"必要のある被検者において異常に増殖する細胞の増殖、定着および/または発育を予防し、阻害しおよび/または逆転させるための薬剤の製造のための、アクチン結合活性および24~36kDaの分子量を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼの使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼが、リボ核酸分解活性を欠いている請求項1に記載の使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼのリボ核酸分解活性が、沸騰、オートクレーブ処理および化学的変性からなる群から選択される方法によって不活性化される請求項2に記載の方法。前記異常に増殖する細胞が腫瘍細胞である請求項1に記載の使用。前記腫瘍細胞が癌性細胞である請求項4に記載の使用。前記腫瘍細胞が、乳頭腫、ブラストグリオーマ、カポジ肉腫、黒色腫、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、星細胞腫、頭部癌、頸部癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、およびバーキット病からなる群から選択される増殖性の障害または疾患に関連する細胞である請求項4に記載の使用。前記異常に増殖する細胞が、関節炎、リウマチ様関節炎、糖尿病網膜症、再狭窄、イン-ステント再狭窄および移植血管再狭窄からなる群から選択される障害または疾患に関連する細胞である請求項1または2に記載の使用。前記薬剤が、経口投与、局所投与、経粘膜投与、非経口投与、直腸投与および吸入による投与からなる群から選択された投与方法のために処方されている請求項1~7のいずれか一項に記載の使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼがRNアーゼB1である請求項1~8のいずれか一項に記載の使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼが、RNアーゼT2、RNアーゼRh、RNアーゼM、RNアーゼTrv、RNアーゼIrp、RNアーゼLe2、RNアーゼPhyb、RNアーゼLE、RNアーゼMC、RNアーゼCL1、RNアーゼBsp1、RNアーゼRCL2、RNアーゼDm、RNアーゼOyおよびRNアーゼTpからなる群から選択される請求項1~8のいずれか一項に記載の使用。必要のある被検者において腫瘍血管新生を阻害するための薬剤の製造のための、アクチン結合活性および24~36kDaの分子量を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼの使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼが、リボ核酸分解活性を欠いている請求項11に記載の使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼのリボ核酸分解活性が、沸騰、オートクレーブ処理および化学的変性からなる群から選択される方法によって不活性化される請求項12に記載の方法。前記腫瘍が癌性腫瘍である請求項11または12に記載の使用。前記腫瘍が、乳頭腫、ブラストグリオーマ、カポジ肉腫、黒色腫、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、星細胞腫、頭部癌、頸部癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、およびバーキット病からなる群から選択される障害または疾患に関連する腫瘍である請求項11~13のいずれか一項に記載の使用。前記薬剤が、経口投与、局所投与、経粘膜投与、非経口投与、直腸投与および吸入による投与からなる群から選択された投与方法のために処方されている請求項11~15のいずれか一項に記載の使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼがRNアーゼB1である請求項11~16のいずれか一項に記載の使用。前記T2ファミリーのリボヌクレアーゼが、RNアーゼT2、RNアーゼRh、RNアーゼM、RNアーゼTrv、RNアーゼIrp、RNアーゼLe2、RNアーゼPhyb、RNアーゼLE、RNアーゼMC、RNアーゼCL1、RNアーゼBsp1、RNアーゼRCL2、RNアーゼDm、RNアーゼOyおよびRNアーゼTpからなる群から選択される請求項11~16のいずれか一項に記載の使用。必要のある被検者において腫瘍の発育を予防し、阻害しおよび/または逆転させるための薬剤の製造のための、アクチン結合活性および24~36kDaの分子量を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼの使用。必要のある被検者において良性腫瘍の悪性腫瘍への転換を予防し、阻害しおよび/または逆転させるための薬剤の製造のための、アクチン結合活性および24~36kDaの分子量を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼの使用。必要のある被検者において個々の腫瘍の数を減らすための薬剤の製造のための、アクチン結合活性および24~36kDaの分子量を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼの使用。必要のある被検者において腫瘍の大きさを小さくするための薬剤の製造のための、アクチン結合活性および24~36kDaの分子量を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼの使用。必要のある被検者において悪性腫瘍の数を減らすための薬剤の製造のための、アクチン結合活性および24~36kDaの分子量を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼの使用。前記腫瘍が悪性腫瘍である請求項4,11,19および21~23のいずれか一項に記載の使用。前記腫瘍が良性腫瘍である請求項4,11,19および21~23のいずれか一項に記載の使用。本発明は、被検者の異常に増殖する細胞の増殖、定着、分化および/または発育を予防し、阻害しおよび/または逆転するための、T2ファミリーのリボヌクレアーゼまたはそのリボヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドの使用を教示する。本発明は、さらに、有効成分として、一般に増殖性の疾患または傷害を、および特に癌を治療するのに用いるT2ファミリーのリボヌクレアーゼまたはそのリボヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドを含有する医薬組成物を教示する。細胞傷害活性を有するリボヌクレアーゼを、腫瘍細胞の増殖を阻害するために使用することは、新しいことではなく、当該技術分野ではすでに論証されている。オンコナーゼとして商業的に知られているAファミリーのリボヌクレアーゼは、臨床試験で腫瘍状組織における細胞の増殖を阻害することが分かっている。RNアーゼAスーパーファミリーのいくつもの他のRNアーゼも、それらのリボ核酸分解活性に加えて細胞傷害活性を有することも論証されている。いくつかのリボヌクレアーゼの細胞傷害性は、ある程度、それらのリボ核酸分解活性に依存しているが、リボ核酸分解活性のレベルは、リボヌクレアーゼについて観察される細胞傷害性のレベルと必ずしも相関関係があるわけではない。さらに、細胞傷害活性を全く示さないがリボヌクレアーゼとしてうまく機能するリボヌクレアーゼのいくつもの例がある。最もよく知られている例はRNアーゼAである。他の場合では、反応速度が、より特異的な結合またはいくつかの他の性能の改良された機能のために犠牲になっている。例えば、アンギオジェニンの活性部位は、RNアーゼAに存在しない側鎖によってブロックされて、RNアーゼを、全基質に対する活性を10000分の一にするが、リボソームのRNAの分解に対しては一層特異的にする。BS-RNアーゼはそれがモノマーの場合、より速いヌクレアーゼである。しかし、その細胞傷害性は一層高いので、二量体の形態の場合、リボヌクレアーゼ阻害剤による阻害はかなり低下する。グリコシル化RNアーゼBは、大部分の基質に対して、RNアーゼAより活性が低いが、BS-RNアーゼにしばしば観察される脱アミド反応アスパラギン67からイソアスパルテートへは、該タンパク質の水素結合構造の全連鎖を切断することによって、RNアーゼA変異体の活性を低下させるShein,C.H.,NatureBiotechnol15巻529-536頁1997年に概説されている。T2ファミリーのリボヌクレアーゼ類は、それらの独特な分子の特徴が特徴である。AファミリーとT2ファミリーのRNアーゼのメンバーの比較結果を以下の表2に要約してあるアミノ酸の位置は、ファミリーAのRNアーゼAとファミリーT2のRNアーゼT2の後である。T2ファミリーのリボヌクレアーゼ類は、植物中のみならず多数の微生物中に確認されており、植物内では、花粉管が胚珠の方に向いて伸びるのを選択的に制御することによって、受粉の過程で能動的な役割を演じている。本発明の発明者らが明らかにして、実施例1,2および6で以下に詳細に述べるように、RNアーゼB1すなわち一種のT2リボヌクレアーゼは、リボ核酸分解的に活性かまたはリボ核酸分解的に不活性であり、伸長中の花粉管中のアクチンに特異的に結合して花粉管の伸長を阻害し、かつ哺乳類の細胞のアクチンにも結合する。アクチンは、細胞構造を維持しかつ臓器細胞の細胞内輸送を支持するのに能動的な、細胞の必須細胞骨格成分であるフィラメントを形成することが知られている。その結果、アクチンフィラメントは、増殖、定着、分化、転換、および組織形成を含む他の発育の側面を含む、正常細胞および異常細胞のライフサイクル全体の多くの細胞プロセスに参画している。アクチンが、癌細胞の発育を制御する各種細胞プロセスにも参画しているということは、多数の研究論文が示しているJordan,M.A.およびWilson,L.,Curr.Opin.CellBiol.10巻123-130頁1998年;Jammy,P.A.およびChaponnier,C.,Curr.Opin.CellBiol.7巻111-117頁1995年;Sigmond,S.H.,Curr.Opin.CellBiol.8巻66-73頁1996年;Tapon,N.ら、Curr.Opin.CellBiol.9巻86-92頁1997年。したがって、例えば、アクチンフィラメントは異常細胞の増殖に参画しているAssoian,R.K.およびZhu,X.,Curr.Opin.CellBiol.9巻93-98頁1997年。悪性細胞は、正常細胞よりサイトカラシンBに対して感受性であることが発見されたHemstreet,G.P.ら、J.CellBiochem.25S197-204頁1996年。アクチンは、高度保存タンパク質であり、進化の面で遠縁の生物間に高レベルの相同性を維持しているので、花粉管の伸長を阻害するRNアーゼB1のアクチン結合活性を、この理論によって限定されることなく利用して、哺乳類の細胞のアクチンに特異的に結合させて、その細胞の増殖、定着、分化および/または発育を阻害できるという仮説を立てたのである。本発明を、実施例の項の実施例2と5で述べるように実施すると、外因性RNアーゼB1が膜アクチンに特異的に結合して、細胞アクチンネットワークの障害を起こす。実施例3~5に示すように、RNアーゼB1の哺乳類癌細胞に対する作用を、生体外と生体内でさらに研究した。その実施例で明らかに立証されているように、RNアーゼB1は、i培養で増殖させた腺癌細胞の増殖および/または定着をかなり減少させ、そしてii大腸癌ラットモデルにおいて、予防的方式および/または治療的方式で、異所性クリプト病巣aberrantcryptfociACFを減らし、腫瘍の数と大きさを小さくし、腫瘍の血管新生を阻害し、腫瘍の悪性度とアデノーマから腺癌への移行を減らし、一方大腸もしくは他の臓器の健康な組織に対して明らかな副作用が全くない。本発明の少なくとも一つの実施態様を詳細に説明する前に、本発明は、以下の説明に述べられているかまたは諸実施例に例示されている詳細事項にその用途を限定されないと解すべきである。本発明は、他の実施態様を実施できるかまたは種々の方式で実施することができる。また、本願で利用される語句は、説明を目的とするもので本発明を限定しないと解すべきである。また、本発明は、本願に示される理論または仮説によって拘束されるかまたは限定されることがないと解すべきである。T2ファミリーの1種以上のリボヌクレアーゼを、本願では、総合的にT2-RNアーゼと呼称する。同様に、T2ファミリーの1種以上のリボヌクレアーゼをコードする1種以上のポリヌクレオチドを、本願では、総合的に、T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドまたは同等物と呼称する。したがって、本発明の一側面によって、被検者の異常に増殖する細胞の増殖、定着、分化および/または発育を予防し、阻害しおよび/または逆転する方法が提供される。本発明のこの側面による方法は、被検者に、治療のために有効な量のT2ファミリーのリボヌクレアーゼまたはT2ファミリーの組換えリボヌクレアーゼをコードして生体内で発見できるポリヌクレオチドを、それ自体でまたは医薬組成物の有効成分として投与することによって行われる。したがって、本発明の他の側面によって、有効成分としてのT2ファミリーのリボヌクレアーゼまたはT2ファミリーの組換えリボヌクレアーゼをコードして生体内で発現できるポリヌクレオチド、および医薬として許容できる担体を含有する医薬組成物が提供される。本発明のさらに他の側面によって、異常に増殖する細胞の増殖、定着、分化および/または発育を予防し、阻害しおよび/または逆転するのに有用な薬剤の製造方法であって、T2ファミリーのリボヌクレアーゼまたはT2ファミリーの組換えリボヌクレアーゼをコードして生体内で発現できるポリヌクレオチドを、医薬として許容できる担体と組み合わせるステップを含んでなる方法が提供される。上記薬剤は、好ましくは、例えば特定の癌のような特定の増殖性の障害または疾患に対し治療剤を提供することが確認される。このような確認は、当該技術分野でよく知られているように、例えば、薬剤が入っている容器またはリーフレットに印刷される。本発明の方法と医薬組成物は、例えばi被検者の腫瘍を治療するため;ii被検者に腫瘍が発するのを予防し、阻害し、および/または逆転させるため;iii被検者の良性腫瘍が悪性腫瘍に転換するのを予防し、阻害しおよび/または逆転させるため;iv被検者の腫瘍の血管新生を予防し、阻害および/または逆転させるため;v被検者の個々の腫瘍の数を減らすため;vi被検者の腫瘍の大きさを小さくするため;vii被検者の悪性腫瘍の数を減らすため;および/またはviii被検者の組織が腫瘍に転換するのを予防し、阻害しおよび/または逆転させるために利用できる。T2-RNアーゼは、天然の原料から、下記実施例1に例示するように誘導することができ、あるいは、適当なポリヌクレオチド下記表2とそれに続く説明参照と発現系を使用して組換えタンパク質として製造することができる。組換えタンパク質の発現と精製は、当該技術分野で周知のことであり、多数の教本および研究所のプロトコル書に詳細に記載されている複数の方法のうちのいずれか一つによって行うことができ、それらの教本とプロトコル書としては、例えばMolecularCloning:AlaboratoryManualSambrookら1989年;CurrentProtocolsinMolecularBiologyI-III巻、Ausubel,R.M.編1994年;Ausubelら、CurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileyandSons、米国メリーランド州ボルチモア1989年;Perbal、APracticalGuidetoMolecularCloningJohnWileySons、米国ニューヨーク州;Watsonら、RecombinantDNAScientificAmericanBooks、米国ニューヨーク州;Birrenら編、GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries1-4巻、ColdSpringHarborLaboratoryPress、米国ニューヨーク州1998年がある。いくつかの用途の場合、望ましくない副作用があるかまたは望ましくない副作用を起こすことがあるリボ核酸分解活性を実質的に欠いているリボヌクレアーゼを使用することが有利である。用語リボ核酸分解活性を実質的に欠いているは、本願で使用する場合、i類似の非不活性化リボヌクレアーゼに比べてリボ核酸分解活性が0~10であるT2ファミリーの不活性化リボヌクレアーゼ天然または組換えの;および/またはii類似の非変異体リボヌクレアーゼに比べてリボ核酸分解活性が0~10であるT2ファミリーの組換え変異体天然の単離物または人工によるもののリボヌクレアーゼを意味する。T2ファミリーのリボヌクレアーゼのリボ核酸分解活性の不活性化は、沸騰、オートクレーブ処理および化学的な変性もしくは不活性化からなる群から選択した方法で行うことができる。後記実施例2と6でさらに詳細に述べるように、本発明の発明者らは、RNアーゼB1の抗増殖活性、抗定着活性、抗分化活性および/または抗発育活性がそのリボ核酸分解活性に依存しておらず、沸騰させ、オートクレーブ処理しおよび化学的に不活性化アセチル化したRNアーゼB1はリボ核酸分解活性がほとんどない10かまたは実質的にない0~10が、その抗増殖活性、抗定着活性、抗分化活性および/または抗発育活性はすべて実質的に保持していることを示した。したがって、本発明のT2-RNアーゼタンパク質は、天然のリボ核酸分解活性型、または代わりに、リボ核酸分解活性がないか0またはほとんどない10までサイレントのもしくは抑制されたリボ核酸分解活性型であるがその他の活性を維持している型の両方で利用することができる。それ故、用語T2-RNアーゼは、そのタンパク質の他の特性のいかんにかかわらず、そのタンパク質の抗増殖型、抗定着型、抗分化型および抗発育型のすべてを含んでいるものとする。リボ核酸分解活性は被検者に望ましくない副作用をもたらすことがあるので、望ましい活性を示すがリボ核酸分解活性が欠けているかまたは抑制されているT2-RNアーゼを、直接に、またはポリヌクレオチドから発現させて利用することが特に有利であることが分かるであろう。本願で定義されるT2-RNアーゼのアミノ酸配列を示すポリペプチドは、当該技術分野で周知のいくつもの方法のうちのいずれか一つによって製造することができる。例えば、そのポリペプチドは、標準のペプチド合成技法によって、例えば、標準の9-フルオレニルメトキシカルボニルF-Moc化学例えば、Atherton,E.とSheppard,R.C.,J.Chem.Soc.Chem.Comm.1651985年参照または標準のブチロキシカーボネートT-Boc化学を利用して合成で製造できるが、ごく最近、Sheppardが開発したフルオレニルメトキシカルボニルFmoc/ter-ブチル系がますます広く利用されていることに注目すべきであるSheppard,R.C.,ScienceTools,TheLKBJournal33巻9頁1986年。あるいは、T2-RNアーゼタンパク質は、このタンパク質を発現することが分かっている生物から、当該技術分野で周知の方法で単離し次いで精製することもできる。このような生物としては、例えば、エロモナスヒドロフィラAeromonushydrophila、ヘモフィルスインフルエンゼHaemophilusinfluenzae、エシェリキアコリEscherichiacoli、アスペルギルスオリゼAspergillusoryzae、アスペルギルスホエニシスAspergillusphoenicis、リソプスニベウスRhisopusniveus、トリコデルマビリデTrichodermaviride、レンティヌラエドデスLentinulaedodes、イルペックスラクテウスIrpexlacteus、フィサルムポリセフルムPhysarumpolycephlum、アラビドプシスタリアナArabidopsisthaliana、リコペルシコンエスクレンツムLycopersiconesculentum、ニコチアナアラタNicotianaalata、マルスドメスチカMalusdomestica、ピルスピリフォリアPyrusPyrifolia、モモルディカカランチアMomordicacharantia、ガルスガルスGallusgallus、ラナカテスベイアナRanacatesbeiana、ドロソフィラメラノガスターDrosophylamelanogaster、クラソステラギグスCrassosteragigus、トダロデスパシフィクスTodarodespasificus、およびホモサピエンスHomosapiensがある。しかし、T2-RNアーゼを産生することがまだ知られていない他の生物は、産生することが発見されると、本発明によって、T2-RNアーゼの原料として使用できると考えられる。あるいは、好ましくは、T2-RNアーゼタンパク質は、そのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを、適当な発現ベクター系を使って発現させることによって組換え法で製造することができる。好ましくは、適切な翻訳後の修飾体を提供する発現系が選択される。適切な発現ベクター系としては、限定されないが、ウイルス例えばアデノウイルス、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルス、アビポックスウイルスに感染した哺乳類細胞;ウイルス例えばバキュロウイルスに感染した昆虫細胞;遺伝子によって改変された植物、またはプラスミド、植物ウイルスもしくはアグロバクテリウムAgrobacterium属の細菌で形質転換された植物細胞;酵母ベクターを含有する酵母などの形質転換された微生物またはバクテリオファージDNA、プラミドDNAもしくはコスミドDNAで形質転換された細菌がある。ベクターの発現制御要素は利用される宿主-ベクター系に対応してその強度と仕様が変化し、いくつもの適切な転写要素と翻訳要素のうちのいずれか一つを使用できる。組換え法で製造したT2-RNアーゼは、宿主の細胞から、アフィニティークロマトグラフィー、電気泳動法、高速液体クロマトグラフィーHPLC、免疫沈降法、沈降法などの当該技術分野で公知の方法によって精製することができる。精製されたT2-RNアーゼを使用し、適当な医薬として許容される担体および/または添加剤を添加して、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、研和、乳化、被包形成、封入entrappingまたは凍結乾燥の方法によって本発明の薬剤を製造することができ、あるいは精製されたT2-RNアーゼは、先に述べたような適当な送達ベヒクルに結合してもよい。本発明のポリヌクレオチドは天然のT2-RNアーゼタンパク質をコードすることができ、この場合のいずれの用語も、抗増殖活性とリボ核酸分解活性の両方を有するT2-RNアーゼを述べており、または、代わりに、本発明のポリヌクレオチドは、リボ核酸分解活性を全くもっていないかもしくはほとんどもっていないサイレントなもしくは抑制されたT2-RNアーゼ変異体をコードして、リボ核酸分解活性を実質的にもっていないタンパク質を生体内で発現し例えば転写し翻訳しすることができる。したがって、用語ポリヌクレオチドは、一般的なT2-RNアーゼの場合にまたは特異的なT2-RNアーゼの場合に、本願で用いるとき、異常に増殖する細胞の増殖、定着、分化および/または発育を予防し、阻害しおよび/または逆転させるのに能動的で、リボ核酸分解活性を有しているかまたは実質的に欠いているT2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチド配列を意味する。リボ核酸分解活性を欠いたT2-RNアーゼをコードしているポリヌクレオチドは、公知の分子生物学の技法、例えばランダム突然変異誘発法、部位特異的突然変異誘発法および促進進化enhancedevolution法を利用して得ることができる。部位特異的突然変異誘発法は、T2-RNアーゼのリボ核酸分解活性のために不可欠のアミノ酸残基が分かっているので[Kusanoら、Biosci.Biothechnol.Biochem.62巻87-94頁1998年この文献は本願に援用するおよび前記表2を参照]、直ちに利用できる。したがって、本発明を使用して、異常に増殖する細胞例えば癌性などの細胞を特徴とする症状、症候群または疾患であって、限定されないが、例えば乳頭腫、ブラストグリオーマ、カポジ肉腫、黒色腫、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、星細胞腫、頭部癌、頸部癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、バーキット病、関節炎、リウマチ様関節炎、糖尿病網膜症、血管新生、再狭窄、イン-ステント再狭窄および移植血管再狭窄を治療することができる。用語癌または腫瘍は、本願で使用するとき、異常な細胞増殖を示す細胞を特徴とする無数の疾患を含む、臨床で述べられる用語である。用語腫瘍は、組織に使用される場合、過剰でかつ異常な細胞の増殖を特徴とする異常な組織の増殖を意味する。腫瘍は、良性でその元の病巣から拡散できないことがあり、または悪性もしくは転移性で、その解剖学的部位を超えて他の領域へ、宿主身体全体にわたって拡散可能であることがある。用語癌は古い用語であり、悪性腫瘍またはそれから起こる疾患の状態を述べるのに一般に使用される。あるいは、その用語は、新生物のような異常増殖および悪性新生物のような悪性異常増殖を意味する。本願に記載されかつ後記実施例の項に例示されている、抗増殖活性、抗定着活性、抗分化活性および/または抗発育活性を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼはいずれも、本発明の教示にしたがって、治療薬として使用できる。同様に、本願に記載されている抗増殖活性、抗定着活性、抗分化活性および/または抗発育活性を有するT2ファミリーのリボヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドはいずれも、本発明の教示にしたがって、治療薬として使用できる。T2ファミリーのリボヌクレアーゼの網羅的でないリストは上記表2に提供してある。後記実施例でさらに例示されるように、T2ファミリーのメンバーである。RNアーゼB1は、抗増殖活性、抗定着活性、抗分化活性および/または抗発育活性を有し、これらの活性は生体内および生体外の検定法で確認した。さらに、RNアーゼB1は、リボ核酸分解活性がなくなるように処理された場合でさえ、アクチンに結合することが示されている。したがって、本発明は、当業技術者が、与えられたリボヌクレアーゼを、その抗増殖活性、抗定着活性、抗分化活性および/または抗発育活性について試験できる三つの異なる検定法を提供し、それらの方法は、被検リボヌクレアーゼの癌性細胞に対する作用を確認する生体外検定法、被検リボヌクレアーゼの腫瘍の発育に対する作用を確認する生体内検定法、および被検リボヌクレアーゼの、細胞アクチンおよび/または遊離アクチンに結合する性能を確認するもう一つの生体外検定法である。本発明を、理論によって限定することなしに、アクチンに結合するリボヌクレアーゼの性能は、このようなリボヌクレアーゼが抗増殖活性、抗定着活性、抗分化活性および/または抗発育活性を有していることを示していると考えられる。本発明のリボヌクレアーゼは、ヒトまたは他の動物などの生物に、それ自体で、または適切な担体または添加剤が混合されている医薬組成物で投与することができる。用語医薬組成物および薬剤は、本願で使用する場合、他の化学的成分、例えば薬理学に適切な担体および添加剤を含有する、本願に記載されている1種以上のリボヌクレアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドの製剤を意味する。医薬組成物の目的は、化合物を生物に投与しやすくすることである。用語添加剤は、本願で使用する場合、医薬組成物に添加して、化合物の投与を一層容易にする不活性物質を意味する。添加剤の例としては、限定されないが炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種の糖類と各種のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコール類がある。また医薬組成物は、一種以上の追加の有効成分を含有していてもよく、例えば限定されないが、抗炎症薬、抗菌薬、麻酔薬などが主有効成分に加えられる。本発明の医薬組成物は、当該技術分野で周知の方法、例えば、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、研和、乳化、被包形成、封入または凍結乾燥の方法によって製造することができる。したがって本発明にしたがって使用される医薬組成物は、有効化合物を、医薬として使用できる製剤に加工しやすくする添加剤と助剤を含む一種以上の薬理学的に許容できる担体を使用する通常の方式で調合できる。適正な調合は、選択される投与経路によって決まる。したがって、投与を行うために、本発明の医薬組成物は、適切な医薬担体、および有効量のT2-RNアーゼもしくはそれをコードするポリヌクレオチドを含有し、例えば、局所、眼内、非経口、経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、皮下または当該技術分野で周知の方法による他の有効な手段で投与される。静脈内、筋肉内または皮下の注射の場合、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドは、好ましくは生理的に相容性の緩衝液、例えばハンクス溶液、リンゲル溶液または生理食塩水の緩衝液で調合することができる。例えば、有効量のT2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドを含有する生理学的に適当な溶液は、血液循環系中に、全身にわたって投与して、直接到達できないかまたは解剖学的に切離すことができない癌または腫瘍を治療することができる。有効量のT2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドを含有する生理的に適当な溶液は、標的組織の腫瘍細胞を治療するために有効な量を、針によって、標的の癌組織または腫瘍組織に直接注射することができる。経粘膜投与の場合は、浸透させるべきバリアーに対して適当な浸透剤を調合に使用する。このような浸透剤は、当該技術分野で広く知られている。経口投与に使用する場合、本発明の医薬組成物は、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドを、当該技術分野で周知の医薬として許容できる担体と組み合わせることによって容易に調合することができる。このような担体によって、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドを、錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして、患者が経口摂取するために調合することができる。経口で服用する薬理学的製剤は、固体の添加剤を使用し、得られた混合物を任意に粉砕し、次いで所望の場合、適当な助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して製造し、錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。適切な添加剤は詳しくのべると充填剤であり、例えば糖類ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む、セルロース製剤例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル-セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および/または生理的に許容できるポリマー類例えばポリビニルピロリドンPVPがある。所望により、崩壊剤、例えば架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩例えばアルギン酸ナトリウムがある。糖衣錠コアには適切なコーティングが行われる。この目的のため、濃縮糖溶液が使用され、この溶液は任意にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含有している。染料または顔料を錠剤または糖衣錠のコーティングに添加して、識別したりまたは有効成分の投与量の異なる組合せを特徴づけることができる。経口で服用できる追加の医薬組成物としては、ゼラチン製のプッシュ-フィットpush-fitカプセル剤、およびゼラチンや可塑剤例えばグリセリンもしくはソルビトールで製造された密封軟カプセル剤がある。前記プッシュ-フィットカプセル剤には、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドがラクトースなどの充填剤、デンプン類などの結合剤、タルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤および任意に安定剤と混合されて入っている。軟カプセル剤中には、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドが、適切な液体例えば脂肪油類、流動パラフィンまたは液状ポリエチレングリコール類に溶解されているか懸濁されている。さらに安定剤を加えてもよい。経口投与用の配合物はすべて、選択された投与経路に適切な用量でなければならない。本発明の医薬組成物の経口による送達は、胃腸期間に存在するpHと酵素による分解のため成功しないことがある。したがって、そのような医薬組成物は、望ましくない環境を避けるように調合しなければならない。例えば、腸溶コーティングを経口固体調合物に適用することができる。酢酸フタル酸セルロースCAP、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートHPMCPおよびアクリル樹脂類のような耐酸性の物質が、マイクロカプセル化のための錠剤または顆粒をコートするために最も一般的に使用される。腸溶コートされた顆粒を製造するには、有効成分とコーティングの反応を避けるため、湿式造粒法を利用することが好ましいLin,S.Y.およびKawashima,Y.PharmaceuticalRes.4巻70-74頁1987年。溶媒蒸発法も利用できる。溶媒蒸発法は、血中グルコース濃度を維持するため糖尿病ラットに投与されるインシュリンをカプセルにつめるのに使用されたLin,S.Y.ら、Biomater,MedicineDevice,Artificialogan13巻187-201頁1986年およびLin,S.Y.ら、BiomchemicalArtificialCellsArtificialOrgan16巻815-828頁1988年。溶媒蒸発法は、ウイルス抗原やコンカナバリンAなどの高分子量の生物物質をカプセルにつめるのにも使用されたMaharaj,I.ら、J.Pharmac.Sci.73巻39-42頁1984年。口腔内投与の場合、本発明の医薬組成物は、通常の方式で調合された錠剤またはロゼンジの形態であればよい。直腸投与の場合は、当該技術分野で周知である坐剤を利用できる。吸入による投与の場合、本発明によって使用されるT2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドは、加圧パックまたはネブライザーから、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素を使用してエーロゾルスプレイの形態で便利に送達される。加圧エーロゾルの場合、用量単位は、弁を設置して計量された量を送達することによって決定することができる。吸入器または吹入器に使用する例えばゼラチン製のカプセルやカートリッジは、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドおよびラクトースもしくはデンプンなどの適切な粉末ベースの粉末混合物を入れて調合できる。本発明の医薬組成物は、例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用にも調合できる。注射用組成物は、単位剤形、例えば任意に保存剤を加えたアンプルもしくはマルチドーズコンテナーで提供できる。その組成物は、油性もしくは水性の媒体による懸濁液、溶液または乳液でもよくそして懸濁化剤、安定剤および/または分散剤などの調合剤を含有していてもよい。非経口投与用医薬組成物としては、水溶性型の有効成分の水溶液がある。さらに、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドの懸濁液は、適当な油性注射懸濁液として製造することができる。適切な親油性の溶媒または媒体としては、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチル、トリグリセリド類もしくはリポソーム類などの合成の脂肪酸エステルがある。水性注射懸濁剤は、その懸濁液の粘度を増大する物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含有していてもよい。この懸濁剤は、T2-RNアーゼもしくはそれをコードするポリヌクレオチドの溶解度を増大して、高濃度溶液を製造できるようにする適切な安定剤または薬品を任意に含有していてもよい。あるいは、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドは、使用する前に、適切な媒体、例えば滅菌されたパイロジェンなしの水で再構成するための粉末形態でもよい。本発明の医薬組成物は、例えばカカオバターなどのグリセリド類のような通常の坐薬ベースを使用して、坐剤または保持浣腸剤などの直腸組成物にも調合することができる。さらに、体腔、例えば眼、胃腸管、泌尿生殖器官例えば膀胱、肺系統および気管支系統などに存在する癌または腫瘍は、有効量のT2-RNアーゼもしくはそれをコードするポリヌクレオチドを含有する生理学的に適当な組成物例えば滅菌された、食塩水もしくはリン酸緩衝液などの溶液、懸濁液または乳液を、針による直接の注射または癌もしくは腫瘍に冒された中空臓器中に配置されたカテーテルなどの送達管によって受け取ることができる。X線、ソノグラムまたは光ファイバーの視覚化装置などの有効な画像形成装置を使用して標的組織の位置をつきとめて針またはカテーテル管を、該組織の近くに案内することができる。本発明の医薬組成物は、浸透マイクロポンプで送達することもできる。その浸透マイクロポンプは体腔のうちの一つに移植され、医薬が治療すべき組織に、定期的に続いて放出される。この方法は、その医薬組成物に対する免疫反応が経験されている場合、特に有利である。この方法はオンコナーゼに利用されているVasandaniV.M.ら、CancerRes.15;56184180-4186頁1996年。あるいは、本発明の別の好ましい実施態様によれば、医薬として許容できる担体としては、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドを、被検者の哺乳類細胞に送達することができる送達媒体がある。タンパク質または核酸を、腫瘍または癌細胞を標的として送りこむ多くの送達媒体や方法が当該技術分野で知られている。例えば、リポソームは、タンパク質または核酸を標的細胞中に送達するのに利用できる人工膜のベシクルであるNewton,A.C.およびHuestis,W.H.,Biochemistry27巻4655-4659頁1988年;Tanswell,A.K.ら、BiochmicaetBiophysicaActa1044巻269-274頁1990年;およびCeccoll,J.ら、JournalofInvestigativeDermatology93巻190-194頁1989年。したがって、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドは、高い効率でリポソームベシクルで被包して哺乳類細胞中に送達できる。その上に、T2-RNアーゼタンパク質または核酸は、例えばLeeの米国特許第5925628号に記載されているように、ミセルによって、腫瘍または癌の細胞を標的として送達することもできる。なおこの特許は本願に援用するものである。リポソームまたはミセルに被包されたT2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドは、局所、眼内、非経口、鼻腔内、気管内、気管支内、筋肉内、皮下に、または他の有効な手段によって、標的組織の異常に増殖する細胞を治療するのに有効な投与量で投与することができる。リポソームは、被包されたT2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドの有効量を含有する生理学的に適当な組成物で投与することができる。あるいは、本発明の他の好ましい実施態様によって、その送達媒体は、限定されないが、特定の細胞表面受容体またはマーカーに結合できる抗体またはリガンドでもよい。抗体またはリガンドは、T2-RNアーゼタンパク質もしくは核酸に、適切なリンカーを通じて直接結合できるか、あるいはこのような抗体もしくはリガンドは、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドを被包しているリポソームの表面に提供することができる。例えば、T2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野ですでに述べられているように、特定の組織または細胞を標的として向かわせるために、特定の膜タンパク質の抗体もしくはリガンドと融合させてもよい。この点については、リボヌクレアーゼAスーパーファミリーのRNアーゼAが、トランスフェリン受容体に対する抗体または抗原CD5に対する抗体と融合すると、上記毒素各々に対して特異的な受容体を保持する腫瘍細胞内でのタンパク質合成が阻害されることが分かるであろうRybak,M.ら、J.Biol.Chem.266巻21202-21207頁1991年およびNewton,DLら、ProteinEng.104巻463-470頁1997年。本発明で使用するのに適切な医薬組成物としては、有効成分の意図する目的を達成するのに有効な量を含有する組成物がある。より具体的に述べると、治療のために有効な量とは、疾患の症状を予防し、軽減しまたは改善するためまたは治療されている被検者の生存を延長するために有効な有効成分の量を意味する。治療のために有効な量を決定することは、特に、本願に詳細に開示されていることにてらして、十分に当業技術者の技量の範囲内にある。本願に記載の有効成分の毒性と治療効力は、細胞培養または実験動物の標準的製薬学的方法によって、例えば被検者に対する有効成分のIC50およびLD50被検動物の50が死ぬ致死量を測定することによって確認することができる。これらの細胞培養検定法や動物実験から得たデータを利用して、ヒトに使用する投与量の範囲内の調合を行うことができる。その投与量は、利用される剤形と利用される投与経路に応じて変えることができる。正確な調合、投与経路および投与量は、個々の医師が、患者の症状を考慮して選択することができる例えば、ThePharmacologicalBasisofTherapeutics1章1頁1975年のFinglらの論文参照。投与は、治療される症状の重症度と反応性に対応して、徐放性組成物の一回の投与でもよく、治療の過程は、数日間~数週間または治癒するまでもしくは疾患状態が減退するまで続く。投与すべき組成物の量は、勿論、治療される被検者、苦痛のきびしさ、投与の方式、担当医師の判断などによって決まる。さきにすでに述べているように、本発明の一側面によって、医薬組成物の有効成分は、T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドである。本発明のこの側面によって、前記ポリヌクレオチドは、医薬として許容できる担体とともに哺乳類細胞中に導入され、その導入によって、その細胞の遺伝子調節が行われて、その細胞内でT2-RNアーゼを発現することができる。用語遺伝子調節は、本願の明細書と特許請求の範囲で使用される場合、核酸を細胞に挿入する方法を意味する。その挿入は、例えばウイルス感染、注射、トランスフェクション、粒子衝撃法または核酸を細胞に導入するのに有効な他の手段で行うことができ、これら手段のうちいくつかは、以下にさらに詳細に説明する。遺伝子調節によって、前記核酸は、全部か一部が細胞のゲノムDNAに組みこまれるかまたは細胞ゲノムの外側に留まり、安定して修飾された細胞または一時的に修飾された細胞が提供される。したがって、本発明のこの側面の医薬組成物は、遺伝子治療に使用することができる。用語遺伝子治療または遺伝治療は、本願で使用する場合、互いに取り換えて使用することができ、かつ癌細胞などの増殖性細胞類の安定した遺伝子調節または一時的な遺伝子調節によって前記細胞の増殖が阻害される治療法を意味する。そのGeneBankの受託番号によって表2にあげたポリヌクレオチドのいずれか一つを、T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドとして、本発明で利用することができる。さらに、先に列挙したポリヌクレオチドと、40以上相同性でおよび/またはゆるやかなおよび/またはストリンジェントなハイブリッド形成条件下でハイブリッドを形成するポリヌクレオチドも、それがコードするタンパク質がT2-RNアーゼとしての特性を有しかつ所望の活性を示すならば、T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドとして利用できる。さらに、かようなポリヌクレオチドの部分、変異体、キメラまたは対立遺伝子も、かようなポリヌクレオチドのかような部分、変異体、キメラまたは対立遺伝子が、所望の活性を示すT2-RNアーゼをコードするならば、やはり、本発明によって、T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドとして使用できる。T2-RNアーゼをコードする新規なポリヌクレオチドを単離することも考えられる。このような単離は当該技術分野で周知の方法を利用して行うことができ、限定されないがライブラリースクリーニング、ハイブリッド形成、PCR増幅、標識化プライマー、標識化変性プライマーlabeleddegeneratedprimerがある。したがってゲノムとcDNAのポリヌクレオチドを利用できる。本発明のポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法を使用して、他のタンパク質をコードするポリペプチドに、インフレームで融合させて、融合タンパク質をコードさせることができる。例えば、そのポリペプチドは、リーダー配列または分泌のためのシグナルペプチドに融合させることができる。同様に、T2-RNアーゼタンパク質は、当該技術分野で周知の方法を使用して他のタンパク質に融合複合させることができる。タンパク質を含む異なるタイプの分子を、複合または融合連結させる多種類の方法が当該技術分野で知られている。これらの方法は、本発明で使用して、T2-RNアーゼを、リガンドもしくは抗体などの他の分子に連結させ、T2-RNアーゼが特定の細胞型を標的として向かわせてそれに結合するのを助ける。当業技術者に知られている複合方法を使用して、タンパク質のペアを複合もしくは融合させることができる。これらのタンパク質は、3-2-ピリジルジチオプロピオン酸エヌヒドロキシスクシンイミドエステルN-スクシンイミジル3-2-ピリジルジチオプロピオネートとも呼称されているSDPDSigmaカタログ番号:P-3415、グルターアルデヒドgluteraldehyde複合法またはカルボジイミド複合法を使用して複合することができる。本発明の好ましい実施態様によれば、ポリヌクレオチドが、T2-RNアーゼをコードする配列に作動的に連結された、一つ以上のセグメントを保持する転写制御配列を含有している。このような転写制御配列は、限定されないが以下に詳細に説明するプロモーターおよびエンハンサーを含有している。これらの転写制御配列は、一般にコード領域の上流に作動的に連結されて、転写および/またはその翻訳を調節する働きをする。本発明の別の好ましい実施態様によれば、T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドは、真核細胞の発現ベクター内に含まれている。用語発現ベクターは、T2-RNアーゼをコードする配列および転写制御配列を含有し、かつT2-RNアーゼを哺乳類の細胞内で発現することができる核酸配列を意味する。哺乳類の遺伝子を発現させることを目的として、DNA断片をベクター中に挿入する多種類の方法が、当該技術分野で知られていて、適当な転写/翻訳制御配列および所望のT2-RNアーゼのポリヌクレオチド配列を含有する、T2-RNアーゼをコードする遺伝子発現ベクターを構築するのに利用することができる。これらの方法としては、生体外でのDNA組換え法と合成法および生体内での遺伝子組換え法がある。T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドの発現は、転写制御配列によって調節され、その結果、T2-RNアーゼが、組換えDNA分子でインフェクトされたかまたはトランスフェクトされた宿主細胞内で発現される。例えば、T2-RNアーゼの発現は、当該技術分野で知られているプロモーター/エンハンサーの要素によって制御できる。そのプロモーターの活性化は、組織特異的であるかまたは代謝産物もしくは投与された物質によって誘発することができる。標的の組織もしくは細胞内でのT2-RNアーゼの発現を制御するのに使用できるプロモーター/エンハンサーとしては、限定されないが、天然のRBプロモーター、サイトメガロウイルスCMVのプロモーター/エンハンサーKarasuyama,H.ら、J.Exp.Med.169巻13頁1989年ヒトβ-アクチンプロモーターGunningP.ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA84巻4831-4835頁1987年、マウスの乳癌ウイルスのロングターミナルリピートHHTVLTR中に存在するグルココルチコイド誘発性プロモーターKlessig,D.F.ら、Mol.CellBiol.4巻1354-1362頁1984年、Holoneyマウス白血病ウイルスのロングターミナルリピート配列MULVLTRWeiss,R.ら、RNATumorViruses1985年、ColdSpringHarborLaboratory、米国ニューヨーク州コールドスプリングハーバー、SV40初期領域プロモーターBernoistおよびChambon、Nature290巻304-310頁1981年、ラウス肉腫ウイルスRSVの3′ロングターミナルリピートに含まれているプロモーターYamamotoら、Cell22巻787-797頁1980年、単純ヘルペスウイルスHSVのチミジンキナーゼプロモーター/エンハンサーWagnerら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.78巻1441-1445頁1981年、メタロチオネイン遺伝子の調節配列Brinsterら、Nature296巻39-42頁1982年、アデノウイルスのプロモーターYamadaら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.8211巻3567-3571頁1985年、および単純ヘルペスウイルスLATプロモーターWolfe,J.H.ら、NatureGenetics1巻379-384頁1992年がある。腫瘍または癌の細胞の遺伝子治療で使用する、哺乳類宿主細胞と相容性の発現ベクターとしては、限定されないがプラスミド、レトロウイルスのベクター、アデノウイルスのベクター、ヘルペスウイルスのベクターおよび非複製型のアビポックスavipoxウイルスがあり、例えば米国特許第5174993号に記載されている。なおこの特許は本願に援用するものである。いくつもの方法を使用して、発現ベクターを、本発明のこの側面によって、一種または複数種の標的哺乳類細胞に送達することができる。例えば、有効量の発現ベクターを含有する、生理学的に適当な溶液などの適切な医薬として許容できる担体は、局所、眼内、非経口、経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、皮下にまたは他の有効な手段によって投与することができる。有効量の発現ベクターを含有する生理学的に適当な溶液は、血液循環系中に全身に投与して、直接には到達できないかまたは解剖学的に分離できない癌または腫瘍を治療することができる。腫瘍塊を治療する場合、有効量の発現ベクターを含有する生理学的に適当な溶液は、標的腫瘍塊の腫瘍細胞を治療するのに有効な量で、針を通じて標的腫瘍塊中に直接注射することができる。あるいは、例えば、眼、胃腸管、泌尿生殖器官例えば膀胱、肺および気管支の系統内の体腔内に存在する癌または腫瘍は、有効量の発現ベクターを含有する生理学的に適当な組成物例えば、発現ベクター以外は滅菌されている食塩水またはリン酸緩衝液の溶液を、針による直接注射または癌もしくは腫瘍に冒された中空臓器内に配置されたカテーテルもしくは他の送達管によって受け取ることができる。X線、ソノグラムまたは光ファイバーの可視化装置などの有効な画像形成装置を使用して、標的組織の位置をつきとめて針またはカテーテル管を案内することができる。裸の発現ベクターは、哺乳類の細胞が能動的に吸収できるので、その発現ベクターが適当に充填されているかまたは被包されているならば、取り込みや標的に対する送達が促進される。したがって、本発明の他の好ましい実施態様によれば、医薬として許容できる担体は、発現ベクターを、哺乳類の細胞中に、標的指向方式で送達するのに適切な送達媒体を含んでいる。ウイルス発現ベクターは、感染または形質導入によって、発現可能の形態で標的細胞中に、送達媒体で導入することができる。このような送達媒体としては、限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルスおよびアビポックスウイルスがある。ベクター構造体を標的細胞中に導入することができかつT2-RNアーゼを標的細胞内で細胞の増殖を阻害する量で発現できる送達媒体は、上記の有効な方法で投与することができる。あるいは、このような送達媒体としては、限定されないが、先に述べたようなリポソーム、ミセル、抗体またはリガンドがある。本願に記載のポリヌクレオチドは、それを、適当な医薬として許容できる担体と混合することによって、哺乳類の哺乳類細胞の増殖を阻害するのに有用な薬剤を製造するのに利用できることは分かるであろう。先に述べたように、T2-RNアーゼをコードするポリヌクレオチドは各種の方法で得ることができるが、これらの方法としては、限定されないが、T2-RNアーゼ特異的プライマーを使用してゲノムまたはcDNAのライブラリーをスクリーニングし、T2-RNアーゼ特異的プライマーとともに逆転写PCRを使用して、T2-RNアーゼを発現することが分かっている生物から単離されたmRNAを増幅するポリメラーゼ連鎖反応PCRによる増幅方法、またはT2-RNアーゼをコードするDNA配列を適当な生物から直接単離する方法がある。この場合、上記方法は、活性形態の上記T2-RNアーゼを単離または発生させるのに利用することもできることは分かるであろう。精製されたポリヌクレオチドは、次に適当な発現ベクター中に挿入するか、または適当な転写制御配列を提供して上記のように製造することができる。以下の実施例の章でさらに例示しかつ先に述べたように、特定のT2-RNアーゼまたはそれをコードするポリヌクレオチドの作用を確認する検定法も本発明の教示によって提供される。このような検定は、例えば、増殖中の細胞をT2-RNアーゼに暴露してそれら細胞の増殖挙動を時間の経過とともに追跡して、対照の未処置の細胞と比較することによって行われる。この検定法は、特定の用途に対して最も強力なT2-RNアーゼを選択するのに利用できるだけでなく、用量反応を確証するのにも利用することができる。このことは生体内実験中、または被検者を治療中の初期治療投与量に反映させることができ、これらのことは、T2ファミリーのRNアーゼB1について本願でさらに例示する。この検定法は、抗増殖活性の部位もしくは部分またはT2-RNアーゼを確認するとか、または発生もしくは単離した、リボ核酸分解活性を示さない変異体の活性を確認するのに使用することもできることが分かるであろう。本発明の追加の目的、利点および新規な特徴は、以下の実施例を試験すれば、当業技術者には明らかになるであろう。なおこれら実施例は本発明を限定するものではない。さらに、先に詳細に説明されかつ特許請求の範囲の章で請求されている本発明の各種実施態様と側面は各々、以下の実施例で実験によって支持されている。ここで以下の実施例について述べるが、これら実施例は、上記説明とともに本発明を例示し、本発明を限定するものではない。一般に、本願で利用される命名法と本発明で利用される実験手順としては、分子生化学的方法、微生物学的方法および組換えDNA法がある。このような技法は文献に綿密に説明されている。例えば以下の文献を参照されたい。すなわち、MolecularCloning:AlaboratoryManualSambrookら1989年;CurrentProtocolsinMolecularBiologyI-III巻、Ausubel,R.M.編1994年;Ausubelら、CurrentProtocolsinMolecularBiology、JohnWileyandSons、米国メリーランド州ボルチモア1989年;Perbal、APracticalGuidetoMolecularCloningJohnWileySons、米国ニューヨーク1988年;Watsonら、RecombinantDNA、ScientificAmericanBooks、米国ニューヨーク;Birrenら編GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries1-4巻、ColdSpringHarborLaboratoryPress米国ニューヨーク1998年;米国特許の4666828号、4683202号、4801531号、5192659号および5272057号に記載されているような諸方法;Cellis,J.編CellBiology:ALaboratoryHandbookI-III巻1994年;Freshney著CultureofAnimalCells-AManualofBasicTechnique第3版1994年、Wiley-Liss、米国ニューヨーク;Coligan,J.E.編CurrentProtocolsinImmunologyI-III巻1994年;Stitesら編、BasicandClinicalImmunology第8版1994年、AppletonLange、米国コネチカット州ノーウォーク;MishellおよびShiigi編SelectedMethodsinCellularImmunology、W.H.FreemanandCo.米国ニューヨーク1980年があり;そして利用可能な免疫検定法は特許や科学文献に広く記載されている。例えば以下のものを参照されたい。米国特許の3791932号、3839153号、3850752号、3850578号、3853987号、3867517号、3879262号、3901654号、3935074号、3984533号、3996345号、4034074号、4098876号、4879219号、5011771号および5281521号;Gait,M.J.編OligonucleotideSynthesis1984年;Hames,B.D.およびHigginsS.J.編NucleicAcidHybridization1985年;Hames,B.D.およびHigginsS.J.編TranscriptionandTranslation1984年;Freshney,R.I.編AnimalCellCulture1986年;ImmobilizedCellsandEnzymes、IRLPress1986年;Perbal,B著APracticalGuidetoMolecularCloning1984年とMethodsinEnzymologyvol.1-317、AcademicPress;PCRProtocols:AGuideToMethodsAndApplications、AcademicPrese、米国カリフォルニア州サンディエゴ1990年;Marshakら著StrategiesforProteinPurificationandCharacterization-ALaboratoryCourseManualCSHLPress1996年。これらの特許や文献は、あたかも本願に完全に記載されているように本願に援用するものである。他の一般的文献がこの文書全体に提供されている。これら文献の方法は、当該技術分野では周知であると考えられ、読者に便利なように提供されている。これら文献に含まれている情報はすべて本願に援用するものである。実施例1アスペルギルニガーAspergillusnigerB1のRNアーゼの特性決定と、そのRNアーゼの、果物の木の花粉管成長に対する阻害作用材料と方法エーニガーの細胞外RNアーゼの調製と精製:アスペルギルスニガーB1CMICC324626を、1w/vの小麦粉と0.05w/vの硫酸アンモニウムを含有する液体培地で増殖させた。得られた混合物を、塩酸でpH3.5に調節してオートクレーブで処理した。約106個の胞子からなる接種物を100mlの培地100mlに懸濁させ、次に200rpmのオービタルシェーカーで30°Cにて100hrインキュベートした。その増殖培地を、10倍容積の2mM酢酸ナトリウムpH6に対し、0.2μm膜を通過させて3回透析した。その透析溶液2lを、20mM酢酸ナトリウムpH6で平衡化させたFractogelEMD-TMAE650M26/10Merckカラムに注入した。捕捉されたタンパク質類を、高速タンパク質液体クロマトグラフィーFPLCシステムPharmaciaを流量5mlmin-1で使用して、同じ緩衝液中0~1.0M塩化ナトリウムの直線勾配液500mlで溶離させた。最高のRNアーゼ活性を示す画分をプールし、2mM酢酸ナトリウムpH6に対して透析し、次にその50mlを、20mM酢酸ナトリウムpH6で平衡化したMONO-Q5/5HRPharmaciaカラム中に注入した。溶離は、0~1.0Mの塩勾配液10mlだけを1ml-min-1の流量で使用したことを除いて、前記EMD-TMAEカラムの場合と同様にして行った。タンパク質類は、ウシ血清アルブミンBSAを標準として使用して、BradfordBradford,M.M.,Anal.Biochem.72巻248-245頁1976年にしたがって280nmで監視して測定した。異なる画分は、12.5ドデシル硫酸ナトリウム-アクリルアミドゲル電気泳動法SDS-PAGELaemmeli,U.K.,Nature227巻680-685頁1970年によって分析した。RNアーゼ活性は、先に記載したようにしてRoizおよびShoseyov,Int.J.PlantSci.156巻37-41頁1995年測定した。上記精製されたRNアーゼB1を、Broothaertsらが報告した方法Broothaerts,W.P.ら、Sex.PlantReprod,4巻258-266頁1991年にしたがって酵素によって脱グリコシル化した。その酵素は、0.5w/vSDSと5w/vβ-メルカプトエタノールに混合し、100°Cで5分間加熱した。放冷後、その反応混合物を、50mMリン酸ナトリウムpH7.5、25mMEDTA、1w/vTritonX-100および0.02w/vアジ化ナトリウムを含有する緩衝液で2.5倍希釈した。ペプチド-N-グリコシダーゼFPNGアーゼF、Boehringer-Mannheimを、最終濃度20単位ml-1まで加えて、一夜37°Cでインキュベートした。次にその試料を試料用緩衝液と混合し、100°Cで5分間加熱し、次いで12.5のゲルを使用してSDS-PAGEで分析した。RNアーゼ検定:RNアーゼの活性に対する最適の条件を、10°Cずつ上昇させる20~100°Cの温度範囲と、50mMと12mMのリン酸塩-クエン酸塩緩衝液で行った、0.5pH単位ずつ上昇させるpH2.5~7の範囲を使ってBrownとHoの方法Brown,P.H.およびHo,T.H.D.,PlantPhysiol.82巻801-806頁1986年を改変した方法によって決定した。10μlずつの各試料を、4mgml-1の酵母RNASigmaを含有する氷冷緩衝液490μlに加えた。各試料の1/2に、25w/v過塩素酸中0.75w/v硫酸ウラニル50μlを含有する停止溶液を直ちに添加することによってブランクとして使用した。残りの1/2は、10分間インキュベートし、続いて停止溶液50μlを各々に添加した。15000Xgで5分間遠心分離を行った後、その上澄み液を蒸留水で20倍に希釈し、260nmの吸光度を測定した。RNアーゼ活性の1単位を、1A.U260nm/minの速度で可溶性ヌクレオチドを放出する酵素の量と決定した。RNアーゼB1を、先に記載したようにしてRoizおよびShoseyov,Int.J.PlantSci.156巻37-41頁1995年可視化した。RNアーゼB1を含有するSDSゲルを、25v/vイソプロパノールを含有する20mM酢酸塩緩衝液pH3.5を使って15分間ずつ2回洗浄し、次に、上記緩衝液だけで15分間ずつ2回洗浄することによって再生させた。RNアーゼB1を含有する再生されたゲルを、20mM酢酸塩緩衝液中0.1RNAと0.8アガロースを含むプレート上に塗布し、次いで37°Cで30分間インキュベートした。そのゲルを取り出し、そのアガロースプレートを、トルイジンブルーの0.02w/v水溶液で染色してRNアーゼの活性を可視化した。RNアーゼB1の花粉管成長に対する作用Peachcv.Almogの花粉を、先に述べたようにしてRoidおよびShoseyov,Int.J.PlantSci.156巻37-41頁1995年、液体培地中、生体外で発芽させた。15w/vスクロース、100μgml-1ホウ酸、200μgml-1硫酸マグネシウム、200μgml-1硝酸カルシウムおよび各種濃度のRNアーゼB1を含有する100μlずつに花粉粒を懸濁させた。暗室中、25°Cで一夜インキュベートした後、発芽率を記録した。花粉管の長さを、アイピースマイクロメータで測定した。花粉管の成長に対するRNアーゼB1による処理の作用も生体内で試験した。桃とタンジェリン[シトルスレチキュラータCitrusreticulata、Blancocv.Murcott]の無傷の花に、開花の初期段階において、100単位ml-1のRNアーゼB1を含有する20mMクエン酸塩緩衝液pH3.5をスプレーした。各々の種の、異なる枝にある同じ段階の追加の花は、対照として緩衝液だけをスプレーするかまたは処理しないままで残した。自然受粉に48hr暴露した後、花柱を、酢酸:エタノールの容積比率3:1の混合物内で24hr固定し、蒸留水で洗浄し、次に、8M水酸化ナトリウム内で一夜吸水させた。蒸留水で十分洗浄した後、花柱を縦方向に切断し、各々をスライドガラス上の0.1Mリン酸カリウム中0.1w/vアニリンブルーの一滴の中に浸漬させ、次いでカバーガラスで注意深く押しつぶした。花粉管をエピフルオレッセンスマイクロスコピーepifluorescencemicroscopyWIBキューブを備えたOlympusBX40で観察した。実止りに対するRNアーゼB1の作用:フィールド実験をネクタリン[プルヌスペルシカ変種ネクタリナファンタシアPrunuspersicavar.NectarinaFantasia]について行った。花がほぼ10開いた長さ30~40cmの枝に、20mMクエン酸塩緩衝液pH3.5と0.025triton-X100混合液中、異なる濃度のRNアーゼB1をスプレーした。未処理の枝および緩衝液とtriton-X100混合液のみをスプレーした枝を対照とした。これらの枝に、開花期間中14日間2~3日間隔でスプレーした。一ヶ月後、1枝当り果実の数をかぞえた。生存度試験を行うため、種子を胚をとおって縦方向に切断し、1の2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド含有水溶液中に、暗室内で20°Cにて4hr浸漬した。赤色に染色した組織は生存可能な組織を示した。実験結果RNアーゼB1の精製と特性決定:液体培地で増殖させたエーニガーは、かなりな量の細胞外RNアーゼB1を産生した。温度60°CでpH3.5が、RNアーゼの活性に対して最適であることが発見されたので、その後のRNアーゼ検定法の標準条件として採用した。RNアーゼB1の精製には三つのステップ表3がある。第一ステップにおいて、粗濾液には1000単位ml-1含まれていて、0.05mgml-1のタンパク質が得られた。その粗濾液に、EMD-TMAEカラムを通過させ、そしてプールされた活性画分図1グラフAは0.1mgml-1のタンパク質を含有し、RNアーゼの活性は40000単位ml-1であった。最後のステップで、プールされた画分に、MONO-Qカラムを通過させ次に、活性RNアーゼの画分を溶離させた図1、グラフB。この画分はタンパク質濃度が1.05μgml-1で、RNアーゼ活性は543000単位ml-1であった。40kDaと32kDaの二つの主要タンパク質のバンドが、精製されたRNアーゼB1画分のSDS-PAGEを行った結果観察された図2。RNアーゼ活性ゲルが、前記32kDaと40kDaのタンパク質に対応する活性バンドを示した。PNGアーゼFにかけると、単一のタンパク質バンドが29kDaに出現した。RNアーゼ活性は、PNGアーゼ消化の後も保持された図示していない。花粉管と実止りに対するRNアーゼB1の作用:生体外の実験では、対照花粉の75が発芽しそして花粉管は長さが約0.5mmになった。増殖培地中に、RNアーゼB1を添加すると、投与量反応方式で、発芽百分率と花粉管の長さが低下した図3。RNアーゼB1には著しい阻害作用があった。0.1μgml-1のタンパク質を示す50単位ml-1が致命的であったが、125μgml-1のBSAは花粉発芽力と花粉管の生成の1/2しか低下させなかった。生体内では、桃の対照の花粉管は受粉後48hrに、柱頭組織を通過して花柱に向かって成長するのが観察された図4a。類似の作用が、緩衝液だけで処理された花柱に観察された。対照的に、RNアーゼB1で処理され、柱頭で発芽した花粉粒は短い花粉管を生成した。その花粉管は成長方向を欠いているようであり、花柱組織を通過できなかった図4b。タンジェリンの場合、柱頭組織直径が2~3mmであったのごく小さい部分しか顕微鏡の視野内にとらえられなかった。したがって図5に示すように、ごく少数の花粉管しか観察されなかった。しかし、対照の花粉管の正常な成長図5aと、RNアーゼで処理された花粉管の異常な成長図5bの差は明白であった。ネクタリンcv.ファンタシアnectarinecv.Fantasiaの場合、RNアーゼB1は、実止まりの低下を起こした表4。未処理のままで残した枝またはtriton-X100含有緩衝液をスプレーした枝はそれぞれ実止りが48.3と36.3であった。低pHの緩衝液は、実止まりに対する阻害作用がいくらかあるようであったが、500単位ml-1および1000単位ml-1のRNアーゼB1で処理した枝はそれぞれ実止りが23.3と18.4であった。このことは、投与量依存方式のRNアーゼの有意な間引き作用を示している。RNアーゼB1で処理した枝には、多数の未熟の小果実が観察された。生存度の試験は、対照の花の場合未処理かまたは緩衝液だけをスプレーは、胚組織が赤色に染色されたが図6aRNアーゼで処理された花の中で成長した胚の組織は、壊死を示す褐色に染色された図6a。アスペスギルスニガーB1細胞外RNアーゼRNアーゼB1を均一になるまで精製した。そのRNアーゼは、29kDaのタンパク質コアを共有する32kDaおよび40kDaの糖タンパク質の2種のアイソフォームを含有していることが発見された。最適のRNアーゼ活性が温度60°CとpH3.5で観察された。桃プルヌスペルシカcv.Almogとタンジェリンシトルスレチキュラータ、Blancocv.Murcottの場合、該酵素は、生体外および生体内で花粉の発芽と花粉管の成長を阻害した。フィールド実験で、RNアーゼはネクタリンプルヌスペルシカ変種ネクタリナファンタジアの実止りを低下させかつ正常な胚の成長を阻害した。実施例2T2-RNアーゼによる花粉の発芽と花粉管の成長の阻害はアクチンとの相互作用によって仲介されるRNアーゼによって花粉の発芽と花粉管の成長が阻害されることはよく知られているが、この酵素が前記伸長プロセスを阻害する機序はまだ明らかでない。したがって、この試験を、花粉管の伸長プロセスを阻害するRNアーゼB1の役割を読み解くために始めた。材料と実験方法花粉管の成長に対するRNアーゼB1の作用:ユリ[リリウムグランジフロルムL.cv.OsnatLiliumgrandiflorumL.cv.Osnat]のやくを、室温で24hr裂開させ、新鮮なものを使うかまたは-20°Cで貯蔵した。RNアーゼB1を、アスペルスニガーの増殖培地の濾液から、実施例1に記載されているようにして製造して精製した。7スクロース、1.27mMCaNO3、0.16mMH3BO3、1mMK2NO3および3mMKH2PO4を含有する水100μlずつの水性培地で、花粉を生体外で発芽させたYokotaおよびShimmenの1994年の論文。いくつかの培地は、100単位/mlのRNアーゼ活性を有するRNアーゼB1を、最終タンパク質濃度16μg/mlまで補充した。追加の培地は、予め30分間沸騰させて50の活性を失わせたRNアーゼまたは触媒活性を欠いているオートクレーブ処理されたRNアーゼを補充した。暗所にて25°Cで2hrインキュベートした後、花粉管の長さを、顕微鏡のアイピースマイクロメーターで測定した。花粉管をIKI0.3I2と1.5KIの水溶液で染色してデンプン体starchbodyを検出した。1hrにわたって活発に伸長している花粉管を顕微鏡載物台上のガラスセルに移した。その花粉管の成長パターンとオルガネラの移動を、ApplitecMSV-800ビデオプレゼンタを使用し、Heslop-Harrison,J.とHeslop-Harrison,Y.法Heslop-Harrison,J.およびHeslop-Harrison,Y.,SexPlantReprod.3巻187-194頁1990年の改変法でビデオに記録した。画像は、ScionLG-3フレームグラバーによって、0.8フレーム/secで8秒間とらえ、次にNIH画像ソフトウエアによってディジタル化して統合した。それらの写真はAdobePhotoshopAdobeSystemsInc.,米国カリフォルニア州マウンテンビューおよびPower-PointMicrosoftCo.のソフトウエアを使用して処理した。花粉管のアクチンフィラメントに対するRNアーゼの作用:RNアーゼありまたはなしの水性培地で、花粉を生体外にて発芽させた。一夜インキュベートした後、花粉管を、おだやかにペレット処理を行いpellet、次いで前記増殖培地を、10-6MのテトラメチルローダミンBイソチオシアネートTRITCで標識化したファロイジンSigmaを含有するPBST緩衝液150mMNaCl、3mMKCl、10mMNa2HPO4、2mMKH2PO4および0.02Tween-20と取りかえた。生体内観察を行うため、lilycv.Stargazerの花を、開花開始時に除雄し、次に10単位/mlのRNアーゼを含有する増殖培地0.5mlを、柱頭を通じて花柱溝中に注射した。RNアーゼなしの増殖培地を注射された花を、対照として使用した。上記液体を、花柱組織中に25°Cで5hr吸収させた後、柱頭に、lilycv.Osnatの花粉を手作業で受粉させた。25°Cで48hrインキュベートした後、各雌ずいを縦方向に切断し、そして花粉管を注意深く切り取って、TRITC-TBST溶液中に移し、1hrインキュベートした。柱頭での切開は花粉管に影響しなかった。というのは花粉管の死活にかかわるプロトプラストは遠位部分に位置していて、カロースプラグcalloseplugで保護されているからである。生体外と生体内の実験の両方で、染色された花粉管をTBSTween-20を欠いたTBSTですすぎ、スライドガラス上に置いて、エピフルオレッセント光学顕微鏡USH-102D水銀ランプを備えたOlypusBX40で観察した。アクチンのRNアーゼB1への結合:RNアーゼB1とアクチンの間の相互作用を、Simm法Simm,F.C.ら、Eur.J.Biochem.166巻49-54頁1987年を改変して利用して定量した。ウサギの筋肉グロブG-アクチンSigmaCo.を、緩衝液F10mMトリスpH8.0、0.1mMATP、0.2mMCaCl2、0.1MKClおよび2mMMgCl2中で、室温にて30分間重合させて線維状F-アクチンを得た。30μMのF-アクチンを各々含有する50μlずつの試料を、1~33μMRNアーゼB1とともに、一夜4°Cでインキュベートした。対照として、各濃度のRNアーゼを、緩衝液Fのみとともにインキュベートした。これら試料を、15000gで40分間遠心分離し、その上澄み液のRNアーゼ活性を測定したRoiz,L.,Goren,R.およびShoseyov,O.Physiol.Plant.94巻585-590頁1995年。花粉管上のRNアーゼB1の免疫金-銀染色法:免疫金-銀染色法IGSSを利用して、ユリの花粉管に対するRNアーゼの吸着を検出した。ポリクローナル抗体を、ウサギに、RNアーゼB1Aminolabに対して生成した。生体外で2hr経過したユリの花粉管を、2.5グルターアルデヒド含有PBST中、4°Cで一夜固定した。その花粉管を、PBST内で1hr洗浄し、1BSAと2脱脂乳を含有するPBST中で1hrブロックし、次にPBSTで1:500の比率で希釈した抗-RNアーゼB1内で1hrインキュベートした。ウサギの免疫前血清PISを対照として利用した。これら花粉管を各々、PBSTで10分間ずつ3回洗浄し、5nmの金粒子と結合したヤギ抗ウサギIgGPBSTで1:100の比率にて希釈内で1hrインキュベートした。PBST内で10分間ずつ2回洗浄し、次に水中で10分間1回洗浄した後、反応を最終的に起こさせるため銀-染色キットBiocellResearchLaboratoriesを使用した。前記花粉管を、混合したキットの溶液に10~15分間浸漬し、過剰の蒸留水で洗浄し、光学顕微鏡OlympusBX40で観察した。実験結果RNアーゼなしの成長培地で生体外にて発芽させたユリの花粉管の対照試料は、長さが約300μmになった図7。同じ条件下RNアーゼで処置した培養物は、長さが160μmにしかならなかった。RNアーゼを沸騰もしくはオートクレーブ処理した場合それぞれの花粉管の長は130μmと170μmであった。花粉管のRNアーゼで処理された3群間に、有意差はないとみなされた。デンプン染色法は、対照試料のアミロプラストが、先端領域を除いて花粉管にそって広がっていることが観察されることを示した図8a。一方、RNアーゼで処理した花粉管のIKIで染色された本体が先端領域に蓄積した図8b。能動的に延びる花粉管の集積ビデオ画像は、細胞質のフローラインflowlineを示した図9aと9b。対照試料の場合、連続した縦方向の運動が最も一般的であり、花粉管の周囲は求頂的フローであり、中心は求基的フローであり、先端領域の下側に逆噴水inversefountainパターンを形成した図9a。先端領域自体は、非常に小さい本体、主としてP粒子が占めていたが、その運動パターンはほとんど観察されなかった。RNアーゼで阻害された花粉管の先端は、膨潤していて、先端領域に到達しているデンプンと脂質の粒子がよく見えた図9b。連続した運動は検出できなかったが、代わりに、伸長した不規則な画像が、細胞質体がランダムに回転していることを示した。アクチンフィラメントの分布に対するRNアーゼの作用を、生体外で1hrおよび生体内で48hrの花粉管で試験した。生体内の花粉管は長さが約3~4cmになり、それらのTRITC-ファロイジン染色は生体外の花粉管より強力であった。しかし、RNアーゼの作用のモードは、両方の実験では類似していた。対照の場合、アクチンのマイクロフィラメントが、花粉管の軸線にそって縦方向に組み付けられて、先端領域に微小ネットワークを形成した図10a、一方、RNアーゼで処理された花粉管の場合、アクチンの塊が、先端の細胞壁に蓄積された図10b。RNアーゼB1とアクチンの間の相互作用を、スキャッチャード分析法を利用して定量した。アクチン-RNアーゼB1実験において、0.45で横座標軸と交差する回帰直線図11は、RNアーゼ:アクチンのモル比が0.45であることを示したが、二つのアクチン分子が各RNアーゼ分子に結合していることを示唆している。RNアーゼB1の存在下で発芽させた花粉を光学顕微鏡で調べるために調製し、RNアーゼの位置を、抗RNアーゼ抗体を使用して、IGSSで確認した図12a~c。RNアーゼなしで成長させた花粉管図12aまたはRNアーゼありで成長させたがPISで処理した花粉管図12bの場合、その細胞壁の外面は、銀による染色がなかった。一方、RNアーゼB1で処置した花粉管の場合、明瞭な免疫金-銀の染色が現れ、先端領域に蓄積した図12c。この試験では、ユリリリウムグランディフロルムLiliumgrandiflrumの花粉の発芽と花粉管の伸長は、エーニガーのRNアーゼB1によって特異的に阻害された。沸騰もしくはオートクレーブ処理され、元の触媒活性をほとんど欠いているRNアーゼは、同様の阻害作用を示した。これら試験結果は、エーニガーのRNアーゼが、花粉管の伸長に対する阻害作用を有するアクチン結合タンパク質であることを立証した。RNアーゼB1の触媒活性には無関係のこの結合によって、花粉管アクチンフィラメントの配列が変形して細胞質の流れが中断される。実施例3ヒトの結腸癌細胞に対するRNアーゼB1の作用花粉管においてRNアーゼB-1に対して開かれたアクチン結合活性が、細胞傷害活性がある可能性を暗示したので、ヒト結腸癌細胞に対するRNアーゼB1の細胞傷害作用を試験することが決定された。材料と実験方法および試験結果細胞の培養:すべての実験を生体外で実施した。ヒトの結腸腺癌HT29細胞を、10のウシ胎仔血清、1のグルタミンおよび10のAntibiotic-Antimicotic溶液Biolabを補充したDMEM培地BiologicalIndustries,BetHaemekで増殖させた。その細胞を、5CO2を含有する加湿大気中で37°Cにてインキュベートした。RNアーゼB1の溶液は、PBS緩衝液pH6.8で調製した。細胞生存能の予備検定:細胞を50mlのフラスコでインキュベートした。各フラスコには、異なる濃度10-8~10-6MのRNアーゼB1の存在下または非存在下、7mlの培地中2×105の細胞を入れた。これらの細胞を48hrまたは72hr増殖させ、次いで生存可能な細胞と生存不能の細胞を、トリパンブルー染色法を利用し、区別して計数した。すべての処理で、72hr間増殖させた細胞の合計数55~60×105は、48hr培養後に得た細胞の数25~30×105の約2倍になった図13a。増殖培地中にRNアーゼB1が存在していることは、細胞の増殖に対して有意な作用はなかった。しかし、48hrと72hrのインキュベーションの両者で、死んだ細胞の数に対するRNアーゼB1の小さいが有意な作用が見られた図13b。クローン原性clonogenicityの検定I:腫瘍細胞の長期間の生存は、それら細胞の分裂してクローンを産生する性能が特徴である。細胞を10-6MのRNアーゼB1を含有する増殖培地で48hrプレインキュベートし次にトリプシンで処理し、洗浄し、次にRNアーゼB1を欠いた増殖培地中に再懸濁させた。96ウェル微量滴定プレート中にプレートする前に、その細胞を、各ウェル200ml中、50~105細胞の範囲で、5倍ずつの段階希釈を行った。これらプレートを、新しい増殖培地を添加することなく、上記条件で14日間培養し、続いてコロニーを固定してメチレンブルーで染色した。各ウェル中のクローン原性細胞を、クローン可視化を行った後、計数した。対照の細胞は上記のように処理したが、最初の48hrを、RNアーゼB1を欠いた培地でプレインキュベートした。100個の細胞をプレートしたウェルには、両方の処置で、類似の数のコロニーが観察された図14。RNアーゼB1の細胞傷害作用は、高密度の細胞が入っているウェルに出現した。500個ずつの細胞をプレートされたウェルの場合、対照の細胞とRNアーゼB1で処理された細胞は、それぞれ、1個のウェル当たり180個と100個のコロニーを産生した。さらに、1000個ずつの細胞でプレートしたウェルの場合、RNアーゼB1で処置した細胞は、ウェル1個当たり約250個のコロニーを形成したが、一方、対照の細胞は、融合して連続層になった非常に多数のコロニーを形成したので、図14には計数して示すことができなかった。高密度でプレートした細胞は、培地を変えない培養では生存しなかった。クローン原性検定II:腫瘍細胞が増殖しおよび定着する能力を、RNアーゼB1に短時間または連続的に暴露して試験した。この実験は、i対照の細胞;ii10-6MのRNアーゼB1を含有する培地でプレインキュベートし次にRNアーゼB1なしの増殖培地で定着させた細胞;およびiiiiiと同様にプレインキュベートし、次に、定着検定中、10-6MのRNアーゼB1を含有する増殖培地でインキュベートした細胞;を使用して、クローン原性検定Iに記載したのと同様に実施した。これらの実験で、初期密度は250~1000細胞/ウェルの範囲内であり、そして定着期間は7日間であった。この実験で利用した短期間のインキュベーション7日間を14日間のプレインキュベーションと比べたところディフューズされたコロニーdefusedcolonyは全くなかった。このコロニーは高密度の細胞を含有するウェルでさえも識別できる。すべての密度において、RNアーゼB1とともに48hrインキュベートすると、細胞が定着する能力は、対照と比べて、20~30低下した図15。しかし、各密度において、RNアーゼB1に連続して暴露すると、クローン原性の90が劇的に低下した。図16a~cは、RNアーゼB1で連続的に処置した細胞図16cが、RNアーゼB1とともに48hrプレインキュベートした細胞図16bまたは対照の細胞図16aより小さくかつ染色性が低かったことを示している。この試験結果は、RNアーゼB1がコロニー増殖速度を損なったことを示している。したがって、ここで提供した試験結果から明らかに分かるように、エーニガーのRNアーゼB1は、ヒトの腺癌HT29細胞に対し、明確な細胞傷害作用を有している。RNアーゼB1の細胞傷害作用は、細胞の生存能力の低下ではなくて、細胞のクローン原性の低下によって表現される。RNアーゼB1は腫瘍細胞に対して長期間、作用することができる。RNアーゼB1は対照と比べてコロニー増殖速度を低下させる。このことはRNアーゼB1は、細胞の増殖する能力を損なうことを示している。実施例4ラットモデルにおける腫瘍発生に対するRNアーゼB1の生体外作用RNアーゼB1の抗癌作用をさらに試験するため、生体内の実験をラットで行った。材料と実験方法Charles-River由来の4週間齢雄ラットを6頭ずつの群に分けた。いくつかの群のラットは、ジメチルヒドラジンDMHを一週間に一回ずつ五回注射することによって結腸癌を発生させた。この実験では、RNアーゼB1の2種の投与方式を試験した。RNアーゼB1は、浸透マイクロポンプによって、結腸に直接適用するか、または腸溶コートされたマイクロカプセルを使用して経口投与した。各ラット群に行った処置全体は図1の模式図に記載してある。実験中、ラットの重量を週一回測定して、ラットの成長速度に対するDMHおよび/またはRNアーゼB1の作用を監視した。RNアーゼB1で処置された群の糞便を、各ケージから週一回集めて60°Cで乾燥した。250mgの乾燥糞便の試料を粉砕し、リン酸緩衝食塩水PBSに再溶解した。遠心分離を行った後、上部溶液のRNアーゼ活性を、Roiz,L.ら、J.Amer.Soc.Hort.Sci.1251巻9-14頁2000年に記載されているようにして試験した。浸透マイクロポンプによる、RNアーゼB1の結腸への投与:RNアーゼB1を浸透マイクロポンプALZETに注入した。そのポンプをラット腹部の皮下に移植した。その浸透ポンプは、ラット結腸の容積が約4mlであると想定して、結腸中10-6Mの計算濃度で少なくとも6週間、RNアーゼB1を結腸にカテーテルによって一定量を放出した。ラットは次のように処置した。第一群のラットには、完全なRNアーゼ活性を有する生のliveRNアーゼB1RNアーゼB1が入っているポンプを移植した。第二群のラットには、オートクレーブによって不活性化されてRNアーゼ活性を欠いているRNアーゼB1I-RNアーゼB1が入っているポンプを移植した。一方第三群のラットには、最初の2群にRNアーゼB1の媒体として使用したPBSが入っているポンプを移植して、対照として利用した。RNアーゼB1の可能な予防作用を検査するため、選ばれてDMHで処置されたラットに、RNアーゼB1を、最初にDMHを注射した後、1~9週間にわたって投与した。次いで、これらラットを殺し、それらラットの結腸を切り取り、PBSで洗い次に0.1MのジチオトレイトールDTTを含有するPBSで洗浄した。次にその結腸を縦方向に切開し、濾紙上で、4ホルムアルデヒド含有PBS内にて少なくとも1hr固定した。0.025メチレンブルー含有PBSで染色した後、その結腸粘膜を、低倍率の顕微鏡によって異所性陰窩病巣aberrantcryptfociACFについて観察した。遠位5cm結腸のACFを計数した。RNアーゼB1の治療作用を検査するため、残りのラットには、最初にDMHを注射した後12~17週にわたってRNアーゼB1を投与した。その結腸を切り取り、上記のようにして固定し、腫瘍を計数し、測定した。組織病理学的検査を行うため、各腫瘍をパラフィン内に埋包した。薄い10μm切片を染色して悪性度を評価した。RNアーゼB1の経口投与:マイクロカプセルの製造:LinJ.J.,ら、Biochem.Biophys.Res,Commun.14;2041156-162頁1994年に記載されている改変法で、マイクロカプセルを製造した。凍結乾燥されたRNアーゼB10.6gとグルコース2.4gの混合物を、乳鉢と乳棒で十分に粉砕した。その微細粉末を、200mlの流動パラフィンと2mlのSpan-80が入っている1Lビーカー中にそそぎ入れ、次いで600rpmで20分間撹拌した。アセトン-エタノール-酢酸ブタル酸セルロースCAP溶液を、上記撹拌中の混合物に注意深く添加し9:1のアセトン:95エタノール40ml中に3.2gのCAP、次にフード内でさらに2hr撹拌して痕跡のアセトンを除いた。そのマイクロカプセルを、30mlのエーテルを添加することによって硬化させ、次にブフナー漏斗を使って濾紙上で乾燥し、次いで痕跡の流動パラフィンを、30mlのエーテルによる追加の洗浄2回によって除いた。そのマイクロカプセルを一夜乾燥し、微細なメッシュを通過させた。大部分のマイクロカプセルは200~500μmであった。予備実験で図18、CAPのマイクロカプセルは、胃の環境に相当する酸性pHでは不溶性であることが分かった。しかし、アルカリ性pH中、1hr後に、最高のRNアーゼ活性に到達した。これはそのマイクロカプセルが、その内容物を、腸において容易に放出できることを示している。RNアーゼB1のマイクロカプセルの経口投与:RNアーゼB1を含有するマイクロカプセルまたはグルコースをプラセボとして含有するマイクロカプセルを、粉砕したピューリナPurinaの固形飼料と混合した。RNアーゼB1で処置されたラットは各々毎日、RNアーゼB11.6mgの投与量で投与され、結腸の最終濃度が10-5Mに到達した。経口投与の実験の詳細は、試験終了を遅らせて11週間、RNアーゼB1の予防効果を評価したことを除いて、マイクロポンプによる投与について先に述べたのと同じであった図17。実験結果ラットの成長速度に対する異なる処置の効果:ラットの初期重量は約200gであった。実験は、上記のように各処置について異なる時間で終了した。ラットは、一般に、約400~500gの最終体重に到達したが、異なる処置間に有意差はなかった図19a~d。しかし、DMHで処置した群は、DMHの存在下または非存在下でRNアーゼB1で処置した群に比べて、体重がわずかに低下した。ラット糞便中のRNアーゼ活性:図20a~cは、予防モード図1で8週間にわたって、RNアーゼB1、I-RNアーゼB1またはPBSが入っている浸透ポンプを移植されたラットの糞便のRNアーゼ活性の変化を示す。RNアーゼB1で処置されたラットの場合図20a、糞便中のRNアーゼ活性は、I-RNアーゼB1で処置されたラット図20bまたはPBSで処置されたラット図20cの場合の5倍であった。この活性は、5週間にわたって高く維持され、次いでポンプ中のRNアーゼB1の貯槽のRNアーゼB1が消費されるにつれて徐々に減少した。基礎的内因性basalendogenousRNアーゼ活性が、前記後者二つの群の糞便中に観察された。マイクロカプセル化したRNアーゼB1を与えられたラットには、同様のパターンが観察されたが、グルコースだけを含有するマイクロカプセルを与えられたラットと比べて、8倍もの高いRNアーゼ活性が検出された図21。この実験において、RNアーゼの活性が徐々に減少するのは、ラットの体重が増加しその結果、結腸の容積が増大したためであると説明できる。予防剤としてのRNアーゼB1の作用:ポンプを移植されたラットは、ポンプの部位に感染が観察されたので、8週間後に殺した。この段階ではACFのみがみとめられた。ACFは、発癌の開始相中のラット結腸の発癌性変化の代理のバイオマーカーである。陰窩cryptaeの杯細胞はより大きくなり、通常の粘膜細胞に比べて強く染色された。ACFの計数値は、RNアーゼB1またはI-RNアーゼB1で処置した場合、劇的に減少した図22。結腸粘膜に対する損傷作用は、DMHなしで、RNアーゼB1またはI-RNアーゼB1で処置したラットには全く観察されなかった。マイクロカプセル化RNアーゼB1を与えられたラットの場合、実験は、DMHを最初に投与した後、11週間続けた。その時点で、腫瘍とACFの両方が存在していた。RNアーゼB1は、対照と比べて、腫瘍の数/結腸図23a、腫瘍の大きさ図23bおよびACFの数図23cを減少させた。さらに、結腸腫瘍の色の多様性が観察された。すなわち、強力に血液を供給された赤色の腫瘍図24a、ほとんど血管を欠いている白色の腫瘍図24b、およびごく少数の血管を有するピンク色の腫瘍図24cが観察された。グルコースで処置したラットの腫瘍はすべて赤色であった。一方、RNアーゼB1で処置されたラットは、赤みを帯びた腫瘍の数が有意に減少するのを観察され図24d、腫瘍の10がピンク色で50が白色であった。これらの試験結果は、RNアーゼB1の抗血管新生作用を明確に示している。腫瘍は、組織病理学的パラメータによって、良性であるかまたは悪性であるかを識別することもできる。アデノーマと呼ばれる良性腫瘍図25aは、増殖した粘膜層によって、そして時にはアデノパピローマの発育によって形成されるが、その粘膜下組織は、無傷であり、他の結腸層に対し輪郭がはっきりしている。腺癌と呼ばれる悪性腫瘍の場合、粘膜細胞が、粘膜下組織の下側につきぬけて、結局、組織の配列が失われる図25bと25c。グルコースまたはRNアーゼB1で予防のため処置したラットの異なるタイプの腫瘍の分布を検査した結果、RNアーゼB1が悪性度を明確に低下したことが分かった図9d。治療剤としてのRNアーゼB1の作用:浸透ポンプによって直接に適用するかまたは経口で適用する方式の両方で、十分に発育した腫瘍を、実験の12~17週間中、RNアーゼB1に暴露した。浸透ポンプによって処置したラットに対し、RNアーゼB1は腫瘍の数/結腸を減少させた図26a。対照に比べて約50の阻害作用は、I-RNアーゼB1で処置したラットの場合、最も有意であった。RNアーゼB1は、大きさの分布によって立証されているように腫瘍の増殖に影響した図26B。一般に大部分の腫瘍は、直径が3~5mmであったが、PBSで処理されたラットの場合、9~12mmを越える例外的に大きい腫瘍が出現した。この試験結果は、RNアーゼB1が既存の腫瘍の発育を阻害または阻止することを暗示している。しかし、RNアーゼB1とI-RNアーゼB1の作用の間に有意差は全く観察されなかった。RNアーゼB1の予防作用の実験の場合と同様に、血管新生のパターンも、浸透ポンによって適用されたRNアーゼB1によって影響を受ける図26c。PBSで処置されたラットの大部分の腫瘍約80が赤色であった。対照的に、RNアーゼB1で処置されたラットとI-RNアーゼB1で処置されたラットの両者は、腫瘍の30しか赤色でなかったが、一方、残りの腫瘍はピンク色もしくは白色であった。RNアーゼB1は、既存の腫瘍の血管新生を減らすことも明らかであった。カプセル化されたRNアーゼB1を与えられたラットの場合、処置の作用は、浸透ポンプで得た作用より有意性は小さかった図27a~c。この結果は、タンパク質のごく少部分が結腸に到達すると想定することによって説明される。先に述べたように、マイクロカプセルは実際に胃を通過するが、さらに、小腸や盲腸を通る長い経路がある。したがって、この仮説を試験する実験を、蛍光タンパク質を負荷したCAPマイクロカプセルを使用しラットに与えて実施した。これらラットは6hr後に殺し、これらラットの胃腸管の内容物を、蛍光顕微鏡で観察した。マイクロカプセルは、十二指腸内で溶解し始めることが発見された。その溶解はさらに回腸や空腸で行われる。マイクロカプセルが盲腸に到達すると、その蛍光の大部分は盲腸の内容物中に拡散した。マイクロカプセルが損傷すると、RNアーゼB1の作用は、腸や盲腸内に存在するプロテアーゼのために低下する。経口投与されたRNアーゼB1は、既存の腫瘍の数と大きさを小さくしなかった事実があるにもかかわらず、腫瘍の色の種類の分布はわずかに影響を受けた図27c。グルコースで処置したラットおよびRNアーゼB1で処置したラットはそれぞれ、赤色の腫瘍が約60と40であった。本発明の配合で経口投与されたRNアーゼB1は血管新生にも影響するが、中位の影響であるようである。実施例5ヒトHT-29結腸癌細胞に対するRNアーゼB1の生体外での作用材料と実験方法細胞増殖の条件:実験はすべて、ヒト直腸腺癌HT-29細胞で実施した。これらの細胞は、10ウシ胎仔血清、1グルタミンおよび1Antibiotic-Antimicotic溶液Biolabを補充したDMEM培地BiologicalIndustries,BetHaemekが入っている50mlフラスコ中で増殖させた。その細胞をトリプシンで処理し、5×104個の細胞を含有する2mlの培地を、6ウェルプレートの各ウェルにプレートした。いくつかのプレートは、RNアーゼB1を、最終濃度10-6Mまで補充した。その細胞を、5CO2を含有する加湿大気中、37°Cでインキュベートした。48hr後、RNアーゼB1が存在しているかまたは存在していない培地をそれぞれ十分に取り換えて、成分とRNアーゼB1の一定の供給を維持した。4日後、培地を除き、細胞培養物を、4ホルムアルデヒド含有のPBS150mMNaCl、3mMKCl、10mMNa2HPO4、2mMNaH2PO4pH7.2中で15分間氷上にて固定した。それら細胞を異なる目的のために、以下のように染色した。細胞内アクチンの直接染色:細胞をPBSで洗浄し、次に0.02のTween-20を含有するPBSPBST内で1hr室温にて透過性にした。PBSで3回洗浄した後、細胞は、アクチンを、10-6MのテトラメチルローダミンBイソチオシアネートTRITCで標識化したファロイジンSigmaで、1hr染色し、PBS中で4°Cにて一夜静置して過剰の染色材料を除いた。細胞を、スライドガラス上の水中に広げ、ConfocalLaserScanningMicroscopeLSM510Zeissを使用して可視化した。細胞膜アクチンの免疫染色:細胞をホルムアルデヒドで固定し、上記のようにしてPBSで洗浄し次いでPBSで1:500の比率で希釈したウサギ抗アクチン抗体Sigmaとともにインキュベートし、PBSで3回洗浄した。次にその細胞を、フルオレセインイソチオシアネートFITCに結合させたヤギ抗ウサギIgGPBSで1:100の比率で希釈とともに、さらに1hr、同じ条件でインキュベートし、再び洗浄し、次に上記のようにして可視化した。細胞表面上のRNアーゼB1の免疫染色:ポリクローナル抗体Aminolab、イスラエルをウサギ内で精製RNアーゼB1に対して発生させた。上記の手順にしたがって、HT-29を免疫染色する際の一次抗体として、抗-RNアーゼB1を使用した。実験結果細胞内アクチンの直接染色:RNアーゼB1なしで増殖している対照細胞に、微細なアクチンネットワークが、TRITCで染色されて観察され、細胞の細胞質を満たしていた。うすい染色が膜の表面に観察された図28a。対照的に、RNアーゼB1で処置された細胞の場合、各細胞の膜および細胞質の周辺領域は強く染色された図28b。これは、RNアーゼB1の外部添加に対する反応としてのアクチンネットワークの再発列を示している。細胞膜アクチンの免疫染色:FITC-免疫染色したところ、対照細胞の細胞膜領域にアクチンの微小蛍光スポットが見つかった図29a。この結果は図28aに示したTRITC染色と一致している。この実験では、界面活性剤は全く使わなかったので、抗体は、細胞の細胞質中にほとんど浸透しなかった。それ故、これらの細胞では、細胞膜アクチンは外部環境と相互に作用する。RNアーゼB1で処理された細胞に、非常に弱い免疫染色が観察されたが図29b、これは、細胞膜アクチンにすでに結合していたRNアーゼB1が抗アクチン抗体の結合を阻害したことを暗示している。RNアーゼB1で処置されていない追加の細胞を、予め混合したウサギ抗アクチンと1μMアクチンとともにインキュベートした。図29bで述べたのと同様の微弱の蛍光が観察された図示せず。自発的なFITC蛍光の起こる可能性をなくすために、細胞を、抗アクチンを省略したことを除いて先に述べたように処置した。蛍光染色は全く検出されなかった。細胞面上のRNアーゼB1の免疫染色:非常に微弱なFITC蛍光が、抗RNアーゼB1とともにインキュベートした対照細胞に出現した図30a。しかし、RNアーゼB1で処理した細胞は強い蛍光反応を示した図30b。この試験結果は、RNアーゼB1が、細胞表面上、特に細胞の端縁と延長部分に有意に存在していることを示している。抗RNアーゼB1の代わりに、ウサギの免疫前血清PISで処置したところ、非常に弱い傾向を生じた図30c。実施例6ユリ花粉管の成長に対するIAC-RNアーゼB1の作用材料と実験方法RNアーゼB1のヨードアセチル化:RNアーゼB1のヨードアセチル化をIrieM,ら、J.Biochem.993巻627-633頁1986年の方法で実施した。RNアーゼB1を、0.1Mのヨード酢酸を含有する0.1M酢酸緩衝液2.5mlに溶解して、10nMの最終濃度にした。37で一夜インキュベートした後、タンパク質を、SephadexG-15カラムで脱塩した。タンパク質を含有する画分を集め、水に対して強く透析した。凍結乾燥を行った後、10mgのタンパク質を得た。ヨードアセチル化IAc-RNアーゼB1のRNアーゼ活性を、修飾されていないRNアーゼB1と比較した。ユリの花粉管に対するIAc-RNアーゼB1の作用:凍結乾燥されたIAc-RNアーゼB1を、7スクロース、1.27mMCaNO32、0.16mMH3BO3、1mMKNO3および3mMKH2PO4を水中に含有するユリ花粉管の成長培地中に、1または5μMの最終濃度まで溶解したYokota,E.およびShimmen,T.Protoplasma177巻153-162頁1994年。ユリリリウムロンギフロルムの花粉粒を、花粉管の入っている100μlの増殖培地で、10-6MのIAc-RNアーゼB1ありまたはなしで、生体外で発芽させた。追加の対照として、ユリの花粉を、同じ濃度のRNアーゼB1またはBSAを含有する増殖培地で発芽させた。暗所にて25°Cにて1.5hrインキュベートした後、各処置の花粉管の長さを光学顕微鏡で測定した。実験結果RNアーゼB1のヨードアセチル化:ヨード酢酸は、RNアーゼの活性部位のヒスチジン残基に結合することによって、RNアーゼの活性を阻害する。IAc-RNアーゼB1のRNアーゼ活性は、処置されていないRNアーゼB1と比べて90小さかった。ユリ花粉管の成長に対するIAc-RNアーゼB1の作用:対照のユリ花粉管は、0.26mmの長さに到達する図31。BSAは、花粉管に対して細胞傷害作用がないので、この実験では、BSAを対照として使用した。BSAは、10-6Mの濃度で実際に、花粉管の成長に対し有意な作用はなかった。5×10-6MのBSAの阻害作用は、花粉管が、成長培地の浸透ポテンシャルの変化に対し敏感であるという事実の結果と説明できる。RNアーゼB1とIAc-RNアーゼB1は、花粉管の成長に対し明確な阻害作用を示した。両方の濃度で、IAc-RNアーゼB1の方がRNアーゼB1より有効であったが、その差は有意でなかった。このように、ユリの花粉管の場合、IAc-RNアーゼB1は修飾されていないRNアーゼB1の類似の方式で花粉管の成長を阻害する。このことはRNアーゼ活性の損失がその阻害作用を低下させないことを示している。本発明をその特定の実施態様によって説明してきたが、多くの変形と変化が当業技術者にとって明らかであることは明白である。したがって、本発明は、本願の特許請求の範囲の精神と広い範囲内にあるかような変形と変化すべてを含むものである。本明細書にあげられているすべての刊行物、特許、特許願および受託番号で識別されている配列は、あたかも個々の刊行物、特許、特許願または配列が具体的にかつ個々に本願に参照して組みこまれているのと、同程度に本発明に援用するものである。さらに、本願に文献を引用することは、このような文献が本発明に対する従来技術として利用できるという自白とみなすべきではない。"