"乳酸菌の生菌又は死菌を投与することで胃酸又はガストリンの産生を抑制する方法及びその方法を利用した医薬品、健康食品など各種製品乳酸菌の生菌又は死菌を投与することで胃酸分泌抑制剤例えばプロトンポンプインヒビターの副作用を緩和する方法及びその方法を利用した医薬品、健康食品など各種製品請求項1及び請求項2の特徴を有する乳酸菌がラクトバシラスジョンソニイLactobacillusjohnsoniiNo.1088受託番号NITEP-278胃液中の酸濃度が高い、つまりは過酸症の状態にあると、胃液が食道に逆流した際に食道の上皮細胞に傷害を与え、炎症が起こる。これが軽度の場合は胸やけの症状を呈し、重症化すると逆流性食道炎を患う。さらに、これが進行すると食道組織の変性癌化が起こり、バレット食道癌などに発展する。また近年、本国での食文化が欧米化してきたことなどによって、胃噴門部と食道の境に存在する括約筋の働きが弱まり、胃酸が逆流しやすくなっていることがある。実際に、現在の本国において逆流性食道炎やバレット食道癌の罹患率が増加傾向にある。ヘリコバクターピロリ菌感染患者がその除菌を行うと、胃液中の酸濃度が上昇すること、また、逆流性食道炎になるリスクが高まることが報告されているLabenzJ,etal.Gastroenterology,112:1442-1447,1997。胃潰瘍や十二指腸潰瘍などの消化性潰瘍などに対する治療として、胃酸の分泌を阻害するPPIを継続的に使用するが、この副作用としてガストリンの産生過多が知られている。またこれに伴って胃粘膜細胞の過剰な増殖や巨大化、胃組織の肥大化などが動物実験では実証されており、ヒトへの臨床試験でも同様のことが示唆される結果がある。さらには消化性潰瘍などの寛解によってPPIの使用を中止した際に、ガストリン過多状態にあることから胃酸の過剰分泌が起こるなどの症状が知られているSchubertML,PeuraDA.Gastroenterology,134:1842-1860,2008。以上の問題を解決するため、胃酸又はガストリンの産生を抑制する方法を開発することが重要である。課題を解決する本発明は、病原性をもたず胃中で作用する細菌を用いることでガストリンの産生を抑制する方法を提供する。当該方法は、乳酸菌の生菌又は死菌を生体に投与することでガストリンの産生を抑制する方法である。課題を解決する本発明は、乳酸菌の生菌又は死菌を投与することでPPIの継続的投与による副作用の緩和をする方法である。本発明は、一部には以下の実験結果に基づいている。1.No.1088の生菌投与による胃酸及びガストリン産生の抑制1-1No1088生菌投与マウスの作製8週齢のジャームフリーGFBalb/c雄マウス東海大学医学部、アイソレーター内で飼育管理を7匹ずつ2群用意した。片方の群にはNo.1088の生菌1x109CFUをリン酸緩衝液PBSに懸濁したものを経口投与し、もう一方の群には等量のPBSを経口投与した。1-2胃組織切片の作製投与より10日後にマウスを屠殺し、胃を摘出し、10ホルマリン和光純薬-PBSに浸し、室温にて一晩置き固定した。次に、固定された胃組織をエタノールに浸し、キシレンに浸した後、パラフィンを用いて包埋した。これをミクロトームにて2μmの厚さで薄切し、シランコーティーングスライドグラスMUTOPURECHEMICALS社に貼り付け、62°C下で一晩乾燥させ作製した。1-3胃組織切片を用いたガストリンの免疫染色作製した切片をキシレン及びエタノール処理にて脱パラフィンを行った後、ターゲットレトリーバルソリューションTargetretrievalsolution,Dako社を用い98°C下10分間でマイクロウェーブを行い抗原を賦活化した。その組織切片に一次抗体としてラビットポリクローナル抗ガストリン抗体Rabbitpolyclonalantigastrinantibody,Dako社を4°C下で一晩反応させた後、二次抗体としてゴート抗ラビットアイジージーアレクサ488修飾抗体GoatantirabbitIgGAlexa488antibody,MolecularProbe社を室温下で2時間反応させ、細胞核を染色するダピDAPIを加えた退色封入剤を用いて封入した。1-4蛍光顕微鏡での観察細胞のDNAに結合する蛍光色素DAPI、および抗ガストリン抗体で染色した組織切片を蛍光顕微鏡BZ-9000Keyence社にて観察、撮影した。その結果を図1に示す。図に示す通り、No.1088生菌を投与してもDAPI染色による胃粘膜組織中の細胞数に大きな変化は認められないが、抗ガストリン抗体染色によるガストリン陽性細胞数は減少していることを認めた。すなわち、No.1088の生菌の投与によってガストリンの産生を抑制していることが示唆された。1-5ガストリン陽性細胞数の統計学的解析各群のガストリン産生の変化を組織切片から統計学的に解析するため、組織写真中の胃幽門部の粘膜層の長さをアキシオヴィジョンAxioVision,Zeiss社にて計測し、その中のガストリン陽性細胞数を目視にて計測、単位長1mmあたりのガストリン陽性細胞数個に換算した。それらの数値をSPSSSPSS社を用いたマンホイットニーユーテストで解析を行った結果を図2に示す。No.1088生菌投与群ではPBS投与群より有意差をもって50以上の減少をしていることが認められた。すなわち、No.1088の生菌を投与することでガストリンの産生を抑制することが示された。また同様の現象がラクトバシラスアシドフィルスLactobacillusacidophilusJCM1187の生菌投与でも認められた。2.No.1088の生菌投与による胃液中の酸濃度の減少とpHの強酸性への傾きの抑制2-1No1088生菌投与マウスの作製8週齢のGF-Balb/c雄マウスを5匹ずつ2群用意した。片方の群にはNo.1088の生菌1x109CFUをPBSに懸濁したものを経口投与し、もう一方の群には等量のPBSを経口投与した。2-2胃液中の酸濃度とpHの測定投与より10日後にマウス及びPBS投与マウスにメンブタールにより麻酔し、手術台に固定し開腹、胃の噴門部に隣接した食道及び胃の幽門部に隣接した十二指腸を鉗子によってクリップし、2時間静置した後、胃内部に蓄積した胃液を採取した。採取した胃液を0.1N-水酸化ナトリウム水溶液和光純薬により酸塩基滴定を行い、酸濃度を測定した。またpH測定器Horiba社を用いて、pHを測定した。それぞれのサンプルより得られた数値を、SPSSを用いたマンホイットニーユーテストで解析を行った結果を表1に示す。No.1088投与群において、有意差をもって胃液中の酸濃度の減少及びpHが弱酸性になっていることが認められた。すなわち、No.1088がもつガストリンの産生抑制効果によって胃液中の酸濃度の減少及びpHの強酸性への傾きの抑制することが示された。3.No.1088の死菌投与によるガストリン産生の抑制3-1No1088死菌投与マウスの作製8週齢のGF-Balb/c雄マウスを5匹ずつ2群用意した。片方の群にはNo.1088の死菌を生菌の1x109CFUに相当する量をPBSに懸濁したものを経口投与し、もう一方の群には等量のPBSを経口投与した。投与は1日1回、10日間連続で行った。3-2胃組織切片の作製最終の投与より24時間後にマウスを屠殺し、胃を摘出し、10ホルマリン-PBSに浸し、室温にて一晩置き固定した。次に、固定された胃組織をエタノールに浸し、キシレンに浸した後、パラフィンを用いて包埋した。これをミクロトームにて2μmの厚さで薄切し、シランコーティーングスライドグラスに貼り付け、62°C下で一晩乾燥させ作製した。3-3胃組織切片を用いたガストリンの免疫染色作製した切片をキシレン及びエタノール処理にて脱パラフィンを行った後、ターゲットレトリーバルソリューションを用い98°C下10分間でマイクロウェーブを行い抗原を賦活化した。その組織切片に一次抗体としてラビットポリクローナル抗ガストリン抗体を4°C下で一晩反応させた後、二次抗体としてゴート抗ラビットアイジージーアレクサ488修飾抗体を室温下で2時間反応させ、退色封入剤を用いて封入した。3-4蛍光顕微鏡での観察染色した組織切片を蛍光顕微鏡BZ-9000にて観察、撮影した。No.1088死菌投与群とPBS投与群を比較すると、No.1088死菌投与群においてガストリン陽性細胞の数が減少していることが示唆された。3-5ガストリン陽性細胞数の統計学的解析各群のガストリン産生の変化を組織切片から統計学的に解析するため、組織写真中の胃幽門部における粘膜層の長さをアキシオヴィジョンにて計測し、その中のガストリン陽性細胞数を目視にて計測、単位長1mmあたりのガストリン陽性細胞数個に換算した。それらの数値をSPSSを用いたマンホイットニーユーテストで解析を行った結果を図3に示す。No.1088死菌投与群ではPBS投与群より有意差をもって40以上の減少をしていることが認められた。すなわち、No.1088は生菌の投与だけでなく死菌を投与によってもガストリンの産生を抑制することが示された。また同様の現象がラクトバシラスアシドフィルスLactobacillusacidophilusJCM1187の死菌投与でも認められた。4.ヘリコバクターピロリ菌の除菌によるガストリン産生の促進とNo.1088の死菌投与による促進の抑制4-1ヘリコバクターピロリ保菌マウスの作製4週齢のGF-Balb/c雄マウスを5匹ずつ6群用意した。そのうち5群にはヘリコバクターピロリ菌の生菌1x109CFUをPBSに懸濁したものを4日間連続で経口投与し、もう一方の群には等量のPBSを4日間連続で経口投与した。ヘリコバクターピロリ菌投与より4週間後にヘリコバクターピロリ保菌マウスのうちの1群及びPBS投与群を屠殺し、前記の操作によってパラフィン包埋を行った。残りのヘリコバクターピロリ保菌マウスのうちの3群にヒトのヘリコバクターピロリ菌の除菌と同様の処理化LindT,etal.Gastroenterology,116:248-253,1999を行い、残りの1群には除菌しない対照群として抗生剤を加えていない溶液を投与した。この投与は2週間の連続投与によって行った。除菌処理が終了した2週間後に除菌処理群のうちの1群及び除菌していない対照群を屠殺し、前記の操作によってパラフィン包埋を行った。残りの除菌処理群のうち、片方の群には前記の操作と同様のNo.1088の死菌1x109CFU相当量をPBSに懸濁したものを経口投与し、もう一方の群には等量のPBSを経口投与した。投与は1日1回、10日間連続で行い、最終の投与より24時間後にマウスを屠殺し、前記の操作によってパラフィン包埋を行った。また、上記のマウスの作製過程は図4上段にも示した。4-2胃組織切片の作製上記の操作によって得られたパラフィン包埋ブロックをミクロトームにて2μmの厚さで薄切し、シランコーティーングスライドグラスに貼り付け、62°C下で一晩乾燥させ作製した。4-3胃組織切片を用いたガストリンの免疫染色作製した切片をキシレン及びエタノール処理にて脱パラフィンを行った後、ターゲットレトリーバルソリューションを用い98°C下10分間でマイクロウェーブを行い抗原を賦活化した。その組織切片に一次抗体としてラビットポリクローナル抗ガストリン抗体を4°C下で一晩反応させた後、二次抗体としてゴート抗ラビットアイジージーアレクサ488修飾抗体を室温下で2時間反応させ、退色封入剤を用いて封入した。4-4蛍光顕微鏡での観察染色した組織切片を蛍光顕微鏡BZ-9000にて観察、撮影した。その結果、まずヘリコバクターピロリ保菌マウスとヘリコバクターピロリ非感染マウスPBS投与群を比較すると、ヘリコバクターピロリ保菌マウスにおいてガストリン陽性細胞の数が減少していることが認められた。次に、ヘリコバクターピロリを除菌したマウスでは、除菌していないマウスと比較してガストリン陽性細胞の数が増加していることが認められた。さらに、除菌後にNo.1088の死菌を投与した群とPBSを投与した群を比較すると、No.1088死菌投与群においてガストリン陽性細胞の数が減少していることが認められた。4-5ガストリン陽性細胞数の統計学的解析上記のサンプルにおいて、各群のガストリン産生の変化を組織切片から統計学的に解析するため、組織写真中の胃幽門部における粘膜層の長さをアキシオヴィジョンにて計測し、その中のガストリン陽性細胞数を目視にて計測、単位長1mmあたりのガストリン陽性細胞数個に換算した。それらの数値をSPSSを用いたマンホイットニーユーテストでそれぞれのサンプルを採取した週齢間で行った結果を図4に示す。まずヘリコバクターピロリ保菌マウスとヘリコバクターピロリ非感染マウスPBS投与群を比較すると、ヘリコバクターピロリ保菌マウスにおいてガストリン陽性細胞の数が減少していることが有意に認められた。次に、ヘリコバクターピロリを除菌したマウスでは、除菌していないマウスと比較してガストリン陽性細胞の数が増加していることが有意に認められた。さらに、除菌後にNo.1088の死菌を投与した群とPBSを投与した群を比較すると、No.1088死菌投与群においてガストリン陽性細胞の数が約40減少していることが有意に認められた。すなわち、ヒトにおけるヘリコバクターピロリ除菌の際に胃酸過多になり、逆流性食道炎のリスクが高まることがガストリンの産生亢進によるものであることが示唆され、またNo.1088の死菌を投与することによってガストリンの産生促進を抑制できることが示された。次に本発明のPPIの継続的投与による副作用の緩和法の実施例を記載するが、本発明は以下の実施例のNo.1088に限定されるものではなく、乳酸菌の生菌又は死菌によるものである。5.PPIの継続的投与による副作用とNo.1088の投与によるその緩和5-1No1088生菌投与マウスの作製4週齢のGF-Balb/c雄マウスを5匹ずつ6群用意した。そのうちの3群にはNo.1088の生菌1x109CFUをPBSに懸濁したものを経口投与し、残りの3群には等量のPBSを経口投与した。5-2PPIの継続的投与マウスが8週齢に達した時点で、No.1088投与マウス及びPBS投与マウスのうち1群ずつにPPIであるオメプラゾールアストラゼネカ社200μgをPBS200μLに溶解したものを一日おきに皮下に投与する処置を開始しPPIの8週間の連続投与、12週齢に達した時点で各投与マウス1群ずつに同様の処置を開始PPIの4週間の連続投与、残りの各投与マウス1群ずつはオメプラゾールの処置は行わず対照群とした。5-3胃重量の測定ならびに胃組織切片の作製各群のマウスが16週齢になった時点でマウスを屠殺し、体重を量った後、胃を摘出、胃内容物飼育飼料などをPBSで洗浄し除去した後、胃重量を計測した。次に採取した胃組織を10ホルマリン-PBSに浸し、室温にて一晩置き固定した。次に、固定された胃組織をエタノールに浸し、キシレンに浸した後、パラフィンを用いて包埋した。これをミクロトームにて2μmの厚さで薄切し、シランコーティーングスライドグラスに貼り付け、62°C下で一晩乾燥させ作製した。5-4胃組織切片を用いたガストリンの免疫染色作製した切片をキシレン及びエタノール処理にて脱パラフィンを行った後、ターゲットレトリーバルソリューションを用い98°C下10分間でマイクロウェーブを行い抗原を賦活化した。その組織切片に一次抗体としてラビットポリクローナル抗ガストリン抗体を4°C下で一晩反応させた後、二次抗体としてゴート抗ラビットアイジージーアレクサ488修飾抗体を室温下で2時間反応させ、退色封入剤を用いて封入した。5-5蛍光顕微鏡での観察染色した組織切片を蛍光顕微鏡BZ-9000にて観察、撮影した。PBS投与マウスではPPIの投与によってガストリン産生細胞の増加が認められた。一方で、No.1088生菌投与マウスではPPIによるガストリン陽性細胞の数の増減はないことが認められた。すなわち、No.1088の生菌の投与によってPPIによるガストリンの産生促進を抑制していることが示唆された。5-6胃重量比及びガストリン陽性細胞数の統計学的解析各群のサンプルより胃を摘出する際に計測した体重及び胃重量を用い、胃重量の体重比を算出した。また、各群のガストリン産生の変化を組織切片から統計学的に解析するため、組織写真中の胃幽門部の粘膜層の長さをアキシオヴィジョンにて計測し、その中のガストリン陽性細胞数を目視にて計測、単位長1mmあたりのガストリン陽性細胞数個に換算した。それらの数値をSPSSを用いたクラスカルワリスティーテストで解析を行った結果、胃重量の体重比については図5aに、ガストリン陽性細胞数については図5bに示す。PBS投与マウスではPPIの投与によって、胃重量比ならびにガストリン産生細胞数が投与期間に比例して有意に増加していた。一方で、No.1088投与マウスではPPIによる胃重量比ならびにガストリン産生細胞数の増減はなかった。すなわち、PPIの継続的投与による副作用であるガストリンの産生過多、胃粘膜細胞の過剰な増殖や巨大化、胃組織の肥大化などをNo.1088に代表される乳酸菌の投与によって緩和できると示唆された。"