"ASPスコア値が0.4以上であるRNAi分子を有効成分として含む、優性変異遺伝子の発現抑制剤であって、前記ASPスコアは、以下の式から算出され、ASPスコア=対照RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量の相対比-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比×1-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比式中、対照RNAi分子は、前記正常型遺伝子及び変異遺伝子の発現に影響を及ぼさないRNAi分子である前記RNAi分子が標的である優性変異遺伝子の転写産物上に生じる少なくとも一つの不連続接合点、及び該転写産物の連続する16~30塩基の配列に一致する塩基配列を含むRNAiセンス鎖領域、並びにそれに相補的な塩基配列を含むRNAiアンチセンス鎖領域を含み、かつ前記RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の不連続接合点に隣接する3’側の塩基から下流側に向かって4~15番目のいずれか一の塩基が該RNAiセンス鎖領域の3’末端塩基を構成する、前記遺伝子発現抑制剤。ASPスコア値が0.4以上であるRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを有効成分として含む、優性変異遺伝子の発現抑制剤であって、前記ASPスコアは、以下の式から算出され、ASPスコア=対照RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量の相対比-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比×1-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比式中、対照RNAi分子は、前記正常型遺伝子及び変異遺伝子の発現に影響を及ぼさないRNAi分子である前記RNAi分子が標的である優性変異遺伝子の転写産物上に生じる少なくとも一つの不連続接合点、及び該転写産物の連続する16~30塩基の配列に一致する塩基配列を含むRNAiセンス鎖領域、並びにそれに相補的な塩基配列を含むRNAiアンチセンス鎖領域を含み、かつ前記RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の不連続接合点に隣接する3’側の塩基から下流側に向かって4~15番目のいずれか一の塩基が該RNAiセンス鎖領域の3’末端塩基を構成する、前記遺伝子発現抑制剤。RNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域の3’末端にさらにTT又はUUを付加する、請求項1又は2に記載の抑制剤。RNAi分子がsiRNAである、請求項1~3のいずれか一項に記載の抑制剤。RNAi分子がshRNAである、請求項1~3のいずれか一項に記載の抑制剤。優性変異遺伝子における変異が塩基の欠失、塩基の挿入、スプライス部位を破壊し得る塩基の置換、遺伝子の重複、遺伝子の転座、及び染色体の逆位からなる一群から選択される、請求項1~5のいずれか一項に記載の抑制剤。優性変異遺伝子が機能獲得型である、請求項1~6のいずれか一項に記載の抑制剤。優性変異遺伝子が疾患の発症に関与する、請求項1~7のいずれか一項に記載の抑制剤。疾患が悪性新生物である、請求項8に記載の抑制剤。悪性新生物が非小細胞肺癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型EGFR遺伝子であるか、悪性新生物が大腸癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型CTNNB1遺伝子であるか、悪性新生物が胃癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型CDH1遺伝子であるか、悪性新生物が乳癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型BRCA1遺伝子若しくは変異型BRCA2遺伝子であるか、悪性新生物が多腺性自己免疫性内分泌不全症I型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型AIRE遺伝子であるか、悪性新生物が自己免疫性リンパ増殖症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型TNFRSF6APT1FAS遺伝子であるか、悪性新生物が慢性骨髄性白血病又は急性リンパ性白血病で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がBCRABLキメラ遺伝子であるか、悪性新生物がバーキットリンパ腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がcmycIgHキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が未分化型大細胞リンパ腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がNPMALKキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が肺癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がEML4ALKキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が隆起性皮膚線維肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がPDGFBCOL1A1キメラ遺伝子であるか、悪性新生物が先天性線維肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がETV6NTRK3キメラ遺伝子であるか、悪性新生物が低悪性線維粘液肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がFUSCREB3L2キメラ遺伝子であるか、悪性新生物が骨外性粘液型軟骨肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がEWSCHNキメラ遺伝子であるか、悪性新生物がユーイング肉腫若しくは線維形成性小細胞腫瘍で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がEWSR1遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が胞巣型横紋筋肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSYT遺伝子若しくはSSX遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が炎症性筋線維芽細胞性腫瘍で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がALK遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が脂肪肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がCHOP遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、又は悪性新生物が軟部明細胞肉腫若しくは悪性線維性組織球腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がATF1遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子である、請求項9に記載の抑制剤。悪性新生物が非小細胞肺癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型EGFR遺伝子である、請求項10に記載の抑制剤。RNAi分子のセンス鎖領域が、配列番号3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、53、55、59、61、63、65、67、129、131、133、135、137、139、141、143又は145で示されるヌクレオチドからなる、請求項11に記載の抑制剤。悪性新生物が慢性骨髄性白血病又は急性リンパ性白血病で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がBCRABLキメラ遺伝子である、請求項10に記載の抑制剤。RNAi分子のセンス鎖領域が、配列番号97、99、101、103、105、107、109、111又は113で示されるヌクレオチドからなる、請求項13に記載の抑制剤。疾患がヒト常染色体優性変異疾患である、請求項8に記載の抑制剤。ヒト常染色体優性変異疾患が先天性夜盲症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がRHO遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が難聴遺伝子領域DFNA2で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がKCNQ4遺伝子若しくはGJB遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がワールデンブルグ症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMITF遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が非症候性難聴で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がDIAPH1DFNA1遺伝子若しくはPOU4F3遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が肥大型心筋症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がTNNT2遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が家族性肥大型心筋症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMYBPC3遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が心尖部肥大型心筋症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がTNNI3遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がシャルコーマリートゥース病1A型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がPMP22遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がシャルコーマリートゥース病1B型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMPZ遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がQT延長症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がKCNQ1遺伝子若しくはKCNH2遺伝子若しくはSCN5A遺伝子若しくはANK2遺伝子若しくはKCNE1遺伝子若しくはKCNE2遺伝子若しくはKCNJ2遺伝子若しくはCAV3遺伝子若しくはSCN48遺伝子若しくはAKAP9遺伝子若しくはANTA1遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がQT短縮症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がKCNH2遺伝子若しくはKCNJ2遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がブルガタ症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSCN5A遺伝子若しくはGPD1L遺伝子若しくはCACNA1C遺伝子若しくはCACNB2B遺伝子若しくはSCN1B遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がカテコラミン誘発性多形性心室頻拍で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がRYR2遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が心伝導障害で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSCN5A遺伝子若しくはSCN1B遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が筋萎縮性側索硬化症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がTDP43遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がヌーナン症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がPTPN11遺伝子であるか、又はヒト常染色体優性変異疾患が低カルシウム血症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がCaR遺伝子である、請求項15に記載の抑制剤。疾患が筋硬直性ジストロフィーで、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がDMPK遺伝子であるか、疾患が脊髄性筋萎縮症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSMN1遺伝子であるか、疾患が先天性筋無力症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がCHRNE遺伝子であるか、疾患が前頭側頭葉型痴呆症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMAPT遺伝子であるか、又は疾患が成長ホルモン単独欠損症II型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がGH1遺伝子である、請求項8に記載の抑制剤。請求項1~17のいずれか一項に記載の抑制剤を有効成分として少なくとも一つ含有する医薬組成物。センス鎖領域が、配列番号83又は85で示されるヌクレオチドからなるRNAi分子、及び/又はそのヌクレオチドをコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクター、並びに/あるいはセンス鎖領域が、配列番号89で示されるヌクレオチドからなるRNAi分子、及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを有効成分としてさらに含有する、請求項11又は12に従属する請求項18に記載の医薬組成物。センス鎖領域が、配列番号89で示されるヌクレオチドからなるRNAi分子、及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含む、点突然変異型EGFR遺伝子発現抑制剤。転写産物上に不連続接合点を有する優性変異遺伝子の発現を選択的に抑制するRNAi分子の設計方法であって、a該転写産物上の不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基として設定する工程、b前記転写産物において、前記第2基準塩基に対応する塩基から下流側に向かって4~15番目の塩基がRNAiセンス鎖の3’末端塩基に対応するように設定する工程、c前記優性変異遺伝子において、その転写産物の第1及び第2基準塩基を含む連続する16~30塩基を含む塩基配列をRNAiセンス鎖領域として設定する工程、d設定されたRNAiセンス鎖領域の塩基配列に相補的な塩基配列を含む塩基配列をRNAiアンチセンス鎖領域として設定する工程を含む、前記設計方法。eASPスコア値が0.4以上あるRNAi分子を選別する工程をさらに含む、請求項21に記載の設計方法であって、ASPスコアは、以下の式から算出される、前記設計方法。ASPスコア=対照RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量の相対比-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比×1-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比式中、対照RNAi分子は、前記正常型遺伝子及び変異遺伝子の発現に影響を及ぼさないRNAi分子であるRNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域の3’末端にさらにTT又はUUを付加する、請求項21又は22に記載の設計方法。本発明は、野生型遺伝子又は所望の優性変異遺伝子の発現を許容し、転写産物上に不連続接合点を生じる特定の標的優性変異遺伝子の発現のみを選択的かつ効果的に抑制することのできるRNAi分子を開発し、当該分子を有効成分として含有する優性変異遺伝子発現抑制剤及び当該RNAi分子の設計方法の提供を目的とする。本発明は、優性変異遺伝子の発現により発症する遺伝性疾患を治療する治療剤の提供を目的とする。本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、転写産物上に不連続接合点を生じる優性変異遺伝子の発現を選択的に、かつ効果的に抑制することができるsiRNA等のRNAi分子の構造的一般法則性を見出した。すなわち、不連続接合点に隣接するセンス鎖領域の3’側の塩基からその3’末端までの塩基長を所定の長さとなるように設定したRNAi分子は、優性変異遺伝子の発現を選択的、かつ効果的に抑制する一方で、野生型遺伝子の発現に対しては、抑制効果をほとんど示さないか又は低減することが明らかとなった。本発明は、上記知見に基づいて完成されたものであり、以下を提供する。1ASPスコア値が0.4以上であるRNAi分子を有効成分として含む、優性変異遺伝子の発現抑制剤であって、前記ASPスコアは、以下の式から算出され、ASPスコア=対照RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量の相対比-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比×1-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比式中、対照RNAi分子は、前記正常型遺伝子及び変異遺伝子の発現に影響を及ぼさないRNAi分子である前記RNAi分子が標的である優性変異遺伝子の転写産物上に生じる少なくとも一つの不連続接合点、及び該転写産物の連続する16~30塩基の配列に一致する塩基配列を含むRNAiセンス鎖領域、並びにそれに相補的な塩基配列を含むRNAiアンチセンス鎖領域を含み、かつ前記RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の不連続接合点に隣接する3’側の塩基から下流側に向かって4~15番目のいずれか一の塩基が該RNAiセンス鎖領域の3’末端塩基を構成する、前記遺伝子発現抑制剤。2ASPスコア値が0.4以上であるRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを有効成分として含む、優性変異遺伝子の発現抑制剤であって、前記ASPスコアは、以下の式から算出され、ASPスコア=対照RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量の相対比-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比×1-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比式中、対照RNAi分子は、前記正常型遺伝子及び変異遺伝子の発現に影響を及ぼさないRNAi分子である前記RNAi分子が標的である優性変異遺伝子の転写産物上に生じる少なくとも一つの不連続接合点、及び該転写産物の連続する16~30塩基の配列に一致する塩基配列を含むRNAiセンス鎖領域、並びにそれに相補的な塩基配列を含むRNAiアンチセンス鎖領域を含み、かつ前記RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の不連続接合点に隣接する3’側の塩基から下流側に向かって4~15番目のいずれか一の塩基が該RNAiセンス鎖領域の3’末端塩基を構成する、前記遺伝子発現抑制剤。3RNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域の3’末端にさらにTT又はUUを付加する、1又は2に記載の抑制剤。4RNAi分子がsiRNAである、1~3のいずれかに記載の抑制剤。5RNAi分子がshRNAである、1~3のいずれかに記載の抑制剤。6優性変異遺伝子における変異が塩基の欠失、塩基の挿入、スプライス部位を破壊し得る塩基の置換、遺伝子の重複、遺伝子の転座、及び染色体の逆位からなる一群から選択される、1~5のいずれかに記載の抑制剤。7優性変異遺伝子が機能獲得型である、1~6のいずれかに記載の抑制剤。8優性変異遺伝子が疾患の発症に関与する、1~7のいずれかに記載の抑制剤。9疾患が悪性新生物である、8に記載の抑制剤。10悪性新生物が非小細胞肺癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型EGFR遺伝子であるか、悪性新生物が大腸癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型CTNNB1遺伝子であるか、悪性新生物が胃癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型CDH1遺伝子であるか、悪性新生物が乳癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型BRCA1遺伝子若しくは変異型BRCA2遺伝子であるか、悪性新生物が多腺性自己免疫性内分泌不全症I型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型AIRE遺伝子であるか、悪性新生物が自己免疫性リンパ増殖症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型TNFRSF6APT1FAS遺伝子であるか、悪性新生物が慢性骨髄性白血病又は急性リンパ性白血病で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がBCRABLキメラ遺伝子であるか、悪性新生物がバーキットリンパ腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がcmycIgHキメラ遺伝子、悪性新生物が未分化型大細胞リンパ腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がNPMALKキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が肺癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がEML4ALKキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が隆起性皮膚線維肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がPDGFBCOL1A1キメラ遺伝子であるか、悪性新生物が先天性線維肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がETV6NTRK3キメラ遺伝子であるか、悪性新生物が低悪性線維粘液肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がFUSCREB3L2キメラ遺伝子であるか、悪性新生物が骨外性粘液型軟骨肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がEWSCHNキメラ遺伝子であるか、悪性新生物がユーイング肉腫若しくは線維形成性小細胞腫瘍で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がEWSR1遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が胞巣型横紋筋肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSYT遺伝子若しくはSSX遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が炎症性筋線維芽細胞性腫瘍で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がALK遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、悪性新生物が脂肪肉腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がCHOP遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子であるか、又は悪性新生物が軟部明細胞肉腫若しくは悪性線維性組織球腫で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がATF1遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子である、9に記載の抑制剤。11悪性新生物が非小細胞肺癌で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子が変異型EGFR遺伝子である、10に記載の抑制剤。12RNAi分子のセンス鎖領域が、配列番号3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、53、55、59、61、63、65、67、129、131、133、135、137、139、141、143又は145で示されるヌクレオチドからなる、11に記載の抑制剤。13悪性新生物が慢性骨髄性白血病又は急性リンパ性白血病で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がBCRABLキメラ遺伝子である、10に記載の抑制剤。14RNAi分子のセンス鎖領域が、配列番号97、99、101、103、105、107、109、111又は113で示されるヌクレオチドからなる、13に記載の抑制剤。15疾患がヒト常染色体優性変異疾患である、8に記載の抑制剤。16ヒト常染色体優性変異疾患が先天性夜盲症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がRHO遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が難聴遺伝子領域DFNA2で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がKCNQ4遺伝子若しくはGJB遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がワールデンブルグ症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMITF遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が非症候性難聴で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がDIAPH1DFNA1遺伝子若しくはPOU4F3遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が肥大型心筋症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がTNNT2遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が家族性肥大型心筋症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMYBPC3遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が心尖部肥大型心筋症で、その標的となる前記優性変異遺伝子がTNNI3遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がシャルコーマリートゥース病1A型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がPMP22遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がシャルコーマリートゥース病1B型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMPZ遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がQT延長症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がKCNQ1遺伝子若しくはKCNH2遺伝子若しくはSCN5A遺伝子若しくはANK2遺伝子若しくはKCNE1遺伝子若しくはKCNE2遺伝子若しくはKCNJ2遺伝子若しくはCAV3遺伝子若しくはSCN48遺伝子若しくはAKAP9遺伝子若しくはANTA1遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がQT短縮症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がKCNH2遺伝子若しくはKCNJ2遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がブルガタ症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSCN5A遺伝子若しくはGPD1L遺伝子若しくはCACNA1C遺伝子若しくはCACNB2B遺伝子若しくはSCN1B遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がカテコラミン誘発性多形性心室頻拍で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がRYR2遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が心伝導障害で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSCN5A遺伝子若しくはSCN1B遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患が筋萎縮性側索硬化症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がTDP43遺伝子であるか、ヒト常染色体優性変異疾患がヌーナン症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がPTPN11遺伝子であるか、又はヒト常染色体優性変異疾患が低カルシウム血症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がCaR遺伝子である15に記載の抑制剤。17疾患が筋硬直性ジストロフィーで、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がDMPK遺伝子であるか、疾患が脊髄性筋萎縮症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がSMN1遺伝子であるか、疾患が先天性筋無力症候群で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がCHRNE遺伝子であるか、疾患が前頭側頭葉型痴呆症で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がMAPT遺伝子であるか、又は疾患が成長ホルモン単独欠損症II型で、かつその標的となる前記優性変異遺伝子がGH1遺伝子である、8に記載の抑制剤。181~17のいずれかに記載の抑制剤を有効成分として少なくとも一つ含有する医薬組成物。19センス鎖領域が、配列番号83又は85で示されるヌクレオチドからなるRNAi分子、及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクター、並びに/あるいはセンス鎖領域が、配列番号89で示されるヌクレオチドからなるRNAi分子、及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを有効成分としてさらに含有する、11又は12に従属する18に記載の医薬組成物。20センス鎖領域が、配列番号89で示されるヌクレオチドからなるRNAi分子、及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含む、点突然変異型EGFR遺伝子発現抑制剤。21転写産物上に不連続接合点を有する優性変異遺伝子の発現を選択的に抑制するRNAi分子の設計方法であって、a該転写産物上の不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基として設定する工程、b前記転写産物において、前記第2基準塩基に対応する塩基から下流側に向かって4~15番目の塩基がRNAiセンス鎖の3’末端塩基に対応するように設定する工程、c前記優性変異遺伝子において、その転写産物の第1及び第2基準塩基を含む連続する16~30塩基を含む塩基配列をRNAiセンス鎖領域として設定する工程、d設定されたRNAiセンス鎖領域の塩基配列に相補的な塩基配列を含む塩基配列をRNAiアンチセンス鎖領域として設定する工程を含む、前記設計方法。22eASPスコア値が0.4以上あるRNAi分子を選別する工程をさらに含む、に記載の設計方法であって、ASPスコアは、以下の式から算出される、前記設計方法。ASPスコア=対照RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量の相対比-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比×1-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比式中、対照RNAi分子は、前記正常型遺伝子及び変異遺伝子の発現に影響を及ぼさないRNAi分子である23RNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域の3’末端にさらにTT又はUUを付加する、21又は22に記載の設計方法。本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2010222847号、2011044347号の明細書及び/又は図面に記載される内容を包含する。本発明の優性変異遺伝子発現抑制剤によれば、野生型遺伝子や標的以外の優性変異遺伝子の発現に大きな影響を及ぼすことなく、標的優性変異遺伝子の発現を選択的に、また効果的に抑制することが可能となる。本発明の優性変異遺伝子発現抑制剤の有効成分であるRNAi分子の設計方法によれば、疾患の原因となる、あらゆる転写産物上に不連続接合点を有する優性突然優性変異遺伝子に対して設計が可能であり、応用性の高い設計方法を提供できる。本発明の医薬組成物によれば、遺伝性疾患において、野生型遺伝子の発現を維持しながら、疾患原因となる標的優性変異遺伝子の発現を選択的に抑制することにより、その疾患を治癒することが可能となる。1.優性変異遺伝子発現抑制剤1-1.概要本発明の第1の実施形態は、優性変異遺伝子発現抑制剤である。本発明の抑制剤は、RNAi分子及び/又はそれをコードする発現ベクターを有効成分として含み、優性変異遺伝子の発現を選択的に抑制することを特徴とする。1-2.RNAi分子の構成と定義本明細書において、RNAi分子とは、生体内においてRNA干渉RNAinterferenceを誘導し、標的とする優性変異遺伝子の転写産物の分解を介してその遺伝子の発現を転写後翻訳前に抑制サイレンシングすることができる分子をいう。RNAi機構を介して遺伝子の発現を抑制できる分子であれば、一本鎖分子又は二本鎖分子のいずれであってもよい。例えば、siRNAsmallinterferingRNAのような二本鎖分子、shRNAshorthairpinRNA又はmiRNAmicroRNAのような一本鎖分子が挙げられる。RNA干渉については、例えば、BassBL2000Cell101235238;SharpPA2001GenesDev15485490;ZamorePD2002Science29612651269;DernburgAFKarpenGH2002Cell111159162を参照されたい。なお、本明細書では、RNAi機構を介した転写後の遺伝子サイレンシングを、以下、遺伝子の発現抑制として表す。本明細書において、RNAi分子は、核酸からなる。ここでいう核酸とは、天然型核酸、非天然型核酸及び/又は核酸類似体をいう。本明細書において、天然型核酸とは、ヌクレオチドを構成単位とし、それらがホスホジエステル結合によって連結した自然界に存在する生体高分子をいう。通常は、アデニン、グアニン、シトシン及びウラシルのいずれかの塩基を有するリボヌクレオチドが連結したRNA及び/又はアデニン、グアニン、シトシン及びチミンのいずれかの塩基を有するデオキシリボヌクレオチドが連結したDNAが該当する。本発明のRNAi分子では、特に、RNAが主な構成成分であることが好ましい。本明細書において、非天然型核酸とは、非天然型ヌクレオチドを含む又はそれからなる核酸をいう。ここで非天然型ヌクレオチドとは、人工的に構築された又は人工的に化学修飾された自然界に存在しないヌクレオチドであって、前記天然に存在するヌクレオチドに類似の性質及び/又は構造を有するヌクレオチド、又は天然に存在するヌクレオシド若しくは塩基に類似の性質及び/又は構造を有するヌクレオシド若しくは塩基を含むヌクレオチドをいう。例えば、脱塩基ヌクレオシド、アラビノヌクレオシド、2デオキシウリジン、α-デオキシリボヌクレオシド、βLデオキシリボヌクレオシド、その他の糖修飾を有するヌクレオシドが挙げられる。さらに、置換五単糖2Oメチルリボース、2デオキシ2フルオロリボース、3Oメチルリボース、1,2デオキシリボース、アラビノース、置換アラビノース糖;置換六単糖及びアルファ-アノマーの糖修飾を有するヌクレオシドが含まれる。また、非天然型ヌクレオチドは、人工的に構築された塩基類似体又は人工的に化学修飾された塩基修飾塩基を包含するヌクレオチドも含む。塩基類似体には、例えば、2オキソ1Hピリジン3イル基、5位置換2オキソ1Hピリジン3イル基、2アミノ62チアゾリルプリン9イル基、2アミノ62チアゾリルプリン9イル基、2アミノ62オキサゾリルプリン9イル基等が挙げられる。修飾塩基には、例えば、修飾化ピリミジン例えば、5ヒドロキシシトシン、5フルオロウラシル、4チオウラシル、修飾化プリン例えば、6メチルアデニン、6チオグアノシン及び他の複素環塩基等が挙げられる。メチルホスホネート型DNARNA、ホスホロチオエート型DNARNA、ホスホルアミデート型DNARNA、2Oメチル型DNARNA等の化学修飾核酸や核酸類似体も含むこともできる。本明細書において核酸類似体とは、天然型核酸に類似の構造及び/又は性質を有する人工的に構築された化合物をいう。例えば、ペプチド核酸PNA:PeptideNucleicAcid、ホスフェート基を有するペプチド核酸PHONA、架橋化核酸BNALNA:BridgedNucleicAcidLockedNucleicAcid、モルホリノ核酸等が挙げられる。また、本発明のRNAi分子を構成する核酸は、必要に応じて、リン酸基、糖及び/又は塩基が核酸用標識物質で標識されていてもよい。核酸用標識物質は、当該分野で公知のあらゆる物質を利用することができる。例えば、放射性同位元素例えば、32P、3H、14C、DIG、ビオチン、蛍光色素例えば、FITC、Texas、cy3、cy5、cy7、FAM、HEX、VIC、JOE、Rox、TET、Bodipy493、NBD、TAMRA、又は発光物質例えば、アクリジニウムエスターが挙げられる。本明細書において変異とは、遺伝子上又は染色体上に生じる塩基配列の物理的又は構造的変異である。遺伝子上に生じる遺伝子変異と、染色体上に生じる染色体変異があるが、本明細書においては、標的優性変異遺伝子の転写産物上に後述する不連続接合点を生じる変異であれば、いずれであってもよい。また、変異は、自然界において生じた突然変異だけでなく、メタンスルホン酸エチルEMSやNメチルN’ニトロNニトロソグアニジンのような突然変異誘発剤等を用いて人為的に誘発された変異及び分子遺伝学的手法を用いて導入された変異も包含する。変異の種類には、例えば、遺伝子における塩基の欠失、挿入若しくは置換、遺伝子の重複若しくは転座、又は染色体の逆位に基づく変異が挙げられる。欠失とは、野生型遺伝子の塩基配列の一部が失われた変異をいう。ここで、野生型遺伝子とは、同種遺伝子のアレル集団内において自然界に最も多く存在し、かつそれがコードするタンパク質又は機能性核酸が本来の機能を有するものである。機能性核酸とは、ノンコーディングRNAとも呼ばれ、タンパク質をコードせずにそれ自身で様々な機能を有するRNAである。例えば、転移RNAtRNA、リボソームRNArRNA、核内低分子RNAsnRNA、核小体低分子RNAsnoRNA、及びマイクロRNAmiRNA等が該当する。本発明において、一遺伝子における欠失部位は、その欠失遺伝子の転写産物上に不連続接合点をもたらす部位であれば、その欠失塩基数や位置は特に限定はしない。1~50塩基、1~40塩基、1~30塩基、又は1~20塩基程度の欠失が一般的ではあるが、欠失によって生じる転写産物が結果的にその変異遺伝子を有する個体に優性変異をもたらす範囲であれば、例えば、野生型遺伝子の塩基配列の70以上、80以上、又は90以上が欠失していても構わない。一遺伝子における欠失部位の例としては、図1Aで示すような、1つのエクソン0101のコード領域0102において、転写開始点0115を含まない破線で示した一部領域0108が欠失した場合、図1Bで示すような、一以上のイントロンを含む遺伝子において、転写開始点0115を含まない一以上のエクソンの全領域0112を含む領域0109が欠失した場合一以上のイントロンの全領域及び/又は一部領域を含んでいてもよい;図1Bでは、欠失部位が1つのエクソンの全領域0112に加えて、その両側に位置する2つのイントロンの一部0114を含む、図1Cで示すような、一以上のイントロンを含む遺伝子において、少なくとも1つのイントロンの全領域0113を含む2つのエクソンの一部すなわち、上流エクソンの3’側の一部と下流エクソンの5’側の一部間の領域0110が欠失した場合、図1Dで示すような、上流エクソンの3’側の一部とそのエクソンの下流に位置するイントロンの5’側の一部を含む領域が欠失した場合その間に位置する一以上の他のエクソン及びイントロンの全領域を含んでいてもよい;図1Dでは、1つのエクソンの全領域0112及びその両側に位置する一方のイントロンの全領域0113と他方のイントロンの一部領域0114を含むが挙げられる。一方、スプライス部位を含まないイントロンの一部領域の欠失や一以上のイントロンの全部領域の欠失は、転写産物上に不連続接合点を生じないため本発明の欠失には該当しない。挿入とは、野生型遺伝子の塩基配列中に一以上の塩基が挿入された変異をいう。本発明において、遺伝子内における塩基の挿入の位置は、エクソン内であれば特に限定はしない。一方、イントロン内に挿入された場合には、通常、遺伝子発現後にそのイントロンはスプライシングによって除かれ、転写産物上に不連続接合点を生じない。それ故、原則として、イントロン内への塩基の挿入は、本発明の挿入には含まないものとする。ただし、イントロン内の挿入であっても、挿入によって後述するスプライス部位が破壊された場合、挿入された塩基の数が膨大であることによって、そのイントロンがスプライシングにより正常に除去されない場合、又は挿入された塩基の中にエクソンに相当する配列が含まれた結果、スプライシング後の転写産物上に新たなエクソンが挿入される場合のように、転写産物上に不連続接合点を生じるときには、本発明の挿入に含むものとする。挿入される塩基数は、特に限定はされない。例えば、前述のように一塩基挿入であってもよいし、トランスポゾンのように数百塩基以上の挿入であってもよい。置換とは、野生型遺伝子の塩基が他の塩基と置き換わった変異をいう。置換変異では、通常、野生型遺伝子と変異遺伝子を対比させた場合において、双方の遺伝子及びその転写産物の塩基配列にギャップは生じない。それ故、スプライス部位を破壊し得る置換以外では、通常、その遺伝子の転写産物上に不連続接合点を生じ得ない。一方、スプライス部位を破壊し得る置換であれば、転写産物において、そのスプライス部位の支配下にあるイントロンのスプライシングによる除去が阻害される結果、転写産物上に不連続接合点、すなわち後述するように、野生型遺伝子と変異遺伝子の転写産物の塩基配列間にギャップを生じる。したがって、本発明における置換は、スプライス部位を破壊し得る置換のみを対象とする。ここでいうスプライス部位とは、遺伝子配列において正常なスプライシングを行なう上で必要な部位をいう。例えば、premRNAスプライシングの場合であれば、イントロンの5’末端周辺に位置する5’スプライス部位ドナー部位、イントロンの3’末端周辺に位置する3’スプライス部位アクセプター部位及びイントロン内に位置するブランチポイント等のイントロン内の所定の位置する一般的な部位が該当する。この他、スプライシングに必要なイントロン内の他の塩基やエクソン内に位置する塩基も包含する。また、tRNAスプライシングやセルフスプライシングの場合であれば、スプライシングに必要なRNA配列内の高次構造の形成に必須の塩基が該当する。置換される塩基数は、スプライス部位を破壊することができれば、特に限定しない。例えば、上記5’スプライス部位におけるGグアニンのように、premRNAスプライシングに必須の塩基であれば、一塩基置換の点突然変異であってよい。重複とは、染色体中に同一の遺伝子が複数個存在する変異をいう。通常、遺伝子の重複は、その遺伝子を含む染色体の一部領域の重複に伴い発生する。本発明においては、遺伝子の一部のみが重複し、それに基づき、その転写産物上に不連続接合点が生じる遺伝子を生じさせる重複が対象となる。転座とは、遺伝子又は染色体の一部が同一又は異なる染色体上にその位置を変えた変異をいう。本発明においては、転座によって遺伝子の一部が異なる位置に移動した結果、その転座した遺伝子の一部を含む転写産物上に不連続接合点がを生じるものが対象となる。例えば、転座の結果生じたキメラ遺伝子、すなわち異なる二以上の遺伝子が部分的に融合した遺伝子であれば、その転写産物は、その融合の基となった各遺伝子のいずれの転写産物と対比しても不連続接合点を有することとなる。逆位とは、染色体の一部の方向が逆になった変異をいう。本発明においては、逆位によって遺伝子の一部の方向が逆になった結果、その逆になった遺伝子の一部を含む転写産物上に不連続接合点が生じるものを対象とする。変異遺伝子とは、野生型遺伝子の塩基配列と異なる塩基を含む遺伝子をいう。本発明において、変異遺伝子は、染色体上に先天的に存在するものの他、後天的に獲得されたものも含む。変異遺伝子は、個体を構成する全ての細胞中に存在する必要はなく、一部の細胞、組織又は器官にのみ存在するものであってもよい。例えば、一の個体において、正常細胞中には存在せず、癌細胞中にのみ存在する変異遺伝子が挙げられる。本明細書において優性変異遺伝子とは、個体においてその変異に基づく形質が表現型として顕在化する変異遺伝子をいう。結果としてその個体に異常な表現型を優性でもたらす変異遺伝子であれば、その変異遺伝子がコードしているタンパク質又は機能性RNAの活性の有無は問わない。例えば、機能獲得型変異gainoffunctionmutation又は機能喪失型変異lossoffunctionmutationのいずれであってもよい。機能獲得型変異は、タンパク質に量的上昇過剰発現:overexpression又は活性上昇構成的活性化:constitutiveactive又は機能亢進型:hyperactiveを示す形質をもたらすハイパーモルフ変異hypermorphmutation、新規機能活性を示す形質をもたらすネオモルフ変異neomorphmutation、及び野生型遺伝子由来のタンパク質と拮抗又はそれを抑制し、野生型遺伝子の形質発現を抑制するアンチモルフ変異antimorphmutationdominantnegativeを含む。また、機能喪失型変異は、遺伝子が形質発現能を完全に失ったアモルフ変異amorphmutation及び遺伝子の形質発現能の低下をもたらすハイポモルフ変異hypomorphmutationが挙げられる。機能喪失型変異の場合、通常は劣性となるものが多いが、本明細書においては、その効果が優性となるもののみを対象とする。好ましくは機能獲得型の優性突然変異である。本明細書において不連続接合点とは、変異遺伝子における転写産物の塩基配列を野生型遺伝子の転写産物の塩基配列と対比したときに、少なくとも1塩基以上のギャップこのギャップは、転写産物の塩基配列端部に位置していてもよいの存在により、変異遺伝子の転写産物と野生型遺伝子の転写産物との間で対応する塩基の連続性が途絶える、変異遺伝子の転写産物上の塩基の接合部をいう。不連続接合点は、一の変異遺伝子の転写産物中に一箇所以上あってもよい。この不連続性は、変異遺伝子の変異に基づくものである。例えば、図2で示すように、変異が一エクソン内の塩基の欠失である場合、野生型遺伝子Aにおいてbで示す領域が欠失した変異遺伝子Bの転写産物B’では、野生型遺伝子の転写産物A’との塩基配列を対比したとき、a及びcで示す領域の塩基配列は対応するが、野生型遺伝子の転写産物におけるa領域の3’末端の塩基とc領域の5’末端の塩基間で、その連続性が途絶える。この場合、変異遺伝子の転写産物B’におけるa領域の3’末端の塩基とc領域の5’末端の塩基の接合部Jが不連続接合点となる。また、図3で示すように、変異遺伝子Bにおける欠失欠失部位を破線で示したCを参照が、第1エクソンの3’末端側の一部の塩基と第1イントロンの5’末端側の一部の塩基からなる領域である場合、変異遺伝子Bの5’スプライス部位の欠失により、premRNAスプライシングのよる第1イントロンの除去が阻害され、結果として第1イントロンの3’末端側の一部の塩基を含む転写産物B’が生じる。この転写産物B’と野生型遺伝子Aの転写産物A’との塩基配列を対比したときには、5’側では第1エクソンの3’欠失末端の塩基で、また3’側では第2エクソンの5’末端の塩基で、その連続性が途絶える。したがって、この場合には、第1エクソンの3’欠失末端の塩基と5’末端側の一部がトランケ―トした第1イントロンの5’欠失末端の塩基の接合部J1、及び第1イントロンの3’末端の塩基と第2エクソンの5’末端の塩基の接合部J2の二箇所が不連続接合点となる。さらに、図4で示すように、変異遺伝子Bにおける欠失欠失部位を破線で示したCを参照が第1イントロン0404の3’末端側の一部の塩基と第2エクソン0402の5’末端側の一部の塩基からなる領域の欠失である場合、変異遺伝子Bの第1イントロンの3’スプライス部位の欠失により、第2エクソン0402の3’末端側の一部の領域0408は、スプライシングによって除去され、その転写産物B’は、第1エクソン0401と第3エクソン0403が連結された状態となる場合がある。この転写産物B’と野生型遺伝子Aの転写産物A’との塩基配列を対比したとき、第1エクソン0401の3’末端の塩基と第3エクソン0403の5’末端の塩基間で、その連続性が途絶える。したがって、この場合には、その第1エクソン0401の3’末端の塩基と第3エクソン0403の5’末端の塩基の接合部Jが不連続接合点となる。また、例えば、図5で示すように、変異遺伝子Bにおける変異が1つのエクソン内への塩基の挿入である場合には、挿入されたc領域を含む変異遺伝子Bの転写産物B’と野生型遺伝子Aの転写産物A’との塩基配列を対比させると、転写産物B’におけるa領域の3’末端とc領域の5’末端、及びc領域の3’末端とb領域の5’末端で、その連続性が途絶える。この場合、変異遺伝子の転写産物B’におけるa領域の3’末端の塩基とc領域の5’末端の塩基の接合部J1、及びc領域の3’末端の塩基とb領域の5’末端の塩基の接合部J2の2箇所が不連続接合点となる。本実施形態において、標的となる遺伝子の種類、及びその遺伝子が由来する生物種は、特に限定はしない。あらゆるタンパク質又は機能性核酸をコードする遺伝子が本実施形態の抑制剤の標的となり得る。また、生物種は、動物、植物のいずれであってもよく、それらのあらゆる種類を包含する。動物であれば、好ましくは脊椎動物、より好ましくは魚類、鳥類又は哺乳動物である。魚類の中でさらに好ましくは水産資源用魚種例えば、サケ科、スズキ科、タラ科、ニシン科、ヒラメ科、カレイ科、アジ科、イカナゴ科、タイ科及びメバル科の魚種である。鳥類の中でさらに好ましくは食用種例えば、ニワトリ、ガチョウ、アヒル、カモ、合鴨、七面鳥、ウズラ、ダチョウ等である。哺乳動物の中でさらに好ましくは家畜ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、実験用動物げっ歯類、ウサギ、イヌ、サル、競争馬、愛玩動物イヌ、ネコ、ウサギ、サル、げっ歯類又はヒトである。一層好ましい生物種は、ヒトである。一方、植物であれば、好ましくは種子植物、より好ましくは被子植物、さらに好ましくは食用植物種例えば、イネ科例えば、イネ、コムギ、オオムギ、ライムギ、トウモロコシ、コーリャン、アワ、マメ科例えば、ダイズ、アズキ、グリーンピース、ナス科例えば、トマト、ナス、ジャガイモ、トウガラシ、ピーマン、ヒルガオ科例えば、サツマイモ、バラ科例えば、イチゴ、アーモンド、モモ、プラム、ウメ、バラ、サクラ、アブラナ科例えば、ダイコン、カブ、アブラナ、アカザ科例えば、ホウレンソウ、テンサイ、セリ科、タデ科、ウリ科、キク科、ユリ科、サトイモ科、ブドウ科、ミカン科、ブナ科、ヤシ科等に属する食用の植物種、繊維資源用植物種例えば、ワタ、アサ等、木材資源用植物種例えば、スギ、ヒノキ、モミ、ツガ、マツ、イチイ、サクラ、カエデ、カシ、ナラ、ブナ、ニレ、ケヤキ、クルミ、ホウ、カツラ、チーク、ラワン、黒檀、マホガニー、ポプラ、ユーカリ等である。前記変異が関与する形質も、特に限定はしないが、好ましくはその発現を抑制したい形質である。例えば、疾患の発症に関与する変異、異常形態に関与する変異等が挙げられる。ここでいう疾患は、例えば、後天的に特定の細胞内のゲノムDNA中に生じた突然変異による疾患や常染色体優性変異疾患を含む。後天的に特定の細胞内のゲノムDNA中に生じた突然変異による疾患には、例えば、新生物腫瘍、特に悪性新生物悪性腫瘍、いわゆる癌であって、白血病を含むが挙げられる。後天的に特定の細胞内のゲノムDNAに生じた塩基配列の挿入又は欠失によって発生する悪性新生物の具体的な例としては、上皮成長因子受容体EGFR遺伝子の変異を原因とする非小細胞肺癌NSCLC、CTNNB1遺伝子の変異を原因とする大腸癌、CDH1遺伝子の変異を原因とする胃癌、BRCA1遺伝子又はBRCA2遺伝子の変異を原因とする乳癌、AIRE遺伝子の変異を原因とする多腺性自己免疫性内分泌不全症I型、TNFRSF6APT1FAS遺伝子の変異を原因とする自己免疫性リンパ増殖症候群等が挙げられる。また、後天的に特定の細胞内のゲノムDNA中に生じた転座を伴う遺伝子の突然変異によって生じる悪性新生物の、より具体的な例としては、BCR遺伝子とABL遺伝子のキメラ遺伝子を原因とする慢性骨髄性白血病及び急性リンパ性白血病、cmyc遺伝子とIgH遺伝子のキメラ遺伝子を原因とするバーキットリンパ腫、NPM遺伝子とALK遺伝子のキメラ遺伝子を原因とする未分化型大細胞リンパ腫、EML4遺伝子とALK遺伝子のキメラ遺伝子を原因とする肺癌、PDGFB遺伝子とCOL1A1遺伝子のキメラ遺伝子を原因とする隆起性皮膚線維肉腫、ETV6遺伝子とNTRK3遺伝子のキメラ遺伝子を原因とする先天性線維肉腫、FUS遺伝子とCREB3L2遺伝子のキメラ遺伝子を原因とする低悪性線維粘液肉腫、EWS遺伝子とCHN遺伝子のキメラ遺伝子を原因とする骨外性粘液型軟骨肉腫、EWS1遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子を原因とするユーイング肉腫、SYT遺伝子若しくはSSX遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子を原因とする胞巣型横紋筋肉腫、ALK遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子を原因とする炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、CHOP遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子を原因とする脂肪肉腫、ATF1遺伝子を転座パートナーとするキメラ遺伝子を原因とする軟部明細胞肉腫若しくは悪性線維性組織球腫等が挙げられる。また、スプライシング異常を伴う疾患であれば、DMPK遺伝子の変異を原因とする筋硬直性ジストロフィー、SMN1遺伝子の変異を原因とする脊髄性筋萎縮症、CHRNE遺伝子の変異を原因とする先天性筋無力症候群、MAPT遺伝子の変異を原因とする前頭側頭葉型痴呆症、GH1遺伝子の変異を原因とする成長ホルモン単独欠損症II型等が挙げられる。また、ヒト常染色体優性変異疾患であれば、RHO遺伝子の変異を原因とする先天性夜盲症、KCNQ4遺伝子若しくはGJB遺伝子の変異を原因とする難聴遺伝子領域DFNA2、MITF遺伝子の変異を原因とするワールデンブルグ症候群、DIAPH1DFNA1遺伝子若しくはPOU4F3遺伝子の変異を原因とする非症候性難聴、TNNT2遺伝子の変異を原因とする肥大型心筋症、MYBPC3遺伝子の変異を原因とする家族性肥大型心筋症、TNNI3遺伝子の変異を原因とする心尖部肥大型心筋症、MPZ遺伝子の変異を原因とするシャルコーマリートゥース病1B型、PMP22遺伝子の変異を原因とするシャルコーマリートゥース病1A型、KCNQ1遺伝子若しくはKCNH2遺伝子若しくはSCN5A遺伝子若しくはANK2遺伝子若しくはKCNE1遺伝子若しくはKCNE2遺伝子若しくはKCNJ2遺伝子若しくはCAV3遺伝子若しくはSCN48遺伝子若しくはAKAP9遺伝子若しくはANTA1遺伝子の変異を原因とするQT延長症候群、KCNH2遺伝子若しくはKCNJ2遺伝子の変異を原因とするQT短縮症候群、SCN5A遺伝子若しくはGPD1L遺伝子若しくはCACNA1C遺伝子若しくはCACNB2B遺伝子若しくはSCN1B遺伝子の変異を原因とするブルガタ症候群、RYR2遺伝子の変異を原因とするカテコラミン誘発性多形性心室頻拍、SCN5A若しくはSCN1B遺伝子の変異を原因とする心伝導障害、TDP43遺伝子の変異を原因とする筋萎縮性側索硬化症、PTPN11遺伝子の変異を原因とするヌーナン症候群、又はCaR遺伝子の変異を原因とする低カルシウム血症等が挙げられる。1-3.RNAi分子の構造本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子は、標的である優性変異遺伝子の転写産物上に生じる少なくとも一つの不連続接合点を含むRNAiセンス鎖領域、及びそれに相補的な塩基配列を含むRNAiアンチセンス鎖領域を含む。一例として、本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子の構造における概念図を図6に示す。この図で示すように、RNAi分子は、二本鎖分子図6A又は一本鎖分子図6Bを包含する。この他、前記RNAiセンス鎖領域及びそれに相補的な塩基配列を含むRNAiアンチセンス鎖領域を含む環状分子を含み得る。各RNAi分子に共通する構成要素本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子は、いずれの形態の場合にも、RNAiセンス鎖領域0601、RNAiアンチセンス鎖領域0602及び不連続接合点0603を必須の構成要素として含む。以下、RNAi分子に共通する構成要素について説明をする。RNAiセンス鎖領域0601とは、標的優性変異遺伝子の転写産物の塩基配列に一致する塩基配列で構成され、その転写産物上に生じる不連続接合点0603図6において、センス鎖領域0601では斜線領域と白抜き領域の接合部として表すを少なくとも一つ含む。また、センス鎖領域0601の塩基長は、その転写産物の連続する16~30塩基、18~25塩基又は19~23塩基である。さらに、前記不連続接合点0603に隣接する3’側の塩基0604を基準後述する第2基準塩基に相当するとし、その基準塩基から数えて下流側に向かって3~16番目の塩基、好ましくは4~15番目の塩基0605、より好ましくは4~13番目の塩基が該RNAiセンス鎖領域の3’末端塩基を構成する。不連続接合点0603が一の転写産物中に複数存在する場合には、いずれか一の不連続接合点に隣接する3’側の塩基を基準塩基とすればよい。RNAiアンチセンス鎖領域0602とは、前記RNAiセンス鎖領域0601に完全に相補する塩基配列で構成される。したがって、その塩基配列中には、前記基準塩基、すなわち不連続接合点0603に隣接する3’側の塩基に相補的な塩基0607を含む。RNAiアンチセンス鎖領域は、本実施形態のRNAi分子が二本鎖分子図6Aの場合には、RNAiセンス鎖領域を含むポリヌクレオチド鎖とは異なる他方のポリヌクレオチド鎖に含まれるが、一本鎖分子図6Bの場合には、RNAiセンス鎖領域と同一のポリヌクレオチド鎖に逆方向で含まれる。不連続接合点については、既に詳述したことから、ここではその説明を省略する。本実施形態のRNAi分子は、ASPスコア値が0.4以上であることを特徴とする。ASPスコアAlleleSPecificityscoreとは、ASPRNAiにおいて重要な要素である対立遺伝子識別能力を数値化したものであり、さらには、正常型遺伝子に対するRNAi分子の非特異的な発現抑制の影響、すなわち、RNAi分子が正常型遺伝子に与える副作用を数値化したものと見なすこともできる。ASPスコア値は、下記式によって導き出される。ASPスコア=対照RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した正常型遺伝子の標準化した発現量の相対比-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比×1-対照RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量に対する前記RNAi分子で処理した変異遺伝子の標準化した発現量の相対比式中、対照RNAi分子は、本実施形態の有効成分であるsiRNA分子のネガティブコントロールとなるRNAi分子で、前記正常型遺伝子及び変異遺伝子の発現に影響を及ぼさないRNAi分子であり、それ故、上記式では、対照RNAi分子で処理した標準化した遺伝子の発現量を100とみなす。例えば、標的となる遺伝子が存在しない任意の塩基配列を含むRNAi分子が該当する。上記式において、標準化後の発現量の相対比が1.0を超えた場合、それは発現抑制効果が無いものとみなし、その相対比を1.0として算出する。ASPスコアによれば、変異遺伝子に対する特異性と抑制効果の両者を反映できる。例えば、あるRNAi分子のASPスコア値が低い場合には、そのRNAi分子が、たとえ変異遺伝子の発現を強く抑制できる場合であっても、特異性が低いゆえに同時に野生型遺伝子の発現までも強く抑制してしまうこと、すなわち野生型遺伝子に対する副作用が強いことを意味する。ASPスコア値が0.4以上であれば、そのRNAi分子は、変異遺伝子の発現を抑制し、かつ野生型遺伝子に対する副作用がないか又は比較的弱い効果を有することから、ASPRNAiとして機能し得る。ASPスコアの算出のための正常型遺伝子と変異遺伝子の発現量の測定については、各発現量を同一の方法によって測定するのであれば、当該分野で公知のいずれの方法を用いてもよく、特に限定しない。また、標準化は、RNAi分子による発現抑制を受けない内部または外来性コントロール遺伝子の発現量に基づいて行なえばよい。好ましくは、OhnishiYら2006JournalofRNAiandGeneSilencingVol2154160によって開発されたレポーター遺伝子発現プラスミドを用いて、後述する実施例1に記載の条件で、ホタルとウミシイタケのルシフェラーゼ等のレポーター遺伝子の発現と、コントロールとしてRNAi分子による発現抑制を受けないβガラクトシダーゼ遺伝子の発現に基づいて、野生型遺伝子と変異遺伝子の発現量を測定することである。二本鎖RNAi分子の構成要素本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子がsiRNAのような二本鎖分子の場合、前記図6Aに示すように、上記RNAi分子共通構成要素であるRNAiセンス鎖領域0601、RNAiアンチセンス鎖領域0602及び不連続接合点0603に加えて、任意でさらにそれぞれのポリペプチド鎖の3’末端に3’末端付加塩基0606を含むことができる。3’末端付加塩基0606は、TTチミン‐チミン又はUUウラシル‐ウラシルの2塩基で構成される。この塩基を付加したRNAi分子は、RNAi抑制効率を高めることができるTuschlTetal1999GenesDev1331917。一本鎖RNAi分子の構成要素本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子がshRNAのような一本鎖分子の場合、前記図6Bに示すように、上記RNAi分子共通構成要素であるRNAiセンス鎖領域0601、RNAiアンチセンス鎖領域0602及び不連続接合点0603に加えて、さらにRNAiセンス鎖領域0601と、それとは逆向きのRNAiアンチセンス鎖領域0602とを連結する短いスペーサー配列0608を含む。スペーサー配列は、通常3~24塩基、好ましくは、4~15塩基からなる任意の塩基配列とすることができる。したがって、RNAi分子が一本鎖の場合、分子全体として、35塩基16×23~84塩基30×224からなる。RNAi分子内では、RNAiセンス鎖領域とRNAiアンチセンス鎖領域が互いに塩基対合し、その間に位置するスペーサー配列がループ構造を形成することによって、分子全体がヘアピン型のステム-ループ構造をなし得る。前記構造を有する一本鎖RNAi分子が細胞内に導入されると、細胞質内でDicerと呼ばれるエンドヌクレアーゼの働きによって二本鎖siRNAに加工され、そのうちRNAiアンチセンス鎖領域がRISCRNAinducedsilencingcomplex複合体に取り込まれた後、前述の二本鎖RNAi分子と同様のRNAi機構によって標的遺伝子の転写後翻訳前発現を抑制することができる。一本鎖分子におけるRNAiセンス鎖領域0601とRNAiアンチセンス鎖領域0602は、前記二本鎖RNAi分子と同様に、それぞれの領域の3’末端に3’末端付加塩基を含むこともできる。一本鎖分子における5’末端、及び/又は3’末端には、任意の配列を付加することもできる。例えば、5’末端及び/又は3’末端にステムループ構造を形成し得る塩基配列を付加することもできる。1-4.発現ベクターの構成本明細書において発現ベクターとは、本実施形態の阻害剤に含まれる有効成分であって、前記RNAi分子をコードするDNAを発現可能なように発現用ベクター内に挿入したベクターである。本実施形態の発現ベクターは、RNAi分子がsiRNAのような二本鎖分子の場合、RNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域のそれぞれをコードするDNA断片を、異なる二つの発現用ベクターに挿入していてもよく、また一つの発現用ベクター内に独立に発現制御されるDNA断片として挿入していてもよい。一方、RNAi分子がshRNAのような一本鎖分子の場合、当該一本鎖RNA分子をコードするDNA断片が発現用ベクター内の所定の位置に挿入されていればよい。本明細書において、発現用ベクターとは、本実施形態の発現ベクターにおける骨格部分、すなわち、本実施形態の発現ベクターにおいて実施形態1のRNAi分子をコードするDNA断片以外の部分をいう。発現用ベクターの種類は、特に限定はしないが、プラスミド又はウイルスが好ましい。これらは、導入する宿主に応じて適宜選択すればよい。例えば、導入する宿主がヒトの場合には、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、センダイウイルス、アデノ随伴ウイルス等のウイルス、あるいは非ウイルスベクターを基礎とするベクターのような公知の発現ベクターを使用することができる。また、導入する宿主が植物の場合には、pBI系若しくはpRI系のバイナリーベクター等のプラスミドやカリフラワーモザイクウイルスCaMV、インゲンマメゴールデンモザイクウイルスBGMV、タバコモザイクウイルスTMV等のウイルスを利用することができる。さらに、導入する宿主が大腸菌の場合には、例えば、pBI系、pPZP系、pSMA系、pUC系、pBR系、pBluescript系stratagene社等のプラスミドを利用することができる。この他、各ライフサイエンスメーカーから市販されている様々な各種宿主用発現ベクターを利用してもよい。前記発現用ベクターは、プロモーター、エンハンサー、若しくはターミネーターのような調節領域、又は選抜マーカー遺伝子のような標識領域を含むことができる。それぞれの種類は、特に限定されない。発現ベクターを導入する宿主に応じて当該分野で公知のものを適宜選択すればよい。大腸菌中で動作可能なプロモーターとしては、例えば、lac、trp若しくはtacプロモーター又はファージ由来のT7、T3、SP6、PR若しくはPLプロモーター等が挙げられる。酵母で動作可能なプロモーターとしては、例えば、酵母解糖系遺伝子由来のプロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子プロモーター、TPI1、ADH24cプロモーター等が挙げられる。植物細胞で動作可能なプロモーターとしては、例えば、カリフラワーモザイクウイルスCaMVの35Sプロモーター、ノパリン合成酵素遺伝子のプロモーターPnos、トウモロコシ由来ユビキチンプロモーター、イネ由来のアクチンプロモーター、タバコ由来PRタンパク質プロモーター等が挙げられる。昆虫細胞で動作可能なプロモーターとしては、例えば、ポリヘドリンプロモーター、P10プロモーター、オートグラファカリホルニカポリヘドロシス塩基性タンパクプロモーター、バキュロウイルス即時型初期遺伝子1プロモーター、バキュロウイルス39K遅延型初期遺伝子プロモーター等が挙げられる。そして、ヒトをはじめとする動物細胞内で動作可能なプロモーターとしては、RNAポリメラーゼII系のプロモーターやRNAポリメラーゼIII系のプロモーターが好適に用いられる。好ましくは、PolIII系のプロモーター、特に好ましくはU6及びH1等のプロモーターである。また、いずれの宿主の場合にも、生体内の特定の部位でのみ発現を誘導する部位特異的プロモーターを使用することもできる。なお、異なる二つの発現用ベクターのそれぞれにRNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域をコードするDNA断片を挿入した場合、各RNA鎖が同程度の量で発現するように、プロモーターは、同一のプロモーター又は同程度の発現活性を有する異なるプロモーターを用いることが好ましい。1-5.RNAi分子の設計と製造本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子の設計方法について説明をする。本設計方法は、図7で示すように、基準塩基設定工程0701、3’末端塩基設定工程0702、RNAiセンス鎖領域設定工程0703、及びRNAiアンチセンス鎖領域設定工程0704を含む。以下、それぞれの工程について説明をする。基準塩基設定工程0701とは、標的とする優性変異遺伝子において、その転写産物上の不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基として設定する工程である。優性変異遺伝子の転写産物中に不連続接合点が二箇所以上存在する場合には、いずれか一の不連続接合点を選択する。その場合、選択された不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基がそれぞれ第1及び第2基準塩基となる。3’末端塩基設定工程0702とは、前記第2基準塩基に対応する塩基を起点に、下流側に向かって4~15番目、好ましくは4~14番目又は4~13番目の塩基がRNAiセンス鎖領域の3’末端塩基に対応するように設定する工程である。RNAiセンス鎖領域設定工程0703とは、優性変異遺伝子の転写産物の塩基配列において、第1及び第2基準塩基を含む連続する16~30塩基をRNAiセンス鎖領域として設定する工程である。前記3’末端塩基設定工程により3’末端の塩基が決定していることから、転写産物の塩基配列上において、その3’末端の塩基に対応する塩基から数えて、上流に向かって、第1及び第2基準塩基を含むようにして、16~30塩基をRNAiセンス鎖領域として設定すればよい。本工程によってRNAi分子の優性変異遺伝子に対する標的領域が定まる。RNAiアンチセンス鎖領域設定工程0704とは、設定されたRNAiセンス鎖領域の塩基配列に相補的な塩基配列を含む塩基配列をRNAiアンチセンス鎖領域として設定する工程である。以上の工程は、本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子の形態にかかわらず共通する工程である。次に、3’末端付加工程及びスペーサー連結工程、ASPスコア選抜工程を説明する。3’末端付加工程は、前記で設計したRNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域のそれぞれの3’末端にTTチミン‐チミン又はUUウラシル‐ウラシルを付加することを特徴とする。本工程は、任意工程であるため、必要に応じて追加すればよい。スペーサー連結工程は、一本鎖RNAi分子又は環状型RNAi分子に特有で、かつ必須の工程である。本工程は、前記で設計したRNAiセンス鎖領域の3’末端本工程に先立ち、RNAiセンス鎖領域が3’末端付加工程を経た場合であれば、RNAiセンス鎖領域の3’末端に付加されたTT又はUUの3’末端とRNAiアンチセンス鎖領域の5’末端をすなわち、RNAiセンス鎖領域とは逆方向でそれぞれスペーサー配列の3’末端と5’末端に連結して、一本鎖分子又は環状型RNAi分子にする工程である。スペーサー配列は、3~24塩基、好ましくは4~15塩基からなる任意の塩基配列でよい。好ましくは、スペーサー配列内で塩基対合を形成しない塩基配列である。ASPスコア選別工程は、上記工程によって調製されたRNAi分子のうち、ASPスコア値が0.4以上あるRNAi分子のみを選別する工程である。ASPスコアは、上記式から算出すればよい。本実施形態のRNAi分子は、前述の方法によって設計された塩基配列に基づいて、化学的合成法によって合成することができる。RNAi分子の化学合成は、各ライフサイエンスメーカー例えば、シグマアルドリッチ社、ベックス社、タカラバイオ社、インビトロジェン社等が受託製造サービスを行っており、それらを利用することもできる。また、本実施形態のRNAi分子は、前述の方法によって設計された塩基配列を一旦DNA配列に変換し、その配列に基づいてDNAを化学合成したものをクローニングした後に、当該分野で公知のinvitroRNA転写法によってRNAとして調製することができる。invitroRNA転写法は、例えば、SambrookJetalMolecularCloningALaboratoryManualSecondEdColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYorkを参照すればよい。また、UiTeiらの方法NucleicAcidsRes329369482004、Reynoldsらの方法NatBiotechnol223263302004、Amarzguiouiらの方法BiochemBiophysResCommun316105010582004を参考にすることができる。1-6.発現ベクターの調製本実施形態の抑制剤に含まれる発現ベクターの調製方法は、基本的には、当該分野で公知の方法、例えば、SambrookJetalMolecularCloningaLaboratoryManualSecondEdColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYorkに記載の方法に従って調製することができる。具体的な例を挙げると、まず、前述の1-5.RNAi分子の設計と製造の項で説明した方法に従い、RNAi分子の塩基配列を決定する。続いて、それに対応するDNA配列に基づき、センス鎖DNA及びアンチセンス鎖DNAを化学合成法等によってそれぞれ合成する。このとき各鎖の両末端に適当な制限部位を付加するか、各鎖のアニーリング後に適当なコヘシブ末端が形成されるようにしておくことが好ましい。DNA合成は、ライフサイエンス関連メーカー各社が受託合成サービスを行っており、それを利用することもできる。合成後の両鎖を混合してアニーリングさせ、二本鎖DNA断片を調製した後、末端に制限部位を付加していた場合には、必要に応じてその制限酵素で切断する。さらに、各鎖の5’末端を必要に応じてT4ポリヌクレオチドキナーゼ等でリン酸化する。続いて、発現用ベクターのプロモーター下流の対応する制限部位に前記調製した二本鎖DNA断片を連結する。DNA断片は、一旦適当なクローニングベクターに連結してクローン化した後、それから切り出したものを発現用ベクターに連結してもよい。また、3’末端付加塩基を有するRNAi分子を発現させるためには、予めRNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域のそれぞれの3’末端にTTを挿入しておくことに留意する。本工程は、任意工程であるため、必要に応じて追加すればよい。1-7.変異型EGFR遺伝子発現抑制剤本実施形態の優性変異遺伝子発現抑制剤の一例として、変異型EGFR上皮成長因子受容体遺伝子の発現を特異的に抑制するRNAi分子EGFRRNAi分子を有効成分とする変異型EGFR遺伝子発現抑制剤が挙げられる。ここでいう変異型EGFR遺伝子とは、後天的に発生する優性変異遺伝子で、非小細胞肺癌nonsmallcelllungcancer;NSCLCの原因となる遺伝子である。EGFRの細胞外ドメインに上皮成長因子EGF等のリガンドが結合すると、通常は細胞内ドメインのチロシンキナーゼ活性化され、自己リン酸化作用が作動する。変異型EGFR遺伝子では、EGFR遺伝子の特定の塩基に置換、欠失、挿入が生じ、下流の細胞内シグナル伝達経路が構成的に活性化状態にある機能獲得型となることによって発生すると考えられているPaezGJetalScience2004304;14971500。本実施形態の変異型EGFR遺伝子発現抑制剤は、このような変異型EGFR遺伝子において、置換以外の欠失及び挿入等の変異に基づく遺伝子の発現を特異的に抑制することができる。本実施形態の変異型EGFR遺伝子発現抑制剤の具体的な例としては、図8-1、9-1、10-1、及び11-1の各Aで示すように、ヒトEGFR遺伝子の一部塩基が欠失したdelL747S変異、また一部塩基の欠失と挿入が生じたdelA750P変異のそれぞれに対するEGFRRNAi分子を有効成分とする変異型EGFR遺伝子発現抑制剤が挙げられる。なお、delA750P変異については、後述するように、コードするアミノ酸配列が同一であっても、塩基配列の欠失と挿入の相違によって、GとAの一塩基の違いを有する2種類の変異が存在する。本明細書では、delA750P変異において、それらの変異の違いを区別する必要がある場合には、以降、便宜的にGを有する変異をdelA750P変異図10-1Aとし、またAを有する変異をdelA750P変異図11-1Aとする。より具体的な変異型EGFR遺伝子発現抑制剤としては、例えば、delL747Sの発現抑制剤としては、例えば、センス鎖領域域が、配列番号29、31、33、35、37、39、41、43、45、47又は49で示される一本鎖若しくは二本鎖のRNAi分子、又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターが挙げられる。さらに、delA750Pの発現抑制剤としては、例えば、センス鎖領域が、配列番号53、55、59、61、63、65又は67で示される一本鎖若しくは二本鎖のRNAi分子、又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターである。あるいは、delA750Pの発現抑制剤としては、例えば、センス鎖領域が、配列番号129、131、133、135、137、139、141、143又は145で示される一本鎖若しくは二本鎖のRNAi分子、又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターである。1-8.BCRABLキメラ遺伝子発現抑制剤本実施形態の優性変異遺伝子発現抑制剤の一例として、フィラデルフィア染色体における転座変異によって生じたBCRABLキメラ遺伝子の発現を特異的に抑制するRNAi分子BCRABLRNAi分子を有効成分とするBCRABLキメラ遺伝子発現抑制剤が挙げられる。ここでいうBCRABLキメラ遺伝子とは、後天的に発生する優性変異遺伝子で、慢性骨髄性白血病又は急性リンパ性白血病の原因遺伝子とみなされている。フィラデルフィア染色体は、慢性骨髄性白血病の90以上、及び急性リンパ性白血病の約20の症例で見出され、9番染色の一部が22番染色に転座した構造を有する腫瘍特異的な染色体である。この転座によって、9番染色体長腕に座位するABL遺伝子と22番染色体長腕に座位するBCR遺伝子とが相互転座してBCRABLキメラ遺伝子が形成される結果、チロシンキナーゼ活性の亢進したp210又はp190タンパク質が生産される。本実施形態のBCRABLキメラ遺伝子発現抑制剤は、このようなBCRABLキメラ遺伝子の発現を特異的に抑制することができる。本実施形態のBCRABLキメラ遺伝子発現抑制剤の具体的な例としては、図12-1及び13-1のAで示すように、BCRABLキメラ遺伝子に対するBCRABLRNAi分子を有効成分とするBCRABLキメラ遺伝子発現抑制剤が挙げられる。より具体的には、例えば、センス鎖領域が、配列番号97、99、101、103、105、107、109、111又は113で示される一本鎖若しくは二本鎖のRNAi分子、又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターである。1-9.効果本実施形態の遺伝子発現抑制剤によれば、有効成分のRNAi分子は、非標的遺伝子の発現に対しては、ほとんど影響を及ぼすことなく、標的遺伝子の発現を選択的、かつ効率的に抑制することができる。本実施形態の抑制剤によれば、細胞内に導入する際に、RNAi分子を有効成分とする場合にはそのRNAi分子がそのままで、また発現ベクターを有効成分とする場合にはその発現ベクターに含まれるDNAにコードされたRNAi分子が発現した後に、標的とする優性変異遺伝子に作用して、RNAiサイレンシング機構によってその発現を抑制することができる。したがって、抑制剤がRNAi分子を含む場合には、投与した細胞等に比較的短時間でそのRNAiによる抑制効果を付与することができる。一方、抑制剤が発現ベクターを含む場合には、投与後の細胞内で発現ベクターが維持されている限り前記効果を継続的に付与し続けることができる。したがって、これらを併用することで、効果的に優性変異遺伝子の発現を抑制することができる。本実施形態の抑制剤を用いれば、後述する医薬組成物に加えることで、様々な疾患を治療又は軽減することができる。2.医薬組成物本発明の第2の実施形態は、医薬組成物である。2-1.構成本発明の医薬組成物は、有効成分として前記実施形態1の優性変異遺伝子発現抑制剤を含有する。優性変異遺伝子発現抑制剤は、標的とする優性変異遺伝子に対するRNAi分子又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを、単独で含んでいても良いし、同一遺伝子を標的とする一以上の異なるRNAi分子及び/又は一以上の異なるRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含んでいてもよい。例えば、本実施形態の医薬組成物の有効成分が変異型EGFR遺伝子発現抑制剤であって、その抑制剤が二以上の異なるEGFRRNAi分子を含む場合には、前記delL747S変異遺伝子を標的とするEGFRRNAi分子例えば、センス鎖領域が配列番号29、31、33、35、37、39、41、43、45、47又は49で示される塩基配列を含む、delA750P変異遺伝子を標的とするEGFRRNAi分子例えば、センス鎖領域が配列番号53、55、59、61、63、65又は67で示される塩基配列を含む及びdelA750P変異遺伝子を標的とするEGFRRNAi分子例えば、センス鎖領域が配列番号、129、131、133、135、137、139、141、143又は145で示される塩基配列を含むからなる群より選択される二以上のRNAi分子を含むことができる。また、変異型EGFR遺伝子発現抑制剤がEGFRRNAi分子とEGFRRNAi分子発現ベクター例えば、そのEGFRRNAi分子及び/又は異なるEGFRRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結したものを含むこともできる。さらに、実施形態の医薬組成物は、製薬上許容可能な範囲内で、かつ前記実施形態1の優性変異遺伝子発現抑制剤中のRNAi分子及び/又は発現ベクターを失活させない範囲において他の有効成分を包含することのできる、いわゆる複合製剤であってもよい。ここでいう他の有効成分は、前記実施形態1の優性変異遺伝子発現抑制剤と同一の遺伝子を標的とするが、前記実施形態1の有効成分とは異なる構成を有するRNAi分子及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含む発現抑制剤とすることができる。一例として、変異型EGFR遺伝子を標的遺伝子とする場合、前記実施形態1に記載の構成を有するEGFRRNAi分子及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含む優性変異遺伝子発現抑制剤に加えて、例えば、センス鎖領域が、配列番号83又は85で示されるRNAi分子、及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含む優性アレル発現抑制剤が挙げられる。この他、前記の優性アレル発現抑制剤とは異なる優性変異遺伝子発現抑制剤であって、後述の実施例4で説明するセンス鎖領域が配列番号89で示されるRNAi分子及び/又はそのRNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを有効成分として含む抑制剤を含有することもできる。このような、同一遺伝子の異なる変異部位を標的として、それぞれの変異に基づく遺伝子の発現を抑制する抑制剤を有効成分とする複合製剤は、標的遺伝子の変異部位が明らかでない場合に有用である。前記抑制剤の有効成分であるRNAi分子は、標的変異遺伝子に対する特異性が高いことから、混合しても他の遺伝子の発現を抑制するような副作用やRNAi分子及び/又は発現ベクターを失活させる可能性がほとんどないという利点を有する。また、他の有効成分は、前記実施形態1の優性変異遺伝子発現抑制剤と異なる薬理作用を有する薬剤であってもよい。例えば、抗生物質等が挙げられる。本発明の医薬組成物は、有効成分であるRNAi分子及び/又は発現ベクターの媒体を含む。媒体には、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアレルアルコール、ポリオキシ化イソステアレルアルコール及びポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類のような溶媒が挙げられる。このような媒体は、殺菌されていることが望ましく、必要に応じて血液と等張に調整されていることが好ましい。本発明の医薬組成物において、医薬組成物中の有効成分であるRNAi分子及び/又は発現ベクターの含有量は、治療対象となる疾患の原因遺伝子の種類、その遺伝子の発症作用機序、RNAi分子の作用効果及び安定性、発現ベクターの発現量、医薬組成物の剤形、使用する担体の種類、及び投与方法、投与する被検体の状態等の様々な条件によって異なる。これらは、当該分野の公知技術に基づいて適宜選択すればよい。本発明のRNAi分子又は発現ベクターの含有量の具体例は、他の医薬の併用を必要としないヒト成人男子体重60kgに対して注射液によって投与する場合、注射液一投与単位あたり約0.01~約20、好ましくは約01~約10で含まれていればよい。具体的には、例えば、1回1mLの注射剤中にはsiRNAが通常1μg~200μg含まれていればよい。また、本発明の医薬組成物の薬理効果を得る上で、本発明の核酸の大量投与が必要な場合、被検体に対する負担軽減のために数回に分割して投与することもできる。本発明の医薬組成物は、必要に応じてさらに製薬上許容可能な担体を含むことができる。製薬上許容可能な担体とは、製剤技術分野において通常使用する添加剤をいう。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、乳化剤、流動添加調節剤、滑沢剤等が挙げられる。賦形剤としては、単糖、二糖類、シクロデキストリン及び多糖類のような糖より具体的には、限定はしないが、グルコース、スクロース、ラクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン及びセルロースを含む、金属塩例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム若しくはリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、クエン酸、酒石酸、グリシン、低、中、高分子量のポリエチレングリコールPEG、プルロニック、カオリン、ケイ酸、あるいはそれらの組み合わせが例として挙げられる。結合剤としては、トウモロコシ、コムギ、コメ、若しくはジャガイモのデンプンを用いたデンプン糊、単シロップ、グルコース液、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック及び/又はポリビニルピロリドン等が例として挙げられる。崩壊剤としては、前記デンプンや、乳糖、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、アルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド又はそれらの塩が例として挙げられる。充填剤としては、前記糖及び/又はリン酸カルシウム例えば、リン酸三カルシウム、若しくはリン酸水素カルシウムが例として挙げられる。乳化剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルが例として挙げられる。流動添加調節剤及び滑沢剤としては、ケイ酸塩、タルク、ステアリン酸塩又はポリエチレングリコールが例として挙げられる。このような担体は、主として前記剤形形成を容易にし、また剤形及び薬剤効果を維持する他、優性変異遺伝子発現抑制剤の有効成分であるRNAi分子が生体内の核酸分解酵素による分解を受け難くするために用いられるものであり、必要に応じて適宜使用すればよい。上記の添加剤の他、必要であれば矯味矯臭剤、可溶化剤、懸濁剤、希釈剤、界面活性剤、安定剤、吸収促進剤、増量剤、付湿剤、保湿剤、吸着剤、崩壊抑制剤、コーティング剤、着色剤、保存剤、抗酸化剤、香料、風味剤、甘味剤、緩衝剤等を含むこともできる。本発明の医薬組成物は、前記RNAi分子が有する薬理効果を失わない範囲において、他の薬剤を含有することもできる。例えば、注射剤の場合であれば、抗生物質を所定量含有していても良い。本実施形態の医薬組成物の剤形は、抑制剤中の有効成分であるRNAi分子又は発現ベクター、さらには他の付加的な有効成分を不活化させない形態であれば特に限定しない。RNAは、一般に不安定であることから、RNAi分子を投与する場合には生体内で分解され難い剤形が好ましい。例えば、液体、固体又は半固体のいずれであってもよい。具体的な剤形としては、例えば、注射剤、懸濁剤、乳剤、点眼剤、点鼻剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、シップ剤及び座剤等の非経口剤形又は液剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、舌下剤、トローチ剤等の経口剤形が挙げられる。RNAi分子又は発現ベクターを有効成分とする抑制剤を含む本実施形態の医薬組成物の場合、剤形は注射剤であることが好ましい。また、本実施形態の医薬組成物又は前記実施形態1の優性変異遺伝子発現抑制剤をナノ粒子、リポソーム例えば、膜透過ペプチド結合リポソーム、SNALPsを含む、コレステロール結合体の形態に調製してもよい。CastanottoDRossiJJ,Nature,2009,457426-433に記載のRNAi伝達システムを利用することもできる。2-2.投与方法本実施形態の医薬組成物は、目的とする疾患の治療のために製薬上有効な量を生体に投与することができる。投与する対象となる生体は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。本明細書において製薬上有効な量とは、本発明の医薬組成物に含まれる抑制剤の有効成分であるRNAi分子及び/又は発現ベクターが、対象とする疾患を治療する又は症状を軽減する上で必要な用量具体的には疾患原因である優性変異遺伝子の形質発現を抑制することができる用量であって、かつ投与する生体に対して有害な副作用例えば、野生型遺伝子等の発現抑制等がほとんどないか又は全くない用量をいう。その具体的な量は、標的とする遺伝子の種類、優性変異遺伝子の形質発現効果、使用する剤形、被検体ヒトの場合には被験者の情報及び投与経路によって異なる。ヒトに投与する場合には、製薬上有効な量の範囲及び好適な投与経路は、一般に細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータに基づいて策定される。最終的な投与量は、個々の被験者に応じて医師の判断により決定され、調整される。その際に、勘案される被験者の情報には、病気の進行度若しくは重症度、全身の健康状態、年齢、体重、性別、食生活、薬剤感受性及び治療に対する耐性等が含まれる。本発明のRNAi分子は、全身投与又は局所的投与のいずれであってもよい。疾患の種類、発症箇所又は進行度等に応じて適宜選択することができる。発症箇所が局部的な疾患であれば、注射などにより発症箇所及びその周辺に直接投与する局所的投与が好ましい。治療すべき箇所組織又は器官に本発明のRNAi分子を十分量投与することができ、また他の組織に影響を及ぼしにくいからである。一方、転移性癌のように治療箇所を特定できない場合や発症が全身性の疾患の場合には、限定はしないが、静脈注射等による全身投与が好ましい。血流を介して本発明のRNAi分子を全身に行き渡らせることで、診断で発見できない病変部にも投与が可能となるからである。本発明のRNAi分子は、含有される有効成分が失活しないあらゆる適当な方法で投与することができる。例えば、非経口例えば、注射、エアロゾル、塗布、点眼、点鼻又は経口のいずれであってもよい。好ましくは、注射である。注射による投与の場合、注入部位は、特に限定しない。標的分子に対して本発明のRNAi分子又は発現ベクターから生産されるRNAi分子がその機能を発揮し、医薬組成物の目的を達し得ればいずれの部位であってもよい。例えば、静脈内、動脈内、肝臓内、筋肉内、関節内、骨髄内、髄腔内、心室内、経皮、皮下、皮内、腹腔内、鼻腔内、腸内又は舌下等が挙げられる。好ましくは、静脈内注射又は動脈内注射等の血管内への注射である。前述のように血流を介して本発明の医薬組成物を全身に行き渡らせることが可能であり、また侵襲性も比較的低いからである。例えば、前述のDavisらの標的ナノ粒子伝達システム等を用いて、血管内注射によりRNAi分子を全身に投与してもよい。2-3.用法本発明の医薬組成物は、疾患の治療用として使用される。例えば、常染色体優性遺伝疾患のような優性変異遺伝子の発現を原因とする疾患において適用することで、その変異遺伝子の発現を選択的に抑制し、同時に正常な機能を有する遺伝子タンパク質をコードする野生型遺伝子の形質を顕在化できることから、従来その治療が困難であった遺伝病や癌等の治療の他、動植物の品種改良等に利用することができる。したがって、本実施形態の医薬組成物の対象となる疾患は、抑制剤に含まれるRNAi分子又は発現ベクターから発現されるRNAi分子が、標的とする優性変異遺伝子の優性形質に基づく疾患である。このような疾患の具体例としては、例えば、後天的に特定の細胞内のゲノムDNA中に生じた突然変異による疾患や常染色体優性変異疾患を含む。これらの疾患の具体的な例については、前述の通りである。したがって、本実施形態の医薬組成物は、治療対象となる疾患に応じて、その原因遺伝子である優性変異遺伝子に対するRNAi分子又はそれをコードするDNAを含む発現ベクターを有効成分として用いることで、様々な疾患に対して適用できる。<実施例1:EGFR遺伝子に対するsiRNAのASPRNAi効果の検討>変異型EGFR上皮成長因子受容体遺伝子の発現を特異的に抑制するsiRNAEGFRsiRNAを設計し、変異遺伝子癌原因遺伝子に対する発現抑制効果、すなわちASPRNAi効果について検証した。機能獲得型の変異型EGFR遺伝子は、非小細胞肺癌nonsmallcelllungcancer;NSCLCの原因遺伝子である。それ故、本発明のEGFRsiRNAがそのような機能獲得型の変異型EGFR遺伝子の発現のみを特異的に抑制するASPRNAi効果を有していれば、非小細胞肺癌に対する効果的な治療剤となり得る。1変異型EGFR遺伝子の種類非小細胞肺癌患者では、EGFR遺伝子アクセッションNoNM005228内に疾患と関連する様々な変異機能獲得型変異が見つかっている。例えば、図8-1Aで示すような2235番目から2249番目開始コドンのAを1番目とする。以下、同じの塩基配列が欠失したdelL747S変異前記遺伝子の欠失変異に伴い、747番目のロイシンから751番目のトレオニンが欠失し、また747番目のロイシンがセリンに置換された変異タンパク質を生じる、図10-1Aで示すような2238番目から2248番目の塩基配列が欠失し、その欠失部位に新たに2塩基が挿入されたdelA750P変異前記遺伝子の欠失/挿入変異に伴い、747番目のロイシンから749番目までのグルタミン酸が欠失し、750番目のアラニンがプロリンに置換された変異タンパク質を生じる、さらに図11-1Aで示すような開始コドンのAから2238番目に相当する塩基、すなわちE746をコードするコドンGAGの三番目の塩基がGPaoetal2005PloSMedicineVol2Issue3e73ではなくAPaezetal2004、Sciencevol30414971500であるdelA750PA変異等がある。そして、その他、点突然変異も挙げられる。そこで、実施形態1に記載のRNAi分子の設計方法に準じて設計し、調製したEGFRsiRNAが、これらの変異遺伝子の発現を特異的に抑制することができるか否かについて検証した。2EGFRsiRNAの設計と調製上記delL747S変異及びdelA750P変異については、その変異遺伝子産物変異mRNA上で、それぞれ図8-1A、9-1A10-1A及び111Aにおいて矢頭で示した位置に相当する箇所が本明細書に記載の不連続接合点に相当する。すなわち、delL747S変異遺伝子の転写産物では不連続接合点がそれぞれ一箇所、またdelA750P変異遺伝子の転写産物では二箇所存在することとなる。そこで、この不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基とした基準塩基設定工程。delA750P変異遺伝子の転写産物は、2つの不連続接合点を有し、かつそれらが僅か1塩基L747E749A750Pの場合又は2塩基L747E749A750Pの場合を挟んで近接している。それ故、ここでは、形式的に3’側に位置する不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基とした。次に、第2基準塩基に対応する塩基から3’末端までの塩基数を一つずつずらして、RNAiセンス鎖領域の3’末端塩基を設定した3’末端塩基設定工程。続いて、各変異遺伝子において、その転写産物の第1及び第2基準塩基を含む連続する19塩基を含む塩基配列をRNAiセンス鎖領域として設定したRNAiセンス鎖領域設定工程。また、設定されたRNAiセンス鎖領域の塩基配列に相補的な塩基配列を含む塩基配列をRNAiアンチセンス鎖領域としたRNAiアンチセンス鎖領域設定工程。本実施例で設計し、使用したEGFRsiRNAの具体的な塩基配列を表1~4に示す。表1にはdel変異遺伝子に対して、表2にはdelL747S変異遺伝子に対して、表3にはdelA750P変異遺伝子、そして表4にはdelA750P変異遺伝子に対して、それぞれ設計したsiRNAのセンス鎖領域ss及びアンチセンス鎖領域asの塩基配列を示している。各表で示す塩基配列は、記載便宜上、センス鎖領域及びアンチセンス鎖領域の3’末端におけるUUからなる3’末端付加塩基を除いている。また、表中の配列番号は、配列表の番号に対応する。各表のEGFRsiRNA名については、例えば、表1のsi746503D19は、del変異の第2基準塩基を起点として3’末端までの塩基数が3つであり、RNAiセンス鎖領域が19塩基からなるsiRNAであること表している。すなわち、si746503D19のsi74650において、siはsiRNAを、74650はdel変異の746~750を、及び3D19において、Dは欠失変異であることを、3は第2基準塩基を起点として3’末端までの塩基数が3つであることを、そして、19はRNAiセンス鎖領域が19塩基からなることを、それぞれ表す。ただし、表4に示したdelA750P変異遺伝子に対するsiRNA名については、表3に示したdelA750P変異遺伝子に対するsiRNAと区別するために、上記基準においてsi747493D19に対してはsi747493D19のようにを加えて、delA750P変異遺伝子に対するsiRNAと区別するようにした。また、各表のセンス鎖領域ssにおける^は、不連続接合点を示し、また、アンチセンス鎖領域asにおける^は、センス鎖領域内の不連続接合点に対応する位置を示す。各表のセンス鎖領域ssにおいて、下線を付した塩基は、第2基準塩基を示している。また、delA750P変異における挿入塩基2塩基を太字で示している。各siRNAの合成は、シグマアルドリッチ社に委託した。合成されたsiRNAは、センス鎖領域及びアンチセンス鎖領域のアニーリング処理が施されており、それを直接実験に使用した。3レポーター遺伝子発現プラスミドの構築前記1で調製したEGFRsiRNAのRNAi効果の評価の選定のために、ホタルルシフェラーゼPhotinusluciferase遺伝子を発現するpGL3TKOhnishiYetal2006JournalofRNAiandGeneSilencingVol2154160と及びウミシイタケルシフェラーゼRenillaluciferase遺伝子を発現するphRLTKプラスミドPromega社を用いて、siRNAの標的となる優性変異遺伝子と非標的の野生型遺伝子のレポーター遺伝子発現プラスミドの構築を行った。変異部位を含む合成オリゴDNAの設計、レポーター遺伝子発現プラスミドへの挿入、選定方法については、OhnishiYetal2008PloSOneVol3Issue5e2248に従った。具体的には、非小細胞肺癌の病因となるEGFR遺伝子のdel、delL747S、又はdelA750Pの各遺伝子の欠失又は欠失挿入変異部位をそれぞれ含むオリゴDNAのセンス鎖領域及びアンチセンス鎖領域をそれぞれ合成したシグマアルドリッチ社に委託。なお、DNA合成の際には、表1~4における各センス鎖領域及びアンチセンス鎖領域のUをTチミンに変換した。変異を持たない野生型遺伝子についても同様に、オリゴDNA合成した。それぞれの具体的な塩基配列を表5及び6に示す。これらのセンス鎖領域及びアンチセンス鎖領域は、EGFR遺伝子断片のセンス鎖領域及びアンチセンス鎖領域の両端に制限酵素切断部位を構成するリンカー配列を含んでいる。表中、リンカー配列を下線で示し、EGFR遺伝子における不連続接合点を^で、各表のセンス鎖領域ssにおける第2基準塩基を黒白反転文字で、そして表5においてdelA750P変異遺伝子における挿入塩基2塩基と、表6においてdelA750P変異遺伝子における挿入塩基1塩基を太字で示している。なお、EGFR及びEGFRは、EGFRの点突然変異用合成オリゴDNAであり、小文字表記した塩基が点突然変異部位を示す。次に、合成した各鎖オリゴDNAのアニーリング処理を行った。具体的には、最終容量10μLとなるように、センス鎖領域及びアンチセンス鎖領域の一本鎖オリゴDNA最終濃度:それぞれ1μM、10×アニーリングバッファインビトロジェン社、最終濃度:1×及び滅菌水を混合し、80°Cで5分間熱処理をした後、室温に30分間放置し、二本鎖を形成させた。続いて、二本鎖オリゴDNAを制限酵素処理した前記2種のプラスミドに挿入した。具体的には、pGL3TKプラスミドとphRLTKプラスミドを制限酵素XbaI及びNotIで処理した後、正常型アレルはpGL3-TKプラスミドにおける、また優性変異遺伝子は、phRLTKプラスミドにおける、各レポーター遺伝子の3’非翻訳領域3’UTR内に挿入して、野生型EGFRレポーター遺伝子発現プラスミド及び優性変異型EGFRレポーター遺伝子発現プラスミドを構築した。また、正常型及び優性変異遺伝子に対してレポーター遺伝子を入れ替えたレポーター遺伝子発現プラスミドも同様に構築した。4細胞培養ヒト由来株化細胞であるHeLa細胞を10ウシ胎仔血清FBS;Invitrogen社及び抗生物質100ユニットmLペニシリン、100μgmLストレプトマイシン;Wako社含有のDMEM培養液Wako社を用いて、5CO2下で37°Cにて培養した。5トランスフェクション及びレポーターアッセイ前記レポーター遺伝子発現プラスミドを用いたレポーターアッセイによって様々なEGFRsiRNAのRNAi効果及びRNAi誘導に好適なRNAi分子の構造的一般法則性について検討した。遺伝子導入の前日に、HeLa細胞をトリプシン消化により分散させた後、細胞密度1×105cellscm2となるように調整して96ウェル培養プレートに播種し、前記HeLa細胞に抗生物質不含のDMEM培養液で培養を行った。24時間後、3種類のプラスミド、すなわち、a野生型EGFRレポーター遺伝子発現プラスミドであるpGL3TKバックボーンプラスミド60ngウェル、b変異型EGFR遺伝子の各レポーター遺伝子発現プラスミドであるphRLTKバックボーンプラスミド20ngウェル及びc外来性コントロールとしてRNAiによる発現抑制を受けないβガラクトシダーゼ遺伝子発現プラスミドであるpSVβガラクトシダーゼ対照用プラスミドPromega社10ngウェルを、EGFR優性変異遺伝子を標的として設計した表1~4で示す様々なEGFRsiRNA終濃度20nMと共に導入した。ネガティブコントロールとしては、終濃度20nMのRNAiを誘導しないsiRNAsiControlQIAGEN社を用いた。これらの核酸の導入には、リポフェクタミン2000Invitrogen社を用いた。トランスフェクション法は、添付されたプロトコールに従った。核酸を導入して24時間後、DualLuciferasereporterassaysystemPromega社のキットに添付されたDualLuciferasereporterassaysystem細胞溶解バッファPassivelysisbufferを用いて細胞抽出液を調製し、発現したそれぞれのレポーター遺伝子及び2種のルシフェラーゼとコントロールのβガラクトシダーゼの活性をDualLuciferasereporterassaysystemPromega社及びBetaGloassaysystemPromega社を用いてそれぞれ測定した。測定にはFusionUniversalMicroplateAnalyzerPerkinElmer社を用いた。さらに、レポーターに関して、使用した2種のルシフェラーゼ活性の違いによる測定差異の可能性を排除するため、各変異遺伝子del、delL747S、delA750P遺伝子に対して、レポーター遺伝子を入れ替えた実験も行った。6結果del変異遺伝子に対する各EGFRsiRNAの結果を図8-1Bに、delL747S変異遺伝子に対する各EGFRsiRNAの結果を図9-1Bに、そしてdelA750P、及びdelA750P変異遺伝子に対する各EGFRsiRNAの結果をそれぞれ図10-1B、及び図11-1Bに、示す。各図において、非標的の野生型EGFR遺伝子と、標的の変異型EGFR遺伝子のルシフェラーゼ活性を、それぞれのsiControlのルシフェラーゼ活性を10としたときの相対値として算出した。各サンプルのルシフェラーゼ活性は、RNAiによる発現抑制を受けない外来性コントロールであるβガラクトシダーゼの発現量で補正している。第2基準塩基を起点に下流側に向かってRNAiセンス鎖領域の3’末端塩基を一つずつずらしながら導入して、全体のRNAiセンス鎖領域の塩基長を19塩基に保持した場合、図8-1B及び図9-1Bで示すように、4~15番目の塩基をRNAiセンス鎖領域の3’末端塩基に設定したとき4D19~15D19で示されるに、コントロールsiControlの発現と比較して、変異型EGFR遺伝子の発現は強く抑制するが、野生型EGFR遺伝子の発現はあまり抑制しないか、コントロールとほとんど変わらないことが明らかとなった。すなわち、これは、ASPRNAi効果の高い有用なsiRNAであることを意味している。一方、図10-1Bでは、2~9番目の塩基をRNAiセンス鎖領域の3’末端塩基に設定したときに、コントロールsiControlの発現と比較して、変異型EGFR遺伝子の発現は強く抑制するが、野生型EGFR遺伝子の発現はあまり抑制しないか、又はコントロールとほとんど変わらないことが明らかとなった。この結果は、上記のdel変異又はdelL747S変異の結果と若干のずれがある。しかし、図10-1A、図11-1Aで示すように、delA750PG、には二箇所の不連続接合点が存在し、それぞれ2塩基と1塩基を挟んで双方が近接している。したがって、上述のように本実施例では、形式的に3’側の不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基としてsi747492D19~9D19そしてsi747493D19~11D19を調製したが、これは、5’側の不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基とみなすことも可能であり、その場合、si747494D19~11D19とsi747494D19~12D19となり、del変異又はdelL747S変異の結果と一致する。したがって、第2基準塩基を起点としてその下流の4~15番目の塩基をRNAiセンス鎖領域の3’末端塩基に設定することがASPRNAi効果の高い有用なEGFRsiRNAを設計する上で好適であることが示唆された。このように、不連続接合点を含む転写産物を標的とするRNAi分子は、不連続接合点を挟む2塩基第1及び第2基準塩基を含みさえすれば、他は任意にその配列を設定してもよいわけではなく、第1及び第2基準塩基がRNAiセンス鎖領域の所定の位置になければ、望ましいASPRNAi効果が得られないことが示された。この傾向は、多少の振れはみられるものの、後述する実施例5及び図12及び13でも示すように、同一遺伝子内の標的領域の塩基配列の差異、又は標的遺伝子の差異にかかわらず認められる現象であることが明らかとなった。<実施例2:ヒト非小細胞肺癌由来株化細胞に対するEGFRsiRNAの欠失又は欠失/挿入変異遺伝子特異的なRNAi効果>前記実施例1で、変異型EGFR、すなわち、del、delL747S、delA750Pに対して効果的な発現抑制効果を示したEGFR-siRNAについて、それらが内在性の変異型EGFRに対しても特異的な発現抑制効果ASPRNAi効果を示すか否かを検討した。本実験にはEGFRdelA750Pを有するヒト肺癌由来のPC3細胞を例として使用した。EGFR-siRNAには、実施例1においてdelA750P変異に対して、特に発現抑制効果のあったsi747493D19、及びsi747498D19を用いて内在性変異型EGFRのRNAiノックダウンを行った。[方法]1細胞培養ヒト非小細胞肺癌由来株化細胞であるPC3細胞を10ウシ胎仔血清FBS;Invitrogen社含有のEMEM培養液Wako社を用いて、5CO2下で37°Cにて培養した。2エレクトロポレーション法によるEGFRsiRNAの導入前記1で培養した細胞をトリプシン消化によって分散させた後、遠心120G、5分間によって回収し、約1×106個の細胞をEGFRsiRNA終濃度5μMを含む100μLのエレクトロポレーションバッファAmaxaCellLineNucleofectorSolutionV、Amaxa社にて懸濁した。前記エレクトロポレーション用サンプルを3つ調製し、添付されたプロトコールに従ってエレクトロポレーションプログラム:U005遺伝子導入システムNucleofectorAmaxa社によって核酸の導入1つは核酸を入れない対照実験群を行なった。導入した核酸は、si747493D19、si747498D19とRNAiを誘導しないコントロールsiRNAQIAGEN社である。前記3群の細胞を前記1の培養液を用いて、6ウェル培養プレートにて培養を行い、24時間後に回収した。3cDNA合成前記2で回収した細胞をTRIzolreagentを用いて、添付されたプロトコールに従って全RNAを回収した。その後、SuperScriptIIIReverseTranscriptase及びOligo15を用いて逆転写酵素反応によってcDNAを合成し、その後RNaseH処理を行った。前記操作は全て添付されたプロトコールに従い行った。4PCR解析前記3で得たcDNAをAmpliTaqGoldDNAPolymeraseとEGFR変異部位周辺配列を特異的に増幅するプライマーを用いてPCR解析を行った。PCRの温度時間条件は、初期変性95°C、10分後、変性、アニール、伸長反応の3段階を26回繰返す条件とした。その後、PCR増幅産物を電気泳動法7ポリアクリルアミドゲル、100mA、1時間にて解析した。使用したプライマー配列は、表7に示す。[結果]si747493D19での結果を図14に、si747498D19での結果を図15にそれぞれ示す。どちらのEGFRsiRNAも、野生型EGFR遺伝子の発現を抑制することなく、内在性変異型EGFR遺伝子の発現を特異的、かつ強力に抑制することが実証された。<実施例3:ヒト非小細胞肺癌由来株化細胞に対するEGFRsiRNAの細胞死及び細胞増殖能における影響評価>実施例2で示した、EGFRsiRNAsi747493D19、及びsi747498D19を用いた内在性変異型EGFRdelA750Pの特異的かつ効果的な発現抑制が細胞増殖や細胞死に対して影響を与え得るか否かを、全細胞数、細胞毒性、細胞増殖生存活性、細胞死アポトーシスに関して、それぞれ検討した。1細胞培養前記実施例21と同様にPC3細胞の培養を行った。2エレクトロポレーション法によるEGFRsiRNAの導入前記実施例22と同様に、エレクトロポレーションを行った。前記1の培養液を用いて、96ウェル培養プレートにて細胞培養を行い、1日、4日後に各評価実験に供した。si747493D19については、コントロールと共に、2日後、及び6日後についても、同様の評価実験に供した。1.細胞増殖能全細胞数の測定[方法]si747493D19導入後のPC3細胞における経時的な細胞数の変化細胞増殖能を調べるため、細胞内LDHLactateDehydrogena乳酸脱水素酵素量をCytoTox96RNonRadioactiveCytotoxicityAssayを用いて測定した。実験は、添付されたプロトコールに従って行った。簡潔には、前記アッセイキットに添付された細胞溶解バッファLysisSolutionを全サンプル群の培養液に加え、45分間37°Cでインキュベートすることによって全細胞に含有される全てのLDHが放出される。このLDH量を測定することで全細胞数を間接的に算出した。吸光度の測定はBenchMarkPlusを用いた。ネガティブコントロールには、siRNAを加えないサンプルsiRNAなしとRNAiを誘導しないsiRNAsiControlQIAGEN社を添加したサンプルを用いた。[結果]図16に結果を示す。この図では、全細胞数とみなす1日目のsiRNAなしのLDH量を100としたときのLDH量の相対値で示した。EGFRsiRNAsi747493D19は、siRNAなしに対しても、またsiControlに対しても有意にPC3細胞のその全細胞数を減少させた。すなわち、この結果はsi747493D19がPC3細胞の細胞増殖を抑制したことを意味する。また、同時に、構成的活性化により細胞増殖活性を促進するPC3内在性優性変異型EGFRdelA750P遺伝子に対してsi747493D19が特異的かつ効果的に、その発現を抑制したことを示している。2.細胞毒性評価[方法]si747493D19導入後のPC3細胞における細胞毒性を評価するため、細胞毒性によって細胞外に放出され、培養液中に存在するLDH量をCytoTox96NonRadioactiveCytotoxicityAssayを用いて測定した。実験操作は、添付されたプロトコールに従って行い、吸光度の測定は、BenchMarkPlusを用いた。また、使用したネガティブコントロールは、前記細胞増殖能の測定時に使用したものと同じ2つのコントロールsiRNAなし及びsiControlを用いた。[結果]図17に結果を示す。この図では、1日目のsiRNAなしの全細胞が含有するLDH量前記細胞増殖能評価実験と同様に細胞溶解バッファを添加したサンプルを100としたときの相対値で示している。si747493D19は、siRNAなしやsiControlと同等又はそれ以上に細胞毒性、又は内在性変異型EGFRの発現抑制による細胞死を誘導しないことが明らかとなった。3.細胞増殖及び生存活性評価1[方法]si747493D19導入後のPC3細胞における細胞増殖及び生存活性を評価するために、CellTiter96AQueousNonRadioactiveCellProliferationAssayを用いて、生細胞に含まれるNADHnicotinamideadeninedinucleotide;ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドによるMTS還元作用を測定した。実験操作は、添付されたプロトコールに従って行い、吸光度の測定はBenchMarkPlusを用いた。また、使用したネガティブコントロールは、前記細胞増殖能の測定時に使用したものと同じ2つのコントロールsiRNAなし及びsiControlを用いた。[結果]si747493D19の結果を図18、si747498D19の結果を図19にそれぞれ示す。この図では、細胞増殖及び生存活性細胞生存率をsiRNAなしの1日目のNADH活性を100としたときの相対値として示している。si747493D19、及びsi747498D19は、siRNAなし及びsiControlのいずれに対しても有意にその増殖率を抑制し、又は生存率を低下させた。4.細胞増殖及び生存活性評価[方法]si747493D19導入後のPC3細胞における細胞増殖及び生存活性を評価するため、CellTiterGloAssayを用いて、細胞の相対的ATP量を測定した。実験操作は添付されたプロトコールに従って行い、発光量の測定はFusionUniversalMicroplateAnalyzerPerkinElmer社を用いた。また、使用したネガティブコントロールは、前記細胞増殖能の測定時に使用したものと同じ2つのコントロールsiRNAなし及びsiControlを用いた。[結果]図20に結果を示す。細胞増殖及び生存活性細胞生存率は、siRNAなしの培養1日目の相対的ATP量を100としたときの、1日目と4日目の相対値を示している。この図が示すように、si747493D19は、培養4日目にはsiRNAなし及びsiControlのいずれに対しても有意にその増殖率を抑制し、又は生存率を低下させた。5.細胞死評価[方法]si747493D19導入後のPC3細胞おける細胞死アポトーシス評価のため、CaspaseGlo37Assayを用いてcaspase37の活性を測定した。実験操作は、添付されたプロトコールに従って行い、発光量の測定は、FusionUniversalMicroplateAnalyzerPerkinElmer社を用いた。また、使用したネガティブコントロールは、前記細胞増殖能の測定時に使用したものと同じ2つのコントロールsiRNAなし及びsiControlを用いた。[結果]図21に結果を示す。caspase37活性は、siRNAなしの培養1日目の活性を100としたときの、1日目と4日目の相対値を示している。この図が示すように、si747493D19は、培養4日目のsiRNAなし及びsiControlのいずれと比較してもcaspase37活性に有意な変化を示さなかった。これは、si747493D19による変異型EGFR特異的発現抑制がアポトーシスを誘導しないことを示している。<実施例4:ヒト非小細胞肺癌由来株化細胞に対するEGFRsiRNAの点変異遺伝子特異的RNAi効果>1EGFR遺伝子に対するEGFR-siRNAのASPRNAi効果の検討[方法]実施例1で記載したように、非小細胞肺癌患者では、EGFR遺伝子内に疾患と関連する機能獲得型変異として、点突然変異も知られているPaezGJetalScience2004304;14971500。例えば、図22Aで示すような2369番目の塩基CがTに置換したT790M変異前記遺伝子の点突然変異に伴い、790番目のトリプトファンがメチオニンにアミノ酸変化T790Mする点突然変異が挙げられる。このような点突然変異による置換変異を有する変異遺伝子は、その転写産物が不連続接合点を有さないことから、本願実施例1の優性変異遺伝子発現抑制剤の対象とはならない。しかし、野生型のEGFR遺伝子発現に影響を及ぼさず、このような点突然変異による置換変異を有する変異型EGFR遺伝子の発現を特異的に抑制することができ、かつ実施形態1の優性変異遺伝子発現抑制剤とは異なる構成を有する他のsiRNA及び/又はそのsiRNAをコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターがあれば、それを前記実施例1に記載のEGFR-siRNAと併用することで、より高い抑制効果が期待される。そこで、点突然変異型EGFR上皮成長因子受容体遺伝子の発現を特異的に抑制するsiRNAEGFRsiRNAを設計し、変異遺伝子癌原因遺伝子に対する発現抑制効果について検証した。表8にはT790M変異に対して設計したsiRNAのセンス鎖領域ss及びアンチセンス鎖領域asの塩基配列を示している。塩基配列中、太字で示した塩基が点突然変異部位に相当する。なお、各表で示す塩基配列は、センス鎖及びアンチセンス鎖の3’末端におけるUUからなる3’末端付加塩基を記載便宜上、除いている。また、表中の配列番号は、配列表の番号に対応する。各表のEGFRsiRNA名については、例えば、表8のsi7909CU18は、T790M変異の点突然変異部位を起点にセンス鎖領域の5’末端塩基までの塩基数が9塩基であること、点突然変異によって野生型EGFR遺伝子上の塩基CがUTに置換されていること、そしてセンス鎖領域及びアンチセンス鎖領域の塩基数が共に18塩基であることを示している。2レポーター遺伝子発現プラスミドの構築とレポーターアッセイ前記1で調製したEGFRsiRNAのRNAi効果の評価の選定のために、siRNAの標的となる優性変異遺伝子と非標的の野生型遺伝子のレポーター遺伝子発現プラスミドの構築、細胞培養、トランスフェクション及びレポーターアッセイを行なった。基本的な操作手順は、実施例1に記載の方法に準じた。[結果]結果を図22Bに示す。この図が示すように、si7909CU18は、siControlと比較して野生型EGFR遺伝子の発現にも比較的強い抑制効果があることからあまり好ましいsiRNAではなかったが、si79010CU18とsi79011CU18は、野生型EGFR遺伝子に対する発現抑制効果がほとんどなく、一方、変異型EGFR遺伝子に対しては効果的な抑制作用を有することが明らかとなった。したがって、si79010CU18とsi79011CU18は、好適なEGFRsiRNAであることが示された。<実施例5:BCRABLキメラ遺伝子に対するBCRABLsiRNAの転座変異遺伝子特異的RNAi効果>フィラデルフィア染色体における転座変異によって生じたBCRABLキメラ遺伝子を標的とする本実施形態1の構成を有するsiRNABCRABLsiRNAを設計し、白血病原因遺伝子であるBCRABLキメラ遺伝子に対する発現抑制効果について検証した。[方法]前述のように、BCRABLキメラ遺伝子は、フィラデルフィア染色体を有する患者で見出されるCMLやALLの原因遺伝子とみなされており、本発明のBCRABLsiRNAが機能亢進型のBCRABL遺伝子の発現のみを特異的に抑制することができれば、フィラデルフィア染色体を有する患者でCMLやALLに対する効果的な予防剤又は治療剤となり得る。1BCRABLキメラ遺伝子の種類Ph転座におけるBCR遺伝子の切断点は、MajorBCRとminorBCRの二箇所に集中していることが知られているが、慢性好中球性白血病/本態性血小板血症では、さらに下流のμBCRの関与が報告されている。それぞれp210BCRABLMBCR切断点、p190BCRABLm-BCR切断点、p230BCRABLμBCR切断点の蛋白が生じ、このうちp210BCRABLはCMLのほぼ全例及びPh陽性ALLに、p190BCRABLはPh陽性ALLの残り半数の患者に認められる。そこで、該疾患において最も高頻度にみられるMBCRを切断点とするBCR-ABLキメラ遺伝子に対して、実施形態1に記載のRNAi分子の設計方法に準じてBCRABLsiRNAを設計及び調製し、これらの転座変異遺伝子の発現を特異的に抑制することができるか否かについて検証した。2BCRABLsiRNAの設計と調製上記MBCRを切断点とするBCR-ABLキメラ遺伝子については、その変異遺伝子産物変異mRNA上で、野生型ABL遺伝子と野生型BCL遺伝子のそれぞれに対して図12-1A、及び13-1Aにおいて矢頭で示した位置に相当する箇所が本明細書に記載の不連続接合点に相当する。この不連続接合点に隣接する5’側及び3’側の塩基をそれぞれ第1及び第2基準塩基として、実施例1と同様の方法によりBCRABLsiRNAの設計し、調製した。本実施例で設計し、使用したBCR-ABLsiRNAの具体的な塩基配列を表9に示す。表9にMBCRを切断点とするBCR-ABLキメラ遺伝子に対して設計したsiRNAのセンス鎖領域ss及びアンチセンス鎖領域asの塩基配列を示している。ただし、各表で示す塩基配列は、記載便宜上、センス鎖領域及びアンチセンス鎖領域の3’末端におけるUUからなる3’末端付加塩基を除いている。また、表中の配列番号は、配列表の番号に対応する。各siRNAの合成は、シグマアルドリッチ社に委託した。合成されたsiRNAは、センス鎖領域及びアンチセンス鎖領域のアニーリング処理が施されており、それを直接実験に使用した。3レポーター遺伝子発現プラスミドの構築レポーター遺伝子発現プラスミドの構築、変異部位を含む合成オリゴDNAの設計、レポーター遺伝子発現プラスミドへの挿入、選定方法については、実施例1の3レポーター遺伝子発現プラスミドの構築に記載の方法に準じた。使用した合成オリゴDNAの具体的な塩基配列を表10に示す。4細胞培養実施例1の4細胞培養に記載の方法に準じた。5トランスフェクション及びレポーターアッセイ実施例1の5トランスフェクション及びレポーターアッセイに記載の方法に準じた。[結果]BCRABLキメラ遺伝子に対する各BCRABLsiRNAの結果を図12-1B及び図13-1Bに示す。各BCRABLsiRNAの該遺伝子に対する特異的発現抑制効果を評価するためには、BCRABLキメラ遺伝子と二つの野生型遺伝子ABL遺伝子とBCR遺伝子に対して評価しなければならない。そのため、各BCRABLsiRNAの標的遺伝子特異的発現抑制効果をBCRABLキメラ遺伝子と野生型ABL遺伝子図12-1B、そしてBCRABLキメラ遺伝子と野生型BCR遺伝子図13-1Bの組み合わせで評価した。また前記と同様に、各図において、非標的の野生型ABL又はBCR遺伝子と、標的のBCRABLキメラ遺伝子のルシフェラーゼ活性を、それぞれのsiControlのルシフェラーゼ活性を10としたときの相対値として算出した。各サンプルのルシフェラーゼ活性は、RNAiによる発現抑制を受けない外来性コントロールであるβガラクトシダーゼの発現量で補正している。第2基準塩基を起点に下流側に向かってsiRNAセンス鎖領域の3’末端塩基を一つずつずらしながら導入して、全体のRNAiセンス鎖領域の塩基長を19塩基に保持した場合、図12-1B及び図13-1Bで示すように、4~13番目の塩基をRNAiセンス鎖領域の3’末端塩基に設定したとき4D19~-13D19で示されるに、コントロールsiControlの発現と比較して、BCRABLキメラ遺伝子の発現は強く抑制するが、野生型ABL又はBCR遺伝子の発現はあまり抑制しないか、コントロールとほとんど変わらないことが明らかとなった。すなわち、これは、ASPRNAi効果の高い有用なsiRNAであることを示している。したがって、前述の実施例1と同様に、第2基準塩基を起点としてその下流の4~15番目の範囲の塩基をRNAiセンス鎖領域の3’末端塩基に設定することが、ASPRNAi効果の高い、有用なBCRABLsiRNAを設計する上で好適であることが示された。<実施例6:ヒト非小細胞肺癌由来株化細胞に対するEGFRsiRNA及び抗癌剤ゲフィチニブの細胞生存活性への影響>前記実施例1でEGFRのdelA750P変異又はdel変異に対してそれぞれ特異的な発現抑制を示したEGFR-siRNA、及び変異型EGFRを発現する非小細胞肺癌に対して有効とされる抗癌剤ゲフィチニブを用いて、それぞれの細胞増殖及び細胞生存活性に対する影響について検証した。[方法]1細胞培養解析には、EGFRのdelA750P変異及びdel変異を有するヒト非小細胞肺癌由来株化細胞であるPC3細胞及びPC9細胞、及び対照用に野生型EGFRを有するヒトHeLa細胞を用いた。PC3細胞の培養は、前記実施例2:1と、またHeLa細胞の培養は、前記実施例1:4と同様に行った。PC9細胞は、10ウシ胎仔血清FBS;Invitrogen社含有のRPMI1640培養液Wako社を用いて、5CO2下で37°Cにて培養した。2ゲフィチニブ処理培養したPC3細胞、PC9細胞及びHeLa細胞を、トリプシン消化によって分散させた後、遠心120G、5分間によって回収し、96ウェル培養プレートにて細胞培養を行った。24時間後、終濃度0、103、102、101、100及び101μMのゲフィチニブ商品名:イレッサ;アストラゼネカ社に曝露し、3日後に細胞生存活性を測定した。3エレクトロポレーション法によるPC3細胞へのEGFRsiRNAの導入前記実施例2:2と同様の方法で、EGFRsiRNAの細胞導入を行った。具体的には、前記1の培養液で培養したPC3細胞をトリプシン消化によって分散させた後、遠心120G、5分間によって回収し、約1×106個の細胞を、終濃度100、50、25、10、5、1及び0nMのEGFRsiRNA又はRNAiを誘導しないsiRNAsiControlQIAGEN社を含む100μLのエレクトロポレーションバッファAmaxaCellLineNucleofectorSolutionV、Amaxa社にて懸濁した。添付されたプロトコールに従ってエレクトロポレーションプログラム:U005遺伝子導入システムNucleofectorAmaxa社を行い、前記siRNAを細胞に導入した。実施例2:1に記載の培地で培養し、3日後に細胞生存活性を測定した。4リポフェクション法によるPC9細胞へのEGFRsiRNAの導入前記196ウェル培養プレートにて細胞培養を行った。終濃度100、50、25、10、5、1及び0nMのEGFRsiRNA及びRNAiを誘導しないsiRNAsiControlQIAGEN社を、リポフェクタミン2000Invitrogen社を用いてPC9細胞に導入した。トランスフェクション法は、添付されたプロトコールに従った。培養3日後に細胞生存活性を測定した。5細胞増殖及び生存活性の評価前記実施例3;3.細胞増殖及び生存活性評価1と同様の方法で評価した。[結果]1細胞増殖及び生存活性に対するゲフィチニブの影響ゲフィチニブによる各細胞の細胞増殖及び生存活性の結果を図23A~Cに示す。図23Aは、delA750P変異を有するPC3細胞の、図23Bは、del変異を有するPC9細胞の、図23CはHeLa細胞の結果である。各図は、それぞれ無処置の細胞における細胞生存活性を100としたときの相対値を示している。PC9細胞が102μM以上のゲフィチニブ濃度で顕著な細胞増殖抑制及び生存活性低下を示したのに対して、PC3細胞とHeLa細胞は、いずれも1μM以上で濃度依存的な細胞増殖抑制及び生存活性低下を示した。この結果から、PC9細胞が少量のゲフィチニブ投与でもその増殖を抑制できるゲフィチニブ感受性の細胞であるのに対して、PC3細胞は、HeLa細胞も影響を受ける、すなわち野生型EGFRを有する細胞でも抑制されるような高濃度のゲフィチニブを投与しなければその細胞増殖及び生存活性の抑制効果が見られないゲフィチニブ耐性細胞であることが示唆された。以上より、ゲフィチニブは、del変異のようなゲフィチニブ感受性のEGFR変異を有する非小細胞肺癌に対しては有効な抗癌剤となり得るが、delA750P変異を有し、かつゲフィチニブ耐性を獲得した非小細胞肺癌に対しては、投与個体に有害な副作用を与え得る高濃度のゲフィチニブを投与しなければ効果が得らないことが示された。実際、ゲフィチニブの有効性とEGFRの遺伝子変異には密接な関係が存在することが報告されておりPaezGJetalScience2004304;1497-1500、LynchTJetalNEnglJMed2004350;2129-2139、ゲフィチニブ感受性EGFR変異を有する患者は、ゲフィチニブの投与によって劇的な治療効果が得られるが、ゲフィチニブ耐性EGFR変異を有する患者では、ゲフィチニブの投与が間質性肺炎や急性肺障害等の副作用をもたらし得ることが知られており、本実施例の結果も、それを支持している。2細胞増殖及び生存活性に対するEGFRsiRNAの影響EGFRsiRNAによる各細胞の細胞増殖及び生存活性結果を図24A~Cに示す。図24Aは、delA750P変異を有するPC3細胞に対するEGFRsiRNAsi747493D19の、図24Bは、del変異を有するPC9細胞EGFRsiRNAsi746504D19の、図24CはHeLa細胞に対するEGFRsiRNAsi747493D19の結果である。各図は、それぞれ無処置の細胞における細胞生存活性を100としたときの相対値を示している。この図で示すように、EGFRに変異を有するPC3細胞及びPC9細胞の両者に対して、EGFRsiRNAsi746504D19及びsi747493D19の顕著な細胞増殖抑制及び生存活性の低下が観察された。一方、いずれものEGFRsiRNAも野生型EGFRを有するHeLa細胞に対しては細胞増殖及び生存活性の抑制効果を示さなかった。以上の結果から、本発明のEGFRsiRNAは、野生型EGFRの発現にはほとんど影響を及ぼさずすなわち、副作用の影響がないか、又は限りなく小さく、かつゲフィチニブ耐性、感受性のどちらのEGFR変異であっても、ゲフィチニブよりも低濃度で極めて特異性の高い細胞増殖抑制及び生存活性低下を誘導できることが立証された。<実施例7:ヒト非小細胞肺癌由来株化細胞の異種異所性移植によるモデルマウスの作製とそれに対するEGFRsiRNAの効果>細胞レベルで検証したEGFRsiRNAの効果を個体レベルで検証した。[方法]ヌードマウスの皮下にPC3細胞を移植し、マウス皮下腫瘍モデルを作出し、そのモデルマウスを用いてEGFRsiRNA投与による腫瘍成長阻害効果を検証した。1ヒト非小細胞肺癌由来PC3細胞の異種異所性移植によるモデルマウスの作出i細胞培養前記実施例2:1と同様の方法でPC3細胞を培養した。iiPC3細胞の移植培養したPC3細胞を、トリプシン消化によって分散させた後、遠心120G、5分間によって回収し、血清及び抗生物質不含の培養液RPMI1640、Wako社で再懸濁し、細胞数1×107cellsmLに調製した。この細胞懸濁液と、BDマトリゲル基底膜マトリックスベクトンディッキンソン社を等量混ぜ合わせ、細胞数5×106cellsmLに調製した。これを、免疫不全モデルのヌードマウス5週齢、BALBcAJclnunu、日本クレア株式会社の右側腹部に100μLで皮下投与した。2マウスの皮下腫瘍へのEGFRsiRNAの投与iEGFRsiRNAの調製と投与アテロコラーゲンを主成分とする核酸デリバリー媒体であるAteloGene登録商標LocalUse株式会社高研と、実施例1~3でPC3細胞に対して効果的な細胞増殖抑制効果を示したsi747493D19、又はsi747498D19との複合体を調製した。調製法は、添付されたプロトコールに従い、EGFRsiRNAsi747493D19、又はsi747498D19の終濃度は、01mgmLとした。対照実験としてRNAiを誘導しないsiRNAsiControlQIAGEN社も同様に調製し、siRNAを含まないアテロコラーゲン液も調製した。ii皮下腫瘍に対するsiRNAの投与PC3細胞を移植して1週間後6週齢に腫瘍径より腫瘍体積を算出し、約50mm3に達した腫瘍に対して、前記で調製した3つのサンプル、すなわちsiRNA不含のアテロコラーゲン溶液、siControl及びEGFRsiRNAの20μg200μL溶液を、それぞれ10mgkg体重で腫瘍に直接単回投与した。腫瘍体積は、以下の式を用いて計算した。体積=短径2×長径×05iiisiRNA投与後の経過観察siRNA等の投与3週目9週齢図25A、si747493D19;図28A、si747498D19に、前記計算式により腫瘍体積を測定し、さらに腫瘍を取り出して図25B、si747493D19;図28B、si747498D19、湿重量を計測した。[結果]EGFRsiRNAの投与による腫瘍体積の時間経過を図26si747493D19投与、図29si747498D19投与に、摘出した腫瘍の湿重量を図27si747493D19投与、図30si747498D19投与に、それぞれ示す。EGFRsiRNAsi747493D19、又はsi747498D19を投与した個体群は、アテロコラーゲン溶液のみ及びsiControlを投与した個体群と比較して、皮下腫瘍の肥大が有意に抑制されることが示された。さらに、腫瘍の湿重量もそれらと比較して有意に低下していた。以上の結果より、本発明のEGFRsiRNAは、細胞レベルのみならず、個体レベルにおいても癌細胞増殖の抑制に有効であることが確認された。本発明のEGFRsiRNAは、ゲフィチニブの投与では副作用が大きく、これまで使用できなかったゲフィチニブ耐性のEGFR変異に対しても、極めて有効に、かつ安全に癌細胞の増殖及び生存活性を抑制することができることが立証された。非小細胞肺癌患者の癌細胞が変異EGFR遺伝子を有するか否かは、LNAPNAPCRclamp法特許4216266号等の高感度検出方法によって検査することできる。患者のEGFR遺伝子がdel変異のようなゲフィチニブ感受性変異を有していた場合には、ゲフィチニブが極めて有効な治療剤となり得る。しかし、delA750Pのような変異を有していてもゲフィチニブ耐性を獲得した癌細胞の場合には、有効かつ副作用のない薬剤は、現在まで知られていない。本発明のEGFRsiRNAは、その様な有効な治療方法が確立されていなかったゲフィチニブ耐性のEGFR遺伝子変異を有する非小細胞肺癌患者に対しても、非常に効果的な抗癌剤となり得ることが示された。<実施例8:内在性野生型EGFR遺伝子発現抑制による副作用の検証>上述の実施例で立証したように、本発明のEGFRsiRNAは変異型のEGFR遺伝子のみを特異的に発現抑制するのに対して、従来のsiRNAは野生型及び変異型のEGFR遺伝子を区別せず両者を強く発現抑制する。そこで、本発明のEGFRsiRNAと従来のsiRNAをマウス個体に投与した場合の副作用の有無について検証した。[方法]ICRマウス雄、10週齢の腹腔内に各種siRNAを投与した。実験群は、siRNAを投与しないアテロコラーゲン溶液のみの群siRNAなしと、RNAiを誘導しないsiRNAsiControlQIAGEN社、変異型EGFR遺伝子を特異的に発現抑制するsi747493D19、及びマウス生体内で発現している内在性野生型EGFR遺伝子を発現抑制するsiEgfrをぞれぞれ投与した、計4群である。これらは、前記実施例7と同様の方法で調製し、マウス腹腔内に投与した。なお、本実施例で設計し、使用したsiEgfrの具体的な塩基配列を表11に示す。投与3日後、各マウスより採血を行い、採取した全血を遠心分離1200×g、10分して血漿を得た。続いて、血漿中の全ビリルビン、間接ビリルビン、直接ビリルビンの量をQuantiChromTMBilirubinAssayKitを用いて、またアルカリホスファターゼの量をラボアッセイTMALPWako社を用いて、測定した。実験操作は、各キットに添付されたプロトコールに従った。[結果]図31に結果を示す。血漿中の全ビリルビンA、直接ビリルビンB、間接ビリルビンC、及びアルカリホスファターゼDの量に関して、siRNAなし群及びsiControl投与群と比較すると、内在性野生型EGFR遺伝子を発現抑制するsiEgfr投与群では、有意な上昇が観察された。一方、本発明のEGFRsiRNA投与群では、有意な変化は観察されなかった。この血中パラメーターの有意な上昇は、siEgfrの投与によって内在性野生型EGFRの発現が抑制されたことに起因し、変化した血中パラメーターのデータから肝胆道系の障害が惹起されたことが示唆された。また、内在性野生型EGFR遺伝子が肝細胞の再生に必要であることからNatarajanetal2007ProcNatlAcadSciUSAVol1041708117086、まとめると、内在性野生型EGFR遺伝子の発現抑制は重篤な副作用をひき起こす危険性があることが示唆された。それに対して、本発明のEGFRsiRNAの投与は、血中パラメーターに全く影響せず、内在性野生型EGFR遺伝子の発現にほとんど影響を及ぼさないことが立証された。この結果は、本発明のEGFRsiRNAが、従来のEGFRsiRNAとは異なり、上記のような肝胆道系の障害等の副作用を生じる危険性がないか、又は極めて低いことを示唆している。これにより、本発明の優性変異遺伝子の発現抑制剤のRNA干渉技術の有用性が立証された。本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。"