"ヒアルロン酸のアルコール基が、レインそれ自体または誘導体形でエステル化されている、ヒアルロン酸に基づく化合物、またはその塩。レインが、ヒアルロン酸のエステル化可能なアルコール基の少なくとも5をエステル化する、請求項1に記載の化合物。レインが、ヒアルロン酸のエステル化可能なアルコール基の5~50をエステル化する、請求項2に記載の化合物。レインが、ヒアルロン酸のエステル化可能なアルコール基の5~20をエステル化する、請求項3に記載の化合物。レインが、ヒアルロン酸のエステル化可能なアルコール基の10をエステル化する、請求項4に記載の化合物。請求項1~5のいずれか一項に記載の化合物のナトリウム塩。請求項1~6のいずれか一項に記載の化合物またはその塩を製造するための方法であって、レインそれ自体または誘導体形の酸塩化物とヒアルロン酸とを反応させることを含んでなる、方法。レインの酸塩化物およびヒアルロン酸が、レインの酸塩化物のmmolとヒアルロン酸のエステル化可能なアルコール単位のmeq.との間の百分率比が少なくとも5であるような量である、請求項7に記載の方法。前記百分率比が、5~50の範囲である、請求項8に記載の方法。前記百分率比が、5~20の範囲である、請求項9に記載の方法。前記百分率比が、10である、請求項10に記載の方法。以下の工程:a非プロトン性非極性溶媒中、ヒアルロン酸の懸濁液を調製する工程;b非プロトン性非極性溶媒に溶解したレインの酸塩化物および水素イオンアクセプターを添加する工程;cエステル化反応が行われるのに十分な時間、還流下で混合物を攪拌させておく工程;およびd溶媒を蒸発除去する工程、を含んでなる、請求項7~11のいずれか一項に記載の方法。前記工程aの非プロトン性非極性溶媒が、シクロヘキサンである、請求項12に記載の方法。工程bにおいて、前記水素イオンアクセプターが、NEt3である、請求項12または13に記載の方法。工程cにおいて、反応を還流下で少なくとも20時間放置しておく、請求項12~14のいずれか一項に記載の方法。レインの酸塩化物を、以下の工程:a’非プロトン性非極性溶媒中、レインの懸濁液を調製する工程;b’SOCl2とレインとの間のモル比が10より大きくなるような量のSOCl2を添加する工程;c’不活性雰囲気下でレイン酸塩化物が形成されるのに十分な時間、還流下で反応物を攪拌させておく工程;およびd’溶媒および過剰な未反応のSOCl2を蒸留によって除去する工程を含んでなる方法によって得る、請求項7~15のいずれか一項に記載の方法。工程aの前記非プロトン性非極性溶媒が、塩化物溶媒である、請求項16に記載の方法。前記塩化物溶媒が、CH2Cl2である、請求項17に記載の方法。工程c’において、反応物を少なくとも3時間還流下で放置する、請求項16~18のいずれか一項に記載の方法。精製の最終工程をさらに含んでなる、請求項7~19のいずれか一項に記載の方法。前記精製工程が、透析膜を用いて行われる、請求項20に記載の方法。請求項1~6のいずれか一項に記載の化合物またはその塩を、好適な賦形剤および/または希釈剤と組み合わせて含んでなる、医薬組成物。局所領域的な投与に好適な処方物を有する、請求項22に記載の医薬組成物。関節内浸潤による投与に好適である、請求項23に記載の医薬組成物。眼への投与に好適である、請求項23に記載の医薬組成物。局所投与に好適である、請求項23に記載の医薬組成物。水分散液の形態である、請求項22~26のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記分散液が、pH7.4の緩衝溶液中のものである、請求項27に記載の医薬組成物。化合物の濃度が、0.1~2w/vの範囲である、請求項27または28に記載の医薬組成物。化合物の濃度が、1w/vである、請求項29に記載の医薬組成物。請求項22~30のいずれか一項に記載の医薬組成物により形成される、ヒト用または獣医学用医薬品。請求項22~30のいずれか一項に記載の医薬組成物により形成される、ヒト用または獣医学用医療機器。炎症性疾患を処置するための医薬を製造するための、請求項1~6のいずれか一項に記載の化合物またはその塩の使用。前記炎症性疾患が、関節の炎症性疾患である、請求項33に記載の使用。組織ここで、組織は、軟骨または皮膚である修復のための医薬を製造するための、請求項1~6のいずれか一項に記載の化合物またはその塩の使用。生体材料を製造するための、請求項1~6のいずれか一項に記載の化合物またはその塩の使用。実施例1レインの酸塩化物の製造レインAldrichから供給21.5mg;0.075mmolを、50ml丸底フラスコに入れ、そこへCH2Cl215mlを加えた。この懸濁液は橙色に変化した。次に、SOCl20.5ml;6.9mmolを懸濁液へ加えた。反応を、不活性雰囲気中N2で還流下50°Cで攪拌しながら行った。反応混合物を還流下で3時間放置したところ、溶液は透明な橙黄色に変化した。CH2Cl2および過剰な未反応のSOCl2を除去するため、トルエン約5mlを添加し、混合物を6.6×104Paに相当する500mmHgで少なくとも4回蒸留して、レインの粗酸塩化物23mgを得た収量:定量的。生成物をTLC酢酸エチルにより同定した。実施例2HA-Re化合物の製造ヒアルロン酸FidiaFarmaceuticiSpA-AbanoT.PD提供;平均分子量約600,000Da277.3mg;4.6×10-4mmol;0.75meq.のエステル化可能な第一級アルコール単位に相当を、シクロヘキサン20ml中に懸濁した。最少量のCH2Cl2に溶解した、実施例1に記載されるように製造したレインの酸塩化物21.5mg;0.075mmolを加えた。次に、Et3N3mlを加えた。懸濁液は赤色に変化した。不活性雰囲気中N2で還流下で70°C攪拌しながら反応を行った。短時間の後、懸濁液は赤橙色に変化し、約3時間後に褐変した。20時間後、反応を停止し、溶媒を減圧下650mmHg、8.7×104Paに相当で蒸発乾固し、透明な黄色の沈殿物の形でHA-Re化合物を得た。実施例3HA-Re化合物の精製aサンプルの調製pH7.4のリン酸緩衝生理食塩水溶液5mlを、実施例2に記載されるように得たHA-Re化合物0.1019gに加えた。2相の系が得られ、溶液は橙黄色に変化し、一方、残りの部分はゼラチン状の粘度を有するconsistency黄褐色塊を呈した。少なくとも24時間待った後、褐色の粘稠なコロイド状の系を得た。b精製透析膜Slide-A-Lyzer登録商標3.5KPierce,Rockford,ILUSAを、pH7.4のリン酸緩衝生理食塩水溶液を用いて適当な方法で水和させた。製造者の説明書に従って、精製する好適な量のHA-Re化合物を導入した。透析をpH7.4のリン酸緩衝液で2時間行ったわずか20分後、緩衝溶液はわずかに黄色く見えた。この操作を、緩衝溶液が無色を維持するまで少なくとも3回繰り返し、可視スペクトルで吸収のないことを確認した。精製したHA-Re化合物を透析によって膜から回収した。このようにして得られたHA-Re化合物の純度は99.8であった。実施例4得られた本発明のHA-Re化合物の分析1UV-VIS分光光度計を用いる試験実施例3に記載されるようにして得た精製されたHA-Re化合物中のレインの濃度を、10-5~10-3の範囲でのロバスト較正に基づいて430nmで分光光度を読み取ることによって評価したR2=0.9999。この波長を選択したのは、レインの定量的測定を困難にするUV域でのヒアルロン酸の吸収がないためである。分光光度の測定値を基にすると、レインに基づくエステル化反応の収率は58であることが分かった。実施例2を考慮して、最高10のヒアルロン酸のエステル化可能な一次アルコール基をエステル化するために、この反応で用いたレインの量を選択した。レインに基づくエステル化反応の収率が58であることが分かったことから、ヒアルロン酸のエステル化可能なアルコール基の5.8がエステル化されたと推定できる。21H-NMR分析実施例2で得たHA-Re化合物の1H-NMRスペクトルを、VarianVRX300分光計を用いて重水素化緩衝溶液中で行った。しかし、このスペクトルの解釈時に問題に突き当たった。ヒアルロン酸と反応するレインの割合では、芳香環を同定することができなかった。水性環境中でレインの溶解性が乏しいことを考慮し、エステル化が可逆反応であることを考えて、HA-Re化合物からレインを得ることのできるように、鹸化、すなわち塩基性加水分解を行った。得られた鹸化化合物を沈殿させた。このようにして得た鹸化化合物の1H-NMRスペクトルを、VarianVRX300分光計を用いてジメチルスルホキシドDMSO中で行った。得られたスペクトルを図1に示すが、これはレインのものと完全に一致した。3I.R分析I.R.スペクトルをNujol法で本発明のHA-Re化合物の鹸化から得た化合物について実行したスペクトルBXFT-IRシステム、PerkinElmerを使用。図2に示されるように、得られたスペクトルは純粋なレインのものと一致する。4HPLC-MSHPLC-MS分析を、本発明のHA-Re化合物の鹸化により得られた化合物について流速0.8ml/分にて2.5ギ酸を含有するメタノール/水80:20混合物を移動相として用いて行ったアジレント1100シリーズLC/MSD装置を使用。図3に示すように、化合物の質量はレインの質量に一致する。実施例5本発明のHA-Re化合物の技術的特性の評価1加水分解安定性の評価実施例2で得たような、透析によって精製されていない本発明のHA-Re化合物を、周囲温度22°Cの暗所で、バイアル中、乾燥状態で6ヶ月を超えて保存した。次に、このサンプルを実施例3に記載のように透析によって精製し、レインの濃度をUV-VIS分光光度計を用いて評価した。濃度は、合成した生成物で直ちに得たものと等しいことが見出された。従って、この実験結果から、乾燥した状態では分解が見られないことが示された。さらに、実施例2に記載のように製造され、実施例3に記載のように透析によって精製された本発明のHA-Re化合物を、温度4°Cの暗所で、バイアル中、pH7.4の2リン酸緩衝液溶液中で6ヶ月間保存した。非滅菌材料の使用、および防腐剤を用いていないという事実のため、異物の存在がサンプル中に見られた。サンプルを、実施例3に記載のものと同じ方法を用いて再度透析に付し、それを少なくとも4日間透析した。UV-VIS試験によって、透析に用いられた種々の緩衝溶液中に遊離したレインを見出すことはできなかった。従ってこの場合も、HA-Re化合物から、少なくとも現在の分析技術を用いて明確に実証できる、いかなるレインの遊離も見出されなかったので、この化合物は化学的に安定であることが示された。従って、溶液中でさえも加水分解は全く観察されなかった。得られた結果から、本発明によるHA-Re化合物は水溶液中で冷蔵条件下4°C±0.5°Cで少なくとも24ヶ月間安定しているということができる。このことは、注目される加水分解が起こらないことから導かれたものである。さらに、レインとのエステル化反応中にヒアルロン酸の加水分解が起こる可能性を除外するため、前記反応の空試験を行った。特に、レインとヒアルロン酸とを結合する反応と同じ条件を用いたが、但し前記レインの不在下で用いた。詳細には、ヒアルロン酸100mgを、シクロヘキサン10ml、ジクロロメタン1mlおよびトリエチルアミン1mlの混合物中へ加え、不活性雰囲気中N2で還流下70°Cで24時間反応を行った。そしてこの時間を経過するとすぐに、反応溶媒を窒素雰囲気下で除去した。得られた化合物は、自然な状態でヒアルロン酸よりもずっと水に溶けにくく、24時間の分散の後に粘度が測定できないことを特徴とする。これは水溶性となり、従って粘度が低下したことから、解重合を除外できることを意味する。最後に、実施例3で得たように精製された本発明のHA-Re化合物の加水分解安定性を滅菌の点から確認した。上述のように、非滅菌材料の使用および防腐剤が用いられていない事実が、結果として本発明の化合物のサンプル中の異物の存在につながったことが分かっている。詳細には、pH7.4のリン酸緩衝生理食塩水溶液中、透析膜を用いて精製された本発明のHA-Re化合物の1溶液を調製した。ヒアルロン酸が熱感受性分子であることを示した実験に基づく証拠を得たので45034513、このようにして得たサンプルを、加圧飽和蒸気を用いてオートクレーブ中で121°Cで20分間滅菌した。次に、透析された液体中のレインの存在を評価するため、サンプルを再度透析膜での透析に付したが、レインの痕跡は見られなかった。これらの結果から、サンプルが熱殺菌に関して加水分解的に安定しているという結論が導き出せる。2流体力学的特性およびシリンジアビリティの分析本発明のHA-Re化合物のシリンジアビリティを高分子量および低分子量双方のヒアルロン酸のものと比較して分析した。特に、以下の3種類のサンプルを調製した。aリン酸緩衝生理食塩水溶液、pH7.4中の高分子量ヒアルロン酸の1w/v溶液平均分子量約1,200,000bリン酸緩衝生理食塩水溶液、pH7.4中の低分子量ヒアルロン酸の1w/v溶液平均分子量約600,000cリン酸緩衝生理食塩水溶液、pH7.4中の本発明のHA-Re化合物の1w/v溶液次に、サンプルの粘度をVISCOMATEモデルVM-10Aを用いて測定しガラス製バイアル:3ml;攪拌条件なし;温度20±0.2°C、以下の数値:aη=78.4mPasbη=64.8mPascη=47.9mPasを得た。得られた結果は、本発明のHA-Re化合物が自然な状態で高分子量と低分子量の双方のヒアルロン酸よりも優れたシリンジアビリティを有することを示す。これは、本発明のHA-Re化合物の1w/v溶液が低分子量ヒアルロン酸の1w/v溶液よりも低い粘度を有し、それは順に高分子量ヒアルロン酸の1w/v溶液よりも低い粘度を有するためである。観察された粘度の低下は、エステル化反応後にヒアルロン酸の解重合反応が存在しないことを証明するもので、レインとヒアルロン酸との間の共有結合相互作用によるものでありうる。実施例6本発明のHA-Re化合物のインビトロ薬理活性の評価正常の軟骨組織生検を、外傷性骨折の結果としての臀部または大腿骨手術中に5名の個体男性3名および女性2名、平均年齢:59.3±5.1歳から得た。この研究に選択された被験者は炎症性疾患または関節疾患の生化学的または臨床的徴候を示さず、肉眼レベルでも顕微鏡レベルでも正常な軟骨を提示した。軟骨を滅菌状態で回収し、直ちに軟骨細胞単離の処理を行った。サンプルは、最初に付着した筋肉組織、結合組織、または肋軟骨下骨組織を取り除き、次に1~3mm3断片へ刻み、リン酸緩衝生理食塩水、pH7.2PBS中ですすいだ。次に、37°Cにて60~75分の0.25トリプシン、400U/mlコラゲナーゼI、1000U/mlコラゲナーゼIIおよび1mg/mlヒアルロニダーゼでの反復酵素消化により単一の軟骨細胞が遊離した。この細胞をプールし、PBS中で十分に洗浄し、35mmプレートに高密度で播種した45×103細胞/cm2。培地は、10FCSを添加したクーンの改変ハムF12培地であったMasciaBrunelli,Milano,Italy。軟骨細胞表現型の維持を、培養上清のペプシン消化後のII型コラーゲンの検出により推定した。細胞生存度をトリパンブルー排除試験により評価した。細胞の複製を、規則的な間隔での培養物のトリプシン処理および細胞数の定量により判定した。初代培養が密集に達した時に刺激実験を行った継代数0。次に、細胞をアスコルビン酸50μg/mlの存在下で2日間培養し、その後、種々の濃度のヒアルロン酸HA、本発明の化合物HA-Reまたはレインを添加して、または添加せずに、rhIL-1β5ng/mtの存在下または不在下で20時間インキュベートした。ヒアルロン酸とレインの双方ともに、軟骨の異化作用に関与するメタロプロテイナーゼMMPの活性を阻害するそれらの能力のため、変形性関節症において有益な効果を有することが報告されている。ヒト軟骨細胞におけるMMP発現への種々の化合物の効果を調査するため、本発明者らはリアルタイム-PCR検定を行った。全RNAを、トリゾールGibcoBRLを製造者の説明書に従って用い、培養されたヒト軟骨細胞から抽出した。cDNAのストランドを、1μgの全RNAを用いてSuperscriptFirst-StrandsynthesiskitGibcoBRLを用いて合成した。プライマーは以下の通りであった。MMP-1コラゲナーゼセンス:5’-CTGAAGGTGATGAAGCAGCC-3’アンチセンス:5’-AGTCCAAGAGAATGGCCGAG-3断片サイズ428bp;MMP-3ストロメリシンセンス:5’-CCTCTGATGGCCCAGAATTGA-3’、アンチセンス:5’-GAAATTGGCCACTCCCTGGGT-3’断片サイズ440bp;グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼGAPDH、センス:5’-CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA-3’;アンチセンス:5’-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCA断片サイズ598bpiCyclerサーマルサイクラーBio-RadHercules,CAにおいて60~64°Cで45サイクル増幅を行い、データをiCycleriQOpticalシステムソフトウエアを用いて分析した。各サンプルにおける相対発現を、対照としてGAPDHmRNAを用いてリアルタイムPCR効率に基づく数学的方法により計算した。全てのサンプルを3回ずつ検定した。45増幅サイクルの後、閾値サイクル値を自動計算し、4桁の範囲にわたる標準曲線から出発cDNAのフェムトグラムを計算した。MMPとGAPDHの双方の標準曲線は反応25μlあたり1~1000フェムトグラムの範囲であった。GAPDH出発量に対するMMPの比を計算した。種々の実験の変数と当該対照との間の結果の統計上の差をスチューデントのt検定を用いて分析した。図4および5は、RT-PCR実験で得られた結果を示したものである。サンプルは総て3回ずつ検定した。各実験において、MMPmRNA発現の変化を未処理細胞のものと比較した増加倍率で表した。3回の実験の平均および標準偏差を示す。スチューデントの両側t検定を用いて種々の処置の効果の有意性を判断した。また、処置群と対照群の統計上の差は、=p<0.01;=p<0.001スチューデントのt検定でも表す。IL-1処置は、MMP-1とMMP-3双方の発現に劇的な増加をもたらし、これは文献のデータに一致した。図4に報告される実験において、本発明者らは文献中で一般に報告される薬理学的濃度1mg/mlでのHAの効果を同じ濃度1mg/mlでのHA-Re本発明の化合物の効果と比較した。0.1~1.5HA濃度範囲で同様の結果が得られた。ヒト軟骨細胞を薬理学的用量1mg/mlでHAに曝露すると、IL1によるMMP1およびMMP2の誘導を有意に阻害することができた図4AおよびB。驚くべきことに、同等用量の本発明のHA-Re化合物が、さらにいっそう劇的な保護効果をもたらし、IL1の曝露にもかかわらずMMP発現を定常レベルにまで戻った。図5は、薬理学的用量10μMでのレインの効果を同等用量のHA-Reの効果と比較した実験の結果を示したものである。やはりHA-Re本発明の化合物は、IL1に誘導されるMMP発現のダウンレギュレーションの実現にRe単独よりもいっそう強力であると思われる。実施例7本発明によるHA-Reのさらなる合成は、レインおよびヒアルロン酸の第一級アルコール基に基づくヒアルロン酸の化学量的濃度に相当する、20mgのヒアルロン酸および23mgのレインの酸塩化物を用いたこと以外は、実施例2のようにして行った。図6はこのようにして得た本発明によるHA-Re化合物の13C-NMRスペクトルを示す。エステル官能基に特有の175ppmでの特徴的なピークが明確に現れている。図7はこのようにして得た本発明のHA-Re化合物の1H-NMRスペクトルを示す。レインの芳香環に特有の7~8ppmの間での特徴的なピークが明確に現れている。従って、本発明によるHA-Re化合物におけるこれら2つのNMRスペクトルからレインがヒアルロン酸のアルコール基をエステル化することが明確に現れている。"