炎症性疾患もしくは炎症関連疾患の診断もしくはモニタリング、又はそれらの治療に対する応答の方法であって、生体試料中のMCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記方法。前記決定する工程が生体試料中のN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の第1の濃度を決定する工程該生体試料中の全MCP1の第2の濃度を決定する工程及び該第1の濃度の値を該第2の濃度の値で除して、CaCdの比を決定する工程を含む、請求項1記載の方法。前記CaCdの比が、50、70、又は85である、請求項2記載の方法。前記工程が生体試料をMCP1に特異的な捕捉用抗体に接触させる工程、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な検出用抗体を適用する工程、得られた免疫複合体を検出する工程、及び捕捉されたN末端ピログルタミン酸修飾MCP1複合体を定量する工程を含む、請求項2記載の方法。N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な前記検出用抗体が3481D43482C93324B8及び3324F8からなる群から選択されるハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体を含む、請求項4記載の方法。N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な前記検出用抗体が、3482C9から選択されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体を含む、請求項5記載の方法。前記工程が生体試料をMCP1に特異的な捕捉用抗体に接触させる工程、MCP1に特異的な検出用抗体を適用する工程、得られた免疫複合体を検出する工程、及び捕捉されたMCP1複合体を定量する工程を含む、請求項2記載の方法。MCP1に特異的な前記捕捉用抗体がポリクローナル抗血清ヤギ抗hMCP1AF抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab18072抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab9669抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab18072ヤギMCP1抗体sc1304ポリクローナル抗血清ウサギ抗mJE抗mMCP1ウサギポリクローナル抗体ab9899抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab7202及びラットモノクローナルMCP1抗体sc74215を含む、請求項7記載の方法。MCP1に特異的な前記捕捉用抗体が、ポリクローナル抗血清ヤギ抗hMCP1AFを含む、請求項8記載の方法。MCP1に特異的な前記検出用抗体がマウス抗hMCP1抗MCP1マウスモノクローナル抗体ab17715マウスモノクローナルMCP1抗体sc32819抗マウスMCP1ハムスターモノクローナルMCP1抗体ab21397ラットモノクローナルMCP1抗体ab8101及びラットモノクローナルMCP1抗体sc74215を含む、請求項7記載の方法。前記複合体の前記検出工程が、特に各検出用抗体と反応する二次抗体を使用して行われる、請求項4~10のいずれか1項記載の方法。前記二次抗体が、抗マウス抗体又は抗ウサギ抗体である、請求項11記載の方法。前記二次抗体が抗マウス抗体である、請求項12記載の方法。前記二次抗体が標識されている、請求項11~13のいずれか1項記載の方法。前記二次抗体が、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識されている、請求項14記載の方法。前記検出された免疫複合体が定量される、請求項4~15のいずれか1項記載の方法。前記捕捉された複合体がELISA、例えば、間接ELISA、サンドイッチELISA、競合ELISA、逆ELISA、酵素結合免疫吸着スポットアッセイフローサイトメトリーMultiplexAssaySystems免疫組織化学免疫沈降及びウエスタンブロット分析からなる群から選択される定量手段によって定量される、請求項4~16のいずれか1項記載の方法。前記捕捉された複合体が、定量手段としてサンドイッチELISAによって定量される、請求項17記載の方法。前記生体試料が、血液、血清、尿、脳脊髄液、血漿、リンパ液、唾液、汗、胸膜液、滑液、涙液、胆汁、及び膵臓分泌液からなる群から選択される、請求項1~18のいずれか1項記載の使用又は方法。前記生体試料が血清である、請求項19記載の方法。生体試料中のグルタミニルシクラーゼ阻害剤の有効性、並びにQC阻害剤の適用による治療におけるグルタミニルシクラーゼ阻害剤の代理マーカーとしての有効性を決定する方法。生体試料中のMCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する方法であって生体試料中のN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の第1の濃度を決定する工程該生体試料中の全MCP1の第2の濃度を決定する工程及び該第1の濃度の値を該第2の濃度の値で除して、CaCdの比を決定する工程を含む、前記方法。グルタミニルシクラーゼ阻害剤をスクリーニングする方法であってMCP1及びグルタミニルシクラーゼを含む対照試料をインキュベートして、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程MCP1及びグルタミニルシクラーゼを含む混合物並びにグルタミニルシクラーゼ阻害剤と共に対照試料をインキュベートして、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含み該工程に対する該工程におけるN末端ピログルタミン酸修飾MCP1全MCP1の比の低下が、グルタミニルシクラーゼの阻害を示す、前記方法。グルタミニルシクラーゼ阻害剤の有効性を測定する方法であって、MCP1及びグルタミニルシクラーゼを含む混合物と共にグルタミニルシクラーゼ阻害剤をインキュベートして、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記方法。炎症性疾患又は炎症関連疾患を診断するキットであって、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な捕捉用抗体、MCP1に特異的な捕捉用抗体、及び請求項1~20のいずれか1項記載の方法に従って該キットを使用するための取扱説明書を含む、前記キット。炎症性疾患もしくは炎症関連疾患を有する、該疾患の疑いがある、又は該疾患に罹りやすい対象における治療効果をモニタリングする方法であって、被験者由来の生体試料において、請求項1~20のいずれか1項記載の、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記方法。被験者から2回以上にわたって採取された生体試料において、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、請求項1~20又は26のいずれか1項記載の診断又はモニタリング方法。2回以上にわたって採取された前記生体試料において、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を比較する工程を含む、請求項27記載の診断又はモニタリング方法。前記炎症性疾患又は前記炎症関連疾患が、神経変性疾患、慢性及び急性炎症、線維症、癌、代謝病、他の炎症性疾患、又は高血圧症及び肥満に関連した病状から選択される、請求項1~28のいずれか1項記載の使用、方法、又はキット。アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、喘息、遅延型過敏反応、膵炎、アルツハイマー病、肺線維症、腎線維症、妊娠中毒症、移植片拒絶反応、神経因性疼痛、糖尿病性ネフロパシー、大腸炎、脳卒中、AIDS、及び腫瘍の検出並びに診断のための請求項29記載の使用、方法、又はキット。アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、再狭窄、及び膵炎の検出並びに診断のための請求項29又は30記載の使用、方法、又はキット。アルツハイマー病又は関節リウマチの検出及び診断のための請求項29~31のいずれか1項記載の使用、方法、又はキット。本発明の第1の態様に従って、炎症性疾患又は炎症関連疾患を診断又はモニタリングする方法であって、生体試料中のMCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記方法を提供する。本発明の第2の態様に従って、生体試料中のグルタミニルシクラーゼ阻害剤の有効性、並びにグルタミニルシクラーゼ阻害剤の適用による治療におけるQC阻害剤の代理マーカーとしての有効性を決定する方法を提供する。本発明の第3の態様に従って、生体試料中のMCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する方法であって生体試料中のN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の第1の濃度を決定する工程上記生体試料中の全MCP1の第2の濃度を決定する工程及び該第1の濃度の値を該第2の濃度の値で除して、CaCdの比を決定する工程を含む、前記方法を提供する。本願で意味する検出用抗体は、MCP1又はN末端ピログルタミン酸修飾MCP1ペプチドに結合する抗体を包含するものとする。好ましくは、検出用抗体は、MCP1又はN末端ピログルタミン酸修飾MCP1ペプチドに高親和性で結合する。本発明の文脈では、高親和性は、107M以下のKD値、例えば、108M以下のKD値、さらに具体的には109M~1012MのKD値の親和性を意味する。用語抗体は、最も広い意味で使用され、具体的には、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つの無傷の抗体から形成された多重特異性抗体、及び望ましい生物活性を示すのであれば抗体断片も包含する。抗体は、例えば、IgM、IgG、IgD、IgA、又はIgEであり得る。しかしながら、好ましくは、抗体は、IgM抗体ではない。望ましい生物活性は、MCP1又はN末端ピログルタミン酸修飾MCP1ペプチドに結合することである。抗体断片は、無傷の抗体の一部、一般的には無傷の抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体断片の例として、Fab、Fab、F2、及びFv断片ダイアボディ単鎖抗体分子及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。本明細書で使用される用語モノクローナル抗体は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指す、すなわちその集団を構成している個々の抗体は、極僅かに存在することがある自然発生し得る突然変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は、単一抗原性部位に対して高度に特異的である。さらに、典型的には様々な抗原決定基に対する様々な抗体を含むポリクローナル抗体標本とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の抗原決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンが混入していないハイブリドーマ培養により合成されるという点で、多くの場合、有利であり得る。モノクローナルは、抗体の実質的に均質な集団から得られるという抗体の特徴を示すものであり、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈するべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Khlerらの論文、Nature256495で最初に説明されたハイブリドーマ法により作製しても良いし、又は一般に周知の組換えDNA法により作製しても良い。モノクローナル抗体は、例えば、Clacksonらの論文、Nature352624628及びMarksらの論文、JMolBiol222581597で説明された技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離しても良い。本明細書に記載されるモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖及び又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体又は特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である一方、この鎖の残りの部分が、別の種に由来する抗体又は別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である、キメラ抗体を含み、望ましい生物活性を示すのであれば、そのような抗体の断片も含む。非ヒト抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片2、又は抗体の他の抗原結合部分配列である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域の残基が、望ましい特異性、親和性、及び能力を有する、非ヒト種、例えば、マウス、ラット、又はウサギのCDRの残基により置き換えられたヒト免疫グロブリンである。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク領域残基が、対応する非ヒト残基により置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたCDR又はフレームワーク配列にも見られない残基を含んでも良い。これらの修飾は、抗体性能をさらに純化して最適化するために行われる。概して、ヒト化抗体は、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含み、該ヒト化抗体では、全て又は実質的に全てのCDR領域は、非ヒト免疫グロブリンのCDR領域に対応し、かつ全て又は実質的に全てのFR領域は、ヒト免疫グロブリン配列のFR領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。さらなる詳細に関しては、Jonesらの論文、Nature321522525、Reichmannらの論文、Nature332323329及びPrestaの論文、CurrOpStructBiel2593596を参照されたい。ヒト化抗体は、Primatized抗体を含み、この抗体の抗原結合領域は、対象となる抗原によるマカクザルの免疫化により産生された抗体、又はラクダ化抗体に由来する。単鎖Fv又はsFv抗体断片は、抗体のVHドメイン及びVLドメインを含み、これらのドメインは、1本のポリペプチド鎖に存在する。一般に、Fvポリペプチドは、VHドメインとVLドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、該ポリペプチドリンカーにより、sFvが、抗原結合に望ましい構造を形成することができる。sFvの総説については、Pluckthunの論文、モノクローナル抗体の薬理学、第113巻、Rosenburg及びMoore編集、SpringerVerlag社、ニューヨーク、269315頁を参照されたい。用語ダイアボディは、2つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメインに結合された重鎖可変ドメインを含む。同じ鎖上の2つのドメインを対合させるには短すぎるリンカーを使用することにより、これらのドメインは、別の鎖の相補ドメインと対合せざるを得なくなり、2つの抗原結合部位を形成する。ダイアボディは、Hollingerらの論文、ProcNatlAcadSolUSA9064446448により詳細に説明されている。単離された抗体は、その天然の環境の成分から同定され、分離され、及び又は回収された抗体である。その天然の環境の汚染成分は、この抗体の診断又は治療での使用を妨げ得る物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性溶質もしくは非タンパク質性溶質を含み得る。適切な実施態様では、この抗体は、Lowry法により決定して、抗体が95重量を超えるまで、最も好ましくは99重量を超えるまで、スピニングカップシークエネーターの使用により、N末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも15の残基を得るのに十分な程度まで、又はクマーシーブルーもしくは適切な銀染色を用いて、還元又は非還元条件下で、SDSPAGEにより均質になるまで精製する。単離された抗体は、その抗体の天然環境の少なくとも1つの成分が存在しないため、組換え細胞内のinsituの抗体を含む。しかしながら、普通に単離された抗体は、少なくとも1つの精製工程により調製される。本明細書で使用される表現細胞、細胞株、及び細胞培養物は、同義的に使用され、このような呼称は全て、子孫を含む。従って、語形質転換体及び形質転換細胞は、継代数にかかわらず、初代対象細胞及び該初代対象細胞由来の培養物を含む。また、意図的な変異又は偶発的な変異のために、全ての子孫が、DNA含量が正確に同一でない場合もあることも理解されたい。最初に形質転換された細胞でスクリーニングされた同じ機能又は生物活性を有する変異子孫が含まれる。明確な指定が意図される場合、これは文脈から明らかである。本明細書で使用される用語ポリペプチド、ペプチド、及びタンパク質は、同義であり、ペプチド結合により連結されたアミノ酸で構成された生体分子を意味すると定義される。2つの配列間の相同性は、配列同一性により決定される。互いに比較されるべき2つの配列が、長さが異なる場合、配列同一性は、好ましくは、長い方の配列のヌクレオチド残基と同一である短い方の配列のヌクレオチド残基の割合に関連する。配列同一性は、コンピュータプログラム、例えば、Bestfitプログラムを使用して従来通り決定することができる。Bestfitは、2つの配列間の最も高い配列同一性を有するセグメントを見つけるために、Smith及びWatermanの論文、AdvancesinAppliedMathematics2482489の局所相同性アルゴリズムを利用する。特定の配列が本発明の参照配列と、例えば、95の同一性を有するか否かを決定するために、Bestfit又は別の配列アラインメントプログラムを使用する場合は、パラメータは、好ましくは、同一性のパーセンテージが、参照配列の全長にわたって計算されるように、かつ参照配列におけるヌクレオチドの総数の最大5の相同性ギャップが許容されるように調節される。Bestfitを使用する場合、いわゆる任意のパラメータは、好ましくは、それらの予め設定された値のままにする。所与の配列と本発明の上記の配列との間の比較で出現する偏差は、例えば、付加、欠失、置換、挿入、又は組換えにより引き起こされ得る。このような配列の比較はまた、好ましくは、プログラムfasta20u66、添付の例、並びにhttpworkbenchsdsceduも参照されたいで実行することができる。この目的のために、デフォルトパラメータ設定を使用しても良い。本明細書で使用される保存的変化は、実質的に高次構造的又は抗原的に中立である変化を指し、未変性のタンパク質と比較して、変異ポリペプチドの三次構造に最小限の変化をもたらす、又は変異ポリペプチドの抗原決定基に最小限の変化をもたらす。本発明の抗体及び抗体断片に言及する場合、保存的変化は、抗体を対象受容体に結合不能にしないアミノ酸置換を意味する。当業者であれば、高次構造的又は抗原的に中立であるという高い可能性を維持したまま、どのアミノ酸を置換できるかを予測することができるであろう。このような指針は、例えば、Berzofskyの論文、Science229932940及びBowieらの論文、Science24713061310に記載されている。高次構造及び抗原性の中立性を維持する可能性に影響を及ぼすと考えられる要因には、以下が含まれるが、これらに限定されるものではない疎水性アミノ酸の置換は、疎水性残基がタンパク質の内部に位置する可能性が高いため、抗原性に影響を与える可能性が低い物理化学的に類似したアミノ酸の置換は、置換されたアミノ酸が未変性のアミノ酸を構造的に模倣するため、高次構造に影響を与える可能性が低い並びに進化的に保存された配列の変化は、このような保存が、そのアミノ酸配列が機能的に重要であり得ることを示唆しているため、高次構造に悪影響を及ぼす可能性が高い。当業者であれば、周知のアッセイ、例えば、限定されるものではないが、ミクロ補体結合法Levineらの論文、MethEnzymol11928936を参照されたいを用いて、高次構造依存性モノクローナル抗体を使用する結合試験によりを参照されたい、タンパク質高次構造の変化を評価することができるであろう。本明細書で使用される用語ある及びそのは、1つ以上を意味すると定義され、文脈が不適切でない限りは複数を含む。本明細書で使用される用語炎症性疾患及び炎症関連疾患は、以下を含む神経変性疾患、例えば、軽度認知障害、アルツハイマー病、ダウン症における神経変性、家族性イギリス型認知症、家族性デンマーク型認知症、多発性硬化症慢性及び急性炎症、例えば、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、膵炎線維症、例えば、肺線維症、肝線維症、腎線維症癌、例えば、癌血管内皮腫増殖、胃癌代謝病、例えば、高血圧症他の炎症性疾患、例えば、神経因性疼痛、移植片拒絶反応生着不全移植片血管障害、HIV感染AIDS、妊娠中毒症、結節硬化症及び高インスリン血症及び肥満に関連した病状。本明細書で使用される用語QCは、グルタミニルシクラーゼ及びQC様酵素を含む。QC及びQC様酵素は、同一又は同様の酵素活性を有し、この活性は、QC活性としてさらに定義される。これに関連して、QC様酵素は、その分子構造がQCとは根本的に異なり得る。本明細書で使用される用語QC活性は、アンモニアの遊離下での、N末端グルタミニル残基のピログルタミン酸への分子内環化、又はN末端LホモグルタミニルもしくはLβホモグルタミニルの環状ピロホモグルタミン誘導体への分子内環化と定義される。これに関連して、スキーム1及びスキーム2を参照されたい。スキーム1QCによるグルタミンの環化スキーム2QCによるLホモグルタミンの環化本明細書で使用される用語ECは、グルタミン酸シクラーゼとしてのQC及びQC様酵素の副活性を含み、この副活性は、さらにEC活性として定義される。本明細書で使用される用語EC活性は、QCによるN末端グルタミル残基のピログルタミン酸への分子内環化として定義される。これに関連して、スキーム3を参照されたい。スキーム3QCによる非荷電グルタミルペプチドのN末端環化用語QC阻害剤及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤は、一般的には当業者に公知であり、上で一般的に定義されているような酵素阻害剤を意味し、グルタミニルシクラーゼの触媒活性又はそのグルタミルシクラーゼ活性を阻害する。QC阻害との相関を考慮して、好ましい実施態様では、本方法及び医学的使用では、QC阻害のKiが10μM以下、より好ましくは1μM以下、さらに好ましくは01μM以下又は001μM以下、最も好ましくは0001μM以下である薬剤を使用する。実際、Ki値が低めのマイクロモル、好ましくはナノモル、さらに好ましくはピコモル範囲である阻害剤が考えられる。従って、活性薬剤を、便宜上、本明細書ではQC阻害剤として記載するが、このような命名は、いかなる場合も本発明の主題を制限することを意図するものではないことを理解されたい。グルタミニルシクラーゼ阻害剤の例は、国際公開第2005075436号、特に31~41頁に示されている例1~141に記載されている。例1~141の合成は、国際公開第2005075436号の40~48頁に示されている。例1~141、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2005075436号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008055945号、特に46~155頁に示されている例1~473に記載されている。例1~473の合成は、国際公開第2008055945号の156~192頁に示されている。例1~473、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008055945号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008055947号、特に53~118頁に示されている例1~345に記載されている。例1~345の合成は、国際公開第2008055947号の119~133頁に示されている。例1~345、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008055947号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008055950号、特に57~120頁に示されている例1~212に記載されている。例1~212の合成は、国際公開第2008055950号の121~128頁に示されている。例1~212、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008055950号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008065141号、特に56~59頁に示されている例1~25に記載されている。例1~25の合成は、国際公開第2008065141号の60~67頁に示されている。例1~25、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008065141号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008110523号、特に55~59頁に示されている例1~27に記載されている。例1~27の合成は、国際公開第2008110523号の59~71頁に示されている。例1~27、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008110523号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008128981号、特に62~65頁に示されている例1~18に記載されている。例1~18の合成は、国際公開第2008128981号の65~74頁に示されている。例1~18、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008128981号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008128982号、特に61~67頁に示されている例1~44に記載されている。例1~44の合成は、国際公開第2008128982号の68~83頁に示されている。例1~44、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008128982号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008128983号、特に64~68頁に示されている例1~30に記載されている。例1~30の合成は、国際公開第2008128983号の68~80頁に示されている。例1~30、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008128983号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008128984号、特に63~69頁に示されている例1~36に記載されている。例1~36の合成は、国際公開第2008128984号の69~81頁に示されている。例1~36、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008128984号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008128985号、特に66~76頁に示されている例1~71に記載されている。例1~71の合成は、国際公開第2008128985号の76~98頁に示されている。例1~71、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008128985号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。グルタミニルシクラーゼの阻害剤のさらなる例は、国際公開第2008128986号、特に65~66頁に示されている例1~7に記載されている。例1~7の合成は、国際公開第2008128986号の66~73頁に示されている。例1~7、それらの合成、及びグルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのそれらの使用についての国際公開第2008128986号の開示は、引用により本明細書中に組み込まれている。ウエスタンブロット分析は、免疫ブロッティング又はタンパク質ブロッティングとしても知られており、不均一試料から特定のタンパク質を検出するために使用される。このプロトコルは、ニトロセルロース膜を使用してHarryTowbinらによって最初に開発された。この方法は、4つの主工程からなる、第1タンパク質試料のドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動。第2膜への電気泳動転写。転写のために、最近の研究者が、単離されたタンパク質の配列決定を可能にする、様々な膜、特にPVDFナイロン様膜を導入した。第3標的タンパク質の特異的な一次抗体及び二次抗体による標識。非特異的抗体の結合は、膜をブロッキング溶液中で、室温で1時間、又は振盪しながら4°Cで一晩インキュベートすることによって防止される。該ブロッキング溶液は、通常は、TBST中の5脱脂乳からなるが、一部の抗体は、乳の代わりにBSAを必要とする。このことは、通常は、試験用抗体の製造業者の取扱説明書に明記されている。一次抗体を一晩、又は室温で2時間インキュベートする。膜を適切な二次抗体と共に室温で1時間インキュベートする。第4標的タンパク質の検出及びイメージング。多数の化学発光試薬が販売されており、各製造業者は、様々な検出感度の試薬を販売している。これらは、典型的には、混合したら即座に膜上で1~5分間インキュベートされる2つの溶液の形態である。タンパク質シグナル及び化学発光法に応じて、1分~1時間、膜をX線フィルムに曝露する。二次抗体は、他の酵素に結合させることができるため、代替のプロトコルを使用して対応する基質により視覚化することができる。ELISAは、最も広く使用されている、高感度かつ再現可能な検体アッセイ用の定量手段である。この技術は、抗体と抗原の相互作用の高い特異性と酵素結合シグナル検出システムとを組み合わせている。間接ELISAでは、抗原を表面に固定し、続いて特定の抗体と酵素の共役複合体の染色により検出を行う。第1の工程では、検査抗原を、多数の既知の濃度で表面に固定して標準曲線を得る。同じ条件で、抗原の量が未知の試料を固定する。抗原特異的抗体が、抗原を認識する。この抗体が酵素に結合した場合、発色基質又は蛍光発生基質を使用した適切な酵素反応のシグナルは、抗原の量に相関し、標準曲線によって算出することができる。サンドイッチELISAは、抗原を2つの異なる抗体間にサンドイッチする技術である。このELISA技術が機能する原理は、以下の通りである捕捉用抗体を適切な基板に固定する。抗原を固定された抗体に結合させる。酵素に結合した二次抗体を、結合した抗原に結合させる。適切な酵素基質を用いて免疫複合体を検出する。このELISAの工程は以下の通りである非標識抗体を、その抗原の存在下でインキュベートする。次いで、これらの抗体抗原複合体を、抗原が被覆されたウェルに添加する。プレートを洗浄して、非結合抗体を除去する。一次抗体に特異的な二次抗体を添加する。この二次抗体が、酵素に結合する。基質が添加され、残った酵素が、発色又は蛍光シグナルを生じさせる。競合ELISAでは、最初の抗原濃度が高ければ高いほど、結果として生じるシグナルが弱い。競合ELISAの主な利点は、粗試料又は不純物が混じった試料を使用でき、存在し得るどの抗原にも選択的になお結合できることである。一部の競合ELISAキットは、酵素結合抗体ではなく酵素結合抗原を含む。標識抗原は、一次抗体が結合する部位について試料の抗原と競合する。試料中に抗原が多ければ多いほど、ウェルに保持される標識抗原が少なく、シグナルが弱い。この技術は、4~12の突出オジーブを備えた免疫吸着ポリスチレンロッドからなる固相を使用する。装置全体を、採取試料を含む試験管中に沈め、次の工程でのインキュベーションを、予め試薬が満たされた標準的なマクロプレートのマイクロウェルにオジーブを浸漬することによって行う。酵素結合免疫吸着スポットアッセイは、ヒト及び動物における免疫応答をモニタリングする一般的な方法である。このアッセイは、個々の活性化細胞又は応答細胞の分泌産物の視覚化を可能にする。捕捉用抗体を、PVDFが設けられたマイクロプレートに無菌状態で被覆する。プレートを、通常は、アッセイのどの抗体とも反応しない血清タンパク質でブロックする。この後、対象となる細胞を、抗原又はマイトジェンと共に、様々な密度でプレーティングし、次いで、加湿された37°CのCO2インキュベータに一定時間入れておく。活性化細胞によって分泌されるサイトカインは、高表面積PVDF膜に被覆された抗体によって局所的に捕捉される。ウェルを洗浄して細胞、デブリ、及び培地成分を除去してから、選択された検体に特異的なビオチン化ポリクローナル抗体をウェルに添加する。この抗体は、標的サイトカインの独特なエピトープと反応性であるため、捕捉されたサイトカインの検出に利用する。非結合ビオチン化抗体を除去する洗浄の後に、検出されたサイトカインを、アビジンHRP及び沈殿基質を用いて可視化する。着色最終産物は、典型的には、個々のサイトカイン産生細胞を表す。該スポットを、手動でカウントするか、又は自動リーダーを使用してマイクロウェルの画像を取り込んでスポットの数及びサイズを解析する。FluoroSpotアッセイは、ELISPOTアッセイの改良型であり、多数の蛍光抗サイトカインを使用することに基づいており、同じアッセイでの2つのサイトカインのスポットを可能にする。ELISAによる分泌サイトカインの検出とは対照的に、細胞内サイトカインの検出では、刺激の最後の2、3時間にわたって、タンパク質輸送阻害剤、例えば、モネンジン又はブレフェルジンAによりサイトカインの分泌をブロックする必要がある。研究者は、様々なタンパク質輸送阻害剤の使用及び効力をそれらに特異的なアッセイシステムで評価することが勧められている。基本的な免疫蛍光染色及びフローサイトメトリー分析のプロトコルの改良型を、単一細胞レベルにおける表面分子と細胞内抗原の同時分析に使用することができる。このプロトコルでは、細胞を最初にinvitroで活性化させ、表面抗原プロトコルと同様に表面抗原を染色し、次いでパラホルムアルデヒドで固定して細胞膜を安定化させ、かつ界面活性剤サポニンで透過化処理して抗サイトカイン抗体の細胞内染色を可能にする。細胞のinvitro刺激は、サイトカインレベルが、典型的には静止細胞では低すぎるため、通常はフローサイトメトリーによるサイトカインの検出を必要とする。適切な試薬を用いる細胞の刺激は、細胞型及び実験条件による。xMAP技術は、赤色及び赤外フルオロフォアにより内部が染色された直径56μmのポリスチレンマイクロスフィアを使用する。様々なバッチのマイクロスフィアに対して様々な量の2種類の色素を使用して、最大100種類のマクロスフィアのセットを作製することができる。各ビーズは、赤色色素と赤外色素の混合物によって決定される分光的特徴を伴い固有である。ビーズは、2種類の色素が特定の既知の比で満たされている。各マイクロスフィアは、固有の特徴を有するため、xMAP検出システムは、各マイクロスフィアがどのセットに属するかを特定することができる。従って、1つの反応体積で最大100の試験を多重化することが可能である。ルミネックスシステムは、フローサイトメトリーの原理に基づいた柔軟な分析器である。該システムでは、極少量の試料を使用して、1つのマイクロプレートのウェルで最大100の検体の多重化が可能である。1つのウェルでの最大40の異なる検体の多重解の分析が可能である。該システムは、遺伝子発現、転写因子プロファイリング、サイトカインプロファイリングなどを含むバイオアッセイを提供する。BioPlexサイトカインアッセイは、組織培養上清又は血清中のサイトカインの定量に液体懸濁液アレイを利用する。この96ウェルマイクロタイタープレート形式のアッセイを使用すると、1つのウェル内の多数のサイトカインのレベルをプロファイリングすることが可能である。BioPlexサイトカインアッセイの原理は、捕捉サンドイッチ免疫測定法に類似している。それぞれの望ましいサイトカインに対する抗体は、異なる色コードのポリスチレンビーズに共有結合する。結合されたビーズは、既知又は未知の量のサイトカインを含む試料と反応する。非結合サイトカインが除去されたら、それぞれのサイトカイン上の異なるエピトープに対するビオチン化検出用抗体を反応に添加する。この結果、それぞれのサイトカインの周りに抗体のサンドイッチが形成される。これらの複合体は、ビーズとは異なる蛍光特性を有するストレプトアビジンフィコエリトリンの添加により検出される。1つのマイクロタイターウェルでの多重化ビーズ捕捉免疫測定法の分析を可能にする専用マイクロプレートリーダーにより定量を行う。混合物中のビーズを個々に読み込むことにより、該システムは、それぞれのサイトカインを個別に検出することができる。BioPlexソフトウエアは、既知の量のサイトカインの標準混合物から得た標準曲線からサイトカインの濃度を自動的に算出する。免疫組織化学又はIHCは、組織切片の細胞に抗原を局在化させるプロセスを指す。IHCはまた、生体組織の異なる部分におけるバイオマーカー及び差次的に発現されるタンパク質の分布及び局在化を理解するために基礎研究で広く使用されている。抗体抗原相互作用の可視化は、様々な方法で達成することができる。最も一般的な例では、抗体は、発色反応を触媒できる酵素、例えば、ペルオキシダーゼに結合する。あるいは、抗体に、フルオロフォア、例えば、フルオレセイン、ローダミン、DyLightFluor、又はAlexaFluorを標識することもできる。抗体は、一次試薬又は二次試薬として分類することができる。一次抗体は、対象となる抗原に対して産生され、典型的には結合していないが、二次抗体は、一次抗体に対して産生される。従って、二次抗体は、特定の種の免疫グロブリンを認識し、ビオチン又はレポーター酵素、例えば、アルカリホスファターゼもしくは西洋ワサビペルオキシダーゼのいずれかに結合する。一部の二次抗体は、蛍光剤に結合する。この手順では、実験試料の目的及び厚さによって、対象となる組織から薄い切片を切り取るか、又は該組織がそれほど厚くなくて透過可能である場合は該組織全体を使用する。このスライスは、通常は、ミクロトームの使用によって行われ、切片がスライドガラスに載せられる。浮遊式IHCは、スライドガラスに載せられていない切片を使用し、これらの切片は、通常は、振動するミクロトームを使用して作製される。直接法は、1工程染色法であり、組織切片中の抗原と直接反応する標識抗体を必要とする。間接法は、組織抗原と反応する非標識一次抗体、及び該一次抗体と反応する標識二次抗体を必要とする。免疫沈降では、既知のタンパク質に特異的な抗体を使用して、該タンパク質を様々なタンパク質を含む溶液から単離する。これらの溶液は、植物組織又は動物組織の粗溶解物の形態である場合が多い。他の試料のタイプには、体液又は生物起源の他の試料が考えられる。本発明の第1の態様に従って、炎症性疾患又は炎症関連疾患を診断又はモニタリングする方法であって、生体試料中のMCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記方法を提供する。本発明の第2の態様に従って、生体試料中のグルタミニルシクラーゼ阻害剤の有効性、並びにグルタミニルシクラーゼ阻害剤の適用による治療におけるQC阻害剤の代理マーカーとしての有効性を決定する方法を提供する。本明細書に示されるデータは、驚くべきことに、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1MCP1の総濃度の比の低下により、腹膜に浸潤する単球の数が減少することを実証している。このような単球の動員は、いくつかの炎症性疾患の一般的な特徴である。従って、このデータは、MCP1の単球動員能をモニタリングすることによって、炎症性疾患又は炎症関連疾患のバイオマーカーとしてのMCP1N1pEMCP1の比の適用性を立証している。本明細書で言及するMCP1には、配列番号1~10のいずれかに対して50を超える配列同一性を有するMCP1ペプチドが該当する。一実施態様では、MCP1は、MCP1である。さらなる実施態様では、MCP1は、ヒトMCP1又はマウスMCP1である。なおさらなる実施態様では、MCP1は、ヒトMCP1である。言及するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1は、ProostPらの論文、JLeukocyteBiol596774に記載されているように、N末端グルタミン残基が、グルタミニルシクラーゼによってN末端ピログルタミニル残基によって修飾された、先に定義されたMCP1ペプチドを指す。一実施態様では、前記の決定する工程は、以下の工程を含む生体試料中のN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の第1の濃度を決定する工程該生体試料中の全MCP1の第2の濃度を決定する工程及び該第1の濃度の値を該第2の濃度の値で除して、CaCdの比を決定する工程。好ましくは、CaCdの比は、パーセントで表される。炎症性疾患又は炎症関連疾患の治療を診断又はモニタリングする場合、一実施態様では、CaCdの比の適切な範囲は、50、70、85である。炎症性疾患又は炎症関連疾患の治療におけるQC阻害剤の有効性を決定する場合、一実施態様では、CaCdの比の適切な範囲は、30、50、70である。哺乳動物細胞株におけるQC阻害剤のプロファイルを評価する場合、一実施態様では、CaCdの比の適切な範囲は、10、30、及び50である。本発明のさらなる態様は、MCP1N1pEバイオマーカー及びMCP1に特異的に結合できるリガンド、例えば、天然又は化学合成化合物を提供する。本発明によるリガンドは、MCP1N1pEバイオマーカー及びMCP1に特異的に結合できるペプチド、抗体もしくはその断片、又はアプタマーもしくはオリゴヌクレオチドを含み得る。一実施態様では、工程は、以下の工程を含む生体試料をMCP1に特異的な捕捉用抗体に接触させる工程、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な検出用抗体を適用する工程、得られた免疫複合体を検出する工程、及び検出されたN末端ピログルタミン酸修飾MCP1複合体を定量する工程。一実施態様では、捕捉用抗体は、MCP1に特異的に結合できるモノクローナル抗体又はその断片である。一実施態様では、検出用抗体は、MCP1N1pEバイオマーカーに特異的に結合できるモノクローナル抗体又はその断片である。さらなる実施態様では、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な検出用抗体は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている抗体を含み、このMCP1N1pE検出用抗体は、引用により本明細書中に組み込まれている。より好ましくは、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な検出用抗体は、モノクローナル抗体であり、該抗体の軽鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号33、37、及び41から選択されるヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号34、38、及び42から選択されるアミノ酸配列を有する。本発明による別の好ましい抗体は、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体であり、該抗体の重鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号35、39、及び43から選択されるヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号36、40、及び44から選択されるアミノ酸配列を有する。本発明によるさらに好ましい抗体は、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体であり、該抗体の軽鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号33のヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号34のアミノ酸配列を有し、かつ該抗体の重鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号35のヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号36のアミノ酸配列を有する。本発明による同様に好ましい抗体は、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体であり、該抗体の軽鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号37のヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号38のアミノ酸配列を有し、かつ該抗体の重鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号39のヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号40のアミノ酸配列を有する。本発明による一層好ましい抗体は、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体であり、該抗体の軽鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号41のヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号42のアミノ酸配列を有し、かつ該抗体の重鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号43のヌクレオチド配列、又は国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号44のアミノ酸配列を有する。ある特定の好ましい実施態様では、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体は、以下の群から選択されるハイブリドーマ細胞株によって産生される3481D43482C93324B8及び3324F8。特に好ましい実施態様では、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体は、3482C9から選択されるハイブリドーマ細胞株によって産生される。さらに好ましい実施態様によると、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な抗体は、ヒト化しても良いし、又はキメラ抗体もしくはヒト抗体である。さらに、上記の群から選択されるN末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な抗体は、上記の群の機能性変異体であっても良い。本発明の文脈では、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な抗体の機能性変異体は、MCP1N1pE38又はその機能性変異体に対する結合能、特に高親和性の結合能を維持した抗体である。このような機能性変異体の提供は、当分野で周知であり、上記の可能性を包含し、該可能性は、抗体及びその断片の定義で示されている。好ましい実施態様では、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な抗体は、先に定義した抗体断片である。さらに好ましい実施態様では、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な抗体は、先に定義した抗体の相補性決定領域を有する抗体である。好ましくは、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な抗体は、標識することができる可能な標識は、上記の標識、及び特に抗体の診断用途の分野の技術者に周知の全ての標識である。本発明によるさらに好ましい抗体は、任意の機能的に等価な抗体又はその機能性部分を含むN末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体であり、該抗体は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号34、38、又は42から選択される配列に対して85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、又は99同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。本発明によるなお好ましい抗体は、任意の機能的に等価な抗体又はその機能性部分を含むN末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体であり、該抗体は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号36、40、又は44から選択される配列に対して85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、又は99同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。さらに、任意の機能的に等価な抗体又はその機能性部分を含むN末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的なモノクローナル抗体であり、該抗体の軽鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号34、38、及び42から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ又は該抗体の重鎖の可変部分は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号36、40、及び44から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ該抗体は、国際特許出願PCTEP200960757に記載されている配列番号34、36、38、40、42、及び44の少なくとも1つの配列に、少なくとも1つ、少なくとも2つ、又は少なくとも3つ以上の保存的置換が導入されることにより変更され、かつ該抗体は、その十分な機能を本質的に維持している。好ましくは、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な抗体は、固相に固定されている。一実施態様では、工程は、以下の工程を含む生体試料をMCP1に特異的な捕捉用抗体に接触させる工程、MCP1に特異的な検出用抗体を適用する工程、得られた免疫複合体を検出する工程、及び捕捉されたMCP1複合体を定量する工程。一実施態様では、工程で使用される捕捉用抗体は、MCP1に特異的に結合できるモノクローナル抗体又はその断片である。さらなる実施態様では、工程で使用されるMCP1に特異的な捕捉用抗体は、以下から選択されるポリクローナル抗血清ヤギ抗hMCP1AF抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab18072抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab9669抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab18072ヤギMCP1抗体sc1304ポリクローナル抗血清ウサギ抗mJE抗mMCP1ウサギポリクローナル抗体ab9899抗MCP1ウサギポリクローナル抗体ab7202及びラットモノクローナルMCP1抗体sc74215。なおさらなる実施態様では、工程で使用されるMCP1に特異的な捕捉用抗体は、ポリクローナル抗血清ヤギ抗hMCP1AFから選択される。一実施態様では、工程で使用されるMCP1に特異的な検出用抗体は、以下を含むマウス抗hMCP1抗MCP1マウスモノクローナル抗体ab17715マウスモノクローナルMCP1抗体sc32819抗マウスMCP1ハムスターモノクローナルMCP1抗体ab21397ラットモノクローナルMCP1抗体ab8101及びラットモノクローナルMCP1抗体sc74215。一実施態様では、複合体の検出工程は、特に各検出用抗体と反応する二次抗体を使用することによって行われる。一実施態様では、二次抗体は、抗マウス抗体又は抗ウサギ抗体、例えば、抗マウス抗体である。一実施態様では、二次抗体を標識する。診断用途の場合、二次抗体は、典型的には、検出可能な部分を標識する。一般に以下のカテゴリーに分類され得る多数の標識が、利用可能である放射性同位元素、例えば、35S、14C、125I、3H、及び131I。抗体は、例えば、CurrentProtocolsinImmunology、第1巻及び第2巻、Gutigenら編集、WileyInterscience社、NewYork、NewYorkPubsに記載された技術を用いて放射性同位元素により標識することができ、かつ放射能は、シンチレーションカウンティングを用いて測定することができる。蛍光標識、例えば、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、リサミン、フィコエリトリン、及びテキサスレッドが利用可能である。これらの蛍光標識は、例えば、CurrentProtocolsinImmunologyに開示された技術を用いて抗体に結合させることができる。蛍光は、蛍光光度計を用いて定量することができる。様々な酵素基質標識が利用可能である。酵素は、一般に、様々な技術を用いて測定することができる発色基質の化学的変化を触媒する。例えば、酵素は、基質内の色の変化を触媒することができ、この変化を、分光光度計により測定することができる。あるいは、酵素は、基質の蛍光又は化学発光を変化させることができる。蛍光の変化を定量する技術は、上記されている。化学発光基質は、化学反応により電子的に励起されるようになり、次いで、測定され得る光を放出し得る、又は蛍光アクセプターにエネルギーを供与し得る。酵素標識の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、23ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、Oガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカリドオキシダーゼ、複素環オキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、及びミクロペルオキシダーゼなどが挙げられる。酵素を抗体に結合する技術は、OSullivanらの論文、酵素免疫測定法に使用される酵素抗体複合体の調製方法、MethodsinEnzym、AcademicPress社、NewYork73147166に説明されている。酵素と基質の組合せの例として、例えば、以下が挙げられる西洋ワサビペルオキシダーゼと基質としての過酸化水素であり、過酸化水素は、色素前駆体又は3355テトラメチルベンジジン塩酸塩を酸化するアルカリホスファターゼと発色基質としてのpニトロフェニルリン酸及びβDガラクトシダーゼと発色基質又は発蛍光基質4メチルウンベリフェリルβDガラクトシダーゼ。多数の他の酵素と基質の組合せも、当業者は利用可能である。検出用抗体の別の可能な標識は、短いヌクレオチド配列である。次いで、RTPCRシステムChimeraBiotechによって濃度を決定する。場合によって、標識を、検出用抗体と間接的に結合させる。当業者は、これを達成する様々な技術を認識している。例えば、該抗体を、ビオチンと結合させることができ、かつ上記の標識の3つの大きいカテゴリーのいずれかを、アビジンと結合させることができ、その逆も同様である。ビオチンがアビジンに選択的に結合するため、標識は、このように間接的に抗体に結合することができる。あるいは、標識の抗体との間接的結合を達成するために、該抗体を、小型ハプテンに結合させて、上記の異なる種類の標識の1つを、抗ハプテン抗体に結合させる。従って、標識の抗体との間接的な結合を達成することができる。本発明に使用される抗体は、任意の公知のアッセイ方法、例えば、競合結合アッセイ、直接及び間接サンドイッチアッセイ、並びに免疫沈降アッセイに利用することができる。Zolaの文献、モノクローナル抗体技術マニュアル、147158頁。競合結合アッセイは、限定された量の抗体との結合について試験試料検体と競合する、標識された標準の能力に依存する。試験試料中の標的ペプチドの量は、抗体に結合する標準の量に反比例する。結合する標準の量の決定を容易にするために、通常は、抗体を、競合の前又は後で不溶化するため、該抗体に結合した標準及び検体を、結合していない標準及び検体から好都合に分離することができる。さらなる実施態様では、二次抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識する。一実施態様では、検出された免疫複合体を定量する。一実施態様では、捕捉された複合体は、以下の群から選択される定量手段によって定量するELISA、例えば、間接ELISA、サンドイッチELISA、競合ELISA、逆ELISA、酵素結合免疫吸着スポットアッセイフローサイトメトリーマルチプレックスアッセイシステム免疫組織化学免疫沈降及びウエスタンブロット分析。さらなる実施態様では、捕捉された複合体は、定量手段としてサンドイッチELISAによって定量する。本発明に使用できるサンドイッチELISA法の適切な例は、実施例5及び11に記載される。一実施態様では、生体試料は、血液、血清、尿、脳脊髄液、血漿、リンパ液、唾液、汗、胸膜液、滑液、涙液、胆汁、及び膵臓分泌液からなる群から選択される。さらなる実施態様では、生体試料は血清である。別の好ましい実施態様によると、該試料は、リカー、脳脊髄液、または滑液試料である。生体試料は、当業者に周知の方法で患者から得ることができる。具体的には、血液試料は、対象から採取することができ、該血液試料を、従来の方法により血清と血漿に分離することができる。生体試料が採取される対象は、炎症性疾患又は炎症関連疾患に罹患していると疑われている、かつ又は炎症性疾患又は炎症関連疾患を発症するリスクがある。本発明のさらなる態様は、MCP1N1pEバイオマーカーに対する抗体に特異的に結合できる該MCP1N1pEバイオマーカー又はその構造形状模倣体を含むバイオセンサを含む。また、本明細書に記載されるリガンド又は模倣体を含むアレイも提供する。用語バイオセンサは、MCP1N1pEバイオマーカーの存在を検出できるあらゆるものを指す。本発明によるバイオセンサは、MCP1N1pEバイオマーカーに特異的に結合できる、本明細書に記載される1つ又は複数のリガンドを含み得る。このようなバイオセンサは、本発明のMCP1N1pEバイオマーカーの検出及び又は定量に有用である。本発明の第3の態様に従って、生体試料中のMCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する方法であって生体試料中のN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の第1の濃度を決定する工程該生体試料中の全MCP1の第2の濃度を決定する工程及び該第1の濃度の値を該第2の濃度の値で除して、CaCdの比を決定する工程を含む、前記方法を提供する。本発明は、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を測定する有効かつ高感度の方法を提供することを理解されたい。グルタミニルシクラーゼが、N末端ピログルタミニル残基を有するMCP1を翻訳後に修飾するという事実を考慮すると、本発明の方法は、試験薬剤のQC活性に影響を与える能力を評価するための有効なスクリーニング法としての有用性もあることが分かる。従って、本発明のさらなる態様に従って、グルタミニルシクラーゼ阻害剤をスクリーニングする方法であってMCP1及びグルタミニルシクラーゼを含む対照試料をインキュベートして、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程MCP1及びグルタミニルシクラーゼを含む混合物並びにグルタミニルシクラーゼ阻害剤と共に対照試料をインキュベートして、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含み、該工程に対する該工程におけるN末端ピログルタミン酸修飾MCP1全MCP1の比の低下が、グルタミニルシクラーゼの阻害を示す、前記方法を提供する。本発明のさらなる態様に従って、上記のクリーニング方法によって得ることができるグルタミニルシクラーゼ阻害剤を提供する。本発明のさらなる態様に従って、グルタミニルシクラーゼ阻害剤の有効性を測定する方法であって、MCP1及びグルタミニルシクラーゼを含む混合物と共にグルタミニルシクラーゼ阻害剤をインキュベートして、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記方法を提供する。本発明のこの態様は、既に同定されているQC阻害剤の有効性を評価するという利点を提供し、例えば、MCP1のN末端ピログルタミン酸修飾MCP1への変換率の低下を所与の期間にわたって評価することができる。便宜上、本発明の方法に使用される抗体は、キットとして、すなわち所定量の試薬と診断アッセイを行うための取扱説明書とを組み合わせたパッケージとして提供することができる。本発明のさらなる態様に従って、炎症性疾患又は炎症関連疾患を診断するキットであって、MCP1に特異的な捕捉用抗体、N末端ピログルタミン酸修飾MCP1に特異的な捕捉用抗体、MCP1に特異的な検出用抗体、及び上記の方法に従って該キットを使用するための任意の取扱説明書を含む、前記キットを提供する。抗体が酵素で標識されている場合、該キットは、該酵素が必要とする基質及び補助因子を含む。加えて、他の添加剤、例えば、安定剤、緩衝液などを含み得る。様々な試薬の相対量を様々に変更して、試薬の溶液を、アッセイの感度を実質的に最適化する濃度にすることができる。具体的には、これらの試薬は、溶解時に試薬溶液を適切な濃度にする賦形剤を含む、通常は凍結乾燥された乾燥粉末として提供することができる。本発明の方法はまた、炎症性疾患もしくは炎症関連疾患の所与の治療の効果をモニタリングする産業への適用性も有する。本発明のさらなる態様に従って、炎症性疾患もしくは炎症関連疾患を有する、該疾患の疑いがある、又は該疾患に罹りやすい対象における治療効果をモニタリングする方法であって、被験者由来の生体試料において、上記の、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記方法を提供する。本発明のさらなる態様に従って、上記の診断又はモニタリング方法であって、被験者から2回以上にわたって採取された生体試料において、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を決定する工程を含む、前記診断又はモニタリング方法を提供する。本発明のさらなる態様に従って、上記の診断又はモニタリング方法であって、2回以上にわたって採取された生体試料において、MCP1の総濃度に対するN末端ピログルタミン酸修飾MCP1の割合を比較する工程を含む、前記診断又はモニタリング方法を提供する。一実施態様では、炎症性疾患又は炎症関連疾患は、MCP1関連疾患、例えば、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、喘息、遅延型過敏反応、膵炎、アルツハイマー病、高インスリン血症、及び肥満であり、II型糖尿病、糖尿病性ネフロパシー、大腸炎、肺線維症、腎線維症、妊娠中毒症、移植片拒絶反応、神経因性疼痛、脳卒中、AIDS、及び腫瘍を含む。最も好ましくは、炎症性疾患又は炎症関連疾患は、アルツハイマー病であり、同様に最も好ましくは、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、再狭窄、及び膵炎、糖尿病性ネフロパシーから選択される疾患であり、特にアルツハイマー病又は関節リウマチである。本発明を、以下の実施例によってさらに説明するが、該実施例は、いかなる場合も本発明を限定すると解釈されるべきものではない本発明は、その範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析を、飛行線形時間分析計を備えたVoyagerDeProを用いて行った。該機器は、337nm窒素レーザー、電位加速源、及び14mの飛行管を備えていた。検出操作は、正イオンモードであった。サンプルを、等量のマトリックス溶液と混合した。マトリックス溶液として、1mlのアセトニトリル01TFAを含む水に20mgのシナピン酸を溶解することによって調製されたシナピン酸を使用した。少量のマトリックス検体混合物をプローブチップに移した。Glu1環化の長期試験のために、MCP1ペプチドを、100μlの01M酢酸ナトリウム緩衝液又は01Mビストリス緩衝液に溶解し、30°Cでインキュベートした。ペプチドを、015mM~05mMの濃度になるように適用し、02UのQCを加えた。異なる時点において、サンプルを分析管から取り出し、ペプチドを製造業者の推奨に従ってZipTipsを用いて抽出し、マトリックス溶液と混合し、続いて質量スペクトルを記録した。負の対照は、QCも熱不活化酵素も含んでいなかった。阻害剤の研究では、試料組成物は、添加される阻害性化合物を除き、上記のものと同様とした。、アミノペプチダーゼP、及びヒト血清中に存在するプロテアーゼによるヒトMCP1のタンパク分解N末端グルタミンで始まる組換えヒトMCP1を、25mMトリスHClpH76に溶解して10μgmlの濃度にした。該MCP1溶液を、組換えヒトQCと共に30°Cで3時間プレインキュベートしてから組換えヒトDP4と共に30°Cでインキュベートするか、又は事前のQC適用なしでDP4と共にインキュベートした。加えて、GlN1MCP1の組換えヒトQCとのインキュベーションを、10μMの1プロピル3チオ尿素塩酸塩の存在下で行った。得られたDP4分解産物を、0分後、15分後、30分後、1時間後、2時間後、及び4時間後にMaldiTOF質量分析法を用いて分析した。ピログルタミル残基の代わりにN末端グルタミニル残基を有するヒト組換えMCP1を、25mMトリスHClpH76に溶解して10μgmlの濃度にした。MCP1を、30μgmlアミノペプチダーゼPと共に30°Cでインキュベートした。Gln1MCP1を、pGlu修飾なしで使用するか、又はpGluを生成するために組換えヒトQCと共に30°Cで3時間プレインキュベートした。得られたアミノペプチダーゼP分解産物を、0分後、15分後、30分後、1時間後、2時間後、4時間後、及び24時間後にMaldiTOF質量分析法を用いて分析した。N末端グルタミニル残基を有するヒト組換えMCP1を、25mMトリスHClpH76に溶解して100μgmlの濃度にした。MCP1を、組換えヒトQCと共に30°Cで3時間プレインキュベートしてからヒト血清と共に30°Cでインキュベートするか、又はQCを添加しないでヒト血清と共にインキュベートした。分解産物を、Gln1MCP1については、0分後、10分後、30分後、1時間後、2時間後、3時間後、5時間後、及び7時間後に、pGlu1MCP1については、0分後、30分後、1時間後、2時間後、3時間後、5時間後、7時間後、及び24時間後にMaldiTOF質量分析法を用いて分析した。ピログルタミル残基の代わりにN末端グルタミニル残基を有するヒト組換えMCP2を、25mMトリスHClpH76に溶解して10μgmlの濃度にした。MCP2を、組換えヒトQCと共に30°Cで3時間プレインキュベートしてから組換えヒトDP4と共に30°Cでインキュベートするか、又はQCとのプレインキュベーションなしで組換えヒトDP4と共にインキュベートした。得られたDP4分解産物を、0分後、15分後、30分後、1時間後、2時間後、4時間後、及び24時間後にMaldiTOF質量分析法を用いて分析した。DP4によるヒトMCP3のN末端分解ピログルタミル残基の代わりにN末端グルタミニル残基を有するヒト組換えMCP3を、25mMトリスHClpH76に溶解して10μgmlの濃度にした。MCP3を、組換えヒトQCと共に30°Cで3時間プレインキュベートしてから組換えヒトDP4と共に30°Cでインキュベートするか、又は事前のQC適用なしで組換えヒトDP4と共にインキュベートした。得られたDP4分解産物を、0分後、15分後、30分後、1時間後、2時間後、4時間後、及び24時間後にMaldiTOF質量分析法を用いて分析した。DP4によるヒトMCP4のN末端分解ピログルタミル残基の代わりにN末端グルタミニル残基を有するヒト組換えMCP4を、25mMトリスHClpH76に溶解して10μgmlの濃度にした。MCP4を、組換えヒトQCと共に30°Cで3時間プレインキュベートしてから組換えヒトDP4と共に30°Cでインキュベートするか、又は事前のQC適用なしで組換えヒトDP4と共にインキュベートした。得られたDP4分解産物を、0分後、15分後、30分後、1時間後、2時間後、4時間後、及び24時間後にMaldiTOF質量分析法を用いて分析した。走化性アッセイを、細孔径が5μmの24ウェルTransWellプレートを用いて行った。THP1細胞を、1×106細胞100μlの濃度でRPMI1640に懸濁し、上部チャンバに100μlのアリコートを適用した。細胞を、37°Cで2時間、化学誘引物質に向けて遊走させた。続いて、上部チャンバの細胞を廃棄し、下部チャンバを、PBS中50μlの70mMEDTAで混合し、15分間37°Cでインキュベートして膜に付着した細胞を遊離させた。その後、下部チャンバに遊走した細胞を、細胞カウンターシステムScharfeSystemを用いてカウントした。走化性指数を、刺激へ遊走した細胞を負の対照へ遊走した細胞で除することによって算出した。グルタミン1で始まるMCP1を、pGlu1MCP1を生成するために組換えヒトQCと共にインキュベートするか、又はAsp3MCP1を生成するためにヒト組換えDP4と共にインキュベートした。1ngml、5ngml、10ngml、50ngml、100ngml、500ngml、及び1000ngmlの濃度の生成されたMCP1変異体を、THP1走化性アッセイを用いて試験した。N末端グルタミンを有するMCP1を、組換えヒトQC及びDP4、ヒト組換えDP4のみ、並びに10μMのQC阻害剤1プロピル3チオ尿素塩酸塩及びDP4と組み合わせた組換えヒトQCと共にインキュベートした。1ngml、5ngml、10ngml、50ngml、100ngml、500ngml、及び1000ngmlの濃度の生成されたMCP1変異体を、走化性アッセイを用いて試験した。N末端グルタミン又はピログルタミル残基を有するヒトMCP1、MCP2、MCP3、及びMCP4を、走化性能について試験した。1ngml、5ngml、10ngml、50ngml、100ngml、500ngml、及び1000ngmlの濃度の特定のMCPを、走化性アッセイを用いて試験した。N末端グルタミンで始まるヒトMCP1、MCP2、MCP3、及びMCP4を、走化性アッセイに直接適用して、MCP1、MCP2、MCP3、及びMCP4のDP4分解産物の走化性能と比較した。DP4分解産物の生成のために、それぞれのMCPを、アッセイの前に、ヒト組換えDP4と共に1100の希釈で、30°Cで2時間インキュベートした。1ngml、5ngml、10ngml、50ngml、100ngml、500ngml、及び1000ngmlの濃度の特定のMCPを、走化性アッセイを用いて試験した。及びN末端ピログルタミン酸を有するヒトMCP1の定量的検出のための間接サンドイッチELISAの確立ヒトMCP1を捕捉するために、ヒトMCP1に特異的に結合する捕捉用抗体として、商業的に入手可能なポリクローナル抗血清ヤギ抗hMCP1AFを、PBSで250ngmlに希釈し、4°Cで一晩、ポリスチレン96ウェルマイクロタイタープレートに固定した。次いで、ELISAブロッカーにより室温で2時間ブロッキングした。標準曲線の作成のために、hMCP1N1pEを得るべく、組換えhMCP1を組換えヒトグルタミニルシクラーゼと共にインキュベートした。組換えhMCP1N1pE標準ペプチドを、ELISAブロッカーにより1000pgml~1563pgmlまで段階希釈し、二連でウェルに加えた。ELISAブロッカーで満たされた2つのウェルは、標準曲線値0pgmlを表す。室温での2時間のインキュベーション後、プレートを、TBSTで少なくとも3回洗浄した。hMCP1N1pEの検出のために、MCP1N1pE抗体クローン3482C9とHRP結合抗マウス抗体の両方を、ブロッキング緩衝液で希釈して500ngmlの最終濃度にした。hMCP1の検出のために、抗体マウス抗hMCP1とHRP結合抗マウス抗体の両方を、ブロッキング緩衝液で希釈して500ngmlの最終濃度にした。検出用抗体共役溶液を、室温で2時間インキュベートした。TBSTによる数回の洗浄後、市販のHRP基質TMBKPLGaithersburgUSAによる呈色反応を行い、続いて12NH2SO4の添加により該反応を停止させた。450540nmにおける吸光度を、TecanSunriseプレートリーダーにより決定した。標準ペプチドの環化状態の全hMCP1ELISAに対する影響を排除するために、環化組換えヒトMCP1と非環化組換えヒトMCP1の検出を比較した。ELISAプロトコルは、実施例5に対応し、標準曲線の作成のために、hMCP1をQCと共に、又はQCを用いずにインキュベートした。炎症性刺激の後、hMCP1の発現が、ヒト正常皮膚線維芽細胞において亢進される。従って、hMCP1及びhMCP1N1pEの量が、オンコスタチンM及びインターロイキン1βのNHDFへの適用後に増加するはずである。これを立証するために、OSM及びIL1β刺激NHDF細胞培養上清を、2つのELISAで分析した。hMCP1の量及びhMCP1N1pEの部分を分析した。実施例5のプロトコルに従ってhMCP1及びhMCP1N1pEの定量的分析を行った。NHDF細胞培養上清を、ウェルに加える前にブロッキング緩衝液で希釈した。NHDFを、10ngmlOSM及びIL1βで14日間にわたって刺激し、7日後にサイトカインを再度適用した。該細胞培養上清を、hMCP1及びhMCP1N1pEの分泌の時間依存性を調べるために異なる時点で分析した。で処置した正常ヒト皮膚線維芽細胞におけるhMCP1N1pEhMCP1の比の決定実施例7は、hMCP1及びhMCP1N1pEの発現が、炎症性刺激の後にNHDFにおいて亢進されることを示している。グルタミニルシクラーゼが、N末端ピログルタミン酸残基の形成を触媒するため、QCの阻害は、hMCP1N1pEレベルの減少をもたらすはずである。これを立証するために、NHDFを、OSM及びIL1βで刺激し、同時にQCIを用いて、又は用いずに処置した。NHDFを10ngmlOSM、IL1βで刺激し、同時に10μMQCIを用いて、又は用いずに6日間処置した。0日目に、サイトカイン及び阻害剤を1回適用した。QCIのhMCP1及びhMCP1N1pEレベルに対する影響を調べるために、細胞培養上清を、実施例7のELISAプロトコルに従って異なる時点で分析した。におけるhMCP1N1pEhMCP1の比の決定実施例8は、QCIの適用が、NHDFにおけるhMCP1N1pEレベルを低下させることを示している。QCI濃度依存性のhMCP1N1pEの低下を分析するために、癌ヒト肺胞基底上皮細胞株A549を異なる濃度のQCIで処置した。A549細胞を、10ngmlのTNFα及びIL1βで24時間刺激した。さらに、QCIを、異なる濃度で該細胞に適用した。24時間後に、細胞培養上清を、実施例7のプロトコルに従って分析した。ヒト血清におけるhMCP1及びhMCP1N1pEの定量的検出を評価するために、スパイク及び回収率の実験を行った。ELISAプロトコルは、FBS、005Tween、ブロッキングのための10FBS、及び希釈工程の使用法を除き、実施例5と一致している。スパイク及び回収率の確認のために、様々なレベルの組換えhMCP1及びhMCP1N1pEを、ヒト血清中でスパイクした。回収率を、スパイクされた血清試料において測定された値からスパイクされていない血清試料において測定された値を減じることによって算出した。及びN末端ピログルタミン酸を有するマウスMCP1の定量的検出のための間接サンドイッチELISAの確立実施例5~10は、組換えヒトMCP1MCP1N1pE及び未変性ヒトMCP1MCP1N1pEの定量的検出を説明している。マウス試料中のmMCP1及びmMCP1N1pEレベルを分析するために、マウスMCP1MCP1N1pEの定量的検出のためにアッセイを開発する必要があった。MCP1N1pE抗体クローン3482C9は、マウスMCP1N1pEと交差反応するため、この抗体を、mMCP1N1pEの検出のための間接サンドイッチELISAの確立に使用した。サイトカインの両方の型を区別するために、全mMCP1の検出のための同等の間接サンドイッチELISAを開発した。マウスMCP1を捕捉するために、マウスMCP1に特異的に結合する捕捉用抗体として、商業的に入手可能なポリクローナル抗血清ウサギ抗mJEを、PBSで500ngmlに希釈し、4°Cで4~7晩にわたってポリスチレン96ウェルマイクロタイタープレートに固定した。次いで、ELISAブロッカーにより室温で2時間ブロッキングした。標準曲線の作成のために、mMCP1N1pEを得るべく、組換えmMCP1をマウスグルタミニルシクラーゼと共にインキュベートした。組換えmMCP1N1pE標準ペプチドを、ELISAブロッカーにより1950pgml~195pgmlまで段階希釈し、二連でウェルに加えた。ELISAブロッカーで満たされた2つのウェルは、標準曲線値0pgmlを表す。室温での2時間のインキュベーション後、プレートを、TBSTで少なくとも3回洗浄した。mMCP1N1pEの検出のために、MCP1N1pE抗体クローン3482C9とHRP結合抗マウス抗体の両方を、ELISAブロッカーで希釈して500ngmlの最終濃度にした。mMCP1の検出のために、同様に、抗体ラット抗マウスMCP1抗MCP1ヤギポリクローナルsc1784とHRP結合抗ラット抗体抗ヤギIgGペルオキシダーゼ複合体の両方を、ブロッキング緩衝液で希釈して250ngmlの最終濃度にした。検出用抗体共役溶液を、室温で2時間インキュベートした。TBSTでの数回の洗浄後、市販のHRP基質TMBKPLGaithersburgUSAによる呈色反応を行い、続いて12NH2SO4の添加により該反応を停止させた。450540nmにおける吸光度を、TecanSunriseプレートリーダーにより決定した。実施例6は、ヒト標準ペプチドhMCP1の環化状態が全hMCP1ELISAに対して全く影響がないことを実証している。これをマウス全MCP1ELISAについても立証するために、全mMCP1ELISAにおける環化組換えマウスMCP1と非環化組換えマウスMCP1の定量の比較を行った。ELISAプロトコルは、実施例6に対応し、標準曲線の作成のために、mMCP1をQCと共に、又はQCを用いずにインキュベートした。実施例9は、QCIの適用が、刺激されたA549におけるヒトMCP1N1pEヒトMCP1の比を濃度依存的に低下させることを示している。マウスMCP1N1pEマウスMCP1の比に対するQCIの影響を分析するために、マウスマクロファージ細胞株RAW2647を、QC阻害剤QCIの非存在下、又は濃度が増加するQCIの存在下でLPSで刺激した。RAW2647を、10ngmlのLPSにより24時間刺激し、異なるQCI濃度で処置した。24時間後に、細胞培養上清を、実施例9のプロトコルに従って分析した。細胞培養上清を、ウェルへの添加の前に、ブロッキング緩衝液で11000に希釈した。RAW2467の刺激及び阻害剤の適用を、実施例9に従って行った。ウエスタンブロット分析のために、細胞培養上清のタンパク質を、SDSゲル電気泳動法に適用して分離した。分離されたタンパク質を、ニトロセルロース膜に電気的に移動させた。膜を、軽く振盪させながら室温で1時間、TBSTMでブロックした。抗体を、等量のTBSTMで1μgmlに希釈した全mMCP1用の検出用抗体又はmMCP1N1pE用の検出用抗体と共に、振盪台で、4°Cで一晩インキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼに結合した二次抗マウス及び抗ラット抗体を、以下の標準手順に従ってシグナルの検出に使用した。実施例13は、QCIの適用が、マウス細胞培養モデルにおけるmMCP1N1pEmMCP1の比を低下させることを示した。invivoでこの結果を立証するために、mMCP1N1pEmMCP1の比を、QCIの適用後に急性炎症性マウスモデルで測定した。mMCP1N1pEmMCP1の比の測定の他に、単球浸潤に対するmMCP1N1pE濃度の低下の影響を調べた。チオグルコール酸を、マウスに腹腔内注射した。異なる濃度のQCIを、チオグルコール酸適用の30分前に腹腔内投与した。4時間後に、8mlのPBS緩衝液で腹腔を洗浄することによって、腹腔洗浄を行った。腹腔洗浄液を、実施例11のプロトコルに従ってELISA分析し、腹腔におけるmMCP1及びmMCP1N1pEレベルを決定した。ウェルへの添加前に、試料をブロッキング緩衝液で15に希釈した。74及びLy6G抗原の二重染色法によるFACS分析によって、浸潤した単球をカウントした。実施例11は、組換えmMCP1/mMCP1N1pE及び未変性mMCP1/mMCP1N1pEの定量的検出を説明している。抗マウスIgGHRP複合体の潜在的な交差反応を起こさずに、マウス液体試料中のmMCP1N1pEレベルを分析するために、MCP1N1pE抗体クローン3482C9のビオチン化を行った。抗MCP1N1pE抗体の抗原hMCP1に対する結合親和性を、VPITCマイクロ熱量計を用いて決定した。両方の抗体クローン及びMCP1ペプチドを、同じ緩衝液条件を保ち、かつプロトン化事象によるバックグラウンド熱を回避するために、2リットルの150mMNaCl、25mMNa2HPO4、25mMKH2PO4、2mMEDTA、pH74に対して4°Cで一晩、透析した。この後、抗体及びペプチドの濃度並びにそれぞれの吸光係数を、280nmにおける吸光度から算出した。滴定実験のために、MCP1N1pE抗体2C9及びMCP1をそれぞれ、187μM及び2919μMの濃度で使用した。10μlのMCP1の抗MCP1N1pE抗体溶液への29回の注入による滴定によって、結合熱を20°Cで記録した。MCP1ペプチドの希釈による熱発生を、条件及び機器の設定を用いる透析緩衝液への滴定によって決定した。次いで、このデータを、MicroCalORIGINソフトウエアによって分析した。算出した結合熱を、ペプチド希釈の熱によって補正した。得られた曲線を1組の部位結合モデルに当てはめて、化学量、解離定数、反応エンタルピー、反応エントロピーを算出した。CSF及び血清試料中のhMCP1及びhMCP1N1pEの測定のために、以下のプロトコルを使用した:ヤギ抗hMCP1抗体をPBSで250ngmlに希釈Maxisorp96ウェルプレート上の1ウェルに付き希釈抗体100μlの添加プレートのシーリング及び4°Cで一晩のインキュベーション抗体溶液の除去1ウェルに付き200μlのPBS10FBS005Tween20の添加による表面のブロッキング、プレートのシーリング、及び室温で2時間のインキュベーション標準ペプチドの環化:165μlPBS2μlhCCL21μl22BSA05μlhQC37°Cで1時間のインキュベーション環化標準ペプチドをPBS10FBS005Tween20で10ngml、最終的に1000pgml、500pgml、250pgml156pgmlに希釈血清又はCSF試料をPBS10FBS005Tween20で14に希釈し、深いウェルプレートに移すプレートをTBS05Tween20で3回洗浄して洗浄緩衝液を除去試料及び標準ペプチド溶液を深いウェルプレートからELISAプレートに移す、100μlウェルプレートのシーリング及び室温で2時間のインキュベーション抗体3482C9の抗マウスIgGHRPとの室温で15分間のプレインキュベーション、その後、プレミックスをPBS10FBS005Tween20で500ngml3482C9及び1μgml抗マウスIgGHRPに希釈全hMCP1抗体の抗マウスIgGHRPとの室温で15分間のプレインキュベーション、その後、プレミックスをPBS10FBS005Tween20で500ngml2C9及び1μgml抗マウスIgGHRPに希釈プレートをTBS05Tween20で3回洗浄して洗浄緩衝液を除去抗体溶液をプレートに添加、100μlウェルプレートのシーリング及び室温で2時間のインキュベーションプレートをTBS05Tween20で3回洗浄して洗浄緩衝液を除去発色溶液をプレートに添加、100μlウェル暗所において室温で30分間のプレートのインキュベーション1ウェルに付き50μlの12NH2SO4の添加による反応の停止TECANSunriseでの450nm540nmにおける吸光度の測定これまで、MCP1レベルの測定は、主にELISAアッセイに基づいた様々な方法によって行われてきた。従って、生体源から全MCP1を検出するために、様々なMCP1抗体が開発されてきた。該抗体は、ウエスタンブロットにおいて、ELISAでの捕捉及び検出用途として、細胞内フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着スポットアッセイ、BioPlexサイトカインアッセイにおいて、免疫組織化学において、免疫沈降、受容体結合の中和、及び他のアプローチにおいて機能することが立証されている。結果として、抗体及びELISAキットは、様々な製造業者、例えばAbcam、RnDsystems、BioRadLaboratories、BioSourceInt、IBLAmerica、santacruzbiotechnologyinc、LINCOResearchInc、Upstate、RayBiotechInc、EnzoBiochemInc、PeproTech、及びLifespanBiosciencesなどから入手可能である。これらの全ての抗体及び方法には、大きな不都合がある:これらは、MCP1ケモカインの完全性、従ってMCP1ケモカインの受容体活性化機能を検出することができない。第1のN末端アミノ酸残基又はN末端GlnProジペプチドの切断は、MCP1ケモカインの受容体活性を少なくとも2桁低下させる。プロリン特異的エキソペプチダーゼジペプチジルペプチダーゼ4の濃度が増加すると、循環中のN末端未修飾CCL2のレベルが急速に低下する。DP4媒介N末端切断によるこのサイトカインの不活化は、グルタミニル残基が翻訳後にピログルタミン酸に変換されると、完全に無効となる。さらに、既存のMCP1アッセイでは通常はモニタリングされないN末端の分解は、反対の特性を有するMCP1種をもたらす:残基710は、受容体の脱感作に必須であるが、機能には十分ではなく、機能の活性には残基16の完全性が必要であった。MCP1、110に対応するペプチドは、検出可能な受容体結合活性を欠いており、残基110がMCP1の機能に必須であるが、他の残基も関与していることを示唆している。876、976、及び1076を含むいくつかの切断類似体は、MCP1誘導Ca2誘導を脱感作したが、著しく活性ではなかった。これらの類似体は、MCP1活性のアンタゴニストであり、最も強力なのは、976類似体である。該976は、83μMのKaでMCP1受容体に特異的に結合し、これは、MCP1Kd28nMよりも3倍高かった。976類似体は、MCP1及びMCP3に対するCa2応答を脱感作したが、他のCCケモカインに対してはそうではなく、MCP受容体特異的であることを示唆している。8種の哺乳動物種由来の成熟MCP1の配列アラインメントは、最初の76のアミノ酸残基の範囲内で46の全体の同一性及び79の類似性を実証している。特に、最初の4個のN末端アミノ酸残基は、完全に保存されて、受容体のアゴニストアンタゴニスト作用が確保されている。異なるヒトMCPタンパク質の比較により、どの成熟タンパク質の場合でも、N末端グルタミンの出現が明らかである。異なる受容体の特異性により、隣接するアミノ酸残基は保存されていない。しかしながら、QCアクセス可能N末端グルタミン残基及びDP4切断可能グルタミンプロリンモチーフの基本原理は、保存されたままである。のタンパク分解についての研究循環内で、MCP1は、N末端pGlu残基によって保護され、該N末端pGlu残基は、アミノペプチダーゼ、例えば、DP4によるN末端の切断に対する抵抗性を付与する。QC阻害剤の投与の結果として、非保護N末端が、DP4によって容易に切断される。N末端切断は、ヒトMCP1の不活化をもたらす。総合すると、これらの結果は、N末端のpGlu形成が、保護の機構を果たし、ポストプロリン切断酵素、例えば、DP4及びアミノペプチダーゼPによるN末端分解に対する抵抗性を付与することを示唆している。のタンパク分解ヒトMCP1のタンパク分解安定性についてのさらなる研究のために、MCP1の精製プロテアーゼとのインキュベーションにより得られたデータを、ヒトMCP1のヒト血清とのインキュベーションによって実証した。ヒトGln1MCP1のヒト血清とのインキュベーションは、基質のN末端切断及び最初の2個のアミノ酸の遊離を示している。加えて、血漿中のQC活性は、N末端タンパク分解と競合してMCP1を安定させ、約60の切断Asp3MCP1と40の完全長pGlu1MCP1の最終比となる。さらに、ヒトMCP1のヒトQCとのプレインキュベーションは、N末端pGlu残基の形成をもたらし、従ってヒトMCP1が安定化する。少なくとも選択された時間枠及び血清の希釈では、pGlu1MCP1の分解は全く観察されなかった。加えて、96μMのDP4阻害剤イソロイシルチアゾリジドの存在下での血清中のMCP1のインキュベーションもまた、N末端の分解を防止し、MCP1が、ヒト血清中のDP4又はDP4様活性によって分解されることを立証している。ヒトMCP1のN末端分解と同様に、DP4によるN末端切断に対する他のヒトMCP、すなわちMCP2、MCP3、及びMCP4の感受性を調べた。既にMCP1で観察されたように、N末端pGlu残基が、DP4によるタンパク分解に対してMCP2、MCP3、及びMCP4を保護する。しかしながら、N末端グルタミンで始まる非環化変異体は、Gln1MCP2、Gln1MCP3、及びGln1MCP4で示されているように、DP4によって容易に切断される。従って、N末端pGlu残基は、アミノペプチダーゼ、例えば、DP4による切断に対して全てのMCPを安定化させる。従って、代謝回転の促進並びに走化性及び受容体活性化の低下を誘発するためにinvivoでのQC活性を低下させるという提示された概念は、MCPファミリーの全てのメンバーに当てはまる。MCP1の異なるN末端変異体のヒトTHP1単球を誘引する能力に対する影響を調べるために、Gln1MCP1、pGlu1MCP1、及びDP4分解産物Asp3MCP1を、invitroでの走化性アッセイで試験した。N末端グルタミニル残基又はピログルタミル残基を有する完全長MCP1は、THP1単球の誘引において同等に能力があり、最大応答が50ngml~100ngmlであることが見出された。加えて、N末端グルタミン又はピログルタミン酸を有するMCP2、MCP3、及びMCP4のヒトTHP1単球を誘引する能力も調べた。MCP1と同様に、MCP2及びMCP3のN末端におけるpGlu形成は、それぞれのグルタミン前駆体と比較して、走化性能に対する影響が全くない。しかしながら、MCP4では、pGLU形成は、該ペプチドの走化性能を僅かに高める。MCP1の安定化におけるQCの役割、及びTHP1単球の遊走に対するQCの影響をさらに調べるために、Gln1MCP1をヒトDP4と共にインキュベートした。平行試料では、MCP1を、DP4の適用の前にヒトQCと共にプレインキュベートした。予想通り、得られた用量反応曲線は、50~100ngmlでの最大応答によって反映されるpGln1MCP1のタンパク分解安定性を暗示している。対照的に、QCの非存在下では、Gln1MCP1は、DP4によって切断され、これにより、最大応答を引き出すために必要なより高いMCP1濃度に用量反応曲線がシフトする。加えて、Gln1MCP1のQC及びQC阻害剤1プロピル3チオ尿素塩酸塩とのプレインキュベーションは、pGlu形成を防止し、従って、pGlu1MCP1と比較して高いMCP1濃度への用量反応曲線のシフトによって観察されるように、該ペプチドがDP切断に対して弱くなる。このため、QCの阻害は、DP4の分解によるMCP1のN末端の不安定化、従って、MCP1の単球走化活性の不活化が起こる。しかしながら、グルタミニル前駆体は、DP4によって切断されるため、MCP2、MCP3、及びMCP4のN切断DP4分解産物の走化性能も、走化性アッセイを用いて調べた。3個全ての変異体では、2個のアミノ酸が切断されると、ケモカインが部分的に不活化される。従って、全ての既知のMCPのN末端におけるpGlu形成は、N末端の切断を防止するだけではなく、走化性能の消失も防止する。従って、N末端成熟の抑制によりMCP1の活性を緩和する提示されたアプローチは、ヒトにおけるMCPファミリーの全てのメンバーに適用される。及びN末端ピログルタミン酸を有するヒトMCP1の定量的検出のための間接サンドイッチELISA生体試料中の両方の型を区別して、全hMCP1及びhMCP1N1pEの定量的な量を決定するために、2つの間接サンドイッチELISAを確立する必要があった。図14は、全hMCP1及びhMCP1N1pEの検出のための2つの特徴的な標準曲線を示している。標準ペプチドの環化状態の全hMCP1ELISAに対する影響を排除するために、同じアッセイにおいて、環化組換えヒトMCP1と非環化組換えヒトMCP1の検出を比較した。実験により、全hMCP1ELISAにおけるhMCP1ペプチドの検出に対するhMCP1ペプチド環化状態の影響がゼロ又は最小限であることが明らかである。これは、両方のELISAの捕捉用抗体及び全hMCP1ELISAの検出用抗体が、hMCP1のN末端アミノ酸と相互作用しないことを実証している。この発見は、hMCP1N1pEレベルが様々な試料における両方のペプチドの比を決定する能力を調べるhMCP1及びhMCP1N1pEELISAの検証にとって重要である。炎症性刺激の後、hMCP1の発現が、ヒト正常皮膚線維芽細胞において亢進される。従って、hMCP1及びMCP1N1pEの量は、オンコスタチンM及びインターロイキン1βのNHDFへの適用後に増加するはずである。これを立証するために、OSM及びIL1β刺激NHDF細胞培養上清を、2つのELISAで分析した。まずhMCP1の量、次いでhMCP1N1pEの部分を分析した。得られたデータは、OSM及びIL1βの適用による炎症性刺激の後に、hMCP1及びhMCP1N1pEの量が、NHDF細胞培養上清中で時間依存的に増加することを示している。全hMCP1レベルに対するhMCP1N1pEの割合は、70~95の範囲であり、成熟MCP1のほぼ完全なN末端ピログルタミン酸修飾を示唆している。で処置した正常ヒト皮膚線維芽細胞におけるhMCP1N1pEhMCP1の比の決定グルタミニルシクラーゼは、N末端ピログルタミン酸残基の形成を触媒するため、QCの阻害は、hMCP1N1pEレベルの低下をもたらすはずである。これを立証するために、NHDFを、OSM及びIL1βで刺激し、同時にQCIを用いて、又は用いずに処置した。実施例7に示されているように、全hMCP1及びhMCP1N1pEの量は、炎症性サイトカインの適用後に時間依存的に増加する。QCIの添加により、hMCP1N1pEレベルが低下した。hMCP1N1pEhMCP1の比は、未処置NHDFでは約1であるが、QCI処置細胞は、約035の比を示している。OSMIL1β刺激の1~2日後に、hMCP1N1pEレベルは、hMCP1N1pEELISAの定量限界よりも低かった。におけるhMCP1N1pEhMCP1の比の決定hMCP1N1pEのQCI濃度依存性の減少を分析するために、癌ヒト肺胞基底上皮細胞株A549を異なる濃度のQCIで処置した。hMCP1N1pEの量は、QCIによって濃度依存的に減少するが、全hMCP1の量は、ほぼ影響を受けない。結果として、hMCP1N1pEhMCP1の比は、阻害剤の濃度の増加と共に減少する。ヒト血清におけるhMCP1及びhMCP1N1pEのスパイク及び回収率表2は、ヒト血清に添加されたhMCP1で得られたスパイク及び回収率を示している。スパイクされた組換えhMCP1ペプチドの回収率は66~81であった。表2は、観察されたhMCP1濃度と比較した予想されたスパイクレベルを示している。表3は、hMCP1N1pEのヒト血清への添加で得られたスパイク及び回収率のデータを示している。スパイクされたhMCP1N1pEペプチドの回収率は66~794であった。表3は、観察されたhMCP1N1pE濃度と比較した予想されたスパイクレベルを示している。これらのデータは、実施例5で説明されているELISAを、ヒト血清におけるhMCP1及びhMCP1N1pEの定量的検出に使用できることを裏付けている。スパイクされたペプチドの回収率は、両方のELISAで同等であり、許容可能な範囲である。及びN末端ピログルタミン酸を有するマウスMCP1の定量検出のための間接サンドイッチELISAの確立マウス試料中のmMCP1及びmMCP1N1pEレベルを分析するために、マウスMCP1及びマウスMCP1N1pEの定量分析のためのアッセイを開発する必要があった。MCP1N1pE抗体クローン3482C9は、マウスMCP1N1pEと交差反応するため、この抗体を、mMCP1N1pEの検出のための間接サンドイッチELISAの確立に使用した。加えて、全mMCP1を検出して、サイトカインの両方の型を区別するために同等の間接サンドイッチELISAを開発した。図19は、mMCP1N1pE及び全mMCP1の検出のための2つの特徴的な標準曲線を示している。図20は、mMCP1ペプチド環化状態が、全mMCP1のELISA検出を妨げなかったことを実証している。このことは、全マウスMCP1及びマウスMCP1N1pEELISA測定の両方の独立性を裏付け、かつ決定されたmMCP1N1pEmMCP1の比の正確さを立証している。マウスMCP1N1pEマウスMCP1の比に対するQCIの影響を分析するために、マウスマクロファージ細胞株RAW2647を、QC阻害剤QCIの非存在下、又は濃度が増加するQCIの存在下でLPAにより刺激した。mMCP1N1pEの量は、QCIによって濃度依存的に減少するが、全mMCP1の量は、影響を受けないままである。結果として、実施例9の結果と同様に、mMCP1N1pEmMCP1の比は、阻害剤の濃度の増加と共に増加する。QCIの適用後にmMCP1N1pEレベルの低下がELISA実験で確認されたことを立証するためにウエスタンブロット分析を行った。この実験は、異なるQCIで処置したRAW2647細胞培養上清を使用して行った。全mMCP1を検出する抗体ラット抗マウスMCP1によって生成されるウエスタンブロットシグナルの強度に変化がない。しかしながら、mMCP1N1pEのウエスタンブロットシグナルは、濃度依存性であり、対応するELISAデータに相関し、異なる量のmMCP1N1pEを示している。この実験は、代替のアッセイを使用したELISAデータの正確さを実証している。MCP1N1pE抗体3482C9の抗原hMCP1に対する結合は以下の通りである化学量183解離定数151nM反応エンタルピー7679kcalmol反応エントロピー501calmolKビオチン化反応後、誘導抗体の特性は以下のようにシフトした化学量141解離定数444nM反応エンタルピー1144kcalmol反応エントロピー996calmolK活性な抗体タンパク質の消失及び親和性の低下が、ELISA実験に使用された抗体濃度の増加によって補償された。ビオチン化MCP1N1pE抗体の適用により、マウス液体試料中の未知の抗原に対する抗マウスIgGHRP複合体の潜在的な交差反応性が低下する。ビオチン化MCP1N1pE抗体は、活性が30低下した。これは、標準ペプチド濃度を3000pgmlに増加させることによって補償することができる。invivoでのmMCP1N1pEmMCP1の比に対するQC阻害剤投与の影響をさらに調べるために、QCIを、チオグリコール酸誘発腹膜炎に適用した。mMCP1N1pEmMCP1の比の決定の他、腹腔洗浄液の細胞成分を、浸潤する単球を特に重点を置いて決定した。この実験では、QCIの適用後に、mMCP1N1pEmMCP1の比が用量依存的に低下した。さらに、mMCP1N1pEレベルと単球の腹膜への侵入との関係を実証した。mMCP1N1pEmMCP1の比の低下により、腹膜に浸潤する単球の数が減少した。このような単球の動員は、例えば、限定されるものではないが、膵炎、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、及び再狭窄などのいくつかの炎症性疾患の一般的な特徴である。この実験は、バイオマーカーとしてのMCP1N1pEMCP1の比の適用性を立証し、MCP1の単球動員能力をモニタリングする。さらに、MCP1N1pEMCP1の比の測定は、様々な炎症性疾患へのQC阻害剤の適用におけるQC阻害剤の能力の特徴付けの方法も提供する。MCP1及びMCP1N1pEの濃度を、アッセイ内変動が18の1枚のプレート及びアッセイ内変動が28の2枚のプレートで決定した。これは、ヒトCSF及び血清試料の分析についてロバスト性が高いことを示している。得られたELISAシグナルは、全hMCP1ELISAのLOQよりも12倍高く、かつhMCP1N1pEELISAのLOQよりも6倍高く、処置又は疾患関連効果を観察する際の、QC阻害剤の存在下又は非存在下での基準MCP1レベルの尺度を提供する。