エリスロポエチン及び単一のポリエチレングリコール残基を含むタンパク質を得るための方法であって、以下の工程:aエリスロポエチンとエリスロポエチン分子当たり1つ又は複数のポリエチレングリコール残基を有するエリスロポエチン及びポリエチレングリコールのコンジュゲートとの混合物を含む溶液を、約21mScmの伝導率を有する溶液が適用されたSPSephacrylS500HRクロマトグラフィー材料を含むカラムに適用する工程、b約21mScmの伝導率を有する溶液をカラムに適用して、それによって、遊離ポリエチレングリコール、及び2つ以上のポリエチレングリコール残基を含むタンパク質を回収する工程、c約62.5mScmの最終値まで線形的に増加する伝導率を有する溶液をカラムに適用して、それによって、エリスロポエチン及び単一のポリエチレングリコール残基を含むタンパク質とエリスロポエチンを別々に回収する工程、これにより、エリスロポエチン及び単一のポリエチレングリコール残基を含むタンパク質が最初に回収される、を含む方法。約21mScmの伝導率を有する溶液が、pH2.5~pH3.5のpH値を有する溶液であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。約21mScmの伝導率を有する溶液が、pH2.5~pH3.5のpH値を有するリン酸緩衝液であることを特徴とする、請求項1~2のいずれか一項に記載の方法。エリスロポエチンとエリスロポエチン分子当たり1つ又は複数のポリエチレングリコール残基を有するエリスロポエチン及びポリエチレングリコールのコンジュゲートとの混合物を含む溶液を、約21mScmの伝導率に調整しないことを特徴とする、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。線形的に増加する伝導率を有する溶液が、線形的に増加する塩化ナトリウム濃度を有する溶液であることを特徴とする、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。線形的に増加する伝導率を有する溶液が、pH2.3~pH3.5のpH値を有することを特徴とする、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。エリスロポエチンが、ヒトエリスロポエチンであることを特徴とする、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。ヒトエリスロポエチンが、配列番号:01又は配列番号:02のアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項7に記載の方法。単一のポリエチレングリコール残基が、20kDa~40kDaの分子量を有することを特徴とする、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。材料方法分析サイズ排除クロマトグラフィー:樹脂:TSK3000Tosohaasカラム:300×7.8mm流速:0.5ml/分溶出溶液:250mM塩化カリウムを含有する200mMリン酸カリウム、pH7.0に調整波長:220nmPEG化エリスロポエチンのクロマトグラフィー:樹脂:SPSephacrylS500HRベッド容量:2.5ml試料負荷:mgml樹脂-可変下記実施例を参照流速:0.5ml/分溶液:A:100mMリン酸カリウム、pH3.0に調整B:100mMリン酸カリウム、1000mM塩化ナトリウム、pH3.0に調整適用溶液:88A及び12B洗浄溶液:88A及び12B洗浄容量:20ml8カラム容量CV線形勾配溶出溶液:100B線形勾配:25ml10カラム容量~100B以内波長:254nm、280nm実施例1約21mScmの伝導率を有する溶液で条件付けしたSPSephacrylクロマトグラフィー材料を用いた、PEG化エリスロポエチン調製物のクロマトグラフィーPEG化エリスロポエチンのクロマトグラフィーを材料及び方法の部に記載のようにして実施した。この方法の溶出クロマトグラムを図1に示す。オリゴPEG化エリスロポエチンのピークフラクション1及びモノPEG化のピークフラクション2及び非PEG化のピークフラクション3の分析サイズ排除クロマトグラムを図2のA-Cに示す。実施例2約29mScmの伝導率を有する溶液で条件付けしたSPSephacrylクロマトグラフィー材料を用いた、PEG化エリスロポエチン調製物のクロマトグラフィーPEG化エリスロポエチンのクロマトグラフィーを材料及び方法の部に記載のようにして、下記の異なるパラメーターを用いて実施した:適用溶液:80A及び20B洗浄溶液:80A及び20B洗浄容量:20ml8カラム容量CV線形勾配溶出緩衝液:100B線形勾配:25ml10カラム容量~50B以内オリゴPEG化エリスロポエチンのピークフラクション1及びモノPEG化のピークフラクション2及び非PEG化のピークフラクション3の分析サイズ排除クロマトグラムを図3のA-Cに示す。実施例3約21mScmの伝導率を有する溶液で条件付けしたSPSephacrylクロマトグラフィー材料及び37mScmの伝導率を有する溶液での段階溶出を用いた、PEG化エリスロポエチン調製物のクロマトグラフィーPEG化エリスロポエチンのクロマトグラフィーを材料及び方法に記載のようにして実施した。この方法の溶出クロマトグラムを図4に示す。オリゴPEG化エリスロポエチンのピークフラクション1及びモノPEG化のピークフラクション2及び非PEG化のピークフラクション3の分析サイズ排除クロマトグラムを図5のA-Cに示す。非PEG化エリスロポエチンが、段階溶出法ではなくカラムの再生の間にのみ回収することができたことに注目すべきある。実施例4約21mScmの伝導率を有する溶液で条件付けしたSPSephacrylクロマトグラフィー材料及び20mScmの伝導率に調整した試料を用いた、PEG化エリスロポエチン調製物のクロマトグラフィーPEG化エリスロポエチンのクロマトグラフィーを材料及び方法に記載のようにして実施した。この方法の溶出クロマトグラムを図6に示す。オリゴPEG化エリスロポエチンのピークフラクション1及びモノPEG化のピークフラクション2及び非PEG化のピークフラクション3の分析サイズ排除クロマトグラムを図7のA-Cに示す。