"抗体の抗原結合ドメインを含み、前記抗原結合ドメインは、IL-23には特異的に結合するが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合しない、単離されたまたは組み換えIL-23結合タンパク質。前記抗原結合ドメインは、IL-23のヘテロ二量体界面に特異的に結合する、請求項1に記載のIL-23結合タンパク質。抗体の抗原結合ドメインを含み、前記抗原結合ドメインは、iIL-23には特異的に結合するが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合せず、ii中の水素が重水素と交換されたIL-23に結合し、iii中の水素が重水素と交換されたIL-23への結合時に、配列番号2の残基112~144を含む領域における前記重水素の水素への交換を低減する、単離されたまたは組み換えIL-23結合タンパク質。1nM以下のIC50および/または1nM以下のEC50で、IL-23のIL-23受容体IL-23Rへの結合を低減する、請求項1~3のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質。約1nM以下のIC50および/または1nM以下のEC50で、脾細胞によるIL-23誘発性のIL-17分泌を低減する、請求項1~4のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質。IL-23に特異的に結合し、抗体のIL-23への結合を競合的に阻害することができる請求項1または2に記載のIL-23結合タンパク質であって、前記抗体は、i配列番号7に記載の配列を含むVHおよび配列番号12に記載の配列を含むVL、またはii配列番号49に記載の配列を含むVHおよび配列番号50に記載の配列を含むVL、のうちのいずれか1つを含む、前記タンパク質。前記タンパク質は、i配列番号7に記載の配列を含むVHおよび配列番号12に記載の配列を含むVL、またはii配列番号49に記載の配列を含むVHおよび配列番号50に記載の配列を含むVL、のうちのいずれか1つを含む抗体によって結合されるエピトープと同じ、またはそれと重複するエピトープに結合する、請求項6に記載のIL-23結合タンパク質。前記抗原結合ドメインは、IL-23の構成要素であるときに、IL-23のIL-23p19サブユニットに特異的に結合する、請求項1、2、4、または5のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質。前記抗原結合ドメインは、IL-23の構成要素が配列番号2のアミノ酸112~144を含む領域にあるときに、IL-23のIL-23p19サブユニットに特異的に結合する、請求項8に記載のIL-23結合タンパク質。配列番号7、12、26~29、49、50のいずれか1つ、配列番号20もしくは30~33のいずれか1つのアミノ酸1~120、配列番号45もしくは46のアミノ酸1~113に記載のアミノ酸配列、または配列番号6、11、18、19、57~60、76、72、73、もしくは77のいずれか1つに記載の配列を含む核酸によってコードされるアミノ酸配列を含む、抗体の抗原結合ドメインを含み、前記抗原結合ドメインは、IL-23には特異的に結合するが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合しない、単離されたまたは組み換えIL-23結合タンパク質。前記抗原結合ドメインは、i配列番号26に記載の配列を含む重鎖可変領域VHおよび配列番号27に記載の配列を含む軽鎖可変領域VL、ii配列番号28に記載の配列を含むVHおよび配列番号29に記載の配列を含むVL、またはiii配列番号49に記載の配列を含むVHおよび配列番号50に記載の配列を含むVL、の可変領域対のうちの1つの、6つの相補性決定領域CDRを含む、請求項1または2に記載のIL-23結合タンパク質。前記タンパク質は、i配列番号8もしくは51に記載の配列、または図7A、7B、もしくは7EでCDR1と標識されかつ下線を引いた配列を含む、重鎖CDR1と、ii配列番号9、22、もしくは52に記載の配列、または図7A、7B、もしくは7EでCDR2と標識されかつ下線を引いた配列を含む重鎖CDR2であって、随意に、CDR2アミノ酸配列の5つのC末端アミノ酸のいずれか1つ以上が、任意の他の天然に存在するアミノ酸と置換される、重鎖CDR2と、iii配列番号10もしくは53に記載の配列、または図7A、7B、もしくは7EでCDR3と標識されかつ下線を引いた配列を含む、重鎖CDR3と、iv配列番号13もしくは54に記載の配列、または図7C、7D、もしくは7FでCDR1と標識されかつ下線を引いた配列を含む、軽鎖CDR1と、v配列番号14もしくは55に記載の配列、または図7C、7D、もしくは7FでCDR2と標識されかつ下線を引いた配列を含む、軽鎖CDR2と、vi配列番号15もしくは56に記載の配列、または図7C、7D、もしくは7FでCDR3と標識されかつ下線を引いた配列を含む、軽鎖CDR3と、を含む、請求項11に記載のIL-23結合タンパク質。前記抗体の前記抗原結合ドメインは、配列番号26、28、または49のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域VHを含む、請求項1または2に記載のIL-23結合タンパク質。前記VHは、配列番号7、配列番号49、または配列番号30~33のいずれか1つに記載のアミノ酸1~120のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項13に記載のタンパク質。前記抗体の前記抗原結合ドメインは、配列番号27、29、または50のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域VLを含む、請求項1または2に記載のIL-23結合タンパク質。前記VLは、配列番号12、配列番号50、または配列番号45もしくは46のアミノ酸1~113のいずれか1つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項15に記載のIL-23結合タンパク質。重鎖可変領域VHおよび軽鎖可変領域VLを含み、前記VHおよびVLは結合して前記抗原結合ドメインを含むFvを形成する、請求項1~16のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質。前記VHおよびVLが単一のポリペプチド鎖中にある、請求項17に記載のIL-23結合タンパク質。i単鎖Fv断片scFv、ii二量体scFvジscFv、またはiiiFcまたは重鎖定常ドメインCH2および/もしくはCH3に連結されたiおよび/またはiiのうちの少なくとも1つである、請求項18に記載のIL-23結合タンパク質。前記VLおよびVHが別々のポリペプチド鎖中にある、請求項17に記載のIL-23結合タンパク質。iダイアボディ、iiトリアボディ、iiiテトラボディ、ivFab、vFab’2、viFv、またはivFcまたは重鎖定常ドメインCH2および/もしくはCH3に連結されたi~iiiのうちの1つである、請求項20に記載のIL-23結合タンパク質。抗体である、請求項20に記載のIL-23結合タンパク質。抗原結合ドメインを含む抗体であって、前記抗原結合ドメインは、IL-23には特異的に結合するが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合せず、i配列番号26に記載の配列を含む重鎖可変領域VHおよび配列番号27に記載の配列を含む軽鎖可変領域VL、ii配列番号28に記載の配列を含むVHおよび配列番号29に記載の配列を含むVL、またはiii配列番号49に記載の配列を含むVHおよび配列番号50に記載の配列を含むVL、を含む、抗体。i配列番号30のアミノ酸1~120に記載の配列を含むVH、および配列番号45のアミノ酸1~113に記載の配列を含むVL、ii配列番号31のアミノ酸1~120に記載の配列を含むVH、および配列番号45のアミノ酸1~113に記載の配列を含むVL、iii配列番号32のアミノ酸1~120に記載の配列を含むVH、および配列番号46のアミノ酸1~113に記載の配列を含むVL、またはiv配列番号33のアミノ酸1~120に記載の配列を含むVH、および配列番号46のアミノ酸1~113に記載の配列を含むVL、のうちのいずれか1つを含むヒト化抗体である、請求項23に記載の抗体。ヒト重鎖定常領域に連結される配列番号7に記載の配列を含むVHおよびヒト軽鎖定常領域に連結される配列番号12に記載の配列を含むVLを含むキメラ抗体である、請求項23に記載の抗体。前記キメラ抗体は、配列番号20に記載の配列を含む重鎖、および配列番号21に記載の配列を含む軽鎖を含む、請求項25に記載の抗体。配列番号7に記載の配列を含むVH、および配列番号12に記載の配列を含むVL、またはそれらのキメラ、脱免疫化、CDRグラフト、ヒト化、もしくは合成ヒト化形態を含む、モノクローナル抗体である、請求項23に記載の抗体。抗原結合ドメインを含むヒト抗体であって、抗原結合ドメインがIL-23には特異的に結合するが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合せず、配列番号49に記載の配列を含む重鎖可変領域VH、および配列番号50に記載の配列を含む軽鎖可変領域VLを含む、前記抗体。キメラであるか、脱免疫化、CDRグラフト、ヒト化、霊長類化、または合成ヒト化される、請求項1~22のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質。化合物に抱合した、請求項1~22のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、または請求項23~29のいずれか1項に記載の抗体。前記化合物は、放射性同位体、検出可能な標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象内で前記タンパク質の半減期を延長させる化合物、およびこれらの混合物から成る群から選択される、請求項30に記載のIL-23結合タンパク質または抗体。請求項1~22のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、もしくは請求項23~29のいずれか1項に記載の抗体をコードする、またはそのポリペプチドをコードする、単離されたまたは組み換え核酸。配列番号6、11、57~60、72、73、76、または77のいずれか1つに記載の配列を含む、単離されたまたは組み換え核酸。プロモーターに操作可能に連結された、請求項32または33に記載の核酸を含む、発現構築体。請求項1~22のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、または請求項23~29のいずれか1項に記載の抗体を発現する、単離されたまたは組み換え細胞。請求項32もしくは33に記載の核酸、または請求項34に記載の発現構築体を含む、請求項35に記載の細胞。請求項1~22もしくは29~31のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、請求項23~28、30、もしくは31のいずれか1項に記載の抗体、請求項32もしくは33に記載の核酸、請求項34に記載の発現構築体、または請求項35もしくは36に記載の細胞、および好適な担体もしくは希釈剤を含む、組成物。前記担体または希釈剤は、薬学的に許容される、請求項37に記載の組成物。請求項1~22もしくは29~31のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、請求項23~28、30、もしくは31のいずれか1項に記載の抗体、請求項32もしくは33に記載の核酸、請求項34に記載の発現構築体、請求項35もしくは36に記載の細胞、または請求項37もしくは38に記載の組成物を、細胞、組織、臓器、または対象に投与することを含む、前記細胞、組織、臓器、または対象における少なくとも1つのIL-23媒介疾患conditionの症状を治療または予防するための方法。前記疾患は、炎症性疾患である、請求項39に記載の方法。請求項1~22もしくは29~31のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、請求項23~28、30、もしくは31のいずれか1項に記載の抗体、請求項32もしくは33に記載の核酸、請求項34に記載の発現構築体、請求項35もしくは36に記載の細胞、または請求項37もしくは38に記載の組成物の、医療薬における使用。請求項1~22もしくは29~31のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、請求項23~28、30、もしくは31のいずれか1項に記載の抗体、請求項32もしくは33に記載の核酸、請求項34に記載の発現構築体、または請求項35もしくは36に記載の細胞の、疾患の治療のための薬剤の製造における使用。前記疾患は、乾癬、クローン病、または多発性硬化症である、請求項40もしくは41に記載の方法、または請求項42に記載の使用。乾癬、クローン病、または多発性硬化症の治療で使用するための、請求項1~22もしくは29~31のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、請求項23~28、30、もしくは31のいずれか1項に記載の抗体、請求項32もしくは33に記載の核酸、請求項34に記載の発現構築体、請求項35もしくは36に記載の細胞、または請求項37もしくは38に記載の組成物。試料中のIL-23を検出するための方法であって、試料を、請求項1~22もしくは29~31のいずれか1項に記載のIL-23結合タンパク質、または請求項23~28、30、もしくは31のいずれか1項に記載の抗体と接触させて、抗原-タンパク質複合体を形成することと、前記複合体を検出することと、を含み、前記複合体を検出することが前記試料中のIL-23を示す、前記方法。対象の疾患を診断するための方法であって、前記対象由来の試料で請求項45に記載の方法を行うことを含み、前記試料中のIL-23の検出が前記疾患を示す、方法。前記試料中のIL-23のレベルを判定することを含み、対照試料と比較した前記試料中のIL-23のレベルの増加または減少が前記疾患を示す、請求項46に記載の方法。対象のIL-23の位置を特定するlocalize、および/または検出するための方法であって、存在する場合は、IL-23に結合した請求項30もしくは31に記載のIL-23結合タンパク質または抗体をインビボで検出することを含み、前記タンパク質または抗体が検出可能な標識に抱合されている、前記方法。前記タンパク質または抗体を前記対象に投与することをさらに含む、請求項48に記載の方法。概要この明細書の全体を通して、別途具体的に提示されない限り、または別途文脈上必要でない限り、単一のステップ、組成物、一群のステップ、または一群の組成物への言及は、1つおよび複数すなわち、1つ以上のそれらのステップ、組成物、一群のステップ、または一群の組成物を包含すると解釈されるべきである。したがって、別途文脈が明確に指示しない限り、本明細書で使用される単数形a、an、およびtheは、複数の指示対象を含む。例えば、aの参照は、1つならびに2つ以上を含み、anの参照は、1つならびに2つ以上を含み、theの参照は、1つならびに2つ以上を含む、等である。本開示の各実施例は、別途具体的に提示されない限り、あらゆる実施形態に準用されるものとする。本開示の各実施例は、抗体の抗原結合ドメインを含み、該抗原結合ドメインが、配列番号49に記載の配列を含むVHおよび配列番号50に記載の配列を含むVLを含む、タンパク質に準用されるものとする。本開示の各実施例は、抗体の抗原結合ドメインを含み、該抗原結合ドメインが、配列番号7に記載の配列を含むVHおよび配列番号12に記載の配列を含むVL、またはそれらのヒト化形態を含む、例えば、表1の2~23行のいずれか1行で説明される抗体のVHおよびVLを含む、タンパク質に準用されるものとする。本開示の各実施例は、抗体の抗原結合ドメインを含み、該抗原結合ドメインが、表1の2、3、6、または7行のいずれか1行で説明される抗体のVHおよびVLを含む、タンパク質に準用されるものとする。当業者は、本明細書の開示に対して、具体的に説明されたもの以外の変形形態および修正形態が可能であることを理解するであろう。本開示は、そのような全ての変形形態および修正形態を包含することを理解されたい。本発明は、本明細書において参照または示される全てのステップ、特徴、組成物、および化合物を個別または集合的に含み、かつ該ステップまたは特徴の全ての組み合わせ、または任意の2つ以上の組み合わせを含む。本開示の範囲は、本明細書で説明される特定の実施形態に限定されるものではなく、それらは例証することを意図したものに過ぎない。機能的に同等の産物、組成物、および方法は、明らかに本開示の範囲内である。本明細書で説明される組成物および方法は、別途指示されていない限り、分子生物学、細菌学、ウイルス学、組み換えDNA技術、溶液中のペプチド合成、固相ペプチド合成、および免疫学といった従来の手法を使用して、過度の実験を伴わずに産生されるか、または行われる。そのような手順は、例えば、Sambrook,FritschManiatis,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratories,NewYork,SecondEdition1989,VolsI,II,およびIII全て、BennyK.C.Lo,AntibodyEngineering:MethodsandProtocols,2004HumanaPress,Vol.248、DNACloning:APracticalApproach,Vols.IおよびIID.N.Glover,ed.,1985,IRLPress,Oxford,全文、OligonucleotideSynthesis:APracticalApproachM.J.Gait,ed,1984IRLPress,Oxford,全文および特に、Gait,ppl-22、Atkinsonetal,pp35-81、Sproatetal,pp83-115、およびWuetal,pp135-151による論文、4.NucleicAcidHybridization:APracticalApproachB.D.HamesS.J.Higgins,eds.,1985IRLPress,Oxford,全文、ImmobilizedCellsandEnzymes:APracticalApproach1986IRLPress,Oxford,全文、Perbal,B.,APracticalGuidetoMolecularCloning1984、MethodsInEnzymologyS.ColowickandN.Kaplan,eds.,AcademicPress,Inc.,全シリーズ、J.F.RamalhoOrtigao,KnowledgedatabaseofAccesstoVirtualLaboratorywebsiteInteractiva,GermanyのTheChemistryofPeptideSynthesis、Sakakibara,D.,Teichman,J.,Lien,E.LandFenichel,R.L.1976.Biochem.Biophys.Res.Commun.73336-342、Merrifield,R.B.1963.J.Am.Chem.Soc.85,2149-2154、Barany,G.andMerrifield,R.B.1979inThePeptidesGross,E.andMeienhofer,J.eds.,vol.2,pp.1-284,AcademicPress,NewYork.12.Wunsch,E.,ed.1974SynthesevonPeptideninHouben-WeylsMetodenderOrganischenChemieMuler,E.,ed.,vol.15,4thedn.,Parts1and2,Thieme,Stuttgart、Bodanszky,M.1984PrinciplesofPeptideSynthesis,Springer-Verlag,Heidelberg、Bodanszky,M.Bodanszky,A.1984ThePracticeofPeptideSynthesis,Springer-Verlag,Heidelberg、Bodanszky,M.1985Int.J.PeptideProteinRes.25,449-474、HandbookofExperimentalImmunology,Vols.I-IVD.M.WeirandC.C.Blackwell,eds.,1986,BlackwellScientificPublications、およびAnimalCellCulture:PracticalApproach,ThirdEditionJohnR.W.Masters,ed.,2000,ISBN0199637970,全文、で説明されている。および/またはという用語、例えばXおよび/またはYという用語は、XおよびYもしくはXまたはYのいずれかを意味するものと理解されるものとし、どちらも意味すること、またはいずれかを意味することに対する明確な支持を提供するものと解釈されるものとする。本明細書で使用される~、間betweenという用語は、2つの値の間の範囲、または2つの残基間のタンパク質またはポリペプチド中の1つの残基という状況において、包含的な様式で読み取られる、すなわち2つの列挙された値/残基の間に位置する任意の値/残基、および2つの列記された値/残基を含むものとして読み取られるべきである。例えば、1~10という用語は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、および10を含むものと理解されるものとする。本明細書の状況において、配列番号XX~YYのいずれか1つまたはいずれか1つ以上は、本明細書で定義されるように列挙された配列番号の間にある配列のいずれか1つまたは1つ以上を定義する明細書または特許請求の範囲に対する原文通りの支持を提供するものと理解されるであろう。この明細書の全体を通して、含むcompriseという用語、または含むcomprisesもしくは含んでいるcomprising等の変形は、明示された要素、完全体、もしくはステップ、または一群の要素、整数、もしくはステップを含むことを意味するが、任意の他の要素、完全体、もしくはステップ、または一群の要素、整数、もしくはステップを除外しないことを意味するものと理解されるであろう。配列リストの見出し配列番号1は、ヒトIL-12p40サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号2は、ヒトIL-23p19サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号3は、ヒトIgG1重鎖定常領域のアミノ酸配列である。配列番号4は、ヒト軽鎖カッパ定常領域のアミノ酸配列である。配列番号5は、可撓性リンカーによって分離されたIL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットを含む融合タンパク質をコードする、ヌクレオチド配列である。配列番号6は、抗体E11E7のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号7は、抗体E11E7のVHのアミノ酸配列である。配列番号8は、抗体E11E7のVHのCDR1のアミノ酸配列であるKabat付番方式に従う。配列番号9は、抗体E11E7のVHのCDR2のアミノ酸配列であるKabat付番方式に従う。配列番号10は、抗体E11E7のVHのCDR3のアミノ酸配列であるKabat付番方式に従う。配列番号11は、抗体E11E7のVLをコードするヌクレオチド配列である。配列番号12は、抗体E11E7のVLのアミノ酸配列である。配列番号13は、抗体E11E7のVLのCDR1のアミノ酸配列であるKabat付番方式に従う。配列番号14は、抗体E11E7のVLのCDR2のアミノ酸配列であるKabat付番方式に従う。配列番号15は、抗体E11E7のVLのCDR3のアミノ酸配列であるKabat付番方式に従う。配列番号16は、ヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列である。配列番号17は、FLAGタグのアミノ酸配列である。配列番号18は、E11E7キメラ抗体のVLをコードするヌクレオチド配列である。配列番号19は、E11E7キメラ抗体のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号20は、E11E7のVHおよびヒト定常領域を含むキメラ抗体E11E7キメラと命名の重鎖のアミノ酸配列である。配列番号21は、E11E7のVLおよびヒト定常領域を含むキメラ抗体E11E7キメラと命名の軽鎖のアミノ酸配列である。配列番号22は、本明細書で説明されるIL-23と結合する抗体のVHの代替のCDR2のアミノ酸配列である。配列番号23は、抗IL-23抗体のVHのCDR1のコンセンサス配列のアミノ酸配列である拡張Chothia付番方式に従う。配列番号24は、抗IL-23抗体のVHのCDR2のコンセンサス配列のアミノ酸配列であるKabat付番方式に従う。配列番号25は、ヒト化抗IL-23抗体のVHのCDR1のコンセンサス配列のアミノ酸配列である拡張Chothia付番方式に従う。配列番号26は、抗IL-23抗体のVHのコンセンサス配列のアミノ酸配列である。配列番号27は、抗IL-23抗体のVLのコンセンサス配列のアミノ酸配列である。配列番号28は、ヒト化抗IL-23抗体のVHのコンセンサス配列のアミノ酸配列である。配列番号29は、ヒト化抗IL-23抗体のVLのコンセンサス配列のアミノ酸配列である。配列番号30は、ヒト化抗体重鎖番号20のアミノ酸配列である。配列番号31は、ヒト化抗体重鎖番号21のアミノ酸配列である。配列番号32は、ヒト化抗体重鎖番号6のアミノ酸配列である。配列番号33は、ヒト化抗体重鎖番号8のアミノ酸配列である。配列番号34は、ヒト化抗体重鎖番号9のアミノ酸配列である。配列番号35は、ヒト化抗体重鎖番号16のアミノ酸配列である。配列番号36は、ヒト化抗体重鎖番号1のアミノ酸配列である。配列番号37は、ヒト化抗体重鎖番号13のアミノ酸配列である。配列番号38は、ヒト化抗体重鎖番号7のアミノ酸配列である。配列番号39は、ヒト化抗体重鎖番号11のアミノ酸配列である。配列番号40は、ヒト化抗体重鎖番号18のアミノ酸配列である。配列番号41は、ヒト化抗体重鎖番号5のアミノ酸配列である。配列番号42は、ヒト化抗体重鎖番号10のアミノ酸配列である。配列番号43は、ヒト化抗体重鎖番号14のアミノ酸配列である。配列番号44は、ヒト化抗体重鎖番号15のアミノ酸配列である。配列番号45は、ヒト化抗体軽鎖番号4のアミノ酸配列である。配列番号46は、ヒト化抗体軽鎖番号22のアミノ酸配列である。配列番号47は、ヒト化抗体軽鎖番号12のアミノ酸配列である。配列番号48は、ヒト化抗体軽鎖番号23のアミノ酸配列である。配列番号49は、ヒト抗体番号ST883/885のVHのアミノ酸配列である。配列番号50は、ヒト抗体番号ST883/885のVLのアミノ酸配列である。配列番号51は、ヒト抗体番号ST883/885のVHのCDR1のアミノ酸配列である。配列番号52は、ヒト抗体番号ST883/885のVHのCDR2のアミノ酸配列である。配列番号53は、ヒト抗体番号ST883/885のVHのCDR3のアミノ酸配列である。配列番号54は、ヒト抗体番号ST883/885のVLのCDR1のアミノ酸配列である。配列番号55は、ヒト抗体番号ST883/885のVLのCDR2のアミノ酸配列である。配列番号56は、ヒト抗体番号ST883/885のVLのCDR3のアミノ酸配列である。配列番号57は、ヒト化抗体重鎖番号20のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号58は、ヒト化抗体重鎖番号21のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号59は、ヒト化抗体重鎖番号6のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号60は、ヒト化抗体重鎖番号8のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号61は、ヒト化抗体重鎖番号9のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号62は、ヒト化抗体重鎖番号16のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号63は、ヒト化抗体重鎖番号1のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号64は、ヒト化抗体重鎖番号13のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号65は、ヒト化抗体重鎖番号7のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号66は、ヒト化抗体重鎖番号11のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号67は、ヒト化抗体重鎖番号18のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号68は、ヒト化抗体重鎖番号5のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号69は、ヒト化抗体重鎖番号10のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号70は、ヒト化抗体重鎖番号14のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号71は、ヒト化抗体重鎖番号15のVHをコードするヌクレオチド配列である。配列番号72は、ヒト化抗体軽鎖番号4のVLをコードするヌクレオチド配列である。配列番号73は、ヒト化抗体軽鎖番号22のVLをコードするヌクレオチド配列である。配列番号74は、ヒト化抗体軽鎖番号12のVLをコードするヌクレオチド配列である。配列番号75は、ヒト化抗体軽鎖番号23のVLをコードするヌクレオチド配列である。配列番号76は、ヒト抗体番号ST883/885のヌクレオチド配列をコードするVHである。配列番号77は、ヒト抗体番号ST883/885のヌクレオチド配列をコードするVLである。配列番号78は、連結した構成要素IL-12p40-リンカー-IL-23p19を含む融合タンパク質のアミノ酸配列である。配列番号79は、HISタグのアミノ酸配列である。配列番号80は、AviHISタグのアミノ酸配列である。配列番号81は、抗体の重鎖のリーダー配列のアミノ酸配列である。配列番号82は、抗体の軽鎖のリーダー配列のアミノ酸配列である。配列番号83は、ヒト軽鎖ラムダ定常領域のアミノ酸配列である。選択された定義単離されたタンパク質または単離されたポリペプチドという用語は、その由来起源または由来源のために、その固有の状態において該タンパク質またはポリペプチドを伴う天然に随伴される成分を伴わない、または同じ種に由来する他のタンパク質を実質的に含まない、タンパク質またはポリペプチドである。タンパク質は、当技術分野で知られているタンパク質精製手法を使用して、単離によって、天然に随伴される成分を実質的に含まないようにすることができる。本明細書で使用される回収するという用語は、例えば、当技術分野で知られているタンパク質精製手法を使用して、単離によって、ポリペプチド等の化学種が、天然に随伴される成分を実質的に含まないようにするプロセスを指す。一実施例において、単離されたタンパク質は、実質的に精製される。実質的に精製されるという用語は、汚染物質を実質的に含まない、例えば、汚染物質を少なくとも約70、75、80、85、90、95、96、97、98、または99含まないことを意味する。組み換えという用語は、人工遺伝子組み換えの産物を意味することを理解されたい。故に、抗体の抗原結合ドメインを含む組み換えタンパク質という状況において、この用語は、B細胞の成熟中に起こる天然組み換えの産物である、対象の体内で自然に発生する抗体を包含しない。しかしながら、そのような抗体が単離された場合、それは抗体可変領域を含む単離されたタンパク質とみなされるとする。同様に、組み換え手段を使用して、タンパク質をコードする核酸を単離させて発現させた場合、結果として生じるタンパク質は、抗体の抗原結合ドメインを含む組み換えタンパク質である。組み換えタンパク質は、それが細胞、組織、または対象内にあるとき、例えばそこで発現したときに、人工組み換え手段によって発現させたタンパク質も包含する。IL-23結合タンパク質という用語は、単一のポリペプチド鎖すなわち、ペプチド結合によって連結される一連の隣接するアミノ酸、または本明細書で説明および/もしくは特許請求される様式でIL-23に結合することが可能な、互いに共有的または非共有的に連結される一連のポリペプチドすなわち、ポリペプチド複合体を含むものと解釈されるものとする。例えば、一連のポリペプチド鎖は、好適な化学結合またはジスルフィド結合を使用して、共有的に連結することができる。非共有結合の例としては、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、および疎水相互作用が挙げられる。前述のパラグラフからのポリペプチド鎖という用語は、ペプチド結合によって連結される一連の隣接するアミノ酸を意味することが理解されるであろう。本明細書で使用される抗原結合ドメインという用語は、抗原に特異的に結合することが可能である、抗体の領域、すなわち、VH、VL、またはFvを意味するものと解釈されるものとする。抗原結合ドメインは、抗体全体という状況である必要はなく、例えば、単離した形態例えば、ドメイン抗体または例えば本明細書で説明されるscFv等の別の形態とすることができる。本開示の目的で、抗体という用語は、Fv内に含まれる抗原結合部位によって、1つまたは複数の密に関連する抗原例えば、IL-23に特異的に結合することが可能な、タンパク質を含む。この用語は、4つの鎖抗体例えば、2つの軽鎖および2つの重鎖、組み換え抗体、または修飾抗体例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、CDR移植抗体、霊長類化抗体、非免疫化抗体、合成ヒト化抗体、半抗体、二重特異性抗体を含む。抗体は、一般に、定常ドメインを含み、これは、定常領域、定常断片、または結晶化可能断片Fcに配列することができる。抗体の例示的な形態は、それらの基本単位として4鎖構造を含む。完全長抗体は、共有的に連結される2つの重鎖約50~70kD、および2つの軽鎖それぞれ、約23kDaを含む。軽鎖は、一般に、可変領域存在する場合と、定常ドメインとを含み、哺乳動物では、κ軽鎖、またはλ軽鎖のいずれかである。重鎖は、一般に、可変領域と、ヒンジ領域によって付加的な定常ドメインに連結される1つまたは2つの定常ドメインとを含む。哺乳動物の重鎖は、α、δ、ε、γ、またはμの型の1つである。各軽鎖も、重鎖の1つに共有的に連結される。例えば、2つの重鎖、ならびに重鎖および軽鎖は、鎖間ジスルフィド結合によって、および非共有相互作用によって互いに保持される。鎖間ジスルフィド結合の数は、抗体の種類によって変動し得る。各鎖は、N末端可変領域それぞれ、アミノ酸長さが約110である、VHまたはVLと、C末端の1つ以上の定常ドメインとを有する。軽鎖アミノ酸長さが約110である、CLの定常ドメインは、重鎖アミノ酸長さが330~440である、CH1の第1の定常ドメインと整列され、それにジスルフィド結合する。軽鎖可変領域は、重鎖の可変領域と整列される。抗体重鎖は、2つ以上の付加的なCHドメイン例えば、CH2、CH3等を含むことができ、かつCH1定常ドメインとCH2定常ドメインとの間にヒンジ領域を含むことができる。抗体は、任意の型例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、およびIgY、クラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2またはサブクラスのものとすることができる。一実施例において、抗体は、ネズミマウスまたはラット抗体、または霊長類例えば、ヒト抗体である。一実施例において、抗体は、キメラであるか、ヒト化、合成ヒト化、CDR移植、または脱免疫化される。本明細書で使用される可変領域は、抗原に特異的に結合することができる、本明細書で定義される抗体の軽鎖および/または重鎖の部分を指し、相補性決定領域CDR、すなわち、CDR1、CDR2、およびCDR3と、フレームワーク領域FRとのアミノ酸配列を含む。例えば、可変領域は、3つのCDRとともに、3または4つのFR例えば、FR1、FR2、FR3、および随意にFR4を含む。IgNAR由来のタンパク質の場合、タンパク質は、CDR2が欠如し得る。VHは、重鎖の可変領域を指す。VLは、軽鎖の可変領域を指す。本明細書で使用される相補性決定領域同意語:CDR、すなわち、CDR1、CDR2、およびCDR3という用語は、その存在が特異的抗体結合の主な要因である、抗体可変領域のアミノ酸残基を指す。各可変領域は、典型的に、CDR1、CDR2、およびCDR3として識別される、3つのCDR領域を有する。一実施例において、CDRおよびFRに割り当てられるアミノ酸位置は、KabatSequencesofProteinsofImmunologicalInterest,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.,1987および1991のKabat配列に従って定義される本明細書では、Kabat付番方式とも称される。別の実施例において、CDRおよびFRに割り当てられるアミノ酸位置は、拡張Chothia番号付けスキームhttp://www.bioinfo.org.uk/mdex.htmlに従って定義される。Kabatの付番方式によれば、VHのFRおよびCDRは、残基1~30FR1、31~35CDR1、36~49FR2、50~65CDR2、66~94FR3、95~102CDR3、および103~113FR4に位置付けられる。Kabatの付番方式によれば、VLのFRおよびCDRは、残基1~23FR1、24~34CDR1、35~49FR2、50~56CDR2、57~88FR3、89~97CDR3、および98~107FR4に位置付けられる。本開示は、Kabat付番方式によって定義されるFRおよびCDRに限定されず、カノニカル付番方式、もしくはChothiaandLeskJ.MolBiol.196:901-917,1987、Chothiaetal.Nature342,877-883,1989、および/もしくはAl-Lazikanietal.,JMolBiol273,927-948,1997の付番方式、HonnegherandPlukthunJ.Mol.Biol.,309:657-670,2001、もしくはtheIMGTsystemdiscussedinGiudicellietal.,NucleicAcidsRes.,25:206-211,1997の付番方式を含む、全ての付番方式を含む。一実施例において、CDRは、Kabat付番方式に従って定義される。随意に、Kabat付番方式に従う重鎖CDR2は、本明細書で列記される5つのC末端を含まず、またはそれらのアミノ酸のいずれか1つ以上が、別の天然に存在するアミノ酸と置換される。付加的または代替的な随意選択肢において、軽鎖CDR1は、本明細書で列記される4つのN末端アミノ酸を含まず、またはそれらのアミノ酸のいずれか1つ以上が、別の天然に存在するアミノ酸と置換される。この点に関して、Padlanetal.,FASEBJ.,9:133-139,1995は、重鎖CDR2の5つのC末端アミノ酸および/または軽鎖CDR1の4つのN末端アミノ酸が、一般に、抗原結合に関与しないことを立証した。フレームワーク領域FRは、CDR残基以外の可変領域残基である。本明細書で使用されるFvという用語は、複数のポリペプチドを含むか、単一のポリペプチドを含むかに関わらず、VLおよびVHが会合して、抗原結合部位を有する、すなわち抗原に特異的に結合することが可能な複合体を形成する、任意のタンパク質を意味するものと解釈されるものとする。抗原結合部位を形成するVHおよびVLは、単一のポリペプチド鎖または異なるポリペプチド鎖中にあり得る。さらに、本開示のFvならびに本開示の任意のタンパク質は、同じ抗原に結合してもよく、結合しなくてもよい、複数の抗原結合部位を有し得る。この用語は、抗体に直接由来する断片、ならびにそのようなタンパク質の組み換え形態を包含するものと理解されるとする。いくつかの実施例では、VHが重鎖定常ドメインCH1に連結されず、および/またはVLが軽鎖定常ドメインCLに連結されない。例示的なFv含有ポリペプチドまたはタンパク質は、Fab断片、Fab’断片、Fab’断片、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、もしくはより高次の複合体、または定常領域に連結する前述の配列のいずれかもしくはそのドメイン、例えばCH2ドメインもしくはCH3ドメイン、例えば、ミニボディを含む。Fab断片は、免疫グロブリンの一価の抗原結合断片から成り、、酵素パパインによる全抗体の消化で、無傷の軽鎖および重鎖の一部分から成る断片を得ることよって産生することができ、または組み換え手段を使用して産生することができる。抗体のFab’断片は、ペプシンで全酵素を処理し、続いて還元して、無傷の軽鎖、ならびにVHおよび単一定常ドメインを含む重鎖の一部分から成る分子を得ることによって得ることができる。このようにして処理された抗体毎に、2つのFab’断片が得られる。Fab’断片は、組み換え手段によって産生することもできる。抗体のFab’2断片は、2つのジスルフィド結合によって互い保持される2つのFab’断片の二量体から成り、以降の還元を伴わずに、酵素ペプシンで全抗体分子を処理することによって得られる。Fab2断片は、例えばロイシンジッパーまたはCH3ドメインを使用して連結される2つのFab断片を含む、組み換え断片である。単鎖FvまたはscFvは、軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域が好適な可撓性ポリペプチドリンカーによって共有的に連結される抗体の可変領域断片Fvを含む、組み換え分子である。この用語の範囲に含まれる例示的なFv含有タンパク質の詳細な考察は、本明細書の以下で提供される。本明細書で使用される特異的に結合するspecificallybindsまたはbindsspecificallyという用語は、本開示のIL-23結合タンパク質が、特定の単数もしくは複数の抗原またはそれを発現する細胞と、代替の抗体または細胞よりも、長い継続期間および/または高い親和性で、より頻繁に、より迅速に反応または会合することを意味するものと解釈されるものとする。例えば、抗原に特異的に結合するタンパク質は、それが他の抗原に結合するよりも、その抗原に、高い親和性、結合活性で、より容易に、および/またはより長い継続期間で結合する。また、この定義を読み取ることによって、例えば、第1の抗原に特異的に結合するタンパク質は、第2の抗原に特異的に結合してもよく、結合しなくてもよい。このように、特異的結合は、必ずしも排他的結合または別の抗原の検出不能の結合を必要とするわけではなく、これは、選択的結合という用語で表される。1つの実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質の抗原への特異的結合は、タンパク質が、100nM以下50nM以下など、例えば、20nm以下、1nM以下等の一定の親和性で抗原に結合することを意味する。本明細書で使用される有意に結合しないという用語は、同じ条件下で試験したときに、IL-23p19サブユニットおよびIL-12p40サブユニットがIL-23の構成要素ではないときに、本開示のIL-23結合タンパク質のそれらへの結合が、IL-23への結合よりも、10倍、20倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、または100倍少ないことを示すことを意味するものと解釈されるものとする。いくつかの実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質は、IL-23p19サブユニットおよびIL-12p40サブユニットがIL-23の構成要素ではないときに、それらに対して1×10-6以下の平衡定数KDを有し、例えば、タンパク質は、少なくとも約1×10-8、5×10-9等のIL-23に対するKDを有する。この結合のレベルの減少は、ELISAまたはバイオセンサー分析例えば、Biacoreで測定し得る。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質は、例えば、ELISA、Biacore、ウエスタンブロット、またはFACSによって測定したときに、IL-23p19およびIL-12p40がIL-23の構成要素ではないときに、それらに検出可能な程度に結合しない。この点に関して、検出可能な程度に結合しないとは、例えば、アイソタイプ対照抗体を使用して判定したときに、結合のレベルがバックグラウンドよりも有意に大きくないことを意味することを理解されたい。IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときにはは、単離したIL-23p19サブユニットまたはIL-12p40サブユニット、またはそれらが別のポリペプチドと複合体形成されるときすなわち、IL-12p40サブユニットが、IL-12p35等のIL-23p19以外のポリペプチドと複合化形成され得るを包含する。本明細書で使用されるIL-23という用語は、IL-12およびIL-27を含む5つのそのようなヘテロ二量体サイトカインのファミリーに属する、ヘテロ二量体ヒトサイトカインを含むTrinchieri,Pflanzetal.2003Immunity19641-4。この用語は、例えばジスルフィド架橋で、互いに連結されたIL-23p19サブユニットおよびIL-12p40サブユニットを含む、ヘテロ二量体タンパク質を含む。IL-23という用語は、標準的な組み換え発現方法によって調製することができる、組み換えIL-23rIL-23を含むことを意図している。いくつかの実施例において、本開示は、その組み換え形態すなわち、rhIL-23を含む、ヒトIL-23本明細書では、hIL-23またはIL-23と略記されるを包含する。本明細書で使用されるIL-12/23という用語は、集合的にIL-12およびIL-23を指す。本明細書で使用されるIL-12p40という用語は、IL-23p40と同一であり、単純にp40およびp40サブユニットまたはIL-12p40サブユニットとも称され、サイトカインIL-12の40kDaサブユニット、およびサイトカインIL-23例えば、ヒトIL-12および/またはIL-23の40kDaサブユニットを含む。命名を目的とし、限定を目的としないが、IL-12p40サブユニットのアミノ酸配列は、配列番号1に記載される。一実施例において、IL-12p40サブユニットは、本明細書で論じられるように、配列番号1に記載の配列を含む。単離されたIL-12p40サブユニットという用語は、例えば別のインターロイキンタンパク質とヘテロ二量体の構成要素を形成しない形態の、上記に定義したようなIL-12p40サブユニットを意味するものと解釈されるものとする。この用語は、単離されたIL-12p40サブユニットが、いかなる他のタンパク質またはポリペプチド配列も含まないことを意味していない。例えば、IL-12p40サブユニットは、別のポリペプチド例えば、FLAGタグまたは抗体のFc領域に融合させることができる。この用語はまた、IL-12p40サブユニットが抗体のFc領域に融合した場合に、ホモ二量体を形成し得るので、単量体形態のIL-12p40サブユニットに限定されないしかしながら、これは、定義によって包含される単離されたIL-12p40サブユニットの1つの例である。本明細書で使用されるIL-23p19という用語は、単純にp19またはp19サブユニットとも称され、サイトカインIL-23例えば、ヒトのIL-23の19kDaサブユニットを含む。命名を目的とし、限定を目的としないが、IL-23p19サブユニットのアミノ酸配列は、配列番号2に記載される。一実施例において、IL-23p19サブユニットは、本明細書で論じられるように、配列番号2に記載の配列を含む。単離されたIL-23p19サブユニットという用語は、例えば別のインターロイキンタンパク質とヘテロ二量体の構成要素を形成しない形態の、上記に定義したようなIL-23p19サブユニットを意味するものと解釈されるものとする。この用語は、単離されたIL-23p19サブユニットが、いかなる他のタンパク質またはポリペプチド配列も含まないことを意味していない。例えば、IL-23p19サブユニットは、別のポリペプチド例えば、FLAGタグまたは抗体のFc領域に融合させることができる。この用語はまた、IL-23p19サブユニットが抗体のFc領域に融合した場合に、ホモ二量体を形成し得るので、単量体形態のIL-23p19サブユニットに限定されないしかしながら、これは、定義によって包含される単離されたIL-23p19サブユニットの1つの例である。本明細書で使用される、ヘテロ二量体という用語は、2つの異なるサイトカインサブユニットを含むタンパク質複合体を意味することを理解されたい。例えば、IL-23p19およびIL-12p40は、IL-23ヘテロ二量体を形成し、IL-12p40およびIL-12p35は、IL-12ヘテロ二量体を形成する。本明細書で使用される単量体という用語は、IL-12のサブユニットが別のサイトカインサブユニットと直接接触していないことを意味するものと解釈されるものとする。本明細書で使用される生物活性とは、IL-23の1つ以上の生物学的特性を指す。IL-23の生物学的性質としては、細胞上のIL-12Rβ1および/または細胞上のIL-23Rへの結合、細胞への結合に続くIFN-γ産生の誘発、細胞への結合に続くIL-17産生の誘発、細胞への結合に続くIL-21産生の誘発、細胞への結合に続くIL-22産生の誘発、TH17細胞分化の誘発および樹枝細胞の抗原提示能の活性化、ならびに、記憶T細胞の増殖の選択的誘発、が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用されるヘテロ二量体界面という用語は、IL-12p40およびIL-23p19が、互いに接触し、互いに連結され、および/またはタンパク質の結合を可能にするのに十分に近く、よって、IL-23に結合するが、IL-12p40サブユニットおよび/またはIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合しない部位を取り囲む、IL-23の領域を意味するものと解釈されるものとする。この点に関して、この用語は、実際に互いに接触するIL-12p40およびIL-23p19中のそれらの残基だけに限定しない。むしろ、残基は、ヘテロ二量体化に関与するタンパク質の領域内にあり図2で示される、かつタンパク質の結合を可能にし、IL-23ヘテロ二量体への特異的結合を可能にするように露出させることだけしか必要としない。一実施例において、ヘテロ二量体界面とは、例えばIL-12p40およびIL-23p19のアミノ酸を含む、タンパク質の二量体化によって産生される、エピトープである。本明細書で使用されるエピトープという用語同意語:抗原決定基は、抗体の抗原結合ドメインを構成するタンパク質が結合する、IL-23の領域を意味するものと理解されたい。この用語は、必ずしも、タンパク質が接触する、特異的残基または構造に限定されない。例えば、この用語は、タンパク質が接触するアミノ酸および/またはこの領域の外側の10以上、5つ~10、2つ~5つ、または1つ~3つのアミノ酸を含む、領域を包含することを意図している。いくつかの実施例において、エピトープは、IL-12p40およびIL-23p19の二量体化に応じて産生される、一連の線状アミノ酸である。しかしながら、エピトープは、IL-23が折り畳まれたとき、すなわち、立体配置エピトープであるときに、互いに近接して位置付けられる例えば、互いに約50オングストローム以内、互いに40オングストローム以内等、例えば、30オングストローム以内、互いに約25オングストローム以内等、一連の非連続アミノ酸を含むこともできる。当業者は、エピトープという用語が、ペプチドまたはポリペプチドに限定されないことに気付くであろう。例えば、エピトープという用語は、糖側鎖、ホスホリル側鎖、またはスルホニル側鎖等の分子の化学活性表面群を含み、ある実施形態では、特異的3次元構造的特性および/または特異的電荷特性を有し得る。エピトープもしくはペプチド、またはそれを含むポリペプチドは、動物に投与して、エピトープに対する抗体を生成することができる。競合的に阻害するという用語は、本開示のIL-23結合タンパク質が、配列番号7に記載の配列を含む重鎖可変領域および配列番号12に記載の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体の、IL-23への結合を低減または防止することを意味するものと理解されるものとする。上述のことから、タンパク質は、抗体の結合を完全に阻害する必要はなく、むしろ、例えば、少なくとも約10、20、30、40、50、60、70、80、90、95といった、統計的に有意な量の結合を低減することだけしか必要としないことが明白であろう。結合の競合的阻害を決定するための方法は、当技術分野で知られており、および/または本明細書で説明される。例えば、抗体が、IL-23に、タンパク質の存在下または非存在下のいずれかで曝露される。タンパク質の非存在下よりも、タンパク質の存在下での抗体の結合が少ない場合、このタンパク質は、抗体の結合を競合的に阻害しているとみなされる。例えば、タンパク質および抗体は、実質的に同時にIL-23に曝露される。一実施例において、結合の競合的阻害は、抗体の抗原結合ドメインと重複するIL-23上のタンパク質の抗原結合ドメインによって引き起こされる。2つのエピトープという文脈での重複するとは、2つのエピトープが、タンパク質が一方のエピトープに結合して、他方のエピトープに結合するタンパク質の結合を競合的に阻害するのに十分な数のアミノ酸残基を共有することを意味するものと解釈されるものとする。例えば、本開示は、配列番号7に記載の配列を含む重鎖可変領域および配列番号12に記載の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体の、そのエピトープへの結合を防止するのに十分な数の残基を共有するエピトープに結合するタンパク質を包含する。本明細書で中程度の緊縮性とは、45°C~65°Cの範囲の温度で2×SSC緩衝剤、0.1w/vSDS、もしくは同じ条件で行われる、ハイブリッド化および/または洗浄として定義される。本明細書で高度の緊縮性とは、少なくとも65°Cの温度で0.1×SSC緩衝剤、0.1w/vSDS、もしくはより低い塩濃度で行われる、ハイブリッド化および/または洗浄として定義される。本明細書で特定のレベルの緊縮性に対する参照は、当業者に知られているSSC以外の洗浄/ハイブリッド化溶液を使用する、同等の条件を包含する。例えば、2本鎖核酸のストランドが解離する温度融解温度またはTmとしても知られるを算出するための方法は、当技術分野で知られている。核酸のTmに類似する温度例えば、5°C以内、または10°C以内、または等しい温度は、高度の緊縮性とみなされる。中程度の緊縮性は、核酸の計算したTmの10°C~20°C以内、または10°C~15°C以内とみなされる。本明細書で使用される疾患は、正常な機能の撹乱またはそれに対する妨害であり、任意の特異的状態に限定されず、疾病または障害を含む。本明細書で使用される予防すること、予防する、または予防という用語は、特定の疾患または状態の少なくとも1つの症状の進行を止めるか、または遅らせるのに十分な治療上有効量の本開示IL-23結合タンパク質を投与することを含む。本明細書で使用される治療している、治療する、または治療という用語は、特定の疾患または状態の少なくとも1つの症状を低減または排除するのに十分な治療上有効量の本明細書で説明されるタンパク質を投与することを含む。本明細書で使用される対象という用語は、哺乳動物等の任意の動物を意味するものと解釈されるものとする。一実施例において、哺乳動物は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。例えば、哺乳動物は、ヒトである。本明細書で試料に対する参照は、体液例えば、血液、滑液、または脳脊髄液、細胞物質例えば、組織吸引物、組織生検標本、または外科標本が挙げられるが、これらに限定されない、対象由来の任意の試料に対する参照として理解されるべきである。試料は、該試料の抽出物、誘導体、および/または画分、例えば、血清、血漿、末梢血単核細胞PBMC、または軟膜画分を含む。本明細書で使用される、診断という用語、および診断する、診断される、または診断すること等が挙げられるが、これらに限定されないその変形は、臨床状態の任意の一次診断、または再発性疾患の診断を含む。本明細書で使用される予後、予後診断すること、およびその変形は、回復、再発の可能性、または治療の結果を含む、疾患の可能性の高い結果または経過を指す。抗体可変領域を含むタンパク質抗体免疫化に基づく方法抗体を生成するために、IL-23、その修飾形態例えば、IL-23p19サブユニットに融合させたIL-12p40サブユニットを含む、融合タンパク質、またはそれらをコードする核酸であって、随意に、任意の好適な、もしくは所望の担体、アジュバント、もしくは薬学的に許容される担体とともに調合されたものが、注射可能な組成物の形態で、対象例えば、マウス、ラット、ニワトリ等の非ヒト対象に簡便に投与される。注射は、鼻腔内、筋肉内、皮下、静脈内、皮内、腹膜内、または他の既知の経路であってもよい。随意に、IL-23またはそれをコードするDNAが、多数回投与される。抗体を調製して特徴付けるための手段は、当技術分野で知られている例えば、Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,1988を参照されたい。。ポリクローナル抗体の産生は、免疫化に続いて、免疫化した動物の血液を種々の時点で採取することによって監視することができる。所望の抗体力価を達成することが必要である場合は、第2の追加免疫注射を行ってもよい。追加免疫および力価測定のプロセスを、適当な力価が得られるまで繰り返す。所望のレベルの免疫原性が得られたときに、免疫化した動物から採血し、血清を分離して、貯蔵し、かつ/またはその動物を使用してモノクローナル抗体Mabを生成する。モノクローナル抗体は、本開示によって企図される例示的な抗体である。一般に、そのような方法は、抗体産生細胞を刺激するのに十分な条件下で、IL-23またはそれをコードする核酸で対象例えば、マウスまたはラットを免疫化することを伴う。いくつかの実施例では、例えば、国際特許出願PCT/US2007/008231号および/またはLonbergetal.,Nature3681994:856-859で説明されているようにヒト免疫グロブリンタンパク質を発現し、かつネズミ免疫グロブリンタンパク質を発現しないように遺伝子操作したマウスを免疫化して、抗体を産生する。免疫化に続いて、抗体産生体細胞例えば、Bリンパ球を、不死細胞、例えば不死骨髄腫細胞と融合させる。そのような融合させた細胞ハイブリドーマを産生するための種々の方法が知られており、例えば、KohlerandMilstein,Nature256,495-497,1975で説明されている。次いで、抗体産生に十分な条件下で、ハイブリドーマ細胞を培養することができる。本方法は、抗体を産生するための他の方法、例えば例えば、Largaespadaetal,Curr.Top.Microbiol.Immunol,166,91-96,1990で説明されているようなABL-MYC技術を企図している。ライブラリに基づく方法本開示は、本開示のIL-23結合タンパク質を特定するための、その可変領域を含む抗体またはタンパク質のライブラリのスクリーニングも包含する。この開示の実施例は、ナイーブライブラリ未処置の対象由来、免疫化したライブラリ抗原で免疫化した対象由来、または合成ライブラリを含む。抗体をコードする核酸またはその領域例えば、可変領域が、例えば、SambrookandRussell,eds,MolecularCloning:ALaboratoryManual,3rdEd,vols.1-3,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001で開示されているように従来の手法によってクローン化され、当技術分野で知られている方法を使用してタンパク質をコードしてディスプレイするために使用される。タンパク質のライブラリを作成するための他の手法は、例えば、米国特許第US6300064号例えば、MorphosysAGのHuCALライブラリ、米国特許第US5885793号、米国特許第US6204023号、米国特許第US6291158号、または米国特許第US6248516号で説明されている。本開示によるIL-23結合タンパク質は、可溶性分泌タンパク質でもよく、または細胞の表面上の融合タンパク質、または粒子例えば、ファージまたは他のウイルス、リボソームまたは胞子として提示されてもよい。種々のディスプレイライブラリ形式が当技術分野で知られている。例えば、ライブラリは、インビトロのディスプレイライブラリ例えば、米国特許第US7270969号で説明されているような、例えば、リボソームディスプレイライブラリ、共有結合ディスプレイライブラリ、またはmRNAディスプレイライブラリである。さらに別の実施例において、ディスプレイライブラリは、例えば、米国特許第US6300064号、米国特許第US5885793号、米国特許第US6204023号、米国特許第US6291158号、または米国特許第US6248516号で説明されているような、ファージディスプレイライブラリであり、抗体の抗原結合ドメインを含むタンパク質が、ファージ上に発現する。他のファージディスプレイ法は、当技術分野で知られており、本開示によって企図される。同様に、細胞ディスプレイ法は、本開示によって企図されており、例えば、米国特許第US5516637号で説明されているような、例えば、細菌性ディスプレイライブラリ、例えば、米国特許第US6423538号または哺乳類ディスプレイライブラリで説明されているような、酵母ディスプレイライブラリである。ディスプレイライブラリをスクリーニングするための方法は、当技術分野で知られている。一実施例において、本開示のディスプレイライブラリは、例えば、ScopesがProteinpurification:principlesandpractice,ThirdEdition,SpringerVerlag,1994で説明しているように、親和性精製を使用してスクリーニングされる。親和性精製の方法は、典型的に、ライブラリによってディスプレイされる抗原結合ドメインを含むタンパク質を、標的抗原例えば、IL-23と接触させることと、洗浄に続いて、抗原に結合したままであるそれらのドメインを溶出することとを伴う。所望であれば、スクリーニングによって特定されたいかなる可変領域またはscFvsも、完全な抗体に容易に修飾される。可変領域またはscFvsを完全な抗体に修飾または再構成するための例示的な方法は、例えば、Jonesetal.,JImmunolMethods.354:85-90,2010、またはJostocketal.,JImmunolMethods,289:65-80,2004で説明されている。代替的に、または加えて、Ausubel他がCurrentProtocolsinMolecularBiology.WileyInterscience,ISBN047150338,1987で、および/またはSambrook他がMolecularCloning:MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratories,NewYork,ThirdEdition2001で説明しているように、標準的なクローン化方法が使用される。IL-23に特異的に結合するタンパク質の選択当業者は、IL-23に特異的に結合する抗体結合ドメインを含むタンパク質を選択するための好適な方法を利用できる。例えば、本開示のIL-23に結合することができるタンパク質を特定するために、スクリーニングを行ってもよい。IL-23に結合する任意のタンパク質は、次いで、IL-23の構成要素ではない例えば、単離したもの、または別のサイトカイン、例えばIL-12の一部であるときに、IL-23p19またはIL-12p40に結合することができないものを特定するために、スクリーニングされる。当然、これらのスクリーニングの順序は、逆にすることもできる。この種のスクリーニングの実施例は、図11で表され、および/または本明細書で例示される。組み換えIL-23またはIL-23を発現するベクターの遺伝的免疫化のマウスへの繰り返し投与に続いて、骨髄腫細胞とのネズミ脾細胞の融合を行い、結果としてハイブリドーマ細胞が得られる。これらのハイブリドーマ細胞によって分泌される抗体は、次いで、天然のIL-23に対して1回目のスクリーニングが行われる。陽性ハイブリドーマは、次いで、FLAGタグ付けした、IL-23、IL-23p19、およびIL-12p40に対して2回目の試験が行われる。IL-23結合に対しては陽性であるが、IL-23p19およびIL-12p40に対しては陽性でない抗体が、ヘテロ二量体特異的抗体である。ディスプレイしたタンパク質では、IL-23に特異的に結合しないタンパク質を取り去るために、パニングを使用することができる。例えば、IL-23に結合するタンパク質をディスプレイするファージは、次いで、IL-23の構成要素ではない例えば、単離したもの、別のサイトカインの一部であるときに、IL-12p40またはIL-23p19に曝露され、それによって、IL-12p40またはIL-23p19に別々に結合する結合タンパク質、すなわち、交差反応タンパク質を除去する。この種の方法の実施例は、図12で表され、および/または本明細書で例示される。この実施例において、ファージは、最初に、IL-23への結合についてスクリーニングまたはパニングされて、未結合のファージが除去され、結合したファージが保持される。結合したファージは、次いで、IL-12p40およびIL-23p19サブユニットへの結合について試験されて、結合したファージが除去され、結合しなかったファージが保持される。数回パニングした後に、IL-23に対する必要な特異性を有する抗体断片が得られる。別の方法は、それらのポリペプチドが二量体化されなかったときに提示または曝露されなかった、IL-23p19およびIL-12p40の二量体化に応じて形成または曝露されたエピトープを特定することと、抗原として該エピトープ含むペプチドまたはポリペプチドを使用して、本開示のタンパク質を産生することとを伴う。脱免疫化、キメラ、ヒト化、合成ヒト化、霊長類化、およびヒトタンパク質本開示のIL-23結合タンパク質は、ヒト化タンパク質であってもよい。ヒト化タンパク質という用語は、ヒト抗体由来のFR上または中にグラフト化された非ヒト種例えば、マウス、ラット、または非ヒト霊長類由来の抗体由来のCDRこの種の抗体は、CDRグラフト化抗体とも称されるを含む、ヒト様可変領域を含むタンパク質を指すものと理解されるものとする。本明細書で例示されるように、ヒト化タンパク質は、ヒトタンパク質の1つ以上の残基が1つ以上のアミノ酸置換によって修飾される、および/またはヒトタンパク質の1つ以上のFR残基が対応する非ヒト残基によって置換される、タンパク質も含む。ヒト化タンパク質は、ヒト抗体および非ヒト抗体のいずれにも見られない残基を含んでもよい。タンパク質の任意の付加的な領域例えば、Fc領域は、一般に、ヒトである。ヒト化は、当技術分野で知られている方法、例えば、米国特許第US5225539号、米国特許第US6054297号、米国特許第US7566771号、または米国特許第US5585089号を使用して行うことができる。ヒト化タンパク質という用語は、例えば、米国特許第US7732578号で説明されるような、超ヒト化タンパク質も包含する。一実施例において、本開示は、i配列番号30に記載の配列を含む重鎖および配列番号45に記載の配列を含む軽鎖、ii配列番号31に記載の配列を含む重鎖および配列番号45に記載の配列を含む軽鎖、iii配列番号32に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、iv配列番号33に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、v配列番号34に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、iv配列番号35に記載の配列を含む重鎖および配列番号47に記載の配列を含む軽鎖、vii配列番号33に記載の配列を含む重鎖および配列番号48に記載の配列を含む軽鎖、viii配列番号34に記載の配列を含む重鎖および配列番号48に記載の配列を含む軽鎖、ix配列番号32に記載の配列を含む重鎖および配列番号48に記載の配列を含む軽鎖、x配列番号36に記載の配列を含む重鎖および配列番号45に記載の配列を含む軽鎖、xi配列番号37に記載の配列を含む重鎖および配列番号47に記載の配列を含む軽鎖、xii配列番号38に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、xiii配列番号39に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、xiv配列番号40に記載の配列を含む重鎖および配列番号45に記載の配列を含む軽鎖、xv配列番号41に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、xvi配列番号42に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、xvii配列番号43に記載の配列を含む重鎖および配列番号47に記載の配列を含む軽鎖、xviii配列番号38に記載の配列を含む重鎖および配列番号48に記載の配列を含む軽鎖、xix配列番号39に記載の配列を含む重鎖および配列番号48に記載の配列を含む軽鎖、xx配列番号44に記載の配列を含む重鎖および配列番号47に記載の配列を含む軽鎖、xxi配列番号41に記載の配列を含む重鎖および配列番号48に記載の配列を含む軽鎖、またはxxii配列番号42に記載の配列を含む重鎖および配列番号48に記載の配列を含む軽鎖、i配列番号30に記載の配列を含む重鎖および配列番号45に記載の配列を含む軽鎖、ii配列番号31に記載の配列を含む重鎖および配列番号45に記載の配列を含む軽鎖、iii配列番号46に記載の配列を含む配列番号32および軽鎖に記載の配列を含む重鎖、またはiv配列番号33に記載の配列を含む重鎖および配列番号46に記載の配列を含む軽鎖、を含む、ヒト化抗体を提供する。一実施例において、ヒト化タンパク質は、本明細書で開示される軽鎖配列の27d~34、50~55、および89~96、ならびに本明細書で開示される重鎖配列の31~35b、50~58、および95~101の領域を含むKabat付番方式に応じた番号付け。この点に関して、Padlanetal.FASEBJ.,9:133-139,1995は、これらの領域が、抗原に最も結合または接触する可能性が高いものである証拠を提示している。本開示のIL-23結合タンパク質は、ヒトのタンパク質であってもよい。本明細書で使用されるヒトタンパク質という用語は、ヒト、例えばヒト生殖細胞系もしくは体細胞に見られる配列に由来または対応する、可変抗体領域および随意に定常抗体領域を有する、タンパク質を指す。ヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸、例えば、インビトロでランダムまたは部位指定変異によって導入される変異、特に、保存的置換を伴う変異、またはタンパク質の少数の残基、例えば、タンパク質の残基の1つ、2つ、3つ、4つ、もしくは5つにおける変異を含む可能性がある。これらのヒト抗体は、必ずしもヒトの免疫応答の結果として生成される必要はなく、むしろ、組み換え手段例えば、ファージディスプレイライブラリのスクリーニングを使用して、ヒト抗体定常領域および/もしくは可変領域を含む遺伝子導入動物例えば、マウスによって、ならびに/または米国特許第US5565332号で説明されているような誘導選択法を使用して、生成することができる。この用語は、そのような抗体の親和性成熟形態も包含する。ヒトタンパク質はまた、ヒト抗体由来のFR、またはヒトFRのコンセンサス配列由来の配列を含み、例えば、米国特許第US6300064号および/もしくは米国特許第US6248516号で説明されているような、CDRの1つ以上が無作為もしくは半無作為であるFRを含むタンパク質を含むものとみなされる。本開示のIL-23結合タンパク質は、合成ヒト化タンパク質であってもよい。合成ヒト化タンパク質という用語は、国際特許出願第WO2007/019620号で説明される方法によって調製されるタンパク質を指す。合成ヒト化IL-23結合タンパク質は、抗体の可変領域を含み、この可変領域は、新世界霊長類の抗体可変領域由来のFR、および非新世界霊長類の抗体可変領域由来のCDRを含む。例えば、合成ヒト化IL-23結合タンパク質は、抗体の可変領域を含み、この可変領域は、新世界霊長類の抗体可変領域由来のFR、およびマウスまたはラット抗体由来のCDR、例えば、本明細書で説明されるE11E7を含む。一実施例において、合成ヒト化IL-23結合タンパク質は、可変領域の一方または双方が合成ヒト化された、IL-23結合抗体である。本開示のIL-23結合タンパク質は、霊長類化タンパク質であってもよい。霊長類化タンパク質は、非ヒト霊長類、例えば、カニクイザルマカクの免疫化に続いて生成される抗体由来の可変領域を含む。随意に、非ヒト霊長類抗体の可変領域は、霊長類化抗体を産生するために、ヒト定常領域に連結される。霊長類化抗体を産生するための例示的な方法は、米国特許第US6113898号で説明されている。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質は、キメラタンパク質である。キメラタンパク質という用語は、抗原結合ドメインが特定の種例えば、マウスまたはラット等のネズミ類に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する一方で、タンパク質の残りが、別の種例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類由来のタンパク質に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する、タンパク質を指す。一実施例において、キメラタンパク質は、非ヒト抗体例えば、ネズミ抗体由来のVHおよびVLを含み、抗体の残りの領域は、ヒト抗体に由来する。そのようなキメラタンパク質の産生は、当技術分野で知られており、例えば、米国特許第US6331415号、米国特許第US5807715号、米国特許第US4816567号、および米国特許第US4816397号で説明されているような標準的な手段によって達成され得る。本開示は、例えば、国際特許出願第WO2000/34317号および国際特許出願第WO2004/108158号で説明されるような、脱免疫化タンパク質も企図する。非免疫化抗体およびタンパク質は、1つ以上のエピトープ、例えばB細胞エピトープまたはT細胞エピトープを除去すなわち、変異し、それによって、対象の抗体またはタンパク質に対する免疫応答が高まる可能性を低減する。例えば、本開示のIL-23結合タンパク質は、1つ以上のB細胞またはT細胞エピトープを特定するために分析し、エピトープ内の1つ以上のアミノ酸残基を変異させ、それによって、IL-23結合タンパク質の免疫原性を低減する。抗原結合ドメインを含む他のIL-23結合タンパク質本開示は、いかのもの等の、他の抗原結合ドメイン含有タンパク質も企図する:i抗体のVHまたはVLの全てもしくは一部分を含む、単一ポリペプチド鎖である、単一ドメイン抗体例えば、米国特許第US6248516号を参照されたい、iiダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ例えば、米国特許第US5844094号および/または米国特許出願第20080152586号で説明されているもの、iiiscFvs例えば、米国特許第US5260203号で説明されているもの、ivミニボディ例えば、米国特許第US5837821号で説明されているもの、v鍵および鍵穴孔二重特異性タンパク質米国特許第US5731168号で説明されているもの、viヘテロ抱合タンパク質例えば、米国特許第US4676980号で説明されているもの、vii化学架橋剤を使用して産生されるヘテロ抱合タンパク質例えば、米国特許第4676980号で説明されているもの、viiiFab’-SH断片例えば、Shalabyetal,J.Exp.Med.,175:217-225,1992で説明されているもの、またはixFab3例えば、欧州特許出願第EP19930302894号で説明されているもの。定常ドメインの融合本開示は、抗体の抗原結合ドメインおよび定常領域例えば、Fcもしくはそのドメイン、例えばCH2および/またはCH3ドメインを含む、タンパク質を包含する。好適な定常領域またはドメインは、当業者に明らかであり、および/またはそのようなポリペプチドの配列は、全米バイオテクノロジー情報センター等の、一般に公開されているデータベースから容易に入手することが可能である。Kabatらは、いくつかの好適な定常領域/ドメインの説明も提供している。いくつかの実施例において、IL-23結合タンパク質の定常領域またはその一部分は、ヒト抗体に由来する。定常領域またはその一部分は、IgM、IgG、IgD、IgA、およびIgEを含む任意の抗体クラス、ならびにIgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4を含む、任意の抗体アイソタイプに由来してもよい。定常領域の例示的な配列は、米国特許出願第20070148167号に含まれる。定常領域および/またはそのドメインは、二量体化、延長された血清半減期例えば、FcRnへの結合による、抗原依存性細胞毒性ADCC、補体依存性細胞毒性CDC、および/もしくは抗原依存性細胞食作用ADCP等の、生物活性を提供、修飾、または増強するために有用である。本開示は、例えば米国特許第US7217797号、米国特許第US7217798号、または米国特許出願第20090041770号延長された半減期を有するもしくは米国特許出願第2005037000号増加したADCCで説明されているような、変異定常領域またはドメインを含むタンパク質も企図する。例えば、IL-23結合タンパク質は、タンパク質の半減期を延長させる、1つ以上のアミノ酸置換を含む。例えば、IL-23結合タンパク質は、新生児Fc領域FcRnに対する定常領域の親和性を増加させる1つ以上のアミノ酸置換を含む、定常領域を含む。例えば、定常領域は、エンドソームにおけるFc/FcRnの結合を促進するように、より低いpH、例えば約pH6.0で、FcRnに対する増加した親和性を有する。一実施例において、定常領域は、約pH7.4でのその親和性と比較して、約pH6で、FcRnに対する増加した親和性を有し、これは、細胞の再利用に続くFcの血液中への再放出を促進する。これらのアミノ酸置換は、血液からのクリアランスを低減することによって、タンパク質の半減期を延長させるために有用である。例示的なアミノ酸置換としては、EU付番方式に従って、T250Qおよび/またはM428L;T252A、T254S、およびT266F;M252Y、S254T、およびT256E;、またはH433KおよびN434Fを含む。付加的であるか選択的アミノ酸置換は、例えば、米国特許出願第20070135620号または米国特許第7083784号で説明されている。本開示の中和タンパク質は、IgG4定常領域または安定化IgG4定常領域を含むことができる。安定化IgG4定常領域という用語は、Fabアーム交換、半抗体のFabアーム交換もしくは形成を受ける傾向、または半抗体を形成する傾向を低減するように修飾された、IgG4定常領域を意味するものと理解されるであろう。Fabアーム交換とは、ヒトIgG4のための一種のタンパク質修飾を指し、そこではIgG4重鎖および取り付けられた軽鎖半分子が、別のIgG4分子からの重鎖-軽鎖の対と交換される。このようにして、IgG4分子は、2つの異なる抗原を認識する2つの異なるFabアームを獲得し得る二重特異性分子をもたらす。Fabアーム交換は、インビボで自然に起こり、精製された血液細胞または還元グルタチオン等の還元剤によってインビトロで誘発することができる。半抗体は、IgG4抗体が解離して、それぞれが単一の重鎖および単一の軽鎖を含む2つの分子を形成したときに形成される。一実施例において、安定化IgG4定常領域は、KabatのシステムKabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterestWashingtonDCUnitedStatesDepartmentofHealthandHumanServices,1987および/または1991に従って、ヒンジ領域の241位にプロリンを含む。この位置は、EU付番方式Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterestWashingtonDCUnitedStatesDepartmentofHealthandHumanServices,2001、およびEdelmanetal.,Proc.Natl.Acad.USA,63,78-85,1969に従って、ヒンジ領域の228位に対応する。ヒトIgG4において、この残基は、一般にセリンである。プロリンに対するセリン置換に続いて、IgG4ヒンジ領域は、配列CPPCを含む。この点に関して、当業者は、ヒンジ領域が、抗体の2つのFabアームに運動性を与える、FcおよびFab領域を連結する、抗体重鎖定常領域のプロリンに富む部分であることに気付くであろう。ヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド結合を伴う、システイン残基を含む。これは、一般に、Kabatの付番方式に従って、ヒトIgG1のGlu226からPro243まで伸びるものとして定義される。他のIgGアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィドS-S結合を形成する、最初および最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによって、IgG1配列と整列させてもよい例えば、国際特許出願第WO2010/080538号を参照されたい。変異タンパク質本明細書で論じられるように、本開示は、本開示の配列に少なくとも80の同一性を有するタンパク質または核酸を提供する。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質は、配列番号7、配列番号30~44のいずれか1つのアミノ酸1~120、または配列番号49のいずれか1つに記載のアミノ酸配列と、少なくとも約80、85、90、95、97、98、または99同一である配列を含む、VHを含み、タンパク質は、IL-23には特異的に結合することが可能であるが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合することができない。代替的に、または加えて、タンパク質は、任意の実施例に従って本明細書で説明されているように、VHのCDRと、少なくとも約80、85、90、95、97、98、または99同一である、CDR例えば、3つのCDRを含み、IL-23には特異的に結合することが可能であるが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合することができない。タンパク質のIL-23、IL-23p19、およびIL-12p40への結合を決定するための方法は、本明細書で説明される。例えば、本発明者らは、残基の約30の変異を有する、一連のVH領域を産生した。したがって、タンパク質は、本明細書で開示されるVHの配列と少なくとも約70同一である配列を含む、VHを含むことができる。一実施例において、配列は、少なくとも85または95同一である。本発明者らは、残基の約11の変異を有する、一連のヒト化VH領域も産生した。したがって、タンパク質は、本明細書で開示されるVHの配列と少なくとも約89同一である配列を含む、VHを含むことができる。一実施例において、配列は、少なくとも90または95同一である。本発明者らは、Kabat付番方式に従って、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合せずに、IL-23への特異的結合を維持しながら変異させることができる、重鎖CDR2中の残基も特定した。例えば、16の残基のうちの2つ残基の12.5を変異させることができる。したがって、タンパク質は、本明細書で開示される重鎖CDR2の配列に対して少なくとも約87.5の同一性を有する、CDR2を含むことができる。本明細書で論じられるように、重鎖CDR2の5つのC末端残基残基の31が保存的または非保存的アミノ酸置換に変異させることができることも当技術分野で知られているPadlanetal.,FASEBJ.,9:133-139,1995。したがって、タンパク質は、本明細書で開示される重鎖CDR2の配列に対して少なくとも約69の同一性を有するCDR2を含むことができる。本発明者らは、拡張Chothia付番方式に従って、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合せずに、IL-23への特異的結合を維持しながら変異させることができる、重鎖CDR1中の残基も特定した。例えば、7つの残基のうちの2つ残基の28または43を変異させことができ、または7つの残基のうちの3つ残基の43を変異させることができる。したがって、タンパク質は、本明細書で開示される重鎖CDR1配列に対して少なくとも約72の同一性を有する、CDR2を含むことができる。別の実施例において、本開示の核酸は、配列番号6、19、57~71、もしくは76のいずれか1つに記載の配列と、少なくとも約80、85、90、95、97、98、または99同一である配列を含む。本開示は、配列番号配列番号7、26、28、配列番号30~44のいずれか1つのアミノ酸1~120、または配列番号49のいずれか1つに記載の配列を含むタンパク質をコードする核酸も包含するが、遺伝子コードの縮重の結果として本明細書で例示される配列と異なる。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質は、配列番号12、配列番号45~48のいずれか1つのアミノ酸1~113、または配列番号50のいずれか1つに記載のアミノ酸配列と、少なくとも約80、85、90、95、97、98、または99同一である配列を含む、VLを含み、タンパク質は、IL-23には特異的に結合することが可能であるが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合することができない。代替的に、または加えて、タンパク質は、任意の実施例に従って本明細書で説明されているように、VLのCDRと、少なくとも約80、85、90、95、97、98、または99同一である、CDR例えば、3つのCDRを含み、IL-23には特異的に結合することが可能であるが、IL-12p40サブユニットおよびIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合することができない。例えば、本発明者らは、残基の約32の変異を有する、一連のVL領域を産生した。したがって、タンパク質は、本明細書で開示されるVLの配列と少なくとも約68同一である配列を含む、VLを含むことができる。一実施例において、配列は、少なくとも85または95同一である。本発明者らは、残基の約14の変異を有する、一連のヒト化VL領域も産生した。したがって、タンパク質は、本明細書で開示されるVHの配列と少なくとも約86同一である配列を含む、VHを含むことができる。一実施例において、配列は、少なくとも90または95同一である。別の実施例において、本開示の核酸は、配列番号11、18、72~75、もしくは77のいずれか1つに記載の配列と、少なくとも約80、85、90、95、97、98、または99同一である配列を含む。本開示は、配列番号12、27、29、配列番号45~48のいずれか1つのアミノ酸1~113、または配列番号50のいずれか1つに記載の配列を含むタンパク質をコードする核酸も包含するが、遺伝子コードの縮重の結果として本明細書で例示される配列と異なる。核酸またはポリペプチドの同一性パーセントは、ギャップ作成ペナルティ=5およびギャップ伸長ペナルティ=0.3でのGAPNeedlemanandWunsch.Mol.Biol.48,443-453,1970分析GCGプログラムによって判定される。問い合わせ配列は、少なくとも50残基の長さであり、GAP分析は、少なくとも50残基の領域にわたって2つの配列を整列させる。例えば、問い合わせ配列は、少なくとも100残基の長さであり、GAP分析は、少なくとも100残基の領域にわたって2つの配列を整列させる。一実施例において、2つの配列は、それらの全体の長さにわたって整列されられる。本開示は、本開示のIL-23結合タンパク質の変異形態を企図する。例えば、そのような変異タンパク質は、本明細書で記載される配列と比較して、1つ以上の保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施例において、IL-23結合タンパク質は、10以下、例えば、9つ、8つ、7つ、6つ、5つ、4つ、3つ、2つ、または1つの保存的アミノ酸置換を含む。保存的アミノ酸置換体とは、アミノ酸残基が、類似した側鎖、疎水性、および/または親水性を有するアミノ酸残基と置換されたものである。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されており、塩基性側鎖例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン、酸性側鎖例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、非荷電極性側鎖例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、非極性側鎖例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、β分岐側鎖例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン、および芳香族側鎖例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジンを含む。疎水性指標は、例えば、KyteandDoolittleJ.Mol.Biol.,157:105-132,1982で説明されており、親水性指標は、例えば、米国特許第US4554101号で説明されている。本開示は、非保存的アミノ酸変化も企図する。例えば、特に対象となるのは、荷電アミノ酸の、別の荷電アミノ酸との置換、および中性のまたは正に荷電したアミノ酸との置換である。いくつかの実施例において、タンパク質は、10以下、例えば、9つ、8つ、7つ、6つ、5つ、4つ、3つ、2つ、または1つの非保存的アミノ酸置換を含む。任意の実施例に従って本明細書で説明されるタンパク質の変異形態は、IL-23に特異的に結合する能力を保持するが、IL-12p40サブユニットおよび/またはIL-23p19サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合しない。IL-23への特異的結合を決定するための方法は、本明細書で説明される。例えば、標識したタンパク質を、固定化したIL-23、IL-12p40サブユニット、またはIL-23p19サブユニットと接触させる。洗浄に続いて、結合した標識を検出する。標識したタンパク質を、固定化したIL-23p19および/またはIL-12p40と接触させ、洗浄に続いて、結合したラベルを検出する。IL-23には結合したが、IL-23p19またはIL-12p40には結合しなかった標識の検出は、変異タンパク質が、IL-23に特異的に結合する能力を保持していることを示す。前述の方法の随意の付加的なステップは、IL-23p19サブユニットおよび/またはIL-12p40サブユニットに結合した標識を検出することを含む。IL-23には結合したが、IL-23p19および/またはIL-12p40には有意に結合しなかった標識が検出された場合、そのタンパク質は、IL-23には特異的に結合するが、IL-23p19サブユニットおよび/またはIL-12p40サブユニットがIL-23の構成要素でないときには、それらに有意に結合しないものとみなされる。一実施例において、変異は、本開示のIL-23結合タンパク質のFR内で起こる。別の実施例において、変異は、本開示のIL-23結合タンパク質のCDR内で起こる。タンパク質の変異形態を産生するための例示的な方法は、以下を含む:DNAの変異誘発Thieetal.,MethodsMolBiol.525:309-22,2009またはRNAの変異誘発Kopsidasetal.,Immunol.Lett.1072:163-8,2006;国際特許出願第WO1999/058661号、ポリペプチドをコードする核酸を、変異誘発細胞、例えばXL-1Red、XL-mutS、XL-mutS-Kanr細菌細胞Stratagene社に導入すること、例えばStemmer,Nature370:389-91,1994で開示されているような、DNAシャフリング、およびDieffenbachおよびDvekslerがPCRPrimer:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratories,NY,1995で説明しているような、部位指定変異誘発。本開示の変異タンパク質の生物活性を決定するための例示的な方法は、当業者に明らかになり、および/または本明細書で説明される。例えば、抗原結合、結合の競合的阻害、親和性、会合、解離、および治療効果を決定するための方法は、本明細書で説明される。一実施例において、変異タンパク質は、親和性成熟によって、またはその後に産生される。例示的なタンパク質本発明者らによって産生されたタンパク質を含む例示的な可変領域、およびそれらをコードする核酸を、表1で説明する。タンパク質を産生するための方法組み換え発現本明細書で論じられるように、本開示のIL-23結合タンパク質および/またはそのようなタンパク質に含まれるポリペプチドをコードする核酸は、発現構築体中に導入され、よって、プロモーターに操作可能に連結され、それによって、その発現を促進する。発現構築体を産生する、例えば発現構築体/ベクターにクローン化するための方法は、当技術分野で知られており、ならびに/またはAusubel他がCurrentProtocolsinMolecularBiology.WileyInterscience,ISBN047150338,1987で、およびSambrook他がMolecularCloning:MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratories,NewYork,ThirdEdition2001で説明しており、また米国特許第US7270969号で説明されている。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質は、細菌細胞中で発現させる。例えばスタフィロコッカス種、コリネバクテリウム属種、サルモネラ種、バチルス種、およびシュードモナス種等の最新細胞における発現に好適な、典型的なプロモーターとしては、lacz、Ipp、温度感受性LまたはRプロモーター、T7、T3、SP6、またはIPTG誘発性tacプロモーターもしくはlacUV5プロモーター等の半人工プロモーター、等のプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。別の実施例において、IL-23結合タンパク質は、酵母細胞中で発現させる。Pichiapastoris、Saccharomycescerevisiae、およびS.pombe等の酵母細胞における発現に好適な、典型的なプロモーターとしては、遺伝子ADH1、GAL1、GAL4、CUP1、PHO5、nmt、RPR1、またはTEF1に由来するプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる実施例において、IL-23結合タンパク質は、昆虫細胞中で発現させる。昆虫細胞または昆虫における発現に好適な、典型的なプロモーターとしては、OPEI2プロモーター、ムリ種カイコガBombyxmuriから単離した昆虫アクチンプロモーター、ショウジョウバエ種のdshプロモーターMarshetalHum.Mol.Genet.9,13-25,2000が挙げられるが、これらに限定されない。本開示のIL-23結合タンパク質は、植物細胞中で発現させることもできる。植物細胞中でペプチドを発現させるためのプロモーターは、当技術分野で知られており、オオムギアミラーゼ遺伝子プロモーター、カリフラワーモザイクウイルス35Sプロモーター、ノパリンシンターゼNOS遺伝子プロモーター、ならびにオーキシン誘導性植物プロモーターP1およびP2が挙げられるが、これらに限定されない。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質は、哺乳動物細胞中で、または哺乳動物中で発現させる。哺乳類細胞における発現に好適な、典型的なプロモーターとしては、例えば、レトロウイルスLTRエレメント、SV40初期プロモーター、SV40後期プロモーター、CMVIEサイトメガロウイルス前初期プロモーター、EF1プロモーターヒト伸長因子1由来、EM7プロモーター、UbCプロモーターヒトユビキチンC由来から成る群から選択される、プロモーターが挙げられる。有用な哺乳類宿主細胞系の例としては、SV40COS-7によって形質転換したサル腎臓CVl系、ヒト胚腎臓系HEK-293細胞、ベビーハムスター腎細胞BHK、チャイニーズハムスター卵巣細胞CHO、アフリカミドリザル腎細胞VERO-76、または骨髄腫細胞例えば、NS/0細胞が挙げられる。一実施例において、細胞は、CHO細胞である。発現構築体/ベクターの他の要素は、当技術分野で知られており、例えば、エンハンサ、転写ターミネーター、ポリアデニル化配列、選択可能または検出可能なマーカーをコードする核酸、および複製の起源が挙げられる。一実施例において、発現構築体は、二シストロン性発現構築体である。二シストロン性とは、核酸の異なる領域に由来する2つの異なるポリペプチドをコードすることが可能である、単一の核酸を意味し、例えば、ポリペプチドを含むVHおよび異なるポリペプチドとしてポリペプチドを含むVLをコードすることが可能である、単一の核酸を意味する。一般に、各異なるポリペプチドをコードする領域は、内部リボソーム進入部位IRESによって分離され、IRESの5領域は、転写末端配列を含まない。例示的なIRESは、例えば、米国特許出願第20090247455号で説明されている。好適な発現構築体は、産生に続いて、当技術分野で知られている任意の方法を使用して、好適な細胞に導入される。例示的な方法としては、特に、マイクロインジェクション、DEAEデキストランによって媒介される形質移入、リポフェクトアミンGibco、MD、USAおよび/またはセルフェクチンGibco、MD、USA等を使用した、リポソームによって媒介される形質移入、PEG媒介性DNA取り込み、電気穿孔法、およびDNA被覆タングステンまたは金粒子Agracetus社、WI、USA等を使用した、微粒子衝撃法が挙げられる。本開示のIL-23結合タンパク質を産生するために使用される細胞は、次いで、当技術分野で知られている条件下で培養されて、本開示のIL-23結合タンパク質を産生する。無細胞発現系、例えば、TNTT7およびTNTT3系Promega、pEXP1-DESTおよびpEXP2-DESTベクターInvitrogenも本開示によって企図される。タンパク質精製産生/発現に続いて、本開示のIL-23結合タンパク質は、当技術分野で知られている方法を使用して精製される。そのような精製は、一般に、実質的に非特異性のタンパク質、酸、脂質、炭水化物等を含まない、本開示のIL-23結合タンパク質を提供する。例えば、IL-23結合タンパク質が調整物中に存在することになり、約90を超える例えば、95、98、または99の調整物中のタンパク質が、本開示のIL-23結合タンパク質である。本開示の単離されたタンパク質を得るために用いられる、ペプチド精製の標準的な方法としては、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、位相分離方法、電気泳動分離、沈殿法、塩溶/塩析法、免疫クロマトグラフィ、および/または他の方法等の、高圧または高性能液体クロマトグラフィHPLCおよび非HPLCポリペプチド単離プロトコルが挙げられるが、これらに限定されない。代替として、親和性精製は、標識を含む融合タンパク質を単離するために有用である。親和性クロマトグラフィを使用してタンパク質を単離するための方法は、当技術分野で知られており、例えば、ScopesがProteinpurification:principlesandpractice,ThirdEdition,SpringerVerlag,1994で説明している。例えば、標識ポリヒスチジンタグの場合、これは、例えば、ニッケル-NTAであり得るに結合する抗体または化合物は、固体支持体上に固定化されてもよい。タンパク質を含む試料は、次いで、しばらくの間、結合が起こるのに十分な条件下で、固定化した抗体または化合物と接触させられる。洗浄し、あらゆる結合しなかったまたは特異的に結合しなかったタンパク質を除去した後に、タンパク質を溶出する。抗体のFc領域を含むタンパク質の場合、タンパク質A、タンパク質G、またはその修飾形態は、親和性精製に使用することができる。タンパク質Aは、ヒトγ1、γ2、またはγ4重鎖Fc領域を含む、精製されたタンパク質を単離するために有用である。タンパク質Gは、全てのマウスFcアイソタイプおよびヒトγ3に推奨される。抱合体本開示は、別の化合物に抱合される本開示のIL-23結合タンパク質、例えば抱合体または免疫抱合体も提供する。他の化合物は、IL-23結合タンパク質に直接的または間接的に結合することができる例えば、間接結合の場合、リンカーを含むことができる。化合物は、IL-23結合タンパク質に、共有的または非共有的に連結することができる。化合物の例としては、放射性同位体例えば、ヨウ素-131、イットリウム-90、またはインジウム-111、検出可能な標識例えば、フルオロフォアまたは蛍光ナノ結晶、治療化合物例えば、化学療法剤または抗炎症剤、コロイド例えば、金、毒素例えば、リシンまたは破傷風類毒素、核酸、ペプチド例えば、血清アルブミン結合ペプチド、タンパク質例えば、抗体または血清アルブミンの抗原結合ドメインを含むタンパク質、対象のタンパク質の半減期を延長させる化合物例えば、この活性を有するポリエチレングリコールまたは他の水溶性ポリマー、およびこれらの混合物が挙げられる。本開示のIL-23結合タンパク質に抱合させることができる例示的な化合物、およびそのような抱合のための方法は、当技術分野で知られており、例えば、国際特許出願第WO2010/059821号で説明されている。抗イディオタイプ抗体IL-23に特異的に結合する本開示のIL-23結合タンパク質に加えて、本開示は、本開示のタンパク質に特異的な抗イディオタイプ抗Id抗体も提供する。抗Id抗体は、本開示のIL-23結合タンパク質の抗原結合ドメインと一般に関連する一意の決定基を認識する、抗体である。抗Idは、本開示のタンパク質またはその抗原結合ドメインで動物を免疫化することによって調製することができる。免疫化された動物は、免疫化するタンパク質のイディオタイプ決定基を認識し、応答して、抗Id抗体を産生する。抗Id抗体は、さらに別の動物において免疫応答を誘発するために、免疫原として使用してもよく、いわゆる抗-抗Id抗体を産生する。スクリーニングアッセイ本開示の抗体可変領域を含むタンパク質は、例えば以下で説明するように、生物活性について容易にスクリーニングされる。結合アッセイそのようなアッセイの1つの形態は、例えば、ScopesがProteinpurification:principlesandpractice,ThirdEdition,SpringerVerlag,1994で説明しているような、抗原結合アッセイである。そのような方法は、一般に、IL-23結合タンパク質を標識付けすることと、それを固定化された抗原と接触させることとを伴う。洗浄し、特異的に結合しなかったタンパク質を除去した後に、標識の量を検出し、その結果として、結合したタンパク質を検出する。当然、IL-23結合タンパク質は、固定化することができ、抗原を標識することができる。例えば本明細書で説明または例示される、パニングタイプのアッセイも使用することができる。中和アッセイ本開示のIL-23結合タンパク質の効果または中和活性を決定するための例示的なインビトロの方法は、IL-23を、免疫細胞を含む細胞の集団に接触させることであり、そのときに、IL-23は、本開示のIL-23結合タンパク質の存在下、または非存在下で作用する。次いで、標準的な方法、例えば、13Hチミジン取り込みまたは5,6-カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステルCFSEの標識またはサイトカイン分泌を使用して、細胞の増殖を測定する。タンパク質の非存在下で培養した試料と比較した、細胞増殖および/またはサイトカイン分泌の増加または減少は、IL-23結合タンパク質が、IL-23の活性を調節することを示す。そのような方法は、本明細書で例示される。本開示のIL-23結合タンパク質がIL-23の中和を調節する能力を決定するための別の方法は、受容体結合アッセイである。そのような方法において、IL-23受容体またはそれを発現する細胞が、固定化される。標識したIL-23例えば、50ng/mL~150ng/mL、100ng/mL等は、次いで、試験タンパク質の存在下、または非存在下で固定化した受容体または細胞に接触させて、結合した標識の量を検出する。IL-23タンパク質およびIL-23は、受容体に接触させる前に互いに接触させることができ、または受容体に実質的に同時に接触させることができる。IL-23結合タンパク質の非存在下と比較したときの、IL-23結合タンパク質の存在下で結合した標識の量の減少が、タンパク質がIL-23のIL-23Rへの結合を低減または防止することを示す。複数の濃度のIL-23結合タンパク質を試験することによって、IC50、すなわち、IL-23Rに結合するIL-23の量を低減するタンパク質の濃度が決定される。一実施例において、IC50は、約1nM以下750pM以下等、例えば、500pM以下である。例えば、IC50は、400pM以下である。一実施例において、IC50は、約1pM~500pM、例えば、約50pM~450pMである。例えば、IC50は、約100pM~400pM、例えば、約150pM~400pMである。同様に、EC50、すなわち、タンパク質によって達成されるIL-23のIL-23Rへの結合の最大阻害の50を達成するタンパク質の濃度を判定することができる。一実施例において、EC50は、1nM以下例えば、750pM以下、例えば、500pM以下、400pM以下等である。一実施例において、EC50は、約300pM以下である。例えば、EC50は、約260pMである。IL-23の活性を中和する、本開示のIL-23結合タンパク質の能力を決定するための別の方法は、脾細胞を、IL-23結合タンパク質の存在下または非存在下でIL-23と接触させて、IL-17等のサイトカインの分泌を検出することである。タンパク質の非存在下と比較して、タンパク質の存在下でのサイトカインのレベルがより低いことが、タンパク質がIL-23の活性を中和することを示す。複数の濃度のタンパク質を試験することによって、IC50、すなわち、サイトカイン分泌の最大阻害の50が起こる濃度が決定される。複数の濃度のIL-23結合タンパク質を試験することによって、IC50、すなわち、分泌されたサイトカイン例えば、IL-17の量を低減するタンパク質の濃度が判定される。一実施例において、IC50は、約1nM以下900pM以下等、例えば、800pM以下である。例えば、IC50は、700pM以下である。一実施例において、IC50は、約1pM~800pM、例えば、約50pM~700pMである。例えば、IC50は、約100pM~700pM、例えば、約120pM~680pMである。同様に、EC50、すなわち、タンパク質によって達成されるサイトカイン例えば、IL-17の最大阻害の50を達成するタンパク質の濃度を決定することができる。一実施例において、EC50は、1nM以下例えば、500pM以下、400pM以下等である。一実施例において、EC50は、約300pM以下である。例えば、EC50は、約290pMである。細胞死滅アッセイ別の実施例において、本開示の例えば、毒性化合物または定常領域に連結しているIL-23結合タンパク質の能力は、細胞の死亡を誘発するそれらの能力を判定することによって評価される。Fcに連結したタンパク質の場合、例えば、ADCC/CDCを促進するために免疫エフェクター細胞および/または補体の存在下でそのようなアッセイを行うことが望ましい。インビボの治療効果アッセイ別の実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質の活性は、IL-23結合タンパク質を動物モデルに投与することによって決定される。例えば、IL-23結合タンパク質を、例えば、Tangetal.,J.Exp.Med.,199:1455-1465,2004で説明されているように糖尿病を抑制、予防、治療、もしくは遅延させる能力を試験するために、NODマウスに投与し、GVHDのマウスモデルに例えば、Trenadoetal.J.Clin.Invest.112:1688-1696,2002で説明されているように投与し、乾癬のマウスモデルに例えば、Wangetal.,J.Clin.Invest.1187:2629-2639,2008で説明されているように投与し、関節リウマチ、例えば、マウスのSKG株のモデルSakaguchietal.Nature,426:454-460,1995、ラットII型コラーゲン関節炎モデル、マウスII型コラーゲン関節炎モデル、もしくはいくつかの種において抗原誘発性の関節炎モデルBendeleJMusculoskelNeuronInteract;14:377-385,2001に投与し、多発性硬化症例えば、実験的自己免疫性脳脊髄炎EAEに投与し、および/または炎症気道疾患例えば、OVAチャレンジまたはゴキブリ抗原チャレンジのモデルに投与する。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質の活性は、例えば本明細書で例示されるように、乾癬のIL-23誘発動物モデルにおいて決定される。例えば、非ヒト哺乳動物例えば、マウスに、局所化された炎症応答が誘発されるように、IL-23を皮下投与する。タンパク質を、IL-23の投与前または投与後に投与することによって、炎症応答を防止または治療するそれらの能力について試験する。次いで、動物を、紅斑および/もしくは硬結について評価し、および/または皮膚試料を各マウスから採集して組織学的評価のために固定する。競合的結合アッセイ本開示の抗体の結合を競合的に阻害するタンパク質を判定するためのアッセイが、当業者に明らかになるであろう。例えば、本開示の抗体を、検出可能な標識、例えば蛍光標識または放射性標識に抱合させる。次いで、標識した抗体および試験タンパク質を、IL-23またはそのエピトープと混合して、接触させる。次いで、標識した抗体のレベルを決定し、タンパク質の非存在下で標識した抗体をIL-23またはエピトープと接触させたときに判定したレベルと比較する。タンパク質の非存在下と比較したときに、タンパク質の存在下で標識した抗体のレベルが減少していた場合、タンパク質は、抗体の結合を競合的に阻害している。随意に、試験タンパク質は、抗体とは異なる標識に抱合される。これは、タンパク質またはエピトープに対する試験タンパク質の結合レベルの検出を可能にする。別の実施例では、IL-23を本明細書で説明される抗体と接触させる前に、試験タンパク質を、IL-23またはその領域に結合させる。タンパク質の非存在下と比較したときの、タンパク質の存在下で結合した抗体の量の減少は、タンパク質が抗体のIL-23への結合を競合的に阻害することを示す。相互アッセイを、標識したタンパク質を使用し、最初に抗体をIL-23に結合させることで、行うこともできる。この場合、抗体の非存在下と比較したときの、抗体の存在下でIL-23に結合した標識したタンパク質の量の減少は、タンパク質が抗体のIL-23への結合を競合的に阻害することを示す。エピトープマッピングアッセイ別の実施例では、本明細書で説明されるタンパク質によって結合されるエピトープをマップする。エピトープマッピング法は、当業者に明らかになるであろう。例えば、関心のエピトープ、例えば10~15のアミノ酸を含むペプチドを含む、IL-23配列またはその領域に架かる一連の重複ペプチドが産生される。次いで、IL-23結合タンパク質を、各ペプチドまたはそれらの組み合わせに接触させて、それに結合したペプチドを決定する。これは、IL-23結合タンパク質が結合したエピトープを含むペプチドの決定を可能にする。複数の不連続なペプチドがタンパク質によって結合された場合、このタンパク質は、立体配置エピトープを結合している場合がある。代替として、または加えて、IL-23内のアミノ酸残基を、例えばアラニン走査変異誘発によって変異させて、タンパク質の結合を低減または防止する変異を判定する。IL-23結合タンパク質の結合を低減または防止する任意の変異は、タンパク質によって結合されたエピトープ内にある可能性が高い。さらなる方法は、IL-23またはその領域を、固定化した本開示のタンパク質に結合させることと、結果として生じた複合体をプロテアーゼで消化することとを伴う。次いで、固定化したタンパク質に結合した状態のペプチドを単離し、例えば質量分析法を使用して分析して、それらの配列を決定する。さらなる方法は、IL-23またはその領域中の水素を重水素原子に変換することと、結果として生じたタンパク質を、固定化した本開示のタンパク質に結合させることとを伴う。次いで、重水素原子を水素に変換し、IL-23またはその領域を単離し、酵素で消化し、例えば質量分析法を使用して分析して、重水素を含む領域を決定するが、この領域は、本明細書で説明されるタンパク質の結合によって、水素への変換から保護されている。この方法の一形態を、本明細書で例示する。親和性アッセイ随意に、IL-23またはそのエピトープについて、タンパク質の解離定数Kd、会合定数Ka、または親和定数KDを判定する。一実施例において、IL-23結合タンパク質のこれらの定数は、放射性標識または蛍光標識したIL-23結合アッセイによって測定する。このアッセイは、標識されていないIL-23の一連の滴定の存在下で、タンパク質を、最小濃度の標識したIL-23と平衡させる。洗浄し、結合していないIL-23を除去した後に、標識の量を判定する。親和性の測定値は、抗体の反応に対する標準的な方法、例えば、免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴SPRRichandMyszkaCurr.Opin.Biotechnol11:54,2000;EnglebienneAnalyst.123:1599,1998、等温滴定熱量測定ITC、または当技術分野で知られている他の動態額的相互作用アッセイによって決定することができる。一実施例において、定数は、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって、例えば、固定化したIL-23またはその領域でのBIAcore表面プラズモン共鳴BIAcore,Inc.,Piscataway,NJを使用することによって測定される。例示的なSPR法は、米国特許第US7229619号で説明されている。半減期アッセイ本開示によって包含されるいくつかのタンパク質は、改善された半減期を有し、例えば、修飾されていないタンパク質と比較して、それらの半減期を延長するように修飾される。改善された半減期を伴うタンパク質を判定するための方法は、当業者に明らかになるであろう。例えば、新生児Fc受容体FcRnに結合するタンパク質の能力が評価される。この点に関して、FcRnの増加した結合親和性は、分子の血清半減期を増加させた例えば、Kimetal.,Eur.J.Immunol.,24:2429,1994を参照されたい。本開示のIL-23結合タンパク質の半減期は、例えばKimetal,EurJofImmunol24:542,1994で説明されている方法に従う、薬物動態学的研究によって測定することもできる。この方法によれば、放射性標識したタンパク質を、マウスに静脈内注射し、その血漿濃度を、例えば注射後の3分~72時間といった、時間の関数として定期的に測定する。このようにして得られたクリアランス曲線は、二相、すなわち、アルファ相およびベータ相となるはずである。インビボでタンパク質の半減期を決定するために、ベータ相のクリアランス速度を計算して、野生型のまたは修飾されていないタンパク質のクリアランス速度と比較する。安定性アッセイ本開示のIL-23結合タンパク質の安定性は、種々のアッセイのいずれかによって評価することができる。例えば、タンパク質は、例えば、熱、酸、または室温でしばらくの間例えば、1ヵ月貯蔵するといった条件に晒される。次いで、濁度の決定不安定性を示す条件に晒した後の濁度の増加、サイズ排除クロマトグラフィ、非還元ゲル電気泳動、または本明細書で説明される結合もしくは中和の試験によって、タンパク質の凝集を評価することができる。薬学的組成物本開示のIL-23結合タンパク質、それをコードする核酸、またはそれを発現する細胞同意語:活性成分は、予防的または治療的処置のための、非経口、局所、経口、もしくは局部投与、エアロゾル投与、または経皮投与に有用である。一実施例において、本開示のIL-23結合タンパク質、それをコードする核酸、またはそれを発現する細胞は、静脈内または皮下投与等の非経口投与のためのものである。投与されるタンパク質、それをコードする核酸、またはそれを発現する細胞の配合物は、選択した投与経路および配合例えば、溶液、乳剤、カプセルに応じて異なる。投与されるタンパク質、それをコードする核酸、またはそれを発現する細胞を含む適切な薬学的組成物は、生理学的に許容される担体において調製することができる。タンパク質の混合物も使用することができる。溶液または乳剤の場合、好適な担体としては、例えば、水溶液もしくはアルコール/水溶液、乳剤、または、食塩水および緩衝培地を含む、懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルのデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル油、または不揮発性油が挙げられる。種々の適切な水性担体が当業者に知られており、水、緩衝水、緩衝食塩水、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール、デキストロース溶液、およびグリシンが挙げられる。静脈内ビヒクルは、種々の添加剤、保存剤、液体の栄養素、または電解質補充液一般的には、Remington’sPharmaceuticalScience,16thEdition,Mack,Ed.1980を参照のことを含むことができる。組成物は、随意に、生理学的条件に近づけるために、必要に応じて、pH調整剤および緩衝剤、ならびに毒性調整剤例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、および乳酸ナトリウム等の、薬学的に許容される補助物質を含有することができる。本開示のIL-23結合タンパク質は、当技術分野で知られている凍結乾燥および還元手法に従って、貯蔵のために凍結乾燥して、使用前に、好適な担体中で再構成することができる。選択した媒質中の活性成分の最適な濃度は、当業者によく知られている手順に従って、経験的に決定することができ、所望の最終的な薬学的配合物に依存することになるであろう。本開示のIL-23結合タンパク質の投与に対する投薬量の範囲は、所望の効果を産生するのに十分に大きいものである。例えば、組成物は、治療的または予防的有効量のIL-23結合タンパク質、それをコードする核酸、またはそれを発現する細胞を含む。本明細書で使用される有効量という用語は、対象におけるIL-23のシグナル伝達を誘発/増加させる、または阻害/低減/防止するための、IL-23結合タンパク質、核酸、または細胞の十分な量を意味するものと解釈されるものとする。当業者は、そのような量が、例えば、タンパク質、核酸、もしくは細胞、特定の対象、および/または治療する状態の種類もしくは重篤性に応じて変動することに気付くであろう。故に、この用語は、本開示を特定の量、例えば、タンパク質、核酸、または細胞の重量または数に限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で使用される治療上有効量という用語は、疾患の1つ以上の症状を低減または阻害するための、タンパク質、核酸、または細胞の十分な量を意味するものと解釈されるものとする。本明細書で使用される予防的有効量という用語は、疾患の1つ以上の検出可能な症状の発生を防止または阻害するための、タンパク質、核酸、または細胞の十分な量を意味するものと解釈されるものとする。投薬量は、過粘稠度症候群、肺水腫、鬱血性心不全等の副作用を引き起こすほど多くすべきではない。一般に、投薬量は、患者の年齢、状態、性別、および疾病の程度によって変動し、当業者によって判定することができる。投薬量は、任意の合併症の場合に、各医師によって調整することができる。投薬量は、1日または複数日にわたって、1回以上の用量投与において、約0.1mg/kg~約300mg/kg、例えば、約0.2mg/kg~約200mg/kg、約0.5mg/kg~約20mg/kg等に変動させることができる。本開示の1つ以上のタンパク質を、単独で、または別の薬物もしくは薬剤と組み合わせて投与前、同時、または投与後、適切な経路によって個人に投与することができる。例えば、本開示のIL-23結合タンパク質は、タンパク質、例えば、TNF拮抗薬、抗IL-12/23抗体、抗炎症剤、または鎮痛剤と組み合わせて使用することもできる。本開示のIL-23結合タンパク質は、抗生物質および/または抗微生物剤と併せて与えられる、別々に投与される組成物として使用することができる。当業者は、本開示のIL-23結合タンパク質が、本開示の発現構築体または本開示のIL-23結合タンパク質を発現する細胞を投与することによって、対象に導入されてもよいことを理解するであろう。インビボで抗体をコードする核酸を標的細胞に導入するための種々の方法を使用することができる。例えば、裸の核酸を標的部位に注射してもよく、リポソーム中にカプセル化してもよく、またはウイルスベクターによって導入してもよい。診断アッセイ以下のアッセイを、本開示のIL-23結合タンパク質で行うことができる。免疫アッセイは、対象の状態を診断するための、または試料中のIL-23を検出するための、例示的なアッセイ形式である。本開示は、ウエスタンブロット法、酵素結合抗体免疫吸着アッセイELISA、蛍光結合免疫吸着アッセイFLISA、競合アッセイ、放射免疫アッセイ、ラテラルフロー免疫アッセイ、フロースルー免疫アッセイ、電気化学発光アッセイ、比濁分析に基づくアッセイ、濁度に基づくアッセイ、および蛍光活性化細胞選別FACSに基づくアッセイを含む、あらゆる形態の免疫アッセイを企図する。好適な免疫アッセイの1つの形態は、例えば、ELISAまたはFLISAである。1つの形態において、そのようなアッセイは、本開示のIL-23結合タンパク質を、例えばポリスチレンもしくはポリカーボネート製のマイクロウエルもしくはディップスティック、膜、またはガラス支持体例えば、ガラススライド等の、固体マトリクス上に固定化することを伴う。次いで、試験試料を、IL-23結合タンパク質と直接接触させて、試料中の任意の抗原を結合させるか、または捕捉する。洗浄し、試料中のあらゆる非結合タンパク質をも除去した後に、別個のエピトープにおいてIL-23に結合する例えば、IL-23p19またはIL-12p40と結合するタンパク質を、捕捉した抗原と直接接触させる。この検出タンパク質は、一般に、例えば酵素西洋わさびペルオキシダーゼHRP、アルカリホスファターゼAP、またはβ-ガラクトシダーゼ等の、検出可能なレポーター分子で標識される。代替として、検出タンパク質に結合する、第2の標識したタンパク質を使用することができる。洗浄し、あらゆる結合していないタンパク質をも除去した後に、過酸化水素、TMBもしくはトルイジン、または5-ブロモ-4-クロロ-3-インドール-β-D-ガラクトピラノシドx-gal等の基質の添加によって、検出可能なマーカーを検出する。当然、逆の様式で、固定化した捕捉タンパク質および検出タンパク質を使用しもよい。次いで、既知の数のマーカーを使用して、または対照試料との比較によって生成した標準曲線を使用して、試料中の抗原のレベルを決定する。FLISAの場合、試料中の標識したタンパク質のレベルを決定するために、酵素ではなく蛍光標識が使用される。上記で説明したアッセイは、検出の基準として化学発光または電気化学発光を使用するように、容易に改良される。当業者に明らかになるように、免疫吸着アッセイに基づく他の検出法が、本開示の機能において有用である。例えば、免疫吸着法は、検出のための放射性標識、検出のための金標識例えば、コロイド状金、検出のための例えばNADをカプセル化したリポソーム、またはアクリジニウム連結免疫吸着アッセイを使用する、前掲の説明に基づく。本開示のいくつかの実施例において、IL-23のレベルは、表面プラズモン共鳴検出器例えば、BIAcore商標,GEHealthcare,Piscataway,N.J.、フロースルーデバイス例えば、米国特許第US7205159号で説明されているもの、マイクロまたはナノ免疫アッセイデバイス例えば、米国特許出願公開第US20030124619号で説明されているもの、ラテラルフローデバイス例えば、米国特許出願公開第US20040228761号または米国特許出願公開第US20040265926号で説明されているもの、蛍光偏光免疫アッセイFPIA:例えば、米国特許第US4593089号または米国特許第US4751190号で説明されているもの、または免疫比濁アッセイ例えば、米国特許第US5571728号または米国特許第US6248597号で説明されているものを使用して決定される。撮像法上述のことから当業者に明らかになるように、本開示は、本開示のIL-23結合タンパク質を使用した、撮像法も企図する。撮像のために、タンパク質は、一般に、検出可能な標識に抱合され、この標識は、撮像によって検出可能である、信号を発することができるあらゆる分子または薬剤とすることができる。しかしながら、本開示のIL-23結合タンパク質に特異的に結合する、標識した二次的化合物が使用されてもよい。例示的な検出可能な標識としては、タンパク質、放射性同位体、フルオロフォア、可視光発光フルオロフォア、赤外発光フルオロフォア、金属、強磁性体、電磁放射物質、特異的磁気共鳴MR分光学的シグネチャを伴う物質、X線吸収もしくは反射物質、または音響変更物質が挙げられる。本開示のIL-23結合タンパク質および、使用する場合、標識した二次的化合物は、撮像手順の前に、撮像する臓器または組織もしくは、癌の場合は腫瘍に、全身的または局所的に投与することができる。一般に、IL-23結合タンパク質は、腫瘍、組織、または臓器の所望の光学画像を達成するのに十分な用量で投与される。そのような用量は、用いられる特定のタンパク質、撮像される状態、撮像手順を受ける組織もしくは臓器、使用されている撮像装置等に依存して、大きく変動し得る。本開示のいくつかの実施例において、IL-23結合タンパク質は、腫瘍の撮像、臓器の断層撮像、臓器機能の観察、冠状血管造影、蛍光内視鏡検査、レーザ誘導手術、光音響法、および音響蛍光法等が挙げられるが、これらに限定されない、種々の生医学的応用において、組織および臓器のインビボでの光学的造影剤として使用される。撮像法の例としては、磁気共鳴撮像MRI、MR分光法、放射線写真撮影、コンピュータ断層撮影CT、超音波、平面ガンマカメラ撮像、単光子放出コンピュータ断層撮影SPECT、陽電子放出断層撮影PET、他の核医学に基づく撮像、可視光を使用した光学的撮像、ルシフェラーゼを使用した光学的撮像、フルオロフォアを使用した光学的撮像、他の光学的撮像、近赤外光を使用した撮像、または赤外光を使用した撮像が挙げられる。いくつかの実施例において、造影剤は、ヒトで使用する前に、インビトロまたはインビボのアッセイを使用して、例えば本明細書で説明されるモデルを使用して試験される。試料および対照試料当業者に明らかであるように、本明細書で説明される実施例のいくつかは、IL-23のレベルを決定するために、ある程度の定量化を必要とする。そのような定量化は、好適な対照試料を本開示のアッセイに含めることによって決定され得る。一実施例において、好適な対照試料は、健康な対象または正常な対象から得られる試料である。この文脈において、健康な対象という用語は、IL-23と関連する疾患、例えば炎症性疾患に罹患していないことが分かっている、個人を意味するものと解釈されるものとする。正常な対象という用語は、個人の集団と比較して、試料中のIL-23のレベルが正常である個人を意味するものと解釈されるものとする。本開示は、正常および/もしくは健康な対象、または正常および/もしくは健康な対象の集団から得られるデータセットとしての、対照試料も企図する。一実施例において、本開示の方法は、例えば本明細書で説明される方法を使用して、対照試料のIL-23のレベルを決定することをさらに含む。一実施例において、対象からの試料および対照試料は、ほぼまたは実質的に同時に検定される。一実施例において、対象からの試料および対照試料は、結果の比較を可能にするために、任意の1つ以上の実施形態において本明細書で説明されるような、同じ本開示の方法を使用して検定される。疾患本開示の方法を行うことによって治療/予防/診断/予後診断され得る例示的な疾患としては、炎症性疾患、GVHD、感染、および癌が挙げられる。例示的な炎症性疾患としては、炎症性腸疾患IBD、全身性紅斑性狼瘡、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症硬皮症、特発性炎症性筋疾患皮膚筋炎、多発性筋炎、シェーグレン症候群、全身性血管炎、類肉腫症、自己免疫溶血性貧血免疫汎血球減少症、発作性夜行性血色素尿症、自己免疫血小板減少症特発性血小板減少紫斑病、免疫介在性血小板減少症、甲状腺炎グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎、多発性硬化症等の中枢および末梢神経系の脱髄性疾患、特発性多発性神経障害、感染性肝炎A型、B型、C型、D型、E型肝炎および他の非肝親和性nonhepatotropicウイルス自己免疫慢性活性肝炎、原発性胆汁性肝硬変症、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎等の肝胆汁性疾患、炎症性および線維性肺疾患例えば、嚢胞性線維症、グルテン過敏性腸症、ウィップル病、水疱性皮膚疾患、多形紅斑、および接触皮膚炎を含む自己免疫または免疫介在性皮膚疾患、乾癬、好酸球性肺炎等の肺のアレルギー性疾患、特発性肺線維症、ならびに過敏性肺炎が挙げられる。例えば、炎症性疾患は、炎症性関節炎例えば、RAまたは若年性慢性関節炎である。別の実施例において、炎症性疾患は、炎症性神経性状態、例えばミエリン会合状態、例えば多発性硬化症である。別の実施例において、炎症性疾患は、炎症性皮膚疾患例えば、自己免疫または免疫介在性皮膚疾患、例えば、水疱性皮膚疾患、多形紅斑、接触皮膚炎である。あるいは、皮膚疾患は、乾癬である。別の実施例において、炎症性疾患は、炎症性粘膜疾患、例えば、腸の炎症性疾患例えば、炎症性腸疾患、クローン病、または潰瘍性大腸炎または肺の炎症性疾患例えば、気道過敏症または喘息である。一実施例において、疾患は、TH17細胞媒介疾患である。本明細書で使用されるTH17細胞媒介疾患という用語は、TH17細胞の過剰な数または活性を特徴とする、またはそれによって引き起こされるあらゆる状態を意味するものと解釈されるものとする。当業者は、TH17細胞が、IL-17を発現するCD4T細胞であることに気付くであろう。例示的なTH17細胞媒介疾患としては、自己免疫/炎症性疾患例えば、乾癬、炎症性腸疾患、関節炎例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、および炎症性腸疾患例えば、クローン病、および移植片対宿主疾患が挙げられる。一実施例において、疾患は、乾癬である。別の実施例において、疾患は、クローン病である。さらなる実施例において、疾患は、多発性硬化症である。一実施例において、多発性硬化症は、再発寛解型多発性硬化症であり、IL-23結合タンパク質または抗体は、再発の防止によって寛解期にある状態の間に投与される。キット本開示は、i本開示のIL-23結合タンパク質またはそれをコードする発現構築体、ii本開示の細胞、またはiii本開示の薬学的組成物、のうちの1つ以上を含む、キットをさらに含む。IL-23を検出するためのキットの場合、キットは、例えば本開示のIL-23結合タンパク質に連結される、検出手段をさらに含むことができる。治療/予防的使用のためのキットの場合、キットは、薬学的に許容される担体または希釈剤をさらに含むことができる。随意に、本開示のキットは、任意の実施形態に従って本明細書で説明される方法で使用するための説明書とともに包装される。本開示は、以下の限定的でない実施例でさらに説明される。一般的な方法HEK293/pTT5発現系HEK293E/pTT5発現系を伴う全ての形質移入について、HEK293E細胞は、完全な細胞成長培地1LのF17培地Invitrogen商標、9mLのPluronicF68Invitrogen商標、50μL/100mLの培養液にジェネティシン50mg/mL、Invitrogen商標とともに20w/vのトリプトンNIOrganotechnie商標を含有する2mMのグルタミン中で培養した。簡潔に述べると、形質移入の前日に、遠心分離によって細胞を採取して、ジェネティシンを伴わない新鮮な培地中に再懸濁した。次の日、製造業者の指示に従って、DNAおよびFuGENERocheを含む形質移入混合物の滴下によって細胞に形質移入した。形質移入した培養物を、穏やかに振盪120rpmしながら、37°C、5のCO2で、一晩インキュベートした後、トリプトンおよびジェネティシン500mLの培養液容積あたり、それぞれ、12.5mLおよび250μLを添加した。次の日、500mLの培養液あたり12.5mLのトリプトンおよび250μLのジェネティシンを添加した。培養物を、7日間にわたって37°C、5のCO2、および120rpmでインキュベートし、次いで、上澄みを採取して精製した。IL-23タンパク質ヒトIL-23IL-23p19配列番号2に共有的に連結されたIL-12p40配列番号1を含むを購入したEbiosciencesorRnDSystems。代替として、IL-23、IL-12p40、およびIL-23p19は、上記で説明したように、DNA発現構築体の形質移入を通して、哺乳類のHEK293E/pTT5発現系中で産生した。以下のタンパク質を産生した。分泌タンパク質を含む培養上清を、2000xgで10分間の遠心分離で、細胞を除去することによって採取した。HISタグを含むタンパク質を、HisTrap商標HPカラムGEHealthcareを使用して、His8親和性タグを介して、上清から精製した。Fc領域を含むタンパク質を、抗体の生成のために、下記で説明されるようなタンパク質Aクロマトグラフィを使用して精製した。溶出したタンパク質は、濃縮器Amiconを使用して、脱塩を介して、またはサイズ排除クロマトグラフィを介して、PBSに緩衝剤交換した。ファージディスプレイについて、組み換えヒトIL-23AviHISのAvitag商標配列を、酵素BirAを使用してビオチン化した。これは、AviTag配列中のアミノ酸を含む単一のアミンにおいて特異的ビオチン化をもたらした。遊離ビオチンを、3.5kDaの分子量カットオフで、Slide-A-Lyzer透析カセットPierceを使用したPBSに対する透析によって、または脱塩カラムGEHealthcareによって、タンパク質調製物から除去した。抗体を発現するベクターの構築重鎖可変領域VHアミノ酸配列を、コンピュータで、CH1、ヒンジ、CH2、およびCH3ドメインを含むヒトIgG1定常領域例えば、NCBI登録番号P01857.1を参照されたい上に構成した。同様に、軽鎖可変領域配列を、コンピュータで、親可変領域のアイソタイプに従って、ヒトカッパまたはラムダ定常領域例えば、NCBI登録番号AAI10395カッパおよびAAI07853ラムダを参照されたい上に構成した。その後、アミノ酸配列を、DNA配列GeneArt,Germanyに逆翻訳した。結果として生じた遺伝子を、合成オリゴヌクレオチドGeneArt、Germanyのアセンブリによって新たに合成した。その後、重鎖および軽鎖遺伝子は、それぞれ、重鎖または軽鎖のリーダー配列それぞれ、配列番号81および82を含む、発現ベクターpTT5の変異体Durocheretal.,NucleicAcidsResearch30,E9,2002にクローン化した。抗体の発現および精製上記で説明したように、抗体を、形質移入試薬FuGENERocheを使用して、pTT5プラスミドを含む重鎖および軽鎖の共形質移入を通して、細胞系HEK293E中に産生した。7日後、上清を遠心分離によって採取して、pH7.4に調整した後、HiTrap商標タンパク質Aカラム5mL、GEHealthcare上に装填した。カラムを、50mLの1xPBSpH7.4で洗浄した。pH2.5、0.1Mのクエン酸を使用して溶出を行った。溶出した抗体を、Zeba脱塩カラムPierceを使用して、1xPBSpH7.4中に脱塩した。抗体を、SDS-PAGEを使用して分析した。抗体の濃度を、製造業者の指示に従って、BCAアッセイキットPierceを使用して決定した。ELISAによる抗体のIL-23への結合の検出NuncMaxisorp96-ウエルプレートを、炭素塩被覆緩衝剤中で1μg/mLに希釈したヒトIL-23で被覆して、4°Cで一晩インキュベートした。プレートを洗浄1xPBS-Tween200.05中で3回し、次いで、室温で、PBS中1のBSAで1時間遮断した。ビオチン化された抗体を10μg/mLから始めて調製し、連続半対数希釈を行い、次いで100μLをプレートに添加して、1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、1:2000希釈のストレプトアビジン-HRPを全てのウエルに添加して、さらに1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、TMBSigmaを使用して、その後現像した。等量の1MHClを添加することによって、発色現像反応を停止させた。プレートに基づく分光光度計を使用して、結果として生じた反応物の吸光度を測定した。IL-23結合抗体の表面プラズモン共鳴SPR分析Biacore3000を使用して、タンパク質APierceを、3000応答単位RUが得られるように、アミン連結化学を使用してCM5チップ上に固定化した。抗体を、フローセル2または4の表面に捕捉し、フローセル1または3を対照表面とした。ヒトIL-23を、双方のフローセルに通過させて、応答単位を測定した。次いで、表面を、pH2.5で10mMのグリシンで再生した。動態学的実行について、このプロセスを5つのIL-23希釈物で繰り返した。ka、kd、およびKDを判定するために、1:1のLangmuir式を使用して適合させる前に、データを、ランニング緩衝剤の注射を使用して二重参照した。ネズミ脾細胞におけるIL-23誘発性のIL-17産生の抗体阻害脾臓を、C57BL/6マウスから得て、最初に、脾臓を均質化し、続いて、NH4Clを使用して赤血球を溶解させることによって準備した。次いで、脾細胞を、培地RPMI、10のFBS、2mMのLグルタミン、100UのPen/Strep中で、再懸濁および遠心分離によって洗浄した。抗体を十分な培養培地で希釈して、96-ウエルプレート全体の滴定曲線を作成した。100ng/mLをヒトIL-23EBiosciencesを各ウエルに添加し、5のCO2湿度で、37°Cで1時間インキュベートした。細胞をウエルに添加し、ウエルあたり200μLの総容積で、1mLあたり5×106個の細胞濃度を得た。培養物を、5のCO2湿度で、37°Cで4日間インキュベートした。インキュベーションの終了後、上清を採取し、ネズミIL-17用のDuosetELISAキットRDSystemsを使用して、産生したネズミIL-17を検出した。IL-23に特異的に結合するモノクローナル抗体の産生ハイブリドーマの生成ヘテロ二量体IL-23に対するモノクローナル抗体を、対応する従来のラットのタンパク質免疫化による遺伝子免疫化によって産生した。遺伝子免疫化について、ヒトIL-23のDNA配列1つのプロモーターからの分子の発現を促進するように、GSリンカーを含む;配列番号5を、制限酵素技術を使用して、遺伝子免疫化のためにプラスミドにクローン化した。結果として生じたプラスミドは、N末端またはC末端でc-mycエピトープによってタグ付けされた、可溶性IL-23の分泌を可能にする。可溶性IL-23の発現を確認するために、c-mycエピトープを利用した。次いで、ラットを、公開されている手順Kilpatricketal.,Hybridoma17:569-576,1998に従って、Helios遺伝子銃Bio-Rad,Germanyを使用して、プラスミドで6回免疫化した。免疫化プラスミドの最後の適用の1週間後に、各ラットを、組み換えヒトIL-23タンパク質Ebiosciencesの皮内注射によって追加免疫した。4日後に、ラットを死亡させ、それらのリンパ球を、ポリエチレングリコールHybriMax商標、Sigma-Aldrich,Germanyを使用して骨髄腫細胞と融合させ、1ウエルあたり100,000個の細胞を96-ウエルマイクロタイタープレートに播種し、ハイブリドーマ選択のために10のウシ胎児血清およびHAT添加剤前掲のKilpatricketal.,1998を補充したDMEM中で成長させた。抗体特異性に対するハイブリドーマのスクリーニング完全長の天然IL-23Ebioscienceを、96-ウエルプレートMaxisorp、Nunc上に被覆した。各ハイブリドーマ由来のハイブリドーマ上清を、IL-23を被覆したウエルに添加し、結合した抗体を、呈色反応を促進するHRP抱合体を伴うネズミラット抗体に特異的な二次抗体を使用して検出した。IL-23に対して陽性結合を示したハイブリドーマを、限界希釈法を介してサブクローン化し、この細胞を、培養倍地で希釈し、1ウエルあたり細胞1個未満の比率で、新鮮な96-ウエルプレート中に入れた。クローンを回収した後に、ハイブリドーマ上清に対してさらなるELISAを行った。抗FLAGM2抗体Sigma-Aldrichを、一晩ELISAプレート上に被覆した。次いで、これらのプレートを、FLAGタグ付けしたIL-23p19、FLAGタグ付けしたIL-12p40、およびFLAGタグ付けしたIL-23を個々に捕捉するために使用した。クローンからのハイブリドーマ上清を添加し、IL-23への結合については陽性であるが、IL-12p40またはIL-23p19については陽性でないハイブリドーマを拡大させた。IL-23ヘテロ二量体特異性を伴うラット抗体E11E7の特定および分子の特徴付け前述の免疫化およびスクリーニング方法を使用したところ、スクリーニングした約83のハイブリドーマの中の1つのラットハイブリドーマが、IL-23には強く結合したが、IL-12p40またはIL-23p19には有意に結合しなかった抗体を分泌した。E11E7と称されるこの抗体を、E11E7発現ハイブリドーマ細胞から単離したRNAを使用して、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応によって配列決定した。簡潔に述べると、製造業者のプロトコルに従って、TRI試薬Sigmaを使用して、RNAを調製した。その後、AccuScript登録商標HighFidelity1stStrandcDNASynthesisKitStratageneを使用して、100~200ngのRNAから合成したcDNAを、PCRのテンプレートとして使用した。NovagenMouseIgGPrimerSetからのプライマーを使用して、基本的に製造業者Stratageneの指示に従って、ポリメラーゼUltraPfuII-HSを使用して、推定のE11E7重鎖および軽鎖配列をcDNAから増幅した。EppendorfMastercyclerおよび以下の循環パラメータを使用して、サーモサイクリングを行った。94°Cで2分1サイクル、続いて、94°Cで30秒、60°Cで30秒、72°Cで45秒30サイクル、続いて72°Cで5分1サイクルアガロースゲル0.7~1.0上での電気泳動に続いて、PCR産物を、Qiaquickゲル抽出キットQiagenを使用して切除し、浄化した。72°Cで15分間の、TaqポリメラーゼInvitrogen商標およびdATPのインキュベーションを通して、Aテーリングを行った。次いで、Aテーリングを行ったPCR産物を、pGEM-TEasyPromega中に結合させ、製造業者の指示に従って、TOP10コンピテント細胞Invitrogen商標に形質転換した。ベクター特異的プライマーを使用した形質転換体のPCRスクリーニングで、約500bpの挿入物を含有するプラスミドを保有するクローンを特定した。その後、プラスミドDNAを、QIAprepスピンミニプレップキットQIAgenを使用して挿入物含有クローンから単離して、配列決定したAGRF,Brisbane。次いで、可変重鎖配列番号6および可変軽鎖配列番号11のヌクレオチド配列を、一次アミノ酸配列に翻訳したVHについて配列番号7、およびVLについて配列番号12。ラットE11E7重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列をヒトの定常領域上に構成することを通して、ラット-ヒトキメラ抗体を生成した。逆翻訳に続いて遺伝子を合成し、その後、一般的な方法で説明したように、発現ベクターpTT5にクローン化した。VHのヌクレオチド配列は、配列番号19に記載の配列を含む。VLのヌクレオチド配列は、配列番号18に記載の配列を含む。これらの完全長重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号20および21で与えられる。E11E7キメラをビオチン化しPierceEZ-LinkSulfo-NHS、一般的な方法で説明したELISA手法を使用して、IL-23Fc、IL-23p19Fc、IL-12p40Fc、およびネズミIL-23Ebiosciencesへの結合についてスクリーニングした。ビオチン化したE11E7キメラは、IL-23には強く結合したが、それぞれのサブユニットまたはネズミIL-23にはほとんどまたは全く結合を示さなかった図1。これは、E11E7キメラが、ヒトIL-23複合体に特異的であるが、それぞれのサブユニットに対しては特異的ではないことを実証した。E11E7のエピトープのマッピング抗体が結合するIL-23上の場所を決定するために、E11E7キメラに対してエピトープマッピングを行った。水素/重水素交換実験本質的に、米国特許第US6797482B2号で説明されているようにを使用して、E11E7への結合に関与するIL-23の臨界領域を特定した。溶液中で、IL-23において水素を重水素に交換した。次いで、この重水素化したIL-23に、溶液中でE11E7キメラのFAb断片を結合させた。抗体と接触し、したがって、交換から保護されたIL-23の領域を除いて、複合体を交換して水素に戻した。次いで、IL-23抗体複合体を消化させ、質量分光法を介して分析して、重水素を含む領域を特定した。以下の結果が得られた。この分析に使用した配列は、IL-12p40サブユニットについては配列番号1に対応し、IL-23p19サブユニットについては配列番号2に対応する。各個々のサブユニットについて、平均±標準偏差S.D.の重水素のパーセント差を、最小の重水素含量を伴うペプチドの50にわたって計算した。平均3S.D.よりも大きい値を有意であるとした。p40サブユニット全体の平均503S.D.の重水素のパーセント差は、10.2であった。p19サブユニット全体の平均503S.D.の重水素のパーセント差は、18.1であった。重水素の差のパーセントが平均50±3S.D.よりも大きかった重複ペプチド配列を、表3において太字で強調する。これらのデータは、IL-12p40およびIL-23p19の残基が、E11E7キメラの結合時に重水素交換から保護されたことを示す。最大の重水素含量を伴うペプチドp40:135~153、p19:112~144を、IL-23の結晶構造にマップした図2。直径が約50オングストローム結晶構造3HMX全体で測定である抗体のFAbアームは、p40およびp19の強調した領域内で、原子間の25オングストロームの間隔全体で十分に結合することができた。E11E7キメラは、IL-23のIL-23Rへの結合を阻害するhIL-23R-HISを、炭酸塩被覆緩衝剤で1μg/mLに希釈し、96-ウエルプレートの各ウエルに添加し、4°Cで一晩インキュベートした。次いで、プレートを3回洗浄した。次いで、200μLの遮断緩衝剤を添加し、プレートを25°Cで1時間インキュベートすることによってウエルを遮断した。E11E7キメラまたは抗p40抗体を、10μg/mLから始まる滴定曲線を作成するのに十分な抗体希釈剤で希釈した。ビオチン化したhIL-23E-bioscienceを、抗体希釈剤で100ng/mLの最終濃度に希釈した。hIL-23を、深ウエル容器中で2時間、抗体とともに前保温した。上で説明したようにプレートを洗浄し、その後、ウエルを25°Cで2時間、抗体/hIL-23溶液でインキュベートした。次いで、上で説明したようにプレートを洗浄し、抗体希釈剤中1:5000の100μLのストレプトアビジンHRPBDPhamingenを使用して、結合したビオチン化したサイトカインを検出した。25°Cで1時間インキュベートした後に、上で説明したようにプレートを再度洗浄した。100μLのTMB基質溶液Sigma-Aldrichを、各ウエルに添加し、15分間発色現像させた。100μLの1MHClを添加して発色現像反応を停止させ、450nm参照波長620nmで吸光度を判定した。E11E7は、試験した最高濃度においてIL-23がIL-23Rに結合するのを阻害することができなかった抗p40と比較したときに、IL-23がIL-23Rに結合するのを阻害することができた図2。E11E7は、インビトロで強力な阻害剤でありかつIL-23生物活性であるSPRアッセイにおいて、E11E7キメラの親和性は、Biacore3000の感度を超え、100pM未満のKDを有する。E11E7およびそのキメラであるE11E7キメラを、ネズミ脾細胞アッセイを使用して、それらのIL-23中和能力についてスクリーニングした。どちらの抗体も、ヒトIL-23誘発性のネズミIL-17分泌の強力な中和を示した図4。これらの結果は、ヘテロ二量体複合体には結合するが、IL-23の個々のサブユニットには結合しない抗体が、IL-23生物活性の強力な中和剤であることを実証する。E11E7キメラは、乾癬のIL-23駆動ネズミモデルにおいて有効であるC57Bl/6JマウスをIL-23の背中への皮内投与で6日間処置したところ、紅斑および硬結を特徴とする限局性の炎症性応答を誘発し、表皮過形成、不全角化症、および限局性の炎症性浸潤を伴った。サイトカイン処置を開始する前日に、単回投薬で炎症性応答を減少させる抗体の能力について抗体を試験した。サイトカイン注射を開始する前日に、E11E7キメラ、ヒトp19特異的抗体米国特許第US7807160号による抗体7G10、またはアイソタイプ対照抗体を、10mg/kgの用量の単回腹腔内注射で与えた。マウスを、試験領域の紅斑および硬結について毎日評点した。全ての処置および観察は、盲検で行った。研究の終了時に、各マウスから皮膚試料を採集し、標準的なプロトコルによって、組織学的処理ならびにマトキシリンおよびエオシンHE染色のために固定した。表皮厚さの値は、各マウスからの皮膚の各部の低電力画像の紙コピーを印刷することによって決定した。各画像上の皮膚区画を、3つの垂直線を使用して4つの四半部に分割した。次いで、表皮厚さを、四半部を描画するために使用した3つの線の交差点で測定し、すなわち、写真1枚あたり3つの測定値を測定した。次いで、各画像に対してスケールを使用して、mmである実際の距離をマイクロメートルに変換した。毛嚢または汗腺等の表皮厚さを表していないとみなされる領域と測定地点が交差した場合は、その測定地点を皮膚の隣接する区画に調整した。測定は、2つの独立した観察者によって盲検で行った。E11E7キメラおよび抗p19を受け取ったどちらの群も、アイソタイプ対照と比較して、5日目から臨床スコアが減少し、この研究における抗体の有効性を実証した図5A。また、E11E7キメラが、6日目から抗p19抗体を超える改善された有効性を示すことも観察された。E11E7キメラおよび抗p19抗体は、アイソタイプ対照と比較して、統計的に有意な表皮厚さの減少を示した図5B。E11E7キメラによる処置は、抗p19抗体による処置よりも大幅に減少した表皮厚さをもたらした。これは、臨床的スコアと十分に相関し、このネズミの乾癬モデルにおいて試験したときに、E11E7キメラが抗p19抗体よりも強力なIL-23の阻害剤であることを実証する。ラット抗体E11E7のヒト化Superhumanisation商標米国特許公開第US2003/0039649号および3次元モデリングLoMethodsMolBiol248:135-159,2004並行方策を用いて、ラットE11E7抗体のCDRを支持することが可能な好適なヒトフレームワークを選択した。3次元モデリングを使用したヒトフレームワーク受容体の選択ラットのVHおよびVLの独立した3次元モデルを、結晶構造のデータベースWorldwideProteinDataBankpdb、http://www.wwpdb.orgおよびソフトウェアパッケージのDiscoveryStudiov3.0Accelrys商標、米国を使用して構成した。簡潔に述べると、結晶構造情報を伴う、類似する相同性が70を超えるポリペプチド配列の抗体を特定するために、ラットの重鎖可変領域または軽鎖可変領域のいずれかを使用して、BasicLocalAlignmentSearchToolBLASTの検索によって、タンパク質データバンクデータベースを確認した。その後、これらの構造を使用して、ラットの可変領域によって共有されるアミノ酸の相同性および特定した結晶構造の相同性に基づいて、相同性モデルを構築した。ラットのVHおよびVLモデルを使用して、どのフレームワーク領域のアミノ酸が、CDR中のアミノ酸と相互作用する可能性が高く、したがって、ヒト化抗体の最適な活性のために、選択したヒト受容体に保存する必要性が高いかを予測した。また、これらのモデルを使用して、それらのフレームワークと齧歯動物の抗体のフレームワークとの構造的相同性に基づいて、タンパク質データバンクから、好適なヒトのVHおよびVL受容体のフレームワークを特定した。正しい重鎖および軽鎖の対形成を確実にするために、同じ抗体結晶構造のVHおよびVLヒト受容体フレームワークを、ヒト化プロセスによって進展させた。、齧歯動物-ヒトの重鎖フレームワーク領域との構造的相同性を有するヒト受容体抗体を、より良好な齧歯動物-ヒトの軽鎖フレームワークの相同性を有するヒト受容体抗体よりも好ましいものとした。ラットの抗体E11E7について、選択したヒト受容体フレームワークは、pdb登録コード3B2U、3L5Y、1U6A、および1QLRであった。選択したフレームワークのうち、3L5Yおよび1U6Aは、ヒト生殖細胞系配列に対して複数のアミノ酸残基の変化を含むので、進展させなかった。ラットE11E7のSuperhumanisation商標簡潔に述べると、カノニカル構造を、それらのそれぞれのアミノ酸配列の検査を通して、ラットE11E7重鎖および軽鎖に割り当てた。E11E7は、カノニカル構造3-1-1/1-1VL/VHを割り当てた。同じカノニカル構造を共有するヒト生殖細胞系配列を、ドナーCDRを移植するための受容体フレームワークとして使用した。ヒト化データの要約ヒト化プロセスの結果として、22のヒト化抗体を産生して、ヒトIL-23と結合するそれらの能力について試験した表4。簡潔に述べると、22のヒト化抗体の2mLの形質移入を、SPRを介して抗体発現レベルおよび結合活性についてスクリーニングした。タンパク質Aを、アミン結合を使用して、CM5ResearchGradeセンサチップのFC1およびFC2または代替として、FC3およびFC4に固定化して、約3000RUを得た。FC1を、実験の全体を通してブランクとして使用した。実験は、HBS-P緩衝剤SPR中で実行した。抗体含有細胞培養上清を、10xHBS-P緩衝剤で、9:1の比率で希釈した。希釈した抗体を、20μL/分の流量でFC2に注入した。FC1およびFC2の双方全体で5分の解離時間、動態学的注射として5g/mLの濃度で、IL-23HEK293E由来に両FCの表面を通過させた。表面の再生を、10mM、pH1.5のグリシンを使用して行った。FC2からのセンサグラムデータは、FC1および緩衝剤だけの対照から減じた。50RUよりも大きいレベルで捕捉し、かつ0.1を超えるIL-23捕捉/抗体捕捉比率を有する抗体をスケールアップし、さらなる試験のために精製した。各抗体の可変重鎖および軽鎖の配列番号を、選択した試験抗体のkdオフレートとともに表4に示す。全ての試験したヒト化抗体は、表面プラズモン共鳴を介して、IL-23への結合を示した表4。抗体1-4、6-22、8-22、20-4、9-22、および21-4を、IL-23への結合について、ELISAで試験した図6。試験した全ての抗体が、E11E7キメラへの結合に類似したIL-23への結合を示した。これらのデータで、ヒト化E11E7抗体における結合活性の良好な保持が確認される。ヒト化抗体およびE11E7のVHおよびVLの配列を図7に示す。また、この図は、保存/同一性およびコンセンサス配列の領域を示す。いくつかの抗体を、Biacoreを介して、それらがIL-23に結合する能力についてさらに試験した表5。試験したヒト化抗体の5つのうち4つが、ピコモル単位の親和性KDで、IL-23と結合した。抗体は、E11E7キメラと比較したときに、より速いオフレートを有した。IL-23に対するヒト化抗体の特異性表5に提示される結果に基づいて、選択的にIL-23に結合するそれらの能力についてさらにスクリーニングするために4つの抗体を選択した。ELISAによって示されるように、抗体21-4、8-22、6-22、および20-4は、全て、IL-23に特異的に結合したが、IL-12p40またはIL-23p19のどちらにも有意に結合しなかったことを示した図8。IL-23に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体の産生ファージディスプレイ複数の個々のヒトFAb断片を含むナイーブバクテリオファージファージライブラリXOMAcorporation,Berkeleyを、IL-23には結合するが、IL-23、p19、およびp40の個々のサブユニットには有意に結合しない抗体を単離する試みでスクリーニングした。Dynal製M450磁気エポキシビーズへの抗原の架橋1mLのDynal製M450エポキシビーズを、pH8.0で1mLの100mMリン酸ナトリウムで1回洗浄した。洗浄したビーズを、pH8.0で0.5mLの100mMのリン酸ナトリウムにさらに再懸濁し、結合させるべき1.4μmolのリガンドを加え、最終的な結合容積を、pH8.0で100mMのリン酸ナトリウムで、1mLにした。結合反応を、ゆっくり回転させながら、室温で一晩約16時間継続させた。その後、ビーズを、pH7.4で20μLの1Mのトリスを添加し、室温で30分間ゆっくり回転させながら遮断した。ビーズを、PBSで3回洗浄し、1mLのPBS中に再懸濁した。ファージライブラリのバイオパニング異なる試薬および/またはパニング条件を使用したいくつかの不成功のファージディスプレイキャンペーンに続いて、前述の特異性を有する抗IL-23抗体を、ファージディスプレイライブラリから単離した。一般プロトコルは、Marks他MarksandBradburyMethodsMolBiol248:161-176,2004によって概説される方法に従った。簡潔に述べると、各ファージディスプレイキャンペーンは、カッパ鎖およびラムダ鎖の双方を含むライブラリを独立してスクリーニングする3回のバイオパニングを伴った。各回のバイオパニングについて、各ライブラリから採取したファージ粒子を、遮断バッファpH7.4のリン酸緩衝食塩水中の5の脱脂乳と1:1で混合し、室温で1時間インキュベートすることによって遮断した。次いで、遮断したファージライブラリを、該当する場合には、ライブラリについて説明されるように遮断した抗原を使用して、室温で1時間、予め枯渇させた。ライブラリパニングは、1.5mLのマイクロ遠心分離管中で、遮断および予め枯渇させたライブラリと、選択複合体予め遮断したものとを混合し、室温で1時間回転させながら行った。特異的に結合しなかったファージは、一連の洗浄を使用して除去した。各洗浄は、磁気ラックを使用してビーズ複合体を溶液から管壁に引き寄せることと、上清を吸引することと、次いで、ビーズを新鮮な洗浄緩衝液で再懸濁することとが含まれた。これを、PBS洗浄緩衝液0.5の脱脂乳を伴うPBSまたはPBS-T洗浄緩衝液0.05のTWEEN-20Sigma-Aldrichおよび0.5の脱脂乳を伴うPBSで複数回繰り返した。洗浄プロセス後、結合したままのファージを溶出した。1回目および2回目のパニングの終了後に、出力ファージを、指数的に成長するTG1大腸菌酵母-トリプトンYT成長媒体の10mLの培養液に添加して、振盪せずに37°Cで30分間インキュベートし、次いで250rpmで30分間振盪することによって、細胞を感染させた。次いで、ファージディスプレイ出力をコードするファージミドを、標準プロトコル前掲のMarksandBradbury,2004に従って、ファージ粒子として救出した。3回目のパニング終了後、TG1細胞を、出力ファージで感染させたが、細胞は、別個の大腸菌のコロニーを産生するのに十分な希釈度で、細胞は固体YT成長媒体2のグルコースおよび100μg/mLのカルベニシリンを補充上で平板培養した。スクリーニングのためのFabの発現3回目のファージライブラリのバイオパニングによる別個の大腸菌のコロニーを使用して、1mLの2YT成長媒体2のグルコースおよび100μg/mLのカルベニシリンを補充のアリコートを、96ウエル深ウエルプレートに接種した。プレートを、380rpmで振盪しながらInnova44Rシェーカー、軌道1インチ約25.4mm30°Cで一晩成長させて、マスタープレートを作成した。Fabについて、誘導細菌を、新鮮な2YT媒体100μg/mLカルベニシリンを補充を含む、さらなる96ウエルの深ウエルプレートで1:100に希釈し、OD600が0.5に到達するまで、37°C、380rpmで成長させた。最終濃度1.25mMのIPTGを添加し、プレートを、前述のように振盪しながら、25°Cで一晩約16時間成長させた。可溶性Fabの調製誘導プレートからの細菌ペレットを、2000gで10分間室温の遠心分離によって採取した。使用済み培地を廃棄し、ペレットを、160μg/mLのリゾチーム、10μg/mLのRNAse、5μg/mLのデオキシリボヌクレアーゼ、およびプロテアーゼ阻害剤カクテルCompleteRocheから成る、1ウエルあたり200μLのリゾチーム緩衝剤中に再懸濁した。プレートを、1ウエルあたりさらに100μLのリゾチーム緩衝剤を添加する前に、21°C、400rpmで30分間でインキュベートし、さらに、21°C、400rpmで30分間インキュベートした。その後、プレートを、アッセイにおいてFab抽出物を使用する前に、3000gで15分間室温遠心分離した。Fab発現、ならびに抗原IL-23、IL-23p19-Fc、およびIL-12p40-Fcへの結合に関するELISAスクリーニングNuncMaxisorp96-ウエルプレートを、炭素塩被覆緩衝剤中1μg/mLのタグ付けしていないヒトIL-23で被覆し、4°Cで一晩インキュベートした。さらに、プレートを、抗原ヒトp19-Fc、ヒトp40-Fc、および抗カッパまたは抗ラムダいずれかの抗体を使用して、IL-23について説明したるように被覆した。プレートを洗浄し、次いで、室温で1時間、PBS中1のBSAで遮断した。プレートを再度洗浄し、その後に、1ウエルあたり50μLのFab抽出物を添加し、室温でさらに1時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、その後に、1ウエルあたり50μLの、1:2000に希釈した抗v5-HRP抗体抱合体Invitrogen商標を添加し、室温でさらに1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、現像して、上記で説明したように読み取った。IL-23結合特異性を示すリードFabのファージディスプレイの結果多数のスクリーニングのアプローチに続いて、キャンペーン4および5からスクリーニングした768のFabのうちの1つのFabST883/885と称するが、IL-23には結合したが、IL-23p19-FcまたはIL-23p40-Fcへの結合がほとんどまたは全く観察されなかった。この特異性を伴うST883/885Fabをコードするファージミドを含むバクテリアを、5mLのLBブロス100μg/mLのアンピシリンを補充中で一晩再成長させ、これを使用して、配列決定のためにプラスミドDNAを単離した。ST883/885の可変重鎖は、配列番号49として与えられ、可変軽鎖は、配列番号50として与えられる。ST883/885のVHおよびVLを、増幅させて、それらのそれぞれのpTT5重鎖および軽鎖発現ベクターにサブクローン化した。次いで、ST883/885IgGと称される完全長抗体を、上記で説明したように、HEK293E細胞のヒトIgG1ラムダのアイソタイプ抗体として発現させた。抗体を、遠心分離による懸濁液からの細胞の除去に続いて、上記で説明したようにタンパク質Aクロマトグラフィによって精製した。図9で示されるように、抗体は、IL-23に対しては特異的であるが、IL-12p40およびIL-23p19には有意に結合しないことが分かった。IL-23特異的抗体による内因性IL-23の検出E11E7等のIL-23特異的抗体は、生物学的試料中のIL-23の検出において有用である。IL-23を検出するE11E7の効果を実証するために、標準的なサンドイッチELISAが開発された。PBS中2μg/mLのE11E7を、MaxisorpプレートNunc上に被覆し、4°Cでインキュベートした。次の日、プレートを、0.05のTween-20PBS-Tを伴うPBSを使用して洗浄し、PBS中10のウシ胎仔血清で1時間遮断した。rhIL-23を、3ng/mLの最高濃度で添加し、プレート全体に連続希釈を行った。プレートを、1時間インキュベートし、次いで、PBS-Tで3回洗浄した。ビオチン化したIL-23による検出抗体、その後PBS-Tで3回洗浄し、次いでストレプトアビジンHRPによる検出を使用して、複合体を検出した。組み換えIL-23を、捕捉抗体としてE11E7を使用して、用量-滴定で検出した図10A。天然のIL-23を検出するためにE11E7を使用できるかどうかを判定するために、THP-1細胞を、培養液中1μg/mLのアメリカヤマゴボウ分裂促進因子PWMおよび異なる濃度のリポ多糖類LPSで24時間刺激した。次いで、上清を採集して、上で説明したELISA形式で検定した。E11E7は、試験したいくつかの濃度のLPSで天然のIL-23を検出することが可能であった図10B。さらなる抗体および抗体断片の産生4.1ハイブリドーマ細胞系の生成ヘテロ二量体IL-23に対するモノクローナル抗体を、従来のタンパク質免疫化によって、または基本的に実施例1で説明されるような、遺伝的免疫化を使用して産生した。この方法は、ラットではなくマウスを免疫化するようにいくつかの形態に改変される。ハイブリドーマのスクリーニングおよびDNAの配列決定は、基本的に実施例1で説明されるように、および/または図11で表されるように行われる。4.2ディスプレイライブラリからのさらなるIL-23ヘテロ二量体抗体の単離一次選択について、抗体断片をディスプレイするファージのライブラリを、保持されているFLAGタグ付けしたIL-23タンパク質および陽性結合ファージに対してパニングする。次いで、抗FLAGM2被覆ビーズSigmaおよびFLAGタグ付けしたp19を使用して、IL-23p19サブユニットへの結合に対して陽性のファージの枯渇を行い、併せて、抗FLAGM2被覆ビーズSigmaおよびFLAGタグ付けしたIL-12p40を使用して、IL-12p40サブユニットへの結合に対して陽性のファージの枯渇を行う。これによって、IL-23のヘテロ二量体界面に対して特異的である抗体断片を提示するファージが残る図11Henderikxetal,Selectionofantibodiesagainstbiotinylatedantigens、AntibodyPhageDisplay:Methodsandprotocols,Ed.O’BrienandAtkin,HumanaPress2002。抗FLAGM2被覆ビーズSigmaおよびFLAGタグ付けしたIL-23に対してスクリーニングすることによって、これらの抗体断片のさらなる親和性成熟を行う。次いで、プラスミドプレップQiagenおよび制限消化によって放出される抗体断片の挿入物によって、選択対象出力からのファージベクターを単離する。これらの挿入物を、ファージ発現ベクターに結合させ、抗体断片の可溶性発現およびスクリーニングのために、大腸菌株HB2151を形質転換するために使用する。代替として、抗体断片挿入物を、配列決定して、短縮したヒト定常領域とともに発現させる。抗体を発現するベクターの構築、発現、および抗体の精製抗体を発現するベクターを、基本的に上で説明したように産生する。次いで、抗体を発現させて、本質的に上で説明したように精製する。精製された抗体の特徴付け実施例5で説明したように、発現させて、精製した抗体を、基本的に上で説明したように、マウス脾細胞を使用したELISAアッセイ、IL-23/IL-23R阻害アッセイ、およびIL-17放出アッセイを使用して特徴付けする。ヘテロ二量体特異的抗体のエピトープの特徴付け点変異技術を使用して、3次元X線結晶構造3D85に基づいて、側鎖が溶液と接触することが予測される各位置において、アラニンをIL-23のタンパク質配列に導入する。次いで、IL-23の発現および精製について上記で説明した方法を使用して、単一のアラニン点変異を含む各IL-23タンパク質を発現させて、精製する。SPR技術を使用して、候補抗体をタンパク質Aチップの表面に固定化し、各IL-23変異体タンパク質を該表面に通過させ、結合動態を測定する。固定化した抗体に結合しなかった、または結合が弱いタンパク質変異体は、IL-23上の抗体のエピトープに点変異を含み得る。さらなる実験では、各IL-23変異体を、ELISAプレート上に被覆する。次いで、遮断後に、IL-23に特異的なポリクローナル抗体と共に、候補抗体を添加する。次いで、それらの対応する二次抗体を使用して、両方の抗体を検出する。候補抗体がIL-23変異体に結合できない状況であるが、ポリクローナル抗体がIL-23変異体に結合したときには、IL-23変異体上のアラニン変異のアミノ酸位置が、候補抗体と相互作用するアミノ酸位置としての役割を果たすことを示し得る。"