"CD34陽性でα4インテグリン陽性の多能性細胞および/または寡能性細胞をヒト対象の末梢血に動員するための方法であって、α4インテグリンに対する有効量のアンチセンス化合物を前記ヒト対象に投与することを含む、方法。前記細胞が、骨髄から動員される、請求項1に記載の方法。前記細胞が、造血幹細胞および/または前駆細胞である、請求項1または2に記載の方法。前記アンチセンス化合物が、5’-MeCMeUGAGTMeCTGTTTMeUMeCMeCAMeUMeUMeCMeU-3’[式中、aオリゴヌクレオチドの19個のヌクレオチド間結合のそれぞれが、O,O-結合型ホスホロチオエートジエステルであり、b5′末端から1~3位のヌクレオチドが、2′-O-2-メトキシエチル修飾リボヌクレオシドであり、c5′末端から4~12位のヌクレオチドが、2′-デオキシリボヌクレオシドであり、d5′末端から13~20位のヌクレオチドが、2′-O-2-メトキシエチル修飾リボヌクレオシドであり、eすべてのシトシンが、5-メチルシトシンMeCである]のアンチセンス化合物またはその製薬上許容される塩である、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。CD34陽性でα4インテグリン陽性の多能性細胞および/または寡能性細胞をヒト対象の末梢血に動員するための方法であって、有効量のアンチセンス化合物が、5’-MeCMeUGAGTMeCTGTTTMeUMeCMeCAMeUMeUMeCMeU-3’[式中、aオリゴヌクレオチドの19個のヌクレオチド間結合のそれぞれが、O,O-結合型ホスホロチオエートジエステルであり、b5′末端から1~3位のヌクレオチドが、2′-O-2-メトキシエチル修飾リボヌクレオシドであり、c5′末端から4~12位のヌクレオチドが、2′-デオキシリボヌクレオシドであり、d5′末端から13~20位のヌクレオチドが、2′-O-2-メトキシエチル修飾リボヌクレオシドであり、eすべてのシトシンが、5-メチルシトシンMeCである]のアンチセンス化合物またはその製薬上許容される塩を、前記ヒト対象に投与することを含む、方法。前記細胞が、骨髄から動員される、請求項5に記載の方法。前記細胞が、造血幹細胞および/または前駆細胞である、請求項6に記載の方法。前記細胞が、間葉前駆細胞または内皮前駆細胞である、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。成長因子もしくはその類似体、またはCXCR4阻害剤を投与することをさらに含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。前記成長因子が、G-CSF、GM-CSF、SDF-1、またはSCFである、請求項9に記載の方法。前記成長因子もしくはその類似体、または前記CXCR4阻害剤を、前記アンチセンス化合物の前、後、またはそれと同時に投与することをさらに含む、請求項9または請求項10に記載の方法。低用量の化学療法または追加のα4インテグリン拮抗薬を、前記アンチセンス化合物の前、後、またはそれと同時に投与することをさらに含む、請求項1~11のいずれか1項に記載の方法。前記動員細胞を採取することをさらに含む、請求項1~12のいずれか1項に記載の方法。前記細胞が、前記アンチセンス化合物の投与から少なくとも4日後に採取される、請求項13に記載の方法。前記細胞を採取する前に、末梢血中のCD34陽性の多能性細胞および/または寡能性細胞の数をモニターすることをさらに含む、請求項13または14に記載の方法。前記細胞が、コロニー形成単位またはフローサイトメトリーによってモニターされる、請求項15に記載の方法。前記細胞が、1つまたは複数の細胞表面抗原決定基の発現についてモニターされる、請求項15または請求項16に記載の方法。前記動員された細胞を採取する前に、末梢血中のB細胞、CD4T細胞、CD8T細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、樹状細胞、血小板、好中球、好酸球、および/または好塩基球の数をモニターすることをさらに含む、請求項13~17のいずれか1項に記載の方法。前記細胞が、B細胞、CD4T細胞、好中球、好酸球、および/または好塩基球のうちの1つまたは複数の数の減少後に採取される、請求項18に記載の方法。前記細胞を採取する前に、前記アンチセンス化合物の前記Cmaxおよび/またはCtrough血漿中濃度をモニターすることをさらに含む、請求項13~19のいずれか1項に記載の方法。前記Ctroughが、20~45ng/mLである、請求項20に記載の方法。正常な血球産生および成熟の機能不全もしくは機能障害、造血器悪性腫瘍、自己免疫疾患、肝疾患、または免疫不全を治療するための方法であって、必要とする対象に、請求項1~21のいずれか1項に記載の動員後に採取された細胞を投与することを含む、方法。前記細胞が同種細胞である、請求項22に記載の方法。前記細胞が自己細胞である、請求項22に記載の方法。配列表の要点配列番号1ヒトα4インテグリンアンチセンス化合物ATL1102配列番号2マウスα4インテグリンアンチセンス化合物ISIS348574一般的方法および選択された定義他に具体的に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、例えば、細胞培養、分子遺伝子学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、および生物化学の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有しなければならない。他に指定のない限り、本発明において利用される組み換えタンパク質、細胞培養、および免疫学的技法は、当業者によく知られた標準手順である。そのような技法は、以下などのソースにおいて、文献全体にわたって記載および説明されている。J.Perbal,APracticalGuidetoMolecularCloning,JohnWileyandSons1984、J.Sambrooketal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbourLaboratoryPress1989、T.A.Browneditor、EssentialMolecularBiology:APracticalApproach,Volumes1and2,IRLPress1991、D.M.GloverandB.D.Hameseditors,DNACloning:APracticalApproach,Volumes1-4,IRLPress1995and1996、F.M.Ausubeletal.editors、CurrentProtocolsinMolecularBiology、GreenePub.AssociatesandWiley-Interscience1988,現在までのすべての改訂を含む、E.HarlowandD.Laneeditors,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbourLaboratory1988J.E.Coliganetal.editors,CurrentProtocolsinImmunology,JohnWileyandSons現在までのすべての改訂を含む用語および/または、例えば、Xおよび/またはYは、XおよびYまたはXまたはYのいずれかを意味するものと理解されるべきであり、両方の意味またはいずれかの意味に対して明示的な支持を提供するべきである。本明細書で使用される、約またはおよそは概して、所与の値または範囲の20以内、より好ましくは10以内、およびさらにより好ましくは5以内を意味するものとする。本明細書全体にわたって、含むcompriseという語、またはcomprisesもしくはcomprisingなどの変型は、指定の要素、整数、もしくは工程、または要素、整数、もしくは工程の群の包含を暗示するが、任意の他の要素、整数、もしくは工程、または要素、整数、もしくは工程の群の除外を意味しないことが理解されるであろう。本明細書全体にわたって、特に別段の指定がない限り、または文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単一の工程、物質の組成物、工程の群、または物質の組成物の群は、それらの工程、物質の組成物、工程の群、または物質の組成物の群のうちの1つおよび複数すなわち、1つまたは複数を包含するものとする。本明細書で使用される、用語幹細胞は、自己複製する能力すなわち、未分化状態を維持しながら多数の細胞分割周期を経る、および特殊化した細胞種に分化する能力を有する細胞を指す。最も厳密な意味において、幹細胞は、分化全能性または多能性のいずれかであり得るが、多能性前駆細胞は、多くの場合、幹細胞と呼ばれ、寡能性、複能性、または単能性前駆細胞が幹細胞と称される場合もある。幹細胞の存在は、例えば、表面抗原決定基の分析例えば、フローサイトメトリー分析によって評価され得る。一実施例において、幹細胞は造血幹細胞である。造血幹細胞は、自己複製および分化して、骨髄単球およびマクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、樹状細胞、赤芽球赤血球、巨核球血小板、およびリンパ球系T細胞、B細胞、NK細胞を含む、あらゆる血球種を生じさせることができる。分化の間に、造血幹細胞は、成熟エフェクター細胞になる過程で段階的に、最初にその自己複製能力を喪失し、次に系列能を喪失する。典型的に、Lin-、c-Kit、SCA-1、Flk2-、CD34-、Slamflマウス細胞は、造血幹細胞である。そのような細胞は、典型的に8週齢のマウスにおいて検出可能である。典型的に、Lin-、CD34、CD38-、CD90、CD45RA-ヒト細胞は、造血幹細胞である。造血幹細胞は、複能性または多能性幹細胞および/または前駆細胞と称される場合がある。一実施形態において、CD34の発現を使用して、ヒトドナーから単離された末梢血中の造血幹細胞を同定する。このマーカーは、造血前駆細胞上にも存在する。そのように単離された細胞群は、真の長期自己複製幹細胞であるいくつかの細胞、いくつかの短期前駆細胞、および汚染物質により末期に近い/末期の血球も含む。本明細書で使用される、用語前駆細胞は、多能性、寡能性、複能性、または単能性細胞を指し、造血、間葉、および内皮前駆細胞を含む。リンパ球共通前駆細胞CLPおよび骨髄系共通前駆細胞CMPは、リンパ球および骨髄コンパートメントの前駆細胞である。これらは、進行性の制限分化能を有する、方向付けされた前駆細胞のコホートに成熟し、最終的に主要な造血系列の非複製後期前駆細胞および末期細胞になる。CFU-GEMM細胞は、CMP細胞に由来する。CFU-GEMM細胞は、リンパ球を除くすべての血球を生じさせる能力を有する。CFU-GEMM細胞は、CFU-GMおよびBFU-E細胞を生じさせる。CFU-GEMMは、CFU-GMおよびBFU-E細胞と比較して、高い増殖能力を有する。しかしながら、CFU-GMおよびBFU-E細胞がより一般的である。CLP細胞は、TおよびBならびに他のリンパ球を生じさせる。前駆細胞の存在は、例えば、CFU-GEMMコロニー形成単位、多能性/寡能性顆粒球、赤血球、巨核球、単球、CFU-GMコロニー形成単位、複能性顆粒球、マクロファージ、BFU-Eバースト形成単位、単能性赤芽球、HPP-CFC高増殖能コロニー形成細胞などを含む、様々な種のコロニー形成単位を形成する、試料中の細胞の能力によって評価され得る。インビトロクローン形成法の開発は、制限分化能力を有すると考えられる、骨髄細胞系列の前駆細胞のサブセットを画定した。前記細胞のクローン成長および成熟によって、造血細胞赤血球、顆粒球、マクロファージ、血小板などを含むおよび非造血細胞例えば、間葉細胞の形態学的に異なるコロニーのインビトロ形成を支持する条件が開発された。アッセイ培地内の異なる成長因子および他の栄養素の特異的な形成は、どの種の前駆細胞コロニーが培養系内で成長するかを決定する。前駆細胞CLP集団を含むの存在は、表面抗原決定基の他の分析例えば、フローサイトメトリー分析によって評価することができる表I。CMPおよびCLP細胞は、以下に寡能性として分類され得る抗原決定基プロファイルを有するが、文献において多能性と称される場合が多い。CFU-GEMM前駆細胞も同様に、抗原的に寡能性であると紹介されるが、文献において多能性と称される場合が多い。一実施形態において、非幹細胞CFU前駆細胞の総数は、幹細胞回復、および血小板または好中球回復の予測因子である。本明細書で使用される、用語分化全能性細胞全能性としても知られるは、胚細胞種および胚体外細胞種に分化し得る細胞を指す。そのような細胞は、完全な生有機体を構成することができる。これらの細胞は、卵子および精子細胞の融合から産生される。受精卵の最初の数回の分裂によって産生された細胞も全能である。本明細書で使用される、用語複能性細胞は、全能性細胞の子孫であり、ほぼすべての細胞すなわち、3つの胚葉のいずれかに由来する細胞に分化し得る細胞を指す。本明細書で使用される、用語多能性細胞は、多数の細胞に分化し得るが、密接に関連する細胞族の細胞のみを指し、造血幹細胞を含む。本明細書で使用される、用語寡能性細胞は、たった数個の細胞に分化し得る細胞を指し、リンパ球または赤血球前駆細胞、例えば、CMP、CLP、およびCFU-GEMM細胞を含む。本明細書で使用される、用語複能性細胞は、たった2つの細胞種、例えば、CFU-GM細胞に分化し得る細胞を指す。用語単能性細胞は、たった1つの細胞種、それら自体に分化し得るが、非幹細胞/前駆細胞と区別する自己複製特性を有する細胞、例えば、BFU-E細胞を指す。細胞個体発生の文脈において、形容詞分化したは相対語である。分化した細胞は、それが比較される細胞よりも発生経路をさらに下方に進行した細胞である。本明細書で使用される、用語動員は、任意の組織源、例えば、骨髄から末梢血への幹細胞および/または前駆細胞の動員を指し、末梢血中の幹細胞および/または前駆細胞の集団または細胞の特定の亜集団の増加をもたらす。本明細書で使用される、用語アンチセンス化合物は、幹細胞および/または前駆細胞の動員に影響するVLA-4および/またはα4β7インテグリンのα4インテグリン鎖をコードする、核酸分子にハイブリダイズするオリゴマー化合物を指す。ヒトのα4インテグリン鎖は、CD49dである。アンチセンス化合物は、CD49d、β1インテグリン、および/またはβ7インテグリンの発現に干渉し得る。本明細書で使用される、用語α4インテグリンをコードする核酸分子は、標的核酸と相互利用可能であり、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリン鎖をコードするDNA、そのようなDNAから転写されたRNA前mRNAおよびmRNAまたはその部分、さらにそのようなRNAに由来するcDNAを包含する。本明細書で使用される、用語VLA-4は、α4インテグリンおよびβ1インテグリンのヘテロ二量体を指す。VLA-4は、正常な末梢血BおよびT細胞、胸腺細胞、単球、および他の細胞上、ならびに造血幹細胞および前駆細胞上に相当レベルで発現される。VLA-4は、間葉および内皮前駆細胞ならびに間葉幹細胞および潜在的に内皮幹細胞上でも発現される。VLA-4のリガンドは、血管細胞接着分子-1VCAM-1およびCS-1、フィブロネクチンのHepII領域内で交互にスプライスしたドメインを含む。本明細書で使用される、用語α4β7インテグリンは、α4インテグリンおよびβ7インテグリンのヘテロ二量体を指す。α4β7インテグリンは、腸管指向性を有するメモリT細胞のサブセットを同定する。α4β7インテグリンは、マスト、リンパ球、およびNK前駆細胞のサブセット上でも発現される。α4β7インテグリンは、いくつかの幹細胞および前駆細胞上で発現される。α4β7インテグリンのリガンドは、MAdCam-1およびVCAM-1を含む。本明細書で使用される、用語G-CSFポリペプチドまたはG-CSFは、自然発生するヒトおよび異種G-CSF、組み換えによって産生されたG-CSF、174または177アミノ酸のいずれかから成る発現産生物、もしくはその断片、類似体、変異体、または誘導体を指し、例えば、Kugaetal.,1989、Luetal.,1989、米国特許第4,810,643号、同第4,904,584号、同第5,104,651号、同第5,214,132号、同第5,218,092号、同第5,362,853号、同第5,606,024号、同第5,824,778号、同第5,824,784号、同第6,017,876号、同第6,166,183号、同第6,261,550号、第2003/0064922号、欧州特許第0335423号、同第0272703号、同第0459630号、同第0256843号、同第0243153号、国際特許第WO9102874号、AU-A-10948/92号およびAU-A-76380/91号に報告される。化学的に修飾されたG-CSFが含まれ、例えば、第WO9012874号、第EP0401384号、および第EP0335423号に報告されるものを参照されたい。第WO03006501号、第WO03030821号、第WO0151510号、第WO9611953号、第WO9521629号、第WO9420069号、第WO9315211号、第WO9305169号、第JP04164098号、第WO9206116号、第WO9204455号、第EP0473268号、第EP0456200号、第WO9111520号、第WO9105798号、第WO9006952号、第WO8910932号、第WO8905824号、第WO9118911号、および第EP0370205号も参照されたい。G-CSFの全形態、例えば、Albugranin登録商標、Neuulasta登録商標、Neupogen登録商標、およびGranocyte登録商標も本明細書に包含される。α4インテグリンに対するアンチセンス化合物本開示の方法は、幹細胞および/または前駆細胞の動員のためのα4インテグリンに対するアンチセンス化合物の使用に依存する。そのようなアンチセンス化合物は、VLA-4またはα4β7のα4インテグリン鎖をコードする核酸を標的とする。好ましくは、アンチセンス化合物は、オリゴヌクレオチドである。しかしながら、オリゴヌクレオチド模倣体を含むが、これに限定されない他のオリゴマーアンチセンス化合物が考えられる。その標的核酸を有するアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、概して、アンチセンスと称される。その標的核酸を有するアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションは、標的核酸の機能を阻害する。そのようなアンチセンス阻害は、典型的に、標的核酸に対するアンチセンス化合物の水素結合性ハイブリダイゼーションに基づき、標的核酸が、開裂、分解されるか、または他の方法で動作不可能になるようにする。干渉される標的DNAの機能は、複製および転写を含み得る。複製および転写は、例えば、内因性細胞テンプレート、ベクター、プラスミド構成体、またはその他に由来し得る。干渉されるRNAの機能は、タンパク質翻訳部位へのRNAの転移、RNA合成部位から離れた細胞内部位へのRNAの転移、RNAからのタンパク質の翻訳、1つまたは複数のRNA種を産出するためのRNAのスプライシング、RNAと係合され得るか、またはRNAによって促進され得る、RNAを伴う触媒活性または複合体形成などの機能を含み得る。本明細書で使用される、ハイブリダイゼーションは、オリゴヌクレオチドおよび標的核酸の相補的塩基の対合を意味する。塩基の対合は、典型的に、相補的ヌクレオシドまたはヌクレオチド塩基核酸塩基間に水素結合を伴い、ワトソン-クリック、フーグスティーン、または逆フーグスティーン水素結合であり得る。グアニンGおよびシトシンCは、3つの水素結合の形成を通じて対合する、相補的核酸塩基の例である。アデニンAおよびチミンTは、2つの水素結合の形成を通じて対合する、相補的核酸塩基の例である。ハイブリダイゼーションは、様々な環境下で起こり得る。ヌクレオシドは、塩基-糖結合である。ヌクレオシドの塩基部分は、通常、複素環塩基である。そのような複素環塩基の2つの最も一般的なクラスは、プリン類およびピリミジン類である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基をさらに含むヌクレオシド類である。ペントフラノシル糖を含むそれらのヌクレオシド類の場合、リン酸基は、糖の2′、3′、または5′ヒドロキシル部分のいずれかに結合され得る。特異的にハイブリダイズ可能なおよび相補的は、アンチセンス化合物と標的核酸との間で安定した特異的結合を引き起こすために十分な相補性の程度を示すように使用される用語である。アンチセンス化合物は、特異的にハイブリダイズ可能なその標的核酸配列に対して100相補的である必要がないと理解される。標的核酸に対するアンチセンス化合物の結合が、標的分子の正常な機能を干渉して活性の喪失をもたらすとき、アンチセンス化合物は、特異的にハイブリダイズ可能であり、特異的結合が所望される条件下、例えば、治療的処置の場合の生理的条件下で、非標的配列に対するアンチセンス化合物の非特異的結合を回避するために十分な程度の相補性がある。本明細書で使用される、用語ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件またはストリンジェントな条件は、アンチセンス化合物が、その標的配列に対してハイブリダイズするが、他の配列には最小数である条件を指す。ストリンジェントな条件は、配列依存であり、状況によって異なる。アンチセンス化合物が標的配列に対してハイブリダイズするストリンジェントな条件は、アンチセンス化合物の性質および組成物、ならびにそれが調査されるアッセイによって決定される。本明細書で使用される、相補性は、アンチセンス化合物の核酸塩基と標的核酸との間の正確な対合のための能力を指す。例えば、アンチセンス化合物の所定位置における核酸塩基が、標的核酸の所定位置における核酸塩基と水素結合できる場合、次にアンチセンス化合物と標的核酸との間の水素結合の位置は、相補的位置であると考えられる。アンチセンス化合物は、介在するか、または隣接するセグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないように、1つまたは複数のセグメントにわたってハイブリダイズする場合がある例えば、ループ構造またはヘアピン構造。一実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸内の標的領域に対して少なくとも70の配列相補性を含む。例えば、20核酸塩基のうちの18個が、標的核酸内の標的領域に対して相補的であり、したがって特異的にハイブリダイズする、アンチセンス化合物は、90の相補性を表す。この例において、残りの非相補的核酸塩基は、相補的核酸塩基と集合または散在されてもよく、互いに、または相補的核酸塩基に隣接する必要はない。そのように、標的核酸と完全に相補的である2つの領域が両側に位置する、4個の非相補的核酸塩基を有する、18核酸塩基長のアンチセンス化合物は、標的核酸と全体で77.8の相補性を有し、したがって、本開示の範囲内にある。標的核酸の領域とのアンチセンスの相補性パーセントは、当該技術分野において既知のBLASTプログラム基本的局所配列検索ツールおよびPowerBLASTプログラムを使用して日常的に決定され得るAltschuletal.,1990、ZhangandMadden,1997。アンチセンスオリゴヌクレオチド本開示は、α4インテグリン、および/またはVLA-4および/またはα4β7インテグリンの発現を阻害するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド類を提供する。そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチド類は、VLA-4および/またはα4β7のα4インテグリンをコードする核酸を標的とする。本明細書で使用される、用語阻害するは、VLA-4またはα4β7インテグリンの発現を任意の測定可能な減少例えば、10、20、50、90、または100を意味する。本明細書で使用される、用語オリゴヌクレオチドは、RNAもしくはDNAのオリゴマーまたはポリマー、またはその模倣体、キメラ、類似体、および相同体を指す。この用語は、自然発生する核酸塩基類、糖類、および共有インターヌクレオシド骨格結合で構成されるオリゴヌクレオチド類、ならびに同様に機能する非自然発生部分を有するオリゴヌクレオチド類を含む。そのような修飾または置換オリゴヌクレオチド類は、所望の特性、例えば、増強された細胞性取り込み、標的核酸に対して増強された親和性、およびヌクレアーゼ存在下での増加した安定性などに起因して、しばしば天然型よりも望ましい。オリゴヌクレオチド類を形成する際に、リン酸基は、互いに隣接するヌクレオシド類を共有結合して、線形ポリマー化合物を形成する。順に、この線形ポリマー化合物のそれぞれの末端をさらに接合して、環状化合物を形成することができるが、一般に線形化合物が好ましい。さらに、線形化合物は、内部の核酸塩基相補性を有してよく、したがって、完全または部分的に二本鎖の化合物を産生するような方法で折り畳んでもよい。オリゴヌクレオチド類に関して、リン酸基は、一般にオリゴヌクレオチドのインターヌクレオシド骨格を形成するものと称される。RNAおよびDNAの正常な結合または骨格は、3′~5′ホスホジエステル結合である。開示のアンチセンスオリゴヌクレオチド類には、例えば、リボザイム、siRNA、外部ガイド配列EGSオリゴヌクレオチド類、選択的スプライサー、プライマー、プローブ、および標的核酸の少なくとも一部分をハイブリダイズする他のオリゴヌクレオチド類が挙げられる。開示のアンチセンスオリゴヌクレオチド類は、一本鎖、二本鎖、環状、またはヘアピンの形態で投与されてよく、内部もしくは末端バルジまたはループなどの構造要素を含有し得る。一旦投与されると、アンチセンスオリゴヌクレオチド類は、標的核酸の修飾影響する、1つまたは複数の酵素または構造タンパク質の作用を引き出し得る。そのような酵素の一非限定例は、RNAseHであり、RNA:DNA二本鎖のRNA鎖を開裂する、細胞エンドヌクレアーゼである。DNA様の一本鎖アンチセンス化合物が、RNAseHを引き出すことは、当該技術分野において既知である。したがって、RNAseHの活性化は、RNA標的の開裂をもたらし、それによって遺伝子発現のオリゴヌクレオチドを介する阻害の効率を大幅に強化する。RNaseIIIおよび酵素のリボヌクレアーゼL族に含まれるものなどの他のリボヌクレアーゼ類についても同様の役割が仮定される。二本鎖RNAdsRNA分子の導入は、遺伝子またはその関連遺伝子産生物の機能の潜在的且つ特異的なアンチセンスを介する減少を誘発することが示された。この現象は、植物および動物の両方で起こり、ウイルスに対する防御およびトランスポゾンサイレンシングとの進化的接続を有すると考えられる。dsRNAが動物において遺伝子サイレンシングをもたらすという最初の証拠は、1995年に線虫シノラブディスエレガンスの研究から得られたGuoandKempheus,1995。Montgomeryら1998は、dsRNAの一次干渉効果が転写後であることを示した。以降、二本鎖RNAdsRNAへの暴露に起因する、シノラブディスエレガンスにおいて画定された転写後アンチセンス機序は、RNA干渉RNAiと指定されている。この用語は一般化されて、内因性標的mRNAレベルの配列特異的減少をもたらす、dsRNAの導入を伴うアンチセンスによる遺伝子サイレンシングを意味するFireetal.,1998。近年、それが実際に、RNAiの潜在的誘導物質である、dsRNAのアンチセンス極性の一本鎖RNAオリゴマーであることが示されたTijstermanetal.,2002。当該技術分野において通常の技術を有する者であれば、過度の実験なしに、本開示の方法に有用なアンチセンスオリゴヌクレオチド類を同定することができる。修飾インターヌクレオシド結合骨格本開示のアンチセンス化合物は、修飾骨格または非天然インターヌクレオシド結合を有するオリゴヌクレオチド類を含む。修飾骨格を有するオリゴヌクレオチド類は、骨格にリン原子を保持するもの、および骨格にリン原子を有しないものを含む。リン原子をその中に含む修飾オリゴヌクレオチド骨格は、例えば、ホスホロチオエート類、キラルホスホロチオエート類、ホスホロジチオエート類、ホスホトリエステル類、アミノアルキルホスホトリエシテル類、メチルおよび他のアルキルホスホン酸塩類3′-アルキレンホスホン酸塩類、5′-アルキレンホスホン酸塩類、およびキラルホスホン酸塩類を含む、ホスフィン酸塩類、ホスホロアミド酸類3′-アミノホスホロアミド酸およびアミノアルキルホスホロアミド酸類を含む、チオノホスホロアミド酸類、チオノアルキルホスホン酸塩類、チオノアルキルホスホトリエステル類、セレノホスホン酸塩類、および正常な3′-5′結合を有するボラノホスホン酸塩類、これらの2′-5′結合類似体、ならびに逆位極性を有するもの1つまたは複数のヌクレオチド間結合が、3′-3′、5′-5′、または2′-2′結合であるを含む。逆位極性を有するオリゴヌクレオチド類は、3′-先端ヌクレオチド間結合での単3′-3′結合、すなわち脱塩基核酸塩基が欠損、またはその場所にヒドロキシル基を有するであり得る単逆位ヌクレオシド残基を含む。様々な塩類、混合塩類、および遊離酸形態も含まれる。上記リン含有結合の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第3,687,808号、第4,469,863号、第4,476,301号、第5,023,243号、第5,177,196号、第5,188,897号、第5,264,423号、第5,276,019号、第5,278,302号、第5,286,717号、第5,321,131号、第5,399,676号、第5,405,939号、第5,453,496号、第5,455,233号、第5,466,677号、第5,476,925号、第5,519,126号、第5,536,821号、第5,541,306号、第5,550,111号、第5,563,253号、第5,571,799号、第5,587,361号、第5,194,599号、第5,565,555号、第5,527,899号、第5,721,218号、第5,672,697号、第5,625,050号が挙げられる。リン原子をその中に含まない修飾オリゴヌクレオチド骨格には、例えば、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルインターヌクレオシド結合、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルインターヌクレオシド結合、または1つまたは複数の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環インターヌクレオシド結合によって形成された骨格が挙げられる。これらは、モルホリノ結合を有するものヌクレオシドの糖部分から一部が形成された、シロキサン骨格、スルフィド、スルホキシド、およびスルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、リボアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファミン酸骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホン酸塩およびスルホンアミド骨格、アミド骨格、および混合N、O、S、およびCH2成分部分を有する他のものを含む。上記オリゴヌクレオチド類の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第5,034,506号、第5,166,315号、第5,185,444号、第5,214,134号、第5,216,141号、第5,235,033号、第5,264,562号、第5,264,564号、第5,405,938号、第5,434,257号、第5,466,677号、第5,470,967号、第5,489,677号、第5,541,307号、第5,561,225号、第5,596,086号、第5,602,240号、第5,610,289号、第5,602,240号、第5,608,046号、第5,610,289号、第5,618,704号、第5,623,070号、第5,663,312号、第5,633,360号、第5,677,437号、第5,792,608号、第5,646,269号、第5,677,439号が挙げられる。修飾糖およびインターヌクレオシド結合本開示のアンチセンス化合物は、ヌクレオチド単位の糖およびインターヌクレオシド結合すなわち、骨格の両方が、新規の基と置き換えられる、オリゴヌクレオチド模倣体を含む。核酸塩基単位は、標的核酸とのハイブリダイゼーションのために維持される。優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されたオリゴヌクレオチド模倣体は、ペプチド核酸PNAと称される。PNA化合物において、オリゴヌクレオチドの糖-骨格は、アミド含有骨格、特にアミノエチルグリシン骨格と置き換えられる。核酸塩基は保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子に直接または間接的に結合される。PNA化合物の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第5,539,082号、第5,714,331号、および第5,719,262号が挙げられる。PNA化合物に関するさらなる教示は、Nielsenetal.,1991において見出すことができる。本開示のアンチセンス化合物は、ホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチド類、およびヘテロ原子骨格、例えば、-CH2-NH-O-CH2-、-CH2-NCH3-O-CH2-[メチレンメチルイミノまたはMMI骨格として知られる]、-CH2-O-NCH3-CH2-、-CH2-NCH3-NCH3-CH2-、および米国特許第5,489,677号の-O-NCH3-CH2-CH2-[天然ホスホジエステル骨格は、-O-P-O-CH2-として表される]、および米国特許第5,602,240号のアミド骨格を有するオリゴヌクレオチド類も含む。本開示のアンチセンス化合物は、米国特許第5,034,506号を有するオリゴヌクレオチド類も含む。修飾糖本開示のアンチセンス化合物は、1つまたは複数の置換糖部分を有するオリゴヌクレオチドを含む。例としては、以下のOH;F;O-、S-、もしくはN-アルキル;O-、S-、もしくはN-アルケニル;O-、S-、もしくはN-アルキニル;またはO-アルキル-O-アルキルうちの1つを2′位に含むオリゴヌクレオチド類が挙げられ、アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換または非置換C1~C10アルキルもしくはC2~C10アルケニルおよびアルキニルであり得る。一つの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下のO[CH2nO]mCH3、OCH2nOCH3、OCH2nNH2、OCH2nCH3、OCH2nONH2、およびOCH2nON[CH2nCH3]2のうちの1つを2′位に含み、nおよびmは1~約10である。修飾オリゴヌクレオチド類のさらなる例としては、以下のC1~C10低級アルキル、置換低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、O-アルカリルもしくはO-アラルキル、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、RNA開裂基、レポーター基、挿入剤、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を向上させるための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を向上させるための基、および同様の特性を有する他の置換基のうちの1つを2′位に含むオリゴヌクレオチド類が挙げられる。一実施形態において、修飾は、2′-メトキシエトキシ2′-O-CH2CH2OCH32′-O-2-メトキシエチルまたは2′-MOEとしても知られるMartinetal.,1995、すなわち、アルコキシアルコキシ基を含む。さらなる実施形態において、修飾は、2′-ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、OCH22ONCH32基2′-DMAOEとしても知られる、または2′-ジメチルアミノエトキシエトキシ当該技術分野において、2′-O-ジメチル-アミノ-エトキシ-エチルまたは2′-DMAEOEとしても知られる、すなわち、2′-O-CH2-O-CH2-NCH32を含む。他の修飾は、2′-メトキシ2′-O-CH3、2′-アミノプロポキシ2′-OCH2CH2CH2NH2、2′-アリル2′-CH2-CH=CH2、2′-O-アリル2′-O-CH2-CH=CH2および2′-フルオロ2′-Fを含む。2′-修飾は、アラビノ上位またはリボ下位であってよい。一実施形態において、2′-アラビノ修飾は2′-Fである。同様の修飾は、オリゴヌクレオチドの他の位、特に3′末端ヌクレオチド上または2′-5′結合オリゴヌクレオチド内の糖の3′位、および5′末端ヌクレオチドの5′位において行われてもよい。オリゴヌクレオチド類は、ペントフラノシル糖の代わりに、シクロブチル部分などの糖模倣体を有してもよい。そのような修飾糖構造の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第4,981,957号、第5,118,800号、第5,319,080号、第5,359,044号、第5,393,878号、第5,446,137号、第5,466,786号、第5,514,785号、第5,519,134号、第5,567,811号、第5,576,427号、第5,591,722号、第5,597,909号、第5,610,300号、第5,627,053号、第5,639,873号、第5,646,265号、第5,658,873号、第5,670,633号、第5,792,747号、および第5,700,920号が挙げられる。糖のさらなる修飾は、ロックされた核酸LNAを含み、2′-ヒドロキシル基が、糖環の3′または4′炭素原子に結合され、それによって二環系糖部分を形成する。一実施形態において、結合は、2′酸素原子および4′炭素原子を架橋するメチレン-CH2-n基であり、nは1または2である。LNAおよびその調製は、国際公開第WO98/39352号および同第WO99/14226号に説明されている。天然および修飾核酸塩基本開示のアンチセンス化合物は、核酸修飾または置換を有するオリゴヌクレオチド類を含む。本明細書で使用される、非修飾または天然核酸塩基は、プリン塩基アデニンAおよびグアニンG、ならびにピリミジン塩基チミンT、シトシンC、およびウラシルUを含む。修飾核酸塩基には、他の合成および天然核酸塩基、例えば、5-メチルシトシン5-me-C、5-ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ハイポキサンチン、2-アミノアデニン、6-メチルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、2-プロピルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、2-チオウラシル、2-チオチミンおよび2-チオシトシン、5-ハロウラシルおよびシトシン、5-プロピニル-C≡C-CH3ウラシルおよびシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、6-アゾウラシル、シトシン、およびチミン、5-ウラシル疑似ウラシル、4-チオウラシル、8-ハロ、8-アミノ、8-チオール、8-チオアルキル、8-ヒドロキシルおよび他の8-置換アデニン類およびグアニン類、5-ハロ、特に5-ブロモ、5-トリフルオロメチルおよび他の5-置換ウラシル類およびシトシン類、7-メチルグアニンおよび7-メチルアデニン、2-F-アデニン、2-アミノ-アデニン、8-アザグアニンおよび8-アザアデニン、7-デアザグアニンおよび7-デアザアデニン、ならびに3-デアザグアニンおよび3-デアザアデニンが挙げられる。さらなる修飾核酸塩基には、三環系ピリミジン類、例えば、フェノキサジン1H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾキサジン-23H-オン、フェノチアジンシチジン1H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾチアジン-23H-オン、G-クランプ、例えば、置換フェノキサジンシチジン例えば、9-2-アミノエトキシ-H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾキサジン-23H-オン、カルバゾールシチジン2H-ピリミド[4,5-b]インドール-2-オン、ピリドインドールシチジンH-ピリド[3′,2′:4,5]ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-オンが挙げられる。修飾核酸塩基類は、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環と置き換えられたもの、例えば、7-デアザ-アデニン、7-デアザグアノシン、2-アミノピリジンおよび2-ピリドンを含んでもよい。さらなる核酸塩基類は、米国特許第3,687,808号に開示されるもの、J.I.Kroschwitzeditor,TheConciseEncyclopediaofPolymerScienceandEngineering,pages858-859,JohnWileyandSons1990に開示されるもの、Englischetal.1991によって開示されるもの、およびY.S.Sanghvi,Chapter15:AntisenseResearchandApplications,pages289-302,S.T.Crooke,B.Lebleueditors,CRCPress,1993によって開示されるものを含む。これらの核酸塩基類のうちのある種は、特にオリゴヌクレオチドの結合親和性を増加させるための有用である。これらには、5-置換ピリミジン類、6-アザピリミジン類、ならびにN-2、N-6、およびO-6置換プリン類が挙げられ、2-アミノプロピルアデニン、5-プロピニルウラシル、および5-プロピニルシトシンを含む。5-メチルシトシンの置換は、0.6~1.2°Cで核酸二本鎖の安定性を増加させることが示された。一実施形態において、これらの核酸塩基置換は、2′-O-メトキシエチル糖修飾と併用される。上記ある種の修飾核酸塩基類ならびに他の修飾核酸塩基類の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第3,687,808号、第4,845,205号、第5,130,302号、第5,134,066号、第5,175,273号、第5,367,066号、第5,432,272号、第5,457,187号、第5,459,255号、第5,484,908号、第5,502,177号、第5,525,711号、第5,552,540号、第5,587,469号、第5,594,121号、第5,596,091号、第5,614,617号、第5,645,985号、第5,830,653号、第5,763,588号、第6,005,096号、第5,681,941号、および第5,750,692号が挙げられる。複合体本開示のアンチセンス化合物は、1つまたは複数の部分または基に共役され、アンチセンス化合物の活性、細胞分布、または細胞取り込みを増強する。これらの部分または基は、一級もしくは二級ヒドロキシル基等の官能基に共有結合されてもよい。例示的な部分または基には、挿入剤、レポーター分子、ポリアミン類、ポリアミド類、ポリエチレングリコール類、ポリエーテル類、オリゴマー類の薬力学的特性を増強する基、およびオリゴマー類の薬物動態特性を増強する基が挙げられる。典型的な複合基には、コレステロール類、脂質類、リン脂質類、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン類、ローダミン類、クマリン類、および染料類が挙げられる。薬力学的特性を増強する部分または基には、取り込みを向上させ、分解への抵抗力を増強し、および/または標的核酸との配列特異的なハイブリダイゼーションを強化する基が挙げられる。薬物動態特性を増強する部分または基は、本開示の化合物の取り込み、分布、代謝、または分泌を向上させる基を含む。代表的な部分または基は、PCT/US92/09196および米国特許第6,287,860号に開示される。部分または基には、これらに限定されるものではないが、脂質部分、例えば、コレステロール部分、コール酸、チオエーテル、例えば、ヘキシル-S-トリチルチオール、チオコレステロール、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基、リン脂質、例えば、ジヘキサデシル-rac-グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム1,2-ジ-O-ヘキサデシル-rac-グリセロ-3-H-ホスホネート、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖、またはアダマンタン酢酸、パルミチル部分、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ-カルボニル-オキシコレステロール部分が挙げられる。本開示のアンチセンス化合物は、活性原薬に共役されてもよい。オリゴヌクレオチド薬複合体およびそれらの調製は、米国公開第09/334,130号に説明されている。そのような複合体の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第4,828,979号、第4,948,882号、第5,218,105号、第5,525,465号、第5,541,313号、第5,545,730号、第5,552,538号、第5,578,717号、第5,580,731号、第5,580,731号、第5,591,584号、第5,109,124号、第5,118,802号、第5,138,045号、第5,414,077号、第5,486,603号、第5,512,439号、第5,578,718号、第5,608,046号、第4,587,044号、第4,605,735号、第4,667,025号、第4,762,779号、第4,789,737号、第4,824,941号、第4,835,263号、第4,876,335号、第4,904,582号、第4,958,013号、第5,082,830号、第5,112,963号、第5,214,136号、第5,082,830号、第5,112,963号、第5,214,136号、第5,245,022号、第5,254,469号、第5,258,506号、第5,262,536号、第5,272,250号、第5,292,873号、第5,317,098号、第5,371,241号、第5,391,723号、第5,416,203号、第5,451,463号、第5,510,475号、第5,512,667号、第5,514,785号、第5,565,552号、第5,567,810号、第5,574,142号、第5,585,481号、第5,587,371号、第5,595,726号、第5,597,696号、第5,599,923号、第5,599,928号、および第5,688,941号が挙げられる。キメラ化合物当業者によって理解されるように、指定化合物のすべての位置が、均一に修飾される必要はなく、実際に、前述の修飾のうちの複数が単一のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチド内の単一のヌクレオシドに組み込まれてもよい。開示のアンチセンス化合物は、キメラオリゴヌクレオチド類を含む。キメラオリゴヌクレオチド類は、2つ以上の化学的に異なる領域を含み、オリゴヌクレオチド化合物の場合、それぞれ少なくとも1つのモノマー単位、すなわちヌクレオチドで形成される。これらのオリゴヌクレオチド類は、典型的に、増加したヌクレアーゼ分解への抵抗力、増加した細胞性取り込み、増加した安定性および/または標的核酸に対する増加した結合親和性をオリゴヌクレオチドに付与するように、オリゴヌクレオチドが修飾される、少なくとも1つの領域を含む。オリゴヌクレオチドの追加領域は、RNA:DNAまたはRNA:RNAハイブリッドを開裂することができる酵素の基質として機能し得る。例として、RNAseHは、RNA:DNA二本鎖のRNA鎖を開裂する細胞性エンドヌクレアーゼである。したがって、RNaseHの活性は、RNA標的の開裂をもたらし、それによって遺伝子発現のオリゴヌクレオチドを介する阻害の効率を著しく増強させる。RNA:RNAハイブリッドの開裂は、同様の様式で、細胞性およびウイルス性RNAの両方を開裂するRNAseLなどのエンドリボヌクレアーゼ類の作用によって達成され得る。RNA標的の開裂は、ゲル電気泳動および必要に応じて、当該技術分野において既知の関連核酸ハイブリダイゼーション技法によって日常的に検出され得る。開示のキメラアンチセンス化合物は、2つ以上のオリゴヌクレオチド類、修飾オリゴヌクレオチド類、および/またはオリゴヌクレオチド模倣体の複合構造として形成されてもよい。そのような化合物は、当該技術分野において、ハイブリッドまたはギャップマーとも称されている。そのようなハイブリッド構造の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第5,013,830号、第5,149,797号、第5,220,007号、第5,256,775号、第5,366,878号、第5,403,711号、第5,491,133号、第5,565,350号、第5,623,065号、第5,652,355号、第5,652,356号、および第5,700,922号が挙げられる。例示的オリゴヌクレオチド一実施形態において、アンチセンス化合物は、VLA-4mRNAの3′-未翻訳領域にハイブリダイズするように設計された第2世代のホスホロチオエート骨格2′-MOE-修飾キメラオリゴヌクレオチドギャップマーである。オリゴヌクレオチドは、VLA-4およびα4β7インテグリンのα4インテグリンサブユニットである、CD49をコードするRNAにハイブリダイズすることによって、一次ヒト細胞およびいくつかのヒト細胞株の両方において、VLA-4発現を選択的に阻害する。オリゴヌクレオチドは、7230ダルトンの分子量を有する3-9-8MOEとも称される、3′→5′ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド20merの19ナトリウム塩であり、5′末端から1~3位のヌクレオチドは、2′-O-2-メトキシエチル2′MOE修飾リボヌクレオシド類2′-O-2-メトキシエチルリボースであり、5′末端から4~12位のヌクレオチド類は、すべてのシトシン類が5-メチルシトシン類である、2′-デオキシリボヌクレオシドであり、5′末端から13~20位のヌクレオチドは、2′-O-2-メトキシエチル修飾リボヌクレオシド類である。オリゴヌクレオチドの配列は、5’-MeCMeUGAGTMeCTGTTTMeUMeCMeCAMeUMeUMeCMeU-3’である。オリゴヌクレオチドの実験式は、C233H327N60O129P19S19Na19である。すべてのウラシル類は、5-メチルウラシル類MeUである。典型的に、オリゴヌクレオチドは、5-メチルウラシル類ではなく、2-メトキシエチル修飾チミジン類を使用して合成される。すべてのピリミジン類は、C5メチル化されるすなわち、U、T、CはC5メチル化される。オリゴヌクレオチドの配列は、許容されるオリゴヌクレオチド命名法によって命名されてもよく、それぞれO-O結合型ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示す。2′-O-メトキシエチル-5-メチルシチジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチル-5-メチルウリジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチルグアノシリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-デオキシアデノシリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-デオキシグアノシリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-チミジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-デオキシ-5-メチルシチジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-チミジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-デオキシグアノシリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-チミジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-チミジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-チミジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチル-5-メチルウリジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-メトキシエチル-5-メチルシチジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-メトキシエチル-5-メチルシチジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチル-5-アデノシリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチル-5-メチルウリジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチル-5-メチルウリジリル-3′→5′O,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチル-5-メチルシトシン3′→5′Ο,O-ホスホロチオイル-2′-O-メトキシエチル-5-メチルウリジリル-19ナトリウム塩。オリゴヌクレオチドは、固相合成および下流処理の2つの異なる操作に分割され得る、多工程プロセスによって合成されてもよい。第1の操作において、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列は、コンピュータ制御固相合成器によって組み立てられる。後次の下流処理は、脱保護工程、調製逆相クロマトグラフ精製、単離および乾燥を含み、オリゴヌクレオチド原薬を産生する。オリゴヌクレオチドの化学合成は、ホスホルアミダイト結合化学に続いて酸化硫化を利用し、伸長オリゴマーへの活性化したモノマーの連続結合を伴い、その3′-末端は、固相担体に共有結合される。脱トリチル反応反応a固相合成のそれぞれの周期は、担体結合したオリゴヌクレオチドの5′末端ヌクレオシドの酸に不安定な5′-O-4ジメトキシトリチルDMT保護基の除去から始まる。これは、酸溶液による処置によって達成される例えば、トルエン中のジクロロ酢酸DCA。脱トリチル反応に続いて、次の反応の準備において、アセトニトリルで洗浄することによって、過剰な試薬が担体から除去される。結合反応b鎖の伸長は、活性化因子例えば、1H-テトラゾールの存在下で、担体結合したオリゴヌクレオチドの5′-ヒドロキシル基と、特定の塩基位置例えば、塩基2の場合:MOE-MeCアミダイトに対応するホスホルアミダイトの溶液との反応によって達成される。これは、流入するヌクレオチドシントンと担体結合したオリゴヌクレオチド鎖との間に亜リン酸トリエステルの形成をもたらす。結合反応後、次の反応の準備において、アセトニトリルで洗浄することによって、過剰な試薬が担体から除去される。硫化反応c新たに形成された亜リン酸トリエステル結合は、硫酸転移試薬例えば、フェニルアセチルジスルフィドの溶液で処理することによって、対応するO,O,O-トリアルキルホスホロチオエートトリエステルに変換される。硫化に続いて、次の反応の準備において、アセトニトリルで洗浄することによって、過剰な試薬が担体から除去される。キャッピング反応d任意の指定周期において使用可能な5′-ヒドロキシ基の一部は伸長できない。後次周期のいずれかにおけるこれらの基の結合は、所望の産生物から分離することが困難である、処理関連不純物DMT-onn-1-merの形成をもたらす。これらの不純物の形成を回避し、精製を促進するために、キャッピング試薬例えば、無水酢酸およびN-メチルイミダゾール/アセトニトリル/ピリジンは、反応容器の中に導入されて、キャップド配列を生じる。得られた失敗配列DMT-オフショートマーは、逆相HPLC精製によって所望の産生物から分離される。キャッピング反応後、次の反応の準備において、アセトニトリルで洗浄することによって、過剰な試薬が担体から除去される。適切な保護ヌクレオシドホスホルアミダイトを使用するこの基本的な4工程周期の繰り返しによって、全体保護オリゴヌクレオチド配列のアセンブリを可能にする。骨格脱保護反応eプロセスのアセンブリ部分の完了に続いて、O,O,O-トリアルキルホスホロチオエートトリエステルヌクレオチド間結合を保護するシアノエチル基は、アセトニトリル中のトリエチルアミンTEA溶液で処理することによって除去される。この工程中に生成された試薬およびアクリロニトリルは、カラムをアセトニトリルで洗浄することによって除去される。担体およびからの開裂および塩基脱保護反応f環外アミノ基の脱保護および担体からの粗産生物の開裂は、含水水酸化アンモニウムで培養することによって達成される反応f。5′-O-DMT保護された粗産生物の精製は、逆相HPLCによって達成される。逆相HPLC工程は、DMT-オフ失敗配列を除去する。溶出プロファイルは、UV吸収分光法によってモニターされる。DMT-オンオリゴヌクレオチド産生物を含む画分が、回収され分析される。酸性脱保護反応g5′-O-DMT保護されたオリゴヌクレオチドを含有する逆相HPLC画分はプールされ、沈殿タンクに移される。いくつかの合成の精製から得られる産生物は、プロセスのこの段階で複合される。精製されたDMT-オンオリゴヌクレオチドは、酸例えば、酢酸で処理され、5′末端に結合されたDMT基を除去する。定めた時間の酸暴露および中和後に、オリゴヌクレオチド原薬は単離され乾燥される。最終の酸性脱保護工程に続いて、溶液は、水酸化ナトリウム水溶液の添加によって中和され、オリゴヌクレオチド原薬は、エタノールを添加することによって溶液から沈殿される。沈殿した物質を反応溶液の底に沈殿させ、エタノール上澄みを静かに移す。沈殿した物質を精製水に再溶解し、溶液のpHをpH7.2~7.3の間に調整する。沈殿工程を繰り返す。沈殿した物質を水に溶解し、0.45ミクロンフィルターを通して溶液を濾過して、使い捨てのポリプロピレンのトレイに移した後、凍結乾燥機の中に置く。溶液を-50°Cに冷却する。一次乾燥を25°Cで37時間行う。温度を300°Cまで高め、二次乾燥工程を5.5時間行う。凍結乾燥プロセスの完了に続いて、原薬を高密度ポリエチレンのボトルに移し、-200°Cで保管した。標的核酸特定の核酸に対するアンチセンス化合物の標的は、多工程プロセスであり得る。プロセスは、通常、その機能が変調される標的核酸の同定から始まる。本開示において、標的核酸は、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリン鎖をコードする。標的プロセスは、通常、アンチセンス相互作用が起こるように、標的核酸内の少なくとも1つの標的領域、セグメント、または部位の特定も含み、所望の効果、例えば、発現の阻害が生じるようにする。本明細書で使用される、用語領域は、少なくとも1つの同定可能な構造、機能、または特徴を有する標的核酸の一部分として定義される。標的核酸の領域内にセグメントがある。セグメントは、標的核酸内の領域のより小さい部分、または副部分として定義される。本明細書で使用される部位は、標的核酸内の位置を意味する。翻訳開始コドンは、典型的に、5′-AUG転写mRNA分子において、対応するDNA分子では5′-ATGであるため、翻訳開始コドンは、AUGコドン、開始コドン、またはAUG開始コドンとも称される。少数の遺伝子が、RNA配列5′-GUG、5′-UUG、または5′-CUGを有する翻訳開始コドンを有し、5′-AUA、5′-ACG、および5′-CUGは、インビボで機能することを示した。したがって、用語翻訳開始コドンおよび開始コドンは、それぞれの例における開始アミノ酸が、典型的にメチオニン真核細胞においてまたはホルミルメチオニン原核細胞においてであるとしても、多くのコドン配列を包含し得る。真核細胞および原核細胞遺伝子は、2つ以上の選択的開始コドンを有し得ることも当該技術分野において既知であり、それらのいずれか1つが、特定の細胞種または組織において、または特定の条件下で、翻訳開始に選好的に利用され得る。本明細書で使用される、用語開始コドンおよび翻訳開始コドンは、そのようなコドンの配列複数可に関わらず、例えば、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリンをコードする遺伝子から転写されるmRNAの翻訳を開始するようにインビボで使用される、1つまたは複数のコドンを指す。停止コドンとも称される翻訳終了コドンは、3つのRNA配列:5′-UAA、5′-UAG、および5′-UGAのうちの1つを有し得る対応するDNA分子において、それぞれ5′-TAA、5′-TAG、および5′-TGA。本明細書で使用される、用語翻訳終了コドンおよび停止コドンは、そのようなコドンの配列複数可に関わらず、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリンをコードする遺伝子から転写されたmRNAの翻訳を終了するようにインビボで使用される、1つまたは複数のコドンを指す。用語開始コドン領域および翻訳開始コドン領域は、翻訳開始コドンからいずれかの方向すなわち、5′または3′に約25~約50個の連続ヌクレオチドを包含する、mRNAまたは遺伝子の一部分を指す。同様に、用語停止コドン領域および翻訳終了コドン領域は、翻訳終了コドンからいずれかの方向すなわち、5′または3′に約25~約50個の連続ヌクレオチドを包含する、mRNAまたは遺伝子の一部分を指す。結果として、開始コドン領域または翻訳開始コドン領域および停止コドン領域または翻訳終了コドン領域は、本開示のアンチセンス化合物によって有効に標的され得る、すべての領域である。翻訳開始コドンと翻訳終了コドンとの間の領域を指すことが当該技術分野において既知である、オープンリーディングフレームORFまたはコーディング領域もまた、有効に標的され得る領域である。一実施形態において、遺伝子のORFの翻訳開始または終了コドンを包含する遺伝子内領域が標的される。他の標的領域は、翻訳開始コドンから5′方向のmRNAの部分を指すことが当該技術分野において知られている、5′未翻訳領域5′UTRしたがって、mRNAの5′キャップ部位と翻訳開始コドンとの間にヌクレオチド類または遺伝子上で対応するヌクレオチド類を含む、および翻訳終了コドンから3′方向のmRNAの部分を指すことが当該技術分野において知られている、3′未翻訳領域3′UTRしたがって、翻訳終了コドンとmRNAの3′末端との間にヌクレオチド類または遺伝子上で対応するヌクレオチド類を含むを含む。mRNAの5′キャップ部位は、5′-5′三リン酸結合を介してmRNAの5′-先端残基に接合されたN7-メチル化グアノシン残基を含む。mRNAの5′キャップ領域は、5′キャップ構造自体、ならびにキャップ部位に隣接する最初の50ヌクレオチドを含むと考えられる。一実施形態において、5′キャップ領域が標的される。いくつかの真核mRNA転写産物は、直接翻訳されるが、多くはイントロンとして知られる1つまたは複数の領域を含み、それが翻訳される前に転写産物から削除される。残りのおよびしたがって翻訳された領域は、エクソンとして知られ、一緒にスプライスされて、連続mRNA配列を形成する。異なる遺伝子源から2つ以上のmRNAをスプライシングするプロセスを介して産生されるmRNA転写産物は、融合転写産物として知られる。一実施形態において、イントロン、またはスプライス部位、すなわちイントロン-エクソン接合もしくはエクソン-イントロン接合、または再配列もしくは削除に起因する異常な融合接合が標的される。選択的RNA転写は、DNAの同一のゲノム領域から産生され得る。これらの選択的転写は、一般に変異型として知られる。mRNA前駆体変異型は、それらの開始または停止位置のいずれかにおいて、同一のゲノムDNAから産生される他の転写産物とは異なる、同一のゲノムDNAから産生された転写産物であり、イントロンおよびエクソン配列の両方を含む。スプライシング中に1つまたは複数のエクソンもしくはイントロン領域、またはその部分を削除するとき、mRNA前駆体変異型は、より小さいmRNA変異型を産生する。結果として、mRNA変異型は、処理されたmRNA前駆体変異型であり、それぞれ固有のmRNA前駆体変異型は、スプライシングの結果として、固有のmRNA変異型を常に産生しなければならない。これらのmRNA変異型は、選択的スプライス変異型としても知られている。mRNA前駆体変異型のスプライシングが起こらない場合、次にmRNA前駆体変異型は、mRNA変異型と同一である。変異型は、転写を開始または停止させる選択的シグナルの使用によって、すなわち、選択的開始コドンまたは停止コドンの使用によって産生され得る。選択的開始コドンを使用するmRNA前駆体またはmRNA起源の変異型は、そのmRNA前駆体またはmRNAの選択的開始変異型として知られる。選択的停止コドンを使用するそれらの転写産物は、そのmRNA前駆体またはmRNAの選択的停止変異型として知られる。選択的停止変異型の特定の一種は、産生された複数の転写産物が、転写機構によってポリA停止シグナルの1つの代替選択から生じ、それによって固有のポリA部位で終了する転写産物を産生する、ポリA変異型である。一実施形態において、RNA前駆体またはmRNA変異型が標的される。アンチセンス化合物がハイブリダイズされる標的核酸上の位置は、標的セグメントと称される。本明細書で使用される、用語標的セグメントは、アンチセンス化合物が標的される標的領域の少なくとも8核酸塩基部分として定義される。理論に縛られるものではないが、現在、これらの標的セグメントは、ハイブリダイゼーションのためにアクセス可能な標的核酸の部分を表すと考えられている。1つまたは複数の標的領域、セグメント、または部位が同定されると、標的セグメントに対して十分に相補的なアンチセンス化合物、すなわち所望の効果を得るために十分に良好にハイブリダイズし、十分な特異性を有するアンチセンス化合物が選択される。さらなる実施形態において、本明細書で同定される標的セグメントは、α4インテグリン遺伝子の発現およびしたがって、α4インテグリン、VLA-4および/またはα4β7インテグリンを調節する追加の化合物のスクリーニングに用いられてもよい。調節因子は、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリン鎖をコードする核酸分子の発現を減少または増加させ、好適な標的セグメントに対して相補的である少なくとも8核酸塩基部分を含む、化合物である。スクリーニング方法は、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリン鎖をコードする核酸の標的セグメントを、1つまたは複数の候補調節因子と接触させるステップと、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリン鎖をコードする核酸の発現を減少または増加させる1つまたは複数の候補調節因子を選択するステップと、を含む。1つまたは複数の候補調節因子が、VLA-4またはα4β7インテグリンのα4インテグリン鎖をコードする核酸の発現を調節例えば、減少または増加のいずれかできることが示されると、次に調節因子は、VLA-4またはα4β7インテグリンの機能に関するさらなる調査研究、または研究、診断、もしくは治療薬として使用するために用いられてもよい。標的セグメントは、安定した二本鎖二重鎖オリゴヌクレオチド類を形成するように、そのそれぞれの相補的アンチセンス化合物と複合されてもよい。そのような二重鎖オリゴヌクレオチド部分は、当該技術分野において、標的発現を調節し、翻訳ならびにアンチセンス機序を介してRNA処理を規制することが示された。さらに、二本鎖部分は、化学修飾に供され得るFireetal.,1998、TimmonsandFire,1998、Timmonsetal.,2001、Tabaraetal.,1998、Montgomeryetal.,1998、Tuschletal.,1999、Elbashiretal.,2001a、Elbashiretal.,2001b。例えば、そのような二本鎖部分は、標的に対する二本鎖のアンチセンス鎖の古典的なハイブリダイゼーションによって、標的を阻害し、それによって標的の酵素分解を誘起することが示されたTijstermanetal.,2002。組成物開示のアンチセンス化合物は、他の分子、分子構造、または化合物の混合物と混合、被包、共役、または他の方法で関連付けられ、例えば、取り込み、分布、および/または吸収を支援するためのリポソーム、受容体標的分子、経口、直腸、局所、または他の製剤を生じ得る。そのような取り込み、分布、および/または吸収を支援する製剤の調製を教示する代表的な米国特許には、これらに限定されるものではないが、第5,108,921号、第5,354,844号、第5,416,016号、第5,459,127号、第5,521,291号、第5,543,158号、第5,547,932号、第5,583,020号、第5,591,721号、第4,426,330号、第4,534,899号、第5,013,556号、第5,108,921号、第5,213,804号、第5,227,170号、第5,264,221号、第5,356,633号、第5,395,619号、第5,416,016号、第5,417,978号、第5,462,854号、第5,469,854号、第5,512,295号、第5,527,528号、第5,534,259号、第5,543,152号、第5,556,948号、第5,580,575号、および第5,595,756号が挙げられる。開示のアンチセンス化合物は、製薬上許容される担体中で投与され得る。用語製薬上許容される担体は、対象、特に哺乳類、およびより具体的にはヒトに投与されると、アレルギー反応、毒性反応、または他の有害反応を生じない分子実体を指す。製薬上許容される担体は、固体または液体であり得る。製薬上許容される担体の有用な例には、これらに限定されるものではないが、開示の活性剤の活性に影響しない希釈剤、溶媒、界面活性剤、賦形剤、懸濁剤、緩衝剤、潤滑剤、アジュバント、媒体、乳化剤、吸収剤、分散媒質、コーティング、安定剤、保護コロイド、接着剤、増粘剤、チキソトロピー剤、浸透剤、封鎖剤、等張剤、および吸収遅延剤が挙げられる。開示のアンチセンス化合物は、製薬上許容される塩、エステル類、もしくはエステル類の塩、または投与時に生物活性代謝物を直接または間接的に提供することができる、任意の他の化合物であり得る。本明細書で使用される用語製薬上許容される塩は、投与時に親化合物の所望の生物活性を保持し、望ましくない毒物学的効果を付与しない、アンチセンス化合物の生理学上および製薬上許容される塩を指す。製薬上許容される塩の好適な例は、米国特許第6,287,860号においてさらに説明される。開示のアンチセンス化合物は、プロドラッグもしくはプロドラッグの製薬上許容される塩、または他の生物学的同等物であり得る。本明細書で使用される、用語プロドラッグは、内因性酵素または他の化学物質および/または条件の作用によって、投与時に活性形態すなわち、薬物に変換される、不活性形態で調製された治療薬を指す。特に、開示のアンチセンス化合物のプロドラッグ形態は、国際公開第WO93/24510号、同第WO94/26764号、および米国特許第5,770,713号に開示される方法に従って、SATE[S-アセチル-2-チオエチルリン酸塩]誘導体として調製される。投与開示のアンチセンス化合物は、全身投与される。本明細書で使用される、全身投与は、腸内または非経口のいずれかの投与経路である。本明細書で使用される、腸内は、胃腸管の任意の部分を伴い、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの錠剤、カプセル、またはドロップ形態での経口投与、経胃栄養管、経十二指腸栄養管、または胃瘻造設、および例えば、アンチセンス化合物の坐薬または注腸形態での直腸投与を含む、任意の投与形態を指す。本明細書で使用される、非経口は、注射または注入による投与を含む。例としては、静脈内静脈の中、動脈内動脈の中、筋肉内筋肉内、心臓内心臓の中、皮下皮膚の下、骨内注射骨髄の中、皮内皮膚自体の中、髄腔内脊柱管の中、腹腔内腹腔の中に注入または注射、膀胱内膀胱の中に注射、経皮正常な皮膚を通じて拡散、経粘膜粘膜を通じて拡散、吸入が挙げられる。アンチセンス化合物は、期間ベースで、例えば、1日1回、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、または14日に1回、週1回、週2回、週3回、または2週間に1回、単回投与または反復投与として投与されてもよい。投与の量および頻度は、担当医師によって決定され得る。例えば、用量50~3400mg、より好ましくは50~1600mgのアンチセンス化合物が対象に投与され得る。用量150~300mg、例えば、用量200mgは、特にヒトに対して考慮される。用量2、3、4、5、6、7、8、9、または10mg/Kgも特に考慮される。5mg/Kgを超える用量は、好ましくは少なくとも週に3回投与される。1回の単一皮下注射の頻度は、最大5mg/Kgの用量が好ましい。5mg/Kgを超える用量の皮下注射の場合、薬物は2つの同時注射として投与されることが好ましい。一実施形態において、G-CSFおよび任意にMozobil登録商標は、同時に添加される。一実施形態において、アンチセンス化合物は、1日当たり4mg/Kgの用量で、4、5、6、または7日間にわたって、計4、5、6、もしくは7回、または最大許容用量で投与される。代替の実施形態において、アンチセンス化合物は、1日当たり4または6mg/Kgの用量で、1日おき1、3、5日目に計3用量、または最大許容用量で投与される。本明細書で使用される、用語有効量は、投与条件下で、幹細胞および/または前駆細胞動員を生じるために十分なアンチセンス化合物の任意の用量を指す。一実施形態において、投与経過中のヒト対象の平均血小板数は、血液1μL当たり血小板50,000個を超える。理論に制限されるものではないが、CD34前駆細胞の動員は、血小板の急速な回復を可能にし、採取後に必要とされる血球輸血の数を減少させることが可能である。別の実施形態において、投与は、2890ng/mL以上、好ましくは10,000~11,000ng/mLのヒト対象の血漿中オリゴヌクレオチドのCmaxを提供するために有効である。別の実施形態において、投与は、少なくとも2.5ng/mL、より好ましくは少なくとも20ng/mL、さらにより好ましくは少なくとも45ng/mLのヒト対象の血漿中オリゴヌクレオチドのCminまたはCtroughを提供するために有効である。本明細書で使用される、用語Cmaxは、その投与後に観察される薬物の最大またはピーク濃度を指す。本明細書で使用される、用語Cminは、最小またはトラフ濃度を指すすなわち、その投与後および後次用量の投与直前に観察される薬物のCtrough。複合療法発明のアンチセンス化合物は、1つまたは複数の他の動員化合物/治療と併せて投与されてもよい。例示的な動員治療には、低用量の化学量法とともに、例えば、シクロホスファミドまたはメルファラン、フィルグラストリムG-CSF類似体、作動薬;Neupogen登録商標Amgen;Granulokine登録商標東欧ではHLR、ペグフィルグラスチムG-CSF類似体、作動薬;Neulastra登録商標、レノグラスチムG-CSF類似体、作動薬;Granocyte登録商標Chugai,LigandPharmaceuticals、サルグラモスチムGM-CSF類似体、作動薬;Leukine登録商標Bayer-Barlex、プレリキサフォルCXCR4拮抗薬、SDF-1に対する部分作動薬;Mozobil登録商標Genzyme、アンセスチム幹細胞因子SCF;Stemgen登録商標Amgenの投与が挙げられる。1つまたは複数の成長因子との複合療法一実施形態において、本開示の方法は、幹細胞および/または前駆細胞の動員において、α4インテグリンに対するアンチセンス化合物と併用して、成長因子の使用を利用する。成長因子は、例えば、G―CSF、EPO、M-GDF、SCF、GM-CSF、M-CSF、CSF-1、SDF-1、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、または他の様々なインターロイキン、IGF-1、LIF、インターフェロン例えば、α、β、γ、またはコンセンサス、神経栄養因子例えば、BDNF、NT-3、CTNF、またはNoggin、他の多能性成長因子例えば、これらがそのような多能性成長因子、flt-3/flk-2リガンド、幹細胞増殖因子、および全能性幹細胞因子であることが証明される程度、線維芽細胞成長因子例えば、FGF、ヒト成長ホルモンおよび類似体、融合分子、および上記の他の誘導体であり得る。複合療法組成物は、幹細胞および/または前駆細胞を動員するために有効な併用量で対象に投与される。このプロセスは、細胞を成長因子およびα4インテグリンに対するアンチセンス化合物と同時に接触させることを伴ってもよい。これは、両方の薬剤を含む単一の組成物もしくは医薬製剤を投与することによって、または2つの異なる組成物もしくは製剤を同時に投与することによって達成されてもよく、成長因子を含む組成物もあれば、α4インテグリンに対するアンチセンス化合物を含むものもある。成長因子治療は、数分から1または2週間にわたる間隔で、α4インテグリンに対するアンチセンス化合物による治療に先行または後続し得る。α4インテグリンに対するアンチセンス化合物の投与は、数分から数週間だけ成長因子に先行し得る。α4インテグリンに対するアンチセンス化合物および成長因子が個別に投与される実施形態において、一般に、それぞれの送達時間の間に著しい期間が経過しないことを保証し、α4インテグリンに対するアンチセンス化合物および成長因子が、依然として有益な併用効果を及ぼすことができるようにする。そのような例において、成長因子およびアンチセンス化合物の両方を、互いに約数分、4~6時間、6~12時間、12~24時間以内、または約3~4日以内、最も好ましくは約4~6時間の遅延時間で、二番目に投与されるアンチセンス化合物薬とともに投与することが考えられる。場合によっては、治療期間を著しく延長することが望ましい場合があるが、数日2、3、4、5、6、または7~数週間1、2、3、4、5、6、7、または8が、それぞれの投与間に経過し、例えば、場合によっては、アンチセンス化合物が最初に投与される。G-CSF一実施形態において、本開示の方法は、幹細胞および/または前駆細胞の動員において、α4インテグリンに対するアンチセンス化合物と併用して、G-CSFの使用を利用する。一実施形態において、α4インテグリンに対するアンチセンス化合物と併用してG-CSFを使用することは、CD34多能性および/または寡能性細胞の動員をもたらす。G-CSFは、血中への造血幹細胞の放出の増加をもたらし、骨髄前駆細胞の増殖、分化、および生存において役割を果たすTakanoetal.,2003。G-CSFおよび他の造血成長因子IL-3、IL-6、GM-CSF、およびSCFを含むは、すべて骨髄における顆粒球形成顆粒球の産生の正の調節因子であることが報告されているTakanoetal.,2003。本発明者らは、G-CSFと併用してα4インテグリンに対するアンチセンス化合物を投与することが、CFU-GEMMおよびCD34細胞の放出を増加させることを示した。これらの細胞の単離および移植は、例えば、顆粒球を必要とする患者を治療するために使用され得る。G-CSFは、神経栄養前駆細胞の成熟好中球への増殖および分化を特異的に刺激することも示されFukunagaetal.,1993、好中球減少状態の治療におけるその有用性がよく知られているWelte,1985、Souzaetal.,1986、Gabrilove,1989。G-CSFは、循環顆粒球の数を増加させ、敗血症モデルにおいて感染を軽減することが報告された。G-CSF投与は、敗血症および拒絶反応中の組織損傷に重要なサイトカインである、腫瘍壊死因子TNFの放出も阻害するWendeletal.,1992。したがって、G-CSFは、好中球の増加が利益をもたらす病態の治療に有用であることがわかった。例えば、癌患者の場合、G-CSFは、化学療法または放射線治療に起因する造血欠損を補償するための選択的刺激神経栄養産生の手段として有益である。他の適応には、様々な感染疾患および関連病態、例えば典型的に細菌の代謝によって引き起こされる敗血症の治療を含む。G-CSFはまた、培養中の細胞の成長または増殖に対して例えば、骨髄移植または生体外増殖に対して単独で有用であるか、または他の化合物、例えば他のサイトカインとの併用も有用である。G-CSFは、感染治療または好中球減少の治療に対する補助として、移植患者に投与されたDifloetal.,1992、Wrightetal.,1991、Lachauxetal.,1993、Colquehounetal.,1993。一実施形態において、α4インテグリンに対するアンチセンス化合物の投与は、好中球増加をもたらさず、好中球減少を生じる場合さえある。アンチセンス化合物とG-CSFの併用は、G-CSFと、例えば、Mozobil登録商標の併用を超える予想外の利益を提供し、G-CSFを超える追加の好中球増加をもたらす場合があり、モニターを必要とする。G-CSFは、線維芽細胞、マクロファージ、T細胞、トロホブラスト、内皮細胞、および上皮細胞によって産生され、第17染色体上に位置する4個のエクソンおよび5個のイントロンで構成された単一コピー遺伝子の発現産生物である。ヒトにおいて、内因性G-CSFは、血漿中で検出可能であるJonesetal.,1989。G-CSFは、交差反応種であり、ヒトG-CSFが別の哺乳類、例えば、マウス、イヌ、またはサルに投与されると、持続的な好中球増加が誘発されるMooreetal.,1987。G-CSFは、多数の源から取得および精製され得る。G-CSFは、培養された腫瘍細胞株の上澄みから単離され得る。組み換えDNA技術の進歩によって、真核宿主細胞発現の産生物として、グリコシル化形態のG-CSF、および原核宿主細胞発現の産生物として、非グリコシル化形態のG-CSFの商業規模量の産生が可能になった。G-CSF組成物または製剤は、投与経路に基づいて選択されてもよく、リポソームおよびミセル製剤ならびに古典的な医薬製剤を含み得る。好適な実施形態において、G-CSFタンパク質に基づく治療は、連続または断続的静脈内投与を介してもたらされる。有効量とは、G-CSFの1つまたは複数の生物活性のレベルにおける観察可能な変化を支持するために十分なG-CSFポリペプチドの量を意味する。変化は、G-CSF活性のレベルの増加であってもよい。好ましくは、変化は、骨髄幹細胞動員の増加である。G-CSFタンパク質製剤の特異的活性は、約100単位/mgタンパク質~約500単位/mgタンパク質の範囲内であり得ると考えられる。したがって、ヒトG-CSFタンパク質の所与の製剤は、約100単位/mgタンパク質、約125単位/mgタンパク質、約150単位/mgタンパク質、約175単位/mgタンパク質、約200単位/mgタンパク質、約225単位/mgタンパク質、約250単位/mgタンパク質、約275単位/mgタンパク質、約300単位/mgタンパク質、約325単位/mgタンパク質、約350単位/mgタンパク質、約375単位/mgタンパク質、約400単位/mgタンパク質、約425単位/mgタンパク質、約450単位/mgタンパク質、約475単位/mgタンパク質、約500単位/mgタンパク質を含み得る。特に好ましい範囲は、約100単位/mgタンパク質~約200単位/mgタンパク質である。より好ましい範囲は、約150単位/mgタンパク質~約200単位/mgタンパク質である。好ましくは、タンパク質組成物は、実質的に汚染因子を含まず、汚染レベルは0.02w/w未満である。患者への注射に適したG-CSF組成物は、例えば、精製されたG-CSFおよび安定化塩を含む凍結乾燥試料の製薬上許容される希釈剤を用いて再構成することによって調製され得る。組成物の投与は、全身または局所であり得、有効量のG-CSFタンパク質組成物の単一部位注入を含んでもよい。G-CSFの投与のための当業者に知られている任意の経路が考えられ、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、または長期投与のためのカテーテルを含む。あるいは、G-CSFは、複数部位において対象に送達されてもよいと考えられる。複数投与は、同時に行われ得るか、または数時間の期間にわたって投与されてもよい。場合によっては、組成物の連続フローを提供することが有益であり得る。追加の治療は、期間ベース、例えば、毎日、毎週、または毎月投与されてもよい。一実施形態において、G-CSFは、4、5、6、もしくは7日間、または製造者によって推奨されるように投与される。Neupogen登録商標は、典型的に、5日目、および十分な幹細胞および/または前駆細胞が放出されていない場合は、5、6、および7日目、最初のアフェレーシス手順の前に10μg/kg/日を毎日4日にわたって皮下注射する。G-CSFの誘導体も本明細書に含まれる。そのような誘導体は、1つまたは複数の水溶性ポリマー分子例えば、ポリエチレングリコールによって、または融合タンパク質を含むポリアミノ酸の添加によって、修飾された分子を含む当該技術分野においてよく知られている手順。そのような誘導体化は、N末端またはC末端において単独で発生し得るか、または複数の誘導体化部位が存在し得る。1つまたは複数のアミノ酸をリシンと置換することによって、誘導体化のための追加部位を提供し得る米国特許第5,824,784号および同第5,824,778号。末梢血からの幹細胞および前駆細胞の採取一実施形態において、幹細胞および/または前駆細胞は、末梢血の中に動員される。幹細胞および/または前駆細胞は、対象の末梢血から単離され得る。末梢血は、全身麻酔を使用せずに採取することができ、手順は通常、外来扱いで行われ、採取中または採取後にほとんどまたは全く不快感を伴わない。幹細胞および/または前駆細胞は、好ましくは、アフェレーシスとして知られるプロセスによって、対象の末梢血から単離される。幹細胞および/または前駆細胞は、蛍光活性化細胞分類または密度勾配遠心分離を使用してさらに精製されてもよい。例えば、CD34を発現する細胞は、蛍光活性化細胞分類によってアフェレーシス試料から精製され得る。幹細胞および/または前駆細胞は、生体外で拡張および/または分化され、将来の使用のために保管されるか、または患者に注射され得る。患者は、その血液を採取した対象またはHLA適合した対象であり得る。一実施形態において、最初のアフェレーシスは、5日目に行われ、フォローアップアフェレーシスが6日目および7日目に行われ、十分な幹細胞/前駆細胞が採取されない場合は、14日目まで毎日アフェレーシスを行ってもよい。典型的に、ヒト移植では、2×106CD34細胞/KGより多くが単離および使用される。一実施例において、非ホジキンリンパ腫では、5×106CD34細胞/Kgが移植用に単離され、多発性骨髄腫では、6×106CD34細胞/Kgが移植用に単離される。好ましくは、5×106CD34細胞/Kgが、非ホジキンリンパ腫における移植用に最大4回のアフェレーシスで単離され、多発性骨髄腫では、6×106CD34細胞/Kgが、最大2回のアフェレーシスで単離される。典型的に、G-CSF単独またはG-CSFとMozobil登録商標などの他の動員剤による動員を使用して、CD34細胞を末梢に放出する。G-CSFNeupogen登録商標は、それぞれ多発性骨髄腫患者および非ホジキンリンパ腫患者の約30および40において、この数の細胞/Kgを達成する際に有効である。Mozobil登録商標とNeupogen登録商標の併用は、それぞれ多発性骨髄腫患者および非ホジキンリンパ腫患者のさらに40および30において有効である。したがって、治療の約3分の2および3分の1は、それぞれ既存の単剤療法および複合治療によって最適以下である。本開示のアンチセンス化合物は、新規の機序を標的とし、Neupogen登録商標およびMozobil登録商標と比較して、放出を向上させ、アフェレーシスの回数を減少させる。既存の治療は、汚染エフェクターT細胞も放出する場合があり、同種移植において移植片対宿主病を引き起こすか、または自家移植の場合に過剰な好中球または汚染腫瘍細胞をもたらす。本開示のアンチセンス化合物は、異なる標的に対するものであり、実施例4および5に示されるように、細胞によって選択的に取り込まれ、好中球を放出しないため、既存の治療をより潜在的な安全性の向上を提供する。開示の方法に従って採取された幹細胞および前駆細胞の使用開示の方法に従って採取された幹細胞および/または前駆細胞は、幹細胞および/または前駆もしくはエフェクター細胞移植を必要とする、疾患および病態の治療において使用することができる。例えば、幹細胞および/または前駆細胞は、正常な血球産生および成熟の機能不全または機能障害、造血器悪性腫瘍、自己免疫疾患、肝疾患、または免疫不全の治療において例えば、放射線治療、化学療法、または病原体の感染の理由で使用することができる。移植は、典型的に、真の長期自己複製幹細胞であるいくつかの細胞、いくつかの短期前駆細胞、およびいくつかの非幹細胞を含む。幹細胞および/または前駆細胞は、患者に投与する前に、生体外で拡張または分化されてもよい。例えば、幹細胞および/または前駆細胞は、エフェクター肝細胞に分化し、肝疾患を患う患者に移植されてもよい。本明細書で使用される、用語治療は、疾患もしくは病態の進行の抑止、阻害、遅延、もしくは逆転、または疾患もしくは病態の臨床症状の軽減もしくは予防を含む。白血病およびリンパ腫開示の方法に従って採取された幹細胞および前駆細胞は、白血球および前駆細胞の未制御増殖から生じる血液の癌白血病およびリンパ腫の治療において使用することができる。一実施形態において、患者自身の癌性造血細胞は、放射線治療または化学療法を介して破壊され、適合する自家ドナーの末梢血から採取した幹細胞および前駆細胞の移植によって置き換えられる。別の実施形態において、患者自身の造血幹細胞および前駆細胞は、放射線治療または化学療法の前に採取され、後次に戻される。血液の癌には、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病CML、ホジキン病、多発性骨髄腫、および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。遺伝性血液障害開示の方法に従って採取された自家幹細胞および前駆細胞の別の使用は、遺伝性血液障害、例えば、異なる種の遺伝性貧血血球の産生障害および先天性代謝異常必須体成分の産生または化学副産物の分解に必要な主要酵素の欠損を特徴とする遺伝性疾患の治療においてである。血液障害は、再生不良性貧血、β-サラセミア、ブラックファン-ダイアモンド症候群、球様細胞白質萎縮症、鎌状赤血球貧血、重度の複合免疫不全、X連鎖リンパ増殖性症候群、およびウィスコット-アルドリッヒ症候群が挙げられる。骨髄移植によって治療され得る先天性代謝異常には、ハンター症候群、ハーラー症候群、レッシュナイハン症候群、および大理石骨病が挙げられる。癌化学療法における造血幹細胞レスキュー癌細胞を急速に分割することを目的とした化学療法は、必然的に造血細胞の急速な分割を目標とする。開示の方法に従って採取された自家幹細胞および前駆細胞を使用して、化学療法によって破壊された細胞を置き換えることができる。患者は自身の細胞を移植されるため、免疫不適合または移植片対宿主病の可能性はない。癌の移植片対腫瘍治療開示の方法に従って採取された幹細胞および前駆細胞を使用して、他の方法では治療不可能な腫瘍、特に、標準治療に抵抗する固体腫瘍肺、前立腺、卵巣、乳房、大腸、食道、肝臓、および膵臓の癌を含むを治療してもよい。この治療は、自家幹細胞または前駆細胞の移植に依存する。対象自身の免疫系は抑制されるが、完全には破壊されない。ドナーの細胞を患者に輸注し、例えば、DNA指紋法を使用して、患者の免疫細胞を注意深くモニターし、ドナー細胞の生着および患者自身の血球の再増殖を追跡する。患者の免疫系は、それらのT細胞が移植片を攻撃するのを阻止し、移植片対宿主病を低減するように、さらに抑制される必要があり得る。他の用途開示の方法に従って採取された幹細胞および前駆細胞を使用して、自己免疫疾患、例えば、1型糖尿病、関節リウマチ、および全身性紅斑性狼瘡を治療してもよい。開示の方法に従って採取された幹細胞および前駆細胞は、損傷した細胞を修復するように遺伝子を送達する手段として使用されてもよいすなわち、遺伝子治療用。実施例1:マウスの薬理学的動員試験本試験では、インビボマウスモデルにおいて、マウスVLA-4をG-CSFと併用して、骨髄性前駆細胞の動員を評価する。動物6~8週齢の雌C57BL/6マウス30匹をJacksonLaboratoryから購入し、ブリティッシュコロンビア癌研究所BritishColumbiaCancerAgencyBCCA,バンクーバー,ブリティッシュコロンビア州,カナダにて収容および処置した。化合物ISIS348574ATATTTTTCCACCTGTGCCC:配列番号:2、マウスおよびラットα4インテグリンマウスおよびラットCD49dに対して完全に相補的なすべてのCについて、ホスホロチオエート骨格および5-メチルシストシンを有する5-10-5MOEギャップマーをこれらの試験で使用した。ISIS348574は、7138.23DaのMWおよび180.0mMのEXTCoeffを有する。マウスVLA-4を標的とするこのオリゴヌクレオチドの分析は、国際公開第WO2006/086821号に説明されるとおりである。動物処置スケジュール6群のマウス1群当たりマウス5匹を生理食塩水の対照または試験化合物Neulasta登録商標、G-CSFの臨床等級ペグ化形態、もしくはISIS348574、マウスVLA-4mVLA-4に対するアンチセンス化合物によって、表3に要約されるスケジュールに従って処置した。マウスの体重に基づいて、mVLA-4アンチセンス化合物6mg/mLで0.8mLアリコートを注入し、最終アンチセンス用量30mg/Kgを得た。mVLA-4アンチセンス化合物は、4、7、10、または14日間、計2、3、5、または7回の投与で注入した。採取の3日前に、すべてのアンチセンス処置群およびG-CSF単独処置群に、50μg用量のNeulasta登録商標を1回注入した。対照群は、生理食塩水媒体の投与を14日間受け、G-CSFの注入はなかった。試験の開始から14日後、カナダ動物管理協会ガイドラインCanadianCouncilonAnimalCareGuidelinesに従って、すべてのマウスを屠殺した。末梢血試料を心穿刺によってEDTAMicrotainer管に採取し、コロニー形成細胞CFCおよびフローサイトメトリー分析のために処理した。細胞処理各試料の体積を記録し、3酢酸およびNeubauer血球計算盤を使用して、有核細胞の計数を行った。これらから、各個のマウスについて、末梢血1mL当たりの有核細胞の総数を計算した。赤血球細胞RBCを氷上で10分間、血液v/vの9倍の塩酸アンモニウム緩衝液で溶解し、試料をIscove修飾ダルベッコ媒体IMDM2ウシ血清FBS中に1回洗浄した。次に細胞ペレットを既知の体積のIMDM2FBS中で再懸濁し、有核細胞数を評価して、細胞濃度を明らかにした。この細胞ストックから、2×106細胞/mLの希釈液を調製して、造血前駆細胞数を評価し、残りの細胞をフローサイトメトリー分析に使用した。フローサイトメトリーマウスScalLy-6A/Eマーカーの発現を評価するために、細胞をSca-1PE共役抗体クローンE13-161.7,BDPharmingen,ロット29286、有効期限2011-05-31および一連のFITC共役系統マーカーCD5、CD45R、Gr-1、CD11b、Ter119を用いて培養した。抗体カクテルを100μL中約1×106個の細胞に添加し、4°Cで30分間培養した。次に細胞をACK溶解緩衝液で短期間培養し、任意の残りの赤血球を溶解した。細胞ならびに非関連FITCおよびPE標識抗体を含む管を調整して、適切な蛍光染色体の補償を確立した。血球計算器調整のための管をPBS2FBSで洗浄し、試料管を、1μg/mLのPBS2FBS含有ヨウ化プロピジウムで洗浄して、死細胞を標識した。最大100,000事象の採取後に、CELLQuestソフトウェアを使用して、生細胞のみのフローサイトメトリー分析を行った。選択的前駆細胞マーカーに関するさらなる情報を得るために、細胞を4°Cで一晩保管し、翌日EPCRPEクローンRMEPCR1560、STI、c-キットAPCクローン2B8、BDPharmingen、ロット27108、有効期限2008-04-30およびFITC共役系統マーカーを用いて、前述の手順に従って染色した。クローン形成アッセイ赤芽球BFU-E、顆粒球-単球CFU-GM、および多能性/寡能性CFU-GEMM系統のクローン形成前駆細胞を、50ng/mLrm幹細胞因子、10ng/mLrmインターロイキン3、10ng/mLrhインターロイキン6、および3U/mLrhエリトロポエチンを含有するメチルセルロース系培地MethoCult登録商標M3434において評価した。各マウスから得た末梢血細胞をMethoCult登録商標M3434に添加し、ボルテックスして、2×105細胞/培養皿を3部で蒔いた。培養物を10日間、37°C、加湿した培養器中5のCO2で培養した。統計解析各群のデータセットについて、および各マウスのクローン形成アッセイの3部培養物について、平均/-1標準偏差を計算した。標準t検定を行い、対照と処置した培養物との間で、生成された細胞またはコロニーの数に差があるか否かを評価した。コロニー係数の潜在的な主観性に起因して、0.01未満のp値を有意とみなす。マウス試験コロニー形成細胞コロニー形成前駆細胞アッセイを使用して、mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFの様々な投与レジメンでマウスを処置した後の骨髄から末梢血への骨髄前駆細胞の動員を明らかにした。顆粒球、赤血球、単球、巨核球多能性/寡能性前駆細胞GEMM、CD34、CD33、CD13、HLADRの割合は、G-CSF単独での処置と比較して、mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置後7日目および10日目に70以上、14日目に85以上であった。増殖能の低いGEMM由来の顆粒球、マクロファージ前駆細胞CFU-GM;CD34、CD33、CD13、HLADRの割合は、G-CSF単独での処置と比較して、mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置後10日目および14日目までに約18上昇した。増殖能の低いGEMM由来の最早赤芽球前駆細胞BFU-Eの割合は、G-CSF単独での処置と比較して、mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置後に変化しなかった。CFU-GMとして約20増加した総コロニー形成コロニーは、最も一般的なコロニー形成単位である。mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置は、意外にも、G-CSF単独と比較して生理食塩水対照と比較して、GEMM細胞を7倍多く動員した、骨髄前駆GEMM細胞を12倍多く動員したp<0.01。さらに、意外にも、mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置後、末梢血中のCFU-GM細胞の増加は限られており、BFU-Eは検出されなかった。G-CSF単独での処置は、GEMMに影響を及ぼしp=0.05~0.07、CFU-GM12倍およびBFU-E2.5倍に対して影響すると考えられる。mVLA-4アンチセンス化合物は、4日間でGEMM放出作用を有し始め、7~10日以内にGEMM細胞多能性/寡能性前駆細胞をG-CSFとともに12倍多く放出すると考えられ、すべての顆粒球、赤血球、単球、巨核球を再配置させることができる。マウス試験細胞のフローサイトメトリー分析フローサイトメトリーを使用して、mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFの様々な投与レジメンによるマウスの処置後の、骨髄から末梢血への前駆細胞および幹細胞の動員を明らかにした。mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置は、生理食塩水と比較した場合ではなく、G-CSF単独での処置と比較して、mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置の10日後に、EPCR細胞を55増加させた。これらの試験の最後の3日間に添加された長期作用性G-CSFは、生理食塩水に対して、EPCR細胞を減少させたと考えられる。EPCRは、CCD41またはCD201としても知られる、内皮タンパク質C受容体である。EPCRタンパク質は、マウス骨髄細胞の~1.5上に検出される。精製されたEPCR細胞は、造血幹細胞活性のために高度に濃縮されると報告されている。EPCR細胞の割合は、恐らく試験におけるマウス造血幹細胞の最適なマーカーである。高EPCR発現細胞は、移植されると骨髄を再構成できると考えられる。マウスのEPCR細胞は、最早ヒト造血幹細胞の同等物であり得る。mVLA-4アンチセンス化合物およびG-CSFによる処置は、白血球減少を引き起こした。G-CSF処置単独では、通常、マウスの血液中の主要な白血球集団である、好中球を増加させ、mVLA-4アンチセンス化合物が白血球の減少を引き起こす可能性がある。ATL1102hVLA-4もまた、ヒト試験においていくらかの血球を減少させるが、実施例8において以下に記載されるVLA-4に対する抗体によって生じるものではない。実施例2:ヒト薬理学的CD34動員試験この試験では、インビボヒト試験においてヒトVLA-4に対するアンチセンスを使用して、CD34細胞動員を評価した。CD34のRNAレベルは、全血中RNAのPCRを介して検出された。化合物ISIS107248CTGAGTCTGTTTTCCATTCT:配列番号:1、ヒトα4インテグリンCD49dに対して完全に相補的なすべてのCについて、ホスホロチオエート骨格および5-メチルシストシンを有する3-9-8MOEギャップマーをこれらの試験で使用した。ATL1102hVLA-4アンチセンスオリゴヌクレオチドとしても知られるこのオリゴヌクレオチドおよび他の標的ヒトVLA-4のインビトロ分析は、国際公開第WO2000/20635号および米国特許第6,258,790号に記載のとおりである。注入用の皮下溶液は、化合中に酸または塩基によってpH7.4に調整された注入用水中にATL1102のみを含んだ。溶液は、透明な明黄色であった。I型フリントグラスバイアル瓶に入れ、テフロン登録商標コーティングを有する臭化ブチルゴム栓で塞ぎ、アルミニウムフリップオフオーバーシールで密閉した。多発性硬化症患者の治療二重盲検プラセボ対照試験において、多発性硬化症患者にATL1102を投与し、磁気共鳴撮像によって脳の病変数に対する薬物の影響を明らかにした。再発寛解型多発性硬化症患者RRMSにおける治療の詳細および損傷数の減少に関するこのオリゴヌクレオチドの分析は、国際公開第2010/008474号に記載のとおりである。インビボヒトモデルにおけるCD34動員試験数人のMS患者から調製した全血中のRNAを、CD34造血幹細胞および前駆細胞動員について評価した。CD34細胞動員は、皮下注射によってATL1102hVLA-4アンチセンスオリゴヌクレオチドを受けている、RRMSと診断された11例の対象治療8週目の全血中のRNAおよびベースラインが入手可能であったにおいて試験した。RNA単離およびcDNA調製は、以下の実施例3に記載のとおりである。CD34のTaqMan実時間定量的PCROppligeretal,Hematologica2005907:875-880に前述されるように、CD34について、実時間定量的RT-PCRを行った。CD34RNA転写分析ATL1102治療は、赤血球を含む、全血中のすべての細胞において発現したPBGDハウスキーピング遺伝子と比較して、11例の適合RRMS患者において、ベースラインと比較すると、8週目に全血中RNAにおけるCD34転写を1.5倍P<0.027増加させた表4。実施例3:ヒトVLA-4RNAの薬力学的試験本試験では、実施例2の上記インビボヒト多発性硬化症試験において、hVLA-4アンチセンスを使用して、VLARNAの作用を評価した。CD49dRNAレベルは、全血RNAまたは分画CD4およびCD8リンパ球RNAにおいて、PCRを介して検出された。RNA単離東欧センターからの試料に対して、Paxgene登録商標BloodRNAシステム管PreAnalytiX,QiagenGmbHを使用した。全血の2.5mLを直接Paxgene登録商標管に採取し、製造者の指示に示されるとおり処置した。この方法によって、細胞内RNAは必要になるまで安定化した。RNA単離は、製造者の指示に従って、Paxgene登録商標キットを使用して行った。ドイツセンターから得た試料に対して、RNA単離は以下のように行った。24mLのEDTA血の採取から2~8時間後、Ficollに基づく分離溶液LSM1077PAAを使用して、リンパ球の事前濃縮を行った。細胞を数え、製造者の手引きに従ってCD4およびCD8陽性の単離キットDynalを使用する、CD4およびCD8細胞の光磁気免疫単離に即時使用した。CD4およびCD8単離細胞の純度を、フローサイトメトリーによってランダムにチェックした。RNA単離は、製造者の指示に従って、RNeasyキットQiagenGmbHを使用して行った。さらに、EDTA血2.5mLを直接Paxgene登録商標BloodRNAシステム管PreAnalytiX,QiagenGmbHに採取し、製造者の指示に従って、Paxgene登録商標キットを使用してRNA単離を行った。cDNA調製cDNAは、AffinityScriptQPCRcDNA合成キットStratageneを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応PCRテンプレートとして産生した。反応混合物は、総RNA6μL、ランダムプライマー3μL0.1μg/μL、第1鎖マスターミックス2×10μLおよびAffinityScriptRT/RNaseBlock酵素混合物1μLを含んだ。反応液を25°Cで5分間、42°Cで15分間、95°Cで5分間培養した。ヒトVLA-4の増殖のための実時間PCRPCRは、7500実時間PCRシステムAppliedBiosystems上で行った。hITGA4VLA-4の増殖の場合、反応混合液は、cDNA5ng、TaqMan発現アッセイ20x、Hs00168433ml、AppliedBiosystems1.25μL、および12.5μLのTaqMan発現マスターミックス2x、AppliedBiosystemsを総容量25μLに含んだ。ハウスキーピング遺伝子hTBPヒトTATAボックス結合タンパク質の増殖の場合、反応混合液は、cDNA5ngの、TaqMan発現アッセイ20x、Hs00427620ml、AppliedBiosystems1.25μL、およびTaqMan発現マスターミックス2x、AppliedBiosystems12.5μLを総容量25μLに含んだ。hITGA4およびhTATAのPCRは、別個のウェルで行われ、実行ごとに複製する。各試料について、PCRを2回行った。各反応は以下のように行った。50°Cで2分間初期培養し、95°Cで10分間酵素活性化した後、95°Cで15秒間、60°Cで1分間のサイクルを40回行った。データ収集は、60°Cの培養工程で行った。ヒトVLA-4の相対定量各試料におけるhITGA4mRNAの発現レベルは、SDSvl.2ソフトウェアAppliedBiosystemsによって分析した。原則およびワークフローは、以前に説明されているAppliedBiosystemsUserBulletinNo.2P/N4303859;LivakandSchmittgen,2001。相対定量は、較正試料比較結果の基礎として使用される試料における同一配列に対する、試験試料における核酸配列標的の発現の変化を明らかにする。内因性対照遺伝子ハウスキーピング遺伝子の目的は、逆転写反応に対して添加されたRNAの量について、PCRを正規化することである。比較CT法ΔΔCT法は、演算式を使用して、相対定量の結果を得る。この方法の場合、標的と内因性対照との間のPCR効率が比較的等しい限り、標準曲線を使用する必要がない。内因性基準に対して正規化されたCt標的遺伝子-Ct内因性対照=ΔCTおよび較正器に相対するΔCT試料-ΔCT較正器=ΔΔCT標的の量は、2-ΔΔCT;CT=閾値サイクルによって得られる。この実験において、健常な未治療の試験対象のRNAは、較正器試料として使用され、標的-およびハウスキーピング遺伝子-PCRの効率が同等であることが検証されたΔ効率≦0.02。サイクル3~15のCT閾値0.2000000およびベースラインが選択された。結果全血または分画CD4およびCD8リンパ球において検出された1マイクログラム当たりのCD49dRNAレベルに変化はなかった。全血中のCD49dRNA分析は、好中球の減少によって影響される場合があり、細胞がヒト血液中に大量発生し、大部分がVLA-4RNA陰性である。CD4およびCD8リンパ球におけるCD49dRNA減少の不在は、ATL1102が選択数の血中T細胞のみにおいてVLA-4RNAを減少させることを示し、全血中の減少の不在は、ATL1102が選択数の他の血球のみにおいてVLA-4RNAを減少させることを示し得る。これは、実施例4および5の観察と一致する。実施例4:ヒトVLA-4細胞性薬力学的試験細胞表面上のVLA-4レベルを評価するために、実施例試験2におけるRRMS患者から、訪問2回目ベースライン、6回目8週目、7回目12週目、および8回目16週目に血液試料を得た。リンパ球に関するVLA-4アッセイには、36mLの全血が必要であった。細胞表面抗原決定基VLA-4の細胞表面発現および白血球副集団のマーカーについて、患者の血液試料の多チャネルフローサイトメトリー分析を行った。試験は、CD3T細胞、CD4T細胞、CD8T細胞、CD19B細胞、およびCD14単球上で行い、VLA-4共染色は、VLA-4MFIとして、または指定の細胞集団内のVLA-4細胞の割合として分析した。VLA-4細胞表面発現の測定VLA-4膜発現について、フローサイトメトリーによって、モノクローナル抗体MoAbフルオレセインイソチオシアネートFITC共役抗CD49dVLA-4、AcrisAntibodies,Hiddenhausen,Germanyを使用して、全血単核細胞を分析した。つまり、200μLのリン酸緩衝生理食塩水PBSに、VLA-4MoAbを10μL添加した。B細胞を同定するために、10μLのフィコエリトリンPE共役抗CD19MoAbを添加した。単球を同定するために、2μLのアロフィコシアニンAPC共役抗CD14MoAbを添加した。T細胞ならびにそれらのCD4およびCD8副集団を同定するために、10μLのペリニジンクロロフィルタンパク質PerCP共役抗CD3MoAb、10μLのPE共役抗CD4MoAb、および2μLのAPC共役抗CD8MoAbを添加した。100μLのEDTA血液を添加した後、試料を暗所に15分間培養した。赤血球を溶解液BectonDickinson,ハイデルベルグ,ドイツで溶解した後、PBSで洗浄した。染色された細胞をFACSCaliburBectonDickinsonで測定し、VLA-4発現を細胞の割合ならびに平均チャネル蛍光強度MFIとして記録した。MoABは、B細胞に対して配向され、Tリンパ球および単球は、BectonDickinsonから購入した。プラセボの統計解析およびベースライン比較は、2つの方法によって、フローサイトメトリーデータについて行った。第1の方法は、未変換およびログ変換したデータの共分散検定の分析を伴い、以下に報告されるログ変換したデータを用いて、減少率を明らかにし、対応するベースライン値がない場合は、データを除外した。第2の方法は、未変換のデータに関するスチューデントT検定の使用を伴い、すべてのデータが含まれた。結果B細胞表面VLA-4の影響ATL1102処置は、検出可能なVLA-4を発現するCD19Bリンパ球の割合を減少させた。これは、プラセボ群およびベースラインの両方と比較して、8週目に観察された。プラセボ比較において、第1の分析方法によって、11の減少p<0.05が観察された。VLA-4/CD19B細胞数データの第2の分析方法によって、8.3の減少p<0.013が観察された。ベースライン比較において、VLA-4/CD19B細胞の割合に同様の減少が観察された。第1の分析方法によって、11の減少p<0.05が観察され、VLA-4/CD19B細胞数データの第2の分析方法によって、7.1の減少p<0.032が観察された。他の分析において、VLA-4MFIの減少は、16週目にB細胞においてのみ観察された<10>減少。T細胞表面VLA-4の影響ATL1102処置は、VLA-4の検出可能なレベルを発現するCD3およびCD4細胞の割合を減少させた。ベースラインと比較して、12週目のデータを分析すると、第2の分析方法は、VLA-4でもある、CD3Tリンパ球の割合の減少8.2減少、p<0.037およびVLA-4でもある、CD4Tリンパ球の割合の減少12減少、p<0.047を示した。結論ATL1102は、選択数の血中B細胞およびT細胞上のVLA-4を減少させる。実施例5:ヒト血球薬力学的試験血球変化を評価するために、実施例試験2において、訪問2、6、7、および8回目にRRMS患者から血液試料を得た。実施例4のように多チャネルフローサイトメトリーを使用して、血液学によって細胞変化を評価した。CD8/CD4測定:CD8/CD4細胞数を評価するために、VLA-4アッセイのために得られた36mLの血液試料を使用して、訪問2、6、7、および8回目に、フローサイトメトリーによって血液試料を分析した。CD4:8の比は、これらの試験において変化しなかった。細胞数:白血球訪問2、6、7、および8回目に、血液学および多チャネルフローサイトメトリーによって血液試料を分析した。ATL1102による処置の8週目に、プラセボに対して以下の減少が観察された第1の分析方法を使用。総白血球:37p<0.0005顆粒球:43p<0.0005リンパ球:25p<0.05B細胞:53p<0.0005HLA-DRB細胞:41p<0.05CD4T細胞:26p<0.05CD8T細胞:23p<0.05CD8CD25T細胞p0.05およびCD8HLA-DRT細胞p<0.005の比率の増加の可能性も見られたが、これらの細胞は少数であった。結論ATL1102は、B細胞、T細胞、および顆粒球好中球、好塩基球、および好酸球を含むの数を減少させるデータ図示せず。ATL1102は、単球またはNKリンパ球の数を減少させない。VLA-4に対する抗体が、通常、血液中のこれらの細胞数を増加させることを考えると、このデータは意外である実施例8を参照。VLA-4は、BおよびT細胞の成熟、アポトーシス、活性、接着、および転移において役割を有することが知られておりArroyoetal.,1996、CarrascoandBatista,2006、Loetal,2003、Alteretal,2003Tchilianetal,1997、Ninoetal,2006、それらのうちの1つまたは複数は、ATL1102相II試験において、細胞性薬力学的観察に寄与し得る。VLA-4は、好中球前駆細胞、好酸球、および好塩基球に対しても役割を有する。CD34幹細胞および前駆細胞由来のATL1102は、自己免疫疾患を引き起こす汚染血球をほとんど有しない場合があり、患者自身のCD34細胞を放射線治療後の自己免疫疾患の自家治療において使用可能にする。加えて、開示の方法に従って採取されたATL1102幹細胞および前駆細胞は、移植片対宿主病に関与する汚染細胞をほとんど含まない場合があり、白血病のより良好な同種治療を可能にする。移植片において影響を受けないナチュラルキラー細胞および樹状単球細胞は、無病の生存を向上させる。ATL1102は、選択数の血中B細胞およびT細胞上のVLA-4を減少させ、患者の腫瘍細胞を放出する能力を減少させる。実施例6:ヒトATL1102薬物動態試験オリゴヌクレオチド1血漿濃度を評価するために、訪問2、5、6、および8回目に、血液試料7mLを得た。訪問2、5、および6回目に、オリゴヌクレオチド1/プラセボの注射から1、2、3、4、および6時間前にこれを行った。訪問8回目に、単一試料を得た。採取後、血液試料を10分間、1,600gで4°Cの温度で遠心分離した。上澄みをピペットによってラベル付きのポリプロピレン管試料当たり管2本に移し、さらに-20°C許容範囲5°C以下の温度で保管するために、大型冷蔵庫に移した。薬物動態データATL1102の中央値プロファイルは、1日目~8週目の蓄積ピークまたは総血漿暴露レベルの兆候を示さない図1および表5。治療段階中のCmin濃度の増加は、オリゴヌクレオチド1が、複数回投与によって組織内に蓄積することを示唆する。フォローアップ段階のCmin濃度の減少は、t1/2の消滅が約3週間であることを示唆する。ATL1102の中央値血漿濃度は、1日目、4週目および8週目の連続測定で明らかにした。皮下投与後、ATL1102は、第1の投与後時点投与後1時間で見られる測定可能な濃度で急速に吸収されるように思われた。続いて、すべての中央値プロファイルは、1~2時間に明らかな増加を示した。1日目の中央値プロファイルは、さらに投与から2~3時間に顕著に増加した。これは、4週目および8週目の中央値プロファイルには当てはまらなかった。中央値プロファイルのATL1102ピーク血漿濃度は、注射から2~4時間後に得られ、その後減少し、すべての中央値プロファイルについて、6時間の値は、4時間の値よりも明らかに低い。4週目および8週目の投与前ATL1102濃度中央値は、それぞれ1日目および4週目の投与後6時間の中央値濃度よりも約100倍低かった。一般に、1週目にはATL1102を3回皮下投与し、2~8週目には週2回皮下投与したところ、1日目~8週目の蓄積ピークCmaxまたは総AUC血漿暴露レベルは認められなかった。しかしながら、トラフ投与前濃度は、4週目~8週目に明らかに増加した。トラフ中央値は、4週目および8週目にそれぞれ38ng/mLおよび88ng/mLであった。8週目に、32例の患者全員が、4週目のトラフレベルを超えるトラフレベルを有した。8週目に計画された治療の中断後、ATL1102血漿濃度中央値は、12週目に32ng/mL投与後4週間、および16週目に11ng/mL投与後8週間であった。薬物動態パラメータは、個別の血漿濃度プロファイルから計算した。計100個のプロファイルを評価し、1日目および4週目にそれぞれ34プロファイル、8週目に32プロファイルを評価した。Cmaxピーク暴露値は、2889ng/mL~24118ng/mLの範囲にあった。中央値は、1日目に9773ng/mL、4週目に10505ng/mL、8週目に9462ng/mL、および全体で9848ng/mLであった。ATL1102の最大濃度は、投与後平均3.3時間1日目、投与後2.7時間4週目、および投与後3.2時間8週目に観察された。100個の血漿濃度プロファイルをすべて考慮すると、最大濃度は、28プロファイルにおいて2時間、41プロファイルにおいて3時間、および27プロファイルでは4時間に観察された。中央値tmaxは、ATL1102の投与後約3時間であった。個別のAUClast値総暴露は、13374h×ng/mL~110909h×ng/mLの範囲にあった。AUClast値は、1日目~8週目の蓄積効果を示さなかった。中央値は、1日目に45847h×ng/mL、4週目に46074h×ng/mL、8週目に45344h×ng/mL、および全体で45976h×ng/mLであった。計18例の患者は、12週目および16週目の両方において、ATL1102血漿濃度を測定し、これによって最終の排泄の半減期t1/2の概算を可能にした。計算された排泄の半減期は、1.8~20週間であり、中央値は3.0週間、幾何平均は3.2週間、および変動係数は106であった。ログ変換された半減期は、標準偏差0.564であった。ATL1102血漿濃度は、女性患者のほうが男性患者よりも約1.6倍高いように思われる。AUClastおよびCmax値の幾何平均は、女性患者のほうが男性患者よりも1.5~1.8倍高い。暴露におけるこの明らかな性差を確認するために、今後より多くの患者を対象とした試験が必要である。結論最大血漿ATL1102濃度は、投与から約3時間後に到達し、2889ng/mL~24118ng/mLの範囲にあった中央値9848ng/mL。投与後6時間までの血漿濃度時間曲線下の面積は、13374h×ng/mL~110909h×ng/mLの範囲にあった中央値45976h×ng/mL。1日目~8週目に蓄積ピークCmaxまたは総AUC血漿暴露レベルは認められなかった。4週目および8週目の投与前濃度中央値は、それぞれ1日目および4週目の投与後6時間の濃度中央値よりも約100倍低かった。4週目中央値38ng/mL~8週目中央値88ng/mLに投与前濃度に増加が見られ、複数回投与時の組織におけるATL1102の蓄積を示唆する。たった2つの時点最終投与後4週間および8週間から推定される最終の排泄の半減期の中央値は、3週間であった。実施例7:ラットにおけるATL1102薬物動態試験Sprague-Dawleyラットに、3H-ATL1102ISIS107248の静脈内ボーラス注射を単回行った。血漿、血液、および組織中の放射能の平均濃度は、液体シンチレーション計数を使用して、雄ラットの平均用量5mg/Kgで決定した。以下の表6は、ATL1102血液/血漿および組織濃度の測定値に関する要約情報を分minおよび時間hrまたは日dで示す。血液および血漿は、1mL当たりのマイクログラム等量であり、組織濃度は、組織1g当たりのマイクログラム等量である。ATL1102は、4時間以内に血液および血漿から器官例えば、腎臓、肝臓、ならびに一次および二次免疫器官骨髄BMおよびリンパ節LNを含むなどに速やかに除去される。大腿骨を除くBMBMexfにおいて、半減期は約14日であった。BM大腿骨において、半減期はより長かった。雄Sprague-Dawleyラットに、3H-ATL1102ISIS107248の19.3mg/Kg静脈内ボーラス注射を単回投与し、雌ラットには、19.7mg/Kgを単回投与した。4時間および24時間の血漿、血液、ならびに骨髄、腎臓、および肝臓における放射能の平均濃度は、表7において以下に示される。ATL1102は、4時間の器官よりも血漿においてより低く、24時間までに大部分が腎臓、肝臓、および骨髄に出現する。異なる部位から分析された様々な骨髄試料において、薬物濃度は、雄および雌の両方において、組織1グラム当たりのマイクログラム等量で肝臓とほぼ同一である。実施例8:VLA-4に対する拮抗薬と比較したVLA-4に対するアンチセンスの比較ヒト成熟血球薬力学および薬物動態異なる薬力学および薬物動態を含むVLA-4アンチセンス薬物の新規の機序は、特にVLA-4拮抗薬小分子および抗体の潜在的使用と比較されるとき、単独および動員剤G-CSFおよび/またはMozobil登録商標と併用して使用されて、幹細胞/前駆細胞動員において利益を提供する。Tysabri登録商標は、インターフェロンβまたはcopaxone不良などの他の治療が失敗したときに、再発寛解型多発性硬化症RRMSを治療するための市販のVLA-4標的に対するモノクローナル抗体である。ボランティアおよびRRMSにおけるTysabri登録商標治療は、血中のすべてのVLA-4白血球に作用して、免疫細胞の末梢隔離に至る。CD4、CD8、およびナチュラルキラー細胞を含む、循環リンパ球1.5倍、ならびにB細胞2.8倍を他のリンパ球よりも増加させる。Tysabri登録商標は、単球を増加させ、顆粒球は好酸球および好塩基球を増加させ、ヒトにおいて事実上すべてVLA-4陰性である、好中球を増加させないKrumholzetal,2008、Polmanetal,2006、Putzkietal,2010、Kivisaaketal,2009。Tysabri登録商標は、長い血中半減期を有し、1ヶ月より長い持続性作用を有する。これは、JCウイルス活性および進行性の多発性白質脳炎PMLを引き起こす能力を有する、強力な免疫抑制薬である。対照的に、VLA-4に対するアンチセンス薬であるATL1102は、循環B細胞、CD4T細胞、CD8T細胞、および顆粒球好中球、好酸球、および好塩基球を含むを減少させ、血中の単球およびナチュラルキラー細胞の数に影響しない。ATL1102は、血漿中で非常に短い半減期を有し、数時間以内に急速に器官に除去され、循環白血球の薬物への暴露を制限する。これらの薬物動態、所定の成熟血球に対する選択的作用、さらに実施例4に概説される治療の選択的なVLA-4薬力学的作用は、大部分の血球において、VLA-4を介する接着および免疫監視能力を保存する。実施例9:ATL1102第I相試験本試験の主な目的は、用量増量レジメンで付与され、健常なボランティアに皮下SC注射される、ATL1102の単回投与および複数回投与の安全性および耐性を評価することである。雄および雌の両方を試験に組み入れた。投与レジメン用量増量試験において雄における単回皮下注射用量は、0.1mg/Kg、0.5mg/Kg、1.0mg/Kg、2.0mg/Kg、4.0mg/Kg、および6.0mg/Kgであった。雄において、2.0mg/Kgの単回の静脈内注射用量は、60分かけて投与される。雌における複数回の皮下注射用量は、1、3、および5日目に4.0mg/Kg、1、3、および5日目に6.0mg/Kgが投与された。対象は、盲検において活性薬物またはプラセボを受けるように無作為抽出した。対象は、他に単会の試験期間のユニットに参加した。単回投与の増量スケジュールの場合、対象は、投与前の午後に入院し1日目、調査者の裁量で、投与完了後約24時間で退院した。複数回の投与スケジュールの対象は、3回目の投与から24時間後に退院した。次に、対象は、多数の外来に戻る薬物動態のための血液試料を採取するために最大59週。ATL1102用量は、医師または看護師によって、0.9NaCl生理食塩水とともに最大100mLの皮下注射として、または静脈内注射として60分間にわたって投与されたグループ7。対象は、注射中は横臥位または半横臥位であった。対象は、投与の時間から少なくとも4時間は横臥位/半横臥位を維持するように求められた。各投与の実際の開始時間およびグループ7のみ終了時間がCRFに記録された。試験以降の日すべての対象は、4、8、15、22、および29日目に、ATL1102用の血液採取のために再訪し、2mg/Kg以上を投与された対象もまた、ATL1102薬物動態試料のために59日目までの日に再訪した。4、8、および15日目に、すべてのグループからバイタルサイン血圧および脈拍を得た。安全性研究所試験のための血液採取は、投与24時間後に行った4、8、15日目およびフォローアップ。フォローアップ血圧、体温、および脈拍数、12誘導ECGおよび研究所安全性試験血液学、臨床化学、および尿検査を含む身体検査。ATL1102用の血液採取は、最大1mg/Kgを受ける対象の場合、29日目の対象の訪問で行い、次に2mg/Kg以上を受ける対象の場合、59日目に行った。同様の評価を複数回投与試験の対象に行った。有害事象はこの訪問時に評価した。薬物動態/薬力学的試料採取約1.6mLの血漿を提供するために、ATL1102アッセイ用の血液試料3mLを採取する必要があった。グループ1~3の場合、試料は、ラベンダートップ4.5mLEDTA管内に、投与前ベースラインおよび投与後30、60、および90分、2、2.5、3、4、6、12、24時間、および4、8、15、22、および29日後に採取した。2mg/Kg~6mg/Kg単回皮下投与を受ける対象の場合、試料は、43日目および59日目にも採取した。2mg/Kg静脈内投与を受ける対象の場合、試料は、投与前、注入開始後30、60、70、および90分後、投与後2、3、4、6、8、および24時間後、ならびに2、4、8、15、22、29、43、および59日目にも採取した。複数回皮下投与を受ける対象の場合、血液試料は、24時間薬物濃度プロファイリングの場合、いつも1日目第1回投与後および5日目第3回投与後に採取され、次に異なる時点、少なくとも投与後最大59日目に採取された。研究所試験血液学:Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、RBC、WBCおよび百分率、血小板、PT、APTT、TT。生化学:Na、K、クレアチニン、空腹時血糖、AP、AST、ALT、GGT総タンパク質、アルブミン、ビリルビン、尿素、相補体。尿:比重、pH、タンパク質、糖、血液、ケトン類10sgマルチスティックを使用する。異常な試験紙結果が生じた場合は、尿を顕微鏡および培養検査に送った。結果短期ATL1102第I相試験において、4mg/Kgおよび6mg/Kgの複数回投与であっても、白血球のレベルの増加および赤血球または血小板に対する影響は見られなかった。実施例10:健常なボランティア、非ホジキンリンパ腫NHL患者、および多発性骨髄腫MM患者における幹細胞/前駆細胞動員ATL1102は、幹細胞/前駆細胞を放出するように、健常なボランティア、非ホジキンリンパ腫NHL患者、多発性骨髄腫MM患者に投与される。優れた動員を提供するために、単独で、G-CSF作動薬と一緒に、Mozobil登録商標と一緒に、またはG-CSFMozobil登録商標もしくは他の動員治療と一緒に投与されてもよい。ATL1102およびG-CSF類似体Neupogen登録商標を使用して、幹細胞および/または前駆細胞を放出するための方法が以下に記載される。試験は、ATL1102G-CSFが、CD34造血幹細胞および/または前駆細胞の放出において、G-CSF単独での動員よりも優れていることを示すように、対照とともに設計される。毎日Neupogen登録商標フィルガストリムを投与する代わりに、ペグフィルグラスチムペグ化G-CSF類似体、Neulasta登録商標長時間作用するG-CSF-ペグを単回投与する。主な目的ATL1102Neupogen登録商標造血前駆細胞動員が、安全、効果的、かつNeupogen登録商標単独での動員よりも優れていることを示す。投与レジメン1:ATL1102およびG-CSF治療スケジュール2つの対象群1群当たり10人は、4、5、6、または7日間、または製造者によって推奨されるように、フィルグラストリムG-CSF類似体、作動薬Neupogen登録商標を毎日注射することにより治療される。Neupogen登録商標は、典型的に、5日目、および任意に、十分な幹細胞/前駆細胞が放出されない場合は、5、6、および7日目の最初のアフェレーシス手順前に、10μg/kg/日を4日間毎日皮下注射される。ある群は、ATL1102、hVLA-4アンチセンス化合物で追加治療される一方で、他の群は、生理食塩水を注射される。hVLA-4アンチセンス化合物は、1日当たり4mg/kKgの最終アンチセンス用量を得るように注射される。hVLA-4アンチセンス化合物は、計4、5、6、もしくは7回投与または最大許容用量で、4、5、6、もしくは7日間にわたって毎日注射される。最初のアフェレーシス手順は5日目であり、十分な幹細胞/前駆細胞が放出されない場合は、6日目および7日目にフォローアップアフェレーシスを行うが、アフェレーシスは、14日目まで毎日行われてもよい。試験は、ATL1102を含むNeupogen登録商標レジメンにおいて、1kg当たりの動員されたCD34幹細胞/前駆細胞の数、幹細胞/前駆細胞の目標数を回収するために必要なアフェレーシスの回数、生着に要する時間、および安全性を測定するように設計される。投与レジメン2:ATL1102およびG-CSF治療スケジュール2つの対象群1群当たり10人は、4、5、6、または7日間、または製造者によって推奨されるように、フィルグラストリムG-CSF類似体、作動薬Neupogen登録商標を毎日注射することにより治療される。Neupogen登録商標は、典型的に、5日目、および任意に、十分な幹細胞/前駆細胞が放出されない場合は、5、6、および7日目の最初のアフェレーシス手順前に、10μg/kg/日を4日間毎日皮下注射される。ある群は、ATL1102、hVLA-4アンチセンス化合物で追加治療される一方で、他の群は、生理食塩水を注射される。hVLA-4アンチセンス化合物は、1日当たり4または6mg/Kgの最終アンチセンス用量を得るように注射される。hVLA-4アンチセンス化合物は、計3回の投与または最大許容用量で、1日おき1、3、5日目に注射される。最初のアフェレーシス手順は5日目であり、十分な幹細胞/前駆細胞が放出されない場合は、6日目および7日目にフォローアップアフェレーシスを行うが、アフェレーシスは、14日目まで毎日行われてもよい。試験は、ATL1102を含むNeupogen登録商標レジメンにおいて、1kg当たりの動員されたCD34幹細胞/前駆細胞の数、幹細胞/前駆細胞の目標数を回収するために必要なアフェレーシスの回数、生着に要する時間、および安全性を測定するように設計される。研究所試験以下の試験を行うことができる。放出されるCD34幹細胞/前駆細胞の数および種に関する情報を得るために、様々な幹細胞/前駆細胞表面マーカーを用いて生細胞のフローサイトメトリー分析を行ってもよく、また他の表面マーカーを使用して、血中の白血球集団を評価してもよい。クローン形成分析を行って、多能性/寡能性CFU-GEMM、赤芽球BFU-E、顆粒球-単球CFU-GM、および巨核球CFU-Mkを含むクローン形成前駆細胞を明らかにする。末梢血細胞は、培養物上で決定される様々な因子およびコロニー形成単位とともに置かれる。マウスへの幹細胞生着:動員および回収されたヒト末梢血幹細胞/前駆細胞の生着能は、NOD-SCID/2m-/-マウスモデルにおいて明らかにされ得る。ヒトへの幹細胞生着:動員および回収されたヒト末梢血幹細胞/前駆細胞の生着能は、高用量化学療法後の患者において明らかにされる。血小板回復および好中球回復の速度ならびに長期グラフト能が調査される。血液学を行って、血中の白血球、血小板、および赤血球集団を評価してもよい。Neupogen登録商標と併用されるATL1102治療の安全性を評価して、深刻な有害事象に関連する任意の薬物が存在するか否かを明らかにする。結果有用性変数:2×106CD34細胞/Kgを達成したボランティアまたは患者の割合。例えば、NHLにおける4回以下のアフェレーシスにおいて、体重1Kg当たり5×106のCD34細胞を超える者の割合、および例えば、MMにおける2回以下のアフェレーシスにおいて、体重1Kg当たり6×106のCD34細胞を超える者の割合。生着が促進され、耐久性があるか否かを評価する。安全性変数:リンパ腫動員を評価し、主要な毒性が検討される。上記試験は、Neupogen登録商標単独と比較して、ATL1102Neupogen登録商標を付与されるボランティアおよび患者が、移植に使用できる幹細胞および/または前駆細胞をより多く有することを示すことが期待される。上記試験は、移植に必要な幹細胞および/または前駆細胞の目標数を得るために必要なアフェレーシス回収の数を明らかにすることが期待される。これらの試験はまた、幹細胞および/または前駆細胞が、Neupogen登録商標単独と比較して、ATL1102Neupogen登録商標によって動員される患者において、再生着に要する日数も評価する。当業者であれば、広義に説明されるように、発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されるように、多くの変型および/または修正を発明に行ってもよいことを理解するであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる観点において、例示的であると見なされ、制限的ではない。本明細書で論考および/または参照されるすべての出版物は、それら全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、行為、物質、装置、物品、または同様物に関する任意の論考は、単に本発明に文脈を提供する目的である。これらの事項のいずれかまたはすべては、本出願の各請求項の優先日前に存在したために、先行技術の一部を形成することの承認として、または本発明に関連する分野における共通の一般的知識であるかのように見なされるものではない。"