以下の工程を含む、単分子DNAから形成される環状DNAからなり、複数分子DNAから形成される環状DNAを含まない、環状DNAの作成方法:1各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程;ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合して、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する、ここで、アダプターAは、いずれのアダプターAの切断末端とも非特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含む:アダプターbは、同一のアダプターb由来の切断末端にのみ特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含む;2アダプターAの切断部位において、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程、3工程2で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第一段階環状化工程;4工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程;5アダプターbの切断部位において、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程、および、6工程5で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第二段階環状化工程。以下の工程を含む、単分子DNAから形成される環状DNAからなり、複数分子DNAから形成される環状DNAを含まない、環状DNAの作成方法:1各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程;ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合して、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する、ここで、アダプターAは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり、アダプターBは、アダプターbと前記アダプターAを含み、アダプターbは、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含み、その逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトの間に、個々のアダプターbに固有の配列を有する二本鎖DNA配列を含む二本鎖DNAであり、該逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトによりアダプターbが開裂した場合、該開裂部位は、同一のアダプターb由来の開裂部位とのみ再結合するものである;2アダプターAに含まれる制限酵素サイトを認識する制限酵素により、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程、3工程2で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第一段階環状化工程;4工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程;5アダプターbにおけるニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを認識するニック作成酵素または制限酵素により、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程、および、6工程5で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第二段階環状化工程。請求項2に記載の工程6において、アダプターbが部分的に異なる切断配列部位を介して結合して環状化することにより形成される環状化DNAを、エンドヌクレアーゼを用いて分解する工程をさらに含む請求項2に記載の方法。アダプターAがパリンドローム配列を認識する制限酵素サイトXを含む二本鎖DNAであり、アダプターBが下記構造y1-Y-y2-Xを有する互いに相補的な二本鎖DNAからなる二本鎖DNAである請求項2記載の方法:[構造中、Xは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトである二本鎖DNAであり;y1およびy2は、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり;Yは、環状化させる個々のDNA分子に固有の配列を有する二本鎖DNA配列であって、nは1以上40以下の整数であり、N1~Nnは、それぞれ同一であっても異なっていてもよく、dAMP、dCMP、dGMPおよびdTMPからなる群から選択されるデオキシリボヌクレオチドであり、N’1~N’nは、前記N1~Nnに対してそれぞれ下記:のデオキシリボヌクレオチドであり、ここで、kは1~nの整数である]。y1およびy2がニック作成酵素認識サイトを含む請求項4記載の方法。ニック作成酵素がNbBtsIまたはNtBsqQIである請求項5記載の方法。y1およびy2が制限酵素サイトを含む請求項5記載の方法。下記構造y1-Y-y2-Xを有する互いに相補的な二本鎖DNAからなる環状DNA作成用アダプター:[構造中、Xは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトである二本鎖DNAであり;y1およびy2は、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり;Yは、環状化させる個々のDNA分子に固有の配列を有する二本鎖DNA配列であって、nは1以上40以下の整数であり、N1~Nnは、それぞれ同一であっても異なっていてもよく、dAMP、dCMP、dGMPおよびdTMPからなる群から選択されるデオキシリボヌクレオチドであり、N’1~N’nは、前記N1~Nnに対してそれぞれ下記:のデオキシリボヌクレオチドであり、ここで、kは1~nの整数である]。y1およびy2がニック作成酵素認識サイトを含む請求項8記載のアダプター。ニック作成酵素がNbBtsIまたはNtBsqQIである請求項9記載のアダプター。y1およびy2が制限酵素サイトを含む請求項8記載のアダプター。請求項8に記載のXにおける制限酵素サイトと同一の制限酵素サイトを含む二本鎖DNAからなるアダプターAと、請求項8~10のいずれかに記載のアダプターBとを含む、環状DNA作成用キット。請求項1から7いずれか記載の方法を用いる、cDNAライブラリーの作成方法。以下の工程を含む、請求項1から7いずれか記載の方法を用いて得られた環状DNA分子をメイトペア法に供することにより遺伝子を同定する方法:1請求項1から7いずれか記載の方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程;および、2解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較することにより、環状DNA分子に含まれる遺伝子を同定する工程。以下の工程を含む、請求項1から7いずれか記載の方法を用いて得られた環状DNA分子をメイトペア法に供することにより融合遺伝子を検出する方法:1請求項1から7いずれか記載の方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程;および、2解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較する工程、ここで、両末端の遺伝子が既知の相異なる遺伝子に対応する場合、環状DNA分子に含まれる遺伝子は融合遺伝子であると同定される。アダプターBの両側に隣接する両側の配列が、既知融合遺伝子の両側の末端に対応する、請求項15に記載の融合遺伝子の検出方法。請求項15に記載の方法により検出された融合遺伝子をマーカーとして用いる、該融合遺伝子の発現を特徴とする疾患を検出する方法。アダプターBの両側に隣接する配列が、相異なる遺伝子の末端配列に対応し、かつ既知融合遺伝子の両側の末端には対応しないことにより、環状DNA分子に含まれる遺伝子が新規融合遺伝子であると同定される請求項15に記載の方法。請求項18に記載の方法により検出された新規融合遺伝子の創薬スクリーニングにおける使用。単分子DNAのみから形成される環状DNA分子を確実に作成する方法が求められている。即ち、本発明は、1つのDNAから1つの環状化DNAを作成することを可能とする方法を提供することを目的とする。本発明者らは、DNA単分子に、固有の配列認識部位を含む特定の構造を有するアダプターを導入し、2段階のライゲーションを行うことにより、単分子のみからなる環状化DNAの形成を可能とすることができることを見いだした。本発明者らは、確実に単分子DNAのみが環状化し、複数のDNAによる多分子間での環状化を起こさせない方法を見いだした。本発明は、第一の態様において、以下の工程を含む、単分子DNAから形成される環状DNAからなり、複数分子DNAから形成される環状DNAを含まない、環状DNAの作成方法を提供する:1各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程;ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合して、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する、ここで、アダプターAは、いずれのアダプターAの切断末端とも非特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含む:アダプターbは、同一のアダプターb由来の切断末端にのみ特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含む;2アダプターAの切断部位において、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程、3工程2で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第一段階環状化工程;4工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程;5アダプターbの切断部位において、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程、および、6工程5で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第二段階環状化工程。第二段階環状化工程においては、アダプターbが同一のアダプターb由来の切断末端にのみ特異的に結合することから、複数のDNA分子の環状化による直線状化は実質的に生じなく環状化されるDNAは単分子DNAとなる。この時、環状化されない直線状のDNA分子は、上記同様に除去する必要がある。工程6において環状化されない直線状のDNAは、極めて微量の工程5において切断されたb部分の再結合がなされなかった単分子DNAと大半の工程3で複数DNA分子が環状化し、工程5において、各アダプターbの切断後、再結合できなかった、単分子または複数分子のDNAである。本発明の第一の態様において、好ましくは、アダプターAは、切断末端が互いに相補的な配列を認識する制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり、例えば、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトを含む二本鎖DNAである。また、本発明は、第二の態様において、以下の工程を含む、単分子DNAから形成される環状DNAからなり、複数分子DNAから形成される環状DNAを含まない、単一環状DNAの作成方法を提供する:1各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程;ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合して、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する、ここで、アダプターAは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり、アダプターBは、アダプターbと前記アダプターAを含み、アダプターbは、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含み、その逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトの間に、個々のアダプターbに固有の配列を有する二本鎖DNA配列を含む二本鎖DNAであり、該逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトによりアダプターbが開裂した場合、該開裂部位は、同一のアダプターb由来の開裂部位とのみ再結合するものである;2アダプターAに含まれる制限酵素サイトを認識する制限酵素により、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程、3工程2で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第一段階環状化工程;4工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程;5アダプターbにおけるニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを認識するニック作成酵素または制限酵素により、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程、および、6工程5で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第二段階環状化工程。好ましくは、本発明の上記第二の態様は、さらに、上記工程6において、アダプターbが部分的に異なる切断配列部位を介して結合してミスアニーリング環状化することにより形成される環状化DNAを、エンドヌクレアーゼを用いて分解する工程を含む。これにより、複数分子からなる環状DNAをより確実に排除することができる。本発明の第二の態様において、好ましくは、アダプターAは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトXを含む二本鎖DNAであり、アダプターBは下記構造y1-Y-y2-Xを有する互いに相補的な二本鎖DNAからなる二本鎖DNAである:[構造中、Xは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトである二本鎖DNAであり;y1およびy2は、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり;Yは、環状化させる個々のDNA分子に固有の配列を有する二本鎖DNA配列であって、nは1以上40以下の整数であり、N1~Nnは、それぞれ同一であっても異なっていてもよく、dAMP、dCMP、dGMPおよびdTMPからなる群から選択されるデオキシリボヌクレオチドであり、N’1~N’nは、前記N1~Nnに対してそれぞれ下記:のデオキシリボヌクレオチドであり、ここで、kは1~nの整数である]。上記構造において、nは1~40であり、好ましくは、nは4~15、さらに好ましくはnは5~10である。ただし、nが40を超えても本発明の方法を実施することができる。この態様において、好ましくは、y1およびy2はニック作成酵素認識サイトを含み、さらに好ましくは、ニック作成酵素は6塩基認識のNbBtsIまたは7塩基認識のNtBsqQIである。あるいは、y1およびy2が制限酵素サイトを含むものでもよい。本発明は、第三の態様において、下記構造y1-Y-y2-Xを有する互いに相補的な二本鎖DNAからなる環状DNA作成用アダプターを提供する:[構造中、Xは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトである二本鎖DNAであり;y1およびy2は、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり;Yは、環状化させる個々のDNA分子に固有の配列を有する二本鎖DNA配列であって、nは1以上40以下の整数であり、N1~Nnは、それぞれ同一であっても異なっていてもよく、dAMP、dCMP、dGMPおよびdTMPからなる群から選択されるデオキシリボヌクレオチドであり、N’1~N’nは、前記N1~Nnに対してそれぞれ下記:のデオキシリボヌクレオチドであり、ここで、kは1~nの整数である]。上記構造において、nは1~40であり、好ましくは、nは4~15、さらに好ましくはnは5~10である。ただし、nが40を超えても本発明の方法を実施することができる。本発明の第三の態様の上記アダプターは、本発明の第二の態様におけるアダプターBに相当し、本発明の単分子DNAから形成される環状DNAからなり、複数分子DNAから形成される環状DNAを含まない、環状DNAの作成方法に好適に用いられる。本発明の第三の態様において、好ましくは、y1およびy2はニック作成酵素認識サイトを含み、さらに好ましくは、ニック作成酵素は6塩基認識のNbBtsIまたは7塩基認識のNtBsqQIである。あるいは、y1およびy2が制限酵素サイトを含むものでもよい。本発明はさらに第四の態様において、上記第三の態様において記載のアダプター単に、アダプターBとも称すると、該アダプターBに含まれるXにおける制限酵素サイトと同一の制限酵素サイトを含む二本鎖DNAからなるアダプター単にアダプターAとも称するとを含む環状DNA作成用キットを提供する。本発明はまた、第五の態様において、上記第一または第二の態様の方法を用いる、cDNAライブラリーの作成方法を提供する。本発明はさらに、第六の態様において、以下の工程を含む、上記第一または第二の態様の方法を用いて得られた環状DNA分子をメイトペア法に供することにより遺伝子を同定する方法を提供する:1上記第一または第二の態様の方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程;および、2解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較することにより、環状DNA分子に含まれる遺伝子を同定する工程。好ましくは、解読する塩基配列は、15~100塩基、さらに好ましくは25~35塩基である。ただし、600塩基以上を解読しても本発明の方法を実施することができる。本発明はさらに、第七の態様において、以下の工程を含む、上記第一または第二の態様の方法を用いて得られた環状DNA分子をメイトペア法に供することにより融合遺伝子を検出する方法を提供する:1上記第一または第二の態様の方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程;および、2解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較する工程、ここで、両末端の遺伝子が既知の相異なる遺伝子に対応する場合、環状DNA分子に含まれる遺伝子は融合遺伝子であると同定される。好ましくは、解読する塩基配列は、15~100塩基、さらに好ましくは25~35塩基である。ただし、600塩基以上を解読しても本発明の方法を実施することができる。本発明の第七の態様において、アダプターBの両側に隣接する両側の配列が、既知融合遺伝子の両側の末端に対応する場合、既知の融合遺伝子が検出される。かかる既知の融合遺伝子と疾患との関係が知られている場合、第七の態様の方法により検出された融合遺伝子をマーカーとして用いる、該融合遺伝子の発現を特徴とする疾患を検出する方法が提供される。一方、アダプターBの両側に隣接する配列が、相異なる遺伝子の末端配列に対応し、かつ既知融合遺伝子の両側の末端には対応しない場合には、環状DNA分子に含まれる遺伝子が新規融合遺伝子であると同定される。この場合、検出された新規融合遺伝子は創薬スクリーニングにおける使用に好適に使用される。本発明のアダプターおよび方法を用いることにより、遺伝子解析の精度が劇的に改善される。また、従来にない高精度のメイトペア解析が可能となり、ゲノム解析に極めて有用なツールが提供される。特に、本発明の方法をcDNAライブラリーの作成に応用することで、新規の融合遺伝子が高い可能性で発見される可能性がある。すなわち、単一DNA分子の環状化を確実に達成することにより、新たな診断ツール方法が開発可能となる。本発明によると、DNAの環状化において、複数分子による環状化を実質的に防止する、単分子DNAのみの環状化方法が提供されることにより、メイトペア解析などの遺伝子解析におけるコンタミネーションの問題が解決され、高精度の解析が可能となる。また、本発明の方法を融合遺伝子の検出解析に適用することにより、高精度の融合遺伝子の解析が可能となり、有効な診断ツールを提供することができる。本発明の第一の態様について本発明は、第一の態様において、以下の工程を含む、単分子DNAから形成される環状DNAからなり、複数分子DNAから形成される環状DNAを含まない、環状DNAの作成方法を提供する:1各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程;ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合して、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する、ここで、アダプターAは、いずれのアダプターAの切断末端とも非特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含む:アダプターbは、同一のアダプターb由来の切断末端にのみ特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含む;2アダプターAの切断部位において、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程、3工程2で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第一段階環状化工程;4工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程;5アダプターbの切断部位において、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程、および、6工程5で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第二段階環状化工程。本発明の上記第一の態様は、実質的に1遺伝子DNAからのみ環状化を生じ、複数の遺伝子DNAからの環状化を阻止することを可能とした技術である。具体的には、本発明の第一の態様の方法は、2段階の環状化によることを特徴とする。以下、第一の態様の方法を工程の順に説明する。工程1は、各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程である。ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合させることにより、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する。即ち、各目的DNA分子の一端には、アダプターAを、他端にはアダプターBを結合させ、アダプターB中のアダプターAをアダプターbよりも末端側に位置させることにより、アダプターAを各目的DNA分子の両末端に位置させる。なお、アダプターAは、いずれのアダプターAの切断末端とも非特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含み、アダプターbは、同一のアダプターb由来の切断末端にのみ特異的に結合する切断末端を生じさせる切断部位を含む。即ち、アダプターAは結合特異性を示さず、あらゆるアダプターA由来の切断末端同士で非選択的に結合することができる。一方、アダプターbは個々の目的DNA分子毎に異なる構成をしており、同一のアダプターb由来の切断末端とのみ再結合可能であり、異なるアダプターb由来の切断末端との再結合はできない。工程2は、アダプターAの切断部位において、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程である。工程1で得られたDNA分子はその両端にアダプターAが結合しているため、この第一切断工程により、各DNA分子の両端にアダプターA由来の切断末端が生じる。工程3は、工程2で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第一段階環状化工程である。一段目の環状化はアダプターAによる環状化であり、各DNA分子の両端に生じたアダプターA由来の切断末端が互いに結合して環状化が起こる。ここで、アダプターBは、第一段目の環状化の際に環状分子内にアダプターAと共に取り込まれる。上記のように、アダプターAの機能は、特異性はなく、目的DNA分子両末端の再結合による選択性はない。このことから、単分子DNA分子での両末端のアダプターA部分での結合の他に、複数のDNA分子のそれぞれの両末端の結合による結合環状化も起こることになる。即ち、アダプターAの機能から、単分子環状化とともに、複数分子の環状化も生じる。複数分子の環状化物には、当然、複数のアダプターBが存在することとなる。工程4は、工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程である。工程5は、アダプターbの切断部位において、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程である。即ち、工程3で環状化した各DNA分子に取り込まれたアダプターbにおいて開裂を行い、線状分子を生じさせる。第二切断工程により、各DNA分子の両端にアダプターb由来の切断末端が生じる。この工程において、切断によって生じる切断末端は、他の環状分子由来の切断末端との結合が実質的に出来ないものである。工程6は、工程5で得られたDNA分子の両末端を結合させて環状化させる第二段階環状化工程である。即ち、工程5で得られた各DNA分子の両端にはアダプターb由来の切断末端が存在し、上記のように、アダプターbは個々の目的DNA分子毎に異なる構成をしており、同一のアダプターb由来の切断末端とのみ再結合可能であり、異なるアダプターb由来の切断末端との再結合はできないため、同一のDNA分子の両端のアダプターb由来の切断末端同士の結合により、2段目の環状化が行われる。このアダプターbの特異性によって、各目的DNA分子は単分子のみが環状化されることとなる。即ち、アダプターbは、結合特異性を有し、それぞれのアダプターbの部分が開裂した場合、再結合環状化に際して、元の環状化物において結合していた部分とのみ再結合し、他の部分との再結合はできない。従って、複数分子の環状化の場合に再結合環状化をする場合には、もとの複数分子での再結合環状化以外にあり得なく、この確率は、後述のように、極めて低く実質的に0である。単分子での環状化の確率は、一般的にその濃度から高く、その結果実質的には単分子環状化のみが起こる。環状化せず、直線状の分子のままについては、エキソヌクレアーゼを作用させることにより、分離排除することができる。アダプターAおよびbは、上記の機能を果たす限り、特にその構造は限定されない。例えば、これらアダプターが二本鎖DNAである場合、アダプターAとしては、回文構造を認識する制限酵素サイトを含むものが例示され、アダプターbとしては、例えば、少なくとも4塩基、好ましくは5塩基以上の互いに相補的な核酸からなる二本鎖DNAであって、切断により互いに相補的な一本鎖末端を生じるものが挙げられる。しかし、アダプターAおよびbはこれらに限定されない。例えば、アダプターbのその他の例として、開裂して鍵と鍵穴関係になる物質などでもよく、要するに、開裂した場合、その後再結合させる時は、実質的に開裂前のアダプターとなるものとのみ、再結合可能なものであればよい。但し、ノンパリンドローム配列の切断部位である場合も本発明の方法は実施可能であり、かかる場合には上流アダプターA1、下流アダプターA2が区別され、A1A2が互いに結合する構成とする。この場合、若干ではあるが通常のアダプターAより第一段階での単分子環状DNAの効率が上がることが期待される。本発明の第一の態様により、例えば、メイトペア法による遺伝子解析、遺伝子同定において、きょう雑物となる、複数遺伝子複数分子による環状化物を排除し、単分子1遺伝子のみの環状化物を作成することが可能となる。本発明の第二の態様について本発明の第二の態様は、以下の工程を含む、単分子DNAから形成される環状DNAからなり、複数分子DNAから形成される環状DNAを含まない、環状DNAの作成方法を提供する:1各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程;ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合して、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する、ここで、アダプターAは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり、アダプターBは、アダプターbと前記アダプターAを含み、アダプターbは、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含み、その逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトの間に、個々のアダプターbに固有の配列を有する二本鎖DNA配列を含む二本鎖DNAであり、該逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトによりアダプターbが開裂した場合、該開裂部位は、同一のアダプターb由来の開裂部位とのみ再結合するものである;2アダプターAに含まれる制限酵素サイトを認識する制限酵素により、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程、3工程2で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第一段階環状化工程;4工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程;5アダプターbにおけるニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを認識するニック作成酵素または制限酵素により、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程、および、6工程5で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第二段階環状化工程。本発明の第二の態様において、上記工程6において、アダプターbが部分的に異なる切断部位を介して結合して環状化することにより形成される環状化DNAを、エンドヌクレアーゼを用いて分解する工程をさらに含むことが好ましい。以下、本発明の第二の態様を工程に沿って図5および6を参照して説明する。工程1は、図5に模式的に示すように、各目的DNA分子の一方の末端に第一段階環状化用アダプターAを結合させ、他方の末端に、アダプターbと前記アダプターAを含む第二段階環状化用アダプターBを結合させる工程である。ここで、アダプターBは、DNA分子にアダプターb側を介して結合して、アダプターB中のアダプターAは、DNA分子とアダプターbとの結合の外側に位置する。ここで、アダプターAは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり、アダプターBは、アダプターbと前記アダプターAを含み、アダプターbは、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含み、その逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトの間に、個々のアダプターbに固有の配列を有する二本鎖DNA配列を含む二本鎖DNAであり、該逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトによりアダプターbが開裂した場合、該開裂部位は、同一のアダプターb由来の開裂部位とのみ再結合するものである。アダプターAおよびbについて以下に詳細に説明する。アダプターA:このアダプターは、第一段階目に制限酵素で切断し、その後に環状DNAを期待して遺伝子結合ligationを行うための配列である。従って、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトであれば如何なる制限酵素サイトを含むものでもよい。好ましくは、目的DNAをなるべく切断しないような稀な遺伝子配列を認識する制限酵素のサイトを含むものである。アダプターAに含まれる制限酵素サイトとしては、例えば、NotIやEcoRIが挙げられる。アダプターb:互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含み、その逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトの間に、個々のアダプターbに固有の配列を有する二本鎖DNA配列を含む二本鎖DNAである。このニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトは第二段階目に切断し各分子に特異的な遺伝子切断断端overhangを形成するためのものである。ニック作成酵素は、DNA鎖の一方のみニック切断するものであり、制限酵素は、同時にDNA鎖の2本鎖双方を切断するものであるが、いずれの認識サイトでも導入可能である。逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトによりアダプターbが開裂した場合、開裂部位が生じ、該開裂部位は、同一のアダプターb由来の開裂部位とのみ再結合するものである。該開裂部位の長さは、ニック作成酵素の場合は限定されないが、制限酵素の場合は以下の例にあげるように、制限が生じる。そのため該開裂部位の長さを自由に調整するためにはニック作成酵素の方が好ましい。以下にニック作成酵素認識サイトおよび制限酵素サイトのそれぞれの具体例を挙げる。ニック作成酵素認識サイトの場合制限酵素の場合1制限酵素の場合2制限酵素の場合3この形式の場合、ループ構造からのプライマー伸長法等を用いて、同等のN配列を2カ所に準備する必要がある。次いで、逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトによりアダプターbが開裂した場合の、開裂部位について説明する。開裂部位は、各分子特異的な遺伝子切断断端overhangに相当する部分である。上記のように制限酵素で作成する場合は塩基数に制限があるが、ニック作成酵素では自由に長さを設定することができる。特異性を高くするためには開裂部位の塩基数は長い程よいが、長すぎる時にはミスマッチで遺伝子結合する可能性が高くなる。ゲノムなど複雑性が増す場合には開裂部位の塩基数をより長く設定し、同時にミスマッチ結合ミスアニーリングの可能性に対してエンドヌクレアーゼによる分解過程を追加することが望ましい。なお、開裂部位の配列はランダムな組合せとし、DNA分子1つ1つについて異なるものとなるよう設計する。以下に例として塩基数を5に設定して具体例を記載する。例として以下のような配列のアダプターBを核酸合成により作成することで本発明の方法に用いることができる。工程2は、アダプターAに含まれる制限酵素サイトを認識する制限酵素により、工程1で得られたDNA分子を切断する第一切断工程である図5。工程3は、工程2で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第一段階環状化工程である図6:第1環状化。工程4は、工程3において、環状化せず直線状となった単分子および複数分子が結合したDNAを除去する工程である。工程5は、アダプターbにおけるニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを認識するニック作成酵素または制限酵素により、工程3および工程4で得られた環状DNA分子を切断する第二切断工程である。工程6は、工程5で得られたDNA分子の両末端をライゲーションさせて環状化させる第二段階環状化工程である図6:開裂再環状化。この工程では、開裂部位の配列の特異性により、同一DNAに結合させたアダプターb由来の開裂部位同士でのみ結合が可能である。本発明の第二の態様において、好ましくは、アダプターAはパリンドローム配列を認識する制限酵素サイトXを含む二本鎖DNAであり、アダプターBは下記構造y1-Y-y2-Xを有する互いに相補的な二本鎖DNAからなる二本鎖DNAである:[構造中、Xは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトである二本鎖DNAであり;y1およびy2は、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり;Yは、環状化させる個々のDNA分子に固有の配列を有する二本鎖DNA配列であって、nは1以上40以下の整数であり、N1~Nnは、それぞれ同一であっても異なっていてもよく、dAMP、dCMP、dGMPおよびdTMPからなる群から選択されるデオキシリボヌクレオチドであり、N’1~N’nは、前記N1~Nnに対してそれぞれ下記:のデオキシリボヌクレオチドであり、ここで、kは1~nの整数である]。上記構造において、nは1~40であり、好ましくは、nは4~15、さらに好ましくはnは5~10である。ただし、nが40を超えても本発明の方法を実施することができる。Y部位は塩基配列をそれぞれランダムに組み合わせたペアとしている。たとえばYが8個の塩基配列により構成されるとすれば、4の8乗個の組み合わせとなる。これにより、環状化のペア形成を特異化選択することができ、元のペアのみと再結合することが可能となる。これにより、単一のDNAのみ、再環状化が出来、他の分子のY部分は構造が異なるため、再結合することができない。Y部分の核酸の個数については、4種類の核酸を重複順列的に組み合わせるため、N個の核酸数とするとその配列の数は4のN乗個となる。従って、Nが5個の場合には4の5乗=1016種類のY部分、N=7であれば、16000以上となり、N=7で実質的には十分となる。但し、8個以上でも差し支えない。仮に、Nが大きい場合、部分的に異なっても、ハイブリダイズし、結合可能であるが、そのようにミスマッチを含む場合は、エンドヌクレアーゼを適用することにより、分解可能である。アダプターBのY部分の製造方法は、基本的にN個数を規定し、核酸を規定しないランダムな逐次縮合による主鎖の合成および共通配列のプライマーによるポリメラーゼ伸展反応により製造可能である。本発明の第二の態様において、好ましくは、y1およびy2がニック作成酵素認識サイトを含み、さらに好ましくは、ニック作成酵素はNbBtsIである。y1およびy2は制限酵素サイトを含むものでもよい。本発明の第三の態様について本発明の第三の態様は、上記本発明の第二の態様の方法において用いられる好適なアダプターB、即ち、下記構造y1-Y-y2-Xを有する互いに相補的な二本鎖DNAからなる環状DNA作成用アダプターを提供する:[構造中、Xは、パリンドローム配列を認識する制限酵素サイトである二本鎖DNAであり;y1およびy2は、互いに逆向きに配向した互いに同一のニック作成酵素認識サイトまたは制限酵素サイトを含む二本鎖DNAであり;Yは、環状化させる個々のDNA分子に固有の配列を有する二本鎖DNA配列であって、nは1以上40以下の整数であり、N1~Nnは、それぞれ同一であっても異なっていてもよく、dAMP、dCMP、dGMPおよびdTMPからなる群から選択されるデオキシリボヌクレオチドであり、N’1~N’nは、前記N1~Nnに対してそれぞれ下記:のデオキシリボヌクレオチドであり、ここで、kは1~nの整数である]。上記構造において、nは1~40であり、好ましくは、nは4~15、さらに好ましくはnは5~10である。ただし、nが40を超えても本発明を実施することができる。上記第二の態様と同様に、本発明の第三の態様において、好ましくは、y1およびy2がニック作成酵素認識サイトを含み、さらに好ましくは、ニック作成酵素はNbBtsIまたはNtBsqQIである。y1およびy2は制限酵素サイトを含むものでもよい。本発明の第四の態様について本発明の第四の態様は、上記本発明の第二の態様の方法において用いられる好適なアダプターAおよびアダプターBとを含む環状DNA作成用キット提供する。即ち、上記第三の態様に記載のXにおける制限酵素サイトと同一の制限酵素サイトを含む二本鎖DNAからなるアダプターAと、上記第三の態様に記載のアダプターBとを含む、環状DNA作成用キットを提供する。本発明のかかる環状DNA作成用キットは、アダプターAおよびアダプターBを含み、これらを目的DNA分子の両末端に結合させ、本発明の第一または第二の態様による二段階環状化方法を行うことにより、単分子DNAのみからなる環状化DNAを含み、複数分子のDNAからなる環状化DNAを含まない環状化DNAを提供することができる。本発明の第五の態様について本発明の第五の態様は、本発明の第一または第二の態様による二段階環状化方法を用いる、cDNAライブラリーの作成方法を提供する。本発明の第一または第二の態様による方法を直鎖状cDNAからなるライブラリーに適用することにより、単分子DNAのみからなる環状化DNAを含むcDNAライブラリーを作成することができる。本発明の第六の態様について本発明の第六の態様は、以下の工程を含む、本発明の第一または第二の態様による方法を用いて得られた環状DNA分子をメイトペア法に供することにより遺伝子を同定する方法を提供する:1本発明の第一または第二の態様による方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程;および、2解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較することにより、環状DNA分子に含まれる遺伝子を同定する工程。本発明の第六の態様の方法の、工程1は、本発明の第一または第二の態様による方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程である。好ましくは、解読する塩基配列は、15~100塩基、さらに好ましくは25~35塩基である。ただし、600塩基以上を解読しても本発明の方法を実施することができる。塩基配列の解読は当業者に周知の方法、シークエンサーを用いて解読することができる。本発明の第六の態様の方法の、工程2は、解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較することにより、環状DNA分子に含まれる遺伝子を同定する工程である。目的DNA分子の両末端配列に対応する、解読した塩基配列が、既知の遺伝子の両末端配列と同一であることが確認されれば、目的DNA分子は、当該既知の遺伝子であると同定される。本発明の第七の態様について本発明の第七の態様は、以下の工程を含む、本発明の第一または第二の態様による方法を用いて得られた環状DNA分子をメイトペア法に供することにより融合遺伝子を検出する方法を提供する:1本発明の第一または第二の態様による方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程;および、2解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較する工程、ここで、両末端の遺伝子が既知の相異なる遺伝子に対応する場合、環状DNA分子に含まれる遺伝子は融合遺伝子であると同定される。本発明の第七の態様の方法の、工程1は、本発明の第一または第二の態様による方法を用いて得られた環状DNA分子における、アダプターBの両側に隣接するそれぞれ15塩基以上600塩基以下の塩基配列を解読する工程である。好ましくは、解読する塩基配列は、15~100塩基、さらに好ましくは25~35塩基である。ただし、600塩基以上を解読しても本発明の方法を実施することができる。塩基配列の解読は当業者に周知の方法、シークエンサーを用いて解読することができる。本発明の第七の態様の方法の、工程2は、解読した塩基配列を既知の遺伝子の両末端の配列と比較する工程である。ここで、両末端の遺伝子が既知の相異なる遺伝子に対応する場合、環状DNA分子に含まれる遺伝子は融合遺伝子であると同定される。即ち、目的DNA分子の両末端配列に対応する、解読した塩基配列の一方の末端に対応する部分が、既知の遺伝子の片側末端と同一であり、他方の末端に対応する部分が、別の既知の遺伝子の片側末端と同一であれば、目的DNA分子は、2つの既知の遺伝子からなる融合遺伝子であると同定される。例えば、アダプターBの両側に隣接する両側の配列が、既知融合遺伝子の両側の末端に対応する場合、目的DNAは既知融合遺伝子であると検出される。既知融合遺伝子の発現と疾患との関係が知られている場合、かかる方法により検出された融合遺伝子をマーカーとして用いることにより、該融合遺伝子の発現を特徴とする疾患を検出することが可能である。また例えば、アダプターBの両側に隣接する配列が、相異なる遺伝子の末端配列に対応し、かつ既知融合遺伝子の両側の末端には対応しない場合、環状DNA分子に含まれる遺伝子は新規融合遺伝子であると同定される。かかる方法により検出された新規融合遺伝子は創薬スクリーニングにおいて使用することができる。以下の実施例において、目的DNA分子の両端目的DNA分子の左端、右端にアダプターを結合させる具体的方法について説明する。実施例1:mRNAから合成したcDNAを用いる融合遺伝子発見への本発明の方法の応用mRNAからcDNAライブラリーを合成する場合、現在使用されている最も一般的な方法ClontechSMARTcDNAmethodでは、図7のようにmRNAの3’末端のpolyAサイトに相補的なpolyT配列を有するオリゴヌクレオチド1を用いて、まず相補鎖DNAを逆転写酵素で合成する。合成終了時にmRNAの5’末端において図7のように特定オリゴヌクレオチド配列2が取り込まれる。次にこの特定配列へ相補的なオリゴヌクレオチドからDNA合成を行う、あるいはPCRでcDNAライブラリーが作成される。cDNA合成の際に同時に本発明のアダプターを組み込む場合この場合、mRNAの3’末端のpolyAサイトに相補的なpolyT配列を有するオリゴヌクレオチド1配列にアダプターBを導入しておき、オリゴヌクレオチド2配列にアダプターAを付加しておくことでcDNAライブラリーが合成されたときには、自動的に本発明の基本形の構造になっており、右端左端に新たな配列を結合させる必要もなく、そのまま次のステップへ進むことができる。この方法で、さらにcDNAライブラリーをPCR増幅する際に、そのまま増幅したのではある特定のN塩基配列が増幅されてしまう。そのためN塩基の多様性を維持するため、例えば、上流primerとして5’リン酸基付加primerを使用し、下流primerにはN塩基を含むprimerを用いて増幅し、PCR後にリン酸基primerを取り込んだ側のストランドをλexonucleaseで分解し、再度上流primerからprimerextensionを行い、N塩基による多様性を維持したcDNAライブラリーを完成させる、等の手続きを行う。但し、アダプター結合法であればこの過程は必要なく、ライブラリーの断片化などの修飾を行った上で本発明のアダプターを導入するためには、次のアダプター結合法を行う。通常のcDNA合成の後に本発明のアダプターを組み込む場合cDNAライブラリーを作成した場合、図7の3のように3’末端、5’末端にそれぞれ制限酵素配列を導入しておくことができる。この場合の制限酵素としては通常のパリンドローム配列を使用することも、末端を区別するためにノンパリンドローム配列を使用することも可能であり、またアダプター結合を確実にするため平滑末端からA突出塩基の形状へアダプターを結合することも可能である。ライブラリーの修飾を行った上に本発明のアダプターを導入するためにはこちらの方法が望ましい。実施例2:ゲノムのメイトペア法解析への本発明の方法の応用ゲノムを対象とする場合はcDNAライブラリーとは状況が異なる。ゲノム断片にはcDNAと異なりDNA断片の左右を区別することができない。従って図8のように左端のアダプター、右端のアダプターを双方結合させて、双方のアダプターが適切に結合したもの、即ち図8ののみをPCR法やビオチン法、あるいは両端のX制限酵素配列としてノンパリンドローム配列を挿入することや、N領域を含む制限酵素BstXI等により同一部位に制限酵素サイトを複数設置する方法等、で選択してゆくことができる。アダプターAとBをDNA分子の両末端にそれぞれ付加することについて基本的に、以下のような手法をとることによりアダプターAとBをDNA分子の両末端にそれぞれ付加する。第一に、目的DNA分子数に応じて、ある程度の濃度を決定した複数のDNA群に、先ず、アダプターAを結合させる。この場合、アダプターAの添加量は存在する対象DNA分子量よりも少なめとする。ただし、量論的には、対象DNA分子数と同数であっても、あるいは、DNA断片に一塩基突出を酵素的に作成し、相補的なアダプターを結合させてもよく、この場合は特にアダプターの濃度は過剰であっても構わない。これにより、アダプターAをDNA分子の末端に結合させる。次いで、アダプターBを結合させる。本発明においては、図8のaに記載のように一方の末端にアダプターA、他方の末端にアダプターBが結合した分子を作成する必要がある。ここで、図8のbやcに記載のように、アダプターAのみ結合したDNA分子図8のbおよびアダプターCのみが結合したDNA分子図8のcは排除する必要がある。以下その方法について説明する。第1制限酵素X部位にノンパリンドローム配列を使う場合図8のタイプの分子の場合、第1環状化、ニックによる切断、第2環状化が問題なく行われ、問題なく目的の環状化DNAが作成される。一方、図8のタイプの分子の場合、第1環状化は、単分子としては不可であるため除去される。しかし複数DNAとの環状化は形成しうる例えば、タイプの分子とタイプの分子による2分子結合。この複数DNA分子は必ず結合先としてまたはタイプの分子と結合することになる。従って、両側は必ずN配列のある特異配列との結合となる。このため、ニック切断後の第2環状化は形成不可となり排除される。また、図8のタイプの分子の場合、第1環状化は単分子としては不可で除去される。しかし複数DNAとの環状化は形成しうる例えば、タイプの分子とタイプの分子による2分子結合。このDNA断片はもともと両端に異なるN配列があるため、ニック切断後の第2環状化は不可であり排除される。第1制限酵素X部位にパリンドローム配列を使う場合図8のタイプの分子の場合、第1環状化、ニックによる切断、第2環状化が問題なく行われ、問題なく目的の環状化DNAが作成される。一方、図8のタイプの分子の場合、第1環状化は可能であるが、ニック配列を有さないためニック切断が行われずに環状化DNAのまま残ってしまい排除できない。これを防ぐ方法例として、下記ののBstXI法がある。また図8のタイプの分子の場合、第1環状化およびニックによる切断は可能であるが、もともと両端に異なるN配列があるため、ニック切断後の第2環状化は不可であり排除される。BstXI法について両端にアダプターAが付加された場合、第一段階でライゲーションされるが、第二段階の開裂が起きないため、このままでは環状のままとどまるという問題を解決する方法として、アダプターAの制限酵素サイトを含む外側に例えばBstXIを仕込むことが挙げられる。つまり、下記制限酵素サイトBstXI部位において、CCANNNNNNTGGを、例えば、CCAGAATTCTGGとなるようにEcoRIサイトを組み込む。即ち、この方法では、アダプターAならびにアダプターBに含まれるアダプターAの制限酵素サイトを例えばEcoRIサイトとする。そして、アダプターAだけ、EcoRIサイトの外側の配列を、例えば、BstXIの認識配列とする。つまり、アダプターAの配列をCCAGAATTCTGGとする。一方、アダプターBに含まれるアダプターAには、EcoRIサイトを含めるが、BstXIの認識配列は組み込まず、BstXIでは切断されないようにする。こうるすことにより、もしアダプターA同士が両端につき、それ同士が会合した場合、BstXIで切断することで、環状化を開き、排除することができる。もちろんアダプターAおよびBとが結合した場合にはアダプターBにはBstXIの認識配列がないため、BstXIでは開裂されない。以上のような方法により、cDNAのように上流下流を区別できないゲノムDNA断片であっても本発明の方法を導入し単分子環状DNAを作成することが可能であり、メイトペア解析の精度を著しく向上させることができる。実施例3:複数分子環状DNAにおいて同遺伝子同士の遺伝子再結合の可能性についてかかる可能性は確率論的に十分無視できるが、その根拠を以下に説明する。確立論的に分離した遺伝子同士が再び会合する可能性を推定するため、1DNA分子の体積と反応溶液量体積で推定する場合、2反応溶液中の分子数から推定する場合これらの時、Y部分のN塩基数が十分に長く特異性が高いと仮定しておく、さらに3N塩基数が十分に長くはなく決まっている場合、の3つに分けて可能性を概算する。1DNA分子の体積と反応溶液量体積で推定する場合まずDNA1分子を球状として体積を推定し、反応系で一度分離された分子同士が互いに球体として溶液中で会合する可能性を概算する。一塩基の長さ:034nm3kbpのプラスミドの長さ:1x10e4mm球体として占めると推定した体積は:43x314xxxmm34x10e12mm3一分子の体積を4x10e12mm3と仮定すると100ul中には球体として:100mm34x10e12mm325x10e13となる。従って、均一であるとすると、ある球体に相補的とされる同等な球体が会合する可能性は、4x10e14と極めて小さい。2反応溶液中の分子数から推定する場合一方、分子数を計算すると、3kbpのプラスミドの分子量は:625x300018x10e61モルのプラスミド質量は:1molL18x10e6g1L18x10e12ug1L3ugのプラスミドのモル数は:1x3ugug318x10e12molL16x10e12molL16x10e9molmlアボガドロ数を6x10e23とすると、3ugプラスミドを1ml中に溶かした時の分子数は:16x10e9molmlx6x10e2316x6x10e141x10e15個従って、100ulの反応系に3ugのプラスミドが存在すると:100ul10e1mm3であるので、1x10e14分子数あることになる。この分子数の溶液中である分子が、その分子に相補的とされる同等な分子に会合する可能性は、11x10e14と極めて小さい。3以上より、むしろY部分のN塩基数の特異性の方が、分離された遺伝子同士が再結合する可能性に寄与すると推測される。N塩基数が5である場合、同じ遺伝子断端同士を有して2つの同遺伝子が再結合する可能性は:xxxxxxxxx1x10e6従ってこれらの概算から、複数のDNAが環状形成した後に分離した場合に、その際と同じDNA同士で再結合する可能性は極めて低く、十分に無視できると結論できる。実施例4:単分子DNAによる環状化DNA作成2段階DNA結合ligation法により単分子DNAによる環状化の効率を上げ、複数DNA分子による環状化のノイズを減少させることを検証するため以下のような実験を行った。2種類のプラスミド、PlasmidAおよびPlasmidBを準備した。それぞれのプラスミドを制限酵素で切断した後に、そのままライゲーションしたものiと、本発明のアダプターをライゲーションして2段階ライゲーションしたものiiを比較した。本発明の方法を適用したiiは、アダプターとして任意の塩基Nを6塩基としてランダム合成し、アダプターライゲーション後にアダプターの末端に存在するNcoIサイトで切断した後に、これらプラスミドの混合物を1段階目のライゲーションにより環状化し、さらにNick酵素で6塩基の任意Nの前後にNickを入れ環状化を解いた後に、再度のライゲーションにより2段階目の環状化を行ったものである。この時、混合溶液中iおよびiiには、1PlasmidAの単分子による環状化DNA、2PlasmidBの単分子による環状化DNA、3PlasmidAの複数分子による環状化DNA、4PlasmidBの複数分子による環状化DNAそして5PlasmidAとPlasmidBを含む複数分子による環状化DNAが含まれると予測される。本発明によると、iと比較してiiでは、345の環状化DNAが大幅に減少していることが期待された。そこでこれらおよびから生成した混合溶液中の、5の量を代表として評価することとし、PlasmidAおよびPlasmidBに特異的なPCRプライマーで定量的PCRを行った。その結果、5のようなノイズにあたる複数分子による環状化DNA量が、本発明の方法の導入によって、の方法と比べて約100分の1に減少させることが可能であることが確認された。