以下の組成:aKnLmただしnは48、mは1120のアミノ酸配列からなる合成ペプチドと脂質とからなるADビークル;bカルボキシビニルポリマー;およびc単独では、効果的な免疫誘導と感染防御効果を生じさせる量の粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを産生させることのない量の抗原蛋白を含み、効果的な免疫誘導と感染防御効果を生じさせる量の抗原特異的粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを産生させることを特徴とする粘膜ワクチン。抗原蛋白cが、ADビークルaとの組合せ、またはカルボキシビニルポリマーbとの組合せによっても効果的な免疫誘導と感染防御効果を生じさせる量の抗原特異的粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを産生させることのない量である請求項1の粘膜ワクチン。合成ペプチドが、配列番号1または2のアミノ酸配列からなる請求項1の粘膜ワクチン。脂質が、ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびオレイン酸の少なくとも1種である請求項1の粘膜ワクチン。脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロールおよびパルミチン酸の3種脂質混合物である請求項3の粘膜ワクチン。抗原蛋白が病原体に由来の不活化抗原、精製抗原、部分精製抗原、リコンビナント抗原又は無毒化毒素、アレルギーの原因となるアレルゲンである請求項1の粘膜ワクチン。以下の組成:aKnLmただしnは48、mは1120のアミノ酸配列からなる合成ペプチドと脂質とからなるADビークル;bカルボキシビニルポリマー;およびc単独では、効果的な免疫誘導を生じさせる量の粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを産生させることのない量の抗原を含み、効果的な免疫誘導を生じさせる量の抗原特異的粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを産生させることを特徴とする粘膜ワクチンの製造法であって、1前記aおよびcを水に懸濁し、2加温と攪拌とを1回以上反復し、3凍結乾燥し、4凍結乾燥体を生理食塩水に懸濁して所定濃度に調製し、5前記bの溶液を加える、ことを特徴とする製造方法。特許文献3の粘膜ワクチンは強い抗体産生能を有するものであるが、粘膜ワクチンの共通の問題点として、経皮注射ワクチンよりも多量の抗原を必要とする問題点を有している。有効なワクチン治療のためには、その標的となる感染症の流行範囲に対して十分な量のワクチンが必要となるが、現状の抗原生産量の規模を鑑みた場合には、粘膜ワクチンの増産は困難である。従って、粘膜ワクチンにさらに強い抗体産生能を付与することが求められている。本願発明は、特許文献3に記載された粘膜ワクチンよりもさらに強い抗体産生能を有し、その結果として経皮注射ワクチンに匹敵するような少量の抗原で優れた効果を発揮することのできる改良型粘膜ワクチンを提供することを課題としている。本願発明者らは、特許文献3の粘膜ワクチンの抗体誘導をさらに増強する手段として、点鼻薬や粘膜適用型ワクチンに使用されているゲル化剤CVP、HPCの中から、ADビークルに働いて抗原提示細胞に運ばれる抗原量を増加させ、粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを誘導する効果を試験し、以下を確認した。特許文献3の粘膜ワクチン抗原合成ペプチド脂質、または特許文献5、6の粘膜ワクチン抗原CVPに比較して、抗原合成ペプチド脂質CVPからなる粘膜ワクチンは遙かに優れた抗体誘導能を有しており、その効果は、特許文献3抗原合成ペプチド脂質と特許文献5、6抗原CVPの単なる組合せから予測される範囲を大きく超えること。CVPと同様に点鼻薬や粘膜ワクチンのゲル化剤として広く報告されているHPC賦形剤は、抗原と併用、あるいは抗原とADビークルに併用した場合には全く抗体誘導能を持たず、粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを誘導する効果も期待できないこと。特許文献3の粘膜ワクチン抗原合成ペプチド脂質において必要な量の約1/5以下に抗原量を減じても、抗原合成ペプチド脂質CVPの粘膜ワクチンは遙かに強力な抗体誘導効果を有すること。本発明は、以上の新規な知見に基づき完成された。すなわち、本発明は、以下の組成:aKnLmただしnは48、mは1120のアミノ酸配列からなる合成ペプチドと脂質とからなるADビークル;bカルボキシビニルポリマー;およびc単独では、効果的な感染防御効果を生じさせる量の粘膜免疫IgAおよび血中免疫IgGを産生させることのない量の抗原蛋白を含み、効果的な感染防御効果を生じさせる量の抗原特異的粘膜免疫IgAおよび血中免疫IgGを産生させることを特徴とする粘膜ワクチンである。本発明の粘膜ワクチンにおいて抗原蛋白cは、さらに、ADビークルaとの組合せ、またはカルボキシビニルポリマーbとの組合せによっても効果的な感染防御効果を生じさせる量の抗原特異的粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを産生させることのない量である。この粘膜ワクチンにおける一つの態様において、前記の合成ペプチドは配列番号1または2のアミノ酸配列からなるペプチドである。またこの粘膜ワクチンにおける別の態様において、脂質は、ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびオレイン酸の少なくとも1種である。さらに具体的には、脂質は、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロールおよびパルミチン酸の3種脂質混合物である。この粘膜ワクチンにおけるさらに別の態様において、抗原は病原体に由来の不活化抗原、精製抗原、部分精製抗原、リコンビナント抗原又は無毒化毒素、アレルギーの原因となるアレルゲンを含む。さらに本発明は、以下の組成:aKnLmただしnは48、mは1120のアミノ酸配列からなる合成ペプチドと脂質とからなるADビークル;bカルボキシビニルポリマー;およびc単独では効果的な免疫誘導を生じさせる量の粘膜免役IgAおよび血中免疫IgGを産生させることのない量の抗原蛋白を含み、効果的な免疫誘導と感染防御効果を生じさせる量の抗原特異的粘膜免疫IgAおよび血中免疫IgGを産生させることを特徴とする粘膜ワクチンの製造法であって、1前記aおよびcを水に懸濁し、2加温と攪拌とを1回以上反復し、3凍結乾燥し、4凍結乾燥体を生理食塩水に懸濁して所定濃度に調製し、5前記bの溶液を加える、ことを特徴とする製造方法である。本発明において、効果的な免疫誘導を生じさせる量の粘膜免免疫IgAおよび血中免疫IgGとは、例えば、血液のウイルス感染阻止効果HIの値が国際的評価基準以上であるような量のIgAおよびIgGである。なお、以下の説明において、合成ペプチドと脂質とからなる組成物をADビークルと記載し、このADビークルと前記抗原とからなる組成物を粘膜ワクチンと記載することがある。これらのADビークルおよび粘膜ワクチンは特許文献3に開示されたものと実施的に同一である。さらに、この粘膜ワクチンにCVPを添加した組成物をCVP添加粘膜ワクチンと記載することがある。また、本願発明は、前記の脂質に関しては特許文献1-3の開示内容、合成ペプチドおよびADビークルに関しては特許文献3の開示内容を包含するものである。本願発明のCVP添加粘膜ワクチンは、ワクチン抗原特異的IgAおよびIgG抗体の極めて強い誘導効果と、誘導された抗体の国際基準をはるかに超える強いウイルス感染阻止効果HI効果を有している。これらの効果は、特許文献3に記載の粘膜ワクチン、あるいは抗原CVPワクチン特許文献5、6と比較しても極めて顕著であり、特許文献3の粘膜ワクチン効果と特許文献5、6のCVP効果とからは予期しえないほどの優れた効果である。このような強い抗体誘導能から、従来の粘膜ワクチンより少量の抗原を含有させることによって必要な感染防御効果が達成される。すなわち、本願発明のCVP添加粘膜ワクチンは、従来の粘膜ワクチン抗原合成ペプチド脂質に使用する抗原量を1/5以下にまで減じても、はるかに強力な抗体誘導効果を示す。例えば、試験例2に示したように、特許文献3の粘膜ワクチンは、抗原としてインフルエンザ抗原を使用した場合には、抗原量が02μgであっても血液のウイルス感染阻止効果HIはインフルエンザワクチンの国際的評価基準であるHI40に満たないが、本発明のCVP添加粘膜ワクチンは抗原量が01μg、さらには抗原量が003μgであってもHI値が100以上という優れたウイルス感染阻止効果を示す。さらに、本願発明のCVP添加粘膜ワクチンの組成物ADビークル、CVP自身には、抗原認識細胞刺激効果は無く、そのため投与したワクチン抗原以外の抗原による予期しない副作用、例えば自己免疫疾患、ワクチン接種後のアレルギーの増悪等の起きる可能性は極めて低い。また、本発明の粘膜ワクチン製造法によれば、抗原特異的粘膜免疫IgAおよび血中免疫IgGのさらに高い産生能を有する粘膜ワクチンを製造することが可能となる。本願発明のCVP添加粘膜ワクチンは以下の組成からなる。合成ペプチドKnLmただしnは48、mは1120のアミノ酸配列からなる合成ペプチドでる。このKnLmはN末側のn個のKLys残基とC末側のm個のL残基が連続している。このような合成ペプチドは、例えば以下のいずれかのペプチドである。なお、括弧内はペプチドの略号である。またアミノ酸残基は1文字記号で示している。配列番号1K6L16KKKKKKLLLLLLLLLLLLLLLL配列番号2K6L11KKKKKKLLLLLLLLLLL配列番号1K6L16は、N末側の6個のKLys残基とC末側の16個のL残基とからなり、配列番号2K6L11は、N末側の6個のKLys残基とC末側の11個のL残基とからなる。これらの合成ペプチドは、公知の化学合成法に従って調製された、純度95以上のものを使用する。脂質リン脂質としては、肺サーファクタントが含有するリン脂質、例えばホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール等の使用が望ましい。その他、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン等を用いることができる。また、脂肪酸としては、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸等を用いることができる。更に、肺の膨張が活発なクジラ、イルカ等の水棲動物に由来の脂質を用いることができる。カルボキシビニルポリマーCVPCVPはアクリル酸を主成分として重合して得られる親水性ポリマーであり、ハイビスワコー103、ハイビスワコー104、ハイビスワコー105、Sigma社製のpAA130SigmaStLouisMOCatNo181293、pAA450SigmaCatNo181285、pAA1250SigmaCatNo306215などの市販品を用いることができる。中でも化粧品や医薬品用ゲルの作成に汎用されているハイビスワコー104、Sigma社製のpAA130、pAA1250が好ましい。CVPを純水あるいは生理食塩水で超音波処理下に0220重量溶解液を作成した後、NaOH中和液でpH50105の作成が可能であるが、ワクチン抗原の安定性に影響しないpHを選択することが好ましい。例えば、インフルエンザスプリットワクチン抗原の場合では、pH6880、好ましくはpH7072に調整する。抗原抗原は、ワクチン用に高度精製された純度が約90以上の細菌由来抗原、ウイルス抗原、トキソイド等のタンパク質、糖タンパク質、アレルゲン、高分子の糖質や核酸等の抗原分子を含む。例えば、水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群ウイルス、ウエストナイルウイルス、ハンタウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、HIVウイルス、C型肝炎ウイルス、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザb型菌、肺炎菌。コレラ菌、マラリア病原体、眠り病病原体などに対するワクチン用の抗原である。これらの抗原は、それ単独、特にADビークルaとの組合せまたはカルボキシビニルポリマーCVPとの組合せによっても効果的な免疫誘導を生じさせる量の抗原特異的粘膜免疫IgAおよび血中免疫IgGを産生させることのない量を調製して使用する。なお、インフルエンザ抗原蛋白の場合はHA抗原分子の他にM蛋白、ノイラミラーゼ、ヌクレオプロテイン等を含有する。以下の説明において、抗原蛋白量とはこれらの抗原分子を含む蛋白質総量を意味する。HA抗原分子それ自体の量は、使用したロットのインフルエンザワクチンでは、抗原総蛋白量の約50であった。次に、これらの材料からADビークルおよびCVP添加粘膜ワクチンを調製する方法を説明する。ADビークルの調製前記の脂質のうちの幾つかを任意の割合で混合し、脂質量として、例えば10mgmLの濃度となるようにクロロホルム:メタノール2:1混合液に懸濁し、脂質成分とする。また、合成ペプチドは、例えば50mgmL濃度となるようにエタノールに溶解する。次いで、この脂質成分と合成ペプチドとを混合する。混合比は、合成ペプチドが約02~約120乾燥重量、脂質が約88~約998乾燥重量である。この混合物をロータリーエバポレーターを用いて約40°Cで乾固し、任意の濃度で10エタノールに再懸濁し、約45°Cの水浴中で15分間程度振盪混和し、均一分散液を調製し、凍結乾燥する。この乾燥物は約-30°Cで保存し、使用時にその都度、純水または生理食塩水を加えて懸濁したのち、超音波、ホモジナイザー、ミキサー、振盪器等を用いて均一分散液とする。CVP添加粘膜ワクチンの調製前記のADビークル、CVPおよび抗原とを任意の割合で混合する。すなわち、インフルエンザワクチンの場合、ワクチン中の抗原蛋白量Aに対するADビークル量Vの乾燥重量比VAが所望の値になるよう、ワクチン原液にADビークル液を添加混合し調製する。マウス1匹当たりに投与する抗原蛋白の乾燥重量Aは約001~約10μgkg体重、好ましくは約003~約50μgKg体重である。この抗原量は、特許文献3の粘膜ワクチン抗原ADビークルにおける抗原量約01~50μgkg体重、好ましくは約03~30μgKg体重の15以下である。このような抗原量において、IgA抗体産生を優先的かつ選択的に誘導するためのVAは、約01~約10が望ましい。また、IgA及びIgG両抗体産生を誘導するためのVAは、約10~約100、好ましくは約5~約20の範囲を採用できる。以上のとおりのVAにおいて、抗原の約60以上がADビークルに結合し、それによって得られた粘膜免疫ワクチンはIgA抗体産生及び/またはIgG抗体産生を効率的に誘導することができる。またCVPを加えた最終経鼻投与ワクチン液中のCVP濃度は約01~10、好ましくは03~08の割合で添加する。尚、ADビークル、抗原、CVPを均一に混合するには、ホモジナイザー、ミキサー、振盪器、攪拌器等を用いることができる。具体的には、下記実施例1に示したように、抗原蛋白とADビークルを混合した後、3分間超音波処理を行い、さらに室温で2時間回転混和した後、最後に1CVP生理食塩水溶液を等量加えてCVP添加粘膜ワクチンを製造することができる。この方法は、CVPを添加することを除き、特許文献3に記載された方法と同一である。ただし、この方法は、超音波処理による発熱でウイルス抗原が失活する場合のあること、超音波処理の行程は、使用する機材の種類、発振器の大きさ、発振器の状態などから、一定の条件を保持することが困難な場合があることといった不都合がある。そこで、実施例7に示したような以下の工程からなる製造方法が好ましい。1ADビークルと抗原蛋白とを水純水に懸濁2加温と攪拌とを1回以上反復3凍結乾燥4凍結乾燥体を生理食塩水に懸濁して所定濃度に調製5生理食塩水に溶解したCVP溶液の添加この方法は超音波処理による前記問題点を解決するだけでなく、後記試験5に示したように、さらに高い抗原特異的なIgAおよびIgGの産生を可能とする、優れた方法である。調製したCVP添加粘膜ワクチンは、1回の投与で使用することもできるが、2回投与初回免疫と2次免疫または3回投与初回免疫、2次免疫、3次免疫として使用することが好ましい。このような複数回の免疫処置により、IgAおよびIgGの抗体価を著しく増加させることができる。なお、2回または3回のワクチン投与は、1週間から3週間、好ましくは約2週間の間隔で行うようにする。さらに、本願発明のCVP添加粘膜ワクチンの投与経路は、鼻腔のほか、口腔内や膣腔への投与も可能である例えば、LubrizolPharmaceuticalBulletinPolymersforPharmaceuticalApplicationsLubrizolAdvancedMaterialsInc2008。以下、実施例を示して本願発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、本願発明は以下の例に限定されるものではない。超音波処理を含む製造工程まず、以下のとおりにADビークルを調製した。ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、パルミチン酸を752510の割合で混合し、リン脂質量として10mgmlの濃度になるようにクロロホルムメタノール混合液に懸濁し、脂質成分とした。また純度95以上の合成ペプチドK6L16を50mgmLになるようにメタノールに溶解した。脂質成分DPPCPGPA752510www溶液とK6L16ペプチド溶液を重量比として、リン脂質成分:K6L161002となるように混合し、ロータリーエバポレーターを用いて40°Cで乾固した。これをリン脂質量として4mgmLとなるように、10エタノールに再懸濁し、45°Cの水浴中で15分間振盪混和し、均一分散液を調整した。これを凍結乾燥して、ADビークルとして30°Cで保存した。次に、前記のADビークルを用いてCVP添加粘膜ワクチンを以下のとおりに調製した。凍結乾燥したADビークルは要事に生理食塩水に懸濁して用いた。インフルエンザワクチン抗原は阪大微生物病研究会より供与されたANewCaledonia2099、194mg蛋白質mLリン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、チメロサール溶液:1mL中にリン酸水素ナトリウム水和物353mg、リン酸二水素ナトリウム054mg、塩化ナトリウム850mg、チメロサール0008mgを用いた。ワクチンとADビークの混合量は、抗原溶液の蛋白量Aに対するADビークル溶液のリン脂質量Vの量比VA=10となるように混合し、超音波処理を30秒間隔でオンとオフを3回繰り返し、合計90秒のオンと90秒のオフの合計3分間の超音波処理を行い、さらに室温で2時間回転混和した後、生理食塩水に溶解し、中性に調整した1CVPハイビスワコー104で最終濃度で05になるように加えた。すなわち、マウス一匹当たり、片鼻2μLを両鼻に投与する合計4μLに含まれる組成は、インフルエンザワクチン抗原蛋白量ADビークル溶液のリン脂質量CVP重量=02μg20μg20μgとなる。なお、このCVP添加粘膜ワクチンのpHは、HA抗原蛋白の抗原性を維持する範囲70―72とした。以下、このCVP添加粘膜ワクチンをHASF10と記載する。なお、SF10量は、前記のとおりADビークル20μgCVP20μg=22μgであるが、下記の説明ではアジュバントのビークル作用の基本骨格となるADビークルのリン脂質量で表記して、SF1020μgと標記する。他の実施例におけるSF10量もCVP量を除いた値で記載する。実施例1の方法に準じて、HA抗原蛋白量が01μgのCVP添加粘膜ワクチンを調製した。HA抗原蛋白、ADビークルおよびCVPの混合比は実施例1と同一としたすなわち、抗原蛋白量の10倍のADビークルと、最終濃度05のCVPを含む。実施例1の方法に準じて、HA抗原蛋白量が003μgのCVP添加粘膜ワクチンを調製した。HA抗原蛋白、ADビークルおよびCVPの混合比は実施例1と同一としたすなわち、抗原蛋白量の10倍のADビークルと、最終濃度05のCVPを含む。比較例1特許文献3の粘膜ワクチンHAADビークルを調製した。HA抗原蛋白およびADビークルは実施例1と同一のものを使用し、ワクチンの調製は実施例1に準じた。HA抗原蛋白量は02μg、ADビークル量は20μgである。比較例2特許文献5、6に開示された粘膜ワクチンHACVPを調製した。HA抗原蛋白およびCVPは実施例1と同一のものを使用し、ワクチンの調製は実施例1に準じた。HA抗原蛋白量は02μg、CVPは最終濃度05である。比較例3特許文献4に開示された粘膜ワクチンHAHPCを調製した。HA抗原蛋白は実施例1と同一のものを使用し、HPCは市販のHPC60100和光純薬を使用した。ワクチンの調製は実施例1に準じた。HA抗原蛋白量は02μg、HPC量は20μgである。比較例4特許文献3のHAADビークルに、さらにHPCを添加した粘膜ワクチンHAADビークルHPCを調製した。HAADビークルは比較例1と同一のもの、HPCは比較例3と同一のものをそれぞれ使用し、ワクチンの調製は実施例1に準じた。HA抗原蛋白量は02μg、ADビークル量は20μg、HPC量は20μgである。比較例5樹状細胞のTollLikeReceptorのリガンドであり、抗原提示細胞を強く刺激して抗体産生を促進するpolyを含む粘膜ワクチンHApolyを文献29102919に記載の方法に準じて調製した。HA抗原蛋白量は02μg、poly量は2μgである。比較例6HA抗原を生理食塩水で希釈して、ワクチンとして使用した。1匹当たりのHA抗原蛋白投与量は02μgである。試験1マウスを用いて、経鼻粘膜ワクチンの抗体産生増強作用を試験した。1.粘膜ワクチンHASF10実施例1HAADビークル比較例1HACVP比較例2HAHPC比較例3HAADビークルHPC比較例4HApoly比較例5HA単独比較例62.動物68週齢、メスBALBc雌マウスを日本エスエルシー株式会社日本静岡から購入して用いた。全ての動物実験は徳島大学医学部実験動物センターの感染動物舎P2レベルで行われ、徳島大学医学部動物実験委員会のガイドラインに従って行われた。3.免疫法ワクチンの経鼻投与においては、上記1の5種の粘膜ワクチンを、片鼻に2μLづつを両側に投与して、合計4μLをケタラール及びセラクタールで麻酔したマウスの両側鼻腔に点鼻投与した。対照には、ワクチン液と同量の生理食塩水投与群および比較例6HA抗原蛋白単独投与群を用いた。各群は910匹のマウスから成る。免疫は初回免疫後2週目に同様の組成からなる検体を、それぞれの群に2次免疫として同量経鼻投与した。2次免疫後2週目に同様な方法で3次免疫を行い、その後2週目に検体を採取した。なお、ワクチンの投与は合計3回おこなっているが、2次免疫で終了してもほぼ同様の結果が得られる。4.マウス鼻腔肺胞洗浄液および血清の調製3次免疫後2週間目のマウスの、鼻腔肺胞洗浄液および血清を調製して、ウイルスHA抗原特異的なIgA、IgGの測定を行った。文献MizunoDIdeKuriharaMIchinomiyaTKuboIKidoHModifiedpulmonarysurfactantisapotentadjuvantthatstimulatesthemucosalIgAproductioninresponsetotheinfluenzavirusantigenJImmunol2006176112230記載の方法に準じて、以下のとおりに行った。ワクチン投与マウスをペントバルビタール麻酔下で開腹開胸し、気管を切開しアトム静脈カテーテル節付3Frアトムメディカル株式会社日本東京を肺へ挿入後、生理食塩水1mLを注入し、この液を回収した。これを3回繰り返して採取した液、計3mLを肺胞洗浄液として用いた。肺洗浄液採取後、切開した気管から鼻腔方向へアトム静脈カテーテルを挿入し、1mLの生理食塩水を注入し、鼻から出てきた液を採取した。この液を鼻洗浄液として用いた。さらに、心臓より採血を行い、5000rpm、10分間の遠心分離により血清を調製した。5.抗インフルエンザ抗体の定量鼻腔、肺胞洗浄液および血清中の抗インフルエンザIgA、IgG含有量を、前記文献MizunoDetalJImmunol2006176112230の記載に従い、ELISAassayにより定量した。ELISAassayはBETHYLLABORATORIES社アメリカテキサスのMouseELISAquantitationkitの方法に従って行った。96ウェルNuncイムノプレートNalgenNuncInternationalアメリカニューヨーク各ウェルにワクチン1μg、ウシ血清アルブミンBSASIGMAアメリカミズーリ1μgmLPBS溶液100μLを加え、4°Cで一晩固層化反応を行った。その後洗浄液50mMTris014MNaCl005Tween20pH80で3回すすぎワクチン液を除去した。各ウェルに015MNaCl、1BSAを含む50mMTrisHCl緩衝液pH80200μLを加え、室温で1時間ブロッキング反応を行った。各ウェルを洗浄液で3回すすいだのち、サンプル結合緩衝液50mMTris015MNaCl1BSA005Tween20pH80にて適量に希釈した鼻洗浄液肺洗浄液あるいは血清を100μL加え、室温で2時間反応させた。GoatantimouseIgAまたはIgGhorserADishperoxidaseHRPBETHYLLABORATORIESINCを二次抗体として用い、TMBMicrowellPeroxidaseSubstrateSystemKirkegaardPerryLaboratoriesIncアメリカメリーランドを用いて発色反応を行った。各ウェルに100μL、2MH2SO4和光純薬株式会社を添加することによって反応を停止し、450nmの吸光度をSPECTRAmaxPLUS384で測定した。定量のためのスタンダードとして、上記肺洗浄液から精製した抗インフルエンザIgAおよびIgG10ngについて同様にして得られた吸光度を用いた。6.結果抗インフルエンザHA抗体の誘導結果を、鼻洗浄液中のIgA左図1、血液中のIgG右図1に示す。また、それぞれの測定値を表1に示す。また、図2および表2は各試験群のHI価を示す。1HA抗原単独投与群比較例6のIgA量は2477ngmL、IgG量は054μgmLに対して、HASF10実施例1投与群ではIgA量が330760ngmL、IgG量は56875μgmLであり、鼻洗浄液中のIgAで132倍に、血清中のIgGで1137倍に増強した。本願発明のCVP添加粘膜ワクチンHASF10が極めて強い抗体誘導効果を有することが確認された図1、表1。2HASF10実施例1投与群における抗体産生量は、HAADビークル比較例1よりもIgAで156倍、IgGで150倍であり、HACVP比較例2よりもIgAで107倍、IgGで1154倍であった図1、表1。HASF10におけるこのような顕著に優れた抗体誘導効果は、特許文献3のおいて公知の粘膜ワクチンHAADビークルと、特許文献5、6において公知のCVPとの単純な組合わせから予測される範囲を遙かに超えるものであった。3HAHPC比較例3投与群の抗体産生量は、HA単独投与群比較例6と同様またはそれ以下であった。また、HAADビークルHPC比較例4投与群の抗体産生量は、HAADビークル比較例1よりも低かった図1、表1。以上の結果から、CVPと同様に点鼻薬や粘膜ワクチンにおいてゲル化剤として広く知られているHPCは、抗原との併用およびADビークルとの併用において免疫誘導増強効果を持たないことが確認された。このことから、ADビークルのアジュバント効果の増強には、単に増粘効果を持つ賦形剤ではなくADビークルの特性を基盤としたその増強効果であることが推定される。4HASF10実施例1投与群における抗体産生量は、HApoly比較例5よりも鼻洗浄液中のIgAで114倍、血清中のIgGで23倍であった図1、表1。この結果から、本願発明のCVP添加粘膜ワクチンHASF10は、抗原提示細胞を強く刺激して抗体産生を促進するpolyよりも強い免疫誘導効果を有することが確認された。5インフルエンザワクチンの国際的評価基準では、血液のウイルス感染阻止効果HI40を超えたワクチンを有効と判定しているが、HAADビークル比較例1ではHI40を越えた検体が50で、平均値でHI39を示した。これに対して、HASF10実施例1では全例がHI40を越え、平均値でHI2133と高値を示し、またHApoly比較例5のHI1370に比べて156倍の強いウイルス感染阻止効果を示した図2、表2。試験2調整した抗原提示樹状細胞MizunoDetalJImmunol200617611221130を、エンドトキシンLPS100ng1×105細胞GrauerOetalHistochemCellBiol2002117351362、poly、SF10でそれぞれ刺激し、細胞膜の活性化表示分子MHCII、CD40、CD80およびCD86の発現レベルを測定した。結果は図3に示したとおりである。LPSおよびpolyはCD40およびCD86の発現を著明に増加させ、抗原提示樹状細胞を活性化させたが、SF10は抗原提示樹状細胞上のMHCII、CD40、CD80およびCD86の発現を増加させず、対照無処理細胞の発現量とほぼ同等のレベルであった。以上の結果から、SF10は抗原提示樹状細胞を直接活性化することなしに、抗原提示能を増強して抗体産生量を増加させていること、すなわち、SF10が効果的に抗原を抗原提示樹状細胞に運搬して抗体産生を誘導することが推定された試験3実施例1HA抗原蛋白量:02μg、実施例2HA抗原蛋白量:01μg、実施例3HA抗原蛋白量:003μgの各CVP添加粘膜ワクチンを試験1と同様にマウス各群10匹に投与し、試験1と同様に鼻洗浄液中のIgA、血液中のIgGを測定した。結果は表3に示したとおりである。実施例1HA抗原蛋白量:02μgおよび実施例2HA抗原蛋白量:01μgはほぼ同等の抗体誘導効果を示した。さらに、実施例1よりも抗原蛋白量が1/6以下の実施例3HA抗原蛋白量:003μgも、試験例1表1の比較例2:HAADビークルHA抗原蛋白量:02μgおよび比較例3:HACVPHA抗原蛋白量:02μgに比べて遙かに強力な抗体誘導効果を示した。すなわち、実施例3投与群のIgA量は比較例2の117倍、比較例3の80倍であり、IgG量は比較例2の772倍、比較例3の601倍であった。以上の結果から、本願発明のCVP添加粘膜ワクチンは、特許文献3HAADビークルや特許文献5、6HACVPの粘膜ワクチンよりも、遙かに少ない抗原量によって十分な抗体産生が可能であることが確認された。またウイルス感染阻止効果HI効果においても、CVP添加粘膜ワクチンではHA抗原蛋白量:003μgでもHI1980と十分な感染抑止効果を示した。実施例1の方法に準じて、ADビークル量が03μg、HA抗原蛋白量が003μgのCVP添加粘膜ワクチンを調製した。HA抗原蛋白、ADビークルおよびCVPの混合比は実施例1と同一としたすなわち、抗原蛋白量の10倍のADビークルと、最終濃度05のCVPを含む。試験4マウス各群10匹に、実施例1ADビークル:20μg、HA抗原蛋白量:02μgおよび実施例4ADビークル:03μg、HA抗原蛋白量:003μgの各CVP添加粘膜ワクチンを試験例1と同様にしてそれぞれ投与し、2回目のブースターワクチン投与合計3回免疫から14日後に50PFUおよび800PFUのインフルエンザウイルスAPR8μLを感染させた。なお、図4に示したように、半数死亡率LD50が得られる感染ウイルス量はPFU<5であり、ワクチン処置を行なわない場合、50PFUは感染後9日、100PFU以上では8日目以内に全マウスが死亡した。ワクチン接種の生存率への果は図5、図6に示したとおりである。コントロール生理食塩水および比較例6HA抗原蛋白単独の場合は共に、50PFUのウイルス感染から79日で、800PFUのウイルス感染では7日後に全例が死亡した。また比較例5HApolyICの場合は、800PFUのウイルス感染では10匹中9匹が9日後までに死亡した。これに対して、実施例1および実施例4のCVP粘膜ワクチンを投与したマウスは、50PFUのウイルス感染では全例が15日間生存した。また、800PFUのウイルス感染では、実施例1のワクチンでは死亡は10匹中1匹8日以後であり、実施例4のワクチンでは10匹中5匹10日後であった。以上の結果から、本発明のCVP添加粘膜ワクチンは優れた感染予防効果を有することが確認された。超音波処理を含まない製造工程B実施例1と同様のHA抗原蛋白液に、凍結乾燥したADビークル粉末を純水に溶解して加え、次いでこの混合液に純水に溶解した10CVPを等量混合して懸濁液を調整した。これを、超音波処理すること無くウォーターバスを用いて10分間42°Cに加温処理し、加温処理中3分、7分時にミキサーで10秒間攪拌して液を均一化にした。加温処理後、懸濁液を30°C~75°Cで一晩凍結させ、凍結乾燥を行って乾燥粉末体を作成した。凍結乾燥粉末は30°Cで保存した。要事に凍結乾燥粉末を生理食塩水に懸濁して、CVP添加粘膜ワクチンとした。マウス1匹当たり片鼻2μLを両鼻に投与する合計4μLに含まれるワクチン液中のCVPは05、HA抗原蛋白量は02μg、ADビークルのリン脂質量は20μgに調整した。以下、このCVP添加粘膜ワクチンをHASF10Bと記載する。超音波処理を含まない製造工程C実施例と同様のHA抗原蛋白液に、凍結乾燥したADビークル粉末を純水に溶解して混合調整した。この懸濁液を、ウォーターバスを用いて10分間42°Cに加温処理し、加温処理中3分、7分時にミキサーで10秒間攪拌して液を均一化にした。加温処理後、懸濁液を30°C~75°Cで一晩凍結させ、凍結乾燥を行って乾燥粉末体を作成した。凍結乾燥粉末は30°Cで保存した。要事に凍結乾燥粉末を、あらかじめ生理食塩水に溶解した05CVP液で泡立たないように軽く攪拌、溶解してCVP添加粘膜ワクチンとした。マウス1匹当たり片鼻2μLを両鼻に投与する合計4μLに含まれるHA抗原蛋白量は02μg、ADビークルのリン脂質量は20μgである。以下、このCVP添加粘膜ワクチンをHASF10Cと記載する。試験5実施例1以下、HASF10Aと記載する、実施例5HASF10B、および実施例6HASF10Cの各CVP添加粘膜ワクチンを、それぞれマウス各群10匹に試験例1と同様に接種2週間間隔で3回し、試験例1と同様に抗インフルエンザIgAおよびIgG抗体を測定した。結果は表4に示したとおりである。実施例6HASF10Cは、実施例1HASF10Aおよび実施例5HASF10Bと比べてIgA量において約2-4倍、IgG量において約2倍の抗体誘導効果を示した。すなわち、実施例6の方法工程Cは、超音波処理工程を含まないことと、CVP液の添加を最終工程で行なうことによって、その優れた抗体誘導効果をもたらすことが推定された。試験6本発明のCVP添加粘膜ワクチンの各組成HA抗原蛋白、ADビークル、CVPの状態を、透過型電子顕微鏡で観察した。図7に示したように、CVPは抗原とADビークルとの結合を大幅に増加させていることが確認された。CVPは、鼻腔内での有効成分の滞留性を改善する増粘剤ポリマーの一つとして、ヒドロキシポロピルセルロース特許文献4、アルギン酸ナトリウム特許文献7、その他の賦形剤と同様に、増粘剤として使用されてきた特許文献5、6。しかし、この試験6の結果が示すように、本発明におけるCVPがADビークルとの組合せにおいて、抗原とADビークルとの結合を増強させ、抗原提示細胞に取り込まれる抗原量を増加させ、ADビークル効果を増強していることが判明した。試験7実施例1に記載したSF10ADビークルCVPと、蛍光色素ATTO488でラベルした実施例1記載のHA抗原蛋白とを混合して、マウス骨髄由来樹状細胞2×105cellsに添加し、1時間後に蛍光色素標識HA抗原蛋白によってラベルされた樹状細胞の蛍光標識量をフローサイトメトリーにより測定した。また、比較例5に記載のpoly10μgと前記の蛍光標識HA抗原蛋白2μgとを混合し、同じく樹状細胞が示す蛍光標識抗原量を測定した。樹状細胞が示す蛍光は、蛍光色素標識HA抗原蛋白の細胞への結合と取り込み量を反映する。結果は図8に示したとおりである。Polyには蛍光色素標識HA抗原蛋白の樹状細胞への結合と取り込み量を促進しなかったが、SF10は有意な促進効果を示した。以上の結果から、本発明のSF10粘膜ワクチンは、抗原提示細胞への抗原蛋白の結合及び取り込みを促進することによって、抗体産生量を増加させ、さらには優れた感染防御能を発揮していることが確認された。試験81mLのcRPMI培地で培養したマウス骨髄由来樹状細胞2×105cellsに、以下を添加し、1時間後の樹状細胞の活性化を樹状細胞の活性化マーカーの一つであるCD86発現増加を指標にフローサイトメトリーにより測定した。なお、計測にはFACSCaliburcytometerBDBiosciences、アメリカ、マサチューセッツを、データ処理にはCellQuestsoftwareBDBioscience、アメリカ、マサチューセッツを用いCD86の発現を測定した。生理食塩水生理食塩水HA抗原蛋白SF10SF10HA抗原蛋白PolyPolyHA抗原蛋白なお、HA抗原蛋白2μgおよびSF1020μgは実施例1に記載のものであり、Poly10μgは比較例5と同一のものを使用した。結果は図9に示したとおりである。Polyは、試験2と同様に単独でCD86の発現を増加樹状細胞を活性化するが、抗原を添加してもCD86の発現はさらに増加することはなかった。これに対して、SF10はそれ単独で樹状細胞を活性化しないが、抗原の共存下でのCD86発現量は約2倍に増強された。以上の結果から、本発明のCVP添加粘膜アジュバントのSF10は、抗原を抗原提示樹状細胞に運搬して樹状細胞を活性化し、抗体産生を促進していることが推定された。なお、同じく樹状細胞の活性化マーカーの一つであるCD40でも同様の結果が得られた。試験9試験8において、invitroで確認したSF10の抗原運搬に依存した樹状細胞活性化をマウス個体invivoで試験するため、試験8と同一の以下をマウス鼻腔内に投与した。生理食塩水生理食塩水HA抗原蛋白SF10SF10HA抗原蛋白なお、動物実験は試験1に準じておこなった。HA抗原蛋白02μgおよびSF102μgは実施例1に記載のものであり、Poly2μgは比較例5と同一のものを使用した。経鼻接種後48時間にマウスから頭部を切断し、鼻腔内組織を採取し、コラゲナーゼ処理1mgmL、37°C、30分振蕩を行った。メッシュでろ過した後、遠心4°C、10分、200×gにより回収した細胞から、AntiCD11cconjugatedmagneticbeadsMiltenylBiotech、ドイツ、ベルギッシュグラートバッハ、LSカラムを用いたVarioMACSMiltenyiBiotec、ドイツ、ベルギッシュグラートバッハ法にて、説明書に記載された方法に従い樹状細胞を調整した。次いで試験8と同様な方法で、CD86の発現増加を測定した。結果は図10に示したとおりである。マウスの鼻腔においても、SF10の抗原運搬に依存した樹状細胞活性化が確認された。試験10CVPの好ましい濃度を試験した。CVPとしてSigma社製のpAA130を使用し、その濃度を01、025、05、075または10とした以外は、実施例6と同様の方法によりCVP添加粘膜ワクチンを製造し、試験例1記載の方法によりマウスの鼻洗浄液IgAおよび血清IgGを測定した。結果は表5に示したとおりであり、IgA、IgGともにCVPpAA130濃度05まではCVP量の増加に従った抗体誘導効果の上昇が認められた。CVP05をピークとしてこれよりも高い濃度のCVPを用いた際には逆に抗体誘導効果が減少する傾向が認められた。