免疫細胞を含む細胞移植片を抗CD4抗体と共にインキュベートする段階であって、該インキュベートする段階が1分間~7日間実施される、段階、該移植片から未結合抗体を除去する段階を含む、免疫細胞を含む細胞移植片を改変するインビトロ方法。前記インキュベートする段階が、1分間~150分間、具体的には5分間~150分間、より具体的には10分間~150分間、より具体的には30分間~150分間、より具体的には40分間~120分間、より具体的には45分間~90分間、特に50分間~70分間または150分間~7日間、具体的には150分間~5日間、より具体的には150分間~3日間、より具体的には150分間~1日、特に150分間~8時間実施される、請求項1記載の方法。前記インキュベートする段階が、01μg~100mgの抗体量を用いて、特に、前記移植片が細胞懸濁液である場合、01μgmlの細胞懸濁液~150μgmlの細胞懸濁液、具体的には7μgmlの細胞懸濁液~100μgmlの細胞懸濁液、より具体的には30μgmlの細胞懸濁液~100μgmlの細胞懸濁液、特に40μg~60μgmlの細胞懸濁液という抗体濃度を用いてまたは該移植片が組織もしくは器官である場合、01mg~10mg、具体的には1mg~10mg、より具体的には2mg~9mg、より具体的には3mg~8mg、特に4mg~6mgという抗体量を用いて、実施される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。前記移植片を移植した際に、GvHD、ドナー移植片拒絶、および器官拒絶からなる群のいずれか1つ、特にGvHDが起こる可能性を低下させるため改変された該移植片を移植した際に、レシピエントの組織に対する移植された免疫担当細胞内での寛容を獲得するため改変された該移植片を移植した際に、改変された該移植片に対する該レシピエントの組織内での寛容もしくは部分的寛容を獲得するためならびにまたは該移植片内での細胞活性化を静めるためのものである、前記請求項のいずれか一項記載の方法。前記移植片が、細胞懸濁液、組織、および器官からなる群より選択されかつまたは幹細胞を含む、前記請求項のいずれか一項記載の方法。前記移植片が、骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞およびまたは脂肪組織由来細胞を含む、細胞懸濁液リンパ球、単球およびまたはマクロファージを含む、細胞懸濁液幹細胞を含む組織幹細胞を含む器官免疫細胞を含む組織ならびに免疫細胞を含む器官からなる群より選択される、請求項5記載の方法。請求項1~6のいずれか一項記載の方法に従って得ることができかつまたは改変された細胞移植片の接触可能なCD4エピトープの40~100に結合された抗CD4抗体を含む、免疫細胞を含む該細胞移植片。医薬において使用するための、請求項7記載の改変された移植片。移植によって治療可能な1種または複数種の疾患を対象において治療する方法において使用するための、請求項7記載の改変された移植片。細胞懸濁液、組織、および器官からなる群より選択されかつまたは幹細胞を含む、請求項7~9のいずれか一項記載の改変された移植片または使用するための改変された移植片。骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞およびまたは脂肪組織由来細胞を含む、細胞懸濁液リンパ球、単球およびまたはマクロファージを含む、細胞懸濁液幹細胞を含む組織幹細胞を含む器官免疫細胞を含む組織ならびに免疫細胞を含む器官からなる群より選択される、請求項10記載の改変された移植片または使用するための改変された移植片。前記治療が、前記移植片を移植した際に、GvHD、ドナー移植片拒絶、および器官拒絶からなる群のいずれか1つを発症する可能性、特にGvHDが起こる可能性を低下させることを含意しかつまたは改変された該移植片を移植した際の、レシピエントの組織に対する移植された免疫担当細胞内での寛容を含意し改変された該移植片を移植した際の、改変された該移植片に対するレシピエントの組織内での寛容もしくは部分的寛容を含意しかつまたは該移植片内での細胞活性化を静めるためのものである、請求項9~11のいずれか一項記載の使用するための改変された移植片。前記移植片が細胞懸濁液であり、かつ2×106個の細胞~2×1010個の有核細胞、具体的には4×106~1×109個の有核細胞、より具体的には1×107~1×108個の有核細胞という量が前記対象に与えられる、請求項9~12のいずれか一項記載の使用するための改変された移植片。前記抗CD4抗体が、Max16H5、OKT4A、OKTcdr4a、cMT412、YHB46からなる群より選択され、特に、Max16H5であるかまたは抗体30F16H5であるかまたはアクセッション番号ECACC88050502で寄託された細胞株から得ることができるかまたは2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株MAX16H530F16H5から得ることができるかまたは抗体16H5chimIgG4であるかまたは2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができるかまたは抗体16H5chimIgG4のVHおよびVKを含む、抗体であるかまたは2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる抗体のVHおよびVKを含む、抗体であるかまたは具体的には組合せがVH1VK1、VH2VK2、VH4VK2、およびVH4VK4より選択され、特に該組合せがVH2VK2である、図12で開示されているVHおよび図13で開示されているVKの任意の該組合せを含む抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の方法、改変された移植片、または使用するための改変された移植片。前記移植片が、可溶性生物活性分子と共に、具体的には、免疫抑制、免疫寛容、およびまたは調節性T細胞の形成を促進する作用物質と共に、特に、Il2、TGFβ、ラパマイシン、レチノイン酸、41BBリガンド、および抗CD28抗体からなる群より選択される作用物質、またはその任意の組合せと共にさらにインキュベートされる、前記請求項のいずれか一項記載の方法、改変された移植片、または使用するための改変された移植片。抗体16H5chimIgG42011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる、抗体抗体16H5chimIgG4のVHおよびVKを含む、抗体2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる抗体のVHおよびVKを含む、抗体組合せがVH1VK1、VH2VK2、VH4VK2、およびVH4VK4より選択され、特に該組合せがVH2VK2である、図12で開示されているVHおよび図13で開示されているVKの該組合せを含む抗体からなる群より選択される、抗CD4抗体。好ましい態様の詳細な説明本発明は、例えば、インビボでの直接的適用を避ける、免疫細胞を含む細胞移植片の抗体によるインビトロ処理に関する。すなわち、本発明者らは、例えば、骨髄移植片を移植する前に、免疫細胞を含むこれらの細胞移植片を抗ヒトCD4抗体と共にインキュベーションすることにより、アイソタイプ対照または未処理の対照と比べて、移植後のGvHDの発症が予防されることを示すことができた。先行技術の研究とは対照的に、提示する研究は、例えば移植片対宿主病を予防するための寛容誘導または免疫抑制を目指した、T細胞、特にCD4細胞を含む細胞懸濁液のような移植片の短期間インキュベーションを例えば扱う。理論に拘束されることを意図するものではないが、本発明者らは、改変された移植片を得るための、CD4陽性細胞を含む移植片の抗CD4抗体インキュベーションおよびそれに続く未結合抗体の除去を考察し、その際、抗体で標識された細胞はその抗体によって選択的に不活性化されるか、またはそれらの細胞が特異的な抗原に遭遇するとすぐに不活性化されるかもしくは調節性細胞になるように準備されており、その結果、例えばGvHDが起こらない。抗CD4抗体は、CD4を有する免疫細胞に結合し、それによってその有益な効果を発揮すると想定される。さらに、本明細書において説明する好ましい抗CD4抗体は、特異的なエピトープに結合するので、例えば、その後の不活性化のために細胞を準備するために、特に有利な特徴を示すことがあり得るとみなされている。当業者には容易に明らかであるとおり、遊離抗CD4抗体、すなわち移植片上に位置する抗原に結合しない抗CD4抗体の投与を実質的に減少または回避することは、有利である。一般に、本発明は、次の利点の内の1つまたは複数に関係しているとみなされるレシピエントへの抗体の直接的な適用が必要とされないことT細胞、特にCD4細胞を含む細胞懸濁液、組織、および器官などの移植片の短期間インキュベーションiii本発明の移植片を移植した後のGvHD予防本発明の移植片を移植した後の他の免疫学的合併症の予防従来の免疫抑制薬の回避または減少によるコスト削減および全身投与と比べて顕著な抗体の減量本発明の移植片の移植を受けた患者の生存率の向上免疫学的合併症が予想されるため通常の移植片を移植できない、高齢患者などの患者も対象とした移植片移植が容易になることならびに移植のためのHLA不一致ドナーまたは本発明を用いない場合よりも少ない良好なHLA一致の使用。第1の局面において、本発明は、免疫細胞を含む細胞移植片を抗CD4抗体と共にインキュベートする段階であって、特に該インキュベートする段階が1分間~7日間実施される、段階、該移植片から未結合抗体を除去する段階を含む、免疫細胞を含む細胞移植片を改変するインビトロ方法に関する。抗体、また抗CD4抗体は、通常、当技術分野において周知である。本明細書において使用される場合、抗体とは、とりわけ、抗原に特異的に合体するか、相互作用するか、またはそうでなければ結合することができる免疫グロブリンファミリーのタンパク質を意味し、抗原への抗体の該合体、相互作用、またはそうでなければ結合は、相補性決定領域によって媒介される。同様に、抗原という用語は本明細書において、前記抗体と特異的に合体するか、相互作用するか、またはそうでなければ結合することができる物質を意味するのに使用される。本発明の抗CD4抗体という文脈において、抗原はCD4、特にヒトCD4であることが意図される。本明細書において使用される場合、CDRという用語は、抗体の相補性決定領域を、すなわち、抗体特異性の決定に寄与する、免疫グロブリン可変ドメイン内の超可変領域の内の1つを意味する。CDRは、当業者には周知である。典型的には、重鎖免疫グロブリン可変ドメインおよび軽鎖免疫グロブリン可変ドメインのどちらも3つのCDRを含む。本発明の文脈において、抗体という用語は、例えば、Fv断片、Fab断片、Fab断片、およびF2断片を含む抗体断片にも関するとみなされる。このような断片は、標準的な方法によって調製され得る。本発明はまた、当技術分野において周知である、様々な組換え形態の抗体由来分子種も企図する。このような種には、VHドメインおよびVLドメインを連結するペプチドリンカーを含む単鎖Fv型、または鎖間ジスルフィド結合によって安定化され、VHドメインおよびVLドメインの結合を容易にするために設計された付加的なシステイン残基を含むFvを含む、安定化されたFv断片が含まれる。同様に、他の組成物も当技術分野でよく知られており、ミニボディと呼ばれる種、および単一の可変ドメインdAbが含まれ得る。他の種、すなわち、例えば、二量体形成ドメインの遺伝子操作によるか、または化学修飾戦略にもよる、複数の抗原結合部位を有する種は、改変抗体V領域ドメインの価数を増やすための手段をさらに含んでもよい。さらに、抗体という用語は、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディなどscFvの多量体、タンダブ、フレキシボディ、二重特異性抗体、およびキメラ抗体にも関し、これらはすべて当技術分野において公知である。本明細書において使用される場合、抗体は、任意の二価抗体または多価抗体も含むとみなされる。これらはまた、任意の抗体誘導体および当業者に公知である他の任意の誘導体も含む。いくつかの態様において、抗体はポリクローナル抗体である。好ましい態様において、抗体はモノクローナル抗体である。本発明によれば、抗CD4抗体という用語は、CD4に結合する能力を有する抗体を意味する。好ましくは、抗CD4抗体は抗ヒトCD4抗体である。CD4または分化クラスター4とは、当業者に周知であるタンパク質、より正確には表面糖タンパク質を意味する。本発明の文脈において、CD4はまた、完全長CD4の断片またはCD4の別の様式で改変された形態も意味してよい。ただし、この断片または別の様式で改変された形態が、本発明の抗体に対して抗原として引き続き機能することを条件とする。好ましい抗CD4抗体は、Max16H5、OKT4A、OKTcdr4a、cMT412、YHB46からなる群より選択される。最も好ましくは、該抗体はMax16H5である。Max16H5を産生させるための細胞は、アクセッション番号ECACC88050502で、ECACCに寄託されている。また、該抗体は、参照により本明細書に組み入れられるDE3919294においても開示されている。本明細書において使用される場合、抗体Max16H5はまた、Max16H5、MAX16H5、もしくはMAX16H5、またはさらに30F16H5と呼ばれてもよい。また、Max16H5は、細胞株MAX16H530F16H5から得ることもできる。本発明で使用するためのさらに好ましい抗CD4抗体は、16H5chimIgG4である。本明細書において使用される場合、該抗体はまた、16H5chimまたはCD416H5chimIgG4と呼ばれてもよい。16H5chimIgG4は、細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる。詳細には、本発明に対する文脈におけるある種の好ましい抗CD4抗体は、例えば、以下の生物学的材料寄託物のいずれかから得ることができる欧州細胞培養物コレクションに寄託されたアクセッション番号ECACC88050502の寄託物2011年12月2日にDSMZに寄託された寄託物MAX16H530F16H52011年12月2日にDSMZに寄託された寄託物CD416H5chimIgG4。これらの寄託物はすべて、細胞または細胞株をそれぞれ含み、これらから、本発明に対する文脈における特定の抗CD4抗体を得ることができる。寄託物ECACC88050502は、例えば、特許出願DE3919294においても説明されている。本発明の方法、改変された移植片、または使用するための改変された移植片のいくつかの態様において、前記抗CD4抗体は、Max16H5、OKT4A、OKTcdr4a、cMT412、YHB46からなる群より選択され、特に、Max16H5でありかつまたは抗体30F16H5でありかつまたはアクセッション番号ECACC88050502で寄託された細胞株から得ることができかつまたは2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株MAX16H530F16H5から得ることができかつまたは抗体16H5chimIgG4でありかつまたは2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができかつまたは抗体16H5chimIgG4のVHおよびVKを含む抗体でありかつまたは2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる抗体のVHおよびVKを含む、抗体でありかつまたは具体的には組合せがVH1VK1、VH2VK2、VH4VK2、およびVH4VK4より選択され、特に該組合せがVH2VK2である、図12で開示されているVHおよび図13で開示されているVKの任意の該組合せを含む抗体である。特定の態様において、本発明で使用される抗CD4抗体はMAX16H5である。特定の態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、ECACC88050502の細胞から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに寄託された、本出願者らが作製した生物学的材料の寄託物から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに本出願者らが寄託した細胞から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、欧州細胞培養物コレクションに寄託されたアクセッション番号ECACC88050502の寄託物から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞MAX16H530F16H5から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞CD416H5chimIgG4から得ることができる抗体である。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図12のVH1を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図12のVH2を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図12のVH4を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図13のVK1を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図13のVK2を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図13のVK4を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO10を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO8を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO4を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO20を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO18を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO14を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図12のVH1およびまたは図13のVK1を含む。いくつかの特に好ましい態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図12のVH2およびまたは図13のVK2を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図12のVH4およびまたは図13のVK2を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、図12のVH4およびまたは図13のVK4を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO10およびまたはSEQIDNO20を含む。一部のいくつかの特に好ましい態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO8およびまたはSEQIDNO18を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO4およびまたはSEQIDNO18を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO4およびまたはSEQIDNO14を含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、抗体16H5chimIgG4のVHおよびVKを含む。いくつかの態様において、本発明で使用される抗CD4抗体は、SEQIDNO2およびSEQIDNO12のCDRを含む。他の好ましい態様において、本発明で使用するための抗CD4抗体は、以下に詳細に開示する本発明の前記のさらなる局面の、またはこの局面による抗CD4抗体である。好ましくは、該抗CD4抗体は、その態様において説明されるとおりであり、好ましい態様が特に好ましい。一般に、本発明で使用される抗CD4抗体は、本明細書において開示される任意の抗CD4抗体でよい。一定の好ましい態様において、抗CD4抗体は、CD4分子の第1およびまたは第2のドメインを認識する抗体より選択される。一定の好ましい態様において、抗CD4抗体は、Max16H5と同じCD4分子ドメインを認識する抗体より選択される。本明細書において使用される場合、未結合の抗体とは、インキュベートする段階の後に、移植片に結合されていない抗体を意味する。言い換えると、これは、移植片上のリガンドに本質的に結合していない抗体を意味する。本明細書において使用される場合、インビトロ方法とは、生きている対象の体外で実施される方法を意味する。これは特に、組織もしくは器官を含むかまたは組織もしくは器官である移植片の場合のようなエクスビボ方法も含むが、特に、生きている対象の体内で実施されるインビボ方法は除外する。好ましくは、本発明によれば、インキュベートすることは、前記抗体の前記移植片への結合を可能にするのに十分な時間、実施される。好ましくは、該インキュベートする段階は、前記移植片の接触可能なCD4エピトープの40~100、具体的には50~100、具体的には60~100、具体的には70~100、より具体的には80~100、より具体的には90~100、より具体的には95~100、より具体的には99~100への抗CD4抗体の結合を可能にするのに十分な時間、実施される。最も好ましくは、前記インキュベートする段階の後、抗CD4抗体は、前記移植片の接触可能なCD4エピトープのほぼすべてに結合する。適切なインキュベーション期間は、当業者によって容易に決定される。通常、適切なインキュベーション期間は、使用される移植片のタイプに依存する。好ましいインキュベーション期間は、使用する抗体の量にも依存し得る。一般に、例えば移植片が細胞懸濁液である場合、例えば移植片が器官である場合よりも、必要とされるインキュベーション期間は短いと考えられる。一般に、移植片が組織もしくは器官を含むかまたは組織もしくは器官である場合、抗体が、例えば拡散によって個々の区画に輸送されるのを可能にするために、より長いインキュベーション期間が好ましい。さらに、いずれにしても、当業者は、例えばフローサイトメトリーを含み得る当技術分野内で周知の方法に従って、抗CD4抗体の結合を容易に試験することができる。一般に、インビトロ処理が原因で移植片に起こり得る何らかの損傷を最小限にするためには、長いインキュベーション期間よりも短いインキュベーション期間が好ましい。本発明によれば、前記インキュベートする段階は、例えば、1分間~7日間、実施され得る。いくつかの態様において、前記インキュベートする段階は、1分間~150分間、具体的には10分間~150分間、より具体的には30分間~150分間、より具体的には40分間~120分間、より具体的には45分間~90分間、特に50分間~70分間、実施される。他の態様において、前記インキュベートする段階は、150分間~7日間、具体的には150分間~5日間、より具体的には150分間~3日間、より具体的には150分間~1日、特に150分間~8時間、実施される。本発明の方法および使用に従った、未結合の抗体の除去に関して、前記段階を実施する様々な方法が当業者に公知である。未結合の抗体を移植片から除去する1つの例示的な方法は、移植片を洗浄することによる。移植片が細胞懸濁液を含むかまたは細胞懸濁液である場合、洗浄は、例えば、遠心分離を使用することによって行ってよい。除去する段階において、未結合の抗体の好ましくは少なくとも40、より具体的には少なくとも50、より具体的には少なくとも60、より具体的には少なくとも70、より具体的には少なくとも80、より具体的には少なくとも90が、移植片から除去される。好ましくは、未結合の抗体の最高100が、移植片から除去される。上記のインキュベートする段階において使用される抗体の量は、特に限定されていない。適切な量は、当業者によって容易に決定されることができ、例えば、使用される移植片のタイプに依存し得る。好ましくは、本発明によれば、前記インキュベートする段階は、01μg~100mgの抗体量を用いて実施される。いくつかの態様において、特に移植片が細胞懸濁液である場合、前記インキュベートする段階は、01μgmlの細胞懸濁液~150μgmlの細胞懸濁液、具体的には7μgmlの細胞懸濁液~100μgmlの細胞懸濁液、より具体的には30μgmlの細胞懸濁液~100μgmlの細胞懸濁液、特に40μg~60μgmlの細胞懸濁液という抗体濃度を用いて実施される。いくつかの態様において、特に移植片が組織である場合または移植片が器官である場合、前記インキュベートする段階は、01mg~10mg、具体的には1mg~10mg、より具体的には2mg~9mg、より具体的には3mg~8mg、特に4mg~6mgの抗体量を用いて実施される。いくつかの態様において、特に移植片が組織である場合または移植片が器官である場合、前記インキュベートする段階は、01mgml~10mgml、具体的には1mgml~10mgml、より具体的には2mgml~9mgml、より具体的には3mgml~8mgml、特に4mgml~6mgmlのインキュベーション溶液中抗体濃度を用いて実施される。好ましくは、指定の体積は、前記組織または器官の体積、ならびに前記組織または器官がインキュベートされる溶液の体積を含む。いくつかの態様において、特に移植片が組織である場合または移植片が器官である場合、前記インキュベートする段階は、10μgml~150μgml、具体的には20μgml~100μgml、より具体的には30μgml~100μgml、特に40μgml~60μgmlの抗体濃度を有する溶液中で前記組織または器官をインキュベートすることによって実施される。好ましくは、指定の体積は、前記組織または器官の体積、ならびに前記組織または器官がインキュベートされる溶液の体積を含む。組織およびまたは器官を抗体含有溶液と共にインキュベートする場合、当業者は、適切な容器を用いるなどしてこのようなインキュベーションを容易に実施する。適切な量の抗体の選択は、当業者の専門知識で十分に対応できる範囲である。一般に、移植片が組織もしくは器官を含むかまたは組織もしくは器官である場合、多い抗体量または高い抗体濃度がそれぞれ好ましい。さらに、使用される抗体の正確な量または濃度の選択はそれぞれ、そのような組織または器官の大きさにも依存する。好ましい態様において、上記のインビトロ方法または使用は、前記移植片を移植した際に、GvHD、ドナー移植片拒絶、および器官拒絶からなる群のいずれか1つ、特にGvHDが起こる可能性を低下させるためのものである。好ましい態様において、上記のインビトロ方法または使用は、前記改変された移植片を移植した際に、レシピエントの組織に対する移植された免疫担当細胞内での寛容を獲得するためのものである。好ましい態様において、上記のインビトロ方法または使用は、前記改変された移植片を移植した際に、改変された移植片に対するレシピエントの組織内での寛容または部分的寛容を獲得するためのものである。本明細書において使用される場合、部分的寛容は、免疫応答の低下をもたらす部分的免疫寛容である。好ましい態様において、上記のインビトロ方法または使用は、前記移植片内での細胞活性化を静めるためのものである。免疫細胞を含む細胞移植片を含む移植片は、当業者に十分に周知である。本明細書において使用される場合、免疫細胞を含む細胞移植片は、免疫細胞を含む移植片である。免疫細胞を含む細胞移植片は、特に限定されない。本発明によれば、移植片は、細胞懸濁液、組織、およびまたは器官を含んでよい。好ましくは、移植片は、細胞懸濁液、組織、およびまたは器官である。より好ましくは、移植片は、細胞懸濁液、組織、および器官からなる群より選択される。さらに、本発明のいくつかの好ましい態様において、移植片は幹細胞を含む。本明細書において、幹細胞を含む移植片は、幹細胞移植片と呼ばれてもよい。本発明によれば、移植片は、CD4抗原を有する細胞を含む。好ましくは、移植片は、免疫細胞、特にCD4抗原を有する免疫細胞を含む。このような細胞は、当業者に周知である。一定の好ましい態様において、これらの免疫細胞は、CD4陽性のTリンパ球またはその前駆細胞である。一定の好ましい態様において、これらの免疫細胞には、Tヘルパー細胞ならびに単球系およびマクロファージ系に属する細胞、例えば単球およびマクロファージが含まれるが、それらに限定されるわけではない。このような細胞の別の例は、ミクログリアである。いくつかの態様において、前記移植片は、組織、好ましくは幹細胞を含む組織を含み、好ましくは組織、好ましくは幹細胞を含む組織である。本発明によれば、適切な組織には、血液、筋肉、脂肪組織、結合組織、上皮、胚組織、および細胞組織が含まれるが、それらに限定されるわけではない。他の態様において、前記移植片は、器官、好ましくは幹細胞を含む器官を含み、好ましくは器官、好ましくは幹細胞を含む器官である。適切な器官には、皮膚、腸、腎臓、および肝臓が含まれるが、それらに限定されるわけではない。好ましくは、前記器官は腸である。好ましい態様において、前記移植片は、細胞懸濁液、好ましくは幹細胞を含む細胞懸濁液を含み、好ましくは細胞懸濁液、好ましくは幹細胞を含む細胞懸濁液である。それらを得るための適切な細胞懸濁液および方法は、当業者に周知である。例えば、細胞懸濁液移植片は、骨髄を含む骨の穿刺、例えば、腸骨稜もしくは胸骨の穿刺によって得ることができるか、または全身の至るところにある幹細胞ニッチ、例えば、脂肪組織、歯根、毛根、および前述の他の任意の供給源から採取することができる。好ましい態様において、細胞懸濁液、特に幹細胞を含む細胞懸濁液は、骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞、およびまたは脂肪組織由来細胞を含む。好ましい態様において、細胞懸濁液、特に、幹細胞を含む細胞懸濁液は、リンパ球、単球、およびまたはマクロファージを含む。一定の好ましい態様において、移植片、特に細胞懸濁液は、骨髄幹細胞、末梢血幹細胞、臍帯血幹細胞、臍帯血幹細胞、骨髄の成体幹細胞、例えばNABMC、胚性幹細胞、およびまたは再プログラムされた成体幹細胞のいずれかを含む。いくつかの特定の態様において、移植片は、胚性幹細胞からなりもせず、胚性幹細胞を含みもしない。いくつかの特定の態様において、移植片は、全能性幹細胞からなりもせず、全能性幹細胞を含みもしない。好ましい態様において、移植片は、特に骨髄幹細胞を含む骨髄懸濁液である。通常、移植片、特に骨髄懸濁液は、血液細胞、臍帯血細胞、ドナーリンパ球、末梢血幹細胞、骨髄の成体幹細胞、胚性幹細胞、およびまたは再プログラムされた成体幹細胞中に含まれる幹細胞のいずれかをさらに含んでよい。移植片、特に骨髄懸濁液は、血液細胞、臍帯血細胞、ドナーリンパ球、末梢血幹細胞、およびまたは骨髄の成体幹細胞中に含まれる幹細胞のいずれかをさらに含んでよい。通常、細胞懸濁液はまた、任意でいずれかの他の細胞と共に、幹細胞を含む任意の細胞懸濁液を含むことが意図される。また、移植片は、前述の移植片の内の1つまたは複数の組合せのような移植片の組合せ、例えば、器官および細胞懸濁液の組合せでもよい。さらなる局面において、本発明は、本発明のインビトロ方法に従って得ることができる免疫細胞を含む改変された細胞移植片に関する。同様に、本発明は、移植片の接触可能なCD4エピトープの40~100に結合された抗CD4抗体を含む、免疫細胞を含む改変された細胞移植片にも関する。好ましくは、免疫細胞を含む改変された細胞移植片は、該移植片の接触可能なCD4エピトープの50~100、具体的には60~100、具体的には70~100、より具体的には80~100、より具体的には90~100、より具体的には95~100、より具体的には99~100に結合された抗CD4抗体を含む。最も好ましくは、免疫細胞を含む細胞移植片の接触可能なCD4エピトープのほぼすべてが、抗CD4抗体に結合される。さらなる局面において、本発明は、医薬において使用するための本発明の改変された移植片に関する。さらなる局面において、本発明は、移植によって治療可能な1種または複数種の疾患を対象において治療する方法において使用するための、本発明の改変された移植片に関する。免疫細胞を含む細胞移植片を含む移植片の移植における使用は、当技術分野において周知である。本発明は、当技術分野において公知である、移植に伴う重大な副次的作用を回避することを意図する改変された移植片を提供する。したがって、本発明の改変された移植片は、非改変移植片に関して公知であるとおりに使用される。好ましくは、前記対象は哺乳動物対象、特にヒトである。好ましくは、移植によって治療可能な前記1種または複数種の疾患は、急性骨髄性白血病急性リンパ性白血病慢性骨髄性白血病骨髄異形成症候群骨髄増殖性症候群特に、ホジキン病、高悪性度非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、低悪性度NHL、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫より選択される悪性リンパ腫重度の再生不良性貧血サラセミア鎌状赤血球貧血特に、重症複合免疫不全、ウィスコットアルドリッチ症候群、および血球貪食性リンパ組織球症より選択される免疫学的異常特に、リソソーム蓄積障害およびペルオキシソーム機能障害より選択される先天性代謝異常自己免疫疾患リウマチ疾患ならびに上記のいずれかの度々の再発からなる群より選択される。さらにより好ましくは、前記1種または複数種の疾患は、急性骨髄性白血病急性リンパ性白血病慢性骨髄性白血病骨髄異形成症候群骨髄増殖性症候群特に、ホジキン病、高悪性度非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、低悪性度非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫より選択される悪性リンパ腫重度の再生不良性貧血サラセミアおよび鎌状赤血球貧血より特別に選択される1種または複数種の血液学的悪性疾患である。一般に本明細書において、前記1種または複数種の疾患は、上記のいずれかの度々の再発ならびに本明細書において言及する疾患の任意の組合せも含む。後者の局面において、好ましくは、移植片は、本発明のインビトロ方法に関連して本明細書において前述したとおりにさらに定義される。すなわち、移植片は、好ましくは、細胞懸濁液、組織、および器官からなる群より選択され得る。より好ましくは、該移植片は、骨髄細胞、非付着性骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞、ワルトン膠質由来細胞、胎盤由来細胞、毛根由来細胞およびまたは脂肪組織由来細胞を含む、細胞懸濁液リンパ球、単球およびまたはマクロファージを含む、細胞懸濁液幹細胞を含む組織ならびに幹細胞を含む器官からなる群より選択される。いくつかの態様において、治療は、該移植片を移植した際に、GvHD、ドナー移植片拒絶、および器官拒絶からなる群のいずれか1つを発症する可能性、特にGvHDが起こる可能性を低下させることを含意する。他の態様において、治療は、該改変された移植片を移植した際の、レシピエントの組織に対する移植された免疫担当細胞内での寛容を含意する。他の態様において、治療は、該改変された移植片を移植した際の、改変された移植片に対する寛容を含意する。他の態様において、治療は、該改変された移植片を移植した際の、改変された移植片に対するレシピエントの組織内での寛容または部分的寛容を含意する。他の態様において、治療は、該移植片内での細胞活性化を静めるためのものである。好ましい態様において、治療は、上記の任意の組合せを含意するか、または上記の任意の組合せのためのものである。移植片中に含まれる細胞の量は、特に限定されない。当業者は、移植のための移植片および移植片の細胞の適切な量を容易に選択できる。さらに、適切な手引きも、例えば、患者のヒト造血幹細胞に関する、DeutscheBundesarztekammerによって詳しく説明された移植のための具体的なガイドラインから例えば入手可能である。好ましくは、本発明によれば、特に、移植片が細胞懸濁液である場合、2×106個の細胞~2×1010個の有核細胞、具体的には4×106~1×109個の有核細胞、より具体的には1×107~1×108個の有核細胞という量が、前記対象、特にヒト対象に与えられる。移植片が組織もしくは器官を含むかまたは組織もしくは器官である場合、該組織または器官の任意の適切な量が前記対象に与えられ得る。当業者には理解されるとおり、組織または器官中の細胞数を測定するのは難しい。特にこういう理由で、移植片中に含まれる細胞の量は、特に限定されない。適切な量は、例えば、対象、移植片、およびまたは治療すべき疾患の個々のタイプを考慮して、当業者によってそれぞれ容易に決定または選択される。器官の場合、器官全体を与えることが好ましい。本発明の方法、改変された移植片、および使用するための改変された移植片において、移植片は、可溶性生物活性分子と共に、特に、免疫抑制、免疫寛容、およびもしくは調節性T細胞の形成を促進する作用物質と共に、またはそのような作用物質の任意の組合せと共にさらにインキュベートされてもよい。好ましくは、このような作用物質は、本明細書において前述した本発明の方法、使用、改変された移植片、または使用するための改変された移植片のそれぞれの特徴または利点、例えば、前記移植片を移植した際に、GvHD、ドナー移植片拒絶、および器官拒絶からなる群のいずれか1つ、特にGvHDが起こる可能性を低下させること、または例えば、前記改変された移植片を移植した際に寛容を獲得することを補助する。このような作用物質には、具体的にはサイトカインが含まれる。好ましい態様において、このような作用物質は、Il2、TGFβ、ラパマイシン、レチノイン酸、41BBリガンド、および抗CD28抗体からなる群より選択されるか、またはそれらの任意の組合せである。同様に、本発明の使用するための改変された移植片において、移植片は、任意の医薬または医薬の組合せと共に対象に任意で与えられてもよい。該医薬は、移植前に、移植と共に、およびまたは移植後に投与されてよい。適切な投与様式および投与経路は、特に限定されず、当業者は容易に選択する。好ましくは、このような医薬は、本明細書において前述した本発明の方法、使用、改変された移植片、または使用するための改変された移植片のそれぞれの特徴または利点、例えば、GvHD、ドナー移植片拒絶、および器官拒絶からなる群のいずれか1つが起こる可能性を低下させることを補助する。このような医薬の非限定的な例には、ラパマイシンおよびレチノイン酸が含まれる。さらなる局面において、本発明は、本発明の改変された移植片、特に、本発明のインビトロ方法に従って得ることができる改変された移植片を用いて、そのような治療を必要とする対象を治療する方法を特徴とする。好ましい態様において、該移植片、対象、治療、およびまたは疾患は、本明細書において前述したとおりである。さらなる局面において、本発明は、移植片、特に、免疫細胞を含む細胞移植片のインビトロでの改変のための抗CD4抗体の使用に関し、この改変は、該移植片を該抗体と共に1分間~7日間インキュベートする段階を含み、特に、この改変は、該移植片から未結合の抗体を除去する段階をさらに含む。好ましい態様において、前記使用は、本発明の方法に関して本明細書において説明したとおりにさらに定義される。さらなる局面において、本発明は、移植によって治療可能な1種または複数種の疾患を対象において治療するための医薬を製造するための、本発明の改変された移植片の使用に関する。好ましい態様において、前記使用は、本発明の方法に関して本明細書において説明したとおりにさらに定義される。特に、移植片、対象、治療、およびまたは疾患は、好ましくは、本明細書において前述したとおりである。本発明の方法、使用、改変された移植片、または使用するための改変された移植片のさらに別の局面において、抗CD4抗体は、他の任意のCD4リガンドに置き換えられる。好ましいCD4リガンドには、ペプチドリガンドならびにアプタマーが含まれるが、それらに限定されるわけではない。このようなCD4リガンドは、当技術分野において公知である。さらに別の局面において、本発明の方法、使用、改変された移植片、および使用するための改変された移植片において言及される移植片は、幹細胞を含んでも含まなくてもよい。すなわち、後者の局面によれば、免疫細胞を含む細胞移植片は任意の移植片で置き換えられてよく、幹細胞を含む移植片も幹細胞を含まない移植片も含む。言い換えると、本発明の移植片または本発明に従って使用される移植片は、任意の移植片でもよく、または免疫細胞を含む細胞移植片でもよい。さらに言い換えると、一定の態様において、本発明の移植片または本発明に従って使用される移植片は幹細胞を含むが、他の態様において、本発明の移植片または本発明に従って使用される移植片は幹細胞を含まない。一定の態様において、移植片は、単離されたCD4細胞を含まない。実施例でさらに説明するとおり、本発明者らは、例えば、ヒトCD4およびHLADR3に関してトランスジェニックであるCD4C57Bl6マウスを使用した。TTGマウスは、完全に機能的なマウス免疫系を有するが、ヒトCD4の代わりにマウスCD4を持たず、かつマウスMHCIIに加えてヒトHLADR3が存在する。この状況において、骨髄細胞は、TTG移植片として採取され、Balbc野生型マウスに移植する前に抗ヒトCD4抗体と共にインキュベートされ得る。この完全なMHCクラスI不一致移植モデルにおいて、GvHD誘発は高い確率で起こり、抗CD4抗体に対するチャレンジである。BalbcマウスへのTTGC57Bl6ドナー細胞の移植をフローサイトメトリーによって確認した。移植後のH2Kd、ヒトCD4、HLADRの安定な移植およびマウスCD4の減少から完全なドナー造血が示され、これは移植後12日目に最初に観察された。生存状況の解析、スコア付けシステム、および組織像に基づいてGvHDを確認した。TTGドナー細胞を用いた場合の方が、C57Bl6野生型ドナー細胞よりGvHDの重症度が高かった。抗CD4抗体で治療したGvHDマウスの生存率は、0から83まで著しく上昇した。抗体治療をしない場合、GvHDマウスは19~35日以内に死亡した。使用された抗CD4抗体は、完全なMHC不一致モデルへのマウスHSCTの後、GvHD発症を効果的に抑制する。この独特な移植モデルにより、TTGマウスをドナーとして用いた安定なマウスGvHDモデルを用いて、マウスにおいて抗ヒトCD4抗体を直接試験することが可能になる。TTGマウス由来の骨髄移植片を抗ヒトCD4で前処理した後、GvHDの誘発はなかった。これらの知見は、反応性T細胞クローンを抑制するための戦略の改善に関連するとみなされる。さらに別の局面において、本発明は、抗体16H5chimIgG42011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる、抗体抗体16H5chimIgG4のVHおよびVKを含む、抗体2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる抗体のVHおよびVKを含む、抗体組合せがVH1VK1、VH2VK2、VH4VK2、およびVH4VK4より選択され、特に該組合せがVH2VK2である抗体からなる群より選択される、図12で開示されているVHおよび図13で開示されているVKの該組合せを含む抗体、からなる群より選択される、抗CD4抗体に関する。このさらに別の局面の特定の態様において、本発明の抗CD4抗体はMAX16H5である。特定の態様において、本発明の抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに寄託された、本出願者らが作製した生物学的材料の寄託物から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明の抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに本出願者らが寄託した細胞から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明の抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞MAX16H530F16H5から得ることができる抗体である。特定の態様において、本発明の抗CD4抗体は、2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞CD416H5chimIgG4から得ることができる抗体である。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図12のVH1を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図12のVH2を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図12のVH4を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図13のVK1を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図13のVK2を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図13のVK4を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO10を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO8を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO4を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO20を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO18を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO14を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図12のVH1およびまたは図13のVK1を含む。いくつかの特に好ましい態様において、本発明の抗CD4抗体は、図12のVH2およびまたは図13のVK2を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図12のVH4およびまたは図13のVK2を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、図12のVH4およびまたは図13のVK4を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO10およびまたはSEQIDNO20を含む。一部のいくつかの特に好ましい態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO8およびまたはSEQIDNO18を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO4およびまたはSEQIDNO18を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、SEQIDNO4およびまたはSEQIDNO14を含む。いくつかの態様において、本発明の抗CD4抗体は、抗体16H5chimIgG4のVHおよびVKを含む。一般に、本発明は、含むという用語または同等の用語が、有するまたは同等の用語で置き換えられる態様にも関する。例えば、本発明は一般に、含んでいるという用語または同等の用語が、有しているまたは同等の用語で置き換えられる態様にも関する。以下に、本発明のさらなる局面を詳細に説明する。1つの面において、本発明の前記のさらなる局面は、重鎖免疫グロブリン可変ドメインおよび軽鎖免疫グロブリン可変ドメインを含む抗ヒトCD4抗体であって、該免疫グロブリン可変ドメインのCDRの外側に位置する少なくとも1つのT細胞エピトープが、該免疫グロブリン可変ドメインから除去される、抗ヒトCD4抗体に関する。このような抗体は、親抗体よりも免疫原性が低く、したがって、T細胞を刺激または活性化する可能性がより低く、それゆえ、例えば、ヒト対象において抗体に対する望まれないT細胞媒介性免疫応答を引き起こす可能性がより低い。さらに、有利には、前記抗体は、対応する非改変抗体がヒトCD4に結合する能力を実質的に保持しており、好ましくは、それらの有利な特徴の内の少なくとも1つをさらに保持している。本発明の前記のさらなる局面で使用される場合、抗体とは、とりわけ、抗原に合体するか、相互作用するか、またはそうでなければ結合することができる免疫グロブリンファミリーのタンパク質を意味する。本発明の前記のさらなる局面の文脈において、抗体という用語は、好ましくは、例えば、Fv断片、Fab断片、Fab断片、およびF2断片を含む抗体断片にも関するとみなされる。このような断片は、標準的な方法によって調製され得る。本発明の前記のさらなる局面はまた、好ましくは、当技術分野において周知である、様々な組換え形態の抗体由来分子種も企図する。このような種には、VHドメインおよびVLドメインを連結するペプチドリンカーを含む単鎖Fv型、または鎖間ジスルフィド結合によって安定化され、VHドメインおよびVLドメインの結合を容易にするために設計された付加的なシステイン残基を含むFvを含む、安定化されたFv断片が含まれる。同様に、他の組成物も当技術分野でよく知られており、ミニボディと呼ばれる種、および単一の可変ドメインdAbが含まれ得る。他の種、すなわち、例えば、二量体形成ドメインの遺伝子操作によるか、または化学修飾戦略にもよる、複数の抗原結合部位を有する種は、改変抗体V領域ドメインの価数を増やすための手段をさらに含んでもよい。さらに、抗体という用語は、好ましくは、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディなどscFvの多量体、タンダブ、フレキシボディ、二重特異性抗体、およびキメラ抗体にも関する。本発明の前記のさらなる局面によれば、抗ヒトCD4抗体という用語は、好ましくは、ヒトCD4に結合する能力を有する、上記に定義した抗体を意味する。さらに、本発明の前記のさらなる局面で使用される場合、非改変抗体または親抗体という用語は、好ましくは、本発明の前記のさらなる局面の抗体とは対照的に、前記免疫グロブリン可変ドメインのCDRの外側に位置するT細胞エピトープが免疫グロブリン可変ドメインから1つも除去されていない、対応する抗ヒトCD4抗体を意味する。抗原という用語は、好ましくは、抗体と相互作用できる物質を意味するために本発明の前記のさらなる局面において使用される。本発明の前記のさらなる局面の抗体の文脈において、抗原は好ましくは、CD4、特にヒトCD4であることが意図される。CD4または分化クラスター4とは、当業者に周知であるタンパク質、より正確には表面糖タンパク質を意味する。本発明の文脈において、CD4はまた、好ましくは、完全長CD4の断片またはCD4の別の様式で改変された形態も意味してよい。ただし、この断片または別の様式で改変された形態が、本発明の前記のさらなる局面の抗体に対して抗原として引き続き機能することを条件とする。免疫グロブリンドメインという用語は、好ましくは、免疫グロブリンフォールドを含むタンパク質ドメインを特に意味するために本発明の前記のさらなる局面において使用される。免疫グロブリンドメインおよび免疫グロブリンタンパク質は、当技術分野において周知である。VHという用語は、好ましくは、抗体の重鎖の重鎖可変領域を意味するために本発明の前記のさらなる局面において使用される。重鎖可変領域は、重鎖免疫グロブリン可変ドメインとも呼ばれる。これらの用語もまた、当技術分野において周知である。VLという用語は、好ましくは、抗体の軽鎖の軽鎖可変領域を意味するために本発明の前記のさらなる局面において使用される。軽鎖可変領域は、軽鎖免疫グロブリン可変ドメインとも呼ばれる。これらの用語もまた、当技術分野において周知である。好ましくは、重鎖免疫グロブリン可変ドメインおよび軽鎖免疫グロブリン可変ドメインは一緒になって、抗原と相互作用できる結合表面を提供する。本発明の前記のさらなる局面で使用される場合、VHは、好ましくは、長さ約110~125アミノ酸残基であり、その配列が本発明の前記のさらなる局面において特定されたVH鎖のいずれかに相当し、VLと組み合わさってCD4抗原に結合できる、ポリペプチドを意味する。同様に、VLは、好ましくは、長さ約95~130アミノ酸残基であり、その配列が本発明の前記のさらなる局面において特定されたVL鎖のいずれかに相当し、VHと組み合わさってCD4抗原に結合できる、ポリペプチドを意味する。完全長免疫グロブリン重鎖は、好ましくは、約50~70kDaの分子量を有し、通常、N末端がVH遺伝子によって、C末端が定常領域の内の1つによってコードされている。同様に、完全長軽鎖は、好ましくは、約25kDaの分子量を有し、通常、N末端がV領域遺伝子によって、C末端がカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされている。抗体の軽鎖は、ラムダタイプの鎖またはカッパタイプの鎖でよい。したがって、軽鎖可変領域は、ラムダタイプ軽鎖可変領域またはカッパタイプ軽鎖可変領域でよい。多数のモノクローナル抗体と同様に、軽鎖は、好ましくはカッパタイプの鎖である。したがって、VLは、好ましくはVkタイプの鎖である。本発明の前記のさらなる局面の文脈において、いくつかの様々な重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列が提供される。本発明の開示は、完全抗体分子中に含まれ得る前記可変ドメイン配列の起こり得る組合せを限定しない。好ましくは、本発明の前記のさらなる局面の抗体は、2つの同一の重鎖免疫グロブリン可変ドメインおよび2つの同一の軽鎖免疫グロブリン可変ドメインを含み、該重鎖免疫グロブリン可変ドメインおよび軽鎖免疫グロブリン可変ドメインは、本発明の前記のさらなる局面で開示される可変ドメインより選択される。本発明の前記のさらなる局面によれば、好ましくは、T細胞エピトープという用語は、MHC分子、好ましくはMHCクラスII分子に結合する潜在能力を有するペプチド配列を意味する。このような配列は、MHCクラスIIと複合して、T細胞を刺激し、かつまたはT細胞に結合し得る。好ましくは、T細胞エピトープという用語は、MHCクラスII分子に結合された場合、T細胞受容体によって認識されることができ、かつ少なくとも原則的に、T細胞応答を促進するのにTCRを従事させることにより、対応するT細胞の刺激または活性化を引き起こすことができる、ペプチド配列を意味する。抗体のT細胞エピトープを同定するために、当業者に公知であるか、かつまたは本出願において説明もしくは言及されるインシリコ方法またはインビトロ方法のいずれかを使用してよい。好ましくは、T細胞エピトープは、8個またはそれ以上のアミノ酸、より好ましくは8~20個のアミノ酸、より好ましくは8~11個のアミノ酸、特に好ましくは9個のアミノ酸からなる。本発明の前記のさらなる局面で使用されるペプチドという用語は、好ましくは、ペプチド結合によって一つに連結されている2個またはそれ以上のアミノ酸を含む化合物である。いくつかのペプチドは、ごく少数のアミノ酸単位しか含まない場合がある。当技術分野では、短いペプチド、例えば、10個未満のアミノ酸単位を有するペプチドはオリゴペプチドと呼ばれることがあり、一方、より多数の、例えば、10~100個または100個を超えるアミノ酸残基を含むペプチドは、ポリペプチドと通常呼ばれる。本発明の前記のさらなる局面の全体を通して、好ましくは、T細胞エピトープは、抗体に対する該エピトープに基づくT細胞媒介性免疫応答が低下しているか、または好ましくは消失している場合、除去されていると言われる。好ましくは、抗体に対するT細胞媒介性免疫応答は、T細胞エピトープがMHC分子、好ましくはMHCクラスII分子に結合する潜在能力が低下している場合、低下している。実施例2で説明する例示的な方法によって、改変されたT細胞エピトープがMHCクラスII対立遺伝子に結合するかをインシリコで試験することができる。この方法において、T細胞エピトープは、改変されたT細胞エピトープに結合することが予測されるMHCクラスII対立遺伝子の数が少なくなっているか、またはない場合、除去されているとみなされる。T細胞媒介性免疫応答の低下または消失を測定するための他の方法は当業者に周知であり、例えば、精製されたMHCクラスII分子もしくはホモ接合性不死化B細胞株のいずれかを用いるインビトロMHCクラスII結合アッセイ法、またはエクスビボT細胞増殖アッセイ法が含まれる。T細胞エピトープの除去は、抗体が示す免疫原性の低下、好ましくは非存在をもたらし得る。免疫原性という用語は、とりわけ、宿主動物において、特に宿主動物がヒトである場合、体液性応答およびもしくはT細胞媒介性応答を引き起こすか、誘導するか、もしくはそうでなければ促進する能力、ならびにまたは適切なインビトロアッセイ法において応答を誘発する能力に関する。例えば、免疫原性は、対応する親抗体、例えば、非改変のげっ歯動物モノクローナル抗体またはキメラモノクローナル抗体と比べて低下している場合、低下していると言われる。本発明の前記のさらなる局面において使用される場合、好ましくは、CDRという用語は、抗体の相補性決定領域を、すなわち、抗体特異性の決定に寄与する、免疫グロブリン可変ドメイン内の超可変領域の内の1つを意味する。CDRは、当業者には周知である。典型的には、重鎖免疫グロブリン可変ドメインおよび軽鎖免疫グロブリン可変ドメインのどちらも3つのCDRを含む。免疫グロブリン可変ドメイン中のCDRは、例えば、当業者に周知であるKabatによって作製された方法に従って同定および定義することができる。本発明の前記のさらなる局面の好ましい態様によれば、CDRはKabatに従って定義される。本発明の前記のさらなる局面で使用される場合、除去されるT細胞エピトープは、好ましくは、除去されることになっているT細胞エピトープの配列が、該免疫グロブリン可変ドメインのCDRのいずれとも重ならない場合、免疫グロブリン可変ドメインのCDRの外側に位置していると言われる。さらに、除去されるT細胞エピトープは、除去されることになっているT細胞エピトープの配列が、該免疫グロブリン可変ドメインのCDRのいずれかと重なるが、そのようなT細胞エピトープに施された改変のすべてが免疫グロブリン可変ドメインのCDRの外側に施されている場合も、免疫グロブリン可変ドメインのCDRの外側に位置していると言われる。本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体でよい。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。好ましい態様によれば、抗体は、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生されたモノクローナル抗体に由来する。ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された抗体はCD4抗体であり、より具体的には、30F16H5とも呼ばれ、例えばDE3919294において開示されているモノクローナルマウス抗ヒトCD4抗体である。該抗体は、ECACCに寄託されたハイブリドーマ細胞株から得ることができる。本発明の前記のさらなる局面の抗体は、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生されたモノクローナル抗体の配列を用いて当業者に公知である任意の適切な方法によって、またはハイブリドーマ細胞株ECACC88050502を用いることによって得られた場合、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生されたモノクローナル抗体に由来すると言われる。好ましくは、抗体は、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された抗体のCDRを有するか、または抗体は、SEQIDNO2およびSEQIDNO12のCDRを有する。SEQIDNO2およびSEQIDNO12のCDRは、図12および図13においてイタリック体で強調した配列を有する。これらの図は、親抗ヒトCD4抗体30F16H5の好ましい免疫グロブリン可変ドメイン配列を示す。図12および図13のそれぞれにおいて、3つのCDRを示している。ここで、図12のCDRは、SEQIDNO2のアミノ酸31~35、50~66、および99~109によって形成され、図13のCDRは、SEQIDNO12のアミノ酸24~33、50~55、および88~96によって形成されている。ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された抗体の、またはSEQIDNO2およびSEQIDNO12のCDRを有する抗体は、親抗体30F16H5の親和性に匹敵する親和性でヒトCD4に結合する高い潜在能力を有する。本発明の前記のさらなる局面の抗体の別の好ましい態様において、前記免疫グロブリン可変ドメインからの1つまたは複数のT細胞エピトープの除去に起因する違いは例外として、重鎖免疫グロブリン可変ドメインは、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された抗体の重鎖免疫グロブリン可変ドメインと同一であるか、またはSEQIDNO2と同一の配列を含みかつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインは、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生される抗体の軽鎖免疫グロブリン可変ドメインと同一であるか、またはSEQIDNO12と同一の配列を含む。実施例2bで説明するとおり、本発明者らは、親抗ヒトCD4抗体30F16H5のT細胞エピトープを発見し、本明細書において開示し、これらの領域を、例えば、下記の表5および表6に示す。本発明の前記のさらなる局面においてEH1~EH101~10と呼ばれるこのT細胞エピトープを個別に表5に示し、本発明の前記のさらなる局面においてEL1~EL11EH101~11と呼ばれるT細胞エピトープを個別に表6に示す。これらの各T細胞エピトープはまた、それぞれの親可変領域SEQIDNO2およびSEQIDNO12の配列上での位置に基づいてそれぞれ説明することもできる。したがって、本発明の前記のさらなる局面の好ましい態様において、少なくとも1つのT細胞エピトープは、SEQIDNO2の4位~12位、SEQIDNO2の10位~18位、SEQIDNO2の11位~19位、SEQIDNO2の20位~28位、SEQIDNO2の37位~45位、SEQIDNO2の70位~78位、SEQIDNO2の73位~81位、SEQIDNO2の83位~91位、SEQIDNO2の107位~115位、SEQIDNO2の110位~118位における重鎖免疫グロブリン可変ドメインのT細胞エピトープ、ならびにSEQIDNO12の2位~10位、SEQIDNO12の3位~11位、SEQIDNO12の10位~18位、SEQIDNO12の11位~19位、SEQIDNO12の45位~53位、SEQIDNO12の53位~61位、SEQIDNO12の59位~67位、SEQIDNO12の61位~69位、SEQIDNO12の62位~70位、SEQIDNO12の70位~78位、およびSEQIDNO12の97位~105位における軽鎖免疫グロブリン可変ドメインのT細胞エピトープからなる群より選択される。一定の状況下で、本発明の前記のさらなる局面において開示されるものに対する配列の付加的領域は、例えば、本発明の事例のものと同様の配列を有するタンパク質またはペプチドを発現する病原体による感染が万一発生した場合には、免疫原性エピトープとなり得ることが理解される。本発明の前記のさらなる局面の好ましい態様によれば、少なくとも1つのT細胞エピトープは、少なくとも1つのアミノ酸残基の変更によって除去される。特に、本発明の前記のさらなる局面で使用される場合、少なくとも1つのアミノ酸残基の変更または改変は、好ましくは以下の内のいずれかでよい他のアミノ酸残基による、少なくとも1つの元来存在するアミノ酸残基の置換、少なくとも1つのアミノ酸残基の付加少なくとも1つの元来存在するアミノ酸残基の欠失少なくとも1つのアミノ酸残基の化学修飾またはその組合せ。少なくとも1つのアミノ酸残基の変更という用語への言及はまた、必要な場合には、通常は特定のアミノ酸の置換、付加、もしくは欠失によるさらなる変更が、ヒトCD4に結合する対応する非改変抗体の能力を実質的に保持するように、同じT細胞エピトープ内または抗体分子中の別の場所で行われる状況も含む。より好ましくは、このようなさらなる変更は、抗体の有利な特徴の内の1つまたは複数をさらに保持するために行われてもよい。好ましくは、1つまたは複数の変更は、EH1~EH10およびまたはEL1~EL11のいずれかまたはすべて、好ましくはEH1~EH10およびEL1~EL11のいずれかまたはすべてに由来する1つまたは複数の残基に対して行われる。特に好ましくは、変更は、MHC結合溝のポケットによって結合されるためポケット残基と一般に名付けられた1つまたは複数のアミノ酸に対して行われる。当業者によって理解されるとおり、該ポケット残基は、免疫原性に特定の関連性があり、それゆえ、抗体に対するT細胞媒介性免疫応答を低下させるか、または好ましくは消失させる可能性が高い残基を構成する。通常、親抗体の最も免疫原性が高い領域内でアミノ酸変更が行われている改変抗体分子を提供することが特に好ましい。しかしながら、所与のエピトープ内の1つかまたは単一のエピトープ内での組み合わせのいずれかのアミノ酸変更は、MHCクラスII結合溝に関するポケット残基と対応する位置だけでなく、ペプチド配列内の任意の箇所に行ってもよい。このような変更はすべて、本発明の前記のさらなる局面の範囲に入る。さらに、当業者には明らかであるとおり、エピトープの除去を達成する多数の代わりの変更セットを得ることができた。しかしながら、結果として生じる配列は、本発明の前記のさらなる局面で開示した特定の組成物との広範囲の相同性を存続しているはずであり、したがって、本発明の範囲に入る。最も相同性の低い領域において、本発明の指定された配列と約70、または約90、または約95、または約99もしくはそれ以上相同であったが、それでいて操作上では等価なままである配列を得ることが典型的であると思われる。このような配列は、同様に本発明の範囲に入る。好ましくは、少なくとも1つのアミノ酸残基の変更は、1つまたは複数のアミノ酸の置換である。したがって、本発明の前記のさらなる局面の抗体の好ましい態様において、少なくとも1つのT細胞エピトープ内の少なくとも1つのアミノ酸が、少なくとも1つのT細胞エピトープを除去するために別のアミノ酸によって置換される。所与のT細胞エピトープ内の単一アミノ酸置換が、エピトープを消失させ得る好ましい経路であることが理解される。さらに、1つのエピトープ内での置換の組合せも企図されてよく、例えば、個別に定義されたエピトープが互いに重複している場合、特に適切であり得る。様々な態様において、2個より多いアミノ酸置換、または3個より多いアミノ酸置換、または4個より多いアミノ酸置換、または5個より多いアミノ酸置換、または6個より多いアミノ酸置換、または7個より多いアミノ酸、または8個より多い、または9個より多い、または10個より多い、または11個より多い、または12個より多い置換が、重鎖およびまたは軽鎖において行われる。いくつかの態様において、1~21個の間、5~20個の間、または7~14個の間のアミノ酸置換が重鎖および軽鎖において行われる。少なくとも1個の置換が存在すること、および抗体がヒトCD4に結合する能力を保持することを条件として、前述のT細胞エピトープEH1~EH10およびEL1~EL11のそれぞれに0個、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、または9個の置換が存在してよい。好ましくは、置換の数は、結合するまたは結合されると予測されるMHCII対立遺伝子の数がそれぞれ有意に減少するように選択される。好ましくは、前記数は、置換がまったく存在しない場合に結合される対立遺伝子の数と比べて、少なくとも50、より好ましくは40、より好ましくは30、より好ましくは20、より好ましくは10、より好ましくは5、より好ましくは2、より好ましくは1、および最も好ましくは0に減少する。実施例2bで例示するとおり、特定のアッセイ法において、結合されるMHCII対立遺伝子の数とは、問題となっているT細胞エピトープに対する結合ペプチドであることが判明する、そのアッセイ法で検査されるMHCクラスII対立遺伝子の所与のパネルの中のMHCクラスII対立遺伝子の数である。該数は、親抗体の非改変T細胞エピトープと比べて、改変T細胞エピトープの場合に数が減少している場合、減少していると言われる。本明細書において開示するとおり、1つまたは複数のT細胞エピトープが除去されている様々な改変抗ヒトCD4抗体は、アミノ酸置換を含むMHCクラスIIエピトープ除去手段によって作製された。この点に関して特に有用な置換の例は、具体的な個々の置換を開示する図12および図13において提供される。すなわち、図12および図13で強調される個々の置換であり、それぞれSEQIDNO2を参照されたいまたはSEQIDNO12を参照されたいにおいて行われ得る。これらの置換は、表5および表6にも示される。したがって、本発明の前記のさらなる局面の好ましい態様によれば、少なくとも1個の置換は、SEQIDNO2中のT9S、V10E、A12K、Q19K、S28T、K38R、R40A、L70I、A72R、V73D、S91T、T115L、L116VおよびSEQIDNO12中のI10T、M11L、L46A、V59S、I62S、S69D、R76S、L105Iからなる群より選択される。特に好ましい態様において、少なくとも1個の置換が存在することを条件として、0個、1個、2個、または3個の置換は、EH1およびEH6のそれぞれの内部にあり0個、1個、または2個の置換は、EH2、EH5、およびEH10のそれぞれの内部にあり0個または1個の置換は、EH3、EH4、EH7、EH8、およびEH9のそれぞれの内部にあり0個、1個、または2個の置換は、EL2、EL3、EL7、EL8、およびEL9のそれぞれの内部にありかつ0個または1個の置換は、EL1、EL4、EL5、EL6、EL10、およびEL11のそれぞれの内部にある。本発明の前記のさらなる局面のある態様によれば、6個、8個、もしくは10個のT細胞エピトープが重鎖免疫グロブリン可変ドメインから除去され、かつまたは5個、9個、10個、もしくは11個のT細胞エピトープが本発明の前記のさらなる局面の抗体の軽鎖免疫グロブリン可変ドメインから除去される。より好ましくは、6個、8個、または10個のT細胞エピトープが重鎖免疫グロブリン可変ドメインから除去され、かつ5個、9個、10個、または11個のT細胞エピトープが本発明の前記のさらなる局面の抗体の軽鎖免疫グロブリン可変ドメインから除去される。1つの態様によれば、すべてのT細胞エピトープが免疫グロブリン可変ドメインから除去される。さらに、本発明の前記のさらなる局面によれば、置換の例示的なグループは、免疫グロブリン可変ドメイン中で行われ、これらのグループは、SEQIDNO4、6、8、および10~に示すならびにSEQIDNO14、16、18、および20~に示すに含まれる。したがって、本発明の前記のさらなる局面のさらに好ましい態様は、重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO4、6、8、および10からなる群より選択される配列を含みかつまたは軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO14、16、18、および20からなる群より選択される配列を含む、抗ヒトCD4抗体である。より好ましくは、重鎖可変ドメインは、SEQIDNO4、6、8、および10からなる群より選択される配列を含み、かつ軽鎖可変ドメインは、SEQIDNO14、16、18、および20からなる群より選択される配列を含む。さらにより好ましくは、重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO4と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO14と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO4と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO20と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO14と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO16と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO20と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO8と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO16と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO8と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO20と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO14と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO16と同一の配列を含むかまたは重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO20と同一の配列を含む。実施例2から理解できるとおり、これらの特定の可変ドメイン配列組み合わせを含む抗体は、特にCD4抗原に対する結合親和性に関して、有利な特徴を示す。特に好ましくは、重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO4と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO14と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO16と同一の配列を含むか重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO16と同一の配列を含むかまたは重鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ軽鎖免疫グロブリン可変ドメインはSEQIDNO20と同一の配列を含む。本明細書において開示する実施例2cにおいて示すとおり、これらの態様による抗体は、参照として使用された親モノクローナルマウス抗CD4抗体30F16H5と比べて向上している、ヒトCD4への結合を示す。通常、上記に示唆したとおり、本発明の改変抗体は、ヒトCD4に結合する能力を示す。本発明の前記のさらなる局面で使用される場合、好ましくは、抗体は、その標的抗原CD4に対する親和性が非改変モノクローナル抗CD4抗体によって示される親和性の少なくとも5、より好ましくは少なくとも10、より好ましくは少なくとも20、より好ましくは少なくとも40、より好ましくは少なくとも50、より好ましくは少なくとも60、より好ましくは少なくとも70、より好ましくは少なくとも80、より好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも100である場合、ヒトCD4に結合する特性を実質的に保持すると言われる。抗体の親和性を測定するための様々な方法が、当業者には周知である。適切な方法には、本明細書の実施例2cにおいて説明する競合ELISAによる親和性の測定、またはスキャッチャード解析、またはBiacoreもしくは類似の機器を用いた解析が含まれる。本発明の前記のさらなる局面の好ましい態様において、標的抗原CD4に対する親和性は、親抗CD4モノクローナル抗体によって示される親和性の10倍または10分の1の範囲内である。例えば、本発明の前記のさらなる局面の抗体のCD4に対する結合親和性は、好ましくは、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された抗体の結合親和性の10倍または10分の1の範囲内である。より好ましくは、結合親和性は、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された抗体の結合親和性の2倍に高くなっているか、または2分の1に低くなっている。特に好ましい態様によれば、抗体のCD4に対する結合親和性は、ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された抗体よりも高い。好ましくは、本発明の前記のさらなる局面で開示される改変抗体はさらに、親抗ヒトCD4抗体の機能的活性の内の少なくとも1つ、および最も好ましくはすべてを保持する。したがって、本発明の前記のさらなる局面の態様は、親非改変抗体の治療的有効性に関連する有益な技術的特徴の内の1つまたは複数、および最も好ましくはすべてが示されている一方で、その抗体がMHCクラスII分子に結合する能力は低下しており、かつまたは対象において弱い免疫応答を誘導するか、もしくは免疫応答をまったく誘導しない改変抗体を包含する。好ましくは、抗ヒトCD4抗体重鎖は、ヒトIgG4定常領域ドメインをさらに含み、軽鎖はヒトκ定常領域ドメインをさらに含む。したがって、別の好ましい態様において、本発明の前記のさらなる局面の抗体の重鎖可変領域はヒトIgG4定常領域ドメインに連結されており、本発明の前記のさらなる局面の抗体の軽鎖可変領域はヒトκ定常領域ドメインに連結されている。IgG4は、ADCCおよびCDCのようなエフェクター機能を刺激する傾向が低く、したがって、患者において炎症誘発性応答を促進することができない。特定の態様において、抗ヒトCD4抗体は、SEQIDNO4、6、8、および10より選択される重鎖可変領域配列に隣接したヒトIgG4定常領域ドメインならびにSEQIDNO14、16、18、20より選択される軽鎖可変領域配列に隣接したヒトκ定常領域ドメインをさらに含む。本明細書において前述したとおり、重鎖可変領域および軽鎖可変領域それぞれに関するこれらの例示的な配列は、好ましい可変領域配列である。本発明の前記のさらなる局面の別の面によれば、本発明の前記のさらなる局面の抗体は、発現ベクターpANTVhG4およびpANTVκを用いて得られる。非限定的な例として、本発明の前記のさらなる局面の抗体は、実施例2で説明する発現ベクターpANTVhG4およびpANTVκを用いて得ることができる。さらに、発現ベクターpANTVhG4およびpANTVκ中に含まれるもののような特定の抗体配列に基づいて改変抗体が構築される、当業者に周知である他の任意の適切な方法も使用され得る。別の面において、本発明の前記のさらなる局面は、以下の段階を含む、本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体を調製する方法に関するハイブリドーマ細胞株ECACC88050502から得られる抗体またはその一部分のアミノ酸配列を供給する段階インビトロ技術もしくはインシリコ技術または生物学的アッセイ法を用いるMHC分子へのペプチド結合の測定を含む任意の方法によって、該抗体またはその一部分の該アミノ酸配列内の1つまたは複数のT細胞エピトープを同定する段階配列変異体が、インビトロ技術もしくはインシリコ技術または生物学的アッセイ法によって測定されたMHC分子への該ペプチド結合が実質的に減少するかまたはなくなるように改変された同定されたT細胞エピトープ内の1つまたは複数のアミノ酸を有する、新しい該配列変異体を設計する段階および組換えDNA技術を用いてこのような配列変異体を構築し、本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体の特性を有する1種または複数種の配列変異体を同定するために該配列変異体を試験する段階。段階によるT細胞エピトープの同定は、当技術分野において以前に説明されている方法に従って実施することができる。適切な方法は、例えば、いずれも参照により本明細書に組み入れられるWO9859244WO0034317米国特許出願第20030153043号において開示されている。前述の方法において、配列変異体は、好ましくは、配列変異による新しいT細胞エピトープの作製を回避するように作製される。ただし、そのような新しいT細胞エピトープが、結果として、MHCクラスII分子へのペプチド結合が実質的に減少するかまたはなくなるように改変される場合は別である。実際には、タンパク質配列に変更を施す場合、任意の適切な手段により、企図される配列をエピトープおよびまたはMHCクラスIIリガンドの存在に関して再試験することによって、企図される変更が新しい免疫原性エピトープを誘導することを回避することが好ましい。様々な態様において、本発明の前記のさらなる局面の改変抗体は、本発明の前記のさらなる局面において指定されるVH遺伝子およびVL遺伝子の様々な組合せを発現させることによって作製される。重鎖および軽鎖のこのような組合せはすべて、本発明の前記のさらなる局面に包含される。通常、完全抗体分子の構成は、組換えDNA技術ならびに当技術分野において周知の抗体分子を精製および操作するための方法によって達成することができる。必要な技術は、当業者に周知である標準的な文献において十分に説明されている。本発明のこの前記のさらなる局面の好ましい分子は、いくつかの方法のいずれかで調製することができるが、最も好ましくは、日常的な組換え方法を活用して行われる。本発明の前記のさらなる局面において提供したタンパク質配列および情報を用いて、好ましい抗体V領域のいずれかをコードするポリヌクレオチドを導き出すことは、比較的容易な手順である。これは、例えば、DNAstarソフトウェア一式DNAstarIncMadisonWisUSAまたは類似物などのコンピューターソフトウェアツールを用いて実行することができる。本発明の好ましいポリペプチドまたはその著しいホモログをコードする能力を有する任意のこのようなDNA配列は、本発明のこの前記のさらなる局面の態様としてみなされるべきである。一般的スキームとして、遺伝子合成によってVH鎖遺伝子またはVL鎖遺伝子のいずれかが作製され、適切な発現ベクター中にクローニングされ得る。次に、発現ベクターは宿主細胞中に導入され、細胞が選択され、培養される。抗体分子は培地から容易に精製され、治療的投与に適した製剤中に配合される。非限定的な例として、1つのこのようなスキームは、合成オリゴヌクレオチドのパネルを用いた遺伝子合成プロセスを含む。これらの遺伝子は、リガーゼ連鎖反応によって組み立てられる。この反応では、相補的末端と特徴として有するオリゴヌクレオチドがアニールされ、続いて、ポリメラーゼ連鎖反応によって増幅および充填される。PCRは、プライマーとしての役割を果たす隣接オリゴヌクレオチドを高濃度で添加することによって推進される。PCR産物は、5側および3側の免疫グロブリン遺伝子隣接領域を含むベクターからのさらなるPCR、および全長抗体の発現用の発現ベクター中へのサブクローニングによって、組み立てられて完全長抗体遺伝子となる。組み立てられたVH遺伝子およびVL遺伝子は、本発明の前記のさらなる局面において開示されるもののいずれかのような多重変異体抗体配列の変異誘発および構築のための鋳型としての機能を果たし得る。によって説明されているオーバーラップ伸長PCRの戦略を使用することが特に簡便であるが、他の方法論および系が容易に応用され得る。可変領域カセットを含む完全長免疫グロブリン遺伝子は、最も簡便には、オーバーラップPCRを用いて組み立てられ、所望の免疫グロブリン定常領域ドメインを含む発現ベクター中にサブクローニングされる。発現ベクターは、例えばエレクトロポレーション技術を用いて、哺乳動物細胞または他の宿主細胞中に導入され得る。NS0細胞株は、欧州動物細胞培養物コレクションから得られる、免疫グロブリンを産生しないマウス骨髄腫であり、この手順のために特に適切な宿主細胞株の例である。抗体を分泌する細胞株が増殖させられ、抗体は、例えばプロテインAアフィニティークロマトグラフィーを用いて容易に精製され得る。精製された抗体の濃度は、関心対象の抗体のヒトκ定常領域を検出する酵素結合免疫吸着測定法を用いて測定され得る。本発明の前記のさらなる局面が改変抗CD4抗体に関する限り、そのような改変抗体または改変抗体の断片を含む組成物および関連する組成物もまた、本発明の範囲内であるとみなされる。したがって、本発明の前記のさらなる局面はさらに、本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物にも関する。本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体の治療用組成物は、薬学的に許容される賦形剤と共に使用され得る。本発明の前記のさらなる局面による薬学的組成物は、賦形剤、担体、佐剤、および緩衝剤を含む、薬学的調製物中で慣習的に使用される物質を含めて、従来調製される。組成物は、例えば、非経口的に、経腸的に、筋肉内に、皮下に、静脈内に、または効果をもたらすのに有用な他の経路によって投与され得る。従来の賦形剤には、作用物質と有害な反応を起こさない、非経口経路、経腸経路、および他の投与経路に適した薬学的に許容される有機または無機の担体物質が含まれる。非経口適用の場合、注射用の滅菌液剤、好ましくは油性液剤または水性液剤、ならびに懸濁剤、乳剤、または坐剤を含む埋め込み剤が特に適切である。アンプルは、簡便な単位投薬量である。薬学的調製物は、滅菌されてよく、所望の場合は、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、または活性化合物と有害な反応を起こさない他の物質と混合されてよい。本発明の前記のさらなる局面において開示される改変抗体は、特に、限定されるわけではないが多発性硬化症、関節リウマチ、全身性血管炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患および強皮症を含む自己免疫性症状を含む、いくつかの重要なヒト疾患において、また移植での使用のために、有用である。したがって、本発明の前記のさらなる局面の抗体は、治療的処置において使用され得る。非限定的な例は、有効量の本発明の前記のさらなる局面による改変抗体を投与する段階を含む、患者の自己免疫性症状を治療する方法を包含する。様々な態様において、自己免疫性症状は、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性血管炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患、または強皮症である。別の例は、有効量の本発明の前記のさらなる局面による抗体を患者に投与する段階を含む、器官の移植の前または後に患者の免疫を抑制する方法である。1つの態様において、移植用の器官は腎臓移植である。本発明の前記のさらなる局面はまた、改変抗体組成物を用いてヒトを治療的に処置するための方法にも関する。個体に投与する場合、改変抗体組成物のいずれかは、好ましくは、少なくとも80純粋であり、かつ発熱物質および他の混入物を含まないように作製される。したがって、1つのさらなる面において、本発明の前記のさらなる局面は、対象、好ましくは患者に抗体を投与する段階を含む、治療的処置の方法に関する。好ましくは、この方法は、自己免疫性症状、特に、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性血管炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患、および強皮症より選択される自己免疫性症状を治療するためのものである。別の好ましい態様によれば、この方法は、器官、特に腎臓の移植の前または後に患者の免疫を抑制するためのものである。好ましくは、対象はヒトである。好ましくは、有効量の抗体が投与される。関連する面において、本発明の前記のさらなる局面は、対象を治療的に処置するための医薬を製造するための、本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体の使用に関する。好ましくは、この医薬は、自己免疫性症状、特に、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性血管炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患、および強皮症より選択される自己免疫性症状を治療するためのものである。別の好ましい態様によれば、この医薬は、器官、特に腎臓の移植の前または後に患者の免疫を抑制するためのものである。好ましくは、対象はヒトである。別の関連する面において、本発明の前記のさらなる局面は、治療的処置の方法において使用するための、本発明の前記のさらなる局面の抗体に関する。好ましくは、この方法は、自己免疫性症状、特に、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性血管炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患、および強皮症より選択される自己免疫性症状を治療するためのものである。別の好ましい態様によれば、この方法は、器官、特に腎臓の移植の前または後に患者の免疫を抑制するためのものである。好ましくは、対象はヒトである。本発明の前記のさらなる局面の治療の方法および医学的使用において、使用される本発明の前記のさらなる局面の抗CD4抗体の実際の投与量は、治療される障害のタイプおよび重症度、ならびに他の治療様式または選択される様式を含む様々な因子に依存する。投与計画の手引きは、当技術分野において公知のヒト化抗CD4の投与から得られる。さらに別の面において、本発明の前記のさらなる局面は、本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体の重鎖およびまたは軽鎖の免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸に関する。好ましくは、核酸は、SEQIDNO3、5、7、9、13、15、17、および19からなる群より選択される配列を含む。また、本発明の前記のさらなる局面の一部は、遺伝コードの縮重が原因でSEQIDNO3、5、7、9、13、15、17、および19とは異なる、本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体の重鎖およびまたは軽鎖の免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸である。ポリヌクレオチドに関する縮重とは、遺伝コードにおいて多くのアミノ酸が複数のコドンによって指定されるという当技術分野で十分に認識されている事実を意味する。コードの縮重は、4種の異なる塩基からなる存在し得る64種のトリプレット配列にコードされる異なるアミノ酸が20種である理由を説明する。別の面において、本発明の前記のさらなる局面は、前述の核酸を含むベクターに関する。好ましくは、この核酸は、発現制御配列に機能的に連結されている。いくつかの態様において、発現ベクターは、発現制御配列に機能的に連結された、T細胞エピトープの数が減少しているSEQIDNO2またはSEQIDNO12の置換された改変変異体を構成するV領域の重鎖または軽鎖をコードする核酸配列を含む。様々な態様において、発現ベクターは、図11に示すとおり、pANTVhG4ベクターおよびVLのためのpANTVκベクターを含むか、またはそれらに由来する。別の面において、本発明の前記のさらなる局面は、前述の核酸およびまたは前述の少なくとも1つのベクターを含む宿主細胞に関する。好ましくは、宿主細胞は、それぞれが前述の核酸を含む1つまたは複数のベクターを含む。好ましくは、宿主細胞は、それぞれが前述の核酸を含む2つのベクターを含む。本発明の前記のさらなる局面はさらに、本発明の前記のさらなる局面の抗ヒトCD4抗体を調製する方法であって、適切な発現制御配列の制御下での発現を可能にする条件下で前記宿主細胞を培養する段階、および該抗体を細胞の培地から精製する段階を含む、方法にも関する。以下の項目1~33において、本発明の前記のさらなる局面の特定の態様を説明する。1重鎖免疫グロブリン可変ドメインおよび軽鎖免疫グロブリン可変ドメインを含む抗ヒトCD4抗体であって、該免疫グロブリン可変ドメインのCDRの外側に位置する少なくとも1つのT細胞エピトープが、該免疫グロブリン可変ドメインから除去される、抗ヒトCD4抗体。2モノクローナル抗体である、項目1記載の抗体。3ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された前記モノクローナル抗体に由来する、項目2記載の抗体。4前記ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された前記抗体のCDRを有するか、またはSEQIDNO2およびSEQIDNO12のCDRを有する、項目1~3のいずれか一項記載の抗体。5前記免疫グロブリン可変ドメインからの1つまたは複数のT細胞エピトープの除去に起因する違いは例外として、前記重鎖免疫グロブリン可変ドメインが、前記ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された前記抗体の重鎖免疫グロブリン可変ドメインと同一であるか、またはSEQIDNO2と同一の配列を含みかつ前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメインが、該ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された該抗体の軽鎖免疫グロブリン可変ドメインと同一であるか、またはSEQIDNO12と同一の配列を含む、項目1~4のいずれか一項記載の抗体。6少なくとも1つの前記T細胞エピトープが、SEQIDNO2の4位~12位、SEQIDNO2の10位~18位、SEQIDNO2の11位~19位、SEQIDNO2の20位~28位、SEQIDNO2の37位~45位、SEQIDNO2の70位~78位、SEQIDNO2の73位~81位、SEQIDNO2の83位~91位、SEQIDNO2の107位~115位、SEQIDNO2の110位~118位における重鎖免疫グロブリン可変ドメインのT細胞エピトープ、ならびにSEQIDNO12の2位~10位、SEQIDNO12の3位~11位、SEQIDNO12の10位~18位、SEQIDNO12の11位~19位、SEQIDNO12の45位~53位、SEQIDNO12の53位~61位、SEQIDNO12の59位~67位、SEQIDNO12の61位~69位、SEQIDNO12の62位~70位、SEQIDNO12の70位~78位、およびSEQIDNO12の97位~105位における軽鎖免疫グロブリン可変ドメインのT細胞エピトープからなる群より選択される、項目1~5のいずれか一項記載の抗体。7少なくとも1つの前記T細胞エピトープ内の少なくとも1つのアミノ酸が、少なくとも1つの該T細胞エピトープを除去するために別のアミノ酸によって置換される、項目1~6のいずれか一項記載の抗体。8前記置換が、SEQIDNO2中のT9S、V10E、A12K、Q19K、S28T、K38R、R40A、L70I、A72R、V73D、S91T、T115L、L116V、およびSEQIDNO12中のI10T、M11L、L46A、V59S、I62S、S69D、R76S、L105Iからなる群より選択される、項目7記載の抗体。9少なくとも1個の置換が存在することを条件として、0個、1個、2個、または3個の置換が、EH1およびEH6のそれぞれの内部にあり0個、1個、または2個の置換が、EH2、EH5、およびEH10のそれぞれの内部にあり0個または1個の置換が、EH3、EH4、EH7、EH8、およびEH9のそれぞれの内部にあり0個、1個、または2個の置換が、EL2、EL3、EL7、EL8、およびEL9のそれぞれの内部にありかつ0個または1個の置換が、EL1、EL4、EL5、EL6、EL10、およびEL11のそれぞれの内部にある、項目6~8のいずれか一項記載の抗体。106個、8個、もしくは10個のT細胞エピトープが前記重鎖免疫グロブリン可変ドメインから除去され、かつまたは5個、9個、10個、もしくは11個のT細胞エピトープが前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメインから除去される、項目1~9のいずれか一項記載の抗体。11前記重鎖免疫グロブリン可変ドメインが、SEQIDNO4、6、8、および10からなる群より選択される配列を含みかつまたは前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメインが、SEQIDNO14、16、18、および20からなる群より選択される配列を含む、項目1~10のいずれか一項記載の抗体。12前記重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO4と同一の配列を含み、かつ前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO14と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO4と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO20と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO14と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO16と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO20と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO8と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO16と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO8と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO20と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO14と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO16と同一の配列を含むかまたは該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO20と同一の配列を含む、項目10または11記載の抗体。13前記重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO4と同一の配列を含み、かつ前記軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO14と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO6と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO16と同一の配列を含むか該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO16と同一の配列を含むかまたは該重鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO10と同一の配列を含み、かつ該軽鎖免疫グロブリン可変ドメインがSEQIDNO20と同一の配列を含む、項目12記載の抗体。14前記抗体のCD4に対する結合親和性が、前記ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された前記抗体の結合親和性の10倍または10分の1の範囲内である、項目1~13のいずれか一項記載の抗体。15前記抗体のCD4に対する結合親和性が、前記ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された前記抗体の結合親和性の2倍または2分の1の範囲内である、項目14記載の抗体。16前記抗体のCD4に対する結合親和性が、前記ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502によって産生された前記抗体よりも高い、項目14または15記載の抗体。17前記抗体のMHCクラスII分子に結合する能力が低下しており該抗体が対象においてより弱い免疫応答を誘導しタンパク質が全長抗体でありキメラ抗体でありかつまたは親分子の最も免疫原性が高い領域内に置換がある、項目1~16のいずれか一項記載の抗体。18重鎖可変領域がヒトIgG4定常領域ドメインに連結されており、かつ軽鎖可変領域がヒトκ定常領域ドメインに連結されている、項目1~17のいずれか一項記載の抗体。19発現ベクターpANTVhG4およびpANTVκを用いて得られる、項目18記載の抗体。20以下の段階を含む、項目1~19のいずれか一項記載の抗体を調製する方法前記ハイブリドーマ細胞株ECACC88050502から得られる前記抗体またはその一部分のアミノ酸配列を供給する段階インビトロ技術もしくはインシリコ技術または生物学的アッセイ法を用いるMHC分子へのペプチド結合の測定を含む任意の方法によって、該抗体またはその一部分のアミノ酸配列内の1つまたは複数のT細胞エピトープを同定する段階配列変異体が、インビトロ技術もしくはインシリコ技術または生物学的アッセイ法によって測定されたMHC分子への該ペプチド結合が実質的に減少するかまたはなくなるように改変された同定されたT細胞エピトープ内の1つまたは複数のアミノ酸を有する、新規の該配列変異体を設計する段階および組換えDNA技術によってこのような配列変異体を構築し、項目1~20のいずれか一項記載の抗体の特性を有する1種または複数種の配列変異体を同定するために該配列変異体を試験する段階。21項目1~19のいずれか一項記載の抗体および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。22対象を治療的に処置するための医薬を製造するための、項目1~19のいずれか一項記載の抗体の使用。23前記医薬が、自己免疫性症状、特に、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性血管炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患、および強皮症より選択される自己免疫性症状を治療するためのものであるかまたは該医薬が、器官、特に腎臓の移植の前もしくは後に患者の免疫を抑制するためのものである、項目22記載の使用。24治療的処置の方法において使用するための、項目1~19のいずれか一項記載の抗体。25前記方法が、自己免疫性症状、特に、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性血管炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患、および強皮症より選択される自己免疫性症状を治療するためのものであるかまたは該方法が、器官、特に腎臓の移植の前もしくは後に患者の免疫を抑制するためのものである、項目24記載の抗体。26前記対象がヒトである、項目22~25のいずれか一項記載の使用または抗体。27項目1~19のいずれか一項記載の抗体の重鎖およびまたは軽鎖の免疫グロブリン可変ドメインをコードする、核酸。28SEQIDNO3、5、7、9、13、15、17、および19からなる群より選択される配列を含む、項目27記載の抗体。29項目27または28記載の核酸を含む、ベクター。30前記核酸が発現制御配列に機能的に連結されている、項目29記載のベクター。31抗体16H5chimIgG4、2011年12月2日にDSMZに寄託された細胞株CD416H5chimIgG4から得ることができる、抗体である、これらの項目のいずれか一項記載の抗体。32項目27もしくは28記載の核酸およびまたは項目29~31のいずれか一項記載の少なくとも1つのベクターを含む、宿主細胞。33適切な発現制御配列の制御下での発現を可能にする条件下で項目32記載の宿主細胞を培養する段階、および該抗体を細胞の培地から精製する段階を含む、項目1~19のいずれか一項記載の抗体を調製する方法。本発明はさらに、ECACC88050502という用語がMAX16H530F16H5で置き換えられる、本明細書において開示する態様の代替の態様にも関する。同様に、本発明はさらに、本明細書において使用される細胞株ECACC88050502という用語または同等の用語が細胞株MAX16H530F16H5という用語または同等の用語で置き換えられる態様にも関する。本発明はさらに、ECACC88050502という用語がCD416H5chimIgG4で置き換えられる、本明細書において開示する態様の代替の態様にも関する。同様に、本発明はさらに、本明細書において使用される細胞株ECACC88050502という用語または同等の用語が細胞株CD416H5chimIgG4という用語または同等の用語で置き換えられる態様にも関する。以下に、本発明の範囲を限定することを意図していない図面および実施例によって本発明を例示する。実施例1動物ドナーC57Bl6CD4koマウス、C57Bl6野生型マウス、およびレシピエントBalbc野生型マウスは、ライプツィヒ大学の動物施設で飼育された。標準化した条件下でマウス系統を維持した。C57Bl6CD4koマウスは、マウスCD4分子がノックアウトされヒトCD4を発現する、安定なC57Bl6バックグラウンドを有する。CD4導入遺伝子は、マウスCD4エンハンサーエレメントに連結されたそれ自身のプロモーターを含み、したがって、T細胞サブセットに特異的な発現をもたらす。CD8細胞は、TTGマウスにおいて影響を受けていない。さらに、これらのマウスは、マウスMHCII複合体に加えて、HLADR3分子を発現する。TTGマウスは、CD4およびHLADRに関して改変されている完全な機能的マウス免疫系を有する。マウスには自由に摂食させた。ドナーとして、C57Bl6マウスおよびBalbcマウスをCharlesRiverから購入した。マウスはすべて、ライプツィヒ大学の動物管理委員会およびライプツィヒの動物管理の地方委員会のガイドラインに従って、飼育するか、扱うか、または取り扱った。統計学的解析データはすべて、平均値±SDとして提示される。統計学的解析およびグラフによる説明は、SigmaPlot100SigmaStat35ソフトウェアを用いて行った。放射線照射のプロトコールマウスの放射線照射のために、X線装置を動物放射線照射用に調整した。体重に応じて、プレキシガラス容器中で動物5匹に同時に放射線照射した。平均放射線量は85Gyであった。骨髄細胞および脾細胞の調製無菌条件下で、C57Bl6CD4koマウスまたはC57Bl6野生型マウスの脛骨および大腿骨から骨髄細胞を新しく得た。したがって、骨ならびに遠位端および近位端から慎重に前処理された筋系および腱を除去した。細い針を用いて、骨髄細胞を無菌PBSですすぎ、50ml管中に採取した。針を通過させて慎重に再懸濁させることによって、単細胞懸濁液を得た。続いて、300×gで10分間、PBS中で細胞を一度洗浄し、PBS中に再び再懸濁し、計数チャンバーを使用し、Tuerk染色液によって染色して、細胞総数を測定した。この後、300×gで10分間、PBS中で骨髄細胞をもう一度洗浄し、FCSを含まないダルベッコ改変イーグル最小必須培地中に細胞ペレットを再懸濁した。C57Bl6CD4koマウスまたはC57Bl6野生型マウスから単細胞の脾細胞懸濁液を作製するために、マウスの死亡後、無菌条件下で直ちに脾臓を摘出し、セルストレイナーに押し通し、50ml管に入れたPBS中に採取した。300×gで10分間、PBS中でこの単細胞懸濁液を2回洗浄した。続いて、無菌PBS中に0155molNH4Cl、001molKHCO3、および001molEDTANaを含む溶解緩衝液に赤血球を溶解した。細胞を再び洗浄し、FCSを含まないDMEM培地中に再懸濁し、細胞数を計測した。抗体インキュベーションの前に、骨髄細胞および脾細胞を所望の細胞数に調整した。当業者に容易に理解されるとおり、本発明の実施例における脾細胞の使用は、操作上の理由から発生する-脾細胞の補足的使用は、特にヒト対象に関する限りでは、本発明によって実際には必要とされない。抗体インキュベーション抗体インキュベーションのために、必要とされる量のMax16H5抗体を使用直前にDMEMに溶解して最終濃度を1mgmlにした。続いて、C57Bl6CD4koマウスまたはC57Bl6野生型マウスに由来する骨髄細胞14×108個および脾細胞14×108個を、FCSを含まない15mlのDMEMに溶かした800μgのMax16H5と共に暗所、室温で1時間インキュベートした。対照として、抗体治療を行っていないC57Bl6CD4koマウスまたはC57Bl6野生型マウスの骨髄細胞および脾細胞もまた、同じ条件下で、FCSを含まないDMEM中でインキュベートした。1時間のインキュベーションの後、300×gで10分間細胞を遠心分離してそれらを沈殿させ、300×gで10分間、PBS中で1回洗浄して、未結合抗体を除去した。細胞移植同時移植実験のために、Max16H5で処理したCD4koマウスの骨髄細胞2×107個を、Max16H5で処理したCD4koマウスの脾細胞2×107個に添加した。最終体積150μlの無菌09NaCl中で細胞濃度を調整した。同様にMax16H5で処理したC57Bl6野生型マウスの骨髄細胞および脾細胞に対して同じことを行った。対照として、CD4koマウスの非処理骨髄細胞2×107個をCD4koマウスの非処理脾細胞2×107個に添加するか、またはC57Bl6野生型マウスの骨髄細胞2×107個をC57Bl6野生型マウスの脾細胞2×107個に添加した。続いて、致死的に放射線照射したレシピエントBalbc野生型マウスの外側尾静脈中に静注することによって、移植片を同種間移植した。移植後毎日、生存状況、Cookeetal1996によるGvHD病状、および体重を評価した。フローサイトメトリー移植前および移植後に、レシピエントBalbc野生型マウスをフローサイトメトリーによって解析した。ドナーCD4koマウスの脾細胞および骨髄細胞の特徴決定細胞数測定解析のために、複合モノクローナル抗体PE、マウスCD4PECy7、マウスCD19APCCy7BDBiosciencesHeidelbergGermany25μlと共に細胞をインキュベートした。20分間のインキュベーション後、PBS1FBS中での2回の洗浄段階を行った。最後に、沈殿物をPBS200μlで再懸濁した。さらに、7アミノアクチノマイシンDで染色することによって、脾細胞および骨髄細胞の生存率を移植前に試験した。室温で30分間、PBSに溶かした7AADと共に細胞1×106個をインキュベートし、直ちに測定した。BDFACSCantoIIフローサイトメーターを用いてデータを取得し、BDFACSDIVAソフトウェアを用いて解析した。レシピエントBalbc野生型マウスのフローサイトメトリーおよび血液学移植処置前および移植処置後に、レシピエントマウスをフローサイトメトリーによって解析した。特定の時点に、エーテル麻酔下で各マウスの後眼窩静脈から血液を採取した。ヘパリン処理済み毛細管を用いて血液を採取した。血液採取後2時間以内にマウス血液に合うように調整しておいたAnimalBloodCounterを用いてヘモグロビン濃度を測定した。細胞数測定解析のために、試料に応じた複合モノクローナル抗体PE、MHCIFITC、マウスCD8PerCP、マウスCD19APCCy7BDBiosciencesHeidelbergGermanyマウスCD3FITC、ヒトCD4APCBeckmanCoulterKrefeldGermanyヒトHLADR3FITCImmunotoolsFriesoytheGermany25μlと共に血液細胞100μlをインキュベートした。20分間のインキュベーション後、製造業者の取扱い説明書に従って赤血球溶解を行ったBDBiosciencesHeidelbergGermany。PBS1FBSを添加することにより、試料を2回洗浄した。最後に、沈殿物をPBS200μlで再懸濁した。調節性T細胞を検出するためのマウスFoxP3の細胞数測定解析には、マウスTreg検出キットを使用した。MACS緩衝液90μl中に細胞1×106個を再懸濁し、10μlのCD4FITC抗体およびCD25PE抗体で細胞表面マーカーを染色した。暗所、4°Cで10分間のインキュベーションの後、MACS緩衝液2mlで細胞を洗浄し、300×g、4°Cで5分間遠心分離した。上清を除去した後、新しく調製した固定透過処理溶液1ml中、4°Cで30分間インキュベートすることによって、細胞1×106個を透過処理した。300×g、4°Cで5分間遠心分離することによって、冷たいMACS緩衝液2ml中で細胞を洗浄した。細胞内FoxP3を染色するために、上清除去の後に透過処理段階を続けた。細胞1×106個を冷たい透過処理緩衝液2mlを用いて洗浄し、300×g、4°Cで5分間遠心分離した。細胞ペレットを冷たい透過処理緩衝液80μl中に再懸濁し、4°Cで5分間インキュベートした。続いて、抗FoxP3APC抗体10μlを添加し、慎重に混合し、4°Cで30分間インキュベートした。細胞を冷たい透過処理緩衝液2mlを用いて洗浄し、300×g、4°Cで5分間遠心分離し、上清を除去し、細胞をMACS緩衝液100μl中に再懸濁した。BDFACSCantoIITMフローサイトメーターを用いてデータを取得し、BDFACSDIVAソフトウェアを用いて解析した。免疫組織学マウスの器官をステンレス鋼ビーカー中に入れ、液体窒素中に15分間浸し、切片化の準備が整うまで80°Cで保存した。切片化はCryostatを用いて実施し対象物をスーパーフロストスライド上に移し、免疫組織学的解析をするまで80°Cで直ちに保存した。対象のスライドを03wvH2O2と共にインキュベートし、ウェットチャンバー中で10分間PBSに溶解し、次いで、PBSで3回洗浄した。室温で60分間、PBS中10wvFBSで器官を処理し、PBSで手短に洗浄し、アビジン溶液と共に10分間インキュベートし、PBSで洗浄した。この調製物をビオチン溶液と共に10分間インキュベートし、PBSで洗浄し、1100で希釈した1次抗体である抗ヒトCD4抗体またはアイソタイプ対照と共に室温で1時間インキュベートした。次に、1100で希釈した二次抗体で室温にて30分間スライドを覆い、PBSで洗浄した。対象のスライドをストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼで30分間覆い、PBSで3回洗浄し、明らかに濃い色に達するまで5分間、DAB希釈物と共にインキュベートし、次いで、ddH2Oで3回洗浄した。これらの試料をマイヤーのヘマラム溶液で1分間覆い、次いで、水道水で10分間洗浄して青い染色を可視化した。濃度が上昇するアルコール系列を通過させた対象スライドをキシレンと共に5分間インキュベートし、最後にEntellanで覆った。顕微鏡下でスライドを解析した。組織学すべてのトランスジェニックマウスの肝臓、骨、および腸を組織学的に解析した。死亡直後に器官を前処理し、ヘマトキシリンエオシンおよびカオリンアニリンオレンジG染色のためにホルマリン中に移した。このホルマリンの箱を暗所で保管して、ホルマリン析出を防いだ。室温で少なくとも7日間、Osteosoft中で骨をインキュベートした。試料はすべて、水道水で2時間洗い流し、次いで、70~100wvのアルコール希釈物に9時間浸した。イソプロパノールと共に1時間、および安息香酸メチルと共に一晩、最終的なインキュベーションを行った。その後、器官をパラフィンに3日間包埋し、薄片を作った。これらのスライドを室温で5分間、キシレンと共に2回インキュベートし、濃度が低下するアルコール系列を通過させ、最後に室温のddH2O中に移した。対象のスライドをマイヤーのヘマラム溶液に5分間浸け、水道水で10分間洗浄して青い染色を得た。1wvエオシンYとのインキュベーション後、これらのスライドを濃度が上昇するアルコール系列に通過させ、最後にEntellanで覆った。対象のスライドを顕微鏡下で解析した。HalmiKonecnyによって説明されているとおりに、KAOで骨を染色した。実施例2当技術分野において周知の方法、および必要に応じて、これらの方法で使用される酵素の使用に関する供給業者の取扱説明書を用いて、組換えDNA技術を遂行した。一般的方法の出所には、SambrookおよびRusselならびにAusubelによって編集された周知の書籍のような標準的文献が含まれた。詳細な実験室方法もまた、後述する。WO9859244で説明されているもののようなインシリコ方法を用いて、MHCクラスII分子に結合すると予測されるペプチドに対するマウス抗CD4の可変重鎖配列および可変軽鎖配列を解析した。実施例2aキメラ抗CD4抗体PolyATractSystem1000mRNA抽出キットを製造業者の取扱い説明書に従って用いて、マウス抗CD4ハイブリドーマ細胞からmRNAを抽出した。次のとおりにmRNAを逆転写した。κ軽鎖の場合、50μlのmRNAを10μlの20pmolμlMuIgκVL3プライマーOL040および55μlのヌクレアーゼ非含有水と混合した。λ軽鎖の場合、50μlのmRNAを10μlの20pmolμlMuIgκVL3プライマーOL042および55μlのヌクレアーゼ非含有水と混合した。γ重鎖の場合、5μlのmRNAを10μlの20pmolμlMuIgVH3プライマーOL023および55μlのヌクレアーゼ非含有水と混合した。3種の反応混合物はすべて、70°Cに設定したサーマルサイクラーの予熱済みブロック中に5分間入れた。これらを氷上で5分間冷やした後、それぞれImPromII5倍反応緩衝液40μl、RNasinリボヌクレアーゼ阻害剤05μl、25mMMgCl220μl、10mMdNTP混合物10μl、およびImpromII逆転写酵素10μlに添加した。これらの反応混合物を室温で5分間インキュベートした後、42°Cに設定した予熱済みPCRブロックに1時間の間移しておいた。この時間の後、70°Cで15分間、PCRブロック中でインキュベートすることにより、逆転写酵素を加熱不活性化した。次のとおりに、重鎖配列および軽鎖配列をcDNAから増幅した。10×HiFiExpandPCR緩衝液375μl、10mMdNTP混合物75μl、およびHiFiExpandDNAポリメラーゼ375μlをヌクレアーゼ非含有水27375μlに添加することによって、PCRマスター混合物を調製した。このマスター混合物を、氷上の薄壁PCR反応チューブ15本に215μlずつ分注した。これらのチューブのうちの6本に、MuIgVH3逆転写反応混合物25μlおよび重鎖5プライマーのプールHA~HFの10μlを添加した。別の7本のチューブには、MuIgκVL3逆転写反応物25μlおよび軽鎖5プライマーのプールLA~LGの10μlを添加した。最後のチューブには、MuIgκVL3逆転写反応25μlおよびλ軽鎖プライマーMuIgλVL5LIの10μlを添加した。反応物をサーマルサイクラーのブロックに入れ、95°Cまで2分間加熱した。94°Cで30秒間、55°Cで1分間、および72°Cで30秒間というサイクルを40回行って、PCR反応を実施した。最後に、PCR産物を72°Cで5分間加熱し、次いで、4°Cで維持した。pGEMTeasyVectorSystemIキットを用いてpGEMTイージーベクター中に増幅産物をクローニングし、配列決定した。得られたマウスVH配列およびマウスVL配列をSEQIDNO1およびSEQIDNO2ならびにSEQIDNO11およびSEQIDNO12として示す。キメラ抗体を生成させるために、プライマーOL330およびOL331を用いたPCRによってVH領域遺伝子を増幅した。これらは、cDNAクローンの内の1つに由来するプラスミドDNAを鋳型として用いて、制限酵素部位5MluIおよび3HindIIIにおいて遺伝子操作するように設計された。05ml容PCRチューブ中で、10×HiFiExpandPCR緩衝液5μl、10mMdNTP混合物10μl、プライマーOL33005μl、プライマーOL33105μl、鋳型DNA10μl、およびHiFiExpandDNAポリメラーゼ05μlを、ヌクレアーゼ非含有水415μlに添加した。オリゴヌクレオチドOL332およびOL333を用いて同様の方法でVL領域を増幅して、制限酵素部位BssHIIおよびBamHIにおいて遺伝子操作した。反応物をサーマルサイクラーのブロックに入れ、95°Cまで2分間加熱した。94°Cで30秒間、55°Cで1分間、および72°Cで30秒間というサイクルを30回行って、ポリメラーゼ連鎖反応を実施した。最後に、PCR産物を72°Cで5分間加熱し、次いで、4°Cで維持した。次いで、VH領域およびVL領域のPCR産物を、それぞれベクターpANTVhG4およびpANTVκのそれぞれMluIHinDIII部位およびBssHIIBamHI部位にクローニングした。pANTVhG4およびpANTVκの両方とも、ヒトIg発現カセットを含むpAT153ベースのプラスミドである。pANTVhG4中の重鎖カセットは、hCMVieプロモーターによって駆動され下流にヒトIgGポリA領域を有するヒトゲノムIgG4定常領域遺伝子からなる。pANTVhG4はまた、SV40プロモーターによって駆動され下流にSV40ポリA領域を有するハムスターdhfr遺伝子も含む。pANTVκの軽鎖カセットは、hCMVieプロモーターによって駆動され下流に軽鎖ポリA領域を有するヒトゲノムκ定常領域から構成される。ヒトIgリーダー配列と定常領域の間にクローニング部位があることで、可変領域遺伝子の挿入が可能になる。エレクトロポレーションによって、これら2つのプラスミドをNS0細胞に同時トランスフェクトし、DMEM5FBSペニシリンストレプトマイシン100nMメトトレキサート中で選択した。メトトレキサート耐性コロニーを単離し、1ml容HiTrapMabSelectSureカラムを製造者が推奨する条件に従って用いるプロテインAアフィニティークロマトグラフィーによって抗体を精製した。精製ヒトIgG1κを標準物質として用いるIgGFcκELISAによって、NS0上清における抗体発現を定量した。1×PBS中で11500に希釈したマウス抗ヒトIgGFc特異的抗体で、37°Cにて1時間、免疫吸着性96ウェルプレートをコーティングした。PBS005Tween20中でプレートを3回洗浄した後、2BSAPBS中で希釈した試料および標準物質を添加した。プレートを室温で1時間インキュベートした後、PBSTween中で3回洗浄し、2BSAPBS中で11000に希釈した検出用抗体のヤギ抗ヒトκ軽鎖ペルオキシダーゼ結合体を100μlウェルで添加した。プレートを室温で1時間インキュベートした後、PBStweenで5回洗浄し、結合された抗体をOPD基質を用いて検出した。このアッセイ法は、暗所で5分間発色させた後、3MHClを添加することによって停止させた。次いで、アッセイ用プレートをMRXTCIIプレートリーダーにおいて490nmで読み取った。BTagマイクロビオチン標識キットを用いてビオチン標識したマウス抗CD4抗体を用いた、ELISAに基づく競合アッセイ法において、キメラ抗体を試験した。キメラIgG4または対照マウス抗体の10μgml~0009μgmlの希釈系列を一定濃度のビオチン標識抗CD4と予備混合した後、50μlウェルの1μgmlCD4で予めコーティングしたNuncMaxiSorp96ウェル平底マイクロタイタープレート中にウェルあたり100μl入れて、室温で1時間インキュベートした。100μlウェルのストレプトアビジンHRP1500希釈物と共に室温で1時間インキュベートし、続いて100μlウェルのOPD基質を用いて検出することによって、ビオチン標識mAbの結合を測定した。50μlウェルの3MHClを用いて反応を停止させた後、DynexTechnologiesMRXTCIIプレートリーダーを用いて490nmでの吸光度を測定した。得られた結果から、キメラIgG4およびマウス抗CD4抗体が、それぞれ025μgmlおよび018μgmlのIC50値を示し、極めて類似した結合特性を有することが示される。したがって、正確な可変領域配列が同定されクローニングされた。実施例2b改変抗CD4抗体の設計可変領域の全長に及ぶ連続した9merペプチドを、MHCクラスII対立遺伝子34個のパネルに対する結合に関してインシリコで試験した。個々の各対立遺伝子に対するスコアを0~1の尺度に標準化し、公知のMHCクラスII結合ペプチドのパネルを用いて広範囲に渡って検証したところ、カットオフ値055によって、予想される結合ペプチドと非結合ペプチドとが有効に区別されることが実証された。詳細には、ソフトウェアiTopeを用いて、可変ドメイン内の潜在的なMHCクラスII結合配列を同定した。iTopeソフトウェアは、あるペプチドのアミノ酸側鎖と34個のヒトMHCクラスII対立遺伝子の結合溝内の特異的結合ポケットとの好ましい相互作用を予測する。試験タンパク質配列の全体に及ぶアミノ酸1個ずつ重複した9merペプチドをインシリコで作製することによって、鍵となる結合残基の位置特定は達成される。潜在的なフィットおよびアミノ酸側鎖とMHCクラスII分子の結合溝との相互作用に基づいて、各9merを採点した。ソフトウェアによって算出されたペプチドスコアは0~1の間になる。高い平均結合スコアをもたらしたペプチドスコアリング機能において055より大きいは強調され、MHCクラスII結合ペプチドの50超、すなわち、対立遺伝子34個の内の17個が高い結合親和性を有していた場合、そのようなペプチドは相手を選ばない高親和性MHCクラスII結合ペプチドと定義された。このようなペプチドは、CD4T細胞エピトープを含むには高リスクとみなされている。中親和性のMHCクラスII結合ペプチドは、高い親和性で多数の対立遺伝子に結合する。次いで、iTopeソフトウェアにより、配列に加えられ得る、MHCクラスII対立遺伝子への結合を減少させるかまたはなくすと思われる変更に関して、高親和性の結合物および中親和性の結合物を解析した。アミノ酸セレクションを作製する際、ヒト抗体の任意の所与の位置に天然に存在するアミノ酸の範囲を考慮に入れた。あるいは、例えば以下の、公的に入手可能なソフトウェアも使用され得るProPred、Rankpep、またはNetMHCII。マウス重鎖可変領域において10種のMHCクラスII結合ペプチドが同定され、マウス軽鎖可変領域において11種が同定された。表5および表6は、同定されたMHCクラスII結合配列およびMHCクラスII結合を減少させるために図12および図13の配列で使用した一連の配列変異体を列挙したものである。MHCクラスII結合配列が同定された場合、MHCクラスII結合を減少させるか、またはなくすために、鍵となるMHCクラスII結合位置にあるペプチド中のアミノ酸を代替のアミノ酸で置き換えた。いくつかの場合においては、結合を完全になくすために複数の変異が必要とされ、他の場合においては、関与する対立遺伝子の数は少なく、結合スコアはカットオフ値に近かったものの、MHCクラスII結合を完全になくすことができなかった。結合された対立遺伝子の数結合された対立遺伝子の数実施例2c改変抗CD4抗体の作製最初の改変抗体VH領域遺伝子およびVK領域遺伝子は、当技術分野において公知の方法を用いて実施例2aに由来するマウス親抗CD4可変領域およびSEQIDNO11をオーバーラップPCRで変異誘発することによって作製した。オーバーラップPCRによる変異誘発によって、SEQIDNO3およびSEQIDNO13からその他の変異体を構築した。次いで、組み立てられた変異体を図11の発現ベクター中に直接クローニングした。クローンはすべて、DNA配列決定によって確認した。詳細には、PCR変異誘発は次のとおりに実施した。センスDNA鎖およびアンチセンスDNA鎖の両方における、変更されるべき鋳型ヌクレオチド配列の領域にまたがるプライマー対を設計した。これらのプライマーは、鋳型配列と同一であり、かつ正確な位置にプライマーを固着させる機能を果たす配列に隣接された、導入変更されるべき配列を含んだ。変異したPCR産物を発現ベクター中にクローニングするのに適した制限部位を含む5末端プライマーおよび3末端プライマーも必要とされた。表3、表4、および表7は、脱免疫変異体の構築のために使用される全プライマーを列挙している。オーバーラップPCRの場合、末端が隣接断片と重複している遺伝子の小断片を個別にPCR増幅し、プライマーによって重複領域に変異を導入する。次いで、短いPCR断片を精製し、5末端プライマーおよび3末端プライマーを用いた1回のPCR反応で1つに組み立てる。変異体4遺伝子を作製するために、マウス可変領域を鋳型として使用し、後続の変異体すべてに対して、変異体4遺伝子をPCR反応用の鋳型として使用したVH変異体4の場合、OL335OL337およびOL336OL338を用いて2回の個別のPCRを実施し、OL334OL338を用いてそれらの断片を連結した。VH変異体3の場合、OL339OL341およびOL340OL342を用いて2回の個別のPCRを実施し、OL339OL342を用いてそれらの断片を連結した。VH変異体2の場合、OL330OL344、OL343OL346、およびOL354OL342を用いて3回の個別のPCRを実施し、OL330OL342を用いてそれらの断片を連結した。VH変異体1の場合、OL339OL348、OL347OL350、およびOL349OL342を用いて3回の個別のPCRを実施し、OL339OL342を用いてそれらの断片を連結した。VK変異体4の場合、OL332OL352、OL351OL354、OL353OL356、およびOL355OL357を用いて4回の個別のPCRを実施し、OL332OL357を用いてそれらの断片を連結した。VK変異体3の場合、OL358OL357を用いて1回のPCRを実施した。VK変異体2の場合、OL358OL360およびOL359OL357を用いて2回の個別のPCRを実施し、OL358OL357を用いてそれらの断片を連結した。VK変異体1の場合、OL358OL362およびOL361OL357を用いて2回の個別のPCRを実施し、OL358OL357を用いてそれらの断片を連結した。使用したPCR条件は、キメラ可変領域遺伝子の増幅に関して実施例2aで説明したとおりであった。生じたPCR断片をVH遺伝子のためのMluIおよびHinDIIIまたはVK遺伝子のためのBssHIIおよびBamHIのいずれかで消化し、適切な発現ベクター中にクローニングした。変異体の重鎖および軽鎖のあらゆる組合せをエレクトロポレーションによってNS0細胞中に安定にトランスフェクトした。100nMメトトレキサートを用いて、トランスフェクトされた細胞を最初に選択し、200nmメトトレキサート中に増殖させ、実施例2aのとおりにIgG発現に関して試験した。VK3鎖を有する変異体の場合も、変異体VH3VK1およびVH1VK2の場合も、発現は観察されなかった。各変異体について最も発現が優れている株を増殖させ、液体窒素下で凍結した。プロテインAアフィニティークロマトグラフィーによって、細胞培養上清からNSOの安定なトランスフェクションから得られる抗ヒトCD4抗体変異体を精製した。01体積量の10×PBSを用いて上清のpHを調整し、1ml容のMabSelectSureProteinAカラムを通過させた。10体積量のPBSでカラムを洗浄した後、50mMクエン酸緩衝液を用いて溶出した。1mlの画分を採取し、1MTrisHCl01mlで直ちに中和した。タンパク質を含む画分を集め、PBSにバッファー交換し、精製した抗体を4°Cで保存した。280nmのUV吸光度に基づいて、精製した抗体の濃度を測定した。競合ELISAによって、精製した抗体を、その標的であるヒトCD4への結合に関して試験した。PBS中1μgmlCD4を1ウェル当たり50μl用いて、NuncMaxiSorp96ウェル平底マイクロタイタープレートを4°Cで一晩コーティングした。2通りの漸増濃度のマウス抗体試料およびエピトープを枯渇させた抗体試料を作製し、PBSpH742BSAに溶かした一定濃度のビオチン標識マウス抗体と混合した。予洗したアッセイ用プレートに漸増濃度試料を添加し、室温で1時間インキュベートした。次いで、前述したとおりにプレートを洗浄し、PBSpH74005Tween20に溶かしたストレプトアビジンHRP1500希釈物をウェル当たり100μl添加し、室温でさらに1時間インキュベートした。さらに洗浄した後、100μlウェルの3355テトラメチルベンジジン基質を用いて、結合されたビオチン標識マウス抗体を検出した。50μlウェルの3MHClで反応を停止させた後、DynexTechnologiesMRXTCIIプレートリーダーを用いて450nmの吸光度を測定し、試験抗体の結合曲線をマウス標準試料および精製したキメラ抗体と比較した。これらの結果を図15および図16に示す。試料濃度に対して吸光度をプロットし、データセットのそれぞれを通過するように直線をフィッティングした。これらの線の式を用いて、CD4へのビオチン標識マウス抗体の結合を50阻害するのに必要とされる濃度を算出した。試験試料のIC50値をマウス抗体のIC50値で割って、結合効率の差の倍率を算出した。これらの値を表8で報告する。表8は、抗体の内の7種がマウス参照抗体の少なくとも2倍以内の効率で結合し、4種の抗体が結合の向上を示すことを示す。参照文献の一覧