"R-008380648-000E、R-008380783-000R、R-008380665-000N、R-008380645-000D、R-008380408-000R、R-008380633-000U、R-008380767-000R、R-008380730-000C、R-008380777-000H、R-008380740-000V、R-008380558-000M、R-008380406-000Y、R-008380764-000P、R-008380772-000P、R-008380389-000D、R-008380362-000H、R-008380363-000S、R-008380340-000F、R-008380689-000H、R-008380756-000P、R-008380736-000E、R-008380757-000Y、R-008380753-000N、R-008380737-000N、R-008380734-000M、またはR-008380791-000Rのいずれかを含む二本鎖低分子干渉核酸siNA分子。請求項1に記載の二本鎖低分子干渉核酸siNAおよび薬学的に許容され得る担体または希釈剤を含む組成物。a請求項1に記載の二本鎖低分子干渉核酸siNA;bカチオン性脂質;cコレステロール;dDSPC;およびePEG-DMGを含む組成物。a請求項1に記載の二本鎖低分子干渉核酸siNA;b13Z,16Z-N,N-ジメチル-3-ノニルドコサ-13,16-ジエン-1-アミン;cコレステロール;dDSPC;およびePEG-DMGを含む組成物。13Z,16Z-N,N-ジメチル-3-ノニルドコサ-13,16-ジエン-1-アミン、コレステロール、DSPC、およびPEG-DMGが、それぞれ50:30:10:2のモル比を有する、請求項4に記載の組成物。請求項5に記載の組成物および薬学的に許容され得る担体または希釈剤を含む組成物。B型肝炎ウイルスHBVの作用または該作用の喪失によって媒介される病状に苦しんでいるヒト被検体を処置する方法であって、前記被検体に、有効量の請求項1に記載の二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を投与することを含む方法。該病状がHBV感染である、請求項6に記載の方法。該病状が肝細胞癌である、請求項6に記載の方法。請求項1に記載の二本鎖低分子干渉核酸siNAを備えるキット。本発明は、HBV発現をモジュレートする新規な低分子干渉核酸siNA分子を用いてHBV遺伝子発現のモジュレーションに応答する疾患を処置する課題に対する解決策を提供する。本発明は、HBV遺伝子の発現のモジュレーションに有用な、ならびに低分子量核酸分子を用いたRNA干渉RNAiによるB型肝炎およびB型肝炎感染に起因する病状の処置に有用な化合物、組成物および方法を提供する。特に、本発明は、低分子量核酸分子、すなわち、低分子干渉核酸siNA分子、例えば限定されないが、低分子干渉RNAsiRNA、二本鎖RNAdsRNA、マイクロRNAmiRNA、低分子ヘアピン型RNAshRNAおよび環状RNA分子、ならびにHBV遺伝子および/またはHBV遺伝子の発現および/または活性の経路に関与している他の遺伝子の発現をモジュレートするために使用される方法を特色とする。本発明者らは、既知のすべてのHBVの完全ゲノムの保存領域から標的部位を選択すると、高効力かつ高効率の配列が得られることを見い出した。一態様において、本発明は、細胞または哺乳動物においてHBV遺伝子の発現を阻害する二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を提供し、ここで、該二本鎖siNAはセンス鎖standとアンチセンス鎖を含むものである。アンチセンス鎖は、HBV遺伝子の発現と関連しているRNAの少なくとも一部分に相補的な配列を含むものである。センス鎖は、アンチセンス鎖に相補的な配列を含むものである。種々の実施形態において、少なくとも一方の鎖は、配列番号:1~502からなる配列の群から選択される少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。一部の特定の実施形態において、アンチセンス鎖は、表1aに示した標的配列に対して配列相補性を有する少なくとも15個のヌクレオチドを含むものである。他の実施形態および/または同じ実施形態において、該アンチセンス鎖は、表1bに示したアンチセンス配列のうちの1つの少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。一部の実施形態において、センス鎖は、表1bに示したセンス鎖配列の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。本発明のこの態様の一部の特定の実施形態において、アンチセンス鎖が、本発明の標的配列に対して配列相補性を有する表1cに示した修飾配列を含むものである二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を提供する。また、一部の実施形態では、センス鎖が、表1cに示した修飾配列を含むものである。一部の特定の実施形態において、本発明は、siNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含むものであり;各鎖が、独立して15~30ヌクレオチド長であり;該アンチセンス鎖が:5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’配列番号:1;5’-GUGGUGGACUUCUCUCAAU-3’配列番号:2;5’-GCCGAUCCAUACUGCGGAA-3’配列番号:3;または5’-CCGAUCCAUACUGCGGAAC-3’配列番号:4のいずれかに相補的な配列を有する少なくとも15個のヌクレオチドを含むものである、HBVの発現をモジュレートする二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を提供する。本発明の一部の実施形態において、siNA分子のアンチセンス鎖は:5’-UGAGAGAAGUCCACCACGA-3’配列番号:452;5’-AUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’配列番号:453;5’-UUCCGCAGUAUGGAUCGGC-3’配列番号:454;または5’-GUUCCGCAGUAUGGAUCGG-3’配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子のセンス鎖は:5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’配列番号:1;5’-GUGGUGGACUUCUCUCAAU-3’配列番号:2;5’-GCCGAUCCAUACUGCGGAA-3’配列番号:3;または5’-CCGAUCCAUACUGCGGAAC-3’配列番号:4の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は:5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’配列番号:1と5’-UGAGAGAAGUCCACCACGA-3’配列番号:452;または5’-GUGGUGGACUUCUCUCAAU-3’配列番号:2と5’-AUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’配列番号:453;または5’-GCCGAUCCAUACUGCGGAA-3’配列番号:3と5’-UUCCGCAGUAUGGAUCGGC-3’配列番号:454;または5’-CCGAUCCAUACUGCGGAAC-3’配列番号:4と5’-GUUCCGCAGUAUGGAUCGG-3’配列番号:455のいずれかを含むものである。一部の実施形態において、本発明は、二本鎖R-008380648-000E、R-008380783-000R、R-008380665-000N、R-008380645-000D、R-008380408-000R、R-008380633-000U、R-008380767-000R、R-008380730-000C、R-008380777-000H、R-008380740-000V、R-008380558-000M、R-008380406-000Y、R-008380764-000P、R-008380772-000P、R-008380389-000D、R-008380362-000H、R-008380363-000S、R-008380340-000F、R-008380689-000H、R-008380756-000P、R-008380736-000E、R-008380757-000Y、R-008380753-000N、R-008380737-000N、R-008380734-000M、またはR-008380791-000Rのいずれかを含む二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を特色とする。一部の実施形態において、本発明は、a本発明の二本鎖低分子干渉核酸siNA;b化合物番号1~46のいずれかまたはその任意の組合せを有するカチオン性脂質化合物compond;cコレステロール;dDSPC;およびePEG-DMGを含む組成物を特色とする。一部の実施形態において、本発明の組成物は、化合物番号1~46のいずれかを、以下のモル比:カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG56.6/38/5.4;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG60/38/2;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG67.3/29/3.7;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG49.3/47/3.7;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG50.3/44.3/5.4;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-C-DMA/DSPC40/48/2/10;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC40/48/2/10;およびカチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC58/30/2/10で有する任意のカチオン性脂質を含むものである。一部の実施形態において、本発明の組成物は、13Z,16Z-N,N-ジメチル-3-ノニルドコサ-13,16-ジエン-1-アミン、コレステロール、DSPC、およびPEG-DMGを、それぞれ、50:30:10:2のモル比で含むものである。一部の実施形態において、本発明の組成物は、さらに抗凍結剤を含むものである。一部の実施形態において、抗凍結剤は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキロース、ベルバスコース、マンニトール、グルコース、ラクトース、マルトース、マルトリオース-ヘプタオース、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、インスリン、ソルビトール、グリセロール、アルギニン、ヒスチジン、リシン、プロリン、ジメチルスルホキシドまたはその任意の組合せである。一部の実施形態では、抗凍結剤はスクロースである。一部の実施形態では、抗凍結剤はトレハロースである。一部の実施形態では、抗凍結剤はスクロースとトレハロースの組合せである。本発明の一部の実施形態において、本発明のsiNAのヌクレオチドはすべて非修飾である。他の実施形態では、siNA分子のいずれか一方または両方の鎖の独立した1つ以上例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30個のヌクレオチド位置が修飾されている。修飾としては、核酸の糖鎖修飾、塩基修飾、主鎖ヌクレオチド間結合修飾、非ヌクレオチド修飾、および/またはその任意の組合せが挙げられる。一部の特定の場合では、プリンヌクレオチドとピリミジンヌクレオチドは異なるように修飾されている。例えば、プリンヌクレオチドとピリミジンヌクレオチドには、糖鎖の2’位において異なる修飾がなされ得るすなわち、同じ鎖または異なる鎖の糖鎖の2’位において、少なくとも1個のプリンは少なくとも1個のピリミジンと異なる修飾を有する。一部の特定の場合では、プリンは、一方または両方の鎖において非修飾であるが、一方または両方の鎖のピリミジンは修飾されている。一部の特定の他の場合では、ピリミジンは、一方または両方の鎖において非修飾であるが、一方または両方の鎖のプリンは修飾されている。一部の場合では、少なくとも1個の修飾ヌクレオチドは、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、または2’-O-アルキルヌクレオチドである。一部の場合では、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が、すべて2’-デオキシ-2’-フルオロまたはすべて2’-O-メチルピリミジンヌクレオチドのいずれかである。一部の場合では、一方または両方の鎖のプリンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が、すべて2’-デオキシ-2’-フルオロまたはすべて2’-O-メチルプリンヌクレオチドのいずれかである。一部の特定の場合では、siNA分子が本明細書に記載の1つ以上の修飾を含むものである場合、ガイドアンチセンス鎖の5’末端の1、2および3位のヌクレオチドが非修飾である。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子は、一方または両方の鎖に1、2、3または4個のヌクレオチドの3’突出端を有する。他の実施形態では、siNA分子には突出端がないすなわち、平滑端を有する。好ましくは、siNA分子は、センス鎖とアンチセンス鎖の両方に2個のヌクレオチドの3’突出端を有するものである。突出端は修飾されていても非修飾であってもよい。突出端の修飾ヌクレオチドの例としては、限定されないが、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、ロックド核酸LNAヌクレオチド、または2’-デオキシヌクレオチドが挙げられる。アンチセンス鎖の突出端ヌクレオチドは、HBV標的配列内のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを含むものであり得る。同様に、センス鎖の突出端は、HBV標的配列内に存在するヌクレオチドを含むものであり得る。一部の特定の場合では、本発明のsiNA分子は、アンチセンス鎖に2’-O-アルキル例えば、2’-O-メチルヌクレオチドである2つの3’突出端ヌクレオチドと、センス鎖に2’-デオキシヌクレオチドである2つの3’突出端ヌクレオチドを有するものである。他の場合では、本発明のsiNA分子は、アンチセンス鎖とセンス鎖の両方に2’-O-アルキル例えば、2’-O-メチルヌクレオチドである2つの3’突出端ヌクレオチドを有するものである。一部の特定の実施形態では、2’-O-アルキルヌクレオチドは2’-O-メチルウリジンヌクレオチドである。また、一部の特定の場合では、突出端は、突出端のヌクレオチド間に1つ以上のホスホロチオエート結合を含むものである。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は、キャップ本明細書では末端キャップとも称するを有する。キャップは、5’末端に存在させても5’-キャップ3’末端に存在させてもよく3’-キャップ、両末端に存在させてもよいsiNAのセンス鎖の5’末端と3’末端など。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は、アンチセンス鎖の5’末端がリン酸化されている。リン酸基は、ホスフェート、ジホスフェート、またはトリホスフェートであり得る。本発明のsiNA分子は、二本鎖である場合は、対称であっても非対称であってもよい。このような二本鎖siNAの各鎖は、独立して、3~30個のヌクレオチドのヌクレオチド長の範囲であり得る。一般的に、本発明のsiNA分子の各鎖は約15~30すなわち、約19、20、21、22、23または24ヌクレオチド長である。二本鎖であるか、または二本鎖構造を有するものである本発明のsiNA分子は、独立して、約3~約30例えば、約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30個の塩基対を含むものである。一般的に、本発明のsiNAの二本鎖構造は、15~30、より一般的には18~25、なおより一般的には19~24、最も一般的には19~21塩基対長である。一部の特定の実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖を有し、式A:を含む二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を提供し、式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であり;該アンチセンス鎖は、配列番号:452、配列番号:453、配列番号:454、または配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものであり、該センス鎖は、該アンチセンス鎖に対して相補性を有する配列を含むものであり;各Nは、独立して非修飾もしくは化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドであり;各Bは、存在する、または存在しない末端キャップであり;Nは、突出端ヌクレオチド各々、独立して非修飾または化学修飾を表し;[N]は、リボヌクレオチドであるヌクレオチドを表し;X1およびX2は、独立して、0~4の整数であり;X3は、15~30の整数であり;X4は、9~30の整数であり;X5は、0~6の整数であるが、X4とX5の和は15~30であるものとする。一実施形態において、本発明は、aNX4位の1個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである;bNX4位の1個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである;cNX3位の1個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである;およびdNX3位の1個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、である、式Aの二本鎖低分子干渉核酸siNAを特色とする。さらに、本発明は、本明細書に記載の二本鎖核酸分子を含み、薬学的に許容され得る担体または希釈剤を含んでいてもよい組成物を提供する。該組成物の投与は、核酸が所望の標的細胞内にインビトロまたはインビボで導入される既知の方法によって行なわれ得る。細胞、組織および生物体への本発明の核酸分子の導入に一般的に使用される手法としては、種々の担体系、試薬およびベクターの使用が挙げられる。本発明における使用に適したかかる担体系の非限定的な例としては、コンジュゲート、核酸-脂質粒子、脂質ナノ粒子LNP、リポソーム、リポプレックス、ミセル、ビロソーム、ウイルス様粒子VLP、核酸複合体、およびその混合物が挙げられる。本発明の組成物は、エアロゾル剤、分散剤、液剤例えば、注射用液剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、散剤、懸濁剤などの形態であり得る。このような組成物は、任意の適当な様式で、例えば、経口、舌下、口腔内、非経口、経鼻または経表面的に投与され得る。一部の実施形態において、該組成物はエアロゾル化され、吸入によって送達される。本発明の分子および組成物は、広範な治療適用用途において有用性を有する。したがって、本発明の別の態様は、被検体の処置における本発明の化合物および組成物の使用に関する。したがって、本発明は、HBVの作用によって媒介される病状に苦しんでいる被検体ヒトなどの処置方法であって、該被検体に有効量の本発明の二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を投与することを含む方法を提供する。したがって、本発明のsiNA分子によりB型肝炎感染および/またはそれに起因する病状が処置される。一部の特定の実施形態において、該病状は肝臓疾患である。一部の特定の実施形態では、該病状はがんである。本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳細説明および添付の図面を参照すると明らかとなろう。さらに、本明細書に記載の任意の方法または組成物は、本明細書に記載の任意の他の方法または組成物に関して行なわれ得ること、および異なる実施形態を組み合わせてもよいことが考慮される。さらに、本発明の種々の態様を説明し、より詳しく示すために本明細書を通して特許、特許出願、および他の文献を挙げている。本明細書において挙げたこれらの参考文献は各々、引用によりその全体図面を含むが本明細書に組み込まれる。A.用語および定義本出願書類で用いる場合、以下の専門用語および定義を適用する。用語無塩基のは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、糖鎖部分の1’位の核酸塩基が欠失しているか、または核酸塩基の代わりに水素原子Hもしくは他の非核酸塩基化学基を有する糖鎖部分をいい、例えば、Adamicら,米国特許第5,998,203号を参照のこと。一実施形態において、本発明の無塩基部分は、リボース、デオキシリボース、またはジデオキシリボース糖鎖である。用語非環式ヌクレオチドは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、非環式リボース糖鎖を有する任意のヌクレオチド、例えば、リボースの炭素/炭素結合または炭素/酸素結合あればが独立して、または組合せでヌクレオチドに存在しないものをいう。用語アルキルは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、飽和または不飽和の炭化水素、例えば、直鎖、分枝鎖のアルケニル、アルキニル基および環式基をいうが、芳香族基は除外される。前述のことにかかわらず、アルキルはまた、非芳香族の複素環式基も指す。好ましくは、アルキル基は1~12個の炭素を有するものである。より好ましくは、炭素数が1~7、より好ましくは炭素数が1~4の低級アルキルである。アルキル基は、置換型であっても非置換型であってもよい。置換型である場合、置換基1つまたは複数は、好ましくは、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、C1~C4アルコキシ、=0、=S、NO2、SH、NH2、またはNR1R2式中、R1およびR2は、独立して、HもしくはC1~C4アルキルであるである。語句細胞周期のチェックポイントに干渉する薬剤は、細胞周期のチェックポイントのシグナルを伝達するプロテインキナーゼを阻害し、それによりがん細胞をDNA損傷剤に対して感作させる化合物をいう。語句受容体チロシンキナーゼRTKに干渉する薬剤は、RTKを阻害し、したがって発がんおよび腫瘍進行に関与している機構を阻害する化合物をいう。語句アンドロゲン受容体モジュレータは、機構に関係なくアンドロゲンのその受容体に対する結合を妨げる、または該結合を阻害する化合物をいう。語句血管新生阻害薬は、機構に関係なく新たな血管の形成を阻害する化合物をいう。用語アリールは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、共役π電子系を有する少なくとも1つの環を有する芳香族基をいい、炭素環式アリール、複素環式アリールおよびビアリール基これらはすべて、置換されていてもよいを包含する。アリール基の好ましい置換基1つまたは複数は、ハロゲン、トリハロメチル、ヒドロキシル、SH、OH、シアノ、C1~C4アルコキシ、C1~C4アルキル、C2~C4アルケニル、C2~C4アルキニル、NH2、ならびにNR1R2基式中、R1およびR2は、独立して、HもしくはC1~C4アルキルであるである。用語アルキルアリールは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、アリール基上記のものに共有結合により連接されたアルキル基上記のものをいう。炭素環式アリール基は、芳香族環の環内原子がすべて炭素原子である基である。該炭素原子は置換されていてもよい。複素環式アリール基は、芳香族環に環内原子として1~3個のヘテロ原子を有し、残りの環内原子が炭素原子である基である。好適なヘテロ原子としては酸素、イオウおよび窒素が挙げられ、かかるヘテロ原子を有する複素環式アリール基の例としては、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、N-低級アルキルピロロ、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルなどすべて、置換されていてもよいが挙げられる。好ましくは、該アルキル基はC1~C4アルキル基である。用語アミドは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、-CO-NH-Rをいい、式中、Rは、アルキル、アリール、アルキルアリールまたは水素のいずれかである。語句アンチセンス領域は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、標的核酸配列に対して相補性を有するsiNA分子のヌクレオチド配列をいう。また、siNA分子のアンチセンス領域は、該siNA分子のセンス領域に対して相補性を有する核酸配列を含むものであってもよい。一実施形態では、siNA分子のアンチセンス領域をアンチセンス鎖またはガイド鎖と称する。語句非対称ヘアピン型は、アンチセンス領域と、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドを含むものであり得るループ部分と、センス領域とを含み、センス領域が、アンチセンス領域と塩基対合してループを有する二本鎖を形成するのに充分な相補ヌクレオチドを有する範囲でアンチセンス領域よりも少ないヌクレオチドを含む線形siNA分子をいう。例えば、本発明の非対称ヘアピン型siNA分子は、細胞内またはインビトロ系においてRNAiを媒介するのに充分な長さ例えば、約15~約30個、または約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29もしくは30個のヌクレオチドを有するアンチセンス領域と、約4~約12例えば、約4、5、6、7、8、9、10、11または12個のヌクレオチドを含むループ領域と、アンチセンス領域に相補的な約3~約25例えば、約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24または25個のヌクレオチドを有するセンス領域とを含むものであり得る。また、非対称ヘアピン型siNA分子は、5’末端リン酸基化学修飾されていてもよいを含むものであってもよい。非対称ヘアピン型siNA分子のループ部分は、ヌクレオチド、非ヌクレオチド、リンカー分子またはコンジュゲート分子本明細書に記載を含むものであってもよい。用語生分解性のは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、生物学的系内における分解、例えば、酵素的分解または化学的分解をいう。用語生分解性リンカーは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、ある分子を別の分子に連結させるために設計され、生物学的系内における分解を受け易いリンカー分子をいう。該リンカーは、核酸系リンカーであっても非核酸系リンカーであってもよい。例えば、生分解性リンカーは、リガンドまたは生物学的に活性な分子を本発明のsiNA分子に結合させるために使用され得る。あるいはまた、生分解性リンカーは、本発明のsiNA分子のセンス鎖とアンチセンス鎖を連結するために使用され得る。生分解性リンカーは、その安定性が具体的な目的特定の組織または細胞型への送達などのためにモジュレートされ得るように設計される。核酸系の生分解性リンカー分子の安定性は、種々の化学物質、例えば、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、ならびに化学修飾されたヌクレオチド2’-O-メチル、2’-フルオロ、2’-アミノ、2’-O-アミノ、2’-C-アリル、2’-O-アリル、および他の2’修飾または塩基修飾ヌクレオチドなどの組合せを使用することによりモジュレートされ得る。生分解性核酸リンカー分子は、二量体、三量体、四量体またはそれより長鎖の核酸分子例えば、約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであってもよく、リン系結合例えば、ホスホロアミダートまたはホスホジエステル結合を有する単一ヌクレオチドを含むものであってもよい。また、生分解性核酸リンカー分子は、核酸主鎖、核酸糖鎖、または核酸塩基の修飾を含むものであってもよい。語句生物学的に活性な分子は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、系内の生物学的応答を誘起もしくは改良し得る、および/または他の生物学的に活性な分子の薬物動態特性および/または薬力学的特性をモジュレートし得る化合物または分子をいう。生物学的に活性な分子の例としては、単独、または他の分子例えば限定されないが、治療上活性な分子、例えば、抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス薬、ペプチド、タンパク質、化学療法薬、小分子、ビタミン類、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、酵素性核酸、アンチセンス核酸、オリゴヌクレオチドを形成する三重鎖、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、他のポリエーテル、2-5Aキメラ、siNA、dsRNA、アロザイム、アプタマー、デコイおよびその類似体などと併用されるsiNA分子が挙げられる。語句生物学的系は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、生物学的供給源、例えば限定されないがヒトまたは動物に由来する精製形態または未精製形態の物質をいい、該系には、RNAi活性に必要とされる成分が含まれている。したがって、この語句は、例えば、細胞、組織、被検体もしくは生物体またはその抽出物を包含する。また、該用語は、生物学的供給源に由来する再構成物質も包含する。語句平滑端は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、突出端ヌクレオチドを有しない二本鎖siNA分子の末端をいう。例えば、平滑端を有する二本鎖siNA分子の2つの鎖は、末端に突出端ヌクレオチドがなく、互いに一直線に並んで塩基対がマッチしている。本発明のsiNA二本鎖分子は平滑端を、該二本鎖の一方または両方の末端例えば、アンチセンス鎖の5’末端、センス鎖の5’末端に位置する末端または該二本鎖の両末端に含むものであってもよい。用語キャップ本明細書において末端キャップとも称するは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、本発明の1種類以上の核酸分子の1つ以上の末端に組み込まれ得る化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドであり得る部分をいう。このような末端修飾により、核酸分子がエキソヌクレアーゼ分解から保護され、細胞内における送達および/または局在化が補助され得る。キャップは、5’末端5’-キャップまたは3’末端3’-キャップに存在させてもよく、本発明の任意の核酸分子の両末端に存在させてもよい。キャップは、本発明の核酸分子のセンス鎖の5’末端、3末端および/または5’末端と3’末端に存在させてもよい。さらに、キャップは、本発明の核酸分子のアンチセンス鎖の3’末端に存在させてもよい。非限定的な例において、5’-キャップとしては、限定されないが、LNA;グリセリル;逆位デオキシ無塩基残基部分;4’,5’-メチレンヌクレオチド;1-β-D-エリトロフラノシルヌクレオチド、4’-チオヌクレオチド;炭素環式ヌクレオチド;1,5-アンヒドロヘキシトールヌクレオチド;L-ヌクレオチド;α-ヌクレオチド;修飾塩基ヌクレオチド;ホスホロジチオエート結合;トレオ-ペントフラノシルヌクレオチド;非環式3’,4’-セコヌクレオチド;非環式3,4-ジヒドロキシブチルヌクレオチド;非環式3,5-ジヒドロキシペンチルヌクレオチド;3’-3’-逆位ヌクレオチド部分;3’-3’-逆位無塩基部分;3’-2’-逆位ヌクレオチド部分;3’-2’-逆位無塩基部分;1,4-ブタンジオールホスフェート;3’-ホスホロアミダート;ヘキシルホスフェート;アミノヘキシルホスフェート;3’-ホスフェート;3’-ホスホロチオエート;ホスホロジチオエート;または橋状結合性もしくは非橋状結合性メチルホスホネート部分が挙げられる。3’-キャップの非限定的な例としては、限定されないが、LNA;グリセリル;逆位デオキシ無塩基残基部分;4’、5’-メチレンヌクレオチド;1-β-D-エリトロフラノシルヌクレオチド;4’-チオヌクレオチド;炭素環式ヌクレオチド;5’-アミノ-アルキルホスフェート;1,3-ジアミノ-2-プロピルホスフェート;3-アミノプロピルホスフェート;6-アミノヘキシルホスフェート;1,2-アミノドデシルホスフェート;ヒドロキシプロピルホスフェート;1,5-アンヒドロヘキシトールヌクレオチド;L-ヌクレオチド;α-ヌクレオチド;修飾塩基ヌクレオチド;ホスホロジチオエート;トレオ-ペントフラノシルヌクレオチド;非環式3’,4’-セコヌクレオチド;3,4-ジヒドロキシブチルヌクレオチド;3,5-ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、5’-5’-逆位ヌクレオチド部分;5’-5’-逆位無塩基部分;5’-ホスホロアミダート;5’-ホスホロチオエート;1,4-ブタンジオールホスフェート;5’-アミノ;橋状結合性および/または非橋状結合性5’-ホスホロアミダート;ホスホロチオエートおよび/またはホスホロジチオエート;橋状結合性または非橋状結合性メチルホスホネート;ならびに5’-メルカプト部分さらなる詳細については、BeaucageおよびIyer,1993,Tetrahedron49,1925を参照のこと;引用により本明細書に組み込まれるが挙げられる。図5は、種々のキャップの非限定的な例を示す。用語細胞は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、その通常の生物学的意味で用いており、完全な多細胞生物体を指すのではない例えば、具体的には、人間を指すのではない。細胞は、生物体、例えば、鳥類、植物および哺乳動物、例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、類人猿、サル、ブタ、イヌ、およびネコに存在するものであり得る。細胞は、原核生物系例えば、細菌細胞であっても真核生物系例えば、哺乳動物または植物の細胞であってもよい。細胞は、体細胞起源または生殖細胞系起源、全能性または多能性、分裂性または非分裂性であり得る。また、細胞は、生殖体もしくは胚、幹細胞または完全に分化した細胞に由来するものであってもよく、これらを構成するものであってもよい。語句化学修飾は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、一般的な天然siRNAまたはRNAのヌクレオチドと異なるヌクレオチド化学構造の任意の修飾をいう。用語化学修飾は、本明細書に記載の、あるいは当該技術分野で知られているような、糖鎖、塩基またはヌクレオチド間結合における天然のsiRNAまたはRNAの付加、置換または修飾を包含する。一部の特定の実施形態において、用語化学修飾は、特定の生物学的系内に天然に存在しているRNAの特定の形態例えば、2’-O-メチル修飾またはイノシン修飾をいう場合があり得る。用語相補性または相補的なは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、一般的に、ある核酸配列と別の核酸配列間での、従来のワトソン-クリック型または本明細書に記載の他の非従来型の結合のいずれかによる水素結合1つまたは複数の形成または存在をいう。本発明の核酸nucleic分子に関連して、核酸分子のその相補配列との結合自由エネルギーは、該核酸の該当する機能例えば、RNAi活性が進行することを可能にするのに充分なものである。核酸分子の結合自由エネルギーの測定は当該技術分野でよく知られている例えば、Turnerら,1987,CSHSymp.Quant.Biol.LIIpp.123-133;Frierら,1986,Proc.Nat.Acad.Sci.USA83:9373-9377;Turnerら,1987,J.Am.Chem.Soc.109:3783-3785を参照のこと。完璧に相補的とは、核酸配列の連続している残基のすべてが、第2の核酸配列内の同じ数の連続している残基と水素結合することを意味する。一部相補性は、種々のミスマッチまたは非塩基対合ヌクレオチド例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個もしくはそれ以上のミスマッチ、非ヌクレオチドリンカーまたは非塩基対合ヌクレオチドを核酸分子内に含むものであり得、これにより、核酸分子のセンス鎖もしくはセンス領域とアンチセンス鎖もしくはアンチセンス領域間、または核酸分子と対応する標的核酸分子のアンチセンス鎖間もしくはアンチセンス領域間に生成される隆起部、ループまたは突出端がもたらされ得る。かかる一部相補性は相補性で表すことができ、非塩基対合ヌクレオチドの数、すなわち、関与しているヌクレオチドの総数に応じて約50、60、70、80、90などと求められる。かかる一部相補性は、核酸分子例えば、siNAがその機能例えば、配列特異的RNAiを媒介する能力維持している範囲で許容される。用語組成物または製剤は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。これらの用語は、一般的に、細胞または被検体例えば、ヒトなどへの投与例えば、全身性または局所投与に適した形態の、例えば、薬学的に許容され得る担体または希釈剤との組成物または製剤をいう。好適な形態は、一部において、用途または進入経路例えば、経口、経皮、吸入もしくは注射に依存する。かかる形態は、該組成物または製剤が標的細胞すなわち、負電荷を有する核酸が送達に望ましい細胞に到達するのを妨げないものであるのがよい。例えば、血流中に注射される組成物は、可溶性であるのがよい。他の要素は、当該技術分野で知られており、毒性および該組成物または製剤の奏功を妨げる形態などの考慮事項が挙げられる。本明細書で用いる場合、医薬製剤は、ヒト使用および獣医学的使用のための製剤を包含する。本発明の核酸分子を用いた製剤に適した薬剤の非限定的な例としては:脂質ナノ粒子例えば、Sempleら,2010,NatBiotechnol.,Feb;282:172-6参照;P-糖タンパク質阻害薬PluronicP85など;生分解性ポリマー徐放送達のためのポリDL-ラクチド-コグリコリドミクロスフィアなどEmerich,DFら,1999,CellTransplant,8,47-58;および負荷ナノ粒子ポリブチルシアノアクリレートで作製されたものが挙げられる。本発明の核酸分子のための送達ストラテジーの他の非限定的な例としては、Boadoら,1998,J.Pharm.Sci.,87,1308-1315;Tylerら,1999,FEBSLett.,421,280-284;Pardridgeら,1995,PNASUSA.,92,5592-5596;Boado,1995,Adv.DrugDeliveryRev.,15,73-107;Aldrian-Herradaら,1998,NucleicAcidsRes.,26,4910-4916;およびTylerら,1999,PNASUSA.,96,7053-7058に記載された物質が挙げられる。薬学的に許容され得る組成物または薬学的に許容され得る製剤は、その所望の活性に最も適した身体位置での本発明の核酸分子の有効な分布を可能にする組成物または製剤をいうものであり得る。語句細胞傷害剤/細胞増殖抑制薬は、主に細胞の機能発揮を直接妨げることにより、細胞死を引き起こすか、または細胞増殖を抑止する化合物、あるいは細胞の有糸分裂mytosisを阻害するか、または妨げる化合物をいい、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレータ、低酸素活性化性化合物、微小管阻害薬/微小管安定化剤、有糸分裂キネシンの阻害薬、ヒストンデアセチラーゼの阻害薬、有糸分裂の進行に関与しているキナーゼの阻害薬、代謝拮抗薬;生物学的応答の改良薬;ホルモン/抗ホルモン療法剤、造血系増殖因子、モノクローナル抗体ターゲテッド治療用薬剤、トポイソメラーゼ阻害薬、プロテアソーム阻害薬およびユビキチンリガーゼ阻害薬が挙げられる。語句エストロゲン受容体モジュレータは、機構に関係なくエストロゲンのその受容体に対する結合を妨げる、または該結合を阻害する化合物をいう。用語遺伝子または標的遺伝子は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、ポリペプチドの生成に必要な一部分の長さまたは全長のコード配列を含む核酸例えば、DNAまたはRNA配列をいう。また、標的遺伝子は、その核酸配列のUTRまたは非コード領域を含むものであってもよい。また、遺伝子または標的遺伝子は、機能性RNAfRNAまたは非コードRNAncRNA、例えば、小分子一本鎖smalltemporalRNAstRNA、マイクロRNAmiRNA、核内低分子RNAsnRNA、低分子干渉RNAsiRNA、小核小体RNAsnRNA、リボソームRNArRNA、トランスファーRNAtRNAおよびその前駆体RNAをコードするものであってもよい。かかる非コードRNAは、機能性または調節性の細胞プロセスに関与しているfRNAまたはncRNAの活性のモジュレーションにおけるsiNA媒介性RNA干渉の標的核酸分子の機能を果たすものであり得る。したがって、疾患をもたらす異常なfRNAまたはncRNAの活性は、本発明のsiNA分子によってモジュレートされ得る。また、fRNAおよびncRNAを標的化するsiNA分子は、遺伝子geneticインプリンティング、転写、翻訳、または核酸プロセッシング例えば、アミノ基転移、メチル化などなどの細胞プロセスに介在することにより、被検体、生物体または細胞の遺伝子型または表現型を操作または改変するために使用され得る。標的遺伝子は、細胞に由来する遺伝子、内因性遺伝子、導入遺伝子、または外因性遺伝子感染後の細胞内に存在する病原体例えば、ウイルスの遺伝子などであり得る。標的遺伝子を含む細胞は、任意の生物体、例えば、植物、動物、原生動物、ウイルス、細菌または真菌に由来するもの、またはこれらに含有されているものであり得る。植物の非限定的な例としては、単子葉植物、双子葉植物、または裸子植物が挙げられる。動物の非限定的な例としては、脊椎動物または非脊椎動物が挙げられる。真菌の非限定的な例としては、カビまたは酵母が挙げられる。概説については、例えば、SnyderおよびGerstein,2003,Science,300,258-260を参照のこと。語句HMG-CoAレダクターゼ阻害薬は、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoAレダクターゼの阻害薬をいう。HMG-CoAレダクターゼ阻害薬という用語は、本明細書で用いる場合、あらゆる薬学的に許容され得るラクトンおよび開環型の酸形態すなわち、ラクトン環が開環してその遊離酸が形成されている場合ならびにHMG-CoAレダクターゼ阻害活性を有する化合物の塩およびエステルの形態を包含し、したがって、かかる塩、エステル、開環型の酸およびラクトン形態の使用は本発明の範囲に含まれる。用語HBVはB型肝炎ウイルスを指し、これは、HBVタンパク質、HBVペプチド、HBVポリペプチド、HBV調節ポリヌクレオチド例えば、HBVmiRNAおよびsiNAをコードしている遺伝子、変異型HBV遺伝子、およびHBV遺伝子のスプライスバリアント、ならびに遺伝子発現および/または活性のHBV経路に関与している他の遺伝子である。したがって、用語HBVに関する本明細書に記載の各実施形態は、用語HBV該用語は本明細書において定義しているに包含されるタンパク質、ペプチド、ポリペプチド、および/またはポリヌクレオチド分子のすべてに適用可能である。包括的に、かかる遺伝子標的は、本明細書において一般的に標的配列例えば、表1aに示した標的配列とも呼ばれる。語句高度に保存された配列領域は、ある世代とその他の世代で、またはある生物学的系とその他の生物学的系で有意に変化していない標的遺伝子内の1つ以上の領域のヌクレオチド配列をいう。語句相同配列は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、1種類以上のポリヌクレオチド配列、例えば、遺伝子、遺伝子転写物および/または非コードポリヌクレオチドなどによって共有されたヌクレオチド配列をいう。例えば、相同配列は、関連しているが異なるタンパク質遺伝子ファミリーの異なる構成員、異なるタンパク質エピトープ、異なるタンパク質アイソフォームなどをコードしている2種類以上の遺伝子または完全に相違する遺伝子によって共有されたヌクレオチド配列であり得る。相同配列は、2種類以上の非コードポリヌクレオチド、例えば、非コードDNAまたはRNA、調節配列、イントロン、および転写の制御部位または調節部位などによって共有されたヌクレオチド配列であってもよい。また、相同配列は、1つより多くのポリヌクレオチド配列によって共有された配列領域を含むものであり得る。相同性は、完璧に同一100である必要はなく、一部相同配列も、本発明の範囲で考慮され、本発明の範囲内で考慮される例えば、少なくとも95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80など。相同性パーセントは、2つの配列間でマッチしているヌクレオチドの数を比較対象の全長で除算して100を乗算したものである。語句改善されたRNAi活性は、インビトロおよび/またはインビボで測定されたRNAi活性の増大をいい、該RNAi活性は、siNAがRNAiを媒介する能力および本発明のsiNAの安定性の両方の反映である。本発明において、このような活性の成果は、全RNAsiNAまたは複数のリボヌクレオチドを含有するsiNAと比べて、インビトロおよび/またはインビボでの増大したものであり得る。一部の場合では、siNA分子の活性または安定性が低下しているすなわち、10倍未満であるものがあり得るが、siNA分子の全体的な活性はインビトロおよび/またはインビボで向上している。用語阻害する、下方調節する、または低減させるは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語hetermは、一般的に、遺伝子の発現、または1種類以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードしているRNA分子もしくは同等RNA分子のレベル、または1種類以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性を、本発明の核酸分子例えば、siNAの非存在下で観察されるものよりも低下させることをいう。また、下方調節は、転写後サイレンシングRNAi媒介性切断など、またはDNAのメチル化パターンもしくはDNAのクロマチン構造の改変によりと関連しているものであり得る。siNA分子による阻害、下方調節または低減は、不活性な分子、弱毒化分子、スクランブル配列を有するsiNA分子、またはミスマッチを有するsiNA分子に関するものであってもよく、あるいはまた、核酸が存在しない系に関するものであってもよい語句細胞の増殖および生存のシグナル伝達経路の阻害薬は、細胞表面受容体および該表面受容体の下流のシグナル伝達カスケードを阻害する医薬用薬剤をいう。用語インテグリン遮断薬は、生理学的リガンドがαωβ3インテグリンに結合することを選択的に拮抗、阻害または反作用する化合物、生理学的リガンドがαωβ5インテグリンに結合することを選択的に拮抗、阻害または反作用する化合物、生理学的リガンドがαωβ3インテグリンとαωβ5インテグリンの両方に結合することを拮抗、阻害または反作用する化合物、および毛管内皮細胞で発現される特定のインテグリン1種類または複数種の活性を拮抗、阻害または反作用する化合物をいう。また、該用語は、αωβ.6、αωβ.8、α1β.1、α2β.1、α5β.1、α6β1、およびα6β4インテグリンの拮抗薬も指す。また、該用語は、αωβ3、αωβ5、αωβ.6、αωβ.8、α1β.1、α2β.1、α5β.1、α6β1、およびα6β4インテグリンの任意の組合せの拮抗薬も指す。用語断続的または断続的には、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、規則的間隔または不規則的間隔のいずれかで定期的に停止および開始させることをいう。用語ヌクレオシド間結合またはヌクレオシド間リンカーまたはヌクレオチド間結合またはヌクレオチド間リンカーは、本明細書において互換的に用いており、当該技術分野で知られた任意のリンカーまたは2つのヌクレオシド単位間の結合をいい、例えば限定されないが、ホスフェート、ホスフェート類似体、ホスホネート、グアニジウム、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、カルバメート、アルキル、および置換アルキル結合が挙げられる。ヌクレオシド間結合は核酸分子の主鎖を構成している。用語哺乳動物のまたは哺乳動物は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、任意の温血脊椎動物種、例えば、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ハムスター、モルモット、ウサギ、家畜動物などをいう。語句定量吸入器またはMDIは、缶、該缶に蓋をするねじ込み式キャップおよび該キャップに配設された製剤を計量する弁を備えたユニットをいう。MDIシステムとしては、適当なチャネル付channelingデバイスが挙げられる。好適なチャネル付デバイスは、例えば、弁作動器と、柱状路または円錐様路これを介して、医薬が充填キャニスターから計量弁によって患者の鼻または口に送達され得るとを備えたものであるマウスピース型作動器。用語マイクロRNAまたはmiRNAは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、標的メッセンジャーRNAの発現を、mRNAの切断、翻訳の抑制/阻害または異質染色質サイレンシングのいずれかによって調節する低分子二本鎖RNAをいう例えば、Ambros,2004,Nature,431,350-355;Bartel,2004,Cell,116,281-297;Cullen,2004,VirusResearch.,102,3-9;Heら,2004,Nat.Rev.Genet.,5,522-531;Yingら,2004,Gene,342、25-28;およびSethupathyら,2006、RNA、12:192-197を参照のこと。用語モジュレートするは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、遺伝子の発現、または1種類以上のRNA分子コードもしくは非コードのレベル、または1種類以上のRNA分子もしくはタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性を、該発現、レベルまたは活性が、モジュレーションをもたらす分子の非存在下で観察されるものよりも大きくなる、または小さくなるように上方調節または下方調節する場合をいう。例えば、用語モジュレートするは、一部の実施形態では、例えば遺伝子発現の阻害を指すものであり得、他の実施形態では、その増強または上方調節を指すものであり得る。語句修飾ヌクレオチドは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、当該技術分野で一般的に知られた非修飾または天然ヌクレオチドの塩基、糖鎖および/またはリン酸基の化学構造内に修飾を含むヌクレオチドをいう。修飾ヌクレオチドの非限定的な例は、本明細書および米国特許出願第12/064,014号に記載されている。語句選択的COX-2阻害薬であるNSAIDは、本明細書における解釈上、細胞アッセイまたはミクロソームアッセイによって評価されるCOX-1の場合のIC50に対するCOX-2の場合のIC50の比率によって測定したとき、COX-1よりもCOX-2の阻害に対して少なくとも100倍の特異性を有するNSAIDをいう。語句非塩基対合は、二本鎖siNA分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域との間でヌクレオチドが塩基対合されていないことをいい;例えば限定されないが、ミスマッチ、突出端、一本鎖ループなどが包含され得る。用語非ヌクレオチドは、核酸鎖内の1つ以上のヌクレオチド単位の代わりに組み込まれ得る任意の基または化合物例えば限定されないが、無塩基部分またはアルキル鎖をいう。該基または化合物は、一般的に認識されているヌクレオチド塩基アデノシン、グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミンなどを含有しておらず、したがって、1’位に核酸塩基がないという点で無塩基である。用語ヌクレオチドは、当該技術分野で一般的に認知されているとおりに用いている。ヌクレオチドは、一般的に、核酸塩基、糖鎖およびヌクレオシド間結合例えば、ホスフェートを含む。塩基は、天然塩基標準であっても修飾塩基であっても塩基類似体であってもよく、これらは、当該技術分野でよく知られている。かかる塩基は、一般的に、ヌクレオチドの糖鎖部分の1’位に存在している。さらに、ヌクレオチドは非修飾であってもよく、糖鎖、ヌクレオシド間結合、および/または塩基部分が修飾されていてもよい互換的にヌクレオチド類似体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準ヌクレオチドなどとも称される;例えば、米国特許出願第12/064,014号を参照のこと。用語突出端は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。例示的な二本鎖核酸分子に関して、該用語は、一般的に、二本鎖核酸分子の2つの鎖が塩基対合されていない末端ヌクレオチド配列部分をいう例えば、図4を参照のこと。突出端は、存在している場合、典型的には、siNA二本鎖の一方または両方の鎖の3’末端に存在している。用語非経口は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、消化管経由以外の様式で分子、薬物、薬剤または化合物を投与する方法または手法をいい、皮膚上、皮下、血管内例えば、静脈内、筋肉内、または髄腔内注射または注入手法などが挙げられる。語句経路標的は、遺伝子の発現または活性の経路に関与している任意の標的をいう。例えば、任意の所与の標的は、生物学的経路内に関連経路標的を有し得、関連経路標的としては、上流遺伝子、下流遺伝子または変更遺伝子が挙げられ得る。このような経路標的遺伝子により、本明細書における疾患、病状および形質の処置において相加的または相乗的効果がもたらされ得る。用語ホスホロチオエートは、酸素原子の代わりに1個以上のイオウ原子を含むヌクレオチド間リン酸結合をいう。したがって、ホスホロチオエートという用語は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合およびホスホロジチオエートヌクレオチド間結合のどちらも指す。プレニル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬は、プレニル-タンパク質トランスフェラーゼ酵素、例えば、ファルネシル-タンパク質トランスフェラーゼFPTase、ゲラニルゲラニル-タンパク質トランスフェラーゼI型GGPTase-I、およびゲラニルゲラニル-タンパク質トランスフェラーゼII型GGPTase-II,RabGGPTaseとも称されるの任意の1種類または任意の組合せを阻害する化合物をいう。語句レチノイド受容体モジュレータは、機構に関係なくレチノイドのその受容体に対する結合を妨げる、または該結合を阻害する化合物をいう。用語リボヌクレオチドは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、β-D-リボフラノース部分の2’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドをいう。用語RNAは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められた意味を示す。一般的に、RNAという用語は、少なくとも1つのリボフラノシド部分を含む分子をいう。該用語には、二本鎖RNA、一本鎖RNA、単離されたRNA、例えば、一部精製RNA、本質的に純粋なRNA、合成RNA、組換え作製されたRNA、ならびに天然に存在するRNAと1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および/または改変によって異なる改変RNAが包含され得る。かかる改変としては、siNAの末端1つまたは複数または内部などの例えば該RNAの1つ以上のヌクレオチドへの非ヌクレオチド物質の付加が挙げられ得る。また、本発明のRNA分子内のヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを含むものであってもよい。このような改変RNAは、類似体または天然RNAの類似体と称されることがあり得る。語句RNA干渉または用語RNAiは、細胞内での遺伝子発現を阻害または下方調節する生物学的プロセスをいい、これは、当該技術分野で一般的に知られており、低分子干渉核酸分子によって媒介される。例えば、ZamoreおよびHaley,2005,Science,309,1519-1524;VaughnおよびMartienssen,2005,Science,309,1525-1526;Zamoreら,2000,Cell,101,25-33;Bass,2001,Nature,411,428-429;Elbashirら,2001,Nature,411,494-498;ならびにKreutzerら,PCT国際出願公開公報番号WO00/44895;Zernicka-Goetzら,PCT国際出願公開公報番号WO01/36646;Fire,PCT国際出願公開公報番号WO99/32619;Plaetinckら,PCT国際出願公開公報番号WO00/01846;MelloおよびFire,PCT国際出願公開公報番号WO01/29058;Deschamps-Depaillette,PCT国際出願公開公報番号WO99/07409;およびLiら,PCT国際出願公開公報番号WO00/44914;Allshire,2002,Science,297,1818-1819;Volpeら,2002,Science,297,1833-1837;Jenuwein,2002,Science,297,2215-2218;ならびにHallら,2002,Science,297,2232-2237;HutvagnerおよびZamore,2002,Science,297,2056-60;McManusら,2002,RNA,8、842-850;Reinhartら,2002,GeneDev.,16,1616-1626;ならびにReinhartBartel,2002,Science,297,1831を参照のこと。さらに、RNAiという用語は、配列特異的RNA干渉を示すために用いている他の用語、例えば、転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、転写阻害、または後成的などと等価であることを意図する。例えば、本発明のsiNA分子は、転写後レベルまたは転写前レベルのいずれかで、後成的遺伝子サイレンシングを行なうために使用され得る。非限定的な例において、本発明のsiNA分子による遺伝子発現の後成的モジュレーションは、遺伝子発現を改変するためのクロマチン構造またはメチル化パターンのsiNA媒介性改良の結果、起こるものであり得る例えば、Verdelら,2004,Science,303,672-676;Pal-Bhadraら,2004,Science,303,669-672;Allshire,2002,Science,297,1818-1819;Volpeら,2002,Science,297,1833-1837;Jenuwein,2002,Science,297,2215-2218;およびHallら,2002,Science,297,2232-2237を参照のこと。別の非限定的な例では、本発明のsiNA分子による遺伝子発現のモジュレーションは、RISCもしくは翻訳阻害によるRNAコードRNAもしくは非コードRNAのいずれかのsiNA媒介性切断の結果、起こるものであり得るか当該技術分野で知られている、またはモジュレーションは、転写阻害の結果、起こるものであり得る例えば、Janowskiら,2005,NatureChemicalBiology,1,216-222を参照のこと。語句RNAi阻害薬は、細胞または生物体においてRNA干渉性の機能または活性を下方調節、低減または阻害し得る任意の分子をいう。RNAi阻害薬は、RNAi例えば、標的ポリヌクレオチドのRNAi媒介性切断、翻訳阻害、もしくは転写サイレンシングを、RNAi経路の任意の成分例えば、RISCなどのタンパク質成分、またはmiRNAもしくはsiRNAなどの核酸成分の機能と相互作用すること、または該機能を妨げることによって下方調節、低減または阻害し得るものである。RNAi阻害薬は、siNA分子、アンチセンス分子、アプタマー、またはRISCの機能と相互作用する、もしくは該機能を妨げる小分子、miRNA、またはsiRNAまたは細胞もしくは生物体のRNAi経路の任意の他の成分であり得る。RNAi例えば、標的ポリヌクレオチドのRNAi媒介性切断、翻訳阻害、または転写サイレンシングを阻害することにより、本発明のRNAi阻害薬は、標的遺伝子の発現をモジュレートする例えば、上方調節または下方調節するために使用され得る。語句センス領域は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、siNA分子のアンチセンス領域に対して相補性を有する該siNA分子のヌクレオチド配列をいう。また、siNA分子のセンス領域は、標的核酸配列と相同性または配列同一性を有する核酸配列を含むものであり得る。一実施形態において、siNA分子のセンス領域はセンス鎖またはパッセンジャー鎖とも称される。語句低分子干渉核酸、siNA、低分子干渉RNA、siRNA、低分子干渉核酸分子、低分子干渉オリゴヌクレオチド分子、または化学修飾された低分子干渉核酸分子は、RNA干渉RNAiまたは遺伝子サイレンシングを配列特異的様式で媒介することにより、遺伝子発現またはウイルス複製を阻害または下方調節し得る任意の核酸分子をいう。これらの用語は、個々の核酸分子、複数のかかる核酸分子、またはかかる核酸分子のプールのいずれも示し得る。siNAは、自己相補性のセンス鎖とアンチセンス鎖を含む二本鎖核酸分子であり得、この場合、アンチセンス鎖は、標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含むものであり、センス鎖は、標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含むものである。siNAは、二本鎖、非対称二本鎖、ヘアピン型または非対称ヘアピン型二次構造を有し、自己相補性のセンス領域とアンチセンス領域を有するポリヌクレオチドであってもよく、この場合、アンチセンス領域は、別々の標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含むものであり、センス領域は、標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含むものである。siNAは、2つ以上のループ構造と、自己相補性のセンス領域およびアンチセンス領域を含む幹部とを有する環状の一本鎖ポリヌクレオチドであってもよく、この場合、アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含むものであり、センス領域は、標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含むものであり、該環状ポリヌクレオチドがインビボまたはインビトロのいずれかでプロセッシングされると、RNAiを媒介し得る活性なsiNA分子が生成され得る。また、siNAは、標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有する一本鎖ポリヌクレオチドを含むものであってもよく例えば、かかるsiNA分子が、該siNA分子内に標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列の存在を必要としない場合、この場合、該一本鎖ポリヌクレオチドは、さらに末端リン酸基、例えば、5’-リン酸基例えば、Martinezら,2002,Cell,110,563-574およびSchwarzら,2002,MolecularCell,10,537-568を参照のこと、または5’,3’-二リン酸基などを含んでいてもよい。用語被検体は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、本発明の核酸分子が投与され得る生物体をいう。被検体は、哺乳動物または哺乳動物細胞例えば、ヒトまたはヒト細胞であり得る。また、該用語は生物体をいい、これは、採取された細胞のドナーもしくはレシピエントまたは細胞それ自体である。語句全身投与は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、血流中の薬物のインビボでの全身性の吸収または蓄積、続いて全身への分布をいう。用語標的は、HBVに言及している場合、任意のHBV標的タンパク質、ペプチドまたはポリペプチド表7に示したGenbank受託番号にコードされているものなどをいう。また、該用語は、任意の標的タンパク質、ペプチドまたはポリペプチド表7に示したGenbank受託番号を有する配列にコードされているタンパク質、ペプチド、またはポリペプチドなどをコードしている核酸配列または標的ポリヌクレオチド配列も指す。対象の標的としては、標的DNAまたは標的RNAなどの標的ポリヌクレオチド配列が挙げられ得る。また、用語標的は、種々のアイソフォーム、変異型標的遺伝子、標的ポリヌクレオチドのスプライスバリアント、標的多型、および非コード配列例えば、ncRNA、miRNA、stRNA、sRNAまたは本明細書に記載の他の調節ポリヌクレオチド配列などの他の配列も包含することを意図する。語句標的部位は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、例えばsiNA構築物そのアンチセンス領域内に標的配列に相補的な配列を含むによって媒介される切断のために標的化される標的核酸分子例えば、RNA内の配列をいう。語句治療有効量は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、細胞、組織、系、動物またはヒトに生物学的または医学的応答が誘起される化合物または組成物の量であって、研究者、獣医、医師または他の臨床家によって模索される量をいう。例えば、所与の臨床処置を、疾患または障害と関連している測定可能なパラメータに少なくとも25の低減が見られたとき有効であるとみなす場合、該疾患または障害の処置のための薬物の治療有効量は、該パラメータに少なくとも25の低減がもたらされるのに必要な量である。語句ユニバーサル塩基は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。ユニバーサル塩基という用語は、一般的に、天然のDNA/RNAの各塩基と、ほとんどまたは全く区別なく塩基対を形成するヌクレオチド塩基類似体をいう。ユニバーサル塩基の非限定的な例としては、C-フェニル、C-ナフチルおよび他の芳香族誘導体、イノシン、アゾールカルボキサミド、ならびにニトロアゾール誘導体3-ニトロピロール、4-ニトロインドール、5-ニトロインドール、および6-ニトロインドールなどが挙げられ、当該技術分野で知られている例えば、Loakes,2001,NucleicAcidsResearch,29,2437-2447を参照のこと。用語上方調節するは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、遺伝子の発現、または1種類以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードしているRNA分子もしくは同等RNA分子のレベル、または1種類以上のRNA、タンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性を、本発明の核酸分子例えば、siNAの非存在下で観察されるものよりも上に増大させることをいう。一部の特定の場合では、siNA分子による遺伝子発現の上方調節または促進は、不活性分子または減弱分子の存在下で観察されるレベルより上になるものである。他の場合では、siNA分子による遺伝子発現の上方調節または促進は、例えば、スクランブル配列またはミスマッチを有するsiNA分子の存在下で観察されるレベルより上になるものである。さらに他の場合では、本発明の核酸分子による遺伝子発現の上方調節または促進は、該核酸分子の存在下の方が非存在下よりも大きくなるものである。一部の場合では、遺伝子発現の上方調節または促進は、RNA媒介性遺伝子サイレンシングの阻害上方調節対象の遺伝子の発現を下方調節、阻害またはサイレンシングするコードRNA標的または非コードRNA標的のRNAi媒介性の切断またはサイレンシングなどと関連するものである。遺伝子発現の下方調節は、例えば、コードRNAまたはそのコードタンパク質によって、例えば、負のフィードバック効果またはアンタゴニスト効果などによって誘導され得る。遺伝子発現の下方調節は、例えば、対象遺伝子に対して調節的制御を有する非コードRNAによって、例えば、翻訳阻害、クロマチン構造、メチル化、RISC媒介性RNA切断または翻訳阻害による該遺伝子の発現のサイレンシングによって誘導され得る。そのため、対象遺伝子を下方調節、抑制またはサイレンシングする標的の阻害または下方調節は、治療的使用のために対象遺伝子の発現を上方調節するために使用され得る。用語ベクターは、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。ベクターという用語は、一般的に、1種類以上の核酸分子を送達するために使用される任意の核酸系および/またはウイルス系の発現系または手法をいう。B.本発明のsiNA分子本発明は、HBVに標的化されるsiNAを含む組成物および方法であって、HBV発現と関連している疾患、例えば、肝臓疾患または悪性疾患および/またはがん、あるいはB型肝炎感染に起因する他の病状を処置するために使用され得る組成物および方法を提供する。本発明の特定の態様および実施形態において、本発明の核酸分子は、表1aおよび表1bに示された配列の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。該siNAはいくつかの形態で提供され得る。例えば、該siNAは、1種類以上のsiNA化合物として単離されたものであってもよく、DNAプラスミド内の転写カセットの形態であってもよい。また、該siNAは化学合成されたものであってもよく、例えば限定されないが、表1cおよび表8に示したような修飾を含むものであってもよい。したがって、種々の実施形態において、本発明の核酸の少なくとも一方の鎖または1つの領域は、配列番号:1~502からなる配列の群から選択される少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。該siNAは、単独で投与してもよく、他のsiNA分子またはHBV関連の疾患もしくは病状を処置するための慣用的な薬剤と共投与してもよい。本発明のsiNA分子は、RNA転写物との相互作用によって、あるいはまた、特定の遺伝子配列との相互作用によってこの場合、かかる相互作用により、転写レベルもしくは転写後レベルのいずれかで遺伝子サイレンシングのモジュレーション例えば限定されないが、RNAiなどがもたらされる、または標的のクロマチン構造またはメチル化パターンをモジュレートし、標的のヌクレオチド配列を有する標的遺伝子の転写を抑制し、それによりサイレンシングが媒介される細胞プロセスによって、遺伝子サイレンシング具体的にはHBVを媒介するために使用され得る。より具体的には、標的は、HBVRNA、DNA、またはmRNAのいずれかである。一態様において、本発明は、細胞または哺乳動物においてHBV遺伝子の発現を阻害するための低分子干渉核酸siNA分子を提供する。該siNAは一本鎖であっても二本鎖であってもよい。二本鎖の場合、該siNAはセンス鎖とアンチセンス鎖を含むものである。アンチセンス鎖は、HBV遺伝子の発現で形成されるmRNAの少なくとも一部分に相補的である。センス鎖は、アンチセンス鎖に相補領域を含むものである。具体的な実施形態において、アンチセンス鎖は、表1bに示したアンチセンス配列の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。一般的に、二本鎖siNAは、表1bのセンス鎖の少なくとも15個のヌクレオチドの配列と、表1bのアンチセンス鎖の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。本発明のsiNAのヌクレオチドの1個以上が修飾されていてもよい。修飾を有するさらなる実施形態において、本発明の一部のsiNAは、表1cに示した配列の群から選択される少なくとも1個のヌクレオチド配列を含むものである。他の実施形態において、該siNAは、表1cに示した配列の群から選択される少なくとも2つの配列を含むものであり、該少なくとも2つの配列のうち1つは、該少なくとも2つの配列のうちの別の配列に相補的であり、該少なくとも2つの配列のうち1つは、HBV遺伝子の発現で生成されるmRNAの配列に相補的である。本発明の特定の修飾siNAの例を表1cに示す。本発明の二本鎖RNA分子は、対称であっても非対称であってもよい相補的な2つの相違する別々の鎖、すなわち2本の一本鎖RNA分子を含むものであってもよく、2つの相補的な部分例えば、センス領域とアンチセンス領域が、塩基対合しており、かつ1つ以上の一本鎖ヘアピン型領域すなわち、ループによって共有結合されており、例えば、一本鎖低分子ヘアピン型ポリヌクレオチドまたは環状の一本鎖ポリヌクレオチドになっている1つの一本鎖分子を含むものであってもよい。リンカーは、ポリヌクレオチドリンカーであってもよく、非ヌクレオチドリンカーであってもよい。一部の実施形態において、リンカーは非ヌクレオチドリンカーである。一部の実施形態において、本発明のヘアピン型または環状のsiNA分子には1つ以上のループモチーフが含まれており、該siNA分子のループ部分の少なくとも1つは生分解性である。例えば、本発明の一本鎖ヘアピン型siNA分子は、該siNA分子のループ部分のインビボでの分解によって、1、2、3または4個のヌクレオチドを含む3’末端突出端3’末端ヌクレオチド突出端などを有する二本鎖siNA分子が生成され得るように設計される。あるいはまた、本発明の環状siNA分子は、siNA分子のループ部分のインビボでの分解によって、約2個のヌクレオチドを含む3’末端突出端3’末端ヌクレオチド突出端などを有する二本鎖siNA分子が生成され得るように設計される。本発明の対称siNA分子において、センスパッセンジャー鎖およびアンチセンスガイド鎖の各鎖は、独立して、約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30ヌクレオチド長である。一般的に、本発明の対称siNA分子の各鎖は、約19~24例えば、約19、20、21、22、23または24ヌクレオチド長である。非対称siNA分子において、該分子のアンチセンス領域または鎖は、約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30ヌクレオチド長であり、そのセンス領域は約3~約25例えば、約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24または25ヌクレオチド長である。一般的に、本発明の非対称siNA分子の各鎖は約19~24例えば、約19、20、21、22、23または24ヌクレオチド長である。また他の実施形態において、本発明のsiNA分子は一本鎖ヘアピン型siNA分子を含むものであり、該siNA分子は、約25~約70例えば、約25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、40、45、50、55、60、65または70ヌクレオチド長である。さらに他の実施形態において、本発明のsiNA分子は一本鎖の環状siNA分子を含むものであり、該siNA分子は、約38~約70例えば、約38、40、45、50、55、60、65または70ヌクレオチド長である。さらに他の実施形態において、本発明のsiNA分子は一本鎖の非環状siNA分子を含むものであり、該siNA分子は、独立して約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30ヌクレオチド長である。種々の対称実施形態において、本発明のsiNA二本鎖は、独立して、約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30個の塩基対を含むものである。一般的に、本発明のsiNAの二本鎖構造は、15~30、より一般的には18~25、なおより一般的には19~24、最も一般的には19~21塩基対長である。また他の実施形態において、本発明の二本鎖siNA分子が非対称である場合、該siNA分子は、約3~25例えば、約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24または25個の塩基対を含むものである。一般的に、本発明のsiNAの二本鎖構造は、15~25、より一般的には18~25、なおより一般的には19~24、最も一般的には19~21塩基対長である。さらに他の実施形態において、本発明のsiNA分子がヘアピン型または環状構造である場合、該siNA分子は、約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30個の塩基対を含むものである。本発明のsiNA分子のセンス鎖とアンチセンス鎖、またはセンス領域とアンチセンス領域は相補的であり得る。また、アンチセンス鎖またはアンチセンス領域は、HBV標的RNAのヌクレオチド配列またはその一部分に相補的であり得る。該siNAのセンス鎖またはセンス領域は、HBV遺伝子またはその一部分のヌクレオチド配列を含むものであり得る。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子のセンス領域またはセンス鎖は、該siNA分子のアンチセンス領域またはアンチセンス鎖のHBV標的ポリヌクレオチド配列例えば限定されないが、表7に示すGENBANK受託番号に代表される配列などに相補的である部分に相補的である。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は、該siNA分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域間に完璧な相補性を有するものである。他の実施形態または同じ実施形態において、本発明のsiNA分子のアンチセンス鎖は、対応する標的核酸分子に完璧に相補的である。また他の実施形態において、本発明のsiNA分子は、該siNA分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域間、あるいは該siNA分子のアンチセンス鎖またはアンチセンス領域と、対応する標的核酸分子間に、一部相補性すなわち、100未満の相補性を有するものである。したがって、一部の実施形態において、本発明の二本鎖核酸分子は、一方の鎖に、他方の鎖のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30個有するものである。他の実施形態において、該分子は、二本鎖核酸分子のセンス領域に、アンチセンス領域のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30個有するものである。一部の特定の実施形態において、本発明の二本鎖核酸分子は、アンチセンス鎖に、その対応する標的核酸分子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチドを約15~約30例えば、約15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30個を有するものである。他の実施形態において、該siNA分子に1つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加が含有されていてもよい;しかしながら、該siNA分子は、例えば、RNAiを媒介するその活性を維持しているものとする。非限定的な例において、該欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加は、ループまたは隆起部、あるいはまた、ウォッブルwobbleまたは他の択一的な非ワトソン-クリック塩基対をもたらすものであり得る。したがって、一部の実施形態において、例えば、本発明の二本鎖核酸分子は、一方の鎖または領域に、他方の鎖または領域とミスマッチであるか、または塩基対合していないヌクレオチドを1個以上例えば、1、2、3、4、5、または6個有するものである。他の実施形態において、本発明の二本鎖核酸分子は、各鎖または各領域内に、他方の鎖または領域とミスマッチであるか、または塩基対合していないヌクレオチドを1個以上例えば、1、2、3、4、5、または6個有するものである。好ましい実施形態において、本発明のsiNAに含有されるミスマッチは3つ以下である。該siNAのアンチセンス鎖に標的配列に対するミスマッチが含有されている場合、ミスマッチ領域は相補性領域の中心に存在していないことが好ましい。他の実施形態において、該siNA分子は、表1bに示した配列に対して1つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加が含有されていてもよいが、該siNA分子は、例えば、RNAiを媒介するその活性を維持しているものとする。非限定的な例において、該欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加は、ループまたは隆起部、あるいはまた、ウォッブルまたは他の択一的な非ワトソン-クリック塩基対をもたらすものであり得る。また、本発明は、第1鎖と第2鎖が互いに相補的であり、少なくとも一方の鎖が表1bの配列のポリヌクレオチド配列に高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能であり、その任意のヌクレオチドは非修飾であるか、または化学修飾されている以外は本明細書において上記のとおりである二本鎖核酸siNA分子を含むものである。ハイブリダイゼーション手法は当業者によく知られている例えば、Sambrookら,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.1989参照のこと。好ましいストリンジェントハイブリダイゼーション条件としては、50ホルムアミド、5×SSC150mMNaCl、15mMクエン酸三ナトリウム、50mMリン酸ナトリウムpH7.6、5×デンハルト液、10硫酸デキストラン、および20マイクログラム/mlの剪断処理した変性サケ精子DNAを含む溶液中、42°Cで一晩のインキュベーション;続いて、0.1×SSC中、約65°Cでのフィルターの洗浄が挙げられる。具体的な一実施形態において、第1鎖は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを約15、16、17、18、19、20または21個有し、少なくとも一方の鎖が表1bのポリヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能である。より好ましい実施形態において、第1鎖は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを約15、16、17、18、19、20または21個有し、少なくとも一方の鎖が配列番号:1、配列番号:1210、配列番号:2、配列番号:1211、配列番号:3、配列番号:1212、配列番号:4、または配列番号:1213に高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能であり、その任意のヌクレオチドは非修飾であるか、または化学修飾されている。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子は、約1~約4例えば、約1、2、3または4個のヌクレオチドの突出端を含むものである。突出端のヌクレオチド同じヌクレオチドであっても異なるヌクレオチドであってもよい。一部の実施形態において、突出端は二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の3’末端に存在している。例えば、本発明の二本鎖核酸分子は、二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖/領域の3’末端、センス鎖/領域の3’末端、またはアンチセンス鎖/領域とセンス鎖/領域の両方にヌクレオチド突出端または非ヌクレオチド突出端を含むものであり得る。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子の突出端部分を構成するヌクレオチドは、HBV標的ポリヌクレオチド配列を主体とした配列を含むものであり、ここで、本発明のsiNA分子のアンチセンス鎖/領域の突出端部分を構成するヌクレオチドは、HBV標的ポリヌクレオチド配列内のヌクレオチドに相補的であり得る、および/または本発明のsiNA分子のセンス鎖/領域の突出端部分を構成するヌクレオチドは、HBV標的ポリヌクレオチド配列内のヌクレオチドを含むものであり得る。したがって、一部の実施形態において、突出端は、HBV標的ポリヌクレオチド配列の一部分に相補的な2個のヌクレオチドの突出端を構成している。しかしながら、他の実施形態では、突出端は、HBV標的ポリヌクレオチド配列の一部分に相補的でない2個のヌクレオチドの突出端を構成している。一部の特定の実施形態において、突出端は、HBV標的ポリヌクレオチド配列の一部分に相補的でない3’-UU突出端を構成している。他の実施形態では、突出端は、アンチセンス鎖の3’末端ではUU突出端を構成しており、センス鎖の3’末端ではTT突出端を構成している。他の実施形態では、突出端は、本明細書の実施例、表および図に記載のヌクレオチドを含むものである。本明細書に記載のsiNA分子が3’末端ヌクレオチド突出端を有する任意の実施形態において、突出端は、1つ以上の核酸の糖鎖位置、塩基位置または主鎖位置が化学修飾されていてもよい。本発明の二本鎖核酸siNA分子の突出端部分の修飾ヌクレオチドの代表的だが限定されない例としては:2’-O-アルキル例えば、2’-O-メチル、2’-デオキシ、2’-デオキシ-2’-フルオロ、2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノFANA、4’-チオ、2’-O-トリフルオロメチル、2’-O-エチル-トリフルオロメトキシ、2’-O-ジフルオロメトキシ-エトキシ、ユニバーサル塩基、非環式、または5-C-メチルヌクレオチドが挙げられる。より好ましい実施形態において、突出端ヌクレオチドは各々、独立して、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-O-メチルヌクレオチド、2’-デオキシdexoy-2-フルオロヌクレオチド、または2’-デオキシリボヌクレオチドである。一部の場合では、突出端ヌクレオチドは、1つ以上のホスホロチオエート結合によって連結されている。また他の実施形態において、本発明のsiNA分子は、平滑端を有するすなわち、ヌクレオチド突出端なし二本鎖核酸分子を含むものであり、この場合、両方の末端が平滑であるか、あるいはまた一方の末端が平滑である。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は、例えば、アンチセンス鎖の5’末端とセンス鎖の3’末端が全く突出端ヌクレオチドを有しない場合1つの平滑端を含むものであり得る。別の例では、該siNA分子は、例えば、アンチセンス鎖の3’末端とセンス鎖の5’末端が全く突出端ヌクレオチドを有しない1つの平滑端を含むものである。他の実施形態では、本発明のsiNA分子は、例えば、アンチセンス鎖の3’末端とセンス鎖の5’末端ならびにアンチセンス鎖の5’末端とセンス鎖の3’末端が全く突出端ヌクレオチドを有しない2つの平滑端を含むものである。本発明のsiNA分子の任意の実施形態または態様において、センス鎖および/またはアンチセンス鎖は、さらに、キャップ本明細書に記載のもの、または当該技術分野で知られたものなどを、センス鎖および/またはアンチセンス鎖の3’末端、5’末端、または3’末端と5’末端の両方に有するものであり得る。あるいは、ヘアピン型siNA分子の場合のように、キャップは、該ポリヌクレオチドの末端ヌクレオチドのいずれか一方に存在していても両方に存在していてもよい。一部の実施形態において、キャップは、二本鎖siNA分子のセンス鎖の末端の一方または両方に存在している。他の実施形態では、キャップは、アンチセンスガイド鎖の3’末端に存在している。好ましい実施形態では、キャップは、センス鎖の3’末端とセンス鎖の5’末端に存在している。かかる末端キャップの代表的だが非限定的な例としては、逆位無塩基ヌクレオチド、逆位デオキシ無塩基ヌクレオチド、逆位ヌクレオチド部分、図5に示した基、グリセリル修飾、アルキルもしくはシクロアルキル基、複素環、または当該技術分野で一般的に知られた任意の他のキャップが挙げられる。本発明のsiNA分子の実施形態はいずれも、5’リン酸末端基を有するものであってもよい。一部の実施形態では、該siNA分子に末端リン酸基がない。本発明のsiNA分子または構築物はいずれも、1つ以上の化学修飾を含むものであってもよい。修飾は、インビトロまたはインビボでの特性、例えば、安定性、活性、毒性、免疫応答例えば、インターフェロン応答、炎症性もしくは炎症促進性のサイトカイン応答、あるいはToll様受容体TlF応答の刺激の抑制および/またはバイオアベイラビリティなどを改善するために使用され得る。本出願人は、本明細書において、対応する非修飾型siNA分子と比べてRNAiの活性および/または安定性が改善された化学修飾siNA分子を説明する。本明細書において開示する種々の化学修飾siNAモチーフにより、非修飾型または修飾が最小限の活性なsiRNAと実質的に同様のRNAi活性を維持する能力がもたらされる例えば、Elbashirら,2001,EMBOJ.,20:6877-6888を参照のことと同時に、治療適用用途における使用に適したヌクレアーゼ抵抗性および薬物動態特性がもたらされる。種々の実施形態において、本発明のsiNA分子は修飾を含むものであり、この場合、センスおよび/またはアンチセンス鎖に存在している任意例えば、1つ以上または全部のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである例えば、1個のヌクレオチドが修飾されている、いくつかのヌクレオチドすなわち、複数もしくは1個より多くが修飾されている、または全部のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は、化学修飾により一部修飾されたものである例えば、約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55または59個のヌクレオチドが修飾されている。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は、修飾ヌクレオチドである少なくとも約8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58または60個のヌクレオチドを含むものである。他の実施形態において、本発明のsiNA分子は、化学修飾により完全に修飾されたものである例えば、100修飾されている、すなわち、該siNA分子にはリボヌクレオチドが全く含有されていない。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子のセンス鎖のヌクレオチドの1個以上が修飾されている。同じ実施形態または他の実施形態において、本発明のsiNA分子のアンチセンス鎖のヌクレオチドの1個以上が修飾されている。単一のsiNA分子内の化学修飾は同じであっても異なっていてもよい。一部の実施形態において、少なくとも一方の鎖が少なくとも1つの化学修飾を有する。他の実施形態において、各鎖は、同じであっても異なっていてもよい少なくとも1つの化学修飾例えば、糖鎖、塩基、または主鎖すなわち、ヌクレオチド間結合の修飾を有する。他の実施形態において、本発明のsiNA分子は、少なくとも2、3、4、5個またはそれ以上の異なる化学修飾を含むものである。本発明における使用に適した化学修飾の非限定的な例は、米国特許出願第10/444,853号;同第10/981,966号;同第12/064,014号およびこれらに挙げられた参考文献に開示されており、糖鎖、塩基およびリン酸基、非ヌクレオチドの修飾、および/またはその任意の組合せが挙げられる。本発明の一部の特定の具体的な実施形態において、少なくとも1個の修飾ヌクレオチドは、2’-デオキシ-2-フルオロヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、2’-O-アルキル例えば、2’-O-メチルヌクレオチド、またはロックド核酸LNAヌクレオチド当該技術分野で一般的に認知されているである。本発明のまた他の実施形態において、少なくとも1個のヌクレオチドは、リボ様NorthernまたはA型ヘリックス立体配置を有するものである例えば、Saenger,PrinciplesofNucleicAcidStructure,Springer-Verlag編,1984参照。Northern立体配置を有するヌクレオチドの非限定的な例としては、ロックド核酸LNAヌクレオチド例えば、2-O、4’-C-メチレン-D-リボフラノシルヌクレオチド;2’-メトキシエトキシMOEヌクレオチド;2’-メチル-チオ-エチルヌクレオチド、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド;2’-デオキシ-2’-クロロヌクレオチド;2’-アジドヌクレオチド;2’-O-トリフルオロメチルヌクレオチド;2’-O-エチル-トリフルオロメトキシヌクレオチド;2’-O-ジフルオロメトキシ-エトキシヌクレオチド;4’-チオヌクレオチドおよび2’-O-メチルヌクレオチドが挙げられる。種々の実施形態において、二本鎖siNA分子に存在しているピリミジンヌクレオチドの大部分例えば、50より多くは糖鎖修飾を含むものである。一部の同じおよび/または他の実施形態において、二本鎖siNA分子に存在しているプリンヌクレオチド大部分例えば、50より多くは糖鎖修飾を含むものである。一部の実施形態において、アンチセンス鎖内のピリミジンヌクレオチドは2’-O-メチルまたは2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドであり、アンチセンス鎖内に存在しているプリンヌクレオチドは2’-O-メチルヌクレオチドまたは2’-デオキシヌクレオチドである。他の実施形態において、センス鎖内のピリミジンヌクレオチドは2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドであり、センス鎖内に存在しているプリンヌクレオチドは2’-O-メチルまたは2’-デオキシプリンヌクレオチドである。本発明の一部の特定の実施形態において、センス鎖上の相補領域内のピリミジンヌクレオチドはすべて、2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドである。一部の特定の実施形態において、アンチセンス鎖の相補領域内のピリミジンヌクレオチドはすべて、2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドである。一部の特定の実施形態において、センス鎖上の相補領域内のプリンヌクレオチドはすべて、2’-デオキシプリンヌクレオチドである。一部の特定の実施形態において、アンチセンス鎖上の相補領域内のプリンはすべて、2’-O-メチルプリンヌクレオチドである。一部の特定の実施形態において、センス鎖上の相補領域内のピリミジンヌクレオチドはすべて、2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドである;アンチセンス鎖の相補領域内のピリミジンヌクレオチドはすべて、2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドである;センス鎖上の相補領域内のプリンヌクレオチドはすべて、2’-デオキシプリンヌクレオチドであり、アンチセンス鎖上の相補領域内のプリンはすべて、2’-O-メチルプリンヌクレオチドである。一部の実施形態において、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドである。一部の実施形態において、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が2’-O-メチルピリミジンヌクレオチドである。一部の実施形態において、一方または両方の鎖のプリンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が2’-デオキシ-2’-フルオロプリンヌクレオチドである。一部の実施形態において、一方または両方の鎖のプリンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が2’-O-メチルプリンヌクレオチドである。一部の特定の実施形態において、プリンとピリミジンは、糖鎖の2’位が異なるように修飾されているすなわち、同じ鎖または異なる鎖の糖鎖の2’位において、少なくとも1個のプリンは少なくとも1個のピリミジンと異なる修飾を有する。例えば、一部の場合では、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が2’-デオキシ-2’-フルオロピリミジンヌクレオチドであり、一方または両方の鎖の少なくとも5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが2’-O-メチルプリンヌクレオチドである。他の場合では、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも5個またはそれ以上が2’-O-メチルピリミジンヌクレオチドであり、一方または両方の鎖の少なくとも5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが2’-デオキシ-2’-フルオロプリンヌクレオチドである。種々の修飾および修飾パターンを有するかかるsiNA分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖のさらなる非限定的な例を図2と3に示す。上記のいずれかの修飾またはその組合せ引用した参考文献のものを含むが本発明の任意のsiNA分子に適用され得る。本発明の修飾siNA分子では、該siNA分子内の種々の位置に修飾を含めることができる。一部の実施形態において、本発明の二本鎖siNA分子は修飾ヌクレオチドを、該siNA二本鎖内の内部塩基対合位置に含んでいる。他の実施形態では、本発明の二本鎖siNA分子は修飾ヌクレオチドを、該siNA分子の非塩基対合領域または突出端領域に含んでいる。また他の実施形態では、本発明の二本鎖siNA分子は修飾ヌクレオチドを、該siNA分子の末端位置に含んでいる。例えば、かかる末端領域としては、該siNA分子のセンスおよび/またはアンチセンス鎖または領域の3’位および/または5’位が挙げられる。さらに、本発明の修飾siNA分子はいずれも、修飾を、該siNA二本鎖の一方または両方のオリゴヌクレオチド鎖例えば、センス鎖、アンチセンス鎖、または両鎖内に有するものであり得る。さらに、本発明のsiNA分子の化学修飾に関して、本発明の二本鎖siNA分子の各鎖は1つ以上の化学修飾を有していてもよく、その結果、各鎖は異なる化学修飾パターンを含むものになる。一部の特定の実施形態において、本発明の二本鎖siNA分子の各鎖は、異なる化学修飾パターン、例えば、本明細書に記載のいずれかのStab修飾化学構造表8参照またはその任意の組合せ、すなわち、規定の安定化化学構造StabilzationchemistryStabの異なる組合せのセンス鎖とアンチセンス鎖を含むものである。さらに、異なる修飾パターンが生じ得る修飾スキームの非限定的な例を表8に示す。表8にStabと示した安定化化学構造は、センス/アンチセンス化学構造の任意の組合せで組み合わせることができるStab7/8、Stab7/11、Stab8/8、Stab18/8、Stab18/11、Stab12/13、Stab7/13、Stab18/13、Stab7/19、Stab8/19、Stab18/19、Stab7/20、Stab8/20、Stab18/20、Stab7/32、Stab8/32、もしくはStab18/32など、または任意の他の安定化化学構造の組合せ。本発明の任意のsiNAにおいて、該siNA分子のガイド鎖またはガイド領域アンチセンス鎖またはアンチセンス領域としても知られているの5’末端の1個以上例えば、1、2、3、4または5個のヌクレオチドはリボヌクレオチドである。一部の特定の実施形態において、本発明は、HBVの発現をモジュレートする二本鎖低分子干渉核酸siNA分子であって、該siNAがセンス鎖とアンチセンス鎖を含むものであり;各鎖が、独立して15~30ヌクレオチド長であり;該アンチセンス鎖が:5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’配列番号:1;5’-GUGGUGGACUUCUCUCAAU-3’配列番号:2;5’-GCCGAUCCAUACUGCGGAA-3’配列番号:3;または5’-CCGAUCCAUACUGCGGAAC-3’配列番号:4のいずれかに相補的な配列を有する少なくとも15個のヌクレオチドを含むものである、二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を提供する。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子のアンチセンス鎖は:5’-UGAGAGAAGUCCACCACGA-3’配列番号:452;5’-AUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’配列番号:453;5’-UUCCGCAGUAUGGAUCGGC-3’配列番号:454;または5’-GUUCCGCAGUAUGGAUCGG-3’配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子のセンス鎖は:5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’配列番号:1;5’-GUGGUGGACUUCUCUCAAU-3’配列番号:2;5’-GCCGAUCCAUACUGCGGAA-3’配列番号:3;または5’-CCGAUCCAUACUGCGGAAC-3’配列番号:4の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものである。一部の実施形態において、本発明のsiNA分子は:5’-UCGUGGUGGACUUCUCUCA-3’配列番号:1と5’-UGAGAGAAGUCCACCACGA-3’配列番号:452;または5’-GUGGUGGACUUCUCUCAAU-3’配列番号:2と5’-AUUGAGAGAAGUCCACCAC-3’配列番号:453;または5’-GCCGAUCCAUACUGCGGAA-3’配列番号:3と5’-UUCCGCAGUAUGGAUCGGC-3’配列番号:454;または5’-CCGAUCCAUACUGCGGAAC-3’配列番号:4と5’-GUUCCGCAGUAUGGAUCGG-3’配列番号:455のいずれかを含むものである。上記のいずれかの修飾またはその組合せ引用した参考文献のものを含むがこれらの任意の実施形態に適用され得る。一部の特定の実施形態において、配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4、または配列番号:455の該少なくとも15個のヌクレオチドの配列のヌクレオチドは、連続したヌクレオチド鎖を形成している。一部の実施形態において、該siNA分子は、配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4、または配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチド配列に対して1つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加が含有されていてもよい;しかしながら、該siNA分子は、例えば、RNAiを媒介するその活性を維持しているものとする。非限定的な例において、該欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加は、ループまたは隆起部、あるいはまた、ウォッブルまたは他の択一的な非ワトソン-クリック塩基対をもたらすものであり得る。本発明の一部の特定の実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖を有し、下記式A:を含む二本鎖siNA分子を提供し、式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であり;該アンチセンス鎖は、配列番号:452、配列番号:453、配列番号:454、または配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むものであり、該センス鎖は、該アンチセンス鎖に対して相補性を有する配列を含むものであり;各Nは、独立して非修飾もしくは化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドであり;各Bは、存在する、または存在しない末端キャップであり;Nは、突出端ヌクレオチド各々、独立して非修飾または化学修飾を表し;[N]は、リボヌクレオチドであるヌクレオチドを表し;X1およびX2は、独立して、0~4の整数であり;X3は、15~30の整数であり;X4は、9~30の整数であり;X5は、0~6の整数であるが、X4とX5の和は15~30であるものとする。一部の特定の実施形態において、配列番号:452、配列番号:453、配列番号:454、または配列番号:455の該少なくとも15個のヌクレオチドの配列のヌクレオチドは、連続したヌクレオチド鎖を形成している。一部の実施形態において、式AのsiNA分子は、配列番号:452、配列番号:453、配列番号:454、または配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチド配列に対して1つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加が含有されていてもよい;しかしながら、該siNA分子は、例えば、RNAiを媒介するその活性を維持しているものとする。非限定的な例において、該欠失、置換、ミスマッチおよび/または付加は、ループまたは隆起部、あるいはまた、ウォッブルまたは他の択一的な非ワトソン-クリック塩基対をもたらすものであり得る。一実施形態において、本発明は、aNX4位の1個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである;bNX4位の1個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである;cNX3位の1個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである;およびdNX3位の1個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチド、2’-O-アルキルヌクレオチド、2’-デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである、式Aの二本鎖低分子干渉核酸siNAを特色とする。一部の特定の実施形態において、本発明は、aNX4位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチドである;bNX4位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが2’-O-アルキルヌクレオチドである;cNX3位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチドである;およびdNX3位1、2、3、4、5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが2’-デオキシヌクレオチドである、式Aの二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を特色とする。一部の特定の実施形態において、本発明は、aNX4位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが2’-O-アルキルヌクレオチドである;bNX4位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌクレオチドである;cNX3位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが2’-O-アルキルヌクレオチドである;およびdNX3位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌクレオチドである、式Aの二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を特色とする。一部の特定の実施形態において、本発明は、aNX4位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチドである;bNX4位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが2’-O-アルキルヌクレオチドである;cNX3位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが2’-O-アルキルヌクレオチドである;およびdNX3位の1、2、3、4、5個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチドである、式Aの二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を特色とする。一部の特定の実施形態において、本発明は、さらに1つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む式Aの二本鎖低分子干渉核酸siNA分子を特色とする。一部の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、該核酸分子のアンチセンス鎖またはアンチセンス領域の5’末端に末端リン酸基を含むものである。種々の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、X5=0、1、2または3;各X1およびX2=1または2;X3=18、19、20、21、22または23、およびX4=17、18、19、20、21、22または23を含むものである。一部の特定の実施形態において、式Aを有するsiNA分子はX5=3を含むものである。他の実施形態では、式Aを有するsiNA分子はX5=0を含むものである。一部の特定の実施形態において、式Aを有するsiNA分子はX1=2およびX2=2を含むものである。種々の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、X5=0、X1=2、およびX2=2を含むものである。他の実施形態では、式Aを有するsiNA分子は、X5=3、X1=2、およびX2=2を含むものである。具体的な一実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、X5=3;各X1およびX2=2;X3=19、およびX4=16を含むものである。別の具体的な実施形態では、式Aを有するsiNA分子は、X5=0;各X1およびX2=2;X3=19、およびX4=19を含むものである。一部の特定の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、センス鎖またはセンス領域の3’末端と5’末端にキャップBを含むものである。一部の特定の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、アンチセンス鎖またはアンチセンス領域の3’末端にキャップBを含むものである。種々の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、センス鎖またはセンス領域の3’末端と5’末端にキャップBおよびアンチセンス鎖またはアンチセンス領域の3’末端にキャップBを含むものである。また他の実施形態では、式Aを有するsiNA分子は、該二本鎖核酸分子のセンス上側の鎖の5’末端のみにキャップBを含むものである。一部の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、さらに、ヌクレオチド間に1つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むものである。一部の特定の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、第1末端Nと、該核酸分子のセンス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方の3’末端上の隣接ヌクレオチドとの間に1つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むものである。例えば、該二本鎖核酸分子は、X1および/またはX2=2を含み、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有する突出端ヌクレオチド位置例えば、NsN式中、sはホスホロチオエートを示すを有するものであり得る。一部の実施形態において、式Aを有するsiNA分子のヌクレオチドの1個以上はユニバーサル塩基を有するものである。一部の特定の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、アンチセンス鎖の5’末端から14位のヌクレオチドがプリンである場合、該14位にリボヌクレオチドを有するものである。他の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、アンチセンス鎖の5’末端から14位のヌクレオチドがピリミジンヌクレオチドである場合、該14位にリボヌクレオチド、2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチドまたは2’-O-メチルヌクレオチドを有するものである。一部の実施形態において、式Aを有するsiNA分子は、アンチセンス鎖下側の鎖内に、HBV標的ポリヌクレオチド配列これも、アンチセンス下側の鎖Nおよび[N]ヌクレオチドに対して相補性を有する内のヌクレオチドに相補的なNヌクレオチドを含むものである。本発明のsiNAに適用可能であると上記において論考した上記の任意の修飾またはその組合せ引用した参考文献のものを含むは、式Aを有するsiNA分子に対する任意の実施形態に適用可能である。C.siNA分子の作製/合成本発明のsiNAは、当業者に知られたいくつかの手法を用いて得ることができる。例えば、該siNAは、化学合成され得るものであってもよく、プラスミドにコードされたものであってもよい例えば、ヘアピン型ループを有する二本鎖に自動的にフォールディングする配列として転写される。また、該siNAは、長鎖dsRNA例えば、約25ヌクレオチド長より大きいdsRNAを大腸菌RNaseIIまたはダイサーによって切断することにより作製したものであってもよい。これらの酵素により、dsRNAはプロセッシングされて生物学的に活性なsiNAになる例えば、Yangら,PNASUSA99:9942-99472002;Calegariら,PNASUSA99:142362002Byronら,AmbionTechNotes;101:4-62009;Kawaskiら,NucleicAcidsRes.,31:981-9872003,KnightおよびBass,Science,293:2269-22712001ならびにRoberstonら,J.Biol.Chem243:821969を参照のこと。1.化学合成好ましくは、本発明のsiNAは化学合成されたものである。オリゴヌクレオチド例えば、一部の特定の修飾オリゴヌクレオチドまたはリボヌクレオチドがないオリゴヌクレオチドの一部分は、例えば、Caruthersら,1992,MethodsinEnzymology211,3-19、Thompsonら,PCT国際出願公開公報番号WO99/54459、Wincottら,1995,NucleicAcidsRes.23,2677-2684、Wincottら,1997,MethodsMol.Bio.,74,59、Brennanら,1998,BiotechnolBioeng.,61,33-45、およびBrennan,米国特許第6,001,311号に記載された、当該技術分野で知られたプロトコルを用いて合成される。オリゴヌクレオチドの合成では、一般的な核酸用保護基およびカップリング基5’末端にジメトキシトリチル、および3’末端にホスホルアミダイトなどが利用される。修飾のないsiNA分子は、Usmanら,1987,J.Am.Chem.Soc,109,7845;Scaringeら,1990,NucleicAcidsRes.,18,5433に記載の手順を用いて合成される。この合成では、一般的な核酸用保護基およびカップリング基が利用される5’末端にジメトキシトリチル、および3’末端にホスホルアミダイトなど、これらは、本発明の一部の特定のsiNA分子に使用され得る。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子は、米国特許第6,995,259号、同第6,686,463号、同第6,673,918号、同第6,649,751号、同第6,989,442号、および米国特許出願第10/190,359号に記載の方法に従って合成され、脱保護され、解析される。非限定的な合成の一例において、小規模合成は、394AppliedBiosystems,Inc.製の合成装置にて、0.2μmol規模プロトコルを使用し、2’-O-メチル化ヌクレオチドでは2.5分間のカップリング工程を、2’-デオキシヌクレオチドまたは2’-デオキシ-2’-フルオロヌクレオチドでは45秒間のカップリング工程を用いて行なわれる。表9に、合成サイクルで使用した試薬の量および接触時間の概略を示す。あるいはまた、本発明のsiNA分子は、別々に合成し、合成後に、例えば、ライゲーションによってMooreら,1992,Science256,9923;Draperら,PCT国際出願公開公報番号WO93/23569;Shabarovaら,1991,NucleicAcidsResearch19,4247;Bellonら,1997,NucleosidesNucleotides,16,951;Bellonら,1997,BioconjugateChem.8,204、あるいは合成および/または脱保護後にハイブリダイゼーションによって、一緒に連接してもよい。また、本発明の種々のsiNA分子を、Scaringeら,米国特許第5,889,136号;同第6,008,400号;および同第6,111,086号の教示を用いて合成することもできる。2.ベクター発現あるいはまた、標的HBV分子をコードしている遺伝子と相互作用して下方調節する本発明のsiNA分子を、DNAまたはRNAベクター内に挿入した転写単位例えば、Coutureら,1996,TIG.,12,510を参照のことから発現させて送達してもよい。組換えベクターは、DNAプラスミドまたはウイルスベクターであり得る。siNA発現ウイルスベクターは、限定されないが、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、またはアルファウイルスをベースにして構築され得る。一部の実施形態では、polIII系構築物を用いて本発明の核酸分子を発現させる。該siNA分子配列の転写は、真核生物のRNAポリメラーゼIpolI、RNAポリメラーゼIIpolII、またはRNAポリメラーゼIIIpolIIIのプロモーターにより駆動させることができる例えば、Thompson,米国特許第5,902,880号および同第6,146,886号を参照のこと。また、IzantおよびWeintraub,1985,Science,229,345;McGarryおよびLindquist,1986,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA83,399;Scanlonら,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88,10591-5;Kashani-Sabetら,1992,AntisenseRes.Dev.,2,3-15;Dropulicら,1992,J.Virol.,66,1432-41;Weerasingheら,1991,J.Virol.,65,5531-4;Ojwangら,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89,10802-6;Chenら,1992,NucleicAcidsRes.,20,4581-9;Sarverら,1990Science,247,1222-1225;Thompsonら,1995,NucleicAcidsRes.,23,2259;Goodら,1997,GeneTherapy,4,45も参照のこと。polIIまたはpolIIIプロモーターによる転写物は、あらゆる細胞において高レベルで発現される;所与の細胞型における所与のpolIIプロモーターのレベルは、近くに存在している遺伝子調節配列エンハンサー、サイレンサーなどの性質に依存する。また、原核生物のRNAポリメラーゼプロモーターも使用されるが、原核生物のRNAポリメラーゼ酵素は、適切な細胞において発現させるものとするElroy-SteinおよびMoss,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87,6743-7;GaoおよびHuang1993,NucleicAcidsRes.,21,2867-72;Lieberら,1993,MethodsEnzymol,217,47-66;Zhouら,1990,Mol.Cell.Biol.,10,4529-37。数名の研究者らにより、かかるプロモーターにより発現させた核酸分子は、哺乳動物の細胞において機能を果たし得ることが示されている例えば、Kashani-Sabetら,1992,AntisenseRes.Dev.,2,3-15;Ojwangら,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89,10802-6;Chenら,1992,NucleicAcidsRes.,20,4581-9;Yuら,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90,6340-4;L’Huillierら,1992,EMBOJ.,11,4411-8;Lisziewiczら,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,90,8000-4;Thompsonら,1995,NucleicAcidsRes.,23,2259;SullengerCech,1993,Science,262,1566。より具体的には、U6核内低分子snRNA、トランスファーRNAtRNAおよびアデノウイルスVARNAをコードしている遺伝子に由来するものなどの転写単位が、細胞内に高濃度の所望のRNA分子siNAなどを生成させるのに有用であるThompsonら,上掲;CoutureおよびStinchcomb,1996,上掲;Noonbergら,1994,NucleicAcidRes.,22,2830;Noonbergら,米国特許第5,624,803号;Goodら,1997,GeneTher.,4,45;Beigelmanら,PCT国際出願公開公報番号WO96/18736。上記のsiNA転写単位は、哺乳動物の細胞内への導入のための多種多様なベクター内に、例えば限定されないが、プラスミドDNAベクター、ウイルスDNAベクターアデノウイルスもしくはアデノ随伴ウイルスベクターなど、またはウイルスRNAベクターレトロウイルスもしくはアルファウイルスベクターなどに組み込まれ得る概説については、CoutureおよびStinchcomb,1996上掲を参照のこと。本発明のsiNA分子を発現させるために使用されるベクターは、siNA二本鎖の一方または両方の鎖をコードしているものであってもよく、自己ハイブリダイズしてsiNA二本鎖になる単一の自己相補的鎖をコードしているものであってもよい。本発明のsiNA分子をコードしている核酸配列は、該siNA分子の発現を可能にする様式で作動可能に連結され得る例えば、Paulら,2002,NatureBiotechnology,19,505;MiyagishiおよびTaira,2002,NatureBiotechnology,19,497;Leeら,2002,NatureBiotechnology,19,500;ならびにNovinaら,2002,NatureMedicine,事前にオンライン公開されたdoi:10.1038/nm725参照。D.担体/送達系本発明のsiNA分子は標的細胞または標的組織に直接添加するか、またはカチオン性脂質と複合体形成させてもよく、リポソーム内に封入してもよく、該siNA分子を発現する組換えプラスミドもしくはウイルスベクターとして、あるいは別の様式で送達してもよい。核酸分子の送達方法は、Akhtarら,1992,TrendsCellBio.,2,139;DeliveryStrategiesforAntisenseOligonucleotideTherapeutics,Akhtar編,1995,Maurerら,1999,Mol.Membr.Biol.,16,129-140;HoflandおよびHuang,1999,Handb.Exp.Pharmacol.,137,165-192;ならびにLeeら,2000,ACSSymp.Ser.,752,184-192に記載されている。Beigelmanらの米国特許第6,395,713号およびSullivanらのPCTWO94/02595には、さらに、核酸分子の一般的な送達方法が記載されている。このようなプロトコルは、事実上いずれの核酸分子の送達にも使用することができる。核酸分子は細胞に、当業者に知られた多種多様な方法によって、例えば限定されないが、リポソーム内への封入、イオン導入、または他の媒体生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリン例えば、Gonzalezら,1999,BioconjugateChem.,10,1068-1074;Wangら,PCT国際出願公開公報番号WO03/47518およびWO03/46185を参照のこと、ポリ乳酸-コ-グリコール酸PLGAおよびPLCAミクロスフィア例えば、米国特許6,447,796および米国特許出願公開公報番号US2002130430を参照のこと、生分解性ナノカプセル、ならびに生体接着性ミクロスフィアなどへの組込みによって、またはタンパク質性ベクターO’HareおよびNormand,PCT国際出願公開公報番号WO00/53722によって投与され得る。一態様において、本発明は、本明細書に記載のsiNA分子を内包する担体系を提供する。一部の実施形態において、担体系は、脂質系の担体系、カチオン性脂質、もしくはリポソーム核酸複合体、リポソーム、ミセル、ビロソーム、脂質ナノ粒子またはその混合物である。他の実施形態では、担体系は、ポリマー系の担体系カチオン性ポリマー-核酸複合体などである。さらなる実施形態では、担体系は、シクロデキストリン系の担体系シクロデキストリンポリマー-核酸複合体などである。さらなる実施形態では、担体系は、タンパク質系の担体系カチオン性ペプチド-核酸複合体などである。好ましくは、担体系は脂質ナノ粒子LNP製剤である。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子は、米国特許出願第11/353,630号、同第11/586,102号、同第61/189,295号、同第61/204,878号、同第61/235,476号、同第61/249,807号、同第61/298,022号、同第61/351373号、同第61/347640号、同第61/345754号、同第61/322054号、同第12/640342号、および同第12/617079号、ならびにPCT特許出願番号PCT/US10/020013およびPCT/US09/053336に記載されているような脂質ナノ粒子組成物を用いて製剤化される。一部の特定の実施形態では、該siNAは、本明細書の実施例6に記載および例示した成分および比率を用いて製剤化される表10と11も参照のこと。種々の実施形態において、表10に示した脂質ナノ粒子配合物は、本明細書に記載の任意のsiNA分子またはsiNA分子の組合せに適用される。一部の実施形態において、本発明は、カチオン性脂質化合物番号1~46のいずれかまたはその組合せを含む組成物として製剤化された本発明のsiNA分子を含む組成物を特色とする。一部の特定の他の実施形態において、本発明は、米国特許出願第61/189,295号、同第61/204,878号、同第61/235,476号、同第61/249,807号、および同第61/298,022号に記載のカチオン性脂質配合物のいずれかを用いて製剤化された本発明のsiNA分子を含む組成物を特色とする。他の実施形態において、本発明は、本発明のsiNA分子のコンジュゲートおよび/または複合体を特色とする。かかるコンジュゲートおよび/または複合体は、生物学的系内細胞などへの該siNA分子の送達を助長するために使用され得る。本発明によって提供されるコンジュゲートおよび複合体は、細胞膜を通過して治療用化合物を運搬すること、薬物動態特性を改変すること、および/または本発明の核酸分子の局在化をモジュレートすることにより、治療活性を付与し得るものである。かかるコンジュゲートの非限定的な例は、米国特許出願公開公報番号US2008/0152661A1およびUS2004/0162260A1例えば、CDM-LBA、CDM-Pip-LBA、CDM-PEG、CDM-NAGなどならびに米国特許出願第10/427,160号同第10/201,394号、同第61/322422号、および同第61/315223号;ならびに米国特許第6,528,631号;同第6,335,434号;同第6,235,886号;同第6,153,737号;同第5,214,136号;および同第5,138,045号に記載されている。種々の実施形態において、ポリエチレングリコールPEGが本発明のsiNA化合物に共有結合され得る。結合されるPEGは任意の分子量であり得る好ましくは約100~約50,000ダルトンDa。また他の実施形態において、本発明は、ポリエチレングリコール脂質PEG修飾型もしくは長時間循環性のリポソームまたはステルスstealthリポソームと本発明のsiNA分子とを内包している表面修飾されたリポソームを含む組成物または製剤を特色とする例えば、PCT国際出願公開公報番号WO96/10391;Ansellら,PCT国際出願公開公報番号WO96/10390;Hollandら,PCT国際出願公開公報番号WO96/10392に開示されているようなもの。また、一部の実施形態では、本発明のsiNA分子は、ポリエチレンイミンおよびその誘導体、例えば、ポリエチレンイミン-ポリエチレングリコール-N-アセチルガラクトサミンPEI-PEG-GALまたはポリエチレンイミン-ポリエチレングリコール-トリ-N-アセチルガラクトサミンPEI-PEG-triGAL誘導体などを用いて製剤化または複合体形なされ得る。一実施形態において、本発明の核酸分子は、米国特許出願公開公報番号20030077829に記載のようにして製剤化される。他の実施形態では、本発明のsiNA分子を、膜破壊剤米国特許出願公開公報第20010007666号に記載のものなどと複合体形成させる。また、さらに他の実施形態では、膜破壊剤1種類または複数種と該siNA分子を、カチオン性脂質またはヘルパー脂質分子米国特許第6,235,310号に記載の脂質などと複合体形成させる。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子は、米国特許出願公開公報第2003077829号;同第20050287551号;同第20050164220号;同第20050191627号;同第20050118594号;同第20050153919号;同第20050085486号;および同第20030158133号;ならびにPCT国際出願公開公報番号WO00/03683およびWO02/087541に記載のような送達系と複合体形成させる。一部の実施形態において、本発明のリポソーム製剤は、米国特許第6,858,224号;同第6,534,484号;同第6,287,591号;同第6,835,395号;同第6,586,410号;同第6,858,225号;同第6,815,432号;同第6,586,001号;同第6,120,798号;同第6,977,223号;同第6,998,115号;同第5,981,501号;同第5,976,567号;同第5,705,385号;ならびに米国特許出願公開公報第2006/0019912号;同第2006/0019258号;同第2006/0008909号;同第2005/0255153号;同第2005/0079212号;同第2005/0008689号;同第2003/0077829号、同第2005/0064595号、同第2005/0175682号、同第2005/0118253号;同第2004/0071654号;同第2005/0244504号;同第2005/0265961および2003/0077829に記載された化合物および組成物と製剤化または複合体形成させた本発明のsiNA分子例えば、siNAを含む。あるいはまた、本発明のsiNAを発現する上記に論考したような組換えプラスミドおよびウイルスベクターを、本発明の分子の送達に使用してもよい。siNA分子発現ベクターの送達は、全身性静脈内もしくは筋肉内投与などによるもの、被検体から取り出された標的細胞に投与した後、該被検体に再導入することによるもの、または所望の標的細胞への導入が可能であり得る任意の他の手段によるものであり得る概説については、Coutureら,1996,TIG.,12,510を参照のこと。また、かかる組換えプラスミドは、直接投与してもよく、適当な送達試薬とともに、例えば、MirusTransitLT1親油性試薬;リポフェクチン;リポフェクタミン;セルフェクチン;ポリカチオン例えば、ポリリジンまたはリポソーム脂質系の担体系、カチオン性脂質、もしくはリポソーム核酸複合体、ミセル、ビロソーム、脂質ナノ粒子などとともに投与してもよい。E.キットまた、本発明は、核酸をキットの形態で提供する。キットには容器が含まれ得る。キットには、典型的には、本発明の核酸を、その投与のための使用説明書とともに含む。一部の特定の場合では、該核酸は、標的化部分が結合されたものであり得る。標的化部分例えば、抗体、タンパク質を結合させる方法は、当業者に知られている。一部の特定の場合では、該核酸は化学修飾されている。他の実施形態では、キットに、1種類より多くの本発明のsiNA分子を含む。キットには、本発明のsiNA分子を薬学的に許容され得る担体または希釈剤とともに含めてもよい。キットに、さらに賦形剤を含めてもよい。F.治療的使用/医薬組成物現在のHBVの研究における一連の知見により、HBV活性をアッセイするための方法の必要性、および研究、診断および治療での使用のためのHBV発現を調節することができる化合物の必要性が示されている。後述するように、本発明の核酸分子は、アッセイにおいて、HBVレベルと関連している疾患状態を診断するために使用され得る。また、該核酸分子および医薬組成物は、HBVRNAレベルと関連している疾患状態を処置するために使用され得る。1.HBVと関連している疾患状態HBV発現のモジュレーションと関連したものであり得る具体的な疾患状態としては、肝臓疾患およびがんが挙げられる。かかる疾患の非限定的な例としては、肝硬変および肝細胞heptocellular癌が挙げられる。本発明のsiNA分子が標的HBVmRNAを分解したがって、上記の疾患を抑止し得るものであることは理解されよう。疾患の抑止は、被検体において疾患の進行を直接測定することにより評価することができる。また、該疾患と関連している病状の変化または逆転を観察することにより推断してもよい。さらに、本発明のsiNA分子を予防法として使用してもよい。したがって、本発明の核酸分子および医薬組成物の使用は、HBV遺伝子発現の調節と関連しているこれらおよび他の疾患を改善、処置、予防および/または治癒するために使用され得る。2.医薬組成物本発明のsiNA分子により、多種多様な治療的、予防的、美容的、獣医学的、診断的、標的確認、ゲノム知得、遺伝子操作、および薬理ゲノミクス適用用途に有用な試薬および方法が提供される。a.製剤したがって、本発明はまた、一態様において、記載のsiNA分子の医薬組成物、すなわち、薬学的に許容され得る担体または希釈剤中の組成物を提供する。このような医薬組成物は、上記の化合物の塩、エステル、またはかかるエステルの塩、例えば、酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、酢酸およびベンゼンスルホン酸の塩を含むものである。他の塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、マンガン、アンモニウムおよびカルシウムの塩が挙げられる。このような医薬製剤または医薬組成物には、当該技術分野で一般的に知られた薬学的に許容され得る担体または希釈剤が含まれ得る。一実施形態において、本発明は、配列番号:1の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。別の実施形態では、本発明は、配列番号:452の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。また別の実施形態では、本発明は、配列番号:2の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。さらに別の実施形態では、本発明は、配列番号:453の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。別の実施形態では、本発明は、配列番号:3の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。別の実施形態では、本発明は、配列番号:454の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。別の実施形態では、本発明は、配列番号:4の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。また別の実施形態では、本発明は、配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列を含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。さらに別の実施形態では、本発明は、式Aを含むsiNA分子を含む医薬組成物を特色とする。本発明のsiNA分子は、好ましくは、被検体に投与する前に、当該技術分野で知られた手法に従って医薬組成物として製剤化される。本発明の医薬組成物は、少なくとも滅菌されており、パイロジェンフリーであることを特徴とする。本発明の医薬組成物の調製方法は、当該技術分野の技能の範囲内であり、例えば、Remington’sPharmaceuticalScience,第17版,MackPublishingCompany,Easton,Pa.1985に記載されている。一部の実施形態において、本発明の医薬組成物例えば、siNAおよび/またはそのLNP製剤は、さらに、慣用的な医薬用賦形剤および/または添加剤を含む。好適な医薬用賦形剤としては、保存料、フレーバー剤、安定剤、酸化防止剤、オスモル濃度調整剤、バッファー、およびpH調整剤が挙げられる。好適な添加剤としては、生理学的に生体適合性のバッファー例えば、塩酸トリメチルアミン、キレート剤例えば、DTPAもしくはDTPA-ビスアミドなどまたはカルシウムキレート錯体例えば、カルシウムDTPA、CaNaDTPA-ビスアミドなどの添加が挙げられ、あるいは、カルシウムもしくはナトリウム塩例えば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウムもしくは乳酸カルシウムを添加してもよい。また、酸化防止剤および懸濁化剤を使用してもよい。局所投与のための製剤の種々の型の非限定的な例としては、軟膏、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、フォーム剤、経皮パッチによる送達のための調製物、粉末剤、スプレー剤、エアロゾル剤、カプセル剤または吸入器もしくは吹送器での使用のためのカートリッジ剤または滴剤例えば、点眼薬または点鼻薬、噴霧化される液剤/懸濁剤、坐薬、膣坐薬、貯留注腸剤およびチュアブル錠もしくはサッカブル錠もしくはペレット剤例えば、アフタ性潰瘍の処置用またはリポソームもしくはマイクロカプセル封入調製物が挙げられる。軟膏、クリーム剤およびゲル剤は、例えば、水性または油性の基剤を用い、適当な増粘剤および/またはゲル化剤および/または溶媒の添加を伴って製剤化され得る。したがって、かかる基剤の非限定的な例としては、例えば、水および/または油類、例えば、液状パラフィンあるいは植物油ラッカセイ油もしくはヒマシ油など、または溶媒ポリエチレングリコールなどが挙げられ得る。基剤の性質に応じて、種々の増粘剤およびゲル化剤が使用され得る。かかる薬剤の非限定的な例としては、軟質パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、羊毛脂、蜜蝋、カルボキシポリメチレンおよびセルロース誘導体および/またはグリセリルモノステアレートおよび/または非イオン性乳化剤が挙げられる。一実施形態において、ローション剤は、水性または油性基剤を用いて製剤化され得、また、一般的に1種類以上の乳化剤、安定化剤、分散化剤、懸濁化剤または増粘剤が含まれる。一実施形態において、外用粉末剤は、任意の適当な粉末基剤、例えば、タルク、ラクトースまたはデンプンの補助を伴って形成され得る。滴剤は、水性または非水性の基剤を用いて製剤化され得、また、1種類以上の分散化剤、可溶化剤、懸濁化剤または保存料が含まれる。経口使用が意図される組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野で知られた任意の方法に従って調製され得、かかる組成物に、医薬品として洗練された口当たりのよい調製物を得るために甘味剤、フレーバー剤、着色剤または保存剤などの1種類以上を含有させてもよい。錠剤は、活性成分を、錠剤の製造に適した無毒性の薬学的に許容され得る賦形剤と混合された状態で含む。このような賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤;炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなど;造粒剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸;結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア;ならびに滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであり得る。錠剤は、コーティングされていなくてもよく、既知の手法によってコーティングされていてもよい。一部の場合では、かかるコーティングは、胃腸管内での崩壊と吸収を遅延させ、それにより長期間にわたって持続作用をもたらすための既知の手法によって調製され得る。例えば、グリセリルモノステアレートmonosterateまたはグリセリルジステアレートなどの時間遅延物質が使用され得る。また、経口使用のための製剤は、活性成分を不活性な固形希釈剤例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合した硬質ゼラチンカプセル剤として、あるいは活性成分を水または油性媒体例えば、ピーナッツ油、液状パラフィンもしくはオリーブ油と混合した軟質ゼラチンカプセル剤として提示され得る。水性懸濁剤は、活性物質を、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤との混合物の状態で含む。かかる賦形剤は、懸濁化剤、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントゴムおよびアカシアゴムである;分散化剤または湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、あるいはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物例えば、ポリオキシエチレンステアレート;またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから得られる部分エステルとの縮合生成物ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなど、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物から得られる部分エステルとの縮合生成物例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。また、水性懸濁剤には、1種類以上の保存料例えば、p-ヒドロキシ安息香酸エチルまたはn-プロピル、1種類以上の着色剤、1種類以上のフレーバー剤、および1種類以上の甘味剤スクロースまたはサッカリンなどが含有され得る。油性懸濁剤は、活性成分を、植物油例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはココナッツ油、または鉱油液状パラフィンなどに懸濁させることにより製剤化され得る。油性懸濁剤には、増粘剤、例えば、蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコールが含有され得る。甘味剤およびフレーバー剤は、口当たりのよい経口調製物を得るために添加され得る。このような組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤の添加によって保存され得る。また、本発明の医薬組成物は水中油型の乳剤の形態であってもよい。油相は、植物油または鉱油またはこれらの混合物であり得る。好適な乳化剤は、天然に存在するゴム例えば、アカシアゴムまたはトラガントゴム、天然に存在するホスファチド、例えば、ダイズ、レシチン、および脂肪酸およびヘキシトール無水物から得られるエステルまたは部分エステル、例えば、ソルビタンモノオレエート、ならびに前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。また、乳剤に甘味剤およびフレーバー剤を含有させてもよい。シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、グルコースまたはスクロースを用いて製剤化され得る。また、かかる製剤には、粘滑剤、保存料およびフレーバー剤および着色剤も含有され得る。医薬組成物は、滅菌された注射用の水性または油性懸濁剤の形態であってもよい。この懸濁剤は、既知の技術に従い、上記に示した適当な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製剤化され得る。また、滅菌された注射用調製物は、無毒性の非経口にparentally許容され得る希釈剤または溶媒中の滅菌された注射用の液剤または懸濁剤例えば、1,3-ブタンジオール中の液剤であり得る。中でも、使用可能な許容され得るビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液である。また、滅菌された固定油も、溶媒または懸濁媒体として慣用的に使用されている。この目的には、任意の無刺激性固定油例えば、合成のモノ-またはジグリセリドが使用され得る。また、オレイン酸などの脂肪酸は、注射用剤の調製に有用性が見い出されている。また、本発明の核酸分子は、例えば、薬物の経直腸投与のための坐薬の形態で投与され得る。このような組成物は、薬物を適当な非刺激性賦形剤と混合することにより調製され得、該賦形剤は、通常の温度では固体であるが直腸温度では液状となり、したがって、直腸内で融解して薬物を放出するものである。かかる物質としては、ココアバターおよびポリエチレングリコールが挙げられる。本発明の核酸分子は、滅菌された媒体にて非経口投与してもよい。薬物は、使用されるビヒクルおよび濃度に応じてビヒクル中に懸濁させるか、または溶解させるかのいずれかであり得る。好都合には、局所麻酔薬、保存料および緩衝剤などの佐剤をビヒクル中に溶解させるのがよい。他の実施形態において、肺経由送達における使用のための本明細書において提供するsiNAならびにLNP組成物および製剤は、さらに、1種類以上の界面活性剤を含む。本発明の組成物の取込みを向上させるための好適な界面活性剤または界面活性剤成分としては、とりわけ、合成および天然の、ならびに完全体および切断型の界面活性体プロテインA、界面活性体プロテインB、界面活性体プロテインC、界面活性体プロテインDならびに界面活性体プロテインE、ジ-飽和ホスファチジルコリンジパルミトイル以外、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン;ホスファチジン酸、ユビキノン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン、パルミトイル-リゾホスファチジルコリン、デヒドロエピアンドロステロン、ドリコール、スルファチジンsulfatidic酸、グリセロール-3-ホスフェート、ジヒドロキシアセトンリン酸、グリセロール、グリセロ-3-ホスホコリン、ジヒドロキシアセトン、パルミテート、シチジン二リン酸CDPジアシルグリセロール、CDPコリン、コリン、コリンリン酸;ならびに界面活性剤成分の天然担体ビヒクルである天然および人工の層状体、ω-3脂肪酸、ポリエン酸、ポリエノン酸、レシチン、パルミチン酸、エチレンまたはプロピレンオキシド、ポリオキシプロピレン、モノマー型およびポリマー型のポリオキシエチレン、モノマー型およびポリマー型のポリビニルアミンと、デキストランおよび/またはアルカノイル側鎖との非イオン性ブロックコポリマー、Brij35、TritonX-100ならびに合成界面活性剤ALEC、Exosurf、SurvanおよびAtovaquoneが挙げられる。このような界面活性剤は、製剤中で単独で、もしくは多成分界面活性剤の一部として、本明細書の医薬組成物中の核酸成分の5’末端および/または3’末端に共有結合された付加物としてのいずれかで使用され得る。b.併用本発明によるsiNAおよび医薬製剤は、被検体に単独で投与してもよく、1種類以上の他の治療用薬剤例えば、抗ウイルス剤または抗がん剤と併用して使用してもよく、該他の治療用薬剤を含めてもよい。したがって、本開示の化合物と他の抗ウイルス剤または抗がん剤または化学療法剤との併用は本発明の範囲に含まれる。抗がん剤または化学療法剤の例は、CancerPrinciplesandPracticeofOncologybyV.T.DevitaandS.Hellman編集者,第6版2001年2月15日,LippincottWilliamsWilkinsPublishersを見るとよい。当業者には、どの薬剤の組合せが有用であり得るかが、関与する具体的な薬物およびがんの特性に基づいて認識され得よう。かかる抗がん剤としては、限定されないが、以下のもの:エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノイド受容体モジュレータ、細胞傷害剤/細胞増殖抑制薬、抗増殖剤、プレニル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬、HMG-CoAレダクターゼ阻害薬および他の血管新生阻害薬、細胞の増殖および生存のシグナル伝達の阻害薬、アポトーシス誘導剤ならびに細胞周期のチェックポイントに干渉する薬剤が挙げられる。また、本発明のsiNAは、HCCの処置に使用される任意の治療用薬剤例えば限定されないが、ソラフェニブとの併用にも有用である。したがって、さらなる実施形態において、本発明は、本発明のsiNA分子例えば限定されないが、配列番号:1、配列番号:1210、配列番号:2、配列番号:1211、配列番号:3、配列番号:1212、配列番号:4、もしくは配列番号:1213の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むsiNA分子などあるいはその薬学的に許容され得る塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能性の誘導体を、1種類以上の抗ウイルス剤と一緒に含む併用を提供する。一部の実施形態では、抗ウイルス薬は別のHBV阻害薬である。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子は、既知のHBV抗ウイルス剤、例えば、以下のもの:ラミブジン2’,3’-ジデオキシ-3’-チアシチジン、一般呼称3TC、ペグインターフェロン-α2a、テノホビル、エンテカビル、テルビブジン、アデホビルとの併用において有用である。また、本発明は、本発明のsiNA分子、例えば限定されないが、配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4、もしくは配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むsiNA分子あるいはその薬学的に許容され得る塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能性の誘導体などを1種類以上の抗がん剤または化学療法剤と一緒に含む併用を提供する。一部の特定の実施形態において、本発明のsiNA分子は、既知の抗がん剤、例えば以下のもの:エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノイド受容体モジュレータ、細胞傷害剤、抗増殖剤、プレニル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬、HMG-CoAレダクターゼ阻害薬、HIVプロテアーゼ阻害薬、逆転写酵素阻害薬、および他の血管新生阻害薬との併用にも有用である。本発明の化合物と併用して使用され得るエストロゲン受容体モジュレータの例としては、限定されないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、LY353381、LY117081、トレミフェン、フルベストラント、4-[7-2,2-ジメチル-1-オキソプロポキシ-4-メチル-2-[4-[2-1-ピペリジニルエトキシ]フェニル]-2H-1-ベンゾピラン-3-イル]-フェニル-2,2-ジメチルプロパノエート、4,4’-ジヒドロキシベンゾフェノン-2,4-ジニトロフェニル-ヒドラゾン、およびSH646が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るアンドロゲン受容体モジュレータの例としては、限定されないが、フィナステリドおよび他の5α-レダクターゼ阻害薬、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、および酢酸アビラテロンが挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るかかるレチノイド受容体モジュレータの例としては、限定されないが、ベキサロテン、トレチノイン、13-シス-レチノイン酸、9-シス-レチノイン酸、α-ジフルオロメチルオルニチン、ILX23-7553、トランス-N-4’-ヒドロキシフェニルレチンアミド、およびN-4-カルボキシフェニルレチンアミドが挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る細胞傷害剤の例としては、限定されないが、セルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモダルシトール、ラニムスチン、ホテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸インプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、シス-アミンジクロロ2-メチル-ピリジン白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド、GPX100、トランス,トランス,トランス-ビス-μ-ヘキサン-1,6-ジアミン-μ-[ジアミン-白金II]ビス[ジアミンクロロ白金II]テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン、三酸化ヒ素、1-11-ドデシルアミノ-10-ヒドロキシウンデシル-3,7-ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサントレン、ミトザントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、3’-デアミノ-3’-モルホリノ-13-デオキソ-10-ヒドロキシカルミノマイシン、アンナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、MEN10755、および4-デメトキシ-3-デアミノ-3-アジリジニル-4-メチルスルホニル-ダウノルビシンWO00/50032参照が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る低酸素活性化性化合物の一例はチラパザミンである。本発明の化合物と併用して使用され得るプロテアソーム阻害薬の例としては、限定されないが、ラクタシスチンおよびボルテゾミブが挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る微小管阻害薬/微小管安定化剤の例としては、限定されないが、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、3’,4’-ジデヒドロ-4’-デオキシ-8’-ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキセル、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、アウリスタチン、セマドチン、RPR109881、BMS184476、ビンフルニン、クリプトフィシン、2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-N-3-フルオロ-4-メトキシフェニルベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、N,N-ジメチル-L-バリル-L-バリル-N-メチル-L-バリル-L-プロリル-L-プロリン-t-ブチルアミド、TDX258、エポチロン例えば、米国特許第6,284,781号および同第6,288,237号参照ならびにBMS188797が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るトポイソメラーゼ阻害薬の一例としては、限定されないが、トポテカン、ヒカプトアミンhycaptamine、イリノテカン、ルビテカン、6-エトキシプロピオニル-3’,4’-O-エキソexo-ベンジリデン-シャールトルーシン、9-メトキシ-N,N-ジメチル-5-ニトロピラゾロ[3,4,5-kl]アクリジン-2-6Hプロパンアミン、1-アミノ-9-エチル-5-フルオロ-2,3-ジヒドロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-1H,12H-ベンゾ[デ]ピラノ[3’,4’:b,7]-インドリジノ[1,2b]キノリン-10,139H,15Hジオン、ラルトテカン、7-[2-N-イソプロピルアミノエチル]-20Sカンプトテシン、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、2’-ジメチルアミノ-2’-デオキシ-エトポシド、GL331、N-[2-ジメチルアミノエチル]-9-ヒドロキシ-5,6-ジメチル-6H-ピリド[4,3-b]カルバゾール-1-カルボキサミド、アスラクリン、5a,5aB,8aa,9b-9-[2-[N-[2-ジメチルアミノエチル]-N-メチルアミノ]エチル]-5-[4-ヒドロオキシ-3,5-ジメトキシフェニル]-5,5a,6,8,8a,9-ヘキソヒドロフロ3’,4’:6,7ナフト2,3-d-1,3-ジオキソル-6-オン、2,3-メチレンジオキシ-5-メチル-7-ヒドロキシ-8-メトキシベンゾ[c]-フェナントリジニウム、6,9-ビス[2-アミノエチルアミノ]ベンゾ[g]イソギノリンguinoline-5,10-ジオン、5-3-アミノプロピルアミノ-7,10-ジヒドロキシ-2-2-ヒドロキシエチルアミノメチル-6H-ピラゾロ[4,5,1-デ]アクリジン-6-オン、N-[1-[2ジエチルアミノエチルアミノ]-7-メトキシ-9-オキソ-9H-チオキサンテン-4-イルメチル]ホルムアミド、N-2-ジメチルアミノエチルアクリジン-4-カルボキサミド、6-[[2-ジメチルアミノエチル]アミノ]-3-ヒドロキシ-7H-インデノ[2,1-c]キノリン-7-オン、およびディメスナが挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る有糸分裂キネシンの阻害薬、特にヒト有糸分裂キネシンKSPの例としては、限定されないが、PCT公開公報WO01/30768、WO01/98278、WO03/050,064、WO03/050,122、WO03/049,527、WO03/049,679、WO03/049,678、WO04/039774、WO03/079973、WO03/099211、WO03/105855、WO03/106417、WO04/037171、WO04/058148、WO04/058700、WO04/126699、WO05/018638、WO05/019206、WO05/019205、WO05/018547、WO05/017190、US2005/0176776に記載の阻害薬が挙げられる。一実施形態において、有糸分裂キネシンの阻害薬としては、限定されないが、KSPの阻害薬、MKLP1の阻害薬、CENP-Eの阻害薬、MCAKの阻害薬、Kifl4の阻害薬、Mphosphlの阻害薬およびRab6-KIFLの阻害薬が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るヒストンデアセチラーゼ阻害薬の例としては、限定されないが、TSA、オキサムフラチン、PXD101、MG98、バルプロ酸およびスクリプタイドが挙げられる。他のヒストンデアセチラーゼ阻害薬に対するさらなる参考文献は、下記の論文;Miller,T.A.ら,J.Med.Chem.4624:5097-51162003を見るとよい。本発明の化合物と併用して使用され得る有糸分裂の進行に関与しているキナーゼの阻害薬の例としては、限定されないが、オーロラキナーゼの阻害薬、Polo様キナーゼPLKの阻害薬特に、PLK-1の阻害薬、bub-1の阻害薬およびbub-R1の阻害薬が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る抗増殖剤の例としては、限定されないが、アンチセンスRNAおよびDNAオリゴヌクレオチドG3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231、およびINX3001など、ならびに代謝拮抗薬エノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスファート、ホステアビンfosteabineナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、2’-デオキシ-2’-メチリデンシチジン、2’-フルオロメチレン-2’-デオキシシチジン、N-[5-2,3-ジヒドロ-ベンゾフリルスルホニル]-N’-3,4-ジクロロフェニル尿素、N6-[4-デオキシ-4-[N2-[2E,4E-テトラデカジエノイル]グリシルアミノ]-L-グリセロ-B-L-マンノ-ヘプトピラノシル]アデニン、アプリジン、エクテイナシジン、トロキサシタビン、4-[2-アミノ-4-オキソ-4,6,7,8-テトラヒドロ-3H-ピリミジノ[5,4-b][1,4]チアジン-6-イル-S-エチル]-2,5-チエノイル-L-グルタミン酸、アミノプテリン、5-フルオロウラシル、アラノシン、11-アセチル-8-カルバモイルオキシメチル-4-ホルミル-6-メトキシ-14-オキサ-1,11-ジアザテトラシクロ7.4.1.0.0-テトラデカ-2,4,6-トリエン-9-イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、2’-シアノ-2’-デオキシ-N4-パリミトイル-1-B-D-アラビノフラノシルシトシンおよび3-アミノピリジン-2-カルボキサルデヒドチオセミカルバゾンなどが挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るモノクローナル抗体ターゲテッド治療用薬剤の例としては、がん細胞特異的または標的細胞特異的モノクローナル抗体に結合させた細胞傷害剤または放射性同位体を有する治療用薬剤例えば、Bexxarなどが挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るthatmaybeusedthatcanbeusedHMG-CoAレダクターゼ阻害薬の例としては、限定されないが、ロバスタチンMEVACOR登録商標;米国特許第4,231,938号、同第4,294,926号および同第4,319,039号参照、シムバスタチンZOCOR登録商標;米国特許第4,444,784号、同第4,820,850号および同第4,916,239号参照、ブラバスタチンPRAVACHOL登録商標;米国特許第4,346,227号、同第4,537,859号、同第4,410,629号、同第5,030,447号および同第5,180,589号参照、フルバスタチンLESCOL登録商標;米国特許第5,354,772号、同第4,911,165号、同第4,929,437号、同第5,189,164号、同第5,118,853号、同第5,290,946号および同第5,356,896号参照ならびにアトルバスタチンLIPITOR登録商標;米国特許第5,273,995号、同第4,681,893号、同第5,489,691号および同第5,342,952号参照が挙げられる。本発明の方法に使用され得るこれらおよびさらなるHMG-CoAレダクターゼ阻害薬の構造式M.Yalpani,CholesterolLoweringDrugs,ChemistryIndustry,pp.85-891996年2月5日の第87頁ならびに米国特許第4,782,084号および同第4,885,314号に記載されている。本発明の化合物と併用して使用され得るプレニル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬の例としては、限定されないが、以下の刊行物および特許:WO96/30343、WO97/18813、WO97/21701、WO97/23478、WO97/38665、WO98/28980、WO98/29119、WO95/32987号、米国特許第5,420,245号、米国特許第5,523,430号、米国特許第5,532,359号、米国特許第5,510,510号、米国特許第5,589,485号、米国特許第5,602,098号、欧州特許公開公報0618221、欧州特許公開公報0675112、欧州特許公開公報0604181、欧州特許公開公報0696593、WO94/19357、WO95/08542、WO95/11917、WO95/12612、WO95/12572、WO95/10514号、米国特許第5,661,152号、WO95/10515、WO95/10516、WO95/24612、WO95/34535、WO95/25086、WO96/05529、WO96/06138、WO96/06193、WO96/16443、WO96/21701、WO96/21456、WO96/22278、WO96/24611、WO96/24612、WO96/05168、WO96/05169、WO96/00736号、米国特許第5,571,792号、WO96/17861、WO96/33159、WO96/34850、WO96/34851、WO96/30017、WO96/30018、WO96/30362、WO96/30363、WO96/31111、WO96/31477、WO96/31478、WO96/31501、WO97/00252、WO97/03047、WO97/03050、WO97/04785、WO97/02920、WO97/17070、WO97/23478、WO97/26246、WO97/30053、WO97/44350、WO98/02436、および米国特許第5,532,359号において知得され得るものが挙げられる。血管新生に対するプレニル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬の役割の一例については、EuropeanJ.ofCancer,Vol.35,No.9,pp.1394-14011999を参照のこと。本発明の化合物と併用して使用され得る血管新生阻害薬の例としては、限定されないが、チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、チロシンキナーゼ受容体Flt-1VEGFR1およびFlk-1/KDRVEGFR2の阻害薬、上皮由来、線維芽細胞由来または血小板由来増殖因子の阻害薬、MMPマトリックスメタロプロテアーゼ阻害薬、インテグリン遮断薬、インターフェロン-α、インターロイキン-12、多硫酸ペントサン、シクロオキシゲナーゼ阻害薬、例えば、非ステロイド系抗炎症薬NSAIDアスピリンおよびイブプロフェンなどならびに選択的シクロオキシゲナーゼ-2阻害薬セレコキシブおよびロフェコキシブなどが挙げられるPNAS,Vol.89,p.73841992;JNCI,Vol.69,p.4751982;Arch.Opthalmol,Vol.108,p.5731990;Anat.Rec,Vol.238,p.681994;FEBSLetters,Vol.372,p.831995;Clin,Orthop.Vol.313,p.761995;JMol.Endocrinol,Vol.16,p.1071996;Jpn.J.Pharmacol,Vol.75,p.1051997;CancerRes.,Vol.57,p.16251997;Cell,Vol.93,p.7051998;Intl.J.Mol.Med.,Vol.2,p.7151998;JBiol.Chem.,Vol.274,p.91161999、ステロイド系抗炎症薬コルチコステロイド、鉱質コルチコイド、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレド、ベタメタゾンなど、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンA-4、スクアラミン、6-O-クロロアセチル-カルボニル-フマギロール、サリドマイド、アンギオスタチン、トロポニン-1、アンギオテンシンII拮抗薬Fernandezら,JLab.Clin.Med.105:141-1451985参照、およびVEGFに対する抗体NatureBiotechnology,Vol.17,pp.963-9681999年10月;Kimら,Nature,362,841-8441993;WO00/44777;およびWO00/61186参照。また、血管新生をモジュレートまたは阻害する他の治療用薬剤も本発明の化合物と併用して使用され得、凝固系およびフィブリン溶解系をモジュレートまたは阻害する薬剤が挙げられるClin.Chem.La.Med.38:679-6922000の概説を参照のこと。本発明の化合物と併用して使用され得るかかる凝固経路およびフィブリン溶解経路をモジュレートまたは阻害する薬剤の例としては、限定されないが、ヘパリンThromb.Haemost.80:10-231998参照、低分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼU阻害薬活性トロンビン活性化性フィブリン溶解阻害薬[TAFIa]の阻害薬としても知られているThrombosisRes.101:329-3542001参照が挙げられる。TAFIa阻害薬は、PCT公開公報WO03/013,526および米国特許出願第60/349,925号2002年1月18日出願に記載されている。本発明の化合物と併用して使用され得る細胞周期のチェックポイントに干渉する薬剤の例としては、限定されないが、ATR、ATM、ChklおよびChk2キナーゼの阻害薬ならびにCdkおよびcdcキナーゼ阻害薬が挙げられ、特に、7-ヒドロキシスタウロスポリン、フラボピリドール、CYC202CyclacelおよびBMS-387032が例示される。本発明の化合物と併用して使用され得る受容体チロシンキナーゼRTKに干渉する薬剤の例としては、限定されないが、c-Kit、Eph、PDGF、Flt3およびHBVの阻害薬が挙げられる。さらなる薬剤としては、Bume-JensenおよびHunter,Nature,411:355-365,2001に記載のRTKの阻害薬が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る細胞の増殖および生存のシグナル伝達経路の阻害薬の例としては、限定されないが、EGFRの阻害薬例えば、ゲフィチニブおよびエルロチニブ、ERB-2の阻害薬例えば、トラスツズマブ、IGFRの阻害薬、サイトカイン受容体の阻害薬、HBVの阻害薬、PI3Kの阻害薬例えば、LY294002、セリン/トレオニンキナーゼ例えば限定されないが、WO02/083064、WO02/083139、WO02/083140、US2004-0116432、WO02/083138、US2004-0102360、WO03/086404、WO03/086279、WO03/086394、WO03/084473、WO03/086403、WO2004/041162、WO2004/096131、WO2004/096129、WO2004/096135、WO2004/096130、WO2005/100356、WO2005/100344などに記載のAktの阻害薬、Rafキナーゼの阻害薬例えば、BAY-43-9006、MEKの阻害薬例えば、CI-1040およびPD-098059ならびにmTORの阻害薬例えば、WyethCCI-779が挙げられる。かかる薬剤としては、小分子阻害薬化合物および抗体拮抗薬が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るアポトーシス誘導剤の例としては、限定されないが、TNF受容体ファミリー構成員例えば、TRAIL受容体の活性化薬が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る選択的COX-2阻害薬であるNSAIDの例としては、限定されないが、米国特許5,474,995、米国特許5,861,419、米国特許6,001,843、米国特許6,020,343、米国特許5,409,944、米国特許5,436,265、米国特許5,536,752、米国特許5,550,142、米国特許5,604,260、U.S.5,698,584、米国特許5,710,140、WO94/15932、米国特許5,344,991、米国特許5,134,142、米国特許5,380,738、米国特許5,393,790、米国特許5,466,823、米国特許5,633,272、および米国特許5,932,598号これらはすべて、引用により本明細書に組み込まれるに開示されたNSAIDが挙げられる。本発明の化合物との併用に特に有用なCOX-2の阻害薬としては:3-フェニル-4-4-メチルスルホニルフェニル-2-5H-フラノン;および5-クロロ-3-4-メチルスルホニル-フェニル-2-2-メチル-5-ピリジニルピリジン;またはその薬学的に許容され得る塩が挙げられる。COX-2の特異的阻害薬と報告されており、したがって本発明に有用である化合物としては、限定されないが:パレコキシブ、CELEBREX登録商標およびBEXTRA登録商標またはその薬学的に許容され得る塩が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得る血管新生阻害薬の例としては、限定されないが、エンドスタチン、ユークレインukrain、ランピルナーゼ、IM862、5-メトキシ-4-[2-メチル-3-3-メチル-2-ブテニルオキシラニル]-1-オキサスピロ[2,5]オクタ-6-イルクロロアセチルカルバメート、アセチルジナナリン、5-アミノ-1-[[3,5-ジクロロ-4-4-クロロベンゾイル-フェニル]メチル]-1H-1,2,3-トリアゾール-4-カルボキサミド、CM101、スクアラミン、コンブレタスタチン、RPI4610、NX31838、硫酸化マンノペンタノースリン酸、7,7-カルボニル-ビス[イミノ-N-メチル-4,2-ピロロカルボニルイミノ[N-メチル-4,2-ピロール]-カルボニルイミノ]-ビス-1,3-ナフタレンジスルホネート、および3-[2,4-ジメチルピロル-5-イルメチレン]-2-インドリノンSU5416が挙げられる。本発明の化合物と併用して使用され得るチロシンキナーゼ阻害薬の例としては、限定されないが、N-トリフルオロメチルフェニル-5-メチルイソオキサゾル-4-カルボキサミド、3-[2,4-ジメチルピロル-5-イルメチリデニルインドリン-2-オン、17-アリルアミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン、4-3-クロロ-4-フルオロフェニルアミノ-7-メトキシ-6-[3-4-モルホリニルプロポキシル]キナゾリン、N-3-エチニルフェニル-6,7-ビス2-メトキシエトキシ-4-キナゾリンアミン、BIBX1382、2,3,9,10,11,12-ヘキサヒドロ-10-ヒドロキシメチル-10-ヒドロキシ-9-メチル-9,12-エポキシ-1H-ジインドロ[1,2,3-fg:3’,2’,1’-kl]ピロロ[3,4-i][1,6]ベンゾジアゾシン-1-オン、SH268、ゲニステイン、イマチニブSTI571、CEP2563、4-3-クロロフェニルアミノ-5,6-ジメチル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジンメタンスルホネート、4-3-ブロモ-4-ヒドロキシフェニルアミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン、4-4’-ヒドロキシフェニルアミノ-6,7-ジメトキシキナゾリン、SU6668、STI571A、N-4-クロロフェニル-4-4-ピリジルメチル-1-フタラジンアミン、およびEMD121974が挙げられる。抗がん化合物以外の化合物との併用も、本発明の組成物および方法に包含される。例えば、本発明の特許請求の範囲に記載の化合物とPPAR-γすなわち、PPAR-ガンマ作動薬およびPPAR-δすなわち、PPAR-デルタ作動薬との併用は、特定の悪性疾患の処置に有用である。PPAR-γおよびPPAR-δは、核ペルオキシソーム増殖因子活性化型受容体γおよびδである。内皮細胞でのPPAR-γの発現およびその血管新生における関与が文献に報告されているJCardiovasc.Pharmacol.31:909-9131998;JBiol.Chem.274:9116-91211999;Invest.OphthalmolVis.Sci.41:2309-23172000参照。ごく最近、PPAR-γ作動薬は、インビトロでVEGFに対する血管新生応答を阻害することが示された;トログリタゾンおよびロシグリタゾンマレイン酸はどちらも、マウスにおいて、網膜の新血管形成の発達を抑止するArch.Ophthamol.119:709-7172001。本発明の化合物と併用して使用され得るPPAR-γ作動薬およびPPAR-γ/α作動薬の例としては、限定されないが、チアゾリジンジオンDRF2725、CS-011、トログリタゾン、ロシグリタゾン、およびピオグリタゾンなど、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロゲムフィブロジル、GW2570、SB219994、AR-H039242、JTT-501、MCC-555、GW2331、GW409544、NN2344、KRP297、NP0110、DRF4158、NN622、GI262570、PNU182716、DRF552926、2-[5,7-ジプロピル-3-トリフルオロメチル-1,2-ベンゾイソオキサゾル-6-イルオキシ]-2-メチルプロピオン酸USSN09/782,856に開示、ならびに2R-7-3-2-クロロ-4-4-フルオロフェノキシフェノキシプロポキシ-2-エチルクロマン-2-カルボン酸USSN60/235,708および60/244,697に開示が挙げられる。本発明の別の実施形態は、がん処置のための遺伝子療法との併用での本開示の化合物の使用である。がんを処置するための遺伝子的ストラテジーの概説については、HallらAmJHumGenet61:785-7891997およびKufeらCancerMedicine,第5版,pp876-889,BCDecker,Hamilton,2000を参照のこと。遺伝子療法は、任意の腫瘍抑制遺伝子を送達するために使用され得る。かかる遺伝子の例としては、限定されないが、p53これは、組換えウイルス媒介性遺伝子導入によって送達され得る例えば、米国特許第6,069,134号参照、uPA/uPAR拮抗薬Adenovirus-MediatedDeliveryofauPA/uPARAntagonistSuppressesAngiogenesis-DependentTumorGrowthandDisseminationinMice,GeneTherapy,August58:1105-131998、およびインターフェロンγJImmunol164:217-2222000が挙げられる。また、本発明の化合物を、固有の多剤耐性MDRの阻害薬、特に、輸送体タンパク質の高レベル発現と関連しているMDRの阻害薬と併用して投与してもよい。かかるMDR阻害薬としては、p-糖タンパク質P-gpの阻害薬、例えば、LY335979、XR9576、OC144-093、R101922、VX853およびPSC833バルスポダールが挙げられる。本発明の化合物を、単独または放射線療法との本発明の化合物の使用に起因するものであり得る悪心または嘔吐、例えば、急性、遅延型、後期および期待的嘔吐を処置するために、制吐剤と併せて使用してもよい。嘔吐の予防または処置のため、本発明の化合物を、他の制吐剤、特に、ニューロキニン-1受容体拮抗薬、5HT3受容体拮抗薬、例えば、オンダンセトロン、グラニセトロン、トロピセトロンおよびザチセトロン、GABAB受容体作動薬、例えば、バクロフェン、コルチコステロイド、例えば、デカドロンデキサメタゾン、ケナログ、アリストコート、ナサリド、プレフェリドPreferid、ベネコルテンBenecortenまたはその他のもの米国特許第2,789,118号、同第2,990,401号、同第3,048,581号、同第3,126,375号、同第3,929,768号、同第3,996,359号、同第3,928,326号および同第3,749,712号に開示されたものなど、抗ドパミン薬、例えば、フェノチアジン例えば、プロクロルペラジン、フルフェナジン、チオリダジンおよびメソリダジン、メトクロプラミドまたはドロナビノールと併せて使用してもよい。一実施形態では、ニューロキニン-1受容体拮抗薬、5HT3受容体拮抗薬およびコルチコステロイドから選択される抗嘔吐剤が、本発明の化合物の投与によるものであり得る嘔吐の処置または予防のための佐剤として投与される。本発明の化合物と併せるのに有用なニューロキニン-1受容体拮抗薬は、例えば、米国特許第5,162,339号、同第5,232,929号、同第5,242,930号、同第5,373,003号、同第5,387,595号、同第5,459,270号、同第5,494,926号、同第5,496,833号、同第5,637,699号、同第5,719,147号;欧州特許公開公報番号EP0360390、0394989、0428434、0429366、0430771、0436334、0443132、0482539、0498069、0499313、0512901、0512902、0514273、0514274、0514275、0514276、0515681、0517589、0520555、0522808、0528495、0532456、0533280、0536817、0545478、0558156、0577394、0585913,0590152、0599538、0610793、0634402、0686629、0693489、0694535、0699655、0699674、0707006、0708101、0709375、0709376、0714891、0723959、0733632および0776893;PCT国際特許公開公報番号WO90/05525、90/05729、91/09844、91/18899、92/01688、92/06079、92/12151、92/15585、92/17449、92/20661、92/20676、92/21677、92/22569、93/00330、93/00331、93/01159、93/01165、93/01169、93/01170、93/06099、93/09116、93/10073、93/14084、93/14113、93/18023、93/19064、93/21155、93/21181、93/23380、93/24465、94/00440、94/01402、94/02461、94/02595、94/03429、94/03445、94/04494、94/04496、94/05625、94/07843、94/08997、94/10165、94/10167、94/10168、94/10170、94/11368、94/13639、94/13663、94/14767、94/15903、94/19320、94/19323、94/20500、94/26735、94/26740、94/29309、95/02595、95/04040、95/04042、95/06645、95/07886、95/07908、95/08549、95/11880、95/14017、95/15311、95/16679、95/17382、95/18124、95/18129、95/19344、95/20575、95/21819、95/22525、95/23798、95/26338、95/28418、95/30674、95/30687、95/33744、96/05181、96/05193、96/05203、96/06094、96/07649、96/10562、96/16939、96/18643、96/20197、96/21661、96/29304、96/29317、96/29326、96/29328、96/31214、96/32385、96/37489、97/01553、97/01554、97/03066、97/08144、97/14671、97/17362、97/18206、97/19084、97/19942および97/21702;ならびに英国特許公開公報番号2266529、2268931、2269170、2269590、2271774、2292144、2293168、2293169、および2302689に充分に記載されている。かかる化合物の調製は、前述の特許および公開公報引用により本明細書に組み込まれるに充分に記載されている。一実施形態では、本発明の化合物と併せての使用のためのニューロキニン-1受容体拮抗薬は:2-R-1-R-3,5-ビストリフルオロメチル-フェニルエトキシ-3-S-4-フルオロフェニル-4-3-5-オキソ-1H,4H-1,2,4-トリアゾロメチルモルホリン、またはその薬学的に許容され得る塩これは、米国特許第5,719,147号に記載されているから選択される。また、本発明の化合物を、貧血の処置に有用な薬剤と投与してもよい。かかる貧血処置剤は、例えば、連続赤血球生成eythropoiesis受容体活性化薬エポエチンアルファなどである。また、本発明の化合物を、好中球減少症の処置に有用な薬剤と投与してもよい。かかる好中球減少症処置剤は、例えば、好中球の生成および機能を調節する造血系増殖因子、例えば、ヒト顆粒球コロニー刺激因子G-CSFである。G-CSFの例としては、フィルグラスチムおよびPEG-フィルグラスチムが挙げられる。また、本発明の化合物を、免疫学的増強薬レバミゾール、イソプリノシンおよびザダキシンなどと投与してもよい。また、本発明の化合物は、他のsiNA療法薬と併用する肝臓疾患またはがんの処置または予防にも有用であり得る。また、本発明の化合物を、γ-セクレターゼ阻害薬および/またはNOTCHシグナル伝達の阻害薬と併用して投与してもよい。かかる阻害薬としては、WO01/90084、WO02/30912、WO01/70677、WO03/013506、WO02/36555、WO03/093252、WO03/093264、WO03/093251、WO03/093253、WO2004/039800、WO2004/039370、WO2005/030731、WO2005/014553、USSN10/957,251、WO2004/089911、WO02/081435、WO02/081433、WO03/018543、WO2004/031137、WO2004/031139、WO2004/031138、WO2004/101538、WO2004/101539およびWO02/47671例えば、LY-450139に記載された化合物が挙げられる。また、本発明の化合物は、PARP阻害薬と併用するがんの処置または予防にも有用であり得る。また、本発明の化合物は、以下の治療用薬剤:アバレリクスPlenaxisdepot登録商標;アルデスロイキンProkine登録商標;アルデスロイキンProleukin登録商標;アレムツズマブCampath登録商標;アリトレチノインPanretin登録商標;アロプリノールZyloprim登録商標;アルトレタミンHexalen登録商標;アミホスチンEthyol登録商標;アナストロゾールArimidex登録商標;三酸化ヒ素Trisenox登録商標;アスパラギナーゼElspar登録商標;アザシチジンVidaza登録商標;塩酸ベンダムスチンTreanda登録商標;ベバシズマブbevacuzimabAvastin登録商標;ベキサロテンカプセル剤Targretin登録商標;ベキサロテンゲル剤Targretin登録商標;ブレオマイシンBlenoxane登録商標;ボルテゾミブVelcade登録商標;ブレフェルディンA;静脈内ブスルファンBusulfex登録商標;経口ブスルファンMyleran登録商標;カルステロンMethosarb登録商標;カペシタビンXeloda登録商標;カルボプラチンParaplatin登録商標;カルムスチンBCNU登録商標、BiCNU登録商標;カルムスチンGliadel登録商標;カルムスチンとPolifeprosan20ImplantGliadelWafer登録商標;セレコキシブCelebrex登録商標;セツキシマブErbitux登録商標;クロラムブシルLeukeran登録商標;シスプラチンPlatinol登録商標;クラドリビンLeustatin登録商標、2-CdA登録商標;クロファラビンClolar登録商標;シクロホスファミドCytoxan登録商標、Neosar登録商標;シクロホスファミドCytoxanInjection登録商標;シクロホスファミドCytoxanTablet登録商標;シタラビンCytosar-U登録商標;リポソームシタラビンDepoCyt登録商標;デカルバジンDTIC-Dome登録商標;ダクチノマイシン、アクチノマイシンDCosmegen登録商標;ダルテパリンナトリウム注射剤Fragmin登録商標;ダルベポエチンαAranesp登録商標;ダサチニブSprycel登録商標;リポソームダウノルビシンDanuoXome登録商標;ダウノルビシン、ダウノマイシンDaunorubicin登録商標;ダウノルビシン、ダウノマイシンCerubidine登録商標;デガレリクスFirmagon登録商標;デニロイキンジフチトクスOntak登録商標;デクスラゾキサンZinecard登録商標;塩酸デクスラゾキサンTotect登録商標;ジデムニンB;17-DMAG;ドセタキセルTaxotere登録商標;ドキソルビシンAdriamycinPFS登録商標;ドキソルビシンAdriamycin登録商標、Rubex登録商標;ドキソルビシンAdriamycinPFSInjection登録商標;リポソームドキソルビシンDoxil登録商標;プロピオン酸ドロモスタノロンDromostanolone登録商標;プロピオン酸ドロモスタノロンMasteroneInjection登録商標;エクリズマブ注射剤Soliris登録商標;エリオットB液Elliott’sBSolution登録商標;エルトロンボパグPromacta登録商標;エピルビシンEllence登録商標;エポエチンαepogen登録商標;エルロチニブTarceva登録商標;エストラムスチンEmcyt登録商標;エチニルエストラジオール;エトポシドリン酸Etopophos登録商標;エトポシド、VP-16Vepesid登録商標;エベロリムス錠剤Afinitor登録商標;エキセメスタンAromasin登録商標;フェルモキシトールFerahemeInjection登録商標;FilgrastimNeupogen登録商標;フロクスウリジン動脈内FUDR登録商標;フルダラビンFludara登録商標;フルオロウラシル、5-FUAdrucil登録商標;フルベストラントFaslodex登録商標;ゲフィチニブIressa登録商標;ゲルダナマイシン;ゲムシタビンGemzar登録商標;ゲムツヅマブオゾガミシンMylotarg登録商標;酢酸ゴセレリンZoladexImplant登録商標;酢酸ゴセレリンZoladex登録商標;酢酸ヒストレリンHistrelinimplant登録商標;ヒドロキシ尿素Hydrea登録商標;イブリツモマブチウキセタンZevalin登録商標;イダルビシンIdamycin登録商標;イホスファミドIFEX登録商標;メシル酸イマチニブGleevec登録商標;インターフェロンα2aRoferonA登録商標;インターフェロンα-2bIntronA登録商標;イオベングアンI123注射剤AdreView登録商標;イリノテカンCamptosar登録商標;イキサベピロンIxempra登録商標;ラパチニブ錠剤Tykerb登録商標;レナリドミドRevlimid登録商標;レトロゾールFemara登録商標;ロイコボリンWellcovorin登録商標、Leucovorin登録商標;酢酸ロイプロリドEligard登録商標;レバミゾールErgamiso1登録商標;ロムスチン、CCNUCeeBU登録商標;メクロレタミン、ナイトロジェンマスタードMustargen登録商標;酢酸メゲストロールMegace登録商標;メルファラン、L-PAMAlkeran登録商標;メルカプトプリン、6-MPPurinethol登録商標;メンサMesnex登録商標;メンサMesnextabs登録商標;メトトレキサートMethotrexate登録商標;メトキサレンUvadex登録商標;8-メトキシソラレン;ミトマイシンCMutamycin登録商標;ミトタンLysodren登録商標;ミトザントロンNovantrone登録商標;ミトラマイシン;ナンドロロンフェンプロピオナートDurabolin-50登録商標;ネララビンArranon登録商標;ニロチニブTasigna登録商標;ノフェツモマブVerluma登録商標;オファツムマブArzerra登録商標;オプレルベキンNeumega登録商標;オキサリプラチンEloxatin登録商標;パクリタキセルPaxene登録商標;パクリタキセルTaxol登録商標;パクリタキセルタンパク質結合粒子Abraxane登録商標;パリフェルミンKepivance登録商標;パミドロネートAredia登録商標;パニツムマブVectibix登録商標;パゾパニブ錠剤Votrienttm登録商標;ペガデマーゼAdagenPegademaseBovine登録商標;ペガスパルガーゼOncaspar登録商標;ペグフィルグラスチムNeulasta登録商標;ペメトレキセド二ナトリウムAlimta登録商標;ペントスタチンNipent登録商標;ピポブロマンVercyte登録商標;プレリキサホルMozobil登録商標;プリカマイシン、ミトラマイシンMithracin登録商標;ポルフィマールナトリウムPhotofrin登録商標;プララトレキサート注射剤Folotyn登録商標;プロカルバジンMatulane登録商標;キナクリンAtabrine登録商標;ラパマイシン;ラスブリカーゼElitek登録商標;塩酸ラロキシフェンEvista登録商標;リツキシマブRituxan登録商標;ロミデプシンIstodax登録商標;ロミプロスチムNplate登録商標;サルグラモスチムLeukine登録商標;サルグラモスチムProkine登録商標;ソラフェニブNexavar登録商標;ストレプトゾシンZanosar登録商標;マレイン酸スニチニブSutent登録商標;タルクSclerosol登録商標;タモキシフェンNolvadex登録商標;テモゾロミドTemodar登録商標;テムシロシムスTorisel登録商標;テニポシド、VM-26Vumon登録商標;テストラクトンTeslac登録商標;チオグアニン、6-TGThioguanine登録商標;チオプリン;チオテパThioplex登録商標;トポテカンHycamtin登録商標;トレミフェンFareston登録商標;トシツモマブBexxar登録商標;トシツモマブ/I-131トシツモマブBexxar登録商標;トランス-レチノイン酸;トラスツヅマブHerceptin登録商標;トレチノイン、ATRAVesanoid登録商標;トリエチレンメラミン;ウラシルマスタードUracilMustardCapsules登録商標;バルルビシンValstar登録商標;ビンブラスチンVelban登録商標;ビンクリスチンOncovin登録商標;ビノレルビンNavelbine登録商標;ボリノスタットZolinza登録商標;ウォルトマニン;およびゾレドロネートZometa登録商標と併用するがんの処置にも有用であり得る。上記の併用は、医薬製剤の形態での使用のために簡便に提示され得、したがって、上記の併用を薬学的に許容され得る希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物は、本発明のさらなる態様を表す。かかる併用の個々の化合物は、逐次または同時のいずれかで、別々の医薬製剤または併合医薬製剤にて投与され得る。一実施形態において、該個々の化合物は併合医薬製剤にて同時投与される。したがって、記載の分子は、当該技術分野で知られた他のHBV阻害薬などの、被検体または生物体において本明細書に記載の疾患、障害、病状および形質を予防または処置するための1種類以上の既知の化合物、処置薬または手順と併用して使用され得る。3.治療適用用途現在のHBVの研究における一連の知見により、治療的使用のためのHBV発現が調節され得る方法の必要性が示されている。したがって、本発明の一態様は、HBV感染またはHBV遺伝子発現の作用によって媒介される病状に苦しんでいる被検体例えば限定されないが、ヒトの処置方法であって、前記被検体に有効量の本発明の二本鎖siNA分子を投与することを含む方法を含む。この態様の一実施形態では、該siNA分子は、配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4もしくは配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むものである。この態様の一部の実施形態において、該病状はがんである。したがって、一部の特定の実施形態では、本発明の分子および組成物は、がんの処置方法、特に肝細胞癌HCCの処置方法に有用である。一部の実施形態では、該病状は肝臓疾患である。したがって、一部の特定の実施形態では、本発明の分子および組成物は、肝臓疾患の処置方法、特に肝硬変の処置方法に有用である。一部の特定の実施形態において、該siNA分子の投与は局所投与または全身投与によるものである。他の実施形態において、本発明は、被検体または生物体を本発明のsiNA分子と、該当する組織または細胞肺の細胞および組織などに対する局所投与によって、例えば、肺経由送達によって接触させることを特色とする。また他の実施形態では、本発明は、被検体または生物体を本発明のsiNA分子と、該被検体または生物体の該当する組織または細胞肝臓またはがん性の組織もしくは細胞への全身投与によって該siNAの静脈内または皮下投与などによって接触させることを特色とする。また、本発明のsiNA分子は、エキソビボ適用における試薬としても使用される。例えば、該siNA試薬は、治療効果のために被検体に移植される組織または細胞内に導入される。該細胞および/または組織は、後でその外植片を受容する生物体または被検体に由来するものであってもよく、移植前の別の生物体または被検体に由来するものであってもよい。該siNA分子は、細胞または組織内の1つ以上の遺伝子の発現を、該細胞または組織がインビボで移植されたら所望の表現型が得られるように、または機能が発揮されるようにモジュレートするために使用され得る。一実施形態では、患者由来の特定のHBV標的細胞を抽出する。抽出したこの細胞を、該細胞内の特定のヌクレオチド配列を標的化するHBVsiNAと、該細胞による該siNAの取込みに適した条件下で接触させる例えば、カチオン性脂質、リポソームなどの送達試薬を使用するか、または細胞内へのsiNAの送達を助長するエレクトロポレーションなどの手法を使用する。次いで、該細胞を同じ患者または他の患者に再導入して戻す。治療適用用途では、医薬有効用量の本発明のsiNA分子または医薬組成物が被検体に投与される。医薬有効用量は、疾患状態を予防する、その発生を抑止する、または疾患状態を処置する症状をある程度、好ましくはあらゆる症状を緩和するために必要とされる用量である。当業者は、被検体の体格および体重、疾患の進行または浸透の程度、被検体の年齢、健康状態および性別、投与経路ならびに投与が局所であるか全身性であるかなどの要素を考慮することにより、所与の被検体に投与される本発明のsiNAの治療有効用量を容易に決定することができよう。一般的に、負電荷ポリマーの効力に応じて0.1μg/kg~100mg/kg体重/日の量の活性成分が投与される。最適な投与スケジュールは、患者の体内の薬物蓄積の測定値から計算され得る。本発明のsiNA分子は、単回用量で投与してもよく、反復用量で投与してもよい。本発明のsiNA分子は、1ヶ月に1回、週に1回、1日1回QD投与してもよく、1ヶ月、1週間または1日の間に多数回例えば限定されないが、1日2回BID、1日3回TID、2週間に1回などの用量に分けてもよい。当業者は、投与の反復率を、測定された滞留時間および体液または組織中の薬物の濃度に基づいて容易に推定することができよう。また、投与は連続的であってもよくすなわち、毎日、断続的であってもよい。例えば、本発明の化合物の断続的投与は、1週間に1~6日の投与であってもよく、サイクルでの投与を意味するものであってもよく例えば、連続2~8週間の毎日の投与、次いで最大1週間の投与なしの休薬期間、隔日での投与を意味するものであってもよい。G.投与該組成物または製剤は、さまざまな様式で投与され得る。本発明の投与方法の非限定的な例としては、経口、口腔内、舌下、非経口すなわち、関節内、静脈内、腹腔内、皮下、もしくは筋肉内、局所経直腸投与または他の局所投与が挙げられる。一実施形態において、本発明の組成物は、吹送および吸入によって投与され得る。該投与は、単回用量で行なっても分割用量で行なってもよい。一部の実施形態において、医薬組成物は、ボーラス注射によって静脈内または腹腔内投与される例えば、米国特許第5,286,634号を参照のこと。脂質核酸粒子は、疾患部位への直接注射によって投与してもよく、疾患部位から遠位の部位への注射によって投与してもよい例えば、Culver,HUMANGENETHERAPY,MaryAnnLiebert,Inc.,Publishers,NewYork.pp.70-711994を参照のこと。一実施形態において、本発明のsiNA分子およびその製剤または組成物は、本明細書に記載した、および当該技術分野で一般的に知られた細胞、被検体または生物体に投与される。1.インビボ投与本発明の任意の処置方法において、該siNAは被検体に、本明細書に記載のようにして、あるいは当該技術分野で知られているようにして、単独療法剤として単独で、または本明細書に記載した、もしくは当該技術分野で知られたさらなる治療薬との併用でのいずれかで、全身投与され得る。全身投与としては、例えば、当該技術分野で一般的に知られた肺経由吸入、噴霧化など、静脈内、皮下、筋肉内、カテーテル法、鼻咽頭経由、経皮、または経口/胃腸投与が挙げられ得る。本発明の任意の処置方法または予防方法において、該siNAは被検体に対し、本明細書に記載のようにして、あるいは、当該技術分野で知られているようにして、単独療法剤として単独で、または当該技術分野で知られたさらなる治療薬との併用でのいずれかで、局所投与または局所組織に投与され得る。局所投与としては、例えば、当該技術分野で一般的に知られた吸入、噴霧化、カテーテル法、埋入、直接注射、経真皮/経皮適用、貼付剤、ステント挿入、点耳剤/点眼剤、または該当組織への門脈投与、または任意の他の局所投与手法、方法もしくは処置が挙げられ得る。一実施形態において、本発明のsiNA分子およびその製剤または組成物は、肝臓に、当該技術分野で一般的に知られているようにして投与される例えば、Wenら,2004,WorldJGastroenterol.,10,244-9;Muraoら,2002,PharmRes.,19,1808-14;Liuら,2003,geneTher,10,180-7;Hongら,2003,JPharmPharmacol.,54,51-8;Herrmannら,2004,ArchVirol.,149,1611-7;およびMatsunoら,2003,geneTher.,10,1559-66を参照のこと。一実施形態において、本発明は、単球およびリンパ球などの造血系細胞への本発明のsiNA分子の送達方法の使用を特色とする。このような方法は、Hartmannら,1998,J.Phamacol.Exp.Ther.,2852,920-928;Kronenwettら,1998,Blood,913,852-862;FilionおよびPhillips,1997,Biochim.Biophys.Acta.,13292,345-356;MaおよびWei,1996,Leuk.Res.,2011/12,925-930;ならびにBongartzら,1994,NucleicAcidsResearch,2222,4681-8に詳細に記載されている。一実施形態において、本発明のsiNA分子およびその製剤または組成物は、真皮または小胞に、直接または経表面的例えば、局所的に、当該技術分野で一般的に知られているようにして投与される例えば、Brand,2001,Curr.Opin.Mol.Ther.,3,244-8;Regnierら,1998,J.DrugTarget,5,275-89;Kanikkannan,2002,BioDrugs,16,339-47;Wraightら,2001,Pharmacol.Ther.,90,89-104;ならびにPreatおよびDujardin,2001,STPPharmaSciences,11,57-68を参照のこと。一実施形態において、本発明のsiNA分子およびその製剤または組成物は、直接または経表面的に、アルコール例えば、エタノールまたはイソプロパノール、水を含み、さらなる薬剤ミリスチン酸イソプロピルおよびカルボマー980などsuchを含んでいてもよい水性アルコールゲル製剤を用いて投与される。他の実施形態では、該siNAは、鼻腔に経表面投与するために製剤化される。経表面用調製物は、罹患領域に1日1回以上の適用によって投与され得る;皮膚領域全体の閉鎖包帯が好都合に使用され得る。連続または長期送達は、接着性レザーバ系によって行なわれ得る。一実施形態において、本発明のsiNA分子はイオン導入的に、例えば、特定の器官または区画例えば、目、眼底、心臓、肝臓、腎臓、膀胱、前立腺、腫瘍、CNSなどに投与される。イオン導入的送達の非限定的な例は、例えば、WO03/043689およびWO03/030989これは、引用によりその全体が本明細書に組み込まれるに記載されている。一実施形態において、本発明のsiNA分子およびその製剤または組成物は、肺に、本明細書に記載のようにして、および当該技術分野で一般的に知られているようにして投与される。別の実施形態では、本発明のsiNA分子およびその製剤または組成物は、肺の組織および細胞に、米国特許出願公開公報第2006/0062758号;同第2006/0014289号;および同第2004/0077540号に記載のようにして投与される。2.エアロゾル剤および送達デバイスa.エアロゾル製剤本発明の組成物は、単独、または他の適当な成分との併用でのいずれかで、エアロゾル製剤に作製されすなわち、霧状にされ得、吸入によって例えば、鼻腔内または気管内投与され得るBrighamら,Am.J.Sci.,298:2781989参照。エアロゾル製剤は、許容され得る加圧された噴射剤中例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などに収容され得る。一実施形態において、本発明のsiNA分子およびその製剤は肺経由送達によって、例えば、吸入デバイスまたはネブライザによって投与されるエアロゾル製剤または噴霧乾燥製剤の吸入によって投与され、該当する肺系組織内への該核酸分子の速やかな局所取込みをもたらす。微粉化核酸組成物の呼吸用乾燥粒子を含む固形微粒状組成物は、乾燥または凍結乾燥させた核酸組成物を磨砕し、次いで、この微粉化組成物を、例えば400メッシュスクリーンに通して大型凝集塊を分解または解離させることにより調製され得る。本発明のsiNA組成物を含む固形微粒状組成物に、エアロゾルの形成を助長する機能を果たす分散化剤ならびに他の治療用化合物を含めてもよい。好適な分散化剤はラクトースであり、これは、該核酸化合物と任意の適当な比率例えば、重量基準で1対1の比でブレンドされ得る。本発明のsiNA分子または組成物を含むスプレー剤組成物は、例えば、加圧パック定量吸入器などから適当な液化噴射剤の使用を伴って送達される水性の液剤もしくは懸濁剤として、またはエアロゾル剤として製剤化され得る。一実施形態において、吸入に適した本発明のエアロゾル剤組成物は懸濁剤または液剤のいずれかであり得、一般的には、配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4、もしくは配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むsiNA分子と、適当な噴射剤例えば、フルオロカーボンまたは水素含有クロロフルオロカーボンまたはその混合物、特に、ヒドロフルオロアルカン、特に、1,1,1,2-テトラフルオロエタン、1,1,1,2,3,3,3-ヘプタフルオロ-n-プロパン、またはその混合物を含むものである。エアロゾル剤組成物には、界面活性剤などの、当該技術分野でよく知られたさらなる製剤用賦形剤を含めてもよい。非限定的な例としては、オレイン酸、レシチンまたはオリゴ乳酸またはその誘導体W094/21229およびW098/34596に記載のものなどならびに共溶媒例えば、エタノールが挙げられる。一実施形態において、本発明の医薬エアロゾル製剤は、本発明の化合物と、噴射剤としてフルオロカーボンまたは水素含有クロロフルオロカーボンまたはその混合物界面活性剤および/または共溶媒と組み合わせてもよいとを含むものである。本発明のエアロゾル製剤は、適当な緩衝剤の添加によって緩衝されたものであってもよい。エアロゾル製剤には、製剤が滅菌状態に調製されていない場合、保存料などの添加剤を含めてもよい。非限定的な例としては、安息香酸メチルヒドロキシ、酸化防止剤、フレーバー、揮発油、緩衝剤および乳化剤および他の製剤用界面活性剤が挙げられる。一実施形態では、分解を低減させるため、およびより安全な生体適合性の本発明の非液状微粒状懸濁剤組成物例えば、siNAおよび/またはそのLNP製剤を提供するため、フルオロカーボンまたはパーフルオロカーボン担体が使用される。別の実施形態では、ネブライザを構成するデバイスにより、含フッ素化学物質これは静菌性であり、それにより適合性のデバイス内での微生物の増殖の可能性を減少させるを含む本発明の組成物例えば、siNAおよび/またはそのLNP製剤を送達する。吸入器または吹送器における使用のための本発明の組成物を含むカプセル剤およびカートリッジ剤は、例えばゼラチン製であり、本発明の化合物と適当な粉末基剤ラクトースまたはデンプンなどの吸入用粉末ミックスを含むように製剤化され得る。一実施形態において、各カプセル剤またはカートリッジ剤は、配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4、もしくは配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むsiNA分子と、1種類以上の賦形剤とを含む。別の実施形態では、本発明の化合物は、ラクトースなどの賦形剤なしで提示され得る。本発明のエアロゾル剤組成物は、呼吸器系内に、呼吸用サイズの粒子例えば、吸入すると鼻、口および喉頭を通過するのに充分小さいサイズの粒子を含む製剤として、肺の気管支および肺胞を介して投与され得る。一般に、呼吸用粒子は、サイズが約0.5~10ミクロンの範囲である。一実施形態において、該微粒状範囲は1~5ミクロンであり得る。別の実施形態では、微粒状範囲は2~3ミクロンであり得る。エアロゾル剤中に含まれた呼吸用でないサイズの粒子は、喉に堆積されて嚥下される傾向にあり、したがって、エアロゾル剤中の呼吸用でない粒子の量は最小限になる。経鼻投与では、鼻腔内での保持を確実にするため、10~500umの範囲の粒径が好ましい。一部の実施形態において、本発明のsiNA組成物は、鼻に、例えば鼻炎の処置のために加圧エアロゾル製剤、水性製剤によって経表面投与され、加圧ポンプまたは噴霧化によって鼻に投与される。好適な製剤は、この目的のための希釈剤または担体として水を含むものである。一部の特定の実施形態では、肺または鼻への本発明の組成物の投与のための水性製剤は、例えば、緩衝剤、張度改良剤などの慣用的な賦形剤を用いて提供され得る。b.デバイス本発明のsiNA分子は、上記に論考したような粒子および/またはエアロゾル剤として製剤化および送達され得、当業者に知られた種々のエアロゾル化デバイスから施薬され得る。本発明のsiNA分子または製剤を含む液状または非液状粒子のエアロゾル剤は、任意の適当な手段によって、例えば、ネブライザ例えば、米国特許4,501,729を参照のこと超音波式または空気ジェット式ネブライザなどを構成するデバイスを用いて作製され得る。本発明のsiNA分子または製剤と界面活性剤とを含む固形粒子エアロゾル剤は、任意の固形微粒状エアロゾル発生器を用いて作製され得る。本発明のsiNA分子に使用される固形粒子エアロゾル発生器の型の一例は吹送器である。実例としてのエアロゾル発生器の第2の型は、定量吸入器MDIを構成しているものである。本明細書において教示する該siNA分子または製剤を内包するMDIは、当該技術水準の方法によって調製され得る例えば、Byron上記およびWO96/32099参照。また、該siNA分子を、流動体ディスペンサーWO05/044354に説明および図解されているものなどからの送達のための流動体製剤として製剤化してもよい。本発明の一部の特定の実施形態では、意識があり自発呼吸する被検体および調節呼吸下のあらゆる年齢の被検体に対する適用において、ネブライザデバイスが使用される。ネブライザデバイスは、肺への経表面および全身性のターゲテッド薬物送達のために使用され得る。一実施形態において、ネブライザを構成するデバイスは、本発明のsiNA分子または製剤を肺または肺系組織に局所送達するために使用される。別の実施形態では、ネブライザを構成するデバイは、本発明のsiNA分子または製剤を全身送達するために使用される。H.本発明のsiNA分子の他の適用/使用本発明のsiNA分子はまた、診断適用、研究適用および/または医薬medicantの製造のためにも使用され得る。一態様において、本発明は、被検体の疾患、形質または病状の診断方法であって、被検体に本発明の組成物を、該被検体の該疾患、形質または病状の診断に適した条件下で投与することを含む方法を特色とする。一実施形態において、本発明のsiNA分子は、被検体または生物体の形質、疾患または病状と関連しているハプロタイプ多型によって生じるHBVタンパク質の発現を下方調節または阻害するために使用される。HBV遺伝子またはHBVタンパク質もしくはRNAレベルの解析は、かかる多型を有する被検体、または本明細書に記載の形質、病状もしくは疾患が発生するリスクのある被検体を特定するために使用され得る。このような被検体は、処置に対して、例えば、本発明のsiNA分子および標的遺伝子発現に関連する疾患の処置に有用な任意の他の組成物での処置に対して寛容である。そのため、HBVのタンパク質またはRNAレベルの解析を用いて、被検体の処置における処置の型および治療過程が決定され得る。HBVのタンパク質例えば、B型肝炎のコア抗原、もしくはHbcAg、HBV表面抗原例えば、HBsAgまたはRNAレベルのモニタリングは、処置の転帰を予測するため、ならびに形質、障害、病状または疾患と関連している特定のHBVタンパク質のレベルおよび/または活性をモジュレートする化合物および組成物の有効性を判定するために使用され得る。別の実施形態では、本発明は、医薬の製造における使用のための本発明による二本鎖核酸の使用を含む。一実施形態において、医薬は、HBV感染またはHBVの作用によって媒介される病状の処置における使用のためのものである。一実施形態では、医薬はHBV感染の処置における使用のためのものである。一部の実施形態では、医薬は、がんの処置における使用のためのものである。特別な一実施形態では、本発明の化合物は肝細胞癌の処置に有用である。一実施形態において、医薬は肝臓疾患の処置における使用のためのものである。特別な一実施形態では、本発明の化合物は肝硬変の処置に有用である。一部の特定の実施形態において、少なくとも一方の鎖が配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4もしくは配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むものであるsiNAは、HBV感染の処置方法における使用のためのものである。一部の特定の実施形態において、少なくとも一方の鎖が配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4もしくは配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むものであるsiNAは、がんの処置方法における使用のためのものである。一部の特定の実施形態において、少なくとも一方の鎖が配列番号:1、配列番号:452、配列番号:2、配列番号:453、配列番号:3、配列番号:454、配列番号:4もしくは配列番号:455の少なくとも15個のヌクレオチドの配列;または式Aを含むものであるsiNAは、肝臓疾患の処置方法における使用のためのものである。I.実施例次に、本発明を、以下の非限定的な例とともに説明する。当業者には、本質的に同じ結果が得られるように変更または修正され得るさまざまなノンクリティカルパラメータが容易に認識されよう。HBVに対するsiNA活性体の設計、合成および同定HBVsiNAの合成一連のsiNA分子を設計し、合成し、HBV遺伝子発現に対する有効性について評価した。HBV配列は、可能な19種類すべてのヌクレオチド配列をHBVゲノム血清型adw2受託番号X02763から選択し、次いで、これらの配列を表7に示した22種類の他のHBVサブタイプのゲノム配列と比較することにより設計して選択した。22種類すべてのゲノムと完璧なマッチを有するか、または22種類のゲノムのうち21種類に完璧なマッチと残りのゲノムに対して1つまたは2つのミスマッチを有する19種類のヌクレオチド配列を保留した。これらの配列を標準的なフィルタリング例えば、ヒトゲノムに対するオフターゲット、同じ塩基の連続run、ヒトmiRNAシード配列とのマッチに供した配列設計方法および標準的なフィルタリングについては、米国特許出願第60/182,605号も参照のこと。残りの候補は、プロプライエタリサイレンシング予測スコアによって分類し、特定の配列を選択した。ヒトsiNAのHBV配列の設計のための主な基準は、i多種類のHBV遺伝子型間および血清型間の相同性ならびにiiプロプライエタリアルゴリズムで測定したときの高い有効性スコアとした。選択したsiNAの標的配列を表1aに示す標的配列。表1aの標的配列に対応するsiNA配列のセンス鎖およびアンチセンス鎖を表1bに示す。合成した種々の化学修飾siNAを表1cに示す。標的配列の各オリゴヌクレオチドについて、siNAの2つの個々の相補鎖を、固相合成を用いて別々に合成し、次いで、逆相固相抽出SPEによって別々に精製した。相補鎖をアニーリングさせて二本鎖doublestrand/duplexを形成し、所望の濃度で選択したバッファーにて送達した。簡単には、一本鎖オリゴヌクレオチドを自動固相合成装置で、当該技術分野で一般的に知られた手順でホスホルアミダイト化学反応を用いて合成した例えば、米国特許出願第12/064,014号を参照のこと。合成用カラムには、第1ヌクレオシド残基天然または化学修飾体を用いて誘導体化した固相支持体を充填した。合成は、酸不安定性5’-O-ジメトキシトリチル基の脱トリチル化によって5’-ヒドロキシルを放出させることにより開始した。好適に保護したホスホルアミダイトと適当な活性化剤アセトニトリル中を、合成用カラムに同時に送達すると、5’-ヒドロキシルへのアミダイトのカップリングがもたらされた。次いで、カラムを溶媒アセトニトリルなどで洗浄した。酸化性溶液ヨウ素溶液などをカラム中にポンプ輸送し、亜リン酸トリエステル結合PIIIをそのホスホトリエステルPV類似体に酸化させた。未反応の5’-ヒドロキシル基を、2,6-ルチジンおよびN-メチルイミダゾールの存在下、無水酢酸などの試薬を用いてキャップした。次のホスホルアミダイトの組込みのため、脱トリチル化工程により伸長サイクルを再開させた。このプロセスを、所望の配列が合成されるまで繰り返した。合成は、最後の5’末端保護基トリチルまたは5’-O-ジメトキシトリチルを用いて終結させた。合成が終了したら、固相支持体と結合オリゴヌクレオチドをアルゴン圧下または真空下で乾燥させた。水性塩基を添加し、スクシニル結合の切断が行なわれるまで混合物を加熱し、リン酸シアノエチル保護基を除去し、環外アミン保護の脱保護を行なった。以下のプロセスを、リボヌクレオチドを含まない1種類の鎖において行なった。固相支持体を水性塩基で処理した後、混合物を濾過し、固相支持体を、脱保護された粗製合成物質から分離した。次いで、固相支持体を水ですすぎ洗浄し、これを濾液と合わせた。塩基性溶液が得られることにより、5’-O-ジメトキシトリチル基が保持され、5’末端の位置に残存することが可能になるトリチル-オン。リボヌクレオチドを含む1種類の鎖には、以下のプロセスを行なった。固相支持体を水性塩基で処理した後、混合物を濾過し、固相支持体を脱保護された粗製合成物質から分離した。次いで、固相支持体をジメチルスルホキシドDMSOですすぎ洗浄し、これを濾液と合わせた。この混合物に、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩などのフッ化物試薬を添加し、溶液を加熱した。反応液を適当なバッファーでクエンチし、最後の5’末端位置に5’-O-ジメトキシトリチル基を有する粗製の1種類の鎖の溶液を得た。粗製の1種類の鎖の各々のトリチル-オン溶液を、クロマトグラフィー精製SPERPC精製などを用いて精製した。トリチル基の疎水性の性質により、所望の完全長オリゴ体が、非トリチル化切断型の不完全配列よりも強力に保持されることが可能になる。不完全配列は、少量割合のアセトニトリルなどの適当な溶媒を用いて樹脂から選択的に洗い流した。次いで、保持されたオリゴヌクレオチドを、トリフルオロ酢酸を用いてカラム上で脱トリチル化し、酸不安定性トリチル基を除去した。残留している酸をカラムから洗い流し、塩交換を行ない、物質の最終脱塩を開始させた。完全長オリゴ体を、水性有機溶媒を用いて精製形態で回収した。次いで、最終生成物を、純度HPLC、実体Maldi-TOFMSおよび収率UVA260について解析した。オリゴ体を真空乾燥または真空濃縮によって乾燥させたアニーリング:生成物の解析に基づき、乾燥させたオリゴ体を適切なバッファーに溶解させた後、等モル量理論消衰係数を用いて計算のセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチド鎖を混合した。次いで、この溶液を、二本鎖の純度クロマトグラフィー法によりおよび所望の終濃度について解析した。解析でいずれかの鎖が過剰であることが示された場合は、過剰でないさらなる鎖を、二本鎖形成が完全になるまで滴定した。解析によって目的の生成物純度が得られたことが示された場合、該物質を送達し、使用可能状態とした。以下は、このプロトコルを用いて合成した、またはこのプロトコルを用いて、もしくは当該技術分野で知られた方法を用いて合成され得る種々の修飾siNAを示す表である。市販の調製物のさらなる合成工程アニーリング工程後に解析によって標的生成物の純度が得られたことが示されたら、該物質を、濃縮および脱塩のためにタンジェンシャルフロー濾過TFFシステムに移すこれをアニーリング工程の前に行なうのとは反対。限外濾過:アニーリング生成物の溶液を、適切な分子量カットオフ膜を含むTFFシステムを用いて濃縮する。濃縮後、この生成物の溶液をダイアフィルトレーションによってMilli-Q水を用いて、濾液の電導度が水のものになるまで脱塩する。凍結乾燥:濃縮された溶液をボトルに移し、フラッシュ凍結させ、凍結乾燥機に取り付ける。次いで、生成物をフリーズドライして粉末にする。ボトルを凍結乾燥機から取り出すと、使用可能状態になっている。初期スクリーニングプロトコル96ウェルプレートトランスフェクション細胞培養物の調製:ヒトヘパトーマ細胞株HepG2、またはマウスヘパトーマ細胞株Hepa1-6を、改変イーグル培地中で培養した。培養培地にはすべて、10ウシ胎仔血清、100μg/mLのストレプトマイシン、100U/mLのペニシリンおよび1重炭酸ナトリウムを補給した。トランスフェクションおよびスクリーニング部分HBVゲノムをpSiCheck2プラスミドPromega,Madison,WI内でウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子の下流のXhoI/NotI部位に挿入したプラスミドpSiCheck-HepB-Partial,参照ID:1104を作製した。それにより、ウミシイタケルシフェラーゼのmRNA転写物がHBV転写物の上流で発現され、したがって、HBVゲノムに標的化されるsiNASによりHBV転写物のノックダウンが引き起こされ、また、ウミシイタケルシフェラーゼ転写物のノックダウンももたらされる。ウミシイタケルシフェラーゼ転写物レベルは、ウミシイタケルシフェラーゼ活性の量を直接測定することmestuingにより測定され得る。また、このプラスミドにより、HBVsiNAに影響されないホタルルシフェラーゼの遺伝子も発現され、細胞をトランスフェクトしたプラスミドの量のばらつきあればを考慮するためにデータを標準化するのに使用することができる。この部分HBVゲノムは、2270ntのadw2遺伝子型AのHBVウイルスEcoRI部位をnt1としたときのnt158~2427からなるものであった。部分HBVDNA配列配列番号:503:細胞を、処理済組織培養96ウェルプレートのすべてのウェル内に、10000細胞/ウェルの最終計数で、100μLの適切な培養培地中にプレーティングした。細胞は、プレーティング後、5CO2の存在下で37°Cにて一晩培養した。翌日、siNA、pSiCheck-HepB-Partialプラスミド、およびLipofectamineInvitrogenを含む複合体を、以下のようにして作出した。500nMのsiNAと30ng/ulのプラスミドを含むsiNAとプラスミドの溶液を作製した。平行して、OPTI-MEMで33倍に希釈したLipofectamineの溶液を調製した。室温で5分間のRNAiMax/OPTI-MEM溶液のインキュベーション後、各siNAについて、等容量のsiNA溶液とRNAiMax溶液を一緒に添加した。混合すると、siNAの濃度が60nMであり、プラスミドが3.6ng/μlであるsiNA/RNAiMaxの溶液が生成された。この溶液を室温で20分間インキュベートした。インキュベーション後、20μLの溶液を、該当する各ウェルに添加した。各ウェル内のsiNAの終濃度を10nMとし、プラスミドは0.6ng/μlとした。各ウェル内のLipofectamineの最終容量を0.3ulとした。12点用量応答曲線試験のため、一連のsiNAを、30nMから初めて6倍連続希釈または40nMから初めて4倍連続希釈する。トランスフェクションはすべて、生物学的に多数の連で設定した。Lipofectamine-siNA複合体とのインキュベーション時間は48時間とし、トランスフェクションとスクリーニングおよび用量応答曲線試験のための収集とで培地は変えなかった。ルシフェラーゼアッセイ50μlのDual-GloTMFirefly試薬Promega,Madison,WIを96ウェルプレートの各ウェルに添加し、次いで、プレートを室温で10分間インキュベートした。次いで、ホタル発光の読み出しをWallacEnvisonプレートリーダーで、ルシフェラーゼプロトコルを用いて行なった。StopGlo基質Promega,Madison,WIの50μlの1:100希釈物を96ウェルプレートの各ウェルに添加し、次いで、プレートを室温で10分間インキュベートした。次いで、ウミシイタケ発光の読み出しをWallacEnvisonプレートリーダーで、ルシフェラーゼプロトコルを用いて行なった。計算対象遺伝子の発現レベルおよび遺伝子発現の阻害KDは比較法を用いて計算した。L_ホタル=log2ホタル発光光度L_ウミシイタケ=log2ウミシイタケ発光光度dL=L_ホタル-L_ウミシイタケddLlog2変化倍数=dL_siRNA-dL_NTC相対発現レベル=2-ddLKD=100×1-2-ddL最も関連性のある対照であるため、特に記載のない限り、非標的化用対照siNAを、遺伝子発現の阻害ノックダウンパーセントを計算する比較対象の値として選択した。さらに、標準化データこれは、細胞の一般的な健全状態および該プラスミドとsiNAの量を反映するのみを調べた。これは、処理細胞内の2種類の異なるmRNA第1のものは標的mRNAであり、第2のものは標準化体mRNAであるのレベルを調べることにより行なった。これは、各ウェル内のウミシイタケルシフェラーゼ標的のlog2発光を、プレート全体のホタルルシフェラーゼ標準化体のlog2発光と比較することにより行なわれる。これにより、対象遺伝子のノックダウンだけでなく、細胞に毒性の可能性があり得るsiNAの排除が可能であった。IC50の計算はすべて、R.2.9.2ソフトウェアを用いて行なった。データは、単純なリガンド結合に対するシグモイド用量応答傾き可変式を用いて解析した。阻害ノックダウンパーセントの計算ではすべて、計算は、特に記載のない限り、非標的化対照CtrlsiNAで処理した試料における対象遺伝子の標準化発現レベルに相対して行なった。結果:HBVsiNAは、先に記載のとおりにして設計し、合成した。種々のsiNAを、pSiCheck-HepB-PartialプラスミドでトランスフェクトしたHepG2またはHepa1-6細胞においてスクリーニングした。ヒト細胞において種々の修飾HBVsiNAで処理したときのHBVmRNA発現レベルのlog2変化倍数を表3aとbに示す。各スクリーニングは48時間目に、ルシフェラーゼアッセイ法を用いて行なった。ノックダウンを確認するため、および異なるプレートで合成したsiNAを直接比較するため、一次スクリーニングで大きなlog2変化倍数を有した表3aと表3bのsiNAのサブセットを、単一の96ウェルプレートに三連で再搭載し、pSiCheck_HepB-partialでトランスフェクトしたヒトHepG2細胞においてスクリーニングした。表4にデータをまとめる。siNAは、HBVmRNA発現レベルのlog2変化倍数に基づいてランク付けした。表4の選択した高ランキングlog2変化倍数値が大きいsiNAを、pSiCheck-HepB-partialプラスミドでトランスフェクトしたHepG2細胞において、有効性と効力についてさらに解析した。値を確立するため、細胞をsiNAの1:6連続用量滴定液で処理した。効力50は、50の標的mRNAのノックダウンがもたらされるsiNAトランスフェクション濃度の計算値である。これらのsiNAの結果を表5に示す。先のスクリーニングでの高ランキングlog2変化倍数値が大きく、効力50値が低いことに基づいて特定した表5の選択した上位成績配列に、次いで、パッセンジャー鎖とガイド鎖の両方に対して種々の化学修飾を合成した。次いで、これらのsiNAを有効性と効力について、pSiCheck-HepB-partialプラスミドでトランスフェクトしたHepa1-6細胞において解析した。ヒト細胞において種々の修飾HBVsiNAで処理したときのHBVmRNA発現レベルのlog2変化倍数を表6Aに示す。各スクリーニングは48時間目にルシフェラーゼluicferaseアッセイ法を用いて行なった。ノックダウンを確認するため、および異なるプレートで合成したsiNAを直接比較するため、一次スクリーニングで大きなlog2変化倍数を有した表6aのsiNAのサブセットを、単一の96ウェルプレートに三連で再搭載し、pSiCheck_HepB-partialでトランスフェクトしたマウスHeap1-6細胞において再スクリーニングした。表6Bにデータをまとめる。siNAは、HBVmRNA発現レベルのlog2変化倍数に基づいてランク付けした。表6bの選択した高ランキングlog2変化倍数値が大きいsiNAを、pSiCheck-HepB-partialプラスミドでトランスフェクトしたHepa1-6細胞において、有効性と効力についてさらに解析した。値を確立するため、細胞をsiNAの1:6連続用量滴定液で処理した。効力50は、50の標的mRNAのノックダウンがもたらされるsiNAトランスフェクション濃度の計算値である。これらのsiNAの結果を表6cに示す。siNAのインビトロ血清安定性の測定siNAを、H2Oで50μM~100μMストック溶液として再構成させ、ヒト血清37°Cまで予備加温に終濃度20μg/mLまで添加する。次いで、混合物を37°Cで0、1および2時間インキュベートする。各時間点の終了時、等容量のPhenomenexLysis-LoadingBufferと混合することにより反応を停止させる。オリゴヌクレオチドを、96ウェル形式でPhenomenexSolidPhaseExtractionによって精製し、LabconcoTriadLyo-00417で乾固するまで凍結乾燥させる。この凍結乾燥試料を150μLの1mMEDTARNase無含有H2Oを用いて調製中で再構成させる。次いで、試料溶液を、ThermoFisherOrbitrapでの液体クロマトグラフィー/質量分析LC/MS解析のために1mMEDTAで5倍に希釈する。siNAの血清中代謝産物を、測定された分子量に基づいて調べた。サイトカイン誘導の試験脂質ナノ粒子例えば、40/48/2/10の比のDLinDMA/コレステロール/S-PEG-C-DMA/DSPC中に負荷した本発明の種々のsiNAの免疫賦活効果を評価するため、C57B1/6マウスに、単回3mpk用量のLNP製剤化siNAを尾静脈注射によって投与する。血清または血漿試料を投与の3時間後と24時後に収集する。これらの試料中のサイトカインおよびケモカインレベルを、SearchLightIRCytokineArrayAushonBiosciences製を製造業者の使用説明書に従って用いて測定する。測定したサイトカインおよびケモカインは、IL-1α、IL-1β、IL-6、KC、IL-10、IFNγ、TNF、GMCSF、MIP-1β、MCP-1/JE、およびRANTESである。マウスにおける有効性試験インビボ有効性試験は、後でHBVを注射するヒト化肝臓を有するSCIDマウスにおいて行なう。罹患肝臓を有するトランスジェニックマウスにヒト一次肝細胞を注入し、70がヒト肝細胞になるまでマウス肝臓に生着させる。次いで、マウスにヒトHBV分離株を接種する。感染マウスに、尾静脈注射によってLNP封入siNAまたはビヒクル対照を、単回3mpk用量を用いてIV投与する。投与後の種々の時間点で血清試料を採取し、次いで血清中の循環HBVゲノムレベルをqPCRによって測定し、ウイルス量に対するsiNAの効果を調べる。非ヒト霊長類における薬力学試験HBV感染チンパンジーに、単回2.5mpk用量のsiNA負荷脂質ナノ粒子を静脈内注入によって投与する。HBVウイルス量をモニタリングするため、投与前および投与後の種々の時間点で血清試料を採取し、HBVゲノムレベルをqPCRによって測定する。手順はすべて、USDAAnimalWelfareAct9CFR,パート1、2および3に概要が示された規定ならびにTheGuideforCareandUseofLaboratoryAnimalsILARpublication,1996,NationalAcademyPressに明記された条件を順守したものである。siNALNP製剤A.DLinDMA製剤に関するLNPプロセスの一般記載:脂質ナノ粒子を衝突噴流プロセスによって調製する。この粒子は、アルコールに溶解させた脂質を、クエン酸バッファーに溶解させたsiNAと混合することにより形成させる。siNAに対する脂質の混合比は、脂質が45~55およびsiNAが65~45を目標にする。脂質溶液は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質コレステロール、PEG例えば、PEG-C-DMA、PEG-DMG脂質およびDSPCを、アルコール例えば、エタノール中に5~15mg/mL目標9~12mg/mLの濃度で含むものにする。脂質の比率は、カチオン性脂質を25~98目標35~65のモルパーセント範囲を有し、ヘルパー脂質は、0~75目標30~50のモルパーセント範囲を有し、PEG脂質は1~15目標1~6のモルパーセント範囲を有し、DSPCは0~15目標0~12のモルパーセント範囲を有するようにする。siNA溶液は、1種類以上のsiNA配列を、クエン酸ナトリウム緩衝塩溶液3.5~5の範囲のpHを有する中に0.3~1.0mg/mLの目標0.3~0.9mg/mLの濃度範囲で含むものにする。この2つの溶液を15~40°C目標30~40°Cの範囲の温度まで加熱し、次いで、衝突噴流混合機内で混合すると、即座にLNPが形成される。T字部内径teeIDは0.25~1.0mmの範囲であり、総流速は10~600mL/分にする。流速とチューブ内径の組合せは、LNPの粒径を30~200nmに制御する効果を有する。次いで、この溶液を緩衝溶液と高pHで、1:1~1:3vol:volだが1:2vol:volを目標にしたの範囲の混合比で混合する。この緩衝溶液を15~40°C目標30~40°Cの範囲の温度にする。混合LNPを30分~2時間保持した後、アニオン交換濾過工程を行なう。インキュベーション時の温度は15~40°C目標30~40°Cの範囲にする。インキュベーション後、この溶液を0.8umフィルターに通して濾過するアニオン交換分離工程を含む。このプロセスでは、1mmID~5mmIDの範囲のチューブ内径および10~2000mL/分の流速が使用される。LNPは濃縮され、限外濾過プロセスによってダイアフィルトレーションされ、このとき、アルコールが除去され、クエン酸バッファーが最終バッファー溶液リン酸緩衝生理食塩水などと交換される。限外濾過プロセスには、タンジェンシャルフロー濾過形式TFFを使用する。このプロセスでは、30~500KDの名目分子量カットオフ範囲の膜を使用する。膜形式は、中空繊維またはフラットシートカセットである。適正な分子量カットオフを用いたTFFプロセスにより、LNPが保持液中に保持され、濾液または透過液中にアルコール;クエン酸バッファー;および最終バッファー廃物が含有される。TFFプロセスは、初期濃度からsiNA濃度1~3mg/mLまでの多工程プロセスである。濃縮後、LNP懸濁液を最終バッファーに対して10~20容量でダイアフィルトレーションし、アルコールを除去してバッファー交換を行なう。次いで、この物質をさらに1~3倍に濃縮する。LNPプロセスの最終工程は、濃縮LNP溶液の滅菌濾過および生成物のバイアル封入である。解析手順:1siNA濃度siNA二本鎖の濃度は、強アニオン交換高速液体クロマトグラフィーSAX-HPLCにより、Waters2695AllianceシステムWaterCorporation,MilfordMAを2996PDA検出器とともに用いて測定される。LNPあるいは、RNAi送達媒体RDVとも称するを、0.5TritonX-100で処理して全siNAを遊離させ、SAX分離により、DionexBioLCDNAPacPA2004×250mmカラム254nmでUV検出を用いて解析する。移動相は、A:25mMNaClO4,10mMTris,20EtOH,pH7.0と、B:250mMNaClO4,10mMTris,20EtOH,pH7.0を0分から15分までの線形勾配で構成し、流速を1ml/分とする。siNA量は、siNA標準曲線との比較により求める。2封入速度蛍光試薬SYBRGoldをRNA定量に使用し、RDVの封入速度をモニタリングする。TritonX-100とともに、または無しでRDVを使用し、遊離siNAおよび全siNAの量を調べる。アッセイは、SpectraMaxM5eマイクロプレート分光測光器MolecularDevicesSunnyvale,CA製を用いて行なわれる。試料を485nmで励起し、蛍光放射を530nmで測定する。siNA量は、siNA標準曲線との比較により求められる。封入速度=1-遊離siNA/全siNA×1003粒径および多分散性1μgのsiNAを内包しているRDVを、1×PBSで最終容量3mlまで希釈する。試料の粒径および多分散性を、動的光散乱法によりZetaPALS機器BrookhavenInstrumentsCorporation,Holtsville,NYを用いて測定する。散乱強度は、He-Neレーザーで25°Cにて90°の散乱角で測定する。4ゼータ電位の解析1μgのsiNAを内包しているRDVを、1mMTrisバッファーpH7.4で最終容量2mlまで希釈する。試料の電気泳動移動度をZetaPALS機器BrookhavenInstrumentsCorporation,Holtsville,NY電極および光源としてHe-Neレーザーを有するを用いて調べる。ゼータ電位の計算では、スモルコフスキー限界を想定する。5脂質の解析個々の脂質濃度を、逆相高速液体クロマトグラフィーRP-HPLCにより、Waters2695AllianceシステムWaterCorporation,MilfordMAをコロナ荷電エアロゾル検出器CADESABiosciences,Inc,Chelmsford,MAとともに用いて測定する。RDV内の個々の脂質を、AgilentZorbaxSB-CI850×4.6mm,1.8μm粒径カラムをCADとともに用いて60°Cで解析する。移動相は、A:0.1TFAH2O中とB:0.1TFAIPA中で構成した。勾配は、60移動相Aおよび40移動相Bで時間0から40移動相Aおよび60移動相Bに1.00分まで;40移動相Aおよび60移動相Bで1.00から5.00分まで;40移動相Aおよび60移動相Bで5.00分から25移動相Aおよび75移動相Bに10.00分まで;25移動相Aおよび75移動相Bで10.00分から5移動相Aおよび95移動相Bに15.00分まで;および5移動相Aおよび95移動相Bで15.00から60移動相Aおよび40移動相Bに20.00分まで変化させ、流速は1ml/分にする。個々の脂質濃度は、RDV内のすべての脂質成分を二次曲線にフィットさせた標準曲線との比較により求める。各脂質のモル分率を、その分子量に基づいて計算する。B.71.9:20.2:7.9の比率のCLinDMA/コレステロール/PEG-DMGの一般的な配合手順siNA溶液を、siNAを25mMのクエン酸バッファーpH4.0に0.8mg/mLの濃度で溶解させることにより調製した。脂質溶液は、71.9:20.2:7.9の比率の2S-オクチル-ClinDMA、コレステロールおよびPEG-DMGの混合物を無水エタノールに約10mg/mLの濃度で溶解させることにより調製した。等容量のsiNA溶液と脂質溶液を、2つのシリンジポンプを同じ流速で用いて混合T字コネクタに送達した。得られた乳状混合物を滅菌ボトル内に収集した。次いで、この混合物を等容量のクエン酸バッファーでゆっくり希釈し、サイズ排除中空ファイバーカートリッジに通して濾過し、混合物中の遊離siNAあればを除去した。クエン酸バッファーpH4.0に対する限外濾過を用いてエタノールを除去しALCOスクリーンの検査スティック、PBSpH7.4に対する限外濾過を用いてバッファー交換した。所望の容量まで濃縮し、0.2mmフィルターに通して滅菌濾過することにより最終LNPを得た。得られたLNPを、粒径、アルコール含量、総脂質含量、封入核酸および総核酸濃度に関して特性評価した。C.表10の種々の製剤の一般的なLNP調製物表10のsiNAナノ粒子懸濁液を、siNAおよび/または担体分子を20mMクエン酸ナトリウムバッファーpH5.0に約0.40mg/mLの濃度で溶解させることにより調製した。脂質溶液は、カチオン性脂質例えば、13Z,16Z-N,N-ジメチル-3-ノニルドコサ-13,16-ジエン-1-アミン,表11の構造参照、DSPC、コレステロールおよびPEG-DMG表10に示した比率の混合物を無水エタノールに、約8mg/mLの濃度で溶解させることにより調製した。リン酸部に対する窒素の比率は6:1と概算された。ほぼ等容量のsiNA/担体溶液と脂質溶液を、2つのFPLCポンプを同じ流速で用いて混合T字コネクタに送達した。背圧弁ワイスwaisを使用し、所望の粒径に調整した。得られた乳状混合物を滅菌ガラスビン内に収集した。次いで、この混合物を等容量のクエン酸バッファーで、続いて等容量のPBSpH7.4で希釈し、イオン交換膜に通して濾過し、混合物中の遊離siNA/担体あればを除去した。PBS7.4に対する限外濾過を使用し、エタノールを除去してバッファーを交換した。所望の容量まで濃縮し、0.2μmフィルターに通して滅菌濾過することにより最終LNPを得た。得られたLNPを、粒径、ゼータ電位、アルコール含量、総脂質含量、封入核酸および総核酸濃度に関して特性評価した。LNP製造プロセス非限定的な例において、LNPを、バルクで以下のようにして調製した。このプロセスは、1脂質溶液の調製;2siNA/担体溶液の調製;3混合/粒子の形成;4インキュベーション;5希釈;6限外濾過および濃縮からなるものとした。1.脂質溶液の調製2L容のガラス試薬ビンとメスシリンダーを脱パイロジェン処理した。脂質を室温まで昇温させた。このガラス試薬ビン内に、8.0gの13Z,16Z-N,N-ジメチル-3-ノニルドコサ-13,16-ジエン-1-アミンをピペットで移し、1.2gのDSPC、3.5gのコレステロール、0.9gのPEG-DMGを添加した。この混合物に1Lのエタノールを添加する。試薬ビンを、加熱した水浴50°Cを超えない温度中に入れた。脂質懸濁液を撹拌バーで撹拌した。この懸濁液中に、丸底フラスコの口の1つから密封アダプターを付けて熱電対プローブを入れた。懸濁液を透明になるまで30~40°Cで加熱した。この溶液を室温まで放冷した。2.siNA/担体溶液の調製滅菌容器Corning保存ビン内に、水補正因子およそ1.2の0.4倍のg数のsiNA粉末を量り入れた。このsiNAを、脱パイロジェン処理した2L容ガラス試薬ビンに移した。この秤量容器をクエン酸バッファー20mM,pH5.0で3回すすぎ洗浄し、すすぎ液をこの2L容ガラスビンに入れ、1Lになるまでクエン酸バッファーで分量供給QSした。siNA溶液の濃度を、UV分光計により以下の手順を用いて測定した。該溶液から20μLを取り出し、希釈し、50倍の1000μLにし、クエン酸バッファーでのブランク測定後にUV読み値をA260nmで記録した。これを繰り返した。注:2つの試料の読み値が整合している場合は、平均をとり、siNAの消散係数に基づいて濃度が計算され得る。最終濃度が0.40±0.01mg/mLの範囲外である場合、さらにsiNA/担体粉末を添加すること、またはさらにクエン酸バッファーを添加することにより濃度が調整され得る。このプロセスは、適用可能な場合は第2のsiNAで反復してもよい。siNA/担体溶液を、2種類以上のsiNA二本鎖および/または担体のカクテルではなく1種類のsiNA二本鎖で構成した場合、siNA/担体を20mMクエン酸バッファーpH5.0に溶解させ、0.4mg/mLの終濃度を得た。次いで、脂質溶液とエタノール溶液をPallAcropak200.8/0.2μm滅菌フィルターPN12203に通して滅菌濾過し、MasterFlexPeristalticPumpModel7520-40を用いて脱パイロジェン処理したガラス槽内に入れ、封入プロセスのための滅菌出発物質を得た。濾過プロセスは、20cm2の膜面積で80mL規模にて実施した。流速は280mL/分とした。このプロセスは、チューブ直径と濾過面積を増大させることによりスケールアップscaleすることができる。3.粒子形成-混合工程ツーバレルシリンジ駆動型ポンプHarvard33TwinSyringeを使用し、滅菌脂質/エタノール溶液と、滅菌siNA/担体またはsiNA/担体カクテル/クエン酸バッファー20mMクエン酸バッファー,pH5.0溶液を、0.5mmIDT-混合機混合ステージI内で、等しいまたはほぼ等しい流速で混合した。得られた排出LNP懸濁液には、40~50volのエタノールが含まれていた。45volエタノール排出懸濁液を得るため、滅菌脂質/エタノールと、滅菌siNA/担体またはsiNA/担体カクテル/クエン酸バッファー溶液を、それぞれ、54mL/分および66mL/分の流速で、排出混合物の総流速が120mL/分となるように混合した。4.希釈混合ステージIの排出流は直接、4mmIDT-混合機混合ステージII内に供給され、ここで、高pHの緩衝溶液20mMクエン酸ナトリウム,300mM塩化ナトリウム,pH6.0により1:1vol:volの比率で希釈された。この緩衝溶液は30~40°Cの範囲の温度であり、4mmT-混合機に蠕動ポンプColeParmerMasterFlexL/S600RPMによって120mL/分の流速で送達した。混合ステージIIの排出流は直接、6mmIDT-混合機混合ステージIII内に供給され、ここで、高pH緩衝溶液PBS,pH7.4により1:1vol:volの比率で希釈された。この緩衝溶液は15~25°Cの範囲の温度であり、6mmT-混合機に蠕動ポンプColeParmerMasterFlexL/S600RPMによって240mL/分の流速で送達された。5.インキュベーションおよび遊離siNAの除去混合ステージIIIの排出流は、30分間のインキュベーションのための混合後に保持した。インキュベーションは35~40°Cの温度で行ない、プロセス内懸濁液を光から保護した。インキュベーション後、遊離の封入されていないsiNAを、MustangQクロマトグラフィーフィルターカプセルでのアニオン交換によって除去した。使用前、クロマトグラフィーフィルターを、逐次、1NNaOH、1MNaCl、および最終の12.5volエタノール溶液PBS中のフラッシュ液で前処理した。最終フラッシュ液のpHは、pH<8が確実であることが確認された。次いで、インキュベーションしたLNP流を、MustangQフィルターによって蠕動ポンプColeParmerMasterFlexL/S600RPMによっておよそ100mL/分の流速で濾過した。濾過流を、以下の限外濾過および濃縮のために滅菌ガラス容器内に受容した。6.限外濾過、濃縮および滅菌濾過限外濾過プロセスは時限的プロセスであり、流速は注意深くモニタリングしなければならない。これは2工程プロセスであり;最初は、希釈物質を採取し、およそ0.3~0.6mg/mLの濃度のsiNAにおよそ8倍濃縮する濃縮工程である。第1の工程では、限外濾過膜100kDaPESSpectrumLabsが取り付けられたリングスタンドを蠕動ポンプSpectrumKrosFloIISystemに装着した。9.2Lの滅菌蒸留水をレザーバに添加し;3Lをドレイン排出して廃棄し、残りを透過液中にドレイン排出して廃棄した。5.3Lの0.25N水酸化ナトリウムをレザーバに添加し、1.5Lをドレイン排出して廃棄し、3.1Lを透過液中にドレイン排出して廃棄した。残りの水酸化ナトリウムを、消毒のために系内に保持し少なくとも10分間、次いでポンプをドレイン排出した。9.2Lの70v/vイソプロピルアルコールをレザーバに添加し、1.5Lをドレイン排出して廃棄し、残りを透過液中にドレイン排出して廃棄した。6Lのコンディショニングバッファーリン酸緩衝生理食塩水中12.5エタノールを添加し、1.5Lをドレイン排出して廃棄し、残りを、廃液が中性pH7~8になるまで透過液中にドレイン排出した。膜の流出値を記録し、次いでポンプをドレイン排出した。希釈LNP溶液をレザーバ内に1.1Lの印まで入れた。ポンプを2.3L/分で作動させた。5分間の再循環後、透過液ポンプを62.5mL/分で作動させ、液レベルをレザーバ内で、およそ950mLに一定にした。希釈LNP溶液を9.8Lから1.1Lまで140分間で濃縮し、希釈LNP溶液がすべてレザーバに移されたらポンプを一時停止した。第2工程は、エタノール/水性バッファーをリン酸緩衝生理食塩水に交換するダイアフィルトレーション工程とした。この工程中、およそ10~20ダイアフィルトレーション容量のリン酸緩衝生理食塩水を使用した。ダイアフィルトレーション後、2回目の濃縮を行ない、LNP懸濁液をおよそ1~1.5mg/mLのsiRNAに3倍濃縮した。濃縮された懸濁液を滅菌プラスチックPETGビン内に収集した。次いで、最終懸濁液を、逐次、Pall0.45umPESフィルターおよびPall0.2umPESフィルターによって最終滅菌のために濾過した後、バイアルに充填した。得られたLNPを、粒径、ゼータ電位、アルコール含量、総脂質含量、封入核酸および総核酸濃度に関して特性評価した。D.新規なカチオン性脂質の合成新規なカチオン性脂質の合成は、脂質酸iを出発物質とする線形プロセスである。N,O-ジメチルヒドロキシルアミンにカップリングさせると、ワインレブアミドiiが得られる。グリニャール付加によりケトンiiiが生成される。チタン媒介性還元的アミノ化によりivの型の最終生成物が得られる。一般スキーム1単一炭素ホモログ化カチオン性脂質vの合成は、脂質ケトンiiiを出発物質とする線形プロセスである。該ケトンのニトリルivへの変換は、TOSMICおよびカリウムtert-ブトキシドでの処理によって行なわれる。該ニトリルを第1級アミンに還元した後、還元的アミノ化を行なうと最終のカチオン性脂質vが得られる。一般スキーム2二炭素ホモログ化カチオン性脂質viiiの合成は、脂質ケトンiiiを出発物質とする線形プロセスである。該ケトンのα,β-不飽和アミドviへの変換は、ピーターソン条件下で行なわれる。該α,β-不飽和の共役還元は、LS-セレクトリドを用いて行なわれ、アミドviiが得られる。該アミドを水素化アルミニウムリチウムで還元すると、最終のカチオン性脂質viiiが得られる。一般スキーム3シクロプロピル含有脂質は一般スキーム4に従って調製される。不飽和ワインレブアミドiiをシモンズスミスシクロプロパン化条件に供すると、シクロプロピル含有ワインレブアミドixが得られる。これを、一般スキーム1~3に概略を示したようにして最終生成物にする。一般スキーム4アリル型アミンカチオン性脂質xvの合成は、アルデヒドxを出発物質とする線形プロセスである。酢酸t-ブチルを付加すると、β-ヒドロキシエステルxiが生成される。該ヒドロキシル官能部をフルオロ基に変換させた後、酸処理を行なうと、β-フルオロ酸xiiが生成される。該酸をワインレブアミドに変換させた後、グリニャール付加を行なうと、β-フルオロケトンxivが得られる。還元的アミノ化により、同時脱離がもたらされ、所望のアリル型アミンxvが生成される。一般スキーム520,23-ノナコサジエン-10-アミン,N,N-ジメチル-,20Z,23Z化合物111,14-エイコサジエン酸,11Z,14Z-50g,162mmol、N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩31.6g,324mmol、HOAt44.1g,324mmol、Et3N45.2mL,324mmol、およびEDC62.1g,324mmolをDCM810mL中で混合し、周囲温度で一晩撹拌した。次いで、反応液を5×700mLの水で洗浄し、次いで1×600mLの1MNaOH洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、セライトに通して濾過し、エバポレートし、53.06g93の11,14-エイコサジエンアミド,N-メトキシ-N-メチル-,11Z,14Zを透明な金色の油状物として得た。1HNMR400MHz,CDCl3δ5.35m,4H,3.68s,3H,3.18s,3H,2.77m,2H,2.41t,J=7Hz,2H,2.05m,4H,1.63m,2H,1.40-1.26m,18H,0.89t,J=7Hz,3H。11,14-エイコサジエンアミド,N-メトキシ-N-メチル-,11Z,14Z-14g,11.38mmolを、250mL容フラスコ内の乾燥THF50.0mlに溶解させた。次いで、1Mのノニルマグネシウムブロミド22.76ml,22.76mmolを窒素下、周囲温度で添加した。10分後、過剰の飽和水性NH4Clで反応液をゆっくりクエンチした。反応液を分液漏斗内でヘキサンと水にて洗浄し、振り、下側の水層を廃棄し、上側の層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、エバポレートし、粗製ケトンを金色の油状物として得た。上記の粗製ケトンに、ジメチルアミンTHF中2M14.22ml,28.4mmolを添加した後、TiO-i-Pr46.67ml,22.76mmolを添加し、一晩撹拌状態にした。翌日、EtOH50mlを添加した後、NaBH40.646g,17.07mmolを添加した。5分間の撹拌後、直接全反応液を、330gシリカカラムに合わせた40gシリカカラムに注入した。10分間は100DCMで、次の30分間は0から15のMeOH/DCMで溶出させると、20,23-ノナコサジエン-10-アミン,N,N-ジメチル-,20Z,23Z12.45g,5.47mmol,48.1収率がかすかに金色の油状物として収集された。1HNMR400MHz,CDCl3δ5.35m,4H,2.78m,2H,2.23m,1H,2.21s,6H,2.05m,4H,1.45-1.16m,38H,0.89m,6H。HRMSC31H61Nの計算値448.4877,実測値448.4872。化合物2~30は新規なカチオン性脂質であり、上記の一般スキーム1に従って調製した。12Z,15Z-N,N-ジメチル-2-ノニルヘニコサ-12,15-ジエン-1-アミン化合物31ケトンiii4.0g,9.55mmol、TOSMIC2.4g,12.4mmolを含むジメトキシエタン45mLの溶液を0°Cまで冷却し、カリウムtert-ブトキシド19.1mmol,19.1mLの1MのtBuOH溶液で処理した。90分後、反応液をヘキサンと水に分配した。有機部分を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。この物質をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し0から5のEtOAc/ヘキサン、所望の生成物を得た約20の出発物質s.m.を含有。この混合物を次の工程に、そのままの状態で持ち越した。LC/MSMH=430.6。水素化アルミニウムリチウム23.9mmol,23.9mLの1MのTHF溶液をニトリルiv3.42g,8mmolに直接、周囲温度で添加し、反応液を20分間撹拌した。反応液を100mLのTHFで希釈し、0°Cまで冷却し、硫酸ナトリウム十水和物溶液を用いて注意深くクエンチした。固形物を濾別し、THFで洗浄した。濾液を真空にてエバポレートし、直接、次の反応に粗製状態で持ち越した。LC/MSMH=434.6。第1級アミン3.45g,6.2mmolのジクロロエタン100mL溶液をホルムアルデヒド1.6mL,21.7mmolで処理した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム6.6g,31mmolで処理した。5分後、反応液をジクロロメタンと1NNaOH間に分配した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。粗製混合物を逆相分取用クロマトグラフィーC8カラムによって精製し、12Z,15Z-N,N-ジメチル-2-ノニルヘニコサ-12,15-ジエン-1-アミンを得た。HRMS計算値462.5033,実測値462.5026。1HNMR400MHz,CDCl3δ5.35m,4H,2.782H,t,J=5.6Hz,2.18s,6H,2.05m,6H,1.3m,39H,0.89m,6H。13Z,16Z-N,N-ジメチル-3-ノニルドコサ-13,16-ジエン-1-アミン化合物32シリルアミドのピーターソン試薬3.1g,16.7mmolをTHF35mLに溶解させ、-63°Cまで冷却した。この溶液にnBuLi16.7mmol,6.7mLの2.5M溶液を添加した。反応液を周囲温度まで30分間昇温させた。ケトン5.0g,11.9mmolを第2のフラスコ内のTHF25mLに溶解させた。ピーターソン試薬を-60°Cのケトン溶液に移した。反応液を-40°Cまで1時間昇温させ、次いで、0°Cまで30分間昇温させた。重炭酸ナトリウムを用いて反応液をクエンチし、さらに水で希釈し、水/ヘキサン間に分配した。有機部分をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。フラッシュクロマトグラフィーによって精製し0から40までのMTBE/ヘキサン、α,β-不飽和アミドviを得た。1HNMR400MHz,CDCl3δ5.75s,1H,5.36m,4H,3.01s,3H,2.99s,3H,2.78t,2H,2.28t,2H,2.05m,6H,1.35m,34H,0.89m,6H。α,β-不飽和アミドvi1g,2.1mmolとLS-セレクトリド4.1mmol,4.1mLの1M溶液を密封チューブ内で合わせ、60°Cまで24時間加熱した。反応液を周囲温度まで冷却し、塩化アンモニウム溶液とヘプタンに分配した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートし、アミドviiを得た。この中間体を直接、次の反応に粗製状態で持ち越した。アミドvii2.85g,5.8mmolの溶液に、水素化アルミニウムリチウム8.7mmol,8.7mLの1M溶液を添加した。反応液を周囲温度で10分間撹拌し、次いで、硫酸ナトリウム十水和物溶液をゆっくり添加することによってクエンチした。固形物を濾過し、THFで洗浄し、濾液を真空にてエバポレートした。粗製混合物を逆相分取用クロマトグラフィーC8カラムによって精製し、13Z,16Z-N,N-ジメチル-3-ノニルドコサ-13,16-ジエン-1-アミン化合物32を油状物として得た。HRMSMH計算値476.5190,実測値476.5189。1HNMR400MHz,CDCl3δ5.37m,4H,2.78t,2H,2.42m,8H,2.05q,4H,1.28m,41H,0.89m,6H。N,N-ジメチル-1-2-オクチルシクロプロピルヘプタデカン-8-アミン化合物330°Cまで冷却したオレイン酸1g,3.5mmolのDCM500mL溶液に、CDI0.63g,3.9mmolを添加した。反応液を周囲温度まで30分間昇温させた後、0°Cまで冷却し、まずトリエチルアミン0.39g,3.9mmolで、次いでジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩0.38g,3.9mmolで処理した。1時間後、反応液を水とヘプタンに分配した。有機部分を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートし、粗製ワインレブアミドiiを得、これを直接、次の反応に持ち越した。ジエチル亜鉛70.3mmol,70.3mLの1M溶液のジクロロメタン130mL溶液を-1°Cまで冷却し、TFA8.0g,70.3mmolの滴下で処理した。30分後、ジヨードメタン18.8g,70.3mmolを添加し、これを氷浴内で30分間熟成させた。この溶液に、ワインレブアミドii7.6g,23.4mmolを添加した。反応液を周囲温度まで昇温させ、1時間撹拌した。塩化アンモニウム溶液100mLを用いて反応液をクエンチし、有機層を分配して取り出し、10チオ硫酸ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。精製はフラッシュクロマトグラフィーとし0から30までのMTBE/ヘプタン、所望の生成物ixを得た。1HNMR400MHz,CDCl3δ3.72s,3H,3.22s,3H,2.48t,2H,1.65m,2H,1.39m,22H,1.18m,2H,0.91t,3H,0.68m,2H,0.59m,1H,-0.32m,1H。ワインレブアミドixの化合物33への変換は、上記の化合物1について記載のものと同様の様式で行なったノニルグリニャール付加の後、還元的アミノ化。LC/MSMH=436.6.1HNMR400MHz,CDCl3δ2.25s,6H,1.30m,45H,0.91m,6H,0.68m,2H,0.59m,1H,-0.31m,1H。化合物34~43は新規なカチオン性脂質であり、上記の一般スキーム1~4に従って調製した。11E,20Z,23Z-N,N-ジメチルノナコサ-11,20,23-トリエン-10-アミン化合物44-78°Cまで冷却したLDA95mmol,47.5mLの2M溶液のTHF127mL溶液に、酢酸t-ブチルを添加した。反応液を15分間撹拌した後、アルデヒドxを添加した。直ちに塩化アンモニウム溶液を用いて反応液をクエンチし、周囲温度まで昇温させ、水/ペンタン間に分配した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。LC/MSMH-tBu=325.4。ヒドロキシケトンxi7g,18.4mmolをジクロロメタン150mLに溶解させ、0°Cまで冷却し、デオキソフルオル7.3g,33.1mmolで処理した。反応液を16時間撹拌して、周囲温度まで昇温させた後、重炭酸ナトリウム溶液を用いてクエンチした。反応液を分配し、有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。フラッシュカラムクロマトグラフィーchromotagraphy0から5までの酢酸エチル/ヘキサンにより、フルオロエステルを得た。フルオロエステル中間体6g,15.6mmolジクロロメタン中を塩化水素157mmol,39.2mLの4Mのジオキサン溶液で処理し、反応液を周囲温度で16時間撹拌した。反応液を真空にてエバポレートし、所望のβ-フルオロ酸xiiを得た。LC/MSMH=327.3。フルオロカルボン酸xii5.1g,15.7mmol、EDC6.0g,31.4mmol、N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩3.1g,31.4mmol、トリメチルアミン4.0g,39.2mmol、およびHOAt4.3g,31.4mmolをDCM78mL中で合わせ、周囲温度で16時間撹拌した。反応液を水/DCM間に分配し、有機部分を水3×とNaOH溶液1×で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。粗製物質を逆相分取用クロマトグラフィーによって精製し、所望のワインレブアミドxiiiを得た。LC/MSMH=370.4。ワインレブアミドxiii4.3g,11.7mmolのTHF50mL溶液を、ノニルマグネシウムブロミド23.4mmol,23.4mLの1M溶液で周囲温度にて処理した。1時間後に塩化アンモニウム溶液を用いて反応液をクエンチし、水とペンタン間に分配した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。この物質を次の工程に粗製状態で持ち越した。ケトンxiv5.1g,11.7mmolをジメチルアミン29.3mmol,14.7mLの2MのTHF溶液とチタンIVイソプロポキシド6.7g,23.5mmolで処理し、反応液を周囲温度で16時間撹拌した。反応混合物にエタノール50mLを添加した後、水素化ホウ素ナトリウム0.67g,17.6mmolを添加した。反応液を直接シリカカラムに負荷し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製した0から15までのMeOH/DCM。この物質は、分取用逆相クロマトグラフィーによる2回目の精製が必要であり、11E,20Z,23Z-N,N-ジメチルノナコサ-11,20,23-トリエン-10-アミンを得た。HRMS計算値446.4720,実測値446.4724。1HNMR400MHz,CDCl3δ5.48m,1H,5.37m,4H,5.23m,1H,2.78t,2H,2.58m,1H,2.22s,6H,2.04m,6H,1.56m,1H,1.30m,31H,0.89m,6H。化合物45は、NatureBiotechnology,2010,28,172-176、WO2010/042877A1、WO2010/048536A2、WO2010/088537A2、およびWO2009/127060A1に記載のDLinKC2DMAである。化合物46は、WO2010/054401、およびWO2010/144740A1に記載のMC3である。E.脂質ナノ粒子組成物以下の本発明の脂質ナノ粒子組成物LNP:カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG56.6/38/5.4;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG60/38/2;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG67.3/29/3.7;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG49.3/47/3.7;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG50.3/44.3/5.4;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-C-DMA/DSPC40/48/2/10;カチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC40/48/2/10;およびカチオン性脂質/コレステロール/PEG-DMG/DSPC58/30/2/10は、オリゴヌクレオチド、特に本発明のsiNA分子の送達に有用である。当業者には、本発明が、課題を遂行するため、ならびに記載の目的および利点ならびに本発明に固有の目的および利点を得るために充分適合したものであることが容易に認識されよう。現時点で代表的な好ましい実施形態である本明細書に記載の方法および組成物は、例示的であり、本発明の範囲に対する限定を意図しない。当業者には、本発明の精神に包含され、特許請求の範囲によって規定される本発明の変形例および他の使用が思いつくであろう。"