"黒色腫抑制活性因子及びヒアルロン酸、アルギン酸塩、硫酸カルシウム、燐酸三カルシウム、ヒドロキシルアパタイト、ポリラクチック-コグリコリド、ポリ酸無水物、コラーゲン又はこれらの組合せ物より成る群から選択された生体親和性及び/又は生分解性のマトリックスを含有する薬剤学的組成物。黒色腫抑制活性因子MIAを骨誘導性蛋白質と組み合わせて含有する、薬剤学的組成物。骨誘導性蛋白質:MIAの比は1:1~1:20である、請求項2に記載の薬剤学的組成物。骨誘導性蛋白質はBMP-2、BMP-7又はヘッジホッグ蛋白質である、請求項2又は3に記載の薬剤学的組成物。組成物は生体親和性マトリックスを含有する、請求項2から4までのいずれか1項に記載の薬剤学的組成物。生体親和性マトリックスは、ヒアルロン酸、アルギン酸塩、コラーゲン、ヘパリン、ポリラクチック-コグリコリド及び/又はポリラクチック-コグリコリド誘導体又はこれらの組合せ物である、請求項1又は5に記載の薬剤学的組成物。軟骨-/骨形成系列の改良された誘導及び軟骨及び/又は骨形成の促進のための薬剤学的組成物を製造するための主成分としての、黒色腫抑制活性因子MIAの使用。組成物は付加的に骨誘導性蛋白質を含有する、請求項7に記載の使用。骨誘導性蛋白質はBMP-2、BMP-7又はヘッジホッグ蛋白質である、請求項8に記載の使用。骨誘導性蛋白質:MIAの比は1:1~1:20である、請求項8又は9に記載の使用。黒色腫抑制活性因子MIAを生体親和性マトリックスと組み合わせる、請求項8から10までのいずれか1項に記載の使用。生体親和性のマトリックスは、ヒアルロン酸、アルギン酸塩、コラーゲン、ヘパリン、ポリラクチック-コグリコリド及び/又はポリラクチック-コグリコリド誘導体又はこれらの組合せ物である、請求項11に記載の方法。軟骨-/骨形成系列の改良された誘導及び軟骨及び/又は骨形成の促進のための薬剤学的組成物の製造のための、黒色腫抑制活性因子MIAの発現ベクター又は骨誘導性蛋白質の発現用ベクターと黒色腫抑制活性因子MIAの発現能力のあるベクターとの組み合わせの使用。軟骨-/骨形成系列の改良された誘導及び軟骨及び/又は骨形成の促進のための薬剤学的組成物の製造のための主成分としての、黒色腫抑制活性因子MIAの発現能力のある発現ベクター又は骨誘導性蛋白質の発現能力のあるベクター及び黒色腫抑制活性因子MIAの発現能力のあるベクターの使用。ヒアルロン酸、アルギン酸塩、硫酸カルシウム、燐酸三カルシウム、ヒドロキシルアパタイト、ポリラクチック-コグリコリド、ポリ酸無水物、コラーゲン又はこれらの組み合わせ物からなる群から選択された生体親和性マトリックスを含有する、請求項13に記載の使用。骨及び/又は軟骨修復の必要な患者の治療のための黒色腫抑制活性因子MIAの使用。黒色腫抑制活性因子MIAと骨誘導性蛋白質の組み合わせを使用する、請求項16に記載の使用。本発明は、間葉幹細胞からの軟骨-/骨形成系列の誘導及び軟骨及び骨形成の促進のための新規の方法及び組成物を発明することを課題とする。本発明は、MIAを有利に骨誘導性蛋白質と組み合わせて用いることによる、軟骨-/骨形成系列の改良された誘導法及び軟骨及び増加された骨形成を促進する方法を提供する。更に、本発明は軟骨-/骨形成系列を誘導し、軟骨及び骨形成の促進を誘導するための薬剤学的組成物の製法に関し、ここでは、本発明による黒色腫抑制活性因子MIAをこの薬剤学的組成物の主成分として使用する。更に、MIAと骨誘導性蛋白質の組み合わせを主成分として使用することが有利である。骨誘導性蛋白質:MIAの比は1:1~1:20が有利である。意外にも、MIAは、有利に骨誘導性骨形成性蛋白質、有利に骨形態形成性蛋白質2、3、4、5又は7又はヘッジホッグ蛋白質と組み合わされて、結果として軟骨及び/又は骨形成をすることが発見された。骨誘導性蛋白質とは、有利に軟骨性骨形成を誘導する骨形成性蛋白質と理解される。軟骨細胞は、軟骨性マトリックスに引き続き、骨芽細胞及び骨細胞を生成し、これらは骨組織を生成する。それにより、軟骨-/骨形成系列の初期遺伝子、例えばCbfa1がアップレギュレートされ、これが究極的に軟骨細胞及び骨細胞の形成をもたらす。例えばBMP類又はヘッジホッグ蛋白質によりこのような骨誘導が達成できる。BMP-2、BMP-7又はヘッジホッグ蛋白質Shh、Ihh又はDhhが有利である。本発明で有用な骨誘導性蛋白質には、TGF-β、BMP類及びEGFと組み合わされたTGF-βのような蛋白質も包含される。骨形成を誘導することの可能な物質は簡単な方法で試験することができる。この目的のために、例えば多能な間葉細胞、例えばC3H10T1/2細胞を潜在的骨誘導性因子と共に又はそれなしで培養する。対照物及び処置細胞をアルカリホスファターゼ活性に関して測定する。この活性は、適当な比色分析基質、例えば燐酸p-ニトロフェニルを用いて光学的に測定することができるNakamuraetalBBRC237465469。アルカリホスファターゼの増加された活性は、骨誘導として記録される。選択的に、オステオカルシン及びアルカリホスファターゼの適当なプライマーを用いるRTPCRによっても、オステオカルシン及びアルカリホスファターゼのアップレギュレーシヨンが測定される。軟骨形成を誘導する化合物の能力は、多能な間葉細胞、例えばC3H10T1/2又はプレ-軟骨形成細胞、例えばRCJ31C518を用いて試験管内で試験することができる。これらの細胞を、3次元的培養で、例えば誘導物質又は誘導物質の混合物を用いるマイクロマス培養で2~3週間培養させる。軟骨マーカーとしてのII型コラーゲンは、モノクローナル抗体を用いる免疫細胞化学により又はRNA単離の後のノーザンブロットにより立証することができた。アルシアンブルー着色は、プロテオグリカンの存在を証明する。アグリカンの試験のためにRT-PCR反応で特異的プライマーを用いる別の方法もある。本発明のもう一つの有利な態様では、有利に骨形成性蛋白質と組み合わされたMIAを、遺伝子治療法により生体外又は生体内で細胞中へ導入することができる。この方法のために、MIA及び場合によっては骨形成性蛋白質をコードする遺伝子を、有利に同じプロモーターのコントロール下に1ベクター中に又は別のベクター中に導入する。MIA又は骨形成性蛋白質の有効な発現のために、強いプロモータをこのベクター中で使用することが必要である。このようなプロモータは、例えばPGK又はCMVプロモータである。有利に、発現ベクターは、このような強いプロモータ、選択された遺伝子の完全長mRNA、例えばBMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-7、Shh、Ihh又はDhh、FGF、HGF、PlGF、VEGF、人工イントロン及びポリ-A-部位よりなる。生体内適用のために、DNAは、有利に骨形成のために凍結乾燥されてコラーゲンスポンジにされるか又は他の適当なキャリア、有利にはヒアルロン酸又はゲルとしての適用のためのコラーゲンと共に、軟骨形成のために適用される。生体外適用のために、軟骨形成性及び骨形成性系列の細胞を、このようなベクターでトランスフェクトさせ、引き続き移植する。本発明による薬剤学的処方物は、例えば組成物のデリバリイ及び/又はサポートのための適当なマトリックスを含有しかつ/又は骨形成のための表面を提供することができる。このマトリックスは、有利に骨誘導性蛋白質との組み合わせでMIAの緩徐な放出を提供することができる。MIAとMIAがイオン性又は疎水性相互作用により可逆的に結合するマトリックスとの組み合わせにより、MIAの緩徐な放出が可能である。この組成物は生体親和性及び/又は生分解可能であるマトリックスを含有するのが有利である。この組成物のための有効なマトリックスは、例えばヒアルロン酸、アルギン酸塩、硫酸カルシウム、燐酸三カルシウム、ヒドロキシルアパタイト、ポリラクチック-コグリコリド、ポリ酸無水物、コラーゲン又はこれらの組み合わせを含有し、この際、ヒアルロン酸、アルギン酸塩、ヘパリン、コラーゲン及び/又はポリラクチック-コグリコリド又はそれらの誘導体が有利である。局所的骨修復のために、MIA又は骨誘導性蛋白質とのその組合せ物を使用するのが有利である。従って、骨形成のために、形状安定なマトリックスを始原細胞と密に接触して使用するのが有利である。3次元マトリックスに適用されたMIA又は組合せ物は、スポンジに類似しており、欠損中に密に入り込み、例えば骨膜又は骨髄からの細胞を増殖させ、かつ骨細胞に分化することが可能であり、これは有利に生分解性である。このようなスポンジを得るために有利な物質は、例えばコラーゲン、アルギン酸塩、燐酸三カルシウム、ヒドロキシルアパタイト及びこれらの組合せ物である。軟骨形成の誘導のためには、MIA又はその軟骨形成性/骨形成性蛋白質との組合せ物が局所的軟骨欠損部に向かうことが重要である。軟骨始原細胞は、軟骨下骨から全幅欠損で又は滑膜から部分幅欠損で誘導される。この治療は細胞を増殖させ及び分化させることができ、これが結果として新しい軟骨を合成する。周辺領域からの成熟軟骨細胞も刺激することができた。この最後に、この薬剤学的組成物を直接軟骨組織上に又は内に、有利に局所移植又は局所注入により適用するのが有利である。注射器を用いてこれを行うのが好適である。ここでもマトリックスの使用が有利である。しかしながら、このマトリックスは形状安定であるよりもゲル又はペーストのように流動性であるのが有利である。この流動性は、薬剤学的処方物を注射器で適用可能にするのに充分な高さであるのが有利である。用量管理は、当該医師により、本発明の処方物の作用を変更する種々の要因を考慮して決定されうる。処方物の作用を変更することのできる要因には、形成されることが望まれる骨の量、適用部位、損傷の状態、患者の年齢、性別及び食餌、感染症の重症度、投薬の回数及び他の臨床的要因が包含される。用量は骨の再形成時に使用されるマトリックスのタイプに応じて変動することができる。更に本発明は、MIAをこの薬剤の主成分として使用することを特徴とする薬剤の製法に関する。この方法では、1インプラント又は1ボラス注射当たりMIA500μgを使用するのが有利である。有利な1実施形では、この薬剤は付加的に骨誘導性蛋白質を含有する。骨誘導性蛋白質:MIAの質量割合は有利に1:1~1:20である。従って、過剰量のMIAを使用するのが有利である。この組成物中では、骨誘導性蛋白質約100μg及びMIA約500μgを使用するのが有利である。MIAと骨誘導性蛋白質の全体の量は、マトリックス蛋白質1gに対して200~800μgの範囲内にあるのが有利である。軟骨適用のために、このような薬剤学的処方物は、ヒアルロニック又はコラーゲンマトリックスをベースとするゲルであるのが有利である。このようなゲルは、有利に注入可能であり、1ボラス注射当たり100μl~2mlの量で適用される。骨内への適用の場合には、コラーゲンスポンジの使用が有利である。更に、本発明はこの種類の薬剤学的組成物に関する。この種類の薬剤学的組成物は、骨修復、生体内での骨形成、殊に骨欠損を蒙り、従って骨修復並びに軟骨修復を必要としている患者の治療のために適用することができる。本発明のもう一つの目的は、MIA及び場合によっては付加的に骨誘導性蛋白質の発現ベクター又はMIAの発現のためのベクターと骨誘導性蛋白質の発現を可能とするベクターとの組み合わせを含有する薬剤学的組成物、同様にこのような薬剤学的組成物の製造法である。その真の範囲が特許請求の範囲に記載されている本発明の理解を助けるために、次の実施例及び参考文献を示す。本発明の範囲を逸脱することなく、前記の処置の範囲内でその変更が可能であることは明らかである。例1骨形成性分化の誘導に関する試験管内細胞検定間葉細胞、例えばC3H10T1/2細胞を96ウエルプレート中に接種する。24時間後に骨誘導性因子、例えばヘッジホッグ又はBMPを単独で又はMIAと組み合わせて添加する第1表参照。対照のためには細胞を処置しない。5日後に、対照及び処置細胞をアルカリホスファターゼ活性及び蛋白質含量に関して分析する。アルカリホスファターゼAP活性を、比色基質としての燐酸p-ニトロフェニルを用いて光度測定法で測定する。活性の増加は骨誘導として記録される。ヘッジホッグ005μg/mlを適用した。MIAを005μ/ml~50μg/mlの種々の濃度で試験した。単独で適用されたMIAは、アルカリホスファターゼ活性を変えなかった。MIAがヘッジホッグと組み合わせて適用された場合には相乗効果が観察され、結果としてアルカリホスファターゼ活性の27倍の増加を生じた。例2軟骨マーカーの誘導に関する試験管内検定ブタの軟骨細胞を大腿顆から単離した。膝手術をした患者の大腿顆からヒト始原軟骨細胞を単離した。この軟骨を刻んで小片にし、コラーゲナーゼRocheDiagnosticsGmbHDE2mg/nl及びヒアルロニダーゼSigma01mg/ml及びDナーゼRocheDiagnosticsGmbHDE015mg/mlを有する10ml中で37°Cで16時間インキュベートした。遠心分離の後にこの軟骨細胞を増殖のためにペトリシャーレに接種した。分化した細胞を検定のために使用した。96ウエルプレート中の各ウエル当たり媒体10μml中の細胞2×104をスポットした。4時間後に媒体200μlを添加した。7日後にこのマイクロマス培養物にインダクターを加えた:BMP-2、ヘッジホッグ、MIA及びこれらの組合せ物。2~4週間後に、培養物を軟骨マーカーに関して検定した。形態学的に、軟骨細胞は丸い外観を有する。免疫細胞化学は、II型コラーゲン発現を示している。細胞化学的にアルシアンブルーは硫酸化されたプロテオグリカンを証明している。PCRでアグリカン及びSOX9を示すことができた。例3増殖の誘導に関する試験管内検定ブタの大腿骨顆から軟骨細胞を単離した。細胞3000を96ウエルプレート中に接種し、3日間培養した。血清不含インキュベーシヨンの24時間後に、MIA、BMP-2、Shh及びこれらの組合せ物を添加した。48時間血清不含誘導時間の最後の16時間の間、BrdUラベリングが存在した。製造者RocheDiagnosticsGmbHの指示に従って検出ELISAを行った。MIAは単独及び組み合わせで始原軟骨細胞のDNA合成を刺激する。例4軟骨形成を研究するための試験管内臓器検定;マウス四肢芽検定無菌状態下にマイクロ切開鋏及びウオッチマーカーズ鉗子を用いてE125~E155マウス胎児NMRIから四肢芽を単離する。この四肢芽を、Gibco-BRLからの抗生物質-抗真菌物質を含有するPBS中ですすぎ、次いで、Gibco-BRLからの血清不含BGJb媒体により記載されているinsituハイブリダイゼーシヨンでのホールマウントのための処理をして固定させた。ThepracticalapproachseriesOxfordUnivPressOxfordNewYorkTokyo。パラフィン区分を石灰化された領域を可視化し、かつ定量化するために、vonKossaで着色し、軟骨形成を評価するためにアルシアンブルーで着色した。加えて、軟骨発生のための遺伝子発現特徴、例えばコラーゲンII、MIA、コラーゲンXを分析するために、insituRNAハイブリダイゼーシヨンを実施した。例5軟骨、骨、腱及び靱帯誘導に関するマウス生物学的検定SampathandReddiラッテ異所着床検定と同様に、近交系C3Hマウス4月齢を用いて、マウス異所着床検定を実施したSampathandReddiProcNatlAcadSciUSA806591695WO9516035。aMIA単独、bBMP-2単独及びcMIAとBMP-2との組合せ物を、適当な緩衝液、BMP-2用の01トリフルオロ酢酸及びMIA用の100mM燐酸カリウム、150mMNaCl、pH60中で適用した。キャリアとしてI型コラーゲンマトリックス及びヒアルロン酸を用いた。任意の好適なキャリア、例えばI型コラーゲンマトリックス、コラーゲン-ヘパリン混合物、ゼラチンカプセル、ヒアルロン酸、アルギン酸塩又は生体親和性、生分解性、安定性及び機械的特性に基づく他の機能的に均等なデバイスが使用できる。インプラントをマウスの殿筋中に筋内配置し、14日間放置した。14日後にマウスを頚部転位により犠牲にした。インプラントを、標準組織学的技術を用いて単離し、処置したTheoryandPracticeofHistologicalTechniquesedBancroftandStevensChurchillLivingstone1996参照。パラフィン区分4μmを切断し、vonKossaで着色して可視化し、各インプラント中で誘導された軟骨及び骨組織の量を定量した。ポジチブ例えばBMP-2及びネガチブ例えば模擬デバイスインプラント対照群を実験インプラントと比較した。誘導された軟骨及び/又は骨の量の評価のために、前記のような軟骨及び骨マーカーに関するRNAinsituハイブリダイゼーシヨンにより、軟骨マーカー例えばコラーゲンII、コラーゲンX及び骨マーカー例えばコラーゲンI、オステオカルシンを用いて、遺伝子発現を研究することができる。例6DNA発現ベクターの軟骨、骨、腱及び靱帯誘導に関するマウス生物学的検定SampathandReddiラッテ異所着床検定と同様に、非近交系NMRIマウス又は近交系C3Hマウス2月齢を用いて、マウス異所着床アッセイを実施したSampathandReddiProcNatlAcadSciUSA806591695WO9516035。a骨誘導因子単独、bMIA単独及びc骨誘導因子とMIAとの組み合わせの発現ベクターを、適当な緩衝液、例えばTE-緩衝液中で凍結乾燥させたFangetalProcNatlAcadSciUSA9357535758。任意の好適なキャリア、例えばI型コラーゲンマトリックス、コラーゲン-ヘパリン混合物、ゼラチンカプセル、ヒアルロン酸、アルギン酸塩又は他の生体親和性、生分解性、安定性及び機械的特性に基づき機能的に均等なデバイスを使用することができる。インプラントをマウスの後肢筋中に、7日及び14日間筋内配置した。7日及び14日後に、マウスを頚部転位により犠牲にした。インプラントを、標準組織学的技術を用いて単離し、処置したTheoryandPracticeofHistologicalTechniquesedBancroftandStevensChurchillLivingstone1996参照。パラフィン区分4μmをトルイジンブルー、アルシアンブルー、vonKossa、モバット又はヘマトキシリン/エオシンで着色して可視化し、各インプラント中に誘導された腱、靱帯、軟骨及び骨組織の量を定量した。ポジチブ例えばBMP-2,Shh発現ベクター及びネガチブ例えば模擬デバイスインプラント対照群を実験インプラントと比較した。誘導された軟骨及び/又は骨の量の評価のために、前記のような軟骨及び骨マーカーに関するRNAinsituハイブリダイゼーシヨンにより遺伝子発現を研究することができる。例7ウサギ中の非-癒合骨折モデルとう骨骨計測MIA単独及びBMP又はヘッジホッグ蛋白質及び適当なキャリアと組み合わされたMIAの組成物の骨修復に及ぼす能力を評価するために、成体ウサギのとう骨で、長さ15cmの非癒合欠損を作った。この動物をキシラジン/ケタミンの静脈注射により麻酔し、無菌状態下に手術を行った。欠損部を、空のまま残すか、適当なキャリアで充填するか又はMIA及びBMP又はこれらのファクター単独各々を含有するキャリアで充填した。動物を自由に運動させ、骨欠損治癒の割合を評価するために、手術後2週目及び4週目にX-線検査をした。この研究の最後に動物を麻酔下で殺し、骨欠損部位を取り出し、vonKossa及びゴールドナー着色を用いて組織学的検査をし、新たに形成された修復組織を計量しかつ品質の特徴付けをした。例8全幅関節軟骨修復モデル単独又はBMP又はヘッジホッグ蛋白質及びキャリアと組み合わせたMIAの軟骨及び骨修復に影響する能力を評価するために、成体ウサギの大腿-膝蓋関節における全幅関節軟骨欠損モデルを用いる。成体ウサギを麻酔し、無菌手術の準備をする。関節軟骨を通り原軟骨下骨層中に入る4×4mmまでの欠損を、膝関節の膝蓋骨溝中に穿孔する。この欠損部を空のまま残すか、適当なキャリアを充填するか又はMIAを単独で又はBMP又はヘッジホッグと組み合わせて含有するキャリアを充填した。動物を4週間自由に運動させる。4週後に、動物を人道的に安楽死させ、関節軟骨/肋軟骨欠損部位を、修復の組織構築、量及び品質に関して組織学的に評価する。例9部分幅関節軟骨修復モデル成体ウサギの大腿-膝蓋関節中の部分幅関節軟骨欠損モデルを、単独の又はBMP又はヘッジホッグ蛋白質及びキャリアと組み合わされたMIAの軟骨及び骨修復に影響する能力を評価するために用いる。成体ウサギを麻酔し、無菌手術の準備する。4×4mmの穴を、関節軟骨を通り膝関節の膝蓋骨溝中に穿孔し、原軟骨下骨層を無傷のまま残す。欠損部を空のまま残すか、適当なキャリアを充填するか又は単独又はBMP又はヘッジホッグ蛋白質と組み合わされたMIAを含有するキャリアを充填した。動物を4週間自由に運動させる。4週後に動物を人道的に安楽死させ、関節軟骨欠損部位を修復の組織構築、量及び品質に関して組織学的に評価する。参考文献のリスト"