"ポリマー結合材を使用することなく、レドックスたんぱく質を非共有結合で結合させ機能化した生体反応性カーボンナノチューブの製法であって、次の工程を含んでいる製法。カーボンナノチューブを濃硝酸中で、高温条件下に酸化する;得られた酸化型カーボンナノチューブを精製水に分散させ、所定濃度にする;レドックスたんぱく質を所定濃度に加え、混合する;得られた生体反応性カーボンナノチューブを分離する。本発明の目的は、レドックスたんぱく質を、ポリマー結合材を使用することなく非共有結合で結合させ機能化した生体反応性カーボンナノチューブの作製方法を提供することである。発明の概要上記目的を達成するため、どのようにすればポリマー結合材を要することなく、グルコースオキシダーゼGOxがカーボンナノチューブのネットワークに固定されうるのか、我々は種々検討した。そして、カーボンナノチューブ上にレドックスたんぱく質GOxを非共有結合的に吸着させることに成功し、また、得られたCNT/GOxハイブリッドはグルコースの検出に好都合な性質を示すものであった。すなわち、本発明は、ポリマー結合材を使用することなく、レドックスたんぱく質を非共有結合で結合させ機能化した生体反応性カーボンナノチューブすなわち、カーボンナノチューブ/レドックスたんぱく質のハイブリッドを提供する。また、本発明は、ポリマー結合材を使用することなくレドックスたんぱく質を非共有結合で結合させ機能化した前記生体反応性カーボンナノチューブの製法も提供するものであり、その製法は以下の工程を含んでいる:カーボンナノチューブを濃硝酸中で、高温条件下に酸化する;得られた酸化型カーボンナノチューブを精製水に分散させ、所定濃度にする;レドックスたんぱく質を所定濃度に加え、混合する;得られた生体反応性カーボンナノチューブ固体を分離する。<略号>用いた略号の意味は次の通り。CNT:カーボンナノチューブDWCNT:二層doublewalledカーボンナノチューブGOx:グルコースオキシダーゼ本発明の、ポリマー結合材なしでレドックスたんぱく質を非共有結合で結合させ機能化した生体反応性カーボンナノチューブは、バイオセンサーを容易に構築する場合に扉を開くものである。これらは、例えば、電気化学的バイオセンサー例:グルコースセンサーとして用いることができる。発明の実施の形態発明の更に詳しい説明次に、本発明を更に詳細に説明する。先に述べたように、本発明は、ポリマー結合材を使用することなく、レドックスたんぱく質を非共有結合で結合させ機能化した生体反応性カーボンナノチューブを提供するものであり、言い換えれば、ポリマー結合材のない生体反応性カーボンナノチューブ/レドックスたんぱく質ハイブリッドを提供するものである。ここで、本発明におけるカーボンナノチューブは、炭素の異型allotypeの一つである。これは、その直径が2nm~100nmの柱状分子の形態を有しており、グラファイトシートを丸めた形状をしている。そのカーボンナノチューブとして、単層カーボンナノチューブ、二層カーボンナノチューブ、多層カーボンナノチューブいずれも使用できるが、好ましくは二層カーボンナノチューブ又は多層カーボンナノチューブである。また、本発明における非共有結合で結合させ機能化したとは、物理的に機能化したさせたことを意味し、これには静電力、水素結合力、疎水性力あるいはπ-π相互作用力のような多くの型の非共有結合力MShimetalNanoLett2285RJChenetalProcNatlAcadSci1004984DCuiJNanosciNanotech71298を含んでいる。また、本発明におけるレドックスたんぱく質とは、基質から又は基質へ電子を交換注入、又は引抜きする生体認識の実行が可能なたんぱく質を意味する。上記レドックスたんぱく質として、基本的に種々のオキシダーゼ、パーオキシダーゼ、デヒドロゲナーゼ及びレダクターゼが使える。例えば、グルコースオキシダーゼ、西洋ワサビパーオキシダーゼ、アルゼネートレダクターゼアズリン、アルコールオキシダーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ等である。中でも、グルコースオキシダーゼが最も好ましく用いられる。また、本発明におけるポリマー結合材とは、ポリマーマトリックスを意味する。先に述べたように、本発明は、また、前記生体反応性ハイブリッドの製法にも関係するものであり、その製法は以下の工程を含んでいる:カーボンナノチューブを濃硝酸中で、高温条件下に酸化する;得られた酸化型カーボンナノチューブを精製水に分散させ、所定濃度にする;レドックスたんぱく質を所定濃度に加え、混合する;得られた生体反応性カーボンナノチューブ固体を分離する。ここで、この方法の工程iにおける高温とは、70°Cないしは90°Cの範囲中の一定温度に維持することを意味する。また、この高温処理は反応が終わるまで、例えば、12~36時間をかけて行なわれる。工程iiにおける酸化型CNTの所定濃度とは、0.1-1.0mg/mLの濃度を意味する。工程iiiにおけるレドックスたんぱく質の所定濃度とは、0.04-0.4mg/mLの濃度を意味する。また、我々は、本発明のレドックスたんぱく質を非共有結合で結合させ機能化した生体反応性カーボンナノチューブで修飾した電極を使用してバイオセンサー生体物質を検出する装置を構築することができる。図1は、二層カーボンナノチューブ上に、非共有結合で固定化させたグルコースオキシダーゼによるグルコースの酸化と、それに続くシグナル変換とを示す模式図である。グルコースオキシダーゼたんぱく質とカーボンナノチューブとの相互作用は複雑であり、例えば、上述したように、静電力、水素結合力、疎水性力、π-π相互作用等の種々の非共有結合力を含んでいる。本発明で用いた実験方法は、以下の通り。<装置>電圧電流実験はすべて、パソコンに接続され、一般目的電気化学システムv.4.9ソフトウェアで制御されたμオートラブIIIEcochemie社ユトレヒト、オランダを用いて行なった。電気化学実験は、電圧電流セル5mL中、室温25°Cで三つの電極を配置した形で行なった。補助電極として白金電極が供され、参照電極として飽和Ag/AgClが供された。電気化学的電位は全てAg/AgClに対するものである。スキャンTEMモードSTEM;スポットサイズは0.7nm、加速電圧は200kVでTEMイメージを得るためには、200kVで作動するJEM2100F電界放出透過型電子顕微鏡JOEL,東京,日本を用いた。比表面積は多点BET法を用いたオートソーブ1装置QuantachromeInstrumentsBoyntonbeachFLUSAによって測定し、窒素が吸着物質に用いられた。試料は吸着実験の前に、真空で、250°Cで16h処理して脱水した。<材料>二層カーボンナノチューブDWCNT,カタログno.637351,純度90以上、グラファイト粉末、過酸化水素30水溶液、グルコース、グルコースオキシダーゼ、二塩基性リン酸カリウム及びリン酸は、シグマ-アルドリッチ社日本から購入した。実施例1iポリマー結合材を使用せずに、レドックスたんぱく質を非共有結合で結合させ機能化した生体反応性カーボンナノチューブの調製二層カーボンナノチューブDWCNTは、濃硝酸6M中、80°Cで、24h処理し、酸化させた。得られた酸/DWCNT混合物は次に蒸留水で洗浄し、遠沈し、水溶液のpHが中性になるまでこの操作を数回繰り返した。次に、上記酸化カーボンナノチューブを、孔の大きさ0.2μmの膜NucleporeTrackEtchMembraneWhatmanUKを用い、フィルム状参照。この観察は、BET法によって測定されたDWCNT及びグラファイトの各々の比表面積DWCNT:5855m2/g、グラファイト:1107m2/gと整合している。グルコースに対するDWCNT/GOx膜電極対照:グラファイト/GOx膜電極の応答を調べた。図3Bは10mMグルコースに対するハイドロダイナミックボルタモグラムである。グラファイト/GOx膜電極では、グルコースオキシダーゼ酵素がグラファイトのミクロ粒子に有意に捕捉若しくは吸着されなかったためか、グルコースに対するレドックス反応が何ら観察されなかった。DWCNT/GOx膜電極の場合は、状況は劇的に異なっている。グルコースに対し、約0.6Vで始まるかなりの酸化電流がDWCNT/GOx膜電極で観察される。図3の結果は、GOxレドックス酵素がDWCNTを、優れた信号変換器として作用するDWCNTへと機能付与させたことを示している。次に、DWCNTネットワークに固定されたGOxの安定性を調べた。図4は、2.5mMグルコースに対するDWCNT/GOx電極の電流応答を連続的に約15分間記録したものである。図示されるように、この時間における応答電流の減少は観察されていない。DWCNT/GOx電極の長時間の安定性を見るため、DWCNT/GOx電極を4°C、乾燥状態で一ヶ月保存した場合には、応答電流は40減少していた。この数字は、報告されたカーボンナノチューブ/ポリマー複合物/GOx電極における数字JWangElectroanalysis13983ASalimietalAnalBiochem33349よりも少し低いが、この相違の理由は現在のところ不明である。図5は、グルコースの添加濃度範囲は1.4~18.5mMに対するグラファイト/GOx電極a及びDWCNT/GOx電極bの電流応答を示すものである。濃度と応答の間の関係は、酵素系についての典型的ミカエリスーメンテン曲線である。見かけのミカエリスーメンテン定数KMappは、ラインウィーバー-バークプロットから14.14mMと計算された。この値は、文献値HZhouetalSensActuatorsB101224と整合する。"