"哺乳動物の接種対象の病原体に対する既存の免疫反応を増強するのに用いるための感染性病原体に特異的な抗原製剤であって、アジュバントを用いず、接種対象の無処置の皮膚に適用され、前記増強される免疫反応は、Th1指向性である抗原製剤。乾燥状態である請求項1に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。実質的に異常が無い角質層を有する皮膚の領域に適用される、請求項1又は2に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。前記既存の免疫性は、前記接種対象への先の非経口、経口又は経鼻での前記病原体に対するワクチン接種により生じる、請求項1~3のいずれか1項に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。前記既存の免疫性は、前記接種対象への先の非経口、経口又は経鼻での前記病原体に対する初回抗原刺激により生じる、請求項1~3のいずれか1項に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。前記既存の免疫性は、前記接種対象への先の前記病原体の自然曝露により生じる、請求項1~3のいずれか1項に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。密封性のパッチデバイスを用いて前記接種対象の皮膚に適用される、請求項1~6のいずれか1項に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。前記密封性のパッチデバイスは、前記抗原が、好ましくは接着剤が加えられずに静電気又はファンデルワールス力により結合された担体を含む、請求項7に記載の抗原製剤。前記接種対象の皮膚に1回、2回又は3回の追加免疫として投与される、請求項1~8のいずれか1項に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。初回抗原刺激又は抗原曝露の好ましくは2~8週間後の皮膚への第1の追加免疫、任意である第1の追加免疫の好ましくは1~12カ月後の皮膚への第2の追加免疫、及び任意である第2の追加免疫の好ましくは1~12カ月後の皮膚への第3の追加免疫を含む、請求項9に記載の既存の免疫反応を増強するのに用いるための抗原製剤。皮膚への追加免疫と先の初回抗原刺激又はワクチン接種とは、同一の抗原が用いられる、請求項1~10のいずれか1項に記載の抗原製剤。感染性病原体は、ウィルス、細菌、寄生生物又は真菌である、請求項1~11のいずれか1項に記載の抗原製剤。前記抗原は、ウィルス又は細菌の表面抗原である、請求項1~12のいずれか1項に記載の抗原製剤。病原体に対して前免疫された哺乳動物の接種対象における免疫反応を増強するのに用いるための感染性病原体に特異的な抗原製剤であって、前記免疫反応の増強及びTh1指向化を可能とする条件下で、前記接種対象の無処置の皮膚に乾燥形態で適用される抗原製剤。哺乳動物の接種対象における病原体特異的なTh1指向性免疫反応を誘導する又は刺激するための方法に用いる感染性病原体に特異的な抗原製剤であって、その方法は、前記病原体に対する免疫反応を引き起こす又は刺激するために、前記病原体に特異的な抗原を哺乳動物に非経口、経口又は経鼻投与すること、及び、その後に、Th1指向性免疫反応を増強させるように、前記病原体に特異的な抗原を哺乳動物の無処置の皮膚に適用することを含む抗原製剤。哺乳動物の接種対象にそれぞれ別々に順次投与される、選択された感染性病原体に特異的な抗原の注射可能な製剤と、皮膚への投与に適する、前記選択された病原体に特異的な抗原の乾燥状態である非アジュバント製剤とを含む組成物。選択された感染性病原体に特異的な抗原の注射可能な製剤と、皮膚への投与に適する、前記選択された病原体に特異的な抗原の乾燥状態である非アジュバント製剤とを含むキット。哺乳動物の接種対象における感染性病原体に対する既存の免疫反応を増大する方法であって、前記接種対象の皮膚に前記病原体に特異的な抗原の非アジュバント製剤を適用することを含む方法。感染性病原体に対して前免疫された哺乳動物の接種対象における免疫反応を増強する方法であって、前記免疫反応の増強及びTh1指向化を可能とする条件下で、前記接種対象の皮膚に前記病原体に特異的な抗原製剤を適用することを含む方法。本発明は、ワクチン接種を改善するための組成物及び方法に関する。特に、本発明は、皮膚の抗原輸送を用いて接種対象における既存の免疫性を刺激することに関する。本発明は、免疫システムが初回抗原刺激をする組成物の従来型の投与により誘導され、追加免疫のための抗原組成物の皮膚への適用により追加免疫される、改善された初回抗原刺激-追加免疫ワクチン接種方法を開示する。また、本発明は、皮膚への抗原投与を用いて前免疫された接種対象において、病原体に対する防御的なTH1指向性免疫反応を起こすための方法に関する。この方法は、患者に安全で、実用的であり、哺乳動物の接種対象において強いTh1指向性免疫反応を起こす。本発明は、先のワクチン接種及び/又は病原体への自然曝露である従来の初回抗原刺激により引き起こされるTH2指向性の特定の免疫反応が、接種対象の皮膚への追加免疫で効率的に増強され、TH1指向化され得ることを示す。ここでの結果は、アジュバントを用いず、皮膚への前処理を行わない皮膚への追加免疫が、既存の免疫反応の効率的な増強及びTH1指向化を引き起こすことを示す。さらに、その結果は、追加免疫が乾燥状態の抗原製剤及び密封性の皮膚デバイスを用いて行われた場合に、そのような反応が特に起こることを示す。本発明は、免疫反応を誘導する又は増強するために、及び病原体に対する免疫性を生じさせるために用いられ得る。本発明は、病原体により引き起こされる疾病の予防又は治療のためにも用いられ得る。本開示は、以下の定義を参照することによって十分に理解されるであろう。定義本明細書で用いられるように、従来型投与又はワクチン接種は、非経口、経口又は経鼻の投与又はワクチン接種をいう。非経口投与は、注射例えば、筋肉内、皮内、静脈内又は皮下、穿刺、及び/又は経皮投与により行われ得る。好ましい非経口投与経路は注射である。皮膚性又は皮膚への適用は、皮膚の表面に接触した条件下で接種対象の皮膚に抗原を適用することをいう。本発明に係る皮膚への適用は、好ましくは無処置又は前処理をしていない皮膚に行われる。皮膚への適用は、皮膚の表層に抗原が浸透できる、及び/又は免疫細胞と抗原が接触できるのに十分な期間、維持されるべきである。本発明において、無処置の皮膚は、完全な角質層が実質的に維持されていることを示す。以前の研究では、効率的な皮膚の免疫療法、増強された抗原の浸透、及び免疫反応の活性化のためには、例えば、研磨又はテープストリップによる皮膚の角質層の除去、又は例えば顕微針を用いた角質層の貫通を必要とすることが提案されていた。これらの以前の研究は、完全な角質層を変質することにより、生物のより良い反応を引き起こすように、ケラチノサイト及びランゲルハンス細胞が活性化又は刺激されることを示す。これらの先の結果に対して、本発明は、例えば完全な角質層が本質的に維持されている皮膚の表面又は領域である無処置すなわち前処理がされていない皮膚に抗原を適用することが好ましいことを示す。実際に、本発明は、指向化されたTh2免疫反応を回避するために、完全な角質層を維持すること、並びに角質層の下に位置するケラチノサイト及びランゲルハンス細胞の自然活性状態を維持することが重要であることを示す。この完全性を維持することにより、得られる反応が耐性という意味で高い指向化がなされる。従って、例えば角質細胞の除去のための、例えば水分補給、水での洗浄、又は非常に穏やかな単一のストリップといった皮膚の表面の穏やかな洗浄が、適用される部位において行われ得るが、皮膚は実質的に完全な角質層を維持するために前処理は行うべきでない。そのような前処理は、全て又は一部の角質層を破壊する又は除去し、ケラチノサイトの刺激を引き起こすため、特に、皮膚へのテープストリップ又は強い研磨は行うべきでない。同様に、角質層の穿孔処理は避けられるべきである。本明細書に記載されているように、ワクチン接種という用語は、通常、抗原に対する免疫反応を起こす及び/又は増強するための、哺乳動物に対する1回又はそれ以上の連続的な投与をいう。連続的な投与は、初回抗原刺激による免疫化の後の1回又は複数回の追加免疫を含む。本発明において、病原体の用語は、病的な状態を引き起こし得る因子をいう。病原体の例は、細胞例えば、細菌細胞、病気の哺乳動物細胞又は哺乳動物の癌細胞、真菌、寄生生物、ウィルス、プリオン又は毒素等を含む。好ましい病原体は、感染性の病原体である。特定の実施形態において、感染性の病原体は、肝炎ウィルス、ロタウィルス、水痘ウィルス、インフルエンザ、サイトメガロウィルス、流感、HIV、エボラウィルス又は狂犬病等のウィルスである。感染性の病原体の特定の例は、ジフテリア菌、破傷風菌、百日咳菌、ポリオウィルス、マンプス、風疹、水痘、肺炎連鎖球菌、ロタウィルス、HPVヒトパピローマウィルス、アフリカトリパノソーマ症睡眠病、炭疽病、トリインフルエンザ、ブルーリ腫瘍、コレラ、クリミア-コンゴ出血性熱ウィルス、デング熱及び出血性デング熱、エボラ出血熱、非ポリオエンテロウィルス、ヘモフィルスインフルエンザB型菌HiB、ヘンドラウィルス、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、E型肝炎、インフルエンザ季節性、ラッサ熱、レジオネラ症、ハンセン病、マラリア、マールブルグ病ウィルス、はしか、髄膜炎菌性髄膜炎、二パウィルス、疫病、灰白髄炎、リフトバレー熱、天然痘、結核又は黄熱の病原体等を含む。本明細書で用いられる抗原とは、接種対象におけるT細胞又はB細胞免疫反応を起こし得る分子をいう。病原体に特異的な抗原は、通常、その病原体から得られた要素、又はその病原体に由来する要素であり、それはエピトープを含み、また、それはその病原体日する免疫反応を起こし得る。病原体の因子に依存して、抗原はポリペプチド、タンパク質、核酸、脂質又は細胞等の種々のものであってもよい。病原体例えば、細菌又はウィルスの弱体型、死んでいる状態、又は不活性型も用いられ、また、それらから精製された材料であるタンパク質、ペプチド又は脂質等も用いられ得る。抗原は、自然に生じ得る、又は人為的に作られ得る。それは、治療される哺乳動物に対して外因性であってもよく、又は内因性例えば腫瘍抗原であってもよい。抗原は、例えば、合成若しくは組換え技術、又は酵素的アプローチ等の本技術分野において周知の技術により生成され得る。本発明において用いるのに適する抗原の特定の例は、例えばウィルス抗原、好ましくは、例えばB型又はA型肝炎ウィルス抗原HBsAg、HAsAg等のウィルス表面抗原を含む。他の抗原は、腫瘍関連の抗原、すなわち正常細胞、細菌タンパク質等でなく、腫瘍細胞により発現された抗原を含む。特定の実施形態において、抗原はタンパク質、ポリペプチド及び/又はペプチドである。ポリペプチド、ペプチド及びタンパク質の用語は、アミノ酸残基のポリマーを意味するために、本明細書において互換的に用いられる。それらの用語は、自然に生じるアミノ酸に対応する人為的な化学的擬似体等の、1つ又はそれ以上のアミノ酸残基が修飾されている、又は非天然の残基を含むようなアミノ酸ポリマーにも適用される。タンパク質の用語が、エピトープを含む断片、又は病原体から得られたタンパク質及びその酵素的、化学的、機械的若しくは熱的に修飾されたもの等の、断片又は変異体といった種々の抗原をも含むことが理解されるべきである。さらに以下で論じるように、抗原は液体又は乾燥状態等の種々の状態であってもよい。一般に、皮膚への適用のためには、抗原は乾燥状態であり、一方、従来のワクチン接種又は初回抗原刺激のためには、抗原は液体状態である。本発明は、皮膚に抗原を適用することを用いて、哺乳動物の接種対象における既存の免疫性を改善する新規の方法に関する。本発明は、既存の免疫反応を改善、刺激、増強、拡張及び/又は再分極するために用いられ得る。そして、それは、選択された病原体に対する接種対象への先の従来のワクチン接種、選択された病原体に対する接種対象への先の従来の初回抗原刺激、及び/又は、選択された病原体に対する接種対象への自然曝露、により生じ得る。第1の実施形態において、本発明は、従来のワクチン接種を受けた哺乳動物の接種対象において、病原体に対する既存の免疫反応を刺激するために、好ましくはTH1分極化するために、抗原を使用することに関し、その抗原は、皮膚に適用することで接種対象に投与される。既存の免疫性は、かなり昔に、例えば子供の時に接種対象に行われた従来のワクチン接種により生じ得る。従来のワクチン接種と皮膚への適用との間の期間は、既存の免疫性が接種対象に表れている限り、実際には実質的に異なり得る。そのような既存の免疫性の存在は、必要なときに、従来の方法により確認され得る。この方法は、例えば子供の時に肝炎又は破傷風に対するワクチン接種を受けた接種対象の場合に適する。皮膚に追加免疫するために用いられる抗原は、不活性型、サブユニット例えば、インフルエンザ、B型若しくはA型肝炎又は百日咳、又は弱毒化型水痘、BCG、ポリオ、インフルエンザ、狂犬病又は黄熱病等であってもよい。他の実施形態において、本発明は、従来の初回抗原刺激を受けた哺乳動物の接種対象において、病原体に対する既存の免疫反応を刺激するために、好ましくはTH1分極化するために、抗原を使用することに関し、その抗原は、皮膚に適用することで接種対象に投与される。実施例に示すように、本発明者らは、非経口での初回抗原刺激と皮膚への追加免疫とを組み合わせることで、強くてTh1指向性である免疫反応を起こすことを示している。特定の実施形態において、本発明は、病原体に対する接種対象へのワクチン接種の方法に関し、それは、病原体に対する免疫反応を起こす又は刺激するために抗原を用いて接種対象に従来の初回抗原刺激を行う第1ステップと、その後に、その病原体に特異的な抗原を皮膚に適用することにより免疫反応を増強するステップとを含む。初回抗原刺激は、1回又は複数回の連続的な抗原投与を含み得る。最も一般的な方法において、従来の初回抗原刺激は、1回又は2回の抗原投与を含む。好ましくは、初回抗原刺激は注射により行われる。従来の投与のために、抗原は、通常、アジュバントと組み合わされる。適当な抗原は、例えば増強された抗原特異的な免疫反応を起こすための免疫システムを活性化する又は促進する物質を含む。本発明に用いられ得るアジュバントの例は、リン酸カルシウム、リン酸アルミニウム及び水酸化アルミニウム等の無機塩、CpGオリゴヌクレオチド等の免疫賦活性DNA若しくはRNA、抗体若しくはToll様受容体に結合するタンパク質等のタンパク質、QS21等のサポニン、ムラミルジペプチド誘導体等のサイトカイン、LPS、MPL及び3D-MPLを含む誘導体、GM-CSF顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子、イミキモド、コロイド粒子、完全若しくは不完全フロイントアジュバント、リビアジュバント、又はコレラ毒素若しくはエンテロトキシンLT等の細菌性毒素を含む。従来の初回抗原刺激のために、通常、アジュバントと組み合わされ、抗原を含む初回抗原刺激のための抗原組成物が用いられる。そのような組成物は、一般に、注射に適する液体型である。その組成物は、希釈剤、キャリア、等張液又は水等の適当な賦形剤をさらに含み得る。上述のように、本発明では、従来の初回抗原刺激又はワクチン接種と、皮膚への追加免疫とを組み合わせる。皮膚への追加免疫のステップは、通常、皮膚に接触可能な条件下で、接種対象の皮膚に抗原製剤を適用することを含む。その適用は、通常、抗原が表皮の角質層の中に侵入できる、及び/又は免疫細胞にまで達し得るのに十分な条件及び/又は期間で行われる。皮膚への適用は、好ましくは、抗原製剤と接種対象の皮膚との接触を維持するのに適当なデバイスを用いて行われる。そのようなデバイスは、パッチ、テープ、ドレッシング、シート又は当業者に周知の他の形態等を含む。好ましくは、その皮膚デバイスはパッチであり、より好ましくは密封性のパッチである。好ましいパッチデバイスは、皮膚の完全性を変更しない。その適用で生じる結果は、皮膚への追加免疫が密封性の皮膚パッチデバイスを用いて行われた場合、明白なTh1指向性免疫反応が起こることを示す。最も好ましい実施形態において、本発明の方法では、国際特許出願WO2002071950及びWO2007122226に記載されているような皮膚パッチデバイスを用いる。そのようなデバイスは、密封性であり、乾燥状態の抗原を用いるために構成され、その抗原は、接着剤を用いることなく静電気及び/又はファンデルワールス力でパッチに保持されている。そのようなデバイスViaskin登録商標と呼ばれるの調製及び特性は、上記の引用された出願に詳細に開示されており、それらは全体で参照として本明細書に組み込まれる。本発明の実施のために、それは、皮膚と密閉されたチャンバを作るために適合された基材を含むデバイスを使用するのに特に適し、この基材は、チャンバ内の皮膚と対抗する面に静電気力及び/又はファンデルワールス力で接着された乾燥抗原を有する。皮膚への適用において、そのチャンバにおける湿気の増大は、抗原の溶解を引き起こし、皮膚に接触する。本発明の他の好ましい実施形態において、抗原は、抗原を結合させるための担体を含む密封性パッチデバイスを用いて哺乳動物の皮膚に適用される。好ましくは、抗原は、接着剤を用いずに静電気又はファンデルワールス力でパッチの担体に結合される。特定の実施形態において、パッチの担体は、セルロースプラスチックCA、CP、ポリ塩化ビニルPVC、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリウレタン、ポリカーボネート、ポリアクリル、ポリオレフィン、ポリエステル、ポリエチレン、及びエチレンビニルアクリレートEVAからなる群から選択されるガラス又はポリマーを含み得る。最も好ましい実施形態において、皮膚への追加免疫は、乾燥状態の抗原製剤を用いて行われ、それは、好ましくは静電気皮膚デバイスを用いて皮膚に適用される。これに関して、乾燥状態の用語は、追加免疫をする抗原製剤が、例えばそれぞれが分かれている又は凝集している粒子の形態であるような実質的に粉末状であることをいう。あまり好ましくないが、追加免疫をする抗原製剤は、液体であってもよく、貯水部又は穴が開いた膜を有する密封性デバイス等の周知のデバイスを用いて適用されてもよい。本発明の好ましい方法は、アジュバントが用いられた液体の初回抗原刺激のための抗原製剤と、乾燥状態の追加免疫のための抗原製剤とを組み合わせる。さらに、好ましい実施形態において、追加免疫のための抗原製剤は、アジュバントを用いずに製剤化又は使用される。実際に、本発明は、追加免疫の製剤にアジュバントを加えなくとも、その方法は、強くて、TH1分極化した免疫反応を起こすことを示す。本発明の好ましい実施形態は、アジュバントが用いられた液体の初回抗原刺激のための抗原製剤と、アジュバントが用いられていない乾燥状態の追加免疫のための抗原製剤とを組み合わせる。追加免疫のための抗原製剤は、浸透増強剤又は水和剤等の不活性な賦形剤又は他の成分を含み得る。しかしながら、単一の活性物質として1つ又は複数の抗原を含む、すなわちアジュバント又は浸透増強剤等の更なる活性物質を含まない追加免疫のための抗原製剤を用いることが好ましい。追加免疫ステップは、1つ又はそれ以上のパッチデバイスが、1回又はそれ以上の回数、前処理がされておらず、好ましくは体のうち無毛の部位の無処置の皮膚に直接に適用され得る。実際に、本願に含まれるが、そのデバイスの適用の前に、皮膚において処置をする必要はない。さらに、本願は、皮膚の前処理が、皮膚への追加免疫により誘導される免疫反応の型に実質的に影響することを示す。特に、抗原製剤がアジュバントを用いず、無処置の皮膚に適用される場合、既存の免疫反応は、強く増強され、Th1分極化が起こる。これは、全く期待されておらず、特に有利である。従って、本発明の対象は、接種対象におけるTh1分極化された抗原特異的免疫反応を誘導する又は増強する方法であり、その方法は、接種対象の無処置の皮膚に、乾燥状態でアジュバントを用いない抗原製剤を適用することを含む。本発明の更なる対象は、選択された病原体に特異的な抗原の注射可能な製剤、及び乾燥状態でアジュバントを用いないその選択された病原体に特異的な抗原の製剤をそれぞれ別々に含み、連続的に哺乳動物の接種対象へ適用される組成物である。本発明の更なる対象は、哺乳動物の接種対象における病原体特異的でTh1指向性の免疫反応を誘導する、刺激する又は増強するのに用いるための上記のように定義された組成物である。本発明の更なる対象は、哺乳動物の接種対象における選択された疾病に対する免疫反応を増強するための上記のように定義された組成物である。本発明の他の対象は、病原体に対して従来の免疫化がなされた哺乳動物の接種対象における免疫反応を増強する方法であり、その方法は、アジュバントを用いず、その病原体に特異的な抗原を、その接種対象の前処理されていない皮膚に適用することを含み、そのような適用は免疫反応の増強を引き起こす。従来の免疫化の用語は、先に哺乳動物が従来の抗原投与により抗原に曝露されている初回抗原刺激されていることを意味する。本発明により生じた結果は、アジュバントを用いず、皮膚へ前処理を行わない皮膚への追加免疫が、従来の投与により先に起こされた又は刺激された免疫反応の効率的な増強及びTh1指向化を引き起こす。本発明の実施において、初回抗原刺激及び追加免疫のために用いられる抗原は、その抗原が選択された病原体に特異的である限り、同一であっても異なっていてもよい。一般に、初回抗原刺激及び追加免疫に用いられる抗原は、共に少なくとも1つのT細胞及び/又はB細胞エピトープを含む。また、用いられる抗原の量は、当業者により調整され得る。初回抗原刺激ステップは、以下に示される用量で実施され得る。本発明に係る追加免疫のために、欠く皮膚デバイスにおける抗原の量は、通常0.1μgから10000μgの範囲、好ましくは20μgから5000μgの範囲である。本発明の方法の追加免疫は、1回又は複数回の追加免疫の適用を含むことができ、それらは、接種対象、抗原、皮膚デバイスおよび疾病等に依存して、同一又は別々の抗原、好ましくは同一の抗原を用いて、種々の時間間隔で実施され得る。特定の実施形態において、各抗原での追加免疫は、1日から数カ月に延長し得る期間において、1回から10回、通常は1回から5回、好ましくは1回、2回又は3回の連続的な皮膚デバイスの適用を含む。各適用は、1日から数週間、通常は1週間から10週間の期間が空けられ得る。さらに、本発明の好ましい処理は、通常、1回、2回又は3回の抗原による追加免疫を含む。最初の追加免疫は、抗原特異的な免疫細胞が存在する限り、初回抗原刺激又は病原体の曝露の後の何時に行われてもよい。好ましくは、最初の追加免疫は、初回抗原刺激の後、2週間から10週間までに行われる。特定の実施形態において、本方法は、従来の初回抗原刺激による免疫化の通常3~6週間後における1回の追加免疫を含む。必要であれば第2の追加免疫が、また任意に第3の追加免疫が行われ得る。第2及び第3の追加免疫は、例えば先の追加免疫の後の2~18カ月といった月単位の間隔で行われ得る。この点に関して、特定の実施形態において、本方法は、従来の初回抗原刺激による免疫化の通常3~6週間後の最初の追加免疫と、通常は1~18カ月後、好ましくは1~12カ月後、例えば3~6週間後の第2の追加免疫とを含む。他の特定の実施形態において、本方法は、従来の初回抗原刺激による免疫化、通常は3~6週間後の最初の追加免疫、通常は1~18カ月後、好ましくは1~12カ月後、例えば3~6週間後の第2の追加免疫、並びに通常は1~18カ月後、好ましくは1~12カ月後、例えば3~6週間後の第3及び最後の追加免疫からなる。抗原の特定の容量、追加免疫の適用の回数及び接触期間は、接種対象、抗原製剤の性質及び用いられるパッチデバイスの型等に依存して熟練者により適合され得る。Viaskin登録商標デバイス等の密封性デバイスにおいて、接触期間は5時間から72時間が好ましい。好ましくは、それぞれの適用において、24時間から60時間程度、より好ましくは24時間から48時間程度、一般に24時間、36時間又は48時間の期間中、デバイスが皮膚上に保持される。その処理は、いつでも、例えば免疫反応の十分な増幅及び/又はTh1指向化が1度確立されれば止められ得る。この点に関して、本発明は、非経口による初回抗原刺激により誘導されたTh2指向性である特定の免疫反応が、皮膚への追加免疫で十分に増幅され、Th1分極化され得る。Th1及びTh2細胞は、サイトカインの生成パターンがそれぞれ異なるCD4ヘルパーT細胞の2つの型である。Th1細胞は、IFN-γ、IL-2及びTFN-βを生成し、細胞内の病原体及び悪性細胞に対する生体防御において有益な細胞性免疫反応に携わる。Th2細胞は、IL-4、IL-5、IL-9、IL-10及びIL-13を分泌し、IgEの生成を含む抗体反応を増強する。Th1及びTh2反応は、それらが互いに平衡し、相互制御して正常に存在するように、相互に拮抗的である。本発明に関して、免疫反応のTh1指向化は、本発明の追加免疫の結果として、Th1/Th2免疫細胞又はサイトカインの比率が増大する、好ましくは少なくとも10増大することを意味する。実施例において開示されるように、本発明に従って追加免疫された接種対象から抽出されたT細胞の上清は、従来の投与経路により追加免疫された接種対象の場合と比較して、顕著に高い濃度のIFN-γ主要なTh1サイトカイン及び顕著に低い濃度のIL-5を含み、従って免疫反応のTh1指向化が証明された。Th1指向化は、特定の実施形態において、IFN-γの濃度若しくはIFN-γ生成細胞の数が従来の投与経路を用いて処理された接種対象の場合と比較して、少なくとも10増大すること、及び/又はIL-5の濃度若しくはIL-5生成細胞の数が従来の投与経路を用いて処理された接種対象の場合と比較して、少なくとも10低減することを示す。本発明の更なる対象は、従来法で免疫化された哺乳動物の接種対象における病原体に対する免疫反応を増強及びTh1指向化する方法に関し、その方法は、アジュバントを加えることなく、病原体に特異的な抗原を免疫化された接種対象に対して、非経口で皮膚上に適用することを含む。本発明の他の対象は、従来法で免疫化された哺乳動物の接種対象における病原体に対する免疫反応を増強及びTh1指向化する方法に関し、その方法は、アジュバントを加えることなく、病原体に特異的な抗原を免疫化された接種対象に対して、非経口で、前処理されていない皮膚上に適用することを含む。以下の実施例は、本発明を詳細に説明することを目的とし、この例に限定されるものではない。[実施例]実施例1:皮膚における追加免疫による免疫反応の増幅及びTH1指向化A.材料及び方法動物大人のBALB/cマウスを、CharlesRiverLaboratoriesから購入した。全ての試験は、動物飼育に関する欧州共同体の規則に従って行った。抗原B型肝炎ウィルスの表面抗原、すなわちHBsAgを用いた。皮膚デバイスWO2007122226に記載されているようなViaskin登録商標デバイスを用いた。そのデバイスは、密封性であり、静電気的である。抗原は、乾燥状態で且つアジュバントを含まない状態で、静電気力により基材の表面に保持されている。特定のIgE、IgG1、IgG2の定量化血液サンプルを免疫療法前及び免疫療法中に後眼窩の静脈叢から採取し、その血漿を更なる分析まで-30°Cで保存した。ICHガイドラインを用いて検証された定量的ELISAを特定のIgG1及びIgG2aのために用いた。手短に言えば、マイクロタイタープレートを2μg/mlのHBsAgでコーティングした。100μlの各血清の段階希釈を各ウェル毎に行い、4°Cで24時間インキュベートした。ペルオキシダーゼでラベルされた抗マウスIgG1又はIgG2a抗体をトレーサーとして用いた。試薬TMBを酵素基質として用いた。希釈曲線をプロットし、血清のタイトレーションを同一の縦座標y軸で決定した。サイトカインの生成最後の血液のサンプリングの後、マウスを脊椎脱臼により殺し、無菌状態で脾臓を採取した。ELISAによる定量化細胞培養を24ウェルマイクロタイタープレート2.106cellswellでHBsAg0~50μgml-1の存在下で行った。インビトロの刺激の72時間後、上清を回収し、IL-5及びIFNγの定量化を製造者の説明書に従って、CytoSetTMキットBioSourceInternationalEuropeBelgiumを用いて行った。ELISpot細胞培養を製造者BDUSAの推奨に従って、ELISpotマイクロタイタープレートRDsystemUSAでHBsAg0~50μgml-1の存在下で行った。IL-5及びIFNγの定量化を、刺激の48時間後に行った。プロトコール初回抗原刺激:大人のBALB/Cマウス7匹で2群に対して2mgHBsAg/10μgAlOHで従来の免疫化筋肉内注射を行った。初回抗原刺激の後28日目血清の回収グループ1HBsAg/Alum:2mgHBsAg/10μgAlOHでの追加免疫グループ2Viaskin登録商標/HBsAgパッチ:100mgHBsAgを含むViaskinでの追加免疫。Viaskinを適用後48時間で外した。初回抗原刺激の後49日目追加免疫I後21日目血清の回収グループ1:追加免疫なしグループ2:100mgHBsAgを含むViaskinでの追加免疫追加免疫1及び追加免疫2のためのパッチを2つの異なる方法で調製した:追加免疫1のためのパッチを凍結乾燥で調製し、追加免疫2のためのパッチを乾燥により調製した。しかしながら、2つの製剤において、パッチ上に抗原を粉末で付けた。初回抗原刺激の後63日目追加免疫II後14日目血清の回収脾臓をT細胞反応の分析のために採取した。抗体の定量化:血清抗HBsAg抗体IgG1及びIgG2aを0日、28日、49日及び63日に抗原がコーティングされたプレートを用いたELISAにより定量化した。T細胞反応:エクスビボ:脾臓細胞を、サイトカインの分泌を抑制するためのブレフェルディンA/モネンシンの添加前に、HBsAg5mg/mlの存在下又は非存在下で1時間培養した。6時間の更なる培養の後に、細胞を表面分子に対する抗体で染色し、固定及び透過処理し、IL-5、IL-2、IFNγに対する抗体で染色した。結果示さず:サイトカイン生成細胞は、いずれの試験群マイトジェン刺激したコントロール脾臓細胞を除くにおいても、バックグラウンド以上が検出されなかった。インビトロの再刺激後脾臓細胞を、72時間の分析の前に、抗原5mg/ml及び20mg/mlの存在下又は非存在下で培養した。IL-5及びIFNγ生成脾臓細胞に対して、HBsAgの存在下又は非存在下での48時間培養後にELISpotによる定量化を行った。サイトカイン分泌量を、HBsAgの存在下又は非存在下での72時間培養後に、ELISAにより培養上清で決定した。統計分析GraphPadSoftwareを統計分析のために用いた。データを、コントロールと処理したマウスとを比較する場合では分散分析ANOVA及びダネット検定を用いて分析し、全ての群を互いに比較する場合ではANOVA及びチューキー検定を用いて分析した。B.結果抗HBsAgIgG1反応における本発明の皮膚への追加免疫の影響図1提示した結果は、最初の皮膚パッチの適用によるIgG1の顕著な増幅を示す図1のD49とD28との比較。抗HBsAgIgG2a反応における本発明の皮膚への追加免疫の影響図2提示した結果は、最初の皮膚パッチの適用によるIgG1の顕著な増幅を示す図2のD49とD28との比較。本発明の皮膚への追加免疫又はHBsAg/AlOHを用いて2度の追加免疫が行われたマウスにおけるサイトカイン生成細胞ELISpot図3図3に提示された結果は、IFNγ生成細胞の数がViaskinで追加免疫した場合とアジュバントを用いた筋肉内注射で追加免疫した場合とで類似しており、一方、IL-5生成細胞がViaskinで追加免疫した場合の方がより少ないことを示している。従って、HBsAg/AlOHでTh2誘導初回抗原刺激したにもかかわらず、Viaskinでの追加免疫は、筋肉内注射によるHBsAg/AlOHの優先的なTh2反応に対して、釣り合っているTh1/Th2反応を誘導した。本発明の皮膚への追加免疫又はHBsAg/AlOHを用いて2度の追加免疫が行われたマウスにおけるサイトカイン生成細胞ELISA図472時間の時点で、Viaskinで追加免疫されたマウスのT細胞の上清には、筋肉内注射によるHBsAg/AlOHでの追加免疫の場合と比較して、IFNγが顕著に高い濃度で存在し、IL-5が顕著に低い濃度で存在している。本発明の皮膚への追加免疫又はHBsAg/AlOHを用いて2度の追加免疫が行われたマウスにおけるIL-5反応ELISA-ELISpotの詳細72時間の時点で、Viaskinで追加免疫されたマウスの方が無処置のマウスよりも高いIL-5濃度を示した。72時間の時点で、Viaskinで追加免疫されたマウスの方がHBsAg/AlOHで追加免疫されたマウスよりも低いIL-5濃度を示した。同一のパターンは、再刺激条件にかかわらず観察されたELISpotによるインビトロのELISA定量。本発明の皮膚への追加免疫又はHBsAg/AlOHを用いて2度の追加免疫が行われたマウスにおけるIFNγ反応ELISA-ELISpotの詳細免疫化マウスからの脾臓細胞は、IFNγを自然に放出し、この放出は、Viaskinで追加免疫されたマウスにおいてより多くなる。この自然放出が差し引かれる場合:無処置のマウスと比較して、HBsAg/AlOHで追加免疫されたマウスでは、IFNγが顕著に高い濃度では検出されない。無処置のマウスと比較して、Viaskinで追加免疫されたマウスでは、IFNγが顕著に高い濃度で検出される。C.結論本発明の皮膚への追加免疫は、HBsAg/AlOHで従来の初回抗原刺激されたマウスにおいて、抗HBsAgIgG1及びIgG2a反応を顕著に増大した。IgG1及びIgG2aレベルは、従来の追加免疫アジュバントを用いた筋肉内注射により得られたものと同等であった。皮膚への追加免疫は、IFNγを増大し、IL-5抗HBsAg反応を低減した。これらの結果は、インビボにおける好結果の増幅と、従来のHBsAg/AlOHでの初回抗原刺激により誘導されたTh2型反応のTh1分極化を証明する。実施例2:皮膚への前処理の免疫反応の型に対する影響A.材料及び方法BALB/cマウスを、アジュバントとしてコレラ毒素と混合された落花生タンパク質抽出物PPEで胃内に6週間1週間に1回感作した。その後、免疫療法を8週連続行った。10匹の感作されたマウスは、無処置の皮膚に処理された。10匹の感作されたマウスは、10回のテープストリップにより前処理された皮膚に処理された。テープストリップは、接着剤を用いた10回のストリップを含み、それは、無処置の角質層の実質的な変更を引き起こす。10匹の感作されたマウスは処理しなかった。10匹の無処置のマウスをコントロールとした。免疫療法の最後において、全てのマウスに対して10日間継続的に経口での落花生飼育を行った。殺した後、組織学的分析により食道及ぶ空腸における損傷を評価した。Th1、Th2及びTregサイトカインのmRNAの発現をTR-qPCRにより測定した。血清学的反応特にIgE、IgG1及びIgG2aの測定を、免疫療法の前及びその最後にELISAにより行った。B.結果無処置の皮膚への処理の後で、sIgEが低減し、sIgG2aが増大し、それぞれ0.036±0.01vs0.231±0.02μg/mlEPITvsSham,p<0.05及び2.86±0.78vs1.06±0.28μg/mlp<0.05であった。対照的に、テープストリップされた皮膚における免疫療法の後、sIgEは増大し、sIgG2aは変化せず、それぞれ0.383±0.08μg/mlp<0.01vsSham及び1.252±0.22μg/mlであった図7A及び7Bを参照。その結果は、食道粘膜における好酸球濃度が、無処置の皮膚に処理されたマウス、2.7±0.9cells/mm2p<0.01及びp<0.05、及びネイティブマウス、1.1±0.7cells/mm2p<0.01と比較して、Sham及び皮膚にストリップ処理されたマウスの方が実質的に高く、19.9±1.5cells/mm2及び26.7±8.7cells/mm2であった図8を参照。さらに、エオタキシン、IL-5及びIL-13のmRNA発現は、Sham2.57、2.60、2.50、p<0.05及び皮膚にストリップ処理されたマウス2.02、1.95、2.01、p<0.05と比較して、無処置の皮膚に処理することにより顕著に低減したそれぞれ1.14、1.35、1.02図9A、B及びCを参照。興味深いことに、Th2転写因子であるGATA-3のmRNAは、図10Aに示すように、Sham群と比較して、無処置の皮膚に処理されたマウスにおいて顕著に低減したp<0.05。また、Treg転写因子であるFoxp3は、ShamP>0.05及び皮膚にストリップ処理されたマウスP<0.001と比較して、無処置の皮膚に処理されたマウスにおいて顕著に増大した図10Bを参照。最後に、図11に示すように、十二指腸の絨毛/陰窩の比率は、無処置の皮膚に処理されたマウス2.9±0.2P<0.05及びネイティブマウス3.3±0.1P<0.001及びP<005と比較して、Sham2.1±0.2及び皮膚にストリップ処理されたマウス2.4±0.3では、顕著に低かった。C.考察得られた結果は、皮膚への免疫療法における、無処置の角質層の損傷度のレベルに依存して引き起こされる免疫学的反応のプロファイルを示す。無処置の皮膚において、IgEの低減及びIgG2aの増大が誘導される。変質された角質層を有する処理された皮膚において、IgEの増大が誘導され、IgG2aは誘導されない。また、落花生のみの食事を与えた後、好酸球の高い浸潤が、ストリップ処理された皮膚に処理されたマウスにのみ観察された。結論その結果は、十分な免疫反応が、密封性のデバイスを用いて適用されたアジュバントを使わない追加免疫を用いた皮膚に対する処置によって得られ得る、及び増幅され得る。その追加免疫は、抗原が無処置の皮膚に適用されるとき、TH1指向化を引き起こし、特に強い免疫反応を引き起こす。参考文献GlennSchartonKerstenetal1999AdvancesinvaccinedeliverytranscutaneousimmunisationExpertOpinInvestigDrugs8797805KaiserlianandEtchart1999EpicutaneousandtranscutaneousimmunizationusingDNAorproteinsEurJDermatol916976PartidosBeignonetal2003DeliveringvaccinesintotheskinwithoutneedlesandsyringesExpertRevVaccines275361ImmunityundertheskinpotentialapplicationfortopicaldeliveryofvaccinesVaccine2177680ShiverJWetal2002ReplicationincompetentadenoviralvaccinevectorelicitseffectiveantiimmunodeficiencyvirusimmunityNature415331335WoodlandDLetal2004JumpstartingtheimmunesystemprimeboostingcomesofageTrendsImmunol2598104WuLetal2005EnhancedbreadthofCD4TcellimmunitybyDNAprimeandadenovirusboostimmunizationtohumanimmunodeficiencyvirusEnvandGagimmunogensJVirol7980248031McConnelletal2007AdenovirusbasedprimeboostimmunizationforrapidVaccinationagainstAnthraxMolecularTherapy15203210"