"明細書に記載の発明。発明の要旨本発明者らは、本明細書において、広汎な種々の高分子を吸着し得る吸着表面を有する微粒子を形成する方法を発明した。この微粒子は、ポリマーおよび界面活性剤の両方から構成される。本発明の微粒子は、そのような高分子を、現在利用可能な微粒子よりも効率的に吸着する。その微粒子は、ポリマー例えば、ポリα-ヒドロキシ酸、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエーテル、ポリ無水物、PACA、ポリシアノアクリレートなどから誘導され、そして界面活性剤例えば、カチオン性、アニオン性、または非イオン性の界面活性剤とともに形成される。この界面活性剤は、組合せで使用され得る。さらに、本発明者らは、これらの微粒子がウイルス抗原の吸着の改善を達成し、そしてPVAのみを使用するプロセスにより形成される微粒子と比較して、優れた免疫応答を提供することを発見した。PVAのみを用いて作製された微粒子は、いくつかの高分子を吸着し得るが、他の界面活性剤を単独、組合せまたはPVAとの組合せで使用する本発明の微粒子は、広汎な種々の高分子を吸着する。従って、次いで、本発明は、そのような微粒子、ならびにそれらを生成するためのプロセスおよびその微粒子を用いる方法に主に関する。1つの実施形態において、本発明は、吸着剤表面を有する微粒子に関し、ここで、その微粒子は、以下からなる群より選択されるポリマーを含む:ポリα-ヒドロキシ酸、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレート。別の実施形態において、本発明は、さらに、その微粒子の表面に吸着された選択された高分子を含む、そのような微粒子例えば、医薬、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質、ホルモン、酵素、転写メディエーター、翻訳メディエーター、代謝経路の中間体、免疫調節剤、抗原、アジュバント、またはそれらの組合せなどに関する。別の実施形態において、本発明は、微粒子組成物に関する。この微粒子組成物は、本発明の微粒子に吸着された、選択された高分子および薬学的に受容可能な賦形剤を含む。別の実施形態において、本発明は、吸着剤表面を有する微粒子を生産する方法に関する。この方法は、以下の工程を包含する:aポリα-ヒドロキシ酸、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレートここで、そのポリマーは、有機溶媒中で約1~約30の濃度で存在するからなる群より選択されるポリマーを含むポリマー溶液と;そのポリマー溶液に対するアニオン性、カチオン性または非イオン性の界面活性剤ここで、その界面活性剤は、0.001~10w/wの界面活性剤対ポリマーの比で存在するとを合わせて、ポリマー/界面活性剤混合物を形成する工程;bそのポリマー/界面活性剤混合物を分散させる工程;cその有機溶媒を除去する工程;およびdその微粒子を回収する工程。好ましくは、その有機溶媒を取り除く前にそのポリマー/界面活性剤混合物を乳化してエマルジョンを形成させる。別の実施形態において、本発明は、上記方法によって調製された微粒子に関する。別の実施形態において、本発明は、以下の工程を包含する、吸着された高分子を有する微粒子を生産するための方法に関する:aポリD,L-ラクチド-コ-グリコリドを含むポリマー溶液ここで、そのポリマーは、有機溶媒中に約3~約10の濃度で存在すると;アニオン性、カチオン性または非イオン性の界面活性剤ここで、その界面活性剤は、0.001~10w/wの界面活性剤対ポリマーの比で存在するとを合わせて、ポリマー/界面活性剤混合物を形成する工程;bそのポリマー/界面活性剤混合物を分散させる工程;cそのエマルジョンからその有機溶媒を除去する工程;dその微粒子を回収する工程;およびeその微粒子の表面に高分子を吸着させる工程であって、その高分子は、以下からなる群より選択される工程:医薬、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ホルモン、酵素、転写メディエーター、翻訳メディエーター、代謝経路における中間体、免疫調節因子、抗原、アジュバント、およびそれらの組合せ。好ましくは、その有機溶媒を除去する前にそのポリマー/界面活性剤混合物を乳化して、エマルジョンを形成させる。別の実施形態において、本発明は、上記の所望の方法によって調製された吸着された高分子を有する微粒子に関する。別の実施形態において、吸着剤微粒子組成物を生成する方法に関する。この方法は、その表面上に高分子を有する吸着剤微粒子と、薬学的に受容可能な賦形剤とを組み合わせる工程を包含する。さらに別の実施形態において、本発明は、脊椎動物被験体に、高分子を送達する方法に関する。この方法は、上記の組成物を脊椎動物被験体に投与する工程を包含する。さらなる実施形態において、本発明は、脊椎動物被験体において細胞性免疫応答を惹起するための方法に関する。この方法は、本発明の微粒子に吸着された、治療的に有効な量の選択された高分子を脊椎動物に投与する工程を包含する。別の実施形態において、本発明は、免疫方法に関する。この方法は、脊椎動物に、治療的有効量の上記の微粒子組成物を投与する工程を包含する。その組成物は、必要に応じて、結合していない高分子を含み得、そしてまた、必要に応じて、リン酸アルミニウムのようなアルミニウム塩を含むアジュバントを含み得る。好ましい実施形態において、その微粒子は、ポリα-ヒドロキシ酸から形成され;より好ましくは、ポリD,L-ラクチド-コ-グリコリドから形成され;そして最も好ましくは、ポリD,L-ラクチド-コ-グリコリドである。本発明の別の実施形態において、微粒子調整物は、イオン表面活性剤とのサブミクロンエマルジョンを包含する。MF59または他のものは、塩基粒子として使用され得るが、イオン表面活性剤は、以下を含み得るがそれらに限定されない:ジオレオイル-3-トリメチルアンモニウムプロパンDOTAP、ジオレオイル-sn-グリセロ-エチルホスホコリンDEPCおよびジオレオイルホスファチジン酸DPA、これらは各々スクアレン中で可溶性である。非網羅的な以前に記載された吸着剤微粒子の各々はまた、必要に応じて、それらに捕捉された高分子を有し得る。本発明はまた、イオン性界面活性剤を用いて処方された油滴エマルジョンを含むミクロエマルジョンに関する。そのような組成物は、容易に、DNA、タンパク質および他の抗原性分子のような高分子を吸着する。アジュバント組成物は、少なくとも1つのCpGモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含み得る。そのアジュバント組成物はまた、正に荷電したエマルジョンを生じる任意の成分を含み得る。この油滴エマルジョンは、好ましくは、代謝可能な油および乳化剤を含む。これらの薬剤は、好ましくは、実質的にすべてが1μm未満の直径である湯的を有する、水中油エマルジョンの形態で存在する。好ましくは、この組成物は、ポリオキシプロピレン-ポリオキシエチレンブロックコポリマーの非存在下で存在する。この油は、好ましくは、動物油、不法は炭化水素、テルペノイド例えば、スクアレンまたは植物油である。この組成物は、好ましくは、0.5~20容量の油を水性媒体中に含む。この乳化剤は、好ましくは、非イオン性界面活性剤例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノ、ジ、もしくはトリエステルまたはソルビタンモノ、ジもしくはトリエーテルを含む。好ましくは、その組成物は、約0.01重量~約0.5重量の乳化剤を含む。そのオリゴヌクレオチドは好ましくは、少なくとも1つのホスホロチオエート結合またはペプチド核酸結合を含む。本発明の好ましい実施形態において、そのオリゴヌクレオチドは、以下からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む:配列番号1~28。本発明の他の好ましい実施形態において、そのオリゴヌクレオチドは、2つのプリンがそのモチーフの5’直ぐに隣接し、そして2つのピリミジンがそのモチーフの3’直ぐに隣接するCpGモチーフを含む。本発明の他の好ましい実施形態において、そのオリゴヌクレオチドは、以下からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む:配列番号19~28。配列番号28において最も好ましいのは、配列番号28にである。本発明のいくつかの好ましい実施形態において、そのアジュバント組成物は、さらに、別々の免疫刺激剤を含む。この刺激剤は、好ましくは以下からなる群より選択される:ミョウバン、細菌細胞壁成分、およびムラミルペプチド。このアジュバント組成物は、微粒子の形態であり得る。本発明はまた、免疫原性組成物に関する。この組成物は、免疫刺激量の抗原性物質、および免疫刺激量の本明細書に記載されるアジュバント組成物を含む。好ましくは、その抗原性物質は、タンパク質、タンパク質-ポリサッカリド、タンパク質-リポポリサッカリド、ポリサッカリド、およびリポポリサッカリドからなる群四厘選択される。本発明のいくつかの実施形態において、その免疫原性組成物は、CpGオリゴヌクレオチドとともに、ポリラクチド-コ-グリコリド微粒子に吸着された抗原性物質を含む。この吸着された抗原性物質は、好ましくは、組換えタンパク質である。本発明の好ましい実施形態において、その抗原性物質は、ウイルス例えば、C型肝炎HCV、B型肝炎HBV、単純ヘルペスウイルスHSV、ヒト免疫不全ウイルスHIV、サイトメガロウイルスCMV、インフルエンザウイルスflu、および狂犬病ウイルスに由来する。好ましくは、その抗原性物質は、HSV糖タンパク質gD、HIV糖タンパク質gp120、およびHIVp55gagからなる群より選択される。本発明の他の好ましい実施形態において、その抗原性物質は、細菌例えば、コレラ、ジフテリア、破傷風、百日咳、Neisseriameningitidis、Neisseriagonorrhoeae、Helicobacterpylori、およびHaemophilusinfluenzaに由来する。本発明の他の好ましい実施形態において、この抗原性物質は、寄生生物例えば、マラリア寄生生物に由来する。本発明はまた、宿主細胞において免疫応答を刺激する方法に関する。この方法は、その動物に、本明細書において記載される免疫原性組成物を免疫応答を誘発するに有効な量で投与する工程を包含する。その宿主動物は、好ましくは、哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。本発明はまた、ウイルス、細菌または寄生生物の感染に対して宿主動物を免疫する方法に関する。この方法は、その動物に、本明細書に記載される免疫原性組成物を、保護的応答を誘発するに有効な量で投与する工程を包含する。その宿主細胞は.好ましくは、哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。本発明はまた、宿主動物におけるTh1免疫応答を増強する方法に関する。この方法は、その動物に、本明細書に記載される免疫原性組成物を、Th1免疫応答を誘発するに有効な量で投与する工程を包含する。その宿主動物は、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。本発明のこれらおよび他の実施形態は、本明細書における開示に鑑み、当業者には容易になる。例えば、本発明は以下の項目を提供する。項目1吸着性表面を有するミクロエマルジョンであって、該ミクロエマルジョンは、以下:a代謝可能な油;およびb乳化剤;を含む微小滴エマルジョンを含み、ここで、該乳化剤は、界面活性剤を含む、ミクロエマルジョン。項目2前記油および前記乳化剤が、油滴を有する水中油型エマルジョンの形態で存在し、該油滴の実質的に全てが、直径1ミクロン未満であり、そして該組成物が、ポリオキシプロピレン-ポリオキシエチレンブロックコポリマーの非存在下で存在する、項目1に記載のミクロエマルジョン。項目3前記油が、動物油、不飽和炭化水素、テルペノイドおよび植物油からなる群のメンバーである、項目2に記載のミクロエマルジョン。項目4前記油が、スクアレンであるテルペノイドである、項目3に記載のミクロエマルジョン。項目5前記組成物が、0.5~20容量の前記油を水性媒体中に含む、項目2に記載のミクロエマルジョン。項目6前記組成物が、0.01~0.5重量の前記乳化剤を含む、項目1に記載のミクロエマルジョン。項目7前記乳化剤が、非イオン性界面活性剤を含む、項目1に記載のミクロエマルジョン。項目8前記乳化剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノエステル、ポリオキシエチレンソルビタンジエステルもしくはポリオキシエチレンソルビタントリエステルまたはソルビタンモノエーテル、ソルビタンジエーテルもしくはソルビタントリエーテルを含む、項目7に記載のミクロエマルジョン。項目9前記乳化剤が、カチオン性界面活性剤を含む、項目1に記載のミクロエマルジョン。項目10前記カチオン性界面活性剤が、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ベンザルコニウムクロリド、ジメチルジオクトデシルアンモニウムブロミド、DOTAP、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムクロリド、セチルピリジニウムクロリド、メチルベンゼトニウムクロリドおよび4-ピコリンドデシル硫酸からなる群より選択される、項目9に記載のミクロエマルジョン。項目11前記組成物が、0.01~0.5重量の前記乳化剤を含む、項目9に記載のミクロエマルジョン。項目12前記乳化剤が、アニオン性界面活性剤を含む、項目1に記載のミクロエマルジョン。項目13その表面に吸着された生物学的に活性な高分子をさらに含み、該生物学的に活性な高分子が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオシド、抗原、薬剤、ホルモン、酵素、転写メディエーターまたは翻訳メディエーター、代謝経路における中間体、イムノモジュレーターおよびアジュバントからなる群より選択される少なくとも1つのメンバーである、項目1に記載のミクロエマルジョン。項目14前記高分子が、CpGオリゴヌクレオチド、ミョウバン、細菌細胞壁成分およびムラミルペプチドからなる群より選択されるアジュバントである、項目13に記載のミクロエマルジョン。項目15前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも1つのホスホロチオエート結合を含む、項目14に記載のミクロエマルジョン。項目16前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも1つのペプチド核酸結合を含む、項目15に記載のミクロエマルジョン。項目17前記オリゴヌクレオチドが、配列番号1~28からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、項目16に記載のミクロエマルジョン。項目18前記オリゴヌクレオチドが、CpGモチーフのすぐ5’側に2つのプリンが、そして該モチーフのすぐ3’側に2つのピリミジンが隣接した該CpGモチーフを含む、項目14に記載のミクロエマルジョン。項目19前記抗原がウイルス由来である、項目13に記載のミクロエマルジョン。項目20前記ウイルス抗原が、ウイルスサブユニットを含む、項目19に記載のミクロエマルジョン。項目21前記ウイルスが、C型肝炎ウイルスHCV、B型肝炎ウイルスHBV、単純ヘルペスウイルスHSV、ヒト免疫不全ウイルスHIV、サイトメガロウイルスCMV、インフルエンザウイルスfluおよび狂犬病ウイルスからなる群より選択される、項目19に記載のミクロエマルジョン。項目22前記抗原が、HSV糖タンパク質gD、HIV糖タンパク質gp120およびHIVp55gagからなる群より選択される、項目19に記載のミクロエマルジョン。項目23前記抗原が、細菌由来である、項目13に記載のミクロエマルジョン。項目24前記細菌が、コレラ、ジフテリア、破傷風、百日咳、HelicobacterpyloriおよびHaemophilusinfluenzaからなる群より選択される、項目23に記載のミクロエマルジョン。項目25前記抗原性物質が寄生生物由来である、項目13に記載のミクロエマルジョン。項目26前記寄生生物が、マラリア寄生生物を含む、項目25に記載のミクロエマルジョン。項目27宿主動物において免疫応答を誘導する方法であって、該動物に項目13~26のいずれかに記載のミクロエマルジョンを投与する工程を包含する、方法。項目28前記宿主動物が哺乳動物である、項目27に記載の方法。項目29前記哺乳動物がヒトである、項目28に記載の方法。項目30宿主動物をウイルス感染、細菌感染または寄生生物感染に対して免疫する方法であって、該動物に、防御応答を誘導するに有効な量の項目13~26のいずれかに記載のミクロエマルジョンを投与する工程を包含する、方法。項目31前記宿主動物が哺乳動物である、項目30に記載の方法。項目32前記哺乳動物がヒトである、項目31に記載の方法。項目33Th1免疫応答を宿主動物において誘導する方法であって、該動物に、項目13~26のいずれかに記載のミクロエマルジョンを投与する工程を包含する、方法。項目34項目13に記載のミクロエマルジョンおよび吸着性表面を有する微粒子を含む組成物であって、該微粒子が、以下:ポリα-ヒドロキシ酸、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物およびポリシアノアクリレートからなる群より選択されるポリマー;ならびに第2の界面活性剤、を含む、組成物。項目35前記微粒子が、その表面に吸着された生物学的に活性な第1の高分子をさらに含み、該生物学的に活性な第1の高分子が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオシド、抗原、薬剤、ホルモン、酵素、転写メディエーターまたは翻訳メディエーター、代謝経路における中間体、イムノモジュレーターおよびアジュバントからなる群より選択される少なくとも1つのメンバーである、項目34に記載の組成物。項目36前記微粒子が、該微粒子内にカプセル化された生物学的に活性な第2の高分子をさらに含み、該生物学的に活性な第2の高分子が、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオシド、抗原、薬剤、ホルモン、酵素、転写メディエーターまたは翻訳メディエーター、代謝経路における中間体、イムノモジュレーターおよびアジュバントからなる群より選択される少なくとも1つのメンバーである、項目34に記載の組成物。項目37前記微粒子が、ポリL-ラクチド、ポリD,L-ラクチドおよびポリD,L-ラクチド-コ-グリコリドからなる群より選択されるポリα-ヒドロキシ酸を含む、項目34~36のいずれかに記載の組成物。項目38前記微粒子が、ポリD,L-ラクチド-コ-グリコリドを含む、項目34~36のいずれかに記載の組成物。項目39前記第2の界面活性剤が、カチオン性界面活性剤である、項目34~36のいずれかに記載の組成物。項目40前記第2の界面活性剤が、アニオン性界面活性剤である、項目34~36のいずれかに記載の組成物。項目41前記第2の界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、項目34~36のいずれかに記載の組成物。項目42前記生物学的に活性な第1の高分子が、gp120、p24gag、p55gagおよびインフルエンザA血球凝集素抗原からなる群より選択される抗原である、項目35~36のいずれかに記載の組成物。項目43前記生物学的に活性な第1の高分子が、gp120をコードするポリヌクレオチドである、項目35~36のいずれかに記載の組成物。項目44前記生物学的に活性な第2の高分子が、アジュバントである、項目36に記載の組成物。項目45前記微粒子に吸着された前記アジュバントが、アルミニウム塩である、項目34~36のいずれかに記載の組成物。項目46薬学的に受容可能な賦形剤をさらに含む、項目34~45のいずれかに記載の組成物。項目47吸着されていないアジュバントをさらに含む、項目34~46のいずれかに記載の組成物。項目48前記吸着されていないアジュバントが、CpGオリゴヌクレオチド、LTK63、LTR72、MPL、QS21、QuilAおよびアルミニウム塩からなる群より選択されるメンバーである、項目47に記載の組成物。項目49前記吸着されていないアジュバントが、リン酸アルミニウムであるアルミニウム塩である、項目48に記載の組成物。項目50治療有効量の高分子を脊椎動物被験体に送達する方法であって、該脊椎動物被験体に、項目35、36、42、43、44、47または48のいずれかに記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。項目51項目35、36、42、43、44、47または48のいずれかに記載の組成物の、疾患の診断のための使用。項目52項目35、36、42、43、44、47または48のいずれかに記載の組成物の、疾患の処置のための使用。項目53項目35、36、42、43、44、47または48のいずれかに記載の組成物の、ワクチンのための使用。項目54項目35、36、42、43、44、47または48のいずれかに記載の組成物の、免疫応答の惹起のための使用。発明の詳細な説明本発明は、吸着した高分子を有する微粒子が改善された免疫応答を示すこと、およびCpGオリゴヌクレオチドおよび代謝可能なな油もしくは生分解性のポリ間の組合せを含むアジュバントが免疫応答を増強するという驚くべき発見に基づく。さらに、吸着された高分子および油エマルジョンの組合せは、強力な免疫応答を惹起するために有用である。本発明の実施は、タンパク質に言及しなければ、当該分野内の、化学、高分子化学、生化学、分子生物学、免疫学、および薬理学の従来の方法を使用する。そのような技術は、文献に完全に説明されている。例えば、Remington’sPharmaceuticalSciences、第18版Easton、Pennsylvania:MackPublishingCompany、1990;MethodsInEnzymologyS.ColowickandN.Kaplan、eds.、AcademicPress、Inc.;HandbookofExperimentalImmunology、第I-IV巻D.M.WeirおよびC.C.Blackwell、編、1986、BlackwellScientificPublications;Sambrook,ら、MolecularCloning:ALaboratoryManual第2版、1989;HandbookofSurfaceandColloidalChemistryBirdi、K.S.編、CRCPress、1997およびSeymour/Carraher’sPolymerChemistry4thedition、MarcelDekkerInc.、1996を参照のこと。本明細書において引用される、すべての刊行物、特許および特許出願は、それらが上記であろうと下記であろうと、その全体が本明細書において参考として援用される。明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形a、an、およびtheは、その内容が明らかにそうでないことを示さない限り、複数の参照形態を包含する。従って、例えば、用語微粒子とは、1つ以上の微粒子などを言及する。A:定義本発明を記載するにあたり、以下の用語を使用し、そして以下に示されるように定義されることが意図される。本明細書において使用される場合、用語微粒子とは、約10nm~約150μmの、より好ましくは約200nm~約30μmの直径、そして最も好ましくは約500nm~約10μmの直径の粒子をいう。好ましくは、その微粒子は、針および毛細管を閉塞させることなく、非経口投与または粘膜投与を可能にする直径のものである。微粒子サイズは、光子相関比色計、レーザ回折法、および/または走査電子顕微鏡のような、当該分野において周知の技術によって容易に決定される。用語粒子とはまた、本明細書において定義される微粒子をも言及するように使用され得る。本明細書において使用するための微粒子は、滅菌可能で、非毒性であり、そして生分解性である材料から形成される。そのような材料としては、限定することなく、以下が挙げられる:ポリa-ヒドロキシ酸、ポリヒドロキシ酪酸、ポリシアノラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、PACA、およびポリシアノアクリレート。好ましくは、本発明を用いた使用のための微粒子は、以下に由来する:ポリα-ヒドロキシ酸、特に、ポリラクチドPLAまたはD,L-ラクチドとグリコリドもしくはグリコール酸とのコポリマー例えば、ポリD,L-ラクチド-コ-グリコリドPLGまたはPLGA、またはD,L-ラクチドとカプロラクトンとのコポリマー。微粒子は、任意の種々のポリマー性出発物質に由来し得る。これは、種々の分子量を有し、そしてPLGのようなコポリマーの場合には、種々のラクチド:グリコリド比を有する。その選択は、大部分選択の問題であって、これは、同時投与される高分子に一部依存する。これらのパラメータは、以下により詳細に記載される。本明細書において使用される場合、用語界面活性剤とは、表面活性剤surfactantおよびエマルジョン安定化剤を包含する。アニオン性界面活性剤としては以下が挙げられるがそれらに限定されない:SDS、SLS、DSSジスルホスクシネート、硫酸化脂肪アルコールなど。カチオン性界面活性剤としては以下が挙げられるがそれらに限定されない:セトリミドCTAB,塩化ベンザルコニウム、DDAジメチルジオクトデシルアノもニウムブロミド、DOTAPなど。非イオン性界面活性剤としては、以下が挙げられるがそれらに限定されない:ソルビタンエステル、ポリソルベート、ポリオキシエチル化グリコールモノエーテル、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、ポロキサマーなど。用語正味のnetの正電荷とは、本明細書において使用される場合、その微粒子の表面上の電荷がPVAを用いて作られた対応する微粒子の表面上の電荷よりも正であることを意味する。同様に、陽後正味の負電荷とは、本明細書において使用される場合、その微粒子の表面上の電荷がPVAを用いて作られた対応する微粒子の表面上の電荷よりも負であることを意味する。正味の電荷は、カチオン性またはアニオン性の界面活性剤を用いて作製されたその微粒子のζ電位動電学的電位ともいわれると、PVAで作製された対応する微粒子と比較することによって評価され得る。従って、正味の正電荷を有する微粒子表面は、PVAを用いて作製された微粒子の表面のζ電位よりも大きなζ電位を有し、そして正味の負電荷を有する微粒子表面は、PVAを用いて作製された微粒子の表面のζ電位よりも小さなζ電位を有する。明白なように、本発明の微粒子についての正味の電荷は、対応するPVA微粒子のζ電位に比較して算出される。用語ζ電位とは、本明細書において使用される場合、すべての固体および液体の界面を横切って存在する電気的電位、すなわち、荷電されたコロイド粒子を囲むイオンの拡散層を横切る電位をいう。ζ電位は、電気泳動移動度すなわち、当該分野で周知の技術を用いて測定されるべき表面に接触して配置される荷電された電極の間をコロイド粒子が移動する速度から算出され得る。用語高分子とは、本明細書において使用される場合、制限することなく、医薬、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ホルモン、酵素、転写メディエーター、翻訳メディエーター、代謝経路における中間体、免疫調節剤,抗原、アジュバント、またはそれらの組合せを包含する。本発明において使用するための粒子状の高分子は、以下により詳細に記載される。用語医薬pharmaceuticalとは、抗生物質、抗ウイルス剤、増殖因子、ホルモンなどのような生物学的に活性な化合物をいう。これらは以下により詳細に記載される。用語ポリヌクレオチドとは、生物学的にアッセイな例えば、免疫原性または治療的タンパク質またはポリペプチドをコードする核酸分子である。ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの性質に依存して、ポリヌクレオチドは、10ほどのヌクレオチドを含み得、例えば、ここで、ポリヌクレオチドは、抗原をコードする。さらに、ポリヌクレオチドとは、二本鎖および一本鎖の両方の配列を含み得、そして、以下のことをいうがそれに限定されない:ウイルス、原核生物または真核生物のmRNAからのcDNA、ウイルス例えば、RNAおよびDNAのウイルスおよびレトロウイルスまたは原核生物DNAからのゲノムRNAおよびDNAの配列、および特に、合成DNA配列。この用語はまた、DNAおよびRNAの公知の塩基アナログのいずれかを包含する配列を包含し、そしてその核酸分子が、治療的または抗原性のタンパク質をコードする限り、ネイティブ配列に対する改変例えば、欠失、付加および置換一般に天然で保存的であるを包含する。これらの改変は、部位特異的変異誘発を介して意図的であり得るが、または抗原を生成する宿主の変異を介して偶然であり得る。用語ポリペプチドおよびタンパク質とは、アミノ酸残基のポリマーをいい、そして最小限の長さの生成物には限定されない。従って、ペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、マルチマーなどは、その定義に入る。全長タンパク質およびそのフラグメントの両方は、その定義に包含される。この用語はまた、そのタンパク質が免疫学的応答を惹起する能力を維持するか、またはそのタンパク質が投与される被験体に対する治療的効果を有する限り、ネイティブ配列に対する改変例えば、欠失、付加および置換を包含する一般に、天然で保存的である。抗原とは、その抗原が本発明に従って提示されるときの細胞性の抗原特異的免疫応答または体液性抗体応答を起こすように宿主の免疫系を刺激し得る1つ以上のエピトープを含む分子を意味する。抗原は、それ自身が、または別の分子と組み合わせて存在するときに細胞性または体液性応答を惹起し得る。通常、エピトープは、約3~15、一般的に約5~15のアミノ酸を含む。所定のタンパク質のエピトープは、当該分野において周知の多数のエピトープマッピング技術を用いて同定され得る。例えば、EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology、第66巻GlennE.Morris編、1996HumanaPress、Totowa、NewJerseyを参照のこと。例えば、直鎖状のエピトープは、例えば、固体支持体の上で多数のペプチドを同時に合成することそのペプチドはタンパク質分子の部分に対応する、およびそのペプチドがその支持体になおも付着される間にそのペプチドと抗体とを反応させることによって、決定され得る。そのような技術は当該分野において公知であり、そして例えば、以下に記載される:米国特許第4,708,871号;Geysenら1984Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:3998-4002;Geysenら1986Molec.Immunol.23:709-715、これらすべては、その全体が本明細書において参考として援用される。同様に、コンフォメーション的エピトープは、アミノ酸の空間的コンフォメーションを決定することによって容易に同定される例えば、X線結晶学、および二次元核磁気共鳴。例えば、EpitopeMappingProtocols、同上を参照のこと。用語抗原とは、本明細書において使用される場合、サブユニット抗原すなわち、その抗原が天然で付随する生物全体から分離されそして別個となっている抗原および殺傷され、減弱されまたは不活化された細菌、ウイルス、寄生生物または微生物をいう。抗イディオタイプ抗体またはそのフラグメントのような抗体ならびに抗原または抗原性決定基を模倣し得る合成ペプチドミモトープもまた、本明細書において使用される抗原の定義の中に入る。同様に、インビボ例えば、遺伝子治療および核酸免疫適用治療的または免疫学的タンパク質、または抗原性決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、本明細書における抗原の定義に含まれる。さらに、本発明の目的のために、抗原は、いくつかの公知のウイルス、細菌、寄生生物および真菌、ならびに任意の種々の腫瘍抗原のいずれかに由来し得る。さらに、本発明の目的のために、抗原とは、そのタンパク質が免疫学的応答を惹起する能力を維持する限り、ネイティブ配列に対する改変例えば、欠失、付加、および置換通常天然で保存的であるを包含するタンパク質をいう。これらの改変は、部位特異的変異誘発を介して意図的であり得るが、または抗原を生成する宿主の変異を介して偶然であり得る。抗原または組成物に対する免疫学的応答は、目的の組成物に存在する分子に対する体液性および/または細胞性の免疫応答の、被験体における発生をいう。本発明の目的のために、体液性免疫応答とは、抗体分子によって媒介される免疫応答をいう。他方、細胞性免疫応答は、Tリンパ球および/または他の白血球によって媒介されるものである。細胞性免疫の重要な1つの局面は、細胞傷害性T細胞CTLによる抗原特異性応答を包含する。CTLは、腫瘍組織適合性複合体MHCによってコードされるタンパク質と会合において提示され、そして細胞の表面に発現されるペプチド抗原について特異性を有する。CTLは、微生物の細胞内破壊またはそのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導しそして促進することを助ける。細胞性免疫の別の局面は、ヘルパーT細胞による抗原特異性応答を包含する。ヘルパーT細胞は、その表面にMHC分子と会合したペプチド抗原を提示する細胞に対して非特異的なエフェクター細胞の機能を刺激することおよびその活性に焦点を充てることを助けるように作用する。細胞免疫応答とはまた、活性化されたT細胞および/またはたの白血球による、サイトカイン、ケモカインおよび他のそのような分子の産生をいうこれらには、CD4T細胞およびCD8T細胞に由来するものが含まれる。細胞性免疫応答を惹起する、組成物例えば、免疫原性組成物またはワクチンは、その細胞表面においてMHC分子との会合において抗原の提示によって脊椎動物被験体を感作するよう作用し得る。細胞媒介性応答は、その表面において抗原を提示する細胞に対してまたはその付近に指向される。さらに、抗原特異的なTリンパ球は、免疫された宿主の将来の保護を可能にするように生成され得る。特定の抗原または組成物が細胞媒介性免疫学的応答を刺激する能力は、多数のアッセイ例えば、リンパ増殖リンパ球活性化アッセイ、CTL細胞障害性細胞アッセイ、または感作された被験体において高原について特異的なTリンパ球によって決定され得る。そのようなアッセイは、当該分野において周知である。例えば、Ericksonら、J.Immunol.1993151:4189-4199;Doeら、Eur.J.Immunol.199424:2369-2376;および以下の例を参照のこと。従って、本明細書において使用される場合、免疫学的応答とは、CTLの産生および/またはヘルパーT細胞の産生もしくは活性化を刺激するものであり得る。目的の抗原はまた、抗体媒介性免疫応答を惹起し得る。従って、免疫学的応答は、1つ以上の以下の効果を含み得る:B細胞による抗体の産生;ならびに/または目的の組成物もしくはワクチンに存在する抗原に対して特異的に指向されるサプレッサーT細胞および/もしくはγδT細胞の活性化。これらの応答は、感染性を中和するように作用し得、および/または抗体-補体、または抗体依存性細胞傷害性ADCCを媒介して、免疫された宿主に対する保護を提供する。そのような応答は、当該分野において周知の標準的な免疫アッセイおよび中和アッセイを用いて決定され得る。微粒子に対して吸着された、選択された抗原を含む組成物は、それがその微粒子と会合することなく送達されるときに等量のその抗原によって惹起される免疫応答よりも多い免疫応答を惹起する能力を有する場合、増強された免疫原性を示す。従って、組成物は、増強された免疫原性を示し得る。なぜなら、その抗原は、その微粒子に対する吸着によってより強く免疫原性であるからであるか、またはそれが投与される被験体においてより少ない用量の抗原が免疫応答を達成するに必要であるからである。そのようなおよび/または図供された免疫原性は、微粒子/抗原の組成物、および抗原コントロールを動物に投与すること、および当該分野において周知の放射イムノアッセイおよびELISAのような標準的なアッセイを用いてその2つに対する抗体力価を比較することによって決定され得る。用語有効量または薬学的有効量の高分子/微粒子は、本明細書において提供されるように、非毒性であるが所望の応答例えば、免疫応答および対応する治療的効果を提供するのに充分量の高分子/微粒子をいい、または治療タンパク質の送達の場合において、以下に規定するように、その被験体の処置を行うに充分な量をいう。以下に指摘されるように、必要とされる正確な量は、被験体の種、年齢および一般的状態、処置される条件の重篤度、および目的の特定の高分子、投与形態などに依存して、被験体ごとにかわる。個々の症例における適切な有効量は、慣用実験を用いて当業者によって決定され得る。脊椎動物被験体とは、脊椎動物亜門の任意のメンバーを意味する。これには、制限することなく、哺乳動物ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマ、およびヒト;家庭内動物イヌ、およびネコ;および鳥家庭内、野生および競技用の鳥例えば、ニワトリおよび雌ニワトリヒヨコを含む、シチメンチョウ、および他の家禽類鳥類が包含される。この用語は、特定の年齢を意図しない。従って、成人および新生児の両方が網羅されることが意図される。薬学的に受容可能なまたは薬理学的に受容可能なとは、生物学的または他の意味で所望されないものではない物質すなわち、所望されない生物学的効果を生ずることもなく、それが含まれる組成物の成分のいずれかとともに有害な様式で相互作用することもなく、その微粒子処方物とともに固体へ投与され得る物質を意味する。生理学的pHまたは生理学的範囲のpHとは、約7.2~8.0両端含むの範囲のpH、より代表的には約7.2~7.6両端含むの範囲にあるpHを意味する。本明細書において使用される場合、処置とは以下のいずれかをいう:i伝統的な意味におけるような感染または再感染の予防、ii症状の減少または除去;およびiii問題の病原体もしくは障害の実質的もしくは完全な除去。処置は、予防的感染前または治療的感染後に行われ得る。本明細書において使用される場合、用語核酸とは、DNA、RNAまたはそれらから形成されたキメラをいう。本明細書において使用される場合、用語少なくとも1つのCpGモチーフを含むオリゴヌクレオチドとは、少なくとも1つのCpGジヌクレオチドを含むポリヌクレオチドをいう。少なくとも1つのCpGモチーフを含むオリゴヌクレオチドは、複数のCpGモチーフを含み得る。これらのオリゴヌクレオチドはまた、当該分野において、CpGオリゴヌクレオチドとして知られる。本明細書において使用される場合、用語CpGモチーフとは、シトシンヌクレオチドに続いてグアノシンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドのジヌクレオチド部分をいう。5-メチルシトシンもまた、シトシンの代わりに用いられ得る。本明細書において使用される場合、用語油滴エマルジョンとは、代謝可能な油および乳化剤を含むエマルジョンをいう。本発明のいくつかの実施形態に従って、ウイルス、真菌、マイコプラズマ、細菌、または原生生物の感染および腫瘍に対して、予防的および/もしくは治療的に免疫するか、または治療する組成物および方法が提供される。本発明の方法は、予防的および/または治療的な免疫を哺乳動物好ましくは、ヒトに付与するのに有用である。本発明の方法はまた、生体医学研究のためにヒト以外の哺乳動物において実施され得る。B.一般的方法1.吸着された高分子を有する微粒子本発明は、本発明のPLAおよびPLGの微粒子が生物学的に活性な高分子を吸着するという発見に基づく。さらに、これらの微粒子は、より多様な分子荷電高分子および/または嵩高いbulky高分子を含むを、PVAを用いて調製された微粒子よりも容易に吸着する。従って、本発明の高分子/微粒子を送達系として使用して、広汎な種々の疾患を処置、予防および/または診断するために生物学的に活性な成分を送達し得る。本発明を用いて、広汎で種々の高分子を送達し得る。これには、以下が挙げられるがそれらに限定されない:医薬例えば、抗生物質および抗ウイルス剤、非ステロイド抗炎症薬、鎮痛剤、血管拡張剤、心臓血管薬物、向精神薬、神経弛緩薬、抑鬱剤、抗パーキンソン薬物、βブロッカー、カルシウムチャネルブロッカー、ブラジキニンインヒビター、ACEインヒビター、血管拡張剤、プロラクチンインヒビター、ステロイド、ホルモンアンタゴニスト、ホルモンアンタゴニスト、抗ヒスタミン剤、セロトニンアンタゴニスト、ヘパリン、化学療法剤、抗新生物剤、および成長因子増殖因子以下を含むがそれらに限定されない:PDGF、EGF、KGF、IGF-1およびIGF-2、FGF、治療剤または免疫原性タンパク質をコードするポリヌクレオチド、ワクチンにおいて使用するための免疫原性タンパク質およびそのエピトープ、ペプチドホルモン例えば、インスリン、プロインスリン、成長ホルモン、GHRH、LHRH、EGF、ソマトスタチン、SNX-111、BNP、インスリノトロピン、ANP、FSH、LH、PSHおよびhCG、性腺ステロイドホルモンアンドロゲン、エストロゲン、およびプロゲステロン、甲状腺刺激ホルモン、インヒビン、コレシスキニン、ACTH、CRF、ジノルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、フィブロネクチンフラグメント、ガラニン、ガストリン、インスリノトロピン、グルカゴン、GTP結合タンパク質フラグメント、グアニリン、ロイコキニン、マガイニン、マストラパン、デルマセプチン、システミン、ニューロメジン、ニューロテンシン、パンクレアスタチン、膵臓ポリペプチド、サブスタンスP、セクレチン、チモシンなどを含むホルモン、酵素、転写メディエーター、翻訳メディエーター、代謝経路の中間体、免疫調節剤例えば、種々のサイトカイン例えば、インターロイキン-1、インターロイキン-2、インターロイキン-3、インターロイキン-4、およびγインターフェロン、抗原、およびアジュバント。好ましい実施形態において、高分子は抗原である。本発明の特定の利点は、吸着された抗原を有する微粒子が細胞媒介性応答を脊椎動物被験体において生成する能力である。本発明の抗原/微粒子が選択された抗原に対する細胞媒介性免疫応答を惹起する能力は、広汎で種々の病原体による感染に対する強力なツールである。従って、本発明の抗原/微粒子は、ワクチン組成物へと取り込まれ得る。従って、慣用の抗体応答に加えて、本明細書において記載される系は、例えば、クラスIMHC分子との発現された抗原の会合を提供し、その結果、目的の抗原に対するインビボ細胞性免疫応答が惹起され得、これが、CTLの産生を刺激して、その抗原の将来の認識を可能にする。さらに、この方法は、抗原特異的な応答をヘルパーT細胞によって惹起させ得る。従って、本発明の方法は、任意の高分子との用途が見出される。その用途について、細胞性および/または体液性の免疫応答が所望され、好ましくは、抗体を惹起し得るウイルス病原体、T細胞ヘルパーエピトープおよびT細胞細胞傷害性エピトープに由来する抗原が所望される。そのような抗原としては、ヒトおよび動物のウイルスが挙げられるがそれらに限定されず、そして構造または非構造的なタンパク質のいずれかに対応し得る。本発明の微粒子は、細胞内のウイルスに対する免疫のために特に有用である。このウイルスは、通常貧弱な免疫応答を惹起する。例えば、本発明は、ヘルペスウイルス科に由来する広汎な種々のタンパク質に対する免疫応答を刺激するための用途を見出す:単純ヘルペスウイルスHSV1型および2型に由来するタンパク質例えば、HSV-1およびHSV-2糖タンパク質gB、gDおよびgH;水痘‐帯状疱疹ウイルスVZV、エプスタインバーウイルスEBVおよびサイトメガロウイルスCMVに由来する抗原CMVgBおよびgHを含む;ならびに他のヒトヘルペスウイルスに由来する抗原例えば、HHV6およびHHV7。例えば、Cheeら、CytomegalovirusesJ.K.McDougall、編、Springer-Verlag1990pp.125-169を、サイトメガロウイルスの内容物をコードするタンパク質の概説について参照のこと;McGeochら、J.Gen.Virol.198869:1531-1574を、種々のHSV-1コードタンパク質の概説について参照のこと;米国特許第5,171,568号を、HSV-1およびHSV-2gBおよびgDのタンパク質ならびにそれらをコードする遺伝子の議論について参照のこと;Baerら、Nature1984310:207-211を、EBVゲノムにおける配列をコードするタンパク質の同定について参照のこと;ならびにDavisonおよびScott、J.Gen.Virol.198667:1759-1816を、VZVの概説について参照のこと。ウイルスの肝炎ファミリーA型肝炎ウイルスHAV、B型肝炎ウイルスHBV、C型肝炎ウイルスHCV、δ型肝炎ウイルスHDV、E型肝炎ウイルスHEVおよびG型肝炎ウイルスHGVからの抗原もまた、本明細書において記載される技術において簡便に使用され得る。例えば、HCVのウイルスゲノム配列は公知であり、同様に、その配列を取得する方法も公知である。例えば、国際公開WO89/04669;WO90/11089;およびWO90/14436を参照のこと。HCVゲノムは、ウイルスタンパク質E1Eとしても知られるおよびE2E2/NSIとしても知られるおよびN末端核キャプシドタンパク質コアと称するを含むHoughtonら、Hepatology199114:381-388を、E1およびE2を含むHCVタンパク質の議論について参照のこと。これらのタンパク質の各々およびその抗原フラグメントは、この組成物および方法において用途を見い出す。同様に、HDVからのδ抗原についての配列が公知である例えば、米国特許第5,378,814号を参照のこと。そして、この抗原はまた、この組成物および方法において簡便に使用され得る。さらに、HBVに由来する抗原例えば、コア抗原、表面抗原sAg、ならびにプレ表面配列、pre-S1およびpre-S2以前pre-Sと呼ばれた、ならびに上記の組合せ例えば、sAg/pre-S1、sAg/pre-S2、sAg/pre-S1/pre-S2およびpre-S1/pre-S2は、本明細書において用途が見出される。例えば、HBVVaccines-fromthelaboratorytolicense:acasestudyinMackett、M.andWilliamson、J.D.、HumanVaccinesandVaccination、pp.159-176を、HBVの構造の議論について;ならびに米国特許第4,722,840号,第同5,098,704号、同第5,324,513号これらは、本明細書において、参考としてそのすべてが援用される;Beamesら、J.Virol.199569:68336838、Birnbaumら、J.Virol.199064:3319-3330;andZhouら、J.Virol.199165:5457-5464を参照のこと。他のウイルスに由来する抗原もまた、請求された組成物および方法における用途を見い出す例えば、限定されることなく、とりわけ以下の科Picornaviridae例えば、ポリオウイルスなど;Caliciviridae;Togaviridae例えば、風疹ウイルス、デングウイルスなど;Flaviviridae;Coronaviridae;Reoviridae;Birnaviridae;Rhabodoviridae例えば、狂犬病ウイルスなど;Filoviridae;Paramyxoviridae例えば、おたふくかぜウイルス、麻疹ウイルス、RSウイルスなど;Orthomyxoviridae例えば、インフルエンザウイルスA型、B型およびC型など;Bunyaviridae;Arenaviridae;Retroviradae例えば、HTLV-I;HTLV-II;HIV-1HTLV-III、LAV、ARV、hTLR、などとしても知られるこれらは以下を含むがそれらに限定されない:単離体HIVIIIb、HIVSF2、HIVLAV、HIVLAI、HIVMN;HIV-1CM235、HIV-lUS4;HIV-2からの抗原;シミアン免疫不全ウイルスSIVのメンバーからのタンパク質。さらに、抗原もまた、ヒトパピローマウイルスHPVおよびダニ媒介脳炎ウイルスに由来し得る。例えばVirology、第3版W.K.Joklik編1988;FundamentalVirology、2ndEditionB.N.FieldsandD.M.Knipe、編1991を、これらおよび他のウイルスの説明について参照のこと。より詳細には、上記のいずれかのHIV単離体からのgp120エンベロープタンパク質HIVの種々の遺伝子サブタイプのメンバーを含むが知られ、そして報告されている例えば、Myersら、LosAlamosDatabase、LosAlamosNationalLaboratory、LosAlamos、NewMexico1992;Myersら、HumanRetrovirusesandAids、1990、LosAlamos、NewMexico:LosAlamosNationalLaboratory;andModrowら、J.Virol.198761:570-578を、種々のHIV単離体のエンベロープタンパク質の比較について参照のこと。そしてこれらの単離体のいずれかに由来する抗原は、本方法において用途が見出される。さらに、本発明は、gp160およびgp41のような任意の種々のエンベロープタンパク質、p24gagおよびp55gagのようなgag、ならびにpol領域に由来するタンパク質を含む。インフルエンザウイルスは、本発明が特に有用であるウイルスの別の例である。具体的には、インフルエンザAのそのエンベロープ糖タンパク質HAおよびNAは、免疫応答を生成することについて特に有用である。インフルエンザAの多数のHAサブタイプが同定されたKawaokaら、Virology1990179:759-767;Websterら,AntigenicvariationamongtypeAinfluenzaviruses,p.127-168.In:P.PaleseandD.W.Kingsbury編、Geneticsofinfluenzaviruses.Springer-Verlag、NewYorkを参照のこと。従って、これらの単離体のいずれかに由来するタンパク質もまた、本明細書において記載される組成物および方法において使用され得る。本明細書において記載される組成物および方法はまた、多数の細菌抗原を用いた用途を見い出す例えば、ジフテリア、コレラ、結核、破傷風、百日咳、髄膜炎および他の病原状態を引き起こす生物限定することなく、以下を包含する:Bordetellapertussis、NeisseriameningitidesA、B、C、Y、Neisseriagonorrhoeae、Helicobacterpylori、およびHaemophilusinfluenza、HemophilusinfluenzatypeBHIB、Helicobacterpyloriからのものおよびそれらの組合せ。NeisseriameningitidesBからの抗原の例は、以下の共有に係る特許出願に開示されている:PCT/US99/09346;PCTIB98/01665;PCTIB99/00103;および以下の米国仮特許出願60/083,758;60/094,869;60/098,994;60/103,749;60/103,794;60/103,796;および60/121,528。寄生生物抗原の例としては、マラリアおよびライム病を引き起こす生物に由来するものが挙げられる。本発明を使用して広汎な種々の高分子を送達し得ること、およびそれゆえ大多数の疾患を処置、予防および/または診断し得ることは容易に明らかである。代替の実施形態において、本発明の高分子/微粒子組成物は、部位特異的な標的化送達について使用され得る。例えば、高分子/微粒子組成物の静脈内投与は、肺、肝臓、脾臓、血液循環または骨髄を標的化するために使用され得る。吸着剤微粒子の表面または、本発明のミクロエマルジョンに対する高分子の吸着は、以下を含むがそれらに限定されない任意の結合相互作用機構によって生じる:イオン結合、水素結合、共有結合、ファンデルワールス結合、および親水性/疎水性相互作用を介した結合。当業者は、吸着されるべき高分子の型について適切な界面活性剤を容易に選択し得る。例えば、荷電界面活性剤例えば、アニオン性界面活性剤またはカチオン性界面活性剤の存在で製造される微粒子は、正味の負電荷または正味の正電荷を有する表面を有する微粒子である。これは、広汎で種々の分子を吸着し得る。例えば、アニオン性界面活性剤を用いて製造される微粒子例えば、ドデシル硫酸ナトリウムSDS、すなわちSDS-PLG微粒子は、正に荷電した抗原例えば、タンパク質を吸着する。同様に、カチオン性界面活性剤例えば、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミドCTABすなわち、CTAB-PLG微粒子を用いて製造される微粒子は、負に荷電した分子例えば、DNAを吸着する。吸着されるべき高分子が正電荷および負電荷の領域を有する場合、カチオン性またはアニオン性の界面活性剤が適切であり得る。本発明とともに使用するための微粒子を製造するための生分解性ポリマーは、以下から簡便に市販されている:例えば、BoehringerIngelheim、GermanyおよびBirminghamPolymers、Inc.、Birmingham、AL。例えば、本明細書における微粒子を形成するための有用なポリマーは、以下に由来するものを包含する:ポリヒドロキシブチル酸;ポリカプロラクトン;ポリオルトエステル;ポリ無水物;およびポリα-ヒドロキシ酸例えば、ポリL-ラクチド、ポリD,L-ラクチド本明細書において両方ともPLAとして知られる、ポリヒロドキシブチレート、D,L-ラクチドおよびグリコリドのコポリマー例えば、ポリD,L-ラクチド-コ-グリコリド本明細書においてPLGまたはPLGAと指定される、またはD,L-ラクチドおよびカプロラクトンのコポリマー。本明細書における使用について特に好ましいポリマーは、PLAおよびPLGのポリマーである。これらのポリマーは、種々の分子量で利用可能であり。そして所定の使用のための適切な分子量は、当業者に容易に決定される。従って、例えば、PLAについて、適切な分子量は、約2000から5000のオーダーにある。PLGについて、適切な分子量は、一般に、約10,000から約200,000の範囲にあり、好ましくは、約15,000から約150,000の範囲にあり、そして最も好ましくは約50,000から約100,000の範囲にある。コポリマー例えば、PLGが微粒子を形成するために使用される場合、種々のラクチド:グリコリド比が本明細書において有用であり、そしてその比は大いに選択の問題であり、これは、同時投与される高分子および所望される分解速度に部分的に依存する。例えば、50:50PLGポリマー50のD,L-ラクチドおよび50グリコリドを含むは、迅速な吸着コポリマーを提供するが、75:25PLGは、よりゆっくり分解し、そして85:15および90:10は、なおいっそうゆっくりと分解する。これは、増加したラクチド成分に起因する。これは、適切な比のラクチド:グリコリドは、当業者によって、抗原の性質および問題の障害に基づいて容易に決定される。さらに、抗原またはアジュバントが微粒子に捕捉される本発明の実施形態において、変動するラクチド:グリコリドの比を有する微粒子の混合物は、本明細書において、所定の高分子について所望の放出反応速度論を達成するため、ならびに一次および二次の免疫応答の両方を提供するための用途を見出す。本発明の微粒子の分解速度はまた、ポリマーの分子量およびポリマーの結晶性のような因子によって制御され得る。変動するラクチド:グリコリド比および分子量を有するPLGコポリマーは、以下を含む多数の供給源から市販される:BoheringerIngelheim、GermanyおよびBirminghamPolymers,Inc.Birmingham,AL。これらのポリマーはまた、以下に記載されるような当該分野において周知の技術を用いて乳酸成分の単純な重縮合によって合成され得る:たばたら、J.Biomed.Mater.Res.198822:837-858。高分子/微粒子は、当該分野において周知のいくつかの方法のいずれかを用いて調製される。例えば、二重エマルジョン/溶媒エバポレーション技術例えば、以下に記載されるもの:米国特許第3,523,907号およびOgawaら、Chem.Pharm.Bull.198836:1095-1103は、本明細書において使用されて、微粒子が作製され得る。これらの技術は、以下からなる群より選択される一次エマルジョンの形成を包含する。これは、次いで、粒子安定化剤/表面活性剤を含む連続水相と混合される。あるいは、以下に記載されるように、水中油中水w/o/w溶媒エバポレーション系を使用して、微粒子を形成し得る:O’Haganら、Vaccine199311:965-969およびJefferyら、Pharm.Res.199310:362。この技術において、この特定のポリマーは、酢酸エチル、ジメチルクロリド塩化メチレンおよびジクロロメタンとも呼ばれる、アセトニトリル、アセトン、クロロホルムなどの有機溶媒と合わされる。このポリマーは、約1~30、好ましくは約2~15、より好ましくは約3~10、そして最も好ましくは約4の溶液中、有機溶媒中に提供される。このポリマー溶液は、例えば、ホモジナイザを用いて乳化される。次いで、このエマルジョンは、必要に応じて、ポリビニルアルコールPVA、ポリビニルピロリドン、ならびにカチオン性、アニオン性または非イオン性の界面活性剤のようなエマルジョン安定剤の大容量の水溶液と合わせられる。このエマルジョンは、1を超えるエマルジョン安定剤および/または界面活性剤例えば、PVAおよび界面活性剤の組合せと合わせられ得る。特定の高分子は、安定剤および/または界面活性剤の組合せを有する微粒子により容易に吸着され得る。エマルジョン安定剤が使用される場合、代表的には、約2~15溶液、より代表的には約4~10溶液中に提供される。一般に、約1から約0.1:1の範囲内の重量対重量での界面活性剤対ポリマーの比が使用され、より好ましくは、約0.001:1から約0.01:1の範囲、そしてさらにより好ましくは約0.005:1から約0。01:1の範囲内のものが使用され得る。次いで、この混合物は、ホモジナイズされて、安定なw/o/w二重エマルジョンが生成する。次いで、有機溶媒がエバポレートされる。処方物のパラメータは、0.05μm50nmのオーダーの小さな微粒子からそれより大きな微粒子の50μmよりさらに大きなものへの調製を可能にするように操作され得る。例えば、Jefferyら、Pharm.Res.199310:362-368;McGeeら、J.Microencap.1996を参照のこと。例えば、減少された攪拌は、より大きな微粒子を生じる。なぜなら、内部相の容量が増加するからである。小さな粒子は、高濃度のエマルジョン安定剤を有する水性相の容量を減らすことによって生成される。微粒子はまた、以下のように形成され得る:例えば、Thomasinら、J.ControlledRelease199641:131;米国特許第2,800,457号;Masters、K.1976SprayDrying2ndEd.Wiley、NewYorkに記載されるようなスプレー乾燥およびコアセルベーションを用いる;Hallら、1980TheWursterProcessinControlledReleaseTechnologies:Methods、Theory、andApplicationsA.F.Kydonieus編、第2巻、pp.133-154CRCPress、BocaRaton、FloridaandDeasy、P.B.、Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.1988S2:99-139に記載されるようなパンコーティングpancoatingおよびWursterコーティングのような空気懸濁コーティング技術;ならびに例えば、Limら、Science1980210:908-910に記載されるようなゲル化。粒子サイズは、例えば、レーザー光散乱によって、例えば、ヘリウム-ネオンレーザーを取り込んだ分光光度計を用いて測定され得る。一般に、粒子サイズは、室温で測定され、そして粒子の直径についての平均値を得るために問題のサンプルの複数の分析を包含する例えば、5-10回。粒子のサイズはまた、走査型電子顕微鏡SEMを用いて容易に決定される。本発明の代替の実施形態は、イオン表面活性剤を有するサブミクロンのエマルジョンを含む微粒子調製物である。MF59または他のものは基本的な粒子として使用され得るが、イオン性表面活性剤は、以下を包含し得るがそれに限定されない:ジオレオイル-3-トリメチルアンモニウム-プロパンDOTAP、ジオレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリンDEPCおよびジオレオイル-ホスファチジン酸DPA。これらは各々、スクアレン中で可溶性である。プロトタイプのイオン性エマルジョンは、4-52mg/mlスクアレンの範囲の濃度で、スクアレン/10Span85中に界面活性剤の各々を溶解することによって処方され得る。スクアレン/表面活性剤混合物は、0.5Tween80/H20と、5mlスクアレン/100mlH20で乳化され得る。予備エマルジョンは、Silversonホモジナイザを用いたホモジナイゼーション5分、5000RPMによって処方され得、そして最終のエマルジョンは、微小流動化によって作製され得る約10,000psi、5回通過、微小流体化器110S。調製後、微粒子は、そのまま保存され得るか、または将来の使用のために凍結乾燥され得る。微粒子に対して高分子を吸着させるために、その微粒子調製物は、目的の高分子と単に混合され、そして得られた処方物を再び使用前に凍結乾燥され得る。一般に、高分子を、その微粒子に添加して約1から0.25:1の、好ましくは1から0.1の、より好ましくは、0.01から0.05の、高分子対微粒子の重量対重量比を有する吸着された高分子を有する微粒子を得る。微粒子の高分子含量は、標準的な技術を用いて決定され得る。本発明の微粒子は、その中に捕捉またはカプセル化された高分子、およびそこに吸着された高分子を有し得る。従って、例えば、当業者は、本発明に従って、そこの吸着されたタンパク質を有するカプセル化されたアジュバントを有する微粒子、またはそこに吸着されたアジュバントを用いてカプセル化されたタンパク質を有する微粒子を調製し得る。一旦高分子が吸着した微粒子が生成されると、その微粒子は、薬学的組成物またはワクチンへと処方されて、広汎で種々の障害を、上記に記載されるように処置、予防および/または診断する。その組成物は、一般に、1つ以上の薬学的賦型剤またはビヒクル例えば、水、生理食塩水、グリセロール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、エタノールなどを含有する。さらに、補助的物質例えば、湿潤剤または乳化剤、生物学的緩衝化物質などが、そのようなビヒクル中に存在し得る。生物学的緩衝液は、薬学的に受容可能であり、そして所望のpHすなわち、生理学的範囲のpHを有する処方物を提供する、実質的に任意の溶液であり得る。緩衝溶液の例は、生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、Tris緩衝化生理食塩水、ハンクス緩衝化生理食塩水などを包含する。アジュバントを使用して、薬学的組成物の有効性を向上させ得る。このアジュバントを、例えば、同じ組成物または別個の組成物中で、本発明の微粒子とともに同時に投与し得る。あるいは、アジュバントは、本発明の微粒子組成物の前または後に投与され得る。別の実施形態において、免疫学的アジュバントのようなアジュバントは、微粒子中でカプセル化され得る。アジュバントは、任意の高分子と同様に、当該分野で公知のいくつかの方法のいずれかを用いて微粒子中にカプセル化され得る。例えば、米国特許第3,523,907号;Ogawaら、ChemPharm.Bull.198836:1095-1103;O’Haganら、Vaccine199311:965-969andJeffereyら,Pharm.Res.199310:362を参照のこと。あるいは、アジュバントは、任意の高分子について上気されるようにその微粒子上に吸着され得る。あるいは、アジュバントは、本発明の油滴エマルジョンを含み得る。免疫学的アジュバントとしては、以下が挙げられるがそれらに限定されない:1アルミニウム塩ミョウバン、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムなど;2水中油エマルジョン処方物ムラミルペプチド以下を参照のことまたは細菌細胞壁成分のような他の特異的免疫刺激剤のあるなし例えば、aModel110Y微小流体化器microfluidizerMicrofluidics、Newton、MAのような微小流体化器を用いてサブミクロン粒子へと処方された、5スクアレン、0.5Tween80、および0.5Span85必要に応じて、種々の亮のMTP-PE以下を参照のことを含むが必要ではないを含有する、MF59国際公開番号WO90/14837号、b微小流体化されてサブミクロンエマルジョンとされたか、またはボルテックスされてより大きな粒子サイズのエマルジョンが生成された、10スクアレン、0.4Tween80、5プルロニックブロックポリマーL121、およびthr-MDP以下を参照のことを含有する、SAF、ならびにc2スクアレン、0.2Tween80、およびモノリン脂質monophosphorylipidAMPL、トレハロースジミコレートTDM、および細胞壁骨格CWS好ましくは、MPLCWSDetoxTMからなる群より選択される1つ以上の細菌細胞壁成分を含有する、Ribiアジュバント系RAS、RibiImmunochem、Hamilton、MT本明細書における使用のための適切なサブミクロン水中油エマルジョンのさらなる議論については、以下の共有に係る特許出願番号を参照のこと:09/015,7361998年1月29日出願;3サポニンアジュバント例えば、QuilAまたはQS21例えば、StimulonTMCambridgeBioscience、Worcester、MAが使用され得るか、またはそれからISCOM免疫刺激複合体のような粒子が生成され得る;4完全フロイントアジュバントCFAおよび不完全フロイントアジュバントIFA;5サイトカイン例えば、インターロイキンIL-1、IL-2など、マクロファージコロニー刺激因子M-CSF、腫瘍壊死因子TNFなど;6無毒化した細菌ADPリボシル化毒素例えば、コレラ毒素CT、百日咳毒素PT、またはE.coli熱不安定性毒素LTの変異体特に、LT-K63ここで、リジンが63位の野生型アミノ酸に取って代わる、LT-R72ここで、アルギニンが72位の野生型アミノ酸に取って代わる、CT-S109セリンが109位の野生型アミノ酸に取って代わるおよびPT-K9/G129リジンが9位の野生型アミノ酸に取って代わり、グリシンが129位のものに取って代わる、例えば、国際公開番号W093/13202およびW092/19265を参照のこと;7CpGオリゴヌクレオチドおよび他の免疫刺激配列ISS;ならびに8その組成物の有効性を向上させる免疫刺激剤として働く他の物質。ミョウバンおよびMF59が好ましい。ムラミルペプチドとしては、以下が挙げられるがそれらに限定されない:N-アセチル-ムラミル-L-スレオニル-D-イソグルタミンthr-MDP、N-アセチル-ノルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミンnor-MDP、N-アセチルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミニル-L-アラニン-2-1’-2’-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリルオキシ-エチルアミンMTP-PEなど。アジュバントのさらなる例について、VaccineDesign、TheSubunitandtheAdjuvantApproach、Powell、M.F.andNewman、M.J編、PlenumPress、1995を参照のこと。この組成物は、治療有効量の目的の高分子を含む。すなわち、ある量の高分子/微粒子が組成物に含まれ、これは、症状を予防、低減、除去または診断するために、十分な応答を生成することを被検体を引き起こす。必要な正確な量は、とりわけ、処置される被検体;処置される被検体の年齢および一般状態;処置される状態の重篤度;免疫学的応答の場合における、被検体の免疫系が抗体を合成する能力;所望される保護の程度、ならびに選択される特定の抗原およびその投与形態に依存して変動する。適切な有効量は、当業者に容易に決定され得る。従って、治療有効量は、慣用的な試行を通じて決定され得る比較的広範囲に入る。例えば、高分子がポリヌクレオチドである場合の本発明の目的について、有効用量は、代表的に、約1ngから約1mgの、より好ましくは約10ngから約1μgの、そしてより好ましくは、約50ngから約500ngの、1用量あたりに送達される高分子の範囲であり;高分子が抗原である場合、有効用量は、代表的に、1μgから約100mgの、より好ましくは約10μgから約1mgの、そして最も好ましくは約50μgから約500μgの範囲の、1用量あたりに送達される高分子の範囲である。一旦処方されると、本発明の組成物は、非経口的に投与され得る例えば、注射。この組成物は、経皮的、腹腔内、静脈内、または筋肉内のいずれかで注射され得る。投与の他の形態は、経鼻、経口、および肺への投与、坐剤ならびに経皮transdermalまたはtranscutaneousならびに塗布を包含する。投薬処置は、単回用量スケジュールまたは複数回用量スケジュールであり得る。複数回用量スケジュールは、主要な投与処置は、1から10の別個の用量を用いてであり得、続いて他の用量が、引き続き治療応答をを維持および/または強制するために選択された時間間隔で与えられ得る例えば、数カ月後に第二用量として1から4カ月で引き続きの用量。この投薬レジメンはまた、少なくとも部分的に、被検体の必要によって決定され、そして実行者の判断に依存する。さらに、疾患の予防が所望される場合、ワクチンにおける高分子は、一般に、目的の病原体を用いた主要な感染の前に投与される。処置が所望される場合例えば、再発の症状の減少、高分子は、一般的に主要な幹線の後に投与される。2.油滴エマルジョン本発明の別の実施形態において、油滴エマルジョンは、代謝可能な油および乳化剤を含ませて調製される。少なくとも1つのCpGを含むオリゴヌクレオチドのような分子は、油滴エマルジョンと合わせらて、アジュバントを形成し得る。油滴エマルジョンは好ましくは、代謝可能な油および乳化剤を含む。ここで、油および乳化剤は、油滴を有する水中油エマルジョンの形態で存在する。この油滴は実質的にすべてが、直径1ミクロン未満である。そのような小滴は、油および乳化剤を含むアジュバント組成物よりも驚くほどの優越性を示す。ここで、油滴は、本発明によって提供されるものよりも有意に大きい。好ましい実施形態において、そのエマルジョンは、カチオン正解面活性剤が乳化剤として使用される結果として正に荷電されているか、または代替的に、乳化剤とは別個のカチオン性界面活性剤を含む。これは、ヌクレオチド抗原性分子例えば、CpGオリゴヌクレオチドまたはウイルスDNAの吸着を可能にする。あるいは、アニオン性界面活性剤の使用は、タンパク質のような分子の吸着を可能にする。本発明のアジュバント組成物の個々の成分は公知であるが、そのような組成物は、同様の様式では組み合わされてこなかった。従って、個々の成分は、一般的におよび好ましい実施形態についていくらか詳細にの両方で以下に記載されているが、当該分野において周知であり、そして本明細書において使用される用語例えば、代謝可能な油、乳化剤、免疫刺激剤、免疫刺激剤、ムラミルペプチド、および脂溶性ムラミルペプチドは、さらなる説明なしに、当業者にとって、これらの化合物を記載することが十分に周知である。これらの組成物の1成分は、代謝可能な、非毒性油、好ましくは約6から約30炭素原子の1つ以下を含むがそれらに限定されない:アルカン、アルケン、アルキン、および対応する酸およびアルコール、それらのエーテルおよびエステル、ならびにそれらの混合物である。その油は、植物油、魚油、動物油、または合成調製された油であって、アジュバントが投与される宿主動物の体内で代謝され得そしてその被検体にとって非毒性であるもののいずれかであり得る。宿主細胞は、代表的に、哺乳動物であり、そして好ましくはヒトである。ミネラルオイルおよび類似の毒性石油蒸留油は、本発明から明示的に除外される。本発明の油成分はまた、任意の長鎖アルカン、アルケンまたはアルキンまたはその酸もしくはアルコール誘導体これは、遊離酸、その塩またはモノエステル、ジエステルもしくはトリエステルのようなエステル例えば、とりグリセリドおよび1,2-プロパンジオールまたは類似のポリヒドロキシアルコールであり得る。アルコールは、アミノ官能または多官能酸例えば、酢酸、プロパン酸、クエン酸などを用いてアシル化され得る。長鎖アルコールに由来するエーテルであって本明細書において使用される油でありそしてその他の基準を満たすものもまた使用され得る。個々のアルカン、アルケン、またはアルキンの部分およびその酸またはアルコール誘導体は、一般に、約6から約30炭素原子を有する。この部分は、直鎖または分岐鎖の構造を有し得る。これは、完全に飽和され得、または1つ以上の二重結合もしくは三重結合を有し得る。モノエステルまたはポリエステルあるいはエーテルベースの油が使用される場合、約6から約30炭素原子の限定は、個々の脂肪酸または脂肪アルコール部分に適用され、全体の炭素数には適用されない。任意の代謝可能な油、特に動物、魚または植物の供給源に由来するものが本明細書において使用され得る。その油は、投与される宿主によって代謝されることが必須であり、そうでなければ、その油成分は、腫瘍、肉芽腫または癌腫でさえ生じ得るか、または動物医療で使用される場合ワクチン摂取された鳥類および動物の肉が、代謝されない油が消費者に対して与え得る有害効果に起因してヒトでの消費に受容可能でなくなり得る。植物油の例示的供給源としては、堅果、種子および穀物種子grainが挙げられる。ピーナツ油、ダイズ油、ココナッツ油、およびオリーブが最も共通して利用可能である、堅果油を例示する。種子油としては、ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ油などが挙げられる。穀物種子油の群には、コーン油が最も容易に利用可能であるが、他の穀物の種子例えば、コムギ、オーツムギ、ライムギ、イネコメ、テフ、ライコムギなどもまた使用され得る。植物油を取得するための技術は十分に開発されており、そして周知である。これらおよび他の類似の油の組成は、例えば、MerckIndexに見出され得、そして植物、栄養および植物技術における原料物質である。グリセロールと1,2-プロパンジオールとの6から10の炭素脂肪酸エステルは、種子油には天然に存在しないが、堅果および種子の油からの適切な出発物質の加水分解、分離およびエステル化によって調製され得る。これらの生成物は、NEOBEE登録商標という名称で、PVOInternational、Inc.、ChemicalSpecialtiesDivision、416DivisionStreet、Boongon、NJなどから市販されている。動物供給源に由来する油もまた、本発明のアジュバントおよび免疫原性組成物において使用され得る。動物油および脂肪は、それらがトリグリセリドとして存在し、そして油または植物からの油よりも高い程度の飽和度を有するという事実に起因して、生理的な温度では通常固体である。しかし、その脂肪酸は、部分的または完全なトリグリセリドのサポニン化遊離脂肪酸を提供するによって動物から入手可能である。哺乳動物乳汁からの脂質および油は代謝可能であり、そしてそれゆえ、本発明の実施において使用され得る。分離、精製、サポニン化のための手段、および動物供給源から純粋な油を入手するたに必要な他の手順は当該分野で周知である。ほとんどの魚は、容易に回収され得る代謝可能な油を含む。例えば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨油例えば、鯨脳は、本明細書において使用され得る魚油のいくつかを例示する。多数の分岐鎖油は、5炭素イソプレン単位で生化学的に合成され、そして一般にテルペノイドと呼ばれる。サメ肝油は、スクアレン2,6,10,15,19,23-ヘキサメチル-2,6,10,14,18,22-テトラコサヘキサエンこれは、本明細書において特に好ましいと呼ばれる分岐不飽和テルペノイドを含有する。スクアレンに対する飽和アナログであるスクアランもまた、特に好ましい油である。スクアレンおよびスクアランを含む魚油は、商業供給源から容易に入手可能であるか、または当該分野における公知の方法によって入手され得る。これらのアジュバントおよび免疫原性組成物の油成分は、約0.5容量から約20容量の量で存在するが、好ましくは、15以下であり、特に約1から約12である。約1から約4の油を使用することが最も好ましい。これらのアジュバント組成物の水性部分は、好ましくは緩衝化生理食塩水であるか、または好ましくは、純水である。これらの組成物は、非経口的投与について意図されることから、免疫原性組成物として最終の緩衝化された溶液を構成して、その等張性すなわち、重量オスモル濃度を、通常の生理学的流体と本質的に同じようにさせて、その組成物と生理学的流体との間の異なるイオン濃度について、その組成物の投与後の膨張または迅速な吸収を予防することが好ましい。通常の生理学的条件と適合するpHを維持するためにその生理食塩水を緩衝化することもまたこのましい。また、特定の場合において、糖ペプチドのような特定の組成物成分の安定性を確保するために特定のレベルでpHを維持することが必要であり得る。任意の生理学的に受容可能な緩衝剤は、本明細書において使用され得るが、リン酸緩衝剤が好ましい。他の受容可能な緩衝剤例えば、酢酸、tris、重炭酸、炭酸なども、リン酸緩衝剤の代替として使用され得る。水性成分のpHは、好ましくは、約6.0から8.0の間である。しかし、ミクロエマルジョンがまず調製される場合、純水が、エマルジョンの水性成分として好ましい。塩濃度を増加させることで、所望の小滴サイズを達成することはより困難となる。最終の免疫原性組成物がアジュバントから調製される場合、免疫原性の材料が適切な重量オスモル濃度で緩衝液中に添加されて、所望の免疫原性組成物を提供し得る。これらの組成物において使用される水性成分の品質は、その組成物の価値を均一へともたらすのに必要な量である。すなわち、100とするに十分な水性成分のある量が上記の列挙される他の成分とともに混合され、その組成物がある容量へともたらされる。乳化剤および懸濁剤のかなりの数が、一般に、医薬品科学で使用されている。これらとしては、天然に由来する物質例えば、樹木からのゴム、植物タンパク質、糖ベースのポリマー例えば、アルギネートおよびセルロースなどが挙げられる。特定のオキシポリマーまたは炭素骨格に水酸化置換基もしくは他の親水性置換基を有するポリマーは、表面活性活性を有する例えば、ポビドン、ポリビニルアルコール、およびグリコールエーテルベースの一官能および多官能の化合物。長鎖の脂肪酸誘導化合物は、本発明において使用され得る、乳化剤および懸濁剤の第三の実質的なグループを形成する。上記の表面活性剤のいずれも、非毒性である限り有用である。本発明に従って使用され得る適切な乳化剤表面活性剤または界面活性剤とも呼ばれるの適切な例は、以下を包含する:1.水溶性石鹸例えば、高級脂肪酸C10からC22のナトリウム、カリウム、アンモニウムおよびアルカノールアニモニウムalkanolanimonium塩、および特にナトリウムおよびカリウムの獣脂およびココナッツ石鹸。2.アニオン性合成非石鹸界面活性剤。これは、有機硫酸反応産物の水溶性の塩に代表され得る。この産物は、その分子構造において、約8から約22の炭素原子ならびに硫酸および硫酸エステルラジカルからなる群より選択されるラジカルを含むアルキルラジカルを有する。これらの例は、獣脂およびココナッツ石鹸に由来するナトリウムもしくはカリウムアルキル硫酸塩;アルキルグリセリルエーテルスルホン酸ナトリウム;ココナツ油脂肪酸モノグリセリドスルホン酸ナトリウムおよびココナツ油脂肪酸モノグリセリド硫酸ナトリウム;1モルの高級脂肪酸アルコールおよび約1から約6モルのエチレンオキシドの反応産物の硫酸エステルのナトリウムもしくはカリウム塩;アルキルフェノールエチレンオキシドエーテルスルホン酸ナトリウムまたはカリウム1分子当たり1から約10単位のエチレンオキシドを有する、およびここでそのアルキルラジカルは、約8から約12の炭素原子を含む;イソエチオン酸でエステル化され、そして水酸化ナトリウムを用いて中和された脂肪酸の反応産物;メチルタウリドtaurideの脂肪酸アミドのナトリウムまたはカリウム塩;ならびにSO3スルホン化C10からC24のαオレフィンのナトリウム塩およびカリウム塩。3.有機疎水性化合物とアルキレンオキシド基との縮合によって作製された非イオン性合成界面活性剤。代表的な疎水性基としては、プロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合産物、アルキルフェノール、プロピレンオキシドとエチレンジアミドとの縮合産物、約8から約22炭素原子を有する脂肪族アルコール、ならびに脂肪酸のアミドが挙げられる。4.非イオン性界面活性剤例えば、アミンオキシド、ホスフィンオキシド、およびスルホキシドこれらは半極性の特徴を有する。長鎖三級アミンオキシドの特定の例としては、以下が挙げられる:ジメチルドデシルアミンオキシドおよびビス-2-ヒドロキシエチルドデシルアミン。ホスフィンオキシドの特定の例は、米国特許第3,304,263号1967年2月14日に発行に見出され、そして以下を包含する:ジメチルドデシルホスフィンオキシドおよびジメチル2-ヒドロキシドデシルホスフィンオキシド。5.長鎖スルホキシド式R1-SO-R2に対応するものを含む。ここで、R1およびR2は、置換されたアルキルラジカルまたは置換されていないアルキルラジカルであって、前者は約10から約28炭素原子を含有し、他方、R2は、1から約3炭素原子を含む。これらのスルホキシドの特定の例としては、ドデシルメチルスルホキシドおよび3-ヒドロキシトリデシルメチルスルホキシドが挙げられる。6.両性合成界面活性剤例えば、3-ドデシルアミノd-プロピオン酸ナトリウム、および3-ドデシルアミノプロパンスルホン酸ナトリウム。7.双性イオン性合成界面活性剤例えば、3-N,N-ジメチル-N-ヘキサデシルアンモニオプロパン-1-スルホネートおよび3-N,N-ジメチル-N-ヘキサデシルアンモニオ-2-ヒドロキシプロパン-1-スルホネート。さらに、以下の型の乳化剤のすべては、本発明の組成物中において使用され得る:a脂肪酸石鹸すなわち、アルカリ塩、ロジンrosin酸、およびトールオイル;bアルキルアレンスルホネート;cアルキルスルフェート分岐鎖および直鎖の疎水性基を有する表面活性剤、ならびに一次および二次のスルフェート基;d疎水性基と親水性基との間の中間体結合を含むスルフェートおよびスルホネート例えば、脂肪アシル化メチルタウリドおよび硫酸化脂肪モノグリセリド;eポリエチレングリコールの長鎖酸エステル、特にトールオイルエステル;fアルキルフェノールのポリエチレングリコールエーテル;g長鎖アルコールおよびメルカプタンのポリエチレングリコールエーテル;ならびにh脂肪アシルジエタノールアミド。表面活性剤は、1つを超える様式で分類され得ることから、このパラグラフに開示される多数のクラスの表面活性は、以前に記載される表面活性剤クラスと重複する。生物学的状況のために特に設計され、そしてそこにおいて一般に使用される、多数の油乳化剤が存在する。例えば、多数の生物学的界面活性剤表面活性剤は、それ自体がSigmaChemicalCompanyによってその1987CatalogofBiochemicalandOrganicCompoundsの310-316頁に列挙されている。そのような表面活性剤は、4つの塩基性型へと分割される:アニオン性、カチオン性、双性イオン性、および非イオン性。アニオン性界面活性剤の例は、以下を包含するがそれらに限定されない:アルギン酸、カプリル酸、コール酸、1-デカンスルホン酸、デオキシコール酸、1-ドデカンスルホン酸、N-ラウロイルサルコシン、およびタウロコール酸など。カチオン性界面活性剤は以下を包含するがそれらに限定されない:セトリミドヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド-CTAB、塩化ベンザルコニウム、ジメチルジオクトデシルアンモニウムDDAブロミド、DOTAP、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、塩化ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化メチルベンゼトニウム、および4-ピコリンドデシルスルフェートなど。双性イオン性界面活性剤の例としては以下が挙げられるがそれらに限定されない:3-[3-コラミドプロピル-ジメチルアンモニオ]-l-プロパンスルホネート一般に、CHAPSと省略される、3-[コラミドプロピル-ジメチルアンモニオ]ヒドロキシ-l-プロパンスルホネート一般に、CHAPSOと省略される、N-ドデシル-N,N-ジメチルアンモニオ-l-プロパンスルホネート、およびリゾ-α-ホスファチジルコリンなど。非イオン性界面活性剤の例としては以下が挙げられるがそれらに限定されない:デカノイル-N-メチルグルカミド、ジエチレングリコールモノペンチルエーテル、n-ドデシルβ-D-グルコピラノシド、脂肪アルコールのエチレンオキシド縮合物例えば、Lubrolの商標名で販売される、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル特に、C12からC20の脂肪酸、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エーテル例えば、Tweenの商標名で販売される、およびソルビタン脂肪酸エーテル例えば、Spanの商標名で販売されるなど。正に荷電したエマルジョンを生じるアジュバント組成物の任意の成分は、例えば、上記のカチオン性界面活性剤のいずれかであり得る。あるいは、上記のカチオン性界面活性剤は、そのエマルジョンを正に荷電させるために上記の油滴エマルジョンのいずれかとともに使用され得る。界面活性剤の特に有用なグループは、ソルビタンベースの非イオン性表面活性剤である。これらの表面活性剤は、ソルビトールの脱水によって調製されて、1,4-ソルビタンを生じ、これは次いで、脂肪酸の1つ以上の等価物と反応される。脂肪酸置換された部分は、さらに、エチレンオキシドと反応されて表面活性剤の第二グループを形成し得る。脂肪酸置換されたソルビタン表面活性剤は、1,4-ソルビタンと、ラウリル酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、または類似の長鎖脂肪酸のような脂肪酸と反応させることによって作製されて、1,4-ソルビタンモノエステルである1,6-ソルビタンセスキエステルまたは1,4-ソルビタントリエステルを生じる。これらの表面活性剤についての一般的な名称は、例えば、以下を包含する:ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノエステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンセスキオレエート、およびソルビタントリオレエート。これらの表面活性剤は、SPAN登録商標またはARLACEL登録商標の名称で市販されている。通常、これには、種々のモノトリエステル、ジエステル、およびトリエステルで置換されたソルビタンとの間を識別する文字または数字の指定が伴う。SPANS登録商標およびARLACEL登録商標の表面活性剤は、親水性であり、そして一般に油に可溶性もしくは分散性である。それらはまた、ほとんどの有機溶媒中で可溶性である。水中で、それらは、一般に、不溶性であるが分散性である。一般に、これらの表面活性剤は、1.8から8.6の間の親水性-親油性の平衡HLB数を有する。そのような表面活性剤は、当該分野において公知の手段によって作製され得、または例えば、ICIAmericasInc.、Wilmington、DEからATLAS登録商標という登録商標で市販されている。表面活性剤の関連グループは、ポリオキシエチレンソルビタンモノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタントリエステルを包含する。これらの材料は、エチレンオキシドを、1,4-ソルビタンモノエステルまたはトリエステルへと添加することによって調製される。ポリオキシエチレンの添加は、親油性ソルビタンモノエステルまたはトリエステルの表面活性剤を、親水性の表面活性剤に変換する。これは、水中で可溶性油分散性であり、そして有機液体において種々の程度で可溶性である。これらの材料は、TWEENという名称で市販されており、水中油エマルジョンを調製するため、および油の可溶化をするため、ならびに無水軟膏水溶性または洗浄可能にさせるために有用である。TWEEN表面活性剤は、関連するソルビタンモノエステルまたはトリエステル表面活性剤と合わせられて、エマルジョンの安定性を促進させ得る。TWEEN表面活性剤は、一般に、9.6と16.7との間のHLB値を有する。単独で、あるいはSPAN登録商標、ARLACEL登録商標、およびTWEEN登録商標の表面活性剤と組み合わせて使用され得る、非イオン性表面活性剤の第三のグループは、長鎖脂肪酸とエチレンオキシドとの反応によって作製されるポリオキシエチレン脂肪酸である。最も一般的に利用可能なこの型の表面活性剤は、MYRJ登録商標という商標の固体であり、そしてステアリン酸のポリオキシエチレン誘導体である。MYRJ登録商標表面活性剤は、親水性であり、そしてTWEEN登録商標表面活性剤のように水中で可溶性もしくは分散性である。MYRJ登録商標は、エマルジョンを形成する際に使用するために、TWEEN登録商標、またはTWEEN登録商標/SPAN登録商標またはARLACEL登録商標混合物と混和され得る。MYRJ登録商標表面活性剤は、当該分野において公知の方法によって作製され得るか、またはICIAmerica’sIncから市販されている。ポリオキシエチレンベースの非イオン性表面活性剤の第四のグループは、ラウリル、アセチル、ステアリル、およびオレイルのアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪酸エーテルである。これらの材料は、上記のように、エチレンオキシドを脂肪アルコールへと添加することによって調製される。これらの表面活性剤についての商標名は、BRIJ登録商標である。BRIJ登録商標表面活性剤は、その表面活性剤中のポリオキシエチレン部分のサイズに応じて親水性であるかまたは親油性であり得る。これらの化合物の調製物は当該分野から入手可能であるが、それらはまた、ICIAmerica’sIncのような商業的供給源から容易に入手可能である。本発明の実施において潜在的に使用され得る、他の非イオン性界面活性剤は、例えば、以下である:ポリオキシエチレン、ポリオール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシプロピレン脂肪エステル、ポリオキシエチレンを含む蜜蝋誘導体、ポリオキシエチレンラノリン誘導体、ポリオキシエチレン脂肪グリセリド、グリセロール脂肪酸エステルまたは他のポリオキシエチレン酸アルコールまたは12-22炭素原子の長鎖脂肪酸のエーテル誘導体。本発明のアジュバントおよび免疫原性組成物は複数相系であることが意図されることから、約7から約16の範囲のHLB値を有するエマルジョン形成非イオン性表面活性剤を選択することが好ましい。この値は、TWEEN登録商標表面活性剤のような単純な非イオン性表面活性剤の使用を通じて入手され得るか、またはソルビタンモノエステル、ジエステルまたはトリエステルベースの表面活性剤を有するような表面活性剤の混和物の使用によって達成され得る;ソルビタンエステルポリオキシエチレン脂肪酸;ポリオキシエチレンラノリン誘導体化表面活性剤と組み合わせたソルビタンエステル;高HLBポリオキシエチレン脂肪エーテル表面活性剤と組み合わせたソルビタンエステル表面活性剤;あるいはポリエチレン脂肪エーテル表面活性剤またはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸。本発明の実施においてエマルジョン安定化させる非イオン性表面活性剤として単純な非イオン性表面活性剤を使用することがより好ましく、最も特定するとTWEEN登録商標表面活性剤である。TWEEN登録商標80と称する表面活性剤は、他の様式では、ポリオキシエチレン20ソルビタンモノオレエートについてポリソルベートとしても知られているが、上記の表面活性剤の中で最も好ましい。十分な小滴サイズの減少は、0.02重量w/wから2.5重量w/wで存在する表面活性剤を有することによって通常行われ得る。0.05から1の量が好ましく、0.01から0.5が特に好ましい。本発明の小滴が達成される様式は、本発明の実施にとっては重要ではない。サブミクロンの油滴が入手され得る1つの様式は、商業的乳化剤の使用による例えば、Microfluidics、Newton、MAから入手されるモデル番号110Y。他の商業的乳化剤の例としては、GaulinModel30CDGaulin、Inc.、Everett、MAおよびRainnieMinilabType8.30HMiroAtomizerFoodandDairy、Inc.、Hudson、WIが挙げられる。高剪断力の原理によって操作されるこれらの乳化剤は、高圧のもとで、小さな開口部を通じて液体を押しつけることによって開発される。モデル110Yが5,000-30,000psiで操作される場合、100-750nmの直径を有する油滴が提供される。油滴のサイズは、界面活性剤と油の比を変化させることその比を増加させると小滴サイズが減少する、圧力を操作する操作圧力を増加すると小滴サイズは減少する、温度温度を上昇させると小滴サイズが減少する、および両親媒性免疫刺激剤の添加そのような薬剤を添加すると、小滴サイズが減少するによって変動され得る。実際の小滴サイズは、特定の界面活性剤、油、および免疫刺激剤あればならびに選択された特定の操作条件によって変動する。小滴サイズは、サイズ変更する装置の使用例えば、CoulterCorporationによって製造される市販のSub-MicronParticleAnalyzerModelN4MDによって確認され得、そしてそのパラメーターは、上記のガイドラインを用いて変動され得、その後、実質的に全ての小滴は1ミクロン未満の直径、好ましくは0.8ミクロン未満の直径、そして最も好ましくは0.5ミクロン未満の直径となる。実質的にすべてとは、少なくとも約80数ベース、好ましくは少なくとも90、より好ましくは約95、そして最も好ましくは少なくとも約98を意味する。粒子サイズ分布は、代表的にはガウス分布であり、その結果、平均直径は、言及された限界よりも小さくなる。本発明は、好ましくは、先行技術文献において以前に教示される他の成分の非存在下で油エマルジョンを調製して、十分な免疫原性についてサブミクロンエマルジョンすなわち、ポリオキシプロピレン-ポリオキシエチレンブロックポリマー例えば、米国特許第4,772,466号および同第4,770,874号、ならびに欧州特許出願0315153A2におけるアジュバントとともに使用することについて記載されるものとともに使用されることによって実施され得る。本発明のミクロエマルジョン組成物は、水中で代謝可能な油およびPOP-POEコポリマー以外の乳化剤を含み得る。乳化剤は、何らかの特定の免疫刺激活性を有する必用はない。なぜなら、油組成物自身が、油滴がサブミクロン範囲にあるときにはアジュバントとして機能し得るからである。しかし、増加された免疫刺激活性は、公知の免疫刺激剤のいずれかをその組成物中に含ませることによって提供され得る。免疫刺激剤は、乳化剤および油とは別個であり得るか、または免疫刺激剤および乳化剤は1つのそして同じ分子であり得る。前者の状況の例としては、Mycobacteriumtuberculosisのような殺傷されたミコバクテリアおよびその細胞内成分と混合された代謝可能な油が挙げられる。さらなる免疫刺激物質としては、そのような細菌の細胞壁の成分であるムラミルペプチドを含み、そしてその誘導体を含む。乳化剤/免疫刺激剤を混合物の例は、Sanchez-Pescadorら、J.Immunol.、1988、141,1720-1727この開示は本明細書においてその全体が参考として援用されるに記載される親油性ムラミルペプチドである。これらの材料は、塩基性のN-アセチルムラミルペプチド親水性部分これは、免疫刺激基として作用するを含むが、これはまた、得られる化合物に対して表面活性特徴を提供する親油性部分を包含する。そのような化合物、および他の型の両親媒性の免疫刺激物質は、免疫刺激剤および乳化剤の両方として作用し、そして本発明の実施において好ましい。さらに、本発明を実施することはまた、両親媒性免疫刺激性物質を、両親媒性ではない免疫刺激物質と組み合わせて使用することによって可能である。例は、本質的に置換されていないすなわち、本質的に親水性のムラミルジペプチドと組み合わせた親油性ムラミルペプチドの使用である。好ましい油滴エマルジョンは、MF59である。MF59は、例えば、以下に記載される手順に従って作製され得る:Ottら、VaccineDesign:TheSubunitAndAdjuvantApproach、1995、M.F.PowellandM.J.Newman、Eds.、PlenumPress、NewYork、p.277-296;Singhら、Vaccine、1998,16,1822-1827;Ottら、Vaccine、1995,13,1557-1562;ならびにValensiら、J.Immunol.、1994,153,4029-39、これらの開示は、その全体が本明細書において参考として援用される。他の油滴エマルジョンとしては以下が挙げられる:例えば、SAF10スクアレン、0.4Tween80、5プルロニックブロックポリマーL121、およびthr-MDPを含み、サブミクロンエマルジョンへと微小流体化されるか、またはボルテックスされてより大きな粒子サイズエマルジョンが生成される、ならびにRibiアジュバント系RAS、RibiImmunochem、Hamilton、MT2スクアレン、0.2Tween80、および以下からなる群より選択される1つ以上の細菌細胞壁成分を含む:一リン酸化リピドmonophosphrylipidAMPL、トレハロースジミコレートTDM、および細胞壁骨格CWS、好ましくはMPLCWSDetoxJ本明細書での使用のために適切な水中油エマルジョのさらなる議論については、共有に係る、特許出願番号09/015,7361998年1月29日出願を参照のこと。本発明のミクロエマルジョンを調製した後、高分子がそれに吸着されて、ミクロエマルジョンのアジュバント効果を増加させ得る。本発明の組成物のさらなる成分は、オリゴヌクレオチドである。これは、少なくとも1つのCpGモチーフを含む。本明細書において使用される場合、用語CpGモチーフとは、オリゴヌクレオチドのジヌクレオチド部分をいい、これは、シトシンヌクレオチド、続いてグアノシンヌクレオチドを含む。そのようなオリゴヌクレオチドは、当業者に周知の従来のオリゴヌクレオチド合成を用いて調製され得る。好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドは、改変された骨格例えば、ホスホロチオエートまたはペプチド核酸を含み、その結果、オリゴヌクレオチドへヌクレアーゼ耐性を付与する。改変された骨格は、当業者に周知である。好ましいペプチド核酸は、以下に詳細に記載されている:以下の米国特許第5,821,060号、第5,789,573号、第5,736,392号、および第5,721,102号、日本国特許公開10-231290、欧州特許番号839,828、およびPCT公開番号WO98/42735、WO98/42876、WO98/36098、WO98/27105、WO98/20162、WO98/16550、WO98/15648、WO98/04571、WO97/41150、WO97/39024、およびWO97/38013、これらの開示は、その全体が参考として本明細書において援用される。このオリゴヌクレオチドは、好ましくは、約6と約100との間のヌクレオチド、より好ましくは約8と約50の間のヌクレオチド、最も好ましくは約10と約40の間のヌクレオチド。さらに、本発明のオリゴヌクレオチドは、糖部分および窒素塩基部分の置換物を含み得る。好ましいオリゴヌクレオチドは、例えば、以下に開示される:Kriegら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、1998,95,12631-12636、Klinmanら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、1996,93,2879-2883、Weinerら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA、1997,94,10833-10837、Chuら、J.Exp.Med.,1997,186,1623-1631,Brazolot-Millanら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1998,95,15553-15558、Ballasら、J.Immunol.、1996,157,1840-1845、Cowderyら、J.Immunol.,1996,156,4570-4575、Halpernら、Cell.Immunol.、1996,167,72-78、Yamamotoら、Jpn.J.CancerRes.、1988,79,866-873、Staceyら、J.Immunol.、Messinaら、J.Immunol.,1991,147,1759-1764、Yiら、J.Immunol.、Yiら、J.Immunol.、1996,157、5394-5402、Yiら、J.Immunol.、1998,160,4755-4761、Romanら,Nat.Med.、1997,3,849-854、Davisら、J.Immunol.、1998,160,870-876、Lipfordら,Eur.J.Immunol.、1997,27,2340-2344、Moldoveanuら、Vaccine、1988,16,1216-1224、Yiら、J.Immunol.、1998、160,5898-5906、PCT公開WO96/02555,PCT公開WO98/16247、PCT公開WO98/18810、PCT公開WO98/40100、PCT公開WO98/55495,PCT公開WO98/37919、およびPCT公開WO98/52581、これらの開示は、その全体が本明細書において参考として援用される。本発明のオリゴヌクレオチドは、少なくとも1つのCpGモチーフを含むが、複数のCpGモチーフを含み得ることが理解されるべきである。好ましいオリゴヌクレオチドは、例えば、以下のようなヌクレオチド配列を含む:。本発明の好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドはCpGモチーフを含み、このCpGモチーフは、モチーフの5’側で2個のプリンおよびモチーフの3’側で2個のピリミジンに隣接される。しかし、本明細書中に記載の油滴エマルジョンと組み合わせられる場合に、オリゴヌクレオチドがTh1リンパ球刺激を増大させる限り、CpGモチーフを含む任意のオリゴヌクレオチドが本発明において使用され得ることが理解されるべきである。別の好ましい実施形態では、高分子は、ミクロエマルジョンに吸着した免疫原性DNAまたは免疫原性タンパク質である。このような吸着は、強力なアジュバント効果を有するミクロエマルジョンを作製する。本発明はまた、吸着された抗原性および/または免疫原性の分子を有する上記ミクロエマルジョンを含む免疫原性組成物に関する。アジュバント組成物は、一般的に、アジュバントと免疫原性組成物において使用される抗原性物質とを合わせる前に、上記成分から調製される。抗原または抗原性物質の用語は、以下を含む任意の物質をいう:動物の血流に対して外来性である場合に、このような動物の組織に接近するとすぐに特異的抗体の形成を刺激し、そしてインビボまたはインビトロにおいて同一抗体と特異的に反応する、タンパク質もしくはタンパク質-ポリサッカリド、タンパク質-リポポリサッカリド、ポリサッカリド、リポポリサッカリド、ウイルスサブユニット、ウイルス全体または細菌全体。さらに、これは、抗原に対するレセプターを有するT-リンパ球好ましくは、Th1リンパ球の増殖を刺激し、そしてこのリンパ球と反応して、細胞性免疫と称される一連の応答を開始させ得る。ハプテンは、この抗原の定義の範囲内である。ハプテンは、その免疫学的特異性を決定する、抗原性分子または抗原性複合体の部分である。通常、ハプテンは、天然に存在する抗原の中のペプチドまたはポリサッカリドである。人工の抗原において、これはアルサニル酸誘導体のような低分子量物質であり得る。ハプテンは、インビボまたはインビトロにおいて、同一抗体またはTリンパ球と特異的に反応する。代替的な記述子は、抗原性決定基、抗原性構造基およびハプテン基である。本発明の好ましい実施形態では、抗原性物質は、例えば、以下のようなウイルス由来である:ヒト免疫不全ウイルスHIV、B型肝炎ウイルスHBV、C型肝炎ウイルスHCV、単純ヘルペスウイルスHSV、サイトメガロウイルスCMV、インフルエンザウイルスfluおよび狂犬病ウイルス。好ましくは、抗原性物質は、HSV糖タンパク質gD、HIV糖タンパク質gp120、およびHIVp55gagからなる群から選択される。本発明の他の好ましい実施形態では、抗原性物質は、例えば、以下のような細菌由来である:Helicobacterpylori、Haemophilusinfluenza、コレラ、ジフテリア、破傷風、Neisseriameningitidis、および百日咳。本発明の他の好ましい実施形態では、抗原性物質は例えば、マラリア寄生生物のような寄生生物由来である。本発明の別の好ましい実施形態では、抗原は本発明の微粒子の表面に吸着される。抗原は、当該分野において公知の方法によって産生され得るか、または商業的供給源から購入され得る。本発明の範囲内である抗原としては、以下が挙げられる:不活化したウイルス粒子全体、単離されたウイルスタンパク質およびタンパク質サブユニット、細胞全体および細菌、細胞膜および細胞壁タンパク質など。いくつかの好ましい抗原を以下に記載する。単純ヘルペスウイルスHSVrgD2は、遺伝子操作されたチャイニーズハムスター卵巣細胞において産生される組換えタンパク質である。このタンパク質は短縮化されたtruncated正常なアンカー領域を有し、これは組織培養培地中に分泌されるグリコシル化タンパク質を生じる。このgD2は、CHO培地において90より高い純度まで精製され得る。ヒト免疫不全ウイルスHIVenv-2-3は、遺伝子操作されたSaccharomycescerevisiaeにおいて産生されるHIVエンベロープタンパク質の組換え形態である。このタンパク質は、HIVgp120のタンパク質領域全体を表すが、酵母から精製される場合にはグリコシル化されず、そして変性する。HIVgp120は、上記のgD2に類似の様式でCHO細胞において産生される、完全にグリコシル化された分泌形態のgp120である。免疫原性組成物における使用に適切なさらなるHSV抗原は、PCT公開WO85/04587およびWO88/02634これらの開示は、それらの全体において本明細書中で参考として援用されるに記載される。アンカー領域を欠失する短縮化された表面抗原であるgB抗原およびgD抗原の混合物が特に好ましい。免疫原性組成物における使用に適切なインフルエンザ抗原は、市販されている。以下の実施例において使用され得る抗原としては、FLUOGEN登録商標Parke-Davisより製造、DupharDupharB.V.より製造、およびインフルエンザワクチンバッチA41influenzavaccinebatchA41InstitutoVaccinogenoPozziより製造が挙げられるが、これらに限定されない。免疫原性組成物における使用に適切なマラリア抗原は、米国特許出願番号336,2881989年4月11日出願、および米国特許第4,826,957号これらの開示は、それらの全体において本明細書中で参考として援用されるに記載される。免疫原性組成物における使用に適切なさらなるHIV抗原は、米国特許出願番号490,858号1990年3月9日出願および公開された欧州特許出願番号1811501986年5月14日これらの開示は、それらの全体において本明細書中で参考として援用されるに記載される。免疫原性組成物における使用に適切なサイトメガロウイルス抗原は、米国特許第4,689,225号、米国特許出願番号367,3631989年6月16日出願、およびPCT公開WO89/07143これらの開示は、それらの全体において本明細書中で参考として援用されるに記載される。免疫原性組成物における使用に適切なC型肝炎ウイルスは、以下において記載される:PCT/US88/04125、公開された欧州特許出願番号3182161989年5月31日、公開された日本国特許出願番号1-5005651988年11月18日出願、カナダ国特許出願番号583,561、およびEPO388,232これらの開示は、それらの全体において本明細書中で参考として援用される。異なるセットのHCV抗原が、欧州特許出願番号90/302866.01990年3月16日出願および米国特許出願番号456,6371989年12月21日出願、およびPCT/US90/01348これらの開示は、それらの全体において本明細書中で参考として援用されるに記載される。本発明の免疫原性組成物は、コレラ、ジフテリア、破傷風、百日咳、インフルエンザ、麻疹、髄膜炎、流行性耳下腺炎、ペスト、ポリオ、狂犬病、ロッキー山紅斑熱、風疹、痘瘡、腸チフスtyphoid、チフスtyphus、ネコ白血病ウイルス、および黄熱病を含むが、これらに限定されない疾患および感染に対して、鳥類および哺乳動物を免疫するために使用され得る。本発明の免疫原性組成物の組成は、有効量の抗原を使用する。すなわち、アジュバントと組み合わせて、免疫したウイルス、細菌、真菌類、マイコプラスマ、または寄生生物への引き続く曝露から被験体に防御を与えるように、被験体に特異的かつ十分な免疫学的応答好ましくは、Th1リンパ球応答を生じさせる量の抗原が含まれる。本発明において使用され得る各々すべての抗原について特定の指針を提供する、単回用量の指示は割り当てられ得ない。抗原の有効量は、その固有の活性および純度の関数であり、そして慣用的な実験を通して当業者によって経験的に決定される。本発明のアジュバント組成物は、細胞全体すなわち、ウイルス性免疫原性組成物と組み合わせて使用され得、同様に、精製された抗原すなわち、組換えDNA技術または合成によって調製されるタンパク質サブユニット免疫原性組成物もしくはペプチド免疫原性組成物と組み合わせて使用され得ることが意図される。本発明のアジュバント組成物は安定であるので、抗原およびエマルジョンは、単純に振盪することによって混合され得る。他の技術例えば、このアジュバントと抗原の溶液または懸濁液との混合物を小さな開口部例えば、皮下注射針に急速に通過させることによって、有用な免疫原性組成物は容易に提供される。本発明に従う免疫原性組成物は、約1ナノグラム~約1000マイクログラムの核酸好ましくは、DNA例えば、CpGオリゴヌクレオチドのようなを含む。いくつかの好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、約10ナノグラム~約800マイクログラムの核酸を含む。いくつかの好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、約0.1~約500マイクログラムの核酸を含む。いくつかの好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、約1~約350マイクログラムの核酸を含む。いくつかの好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、約25~約250マイクログラムの核酸を含む。いくつかの好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、約100マイクログラムの核酸を含む。当業者は、任意の所望される量の核酸を含む免疫原性組成物を容易に処方し得る。本発明に従う免疫原性組成物は、無菌性で、かつ発熱物質を含まずに提供される。免疫原性組成物は、単位投薬量形態で都合良く投与され得、そして例えば、Remingston’sPharmaceuticalSciencesMackPub.Co.、Easton、PA、1980この開示は、その全体において本明細書中で参考として援用されるに記載されるような、薬学分野において周知の任意の方法によって調製され得る。本発明はまた、宿主動物において免疫応答を刺激する方法に関する。この方法は、免疫応答を誘導するに有効な量の上記免疫原性組成物を動物に投与する工程を包含する。宿主動物は、好ましくは、哺乳動物、より好ましくはヒトである。好ましい投与経路としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:筋内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、眼内および経口、ならびに経皮的または吸入もしくは坐剤による。最も好ましい投与経路としては、筋内注射、腹腔内注射、皮内注射、および皮下注射が挙げられる。本発明のいくつかの実施形態に従って、免疫原性組成物は、無針注入デバイスneedlelessinjectiondeviceこれは周知であり、そして広範に入手利用可能であるを使用して、宿主動物に投与される。当業者は、本明細書の教示に従って、無針注入デバイスを使用し、個体の細胞に免疫原性組成物を送達し得る。本発明はまた、ウイルス感染、細菌感染、または寄生生物感染に対して宿主動物を免疫する方法に関し、この方法は、防御応答を誘導するに有効な量の上記免疫原性組成物を動物に投与する工程を包含する。宿主動物は、好ましくは、哺乳動物、より好ましくはヒトである。好ましい投与経路は、上記されている。宿主動物の予防的または治療的処置は、任意の病原体に指向し得るが、好ましい病原体としては、上記のウイルス病原体、細菌病原体、および寄生生物病原体が挙げられるしかし、これらに限定されない。本発明はまた、宿主動物においてTh1免疫応答を増大させる方法に関する。この方法は、Th1免疫応答を誘導するに有効な量の上記免疫原性組成物を動物に投与する工程を包含する。宿主動物は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。好ましい投与経路は、上記されている。当業者は、Th1リンパ球、ならびにその応答および測定に容易に精通する。本発明は、単独または互いとの組み合わせにおいて免疫応答を誘発するために使用される吸着抗原を有する微粒子またはミクロエマルジョンの使用を意図する。すなわち、本発明は、吸着された抗原を有する微粒子、吸着された抗原または免疫刺激分子を有するミクロエマルジョン、および吸着された抗原を有する微粒子と吸着された抗原もしくは免疫刺激分子を有するミクロエマルジョンとの組み合わせを包含する。以下の実施例によって示されるように、吸着された高分子を有する本発明の微粒子は、強力な免疫応答を誘発する。さらに、本発明の油滴エマルジョンはまた、強力な免疫応答を誘発する。従って、吸着された高分子を有する本発明の微粒子と本発明の油滴エマルジョンアジュバントとの組み合わせは、免疫応答を誘発するための強力なツールである。本発明はさらに、本発明を明らかにするために意図された以下の実施例によって例示される。前述の例は、本発明を例示することを意味し、そして如何なる様式でも本発明を制限すると解釈されるべきではない。当業者は、本発明の精神および範囲内である変更を認識する。本明細書中で引用されるすべての参考文献は、それらの全体において本明細書中で参考として援用される。C.実験以下は、本発明の実施についての特定の実施形態の例である。この例は、例示目的のために提供され、そして如何なる様式でも本発明の範囲を制限するように意図されない。用いられた数値例えば、量、温度などに関して精度を確実にするように努力がなされたが、当然のことながら、幾分かの実験誤差および偏差は許容されるべきである。実施例1エマルジョン安定剤としてPVAを使用するブランク微粒子の調製ブランク微粒子例えば、吸着された高分子または捕捉されたentrapped高分子を有さないを、ポリビニルアルコールPVAを使用して、以下のように作製した。溶液は、以下を使用した:1ジクロロメタン中の6RG504PLGBoehringerIngelheim2水中の10ポリビニルアルコールPVAICN。特に、10mlのポリマー溶液と1.0mlの蒸留水とを合わせること、そしてOmnibenchtopホモジナイザーを使用し、10Krpmにて10mmプローブと共に3分間ホモジナイズして、水/油w/oエマルジョンを形成することによって、この微粒子は作製された。このw/oエマルジョンを40mlの10PVA溶液に添加し、そして3分間ホモジナイズして、水/油/水w/o/wエマルジョンを形成した。このw/o/wエマルジョンを溶媒のエバポレーションのために一晩攪拌しながら放置し、微粒子を形成する。形成された微粒子を、4回の遠心分離によって水で洗浄し、そして凍結乾燥した。次いで、今後の使用のために、この微粒子をMalvernMaster整粒器でサイズ分類した。実施例2CTABを使用するブランク微粒子の調製ブランク微粒子を、CTABを使用して、以下のように作製した。溶液は、以下を使用した:1ジメチルクロリド中の4RG504PLGBoehringerIngelheim2水中の0.5CTABSigmaChemicalCo.、St.Louis、MO。特に、12.5mlのポリマー溶液と1.25mlの蒸留水とを合わせること、そしてOmnibenchtopホモジナイザーを使用し、10Krpmにて10mmプローブと共に3分間ホモジナイズして、w/oエマルジョンを形成することによって、この微粒子は作製された。このw/oエマルジョンを50mlの0.5CTAB溶液に添加し、そして3分間ホモジナイズして、w/o/wエマルジョンを形成した。このw/o/wエマルジョンを溶媒のエバポレーションのために一晩攪拌しながら放置し、微粒子を形成する。次いで、形成された微粒子を、38μメッシュを通して濾過し、4回の遠心分離によって水で洗浄し、そして凍結乾燥した。次いで、今後の使用のために、この微粒子をMalvernMaster整粒器でサイズ分類した。実施例3SDSを使用するブランク微粒子の調製ブランク微粒子を、SDSを使用して、以下のように作製した。溶液は、以下を使用した:1ジメチルクロリド中の6RG504PLGBoehringerIngelheim2水中の1SDSSigmaChemicalCo.、St.Louis、MO。特に、12.5mlのポリマー溶液と50mlのSDS溶液とを合わせること、そしてOmnibenchtopホモジナイザーを使用し、10Krpmにて10mmプローブと共に3分間ホモジナイズすることによって、この微粒子は作製された。このエマルジョンを溶媒のエバポレーションのために一晩攪拌しながら放置した。今後の使用のために、形成された微粒子を、38μメッシュを通して濾過し、4回の遠心分離によって水で洗浄し、そして凍結乾燥した。次いで、今後の使用のために、この微粒子をMalvernMaster整粒器でサイズ分類した。実施例4ブランク微粒子へのタンパク質の吸着タンパク質を以下のように微粒子に吸着させた。A.p55gagの1および3の理論上負荷theoreticalload1および3の理論上負荷を達成するために、実施例3においてのように生成された50mgの凍結乾燥したブランクSDS/PLG微粒子を、Nalgene遠心管内に配置し、そして10mlの25mMホウ酸緩衝液pH9をp55gagタンパク質ChironCorporation、Berkeley、CAを含有する6M尿素と共に添加した:a1の理論上負荷のために、10mlの50μg/mlのp55gag溶液を使用した;そしてb3の理論上負荷のために、10mlの150μg/mlのp55gag溶液を使用した。この混合物を、振盪させながら、室温にて一晩インキュベートした。翌日、微粒子を遠心分離し、そして塩基加水分解basehydrolysis、次ぐビシンコニン酸bicinchoninicアッセイBCA;Pierce、Rockford、ILによりタンパク質負荷を分析して、吸着した量を決定した。今後の使用のために、微粒子を10mlのホウ酸塩/6M尿素緩衝液で2回洗浄し、そして30mlの水で2回洗浄し、そして凍結乾燥した。B.HCVコア抗原HCVcoreantigenの1の理論上負荷1の理論上負荷を達成するために、50mgの凍結乾燥したブランクSDS/PLG微粒子を、Nalgene遠心管内に配置し、そして10mlの30mMクエン酸緩衝液pH6.5を単一HCVコアタンパク質10mlの50μg/mlHCVコアタンパク質溶液;ChironCorporation、Berkeley、CAを含有する6M尿素と共に添加した。この混合物を、振盪させながら、室温にて一晩インキュベートした。翌日、微粒子を遠心分離し、そして、塩基加水分解、次ぐビシンコニン酸アッセイBCA;Pierce、Rockford、ILによりHCV濃度についてタンパク質負荷を分析して、吸着した量を決定した。今後の使用のために、微粒子を30mlのクエン酸塩/6M尿素緩衝液で2回洗浄し、そして30mlの水で2回洗浄し、そして凍結乾燥した。実施例5微粒子の吸着効率実施例4からの吸着タンパク質を有する凍結乾燥微粒子を、塩基加水分解を使用して、吸着されたタンパク質の合計について、以下のように分析した。10mgの凍結乾燥した吸着された粒子を、5のSDSを有する2mlの0.2NNaOH中で4時間加水分解し、中和し、1:10に希釈し、そしてMicroBCAタンパク質アッセイPierce、Rockford、ILを使用して、タンパク質含量について分析した。表1に示されるように、改変された表面を有する微粒子をCTABおよびSDSのような界面活性剤を用いて調製し、両方とも単独のPVAを使用して作製される微粒子よりも効率的にタンパク質を吸着した。実施例6A.gag-吸着微粒子の免疫原性実施例4に記載されるように、PVAまたはSDSを使用して生成されるgag-吸着微粒子、ならびに付随した微粒子を有さないp55gag単独ネガティブコントロールとしておよびワクシニアgag-polコントロールポジティブコントロールとしてを、マウスに筋内投与した。この動物を7日目および14日目に追加免疫した。投与された総用量を、表2および3に示す。最後の免疫の2週間後に脾臓を収集し、そしてDoeら、Proc.Natl.Acad.Sci.199693:8578-8583に記載のように、CTL活性をアッセイした。リンパ球培養物を、以下のように調製した。免疫したマウス由来の脾臓細胞scを、24ウェルディッシュにおいて1ウェルあたり5×106細胞で培養した。これらの細胞のうち、1×106個を、10μMの濃度で37°Cにて1時間、合成エピトープ性ペプチド形態HIV-1SF2タンパク質で感作し、洗浄し、そして熱非働化胎仔ウシ血清、5×105Mの2-メルカプトエタノール、抗生物質、および5インターロイキン2RatT-Stim、CollaborativeBiomedicalProducts、Bedford、MAを補充した2mlの培養培地[50RPMI1640および50α-MEMGIBCO]において残存する4×106個の未処理scと共に同時培養した。3日目および5日目に、1mlの新鮮な培養培地で細胞に給餌feedし、そして6日目に細胞傷害性をアッセイした。細胞傷害性細胞アッセイを、以下のように実施した。51Cr放出アッセイにおいて使用されたSvBALBH-2dSvBおよびMC57H-2b標的細胞は、クラスIIMHC分子ではなく、クラスIMHC分子を発現する。約1×106個の標的細胞を、50μCi1Ci=37Gbpの51Crおよび合成HIV-1ペプチド1mMを含有する200μlの培地中で60分間インキュベートし、そして3回洗浄した。エフェクターE細胞と5×103個の標的T細胞とを、96ウェルの丸底組織培養プレート中の200μlの培養培地において種々のE/T比率で4時間培養した。二連のウェルからの平均cpmを使用して、特異的な51Cr放出のを算出した。表2および3に示されるように、SDS-PLG/p55微粒子は、ワクシニアコントロールに匹敵し得る活性を有しており、そしてPVA-PLG/p55微粒子およびp55gagタンパク質処方物よりも活性であった。詳細には、表2において示されるように、p55gagタンパク質は、10μg、25μgおよび50μgの濃度で不活性であった。さらに、表3において示されるように、SDS-PLG/p55処方物は、PVA-PLG/p55およびp55gagタンパク質処方物よりも活性であり、このことは、このタンパク質が、PVA-PLG/p55およびp55gagタンパク質処方物と比較してSDS-PLG/p55処方物において、より効率的に微粒子に吸着されたことを示す。実施例7改変した表面を有するpCMVgp120DNA吸着微粒子の調製吸着したgp120をコードするプラスミドDNAを有する微粒子を以下のように調製した。20mgのブランクの微粒子を、実施例1および2に記載するように調製し、これを4°Cにて3時間1.0ml容積中で、pCMVgp120DNAの増加濃度でインキュベートした。インキュベーション後、この微粒子を遠心分離し、Tris-EDTA緩衝液で2回洗浄し、そして一晩凍結乾燥した。この微粒子を実施例5に記載するように加水分解し、そしてA260nmで吸着したDNAの量について分析した。表4は、PLG-PVAおよびPLG-CTAB微粒子の負荷効率を図示する。この表に示すようにPLG-CTAB微粒子は、対応するPLG-PVA粒子よりも効果的に吸着する。実施例8HCV-E2吸着微粒子を、先の実施例に記載するように、PVAおよびいくつかの異なる界面活性剤を使用して調製した。C型肝炎ウイルスHCV由来のE2タンパク質を以下のように微粒子の表面上に吸着させた:0.2mg/mlのE2を、PBS中で20mgの微粒子に添加し、全容量0.5ml中の0.5w/wE2/PLGでの溶液を形成した。この溶液を37°Cにて1.5時間インキュベートし、次いで遠心分離した。上清を収集し、次いでmicroBCAによりタンパク質含有量のついて測定した。この結果を表5に示す。この結果は、本発明の微粒子による高分子の優れた吸着を確認した。実施例9gp120タンパク質の吸着微粒子を、先の実施例に記載するようにPVAを使用して、調製した。微粒子をまた、以下のように、NaOleate、陰イオン性界面活性剤を使用して調製した:w/o/wエマルジョンを、内部水相として1.67mlの30mMのNaCitratepH6、溶媒として16.7mlのジクロロメタン中の6ポリマーRG505PLGBoehringerIngelheim油相、および外部水相として66.8mlの0.4NaOleateを用いて調製した。これらの微粒子を、NaOleate-PLGw/o/wとして以下の表6に表す。さらに、微粒子を、水中に油の製剤形態で、NaOleateを使用して調製し、そしてこれらの微粒子をNaOleate-PLGo/wとして以下の表6に表す。gp120タンパク質を、以下のように、調製した微粒子の表面に吸着させた:0.388mg/mlのタンパク質をPBS中の約20mgの微粒子に添加し、総容量0.8ml中の約1.4w/wのgp120/PLGでの溶液を形成した。この溶液を、37°Cにて1.5時間インキュベートし、次いで遠心分離した。上清を収集し、次いでmicroBCAによりタンパク質含有量について測定した。結果を表6に示す。この結果は、本発明の微粒子による高分子の優れた吸着を確認した。実施例10リステリオリジンlisteriolysinタンパク質の吸着微粒子を、先の実施例に記載するようにPVAおよびCTABを使用して調製した。Listeriamonocytogenes由来のリステオリジンタンパク質LLOを、以下のように微粒子の表面上に吸着させた:1.0mg/mlのLLOをPBS中の100mgの微粒子に添加し、総容量5ml中の1w/wLLO/PLGでの溶液を形成した。この溶液を37°Cにて1.5時間インキュベートし、次いで遠心分離した。上清を収集し、次いでmicroBCAによりタンパク質含有量について測定した。結果を表7に示す。この結果は、本発明の微粒子による高分子の優れた吸着を確認した。実施例11アジュバントとしてのアルミニウム塩の効果p55gagDNA吸着PLG微粒子をCTABを使用して上記のように調製した。この微粒子を2種類の濃度でマウスに筋肉内注射し、そしてコントロールとして、DNAのみを同じ2種類の濃度で注射した。さらに、ある試験で、50μgのリン酸アルミニウムを注射したCTAB組成物に添加した。各処方物を10匹のマウスに注射した。このマウスを28日後にブーストした。二度目の免疫化の2週間後、血清を収集し、そして標準誤差SEと一緒に、各血清の相乗平均力価GMTを測定した。この結果を表8で要約し、一次的な値および対数値の両方で表す。各数は、10匹のマウスから得た結果の平均である。これらの結果を統計学的に比較するために、各々についてP-値を求めた:DNA-CTAV対DNA-CTABALUMP-値=0.0017;DNA-CTABALUM対DNAのみP-値<0.0001;およびDNA-CTAB10μg対DNAのみ10μgP-値<0.0001。これらのP-値は、表8中の値の統計学的有意性を確認した。実施例12ζ電位の測定ζ電位の測定をCoulterCorp.,Miami,FL33116製のDELSA440SXゼータサイザーzetasizerで行った。このシステムを、Coulter製の移動度標準物質EMPSL7、ポリスチレンラテックスビーズの水性懸濁液を使用して較正した。滅菌水でサンプルセルをリンスした後、サンプルをサンプルセルに添加した。次いで、ビームをその最も低い値に合わせることにより計数器をゼロに設定した。参照について電流を0.7mA、そしてサンプルについて20Vに設定した。4つ全てのビームからの検出器レベルを確認し、次いでソフトウエアからrunを選択することによりサンプルを実行し、そして周波数測定を読み出した。このビームは20Hz離れているべきである。次いで、各サンプルについて平均ζ電位を読み出す。本発明のいくつかの微粒子処方物についての測定を読み出し、そして結果を表9に示す。結果が示すように、高分子の微粒子表面への吸着が微粒子のζ電位を変化させる。実施例13カプセル化した高分子および吸着した高分子を有する微粒子A.PLG微粒子を、RG505PLGおよびPVAを使用して調製し、そしてこれは、アジュバントLTK63をカプセル化する。100mgの微粒子を400μg/mlのp24gagタンパク質を含む5mlのPBSとインキュベートした。次いで、この混合物を一晩室温で揺り動かしながらインキュベートし、遠心分離することにより20mlのPBSで2回、そして水で1回洗浄し、次いで、凍結乾燥した。塩基性加水分解および中和後、吸着したタンパク質およびカプセル化したアジュバントを測定し;結果を表10に表す。B.PLG微粒子を、以下のように、SDSおよびRG505PLGを使用して調製し、そしてこれは、アジュバントCpGオリゴヌクレオチドをカプセル化する:5mlのDCM中の6RG505ポリマーを、0.5mlの50mMTris/EDTA中の5mg/mlのCpGと乳化し、w/oエマルジョンを形成した。このw/oエマルジョンを20mlの1SDSに添加し、次いで乳化し、w/o/wエマルジョンを形成した。微粒子を、一晩、溶媒エバポレーションにより形成し、次いで洗浄し、遠心分離し、そして乳化した。10mgのCpG-カプセル化微粒子を1mlのDCMに溶解した。0.5mlの水を抽出オリゴヌクレオチドに添加し、次いで混合物を遠心分離し、そして水層を移動相としてPBSでサイズ排除カラム上に注入した。10mgのプラセボ微粒子を100μgのCpGオリゴヌクレオチドと混合し、そしてDCMで上記のように抽出し、そして標準物質としてカラム上に流した。粒子中に存在する閉じ込められたCpGオリゴヌクレオチドの量を、標準物質に対して算出した。p55gagを以下のようにCpG-カプセル化微粒子上に吸着した:50mgの乳化したCpG-カプセル化微粒子を、140μgのp55gagタンパク質を含む6MウレアpH9と5mlの25mMホウ酸塩と共に一晩インキュベートした。この混合物を室温で一晩揺り動かしながらインキュベートし、20mlのホウ酸緩衝液/6Mウレアで2回、そして20mlの水で2回洗浄し、次いで、凍結乾燥した。10mgのCpG-カプセル化/p55gag吸着した微粒子を、塩基加水分解し、そして取り込んだ高分子および吸着した高分子を測定した。他に記載しない限り、目標の負荷は、1.0であった。結果を表10に表す。実施例142種類の吸着高分子を有する微粒子A.本発明に従って、2種類以上の高分子を、両方の高分子を吸着している微粒子を含む組成物中に投与し得るか、または各々単一の高分子を吸着している、2種類以上の異なる微粒子を含む組成物中に投与し得る。例えば、以下のように、微粒子を調製し、これは、E2ポリペプチドおよびアジュバントCpGオリゴヌクレオチドの両方を吸着している:ブランクのPLG-CTABを先に記載したように調製した。20mgの乳化した微粒子を生理食塩水中の1mlの200μg/mlのE2と4時間インキュベートした。この混合物を室温で4時間揺り動かし、10,000Gで遠心分離することにより20mlの正常な生理食塩水で2回洗浄し、そしてペレットを、室温で4時間、200μg/mlのCpGを含む1mlのTE緩衝液中のCpG溶液に再懸濁した。最後の上清を、遠心分離することによりTE緩衝液で2回洗浄し、次いで、凍結乾燥した。10mgの吸着したCpGおよびE2を有する微粒子を塩基加水分解し、そしてタンパク質濃度をBACにより決定し、そして上清中の残りの量のCpGをHPLCにより分析し、微粒子上に吸着したCpGの量を測定した。結果を表11に表し、これは、両方の微粒子についてポジティブな吸着を示す。B.微粒子を本発明に従って調製した。一部をE2ポリペプチドを吸着するために使用し、一方、他部分をアジュバントCpGオリゴヌクレオチドを吸着するために使用した。ブランクのPLG-CTABを先に記載するように調製した。20mgの凍結乾燥した微粒子を生理食塩水中の1mlの200μg/mlのE2と4時間インキュベートした。この混合物を室温で4時間揺り動かし、10,000Gで遠心分離することにより、20mlの正常な生理食塩水で2回洗浄し、次いで、凍結乾燥した。別々に、20mgの凍結乾燥した微粒子をTE緩衝液中の1mlの200μg/mlのCpGと4時間インキュベーションした。この混合物を室温で4時間揺り動かし、20mlのTE緩衝液と10,000Gで遠心分離することにより2回洗浄し、次いで、凍結乾燥した。吸着した高分子のパーセントの測定の結果を表11に現す。実施例15界面活性剤detergentとPVAの組み合わせを使用して形成された微粒子以下の手順を使用して、2種類の界面活性剤surfactantを含む微粒子を形成した:PVAおよび界面活性剤:10mlのDCM中の5PLGポリマーおよび0.2の界面活性剤DOTAPを1.0mlの蒸留水と3分間12,000rpmで乳化し、第1のw/oエマルジョンを形成した。このw/oエマルジョンを40mlの0.8PVAに添加し、そして3分間乳化し、第2のw/o/wエマルジョンを形成した。この第2のw/o/wエマルジョンを一晩攪拌し、溶媒をエバポレートし、そして微粒子を形成した。この微粒子を蒸留水中で2回洗浄し、そして凍結乾燥した。次いで、この微粒子を本発明に従って、高分子の吸着に用意した。同じ手順を使用して、PVAおよび界面活性剤DDAの組み合わせを含む微粒子を形成した。実施例16吸着したp55DNAを有する微粒子の免疫原性微粒子を界面活性剤CTABまたはDDAを使用して、先の実施例のように形成した。p55DNAを微粒子へ吸着させ、そして免疫原性を先の実施例に記載する手順を使用して評価した。結果を以下の表12に要約する。実施例17吸着したルシフェラーゼDNAを有する微粒子を使用したインビボルシフェラーゼ発現微粒子をPLGおよび界面活性剤CTABを使用して、上記の手順を使用して形成した。ルシフェラーゼDNAを先に記載の方法を使用して、これらの微粒子上に吸着させた。5μg用量のルシフェラーゼDNAを使用するインビトロルシフェラーゼ発現を、ルシフェラーゼDNAのみ1248pgおよび上に吸着したルシフェラーゼDNAを有する微粒子2250pgを使用して測定した。インビボでのルシフェラーゼ発現を、以下のように投与後1日および14日目に筋肉において測定した:2つの群のマウスn=5を50μgのルシフェラーゼプラスミドまたは50μgのPLG-CTAB-ルシフェラーゼDNA微粒子のどちらかで各々注射した。マウスの両方の群を2本の肢で前脛骨TA筋に筋肉内注射した。2つの群における各マウスからの両方のTA筋肉を、1日または14日のどちらかで採取し、そして-80°C冷凍庫中で保存した。この筋肉を、ドライアイス上で乳鉢と乳棒ですった。粉状にした筋肉を、0.5mlの1×ReporterLysisBufferでエッペンドルフチューブに収集した。このサンプルを室温にて15分間ボルテックスした。3回の凍結/吸引後、サンプルを10分間14,000rpmでスピンした。各マウスのTA筋の上清を各時点でプールし、そして20ulのサンプルをルシフェラーゼ発現について強化閃光下で、ML3000Dynatechを使用してアッセイした。ルシフェラーゼ決定を化学発光アッセイを使用して行った。緩衝液を調製し、これは、1×ReporterLysisPromega中に1mg/mlのBSAを含む。10mg/mlでルシフェラーゼ酵素ストックPromegaを標準物質として使用して、500pg/20ulの濃度に希釈した。この標準物質を1:2に連続的に希釈し、Micrilite2プレートDynatechに落とし、標準曲線を作成した。20μlのブランクおよびサンプルをまた、プレート上に置き、1:2に連続的に希釈した。このプレートをML3000中に置き、そこで100ulのLuciferaseAssayReagentPromegaをウェルごとに注入した。強化閃光下で相対的光ユニットを各サンプルについて測定した。結果を、表13において以下に作表する。実施例18吸着した抗原対包括した抗原を用いる微粒子の免疫原性微粒子を、先の実施例において議論した手順を用いて調製した。次いで、E2タンパク質を、上記のようにその上に吸着させた。E2を用いて、その上に吸着させるのではなく、その中に包括させた微粒子もまた、上記のように調製した。この微粒子を、各型の微粒子を用いる10匹のマウスの免疫後にIgG抗体を誘導するそれらの能力について評価した。各マウスからの血清の相乗平均力価GMTを測定し、次いで、10匹の動物のグループについて平均した。標準誤差SEもまた計算した。フィッシャーのPLSD有意性レベル5をp=0.0006で測定した。その結果を以下の表14に示す。この結果は、本発明の吸着した微粒子を使用する体液性免疫応答の卓越した誘導を明確に実証する。実施例19HCVE1E2タンパク質を吸着した微粒子の免疫原性PLG-CTAB微粒子を、先の実施例において議論した手順を用いて調製した。C型肝炎ウイルスHCVからのE1E2タンパク質をその上に吸着させた。その粒子を、ミョウバンアジュバントのあるなしで、10μgまたは100μgのタンパク質のいずれかを提供するように計算された微粒子の投薬量でマウスを免疫するために使用した。相乗平均力価を計算し、そしてその結果を以下の表15に示す。この結果が示すように、タンパク質を吸着した微粒子は、10μg用量で卓越した免疫応答を産生する。このことは、この微粒子が、遊離のDNAがこのような応答を生成することができない、低い用量で免疫応答を誘発する際に有用である利点を有することを実証する。実施例20p24gagタンパク質を吸着した微粒子の免疫原性PLG-PVA微粒子を、先の実施例に議論した手順を用いて調製した。次いで、タンパク質p24gagを、上記のようにその上に吸着させた。その微粒子を、10匹のマウスの免疫後にIgG抗体、IgG1抗体、およびIgG2a抗体を誘導するそれらの能力について評価した。2回目の免疫後2週間2wp2マウスおよび3回目の免疫後2週間2wp3のマウスから収集した血清の相乗平均力価GMTを測定し、次いで、10匹の動物のグループについて平均した。標準誤差SEもまた計算した。その結果を以下の表16に示す。この結果は、本発明の吸着した微粒子を使用する体液性免疫応答の卓越した誘導を明確に実証する。実施例21p55gagタンパク質および種々のアジュバントのIM免疫PLG/CTAB、PLG/SDS、およびPLG/PVA微粒子を、先の実施例において上記に記載したように形成した。微粒子上に吸着した抗原p55gagタンパク質を用いてマウスを免疫すること対遊離の可溶性p55gagを提供することの異なる効果を分析するために、そして、他の微粒子上にもまた吸着したか、あるいは可溶性形態で供給されるかの、アジュバントCpGCpGモチーフを有する20塩基長の一本鎖オリゴヌクレオチドを有することの効果を決定するために、微粒子の8つのグループを作製した。異なるグループは以下のように調製した:グループ1は、CpGを吸着したPLG/CTAB粒子と混合した可溶性p55gagタンパク質2M尿素を有するtris/NaCl緩衝液中で2mg/mlで酵母において産生された組換えHIVp55gagタンパク質を使用した。グループ2は、CpGを吸着したPLG/CTAB粒子と混合した、p55gagが吸着したPLG/SDS粒子を使用した。グループ3は、遊離のCpGと混合した、p55gagが吸着したPLG/SDS粒子を使用した。グループ4は、p55gagが吸着し、アジュバントを有さないPLG/SDS粒子を使用した。グループ5は、CpGが吸着したPLG/CTAB粒子と混合した、p55gagが包括されたPLG/PVA粒子を使用した。グループ6は、コントロールであり、抗原を使用せず、そして可溶性CpGを使用した。グループ7は、別のコントロールであり、可溶性p55gagタンパク質を使用し、そしてアジュバントを使用しなかった。グループ8は、別のコントロールであり、gag遺伝子を発現するワクシニアウイルスvvgagのみを使用し、アジュバントを使用しなかった。各グループについて、10匹のマウスを、十分な量の微粒子または遊離の分子で免疫し、その結果、グループ8これは、10×107pfuの用量で使用したを除いて、p55gag抗原およびCpGアジュバントの投薬量は各25μgであるグループに存在する場合。免疫の経路は、グループ8この経路はIPであるを除いて、IMであった。免疫後、血清抗p55IgG力価を測定し、その結果は以下の表17Aに見られる3wp2、2回目の免疫3週間後。表17Bは、アイソタイプであるIgG1成分およびIgG2a成分の分析を提供し、これは、IgG2A/IgG1の比を含む。CTLによる標的の溶解はまた、各グループを用いて測定された。それらの結果は、以下の表18Aおよび18Bに見られる2つの別々の実験。aSvB細胞株を、関連性のないペプチドでパルスしたbSvB細胞株を、p7gペプチドでパルスしたaSvB細胞株を、関連性のないペプチドでパルスしたbSvB細胞株を、p7gペプチドでパルスした実施例22p55gagタンパク質またはp55DNAおよび種々のアジュバントのIM免疫PLG微粒子を、以前に上記で記載されるように形成した。微粒子のグループを、微粒子に吸着したp55gagタンパク質でマウスを免疫すること対遊離の可溶性p55gagを提供することの異なる効果を分析するため、および、他の微粒子上にまた吸着したか、または遊離の可溶性形態で提供したかのアジュバントCpGCpG1またはCpG2、異なるオリゴヌクレオチドのグループを表すを有する効果を決定するために作成した。10匹の動物のグループを、以下のようにして異なる処方で免疫した:グループ1は、p55gagタンパク質2M尿素を有するtris/NaCl緩衝液中で2mg/mlで酵母において産生された組換えHIVp55gagタンパク質と混合した、CpGを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ2は、p55gagタンパク質が吸着したPLG/SDS粒子と混合した、CpG1を吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ3は、遊離のCpGと混合した、p55gagタンパク質が吸着したPLG/SDS粒子を使用した。グループ4は、p55gagタンパク質が吸着し、アジュバントを有さないPLG/SDS粒子を使用した。グループ5は、CpG1が吸着したPLG/CTAB粒子およびPVA/p55gagタンパク質が包括されたPLG/CTAB粒子を使用した。グループ6は、p55gagタンパク質が吸着したPLG/SDS粒子と混合した、CpG2を吸着したPLG/CTAB粒子である。グループ7は、コントロールであり、p55gagタンパク質が吸着したPLG/SDS粒子およびブランクPLG/CTAB微粒子を使用する。グループ8は、別のコントロールであり、遊離のCpG2のみを使用する。グループ9は、別のコントロールであり、遊離のCpG1のみを使用する。グループ10は、別のコントロールであり、遊離の可溶性p55gagタンパク質1のみを使用する。各グループについて、10匹のマウスを、十分な量の微粒子または遊離の分子で免疫し、その結果、p55gag抗原およびCpGアジュバントの投薬量は各25μgであったそのグループに存在する場合。免疫の経路はIMTAであった。免疫後、血清抗p55IgG力価を測定し、その結果は以下の表19Aに見られる。その血清を2wp22回目の免疫2週間後および2wp33回目の免疫2週間後で測定した。同様の実験を、種々のPLG微粒子を使用して、界面活性剤としてCTABを使用して、抗原としてp55gagDNAを使用して、アジュバントしてCpGまたはLTK63を使用して、および以下のグループを使用して行った:グループ1は、1μgのp55gagDNAを吸着したPLG/PVA/CTAB粒子を使用した。グループ2は、10μgのp55gagDNAを吸着したPLG/PVA/CTAB粒子を使用した。グループ3は、1μgのp55gagDNAを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ4は、10μgのp55gagDNAを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ5は、粒子またはアジュバントなしで、1μgの可溶性p55gagDNAを使用した。グループ6は、粒子またはアジュバントなしで、10μgの可溶性p55gagDNAを使用した。グループ7は、遊離のCpGと混合した、1μgのp55gagDNAを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ8は、吸着したCpG1を有するPLG/CTAB粒子と混合した、1μgのp55gagDNAを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ9は、遊離のLTK63と混合した、1μgのp55gagDNAを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ10は、吸着したLTK63を有するPLG/SDS粒子と混合した、1μgのp55gagDNAを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。各グループについて、10匹のマウスを、十分な量の微粒子または遊離の分子で免疫し、その結果、示されるように、p55gag抗原およびCpGアジュバントの投薬量は各25μgであったそのグループに存在する場合。免疫の経路はIMTAであった。免疫後、血清抗p55IgG力価を測定し、その結果は以下の表19Bに見られる。その血清を2wp22回目の免疫2週間後で測定した。同様の実験を、種々のPLG微粒子またはMF59ミクロエマルジョンを使用して、界面活性剤としてホスファチジン酸PA、DSS、DOTAP、またはCTABを使用して、抗原としてgp120タンパク質を使用して、および以下のグループを使用して行った:グループ1は、遊離のgp120タンパク質を有するMF59エマルジョンを使用した。グループ2は、吸着したgp120タンパク質を有するMF59/PAエマルジョンを使用した。グループ3は、包括されたgp120タンパク質を有するPLG/DSSを使用した。グループ4は、吸着したgp120タンパク質を有し、そしてアジュバントを有さないPLG/DSS粒子を使用した。グループ5は、吸着したgp120タンパク質が吸着したPLG/DSS粒子およびCpGが吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ6は、CpGを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ7は、CpG1を吸着したMF59/DOTAP80粒子と混合した、吸着したgp120タンパク質を有するPLG/DSS粒子を使用した。グループ8は、CpG1を吸着したMF59/DOTAP80エマルジョンを使用した。グループ9は、gp120タンパク質を吸着するMF59/PA粒子と混合した、CpGを吸着したPLG/CTAB粒子を使用した。グループ10は、遊離のCpG1および可溶性gp120タンパク質を使用した。各グループについて、10匹のマウスを、十分な量の微粒子または遊離の分子で免疫し、その結果、gp120抗原およびCpGアジュバントの投薬量は各25μgであったそのグループに存在する場合。免疫の経路はIMTAであった。免疫後、血清抗gp120IgG力価を測定し、その結果は以下の表19Cに見られる。その血清を2wp22回目の免疫2週間後および2wp33回目の免疫2週間後で測定した。上記のデータは、gp120タンパク質抗原の場合、CpGオリゴヌクレオチドが他のPLG粒子またはMF59/DOTAPエマルジョンに吸着されていても、いなくても、PLG粒子に吸着された抗原で免疫されたグループにおいて最も高い免疫応答が誘発されたことを実証する。対照的に、抗原がMF59/DOTAPエマルジョンに吸着され、そしてCpGオリゴヌクレオチドがPLG粒子に吸着された場合、免疫応答は基本的に些細であった。本明細書中の教示によって、当業者は、任意の特定の抗原についての最適な吸着された微粒子のおよび/またはミクロエマルジョンの組み合わせを容易に決定し得る。実施例23p55DNAの吸着および捕捉吸着されたp55DNAを有するPLG/CTAB微粒子を上記の実施例に記載されるように形成し、そしてブランク粒子、遊離CTAB、および遊離p55DNAに対するIM免疫後4週間および2度目のIM免疫後2週間の抗体の誘導について試験した。結果を以下の表20Aに表し、そして結果は、溶液中で遊離するよりも微粒子に吸着されたp55DNAを有することの明瞭な利点を示す。表20ACTLの誘導を同じ処方物で調べ、そして標的:エフェクターの比4:1、15:1、および60:1を使用しての1度目の免疫後3週後に測定した。結果を以下の表20Bに表し、結果は微粒子に吸着されたp55DNAの利点を示す。吸着されたp55DNAを有するPLG/CTAB微量粒子、および捕捉されたp55DNAを有するPLG/PVA微粒子を、上記の実施例に記載されるように形成した。マウスのIM免疫および抗体の誘導血清の収集および分析を、1度目の免疫後4週間4wplで、および2度目の免疫後2、4、6、13、ならびに15週間それぞれ2wp2、4wp2、6wp2、13wp2、ならびに15wp2で、上記の実施例に記載されるように行った。以下の表20Cに示される結果は、捕捉されたp55および遊離のp55の両方にわたって吸着された微粒子の明瞭な利点を実証する。表20C吸着されたp55DNA1DNAを有するPLG/CTAB/PVA粒子を、上記の実施例に記載されるように調整し、そしていくつかの特徴について測定した。結果を以下の表20Dに表す。表20DPLG/CTAB粒子およびPLG/PVA/CTAB粒子を、上記のように調製し、そしてp55DNAをそれらの粒子上に吸着した。マウスをp55DNAの用量が、1μgまたは10μgのいずれかである粒子で免疫した。2度目の免疫後2週間の抗体誘導実験の結果を上記の表19Bに表し、そして以下の表20Eに要約した。表20E界面活性剤としてDOTAPまたはCTABを使用し、かつ抗原としてp55DNAを使用する種々のPLG微粒子、またはMF59ミクロエマルジョンを調製し、そして以下のようにマウスを免疫するために使用した:グループ1は、吸着されたp55DNAを有するPLG/CTAB粒子を使用した。グループ2は、捕捉されたp55DNAを有するPLG/CTAB粒子を使用した。グループ3は、吸着されたp55DNAを有するPLG/DOTAP粒子を使用した。グループ4は、遊離CTABおよび遊離p55DNAを有するPLG粒子を使用した。グループ5は、遊離p55DNAを有するMF59/DOTAP80エマルジョンを使用した。グループ6は、遊離p55DNAを有するMF59エマルジョンを使用した。グループ7は、遊離p55DNAを単独で使用した。グループ8は、ブランクPLG粒子および遊離したp55DNAを使用した。グループ9は、ブランクPLG粒子、遊離CTAB、および遊離したp55DNAを使用した。各グループについて、10匹のマウスを十分量のp55DNAの用量が1μgである微粒子または遊離分子で免疫した。免疫の経路は、IMTAであった。免疫後、血清抗p55DNAの力価を測定し、測定結果を以下の表20Fに表した。血清を3wp11度目の免疫後、3週間および3wp22度目の免疫後、3週間で測定した。表20F抗原として1μgの用量他に示されない場合を除いてで、DOTAP40またはDOTAP80、およびp55DNAを使用するPLG/CTAB微粒子およびPLG微粒子、およびMF59ミクロエマルジョンを、上記に記載されるように調製し、そして以下のようにマウスを免疫するために使用した:グループ1は、バーストされていない吸着されたp55DNAを有するPLG/CTAB粒子を使用したすなわち、これらの粒子は、免疫の前にインビトロでバーストされる。グループ2は、吸着されたp55DNAを有するPLG/CTAB粒子を使用した。グループ3は、吸着されたp55DNAを有するPLG/CTAB粒子比フリーズドライを使用した。グループ4は、吸着されたp55DNAを有するMF59/DOTAP40エマルジョンを使用した。グループ5は、10μgの用量で、吸着されたp55DNAを有するMF59/DOTAP40エマルジョンを使用した。グループ6は、吸着されたp55DNAを有するMF59/DOTAP80エマルジョンを使用した。グループ7は、10μgの用量で、吸着されたp55DNAを有するMF59/DOTAP80エマルジョンを使用した。グループ8は、遊離p55DNAを使用した。グループ9は、10μgの用量で、遊離p55DNAを使用した。グループ10は、10μgの用量で、遊離p55DNAを有するMF59エマルジョンを使用した。各グループについて、10匹のマウスを十分量のp55DNAの用量が、示されるように1または10μgの用量である微粒子または遊離分子で免疫した。免疫の経路は、IMTAであった。免疫後、血清抗p55DNA力価を測定し、測定結果を以下の表20Gに表す。この血清を、4wp11度目の免疫後、4週間および2wp22度目の免疫後、2週間で測定した。表20G実施例24モルモットにおける免疫応答の微粒子誘導吸着されたgp120DNAを有するPLG/CTAB微粒子を、上記の実施例において記載されるように形成した。他のサンプルを以下の表20に示し、そしてそれらとしては、gp120DNAによってコードされる微粒子リン酸アルミニウムを有するか、有さない、コントロールの遊離可溶性gp120リン酸アルミニウムを有するか、有さない、およびMF59タンパク質が挙げられる。モルモットのIM免疫および抗体の誘導血清の収集および分析を上記の実施例に記載されるように行った。結果を以下の表21に示す。表21実施例25微粒子に吸着されたp55DNAを有する鼻腔内IN免疫吸着されたp55DNAを有するPLG/CTAB微粒子、および吸着されたp55DNAを有するPLG/DDA微粒子を、上記の実施例に記載されるように形成した。25または100μgでのマウスのIN免疫、抗体誘導血清の収集および分析、およびCTL誘導を上記の実施例において記載されるように、1度目の免疫後、2週間および4週間2wp1、4wp1で、2度目の免疫後、2週間および4週間2wp2、4wp2で、および3度目の免疫後、2週間および4週間2wp3、4wp3で行った。コントロールとしては、可溶性p55DNA単独、または10μgのコレラ毒素を有する免疫が挙げられる。抗体誘導についての結果を、表22に示し、そしてCTLによる溶解4度目の免疫後、4週間での結果を、以下の表23に示した。表22表23実施例26アジュバント組成物の調整MTP-PEは、CIBA-GEIGYBasal、Switzerlandにより提供された。スクアレンおよびTWEEN登録商標80をSigmaChemicalCo.St.Louis、MOより得た。CFAおよびIFAをGibcoGrandIsland、NYより得た。水酸化アルミニウムRehsorptarをReheisChemicalCo.BerkeleyHeightsNJより得た。油滴の調製を多くの方法によって行った。第1の方法において、4スクアレン、0.008TWEEN登録商標80、250μg/mlMTP-PEおよび抗原リン酸緩衝生理食塩水PBS中を含む混合物を6回、23ゲージ針を通過させた。油滴からなるこのエマルジョンは、10ミクロンの範囲のサイズであり、そしてMTP-PE-LOと称される。第2の方法は、上記の混合物をKirkland乳化剤を5回、通過させる工程を包含する。油滴からなるこのエマルジョンは、主に1~2ミクロンであり、そしてMTP-PE-LO-KEと称される。このKirkland乳化剤KirklandProducts、WalnutCreek、CAは、小型の市販のナイフの刃をつけたホモジナイザー例えば、GaulinModel30CDおよびRainnieMinilabType8.30Hであり、作業チャンバーにおいて約1000psiを産生する。第3の方法において、0.3~18スクアレンおよび0.2~1.0mg/mlMTP-PETWEEN登録商標80を含むか、含まないを含む混合物を、Microfluidizer型番110YMicrofluidics、Newton、MAを5,000~30,000psiで通過させた。代表的には、microfluidizer中で50mlのエマルジョンを、5分、または100mlを10分混合した。生じるエマルジョンは、スクアレン、MTP-PEならびに界面活性剤の濃度、およびにmicrofluidizerの操作圧力ならびに温度に依存する100~75nmの油滴からなった。この組成物は、MTP-PE-LO-MFと称される。実施例27CTABを使用する微粒子の調製ブランク微粒子をCTABを使用して以下のように産生した。使用した溶液:1ジメチルクロライド中の4RG504PLGBoehringerIngelheim。2水中の0.5CTABSigmaChemicalCo.,St.Louis、MO。特に、12.5mlのポリマー溶液と1.25mlの蒸留水とを混合し、w/oエマルジョンを形成するために10Krpmで10mmプローブを備えたOmniベンチトップbenchtopホモジナイザーを使用して3分ホモジネートし、微粒子を作製した。w/oエマルジョンを50mlの0.5CTAB溶液に添加し、そしてw/o/wエマルジョンを形成するために3分間、ホモジネートした。w/o/wエマルジョンを溶媒の蒸発のために一晩攪拌し続け、微粒子を形成した。次いで、形成された微粒子を38μメッシュを通して濾過し、4回遠心分離することにより水で洗浄し、そして凍結乾燥した。次いで、微粒子を将来の使用のためにMalvernMasterサイズで分類した。実施例28免疫応答表現型に対するMPLおよびCpGオリゴヌクレオチドの効果10匹のマウスのグループを以下のように免疫した:グループ1CpGオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下で組換えHIVp55gagタンパク質を有するMF59;グループ2HIVp55gagタンパク質を有するモノホスホリル脂質lipdAMPLを取り込むMF59;グループ3CpGオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下で表面に吸着されたHIVp55gagタンパク質を有するSDS/PLG微粒子;グループ4MPLを有する微粒子に吸着されたSDS/PLGp55;グループ5MPLを有する組換えタンパク質;およびグループ6組換えタンパク質単独。MF59の用量は、25μl/動物であり、そしてHIVp55タンパク質は25μg/動物であり、CpGオリゴヌクレオチドは、50μg/動物であり、MPLは10μg/動物で与えられた。微粒子は、25μgのタンパク質を含む用量で与えられた。MPLをRibiImmunochemRes.Inc.Hamilton、Montanaより得た。MPL/MF59を、CHCl3中にMPLを溶解し、スクアレン/Span85に溶液を移し、そして標準MF59エマルジョンをTween80/H2Oと処方することによって調製した。組換え酵母p55gagタンパク質を、当業者に公知の標準的発酵技術酵母がダイノミルdynomillによって分裂するによって産生した。p55タンパク質を、尿素/NaCl緩衝液中の細胞溶解物より得たペレット物質より抽出した。尿素溶液タンパク質を、6Mの尿素の存在下でアニオン交換クロマトグラフィーによって90以上の均一性まで精製した。毎週の間隔で3度の筋肉内注射を受けたマウス、および血清サンプルを、3度目の注射後2週間で収集し、そしてCAAequornSealiteInc.,Norcross、GAに基づく化学発光ELISAアッセイを使用して総IgGGMA、IgG1およびIgG2aについてアッセイした。代表的なアッセイの結果を図1および2に示す。吸着された微粒子の場合、CpGオリゴヌクレオチドを受けた動物は、吸着された粒子単独のIgG2a応答より19倍高いIgG2a応答、MPLを有する吸着された粒子よりも7倍高い応答、そしてタンパク質単独よりも17倍高い応答を示した。MF59を有するタンパク質の場合、CpGオリゴヌクレオチドを受けた動物は、CpGオリゴヌクレオチドの非存在下で誘導されたIgG2a応答よりも7倍高いIgG2a応答を示し、MF59およびMPLの組み合わせよりも2.6倍より高く、MPLを有するタンパク質よりも15倍より高く、そしてタンパク質単独よりも23倍より高かった。これらの結果は、MF59またはPLG微粒子のいずれかと組み合わされたCpGオリゴヌクレオチドが、MF59またはPLG微粒子のいずれかを有するMPLによって誘導されたリンパ球応答よりも有意により高いTh1リンパ球応答を刺激することを示す。オリゴヌクレオチドはOligoEtc.,Inc.Wilsonville、ORによって調製された。CpG1は、配列番号28を含む。CpG2は、非CpG配列tccaggacttctctcaggtt配列番号29を含む。実施例29p55gagタンパク質のIM免疫および種々のアジュバント9匹のマウスのグループを以下のように筋肉内免疫した記載される場合を除く:グループ1CpG1オリゴヌクレオチドの存在下での組換えHIVp55gagタンパク質を有するMF59、およびDOTAP80;グループ2CpG1オリゴヌクレオチドの存在下での組換えHIVp55gagタンパク質を有するMF59、およびDOTAP160;グループ3組換えHIVp55gagタンパク質を有するMF59およびDOTAP;グループ4組換えHIVp55gagタンパク質を有するMF59;グループ5CpG1オリゴヌクレオチドの存在下での組換えHIVp55gagタンパク質を有するMF59;グループ6組換えHIVp55gagタンパク質およびDOTAP160;グループ7組換えHIVp55gagタンパク質およびCpG1オリゴヌクレオチド;グループ8CpG1オリゴヌクレオチドの存在下での組換えHIVp55gagタンパク質、およびDOTAP160;およびグループ9vv-gag-pol2×107pfuIP。MF59no用量は25μl/動物であり、HIVp55タンパク質は25μg/動物であり、そしてCpGオリゴヌクレオチドは50μg/動物であった。免疫後、血清抗p55IgG力価を測定し、測定結果を図3に示した。示されるように、正に荷電したエマルジョンDOTAPを有するの存在下での抗体力価は、正に荷電したエマルジョンDOTAPを有さないの存在下の2倍の高さである。CTLによる標的SvB細胞株の溶解をまた、各グループで測定し、測定結果を図4に表した。示されるように、正に荷電したエマルジョンを生じるためのDOTAPの添加は、CTL応答を増加する。実施例30イオン性エマルジョンアジュバントイオン性界面活性剤を含む1ミクロン未満のエマルジョンを、非イオン性安定化MF59処方物を使用して処方した。いくつかのイオン性界面活性剤をスクアレン中の溶解度について試験した。3つのイオン性界面活性剤ジオレオイル-3-トリメチルアンモニウム-プロパンDOTAP、ジオレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリンDEPCおよびジオレオイル-ホスファチジン酸DPAが、スクアレンに可溶性であることを見出した。各界面活性剤を、4~52mg/mlスクアレンの範囲の濃度で、スクアレン/10Span85に溶解することによって、プロトタイプイオン性エマルジョンを処方した。スクアレン/界面活性剤混合物を5mlのスクアレン/100mlH2Oの0.5Tween80/H2Oを用いて乳化した。プレエマルジョンをSilversonホモジナイザーを用いてホモジネート5分、5000RPMすることによって生成し、そして最終エマルジョンを微小流動化約10,000psi、5回の通過、Microfluidizer110Sによって作製した。各型のエマルジョンを液滴のサイズおよびζ電位について試験した。これらの結果を以下の表24に示す。MF59/DOTAP/160およびMF59/DOTAP/80をDNAおよびCpGODNの両方の結合について試験した。2つのMF59/DOTAP処方物、160mg/100mlDOTAPおよび80mg/100mlDOTAP使用してp55DNAを吸着した。これらのエマルジョンを各々50μg/ml、100μg/mlおよび200μg/mlのDNAと共に4°Cで一晩インキュベートした。DOTAPを含まないMF59/水のコントロールもまた50、100および200μgのDNAと共にインキュベートした。これらのエマルジョンをエアーフュージairfugeを使用して遠心分離し、そして各サンプルについての浮遊物subnatantを酸加水分解し、そしてDNAアッセイを行った。なぜなら、A260測定を妨げる十分な濁度が存在するから。DOTAPコントロールサンプルを有さないMF59を使用して標準曲線を確立した。この標準曲線よりMF59/DOTAPサンプルの浮遊物中に残ったDNAの量を算出し、これらの結果を以下の表25に示す。MF59をスクアレン中のDPTAPを使用して作製した。これを0.5mg/mlCpGと共に一晩インキュベートし、翌日そのエマルジョンを、エッペンドルフeppindorf遠心分離中で50分間、遠心分離し、そして浮遊物をGPCカラムにかけた。0.5/mlCpGを通常のMF59に添加し、そしてスピンダウンし、次いでカラム上で分析した。MF59/Dotap浮遊物におけるCpGの量は、CpGでスパイクしたMF59の量の50であった。このことは、CpGの投入量のほとんど50が、実際に油相にあることを示す。吸着等温線adsorptionisothermが、次になされ、ここでCpGが、100μg/ml、500μg/ml、1mg/mlおよび2mg/mlで、MF59/Dotapに添加された。これを4°Cで約4日間放置し、ついで、エアーフュージでサンプルを遠心分離し、続いて0.5mg/mlCpGで、MF59をスパイクした。浮遊物非常に透明であるを、GPCカラムにかけ、次いで0.5μg、1μg、5μg、10μgおよび20μgでスパイクされたMF59を用いて標準曲線を作製した。吸着の百分率を測定し、そして測定結果を以下の表26に示した。"