"APCbindingproteinEB1をマーカーとして検出する大腸癌の診断検査方法。大腸癌の診断が請求項1に記載の検査方法。以下の工程を含む検査方法:1生体から採取した生体検体中のAPCbindingproteinEB1を検出又は定量する工程;2検出又は定量したAPCbindingproteinEB1により、大腸癌を診断する工程。生体検体が、大腸癌からなる悪性腫瘍組織を含む生体検体である請求項3に記載の検査方法。APCbindingproteinEB1の検出又は定量を、免疫学的手法により行う検査方法。免疫学的手法が、免疫組織染色である請求項4に記載の予後予測検査方法。請求項1~6のいずれかに記載の検査方法に使用する、APCbindingproteinEB1からなる悪性腫瘍のマーカー。APCbindingproteinEB1を大腸癌細胞の増殖抑制標的として使用する大腸癌の治療方法。大腸癌の治療法が請求項7に記載の細胞増殖抑制方法。本発明は、悪性腫瘍の予後を予測するためのマーカー及び当該マーカーを用いた悪性腫瘍の検査方法を提供することを課題とする。より詳しくは、当該マーカーを用いた大腸癌の診断に関する検査方法を提供することを課題とし、又は大腸癌の治療法を提供することを課題とする。本発明者らは上記課題を解決するために、鋭意研究を重ね、生体検体から取得した悪性腫瘍を含む組織から、タンパク質を抽出した後、蛍光二次元電気泳動法と質量分析装置にて予後に関係するタンパク質を解析した。解析の結果、APCbindingproteinEB1に着目し、APCbindingproteinEB1について大腸癌腫瘍組織と大腸正常粘膜組織との関係を調べた結果、APCbindingproteinEB1の発現が大腸癌腫瘍組織において有意に高いことが確認された。また、APCbindingproteinEB1の発現を抑制することで大腸癌細胞の増殖を抑制することを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下よりなる。1.APCbindingproteinEB1をマーカーとして検出する大腸癌の検査方法。2.下の工程を含む検査方法:1生体から採取した生体検体中のAPCbindingproteinEB1を検出又は定量する工程;2検出又は定量したAPCbindingproteinEB1により、悪性腫瘍の存在を決定する行程3.APCbindingproteinEB1の検出又は定量を、免疫学的手法により行う検査方法。4.免疫学的手法が、免疫組織染色である前項4に記載の検査方法。5.APCbindingproteinEB1を大腸癌細胞の増殖を抑制する分子として使用する方法本発明の検査方法、具体的には免疫組織染色によると、大腸癌についてAPCbindingproteinEB1の発現が高い細胞は大腸癌腫瘍細胞であることが形態学的病理学的に診断された。また、本発明の大腸癌の検査方法によると、例えばAPCbindingproteinEB1陽性細胞は100大腸癌であったのに対し、APCbindingproteinEB1陰性細胞では100であり、APCbindingproteinEB1陽性細胞は大腸癌であると診断された。APCbindingproteinEB1を単一のマーカーとして用いる本発明の大腸癌の検査方法によると、大腸癌の正確な診断が可能になる。内視鏡などで切除された検体を、本発明の検査方法により検査することで大腸癌を判断することができる。つまり、APCbindingproteinEB1を単一のマーカーとして用いることにより、技術的に簡便に迅速に低いコストで実用的に大腸癌を診断できることになる。本発明は、APCbindingproteinEB1をマーカーとして検出する悪性腫瘍の診断に関する。本発明におけるAPCbindingproteinEB1のアミノ酸配列は、出願時において、SwissprotdetabaseAccessionNoQ15691に掲載されているものを一例としてあげることができるが、いわゆるAPCbindingproteinEB1タンパク質であれば、上記掲載されている配列からなるタンパク質に限定されるものではない。本発明において、大腸癌の診断とは、大腸癌腫瘍細胞を含む生体検体から大腸癌腫瘍細胞を検出することをいう。本発明において、大腸癌の治療とは、大腸癌腫瘍細胞の増殖を有意に低下させることをいう。臨床的な治療縮小効果、RECISTという評価基準に基づいて画像診断で判断される腫瘍縮小効果などが、生体では対応する減少として挙げられる。本発明の予後予測検査は、以下の工程を含む方法により行うことができる。1生体から採取した生体検体中のAPCbindingproteinEB1を検出又は定量する工程;2検出又は定量したAPCbindingproteinEB1により、大腸癌を診断する工程。本明細書において、生体検体とは、生体から取得した検体をいい、各種検査や試験に供するために前処理された検体を試料ということとする。本発明の検査方法に供するための生体検体は、悪性腫瘍患者の組織に由来するものであればよく、特に限定されないが、好ましくは悪性腫瘍細胞を含む検体であれば良い。生体検体は、生体、例えば患者から取得した検体であり、本発明の検査方法のために取得した検体であってもよく、他の検査に供するために取得した検体や、手術により採取した検体であってもよい。例えば検体を免疫組織染色検査に供する場合、検査に供する試料として、患者から得られた検体から調製したパラフィン切片を用いることができる。また、例えば検体をウエスタンブロット法又はRT-PCRに供する場合、試験に供する試料として、患者から得られた検体から調製したタンパク質抽出液又はmRNA抽出液を用いることができる。本発明の検査方法において、APCbindingproteinEB1をマーカーとして検出又は定量する方法は、生体検体中のAPCbindingproteinEB1を確認可能な方法であれば良く、特に限定されない。各生体検体におけるAPCbindingproteinEB1は、以下に例示する任意の方法で検出又は定量することができる。なお、APCbindingproteinEB1の検出又は定量は、単にAPCbindingproteinEB1の有無を検出するものであってもよく、またAPCbindingproteinEB1の発現量を相対的又は絶対的に決定するものであってもよい。APCbindingproteinEB1発現は、タンパク質レベルで検出又は定量してもよく、またmRNAレベルで検出又は定量してもよい。APCbindingproteinEB1発現のタンパク質レベルでの検出又は定量は、免疫学的手法によるのが簡便であり、好適である。例えば、免疫染色法蛍光抗体法、酵素抗体法、重金属標識抗体法、放射性同位元素標識抗体法を含む、電気泳動法による分離と蛍光、酵素、放射性同位元素などによる検出又は定量との組み合わせウエスタンブロット法、蛍光二次元電気泳動法を含む、酵素免疫測定吸着法ELISA、ドットブロッティング法等により行うことができる。また、mRNAレベルでの検出又は定量は、例えば、RT-PCR好ましくはリアルタイムRT-PCR、ノーザンブロッティング法、BranchedDNAアッセイ等により行うことができる。免疫組織染色法は自体公知の方法を採用することができ、特に限定されないが、その具体例を以下に示す。悪性患者から分離した生体検体を常法によりホルマリン固定をした後、パラフィンに包埋をしてミクロトームにて厚さ4μm程度の組織片に薄切し、スライドガラスに貼り付けたものを切片試料として使用する。切片試料はキシレン処理で完全にパラフィンを除き、100から徐々に濃度を下げたアルコール溶液にくぐらせ親水化し、水洗する。その後、抗体の浸透性を高めるために耐熱ガラス容器に入れたpH6.0のクエン酸緩衝液中に切片試料を漬け、オートクレーブにて121°Cで10分間熱処理し抗原を賦活化する。室温まで放置して冷却し、流水で緩衝液を水洗後、免疫組織染色を行う。内因性ペルオキシダーゼ活性、非特異的反応をブロッキングした後、切片試料に抗APCbindingproteinEB1抗体を滴下し常温で一晩反応させる。洗浄後、HRP標識抗ウサギ抗体を用いてそれぞれ30分間反応させる。洗浄後、DAB溶液を用いて発色を行う。なお洗浄にはTBSTを用いる。流水にて洗浄後、ヘマトキシリン液にて検体の細胞核を染色する。流水にて水洗後、アルコール溶液、次いでキシレン溶液をくぐらせ脱水し、検体上に封入剤を滴下しカバーグラスを被せて顕微鏡にて観察する。顕微鏡下では肝細胞がんの細胞のAPCbindingproteinEB1タンパク質は茶褐色の発色として観察される。以下に説明するように、その発色により陽性陰性の判定を行うことができる。APCbindingproteinEB1発現の検出又は定量の結果は、2種類の段階陽性及び陰性に分類することができる。APCbindingproteinEB1発現の分類は、検出又は定量方法に応じて、十分な経験を有する病理医、臨床医、検査技師又は検査施設が行うことが好ましい。例えば、APCbindingproteinEB1発現の分類は、免疫組織染色法を用いる場合は病理医が行うことができ、ウェスタンブロッティングまたはRT-PCRを用いる場合は検査技師が行うことができる。なお、APCbindingproteinEB1発現の分類は、患者からの生体検体におけるAPCbindingproteinEB1の発現量を、コントロールにおけるAPCbindingproteinEB1の発現量と比較することにより行うことが好ましい。APCbindingproteinEB1発現の結果を分類する段階の数に応じて、複数のコントロールを用いることが好ましい。例えば、APCbindingproteinEB1発現の結果を2種類の段階陽性及び陰性に分類する場合は、それぞれの段階に対応した2種類のコントロールAPCbindingproteinEB1陽性コントロール及びAPCbindingproteinEB1陰性コントロールを用いることが好ましい。また、コントロールの1つとして、健常者に由来するコントロールを用いることが好ましい。免疫組織染色法により、APCbindingproteinEB1発現の結果を陽性及び陰性の2種類の段階に分類する場合、免疫組織染色の結果を例えば以下のように判定することができる。a.染色性が強く染色されるb.染色性が弱く染色されるc.染色なしとし、悪性細胞全体に対するa,b,cの割合を測定する。本発明は、生体検体中のAPCbindingproteinEB1を検出又は定量するため検査用試薬及び検査用キットにも及ぶ。当該キットにより、患者から得られた生体検体におけるAPCbindingproteinEB1の発現を検出又は定量することができる。すなわち、タンパク質レベルでAPCbindingproteinEB1の発現を検出又は定量するための検査用試薬キットとして、免疫学的手法、例えば免疫組織染色やウエスタンブロット法などに使用される検査用キットが挙げられる。免疫学的手法により検査を行う場合には、少なくとも抗APCbindingproteinEB1抗体が検査用試薬に含まれる。抗APCbindingproteinEB1抗体は、APCbindingproteinEB1の発現を検出しうる抗体であればよく、特に限定されないが、例えばモノクローナル及びポリクローナル抗体、標識化抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体ならびにこれらの結合活性断片などが挙げられる。また検査用試薬キットには、上記抗体のほか検出用に用いる標識を含んでいてもよい。キットには、緩衝液、発色基質、二次抗体、ブロッキング剤等の試薬、試験に必要な器具やコントロール等を含むことができる。以下本発明を完成するに至った経緯を参考例に、本発明の内容を実施例において示し、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内で種々の応用が可能である。実施例1二次元電気泳動によるタンパク質の解析本発明において、APCbindingproteinEB1に着目した経緯は、以下の検討による。大腸癌腫瘍組織および大腸正常粘膜上皮細胞を回収し、タンパク質を抽出した。その後、蛍光二次元電気泳動図1参照と質量分析装置にて大腸癌腫瘍組織細胞と大腸正常粘膜上皮細胞とで発現が異なるタンパク質を解析した。国立がん研究センター中央病院から倫理委員会の承諾を得て研究に使用している大腸癌59症例の手術検体を使用した。APCbindingproteinEB11試料調製手術検体をマルチビーズショッカーTM安井機器、大阪にて破砕して粉末状にした。粉末状にした組織に、タンパク質抽出用緩衝液6Mウレア、2Mチオウレア、3CHAPS、1TritonX100を加えてタンパク質を抽出した。抽出したタンパク質を蛍光色素サチュレーションダイCy5TM、GE社で標識した。標識は以下のように行った。1終濃度30mMとなるようにpH80のトリス緩衝液を加え、次に21nmolのTECPトリス2-カルボキシエチルホスフィンヒドロクロライド、Sigma社を加え、337°Cで60分間処理した。次に、4Cy5蛍光色素を4nmol加えて、37°Cで30分間処理した。今回の実験に用いたタンパク質試料から等量ずつタンパク質試料を集めて混合し、内部コントロール試料とした。内部コントロール試料を蛍光色素サチュレーションダイCy3TM、GE社で上記と同様に標識した。Cy5で標識した個別のサンプルとCy3で標識した内部コントロール試料を混合し、ウレア可溶化液で最終容量420μlとした。その際、終濃度が65mMとなるようにジチオスレイトールを、2となるようにとアンフォラインTMGEHealthcareBiosciences社を加えた。Cy5で標識した個別試料とCy3で標識した内部コントロール試料を混合したサンプルを一枚の二次元電気泳動ゲルで泳動した。2二次元電気泳動まず、一次元目の泳動はイモビラインゲル24cm、pI47、GE社と、MultiphorIITMGEHealthcareBiosciences社を使用した。泳動するタンパク質試料でイモビラインゲルを室温にて一晩膨潤させた。泳動は40000Vhで行った。二次元目の泳動は9-15のポリアクリルアミドのグラジエントゲルと、二次元泳動装置を使用した。泳動は泳動装置一台につき18Wで10時間、15°Cで行った。3タンパク質検出泳動終了後は、タンパク質を検出する目的で、ガラス板に挟んだままの状態のゲルをレーザースキャナーTyphoonTrioTM、GE社に載せてスキャンした。4発現解析読み込んだ画像を画像解析ソフトProgenesisSameSpotssoftwareで解析した。5タンパク質同定a.ゲル内消化法全自動スポット回収装置ProHunterTMAsOne社を用いて、ゲルから96穴プレートにスポットを回収した。ゲルをメタノールで十分洗浄し、タンパク質分解酵素トリプシンで37°Cにて一晩処理した。この処理によってタンパク質はペプチド化される。得られたペプチドは、60アセトニトリルにてゲルを洗浄することで回収した。b.質量分析ペプチドの質量を測定するためにLTQTMサーモエレクトロン社を使用した。タンパク質同定のためのデータベース検索にはMasCotTMを使用した。6結果上記方法により二次元電気泳動を行った結果、約3500個のタンパク質スポットから、各群間の比較において、1Wilcoxon検定p001、2平均値の値が2倍以上の差、という基準でタンパク質スポット110個を選別した。質量分析装置を用いたタンパク質同定の結果、APCbindingproteinEB1に由来するタンパク質スポットが、110個のスポット中に含まれていた図2。実施例2ウエスタンブロッティングによるAPCbindingproteinEB1の確認参考例を検証する目的で、ウエスタンブロッティングによりAPCbindingproteinEB1の発現を調べた図2参照。大腸正常粘膜上皮細胞ではAPCbindingproteinEB1はほとんど検出されず、大腸癌腫瘍組織では高い発現が認められた。1タンパク質の回収各細胞又は異種移植組織をマルチビーズショッカーTM安井機器、大阪にて破砕して粉末状にした。粉末状にした組織に、参考例と同手法によりタンパク質抽出用緩衝液を加えてタンパク質を抽出した。2ウエスタンブロット法上記抽出したタンパク質5μgをSDSPAGEにて分離し、ニトロセルロース膜に転写した。1次抗体としては、マウス抗APCbindingproteinEB1を用い、2次抗体としてはペルオキシダーゼで標識した抗マウス抗体を用いた。1次抗体は500倍希釈し、2次抗体は1000倍希釈した。検出にはECLPlusキットGE社を使用した。検出したバンドの強度は、ルミノイメージアナライザーLAS3000TM富士フィルム社及びImageQuantTMsoftwareにより解析した。3結果ウエスタンブロット法による解析の結果、APCbindingproteinEB1の強い発現が大腸癌腫瘍組織で確認された図2。実施例3免疫組織染色によるAPCbindingproteinEB1の確認APCbindingproteinEB1抗体を用いた免疫組織染色を行った。パラフィン包埋組織切片試料について、免疫組織染色を行った。通常の方法に従い脱パラフィン処理した切片試料を、10mMクエン酸塩緩衝液中で10分間121°Cオートクレーブ滅菌した。切片試料を、500倍希釈のマウス抗APCbindingproteinEB1抗体、HRP標識抗マウス抗体を用いて標識した。DAB溶液を用いて発色を行い、洗浄にはTBSTを用いた。流水にて洗浄後、ヘマトキシリン液にて検体の細胞核を染色した。免疫組織染色によるAPCbindingproteinEB1染色の結果を図3に示した。その結果、蛍光二次元電気泳動法によるスポットの検出結果と同様に、大腸癌腫瘍細胞Colo320はAPCbindingproteinEB1染色は陽性であり、大腸正常粘膜上皮細胞はAPCbindingproteinEB1陰性であった。実施例4APCbindingproteinEB1を治療標的とする治療法APCbindingproteinEB1の治療標的としての有用性を検証する目的で、APCbindingproteinEB1をsiRNA法で抑制する実験を大腸癌細胞について行った。APCbindingproteinEB1の発現を強制的に低下させた細胞では、増殖が有意に抑制された。以上よAPCbindingproteinEB1は大腸癌の検出法のためのバイオマーカーとして有用であること、大腸癌の分子標的となりうることが考えられる。"