"抗癌剤の細胞内濃度を制御するインビトロの方法であり、Patchedタンパク質の活性の制御因子が細胞に接触することにより、抗癌剤の細胞内濃度を制御する、当該方法。Patchedタンパク質による抗癌剤の輸送の活性の刺激因子が細胞に接触する、請求項1に記載の方法。Patchedタンパク質による抗癌剤の輸送の活性の阻害因子が細胞に接触する、請求項1に記載の方法。抗癌剤の細胞内濃度を制御するための医薬を調製するための、Patchedタンパク質の活性の制御因子の使用。前記Patchedタンパク質の活性の制御因子がPatchedタンパク質の活性の活性化因子であり、そして、前記医薬が、抗癌剤の細胞内濃度を減少させるためのものである、請求項4に記載の使用。前記Patchedタンパク質の活性の制御因子がPatchedタンパク質の活性の阻害因子であり、そして、前記医薬が、抗癌剤の細胞内濃度を増大させるためのものである、請求項4に記載の使用。前記抗癌剤が、抗腫瘍抗生物質、アルキル化剤、代謝拮抗物質、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤又は有糸分裂紡錘体毒素mitoticspindlepoisonから選択される、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法又は請求項4~6のいずれか1項に記載の使用。前記抗癌剤が、抗腫瘍抗生物質である、請求項7に記載の方法又は使用。前記抗腫瘍抗生物質が、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ハイドロキシウレア、イデルビシン、マイトマイシンC、又はマイトキサントロン、好ましくはドキソルビシンから選択される、請求項8に記載の方法又は使用。抗癌治療の効率を改善することを意図する医薬の調製における、Patchedタンパク質の活性の制御因子の使用。故に、本発明の第一の主題は、Patchedタンパク質の活性の制御因子が細胞に接触することを特徴とする、細胞内抗癌剤の細胞内濃度を制御するインビトロの方法である。当業者は、抗癌剤による治療、特に細胞内標的を用いた治療の過程で、様々な手段において、単一の抗癌剤又はいくつかの抗癌剤の組み合わせの使用が推奨されることを認識する。本発明においても、抗癌剤という表現は、1つ又は複数の細胞内抗癌剤を指す。制御因子は、本発明において、活性化因子又は阻害因子を意味する。本発明の変形において、当該方法は、Patchedタンパク質による抗癌剤の輸送の活性の阻害剤が細胞に接触することを特徴とする、抗癌剤の細胞内濃度を増大させるインビトロの方法である。本発明の他の変形において、当該方法は、Patchedタンパク質による抗癌剤の輸送の活性の刺激因子が細胞に接触することを特徴とする、抗癌剤の細胞内濃度を減少させるインビトロの方法である。治療的用途も想定される。故に、本発明の主題は、抗癌剤の細胞内濃度を制御することを意図する医薬を調製するための、Patchedタンパク質の活性の制御因子の使用でもある。一つの変形において、本発明は、抗癌剤の細胞内濃度を低下させることを意図する医薬を調製するための、Patchedタンパク質の活性の活性化因子の使用である。他の変形において、本発明の主題は、抗癌剤の細胞内濃度を増大させることを意図する医薬の調製のためのPatchedタンパク質の活性の阻害剤の使用である。本発明において、Patchedタンパク質の阻害因子とは、以下のものを意味する。-Patchedタンパク質に対する抗体例えばNakamuraMasafumietal.,AnticancerResearch27,3743-37482007-コレステロール、オキシステロール又は他のコレステロールのアナログ。実際に、本発明者らは、Patchedタンパク質が、コレステロールを細胞内から細胞外に輸送することを示している国際出願PCT/FR2011/000558,出願日2011年10月18日、及びBidetetal.,PlosOne,September2011,vol.6,Issue9,2011。十分量のコレステロール又はそのアナログの存在は、Patchedタンパク質上で抗癌剤と競合して、抗癌剤の排出を阻害する。-抗癌剤の輸送されないアナログ。本発明において、抗癌剤は、抗腫瘍抗生物質、アルキル化剤、代謝拮抗物質、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤又は有糸分裂紡錘体毒素mitoticspindlepoisonを意味する。抗腫瘍抗生物質として、例えば、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ハイドロキシウレア、イデルビシン、マイトマイシンC、又はマイトキサントロンが挙げられる。アルキル化剤として、例えば、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、オキサリプラチン、ウラムスチン、又はテモゾロミドが挙げられる。代謝拮抗剤として、例えば、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、フロキシウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、メトトレキサート、又はペメトレキセドが挙げられる。植物アルカロイドとして、例えば、ブンブラスチン又はビンクリスチンビノレルビンが挙げられる。トポイソメラーゼ阻害剤として、例えば、イリノテカン、トポテカン、又はエトポシドが挙げられる。そして有糸分裂紡錘体毒素として、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビノラルビンが挙げられる。好ましくは、本発明において、特に重要な細胞内抗癌剤は、抗腫瘍抗生物質のファミリーに属するもので、より有利には、特に重要な細胞内抗癌剤は、ドキソルビシンである。本発明において、Patchedタンパク質の活性の制御因子活性化又は阻害は、好ましくは、生理的に有効な用量で、医薬中に存在する。本発明において、前記医薬は、内服又は非経口経路用に製剤化されてもよい。本発明の医薬は、更に、Patchedタンパク質の活性の制御因子と組み合わせて、1つ以上の他の治療有効成分を含有してもよく、当該成分は、同一の病理又は異なる病理に対するものであってもよく、特に当該病理の1つに罹患した対象の治療期間中に、同時に、別箇に、又は交互に使用されてもよい。他の有効成分の一例として、スタチン、Smoothened受容体のアンタゴニスト、又はPatchedタンパク質の活性の制御因子とは別の抗癌剤の流出の活性の制御因子が挙げられる。故に、本発明の主題は、Patchedタンパク質の活性の制御因子、スタチン、Smoothened受容体のアンタゴニスト、又はPatchedタンパク質の活性の制御因子とは別の抗癌剤の流出の活性の制御因子の組み合わせ使用にも関する。好ましくは、Patchedタンパク質の活性の制御因子は、Patchedタンパク質の活性の阻害剤であってもよい。本発明において、Patchedタンパク質の活性の制御因子活性化又は阻害は、医薬において、1つ以上の賦形剤、又は不活性、即ち医薬的に不活性かつ無毒性のビヒクルと混合して使用されてもよい。例えば、生理食塩水、生理的、等張、緩衝等の溶液であって、医薬的使用に適合し、当業者に知られるものが挙げられる。当該組成物は、分散剤、可溶化剤、安定化剤、保存料から選択される1つ以上の薬剤又はビヒクルを含有してもよい。製剤化液体、注射剤又は固体において使用される薬剤又はビヒクルとして、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、シクロデキストリン、ポリソルベート80、マンにトール、ゼラチン、ラクトース、植物又は動物油、アカシア等が挙げられる。好ましくは、植物油が使用される。前記組成物は、注射用懸濁物、ゲル、油、錠剤、座薬、粉末、ゲルカプセル、カプセル等の形態に製剤化されてもよく、任意で、本草薬形態galenicalform、又は放出期間を延長/遅延させるためのデバイスにより製剤化される。この種類の製剤化において、セルロース、炭酸塩又は澱粉を使用するのが好ましい。当業者に知られた任意の方法により投与が実施され、好ましくは経口又は注射投与であり、典型的には、腹腔内、脳内、髄腔内、静脈内、動脈内、又は筋肉内経路による。経口経路による投与が好ましい。本発明は、哺乳類、特にヒトに使用されてもよい。一般に、前記化合物の日常用量は、所望の治療効果を得る最少の用量であり得る。場合によっては、当該日常用量は、1日に2、3、4、5、6又はそれ以上の回数に分けて投与されてもよく、又は適切な間隔で複数回投与されてもよい。選択される用量は、特に投与経路、投与期間、投与回数、Patchedタンパク質の活性の制御因子の排出の割合、Patchedタンパク質の活性の制御因子と組み合わせて使用される物質、患者の年齢、体重及び生理的状態、及び病歴、並びにその他の医学分野で知られる情報等の、複数の要素に依存し得る。また、本発明の主題は、抗癌治療、好ましくは抗癌治療の効率を改善するための、Patchedタンパク質の活性の制御因子の使用でもある。本発明の他の特徴及び長所は、下記本発明の実施例及び図面を参照して明確になり得る。材料及び方法細胞培養及び膜の調製NIH3T3マウス繊維芽細胞株を、10ウシ胎児血清、100U/mlペニシリン及び100μg/mLストレプトマイシンを添加したDMEM培養培地Invitrogen,USA中、37°C、5CO2含有水飽和空気中で維持した。当該細胞を90~100コンフルエントとなるまで単層で培養し、4~5日置きに20回未満継代した。酵母培養及び膜の調製サッカロマイケスセレウィシアエのK669株Mata,ura3,及びleu2-3を、酢酸リチウム法を用いてプラスミドYEpPMAhPtc-MAPJoubertetal..2009,BBABiomembrane,1788:1813-1821;2010,MethodsinMolecularBiology,HumanaPress,Mus-VeteauEd.,601:87-103で形質転換し、最少培地及びロイシンを含有しないアミノ酸の混合物を含有する培養皿に播種した。クローンを、600nmOD600で3に達するまで、2のD-グルコースを添加した最少培地MM0.67アミノ酸不含酵母窒素ベース、0.3mMアデニン、0.5mMウラシル、0.3mMチロシン及びロイシンを含有しないアミノ酸の混合物中で、30°Cでプレカルチャーした。このプレカルチャーをOD600が0.1~0.2となるまで、2D-グルコースを含有する富栄養培地酵母抽出物、バクトペプトン、ペプチンで希釈して、OD600が5~7になるまで18°C、200rpmで撹拌培養した。膜の調製のために、全ての測定は、4°Cで実施された。酵母を冷水で洗浄し、50mMTris-HClpH7.4、150mMNaCl、2.5mMEDTA、1mMPMSF及び4mMベンズアミジン中に再懸濁し、グラスビーズ425~600μm,Sigmaを入れて15分間ボルテックス撹拌により2回破壊した。5分間2000gで遠心分離して、破壊されなかった酵母及びガラスビーズを除去した。取得された上澄を1時間100,000gで遠心分離して、膜を回収した。当該ペレットを、EDTAを含有しない同一の緩衝剤中で2回洗浄し、50mMTris-HClpH7.4、150mMNaCl、10グリセロール、1mMPMSF及び4mMベンズアミジンを含有する緩衝剤中に、5mg/mgで再懸濁した。ゲル電気泳動及びウエスタンブロット試料中に含有されるタンパク質を、標準的な技術を使用して、8SDS/ポリアクリルアミドゲル8SDS-PAGEによる電気泳動で分離し、そしてニトロセルロースメンブレンAmersham上に転写した。当該ニトロセルロース麺部練を、まずブロッキング緩衝剤20mMTris-HClpH7.5,450mMNaCl,0.1Tween-20,4スキムミルク中、室温で1時間ブロッキングし、そしてウサギ抗PCTポリクローナル抗体希釈1:1000Joubertetal.2009と接触させて4°Cで一昼夜置いた。当該ニトロセルロース膜を、前記ブロッキング緩衝剤中で2回洗浄した。ホースラディッシュペルオキシダーゼを付加したヤギ抗ウサギ二次ポリクローナル抗体希釈1:3000Dakoを、4°Cで2時間適用した。反応の検出は、ウエスタンブロット用化学発光検出系のECLキットMillipore及びFusionFX7登録商標Vilber-Lourmatを使用して実施された。酵母のドキソルビシン耐性ヒトPatchedタンパク質を発現しない酵母対照K699及びヒトPatchedタンパク質を発現する酵母を、通常の富栄養培地中で18°Cで培養し、これに培地1mlあたり10μgのドキソルビシンを添加した。培養期間中、600nmにおける酵母のODが測定された。ドキソルビシンの流出の測定NIH3T3細胞については、10ウシ胎児血清、100U/mlペニシリン及び100μg/mlストレプトマイシンが添加されたDMEM培養培地Invitrogen,USAを充填した24ウェルプレートに播種され、5CO2水飽和大気中、37°Cで維持された。80コンフルエントの時点で培地を除去し、10μMのドキソルビシンを含有する培地に置き換えた。そして細胞を、50rpmで振盪しながら37°Cで2時間インキュベートした。そして細胞をNaCl緩衝剤140mMNaCl,5mMKCl,1mMCaCl2,1mMMgSO4,5mMグルコース,20mMHEPES,pH7.4で洗浄し、そして、30、60及び90分間、30nMのShhの存在下、又は非存在下、250μLのNaCl緩衝剤140mMNaCl,5mMKCl,1mMCaCl2,1mMMgSO4,5mMグルコース,20mMHEPES,pH7.4中でインキュベートした。遠心分離5分、6800gで細胞の断片を全て除去した後、プレートリーダーFLUOstar,Labtech中の200μLの上澄において、ドキソルビシン蛍光の読み取りλex=490/-10nm,λem=610/-10nmを実施した。酵母においては、K699対照酵母及びPatchedタンパク質を発現する酵母を、2グルコース添加富栄養培地中で、OD600が7になるまで培養した。当該細胞を遠心分離し5分、3000g、水で4回洗浄し、そして最後に、50mMNaOH-Hepes緩衝剤pH7.0中にOD600が10となるように慎重に懸濁し、10μMドキソルビシン存在下で2時間インキュベートした。洗浄後、当該酵母を、50mMNaOH-Hepes緩衝剤pH7.0中に再懸濁した。20分後、酵母を遠心分離して、上澄中に含有されるドキソルビシンを、蛍光強度により測定したλex=490/-10nm,λem=610/-10nm。ゼノパス卵:卵の取得及び調製卵は、倫理委員会に推奨される手順に従い、MS222トリカインメタンスルホン酸で麻酔した雌のゼノパスラエウィスから外科的に回収した。当該卵を、50U/mlのペニシリン及び50μg/mlのストレプトマイシンを添加した、pH7.4のMBS生理食塩水溶液NaCl85mM,KCl1mM,NaHCO32.4mM,MgSO40.82mM,CaNO320.33mM,CaCl20.41mM,HEPES10mM,NaOH4.5mMで洗浄した。そして、当該卵を、1.8mg/mlのコラゲナーゼ中で19°C、16時間、そしてカルシウムを含有しないMBS中で30分間インキュベーションし、そしてMBS中に置いた。当該卵に、1個あたり10又は20ngのヒトPatchedタンパク質をコードするRNAを注入した。当該卵を、MBS中、19°Cで3日間インキュベーションした。10個の対照卵未注射及びヒトPatchedタンパク質をコードするRNAを注入した卵を4回試行、100μMドキソルビシンの存在下、16時間、19°Cでインキュベーションした。洗浄後、当該卵を、MBS中に置いた。上澄を90分後に採取し、当該試料中に存在するドキソルビシンを蛍光強度により測定したλex=490/-10nm,λem=610/-10nm。Patchedタンパク質へのドキソルビシンの結合Patchedタンパク質へのドキソルビシンの結合は、K699対照酵母及びヒトPatchedタンパク質を発現する酵母から取得した膜調製物のドキソルビシン蛍光を消光することにより示された。50nMのドキソルビシンを30μgの膜に添加して、ドキソルビシン蛍光を、時間との関係で測定した。実施例1:ヒトPatchedタンパク質を発現する酵母は、発現しない酵母よりも、ドキソルビシンに対する耐性が強い図1。通常の富栄養培地中で、K699対照酵母黒色正方形及びヒトPatchedタンパク質を発現する酵母黒色菱形は、培養期間中、同程度の増殖を示した1A。ドキソルビシンの存在下、トPatchedタンパク質を発現する酵母は、発現しない酵母よりも、ドキソルビシンに対して高い耐性を示した1B。実施例2:酵母中で発現したヒトPatchedタンパク質は、ドキソルビシンの流出を促進する図2。酵母の膜上のヒトPatchedタンパク質の存在は、ドキソルビシンの流出の増大を引き起こすことが観察された。実施例3:内在的Patchedタンパク質は、マウス繊維芽細胞におけるドキソルビシンの流出を促進する図3。Patchedタンパク質が内在系の中で同一の機能を有するか否かをチェックするため、NIH3T3マウス繊維芽細胞を24ウェルプレート中でコンフルエントとなるまで培養し、そしてドキソルビシンの存在下でインキュベーションした。Shhの存在は、ドキソルビシンの流出を、20~30まで阻害したことが観察された。細胞表面でShhはPatchedタンパク質と相互作用して、その内面化internalizationを引き起こす。Shhの存在下で観察されるドキソルビシンの流出の減少は、細胞表面からのPatchedタンパク質の消失によると考えられる。実施例4:ゼノパス卵中で発現するヒトPatchedタンパク質は、ドキソルビシンの流出を促進する図4。図4Aは、1個あたり10ngトラック1又は20ngトラック2のヒトPatchedタンパク質をコードするRNAを注入した卵の膜の調製物について実施されたウエスタンブロットを示す。トラック3は、未注入卵対照の調製物に対応する。ヒトPatchedタンパク質が、卵の細胞質膜上に発現し、この発現量が、注入されたRNAの量に比例することが観察された。図4Bは、卵におけるドキソルビシンの流出の測定を示す。当該試験は、10個の対照卵未注入及びヒトPatchedタンパク質をコードするRNAを注入した卵について実施され4回試行、4回試行の平均値を示す。当該卵の細胞質膜上のヒトPatchedタンパク質の存在は、細胞からのドキソルビシンの流出の増大を引き起こすことが観察された。実施例5は、酵母において発現したヒトPatchedタンパク質へのドキソルビシンンの結合を示す図5。黒色菱形は、ヒトPatchedタンパク質を発現しない対照酵母を示す。黒色正方形は、ヒトPatchedタンパク質を発現する酵母調製物1を示す。×印は、は、ヒトPatchedタンパク質を発現する酵母調製物2を示す。黒色三角形は、ヒトPatchedタンパク質を発現する酵母調製物3を示す。ヒトPatchedタンパク質を含有する膜において、迅速かつ顕著なドキソルビシン蛍光の消光が観察され、これは、ヒトPatchedタンパク質へのドキソルビシンの結合に対応する。"