"化合物および薬学的に許容されるその塩。医薬として使用するための請求項1に記載の化合物。がんの治療において、詳細には非小細胞肺癌;小細胞肺がん;乳がん;卵巣腫瘍;消化管腫瘍;脳がん;前立腺がん;膵臓がん;基底細胞癌;ゴーリン症候群;悪性黒色腫;扁平上皮細胞癌;多発性骨髄腫;リンパ腫;間葉性がん;慢性骨髄性白血病;子宮内膜癌;肝細胞癌から選択されるがんの治療において使用するための請求項1に記載の化合物。脳がんの治療において使用するための請求項1に記載の化合物。脳内のがん転移の治療において使用するための請求項1に記載の化合物。脳に転移するがんの治療において使用するための請求項1に記載の化合物。Smo受容体アンタゴニストとして使用するための請求項1に記載の化合物。医薬を製造するための、詳細にはがんを治療するための医薬を製造するための請求項1に記載の化合物の使用。請求項1に記載の化合物を調製する方法であって、aパラジウム触媒作用下および適切な塩基の存在下で、化合物Dを少なくとも1当量のイソニペコテートで処理して、化合物X1[式中、LGは適切な脱離基である]を得るステップと、b化合物X1を化合物X2に変換するステップと、c化合物X2をN-メチル-ピペラジンとカップリングさせて、請求項1に記載の化合物を得るステップとを含むことを特徴とする方法。化合物Dを調製するために、a適切な溶媒中で、化合物X3を少なくとも等モル量のヨウ素および過剰のピリジンで処理して、化合物X4を得るステップと、b極性溶媒中で、化合物X4を少なくとも1当量のメタクロレインならびに過剰のAcOHおよびCH3COONH4の等モル混合物で処理して、化合物Dを得るステップと、をさらに含む、請求項9に記載の方法。化合物Dを調製するために、a酸性pHで、化合物X3を少なくとも等モル量の臭素で処理して、化合物X5を得るステップと、b化合物X5を当量のピリジンで処理して、化合物X6を得るステップと、c極性溶媒中で、X6を少なくとも1当量のメタクロレインならびに過剰のAcOHおよびCH3COONH4の等モル混合物で処理して、化合物Dを得るステップと、をさらに含む、請求項9に記載の方法。LGが直鎖、分枝または環式のC1~6アルコキシ基である、請求項10または11に記載の方法。の化合物。請求項1に記載の化合物を調製する際の中間体または出発材料としての請求項12に記載の化合物の使用。発明の説明意外にも、例2に示されているとおりのSmo受容体アンタゴニストである化合物Cは、例3において示されているとおり、詳細にはWO2009074300に開示されているその近似類似体AおよびBの2種について、例外的に高い脳透過特性を有することが判明した。一実施形態では、化合物Cおよび薬学的に許容されるその塩を提供する;別の実施形態では、医薬として使用するための化合物Cを提供する;特定の実施形態では、がんの治療において使用するための、詳細には非小細胞肺癌;小細胞肺がん;乳がん;卵巣腫瘍;消化管腫瘍;脳がん;前立腺がん;膵臓がん;基底細胞癌;ゴーリン症候群;悪性黒色腫;扁平上皮細胞癌;多発性骨髄腫;リンパ腫;間葉性がん;慢性骨髄性白血病;子宮内膜癌;肝細胞癌から選択されるがんを治療するための化合物Cを提供する;さらなる実施形態では、脳がんの治療において使用するための化合物Cを提供する;まださらなる実施形態では、脳内のがん転移の治療において使用するための化合物Cを提供する;別の実施形態では、脳に転移するがんの治療において使用するための化合物Cを提供する;本発明の別の実施形態は、Smo受容体アンタゴニストとして使用するための化合物Cに関する。別の実施形態では、化合物Cもしくは薬学的に許容されるその塩、薬学的に許容される担体および/または薬学的に許容される補助物質を含む医薬組成物を提供する。本発明の別の実施形態は、医薬を製造するための、詳細にはがんを治療するための医薬を製造するための化合物Cの使用に関する。本発明の別の実施形態は、非小細胞肺癌;小細胞肺がん;乳がん;卵巣腫瘍;消化管腫瘍;脳がん;前立腺がん;膵臓がん;基底細胞癌;ゴーリン症候群;悪性黒色腫;扁平上皮細胞癌;多発性骨髄腫;リンパ腫;間葉性がん;慢性骨髄性白血病;子宮内膜癌;肝細胞癌から選択されるがんを治療するための医薬を製造するための化合物Cの使用に関する。本発明の他の実施形態は、ヘッジホッグ経路の阻害によって利益を得る疾患、状態または機能不全を治療する方法に関し、その方法は、それを必要とする対象に、有効量の化合物Cを投与することを含む。療法で使用される化合物Cの投薬量は、例えば投与経路、疾患の性質および重症度に応じて変動し得る。一般に、ヒトにおいて許容される薬理学的効果は、0.01から200mg/kgまでの範囲の一日投薬量で得ることができる。本発明の医薬組成物は、固体、半固体または液体の調製物の形態、好ましくは液剤、懸濁剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、エアロゾル剤または制御送達システムの形態であってよい。組成物は、経口、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、直腸および鼻腔内を包含する様々な経路で投与することができ、かつ好ましくは単位剤形で製剤化する。経口単位剤形は、本発明の化合物を約1mgから約1000mg含有してよい。本発明はまた、化合物Cの酸付加塩、好ましくは薬学的に許容される酸との塩を包含する。化合物Cは、下記のスキーム1に概説されているとおり式中、LGは適切な脱離基であるかつ例1において十分に詳述されているとおりの、本発明のさらなる実施形態である新規な重要な中間体Dまたは平均的な当業者の技能の範囲内であるその変異形から出発して得ることができる。特定の実施形態では、LGは直鎖、分枝または環式C1~6アルコキシ基である。したがって、中間体または出発材料としての化合物Dの使用を含む、化合物Cを得る方法を提供する。より具体的には、aパラジウム触媒作用下および適切な塩基の存在下で、化合物Dを少なくとも1当量の適切なイソニペコテート誘導体で処理して、化合物X1を得るステップと、b化合物X1を化合物X2に変換するステップと、c化合物X2をN-メチル-ピペラジンとカップリングさせて、化合物Cを得るステップとを含む、化合物Cを得る方法を提供する。上記のステップbおよびcを行う方法についての例は、限定ではないが、MarchによってAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure、第6版、Wiley編、ISBN9780471720911において記載されている方法を包含する。化合物Dは、市販の化合物から出発して、下記のスキーム2に概説されていて、かつ例1に十分に詳述されている3つの選択的合成経路または平均的な当業者の技能の範囲内であるその変異形を使用して得ることができる。中間体Dに至るまでが最も長い経路スキーム2の方法1の主な欠点は、5-メチル-2-ピリジル亜鉛ブロミドの費用が高いこと、およびステップbで必要とされる反応時間が長いこと収率44に達するために30時間にある。本発明のさらなる実施形態である第2の方法スキーム2の方法2の利点は、比較的安価で、容易に入手可能で、取扱いが容易な試薬を使用すること、および反応時間がはるかに短いことであり、それらによってこの手順はスケールアップにより適している。別法では、本発明のさらなる実施形態である第3の方法スキーム2の方法3は、結晶質で、容易に単離することができるX5の形成を伴う。さらに、許容される収率に達するためには、ステップaにおいて過剰のピリジンが必要な第2の方法とは逆に、この第3の方法は、第2のステップにおいて等モル量のピリジンの使用を含意する。さらに、X6を化合物Dに変換する第3のステップは、X6を反応混合物から単離することなく行うことができる。しかしながら、必要な純度のグレードに応じて、X6を反応混合物から単離することが簡便であることがある。これは例えば、X6を反応混合物から沈殿させることによって行うことができる。方法3はまた、方法2に対して、完了させるために必要な緩衝液の量が半分であるという利点を有する。したがって、a適切な溶媒中で、化合物X3を少なくとも等モル量のヨウ素および過剰のピリジンで処理して、化合物X4を得るステップと、b極性溶媒中で、化合物X4を少なくとも1当量のメタクロレインならびに過剰のAcOHおよびCH3COONH4の等モル混合物で処理して、化合物Dを得るステップと、を含む、化合物Dを得る方法を提供する。化合物X3は、市販されているか、または市販の化合物から当業者に知られている方法および反応によって容易に調製することができる。さらなる実施形態では、a酸性pHで、化合物X3を少なくとも等モル量の臭素で処理して、化合物X5を得ることと、b化合物X5を当量のピリジンで処理して、化合物X6を得ることと、c極性溶媒中で、X6を少なくとも1当量のメタクロレインならびに過剰のAcOHおよびCH3COONH4の等モル混合物で処理して、化合物Dを得ること、とによって、化合物Dを調製する。さらなる研究努力によって、上記の方法2のステップbを行うための理想の反応条件は、5当量のAcOH、5当量のCH3COONH4および溶媒としてのエタノールであることが決定されている。アセトニトリルを溶媒として使用すると、さらに良好な結果を達成することができる。さらに我々は、方法3のステップb/cを行うための最良の条件は、2.5当量のAcOH、2.5当量のCH3COONH4および溶媒としてのアセトニトリルであることを決定している。アセトニトリルを溶媒として使用すると、水を加え、シクロヘキサンなどのアセトニトリル不混和性溶媒で抽出することによって、化合物Dを容易に単離することができる。試行錯誤によって、生成物の回収を最大にするためにどの程度の量の水を加えるかを決定することは、平均的な化学者の技能の範囲内である。したがって、さらなる本発明の実施形態では、a適切な溶媒中で、化合物X3を少なくとも等モル量のヨウ素および過剰のピリジンで処理して、化合物X4またはaを得ることと、b極性溶媒中で、化合物X4を少なくとも1当量のメタクロレインならびに過剰のAcOHおよびCH3COONH4の等モル混合物で処理して、化合物Dを得ることと、cパラジウム触媒作用下および適切な塩基の存在下で、化合物Dを少なくとも1当量のイソニペコテートで処理して、化合物X1を得ることと、d化合物X1を化合物X2に変換することと、e化合物X2をN-メチル-ピペラジンとカップリングさせて、化合物Cを得ることとによって、化合物Cを調製する。さらなる実施形態では、a酸性pHで、化合物X3を少なくとも等モル量の臭素で処理して、化合物X5を得ることと、b化合物X5を当量のピリジンで処理して、化合物X6を得ることと、c極性溶媒中で、X6を少なくとも1当量のメタクロレインならびに過剰のAcOHおよびCH3COONH4の等モル混合物で処理して、化合物Dを得ることと、dパラジウム触媒作用下および適切な塩基の存在下で、化合物Dを少なくとも1当量のイソニペコテートで処理して、化合物X1を得ることと、e化合物X1を化合物X2に変換することと、f化合物X2をN-メチル-ピペラジンとカップリングさせて、化合物Cを得ることとによって、化合物Cを調製する。例1:合成経路化合物Dの合成1-クロロ-2-ヨード-4-ニトロ-ベンゼン方法1ステップa3Lの四つ口丸底フラスコ内で、2-クロロ-5-ニトロフェニラミンをH2Oおよび濃H2SO4の溶液に加えた。暗黄色の懸濁液を0°Cに冷却し、NaNO2のH2O中の溶液を滴加した。混合物を0°Cで30分間撹拌し、次いで、KIのH2O中の溶液を、温度を10°C未満に維持しながら滴加した。混合物を室温で2時間撹拌し、次いでLC-MSによってチェックした。懸濁液をEtOAcで抽出し、有機抽出物を収集し、10Na2S2O5およびブラインで洗浄し、次いで、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、粗製の茶色の固体74.8gを得た。これをiPr-OHから結晶化させて、中間体58.1gを赤茶色の結晶質固体として得た:3086、1522、1342、869、738。2-2-クロロ-5-ニトロ-フェニル-5-メチル-ピリジン方法1ステップb1Lの四つ口丸底フラスコ内で、Ar流下で十分に乾燥させた1-クロロ-2-ヨード-4-ニトロ-ベンゼン1を無水DMAに溶かし、次いで5-メチル-2-ピリジル亜鉛ブロミドおよびテトラキスパラジウム0を加えた。溶液を60°Cに30時間加熱し、LC-MSによって進行する変換をチェックした。反応混合物を室温に冷却し、1:1:1のEtOAc:2MのNaOH:破砕氷混合物で洗浄しながらグーチで濾過した。濾液を分離し、水性相をEtOAcで抽出した。収集した有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、濃縮して湿潤な茶色の固体を得た。これを1MのHClで溶解し、EtOAcで洗浄した。有機層を1MのHClで逆抽出し、次いで、合わせた酸性水性抽出物を0°Cに冷却し、10MのNaOHで塩基性にした。茶色の固体が形成し、これを濾過し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、中間体211.6gを茶色の固体として得た:1530、346,1033,886,837,739。4-クロロ-3-5-メチル-ピリジン-2-イル-フェニルアミン方法1ステップc500mlの四つ口丸底フラスコ内で、2--5-メチル-ピリジンをEtOHに懸濁させ、次いで、SnCl2および37HClを加えた。溶液を60°Cに加熱し、この温度で3時間撹拌し、LC-MSによってチェックした。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を1MのHClで溶解し、懸濁液を得、これをEtOAcで洗浄した。水性層を0°Cに冷却し、10MのNaOHで塩基性にし、EtOAcで抽出した。合わせた有機層をNa2CO3、水およびブラインで洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、所望の化合物7.8gを茶色のオイルとして得た。MS:m/z=219/221[MH]。2-5-ブロモ-2-クロロ-フェニル-5-メチル-ピリジン化合物D方法1ステップd500mlの四つ口丸底フラスコ内で、NaNO2の水中の溶液を、予め0°Cに冷却しておいた4-クロロ-3-5-メチル-ピリジン-2-イル-フェニルアミンの48HBr中の溶液に滴加し、次いで、その系を室温で30分間撹拌した。反応混合物を-5°Cに冷却し、次いでCuBrの48HBr中の溶液を滴下しながら添加した1。その系を室温にし、1時間撹拌し、次いでLC-MSによってチェックした。反応混合物を-5°Cに冷却し、5NのNaOHで抽出した。収集した有機層を水およびブラインで洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗製の生成物8.5gを茶色のオイルとして得た。これを自動のカラムクロマトグラフィーによって精製して、生成物6.4gを白色の固体のiPrOAc中の懸濁液にピリジンを、滴下漏斗を介して5分で加えたΔT=5°C。添加の完了の後に、1-5-ブロモ-2-クロロ-フェニル-エタノンのiPrOAc中の溶液を、滴下漏斗を介して一度に加えた発熱は観察されなかった。さらなるiPrOAc300mLを加えて、ガラス器具を洗浄し、最終反応体積を5体積にした。アセトフェノンが完全に変換するまで、生じた混合物を還流加熱したHPLC分析から18時間。次いで、氷浴を使用して、反応混合物を15°Cに冷却し、濾過し、形成した固体をH2OおよびEtOHで洗浄した。濾過し、恒量まで乾燥させた後に、黄色の固体330gを得た。収率:70。2-5-ブロモ-2-クロロ-フェニル-5-メチル-ピリジン化合物D方法2ステップb5Lの四つ口丸底フラスコ内の1-[2-5-ブロモ-2-クロロ-フェニル-2-オキソ-エチル]-ピリジニウムヨージドのEtOH中の懸濁液に、CH3COONH4を少量ずつ加えたΔT=-4°C。次いで順番に、AcOHおよびメタクロレインのEtOH中の溶液を滴下し発熱は検出されなかった、ピリジニウム塩が完全に消費されるまで、生じた混合物を還流加熱したHPLC分析から5時間。反応溶液を真空下で濃縮し、粗製物をDCMに溶かし、有機相をNaHCO3ss、15NaOHおよびH2Oで洗浄し、次いで、溶媒を蒸発させた。5L四つ口丸底フラスコ内で粗製物をiPrOHに溶かし、45°Cで加熱し、内部温度を約36°Cに維持しながらH2Oを徐々に加えたが、その間、種結晶を加えることで結晶化を惹起することによって、精製の第1の試験を行った。懸濁液を15°Cで冷却し、40分間撹拌し、濾過し、固体をH2Oで洗浄した。固体のNMR分析によって、98の純度が判明した。粗製物をシクロヘキサンに懸濁させ、生じた懸濁液を濾過し、固体をシクロヘキサンで洗浄した。母液を5L四つ口丸底フラスコに移し、活性炭8gを加え、生じた懸濁液を室温で3時間撹拌し、濾過し、溶媒を蒸発させた。最後に、黄色の固体152gが得られた。収率71。方法3ステップa2-ブロモ-1-2-クロロ-5-メチル-フェニル-エタノン1-Cl-5-Br-アセトフェノンを10Lの反応器に窒素流下で装入し:DCM2.5L、続いてAcOHおよび他のDCM2.5Lを加えた。混合物を5°Cで20分間撹拌した。Br2のDCM5L中の溶液を2時間で滴加したが、その際、温度を0°Cから5°Cの間に維持した:添加の終了時に、HPLCチェックによって変換の完了が示されるまで、混合物を20°Cで1時間撹拌した。後処理:減圧下での蒸留によって、DCMを部分的に除去し、生じた混合物をチオスルフェート、水、0.2MのNaOH溶液および水で洗浄した。DCM1Lを真空下で除去し、次いでシクロヘキサン2.5Lを加え:残りのDCMを減圧下で蒸留して、透明な黄色の溶液を得た。黄色の溶液を0°Cで冷却し、白色の沈殿物の形成が観察されるまで1時間撹拌し:白色の懸濁液の濾過をブフナー漏斗で濾過して、白色の結晶質固体1.224Kgを得、これを真空下、室温で一晩乾燥させた。母液を真空下で濃縮し、残渣を0°Cで冷却し、ブフナーで濾過し、フィルター上で一晩乾燥させ:所望の生成物の第2の収量を収集しを得た。収率:76.6。HPLC純度>99方法3ステップb2-2-クロロ-5-メチル-フェニル-5-メチル-ピリジン2-ブロモ-1-2-クロロ-5-メチル-フェニル-エタノンを10Lの反応器に窒素流下で装入し:ACN8Lを加え、生じた混合物を室温で20分間撹拌した後に、ピリジンを1回で加えた。HPLCチェックが変換の完了を示すまで、混合物を60°Cで3時間撹拌し、生じた懸濁液をそのまま、次のステップで使用したHPLC純度>98。方法3ステップc2-5-ブロモ-2-クロロ-フェニル-5-メチル-ピリジン化合物D懸濁液を5°Cで冷却し、次いで、AcOH、NH4OHおよびメタアクロレインをそれぞれ1回で加えた。撹拌しながら混合物を30°Cにし、次いで75°Cで一晩加熱すると:HPLCは、変換の完了、明白な反応プロファイルを示す。後処理:反応混合物を50°Cで冷却し、次いでACN3Lを真空下で蒸留し;残った混合物を10°Cで冷却し、次いで、NaOH溶液を加えることによって、pH=7に調節した。生じた水溶液をシクロヘキサンで抽出し、次いで、収集した有機相をH2Oで洗浄し、次いで、真空下で3L体積まで濃縮した。生じた混合物を0°Cで一晩機械的に撹拌させ、次いで、ブフナーで濾過して、淡黄色の固体410gを得たで抽出し;有機相を水で洗浄し、次いでシクロヘキサン4Lを減圧下で留去した。撹拌しながら残った溶液を5°Cで冷却し、次いで、ブフナーで濾過し:オレンジ色の固体109gを回収した。母液をシクロヘキサン200mLに溶かし、撹拌しながら5°Cで冷却し、次いで濾過して、所望の生成物を他に70g得た。得られた全ての生成物を集め、真空下で一晩乾燥させた。所望の化合物727gを回収した。HPLC純度>994-{1-[4-クロロ-3-5-メチル-ピリジン-2-イル-フェニル]-ピペリジン-4-カルボニル}-1-メチル-ピペラジン-1-イウムクロリド1-[4-クロロ-3-5-メチル-ピリジン-2-イル-フェニル]-ピペリジン-4-カルボン酸エチルエステルPd2、BINAPおよびトルエンを10Lのジャケット付き反応器に窒素流下で装入し、懸濁液を45°Cで20分間撹拌した。次いで、イソニペコチン酸エチル、2--5-メチル-ピリジンおよびCs2CO3をそれぞれ加え、変換が完了するまで、生じた混合物を110°Cで加熱したHPLC分析から2時間。反応混合物を室温に冷却し、ブフナー漏斗で濾過し、固体をEtOAcで洗浄した。母液をH2OおよびNH4Clssで洗浄し、溶媒を蒸発させて、茶色のオイルを得、これをさらに精製することなく、次のステップのために使用した。m/z359MH;保持時間=1.56UPLC。1-[4-クロロ-3-5-メチル-ピリジン-2-イル-フェニル]-ピペリジン-4-カルボン酸5L四つ口丸底フラスコ内のエステル7の14-ジオキサン中の懸濁液に、15NaOHを滴下漏斗を介して5分で滴加しΔT=-4°C、加水分解が完了するまで、生じた溶液を80°Cで加熱したHPLC分析から3時間。溶媒を蒸発させ、粗製物をH2Oに溶かし、水溶液をiPrOAcで洗浄し、pH4.9まで酸性化させpHメーターによって測定、形成した懸濁液をブフナー漏斗で濾過した。形成した固体をH2Oで洗浄し、オーブンで乾燥させて、黄色の固体280KarlFisherによりH2O含有率16.5を得た。次いで、5L四つ口丸底フラスコ内で固体をEtOHに懸濁させ、生じた懸濁液を1時間還流加熱し、室温に冷却し、ブフナー漏斗で濾過し、固体をEtOHで洗浄し、Rotavaporで乾燥させて、薄黄色の固体210gを得た。2ステップでの全体収率69。{1-[4-クロロ-3-5-メチル-ピリジン-2-イル-フェニル]-ピペリジン-4-イル}-4-メチル-ピペラジン-1-イル-メタノン化合物C5L四つ口丸底フラスコ内の窒素流処理されているCDIのDCM中の溶液を10分で滴加しΔT=4°C、生じた混合物を室温で3日間撹拌した変換率98.5。反応溶液を0.9MのNaOHで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、溶媒を蒸発させて、表題化合物を茶色のオイルとして得て、これをさらに精製することなく、塩化ステップで使用した。材料および方法方法1LC-MSクロマトグラムをSpectraSystemSCM100クロマトグラフで、ZorbaxBonusRPおよび254nmでのUV検出を使用して記録した。移動相は、NH4Ac95と有機調整剤としてのMeOH5とからなった。流速は1ml/分に維持する。調整剤の濃度を7分かけて5から95へと直線状に上げ、水性緩衝液の濃度を7分かけて95から5へと直線状に下げた。次いで、定組成でMeOH95を7分間。流速は1ml/分に維持する。LCピークの質量スペクトルは、ThermoFinneganAQA単一四重極分光計を使用して記録した。HPLCは、Perkin-ElmerHPLC-DADシステムでPhenomenexGemini-NXc18カラムおよび254nmでのUV検出を使用して記録した。移動相は、酢酸アンモニウム緩衝液15と有機調整剤としてのMeOH85からなった。流速は1ml/分に維持する。1H-NMRスペクトルは、VarianMercury400MHz分光計を使用して記録した。FTIRは、JascoFT/IR-420フーリエ変換赤外分光計で記録した。自動カラムクロマトグラフィーは、BuchiMPLCシステムでシリカゲルVersaflashカートリッジを使用して行い、約1g/30gの生成物-シリカ比によって、溶離剤としてEDPおよび酢酸エチルの9/1混合物を用いて特性決定した。流速0.5CV/分。方法2および3ならびに最終化合物の合成報告されている収率は、生成物の純度および水/溶媒含有率について補正されていない。一般に、反応はHPLCによってモニタリングし、引用されている純度/変換率は、254nmでのHPLC面積を指す。HPLC条件:カラムWatersSymmetryC183.5μm4.6×75mm流速0.8mL/分移動相A0.76K2HPO4水性緩衝液または0.1ギ酸水溶液移動相Bアセトニトリル勾配10分で95:5のA/Bから20:80のA/Bへ、次いで3分平衡化3/5分にわたって分析UPLC-MSは、WatersSQDESイオン化およびWatersAcquityPDA検出器を備えたAcquityWatersUPLCを使用し、カラムBEHC181.7μm、2.1×5.00を使用して作動させた勾配0.1ギ酸/水および0.1ギ酸/CH3CNを流速:0.6ml/分で3分かけて95/5から5/95に勾配させる。1H-NMRスペクトルは、PFGATBBroadbandプローブを備えたVarianMercury400MHz分光計を使用して記録した。水分測定はMettlerToledoV20で記録した。例2:化合物CはSmo受容体アンタゴニストであるSmo受容体との化合物Cの結合親和性を、競合結合アッセイを使用して、WO2009074300に記載されている蛍光標識されたBodipy-シクロパミンに代えて評価すると、100nM未満のKi値が生じた。この結合から生じるHh経路の不活性化のレベルを、WO2009074300に記載されているアルカリホスファターゼをベースとするアッセイを使用して決定すると、30nM未満のIC50値が生じた。例3:化合物Cは優れた脳透過特性を有する実験の設計は、3匹のCD-1マウスを、適切に製剤化され、遊離塩基5mg/kgで経口投与される研究中の化合物で処置することにある。各採取時間0.5、1.0および4.0時間で、血漿および脳を同じ動物から収集し、生じた濃度データを使用して、AUC0-t脳/AUC0-t血漿比を算出することによって、CNS分配についての情報を得る[式中、AUCは曲線下面積、即ち、濃度対時間プロットによって描かれる台形の幾何面積である]。血漿7つのレベル、2回注入、1~5000ng.mL-1の範囲では、LC-MS/MSに基づく分析を抽出後に行った。血漿試料をタンパク質沈殿によってのみ処理した。有機溶媒、アセトニトリルを加えることによって、タンパク質を沈殿させた[体積比:11:1]。生じた懸濁液を3220g、4°Cで15分間遠心分離した。上清を適切な96ウェルプレートに校正物質および品質対照物質と共に移し、次いで、H2OHCOOH0.1で希釈し、その後、LC-MS/MSシステムに注入した。脳8つのレベル、2回注入、1から2000ng.g-1の範囲では、LC-MS/MSに基づく分析を解体およびMeOHでの抽出の後に行った。脳組織の均質化は、Mikro-DismembratorSで行った。4°Cでまだ凍結している脳をメスで、ペトリ皿内で切断し、ステンレス鋼製の振盪フラスコに移した。液体窒素に7分間浸漬した後に、炭化タングステン製の研磨ボールを加え、冷室をMikroDismembratorに素速く移して、組織を均質化した。得られた粉末50mgをエッペンドルフ管に移し、有機溶媒のMeOHを加えることによって抽出した[体積比:11:1]。5分間ボルテックス処理した後に、試料を23755gで4°Cで30分間遠心分離した。上清を校正物質および品質対照物質と共に96ウェルプレートに移して、直接注入した。LC分離を血漿および脳試料の両方についてUPLCAcquitySystemで急速な勾配で行った。ESI-MS/MS測定をQTrap5500質量分析計AppliedBiosystemsによって多重反応モニタリングモードで行う。Analyst1.5を使用して、データを収集した。Q1およびQ3は両方とも、単位導出で操作していた。上記の条件下で試験すると、化合物A、BおよびCは、下表に挙げられている脳と血漿との分配値を示す"