"トリコデルマTrichoderma宿主細胞であって、トリコデルマTrichoderma宿主細胞による熱安定性エンドグルカナーゼVEGVの生成を実質的に低減又は防止する、修飾と、プロモーターに操作可能に連結した所望のポリペプチドをコードする、所望の外因性核酸分子とを含み、少なくとも1つの内因性ポリペプチド及び前記所望のポリペプチドがそれぞれ、前記トリコデルマTrichoderma宿主細胞によってインビボで発現される、トリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記修飾が、EGVの発現に関与するヌクレオチドにおける1つ以上の欠失又は破壊を含む、請求項1に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記破壊又は欠失が、EGV発現をコードする遺伝子の、EGV発現のためのコーディング領域の、又はEGV発現のための前記プロモーター若しくは調節エレメントの、欠失又は破壊を含む、請求項2に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記欠失又は破壊が、egl5の欠失又は破壊を含む、請求項3に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記欠失又は破壊が、egl5の破壊を含む、請求項4に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記欠失又は破壊が、egl5の欠失を含む、請求項4に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。egl5が、相同組み換えによって欠失される、請求項6に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記内因性ポリペプチドが、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、又はこれらの組合せを含む、請求項1に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。熱不安定性酵素が、セルラーゼ又はヘミセルラーゼを含む、請求項8に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記トリコデルマTrichodermaが、トリコデルマリーゼイTreeseiである、請求項1に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記所望のポリペプチドが、ヒドロホビンIIである、請求項1に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記所望のポリペプチドが、ヒドロホビンIIである、請求項10に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記所望のポリペプチドが、熱安定性である、請求項1に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。前記所望のポリペプチドが、感熱性又は熱不安定性である、請求項1に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。請求項1~12のいずれか一項に記載の修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞内で、熱安定性である前記所望のポリペプチドを作製するための方法であって、当該方法は、前記修飾された宿主細胞が前記所望の熱安定性ポリペプチド及び前記内因性ポリペプチドを生成するのに適した培地内で、前記修飾された宿主細胞をインキュベートし、これによって、前記内因性ポリペプチド及び前記所望の熱安定性ポリペプチドのそれぞれが、前記修飾された宿主細胞によって発現されることと、前記所望の熱安定性ポリペプチド及び前記内因性ポリペプチドを昇温状態にさらすこととを含み、前記昇温状態が、前記内因性ポリペプチドを実質的に不活性化するのに十分であるが、前記所望の熱安定性ポリペプチド及び存在するならばEGVを不活性化するには不十分であり、これによって前記所望の熱安定性ポリペプチドが、前記内因性ポリペプチドからの活性の実質的に非存在下で、活性形態又は機能的形態で生成される、方法。前記所望のポリペプチド及び前記内因性ポリペプチドを前記昇温状態にさらす工程の前に、前記修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞からタンパク質混合物を単離することを更に含む、請求項15に記載の方法。前記修飾された宿主細胞が、エキソセロビオヒドロラーゼ、エンドグルカナーゼ、β-グルコシダーゼ、又はこれらの組合せを発現する、請求項15に記載の方法。前記所望の熱安定性ポリペプチドは、可逆的な熱変性が可能である、請求項15に記載の方法。前記昇温状態が、約90°C以上の温度である、請求項15に記載の方法。前記昇温状態への暴露が、約5分以上の時間の間である、請求項15に記載の方法。前記昇温状態への暴露が、約60分以上の時間の間である、請求項15に記載の方法。請求項1~10のいずれか一項に記載の修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞によって発現した、感熱性又は熱不安定性である前記所望のポリペプチドの活性を制御するための方法であって、当該方法は、前記所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチド及び前記内因性ポリペプチドを昇温状態にさらすことを含み、前記昇温状態が、前記内因性ポリペプチド及び前記感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを不活性化するのに十分である、方法。前記内因性ポリペプチドが、セルラーゼである、請求項22に記載の方法。前記所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを前記昇温状態にさらす前に、前記所望のポリペプチドを、前記所望のポリペプチドが作用する化合物と接触させることを更に含む、請求項22に記載の方法。前記所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを前記昇温状態にさらす前に、前記所望のポリペプチドを、前記セルラーゼ及び前記所望のポリペプチドが作用する1つ以上の化合物と接触させることを更に含む、請求項23に記載の方法。糸状菌宿主細胞から得られた又は得ることができ、かつヒドロホビンIIを含む発酵ブロス組成物であって、当該発酵ブロスがセルラーゼ活性及び/又はマンナナーゼ活性を実質的に含まず、かつ前記ヒドロホビンIIが請求項11又は12のいずれか一項に記載の修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞内で生成される、発酵ブロス組成物。請求項1~10のいずれか一項に記載の修飾されたトリコデルマTrichodermaから得られた又は得ることができる、発酵ブロス組成物。請求項27に記載の発酵ブロスにおける前記所望のポリペプチド活性を制御する方法であって、前記所望のポリペプチドが感熱性又は熱不安定性であり、当該方法は、前記発酵ブロスを前記内因性ポリペプチド及び前記感熱性又は熱不安定性のポリペプチドを不活性化するのに十分な昇温状態に曝すことを含む、方法。前記内因性ポリペプチドが、セルラーゼである、請求項28に記載の方法。前記発酵ブロスを前記昇温状態に曝す前に、前記発酵ブロスを前記所望のポリペプチドが作用する所望の化合物と接触させることを更に含む、請求項28に記載の方法。前記発酵ブロスを前記昇温状態に曝す前に、前記発酵ブロスを、前記セルラーゼ及び前記所望のポリペプチドが作用する1つ以上の化合物と接触させることを更に含む、請求項29に記載の方法。請求項1~10のいずれか一項に記載の修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞から得られる組成物内に存在するセルラーゼの活性を制御するための方法であって、前記組成物がEGV以外の少なくとも1つのセルラーゼ酵素を含み、当該方法は前記組成物を前記所望のポリペプチドを不活性化するのに十分な昇温状態に曝すことを含み、かつ前記組成物を昇温状態に曝した後では、前記組成物はセルラーゼ活性が実質的に認められない、方法。前記所望のポリペプチドが、感熱性又は熱不安定性である、請求項32に記載の方法。前記所望のポリペプチドが、耐熱性又は熱安定性である、請求項32に記載の方法。前記組成物を昇温状態に曝すことが、食品又は飲料において行われる、請求項32に記載の方法。前記昇温状態が、約100°C未満である、請求項32に記載の方法。前記修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞から得られる前記組成物が、ヒドロホビンを含む発酵ブロスである、請求項32に記載の方法。本発明は、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiにおいて見出される熱安定性セルラーゼ酵素に関する組成物、例えば、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIなどの所望のタンパク質を発現するように遺伝子操作された細胞を含む、修飾された細胞、及び方法を提供する。一態様では、本発明は、熱安定性EGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止する修飾を含むか、又は本質的にそれからなるトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞を提供する。更なる態様では、本発明は、熱安定性EGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止する修飾を含むか、又は本質的にそれからなる、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞を提供し、修飾は、本質的に、EGVの発現に関与するヌクレオチドにおける1つ以上の欠失又は破壊、例えば、このセルラーゼの発現をコードする遺伝子若しくはそのためのコード領域、又はそのためのプロモーター若しくは調節エレメントの欠失又は破壊からなる。一実施形態において、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、熱安定性EGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止する修飾を含むか、又は本質的にそれからなり、修飾は、egl5の欠失若しくは破壊を含むか、又は本質的にそれからなる。幾つかの実施形態では、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、破壊されたegl5を含むか、又は本質的にそれからなる。幾つかの実施形態では、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、欠失したegl5を含むか、又は本質的にそれからなる。特定の実施形態では、egl5は、相同組換えによって欠失される。それはまた、相同組換えによって破壊され得る。幾つかの実施形態では、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、機能的egl5を含む、親宿主細胞を修飾することによって生成される。幾つかの実施形態では、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、1つ以上の内因性機能的遺伝子、若しくは熱不安定性酵素をコードすることによって熱不安定性酵素を発現させる核酸分子を含むか、又は本質的にそれらからなり、例えば、熱不安定性酵素は、セルラーゼcellulase、ヘミセルラーゼhemicellulase、プロテアーゼprotease、又はこれらの酵素のいずれか2つ若しくは3つすべてであり得る。幾つかの実施形態では、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiは、エキソセロビオヒドロラーゼexocellobiohydrolase、エンドグルカナーゼendoglucanase、β-グルコシダーゼβglucosidase、又はこれらのタンパク質のいずれか2つ若しくは3つすべてであり得る、1つ以上の追加のタンパク質を発現させることができる。幾つかの実施形態では、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、所望の機能的遺伝子、又は所望のタンパク質をコードし発現を可能にするヌクレオチドを更に含む。幾つかの実施形態では、所望の遺伝子がコードするか、又は所望のタンパク質が、熱安定性ポリペプチド、例えば、ヒドロホビンIIなどのヒドロホビンである。別の態様では、本発明は、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞において、所望の熱安定性タンパク質を作製するための方法を提供し、所望のタンパク質がインビボで発現される条件下で、所望の熱安定性タンパク質をコードする核酸分子をトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞に導入する工程を含み、例えば、所望の核酸分子は、発現のプロモーター又は調節エレメントに動作可能に結合され、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、熱安定性EGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止する修飾を含むか、又は本質的にそれからなり、その修飾は、EGVの発現に関与するヌクレオチドにおける1つ以上の欠失又は破壊、例えば、このセルラーゼの発現をコードする遺伝子、若しくはそのためのコード領域、又はそのためのプロモーター若しくは調節エレメントから本質的になり、その修飾は、egl5の欠失又は破壊を含むか、又は本質的にそれからなる。所望の熱安定性タンパク質は、ヒドロホビン、例えば、ヒドロホビンIIであり得る。トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiは、1つ以上の追加の機能的タンパク質がインビボで発現される条件下で、追加の機能的タンパク質をコードする1つ以上の遺伝子、又は追加の機能的タンパク質をコードする1つ以上の核酸分子を更に含むことができ、例えば、1つ以上の核酸分子は、発現のプロモーター及び/又は調節エレメントに動作可能に結合される。方法は、所望のタンパク質及び発現された追加の機能的タンパク質を発現産物に含む細胞の発現産物を、実質的に追加のタンパク質を不活性化するのに十分な昇温状態にさらす工程を更に含むことができ、昇温状態は、所望の熱安定性タンパク質を不活性化するのに不十分であって、EGVセルラーゼを不活性化するのに不十分であり、所望の熱安定性タンパク質は、追加のタンパク質からの活性の実質的に非存在下で、活性形態又は機能的形態で生成される。別の態様では、発明は、所望の熱安定性タンパク質、例えば、ヒドロホビンIIなどのヒドロホビンを作製するための方法であって、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞から得られる発現産物を昇温状態にさらす工程を含む、方法を提供し、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞は、熱安定性EGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止する修飾を含むか、又は本質的にそれからなり、修飾は、本質的に、EGVの発現に関与するヌクレオチドにおける1つ以上の欠失又は破壊、例えば、このセルラーゼの発現をコードする遺伝子若しくはそのためのコード領域、又はそのためのプロモーター若しくは調節エレメントの欠失又は破壊からなり、例えば、修飾は、egl5の欠失若しくは破壊を含むか、又は本質的にそれからなり、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiは、1つ以上の追加の機能的タンパク質がインビボで発現される条件下で、追加の機能的タンパク質をコードする1つ以上の遺伝子、又は追加の機能的タンパク質をコードする1つ以上の核酸分子を更に含むことができ、例えば、1つ以上の核酸分子は、発現のプロモーター及び/又は調節エレメントに動作可能に結合され、昇温状態は、1つ以上の追加の機能的タンパク質を不活性化するのに十分であるが、存在するならば所望の熱安定性ポリペプチド又はEGVを不活性化するには不十分であり、これによって所望の熱安定性ポリペプチドを、追加の機能的タンパク質からの活性の非存在下で、活性形態又は機能的形態で生成する。前述の方法は、修飾されたトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞が、所望のタンパク質、及び存在するならば追加の機能的タンパク質を生成するのに適した培地内で、修飾されたトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞をインキュベートする工程を更に含むことができる。前述の方法は、所望のタンパク質、及び存在するならば追加の機能的タンパク質を昇温状態にさらす工程の前に、発現産物又はタンパク質混合物を修飾されたトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞から単離する工程を含むこともできる。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、egl5は、そうでなければ自然にegl5を含む、宿主細胞内で破壊される。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、egl5は、そうでなければ自然にegl5を含む、宿主細胞内で欠失される。したがって、どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、破壊又は欠失されたegl5は内因性である。したがって、方法は、egl5を欠失若しくは破壊するか、ないしは別の方法で熱安定性EGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止するように、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiを修飾する工程を更に含むことができ、その修飾は、EGVの発現に関与するヌクレオチドにおける1つ以上の欠失又は破壊、例えば、このセルラーゼの発現をコードする遺伝子若しくはそのためのコード領域、又はそのためのプロモーター若しくは調節エレメントの欠失又は破壊から本質的になる。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、egl5は、相同組換えによって欠失される。それはまた、相同組換えによって破壊され得る。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、1つ以上の追加のタンパク質は、熱不安定性タンパク質である。幾つかの実施形態では、1つ以上の追加のタンパク質は、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、又はこれらの酵素のいずれか2つ若しくは3つすべてであり得る。幾つかの実施形態では、1つ以上の追加のタンパク質は、エキソセロビオヒドロラーゼ、エンドグルカナーゼ、β-グルコシダーゼ、又はこれらのタンパク質のいずれか2つ若しくは3つすべてであり得る。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、所望のタンパク質は、可逆的に熱変性可能性であることに基づいて、熱安定性である。どの方法の場合でも、特定の実施形態では、所望のタンパク質は、ヒドロホビン、例えば、ヒドロホビンIIである。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、昇温状態は、90°C以上の温度である。有利な実施形態において、昇温状態は、約100°C未満であってよい。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、昇温状態への暴露は、5分以上の時間の間である。どの方法の場合でも、幾つかの実施形態では、昇温状態への暴露は、60分以上の時間の間である。なおも更なる態様では、これらの方法のいずれかによって生成される熱安定性又は可逆的に熱変性可能性のタンパク質が提供される。関連態様では、発明は、糸状菌宿主細胞、例えば、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiから得られ、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIを含む発酵ブロス組成物を提供し、その発酵ブロスは、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼ活性を実質的に含まない。例えば、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼ活性を実質的に含まない発酵ブロスは、前述の方法のいずれかから得られたか、又は得ることができる。したがって、幾つかの実施形態では、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIは、熱不安定性セルラーゼcellulase及び/又はマンナナーゼmannanaseの存在下で生成され、昇温状態にさらされてセルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドを不活性化する。幾つかの実施形態では、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIは、セルラーゼcellulase及び/若しくはマンナナーゼmannanaseの生成を実質的に低減若しくは防止する修飾を含むか、又は本質的にそれからなるトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiなどの宿主細胞において生成され、その修飾は、セルラーゼ及び/若しくはマンナナーゼの発現に関与するヌクレオチドにおける1つ以上の欠失又は破壊から、例えば、セルラーゼ及び/若しくはマンナナーゼの発現をコードする遺伝子、若しくはそのためのコード領域、又はそのためのプロモーター若しくは調節エレメントの欠失又は破壊から本質的になり、これによって、ヒドロホビンを生成及び含有することから得られる発酵ブロスは、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼ活性を実質的に含まない。幾つかの実施形態では、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIは、宿主細胞がセルラーゼ及び/若しくはマンナナーゼをコードする遺伝子又は核酸分子を欠失する修飾を含むか、又は本質的にそれからなるトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiなどの宿主細胞において生成され、これによって、ヒドロホビンを生成及び含有することから得られる発酵ブロスは、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼ活性を実質的に含まない。発酵ブロスの実施形態では、発酵ブロスは濃縮されてよく、セルラーゼcellulase及び/又はマンナナーゼmannanase以外の任意の数の宿主細胞タンパク質を更に含んでもよい。本発明の実施形態のいずれかでは、所望のポリペプチドは、熱安定性、感熱性、又は熱不安定性であり得る。本発明はまた、本発明の修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞によって発現される所望のポリペプチドの活性を制御することに関し、所望のポリペプチドは、感熱性又は熱不安定性であり、該方法は、所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチド及び内因性ポリペプチドを昇温状態にさらす工程を含んでよく、その昇温状態は、内因性ポリペプチド及び感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを不活性化するのに十分であり得る。有利な実施形態では、内因性ポリペプチドは、セルラーゼであってよい。方法は、所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを昇温状態にさらす前に、所望のポリペプチドを、所望のポリペプチドが作用する化合物と接触させる工程を更に含み得る。方法は、所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを昇温状態にさらす前に、所望のポリペプチドを、セルラーゼ及び所望のポリペプチドが作用する1つ以上の化合物と接触させる工程を更に含んでもよい。本発明の方法はまた、本発明の発酵ブロスにおける所望のポリペプチドの活性を制御するための方法に関し、その所望のポリペプチドは、感熱性又は熱不安定性であってよく、その方法は、発酵ブロスを内因性ポリペプチド及び感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを不活性化するのに十分な昇温状態に曝す工程を含み得る。有利な実施形態では、内因性ポリペプチドは、セルラーゼであってよい。方法は、発酵ブロスを昇温状態に曝す前に、発酵ブロスを、所望のポリペプチドが作用する所望の化合物と接触させる工程を更に含み得る。方法は、発酵ブロスを昇温状態に曝す前に、発酵ブロスを、セルラーゼ及び所望のポリペプチドが作用する1つ以上の化合物と接触させる工程を更に含んでもよい。本発明はまた、修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞から得られる組成物内に存在するセルラーゼの活性を制御するための方法であって、その組成物がEGV以外の少なくとも1つのセルラーゼ酵素を含み、その方法は、組成物を所望のポリペプチドを不活性化するのに十分な昇温状態に曝す工程を含んでよく、組成物を昇温状態にさらす工程の後の組成物は、セルラーゼ活性を実質的に含まない。所望のポリペプチドは、感熱性又は熱不安定性であってよい。別の実施形態では、ポリペプチドは耐熱性又は熱安定性であってよい。組成物を昇温状態に曝す工程は、食品又は飲料において行われ得る。別の実施形態では、昇温状態は約100°C未満であってよい。別の実施形態では、修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞から得られる組成物は、ヒドロホビンを含む発酵ブロスであり得る。したがって、出願人が本権利を所有し、それによって任意の以前に既知の産物、プロセス、又は方法の権利否認を告知するように、任意の以前に既知の産物、その産物を作製するプロセス、又はその産物を使用する方法を本発明に包含しないことは、本発明の目的である。本発明は、出願人が本権利を所有し、それによって任意の前述の産物、その産物を作製するプロセス、又はその産物を使用する方法の権利否認を告知するように、USPTO35USC§112、第1パラグラフ又はEPOEPC条項83の文書記述及び実施可能要件を満たさない、任意の産物、その産物を作製するプロセス、又はその産物を使用する方法を本発明の範囲内に包含することを意図しないことに更に注意する。本開示において、特に請求項及び/又はパラグラフにおいて、含むcomprises、comprised、comprising、及び同様の語などの用語は、米国特許法においてそれに属する意味を有し得、例えば、それらは含むincludes、included、including、及び同様の語などの用語を意味し得ること、並びに本質的にそれからなるconsistingessentiallyof及びconsistessentiallyofなどの用語は、米国特許法においてそれらに帰する意味を有し、例えば、それらは明示的に列挙されない要素を許可するが、先行技術において見出されるか、又は発明の基本的特徴若しくは新規特徴に影響する要素を除外することに注意する。用語本質的にそれからなるconsistsessentiallyof及びconsistingessentiallyofは、EGVの発現に関与するヌクレオチドの欠失又は破壊、例えば、このセルラーゼをコードする遺伝子、若しくはそのためのコード領域の破壊又は欠失、例えば、egl5に関する欠失又は破壊が、熱安定性の外因性ポリペプチド、例えば、ヒドロホビンヒドロホビンIIなどの発現及び/又は取得を支援することが予想外に見出されたためであって、請求項が、先行技術単独で、又は任意の組合せで開示され又は示唆される実施形態によって読み取られことを避けるようにするためのものである。これら及び他の実施形態は、開示されるか、又は添付の図面を含む以下の詳細な説明から明らかであり、それらによって包含される。本組成物及び方法を詳細に説明する前に、以下の用語が明確にするために定義される。定義されていない用語は、関連技術において使用されるように、それらの通常の意味に従うべきである。本明細書で使用するとき、セルラーゼcellulaseは、β-1,4-グルカン又はβ-D-グルコシド結合を加水分解して、セルロースからグルコース、セロビオース、セロオリゴ糖等の形成をもたらす酵素である。セルラーゼcellulaseは、例えば、エンドグルカナーゼendoglucanase、エキソグルカナーゼexoglucanase、β-グルコシダーゼβglucosidase等を含む。本明細書で使用するとき、エンドグルカナーゼEGは、主にセルロース繊維の非晶質部分に作用し、低結晶化度の領域において、内部β-1,4-グルコシド結合を加水分解するセルラーゼcellulaseである。本明細書で使用するとき、用語ヘミセルラーゼhemicellulase及びキシラナーゼxylanaseは、互換的に使用され、5炭糖を含む多糖類において、グリコシド結合を加水分解することができる酵素を一般的に意味する。そのような酵素は、例えば、マンナナーゼmannanase、アラビナナーゼarabinanase、グルクロニダーゼglucuronidase、アセチルキシランエステラーゼacetylxylanesterase、アラビノフラノシダーゼarabinofuranosidase、キシロシダーゼxylosidase等を含む。本明細書において使用するところのトリコデルマリーゼイ又はT.reeseiは、子嚢菌門phylumAscomycotaの糸状菌を指す。この有機体は、以前はハイポクレアジェコリナHypocreajecorinaとして知られていた。本明細書において使用するところのトリコデルマリーゼイTreeseiEGVセルラーゼという表現は、配列番号:33のアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は関連ポリペプチドを指す。関連ポリペプチドは、配列番号:33と少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約91、少なくとも約92、少なくとも約93、少なくとも約94、少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、又は更には少なくとも約99の、若しくはそれ以上のアミノ酸配列同一性を有し、セルロース基質でのエンドグルカナーゼ活性を有し、本明細書に記載のアッセイを使用して熱安定性である。EGVは、本明細書においてEG5と称される場合がある。本明細書で使用するとき、トリコデルマリーゼイTreeseiegl5遺伝子又はegl5という表現は、本明細書に記載の通り、EGVセルラーゼをコードする核酸、又は関連ポリペプチドを指す。代表的なegl5のヌクレオチド配列は、配列番号:32として示される。EGVのアミノ酸配列は、配列番号:33に示される。本明細書で使用するとき、用語熱安定性は、ポリペプチドに関して、ポリペプチドが、事前に選択した時間の間、事前に選択した昇温状態に曝された後に、生物活性を保持する能力を指す。生物活性は、ポリペプチドに特有の酵素活性enymaticactivity、結合活性、界面活性特性、又は任意の他の活性若しくは特性であり得る。ポリペプチドは、事前に選択した時間の間、事前に選択した昇温状態に暴露された後に、その元の活性の少なくとも半分を維持するならば熱安定性であると見なされる。広義には、事前に選択した温度及び時間は、EGV以外のトリコデルマリーゼイTreeseiを実質的に不活性化するために必要な温度及び時間である。これらの条件は、egl5欠失を含むか、又はそれから本質的になるトリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞におけるセルラーゼ活性を分析することによって容易に確立され得る。場合によっては、タンパク質が、少なくとも約70°C、少なくとも約75°C、少なくとも約80°C、少なくとも約85°C、少なくとも約90°C、又は更には少なくとも約95°Cの温度に、少なくとも約3分、少なくとも約5分、少なくとも約10分、少なくとも約15分、少なくとも約20分、少なくとも約30分、少なくとも約45分、又は更には少なくとも約60分の時間の間暴露された後に、その生物活性の少なくとも半分すなわち、少なくとも50を保持するならば、熱安定性であると見なされる。一実施例では、事前に選択した温度は、約90°C以上であり、事前に選択した時間は、約5分以上である。別の実施例では、事前に選択した温度は、約90°C以上であり、事前に選択した時間は、約60分以上である。熱安定性ポリペプチドは、それらの生物活性の少なくとも半分すなわち、少なくとも50が、記載の通り暴露後に回復されるように、昇温状態で可逆的に変性されるポリペプチドを含む。本明細書で使用するとき、用語非耐熱性、非熱安定性、及び熱不安定性とは、ポリペプチドに関して、互換的に使用され、ポリペプチドが、事前に選択した時間の間、事前に選択した温度に曝された後に、生物活性を保持できないことを指す。生物活性は、ポリペプチドに特有の酵素活性enymaticactivity、結合活性、界面活性特性、又は任意の他の活性若しくは特性であり得る。ポリペプチドは、事前に選択した時間の間、事前に選択した温度に暴露された後、その元の活性の少なくとも90、少なくとも95、少なくとも97、少なくとも99、又は更には本質的に100を喪失するならば、非耐熱性であると見なされる。そのような温度及び時間は、直前に及び本記述の他の箇所で説明される。非耐熱性ポリペプチドの数又は型に関する制約はない。例には、これらに限定されないが、セルラーゼcellulase、ヘミセルラーゼhemicellulase、プロテアーゼprotease、リパーゼlipase、アミラーゼamylase、エステラーゼesterase、ペルヒドロラーゼperhydrolase、フィターゼphytase、ラッカーゼlaccase、及び他の市販の関連酵素、結合タンパク質、及び構造タンパク質が挙げられる。本明細書で使用するとき、所望のタンパク質という表現は、トリコデルマリーゼイTreeseiにおいて発現されることが望ましい、EGV以外のポリペプチドを指す。そのようなタンパク質は、酵素、結合タンパク質、界面活性タンパク質、構造タンパク質等であってよい。所望のタンパク質は、熱安定性又は熱不安定性であり得る。定められている場合、熱安定性である。本明細書で使用するとき、活性を実質的に含まないという表現又は同様の表現は、特定の活性が、ポリペプチドの混合物中で検出不可能であるか、又は混合物の意図される目的を干渉しない量で存在するかのいずれかであることを意味する。本明細書で使用するとき、用語ポリペプチド及びタンパク質は互換的に使用され、ペプチド結合によって結合されたアミノ酸残基を含む任意の長さのポリマーを指す。アミノ酸残基について、本明細書では従来の1文字コード又は3文字コードが使用される。ポリマーは直鎖又は分枝鎖であってよく、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断され得る。この用語は、自然に、又は介在によって、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは修飾、例えば、標識成分との共役によって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。例えば、アミノ酸の1つ以上の類似体例えば、非天然アミノ酸などを含むを含有するポリペプチド、並びに当該技術分野において既知の他の修飾物も定義内に含まれる。本明細書で使用するとき、機能的及び/又は構造的に類似するタンパク質は、関連タンパク質であると見なされる。そのようなタンパク質は、異なるジャンル及び/若しくは種の有機体、又は更には異なる群の有機体例えば、細菌及び真菌から生じ得る。関連タンパク質は、一次配列分析によって決定されるか、二次若しくは三次構造分析によって決定されるか、又は免疫学的交差反応性によって決定される、相同体も包含する。本明細書で使用するとき、用語誘導体ポリペプチド/タンパク質は、N末端若しくはC末端のいずれか又は両方への1つ以上のアミノ酸の付加、アミノ酸配列の1つの部位若しくは多数の異なる部位での1つ以上のアミノ酸の置換、タンパク質の一端若しくは両端又はアミノ酸配列の1つ以上の部位での1つ以上のアミノ酸の欠失、及び/又はアミノ酸配列の1つ以上の部位での1つ以上のアミノ酸の挿入によってタンパク質から生じるタンパク質を指す。タンパク質誘導体の調製は、天然のタンパク質をコードするDNA配列、そのDNA配列の好適な宿主への形質転換、及び誘導体タンパク質を形成するための修飾されたDNA配列の発現を修飾することによって達成され得る。関連及び誘導体タンパク質は、変異タンパク質を含む。変異タンパク質は、少数のアミノ酸残基での置換、欠失、及び/又は挿入によって、比較タンパク質/親タンパク質、例えば、野生型タンパク質とは異なる。異なるアミノ酸残基の数は、1つ以上、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、又はそれ以上のアミノ酸残基であり得る。変異タンパク質は、比較タンパク質と少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約91、少なくとも約92、少なくとも約93、少なくとも約94、少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、又は更には少なくとも約99、若しくはそれ以上のアミノ酸配列同一性を共有する。変異タンパク質は、選択したモチーフ、ドメイン、エピトープ、保存領域等においても比較タンパク質とは異なる。本明細書で使用するとき、用語類似配列は、所望のタンパク質すなわち、典型的に所望の原タンパク質と類似する機能、三次構造、及び/又は保存残基を提供するタンパク質内の配列を指す。例えば、α-立体らせん又はβ-シート構造を含むエピトープ領域において、類似配列における置き換えアミノ酸は、好ましくは同一の特定構造を維持する。この用語は、ヌクレオチド配列並びにアミノ酸配列も指す。幾つかの実施形態では、類似配列は、置き換えアミノ酸が、類似する機能又は改善された機能を示す変異酵素を生じるように開発される。幾つかの実施形態では、所望のタンパク質におけるアミノ酸の三次構造及び/又は保存残基は、所望のセグメント若しくは断片に位置するか、又はその付近に位置する。したがって、所望のセグメント又は断片が、α-立体らせん又はβ-シート構造を含む場合、置き換えアミノ酸は、好ましくはその特定の構造を維持する。本明細書で使用するとき、用語相同タンパク質は、比較タンパク質に類似する活性及び/又は構造を有するタンパク質を指す。相同体が必ず進化的に関連することは意図しない。したがって、この用語は、異なる有機体から得られる同一、類似、又は対応する酵素すなわち、構造及び機能に関してを包含することが意図される。幾つかの実施形態では、比較タンパク質に類似する四次、三次、及び/又は一次構造を有する相同体を同定することが望ましい。幾つかの実施形態では、相同タンパク質は、比較タンパク質に類似する免疫学的応答を惹起する。幾つかの実施形態では、相同タンパク質は、所望の活性を有する酵素を生成するように遺伝子操作される。配列間の相同性の程度は、当該技術分野において既知の任意の好適な方法を使用して決定され得る例えば、SmithandWaterman1981Adv.Appl.Math.2:482;NeedlemanandWunsch1970J.Mol.Biol.,48:443;PearsonandLipman1988Proc.Natl.Accad.Sci.USA85:2444;WisconsinGeneticsSoftwarePackageのGAP、BESTFIT、FASTA、及びTFASTAなどのプログラムGeneticsComputerGroup,Madison,WI;及びDevereuxetal.1984NucleicAcidsRes.12:387~395を参照。例えば、PILEUPは、配列相同性レベルを決定する有用なプログラムである。PILEUPは、漸進的、ペアーワイズアラインメントprogressive,pairwisealignmentを用いた群の関連配列から多配列アライメントを作成する。またアラインメントを作るために用いられたクラスター関係を示すツリーtreeをプロットすることもできる。PILEUPは、Feng及びDooittleのプログレッシブアラインメント法の簡略化したものを使用するFengandDoolittle1987J.Mol.Evol.35:351~360。この方法は、Higgins及びSharpにより記載されるものと類似しているHigginsandSharp1989CABIOS5:151~153。有用なPILEUPパラメーターは3.00のデフォルトギャップウエイト、0.10のデフォルトギャップレングスウエイト、及び加重エンドギャップを含む。他の有用なアルゴリズムの例は、AltschulらAltschuletal.1990J.Mol.Biol.215:403~410、及びKarlinら1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873~5787により記述される、BLASTアルゴリズムである。特に有用なBLASTプログラムはWU-BLAST-2プログラムであるAltschuletal.1996Meth.Enzymol.266:460~480を参照。パラメーターW、T、及びXは、アライメントの感度及び速度を決定する。BLASTプログラムは、11のデフォルトとしてワードレングスW、BLOSUM62スコア行列HenikoffandHenikoff1989Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915を参照、50のアラインメントB、10の期待値E10、M’5、N’-4、及び両ストランドの比較を使用する。本明細書で使用するとき、実質的に類似の及び実質的に同一のという表現は、少なくとも2つの核酸又はポリペプチドの文脈において、典型的には、ポリヌクレオチド又はポリペプチドが、比較すなわち、野生型配列と比較して、少なくとも約70同一性、少なくとも約75同一性、少なくとも約80同一性、少なくとも約85同一性、少なくとも約90同一性、少なくとも約91同一性、少なくとも約92同一性、少なくとも約93同一性、少なくとも約94同一性、少なくとも約95同一性、少なくとも約96同一性、少なくとも約97同一性、少なくとも約98同一性、又は更には少なくとも約99同一性、又はそれ以上を有する配列を含む。配列同一性は、標準パラメーターを用いた、BLAST、ALIGN、及びCLUSTALなどの既知のプログラムを使用して決定され得る例えば、Altschul,etal.1990J.Mol.Biol.215:403~410、Henikoffetal.1989Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:10915、Karinetal.1993Proc.Natl.Acad.SciUSA90:5873、及びHigginsetal.1988Gene73:237~244を参照。BLAST解析を実行するためのソフトウェアは、米国国立生物工学情報センターtheNationalCenterforBiotechnologyInformationにより公表されている。またデータベースは、FASTAを使用して検索され得るPearsonetal.1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444~2448。2つのポリペプチドが実質的に同一である一つの印は第一のポリペプチドが第二のポリペプチドと免疫学的に交差反応することである。典型的には、保存アミノ酸置換によって異なるポリペプチドは免疫学的に交差反応する。したがって、例えば、2つのポリペプチドが保存置換のみが異なるポリペプチド場合は実質的に第二ポリペプチドと同一である。2つの核酸配列が実質的に同一である他の印は、2つの分子がお互いに厳格な条件例えば、中程度から高度に厳格な条件の範囲内においてお互いにハイブリッドすることである。本明細書で使用するとき、野生型及び天然の遺伝子又はタンパク質は、自然界に見出されるものである。用語野生型配列及び野生型遺伝子/タンパク質は、本明細書において互換的に使用され、宿主細胞において天然又は自然発生する配列を指す。本明細書で使用するとき、遺伝子の欠失は、宿主細胞のゲノムからのその除去を指す。本明細書で使用するとき、遺伝子の破壊は、広義に、宿主細胞における機能的遺伝子産物例えば、タンパク質の発現を実質的に防止する、任意の遺伝子操作又は化学操作を指す。代表的な破壊の方法は、遺伝子ポリペプチドコード配列を含む、プロモーター、エンハンサー、若しくは別の調節エレメントの任意の部分の完全又は部分的欠失、又はそれらの突然変異生成置換、挿入、欠失、及びこれらの組合せを含むを含み、機能的遺伝子産物の発現を実質的に防止する。本明細書で使用するとき、機能的遺伝子は、細胞成分によって使用され、活性遺伝子産物、典型的にはタンパク質を生成することができる遺伝子である。機能的遺伝子は、細胞成分によって使用されて活性遺伝子産物を生成することができないように修飾されている破壊された遺伝子とは正反対のものである。代表的な機能的遺伝子には、これらに限定されないが、EGV以外のセルラーゼcellulase、ヘミセルラーゼhemicellulase、プロテアーゼprotease、アミラーゼamylase、リパーゼlipase、ペルヒドロラーゼperhydrolase、エステラーゼesterase、ペクチン酸リアーゼpectatelyase、ペクチナーゼpectinase、ラッカーゼlaccase、オキシダーゼoxidase、レダクターゼreductase、アミダーゼamidase、及び他の酵素、構造タンパク質、界面活性タンパク質、結合タンパク質等が挙げられる。本明細書で使用するとき、トリコデルマリーゼイTreeseiは、例えば、本明細書に記載の分析を使用して決定される通り、熱安定性セルラーゼ活性を呈するEGVポリペプチドの生成を防止するように遺伝学的又は化学的に改変されているならば、熱安定性EGVセルラーゼの生成を防止するように修飾されているとされる。そのような修飾には、これらに限定されないが、egl5の欠失、egl5の破壊、コードされたEGVポリペプチドが熱安定性でないようにするegl5の修飾、コードされたEGVポリペプチドがセルラーゼ活性を示さないようにするegl5の修飾、コードされたEGVポリペプチドが分泌されないようにするegl5の修飾、EGVが発現されないようにするプロモーター又は調節エレメントの修飾、及びこれらの組合せが挙げられる。本明細書で使用するとき、機能的ポリペプチド/タンパク質は、酵素活性、結合活性、界面活性特性などの活性を有し、そのものは、その活性を消滅させる又は本質的に排除するような突然変異、切断、ないしは別の方法による修飾などを受けていないタンパク質である。機能的ポリペプチドは、規定されているように、熱安定性又は熱不安定性であってよい。本明細書で使用するとき、不必要な活性は、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞から生成されるタンパク質調製物において所望されない活性例えば、酵素活性、結合活性、界面活性特性、又は同様のものである。不必要な活性は、典型的にはタンパク質調製物において発生し、所望の活性又は望ましい活性を有する、所望のタンパク質を更に含む。本明細書で使用するとき、発酵ブロス組成物は、ヒドロホビンなどの所望のタンパク質を含有する細胞増殖培地を指す。細胞増殖培地は、細胞及び/又は細胞残屑を含んでよく、濃縮されていてもよい。代表的な発酵ブロス組成物は、ヒドロホビンを含有する、限外濾過濃縮された発酵ブロスである。本明細書で使用するとき、マンナナーゼマンノース単位MMUは、0.24ローカストビーンガムLBGの存在下、pH7.0及び50°Cで1分当たり1μmolの還元末端等価物D-マンノースを含むがこれに限定されないを生成するために必要なヒドロホビン1mg当たりのマンナナーゼの量である。本明細書で使用するとき、エンドグルカナーゼ単位EGUは、1分当たり1μmolの還元糖を生成するために必要なヒドロホビン1mg当たりのエンドグルカナーゼの量である。本明細書で使用するとき、プロテアーゼ単位PUは、pH6.2及び25°Cで1分当たり1μmolのN-ベンゾイル-L-アルギニンエチルエステルBAEEを加水分解するために必要なヒドロホビン1mg当たりのシステインプロテアーゼの量に対応する。本明細書で使用するとき、材料における変化を生じさせるように食品又は他の材料を処理することは、その食品又は他の材料を、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞から生成されたタンパク質調製物と接触させることを意味し、タンパク質調製物に存在する1つ以上のタンパク質は、食品又は他の材料の成分に作用して、例えば、酵素活性、結合活性、界面活性特性、又は同様のものの結果として、化学変化をもたらす。処理の例には、焼いた食品をアミラーゼと接触させてアミロペクチンを加水分解すること、食品をリパーゼと接触させて乳化剤を生成すること、及び食品をヒドロホビンと接触させて歯ごたえを変更することが挙げられる。本明細書で使用するとき、単数を表わすa、an及びtheは、文意より明確に異なる意味に解せられない限りその複数形対象をも含む。本明細書に引用される参考文献はすべて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。以下の省略形/頭字語は、特に定めのない限り、以下の意味を有する。本組成物及び方法は、一部分において、トリコデルマリーゼイTreeseiegl5が熱安定性セルラーゼ酵素、すなわち、EGVをコードするという発見に基づく。対照的に、トリコデルマリーゼイTreeseiにより発現された他の既知のセルラーゼは、非耐熱性である。egl5の産物が熱安定性であるという発見は、セルラーゼ活性を含み不必要な酵素活性の非存在下で、トリコデルマリーゼイTreeseiによる内因性及び外因性ポリペプチドの両方の生成に関して広範囲にわたる影響を有するということである。PCT国際特許出願WO2005/093073号073PCTについて言及する。073PCTは、外因性融合タンパク質を発現するトリコデルマリーゼイTreeseiに関する。PCT国際特許出願WO2005/001036号036PCTについても言及する。036PCTは、トリコデルマリーゼイTreeseiにおける特定の遺伝子の同定及び単離に関する。PCT国際特許出願WO98/15619号619PCTについて更に言及する。619PCTは、トリコデルマロギブラキアタムTrichodermalongibrachiatumによるEGVIの発現に関する。073PCT、036PCT、及び619PCTのいずれも、個別に、又は任意の組合せのいずれかで、内因性の熱安定性セルラーゼ例えば、EGVのトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiにおける発現を防止若しくは低減することを教示又は示唆し、特に、内因性熱安定性セルラーゼ例えば、EGVのトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiにおける発現、及びヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIなどの外因性熱安定性ポリペプチドのトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiによる発現を防止若しくは低減することを教示又は示唆しない。一態様では、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマTreeseiリーゼイにおける熱安定性ポリペプチドを発現するための方法が提供され、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞内のegl5を破壊する工程と、トリコデルマTrichoderma宿主細胞内の熱安定性ポリペプチドを発現する工程と、得られる全細胞可溶化物、細胞ブロス、又は部分的に精製されたタンパク質調製物を昇温状態に暴露し、それによってすべての非耐熱性酵素活性をタンパク質調製物から実質的に排除する工程と、を含むか、又は本質的にそれらからなる。幾つかの実施形態では、非耐熱性酵素活性は、セルラーゼ活性である。この方法の1つの重要な利点は、egl5が、所望の熱安定性タンパク質を発現するために使用されるトリコデルマTrichoderma宿主細胞内で破壊され得るが、一方で非耐熱性酵素をコードする他の遺伝子は正常なままであって、トリコデルマTrichoderma宿主細胞内に複数の欠失を作製する必要性を回避することができる。代表的な非耐熱性酵素は、プロテアーゼprotease、セルラーゼcellulase、及びキシラナーゼxylanaseである。関連態様では、破壊されたegl5を有するか、又は本質的にそれからなるトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞が提供され、この宿主細胞は、不必要な酵素活性を含まない熱安定性ポリペプチドを発現するために好適である。上述のように、これらの遺伝子の発現産物は熱により不活性化され得るため、非耐熱性酵素をコードするトリコデルマTrichoderma遺伝子は、宿主細胞内で正常なままであり得る。この方法において、egl5が破壊される限り、トリコデルマTrichoderma宿主細胞は、非耐熱性セルラーゼcellulaseをコードする任意の数の正常な遺伝子を含んでよい。更に関連する態様では、破壊されたegl5を有するか、又は本質的にそれからなるトリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞が提供され、この宿主細胞は非耐熱性ポリペプチドを発現するために好適であり、本質的にすべての酵素活性は、発現後の事前に選択した時間において、熱により不活性化され得る。前述のように、egl5が破壊される限り、トリコデルマTrichoderma宿主細胞は、非耐熱性酵素をコードする任意の数の正常な遺伝子を含んでよい。別の態様では、熱安定性エンドグルカナーゼendoglucananseVEGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止するように修飾され、この修飾は、トリコデルマTrichoderma宿主細胞からEGVをコードする遺伝子を破壊又は欠失する工程を含むか、又は本質的にそれからなり、EGVをコードする遺伝子がegl5であるトリコデルマTrichoderma宿主細胞が提供される。関連態様では、少量のセルラーゼ活性及び/又はマンナナーゼ活性の存在下、又は実質的にその非存在下で、ヒドロホビンポリペプチドを含む組成物が提供される。幾つかの実施形態では、ヒドロホビンポリペプチドは、糸状菌宿主細胞から得られる。そのようなヒドロホビン組成物は、セルロース及びマンノースが存在する適用での使用に良く適しており、これらの複合糖complexsugarの酵素加水分解は望ましくない。幾つかの実施形態では、ヒドロホビンポリペプチドは、熱不安定性セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドの存在下で生成され、昇温状態に曝されて、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドを不活性化する。場合によっては、ヒドロホビンポリペプチドは、活性セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドが宿主細胞内で生成されないように、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドをコードする破壊された遺伝子を有するか、又は本質的にそれからなる宿主細胞内で生成される。更に他の場合、ヒドロホビンポリペプチドは、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドをコードする遺伝子又は核酸分子を欠失する宿主細胞内で生成される。本明細書で言及されるegl5遺伝子は、ジーンバンク登録番号Z33381Saloheimo,A.etal.1994Mol.Microbiol.13:219~28に対応する。egl5のヌクレオチド配列は、図10に記載され、配列番号:32として指定される。EGVポリペプチドの対応するアミノ酸配列は、図10に記載され、配列番号:33として指定される。EGVは、炭水化物活性酵素CAZy族45グリコシルヒドロラーゼglycosylhydrolaseに属し、酵素分類EC番号EC3.2.1.4を有するエンド-1,4-β-グルカナーゼendo14betaglucanaseである。これらの酵素は、以前はK族セルラーゼcellulase/キシラナーゼxylanaseとして知られていた。他の既知のトリコデルマリーゼイTreeseiセルラーゼを区別する、EGVの重要な特徴は、EGVが熱安定性であるということである。本組成物及び方法によるEGVポリペプチドは、配列番号:33のアミノ酸配列を有するEGVセルラーゼと比較して、類似の構造及び機能を有するセルラーゼである。類似構造は、配列番号:33と少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約91、少なくとも約92、少なくとも約93、少なくとも約94、少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、又は更には少なくとも約99、若しくはそれ以上の一次アミノ酸配列同一性を意味する。類似機能は、熱安定性エンド-1,4-β-グルカナーゼ活性を意味する。この文脈において、熱安定性とは、セルラーゼが、約90°C以上の温度に約5分以上の時間で暴露された後に、その元の活性の少なくとも半分すなわち、少なくとも50を保持する能力を指す。組成物及び方法の一態様は、機能的酵素の発現を不可能にする、egl5の欠失又は破壊を含む宿主細胞である。組成物及び方法の別の態様は、機能的酵素の発現を不可能にする、egl5の欠失又は破壊を含むか、又は本質的にそれからなる宿主細胞である。欠失は、例えば、相同的組換え又は化学的突然変異生成により達成され得る、宿主細胞のゲノムからのegl5の除去を指す。相同組換えは、標的とされた方法であるため、一般に好ましい。egl5の破壊は、広義に、酵素的に活性なEGVセルラーゼの発現を実質的に回避する、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞の任意の遺伝子操作又は化学操作を指す。代表的な破壊の方法には、egl5の完全な欠失、egl5を含むゲノムの一部分の欠失、egl5の部分欠失切頭を含む、egl5プロモーター、エンハンサー、若しくは他の遺伝子制御要素の完全若しくは部分欠失、egl5をコードする配列、プロモーター、エンハンサー、若しくは他の遺伝子制御要素の突然変異発生、又は機能的egl5遺伝子産物すなわち、EGVの発現を不可能にする任意の他の遺伝子修飾が挙げられる。そのような破壊は、例えば、相同組換え又は化学的突然変異生成により達成されてもよい。本組成物及び方法の目的で、egl5遺伝子の破壊は、EGVポリペプチドの熱安定性を消滅又は低減させる遺伝子修飾も含む。egl5を欠失又は破壊する過程において、多数の選択可能なマーカーが宿主細胞に導入されて、固体若しくは液体培地上の変異した宿主細胞の選択を可能にして、細胞分類例えば、FACS解析による選択を可能にするか、又はPCR若しくはサザンブロット解析によるスクリーニングを容易にし得る。追加の宿主細胞遺伝子もまた、欠失又は破壊され得る。場合によっては、所望の遺伝子をegl5の欠失又は破壊部位に導入することが望ましい場合がある。この方法において、本組成物及び方法は、熱安定性ポリペプチドをコードする核酸配列をトリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞に導入するための相同組換え部位として、eglを使用することを意図する。所望の遺伝子は、セルラーゼ活性の非存在下、トリコデルマTrichoderma内で発現することが望ましい所望のタンパク質をコードする。場合によっては、所望の遺伝子は、熱安定性ポリペプチドをコードする。そのような熱安定性ポリペプチドは、egl5が欠失又は破壊された宿主細胞内でそれらを発現させ、これらの宿主細胞からの宿主細胞可溶化物又は培地を熱応力にさらして、宿主細胞により発現されたセルラーゼを熱で不活性化して、セルラーゼ活性を実質的に含まない熱安定性ポリペプチドを回復する。熱安定性ポリペプチドは、酵素、構造タンパク質、核酸結合タンパク質、受容体等を含む。そのようなタンパク質は、これらに限定されないが、パイロコッカスフリオサスPyrococcusfuriosus、サーマスアクアチクスThermusaquaticus、サーマスサーモフィルスThermusthermophilus、サーマスサーモフィルスThermusthermophilus、サーマスフラバスThermusflavus、サーモアナエロバクテリウムサーモスルフリジンThermoanaerobacteriumthermosulfurigene、バシラスサーモプロテオリチカスBacillusthermoproteolyticus、サーモトガマリタイムThermotogamaritime、サーモマイセスラヌジノサスThermomyceslanuginosus、バシラスサーモプロテオリチカスBacillusthermoproteolyticus、及びバシラスステアロサーモフィルスBacillusstearothermophilusを含む、好熱性生物に由来し得る。代表的な好熱性タンパク質には、パイロコッカスフリオサスPyrococcusfuriosusからのクエン酸シンターゼ、ルブレドキシン、グルタミン酸脱水素酵素、及びメチオニンアミノペプチダーゼ、サーマスアクアチクスThermusaquaticus及びサーマスサーモフィルスThemiusthermophilusからのEF-TU及びEF-TU-TS、サーマスサーモフィルスThemiusthermophilusからの無機プロハスファターゼ及びマンガンスーパーオキシドジスムターゼ、バシラスステアロサーモフィルスBacillusstearothermophilusからの乳酸脱水素酵素、3-ホスホグリセリン酸キナーゼ、アデニル酸キナーゼ、及びホスホフルクトキナーゼ、サーマスフラバスThermusflavusからのマレイン酸脱水素酵素、サーモアナエロバクテリウムサーモスルフリジンThermoanaerobacteriumthermosulfurigeneからのシクロデキストリン、バシラスサーモプロテオリチカスBacillusthermoproteolyticusからのサーモリシン、中性プロテアーゼ、及びフェレドキシン、サーモトガマリタイムThermotogamaritimeからのcheY、並びにサーモミセスラヌジノサスThermomyceslanuginosusからのエンド-1,4-βキシラナーゼが挙げられる。更なる熱安定性ポリペプチドには、アミラーゼ、プルラナーゼ、キシラナーゼ、キチナーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、ポリメラーゼ、及び更にはセルラーゼが挙げられる。好熱性セルラーゼは、当該技術分野において既知であるが、EGVがトリコデルマリーゼイTreesei内で、少なくとも、トリコデルマリーゼイTreeseiからの細胞可溶化物全体、ブロス、又は部分的に精製された細胞タンパク質調製物において相当量のセルラーゼ活性を生成するような量で発現された唯一の熱安定性セルラーゼであったことがこれまで未知であったことに留意されたい。したがって、本組成物及び方法を使用して、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞内で外因性熱安定性セルラーゼを生成することができ、この外因性熱安定性セルラーゼは、不必要なトリコデルマリーゼイTreeseiセルラーゼ活性を実質的に含まない。尚も更なる熱安定性ポリペプチドには、ほんの数例を挙げると、構造ポリペプチド、転写因子、シャペロニン、及びポリペプチド阻害剤を含む。本組成物及び方法を使用して生成され得る代表的なタンパク質群は、ヒドロホビンであり、糸状菌により発現されるシステインに豊むポリペプチドのクラスである。ヒドロホビンは、それらが自己組織化し、両親媒性タンパク質を形成する能力が知られている小~100アミノ酸ポリペプチドである。それらは、細胞及び人工材料を含む物体の表面上に疎水性コーティングを形成し得る。1991年にスエヒロタケコミューンSchizophyllumcommuneにおいて最初に発見されたヒドロホビンは、現在多数の糸状菌において認識されている。疎水性親水性指標ハイドロパシー及び他の生物物理学的特性における差異に基づいて、ヒドロホビンは、クラスI又はクラスIIとして分類される。好適なヒドロホビンは、当該技術分野において既知の任意のクラスI又はクラスIIヒドロホビン、例えば、アガリクスAgaricus属例えば、アガリクスビスポラスAgaricusbisporus、アグロサイブAgrocybe属例えば、ポプラキノコAgrocybeaegerita、アジェロミセスAjellomyces属例えば、アジェロミセスカプスラタスAjellomycescapsulatus、アジェロミセスデルマティティディスAjellomycesdermatitidis、アスペルギルスAspergillus属例えば、アスペルギルスアルビAspergillusarvii、アスペルギルスブレビプスAspergillusbrevipes、アスペルギルスクラバタスAspergillusclavatus、アスペルギルスデリカウリスAspergillusduricaulis、アスペルギルスエリプティカスAspergillusellipticus、アスペルギルスフラバスAspergillusflavus、アスペルギルスフミガーツスAspergillusfumigatus、アスペルギルスフミシネマタスAspergillusfumisynnematus、アスペルギルスレンタスAspergilluslentulus、アスペルギルスニゲルAspergillusniger、アスペルギルスユニラテラリスAspergillusunilateralis、アスペルギルスビリジニュータンスAspergillusviridinutans、ボーベリアBeauveria属例えば、ボーベリアバッシアナBeauveriabassiana、クラビセプスClaviceps属例えば、クラビセプスフシホルミスClavicepsfusiformis、コクシジオイドCoccidioides属例えば、コクシジオイドポサダシCoccidioidesposadasii、コクリオボラスCochliobolus属例えば、コクリボルスヘテロストロフスCochliobolusheterostrophus、クリニペリスCrinipellis属例えば、クリニペリスペルニキオサCrinipellisperniciosa、クリフォネクトリアCryphonectria属例えば、クロフォネクトリアパラシティカCryphonectriaparasitica、ダビディエラDavidiella属例えば、ダビディエラタシアナDavidiellatassiana、ディクチオネマDicxyonema属例えば、ディクチオネマグラブラタムDictyonemaglabratum、エメリセラEmericella属例えば、エメリセラニデュランスEmericellanidulans、フランムリナFlammulina属例えば、フランムリナベルティペスFlammulinavelutipes、フサリウムFusarium属例えば、フサリウムクルモラムFusariumculmorum、ギベレラGibberella属例えば、ギベレラモニリホルミスGibberellamoniliformis、グロメレラGlomerella属例えば、グロメレラグラミニコラGlomerellagraminicola、グリフォラGrifola属例えば、グリフォラフロンドサGrifolafrondosa、ヘテロバシジオンHeterobasidion属例えば、ヘテロバシイオンアンノサムHeterobasidionannosum、ハイポクレアHypocrea属例えば、ハイポクレアジェコリナHypocreajecorina、ハイポクレアリキシHypocrealixii、ハイポクレアビレンスHypocreavirens、ラッカリアLaccaria属例えば、ラッカリアビカラLaccariabicolor、レンチヌラ属Lentinula例えば、レンチヌラエドーデスLentinulaedodes、マグナポルテMagnaporthe属例えば、マグナポルテオリザエMagnaportheoryzae、マラスミウスMarasmius属例えば、マラスミウスクラドフィラスMarasmiuscladophyllus、モニリオフトラMoniliophthora属例えば、モニリオフトラペルニシオサMoniliophthoraperniciosa、ネオサルトリアNeosartorya属例えば、ネオサルトリアアウレオラNeosartoryaaureola、ネオサルトリアフェンネリアNeosartoryafennelliae、ネオサルトリアフィッシェリNeosartoryafischeri、ネオサルトリアグラブラNeosartoryaglabra、ネオサルトリアヒラツカNeosartoryahiratsukae、ネオサルトリアニシムラNeosartoryanishimurae、ネオサルトリアオータニNeosartoryaotanii、ネオサルトリアスードフィッシェリNeosartoryapseudofischeri、ネオサルトリアクアドリシンクタNeosartoryaquadricincta、ネオサルトリアスパスラタNeosartoryaspathulata、ネオサルトリアスピノサNeosartotyaspinosa、ネオサルトリアストラメニアNeosartoryastramenia、ネオサルトリアウダガワNeosartoryaudagawae、ニューロスポラNeurospora属例えば、ニューロスポラクラッサNeurosporacrassa、ニューロスポラジスクレタNeurosporadiscreta、ニューロスポラインターメディアNeurosporaintermedia、ニューロスポラシトフィラNeurosporasitophila、ニューロスポラテトラスペルマNeurosporatetrasperma、オフィオストマOphiostoma属例えば、オフィオストマノボ-ウルミOphiostomanovoulmi、オフィオストマクエルカスOphiostomaquercus、パラコクシジオイドParacoccidioides属例えば、パラコクシジオイドブラシリエンシスParacoccidioidesbrasiliensis、パッサローラPassalora属例えば、パッサローラフルバPassalorafulva、パキシルスフィラメントサスPaxillusfilamentosus、パキシラスインボルタスPaxillusinvolutus、ペニシリウムPenicillium属例えば、ペニシリウムカメンベルチPenicilliumcamemberti、ペニシリウムクリソゲナムPenicilliumchrysogenum、ペニシルムマルネッフェイPenicilliummarneffei、フレビオプシスPhlebiopsis属例えば、フレビオプシスギガンテアPhlebiopsisgigantea、ピソリタスPisolithus例えば、ピソリサスティンクトリウスPisolithustinctorius、プレウロタスPleurotus属例えば、プレウロタスオストレアタス、ポドスポラPodospora属例えば、ポドスポラアンセリナ、ポスティアPodospora属例えば、ポスティアプラセンタPostiaplacenta、ピレノホラPyrenophora属例えば、ピレノホラトリティキ-レペンティスPyrenophoratriticirepentis、シゾフィリウムSchizophyllum属例えば、シゾフィリウムコミューン、タラロマイセスTalaromyces属例えば、タラロマイセススティピタタスTalaromycesstipitatus、トリコデルマTrichoderma属例えば、トリコデルマアスペレラムTrichodermaasperellum、トリコデルマアトロビリデTrichodermaatroviride、トリコデルマビリデTrichodermaviride、トリコデルマリーゼイTreesei[以前のハイポクレアジェコリナHypocreajecorina]、トリコロマTricholoma属例えば、トリコロマテレウムTricholomaterreum、ウンキノカルプスUncinocarpus属例えば、ウンキノカルプスリーゼイUncinocarpusreesii、ベルティシリウムVerticillium属例えば、ベルティシリウムダリアVerticilliumdahliae、キサントダクチロンXanthodactylon属例えば、キサントダクチロンフランメウムXanthodactylonflammeum、キサントリアXanthoria属例えば、キサントリアカルシコラXanthoriacalcicola、キサントリアカペンシスXanthoriacapensis、キサントリアエクタネオイドXanthoriaectaneoides、キサントリアフランメアXanthoriaflammea、キサントリアカロオエンシスXanthoriakarrooensis、キサントリアリグラタXanthorialigulata、キサントリアパリエティナXanthoriaparietina、キサントリアツルビナタXanthoriaturbinata等からのヒドロホビンである。ヒドロホビンは、例えば、Sunde,M.etal.2008Micron39:773~84、Linder,M.etal.2005FEMSMicrobiolRev.29:877~96、及びWosten,H.etal.2001Ann.Rev.Microbiol.55:625~46において再調査されている。代替又は追加として、所望のタンパク質は、EGV以外のセルラーゼを不活性化するために必要な温度で最小限に変性される、中温性タンパク質であり得る。所望のタンパク質は、それらの熱安定性に対して選択された遺伝子操作を受けたタンパク質であってもよい。所望のタンパク質は、活性的又は構造的に正常なタンパク質が、昇温状態への暴露後で回復されるように、EGV以外のセルラーゼを不活性化するために必要な温度で可逆的に変性されるものであってもよい。所望のポリペプチド、特に所望の熱安定性ポリペプチドは、国際公開特許WO/2011/019686号で論じされるように、その発明の例えば実施例1の技法に従って有利に回復され得る。幾つかの実施形態では、本組成物及び方法は、所望のタンパク質が、セルラーゼ、マンナナーゼ、及び/又はプロテアーゼ活性を含む、検出可能な酵素活性の実質的に非存在下で生成されることを可能にする。他の実施形態では、所望のタンパク質は、少量であるが検出可能な量の検出可能なセルラーゼ、マンナナーゼ、及び/又はプロテアーゼ活性の存在下で生成される。例えば、特定の実施形態では、所望のタンパク質は、約0.1EGU未満、若しくは更には約0.05EGU、約0.10MMU未満、約0.05MMU未満、約0.025MMU未満、約0.02MMU未満、約0.015MMU未満、若しくは更には,約0.01MMU未満のエンドグルカナーゼ活性、及び/又は約1.3PU未満、若しくは更には約0.5PU未満の検出可能なシステインプロテアーゼ活性の存在下で生成される。所望のタンパク質が、例えば、食品適用を意図されたヒドロホビンである場合、そのような量の夾雑物活性contaminatingactivityは、一般に有害ではない。一般に、所望のタンパク質は、タンパク質が熱安定性を保持するか、又は熱応力に応答して、可逆的に変性する能力を保持する限り、任意の数のアミノ酸置換、挿入、及び/若しくは欠失、又は化学修飾を含み得る。好ましい所望のタンパク質は、少なくとも約70°C、少なくとも約75°C、少なくとも約80°C、少なくとも約85°C、少なくとも約90°C、又は更には少なくとも約95°Cの温度に、少なくとも約3分、少なくとも約5分、少なくとも約10分、少なくとも約15分、少なくとも約20分、少なくとも約30分の時間の間暴露された後に、その活性、結合能力、又は天然構造タンパク質の型に応じての少なくとも半分すなわち、少なくとも50を保持する。特定の場合、所望のタンパク質は、少なくとも約90°Cの温度に少なくとも約5分の時間の間暴露された後で、その活性、結合能力、又は天然構造の少なくとも約50を保持する。所望の遺伝子又は所望の核酸分子は、相同組換え、一時発現ベクター、安定した統合発現ベクトル、若しくは人工染色体を使用する形質転換、ウイルス感染/形質導入、及び同様のものを含む、任意の既知の方法を使用して、トリコデルマTrichoderma細胞に導入され得る。場合によっては、所望の遺伝子を、破壊されるegl5の部位に導入することが望ましい場合がある。場合によっては、複数の所望の遺伝子又は核酸分子が存在し得る。一態様では、本組成物及び方法は、egl5に関して欠失又は破壊されるが、任意に他のセルラーゼ-遺伝子をコードする、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreesei宿主細胞を使用して、熱安定性タンパク質例えば、ヒドロホビンの発現を可能にする。熱安定性タンパク質の発現後に、トリコデルマTrichodermaからの全細胞可溶化物、ブロス、又は部分的に精製された細胞タンパク質調製物は、非耐熱性酵素を不活性化するのに十分な温度でインキュベートされ、不必要なセルラーゼcellulase[エンドグルカナーゼendoglucanaseEGVを除く、エキソグルカナーゼexoglucanase、セロビオヒドロラーゼcellobiohydrolase、β-グルコシダーゼβglucosidase、カルボキシメチルセルラーゼcarboxymethylcellulase等を含む]、ヘミセルラーゼhemicellulaseキシラナーゼxylanase、マンナナーゼmannanase、アラビナナーゼarabinanase、グルクロニダーゼglucuronidase、アセチルキシランエステラーゼacetylxylanesterase、アラビノフラノシダーゼarabinofuranosidase、キシロシダーゼxylosidase等を含む、プロテアーゼprotease、リパーゼlipase、アミラーゼamylase、エステラーゼesterase、ペルヒドロラーゼperhydrolase、フィターゼphytase、ラッカーゼlaccase、及び他の市販の関連酵素活性を含むが、これらに限定されない不必要な酵素活性の非存在下で所望のタンパク質を生成し、その間、宿主細胞内の多数の異なる非耐熱性酵素をコードする遺伝子を破壊する必要性がない。これは、トリコデルマTrichoderma内の遺伝子又は核酸分子の発現を著しく簡素化する。別の態様では、本組成物及び方法は、egl5に関して本質的に欠失又は破壊されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞を使用するが、任意に他のセルラーゼを発現させるか、又は他のセルラーゼ-遺伝子をコードして、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIなどの熱安定性タンパク質の発現を可能にする。熱安定性タンパク質の発現後、トリコデルマTrichodermaからの全細胞可溶化物、ブロス、又は部分的に精製された細胞タンパク質調製物は、非耐熱性酵素を不活性化するのに十分な温度でインキュベートされ、不必要なセルラーゼ[エンドグルカナーゼEGVを除く、エキソグルカナーゼ、セロビオヒドロラーゼ、β-グルコシダーゼ、カルボキシメチルセルラーゼ等を含む]、ヘミセルラーゼキシラナーゼ、マンナナーゼ、アラビナナーゼ、グルクロニダーゼ、アセチルキシランエステラーゼ、アラビノフラノシダーゼ、キシロシダーゼ等を含む、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、エステラーゼ、ペルヒドロラーゼ、フィターゼ、ラッカーゼ、及び他の市販の関連酵素活性を含むが、これらに限定されない不必要な酵素活性の非存在下で所望のタンパク質を生成し、その間、宿主細胞内の多数の異なる非耐熱性酵素をコードする遺伝子を破壊する必要性がない。別の態様では、本組成物及び方法は、熱安定性エンドグルカナーゼendoglucananseVEGVの生成を実質的に低減又は防止するように修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞を使用して、ヒドロホビンなどの熱安定性タンパク質の発現を可能にし、この修飾は、トリコデルマTrichoderma宿主細胞からのEGVをコードする核酸分子を欠失するか、又はその発現を提供することを含むか、又は本質的にそれからなり、egl5であるEGVをコードする核酸分子が提供される。別の態様では、本組成物及び方法は、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼ活性の非存在下で、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIが存在する宿主細胞から得られる組成物を提供する。そのような組成物は、熱不安定性セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドも生成する、糸状菌、例えば、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiなどの宿主細胞内でヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIを生成し、次に宿主細胞により生成されたタンパク質を昇温状態にさらして、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドを不活性化することによって得られてよい。あるいは、ヒドロホビンは、セルラーゼ及び/若しくはマンナナーゼポリペプチドをコードするか、又はその発現に関与する欠失及び/若しくは破壊された核酸分子を有するか、又はセルラーゼ及び/若しくはマンナナーゼポリペプチドをコードする核酸分子を欠失する、トリコデルマTrichoderma例えば、トリコデルマリーゼイTreeseiなどの宿主細胞内で生成されてもよい。そのような組成物は、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼ活性の存在が望ましくない場合、ヒドロホビン例えば、ヒドロホビンIIを必要とする適用に有用である。本発明の組成物及び方法のこれら及び他の態様並びに実施形態は、本説明に照らして当業者に明らかとなるであろう。実際に、当業者は、本発明を、いずれも参照することにより本明細書に援用される、2011年3月29日に出願された米国特許出願シリアル番号61/469,067号及び2011年4月15日に出願されたシリアル番号61/475,933号のそれぞれ又は両方と併せて実施できることが言及される。具体的には、当業者は、本発明と共に、ヒドロホビンIIが本発明の実施において発現された後の任意の熱処理前又は後を含む時点で、2011年4月15日に出願された米国特許出願シリアル番号61/475,933号のヒドロホビンIIを精製するための方法を使用することができ、精製するためのこの方法は、C1~C3アルコール、例えば、イソプロパノールをヒドロホビン溶液に添加して、第1の沈殿物を生成する工程と、C1~C3アルコール/ヒドロホビン溶液から上澄み液を移す工程と、C1~C3アルコールをその上澄み液に添加して、第2の沈殿物を生成する工程と、を含んでよく、第2の沈殿物は、精製されたヒドロホビンIIであり得る。また本発明が実施されるとき、ヒドロホビンIIの発現の間に、2011年3月29日に出願された米国特許出願シリアル番号61/469,067号の沈殿剤技法を使用してもよい。本発明はまた、本発明の修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞によって発現される所望のポリペプチドの活性を制御することに関し、その所望のポリペプチドは感熱性又は熱不安定性であり、その方法は所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチド及び内因性ポリペプチドを昇温状態に曝す工程を含んでよく、その昇温状態は内因性ポリペプチド及び感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを不活性化するのに十分であり得る。有利な実施形態では、内因性ポリペプチドは、セルラーゼであってよい。方法は、所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを昇温状態に曝す前に、所望のポリペプチドを、所望のポリペプチドが作用する化合物と接触させる工程を更に含み得る。方法は、所望の感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを昇温状態に曝す前に、所望のポリペプチドを、セルラーゼ及び所望のポリペプチドが作用する1つ以上の化合物と接触させる工程を更に含んでもよい。本発明の方法はまた、本発明の発酵ブロスにおける所望のポリペプチドの活性を制御するための方法に関し、その所望のポリペプチドは感熱性又は熱不安定性であってよく、その方法は発酵ブロスを内因性ポリペプチド及び感熱性又は熱不安定性ポリペプチドを不活性化するのに十分な昇温状態に曝す工程を含み得る。有利な実施形態では、内因性ポリペプチドは、セルラーゼであってよい。方法は、発酵ブロスを昇温状態に曝す前に、発酵ブロスを所望のポリペプチドが作用する所望の化合物と接触させる工程を更に含み得る。方法は、発酵ブロスを昇温状態に曝す前に、発酵ブロスを、セルラーゼ及び所望のポリペプチドが作用する1つ以上の化合物と接触させる工程を更に含んでもよい。所望のポリペプチド及び/又はセルラーゼが作用する化合物は、所望のポリペプチド及び/又はセルラーゼと直接又は間接的に相互作用する、任意の化合物であり得る。所望の化合物は、所望のポリペプチド及び/又はセルラーゼ、すなわち、シス作用化合物に直接結合する化合物であり得る。一実施形態では、所望の化合物は、所望のポリペプチド及び/又はセルラーゼの基質であってよく、例えば、セルロース、ヘミセルロース、リグニン、ペクチン、又はこれらの誘導体であり得る。例には、これらに限定されないが、酢酸セルロース、三酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、ニトロセルロース硝酸セルロース、硫酸セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、エチルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースHPC、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースHPMC、エチルヒドロキシエチルセルロース、及びカルボキシメチルセルロースCMCが挙げられる。別の実施形態では、所望の化合物は、所望のポリペプチド及び/又はセルラーゼ、すなわち、トランス作用化合物と間接的に相互作用する化合物であり得る。本発明はまた、修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞から得られる組成物内に存在するセルラーゼの活性を制御するための方法であって、その組成物はEGV以外の少なくとも1つのセルラーゼ酵素を含み、その方法は組成物を、所望のポリペプチドを不活性化するのに十分な昇温状態に曝す工程を含んでよく、組成物を昇温状態に曝す工程の後で、組成物はセルラーゼ活性を実質的に含まない。所望のポリペプチドは、感熱性又は熱不安定性であってよい。別の実施形態では、ポリペプチドは、耐熱性又は熱安定性であってよい。組成物を昇温状態に曝す工程は、食品又は飲料において行われ得る。別の実施形態では、昇温状態は約100°C未満であり得る。本発明の昇温状態は、熱安定性セルラーゼを破壊する、焼き、揚げ、低温殺菌、又は他の熱処理を包含することを意味しない。別の実施形態では、修飾されたトリコデルマTrichoderma宿主細胞から得られた組成物は、ヒドロホビンを含む発酵ブロスであり得る。以下の例は、これらに限定されないが、組成物及び方法を更に説明することが意図される。実施例1.破壊されたpry2遺伝子を有するトリコデルマリーゼイTreesei株の構成アスペルギルスニゲルAspergillusnigerからのsucA断片を、プライマーoANSUCA5及びoANSUCA3を使用して、PCRにより増幅させた。同様に、ヘキソキナーゼ遺伝子プロモーターを、プライマーoHXK5及びoHXK3を使用して、トリコデルマリーゼイTreeseiの染色体から増幅させた。増殖されたsucADNA断片を、EcoRI及びAscIによって制限した。ヘキソキナーゼプロモーターを担持する増幅されたDNA断片を、HindIII及びEcoRIによって消化した。HindIII及びAscIによって消化されたプラスミドpTrex3AGL51M参照することにより本明細書に援用される国際公開特許WO08/118382号を参照との連結反応において、2つの消化された断片を一緒にインキュベートした。得られるベクターpTHXKSUCAを、HindIII及びBamHIによって消化し、ヘキソキナーゼプロモーターと融合されたsucAの断片を担持する3.5kbのDNA断片を、アガロースゲル電気泳動によって単離した。この断片のヌクレオチド配列は図7に提供され、本明細書では配列番号:1として指定される。pF1Xは、pUC19からの複製起点及びアンピシリン耐性遺伝子、並びにバクテリオファージf1複製起点を含む、小プラスミドである。その完全ヌクレオチド配列は図8に提供され、本明細書では配列番号:2として指定される。トリコデルマリーゼイTreeseiのpyr2遺伝子を、プライマーoPYR251及びoPYR231を使用して増幅した。得られた断片をSfiI及びNotIによって消化し、同一酵素によって消化されたpF1Xとの連結反応においてインキュベートした。得られたプラスミドは、pF1Xpyr2hxksucと指定された。大腸菌株XL1-BlueMRF’を、pF1Xpyr2hxksucによって形質転換し、ヘルパーファージM13K07Invitrogenを形質転換した。pF1Xpyr2hxksucのファージミド形態からのDNAを、標準的方法を使用して単離した例えば、Invitrogen社からの使用説明書を参照。ファージミドDNAを、H-制限酵素緩衝液に約1mg/mL濃度で溶解し、溶液を75°Cに加熱し、それを徐々に室温に冷ますことによって、2つのオリゴヌクレオチドoPYR2F_3M及びoPYR2_5Pいずれも5μMの濃度で存在するにアニールさせた。得られた部分的二本鎖のDNAをBamHIによって消化し、この消化から得られる2つのDNA断片のうちの大きい方を、アガロースゲル電気泳動によって精製した。大きい方のBamHIDNA断片を使用して、トリコデルマリーゼイTreeseiのクワド欠損quaddeletedΔcbh1、Δcbh2、Δeg1、及びΔeg2株すなわち、Quad、米国特許第5,650,322号を芽胞電気穿孔法sporeelectroporationによって形質転換した例えば、Miasnikov,A.andKim,S.2009Abstractsofthe25thFungalGeneticsconferenceatAsilomar.p.232を参照。形質転換細胞を、それらが最小スクロース培地スクロース、5g/l;KH2PO4、5g/l;NH42SO4、6.6g/l;MgCl2、1g/l;MgSO4、0.1g/l;CaCl2、0.25g/l;FeSO4、5.0mg/l;MnSO4、1.6mg/l;ZnSO4、1.4mg/l、ウリジン、100mg/l上で増殖する能力について選択した。スクロース上で増殖した形質転換細胞を、1g/lフルオロオロチン酸FOAを有する同一培地を含むプレート上で継代培養subcultureした。染色体DNAを、FOAの存在下で最も良く増殖することを示した形質転換細胞コードされたDURAから単離した。このDNAを、プライマー対ioPYR2FD_R1及びoSUC2_D1、並びにiioPYR2FU_D1及びoSUC2_R1を使用して、PCRにより解析した。いずれの場合も、予想された大きさのPCR産物それぞれ2.4及び1.8kbが観測された。株DURAは、ウリジンを欠失する最小スクロース培地上で増殖せず、pyr2遺伝子がこの株において破壊されることを確認した。この実施例において言及されたプライマーの配列は、表1に記述する。実施例2egl5遺伝子の破壊トリコデルマリーゼイTreeseiegl5遺伝子を、テンプレートとしてトリコデルマリーゼイTreesei染色体DNA、並びにプライマーoEG5_5及びoEG5_3を使用して、PCRにより増幅した。増幅されたDNA断片を、制限エンドヌクレアーゼSfiI及びNotIによって消化し、同一酵素によって消化されたpF1Xにクローン化させて、プラスミドpF1XEG5を得た。egl5コード領域後に反復領域と称されるの更に上流に位置する、トリコデルマリーゼイTreesei染色体DNAの別の断片を、プライマーoEG5R_5及びoEG5R_3を使用して同様に増幅した。増幅された断片は、SpeI及びSaIIによって消化し、AvaII及びXhoIによって消化されたpF1XEG5にクローン化させて、プラスミドpF1XEG5Rを生成した。egl5破壊カセットを構成する最終工程は、トリコデルマリーゼイTreeseipyr2遺伝子を、プライマーoPYR2_55及びoPYR2_35並びにクワド欠損したトリコデルマリーゼイTreesei株上記の染色体DNAをテンプレートとして使用するPCRにより増幅し、増幅されたDNA断片をXhoI及びSpeIによって消化し、消化された断片をXhoI及びXbaI消化されたpFIEG5Rとの連結反応においてインキュベートすることであった。pFIXEG5RPyr2と指定された最終プラスミドは、pyr2遺伝子の機能的コピー及びegl55’-反復領域図1の両方により破壊されたトリコデルマリーゼイTreeseiegl5遺伝子を担持した。破壊された遺伝子すなわち、破壊カセットのDNA配列は、egl5及びpyr2遺伝子の既知の染色体DNA配列、前述の構成スキーム、及び複数の制限エンドヌクレアーゼ分析に基づいて推定された。配列は図9に提供され図9A及び9Bからなる、本明細書では配列番号:3として指定される。破壊カセットは、テンプレートとしてpF1XEG5RPyr2、並びにプライマーoEG5f及びoEG5rを使用して、PCRにより増幅した。PCR産物を使用して、トリコデルマリーゼイTreesei株DURA実施例1に記載を形質転換し、ウリジン原栄養を付与した。染色体DNAを、多数の形質転換細胞から単離し、プライマー対oEG5R_D1及びoEG5D_R1、oEG5R_D2及びoEG5DR2、oEG5R_D2及びoPYR2U_R2、並びにoPYR2D_D2及びoEG5D_R2を使用するPCRにより解析した。3つの形質転換細胞すなわち、DURAΔEG518、DURAΔEG522、及びDURAΔEG523は、すべて4つのプライマー対を有する、予想された大きさのPCR産物を産出したすなわち、それぞれ1.2kb、1.15kb、1.4kb、及び1.5kb、図2。これら3つの株は、それらのセルラーゼ活性の生化学的特徴について選択した。この実施例において言及されたプライマーの配列は、表2に説明される。実施例3.還元糖の検出に基づくトリコデルマリーゼイTreesei対照及びegl5欠失株におけるセルラーゼ活性トリコデルマリーゼイTreesei株クアド対照として並びに独立して単離された形質転換細胞DURAΔEG518、DURAΔEG522、及びDURAΔEG523は、28°Cで6日間、振盪フラスコ内で、炭素及びエネルギー源として1.6グルコース-ソフォロース混合物を含む最小培地を使用して増殖させた。菌糸体は、0.22γm膜を通して濾過により分離し、培養上澄み液は、10kDaカットオフ膜を使用する限外濾過により約100倍に濃縮した。濃縮された培養上澄み液100μLを水100μLで希釈し、60°C又は90°Cで60分間、EppendorfThermomixerRPCRマシン内で加熱した。次いで熱処理された上澄み液10μLを、96ウェルプレート内で195μL多糖類基質0.5カルボキシメチルセルロース、50mMクエン酸ナトリウム、pH5.45と混合した。プレートをアルミニウムシールフィルムで被覆し、40°Cで16時間、400rpmで振盪させながらインキュベートした。得られたセルラーゼ反応混合液の一部分75μLを、96ウェルPCRプレート内で、75μLDNS試薬13,5-ジニトロサリチル酸、1NaOH、0.2フェノール、0.05メタ重亜硫酸ナトリウム、及び10酒石酸カリウムナトリウムと混合し、99°Cで10分間、EppendorfThermomixerRPCRマシン内でインキュベートした。DNSを使用して、還元糖の量を測定する。得られたDNS反応液100μLの540nmにおける吸光度を、透明な底部の96ウェルプレートMolecularDevicesSpectraMaxM2UVプレートリーダー内で測定した。活性は、放出されたグルコースGlc等価物の濃度として報告された図3。A540読取り値をバックグラウンドについて補正し、グルコース検量線からのグルコース等価物と相関させた図4。セルラーゼ活性は、欠失されたegl5遺伝子を有する3種のトリコデルマリーゼイTreesei株のいずれにおいても欠失されなかった。対照クアド株は、90°Cの熱処理を受けた後で、その元のセルラーゼ活性の約半分を保持した。3種の複製に基づく結果を表3に示す。この実験は、他の機能的セルラーゼ遺伝子を含むすなわち、egl5を除くトリコデルマリーゼイTreesei株からのegl5遺伝子の欠失が、昇温状態への暴露によって、細胞材料内のすべてのセルラーゼ活性を消滅させ得ることを示す。昇温状態を使用してすべてのセルラーゼ活性を消滅させることは、EGVセルラーゼ遺伝子産物が熱安定性であるため、トリコデルマリーゼイTreesei株が機能的egl5遺伝子を含む時には不可能である。実施例4.粘度の変化に基づくセルラーゼ活性の分析多糖類基質[300mL、1.0カルボキシメチルセルロースCMC、50mMクエン酸ナトリウムpH5.45]を、400mLガラスビーカーに添加し、初期粘度を測定したBrookfieldViscometerDV-IIPro、スピンドル62、10rpm。これらのCMC溶液/懸濁液への添加に備えて、トリコデルマリーゼイTreesei対照又はegl5欠失株からの濃縮された培養上澄み液220μLを4°C又は90°Cのいずれかで60分間、EppendorfThermomixerRPCRマシン内でインキュベートした。熱処理した上澄み液の一部分100μLをCMC溶液/懸濁液に添加し、22°Cで16時間、150rpmで攪拌した。反応液の最終粘度は、上記のように測定した。結果を表4及び図5に示す。活性は、10rpmでのトルクのログ変換された倍率変化logfoldchangeとして報告した。クアド対照株からの培養上澄み液を用いたCMC溶液/懸濁液のインキュベーションは、熱処理とは無関係に、粘度の著しい減少をもたらした。同様に、CMC溶液/懸濁液の粘度において、DURAΔEG518株からの培養上澄み液は、著しい低減をもたらしたが、90°Cでの熱処理後には無かった。これらの結果は、EGVがトリコデルマリーゼイTreesei細胞に存在する唯一の熱安定性セルラーゼであること、及びトリコデルマTreeseiリーゼイ内のegl5遺伝子の欠失が、トリコデルマリーゼイTreesei培養上澄み液に存在するすべてのセルラーゼ酵素の熱不活性化を可能にすることを示唆した。実施例5.egl5破壊された株からのpyr2マーカーの切除株DURAΔEG518、DURAΔEG522、及びDURAΔEG523を胞子形成させて、芽胞懸濁液をウリジン及びFOAを補充したスクロース最小培地の上で平板培養した。数個のFOA難消化性クローンを、3種の株のそれぞれの子孫から選択し、それらの染色体DNAを単離して、プライマー対ioEG5FU_D1及びoEG5D_R1、並びにiioEG5FU_D2及びoEG5D_R2を使用するPCRにより解析した表2に記載の通り。解析されたクローンの大部分から得られる染色体DNAは、予想されたすなわち、約aout1.6~1.7kbのPCR産物を生成した後、DURAΔEG518、DURAΔEG522、及びDURAΔEG523の染色体内の2つの反復領域間の相同組換えをもたらした図6。実施例6.セルラーゼ及びマンナナーゼmannanse活性の解析以下の分析を使用して、ヒドロホビン調製物中のセルラーゼ活性及びマンナナーゼ活性を測定した。セルラーゼ分析セルラーゼ活性は、100mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5中で基質として4-メチルウンベリフェリルβ-D-セロビオシド4MUC、SigmaAldrich、M6018を使用して測定した。標準セルラーゼ組成物すなわち、EG3セルラーゼ、Genencorを参照として使用した。サンプル組成物例えば、ヒドロホビンを含む発酵ブロス及び標準セルラーゼ組成物のシリーズの希釈液を調製し、4MUC試薬を用いて40°Cで1時間、プレート培養器内で400rpmで振盪させることによってインキュベートした。以下のパラメーターを使用して、SpectraMax蛍光プレートリーダー上で蛍光を読み取った:励起=360nm、発光=460nm、オートカットオフ=455nm。実験サンプルによって生成された蛍光シグナルの量を、標準セルラーゼ組成物によって精製された蛍光シグナルの量と相関させ、NPC/mL=遊離したo-ニトロフェノールμmole/min/mLセルラーゼ活性の標準測定値として報告した。マンナナーゼ分析マンナナーゼ活性は、100mM酢酸ナトリウム緩衝液pH5.5中で基質として4-メチルウンベリフェリルβ-D-マンノピラノシド4MUM、SigmaAldrich、M0905を使用して測定した。標準マンナナーゼ組成物Genencorを参照として使用した。サンプル組成物例えば、ヒドロホビンを含む発酵ブロス及び標準マンナナーゼ組成物のシリーズの希釈液を調製し、4MUM試薬を用いて40°Cで1時間、プレート培養器内で400rpmで振盪させることによってインキュベートする。以下のパラメーターを使用して、SpectraMax蛍光プレートリーダー上で蛍光を読み取った:励起=360nm、発光=460nm、オートカットオフ=455nm。実験サンプルによって生成された蛍光シグナルの量を、標準マンナナーゼ組成物によって精製された蛍光シグナルの量と相関させ、MU/L=遊離したo-ニトロフェノールμmole/min/mLとして報告した。ヒドロホビンの分析は、上述のように行った。上述のように生成されるヒドロホビン含有発酵ブロス組成物における残留セルラーゼ及びマンナナーゼ活性は、上述のように、試料を4-メチルウンベリフェリルβ-D-セロビオシドセルラーゼ又は4-メチルウンベリフェリルβ-D-アンノピラノシドマンナナーゼでインキュベートすることによって試験し、これらの値を、EG3セルラーゼ基準又はマンナナーゼ基準Genencorを使用して得られたものthosと比較した。データ表5に示されるは、溶液1mL若しくは1L当たりの活性として、又はヒドロホビン1グラム当たりの活性として表わされる。この発酵ブロス組成物において、精密濾過によって細胞を除去し、タンパク質を限外濾過によって濃縮したが、ヒドロホビンと他のタンパク質、例えば、残留マンナナーゼ及びセルラーゼとの比率を変更するための精製工程は行わなかった。表に示されるように、残留マンナナーゼ及び特にセルラーゼ活性のレベルは、熱処理後に著しく低減した。実施例7.egl5-欠失した株におけるHFB2発現pTrex8RHfb2及びpTrex3gMHfb2の構成2つのベクターはいずれも、強力なcbhIプロモーターの制御下で、その天然コード配列からHFB2の発現を駆動するように設計された。2つのベクターの発現カセットは同一であり、これら2つの分子間の唯一の相違は、pTrex3gMHfb2は選択可能なマーカーとしてamdS遺伝子を有するが、pTrex8RHfb2はpyr2を有することである。いずれのベクターも、LR-Gateway登録商標クローン化手順により、pENTRTOPO/Dベクター及び目的地ベクターpTrex3gM及びpTrex8Rにおいてクローン化されたhfb2遺伝子の染色体コピーを使用して構成された。表6は、プラスミドpTrex8Rhfb2及びpTrex3gMhfb2における機能的要素の完全リストを提供する。表6に列挙されていない任意の配列は、LR-Gateway登録商標反応により生成される制限部位又は配列のように、遺伝子工学の目的で使用される、DNAの短い断片である。プラスミドpTrex8RHfb2及びpTrex3gMHfb2の機能的及び部分的制限マップを、図12に提供する。それらの完全ヌクレオチド配列を図13に列挙する。HFB2発現カセットによるトリコデルマリーゼイTreeseiDUD5の形質転換形質転換は、2つの連続段階で行った。最初に、株DUD5を、プラスミドpTrex8Rhfb2の単離された大SfiI断片を用いて、標準プロトプラスト変換技法を使用してウリジン原栄養に形質転換した。ランダムな形質転換細胞群の培養培地をスクリーニングした後、高レベルのHFB2発現のために3つのクローンDUD5HFB176、194、及び228を選択した。これらの単離体は、プラスミドpTrex3gMhfb2の大SfiI断片によって、アセトアミド同化表現型に更に形質転換した。2回目のスクリーニング後同様に、cbhIプロモーターを誘導する条件下で、液体培養物中で個別の形質転換細胞を増殖させ、培養培地をSDSPAGEによって解析することによって、クローンDUD5HFB2B、DUD5HFB2D、DUD5HFB2K、及びDUD5HFB2Nを最善のHFB2生成体として選択した。本発明は、以下の番号付き項目によって更に説明される。1.熱安定性EGVポリペプチドの生成を実質的に低減又は防止するように修飾されるトリコデルマTrichoderma宿主細胞。2.破壊されたegl5遺伝子を含む、項目1に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。3.欠失されたegl5遺伝子を含む、項目1又は2に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。4.egl5遺伝子が相同組換えによって欠失される、項目1~3のいずれか一項に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。5.機能的egl5遺伝子を含む親宿主細胞を修飾することによって生成される、項目1~4のいずれか一項に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。6.熱不安定性酵素をコードする1つ以上の内因性機能的遺伝子を更に含む、項目1~5のいずれか一項に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。7.セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、及びプロテアーゼからなる群から選択される熱不安定性酵素をコードする1つ以上の機能的遺伝子を更に含む、項目1~6のいずれか一項に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。8.熱不安定性セルラーゼ又はヘミセルラーゼをコードする機能的遺伝子を更に含む、項目1~7のいずれか一項に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。9.所望の機能的遺伝子を更に含む、項目1~8のいずれか一項に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。10.所望の遺伝子が、熱安定性ポリペプチドをコードする、項目9に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。11.熱安定性ポリペプチドがヒドロホビンである、項目10に記載のトリコデルマTrichoderma宿主細胞。12.トリコデルマTrichoderma宿主細胞内で所望の熱安定性タンパク質を作製するための方法であって、所望の熱安定性タンパク質をコードする遺伝子を、破壊されたegl5遺伝子と、追加の機能的タンパク質をコードする1つ以上の内因性遺伝子と、を有するをトリコデルマTrichoderma宿主細胞の中に導入する工程と、所望のタンパク質及び追加の機能的タンパク質を生成するために好適な培地において宿主細胞をインキュベートする工程と、所望のタンパク質及び追加の機能的タンパク質を、該追加のタンパク質を実質的に不活性化するのに十分な昇温状態に曝す工程と、を含み、その昇温状態が、所望の熱安定性タンパク質を不活性化するのに不十分であり、かつ機能的egl5遺伝子により生成されるEGVセルラーゼを不活性化するのに不十分であり、その所望の熱安定性タンパク質が、追加のタンパク質からの活性の実質的に非存在下で、活性形態又は機能的形態で生成される、方法。13.トリコデルマTrichoderma宿主細胞内で所望の熱安定性タンパク質を作製するための方法であって、所望の熱安定性タンパク質及び1つ以上の追加の機能的タンパク質を、所望のタンパク質をコードする遺伝子と、破壊されたegl5遺伝子と、1つ以上の追加の機能的タンパク質をコードする1つ又は複数の遺伝子と、を含むトリコデルマTrichoderma宿主細胞内で生成する工程と、その宿主細胞から得られたタンパク質混合物を、1つ以上の追加の機能的タンパク質を実質的に不活性化するのに十分であるが、所望の熱安定性タンパク質及び機能的egl5により生成されるEGVセルラーゼを不活性化するには不十分である、昇温状態に曝す工程と、を含み、所望の熱安定性タンパク質が、追加のタンパク質からの活性の実質的に非存在下で、活性形態又は機能的形態で生成される、方法。14.所望の熱安定性タンパク質をトリコデルマTrichoderma宿主細胞内で作製するための方法であって、所望の熱安定性タンパク質をコードする遺伝子と、破壊されたegl5遺伝子と、追加の機能的タンパク質をコードする1つ以上の遺伝子と、を含むトリコデルマTrichoderma宿主細胞から得られたタンパク質混合物を昇温状態に曝して、1つ以上の追加の機能的タンパク質を不活性化し、それによって追加の機能的タンパク質からの活性の非存在下で、活性形態又は機能形態で、所望の熱安定性タンパク質を生成する工程を含む。15.egl5遺伝子が、egl5遺伝子を自然に含む宿主細胞内で破壊される、項目12~14のいずれか一項に記載の方法。16.egl5遺伝子が、egl5遺伝子を自然に含む宿主細胞内で欠失される、項目12~15のいずれか一項に記載の方法。17.egl5が、相同組換えによって欠失される、項目12~16のいずれか一項に記載の方法。18.1つ以上の追加のタンパク質が、熱不安定性タンパク質である、項目12~17のいずれか一項に記載の方法。19.1つ以上の追加のタンパク質が、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、及びプロテアーゼからなる群から選択される、項目12~18のいずれか一項に記載の方法。20.1つ以上の追加のタンパク質が、エキソセロビオヒドロラーゼ、エンドグルカナーゼ、及びβ-グルコシダーゼからなる群から選択される、項目12~18のいずれか一項に記載の方法。21.所望のタンパク質が、可逆的に熱変性可能性であることに基づいて熱安定性である、項目12~20のいずれか一項に記載の方法。22.所望のタンパク質が、ヒドロホビンである、項目12~20のいずれか一項に記載の方法。23.昇温状態が、90°C以上である、項目12~22のいずれか一項に記載の方法。24.昇温状態への暴露が、5分以上の時間の間である、項目12~23のいずれか一項に記載の方法。25.昇温状態への暴露が、60分以上の時間の間である、項目12~23のいずれか一項に記載の方法。26.項目12~25のいずれか一項に記載の方法により生成される、熱安定性又は可逆的に熱変性可能性なタンパク質。27.糸状菌宿主細胞から得られ、かつヒドロホビンポリペプチドを含む発酵ブロス組成物であって、当該発酵ブロスが、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼ活性を実質的に含まない、発酵ブロス組成物。28.ヒドロホビンポリペプチドが、熱不安定性セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドの存在下で生成され、かつセルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドを不活性化するように昇温状態に曝される、項目27に記載の発酵ブロス組成物。29.ヒドロホビンポリペプチドが、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドをコードする破壊された遺伝子を有する宿主細胞内で生成される、項目27に記載の発酵ブロス組成物。30.ヒドロホビンポリペプチドが、セルラーゼ及び/又はマンナナーゼポリペプチドをコードする遺伝子を欠失する宿主細胞内で生成される、項目27に記載の発酵ブロス組成物。したがって、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明したが、上記項目により定義される発明は、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、その多くの明らかな変型が可能であるため、上記説明に記載された特定の詳細に限定されるものではないことを理解されたい。"