式I式中、AおよびBは、いずれか一方がHOOC-CH22-COO-、HOOC-CH23-COO-またはHOOC-CH2-O-CH2-COO-を表し、他方が保護されたヒドロキシル基を表し、ここで、保護基はハロゲン原子1~3個により置換されていてもよい直鎖もしくは分岐のC1-C6アルキルカルボニル基、アリルオキシ基、トリ-直鎖もしくは分岐のC1-C6アルキルシリルオキシ基、フェニルオキシカルボニル基、ピバロエートエステル基、レブリネートエステル基を表しa、b及びcは、相互に独立して、0~3の整数を表し、あるいはまたcの付された結合式中の>c部分は存在しなくてもよく、ただし、a、b及びcは全体で3~7員環を形成するように定義されており、mは0~12の整数を表し、そしてnは0~12の整数を表し、RaおよびRbは独立して、上記AおよびBについて定義したいずれかの保護基、またはフェニル環がメトキシにより置換されていてもよいベンジル基、フェニル環がメトキシにより置換されていてもよいベンズヒドリル基もしくはフェニル環がメトキシにより置換されていてもよいトリチル基、アセタール、9-フルオレニルメチルカルボニル基またはアリル基を表す、で表わされる二価性核酸分子コンジュゲートの製造用前駆体。請求項1に記載の上記式Iで表わされる前駆体を、A及びBのいずれか一方のHOOC-CH22-COO-、HOOC-CH23-COO-またはHOOC-CH2-O-CH2-COO-のカルボキシ基HOOC-を介して対応する反応性基を表面に有する固体支持体表面に固定し、次いで、RaおよびRbの両方の置換基の置換反応を介するか、あるいはいずれか一方の置換基の置換反応を介し、次いで残りの置換基の置換反応を介して核酸分子を導入する工程を含むことを特徴とする、二価性核酸分子コンジュゲート製造方法。本発明の説明を簡潔にする目的で、典型的な二価性核酸分子コンジュゲートの製造例を次の反応スキーム1を参照しながら具体的に説明する。反応スキーム1:1化合物2の合成化合物11.02gをピリジン80mlに溶解させ、ジメトキシトリチルクロリド8.0gを加え8時間25°Cで撹拌した。反応後、反応液をエバポレーションにより濃縮し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液50mlと酢酸エチル50mlで分液をした後、飽和食塩水50mlで有機層を洗浄し、硫酸アンモニウムで乾燥させた後、シリカゲルカラムWakogelC300で精製し、化合物2を得た収率66。2化合物3の合成化合物2420mg、4-メチルモルホリンN-オキシド130mをアセトン2ml、水2ml、アセトニトリル2mlに溶解させ、マイクロカプセル化酸化オスミウム10mgを加え24時間25°Cで反応させた。反応後フィルターによりマイクロカプセル化酸化オスミウムを除き、エバポレーションにより濃縮した後、シリカゲルカラムWakogelC300で精製し、化合物3を得た収率62。3化合物4の合成化合物3270mgをピリジン3mlに溶解させ、無水酢酸33.4μlを加え12時間25°Cで反応させた。反応後飽和食塩水30ml、酢酸エチル30mlで分液し硫酸アンモニウムで乾燥させた後、シリカゲルカラムWakogelC300で精製し、化合物4を得た収率32。4化合物5の合成化合物4116mgを塩化メチレン2mlに溶解させ、無水コハク酸26mg、4-ジメチルアミノピリジン20mgを加え25°Cで12時間反応させた。反応後反応液を飽和食塩水30mlで洗浄し、硫酸アンモニウムで乾燥させた後、シリカゲルカラムWakogelC300で精製し、化合物5を得た収率88。5化合物5のアルキルアミノガラス多孔体への固定化化合物510mgを塩化メチレン2mlに溶解させ、アルキルアミノガラス多孔体314mg、ジシクロヘキシルカルボジイミド7mgを加え24時間25°Cで反応させた。反応後、アセトニトリル10ml次いで塩化メチレン10mlで固相担体を洗浄し、未反応のアミノ基を不活性化させるためにピリジン:無水酢酸9:1の混合溶液を加え25°Cで24時間反応させた。反応後、反応後、アセトニトリル10ml次いで塩化メチレン10mlで固相担体を洗浄した。洗浄後、乾燥させ化合物5を固定化した固相担体を得た。6二価性核酸コンジュゲートの製造化合物5を固定化した固相担体20mgを核酸合成機の反応カラムに入れ通常の合成サイクルでオリゴ核酸を合成した。合成した配列はチミジンが10個連なったものである。二価性であるため10個のチミジンが2箇所から伸びている事になる。合成後、アンモニア水により脱保護、切り出しを行い、HPLCにより解析した。結果を図1に示す。ピークを分取し、MALDITOF/MSにより解析した。実測値:6244.41、理論値:6242.127二価性アプタマーの機能化下記スキーム2にしたがい、合成した二価性核酸1nmolを5μlの水に溶解させ、0.1M過ヨウ素酸ナトリウム溶液を1μl加え20°Cで20分反応させる。反応後0.2Mホスフィン酸ナトリウム水溶液を1μl加え20°Cで20分反応させた。その後、50mM酢酸ナトリウム緩衝液pH4を7μl加えた。4アミノフルオレセインを5mMになるように加え37°Cで1時間反応させた。反応後シアノ水素化ホウ素ナトリウム20mMで30分間還元しアミノフルオレセインを結合させた。反応後にHPLCを用いて解析をおこなった。結果を図2に示す。ピークを回収し、MALDITOF/MSにより解析した。実測値:6559.16、理論値:6555.44以上の結果により二価性のアプタマーの部位特異的に化合物を結合させた二価性アプタマーコンジュゲート体の構築を確認した。