"単離されたピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを含む組成物。免疫原性である、請求項1に記載の組成物。前記ポリペプチドが、対応する野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドと比較して、N末端Cysの欠失を含む、請求項1に記載の組成物。前記ポリペプチドが、1位のシステインが欠失している、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、および配列番号21からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の組成物。前記ポリペプチドが、配列番号44、配列番号49、配列番号50、および配列番号55からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項4に記載の組成物。前記ポリペプチドが、発現系に作動可能に連結したヌクレオチド配列によってコードされ、前記発現系が、細菌細胞において発現され得る、請求項1に記載の組成物。発現系がプラスミド発現系である、請求項6に記載の組成物。細菌細胞が大腸菌E.coli細胞である、請求項6に記載の組成物。ヌクレオチド配列が、前記ヌクレオチド配列の発現を制御する調節配列に連結している、請求項6に記載の組成物。前記ポリペプチドが、対応する野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドと比較して、N末端Cysの置換を含む、請求項1に記載の組成物。1位のシステインが欠失している、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、および配列番号21からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、細菌細胞において発現され得る発現系に作動可能に連結しているヌクレオチド配列を発現させるステップを含むプロセスによって得ることが可能なピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを含む組成物。細菌細胞が大腸菌E.coliである、請求項0に記載の組成物。配列番号49で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド、および配列番号44で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドを含む組成物。免疫原性である、請求項1~13のいずれかに記載の組成物。血清群Bの髄膜炎菌NeisseriameningitidisのORF2086サブファミリーAポリペプチドをさらに含む、請求項13に記載の組成物。血清群Bの髄膜炎菌NeisseriameningitidisのORF2086サブファミリーBポリペプチドに対する、哺乳動物における殺菌性の免疫応答を誘発する、請求項1~13のいずれかに記載の組成物。配列番号49で示されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。配列番号46を含む、単離されたヌクレオチド配列。配列番号47を含む、単離されたヌクレオチド配列。配列番号48を含む、単離されたヌクレオチド配列。配列番号50で示されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。配列番号45を含む、単離されたヌクレオチド配列。配列番号44で示されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。配列番号46、配列番号47、配列番号48、および配列番号45からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むプラスミドであって、細菌細胞において発現され得るプラスミド。細菌細胞が大腸菌E.coliである、請求項24に記載のプラスミド。哺乳動物においてORF2086サブファミリーB血清群Bの髄膜炎菌Neisseriameningitidisに特異的な殺菌性抗体を誘発する方法であって、配列番号44および配列番号49からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはその組み合わせを含む、効果的な量の単離されたポリペプチドを哺乳動物に投与することを含む方法。配列番号21に対する90を超える同一性を有する配列を含むポリペプチドを細菌細胞において発現させるステップであって、前記配列が、配列番号21のアミノ酸13~18、配列番号21のアミノ酸21~34、および配列番号21のアミノ酸70~80からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせを含み、前記配列がN末端システインを欠いている、ステップ、およびポリペプチドを精製するステップを含む、ポリペプチドを産生するための方法。前記配列が、配列番号21のアミノ酸96~116、配列番号21のアミノ酸158~170、配列番号21のアミノ酸172~185、配列番号21のアミノ酸187~199、配列番号21のアミノ酸213~224、配列番号21のアミノ酸226~237、配列番号21のアミノ酸239~248からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせをさらに含む、請求項27に記載の方法。細菌細胞が大腸菌E.coliである、請求項27に記載の方法。請求項27に記載の方法を含むプロセスによって産生される、単離されたポリペプチド。請求項27に記載の方法を含むプロセスによって産生される免疫原性組成物。血清群Bの髄膜炎菌NeisseriameningitidisのORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物であって、前記ポリペプチドがピルビル化されていない非脂質化B44である、免疫原性組成物。血清群Bの髄膜炎菌Neisseriameningitidisの第2のORF2086サブファミリーBポリペプチドをさらに含み、第2のポリペプチドがピルビル化されていない非脂質化B09である、請求項32に記載の組成物。3つ以下のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む、請求項32に記載の組成物。2つ以下のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む、請求項32に記載の組成物。ORF2086サブファミリーAポリペプチドをさらに含む、請求項32に記載の組成物。A05サブファミリーAポリペプチドを含む、請求項36に記載の組成物。髄膜炎菌ワクチンに対するこれらのおよび他の要求を満たすために、髄膜炎菌N.meningitidisORF2086ポリペプチドの非脂質化変異体を用いるための適用範囲を提供するために、さらなる組成物を評価した。本発明の第1の態様は、非脂質化ORF2086タンパク質を含む免疫原性組成物を提供し、ORF2086タンパク質は、B44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、B09変異体、A05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である。一部の実施形態において、ORF2086タンパク質は、B44変異体、B22変異体、B09変異体、A05変異体、A12変異体、またはA22変異体である。本発明の別の態様は、非脂質化ORF2086タンパク質サブファミリーB変異体P2086サブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。一部の実施形態において、P2086サブファミリーBポリペプチドは、B44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である。一部の実施形態において、免疫原性組成物は、非脂質化ORF2086タンパク質サブファミリーA変異体P2086サブファミリーAポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態において、P2086サブファミリーAポリペプチドは、A05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である。一部の実施形態において、免疫原性組成物はさらに、アジュバントを含む。一部の実施形態において、アジュバントは、アルミニウムアジュバント、サポニン、CpGヌクレオチド配列、またはそのあらゆる組み合わせである。一部の実施形態において、アルミニウムアジュバントは、AlPO4、AlOH3、Al2SO43、またはミョウバンである。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125μg/mlと0.5μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.25μg/mlである。好ましい実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125mg/mlと0.5mg/mlとの間である。一部の好ましい実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.25mg/mlである。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、1μg/mlと250μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、10μg/mlと100μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、10μg/mlである。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、100μg/mlである。一部の実施形態において、サポニンは、QS-21Stimulon登録商標Agenus、Lexington、MAまたはISCOMATRIX登録商標CSLLimited、Parkville、Australiaである。一部の実施形態において、免疫原性組成物は、複数回用量の免疫原性組成物を対象に投与した後に、髄膜炎菌Neisseriameningitidisに対する免疫原性応答を生じさせる能力を付与する。一部の実施形態において、免疫原性応答は、2回用量を対象に投与した後に付与される。一部の実施形態において、免疫原性応答は、3回用量を対象に投与した後に付与される。本発明の別の態様は、非脂質化P2086抗原の免疫原性を増大させる組成物を提供し、組成物は、サポニンおよび少なくとも1つの非脂質化P2086抗原を含む。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、1μg/mlと250μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、10μg/mlと100μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、10μg/mlである。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、100μg/mlである。一部の実施形態において、サポニンは、QS-21またはISCOMATRIXである。一部の実施形態において、組成物はさらに、アルミニウムを含む。一部の実施形態において、アルミニウムは、AlPO4、AlOH3、Al2SO43、またはミョウバンとして存在する。一部の実施形態において、組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125μg/mlと0.5μg/mlとの間である。一部の実施形態において、組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.25μg/mlである。好ましい実施形態において、組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125mg/mlと0.5mg/mlとの間である。一部の好ましい実施形態において、組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.25mg/mlである。一部の実施形態において、免疫原性組成物は、複数回用量の免疫原性組成物を対象に投与した後に、髄膜炎菌Neisseriameningitidisに対する免疫原性応答を生じさせる能力を付与する。一部の実施形態において、免疫原性応答は、2回用量を対象に投与した後に付与される。一部の実施形態において、免疫原性応答は、3回用量を対象に投与した後に付与される。一部の実施形態において、非脂質化P2086抗原は、P2086サブファミリーBポリペプチドである。一部の実施形態において、P2086サブファミリーBポリペプチドは、B44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である。一部の実施形態において、非脂質化P2086抗原は、P2086サブファミリーAポリペプチドである。一部の実施形態において、P2086サブファミリーAポリペプチドは、A05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である。一部の実施形態において、組成物は、少なくとも2つの非脂質化P2086抗原を含み、この2つの非脂質化P2086抗原は、少なくとも1つの非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドおよび少なくとも1つの非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドである。一部の実施形態において、非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドはA05変異体であり、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドはB44変異体である。一部の実施形態において、非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドはA05変異体であり、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドはB22変異体である。一部の実施形態において、非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドはA05変異体であり、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドはB09変異体である。本発明の別の態様は、髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対して対象に免疫を付与するための方法を提供し、この方法は、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物を対象に投与するステップを含む。一部の実施形態において、P2086サブファミリーBポリペプチドは、B44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である。一部の実施形態において、免疫原性組成物はさらに、P2086サブファミリーAポリペプチドを含む。一部の実施形態において、P2086サブファミリーAポリペプチドは、A05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である。一部の実施形態において、免疫原性組成物はさらに、アジュバントを含む。一部の実施形態において、アジュバントは、アルミニウムアジュバント、サポニン、CpGヌクレオチド配列、またはそのあらゆる組み合わせである。一部の実施形態において、アルミニウムアジュバントは、AlPO4、AlOH3、Al2SO43、またはミョウバンである。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125μg/mlと0.5μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.25μg/mlである。好ましい実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125mg/mlと0.5mg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.25mg/mlである。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、1μg/mlと250μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、10μg/mlと100μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、10μg/mlである。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるサポニンの濃度は、100μg/mlである。一部の実施形態において、サポニンは、QS-21またはISCOMATRIXである。一部の実施形態において、免疫原性組成物は、投与スケジュールを通して複数回用量で対象に投与される。一部の実施形態において、免疫原性組成物は、投与スケジュールを通して2回用量で対象に投与される。一部の実施形態において、免疫原性組成物は、投与スケジュールを通して3回用量で投与される。本発明の別の態様は、aORF2086変異体の核酸を発現ベクター内にクローニングして、ORF2086発現ベクターを生成するステップ、b細菌をOFR2086発現ベクターで形質転換するステップ、cORF2086発現ベクターからのP2086変異体の発現を誘発するステップ、およびd発現したP2086変異体タンパク質を単離するステップを含む、非脂質化P2086変異体を産生する方法を提供し、この方法において、ORF2086発現ベクターは、脂質化制御配列を含まない。一部の実施形態において、細菌は、大腸菌E.coliである。一部の実施形態において、発現は、IPTGの添加によって誘発される。一部の実施形態において、P2086変異体のN末端Cysをコードするコドンが欠失している。一部の実施形態において、P2086変異体のN末端Cysをコードするコドンは、Alaコドン、Glyコドン、またはValコドンを生成するように突然変異している。一部の実施形態において、P2086変異体は、A05変異体、B01変異体、またはB44変異体である。一部の実施形態において、P2086変異体は、B09変異体である。一部の実施形態において、N末端尾部は、Ser残基およびGly残基を付加してN末端Cysのすぐ下流のGly/Serストークを伸長させるように突然変異している。一部の実施形態において、Gly/SerストークにおけるGly残基およびSer残基の総数は、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、または少なくとも12である。一部の実施形態において、P2086変異体のN末端尾部のコドンは、点突然変異生成によって最適化されている。一部の実施形態において、ORF2086変異体のN末端尾部のコドンは、ORF2086変異体の5番目のアミノ酸をコードするコドンが配列番号8のヌクレオチド13~15に100同一となり、ORF2086変異体の13番目のアミノ酸をコードするコドンが配列番号8のヌクレオチド37~39に100同一となるような点突然変異生成によって最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部は、5の45個の核酸が配列番号8の核酸1~45に100同一となるように最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部は、5の42個の核酸が配列番号8の核酸4~45に100同一となるように最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部は、5の39個の核酸が配列番号8の核酸4~42に100同一となるように最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸1~15と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸1~15と比較して2つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸2~15と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸2~15と比較して2つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、保存的なアミノ酸置換である。1つの実施形態において、本発明は、免疫原性組成物における髄膜炎菌NeisseriameningitisORF2086サブファミリーB抗原の安定な製剤に関する。本発明はまた、髄膜炎菌NeisseriameningitisORF2086抗原の立体構造を保存する方法、および髄膜炎菌NeisseriameningitisrLP2086抗原の有効性を決定するための方法に関する。1つの態様において、本発明は、単離されたピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを含む組成物に関する。1つの実施形態において、組成物は免疫原性である。別の実施形態において、ポリペプチドは、対応する野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドと比較して、N末端Cysの欠失を含む。1つの実施形態において、ポリペプチドは、1位のシステインが欠失している、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、および配列番号21からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ポリペプチドは、配列番号44、配列番号49、配列番号50、および配列番号55からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態において、ポリペプチドは、発現系に作動可能に連結したヌクレオチド配列によってコードされ、前記発現系は、細菌細胞において発現され得る。1つの実施形態において、発現系はプラスミド発現系である。1つの実施形態において、細菌細胞は大腸菌E.coli細胞である。別の実施形態において、ヌクレオチド配列は、前記ヌクレオチド配列の発現を制御する調節配列に連結している。別の態様において、本発明は、本プロセスによって得ることが可能なピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを含む組成物に関する。プロセスは、1位のシステインが欠失している、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、および配列番号21からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を発現させることを含み、ヌクレオチド配列は、細菌細胞において発現され得る発現系に作動可能に連結している。1つの実施形態において、細菌細胞は大腸菌E.coliである。1つの態様において、本発明は、配列番号49で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド、および配列番号44で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドを含む組成物に関する。1つの実施形態において、本明細書において記載される組成物は、免疫原性である。別の実施形態において、本明細書において記載される組成物はさらに、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのORF2086サブファミリーAポリペプチドを含む。別の実施形態において、本明細書において記載される組成物は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのORF2086サブファミリーBポリペプチドに対する、哺乳動物における殺菌性の免疫応答を誘発する。1つの態様において、本発明は、配列番号49で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドに関する。別の態様において、本発明は、配列番号46を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。1つの態様において、本発明は、配列番号47を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。1つの態様において、本発明は、配列番号48を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。1つの態様において、本発明は、配列番号50で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドに関する。1つの態様において、本発明は、配列番号45を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。1つの態様において、本発明は、配列番号44で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドに関する。1つの態様において、本発明は、配列番号46、配列番号47、配列番号48、および配列番号45からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むプラスミドに関するものであり、プラスミドは、細菌細胞において発現され得る。1つの実施形態において、細菌細胞は大腸菌E.coliである。1つの態様において、本発明は、哺乳動物においてORF2086サブファミリーB血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisに特異的な殺菌性抗体を誘発する方法に関する。この方法は、配列番号44および配列番号49からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはその組み合わせを含む、効果的な量の単離されたポリペプチドを哺乳動物に投与することを含む。1つの態様において、本発明は、ポリペプチドを産生するための方法に関する。この方法は、配列番号21に対する90を超える同一性を有する配列を含むポリペプチドを細菌細胞において発現させることを含み、前記配列は、配列番号21のアミノ酸13~18、配列番号21のアミノ酸21~34、および配列番号21のアミノ酸70~80からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせを含み、配列は、N末端システインを欠いている。この方法はさらに、ポリペプチドを精製することを含む。1つの実施形態において、配列は、配列番号21のアミノ酸96~116、配列番号21のアミノ酸158~170、配列番号21のアミノ酸172~185、配列番号21のアミノ酸187~199、配列番号21のアミノ酸213~224、配列番号21のアミノ酸226~237、配列番号21のアミノ酸239~248からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせをさらに含む。1つの実施形態において、細菌細胞は大腸菌E.coliである。1つの態様において、本発明は、本明細書において記載される方法を含むプロセスによって産生される、単離されたポリペプチドに関する。別の態様において、本発明は、本明細書において記載される方法を含むプロセスによって産生される免疫原性組成物に関する。1つの態様において、本発明は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物に関するものであり、この組成物において、ポリペプチドは、ピルビル化されていない非脂質化B44である。1つの実施形態において、組成物はさらに、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisの第2のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含み、第2のポリペプチドは、ピルビル化されていない非脂質化B09である。1つの実施形態において、組成物は、3つ以下のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む。別の実施形態において、組成物は、2つ以下のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む。1つの実施形態において、組成物はさらに、ORF2086サブファミリーAポリペプチドを含む。別の実施形態において、組成物は、A05サブファミリーAポリペプチドを含む。配列の識別子配列番号1は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A04の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号2は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A05の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号3は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A12の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号4は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A12-2の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号5は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A22の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号6は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B02の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号7は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B03の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号8は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号9は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B22の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号10は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B24の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号11は、N末端Cysをコードするコドンを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B44の遺伝子のDNA配列を示す。配列番号12は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A04のアミノ酸配列を示す。配列番号13は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A05のアミノ酸配列を示す。配列番号14は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A12のアミノ酸配列を示す。配列番号15は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A22のアミノ酸配列を示す。配列番号16は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B02のアミノ酸配列を示す。配列番号17は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B03のアミノ酸配列を示す。配列番号18は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09のアミノ酸配列を示す。配列番号19は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B22のアミノ酸配列を示す。配列番号20は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B24のアミノ酸配列を示す。配列番号21は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B44のアミノ酸配列を示す。配列番号22は、実施例2において示される、フォワードプライマーのDNA配列を示す。配列番号23は、実施例2において示される、リバースプライマーのDNA配列を示す。配列番号24は、実施例2、表1において示される、フォワードプライマーのDNA配列を示す。配列番号25は、実施例2、表1において示される、リバースプライマーのDNA配列を示す。配列番号26は、実施例2、表1において示される、フォワードプライマーのDNA配列を示す。配列番号27は、実施例2、表1において示される、リバースプライマーのDNA配列を示す。配列番号28は、実施例4において示される、Gly/SerストークのDNA配列を示す。配列番号29は、例えば配列番号28によってコードされる、実施例4において示されるGly/Serストークのアミノ酸配列を示す。配列番号30は、実施例4において示されるGly/SerストークのDNA配列を示す。配列番号31は、例えば配列番号30によってコードされる、実施例4において示されるGly/Serストークのアミノ酸配列を示す。配列番号32は、実施例4において示されるGly/SerストークのDNA配列を示す。配列番号33は、例えば配列番号32および配列番号34によってコードされる、Gly/Serストークのアミノ酸配列を示す。配列番号34は、実施例4において示されるGly/SerストークのDNA配列を示す。配列番号35は、図5において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B01のN末端のアミノ酸配列を示す。配列番号36は、図5において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B44のN末端のアミノ酸配列を示す。配列番号37は、図5において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A05のN末端のアミノ酸配列を示す。配列番号38は、図5において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A22のN末端のアミノ酸配列を示す。配列番号39は、図5において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B22のN末端のアミノ酸配列を示す。配列番号40は、図5において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A19のN末端のアミノ酸配列を示す。配列番号41は、図6において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体のN末端のアミノ酸配列を示す。配列番号42は、図6において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A22のN末端のDNA配列を示す。配列番号43は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B44の遺伝子の、コドンを最適化されたDNA配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは、配列番号11と比較して欠失している。プラスミドpDK087は、配列番号43を含む。配列番号44は、脂質化されていない髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B44のアミノ酸配列を示す。配列番号44は配列番号21に同一であり、配列番号21の1位のN末端システインが欠失している。配列番号44は、例えば配列番号43によってコードされる。配列番号45は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09の遺伝子の、コドンを最適化されたDNA配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは欠失しており、配列は、配列番号8と比較して、さらなるGly/Ser領域をコードするコドンを含む。プラスミドpEB063は、配列番号45を含む。配列番号46は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09の遺伝子の、コドンを最適化されたDNA配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは、配列番号8と比較して欠失している。プラスミドpEB064は、配列番号46を含む。配列番号47は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09の遺伝子の、コドンを最適化されたDNA配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは、配列番号8と比較して欠失している。プラスミドpEB065は、配列番号47を含む。配列番号48は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09の遺伝子のDNA配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは、配列番号8と比較して欠失している。プラスミドpLA134は、配列番号48を含む。配列番号49は、脂質化されていない髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09のアミノ酸配列を示す。配列番号49は配列番号18に同一であり、配列番号18の1位のN末端システインが欠失している。配列番号49は、例えば、配列番号46、配列番号47、および配列番号48からなる群から選択されるDNA配列によってコードされる。配列番号50は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09のアミノ酸配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは欠失しており、配列は、配列番号18と比較して、さらなるGly/Ser領域をコードするコドンを含む。配列番号50は、例えば配列番号45によってコードされる。配列番号51は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B44の遺伝子のDNA配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは、配列番号11と比較して欠失している。プラスミドpLN056は、配列番号51を含む。配列番号52は、図6において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B22のN末端のDNA配列を示す。配列番号53は、図6において示される、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B09のN末端のDNA配列を示す。配列番号54は、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A05の遺伝子のDNA配列を示し、この配列において、N末端システインをコードするコドンは、配列番号2と比較して欠失している。配列番号55は、脂質化されていない髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A05のアミノ酸配列を示す。配列番号55は配列番号13に同一であり、配列番号13の1位のN末端システインが欠失している。配列番号55は、例えば配列番号54によってコードされる。配列番号56は、実施例7において示される、セリン-グリシン反復配列のアミノ酸配列を示す。配列番号57は、脂質化されていない髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B01のアミノ酸配列を示す。配列番号57は配列番号58に同一であり、配列番号58の1位のN末端システインが欠失している。配列番号58は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B01のアミノ酸配列を示す。配列番号59は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B15のアミノ酸配列を示す。配列番号60は、アミノ酸位置1にN末端Cysを含む、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B16のアミノ酸配列を示す。配列番号61は、配列番号19のアミノ酸位置1のN末端Cysのコドンがグリシンのコドンで置き換えられている、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B22のDNA配列を示す。配列番号62は、配列番号19のアミノ酸位置1のN末端Cysがグリシンで置き換えられている、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体B22のアミノ酸配列を示す。配列番号63は、配列番号15のアミノ酸位置1のN末端Cysのコドンがグリシンのコドンで置き換えられている、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A22のDNA配列を示す。配列番号64は、配列番号15のアミノ酸位置1のN末端Cysがグリシンで置き換えられている、髄膜炎菌N.meningitidis、血清群B、2086変異体A22のアミノ酸配列を示す。別段の規定がない限り、本明細書において用いられる全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書において記載されるものに類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験において用いることができるが、適切な方法および材料が以下に記載される。材料、方法、および例は、例示的なものにすぎず、限定することを目的としたものではない。本明細書において言及される全ての刊行物、特許、および他の文献は、参照することによってその全体が組み込まれる。本開示において、含むcomprises、含んだcomprised、含んでいるcomprising、含有するcontains含有しているcontainingなどの用語が、米国特許法におけるそれらの意味を有し得ること、例えば、これらが、含むincludes、含んだincluded、含んでいるincludingなどを意味し得ることに留意されたい。このような用語は、いかなる他の構成要素も排除することなく、特定の構成要素または構成要素の組を含めることを言う。から本質的になるconsistingessentiallyofおよびから本質的になるconsistsessentiallyofなどの用語は、米国特許法におけるそれらの意味を有し、例えば、これらは、本発明の新規なまたは基本的な特徴を損なわないさらなる構成要素またはステップを含めることを可能にし、すなわち、これらは、本発明の新規なまたは基本的な特徴を損なうさらなる言及されていない構成要素またはステップを排除し、またこれらは、特に、先行技術に対して、例えば本明細書において引用されるかまたは参照することによって本明細書に組み込まれる文献に対して特許性のある、例えば新規な、自明ではない、進歩性のある実施形態を規定することが本明細書の目的であるため、本明細書において引用されるかまたは参照することによって本明細書に組み込まれる当技術分野における文献などの先行技術の構成要素またはステップを排除する。また、用語からなるconsistsofおよびからなるconsistingofは、米国特許法におけるそれらの意味を有し、すなわち、これらの用語は限定的なものである。したがって、これらの用語は、特定の構成要素または構成要素の組を含め、かつすべての他の構成要素を排除することを言う。定義本明細書において用いられる場合、単数形a、an、およびtheは、文脈から別のことが明らかに示されない限り、複数形の言及を含む。したがって、例えば、方法への言及は、1つもしくは複数の方法、ならびに/または、本明細書において記載されるタイプのおよび/もしくは本開示などを読んで当業者に明らかになるタイプのステップを含む。本明細書において用いられる場合、複数形は、文脈から別のことが明らかに示されない限り、単数形の言及を含む。したがって、例えば、方法への言及は、1つもしくは複数の方法、ならびに/または、本明細書において記載されるタイプのおよび/もしくは本開示などを読んで当業者に明らかになるタイプのステップを含む。本明細書において用いられる場合、約は、言及された濃度範囲、時間枠、分子量、温度、またはpHなどの、値の統計的に有意な範囲内にあることを意味する。このような範囲は、所与の値または範囲の1桁以内であり得、典型的には20以内、さらに典型的には10以内、さらに典型的には5以内であり得る。用語約によって包含される許容可能な変型は、研究下にある特定の系に応じ、当業者によって容易に理解され得る。範囲が本願において列挙されている場合は常に、その範囲内の全ての整数もまた、本発明の実施形態として検討される。用語アジュバントは、本明細書においてさらに記載および例示されるように抗原に対する免疫応答を増強させる化合物または混合物を言う。本発明のワクチンにおいて用いることができるアジュバントの非限定的な例には、RIBIアジュバント系RibiInc.、Hamilton、Mont.、ミョウバン、無機物ゲル、例えば水酸化アルミニウムゲル、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、例えば、フロイント完全アジュバントおよび不完全アジュバント、ブロックコポリマーCytRx、AtlantaGa.、QS-21CambridgeBiotechInc.、CambridgeMass.、SAF-MChiron、EmeryvilleCalif.、AMPHIGEN登録商標アジュバント、サポニン、QuilA、または他のサポニン画分、モノホスホリル脂質A、ならびにアブリジン脂質-アミンアジュバントが含まれる。抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも1つの抗原認識部位を介して、糖質、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合し得る、免疫グロブリン分子である。本明細書において用いられる場合、文脈によって別のことが示されない限り、この用語は、無傷のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体だけではなく、操作された抗体例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ならびに/またはエフェクター機能、安定性、および他の生物学的活性を改変するように誘導体化された抗体およびその断片Fab、Fab’、Fab’2、Fvなど、一本鎖抗体ScFvおよびサメ抗体やラクダ抗体を含むドメイン抗体、ならびに抗体部分を含む融合タンパク質、多価抗体、多重特異的抗体例えば、所望の生物学的活性を示す限りの二重特異的抗体および本明細書において記載される抗体断片、ならびに抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子のあらゆる他の修飾された立体構造も包含するものである。抗体は、IgG、IgA、またはIgMまたはそのサブクラスなどのあらゆるクラスの抗体を含み、また抗体は、何らかの特定のクラスのものである必要はない。抗体の重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの5つの主要なクラス、すなわちIgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMが存在し、これらのいくつかは、サブクラスアイソタイプ、例えばヒトにおいてはIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2にさらに分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。抗体断片は、無傷抗体の一部分のみを含み、その部分は好ましくは、無傷抗体内に存在する場合にその部分に通常は関連する機能の、少なくとも1つ、好ましくはほとんどまたは全てを保持する。用語抗原は通常、同族抗体が選択的に結合し得る少なくとも1つのエピトープを含有する生体分子、通常はタンパク質、ペプチド、多糖、脂質、もしくはコンジュゲートを言うか、または場合によっては、動物内に注射もしくは吸収される組成物を含む、動物における抗体の産生もしくはT細胞の応答もしくはその両方を刺激し得る免疫原性物質を言う。免疫応答は、分子全体に対して、または分子の1つもしくは複数の様々な部分例えば、エピトープまたはハプテンに対して生じ得る。この用語は、個別の分子、または均質なもしくは異種の抗原性分子集団を言うために用いることができる。抗原は、抗体、T細胞受容体、または特異的な液性および/もしくは細胞性免疫の他のエレメントによって認識される。用語抗原には、全ての関連する抗原性エピトープが含まれる。所与の抗原のエピトープは、当技術分野において周知のあらゆる数のエピトープマッピング技術を用いて同定することができる。例えば、EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology、Vol.66GlennE.Morris編、1996HumanaPress、Totowa、N.J.を参照されたい。例えば、線状エピトープは、例えば、タンパク質分子の部分に対応する多数のペプチドを固体担体上で同時に合成し、ペプチドを担体に付着させたままペプチドと抗体とを反応させることによって決定することができる。このような技術は、当技術分野において知られており、例えば、参照することによって全てその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第4,708,871号;Geysenら1984Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:3998~4002;Geysenら1986Molec.Immunol.23:709~715において記載されている。同様に、立体構造エピトープは、例えばX線結晶学および2次元核磁気共鳴などによってアミノ酸の空間的立体構造を決定することによって同定することができる。例えば、上記のEpitopeMappingProtocolsを参照されたい。さらに、本発明の目的では、抗原はまた、免疫学的応答を誘発する能力をタンパク質が維持する限りの、天然配列に対する修飾、例えば欠失、付加、および置換通常は保存的な性質であるが、非保存的であり得るを含むタンパク質を言うために用いることができる。これらの修飾は、部位特異的突然変異生成を介する、もしくは特定の合成手順を介する、もしくは遺伝子操作アプローチを介する、意図的なものであり得るか、または、抗原を産生する宿主の突然変異などを介する、偶発的なものであり得る。さらに、抗原は、微生物、例えば細菌から誘導することができるか、得ることができるか、もしくは単離することができるか、または生物全体であり得る。同様に、核酸免疫化の用途におけるような、抗原を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドもまた、この定義に含まれる。合成抗原、例えば、ポリエピトープ、隣接エピトープ、および他の組換え抗原または合成によって誘導された抗原もまた含まれるBergmannら1993Eur.J.Immunol.23:27772781;Bergmannら1996J.Immunol.157:32423249;Suhrbier,A.1997Immunol.andCellBiol.75:402408;Gardnerら199812thWorldAIDSConference、Geneva、Switzerland、Jun.28~Jul.3、1998を参照されたい。用語保存的なアミノ酸置換は、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、および/または両親媒性の性質の類似性に基づいて行うことができる。例えば、非極性の疎水性のアミノ酸には、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、トリプトファン、およびメチオニンが含まれ、極性/中性のアミノ酸には、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンが含まれ、正に荷電した塩基性のアミノ酸には、アルギニン、リジン、およびヒスチジンが含まれ、負に荷電した酸性のアミノ酸には、アスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれる。一部の実施形態において、保存的なアミノ酸の変化は、ORF2086ポリペプチドの一次配列を改変するが、分子の機能は改変しない。これらの突然変異体を生成する場合、アミノ酸のハイドロパシー指標が考慮され得る。ポリペプチドへの相互作用性の生物学的機能の付与におけるハイドロパシーアミノ酸指標の重要性は、当技術分野において一般に理解されているKyteDoolittle、1982、J.Mol.Biol.、1571:105~32。特定のアミノ酸が、類似のハイドロパシー指標またはスコアを有する他のアミノ酸に置換され得、そして依然として類似の生物学的活性を有するポリペプチドを生じさせることが知られている。各アミノ酸は、疎水性および電荷の特徴に基づいてハイドロパシー指標を付与されている。これらの指標は、イソロイシン4.5、バリン4.2、ロイシン3.8、フェニルアラニン2.8、システイン/シスチン2.5、メチオニン1.9、アラニン1.8、グリシン-0.4、スレオニン-0.7、セリン-0.8、トリプトファン-0.9、チロシン-1.3、プロリン-1.6、ヒスチジン-3.2、グルタメート-3.5、グルタミン-3.5、アスパルテート-3.5、アスパラギン-3.5、リジン-3.9、およびアルギニン-4.5である。アミノ酸残基の相対的なハイドロパシー特徴が、生じたポリペプチドの二次構造および三次構造を決定し、これが次に、ポリペプチドと他の分子、例えば酵素、基質、受容体、抗体、抗原などとの相互作用を規定すると考えられている。アミノ酸が、類似のハイドロパシー指標を有する別のアミノ酸によって置換され得、そして依然として機能的に同等なポリペプチドを得ることが、当技術分野において知られている。このような変化において、そのハイドロパシー指標が/-2以内であるアミノ酸の置換が好ましく、/-1以内である置換が特に好ましく、/-0.5以内である置換がさらに特に好ましい。保存的なアミノ酸の置換または挿入はまた、親水性に基づいて行うことができる。参照することによって本明細書に組み込まれる米国特許第4,554,101号において記載されているように、その隣接するアミノ酸の親水性によって支配される、ポリペプチドの最大の局所的な平均親水性は、その免疫原性および抗原性と、すなわち、ポリペプチドの生物学的特性と相関する。米国特許第4,554,101号は、以下の親水性値がアミノ酸残基に付与されていることを挙げている:アルギニン3.0、リジン3.0、アスパルテート3.0±1、グルタメート3.0±1、セリン0.3、アスパラギン0.2、グルタミン0.2、グリシン0、プロリン-0.5±1、スレオニン-0.4、アラニン-0.5、ヒスチジン-0.5、システイン-1.0、メチオニン-1.3、バリン-1.5、ロイシン-1.8、イソロイシン-1.8、チロシン-2.3、フェニルアラニン-2.5、トリプトファン-3.4。アミノ酸が、類似の親水性値を有する別のアミノ酸に置換され得、そして依然として生物学的に同等の、特に免疫学的に同等のポリペプチドを得ることが理解される。このような変化において、親水性値が±2以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±1以内である置換が特に好ましく、±0.5以内である置換がさらに特に好ましい。様々な前述の特徴を考慮する典型的な置換は、当業者に周知であり、限定はしないが、アルギニンおよびリジン、グルタメートおよびアスパルテート、セリンおよびスレオニン、グルタミンおよびアスパラギン、ならびにバリン、ロイシンおよびイソロイシンを含む。本明細書において用いられる用語効果的な免疫原性量は、脊椎動物宿主における免疫応答の誘発において効果的なポリペプチドまたはポリペプチド含む組成物の量を言う。例えば、本発明のrLP2086タンパク質の効果的な免疫原性量は、脊椎動物宿主における免疫応答の誘発において効果的な量である。特定の効果的な免疫原性投与量または量は、宿主の年齢、体重、および医学的状態、ならびに投与方法に応じる。適切な用量は、当業者によって容易に決定される。本明細書において用いられる用語Gly/Serストークは、ORF2086によってコードされるタンパク質のN末端Cys残基のすぐ下流の一連のGly残基およびSer残基を言う。Gly/Serストークにおいて、5個と12個との間のGly残基およびSer残基が存在し得る。したがって、Gly/Serストークは、ORF2086によってコードされるタンパク質の2個から7個と13個との間までのアミノ酸からなる。好ましくは、Gly/Serストークは、ORF2086によってコードされるタンパク質の2個の、最大7個と13個との間のアミノ酸からなる。本発明のP2086変異体のGly/Serストークは、図2配列番号12~21における下線を引かれた配列によって表される。本明細書において示されるように、Gly/Serストークの長さは、非脂質化P2086変異体の安定性または発現レベルに影響し得る。典型的な実施形態において、Gly/Serストークの長さに対する影響の効果を、対応する野生型変異体の効果と比較する。用語免疫原性のは、抗原またはワクチンの、液性または細胞介在性またはその両方の免疫応答を誘発する能力を言う。それぞれが本明細書において区別せずに用いられる免疫原性量または免疫学的に効果的な量または用量は、通常、当業者に知られている標準的なアッセイによって測定される、細胞性T細胞応答または液性B細胞または抗体応答またはその両方の免疫応答を誘発するために十分な、抗原または免疫原性組成物の量を言う。用語免疫原性組成物は、抗原、例えば微生物、またはその成分を含有する、あらゆる医薬組成物に関連し、この組成物は、対象における免疫応答を誘発するために用いることができる。本発明の免疫原性組成物は、全身的な経皮経路または粘膜経路を介して免疫原性組成物を投与する手段によって、髄膜炎菌N.meningidis感染にかかりやすいヒトを治療するために用いることができる。これらの投与には、筋肉内経路i.m.腹腔内経路i.P.、皮内経路i.d.、もしくは皮下経路を介する注射、パッチもしくは他の経皮送達装置による塗布、または口道/消化管、気道、もしくは尿生殖路への経粘膜投与が含まれ得る。1つの実施形態において、免疫原性組成物は、ワクチンの製造において、または対象を受動的に防御もしくは治療するために用いることができるポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体の誘発において用いることができる。特定の免疫原性組成物のための成分の最適な量は、対象における適切な免疫応答の観察を伴う標準的な研究によって確認することができる。初回ワクチン接種の後、対象に、適切に間隔をあけた1回または複数回の追加免疫化を行うことができる。用語単離されたは、材料が、その本来の環境例えば、それが天然である場合には天然の環境、またはそれが組換え物である場合にはその宿主生物、または1つの環境から異なる環境へ移されるから取り出されることを意味する。例えば、単離されたタンパク質またはペプチドは、細胞材料、またはタンパク質が由来する元である細胞源もしくは組織源からの他の汚染タンパク質を実質的に有さないか、あるいは、化学的に合成された場合の、または化学物質反応の一部として混合物内に別の形で存在する、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に有さない。本発明において、タンパク質は、細菌細胞から、または細胞残屑から単離することができ、その結果、タンパク質は、免疫原性組成物の製造において有用な形態で提供される。用語単離されたまたは単離することは、本明細書において記載されるようなタンパク質の精製方法を例えば含む、精製することまたは精製を含み得る。表現細胞材料を実質的に有さないは、ポリペプチドまたはタンパク質が、それが単離されたかまたは組換えによって産生された元である細胞の細胞成分から分離されている、ポリペプチドまたはタンパク質の調製物を含む。したがって、細胞材料を実質的に有さないタンパク質またはペプチドは、約30、20、10、5、2.5、または1乾燥重量未満の汚染タンパク質または多糖または他の細胞材料を有する、莢膜多糖、タンパク質、またはペプチドの調製物を含む。ポリペプチド/タンパク質が組換えによって産生される場合、これは好ましくは、培養培地を実質的に有さず、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の容積の約20、10、または5未満に相当する。ポリペプチドまたはタンパク質が化学合成によって産生される場合、これは好ましくは、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に有さず、すなわち、これは、タンパク質または多糖の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離されている。したがって、ポリペプチドまたはタンパク質のこのような調製物は、約30、20、10、5乾燥重量未満の化学的前駆体または目的のポリペプチド/タンパク質もしくは多糖断片以外の化合物を有する。本明細書において用いられる用語N末端尾部は、タンパク質を細胞膜に付着させる、ORF2086によってコードされるタンパク質のN末端部分を言う。N末端尾部は、図3における側面図の構造の最下部に示されている。N末端尾部は、典型的には、ORF2086によってコードされるタンパク質のN末端の16個のアミノ酸を含む。一部の実施形態において、N末端尾部は、配列番号12~21のいずれか1つの、アミノ酸1~16である。本明細書において用いられる用語ORF2086は、ナイセリア属Neisseria種の細菌に由来するオープンリーディングフレーム2086を言う。ナイセリア属NeisseriaORF2086、それからコードされるタンパク質、これらのタンパク質の断片、およびこれらのタンパク質を含む免疫原性組成物は、当技術分野において知られており、例えば、そのそれぞれが参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる、WO2003/063766および米国特許出願公開第US20060257413号および米国特許出願公開第US20090202593号において記載されている。用語P2086は通常、ORF2086によってコードされるタンパク質を言う。2086の前のPは、タンパク質の略である。本発明のP2086タンパク質は、脂質化されていても脂質化されていなくてもよい。LP2086およびP2086は、典型的には、それぞれ、脂質化形態および非脂質化形態の2086タンパク質を言う。本発明のP2086タンパク質は、組換えであり得る。rLP2086およびrP2086は、典型的には、それぞれ、脂質化形態および非脂質化形態の組換え2086タンパク質を言う。2086はまた、因子Hに結合するその能力に起因して、因子H結合タンパク質fHBPとして知られている。本明細書において用いられる用語薬学的に許容できる担体は、ヒト宿主または他の脊椎動物宿主への投与に適合する、あらゆるおよび全ての溶媒、分散媒質、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むものである。典型的には、薬学的に許容できる担体は、連邦規制当局、州政府、もしくは他の規制当局によって認可されている、または、米国薬局方もしくは他の一般的に認識されている薬局方においてヒトおよび非ヒト哺乳動物を含む動物における使用について列挙されている担体である。用語担体は、医薬組成物がそれと共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、または媒体を言う。このような薬学的担体は、無菌の液体、例えば水および油であり得、油には、石油、動物油、植物油、または合成由来の油が含まれる。水、生理食塩水溶液、ならびに水性デキストロース溶液およびグリセロール溶液を、液体担体として、特に、注射可能な溶液に、採用することができる。適切な薬学的賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが含まれる。組成物はまた、必要に応じて、少量の湿潤剤、充填剤、乳化剤、またはpH緩衝剤を含有し得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、持続放出製剤などの形態をとり得る。適切な薬学的担体の例は、E.W.MartinによるRemington’sPharmaceuticalSciencesにおいて記載されている。製剤は、投与態様に適しているべきである。適切な担体は、当業者に明らかとなり、投与経路に大きく依存する。保存的な免疫応答は、対象を感染から防御する働きをする、免疫原性組成物の、液性または細胞介在性の免疫応答を誘発する能力を言う。もたらされる防御は、完全なものである必要はなく、すなわち、感染は、例えばワクチンまたは免疫原性組成物を投与されていない感染動物である対照の対象集団と比較して統計的に有意な向上があれば、完全に予防または根絶される必要はない。防御は、感染の症候の重症度または発病の速さを緩和することに限定することができる。通常、防御性免疫応答は、各抗原に対するある程度のレベルの測定可能な機能的抗体応答を含む、対象の少なくとも50における特定の抗原に特異的な抗体レベルの増大の誘発を含む。特定の状況において、防御性免疫応答は、各抗原に対するある程度のレベルの測定可能な機能的抗体応答を含む、対象の少なくとも50における特定の抗原に特異的な抗体レベルの2倍の増大または抗体レベルの4倍の増大の誘発を含み得る。特定の実施形態において、オプソニン化抗体は、防御性免疫応答と相関する。したがって、防御性免疫応答は、血清殺菌活性SBAアッセイまたはオプソニン化貪食作用アッセイ、例えば以下に記載されているアッセイにおいて、細菌数の減少パーセントを測定することによってアッセイすることができる。このようなアッセイはまた、当技術分野において知られている。髄膜炎菌ワクチンでは、例えば、SBAアッセイは、防御についての確立された代替手段である。一部の実施形態において、免疫原性組成物の不存在下での細菌数と比較して、少なくとも10、25、50、65、75、80、85、90、95、またはそれ以上の細菌数の減少がある。用語タンパク質、ポリペプチド、およびペプチドは、アミノ酸残基のポリマーを言い、最短の生成物に限定されない。したがって、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などは、この定義に含まれる。完全長タンパク質およびその断片の両方は、この定義によって包含される。この用語はまた、好ましくはタンパク質が、タンパク質が投与される動物内で免疫学的応答を誘発する能力を維持するような、天然配列に対する修飾、例えば欠失、付加、および置換通常は保存的な性質であるが、非保存的であり得るを含む。また、発現後の修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、脂質化、リン酸化などが含まれる。本明細書において用いられる用語組換えのは、遺伝子操作方法によって産生される、目的の遺伝子を発現するあらゆるタンパク質、ポリペプチド、または細胞を言う。タンパク質またはポリペプチドに関して用いられる用語組換えのは、組換えポリヌクレオチドの発現によって産生されるポリペプチドを意味する。本発明のタンパク質は、天然源から単離され得るか、または遺伝子操作方法によって産生され得る。本明細書において用いられる組換えのは、さらに、その由来源または操作のおかげで、それが天然で関連するポリヌクレオチドの全てまたは一部と関連していない、核酸分子を記載する。宿主細胞に関して用いられる用語組換えのは、組換えポリヌクレオチドを含む宿主細胞を意味する。用語安定剤は、抗原に結合し、一定期間にわたり抗原のエピトープまたは免疫反応性を維持する化合物を言う。安定剤は、当技術分野において知られている。安定剤の例には、多価陽イオン、例えば、カルシウムまたはアルミニウムが含まれる。用語対象は、哺乳動物、鳥類、魚類、爬虫類、またはあらゆる他の動物を言う。用語対象はまた、ヒトを含む。用語対象はまた、ペットを含む。ペットの非限定的な例には、犬、猫、豚、ウサギ、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、モルモット、フェレット、鳥、ヘビ、トカゲ、魚、亀、およびカエルが含まれる。用語対象はまた、家畜動物を含む。家畜動物の非限定的な例には、アルパカ、バイソン、ラクダ、牛、鹿、豚、馬、ラマ、ラバ、ロバ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、トナカイ、ヤク、ニワトリ、ガチョウ、および七面鳥が含まれる。本明細書において用いられる用語哺乳動物は、あらゆる哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ウサギ、非ヒト霊長類を言う。好ましい実施形態において、哺乳動物はヒトである。用語ワクチンまたはワクチン組成物は、区別せずに用いられ、対象における免疫応答を誘発する少なくとも1つの免疫原性組成物を含む医薬組成物を言う。概説本発明は、P2086の非脂質化変異体の特定の製剤および投与スケジュールが、例えば、Fletcherら、InfectionImmunity.Vol.724:2088~21002004において記載されているような、P2086のこれまでの製剤よりも高い殺菌性抗体の力価を誘発するという新規な発見に基づく。あるいは、本発明は、P2086の非脂質化変異体の特定の製剤および投与スケジュールが、脂質化LP2086変異体の市販の製剤よりも高い殺菌性抗体の力価を誘発するという新規な発見に基づく。しかし、脂質化LP2086の市販の製剤が現在は入手不可能であり得ることに留意されたい。より高い応答比率ベースラインに対するSBA力価の4倍以上の増大によって規定されるが、脂質化rLP2086ワクチンと比較して、非脂質化rP2086変異体を含有するワクチンで観察された。非脂質化P2086変異体の製剤は、類似の92を超えるIDおよび多様な92未満のIDLP2086配列の両方を有する株を含むより広範な株に対して、殺菌性抗体を誘発した。本発明はまた、これまでに同定されていない、非脂質化P2086変異体を発現させる困難性を同定し、これらの困難性を克服するための方法およびそれから得られる新規な組成物を提供する。非脂質化P2086変異体をコードするプラスミド構築物は、非脂質化変異体の強力な発現をもたらしたが、これらの変異体は、N末端Cys上でピルビル化されていた。ピルビル化は、ポリペプチドの製造の一貫性または均一性の可能性を阻害するかまたは低減させる。本発明者らはさらに、非脂質化P2086変異体の配列からのN末端Cysの欠失によって、非脂質化P2086変異体のピルビル化が避けられることを見出した。N末端Cysのコドンの欠失によってピルビル化を克服しようと試みることによって、発現が無効になるか、または不溶性の変異体の発現が低減した。あるいは、非脂質化P2086変異体からのN末端Cysの除去によって、一部の変異体における発現が減少した。しかし、驚くべきことに、本発明者らは、少なくともピルビル化されていない非脂質化A05変異体、B01変異体、B09変異体、およびB44変異体が、N末端Cys残基が欠失しているにも関わらず発現され得ることを発見した。全体として、これらのポリペプチドは、対応する野生型の非脂質化配列と比較してCys欠失以外のさらなる修飾がなくても発現され得た。例えば、実施例2および4を参照されたい。さらに、本発明者らは、ピルビル化されていない非脂質化変異体が驚くべきことに免疫原性であり、これらが殺菌性抗体を予想外に誘発することを発見した。したがって、本発明は、非脂質化変異体の発現におけるこれらの困難性の可能性を克服するかまたは低減させるための2つの方法を提供する。しかし、さらなる方法が、本発明によって検討される。第1の方法は、N末端Cysのすぐ下流の、N末端尾部におけるGly/Serストークの長さを変化させることであった。第2の方法は、N末端尾部内でのコドンの最適化であった。しかし、さらなるコドンの最適化が、本発明によって検討される。これらの方法は、可溶性の非脂質化P2086変異体の発現を増強させた。例えば、1つの実施形態において、可溶性の非脂質化P2086変異体の増強した発現は、対応する野生型の非脂質化変異体の発現と比較したものである。単離されたポリペプチド本発明者らは、驚くべきことに、単離されたピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを発見した。本発明者らはさらに、このポリペプチドが、予想外に免疫原性であり、殺菌性の免疫応答を誘発し得ることを発見した。本明細書において用いられる場合、用語ピルビル化されていないは、ピルベート含有物を有さないポリペプチドを言う。ピルベート含有物を有する非脂質化ORF2086ポリペプチドは、典型的には、対応する野生型ポリペプチドと比較して70の質量シフトを示した。1つの実施形態において、本発明のポリペプチドは、質量分析によって測定すると、対応する野生型の非脂質化ポリペプチドと比較して70の質量シフトを示さなかった。例えば、実施例10を参照されたい。別の実施形態において、単離されたピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドは、対応する野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドと比較して、N末端システイン残基の欠失を含む。用語N末端システインは、ポリペプチドのN末端またはN末端尾部のシステインCysを言う。さらに具体的には、本明細書において用いられるN末端システインは、当技術分野において知られているように、LP2086リポタンパク質がトリパルミトイル脂質尾部で脂質化されている、N末端システインを言う。例えば、配列番号12~21のいずれか1つを参照配列として参照する場合、N末端システインは1位に位置する。本明細書において用いられる用語野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドまたは野生型の非脂質化2086ポリペプチドまたは野生型の非脂質化ポリペプチドは、天然で見られる対応する成熟した脂質化ORF2086ポリペプチドのアミノ酸配列に同一なアミノ酸配列を有するORF2086ポリペプチドを言う。非脂質化分子と脂質化分子との間の唯一の違いは、野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドが、N末端システインで、トリパルミトイル脂質尾部で脂質化されていないことである。当技術分野において知られているように、非脂質化2086形態は、本来のリーダー配列を欠くタンパク質によって、または宿主細胞における脂肪酸アシル化のための部位を特定しない配列部分で置き換えられているリーダー配列によって、産生される。例えば、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれるWO2003/063766を参照されたい。非脂質化ORF2086の例には、記載したばかりの野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドだけではなく、N末端Cysが欠失している、配列番号12~21のいずれか1つに従ったアミノ酸配列を有するポリペプチド、および、N末端Cysが置換されている、配列番号12~21のいずれか1つに従ったアミノ酸配列を有するポリペプチドも含まれる。非脂質化ORF2086ポリペプチドのさらなる例には、配列番号44、配列番号49、配列番号55、配列番号57、配列番号62、および配列番号64から選択されるアミノ酸配列が含まれる。野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドの例には、図2において示される配列番号12~21、配列番号58、配列番号59、および配列番号60のいずれか1つに従ったアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。これらの典型的な野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドは、N末端Cysを含む。本明細書において用いられる場合、例えば、非脂質化B44ポリペプチドは、配列番号21、1位のN末端Cysが欠失している配列番号21、および配列番号44から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。野生型の非脂質化B44ポリペプチドは、配列番号21のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチドは、1位のN末端Cysが欠失している配列番号21、および配列番号44から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。別の実施例として、本明細書において用いられる場合、非脂質化B09ポリペプチドは、配列番号18、1位のN末端Cysが欠失している配列番号18、配列番号49、および配列番号50から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。野生型の非脂質化B09ポリペプチドは、配列番号18のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ピルビル化されていない非脂質化B09は、1位のN末端Cysが欠失している配列番号18、配列番号49、および配列番号50から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。さらなる実施例として、本明細書において用いられる場合、非脂質化A05ポリペプチドは、配列番号13、1位のN末端Cysが欠失している配列番号13、および配列番号55から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。野生型の非脂質化A05は、配列番号13のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ピルビル化されていない非脂質化A05は、1位のN末端Cysが欠失している配列番号13、および配列番号55から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。本明細書において用いられる、N末端Cysの欠失という用語は、野生型の非脂質化ポリペプチド配列と比較してN末端Cysを欠失させる突然変異を含む。例えば、N末端Cysの欠失は、参照配列からの、例えば対応する野生型配列からのアミノ酸Cysの除去を言い、これによって、参照配列と比較してアミノ酸残基が減少する。別の実施形態において、N末端Cysは、Cys残基ではないアミノ酸で置換されている。例えば、典型的な実施形態において、配列番号12~21の1位のN末端Cysは、1位でのC→G置換を含む。例えば、配列番号19B22野生型と比較した配列番号62、および配列番号15A22野生型と比較した配列番号64を参照されたい。N末端Cysを置き換えるための典型的なアミノ酸には、あらゆる非Cysアミノ酸、好ましくは極性の非荷電アミノ酸、例えばグリシンが含まれる。好ましい実施形態において、置換は、Cysに対して非保存的な残基で行われる。本発明者らは、驚くべきことに、N末端Cys残基の欠失を有する非脂質化ORF2086ポリペプチドの発現によって、質量分析によって測定すると、対応する野生型の非脂質化ORF2086ポリペプチドと比較して、検出可能なピルビル化が生じないことを発見した。ピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドの例には、1位のシステインが欠失している、配列番号12A04、配列番号13A05、配列番号14A12、配列番号15A22、配列番号16B02、配列番号17B03、配列番号18B09、配列番号19B22、配列番号20B24、および配列番号21B44からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するものが含まれる。単離されたピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドのさらなる例には、配列番号44、配列番号49、配列番号50、および配列番号55からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。好ましくは、ピルビル化されていない非脂質化2086ポリペプチドは、少なくとも約250個、255個、または260個の連続的なアミノ酸、最大約270個、269個、268個、267個、266個、265個、264個、263個、260個、259個、258個、257個、256個、または255個の連続的なアミノ酸を含む。範囲を規定するために、あらゆる最小値をあらゆる最大値と組み合わせることができる。さらに好ましくは、ポリペプチドは、少なくとも254個または262個の連続的なアミノ酸を有する。1つの実施形態において、単離されたピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドは、発現系に作動可能に連結したヌクレオチド配列によってコードされ、発現系は、細菌細胞において発現され得る。典型的な実施形態において、ヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列の発現を制御する調節配列に連結される。適切な発現系、調節配列、および細菌細胞は、当技術分野において知られている。例えば、ポリペプチドが細菌細胞において発現され得る限りにおいて、あらゆるプラスミド発現ベクター、例えばPET商標Novogen、MadisonWis.またはPMAL商標NewEnglandBiolabs、Beverly、Mass.を用いることができる。好ましくは、PET商標ベクターが、大腸菌E.coliにおける組換えタンパク質のクローニングおよび発現に用いられる。PET商標系において、クローニングされた遺伝子は、ファージT7プロモーターの制御下で発現され得る。典型的な細菌細胞には、シュードモナスフルオレッセンスPseudomonasfluorescensおよび好ましくは大腸菌E.coliが含まれる。1つの態様において、本発明は、本プロセスによって得ることが可能なピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドに関する。ポリペプチドは、好ましくは単離されている。本発明はさらに、本プロセスによって得ることが可能なピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを含む組成物に関する。組成物は、好ましくは免疫原性組成物である。プロセスは、1位のシステインが欠失している、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、および配列番号21からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を発現させることを含む。ヌクレオチド配列は、細菌細胞において発現され得る発現系に作動可能に連結している。1つの実施形態において、プロセスは、配列番号44、配列番号49、配列番号50、および配列番号55からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を発現させることを含む。別の実施形態において、ヌクレオチド配列は、配列番号43、配列番号51、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号45、配列番号54からなる群から選択される。好ましくは、細菌細胞は大腸菌E.coliである。1つの態様において、本発明は、配列番号49で示されるアミノ酸配列を含む第1の単離されたポリペプチド、および配列番号44で示されるアミノ酸配列を含む第2の単離されたポリペプチドを含む組成物に関する。好ましい実施形態において、ポリペプチドは免疫原性である。別の好ましい実施形態において、組成物はさらに、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのORF2086サブファミリーAポリペプチドを含む。好ましくは、ORF2086サブファミリーAポリペプチドは、ピルビル化されていない非脂質化ORF2086サブファミリーAポリペプチドである。典型的な実施形態において、ORF2086サブファミリーAポリペプチドはA05であり、この例には、例えば、1位のN末端システインが欠失している配列番号13、および配列番号55が含まれる。別の態様において、本発明は、単離されたポリペプチドを産生するための方法に関する。本方法は、配列番号21に対する90を超える同一性を有する配列を含むポリペプチドを細菌細胞において発現させることを含み、前記配列は、配列番号21のアミノ酸13~18、配列番号21のアミノ酸21~34、および配列番号21のアミノ酸70~80からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせを含み、ポリペプチドは、N末端システインを欠いている。本方法はさらに、ポリペプチドを精製することを含む。前記方法において産生されるポリペプチドは、ピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを含む。好ましくは、ポリペプチドは免疫原性である。好ましい実施形態において、細菌細胞は大腸菌E.coliである。配列番号21のアミノ酸13~18、配列番号21のアミノ酸21~34、および配列番号21のアミノ酸70~80からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせを含むポリペプチドの例には、配列番号12A04、配列番号13A05、配列番号14A12、配列番号15A22、配列番号16B02、配列番号17B03、配列番号18B09、配列番号19B22、配列番号20B24、および配列番号21B44が含まれる。好ましくは、これらのポリペプチドの1位のシステインは欠失している。さらなる典型的なポリペプチドには、配列番号44、配列番号49、配列番号50、配列番号55、配列番号62、および配列番号64が含まれる。1つの典型的な実施形態において、単離されたポリペプチド配列は、配列番号21のアミノ酸96~116、配列番号21のアミノ酸158~170、配列番号21のアミノ酸172~185、配列番号21のアミノ酸187~199、配列番号21のアミノ酸213~224、配列番号21のアミノ酸226~237、配列番号21のアミノ酸239~248からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせをさらに含む。配列番号21のアミノ酸13~18、配列番号21のアミノ酸21~34、および配列番号21のアミノ酸70~80からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせを含み、かつ配列番号21のアミノ酸96~116、配列番号21のアミノ酸158~170、配列番号21のアミノ酸172~185、配列番号21のアミノ酸187~199、配列番号21のアミノ酸213~224、配列番号21のアミノ酸226~237、配列番号21のアミノ酸239~248からなる群から選択される少なくとも1つのドメイン、またはその組み合わせをさらに含むポリペプチドの例には、配列番号16B02、配列番号17B03、配列番号18B09、配列番号19B22、配列番号20B24、および配列番号21B44が含まれる。好ましくは、これらのポリペプチドの1位のシステインは欠失している。さらなる典型的なポリペプチドには、配列番号44、配列番号49、配列番号50、および配列番号55、および配列番号62から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。1つの態様において、本発明は、本明細書において記載されるプロセスによって産生される、単離されたポリペプチドに関する。1つの実施形態において、単離されたポリペプチドは、ピルビル化されていない非脂質化ポリペプチドである。別の態様において、本発明は、本明細書において記載されるプロセスによって産生される免疫原性組成物に関する。1つの態様において、本発明は、1位のN末端Cysが欠失している配列番号18、または配列番号49で示されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドに関する。配列番号49をコードする典型的なヌクレオチド配列には、配列番号46、配列番号47、および配列番号48から選択される配列が含まれる。好ましくは、ヌクレオチド配列は配列番号46である。1つの態様において、本発明は、配列番号46を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。1つの態様において、本発明は、配列番号47を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。1つの態様において、本発明は、配列番号48を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。1つの態様において、本発明は、配列番号46、配列番号47、配列番号48、および配列番号45から選択されるヌクレオチド配列を含むプラスミドに関するものであり、プラスミドは、細菌細胞において発現され得る。上記のように、適切な発現系、調節配列、および細菌細胞は、当技術分野において知られている。好ましくは、細菌細胞は大腸菌E.coliである。別の態様において、本発明は、配列番号50で示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドに関する。典型的な実施形態において、配列番号50は、配列番号45によってコードされる。さらに別の態様において、本発明は、N末端Cysが欠失している配列番号21、または配列番号44で示されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドに関する。配列番号44をコードする典型的なヌクレオチド配列には、配列番号43および配列番号51から選択される配列が含まれる。好ましくは、ヌクレオチド配列は配列番号43である。1つの態様において、本発明は、配列番号43を含む単離されたヌクレオチド配列に関する。免疫原性組成物好ましい実施形態において、単離されたピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを含む、本明細書において記載される組成物は、免疫原性である。髄膜炎菌NeisseriameningitidisORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質を含む免疫原性組成物は、当技術分野において知られている。典型的な免疫原性組成物には、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる、WO2003/063766および米国特許出願公開第US20060257413号および米国特許出願公開第US20090202593号において記載されているものが含まれる。これらの文献において記載されるこのような免疫原性組成物は、ORF2086タンパク質として同定される、殺菌活性を示すタンパク質、その免疫原性部分、および/またはその生物学的同等物を含む。ORF2086タンパク質とは、ナイセリアNeisseria種のオープンリーディングフレーム2086によってコードされるタンパク質を言う。タンパク質は、天然のナイセリアNeisseria種に由来する組換えタンパク質または単離されたタンパク質であり得る。例えば、ナイセリア属NeisseriaORF2086タンパク質は、細菌株、例えば、髄膜炎菌Neisseriameningitidis血清群A、B、C、D、W-135、X、Y、Z、および29E、淋菌Neisseriagonorrhoeae、およびナイセリアラクタミカNeisserialactamicaの株を含む、ナイセリア種Neisseriaの細菌株、ならびに前記タンパク質の免疫原性部分および/または生物学的同等物から単離することができる。ORF2086タンパク質は、2086サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質、その免疫原性部分、ならびに/またはその生物学的同等物を含む。2086サブファミリーAタンパク質および2086サブファミリーBタンパク質は、当技術分野において知られており、例えば、上記で引用されたFletcherら、2004、およびMurphyら、JInfectDis.2009Aug1;2003:379~89を参照されたい。また、配列番号260から278を2086サブファミリーAのタンパク質に関連する代表的なアミノ酸配列として開示している、WO2003/063766を参照されたい。さらに、WO2003/063766において、配列番号279から299が、2086サブファミリーBのタンパク質に関連する代表的なアミノ酸配列として開示されている。WO2003/063766は、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。ORF2086タンパク質またはその同等物などは、脂質化されていても脂質化されていなくてもよい。好ましくは、ナイセリア属NeisseriaORF2086タンパク質は、脂質化されていない。あるいは、免疫原性組成物は、脂質化ORF2086タンパク質および非脂質化ORF2086タンパク質の組み合わせであり得る。1つの実施形態において、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質に対する少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたタンパク質を含む。1つの実施形態において、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるサブファミリーAタンパク質に対する少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたタンパク質を含む。好ましくは、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされる、単離されたサブファミリーAタンパク質を含む。一部の実施形態において、ORF2086サブファミリーAポリペプチドは、A05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である。一部の実施形態において、ORF2086サブファミリーAポリペプチドは、A05変異体、A12変異体、またはA22変異体である。別の実施形態において、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるサブファミリーBタンパク質に対する少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたタンパク質を含む。好ましくは、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされる、単離されたサブファミリーBタンパク質を含む。一部の実施形態において、ORF2086サブファミリーBタンパク質は、B44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である。一部の実施形態において、ORF2086サブファミリーBタンパク質は、B44変異体、B22変異体、またはB09変異体である。好ましい実施形態において、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるサブファミリーBタンパク質に対する少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたピルビル化されていない非脂質化ポリペプチドを含む。例えば、一部の実施形態において、ORF2086サブファミリーBタンパク質は、N末端Cysが欠失している、配列番号21で示されるアミノ酸配列を有するB44変異体、配列番号16で示されるアミノ酸配列を有するB02変異体、配列番号17で示されるアミノ酸配列を有するB03変異体、配列番号19で示されるアミノ酸配列を有するB22変異体、配列番号20で示されるアミノ酸配列を有するB24変異体、もしくは配列番号18で示されるアミノ酸配列を有するB09変異体から選択される配列、またはその組み合わせである。さらに好ましくは、免疫原性組成物は、ピルビル化されていない非脂質化B09ポリペプチド、ピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチド、またはその組み合わせを含む。1つの実施形態において、組成物は、N末端Cysが欠失している配列番号18で示されるアミノ酸配列を有するピルビル化されていない非脂質化B09変異体、N末端Cysが欠失している配列番号21で示されるアミノ酸配列を有する、ピルビル化されていない非脂質化B44、またはその組み合わせを含む。別の実施形態において、免疫原性組成物は、配列番号49を有するピルビル化されていない非脂質化B09、配列番号44を有するピルビル化されていない非脂質化B44、またはその組み合わせを含む。1つの態様において、本発明は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物に関するものであり、ポリペプチドは、ピルビル化されていない非脂質化B44である。B44は、N末端Cysが欠失している配列番号21、または配列番号44で示されるアミノ酸配列を含み得る。1つの実施形態において、組成物はさらに、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisの第2のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含み、第2のポリペプチドは、ピルビル化されていない非脂質化B09である。B09は、N末端Cysが欠失している配列番号18、または配列番号49で示されるアミノ酸配列を含み得る。1つの実施形態において、免疫原性組成物はワクチンである。別の実施形態において、組成物は、3つ以下のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む。さらなる実施形態において、組成物は、2つ以下のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む。1つの実施形態において、組成物はさらに、1つまたは複数のORF2086サブファミリーAポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、組成物は、A05サブファミリーAポリペプチドを含む。さらに別の実施形態において、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるサブファミリーAタンパク質に対する少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたタンパク質、およびナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるサブファミリーBタンパク質に対する少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する、単離されたタンパク質を含む。好ましくは、免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされる、単離されたサブファミリーAタンパク質、およびナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされる、単離されたサブファミリーBタンパク質を含む。さらに好ましくは、免疫原性組成物は、単離されたピルビル化されていない非脂質化サブファミリーAORF2086ポリペプチド、および単離されたピルビル化されていない非脂質化サブファミリーBORF2086ポリペプチドを含む。一部の実施形態において、ORF2086サブファミリーAポリペプチドは、A05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である。好ましい実施形態において、ORF2086サブファミリーAポリペプチドは、配列番号13で示されるアミノ酸配列を有するA05、配列番号12で示されるアミノ酸配列を有するA04、配列番号14で示されるアミノ酸配列を有するA12、またはN末端Cysが欠失している配列番号15で示されるアミノ酸配列を有するA22変異体、またはそのあらゆる組み合わせである。一部の実施形態において、ORF2086サブファミリーBタンパク質は、B44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である。好ましい実施形態において、ORF2086サブファミリーBタンパク質は、配列番号21で示されるアミノ酸配列を有するB44、配列番号16で示されるアミノ酸配列を有するB02、配列番号17で示されるアミノ酸配列を有するB03、配列番号19で示されるアミノ酸配列を有するB22、配列番号20で示されるアミノ酸配列を有するB24、または末端Cysが欠失している配列番号18で示されるアミノ酸配列を有するB09変異体、またはその組み合わせである。1つの実施形態において、免疫原性組成物は、サブファミリーBタンパク質に対して1:1の比率のサブファミリーAタンパク質を含む。別の態様において、本明細書において記載される単離されたポリペプチドおよび組成物は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのORF2086ポリペプチドに対する、哺乳動物における殺菌性の免疫応答を誘発する。組成物は、哺乳動物に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を誘発する能力を有し、好ましい実施形態において、それぞれのサブファミリーを有する株に対して殺菌性である抗体を誘発し得る。殺菌性の応答についてのさらなる情報は以下で示される。例えば、実施例6、11、12、および13を参照されたい。殺菌性抗体はヒトにおける防御の指標であり、前臨床研究は代替手段として役立ち、あらゆる新規な免疫原性組成物候補がこれらの機能的抗体を誘発するはずである。典型的な実施形態において、1位のN末端Cysが欠失している配列番号18、または配列番号49を有する、単離されたピルビル化されていない非脂質化B09ポリペプチド、およびその免疫原性組成物は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのサブファミリーAまたは好ましくはサブファミリーBのORF2086ポリペプチドに対する例えば、それに結合し得る殺菌性抗体を誘発する。好ましくは、ピルビル化されていない非脂質化B09ポリペプチドおよびその免疫原性組成物は、A05変異体配列番号13、B44変異体配列番号21、B16変異体配列番号60、B24変異体配列番号20、B09変異体配列番号18、またはその組み合わせに対する殺菌性抗体を誘発する。典型的な実施形態において、ピルビル化されていない非脂質化B09ポリペプチドおよびその免疫原性組成物は、B44変異体配列番号21、B16変異体配列番号60、B24変異体配列番号20、B09変異体配列番号18、またはその組み合わせに対する殺菌性抗体を誘発する。例えば、実施例11、実施例12、および実施例13を参照されたい。別の典型的な実施形態において、1位のN末端Cysが欠失している配列番号21、または配列番号44を有する、単離されたピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチド、およびその免疫原性組成物は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのサブファミリーBのORF2086ポリペプチドに対する例えば、それに結合し得る殺菌性抗体を誘発する。好ましくは、ピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチドおよびその免疫原性組成物は、B44変異体配列番号21、B16変異体配列番号60、B24変異体配列番号20、B09変異体配列番号18、またはその組み合わせに対する殺菌性抗体を誘発する。例えば、実施例11を参照されたい。さらに、ピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチドおよびその免疫原性組成物はまた、B02変異体配列番号16に結合する殺菌性抗体を誘発し得る。例えば、実施例12および実施例13を参照されたい。さらに、ピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチドおよびその免疫原性組成物はまた、B03変異体配列番号17およびB15変異体配列番号59に結合する殺菌性抗体を誘発し得る。例えば、実施例6を参照されたい。さらなる典型的な実施形態において、1位のN末端Cysが欠失している配列番号19を有する、単離されたピルビル化されていない非脂質化B22ポリペプチド、およびその免疫原性組成物は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのサブファミリーBのORF2086ポリペプチドに対する例えば、それに結合し得る殺菌性抗体を誘発する。好ましくは、ピルビル化されていない非脂質化B22ポリペプチドは、B44変異体配列番号21、B16変異体配列番号60、B24変異体配列番号20、B09変異体配列番号18、またはその組み合わせに対する殺菌性抗体を誘発する。例えば、実施例13を参照されたい。1つの実施形態において、N末端Cysが欠失している配列番号13、または配列番号55を有する、単離されたピルビル化されていない非脂質化A05ポリペプチド、およびその免疫原性組成物は、血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisのサブファミリーAのORF2086ポリペプチドに対する例えば、それに結合し得る殺菌性抗体を誘発する。好ましくは、ピルビル化されていない非脂質化A05およびその免疫原性組成物は、A05変異体配列番号13、A22変異体配列番号15、A12変異体配列番号14、またはその組み合わせに対する殺菌性抗体を誘発する。例えば、実施例6および13を参照されたい。1つの態様において、本発明は、哺乳動物において血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisに特異的な殺菌性抗体を誘発する方法に関する。典型的な実施形態において、本方法は、ORF2086サブファミリーB血清群B髄膜炎菌N.meningitidis、ORF2086サブファミリーA血清群B髄膜炎菌N.meningitidis、またはその組み合わせに特異的な殺菌性抗体を誘発することを含む。本方法は、効果的な量の、上記のような単離されたピルビル化されていない非脂質化2086ポリペプチドまたはその免疫原性組成物を哺乳動物に投与することを含む。好ましい実施形態において、本方法は、ORF2086サブファミリーB血清群B髄膜炎菌N.meningitidisに特異的な殺菌性抗体を誘発することを含む。単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、ピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチドを含む。別の好ましい実施形態において、組成物はさらに、ピルビル化されていない非脂質化B09ポリペプチドを含む。典型的な実施形態において、単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、配列番号49、配列番号44、またはその組み合わせを含む。別の典型的な実施形態において、単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、1位のN末端Cysが欠失している配列番号18、1位のN末端Cysが欠失している配列番号21、またはその組み合わせを含む。さらに別の典型的な実施形態において、単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、1位のN末端Cysが欠失している配列番号19を含む。好ましい実施形態において、本方法は、ORF2086サブファミリーA血清群Bの髄膜炎菌N.meningitidisに特異的な殺菌性抗体を誘発することを含む。単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、ピルビル化されていない非脂質化A05ポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、1位のN末端Cysが欠失している配列番号13を含む。別の好ましい実施形態において、組成物はさらに、ピルビル化されていない非脂質化B44ポリペプチドを含む。例えば、実施例6および13を参照されたい。典型的な実施形態において、単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、配列番号55、配列番号44、またはその組み合わせを含む。好ましい実施形態において、単離されたポリペプチドまたは免疫原性組成物は、1位のN末端Cysが欠失している配列番号13、1位のN末端Cysが欠失している配列番号21、またはその組み合わせを含む。免疫原性組成物は、ナイセリア属NeisseriaORF2086のヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質、ポリヌクレオチド、またはその同等物を、免疫原性組成物における単独の活性免疫原として含み得る。あるいは、免疫原性組成物はさらに、他のナイセリア種Neisseriasp.の免疫原性ポリペプチド、または1つもしくは複数の他の微生物病原体例えば、限定はしないが、ウイルス、プリオン、細菌、または真菌の免疫学的に活性なタンパク質、または莢膜多糖を含む、活性免疫原を含み得る。組成物は、選択された指示に望ましい、1つまたは複数の所望のタンパク質、断片、または医薬化合物を含み得る。あらゆる多抗原免疫原性組成物または多価免疫原性組成物が、本発明によって検討される。例えば、免疫原性組成物は、2つ以上のORF2086タンパク質の組み合わせ、ORF2086タンパク質と1つもしくは複数のPorAタンパク質との組み合わせ、ORF2086タンパク質と髄膜炎菌meningococcus血清群A、C、Y、およびW135多糖ならびに/もしくは多糖コンジュゲートとの組み合わせ、ORF2086タンパク質と髄膜炎菌meningococcusおよび肺炎球菌pneumococcusの組み合わせとの組み合わせ、または所望の投与、例えば粘膜送達に適切な形態の前述のもののいずれかの組み合わせを含み得る。当業者であれば、このような多抗原免疫原性組成物または多価免疫原性組成物を容易に製剤し得よう。本発明はまた、病原体に対して有用なあらゆる組成物を、本発明の組成物内に、または本発明の組成物と組み合わせることができる、多免疫化レジメンを検討する。例えば、限定はしないが、患者に、ヒトパピローマウイルスウイルスHPVに対して免疫化するため、本発明の免疫原性組成物および別の免疫学的組成物、例えば、HPVワクチンGARDASIL登録商標を、多免疫化レジメンの一部として投与することができる。当業者であれば、多免疫化レジメンを開発および実行する目的で本発明の免疫原性組成物と組み合わせて用いるための免疫原性組成物を、容易に選択することができよう。ORF2086ポリペプチド、断片、および同等物は、コンジュゲート免疫原性組成物の一部として用いることができ、1つまたは複数のタンパク質またはポリペプチドは、いくつかの血清型、すなわち髄膜炎菌N.meningitidisの血清型、具体的には髄膜炎菌血清群、具体的には血清群Bに対する、および/またはいくつかの疾患に対する免疫原性特性を有する組成物を生成するために、担体にコンジュゲートさせることができる。あるいは、ORF2086ポリペプチドの1つを、他の免疫原性ポリペプチドのための担体タンパク質として用いることができる。このような免疫原性組成物の製剤は、当業者に周知である。本発明の免疫原性組成物は、好ましくは、薬学的に許容できる担体を含む。適切な薬学的に許容できる担体および/または希釈剤は、あらゆるおよび全ての従来の溶媒、分散媒質、充填剤、固体担体、水性溶液、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。適切な薬学的に許容できる担体には、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝溶液、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの1つまたは複数、およびその組み合わせが含まれる。薬学的に許容できる担体はさらに、抗体の保存期間または有効性を増強させる、少量の補助物質、例えば湿潤剤もしくは乳化剤、防腐剤、または緩衝液を含み得る。薬学的に許容できる担体の調製および使用は、当技術分野において周知である。あらゆる従来の培地または作用物質が活性成分と不適合である場合を除いて、本発明の免疫原性組成物におけるその使用が検討される。免疫原性組成物は、非経口的に、例えば、皮下または筋肉内の注射によって、および経口的に、または鼻腔内に投与することができる。筋肉内免疫化のための方法は、Wolffら、Biotechniques;114:474~851991、およびSedegahら、PNASVol.91、pp.9866~98701994によって記載されている。他の投与態様は、例えば、限定はしないが、経口製剤、肺製剤、坐剤、および経皮塗布を採用する。経口製剤は、例えば、限定はしないが、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの、通常採用される賦形剤を例えば採用する。好ましくは、免疫原性組成物は筋肉内に投与される。本発明の免疫原性組成物はさらに、免疫系を混乱させるかまたは改変して液性および/または細胞介在性の免疫性の上方調節または下方調節が観察されるようにする作用物質である、1つまたは複数のさらなる免疫調節物質を含み得る。1つの特定の実施形態において、液性および/または細胞介在性の免疫系の上方調節が好ましい。特定の免疫調節物質の例には、例えば、アジュバントまたはサイトカイン、またはとりわけ米国特許第5,254,339号において記載されているISCOMATRIXCSLLimited、Parkville、Australiaが含まれる。本発明のワクチンにおいて用いることができるアジュバントの非限定的な例には、RIBIアジュバント系RibiInc.、Hamilton、Mont.、ミョウバン、無機物ゲル、例えば水酸化アルミニウムゲル、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、例えば、フロイント完全アジュバントおよび不完全アジュバント、ブロックコポリマーCytRx、AtlantaGa.、QS-21CambridgeBiotechInc.、CambridgeMass.、SAF-MChiron、EmeryvilleCalif.、AMPHIGEN登録商標アジュバント、サポニン、QuilA、または他のサポニン画分、モノホスホリル脂質A、ならびにアブリジン脂質-アミンアジュバントが含まれる。本発明のワクチンにおいて有用な水中油型エマルジョンの非限定的な例には、修飾されたSEAM62およびSEAM1/2製剤が含まれる。修飾されたSEAM62は、5v/vのスクアレンSigma、1v/vのSPAN登録商標85洗剤ICISurfactants、0.7v/vのpolysorbate登録商標80洗剤ICISurfactants、2.5v/vのエタノール、200μg/mlのQuilA、100μg/mlのコレステロール、および0.5v/vのレシチンを含有する、水中油型エマルジョンである。修飾されたSEAM1/2は、5v/vのスクアレン、1v/vのSPAN登録商標85洗剤、0.7v/vのポリソルベート80洗剤、2.5v/vのエタノール、100μg/mlのQuilA、および50μg/mlのコレステロールを含む、水中油型エマルジョンである。ワクチンに含まれ得る他の免疫調節物質には、例えば、1つまたは複数のインターロイキン、インターフェロン、または他の既知のサイトカインもしくはケモカインが含まれる。1つの実施形態において、アジュバントは、それぞれ米国特許第6,165,995号および米国特許第6,610,310号において記載されているものなどの、シクロデキストリン誘導体またはポリアニオン系ポリマーであり得る。用いられる免疫調節物質および/またはアジュバントは、ワクチンまたは免疫原性組成物が投与される対象、注射の経路、および投与する注射の数に応じることが理解されるべきである。一部の実施形態において、アジュバントはサポニンである。一部の実施形態において、サポニンの濃度は、1μg/mlと250μg/mlとの間、5μg/mlと150μg/mlとの間、または10μg/mlと100μg/mlとの間である。一部の実施形態において、サポニンの濃度は、約1μg/ml、約5μg/ml、約10μg/ml、約20μg/ml、約30μg/ml、約40μg/ml、約50μg/ml、約60μg/ml、約70μg/ml、約80μg/ml、約90μg/ml、約100μg/ml、約110μg/ml、約120μg/ml、約130μg/ml、約140μg/ml、約150μg/ml、約160μg/ml、約170μg/ml、約180μg/ml、約190μg/ml、約200μg/ml、約210μg/ml、約220μg/ml、約230μg/ml、約240μg/ml、または約250μg/mlである。特定の好ましい実施形態において、本発明のタンパク質は、粘膜アジュバントを含み、そしてヒト宿主における髄膜炎菌N.meningitidis感染を治療または予防するために用いられる、経口投与のための免疫原性組成物において用いられる。粘膜アジュバントはコレラ毒素であり得るが、好ましくは、本発明に従って用いることができるコレラ毒素以外の粘膜アジュバントには、Aサブユニットが突然変異生成されたコレラホロトキシンの無毒誘導体、化学的に修飾されたコレラ毒素、またはコレラ毒素のアミノ酸配列の修飾によって産生される関連タンパク質が含まれる。本発明の免疫原性組成物の調製において得に有用であり得る特異的なコレラ毒素については、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる国際出願公開WO00/18434において開示されている、突然変異コレラホロトキシンE29Hを参照されたい。これらは、本発明のポリペプチドに付加またはコンジュゲートすることができる。同一の技術を、大腸菌Escherichiacoliの易熱性毒素LTなどの、粘膜アジュバントまたは送達特性を有する他の分子に適用することができる。粘膜表面の構造的または機能的完全性を改変する、胆汁;DEAE-デキストランおよびポリオルニチンなどのポリカチオン;ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどの洗剤;脂質にコンジュゲートした材料;ストレプトマイシンなどの抗生物質;ビタミンA;ならびに他の化合物などの、粘膜アジュバントまたは送達活性を有する他の化合物を用いることができる。他の粘膜的に活性な化合物には、MDPなどの微生物構造の誘導体、アクリジン、およびシメチジンが含まれる。上記のようなSTIMULON商標QS-21、MPL、およびIL-12もまた、用いることができる。本発明の免疫原性組成物は、ISCOMS免疫刺激複合体、CTBを含有するISCOMS、リポソームの形態で送達され得るか、または、吸着に適したサイズのミクロスフェアを形成するために例えばアクリレートもしくはDL-ラクチド-グリコシド共重合体などの化合物内にカプセル化され得る。本発明のタンパク質はまた、油性エマルジョン内に組み込むことができる。患者に投与される免疫原性組成物の量すなわち用量は、特定の抗原、アジュバント存在する場合、特定の患者の年齢、性別、体重、種、状態、および投与経路などの因子を考慮して、当業者に知られている標準的な技術に従って決定することができる。例えば、青年期のヒト患者のための投与量は、少なくとも0.1μg、1μg、10μg、または50μgのナイセリア属NeisseriaORF2086タンパク質、最大80μg、100μg、150μg、または200μgのナイセリア属NeisseriaORF2086タンパク質を含み得る。あらゆる最小値およびあらゆる最大値を、適切な範囲を規定するために組み合わせることができる。アジュバント本明細書において記載される免疫原性組成物はまた、特定の実施形態において、1つまたは複数のアジュバントを含む。アジュバントは、免疫原または抗原と共に投与された場合に免疫応答を増強させる物質である。限定はしないが、インターロイキン1-α、1-β、2、4、5、6、7、8、10、12例えば、米国特許第5,723,127号を参照されたい、13、14、15、16、17、および18およびその突然変異形態、インターフェロン-α、β、およびγ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSF例えば、米国特許第5,078,996号およびATCC受託番号39900を参照されたい、マクロファージコロニー刺激因子M-CSF、顆粒球コロニー刺激因子G-CSF、ならびに腫瘍壊死因子αおよびβを含む、多くのサイトカインまたはリンホカインが、免疫調節活性を有することが示されており、したがって、アジュバントとして有用である。本明細書において記載される免疫原性組成物と共に有用なさらに他のアジュバントには、限定はしないが、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、およびRANTESを含むケモカイン;セレクチン、例えばL-セレクチン、P-セレクチン、およびE-セレクチンなどの、接着分子;ムチン様分子、例えば、CD34、GlyCAM-1、およびMadCAM-1;LFA-1、VLA-1、Mac-1、およびp150.95などの、インテグリンファミリーのメンバー;PECAM、ICAM、例えばICAM-1、ICAM-2、およびICAM-3、CD2、およびLFA-3などの、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー;B7-1、B7-2、CD40、およびCD40Lなどの同時刺激分子;血管増殖因子、神経成長因子、線維芽細胞増殖因子、上皮成長因子、PDGF、BL-1、および血管内皮増殖因子を含む増殖因子;Fas、TNF受容体、Flt、Apo-1、p55、WSL-1、DR3、TRAMP、Apo-3、AIR、LARD、NGRF、DR4、DR5、KILLER、TRAIL-R2、TRICK2、およびDR6を含む受容体分子;ならびにCaspaseICEが含まれる。他の典型的なアジュバントには、限定はしないが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、STIMULON商標QS-21AquilaBiopharmaceuticals,Inc.、Framingham、Mass.、MPL商標3-O-脱アシル化モノホスホリル脂質A、Corixa、Hamilton、Mont.、529アミノアルキルグルコサミンホスフェート化合物、Corixa、Hamilton、Mont.、IL-12GeneticsInstitute、Cambridge、Mass.、GM-CSFImmunexCorp.、Seattle、Wash.、N-アセチルムラミル-L-スレオニル-D-イソグルタミンthr-MDP、N-アセチル-ノル-ムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミンノルMDPと呼ばれるCGP11637、N-アセチルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミニル-L-アラニン-2-1’-2’-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリルオキシエチルアミンMTP-PEと呼ばれるCGP19835A、およびコレラ毒素が含まれる。特定の好ましい実施形態において、アジュバントはQS-21である。さらなる典型的なアジュバントには、そのAサブユニットを含むコレラ毒素の無毒誘導体、および/あるいは、髄膜炎菌N.meningitidisポリペプチドと、コレラ毒素もしくはそのBサブユニットCTB、プロコレラゲノイド、シゾフィランを含む真菌多糖、ムラミルジペプチド、ムラミルジペプチドMDP誘導体、ホルボールエステル、大腸菌E.coliの易熱性毒素、ブロックポリマー、またはサポニンとの、コンジュゲートまたは遺伝子操作された融合体が含まれる。リン酸アルミニウムは、第1相臨床試験において、米国連邦規制基準[610.15a]によって特定されている0.85mg/投与の限界よりかなり低い濃度0.125mg/投与まで、アジュバントとして用いられている。アルミニウム含有アジュバントは、筋肉内または皮下に投与される場合に抗原の免疫応答を強化するために、ヒトにおいて広く用いられている。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125μg/mlと0.5μg/mlとの間、0.20μg/mlと0.40μg/mlとの間、または0.20μg/mlと0.30μg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、約0.125μg/ml、約0.15μg/ml、約0.175μg/ml、約0.20μg/ml、約0.225μg/ml、約0.25μg/ml、約0.275μg/ml、約0.30μg/ml、約0.325μg/ml、約0.35μg/ml、約0.375μg/ml、約0.40μg/ml、約0.425μg/ml、約0.45μg/ml、約0.475μg/ml、または約0.50μg/mlである。好ましい実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、0.125mg/mlと0.5mg/mlとの間、0.20mg/mlと0.40mg/mlとの間、または0.20mg/mlと0.30mg/mlとの間である。一部の実施形態において、免疫原性組成物におけるアルミニウムの濃度は、約0.125mg/ml、約0.15mg/ml、約0.175mg/ml、約0.20mg/ml、約0.225mg/ml、約0.25mg/ml、約0.275mg/ml、約0.30mg/ml、約0.325mg/ml、約0.35mg/ml、約0.375mg/ml、約0.40mg/ml、約0.425mg/ml、約0.45mg/ml、約0.475mg/ml、または約0.50mg/mlである。免疫応答を増強させるために用いられる適切なアジュバントにはさらに、限定はしないが、米国特許第4,912,094号において記載されているMPL商標3-O-脱アシル化モノホスホリル脂質A、Corixa、Hamilton、MTが含まれる。アジュバントとしての使用に同様に適切なものは、CorixaHamilton、MTから入手可能であり、米国特許第6,113,918号において記載されている、合成脂質A類似体もしくはアミノアルキルグルコサミンホスフェート化合物AGP、またはその誘導体もしくは類似体である。1つのこのようなAGPは、529としても知られている以前はRC529として知られていた、2-[R-3-テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ]エチル-2-デオキシ-4-O-ホスホノ-3-O-[R-3-テトラデカノイルオキシテトラデカノイル]-2-[R-3-テトラデカノイルオキシテトラデカノイル-アミノ]-b-D-グルコピラノシドである。この529アジュバントは、水性形態AFとして、または安定なエマルジョンSEとして製剤される。さらに他のアジュバントには、ムラミルペプチド、例えば、N-アセチルムラミル-L-スレオニル-D-イソグルタミンthr-MDP、N-アセチルノルムラミル-L-アラニン-2-1’-2’ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリルオキシ-エチルアミンMTP-PE;水中油型エマルジョン、例えば、MF59米国特許第6,299,884号マイクロフルイダイザー、例えばModel110YマイクロフルイダイザーMicrofluidics、Newton、MAを用いてサブミクロンの粒子に製剤された、5スクアレン、0.5ポリソルベート80、および0.5Span85を含有する様々な量のMTP-PEを含有していてもよい、およびSAFサブミクロンのエマルジョンにマイクロフルイダイズされているかまたはさらに大きな粒子サイズのエマルジョンを生成させるためにボルテックスされている、10スクアレン、0.4ポリソルベート80、5のプルロニックでブロックされたポリマーL121、およびthr-MDPを含有する;不完全フロイントアジュバントIFA;アルミニウム塩ミョウバン、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム;Amphigen;アブリジン;L121/スクアレン;D-ラクチド-ポリラクチド/グリコシド;プルロニックポリオール;死滅ボルデテラ属Bordetella;サポニン、例えば、米国特許第5,057,540号において記載されているStimulon商標QS-21Antigenics、Framingham、MA、米国特許第5,254,339号において記載されているISCOMATRIXCSLLimited、Parkville、Australia、および免疫刺激複合体ISCOMATRIX;結核菌Mycobacteriumtuberculosis;細菌リポ多糖;合成ポリヌクレオチド、例えば、CpGモチーフを含有するオリゴヌクレオチド例えば、米国特許第6,207,646号;欧州特許第1,296,713号および欧州特許第1,326,634号において記載されているIC-31IntercellAG、Vienna、Austria;百日咳毒素PTもしくはその突然変異体、コレラ毒素もしくはその突然変異体例えば、米国特許第7,285,281号、米国特許第7,332,174号、米国特許第7,361,355号、および米国特許第7,384,640号;または大腸菌E.coliの易熱性毒素LTもしくはその突然変異体、特にLT-K63、LT-R72例えば、米国特許第6,149,919号、米国特許第7,115,730号、および米国特許第7,291,588号が含まれる。非脂質化P2086抗原を産生する方法1つの態様において、本発明は、ピルビル化されていない非脂質化ORF2086ポリペプチドを産生する方法に関する。本方法は、対応する野生型配列と比較してN末端システインが欠失しているORF2086ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を発現させることを含み、このヌクレオチド配列は、細菌細胞において発現され得る発現系に作動可能に連結している。本方法によって産生される典型的なポリペプチドには、本明細書において記載されるあらゆるポリペプチドが含まれる。例えば、好ましくは、ポリペプチドは、対応する野生型配列と比較して1位のシステインが欠失している、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21で示されるアミノ酸配列を有する。さらなる典型的なポリペプチドには、配列番号44、配列番号49、配列番号50、配列番号55、配列番号57、配列番号62、および配列番号64から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。本方法はさらに、ポリペプチドを精製することを含む。一部の実施形態において、本発明は、ORF2086変異体の核酸配列を、脂質化制御配列を有さない大腸菌E.coli発現ベクター内にクローニングするステップ、大腸菌E.coli細菌をORF2086発現ベクターで形質転換するステップ、発現を誘発するステップ、および発現したP2086タンパク質を単離するステップを含む、可溶性の非脂質化P2086抗原を産生するための方法を提供する。一部の実施形態において、発現は、IPTGを用いて誘発される。一部の実施形態において、ORF2086変異体のN末端Cysのコドンは欠失している。このようなコドンの例には、TGCが含まれる。一部の実施形態において、ORF2086変異体のN末端Cysのコドンは、Alaコドン、Glyコドン、またはValコドンを生成するための点突然変異生成によって突然変異している。一部の実施形態において、SerコドンおよびGlyコドンがORF2086変異体のN末端尾部に付加されて、N末端Cysのすぐ下流のGly/Serストークを伸長する。一部の実施形態において、Gly/Serストーク内のGly残基およびSer残基の総数は、少なくとも7、8、9、10、11、または12である。一部の実施形態において、N末端Cysのコドンは欠失している。一部の実施形態において、N末端の7、8、9、10、11、または12個の残基は、GlyまたはSerである。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部のコドンは、点突然変異生成によって最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部は、B09変異体のN末端尾部に適合するように最適化されている。一部の実施形態において、ORF2086変異体のN末端尾部のコドンは、ORF2086変異体の5番目のアミノ酸をコードするコドンが配列番号8のヌクレオチド13~15に100同一となり、ORF2086変異体の13番目のアミノ酸をコードするコドンが配列番号8のヌクレオチド37~39に100同一となるような点突然変異生成によって最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部は、5’の45個の核酸が配列番号8の核酸1~45に100同一となるように最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部は、5’の42個の核酸が配列番号8の核酸4~45に100同一となるように最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化ORF2086変異体のN末端尾部は、5の39個の核酸が配列番号8の核酸4~42に100同一となるように最適化されている。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸1~15と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸1~15と比較して2つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸2~15と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、非脂質化P2086変異体のN末端尾部は、配列番号18のアミノ酸2~15と比較して2つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、アミノ酸置換は、保存的なアミノ酸置換である。一部の実施形態において、非脂質化変異体のコドンは、発現が増大するように最適化されている。コドンの最適化は、当技術分野において知られている。例えば、Sastallaら、AppliedandEnvironmentalMicrobiology、vol.757:2099~21102009、およびColemanら、Science、vol.320:17842008を参照されたい。一部の実施形態において、コドンの最適化は、特定のDNA配列を含めながらおよび/または排除しながら、アミノ酸配列のコドン利用を、選択された宿主生物のコドン頻度とマッチさせることを含む。一部の実施形態において、コドンの最適化はさらに、対応するmRNA二次構造を最小化して、翻訳障害を低減させることを含む。一部の実施形態において、N末端尾部は、配列番号28、30、32、および34のいずれか1つを含むようにコドンを最適化されている。一部の実施形態において、Gly/Serストークは、配列番号28、30、32、および34のいずれか1つを含むようにコドンを最適化されている。本発明がより良く理解され得るように、以下の実施例を示す。実施例は説明を目的としたものにすぎず、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。免疫原性組成物製剤特定の実施形態において、本発明の免疫原性組成物はさらに、アジュバント、緩衝液、凍結保護物質、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、フリーラジカル酸化の阻害剤、希釈剤、または担体の少なくとも1つを含む。本発明の免疫原性組成物はさらに、複数の髄膜炎菌タンパク質抗原および莢膜多糖-タンパク質コンジュゲートに加えて、1つまたは複数の防腐剤を含む。FDAは、わずかな例外を除いて、複数回用量多用量バイアル内の生物学的生成物が防腐剤を含有することを求めている。防腐剤を含有するワクチン生成物には、塩化ベンゼトニウム炭疽、2-フェノキシエタノールDTaP、A型肝炎、ライム病、ポリオ非経口、フェノール肺炎、腸チフス非経口、ワクシニア、およびチメロサールDTaP、DT、Td、B型肝炎、Hib、インフルエンザ、JE、髄膜症、肺炎、狂犬病を含有するワクチンが含まれる。注射可能な薬剤における使用に認可されている防腐剤には、例えば、クロロブタノール、m-クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、2-フェノキシエタノール、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、フェノール、チメロサール、および硝酸フェニル水銀が含まれる。本発明の製剤はさらに、緩衝液、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、凍結保護物質、例えば糖、および抗酸化剤、例えばフリーラジカルスカベンジャー、もしくはキレート剤の1つもしくは複数、またはそのあらゆる複数の組み合わせを含み得る。あらゆる1つの成分、例えばキレート剤の選択によって、別の成分例えばスカベンジャーが望ましいか否かが決定され得る。投与のために製剤された最終組成物は、無菌であり、かつ/または発熱性物質を有さない。当業者は、所要の特定の保存条件および投与条件などの様々な因子に応じて、これらのおよび他の成分のどの組み合わせが、防腐剤を含有する本発明の免疫原性組成物に含めるために最適であるかを、経験的に決定することができる。特定の実施形態において、非経口投与に適合する本発明の製剤は、限定はしないが、Trisトリメタミン、ホスフェート、アセテート、ボレート、シトレート、グリシン、ヒスチジン、およびスクシネートから選択される、1つまたは複数の生理学的に許容できる緩衝液を含む。特定の実施形態において、製剤は、約6.0から約9.0、好ましくは約6.4から約7.4のpH範囲内に緩衝される。特定の実施形態において、本発明の免疫原性組成物または製剤のpHを調整することが望ましい場合がある。本発明の製剤のpHは、当技術分野における標準的な技術を用いて調整することができる。製剤のpHは、3.0と8.0との間に調整することができる。特定の実施形態において、製剤のpHは、3.0と6.0との間、4.0と6.0との間、または5.0と8.0との間であり得るか、またはそれに調整することができる。他の実施形態において、製剤のpHは、約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.5、約5.8、約6.0、約6.5、約7.0、約7.5、または約8.0であり得るか、またはそれに調整することができる。特定の実施形態において、pHは、4.5から7.5、または4.5から6.5、5.0から5.4、5.4から5.5、5.5から5.6、5.6から5.7、5.7から5.8、5.8から5.9、5.9から6.0、6.0から6.1、6.1から6.2、6.2から6.3、6.3から6.5、6.5から7.0、7.0から7.5、または7.5から8.0の範囲であり得るか、またはそれに調整することができる。具体的な実施形態において、製剤のpHは約5.8である。特定の実施形態において、非経口投与に適合する本発明の製剤は、限定はしないが、MgCl2、CaCl2、およびMnCl2を含む、1つまたは複数の二価陽イオンを、約0.1mMから約10mMの範囲の濃度で含み、最大約5mMが好ましい。特定の実施形態において、非経口投与に適合する本発明の製剤は、非経口投与の際に対象に対して生理学的に許容できるイオン強度で存在し、最終製剤において、選択されたイオン強度またはモル浸透圧濃度をもたらすような最終濃度で含まれる、限定はしないが、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、および硫酸カリウムを含む、1つまたは複数の塩を含む。製剤の最終イオン強度または重量モル浸透圧濃度は、複数の成分例えば、緩衝化合物1つまたは複数に由来するイオン、および他の非緩衝塩によって決定される。好ましい塩であるNaClは、最大約250mMの様々な濃度で存在し、塩濃度は、他の成分例えば糖を補って製剤の最終総モル浸透圧濃度が非経口投与例えば、筋肉内注射または皮下注射に適合するように、また様々な温度範囲にわたって免疫原性組成物製剤の免疫原性成分の長期の安定性を促進するように、選択される。無塩製剤は、増大した範囲の1つまたは複数の選択された凍結保護物質に対して耐性を有して、所望の最終モル浸透圧濃度レベルを維持する。特定の実施形態において、非経口投与に適合する本発明の製剤は、限定はしないが、二糖例えば、ラクトース、マルトース、ショ糖、またはトレハロースおよびポリヒドロキシ炭化水素例えば、ズルシトール、グリセロール、マンニトール、およびソルビトールから選択される、1つまたは複数の凍結保護物質を含む。特定の実施形態において、製剤のモル浸透圧濃度は、約200mOs/Lから約800mOs/Lの範囲であり、好ましい範囲は、約250mOs/Lから約500mOs/L、または約300mOs/L~約400mOs/Lである。無塩製剤は、例えば、約5から約25のショ糖、好ましくは約7から約15、または約10から約12のショ糖を含有し得る。あるいは、無塩製剤は、例えば、約3から約12のソルビトール、好ましくは約4から7、または約5から約6のソルビトールを含有し得る。塩化ナトリウムなどの塩が添加されると、ショ糖またはソルビトールの効果的な範囲は比較的減少する。これらのおよび他のこのような重量モル浸透圧濃度およびモル浸透圧濃度の考慮は、十分に当技術分野の技術の範囲内である。特定の実施形態において、非経口投与に適合する本発明の製剤は、1つまたは複数のフリーラジカル酸化阻害剤および/またはキレート剤を含む。様々なフリーラジカルスカベンジャーおよびキレート剤が、当技術分野において知られており、本明細書において記載される製剤および使用方法に適用される。例には、限定はしないが、エタノール、EDTA、EDTA/エタノールの組み合わせ、トリエタノールアミン、マンニトール、ヒスチジン、グリセロール、クエン酸ナトリウム、イノシトールヘキサホスフェート、トリポリホスフェート、アスコルビン酸/アスコルベート、コハク酸/スクシネート、リンゴ酸/マレエート、デスフェラール、EDDHAおよびDTPA、ならびに上記の2つ以上の様々な組み合わせが含まれる。特定の実施形態において、少なくとも1つの非還元性フリーラジカルスカベンジャーを、製剤の長期の安定性を効果的に増強させる濃度で添加することができる。スカベンジャーおよび二価陽イオンなどの1つまたは複数のフリーラジカル酸化阻害剤/キレート剤をまた、様々な組み合わせで添加することができる。キレート剤の選択によって、スカベンジャーの添加が必要であるか否かが決定される。特定の実施形態において、非経口投与に適合する本発明の製剤は、限定はしないが、Brij58、Brij35、およびその他、例えばトリトンX-100、トリトンX-114、NP40、Span85、およびプルロニックシリーズの非イオン性界面活性剤例えば、プルロニック121を含む、限定はしないが、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリソルベート-80Tween80、ポリソルベート-60Tween60、ポリソルベート-40Tween40、およびポリソルベート-20Tween20、ポリオキシエチレンアルキルエーテルを含む、1つまたは複数の非イオン性界面活性剤を含み、好ましい成分は、約0.001から約2最大約0.25が好ましいの濃度のポリソルベート-80、または約0.001から1最大約0.5が好ましいの濃度のポリソルベート-40である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、非経口投与に適切な1つまたは複数のさらなる安定剤、例えば、少なくとも1つのチオール-SH基例えば、システイン、N-アセチルシステイン、還元型グルタチオン、ナトリウムチオグリコレート、チオスルフェート、モノチオグリセロール、またはその混合物を含む還元剤を含む。あるいは、または場合によって、本発明の、防腐剤を含有する免疫原性組成物製剤は、酸素を保存容器から除去すること、製剤を光から保護することによって例えば、琥珀色ガラス容器を用いることによってさらに安定化され得る。本発明の、防腐剤を含有する免疫原性組成物製剤は、1つまたは複数の薬学的に許容できる担体または賦形剤を含み得、賦形剤には、それ自体は免疫応答を誘発しないあらゆる賦形剤が含まれる。適切な賦形剤には、限定はしないが、タンパク質、糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、ショ糖Paolettiら、2001、Vaccine、19:2118、トレハロース、ラクトース、および脂質凝集体例えば、油滴またはリポソームなどの高分子が含まれる。このような担体は、当業者に周知である。薬学的に許容できる賦形剤は、例えば、Gennaro、2000、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy、第20版、ISBN:0683306472において論じられている。本発明の組成物は、凍結乾燥され得るか、または水性形態、すなわち溶液もしくは懸濁液であり得る。液体製剤は、有利には、それらのパッケージされた形態から直接的に投与され得、したがって、さもなければ本発明の凍結乾燥組成物に必要な水性媒質における再構成をする必要なく、注射に理想的である。対象への本発明の免疫原性組成物の直接的な送達は、非経口投与筋肉内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、または組織の間質性空間へによって、または直腸投与、経口投与、膣投与、局所投与、経皮投与、鼻腔内投与、眼投与、耳投与、肺投与、もしくは他の粘膜投与によって行うことができる。好ましい実施形態において、非経口投与は、筋肉内注射によって、例えば、対象の大腿部または上腕に行われる。注射は、針例えば皮下注射針を介して行うことができるが、無針注射も代わりに用いることができる。典型的な筋肉内用量は、0.5mLである。本発明の組成物は、例えば液体溶液または懸濁液としての注射のために、様々な形態で調製することができる。特定の実施形態において、組成物は、肺投与のために粉末またはスプレーとして、例えば吸入器において調製することができる。他の実施形態において、組成物は、坐剤もしくはペッサリーとして調製することができるか、または、鼻投与、耳投与、もしくは眼投与のために、例えばスプレー、ドロップ、ゲル、もしくは粉末として調製することができる。特定の免疫原性組成物のための成分の最適な量は、対象における適切な免疫応答の観察を伴う標準的な研究によって確認することができる。初回ワクチン接種の後、対象に、適切に間隔をあけた1回または複数回の追加免疫化を行うことができる。パッケージングおよび投与形態本発明の免疫原性組成物は、単位用量形態または多用量形態例えば、2回用量、4回用量、またはそれ以上にパッケージすることができる。多用量形態では、バイアルが典型的であるが、充填済みシリンジよりも必ずしも好ましいというわけではない。適切な多用量フォーマットには、限定はしないが、容器当たり2から10回用量で、用量当たり0.1から2mLのものが含まれる。特定の実施形態において、用量は0.5mL用量である。例えば、参照することによって本明細書に組み込まれる、国際特許出願WO2007/127668を参照されたい。組成物は、バイアルもしくは他の適切な保存容器内に存在し得るか、または充填済み送達装置、例えば、針を有していてもいなくてもよい、単一成分シリンジもしくは複数成分シリンジ内に存在し得る。シリンジは、典型的には、単回用量の本発明の防腐剤を含有する免疫原性組成物を含有するが、必ずしもそうである必要はなく、多用量の充填済みシリンジもまた構想される。同様に、バイアルは、単回用量を含み得るが、代わりに複数回用量を含んでいてもよい。効果的な投与量容積は、通常通り決定することができるが、注射のための組成物の典型的な用量は、0.5mLの容積を有する。特定の実施形態において、用量は、ヒト対象への投与のために製剤される。特定の実施形態において、用量は、成人、十代、青年、幼児、または乳児すなわち、1歳以下のヒト対象への投与のために製剤され、好ましい実施形態においては注射によって投与することができる。本発明の液体免疫原性組成物はまた、凍結乾燥形態の他の免疫原性組成物を再構成するために適切である。免疫原性組成物をこのような即時の再構成に用いる場合、本発明は、2つ以上のバイアル、2つ以上の充填済シリンジ、またはそれぞれの1つもしくは複数を有するキットを提供し、シリンジの内容物は注射の前にバイアルの内容物を再構成するために用いられ、または逆の場合も同様である。あるいは、本発明の免疫原性組成物は、それらを調製するために用いられる正確な方法を変化させることによって選択および制御され得る平均直径サイズなどの粒子特徴を有するマイクロペレットまたはミクロスフェアなどの、乾燥した通常の形状の例えば球状の粒子を形成するための、技術分野において周知の凍結乾燥のための多数の方法の1つを例えば用いて、凍結乾燥および再構成することができる。免疫原性組成物はさらに、マイクロペレットまたはミクロスフェアなどの個別の乾燥した通常の形状の例えば球状の粒子と共に場合によって調製され得るかまたは前記粒子内に含有され得るアジュバントを含み得る。このような実施形態において、本発明はさらに、安定化された乾燥免疫原性組成物を含み、1つまたは複数の本発明の防腐剤をさらに包含していてもよい、第1の成分、および第1の成分を再構成するための無菌の水性溶液を含む第2の成分を含む、免疫原性組成物キットを提供する。特定の実施形態において、水性溶液は、1つまたは複数の防腐剤を含み、少なくとも1つのアジュバントを含んでいてもよい例えば、参照することによって本明細書に組み込まれる、WO2009/109550を参照されたい。さらに別の実施形態において、多用量フォーマットの容器は、限定はしないが、通常の実験用ガラス製品、フラスコ、ビーカー、メスシリンダー、発酵槽、バイオリアクター、管類、パイプ、袋、瓶、バイアル、バイアル密閉器例えば、ゴムストッパー、ねじ式キャップ、アンプル、シリンジ、二チャンバシリンジまたは多チャンバシリンジ、シリンジストッパー、シリンジプランジャー、ゴム密閉器、プラスチック密閉器、ガラス密閉器、カートリッジ、および使い捨てのペンなどからなる群の1つまたは複数から選択される。本発明の容器は、製造の材料によって限定されず、ガラス、金属例えば、鋼鉄、ステンレス鋼、アルミニウムなど、およびポリマー例えば、熱可塑性物質、エラストマー、熱可塑性エラストマーなどの材料を含む。特定の実施形態において、このフォーマットの容器は、ブチルストッパーを有する5mLのSchottType1ガラスバイアルである。当業者には、上記で説明されたフォーマットが決して包括的な列挙ではなく、単に、本発明に利用可能な様々なフォーマットに関して当業者に助言するためのものであることが理解されよう。本発明において用いるために検討されるさらなるフォーマットは、UnitedStatesPlasticCorp.Lima、OH、VWRなどの実験機器の販売者および製造者から発行されたカタログにおいて見ることができる。実施例1:実験手順血清殺菌アッセイカニクイザルCynomolgusmacaquesn=5/群を、AlPO4に吸着させたrLP2086タンパク質またはrP2086ABタンパク質を用いて筋肉内で免疫化した。カニクイザルは、非ヒト霊長類の例である。動物に、0週目、4週目、および24週目にワクチン接種し、ORF2086特異的IgGおよび機能的抗体の力価を、0週目、4週目、6週目、および26週目に決定した。血清のORF2086特異的IgGの力価を、rLP2086AおよびBに対して決定した。機能的抗体の力価を、ワクチン内に含有される配列に相同または異種の配列を有するLP2086を発現する髄膜炎菌Neisseriameningitidis株に対する血清殺菌アッセイSBAによって試験した。ORF2086ワクチンで免疫化されたマカクまたはウサギにおける血清殺菌抗体を、ヒト補体を用いるSBAを用いて決定した。ウサギ免疫血清またはマカク免疫血清を加熱不活化して、固有の補体活性を除去し、その後、96ウェルマイクロタイタープレート内で、Ca2およびMg2を有するダルベッコPBSD-PBS内に1:2で連続希釈して、髄膜炎菌N.meningitidis株に対する血清の殺菌活性について試験した。このアッセイにおいて用いられる細菌は、Kellogg補助物質を補ったGC培地GCKにおいて成長させ、650nmでの光学密度によってモニタリングした。細菌を、0.50~0.55の最終OD650で、アッセイにおいて用いるために採取し、D-PBS内に希釈し、1000~3000CFUを、20ヒト補体を有するアッセイ混合物に添加した。検出可能な殺菌活性を有さないヒト血清を、外因性の補体源として用いた。補体源を、それぞれの個別の試験株に対する適合性について試験した。補体源は、免疫血清を添加していない対照において生存している細菌の数が75を超える場合にのみ用いた。10の固有の補体源が、この研究において記載されているSBAを行うために必要であった。37°C、5CO2での30分間のインキュベーションの後、D-PBSを反応混合物に添加し、アリコートを、50GCK培地で満たされたマイクロフィルタープレートに移した。マイクロフィルタープレートを濾過し、37°C、5CO2で一晩インキュベートし、ミクロコロニーを染色および定量した。血清の殺菌力価は、免疫血清を有さない対照ウェルにおけるCFUと比較してCFUが50低減した血清希釈の、補間された逆数として定義した。SBAの力価は、37°Cで30分間のインキュベーションの後の細菌数における50の低減を引き起こす試験血清の補間された希釈の逆数として定義する。ORF2086免疫血清での死滅に対する感受性は、対応する免疫前血清と比較してORF2086免疫血清についてのSBA力価が4倍以上上昇する場合に定めた。開始希釈でアッセイ株に対して陰性であった血清には、アッセイでの検出限界の2分の1の力価すなわち4が付与された。実施例2:非脂質化ORF2086変異体のクローニングおよび発現髄膜炎菌N.meningitidis株M98250771A05の残基27~286に対応する成熟P2086アミノ酸配列は、ゲノムDNAからのPCR増幅に元々由来するものであった。配列TGCCATATGAGCAGCGGAAGCGGAAG配列番号22を有するフォワードプライマーは、5’配列にアニーリングされ、クローニングのためのNdeI部位を含有していた。配列CGGATCCCTACTGTTTGCCGGCGATGC配列番号23を有するリバースプライマーは、遺伝子の3’末端にアニーリングされ、制限部位BamHIの前にある終結コドンTAGを含有していた。799bpの増幅断片をまず、中間ベクターPCR2.1Invitrogen、Carlesbac、CA内にクローニングした。このプラスミドをNdeIおよびBamHIで切断し、NdeIおよびBamHIで切断されている発現ベクターpET9aNovagen、Madison、WI内にライゲーションした。得られたベクターpLA100これは配列番号54を含むは、脂質化タンパク質内に存在するN末端システインを有さない株M982507711位のN末端Cysが欠失している配列番号13、または配列番号55を参照されたいから、成熟サブファミリーA05P2086を発現した。BLRDE3大腸菌E.coli宿主株[F-ompThsdSBrB-mB-galdcmΔsrl-recA306::Tn10TetRDE3]Novagenを用いて、fHBPの発現を得た。同一のクローニングステップを用いて、N末端Cysが欠失した変異体B02、B03、B09、B22、B24、B44、A04、A12、およびA22を調製した。N末端Cysを含有する変異体もまた、Cysコドン例えば、配列番号1~11の最初のコドンも含むフォワードプライマーを用いて、この同一の方法によって調製した。本明細書において提供される配列に基づいて、当業者であれば、これらの変異体のそれぞれについてフォワードプライマーおよびリバースプライマーを設計し得よう。例えば、以下のプライマーを用いてB44非脂質化変異体を増幅し、その後、NdeIおよびBlpIを用いてpET9a内にクローニングした。結果非脂質化プラスミド構築物は強力に発現されたが、非脂質化タンパク質変異体は、N末端Cys残基でピルビル化されていた。例えば構築物を発現させる方法を説明する、実施例8および9を参照されたい。このピルビル化を克服するために、N末端Cysコドンを欠失させた。例えば実施例10を参照されたい。N末端Cysの欠失は、しかし、A22変異体およびB22変異体の発現を無効にした。例えば図4を参照されたい。A05変異体、B01変異体、およびB44変異体は、しかし、N末端Cys残基が欠失しているにもかかわらず、依然として発現した。例えば、1位のN末端Cysが欠失している配列番号13A05、配列番号35B01のN末端、および1位のN末端Cysが欠失している配列番号21B44を参照されたい。例えば図5を参照されたい。さらに、非脂質化B09変異体の発現は、N末端Cys残基の欠失によって影響されなかった。例えば実施例4を参照されたい。実施例3:非脂質化変異体の発現に対するGly/Serストークの影響なぜA05変異体、B01変異体、およびB44変異体がN末端Cysの不存在下で発現し、A22変異体およびB22変異体が発現しなかったのかを解明するために、これらの変異体の配列をアラインした。A05変異体、B01変異体、およびB44変異体は全て、N末端Cysの直後の、伸長した一連の10個または11個のGly残基およびSer残基すなわちGly/Serストークを有している。A22変異体およびB22変異体は、しかし、6個のGly残基およびSer残基からなるGly/Serストークを有していたにすぎない。したがって、A22変異体およびB22変異体のGly/Serストークを、さらなるGly残基およびSer残基の挿入によって拡張した。長いGly/Serストーク変異体を、10個または11個のGly残基およびSer残基を有するGly/Serストークをコードするフォワードプライマーを用いて、実施例2において記載されている方法によって調製した。N末端Cysが欠失した長いGly/Serストーク10~11個のGly/Ser残基のA22変異体およびB22変異体は、N末端Cysが欠失した短いGly/Serストーク6個のGly/Ser残基変異体A22およびB22よりも増大した発現を示した。これらの発現レベルは、しかし、A05変異体、B01変異体、およびB44変異体の発現レベルと比較して依然として低減した。実施例4:コドンの最適化非脂質化B09変異体の発現は、N末端Cys残基の欠失によって影響されなかった1位のシステインが欠失している配列番号18、または配列番号49を参照されたい。例えば図6を参照されたい。B09変異体の配列の評価は、B09変異体が、A22変異体およびB22変異体のGly/Serストークと同様に、6個のGly残基およびSer残基からなるGly/Serストークを有することを示した。実際、B09変異体およびA22変異体のN末端尾部は、アミノ酸レベルで同一である。B09変異体およびA22変異体それぞれ配列番号53および42のN末端尾部は、しかし、核酸レベルで、2つの核酸、すなわち配列番号8の核酸15および39が異なる。例えば図6を参照されたい。B22変異体のN末端尾部の最初の14個のアミノ酸は、B09変異体およびA22変異体に同一であり、B22変異体のN末端尾部は、15番目のアミノ酸で異なるにすぎない。B22変異体の核酸1~42は、A22変異体の核酸1~42に同一である。B22変異体配列番号52を参照されたいの核酸1~42は、最適にアラインした場合、B09配列番号53を参照されたいの核酸1~42に同一であるが、核酸15および39で異なる。したがって、B22変異体は、B09変異体と、配列番号8のアミノ酸15および39で異なる。この最後の文は誤植を含んでおり、B22変異体がB09変異体と配列番号8の核酸15および39で異なることを述べるものである。核酸の違いが、A22変異体およびB22変異体と比較してB09変異体の発現レベルに影響したかを決定するために、A22変異体およびB22変異体を点突然変異によって突然変異させて、核酸15および39をGly5およびGly13の対応するコドン内に組み込んだ。これらのサイレント核酸突然変異の組み込みは、N末端Cysが欠失した変異体A22およびB22の発現を、N末端Cysが欠失したB09変異体に類似のレベルまで有意に増大させた。例えば図7を参照されたい。したがって、B09変異体にマッチさせるためのコドンの最適化は、N末端Cysが欠失した非脂質化P2086変異体の発現を増大させ得る。非脂質化変異体の配列のさらなる分析は、発現を向上させるための、Gly/Serストークにおけるさらなるコドン最適化を示唆した。したがって、さらなる非脂質化変異体を、このようなコドンを最適化された配列を含むフォワードプライマーを用いて、実施例2の方法によって構築した。最適化されたGly/Serストークを生成するために用いられるフォワードプライマーは、以下の配列のいずれかを含む:ATGAGCTCTGGAGGTGGAGGAAGCGGGGGCGGTGGA配列番号28MSSGGGGSGGGG配列番号29ATGAGCTCTGGAAGCGGAAGCGGGGGCGGTGGA配列番号30MSSGSGSGGGG配列番号31ATGAGCTCTGGAGGTGGAGGA配列番号32MSSGGGG配列番号33ATGAGCAGCGGGGGCGGTGGA配列番号34MSSGGGG配列番号33実施例5:免疫原性組成物製剤の最適化ISCOMATRIX製剤ワクチンは、迅速な免疫応答を生じさせ、その結果、血清殺菌アッセイにおいて測定される4倍を超える応答比率を達成するために必要な投与の数が低減する。5頭のアカゲザルからなる群を、二価の非脂質化rP2086ワクチンの異なる製剤で免疫化した。ワクチンは、ピルビル化されていない非脂質化A05変異体1位のN末端Cysが欠失している配列番号13、または配列番号54によってコードされる配列番号55およびピルビル化されていない非脂質化B44変異体1位のN末端Cysが欠失している配列番号21、または配列番号51によってコードされる配列番号44を含んでいた。アジュバント単位は以下の通りである:AlPO4は250mcgであり、ISCOMATRIXは10mcgと100mcgとの間である。表2~5において示されるAlPO4のアジュバント単位はミリグラム単位で示され、したがって、250mcgに対して0.25ミリグラムと示される。免疫化スケジュールは、0週目、4週目、および24週目であり、採血は0週目、4週目、6週目、および26週目であった。いずれの群でも、1回目投与後でSBA力価は増大しなかった。2回目投与後では、ベースラインに対するSBA力価の4倍の増大によって規定される、SBA力価およびレスポンダーの数の増大が、ISCOMATRIXアジュバントを含有する製剤で観察された。表2および3は、それぞれfHBPサブファミリーAおよびB株で観察されたSBAGMTを提供する。それぞれAおよびBサブファミリー株について、ISCOMATRIX製剤のSBAGMTは、AIPO4製剤について観察されたものよりも3~19および4~24倍高かった。増強した力価はまた、AIPO4製剤と比較して、それぞれfHBPサブファミリーAおよびB株について、13~95および2~10で、ISCOMATRIX製剤の3回目投与後に観察された。ベースラインに対するSBA力価の4倍以上の増大によって規定されるレスポンダー比率の分析は、類似の傾向を明らかにした表4および5。実施例6:脂質化変異体および非脂質化変異体によって付与された免疫防御組換えによって発現される非脂質化P2086変異体B44は、多様なfHBP変異体約85から約92未満のIDのLP2086配列を示す株に対するSBAによって測定される広範な防御を誘発する。これらの応答比率を、AlPO4と共に製剤された非脂質化ワクチンについて得た。二価のfHBPワクチンによって生じたサブファミリーBfHBPMnB株に対するSBA応答比率を示す表6を参照されたい。非脂質化ワクチン脂質化の欄の下の-によって表されるは、タンパク質当たり1mcgの、ピルビル化されていない非脂質化A05変異体1位のN末端Cysが欠失している配列番号13およびピルビル化されていない非脂質化B44変異体1位のN末端Cysが欠失している配列番号21を含んでいた。あるいは、組換えによって発現される非脂質化P2086変異体B44は、類似の92を超えるIDおよび多様な92未満のIDLP2086配列を有する株に対して、脂質化変異体B01よりも、SBA力価によって測定される優れた免疫応答を誘発する。より高い応答比率ベースラインに対するSBA力価の4倍の増大または大きさによって規定されるが、脂質化rLP2086B01ワクチンと比較して、非脂質化rP2086B44を含有するワクチンで観察された表6。表6によると、非脂質化B44は、複数のLP2086変異株に対する広い適用範囲をもたらす例えば、殺菌性抗体を誘発するための、組成物におけるfHBPの好ましいサブファミリーB成分である。驚くべきことに、本発明者らは、LP2086B09変異株が、異種の非B09ORF2086ポリペプチドに関して正のSBA応答比率を有する可能性が特に低いことに気付いた。特に、本発明者らは、LP2086B09が、表6において記載されているA05/B44免疫原性組成物が殺菌性抗体を誘発した対象であるアッセイ株の例外であることを見出した。したがって、好ましい実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、特に、2つ以上のORF2086サブファミリーBポリペプチドを含む組成物の背景において、B09ポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、非脂質化B44を含む免疫原性組成物はまた、非脂質化B09ポリペプチドを含み得る。実施例7:B44変異体およびB09変異体のコドンの最適化先の実施例において達成された発現レベルは多くの適用に適切であるが、さらなる最適化が望ましく、タンパク質の完全長にわたるさらなるコドン最適化を含有する大腸菌E.coli発現構築物を調製および試験した。Cysを有さないB44タンパク質の発現のための1つのこのような改良された配列は、配列番号43で示される核酸配列であることが見出された。実施例9において示されるように、配列番号43を含有する発現構築物は、最適化されていない野生型配列の発現と比較して増強した発現を示した。N末端Cysが欠失したB09タンパク質の発現は、上記の最適化されたB44配列番号43構築物からB09配列番号48へのコドンの変化を適用することによって向上した。最適化されたB09配列を生成するために、B44の最適化されたDNA配列配列番号43をまず、B09対立遺伝子配列番号48のDNA配列にアラインした。B09対立遺伝子配列番号48の非脂質化コード配列全体を最適化して、B44配列番号44とB09配列番号49との間のアミノ酸が同一であるところは全て、B44の最適化された対立遺伝子配列番号43において見られるコドンの変化を反映させた。B09対立遺伝子とB44対立遺伝子との間の同一のアミノ酸に対応する、B09対立遺伝子におけるコドン配列を、B44の最適化された配列配列番号43において用いられるコドンを反映するように変化させた。B09配列番号49とB44配列番号44との間で異なるアミノ酸のコドン配列は、B09のDNA配列においては変化させなかった。さらに、非脂質化B44アミノ酸配列配列番号44は、そのN末端に2つの連続的なセリン-グリシン反復配列S-G-G-G-G配列番号56配列番号44のアミノ酸2から6もまた参照されたいを含有し、一方、B09対立遺伝子は、N末端にただ1つのセリン-グリシン反復を含有する配列番号49のアミノ酸2から6およびアミノ酸7から11を参照されたい。B44のN末端にある2つのセリン-グリシン反復配列番号44のアミノ酸2から6およびアミノ酸7から11を参照されたいはまた、異なるコドン使用頻度を有し配列番号43のヌクレオチド4から18およびヌクレオチド19から33を参照されたい、最適化されたB44のセリン-グリシン反復の異なる組み合わせ例えば、配列番号43のヌクレオチド4から18、または配列番号43のヌクレオチド19から33、またはその組み合わせを、組換えタンパク質発現に対する影響を試験するために、B09のDNA配列に適用した例えば、配列番号48のヌクレオチド4から18に適用された、配列番号48。3つの異なる型の最適化されたB09を構築した:配列番号45は、最適化されたB44の両セリン-グリシン反復GS1およびGS2配列番号43の核酸4から33を含有し、配列番号46は、GS1配列番号43の核酸4から18を含有し、配列番号47は、GS2配列番号43の核酸19から33を含有する。上記のコドンを最適化された配列の全てについてのDNAは、当技術分野の化学における標準を用いて化学的に合成された。得られたDNAを適切なプラスミド発現ベクター内にクローニングし、実施例8および9において記載されているように、大腸菌E.coli宿主細胞における発現について試験した。実施例8:ORF2086、B09変異体を発現させるための方法大腸菌E.coliK-12株recA、fhuA、およびaraAの欠失を有する野生型W3110CGSC4474の誘導体の細胞を、配列番号45を含むプラスミドpEB063、配列番号46を含むpEB064、配列番号47を含むプラスミドpEB065、または配列番号48を含むプラスミドpLA134で形質転換した。K-12株に対する好ましい修飾は、発酵目的に有用であるが、タンパク質の発現に必要ではない。細胞を、グルコース-塩規定培地に接種した。37°Cで8時間インキュベートした後、線状グルコース流加物をアプライし、インキュベーションをさらに3時間続けた。イソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシドIPTGを0.1mMの最終濃度まで培養物に添加し、その後、37°Cで12時間インキュベートした。細胞を、16,000×gで10分間にわたる遠心分離によって回収し、LiencoTechnologiesSt.Louis、MOから入手したEasy-Lyse商標CellLysingKit、およびローディングバッファーを添加することによって溶解した。澄明化した溶解物を、SDS-PAGEゲルのクマシー染色および/またはウェスタンブロット分析によってB09の発現について分析し、走査デンシトメーターによって定量した。走査デンシトメトリーの結果を以下の表7に示す。実施例9:ORF2086、B44変異体を発現させるための方法大腸菌E.coliB株BLRDE3、Novagenの細胞を、配列番号51を含むプラスミドpLN056で形質転換した。大腸菌E.coliK-12株野生型W3110の誘導体の細胞を、配列番号43を含むプラスミドpDK087で形質転換した。細胞を、グルコース-塩規定培地に接種した。37°Cで8時間インキュベートした後、線状グルコース流加物をアプライし、インキュベーションをさらに3時間続けた。イソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシドIPTGを0.1mMの最終濃度まで培養物に添加し、その後、37°Cで12時間インキュベートした。細胞を、16,000×gで10分間にわたる遠心分離によって回収し、LiencoTechnologiesSt.Louis、MOから入手したEasy-Lyse商標CellLysingKit、およびローディングバッファーを添加することによって溶解した。上清を、SDS-PAGEゲルのクマシー染色および/またはウェスタンブロット分析によってB09の発現について分析し、走査デンシトメーターによって定量した。走査デンシトメトリーの結果を以下の表8に示す。実施例10:ピルビル化本実施例は、非脂質化ORF2086タンパク質のN末端Cys残基が、例えば大腸菌E.coliにおいて発現した場合にピルビル化され得ることを示す。変異体A05配列番号13およびB44配列番号21の産生の間の異種タンパク質の蓄積を、逆相高速液体クロマトグラフィーRP-HPLCを用いてモニタリングした。この分離を、四重極飛行時間型質量分析計QTOF-MSと連動させて、生成物に関連する変異体の形成をモニタリングする手段を提供する。大腸菌E.coliBおよび/またはK-12宿主細胞において発現した後、これらの発酵に由来する生成物を精製手順に供し、その間に生成物の修飾が観察された。質量スペクトルのデコンボリューションは、それぞれA05およびB44について、変異体を、27640および27572Daの天然生成物と比較して70Daの質量シフトを示すと特徴付けした。公開された文献は、70Daの質量シフトがタンパク質においてこれまでに観察されており、アミノ末端残基のピルビル化に寄与していることを示した。ピルベート基の存在および位置を、質量スペクトルのフラグメンテーションデータMS/MSを用いて確認した。データは、修飾が、A05およびB44に従うと、アミノ末端のシステイン残基、すなわち1位のアミノ酸にあることを示した。A05では、ピルビル化されたポリペプチドのパーセンテージは、A05ポリペプチド配列番号13の総数と比較して約30であった。B44では、ピルビル化されたポリペプチドのパーセンテージは、B44ポリペプチド配列番号21の総数と比較して約25であった。アミノ末端システインを含有しない、A05変異体1位のN末端Cysが欠失している配列番号13、または配列番号55およびB44変異体1位のN末端Cysが欠失している配列番号21、または配列番号44を精製すると、検出可能なピルビル化70Daは存在しなかった。実施例11:個別のおよび組み合わせたB09およびB44の免疫原性5~10群のアカゲザルを、用量当たり250mcgのAlPO4と共に製剤されたB09変異体配列番号48によってコードされる配列番号49またはB44変異体配列番号43によってコードされる配列番号44、またはA05、B09、およびB44それぞれ、配列番号55、配列番号48によってコードされる配列番号49、および配列番号43によってコードされる配列番号44で免疫化した。サルを、表9および10において列挙されているような単独のまたは組み合わせた各10mcgの非脂質化fHBPで、0週目、4週目、および8週目に、筋肉内経路を介してワクチン接種した。0週目および12週目の両方で、血清試料を、サブファミリーAまたはサブファミリーBのfHBP変異体を用いるMnB株に対するSBAにおいて分析した。レスポンダーを、力価が4倍上昇した動物として記録した。試験したB44変異体は、最適化された構築物配列番号43であり、これまでの研究上記の表において観察された広い応答比率は、最適化された構築物表9である単独のまたはB09と組み合わされたB44ワクチンについて維持された。B09ワクチン単独表10もまた、広く交差反応性の免疫応答を生じさせ得た表10。アカゲザルn=10を、250mcgのAlPO4と製剤した、ワクチンの欄において列挙されているような単独のまたは組み合わされた各10mcgの非脂質化fHBPで、0週目、4週目、および8週目にi.m.で免疫化した。0週目および10週目の両方の血清試料を、表において列挙されているMnB株に対するSBAにおいて分析した。レスポンダーを、力価が4倍上昇した動物として記録した。表9は、例えば、ピルビル化されていない非脂質化B44、B09、およびA05の組み合わせを含む組成物が、B44のみを含む組成物からの交差適用範囲と比較して、試験変異体に対するさらに高い交差適用範囲を示したことを示す。特に表6および表9を共に含む、本願において示される結果を考慮して、単独のまたは組み合わされたB44、B09、およびA05を含む組成物は、本発明の好ましい実施形態である。特に、B44およびB09の両方を含む組成物が開示される。このような組成物は、好ましくはさらに、特にA05などのサブファミリーAポリペプチドを含む。アカゲザルn=5を、250mcgのAlPO4と製剤した、ワクチンの欄において列挙されているような単独のまたは組み合わされた各10mcgの非脂質化fHBPで、0週目、4週目、および8週目にi.m.で免疫化した。0週目および10週目の両方の血清試料を、表において列挙されているMnB株に対するSBAにおいて分析した。レスポンダーを、力価が4倍上昇した動物として記録した。実施例12:脂質化変異体構築物および非脂質化変異体構築物によって付与された免疫防御CharlesRiverCanadaから入手した、2.5~3.5kgの、20頭のメスのニュージーランドホワイトウサギを、全細胞ELISAによってプレスクリーニングし、10頭の動物を、fHBP変異体B02配列番号16およびB44配列番号21を示す試験株に対するそれらの低いバックグラウンド力価に基づいて、この研究のために選択した表11。3頭の動物からなる群を、0週目、4週目、および9週目に、0.5ml用量当たり50μgのISCOMATRIXと共に製剤された100μgの各タンパク質でi.m.で免疫化した表12。群1を、非脂質化B44配列番号44でワクチン接種した。対照群には、AlPO4250mcgと共に製剤された脂質化B01でワクチン接種されたものが含まれた。ウサギを、0週目、4週目、9週目、および10週目に採血した。10週目の個別の血清を調製し、fHBPBサブファミリーの複数の血清群Bの髄膜炎菌株に対する血清殺菌アッセイによって分析した。血清殺菌アッセイSBA:複数の血清群Bの髄膜炎菌株表13に対する、マイクロコロニーに基づいた血清殺菌アッセイSBAを、個別の血清試料に対して行った。ドナーのヒト血清は、アッセイにおいて試験される株のための補体源として適格であった。補体介在性の抗体依存性の殺菌力価を補間し、アッセイにおいて髄膜炎菌細胞の50を死滅させた試験血清の希釈の逆数として表した。アッセイの検出限界は、SBA力価4であった。4未満のSBA力価には、数字2が付与された。採血前の力価と比較した、10週目の血清におけるSBA力価の4倍以上の上昇を計算し、比較した。SBAにおいて測定される血清殺菌抗体の活性は、髄膜炎菌性の疾患に対する防御の免疫学的代替手段である。非脂質化rfHBPでの免疫化の、ウサギにおける殺菌性抗体を誘発する能力を、SBAによって決定した。SBAは、天然に生じる補体介在性の細菌溶解を模倣することによって、血清試料における抗体のレベルを測定する。10週目から回収されたウサギ血清試料を、B44fHBPまたはB02fHBPを有する株に対するSBAによって分析した。表13において示されるように、第3回目の免疫化10週目の1週間後、全ての血清試料は、両試験株に対して殺菌活性を示した表13。非脂質化B44配列番号44は、これらの株に対して、ニュージーランドウサギにおいて、非脂質化B01よりも免疫原性であった。iscomatrixアジュバントと共に製剤された非脂質化B44配列番号44は、これらの株に対して、リン酸アルミニウムと共に製剤された脂質化B01に匹敵する力価をもたらした。ウサギの採血前の血清は、全体として、試験した株に対して既存の殺菌活性を示さなかった。実施例13:ニュージーランドホワイトウサギにおける6個の非脂質化因子H結合タンパク質の免疫原性5頭のウサギからなる群を、表14において記載されているように非脂質化fHBP変異体で免疫化した。ワクチンを、0週目、4週目、および9週目に投与した。0週目および10週目に回収されたウサギの血清試料を、相同なおよび異種のfHBP配列を有する株に対するSBAによって分析した。表14は、3回目の免疫化の後のレスポンダーパーセントを示す。3回目の免疫化10週目の1週間後、全ての血清試料は、相同な株および同一のfHBPサブファミリーの他の試験株に対して殺菌活性を示した。ウサギの採血前の血清は、全体として、試験した株に対して既存の殺菌活性を示さなかった。本発明はまた、以下の箇条書きで規定される以下の実施形態を提供する。C1.P2086ポリペプチドを含む免疫原性組成物であって、P2086がB44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、B09変異体、A05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である、免疫原性組成物。C2.P2086サブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物であって、P2086サブファミリーBポリペプチドがB44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である、免疫原性組成物。C3.P2086サブファミリーAポリペプチドをさらに含む、C2に記載の免疫原性組成物。C4.P2086サブファミリーAポリペプチドがA05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である、C3に記載の免疫原性組成物。C5.アジュバントをさらに含む、C1~4のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C6.アジュバントが、aアルミニウムアジュバント、bサポニン、cCpGヌクレオチド配列、ならびにda、b、およびcのあらゆる組み合わせからなる群から選択される、C5に記載の免疫原性組成物。C7.アルミニウムアジュバントが、AlPO4、AlOH3、Al2SO43、およびミョウバンからなる群から選択される、C6に記載の免疫原性組成物。C8.アルミニウムの濃度が0.125μg/mlと0.5μg/mlとの間である、C6またはC7に記載の免疫原性組成物。C9.アルミニウムの濃度が0.25μg/mlである、C8に記載の免疫原性組成物。C10.サポニンの濃度が1μg/mlと250μg/mlとの間である、C6~9のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C11.サポニンの濃度が10μg/mlと100μg/mlとの間である、C10に記載の免疫原性組成物。C12.サポニンの濃度が10μg/mlである、C10に記載の免疫原性組成物。C13.サポニンの濃度が100μg/mlである、C10に記載の免疫原性組成物。C14.サポニンがQS-21またはISCOMATRIXである、C6~13のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C15.複数回用量を対象に投与した後に髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対する免疫原性応答を生じさせる能力を付与する、C1~14のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C16.髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対する免疫原性応答が、2回用量を対象に投与した後に付与される、C15に記載の免疫原性組成物。C17.髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対する免疫原性応答が、3回用量を対象に投与した後に付与される、C15に記載の免疫原性組成物。C18.サポニンおよび少なくとも1つの非脂質化P2086抗原を含む、非脂質化P2086抗原に対する免疫原性を増大させる組成物。C19.サポニンの濃度が1μg/mlと250μg/mlとの間である、C18に記載の免疫原性組成物。C20.サポニンの濃度が10μg/mlと100μg/mlとの間である、C19に記載の免疫原性組成物。C21.サポニンの濃度が10μg/mlである、C19に記載の免疫原性組成物。C22.サポニンの濃度が100μg/mlである、C19に記載の免疫原性組成物。C23.サポニンがQS-21またはISCOMATRIXである、C18~C22のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C24.アルミニウムをさらに含む、C18~C23のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C25.アルミニウムの濃度が0.125μg/mlと0.5μg/mlとの間である、C24に記載の免疫原性組成物。C26.アルミニウムの濃度が0.25μg/mlである、C25に記載の免疫原性組成物。C27.複数回用量を対象に投与した後に髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対する免疫原性応答を付与する、C18~26のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C28.髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対する免疫原性応答が、2回用量を対象に投与した後に付与される、C27に記載の免疫原性組成物。C29.髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対する免疫原性応答が、3回用量を対象に投与した後に付与される、C27に記載の免疫原性組成物。C30.非脂質化P2086抗原が、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドである、C18~29のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C31.非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドがB44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である、C30に記載の免疫原性組成物。C32.非脂質化P2086抗原が、非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドである、C18~29のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C33.非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドがA05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である、C32に記載の免疫原性組成物。C34.組成物が少なくとも2つの非脂質化P2086抗原を含み、2つの非脂質化P2086抗原が、少なくとも1つの非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドおよび少なくとも1つの非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドである、C18~33のいずれか1つに記載の免疫原性組成物。C35.非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドがA05変異体であり、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドがB44変異体である、C34に記載の免疫原性組成物。C36.非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドがA05変異体であり、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドがB22変異体である、C34に記載の免疫原性組成物。C37.非脂質化P2086サブファミリーAポリペプチドがA05変異体であり、非脂質化P2086サブファミリーBポリペプチドがB09変異体である、C34に記載の免疫原性組成物。C38.対象に髄膜炎菌Neisseriameningitidis細菌に対する免疫性を付与するための方法であって、P2086サブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物を対象に投与するステップを含み、P2086サブファミリーBポリペプチドがB44変異体、B02変異体、B03変異体、B22変異体、B24変異体、またはB09変異体である方法。C39.免疫原性組成物がP2086サブファミリーAポリペプチドをさらに含む、C38に記載の方法。C40.P2086サブファミリーAポリペプチドがA05変異体、A04変異体、A12変異体、またはA22変異体である、C39に記載の方法。C41.免疫原性組成物がアジュバントをさらに含む、C38~40のいずれか1つに記載の方法。C42.アジュバントが、aアルミニウムアジュバント、bサポニン、cCpGヌクレオチド配列、ならびにda、b、およびcのあらゆる組み合わせからなる群から選択される、C41に記載の方法。C43.アルミニウムアジュバントが、AlPO4、AlOH3、Al2SO43、およびミョウバンからなる群から選択される、C42に記載の方法。C44.アルミニウムの濃度が0.125μg/mlと0.5μg/mlとの間である、C42またはC43に記載の方法。C45.アルミニウムの濃度が0.25μg/mlである、C44に記載の方法。C46.サポニンの濃度が1μg/mlと250μg/mlとの間である、C42~45のいずれか1つに記載の方法。C47.サポニンの濃度が10μg/mlと100μg/mlとの間である、C46に記載の方法。C48.サポニンの濃度が10μg/mlである、C47に記載の方法。C49.サポニンの濃度が100μg/mlである、C48に記載の方法。C50.サポニンがQS-21またはISCOMATRIXである、C42~49のいずれか1つに記載の方法。C51.免疫原性組成物が、投与スケジュールを通して複数回用量で対象に投与される、C38~50に記載の方法。C52.免疫原性組成物が、投与スケジュールを通して2回用量で対象に投与される、C51に記載の方法。C53.免疫原性組成物が、投与スケジュールを通して3回用量で対象に投与される、C51に記載の方法。C54.非脂質化P2086変異体ポリペプチドを産生するための方法であって、aORF2086変異体の核酸配列を大腸菌E.coli発現ベクター内にクローニングするステップ、b細菌をORF2086発現ベクターで形質転換するステップ、c発現を誘発するステップ、およびd発現したP2086タンパク質を単離するステップを含み、ORF2086発現ベクターが脂質化制御配列を含まない方法。C55.ORF2086変異体のN末端Cysをコードするコドンが欠失している、C54に記載の方法。C56.ORF2086変異体のN末端Cysをコードするコドンが、Alaコドン、Glyコドン、またはValコドンを生じさせるように突然変異している、C54に記載の方法。C57.ORF2086変異体がA05変異体、B01変異体、またはB44変異体である、C55または56に記載の方法。C58.N末端尾部が、Ser残基およびGly残基を付加してN末端Cysのすぐ下流のGly/Serストークを伸長するように突然変異されている、C54~57のいずれか1つに記載の方法。C59.Gly/SerストークにおけるGly残基およびSer残基の総数が少なくとも7である、C58に記載の方法。C60.Gly/SerストークにおけるGly残基およびSer残基の総数が少なくとも8である、C58に記載の方法。C61.Gly/SerストークにおけるGly残基およびSer残基の総数が少なくとも9である、C58に記載の方法。C62.Gly/SerストークにおけるGly残基およびSer残基の総数が少なくとも10である、C58に記載の方法。C63.Gly/SerストークにおけるGly残基およびSer残基の総数が少なくとも11である、C58に記載の方法。C64.Gly/SerストークにおけるGly残基およびSer残基の総数が少なくとも12である、C58に記載の方法。C65.ORF2086変異体のN末端尾部のコドンが、ORF2086変異体の5番目のアミノ酸をコードするコドンが配列番号8のヌクレオチド13~15に100同一となり、ORF2086変異体の13番目のアミノ酸をコードするコドンが配列番号8のヌクレオチド37~39に100同一となるような点突然変異生成によって最適化されている、C54~57のいずれか1つに記載の方法。C66.ORF2086変異体のN末端尾部のコドンが、配列番号8のヌクレオチド1~45に100同一である、C65に記載の方法。C67.ORF2086変異体のN末端尾部のコドンが、配列番号8のヌクレオチド4~45に100同一である、C65に記載の方法。C68.ORF2086変異体のN末端尾部のコドンが、配列番号8のヌクレオチド4~42に100同一である、C65に記載の方法。C69.ORF2086変異体によってコードされるタンパク質のN末端尾部が、配列番号18のアミノ酸1~15と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、C65に記載の方法。C70.ORF2086変異体によってコードされるタンパク質のN末端尾部が、配列番号18のアミノ酸2~15と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、C65に記載の方法。C71.ORF2086変異体によってコードされるタンパク質のN末端尾部が、配列番号18のアミノ酸1~15と比較して2つのアミノ酸置換を含む、C65に記載の方法。C72.ORF2086変異体によってコードされるタンパク質のN末端尾部が、配列番号18のアミノ酸2~15と比較して2つのアミノ酸置換を含む、C65に記載の方法。C73.アミノ酸置換が、保存的なアミノ酸置換である、C69~72のいずれか1つに記載の方法。C74.ORF2086変異体がA22変異体またはB22変異体である、C65~73のいずれか1つに記載の方法。C75.発現がIPTGの付加によって誘発される、C55~74のいずれか1つに記載の方法。C76.細菌が大腸菌E.coliである、C55~75のいずれか1つに記載の方法。"