a油相を含むタンク中に正圧をかけることによって、混合装置に油相を導入する工程を含む、水中油型エマルションを製造する方法。工程b水相を含むタンク中に正圧をかけることによって、先の混合装置に水相を導入することを含む、請求項1に記載の方法。油相およびまたは水相を、約2から6bar、例えば約4から約5bar、例えば45barの圧力に調整した混合装置に導入する、請求項1または2に記載の方法。工程aおよびbを実質的に同時に行う、請求項2または3に記載の方法。水相および油相を、約90:10、95:5または9875:125パーセントvvの比率で導入する、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。混合装置が高せん断力ホモジナイザーまたは高圧ホモジナイザーである、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。工程c水中油型エマルションを形成するために油相および水相を混合することを含む、請求項2から6のいずれか1項に記載の方法。d水中サブミクロン油型エマルションを形成するために工程cの水中油型エマルションを高圧均質化する工程を更に含む、請求項7に記載の方法。工程dを2、3、4、5または6回行う、請求項8に記載の方法。高圧均質化を約10000psiから約20000psi、約12000psiから約18000psi、約14000psiから約16000psiまたは約15000±1000psiで行う、請求項8または9に記載の方法。工程dが行われたそれぞれの回の後に、水中油型サブミクロンエマルションを、15°Cから30°C、16°Cから29°C、17°Cから28°C、16°Cから27°Cまたは16°Cから28°Cに冷却する、請求項8から10のいずれか1項に記載の方法。e水中油型エマルションをプレろ過し、f工程eにおいてろ過された水中油型エマルションを減菌グレードフィルターに通してろ過する工程を含む工程を更に含む、請求項8から11のいずれか1項に記載の方法。水中油型エマルションが2から8vvの油を含む、前記請求項に記載の方法。水中サブミクロン油型エマルションが4から6vvの油を含む、請求項に記載の方法。水中油型エマルションが8から12vvの油を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。油相がスクアレンを含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。油相が界面活性剤を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。界面活性剤がソルビタントリオレアートSPAN85である、請求項17に記載の方法。油相がトコールを含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。トコールがαトコフェロールである、請求項19に記載の方法。水相が水溶液および界面活性剤を含む、請求項2から20のいずれか1項に記載の方法。界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80である、請求項21に記載の方法。請求項1から22のいずれか1項に記載の方法によって製造された水中油型エマルション。請求項23による水中油型エマルションおよび抗原を含む免疫原性組成物。医療において使用するための請求項23に記載の水中油型エマルションまたは請求項24に記載の免疫原性組成物。病気の予防およびまたは治療に使用するための請求項23に記載の水中油型エマルションまたは請求項24に記載の免疫原性組成物。病気の予防およびまたは治療の薬剤の製造における請求項23に記載の水中油型エマルションまたは請求項24に記載の免疫原性組成物の使用。請求項23に記載の水中油型エマルションまたは請求項24に記載の免疫原性組成物を哺乳類、例えば人に投与する工程を含む治療方法。i請求項23に記載の水中油型エマルション;およびii抗原を含むキット。抗原がインフルエンザウイルス由来である請求項23に記載の免疫原性組成物または請求項29に記載のキット。本発明の目的は、水中油型エマルションの製造方法を提供することである。本発明はサブミクロン水中油型エマルション、特にスクアレンを含むサブミクロン水中油型エマルションの製造方法に関する。特に、本発明は、a油相を含むタンクに正圧をかける事によって、混合装置に油相を導入する工程を含む、水中油型エマルションの製造方法に関する。水中油型エマルションは、油相1またはそれ以上の油および場合により1またはそれ以上の界面活性剤を、界面活性剤を含む水相と組み合わせて混合することにより作られる。界面活性剤および顕微溶液化ミクロ流動化、microfluidisationは、安定したエマルション、すなわち少なくとも3年間は油相と水相に分離しないエマルションを形成する事を可能とする。本発明者は、油相を含む容器例えば供給タンクに正圧をかける事によって混合装置内に油相を導入することによって、油相を、例えば膜ポンプによって導入した水中油型エマルションと比較して、減少した多分散性、減少した液滴サイズおよび改善したろ過性を持つ水中油型エマルションが生成することを立証した。したがって、本発明は、a油相を含むタンクに正圧をかける事によって混合装置に油相を導入する工程を含む水中油型エマルションの製造方法を提供する。油相およびまたは水相を導入するのに使用できる圧力は、当業者により容易に決定することができる。本発明方法の特定の実施形態として、油相およびまたは水相は、約2から6bar、例えば約4から約5bar、例えば45barの圧力に調整することによって混合装置に導入される。水中油型組成物がヒトへの投与に適しているためには、油相は代謝可能なすなわち生分解性の油を含む必要がある。油は、受容者に対して毒性がなく代謝によって変換が可能なあらゆる植物油、魚油、動物油または合成油とすることができる。木の実、種子、および穀粒は植物油の一般的な原料である。合成油もまた適している。したがって、本発明の水中油型エマルションは代謝可能な油を含み、特定の実施形態としては本発明の水中油型エマルションはスクアレンを含む例えば約4から6vv。油相は1またはそれ以上の代謝可能な油を含む事ができる。特定の実施形態として、油相はスクアレンまたはスクアラン、特にスクアレンを含む。本発明の更なる実施形態として、油相はトコールを含み、本発明の特定の実施形態として、油相はαトコフェロールを含む。本発明の更なる実施形態として、油相はスクアレンおよびαトコフェロールを含む。油相は更に界面活性剤を含む事ができる。適した界面活性剤は当業者によく知られており、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80、ソルビタントリオレアートSPAN85、ホスファチジルコリンレシチン、ポリオキシエチレン12セトステアリルエーテルおよびオクトキシノール9TRITONX100を含むが、これに限定されない。特定の実施形態として、油相はソルビタントリオレアートSPAN85を含む。本発明の特定の実施形態として、油相はスクアレンおよびソルビタントリオレアートSPAN85を含む。本発明の更なる実施形態として、更に、b水相を含むタンクに正圧をかけることによって、前記混合装置に水相を導入する工程を含む本明細書に記載の方法を提供する。本発明の方法で使用される水相は水、例えば、注射用水WFIであってもよい。しかしながら、好ましくは本発明の水相は緩衝液を含む。適した緩衝液は当業者によく知られており、リン酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、トリス緩衝液、コハク酸塩緩衝液、マレイン酸塩緩衝液またはホウ酸塩緩衝液を含むが、これに限定されない。特定の実施形態として、緩衝液は、リン酸塩緩衝食塩水PBS、改変PBSPBSmodおよびクエン酸塩緩衝液のグループから選択される。特定の実施形態として、水相は、油相と混合されたときに実質的に等張の水中油型エマルションを提供する緩衝液を含む。本発明の特定の実施形態として、水相は本明細書に記載の1またはそれ以上の界面活性剤を含む。本発明の特定の実施形態として、水相は界面活性剤ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80を含む。本発明の特定の実施形態として、工程bの水相および工程aの油相の導入は実質的に同時に行われる。本発明の更なる実施形態として、本明細書に記載の水相および油相は約90:10または約95:5または約975:25または約9875:125パーセントvvの比率で導入される。本明細書で使用する用語混合装置は、エマルションを形成するのに油相および水相を混合するために適した装置を意味する。本発明の特定の実施形態として、混合装置は高せん断混合装置である。適した高せん断混合装置は当業者によって知られており、高速羽根ホモジナイザー、インラインホモジナイザー、コロイドミルまたはソノレーターを含むが、これに限定されない。本発明の特定の実施形態において、混合装置は高圧ホモジナイザーである。適した高圧ホモジナイザーは当業者によって知られており、固定形状マイクロフリューダイザーまたは可変式構造高圧ホモジナイザーを含むが、これに限定されない。本発明の更なる実施形態として、更に工程c水中油型エマルションを形成するために油相および水相を混合する工程を含む、本明細書に記載の方法を提供する。工程cの混合の後の水中油型エマルションは、例えば高せん断力混合装置で混合した場合は、粗い水中油型エマルションであり得る。例えば減菌ろ過に適するように水中油型エマルションの油滴サイズを減少させるためには、工程cからのエマルションを更に例えば高圧ホモジナイザーで処理することができる。したがって、本発明の更なる実施形態として、更に工程dサブミクロン水中油型エマルションを形成するために工程cの水中油型エマルションを高圧均質化する工程を含む、本明細書に記載の方法を提供する。熟練者はエマルションを高圧ホモジナイザーに通す回数を変更することで、望ましい油滴サイズを達成する事ができ、油滴サイズはそれぞれのサイクルを経ることで減少する。したがって、本発明の1つの実施形態として、エマルションを1、2、3、4、5、6、7、8またはそれ以上の回数高圧均質化する工程f、本明細書に記載の方法を提供する。本発明の更なる実施形態として、高圧均質化は約10000から約20000、約12000から約18000、約14000から約16000または約15000±1000psiの圧力で行われる。高圧均質化の間、水中油型エマルションの温度は典型的に上昇するため、本発明の1つの実施形態として、水中油型エマルションは1回またはそれ以上の回数の後、しかし少なくともエマルションを高圧均質化した最後の回の後には、約15°C~約30°C、約16°C~約29°C、約17°C~約28°C、約16°C~約27°Cまたは約16°C~約28°Cに冷却される。更なる実施形態として、本発明の方法は、e水中油型エマルションをプレろ過し、f工程eにおいてろ過された水中油型エマルションを減菌グレードフィルターに通してろ過する、工程を含む。減菌グレードフィルターは、1cm2の有効ろ過面積当たり1×107以上の誘発レベルの微生物により誘発した後に無菌溶出液を生成するフィルターを意味する。減菌グレードフィルターは本発明の分野の当業者によく知られており、約02μmの孔サイズを持っており、約022μmの孔サイズをもつフィルターを含む。プレフィルターすなわち工程eで使用されるフィルターで使用されるフィルターは減菌グレードフィルターの孔サイズすなわち約02μmから約2μmの孔サイズまでの範囲の孔を持つことができる。特定の実施形態として、プレフィルターの孔サイズは減菌グレードフィルターの孔のサイズから約1μmのサイズの範囲である。例えば、工程eで使用されるフィルターの孔のサイズは、約2μm、約25μm、約1μm、約09μm、約08μm、約09μm、約07μm、約06μm、約05μm、045μm、または減菌グレード例えば約02μm、例えば022μmである。フィルターの膜は当業者によって知られている適した材料なら何からでも作製する事ができ、例えば、アセチルセルロース、ポリエーテルスルホンPES、ポリビニリデンフルオリドPVDF、ポリテトラフルオロエチレンPTFEがあるが、これに限定されない。本発明の特定の実施形態として、本発明の1つのまたはそれ以上のまたは全てのフィルター膜はポリエーテルスルホン、例えば親水性ポリエーテルスルホンを含む。本発明の実施形態として、サブミクロン水中油型エマルションは、約2から約15、約4から約12、約5から約10、約4から約6、約8から約12、例えば約5または約10vvの油を含む。油相を膜ポンプのような手段により導入して製造された水中油型エマルションと比較して、本発明の方法では、より小さい油滴の水中油型エマルションが生成し、多分散性は減少し、およびまたは水中油型エマルションはより容易にろ過される。したがって、本発明は本明細書に記載の方法により製造される水中油型エマルションを提供する。本発明の水中油型エマルションはアジュバントとして有用であり得、免疫原性組成物を製造するために1以上の抗原と結合する事ができる。したがって、本発明は本明細書に記載の方法によって製造された水中油型エマルションおよび抗原を含む免疫原性組成物を提供する。本発明の更なる実施形態として、i本明細書に記載の方法により製造された水中油型エマルション、およびii抗原を含むキットを提供する。本発明の免疫原性組成物またはキットでの使用に適した抗原はインフルエンザウイルス由来の抗原を含むが、これに限定されない。特に、インフルエンザ抗原はサブユニットまたはスプリットインフルエンザウイルスである。インフルエンザ抗原は、卵由来または特に細胞培養由来のどちらかである。本発明の水中油型エマルションはまたトコールを含む事ができる。トコールは当業者によってよく知られており、EP0382271に記載されている。特に、トコールはαトコフェロールまたはその誘導体であり、例えばアルファトコフェロールコハク酸エステルビタミンEコハク酸エステルとしても知られているがある。本発明の特定の実施形態として、スクアレン例えば約5vvおよびαトコフェロール例えば約5vvを含む本発明の水中油型エマルションを提供する。本発明の水中油型エマルションは1またはそれ以上の界面活性剤を含む。適した界面活性剤は当業者によく知られており、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80、ソルビタントリオレアートSPAN85、ホスファチジルコリンレシチン、ポリオキシエチレン12セトステアリルエーテルおよびオクトキシノール9TRITONX100を含むが、これに限定されない。本発明の特定の実施形態として、水中油型エマルションはポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80を含む。更なる実施形態として、本発明の水中油型エマルションはポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80および更に別の活性剤、特にソルビタントリオレアートSPAN85を含む。本発明の特定の実施形態として、水中油型エマルションは代謝可能な油例えばスクアレン、トコール例えばαトコフェロールおよび界面活性剤例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80を含む。本発明の更なる実施形態として、本発明の水中油型エマルションは代謝可能な油例えばスクアレン、界面活性剤例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80、および場合により第2の界面活性剤例えばソルビタントリオレアートSPAN85を含む。本発明の更なる実施形態として、本発明の水中油型エマルションは代謝可能な油例えばスクアレン、非イオン性親水性ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤例えばポリオキシエチレン12セトステアリルエーテルおよび非イオン性疎水性界面活性剤例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTWEEN80、POLYSORBATE80またはソルビタントリオレアートSPAN85を含む。本明細書に記載の水中油型エマルションおよび免疫原性組成物は、医療における使用、特に病気の予防およびまたは治療に適している。したがって、医療において使用するための、本明細書に記載のいずれかの方法によって製造された水中油型エマルションまたは本明細書に記載の免疫原性組成物を提供する。更なる実施形態として、哺乳類、特に人の病気の予防およびまたは治療に使用するための、本明細書に記載のいずれかの方法によって製造された水中油型エマルションまたは本明細書に記載の免疫原性組成物を提供する。更なる実施形態として、哺乳類、特に人の病気の予防およびまたは治療のための薬剤の製造における本明細書に記載のいずれかの方法によって製造された水中油型エマルションまたは本明細書に記載の免疫原性組成物の使用を提供する。更なる実施形態として、本明細書に記載のいずれかの方法によって製造された水中油型エマルションまたは本明細書に記載の免疫原性組成物を哺乳類、特に人に投与する工程を含む治療方法を提供する。本発明のワクチン組成物に関する本明細書の実施形態はまた、本発明の免疫原性組成物に関する実施形態に適用可能であり、逆もまた同じである。本明細書の用語含むは、発明者により場合によりあらゆる場合において用語からなるに代用可能であると意図されている。数値xに関する用語約は、x±5または10を意味する。方法水相を、注射用水、リン酸塩緩衝食塩水およびTweenを混合することでタンク2に準備した。油相を、トコフェロールおよびスクアレンを混合することでタンク1に準備した。両相を均質性が得られるまで撹拌した。トコフェロールの酸化を避ける為に装置全体に窒素を流した。高圧ホモジナイザーには膜ポンプを使用して送り込んだ。両相を所要の流量割合で一緒に送り込んだ。初めは両相を高せん断ホモジナイザーに通し、そこで粗いエマルションを得た。さらに、高せん断ホモジナイザーに続いて、製造品を高圧ホモジナイザーに入れ、細かいエマルションを得た。混合装置の出口において、製造品をタンク3初回パスに回収した。タンク2およびタンク1が空になってから、タンク3からのエマルションを混合装置の注入口に向け、2回目のパスを行った。2回目のパスの終わりには、製造品をタンク2に回収した。タンク3が空になってから、タンク2からのエマルションを混合装置の注入口に向け、3回目のパスを行った。エマルションをタンク3に回収し、ろ過をするまで窒素雰囲気下で貯蔵した。供給方法の影響を評価する為に、方法をまた、装置全体に正の供給圧力をかけて行った。このようにする為に、タンクを窒素または空気で加圧した。結果サイズは、光の拡散に基づく方法である動的光散乱法によって測定した。Z平均直径は装置全体に正圧をかけた方法と比較して供給に膜ポンプを使用した方法の方がより小さかった。この違いは方法の初めパス1では大きかったが、方法の最後ろ過した製造品では減少する傾向であった。加えて、システム全体が正圧下の状態で供給を行ったとき、サイズの変動性はまた、パスを加えると減少した。これは膜ポンプを使用した場合には起こらない。図1を参照。多分散性は供給方法が何であれ同じ範囲であったが、再現性は装置全体に正圧をかけて行った方法の方がずっと良好であった。図2を参照。ろ過性は増加し、最も重要なことは、再現性が、供給が膜ポンプで行われた方法と比較して装置全体に正圧をかけて行った方法の方が改善されていた。図3を参照。結論装置全体に正圧をかけることによる混合装置への供給は、より小さな液滴サイズおよび改善されたろ過性を得ることを可能とする。さらに、ZAD、PDIおよびろ過性で得られた標準偏差が供給を膜ポンプにより行った方法と比較してより小さかったことから、装置全体に正圧をかけることによる混合装置への供給はまた、方法の再現性も改善している。