高分子カスケードプロドラッグであって、アミンを含む生物学的に活性な成分と、少なくとも1個の求核性成分を有していてキャリヤーとは異なるマスキング基とを含む高分子カスケードプロドラッグ。以下の構造:[ここで、Tは、D又はAであり;Dは、アミンを含む生物学的に活性な成分の残基であり;Aは、脱離基であり;Xは、R5Y6のようなスペーサー成分であり;Y1、Y2は、それぞれ、互いに独立して、O、S又はNR6であり得;Y3、Y5は、それぞれ、互いに独立して、O又はSであり得;Y4は、O、NR6又はCであり;Y6は、O、S、NR6、スクシンイミド、マレイミド、不飽和炭素炭素結合若しくは自由電子対を含むヘテロ原子であるか、又は、存在せず;R3は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、シアノ、ニトロ、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、又は、カルボキサミドアルキルから選択され;R4は、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルコキシ、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、シアノ、又は、ハロゲンから選択され;R5は、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;R7及びR8は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、カルボキサミドアルキル、シアノ、又は、ハロゲンから選択され;R6は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;R1は、ポリマーであり;Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Nuは、求核性成分であり;nは、ゼロ又は正の整数であり;そしてArは、複数の置換基を有する芳香族炭化水素又は複数の置換基を有する芳香族ヘテロ環である]を有する請求項1に記載のプロドラッグ又は対応する高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬。以下の構造:[ここで、Tは、D又はAであり;Dは、アミンを含む生物学的に活性な分子の残基であり;Aは、脱離基であり;Xは、R5Y6のようなスペーサー成分であり;Y1、Y2は、それぞれ、互いに独立して、O、S又はNR6であり得;Y3、Y5は、それぞれ、互いに独立して、O又はSであり得;Y4は、O、NR6又はCであり;Y6は、O、S、NR6、スクシンイミド、マレイミド、不飽和炭素炭素結合若しくは自由電子対を含むヘテロ原子であるか、又は、存在せず;R2及びR3は、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、シアノ、ニトロ、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、又は、カルボキサミドアルキルから選択され;R4は、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルコキシ、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、シアノ、又は、ハロゲンから選択され;R5は、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;R7及びR8は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、カルボキサミドアルキル、シアノ、又は、ハロゲンから選択され;R6は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;R1は、ポリマーであり;Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Nuは、求核性成分であり;nは、ゼロ又は正の整数であり;そしてArは、複数の置換基を有する芳香族炭化水素又は複数の置換基を有する芳香族ヘテロ環である]を有する請求項1に記載のプロドラッグ又は対応する高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬。前記生物学的に活性な成分が、小分子の生物学的に活性な作用物質又は生体高分子からなる生物学的成分の群から選択される、請求項1~3のいずれか1項に記載のプロドラッグ。前記生体高分子が、タンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド及びペプチド核酸からなる生体高分子の群から選択される、請求項4に記載のプロドラッグ。前記ポリペプチドが、ACTH、アデノシンデアミナーゼ、アガルシダーゼ、アルブミン、α1アンチトリプシン、α1プロテイナーゼインヒビター、アルテプラーゼ、アニストレプラーゼ、アンクロドセリンプロテアーゼ、抗体、抗トロンビンIII、抗トリプシン、アプロチニン、アスパラギナーゼ、ビファリン、骨形成タンパク質、カルシトニン、コラゲナーゼ、DNアーゼ、エンドルフィン、エンフュービルタイド、エンケファリン、エリスロポエチン、VIIa因子、VIII因子、VIIIa因子、IX因子、フィブリノリジン、融合タンパク質、卵胞刺激ホルモン、顆粒球コロニー刺激因子、ガラクトシダーゼ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド例えば、GLP1、グルコセレブロシダーゼ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ホスホリパーゼ活性化タンパク質、絨毛性性腺刺激ホルモン、ヘモグロビン、B型肝炎ワクチン、ヒルジン、ヒアルロニダーゼ、イズルノニダーゼ、免疫グロブリン、インフルエンザワクチン、インターロイキン、IL1受容体拮抗薬、インスリン、インターフェロン、角質細胞増殖因子、トランスホーミング増殖因子、ラクターゼ、ロイプロリド、レボチロキシン、黄体形成ホルモン、ライムワクチン、ナトリウム利尿ペプチド、パンクレリパーゼ、パパイン、副甲状腺ホルモン、PDGF、ペプシン、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ、プロラクチン、タンパク質C、オクトレオチド、セクレチン、セルモレリン、スーパーオキシドジスムターゼ、ソマトロピン、ソマトスタチン、ストレプトキナーゼ、スクラーゼ、破傷風毒素フラグメント、チラクターゼ、トロンビン、チモシン、甲状腺刺激ホルモン、チロトロピン、腫瘍壊死因子、TNF受容体IgGFc、組織プラスミノーゲン活性化因子、TSH、尿酸オキシダーゼ、ウロキナーゼ、ワクチン及び植物性タンパク質からなるポリペプチドの群から選択される、請求項5に記載のプロドラッグ。前記タンパク質が、組換えDNA技術により調製されたタンパク質である、請求項5に記載のプロドラッグ。前記タンパク質が、抗体フラグメント、一本鎖結合タンパク質、触媒性抗体及び融合タンパク質からなるタンパク質の群から選択される、請求項5に記載のプロドラッグ。前記タンパク質が、抗体、カルシトニン、GCSF、GMCSF、エリスロポエチン、ヘモグロビン、インターロイキン、インスリン、インターフェロン、SOD、ソマトロピン、TNF、TNF受容体IgCFc、グルカゴン様ペプチド例えば、GLP1からなるタンパク質の群から選択される、請求項5に記載のプロドラッグ。前記小分子生物学的活性作用物質が、少なくとも1個の第一級アミノ基又は第二級アミノ基を有する、中枢神経系活性作用物質、抗感染症薬、抗新生物薬、抗細菌薬、抗真菌薬、鎮痛薬、避妊薬、抗炎症薬、ステロイド性作用薬、血管拡張性作用薬、血管収縮作用薬及び心臓血管作用薬からなる作用物質の群から選択される、請求項4に記載のプロドラッグ。前記小分子生物学的活性作用物質が、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、アミノグルテチミド、アマンタジン、ジアフェニルスルホン、エタンブトール、スルファジアジン、スルファメラジン、スルファメトキサゾール、スルファレン、クリナフロキサシン、モキシフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ノルフロキサシン、ネオマイシンB、スプレクチノマイシン、カナマイシンA、メロペネム、ドパミン、ドブタミン、リシノプリル、セロトニン、アシビシン及びカルブタミドからなる化合物の群から選択される、請求項4に記載のプロドラッグ。R4が、水素、メチル、エチル、エトキシ、メトキシ、並びに、1個~6個の炭素原子を含む他の直鎖アルキル、シクロアルキル又は分枝鎖アルキル及びヘテロアルキルからなる小さな置換基の群から選択される、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。R1が、ポリアルキルオキシをベースとするポリマー、例えば、ポリ又はポリ、デキストラン、キトサン、ヒアルロン酸及び誘導体、アルギナート、キシラン、マンナン、カラギーナン、アガロース、セルロース、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン及び炭水化物をベースとする他のポリマー、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ又はポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ、コラーゲン、ゼラチン、コポリマー、グラフトコポリマー、架橋ポリマー、並びに、上記で挙げたポリマーに由来するブロックコポリマーからなるポリマーの群から選択される、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。R1がヒドロゲルである、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。R1が、分岐ポリマー又は高分岐ポリマーである、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。R1が、デンドリマー又は高密度スターポリマーである、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。R1が生体高分子である、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。R1がタンパク質である、請求項17に記載のプロドラッグ。前記タンパク質が、アルブミン、抗体、繊維素、カゼイン又は他の血漿タンパク質である、請求項18に記載のプロドラッグ。R1が、1種類以上の生物学的に活性な物質をさらに含む、請求項2~19のいずれか1項に記載のプロドラッグ。R1の前記ポリマーが、Xに結合するための少なくとも1個の官能基を有している、請求項2~20のいずれか1項に記載のプロドラッグ。前記少なくとも1個の官能基が、カルボン酸及び活性化誘導体、アミノ、マレイミド、チオール、スルホン酸及び誘導体、カーボネート及び誘導体、カルバメート及び誘導体、ヒドロキシル、アルデヒド、ケトン、ヒドラジン、イソシアネート、イソチオシアネート、リン酸及び誘導体、ホスホン酸及び誘導体、ハロアセチル、ハロゲン化アルキル、アクリロイル、アリール化剤、例えば、フッ化アリール、ヒドロキシルアミン、ジスルフィド、例えば、ピリジルジスルフィド、ビニルスルホン、ビニルケトン、ジアゾアルカン、ジアゾアセチル化合物、エポキシド、オキシラン並びにアジリジンからなる官能基の群から選択される、請求項21に記載のプロドラッグ。前記少なくとも1個の官能基が、チオール、マレイミド、アミノ、カルボン酸及び誘導体、カーボネート及び誘導体、カルバメート及び誘導体、アルデヒド並びにハロアセチルからなる官能基の群から選択される、請求項21又は22に記載のプロドラッグ。XとR1の間で形成される結合又は基が、ジスルフィド、Sスクシンイミド、アミド、アミノ、カルボン酸エステル、スルホンアミド、カルバメート、カーボネート、エーテル、オキシム、ヒドラゾン、尿素、チオ尿素、ホスフェート、ホスホネートからなる結合又は基の群から選択される、請求項21~23のいずれか1項に記載のプロドラッグ。XとR1の間で形成される結合又は基が、Sスクシンイミド、アミド、カルバメート及び尿素からなる結合又は基の群から選択される、請求項21~24のいずれか1項に記載のプロドラッグ。Aが、塩化物、臭化物、フッ化物、ニトロフェノキシ、イミダゾリル、Nヒドロキシスクシンイミジル、Nヒドロキシベンゾトリアゾリル、Nヒドロキシアゾベンゾトリアゾリル、ペンタフルオロフェノキシ及びNヒドロキシスルホスクシンイミジルからなる脱離基の群から選択される、請求項2~25のいずれか1項に記載の高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬。前記成分:が、好ましくは、からなる成分の群から選択される、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。前記成分:が、である、請求項27に記載のプロドラッグ。R6が、さらに、NuWであることができる、請求項27又は28に記載のプロドラッグ。請求項2~29のいずれか1項に記載のプロドラッグにおいて、が、ここで、R9、R10、R11及びR12は、独立して、水素、置換若しくは非置換のアルキル若しくはヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のアリール若しくはヘテロアリールから選択されるである、前記プロドラッグ。R9、R10、R11及びR12が、独立して、水素、又は、置換若しくは非置換のアルキルから選択される、請求項30に記載のプロドラッグ。Nuが、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、チオール、カルボン酸、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン及び窒素含有ヘテロアリールからなる求核性成分の群から選択される、請求項2~31のいずれか1項に記載のプロドラッグ。R7及び又はR8が水素ではない、請求項30又は31に記載のプロドラッグ。Arが、以下の構造:を有する成分の群から選択され、ここで、Wは、互いに独立して、O、S又はNである、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。Arが、単環式又は二環式の芳香族炭化水素又は芳香族ヘテロ環である、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。Arが、5員又は6員の芳香族炭化水素又は芳香族ヘテロ環である、請求項2又は3に記載のプロドラッグ。Tが、生物学的に活性な成分と共有結合するための脱離基Aである、請求項2~36のいずれか1項に記載の高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬。前記生物学的に活性な成分がアミン含有分子である、請求項37に記載の高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬。前記生物学的に活性な成分が、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である、請求項37又は38に記載の高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬。高分子プロドラッグを合成する方法であって、式:で表される出発分子を提供するステップ;式で表される該出発分子から少なくとも1個の中間体化合物を合成するステップ;及び、アミン含有生物学的活性成分Dを、該少なくとも1個の中間体化合物に結合させて、該高分子プロドラッグを形成させるステップ;を含み、ここで、Y2は、O、S又はNR6から選択され;Y3は、O又はSから選択され;Xは、R5Y6のようなスペーサー成分であり;R3は、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、シアノ、ニトロ、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル又はカルボキサミドアルキルから選択され;R4は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルコキシ、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ若しくはヘテロアリールオキシ、シアノ又はハロゲンから選択され;R5は、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;R6は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Y6は、O、S、NR6、スクシンイミド、マレイミド、不飽和炭素炭素結合又は自由電子対を含むヘテロ原子であり;nは、ゼロ又は正の整数であり;そしてArは、複数の置換基を有する芳香族炭化水素又は複数の置換基を有する芳香族ヘテロ環である;前記方法。前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第一の化合物が、Y2を、でアシル化し、そして、場合により第一の保護基PG1を結合させることにより合成された、式:で表される中間体分子であり、ここで、Nuは、求核性成分であり;Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Y1は、O、S又はNR6からなる成分の群から選択され;Y4は、C、O又はNR6からなる成分の群から選択され;R7及びR8は、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、カルボキサミドアルキル、シアノ又はハロゲンから選択され;R6は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択される;請求項40に記載の方法。前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第二の化合物が、式で表される化合物を活性化剤で活性化することにより形成された、式:で表される中間体化合物であり、ここで、Aは脱離基であり、Y5はO又はSから選択される、請求項41に記載の方法。Aが、塩化物、臭化物、フッ化物、ニトロフェノキシ、イミダゾリル、Nヒドロキシスクシンイミジル、Nヒドロキシベンゾトリアゾリル、Nヒドロキシアゾベンゾトリアゾリル、ペンタフルオロフェノキシ及びNヒドロキシスルホスクシンイミジルから選択される、請求項42に記載の方法。前記活性化剤が、クロロギ酸4ニトロフェニル又はジスクシニルカーボネートからなる活性化剤の群から選択される、請求項42又は43に記載の方法。前記アミン含有生物学的活性成分Dを、脱離基Aの置換により少なくとも1個の中間体化合物のうちの第二の化合物に結合させる、請求項42又は43に記載の方法。少なくとも1個の中間体化合物のうちの第二の化合物から可逆的な第一の保護基PG1を除去するステップを含む、請求項45に記載の方法。前記可逆的な保護基PG1を除去するステップを、トリフルオロ酢酸又はDTTからなる試薬の群から選択された試薬を用いて実施する、請求項46に記載の方法。ポリマーR1をXに結合させるステップをさらに含む、請求項46又は47のいずれか1項に記載の方法。第一のポリマー保護基PG1を除去してポリマーR1をXに結合させることにより式:で表される前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第三の化合物を形成させるステップをさらに含む、請求項41に記載の方法。活性化剤を用いて前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第三の化合物を活性化することにより式:式中、Aは脱離基であるで表される前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第四の化合物を形成させるステップをさらに含む、請求項49に記載の方法。Aが、塩化物、臭化物、フッ化物、ニトロフェノキシ、イミダゾリル、Nヒドロキシスクシンイミジル、Nヒドロキシベンゾトリアゾリル、Nヒドロキシアゾベンゾトリアゾリル、ペンタフルオロフェノキシ及びNヒドロキシスルホスクシンイミジルから選択される、請求項50に記載の方法。前記活性化剤が、クロロギ酸4ニトロフェニル又はジスクシニルカーボネートからなる活性化剤の群から選択される、請求項50又は51に記載の方法。前記アミン含有生物学的活性成分Dを、脱離基Aの置換により式で表される化合物に結合させる、請求項50~52のいずれか1項に記載の方法。式で表される出発分子を第一ポリマーR1と反応させることにより該第一ポリマーR1をXに結合させるステップをさらに含む、請求項40に記載の方法。Y2を第二の保護基PG2で保護するステップをさらに含む、請求項54に記載の方法。活性化剤で該プロドラッグを活性化してアミン含有生物学的活性成分Dと反応させることにより式:で表される前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第五の化合物を形成させるステップをさらに含む、請求項54又は55に記載の方法。前記活性化剤が、クロロギ酸4ニトロフェニル又はジスクシニルカーボネートからなる活性化剤の群から選択される、請求項56に記載の方法。Y2から前記第二の保護基PG2を除去し、そして、Y2を、ここで、Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Nuは、求核性成分であり;Y1は、O、S又はNR6からなる成分の群から選択され;Y4は、C、O、NR6からなる成分の群から選択され;そしてR7及びR8は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、カルボキサミドアルキル、シアノ又はハロゲンから選択されるでアシル化する、請求項56又は57に記載の方法。前記第二の可逆的基PG2の除去を、トリフルオロ酢酸又はDTTからなる試薬の群から選択される試薬を用いて実施する、請求項58に記載の方法。除去可能な第一の保護基PG1をXに結合させ、除去可能な第二の保護基PG2を式で表される出発化合物に結合させた後、活性化剤を用いて活性化することにより、式:式中、Aは脱離基であるで表される前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第六の化合物を形成させるステップを含む、請求項40に記載の方法。Aが、塩化物、ニトロフェノキシ、イミダゾリル、Nヒドロキシスクシンイミジル、Nヒドロキシベンゾトリアゾリル、Nヒドロキシアゾベンゾトリアゾリル、ペンタフルオロフェノキシ及びNヒドロキシスルホスクシンイミジルからなる脱離基の群から選択される、請求項60に記載の方法。前記活性化剤が、クロロギ酸4ニトロフェニル又はジスクシニルカーボネートからなる活性化剤の群から選択される、請求項60又は61に記載の方法。前記アミン含有生物学的活性成分Dを、脱離基Aの置換により少なくとも1個の中間体化合物のうちの第六の化合物に結合させる、請求項60~62のいずれか1項に記載の方法。Xから前記第一の保護基PG1を除去してポリマーR1を結合させるステップを含む、請求項63に記載の方法。Y2から前記第二の保護基PG2を除去し、そして、Y2を、ここで、Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Nuは、求核性成分であり;Y1は、O、S又はNR6からなる成分の群から選択され;Y4は、C、O又はNR6からなる成分の群から選択され;そしてR7及びR8は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、カルボキサミドアルキル、シアノ又はハロゲンから選択されるでアシル化する、請求項64に記載の方法。Y2から前記第二の保護基PG2を除去し、そして、Y2を、ここで、Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Nuは、求核性成分であり;Y1は、O、S又はNR6からなる成分の群から選択され;Y4は、C、O又はNR6からなる成分の群から選択され;そしてR7及びR8は、水素、置換若しくは非置換の直鎖アルキル、分枝鎖アルキル若しくは環状アルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアルキル若しくはヘテロアリール、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、カルボキサミドアルキル、シアノ又はハロゲンから選択されるでアシル化する、請求項63に記載の方法。Xから前記第一の保護基PG1を除去してポリマーR1を結合させるステップを含む、請求項66に記載の方法。Y2を、ここで、Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールから選択され;Nuは、求核性成分であり;Y1は、O、S又はNR6からなる成分の群から選択され;Y4は、C、O又はNR6からなる成分の群から選択され;そしてR7及びR8は、水素、置換若しくは非置換の直鎖アルキル、分枝鎖アルキル若しくは環状アルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアルキル若しくはヘテロアリール、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、カルボキサミドアルキル、シアノ又はハロゲンから選択されるでアシル化して前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第三の化合物を形成させるステップを含む、請求項54に記載の方法。活性化剤を用いて前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第三の化合物を活性化して式:式中、Aは脱離基であるで表される前記少なくとも1個の中間体化合物のうちの第七の化合物を形成させるステップをさらに含む、請求項68に記載の方法。Aが、塩化物、ニトロフェノキシ、イミダゾリル、Nヒドロキシスクシンイミジル、Nヒドロキシベンゾトリアゾリル、Nヒドロキシアゾベンゾトリアゾリル、ペンタフルオロフェノキシ及びNヒドロキシスルホスクシンイミジルからなる脱離基の群から選択される、請求項69に記載の方法。前記活性化剤が、クロロギ酸4ニトロフェニル又はジスクシニルカーボネートからなる活性化剤の群から選択される、請求項69又は70に記載の方法。前記アミン含有生物学的活性成分Dを、脱離基Aの置換により式で表される化合物に結合させる、請求項69~71のいずれか1項に記載の方法。式で表される前記出発分子を、式:式中、R2は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、シアノ、ニトロ、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル又はカルボキサミドアルキルから選択されるで表される出発分子で置き換える、請求項40~72のいずれか1項に記載の方法。請求項1~36のいずれか1項に記載のプロドラッグを加水分解する方法であって、該プロドラッグをpHが約74である溶液の中に入れるステップを含む、前記方法。前記溶液が細胞外液である、請求項74に記載の方法。アミン含有成分を生体に投与する方法であって:請求項1~39のいずれか1項に記載の高分子カスケードプロドラッグを提供する第一ステップ;前記高分子カスケードプロドラッグを当該生体に投与する第二ステップ;及び、実質的に非酵素的な反応を用いて、前記高分子カスケードプロドラッグから当該アミン含有成分を開裂させる第三ステップ;を含む、前記方法。前記第三ステップを細胞外液内で行わせる、請求項76に記載の方法。前記実質的に非酵素的な反応が加水分解のステップを含む、請求項76又は77に記載の方法。前記実質的に非酵素的な反応が分子内環化又は分子内触媒作用のステップを含む、請求項76~78のいずれか1項に記載の方法。前記リンカーの少なくとも一部分を立体要求性キャリヤーで立体的に保護するステップをさらに含む、請求項76~79のいずれか1項に記載の方法。請求項1~39のいずれか1項に記載の高分子カスケードプロドラッグにおいて、求核性成分含有リンカーの実質的に非酵素的な反応により、前記アミン含有成分を前記キャリヤーから開裂させる方法。前記実質的に非酵素的な反応を約74のpHで行わせる、請求項81に記載の方法。前記キャリヤーに結合している該アミン含有成分を細胞外液内で開裂させる、請求項81又は82に記載の方法。前記実質的に非酵素的な反応が加水分解のステップを含む、請求項81~83のいずれか1項に記載の方法。前記実質的に非酵素的な反応が分子内環化又は触媒作用のステップを含む、請求項81~84のいずれか1項に記載の方法。前記求核性成分含有リンカーの少なくとも一部分を立体要求性キャリヤーで立体的に保護するステップをさらに含む、請求項81~85のいずれか1項に記載の方法。前記アミン含有成分が生物学的に活性な成分である、請求項81~86のいずれか1項に記載の方法。治療上有用な濃度の生物学的に活性な分子を提供する方法であって、該生物学的に活性な分子を請求項1~39のいずれか1項に記載のプロドラッグからインビボで開裂させることによる、前記方法。これらの理由により、記述されている高分子プロドラッグの上記制限を克服するために、アミン含有活性物質の高分子プロドラッグを形成させる新規なリンカー及び又はキャリヤー技術を提供することが求められている。本発明は、上記で記載した不利な点に取り組むものである。本発明は、求核性成分を含み且つキャリヤーとは異なるマスキング基を特徴とする高分子カスケードプロドラッグを提供する。該求核性成分は、第一の一時的結合の開裂後に、1除去反応を受けることが可能な芳香族活性化基を有する第一の一時的結合に対して適切な距離にある。本発明は、さらに、1除去の結果として開裂される第二の一時的結合を介して薬物分子のアミノ基に連結されている活性化基を特徴とする。さらなる構造的特徴は、高分子キャリヤーが永久的な結合で活性化基に結合していることである。本発明によるマスキング基は、少なくとも1個の求核性成分Nuを含んでいる。この求核性成分は、例えば、第一級アミノ基、第二級アミノ基又は第三級アミノ基であることができるが、該求核性成分は、分子内触媒又は分子内環化により、活性化成分からのマスキング基の開裂を援助することが可能である。本発明は、式又は:式中、Y1~Y5、R1~R4、T、X、W、Nu及びArは、下記で定義されているで表される高分子カスケードプロドラッグ及び対応する高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬を提供する。本来の薬物は、二段階の機構により放出される。第一段階は、マスキング基と活性化成分の間の第一の一時的結合の当該高分子プロドラッグからのインビボにおける律速的な開裂である。上記で記載したように、マスキング基の開裂は、酵素的段階又は非酵素的段階、例えば、pH依存性加水分解又は分子内環化などにより介在され得る。本発明の好ましい実施形態では、開裂は、分子内環化又は触媒により非酵素的に成される。本発明のマスキング基の37°Cの水性バッファー中における開裂速度の半減期は、好ましくは、1時間~6ヶ月であり、さらに好ましくは、1日~3ヶ月であり、最も好ましくは、1日~2ヶ月である。再生された本来の薬物の放出における第二の最終段階は、それぞれ、式又は式で表される残りの高分子プロドラッグの成分の、迅速で、自発的且つ不可逆的な、いわゆる、14除去、又は、16除去、又は、1除去である。マスキング基の加水分解性開裂とそれに続く活性化基の16除去段階により誘発される、高分子プロドラッグからの本来の薬物の放出の上記機構は、本発明の高分子プロドラッグにより例証される。式又は式におけるY1~Y5、R1~R4、T、X、W、Nu及びArの定義Tは、D又はAである。本発明による構造が高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬である場合、TはAであり、そして、Aは脱離基である。適切な脱離基Aの非限定的な例としては、限定するものではないが、塩化物、臭化物、フッ化物、ニトロフェノキシ、イミダゾリル、Nヒドロキシスクシンイミジル、Nヒドロキシベンゾトリアゾリル、Nヒドロキシアゾベンゾトリアゾリル、ペンタフルオロフェノキシ、Nヒドロキシスルホスクシンイミジル、又は、当業者には既知の任意の他の脱離基などを挙げることができる。本発明による構造が高分子カスケードプロドラッグである場合、TはDであり、そして、Dは、アミン含有生物学的活性物質の残基であり、ここで、アミン含有生物学的活性物質としては、限定するものではないが、小分子生理活性作用物質又は生体高分子、例えば、タンパク質、ポリペプチド、及び、オリゴヌクレオチド、ペプチド核酸などを挙げることができる。ここで留意すべきことは、本明細書において、しばしばプロドラッグについて言及されているということである。真のプロドラッグは、Tがアミン含有生物学的活性物質又はアミン含有生物学的活性成分の残基である場合である。Tが脱離基Aである場合、当該式は、高分子カスケードプロドラッグリンカー試薬を表している。簡単にするために、本明細書においては、これらをプロドラッグと称する。真のプロドラッグ又は前駆体としての試薬のいずれを意味しているのかは、前後関係から理解されるであろう。適切な有機小分子生理活性成分としては、限定するものではないが、少なくとも1個の第一級アミノ基又は第二級アミノ基を有する、中枢神経系活性作用物質、抗感染症薬、抗新生物薬、抗細菌薬、抗真菌薬、鎮痛薬、避妊薬、抗炎症薬、ステロイド性作用薬、血管拡張性作用薬、血管収縮作用薬及び心臓血管作用薬などの成分を挙げることができる。そのような化合物の非排他的な例は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、アミノグルテチミド、アマンタジン、ジアフェニルスルホン、エタンブトール、スルファジアジン、スルファメラジン、スルファメトキサゾール、スルファレン、クリナフロキサシン、モキシフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ノルフロキサシン、ネオマイシンB、スプレクチノマイシン、カナマイシンA、メロペネム、ドパミン、ドブタミン、リシノプリル、セロトニン、カルブタミド及びアシビシンなどである。少なくとも1個の遊離アミノ基を有する適切なタンパク質及びポリペプチドとしては、限定するものではないが、ACTH、アデノシンデアミナーゼ、アガルシダーゼ、アルブミン、α1アンチトリプシン、α1プロテイナーゼインヒビター、アルテプラーゼ、アニストレプラーゼ、アンクロドセリンプロテアーゼ、抗体、抗トロンビンIII、抗トリプシン、アプロチニン、アスパラギナーゼ、ビファリン、骨形成タンパク質、カルシトニン、コラゲナーゼ、DNアーゼ、エンドルフィン、エンフュービルタイド、エンケファリン、エリスロポエチン、VIIa因子、VIII因子、VIIIa因子、IX因子、フィブリノリジン、融合タンパク質、卵胞刺激ホルモン、顆粒球コロニー刺激因子、ガラクトシダーゼ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド例えば、GLP1、グルコセレブロシダーゼ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ホスホリパーゼ活性化タンパク質、絨毛性性腺刺激ホルモン、ヘモグロビン、B型肝炎ワクチン、ヒルジン、ヒアルロニダーゼ、イズルノニダーゼidurnonidase、免疫グロブリン、インフルエンザワクチン、インターロイキン、IL1受容体拮抗薬、インスリン、インターフェロン、角質細胞増殖因子、トランスホーミング増殖因子、ラクターゼ、ロイプロリド、レボチロキシン、黄体形成ホルモン、ライムワクチン、ナトリウム利尿ペプチド、パンクレリパーゼ、パパイン、副甲状腺ホルモン、PDGF、ペプシン、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ、プロラクチン、タンパク質C、オクトレオチド、セクレチン、セルモレリン、スーパーオキシドジスムターゼ、ソマトロピン、ソマトスタチン、ストレプトキナーゼ、スクラーゼ、破傷風毒素フラグメント、チラクターゼ、トロンビン、チモシン、甲状腺刺激ホルモン、チロトロピン、腫瘍壊死因子、TNF受容体IgGFc、組織プラスミノーゲン活性化因子、TSH、尿酸オキシダーゼ、ウロキナーゼ、ワクチン及び植物性タンパク質などを挙げることができる。同様に、ここで、インビボ生理活性を有する任意の合成ポリペプチド又はポリペプチドの任意の部分なども挙げることができる。さらに、組換えDNA法で調製したタンパク質、例えば、上記で挙げたタンパク質の突然変異体、抗体フラグメント、一本鎖結合タンパク質、触媒性抗体及び融合タンパク質なども挙げることができる。好ましいタンパク質は、抗体、カルシトニン、GCSF、GMCSF、エリスロポエチン、ヘモグロビン、インターロイキン、インスリン、インターフェロン、SOD、ソマトロピン、TNF、TNF受容体IgCFc及びGLP1である。Xは、R5Y6などのようなスペーサー成分である。Y1、Y2は、それぞれ、互いに独立して、O、S又はNR6であり得る。Y3、Y5は、それぞれ、互いに独立して、O又はSであり得る。Y4は、O、NR6又はCである。Y6は、O、S、NR6、スクシンイミド、マレイミド、不飽和炭素炭素結合若しくは自由電子対を含んでいる任意のヘテロ原子であるか、又は、存在しない。R2及びR3は、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、シアノ、ニトロ、ハロゲン、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボニル、又は、カルボキサミドアルキルなどから選択される。本発明との関連において、用語ヘテロアルキルは、アルキル鎖を表し、ここで、該アルキル鎖は、任意の位置において、0、S、N、P、Si、Cl、F、Br及びIなどから独立して選択される1個以上のヘテロ原子、又は、カルボキサミド、カルボン酸エステル、ホスホン酸エステル、リン酸エステル、二重結合若しくは三重結合、カルバメート、尿素、チオ尿素、チオカルバメート、オキシム、シアノ、カルボキシル及びカルボニルなどから独立して選択される1個以上の基を含んでいるか又はそれらで置換されている。Ar上の各R4置換基は、同一であっても又は異なっていてもよく、そして、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルコキシ、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、シアノ又はハロゲンなどから選択される。R4は、好ましくは、小置換基、例えば、水素、メチル、エチル、エトキシ、メトキシ、並びに、他の、C1C6の直鎖、環状若しくは分枝鎖のアルキル及びヘテロアルキルなどから選択される。nは、ゼロ又は正の整数である。R7及びR8は、独立して、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換のヘテロアリール、シアノ又はハロゲンなどから選択される。R5は、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールなどから選択される。R6は、水素、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくはヘテロアルキル、アリール、置換アリール、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールなどから選択される。R1は、ポリマーである。適切なポリマーの非限定的な例は、ポリアルキルオキシをベースとするポリマー、例えば、ポリ又はポリ、デキストラン、キトサン、ヒアルロン酸及び誘導体、アルギナート、キシラン、マンナン、カラギーナン、アガロース、セルロース、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン及び炭水化物をベースとする他のポリマー、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ又はポリ、ポリ、ポリ、例えば、ポリ、コラーゲン、ゼラチン、コポリマー、グラフトコポリマー、架橋ポリマー、ヒドロゲル、並びに、上記で挙げたポリマーに由来するブロックコポリマーである。ヒドロゲルは、大量の水を吸収している親水性又は両親媒性の三次元高分子網状組織であると定義される。この網状組織は、ホモポリマー又はコポリマーで構成され、共有結合性の化学的又は物理的架橋が存在していることに起因して不溶性である。架橋により、網状組織構造及び物理的一体性がもたらされている。ヒドロゲルは、水との熱力学的な適合性を示すが、それにより、水性媒体中で膨潤することができる。その網状組織の鎖は、細孔が存在し且つその細孔のかなりの割合は1~1000nmの寸法を有するようにつながっている。特定の重合条件を選択することにより、当該ヒドロゲルは、無定形のゲルの形態で得ることができるか又はビーズ状樹脂として得ることができる。そのような柔らかいビーズは、1~1000μmの寸法を有し得る。ヒドロゲルは、上記で挙げたポリマー及びコポリマーから合成することが可能であり、また、文献に記載されているように、縮合反応や付加反応などのような化学反応により、ラジカル重合、アニオン重合又はカチオン重合によって、化学的に架橋することができるか又は物理的に架橋することができる。さらなる例には、分岐ポリマー及び高分岐ポリマーなどがある。そのようなポリマーの例としては、デンドリマー及びほかの高密度スターポリマーなどを挙げることができる427436;PMHeegaardUBoasChemSocRev20044363;SMGraysonJMFrechetChemRev200110138193868。R1は、タンパク質などのような生体高分子であることもできる。そのようなポリマーの非限定的な例としては、アルブミン、抗体、繊維素、カゼイン及び他の血漿タンパク質などを挙げることができる。各R1ポリマーは、本明細書に記載されている第二のプロドラッグリンカー又は当業者には既知の任意の別のリンカーとのコンジュゲーションにより該ポリマーに結合させた1個以上の生物学的活性物質を有し得る。該ポリマーは、さらなる置換基を有することも可能であり、また、スペーサー成分Xに結合するように官能基化することも可能である。そのような官能基の非限定的な例には、カルボン酸及び活性化誘導体、アミノ、マレイミド、チオール、スルホン酸及び誘導体、カーボネート及び誘導体、カルバメート及び誘導体、ヒドロキシル、アルデヒド、ケトン、ヒドラジン、イソシアネート、イソチオシアネート、リン酸及び誘導体、ホスホン酸及び誘導体、ハロアセチル、ハロゲン化アルキル、アクリロイル、アリール化剤、例えば、フッ化アリール、ヒドロキシルアミン、ジスルフィド、例えば、ピリジルジスルフィド、ビニルスルホン、ビニルケトン、ジアゾアルカン、ジアゾアセチル化合物、エポキシド、オキシラン並びにアジリジンなどを挙げることができる。R1ポリマーについての好ましい官能基としては、限定するものではないが、チオール、マレイミド、アミノ、カルボン酸及び誘導体、カーボネート及び誘導体、カルバメート及び誘導体、アルデヒド並びにハロアセチルなどを挙げることができる。特に好ましい官能基としては、チオール、マレイミド、アミノ、カルボン酸及び誘導体、カルバメート及び誘導体、並びに、カーボネート及びその誘導体などを挙げることができる。XとR1の間で形成させる適切な結合又は基の非限定的な例としては、ジスルフィド、Sスクシンイミド、アミド、アミノ、カルボン酸エステル、スルホンアミド、カルバメート、カーボネート、エーテル、オキシム、ヒドラゾン、尿素、チオ尿素、ホスフェート及びホスホネートなどを挙げることができる。XとR1の間で形成させる好ましい結合又は基には、Sスクシンイミド、アミド、カルバメート及び尿素などがある。好ましくは、R1ポリマーは、哺乳動物において、充分に水和しており、また、分解可能又は排泄可能であり、無毒性且つ非免疫原性である。好ましいR1ポリマーとしては、NektarInc2003catalogNektarMoleculeEngineeringPolyethyleneGlycolandDerivativesforAdvancedPEGylationに記載されているポリエチレングリコール試薬及びポリエチレングリコールなどのようなポリアルコキシをベースとするポリマー、分岐、高分岐、架橋ポリマー及びヒドロゲル、並びに、アルブミンなどのようなタンパク質などを挙げることができる。Wは、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル、アリール、置換アリール、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のヘテロアリールなどから選択される。Wは、好ましくは、無毒性の、置換若しくは非置換の直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル又はヘテロアルキルから選択される。の好ましい変形態様は、である。の特に好ましい変形態様は、であり、これらは、下記式:で表される高分子プロドラッグを形成する。式及び式において、R6は、NuWであることも可能である。少なくとも1個のNuは、NuWに存在している。Nuは、求核性成分であり、これは、のカルボニル炭素において求核攻撃することが可能であり、従って、分子内触媒又は環化によりマスキング基の開裂を触媒することが可能である。図8は、マスキング基が分子内環化により開裂される、式又は式による例を示している。Nuが分子内触媒によりマスキング基の開裂のみを触媒する場合、該マスキング基の環状生成物は形成されない。好ましい求核性成分としては、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、チオール、カルボン酸、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン及び窒素含有ヘテロアリールなどを挙げることができる。特に好ましい求核性成分としては、第一級アミノ基、第二級アミノ基及び第三級アミノ基などを挙げることができる。該マスキング基の開裂を効果的に触媒するために、求核性成分NuとY2の間の間隔は、好ましくは、3個の原子~15個の原子である。さらに好ましくは、NuとY2の間の間隔は、4個の原子~10個の原子である。少なくとも1個の該求核性成分NuをWのいずれかに結合させ得るか、又は、少なくとも1個の該求核性成分NuをWの一部とすることができる。該マスキング基:の好ましい変形態様は、独立に、から選択され、ここで、は、第一級、第二級又は第三級のアミン求核性成分Nuを形成している。これらの好ましい変形態様により、下記式:で表される高分子プロドラッグが形成される。R9及びR10は、独立して、水素、置換若しくは非置換のアルキル若しくはヘテロアルキル、又は、置換若しくは非置換のアリール若しくはヘテロアリールから選択される。該マスキング基:の特に好ましい変形態様は、から選択される。好ましくは、R9、R10、R11及びR12は、独立して、水素、又は、置換若しくは非置換のアルキルから選択され、R7及び又はR8は、水素ではない。R6は、さらにまた、であってもよく、また、R6は、好ましくは、水素ではない。驚くべきことに、該マスキング基内に求核性成分Nuが存在していない場合、該マスキング基が前記アミン含有生物学的活性成分を不可逆的に修飾し得ることが見いだされた。実施例のところで示されているように、本発明には包含されないペンタノイルマスキング基を有している高分子プロドラッグからの生理活性成分インスリンの放出に際して、インスリン分子の約30がアシル転位により該マスキング基で修飾された。マスキング基からのアシル転位に対する求核性成分として作用する付加的な遊離アミノ基をDが含んでいるこの修飾の例の機構は、図9に示してある。式又は式のArは、複数の置換基を有する芳香族炭化水素又は複数の置換基を有する芳香族ヘテロ環である。芳香族であるためには、π電子の数はヒュッケル則を満たさなければならず、また、当該環は平面的でなければならない。多くの種類のさまざまな化合物がこれらの基準を満たし、従って、それらは、式又は式のArとして適している。非限定的な好ましい芳香族成分としては、以下のものなどがある。ここで、Wは、互いに独立して、O、N又はSである。式におけるY2と又は、式におけるY2とは、14除去、又は、16除去、又は、1除去が起こり得るように、当該芳香環上に配置されていなければならない。例えば、6員環の場合、置換基は、オルト又はパラに配置されていなければならない。Arについての好ましい成分は、単環式及び二環式の芳香族炭化水素又は芳香族ヘテロ環である。特に好ましい成分は、単環式の5員又は6員の芳香族炭化水素又は芳香族ヘテロ環である。該高分子プロドラッグの一般的な合成手順本発明の高分子プロドラッグの代表的な例の合成については、実施例のところで記載してある。本発明のプロドラッグは、種々の異なった方法で調製することができる。図10には、式で表される本発明の高分子プロドラッグの一般的な合成経路が示してある。第一の方法では、出発物質をマスキング基でアシル化することにより中間体を提供する。そのために、X又はNuは、可逆的な保護基PG1で保護しなければならない場合もある。適切な保護基は、TWGreenePGMWutsProtectivegroupsinorganicsynthesis1999JohnWileySons3rdedに記載されている。中間体からを得るために、2種類の代替的な経路を用いることができる。第一の経路では、中間体をクロロギ酸4ニトロフェニル又はジスクシニルカーボネートなどの活性化剤で活性化して、を生成させる。活性化された中間体の脱離基を置き換えることによりアミン含有薬物分子をに結合させて、を得る。例えば中間体をトリフルオロ酢酸又はDTTなどの試薬で処理することにより、Xを脱保護し、その後、脱保護された中間体をポリマーR1と反応させて、高分子プロドラッグを得る。第二の経路では、Xを脱保護した後、ポリマーR1を最初に中間体に結合させて中間体を形成させる。活性化段階に付した後、中間体を形成させる。をアミン含有薬物分子と反応させて、高分子プロドラッグを形成させる。第二の方法では、クロロギ酸4ニトロフェニルなどの活性化剤で出発物質を活性化することにより中間体を提供する。そのために、Y2及び又はXは、保護基PG2及び又はPG1で保護しなければならない場合もある。アミン含有薬物を中間体と反応させて、を形成させる。第一の経路では、のY2を選択的に脱保護し、アシル化して、中間体を形成させ、これを、上記で記載したようにさらに処理して、とする。第二の経路では、Xを選択的に脱保護し、ポリマーR1と反応させて、中間体を形成させる。次いで、のY2を脱保護し、アシル化して、高分子プロドラッグを形成させる。第三の方法では、出発物質をポリマーR1と反応させて、中間体を形成させる。1つの経路では、中間体をアシル化して中間体を形成させることができる。これを上記で記載したように処理して、高分子プロドラッグを形成させる。第二の経路では、Y2を保護基PG2で保護し、活性化し、アミン含有薬物分子と反応させて、を形成させる。次いで、中間体を上記で記載したように処理して、高分子プロドラッグを形成させる。記載した全ての方法に関し、Y3などのさらなる官能基又はNuW内に存在している求核性成分を、適切な保護基で保護しなければならない場合もある。式で表される高分子プロドラッグは、図10において、の代わりに出発物質を使用して、式で表されるプロドラッグについて上記で記載した方法で調製することができる。当然のことながら、記載したような保護基又は脱離基を有し、対応する高分子プロドラッグの合成に使用される、ここで概説した本発明によるリンカー構造は、本発明の範囲内にあると見なされる。分子療法における高分子プロドラッグの適用高分子カスケードプロドラッグに関し、第一の一時的結合の開裂動力学は、ヒトの血液循環内の条件下で進行するのが望ましい。最も重要なことは、第一の一時的結合の開裂は、加水分解に基づくべきであるということであり、また、酵素類、塩類又は結合タンパク質類などのようなヒトの血液循環内に存在している化学的物質又は生化学的物質又は物理化学的物質への依存性は全く示さないか又は極限られた依存性しか示すべきではないということである。マスキング基と活性化基を連結している第一の一時的結合の開裂速度及びその血液成分への依存性が、該マスキング基内に存在していて対応する一時的結合に対して特定の間隔に位置している求核性官能基が介在する隣接基効果によって制御することができるということが見いだされた。マスキング基がこのように構築されている場合、該求核性成分が寄与する分子内反応により、該結合の動力学が規定される中の該プロドラッグの半減期が、酵素を含んでいないpH74のバッファー中の該プロドラッグの半減期の少なくとも50であることである。このような特徴を有することにより、生体への投与後の放出速度のよりよい予測と制御が可能となり、患者間の可変性が小さくなる。Antzczakら、Shabatら、及び、Leeらの上記実施例に記載されているようなマスキング基の除去の酵素依存性とは対照的に、マスキング基が酵素非依存的な自己脱離特性を有している場合、放出速度をより高度なレベルで制御することができる。本発明のマスキング基は、少なくとも1個の求核性成分Nuを含んでいる。このマスキング基の構造的特徴は、プロドラッグの開裂速度を正確に調節するために、系統的に最適化することができる。図8に図式的に示されているように、分子間反応よりも分子内反応の方が一般に好ましいという事実により、アンマスキングとそれに続く転位をもたらすそのような分子内反応は、酵素からは高度に独立している。本発明の別の実施形態では、プロドラッグ開裂の酵素レベルへの非依存性は、図7に示されているように、立体要求性キャリヤー基を含んでいるプロドラッグを提供することにより達成される。そのような、立体要求性キャリヤー基による立体的保護又はカプセル化は、キャリヤーポリマーの分岐構造、高分岐構造、架橋構造又は自己組織化構造により付与され得る。そのようなポリマーは、例えば、デンドリマー、高密度スターポリマー又はビーズ形のナノ粒子及びマイクロ粒子又は無定型ゲルなどにおけるような、高密度に詰め込まれた分子容を形成する傾向を有する。薬物へのポリマーキャリヤーの結合がポリマーキャリヤーの内部に位置している場合、そのように結合された薬物は、効率よくカプセル化されて酵素の攻撃から保護される。この場合、該ポリマーによる立体障害により、酵素の接近が防止され、一時的結合の酵素による開裂が防止される。さらに別の実施形態では、プロドラッグの酵素非依存的開裂は、分子内自己脱離性マスキング基を、カプセル化する高分岐キャリヤー又は架橋キャリヤー又は自己組織化キャリヤーと組み合わせることにより達成される。本発明のさらなる有利点は、修飾されていない生物学的活性成分の放出である。該生物学的活性成分が、タンパク質内のリシン残基のアミノ基のようなさらなる反応性官能基を含んでいる場合、マスキング基と生物学的活性成分の間の不要な副反応が起こり得る。生物学的活性成分のそのような反応性官能基は、マスキング基と反応することが可能であり、それにより安定な共有結合を形成し、そして、結果として、修飾された生物学的活性成分を放出する。この潜在的な副反応は、図9に図式的に示してある。そのような副反応の生起については、マスキング基内に求核性成分Nuを含まない、Antczakら又はLeeらによって記載されているペンタノイル残基のような単純なマスキング基を有する本発明には包含されない高分子プロドラッグを用いて、実施例のところで示してある。このリンカー系における該副反応は、求核性成分Nuを含んでいる分子内で活性化されたマスキング基を有する本発明の高分子プロドラッグを使用することにより抑制することができる。酵素非依存的な放出の制御により、カプセル化する必要なく、デポー製剤が可能となる。これまで、大きな細孔径を有するヒドロゲルなどのような多くの種類の生体適合性材料は、カプセル化特性が欠如しているために、デポー製剤には使用することができなかった。そのような充分に水和している機械的に柔らかい生体適合性材料からは、生物学的活性成分は、大部分の治療用途について、速く放出されすぎるであろう。本発明において記述されているプロドラッグリンカーと組み合わせた場合、放出は、専らリンカー開裂動力学により制御されて、ポリマーキャリヤー自体の化学的又は酵素的分解を必要とはしないので、該キャリヤー材料は、その生体適合特性について最適化され得る。放出速度は、実質的に非酵素的化学的反応により制御され、該反応は、該リンカーの分子構造に依存する。例えば1つ以上の位置における置換基を変えることにより、例えばカスケードプロドラッグにおけるマスキング基を変えることにより、化学構造を系統的に又はランダムに修飾することで、種々の放出速度を有するプロドラッグリンカーを形成させることができる。従って、さまざまなプロドラッグリンカーを作り出すことが可能であり、また、所与の薬剤の適用又は所与の治療用途による要求に照らして、速く開裂するプロドラッグリンカー又はゆっくりと開裂するプロドラッグリンカーを選択することが可能である。本発明の一部である別の有利な特徴は、該ポリマーキャリヤーが、二重又はカスケードプロドラッグ放出機構に関与している活性化成分に、安定な共有結合で結合しているということである。本発明の一部として、該活性化成分は、薬物の放出後にもポリマーキャリヤーに結合したままで残っており、従って、環境中に拡散することがない。ポリマーキャリヤーが活性化基に永久的に結合していることにより、活性化成分の全ての副反応性が大いに低減され、また、好ましくない毒性作用の可能性が著しく低減される。当技術分野で知られている別の高分子カスケードプロドラッグにおいては、薬物に加えて、活性化成分も放出される。カスケードプロドラッグにおいて用いられる分子転位機構に起因して、活性化成分が高い反応性を有する形態で放出されて周囲の生体分子に直接的な損傷を引き起こし得るか、又は、活性化成分の潜在的に毒性な誘導体がインビボで形成され得る。図面の説明図1は、キャリヤー結合プロドラッグを示している。図2は、酵素依存性キャリヤー結合プロドラッグを示している。図3は、マスキング基がキャリヤーの一部であるカスケードプロドラッグを示している。図4は、マスキング基がキャリヤーの一部である酵素依存性カスケードプロドラッグを示している。図5は、マスキング基がキャリヤーから分離している自己開裂性カスケードプロドラッグを示している。図6は、マスキング基がキャリヤーから分離している酵素依存性カスケードプロドラッグを示している。図7は、キャリヤーがマスキング基を立体的に保護しているカスケードプロドラッグを示している。図8は、分子内環化によるマスキング基の開裂を示している。図9は、高分子プロドラッグの活性化による可能な副反応を示している。図10は、一般的な合成方法を示している。図11は、プロドラッグから放出されたインスリン分子の質量スペクトルを示している。実施例材料Fmocアミノ酸、樹脂及びPyBOPは、Novabiochemから購入した。それらの名前を挙げるときはそのカタログに従う。FmocAdoOHは、Neosystemから入手した。それ以外の化学薬品は全て、SigmaAldrichから購入した。組換えヒトインスリンは、ICNBiomedicals製のものであった。MaleimidePEG5kは、Nektarから入手した。5カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステルは、MolecularProbesから入手した。固相合成反応媒体固相合成は、NovaSynTGSieberアミド樹脂、又は、塩化2クロロトリチル樹脂で実施した。ポリプロピレン製フリットを具備したシリンジを反応容器として用いた。fmocで保護されているアミノ酸についての標準的なカップリングサイクルfmoc保護基を除去するために、該樹脂を、2296ピペリジンDBUDMFと一緒に繰り返し撹拌し、DMFで洗浄した。樹脂上における遊離アミノ酸へのfmoc保護アミノ酸のカップリングは、該樹脂を、DMF中で、遊離アミノ基に対して3当量のfmocアミノ酸と3eqのPyBOPと6eqのDIEAと一緒に60分間撹拌することにより行なわせた。最後に、該樹脂をDMFで繰り返し洗浄した。TentaGelSieberアミド樹脂のための標準的な開裂プロトコル合成が完了した時点で、該樹脂をDCMで洗浄し、減圧下に乾燥させ、9721DCMTESTFAで繰り返し処理した。蒸発させた後、分取RPHPLCで化合物を精製した。塩化2クロロトリチル樹脂のための標準的な開裂プロトコル合成が完了した時点で、該樹脂をDCMで洗浄し、減圧下に乾燥させ、6535HFIPDCMで30分間2回処理した。溶出液を合した後、揮発性成分を蒸発させた。分析質量分析は、WatersZQ4000ESI装置で行った。必要に応じ、WaterssoftwareMaxEntによりスペクトルを解釈した。サイズ排除クロマトグラフィーは、Superdex200カラムを備えたAmershamBioscienceAEKTAbasicシステムで行った。BrukerAC300に、NMRスペクトルを記録した。エステル結合で結合したマスキング基を有する式の高分子プロドラッグの合成の概略カーバメート結合で結合したマスキング基を有する式の高分子プロドラッグの合成カーバメート結合で結合したマスキング基を有する式の高分子プロドラッグの合成化合物の合成Mmtクロリド及びメルカプトプロピオン酸をTFAに溶解させ、30分間インキュベーションした。減圧下に溶媒を除去した。生成物をピリジンに溶解させ、水で希釈し、酢酸で酸性化し、エーテルで抽出した。エーテル相を分離し、Na2SO4で脱水した。減圧下に溶媒を除去し、生成物をRPHPLCで精製した。化合物及び化合物の合成オクトパミン塩酸塩、DIEA及びPyBOPをDMFに溶解させ、を添加し、その混合物を室温で50分間反応させた。酢酸を添加した後、生成物をRPHPLCで精製した。は、ノルメタネフリン塩酸塩から上記と同様にして合成した。:MSMNa536:MSMNa566メルカプトチアゾリドの合成2メルカプトチアゾリン及びトリエチルアミンを乾燥THFに溶解させ、塩化ペンタノイルを添加した。その混合物を、不活性雰囲気下、50°Cで1時間撹拌し、室温まで冷却した。05N水性HClを添加した。有機相を分離し、Na2SO4で脱水した。減圧下に濃縮した後、残渣を、移動相として11のヘプタン酢酸エチルを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。メルカプトチアゾリドを粘性の黄色の油状物として採集した。Rf07化合物及び化合物の合成一般的な合成プロトコル:1gの塩化2クロロトリチル樹脂を、5mLのDCMDMF中で、850mgのFmocIleOH及び840μLのDIEAと一緒に1時間インキュベーションした。fmocを除去し、該樹脂をDMFで洗浄した後、標準的なカップリング方法に従い、bocアミノ酪酸を05gの樹脂にカップリングさせた。97l2DCMTFATESを用いて、45分間、化合物を該樹脂から開裂させた。ピリジンで中和した後、減圧下に溶媒を除去し、をRPHPLCで精製した。は、bocアミノヘキサン酸から上記と同様にして合成した。MSMNa3392MSMNa3674化合物の合成メルカプトチアゾリド、フェノール及びDMAPを、窒素雰囲気下、DCM中で2時間還流した。酢酸で中和した後、減圧下に溶媒を除去し、生成物をRPHPLCで精製した。MSMNa620化合物~化合物の合成一般的な合成プロトコル:DMF中のカルボン酸、フェノール、DIC及びDMAPを室温で1時間反応させた。酢酸を添加した後、生じたカルボン酸エステルをRPHPLCで精製した。は、出発物質として及びを使用し、上記と同様にして合成した。は、ZLysOH及びを使用し、上記と同様にして合成した。は、及びを使用し、上記と同様にして合成した。MSMNa928MSMNa864MSMNa892MSMNa862化合物~化合物の合成一般的な合成プロトコル:アルコール、クロロギ酸4ニトロフェニル及びDIEAを、窒素雰囲気下で、乾燥ジオキサン中、室温で3時間撹拌した。酢酸を添加した後、その混合物を73アセトニトリルH2Oで希釈し、得られたカーボネートをRPHPLCで精製した。、、又はは、それぞれ、、、又はから、上記と同様にして合成した。MSMNa785MSMNa1093MSMNa1029MSMNa1057MSMNa1027化合物~化合物の合成一般的な合成プロトコル:11DMSODMF中のRhインスリンを、DMSO中の09eqのカーボネートの溶液と混合した。その溶液をDIEAで塩基性pHに調節し、室温で15時間撹拌した。RPHPLCで精製して、Mmtで保護された中間体を得た。凍結乾燥後、Mmtで保護された上記中間体を955TFAトリエチルシランと混合し、5分間撹拌した。窒素流下で揮発性物質を除去した。をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。インスリン修飾の位置選択性は、DTT還元及びMS分析により確認した。又はは、それぞれ、又はから、上記と同様にして合成した。MSM2H230789;M3H320532;M4H415406MSM2H231529;M3H321006;M4H415758MSM3H321107;M4H415837;M5H512666化合物~化合物の合成NεB29フルオレセインインスリンの合成:80mgのrhインスリンを4mLの11DMFDMSOに溶解させ、40μLのDIEAを添加した。8mgの5カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステルを添加し、その溶液を室温で30分間撹拌した。4mLの551アセトニトリル水酢酸を添加した。生成物であるNεB29フルオレセインインスリンをRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。コンジュゲーション部位は、14ジチオトレイトールでのNεB29フルオレセインインスリンの還元、プロテアーゼ消化及びMS分析により確認した。MS:M2H230840;M3H32054611DMFDMSO中のNεB29フルオレセインインスリンを、DMSO中の09eqのカーボネートの溶液と混合した。その溶液をDIEAで塩基性pHに調節し、室温で3時間撹拌した。RPHPLCで精製して、Mmtで保護された中間体を得た。凍結乾燥後、該中間体を955TFAトリエチルシランに溶解させ、5分間撹拌した。窒素流下で揮発性物質を除去した。をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。、又はは、それぞれ、、又はを用いて、上記と同様にして合成した。MS:M2H233641;M3H322427;M4H416815MS:M3H322192;M4H416659;M5H513328MS:M3H322297;M4H416733;M5H513377MS:M3H322187;M4H416649化合物~化合物の合成70μLの14アセトニトリル水中500μMを、7μLの14アセトニトリル水中10mMマレイミドPEG5k及び10μLの05Mリン酸ナトリウムバッファーと混合し、15分間インキュンベーションした。化合物を、移動相として10mMHEPESバッファー、150mMNaCl、3mMEDTA及び0005Tweenを用いるSECで精製した。採集した溶出液を、放出速度の測定にそのままで直接使用した。、、、、又はは、それぞれ、、、、、又はから、上記と同様にして合成した。~:SEC保持時間:195分化合物及び化合物の合成35ジメチル4ヒドロキシアセトフェノン及びCuBr2を10mLの酢酸エチルに溶解させ、2時間還流した。濾過により固体状の副生成物を除去した。濾液を蒸発させ、粗製生物をRPHPLCで精製した。は、4ヒドロキシ3メチルアセトフェノンから、上記と同様にして合成した。:収量754mg;MSMH24312451:収量533mg;MSMH22922311化合物及び化合物の合成500mgの及び576mgのヘキサメチレンテトラミンを20mLのトリクロロメタンに溶解させ、30分間還流した。減圧下に溶媒を除去した。4mLのエタノール及び2mLの濃HClを添加し、得られたスラリーを50°Cに4時間加熱した。その混合物を減圧下に濃縮し、アセトニトリル水で希釈し、をRPHPLCで精製した。は、472mgのから、上記と同様にして合成した。:収量TFA塩として547mg;MSMNa2022:収量TFA塩として455mg;MSMNa1882化合物の合成500mgのを10mLの11メタノール水に溶解させ、129mgのNaBH4を添加した。その混合物を、室温で30分間撹拌した。05mLの酢酸を添加し、をRPHPLCで精製した。:収量TFA塩として313mg;MSMNa2042;NMRδppm825784689585462293280217化合物~化合物の合成を、化合物について記載されているように化合物にカップリングさせて、を生成させた。又はは、それぞれ、シネフリン又はメタネフリンを用いて、上記と同様にして合成した。シネフリンを上記と同様に3トリチルスルファニルプロピオン酸にカップリングさせて、を生成させた。:収量254mg;MSMNa5647:収量760mg;MSMNa5502:収量530mg;MSMNa5804:収量567mg;MSMNa5205化合物、化合物及び化合物の合成一般的な合成プロトコル:1gの塩化2クロロトリチル樹脂を、DCM中で、NNジメチルプロパン13ジアミンを合成する場合又はNNジエチルプロパン13ジアミンを合成する場合又はNNジメチルエタン12ジアミンを合成する場合と一緒に1時間インキュベーションした。該樹脂をDMFで洗浄した後、アミンを、112無水酢酸ピリジンDMFで14時間アセチル化した。その樹脂をTHFで洗浄し、乾燥させた。THF中に懸濁させた該樹脂に、LiAlH4を滴下して加えた。得られた懸濁液を、窒素雰囲気下、45°Cで3時間撹拌した。冷却後、ロッシェル塩水溶液を添加し、樹脂を分離し、乾燥させた。21HFIPDCMで化合物を樹脂から開裂させた。揮発性成分を蒸発させた。生成物、生成物又は生成物は、それ以上精製することなく次の段階で使用した。MSMH1312MSMH1592MSMH1171化合物~化合物及び化合物の合成R1R2R5Me、R62エチル、R7H、R4MmtR1OMe、R2H、R5Et、R62エチル、R7H、R4MmtR1OMe、R2H、R5Me、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1R2H、R5Me、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1OMe、R2H、R5Et、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1R2H、R5Et、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1R2H、R5Et、R62エチル、R7Me、R4Trtを15mLの乾燥THEに溶解させた。クロロギ酸pニトロフェニル及びDIEAを添加し、その混合物を室温で30分間撹拌した。を添加し、撹拌を30分間継続した。減圧下に溶媒を除去し、100μLのAcOHを添加し、をRPHPLCで精製した。は、及びから、上記と同様にして合成した。又はは、それぞれ、及びジアミンから、又は、及びジアミンから、上記と同様にして合成した。又はは、それぞれ、及びジアミンから、又は、及びジアミンから、上記と同様にして合成した。は、及びから、上記と同様にして合成した。:収量TFA塩として120mg;MSMNa6924:収量TFA塩として48mg;MSMNa7363:収量TFA塩として8mg;MSMNa7364:収量TFA塩として20mg;MSMNa7063:収量TFA塩として2mg;MSMNa7646:収量TFA塩として6mg;MSMNa7344:収量TFA塩として152mg;MSMNa6905化合物の合成アミンを、化合物について記載されているように、化合物にカップリングさせた。:収量608mg;MSMNa5483化合物及び化合物の合成R1R5Me、R2H、R63プロピルR1R5Me、R2H、R62エチル383mgのを、クロロギ酸pニトロフェニル及び、それぞれ、NNNトリメチルプロパン13ジアミン又はと反応させ、化合物について記述したようにして、又はを生成させる。:収量TFA塩として287mg;MSMNa6907:収量TFA塩として148mg;MSMNa6909化合物及び化合物の合成R1R5Me、R2H、R63プロピルR1R5Me、R2H、R62エチルを5mLのメタノールに溶解させ、NaBH4を添加した。その混合物を室温で30分間撹拌した。05mLの酢酸を添加し、をRPHPLCで精製した。を上記で記載したのと同様に反応させて、を生成させた。:収量TFA塩として201mg;MSMNa6927:収量TFA塩として6mg;MSMNa6927化合物~化合物の合成R1R2R5Me、R62エチル、R7H、R4MmtR1OMe、R2H、R5Et、R62エチル、R7H、R4MmtR1OMe、R2H、R5Me、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1R2H、R5Me、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1OMe、R2H、R5Et、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1R2H、R5Et、R63プロピル、R7Me、R4MmtR1R5Me、R2H、R63プロピル、R7H、R4MmtR1R5Me、R2H、R62エチル、R7H、R4MmtR1R2H、R5Et、R62エチル、R7Me、R4Trtカーボネート~カーボネートは、それぞれ、~から、化合物について記載したのと同様に合成した。:収量TFA塩として98mg;MSMNa8578:収量TFA塩として6mg;MSMNa9018:収量TFA塩として1mg;MSMNa9014:収量TFA塩として8mg;MSMNa8714:収量TFA塩として03mg;MSMNa9294:収量TFA塩として4mg;MSMNa8997:収量TFA塩として6mg;MSMNa8578:収量TFA塩として08mg;MSMNa8577:収量TFA塩として77mg;MSMNa8562化合物~化合物の合成20aR1R2R5Me、R62エチル、R7H20bR1OMe、R2H、R5Et、R62エチル、R7H20cR1OMe、R2H、R5Me、R63プロピル、R7Me20dR1R2H、R5Me、R63プロピル、R7Me20eR1R5Me、R2H、R63プロピル、R7H20fR1R5Me、R2H、R62エチル、R7Hインスリン誘導体、、、、又はは、それぞれ、、、、、又はから、化合物について記載したのと同様にして合成した。MSM3H320773;M4H415592MSM3H320930;M4H415696MSM3H320908;M4H415687MSM3H320813;M4H415618MSM3H320771;M4H415582MSM3H320767;M4H415593化合物~化合物の合成R1R2R5Me、R62エチル、R7HR1OMe、R2H、R5Et、R62エチル、R7HR1OMe、R2H、R5Me、R63プロピル、R7MeR1R2H、R5Me、R63プロピル、R7MeR1R5Me、R2H、R63プロピル、R7HR1R5Me、R2H、R62エチル、R7Hインスリン誘導体、、、、又はは、それぞれ、化合物、、、、又はから、化合物について記載したのと同様にして合成した。~:SEC保持時間:195分化合物及び化合物の合成ニトロベンゼン中のoクレゾール、無水コハク酸及びAlCl3を100°Cに1時間加熱した。その反応混合物をHCl氷に注ぎ、エーテルで抽出した。有機層を1NNaOHで抽出し、水層を濃HClで酸性化した。水層をエーテルで抽出し、そのエーテルを蒸発させた。をRPHPLCで精製した。は、26ジメチルフェノールから、上記で記載したのと同様にして合成した。:収量552mg;MSMNa2310;NMRδppm1205102377477686313CH23JHH64Hz253216:収量166mg;MSMNa2454化合物の合成185gのシステアミン塩酸塩を15mLのTFAに溶解させ、247gのMmtClを添加した。その混合物を室温で20分間撹拌した後、減圧下に溶媒を蒸発させた。残渣をジエチルエーテルに溶解させ、飽和水性NaHCO3、1NH2SO4及びブラインで抽出した。溶媒を蒸発させ、をRPHPLCで精製した。:収量TFA塩として111g;TLCRf024化合物及び化合物の合成、HOBt及びDICをDMFび溶解させ、室温で30分間撹拌した。及びDIEAを添加し、その溶液を60分間撹拌した。酢酸を添加し、をRPHPLCで精製した。は、から、上記で記載したのと同様にして合成した。:収量552mg;MSMNa5627:収量15mg;MSMNa5766化合物及び化合物の合成R1Me、R2H、R5R63プロピルR1R2R5Me、R62エチル267mgのをクロロギ酸pニトロフェニル及びNNNジメチルプロパン13ジアミンと反応させ、化合物について記載したのと同様にしてを生成させた。は、15mgの及びNNNトリメチルエタン12ジアミンを用いて、上記で記載したのと同様にして合成した。:収量複TFA塩として282mg;MSMNa7752:収量TFA塩として17mg;MSMNa7045化合物及び化合物の合成R1Me、R2H、R5R63プロピルR1R2R5Me、R62エチルを5mLのメタノールに溶解させ、NaBH4を添加した。その混合物を室温で30分間撹拌した。05mLの酢酸を添加し、をRPHPLCで精製した。アルコールは、から同様にして合成した。:収量複TFA塩として142mg;MSMNa7779:収量TFA塩として6mg;MSMNa7065化合物及び化合物の合成R1Me、R2H、R5R63プロピルR1R2R5Me、R62エチルカーボネート又はカーボネートは、それぞれ、又はから、化合物について記載したのと同様にして合成した。:収量1mg;MSMNa9429:収量15mg;MSMNa8716化合物及び化合物の合成R1Me、R2H、R5R63プロピルR1R2R5Me、R62エチルインスリン誘導体又はインスリン誘導体は、それぞれ、又はから、化合物について記載したのと同様にして合成した。MSM3H321058;M4H415802MSM3H320818;M4H415624モノペグ化インスリン誘導体及びモノペグ化インスリン誘導体の合成R1Me、R2H、R5R63プロピルR1R2R5Me、R62エチルインスリン誘導体又はインスリン誘導体は、それぞれ、又はから、化合物について記載したのと同様にして合成した。及び:SEC保持時間:195分エステル結合マスキング基及び樹枝状キャリヤーを有する式の高分子プロドラッグの合成化合物の合成は、標準的な固相合成プロトコルに準じて得た。アミノ酸FmocDprOH、FmocDprOH、FmocDprOH、FmocAdoOH及びFmocDprOHをNovaSynTGSieberアミド樹脂にカップリングさせた。最後のfmocを除去した後、該樹脂を、DMF中で、アミノ基に対して5eqのマレイミドプロピオン酸及び5eqのDICと一緒に30分間撹拌した。9532TFATES水を用いて、を樹脂から開裂させた。溶媒を蒸発させた後、生成物をRPHPLCで精製した。MS:MH24946化合物の合成化合物は、標準的な固相合成プロトコルに準じて得た。アミノ酸FmocCysOH、FmocDprOH、FmocDprOH、FmocAdoOH及びFmocDprOHをNovaSynTGSieberアミド樹脂にカップリングさせた。最後のfmocを除去した後、該樹脂を、DMF中で、アミノ基に対して3eqのBocアミノオキシ酢酸、3eqのDIC及び3eqのHOBtと一緒に30分間撹拌した。9712DCMTFATESを用いて、を樹脂から開裂させた。TFAに対して08eqのピリジンを添加した後、溶媒を蒸発させ、生成物をRPHPLCで精製した。MS:MH26882gmol化合物の合成化合物は、標準的な固相合成プロトコルに準じて得た。アミノ酸FmocDprOH、FmocDprOH、FmocDprOH、FmocLysOH及びFmocAdoOHをNovaSynTGSieberアミド樹脂にカップリングさせた。最後のfmocを除去した後、該樹脂を、DMF中で、アミノ基に対して3eqの369トリオキサデカン酸、3eqのPyBOP及び6eqのDIEAと一緒に60分間撹拌した。ivDde保護基を開裂させるために、該樹脂をDMF中の2ヒドラジンで3回処理した。洗浄した後、3eqのFmocSerOHを3eqのDIC及び3eqのHOBtと30分間カップリングさせた。最後のfmocを除去した後、樹脂を洗浄し、88102DCMTFATESで樹脂から生成物を開裂させた。溶媒を蒸発させ、樹脂を、3201Mリン酸ナトリウムアセトニトリル中で、10eqの過ヨウ素酸ナトリウムで15分間酸化し、を生成させた。生成物をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。MS:MH33721gmol化合物の合成6mgの化合物を1mLの21アセトニトリル01Mリン酸ナトリウムバッファーに溶解させ、65mgの化合物を添加した。その溶液を室温で2時間撹拌した後、生成物をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。凍結乾燥させた該生成物を05mLのDMFに溶解させ、10μLのDIEAを添加した。150μLのDMF中の5mgの3マレイミドプロピオン酸及び47μLのDICを添加し、その反応混合物を室温で20分間撹拌した。生成物をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。凍結乾燥させた該生成物を955TFA水の中で10分間インキュベーションし、次いで、窒素流下で溶媒を除去した。生成物をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。MS:1770018200化合物の合成15mgの及び5mgのを混合し、300μLの2101Mリン酸ナトリウムバッファーアセトニトリルに溶解させ、室温で15分間インキュベーションした。生成物をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。凍結乾燥させた該生成物を200μLの01Mクエン酸ナトリウムバッファーに溶解させ、200μLの21アセトニトリルクエン酸ナトリウムバッファー中の69mgのを添加した。その混合物を室温で24時間撹拌し、生成物をサイズ排除クロマトグラフィー0005Tween203mMEDTA流速:075mL分で精製した。SEC溶離時間:15分化合物の合成250mgの塩化2クロロトリチル樹脂を、4mLのDCM中で、308mgの4710トリオキサトリデカン113ジアミンと一緒に15時間インキュベーションして、を生成させた。その樹脂をDCMで洗浄し、乾燥させた。3mLのDMF中の107mgのHOBt、110μLのDIC及び150mgの5ホルミルサルチル酸を添加し、得られた懸濁液を室温で1時間撹拌して、を生成させた。DCM及びTHFで洗浄した後、その樹脂を6mLのTHFに懸濁させ、3mLのBH3THFを滴下して加えた。その反応混合物を、窒素雰囲気下、45°Cで18時間撹拌した。冷却後、4mLのTHF、08mLのDIEA及び16mLのMeOHを順次添加した。210mgのI2を添加し、得られた懸濁液を1時間撹拌した。その樹脂を、THF、DMF、MeOH及びDCMで繰り返し洗浄した。乾燥させた該樹脂を、3mLのDMF中で、107mgのHOBt、110μLのDIC及び55μLのAcOHと1時間反応させた。この樹脂をDMF及びDCMで洗浄した後、21HFIPDCMで樹脂から化合物を開裂させた。揮発性成分を蒸発させた。生成物は、それ以上精製することなく次の段階で使用した。:収量TFA塩として29mg;MSMNa4214化合物の合成05mLのDMF中の24mgの、31mgのPyBOP、32μLのDIEA及び23mgのを室温で50分間反応させた。50μLの酢酸を添加した後、生成物をRPHPLCで精製した。:収量7mg;MSMNa7813化合物の合成300mgの塩化2クロロトリチル樹脂を、4mLのDCM中で、245mgの18ジアミノオクタンと一緒に15時間インキュベーションして、を生成させた。その樹脂をDCMで洗浄し、乾燥させた。3mLのDMF中の107mgのHOBT、110μLのDIC及び150mg5ホルミルサリチル酸を添加し、得られた懸濁液を室温で1時間撹拌して、を生成させた。DCM及びTHFで洗浄した後、その樹脂を6mLのTHFに懸濁させ、3mLのBH3THFを滴下して加えた。その反応混合物を、窒素雰囲気下、45°Cで18時間撹拌した。冷却後、4mLのTHF、08mLのDIEA及び16mLのMeOHを順次添加した。210mgのI2を添加し、その懸濁液を1時間撹拌した。樹脂を、THF、DMF、McOH及びDCMで繰り返し洗浄した。乾燥させた該樹脂を、3mLのDMF中で、107mgのHOBT、110μLのDIC及び55μLAcOHと1時間反応させた。その樹脂をDMF及びDCMで洗浄した後、11THFDCM中の化合物、78mgのクロロギ酸pニトロフェニル及び210μLのDIEAを室温で30分間反応させた。分離させた樹脂を11THFDCMに懸濁させ、210μLのNNNトリメチルエチレンジアミンを添加した。得られた懸濁液を室温で25分間撹拌した。樹脂を分離させ、DCMで洗浄した。21HFIPDCMで樹脂から生成物開裂させた。揮発性成分を蒸発させ、生成物をHPLCで精製した。:収量TFA塩として16mg;MSMNa4735化合物の合成を200μLの乾燥THEに溶解させた。クロロギ酸pニトロフェニル及びDIEAを添加し、その混合物を室温で30分間撹拌した。NNNトリエチルエチレンジアミンを添加し、撹拌を30分間継続した。減圧下に溶媒を除去した。10μLのAcOHを添加し、をRPHPLCで精製した。:収量TFA塩として1mg;MSMNa9511化合物の合成05mLのDMF中の15mgの、18mgのPyBOP、23μLのDIEA及び13mgのを室温で45分間反応させた。50μLの酢酸を添加した後、生成物をRPHPLCで精製した。:収量TFA塩として10mg;MSMH8115化合物及び化合物の合成カーボネート又はカーボネートは、又はから、化合物について記載したのと同様にして合成した。:収量TFA塩として04mg;MSMNa11168:収量TFA塩として2mg;MSMH9768化合物の合成インスリン誘導体は、から、化合物について記載したのと同様にして合成した。MSM3H321245;M4H415946化合物の合成インスリン誘導体は、から、化合物について記載したのと同様にして合成した。:SEC保持時間:180分rhインスリンをロードしたPEGAヒドロゲルの合成ポリアクリルアミドベースヒドロゲルのマレイミド誘導体化:04mmolgのローディング及び150~300μmのビーズ寸法を有するNH2PEGAヒドロゲルビーズをNovabiochemから購入した。メタノールで湿らせた25gのNH2PEGAヒドロゲルを量って、ポリプロピレン製フリットを具備したシリンジの中に入れた。マレイミドのローディングは、下記に記載してあるように、活性化マレイミドプロピオン酸と酢酸の混合物を用いるアシル化により調節した。該ヒドロゲルをDMFで5回洗浄し、4mLのDMF中で、135mgの3マレイミドプロピオン酸、1152μLの酢酸及び313μLのDICと30分間反応させた。そのマレイミドで誘導体化したヒドロゲルをDMF及びDCMで10回洗浄し、最後に、アセトニトリルで洗浄した。30mgのマレイミド誘導体化樹脂を、600μLの2080アセトニトリル50mMリン酸バッファー中で、3mgの化合物と10分間反応させて、rhインスリンがロードしたヒドロゲルを得た。そのヒドロゲルを5050アセトニトリル水で5回洗浄し、アセトニトリルで3回洗浄し、減圧下に乾燥させた。rhインスリン炭水化物ベースヒドロゲルの合成NHS活性化セファロース4高速流動ヒドロゲルビーズをAmershamから購入した。エタノールで湿らせた15gのセファロースヒドロゲルを量ってポリプロピレン製フリットを具備したシリンジの中に入れ、DMF中の1Mの4710トリオキサトリデカン113ジアミンと30分間反応させた。DMFでの洗浄段階を5回行った後、ヒドロゲルを、4mLのDMF中で、85mgの3マレイミドプロピオン酸、57μLの酢酸、151mgのHOBt及び158μLのDICと30分間反応させて、マレイミドで誘導体化したヒドロゲルを得た。そのヒドロゲルをDMFで10回洗浄し、最後に、アセトニトリルで洗浄した。15mgのを2575アセトニトリル50mMリン酸バッファーに溶解させ、108mgのマレイミド誘導体化ヒドロゲルと10分間反応させた。そのrhインスリンがロードされたヒドロゲルを5050アセトニトリル水で5回洗浄し、アセトニトリルで3回洗浄し、減圧下で乾燥させた。フルオロセインインスリンrHSAの合成スキームビスマレイミドの合成200μLのDMF中の3マレイミドプロピオン酸を、室温で、DICと15分間反応させた。4710トリオキサトリデカン113ジアミンを添加し、その混合物を室温で30分間撹拌した。800μLの14酢酸水を添加した後、をRPHPLCで精製した。:収量23mg;MSMNa5455rHSAマレイミドの合成145mMNaCl、32mMオクタン酸ナトリウム及び00015Tween80に溶解させたrHSAの3mM溶液665μLを665μLの05Mリン酸バッファーと混合した。041mgのビスマレイミドを添加し、その混合物を室温で15分間反応させた。化合物を、移動相として10mMHEPESバッファー、150mMNaCl、3mMEDTA及び0005Tweenを用いるSECで精製した。SEC保持時間:171分n;ESIMS66988フルオレセインインスリンリンカーマレイミドの合成40μLの11アセトニトリル水中24mMビスマレイミドを、40μLの05Mホウ酸ナトリウムバッファーと混合した。168μLの11アセトニトリル水中24nmolを添加し、その混合物を室温で10分間インキュベーションした。5μLのAcOHを添加し、をRPHPLCで精製した。ESIMS7211フルオレセインインスリンリンカーrHSAの合成とrHSAからとから30μLの11アセトニトリル水中80mMを、70μLの025Mリン酸ナトリウムバッファーと混合した。145mMNaC1、32mMオクタン酸ナトリウム及び00015Tween80の中の3mMrHSA8μLを添加し、その混合物を室温で20分間インキュベーションした。化合物を、移動相として10mMHEPESバッファー、150mMNaCl、3mMEDTA及び0005Tweenを用いるSECで精製した。SEC保持時間:173分;ESIMS73676rHSAマレイミドのSEC溶出液を、20μLの05Mホウ酸ナトリウムバッファーと混合した。14μLの11アセトニトリル水中141mMを添加し、その混合物を室温で10分間インキュベーションした。12μLの11アセトニトリル水中485mM3マレイミドプロピオン酸を添加し、化合物を、移動相として10mMHEPESバッファー、150mMNaCl、3mMEDTA及び0005Tweenを用いるSECで精製した。SEC保持時間:171分;ESIMS73698rHSAリンカーGLP1及びrHSAリンカーGLP1の合成スキームの合成fmoc方法を用いるRinkアミド樹脂で、GLPを合成した。N末端fmoc保護基を除去し、樹脂をDCMで洗浄し、乾燥させた。118mgの樹脂を、50mgのを750μLの乾燥DMSOと224μLのDIEAに溶解させた溶液に懸濁させた。21μLのピリジンを添加し、その混合物を室温で48時間振盪した。その樹脂を毎回DMF及びDCMで6回洗浄した後、樹脂からペプチドを開裂させ、9622TFAトリエチルシラン水を用いて保護基を除去した。窒素流下で揮発性物質を除去し、をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。:収量46mg;MS:M3H312510の合成fmoc方法を用いるRinkアミド樹脂で、Lys28ivDde側鎖で保護されているGLPGRアミドを合成した。N末端fmoc保護基を除去し、樹脂をDCMで洗浄し、乾燥させた。50mgの樹脂を、25mgのを400μLの乾燥DMSOと112μLのDIEAに溶解させた溶液に懸濁させた。11μLのピリジンを添加し、その混合物を室温で48時間振盪した。その樹脂をDMFで6回洗浄した後、樹脂をDMF中の5ヒドラジンと一緒に20分間3回インキュベーションすることにより、ivDde保護基を開裂させた。標準的なカップリングサイクルに従い、Fmoc8アミノ36ジオキサオクタン酸をカップリングさせた。Fmoc保護基を除去した。該樹脂を8mgの5カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル及び2μLのDIEAと一緒に60分間インキュベーションすることにより、カルボキシフルオレセインをカップリングさせた。樹脂を毎回DMF及びDCMで6回洗浄した。9622TFAトリエチルシラン水を用いて、樹脂からペプチドを開裂させ、保護基を除去した。窒素流下で揮発性物質を除去した。は、それ以上精製することなく、の合成に使用した。MS:M3H410643M2H314183の合成原料を500μLの11アセトニトリル025Mリン酸ナトリウムに溶解させ、8mgのNNビス2ヒドロキシ13プロパンジアミンを添加した。その溶液を室温で15分間撹拌した。をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。:収量:51mg;MSM3H411628;M2H315494化合物の合成30μLの10mMHEPESバッファー中157mM、150mMNaCl、3mMEDTA及び0005Tweenを、10μLの05Mリン酸ナトリウムバッファーと混合した。91水アセトニトリルの中の2μLのDMSOと12μLの606mMの混合物を添加し、その溶液を室温で30分間インキュベーションした。を、移動相として10mMリン酸バッファー、150mMNaCl及び0005Tweenを用いるSECで精製した。SEC保持時間:177分;ESIMS70745の合成100μLの91の50mMリン酸ナトリウムアセトニトリル中3mMを100μLの3mMHSAと混合し、その溶液を室温で30分間インキュベーションした。を、移動相として10mMHEPESバッファー、150mMNaCl、3mMEDTA及び0005Tweenを用いるSECで精製した。SEC保持時間:177分化合物及び化合物の合成AlCl3をDCMに懸濁させ、6ブロモヘキサン酸クロリドを添加した。室温で20分間撹拌した後、oクレゾールを添加した。その混合物を室温で25分間反応させた。その反応混合物を氷水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機相を分離してNa2SO4で脱水し、減圧下に濃縮した。生成物を、移動相としてヘプタン酢酸エチルを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。は、6ブロモヘキサン酸クロリド及びフェノールを用いて、上記と同様にして合成した。:収量37g;MSMH2851及び2872:収量620mg;MSMH2712化合物及び化合物の合成臭化物及びトリチルチオールを50mLの乾燥DMSOに溶解させた溶液に、DBUを添加した。その反応混合物を室温で40分間撹拌し、1NH2SO4で酸性化した。水層を酢酸エチルで抽出し、蒸発させた。をRPHPLCで精製した。は、を使用して、同じプロトコルに準じて合成した。:収量173mg;MSMNa5036:収量160mg;MSMNa4895化合物及びの合成R1Me、R2R33プロピルR1H、R2Me、R33プロピルは、、クロロギ酸pニトロフェニル及びビスアミンから、化合物について記載したのと同様にして調製した。は、、クロロギ酸pニトロフェニル及びNエチルNNジメチル13プロパンジアミンから、化合物について記載したのと同様にして合成した。:収量TFA塩として12mg;MSMNa7168:収量TFA塩として80mg;MSMNa6456化合物及び化合物の合成R1Me、R2R33ジメチルアミノプロピルR1H、R2Me、R33プロピル及びは、それぞれ、及びから、化合物について記載したのと同様にして合成した。:収量TFA塩として9mg;MSMNa7190:収量TFA塩として60mg;MSMNa6474化合物及び化合物の合成R1Me、R2R33プロピルR1H、R2Me、R33プロピル、クロロギ酸4ニトロフェニル、DIEA及びDMAPを、1mLの乾燥DCM中で、窒素雰囲気下、室温で45分間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、酢酸を添加した。その混合物を11アセトニトリル水に溶解させ、カーボネートをRPHPLCで精製した。カーボネートは、から、同様にして調製した。:収量TFA塩として7mg;MSMNa8838:収量TFA塩として110mg;MSMNa8124化合物の合成03mLのDMSO中のrhインスリン、カーボネート、DIEA及びDMAPを、室温で30分間反応させた。その反応混合物を酢酸で中和し、11アセトニトリル水で希釈した。RPHPLCで精製して、Trtで保護された適切な中間体を得た。凍結乾燥後、該Trt保護中間体を955TFAトリエチルシランと混合し、5分間撹拌した。窒素流下で揮発性物質を除去した。をRPHPLCで精製し、凍結乾燥させた。インスリン修飾の位置は、DTT還元及びMS分析により確認した。:MSM3H320955;M4H415722化合物の合成は、から、化合物について記載したのと同様にして調製した。:SEC保持時間:195分化合物の合成、DSC、DIEA及びDMAPを、1mLの乾燥アセトニトリル中で、窒素雰囲気下、室温で14時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、酢酸を添加した。その混合物を11アセトニトリル水に溶解させ、カーボネートをRPHPLCで精製した。:収量TFA塩として40mg;MSMNa7884化合物の合成及びNPysClを、1mLのDCM中で、窒素雰囲気下、10°Cで2時間撹拌した。窒素流下で揮発性物質を除去し、をRPHPLCで精製した。:収量TFA塩として7mg;MSMNa7009化合物の合成200μLの50mMホウ酸バッファー中の09mgの脱塩rhGH、8μLのアセトニトリル中カーボネート及び40μLのDMSOを、室温で3時間反応させた。Centricon5フィルターを用いる限外瀘過により、溶媒混合物及び低分子量化合物を水で置き換えた後、酢酸バッファーで置き換えた。8μLの25mM酢酸バッファー中10mMDTTを添加し、室温で30分間インキュベーションした。Centricon5フィルター及び溶出液としての25mM酢酸バッファーを用いる限外瀘過により、低分子量化合物を除去した。容積が100μLになるまで濃縮した後、20μLの水中5mMマレイミドPEG5k及び80μLの05Mリン酸バッファーを添加した。その混合物を室温で5分間インキュベーションした。移動相として10mMリン酸バッファー、150mMNaCl及び0005Tween20を用いるSECにより、モノコンジュゲートを分離した。集めた溶出液を、005NaN3を含有している05mLのバッファーで希釈し、放出速度の測定に直接使用した。:SEC保持時間:175分バッファー中におけるコンジュゲートからのインスリン又はフルオレセインインスリンの放出インスリンコンジュゲート~、~、、、、及びからのインスリンの放出、からのフルオレセインGLP1の放出、並びに、からのrhGHの放出は、水性バッファーでのリンカー加水分解により行わせた。インスリンコンジュゲート、フルオレセインGLP1コンジュゲート及びrhGHコンジュゲートのSEC溶出液をそれぞれ採取し、それらを、37°Cでインキュベーションした。時間間隔を開けてサンプルを取り、RPHPLC又はSEC、及び、UV検出又はVIS検出により分析した。天然インスリン、フルオレセインインスリン、フルオレセインGLP1及びrhGHの保持時間に関連するピークをそれぞれ積分し、インキュベーション時間に対してプロットした。カーブフィッティングソフトウェアを適用して、対応する半放出時間を推定した。ヒドロゲルコンジュゲート及びからのインスリンの放出4mgの又は2mgのを量って試験管の中に入れ、1mLの10mMHEPESバッファー、150mMNaCl、0005Tweenと一緒に37°Cでインキュベーションした。種々の時間間隔で45μLのサンプルを取り、rhインスリンについて、RPHPLCアッセイにより定量的に分析した。rhインスリンのピークを積分し、標準曲線からrhインスリン濃度を求めた。一次放出動力学をデータポイントに当てはめて、リンカー半減期を得た。化合物、及びから放出されたインスリンのMS分析バッファーから放出されたインスリンのサンプルを質量分析法で分析した。図11は、化合物、化合物及び化合物から放出されたインスリンの質量スペクトルを示している。化合物から放出されたインスリンの質量スペクトルには、不可逆的にペンタノイルで修飾されたインスリンに相当する主要な副生成物が明瞭に示されている。この場合、ペンタノイルマスキング基は、加水分解では除去されなかったが、インスリンへのアシル転位により除去された。化合物及び化合物から放出されたインスリンの質量スペクトルには、修飾は示されていなかった。80ヒト血漿中におけるコンジュゲート及びからのフルオレセインインスリンの放出又はからのフルオレセインインスリンの放出は、20mMHEPES中の80ヒト血漿中、37°Cで、加水分解により行わせた。時間間隔を開けてサンプルを取り、SEC及びVIS検出により分析した。フルオレセインインスリンの保持時間に関連するピークを積分し、インキュベーション時間に対してプロットした。カーブフィッティングソフトウェアを適用して、対応する半放出時間を推定した。上述の事項は、本発明の原理を例証しているものと見なされる。当業者には多くの変更が想定されるので、本発明は、まさに記載されているその構成及び操作に限定されるものではない。適切な全ての変更及び等価物は、特許請求の範囲の範囲内である。