"フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがヒト血清アルブミンのドメイン1または2に1μM以下のKDで結合し、アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも5倍大きいポリペプチド。10Fn3ドメインが、野生型10Fn3ドメインと比較して、BC、DEおよびFGループの1つ以上に修飾されたアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが55~74のpH範囲において血清アルブミンに結合する、請求項1または2に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインがpH55において200nM以下のKDでHSAに結合する、請求項1~3のいずれか一項に記載のポリペプチド。フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがヒト血清アルブミンに結合し、かつ10Fn3ドメインが配列番号2と少なくとも70同一なアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。10Fn3ドメインが、配列番号5に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号7に示すアミノ酸配列を含むFGループの1つ以上を含む、請求項5に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが、配列番号8、12、16、20、および24~44から選択される配列を含む、請求項5に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが、アカゲザル血清アルブミンRhSA、カニクイザル血清アルブミンCySA、またはマウス血清アルブミンMuSAの1つ以上にも結合する、請求項5~7のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが、RhSA、CySAまたはMuSAの1つ以上と交差反応しない、請求項5~7のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが1μM以下のKDでHSAに結合する、請求項5~9のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが500nM以下のKDでHSAに結合する、請求項5~10のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインがHSAのドメインIまたはIIに結合する、請求項5~11のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが55~74のpH範囲において血清アルブミンに結合する、請求項5~12のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインがpH55において200nM以下のKDでHSAに結合する、請求項5~13のいずれか一項に記載のポリペプチド。血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも5倍大きい、請求項5~14のいずれか一項に記載のポリペプチド。血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が少なくとも2時間である、請求項5~15のいずれか一項に記載のポリペプチド。フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがヒト血清アルブミンに結合し、かつ10Fn3ドメインが、配列番号5に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号7に示すアミノ酸配列を含むFGループを含む、ポリペプチド。10Fn3ドメインが、アカゲザル血清アルブミンRhSA、カニクイザル血清アルブミンCySA、またはマウス血清アルブミンMuSAの1つ以上にも結合する、請求項17に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが、RhSA、CySAまたはMuSAの1つ以上と交差反応しない、請求項17に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが1μM以下のKDでHSAに結合する、請求項17~19のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが500nM以下のKDでHSAに結合する、請求項17~20のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインがHSAのドメインIまたはIIに結合する、請求項17~21のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが55~74のpH範囲において血清アルブミンに結合する、請求項17~22のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインがpH55において200nM以下のKDでHSAに結合する、請求項17~23のいずれか一項に記載のポリペプチド。血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも5倍大きい、請求項17~24のいずれか一項に記載のポリペプチド。血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が少なくとも2時間である、請求項17~25のいずれか一項に記載のポリペプチド。フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインと異種タンパク質とを含む融合ポリペプチドであって、10Fn3ドメインが1μM以下のKDでヒト血清アルブミンに結合する、融合ポリペプチド。10Fn3ドメインが、配列番号4と少なくとも70同一なアミノ酸配列を含む、請求項27に記載の融合ポリペプチド。10Fn3ドメインが、配列番号8、12、16、20、および24~44から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項27または28に記載の融合ポリペプチド。10Fn3ドメインが、配列番号5に示すアミノ酸配列を有するBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を有するDEループ、および配列番号7に示すアミノ酸配列を有するFGループを含む、請求項27または28に記載の融合ポリペプチド。異種タンパク質が、線維芽細胞成長因子21FGF21、インスリン、インスリン受容体ペプチド、骨形成タンパク質9BMP9、アミリン、ペプチドYYPYY336、膵ポリペプチドPP、インターロイキン21IL21、グルカゴン様ペプチド1GLP1、プレクタシン、プログラニュリン、アトストリン、オステオカルシンOCN、アペリン、または10Fn3ドメインを含むポリペプチドから選択される、請求項27~30のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。異種タンパク質がFGF21である、請求項31に記載の融合ポリペプチド。異種タンパク質が配列番号118に示す配列を含む、請求項32に記載の融合ポリペプチド。異種タンパク質が、HSA以外のターゲットタンパク質に結合する第2の10Fn3ドメインを含む、請求項27~30のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。ターゲットタンパク質に結合する第3の10Fn3ドメインをさらに含む、請求項34に記載の融合ポリペプチド。第3の10Fn3ドメインが、第2の10Fn3ドメインと同じターゲットに結合する、請求項35に記載の融合ポリペプチド。第3の10Fn3ドメインが、第1および第2の10Fn3ドメインとは異なるターゲットに結合する、請求項35に記載の融合ポリペプチド。10Fn3ドメインが、アカゲザル血清アルブミンRhSA、カニクイザル血清アルブミンCySA、またはマウス血清アルブミンMuSAの1つ以上にも結合する、請求項27~37のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。10Fn3ドメインが、RhSA、CySAまたはMuSAの1つ以上と交差反応しない、請求項27~37のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが1μM以下のKDでHSAに結合する、請求項27~39のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。10Fn3ドメインがHSAのドメインIまたはIIに結合する、請求項27~40のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。10Fn3ドメインが55~74のpH範囲において血清アルブミンに結合する、請求項27~41のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。10Fn3ドメインがpH55において200nM以下のKDでHSAに結合する、請求項27~42のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。血清アルブミンの存在下における融合物の半減期が、異種タンパク質単独の半減期より少なくとも5倍大きい、請求項27~43のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が少なくとも2時間である、請求項27~44のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインが、i野生型10Fn3ドメインと比較して、AB、BC、CD、DE、EFおよびFGループの1つ以上に修飾されたアミノ酸配列を含み、ii野生型10Fn3ドメインによって結合されないターゲット分子に結合し、かつiii配列nを有するC末端テールここで、nは3~7の整数であるを含む、ポリペプチド。10Fn3ドメインが、配列番号1の残基9~94に示すアミノ酸配列と少なくとも60の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項46に記載のポリペプチド。C末端テールがN末端にE、IまたはEIをさらに含む、請求項46または47に記載のポリペプチド。C末端テールが、ポリペプチドの溶解度を向上させるか、ポリペプチドの凝集を減少させるか、またはその両方である、請求項46~48のいずれか一項に記載のポリペプチド。10Fn3ドメインが、野生型10Fn3ドメインと比較して、BC、DEおよびFGループのそれぞれに修飾されたアミノ酸配列を含む、請求項46~49のいずれか一項に記載のポリペプチド。1μM以下のKDでターゲットに結合する、請求項46~50のいずれか一項に記載のポリペプチド。配列番号132~174から選択される配列を含む、請求項32に記載の融合ポリペプチド。異種タンパク質がPYY3~36、PPまたはアミリンである、請求項31に記載の融合ポリペプチド。フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがヒト血清アルブミンに結合し、かつ10Fn3ドメインが、配列番号8、12、16、20、および24~44と少なくとも70同一なアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。請求項1~54のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む医薬組成物。生理学上許容される担体をさらに含む、請求項55に記載の医薬組成物。糖尿病を処置し、インスリン抵抗性を処置するか低下させ、肥満を処置し、体重を減少させるか体重増加を防止し、異常脂質血症を処置し、脂肪組織におけるグルコース取り込みを増加させ、または糖尿病の進行を遅らせるための方法であって、請求項32~33または52のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの治療有効量を対象に投与することを含む方法。低血糖、肥満、糖尿病、摂食障害、インスリン抵抗性症候群、または心血管疾患を処置するための方法であって、請求項53に記載の融合ポリペプチドの治療有効量を対象に投与することを含む方法。請求項1~26、45~51または53のいずれか一項に記載のポリペプチド、または請求項27~45または52のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドをコードする核酸。表3に示す配列を含む、請求項58に記載の核酸。請求項59または60の核酸を含むベクター。発現ベクターである、請求項61のベクター。請求項61または62のベクターを含む宿主細胞。細菌細胞である、請求項63に記載の宿主細胞。哺乳動物細胞である、請求項63に記載の宿主細胞。本願は、さまざまな治療薬の血清中半減期を増加させる化合物、増加した血清中半減期を有する化合物、および治療薬の血清中半減期を増加させるための方法を提供する。治療薬の血清中半減期を増加させるためのそのような化合物および方法は、費用対効果の高い手法で製造することができ、望ましい生物物理学的性質例えばTm、実質的に単量体であること、またはよくフォールディングされていることを有し、サイズは組織透過が可能なほど十分に小さい。[発明の概要]本発明は、血清アルブミン結合性フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメイン、およびそれらの使用に関する。本明細書には、血清アルブミン結合性10Fn3を含む融合分子およびそれらの使用も開示する。ある態様において、本発明は、フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがヒト血清アルブミンHSAのドメインIまたはIIに1μM以下のKDで結合し、アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも5倍大きいポリペプチドを提供する。ある実施形態において、10Fn3ドメインは、野生型10Fn3ドメインと比較して、BC、DEおよびFGループの1つ以上に修飾されたアミノ酸配列を含む。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲においてHSAに結合する。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲において、200nM以下のKDで、HSAに結合する。もう一つの実施形態では、10Fn3ドメインが、pH55において、200nM以下のKDで、HSAに結合する。いくつかの態様では、10Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがHSAに結合し、かつ10Fn3ドメインが配列番号2と少なくとも70同一なアミノ酸配列を含むポリペプチドが、ここに提供される。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、配列番号5に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号7に示すアミノ酸配列を含むFGループの1つ以上を含む。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、10Fn3ドメインは、アカゲザル血清アルブミンRhSA、カニクイザルcynomolgousmonkey血清アルブミンCySA、またはマウス血清アルブミンMuSAの1つ以上にも結合する。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、RhSA、CySAまたはMuSAの1つ以上と交差反応しない。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、10Fn3ドメインは、1μM以下のKDでHSAに結合する。いくつかの実施形態では、10Fn3ドメインが、500nM以下のKDでHSAに結合する。別の実施形態では、10Fn3ドメインが、少なくとも200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDでHSAに結合する。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、10Fn3ドメインは、HSAのドメインIまたはIIに結合する。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、HSAのドメインIとドメインIIの両方に結合する。いくつかの実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲においてHSAに結合する。別の実施形態では、10Fn3ドメインが、pH55において、200nM以下のKDで、HSAに結合する。もう一つの実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲において、少なくとも500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDで、HSAに結合する。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、pH55において、少なくとも500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDで、HSAに結合する。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期は、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも2倍大きい。一定の実施形態では、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも5倍、7倍、10倍、12倍、15倍、20倍、22倍、25倍、27倍、または30倍大きい。いくつかの実施形態では、血清アルブミンが、HSA、RhSA、CySA、またはMuSAのいずれか1つである。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期は、少なくとも20時間である。一定の実施形態では、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が、少なくとも2時間、25時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、12時間、15時間、20時間、25時間、30時間、40時間、50時間、75時間、90時間、100時間、110時間、120時間、130時間、150時間、170時間、または200時間である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの半減期が、霊長類例えばヒトまたはサルまたはマウスにおいて観察される。ある態様において、本発明は、10Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがHSAに結合し、かつ10Fn3ドメインが配列番号5に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を含むDEループ、配列番号7に示すアミノ酸配列を含むFGループを含むポリペプチドを提供する。もう一つの態様では、10Fn3ドメインが、配列番号5に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を含むDEループ、配列番号7に示すアミノ酸配列を含むFGループの1つ以上を含む。ある態様において、本発明は、10Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがHSAに結合し、かつ10Fn3ドメインが、配列番号9に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号10に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号11に示すアミノ酸配列を含むFGループを含むポリペプチドを提供する。もう一つの態様では、10Fn3ドメインが、配列番号9に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号10に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号11に示すアミノ酸配列を含むFGループの1つ以上を含む。ある態様において、本発明は、10Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがHSAに結合し、かつ10Fn3ドメインが配列番号13に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号14に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号15に示すアミノ酸配列を含むFGループを含むポリペプチドを提供する。もう一つの態様では、10Fn3ドメインが、配列番号13に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号14に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号15に示すアミノ酸配列を含むFGループの1つ以上を含む。ある態様において、本発明は、10Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインがHSAに結合し、かつ10Fn3ドメインが配列番号17に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号18に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号19に示すアミノ酸配列を含むFGループを含むポリペプチドを提供する。もう一つの態様では、10Fn3ドメインが、配列番号17に示すアミノ酸配列を含むBCループ、配列番号18に示すアミノ酸配列を含むDEループ、および配列番号19に示すアミノ酸配列を含むFGループの1つ以上を含む。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、10Fn3ドメインは、アカゲザル血清アルブミンRhSA、カニクイザル血清アルブミンCySA、またはマウス血清アルブミンMuSAの1つ以上にも結合する。いくつかの実施形態では、10Fn3ドメインが、RhSA、CySAまたはMuSAの1つ以上と交差反応しない。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、1μM以下のKDでHSAに結合する。別の実施形態では、10Fn3ドメインが、少なくとも15μM、12μM、1μM、700nM、500nM、300nM、200nM、100nM、75nM、50nM、25nM、10nM、または5nMのKDでHSAに結合する。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、10Fn3ドメインはHSAのドメインIまたはIIに結合する。一定の実施形態では、10Fn3ドメインがHSAのドメインIとドメインIIの両方に結合する。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲においてHSAに結合する。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、pH55において、200nM以下のKDで、HSAに結合する。もう一つの実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲において、少なくとも500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDでHSAに結合する。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、pH55において、少なくとも500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDで、HSAに結合する。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期は、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも2倍大きい。一定の実施形態では、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも5倍、7倍、10倍、12倍、15倍、20倍、22倍、25倍、27倍、または30倍大きい。いくつかの実施形態では、血清アルブミンが、HSA、RhSA、CySA、またはMuSAのいずれか1つである。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期は、少なくとも20時間である。一定の実施形態では、血清アルブミンの存在下におけるポリペプチドの血清中半減期が、少なくとも2時間、25時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、12時間、15時間、20時間、25時間、30時間、40時間、50時間、75時間、90時間、100時間、110時間、120時間、130時間、150時間、170時間、または200時間である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの半減期が、霊長類例えばヒトまたはサルまたはマウスにおいて観察される。ある態様において、本発明は、フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインと異種タンパク質とを含む融合ポリペプチドであって、10Fn3ドメインが1μM以下のKDでHSAに結合する融合ポリペプチドを提供する。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、配列番号4と少なくとも70同一なアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、配列番号5に示すアミノ酸配列を有するBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を有するDEループ、および配列番号7に示すアミノ酸配列を有するFGループを含む。もう一つの実施形態では、10Fn3ドメインが、配列番号5に示すアミノ酸配列を有するBCループ、配列番号6に示すアミノ酸配列を有するDEループ、および配列番号7に示すアミノ酸配列を有するFGループの1つ以上を含む。ある実施形態では、異種タンパク質が、線維芽細胞成長因子21FGF21、インスリン、インスリン受容体ペプチド、GIPグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド、骨形成タンパク質9BMP9、アミリン、ペプチドYYPYY336、膵ポリペプチドPP、インターロイキン21IL21、グルカゴン様ペプチド1GLP1、プレクタシン、プログラニュリン、オステオカルシンOCN、アペリン、または10Fn3ドメインを含むポリペプチドから選択される。別の実施形態では、異種タンパク質が、GLP1、エキセンディン4、アディポネクチン、IL1Raインターロイキン1受容体アンタゴニスト、VIP血管作動性腸ペプチド、PACAP下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド、レプチン、INGAP膵島新生関連タンパク質、BMP骨形成タンパク質、およびオステオカルシンOCNから選択される。ある実施形態では、異種タンパク質が、配列番号118に示す配列を含む。一定の実施形態では、異種タンパク質が、血清アルブミン以外のターゲットタンパク質に結合する第2の10Fn3ドメインを含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドが、さらに、ターゲットタンパク質に結合する第3の10Fn3ドメインを含む。ある実施形態では、第3の10Fn3ドメインが、第2の10Fn3ドメインと同じターゲットに結合する。別の実施形態では、第3の10Fn3ドメインが、第2の10Fn3ドメインとは異なるターゲットに結合する。ある実施形態では、融合ポリペプチドの10Fn3ドメインが、アカゲザル血清アルブミンRhSA、カニクイザル血清アルブミンCySA、またはマウス血清アルブミンMuSAの1つ以上にも結合する。別の実施形態では、10Fn3ドメインが、RhSA、CySAまたはMuSAの1つ以上と交差反応しない。一定の実施形態では、融合ポリペプチドの10Fn3ドメインが、1μM以下のKDでHSAに結合する。いくつかの実施形態では、10Fn3ドメインが、500nM以下のKDでHSAに結合する。別の実施形態では、10Fn3ドメインが、少なくとも200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDでHSAに結合する。別の実施形態では、融合ポリペプチドの10Fn3ドメインが、HSAのドメインIまたはIIに結合する。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、HSAのドメインIとドメインIIの両方に結合する。いくつかの実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲においてHSAに結合する。別の実施形態では、10Fn3ドメインが、pH55において、200nM以下のKDで、HSAに結合する。もう一つの実施形態では、10Fn3ドメインが、55~74のpH範囲において、少なくとも500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDで、HSAに結合する。ある実施形態では、10Fn3ドメインが、pH55において、少なくとも500nM、200nM、100nM、50nM、20nM、10nM、または5nMのKDで、HSAに結合する。いくつかの実施形態では、血清アルブミンの存在下における融合ポリペプチドの血清中半減期が、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも5倍大きい。一定の実施形態では、血清アルブミンの存在下における融合ポリペプチドの血清中半減期が、血清アルブミンの非存在下におけるポリペプチドの血清中半減期より少なくとも2倍、5倍、7倍、10倍、12倍、15倍、20倍、22倍、25倍、27倍、または30倍大きい。いくつかの実施形態では、血清アルブミンが、HSA、RhSA、CySA、またはMuSAのいずれか1つである。一定の実施形態では、血清アルブミンの存在下における融合ポリペプチドの血清中半減期が、少なくとも20時間である。一定の実施形態では、血清アルブミンの存在下における融合ポリペプチドの血清中半減期が、少なくとも2時間、25時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、12時間、15時間、20時間、25時間、30時間、40時間、50時間、75時間、90時間、100時間、110時間、120時間、130時間、150時間、170時間、または200時間である。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドの半減期が、霊長類例えばヒトまたはサルまたはマウスにおいて観察される。前述の態様および実施形態のいずれかにおいて、10Fn3ドメインは、配列番号8、12、16、20、および24~44から選択される配列を含む。ある態様において、本発明は、フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインが、i野生型10Fn3ドメインと比較して、AB、BC、CD、DE、EFおよびFGループの1つ以上に修飾されたアミノ酸配列を含み、ii野生型10Fn3ドメインによって結合されないターゲット分子に結合し、かつiii配列nを有するC末端テールここで、nは3~7の整数であるを含む、ポリペプチドを提供する。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、配列番号1の残基9~94に示すアミノ酸配列と少なくとも60の同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、C末端テールが、そのN末端にE、IまたはEIを、さらに含む。いくつかの実施形態では、C末端テールが、ポリペプチドの溶解度を向上させ、かつまたはポリペプチドの凝集を減少させる。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、野生型10Fn3ドメインと比較して、BC、DEおよびFGループのそれぞれに修飾されたアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ポリペプチドが、1μM以下のKDでターゲットに結合する。いくつかの態様において、本発明は、前述の態様および実施形態のいずれかのポリペプチドを含む医薬組成物を提供する。一定の実施形態では、医薬組成物が、コハク酸、グリシン、およびソルビトールを含む。例示的実施形態では、組成物が、pH60で、5nM~30mMのコハク酸、5~15のソルビトール、および25~10のグリシンを含む。一定の実施形態では、組成物が、pH60で、10mMコハク酸、8ソルビトール、および5グリシンを含む。別の実施形態では、医薬組成物が、生理学上許容される担体をさらに含む。[発明の詳細な説明]定義本明細書において使用される次の用語および語句は、以下に示す意味を有する。本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、別段の定義がある場合を除いて、当業者に一般に理解されている意味と同じ意味を有する。単数形あるおよびそのaanおよびtheは、文脈上別段の必要がある場合を除いて、複数の指示対象を包含する。を含むおよびを含んでいるcompriseおよびcomprisingという用語は、包括的、非限定的な意味で使用され、すなわち追加の要素が含まれていてもよい。を包含するicludingという用語は、を包含するが、それに限定されるわけではないincludingbutnotlimitedtoを意味する。を包含するとを包含するが、それに限定されるわけではないとは可換的に使用される。抗体様タンパク質という用語は、免疫グロブリン様フォールドを有する、すなわちβシートを形成する一組のβまたはβ様ストランドに構造的に組織化される約80~150個のアミノ酸残基を含み、そのβまたはβ様ストランドが介在するループ部分によってつながれている、非免疫グロブリンタンパク質を指す。βシートは抗体様タンパク質の安定なコアを形成すると同時に、βまたはβ様ストランドをつなぐループで構成された2つの面を作り出す。本明細書において説明するとおり、これらのループを変異させることで、カスタマイズされたリガンド結合部位を作り出すことができ、そのような変異はタンパク質の総合的安定性を破壊することなく生成させることができる。そのような抗体様タンパク質の一例はフィブロネクチンベースのスキャフォールドタンパク質であり、これは、フィブロネクチンIII型ドメインFn3に基づくポリペプチドを意味する。ある態様では、抗体様タンパク質が第10フィブロネクチンIII型ドメイン10Fn3に基づく。ポリペプチドとは、長さ、翻訳後修飾、または機能を問わず、2つ以上のアミノ酸の任意の配列を意味する。ポリペプチドペプチドおよびタンパク質は、本明細書においては可換的に使用される。パーセントアミノ酸配列同一性は、本明細書においては、どの保存的置換も配列同一性の一部であるとは見なさずに、最大のパーセント配列同一性が得られるように、配列をアラインメントし、必要であればギャップを導入した後に、第2配列中のアミノ酸残基と同一である、第1配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。パーセントアミノ酸配列同一性の決定を目的とするアラインメントは、当技術分野における技量の範囲内にあるさまざまな手法で、例えば公的に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えばBLAST、BLAST2、ALIGN、ALIGN2またはMegalignDNASTARソフトウェアなどを使って、達成することができる。当業者は、アラインメントをはかるための適当なパラメータを、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めて、決定することができる。ただし、ここでの目的には、アミノ酸配列同一性値が、後述のように、配列比較コンピュータプログラムALIGN2を使用することによって得られる。ALIGN2配列比較コンピュータプログラムはGenentechIncによって作成され、米国著作権局WashingtonDC20559に利用者向け文書と共に登録申請されて、米国著作権登録番号TXU510087として登録されており、GenentechIncカリフォルニア州サウスサンフランシスコを通して公的に入手することができる。ALIGN2プログラムは、UNIXオペレーティングシステム、好ましくはdigitalUNIXV40D上で使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータはALIGN2プログラムによって設定され、変動しない。ここでの目的には、所与のアミノ酸配列Aの、所与のアミノ酸配列Bへの、または所与のアミノ酸配列Bとの、または所与のアミノ酸配列Bに対するアミノ酸配列同一性これは、所与のアミノ酸配列Bに、または所与のアミノ酸配列Bと、または所与のアミノ酸配列Bに対して、一定のアミノ酸配列同一性を有する、または含む、所与のアミノ酸配列Aと、言い換えることもできるは、以下のように算出される:100×分率XYここで、Xは、配列アラインメントプログラムALIGN2が、そのプログラムによるAとBのアラインメントにおいて、完全一致identicalmatchとスコアリングしたアミノ酸残基の数であり、YはB中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと等しくない場合に、Bに対するAのアミノ酸配列同一性が、Aに対するBのアミノ酸配列同一性と等しくなくなることは、理解されるであろう。治療有効量という用語は、哺乳動物における疾患または障害を処置し、かつまたはその障害に関連する症状の1つ以上をある程度緩和するのに有効な、薬物の量を指す。SABAという用語は、血清アルブミン結合性SerumAlbuminBindingAdnectin商標を指す。Adnectin商標AdnexusaBristolMyersSquibbRDCompanyは、第10フィブロネクチンIII型ドメイン、すなわちFn3の第10モジュール10Fn3に基づく、リガンド結合性スキャフォールドタンパク質である。アミノ酸配列または化合物の半減期t12は、一般に、ポリペプチドの血清中濃度が、例えばその配列もしくは化合物の分解およびまたは自然の機序によるその配列もしくは化合物の浄化もしくは隔離などにより、生体内で50減少するのに要する時間と定義することができる。半減期は、当技術分野において知られている任意の手法で、例えば薬物動態分析によって決定することができる。例えばMGibaldiおよびDPerron著PharmacokineticsMarcelDekker刊、改訂第2版1982を参照されたい。半減期は、t12α、t12βおよび曲線下面積AUCなどのパラメータを使って表すことができる。半減期の増加とは、これらのパラメータの任意の1つ、これらのパラメータの任意の2つ、またはこれらのパラメータの3つ全ての増加を指す。一定の実施形態では、半減期の増加がt12βの増加を指し、t12αもしくはAUCの増加またはその両方の増加を伴っても、伴わなくてもよい。PKという用語はpharmokinetic薬物動態のの頭文字であり、例えば吸収、分布、代謝、および対象による排除などといった化合物の性質を包含する。PK調整タンパク質またはPK部分は、生物活性分子に融合するか生物活性分子と一緒に投与した場合にその生物活性分子の薬物動態的性質に影響を及ぼす任意のタンパク質、ペプチド、または部分を指す。概略Fn3とはフィブロネクチン由来のIII型ドメインを指す。Fn3ドメインは小さく、単量体であり、可溶性であり、安定である。これはジスルフィド結合を欠き、それゆえに、還元条件下で安定である。Fn3の全体的構造は免疫グロブリンフォールドと類似している。Fn3ドメインは、N末端からC末端に向かって、順に、βまたはβ様ストランドA;ループAB;βまたはβ様ストランドB;ループBC;βまたはβ様ストランドC;ループCD;βまたはβ様ストランドD;ループDE;βまたはβ様ストランドE;ループEF;βまたはβ様ストランドF;ループFG;およびβまたはβ様ストランドGを含む。7本の逆平行βストランドは2つのβシートとして配置され、それらが安定なコアを形成すると同時に、βまたはβ様ストランドをつなぐループで構成された2つの面を作り出す。ループAB、CD、およびEFは一方の面に位置し、ループBC、DE、およびFGは反対面に位置する。ループAB、BC、CD、DE、EFおよびFGのいずれかまたは全てが、リガンド結合に関与しうる。Fn3のモジュールは少なくとも15種類あり、モジュール間の配列相同性は低いが、三次構造は、全てが高い類似性を共有している。Adnectin商標AdnexusaBristolMyersSquibbRDCompanyは、第10フィブロネクチンIII型ドメイン、すなわちFn3の第10モジュール10Fn3に基づく、リガンド結合性スキャフォールドタンパク質である。天然ヒト10Fn3のアミノ酸配列を配列番号1に示す:配列番号1AB、CDおよびEFループに下線を付し、BC、FG、およびDEループを太字で強調している。配列番号1では、ABループが残基15~16に対応し、BCループが残基21~30に対応し、CDループが残基39~45に対応し、DEループが残基51~56に対応し、EFループが残基60~66に対応し、FGループが残基76~87に対応するXuらChemistryBiology20029933942。BC、DEおよびFGループは、分子の一方の面に沿って並び、AB、CDおよびEFループは分子の反対面に沿って並ぶ。配列番号1では、βストランドAが残基9~14に対応し、βストランドBが残基17~20に対応し、βストランドCが残基31~38に対応し、βストランドDが残基46~50に対応し、βストランドEが残基57~59に対応し、βストランドFが残基67~75に対応し、βストランドGが残基88~94に対応する。ストランドは、例えばストランドAとBが、ループABにより、ストランドA、ループAB、ストランドBの構成でつながれるというように、対応するループによって互いにつながれる。配列番号1の最初の8アミノ酸上記の配列では斜体は、分子の結合活性を保ったまま、欠失させることができる。疎水性コアの形成に関与する残基コアアミノ酸残基には、次に挙げる配列番号1のアミノ酸が包含される:L8、V10、A13、L18、I20、W22、Y32、I34、Y36、F48、V50、A57、I59、L62、Y68、I70、V72、A74、I88、I90およびY92ここでは、コアアミノ酸残基を、1文字アミノ酸記号とそれに続く配列番号1内でのその位置によって表している。例えばDickinsonらJMolBiol23610791092を参照されたい。10Fn3は、抗体に、具体的には抗体の可変領域に、構造的にも機能的にも類似している。10Fn3ドメインは抗体模倣物質または抗体様タンパク質と記述することができるが、これらには従来の抗体より有利な点がいくつかある。特にこれらは、抗体と比べて、より良いフォールディング特性および熱安定性特性を示し、一定の条件下で適正なフォールディングを妨害または防止することが知られているジスルフィド結合を欠く。例示的な10Fn3ベースの血清アルブミン結合物質は、主として、平均約65°CのTmを有する単量体型である。10Fn3のBC、DE、およびFGループは、免疫グロブリンの相補性決定領域CDRに類似している。これらのループ領域中のアミノ酸配列の改変は、10Fn3の結合特異性を変化させる。所望のターゲットに結合する分子を作製するために、AB、CDおよびEFループ中に修飾を有する10Fn3ドメインを作ることもできる。ループ外のタンパク質配列は、免疫グロブリンのフレームワーク領域に類似しており、10Fn3の構造コンフォメーションにおいて役割を果たす。10Fn3のフレームワーク様領域における改変は、リガンド結合が破壊されるほど構造コンフォメーションが改変されない限り、許容される。10Fn3リガンド特異的結合物質を生成させるための方法は、高アフィニティTNFα結合物質を開示するPCT公開番号WO00034787、WO0164942、およびWO02032925、高アフィニティVEGFR2結合物質を開示するPCT公開番号WO2008097497、ならびに高アフィニティIGFIR結合物質を開示するPCT公開番号WO2008066752に記載されている。10Fn3結合物質および結合物質の選択方法を議論しているさらなる参考文献には、PCT公開番号WO98056915、WO02081497、およびWO2008031098、ならびに米国特許出願公開第2003186385号が包含される。上述のように、配列番号1の残基21~30、51~56、および76~87に対応するアミノ酸残基は、それぞれBC、DEおよびFGループを規定する。しかし、ヒト血清アルブミンなどの所望のターゲットに対して強いアフィニティを有する10Fn3結合物質を獲得するために、ループ領域内のあらゆる残基を修飾する必要があるわけではないことを、理解すべきである。例えば、本明細書に記載する実施例の多くでは、高アフィニティ10Fn3結合物質を作製するために、BCループのアミノ酸23~30およびDEループのアミノ酸52~55に対応する残基だけが修飾された。したがって、一定の実施形態では、BCループを配列番号1の残基23~30に対応するアミノ酸によって規定し、DEループを、配列番号1の残基52~55に対応するアミノ酸によって規定することができる。さらにまた、ループ領域中に挿入および欠失を加えてもなお、高アフィニティ10Fn3結合物質を作製することができる。例えば配列番号4SABA1は、FGループが4つのアミノ酸欠失を含有するすなわち配列番号1のアミノ酸21~29に対応する11残基が7つのアミノ酸で置き換えられているHSA結合物質の一例である。配列番号113は、FGループがアミノ酸挿入を含有するすなわち配列番号1のアミノ酸21~29に対応する11残基が12個のアミノ酸で置き換えられているHSA結合物質の一例である。したがって、いくつかの実施形態において、BC、DE、およびFGから選択される1つ以上のループは、野生型ヒト10Fn3中の対応するループと比較して、長さが伸長または短縮されていてもよい。いくつかの実施形態において、ループの長さは、2~25アミノ酸分、伸長されていてもよい。いくつかの実施形態において、ループの長さは、1~11アミノ酸分、減少していてもよい。特に、10Fn3のFGループが12残基長であるのに対して、抗体重鎖中の対応するループは4~28残基の範囲にある。それゆえ、抗原結合を最適化するには、10Fn3のFGループの長さを、抗原結合において最大限のフレキシビリティおよびアフィニティを得るために、長さも、配列も、4~28残基のCDR3範囲を網羅するように改変することができる。いくつかの実施形態では、インテグリン結合モチーフアルギニングリシンアスパラギン酸RGDを、極性アミノ酸中性アミノ酸-酸性アミノ酸配列N末端からC末端に向かってで置き換えることができる。10Fn3は一般に、配列番号1の1番目に対応するアミノ酸残基で始まる。しかし本発明にはアミノ酸欠失を有するドメインも包含される。いくつかの実施形態では、配列番号1の最初の8アミノ酸に対応するアミノ酸残基が欠失している。N末端またはC末端に追加の配列を付加することもできる。例えば、10Fn3のN末端に、追加のMG配列を置くことができる。通常、Mは切り離されて、N末端にGが残るであろう。いくつかの実施形態では、10Fn3ドメインのC末端に伸長配列、例えばEIDKPSQ配列番号54、EIEKPSQ配列番号60、またはEIDKPSQLE配列番号61を、置くことができる。そのようなC末端配列を、ここではテールまたは伸長部といい、本明細書においてさらに説明する。いくつかの実施形態では、His6タグをN末端またはC末端に置くことができる。10Fn3の非リガンド結合配列、すなわち10Fn3スキャフォールドは、その10Fn3がリガンド結合機能およびまたは構造安定性を保持するという条件の下で、改変することができる。いくつかの実施形態では、Asp7、Glu9、およびAsp23の1つ以上が、別のアミノ酸で、例えば非陰性荷電アミノ酸例えばAsn、Lysなどで置き換えられる。これらの変異は、野生型と比べて中性pHにおける変異型10Fn3のより高い安定性を増進する効果を有すると報告されているPCT公開番号WO0204523参照。10Fn3スキャフォールドにおける追加の改変であって、有益または中立であるものは、種々開示されている。例えばBatoriらProteinEng200215101520;KoideらBiochemistry2001401032633を参照されたい。10Fn3スキャフォールドは、1つ以上の保存的置換によって修飾することができる。保存的置換により、リガンドに対する10Fn3のアフィニティを実質的に改変することなく、10Fn3スキャフォールド中のアミノ酸の5、10、20、さらには30以上ものアミノ酸を改変することができる。例えば、スキャフォールドの修飾による、リガンドに対する10Fn3結合物質の結合アフィニティの減少は、好ましくは、100倍、50倍、25倍、10倍、5倍、または2倍未満である。そのような変化は生体内での10Fn3の免疫原性を改変するかもしれない。そして免疫原性が減少する場合、そのような変化は望ましいであろう。本明細書にいう保存的置換とは、対応する基準残基に物理的または機能的に類似する残基である。すなわち、保存的置換とその基準残基とは、類似するサイズ、形状、電荷、共有結合または水素結合を形成する能力などといった化学的性質などを有する。好ましい保存的置換は、DayhoffらAtlasofProteinSequenceandStructure53453521978Suppにおいて許容される点突然変異に関して規定された基準を満たすものである。保存的置換の例は次のグループ内での置換である:aバリン、グリシン;bグリシン、アラニン;cバリン、イソロイシン、ロイシン;dアスパラギン酸、グルタミン酸;eアスパラギン、グルタミン;fセリン、スレオニン;gリジン、アルギニン、メチオニン;およびhフェニルアラニン、チロシン。一定の実施形態では、10Fn3スキャフォールドに基づく抗体様タンパク質を、次の配列:EVVAATaSLLIxYYRITYGEbQEFTVyATIcDYTITVYAVzISINYRT配列番号2によって、広く定義することができる。配列番号2では、ABループがXaで表され、CDループがXbで表され、EFループがXcで表され、BCループがXxで表され、DEループがXyで表され、FGループがXzで表される。Xは任意のアミノ酸を表し、Xに続く下付き文字はアミノ酸数の整数を表す。特に、aは、1~15、2~15、1~10、2~10、1~8、2~8、1~5、2~5、1~4、2~4、1~3、2~3、または1~2アミノ酸ぐらいであることができ、b、c、x、yおよびzは、それぞれ独立して、2~20、2~15、2~10、2~8、5~20、5~15、5~10、5~8、6~20、6~15、6~10、6~8、2~7、5~7、または6~7アミノ酸ぐらいであることができる。好ましい実施形態では、aが2アミノ酸、bが7アミノ酸、cが7アミノ酸、xが9アミノ酸、yが6アミノ酸、そしてzが12アミノ酸である。βストランドの配列は、配列番号1に示す対応するアミノ酸と比較して、7つ全てのスキャフォールド領域全体にわたって、0~10、0~8、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、または0~1個ぐらいの置換、欠失または付加を有することができる。例示的一実施形態において、βストランドの配列は、配列番号1に示す対応するアミノ酸と比較して、7つ全てのスキャフォールド領域全体にわたって、0~10、0~8、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、または0~1個ぐらいの保存的置換を有することができる。一定の実施形態では、コアアミノ酸残基が固定され、置換、保存的置換、欠失または付加はいずれも、コアアミノ酸残基以外の残基に存在する。例示的実施形態では、それぞれx、y、およびzで表されるBC、DE、およびFGループが、下記の表2に示すHSA結合物質すなわち、表2の配列番号4、8、12、16、20、および24~44のいずれかに由来するBC、DEおよびFGループ配列を含むポリペプチドで置き換えられる。一定の実施形態では、10Fn3スキャフォールドに基づく抗体様タンパク質を、配列:EVVAATPTSLLIxYYRITYGETGGNSPVQEFTVyATISGLKPGVDYTITVYAVzISINYRT配列番号3によって、広く定義することができる。配列番号3では、BCループがXxで表され、DEループがXyで表され、FGループがXzで表される。Xは任意のアミノ酸を表し、Xに続く下付き文字はアミノ酸数の整数を表す。特にx、yおよびzは、それぞれ独立して、2~20、2~15、2~10、2~8、5~20、5~15、5~10、5~8、6~20、6~15、6~10、6~8、2~7、5~7、または6~7アミノ酸ぐらいであることができる。好ましい実施形態では、xが9アミノ酸、yが6アミノ酸、そしてzが12アミノ酸である。βストランドの配列は、配列番号1に示す対応するアミノ酸と比較して、7つ全てのスキャフォールド領域全体にわたって、0~10、0~8、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、または0~1個ぐらいの置換、欠失または付加を有することができる。例示的一実施形態において、βストランドの配列は、配列番号1に示す対応するアミノ酸と比較して、7つ全てのスキャフォールド領域全体にわたって、0~10、0~8、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、または0~1個ぐらいの保存的置換を有することができる。一定の実施形態では、コアアミノ酸残基が固定され、置換、保存的置換、欠失または付加はいずれも、コアアミノ酸残基以外の残基に存在する。例示的実施形態では、それぞれx、y、およびzで表されるBC、DE、およびFGループが、下記の表2に示すHSA結合物質すなわち、表2の配列番号4、8、12、16、20、および24~44のいずれかに由来するBC、DEおよびFGループ配列を含むポリペプチドで置き換えられる。EDテールを有する10Fn3ドメインある態様において、本発明は、フィブロネクチンIII型第1010Fn3ドメインを含むポリペプチドであって、10Fn3ドメインが、i野生型10Fn3ドメインと比較して、AB、BC、CD、DE、EFおよびFGループの1つ以上に修飾されたアミノ酸配列を含み、ii野生型10Fn3ドメインによって結合されないターゲット分子に結合し、かつiii配列nを有するC末端テールここで、nは、2~10、2~8、2~5、3~10、3~8、3~7、3~5、もしくは4~7の整数であるか、またはnは、2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10であるを含む、ポリペプチドを提供する。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、配列番号1の残基9~94に示すアミノ酸配列と少なくとも60、65、70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが配列番号1、2または3を含む。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、配列番号1のアミノ酸9~94を含む。一定の実施形態では、EDテールを有する10Fn3ドメインが、C末端かつEDリピートの直前に、E、IまたはEIを含む。いくつかの実施形態では、EDリピートが、10Fn3ドメインの溶解度を向上させ、かつまたは10Fn3ドメインの凝集を減少させる。一定の実施形態では、EDテールを有する10Fn3ドメインが、野生型10Fn3ドメインと比較して、BC、DEおよびFGループのそれぞれに、修飾されたアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、EDテールを有する10Fn3ドメインが、1μM以下のKDで、所望のターゲットに結合する。血清アルブミン結合物質10Fn3ドメインは、サイズが約10kDaと小さいため、腎臓濾過および分解によって、循環から迅速に浄化されるマウスにおいてt12=15~45分;サルにおいて3時間。一定の態様において、本願は、血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミンHSAに特異的に結合することで10Fn3ドメインのt12を引き延ばす、10Fn3ドメインを提供する。HSAは、ヒトでは600μMの血清中濃度および19日のt12を有する。HSAの長いt12は、新生児型Fc受容体FcRnによるそのリサイクリングが一因であると考えられている。HSAは、内皮細胞内へのエンドソーム取り込み後に、pH依存的にFcRnに結合する。この相互作用が再びHSAを血流へとリサイクルさせることで、HSAをリソソーム分解から遠ざけている。FcRnは、広く発現しており、このリサイクリング経路は構成的であると考えられる。大部分の細胞タイプでは、大半のFcRnが細胞内ソーティングエンドソーム中に存在する。HSAは、液相飲作用の非特異的機序によって容易にインターナライズされ、FcRnにより、リソソームにおける分解からレスキューされる。エンドソームに見いだされる酸性pHでは、FcRnに対するHSAのアフィニティが増加するpH60において5μM。FcRnに結合すると、HSAは、リソソーム分解経路から遠ざけられ、ひとたび細胞表面へのトランスサイトーシスを受けて、細胞表面で放出される。ある態様において、本開示は、血清アルブミン結合性10Fn3ドメインを含む抗体様タンパク質を提供する。例示的実施形態において、本明細書に記載する血清アルブミン結合性10Fn3タンパク質は、3μM、25μM、2μM、15μM、1μM、500nM、100nM、50nM、10nM、1nM、500pM、100pM、100pM、50pMまたは10pM未満のKDで、HSAに結合する。一定の実施形態において、本明細書に記載する血清アルブミン結合性10Fn3タンパク質は、55~74のpH範囲、25°Cまたは37°Cにおいて、3μM、25μM、2μM、15μM、1μM、500nM、100nM、50nM、10nM、1nM、500pM、100pM、100pM、50pMまたは10pM未満のKDで、HSAに結合する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載する血清アルブミン結合性10Fn3タンパク質は、74以上のpHでのHSAに対する結合アフィニティと比べて、74未満のpHでは、HSAに、より強固に結合する。一定の実施形態において、本明細書に記載するHSA結合性10Fn3タンパク質は、サル、ラット、またはマウスの1つ以上に由来する血清アルブミンにも結合しうる。一定の実施形態において、本明細書に記載する血清アルブミン結合性10Fn3タンパク質は、3μM、25μM、2μM、15μM、1μM、500nM、100nM、50nM、10nM、1nM、500pMまたは100pM未満のKDで、アカゲザル血清アルブミンRhSAまたはカニクイザル血清アルブミンCySAに結合する。一定の実施形態において、本明細書に記載する血清アルブミン結合性10Fn3タンパク質は、HSAのドメインIおよびまたはドメインIIに結合する。ある実施形態では、本明細書に記載する血清アルブミン結合性10Fn3タンパク質は、HSAのドメインIIIに結合しない。一定の実施形態では、血清アルブミン結合性10Fn3SABAが、野生型10Fn3ドメイン配列番号1に対して少なくとも40、50、60、70、75、80または85の同一性を有する配列を含む。ある実施形態では、BC、DE、またはFGループの少なくとも1つが、野生型10Fn3ドメインと比較して修飾されている。もう一つの実施形態では、BC、DE、またはFGループの少なくとも2つが、野生型10Fn3ドメインと比較して修飾されている。もう一つの実施形態では、BC、DE、およびFGループの3つ全てが、野生型10Fn3ドメインと比較して修飾されている。別の実施形態では、SABAが、表2に示す26のコアSABA配列すなわち配列番号4、8、12、16、20、および24~44のいずれか1つまたは表2に示す伸長されたSABA配列すなわち配列番号89~116、6×HISタグを除くのいずれか1つに対して、少なくとも40、50、60、70、75、80、85、90、または95の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本明細書に記載するSABAは、それぞれx、y、およびzで表されるBC、DE、およびFGループが、26のコアSABA配列すなわち、表2の配列番号4、8、12、16、20、および24~44のいずれかに由来する明示されたBC、DE、およびFGループの各セットまたはそれら26のコアSABA配列のBC、DEおよびFGループ配列と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99同一な配列で置き換えられている、配列番号2または3に示す配列を含んでもよい。例示的実施形態において、本明細書に記載するSABAは配列番号3によって規定され、26のコアSABA配列すなわち表2の配列番号4、8、12、16、20、および24~44のいずれかに由来する一組のBC、DEおよびFGループ配列を有する。そのようなSABAのスキャフォールド領域は、配列番号1のスキャフォールドアミノ酸残基と比較して、0~20、0~15、0~10、0~8、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、または0~1個ぐらいの置換、保存的置換、欠失または付加を有しうる。例えばSABA1は配列番号4に示すコア配列を有し、それぞれ配列番号5~7に示すBC、DE、およびFGループを含む。それゆえに、SABA1コアに基づくSABAは、xが配列番号5を含み、yが配列番号6を含み、かつzが配列番号7を含む配列番号2または3を含みうる。他のSABAコア配列に由来するBC、DEおよびFGループのセットを利用して、同様のコンストラクトが考えられる。そのようなSABAのスキャフォールド領域は、配列番号1のスキャフォールドアミノ酸残基と比較して、0~20、0~15、0~10、0~8、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、または0~1個ぐらいの置換、保存的置換、欠失または付加を含みうる。そのSABAが所望のKDで血清アルブミン、例えばHSAに結合する能力を有する限り、そのようなスキャフォールド修飾を施すことができる。一定の実施形態では、SABA例えば上述のSABAコア配列またはそれに基づく配列を修飾して、N末端伸長配列およびまたはC末端伸長配列を含むようにすることができる。例示的な伸長配列を表2に示す。例えば、SABA11と呼ばれる配列番号89は、コアSABA1配列配列番号4を含み、N末端配列MGVSDVPRDLE配列番号45、AdNT1と呼ばれるとC末端配列EIDKPSQ配列番号54、AdCT1と呼ばれるとを伴う。SABA11は、さらに、C末端にHis6タグを含むが、His6タグは全く随意であって、N末端またはC末端伸長配列内のどこにおいてもよいと理解すべきである。さらに、表2に掲載する任意の所与のSABAコア配列を修飾するために、表2に掲載する例示的N末端またはC末端伸長配列配列番号45~64および215およびその変異体を、どれでも使用することができる。一定の実施形態では、表2に掲載するリンカー配列配列番号65~88、216~221および397を、C末端テール配列として、単独で、または配列番号54~64または215の一つと組み合わせて、使用することができる。一定の実施形態において、C末端伸長配列テールとも呼ぶは、EおよびD残基を含み、8~50、10~30、10~20、5~10、および2~4アミノ酸長であることができる。いくつかの実施形態では、テール配列は、配列がEDのタンデムリピートを含んでいるEDベースのリンカーを包含する。例示的実施形態において、テール配列は、2~10、2~7、2~5、3~10、3~7、3~5、3、4または5個のEDリピートを含む。一定の実施形態では、EDベースのテール配列が、例えばEI、EID、ES、EC、EGS、およびEGCなどといった追加のアミノ酸残基も包含する。そのような配列は、部分的に、既知のAdnectin商標テール配列に基づき、例えば残基DおよびKが除去されているEIDKPSQ配列番号54である。例示的実施形態において、EDベースのテールは、EDリピートの前にE、IまたはEI残基を含む。別の実施形態では、例えばEIEDEDEDEDEDがGSGSGSGSと接合されている配列番号147SABA1FGF21v16など、SABA融合分子を設計する際に、テール配列を、必要に応じて他の既知リンカー配列例えば表2の配列番号65~88、216~221および397と組み合わせることができる。血清アルブミン結合性Adnectin商標SABAの融合物本発明の一態様は、血清アルブミン結合性10Fn3SABAと少なくとも1つの追加部分とを含むコンジュゲートを提供する。追加部分は、任意の診断、イメージング、または治療目的に役立ちうる。一定の実施形態では、SABAに融合される部分の血清中半減期が、SABAにコンジュゲートされていない当該部分の血清中半減期と比較して増加する。一定の実施形態では、SABA融合物の血清中半減期が、SABAに融合されていない当該部分の血清中半減期と比較して、少なくとも20、40、60、80、100、120、150、180、200、400、600、800、1000、1200、1500、1800、1900、2000、2500、または3000長い。別の実施形態では、SABA融合物の血清中半減期が、SABAに融合されていない当該部分の血清中半減期より、少なくとも15倍、2倍、25倍、3倍、35倍、4倍、45倍、5倍、6倍、7倍、8倍、10倍、12倍、13倍、15倍、17倍、20倍、22倍、25倍、27倍、30倍、35倍、40倍、または50倍大きい。いくつかの実施形態では、SABA融合物の血清中半減期が、少なくとも2時間、25時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、15時間、20時間、25時間、30時間、35時間、40時間、50時間、60時間、70時間、80時間、90時間、100時間、110時間、120時間、130時間、135時間、140時間、150時間、160時間、または200時間である。一定の実施形態では、SABA融合タンパク質が、3μM、25μM、2μM、15μM、1μM、500nM、100nM、50nM、10nM、1nM、500pM、100pM、100pM、50pMまたは10pM未満のKDで、HSAに結合する。一定の実施形態では、SABA融合タンパク質が、55~74のpH範囲、25°Cまたは37°Cにおいて、3μM、25μM、2μM、15μM、1μM、500nM、100nM、50nM、10nM、1nM、500pM、100pM、100pM、50pMまたは10pM未満のKDで、HSAに結合する。いくつかの実施形態では、SABA融合タンパク質が、pH74における結合と比較して、74未満のpHでは、HSAに、より強固に結合する。したがって本明細書に記載するSABA融合分子は、治療部分とSABAとの融合物を作り出すことによって、治療部分例えばFGF21の半減期を増加させるのに有用である。そのような融合分子は、その融合物に含有される治療部分の生物学的活性に応答する状態を処置するのに使用することができる。本発明では、次に挙げるタンパク質または分子のいずれかの調節不全によって引き起こされる疾患における、SABA融合分子の使用が考えられる。異種部分いくつかの実施形態では、SABAが、小さな有機分子、核酸、またはタンパク質である第2の部分に融合される。いくつかの実施形態では、SABAが、受容体、受容体リガンド、ウイルスコートタンパク質、免疫系タンパク質、ホルモン、酵素、抗原、または細胞シグナリングタンパク質をターゲットとする治療部分に融合される。融合物は、第2部分をSABA分子のどちらか一方の端に、すなわちSABA治療分子の配置または治療分子SABAの配置で取り付けることによって、形成させることができる。例示的実施形態では、治療部分が、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、Her1、Her2、Her3、EGFI、EGF2、EGF3、α3、cMet、ICOS、CD40L、LFAI、cMet、ICOS、LFAI、IL6、B71、Wl2、OX40、ILIb、TACI、IgE、BAFFまたはBLys、TPOR、CD19、CD20、CD22、CD33、CD28、ILIR1、TNFα、TRAILR1、補体受容体1、FGFa、オステオポンチン、ビトロネクチン、エフリンA1A5、エフリンB1B3、α2マクログロブリン、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CXCL16、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、PDGF、TGFb、GMCSF、SCF、p40IL12IL23、ILIb、ILIa、IL1Ra、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL8、IL10、IL12、IL15、IL23、Fas、FasL、Flt3リガンド、41BB、ACE、ACE2、KGF、FGF7、SCF、ネトリン1,2、IFNa,b,g、カスパーゼ2,3,7,8,10、ADAMS1,S5,8,9,15,TS1,TS5;アディポネクチン、ALCAM、ALKI、APRIL、アネキシンV、アンギオゲニン、アンフィレギュリン、アンジオポエチン1,2,4、B71CD80、B72CD86、B7H1、B7H2、B7H3、Bcl2、BACEI、BAK、BCAM、BDNF、bNGF、bECGF、BMP2,3,4,5,6,7,8;CRP、カドヘリン6,8,11;カテプシンA,B,C,D,E,L,S,V,X;CD11aLFA1、LFA3、GP2b3a、GH受容体、RSVFタンパク質、IL23p40、p19、IL12、CD80、CD86、CD28、CTLA4、α4β1、α4β7、TNFリンフォトキシン、IgE、CD3、CD20、IL6、IL6R、BLYSBAFF、IL2R、HER2、EGFR、CD33、CD52、ジゴキシン、Rho、水痘Varicella、肝炎Hepatitis、CMV、破傷風Tetanus、ワクシニアVaccinia、抗毒素Antivenom、ボツリヌスBotulinum、TrailR1、TrailR2、cMet、TNFRファミリー、例えばLANGFR、CD27、CD30、CD40、CD95、リンフォトキシンab受容体、WsII、TL1ATNFSF15、BAFF、BAFFRTNFRSF13C、TRAILR2TNFRSF10B、TRAILR2TNFRSF10B、FasTNFRSF6CD27TNFRSF7、DR3TNFRSF25、HVEMTNFRSF14、TROYTNFRSF19、CD40リガンドTNFSF5、BCMATNFRSF17、CD30TNFRSF8、LIGHTTNFSF14、41BBTNFRSF9、CD40TNFRSF5、GITRγNFRSF18、オステオプロテゲリンTNFRSF1IB、RANKTNFRSF11A、TRAILR3TNFRSF10C、TRAILTNFSF10、TRANCERANKLTNFSF11、41BBリガンドTNFSF9、TWEAKTNFSF12、CD40リガンドTNFSFS、FasリガンドTNFSF6、RELTTNFRSF19L、APRILTNFSF13、DcR3TNFRSF6B、TNFRITNFRSFIA、TRAILR1TNFRSF10A、TRAILR4TNFRSF10D、CD30リガンドTNFSF8、GITRリガンドTNFSF18、TNFSF18、TACITNFRSF13B、NGFRTNFRSF16、OX40リガンドTNFSF4、TRAILR2TNFRSF10B、TRAILR3TNFRSF10C、TWEAKRTNFRSF12、BAFFBLySTNFSF13、DR6TNFRSF21、TNFαTNFSF1A、ProTNFαTNFSF1A、リンフォトキシンβRTNFRSF3、リンフォトキシンβRFcキメラ、TNFRITNFRSFIA、TNFβTNFSF1B、PGRPS、TNFRITNFRSFIA、TNFRIITNFRSFIB、EDAA2、TNFαTNFSFIA、EDAR、XEDAR、TNFRITNFRSFIAである。特に興味深いのは、精製された形態で市販されているヒトターゲットタンパク質、ならびにこれらのターゲットタンパク質に結合するタンパク質である。以下はその例である:4EBP1、1433ζ、53BP1、2B4SLAMF4、CCL216Ckine、41BBTNFRSF9、8D6A、41BBリガンドTNFSF9、8オキソdG、4アミノ18ナフタルイミド、A2B5、アミノペプチダーゼLRAPERAP2、A33、アミノペプチダーゼNANPEP、Aag、アミノペプチダーゼP2XPNPEP2、ABCG2、アミノペプチダーゼP1XPNPEP1、ACE、アミノペプチダーゼPILSARTS1、ACE2、アムニオンレスAmnionless、アクチン、アンフィレギュリン、βアクチン、AMPKα12、アクチビンA、AMPKα1、アクチビンAB、AMPKα2、アクチビンB、AMPKβ1、アクチビンC、AMPKβ2、アクチビンRIAALK2、アンドロゲンRNR3C4、アクチビンRIBALK4、アンギオゲニン、アクチビンRIIA、アンジオポエチン1、アクチビンRIIB、アンジオポエチン2、ADAM8、アンジオポエチン3、ADAM9、アンジオポエチン4、ADAM10、アンジオポエチン様1、ADAM12、アンジオポエチン様2、ADAM15、アンジオポエチン様3、TACEADAM17、アンジオポエチン様4、ADAM19、アンジオポエチン様7CDT6、ADAM33、アンジオスタチン、ADAMTS4、アネキシンA1アネキシンI、ADAMTS5、アネキシンA7、ADAMTS1、アネキシンA10、ADAMTSL1パンクチンPunctin、アネキシンV、アディポネクチンAcrp30、ANP、AEBSF、APサイトAPSite、アグリカン、APAFI、アグリン、APC、AgRP、APE、AGTR2、APJ、AIF、APLPI、Akt、APLP2、Aktl、アポリポタンパク質AI、Akt2、アポリポタンパク質B、Akt3、APP、血清アルブミン、APRILTNFSF13、ALCAM、ARC、ALKI、アルテミン、ALK7、アリールスルファターゼAJARSA、アルカリホスファターゼ、ASAH2Nアシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ2、α2uグロブリン、ASC、α1酸性糖タンパク質、ASGR1、αフェトプロテイン、ASK1、ALS、ATM、エナメル芽細胞ATRIP、AMICAJAML、オーロラAuroraA、AMIGO、オーロラB、AMIGO2、アキシンAxin1、AMIGO3、AxI、アミノアシラーゼACY1、アズロシジンCAP37HBP、アミノペプチダーゼAENPEP、B4GALT1、BIM、B71CD80、6ビオチン17NAD、B72CD86、BLAMESLAMF8、B7H1PDL1、CXCL13BLCBCA1、B7H2、BLIMP1、B7H3、BIk、B7H4、BMII、BACEI、BMP1PCP、BACE2、BMP2、Bad、BMP3、BAFFTNFSF13B、BMP3bGDF10、BAFFRTNFRSF13C、BMP4、Bag1、BMP5、BAK、BMP6、BAMBINMA、BMP7、BARD1、BMP8、Bax、BMP9、BCAM、BMP10、Bcl10、BMP15GDF9B、Bcl2、BMPRIAALK3、Bcl2関連タンパク質A1、BMPRIBALK6、Bclw、BMPRII、Bclx、BNIP3L、BclxL、BOC、BCMATNFRSF17、BOK、BDNF、BPDE、ベンズアミド、ブラキュリBrachyury、共通β鎖、BRaf、βIGH3、CXCL14BRAK、ベータセルリン、BRCA1、βディフェンシン2、BRCA2、BID、BTLA、バイグリカン、Bub1、Bik様キラータンパク質、cjun、CD90Thy1、cRel、CD94、CCL6C10、CD97、CIqR1CD93、CD151、CIqTNFl、CD160、C1qTNF4、CD163、C1qTNF5、CD164、補体成分CIr、CD200、補体成分CIs、CD200R1、補体成分C2、CD229SLAMF3、補体成分C3a、CD23FcεRII、補体成分C3d、CD2F10SLAMF9、補体成分C5a、CD5L、カドヘリン4Rカドヘリン、CD69、カドヘリン6、CDC2、カドヘリン8、CDC25A、カドヘリン11、CDC25B、カドヘリン12、CDCP1、カドヘリン13、CDO、カドヘリン17、CDX4、Eカドヘリン、CEACAM1CD66a、Nカドヘリン、CEACAM6、Pカドヘリン、サーベラスCerberus1、VEカドヘリン、CFTR、カルビンディンD、cGMP、カルシニューリンA、ChemR23、カルシニューリンB、ケマリン、カルレティキュリン2、ケモカインサンプラーパック、CaMキナーゼII、キチナーゼ3様1、cAMP、キトトリオシダーゼCHIT1、カンナビノイドR1、Chk1、カンナビノイドR2CB2CNR2、Chk2、CARNR1I3、CHL1L1CAM2、炭酸脱水酵素I、コリンアセチルトランスフェラーゼCbAT、炭酸脱水酵素II、コンドロレクチン、炭酸脱水酵素III、コーディン、炭酸脱水酵素IV、コーディン様1、炭酸脱水酵素VA、コーディン様2、炭酸脱水酵素VB、CINCI、炭酸脱水酵素VI、CINC2、炭酸脱水酵素VII、CINC3、炭酸脱水酵素VIII、クラスピン、炭酸脱水酵素IX、クローディン6、炭酸脱水酵素X、CLC、炭酸脱水酵素XII、CLECI、炭酸脱水酵素XIII、CLEC2、炭酸脱水酵素XIV、CLECSF13CLEC4F、カルボキシメチルリジン、CLECSF8、カルボキシペプチダーゼA1CPA1、CLFI、カルボキシペプチダーゼA2、CLP1COLEC12、カルボキシペプチダーゼA4、クラスタリン、カルボキシペプチダーゼB1、クラスタリン様1、カルボキシペプチダーゼECPE、CMG2、カルボキシペプチダーゼX1、CMVUL146、カルジオトロフィン1、CMVUL147、カルノシンジペプチダーゼ1、CNP、カロンテCaronte、CNTF、CART、CNTFRα、カスパーゼ、凝固第II因子トロンビン、カスパーゼ1、凝固第III因子組織因子、カスパーゼ2、凝固第VII因子、カスパーゼ3、凝固第X因子、カスパーゼ4、凝固第XI因子、カスパーゼ6、凝固第XIV因子プロテインC、カスパーゼ7、COCO、カスパーゼ8、コヒーシン、カスパーゼ9、コラーゲンI、カスパーゼ10、コラーゲンII、カスパーゼ12、コラーゲンIV、カスパーゼ13、共通γ鎖IL2Rγ、カスパーゼペプチドインヒビター、COMPトロンボスポンジン5、カタラーゼ、補体成分CIrLP、βカテニン、補体成分CIqA、カテプシン1、補体成分CIqC、カテプシン3、補体因子D、カテプシン6、補体因子I、カテプシンA、補体MASP3、カテプシンB、コネキシン43、カテプシンCDPPI、コンタクチン1、カテプシンD、コンタクチン2TAG1、カテプシンE、コンタクチン4、カテプシンF、コンタクチン5、カテプシンH、コリンCorin、カテプシンL、コルヌリンCornulin、カテプシンO、CORS26C1qTNF,3、カテプシンS、ラット皮質幹細胞、カテプシンV、コルチゾール、カテプシンXITJ、COUPTFINR2F1、CBP、COUPTFIINR2F2、CCI、COXI、CCKAR、COX2、CCL28、CRACCSLAMF7、CCR1、C反応性タンパク質、CCR2、クレアチンキナーゼ筋型CKMM、CCR3、クレアチニン、CCR4、CREB、CCR5、CREG、CCR6、CRELD1、CCR7、CRELD2、CCR8、CRHBP、CCR9、CRHRI、CCR10、CRIM1、CD155PVR、クリプトCripto、CD2、CRISP2、CD3、CRISP3、CD4、クロスベインレスCrossveinless2、CD445RA、CRTAM、CD445RO、CRTH2、CD4CD62LCD44、CRY1、CD4CD62LCD44、クリプティックCryptic、CD5、CSBERCC6、CD6、CCL27CTACK、CD8、CTGFCCN2、CD845RA、CTLA4、CD845RO、キュビリン、CD9、CX3CR1、CD14、CXADR、CD27TNFRSF7、CXCL16、CD27リガンドTNFSF7、CXCR3、CD28、CXCR4、CD30TNFRSF8、CXCR5、CD30リガンドTNFSF8、CXCR6、CD31PECAM1、シクロフィリンA、CD34、Cyr61CCN1、CD36SRB3、シスタチンA、CD38、シスタチンB、CD40TNFRSF5、シスタチンC、CD40リガンドTNFSF5、シスタチンD、CD43、シスタチンEM、CD44、シスタチンF、CD45、シスタチンH、CD46、シスタチンH2、CD47、シスタチンS、CD48SLAMF2、シスタチンSA、CD55DAF、シスタチンSN、CD58LFA3、シトクロムc、CD59、アポシトクロムc、CD68、ホロシトクロムc、CD72、サイトケラチン8、CD74、サイトケラチン14、CD83、サイトケラチン19、CD84SLAMF5、サイトニン、D6、DISP1、DAN、Dkk1、DANCE、Dkk2、DARPP32、Dkk3、DAX1NR0B1、Dkk4、DCC、DLEC、DCIRCLEC4A、DLL1、DCAR、DLL4、DcR3TNFRSF6B、dルシフェリン、DCSIGN、DNAリガーゼIV、DCSIGNRCD299、DNAポリメラーゼβ、DcTRAILR1TNFRSF23、DNAMI、DcTRAILR2TNFRSF22、DNAPKcs、DDR1、DNER、DDR2、ドーパデカルボキシラーゼDDC、DEC205、DPCRI、デカペンタプレジック、DPP6、デコリン、DPPA4、デクチン1CLEC7A、DPPA5ESG1、デクチン2CLEC6A、DPPIIQPPDPP7、DEP1CD148、DPPIVCD26、デザートヘッジホッグ、DR3TNFRSF25、デスミン、DR6TNFRSF21、デスモグレイン1、DSCAM、デスモグレイン2、DSCAML1、デスモグレイン3、DSPG3、ディシェベルド1、Dtk、ディシェベルド3、ダイナミン、EAR2NR2F6、EphA5、ECEI、EphA6、ECE2、EphA7、ECFLCHI3L3、EphA8、ECMI、EphB1、エコチン、EphB2、EDA、EphB3、EDAA2、EphB4、EDAR、EphB6、EDGI、エフリン、EDG5、エフリンA1、EDG8、エフリンA2、eEF2、エフリンA3、EGF、エフリンA4、EGFR、エフリンA5、EGR1、エフリンB、EGVEGFPK1、エフリンB1、eIF2α、エフリンB2、eIF4E、エフリンB3、EIkI、エピジェンEpigen、EMAPII、エピモルフィンシンタキシン2、EMMPRINCD147、エピレギュリン、CXCL5ENA、EPR1Xa受容体、エンドカンEndocan、ErbB2、エンドグリンCD105、ErbB3、エンドグリカンEndoglycan、ErbB4、エンドヌクレアーゼIII、ERCC1、エンドヌクレアーゼIV、ERCC3、エンドヌクレアーゼV、ERK1ERK2、エンドヌクレアーゼVIII、ERK1、エンドレペリンEndorepellinパーレカン、ERK2、エンドスタチン、ERK3、エンドセリン1、ERK5BMK1、エングレイルドEngrailed2、ERRαNR3B1、ENRAGE、ERRβNR3B2、エンテロペプチダーゼエンテロキナーゼ、ERRγNR3B3、CCL11エオタキシン、エリスロポエチン、CCL24エオタキシン2、エリスロポエチンR、CCL26エオタキシン3、ESAM、EpCAMTROP1、ERαNR3A1、EPCR、ERβNR3A2、Eph、エキソヌクレアーゼIII、EphA1、エキソストシンExostosin様2EXTL2、EphA2、エキソストシン様3EXTL3、EphA3、FABP1、FGFBP、FABP2、FGFR14、FABP3、FGFR1、FABP4、FGFR2、FABP5、FGFR3、FABP7、FGFR4、FABP9、FGFR5、補体因子B、Fgr、FADD、FHR5、FAM3A、フィブロネクチン、FAM3B、フィコリン2、FAM3C、フィコリン3、FAM3D、FITC、線維芽細胞活性化タンパク質αFAP、FKBP38、FasTNFRSF6、Flap、FasリガンドTNFSF6、FLIP、FATP1、FLRG、FATP4、FLRT1、FATP5、FLRT2、FcγRICD64、FLRT3、FcγRIIBCD32b、Flt3、FcγRIICCD32c、Flt3リガンド、FcγRIIACD32a、フォリスタチン、FcγRIIICD16、フォリスタチン様1、FcRH1IRTA5、FosBG0S3、FcRH2IRTA4、FoxD3、FcRH4IRTA1、FoxJ1、FcRH5IRTA2、FoxP3、Fc受容体様3CD162、Fpg、FENI、FPR1、フェチュインA、FPRL1、フェチュインB、FPRL2、酸性FGF、CX3CL1フラクタルカイン、塩基性FGF、フリズルドFrizzled1、FGF3、フリズルド2、FGF4、フリズルド3、FGF5、フリズルド4、FGF6、フリズルド5、FGF8、フリズルド6、FGF9、フリズルド7、FGF10、フリズルド8、FGF11、フリズルド9、FGF12、Frk、FGF13、sFRP1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G2A、ネクチン3、NKG2C、ネクチン4、NKG2D、ネオゲニン、NKp30、ネプリライシンCD10、NKp44、ネプリライシン2MMEL1MMEL2、NKp46NCR1、ネスチン、NKp80KLRF1、NETO2、NKX25、ネトリン1、NMDAR、NR1サブユニット、ネトリン2、NMDAR、NR2Aサブユニット、ネトリン4、NMDAR、NR2Bサブユニット、ネトリンG1a、NMDAR、NR2Cサブユニット、ネトリンG2a、NMe67diOHTIQ、ニューレグリン1NRG1、ノーダルNodal、ニューレグリン3NRG3、ノギン、ニューリチンNeuritin、Nogo受容体、NeuroD1、NogoA、ニューロファシン、NOMO、ニューロゲニン1、ノープNope、ニューロゲニン2、ノリンNorrin、ニューロゲニン3、eNOS、ニューロリシン、iNOS、ニューロフィジンII、nNOS、ニューロピリン1、ノッチ1、ニューロピリン2、ノッチ2、ニューロポエチンNeuropoietin、ノッチ3、ニューロトリミンNeurotrimin、ノッチ4、ニュールツリン、NOVCCN3、NFAM1、NRAGE、NFH、NrCAM、NFkB1、NRL、NFkB2、NT3、NFL、NT4、NFM、NTBASLAMF6、NG2MCSP、NTH1、NGFRTNFRSF16、ヌクレオステミンNucleostemin、βNGF、Nurr1NR4A2、NGFIBαNR4A1、OAS2、オレキシンB、OBCAM、OSCAR、OCAM、OSF2ペリオスチン、OCILCLEC2d、オンコスタチンMOSM、OCILRP2CLEC2i、OSMRβ、Oct34、オステオアクチビンGPNMB、OGG1、オステオアドヘリンOsteoadherin、Olig1,2,3、オステオカルシン、Olig1、オステオクリンOsteocrin、Olig2、オステオポンチン、Olig3、オステオプロテゲリンTNFRSF11B、乏突起膠細胞マーカーO1、Otx2、乏突起膠細胞マーカーO4、OV6、OMgp、OX40TNFRSF4、オプチシンOpticin、OX40リガンドTNFSF4、オレキシンA、OAS2、オレキシンB、OBCAM、OSCAR、OCAM、OSF2ペリオスチン、OCILCLEC2d、オンコスタチンMOSM、OCILRP2CLEC2i、OSMRβ、Oct34、オステオアクチビンGPNMB、OGG1、オステオアドヘリン、Olig1,2,3、オステオカルシン、Olig1、オステオクリン、Olig2、オステオポンチン、Olig3、オステオプロテゲリンTNFRSF11B、乏突起膠細胞マーカーO1、Otx2、乏突起膠細胞マーカーO4、OV6、OMgp、OX40TNFRSF4、オプチシン、OX40リガンドTNFSF4、オレキシンA、RACK1、Ret、Rad1、REVERBαNR1D1、Rad17、REVERBβNR1D2、Rad51、Rex1、Rae1、RGMA、Rae1α、RGMB、Rae1β、RGMC、Rae1δ、Rheb、Rae1ε、リボソームタンパク質S6、Rae1γ、RIP1、Raf1、ROBO1、RAGE、ROBO2、RalARalB、ROBO3、RalA、ROBO4、RalB、RORNR1F13汎、RANKTNFRSF11A、RORαNR1F1、CCL5RANTES、RORγNR1F3、Rap1AB、RTK様オーファン受容体1ROR1、RARαNR1B1、RTK様オーファン受容体2ROR2、RARβNR1B2、RP105、RARγNR1B3、RPA2、Ras、RSK汎、RBP4、RSK1RSK2、RECK、RSK1、Reg2PAP、RSK2、RegI、RSK3、RegII、RSK4、RegIII、Rスポンジン1、RegIIIa、Rスポンジン2、RegIV、Rスポンジン3、リラキシン1、RUNX1CBFA2、リラキシン2、RUNX2CBFA1、リラキシン3、RUNX3CBFA3、RELMα、RXRαNR2B1、RELMβ、RXRβNR2B2、RELTTNFRSF19L、RXRγNR2B3、レジスチン、S100A10、SLITRK5、S100A8、SLPI、S100A9、SMACディアブロDiablo、S100B、Smad1、S100P、Smad2、SALL1、Smad3、δサルコグリカン、Smad4、Sca1Ly6、Smad5、SCDI、Smad7、SCF、Smad8、SCFRckit、SMC1、SCGF、α平滑筋アクチン、SCLTall、SMUG1、SCP3SYCP3、Snail、CXCL12SDF1、ナトリウムカルシウム交換輸送体1、SDNSFMCFD2、Soggy1、αセクレターゼ、ソニックヘッジホッグ、γセクレターゼ、SorCS1、βセクレターゼ、SorCS3、Eセレクチン、ソルチリン、Lセレクチン、SOST、Pセレクチン、SOX1、セマフォリン3A、SOX2、セマフォリン3C、SOX3、セマフォリン3E、SOX7、セマフォリン3F、SOX9、セマフォリン6A、SOX10、セマフォリン6B、SOX17、セマフォリン6C、SOX21セマフォリン6D、SPARC、セマフォリン7A、SPARC様1、セパラーゼ、SPD、セリンスレオニンホスファターゼ基質I、スピネシンSpinesin、セルピンA1、Fスポンジン、セルピンA3、SRAIMSR、セルピンA4カリスタチン、Src、セルピンA5プロテインCインヒビター、SRECISRF1、セルピンA8アンジオテンシノゲン、SRECII、セルピンB5、SSEAI、セルピンC1アンチトロンビンIII、SSEA3、セルピンD1ヘパリン補因子II、SSEA4、セルピンE1PAI1、ST7LRP12、セルピンE2、スタビリンStabilin1、セルピンF1、スタビリン2、セルピンF2、スタニオカルシン1、セルピンG1C1インヒビター、スタニオカルシン2、セルピン12、STAT1、血清アミロイドA1、STAT2、SF1NR5A1、STAT3、SGK、STAT4、SHBG、STAT5ab、SHIP、STAT5a、SHPNR0B2、STAT5b、SHPI、STAT6、SHP2、VEスタチン、SIGIRR、ステラStellaDppa3、シグレックSiglec2CD22、STROI、シグレック3CD33、サブスタンスP、シグレック5、スルファミダーゼSGSH、シグレック6、スルファターゼ修飾因子1SUMF1、シグレック7、スルファターゼ修飾因子2SUMF2、シグレック9、SUMO1、シグレック10、SUMO234、シグレック11、SUMO3、シグレックF、スーパーオキシドジスムターゼ、SIGNR1CD209、スーパーオキシドジスムターゼ1CuZnSOD、SIGNR4、スーパーオキシドジスムターゼ2MnSOD、SIRPβ1、スーパーオキシドジスムターゼ3ECSOD、SKI、サバイビン、SLAMCD150、シナプシンI、スリーピングビューティSleepingBeautyトランスポザーゼ、シンデカンICD138、Slit3、シンデカン2、SLITRK1、シンデカン3、SLITRK2、シンデカン4、SLITRK4、TACITNFRSF13B、TMEFF1トモレギュリンTomoregulin1、TAO2、TMEFF2、TAPP1、TNFαTNFSFIA、CCL17TARC、TNFβTNFSF1B、タウ、TNFRITNFRSFIA、TC21RRas2、TNFRIITNFRSF1B、TCAMI、TOR、TCCRWSX1、TPI、TCPTP、TP63TP73L、TDG、TR、CCL25TECK、TRαNR1A1、テネイシンC、TRβ1NR1A2、テネイシンR、TR2NR2C1、TER119、TR4NR2C2、TERT、TRA185、テスティカンTestican1SPOCK1、TRADD、テスティカン2SPOCK2、TRAF1、テスティカン3SPOCK3、TRAF2、TFPI、TRAF3、TFPI2、TRAF4、TGFα、TRAF6、TGFβ、TRAILTNFSF10、TGFβ1、TRAILR1TNFRSF10A、LAPTGFβ1、TRAILR2TNFRSF10B、潜在型TGFβ1、TRAILR3TNFRSF10C、TGFβ12、TRAILR4TNFRSF10D、TGFβ2、TRANCETNFSF11、TGFβ3、TfRトランスフェリンR、TGFβ5、アポトランスフェリン、潜在型TGFβbp1、ホロトランスフェリン、潜在型TGFβbp2、トラッピンTrappin2エラフィン、潜在型TGFβbp4、TREM1、TGFβRIALK5、TREM2、TGFβRII、TREM3、TGFβRIIb、TREML1TLT1、TGFβRIII、TRFI、サーモライシン、TRF2、チオレドキシン1、TRH分解エクトエンザイムTRHDE、チオレドキシン2、TRIM5、チオレドキシン80、トリペプチジルペプチダーゼI、チオレドキシン様5TRP14、TrkA、THOP1、TrkB、トロンボモジュリンCD141、TrkC、トロンボポエチン、TROP2、トロンボポエチンR、トロポニンIペプチド3、トロンボスポンジン1、トロポニンT、トロンボスポンジン2、TROYTNFRSF19、トロンボスポンジン4、トリプシン1、サイモポエチン、トリプシン2PRSS2、胸腺ケモカイン1、トリプシン3PRSS3、Tie1、トリプターゼ5Prss32、Tie2、トリプターゼαTPS1、TIMIKIMIHAVCR、トリプターゼβ1MCPT7、TIM2、トリプターゼβ2TPSB2、TIM3、トリプターゼεBSSP4、TIM4、トリプターゼγ1TPSG1、TIM5、トリプトファンヒドロキシラーゼ、TIM6、TSC22、TIMPI、TSG、TIMP2、TSG6、TIMP3、TSK、TIMP4、TSLP、TL1ATNFSF15、TSLPR、TLR1、TSP50、TLR2、βIIIチューブリン、TLR3、TWEAKTNFSF12、TLR4、TWEAKRTNFRSF12、TLR5、Tyk2、TLR6、ホスホチロシン、TLR9、チロシンヒドロキシラーゼ、TLXNR2E1、チロシンホスファターゼ基質I、ユビキチン、UNC5H3、Ugi、UNC5H4、UGRP1、UNG、ULBPI、uPA、ULBP2、uPAR、ULBP3、URB、UNC5H1、UVDE、UNC5H2、バニロイドR1、VEGFR、VASA、VEGFR1Flt1、バソヒビン、VEGFR2KDRFlk1、バソリンVasorin、VEGFR3FU4、バソスタチン、バーシカン、Vav1、VG5Q、VCAMI、VHR、VDRNR1I1、ビメンチン、VEGF、ビトロネクチン、VEGFB、VLDLR、VEGFC、vWFA2、VEGFD、シヌクレインα、Ku70、WASP、Wnt7b、WIFI、Wnt8aWISP1CCN4、Wnt8b、WNK1、Wnt9a、Wnt1、Wnt9b、Wnt3a、Wnt10a、Wnt4、Wnt10b、Wnt5a、Wnt11、Wnt5b、wnvNS3、Wnt7a、XCR1、XPEDDB1、XEDAR、XPEDDB2、Xg、XPF、XIAP、XPG、XPA、XPV、XPD、XRCC1、Yes、YY1、EphA4。数多くのヒトイオンチャネルはとりわけ興味深いターゲットである。非限定的な例には、次に挙げるものが包含される:5ヒドロキシトリプタミン3受容体Bサブユニット、5ヒドロキシトリプタミン3受容体前駆体、5ヒドロキシトリプタミン受容体3サブユニットC、AAD14タンパク質、アセチルコリン受容体タンパク質、αサブユニット前駆体、アセチルコリン受容体タンパク質、βサブユニット前駆体、アセチルコリン受容体タンパク質、δサブユニット前駆体、アセチルコリン受容体タンパク質、εサブユニット前駆体、アセチルコリン受容体タンパク質、γサブユニット前駆体、酸感受性イオンチャネル3スプライス変異体b、酸感受性イオンチャネル3スプライス変異体c、酸感受性イオンチャネル4、ADPリボースピロホスファターゼ,ミトコンドリア前駆体、α1A電位依存性カルシウムチャネル、アミロライド感受性カチオンチャネル1,神経性、アミロライド感受性カチオンチャネル2、神経性アミロライド感受性カチオンチャネル4アイソフォーム2、アミロライド感受性ナトリウムチャネル、アミロライド感受性ナトリウムチャネルαサブユニット、アミロライド感受性ナトリウムチャネルβサブユニット、アミロライド感受性ナトリウムチャネルδサブユニット、アミロライド感受性ナトリウムチャネルγサブユニット、アネキシンA7、アピカルApical様タンパク質、ATP感受性内向き整流カリウムチャネル1、ATP感受性内向き整流カリウムチャネル10、ATP感受性内向き整流カリウムチャネル11、ATP感受性内向き整流カリウムチャネル14、ATP感受性内向き整流カリウムチャネル15、ATP感受性内向き整流カリウムチャネル8、カルシウムチャネルα122サブユニット、カルシウムチャネルα122サブユニット、カルシウムチャネルα1Eサブユニットデルタ19デルタ40デルタ46スプライス変異体、カルシウム活性化カリウムチャネルαサブユニット1、カルシウム活性化カリウムチャネルβサブユニット1、カルシウム活性化カリウムチャネルβサブユニット2、カルシウム活性化カリウムチャネルβサブユニット3、カルシウム依存性クロライドチャネル1、カチオンチャネルTRPM4B、CDNAFLJ90453fis,クローンNT2RP3001542,カリウムチャネル四量体化ドメイン含有6に高度に類似、CDNAFLJ90663fis,クローンPLACE1005031,細胞内クロライドチャネルタンパク質5に高度に類似、CGMP作動性カチオンチャネルβサブユニット、クロライドチャネルタンパク質、クロライドチャネルタンパク質2、クロライドチャネルタンパク質3、クロライドチャネルタンパク質4、クロライドチャネルタンパク質5、クロライドチャネルタンパク質6、クロライドチャネルタンパク質ClCKa、クロライドチャネルタンパク質ClCKb、クロライドチャネルタンパク質、骨格筋、細胞内クロライドチャネル6、細胞内クロライドチャネルタンパク質3、細胞内クロライドチャネルタンパク質4、細胞内クロライドチャネルタンパク質5、CHRNA3タンパク質、Clcn3eタンパク質、CLCNKBタンパク質、CNGA4タンパク質、カリン5、サイクリックGMP作動性カリウムチャネル、環状ヌクレオチド作動性カチオンチャネル4、環状ヌクレオチド作動性カチオンチャネルα3、環状ヌクレオチド作動性カチオンチャネルβ3、環状ヌクレオチド作動性嗅覚チャネル、嚢胞性線維症膜コンダクタンス調節因子、シトクロムB245重鎖、ジヒドロピリジン感受性L型、カルシウムチャネルα2δサブユニット前駆体、FXYDドメイン含有イオン輸送調節因子3前駆体、FXYDドメイン含有イオン輸送調節因子5前駆体、FXYDドメイン含有イオン輸送調節因子6前駆体、FXYDドメイン含有イオン輸送調節因子7、FXYDドメイン含有イオン輸送調節因子8前駆体、Gタンパク質活性化内向き整流カリウムチャネル1、Gタンパク質活性化内向き整流カリウムチャネル2、Gタンパク質活性化内向き整流カリウムチャネル3、Gタンパク質活性化内向き整流カリウムチャネル4、γアミノ酪酸受容体α1サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体α2サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体α3サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体α4サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体α5サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体α6サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体β1サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体β2サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体β3サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体δサブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体εサブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体γ1サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体γ3サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体πサブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体ρ1サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体ρ2サブユニット前駆体、γアミノ酪酸受容体θサブユニット前駆体、GluR6カイニン酸受容体、グルタミン酸受容体1前駆体、グルタミン酸受容体2前駆体、グルタミン酸受容体3前駆体、グルタミン酸受容体4前駆体、グルタミン酸受容体7、グルタミン酸受容体B、グルタミン酸受容体δ1サブユニット前駆体、グルタミン酸受容体イオンチャネル型カイニン酸型1前駆体、グルタミン酸受容体イオンチャネル型カイニン酸型2前駆体、グルタミン酸受容体イオンチャネル型カイニン酸型3前駆体、グルタミン酸受容体イオンチャネル型カイニン酸型4前駆体、グルタミン酸受容体イオンチャネル型カイニン酸型5前駆体、グルタミン酸[NMDA]受容体サブユニット3A前駆体、グルタミン酸[NMDA]受容体サブユニット3B前駆体、グルタミン酸[NMDA]受容体サブユニットε1前駆体、グルタミン酸[NMDA]受容体サブユニットε2前駆体、グルタミン酸[NMDA]受容体サブユニットε4前駆体、グルタミン酸[NMDA]受容体サブユニットζ1前駆体、グリシン受容体α1鎖前駆体、グリシン受容体α2鎖前駆体、グリシン受容体α3鎖前駆体、グリシン受容体β鎖前駆体、HACAリボ核タンパク質複合体サブユニット1、高親和性免疫グロブリンε受容体βサブユニット、仮想Hypotheticalタンパク質DKFZp31310334、仮想タンパク質DKFZp761M1724、仮想タンパク質FLJ12242、仮想タンパク質FLJ14389、仮想タンパク質FLJ14798、仮想タンパク質FLJ14995、仮想タンパク質FLJ16180、仮想タンパク質FLJ16802、仮想タンパク質FLJ32069、仮想タンパク質FLJ37401、仮想タンパク質FLJ38750、仮想タンパク質FLJ40162、仮想タンパク質FLJ41415、仮想タンパク質FLJ90576、仮想タンパク質FLJ90590、仮想タンパク質FLJ90622、仮想タンパク質KCTD15、仮想タンパク質MGC15619、イノシトール145三リン酸受容体1型、イノシトール145三リン酸受容体2型、イノシトール145三リン酸受容体3型、中間コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネルタンパク質4、内向き整流カリウムチャネル13、内向き整流カリウムチャネル16、内向き整流カリウムチャネル4、内向き整流Kチャネル負調節因子Kir22v、カイニン酸受容体サブユニットKA2a、KCNH5タンパク質、KCTD17タンパク質、KCTD2タンパク質、ケラチノサイト関連膜貫通タンパク質1、Kvチャネル相互作用タンパク質4、メラスタチン1、膜タンパク質MLC1、MGC15619タンパク質、ムコリピンMucolipin1、ムコリピン2、ムコリピン3、多剤耐性関連タンパク質4、NメチルDアスパラギン酸受容体2Cサブユニット前駆体、NADPHオキシダーゼホモログ1、Nav15、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α10サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α2サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α3サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α4サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α5サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α6サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α7サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質α9サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質β2サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質β3サブユニット前駆体、神経性アセチルコリン受容体タンパク質β4サブユニット前駆体、神経性電位依存性カルシウムチャネルα2Dサブユニット、P2Xプリン受容体1、P2Xプリン受容体2、P2Xプリン受容体3、P2Xプリン受容体4、P2Xプリン受容体5、P2Xプリン受容体6、P2Xプリン受容体7、膵カリウムチャネルTALKIb、膵カリウムチャネルTALKIc、膵カリウムチャネルTALKId、ホスホレマン前駆体、プラスモリピンPlasmolipin、多発性嚢胞腎2関連タンパク質、多発性嚢胞腎2様1タンパク質、多発性嚢胞腎2様2タンパク質、PKDREJPolycystickidneyandreceptorforeggjellyrelatedprotein前駆体、ポリシスチン2、カリウムチャネル調節因子、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー1、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー10、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー12、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー13、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー15、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー16、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー17、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー2、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー3、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー4、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー5、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー6、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー7、カリウムチャネルサブファミリーKメンバー9、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有3、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有タンパク質12、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有タンパク質14、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有タンパク質2、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有タンパク質4、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有タンパク質5、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有10、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有タンパク質13、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーAメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーAメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーAメンバー4、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーAメンバー5、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーAメンバー6、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーBメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーBメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーCメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーCメンバー3、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーCメンバー4、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーDメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーDメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーDメンバー3、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーEメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーEメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーEメンバー3、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーEメンバー4、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーFメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーGメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーGメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーGメンバー3、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーGメンバー4、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー3、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー4、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー5、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー6、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー7、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー8、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーKQTメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーKQTメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーKQTメンバー3、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーKQTメンバー4、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーKQTメンバー5、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーSメンバー1、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーSメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーSメンバー3、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーVメンバー2、電位作動性カリウムチャネルサブファミリーHメンバー7アイソフォーム2、カリウムナトリウム過分極活性化環状ヌクレオチド作動性チャネル1、カリウムナトリウム過分極活性化環状ヌクレオチド作動性チャネル2、カリウムナトリウム過分極活性化環状ヌクレオチド作動性チャネル3、カリウムナトリウム過分極活性化環状ヌクレオチド作動性チャネル4、予想Probableミトコンドリア搬入受容体サブユニットTOM40ホモログ、プリン作動性受容体P2X5アイソフォームA、推定Putative4リピート電位作動性イオンチャネル、推定クロライドチャネルタンパク質7、推定GluR6カイニン酸受容体、推定イオンチャネルタンパク質CATSPER2変異体1、推定イオンチャネルタンパク質CATSPER2変異体2、推定イオンチャネルタンパク質CATSPER2変異体3、推定カリウムチャネル調節因子タンパク質変異体1、推定チロシンプロテインホスファターゼTPTE、リアノジン受容体1、リアノジン受容体2、リアノジン受容体3、SH3KBP1結合タンパク質1、短型Short一過性受容体電位チャネル1、短型一過性受容体電位チャネル4、短型一過性受容体電位チャネル5、短型一過性受容体電位チャネル6、短型一過性受容体電位チャネル7、小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネルタンパク質1、小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネルタンパク質2アイソフォームb、小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネルタンパク質3アイソフォームb、小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネルSK2、小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネルSK3、ナトリウムチャネル、ナトリウムチャネルβ1サブユニット前駆体、ナトリウムチャネルタンパク質II型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質III型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質IV型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質IX型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質V型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質VII型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質VIII型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質X型αサブユニット、ナトリウムチャネルタンパク質XI型αサブユニット、ナトリウムクロライド活性化ATP感受性カリウムチャネル、ナトリウムカリウム輸送ATPアーゼγ鎖、精子関連カチオンチャネル1、精子関連カチオンチャネル2アイソフォーム4、シンタキシン1B1、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーAメンバー1、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーMメンバー2、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーMメンバー3、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーMメンバー6、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーMメンバー7、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーVメンバー1、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーVメンバー2、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーVメンバー3、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーVメンバー4、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーVメンバー5、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーVメンバー6、一過性受容体電位チャネル4εスプライス変異体、一過性受容体電位チャネル4ζスプライス変異体、一過性受容体電位チャネル7γスプライス変異体、腫瘍壊死因子α誘導タンパク質1内皮性、2ポアカルシウムチャネルタンパク質2、VDAC4タンパク質、電位作動性カリウムチャネルKv32b、電位作動性ナトリウムチャネルβ1Bサブユニット、電位依存性アニオンチャネル、電位依存性アニオンチャネル2、電位依存性アニオン選択的チャネルタンパク質1、電位依存性アニオン選択的チャネルタンパク質2、電位依存性アニオン選択的チャネルタンパク質3、電位依存性カルシウムチャネルγ1サブユニット、電位依存性カルシウムチャネルγ2サブユニット、電位依存性カルシウムチャネルγ3サブユニット、電位依存性カルシウムチャネルγ4サブユニット、電位依存性カルシウムチャネルγ5サブユニット、電位依存性カルシウムチャネルγ6サブユニット、電位依存性カルシウムチャネルγ7サブユニット、電位依存性カルシウムチャネルγ8サブユニット、電位依存性L型カルシウムチャネルα1Cサブユニット、電位依存性L型カルシウムチャネルα1Dサブユニット、電位依存性L型カルシウムチャネルαISサブユニット、電位依存性L型カルシウムチャネルβ1サブユニット、電位依存性L型カルシウムチャネルβ2サブユニット、電位依存性L型カルシウムチャネルβ3サブユニット、電位依存性L型カルシウムチャネルβ4サブユニット、電位依存性N型カルシウムチャネルα1Bサブユニット、電位依存性PQ型カルシウムチャネルα1Aサブユニット、電位依存性R型カルシウムチャネルα1Eサブユニット、電位依存性T型カルシウムチャネルα1Gサブユニット、電位依存性T型カルシウムチャネルα1Hサブユニット、電位依存性T型カルシウムチャネルα1Iサブユニット、電位作動性L型カルシウムチャネルα1サブユニット、電位作動性カリウムチャネルβ1サブユニット、電位作動性カリウムチャネルβ2サブユニット、電位作動性カリウムチャネルβ3サブユニット、電位作動性カリウムチャネルKCNA7。ヒト電位作動性ナトリウムチャネルのNavlxファミリーも特に有望なターゲットである。このファミリーには、例えばチャネルNavl6およびNavl8が包含される。別の実施形態では、治療タンパク質がGタンパク質共役受容体GPCRであってもよい。例示的GPCRには、次に挙げるものが包含されるが、これらに限定されるわけではない:クラスAロドプシン様受容体、例えばムスカリン性Museアセチルコリン脊椎動物1型、ムスカリン性アセチルコリン脊椎動物2型、ムスカリン性アセチルコリン脊椎動物3型、ムスカリン性アセチルコリン脊椎動物4型;アドレノセプターαアドレノセプター1型、αアドレノセプター2型、βアドレノセプター1型、βアドレノセプター2型、βアドレノセプター3型、ドーパミン脊椎動物1型、ドーパミン脊椎動物2型、ドーパミン脊椎動物3型、ドーパミン脊椎動物4型、ヒスタミン1型、ヒスタミン2型、ヒスタミン3型、ヒスタミン4型、セロトニン1型、セロトニン2型、セロトニン3型、セロトニン4型、セロトニン5型、セロトニン6型、セロトニン7型、セロトニン8型、セロトニンの他のタイプ、微量アミン、アンジオテンシン1型、アンジオテンシン2型、ボンベシン、ブラジキニン、C5aアナフィラトキシン、Fmetleuphe、APJ様、インターロイキン8タイプA、インターロイキン8タイプB、インターロイキン8の他のタイプ、CCケモカイン1型~11型および他のタイプ、CXCケモカイン2型~6型および他のタイプ、CX3Cケモカイン、コレシストキニンCCK、CCKタイプA、CCKタイプB、他のCCK、エンドセリン、メラノコルチンメラニン細胞刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、メラノコルチンホルモン、ダッフィ抗原、プロラクチン放出ペプチドGPR10、神経ペプチドY1型~7型、神経ペプチドY、他の神経ペプチドY、ニューロテンシン、オピオイドD、K、M、X型、ソマトスタチン1型~5型、タキキニンサブスタンスPNK1、サブスタンスKNK2、ニューロメジンKNK3、タキキニン様1、タキキニン様2、バソプレシンバソトシン1型~2型、バソトシン、オキシトシン/メソトシン、コノプレッシン、ガラニン様、プロテイナーゼ活性化様、オレキシンおよび神経ペプチドFF、QRFP、ケモカイン受容体様、ニューロメジンU様ニューロメジンU、PRXアミド、ホルモンタンパク質卵胞刺激ホルモン、ルトロピン絨毛性性腺刺激ホルモン、サイロトロピン、ゴナドトロピンI型、ゴナドトロピンII型、オプシンロドプシン、ロドプシン脊椎動物1~5型、ロドプシン脊椎動物5型、ロドプシン節足動物、ロドプシン節足動物1型、ロドプシン節足動物2型、ロドプシン節足動物3型、ロドプシン軟体動物、ロドプシン,嗅覚嗅覚IIファミリー1~13、プロスタグランジンプロスタグランジンE2サブタイプEP1、プロスタグランジンE2D2サブタイプEP2、プロスタグランジンE2サブタイプEP3、プロスタグランジンE2サブタイプEP4、プロスタグランジンF2α、プロスタサイクリン、トロンボキサン、アデノシン1型~3型、プリン受容体、プリン受容体P2RY14,6,11GPR91、プリン受容体P2RY5,8,9,10GPR35,92,174、プリン受容体P2RY1214GPR87UDPグルコース、カンナビノイド、血小板活性化因子、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、性腺刺激ホルモン放出ホルモンI型、性腺刺激ホルモン放出ホルモンII型、脂質動員ホルモン様、コラゾニン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンおよび分泌促進物質、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン分泌促進物質、成長ホルモン分泌促進物質様、脱皮トリガリングホルモンETHR、メラトニン、リゾスフィンゴリピドおよびLPAEDG、スフィンゴシン1リン酸Edg1、リゾホスファチジン酸Edg2、スフィンゴシン1リン酸Edg3、リゾホスファチジン酸Edg4、スフィンゴシン1リン酸Edg5、スフィンゴシン1リン酸Edg6、リゾホスファチジン酸Edg7、スフィンゴシン1リン酸Edg8、他のEdg、ロイコトリエンB4受容体、ロイコトリエンB4受容体BLT1、ロイコトリエンB4受容体BLT2、クラスAオーファンその他、推定神経伝達物質、SREB、Masがん原遺伝子およびMas関連MRG、GPR45様、システイニルロイコトリエン、Gタンパク質共役胆汁酸受容体、遊離脂肪酸受容体GP40、GP41、GP43、クラスBセクレチン様、カルシトニン、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、胃抑制ペプチド、グルカゴン、成長ホルモン放出ホルモン、副甲状腺ホルモン、PACAP、セクレチン、血管作用性腸管ポリペプチド、ラトロフィリン、ラトロフィリン1型、ラトロフィリン2型、ラトロフィリン3型、ETL受容体、脳特異的血管新生インヒビターBAI、メトセラMethuselah様タンパク質MTH、カドヘリンEGFLAGCELSR、超高分子VerylargeGタンパク質共役受容体、クラスC代謝型グルタミン酸フェロモン、代謝型グルタミン酸グループI~III、カルシウム感知様、細胞外カルシウム感知、フェロモン、他のカルシウム感知様、推定フェロモン受容体、GABAB、GABABサブタイプ1、GABABサブタイプ2、GABAB様、オーファンGPRC5、オーファンGPCR6、ブライドオブセブンレスBrideofsevenlessタンパク質BOSS、味覚受容体TlR、クラスD真菌フェロモン、真菌フェロモンA因子様STE2、STE3、真菌フェロモンB様BAR、BBR、RCB、PRA、クラスEcAMP受容体、眼白子症タンパク質、フリズルドスムースンドSmoothenedファミリー、フリズルドグループAFz1および2および4および5および7~9、フリズルドグループBFz3および6、フリズルドグループCその他、鋤鼻受容体、線虫化学受容体、昆虫匂い受容体、およびクラスZ古細菌細菌真菌オプシン。別の実施形態において、本明細書に記載するSABA融合物は、次に挙げる活性ポリペプチドをどれでも含むことができる:ボトックスBOTOX、マイオブロックMyobloc、ニューロブロックNeurobloc、ディスポートDysportまたは他の血清型のボツリヌス神経毒、アルグルコシダーゼアルファ、ダプトマイシン、YH16、絨毛性ゴナドトロピンアルファ、フィルグラスチム、セトロレリクス、インターロイキン2、アルデスロイキン、テセロイキン、デニロイキンジフチトクス、インターフェロンアルファn3注射剤、インターフェロンアルファn1、DL8234、インターフェロン、サントリーSuntoryガンマIa、インターフェロンガンマ、チモシンアルファ1、タソネルミン、DigiFab、ViperaTAb、EchiTAb、CroFab、ネシリチド、アバタセプト、アレファセプト、レビフRebif、エプトテルミンアルファ、テリパラチド骨粗鬆症、カルシトニン注射用骨疾患、カルシトニン点鼻用、骨粗鬆症、エタネルセプト、ヘモグロビングルタマーhemoglobinglutamer250ウシ、ドロトレコギンアルファ、コラゲナーゼ、カルペリチド、組換えヒト上皮成長因子局所外用ゲル、創傷治癒、DWP401、ダルベポエチンアルファ、エポエチンオメガ、エポエチンベータ、エポエチンアルファ、デシルジン、レピルジン、ビバリルジン、ノナコグアルファ、モノニンMononine、エプタコグアルファ活性型、組換え第VIII因子VWF、リコネイトRecombinate、組換え第VIII因子、第VIII因子組換え、アルファネートAlphanate、オクトコグアルファ、第VIII因子、パリフェルミン、インディキナーゼIndikinase、テネクテプラーゼ、アルテプラーゼ、パミテプラーゼ、レテプラーゼ、ナテプラーゼnateplase、モンテプラーゼ、フォリトロピンアルファ、rFSH、hpFSH、ミカファンギン、ペグフィルグラスチム、レノグラスチム、ナルトグラスチム、セルモレリン、グルカゴン、エクセナチド、プラムリンチド、イミグルセラーゼ、ガルスルファーゼ、ロイコトロピンLeucotropin、モルグラモスチム、酢酸トリプトレリン、ヒストレリン皮下インプラント、ハイドロンHydron、デスロレリン、ヒストレリン、ナファレリン、ロイプロリド徐放性デポーアトリゲルATRIGEL、ロイプロリドインプラントデュロスDUROS、ゴセレリン、ソマトロピン、ユートロピンEutropin、KP102プログラムprogram、ソマトロピン、ソマトロピン、メカセルミン成長不全、エンフビルチド、Org33408、インスリングラルギン、インスリングルリジン、インスリン吸入薬、インスリンリスプロ、インスリンデテミル、インスリンバッカル剤、RapidMist、メカセルミンリンファベートmecaserminrinfabate、アナキンラ、セルモロイキン、99mTcアプシタイドapcitide注射剤、ミエロピドmyelopid、ベータセロンBetaseron、酢酸グラチラマー、ゲポンGepon、サルグラモスチム、オプレルベキン、ヒト白血球由来アルファインターフェロン、ビリブBilive、インスリン組換え、組換えヒトインスリン、インスリンアスパルト、メカセルミン、ロフェロンRoferonA、インターフェロンアルファ2、アルファフェロンAlfaferone、インターフェロンアルファコン1、インターフェロンアルファ、アボネックスAvonex組換えヒト黄体形成ホルモン、ドルナーゼアルファ、トラフェルミン、ジコノチド、タルチレリン、ジボテルミンアルファ、アトシバン、ベカプレルミン、エプチフィバチド、ゼマイラZemaira、CTC111、シャンバックShanvacB、HPVワクチン四価、NOV002、オクトレオチド、ランレオチド、アンセスチム、アガルシダーゼベータ、アガルシダーゼアルファ、ラロニダーゼ、酢酸プレザチド銅局所外用ゲル、ラスブリカーゼ、ラニビズマブ、アクティミューン、PEGイントロン、トリコミンTricomin、組換えヒョウヒダニアレルギー脱感作注射剤、組換えヒト副甲状腺ホルモンPTH184皮下、骨粗鬆症、エポエチンデルタ、トランスジェニックアンチトロンビンIII、グランジトロピンGranditropin、ビトラーゼVitrase、組換えインスリン、インターフェロンアルファ経口口中錠、GEM2IS、バプレオチド、イデュルスルファーゼ、オマパトリラート、組換え血清アルブミン、セルトリズマブペゴール、グルカルピダーゼ、ヒト組換えC1エステラーゼインヒビター血管性浮腫、ラノテプラーゼ、組換えヒト成長ホルモン、エンフビルチド無針注射剤、Biojector2000、VGVI、インターフェロンアルファ、ルシナクタント、アビプタジル吸入型、肺疾患、イカチバント、エカランチド、オミガナンomiganan、オーログラブAurograb、酢酸ペキシガナン、ADIPEG20、LDI200、デガレリクス、シントレデキンベスドトクスcintredekinbesudotox、FavId、MDX1379、ISAtx247、リラグルチド、テリパラチド骨粗鬆症、チファコギンtifacogin、AA4500、T4N5リポソームローション、カツマキソマブ、DWP413、ART123、クリサリンChrysalin、デスモテプラーゼ、アメジプラーゼ、コリフォリトロピンアルファ、TH9507、テデュグルチドteduglutide、ディアミドDiamyd、DWP412、成長ホルモン徐放性注射剤、組換えGCSF、インスリン吸入型、AIR、インスリン吸入型、テクノスフェアTechnosphere、インスリン吸入型、AERx、RGN303、DiaPep277、インターフェロンベータC型肝炎ウイルス感染HCV、インターフェロンアルファn3経口、ベラタセプト、経皮インスリン貼付薬、AMG531、MBP8298、キセレセプトXerecept、オペバカン、エイズバックスAIDSVAX、GV1001、リンフォスキャンLymphoScan、ランピルナーゼ、リポキシサンLipoxysan、ルスプルチド、MP52βリン酸三カルシウム運搬体、骨再生、黒色腫ワクチン、シプロイセルT、CTP37、インセジアInsegia、ビテスペン、ヒトトロンビン凍結物、手術による出血、トロンビン、TransMID、アルフィメプラーゼ、プリカーゼPuricase、テルリプレシン静脈内、肝腎症候群、EUR1008M、組換えFGFI注射用、血管疾患、BDME、ロチガプチド、ETC216、P113、MBI594AN、デュラマイシンduramycin吸入型、嚢胞性線維症、SCV07、OPI45、エンドスタチン、アンジオスタチン、ABT510、ボウマンバークインヒビターコンセントレート、XMP629、99mTcHynicアネキシンV、カハラライドF、CTCE9908、テベレリクスteverelix持続放出、オザレリクスozarelix、ロミデプシン、BAY504798、インターロイキン4、PRX321、ペプスキャンPepscan、イボクタデキンiboctadekin、rhラクトフェリン、TRU015、IL21、ATN161、シレンジチドcilengitide、アルブフェロンAlbuferon、Biphasix、IRX2、オメガインターフェロン、PCK3145、CAP232、パシレオチドpasireotide、huN901DM1、卵巣がん免疫療法ワクチン、SB249553、OncovaxCL、OncoVaxP、BLP25、CerVax16、マルチエピトープペプチド黒色腫ワクチンMARTI、gp100、チロシナーゼ、ネミフィチド、rAAT吸入型、rAAT皮膚科用、CGRP吸入型、喘息、ペグスネルセプト、チモシンβ4、プリチデプシン、GTP200、ラモプラニン、GRASPA、OBII、AC100、サケカルシトニン経口、エリジェンeligen、カルシトニン経口、骨粗鬆症、エクサモレリンexamorelin、カプロモレリン、Cardeva、ベラフェルミン、131ITM601、KK220、TP10、ウラリチド、デペレスタット、ヘマチドhematide、クリサリンChrysalin局所外用、rNAPc2、組換え第VIII因子PEG化リポソーム、bFGF、PEG化組換えスタフィロキナーゼ変異体、V10153、SonoLysisProlyse、NeuroVax、CZEN002、島細胞新生療法、rGLP1、BIM51077、LY548806、エクセナチド放出制御剤、Medisorb、AVE0010、GAGCB、アボレリンavorelin、AOD9604、酢酸リナクロチオド、CETiI、ヘモスパンHemospan、VAL注射用、速効性インスリン注射用、Viadel、鼻腔内インスリン、インスリン吸入型、インスリン経口、エリジェンeligen、組換えメチオニルヒトレプチン、ピトラキンラ皮下注射剤、湿疹、ピトラキンラ吸入用乾燥粉末、喘息、マルチカインMultikine、RG1068、MM093、NBI6024、AT001、PI0824、Org39141、Cpn10自己免疫疾患炎症、タラクトフェリンtalactoferrin局所外用、rEV131眼科用、rEV131呼吸器疾患、経口組換えヒトインスリン糖尿病、RPI78M、オプレルベキン経口、CYT99007CTLA4Ig、DTY001、バラテグラスト、インターフェロンアルファn3局所外用、IRX3、RDP58、タウフェロンTauferon、胆汁酸塩刺激リパーゼ、メリスパーゼMerispase、アルカリホスファターゼ、EP2104R、メラノタンII、ブレメラノチド、ATL104、組換えヒトマイクロプラスミン、AX200、SEMAX、ACVI、Xen2174、CJC1008、ダイノルフィンA、SI6603、LABGHRH、AER002、BGC728、マラリアワクチンビロゾーム、PeviPRO、ALTU135、パルボウイルスB19ワクチン、インフルエンザワクチン組換えノイラミニダーゼ、マラリアHBVワクチン、炭疽ワクチン、Vacc5q、Vacc4x、HIVワクチン経口、HPVワクチン、Tatトキソイド、YSPSL、CHS13340、PTHリポソームクリームNovasome、オスタボリンOstabolinC、PTHアナログ局所外用、乾癬、MBRI9302、MTB72Fワクチン結核、MVAAg85Aワクチン結核、FAR404、BA210、組換えペストF1Vワクチン、AG702、OxSODrol、rBetVl、DerplDerp2Derp7アレルゲンターゲティングワクチンチリダニアレルギー、PR1ペプチド抗原白血病、変異型rasワクチン、HPV16E7リポペプチドワクチン、ラビリンシンlabyrinthinワクチン腺癌、CMLワクチン、WT1ペプチドワクチンがん、IDD5、CDX110、ペントリスPentrys、ノレリンNorelin、CytoFab、P9808、VT111、イクロカプチド、テルベルミン皮膚科、糖尿病性足病変潰瘍、ルピントリビル、レティキュロースreticulose、rGRF、P1A、αガラクトシダーゼA、ACE011、ALTU140、CGX1160、アンジオテンシン治療用ワクチン、D4F、ETC642、APP018、rhMBL、SCV07経口、結核、DRF7295、ABT828、ErbB2特異的イムノトキシン抗がん、DT388IL3、TST10088、PRO1762、コンボトックスCombotox、コレシストキニンBガストリン受容体結合ペプチド、111InhEGF、AE37、トラスツズマブDM1、アンタゴニストG、IL12組換え、PM02734、IMP321、rhIGFBP3、BLX883、CUV1647局所外用、L19に基づく放射免疫治療薬がん、Re188P2045、AMG386、DCI540KLHワクチンがん、VX001、AVE9633、AC9301、NYESOIワクチンペプチド、NA17A2ペプチド、黒色腫ワクチンパルス抗原治療薬、前立腺がんワクチン、CBP501、組換えヒトラクトフェリンドライアイ、FX06、AP214、WAP8294A2注射用、ACPHIP、SUN11031、ペプチドYY336肥満、鼻腔内、FGLL、アタシセプト、BR3Fc、BN003、BA058、ヒト副甲状腺ホルモン134点鼻用、骨粗鬆症、F18CCR1、AT1001セリアック病糖尿病、JPD003、PTHリポソームクリームNovasome、デュラマイシン眼科用、ドライアイ、CAB2、CTCE0214、グリコPEG化GlycoPEGylatedエリスロポエチン、EPOFc、CNTO528、AMG114、JR013、第XIII因子、アミノキャンディンAminocandin、PN951、716155、SUNE7001、TH0318、BAY737977、テベレリクス即放性、EP51216、hGH放出制御剤、バイオスフェアBiosphere、OGPI、シフビルチドsifuvirtide、TV4710、ALG889、Org41259、rhCCIO、F991、チモペンチン肺疾患、rCRP、肝選択的インスリン、スバリンsubalin、L19IL2融合タンパク質、エラフィン、NMK150、ALTU139、EN122004、rhTPO、トロンボポエチン受容体アゴニスト血小板減少性障害、AL108、AL208、神経成長因子アンタゴニスト疼痛、SLV317、CGX1007、INNO105、経口テリパラチドエリジェンeligen、GEMOS1、AC162352、PRX302、LFnp24融合ワクチンセラポアTherapore、EP1043、肺炎レンサ球菌小児用ワクチン、マラリアワクチン、B群髄膜炎菌ワクチン、新生児B群連鎖球菌ワクチン、炭疽ワクチン、HCVワクチンgpElgpE2MF59、中耳炎治療、HCVワクチンコア抗原ISCOMATRIX、hPTH経皮、ViaDerm、768974、SYN101、PGN0052、アビスクミンaviscumine、BIM23190、結核ワクチン、マルチエピトープチロシナーゼペプチド、がんワクチン、エンカスチムenkastim、APC8024、GI5005、ACC001、TTSCD3、血管標的TNF固形腫瘍、デスモプレシン口腔粘膜放出制御剤、オネルセプト、TP9201。他の例示的実施形態では、SABAが、次に挙げるものただしこれらに限るわけではないから選択される部分に融合される:FGF21線維芽細胞成長因子21、GLP1グルカゴン様ペプチド1、エキセンディン4、インスリン、インスリン受容体ペプチド、GIPグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド、アディポネクチン、IL1Raインターロイキン1受容体アンタゴニスト、VIP血管作動性腸ペプチド、PACAP下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド、レプチン、INGAP膵島新生関連タンパク質、BMP9骨形成タンパク質9、アミリン、PYY336ペプチドYY336、PP膵ポリペプチド、IL21インターロイキン21、プレクタシン、PRGNプログラニュリン、アトストリンAtstrrin、IFNインターフェロン、アペリンおよびオステオカルシンOCN。他の例示的実施形態では、SABAが、1つ以上の追加10Fn3ドメインに融合される。例えばSABAは、1つ、2つ、3つ、4つまたはそれ以上の追加10Fn3ドメインに融合することができる。追加10Fn3ドメインは、血清アルブミン以外の同じまたは異なるターゲットに結合することができる。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1YまたはYX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには、例えば配列番号65~88、216~221または397の任意の1つが包含されるであり、Yは本明細書に記載する治療部分である]によって表すことができるSABAY融合物を提供する。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1CysX2YまたはYX1CysX2SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1は随意のポリペプチドリンカー適切なリンカーには、例えば配列番号65~88、216~221または397の任意の1つが包含されるであり、Cysはシステイン残基であり、X2は化学的に誘導されたスペーサー適切なスペーサーの例を表1に示すであり、Yは本明細書に記載する治療部分である]によって表すことができるSABAY融合物を提供する。例示的実施形態では、化学的に誘導されたスペーサーがマレイミド部分を含有し、これを使って、本明細書においてさらに説明するマイケル付加反応により、治療部分をSABAポリペプチドのC末端Cysにコンジュゲートするか、またはSABAポリペプチドを治療部分のC末端にコンジュゲートすることができる。別の態様では、SABAを2つ以上の治療部分に結合してもよい。例えば2つの部分を、例えば融合物配列のN末端からC末端に向かって次に挙げるようなさまざまな配置で、SABAに結合することができる:XYSABA、XSABAY、またはSABAXY式中、XおよびYは2つの異なる治療部分を表す。2つの異なる治療部分は、本明細書に開示する部分のどれからでも選択することができる。1.FGF21線維芽細胞成長因子21FGF21は、シグナリングタンパク質のFGFファミリーのメンバーである。これらのタンパク質は、細胞表面チロシンキナーゼファミリーのメンバーであるFGF受容体に結合し、それを活性化することによって機能する。FGF21は、ヘパリンには結合しないが、活性には補助受容体として、1回膜貫通タンパク質であるβクロトーklothoを必要とするので、このファミリーの非定型的メンバーである。これらの受容体は幅広い組織分布を有するが、βクロトー発現は一定の組織肝臓、脂肪および膵臓に限られ、FGF21に対するターゲット特異性を付与するのはβクロトーの組織選択的発現である。白色脂肪組織および肝臓では、それぞれFGFR1cFGFR1のアイソフォームおよびFGFR4が好ましい受容体であることが、インビトロ研究によって示される。FGF21は代謝調整物質として機能し、FGF21の調節不全はさまざまな代謝障害につながりうる。FGF21は、ERKリン酸化およびGLUT1発現を誘導することによって、3T3L1脂肪細胞および初代ヒト脂肪細胞培養物におけるグルコース取り込みを増加させる。INS1E細胞および単離された島では、FGF21がERKおよびAKTリン酸化を誘導する。肝臓細胞株では、FGF21が、典型的FGFシグナリングERKリン酸化を刺激し、グルコース生産を減少させた。以下にさらに説明するとおり、本明細書に記載するSABAFGF21融合物は、さまざまな代謝性疾患および代謝性障害を処置または防止するために使用することができる。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたFGF21、および本明細書においてFGF21SABA融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。FGF21SABA融合物は、例えばSABAFGF21、FGF21SABA、FGF21SABAFGF21などといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するFGF21には、FGF21の機能的活性を保持しているFGF21の変異体、切断型trancate、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するFGF21には、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がFGF21の生物学的活性を保持している限り包含される。例えば、野生型完全長FGF21を配列番号117に示す。表2に掲載するFGF21変異体は全て、配列番号118に示すコアFGF21配列を含有している。さまざまなN末端配列、例えば配列番号119~124のいずれか1つに示すものを、コアFGF21配列配列番号118のN末端に付加し、機能的活性を保持することができる。加えて、His6タグをN末端に付加してもよい例えば配列番号128~131。コアFGF21配列はC末端セリンを欠き、このC末端セリンはコア配列のC末端に付加しても付加しなくてもよく、その活性には影響しない。さらにまた、FGF21とSABAの融合分子は、FGF21の機能的活性には影響を及ぼすことなく、FGF21SABAまたはSABAFGF21本明細書に記載する、および当技術分野において知られている、任意の、随意の末端伸長部およびリンカー配列を包含するの順序で、接合することができる例えば実施例B6を参照されたい。例示的実施形態において、本願は、FGF21部分が配列番号117~118もしくは125~131の配列、または配列番号117~118もしくは125~131のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAFGF21融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAFGF21融合物が、配列番号132~174のいずれか1つの配列、または配列番号132~174のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、もしくは99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1FGF21またはFGF21X1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、FGF21は本明細書に記載するFGF21ペプチドである]によって表すことができるSABAFGF21融合物を提供する。2.インスリンもう一つの態様において、本発明は、SABAとインスリンとの融合分子を記載する。インスリンは、身体におけるエネルギー代謝およびグルコース代謝を調節するホルモンである。このポリペプチドは膵β島細胞によって血中に分泌され、血中では、肝臓、筋および脂肪細胞による血液からのグルコース取り込みを刺激し、グリコーゲン生成および脂質生成を促進する。インスリンの分泌およびまたは作用のいずれかのステップの機能不全は、酸素利用、脂肪生成、グリコーゲン生成、脂質生成、グルコース取り込み、タンパク質合成、熱産生、および基礎代謝率の維持の調節不全などといった、多くの障害につながりうる。この機能不全は、高インスリン血症、インスリン抵抗性、インスリン欠乏、高血糖、高脂質血症、高ケトン血、真性糖尿病、および糖尿病性腎症などといったただしこれらに限るわけではない疾患およびまたは障害をもたらす。したがって、本明細書に記載するSABAインスリン融合ポリペプチドは、そのような疾患およびまたは障害を有する対象を処置するのに役立ちうる。例示的実施形態において、本発明に応用することができるインスリン部分には、天然インスリン、生合成インスリン、インスリン誘導体およびインスリンアナログが包含される。インスリンアナログは、ヒトインスリンまたは動物型インスリンなどの天然インスリンタンパク質のアナログであって、少なくとも1つのアミノ酸残基が置換、付加およびまたは除去されているものである。そのようなアミノ酸は合成または修飾アミノ酸であることができる。インスリン誘導体は、例えば1つ以上のアミノ酸への1つ以上の特別な化学基の付加などによって化学修飾されている、天然インスリンまたはインスリンアナログのどちらかの誘導体である。例示的インスリンアナログは、引用によりそのまま本明細書に組み込まれる米国特許第7476652号に記載されている。3.インスリン受容体ペプチドある態様において、本発明は、SABAとインスリン受容体ペプチドとの融合分子を記載する。一定の実施形態では、インスリン受容体ペプチドが、インスリン受容体のアミノ酸687~710KTDSQILKELEESSFRKTFEDYLH;配列番号175を含む。インスリン受容体は、ホルモンであるインスリンによって活性化される膜貫通受容体チロシンキナーゼである。インスリン受容体の活性化は、最終的には細胞表面へのグルコース輸送体の輸送をもたらして細胞が血液からグルコースを取り込むことができるようにするシグナリングカスケードの引き金を引く。グルコースの取り込みは、主として脂肪細胞および筋細胞で起こる。インスリン受容体の機能障害は、細胞がグルコースを取り込むことができなくなった時に起こる2型真性糖尿病および他の合併症にしばしばつながるインスリン非感受性またはインスリン抵抗性と関連する。インスリン受容体遺伝子中の変異と関連する他の障害には、ドナヒュー症候群およびラブソンメンデンホール症候群が包含される。それゆえに、本明細書に記載するSABAインスリン受容体ペプチド融合物の例示的使用には、2型真性糖尿病または不十分な細胞グルコース取り込みに関連する他の障害、ドナヒュー症候群およびラブソンメンデンホール症候群のような障害を有する対象の処置が包含されうる。4.BMP9一定の態様において、本発明は、SABAとBMP9との融合分子を記載する。さまざまなBMP9組成物が、引用により本明細書にそのまま組み込まれる米国特許第5661007号および同第6287816号に記述されている。骨形成タンパク質BMPは、成長因子およびサイトカインのTGFβファミリーに属する。BMPは骨および軟骨の形成を誘導し、他の多くの組織における形態形成変化を媒介する。BMPシグナリングは、胚発生ならびに出生後組織の成長および維持には不可欠である。シグナリング経路は、脊椎障害から、がん、逆流性食道炎等まで、多岐にわたる疾患にも関連付けられている。20を越えるBMPが発見されている。これらの分子のうち、BMP9は、主として非実質性肝臓細胞において発現しており、肝細胞の増殖と機能、特に肝グルコース生産に関係づけられている。BMP9は、がん細胞のアポトーシス、内皮細胞におけるシグナリング、骨形成、軟骨形成、認知等において、他の役割も果たすようである。したがって、本明細書に記載するSABABMP9融合ポリペプチドは、さまざまな疾患および障害、例えばさまざまなタイプの創傷および肝臓の変性を示す疾患などを処置するのに役立つと共に、骨およびまたは軟骨欠損、歯周病ならびにさまざまながんを包含する他の疾患およびまたは障害の処置にも役立つ。5.アミリンいくつかの態様において、本発明は、SABAとアミリンとの融合分子を記載する。アミリンまたは島アミロイドポリペプチド、IAPPは、膵β細胞によって分泌される37アミノ酸の小さいペプチドホルモンである。アミリンはインスリンと同時に分泌され、インスリン分泌、グルコースホメオスタシス、胃内容排出、および満腹シグナルの脳への伝達を制御する役割を果たすと考えられている。アミリンは、膵β細胞のアポトーシス細胞死に関係づけられているフィブリルを形成する。この知見と合致して、2型真性糖尿病を患っている患者または神経内分泌腫瘍であるインスリノーマを抱える患者の膵島には、アミリンがよく見いだされる。アミリンは、真性糖尿病を有する患者のための治療薬として使用することができる。アミリンペプチドの調製は、引用により本明細書にそのまま組み込まれる米国特許第5367052号に記載されている。同様に、米国特許第6610824号および同第7271238号これらは引用により本明細書にそのまま組み込まれるには、低血糖状態を処置または防止するために使用することができる、Asn、SerおよびまたはThr残基のグリコシル化によって形成されたアミリンのアゴニストアナログが記載されている。したがって本明細書において記載するSABAアミリン融合ポリペプチドは、例えば、低血糖、肥満、糖尿病、摂食障害、インスリン抵抗性症候群、および心血管疾患を有する対象の処置に役立ちうる。SABAアミリン融合物の調製については実施例で説明する。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたアミリン、および本明細書においてSABAアミリン融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAアミリン融合物は、例えばアミリンおよびアミリンSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。例示的実施形態では、SABAアミリン融合物が、アミリンペプチドのC末端が遊離であるような配置をとり、これにより、カルボキシ末端のアミド化が可能になる。一定の例示的SABAアミリン融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するアミリンには、アミリンの機能的活性を保持しているアミリンの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するアミリンには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がアミリンの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的アミリン配列を、表2に配列番号296~303として掲載する。例示的実施形態において、本願は、アミリン部分が配列番号296~303のいずれか1つの配列、または配列番号296~303のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAアミリン融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAアミリン融合物が、配列番号304~328のいずれか1つの配列、または配列番号304~328のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1アミリン[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、アミリンは本明細書に記載するアミリンペプチドである]によって表すことができるSABAアミリン融合物を提供する。好ましくはアミリンペプチドはC末端がアミド化されている。アミリンペプチドは、Cys17またはCys27ジスルフィド結合を、さらに含んでもよい。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1CysX2アミリン[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1は随意のポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、215~221または397のいずれか1つが包含されるであり、Cysはシステイン残基であり、X2は化学的に誘導されたスペーサー適切なスペーサーの例を表1に示すであり、アミリンは本明細書に記載するアミリンペプチドである]によって表すことができるSABAアミリン融合物を提供する。好ましくは、アミリンペプチドはC末端がアミド化されている。アミリンペプチドは、Cys17またはCys27ジスルフィド結合を、さらに含んでもよい。例示的実施形態において、化学的に誘導されたスペーサーはマレイミド部分を含有し、これを使って、本明細書においてさらに説明するマイケル付加反応により、アミリンペプチドをSABAポリペプチドのC末端Cysにコンジュゲートすることができる。6.PYY336別の態様において、本発明はSABAとPYYとの融合分子を記載する。ペプチドYYPYY、ペプチドチロシンチロシン、または膵ペプチドYYとも呼ばれているは、摂食に呼応して回腸および大腸中の細胞によって放出される36アミノ酸タンパク質である。PYYは膵臓において分泌されて、例えばインスリンなどの膵分泌を阻害することで血中グルコースレベルの増加をもたらし、摂食量を減らす必要を知らせることによって、エネルギーホメオスタシスの制御を助ける。PYYには2つの主要形態、完全長型136と切断型336がある。循環PYY免疫反応性の最も一般的な形態はPYY336である。PYY336はY2受容体に対してPYY136より高いアフィニティを有する。加えて、PYY1336もY2受容体において同様の高い力価を有することから、残基4~12は、この受容体では重要でないことが示唆されるKMcCreaら236K4RYYSAPPanovelY5receptorpreferringligandwithstrongstimulatoryeffectonfoodintakeRegulPept8713pp4758。さらにまた、他のNPY受容体Y1、Y4およびY5との比較でY2選択性を示す、PYYおよびの構造に基づくさらに短いPYYフラグメントアナログも記載されている。例えば、引用により本明細書に組み込まれる米国特許第5604203号および同第6046167号を参照されたい。反応性基にカップリングされたPYYペプチドおよび機能的誘導体は、引用により本明細書に組み込まれる米国特許第7601691号に記載されている。PYYは、栄養の取り込み、細胞増殖、リポリーシス、および血管収縮などといった、いくつかの生理学的活動に関係づけられている。特にPYY336は、ヒトにおいて食欲および食物摂取を減少させることが示されている例えばBatterhamらNature4186566542002を参照されたい。したがって、本明細書に記載するSABAPYY融合ポリペプチドの例示的使用には、肥満、糖尿病、摂食障害、インスリン抵抗性症候群、および心血管疾患の処置が包含されうる。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたPYY、および本明細書においてSABAPYY融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAPYY融合物は、例えばSABAPYYおよびPYYSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。例示的実施形態では、SABAPYY融合物が、PYYペプチドのC末端が遊離であるような配置をとり、これにより、カルボキシ末端のアミド化が可能になる。一定の例示的SABAPYY融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に記載するPYYには、PYYの機能的活性を保持しているPYYの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するPYYには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がPYYの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的PYY配列を表2に配列番号329~337および408~418として掲載する。例示的実施形態において、本願は、PYY部分が、配列番号329~337もしくは408~418のいずれか1つの配列;配列番号329~337もしくは408~418のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列;配列番号329~333もしくは335~337のいずれか1つの残基3~36、13~36、21~36、22~36、24~36、または25~36を有する配列;配列番号329~333もしくは335~337のいずれか1つの残基3~36、13~36、21~36、22~36、24~36、または25~36を有する配列と少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列;またはV31L置換を有する前述の配列のいずれか1つを含む、SABAPYY融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAPYY融合物が、配列番号338~344のいずれか1つの配列、または配列番号338~344のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1PYY[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、PYYは本明細書に記載するPYYペプチドである]によって表すことができるSABAPYY融合物を提供する。好ましくは、PYYペプチドはC末端がアミド化されている。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1CysX2PYY[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1は随意のポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、215~221または397のいずれか1つが包含されるであり、Cysはシステイン残基であり、X2は化学的に誘導されたスペーサー適切なスペーサーの例を表1に示すであり、PYYは本明細書に記載するPYYペプチドである]によって表すことができるSABAPYY融合物を提供する。好ましくは、PYYペプチドはC末端がアミド化されている。例示的実施形態において、化学的に誘導されたスペーサーはマレイミド部分を含有し、これを使って、本明細書においてさらに説明するマイケル付加反応により、PYYペプチドをSABAポリペプチドのC末端Cysにコンジュゲートすることができる。7.膵ポリペプチドいくつかの態様において、本発明は、SABAと膵ポリペプチドとの融合分子を記載する。膵ポリペプチドPPは膵ポリペプチドホルモンファミリーのメンバーであり、このファミリーには、神経ペプチドYNPYおよびペプチドYYPYYも包含される。PPは、食事、運動、および絶食に呼応して膵ポリペプチド細胞によって放出される36アミノ酸タンパク質である。PPは、膵臓、消化管、およびCNSに見いだされ、そこでは、胆嚢収縮、膵分泌、腸の運動性、ならびにグリコーゲン分解および脂質レベルの低下などといった代謝機能に影響を及ぼす。PPは、食物摂取、エネルギー代謝、ならびに視床下部ペプチドおよび胃グレリンの発現にも関係づけられている。加えて、PPは、食物摂取量の増加を伴う状態では減少する。PPは、膵ペプチド細胞のまれな悪性腫瘍などの腫瘍形成にも関与しうる。PPは、例えば肝グルコース生産を減少させるために、患者に投与することができる米国特許第5830434号。本明細書に開示するSABAPP融合ポリペプチドの例示的使用には、肥満、糖尿病、摂食障害、インスリン抵抗性症候群、および心血管疾患の処置が包含されうる。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたPP、および本明細書においてSABAPP融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAPP融合物は、例えばSABAPPおよびPPSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。例示的実施形態では、SABAPP融合物が、PPペプチドのC末端が遊離であるような配置をとり、これにより、カルボキシ末端のアミド化が可能になる。一定の例示的SABAPP融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するPPには、PPの機能的活性を保持しているPPの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するPPには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がPPの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的PP配列を、表2に配列番号345~357として掲載する。例示的実施形態において、本願は、PP部分が、配列番号345~357のいずれか1つの配列、または配列番号345~357のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAPP融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAPP融合物が、配列番号358~364のいずれか1つの配列、または配列番号358~364のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1PP[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、PPは本明細書に記載するPPペプチドである]によって表すことができるSABAPP融合物を提供する。好ましくは、PPペプチドはC末端がアミド化されている。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1CysX2PP[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1は随意のポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、215~221または397のいずれか1つが包含されるであり、Cysはシステイン残基であり、X2は化学的に誘導されたスペーサー適切なスペーサーの例を表1に示すであり、PPは本明細書に記載するPPペプチドである]によって表すことができるSABAPP融合物を提供する。好ましくは、PPペプチドはC末端がアミド化されている。例示的実施形態において、化学的に誘導されたスペーサーはマレイミド部分を含有し、これを使って、本明細書においてさらに説明するマイケル付加反応により、PPペプチドをSABAポリペプチドのC末端Cysにコンジュゲートすることができる。8.インターロイキン21IL21もう一つの態様において、本発明は、SABAとIL21との融合分子を記載する。IL21は、IL2、IL4、IL7、IL9、およびIL15と共通する受容体γ鎖を有するI型サイトカインである。IL21は、活性化ヒトCD4T細胞において発現し、Tヘルパー細胞のTh2およびTh17サブセット、濾胞性T細胞およびNKT細胞においてアップレギュレートされる。このサイトカインは、これら全ての細胞タイプの機能を調節する役割を有する。B細胞もIL21によって調節される。IL21は、共刺激シグナルとの相互関係およびB細胞の発生段階に依存して、マウスでもヒトでも、増殖、Ig生産形質細胞への分化、またはアポトーシスを誘導することができる。IL21は、単独で、またはTh細胞由来サイトカインとの組合せで、IgG、IgA、またはIgEアイソタイプへのクラススイッチ組換えを調節することができ、これは、IL21が、B細胞のエフェクター機能を形作る上で重要な役割を持つことを示している。このように、IL21は、免疫細胞に対するその複数の効果により、正常な免疫応答の多くの側面において役割を果たす。免疫系の調節物質として、免疫系のアップレギュレーションが望まれる状況における数ある使用法の中でもとりわけ、がん治療用の免疫刺激物質としての単独での、または他の治療法との組合せでのIL21の使用、免疫療法の補助としての使用、およびウイルス治療としての使用が研究されている。臨床的にも前臨床的にも処置されたことがある具体的がんは、転移性黒色腫、腎細胞癌、大腸癌、膵癌、乳癌、胸腺腫thyoma、頭頸部扁平上皮細胞癌、および神経膠腫である総説としてSondergaardandSkakTissueAntigens744674792009を参照されたい。加えて、IL21のアップレギュレーションは、例えばクローン病CD、潰瘍性大腸炎、主要な形態の炎症性腸疾患IBD、ヘリコバクターピロリHelicobacterpylori関連胃炎、セリアック病、アトピー性皮膚炎AD、全身性エリテマトーデスsystemiclupuserthyematosus、関節リウマチ、および乾癬などといった、T細胞が媒介するまたはT細胞と連関するさまざまなヒト炎症性病変とも結びつけられている総説としてMonteleoneらTrendsPharmacolSci3044172009を参照されたい。例示的IL21タンパク質は、米国特許第6307024号および同第7473765号に記載されており、これらは引用により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載するSABAIL21融合ポリペプチドの例示的使用には、一定のタイプのがん、ウイルス関連疾患、ならびにT細胞が媒介するまたはT細胞と連関するさまざまな炎症性障害、例えばクローン病CD、潰瘍性大腸炎、主要な形態の炎症性腸疾患IBD、ヘリコバクターピロリ関連胃炎、セリアック病、アトピー性皮膚炎AD、全身性エリテマトーデスsystemiclupuserthyematosus、関節リウマチ、および乾癬の処置などが包含される。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたIL21、および本明細書においてSABAIL21融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAIL21融合物は、例えばSABAIL21およびIL21SABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的SABAIL21融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するIL21には、IL21の機能的活性を保持しているIL21の変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するIL21には、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がIL21の生物学的活性を保持している限り包含される。例示的IL21配列を、表2に配列番号286~287として掲載する。例示的実施形態において、本願は、IL21部分が、配列番号286~287のいずれか1つの配列、または配列番号286~287のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAIL21融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAIL21融合物が、配列番号290~295のいずれか1つの配列、または配列番号290~295のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1IL21またはIL21X1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、IL21は本明細書に記載するIL21ペプチドである]によって表すことができるSABAIL21融合物を提供する。9.グルカゴン様ペプチド1GLP1エキセンディン4もう一つの態様において、本発明は、SABAとGLP1との融合分子を記載する。グルカゴン様ペプチド1GLP1は、栄養摂取に呼応して腸内分泌L細胞から放出される30アミノ酸または31アミノ酸のペプチド配列番号226および227である。このホルモンは、複数の機序で作用して、グルコースホメオスタシスを調整し、抗糖尿病効果を発揮する。GLP1シグナリングは、動物モデルにおいて、グルコース依存的インスリン分泌を高め、グルカゴン分泌をグルコース依存的に阻害し、胃内容排出を遅らせ、食物摂取と体重の減少をもたらし、β細胞塊の増加を引き起こす。ネイティブGLP1の治療的有用性は、それが遍在性プロテアーゼであるジペプチジルペプチダーゼIVDPPIVによって迅速に分解されるせいで半減期が2分未満であることから、限定されている。DPPIVは、2番目の位置にアラニンまたはプロリンを有するアミノ末端ジペプチドを優先的に切断するので、半減期を増加させるための戦略の一つは、活性GLP1における2番目のアミノ酸位置8を、ペプチドがもはやDPPIV基質ではなくなるように改変することである。位置8におけるアラニンを、例えばグリシン、セリン、スレオニン、またはバリンなどといった、多種多様な天然または非天然アミノ酸で置き換えることで、DPPIV耐性GLP1アナログを作製することができる。しかし、DPPIV耐性GLP1アナログは、腎クリアランスによって排除されるので、依然として比較的短い薬物動態半減期を有する。例えば、強力なDPPIV耐性GLP1受容体アゴニストである合成エキセンディン4配列番号228;バイエッタByettaの活性医薬成分は、腎臓によって迅速に浄化されるので、ヒト糖尿病患者では、依然として毎日2回投与しなければならない。持効性GLP1受容体アゴニストを作製するためのもう一つのアプローチは、DPPIV耐性GLP1アナログを、アルブミンまたはトランスフェリンなどの長命タンパク質と同じオープンリーディングフレームで発現させることであった。そのような融合タンパク質の一つ、ヒト血清アルブミンに融合されたDPPIV耐性GLP1アナログであるアルビグルチドは、現在、第III相臨床治験において評価されているところである。報告された症例のすべてにおいて、活性な融合タンパク質は、融合タンパク質のアミノ末端にDPPIV耐性GLP1受容体アゴニストを有しており、c末端融合物は力価が著しく低い。例示的実施形態において、SABAGLP1融合タンパク質は、N末端からC末端に向かって、DPPIV耐性GLP1受容体アゴニストGLP1またはエキセンディン4に基づく配列を潜在的に包含する、リンカー、およびSABAを含む。SABAGLP1およびSABAエキセンディン融合ポリペプチドの例示的使用には、糖尿病、肥満、過敏性腸症候群initablebowelsyndromeの処置、ならびに血漿中グルコースを低下させること、胃およびまたは腸の運動を阻害すること、ならびに胃およびまたは腸排出を阻害すること、または食物摂取を阻害することによって利益が得られるであろう他の状態の処置が包含される。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたGLP1またはエキセンディン、および本明細書においてSABAGLP1またはSABAエキセンディン融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAGLP1またはSABAエキセンディン融合物は、例えばSABAGLP1、GLP1SABA、SABAエキセンディンおよびエキセンディンSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的SABAGLP1およびSABAエキセンディン融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するGLP1およびエキセンディンには、GLP1またはエキセンディンの機能的活性を保持しているGLP1およびエキセンディンの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するGLP1およびエキセンディンには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がGLP1またはエキセンディンの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的GLP1配列を表2に配列番号226~227として掲載し、例示的エキセンディン配列を表2に配列番号228として掲載する。例示的実施形態において、本願は、GLP1部分が、配列番号226~227のいずれか1つの配列、または配列番号226~227のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAGLP1融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAGLP1融合物が、配列番号229~232のいずれか1つの配列、または配列番号229~232のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1GLP1またはGLP1X1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、GLP1は本明細書に記載するGLP1ペプチドである]によって表すことができるSABAGLP1融合物を提供する。例示的実施形態において、本願は、エキセンディン部分が、配列番号228、または配列番号228に対して少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAエキセンディン融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAエキセンディン融合物が、配列番号233~236のいずれか1つの配列、または配列番号233~236のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1エキセンディンまたはエキセンディンX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、エキセンディンは本明細書に記載するエキセンディンペプチドである]によって表すことができるSABAエキセンディン融合物を提供する。10.プレクタシンもう一つの態様において、本発明は、SABAとプレクタシンとの融合分子を記載する。プレクタシンは、真菌である腐性子嚢菌クロチャワンタケPseudoplectanianigrellaから単離された新規殺細菌性抗微生物ペプチドである。インビトロで、プレクタシンは、黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureusおよび肺炎レンサ球菌Streptococcuspneumoniaを、通常の抗生物質に対して耐性である数多くの株を含めて、バンコマイシンにもペニシリンにも匹敵する速度で迅速に殺すことができるが、哺乳動物細胞に対する細胞傷害効果は伴わない。生体内でも、プレクタシンは、マウスにおいて極めて低い毒性を示し、肺炎レンサ球菌が引き起こす腹膜炎および肺炎をバンコマイシンおよびペニシリンと同じぐらい有効に治癒させることができる。例えばMygindPHらPlaectasinisapeptideantibioticwiththerapeuticpotentialfromasaprophyticfungusNature437975980;BrinchKSらPlectasinshowsintracellularactivityagainstStaphylococcusaureusinhumanTHP1monocytesandinthemouseperitonitismodelAntimicrobAgentsChemother5348014808;3HaraSらPlectasinhasantibacterialactivityandnoeffectoncellviabilityorIL8productionBiochemBiophysResCommun374709713;およびOstergaardCらHighcerebrospinalfluidpenetrationandpotentbactericidalactivityinCSFofNZ2114anovelplectasinvariantduringexperimentalpneumococcalmeningitisAntimicrobAgentsChemother5315811585を参照されたい。これらの特徴を考えると、プレクタシンは、有望な抗生物質製品として役立つ魅力的な候補である。例えばXiaoLanJらHighLevelExpressionoftheAntimicrobialPeptidePlectasininEscherichiacoliCurrMicrobiol61197202を参照されたい。したがって、本明細書に記載するSABAプレクタシン融合ポリペプチドは、抗細菌剤として使用することができる。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたプレクタシン、および本明細書においてSABAプレクタシン融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAプレクタシン融合物は、例えばSABAプレクタシンおよびプレクタシンSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的SABAプレクタシン融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するプレクタシンには、プレクタシンの機能的活性を保持しているプレクタシンの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するプレクタシンには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がプレクタシンの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的プレクタシン配列を表2に配列番号237として掲載する。例示的実施形態において、本願は、プレクタシン部分が、配列番号237、または配列番号237と少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAプレクタシン融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAプレクタシン融合物が、配列番号238~239のいずれか1つの配列、または配列番号238~239のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1プレクタシンまたはプレクタシンX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、プレクタシンは本明細書に記載するプレクタシンペプチドである]によって表すことができるSABAプレクタシン融合物を提供する。11.プログラニュリンPRGNおよびアトストリンもう一つの態様において、本発明は、SABAとプログラニュリンまたはSABAとアトストリンの融合分子を記載する。プログラニュリンと、プログラニュリン由来の3フラグメントを含む改変タンパク質であるアトストリンは、TNFシグナリングを拮抗する腫瘍壊死因子TNF受容体結合物質である。プログラニュリンおよびアトストリンは、関節炎のマウスモデルにおいて、炎症を防止する。例えばTangWらTheGrowthFactorProgranulinBindstoTNFReceptorsandIsTherapeuticAgainstInflammatoryArthritisinMiceScienceScienceExpressMarch102011SupplementaryMaterialを参照されたい。どちらのタンパク質のSABA融合物も、TNFαが媒介する疾患のための潜在的治療薬でありうる。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたプログラニュリンまたはアトストリン、および本明細書においてSABAPRGNまたはSABAアトストリン融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAPRGNまたはSABAアトストリン融合物は、例えばSABAPRGN、PRGNSABA、SABAアトストリンおよびアトストリンSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的SABAPRGNおよびSABAアトストリン融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するプログラニュリンおよびアトストリンには、プログラニュリンまたはアトストリンの機能的活性を保持しているプログラニュリンおよびアトストリンの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するプログラニュリンおよびアトストリンには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がプログラニュリンまたはアトストリンの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的プログラニュリン配列を、表2に配列番号240~241として掲載し、例示的アトストリン配列を表2に配列番号242として掲載する。例示的実施形態において、本願は、PRGN部分が、配列番号240~241のいずれか1つの配列、または配列番号240~241のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAPRGN融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAPRGN融合物が、配列番号243~246のいずれか1つの配列、または配列番号243~246のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1PRGNまたはPRGNX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、PRGNは本明細書に記載するプログラニュリンペプチドである]によって表すことができるSABAPRGN融合物を提供する。例示的実施形態において、本願は、アトストリン部分が、配列番号242、または配列番号242に対して少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAアトストリン融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAアトストリン融合物が、配列番号247~250のいずれか1つの配列、または配列番号247~250のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1アトストリンまたはアトストリンX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、アトストリンは本明細書に記載するアトストリンペプチドである]によって表すことができるSABAアトストリン融合物を提供する。12.オステオカルシンOCN一定の態様において、本発明は、SABAとオステオカルシンとの融合分子を記載する。オステオカルシンOCN;骨Glaタンパク質、またはBGPとも呼ばれているは、骨芽細胞によって生産される49アミノ酸タンパク質であり、血流および骨基質中に分泌される。血漿中OCNレベルは、概日周期、季節、性別、年齢および月経周期などといった生物学的変動の影響を受ける。OCNは、カルボキシル化型、非カルボキシル化型および低カルボキシル化型として存在し、非カルボキシル化型と低カルボキシル化型は、インスリン分泌、膵β細胞増殖を刺激し、インスリン感受性を高めるこれは部分的にアディポネクチンによって媒介されることによって、エネルギー代謝の調節に関与している。インスリンは骨リモデリングを促進し、骨芽細胞におけるそのシグナリングは、循環への非カルボキシル化およびまたは低カルボキシル化OCNの放出を増加させ、ひいてはそれが、グルコースの取扱いを改善する。したがって、本明細書に記載するSABAOCN融合ポリペプチドは、酸素利用、脂肪生成、グリコーゲン生成、脂質生成、グルコース取り込み、タンパク質合成、熱産生、および基礎代謝率の維持の調節不全などといった、インスリン関連障害の処置に使用することができる。この機能不全は、高インスリン血症、インスリン抵抗性、インスリン欠乏、高血糖、高脂質血症、高ケトン血、真性糖尿病、および糖尿病性腎症などといったただしこれらに限るわけではない疾患およびまたは障害をもたらす。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたOCN、および本明細書においてSABAOCN融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAOCN融合物は、例えばSABAOCNおよびOCNSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的SABAOCN融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するOCNには、OCNの機能的活性を保持しているOCNの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するOCNには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がOCNの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的OCN配列を、表2に配列番号365~378として掲載する。例示的実施形態において、本願は、OCN部分が、配列番号365~378のいずれか1つの配列、または配列番号365~378のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAOCN融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAOCN融合物が、配列番号379~396のいずれか1つの配列、または配列番号379~396のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1OCNまたはOCNX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、OCNは本明細書に記載するOCNペプチドである]によって表すことができるSABAOCN融合物を提供する。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1CysX2OCNまたはOCNX1CysX2SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1は随意のポリペプチドリンカー適切なリンカーには、例えば配列番号65~88、216~221または397の任意の1つが包含されるであり、Cysはシステイン残基であり、X2は化学的に誘導されたスペーサー適切なスペーサーの例を表1に示すであり、OCNは本明細書に記載するOCNペプチドである]によって表すことができるSABAOCN融合物を提供する。例示的実施形態において、化学的に誘導されたスペーサーはマレイミド部分を含有し、これを使って、本明細書においてさらに説明するマイケル付加反応により、OCNペプチドをSABAポリペプチドのC末端Cysにコンジュゲートするか、またはSABAポリペプチドをOCNペプチドのC末端Cysにコンジュゲートする事ができる。13.インターフェロンラムダIFNλもう一つの態様において、本発明は、SABAとインターフェロンラムダIFNλとの融合分子を記載する。ヒトインターフェロンIFNは、3つの主要タイプ、すなわちI型、II型およびIII型に分類される。I型IFNは、ウイルス感染に対する防御の最前線として発現する。I型IFNの主な役割は、ウイルス感染の最初の数日間におけるウイルスの蔓延を制限することで、その感染に対する強力な適応免疫応答が生成するための十分な時間を確保することである。II型およびIII型IFNは、I型IFNの抗ウイルス特性の一部を示す。IFNλはIII型IFNである。ヒトは、3つのIFNλ分子、すなわちIFNλ1IL29、IFNλ2IL28AおよびIFNλ3IL28Bをコードしている。US7135170に記載されているように、IL28およびIL29は、肝炎ウイルス感染の処置に有用であることが示されている。重要なことに、IL28およびIL29は、既知のIFN治療法の使用に付随する毒性の一部を伴わずにこれらの抗ウイルス活性を有することが示された。I型IFN治療に関係する毒性の一つは骨髄抑制である。これはI型IFNによる骨髄前駆細胞の抑制に起因している。IL29は、I型IFN処置で見られるように骨髄細胞の拡充またはB細胞の増殖を有意に抑制することがないので、IL29には、処置に関連する毒性が少ないだろう。同様の結果が、IL28AおよびIL28Bでも予期されるだろう。したがって、本明細書に記載するSABAIFNλ融合ポリペプチドの例示的使用には、例えばA型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、およびD型肝炎などのウイルス感染を含むウイルス感染を有する対象の処置が包含される。本明細書に記載するSABAIFNλ融合ポリペプチドは、呼吸器合胞体ウイルス、ヘルペスウイルス、エプシュタインバーウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、ワクシニアウイルス、ウエストナイルウイルス、デングウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ピチンデウイルスおよびポリオウイルスに関連するウイルス感染を処置するための抗ウイルス剤として使用することもできる。本明細書に記載するSABAIFNλ融合ポリペプチドは、慢性または急性ウイルス感染のどちらかを有する対象を処置するために使用することができる。一定の実施形態において、本明細書に記載するSABAIFNλ融合物は、他の薬物動態部分、例えばPEGなどに融合されたIFNλポリペプチドより有益でありうる。特に、ここに提供するSABAIFNλ融合物は、PEGIFNλコンジュゲートと比べて、IFNλ分子の血清中半減期の有意な改善をもたらしうる。そのような半減期の増加により、頻度を下げた投与レジメンが可能になり、例えばSABAIFNλ融合物は、PEGIFNλコンジュゲートのような他のIFNλ治療薬での、より頻繁な投薬、例えば週に1回の投薬と比べて、月に1回の投薬を可能にしうる。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたIFNλ、および本明細書においてSABAIFNλ融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAIFNλ融合物は、例えばSABAIFNλおよびIFNλSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的SABAIFNλ融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するIFNλには、IFNλの機能的活性を保持しているIFNλの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するIFNλには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がIFNλの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的IFNλ配列を、表2に配列番号251~257として掲載する。例示的実施形態において、本願は、IFNλ部分が、配列番号251~257のいずれか1つの配列、または配列番号251~257のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAIFNλ融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAIFNλ融合物が、配列番号258~285のいずれか1つの配列、または配列番号258~285のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1IFNλまたはIFNλX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、IFNλは本明細書に記載するIFNλペプチドである]によって表すことができるSABAIFNλ融合物を提供する。14.アペリンもう一つの態様において、本願は、SABAとアペリンとの融合分子を提供する。アペリンは、Gタンパク質共役受容体APJの内在性リガンドである。アペリン遺伝子は、より短い活性フラグメントに切断される77アミノ酸のプレプロタンパク質をコードしている。完全長成熟ペプチドはアペリン36であるが、アペリン17およびアペリン13も活性であるMKleinzらPharmacolTher107198211。アペリンは、中枢神経系および末梢組織において広く発現しており、細胞発現には内皮細胞および脂肪細胞が包含される前掲。アペリンは、血管拡張をもたらし、心不全を有する患者の血行力学および心臓プロファイルを改善すると共に、前臨床モデルにおいてアテローム性動脈硬化を防止することが示されているAGJappらCirc12118181827;およびHYChunらJClinInvest11833433354。加えて、アペリン投与は、糖尿病の前臨床モデルにおけるインスリン感受性の改善と関連するCDrayらCellMetabolism8437445。したがって、本明細書に記載するSABAアペリン融合ポリペプチドの例示的使用には、糖尿病、肥満、摂食障害、インスリン抵抗性症候群および心血管疾患例えば心不全、アテローム性動脈硬化、および高血圧の処置がが包含されうる。ある態様において、本願は、血清アルブミン結合性10Fn3すなわちSABAに融合されたアペリン、および本明細書においてSABAAPLN融合物と総称するそのような融合物の使用を提供する。SABAAPLN融合物は、例えばSABAAPLNおよびAPLNSABAなどといった、さまざまな配置を有する融合物を指す。一定の例示的SABAAPLN融合物コンストラクトを表2に示す。ただし、本明細書に開示するアペリンには、アペリンの機能的活性を保持しているアペリンの変異体、切断型、および任意の修飾型が包含されると理解すべきである。すなわち、本明細書に記載するアペリンには、一定のアミノ酸が欠失または置換されている修飾型フラグメントを包含するならびに変異体、および1つ以上のアミノ酸が修飾アミノ酸または非天然アミノ酸に変えられている修飾、およびグリコシル化などの修飾も、その修飾型がアペリンの生物学的活性を保持している限り包含される。例示的アペリン配列を、表2に配列番号419~423として掲載する。例示的実施形態において、本願は、アペリン部分が、配列番号419~423のいずれか1つの配列、または配列番号419~423のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む、SABAAPLN融合物を提供する。一定の実施形態では、SABAAPLN融合物が、配列番号424~430のいずれか1つの配列、または配列番号424~430のいずれか1つと少なくとも70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む。一定の実施形態において、本願は、式:SABAX1APLNまたはAPLNX1SABA[式中、SABAは本明細書に記載するSABAポリペプチド任意のN末端およびまたはC末端伸長部を包含するであり、X1はポリペプチドリンカー適切なリンカーには例えば配列番号65~88、216~221または397のいずれか1つが包含されるであり、APLNは本明細書に記載するAPLNペプチドである]によって表すことができるSABAAPLN融合物を提供する。15.他のAdnectin商標一定の態様において、本願は、血清アルブミン例えばHSA以外のターゲット分子に結合する10Fn3ドメインに融合されて、SABA10Fn3または10Fn3SABA構成のAdnectin商標二量体融合分子をもたらしている、SABAを提供する。別の態様において、本願は、2つ以上の10Fn3ドメインに融合されて多量体を形成しているSABAを提供する。例えば、ある実施形態において、本願は、2つの10Fn3ドメイン、すなわち10Fn3aと10Fn3bとに融合されたSABAであって、各10Fn3aおよび10Fn3bが異なるターゲット分子に結合し、どちらも血清アルブミン例えばHSAには結合しないものを提供する。その結果生じるAdnectin商標三量体の構成は、SABA10Fn3a10Fn3b、10Fn3aSABA10Fn3b、または10Fn3a10Fn3bSABAであることができる。例示的実施形態では、SABAが、配列番号1~3のいずれか1つ、または配列番号1~3のいずれか1つと少なくとも50、60、65、70、75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有する配列を含む10Fn3ドメインに融合され、ここで、BC、DEおよびFGループはそれぞれ野生型BC、DEおよびFGループの配列と比較して修飾されており、かつ10Fn3ドメインは500μM未満のKDでインテグリン以外のターゲットに結合する。10Fn3ドメインは、本明細書に記載するN末端およびまたはC末端伸長部を、さらに含むことができる。一定の実施形態では、10Fn3ドメインが、本明細書に記載する治療部分であるターゲットに結合する。例示的実施形態では、追加の10Fn3ドメインを1つ含む融合物において、10Fn3ドメインがVEGFR2、TNFα、IGF1R、またはEGFRに結合する。例示的実施形態では、追加の10Fn3ドメインを2つ含む融合物において、10Fn3ドメインがVEGFR2およびIGF1RまたはEGFRおよびIGF1Rに結合する。コンジュゲーションリンカーSABA融合物は共有結合で連結するか、非共有結合で連結することができる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドリンカーを介して、血清アルブミン結合性10Fn3を、異種分子に直接または間接的に連結することができる。SABAを目的のタンパク質に接合するための適切なリンカーは、別々のドメインが、互いに独立にフォールディングして、融合タンパク質のどちらのメンバーの機能も破壊しない三次元構造を形成することを可能にするものである。例示的リンカーを表2に配列番号65~88、216~221および397として掲載する。この開示は、グリシンセリンベースのリンカー、グリシンプロリンベースのリンカー、ならびにアミノ酸配列PSTSTST配列番号85を有するリンカーなどといった、いくつかの適切なリンカーを提供する。いくつかの実施形態では、リンカーがグリシンセリンベースのリンカーである。これらのリンカーはグリシン残基とセリン残基を含み、8~50、10~30、および10~20アミノ酸長であることができる。例には、アミノ酸配列7配列番号72、G6配列番号67、およびG7G配列番号69を有するリンカーが包含される。別のリンカーはグルタミン酸を含有し、これには例えば、5配列番号74およびGGSEGGSE配列番号78が包含される。別の例示的グリシンセリンリンカーには、4配列番号71、7配列番号80、5配列番号81、および3G配列番号82が包含される。いくつかの実施形態では、リンカーがグリシンプロリンベースのリンカーである。これらのリンカーは、グリシン残基とプロリン残基を含み、3~30、10~30、および3~20アミノ酸長であることができる。例には、アミノ酸配列3G配列番号83、5G配列番号84、およびGPGを有するリンカーが包含される。別の実施形態において、リンカーは、3~30、10~30、および3~20アミノ酸の長さを有するプロリンアラニンベースのリンカーであることができる。プロリンアラニンベースのリンカーの例には、例えば3配列番号86、6配列番号87および9配列番号88が包含される。最適なリンカーの長さとアミノ酸組成は、当技術分野において周知の方法による日常的な実験で決定することができると考えられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する融合物が、血中またはターゲット組織中のプロテアーゼによって切断されうるプロテアーゼ部位を有するポリペプチドリンカーを介してSABAに連結される。より良い送達特性もしくは治療特性のために、またはより効率的な生産のために、そのような実施形態を使って治療タンパク質を放出させることができる。さらなるリンカーまたはスペーサーを、Fn3ドメインのC末端、Fn3ドメインとポリペプチドリンカーの間に導入してもよい。さらなるリンカーまたはスペーサーを、Fn3ドメインのN末端、Fn3ドメインとポリペプチドリンカーの間に導入してもよい。いくつかの実施形態では、ポリマーリンカーを介して、治療部分をSABAに直接または間接的に連結することができる。ポリマーリンカーは、融合物の各構成要素間の距離を最適に変化させることで次に挙げる特徴の1つ以上を有するタンパク質融合物を作り出すために使用することができる:1目的のタンパク質に結合するときの、1つ以上のタンパク質ドメインの結合の、減少または増加した立体障害、2増加したタンパク質安定性または溶解度、3減少したタンパク質凝集、および4タンパク質の増加した総アビディティまたはアフィニティ。いくつかの実施形態では、治療部分が、ポリマー糖などの生体適合性ポリマーを介してSABAに連結される。ポリマー糖は、血中またはターゲット組織中の酵素によって切断されうる酵素的切断部位を包含することができる。より良い送達特性もしくは治療特性のために、またはより効率的な生産のために、そのような実施形態を使って治療タンパク質を放出させることができる。SABA神経ペプチド融合物一定の実施形態において、本願は、SABA神経ペプチド融合物を提供する。例示的神経ペプチドには、例えばアミリン、PYYおよびPPが包含される。SABA神経ペプチド融合物は、ポリペプチド融合物として構築するか、化学的に誘導されたスペーサーを介して連結されたコンジュゲートとして構築することができる。ある実施形態では、SABA神経ペプチド融合物が、SABA、アミノ酸リンカー、および神経ペプチドを含むポリペプチド融合物である。多くの神経ペプチドはC末端がアミド化されているので、融合タンパク質の例示的配置は、N末端からC末端に向かって、SABA、アミノ酸リンカー、および神経ペプチドである。もう一つの実施形態では、SABA神経ペプチド融合物が、SABAを神経ペプチドに連結する化学的に誘導されたスペーサーを含有する。SABA神経ペプチドコンジュゲートの例示的配置は、次のとおりである:1SABACys化学的に誘導されたスペーサー神経ペプチド、または2SABAアミノ酸リンカーCys化学的に誘導されたスペーサー神経ペプチド。本明細書においてさらに説明するように、SABA神経ペプチド融合物は、微生物または哺乳動物細胞などの宿主細胞内で生産することができる。化学的に誘導されたスペーサーによって連結されたSABA神経ペプチド融合物のペプチド構成要素は、宿主細胞によって、もしくは化学合成によって、またはそれらの組合せによって、生産することができる。例示的実施形態では、化学的に誘導されたスペーサーによって連結されたSABA神経ペプチド融合物が、宿主細胞例えば大腸菌Ecoli中で生産されたSABAと、化学合成によって生産された神経ペプチドとから組み立てられる。SABA神経ペプチド融合物の生産に関するさらなる詳細を以下に記載すると共に、実施例にも記載する。多くの神経ペプチドは、その生物学的活性にとって重要なC末端αアミド基を含有する。例えばアミリン、PYYおよびPPペプチドは全て、C末端アミド化されている。哺乳動物細胞では、αアミド化が、ペプチジルグリシン基質のαアミド化生成物への転化を触媒する二機能性酵素であるペプチジルグリシンαアミド化モノオキシゲナーゼPAMによってプロセシングされうる。C末端アミド化ペプチドを生産するための技法は種々存在する。例えば、ペプチド前駆体C末端グリシンもしくはグリシンリジンアルギニンまたは他の伸長部を伴うものを、精製PAM酵素により、インビトロでプロセシングすることができる。PAMと、PAMを使ってC末端アミド化ペプチドを生産するための方法は、当業者には知られている。例えばUS4708934、US5789234およびUS6319685を参照されたい。C末端アミド化は、内在性PAMを発現する哺乳類発現系でも達成することができる。融合タンパク質は、グリシンまたはグリシンリジンアルギニン配列によって伸長された前駆体分子として発現させることができる。真核細胞例えばCHO、NIH3T3およびBHKにおいて分泌タンパク質として発現させた場合、そのタンパク質は内在性PAM酵素によって切断されて、C末端カルボキシアミドをもたらしうる。例えばEndocrinologyV129553555;およびMolecularandCellularEndocrinology91135141を参照されたい。C末端アミド化は、ヒトPAMが同時発現する哺乳類発現系において達成することもできる。例えばChineseJournalofBiotechnologyv182024を参照されたい。インビトロでのPAM酵素によるCOOHのCONH2への転化の他に、目的のタンパク質上のカルボキサミド末端は、メリフィールド合成を使って作り出すこともできる。メリフィールド合成では、メリフィールド合成プロセス中に、ペプチドのN末端にマレイミド部分を取り付けることが可能である。このマレイミド部分は、2つのポリペプチドドメインの間に置かれたスペーサーとして役立ちうるさまざまな非アミノ酸部分を使って、例えばSABAとカルボキシアミド化神経ペプチドなどといった2つのアミノ酸配列間でのコンジュゲートを作り出すことを可能にする。スペーサーとして使用することができる適切な非アミノ酸部分の例を下記の表1に示す。マレイミドコンジュゲーション反応の利点は、タンパク質上で容易に行うことができ、タンパク質分子にとって好ましい穏やかな条件下で高い収率を与え、高度に特異的で、副生成物をほとんど伴わないことである。[表1]N末端にマレイミド部分を有するペプチドにSABA分子をコンジュゲートするためのリンカースペーサーの実例いくつかの実施形態では、ペプチドのマレイミド誘導体典型的にはペプチドのN末端にマレイミド基を持つものへの、SABAのC末端Cysのスルフヒドリル基のマイケル付加反応で、安定なチオエーテル結合を得ることにより、本明細書に記載するC末端アミド化合成ペプチドを、C末端Cys残基を含有するSABAと、溶液中でコンジュゲートすることができる。同じコンジュゲーションを、ペプチドのハロアルキル誘導体例えばブロモ酢酸またはヨード酢酸を使ったアシル化によってペプチド上に導入されたブロモメチル基またはヨードメチル基による、SABAのCysスルフヒドリルのアルキル化によって達成することもできる。このタイプのペプチドタンパク質コンジュゲーションは、例えばGTHermansonBioconjugateTechniquesAcademicPressカリフォルニア州サンディエゴ1996に記載されているようなバイオコンジュゲーション法など、いくつかの異なる方法を使って達成できることは、当業者であればわかるであろう。もう一つの実施形態では、中性リンカーまたはスペーサーを、ペプチド上のチオール反応性基と、ネイティブまたは変性ペプチド配列との間に置く。リンカーまたはスペーサーは、立体障害の低下をもたらし、ペプチドの、そのコグネイト受容体またはタンパク質パートナーへの結合を容易にしうる。適切なリンカーには、表1に記載するリンカーが包含されるが、これらに限るわけではない。チオール反応性マレイミドまたはヨードアセチル基を有するリンカー8~11が示されており、これらは、当技術分野において記載されている対応Nスクシンイミジル活性エステルを使って、ペプチドにカップリングすることができる。本明細書に記載するペプチドおよびペプチドアナログは、化学合成により、さまざまな固相技法、例えばGBaranyおよびRBMerrifieldThePeptidesAnalysisSynthesisBiology;Volume2SpecialMethodsinPeptideSynthesisPartApp3284EGrossおよびJMeienhofer編AcademicPressニューヨーク1980;またはWCChanおよびPDWhiteFmocSolidPhasePeptideSynthesisAPracticalApproachOxfordUniversityPress英国オックスフォード2000に記載されているものなどを使って作製することができる。ペプチド合成のための例示的戦略は、αアミノ基を一時的に保護するためのFmoc9フルオレニルメチルメチルオキシカルボニル基と、アミノ酸側鎖を一時的に保護するためのtertブチル基との組合せに基づく例えばThePeptidesAnalysisSynthesisBiology中のEAthertonおよびRCSheppardTheFluorenylmethoxycarbonylAminoProtectingGroup;Volume9SpecialMethodsinPeptideSynthesisPartCpp138SUndenfriendおよびJMeienhofer編AcademicPressサンディエゴ1987を参照されたい。ペプチドは、不溶性ポリマー支持体レジンともいう上で、ペプチドのカルボキシ末端から出発して段階的に合成することができる。合成は、ペプチドのC末端アミノ酸をアミドまたはエステル結合の形成を介してレジンに添加することによって開始される。これにより、結果として生じたペプチドを最終的にそれぞれC末端アミドまたはカルボン酸として放出させることが可能になる。C末端アミノ酸および合成に使用される他のアミノ酸は全て、好ましくは、合成中にαアミノ保護基を選択的に除去することができるように、差異的に保護されたαアミノ基と側鎖官能基存在する場合とを有する。アミノ酸のカップリングは、そのカルボキシル基を活性エステルとして活性化し、それを、レジンに添加されたN末端アミノ酸の、ブロックされていないαアミノ基と反応させることによって行われる。αアミノ基脱保護およびカップリングのサイクルを、ペプチド配列全体が組み立てられるまで繰り返す。次に、副反応を制限するために通常は適当なスカベンジャーの存在下で、ペプチドをレジンから切り離すと同時に、側鎖官能基を脱保護する。その結果得られたペプチドは、逆相分取用HPLCで精製することができる。最終ペプチドへの前駆体として使用されるペプチジルレジンの合成には、市販の架橋ポリスチレンポリマーレジンNovabiochem、カリフォルニア州サンディエゴまたはChemMatrixPEGポリマーレジンPCASBioMatrix、カナダケベックシティーを利用することができる。好ましい固形支持体には、例えば次に挙げるものが包含される:C末端カルボキサミド用の、4フェノキシアセチルpメチルベンズヒドリルアミンレジンRinkアミドMBHAレジン;9Fmocアミノキサンテン3イルオキシメリフィールドレジンSieberアミドレジン;4アミノメチル35ジメトキシフェノキシバレリルアミノメチルメリフィールドレジンPALレジン、および対応するChemMatrixPEGベースレジン。第1アミノ酸およびそれ以降のアミノ酸のカップリングは、DICHOBt、HBTUHOBt、またはDIC6ClHOBtもしくはHCTU6ClHOBtからそれぞれ作製されるHOBtまたは6ClHOBt活性エステルを使って達成することができる。本明細書に記載するペプチドおよびペプチドアナログは、LibertyマイクロウェーブペプチドシンセサイザーCEMCorp、ノースカロライナ州マシューズなどの自動ペプチド合成装置を使って行うことができる。実施例で述べるFmoctブチル保護戦略を使って、段階的固相ペプチド合成を行うことができる。いくつかの実施形態では、図21に示すFmocアミノ酸誘導体を使用することができる。アミリン誘導体の場合、Acm保護Cys残基間のジスルフィド結合例えばCys27またはCys17は、レジン上でのヨウ素媒介参加によって形成させることができるChanおよびWhite2000。各ペプチドのペプチジルレジン前駆体は、任意の標準的手法を使って、切断し、脱保護することができる例えばDSKingらIntJPeptideProteinRes36255266。いくつかの実施形態では、スカベンジャーとしての水、TISおよびフェノールの存在下で、TFAを使用する。典型的には、ペプチジルレジンを、TFA水TIS94:3:3,v:v:v;1mL100mgペプチジルレジンまたはTFA水フェノール90:5:5;v:v:w中、室温で、2~3時間撹拌する。次に、使用済みのレジンを濾去し、TFA溶液を減圧下で濃縮または乾燥する。その結果得られた粗ペプチドは、Et2Oで沈殿させ洗浄するか、あるいは分取用HPLCによる精製のためにDMSO、DMFまたは50水性AcCNに直接再溶解することができる。望ましい純度を有するペプチドは、例えば島津モデルLC8A液体クロマトグラフでの分取用HPLCを使った精製によって得ることができる。例えば、粗ペプチドの溶液をPhenomenexLunaC185μm212×250mmカラムに注入し、どちらも01TFAで緩衝化した水中のMeCNの直線的勾配で、14~20mL分の流速を使って、220nmにおけるUV吸光度で流出液のモニタリングを行いながら溶出させることができる。精製されたペプチドの構造は、エレクトロスプレーLCMS分析によって確認することができる。例えば、ペプチド試料は、WatersAcquity超高速液体クロマトグラフUPLCに接続されたWatersZQ2000シングル四重極質量分析計マサチューセッツ州ミルフォードでのLCMSによって分析することができる。クロマトグラフィー分離は、21×50mm、17μm、300Å、AcquityBEH300C18カラムWaters、マサチューセッツ州ミルフォードを使用して、08mL分の勾配溶出で達成することができる。カラム温度は50°Cにすることができる。移動相Aは、005TFAを含む98:2水:アセトニトリルにすることができ、移動相Bは、004TFAを含むアセトニトリルにすることができる。直線的勾配は、1、2、または5分かけて2の移動相Bから80の移動相Bまで形成させることができる。2μLの注入を使用して、mz500からmz1500まで、またはmz1000からmz2000までのESIMSデータを取得することができる。機器はユニット分解能で稼働させることができる。結合ポリペプチドの脱免疫化血清アルブミン結合物質およびそれらの融合物のアミノ酸配列は、1つ以上のB細胞エピトープまたはT細胞エピトープを排除するために改変してもよい。本明細書に記載するSABA融合物などのタンパク質は、それを、所与の種に対して非免疫原性にするか、免疫原性を低下させるために、脱免疫化することができる。脱免疫化はタンパク質の構造改変によって達成することができる。当業者に知られている脱免疫化技法はどれでも使用することができる。例えばWO0034317この文献の開示は引用によりそのまま本明細書に組み込まれるを参照されたい。ある実施形態では、血清アルブミン結合物質およびそれらの融合物の配列を、MHCクラスII結合モチーフの存在について分析することができる。例えば、MHC結合モチーフのデータベースとの比較を、例えばワールドワイドウェブサイトwehilwehieduau上のモチーフデータベースを検索することなどによって行うことができる。あるいは、MHCクラスII結合ペプチドを、コンピュータスレッディングcomputationalthreading法、例えばポリペプチド由来の連続するオーバーラッピングペプチドを、MHCクラスIIタンパク質への結合エネルギーについて調べる、Altuviaらが考案したものなどJMolBiol249244250を使って、同定することができる。コンピュータ結合予測アルゴリズムには、iTope商標、Tepitope、SYFPEITHI、EpiMatrixEpiVax、およびMHCpredが包含される。MHCクラスII結合ペプチドの同定を支援するために、うまく提示されるペプチドに関係する関連配列特徴、例えば両親媒性およびRothbardモチーフ、ならびにカテプシンBおよび他のプロセシング酵素の切断部位などを検索することができる。潜在的例えばヒトT細胞エピトープが同定されたら、次に、T細胞エピトープを排除するのに必要な1つ以上のアミノ酸の改変を行うことによって、これらのエピトープを排除する。通常、これは、T細胞エピトープそのものの中の1つ以上のアミノ酸の改変を伴うであろう。これは、タンパク質の一次構造から見てエピトープに近接するアミノ酸、または一次構造では近接していないが、その分子の二次構造では近接しているものを改変することを伴いうる。考えられる通常の改変はアミノ酸置換であるだろうが、一定の状況では、アミノ酸の付加または欠失が適当である場合もありうる。全ての改変は、組換えDNA技術によって達成することができるので、最終的な分子は、組換え宿主からの発現により、例えば確立された方法によって調製することができるが、タンパク質化学または他の任意の分子改変手段も使用することができる。同定されたT細胞エピトープを除去したら、新しいT細胞エピトープが作り出されていないことを保証し、新しいエピトープが作り出されている場合には、そのエピトープを欠失させることができるように、脱免疫化された配列を再び分析することができる。計算上同定されたT細胞エピトープの全てを除去する必要はない。特定のエピトープの強さ、もっと正確に言えば潜在的免疫原性の重要性は、当業者には理解されるであろう。さまざまな計算方法によって潜在的エピトープに関するスコアが生成される。高スコアのエピトープだけを除去すればよい場合がありうることは、当業者にはわかるであろう。また、潜在的エピトープの除去とそのタンパク質の結合アフィニティまたは他の生物学的活性の維持との間にバランスがあることも、当業者にはわかるであろう。それゆえに、一つの戦略は、SABAまたはSABA融合タンパク質中に置換を逐次的に導入し、次に、ターゲット結合性または他の生物学的活性および免疫原性について調べることである。ある態様において、脱免疫化されたSABAまたはSABA融合タンパク質は、ヒト対象において、元のタンパク質よりも免疫原性が低いもっと正確に言えば、誘発されるHAMA応答が弱くなる。免疫原性を決定するためのアッセイは、当業者にはよく知られている。当技術分野において認識されている、免疫応答を決定するための方法を実施することで、特定の対象における、または臨床試験中の、HAMA応答をモニタリングすることができる。脱免疫化されたタンパク質を投与した対象には、当該治療の施行の開始時および施行中のあらゆる時点で、免疫原性評価を加えることができる。HAMA応答は、例えば、対象から採取した血清試料中の、脱免疫化タンパク質に対する抗体を、表面プラズモン共鳴技術BIAcoreおよびまたは固相ELISA分析などといった当業者に知られている方法を使って検出することによって測定される。あるいは、T細胞活性化イベントを測定するために設計されたインビトロアッセイも、免疫原性を示す。さらなる修飾一定の実施形態において、血清アルブミン結合物質およびそれらの融合物は、さらに翻訳後修飾を含みうる。例示的翻訳後タンパク質修飾には、リン酸化、アセチル化、メチル化、ADPリボシル化、ユビキチン化、グリコシル化、カルボニル化、SUMO化、ビオチン化、またはポリペプチド側鎖もしくは疎水性基の付加が包含される。結果として、修飾された血清アルブミン結合物質およびそれらの融合物は、脂質、多糖または単糖、およびリン酸基などの非アミノ酸要素を含有しうる。好ましい形態のグリコシル化は、1つ以上のシアル酸部分がポリペプチドにコンジュゲートするシアリル化である。シアル酸部分は溶解性および血清中半減期を改善すると同時に、タンパク質の考えうる免疫原性も減少させる。例えばRajuらBiochemistry2001Jul3140886876を参照されたい。そのような非アミノ酸要素が血清アルブミン結合物質またはそれらの融合物の機能性に及ぼす効果を、特定の血清アルブミン例えばHSAまたはRhSAに結合するそれらの能力に関して、およびまたは融合物の場合には具体的な非10Fn3部分によって付与される機能的役割例えばFGF21がグルコース取り込みに及ぼす効果に関して、調べることができる。ベクターおよびポリヌクレオチドの実施形態この開示には、本明細書に記載するタンパク質のいずれかをコードする核酸配列も包含される。当業者には理解されるように、第3塩基の縮重ゆえに、ほとんどすべてのアミノ酸は、コードしているヌクレオチド配列中で、2つ以上のトリプレットコドンによって表されうる。加えて、軽微な塩基対変化は、コードされるアミノ酸配列における保存的置換をもたらす場合もあるが、遺伝子産物の生物学的活性は実質的に改変させないと予想される。それゆえに、本明細書に記載するタンパク質をコードする核酸配列は、配列をわずかに修飾してもなお、それぞれの遺伝子産物をコードすることができる。血清アルブミン結合物質およびそれらの融合物をコードする一定の例示的核酸には、表3に示す配列を有する核酸が包含される。本明細書に開示するさまざまなタンパク質またはポリペプチドのいずれかをコードする核酸は、化学的に合成することができる。細胞内での発現が改善されるようにコドン使用頻度を選択することができる。そのようなコドン使用頻度は選択した細胞タイプに依存するであろう。大腸菌および他の細菌、ならびに哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞および昆虫細胞に、それぞれ特化したコドン使用頻度パターンが開発されている。例えばMayfieldらProcNatlAcadSciUSA200310043842;SinclairらProteinExprPurif200296105;ConnellNDCurrOpinBiotechnol20014469;MakridesらMicrobiolRev19966051238;およびSharpらYeast1991765778を参照されたい。核酸操作のための一般技法は当業者の知るところであり、例えばSambrookらMolecularCloningALaboratoryManual第1~3巻ColdSpringHarborLaboratoryPress第2版1989またはFAusubelらCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenPublishingandWileyInterscience:ニューヨーク、198とその定期改訂版にも記載されており、これらは引用により本明細書に組み込まれる。タンパク質をコードするDNAは、哺乳動物遺伝子、ウイルス遺伝子または昆虫遺伝子に由来する適切な転写または翻訳調節要素に作動的に連結される。そのような調節要素には、転写プロモーター、転写を制御するための随意のオペレーター配列、適切なmRNAリボソーム結合部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳の終結を制御する配列が包含される。宿主中で複製する能力通常は複製起点によって付与されるおよび形質転換体の認識を容易にするための選択遺伝子が、さらに組み込まれる。適切な調節要素は当技術分野ではよく知られている。本明細書に記載するタンパク質および融合タンパク質は、異種ポリペプチド好ましくはシグナル配列であるか、成熟タンパク質またはポリペプチドのN末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドであるものとの融合タンパク質として作製することができる。好ましく選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識されプロセシングされるすなわちシグナルペプチダーゼによって切断されるものである。ネイティブシグナル配列を認識しプロセシングしない原核宿主細胞の場合は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、lpp、または耐熱性エンテロトキシンIIリーダーの群などから選択される原核生物シグナル配列で、シグナル配列を置換する。酵母分泌のためには、ネイティブシグナル配列を、例えば酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダーサッカロミセスSaccharomycesおよびクリベロミセスKluyveromycesのα因子リーダーを包含する、または酸性ホスファターゼリーダー、カンジダアルビカンスCalbicansグルコアミラーゼリーダー、またはPCT公開番号WO9013646に記載のシグナルで置換することができる。哺乳動物細胞発現においては、哺乳動物シグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、例えば単純ヘルペスgDシグナルを利用することができる。そのような前駆体領域のDNAは、タンパク質をコードするDNAに読み枠を合わせてライゲートすることができる。真核宿主細胞例えば酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物由来の有核細胞において使用される発現ベクターは、転写の終結およびmRNAの安定化に必要な配列も含有するであろう。そのような配列は、一般に、真核生物またはウイルスのDNAまたはcDNAの5非翻訳領域、また時には3非翻訳領域から、入手することができる。これらの領域は、多価抗体をコードするmRNAの非翻訳部分にポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。有用な転写終結構成要素の一つは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。PCT公開番号WO9411026とそこに開示されている発現ベクターを参照されたい。組換えDNAは、タンパク質の生成に役立ちうる任意のタイプのタンパク質タグ配列も包含することができる。タンパク質タグの例には、ヒスチジンタグ、FLAGタグ、mycタグ、HAタグ、またはGSTタグが包含されるが、これらに限るわけではない。細菌、真菌、酵母、および哺乳動物細胞宿主と共に使用するための適当なクローニングベクターおよび発現ベクターは、CloningVectorsALaboratoryManualElsevierニューヨーク1985に見いだすことができ、この文献の関連する開示は引用により本明細書に組み込まれる。発現コンストラクトは、当業者には明白であるだろうように、その宿主細胞に適した方法を使って、宿主細胞に導入される。エレクトロポレーション;塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、DEAEデキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション;マイクロプロジェクタイルボンバードメント;リポフェクション;および感染この場合、ベクターは感染性因子であるなどただしこれらに限るわけではない、宿主細胞中に核酸を導入するためのさまざまな方法が、当技術分野では知られている。適切な宿主細胞には、原核生物、酵母、哺乳動物細胞、または細菌細胞が包含される。適切な細菌には、グラム陰性生物またはグラム陽性生物、例えば大腸菌またはバチルス属Bacillussppが包含される。酵母、好ましくは、サッカロミセス属の酵母、例えばサッカロミセスセレビシアScerevisiaeなども、ポリペプチドの生産に使用することができる。さまざまな哺乳動物細胞培養系または昆虫細胞培養系も、組換えタンパク質を発現させるために使用することができる。昆虫細胞中で異種タンパク質を生産するためのバキュロウイルス系については、LuckowおよびSummersによる総説BioTechnology6471988がある。いくつかの例では、例えばグリコシル化のために、脊椎動物細胞においてタンパク質を生産することが望ましいであろうが、培養組織培養における脊椎動物細胞の増殖は、既に日常的な手法になっている。適切な哺乳動物宿主細胞株の例には、内皮細胞、COS7サル腎臓細胞、CV1、L細胞、C127、3T3、チャイニーズハムスター卵巣CHO、ヒト胎児腎臓細胞、HeLa、293、293T、およびBHK細胞株が包含される。多くの応用では、本明細書に記載するタンパク質多量体のサイズが小さいことから、大腸菌が好ましい発現方法になるであろう。タンパク質生産宿主細胞は、タンパク質生産のために、本明細書に記載する発現ベクターまたはクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択肢、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、適宜、変更が加えられた従来の栄養培地において培養される。本発明のタンパク質を生産するために使用される宿主細胞は、さまざまな培地中で培養することができる。ハムF10Sigma、最小必須培地MEM,Sigma、RPMI1640Sigma、およびダルベッコ変法イーグル培地DMEM,Sigmaなどの市販培地は、宿主細胞を培養するのに適している。加えて、HamらMethEnz5844、BarnesらAnalBiochem102255、米国特許第4767704号;同第4657866号;同第4927762号;同第4560655号;または同第5122469号;WO9003430;WO8700195;または米国再発行特許発明第30985号に記載された培地はどれでも、宿主細胞用の培養培地として使用することができる。これらの培地のいずれにも、必要に応じて、ホルモンおよびまたは他の成長因子インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子など、塩類塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩など、バッファーHEPESなど、ヌクレオチドアデノシンおよびチミジンなど、抗生物質ゲンタマイシン商標薬など、微量元素通常はマイクロモル濃度域の最終濃度で存在する無機化合物と定義される、およびグルコースまたは等価なエネルギー源を補足することができる。他の必要な補足物も、当業者には知られているであろう適当な濃度で含めることができる。例えば温度、pHその他の培養条件は、発現用に選択した宿主細胞で以前使用されたものであり、当業者には明白であるだろう。本明細書に開示するタンパク質は、細胞翻訳系を使って生産することもできる。そのような目的には、インビトロ転写によるmRNAの生産が可能になるように、そしてまた、利用するその無細胞系におけるmRNAの無細胞翻訳が可能になるように、タンパク質をコードする核酸を修飾しなければならない。例示的真核生物無細胞翻訳系には、例えば哺乳動物または酵母無細胞翻訳系が包含され、例示的原核生物無細胞翻訳系には、例えば細菌無細胞翻訳系が包含される。本明細書に開示するタンパク質は、化学合成によって例えばSolidPhasePeptideSynthesis第2版,1984,ThePierceChemicalCo,イリノイ州ロックフォードに記載の方法によって生産することもできる。タンパク質への修飾も化学合成によって加えることができる。本明細書に開示するタンパク質は、タンパク質化学の分野において広く知られているタンパク質の単離精製法によって精製することができる。非限定的な例には、抽出、再結晶、塩析例えば硫酸アンモニウムまたは硫酸ナトリウム、遠心分離、透析、限外濾過、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲル濾過、ゲル浸透クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、電気泳動、向流分配法またはこれらの任意の組合せが包含される。精製後に、濾過および透析などといったただしこれらに限るわけではない当技術分野において知られているさまざまな方法のいずれかによって、タンパク質を異なるバッファーへと交換し、かつまたは濃縮することができる。精製されたタンパク質は、好ましくは、少なくとも85の純度、より好ましくは少なくとも95の純度、最も好ましくは少なくとも98の純度を有する。純度の正確な数値がどうであれ、タンパク質は、医薬製品としての使用にとっては、十分に純粋である。イメージング、診断および他の応用ここに提供するSABA融合物は、SABAに融合された異種分子の実体に基づいて、さまざまな疾患および障害を処置するために使用することができる。当業者は、当技術分野における知識および本明細書に記載する情報に基づいて、SABA融合物の応用を決定することができる。さまざまなSABA融合タンパク質の使用を本明細書において詳述する。SABA融合物は、ヒトとヒト以外の生物の両方を包含する任意の哺乳動物対象または患者に投与することができる。本明細書に記載する血清アルブミン結合物質および融合分子は、検出可能に標識することができ、イメージング応用または診断応用のために、例えばその融合分子によって結合されるタンパク質を発現する細胞と接触させる目的で使用することができる。タンパク質を検出可能部分にコンジュゲートするための当技術分野において知られる方法は、HunterらNature144945;DavidらBiochemistry131014;PainらJImmunolMeth40219;およびNygrenJHistochemandCytochem30407に記載されている方法を含めて、どれでも使用することができる。一定の実施形態では、本明細書に記載する血清アルブミン結合物質および融合分子を、さらに、検出することができるラベルに取り付ける例えば、ラベルは、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素補因子であることができる。ラベルは、放射性物質、例えば鉄キレート化合物などの放射性重金属、ガドリニウムまたはマンガンの放射性キレート化合物、酸素、窒素、鉄、炭素、またはガリウムの陽電子放出体、43K、52Fe、57Co、67Cu、67Ga、68Ga、123I、125I、131I、132I、または99Tcであることができる。そのような部分に付加された血清アルブミン結合物質または融合分子は、イメージング剤として使用することができ、ヒトなどの哺乳動物における診断的使用のために有効量で投与された後、イメージング剤の局在化および蓄積が検出される。イメージング剤の局在化および蓄積は、ラジオシンチグラフィ、核磁気共鳴イメージング、コンピュータ断層撮影法または陽電子放射断層撮影法によって検出することができる。当業者には明らかであるだろうように、投与すべき放射性同位体の量は放射性同位体に依存する。当業者であれば、投与すべきイメージング剤の量を、放射能部分として使用される所与の放射性核種の比放射能およびエネルギーに基づいて、容易に処方することができる。血清アルブミン結合物質および融合分子は、アフィニティ精製剤としても有用である。このプロセスでは、当技術分野において周知の方法を使って、Sephadex樹脂または濾紙などの適切な支持体上にタンパク質が固定化される。タンパク質は、競合結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降アッセイなどといった、任意の既知アッセイ法で使用することができるZolaMonoclonalAntibodiesAManualofTechniquespp147158CRCPressInc1987。SABAFGF21融合物の例示的使用ここに提供するSABAFGF21融合物は、下記の1つ以上の処置または防止に使用することができる:糖尿病、高血糖、耐糖能異常、妊娠糖尿病、インスリン抵抗性、高インスリン血症、網膜症、ニューロパシー、ネフロパシー、創傷治癒、アテローム性動脈硬化およびその続発症急性冠症候群、心筋梗塞、狭心症、末梢血管疾患、間欠性跛行、心筋虚血、脳卒中、心不全、メタボリック症候群、高血圧、肥満、異常脂質血症、高脂質血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、低HDL、高LDL、血管再狭窄、末梢動脈疾患、脂質障害、骨疾患骨粗鬆症を包含する、PCOS、HIVプロテアーゼ関連リポジストロフィー、緑内障および炎症性疾患、例えば乾癬、関節リウマチおよび変形性関節症、ならびに糖尿病、リポジストロフィーおよび骨粗鬆症に関係するコルチコステロイド処置による副作用の処置。一定の実施形態において、ここに提供するSABAFGF21融合物は、対象において、肥満を処置または防止するため、体重を減少させるため、または体重増加を防止するために使用することができる。例示的一実施形態では、25~299のBMIを有する対象において、体重を減少させるためまたは体重増加を防止するために、SABAFGF21融合物を使用することができる。もう一つの例示的実施形態では、≧30のBMIを有する対象において、体重を減少させるためまたは体重増加を防止するために、SABAFGF21融合物を使用することができる。もう一つの実施形態では、≧200mgdLの総コレステロールレベルおよびまたは≧150mgdLのトリグリセリドレベルを有する対象を処置するために、SABAFGF21融合物を使用することができる。別の実施形態では、インスリン抵抗性を処置または低下させ、かつまたは脂肪組織におけるグルコース取り込みを増加させるために、SABAFGF21融合物を使用することができる。別の実施形態では、前糖尿病対象における糖尿病の進行を遅らせるために、SABAFGF21融合物を使用することができる。別の実施形態では、対象における血中グルコースレベルを低下させ、トリグリセリドレベルを低下させ、コレステロールレベルを低下させ、エネルギー消費を増加させ、脂肪利用を増加させ、かつまたは脂質排出を増加させるために、SABAFGF21融合物を使用することができる。本明細書にいう疾患または障害を防止するとは、無処置対照サンプルと比較して、統計サンプルにおける疾患状態の発生の確率を低下させること、または無処置対照サンプルと比較して、その疾患または障害の1つ以上の症状の発生を遅延させるか、前記症状の重篤度を低減することを指す。患者は、一般集団と比べて臨床的疾患状態を患うリスクを増加させることが知られている要因に基づいて、予防的治療のために選択することができる。本明細書において使用する処置するという用語は、a疾患状態を阻害すること、すなわちその発達を阻むこと;およびまたはb疾患状態を緩和すること、すなわち疾患状態が樹立された時にその退縮を引き起こすことを包含する。一定の実施形態において、本願は、活性成分として治療有効量のSABAFGF21融合物を、単独で、または医薬担体と組み合わせて含む、医薬組成物を提供する。場合により、SABAFGF21融合物は、単独で使用するか、本明細書に記載する他の融合物と組み合わせて、または1つ以上の他の治療剤、例えば抗糖尿病剤もしくは他の医薬活性物質と組み合わせて使用することができる。一定の実施形態では、SABAFGF21融合物を、単独で、または1つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて投与することができる。組み合わせて投与または併用療法とは、SABAFGF21融合物と1つ以上のさらなる治療剤とが、処置される哺乳動物に並行して投与されることを意味する。組み合わせて投与される場合、各構成要素は同時に投与されてもよいし、異なる時点において任意の順序で逐次的に投与されてもよい。したがって各構成要素は、別々に、ただし所望の治療効果が得られるように十分に近い時間間隔で、投与することができる。ここに提供するSABAFGF21融合物は、抗糖尿病剤、抗高血糖剤、抗高インスリン血症剤、抗網膜症剤、抗ニューロパシー剤、抗ネフロパシー剤、抗アテローム性動脈硬化剤、抗虚血剤、抗高血圧剤、抗肥満剤、抗異常脂質血症剤、抗異常脂質血症剤、抗高脂血症剤、抗高トリグリセリド血症剤、抗高コレステロール血症剤、抗再狭窄剤、抗膵臓剤antipancreaticagent、脂質低下剤、食欲抑制剤、記憶増強剤、抗認知症剤、または認知促進剤、食欲抑制剤、心不全のための処置、末梢動脈疾患のための処置、および抗炎症剤と組み合わせて使用することができる。SABAFGF21融合物と組み合わせて使用される抗糖尿病剤には、インスリン分泌促進物質またはインスリン抵抗性改善薬、GPR40受容体調整物質、または他の抗糖尿病剤が包含されるが、これらに限るわけではない。これらの薬剤には、ジペプチジルペプチダーゼIVDP4阻害剤例えばシタグリプチン、サクサグリプチン、アログリプチン、ビルダグリプチンなど、ビグアニド剤例えばメトホルミン、フェンホルミンなど、スルホニル尿素剤例えばグリブリドgliburide、グリメピリド、グリピジドなど、グルコシダーゼ阻害剤例えばアカルボース、ミグリトール、など、チアゾリジンジオン類などのPPARγアゴニスト例えばロシグリタゾン、ピオグリタゾンなど、PPARαγ二重アゴニスト例えばムラグリタザル、テサグリタザル、アレグリタザルなど、グルコキナーゼ活性化因子引用により本明細書に組み込まれるFyfeMCTらDrugsoftheFuture34641653に記載されているもの、GPR119受容体調整物質MBX2952、PSN821、APD597など、SGLT2阻害剤ダパグリフロジン、カナグリフロジン、レマグリフロジンremagliflozinなど、プラムリンチドなどのアミリンアナログ、およびまたはインスリンが包含されるが、これらに限るわけではない。糖尿病を処置するための現在の治療法および注目を集めつつある治療法に関する総説は、MohlerMLらMedicinalResearchReviews29125195、およびMizunoCSらCurrentMedicinalChemistry156174に見いだすことができる。SABAFGF21融合物は、場合により、1つ以上の食欲減退剤、例えばジエチルプロピオン、フェンジメトラジン、フェンテルミン、オルリスタット、シブトラミン、ロルカセリン、プラムリンチド、トピラマート、MCHR1受容体アンタゴニスト、オキシントモジュリン、ナルトレキソン、アミリンペプチド、NPYY5受容体調整物質、NPYY2受容体調整物質、NPYY4受容体調整物質、セチリスタット、5HT2c受容体調整物質などと組み合わせて使用することもできる。SABAFGF21融合物は、注射によって投与するか、鼻腔内に投与するか、経皮デバイスまたはバッカルデバイスによって投与することができるグルカゴン様ペプチド1受容体GLP1Rのアゴニスト、例えばエクセナチド、リラグルチド、GPR1アミド、GLP1アミド、GLP1Habenerの米国特許第5614492号に開示されているもの;この特許文献の開示は引用により本明細書に組み込まれるなどと組み合わせて使用することもできる。肥満を処置するための現在の治療法および注目を集めつつある治療法に関する総説は、MelnikovaIらNatureReviewsDrugDiscovery5369370;JonesDNatureReviewsDrugDiscovery8833834;ObiciSEndocrinology15025122517;およびElangbamCSVetPathol461024に見いだすことができる。一定の実施形態では、SABAFGF21融合物が、約10ng~20mg、10ng~5mg、10ng~2mg、10ng~1mg、100ng~20mg、100ng~5mg、100ng~2mg、100ng~1mg、1μg~20mg、1μg~5mg、1μg~2mg、1μg~1mg、10μg~20mg、10μg~5mg、10μg~2mg、10μg~1mg、001~20mg、001~10mg、01~20mg、01~10mg、001~5mg、01~5mg、もしくは07~5mg、または約10ng、100ng、1μg、10μg、100μg、または約1、2、25、3、4、5、6、7、8、9、10mgの用量で投与される。一定の実施形態では、SABAFGF21融合物が、約100pgkg~200μgkg、100pgkg~50μgkg、100pgkg~20μgkg、100pgkg~10μgkg、1ngkg~200μgkg、1ngkg~50μgkg、1ngkg~20μgkg、1ngkg~10μgkg、10ngkg~200μgkg、10ngkg~50μgkg、10ngkg~20μgkg、10ngkg~10μgkg、100ngkg~200μgkg、100ngkg~50μgkg、100ngkg~20μgkg、100ngkg~10μgkg、01~200μgkg、01~100μgkg、1~200μgkg、1~100μgkg、01~50μgkg、1~50μgkg、もしくは7~50μgkg、または約100pgkg、1ngkg、10ngkg、100ngkg、または1、2、5、10、20、25、30、40、50、60、75、100、125、150、200もしくは250μgkgの用量で投与される。SABAFGF21融合物は毎日例えば毎日1回、2回、3回、または4回与えてもよいし、それより低い頻度で例えば2日に1回、週または月に1回または2回与えてもよい。例示的実施形態では、SABAFGF21融合物が、1週間あたり約001~20mg、約001~10mg、約01~20mg、約01~10mg、約001~5mg、約01~5mg、もしくは約07~5mg、または約1、2、25、3、4、5、6、7、8、9、10mgの用量で投与される。例示的実施形態では、SABAFGF21融合物が、1週間あたり約01~200μgkg、約01~100μgkg、約1~200μgkg、約1~100μgkg、約01~50μgkg、約1~50μgkg、もしくは約7~50μgkg、または約1、2、5、10、20、25、30、40、50、60、75、100、125、150、200もしくは250μgkgの用量で投与される。例示的実施形態では、SABAFGF21融合物が、1日あたり約10ng~20mg、約10ng~5mg、約10ng~2mg、約10ng~1mg、約10ng~500μg、約10ng~200μg、約100ng~20mg、約100ng~5mg、約100ng~2mg、約100ng~1mg、約100ng~500μg、約100ng~200μg、約1μg~20mg、約1μg~5mg、約1μg~2mg、約1μg~1mg、約1μg~500μg、約1μg~200μg、約10μg~20mg、約10μg~5mg、約10μg~2mg、約10μg~1mg、約10μg~500μg、約10μg~200μg、または約10ng、100ng、1μg、10μg、100μg、200μg、500μg、1mg、15mg、2mg、25mg、3mg、もしくは5mgの用量で投与される。例示的実施形態では、SABAFGF21融合物が、1日あたり約100pgkg~200μgkg、約100pgkg~50μgkg、約100pgkg~20μgkg、約100pgkg~5μgkg、約100pgkg~2μgkg、約1ngkg~200μgkg、約1ngkg~50μgkg、約1ngkg~20μgkg、約1ngkg~5μgkg、約1ngkg~2μgkg、約10ngkg~200μgkg、約10ngkg~50μgkg、約10ngkg~20μgkg、約10ngkg~5μgkg、約10ngkg~2μgkg、約100ngkg~200μgkg、約100ngkg~50μgkg、約100ngkg~20μgkg、約100ngkg~5μgkg、約100ngkg~2μgkg、約1μgkg~200μgkg、約1μgkg~50μgkg、約1μgkg~20μgkg、約1μgkg~5μgkg、約1μgkg~2μgkg、約10μgkg~200μgkg、約10μgkg~50μgkg、もしくは約10μgkg~20μgkg、または約100pgkg、1ngkg、10ngkg、100ngkg、500ngkg、1μgkg、5μgkg、10μgkg、20μgkg、50μgkg、100μgkgもしくは200μgkgの用量で投与される。加えて、当技術分野では知られているとおり、年齢ならびに体重、全身の健康状態、性別、食餌、投与の時間、薬物相互作用、および疾患の重症度に合わせた調節が必要であるだろうが、当業者は、それらを日常的な実験で確かめることができるであろう。治療用製剤および投与様式本願は、SABAに融合された治療部分を投与するための方法であって、SABAに融合されると治療部分の半減期が延長される方法を提供する。融合コンストラクトを投与するための技法および投薬量は、SABAに融合される治療部分のタイプおよび処置される具体的状態に依存して変動するであろうが、当業者であればすぐに決定することができる。一般に、規制当局は、治療薬として使用されるタンパク質試薬については、含まれる発熱性物質のレベルが許容される程度に低くなるように製剤化されることを要求する。したがって、治療用製剤は一般に、それらが実質的に発熱性物質を含まないという点で、または少なくとも、適当な規制当局例えばFDAによって決定される許容されるレベルを超える発熱性物質を含有しないという点で、他の製剤とは区別されるであろう。一定の実施形態では、SABAおよびそれらの融合分子の医薬製剤が、例えばpH40~70で、1~20mMコハク酸、2~10ソルビトール、および1~10グリシンを含む。例示的一実施形態では、SABAおよびそれらの融合分子の医薬製剤が、例えばpH60で、10mMコハク酸、8ソルビトール、および5グリシンを含む。いくつかの実施形態では、SABAおよびその融合物が、哺乳動物、特にヒトにとって、医薬上許容される。医薬上許容されるポリペプチドとは、動物に投与しても際立った有害な医学的結果を伴わないポリペプチドを指す。医薬上許容されるSABAおよびその融合物の例には、本質的にエンドトキシンを含まないか、極めて低いエンドトキシンレベルしか持たない、インテグリン結合ドメインRGDを欠く10Fn3ドメイン、およびSABAまたはSABA融合物の組成物が包含される。治療用組成物は、医薬上許容される希釈剤、担体、または賦形剤と共に、単位剤形で投与することができる。投与は、非限定的な例として、非経口例えば静脈内、皮下投与、経口投与、または局所外用投与であることができる。組成物は、経口投与用の丸剤、錠剤、カプセル剤、液剤、または徐放性錠剤;静脈内、皮下または非経口投与用の液剤;または局所外用投与のためのゲル剤、ローション剤、軟膏、クリーム剤、またはポリマーもしくは他の徐放性媒体の形態をとることができる。製剤を製造するための当技術分野において周知の方法は、例えばRemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy第20版、ARGennaroAR編、2000、LippincottWilliamsWilkins、ペンシルベニア州フィラデルフィアに見いだされる。非経口投与用の製剤は、例えば賦形剤、滅菌水、食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物由来の油、または水素化ナフタレンhydrogenatednapthalenesを含有しうる。化合物の放出を制御するために、生体適合性生分解性ラクチドポリマー、ラクチドグリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレンポリオキシプロピレンコポリマーを使用することができる。化合物の体内分布を制御するためにナノ粒子状製剤例えば生分解性ナノ粒子、固形脂質ナノ粒子、リポソームを使用することができる。他の潜在的に有用な非経口送達システムには、エチレン酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、植え込み型注入システム、およびリポソームが包含される。製剤中の化合物の濃度は、投与すべき薬物の投薬量や投与経路などといった、いくつかの要因に依存して変動する。ポリペプチドは、場合により、医薬上許容される塩、例えば無毒性酸付加塩として、または医薬品業界においてよく使用される金属錯体として投与することができる。酸付加塩の例には、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはトリフルオロ酢酸などの有機酸;タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸;および塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸が包含される。金属錯体には、亜鉛、鉄などが包含される。ある例では、ポリペプチドが、熱安定性を増加させるために酢酸ナトリウムの存在下で製剤化される。経口使用のための製剤には、無毒性の医薬上許容される賦形剤と混合された活性成分を含有する錠剤が包含される。これらの賦形剤は、例えば不活性希釈剤または充填剤例えばスクロースおよびソルビトール、潤滑剤、流動促進剤、および粘着防止剤例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油、またはタルクであることができる。経口使用のための製剤は、咀嚼錠として、または活性成分が不活性固形希釈剤と混合されている硬ゼラチンカプセル剤として、または活性成分が水または油性媒質と混合されている軟ゼラチンカプセル剤として提供することもできる。治療有効量とは、その投与の目的である治療効果をもたらす用量を指す。正確な用量は処置される障害に依存するであろうが、当業者であれば、既知の技法を使って確かめることができる。一般に、SABAまたはSABA融合物は、1日あたり約001μgkg~約50mgkg、好ましくは1日あたり001mgkg~約30mgkg、最も好ましくは1日あたり01mgkg~約20mgkgの用量で投与される。ポリペプチドは、毎日例えば毎日1回、2回、3回、または4回与えてもよいし、それより低い頻度で例えば2日に1回、週または月に1回または2回与えてもよい。加えて、当技術分野では知られているとおり、年齢ならびに体重、全身の健康状態、性別、食餌、投与の時間、薬物相互作用、および疾患の重症度に合わせた調節が必要になりうるが、当業者は、それらを日常的な実験で確かめることができるであろう。例示ここに概説した発明は、以下の実施例を参照することにより、より容易に理解されるであろうが、これらは、本発明の一定の態様および実施形態を例証するために記載するに過ぎず、決して本発明の限定を意図するものではない。配列の要約本願において言及する配列の多くを以下の表2に要約する。別段の指定がある場合を除き、全てのN末端伸長部を一重下線で示し、全てのC末端テール伸長部を二重下線で示し、リンカー配列を四角い枠で囲む。各コアSABA配列についてはループ領域BC、DEおよびFGに影を付ける。[表2]例示的配列の要約[表3]一定の例示的核酸配列配列番号176~214および397~407A.血清アルブミン結合性Adnectin商標SABA実施例A1.候補血清アルブミン結合性Adnectin商標のスクリーニングと選択概略PROfusionと呼ばれる選択技法例えばRobertsおよびSzostakProcNatlAcadSciUSA94122973021997ならびにWO2008066752を参照されたいを、10Fn3のBC、DEおよびFGループにデザインされた可変領域を有するDNAライブラリーに応用した。1013を越える分子のランダムライブラリーをこのデザインから作り出し、ビオチン化型のHSAに対して選択圧をかけることで、所望の結合特性を有する候補血清アルブミン結合性Adnectin商標SABAを単離した。高スループットタンパク質生産HTTPプロセス高スループットタンパク質生産プロセスHTPPを使ってさまざまなHSA結合性Adnectins商標を精製した。選ばれた結合物質を、HIS6タグを含有するpET9dベクター中にクローニングし、大腸菌BL21pLysS細胞に形質転換した。形質転換された細胞を、50μgmLカナマイシンを含有するLB培地5mlに、24ウェルフォーマットで接種し、37°Cで終夜成長させた。終夜培養物から200μlを吸引し、それを適当なウェルに吐出することによって、誘導発現用に、新鮮な5mLLB培地50μgmLカナマイシン培養を調製した。培養をA60006~09まで37°Cで成長させた。1mMイソプロピルβチオガラクトシドIPTGによる誘導後に、培養を30°Cでさらに4時間成長させ、4°C、3220×gで10分間の遠心分離によって収穫した。細胞ペレットを-80°Cで凍結した。450μlの溶解バッファー50mMNaH2PO4、05MNaCl、1×Complete商標プロテアーゼインヒビターカクテルEDTAフリーRoche、1mMPMSF、10mMCHAPS、40mMイミダゾール、1mgmlリゾチーム、30μgmlDNAse、2μgmlアプロトニンaprotonin、pH80に再懸濁することによって細胞ペレット24ウェルフォーマットを溶解し、室温で1時間振とうした。96ウェルの650μlキャッチプレートに装着した96ウェルWhatmanGFDユニフィルターに移すことによって、溶解物を清澄化すると共に96ウェルフォーマットに装填し直し、200×gで5分間遠心分離した。清澄化した溶解物を、平衡化バッファー50mMNaH2PO4、05MNaCl、10mMCHAPS、40mMイミダゾール、pH80で平衡化させておいた96ウェルNiキレートプレートに移し、5分間インキュベートした。結合していない物質を除去した。樹脂を、03mlウェル×2の洗浄バッファー150mMNaH2PO4、05MNaCl、5mMCHAPS、40mMイミダゾール、pH80で洗浄した。次に、樹脂を03mlウェル×3のPBSで洗浄した。溶出に先だって、各ウェルを50μlの溶出バッファーPBS20mMEDTAで洗浄し、5分間インキュベートし、この洗浄液を減圧によって捨てた。さらに100μlの溶出バッファーを各ウェルに適用することによってタンパク質を溶出させた。室温で30分間のインキュベーション後に、プレートを200×gで5分間遠心分離し、溶出したタンパク質を、Niプレートの底に固定された5μlの05MMgCl2が入っている96ウェルキャッチプレートに集めた。溶出したタンパク質は、SGE対照Adnectin商標をタンパク質標準にして、BCAプロテインアッセイを使って定量した。SGEAdnectinは、インテグリン結合ドメイン位置78~80のアミノ酸RGDがSGEで置き換えられている野生型10Fn3ドメイン配列番号1である。HSA、RhSAおよびMuSA直接結合ELISAHSAへの直接結合物質をアッセイするために、Maxisorp商標プレートNuncInternational、ニューヨーク州ロチェスターを、4°Cにおいて、PBS中の10μgmLHSASigma、ミズーリ州セントルイスで、終夜コーティングした後、カゼインブロックバッファーThermoScientific、イリノイ州ロックフォード中、室温で1~3時間ブロッキングした。1点スクリーニングアッセイのために、精製HTPPAdnectin商標をカゼインブロックバッファーに1:20希釈し、室温で1時間、各ウェル中のHSAに結合させた。用量応答アッセイには、01nMから1μMまでの範囲にわたる濃度を使用した。未結合のAdnectin商標を除去するためにPBST中で洗浄した後、カゼインブロックバッファーに1:2500希釈した抗HismAbHRPコンジュゲートRDSystems、ミネソタ州を、結合しているHisタグ付きAdnectin商標に、室温で1時間加えた。PBSTで洗浄することによって過剰のコンジュゲートを除去し、TMB検出試薬BDBiosciencesを製造者の指示に従って使用することにより、結合しているAdnectin商標を検出した。分析用サイズ排除クロマトグラフィーによる凝集測定HTPPで得られたSABAに対してサイズ排除クロマトグラフィーSECを行った。HTPP由来物質のSECは、Superdex2005150またはSuperdex755150カラムGEHealthcareを使って、Agilent1100または1200HPLCシステムにより、A214nmおよびA280nmにおけるUV検出ならびに蛍光検出励起=280nm、蛍光=350nmで行った。100mM硫酸ナトリウム、100mMリン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH68のバッファーを、SECカラムに適した流速で使用した。分子量キャリブレーションにはゲル濾過標準BioRadLaboratories、カリフォルニア州ハーキュリーズを使用した。HTPP精製SABAに関するSECの結果は、主として単量体であること、および球状ゲル濾過標準BioRadとの対比で10kDaの概略範囲に溶出することを示した。5.候補血清アルブミン結合性Adnectin商標SABAの同定HSARhSAMuSA結合および生物物理学的基準に関するスクリーニングの結果として、マウスにおいてその半減期を評価するために、4つのユニークな血清アルブミン結合性Adnectin商標SABAが同定され、選択された。インビトロおよびインビボでの特徴づけを行うために、これらの4つのSABAについて中規模生産を行った。表2に、PROfusionによって同定された26のユニークなSABAコア配列SABA1~26と名付けたの配列を掲載する。SABA4は、中規模生産の前に固定されたスキャフォールド変異を有していた。SABA4のスキャフォールド完全版はSABA5である。SABA4とSABA5は、BC、DE、およびFGループでは同一の配列を有する。実施例A2.候補SABAの生産と製剤化SABAの中規模タンパク質生産実施例A1に記載の選ばれたSABAHis6タグが後続しているものをpET9dベクターにクローニングし、大腸菌BL21pLysS細胞で発現させたSABA11、SABA21、SABA31、およびSABA51と名付けられた各Hisタグ付きSABA配列については表2を参照されたい。20mlの種菌培養単一平板培養コロニーから生成させたものを使って、50μgmLカナマイシンを含有する1リットルのLB培地に接種した。培養をA60006~10まで37°Cで成長させた。1mMイソプロピルβチオガラクトシドIPTGによる誘導後に、培養を30°Cでさらに4時間成長させ、4°C、≧10000×gで30分間の遠心分離によって収穫した。細胞ペレットを-80°Cで凍結した。細胞ペレットを、25mLの溶解バッファー20mMNaH2PO4、05MNaCl、1×Complete商標プロテアーゼインヒビターカクテルEDTAフリーRoche、pH74に、氷上でUltraturraxホモジナイザーIKAworksを使って再懸濁した。細胞溶解は、モデルM110SマイクロフルイダイザーMicrofluidicsを使った高圧ホモジナイゼーション≧18000psiによって達成した。可溶性画分を、4°C、23300×gで30分間の遠心分離によって分離した。上清を045μmフィルターで清澄化した。清澄化した溶解物を、20mMNaH2PO4、05MNaCl、pH74で前平衡化したHisTrapカラムGEにローディングした。次にカラムを25カラム体積の20mMNaH2PO4、05MNaCl、pH74で洗浄した後、20カラム体積の20mMNaH2PO4、05MNaCl、25mMイミダゾール、pH74で洗浄し、次に35カラム体積の20mMNaH2PO4、05MNaCl、40mMイミダゾール、pH74で洗浄した。タンパク質を15カラム体積の20mMNaH2PO4、05MNaCl、500mMイミダゾール、pH74で溶出させ、A280における吸光度に基づいてフラクションをプールし、1×PBS、50mMトリス、150mMNaCl、pH85または50mMNaOAc;150mMNaCl;pH45に対して透析した。022μmで濾過することにより、沈殿物をすべて除去した。中規模での発現および精製により、可溶型で発現され、細菌細胞質ゾルの可溶性画分から精製された、高度に純粋で活性なAdnectin商標を得た。100mMNaPO4、100mMNaSO4、150mMNaCl、pH68の移動相におけるSuperdex200またはSuperdex751030GLでのSEC分析GEHealthcareにより、主として単量体型であるAdnectin商標が実証された。SABA12の製剤予備的製剤化スクリーンには、一つの具体的SABA、SABA12配列番号80を選んだ。SABA12は、10Fn3のコア1配列上に5伸長部を含んでいる。SABA12については、10mMコハク酸、8ソルビトール、5グリシン、pH60で、製品濃度5mgmLの安定な製剤が同定された。この製剤では、タンパク質融解温度は、125mgmLのタンパク質濃度を使った示差走査熱量測定DSCによる決定で、75°Cであった。この製剤は4°Cおよび25°Cで良好な物理的および化学的安定性をもたらし、初期凝集物レベルは12だった。1ヶ月間安定性を保った後も、凝集のレベルは極めて低かった4°Cで16、25°Cで38。タンパク質は、この製剤では、-80°Cおよび-20°Cから周囲温度まで推移する5サイクルの凍結融解後も安定であった。加えて、この製剤では、SABA12は、4°Cおよび周囲温度において、少なくとも20mgmLタンパク質濃度まで可溶であり、沈殿も凝集の増加も起こらなかった。実施例A3.候補SABAの生物物理学的特徴づけサイズ排除クロマトグラフィー中規模プロセスによって得られた候補SABAに対して標準的サイズ排除クロマトグラフィーSECを行った。中規模生産材料のSECは、Superdex2001030またはSuperdex751030カラムGEHealthcareを使って、Agilent1100または1200HPLCシステムにより、A214nmおよびA280nmにおけるUV検出ならびに蛍光検出励起=280nm、蛍光=350nmで行った。100mM硫酸ナトリウム、100mMリン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH68のバッファーを、SECカラムに適した流速で使用した。分子量キャリブレーションにはゲル濾過標準BioRadLaboratories、カリフォルニア州ハーキュリーズを使用した。中規模生産精製SABAでのSECの結果は、主として単量体型であるAdnectin商標と、球状ゲル濾過標準BioRadとの対比で10kDaの概略範囲における溶出とを示した。熱安定性中規模生産SABAの示差走査熱量測定DSC分析を行うことで、それぞれのTmを決定した。1mgml溶液を、NDSCII熱量計CalorimetrySciencesCorpにおいて、3気圧下で、温度を5°Cから95°Cまで毎分1度の速度で昇温させることによって走査した。データは、OrginSoftwareOrginLabCorpを使用し、ベストフィットを使って、適当なバッファーの対照ランと対比して分析した。SEC分析およびDSC分析の結果を表4に要約する。[表4]候補SABAに関するSEC分析およびDSC分析の要約実施例A4.血清アルブミンへの候補SABA1結合の特徴づけ各血清アルブミンHSARhSAMuSAをBiasensorCM5チップの表面に固定化し、参照セルと固定化したアルブミンの両方に一連の濃度のSABAを流すことにより、実施例A1およびA2で述べたHTPP材料および中規模生産材料から精製した選ばれたSABAクローンのキネティクスを決定した。加えて、アルブミンへの結合を、pH55からpH74までの範囲にあるさまざまなpH条件下で行った。HSA結合性Adnectin商標SABA21、SABA31、SABA41SABA51およびSABA11は、RhSAと交差反応したが、MuSAとは交差反応しなかった。SABA2およびSABA4の結合がpH感受性であるのに対し、クローンSABA3は、下はpH60まで、HSAに対してpH耐性の結合を示した。SABA11は、下はpH55まで、pH耐性およびアフィニティキネティクスの生化学的基準を満たす。Biacoreによってドメインマッピングを行った。HSA、またはHSAドメインIおよびIIだけもしくはHSAドメインIIIだけからなるコンストラクトをBiasensorCM5チップの表面に固定化し、参照フローセルと固定化したアルブミンとの両方に一連の濃度のSABAを流すことにより、HTPP材料およびまたは中規模生産材料から精製した選ばれたSABAクローンについて決定した。クローンSABA2およびSABA1はHSAおよびHSAドメインIIIコンストラクトに結合したが、HSAドメインIIIコンストラクトには結合しなかった。クローンSABA3およびSABA4はHSAには結合したが、HSAドメインIIIコンストラクトにもHSAドメインIIIコンストラクトにも結合しなかった。これらの結果を表5に要約する。[表5]候補SABASABA11、21、31および41の結合アフィニティおよびキネティクス実施例A5.候補SABAの生体内t12の調査HSA結合性Adnectin商標はMuSAと交差反応しないので、マウスにおいてHSA結合性Adnectin商標を評価することが可能になるように、マウスにおけるHSAの半減期を決定した。HSAを、約6週齢のNcrヌード雌マウスの尾静脈に、20mgkg図1Aおよび50mgkg図1Bの用量で注射し、注射後に間隔をおいて採取した血液試料中のHSAの濃度をELISAによって決定した。WinNonlinソフトウェアおよび非コンパートメントモデリングを使って、20mgkgおよび50mgkgの量でマウスに注射されたHSAのt12は、それぞれ約24時間および約20時間であると決定された。マウスにおけるSABA1~4の半減期決定HSA結合性クローンSABA11、SABA21、SABA31、およびSABA41の1リットル大腸菌培養物を調製し、精製し、エンドトキシンを除去した。各SABA変異体をHSAと共にまたはHSAを伴わずにマウスの尾静脈に注射し、注射後に間隔をおいて採取した血液試料中の濃度を、血漿試料中のAdnectin商標を検出するために開発された定量的ELISAベースアッセイを使って決定した。WinNonlinソフトウェアによる非コンパートメントモデリングを使って、各Adnectin商標の薬物動態パラメータを決定した。各SABAの薬物動態プロファイルを、約6週齢のNcrヌード雌マウスにおいて、HSAの存在下または非存在下で比較した。結合性クローンはHSAおよびRhSAに対して選択的であり、マウス血清アルブミンには結合しなかったので、HSAとの同時注射を行ったマウスには、各SABAと予め混合されたHSA3~4モル過剰のHSAを与えた。マウス血漿におけるSABA11の半減期が056時間であったのに対し、HSAと同時注射されたSABA11の半減期は56時間と、半減期が約10倍増加した図2A。マウス血漿におけるSABA21の半減期が024時間であったのに対し、HSAと同時注射されたSABA21の半減期は28時間と、半減期が約12倍増加した図2B。マウス血漿におけるSABA31の半減期が028時間であったのに対し、HSAと同時注射されたSABA31の半減期は053時間と、半減期が約2倍増加した図2C。マウス血漿におけるSABA41の半減期が066時間であったのに対し、HSAと同時注射されたSABA4の半減期は46時間と、半減期が約7倍増加した図2D。この実施例の要約を図3に示す。表6に、SABA11、SABA21、SABA31、SABA41およびSABA51について、類似するデータを要約する;利用できる場合はカニクイザルcynoにおける半減期と比較する。[表6]マウスおよびサルにおけるSABA11、SABA21、SABA31、SABA41およびSABA51に関するデータカニクイザルにおけるSABA11およびSABA51の半減期決定SABA11図4AおよびSABA51図4Bの3週間単回投与概念証明研究をカニクイザルで行うことで、2匹のカニクイザルにおいて1mgkgmpk用量でのIV投与時の薬物動態を評価した。薬物動態は、血漿試料中のAdnectin商標を検出するために開発された定量的ELISAベースアッセイを使って評価した。SABA11は、96~137時間の範囲にある半減期を有する図4Aおよび表7。SABA51は、約12時間の半減期を有し、ELISAでは120時間までしか測定できなかった図4Bおよび表8。SABA11に関するデータを表7に要約し、SABA51に関するデータを表8に要約する。[表7]SABA11に関するデータ[表8]SABA51に関するデータ実施例A6.血清アルブミンへのSABA1結合の特徴づけSABA11および12はHSAおよびRhSAに結合する5伸長部配列番号90を含むコア110Fn3であるSABA12は、中性pHおよび25°Cにおいて、821E03M1s1の平均会合速度定数kaおよび443E04s1の平均解離速度定数kdでヒト血清アルブミンHSAに結合し、平均KDの計算値は553nMになる表9。アカゲザル血清アルブミンRhSAの場合、測定された平均会合速度定数は66E03M1s1であり、解離速度定数は378E03s1であったことから、平均KDの計算値は580nMになった。SABA12とマウスまたはラット血清アルブミンの間の測定可能な相互作用は1μMまで観察されなかった表9および図5。37°Cではkaおよびkdが2~5倍増加して、HSAに対するアフィニティーが約2倍増加し、RhSAに対するアフィニティーが12になった表9。[表9]HBSPバッファーにおけるアルブミンへのSABA12結合に関する速度論的パラメータさらに、SABA1とHSAの間の化学量論を決定するために熱量滴定を行った。この研究には、His6伸長部を含むコア110Fn3であるSABA11配列番号89を使用した。濃度81μMのSABA11を含有している熱量測定用セルに、HSA注入1回につき10μlの115μMタンパク質溶液を注入した。実験は、pH74のPBSバッファー中、37°Cで行った。図6は、SABA11が1:1の化学量論でHSAに結合することを示している。SABA12は低いpHでHSAに強く結合するアルブミンの長い半減期例えばHSAのt12は19日であるは、エンドソームの内部に存在する低pH条件下でそれらが新生児型Fc受容体FcRnに結合することによってエンドサイトーシス経路からリサイクルされるという事実に、かなりの部分、起因している。表10に示すように、SABA12は55のエンドソームpHにおいてHSAに強く結合したことから、ひとたびHSAに結合すれば、SABA1のt12も、FcRnリサイクリング機構の恩恵を受けるであろうことが示唆される。[表10]MESバッファー中、pH74および55における、アルブミン結合キネティクスの比較SABA12はHSAのドメインIおよびIに結合するがドメインIIIには結合しないSABA12に対するアルブミン上の結合部位は、組換えHSAフラグメントを使って、N末端ドメインIまたはIIにマッピングされ、ドメインIIIへの検出可能な結合はなかった図7。ドメインIIIは主としてFcRnと相互作用するHSAのドメインであるから、SABA12が、FcRnへのHSA結合に関して競合する可能性は低く、ここでも、リサイクリング機構を活用して半減期を向上させる可能性が増加する。実施例A7.SABA12の生体内薬理SABA12の4週間単回投与前毒性研究をカニクイザルで行うことで、2つの異なる用量レベルにおける薬物動態を評価した。薬物動態およびバイオアベイラビリティも、静脈内投与アームと皮下投与アームの両方を包含する3週間単回投与前毒性研究において評価した。これらの研究のそれぞれでは、血漿試料中のSABA12を検出するために開発された定量的ELISAベースアッセイをWinNonlinソフトウェアによる非コンパートメントモデリングと組み合わせて使用することによって、SABA12の薬物動態を評価した。SABA12を1mpkおよび10mpkIVでサルに投与した。WinNonlinソフトウェアを使った非コンパートメント分析を行うことで、薬物動態パラメータを評価した。図20および後述のパラメータに示すように、濃度時間曲線下面積areaundertheconcentrationtimecurve:AUC評価によって決定したところ、この研究において、SABA12は、用量依存的薬物動態を示した。10mpkのSABA12については、クリアランスCLが015ml時間kg、β相半減期t12は143時間、分布容積Vzは30mLkg、そして総薬物曝露量AUCallは5609457時間nmolLであった表11。1mpkのSABA12については、クリアランスCLが04ml時間kg、半減期t12が124時間、分布容積Vzが72mLkg、そして総薬物曝露量AUCallが214636時間nmolLであった表11。SABA12のSCまたはIV投与後はβ相薬物動態プロファイルが類似していた図9。1mpkIVのSABA12については、クリアランスCLが022ml時間kg、β相半減期t12が125時間、分布容積Vzが40mLkg、そして総薬物曝露量AUCallが時間nmolLだった表11。1mpkSCのSABA12については、クリアランスCLが032ml時間kg、β相半減期t12が134時間、分布容積Vzが62mLkg、そして総薬物曝露量AUCallが251339時間nmolLであった表11。IVと比較したSCの相対的バイオアベイラビリティFは07だった。[表11]サルにおけるSABA12に関する薬物動態パラメータ実施例A8.SABA12との複合体におけるヒト血清アルブミンの構造ヒト血清アルブミンとSABA12との複合体は、ProterosBiostructuresGmbHによって、100mM酢酸Na、pH475、100mMNaCl、および28PEG200から結晶化された。FreeMountingSystemFMSを使って結晶からの回折を最適化し、オイル下でフラッシュ冷却した。データは、ProterosBiostructuresGmbHにより、SwissLightSourceビームラインPXIX06SAにおいて、100Kに維持された結晶を使って収集された。波長は10015Åであり、検出器はPilatus6MDectrisだった。データをXDSおよびXSCALEWKabschXDSActaCrystallogrSectD66125132;WKabschIntegrationscalingspacegroupassignmentandpostrefinementActaCrystallogrSectD66133144で処理し、以下の統計量を得た:空間群:P212121;単位格子:a=61.6Å;b=124.1Å;c=100.0Å。[表12]結晶データの要約分子置換のためのプログラムMOLREPVaginAおよびTeplyakovAMOLREPanAutomatedProgramforMolecularReplacementJAppCrystallogr3010221025と、検索モデルとしてPDBエントリー1BM0とを使用して、ヒト血清アルブミンの構造を決定した。Adnectin部分の構造は、PDBエントリー1FNF残基1423~1502に基づく検索モデルから、分子置換プログラムPHASERAJMcCoyRWGrosseKunstlevePDAdamsMDWinnLCStoroniおよびRJReadPhaserCrystallographicSoftwareJApplCrystallogr40658674を使って決定した。モデルの精密化は、BUSTERTNTBlancERoversiPVonrheinCFlensburgCLeaSMおよびBricogneGRefinementofseverelyincompletestructureswithmaximumlikelihoodinBUSTERTNTActaCrystallogrSectD6022102221を使って行い、モデル構築はCOOTEmsleyPおよびCowtanKCootmodelbuildingtoolsformoleculargraphicsActaCrystallogrSectD6021262132;EmsleyPLokhampBScottWGおよびCowtanKFeaturesandDevelopmentofCootActaCrystallogrSectD66486501で行った。表示用の図は、PyMolDeLanoWLThePyMolMoleculargraphicsSystemDeLanoScientific、米国カリフォルニア州サンカルロス;ワールドワイドウェブのpymolorgにおいて入手可能で作成した。精密化の最終ラウンドによって表13に示す統計量が得られた。[表13]精密化の最終ラウンドから得られた統計量構造の説明SABA12に対する結合部位は、厳密に、ヒト血清アルブミンHuSAのドメイン1上にある図17AおよびB。次に挙げるHuSAの残基がAdnectinと接触していたシグナルおよびプロペプチド領域を欠く成熟HuSA配列に基づくナンバリング:Pro35、Phe36、Glu37、Pro113、Arg114、Leu115、Arg117、Pro118、Glu119、Val122、Met123、Phe134、Lys137、Tyr140、Glu141、Arg144、Arg145、およびTyr161SheriffSHendricksonWAおよびSmithJLStructureofMyohemerythrinintheAzidometStateat1.7/1.3ÅResolutionJMolBiol197273296;SheriffSSomemethodsforexaminingtheinteractionsbetweentwomoleculesImmunomethods3191196。より広義の相互作用残基は、少なくとも部分的に埋没しているものであり、これには、接触している残基として上に列挙したものに加えて、次に挙げる残基が包含される:Asp38、Thr125、Ala126、Asp129、Thr133、Tyr138、およびLeu182。AdnectinはBC、DE、およびFGループを介して相互作用し、次に挙げる残基がHuSAと接触している:SABA12、例えば配列番号90のHis25、Ser26、Tyr27、Glu29、Gln30、Asn31、Pro53、Tyr54、Ser55、Thr57、Tyr78、Tyr83、およびTyr84。先に列挙した残基に加えて、次に挙げる残基も、相互作用によって少なくとも部分的には埋没している:SABA12、例えば配列番号90のTrp24、Ser32、Tyr33、Gln56、Gly79、およびLys81。実施例A9.第I相SABA安全性試験の計画健常男性ボランティアにおいて、静脈内投与されたSABA12の第1相部分盲検プラセボ対照薬物動態試験が行われる。ボランティアは、処方せん薬または一般用医薬品による処置を現在受けていない、プロトコールに定められた健康状態および臓器機能に関する制限に合致する、18~60歳の健常成人男性被験者とする。SABA12は、ヒト血清アルブミンHSAに対する結合アフィニティを有する非治療用Adnectinである。これは、そのままでは迅速に排除されるであろう別個の治療用Adnectinまたは他のタンパク質と共に単一のポリペプチド鎖に組み込まれた時に、血清中半減期THALFを延長させるためのアルブミン結合物質として役立つことを意図したものである。被験者のコホートは、01、03、または10mgkgのSABA12またはプラセボで、2週間に1回、合計2回の投薬で処置される。試験計画.ボランティア被験者にはSABA12またはプラセボのどちらか一方がランダムに与えられ、それぞれのランダム化された処置の投与が、14日の間隔を空けて2回、それぞれに1時間の注入として施行され、その後、2週間の試料収集および観察期間が設けられる。また、2回目の観察期間後、被験者はさらに4週間にわたって、安全性に関して追跡される。処置SABA12またはプラセボは1日目および15日目に施行される。SABA12の用量レベルを漸増させて、3つの逐次的コホートがリクルートされる。個々の用量コホートはさらに、部分盲検的被験者および治験スタッフは輸液剤の実体について盲検化され、薬剤師は盲検化されないにSABA12またはプラセボに逐次的に曝露される3つのサブグループに分割される図18参照。各コホートの第1サブグループは、リスクを最小限に抑えるために、活性薬処置被験者を1人だけ含む。コホート1の全ての被験者がそれぞれの29日目の来院を完了し、PK所見が評価された後最大4週間と予想されるに、所定の最大無毒性量noobservedadverseeventlevel:NOAELを上回る基準がコホート1では認められなかったと仮定して下記参照、コホート2が試験を開始する。同様に、NOAELを上回らなかったと仮定して、コホート2の完了とPK評価までは、コホート3を開始しない。NOAELは、a2人以上の積極的処置非プラセボ被験者が何らかのグレード2国立癌研究所NationalCancerInstitute:NCI;米国有害事象共通用語基準CommonTerminologyCriteriaforAdverseEvents:CTCAEv403SABA12関連毒性を経験するか、b少なくとも1人の積極的処置被験者が、何らかのグレード≧3SABA12関連毒性を経験する最低用量レベルよりも、1レベル低い用量レベルと定義される。これらの基準のどちらも満たさない場合は、完了した最も高い用量レベルをNOAELとする。コホート2または3においてNOAEL基準を上回った場合は、その次に低いコホートがNOAELと宣言され、残りの被験者は全員がNOAELで処置され、この試験では合計37人SABA12を投与される28人とプラセボを投与される9人が処置されることになる。これは、薬物動態PKおよび免疫原性評価を裏付けるために要求される統計精度を維持するため、および安全性観察を受ける被験者の数を十分な数に維持するためである。コホート1の用量レベルがNOAELを越えることが分かった場合は、さらなる被験者への投与は行わず、試験は終了されることになる。試験評価および主要評価項目.試験の主要評価項目はPKであり、全ての用量にわたる平均THAL、最高血漿中濃度Cmax、全身クリアランスCL、投薬から投薬間隔終了時点までの濃度時間曲線下面積AUCtlast、および定常状態における分布容積VSSが包含されるであろう。PK分析用の連続試料は、試験1日目および15日目の各注入の開始前と、開始後05注入中、1注入終了時、15、2、3、5、7、24、48、72、96または120、および168時間の時点で収集される。加えて、SABA12血漿中濃度のための単一ランダム試料を29日目15日目の投与の336時間後の標本、36日目、43日目、50日目、および57日目に収集する。安全性評価には、バイタルサイン、理学的検査、心電図、臨床検査室評価、および有害事象が包含される。加えて、抗薬物抗体ADA、自己免疫の血清指標抗核抗体[ANA]、C3、およびC4の測定、および臨床観察例えば発疹、輸液反応、筋痛または関節痛などによって、免疫原性が評価される。観察された何らかの免疫原性の機序を理解するための試みとして、HLAタイピングおよびT細胞刺激アッセイが行われるであろう。統計的方法.被験者が25人の場合、133159時間以上のTHALF観測値については、片側95信頼区間CIの下限が120時間に及ぶことはないであろう。25人の積極的処置完了者を得るために、積極的処置被験者が合計28人になるように、1用量コホートあたり1人の追加被験者を含める。血漿PKパラメータについて、用量別に、および用量間で、要約統計量を製表する。PKパラメータは、時間に対するSABA12血漿中濃度から、非コンパートメント法を使って導き出される。正当な理由があるなら、消長をさらに理解するために、コンパートメントアプローチを使用してもよい。平均THALFは95CIによって推定される。Cmax、AUCtlast、R、およびCLについては幾何平均およびCVが報告され、Tmaxについては中央値最小、最大が報告され、他のパラメータについては平均および標準偏差が報告される。SABA12の用量比例性が評価される。線形混合効果モデリングを使って対数変換AUCおよびCmaxが対数変換用量にフィッティングされる。関係の傾きに関して対称漸近95CIが構築される。95CIが10の値を包含するのであれば、用量比例性が結論されることになる。逆に、95CIが10の値を包含しないのであれば、非比例性が結論されることになる。安全性結果は、用量レベル別に、および包括的に、記述的に要約されるであろう。開始用量の理論的根拠.週に2回、5回にわたって投与した場合、カニクイザルにおけるNOELNoobservedeffectivelevel:無作用量は、30mgkgIVである。体表面積から見た用量によれば、このヒト臨床治験におけるSABA12の開始用量01mgkgは、サルにおけるNOELより低く、100倍の安全係数に相当し、この試験における最も高い計画用量1mgkgは10倍の安全係数に相当する。予測されるヒトCmaxおよびAUCによれば、この臨床試験における開始用量は、サルNOELにおける15日目のサルCmaxおよびAUCに対して、それぞれ約600倍および200倍の安全係数に相当し、一方、この試験における最も高い計画用量によれば、予測されるヒトCmaxおよびAUCは、15日目のサルパラメータに対して、それぞれおよそ50倍および20倍の安全係数に相当する。このように、この試験における用量レベルについては、十分な安全係数が考慮されている。B.FGF21SAB融合物分子実施例B1.FGF21SABA融合分子の調製概略本明細書において開示するFGF21SABADNA配列は全て、市販の発現ベクターpET29bEMDBiosciences、米国カリフォルニア州サンディエゴに入れた。リボソーム結合部位のすぐ下流にあるプラスミドベクターのNDEI制限エンドヌクレアーゼ部位とXHOI制限エンドヌクレアーゼ部位の間に、配列を適切に配置した図10。それらの発現ベクターを宿主株BL21EMDBioscinecesに形質転換したところ、封入体としてさまざまなレベルに発現した。あるいは、それらを大腸菌株の酸化性株、例えばOrigami商標EMDBiosciencesに形質転換することもできる。後者の宿主株は、チオレドキシンレダクターゼtrxB遺伝子とグルタチオンレダクターゼgor遺伝子の両方に変異を含有し、これらの変異は大腸菌細胞質におけるジスルフィド結合の形成を著しく強化する。適切な配慮を払って、さまざまなFGF21SABA融合物、例えば表2に記載するものを発現させた。精製したプラスミドDNA発現ベクターを、当業者に広く知られている標準的形質転換法により、上記の大腸菌に組み込んだ、すなわち形質転換した。簡単に述べると、市販のコンピテント細胞EMDBiosciencesを氷上で融解し、細胞が均等に懸濁されていることを保証するために、静かに混合した。これらの細胞を、氷上で予冷しておいた15mlポリプロピレン製微量遠心チューブに、20μlずつピペッティングした。約1μlの精製プラスミドDNA1~10ngμlプラスミドを細胞に直接加え、混合するために静かに振とうした。チューブを氷上に5分間保った後、正確に30秒間、42°Cの水浴で加熱した。加熱したチューブを直ちに氷上に置き、2分間休ませた。80μlの室温SOCまたはLB培地を各チューブに加えた。形質転換体の選択は、pET29bプラスミドがコードする薬物耐性用に、カナマイシンを含有する培地で平板培養することによって達成した。形質転換された細胞の終夜スターター培養を成長させることにより、Origami2細胞株における可溶性FGF21SABA融合ポリペプチドの発現を開始した。細胞を、それぞれ1リットルのLB培地ルリアブロスが入っている2リットル振とうフラスコの接種に使用し、250~300RPMで激しく振とうしながら、OD600nmが06~08に達するまで、37°Cで成長させた。この時点で、T7RNAポリメラーゼ誘導を開始するために01mMIPTGイソプロピルβD1チオガラクトピラノシドを加え、振とうインキュベータの温度を18°Cに低下させた。発酵を12~16時間継続し、遠心分離によって細胞を収穫し、圧縮湿細胞ペーストとして-80°Cで凍結した。BL21細胞株における封入体IBとしてのFGF21SABA融合ポリペプチドの発現も、形質転換された細胞の終夜スターター培養を成長させることから開始した。細胞を、それぞれ1リットルのOvernightExpress商標培地EMDBiosciences、およびNatureMethods22332352005が入っている2リットル振とうフラスコの接種に使用した。封入体形成のためには、発酵温度を低下させる必要がなく、その代わりに細胞を37°Cで12~16時間成長させてから、遠心分離によって収穫した。収穫された細胞は、圧縮湿細胞ペーストとして-80°Cで凍結した。記載したFGF21SABA変異体の精製は、使用したその配列変異体と、タンパク質をOrigami細胞株において細胞質ゾル可溶型として発現させるかどうか、またはBL21細胞株において封入体として発現させるかどうかとに依存して、さまざまである。方法は、配列が精製を助けるための6×ヒスチジンタグを含有するかどうかにも依存する。しかし一般に、精製法には、当業者にはよく知られる共通の技法が含まれる。以下は、精製法の詳細な説明である。細胞溶解および封入体IBペレットの調製細胞を、圧縮細胞ペースト1部に対してバッファー8~10部の希釈度で、溶解バッファーに懸濁した。AvestinC5ホモジナイザーAvestinInc、カナダオンタリオ州オタワを使って、2000PSIで2回通すことにより、細胞を機械的に溶解した。溶解後に、溶解物を遠沈した4000RPMで20~30分間。可溶性画分は捨てる。細胞片を除去するために封入体ペレットを05TritonX100で洗浄し、その懸濁液を再び遠心分離した。このプロセスを、ペレットが均一な白色に見えるまで典型的には2回または3回繰り返した。次に、その結果得られた濃縮IB調製体ペレットをPBSバッファーで洗浄することで、過剰の界面活性剤を除去した。封入体の可溶化次に、洗浄し界面活性剤を枯渇させたIBペレットを、50mMトリスHClpH80と500mMNaClで緩衝化した6MグアニジンHClに可溶化した。この方法で調製した材料の大半は、自由に溶液相に入るが、少量の細胞片が残るので、SS34ローター中、16000RPMで1時間の遠心分離によって、これを除去した。リフォールディングおよび酸化ステップのために、上清をとっておいた。あるいは、この段階で、金属キレーションクロマトグラフィーステップIMACを使って、6×Hisタグを含有するタンパク質融合物変異体を捕捉して、さらに精製することができる。カオトロープで変性させた材料をカラムに結合させ、夾雑物を洗浄してから、イミダゾールを補足した変性バッファーの存在下で溶出させることができる。リフォールディングと酸化グアニジンHClで可溶化した材料を約1mgmLタンパク質280nMの吸光度で推定に希釈し、35MWCO透析チューブに入れた。次に、透析デバイス中の試料を、4Lのリフォールドバッファー50mMトリス、150mMNaCl、1mMEDTA、pH90に、4°Cで終夜、静かに撹拌しながら浮かせた。透析リフォールドバッファーは、翌朝に、新鮮なリフォールドバッファーと交換する。このプロセスの間に、融合タンパク質のFGF21ドメイン中のジスルフィド橋が、容易に空気酸化される。この簡便な透析法は便利であり、必要であればいくつかの試料を一度に処理することができる。あるいは、グアニジンHClの代わりに尿素中でタンパク質を変性させることもできる。あるいは、高いカオトロピック塩濃度から低い塩濃度への分子の急速希釈を使って、リフォールディングと酸化を行うこともできる。あるいは、空気酸化の代わりに、還元型および酸化型グルタチオンGSHGSSGの所定の酸化還元混合物を使って、系をリフォールディングさせることもできる。あるいは、上述のように透析または急速希釈によって自由拡散相でこれらのタンパク質をリフォールディングさせる代わりに、クロマトグラフィー樹脂に結合している間に、これらをリフォールディングさせてもよい。バルク凝集と収量損失につながりうるリフォールディング相中のタンパク質相互作用が最小限に抑えられるので、この方法には利点があり、収率が改善されることが多い。沈殿剤precipitantの除去これらの条件下でのリフォールドおよび酸化ステップの終わりに、タンパク質の全てが可溶性のままであるわけではない。分子の一部は、凝集した状態で存在し、沈殿物precpitatantとして溶液から容易に降下する。これを、SS34ローターで1時間、16000RPMで遠心分離することによって除去した。そして、典型的には、クロマトグラフィーに先だって、これを02μmシリンジフィルターで濾過する。クロマトグラフィー分離DNAおよび他の夾雑物を除去するために、リフォールディングされたFGF21SABA融合物を、ResourceQまたは類似のイオン交換媒体系GEHealthcare、ニュージャージー州ピスカタウェイを使って精製することができる。40mLResourceQカラムをリフォールドバッファー150mMNaCl、1mMEDTAを含む50mMトリス、pH90中で平衡化し、清澄化したリフォールディングされた材料を、そのカラムに通す。これらの条件下で、FGF21SABA変異体の大部分は、結合せずに樹脂ベッドを通過する。洗浄された封入体からのDNAおよび他の細胞片は、カラム樹脂上に保持される。あるいは、6×Hisタグを含有するフォールディングされたタンパク質融合物変異体を、この時点で、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーIMACステップを使って捕捉し、イミダゾールまたはヒスチジンの勾配で溶出させることもできる。濃縮次に、第1クロマトグラフィーステップで富化されたタンパク質試料を、Pellicon登録商標XLデバイスおよびLabscale商標タンジェンシャルフロー濾過TFFシステムMilliporeInc、マサチューセッツ州ビルリカを使って、約4mgmLまで濃縮した。サイズ排除クロマトグラフィー次に、PBSバッファーpH72中で前平衡化した2660SephacrylS100または2660Superdex75サイズ排除カラムGEHealthcare、米国ニュージャージー州ピスカタウェイを使って、FGF21SABA融合物の約4mgmL試料をさらに精製した。単量体型タンパク質融合物に対応する試料をプールし、必要であれば試料を1~2mgmlに希釈してから、-80°Cで凍結した。この方法を使って、封入体を生産した元の自己誘導培地100mLにつき、20mgまでのFGF21SABA融合物を精製することができる。実施例B2.血清アルブミンへのFGF21SABA融合物結合の特徴づけMicrocalVPITC機器MicrocalInc、米国マサチューセッツ州アマーストでの等温滴定熱量測定を使って、ヒト血清アルブミンへのFGF21SABA融合物変異体の結合能力および熱力学的特徴づけを行った。さらに、ヒト血清アルブミンHSA、SigmaA3782、米国ミズーリ州セントルイス、カニクイザル血清アルブミンCySA、EquitechBioCMSA、米国テキサス州カーヴィル、およびマウス血清アルブミンMuSA、SigmaA3559へのFGF21SABA1融合物変異体の結合能力および速度論的特徴づけを、BiacoreT100機器GEHealthcareInc、ニュージャージー州ピスカタウェイで行った。詳細な実験条件を以下に述べる。熱量測定アッセイには、FGF21SABA変異体SABA1FGF21v1配列番号132を使用した。37°Cにおける代表的滴定曲線を図11に示す。KDは38nMと計算された。SPR研究では、SABA1FGF21v1およびSABA1FGF21v3配列番号134を調べた。ヒト由来HSA、カニクイザル由来CySAおよびマウス由来MuSAの血清アルブミンへの1000、500、250、125、および625nM融合物の結合に関するSPRセンサーグラムデータを、図12に示す。HSA、CySA、およびMuSAへのこれらの融合物の結合に関する速度論的データを、表14に要約する。[表14]HSA、CySA、およびMuSAへのSABA1FGF21v1およびSABA1FGF21v3の結合に関するSPR速度論的データ詳細なプロトコール等温滴定熱量測定実験のための適正な溶媒マッチングを保証するために、精製SABA1FGF21融合タンパク質および市販のヒト血清アルブミンHSA、SigmaA3782、米国ミズーリ州セントルイスを、別々の3500MW透析バッグで、PBSバッファー10mMリン酸ナトリウム、130mM塩化ナトリウム、pH71に対して透析した。SABAFGF21融合タンパク質バッファーを、04~10mgmLタンパク質の濃度範囲で、機器試料セルに入れた。整合するバッファーを参照セルに入れた。純粋なタンパク質のタンパク質配列から算出された吸光係数を使って、濃度を決定した。機器反応セルを37°Cで平衡化した。反応セルへの各10μlの反復注入を注入シリンジから行い、HSA1モルあたりの過剰の熱を監視した。得られたデータセットからベースラインを差し引き、セルに注入したHSAの希釈熱について補正した。その結果得られたサーモグラムデータを、Origin商標評価ソフトウェアパッケージMicrocalIncバージョン202を使ってフィッティングすることで、タンパク質タンパク質結合反応の化学量論、エンタルピー、および平衡解離定数KDを推定した。表面プラズモン共鳴血清アルブミンをPBSバッファー10mMリン酸ナトリウム、130mM塩化ナトリウム、pH71に10mgmlの濃度で溶解してから、固定化のために10mM酢酸ナトリウムpH50に8~10μgmlまで希釈した。HBランニングバッファー中、25°Cで、標準的エチルカルボジイミドEDCNヒドロキシスクシンイミドNHSケミストリーを使用し、製造者の一般的指針に従って、血清アルブミンを、SeriesSCM5センサーチップ上に固定化した。フローセル1はEDCNHSで活性化し、エタノールアミンでブロッキングした。フローセル2、3および4は、それぞれEDCNHSで活性化した後、8~10μgml血清アルブミンの固定化を行い、エタノールアミンでブロッキングすることで、700RUHSAフローセル2、1100RUCySAフローセル3、および1050RUMuSAフローセル4の表面密度を得た。速度論的実験は、005Tween20を含有するPBSバッファーランニングバッファー中、25°Cまたは37°Cで行った。PBSpH72中のSABA1FGF21v3153μMまたはSABA1FGF21v1406μMの原液をPBSランニングバッファーで1μMまで希釈してから、段階希釈2:1を行うことで、各タンパク質について10μM、05μM、025μM、0125μM、0063μMの濃度系列を作成した。物質輸送限界をチェックするために、これらの試料を、フローセル1~4を横切るように、30μl分または60μl分の流速で300秒間注入し、解離時間を420秒とした。全ての表面を、30μl分で30秒間の10mMグリシンpH20のパルス2回で再生させた。フローセル1データをフローセル2、3または4のデータから差し引いた後、別個のバッファーサイクルを各センサーグラムから差し引くことにより、生センサーグラムを二重準拠doublereferencedにした。この二重準拠センサーグラムデータを、BiacoreT100評価ソフトウェアバージョン202を使って1:1ラングミュアモデルにフィッティングすることで、会合速度定数ka、解離速度定数kd、および平衡解離定数KDを決定した。実施例B3.HEKβクロトー細胞におけるSABA1FGF21融合物のインビトロ活性FGF21はβクロトーの存在下でERKリン酸化を誘導する。そこで、FGF21SABA融合物の機能的活性をインビトロで調べるために、本HEKβクロトーアッセイ系を構築した。具体的に述べると、非融合Hisタグ付きFGF21FGFv1;配列番号125をコンパレーターとして使用して、HEKβクロトー発現安定細胞pERK12アッセイで測定されるインビトロ活性、力価potencyEC50および効力efficacySABAに融合されていないFGF21分子で観察される最大活性に対するパーセンテージとしてを、SABA1FGF21v1配列番号132融合タンパク質について決定した。図13に示すように、SABA1FGF21v1は、ヒトβクロトーを安定に発現するHEK細胞におけるpERK12レベルを、用量依存的に刺激する。力価EC50は、Hisタグ付きFGF21と比較して約15倍右方シフトし、効力はHisタグ付きFGF21の62である下記表15参照。したがってSABA1FGF21v1は、ヒト血清アルブミンに結合している時でも、FGF21活性を保っている。[表15]対照FGF21と比べたSABAFGF21融合物の力価HEKβクロトー発現安定細胞pERK12アッセイにおいて測定される化合物の力価EC50および効力His6タグ付きFGF21最大活性に対する。N≧4の独立したアッセイから平均±標準偏差として与えられる複数の実験から集計されたデータ。βクロトーを内在的に発現しない親HEK細胞における特異性アッセイでは、Hisタグ付きFGF21とSABA1FGF21v1はどちらもpERK12レベルを刺激しなかったが、陽性対照FGF1は刺激した図14A。タンパク質希釈液は同じだが標準アッセイHEKβクロトー安定細胞を使用する並行実験では、3つ全てのタンパク質が活性を示した図14B。したがってSABA1FGF21v1は、アルブミンに結合している時でも、FGF21の特異性を保っている。この細胞ベースアッセイでは、pERKリン酸化経路を活性化するのに必要な薬物の濃度を、まず最初に決定する必要があった。この目的のために、細胞培地中、HSAの存在下および非存在下で、細胞に融合タンパク質を滴定した。HSAを加える場合には、血流中に見いだされる生理的濃度30~40mgmL、約500μMのHSAで加えた。この濃度は、全てのFGF21SABA融合タンパク質を飽和させるのに必要な濃度より数千倍高い。FGF21SABAHSA溶液結合定数は約4nMである図11参照。HSAの存在とは関わりなくアッセイ中のタンパク質融合物の活性に変化はなかったことから、融合タンパク質がHSAと複合体を形成している時もFGF21ドメインの活性は変化しないことが示された。以下は実験方法の詳細な説明である。HEKβクロトー安定細胞株の構築ヒトβクロトーを安定に発現するHEK細胞株を構築した。ヒトβクロトーコンストラクトは、CMVプロモーターの制御下にあって、C末端FLAGタグを伴う、完全長タンパク質をコードしていた。Lipofectamine2000Invitrogenカタログ番号11668027を製造者のプロトコールに従って使用し、標準的技法を使って、HEK293細胞を、線状化したcDNAでトランスフェクトした。Lグルタミン、Hepesを含有する高グルコースのダルベッコ変法イーグル培地Invitrogenカタログ番号12430054および10FBSHyCloneカタログ番号SH30071中、600μgmlのジェネティシンInvitrogenカタログ番号10131における14日間の選択後に、陽性クローンが単離された。陽性安定クローンを、ウェスタンブロット分析およびAlphaScreenPerkinElmerカタログ番号TGRES50K分析によるpERK活性化によって、さらに特徴づけた。HEKβクロトーpERK12アッセイヒトβクロトーを安定に発現するHEK細胞を、96ウェル組織培養プレートにおいて、10vvFBSHycloneおよび600μgmlG418Gibcoを含有するDMEM高グルコース培地Gibco中、20000細胞ウェルの密度でプレーティングした。翌日、培地を除去し、血清を含まないDMEM高グルコース培地で置き換え、細胞を終夜インキュベートした。3日目の朝、無血清培地を除去し、細胞を、3wv脂肪酸フリーヒト血清アルブミンを含有するPBS中に作成したタンパク質の希釈液と共に、合計7分間インキュベートした。希釈液は、三つ一組にして、3つのプレートのそれぞれで1ウェルずつ試験した。7分間のインキュベーションの終了時に、タンパク質希釈液を除去し、1ウェルにつき100μlの1×AlphaScreen溶解バッファーPerkinElmerを加え、振とうしながら約10~15分間インキュベートした。細胞溶解物が入っているプレートを、80°Cで、少なくとも30分間またはアッセイの準備ができるまで凍結した。融解した細胞溶解物の各ウェルからの4μlを、384ウェル白色ProxiplatePerkinElmerを使用し、SurefireAlphaScreenpERK12キットPerkinElmerを製造者の指示に従って使用することにより、pERK12について分析した。プレートを暗所、室温で、2時間インキュベートしてから、Envision2103マルチプレートリーダーPerkinElmerで読み取った。GraphPadPrismソフトウェアを使用し、非線形回帰分析を使って、データを分析した。選択性アッセイは、βクロトーを内在的に発現しない親HEK細胞化を使って、上記のように行った。これらの実験ではFGF1を陽性対照として使用した。実施例B4.3T3L1脂肪細胞におけるSABA1FGF21v1のインビトロ活性3T3L1細胞ATCC番号CL173は、マウス脂肪細胞に分化することができるマウス線維芽細胞である。βクロトーは分化した3T3L1細胞でしか発現しないので、実施例B3で述べたβクロトーpERK12アッセイを行う前に、それらをまず分化させる必要があった。HEK系におけるその活性と同様に、SABA1FGF21v1は、3T3L1脂肪細胞でもERKをリン酸化する能力を保持しており、この活性はHisタグ付きFGF21に匹敵する。結果を表16に示す。[表16]3T3L1脂肪細胞においてSABA1FGF21v1活性はHisタグ付きFGF21に匹敵する以下は実験方法の詳細な説明である。3T3L1脂肪細胞の分化細胞を、10高品質characterizedウシ胎児血清HycloneSH3007103および1×抗生物質抗真菌剤Gibco15240096を補足したDMEM培地Invitrogen12430054中で成長させた。細胞は、37°Cのインキュベーター中、5CO2で培養した。トリプシンEDTA溶液の代わりにTrypLEExpressGibco12605を使用した点以外は、ATCCの製品情報シートに記載されている継代培養の手法に従った。分化の約68時間前に、1ウェルあたり培地150μl中5500個の細胞を96ウェルプレートFalcon353072に播種した。細胞数は播種の時間とそれらの倍加時間に応じて調節できるであろうが、分化手法を開始した時点で細胞は100コンフルエントであった。分化を開始させるために、細胞上清を注意深く吸引し、200μlの新鮮な分化培地IIBMX500μM、デキサメタゾン100nM、インスリン240nMを含有する成長培地;全てSigma製を各細胞ウェルに加えた。次に、細胞を41~48時間インキュベートしてから、細胞上清を注意深く吸引し、200μlの分化培地II240nMのインスリンを含有する成長培地を各細胞ウェルに加えた。細胞を再び48時間インキュベートした後、細胞上清を注意深く吸引し、200μlの通常成長培地を各ウェルに加えた。次に、細胞をさらに48~72時間インキュベートした。この時点で、細胞は脂肪細胞へと十分に分化しているだろう。3T3L1脂肪細胞におけるpERKアッセイの確立分化の9日目から10日目に、成長培地を細胞から吸引除去し、細胞を、2ウシ胎児血清を含む200μlのDMEMInvitrogen12320032で飢餓処理した。翌日、プレート中の96ウェル全てへの同時添加が保証されるようにTomtecQuadraを使って、飢餓細胞を、試験剤FGF21またはその変異体の一つまたは対照としてのPBSを含有する100μlのDMEM01脂肪酸フリーBSASigmaA6003で処理した。次に、プレートを、95空気5CO2の37°Cインキュベーター中で、7分間インキュベートした。7分後に、処置培地を細胞から除去し、100μlの溶解バッファーを各ウェルに加えた。溶解バッファー原液は、05mMDTTSigma、D9779、5mMピロリン酸ナトリウムSigma、S6422、1mMオルトバナジウム酸ナトリウムSigmaS6508およびRocheのプロテアーゼインヒビタータブレット04693159001を補足したPerkinElmerのAlphaScreenSureFirepERK12アッセイキットカタログ番号TGRES10Kであった。検出プロトコールはアッセイキットに基づいた。すなわち、溶解バッファーを含むプレートをプレート振とう器上で約15分間撹拌し、-80°Cで30分間凍結した。プレートを室温で融解し約40分、完全な溶解を保証するために融解物をピペットで20回上下させることにより撹拌した。次に、各ウェルから4μlの溶解物を384ウェルプレートに移し、7μlの反応ミックスキットのプロトコールに従って混合した活性化バッファーならびにIgG検出ドナーおよびアクセプタービーズ[PerkinElmer6760617M]を各ウェルに加えた。プレートを封止し、1~2分間撹拌した後、遮光エリアにおいて22°Cで2時間インキュベートした。最後に、PerkinElmerEnvision2103MultilabelReaderで、標準的AlphaScreening設定を使って、プレートを読み取った。実施例B5.糖尿病obobマウスにおけるSABA1FGF21v1の生体内効力FGF21は、3T3L1脂肪細胞および初代ヒト脂肪細胞培養におけるグルコース取り込みを増加させることが示されている。したがって、糖尿病obobマウスにおける血漿中グルコースレベルを監視することは、FGF21SABA融合タンパク質の機能的活性の評価を可能にする一方法になる。8週齢から始めて、7日間にわたって、糖尿病obobマウスに毎日、皮下投与を行った1群あたりn=8。プロトコールは全てBMSACUC委員会によって承認された。午前800から始まる7日目の投与の24時間後と3時間後の両方で、摂食時グルコースレベルを調べた。Hisタグ付きFGF21およびSABA1FGF21v1はPBS中に製剤化し、それぞれ03mgkgおよび10mgkgの用量で投与した。ヒトアルブミンに結合しているSABA1FGF21v1の効力を評価するために、融合タンパク質1mgkgをモル過剰のヒト血清アルブミン6mgkgと共にインキュベートし、その混合物をもう一つの群に注射したqd、sc、7日間。もう一つの対照群としてヒト血清アルブミン6mgkgを使用した。図15に示す結果は、SABA1FGF21v1が投与の3時間後にPBS媒体対照と比べてグルコースを29低下させ、この低下は7日目のHisタグ付きFGF21によるそれに匹敵することを示している図15A。これに対し、SABA1FGF21v1とヒトアルブミンの組合せは、HSA対照と比べて血漿中グルコースレベルを46低下させた。投与の24時間後は、SABA1FGF21v1によるグルコース低下の強さが7であるのに対し、SABA1FGF21v1とHSAの組合せは41だったので、7日目の最後の投与後24時間は持続したことになる図15B。したがってSABA1FGF21v1は、ヒト血清アルブミンに結合している時にも、obobマウスにおける血漿中グルコースレベルを低下させるのに、極めて有効であった。ヒトアルブミンを伴うおよびヒトアルブミンを伴わないSABA1FGF21v1の曝露を表17および18に示す。SABA1FGF21v1の曝露は、ヒト血清アルブミンの存在下の方が、その非存在下より大きい。[表17]投与の3時間後のHisタグ付きFGF21およびSABA1FGF21v1の血漿中濃度SD:標準偏差[表18]投与の24時間後のHisタグ付きFGF21およびSABA1FGF21v1の血漿中濃度<LLOQは定量下限未満である。実施例B6.マウスおよびサルにおけるSABA1FGF21v1の血漿中t12の測定Hisタグ付きFGF21およびSABA1FGF21v1の薬物動態を特徴づけるために、マウスおよびサルにおいて、さまざまな生体内研究を行った。ELISAベースのリガンド結合アッセイを使って、全てのマウスおよびサル血漿試料中のHisタグ付きFGF21およびSABA1FGF21v1を測定した。静脈内投与および皮下投与後のマウスにおけるHisタグ付きFGF21およびSABA1FGF21v1の薬物動態Hisタグ付きFGF21CD1マウスにおける静脈内投与1mgkg後、Hisタグ付きFGF21の定常状態分布容積Vssは027Lkgだった。全身血漿クリアランスCLTp値は12mL分kgだった。終末相半減期T12は05時間だった。皮下投与後、Hisタグ付きFGF21はよく吸収された。絶対皮下バイオアベイラビリティは約100だった。見掛けの皮下終末相半減期T12は06時間だった。SABA1FGF21v1CD1マウスにおける静脈内投与16mgkg後、SABA1FGF21v1の定常状態分布容積Vssは012Lkgだった。全身血漿クリアランスCLTp値は29mL分kgだった。終末相半減期T12は19時間で、Hisタグ付きFGF2105hより長かった。皮下投与後、SABA1FGF21v1はよく吸収された。見掛けの皮下終末相半減期T12は19時間だった。また、SABA1FGF21v1をヒト血清アルブミン6mgkgとの前混合後に1mgkgの用量でobobマウスに皮下投与した。見掛けの皮下終末相半減期T12はさらに9時間に増加した。静脈内投与および皮下投与後のサルにおけるHisタグ付きFGF21およびSABA1FGF21v1の薬物動態Hisタグ付きFGF21静脈内投与05mgkg後、Hisタグ付きFGF21の定常状態分布容積Vssは1Lkgだった。全身血漿クリアランスCLTp値は64mL分kgだった。終末相半減期T12は19時間だった。皮下投与後、Hisタグ付きFGF21はよく吸収された。絶対皮下バイオアベイラビリティは65だった。見掛けの皮下終末相半減期T12は43時間だった。SABA1FGF21v1静脈内投与008mgkg後、SABA1FGF21v1の定常状態分布容積Vssは008Lkgだった。全身血漿クリアランスCLTp値は0012mL分kgだった。終末相半減期T12は97時間だった。皮膚投与後、SABA1FGF21v1はよく吸収された。絶対皮下バイオアベイラビリティは68だった。見掛けの皮下終末相半減期T12は67時間だった。図16は、例示的融合物であるSABA1FGF21v3配列番号134と、SABA部分がFGF21のC末端にあるFGF21SABA1v1配列番号171の、サルにおけるt12を、Hisタグ付きFGF21と比較して示している。これらの結果は、FGF21のみと比較して、融合物がt12を約27倍増加させたことを示している。データを下記表19に要約する。[表19]SABAFGF21融合物に関する薬物動態データ実施例B7.SABA1FGF21v1はobobマウスにおけるHbA1cを低下させるSABA1FGF21v1のさらなる急性および慢性効果を糖尿病obobマウスにおいて調べた。毎日の処置を3週間にわたって行った後の研究終了時に、血漿中グルコース、インスリン、および総コレステロールを観察した。血漿中アラニンアミノトランスフェラーゼは低下し、βヒドロキシ酪酸レベルは上昇した。経口ブドウ糖負荷試験において、SABA1FGF21v1処置動物は、グルコース負荷を処理する能力の増加を示した。もう一つの実験は、SABA1FGF21v1の3つの異なる用量001または01または1mgkgのうちの1つをヒト血清アルブミン6mgkgのHSAと前もって混合し、それを14日間にわたって注射sc、qdした糖尿病obobマウス1群あたりn=8において行った。対照群にはHSAPBS中の6mgkgだけを与えた。最後の投与の24時間後に、血漿試料中のHbA1cを測定した図19参照。対照群HSAのみを与えたものは、ベースライン値と比べてHbA1cレベルの低下を示さなかった。最も低い用量001mgkgは低下を示さず、中間用量01mgkgは統計的に有意でない039の低下を示した。最も高い用量である1mgkgすなわちmpkは、HbA1cに、ベースラインに対して09、媒体との比較で094の低下を示し、これらは統計的に有意だった。したがって、ヒトアルブミンと同時注射したSABA1FGF21v1は、糖尿病マウスにおけるHbA1cレベルを低下させるのに有効であった。001、01および1mgkg用量での血漿中SABA1FGF21v1レベルは、最後の投与の24時間後に、それぞれ385、228および2873ngmlだった。実施例B8.カニクイザルにおけるSABA1FGF21v1の薬物動態静脈内IV投与後、SABA1FGF21v1の定常状態分布容積Vssは0076Lkgだった。この値は血漿体積より大きいが細胞外液の体積よりは小さかったことから、SABA1FGF21v1は主に細胞外間隙に存在することが示された。SABA1FGF21v1の全身血漿クリアランスは低く071mL時間kg、サル血清アルブミンへの高アフィニティ結合と合致していた。終末相半減期T12は97時間だった図20および表20参照。さらにまた、SABA1FGF21v1はサルにおいて良好な皮下SCバイオアベイラビリティを示した図20および表20参照。絶対SCバイオアベイラビリティは68だった。[表20]サルにおけるSABA1FGF21v1の単回投与薬物動態パラメータ平均±SD3匹のうちの1匹では投与の24時間後の血漿試料が収集されなかった;サル:N=2IVおよび3SC。C.SABA合成ペプチド融合物分子実施例C1.化学的に誘導されたスペーサーによって連結されたSABA合成ペプチド融合物分子に使用するためのSABAポリペプチドの調製合成的に誘導されたペプチドにコンジュゲートしてSABA融合タンパク質を形成させるためのSABA175GCysポリペプチドを、以下に述べる方法を使って作製した。このプロセスは、ポリペプチドリンカーによって共有結合されたSABAペプチド融合物を作製するためにも使用することができる。5GC末端テール配列番号397とC末端His残基とを伴うSABA17配列番号225SABA175GCysをコードするDNA配列を、市販の発現ベクターpET29bEMDBiosciences、米国カリフォルニア州サンディエゴに入れた。リボソーム結合部位のすぐ下流にあるプラスミドベクターのNDEI制限エンドヌクレアーゼ部位とXHOI制限エンドヌクレアーゼ部位の間に、配列を適切に配置した図10。発現ベクターを宿主株BL21EMDBiosciencesに形質転換し、封入体として発現させた。精製したプラスミドDNA発現ベクターを、当業者に広く知られている標準的形質転換法により、上記の大腸菌に組み込んだ、すなわち形質転換した。簡単に述べると、市販のコンピテント細胞EMDBiosciencesを氷上で融解し、細胞が均等に懸濁されていることを保証するために、静かに混合した。これらの細胞を、氷上で予冷しておいた15mlポリプロピレン製微量遠心チューブに、20μlずつピペッティングした。約1μlの精製プラスミドDNA1~10ngμlプラスミドを細胞に直接加え、混合するために静かに振とうした。チューブを氷上に5分間保った後、正確に30秒間、42°Cの水浴で加熱した。加熱したチューブを直ちに氷上に置き、2分間休ませた。80μlの室温SOCまたはLB培地を各チューブに加えた。形質転換体の選択は、pET29bプラスミドがコードする薬物耐性用に、カナマイシンを含有する培地で平板培養することによって達成した。形質転換された細胞の終夜スターター培養を成長させることにより、大腸菌における可溶性SABA175GCysの発現を開始した。細胞を、それぞれ1リットルのOvernightExpress商標培地EMDBiosciences、およびNatureMethods22332352005が入っている2リットル振とうフラスコの接種に使用した。可溶物収量を改善するために、振とうインキュベータの温度を18°Cまで低下させることができる。発酵を12~16時間継続させ、遠心分離によって細胞を収穫し、圧縮湿細胞ペーストとして-80°Cで凍結した。タンパク質封入体IBの形成は、それが保護と、宿主細胞プロテアーゼ切断を最小限に抑えることに役立つので、好ましいことがわかった。細胞溶解および封入体IBペレットの調製細胞を融解し、圧縮細胞ペースト1部に対してバッファー8~10部の希釈度で、溶解バッファーに懸濁した。AvestinC5ホモジナイザーAvestinInc、カナダオンタリオ州オタワを使って、2000PSIで2回通すことにより、細胞を機械的に溶解した。溶解後に、溶解物を遠沈した4000RPMで20~30分間。可溶性画分は捨てる。細胞片を除去するために封入体ペレットを05TritonX100で洗浄し、その懸濁液を再び遠心分離した。このプロセスを典型的には2回または3回繰り返した後は、ペレットが均一な白色に見える。次に、その結果得られた濃縮IB調製体ペレットをPBSバッファーで洗浄することで、過剰の界面活性剤を除去した。封入体の可溶化次に、洗浄し界面活性剤を枯渇させたIBペレットを、50mMトリスHClpH80と500mMNaClで緩衝化した6MグアニジンHClに可溶化した。この方法で調製した材料の大半は、自由に溶液相に入るが、少量の細胞片が残るので、SS34ローター中、16000RPMで1時間の遠心分離によって、これを除去した。リフォールディングおよび酸化ステップのために、上清をとっておいた。あるいは、この段階で、金属キレーションクロマトグラフィーステップIMACを使って、6×Hisタグを含有するタンパク質を捕捉して、さらに精製することができる。カオトロープで変性させた材料をカラムに結合させ、夾雑物を洗浄してから、イミダゾールを補足した変性バッファーの存在下で溶出させることができる。リフォールディングおよび酸化の制御グアニジンHClで可溶化した材料を約1mgmLタンパク質280nMの吸光度で推定に希釈し、35MWCO透析チューブに入れた。次に、透析デバイス中の試料を、4Lのリフォールドバッファー50mMトリス、150mMNaCl、1mMEDTA、pH90に、4°Cで終夜、静かに撹拌しながら浮かせた。透析リフォールドバッファーは、翌朝に、新鮮なリフォールドバッファーと交換する。このプロセスの間に、融合タンパク質のジスルフィド酸化およびまたは架橋形成の調整を、必要に応じて達成することができる。適正な最終形態に到達するには、ジスルフィド橋がそのポリペプチド配列中の2つのシステイン残基間に形成されることを必要とするアミリンなどのペプチドの場合は、透析プロセス中に系を空気酸化させる。後で目的のペプチドにマレイミドコンジュゲートすることができるように還元型でなければならない単一のシステイン残基を含有するSABA175GCysの場合は、リフォールドプロセスの最後に還元剤例えばTCEP、トリス2カルボキシエチルホスフィンTCEP、またはジチオスレイトールDTTを添加することによって、酸化を最小限に抑えることができる。酸化を極力伴わないリフォールディングは、Cysアミノ酸のチオラートアニオンが生じてジスルフィド橋形成を開始することが容易ではないpH45におけるリフォールディングによって達成することもできる。この簡便な透析法は便利であり、必要であればいくつかの試料を一度に処理することができる。あるいは、グアニジンHClの代わりに尿素中でタンパク質を変性させることもできる。あるいは、高いカオトロピック塩濃度から低い塩濃度への分子の急速希釈を使って、リフォールディングと酸化を行うこともできる。あるいは、空気酸化の代わりに、還元型および酸化型グルタチオンGSHGSSGの所定の酸化還元混合物を使って、系をリフォールディングさせることもできる。あるいは、上述のように透析または急速希釈によって自由拡散相でこれらのタンパク質をリフォールディングさせる代わりに、クロマトグラフィー樹脂に結合している間に、これらをリフォールディングさせてもよい。バルク凝集と収量損失につながりうるリフォールディング相中のタンパク質相互作用が最小限に抑えられるので、この方法では収率が改善されることが多い。沈殿剤precipitantの除去リフォールドステップおよび必要であれば酸化ステップの終わりに、タンパク質の全てが可溶性のままであるわけではない。分子の一部は、凝集した状態で存在し、沈殿物precpitatantとして溶液から容易に降下する。この物質を、SS34ローターで1時間、16000RPMで遠心分離することによって除去した。そして、典型的には、クロマトグラフィーに先だって、これを02μmシリンジフィルターで濾過する。クロマトグラフィー分離DNAおよび他の夾雑物を除去するために、リフォールディングされたSABA175GCysを、ResourceQまたは類似のイオン交換媒体系GEHealthcare、ニュージャージー州ピスカタウェイを使って精製することができる。40mLResourceQカラムをリフォールドバッファー150mMNaCl、1mMEDTAを含む50mMトリス、pH90中で平衡化し、清澄化したリフォールディングされた材料を、そのカラムに通す。これらの条件下で、ポリペプチドの大部分は、結合せずに樹脂ベッドを通過する。洗浄された封入体からのDNAおよび他の細胞片は、カラム樹脂上に保持される。あるいは、6×Hisタグを含有するフォールディングされたポリペプチドを、この時点で、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーIMACステップを使って捕捉し、イミダゾールまたはヒスチジンの勾配で溶出させることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー次に、PBSバッファーpH72中で前平衡化した2660SephacrylS100または2660Superdex75サイズ排除カラムGEHealthcare、米国ニュージャージー州ピスカタウェイを使って、SABA175GCysをさらに精製することができる。単量体型タンパク質に対応する試料をプールし、必要であれば試料を1~2mgmlに希釈してから、-80°Cで凍結した。ここで発現し精製されるタンパク質の発現および精製収率はさまざまである。これらの方法を使って、封入体を生産した元の自己誘導培地1Lにつき、05~10mg以上の精製収量を得ることができる。実施例C2.化学的に誘導されたスペーサーによって連結されたSABA神経ペプチド融合物分子に使用するための神経ペプチドの化学合成実施例C21:3マレイミドプロピオニルPEG20ラットアミリン:Mal20KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTYNH2の合成ペプチドは、LibertyマイクロウェーブペプチドシンセサイザーCEMCorp、ノースカロライナ州マシューズを使って、固相合成によって調製した。Fmoc脱保護およびカップリングステップは、20Wの電力パルス印加シーケンスによってもたらされるマイクロ波加熱を使って、75°Cで行った。反応容器中に挿入した光ファイバープローブで反応温度を監視した。合成は、50mLポリプロピレン容器に入れた025mmolのFmoc保護PALPEGレジン034mmolgから開始した。製造者によって提供された025mmolスケール法を使ってアミノ酸をカップリングした。各カップリングステップの最初に、01MHOBtを含有するDMF中の5ピペラジンによる5分間の処置を2回行うことによって、Fmoc基を除去した。20mLのDMFによる洗浄を5回行った後、DMF中の05MHCTU4当量とNMP中の2MDIEA8当量で活性化することによって、必要なFmocアミノ酸を逐次的にカップリングした。各カップリングの最後に、レジンを20mLのDMF洗浄液で5回洗浄した。FmocPEG20のカップリングに先だって、ペプチジルレジン0125mmolの半分を取り除き、FmocPEG20を上述のように合成装置でカップリングした。Fmoc脱保護ペプチジルレジンを、フリット付きポリプロピレンリアクターに移し、HOAtDIC5当量による16時間の活性化によって、3マレイミドプロピオン酸を手作業でカップリングした。ペプチジルレジンをDMF5mL×4およびDCM5mL×4で洗浄し、再びDMF5mL×4で洗浄した。I220当量のDMF10mL溶液を加え、その混合物を1時間撹拌した。レジンをDMF5mL×5およびDCM5mL×3で洗浄することにより、所望のラットアミリンペプチド誘導体Mal20KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTYNH2を、環状ジスルフィド生成物として得た。TFA水フェノール90:5:5;v:v:w15mLを使って室温で90分間処理することにより、ペプチドを脱保護し、リジンから遊離させた。使用済みのレジンを濾去し、追加の切断溶液25mL×2ですすいだ。合わせた濾液を約4mLまでエバポレートし、Et2O35mLの添加によって生成物を沈殿させた。沈殿した生成物を遠心分離によって集め、追加のEt2Oで洗浄し、乾燥することで、オフホワイトの固形物理論値の50を得た。次に述べるように島津モデルLC8A液体クロマトグラフィーでの分取用RPHPLCによって、粗ペプチドを精製した。ペプチドを水AcCNTFA60:40:01に溶解し、045ミクロンフィルターで濾過し、一度に30mgをPhenomenexLunaC18カラム212×100mm;5μに注入した。45分にわたるA中の25-45Bの勾配を使って、15mL分で生成物を溶出させた220nmにおけるUV検出。溶媒A:水中の01TFA;溶媒B:AcCN中の01TFA。分析用HPLCによる決定できれいな生成物を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥することで、純度が少なくとも95の生成物を白色凍結乾燥物として得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=14640および44=10979は、分子量計算値43899Dと合致している。実施例C22:3マレイミドプロピオニル5ラットアミリン:MalGSGSGSGSGSKCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTYNH2の合成実施例C21に記載したものと同じ固相カップリングおよびジスルフィド環化法を使ってペプチドを調製することにより、所望のラットアミリンペプチド誘導体MalGSGSGSGSGSKCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTYNH2を環状ジスルフィド生成物として得た。脱保護とレジンからの遊離後に、40分にわたるA中の1055Bの勾配を使ってペプチドを溶出した点以外は実施例C21で述べたとおりに、分取用RPHPLCで粗ペプチドを精製することにより、純度が少なくとも98の生成物を得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=15983および44=11993から導き出される47922Dという分子量は、分子量計算値47912Dの1ダルトン以内にある。実施例C23:3マレイミドプロピオニルAhxマウスPYY:MalAhxAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRYNH2の合成実施例C21に記載したものと同じ固相法を使ってこのペプチドを調製することにより、所望のマウスPYYペプチド誘導体MalAhxAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRYNH2を得た。Ala12Ser13残基対とAla22Ser23残基対は、FmocAlaSerOHシュードプロリンジペプチドEMDChemicalsInc、カリフォルニア州サンディエゴとしてカップリングした。脱保護およびレジンからの遊離後に、45分にわたるA中の550Bの勾配を使ってペプチドを溶出した点以外は実施例C21で述べたとおりに、分取用RPHPLCで粗ペプチドを精製することにより、純度が少なくとも97の生成物を得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=14158および44=10622は、分子量計算値42447Dと合致している。実施例C24:3マレイミドプロピオニルPEG20マウスPYY:MalPEG20AKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRYNH2の合成Fmoc6AhxOHの代わりにFmocPEG20OHをカップリングした点以外は実施例C23に記載したものと同じ固相カップリング法を使ってこのペプチドを調製することにより、所望のマウスPYYペプチド誘導体MalPEG20AKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRYNH2を得た。脱保護およびレジンからの遊離後に、実施例C23に記載したように分取用RPHPLCで粗ペプチドを精製することにより、純度が少なくとも86の生成物を得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=14848および44=11135は、分子量計算値44499Dと合致している。実施例C25:3マレイミドプロピオニル5マウスPYY:MalGSGSGSGSGSAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRYNH2の合成このペプチドは、GenScriptUSAIncニュージャージー州ピスカタウェイにより、実施例C23に記載したものと同様の固相法を使ってカスタム合成され、所望のマウスPYYペプチド誘導体MalGSGSGSGSGSAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRYNH2を95の純度で得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=16185および44=12141は、分子量計算値48522Dと合致している。実施例C26:3マレイミドプロピオニルAhxマウスPP:MalAhxAPLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTLTRPRYNH2の合成実施例C23に記載したものと同じ固相法を使ってこのペプチドを調製することにより、所望のマウスPPペプチド誘導体MalAhxAPLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTLTRPRYNH2を得た。Ala12Thr13残基対は、FmocAlaThrOHシュードプロリンジペプチドEMDChemicalsInc、カリフォルニア州サンディエゴとしてカップリングした。脱保護およびレジンからの遊離後に、実施例C23で述べたとおりに分取用RPHPLCで粗ペプチドを精製することにより、純度が少なくとも99の生成物を得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=15335および44=11504から導き出される45975Dの分子量は、分子量計算値45982Dの1ダルトン以内にある。実施例C27:3マレイミドプロピオニルPEG20マウスPP:MalPEG20APLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTLTRPRYNH2の合成Fmoc6AhxOHの代わりにFmocPEG20OHをカップリングした点以外は実施例C26に記載したものと同じ固相法を使ってこのペプチドを調製することにより、所望のマウスPPペプチド誘導体MalPEG20APLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTLTRPRYNH2を得た。脱保護およびレジンからの遊離後に、実施例C23で述べたとおりに分取用RPHPLCで粗ペプチドを精製することにより、純度が少なくとも91の生成物を得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=16019および44=12017から導き出される48030Dの分子量は、分子量計算値48034Dの1ダルトン以内にある。実施例C28:3マレイミドプロピオニル5マウスPP:MalGSGSGSGSGSAPLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTLTRPRYNH2の合成このペプチドは、GenScriptUSAIncニュージャージー州ピスカタウェイにより、実施例C26に記載したものと同様の固相法を使ってカスタム合成され、所望のマウスPPペプチド誘導体MalGSGSGSGSGSAPLEPMYPGDYATPEQMAQYETQLRRYINTLTRPRYNH2を、90の純度で得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン44=13025および55=10421は、分子量計算値52057Dと合致している。実施例C29:ヒトオステオカルシン:YLYQWLGAPVPYPDPLEPRREVCELNPDCDELADHIGFQEAYRRFYGPVCys23Cys29ジスルフィドによって環化したものの合成線状ペプチドは、GenScriptUSAIncニュージャージー州ピスカタウェイにより、実施例C26に記載したものと同様の固相法を使ってカスタム合成され、ヒトOCNの所望の線状前駆体を87の純度で得た。ペプチドの酸化的ジスルフィド環化は、50mMトリスバッファーpH81、5mM還元型グルタチオンおよび05mM酸化型グルタチオン中の線状ペプチドの溶液05mgmL;20mLを室温で4日間撹拌することによって達成した。その溶液をロータリーエバポレーションによって10mLまで濃縮し、40分にわたるA中の2050Bの勾配を溶出に使用した点以外は実施例C21で述べたとおりに、分取用HPLCでペプチドを精製した。これにより、所望の環状ヒトOCNペプチドを99の純度で得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=19333および44=14498は、分子量計算値57974Dと合致している。実施例C210:マウスオステオカルシン:YLGASVPSPDPLEPTREQCELNPACDELSDQYGLKTAYKRIYGITICys19Cys25ジスルフィドによって環化したものの合成線状ペプチドは、GenScriptUSAIncニュージャージー州ピスカタウェイにより、実施例C29に記載したものと同様の固相法を使ってカスタム合成され、マウスOCNの所望の線状前駆体を90の純度で得た。このペプチドを、実施例C29で述べたように環化し、分取用HPLCで精製することにより、環状マウスOCNペプチドを98の純度で得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=17053および44=12795は、分子量計算値51147Dと合致している。実施例C211:ラットオステオカルシン:YLNNGLGAPAPYPDPLEPHREVCELNPNCDELADHIGFQDAYKRIYGTTVCys23Cys29ジスルフィドによって環化したものの合成このジスルフィド環状ペプチドは、GenScriptUSAIncニュージャージー州ピスカタウェイにより、実施例C29に記載したものと同様の固相法および酸化的環化法を使ってカスタム合成され、所望の環状ラットOCNを96の純度で得た。ペプチドの実体をエレクトロスプレーモードのLCMS分析によって確認した。実測されたmzイオン33=18625および44=13975は、分子量計算値55861Dと合致している。実施例C3.化学的に誘導されたスペーサーにより、マレイミドコンジュゲーション反応を使って連結された、SABAアミリン、SABAPYYおよびSABAPP融合物分子の形成QSepharoseカラムGEHealthcare、ニュージャージー州ピスカタウェイで上に概説したように精製したSABA175GCysタンパク質を05mMTCEPで還元した。50mM酢酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH52中で平衡化したSuperdex75カラムGEHealthcareでのサイズ排除クロマトグラフィーにより、TCEPを除去し、タンパク質をさらに精製した。溶出したSABA175GCysタンパク質を、このバッファー中で、モル比1:1のマレイミドPEG20アミリンCONH2、マレイミドPEG20PYYCONH2またはマレイミドPEG20PPCONH2合成ペプチドと合わせ、静かに振とうしながら4°Cで終夜インキュベートした。インキュベーション後に、反応混合物を02μmフィルターで濾過し、PBSpH74中のSuperdex75SECカラムを使って、修飾タンパク質SABA175GCysPEG20アミリンCONH2配列番号328、SABA175GCysPEG20PYYCONH2配列番号344またはSABA175GCysPEG20PPCONH2配列番号364を、遊離の反応物から単離した。実施例C4.ヒト血清アルブミンへのSABA神経ペプチドアミリン、PYYおよびPP融合物の結合効力表面プラズモン共鳴SPRは、分子相互作用をリアルタイムに観察することができる直接結合技法である。これらの実験では、ProteOnXPR36機器BioRadLaboratoriesを使ってSPR結合研究を行った。ランニングバッファーであるリン酸緩衝食塩水005Tween20pH74はTeknovaから購入しカタログ番号P1192、全ての実験を25°Cで行った。ヒト血清アルブミンは、BioRadLaboratoriesから購入したアミンカップリング試薬を使用し、製造者の指針に従って、アミンカップリングにより、BioRadGLCチップ上に直接固定化した。ヒト血清アルブミンはNovozymesから購入したRecombumin商標。約5000レゾナンスユニットRUのヒト血清アルブミンを、GLCチップ表面の別々の4レーン上に固定化した。各分析物について、156nMから250nMまでの範囲にわたる5つの濃度を、30μl分で、240秒間、表面上に注入した。解離を600秒間監視した。表面を100mMHClで再生した。その結果得られたデータを、ProteOnManagerソフトウェアを使って、ラングミュア1:1結合モデルにフィッティングした。異なる濃度範囲で実験を繰り返した。この第2の実験では、500nMから32nMまでの範囲にわたる5つの濃度を表面上に注入し、上記のようにデータを分析した。これらの実験の結果を平均し、表21に示す。KDは解離定数である。小さい数字は血清アルブミンへの強固な結合を示す。血清アルブミンに結合するSABAに共有結合された分子は、SABAFGF21融合物に関して先に述べたように、より長い生体内薬物動態半減期を示す。[表21]ヒト血清アルブミンへの結合に関するSABA神経ペプチド融合物のKon、KoffおよびKD値実施例C5.SABA合成ペプチド融合物のインビトロ活性実施例C51:SABAアミリン融合物のインビトロ活性アミリンは、Gs共役GPCRであるアミリン受容体を活性化することによって細胞環状アデノシン一リン酸cAMP生産を誘導する。したがって細胞cAMP生産は、アミリンアゴニストのインビトロでの機能的活性の読出しとして使用される。具体的には、力価EC50および効力アミリンペプチドで観察される最大活性に対するパーセンテージとしてなどといったインビトロ活性を、SABA1AMYv25配列番号328タンパク質について決定した。下記表22に示すように、SABA1AMYv25は、アミリン受容体を安定に発現するHEK細胞におけるcAMP生産を刺激する。SABA1AMYv25の力価EC50は122nMであり、効力はアミリンペプチドの約119である。したがってSABA1AMYv25は、SABAに連結されていても、インビトロアッセイにおいて完全なアミリンの機能的活性を保っている。さらなる実験において、ラットアミリンとSABA1AMYv25はどちらもHEK親細胞におけるcAMPレベルに対して有意な効果を持たなかったことから、アミリン受容体に対するそれらの特異性が実証された。アミリン受容体安定細胞株の構築アミリン受容体は、カルシトニン受容体CTと受容体活性調節タンパク質RAMPの一つとのヘテロ二量体である。チンパンジーCTとヒト受容体活性調節タンパク質3RAMP3との両方をHEK293細胞に安定にトランスフェクトすることにより、組換えアミリン受容体細胞株を作製した。ラットアミリン、サケカルシトニン、ヒトカルシトニンおよびヒトCGRPなどといったいくつかのアミリンアゴニストペプチドを使って、これらの組換え受容体細胞株を選択し、特徴づけた。安定細胞株は、300μgmlネオマイシンおよび250μgmlハイグロマイシンを含む完全DMEM中、37°Cおよび5CO2で培養した。SABA1AMYv25活性を評価するためのインビトロ環状AMPcAMP機能アッセイCisbioマサチューセッツ州ベッドフォード製のHTRF登録商標cAMPアッセイキットを使ってcAMPアッセイを行った。アミリン受容体安定細胞を、BDFalcon商標75cm2フラスコBDBiosciences、マサチューセッツ州ベッドフォードにおいて、培地10FBS、300μgmlネオマイシンおよび250μgmlハイグロマイシンを含むDMEM中、37°Cおよび5CO2で成長させた。Invitrogen製の細胞解離バッファー酵素フリーを使って細胞をフラスコから収穫した。PBSバッファーで1回洗浄した後、細胞をアッセイバッファーHBSSバッファー、25mMHEPES、pH75、100μMIBMXに再懸濁し、96ウェルアッセイプレートにローディングした約2000細胞ウェル。次に細胞を、アミリンペプチドまたはSABAアミリンと共に、37°Cで30分間インキュベートした。細胞中のcAMP量を製造者のプロトコールCisbioに従って決定した。実施例C52:SABAPYY336およびSABAPP融合物のインビトロ活性ペプチドYYPYYおよび膵ポリペプチドPPは、摂食に呼応してそれぞれ腸および膵臓から分泌される天然の満腹因子であり、絶食すると減少する。PYYおよびPPは、どちらも、36残基ペプチドアミドである完全長型で単離することができる。PYYは、酵素DPPIVによってさらに切断されて、より短い生物活性型PYYにもなりうる。PYYまたはPPの末梢注射は、動物モデルおよびヒトにおいて、食物摂取量と体重の低下を引き起こす。病的肥満を有する患者では、基礎および食餌刺激時PYYおよびまたはPPレベルが、どちらも低下している。対照的に、食欲不振またはバイパス手術後の体重減少を伴う患者では、血漿中PYYおよびまたはPPが正常より高い。PYYおよびPPのアゴニズムは、肥満および代謝性疾患の処置に大きな治療的価値を有する。NPYY2およびY4は、それぞれPYYおよびPPに対して最も高いアフィニティを有する受容体である。NPY受容体はGタンパク質共役受容体ファミリーに属する。アゴニスト刺激を受けると、NPY受容体は、下流のGタンパク質を刺激して、その結合型GDPをGTPと交換しうる。競合結合アッセイを使って、それぞれの受容体に対するSABA1PYYv7配列番号344およびSABA1PPv7配列番号364の結合アフィニティを測定し、GTPγS結合アッセイを使って、最初期の受容体媒介イベントの一つにおける受容体占有の機能的結果を測定した。表22に示すように、記載のアッセイにおいて測定された力価EC50は、PYY336については06nMであり、SABA1PYYv7融合物については52nMである。記載のアッセイにおいて測定された力価EC50は、PPについては17nMであり、SABA1PPv7融合物については>1μMである。SABA1PPv7融合物に関する力価の減少は、SABAとPPポリペプチドをコンジュゲートするために使用したPEG20リンカーによるのかもしれない。PEG20リンカーはこのコンストラクトでは最適とは言えないかもしれないので、SABAPP融合物の力価を改善するには、代替リンカーを持つコンストラクトが使用されるであろう。受容体膜調製:ヒトNPYY2またはY4受容体を過剰発現する組換えCHO細胞のT150フラスコ1本を、05mgmlのG418を含むF12培地Lグルタミン酸を含むHAMでコンフルエントになるまで成長させた。収穫前に細胞をPBSCa2およびMg2を含まないもので洗浄し、次に、細胞解離溶液を使って剥離した。遠心分離後に、細胞ペレットを1mlの溶解バッファー20mMトリスClpH75、1mMEDTAおよびプロテイナーゼインヒビターに再懸濁し、ポリトロンホモジナイザーを使ってホモジナイズした5に設定、10秒×2。ホモジナイズされた細胞を1000gで10分間遠心分離した。上清を集め、ペレットを1mlの溶解バッファーに再懸濁し、ホモジナイズし、再び1000gで10分間、遠心分離した。両方の遠沈で得た上清をプールし、100000gで60分間遠心分離した。その結果得られた膜ペレットを250μlのアッセイバッファーTBSpH74、1mMMgCl2、25mMCaCl2に再懸濁した。タンパク質濃度を測定し、小分けしたものを使用時まで-80°Cで保存した。競合結合アッセイ:アッセイは、96ウェルプレートにおいて、総体積250μlのアッセイバッファーTBSpH74、1mMMgCl2、25mMCaCl2で行った。反応混合物は、アッセイ試料SABA1PYYv7SABA1PPv7、対照PPPYY、対照培地、膜、および0025nMの125IhPYYまたは125IhPP2200Cimmol、PerkinElmerからなった。試薬添加の順序は、150μlのアッセイ試料、50μlの125IPYYまたは125IhPP、次に50μlの膜アッセイバッファー中、1~3μgウェルであった。結合混合物を室温で120分間インキュベートした。Packardセルハーベスターを使って反応をGFCプレート05ポリエチレンイミンおよび01BSAに予浸したもの上に移すことにより、結合反応を停止させた。次に、フィルタープレートを、氷冷50mMトリスバッファーpH74で、200ml×4回洗浄した。洗浄後に、40μlのMicroScint20を各ウェルに加え、PackardTopCountシンチレーション計数器で、プレートをカウントした。GTPγS結合アッセイアッセイは、96ウェルプレート上、100μlの総体積で行った。まず最初に、10μlのユニバーサルバッファー20mMHEPESpH74、100mMNaCl、1mMMgCl2、10μMGDP、01BSAを各ウェルに加えた。次に、10μlの試験試料を加え、続いて40μlの膜アッセイバッファー中、1~3μgウェルを加え、よく混合した。反応を25°Cで振とうしながら30分間インキュベートした。次に、35SGTP025μCimlを含む40μlのSPAビーズ05mgウェルを加え、振とうしながら25°Cでさらに60分間インキュベートした。1000rpmで5分間の遠沈によって反応を停止させた。[表22]SABAアミリン、SABAPYY336およびSABAPP融合物の機能的活性ネイティブペプチドリガンド最大活性に対する試験化合物のとして表したもの。結果を、1回の実験で得た三つ一組の測定の平均±SEMとして表す。D.他のSAB融合物分子実施例D1:SABAオステオカルシン融合物のインビトロ活性オステオカルシンOCNは膵β細胞におけるインスリン分泌を刺激するので、齧歯類動物の島からのインスリン生産が、インビトロでオステオカルシンOCNの生物学的機能を評価するための読出しとして使用される。齧歯類動物の島を、ネイティブヒトOCNhOCNおよびAdnectinSABA融合ヒトOCNSABAhOCNで処理し、各コンストラクトに関連するインスリン分泌の強化の程度を決定する。実施例D2:SABAアペリン融合物SABAAPLNv2は、6×Hisタグおよび7リンカーを介してAPLNv4に融合されたSABA16の融合物である。麻酔したラットにおいて、APLNv4は、60μgkgの静脈内送達で、ロバストな血圧降下作用を示した。SABAAPLNv2は15000の分子量を示すので、APLNv4は融合タンパク質の質量の10に相当する。SABAAPLNv2を、麻酔したラットに600μgkgの用量で静脈内送達しても、血圧には影響がなかった。SABAAPLNv2コンストラクトに活性がなかったことの考えうる説明には、生産的衝突頻度の減少、立体障害、またはペプチドPKEアニーリングによる、力価の減損が包含されうる。SABAAPLNv2がHSAに結合するかどうかを決定するための試験は行わなかった。"