SEQIDNO1、2、3、4、5、6、7、8、および9からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるIL20ポリペプチドが役割を果たしている疾患に罹患している哺乳動物を治療するための方法であって、該IL20ポリペプチドのアンタゴニストを該個体に投与する工程を含む、方法。前記アンタゴニストが、前記IL20ポリペプチドに結合する抗体、抗体断片、または単鎖抗体、前記IL20ポリペプチドに結合する可溶性受容体、およびIL20の可溶性受容体に結合する抗体、抗体断片、または単鎖抗体からなる群より選択され、該可溶性受容体が、IL20RAサブユニットおよびIL20RBサブユニットからなる、請求項1記載の方法。前記可溶性受容体が、IL20RAの細胞外ドメインおよびIL20RBの細胞外ドメインからなる、請求項2記載の方法。IL20RAの細胞外ドメインが免疫グロブリン分子の重鎖定常領域と融合し、かつIL20RBの細胞外ドメインがIg分子の軽鎖定常領域と融合している、請求項3記載の方法。IL20受容体に結合する抗体、抗体断片、または単鎖抗体が、IL20RAサブユニットに結合する、請求項2記載の方法。IL20受容体に結合する抗体、抗体断片、または単鎖抗体が、IL20RBサブユニットに結合する、請求項2記載の方法。IL20ポリペプチドが役割を果たしている疾患が、乾癬、湿疹、アトピー性皮膚炎、および接触性皮膚炎からなる群より選択される皮膚病である、請求項1記載の方法。IL20ポリペプチドが役割を果たしている疾患が、成人呼吸器疾患、喘息、気管支炎、および肺炎からなる群より選択される炎症肺である、請求項1記載の方法。細胞におけるIL8発現を促進するための方法であって、細胞とIL20とを接触させる工程を含む、方法。個体におけるIL8発現を増大させるための方法であって、該個体にIL20を投与する工程を含む、方法。定義本発明を詳細に説明する前に、以下の用語を定義することが本発明の理解に役立つかもしれない。アミノ末端およびカルボキシル末端という用語は、ポリペプチドの中の位置を示すために本明細書において用いられる。文脈に沿っていれば、これらの用語は、ポリペプチドの特定の配列または部分に関して、近傍または相対位置を示すために用いられる。例えば、ポリペプチドの中の参照配列に対してカルボキシル末端側にある特定の配列は、参照配列のカルボキシル末端の近位にあるが、必ずしも、完全ポリペプチドのカルボキシル末端にあるとは限らない。相補物抗相補物対という用語は、非共有結合により結合した安定な対を適切な条件下で形成する同一でない部分を示す。例えば、ビオチンおよびアビジンは相補物抗相補物対の模範的なメンバーである。他の例示的な相補物抗相補物対には、受容体リガンド対、抗体抗原対、センスアンチセンスポリヌクレオチド対などが含まれる。相補物抗相補物対が後で解離することが望ましい場合、相補物抗相補物対は、好ましくは、109M1の結合親和性を有する。ポリヌクレオチド分子の相補物という用語は、参照配列と比較して相補的な塩基配列および逆方向を有するポリヌクレオチド分子である。例えば、配列5ATGCACGGG3は、5CCCGTGCAT3に相補的である。コンティグという用語は、別のポリヌクレオチドと同一の配列または相補的な配列の連続領域を有するポリヌクレオチドを示す。連続配列は、ある特定のポリヌクレオチド配列領域と、そのポリヌクレオチドの全体において、または部分領域に沿って重複すると言われる。例えば、ポリヌクレオチド配列5ATGGCTTAGCTT3に対する代表的なコンティグは、5TAGCTTgagtct3および3gtcgacTACCGA5である。縮重ヌクレオチド配列という用語は、1つまたは複数の縮重コドンを含むヌクレオチド配列を示す。縮重コドンは異なるヌクレオチドトリプレットを含むが、同じアミノ酸残基をコードする。発現ベクターという用語は、関心対象のポリペプチドをコードするセグメントが、その転写をもたらすさらなるセグメントに機能的に連結している、線状または環状のDNA分子を示すために用いられる。このようなさらなるセグメントはプロモーター配列およびターミネーター配列を含み、1つまたは複数の複製起点、1つまたは複数の選択マーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナルなども含み得る。発現ベクターは、一般的に、プラスミドもしくはウイルスDNAに由来するか、または両方のエレメントを含んでもよい。単離されたという用語はポリヌクレオチドに適用された時に、ポリヌクレオチドがその天然の遺伝子環境から取り出されており、従って、他の外来性コード配列または不必要なコード配列を含まず、遺伝子操作されたタンパク質産生系内での使用に適した形をしていることを示す。このような単離された分子は、その天然環境から分離された分子であり、cDNAおよびゲノムクローンを含む。本発明の単離されたDNA分子は、通常結合している他の遺伝子を含まないが、天然の5非翻訳領域および3非翻訳領域、例えば、プロモーターおよびターミネーターを含んでもよい。結合している領域の特定は当業者に明らかであろうを参照されたい。単離されたポリペプチドまたはタンパク質は、天然環境以外の状態で、例えば、血液および動物組織から離れた状態で見られるポリペプチドまたはタンパク質である。単離されたポリペプチドは、好ましい形では、他のポリペプチド、特に、動物由来の他のポリペプチドを実質的に含まない。高度に精製された形をした、すなわち、純度が95超、より好ましくは純度が99超のポリペプチドを提供することが好ましい。これに関連して用いられる場合、単離されたという用語は、別の物理的な形、例えば、二量体またはグリコシル化型もしくは誘導体化型をした同じポリペプチドの存在を排除しない。機能的に連結されたという用語はDNAセグメントについて言及している場合、セグメントが、意図されたように協調して機能するように、例えば、転写がプロモーターにおいて開始し、コードセグメントを通ってターミネーターまで進むように並べられていることを示す。ポリヌクレオチドは、5末端から3末端に読み取られる、デオキシリボヌクレオチド塩基またはリボヌクレオチド塩基からなる一本鎖ポリマーまたは二本鎖ポリマーである。ポリヌクレオチドはRNAおよびDNAを含み、天然供給源から単離されてもよく、インビトロで合成されてもよく、天然分子および合成分子の組み合わせから調製されてもよい。ポリヌクレオチドのサイズは、塩基対、ヌクレオチド、またはキロベースで表される。文脈に沿っていれば、最後の2つの用語は、一本鎖または二本鎖のポリヌクレオチドについて述べていることがある。この用語が二本鎖分子に適用された場合には全長を示すために用いられ、塩基対という用語と同等であると理解されるだろう。二本鎖ポリヌクレオチドの2本の鎖は長さがわずかに異なってもよく、酵素的切断の結果として、その末端は付着末端でもよく、従って、二本鎖ポリヌクレオチド分子内の全てのヌクレオチドは対形成しなくてもよいことが当業者に理解されるだろう。このような対形成しない末端は、一般的に、長さが20ヌクレオチドを超えない。ポリペプチドは、天然または合成にかかわらずペプチド結合でつながっているアミノ酸残基からなるポリマーである。通常、約10アミノ酸残基未満のポリペプチドがペプチドと呼ばれる。プロモーターという用語は、RNAポリメラーゼを結合し、転写を開始するDNA配列を含有する遺伝子の部分を示すために、当技術分野において認められた意味で本明細書において用いられる。通常、プロモーター配列は遺伝子の5非コード領域に見られるが、常に遺伝子の5非コード領域に見られるとは限らない。タンパク質は、1本または複数本のポリペプチド鎖を含む高分子である。タンパク質はまた炭水化物基などの非ペプチド成分を含んでもよい。タンパク質が産生される細胞によって、炭水化物および他の非ペプチド置換基がタンパク質に付加されることがあり、細胞型によって異なる。タンパク質は、本明細書ではアミノ酸バックボーン構造の点で定義される。一般的に、炭水化物基などの置換基は特定されないが、それにもかかわらず存在してもよい。受容体という用語は、生理活性分子に結合し、細胞に対するリガンドの効果を媒介する細胞関連タンパク質を示す。膜結合型受容体は、細胞外リガンド結合ドメイン、および典型的にはシグナル伝達に関与する細胞内エフェクタードメインを含む多ドメイン構造を特徴とする。リガンドと受容体が結合すると受容体内でコンホメーション変化が起こり、これにより、エフェクタードメインと細胞内の他の分子が相互作用する。次に、この相互作用は細胞代謝の変化につながる。受容体リガンド相互作用と結びついている代謝事象には、遺伝子転写、リン酸化、脱リン酸、サイクリックAMP産生の増加、細胞カルシウムの動員、膜脂質の動員、細胞接着、イノシトール脂質の加水分解、およびリン脂質の加水分解が含まれる。一般的に、受容体は、膜結合型、サイトゾル型、または核型、単量体または多量体でもよい。分泌シグナル配列という用語は、大きなポリペプチドの成分として、大きなポリペプチドが合成された細胞の分泌経路に、大きなポリペプチドを誘導するポリペプチドをコードするDNA配列を示す。大きなポリペプチドは、通常、分泌経路を通過する間に分泌ペプチドが除去されるように切断される。不正確な分析方法によって求められたポリマーの分子量および長さは近似値であることが理解されるだろう。このような値が約XまたはおよそXで表されている時に、言及された値Xは±10の精度であると理解されるだろう。序論本発明は、IL20が開始または拡大または維持において役割を果たしている炎症および炎症性疾患の治療であって、IL20に対するアンタゴニストを罹患個体に投与することによる治療に関する。このアンタゴニストは、IL20に対する抗体、IL20に結合する可溶性受容体、IL20受容体のIL20RAサブユニットまたはIL20RBサブユニットのいずれかに結合するアンチセンス分子または抗体でもよい。IL20は定義されており、IL20を産生する方法およびIL20に対する抗体は、国際特許出願PCTUS9825228、1998年11月25日に公開された公開番号WO9927103、ならびに1999年5月17日に出願された米国特許出願第09313458号に記載されている。ヒトIL20のポリヌクレオチドおよびポリペプチドはSEQIDNO14で表され、マウスIL20のポリヌクレオチドおよびポリペプチドはSEQIDNO59で表される。IL20受容体は発見されており、IL20RAと呼ばれるポリペプチドおよびIL20RBと呼ばれるポリペプチドからなるヘテロ二量体である。IL20RAポリペプチド、これをコードする核酸、IL20RAに対する抗体、およびこれを産生する方法は、1999年8月31日に発行された米国特許第5945511号に開示される。SEQIDNO1012は、IL20RAのポリヌクレオチドおよびポリペプチドである。ヒトIL20RAの細胞外ドメインは、SEQIDNO12、55、63、および65からなる群より選択されるポリペプチドからなり、完全長受容体サブユニットはSEQIDNO11からなる。マウスIL20RAの細胞外ドメインはSEQIDNO38であり、マウスIL20RAの全体はSEQIDNO37である。IL20RBの細胞外ドメインは、SEQIDNO15、59、61、67、68、および69からなる群より選択されるポリペプチドからなる。好ましくは、IL20RAポリペプチドの細胞外ドメインおよびIL20RBポリペプチドの細胞外ドメインは一緒に共有結合している。好ましい態様では、これらの2つの細胞外サブユニットポリペプチドが一緒になって可溶性受容体を形成し、Igの重鎖と軽鎖との間でジスルフィド結合が形成されるように、一方の細胞外サブユニットポリペプチドは、そのカルボキシ末端と免疫グロブリンの重鎖定常領域が融合しており、他方の細胞外サブユニットは、そのカルボキシ末端と免疫グロブリンの軽鎖定常領域が融合している。別の方法では、ペプチドリンカーがポリペプチドの2つのカルボキシ末端に融合して、共有結合した可溶性受容体を形成してもよい。SEQIDNO22および23は、実施例5に示した手順に従って作製された、IL20RA細胞外ドメインが変異ヒト免疫グロブリンγ1定常領域と融合している構築物である。SEQIDNO62は、シグナル配列の無い予測成熟配列である。SEQIDNO20および21は、実施例5の手順に従って作製された、IL20RB細胞外ドメインが野生型ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域と融合している構築物である。SEQIDNO60は、シグナル配列の無い予測成熟配列である。図1は、実施例5によって作製されたヘテロ四量体を示す。SEQIDNO52および53は、実施例12に示した手順に従って作製された、IL20RA細胞外ドメインが変異ヒト免疫グロブリンγ1定常領域と融合している構築物である。SEQIDNO54は、シグナル配列の無い予測成熟配列である。SEQIDNO56および57は、実施例12の手順に従って作製された、IL20RB細胞外ドメインが野生型ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域と融合している構築物である。SEQIDNO58は、シグナル配列の無い予測成熟配列である。得られたヘテロ四量体は、実施例5によって作製されたものとほぼ同一であり、主な違いは、細胞外ドメインとIg定常領域の始まりとの間にポリペプチドリンカー、図1の22が無いことである。以下、受容体の細胞外ドメインという用語は、受容体の細胞外ドメインまたはそのリガンドとの結合に必要な細胞外ドメインの一部を意味し、この場合、リガンドはIL20である。得られる可溶性受容体がIL20に結合できるような多くのやり方で、IL20RA細胞外ドメインとIL20RB細胞外ドメインとを一緒に連結することができる。図1~8は代表的な数の本発明の態様を例示する。図面のそれぞれにある共通の要素を同じ数字で示した。図1は、下記の実施例5に従って作製された本発明の態様を表す。10と指定した可溶性受容体構築物は、12および14と指定した2つのIL20結合部位ポリペプチド鎖からなる。それぞれの結合部位は、16と指定したIL20RA細胞外ドメインおよび18と指定したIL20RB細胞外ドメインからなる。IL20RAの細胞外ドメイン16は、SEQIDNO72のリンカー22を介して、ヒト免疫グロブリンγ1重鎖定常領域の重鎖定常ドメイン120と連結される。次いで、ヒンジ領域23を介して、CH1ドメイン20はCH2ドメイン24と連結される。ヒンジ領域25を介して、CH2ドメイン24はCH3ドメイン26と連結される。図1の構築物とSEQIDNO22を比較すると、IL20RAの細胞外ドメイン16は、SEQIDNO22のアミノ酸残基36のバリンからアミノ酸残基249のグルタミンまで及んでいる。ポリペプチドリンカー22は、SEQIDNO22のアミノ酸残基250のグリシンからアミノ酸残基264のセリンまで及んでいる。図1のCH1ドメイン22は、SEQIDNO22のアミノ酸残基265のアラニンからアミノ酸残基362のバリンまで及んでいる。図1のヒンジ領域23は、SEQIDNO22のアミノ酸残基363のグルタミン酸からアミノ酸残基377のプロリンまで及んでいる。鎖12および14は、ジスルフィド結合28および30によって一緒にジスルフィド結合している。ジスルフィド結合は、重鎖間で、2本の重鎖それぞれのSEQIDNO22の位置373および376にあるシステイン残基によって形成される。IL20RBの細胞外ドメイン18は、ポリペプチドSEQIDNO72のポリペプチドリンカー32を介して、図1のヒトκ軽鎖の定常領域34と連結される。IL20RBの細胞外ドメイン18は、SEQIDNO20のアミノ酸残基30のバリンからアミノ酸残基230のアラニンまで及んでいる。ポリペプチドリンカー32は、SEQIDNO20のアミノ酸残基231のグリシンからアミノ酸残基245のセリンまで及んでいる。κ軽鎖定常領域34は、SEQIDNO20のアミノ酸残基246のアルギニンから最後のアミノ酸残基352のシステインまで及んでいる。SEQIDNO20の位置352にあるシステインは、SEQIDNO22の位置367にあるシステインと共に、図1のジスルフィド結合36を形成する。従って、軽鎖定常34は、ジスルフィド結合36によってヒンジ領域23と連結される。このように、IL20RAの細胞外ドメイン16はIL20RBの細胞外ドメイン18と連結して、可溶性受容体を形成する。SEQIDNO22の位置373および376にあるシステイン残基が異なるアミノ酸残基に変化したら、2つのIL20結合ポリペプチド12および14は一緒にジスルフィド結合を形成せず、ヒンジ領域27を有する図2に示した構築物を形成するだろう。図3は、本発明の非常に簡単な可溶性受容体38を示す。ここで、IL20RAの細胞外ドメイン16は、ポリペプチドリンカー40によって、IL20RBの細胞外ドメイン18と接続している。ポリペプチドリンカーはIL20RAの細胞外ドメイン16のアミノ末端から延びており、IL20RBの細胞外ドメイン18のカルボキシル末端と接続している。ポリペプチドリンカーは、長さが100~240アミノ酸、好ましくは、長さが約170アミノ酸残基でなければならない。適切なリンカーはグリシン残基およびセリン残基からなる。可能性のあるリンカーは、SEQIDNO72の複数の単位、好ましくは、約12個の単位であろう。図4は、図3のように、リンカー40によって、IL20RAの細胞外ドメイン16がIL20RBの細胞外ドメイン18と連結している態様を示す。IL20RAの細胞外ドメイン16は、図1のように、ポリペプチドリンカー42によって、CH1ドメイン20と連結される。ポリペプチドリンカー42は長さが約30アミノ酸残基でなければならない。理想的なリンカーは、SEQIDNO72のようなグリシンおよびセリン、ならびに図1のヒンジ配列23からなる。図5は、別の可能性のある本発明の態様を示す。この態様において、約15アミノ酸残基からなるポリペプチドリンカー44、例えば、SEQIDNO72は、IL20RBの細胞外ドメイン18のカルボキシル末端と、IL20RAの細胞外ドメイン16のアミノ末端を連結する。約30アミノ酸残基からなるポリペプチドリンカー46は、IL20RAの細胞外ドメイン16のカルボキシ末端からCH2ドメインまで及んでいる。リンカー46のカルボキシル末端は、好ましくは、SEQIDNO22のアミノ酸残基363のグルタミン酸からアミノ酸残基377のプロリンまで及ぶヒンジ領からなる。それにもかかわらず、ジスルフィド結合が形成できるように、ポリペプチドリンカー46は、理想的には、そのカルボキシル末端に少なくとも1個のシステイン残基を有する。図6の可溶性IL20受容体は、図1のCH3ドメイン26が図6の態様に存在しないことを除けば図1のものと同一である。CH3領域はSEQIDNO22のアミノ酸残基488のグリシンから始まり、最後の残基594まで及ぶ。図7は、CH2およびCH3ドメインが両方とも存在しないことを除けば図1の構築物と同一の可溶性IL20受容体構築物を示す。CH2ドメインおよびCH3ドメインは、SEQIDNO22のアミノ酸残基378のアラニンからポリペプチド配列の末端まで及んでいる。図8は、IL20RAである16およびIL20RBが両方とも、それぞれのカルボキシル末端にポリペプチドリンカー48が融合している構築物を示す。それぞれのポリペプチドリンカーは発現された時に、システインが2つのジスルフィド結合50および52を形成するように、2個のシステイン残基を有する。この場合、ポリペプチドリンカーは図1のヒンジ領域23からなる。ヒンジ領域は、SEQIDNO22のアミノ酸残基363のグルタミンからアミノ酸残基377まで及ぶ。本発明の別の局面において、IL20RAの細胞外ドメインおよびIL20RBの細胞外ドメインからなる可溶性受容体を産生するための方法であって、以下の工程第1の分泌シグナル配列と機能的に連結された転写プロモーターの下流に、かつ正しい読み枠で、IL20RAの細胞外部分をコードするDNAおよび免疫グロブリン軽鎖定常領域をコードするDNAが続く第1のDNA配列を、宿主細胞に導入する工程第2の分泌シグナルと機能的に連結された転写プロモーターの下流に、かつ正しい読み枠で、IL20RBの細胞外部分をコードするDNA配列、ならびにCH1、CH2、CH3、およびCH4からなる群より選択される免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインをコードするDNA配列が続く第2のDNA構築物を、宿主細胞に導入する工程IL20RAの細胞外ドメインおよびIL20RBの細胞外ドメインからなる融合タンパク質の分泌を可能にする生理学的条件下で、適切な増殖培地中で宿主細胞を増殖させる工程ならびに宿主細胞からポリペプチドを単離する工程を含む方法が提供される。1つの態様において、第2のDNA配列はさらに免疫グロブリン重鎖ヒンジ領域をコードし、ここで、ヒンジ領域は重鎖定常領域ドメインとつながっている。別の態様において、第2のDNA配列はさらに免疫グロブリン可変領域をコードし、免疫グロブリン可変領域は、その上流かつ正しい読み枠で免疫グロブリン重鎖定常領域とつながっている。代わりの態様において、IL20RAの細胞外ドメインおよびIL20RBの細胞外ドメインからなる可溶性受容体を産生するための方法であって、以下の工程第1の分泌シグナル配列と機能的に連結された転写プロモーターの下流に、かつ正しい読み枠で、IL20RBの細胞外部分をコードするDNAおよび免疫グロブリン軽鎖定常領域をコードするDNAが続く第1のDNA配列を、宿主細胞に導入する工程第2の分泌シグナルと機能的に連結された転写プロモーターの下流に、かつ正しい読み枠で、IL20RAの細胞外部分をコードするDNA配列、ならびにCH1、CH2、CH3、およびCH4からなる群より選択される免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインをコードするDNA配列が続く第2のDNA構築物を、宿主細胞に導入する工程IL20RAの細胞外ドメインおよびIL20RBの細胞外ドメインからなる二量体化したヘテロ二量体融合タンパク質の分泌を可能にする生理学的条件下で、適切な増殖培地中で宿主細胞を増殖させる工程ならびに二量体化したポリペプチドを宿主細胞から単離する工程を含む方法が提供される。1つの態様において、第2のDNA配列はさらに免疫グロブリン重鎖ヒンジ領域をコードし、ここで、ヒンジ領域は重鎖定常領域ドメインとつながっている。別の態様において、第2のDNA配列はさらに免疫グロブリン可変領域をコードし、免疫グロブリン可変領域は、その上流かつ正しい読み枠で免疫グロブリン重鎖定常領域とつながっている。本明細書で使用する、抗体という用語は、ポリクローナル抗体、アフィニティ精製されたポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ならびに抗原結合断片、例えば、F2およびFabタンパク質分解断片を含む。遺伝子操作されたインタクトな抗体または断片、例えば、キメラ抗体、Fv断片、単鎖抗体など、ならびに合成の抗原結合ペプチドおよびポリペプチドも含まれる。非ヒト抗体は、非ヒトCDRをヒトフレームワークおよび定常領域に接ぎ合わせるか、非ヒト可変ドメイン全体を組み込むことによってヒト化することができる。場合によっては、ヒト化抗体は、適切な結合特性を高めるために、ヒト可変領域フレームワークドメイン内に非ヒト残基を保持してもよい。抗体をヒト化することによって、生物学的半減期を延ばすことができ、ヒトへの投与の際の有害な免疫反応の可能性が少なくなる。抗体の結合親和性は、例えば、スキャッチャード分析によって、当業者により容易に決定することができる。当業者に公知の様々なアッセイを用いて、タンパク質またはペプチドに結合する抗体を検出することができる。例示的なアッセイは、AntibodiesALaboratoryManualHarlowandLaneにおいて詳述されている。このようなアッセイの代表例には、同時免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ、放射性免疫沈降、酵素結合免疫測定法、ドットブロットまたはウエスタンブロットアッセイ、阻害アッセイまたは競合アッセイ、およびサンドイッチアッセイが含まれる。本発明者らは、IL20がIL8をアップレギュレートすることを示した。IL8が大きな役割を果たし、IL8の減少が有益なものとなる炎症性疾患は、成人呼吸器疾患、敗血症ショック、多臓器不全、炎症性肺損傷、例えば、喘息または気管支炎、細菌性肺炎、乾癬、ならびに炎症性腸疾患、例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病、湿疹、アトピー性皮膚炎、および接触性皮膚炎である。従って、IL20に対するアンタゴニストを用いて、これらの疾患を治療することができる。IL20、その受容体の生物学的特性、および乾癬におけるその役割2つのオーファンクラスIIサイトカイン受容体がIL20受容体サブユニットとして特定された。これらは両方とも皮膚において発現している。どちらのIL20受容体サブユニットもリガンド結合に必要であり、このため、これらの役割は、他の4つの既知のクラスIIサイトカイン受容体にあるサブユニットの役割とは異なる。IL20RAおよびIL20RBはまた、皮膚以外に、卵巣、副腎、精巣、唾液腺、筋肉、肺、腎臓、心臓を含む多くのヒト組織においても同時発現し、さらに少ない程度で小腸でも同時発現している。このことは、IL20が作用するためのさらなる標的組織を示唆している。さらに、本発明者らは、胃、甲状腺、膵臓、子宮、脳、および前立腺を含む、いくつかのヒト組織においてIL20RAmRNAを検出したが、IL20RBmRNAを検出しなかった。このことは、IL20RAが、他のクラスII受容体サブユニットのパートナーとなり得ることを示唆している。本発明者らは、IL20ヘテロ二量体受容体は他のクラスIIサイトカイン受容体と構造が似ており、本発明者らがIL20リガンドの活性を証明した皮膚において発現していると結論付けた。2つの証拠から、IL20およびその受容体の役割は乾癬に関与していることが分かっている。この複遺伝子性の皮膚病は、ケラチノサイト増殖の増大、ケラチノサイト分化の変化、皮膚への免疫細胞の浸潤を特徴とする。IL20が乾癬において役割を果たしているという第1の証拠は、トランスジェニックマウスにおいて観察された角質増殖と表皮肥厚がヒト乾癬異常に似ていることである。トノフィラメント数の減少は角質化の欠損に関連すると考えられ、ヒト乾癬の顕著な特徴である。ミトコンドリア内の封入体が、マウスにおける化学的に誘導された過形成皮膚状態および天然の過形成皮膚状態の両方において見出されている。封入体の原因およびミトコンドリア機能への影響はあったとしても不明である。本発明者らは、IL20トランスジェニックマウスは、ヒト乾癬において観察される特徴の多くを示すと結論付けた。IL20受容体と乾癬を結び付ける第2の証拠は、正常皮膚と比較してヒト乾癬皮膚では、IL20RAmRNAおよびIL20RBmRNAが両方とも著しくアップレギュレートされることである。IL20受容体サブユニットは両方とも表皮全体にわたってケラチノサイトにおいて発現し、免疫細胞および内皮細胞の一部においても発現している。本発明者らは、活性化IL20受容体の発現増大が、内皮細胞と免疫細胞とケラチノサイトとの相互作用を変化させ、これが、ケラチノサイト増殖および分化の調節不全につながった可能性があると提唱する。新規サイトカインの機能の理解における重要な段階は、そのコグネイト受容体の特定および特徴付けである。本発明者らは、新規インターロイキンを単離するために構造に基づくアプローチを首尾良く使用しており、最終的に、その受容体の単離につながった。IL20は、ヒトケラチノサイトHaCaT細胞株においてシグナル伝達を刺激する。このことは、この新規リガンドが皮膚において直接作用することを裏付けている。さらに、ケラチノサイトにおいて活性があり、皮膚における増殖シグナルおよび炎症促進シグナルと関係があることが知られているタンパク質であるIL1β、EGF、およびTNFαは、IL20に対する応答を増強する。IL20受容体を発現するHaCaT細胞およびBHK細胞の両方において、IL20はSTAT3を介してシグナル伝達を行う。乾癬を治療するための、IL20に対するアンタゴニストの使用前記の議論および下記の実施例において示されるように、IL20は乾癬の病理にも関与する。本発明は、特に、IL20に対するアンタゴニストを投与することによって乾癬を治療するための方法である。IL20に対するアンタゴニストは、IL20に結合する可溶性受容体、またはIL20もしくはIL20受容体のいずれかに結合する抗体、単鎖抗体、もしくは抗体断片でもよい。従って、アンタゴニストは、IL20受容体の活性化を阻止する。乾癬は、最もよく見られる皮膚病の1つであり、世界人口の1~2パーセントにまで罹患する。乾癬は、銀色の雲母状の板状鱗屑で覆われた、境界の極めて明瞭な紅斑性の丘疹および丸みのあるプラークを特徴とする慢性炎症性皮膚障害である。乾癬の皮膚病変は、そう痒性が様々である。外傷領域は乾癬病変を発症することが多い。さらに、感染、ストレス、および薬物療法、例えば、リチウム、β遮断薬、および抗マラリア剤を含む他の外的要因が乾癬を悪化させることがある。最も一般的な種類の乾癬はプラーク型と呼ばれる。プラーク型乾癬患者には安定した、ゆっくりと増殖するプラークがあり、基本的には長期間、不変のままである。プラーク乾癬が発症する最も一般的な領域は、肘、膝、殿裂、および頭皮である。合併症は対称的になる傾向がある。逆位乾癬は、腋窩、鼡径部、乳腺下領域、および臍を含む間擦領域において発症し、頭皮、手掌、および足底においても発症する傾向がある。個々の病変は、境界の極めて明瞭なプラークであるが、その位置のために湿っていることがある。プラーク型乾癬は一般的にゆっくりと発症し、遅進性の経過をたどる。まれに自然に寛解する。発疹性乾癬は小児および若年成人においてよく見られる。これは、乾癬のない個体または慢性プラーク乾癬のある患者において急性発症する。患者は、鱗屑のある多くの小さな紅斑性丘疹を、往々にしてβ溶血性連鎖球菌による上気道感染後に呈する。乾癬患者はまた膿疱性病変も発症することがある。これらは手掌および足底に限局されるか、または全身性のこともあり、発熱、倦怠感、下痢、および関節痛と関連することもある。全乾癬患者のうち約半分には爪合併症があり、点状のくぼみ、爪肥厚、または爪下角質増殖として現われる。乾癬患者の約5~10パーセントには随伴性の膝愁訴があり、これらは、爪合併症のある患者において最もよく見られる。一部には、古典的な慢性関節リウマチが同時に起こるが、多くは、乾癬に関連する5つの型1つまたは数個の小さな関節に限定される疾患血清反応陰性慢性関節リウマチ様疾患遠位指節間関節の合併症破壊性関節炎の発症を伴う重篤な破壊型関節炎および脊椎に限定される疾患の1つに分類される関節疾患がある。IL20に対するアンタゴニストを投与することによって、乾癬を治療することができる。好ましいアンタゴニストは、IL20に対する可溶性受容体、またはIL20受容体もしくはIL20に結合する抗体、抗体断片、もしくは単鎖抗体である。IL20に対するアンタゴニストは単独で投与されてもよく、または他の確立した療法、例えば、潤滑剤、角質溶解薬、局所コルチコステロイド、局所ビタミンD誘導体、アントラリン、全身代謝拮抗物質、例えば、メトトレキセート、ソラレン紫外線療法、エトレチナート、イソトレチノイン、シクロスポリン、および局所ビタミンD3誘導体カルシポトリオールと組み合わせて投与されてもよい。アンタゴニスト、特に、IL20またはIL20受容体に結合する可溶性受容体または抗体は、個体に、皮下投与、静脈内投与、またはIL20アンタゴニストを含有するクリームもしくは経皮パッチを用いて経皮投与することができる。皮下投与されるのであれば、アンタゴニストは、1つまたは複数の乾癬プラークに注入することができる。経皮投与されるのであれば、アンタゴニストは、IL20に対するアンタゴニストを含有するクリームを用いてプラークに直接投与することができる。肺の炎症状態を治療するための、IL20に対するアンタゴニストの使用IL20に対するアンタゴニストは、喘息、気管支炎、もしくは嚢胞性線維症、または他の炎症性肺疾患を有する人間に、これらの疾患を治療するために投与することができる。アンタゴニストは、静脈内投与、皮下投与、気管支洗浄を含む任意の適切な方法によって、およびIL20に対するアンタゴニストを含有する吸入剤を用いることによって投与することができる。IL20に対するアンタゴニストの投与有効な療法に必要な、IL20に対するアンタゴニストの量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、および投与される他の薬物療法を含む多くの異なる要因に依存する。従って、治療投与量は、安全性および効力を最適化するように設定すべきである。典型的には、インビトロで用いられる投与量は、これらの試薬のインビボ投与に有用な量の有用な指導を与え得る。さらに、特定の障害の治療のための有効量の動物試験はヒトへの投与量を予測するものである。投与方法には、経口投与、静脈内投与、腹腔投与、筋肉内投与、経皮投与、またはネブライザーもしくはアトマイザーによるスプレーの形での肺もしくは気管への投与が含まれる。薬学的に許容される担体は、いくつかの例を挙げてみると、水、食塩水、緩衝液を含む。投与量範囲は、通常、1μg~1000μg体重キログラム日から予想される。平均的な成人へのIL20可溶性受容体の投与量は、週2回、皮下注射として与えられる約25mgであろう。IL20に結合する抗体の投与量は、週2回与えられる約25mgであろう。IL20RAおよびIL20RBサブユニットに結合する抗体の混合物は、成人の場合、週2回与えられる約25mgであろう。乾癬治療の場合、乾癬病変部位に注射することができる。IL20に対するアンタゴニストの皮下投与または静脈内投与の場合、抗体または可溶性受容体はリン酸緩衝食塩水に溶解されてもよい。また、乾癬などの皮膚病では、軟膏または経皮パッチを介してIL20に対するアンタゴニストを投与することができる。用量は、当技術分野において通常の知識を有する医師によって決定できるように、これより高くても低くてもよい。薬物製剤および投与量範囲の完全な議論については、RemingtonsPharmaceuticalSciences18thEd、およびGoodmanandGilmansThePharmacologicalBasesofTherapeutics9thEdを参照されたい。本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに説明される。実施例1IL20によるIL8のアップレギュレーション方法継代数2の正常ヒト表皮新生児ケラチノサイトをプレートし、12ウェル組織培養プレートにおいてコンフルエントになるまで増殖させた。KGMはCloneticsから購入した。細胞がコンフルエントになったら、増殖因子を含まないKGM培地KBMを用いて洗浄した。KBM中で、細胞から血清を72時間欠乏させた後に、試験化合物を添加した。1IUmLのトロンビンおよび25nMトリプシンを正の対照として使用した。1mLの培地ウェルを添加した。負の対照としてKBMのみを使用した。IL20をKBM培地中で作り上げ、第1の実験では618ngmL~25μgml、第2の実験では3ngmL~25μgmLの様々な濃度で添加した。細胞を、37°C、5CO2で48時間インキュベートした。上清を除去し、80°Cで数日間凍結させた後に、IL8およびGMCSFレベルをアッセイした。ヒトIL8ImmunoassayキットD8050およびヒトGMCSFImmunoassayキットHSGMOを用いて、製造業者の説明書に従って、サイトカイン産生を確かめた。結果結果から、IL8およびGMCSFの発現がIL20によって誘導されたことが分かった。実施例2IL20RBのクローニングIL20RBコード領域のクローニング1999年3月8日に出願された国際特許出願PCTUS9903735からの配列に基づいて、2つのPCRプライマーを設計した。SEQIDNO16は、ATGコドンとEcoRI制限部位を含有し、SEQIDNO17は、停止コドンとXhoI制限部位を含有する。テンプレートとしてヒトケラチノサイトcDNAライブラリーDNAを用いて、プライマーとしてSEQIDNO16およびSEQIDNO17を用いて、PCR増幅を行った。PCR反応は以下の通り行った。94°C1分のインキュベーションに続いて、94°C30秒および68°C2分からなる30サイクル、この後にさらに68°C4分。反応物は4°Cで保管した。PCR産物を1アガロースゲル上で流し、1kbDNAバンドを観察した。PCR産物をゲルから切断し、QIAquickGelExtractionKitを用いて、DNAを精製した。精製されたDNAをEcoRIおよびXhoIで消化し、pZPベクターにクローニングし、これをpZP7Nと呼んだ。pZPプラスミドは、マウスメタロチオネイン1プロモーター、ヒトtPAリーダーペプチド、コード配列挿入用の複数の制限部位、GluGluタグ、およびヒト成長ホルモンターミネーターを有する発現カセットを含む哺乳動物発現ベクターである。このプラスミドはまた、大腸菌複製起点、SV40プロモーター、エンハンサー、および複製起点を有する哺乳動物選択マーカー発現単位、ならびにDHFR遺伝子、ならびにSV40ターミネーターも有する。いくつかのIL20RBpZP7Nクローンを配列決定した。これらは全て、PCTUS9903735にあるIL20RBの配列と比較して3個の非保存的変異、146ProThr、148HisAsp、および171ThrArgを含有する。IL20RBpZP7Nクローンにおける3個の置換を確認するために、テンプレートとして3種類のcDNA供給源、胎児皮膚マラソンcDNA、HaCaTcDNAライブラリーDNA、および前立腺平滑筋cDNAライブラリーDNAを用いて、PCR増幅を行った。PCR産物をゲル精製し、配列決定した。3つのPCR産物のそれぞれの配列は、IL20RBpZP7Nクローンのものと一致していた。IL20RBはSEQIDNO13および14であり、成熟細胞外ドメインはSEQIDNO15である。実施例3IL20とIL20RBIL20RAヘテロ二量体との結合細胞ベースの結合アッセイを用いて、IL20がIL20RAIL20RBヘテロ二量体に結合することを確認した。既知のオーファンクラスIIサイトカイン受容体を含有する発現ベクターを様々に組み合わせてCOS細胞に一過的にトランスフェクトし、次いで、ビオチン標識IL20タンパク質に結合する能力についてアッセイした。結果から、IL20RBIL20RAヘテロ二量体はIL20受容体であることが分かる。使用した手順を以下で説明する。以下の通り12ウェル組織培養プレート中で、COS細胞トランスフェクションを行った。92μl無血清ダルベッコ変法イーグル培地の中に5μlリポフェクタミンを含有する培地と、05μgDNAを混合し、室温で30分間インキュベートし、次いで、400μl無血清DMEM培地に添加した。次いで、この500μl混合物を15x105COS細胞ウェルに添加し、37°Cで5時間インキュベートした。500μlの20胎仔ウシ血清DMEM培地を添加し、一晩インキュベートした。このアッセイは分泌トラップの改良法であり、以下の通りに行った。細胞をPBS1ウシ血清アルブミンでリンスし、TNBを含む水で1時間ブロックした。この後に、3μgmlビオチン化IL20タンパク質を含むTNBと1時間インキュベートした。細胞をPBS1BSAで洗浄し、1300に希釈したストレプトアビジンHRPを含むTNBと、さらに数時間インキュベートした。もう1回洗浄した後に、細胞を、18ホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝食塩水で15分間固定した。次いで、細胞を、TNTで洗浄した。希釈緩衝液で150に希釈したフルオレセインチラミド試薬と5分間インキュベートした後に、陽性結合シグナルが検出された。細胞をTNTで洗浄し、TNTで15に希釈したVectashieldMountingMediaを用いて保存し、倒立蛍光顕微鏡によってFITCフィルターを用いて視覚化した。実施例4IL20による炎症性サイトカインのアップレギュレーション細胞処理ヒトケラチノサイト細胞株であるHaCaTを、T75組織培養フラスコ中で、コンフルエントになった数日後まで37°Cで増殖させた。この時点で、正常増殖培地を除去し、無血清培地と交換した。次いで、細胞を37°Cで2日間インキュベートした。次いで、DMEMを除去し、処理1回につき4個の細胞フラスコを、以下のそれぞれの条件5ngmLの組換えヒトIL1α、20ngmLのrhIL1α、5ngmLのrhIL1α1μgmLのIL20、1μgmLのIL20、または10ngmLのrhIL10の1つを用いて37°Cで4時間、処理した。RNA単離サイトカイン処理後に、培地を除去し、チオシアン酸グアニジン溶液を用いて細胞を溶解した。塩化セシウム勾配上で一晩回転させることによって、細胞溶解産物から総RNAを単離した。翌日、RNAペレットをTESDS溶液に再懸濁し、エタノール沈殿させた。次いで、分光光度計を用いてRNAを定量した後に、ClontechsAtlascDNAExpressionArraysUserManualのSectionVBに従って、DNase処理を行った。RNA試料の品質は、スペクトル測定値に基づく純度計算によって、およびアガロースゲル上での視覚化によって確認した。RNA試料のゲノム汚染は、βアクチン遺伝子のPCR分析によって除外した。プローブ合成ポリA濃縮、プローブ合成、およびAtlasアレイとのハイブリダイゼーションのためのClontechプロトコールに従ったPureTotalRNALabelingSystemUserManual、PT32311PR96157、62299公開を参照されたい。簡単に述べると、ストレプトアビジンでコーティングされた磁気ビーズおよび磁気粒子分離器を用いて、50mgの総RNAからポリARNAを単離した。次いで、RTPCRによって、ポリARNAをalpha32PdATPで標識した。Atlasヒトサイトカイン受容体アレイ上にある268の遺伝子に特異的なClontechCDSプライマーを反応に使用した。カラムクロマトグラフィーを用いて標識プローブを単離し、シンチレーション液中でカウントした。アレイ膜ハイブリダイゼーションAtlasアレイを、連続撹拌しながら、ClontechExpressHyb100mgmL熱変性サケ精子DNAと68°Cで少なくとも30分間プレハイブリダイズさせた。次いで、膜を、連続撹拌しながら、19x106CPMmLと68°Cで一晩ハイブリダイズさせた。翌日、膜を、68°Cの2XSSC、1SDSで30分間、4回、洗浄し、68°Cの01XSSC、05SDSで30分間、1回、洗浄し、その後に最後に、室温の2XSSCで5分間、1回、洗浄した。次いで、アレイ膜をKodakプラスチックポーチに入れ、密封し、ホスフォイメージャースクリーンに室温で一晩、曝露した。翌日、ホスフォスクリーンをホスフォイメージャーでスキャンし、ClontechsAtlaslmage10ソフトウェアを用いて分析した。結果IL20によってアップレギュレートされる遺伝子1腫瘍壊死因子がIL20によって19~24倍にアップレギュレートされた。2胎盤増殖因子1および2がIL20によって19~20倍にアップレギュレートされた。3凝固因子II受容体がIL20によって20~25倍にアップレギュレートされた。4カルシトニン受容体がIL20によって22~23倍にアップレギュレートされた。5TNF誘導性ヒアルロン酸結合タンパク質TSG6がIL20によって21~22倍にアップレギュレートされた。6血管内皮増殖因子受容体1前駆体、チロシンプロテインキナーゼ受容体がIL20によって21~27倍にアップレギュレートされた。7MRP8がIL20によって29~41倍にアップレギュレートされた。8MRP14がIL20によって30~38倍にアップレギュレートされた。9リラキシンH2がIL20によって314倍にアップレギュレートされた。10トランスフォーミング成長因子β受容体III300kDaがIL20によって24~36倍にアップレギュレートされた。IL20IL1処理により相乗作用を示す遺伝子1骨形成タンパク質2aが、IL20処理単独で18倍に、IL1処理単独で25倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて82倍にアップレギュレートされた。2MRP8が、IL20処理単独で29倍に、IL1処理単独で107倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて180倍にアップレギュレートされた。3赤血球分化タンパク質が、IL20処理単独で19倍に、IL1処理単独で97倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて190倍にアップレギュレートされた。4MRP14が、IL20処理単独で30倍に、IL1処理単独で122倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて203倍にアップレギュレートされた。5ヘパリン結合EGF様増殖因子が、IL20処理単独で20倍に、IL1処理単独で14倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて250倍にアップレギュレートされた。6βトロンボグロブリン様タンパク質が、IL20処理単独で15倍に、IL1処理単独で15倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて27倍にアップレギュレートされた。7脳由来神経栄養因子が、IL20処理単独で17倍に、IL1処理単独で25倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて48倍にアップレギュレートされた。8単球走化性活性化因子MCAFが、IL20処理単独で13倍に、IL1処理単独で32倍に、ならびにIL20処理およびIL1処理合わせて56倍にアップレギュレートされた。実施例5IL20RARB受容体Ig融合ヘテロ四量体発現ベクターpEZE3を用いて、組換えIL20受容体Ig融合タンパク質を発現させた。プラスミドpEZE3はpDC312に由来する。pDC312は、ImmunexCorporationからの使用許諾を通じて入手した。プラスミドpDC312およびpEZE3は、WO9725420に記載のEASEセグメントを含有する。発現ベクターにEASEセグメントが存在すると、安定細胞プールにおける組換えタンパク質の発現を2~8倍に改善することができる。プラスミドpEZE3は、哺乳動物細胞、好ましくは、チャイニーズハムスター卵巣細胞において3種類までのタンパク質を発現するのに使用することができるトリシストロニック発現ベクターである。pEZE3発現単位は、サイトメガロウイルスエンハンサープロモーター、アデノウイルストリパータイトリーダー配列、第1の組換えタンパク質のコード領域挿入用のマルチクローニングサイト、ポリオウイルス2型配列内リボソーム進入部位、第2の組換えタンパク質のコード領域挿入用の第2のマルチクローニングサイト、脳心筋炎ウイルス配列内リボソーム進入部位、マウスジヒドロ葉酸レダクターゼのコードセグメント、およびSV40転写ターミネーターを含有する。さらに、pEZE3は、大腸菌複製起点および細菌βラクタマーゼ遺伝子を含有する。IL20受容体Ig融合タンパク質は、ヒトIL20RBの細胞外ドメインと、野生型ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域が融合した2本の鎖、およびヒトIL20RAタンパク質細胞外ドメインと、変異ヒト免疫グロブリンγ1定常領域が融合した2本の鎖からなるジスルフィド結合ヘテロ四量体である。ヒト免疫グロブリンγ1定常領域は、FcγRI結合およびC1q補体結合を弱めるアミノ酸置換を含有する。ヒトIL20RB細胞外ドメインヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域融合構築物はオーバーラップPCRにより作製した。IL20RBをコードするセグメントはアミノ酸1~230からなる。IL20RセグメントのPCR増幅に使用したテンプレートは、下記の実施例12に記載のように作製したIL20RBヒトκ軽鎖定常領域発現構築物であった。オリゴヌクレオチドプライマーSEQIDNO24およびSEQIDNO25を用いて、IL20RBセグメントを増幅した。野生型ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域の全体を使用した。野生型ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域セグメントのPCR増幅に使用したテンプレートは、実施例12に記載のように作製したIL20RBヒトκ軽鎖定常領域発現構築物であった。オリゴヌクレオチドプライマーSEQIDNO26およびSEQIDNO27を用いて、野生型ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域を増幅した。オリゴヌクレオチドSEQIDNO24およびSEQIDNO27を用いて、2つのタンパク質コードドメインをオーバーラップPCRによって連結した。2つのタンパク質ドメイン間に、3ペプチドリンカーを挿入した。3ペプチドリンカーは、PCRプライマーSEQIDNO26およびSEQIDNO25の上にコードされた。得られたIL20RB細胞外ドメインκ軽鎖定常領域融合構築物を、SEQIDNO20および21に示した。シグナル配列の無い予測成熟ポリペプチドはSEQIDNO60である。実際に使用したIL20RB細胞外ドメインの部分は、SEQIDNO61のアミノ酸配列からなった。N末端配列決定によって予測アミノ酸配列を得た。ヒトIL20RA細胞外ドメインヒト免疫グロブリンγ1重鎖定常領域融合構築物は、4つの別々のDNA断片のオーバーラップPCRによって作製した。これらのDNA断片はそれぞれ別々のPCR増幅反応によって作製した。第1の断片は、最適化tPAシグナル配列を含有した。オリゴヌクレオチドプライマーSEQIDNO28およびSEQIDNO29を使用し、以前に作製された社内の発現ベクターをテンプレートとして用いて、tPAシグナル配列を増幅した。第2の断片は、SEQIDNO11のアミノ酸30243からなるIL20RA細胞外ドメインコード領域を含有した。オリゴヌクレオチドプライマーSEQIDNO30およびSEQIDNO31を使用して、以前に作製されたIL20RAクローンをテンプレートとして用いて、このIL20RAセグメントを増幅した。2つのセグメントからヒトγ1重鎖定常領域を作製した。オリゴヌクレオチドプライマーSEQIDNO32およびSEQIDNO33を使用し、野生型ヒトγ1重鎖定常領域のクローンをテンプレートとして用いて、CH1ドメインを含有する第1のセグメントを増幅した。オリゴヌクレオチドプライマーSEQIDNO34およびSEQIDNO35を使用して、ヒト免疫グロブリンγ1重鎖定常領域の残りのヒンジ、CH2、およびCH3ドメインを含有する第2のセグメントをPCR増幅によって作製した。このPCR増幅に使用したテンプレートは、実施例12に記載のFcγRI結合およびC1q補体結合を弱めるアミノ酸置換用のコドンを含有する、以前に作製されたヒトγ1Fc構築物に由来した。オリゴヌクレオチドSEQIDNO28およびSEQIDNO35を用いて、4つのタンパク質コードドメインをオーバーラップPCRによって連結した。IL20RAとCH1タンパク質ドメインの間に3ペプチドリンカーを挿入した。3ペプチドリンカーは、PCRプライマーSEQIDNO32およびSEQIDNO31の上にコードされた。IL20RA細胞外ドメインドメインヒト免疫グロブリンγ1重鎖定常領域融合タンパク質およびDNA配列を、SEQIDNO22および23に示した。シグナル配列の無い予測成熟ポリペプチドはSEQIDNO62である。実際に使用したIL20RB細胞外ドメインの部分は、SEQIDNO63からなった。IL20RB細胞外ドメインヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域融合をコードするセグメントは、第2のMCSにクローニングしたのに対して、ヒトIL20RA細胞外ドメインヒト免疫グロブリンγ1重鎖定常領域融合をコードするセグメントは、pEZE3の第1のMCSにクローニングした。このプラスミドを用いて、CHO細胞をトランスフェクトした。ヒポキサンチンまたはチミジンを含まない培地中で細胞を選択し、メトトレキセートを用いてトランスジーンを増幅した。タンパク質の存在は、抗ヒトγ1重鎖定常領域および抗ヒトκ軽鎖抗体を用いたウェスタンブロッティングによってアッセイした。N末端配列決定によって、最適化tPAリーダーは完全に切断されなかったことが明らかになった。観察された質量から、ポリペプチド配列の最初の残基はピログルタミン酸であり、N末端配列は、pyroEEIHAELRRFRRVPCVSGGであるらしく、下線の部分はtPAリーダーの残存物であることが分かった。実施例6IL20トランスジェニック表現型ヒトIL20およびマウスIL20を両方とも、様々なプロモーターを用いてトランスジェニックマウスにおいて過剰発現させた。循環濃度のタンパク質を実現する試みの中で、最初に、ヒトIL20を発現させる肝臓特異的マウスアルブミンプロモーターを使用した。後の研究は、主に、発現を表皮および他の重層扁平上皮に標的化するケラチン14プロモーター広範囲の発現パターンを生じさせるマウスメタロチオネイン1プロモーターならびにリンパ系列の細胞において発現を動かすEμLCKプロモーターを用いて行った。おそらく、これらのプロモーターは全て循環濃度のIL20を生じさせるという理由で、4つ全ての場合において類似の結果が得られた。全ての場合において、IL20トランスジーンを発現するトランスジェニック仔は非トランスジェニック同腹仔より小さく、光沢のある外観と、ぴんと張った、しわのある皮膚を有し、生後数日以内に死んだ。仔の胃の中には乳があり、これは、乳を吸うことができたことを示している。これらのマウスは、膨張した四肢、尾、鼻孔、および口の領域を有し、移動困難を示した。さらに、これらのマウスは虚弱であり、目に見える脂肪組織が無く、耳および足指の発達が遅延していた。肝臓における低発現レベルは、新生児致死および皮膚異常に十分であった。目に見える表現型の無いトランスジェニックマウスはトランスジーンを発現しなかったか、検出可能なレベルでトランスジーンを発現しなかったか、またはモザイクであった。IL20トランスジェニックマウスの皮膚の組織分析は、非トランスジェニック同腹仔と比較して肥厚した表皮、角質増殖、および緻密な角質層を示した。時折、血清細胞痂皮が観察された。トランスジェニックマウスからの皮膚の電子顕微鏡分析は、ミトコンドリア内のリポイド封入体、斑状のケラトヒアリン顆粒、および比較的少ないトノフィラメントを示し、これらは、ヒト乾癬皮膚およびマウス皮膚病モデルにおいて観察されたものに似ている。さらに、トランスジェニックマウスの多くにはアポトーシス胸腺リンパ球があった。病理組織学的分析によって他の異常は検出されなかった。これらの組織学的結果およびEM結果は、観察されたひどい皮膚変化を裏付け、展開するものである。実施例7IL20受容体に対するIL20の特異性および親和性IL20受容体に対するIL20の特異性および親和性を、IL20RA、IL20RB、または両受容体サブユニットで安定にトランスフェクトされたBHK細胞を用いて確かめた。放射標識リガンドを用いた結合アッセイによって、IL20は、IL20RAおよびIL20RBの両方を発現するBHKトランスフェクタントに結合するが、トランスフェクトされていない細胞にも、一方の受容体サブユニットのみを発現するトランスフェクタントにも結合しないことが証明された。125I標識IL20の結合は、100倍過剰な非標識IL20の存在下では無くなったが、100倍過剰な非関連サイトカインIL21の存在下では無くならなかった。IL20とIL20RAIL20RBヘテロ二量体受容体との結合親和性は約15nMと求められた。実施例8IL20受容体の活性化IL20結合によって受容体が活性化するかどうか確かめるために、因子依存性プレB細胞株BaF3にIL20RAおよびIL20RBを同時導入し、様々な濃度のIL20で処理した。IL20は用量依存的に増殖を刺激し、11pMで検出可能なシグナルを生じ、最大半量応答は34pMであった。本発明者らは、BaF3細胞における最大半量増殖応答のためのIL20濃度が、BHK細胞における最大半量結合親和性の11000であると指摘する。この大きな差異の考えられる説明には、異なる細胞株が用いられたこと、受容体発現レベルが異なること、アッセイ出力が異なることが含まれる。IL20はまた、IL20RAおよびIL20RBを天然に発現する生物学的に関連するヒトケラチノサイト細胞株HaCaTにおいてシグナル伝達を刺激した。従って、IL20は、サイトカインについて予想される濃度でヘテロ二量体IL20RAIL20RB受容体に結合し、活性化する。負の対照は、トランスフェクトされていないBaF3を含む。実施例9IL20RAおよびIL20RBの発現分析IL20RAおよびIL20RBの発現パターンを確かめるために、様々なヒト組織に対してRTPCR分析を行った。両受容体サブユニットとも皮膚および精巣において最も高く発現していた。重大な結果は、IL20RAおよびIL20RBが両方とも皮膚において発現していたことである。皮膚では、これらはIL20誘導性応答を媒介することが示されている。IL20RAおよびIL20RBは両方とも、単球、肺、卵巣、筋肉、精巣、副腎、心臓、唾液腺、および胎盤においても発現していた。IL20RAはまた、脳、腎臓、肝臓、結腸、小腸、胃、甲状腺、膵臓、子宮、および前立腺でも発現しているのに対して、IL20RBは発現していない。実施例10IL20RAmRNAおよびIL20RBmRNAは乾癬においてアップレギュレートされるインサイチューハイブリダイゼーションを用いて、IL20受容体発現が乾癬において変化するかどうか確かめた。2つの受容体サブユニットmRNAに特異的なプローブを用いて、4人の乾癬患者および3人の非罹患患者からの皮膚試料をアッセイした。4つの乾癬皮膚試料は全て、ケラチノサイトにおけるIL20RAmRNAおよびIL20RBmRNAレベルが高かったが、正常皮膚試料は、どちらの受容体サブユニットmRNAレベルも検出できなかった。乾癬皮膚における陽性シグナルは単核免疫細胞および血管の一部にある内皮細胞でも観察された。従って、IL20RAおよびIL20RBは両方とも、ケラチノサイト、免疫細胞、および内皮細胞において発現しており、これらの主な細胞型は乾癬において相互作用していると考えられる。実施例11マウスIL20RAのクローニングヒトIL20RAをコードする完全長cDNA断片を含む異種間ハイブリダイゼーションプローブを作製した。ヒトIL20RAcDNAがマウス配列に特異的にハイブリダイズできることを証明するために、マウスゲノムDNAのサザンブロットおよびマウスRNAのノザンブロットを行った。ノザンブロット結果から、マウスIL20RARNAは、15日目および17日目のマウス胚、ならびに心臓、脳、肺、肝臓、腎臓、精巣、脾臓、胸腺、肝臓、胃、および小腸に存在することが分かった。ヒトIL20RA完全長DNAハイブリダイゼーションプローブを用いて、マウスゲノムライブラリーをスクリーニングした。このライブラリーは、Clontechから入手し、マウスゲノムDNAのMboI部分消化物から作製し、ラムダバクテリオファージEMBL3SP6T7のBamHI部位にクローニングされた。陽性バクテリオファージをプラーク精製し、PromegasWizardLamdaPrepsDNAPurificationSystemを用いて、バクテリオファージDNAを調製した。陽性バクテリオファージから、2個のゲノム制限酵素断片である57kbEcoRI断片および80kbSacI断片を作製し、pBluescriptにサブクローニングした。DNA配列分析から、マウスオルソログからヒトIL20RAまで3個のエキソンが存在することが明らかになった。PCR増幅によって完全長マウスIL20RA配列を作製するために、5UTRに由来するPCRプライマー、SEQIDNO40、および3UTRに由来するPCRプライマー、SEQIDNO41を設計した。マウス胚15日目17日目のcDNAを、PCR増幅用のテンプレートとして使用した。PCR産物をサブクローニングし、確認のために配列決定した。マウス配列はSEQIDNO36および37である。成熟細胞外ドメインはSEQIDNO38からなる。実施例12IL20受容体ヘテロ四量体の構築分泌型hIL20RAhIL20Bヘテロ二量体を発現するベクターを構築した。この構築物では、hIL20RAの細胞外ドメインを、IgGガンマ1の重鎖と融合したのに対して、IL20RBの細胞外部分をヒトカッパ軽鎖と融合した。IgGγ1およびヒトκ軽鎖融合ベクターの構築5EcoRI部位および3NheI部位を有する受容体の細胞外部分をクローニングして、N末端細胞外ドメインC末端IgGγ1融合を得ることができるように、IgGγ1重鎖をZem229R哺乳動物発現ベクターにクローニングした。この構築物に使用したIgGγ1断片は、テンプレートとしてClontechヒト胎児肝臓cDNAライブラリーからIgGγ1配列を単離するようにPCRを用いて作製した。SEQIDNO42およびSEQIDNO43を用いたPCR反応は、以下の通り行った。94°C60秒、53°C60秒、および72°C120秒の40サイクル、ならびに72°C7分。PCR産物をアガロースゲル電気泳動によって分離し、QiaQuickゲル抽出キットを用いて精製した。単離された990bpのDNA断片を、MluIおよびEcoRIによって消化し、QiaQuickゲル抽出キットを用いて抽出し、MluIEcoRIリンカーを含むオリゴSEQIDNO44およびSEQIDNO45と共に、本明細書に開示された標準的な分子生物学法を用いてMluIおよびEcoRIによって前もって消化されたZem228Rに連結した。この一般的なクローニングベクターを、ベクター76hIgGgamma1wCh1786Zem229Rと呼んだ。IgGγ1重鎖と融合したhIL20RAの細胞外ドメインのポリヌクレオチド配列をSEQIDNO52に示し、対応するポリペプチド配列をSEQIDNO53に示した。シグナル配列の無い成熟ポリペプチドはSEQIDNO54からなる。使用したIL20RA細胞外ドメインの部分はSEQIDNO55からなった。5EcoRI部位および3KpnI部位を有する受容体の細胞外部分をクローニングして、N末端細胞外ドメインC末端ヒトκ軽鎖融合を得ることができるように、ヒトκ軽鎖をZem228R哺乳動物発現ベクターにクローニングした。この構築物に使用したヒトκ軽鎖断片は、前記で使用したもの同じClontechhFetalLivercDNAライブラリーからヒトκ軽鎖配列を単離するようにPCRを用いて作製した。PCR反応は、オリゴSEQIDNO46およびSEQIDNO47を用いて行った。PCR産物をアガロースゲル電気泳動によって分離し、QiaQuickゲル抽出キットを用いて精製した。単離された315bpのDNA断片を、MluIおよびEcoRIによって消化し、QiaQuickゲル抽出キットを用いて抽出し、前記のMluIEcoRIリンカーを使用して、本明細書に開示された標準的な分子生物学法を用いてMluIおよびEcoRIによって前もって消化されたZem228Rに連結した。この一般的なクローニングベクターを、ベクター77hκlight774Zem228Rと呼んだ。ヒトκ軽鎖と融合したIL20RBの細胞外部分のポリヌクレオチド配列をSEQIDNO56に示し、対応するポリペプチド配列をSEQIDNO57に示した。シグナル配列の無い成熟ポリペプチドはSEQIDNO58からなる。実際に使用したIL20RB細胞外ドメインの部分はSEQIDNO59からなった。融合ベクター構築物へのhIL20RA細胞外ドメインおよびIL20RB細胞外ドメインの挿入前記の構築ベクターを用いて、IgGγ1と融合したヒトIL20RAを有する構築物を作製した。この構築は、以下に記載の条件下94°C60秒、57°C60秒、および72°C120秒の30サイクルならびに72°C7分で、オリゴSEQIDNO48およびSEQIDNO49を用いて、hIL20RAIgGベクター102からヒトIL20RA受容体を得るようにPCRを使用することによって行った。得られたPCR産物をEcoRIおよびNheIによって消化し、本明細書に記載のようにゲル精製し、EcoRIおよびNheIによって前もって消化され、バンド精製されたベクター76に連結した。得られたベクターを配列決定して、ヒトIL20RαIgGγ1融合が正しいことを確認した。hIL20RACh1IgGγ11825Zem229Rベクターをベクター195と呼んだ。このように得られたIL20RACh1IgGγ1配列を、SEQIDNO52および53に示した。N末端配列決定から、SEQIDNO54の予測成熟ポリペプチド配列が存在することが分かった。κ軽鎖と融合したIL20RBを有する別の構築物も構築した。IL20RBヒトκ軽鎖の構築は、前記のように、オリゴSEQIDNO50およびSEQIDNO51を用いてDR17N4からPCRを行い、得られたバンドをEcoRIおよびKpnIにより消化し、次いで、この産物を、EcoRIおよびKpnIによって前もって消化され、バンド精製されたVec77に連結することによって行った。得られたベクターを配列決定して、IL20RBヒトκ軽鎖融合が正しいことを確認した。このIL20RBκ軽鎖構築物をSEQIDNO56および57に示した。得られたポリペプチドのN末端配列決定から、SEQIDNO58からなる予測成熟アミノ酸配列が存在することが分かった。SEQIDNO59は、使用したIL20RB細胞外ドメインの成熟部分である。ヒトIL20RA受容体およびヒトIL20RB受容体の同時発現リポフェクタミン試薬を用いて、製造業者の説明書に従って、前記の約16μgのベクター194および195をそれぞれBHK570細胞に同時導入した。トランスフェクトされた細胞を、1μMメトトレキセートを含有するDMEM5FBS中で10日間、05mgmlG418を含有するDMEM5FBS中で10日間、選択した。得られたトランスフェクタントプールを、10μMMTXおよび05mgmlG418の中で10日間、再選択した。得られた二重選択細胞プールを用いて、タンパク質を生成した。このプールの3箇所の工場を用いて、8Lの無血清ならし培地を作製した。このならし培地を1mlプロテインAカラムに通し、750マイクロリットル画分中に溶出した。最大濃度であると見出された、これらの画分のうち4個をプールし、PBSに対して透析した。最後に、透析された材料をBCAで分析し、濃度が317μgmlであると見出された。この8L精製から合計951μgを得た。実施例13HaCaTケラチノサイト細胞株においてIL20結合はSTAT3を活性化するIL20は、IL20受容体の両サブユニットでトランスフェクトされた細胞株に結合する。しかしながら、これらの細胞株は正常レベルと比較してIL20受容体を過剰発現し、IL20の生理学的役割との関係は不明である。内因性IL20RAおよびIL20RBを発現するヒトHaCaTケラチノサイト細胞株を用いて、生物学的に関連する細胞型においてIL20シグナル伝達を調べた。HaCaT細胞に、細胞内シグナル伝達の検出を可能にするレポーター構築物を含有する組換えアデノウイルスに感染させた。この構築物は、血清応答エレメントならびにトランスダクションエレメントのシグナルトランスデューサ―およびアクチベーターからなるプロモーターエンハンサー配列によって駆動されるホタルルシフェラーゼ遺伝子からなる。このアッセイ系は生産的なリガンド受容体相互作用を検出し、受容体活性化に関与する、可能性のある下流シグナル伝達成分を示す。IL20のみで処理するとルシフェラーゼ活性が用量依存的に増大し、最大半量応答は約23nMで生じた。この後に、SREエレメントのみ、またはSTATエレメントのみを含有するアデノウイルスベクターを用いてルシフェラーゼレポーターアッセイを行うと、STATのみで、検出可能なレポーター活性化が生じた。他のサイトカインがIL20と協調作用するかどうか確かめるために、HaCaT細胞を、IL20単独で、または一回の最大用量以下のEGF、IL1β、またはTNFαと組み合わせて処理した。これらの3種類のタンパク質がそれぞれ存在すると、IL20処理によってルシフェラーゼ活性が用量依存的に増大した。IL20とIL1βとの組み合わせによって、IL20のみの約15である約05nMで最大半量応答が得られた。さらに、レポーター遺伝子の活性化は、単独で必要とされるIL20用量の110以下の用量である01nMIL20で検出可能である。IL20RA、IL20RB、または両受容体サブユニットでトランスフェクトされたBHK細胞を用いて、STATルシフェラーゼのIL20刺激に受容体対形成が必要であるかどうか確かめた。結合アッセイと同様に、両受容体サブユニットでトランスフェクトされた細胞しかIL20に応答せず、57pMの最大半量応答で応答した。本発明者らは、BHK細胞における最大半量応答のためのIL20濃度は、HaCaT細胞における最大半量応答のためのIL20濃度の1400であると指摘する。BHKIL20受容体トランスフェクタントの方が受容体レベルが高いために、BHK細胞における最大半量応答に必要なIL20濃度はHaCaT細胞と比較して低くなった可能性が高い。核移行アッセイを用いて、IL20作用に関与するSTATタンパク質を特定した。内因性IL20受容体を有するHaCaT細胞ならびにIL20RAおよびIL20RBでトランスフェクトされたBHK細胞を両方ともIL20タンパク質で処理し、細胞質から核へのSTAT3およびSTAT1転写因子の移行を免疫蛍光法によってアッセイした。刺激されていないHaCaT細胞では、STAT3染色は主にサイトゾルにあった。HaCaT細胞をIL20で処理すると、STAT3は核に明瞭に蓄積した。漸増濃度のIL20に応答してSTAT3の核移行が起こり、最大半量IL20濃度は7nMであった。STAT3移行とは対照的に、IL20で処理したHaCaT細胞は、STAT1の検出可能な核蓄積を示さなかった。IL20RAおよびIL20RBでトランスフェクトされたBHK細胞を用いて、IL20受容体がSTAT3核移行のIL20刺激に必要なことを確かめた。IL20受容体を欠くBHK細胞では、IL20処理後に、STAT3はサイトゾルに残った。対照的に、IL20受容体でトランスフェクトされたBHK細胞では、STAT3はIL20に応答して核に移行した。さらに、IL20処理にもIL20受容体発現にも関係なく、STAT1はサイトゾルに残った。本発明者らは、IL20を介したSTAT3活性化にはIL20受容体が必要であると結論付けている。