"好中球におけるアポトーシスを誘導するのに使用するためのCD89活性化分子。Fcα又はその機能的な等価物を含んでなる分子である、請求項1に記載のCD89活性化分子。免疫グロブリンAIgAである、請求項2に記載の分子。IgAが、血清又は血漿由来である、請求項3に記載のIgA。IgAが、二量体である、請求項3又は4に記載のIgA。IgAが、単量体である、請求項3又は4に記載のIgA。IgA二量体が、J鎖を含んでなる、請求項5に記載のIgA。IgA二量体が、分泌成分を含んでなる、請求項7に記載のIgA。IgAが、単量体及び二量体のIgAを含んでなる、請求項3又は4に記載のIgA。ポリクローナルである、請求項3~9のいずれか1項に記載のIgA。モノクローナルである、請求項3、又は5~9のいずれか1項に記載のIgA。IgAが、IgA1若しくはIgA2、又はその混合物である、請求項3~11のいずれか1項に記載のIgA。抗CD89抗体、好ましくはモノクローナル抗体である、請求項1に記載のCD89活性化分子。請求項1~13のいずれか1項に記載のCD89活性化分子を含んでなる医薬組成物であって、組成物中のタンパク質の少なくとも50がCD89活性化分子である、上記医薬組成物。好中球が、自己免疫障害又は炎症性状態に罹患している患者内に含まれている、請求項1~13のいずれか1項に記載のCD89活性化分子。自己免疫障害又は炎症性状態が、無菌性好中球性炎症、感染性炎症、好中球誘発炎症、炎症性腸疾患及びネトーシスNETosisから選択される、請求項15に記載のCD89活性化分子。自己免疫障害が、関節炎、特に関節リウマチ、脊椎関節炎、強直性脊椎炎/ベヒテレフ病ankylosingspondylitisMorbusBechterew、又は反応性関節炎である、請求項15に記載のCD89活性化分子。CD89活性化分子が局所的に投与される、請求項1~13のいずれか1項に記載のCD89活性化分子。好中球が嚢胞性線維症に罹患している患者内に存在する、請求項1~13のいずれか1項に記載のCD89活性化分子。好中球のアポトーシスを誘導する方法であって、好中球を有効な量の請求項1~13のいずれか1項に記載のCD89活性化分子と接触させることを含んでなる、上記方法。好中球が、炎症性サイトカイン又は細菌菌体成分例えば、LPSなどの炎症性刺激物によってプレ活性化されている、請求項20に記載の方法。本発明者らは現在、驚くべきことに、具体的には、IgAのようなFcαを含む分子、又は抗CD89抗体によってCD89を活性化することによって、好中球におけるアポトーシスを誘導することができ、そして好中球が、例えば、リポ多糖LPS又はリポタイコ酸lipoteichoicacidLTAのような微生物成分、あるいはGM-CSF又はTNF-αなどのサイトカインでプレ活性化preactivatedされるとき、この活性化が増強されることを見出した。この所見は、慢性好中球性炎症、例えば、自己免疫性炎症状態、過剰NETosisJohnWileySonsInc;httpwwwcurrentprotocolscomWileyCDA中に見出すことができる。用語IgAがこの明細書中で使用されるときには、IgAの機能的変異体、例えば、CD89活性化活性の喪失をもたらさない1つ又は複数のアミノ酸の置換、欠失又は挿入を有するIgAもまた包含されることを意味している。Fcαを含む分子はまた、遺伝子操作による融合タンパク質でありうる。例えば、IgA重鎖のFcα部分をコードするcDNAは、別のタンパク質、好ましくは、可溶性タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミンをコードするcDNAとフレーム内で融合する。適切なFcαcDNA配列の例は、配列番号1及び2中に示されている。Fcαを含む分子はまた、一本鎖Fvフラグメントを遺伝子操作する方法と同様にして、2つのFcαcDNAsが、リンカーペプチドをコードする核酸によって連結される一本鎖Fcαタンパク質でありうるWoernAPlueckthunAJMolBiol20013059891010。2つ又はそれより多いこうした一本鎖Fcαタンパク質はまた、結合してFcαユニットの二量体又は多量体を形成することができる。こうした分子は、通例行なわれている技法例えば、CurrentProtocolsinMolecularBiologyAusubelFMetalJohnWileySonsInc;httpwwwcurrentprotocolscomWileyCDA中に記載されているによって生成することができる。例えば、IgAの重鎖のFcα部分は、適切な制限部位を含むように設計されているプライマーを用いて、RT-PCRによって、IgAを産生する細胞から増幅することができる。次いで、この結果生じるcDNAを相当する制限酵素複数を含むで消化し、そして適切に調製された発現ベクター中にクローニングすることができる。リンカーペプチドをコードする合成オリゴヌクレオチドは、例えば、cDNAを適切な制限酵素で消化し、そしてオリゴヌクレオチドを適切に設計された末端でベクター中にライゲートすることによって適切な位置に挿入することができる。次いで、コンプリート発現プラスミドを、標準的な技法を用いて、例えば、大腸菌Ecoli中で多量作製することができる。精製後、これを哺乳類細胞にトランスフェクトし、そして所望のタンパク質を安定に発現する細胞株を作製することができる。次いで、このタンパク質を精製することができる。標準的な技法はこうした手順を行なうのに利用可能である。例えば、IgA1の重鎖に起源する1つの定常ドメイン、及びIgA2の重鎖に起源する1つの定常ドメインを含んでなるキメラFcα部分もまた、意図されている;当業者であれば、この免疫グロブリンドメインを十分認識しており、そしてドメイン境界を識別し、免疫グロブリンドメインを所望の通りに結合させることができる。Fcα部分と、J鎖との組み合わせもまた含まれる;これに加えて、この結果生じる分子はまた、分泌成分と結合することができる。上記に述べられている如く、Fcαの機能的フラグメント及び機能的変異体もまた使用することができる;融合タンパク質、二量体、多量体、そうした機能的変異体と、J鎖との、又はJ鎖及び分泌成分との組み合わせもまた含まれる。好ましい分泌成分は、少なくとも、1つのヒト多量体免疫グロブリン受容体pIgRアミノ酸配列又はその変異体、例えば、異なる哺乳類種に起源する類似の部分のアミノ酸残基1~残基約606の断片を含む。しかしながら、ヒトの配列が好ましい。このヒトpIgRのタンパク質配列は、スイスプロットアクセッション番号P01833のもとで見いだすことができるKrajcietal1989BiochemBiophysResComm158783789もまた参照されたい。これに代えて、CD89活性化タンパク質は、抗CD89でありうる。当業者であれば、抗CD89を作製する方法を十分認識している。CD89、又はそのフラグメントは、特異的な抗血清を作製するための抗原として使用できる。抗体は、こうした抗血清から単離することができる。モノクローナル抗体もまた作製することができ、そしてそうしたモノクローナル抗体を作製する方法は当業者に周知である。好ましくは、モノクローナル抗CD89抗体は、ヒト抗体であり、例えば、該抗体は、不死化されたヒトBリンパ球から作製されるか、あるいは動物において作製され、動物自身の免疫グロブリン遺伝子が対応するヒト遺伝子によって少なくとも一部分置き換えられる。抗体の作製のために使用される技法は、周知であり、様々な研究室マニュアル、例えば、EdHarlowDavidLaneAntibodiesALaboratoryManualorSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManual双方ともCSHLから中に詳細に記載されている。本発明を、以下の実施例中で例示する。この実施例は本発明を行なう方法の説明として意図されており、本発明を制限するものと考えてはならない。実施例:好中球におけるアポトーシスの誘導材料と方法抗体:抗CD89クローンA59非標識及びフィコエリスリン[PE]コンジュゲートphycoerythrinPEconjugatedの双方、及びPEコンジュゲート免疫グロブリンG1IgG1アイソタイプコントロールは、BDBiosciences社BaselSwitzerlandからのものであった。ヤギ抗マウスIgGGaM及び非標識コントロールIgG1は、JacksonImmunoResearchLaboratoriesMilanAnalyticaLaRocheSwitzerlandによって販売から得た。抗FasアゴニストmAbCH11は、LabForceAGNunningenSwitzerlandから得た。プールした血清IgAをCSLBehringAGWankdorfBernから得、そして次のように調製した:IgAを、BACNaardenNetherlandsからのCaptureSelectヒトIgAレジンを用い、アフィニティクロマトグラフィーによって、ヒト血漿及びIVIg/SCIg製造方法の副画分から精製した。簡潔に述べれば、低温除去ヒトプール血漿cryodepletedhumanpoolplasma又は副画分を、生理学的条件近辺pH,伝導性のもとでカラムのIgA結合能を超えずに、平衡化CaptureSelectヒトIgAカラム上にローディングした。ローディング後、このカラムをリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、そしてIgAをpH3で、グリシンバッファーで溶出した。溶出液をpH校正し、そして50mg/mlタンパク質まで濃縮した。単量体IgAを上記に述べられているようにして得た血漿IgAから分取サイズ排除クロマトグラフィーによって、例えば、Superdex200ゲルレジンを用いて精製することができる。細胞:血液好中球は、健常個体及び急性関節炎症に関連する関節リウマチRAに罹患している患者から単離した。簡潔に述べれば、末梢血単核細胞PBMCsを、Ficoll-HypaqueSeromedFakolaAGBaselSwitzerlandによって遠心分離によって分離した。主として顆粒球及び赤血球である下相を、赤血球溶解液155mMNH4Cl,10mMKHCO3,及び0.1mMEDTA[エチレンジアミン四酢酸],pH7.3で処理した。この結果生じた細胞集団は、大部分は好中球を含んでいた。RAに罹患している患者からの関節液の好中球を同じプロトコルを用いて単離した。細胞純度を、Diff-QuikBaxterDuedingenSwitzerlandで染色し、そして光学顕微鏡分析によって評価した。この結果生じた集団の純度は、好中球は、少なくとも95であった。免疫蛍光:CD89の表面発現を、PEコンジュゲート抗CD89及びアイソタイプのマッチしたPEコンジュゲートコントロールmAbの飽和濃度で細胞をインキュベーションした後、フローサイトメトリーによって解析した。細胞培養:好中球を、サイトカイン又はLPS及び/又は抗体の存在下若しくは不存在下で、指示された時間、完全培養培地10ウシ胎児血清[FCS]及び200IU/mLペニシリン/100μg/mLストレプトマイシンを含むRPMI1640,すべてLifeTechnologiesBaselSwitzerlandからを用いて、1×106/mLで培養した。別途指示のない限り、細胞は、17.5μg/mL抗CD89mAb又は10mg/ml血漿IgAで刺激された。GM-CSFNovartisPharmaGmbHNuernbergGermanyは、25ng/mLで、抗FasmAbCH11は、1μg/mLで用いた。LPSSigmaAldrichBuchsSwitzerlandは、100ng/mlで用いた。ヤギ抗マウスGoatantimouseは、30μg/mlで、G-CSFAventisPharmaZurichSwitzerlandは、25ng/mLで、IFN-γRDSystemsWiesbadenNordenstadtGermanyは、85ng/mLで、IFN-αPBLBiomedicalLaboratoriesAlexisによって販売は、500U/mLで、TNF-αRDSystemsWiesbadenNordenstadtGermanyは、25ng/mLで、そしてLTATHartungUniversityofKonstanzからの寄贈は、10μg/mLで用いた。カスパーゼ阻害剤qVD-OPhキノリン-Val-Asp-ジフルオロフェノキシメチルケトンは、20μMで用いた。細胞死及びアポトーシスの判定:細胞死は、1μM臭化エチジウムの取り込み、及びフローサイトメトリー解析FACSCaliburBectonDickinsonによって評価した。細胞死の形態を判定するために、形態学的解析morphologicanalysis及びアネキシンV解析を行なった。形態学的解析の場合には、細胞を15時間培養し、そしてGiemsaMayGruenwaldDiffQuikで染色した。630/1.4油浸oil対物レンズを備えたAxiovert35顕微鏡を用いたCarlZeissHeidelbergGermany。画像をAdobePhotoshop50ソフトウェアAdobeSanJoseCAを用いて処理した。細胞死がアポトーシスであるか否かを判定するために、好中球メンブレン上のホスファチジルセリンPSの再分布redistributionを、ヨウ化プロピジウムPIGuntenSetalBlood200510614231431からの存在下で、アネキシンV染色及びフローサイトメトリーFACSCaliburBectonDickinsonによって、市販のアポトーシス検出キットを用いて製造業者のプロトコルBDBiosciencesに従って測定した。アポトーシスの典型的な顕著な特徴であるDNA断片化を検出するために、細胞を低張蛍光色素液50μg/mlヨウ化プロピジウム,0.1クエン酸ナトリム,0.1TritonX-100によって透過性処理すると、細胞からのDNA多量体182bpの漏出がもたらされる。次いで、この残存している、減少した量のDNAをDNAインターカレート剤、ヨウ化プロピジウムによって染色し、そしてフローサイトメトリーによって解析したNicolettiIetalJImmunolMethods1991139271279。統計的解析:統計的解析を、スチューデントのt検定を用いることによって行なった。平均レベルが提示される場合には、平均の標準誤差SEM及び独立した実験の数nがそれぞれの場合に指摘される。0.05未満の確率値が統計的に有意であると見なされた。実施例1:LPS又はGM-CSFを用いての刺激に対する好中球のCD89発現好中球を上記に述べられているように健常者ボランティアの血液から単離した。細胞を炎症性刺激物100ng/mlLPS又は10ng/mlGM-CSFの存在下、又は不存在下で8時間インキュベートした。次いで、この細胞をフィコエリスリンPE標識抗CD89又はPE標識アイソタイプマッチコントロール抗体と共にインキュベートした。次にCD89発現をフローサイトメトリーによって評価した。好中球は、炎症性刺激物の不存在下でCD89を発現し図1A、そして細胞をLPS図1A、左のパネル又はGM-CSF図1A、右のパネルのような炎症性刺激物の存在下でインキュベートすると、CD89の発現が増加した。コントロール抗体を用いて染色した細胞のプロフィルもまた示されている。図1Bは、LPS及びGM-CSFでのCD89アップレギュレーションの時間的経過を示す。発現の有意なアップレギュレーションが4時間後に観察された。実施例2:CD89ライゲーションは好中球細胞死を刺激する好中球を上記に述べられているように単離した。次いでこの細胞を、それぞれ、ヤギ抗マウス抗体GaMの存在下、及び不存在下で、抗CD89モノクローナル抗体、抗Fas抗体、抗体Fas抗CD89と共にインキュベートした。細胞死を、臭化エチジウムの取り込み、及びフローサイトメトリー解析によって評価した。抗CD89モノクローナル抗体mAbによるCD89のライゲーションは、好中球細胞死の有意な増加をもたらし図2A、抗Fasによって誘導された細胞死の場合と同様であった。CD89媒介死は、更にクロスリンキングによって有意に増強された。22時間培養の結果を示したn=5。B22時間の好中球培養における抗CD89mAbの濃度作用曲線concentrationeffectcurveでは、17.5μg/mln=5において最大死作用を示した図2B。血漿から単離されたIgA、又はモノクローナルIgA、及び他のFcαを含む分子は、特にCD89のクロスリンキングが行なわれる場合に、同様な作用を示すであろう。実施例3:血清IgA及びCD89は、好中球細胞死を誘導する血液好中球を上記に述べられているように健常者ボランティアから単離した。この細胞を種々の炎症性刺激物の存在下で、10mg/mlにおいて血漿IgA図3A、又は17.5μg/mlにおいて抗CD89mAb図3Bの存在下又は不存在下で、培地でインキュベートした。IgAは、活性化された好中球中で細胞死を明瞭に増加させた図3A。同様な結果を、抗CD89モノクローナル抗体の場合に得た図3Bに示されていた。全血漿IgA単量体及び二量体を含む、及び血漿IgAの単量体副分画monomericsubtractionは、好中球細胞死を誘導する際に同じように有効であった図3C。実施例4:強直性脊椎関節炎患者由来の好中球は、高いレベルのCD89を発現する好中球を健常者ボランティア及び強直性脊椎関節炎患者の血液から単離した。次いでそれらをPE標識抗CD89mAb又はPE標識コントロール抗体と共にインキュベートし、そしてCD89発現をフローサイトメトリーによって解析した。強直性脊椎関節炎患者由来の好中球は、健常者ドナー図4、点線と比較してCD89の表面発現の有意な増加を示した図4、実線。好中球の同じサンプルのアイソタイプマッチコントロールmAbでの染色の場合も示されている。実施例5:患者から単離した好中球は、抗CD89細胞死及びIgA媒介細胞死に対して感受性が増している好中球をコントロール目的のための健常者ボランティアの血液から、そして関節炎患者関節リウマチ、強直性脊椎関節炎、乾癬性関節炎、及び原因不明unknownの関節炎に罹患している患者の関節/滑液から単離し、そして抗CD89抗体の存在下又は不存在下、又は培地において24時間培養した;その後、好中球の細胞死を上記に述べられているように解析した。抗CD89は、関節炎患者由来の滑液の好中球における高い比率の死をもたらした。死の比率は、図5Aに示されているように健常者ボランティアの血液からの好中球のそれと比較して有意に高かった。同じ作用は10mg/mlでの血漿IgAの場合に観察された図5B。実施例6:パン-カスパーゼ阻害剤qVD-OPhは、好中球におけるIgA媒介細胞死を抑制する好中球を上記に述べられているように健常者ボランティアの血液から単離した。次いで、この細胞を、炎症性刺激物LPS,GM-CSFの存在下、又は不存在下で、24時間培養し、そしてIgA及び/又はパン-カスパーゼ阻害剤qVD-OPh20μMの不存在下、又は存在下で細胞死を評価した。この結果を図6に示した。このパン-カスパーゼ阻害剤qVD-OPhは、LPS及びGM-CSFの存在下及び不存在下の双方で血漿IgA媒介好中球細胞死をブロックした。コントロールとして、抗FasmAbの場合のアポトーシス誘導及びqVD-OPhでのその抑制が示されている。こうした知見によって、IgA媒介好中球細胞死は、カスパーゼ依存性のプログラムされた細胞死、すなわち、アポトーシスであることが示された。実施例7:アネキシンV染色によって示される、好中球に結合するプールされた血清IgAに対してのホスファチジルセリン再分布redistribution好中球を上記に述べられているように健常者ボランティアの血液から単離し、血漿IgA又は抗CD89mAbの存在下、又は不存在下で、培地中で、GM-CSF又はLPSを含む培地中でインキュベートした。コントロールとして好中球をアポトーシス誘導体抗抗FasmAbを加えてインキュベートした。6時間後、ホスファチジルセリン分布をアネキシンV染色及びフローサイトメトリーによって評価した。10時間後、DNA断片化をヨウ化プロピジウム染色及びフローサイトメトリーによって評価した。GM-CSF又はLPSの存在下でプールされた血清IgAライゲーションpooledserumIgAligationは、強いホスファチジルセリン再分布図7A、そしてDNA断片化図7Bをもたらし、双方とも好中球のアポトーシスの誘導を示している。同等な結果が、血漿IgAの代わりに、抗CD89mAbを用いて得られた図7A、7B。こうした散布図scatterplotsによって、5からの1つの代表的な実験が示されている。各クワドラントquadrantにおける細胞のパーセンテージが示されている。図7Bでは、アポトーシス細胞の相対数パーセンテージが各ヒストグラム中に示されている。実施例8:CD89媒介好中球死の形態学好中球を上記に述べられているように健常者ボランティアの血液から単離した。それらを、抗CD89の存在下及び不存在下で、培地だけ、GM-CSF又はLPSの存在下において15時間培養した。それらをGiemsaMayGruenwaldDiffQuikで染色し、顕微鏡を使用することによって検討した。CD89媒介好中球死によって、古典的なアポトーシス細胞体積の減少、核の断片化の典型的な形態学的特徴が示された。IgA媒介好中球死によって、同じ形態が示されることが見込まれる。"