機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含む、内因性H2クラスI遺伝子およびH2クラスII遺伝子の両方を欠いたトランスジェニックマウスであり、前記HLA-A2トランスジーンが、HLA-A2の重鎖に共有結合したヒトβ2ミクログロブリンを含む一本鎖である、トランスジェニックマウス。HLA-A2トランスジーンがシーケンスリストにおいてSEQIDNO:1で掲載されたHLA-A2の配列を含み、HLA-DR1トランスジーンがシーケンスリストにおいてSEQIDNO:2およびSEQIDNO:3で掲載されたHLA-DR1の配列を含んでいる、請求項1に記載のトランスジェニックマウス。候補抗原または候補抗原群における、特異的液性免疫反応、THのHLA-DR1拘束性反応、および/またはCTLのHLA-A2拘束性反応を生じさせる、一つまたは複数のエピトープの存否を同時に識別する方法であり、a候補抗原または候補抗原群を請求項1または請求項2に記載のマウスに投与すること、bマウスにおける、抗原に対する特異的液性免疫反応を分析すること、cマウスにおける、抗原に対するTHのHLA-DR1拘束性反応を分析すること、および、dマウスにおける、抗原に対するCTLのHLA-A2拘束性反応を分析することを含み、-マウスにおいて抗原に対する特異的液性免疫反応が見られることによって、抗原における液性免疫反応を生じさせるエピトープが確認され、-マウスにおいて抗原に対するTHのHLA-DR1拘束性反応が見られることによって、抗原におけるTHのHLA-DR1拘束性反応を生じさせるエピトープが確認され、-マウスにおいて抗原に対するCTLのHLA-A2拘束性反応が見られることによって、抗原におけるCTLのHLA-A2拘束性反応を生じさせるエピトープが確認される方法。マウスにおける抗原に対するTh1特異的反応を分析することと、マウスにおける抗原に対するTh2特異的反応を分析することをさらに含む、請求項3に記載の方法であり、-マウスにおいて抗原に対するTh1特異的反応が見られることによって、マウスにおける抗原に対するTh1特異的反応を生じさせるエピトープが確認され、-マウスにおいて抗原に対するTh2特異的反応が見られることによって、マウスにおける抗原に対するTh2特異的反応を生じさせるエピトープが確認される方法。候補抗原または候補抗原群においてエピトープの存否を識別する方法であり、a候補抗原または候補抗原群を請求項1または請求項2に記載のマウスに投与すること、そして、bマウスにおける、抗原に対するエピトープ反応を分析することを含み、-マウスにおいてTHのHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞エピトープ反応が見られることによって、抗原におけるHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞エピトープが確認され、-HLA-A2拘束性細胞傷害性CTLT細胞エピトープ反応が見られることによって、抗原におけるHLA-A2拘束性細胞傷害性CTLT細胞エピトープが確認される方法。二つまたはそれ以上のワクチンによって誘発された反応の有効性を比較する方法であり、a第一の候補ワクチンを請求項1または請求項2に記載のマウスに投与し、第一の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発された反応を測定すること、b第二の候補ワクチンを請求項1または請求項2に記載のマウスに投与し、第二の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発された反応を測定すること、c比較すべきさらなる候補ワクチンのそれぞれを請求項1または請求項2に記載のマウスに投与し、比較すべきそれぞれのさらなる候補ワクチンによってマウスにおいて誘発された反応を測定すること、そして、d比較すべき各ワクチンに対する反応を互いに比較することで、反応を誘発する各候補ワクチンの有効性を判定することを含み、前記反応が、ヘルパーT細胞反応、細胞傷害性T細胞反応、またはその両方である方法。ヘルパーT細胞反応がHLA-DR1拘束性反応である、請求項6に記載の方法。細胞傷害性T細胞反応がHLA-A2拘束性反応である、請求項6に記載の方法。ヘルパーT細胞反応がHLA-DR1拘束性反応であり、細胞傷害性T細胞反応がHLA-A2拘束性反応である、請求項6に記載の方法。抗原、または、一つもしくは複数の抗原を含むワクチンによる免疫付与の後に、マウスの液性免疫反応、ヘルパーT細胞反応、および細胞傷害性T細胞反応を同時に判定する方法であり、a抗原、または、一つもしくは複数の抗原を含むワクチンを、請求項1または請求項2に記載のマウスに投与すること、b抗原、または、一つもしくは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおける特異的液性免疫反応を分析すること、c抗原、または、一つもしくは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおけるヘルパーT細胞反応を分析すること、そして、d抗原、または、一つもしくは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおける細胞傷害性T細胞反応を分析することを含む方法。ヘルパーT細胞反応がTHのHLA-DR1拘束性反応である、請求項10に記載の方法。細胞傷害性T細胞反応がCTLのHLA-A2拘束性反応である、請求項10に記載の方法。事前に選択された基準に基づき、二つまたはそれ以上の候補ワクチンの組成物をヒトへ投与するために最適化する方法であり、-請求項10に従って、二つまたはそれ以上の候補ワクチンの組成物で免疫付与した後、マウスの液性免疫反応、ヘルパーT細胞反応、および細胞傷害性T細胞反応を同時に判定すること、そして、-事前に選択された基準を結果に適用することで、最適化されたワクチンを選択することを含む方法。二つまたはそれ以上の候補ワクチンが、ワクチン中に存在するアジュバントに対する抗原の割合においてのみ異なっている、請求項13に記載の方法。二つまたはそれ以上の候補ワクチンが、ワクチン中に存在するアジュバントのタイプにおいてのみ異なっている、請求項13に記載の方法。ヒトに投与されるとき、ワクチンが自己免疫疾患を誘発する危険性を有するか否かを判定する方法であり、aワクチンを請求項1または請求項2に記載のマウスに投与すること、そして、bマウスにおける自己免疫反応を分析することを含んでおり、マウスにおいて自己免疫反応が見られることによって、ワクチンがヒトに投与されたときに自己免疫疾患を誘発する危険性を有することが示される方法。内因性H-2クラスI遺伝子およびH-2クラスII遺伝子の両方を欠き、機能的なHLA-A2トランスジーンと機能的なHLA-DR1トランスジーンを含んでいる、単離されたトランスジェニックマウスの細胞であり、前記HLA-A2トランスジーンが、HLA-A2の重鎖に共有結合したヒトβ2ミクログロブリンを含む一本鎖である細胞。HLA-A2トランスジーンがシーケンスリストにおいてSEQIDNO:1で掲載されたHLA-A2の配列を含み、HLA-DR1トランスジーンがシーケンスリストにおいてSEQIDNO:2およびSEQIDNO:3で掲載されたHLA-DR1の配列を含んでいる、請求項17に記載のトランスジェニックマウスの細胞。本発明者らは、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いている遺伝的背景で、HLA-A2.1分子とHLA-DR1分子の両方を遺伝子導入したマウスを提供することで、この必要性を満たし、さらなる必要性に応えた。具体的には、本発明はマウスを提供するものであるが、該マウスは、1変異したH-2クラスI分子およびクラスII分子を含み、2遺伝子導入したHLAクラスI分子、または、遺伝子導入したHLAクラスII分子、あるいは、遺伝子導入したHLAクラスI分子と遺伝子導入したHLAクラスII分子の両方を発現するものである。これらのマウスは、ヒトに使用するための、インビボにおける最大の免疫原性を備えたワクチン構造を開発し、最適化することにおいて有用なモデルを提供する。具体的には、このようなマウスによって、動物個体における免疫適応応答の三つの構成要素抗体、ヘルパーT細胞および細胞溶解の完全な分析、ならびに、抗原の攻撃に対する、ワクチン投与によって特異的に与えられる防御を評価することが可能になる。本発明のマウスは、H-2クラスI分子とクラスII分子の両方をノックアウトし、遺伝子導入したHLAクラスIの分子および遺伝子導入したHLAクラスIIの分子を発現するもので、完全にヒト化した実験用マウスであり、該マウスは、抗原特異的抗体、抗原特異的なHLA-DR1拘束性のT細胞反応、および抗原特異的なHLA-A2拘束性のT細胞反応の存否を同時に検出するために用いることができる。これらのマウスは、CTL反応、TH反応特にTH1またはTH2反応、そして場合によっては液性免疫反応の間でどのように相互協調が起こるのかということを研究するために有用となる。これらのマウスは、基礎的および応用的なワクチン研究のための最適なツールとなる。本発明の第一の実施態様は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、および、機能的なHLAクラスIトランスジーンまたはクラスIIトランスジーンを含む、トランスジェニックマウスを提供するものである。本発明の第二の実施態様は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLAクラスIトランスジーン、および機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含む、トランスジェニックマウスを提供するものである。いくつかの実施態様では、HLAクラスIトランスジーンはHLA-A2トランスジーンであり、HLAクラスIIトランスジーンはHLA-DR1トランスジーンである。その他の実施態様では、HLA-A2トランスジーンはシーケンスリストに掲載されたHLA-A2の配列を含み、HLA-DR1トランスジーンはシーケンスリストに掲載されたHLA-DR1の配列を含んでいる。本発明のさらなる実施態様は、H-2クラスI分子とクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスを提供しており、該実施態様では、トランスジェニックマウスは機能的なHLAクラスIトランスジーンと、機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含んでいる。一つの実施態様では、マウスはHLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している。いくつかの実施態様では、HLA-A2トランスジーンはシーケンスリストに掲載されたHLA-A2の配列を含み、HLA-DR1トランスジーンはシーケンスリストに掲載されたHLA-DR1の配列を含んでいる本発明のもう一つの実施態様は、一つの候補抗原または候補抗原群における一つまたは複数のエピトープの存否を同時に識別するための方法を提供しており、該実施態様では、一つまたは複数のエピトープにより、特異的な液性免疫反応、THのHLA-DR1拘束性反応、および/またはCTLのHLA-A2拘束性反応が生じる。該方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーン、および機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、あるいは、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子とクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、候補抗原または候補抗原群を投与すること、マウスにおける、抗原に対する特異的液性免疫反応を分析すること、マウスにおける、抗原に対するTHのHLA-DR1拘束性反応を分析すること、そして、マウスにおける、抗原に対するCTLのHLA-A2拘束性反応を分析することを含んでいる。マウスにおいて抗原に対する特異的液性免疫反応が見られることで、抗原における液性免疫反応を生じさせるエピトープが確認される。マウスにおいて抗原に対するTHのHLA-DR1拘束性反応が見られることで、抗原におけるTHのHLA-DR1拘束性反応を生じさせるエピトープが確認される。マウスにおいて抗原に対するCTLのHLA-A2拘束性反応が見られることで、抗原におけるCTLのHLA-A2拘束性反応を生じさせるエピトープが確認される。いくつかの実施態様では、この方法は、マウスにおける抗原に対するTh1特異的反応を分析することと、マウスにおける抗原に対するTh2特異的反応を分析することを含んでいる。この場合、マウスにおいて抗原に対するTh1特異的反応が見られることで、マウスにおいて抗原に対するTh1特異的反応を生じさせるエピトープが確認され、マウスにおいて抗原に対するTh2特異的反応が見られることで、マウスにおける抗原に対するTh2特異的反応を生じさせるエピトープが確認される。また、本発明は、一つの候補抗原または候補抗原群におけるHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞エピトープの存否を識別する方法も提供するものであり、該方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含んでいるトランスジェニックマウスに、あるいは、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、候補抗原または候補抗原群を投与することと、マウスにおいて、抗原に対する、THのHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞エピトープ反応を分析することを含んでいる。マウスにおいて、抗原に対する、THのHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞エピトープ反応が見られることで、抗原における、THのHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞エピトープ反応を生じさせるエピトープが確認される。さらに、本発明は、前段落の方法によって確認されたHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞のエピトープを含む、単離された抗原を提供するものである。いくつかの実施態様では、単離された抗原はさらに、液性免疫反応を生じさせるエピトープおよび/またはCTLのHLA-A2拘束性反応を生じさせるエピトープを含んでいる。別の実施態様では、HLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞のエピトープを含む抗原はポリペプチドを含んでいる。その他の実施態様では、HLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞のエピトープを含む抗原はポリヌクレオチドを含んでいる。さらなる実施態様では、HLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞のエピトープを含む抗原は、DNA、RNA、あるいはDNAとRNAの両方を含んでいる。さらに、本発明は、一つの候補抗原または候補抗原群におけるHLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTLエピトープの存否を識別する方法も提供するものであり、該方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含んでいるトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、候補抗原または候補抗原群を投与することと、マウスにおける抗原または抗原群に対するHLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTL反応を分析することを含んでいる。マウスにおいて抗原または抗原群に対するHLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTL反応が見られることで、抗原または抗原群においてHLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTL反応を生じさせるエピトープが確認される。本発明は、前段落の方法によって確認された、HLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTLエピトープを含む、単離された抗原を提供するものである。いくつかの実施態様では、抗原がさらに、液性免疫反応を生じさせるエピトープおよび/またはTHのHLA-DR1拘束性ヘルパーT細胞エピトープ反応を生じさせるエピトープを含んでいる。別の実施態様では、HLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTLエピトープを含む抗原はポリペプチドを含んでいる。その他の実施態様では、HLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTLエピトープを含む抗原はポリヌクレオチドを含んでいる。さらなる実施態様では、HLA-A2拘束性細胞傷害性T細胞CTLエピトープを含む抗原は、DNA、RNA、または、DNAとRNAの両方を含んでいる。また、本発明は二つまたはそれ以上のワクチンによって誘発されたヘルパーT細胞の反応の有効性を比較する方法も提供するものである。この方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、あるいは、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有する、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、第一の候補ワクチンを投与し、第一の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発されたヘルパーT細胞の反応を測定すること、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンおよび機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、第二の候補ワクチンを投与し、第二の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発されたヘルパーT細胞の反応を測定すること、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を含んでいる、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、比較すべきさらなる候補ワクチンのそれぞれを投与し、さらなる候補ワクチンによってマウスにおいて誘発されたヘルパーT細胞の反応を測定すること、そして、比較すべき各ワクチンに対するヘルパーT細胞の反応を相互に比較してヘルパーT細胞の反応を誘発する各候補ワクチンの有効性を判定することを含んでいる。いくつかの実施態様では、ヘルパーT細胞の反応はHLA-DR1拘束性反応である。さらに、本発明は、二つまたはそれ以上のワクチンによって誘発された細胞傷害性T細胞反応の有効性を比較する方法を提供するものである。本方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、第一の候補ワクチンを投与し、第一の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発された細胞傷害性T細胞の反応を測定すること、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、第二の候補ワクチンを投与し、第二の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発された細胞傷害性T細胞反応を測定すること、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、比較すべきさらなる候補ワクチンのそれぞれを投与し、さらなる候補ワクチンによってマウスにおいて誘発された細胞傷害性T細胞反応を測定すること、そして、比較すべき各ワクチンに対する細胞傷害性T細胞反応を相互に比較して細胞傷害性T細胞反応を誘発する各候補ワクチンの有効性を判定することを含んでいる。いくつかの実施態様では、細胞傷害性T細胞反応はHLA-A2拘束性反応である。さらに、本発明は、二つまたはそれ以上のワクチンによって誘発されたヘルパーT細胞の反応と細胞傷害性T細胞の反応の有効性を同時に比較する方法も提供するものである。本方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、第一の候補ワクチンを投与し、第一の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発されたヘルパーT細胞の反応と細胞傷害性T細胞の反応を測定すること、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、第二の候補ワクチンを投与し、第二の候補ワクチンによってマウスにおいて誘発されたヘルパーT細胞の反応と細胞傷害性T細胞の反応を測定すること、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、比較すべきさらなる候補ワクチンのそれぞれを投与し、さらなる候補ワクチンのそれぞれによってマウスにおいて誘発されたヘルパーT細胞の反応と細胞傷害性T細胞の反応を測定すること、そして、比較すべき各ワクチンに対するヘルパーT細胞の反応と細胞傷害性T細胞の反応を相互に比較してヘルパーT細胞の反応と細胞傷害性T細胞の反応を誘発する各候補ワクチンの有効性を判定することを含んでいる。いくつかの実施態様では、ヘルパーT細胞の反応はHLA-DR1拘束性反応であり、細胞傷害性T細胞の反応がHLA-A2拘束性反応である。また、本発明は、一つの抗原による免疫付与、あるいは、一つまたは複数の抗原を有するワクチンによる免疫付与に従った、マウスの液性免疫反応、ヘルパーT細胞の反応、そして細胞傷害性T細胞の反応を同時に判定する方法を提案するものでもある。本方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子とクラスIIの分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンを投与すること、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおける特異的液性免疫反応を分析すること、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおけるヘルパーT細胞の反応を分析すること、そして、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおける細胞傷害性T細胞の反応を分析することを含んでいる。いくつかの実施態様において、ヘルパーT細胞の反応はTHのHLA-DR1拘束性反応である。いくつかの実施態様において、細胞傷害性T細胞の反応はCTLのHLA-A2拘束性反応である。また、本発明は、事前に選択された基準に基づき、二つまたはそれ以上の候補ワクチンの組成物をヒトに投与するために最適化する方法も提供するものである。本方法は、二つまたはそれ以上の候補ワクチンの組成物による免疫付与に従った、マウスの液性免疫反応、ヘルパーT細胞の反応および細胞傷害性T細胞の反応を同時に判定することを含み、ここで用いる方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している、H-2クラスI分子とクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスに、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンを投与すること、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおける特異的液性免疫反応を分析すること、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおけるヘルパーT細胞の反応を分析すること、抗原、もしくは、一つまたは複数の抗原を含むワクチンに対する、マウスにおける細胞傷害性T細胞の反応を分析すること、そして、事前に選択された基準を結果に適用して、最適化されたワクチンを選択することを含む。いくつかの実施態様では、二つまたはそれ以上のワクチン候補は、ワクチンに存在するアジュバントに対する抗原の割合においてのみ異なっている。いくつかの実施態様では、二つまたはそれ以上のワクチン候補は、ワクチンに存在するアジュバントのタイプにおいてのみ異なっている。もう一つの特徴では、本発明は、ワクチンがヒトに投与されたときに、自己免疫疾患を誘発する危険性を有するか否かを判定する方法を提供するものである。本方法は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLA-A2トランスジーンおよび機能的なHLA-DR1トランスジーンを含むトランスジェニックマウスに、または、機能的なHLAクラスIトランスジーンと機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含み、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有する、H-2クラスI分子とクラスII分子の両方を欠いたトランスジェニックマウスにワクチンを投与すること、そして、マウスにおける自己免疫反応を分析することを含んでおり、該分析において、マウスにおいて自己免疫反応が見られるということは、ワクチンがヒトに投与されたときに自己免疫疾患を誘発する危険性を有するものであることを示す。また、本発明は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、および、機能的なHLAクラスIトランスジーンまたはクラスIIトランスジーンを含む、単離されたトランスジェニックマウスの細胞を提供するものでもある。さらに、本発明は、破壊されたH-2クラスI遺伝子、破壊されたH-2クラスII遺伝子、機能的なHLAクラスIトランスジーンおよび機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含む、単離されたトランスジェニックマウスの細胞を提供するものでもある。いくつかの実施態様では、HLAクラスIトランスジーンはHLA-A2トランスジーンであり、HLAクラスIIトランスジーンはHLA-DR1トランスジーンである。その他の実施態様では、HLA-A2トランスジーンは、シーケンスリストに掲載されたHLA-A2の配列を含み、HLA-DR1トランスジーンは、シーケンスリストに掲載されたHLA-DR1の配列を含んでいる。さらに、本発明は、H-2クラスI分子およびクラスII分子の両方を欠いている、単離されたトランスジェニックマウスの細胞を提供するものであり、ここでは、トランスジェニックマウスの細胞は、機能的なHLAクラスIトランスジーンと、機能的なHLAクラスIIトランスジーンを含んでいる。いくつかの実施態様では、トランスジェニックマウスの細胞はHLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚という遺伝子型を有している。その他の実施態様では、HLA-A2トランスジーンは、シーケンスリストに掲載されたHLA-A2の配列を含み、HLA-DR1トランスジーンは、シーケンスリストに掲載されたHLA-DR1の配列を含んでいる。本発明は、以下の図面を参照することで、より十全に説明されるものである。以下の実験技術および試薬は、本発明のいくつかの非限定的な実施態様を示すために用いた。トランスジェニックマウスHLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスII-KOマウスIAβb ゚を、リールのパスツール研究所においてInstitutPasteurofLille、HLA-DR1を遺伝子導入したマウスAltmann、D.M.etal.、JExpMed181、867-8751995とH-2クラスII-KOマウスIAβb ゚Rohrlich、P.S.etal.、IntImmunol15、765-7722003を交配して得た。キメラ一本鎖HHD分子:HLA-A2.1のα1-α2ドメイン、H-2Dbのα3から細胞内ドメインまでが、そのN末端において、15のアミノ酸のペプチドリンカーによって、ヒトβ2mのC末端と結合しているを発現する、HLA-A2.1を遺伝子導入したマウスを作成したPascolo、S.etal.、JExpMed185、2043-20511997。HLA-A2.1HHDを遺伝子導入したH-2クラスI-KOマウスとHLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスII-KOマウスIAβb ゚を異系交配し、後代を、HLA-A2.1/-/HLA-DR1/-の二つを遺伝子導入したH-2クラスIβ2m0/クラスIIIAβ0-KOマウスが得られるまで選別し、ここに記載された実験に使用した。HLA-A2.1/-のみを遺伝子導入したH-2クラスIβ2m0/クラスIIIAβ0-KOマウスを防御分析における対照として使用した。マウスは、パリのパスツール研究所InstitutPasteur、Parisの動物施設で飼育し、全ての手順は、動物保護についてのフランスおよびヨーロッパの規制、および公衆衛生局の勧告を遵守するために、パスツール研究所の所轄局による調査を受けている。遺伝子型決定HLA-DRB10101、HLA-DRA0101およびHLA-A0201トランスジーンをPCRで検出した。100mMのNaCl、50mMのpH7.2であるTris-HCI、100mMのEDTA、1のSDSおよび0.5mg/mlのプロテイナーゼKの中で、56°Cで一晩インキュベートし、その後、250μlの飽和NaCl溶液を添加し、イソプロパノール沈殿を行った後、DNAの末尾部分を抽出した。標本を70のエタノール中で洗浄し×3、150μlの、10mMのTris-HCI、1mMのpH8であるEDTAで再懸濁した。PCR条件は以下の通りである。1.5mMのMgCl2、1.25UのTaqポリメラーゼ、緩衝液は、製造業者InVitrogen社、カリフォルニア州カールスバッドによって提供されたものであり、1サイクル7分、94°C、40サイクル30秒、94°C;30秒、60°C;1分、72°C、1サイクル4分、72°Cを行い、フォワードプライマーおよびリバースプライマーとして、HHDについては、5’CATTGAGACAGAGCGCTTGGCACAGAAGCAG3’および5’GGATGACGTGAGTAAACCTGAATCTTTGGAGTACGC3’を用い、HLA-DRB10101については、5’TTCTTCAACGGGACGGAGCGGGTG3’および5’CTGCACTGTGAAGCTCTCACCAAC3’を用い、HLA-DRA0101については、5’CTCCAAGCCCTCTCCCAGAG3’および5’ATGTGCCTTACAGAGGCCCC3’を用いた。FACS分析細胞の蛍光定量を、赤血球を除去した、Lympholite-MTebu-bio社、LePerrayenYvelines、フランスで精製した脾細胞について、FITCと結合したW6/32抗HLA-ABC、Sigma社、ミズーリ州セントルイスとビオチン化した抗28-8-6S抗H-2Kb/Db、BDBiosciences社、カリフォルニア州サンディエゴm.Abを用いて行った。CD4およびCD8のTリンパ球を、PE標識CT-CD4抗マウスCD4CALTAG社、カリフォルニア州南サンフランシスコとFITC標識53-6.7抗マウスCD8-m.AbBDBiosciences社を用いて染色した。MHCクラスII分子の発現の分析を、MSカラムMiltenyiBiotec社、ベルギッシュグラートバッハ、ドイツでポジティブセレクトしたB220Bリンパ球について行った。2.4G2m.AbでFcレセプターが飽和した後、HLA-DR1およびH-2IAbの発現を、FITC標識L243抗HLA-DRおよびPE標識AF6-120.1抗H-2IAβbm.AbBDBiosciences社を用いて分析した。パラホルムアルデヒドで固定した細胞を、FACSCaliburBectonDickinson社、マサチューセッツ州ベッドフォードで分析した。Immunoscope分析未処理マウスに由来するCD4およびCD8のT細胞を、Auto-MacsMiltenyiBiotec社でポジティブセレクトし、RNAを、RNAEasyKitQiagen社、ヒルデン、ドイツを用いて調製し、cDNA合成に使用した。cDNAを、BVセグメントファミリーのそれぞれに特異的なフォワードプライマーと、二つのBCセグメントに共通のリバースプライマーを用いてPCR増幅した。PCR産物を、FAMをタグ付けした内部BCプライマーを用いて、ランオフで伸長した。ランオフした産物を、373ADNAシーケンサーPerkinElmerAppliedBiosystem社、カリフォルニア州フォスターシティで分離する7h、35Wために、6アクリルアミド/8M尿素ゲルにロードした。データを、ImmunoscopeソフトPannetier、C.etal.、ProcNatlAcadSciUSA90、4319-43231993を用いて分析した。ペプチドHLA-A2結合ペプチドのHBsAg348-357GLSPTVWLSVおよびHBsAg335-343WLSLLVPFV、H-2Kb結合ペプチドのHBsAg371-378ILSPFLPL、HLA-DR1結合ペプチドのHBsAg180-195QAGFFLLTRILTIPQS、H-2IAb結合ペプチドのHBsAg126-138RGLYFPAGGSSSG、ならびにpreS2ペプチドのHBsAg109-134MQWNSTTFHQTLQDPRVRGLYFPAGGは、Neosystem社ストラスブール、フランスによって合成されたものであり、PBS-10のDMSOに1mg/mlの濃度で溶解した。ペプチドのアミノ酸配列のナンバリングは、HBVのaywサブタイプのpreS1領域の最初のメチオニンから開始している。HBVのS2-Sタンパク質をコードするDNAによる免疫付与ヒトCMV前初期遺伝子プロモーターの制御下で発現するHBVの表面抗原preS2およびSをコードしている、pCMV-S2.SプラスミドベクターMichel、M.L.etal.、ProcNatlAcadSciUSA92、5307-53111995を、エンドトキシンフリーの条件の下、PlasmidGigaKitQiagen社のカラムで精製した。先行文献で説明されているようにDavis、H.L.、Michel、M.L.Whalen、R.G.、HumMolGenet2、1847-18511993、麻酔したマウスの再生前脛骨筋に注入した各側に50μg。T細胞増殖分析最後の免疫付与から12日後、文献で説明されているようにLoirat、D.、Lemonnier、F.A.Michel、M.L.、JImmunol165、4748-47552000、赤血球を除去した、Ficollで精製した脾細胞5×106細胞/25cm2培養フラスコTechnoPlasticProductsTPP、Trasadingen、スイスを、ペプチドをパルスし20μg/ml、γ線を放射180Gyした、LPS幼若化細胞5×106細胞/培養フラスコと、10のFCS、10mMのHEPES、1mMのピルビン酸ナトリウム、5×10-5Mの2-メルカプトエタノール、100I×U/mlのペニシリンおよび100μgのストレプトマイシンを加えたRPMI培地で、共培養した。7日目、増殖分析のために、細胞を、ペプチドをパルスし、放射線照射したLPS幼弱化細胞2×105細胞/ウェルと、72時間、3のFCSを加えたRPMI完全培地で平面培養した平底の96ウェルマイクロプレートTPPに5×105細胞/ウェル。細胞に、TOMTECコレクターを用いるfiltermatesPerkinElmerAppliedBiosystem社で回収する前の16時間、ウェルあたり1μCiの3H-チミジンをパルスし、取り込まれた放射活性をマイクロβカウンターPerkinElmerAppliedBiosystem社で測定した。結果は、賦活指数SI=特異的ペプチドでのcpm/関連のないペプチドでのcpmで示した。CTL活性の測定増殖分析として、細胞毒性分析を、同一の免疫脾細胞群で行った。応答細胞5×106細胞/25cm2培養フラスコ、TPPと、刺激するための、ペプチドをパルスし20μg/ml、γ線を放射した180GyLPS幼若化抗原細胞5×106細胞/培養フラスコを、7日間にわたって、同様の添加RPMI培地の中で共培養した。細胞溶解活性を、10μg/mlの実験対象のペプチドまたは対照ペプチドをパルスしたRMA-S-HHD標的細胞について、標準的な4h51Crアッセイで試験した。で示された特異的溶解は二段階で計算したのだが、該計算は、[実験対象の自然放出]/[最大の自然放出]×100から、対照ペプチドで見られる非特異的溶解を差し引いたものである。インビボでの抗体産生の測定DNAの注入前後の様々な時間に、マウスから、ヘパリン処理したガラスピペットを用いて、血液を球後穿刺によって採取し、遠心分離によって回収した血清を、抗HBsおよび抗preS2について、特異的ELISAによって分析した。HBVのsmallSタンパク質1μg/mlまたはpreS2120-145合成ペプチド1μg/mlを含有する、精製した組換え粒子を、固相として用いた。10のFCSを加えたPBST0.1のTween20を含有するPBSでブロックした後、連続希釈を行った。よく洗浄した後、ホースラディッシュペルオキシダーゼAmersham社、LittleChalfont、イギリスで標識した抗マウスIg全IgGで、結合抗体を検出した。抗体力価を、連続終末点希釈法によって測定した。マウスの血清は個別に試験し、力価は、少なくとも三つの測定値の平均とした。1/100未満まで血清を希釈した場合はネガティブであるとした。抗体力価測定免疫付与したマウスに由来する血清を個別に、ELISAMichel、M.L.etal.、ProcNatlAcadSciUSA92、5307-53111995によって、精製したHBVのmiddleタンパク質とsmallタンパク質またはpreS2合成HBs109-134ペプチドのいずれかについて分析した。0.1のTween20と10のFCSを加えた1×PBSでブロックし、洗浄×3した後、結合抗体を、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識した抗マウスIgGAmersham社、LittleChalfont、イギリスで検出した。抗体力価少なくとも3回の測定の平均は連続終末点希釈法によって測定した。1/100未満の力価はネガティブであるとした。ワクチン攻撃とプラークアッセイDNAを注入したマウスは、HbsAgタンパク質Smith、G.L.、Mackett、M.Moss、B.、Nature302、490-4951983またはHBxタンパク質Schek、N.、Bartenschlager、R.、Kuhn、C.Schaller、H.、Oncogene6、1735-17441991のいずれかを発現している、107PFUの組換えワクシニアウイルスWesternReserve株で、最後の注入から12日後に腹腔内を攻撃したのだが、HBsAgタンパク質を発現しているワクシニアウイルスとHBxタンパク質を発現しているワクシニアウイルスはそれぞれ、B.Moss博士とH.Schaller博士の好意によって提供されたものである。4日後、卵巣を、rVV力価について、BHK21細胞Buller、R.M.Wallace、G.D.、LabAnimSci35、473-4761985に対するプラークアッセイによって分析した。MHC分子の細胞表面発現HLA-A2.1、H-2Kb/Db、HLA-DR1およびH-2IAb分子の細胞表面発現を、フローサイトメトリー法によって、脾細胞で評価した。図1aに示されているように、類似したレベルのHLA-A2.1の発現が、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスと、HLA-A2.1を遺伝子導入したH-2クラスI-KOマウスで見られたのに対し、HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスII-KOマウスでは、HLA-A2.1は見られず、H-2Kb/Dbのみが発現した。HLA-DR1およびH-2IAbの細胞表面発現を、B220に富んだB細胞で測定した。図1bに示されているように、類似したレベルのHLA-DR1の発現が、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスと、HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスII-KOマウスで見られたのに対し、HLA-A2.1を遺伝子導入したH-2クラスI-KOマウスでは全く発現が検出されなかった。しかし、遺伝子導入した分子特にHLA-DR1の細胞表面発現は、内因性のH-2クラスI分子およびクラスII分子の発現より低かった。末梢CD4T細胞およびCD8T細胞CD4およびCD8の脾臓T細胞の数を、図2aに示されているように、免疫染色分析およびフローサイトメトリー分析によって測定した。CD4T細胞は、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスと、HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスII-KOマウスの両方において、脾細胞群の13~14であった。対照的に、H-2クラスII-KOマウスでは、細胞の2~3だけがCD4でありデータは示されていない、MHCクラスII分子を欠くマウスについての初期報告Cosgrove、D.etal.、Cell66、1051-10661991に一致する。期待された通り、遺伝子導入したHLA-A2.1分子の発現は、末梢CD8T細胞群の割合を増加させ、β2ミクログロブリンβ2mをKOした、MHCクラスIを欠いたマウスでは、0.6~1であったPascolo、S.etal.、JExpMed185、2043-20511997のに対し、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスと、HLA-A2.1を遺伝子導入したH-2クラスI-KOマウスの両方においては、全脾細胞の2~3に達した。実施例1および実施例2で示された結果は、1HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚マウスでは、HLA-A2分子の発現、H-2-Kb分子の非発現、CD8末梢Tリンパ球の数、およびCD8Tレパートリーの多様性が、概ねHLA-A2β2m ゚マウスに匹敵していること、2HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚マウスでは、HLA-DR1分子の発現、H-2-IAb分子の非発現、CD4Tリンパ球の数、およびCD4レパートリーの多様性が、概ねHLA-DR1IAβ ゚マウスに匹敵していること、そして、3HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚マウスが、HLA-A2β2m ゚マウスおよびHLA-DR1IAβ ゚マウスで見られる特徴的な利点の全てを有していること、を示している。TCRのBVセグメントの使用一つのMHCクラスI分子と一つのMHCクラスII分子の存在により、TCRレパートリーの数と多様性を減少させることができるので、過去に記載されているようにCochet、M.etal.、EurJImmunol22、2639-26471992、様々なBVファミリーの発現とCDR3の長さの多様性を、RT-PCRをベースとするimmunoscope技術によって、精製した脾細胞のCD4またはCD8のT細胞について研究した。ガウス分布に似た分布での大きなピークが、ほとんどのBVファミリー分析した20のうち15について、T細胞のCD8群図2bおよびCD4群図2cの両方で見られた。抹消Tリンパ球で見られたこのようなグラフの特徴は、機能的に再配列したBVセグメントに典型的であり、一つ目のピークから次のピークまでに、CDR3亜領域の3ヌクレオチド長の変化を有するCochet、M.etal.、EurJImmunol22、2639-26471992。BV5.3および17で見られるような、展開または大きく変化したグラフの特徴がないことは、予想されていたことであるが、それは、これらの二つのBVセグメントがC57BL/6マウスにおいて偽遺伝子だからであるWade、T.、Bill、J.、Marrack、P.C.、Palmer、E.Kappler、J.W.、JImmunol141、2165-21671988;Chou、H.S.etal.、ProcNatlAcadSciUSA84、1992-19961987。しかし、BV5.1、5.2および11のセグメントについて見られたグラフの変化は、対応するBV発現T細胞亜群が小さいことに起因している該T細胞亜群はC57BL/6マウスでは5より少なく、HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスII-KOマウスではおよそ2であるデータは示していない。これらの事例以外では、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスにおけるCD4およびCD8のT細胞の両方が、それぞれ、非トランスジェニックC57BL/6マウスのパターンと類似した、TCRのBV鎖の使用とCDR3の多様性のパターンを示している。機能的解析AgHBsB型肝炎ウイルスのエンベロープタンパク質で免疫付与したHLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚マウスを分析した。図5は、HBsS2抗体の産生によって示される特異的液性免疫反応を示している。図6は、HBs348-357に対する、特異的なDR1拘束性CD4T細胞の増殖反応を示している。そして図7は、HBs348-357またはHBs335-343に対する、特異的なHLA-A2拘束性CD8細胞溶解性T細胞の反応を示している。これらの結果は、HLA-A2HLA-DR1β2m ゚IAβ ゚マウスによって、免疫付与した個体において、特異的液性免疫反応、CD4Tヘルパー細胞のAg特異的HLA-DR1拘束性反応、そして、Ag特異的HLA-A2拘束性CD8T細胞の細胞溶解反応を同時に分析することが可能になることを示している。これらのマウスから得られた追加データを以下の表1~表3に示した。HBsAg-DNAワクチンに対する免疫反応HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスの免疫学的潜在能力を評価するため、そして、それらの液性免疫反応、CD4T細胞反応およびCD8T細胞反応をヒトのものと比較するために、マウスを、HBsAg-DNAプラスミドで免疫付与した。このプラスミドは二つのB型肝炎ウイルスエンベロープタンパク質middleであるpreS2/SおよびsmallであるSをコードしており、該タンパク質は、B型肝炎表面抗原を有する粒子で自己組織化している。B型肝炎に対して現状で用いられているワクチンは、これらの二つのタンパク質を含んでいる。代表的なマウスについて図3aで示されているように、HBsAg特異的抗体は、HBsAg-DNAワクチンの注射後12日目に最初に検出し図3a、上パネル、これらの抗体の力価は、24日目まで増加した二回目のDNA免疫付与の12日後、データは示していない。この抗体の早期反応は、middleのHBVエンベロープタンパク質が有するpreS2-B細胞エピトープHBs109-134とHBsAg粒子に対して特異的であり、HBsAg-DNAで免疫付与したマウスMichel、M.L.etal.、ProcNatlAcadSciUSA92、5307-53111995と、HBsAgをワクチン投与されたヒトMoulia-Pelat、J.P.etal.、Vaccine12、499-5021994で報告された類似の反応に一致している。HBsAgに対するCD8CTL反応を試験し、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスの末梢におけるCD8T細胞が、遺伝子導入したヒトのクラスI分子によって機能的に拘束されるかどうか判定した。HBVに感染したHLA-A2.1のヒトでは、免疫的にドミナントなHLA-A2.1拘束性HBsAg特異的CTL反応が、HBsAg348-357ペプチドMaini、M.K.etal.、Gastroenterology117、1386-13961999およびHBsAg335-343ペプチドNayersina、R.etal.、JImmunol150、4659-46711993に対して生じたすなわち、複数のエピトープ反応が見られた。C57BL/6マウスでは、H-2Kb拘束性HBsAg特異的CTL反応が、HBsAg371-378ペプチドSchirmbeck、R.、Wild、J.Reimann、J.、EurJImmunol28、4149-41611998に対して生じた。ヒト化したマウスがヒトのように反応することができるかどうかを評価するために、ここに記載したように、脾臓T細胞を7日間にわたって、関連ペプチドHBsAg348-357、HLA-A2.1拘束性または対照ペプチドHBsAg371-378、H-2Kb拘束性、MAGE-3271-279、HLA-A2.1拘束性のいずれかで再賦活した。図3a中パネルは、HBsAg-DNAによる免疫付与が強いHBsAg348-357特異的CTL反応を生じさせるが、HBsAg371-378ペプチドまたはMAGE-3271-279ペプチドのいずれに対する反応も生じさせなかったことを示している。このHLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスの末梢におけるCD4T細胞が、遺伝子導入したヒトのクラスII分子によって機能的に拘束されるかどうかを判定するため、HBsAgタンパク質に対するCD4T細胞反応を試験した。HBsAgをワクチン投与した、または、HBVに感染したHLA-DR1のヒトでは、免疫的にドミナントなHLA-DR1拘束性HBsAg特異的CD4T細胞反応が、HBsAg180-195ペプチドMm、W.P.etal.、HumImmunol46、93-991996に対して生じる。C57BL/6マウスでは、H-2IAb拘束性HBsAg特異的CD4T細胞反応が、HBsAg126-138ペプチドMilich、D.R.、SeminLiverDis11、93-1121991に対して生じた。ヒト化したマウスをヒトおよび野生型マウスと比較するために、脾臓のT細胞を、関連ペプチドHBsAg180-195、HLA-DR1拘束性または対照ペプチドHBsAg126-138、H-2IAb拘束性、HIV1Gag263-278、HLA-DR1拘束性のいずれかでインビトロで再賦活した。図3a下パネルは、期待されたように、HLA-DR1拘束性HBsAg180-195ペプチドに対する強い増殖反応を示す一方、H-2IAb拘束性ペプチドは反応の賦活においては効果的ではなかった。同様に、HIV1Gag263-278ペプチドによっても反応は誘発されなかった。さらに、HBsAg180-195ペプチドによってさらにインビトロで再現したところ、特異的増殖指数が数倍増加したデータは示していない。第一の、HBsAg-DNAで免疫付与した、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-マウスにおける、HBsAg特異的抗体反応、T細胞の増殖反応および細胞溶解性反応の発生と特異性については実証したが、同じ三つの反応について、さらに6頭のHBsAg-DNAで免疫付与したマウスと、対照である6頭の未処理のHLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスも、個別に試験した。図3bに示されているように、三つの反応は、試験した6頭の免疫付与したマウスでは同時に実証されたが、対照用の未処理マウスでは実証されなかった。興味深いことに、2頭の免疫付与したマウスは、HBsAg348-357およびHBsAg335-343のHLA-A2.1拘束性ペプチドの両方に対するCTL反応を示す能力があった図3b、中パネル。防御分析上記の実施例は、HLA-A2.1/HLA-DR1を遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスにおける、HBsAg特異的液性免疫性の、CD4およびCD8T細胞反応の誘発を実証しており、また、該反応が、自然感染した、または、HBsAgをワクチン投与したヒトの反応と同一の、免疫的にドミナントなエピトープに対して生じることを示している。本実施例では、これらの反応がワクチン投与したマウスで防御を示すかどうかを試験した。マウスはHBVに対して寛容ではないため、HBsAgを遺伝子組換えしたワクシニアウイルスrVV-HBsAgをこれらの実験に用いた。マウスは、100μgのHBsAg-DNAで二回、筋肉内に免疫付与した。最後の免疫付与から12日後、マウスは、107PFUのrVV-HBsAgで、腹腔内を攻撃した。4日後、ウイルス力価を、既知の方法に従って測定し、rVVのPFU/卵巣で記録したBuller、R.M.Wallace、G.D.、LabAnimSci35、473-4761985。結果を図4に示した。HBsAg-DNAで免疫付与していない未処理マウスは、攻撃後にrVV-HBsAgが複製されていることを示した。対照的に、HBsAg-DNAで免疫付与したマウスにおけるウイルス力価は、4桁以上小さい値であった。これらの結果は、HBsAg-DNAでのワクチン投与が、rVV-HBsAgによる感染を制御する防御性のHBsAg特異的免疫反応を誘発することを強く示唆している。HBsAg-DNAのワクチン投与によって与えられる防御の特異性は、HBsAg-DNAで免疫付与したマウスを他のHBx遺伝子組換えVVB型肝炎のxタンパク質をコードしているで攻撃することで実証された。免疫付与していない対照と比べ、HBsAg-DNAで免疫付与したマウスでは、rVV-HBxの複製の減少は見られなかった。HLA-DR1拘束性のCD4T細胞は、抗体、ならびにウイルス感染に対するCTL反応および防御にとって重要である。HLA-DR1拘束性ヘルパーTリンパ球がヒト化したマウスにおける抗体反応とCTL反応に寄与するかどうかを評価するために、免疫反応とウイルス感染効率を、一つHLA-A2.1を遺伝子導入した、および二重HLA-A2.1/HLA-DR1に遺伝子導入した、H-2クラスI/クラスII-KOマウスにおいて比較した。表4に示されているように、強力なHBsAg348-357特異的CTL反応は、HLA-A2.1/HLA-DR1を二重に遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスでは見られたが、HLA-A2.1のみを遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスでは見られなかった。さらに、抗HBs抗体は、HBsAg-DNAをワクチン投与した、HLA-A2.1のみを遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスでは検出することができなかった。結果的に、HBsAg-DNAで免疫付与した、HLA-A2.1のみを遺伝子導入したH-2クラスI/クラスII-KOマウスは、rVV-HBsAgの感染に対して防御されなかった。本出願を通して引用されたすべての参考文献、特許文献および公開された特許出願の全内容は、参照することによってそれらの全体が本発明の一部を構成するものである。