。さらに、アミンが一級アミンR1=Hである場合、得られた化合物Iを塩基存在下、ハロゲン化アルキルR1-X;R1がC1~C6アルキルまたはC7~C15アラルキルであるで処理することによって、さらにアルキル化することができる。具体的な実施形態では、フェニル-リチウムハロゲン化物を式IVのエステルに付加し、さらに脱水反応によって式IIの化合物を調製することができる。好ましい実施形態によれば、有機リチウム化合物は、n-ブチルリチウムをハロゲン化フェニルに付加することによって調製される。別の好ましい実施形態によれば、脱水工程は、酸存在下で行われる。好ましい実施形態では、酸はH2SO4である。好ましくは、化合物IIの合成は、エーテル系溶媒存在下で行われる。さらに好ましくは、ジエチルエーテルおよびテトラヒドロフランから選ばれる。具体的な実施形態では、式VIの化合物すなわちR1が水素であり、R2が-[[CHR3]m-R4]-であり、mが0であり、R4が本明細書に定義する置換または非置換ヘテロアリールである式Iの化合物は、塩基および有機溶媒が存在する状態で、式VIIIのアミンと、対応する置換または非置換のハロゲン化ヘテロアリール誘導体Het-X;Xは、F、Br、ClまたはIとの反応によって調製することができる。好ましい実施形態によれば、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸カリウムを塩基として使用する。別の好ましい実施形態によれば、有機溶媒はエタノールである。アミンをアルキル化するさらなる条件は、当業者に知られている。具体的な実施形態では、式VIIIの化合物は、DMF中、化合物IIIとナトリウムアジドとを反応させた後、THF中、このアジドをトリフェニルホスフィンで還元することによって調製することができる。以下、実施例によって本発明をさらに説明する。この説明は、特許請求の範囲で定義される本発明の範囲を限定することを意味するものであってはならない。本発明の式Iの化合物を、以下に詳細に記載する一般的な調製戦略にしたがって調製した。いくつかの化合物の詳細な調製を以下に記載する。使用する反応剤はすべて市販されている。実施例1:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-フルオロ-ベンジル-アミン塩酸塩化合物3の合成工程1.5-ブロモ-1,1-ビスフェニルペンテンの合成ブロモベンゼン20.86mL、0.225molの無水Et2O60mL溶液を、アルゴン雰囲気下、温度を5~10°Cに維持しつつ、2.5Mn-ブチルリチウム100mL、0.250molと無水Et2O100mLの混合物に加えた。攪拌を10°Cでさらに15分間続けた後、混合物を-70°Cまで冷却した。温度を-65°C未満に維持しつつ、5-ブロモ吉草酸エチル14.54mL、0.090molの無水Et2O60mL溶液を加えた。添加が終了したら、混合物を-70°Cで2.5時間攪拌した。温度を0°C未満に維持しつつ、冷水75mLおよび冷1NHCl水溶液35mLを続けて加えた。反応混合物を15分間攪拌して温度を0°Cより高い温度まで上げ、相を分離させた。水相をEt2O75mLで抽出し、有機相を合わせ、水60mLおよび塩水60mLで洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させ、固体46.5gを得て、これを2-プロパノール225mLに溶解した。20H2SO4水溶液25mLを加え、環流状態で混合物を1時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発させて残渣を得て、これをCH2Cl2400mLと飽和NaHCO3溶液75mLとに分配した。相を分離させ、水相をさらにCH2Cl275mLで抽出した。有機相を合わせ、水75mL、塩水75mLで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、5-ブロモ-1-1-ビスフェニルペンテン20.0g、73.7を黄色油状物として得た。1HNMRCDCl3,δppm:7.2-7.4m,10H;6.2t,1H;3.3t,2H;2.3q,2H;1.9q,2H。さらなる化合物工程255-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-フルオロ-ベンジル-アミンの合成4-フルオロ-ベンジルアミン0.62g、5mmolおよびK2CO30.7g、5mmolを、5-ブロモ-1-1-ビスフェニルペンテン0.75g、2.5mmolのアセトニトリル25mL溶液に加えた。この反応物を撹拌しつつ、加熱して16時間環流させた。溶媒を減圧下で除去し、水を加え、混合物をCH2Cl2で抽出した50mL×3回。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させて油状物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーAcOEt/ヘプタン/TEA45:55:1によって精製し、5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-フルオロ-ベンジル-アミン0.58g収率67.1を黄色油状物として得た。1HNMRCDCl3,δppm:7.2-7.5m,12H;7.0-7.1m,2H;6.2t,1H;3.8s,2H;2.7t,2H;2.3c,2H;1.7q,2H。13CNMRCDCl3,δppm:163.2;143.4;141.9;139.5;132.5;132.3;129.6;128.3;128.1;127.1;126.6;125.7;116.3;115.9;49.6;45.3;26.7;25.8。工程3.5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-フルオロ-ベンジル-アミン塩酸塩化合物3の合成5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-フルオロ-ベンジル-アミン1g、3mmolの無水Et2O100mL溶液に、HClの1M無水Et2O溶液3mL、3mmolを10分以内に加えた。反応物を30分間撹拌した。固体を濾過し、結晶化皿に移し、減圧オーブン中、50°Cで乾燥させた0.9g、収率84.7。MP=128.0~130.1°C。1HNMRCDCl3,δppm:9.9bs,2H;7.6-7.5m,2H;7.3-7.0m,12H;5.9t,1H;4.0bs,2H;2.7t,2H;2.2-1.9m,4H。13CNMRCDCl3,δppm:163.2;143.4;141.9;139.5;132.5;132.3;129.6;128.3;128.1;127.1;126.6;125.7;116.3;115.9;49.6;45.3;26.7;25.8。式Iの化合物について上に記載した一般的な合成方法にしたがって、具体的には、5-ブロモ-1-1-ビスフェニルペンテンと、対応するアリールベンジルアミンとの反応によって以下の化合物を得た。実施例2:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-トリフルオロメトキシベンジルアミン塩酸塩化合物21H-NMRCDCl3,δppm:7.2m,14H;6.1t,1H;3.8s,2H;2.7t,2H;2.2q,2H;1.7m,2H。実施例3:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-トリフルオロメチルベンジルアミン塩酸塩化合物1m.p.:121.4~122.7°C。1H-NMRCDCl3,δppm:10.1s,2H,;7.7-7.6m,4H;7.0-6.8m,10H;5.9t,2H,;4.0s,2H;2.6bs2H;2.1-1.9m,4H。実施例4:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-4-メトキシベンジルアミン塩酸塩化合物4m.p.:69.2~73.8°C。1H-NMRCDCl3,δppm:9.7bs,2H;7.4d,2H;7.3-7.0m,10H;6.8d,2H;5.9t,1H;3.9bs2H;3.7s,3H;2.6bs,2H,;2.1-1.9m,4H。実施例5:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-チオフェン-3-イルメチルアミン塩酸塩化合物5m.p.:108.0-109.7°C。1H-NMRCDCl3δppm:9.8bs,2H;7.5-7.4m,1H;7.3-7.0m,12H;5.9t,1H;4.0bs,2H;2.7bs,2H;2.1-1.9m,4H。実施例6:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-チオフェン-2-イルメチル-アミン塩酸塩化合物6m.p.:161.0~161.6°C。1H-NMRCDCl3,δppm:7.4-7.1m,11H;6.9m,2H;;6.1t,1H;4.0s,2H;2.7t,2H;2.2q,2H;1.6m,2H。実施例7:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニルピリジン-2-イルメチルアミン塩酸塩化合物7m.p.:125.0~126.9°C。1H-NMRCDCl3,δppm:8.5m,1H;7.8m,2H;7.4-7.0m,11H;5.9t,1H;4.4s,2H;2.9t,2H;2.2-2.0m,4H。実施例8:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニルフラン-2-イルメチルアミン塩酸塩化合物8m.p.:139.0~141.3°C。1H-NMRDMSO-d6,δppm:9.5bs,2H;7.7m,1H;7.5-7.0m,10H;6.6m,1H;6.5m,1H;6.0t,1H;4.1bs,2H;2.8bs,2H;;2.1-2.0m,2H;1.8-1.7m,2H。実施例9:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-3-トリフルオロメトキシ-ベンジルアミン塩酸塩化合物9m.p.:102.4~104.0°C。1H-NMRCDCl3,δppm:10.0bs2H;7.6-7.0m,14H;5.9t,1H;4.0s,2H;2.7bs,2H;2.1-1.9m,4H。実施例10:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-2-トリフルオロメトキシベンジルアミン塩酸塩化合物10m.p.:109.0~110.7°C。1H-NMRCDCl3,δppm:10.0bs,2H,8.0m,1H;7.4-7.0m,13H;5.9t,1H;4.2s,2H;2.7bs,2H;2.1-2.0m,4H。実施例11:1H-ベンゾイミダゾール-2-イルメチル-5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニルアミン塩酸塩化合物11m.p.:251.0-253.8°C。1H-NMRDMSO-d6,δppm:10.1bs,2H;7.8-7.1m,14H;6.2bs2H,;6.1t,1H;4.6s,2H;3.0bs,2H;2.1-2.0m,2H;1.8-1.0m,2H。実施例12:4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-4-トリフルオロメトキシベンジルアミン塩酸塩化合物12m.p.:126-128.°C。1H-NMRCDCl3,δppm:10.1s,1H;6.1t,1H;7.5d,2H;7.3-7.0m,12H;3.9s,2H;2.8m,2H;2.6m,2H。実施例13:44-ジフェニル-ブタ-3-エニル-チオフェン-2-イルメチル-アミン塩酸塩化合物13m.p.:163-165.5°C。1H-NMRCDCl3,δppm:2.3q,2H;2.8t,2H;4.0s,2H;6.1t,1H;6.9m,2H;7.0m,8H;7.4m,3H。実施例14:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-4-トリフルオロメトキシベンジルアミン塩酸塩化合物14m.p.:109~110.5°C。1H-NMRCDCl3,δppm:10.0m,2H;7.6d,2H;7.4-7.0m,14H;6.0t,1H;3.9s,2H;2.7s,2H;2.1q,2H;1.8m,2H;1.5m,2H。実施例15:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-3-トリフルオロメトキシベンジルアミン塩酸塩化合物15m.p.:96.6~98.5°C。1H-NMRCDCl3,δppm:7.4-7.0m,13H;6.1t,1H;3.8s,2H;2.6t,2H,2.2q,2H;1.6m,4H。実施例16:ベンジル-5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-メチル-アミン塩酸塩化合物161H-NMRCDCl3,δppm:12.5s,1H;7.0-7.6m,15H;5.9t,1H;4.1s,2H;2.9-2.6m,2H;2.6s,3H;2.2-1.8m,4H。実施例17:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-1-フェニル-エチル-アミン塩酸塩化合物171H-NMRCDCl3,δppm:10.1bs1H;9.8bs,1H;7.6-7.0m,15H;5.9t,1H;4.16t,1H;2.6bs,2H;2.0m,4H;1.9d,3H。実施例18:ベンズヒドリル-5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-アミン塩酸塩化合物181H-NMRCDCl3,δppm:10.3bs,2H;7.6-7.0m,20H;5.8t,1H;5.1bs,1H;2.5bs2H;1.9-1.7m,4H。実施例19:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-2-フルオロベンジルアミン塩酸塩化合物191H-NMRCDCl3δppm:10.0s,2H;7.4-6.9m,15H;6.0t,1H;4.0s,2H;2.7m,2H;2.2-2.0m,4H。実施例20:4-クロロベンジル-5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニルアミン塩酸塩化合物201H-NMRCDCl3,δppm:1.7m,2H;2.2m,.2H;2.7m,2H;4.0s,2H;6.1t,1H;7.5-7.0m,14H;10.0bs,2H。実施例21:4-[5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニルアミノ-メチル]ベンゾニトリル塩酸塩1H-NMRCDCl3,δppm:10.2s,2H;7.8-7.6m,4H;7.4-7.0m,10H;5.9t,1H;4.1s,2H;2.7m,2H;2.2m,2H;2.0m,2H。実施例22:4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-4-トリフルオロメチルベンジルアミン塩酸塩1H-NMRCDCl3δppm:11.0bs,2H;7.6m,4H;7.4-7.2m,8H;7.1m,2H;6.1t,1H;4.0s,2H;2.9t,2H;2.6m,2H。実施例23:4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-4-フルオロ-ベンジル-アミン塩酸塩1H-NMRCDCl3,δppm:10.0s,2H;7.6-7.4m,10H;7.0-6.8m,4H;6.1t,1H;3.9m,2H;2.8m,2H;2.5m,2H。実施例24:ベンジル-4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニルアミン塩酸塩1H-NMRCDCl3,δppm:10.0bs,2H;7.5-7.2m,13H;7.0m,2H;6.1t,1H;3.9s2H;2.9m,2H;2.6m,2H。実施例25:4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-3-トリフルオロメトキシlベンジルアミン塩酸塩1H-NMRCDCl3,δppm:10.2bs,2H;7.8d,1H;7.6m,2H;7.5m,1H;7.7-7.4m,10H;6.1t,1H;4.0s,2H;2.9m,2H;2.6m,2H。実施例26:4,4-ジフェニル-ブタ-3-エニル-3-フルオロベンジルアミン塩酸塩1H-NMRCDCl3,δppm:10.0bs,2H;7.4-7.7m,14H;6,1t,1H;4.0s,2H;2.9m,2H;2.6m,2H。実施例27:1-5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-2-メチル-1H-ベンゾイミダゾール化合物27の合成2-メチル-ベンズイミダゾール0.66g、5.0mmolの無水DMF20mL溶液をあらかじめ冷却しておき氷/水冷却浴、これに水素化ナトリウム0.24g、60油分散物、6.0mmolをゆっくりと滴下した。2時間後、5-ブロモ-1,1-ビスフェニルペンテン1.5g、5.0mmolを滴下し、得られた混合物を20時間撹拌した。気体の発生が収まるまでメタノール3mLを加えることによって反応を停止させた。水120mLで希釈し、酢酸エチルで抽出した25mL×3回。有機抽出物を塩水で洗浄し20mL×1回、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、低圧下で溶媒を除去して残渣1.9gを得て、これをフラッシュクロマトグラフィーDCM/MeOH98:2によって精製し、黄色固体1.5g4.2mmol、収率60を得た。1H-NMRCDCl3,δppm:7.7m,1H;7.4-7.0m,13H;6.0t,1H;4.0t,2H;2.5s,3H;2.3q,2H;1.9m,2H。類似の様式で以下の化合物を調製した。実施例28:1-5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-1H-イミダゾール化合物281H-NMRCDCl3,δppm:7.5-7.2m,11H;7.0s,1H;6.8s,1H;6.1t,1H;3.9t,2H;2.2q,2H;1.9m,2H。実施例29:2-クロロ-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-アミン化合物29の合成工程1.6-アジド-1,1-ジフェニル-1-ヘキセン中間体[D]の合成6-ブロモ-1,1-ジフェニル-1-ヘキセン50.0g、158mmolおよびナトリウムアジド31.0g、476mmol、DMF250mLの混合物を周囲温度で16時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル400mLで希釈し、飽和NH4Cl水溶液で洗浄した100mL×3回。有機抽出物を塩水で洗浄し60mL×1回、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒物を低圧で除去し、無色油状物41g148mmol、96.68を得て、6-アジド-1,1-ジフェニル-1-ヘキセンであると特定した。1H-NMRCDCl3,δppm:7.4-7.1m,10H;6.1t,1H;3.2t,2H;2.1m,2H;1.5m,4H。類似の様式で中間体[A]実施例27を参照とナトリウムアジドとを反応させることによって、以下の中間体化合物を調製した。中間体[E]5-アジド-1,1-ジフェニル-1-ペンテン。1H-NMRCDCl3,δppm:7.4-7.0m,10H;6.1t,1H;3.3t,2H;2.1m,2H;1.6m,2H。工程2.6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン中間体[F]の合成6-アジド-1,1-ジフェニル-1-ヘキセン2.7g、9.7mmolおよびトリフェニルホスフィン3.1g、12mmolをTHF50mLおよび水2.5mLと混合し、この混合物を周囲温度で20時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去して油状物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーDCM/MeOH/Et3N95:5:5によって精製し、6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミンを黄色油状物として得た2.4g、収率98。1H-NMRCDCl3,δppm:1.4m,4H;7.3m,10H;6.1t,1H;2.6m,2H;2.2q,2H;1.6s,2H。類似の様式で以下の中間体化合物を調製した。中間体[G]5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニルアミン1H-NMRCDCl3,δppm:7.4-7.2m,10H;6.1t,1H;2.7t,2H;2.2q,2H;1.9s,2H;1.6m,2H。工程3.2-クロロ-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-アミン6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン25.6g、103mmolのエタノール500mL溶液に、プリン17.0g、90mmolおよびDIPEA15.7mL、90mmolを加えた。得られた混合物を加熱して3時間環流させた。この時間が経過したら、低圧で溶媒を除去し、水150mLを加え、沈殿を濾過し、メタノールで洗浄し、2-クロロ-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-アミンを白色固体として得た31.76g、78.6mmol、収率87.3m.p.:205.7°C~207.0°C。1H-NMRCDCl3,δppm:8.1s,2H;7.5-7.0m,10H;6.1t,1H;2.5m,2H;2.1m,2H;1.7-1.4m,4H。類似の様式で、6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミンと対応する市販の6-クロロプリン誘導体または4-クロロ-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン誘導体とを反応させることによって、以下の化合物を調製した。市販されていない化合物は、例えば、米国特許第6936713号;Eur.J.Med.Chem、2003、38、199-214;WO2005/009348;Synthesis、1994、1401;J.Am.Chem.Soc.1956、78、784-790;J.Med.Chem.2005、6887;J.Med.Chem.2006、1549;および/またはEur.J.Med.Chem、2004、939に記載されるような既知の文献の方法によって調製した。実施例30:9-ベンジル-2-ヨード-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン塩酸塩化合物306-クロロ-2-ヨード-9H-プリンとの反応によって表題化合物を得た。1H-NMRCDCl3,δppm:7.5s,1H;7.4-7.0m,15H;6.1t,1H;5.7s,1H;5.3s,2H;3.6s,2H;2.1q,2H;1.6m,5H。実施例31:9-ベンジル-N-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-9H-プリン-2,6-ジアミン化合物319-ベンジル-6-クロロ-9H-プリン-2-イルアミンとの反応によって表題化合物を得た。1H-NMRCDCl3,δppm:7,4-7.1m,15H,6.1t,1H,5.5m,1H,NH;5.2s,2H;4.7s,2H,NH2;3.5m,2H;2.2m,2H;1.6m,4H。実施例32:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-2-フェニル-9H-プリン-6-イルアミン化合物326-クロロ-2-フェニル-9H-プリンとの反応によって表題化合物を得た。1H-NMRCDCl3DMSO-d6,δppm:8.2m,2H;7.7s,1H;7.4-7.0m,14H;6.9bs,1H;6.0t,1H;3.6m,2H;2.1q,2H;1.8-1.4m,4H。実施例33:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-9-メチル-2-トリフルオロメチル-9H-プリン-6-イルアミン化合物336-クロロ-9-メチル-2-トリフルオロメチル-9H-プリンとの反応によって表題化合物を得た。1H-NMRCDCl3,δppm:7.8s,1H;7.4-7.0m,10H;6.1t,1H;5.8bs,1H;3.9s,3H;3.6bs,2H;2.2q,2H;1.8-1.5m,4H。実施例34:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-9-メチル-9H-プリン-6-イルアミン化合物346-クロロ-9-メチル-9H-プリンとの反応によって表題化合物を得た。1H-NMRCDCl3,δppm:8.4s,1H;7.7s,1H;7.4-7.0m,10H;6.1t,1H;5.7s,1H,NH;3.9s,3H;3.6m,2H;2.3q,2H;1.9m,2H。実施例35:2-クロロ-9-メチル-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン化合物35の合成2-クロロ-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-アミン2.0g、5.0mmolのDMF50mL溶液に炭酸カリウム1.4g、10mmolを加え、得られた懸濁物をヨウ化メチル0.5mL、7.92mmolで処理した。反応混合物を周囲温度で72時間撹拌した。水250mLを加え、得られた混合物を酢酸エチルで抽出した50mL×3回。有機抽出物を塩水で洗浄し25mL×1回、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、低圧下で溶媒を除去し、固体残渣2.30gを得て、これをフラッシュクロマトグラフィーEtOAc/ヘプタン60:30によって精製し、2-クロロ-9-メチル-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン1.45g、収率70を白色固体として得た。1H-NMRCDCl3,δppm:7.7s,1H;7.4-7.0m,10H;6.1t,1H;5.9bs,1H;3.8s,3H;3.6bs,2H;2.2q,2H;1.7-1.52q,4H。実施例36:9-ベンジル-2-メチルスルファニル-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン化合物36の合成250mLの高圧反応器に、9-ベンジル-2-ヨード-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-アミン化合物30溶液2.4g、エタノール30mLおよび水30mLの混合物中4.1mmolをナトリウムチオメトキシド1.4g、20.5mmolで処理した。反応容器を閉じ、混合物を130°Cで6時間加熱した最大内圧:2bar。この時間が経過したら、低圧下で溶媒を除去し、水120mLを加え、得られた混合物を酢酸エチルで抽出した50mL×3回。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させて残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーEtOAc/ヘプタン1:1によって精製し、9-ベンジル-2-メチルスルファニル-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン1.68g、3.3mmol、81を黄色固体として得た。1H-NMRCDCl3,δppm:7.55s,1H;7.45-7.12m,15H;6.071H,t;5.65bs,1H;5.29s,2H;3.58bs,2H;2.55s,3H;2.16q,2H;1.79-1.51m,4H。実施例37:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-9-メチル-2-フェニル-9H-プリン-6-イルアミン化合物372-クロロ-9-メチル-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン3.0g、7.0mmol、炭酸ナトリウム1.3g、12.28mmol、フェニルホウ酸1.05g、8.6mmolおよびテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム01.21g、1.05mmol、15molのDME50mL懸濁物をAr下、100°Cで40時間撹拌した。この時間が経過したら、溶媒を低圧で除去し、水34mLを加えた。得られた混合物を10分間撹拌し、沈殿を濾過し、水で洗浄し20mL×2回、エーテルで洗浄した20mL×2回。このようにして得られた物質を減圧下で乾燥させ、2-クロロ-9-メチル-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン2.6g、5.7mmol、収率81を黄色固体として得た。1H-NMRCDCl3,δppm:8.5d,2H;7.7s,1H;7.5-7.1m,13H;6.1t,1H;5.7m,1H,NH;3.9s,3H;3.7m,2H;2.3q,2H;1.8m,2H;1,6q,2H。類似の様式で、2-クロロ-9-メチル-9H-プリン-6-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミンと、対応するヘテロアリールホウ酸誘導体とを反応させることによって以下の化合物を調製した。実施例38:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-9-メチル-2-チオフェン-2-イル-9H-プリン-6-イルアミン化合物381H-NMRCDCl3,δppm:7.7-7.5m,2H;7.5-7.0m,11H;6.1t,1H;5.4bs,1H;3.7s,3H;3.6bs,2H;2.1q,2H;1.8-1.52q,4H。実施例39:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-9-メチル-2-ピリジン-4-イル-9H-プリン-6-イルアミン化合物391H-NMRCDCl3,δppm:8.7d,2H;8.3d,2H;7.7s,1H;7.3-7.0m,10H;6.1t,1H;5,5bs,1H;3.9s,3H;3.7bs,2H;2.2q,2H;1.8-1.52q,4H。実施例40:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-イルアミン化合物401H-NMRCDCl3,DMSO-d6,δppm:12.81bs,1H;8.22s,1H;7.92s,1H;7.02-7.26m,10H;6.80bs,1H;5.95t,1H;3.41-3.45m,2H;2.45-2.58m,2H;2.03-2.10m,2H;1.42-1.62m,4H。実施例41:5,5-ジフェニル-ペンタ-4-エニル-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-イルアミン化合物411H-NMRDMSO-d6,δppm:13.35bs,1H;8.11bs,1H;8.04s,1H;7.05-7.33m,10H;6.16t,1H;3.42-3.49m,2H;2.08-2.15m,2H;1.72-1.77m,2H。化合物35と類似の様式で、化合物41と、対応するハロゲン化アルキルベンジル誘導体とを反応させることによって以下の化合物を調製した。実施例42:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-1-メチル-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-イルアミン塩酸塩化合物421H-NMRCDCl3,δppm:8.35bs,1H;7.83s,1H;7.14-7.39m,10H;6.07t,1H;4.04s,3H;3.5-3.6m,2H;2.19q,2H;1.67-1.75m,2H;1.56-1.63m,2H。実施例43:1-ベンジル-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-イル-6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニルアミン塩酸塩化合物431H-NMRCDCl3,δppm:8.4bs,1H;7.9s,1H;7.4-7.2m,16H;6.1t,1H;5.6s,2H;3.6-3.5m,2H;2.2q,2H;1.9-1.8m,2H;1.6-1.5m,2H。実施例44:6,6-ジフェニル-ヘキサ-5-エニル-1-イソプロピル-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4-イルアミン塩酸塩化合物441H-NMRDMSO-d6,δppm:11.0bs,1H;8.8s,1H;8.4s,1H;7.3-7.1m,10H;6.1t,1H;5.0hept,1H;3.7-3.4m,2H;2.1-1.9m,2H;1.7-1.6m,2H;1.6-1.40m,2H;1.39d,6H。生物学的アッセイ形質移入体の作成すべての形質移入体は、細胞における共通の、試験対象経路の重要な受容体を欠いていた。分泌したホスファターゼsPaseを、リン酸ニトロフェノールと化学的に類似する基質の加水分解に基づいて培地から得られる発光性基質または発色性基質を処理する能力について、リポーターとして使用した。5種類の形質移入体の作成を記載のように行った。1.IL-4R。非造血細胞の中で共通の鎖であるII型IL-4rの鎖を形質移入し、IL-4rによる核シグナル伝達経路の重要な分子であるSTAT6、最後に、STAT6に対する応答を測定するためのリポーター遺伝子を導入した。細胞は、p62/aPKCを介してSTAT6と関係があることがすでに知られているJanusAssociatedKinase1JAK1を内部に有していた。2.IL-6R。IL-6Rの鎖を形質移入し、STAT3に対する応答を測定することが可能なリポーター遺伝子を導入した。よく知られているように、STAT3は、形質導入分子であり、IL-6/IL-6Rの標準的な応答で生理学的に産生される核内因子である。3.TNF-R。この場合、形質導入分子であり、TNF-αに対する応答で生理学的に産生される核内因子であるという理由で、NF-kBに対する応答を測定することが可能なリポーター遺伝子を導入した。TNF-α形質移入体は、LPSのようなNFkBの強力なアクチベーターに対して応答しなかった。4.TLR4/MD2/CD14によってあらわされるLPS-受容体複合体。上の場合と同様に、NFkBに応答する構成要素を含むリポーター遺伝子を使用したが、LPS-R複合体の構成要素を同時トランスフェクションすることによって選択性を達成した。LBPとして知られるある血漿タンパク質に対するユニオンによって、血清からLPSを捕捉し、LPSを膜タンパク質CD14に移す。LBPを含むことで、LBPを含まない培地または培養物と比較して感度が1000倍上がることとなる。CD14分子は、LPS-受容体ではなく、LBPを捕捉する受容体複合体の一要素であり、MD2に対する細胞表面にLPSを移動させる。CD14は、細胞質尾部を有しておらず、シグナル伝達体になることはできないが、このシステムの感度をかなり上げる。同様の様式で、MD2は、シグナル伝達体ではないが、CD14とMD2を組み合わせることで感度を10000倍上げることができる。5.IL-1R。上の場合と同様に、NFkBに応答する構成要素を含むリポーター遺伝子を使用したが、受容体複合体IL-1Rに属する構成要素の発現によって選択性を達成した。IL-1Rは、TIR形質導入体ドメインToll様IL-1Rを使用する受容体スーパーファミリーに属する。IL-1R経路が、JNK型の分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼMAPKを活性化し、ひいてはAP-1のような転写的に活性な核内因子を生成することが知られている。リポーター遺伝子は、生理学的刺激を模倣するために鎖状に接続したNFkBおよびAP-1部位を含む。マウス内毒素血症:TNF-αの血清濃度に対する化合物11および化合物8の活性材料および方法:制御された標準的な条件で飼育した体重30~35gの雄CD1マウスを使用した。これらの動物を、絶食させ14~16時間、1グループに12匹、約500cm2の1つのかごに6匹、サッカロース8およびNaCl0.2から作られた栄養溶液は自由に摂取させた。経口試験による治療は、10ml/kgの容積比で、懸濁物ビヒクル:Tween800.1-NaCl0.9で与えられた。1時間後、血清型055:B5のEscherichiacoliSigmaL-2880から得られるリポ多糖を1mg/kgの投薬量および10ml/kgの容積比で滅菌塩水に溶解して腹腔内注射することによって、マウス内毒素血症を誘発させた。LPSを注射腹腔内してから90分後、イソフルランで麻酔しつつ、心臓穿孔によって血液0.5~0.8mlを抜き取り、血液サンプルを遠心分離処理し6000rpm、10分間、4°C、2つの血清サンプルを採取し、血清TNF-α濃度を測定するRDSystems製のEIA:MouseTNF/TNFSF1AQuantikineまで、-70°Cで凍結させておいた。化合物11および8を経口で100mg/kg/10mlの投薬量で与えると、E.coliによって誘発されたマウス内毒素血症から得たこのLPS腹腔内実験モデルにおいて活性を示し、ビヒクルのグループに関し、TNF-αの血清濃度がそれぞれ統計学的に有意な様式で35.42および37.7減少する。副甲状腺ホルモンで治療したマウスにおけるIL6の血清濃度。化合物15の活性材料および方法:制御された標準的な条件で飼育した5~7週の雄CD1マウスを使用した。これらの動物を、絶食させ14~16時間、1グループに12匹、約1100cm2の1つのかごに6匹、固体および液体の食事は自由に摂取させた。5日間にわたって、pTH-rp1-34、ヒト15μg/0.1mL/注射で8回腹腔内投与し、動物を治療した。経口試験による治療は、pTH注射の1時間後に10ml/kgの容積比で、懸濁物ビヒクル:Tween800.1-NaCl0.9で与えられた。最後のpTH投与から2時間後、イソフルランで麻酔しつつ、心臓穿孔によって血液0.5~0.8mlを抜き取り、血液サンプルを遠心分離処理し6000rpm、10分間、4°C、2つの血清サンプルを採取し、血清IL-6濃度を測定するEIA:リファレンス番号555240。BDBioscienceまで、-70°Cで凍結させておいた。25mg/kg/10mlの投薬量で経口で与えた化合物15は、この実験モデルに活性を示し、ビヒクルのグループに関し、IL-6の血清濃度が統計学的に有意な様式で64.58減少する。抗腫瘍活性細胞株NCIパネル一次スクリーニングこの試験で使用する別個のヒト細胞株をAmericanTypeCultureCollectionから得て、10v/vの熱で不活化した胎児ウシ血清、2mML-グルタミン、100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシンを含有するRPMI-1640培地中、加湿した95の空気および5CO2の下、37°Cで培養した。別個の量の指数関数的に成長するヒト細胞株を96ウェル平底マイクロタイタープレートに最終容積が100μlになるように播種し、5CO2/空気95の加湿雰囲気下、37°Cで24時間インキュベートし、細胞をプレートに付着させた。次いで、5CO2/空気95の雰囲気下、異なる濃度の評価される化合物とともに細胞を37°Cで72時間インキュベートした。XTT3’-[1-フェニルアミノカルボニル]-3,4-テトラゾリウム-ビス4-メトキシ-6-ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩水和物細胞増殖キットRocheMolecularBiochemicals、マンハイム、ドイツを用い、製造業者の指示にしたがって細胞増殖を定量した。簡単に言うと、それぞれのウェルに、XTT標識試薬およびPMSN-メチルジベンゾピラジンメチルサルフェート電子カップリング試薬を含む新しく調製した混合物溶液50μlを加えた。得られた混合物をさらに加湿雰囲気37°C、5CO2中、4時間インキュベートし、マイクロタイタープレートリーダーを用い、試験波長490nmおよびリファレンス波長655nmで、生成したホルマザン産物の吸光度を測定した。次いで、IC5050阻害濃度を、細胞増殖を50阻害する薬物濃度として計算した。4つの独立した実験をそれぞれ3組で行った平均値±S.D.としてデータを示す。表1は、3細胞株パネルおよび60細胞株パネルの両方でスクリーニングした後の試験化合物のIC50濃度の一部を示す。メラノーマB16-F1、MALM-3M、結腸癌HCT-116、SW260、ヘパトーマHepG2、膠芽細胞腫SF268および肺癌NCI-H460細胞株における、化合物6、8、40、41、44のinvitroでの細胞毒性SRB法に従ったWieland,V.ら、SulforhodamineBAssayandChemosensitivity.Chemosensitivity、第1巻、InVitroAssays.MethodsinMolecularMedicine.、RosalynD.Blumenthal編集。HumanaPress、トトワ、ニュージャージー、2005。細胞を96ウェルのマイクロプレートに播種した。それぞれのウェルにおいて、細胞種に応じて、特定の数の細胞を200マイクロリットル播種した。これらの条件で、細胞を指数関数増殖段階に到達させ、産生物の細胞毒性を評価する目的で、細胞を3日間培養した。治療当日に、ストック溶液10mMを解凍した後に産生物の濃縮物を得た。播種した細胞を含むマイクロプレートを3日間育てた後、培地を捨て、それぞれのウェルについて新しい培地150μlと交換した。その後、それぞれのウェルについて、最終的な容積である200マイクロリットル中の最終濃度が計画したとおりになるように、対応する産物の希釈物50μlを加えた。この産物を、細胞が成長している単層とアッセイする濃度で72時間接触させ、37°C、5CO2でインキュベートした。最後に、冷TCAトリクロロ酢酸50を50μlウェル中の最終濃度10加え、細胞の成長を止めた。次いで、SRBを用いた洗浄および染色を開始するまでに、マイクロプレートを4°Cで60分間維持し、細胞タンパク質を固定した。細胞生存率=処置したウェルの細胞集合/標準曲線の最大細胞集合×100評価する濃度において、それぞれのウェルで得られた値から、それぞれの濃度について平均生存率の値を計算した。7種類の異なる細胞種について、試験した化合物のIC50濃度は第2表に示されるとおりであった。ヒト非腫瘍細胞二次スクリーニング線維芽細胞、HUVEC細胞および休止PBL末梢血リンパ球において、ヒト非腫瘍細胞に対する化合物の細胞毒性を試験した。試験した化合物は、HUVEC細胞および線維芽細胞に対し、10-5Mの範囲で特定の細胞毒性を示す。他のPBLだと、化合物は、10-4MであってもPBLにほとんど影響を及ぼさない。化合物は、10-5~10-6Mの濃度範囲で血液癌細胞株のアポトーシスを誘発するため、これらのデータは、正常な血液細胞と比較して、血液癌に対する治療域を示す。ヒト臍帯をI型コラゲナーゼで処理し、Hank培地中01の濃度で、37°Cで20分間インキュベートすることによってHUVEC細胞を得た。その後、細胞を集め、20FBS、1P/Sおよび25mg/500mlのECGF培地を追加したM199培地で培養し、細胞を0.2ゼラチンマトリックス中で成長させた。別個の量の指数関数的に成長する細胞を96ウェル平底マイクロタイタープレートに最終容積が100μlになるように播種し、5CO2/空気95の加湿雰囲気下、37°Cで24時間インキュベートし、細胞をプレートに付着させた。次いで、5CO2/空気95の雰囲気下、異なる濃度の評価される化合物とともに細胞を37°Cで72時間インキュベートした。XTT細胞増殖キットRocheMolecularBiochemicals、マンハイム、ドイツを用い、製造業者の指示にしたがって細胞増殖を定量した。簡単に言うと、それぞれのウェルに、XTT標識試薬およびPMSN-メチルジベンゾピラジンメチルサルフェート電子カップリング試薬から新しく調製した混合物溶液50μlを加えた。得られた混合物をさらに加湿雰囲気37°C、5CO2中、4時間インキュベートし、マイクロタイタープレートリーダーを用い、試験波長490nmおよびリファレンス波長655nmで、生成したホルマザン産物の吸光度を測定した。次いで、IC5050阻害濃度を、細胞増殖を50阻害する薬物濃度として計算した。4つの独立した実験をそれぞれ3組で行った平均値としてデータを示す。結果は第3表に示されるとおりであった。正常な末梢血リンパ球PBLを単離するために、健康な志願者から得た新しいヒト末梢血から、Ficoll-Hypaqueの密度勾配型遠心分離によって単核細胞を得て、これをリン酸緩衝生理食塩水PBSで洗浄し、文献に記載されるように、10v/vの熱で不活化したFB、2mML-グルタミン、100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシンが入ったRPMI-1640培地に再び懸濁したCabanerら、Br.J.Pharmacol127:813-825.1999。一晩インキュベートした後、培養皿への付着によって単球を除いた。非付着性のT細胞リンパ球をPBSで洗浄し、集めた。PBL調製物は、典型的には、CD3が70~75、CD19が24~29、CD14が0.4未満であった。化合物3および6は、10-4MであってもPBLにほとんど影響を及ぼさず、ここでもドキソルビシンよりも細胞毒性が低いことを示している。これらの化合物は、10-6Mの濃度範囲で血液癌細胞株のアポトーシスを誘発するため、このデータは、正常な血液細胞と比較したときに血液癌の治療域を示す。慢性リンパ球性白血病異種移植動物モデルにおける化合物3のinvivoでの抗腫瘍活性10v/v熱で不活化した胎児ウシ血清、2mML-グルタミン、100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシンが入ったRPMI-1640培地中、加湿した95の空気および5CO2の下、37°Cで慢性リンパ球性白血病CLLのEHEB細胞株を培養した。細胞をマイコプラズマ感染について周期的に試験し、陰性であることがわかった。CB17重症複合免疫不全SCIDマウスCharlesRiverlaboratorie、リヨン、フランスを、温度22°C、12/12時間の明/暗サイクルでスペイン国の法律に準拠した法律のガイドラインにしたがって保存し、取り扱い、標準的な餌と酸性水を不断給餌の状態で与えておいた。100μlPBSおよび100μlMatrigel基底膜マトリックスBectonDickinsonに1.5×107EHEB細胞を入れ、これをCB17-SCIDマウスに、下側背部から皮下接種した。腫瘍が触診可能になったら、マウスをランダムに10匹ごとの群に分け、尾から化合物を静脈投与した3回/週。各静脈投与で使用する容積は200μlであり、最終的な薬物濃度を2.5mg/kg体重とした。これに並行して、等容積のビヒクルをマウスに静脈投与した。キャリパーによって腫瘍の最小直径および最大直径を測定し、以下の標準式を用いて腫瘍の体積10-3cm3を計算した。最小直径2×最大直径×0.5。腫瘍の直径が3cmに達したとき、または顕著な毒性がみとめられたとき、法律によるガイドラインにしたがって動物を殺した。動物の体重および何らかの罹患の徴候について監視した。薬物による治療を41日間続けた。次いで、腫瘍異種移植片を取り出し、測定し、計量し、腫瘍および別個の臓器に関する解剖分析を行った。全ての値を平均±SDとしてあらわした。統計的な群間差について、Mann-Whitney検定またはStudentのt検定を用いて評価した。p値が0.05未満であれば、統計的に有意であるとみなした。結果を図1に示す。化合物3は、コントロール群ビヒクル投与と比較して、有意に、p<0.01CLL腫瘍の成長を阻害した。invivoアッセイが終了した後、コントロールおよび化合物3で治療したマウスを殺し、腫瘍異種移植片を取り出し、腫瘍の重さと体積を測定し、化合物3で治療したマウスについて、コントロールの未治療群と比較して、腫瘍の大きさおよび重量が顕著かつ有意にp<0.01減少していることが示されている。マウスを殺したら、腫瘍および別個の臓器に関する解剖分析を行った。分析した別個の臓器について、解剖分析後に、有意な事象または変化はなんら検出されなかった。マウスの重量は、未治療コントロールと治療したマウスの両方で同等であった。これらのデータは、化合物3を用いたマウスの治療において、顕著な副作用がみられないことを示唆している。化合物3で治療したマウスから取り出した腫瘍は、薬物を用いない腫瘍を有するコントロールマウスと比較して、血管形成が非常にわずかであることが示され、このことは、化合物3が、抗腫瘍性となる細胞毒性活性を高めることができる抗血管形成活性を有し得ることを示唆している。これらの結果は、化合物3が、CLL異種移植マウスモデルにおいて有意かつ強力なinvivo抗腫瘍活性を示すことを示している。それに加え、両薬物を用いた治療は、忍容性が十分にあり、解剖検査で明らかな毒性はなんら検出されなかった。全測定日にわたって、コントロールに対する化合物3の差は、統計的に有意なものであったp<0.05。多発性骨髄腫異種移植動物モデルにおける化合物3のinvivoでの抗腫瘍活性10v/v熱で不活化した胎児ウシ血清、2mML-グルタミン、100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシンが入ったRPMI-1640培地中、加湿した95の空気および5CO2の下、多発性骨髄腫MMのMM1S細胞株を37°Cで培養した。細胞をマイコプラズマ感染について周期的に試験し、陰性であることがわかった。CB17重症複合免疫不全SCIDマウスCharlesRiverlaboratories、リヨン、フランスを、温度22°C、12/12時間の明/暗サイクルでスペイン国の法律に準拠した法律のガイドラインにしたがって保存し、取り扱い、標準的な餌と酸性水を不断給餌の状態で与えておいた。100μlPBSおよび100μlMatrigel基底膜マトリックスBectonDickinsonに3×107MM1S細胞を入れ、これをCB17-SCIDマウスに、下側背部から皮下接種した。腫瘍が触診可能になったら、マウスをランダムに10匹ごとの群に分け、尾から化合物を静脈投与した3回/週。各静脈投与で使用する容積は200μlであり、最終的な薬物濃度を2.5mg/kg体重とした。これに並行して、等容積のビヒクルをマウスに静脈投与した。キャリパーによって腫瘍の最小直径および最大直径を測定し、以下の標準式を用いて腫瘍の体積10-3cm3を計算した。最小直径2×最大直径×0.5。腫瘍の直径が3cmに達したとき、または顕著な毒性がみとめられたとき、法律によるガイドラインにしたがって動物を殺した。動物の体重および何らかの罹患の徴候について監視した。薬物による治療を1ヶ月間続けた。次いで、腫瘍を取り出し、測定し、計量し、腫瘍および別個の臓器に関する解剖分析を行った。全測定日にわたって、コントロールに対する化合物3の差は、統計的に有意なものであったp<0.05。結果を図2に示す。以下の表は、治療終了時のexvivoでの腫瘍データを示す。患者から得た慢性リンパ球性白血病細胞に対する化合物3の抗腫瘍活性異なるZAP70発現パターンを示す6人のヒト患者の慢性リンパ球性白血病細胞群を選択した第5表に示される細胞遺伝学的変化を参照。化合物3の存在下、細胞をインキュベートした。この試験の結果生存率を示すは図3に示されるとおりであった。ZAP70の発現量が低い細胞の方が、用量に依存する様式での生存率の低下が顕著であった。変異したKras結腸癌同所性動物モデルにおける化合物3のinvivoでの抗腫瘍活性Kras変異を有する患者から得た結腸直腸癌細胞に基づき、マウスの結腸領域に移植した動物モデルYao、M.Cyclooxygenase-2selectiveinhibitionwithNS-398suppressesproliferationandinvasivenessanddelayslivermetastasisincolorectalcancer.Br.J.Cancer,2004年2月9日;903:712-9を用い、化合物3の効果を試験した。図4Aの写真は、ヒト結腸直腸癌の腫瘍体積について、明らかに減少させる効果があることを示している。化合物3および5-FUおよびオキサリプラチンOXAという2種類の異なる結腸癌について広範囲に使用される抗腫瘍薬物を直接比較した効果を示している。化合物3NF、オキサリプラチンOXA、5-Fウラシル5-FUおよびこれらの組み合わせで治療したマウスから得たヒト結腸癌腫瘍の重さを図4Bに示す。メラノーマ同所性動物モデルにおける化合物3のinvivoでの抗腫瘍活性B16メラノーママウス細胞に基づく動物モデルを用いSzende、Bら、EffectofanovelsomatostatinanaloguecombinedwithcytotoxicdrugsonhumantumourxenograftsandmetastasisofB16melanoma.BritishJournalofCancer200388、132-136、化合物3は、メラノーマ同所性マウスモデルにおいて、invivoで強力な抗腫瘍活性を示した。化合物3の用量は、これらの実験すべてで腹腔内に30mg/kgであった。結果を図5に示す。図5Aは、invivoでのメラノーマ腫瘍ルシフェラーゼ活性のPET写真をあらわす。シグナルの強度は、増殖性細胞を多く含む腫瘍ほど大きい。図5Bは、この治療終了時に動物から得たexvivoメラノーマ腫瘍を示す。図5Cは、コントロールまたは化合物3で治療した後のメラノーマ腫瘍の重さを示すグラフである。1グループあたりn=4の動物を用いた4種類の異なる独立した実験を行った。図5Dは、1グループあたりn=9の動物を用いたinvivoモデルにおいて、メラノーマB16に対する独立した実験を示すグラフである。卵巣腫瘍同所性動物モデルにおける化合物3のinvivoでの抗腫瘍活性化合物3は、invivoで腫瘍領域を小さくする強力な抗腫瘍活性を示す。クローン化したルシフェラーゼリポーターを含むMOSECID8細胞マウス卵巣表面上皮細胞およびマウス卵巣領域に移植した細胞を用い、実験を行ったYu-HungHuangら、Claudin-3genesilencingwithsiRNAsuppressesovariantumorgrowthandmetastasis.3426-3430PNAS2009.vol.106、no.9。結果を図6に示す。図6Aは、invivoでの腫瘍のルシフェラーゼ活性のPET写真をあらわす化合物3で治療したマウス:30mg/Kg、腹腔内、1週間に5日を2週間。図6Bは、コントロールまたは化合物3で治療した後の動物からのルシフェラーゼシグナルの定量結果を示す。作用機序血液癌細胞株化合物3を異なるヒト血液癌細胞株CLL細胞株、MM細胞株、急性T細胞株および急性骨髄性白血病細胞株を含むとともにインキュベートすると、初期アポトーシスに特徴的な、G1よりもDNA癌流量が少ない細胞の外観によって評価されるように、アポトーシスを誘発したG1前のピーク;治療から6~9時間後。10μMの化合物3と、EHEB細胞CLL、RPMI-8226細胞MM、Jurkat細胞急性T細胞白血病およびHL-60細胞急性骨髄性白血病とを用いて24時間治療した後、20を超えるアポトーシスが誘発された。アポトーシスによる細胞死の誘発は、カスパーゼ-3の基質であるPARPの迅速な開裂、およびカスパーゼ-3の活性化によってさらに裏付けられた。EHEB細胞を化合物3で処理する場合、カスパーゼ-9も活性化し、このことは、この薬物の作用に、固有のミトコンドリアが介在するシグナル伝達が関与していることを示唆している。カスパーゼ-4が活性化するが、このことは、小胞体のストレスが関与している可能性を示唆している。興味深いことに、インキュベート時間中に、脂質化された微小管関連タンパク質1の軽鎖3LC3-IIが多く発生することによって評価されるように、化合物3で処理した後に、非常に迅速かつ強力な自食作用の誘発がみられた。化合物3によるEHEB細胞のアポトーシス誘発図7A:10μMの化合物3を用い、所定の時間、EHEB細胞をインキュベートし、次いで、フローサイトメトリーによる細胞周期分析において、G1前領域にある細胞の割合としてアポトーシスを定量化した。G1前ピーク低二倍性の位置をアポトーシス細胞によって積分し、G0/G1ピークおよびG2/Mピークを矢印で示す。並行して未処理のコントロール細胞について実施した。G1よりDNA含有量が少ない細胞G1前の細胞の割合を各ヒストグラムに示す。ここに示す実験は、3回行った実験の代表例である。簡単に言うと、細胞5×105を遠心分離処理し、70エタノールを用い、4°Cで一晩固定した。細胞をPBSで3回洗浄し、1mg/mlRNaseAおよび20μg/mlヨウ化プロピジウムを用い、室温で1時間インキュベートし、次いで、BectonDickinsonFACSCaliburフローサイトメーターサンノゼ、CAを用いて細胞周期を分析した。細胞周期分析において、G1前の領域低二倍性にある細胞の割合として、アポトーシス細胞の定量結果を計算した。化合物3で処理したEHEB細胞における異なるタンパク質の発現図7B:10μMの化合物3を用い、所定の時間かけて細胞を処理し、所定のタンパク質に特異的な抗体を用い、免疫ブロット法によって分析した。異なるタンパク質の移動位置を示す。ローディングコントロールとしてβ-アクチンを使用した。ここに示すデータは、3回の実験を実施したうちの代表例である。結腸上皮癌細胞得られた結果は、化合物3が、細胞周期分析およびカスパーゼ活性化におけるG1前のピーク低二倍性の外観によって評価されるように、ヒト結腸上皮癌細胞株SW620、HCT-116のアポトーシスを誘発することを示している。化合物3によって誘発されるアポトーシスに、ミトコンドリアが介在する本質的なアポトーシスシグナル伝達が関与しているという推察は、カスパーゼ-9の誘発によって示唆される。さらに、化合物3は、Mcl-1S短と呼ばれる骨髄細胞白血病-1Mcl-1の代わりとなる接合した小さな遺伝子産物の発現を誘発し、これがアポトーシスのプロモーターとなる。化合物3を用いた治療によって、タンパク質p53の量も増加した。まとめると、このデータは、化合物3がMcl-1Sおよびp53の上方制御を促進し、これが結腸癌細胞の死に関与している可能性を示している。ヒト結腸癌HCT-116細胞株における、化合物3によるアポトーシスの誘発図8A細胞周期分析のG1前領域低二倍性にある細胞の割合として、アポトーシスの誘発を定量化した。簡単に言うと、細胞5×105を遠心分離処理し、70エタノールを用い、4°Cで一晩固定した。細胞をPBSで3回洗浄し、1mg/mlRNaseAおよび20μg/mlヨウ化プロピジウムを用い、室温で1時間インキュベートし、次いで、BectonDickinsonFACSCaliburフローサイトメーターサンノゼ、CAを用いて細胞周期を分析した。10μMの化合物3を用い、所定の時間、HCT-116細胞をインキュベートし、次いで、フローサイトメトリーによる細胞周期分析において、G1ピークより前の領域にある細胞の割合としてアポトーシスを定量化した。G1ピークより前の位置低二倍性を、アポトーシス細胞によって積分し、G0/G1ピークおよびG2/Mピークを矢印で示す。並行して未処理のコントロール細胞について実施した。G1よりDNA含有量が少ない細胞G1前の細胞の割合を各ヒストグラムに示す。ここに示す実験は、3回行った実験の代表例である。化合物3で処置している間の異なるアポトーシス関連タンパク質の発現図8BHCT-116細胞およびSW620細胞を10μMの化合物3で所定の時間かけて処理し、所定のタンパク質に特異的な抗体を用い、免疫ブロット法によって分析した。異なるタンパク質の移動位置を示す。ローディングコントロールとしてβ-アクチンを使用した。ここに示すデータは、3回の実験を実施したうちの代表例である。遠心分離処理によって、約107の細胞をペレット状にし、PBSで洗浄し、溶解させた。タンパク質20μgをドデシル硫酸ナトリウムSDS-ポリアクリルアミドゲル上で処理し、ニトロセルロース膜に移し、TBST50mMトリス-HClpH8.0、150mMNaCl、0.1Tween20中、5w/vの脱脂乳を用い、室温で90分間かけて固定し、以下の特異的な抗体とともに室温で1時間、または4°Cで一晩インキュベートした。抗ポリADP-リボースポリメラーゼPARP1:1000希釈マウスモノクローナル抗体BDBiosciencesPharmingen;抗Bcl-XL1:500希釈ウサギポリクローナル抗体BDBiosciencesPharmingen;抗Bcl-21:250希釈マウスモノクローナル抗体BDBiosciencesPharmingen;抗カスパーゼ-31:500希釈ウサギポリクローナル抗体BDBiosciencesPharmingen;抗カスパーゼ-91:1000希釈ウサギポリクローナル抗体Oncogene;抗Mcl-11:1000希釈ウサギポリクローナル抗体BDBiosciencesPharmingen;抗p531:500希釈マウスモノクローナル抗体SantaCruzBiotechnology;抗β-アクチン1:5000希釈マウスモノクローナル抗体Sigma。マウス、ウサギGEHealthcareおよびヤギSantaCruzBiotechnologyの二次HRP抗体を、TBST中の5w/vの脱脂乳中、1:5000希釈状態で、室温で1時間インキュベートした。改良した化学発光検出キットAmershamを用い、シグナルを増幅させた。"