"下記式で示される、タウタンパク質凝集のインヒビターとして適切なキノリン誘導体。[式中、R2は、2-4-アミノフェニルまたは2-4-メチルフェニルであり、R6はメチルである。]R2が2-4-アミノフェニルであり、R6がメチルである請求項1記載のキノリン誘導体。アルツハイマー病ADの治療に適する請求項1または2に記載のキノリン誘導体。タウタンパク質凝集の阻害に有用な医薬の製造のための下記式で示されるキノリン誘導体の使用。[式中、R2は、2-4-アミノフェニルまたは2-4-メチルフェニルであり、R6はメチルである]R2が2-4-アミノフェニルであり、R6がメチルである請求項4記載の使用。アルツハイマー病の治療に有用な医薬の製造のための請求項4または5に記載の使用。下記式で示されるキノリン誘導体を投与することを特徴とするタウタンパク質凝集の防止方法。:[式中、R2は、2-4-アミノフェニルまたは2-4-メチルフェニルであり、R6はメチルである]R2が2-4-アミノフェニルであり、R6がメチルである請求項8記載の方法。下記式で示されるキノリン誘導体を投与することを含むアルツハイマー病の治療方法。[式中、R2は、2-4-アミノフェニルまたは2-4-メチルフェニルであり、R6はメチルである]R2が2-4-アミノフェニルであり、R6がメチルである請求項9記載の方法。本明細書中、上に提示したデータによると、またニューロン中のNFT沈降物が徐々に神経変性過程に導き得るという状況下で、そしてこれらのキノリン類がタウタンパク質に対して一定の親和性を有することOkamuraNSuemotoTFurumotoSSuzukiMShimadzuHAkatsuHYamamotoTFujiwaraHNemotoMMaruyamaMAraiHYanaiKSawadaTKudoYQuinolineandbencimidazolederivativescandidateprobesforinvivoimagingoftaupathologyinAlzheimer’sdiseaseキノリンおよびベンズイミダゾール誘導体:アルツハイマー病のタウ病因のインビボ画像化用候補プローブJNeurosci251085710862に基づき、本発明者は、NFTの形成前の過剰リン酸化タウの凝集の強力なブロッカーとして、タウタンパク質、特に、アルツハイマー重合型タウに結合する分子リガンドの探索を実施し、臨床上適合する一群のキノリン類の能力、およびADに対して可能性のある治療ルートにおいて、インビトロで産生されるPHF形状のタウタンパク質の凝集を阻害するそれらの誘導体THQ類下記表1参照を評価した。12-4-メチルフェニル,6-O-メチルキノリンTHQ-3S22-4-メチルフェニル,6-メチルキノリンTHQ-4S;32-4-アミノフェニル,6-メチルキノリンTHQ-55;42-4-アミノフェニルキノリンTHQ-56;52-4-メチルフェニル,8-ブロモキノリンTHQ-9S;および62-5-メチルフェニル,6-メチルキノリンTHQ-12S脳のタウタンパク質と相互作用し、病的症状のこの過剰リン酸化タンパク質の自己生成過程に影響を与え得るすでに考察した結合分子は、アルツハイマー病ドメインの研究において、生物医学的適合性を目標として有する、と評価された。この目標を達成するために、以下の工程を実施した:ヒト脳からの脳タウタンパク質と対らせん状フィラメントPHFおよびウシのタウタンパク質を分離して特性化し、そのすべてをヘパリンで重合させたMandelkowEMMandelkowETauasamarkerforAlzheimersdiseaseアルツハイマー病用マーカーとしてのタウTrendsBiochemSci184803;オクタノール/水分配係数を確立し、実験的に血液-脳関門BHEを通過するキノリンの能力と脂溶性とを相関させた;分離したタンパク質および組換えタンパク質から出発して、タウタンパク質らせん状フィラメントを生成させ、特性化した。別途、Aβ1-42組換えペプチドから出発して、アミロイド凝集体を生成させ、特性化した;選択したキノリンとタウタンパク質およびその凝集体との相互作用を研究し、特性化した;および理論的ドッキングコンピューター利用研究を実施して、アッセイした化合物のタンパク質構造中の可能な相互作用部位を確立する。指定された関係を展開するために、最近殺処理されたウシの脳および/またはアルツハイマー病患者に属する死後のヒトの-80°Cに保存された脳を使用した。アフィニティカラムにより、ヒトの脳から精製したヒトのPHFを入手した。アルツハイマー病の治療を目的とし、表1にすでに記載したように、本発明に関連する範囲内の生物医学的に重要なキノリン類を有機合成により取得した。キノリンの標品はメタノール中、1.0mg/mLの濃度で調製し、異なる濃度で段階希釈を実施した;それらについて、290nmの励起波長および260と500nm間の発光によりその蛍光を確立した。分配係数logPo/Wは文献TakacsNovakKNagyPJozanMOrfiLDunnWJ3rdSzaszGRelationshipbetweenpartitioningpropertiesandmolecularsurfaceSPRinvestigationofmidazoquinazolonebderivatives分配性と計算分子表面間の関連性、ミダゾキナゾロンb誘導体のSPRによる研究ActaPharmHung625564記載どおりに実施した;その際、2相を用いるが、その水相は有機相からなるn-オクタノール溶液で飽和した緩衝液PBS0.1XpH7.4からなる。検討される各キノリンの1.0mg/mLの保存液は、オクタノールで飽和したPBS緩衝液0.1XpH7.4で調製した。キノリン標品THQ9SおよびTHQ12S表1参照をその粘性に応じて、30秒以内の超音波により処理した。これらの溶液から出発して、UV~可視領域のそれらの最大吸収を確立するために、1.0mg/mL~100μg/mLの範囲の濃度で希釈を実施した。次いで、テストしたキノリンをn-オクタノールで飽和したPBS0.1XpH7.4に溶解し、室温で30分間撹拌した。次に、この懸濁液を48時間静置し、さらに3,000rpmで10分間遠心分離して相分離した。オクタノール/水の分配係数およびLogPは共に、以下の等式1を用いて各化合物についてのUV~可視領域の吸光度の差を用いて確立した:等式1:[オクタノール中THQ]=[THQスタート]-[THQ緩衝液]式中:[THQ緩衝液]=各標品の吸光度により確立された濃度THQスタートの濃度は下記等式2を用いて確立する:次に、指数Pを等式3で示すように両相間に確立する:最後に、分配係数をLogPにより確立する。本テストのために、2種の対照を使用した:脂溶性ではない四級アミンである臭化クリジニウム、および高脂溶性バルビツール系麻酔薬であるナトリウムチオペンタール。該テストの各部分は三重測定で実施した。タウタンパク質は、本質的にファリアス法FariasGAVialCandMaccioniRBSpecificmacromolecularinteractionsbetweentauandthemicrotubulesystemタウおよび微小管系間の特異的高分子相互作用MoleculaandCellularBiochemistry1128188を若干修飾した方法に従って得る。最近殺処理されたウシの脳および/または死後のヒトの-80°Cに保存された脳から髄膜、血管および表面の血液をきれいに落とし、その脳を温度依存的に集合と解離の繰り返しサイクルプロトコールに従って処理加工する。ADに罹患している側頭葉および前頭葉などの脳領域を均一化緩衝液溶液A中、4°Cでホモジナイズする。このホモジネートを4°Cで30分間、42,000g19,450rpm;T647.5ローター使用で遠心分離する;この段階で上清を集める。次いで、この上清に、必要なMT重合成分溶液Bを加える。この溶液を37°Cで緩やかに撹拌しながら1時間インキュベートする。得られるより粘度の高い液体を遠沈管に分割する。引き続き、形成される微小管を、37°Cで30分間、42,000gで遠心分離することにより形成されたペレットから分離する。この微小管ペレットを次いで、微小管均一化緩衝液溶液Cで処理する。調製容量は約60mLである各ペレット容量あたり3倍容量の溶液。次に、ドーンスdounceホモジナイザーを用いて、氷上、15分間、均一化を行う。この工程はタウの収率が重要である。得られるスラリーは、熱に不安定なチューブリンと他の混入物を沈殿させるために、100°Cの熱水浴に5分間漬ける。その後、このスラリーを4°Cで30分間、42,000gで遠心分離する;この段階で、上清を確保し、75飽和硫酸アンモニウムで、4°C、一夜処理してタウタンパク質を沈殿させるFariasGAMunozJPGarridoJMaccioniRBTubulinactinandtauproteininteractionsandthestudyoftheirmacromolecularassembliesチューブリン、アクチン、およびタウタンパク質、それらの高分子集合体の研究JCellBiochem85315324。次に、これを4°Cで30分間、42,000gで遠心分離する;そこで、沈殿を溶液Dに再懸濁し、透析して塩を除く。透析は既知細孔12kDaサイズの透析膜により、4°Cで24時間の撹拌下、2.5mM-トリス-HCl緩衝液を3回取り替えて、24時間実施する。得られる溶液をセントリコン限界濾過システムにより、4°Cで30分間、2,000gで遠心分離することにより濃縮する。図1は、タウ精製のために実施した工程をまとめたものである。校正曲線描出のために、ウシアルブミン血清を用い、ブラッドフォード法BradfordMMARapidandSensitiveMethodfortheQuantitationofMicrogramQuantitiesofProteinUtilizingthePrincipleofProteinDyeBindingタンパク質色素結合の原理を利用するマイクログラム量のタンパク質を定量する迅速高感度法AnalyticalBiochem72248254によりタンパク質濃度を確立する。タウタンパク質の精製とその濃度の確立の後、均一量のタンパク質を、10のポリアクリルアミド変性ゲル上で荷電したLaemmliUKCleavageofstructuralproteinsduringtheassemblyoftheheadofbacteriophageT4バクテリオファージT4頭部の集合に際しての構造タンパク質の開裂Nature2276805;次いで、それらをニトロセルロース膜に移し、その一つをPBS中の5脱脂乳によりブロックした。次に、この膜を一次抗体PBS1X中、1脱脂乳中に1:1000に希釈と4°Cで一夜インキュベートする。この膜をPBS-トゥイーン0.05で3回洗浄した後、ペルオキシダーゼと会合させた二次抗体PBS1X中、1脱脂乳中に1:1000に希釈とインキュベートした。最後に、発光システムを用いて検出を実施し、標品を写真乾板上で分析した。以下の一次抗体を免疫検出に使用した;タウタンパク質のリン酸化状態を研究するために、タウタンパク質のSer202およびThr205リン酸化エピトープを認識するAT8抗体を使用した;それらのリン酸化状態から独立して、タウタンパク質エピトープを認識するタウ5;および長さが42個のアミノ酸からなるβ-アミロイドペプチドを認識するRBX抗β-アミロイド1-42。これらの抗体は、すべて製造者の指示に従って使用した。タンパク質凝集の研究タウ凝集におけるキノリンの効果;電子顕微鏡による研究ME精製した高濃度タウタンパク質を、ポリアニオンの存在下200μg/mL濃度のヘパリン、最終容量10μLとしてPHFの形状で重合させる。この混合物を37°Cでインキュベートし、緩やかに撹拌しながら7日間維持する。同時に、タウタンパク質、ヘパリン200μgおよび研究下の異なるキノリンTHQ4SおよびTHQ55表1参照を含有する別の標品を同様の方法で、10μMの濃度と10μLの最終容量でインキュベートし、これらの手段によりこのタンパク質の重合においてキノリンが有する効果を証明した。並行して、蒸留水中で調製した2.0mg/mL濃度の組換えタウタンパク質を用いての研究を実施した。表2は本実験のパラメータを要約したものである。このように形成された凝集物は、2酢酸ウラニルによるネガティブ染色により、電子顕微鏡を用いて可視化した。最終的に、視野あたりの線維数を計測し、そのものの長さと幅を測定し、25の視野についての平均値を求めた。表2:タウタンパク質凝集:陽性対照として、タウおよびヘパリン-含有溶液キノリン含有せずを用い、陰性対照としてタウおよび水を用いる;一方、研究下の標品は、タウ、ヘパリンおよびキノリンTHQ4SもしくはTHQ55表1参照を10μMの濃度で含んでいた。Xは存在を示し、-は存在しないことを示す。PHF解離におけるキノリンの影響;ME研究400μg/mL濃度のPHFを、最終濃度10μMの研究下のキノリンと共に、容量10μLとして、緩やかに撹拌しながら37°Cで7日間インキュベートする。結果は、2酢酸ウラニルでのネガティブ染色により電子顕微鏡法で可視化した。Aβ1-42ペプチド凝集におけるキノリンの影響:ME研究Aβ1-42ペプチドをpH7.4の1×PBS緩衝液に溶解し、滅菌、濾過して、最終濃度1.0mg/mL、最終容量100μLの溶液を得た。タウタンパク質との比較パラメータを得るために、Aβ1-42ペプチドをAβ細線維と凝集体の形状で重合させた。この溶液を37°Cでインキュベートし、緩やかに撹拌しながら7日間維持したWardRVJenningsKHJeprasRNevilleWOwenDEHawkinsJChristieGDavisJBGeorgeAKarranEHandHowlettDRFractionationandcharacterizationofoligomericprotofibrillarandfibrillarformsofbetaamyloidpeptideベータ-アミロイドペプチドのオリゴマー、プロトフィブリルおよび細線維形状の分画および特性化BiochemJ348137144。同時に、同様の方法で、Aβ1-42ペプチドおよび研究下の異なるキノリンTHQ4SおよびTHQ55表1参照を含有する別の標品を同様の方法で、濃度10μM,最終容量100μLとしてインキュベートし、キノリンがAβ1-42ペプチド凝集体に対して有する影響を証明した。表3は本実験のパラメータを要約する。このように形成された凝集体は、2酢酸ウラニルでのネガティブ染色により電子顕微鏡法で可視化した。最終的に、視野あたりのファイバー数を計測し、そのものの長さと幅を測定し、25の視野についての平均値を求めた。表3:Aβ1-42ペプチド凝集の研究:陽性対照として、β-アミロイドペプチドを1.0mg/mLの濃度で含む溶液を、37°Cで緩やかに撹拌しながら使用し、陰性対照と比較した;陰性対照もβ-アミロイドペプチドを含むが、-80°Cに保存し、従って、重合していないものである;一方、研究下の標品はβ-アミロイドペプチドおよびTHQ4SとTHQ55キノリン表1参照を10μMの濃度で含んでいた。Xは存在を示し、-は存在しないことを示す。電子顕微鏡観察用標品の調製タウ、Aβ1-42およびPHFタンパク質の凝集体を酢酸ウラニルでのネガティブ染色により電子顕微鏡法で可視化した。これを達成するために、6.0μLの標品を使用しタウ、PHFまたはAβ1-42凝集体、銅グリッドパーロジオンおよび炭素蒸気にて予め処理に収容し、室温で1分間吸着させた。過剰の標品を濾紙で取り除いた。次に、再蒸留水で調製した2酢酸ウラニル6.0μLをグリッド上に配置し、30秒間乾燥させ、ネガティブ染色に使用した。最後に、グリッドを顕微鏡下で観察した。タウ凝集におけるキノリンの影響;比濁分析による研究タウ凝集は、UV分光光度法によりλ340nmでのその吸光度により測定した。ウシ脳から精製した高濃度タウタンパク質を0.1M-MES緩衝液pH7.2に再懸濁し、ポリアニオンの存在下200μg/mL濃度のヘパリン、最終容量1.0mLとしてPHFの形状で重合させた。この混合物を37°Cでインキュベートし、緩やかに撹拌しながら7日間維持した。同時に、タウタンパク質、ヘパリン200μg/mLおよび1.0~50μMの異なる濃度の選択したキノリンを含有する別の標品を最終容量1.0mLとして、同様の方法でインキュベートし、キノリンがタウ凝集に対して有する影響を証明した。表4は、この実験のパラメータを要約する。ある種のベンズイミダゾール誘導体がタウ凝集を防止しないことが知られている;この状況下、対照は、タウ2.0mg/mL、ヘパリン200μg/mLおよびアステミゾールを10μM濃度で含むものを使用した。これらのキノリン類の吸光度を測定するために、さらなる対照として、タウタンパク質を水と置き換えた。各標品は三重測定で実施した。表4:キノリンの存在下および不存在下でのタウ凝集の比濁分析の研究:陽性対照として、タウとヘパリンを含有する溶液を使用し、陰性対照として、タウと水を使用した;一方、研究下の標品は、タウ、ヘパリンおよびTHQ55キノリン表1参照を1.0~50μMの間の異なる濃度で含んでいた。他の凝集対照は、タウ、ヘパリンおよびアステミゾールASTを10μMの濃度で含んでいた。Xは存在を示し、-は存在しないことを示す。タウ凝集におけるキノリンの影響:沈降の研究緩やかな撹拌下、37°Cで7日間インキュベートした後、キノリンの存在下および不存在下にタウ凝集体の沈降を実施した。この目的のために、比濁分析用に調製した各標品の400μLを採り、それらを37°Cで25分間、42,000gAH-650ローターにより18,000rpmで遠心分離した。この遠心分離の各標品から得られたペレットを弱アルカリ性の0.1M-MES緩衝液pH7.250μLに再懸濁し、それぞれについてタンパク質濃度を確立した。本手法においては、標品容量が非常に少ないために、ナノ光度計を用いて、λ280nmにて、沈降再懸濁したタンパク質濃度を測定した。キノリン類とタウとの相互作用およびH3-ASTとのインビトロ置換テスト発明者による先の実験室でのテストにおいて、また他の著者らOkamuraNSuemotoTFurumotoSSuzukiMShimadzuHAkatsuHYamamotoTFujiwaraHNemotoMMaruyamaMAraiHYanaiKSawadaTKudoYQuinolineandbecimidazolederivativescandidateprobesforinvivoimagingoftaupathologyinAlzheimer’sdiseaseキノリンおよびベンズイミダゾール:アルツハイマー病におけるタウ病因のインビボ画像診断用の候補プローブJNeurosci251085710862RojoLAvilaMChandiaMandMaccioniRB18FLansoprazoleasPETradiotracerChemicalandbiologicalstudiestowardsthedevelopmentofaNewPETRadiotracerPET放射性トレーサーとしての18Fランソプラゾール、新規PET放射性トレーサーの開発に向けた化学的生物学的研究InternationalConferenceonClinicalPETandMolecularNuclearMedicine臨床上PETおよび分子核医学に関する国際会議、11月10~14日、バンコクから、臨床用のある種ベンズイミダゾールに特異的なKdおよび結合最大値を、タウタンパク質により確立した相互作用を経て、取り分け、[O-メチル-3H]-アステミゾール図2について確立した。この背景として、スカッチャードおよび置換テストをすでに考察したキノリンで実施した。図3の図式は、両方の実験に使用した手法を要約したものである。スカッチャードテストの場合、固定タウタンパク質濃度230nMおよび10~120nMの可変3H-AST濃度を使用し、8エタノールEtOH8で最終容量20μLとした。このテストに先立ち、タウタンパク質を処理して、37°Cで緩やかに撹拌しながら7日間インキュベートした。次に、タウタンパク質と3H-ASTを25°Cで緩やかに撹拌しながら4時間インキュベートした。次いで、この溶液を真空下に10分間濾過し、その濾紙を室温で乾燥し、1.0mLのシンチレーション液でバイアルに移した。次いで、これを暗所に放置し、最後に、シンチレーションカウンター装置により、1分当たりのカウントcpmを測定する。薬物の置換テストにおいては、すでに示した同じ手法を用いたが、唯一の相違点は、ヒトタウタンパク質と3H-ASTの濃度を固定しそれぞれ、230nMと52nM、またコールドリガンドTHQ4SおよびTHQ55別々に、表1参照をRapidAssemblyofAlzheimerlikePairedHelicalFilamentsfromMicrotubuleAssociatedProteinTauMonitoredbyFluorescenceinSolution溶液中の蛍光によりモニターした微小管会合タンパク質タウからのアルツハイマー様対らせん状フィラメントの急速な集合Biochemistry371022310230、これらの化合物が高濃度1.0mg/mLより高いで弱い蛍光を発することを発見した;このことは、結合テストを実施する際に、またKd、KiおよびBmax定数を確立する際に、より多くのタンパク質の使用を必要とすることを暗示し、さらに製造レベルによって限界のあることを示している。この方法において、THQ55キノリン表1参照が最良の結果を示す化合物であることが判明した。このキノリンは1.0mg/mLの濃度であり、λ290nmで励起すると、λ350と480nmで発光した。蛍光強度は、最初のテストにおいて最大1000から80および30であり、最大1000から30および478となる後の事例では、装置のスリップまたは光開口部を大きくした。蛍光アッセイはTHQ4SおよびTHS12Sキノリン表1参照についても実施したが、スリップの開口部を大きくしても蛍光強度は低すぎた1000の最大でも10未満。図4aおよび4bは、THQ55表1参照についての蛍光の確立において得られた結果を示す。オクタノール/水LogP分配係数の決定作業仮説に従い、これらの分子において我々が研究すべきことは、ADに罹患しているヒトの脳にそれら分子が到達し得るかどうか、また罹患した領域においてそれらの作用を発揮し得るかどうかを評価することである。この状況下、第一のステップはLogPで表される脂溶性の決定である。この薬物の理化学的薬物動態学的特性表6は、その脂溶性LogPとして表されるが比較的高いことを示している。表6:使用したキノリン誘導体系統群の分子性質:LogPとして表されるオクタノール/PBSの分配係数;TPSA:総極性表面積;VM:分子体積;PM:分子量;nON:水素受容原子;nOHNH:水素供与原子。総極性表面積TPSAの計算は、これらの化合物の各極性基の個々の寄与に基づいて文献記載の方法ErtlPRohdeBSelzerPFastcalculationofmolecularpolarsurfaceareaasasumoffragmentbasedcontributionsanditsapplicationtothepredictionofdrugtransportpropertiesフラグメント-ベースの寄与の総計としての分子極性表面積の迅速な計算および薬物輸送性予測へのその適用JMedChem4337143717に従って実施したが、その計算は、これらの薬物がBHEの良好な吸収と浸透性を有する他の薬物同様のTPSA値を有することを示す。分子の性質の分析は、文献LipinskiCALombardoLBominyBWFeeneyPJExperimentalandcomputationalapproachestoestimatesolubilityandpermeabilityindrugdiscoveryanddevelopmentsettings薬物発見と開発設定における溶解性と浸透性を評価するための実験方法とコンピューター計算方法AdvDrugDeliveryRev23425記載の5のルールに従うと、この薬物がヒトにおいてBHEの浸透を促進する構造を有することを示す。タウタンパク質の精製タウタンパク質の純度を決定するために、硫酸アンモニウム塩で沈殿させ、透析した後に、ドットブロット法により特性化した。ドットブロット法については、タウ-5を一次抗体として使用し、ヤギで発生分化させ、ペルオキシダーゼを結合させたマウス抗IgGを二次抗体として使用した図5。この技法を用いて、すべてのタウタンパク質を、上清ではなく、硫酸アンモニウム塩との沈殿として得ることを確立した。SDS-PAGEとウエスタンブロット法を用いて、精製により得られる沈殿中に存在するタウイソ型のパターンを確立した図6。マイクロブラッドフォード法を用いて、精製において得られたウシタウとヒトタウ両方の濃度を確立した。次に、ヒトタウとウシタウ両方の標品のそれぞれを濃縮するために、凍結乾燥を実施した;引き続く研究のために適当なそれらの濃度は、タウ精製の場合、12ないし14の収率で得られた;それらのすべては文献記載の方法に従ったFariasGAVialCandMaccioniRBSpecificmacromolecularinteractionsbetweentauandthemicrotubulesystemタウおよび微小管システム間の特異的高分子相互作用MoleculaandCellularBiochemistry1128188FariasGAMunozJPGarridoJMaccioniRBTubulinactinandtauproteininteractionsandthestudyoftheirmacromolecularassembliesチューブリン、アクチン、およびタウタンパク質相互作用、およびそれらの高分子集合体の研究JCellBiochem85315324。表7は、両方の工程において得られたタンパク質の総量を示す。表7:精製工程において得られたタウタンパク質の濃度:濃度はマイクロブラッドフォード法により決定した。精製した後、標品を凍結乾燥して、次のテスト用の適切な濃縮物を得た。タンパク質凝集の研究:ヒトタウの凝集におけるキノリン類の影響;電子顕微鏡法による研究:緩やかな撹拌下、37°Cで7日間、タンパク質をインキュベートした後のタウ凝集体は、PHFと同様の形態学的特性を有することが観察された。このことは、ウシ脳から単離されたタウおよびヒト脳から単離されたタウの両方について達成された図7aおよび7b。欠失を有し、そのC-末端ドメインを有しない変異タウが、PHFタイプの構造を生じないということを示す証拠JakesRNovakMDavisonMandWischikMIdentificationof3and4repeattauisoformaswithinthePHFinAlzheimer’sDiseaseアルツハイマー病におけるPHF内の3個および4個の反復タウイソ型の同定EMBOJ1027252729に基づく、PHFの形成を証明する凝集についての研究は、異なるキノリンが、タウのC-末端調節領域に結合することを示す。従って、該キノリンはその重合を防止し、またフィラメントの構造に影響を与える図7cおよび7d。結果はまた、視野当たりのフィラメント数およびフィラメント構造それぞれの長さと幅の両方に減少を示した図8。これらのキノリン類最終濃度10μMをヒト脳から精製したPHFと共にインキュベートした場合、対照により提示される凝集体数に減少が観察された。この結果は、重合の防止と共に、キノリンがADに罹患した患者に形成されるPHFを解離すること示している図7eおよび7f。Aβ1-42ペプチドの凝集におけるキノリンの影響;電子顕微鏡法での研究ME緩やかな撹拌下、37°Cで7日間インキュベートした後、このペプチドの凝集体は、アミロイド線維の形成を示すものとして得られた図9。これらの凝集の研究は、キノリン類が、タウ凝集でのように、Aβ1-42ペプチドの重合を妨げ、フィラメントの構造に影響を与えることを示した。結果は、視野あたりのフィラメント数の減少を示すが、線維長は増大を示す図10。このことは、それがタウとAβ1-42凝集体に対するキノリンの影響を差別化しているという理由で、強調することが重要な興味深い観察である。この沈降テストMaccioniRBandSeedsNWEnhancementoftubulinassemblyasmonitoredbyarapidfiltrationassay迅速濾過アッセイによりモニターした場合のチューブリン集合体の増進ArchBiochemBiophys18526271は、さらに、凝集したアミロイドの総集団が、タウポリマーとは対照的に、実質的に減少しないことを示すが、その場合は明らかに凝集するタウモノマーの量に減少が認められる。キノリンの存在下および不存在下に得られるタウフィラメントの構造変化を分析する以外にも、当該凝集体中のこれらの分子の影響を定量することも興味のあることである。従って、キノリンの存在下および不存在下に、タウポリマーの沈降テストMaccioniRBVeraJCDominguezJAvilaJAdiscreterepeatedsequencedefinesatubulinbindingdomainonmicrotubuleassociatedproteintau個別の反復配列は、微小管会合タンパク質タウ上のチューブリン結合ドメインを規定するArchBiochemBiophys27556879並びに比濁テストを実施し、薬物の異なる濃度で重合したタウ量を分析した。タウ凝集におけるキノリンの影響;比濁分析の研究タウタンパク質の凝集阻害は、AD治療のために潜在的な治療用化合物の重要な側面である。THQ55キノリンTHQ55表1参照はこの目的に使用される。当該薬物は、タウ凝集を阻害する高い能力を示した;この事実は、λ340で吸光度を測定することにより証明され図11、またこの薬物が極めて低濃度で、凝集に対して潜在的な作用を有することを示した。タウ凝集におけるキノリンの影響;沈降による研究緩やかな撹拌下、37°Cで7日間インキュベートした後、キノリンの存在下および不存在下に沈降タンパク質を濃縮し、λ280nmで測定した結果、インビトロテストにおいて、タウタンパク質の自己凝集に対して、THQ55表1参照は顕著な阻害作用を示した。この阻害作用は、10μMを超えるTHQ55表1参照の濃度でさらにより顕著であった。沈降において得られるタウポリマーの濃度を表8に示す。表8:キノリンの存在下および不存在下でのタウ凝集についての沈降研究:陽性対照として、タウおよびヘパリンを含有する溶液を用い、陰性対照として、タウと水のみを使用した;一方、研究中の標品は1.0ないし50μMの異なる濃度でタウタンパク質、ヘパリンおよびキノリンTHQ55表1参照を含んでいた。他の凝集対照は、10μMの濃度でタウ、ヘパリンおよびアステミゾールASTを含む。キノリンとタウの相互作用およびインビトロでの3H-ASTとの置換テストタウ-ベンズイミダゾール系の特性化に基づき、タンパク質-リガンド相互作用パラメータを研究した。結果を図12および表9に示し、アステミゾールが高い親和性でタウフィラメントに結合することを示す。この現象は、インビトロで誘導されるタウフィラメントに対して、またAD脳由来の分離フィラメントに対しての親和性を比較したときに繰り返されるRojoLAvilaMChandiaMandMaccioniRB18FLansoprazoleasPETradiotracerChemicalandbiologicalstudiestowardsthedevelopmentofaNewPETRadiotracerPET放射性トレーサーとしてのランソプラゾール、新規PET放射性トレーサーの開発に向けての化学的生物学的研究InternationalConferenceonClinicalPETandMolecularNuclearMedicine臨床用PETおよび分子核医学に関する国際会議、11月10~14日、バンコク。この状況下で、3H-AST置換テストをキノリンとの間で実施し、タウとの親和性を決定した。図13に提示した結果は、タウ凝集体に対するキノリンの親和性を明らかにする。化合物THQ4SおよびTHQ55表1参照は、10μMを超える非常に高いKi値を示し、これらの薬物が放射性リガンドと置き換わらないことを示唆することが観察され得る。表9:飽和データの比較分析:3H-ASTに対するKd、Bmax、およびKb/Bmax、およびタウ凝集形状ドッキングテストタウは、統計的もつれランダムコイルとして大きな非構造性ドメインをもつ極めて線維性の高いタンパク質であるVonBergenMBarghornSBiernatJMandelkowEMMandelkowETauaggregationisdrivenbyatransitionfromrandomcoiltobetasheetstructureタウ凝集はランダムコイルからベータシート構造への遷移により推進されるBiochimicaetBiophysicaActa1739158166ために、このタンパク質の完全な結晶化は達成されていない。タウは全体として規則正しい構造をもつタンパク質ではない。従って、今日まで、全タンパク質の結晶構造は知られておらず、ノバクらNovakMWischikCMEdwardsPPannellRMilsteinCCharacterizationofthefirstmonoclonalantibodyagainstthepronaseresistantcoreofAlzheimerPHFアルツハイマーPHFのプロナーゼ耐性コアに対する最初のモノクローナル抗体の特性化PrgClinBiolRes31775561が実施した研究は、C-末端ドメインに位置するペンタペプチド387DHGAE391からなり、PHFを形成するためにタウ集合体の調節領域に関与する唯一既知のフラグメントを記載しているにすぎない。この領域は、モノクローナル抗体MN423の活性に寄与するFigure13XraystructureofthePHFcoreCterminusinsightintothefoldingoftheintrinsicallydisorderedproteintauinAlzheimersdiseasePHFコアC-末端のX線構造:アルツハイマー病における固有の異常となったタンパク質タウの折りたたみに対する洞察FEBSLett58158725878。従って、これを根拠とする立体的表現は、文献に記載されているように、該タンパク質の対フィラメントに接触したときに、このタウフラグメントにより達成されたNovakMWischikCMEdwardsPPannellRMilsteinCCharacterizationofthefirstmonoclonalantibodyagainstthepronaseresistantcoreofAlzheimerPHFアルツハイマーPHFのプロナーゼ耐性コアに対する最初のモノクローナル抗体の特性化PrgClinBiolRes31775561;およびSkrabanaRSkrabanovaMCsokovaNSevcikJNovakMIntrinsicallydisorderedtauproteininAlzheimerstanglesacoincidenceoraruleアルツハイマーのもつれにおいて固有の障害を受けたタウタンパク質:合致か、または規則かBratislLekListy1073548。この分析を完全なものとするために、これまでに知られているタウタンパク質もしくはそのフラグメントについての結晶学的構造を用いて、ソフトウエアオートドックIIIAutodockIII;登録商標を使用し、コンピューターによるドッキングの研究を実施した。ドッキング研究を実施することにより、キノリンとタウタンパク質の間で生じるより安定な相互作用のタイプの予測を可能とするアルゴリズムの近似値を得た。このペンタペプチドとTHQ4Sキノリン表1参照間のドッキングは、結果として、-4.5ないし-4.47Kcal/molの範囲のそれぞれのドッキングエネルギーをもつ最も妥当な相互作用を示した図14。表10は、THQ4S表1参照および結晶構造が完全に判明しているプロナーゼPHF-タウ-387DHGAE391に耐性のフラグメントに対するドッキングのバイオ-コンピューター分析から得た結果を要約したものである。従って、この表に記載された結合エネルギーは、代謝調節型グルタミン酸受容体mGluRなどの高親和性を有する薬物について、同じソフトウエアにより得られるエネルギーと比較したものであるYanamalaNTirupulaKCandKleinSeetharamanJPreferentialbindingofallostericmodulatorstoactiveandinactiveconformationalstatesofmetabotropicglutamatereceptors代謝調節型グルタミン酸受容体の活性型および不活性型立体配座に対するアロステリックモジュレーターの優先的結合BMCBioinformatics9S16。より陰性のエネルギー値は、もしそれらが自由エネルギーΔGとして関係しているとするなら、より熱動力学的に好ましいと思われ、このキノリンがタウ-387DHGAE391フラグメントに類似していることを示しており、従って、このフラグメントはその結合と抗-凝集活性に関与し得ることを示唆している。表10:ドッキングエネルギーの比較:高親和性受容体について得られたドッキングエネルギーと比較したTHQ4Sキノリンについて得られたエネルギーすでに述べたように、本発明の目的は、NFT形成前のタウ凝集の強力な阻止剤として、重合化タウタンパク質に結合するリガンド分子の追求を目的とする。この方法で、一群の異なるキノリン類がタウタンパク質と相互作用する方法を確立すること、またこの方法で、AD内の生物医学の計画を達成することが可能とされた。このことは、神経変性への道筋において、タウに結合し、同時にその病因となる自己集合に干渉する新しい一群の分子の確認を遂行する、今のところ最初の発見であるはずである。この研究は、本質的にインビトロモデルにおいて実施されてきたが、その達成された結果に従うと、これらのキノリンがその重合したPHFの形状において、タウ凝集を阻止するための候補となろうと結論し得る。蛍光テスト本研究は、タウタンパク質とその凝集体に対するキノリンの親和性を決定すること、また他の著者らが以前に提案していたものを補強することを目的としたRojoLAvilaMChandiaMandMaccioniRB18FLansoprazoleasPETradiotracerChemicalandbiologicalstudiestowardsthedevelopmentofaNewPETRadiotracerPET放射性トレーサーとしての18Fランソプラゾール、新規PET放射性トレーサー開発に向けた化学的生物学的研究InternationalConferenceonClinicalPETandMolecularNuclearMedicine臨床用PETおよび分子核医学に関する国際会議11月10~14日、バンコクOkamuraNSuemotoTFurumotoSSuzukiMShimadzuHAkatsuHYamamotoTFujiwaraHNemotoMMaruyamaMAraiHYanaiKSawadaTKudoYQuinolineandbencimidazolederivativescandidateprobesforinvivoimagingoftaupathologyinAlzheimer’sdiseaseキノリンおよびベンズイミダゾール誘導体;アルツハイマー病におけるタウ病因のインビボ画像化のための候補プローブJNeurosci251085710862。最後に蛍光テストを実施したが、これらの化合物の発光パターンが低すぎるため、シグナルを得るために非常に高い濃度の薬物を必要とした。その結果、シグナルを得るために必要とされるキノリンの量によると、キノリンとの結合に要するタンパク質量が多すぎるために、この結合テストは考慮外となった。オクタノール/水のLogP分配係数の決定:本発明の開発によると、分析した最初の性質の一つは、これらの分子、キノリン類が血液-脳関門を通過して、従って脳に達し得るか否かであった。これらの分子は、比較的高い脂溶性を示した。キノリンンの脂溶性と血液-脳関門BHEを通過する能力との間の相関関係は、6種の化合物の内、3種については最適であった。分子としての分析は、キノリン類がBHEを通過する他の薬物と同様の性質を有することを明らかにした。結果は、この説明の全般にわたって証明されるようにポジティブなものであり、これらの分子がインビトロのモデル研究に対応してBHEを通過し得るであろうことを示唆している。この状況下で、該化合物は可能性のある薬理学的適用において、神経レベルで興味のある一定の要件を満たさなければならない:1それらは高度に親油性であり、血液-脳関門BHEを通過する能力を有しなければならない;2低濃度で作用し、短時間脳内に留まらなければならない;3タウタンパク質およびその凝集体と相互作用しなければならない;および4非特異的結合が低くなければならない。この方法において、これらの薬物は、AD罹患患者の脳領域に直接の作用を示すようになる。本明細書に記載するキノリン類はこれらの要件を完全に満足する;すなわち、高い親油性の性質を示し、タウと相互作用し、そしてPHFなどの病因となるポリマーにおいてそれらの自己凝集を阻止することによりそれらの作用を示す。このような性質を満たす分子についてはこれまでに記載されたことがない故に、我々はこれを重要な発見であると考える。最初のテストの一つは、LogPで表される脂溶性を確立することであった。我々の結果は、THQ4S、THQ55およびTHQ12S化合物表1参照の脂溶性が最適であり、それらをBHE通過の一連の候補とすることを示す。表2に示した理化学的性質および薬物動態学的性質によると、これらのキノリン類は、血液-脳関門での良好な吸収と浸透性を有する他の薬物と同様のTPSA値を有する。文献LipinskiCALombardoLBominyBWFeeneyPJExperimentalandcomputationalapproachestoestimatesolubilityandpermeabilityindrugdiscoveryanddevelopmentsettings薬物発見と開発設定における溶解性と浸透性を評価するための実験方法とコンピューター計算方法AdvDrugDeliveryRev23425記載の5のルールに従い分子の性質を分析すると、この薬物がヒトにおけるBHEの浸透性を促進し、脳のレベルでそれらの作用を発揮し得ることを示す。重要な情報は、抗マラリア剤として使用される臨床用途の多くの薬物が、それらの構造中にキノリン核を有することである。この状況下では、それらのヒトでの使用が承認されているので、それらの薬理学的評価に際しては、前臨床相の研究が回避され得よう。これに基づき、またそれらの分子の性質に従って、THQ4SおよびTHQ55表1参照を使用した。別の関連情報として、神経細胞膜の浸透性は、さらにタウの細胞内凝集体の画像を得るために重要な因子を提示することが知られているSmallGWAgdeppaEDKepeVSatyamurthyNHuangSCBarrioIRInvivobrainimagingoftangleburdeninhumansヒトにおけるもつれ荷重のインビボ脳画像JMolNeurosci19323327が、その場合、この化合物の高脂溶性が有利となる。タウタンパク質の精製タウタンパク質の精製に関しては、このタンパク質が酸性条件に抵抗性であり、従って精製の最終工程の一つにおいて、タウは多くの場合、過塩素酸での沈殿を用いて精製したFariasGAVialCandMaccioniRBSpecificmacromolecularinteractionsbetweentauandthemicrotubulesystemタウと微小管との間の特異的高分子相互作用MoleculaandCellularBiochemistry1128188。次に、ファリアスらFariasGAMunozJPGarridoJMaccioniRBTubulinactinandtauproteininteractionsandthestudyoftheirmacromolecularassembliesチューブリン、アクチン、およびタウタンパク質の相互作用、およびそれらの高分子集合体の研究JCellBiochem85315324の公開に基づいて、硫酸アンモニウムの使用を変法として導入し、従って、タウの濃縮をその純度の僅かの上昇と共に可能とした。考察する価値のあるのは、タウ精製における重要なステップが、当初、文献に記載されているように、重合および脱重合のサイクルの正確な使用に基づくことであるMaccioniRBRivasCIVeraJCDifferentialinteractionofsyntheticpeptidesfromthecarboxylterminalregulatorydomainoftubulinwithmicrotubuleassociatedproteinsチューブリンのカルボキシル末端調節ドメインからの合成ペプチドと微小管会合タンパク質との特異的な相互作用EMBOJ7195763。タンパク質凝集の研究最も重要な研究の一つは、タウタンパク質の重合を阻止するこれら薬物の可視化である。その結果は、その凝集したPHF形態におけるタウタンパク質の明瞭な阻害を示す;その理由は、キノリンと該タンパク質のインキュベーションが、視野あたりのフィラメント数とこれらのフィラメント構造の幅を低下させるからである。比較として、同様のテストをヒトの組換えタウタンパク質で実施し、同様の結果を得たが、このタンパク質における凝集体の数は、組換えタンパク質がリン酸化されておらず、またヘパリンとインキュベートするPHF数が枯渇しているために、少なかった。該キノリンは、インビトロで形成されたタウフィラメントの長さを5倍低下させ、その幅を10倍低下させた。これらの薬物がAβの場合凝集するタウタンパク質に対してより高い親和性を示すことを証明するために、前記同様のテストを実施して、キノリンがアミロイド凝集の数を低下させるが、線維の長さを増加させることを明らかにした。キノリンは線維数を低下させるが、その長さは増大させる;このことは、それが集団の再分配と関係しており、凝集の妨害には関係していないことを示唆している。これが、タウおよびAβ1-42凝集体に対するキノリンの影響の差によるものと強調することは重要である、とするのは興味のある見方であり、総アミロイド凝集塊は実質的に低下せず、その代わりに、タウポリマーとは反対に、再分配されることを物語っている;その場合、本明細書に後に記載するように、凝集するタウモノマーの量が減少する。比濁分析と沈降アッセイ電子顕微鏡法データを沈降テスト並びに比濁分析テストにより確認し、インビトロアッセイにおけるタウタンパク質の自己凝集に対するTHQ55表1参照の重要な阻害効果を明らかにした。タウ自己凝集に影響するこれらのキノリン類の能力の確固とした証拠は、キノリンTHQ55,表1参照濃度を増大させながらのタウポリマーの比濁分析テスト、引き続く沈降テストより得た。従って、正確な顕微鏡観察に補足的な方法における沈降および比濁分析テストは、タウ凝集を防止するこれら薬物の能力を直接確認することを可能とした。この阻害作用は、10μMより高いTHQ55濃度表1参照でさらにより重要であった図10および表8参照。これらの結果は、このキノリンがタウ抗-凝集剤としての可能性を秘める候補であり、アルツハイマー病における神経細線維性もつれの制御に向けた治療法として相当に大きな適合性を有するであろうことを示唆している。他方、アミロイド重合のインビトロインヒビターとして使用されている多くの小型分子が、それらの構造中に芳香環を含むということは考慮する価値がある。これらのインヒビターは、β-アミロイドに対するコンゴ-レッド、およびタウに対するアントラキノンとポルフィリンであるPickhardtMGazovaZvonBergenMKhilistunovaIWangYHascherAMandelkowEMBiernatJandMandelkowEAnthraquinonesinhibittauaggregationanddissolvepairedhelicalfilamentsinvitroandincellsアントラキノンは、インビトロおよび細胞において、タウ凝集を阻害し、溶解した対らせん状フィラメントを溶解するJBiolChem28036283635;InouyeHSharmaDGouxWJandKirschnerDAStructureofcoredomainoffibrilformingPHFtaufragment細線維形成PHF/タウフラグメントのコアドメインの構造BiophysJ9017741789。アントラキノンおよびポルフィリンとの相違として、キノリンはタウ抗凝集療法に向けての重要な候補であるが、その理由は、これらが低濃度でタウ凝集を阻止することに加えてBHEを通過し、さらには、ポルフィリン類およびアントラキノン類と違って、その患者での使用がすでに承認されていることである。タウタンパク質類似体について先に実施された電子顕微鏡法およびX線回折での研究は、βフォイルに一致する3種の残基のみが、PHFのフィラメント形状の重合に関わり得るということを証明しているInouyeHSharmaDGouxWJandKirschnerDAStructureofcoredomainoffibrilformingPHFtaufragment細線維-形成PHF/タウフラグメントのコアドメインの構造BiophysJ9017741789が、このことは、他の研究とも一致して、これらの相互作用が小型ペプチド間のH架橋または芳香性残基を経て確立されることを示しているGazitEApossibleroleforπstackingintheselfassemblyofamyloidsfibrilsアミロイド細線維の自己集合におけるπ-スタッキングの可能な役割FASEBJ167783;MakinOSAtkinsESirkoskiPJohansonJandSerpellLCMolecularbasisforamyloidfibrilformationandstabilityアミロイド細線維形成と安定性のための分子基盤ProcNatlAcadSciUSA102315320。このタイプの相互作用は、線維形成を阻害するか、または既に形成された線維を破壊するために妥当な標的として使用し得よう。当該研究は、本発明の実験で得られた結果により確認されるが、その理由は、該キノリンが1位に1個のNを有するナフタレンに酷似した2つの芳香環からなるからである。井上らInouyeHandKischnerDAFoldingandfunctionofthemyelinproteinsfromprimarysequencedata一次配列データからのミエリンタンパク質の折りたたみと機能JNeuroscRes28117が、PHFにおける核形成と重合に関わる小型のペプチドからなるC-末端に位置するタウドメインについて実施した別の研究は、チロシン間の可能な相互作用を示し、従って、該インヒビターは相互作用により芳香性残基に結合し得ることを示唆しているHunterCASandersJKMThenatureofππinteractionsπ-π相互作用の性質JAmChemSoc11255255534。3H-ASTとのインビトロ置換の研究ベンズイミダゾール誘導体が、特異的に高親和性で、タウタンパク質に結合するという事実に基づくと、gnaNFTRojoLAvilaMChandiaMandMaccioniRB18FLansoprazoleasPETradiotracerChemicalandbiologicalstudiestowardsthedevelopmentofaNewPETRadiotracerPET放射性トレーサーとしての18Fランソプラゾール、新規PET放射性トレーサーの開発に向けた化学的生物学的研究InternationalConferenceonClinicalPETandMolecularNuclearMedicine臨床上PETおよび分子核医学に関する国際会議、11月10~14日、バンコク;OkamuraNSuemotoTFurumotoSSuzukiMShimadzuHAkatsuHYamamotoTFujiwaraHNemotoMMaruyamaMAraiHYanaiKSawadaTKudoYQuinolineandbencimidazolederivativescandidateprobesforinvivoimagingoftaupathologyinAlzheimer’sdiseaseキノリンおよびベンズイミダゾール誘導体;アルツハイマー病におけるタウ病因のインビボ画像化のための候補プローブJNeurosci251085710862は、ベンゼン環核のそれらの構造類似性とベンズイミダゾール環の1位のNに基づいて、この相互作用を置き換え得る可能性を示唆している。この方法において、このものはベンズイミダゾールと置き換わり、インビトロでタウタンパク質の凝集体に結合するはずである。この目的にはH3-ASTを使用するが、その結果は、得られる阻害定数Kiが非常に高く10μMを超える、これらの薬物は放射性リガンドと置き換わらないことを示す;そのためタンパク質に対するこれら化合物の親和性を得るための唯一の選択肢は、放射線標識キノリン市販品としては入手できないを使用することであろうことを示している。結果として、この実験は、この2種類のキノリンが、使用したベンズイミダゾールと置き換わる能力を有せず、従って、これらキノリン類のもつ非常に高いKiのために、タウに対するそれらの親和性はベンズイミダゾールよりも低いこと、または両方の分子において、タウタンパク質との相互作用部位が異なっているこの側面は研究すべきであることを示唆していることを示した。ドッキングテストこの状況下、キノリンとタウタンパク質間の相互作用の形状を予測するためにドッキングテストを実施した。これらの研究を実施するためには、結晶化したタウタンパク質フラグメントを取得することが必要であった。このことは、もしタンパク質の結晶構造が存在しないとすれば、ドッキングはなし得ないという理由で重要な局面である。グラベGlabeCGConformationdependentantibodiestargetdiseasesofproteinmisfolding立体配座依存性抗体はタンパク質の誤った折りたたみによる疾患を標的とするTrendsBiochemSci29542547が実施した研究は、モノクローナル抗体の三次構造が、タウの場合のように、本質的に障害されたタンパク質IDPの病理学的集合メカニズムの検討のための必須の手段であることを示している。ソコバらCsokovaNSkrabanaRUrbanikovaLKovacechBPopovASevcikJNovakMPreparationcrystallizationandpreliminaryXrayanalysisoftheFabfragmentofmonoclonalantibodyMN423revealingthestructuralaspectsofAlzheimerspairedhelicalfilamentsモノクローナル抗体MN-423のFabフラグメントの調製、結晶化および予備的X線分析は、アルツハイマーの対らせん状フィラメントの構造的側面を明らかにするProteinPeptLett139414が実施した以前の研究は、モノクローナル抗体MN-423が、プロナーゼ抵抗性のタウC-末端の93~95アミノ酸の配列からなるPHF/タウ構造核に特異的に結合することを見出した。このタウ配列アミノ酸306~391を用いて、本発明者らは3カ月間このタンパク質の結晶化を実施した;その際、詳細な分析は、該抗体の反応性に寄与するペンタペプチド387DHGAE391が、PHF構造中のタウタンパク質の集合に関わり、該フィラメントの集合に際して、ベータ構造の既知配列を変化させることを示したSevcikJSkrabanaRDvorskyRCsokovaNIqbalKNovakMXraystructureofthePHFcoreCterminusinsightintothefoldingoftheintrinsicallydisorderedproteintauinAlzheimersdiseasePHFコアC-末端のX線構造:アルツハイマー病における本質的に障害されたタンパク質の折りたたみに対しての洞察FEBSLett58158725878。さらに、この配列がタウ中に高度に保存されたゾーンに位置し、C-末端の反復領域に関係していることを付け加えることは重要である。上記の情報に基づき、またこの配列を用いて、ドッキング研究を実施した;この研究はキノリンとタウの相互作用間の数理モデルに基づく第一近似値を提示する。これらの研究を通して、これらのキノリン類、具体的にTHQ4S表1参照は、これらの化合物とタウタンパク質のフラグメント間の相互作用にとって有利なドッキングエネルギーを有することが確立された。THQ4S表1参照は、分子の性質が有利であり、THQ55表1参照よりも親油性であるため、これらのテストに選択した。THQ55表1参照とこのタウフラグメントとのドッキングは、未だに検討されていない一局面であり、譬え可能性としてTHQ55表1参照の相互作用のエネルギーが、THQ4S表1参照のエネルギーよりもさらにより陰性であり得るとしても、THQ55表1参照は、キノリンの芳香環の共鳴に影響を与え得る置換基に電子供与基を提供して、電子を非局在化するので、従って、Nをより陰性とし、タウの場合のように、陽イオンタンパク質との相互作用と協力する。さらに、このことはこの近似から得られる重要な情報、すなわち、キノリン中のこのN図22、白抜き矢印で示すがペプチドの最末端に突出するOと相互作用し、AlaとGluの間に形成される小さな空隙ポケット構造を構成するという情報により確認される。この窒素原子は、MN-423AβのArg106の1個のNと特異的に置き換わり得る。得られた結果が妥当であるとしても、結合ドメインは、該ペプチドが非常に小さく、またタウとキノリン間の可能な相互作用の近似値を提供するだけであるため、正確に確立することができない。従って、本発明の目的は、NFT形成の前に、タウ凝集の可能性のあるブロッカーとして、重合したタウに結合するリガンド分子の研究を主たる目的とする。正確な顕微鏡法による研究、沈降および比濁分析テストは、タウ凝集を妨げるこれら薬物の許容力を直接確認し得るものとする。他方、これらの分子は比較的高い脂溶性を提供し、BHEを通過する他の薬物同様の分子性を示して、それにより結局、脳レベルでの作用を発揮することができる。これらの結果から結論されることは、これらのキノリン類およびその誘導体が、AD処置のために可能性のある治療方針において、タウ凝集の潜在的なインヒビター薬物として使用し得ることである。"