"分子をアッセイする方法であって、a.無標識バイオセンサーの分析に使用されるバイオセンサー表面上でKATP細胞株を培養するステップと、b.分子で前記細胞株をインキュベートして分子処理した細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記分子処理した細胞株を分析して分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記分子データ出力と既知のKATPモジュレーターデータ出力とを比較して分子-KATPモジュレーターの比較を産生するステップと、を含むことを特徴とする方法。分子をアッセイする方法であって、a.無標識バイオセンサーの分析に使用されるバイオセンサー表面上でKATP細胞株を培養するステップと、b.マーカー及び分子で前記細胞株をインキュベートしてインキュベートしている細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記インキュベートしている細胞株を分析してマーカー-分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記マーカー-分子データ出力とマーカー-KATPモジュレーターデータ出力とを比較してマーカー-分子/マーカー-KATPモジュレーターの比較を産生するステップと、を含むことを特徴とする方法。KATP細胞株はミトコンドリアATP感受性カリウムイオンチャネルmitoKATPを含むことを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。細胞株は肝細胞を含むことを特徴とする請求項3に記載の方法。肝細胞は肝細胞を含むことを特徴とする請求項4に記載の方法。肝細胞は肝ウイルスに感染されたことを特徴とする請求項4に記載の方法。肝ウイルスは、A、B、C、D、Eの型肝炎、単純ヘルペス、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、黄熱病ウイルス、又はアデノウイルスであることを特徴とする請求項6に記載の方法。細胞は、非ウイルス性感染症に感染された源から得ることを特徴とする請求項5に記載の方法。非ウイルス性感染症は、トキソプラズマ、レプトスピラ、Q熱、又はロッキー山紅斑熱を含むことを特徴とする請求項8に記載の方法。細胞は、化学物質、毒素、又は薬物であるか又はそれらの影響を受ける源から得ることを特徴とする請求項5に記載の方法。化学物質又は毒素は、アルコール、パラセタモール、アモキシシリン、抗結核薬、ミノサイクリン、メチルドパ、ニトロフラントイン、イソニアジド又はケトコナゾールを含むことを特徴とする請求項10に記載の方法。既知KATPモジュレーターデータ出力は、培養した前記KATP細胞株で前記KATPモジュレーターをインキュベートしてKATPモジュレーターデータ出力を生成する無標識バイオセンサーで、前記インキュベートした細胞株を解析することにより、産生されたことを特徴とする請求項1ないし11のいずれか1つに記載の方法。前記比較において分子データ出力及びKATPモジュレーターデータ出力が類似していることを示すとき、潜在的KATPモジュレーターを識別するステッップを更に含むことを特徴とする請求項1ないし12のいずれか1つに記載の方法。KATP細胞株は、HepG2細胞又はHepG2C3A細胞株から選択されることを特徴とする請求項1ないし13のいずれか1つに記載の方法。既知KATPモジュレーターは、カリウムチャネルオープナーKCOを含むことを特徴とする請求項1ないし14のいずれか1つに記載の方法。KCOは、ジアゾキシド、ピナシジル、クロマカリム又はニコランジルを含むことを特徴とする請求項15に記載の方法。KATPモジュレーターは、KATP抑制物質を含むことを特徴とする請求項1ないし16のいずれか1つに記載の方法。KATP抑制物質は、スルホニルウレア又はU-37883Aを含むことを特徴とする請求項1ないし17のいずれか1つに記載の方法。スルホニル尿素は、トルブタミド、トラザミド又はグリピジドを含むことを特徴とする請求項18に記載の方法。マーカー-KATPモジュレーターデータ出力は、培養した前記KATP細胞株で前記マーカー及び前記KATPモジュレーターをインキュベートして、マーカー-KATPモジュレーターデータ出力を生成する無標識バイオセンサーで、前記インキュベートした細胞株を解析することにより、産生されたことを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。前記比較においてマーカー-分子データ出力及びマーカー-KATPモジュレーターデータ出力が類似していることを示すとき、潜在的KATPモジュレーターを識別するステッップを更に含むことを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。マーカーはROCK1抑制物質又はROCK2抑制物質を含むことを特徴とする請求項21に記載の方法。ROCK1抑制物質又はROCK2抑制物質はY-27632、H-89、H-8を含むことを特徴とする請求項22に記載の方法。マーカーはJAKモジュレーターを含むことを特徴とする請求項21に記載の方法。JAKモジュレーターは、JAK抑制物質を含むことを特徴とする請求項24に記載の方法。JAK抑制物質は、AG490を含むことを特徴とする請求項25に記載の方法。マーカーは、チトクロムP450酵素モジュレーターを含むことを特徴とする請求項21に記載の方法。チトクロムP450酵素モジュレーターは、チトクロムP450活性化物質を含むことを特徴とする請求項27に記載の方法。チトクロムP450酵素は、CYP2D6又はCYP3A4を含むことを特徴とする請求項28に記載の方法。チトクロムP450活性化物質は、リファンピシンを含むことを特徴とする請求項29に記載の方法。ROCK経路の活性化に対する分子をアッセイするステップを更に含むことを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。前記アッセイのステップは、a.無標識バイオセンサーの分析に使用される表面上でROCK抑制物質応答性細胞株を培養するステップと、b.分子で前記細胞株をインキュベートしてインキュベートする細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記インキュベートする細胞株を分析して分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記分子データ出力と既知のROCK抑制物データ出力とを比較して分子-ROCK抑制物の比較を産生するステップと、を含むことを特徴とする請求項31に記載の方法。ROCK抑制物質応答性細胞株は、既知のROCK抑制物質によるROCKの基礎活性を阻害することが豊富なバイオセンサーシグナルを生成するような細胞株を含むことを特徴とする請求項32に記載の方法。細胞株は、A431、A549、又はHT29から選択されることを特徴とする請求項33に記載の方法。前記方法は、少なくとも2つのマーカーを使用して独立して実行されることを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。マーカーは少なくともEC70、EC80、EC90、EC95、及びEC100の濃度で添加されることを特徴とする請求項35に記載の方法。分子をアッセイする方法であって、a.無標識バイオセンサーの分析に使用されるバイオセンサー表面上でA431、HT29、A549、及びHepG2の4つの異なる細胞株を培養するステップと、b.分子で前記細胞株の各々をインキュベートして4つのインキュベートしている細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記インキュベートしている細胞株の各々を分析して各インキュベートしている細胞株に対する分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記分子データ出力とROCK抑制物質のデータ出力とを比較して各細胞株に対する分子-ROCK抑制物質の比較を産生するステップと、を含むことを特徴とする方法。ROCK抑制物質のデータ出力は、各細胞株とROCK抑制物質をインキュベートし、各細胞株に対するROCK抑制物質のデータ出力を生成する無標識バイオセンサーで各培養細胞株を解析することにより産生することを特徴とする請求項37に記載の方法。KATPモジュレーターデータ出力を生成するステップと、各細胞株について分子-KATP抑制物質の比較を生成するステップと、を更に含むことを特徴とする請求項37に記載の方法。追加のイオンチャネルアッセイを行うステップを更に含むことを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。追加のイオンチャネルアッセイは、従来の又は自動化されたパッチクランプするステップを含むことを特徴とする請求項40に記載の方法。対象物を処理する方法であって、肝疾患の治療の必要性である対象物にmitoKATPモジュレーターを投与するステップを含むことを特徴とする方法。肝疾患はJAK又はmitoKATPから下流のRhoキナーゼシグナルに関与することを特徴とする請求項42に記載の方法。mitoKATPチャネルはKir6.2及びSUR2チャネルであることを特徴とする請求項43に記載の方法。対象物における肝毒性を減少させる方法であって、KCOの機能が対象物に与えられた薬物の肝臓毒性を減少させる前記KCOを対象物に投与するステップを含むことを特徴とする方法。KCOがピナシジルであることを特徴とする請求項45に記載の方法。A.材料、組成物及びアッセイ:1.イオンチャネル:イオンチャネルは、細胞膜を通過するイオンの動きを制御する内在性膜タンパク質である。人間において、約400の遺伝子がタンパク質を符号化して、数千以上のいくつかの異なるイオンチャネルサブタイプを組み立てて形成して、通常、チャネルポアを形成し付属サブユニットを伴うヘテロ多量体複合体である。これらのサブタイプは、それらのイオン選択、配列相同性、四次構造やゲート開閉機構に応じて分類することができる。イオンチャネルは、刺激の広い配列に対応してゲーティングによる細胞の電気的特性を制御する。現在までに、イオンチャネルは、小さな分子やイオン等の配位子の濃度変化、膜電位の変化、温度変化、膜張力の変化、及び、可視光への曝露に敏感であることが最近確認されている。イオンチャネルタンパク質は、細胞内又は細胞外のリガンド又はイオンは、電圧、温度やストレッチによってゲート開閉され得る。細胞膜のチャネルを通るイオン流動は、次の3つの要因、機能的なチャネルの数と、イオンの電気化学勾配を下げるイオンのために存在する原動力と、開口のイオン伝導状態におけるチャネルの割合とによって決定される。この開口確率は、G-タンパク質、脂質キナーゼ等のシグナル伝達分子や、他のシグナル伝達分子の大きな変動で調節され得る。イオンチャネルは人間の病気状態へ導く分子経路において重要な役割を果たし、病気と先天性イオンチャネル機能障害いわゆるチャネル病との間の既知リンク数の増加に反映されている。更に、イオンチャネルは、Gタンパク質共役受容体、キナーゼ、トランスポーター及び酵素の5つの主要な薬物標的のファミリーの1つである。高血圧治療ためのL型Ca2チャネルブロッカー、糖尿病治療ための細胞膜KATPチャネルオープナー、不安治療ためのGABAA受容体モジュレーター、及び、てんかんや不整脈患者に与える使用依存性Naチャネルブロッカーは、ブロックバスター売上高を示す薬物の例である。このように、イオンチャネルは非常に魅力的な薬物標的である。しかし、ほとんどの市販のイオンチャネル薬は運よく見つけたものであり、数百万の化合物ライブラリが使用されていたイオンチャネル創薬は、ハイスループット技術の影響を受けやすい機能アッセイの欠如によって妨げられてきた。2.肝臓と肝疾患:肝臓は、人間が日常的にさらされている化学物質の膨大な数と種類の代謝の主要な器官である。肝臓での代謝酵素中で最も重要なクラスは、積極的に薬や他の化学物質の排除に関与するチトクロムP450である。P450は、それらを排泄できるように化学物質を分解するプロセスを開始するが、代謝の過程で、所望の薬理学的効果を有するいくつかの活性代謝物は、作成することができる。しかし、逆もまた真であり、代謝は共通の鎮痛剤アセトアミノフェンの分解のように有毒な代謝産物を生成することができる。肝臓は血液から多くの有毒物質の解毒だけでなく、多くの化合物の合成と分泌の主な器官トである。肝細胞、肝臓の細胞質質量の70-80を占める最も豊富な細胞は、肝臓での代謝と生合成プロセスのほとんどを行っている。したがって、invitroで培養された肝細胞は薬物代謝と毒性試験用に好まれている。肝炎複数の肝炎は、臓器の組織における炎症性細胞の存在によって特徴付けられる肝臓への損傷を意味する。条件は、自分自身で癒し、自己制限することも、肝臓の瘢痕化に進行することができる。それが長く持続するとき、それが六箇月以上と慢性持続するときには、急性肝炎と考えられている。肝炎は肝臓の損傷、世界中のほとんどの症例の原因となる肝炎ウイルスによって引き起こされる場合がある。肝炎は毒素特にアルコール、他の感染症や自己免疫プロセスから引き起こされる場合もある。肝炎にはA、B、C、D、E、F及びG型肝炎並びに虚血性肝炎等の多くの種類がある。肝炎はウイルス例えば、肝炎A-Eのほとんどがウイルス感染によって引き起こされるによって誘発される。肝炎はまた毒素、化学物質、薬物分子例えば、アルコール、毒素、パラセタモール、アモキシシリン、抗結核薬、ミノサイクリンに起因することもある。肝炎はまた、循環不全すなわち、虚血性肝炎、自己免疫状態、代謝性疾患、又はウィルソン病等の遺伝性疾患に起因され得る。急性肝炎は、肝炎A-E型ウイルス原因の95以上、単純ヘルペス、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、黄熱病ウイルス、及びアデノウイルスの感染によって引き起こされ得る。急性肝炎はまた、トキソプラズマ、レプトスピラ症、Q熱、及びロッキー山紅斑熱等の非ウイルス性感染症による原因で、同様に化学物質やアルコール等の毒素、毒素及び薬物例えば、パラセタモール、アモキシシリン、抗結核薬、ミノサイクリン及び多くの他のものによる原因で発生し得る。慢性肝炎は、通常、ウイルス性肝炎すなわち、D型肝炎の有無にかかわらないB型肝炎、C型肝炎、自己免疫性、アルコール、ある種の薬剤例えば、メチルドパ、ニトロフラントイン、イソニアジド、ケトコナゾールによって引き起こされ、また、ウィルソン病等の遺伝性疾患や、アルファ1アンチトリプシン欠損症によって引き起こされ得る。人間の体は、ほぼすべての薬を異物として識別して、それらを種々の化学プロセスすなわち代謝により適宜排除する。これは化学変換を必要とし、a脂肪溶解性を減らし、b生物学的活性を変化させる。体内のほぼすべての組織は、化学物質を代謝するためにいくつかの機能を有するが、肝臓における滑面小胞体は、内因性化学物質例えば、コレステロール、ステロイドホルモン、脂肪酸、タンパク質及び外因性物質例えば、薬物又は他の非ネイティブの化学物質の両方の主なメタボリッククリアリングハウスである。化学物質の排除及び変換で肝臓が演じる中心的な役割はまた、肝毒性と称される薬剤誘発性傷害にそれが受けやすくなる。特定の薬剤は、過量投与で撮影するときや治療の範囲内で導入された場合でも、いつか、肝臓を傷つけ得る。研究所や産業、自然の化学物質例えばミクロシスチンと薬草療法で使用されているもの等の他の化学薬剤はまた、肝毒性を誘発し得る。900以上の薬は肝障害の誘発に関与しているので、それが市場から撤退すべき薬物の最も一般的な理由とされている。化学物質は、異常な肝酵素のテストとしてのみ現れる肝臓への不顕性傷害をしばしば引き起こす。薬剤性肝障害は、すべての入院患者の5、すべての急性肝障害の50に該当している。いくつかのメカニズムには誘発肝傷害又は損傷過程の悪化に原因がある。多くの化学物質は、エネルギーを作り出すミトコンドリア、細胞内小器官を損傷することがある。その機能不全は、順番に肝細胞を傷つけ得る酸化剤の過剰な量を解放する。CYP2E1等のチトクロムP-450システム内の一部の酵素の活性化はまた、酸化ストレスを導き得る。肝細胞と胆管細胞への損傷は、肝臓内部の胆汁酸の蓄積を導く。これは、更に肝臓の損傷を促進することができる。クッパー細胞、脂肪貯蔵星状細胞及び白血球すなわち好中球及び単球等の非実質細胞はまた、機構の役割を有することができる。フェーズ1とフェーズ2:薬物代謝は通常、2つのフェーズに分けられる。フェーズ1の反応はフェーズ2に薬剤を準備していると考えられている。しかし、多くの化合物が直接、フェーズ2で代謝されることができる。フェーズ1の反応は、酸化、還元、加水分解、水和及び他の多くの希少な化学反応を伴う。これらのプロセスは、薬物の水への溶解度を増加させる傾向があると、より化学的に活性な、潜在的に有毒である代謝物を生成することができる。位相のほとんどは、2の反応は細胞質で行われ、トランスフェラーゼ酵素を介した内因性化合物との結合を含む。化学的に活性なフェーズ1の製品は、比較的不活性であり、このステップによって除去するのに適したレンダリングされる。チトクロムP-450として知られている小胞体内に位置する酵素群は、肝臓での代謝酵素中で最も重要なファミリーである。チトクロムP-450は、電子輸送鎖の末端オキシダーゼ成分である。それは単一の酵素ではなく、むしろ密接に関連した50個のアイソフォームからファミリーで構成され、それらの6個が薬物の90を代謝する。個々のP-450遺伝子産物には途方もない多様性があり、この不均一性は、肝臓がフェーズ1での化学物質の広大な配列ほぼすべての薬物を含むで酸化を行うことを可能としている。P450系の3つの重要な特性、遺伝的多様性、酵素活性変化及び競争的阻害は、薬剤誘発性毒性の役割を担っている。多くの物質は、P-450酵素のメカニズムに影響を与えることができる。薬はいくつかの方法で酵素ファミリーと相互作用する。チトクロムP-450酵素を修飾する薬は抑制物質又は誘導物質としてと呼ばれている。CYP抑制物質は、1つ又は複数のP-450酵素の代謝活性をブロックする。この効果は、通常すぐに発生する。一方、誘導物質はその合成を増加させることにより、P-450活性を増加させる。薬物の半減期を誘導することに応じて、酵素活性前の遅延が増加することは通常である。薬物副作用は、タイプA内因性又は薬理学的又はタイプB特有として分類されている。タイプA薬物反応は、すべての毒性の80の原因になる。薬理学的タイプA肝毒性を有する薬物や毒素は、予測可能な用量反応曲線を有するもの高濃度が肝臓の損傷をより引き起こすや、肝組織を直接損傷する又は代謝プロセスをブロックする等の毒性の十分に特徴付けられたメカニズムを有するものである。アセトアミノフェン過量摂取の場合と同様に、傷害のこのタイプは毒性のための或るしきい値に達した直後に発生する。特有な損傷は、影響を受けやすい個人において、薬剤が用量に関連せずに変りやすい潜伏期間を有する非予測肝毒性を引き起こすときに、警告なしに発生する。傷害のこのタイプは明確な用量反応又は時間的な関係を有しておらず、最も、予測モデルを有していない。FDAの承認プロセスの一環として厳密な臨床試験の後に、特有な肝毒性は市場からのいくつかの薬物、の撤退に導く事になり、トログリタゾンRezulin登録商標及びトロバフロキサシンTrovan登録商標が特有な肝毒性の2つの典型的な例である。抗凝固キシメラガトランExanta登録商標の開発は、肝臓損傷の懸念のために中止された。3.ATP感受性カリウムイオンチャネル及びmitoKATPチャネル:アデノシン三リン酸感受性カリウムチャネルKATPチャネルは、細胞の代謝レベルを細胞膜興奮性にリンクする分子センサーとしての役割を果たす。KATPチャネルは細胞内MgADPとの相互作用によって活性化され、ATPの高いレベルによって阻害される。1つのKATPチャネルタンパク質複合体は、4つのポア形成内向き整流カリウムチャネルサブユニットKir6.1又はKir6.2と、スルホニル尿素受容体と呼ばれる4つの規制βサブユニットSUR1又はSUR2A、2Bから構成されており、ATP結合カセットABCスーパーファミリーのメンバーである。KATPチャネルは、心筋細胞、膵β細胞、平滑筋細胞、及び神経細胞を含む異なる分子組成物を伴う様々な組織で発現しているSeinoSAnnuRevPhysiol19996133762。細胞原形質膜上での発現に加えて、KATPチャネルは、ミトコンドリアの内膜にInoueIetalNature19913522447及び核膜にIQuesadaetalPNAS20029995449549おいても発見されている。i.KATPチャネルの構造、機能及び関連疾患:他の内向き整流Kチャネルと同様に、Kir6.1及びKir6.2の各サブユニットは、2つの膜貫通セグメントM1とM2と細胞内のN末端及びC末端を伴うポア形成領域とを有するものであり、いくつかの潜在的なプロテインキナーゼAPKA又はプロテインキナーゼCPKCの依存性のリン酸化部位が含まれているSeinoSAnnuRevPhysiol19996133762。各SURサブユニットは、3つの膜貫通ドメインTMD0、1、2と2つの細胞内ヌクレオチド結合ドメインNBD1と2を含んでいる。SUR1及びSUR2は、それらの結合スルホニル尿素への親和性と組織分布に違いがあり、SUR2の2つのバリエーションは最後の42個のアミノ酸でお互いに異なっている。KirとSURサブユニット間の相互作用は、細胞表面上のKATPチャネルの発現を決定するだけでなく、ATP結合及び加水分解上のチャネル活性化を調節する。膵β細胞では、KATPチャネルはKir6.2とSUR1とで構成され、それらはインスリン分泌の調節に重要な役割を果たしている。血流中の高グルコースレベルはβ細胞における細胞質ATP濃度の上昇を誘導して、KATPチャネルの閉鎖をもたらし、これがβ細胞膜の脱分極と電位依存性Ca2チャネルと次のインスリン分泌の開放を導く。スルホニル尿素例えばトルブタミド及びグリピジド等と高い親和性でSUR1に結合し、KATPチャネル活性を刺激することによりインスリン分泌を抑制することができる。インスリン過剰分泌になるSUR1又はKir6.2の機能変異の損失は、乳児期の永続的な高インスリン血性低血糖PHHIを引き起こすことが分かっている。逆に、KATPチャネルの連続的な開口につながる変異が一過性又は永続性新生児糖尿病を引き起こし得る。長年にわたり様々な組織におけるKATPチャネルの分子組成物は、組換えKir6.xとSURxサブユニットの異なる組み合わせたものとして表現し、ネイティブのATP感受性カリウム電流と比較することによって決定した。KATPチャネルは、主に心筋細胞、Kir6.2をSUR2Bと平滑筋細胞や血管平滑筋細胞におけるKir6.1とKir6.2をSUR2BにおけるSUR2Aとで構成されている。心臓では、両方の筋細胞膜やミトコンドリアKATPチャネルは虚血性プレコンディショニングIPCの保護効果を有することが示唆されている。KATPチャネルは、膀胱、結腸、気道の平滑筋の収縮性の調節における強力な役割を果たしている。KATPチャネルはまた、サイクリックAMP依存PKAシグナル伝達経路や血管拡張薬によって開始サイクリックGMP依存PKG経路の調節を介して血管拡張に貢献している。ii.KATPチャネルオープナー、ブロッカー及びそれらの治療法としての潜在性:細胞内ATP/MgADP濃度による調節に加え、KATPチャネルは、カリウムチャネルオープナーKCOと呼ばれる構造多様化合物群並びにスルホニル尿素及びその他の非スルホニル尿素化学物質等の被ブロック化合物によっても、活性化され得るBabenkoAPetalJBiolChem2000275717720。異なるKCOsへのチャネル応答は、KATPチャネルの分子組成物に依存する。ジアゾキシドはKir6.2/SUR1チャネルを効果的に活性化するがKir6.2/SUR2Aチャンネルにほとんど影響を与えない一方で、ピナシジル、クロマカリム、及びニコランジルは優先的にKir6.2/SUR2チャネルを活性化する。キメラチャネルを使用した放射性結合のアッセイ及び研究は、KCOsがSURサブユニットに結合すること、特に、ジアゾキシドがTMD1及びピナシジルに結合し、又はその類似体がTMD2に結合すること、それらのKATPチャネルに及ぼす影響がNBDSとのヌクレオチド相互作用によって調節されていること、を示唆している。スルホニル尿素薬は、II型糖尿病の治療に用いられているが、それらがSUR1サブユニットに結合し、KATPチャネルを閉じて、インスリン分泌を導くからである。これらの薬剤はまたSUR2ベースKATPチャネルで同様の阻害を示す。また、選択的にKir6.1含有KATPチャネルを阻害することが報告されているU-37883A等の非スルホニル尿素ブロッカーもある。KATPチャネルのオープナーとブロッカーの両方は治療的可能性を有する。例えば、スルホニル尿素薬は、II型糖尿病の治療のために使用されている。また、選択的KATPチャネルブロッカーは活性電位持続時間を減らすことによって、不整脈を防止するために使用することができる。KATPチャネルオープナーは、高血圧、高インスリン血症、冠状動脈疾患の治療に用いられている。iii.肝細胞のKATPチャネル:KATPチャネルに関するほとんどの研究は、膵β細胞や心筋細胞で行われてきた。Malhiらは、ラット肝細胞における及びヒト肝癌細胞株における細胞増殖へのKATPチャネルとそれらの効果の発現を報告したMalhiHetalJBiolChem20002752605026057。しかし、他の研究では、ヒト肝癌細胞株HepG2の細胞表面上の現在少しKATPチャネルを有するが、KATPチャネルの発現がインスリンとグルコース輸送体GLUT2の形質移入によって誘導されることがあることを示しているLiuGJetalFASEBJ20031716821684。無気力ミトコンドリアKATPチャネルはラット肝ミトコンドリアから単離されたミトプラストを使用する単一チャネル記録によって1991年に最初に報告されたInoueIetalNature1991352244247。技術的な難しさとミトコンドリアの複雑さの故に、ミトコンドリアKATPチャネルの分子組成はまだ明確ではないRodrigoGCandStandenNBCurrentPharmaceuticalDesign20051119151940。ミトコンドリアKATPチャネルが心臓組織におけるIPCの保護の役割を果たしており、活性酸素種ROSの生成の調節を含むいくつかの可能なメカニズムを介して細胞のアポトーシスを抑制し、ミトコンドリア基質体積を維持し、ミトコンドリアCa2のレベルを調節していることが提案されているArdehaliHJBioenergeticsandBiomembranes200537171177。4.無標識アッセイを用いたミトコンドリアATP感受性カリウムイオンチャネルのスクリーニング:イオンチャネルは依然として標的の目立った被搾取クラスのままである。1つの制限要因は、生理学的に関連するスクリーニングツールの欠如である。従来及び自動化されたパッチクランプを含むパッチクランプ法は中規模のスループットへの低位性があり、人工的なシステムすなわち、操作された細胞、及び/又は人工的な測定環境の使用を伴う。最も重要なことは、これらのアッセイが単一細胞アッセイである。しかし、細胞応答は、単一細胞レベルで非常に不均一である。同様に重要なのは、これらのアッセイは、侵襲的であるということであり、必要な密封はイオンチャネル複合体の細胞構造を混乱させ得る。侵襲的であり、人工的なシステムすなわち、操作された細胞及び/又は色素標識分子の使用に加えて、イオン流動/蛍光アッセイは、細胞の背景を変更し得る染料又はイオンを予め充填する必要がある故、一般的に合致品質が低く、正の陽性及び負の陰性を誤ることが高くなる。これらの欠点を克服するために、本方法は無標識細胞アッセイを使用して、ネイティブ細胞における内因性イオンチャネルのためにここで選別モジュレーターを開示した。いくつかの実施形態では、開示された方法は、内因性mitoKATPイオンチャンネル等の選別モジュレーターに無標識細胞アッセイを使用している。いくつかの実施形態では、スクリーニングは、非従来型の細胞株で実行される。いくつかの実施形態では、mitoKATPチャネルの機能的役割は不明であるが、その活性化はバイオセンサー細胞アッセイにより強力に検出することができる。無標識バイオセンサー、特にSPRとRWG含む光学バイオセンサーは、非侵襲的であり、イオンチャネル、イオンチャネルを介して媒介された検知ゾーン内の細胞事項のリガンド誘導の動的再配分のリアルタイム検出を有効にする。結果のDMRシグナルは統合された細胞応答であり、イオンチャネル活性の全体の進化に従っている。リアルタイムの動態は、イオンチャネルとそれらの調節タンパク質に作用するモジュレーターの動作のモードの分類を可能にする。バイオセンサーのイオンチャネル細胞アッセイのさらなる利点は、これらに限定されるものではないが、バイオセンサーのイオンチャネルアッセイは、イオンチャネル活性を細胞生理学へのつなげるイオンチャネル調節するための新たな洞察を提供することができることを含んでいる。5.肝疾患を予防又は治療するための治療標的としての内因性mitoKATP:肝細胞又は肝組織における内因性mitoKATPチャネルの生物学的、生理学的及び病態生理学的役割は不明である。しかし、KATPチャネルは内生的に形質転換された肝細胞腫瘍細胞株HepG2細胞で発現していることを示すいくつかの証拠がある。開示された方法も、原発性肝細胞内での形質転換におけるmitoKATPチャネルの発現や、細胞生物学及び生理学の下流への内因性mitoKATPチャネル活性化や、原発性肝細胞内での薬物代謝におけるmitoKATPチャネル活性化の役割を、示す証拠を提供することがでる。開示された方法はまた、肝臓疾患を治療するための潜在的な治療標的として下流mitoKATP活性化標的例えば、JAK及びRhoキナーゼを識別することができる。i.Rhoキナーゼ:ROCKとも呼ばれるRhoキナーゼは、RhoAの主要なエフェクターである。ROCKは遺伝子産物、ROCKI及びROCKIIキナーゼ-1及び-2を含むRho関連のコイルドコイル、それぞれRokb/p160ROCKとRokaとして知られているに対応する約160kDaのセリン/スレオニンプロテインキナーゼである。2つのキナーゼは、触媒キナーゼドメインにおける89の同一性を有するヒトでは64の全体的同一性を有する。両方のキナーゼは、C1保存領域によって分割されたコイルドコイル領域とプレクストリン相同領域PHを含む。2つのROCKは空間的に特異な発現を有する。RhoキナーゼはそのCOOH末端ドメインによって自動調節され、そのキナーゼ活性を阻害する活性部位に折り返されている。RhoAの活性GTP結合形態だけはROCKに結合し、タンパク質の不活性化をブロックする。Rhoの活性形態がROCKに結合される限りは、キナーゼは活性化のままである。Rhoキナーゼはまた、アラキドン酸及びスフィンゴによって活性化され得る。カスパーゼによるCOOH末端抑制の切断は、アポトーシス中ROCK活性の増加をもたらすことができる。セリン/トレオニンキナーゼROCK1及びROCK2は活性化されたRhoGTPアーゼの直接の標的であり、異常なρ/ROCKシグナル伝達はヒト疾患の数に関与している。ROCK1及びROCK2は、成長因子、インテグリンの活性化、細胞のストレスを含む細胞外刺激の数に応じて活性化Rhoの下流にて活性化された酵素のAGCサブファミリーのメンバーに密接に関連している。ROCKの活性化は、力発生と形態学的変化を促進する事象の協調の一連を導く。これらの事象には、細胞の運動性、接着性、平滑筋収縮、神経突起退縮、及び食作用等のアクチン-ミオシン媒介プロセスの多くに直接貢献している。これらの応答は、細胞の種類に依存している場合もあるが、加えて、ROCKのキナーゼは、増殖、分化、アポトーシス、発癌性形質転換における役割を果たしている。ROCKの活性化は、多くの異なる下流標的の後続のリン酸化をもたらす。Rhoキナーゼ中で最もよく知られている標的は、ミオシン軽鎖MLCである。ミオシンホスファターゼもRhoキナーゼによってリン酸化され、この相互作用がリン酸化MLCの増加を引き起こす。また、ROCKはそれらの活性化ループ中の保存されたスレオニンでLIMキナーゼ1及びキナーゼ-2LIMK1とLIMK2をリン酸化し、LIMK活性及びコフィリンタンパク質のその後のリン酸化を増加して、それらのFアクチン切断活性をブロックする。アクチン細胞骨格の再構成に関与する他の多くのタンパク質は、ROCKによってリン酸化される。ROCK酵素は、細胞形態、ストレスファイバーの形成と機能、細胞接着、細胞遊走及び浸潤、上皮間葉移行、変換、食作用、アポトーシス、神経突起退縮、細胞質分裂、及び細胞分化を含む複数の細胞プロセスにおいて重要な役割を果たしている。このように、ROCKキナーゼは、癌、高血圧、痙攣、喘息、切迫早産、勃起不全、緑内障、アテローム性動脈硬化症、心筋肥大、神経疾患を含む様々な疾患を治療するために抑制物質の開発のための潜在的な標的を表す。喘息は、神経伝達物質と炎症性メディエーターを含む様々な刺激に気道過敏症及び気道に炎症細胞の浸潤及び活性化に関連付けられている初期及び後期喘息様反応を特徴とする慢性炎症性気道疾患である。喘息において、リクルート炎症細胞及び常在性構造細胞によって気道で放出される炎症性メディエーターmediatorsは、増加気管支収縮に起因する気道過敏症を招くことになる。また、慢性的炎症は慢性喘息における固定気道閉塞及び気道過敏症の進展に寄与する気道の再造形を駆り立てるように発現する。気道の再造形は、気道壁線維症及び気道を取り囲む収縮、気道平滑筋の増加が豊富で細胞外基質タンパク質の過剰な沈着等のいくつかの重要な機能が含まれる。気道過敏症は、筋肉中の固有機能の変化により、又は筋機能の神経性及び非神経性制御の変化のいずれかによって引き起こされる気道平滑筋収縮の増加により、部分的に説明することができる。また、気道過敏症の進展は、上皮層の損傷、粘膜の腫れ、杯細胞の過形成及び気道壁の再造形等の気道の物理的変化によって支えられている。気道再造形は、典型的には、網状薄膜の肥厚、上皮下細胞外基質の沈着線維化を増強、及び気道を取り囲む収縮気道平滑筋の割合の増加によって特徴付けられている。現在の喘息治療は、十分にこれらの機能を阻害することができない。現在、アレルギー性喘息の急性及び慢性の機能の治療は、主に、β2-アドレナリン受容体アゴニスト及びコルチコステロイドによってなされている。過度の気道平滑筋の収縮に起因する急性気管支痙攣は、ほとんどの患者において吸入β2-アドレナリン受容体アゴニストにより、それらが気道平滑筋弛緩を引き起こすように、十分に復帰させることができる。しかし、残念なことに、患者はβ2-アドレナリン受容体アゴニストに対する耐性を進展させることができ、これらの薬剤は、それらが、invitroで気道再造形例えば気道平滑筋の増殖の個々の機能を阻害することができるという報告にもかかわらず、invivoでの気道炎症と気道再造形に対する最小限の効果しかもたらさない。吸入コルチコステロイドは、永続的な、軽度、中等度及び重度の喘息を含むいくつかのアレルギー疾患の制御のために主力を表しており、喘息を特徴づける炎症過程の強度を低減する活性への広域スペクトルのためによく知られている。しかし、残念なことに、気道炎症例えば好中球のいくつかの機能は、コルチコステロイド治療の影響を比較的受けすることができる。また、コルチコステロイドは、気道再造形の抑制機能では部分的にのみ効果がある。よって、コルチコステロイドは気道再造形のいくつかの機能線維症、気道平滑筋の肥厚、粘液腺の肥大を効果的に防ぐものの、それらは気道壁の再造形の反転に不完全に有効である。β2-アドレナリン受容体アゴニスト及びコルチコステロイド治療に関連した制限は、代替薬物標的の調査と同定を推進させてきた。それらの中でも、Rhoキナーゼは、喘息における気道過敏症の治療のための潜在的な標的として浮上している。RhoキナーゼはRhoAのエフェクター分子、単量体GTP結合タンパク質であり、ミオシンホスファターゼの不活性化を介したCa2の鋭敏化を引き起こす。Rhoキナーゼの主要な生理機能は収縮、移行、及び細胞の増殖を含む。これらの作用は、喘息の病態生理学的特徴、すなわち、気流制限、気道過敏症、β-アドレナリン作動性脱鋭敏化、好酸球動員及び気道再造形に関連すると考えられている。6.JAK:ヤヌスキナーゼJAKファミリーは、免疫応答に関与する細胞の増殖や機能のサイトカイン依存性調節の役割を果たしている。現在、4つの既知の哺乳類JAKファミリーメンバー、JAK1ヤヌスキナーゼ-1としても知られている、JAK2ヤヌスキナーゼ-2として知られている、JAK3また、ヤヌスキナーゼ、白血球、JAKL、L-JAK、ヤヌスキナーゼ-3としても知られている及び、TYK2また、タンパク質-チロシンキナーゼTとして知られているがある。JAKタンパク質は120ないし140kDaの大きさの範囲で変動し、7つの保存JAKホモロジーJHドメインを含み、これらの1つが機能触媒キナーゼドメインであり、他は、調節機能を潜在的に提供し、及び/又はSTATのためのドッキングサイトとして機能する偽性キナーゼドメインである。JAKキナーゼのレベルでのシグナル伝達をブロックすることは、いくつか例を挙げれば炎症性疾患、自己免疫疾患や骨髄増殖性疾患、人間の癌を含む多くの疾患の治療法を開発するための可能性を秘めている。JAKキナーゼのモジュレーター又は阻害は、乾癬及び皮膚過敏症等の皮膚免疫疾患を患っている患者の治療上の利点を有する。したがって、ヤヌスキナーゼ又は関連するキナーゼの抑制物質が広く求められ、いくつかの出版物は化合物の効果的な知見を報告する。JAK-関連疾患のさらなる例としては、多発性硬化症等の自己免疫疾患、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、タイプI型糖尿病、狼瘡、乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、自己免疫性甲状腺障害、等が挙げられる。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、尋常性天疱瘡PV又は水疱性類天疱瘡BP等の自己免疫性水疱性皮膚疾患である。JAK-関連疾患のさらなる例は、喘息、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎や鼻炎等のアレルギー症状がある。JAK-関連疾患のさらなる例は、エプスタインバーウイルスEBV、B型肝炎、C型肝炎、HIV、HTLV1、水痘帯状疱疹ウイルスVZVとヒトパピローマウイルスHPV等のウイルスによる疾患が含まれる。更に、JAK-関連疾患は、炎症及び炎症性疾患を含む。例えば炎症性疾患は、眼の炎症性疾患例えば、虹彩炎、ぶどう膜炎、強膜炎、結膜炎、又は関連疾患、気道の炎症性疾患例えば、アレルギー性鼻炎又は副鼻腔炎や鼻や副鼻腔等を含む上気道又は気管支炎、慢性閉塞性肺疾患等を含む下気道、心筋炎等の炎症性筋疾患、及び他の炎症性疾患を含む。7.アコースティックバイオセンサー:水晶振動子等の音響バイオセンサーは、細胞応答を特徴付けるための音波を利用している。音響波は、一般的に圧電使用して生成され、受信される。音響バイオセンサーは、多くの場合、共振型センサ構成で動作するように設計されている。典型的なセットアップにおいて、薄い石英ディスクは2つの金電極間に挟まれている。電極間の交流信号の印加は、励起と敏感な発振回路として動作する水晶発振を導く。出力センサ信号は共振周波数と動抵抗がある。バイオセンサー表面が硬質である場合、共振周波数は主に吸着した物質の総質量の線形関数である。液体環境下での音響センサ応答は、結合した分子の質量だけではなく、形成されたる分子複合体又は生細胞の粘弾性特性の変化と電荷に、敏感である。共振周波数と結晶に関連する細胞の運動抵抗を測定することにより、細胞接着や細胞毒性を含む細胞プロセスをリアルタイムで調べることができる。8.電気バイオセンサー:電気バイオセンサーは、細胞接着を含む細胞応答を特徴づけるインピーダンスを採用している。典型的なセットアップでは、生きている細胞は、統合された電極アレイを埋め込んだことを特徴とするバイオセンサー表面に接触されている。定電圧かつ高周波の小ACパルスは、細胞の存在によって妨害された電極間に電界を生成するために使用されている。電気パルスは、統合された電気回路を使用して現場で生成され、回路を流れる電流が時間とともに続く。得られたインピーダンスは細胞層の電気伝導度の変化の尺度である。細胞の形質膜は、細胞間や下に流れる電流を強制的に絶縁材として作用し、インピーダンスの非常に豊富な変化をもたらす。インピーダンスベースの測定は、細胞接着や拡散、細胞微動、細胞の形態学的変化、及び細胞死、細胞シグナル伝達を含む細胞の事象の広い範囲を研究するために適用されている。9.光バイオセンサー:光バイオセンサーは、細胞応答を特徴付けるために表面に結合した電磁波を主に採用している。表面に結合した波は、光励起された表面プラズモン表面プラズモン共鳴、SPRのいずれかを使用して、金基板上又は導波モード共鳴共振導波路格子、RWG結合された回折格子を用いた誘電体基板上にて達成することができる。中赤外SPRを含むSPRの場合、読み出しは、反射光の強度の最小のものが発生する共鳴角である。同様に、フォトニック結晶バイオセンサー等、バイオセンサーをRWGに、読み出しは最大内部結合効率が達成される共鳴角又は波長である。共鳴角又は波長はセンサ表面又はその近くで局所的な屈折率の関数である。アッセイ実行のための流路の少数に限定されているSPRとは異なり、RWGバイオセンサーは、計測及びアッセイにおける最近の進歩の故に、ハイスループットスクリーニングHTSと細胞アッセイに適している。典型的なRWGでは、細胞を直接、高屈折率材料から成るバイオセンサーが埋め込まれたマイクロタイタープレートのウェルに配置される。屈折率の局所的な変化は、刺激による生細胞の動的質量再分配DMRシグナルを導く。これらのバイオセンサーは、受容体生物学、リガンドの薬理学、細胞接着を含む多様な細胞プロセスを研究するために使用されてきている。本発明は、コーニングのエピック登録商標システムなどの共振導波路回折格子バイオセンサーを好ましくは使用している。エピック登録商標システムは、市販の波長統合システム又は角度インターロゲーションシステムangularinterrogationsystem又は掃引波長イメージングシステムsweptwavelengthimagingsystemコーニング社、コーニング、ニューヨーク州を含む。商用システムでは、ロボット工学とオンボードの液体ハンドリングユニット、又はロボットを使用した外部液体アクセサリーシステムで温度制御ユニット、光学検出部と、から構成されている。検出部は、統合された光ファイバを中心に配置され、約7又は15秒の時間間隔で、細胞応答の運動測定を可能にする。化合物溶液は、オンボードの液体ハンドリングユニット又は外部液体アクセサリーシステム両者は従来の液体ハンドリングシステムを使用しているを使用して導入された。高分解能イメージングシステムだけでなく高い取得光バイオセンサーシステムを含むさまざまなRWGバイオセンサーシステムを使用することもできる。10.バイオセンサー及びバイオセンサー細胞アッセイ:無標識の細胞ベースアッセイは、一般的にバイオセンサーを用いて生細胞における分子誘発性の応答を監視する。当該分子は天然のもの又は人工のものであることができ、精製されている又は浄化されていない混合物であることができる。典型的な場合、バイオセンサーは、光学的トランスデューサ、電気的トランスデューサ、熱量的トランスデューサ、音響的トランスデューサ、磁気的トランスデューサなどのトランスデューサを用いて、バイオセンサーに接触した細胞における分子認識事象又は分子誘発性の変化を定量化可能なシグナルに変換する。これら無標識のバイオセンサーは分子相互作用の分析に使用されることができ、当該分析は、どのように分子錯体が形成及び分離するかを経時的に特性化すること、又は細胞応答についてはどのように細胞が刺激に対して応答するかを特性化することを含む。本方法に適用可能なバイオセンサーは、例えば、フォトニック結晶バイオセンサー、共振ミラー、エリプソメータを含む表面プラズモン共振型SPRバイオセンサー及び共振導波路回折格子型RWGバイオセンサーなどの光学バイオセンサーシステム、並びに生体インピーダンスシステムなどの電気バイオセンサーシステムを含む。i.SPRバイオセンサーとそのシステム:SPRは入射光の範囲をカバーするプリズムに依存しており、プリズムは、くさび状の偏光された光を、導電性金属フィルム例えば金を含む平面ガラス基板に導き、これによって表面プラズモンを励起する。発生するエバネセント波は金層内の自由電子雲と相互作用して吸収され、電子電荷密度波すなわち表面プラズモンを生成し、反射光の強度を低下させる。この発生する強度が最小の共振角度は、センサ表面の反対の面にある金層に近接した溶液の屈折率の関数である。ii.RWGバイオセンサーとシステム:RWGバイオセンサーは、例えば、基板例えばガラス、回折格子又は周期構造が組み込まれた導波路薄膜、及び細胞層を含み得る。RWGバイオセンサーは、回折格子による光の導波路への共振結合を使用して溶液と表面との接触面における全反射を導き、これによって当該接触面において電磁場を生成する。この電磁場の性質は一過性のものであり、これは当該電磁場がセンサ表面から急激に減衰することを意味し、当該電磁場が初期値の1/eに減衰する距離は侵入深さとして知られており、侵入深さは特定のRWGバイオセンサー構成の関数であるが、典型的な場合約200nmである。このタイプのバイオセンサーはエバネセント波を利用してバイオセンサー表面又はその近傍における細胞層のリガンド誘発性変化を特性化する。RWG機器は角度シフト又は波長シフトの測定に基づいたシステムへさらに分割されることができる。波長シフトの測定において、一定の角度の入射波長の範囲をカバーする偏光された光が使用されて導波路を照射し、特定の波長の光は当該導波路に結合されかつ当該導波路に沿って伝播する。一方、角度シフトの機器において、センサは単色光を用いて投射され、当該光が共振的に結合される角度が測定される。共振条件はバイオセンサーの表面に直接接触している細胞層例えば、細胞密度、細胞付着、及び細胞状態の影響を受ける。リガンド又は検体が生細胞における細胞標的例えば、GPCR、イオンチャネル、キナーゼと相互作用した場合、細胞層内の局所的な屈折率の変化は共振角度又は波長のシフトとして検出されることができる。コーニング登録商標Epic登録商標システムは、無標識の生物化学的すなわち細胞ベースのアッセイのためにRWGバイオセンサーを使用するコーニング社、コーニング、NY。Epic登録商標システムは、RWGプレートリーダ及びSBS生体分子スクリーニング協会標準のマイクロタイタープレートで構成されている。当該プレートリーダにおける検出システムは、細胞のリガンド誘発性変化を受けると、統合されたファイバ光学系を用いて入射光の波長シフトを測定する。一組の照射-検出ヘッドは直線的に設けられ、これによって反射スペクトルは384ウェルのマイクロプレートのコラム内のウェルの各々から同時に収集される。プレート全体が走査され、センサの各々が複数回アドレス指定され、コラムの各々が順次アドレス指定される。入射光の波長は分析用に収集されかつ使用される。温度管理ユニットが機器に含まれることができ、これによって温度変化による入射波長の擬似シフトが最小限にする。測定された応答は細胞の集団の平均的な応答を表している。当該システムの様々な機能が自動化されることができ例えばサンプルローディング、また、多重化されることができる例えば96ウェル又は386ウェルのマイクロタイタープレート。液体操作はオンボードの液体操作部又は外部の付属液体操作部によって行われる。特に、分子溶液は、下部に培養された細胞を含んでいる細胞アッセイプレートのウェルへ直接付加又はピペッティングされる。当該細胞アッセイプレートは細胞を覆う特定のアッセイバッファ溶液の領域を含む。さらに、特定の回数のピペッティングによる単純な混合ステップは分子付加ステップに組み込まれることができる。iii.電気バイオセンサーとそのシステム:電気バイオセンサーは、基板例えばプラスチック、電極、及び細胞層で構成されている。この電気的検出方法において、細胞は基板上に設けられた小さな金電極上において培養され、システムの電気インピーダンスは時間に従う。当該インピーダンスは細胞層の導電性の変化の尺度である。典型的な場合、固定又は変更された周波数における小さな一定の電圧が電極又は電極アレイに加えられ、回路の電流が経時的に監視される。電流のリガンド誘発性変化は細胞応答の尺度を提供する。全ての細胞検知に対するインピーダンス測定は1984年に初めて実現された。それ以降、インピーダンスベースの測定は、細胞付着、細胞拡散、細胞の微細動作、細胞の形態変化、及び細胞死を含む幅広い細胞事象の研究に用いられている。従来のインピーダンスシステムは、小さな検出電極及び大きな基準電極を使用したため、大きなアッセイのばらつきに悩まされている。このばらつきを克服するために、CellKeyシステムMDSSciex社、南サンフランシスコ、CA、RT-CESACEABiosciences社、サンディエゴ、CAなどの最新世代のシステムは、微小電極アレイを有する集積回路を使用する。iv.高い空間分解能のバイオセンサー画像化システム:SPR画像化システム、エリプソメトリ画像化システム、及びRWG画像化システムを含む光学バイオセンサー画像化システムは、高い空間分解能を提供し、本開示の実施例に使用されることができる。例えば、SPRイメージャ登録商標IIGWCTechnologies社は、プリズムに結合したSPRを使用し、固定入射角度にてSPR測定を行い、CCDカメラを用いて反射光を収集する。表面の変化は反射率変化として記録される。従って、SPR画像化は、すべてのアレイの要素に対する測定結果を同時に収集する。画像化ベースの用途にはRWGバイオセンサーに基づいた波長走査型光学インターロゲーションシステムsweptwavelengthopticalinterrogationsystemが用いられることができる。このシステムにおいて、センサすなわちマイクロプレート型のRWGバイオセンサーのアレイに投射するのに高速の調節可能レーザ源が使用される。当該センサのスペクトルは、当該センサから反射された光学パワーをレーザ波長が走査する際の時間の関数として検出することによって解釈されることができ、コンピュータ化された共振波長インターロゲーションモデリングを用いた測定データの分析は、固定化受容体又は細胞層を有するバイオセンサーの空間分解された画像の説明を与える。画像センサの使用は、画像化ベースのインターロゲーション構成につながる。二次元の無標識画像は部品を移動することなく得られることができる。一方、横磁場モードすなわちp-偏光されたTM0モードの角度インターロゲーションシステムが使用されることもできる。このシステムは、約200μmx3000μm又は200μmx2000μmの大きさのRWGセンサに照射するような各光ビームアレイを生成する投光システムと、これらセンサから反射された光ビームの角度の変化を記録するCCDカメラベースの受光システムと、で構成されている。アレイ化された光ビームは、回折光学レンズと組み合わせたビームスプリッタを用いて得られることができる。このシステムは、最大49センサ7x7ウェルセンサアレイ内が3秒ごとに同時にサンプリングされること又は全384ウェルのマイクロプレートが10秒毎に同時にサンプリングされることを可能にする。さらに、波長走査型インターロゲーションシステムが使用されることもできる。このシステムにおいて、一定の角度の入射波長の範囲をカバーする偏光された光が導波路回折格子型バイオセンサーに亘って照射及び走査されるのに使用され、各位置における反射光が同時に記録されることができる。走査中にバイオセンサーにおける高分解能画像が得られることもできる。v.バイオセンサーパラメータ:RWGバイオセンサー又は生体インピーダンスバイオセンサーなどの無標識バイオセンサーはリガンド誘発性の細胞応答をリアルタイムで追跡することができる。非侵襲的かつ操作不要のバイオセンサーの細胞アッセイは細胞シグナル伝達の予備知識を必要としない。得られるバイオセンサーシグナルはリガンド薬理及び受容体シグナル伝達に関する高度な情報を含む。多重パラメータは刺激された細胞の動的バイオセンサー応答から抽出されることができる。これらパラメータは動態全体、段階、シグナル振幅、を含み、さらに1の段階から他の段階への遷移時間を含む動態パラメータ、及び各段階の動態を含むが、これらに限定されないFangYandFerrieAMlabelfreeopticalbiosensorforliganddirectedfunctionalselectivityactingonβ2adrenoceptorinlivingcellsFEBSLett582558564FangYetalCharacteristicsofdynamicmassredistributionofEGFreceptorsignalinginlivingcellsmeasuredwithlabelfreeopticalbiosensorsAnalChem7757205725FangYetalResonantwaveguidegratingbiosensorforlivingcellsensingBiophysJ9119251940、参照。クラスタリング又は類似の分析では、各ノードすなわち、分子に対してエッジの属性すなわち、バイオセンサー、細胞応答データが異なることがある。例えば、細胞内の分子プロファイル一次的、二次的では、エッジの属性は、特定の運動パラメータ例えば、DMRシグナルのDMR事象の振幅や速度、又は所定時間の刺激後のバイオセンサーシグナルの実際の値、又は複数又はすべての時間ポイントの刺激後のバイオセンサーシグナルの実際の値であることがある。分子バイオセンサーの二次的プロファイルに対するエッジの属性はまた、それぞれのマーカーの一次的プロファイルに正規化した後の特定のマーカーに対するバイオセンサーシグナルの出力パラメータの変調率とすることができる。その結果、集団のエッジの属性はノード分子の無標識薬理学を表示するための効果的な意味を表し、開示された方法に基づいて分子の既知の分子との類似性が比較でき、分子を決定することができるようになる。a.バイオセンサー出力パラメータ:多くの異なるバイオセンサーの出力パラメータが本明細書で説明されている。例えば、細胞内の刺激で誘発される指向質量再分配の動態を規定する6つのパラメータとして、全体の動態すなわち、形状、応答の位相休止A431細胞におけるEGF誘導DMRシグナルの特定の例では、ポジティブな動的質量再分配P-DMR、ネガティブな動的質量再分配N-DMR、及び回復したポジティブな動的質量再分配RP-DMRの細胞応答に関連する3つの主要な位相がある。、動態、各相の合計持続時間、各DMRの事象の合計振幅、並びにP-DMR相からN-DMR相へ若しくはN-DMR相からRP-DMR相への遷移時間であり得る。動的質量再分配は、しばしば、動的な細胞物質の再配布又は方向性質量の再分配と呼ばれている。他のバイオセンサーの出力パラメータは、共振ピークから入手することができる。例えば、ピークの位置、強度、ピーク形状及びピーク半値幅PWHMを使用することができる。バイオセンサーの出力パラメータはまた、バイオセンサーの共振バンド画像から取得することもできる。バンドの形状、位置、強度、分布及び幅の5つの追加特徴のこれらのパラメータはすべて、本明細書に開示されるようなバイオセンサーを使用して、任意の細胞アッセイの任意のアプリケーションのために独立して、又は一緒に使用することができる。任意のサブセット又は組み合わせでパラメータを使用すると、細胞受容体アッセイのためのシグネチャやEGF受容体ベースのアッセイのために特定のシグネチャなどの所定のアッセイ又は特定のアッセイの所定のバリエーションのためのシグネチャを生成することができる。A刺激誘発指向質量再分配の動態に関連するパラメータ:刺激誘発DMRの動態に関連する多くのバイオセンサーの出力パラメータがある。これらのパラメータは変化率を見ており、変化率は細胞へ発生している刺激の事象としてバイオセンサーデータ出力に発生している。刺激事象は、例えば、培地への分子の添加、培養培地から分子の除去、温度の変化やpHの変化、又は、細胞への放射線の導入などの細胞の状態を変化させ得る任意の事象である。刺激事象は、刺激事象によって生成された細胞上の方向性の質量再分配など何らかの効果で刺激効果を産生され得る。刺激事象は、分子、化学物質、生化学物質、生物学物質、ポリマーである可能性がある。生化学物質又は生物学物質は、ペプチド、合成ペプチド又は天然に存在するペプチドであり得る。例えば、多くの異なるペプチドはブラジキニン炎症性ペプチド、プロテアーゼ酵素トロンビン、及び血圧調節アンジオテンシンペプチドを含むシグナル伝達分子として機能する。これら3つのタンパク質は、それらの配列と生理学で区別され、別の細胞表面受容体を介して作用する一方で、それらは細胞表面受容体のGタンパク質共役受容体GPCRと呼ばれる共通の分類に分けられている。GPCRの他のポリペプチドリガンドは、バソプレッシン、オキシトシン、ソマトスタチン、ニューロペプチドY、GnRH、黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺ホルモン、オレキシン、ウロテンシンII、エンドルフィン、エンケファリン、及び多くの他のものが含まれている。GPCRは、ペプチドリガンドに応答するだけでなく小分子神経伝達物質アセチルコリン、ドーパミン、セロトニン、アドレナリン、光、臭気物質、味、脂質、ヌクレオチド、イオンにも応答する広範かつ多様な遺伝子ファミリーに属している。GPCRにより使用されるメインのシグナル伝達機構は、細胞内カルシウム放出及びcAMP産生を含む下流側の第2メッセンジャーシステムに結合したGタンパク質とGTPaseタンパク質とが相互作用することである。ペプチドGPCRによって使用される細胞内シグナル伝達システムは、すべてのGPCRで使用されるものに類似しており、それらが相互作用するGタンパク質及び活性化されるセカンドメッセンジャーシステムに応じて一般的に分類される。Gs共役GPCRのために、受容体によるGタンパク質Gsの活性化は、アデニル酸シクラーゼの活性化と下流のサイクリックAMPの産生を刺激しつつ、Gi共役受容体はcAMPの産生を阻害する。cAMP産生の主要な結果の一つは、プロテインキナーゼAの活性化である。Gq共役受容体は、ホスホリパーゼC、放出IP3及びジアシルグリセロールを刺激する。IP3はER内の受容体に結合し、細胞内のカルシウムの放出、及びプロテインキナーゼCのその後の活性化、カルモジュリン依存性経路を引き起こす。GPCRのためのこれらのセカンドメッセンジャーシグナリングシステムに加えて、GPCRの経路は、チロシンキナーゼ成長因子受容体及びMapキナーゼ経路を含む他のシグナル伝達経路とのクロストークを示す。EGF受容体のような受容体チロシンキナーゼ又は接着斑複合体のいずれかのトランス活性化は、アダプタータンパク質She、Grb2及びSos、並びにErk1とErk2を活性化する下流のMapキナーゼを介してras活性化を刺激することができる。Srcキナーゼはまた、GPCRによるras及びMapキナーゼ経路の活性化に不可欠な媒介の役割を果たす可能性がある。いくつかの刺激事象が発生する可能性があることは可能であるが、データ出力に変更はない。この状況はまだ刺激事象であり、なぜならば、細胞の条件が指向性質量再配布又は細胞又は細胞培養液中で変化を引き起こし得る何らかの方法で変化するからである。本明細書に開示されるように特定のシグネチャが任意のアッセイ又は任意の細胞の状態のために決定され得ることができる、ことが理解される。多数のシグネチャが異なるアッセイのため本明細書に開示されているが、任意のアッセイのために本明細書中では実行され、そのアッセイのシグネチャを決定することができる。任意の所定のアッセイのために複数のシグネチャが存在し得ることも可能であり、そして各々は本明細書に記載のように決定されることができる。バイオセンサーの出力データを収集した後、1つ以上のパラメータを見る、すなわち、所定のアッセイのためのシグネチャが取得され得る。最適なシグネチャを識別するために複数の実験を実行する必要があり、そして最適なシグネチャを見つけるために異なる条件下で実験を行う必要があり得るが、これを行うことができる。これは、本明細書に開示の方法のいずれかが識別又は決定又は提供する工程を有することができることを理解され、例えば、シグネチャはそれらの上に追加される。1全体の動態:見られ得るパラメータの1つは、データ出力の全体的な動態であり、この全体的な動態パラメータは、データ収集の完全な運動像を観察する。観察することができる総合的な動態の一態様は、時間をかけてデータ出力によって生成される曲線の形状の変化である。したがってデータ出力によって生成される曲線の形状は、変更され、又は刺激事象の発生時の着実な滞在することができる。その変化の方向性は、全体の質量分布を示し、例えば、ポジティブなDMRP-DMR位相では、センサのエバネセントテールevanescenttail以内での増加質量を示し、正味ゼロDMRはセンサのエバネセントテール内の質量の正味の変化が殆ど存在しないことを示唆し、一方、ネガティブなDMRはセンサのエバネセントテール内の正味死亡質量netdeceasedmassを示す。光バイオセンサーを用いて得られた刺激誘発細胞応答の全体的な動態は、単相P-DMR、N-DMRもしくは正味ゼロ-DMRのいずれか、又は2位相例えば、これらの3相のいずれかの2相の組み合わせが可能、又は3相、又は多相で構成される例えば、複数P-DMRが時間経過中に発生可能から構成される。2応答相:時間の関数として観測することができる別のパラメータは、データ出力内で発生する位相の変化である。無標識バイオセンサーは、曲線を生成するようにグラフ化することができるデータ出力を生成する。この曲線は遷移点を持つことになり、例えば、データは増加状態から減少状態に変わり、又はその逆に変わる。これらの変化は、相転移と呼ぶことができ、そして、それらが発生した時刻とそれらが取る形状とはバイオセンサー出力パラメータとしては、例えば、使用することができる。例えば、P-DMR、正味ゼロDMR、N-DMR、又はRP-DMRがある場合がある。P-DMR、N-DMR、及びRP-DMRの振幅は別個のバイオセンサー出力パラメータとして測定されることができる。3動態:もう一つのバイオセンサーの出力パラメータは、例えば、相転移が完了した時点で速度などのデータ出力の態様のいずれかの動態であり得る。例えば、どのくらいの速さで相転移が完了するか、又はデータ出力を完了するにはどのくらいの時間がかかるかが、動態であり得る。測定することができる動態のもう一つの例は、データ出力の全体的な位相にかかる時間長さであり得る。もう一つの例は、P-DMR相とN-DMR相のいずれか又は両方の時間の合計持続時間であり得る。もう一つの例は、P-DMR相とN-DMR相のいずれか又は両方の合計振幅を取得するのにかかる速さ又は時間であり得る。もう一つの例は、P-DMRからN-DMR相までの遷移時間τであり得る。P-DMR相とN-DMR相の事象の両方の動態又は相も測定することができる。B共振ピークに関連するパラメータ:所定導波モードの共振ピークは、例えば、光強度に対するバイオセンサーへの光のカップリングの角度を、又は、光強度に対するバイオセンサーへのカップリングした光の角度を調べることで発生したデータ出力のタイプである。光導波路光モードスペクトルは、バイオセンサーを照らすために光の角度の広い範囲を使用し、そして角度の関数として結合強度の強度を監視する方法における、光強度に対するバイオセンサーへの光のカップリングの角度を調べることで発生したデータ出力のタイプである。このスペクトルでは、複数の導波モードの複数の共振ピークが共に発生する。共振ピークやOWLSスペクトル背後原理が同一であるため、所定導波モードの共振ピーク、又は多導波モードのOWLSスペクトルの共振ピークを、交換可能にバイオセンサーでは使用することができる。光の特定の波長が発生したとき又は光が特定の角度でバイオセンサーに当たるように生成された場合、光源から出射された光は、バイオセンサーの中にて結合され、この結合は、バイオセンサーから生じるシグナルを増加させる。光の角度又は波長を結合の関数として強度内のこの変化は共振ピークと呼ばれている。センサの個別の所定モードは、異なる特性を持つ類似の共振ピークを生じさせることができる。DMR又は細胞効果を評価するこのピークに関連して使用できる、所定モードの共振ピーク又は共振スペクトルを定義する異なるパラメータが多数ある。これらのサブセットは以下で議論される。1ピーク位置:データ出力が共振ピークの発生のピークでグラフ化されている場合、例えば、光の特定の波長で又はでバイオセンサーへの光結合のための特定の入射角において、ピークは発生している。この発生の位置での角度又は波長は、刺激事象に応答して質量再分配又は細胞の事象が原因で変化することがある。例えば、EGF受容体などの特定の受容体に対する潜在的な成長因子の存在下では、培養細胞の共振ピークの位置はカップリングの角度又はカップリングの波長を増加又は減少させることができ、結果として、共振ピークの中央位置の変化になる。ピーク強度の位置が測定され、それが測定されるべき良い点とすると、75のピーク強度又は50のピーク強度又は25のピーク強度、又は66のピーク強度又は45のピーク強度など、例えばピーク強度の百分の1から100までのすべてのレベルが開示されたと見なされる共振ピークに沿った任意の点の位置が測定され得ることが理解される。しかし、ピーク強度以外のポイントを使用する場合、ピーク強度の前及びピーク強度の後に、例えば、45のピーク強度になる位置が常にあり得る。したがって、ピーク強度以外の強度のために、その強度が発生するピーク内には二つが常にあり得る。これらの非ピーク強度の位置はバイオセンサーの出力パラメータとして利用することができるが、強度の位置が事前ピーク強度又は事後ピーク強度である場合、人は単に知っている必要がある。2強度:共振ピークの特定の強度の位置はバイオセンサー出力パラメータとして使用できるのと同じように、強度自体の量はまた、バイオセンサー出力パラメータになることができる。1つの特に関連強度は所定モードの共振ピークの最大強度である。この最大強度の大きさは、ちょうど位置のように、細胞又は細胞培養に特に効果があり刺激事象の存在に基づいて変化することがあり、この変化が測定されシグネチャに使用される。ちょうど共振ピーク位置と同様に、共振ピーク強度は、ピーク内の任意の強度や位置で測定することができる。例えば、バイオセンサー出力パラメータとして、最大強度の50、又は最大強度の30、又は最大強度の70、又は1から100の間の任意の割合が強度として使用することができる。同様に、強度の位置と同様に、例えば45最大強度のように最大強度以外の強度が使用される場合、非最大強度を使用して、この強度を有する共振ピーク内に常に二箇所があり得る。強度位置パラメータと同様に行うことができるが、強度が事前最大強度又は事後最大強度あるかどうかを考慮する必要がある。例えば、元の細胞の集密度が50前後50集密度にて、センサ表面の細胞が最大PWHM値へ導く傾向があるであるとき、抑制物質及び活性化物質の両方の存在は、培養後のピーク半値幅PWHMの減少結果をもたらす。しかし、合計角度シフトすなわち、共振ピークの中心位置のような他のバイオセンサー出力パラメータは、まったく効果を有しない分子からの活性化物質から抑制物質を区別するために用いることができる。図6Bに例示するように、PWHMはピークの最大強度高さの半分で、ピーク上の点の間に引かれた線の長さである。抑制物質は、例えば、細胞増殖、全く治療なしでの細胞のためのシフトよりも小さい角速シフトを生じさせる傾向がある一方で、活性化物質は、すべてのセンサ上の細胞密度が本質的に同一又はほぼ同じである場合の処理をしていない細胞を有するセンサに比べて、大きな角度シフトを生じさせる傾向がある。細胞増殖を阻害抑制物質などする、又は刺激活性化物質などする分子の効力又は能力は、すべての分子の濃度が同じである場合、PWHM値に対するそれらの効果によって決定することができる。PWHM変化の所定値は、共振ピークの中心位置の変化との組み合わせで、抑制物質又は活性化物質を除外するために使用することができる。所定モードの共振ピークを検出するために使用されるインターロゲーションシステムに応じて、PWHMの単位又は値が変化させられ得る。例えば、角度インターロゲーションシステムでは、単位は度とすることができる。度のPWHMにおける変化は、例えば、1000分の1、1000分の2、1000分の3、1000分の5、1000分の7、又は1000分の10であり得る。3ピーク形状:使用することができるもう一つのバイオセンサーの出力パラメータは、全体的なピーク形状であるか、又はある強度の特定のピーク間の形状がある。例えば、半最大ピーク強度のピーク形状、又は他の任意の強度30、40、70、又は88、又は20~100の間のいずれかパーセントのピーク形状は、バイオセンサーの出力パラメータとして使用することができる。形状は特定の強度の上又は下のピーク面積によって特徴づけることができる。例えば、半最大ピーク強度では、事前ピーク強度である点とポストピーク強度である点とがある。1つのラインはこれらの2点の間に描画することができ、そして、共振ピーク内のこのラインより上の面積、又は、共振ピーク内のこのラインより下の面積が決定され、バイオセンサーの出力パラメータになることができる。所定ピークの積分面積はまた、細胞に作用する分子の影響を分析するために使用することができると理解されている。もう一つの形状関連バイオセンサーの出力パラメータは、特定のピーク強度の共振ピークの幅があることができる。例えば、ピーク強度の50である共振ピーク上の事前ピーク強度の点とピーク強度の50である共振ピーク上の事後ピーク強度のライン上の点との間の線の大きさを測定することにより、半最大ピーク強度HMPWでの共振ピークの幅が、求められることができる。この測定は、次にバイオセンサー出力パラメータとして使用することができる。これは、共振ピークの幅がピーク強度の20~100の間で任意の強度に対して、このようにして決定され得ることが理解される。この例は、図6bのような数字は、全体を通して見ることができる。Cバイオセンサーの共振バンド画像に関連したパラメータ:今では、ほとんどの光学バイオセンサーは、センサ表面に固定化されたプローブ分子への標的分子の結合、又は一度毎のセンサ面上の細胞接着や細胞の生存を監視している。複数のバイオセンサーに結合事象又は細胞接着や細胞の生存のために、研究者は、一般的に、時間順次にこれらの事象を監視する。よって、直接異なるセンサ間の比較が困難な場合がある。さらに、波長又は角度のインターロゲーションであるかどうか、これらの検出システムは、センサを照らすために小さなスポット約100から500μm直径のレーザー光を利用する。応答又は共振ピークは、照射領域から細胞応答の平均を表す。、96ウェルマイクロプレートバイオセンサー例えば、コーニングのEpicマイクロプレートについては、それぞれのRWGセンサは約3×3mmであり、各ウェルの底にあり、一方、センサは一般的に384ウェルマイクロプレートフォーマットのために1×1mm2の寸法を有している。したがって、現在のセンサ技術を用いて得られた応答は、センサ表面のごく一部だけで現れる。理想的には、検出システムは1つだけを許してはならない同時に複数のバイオセンサーに付着した生細胞の応答を監視するだけでなく、比較的大きな面積又は各センサの複数の領域からのシグナルインターロゲーションを可能とする。撮像光学インターロゲーションシステム例えば、CCDカメラを介した共振バンドはデータ出力の1つのタイプであり、該データ出力は物理的な位置と単一センサに亘って定義された場所で反射光すなわち、外部結合したの強度を、例えば、見ることによって発生したものである。反射光は、内部結合した光に直接関係している。代わりに、共振バンドは、小型のレーザースポットを使用しセンサを照らし、一次元又は二次元でセンサ全体を横切って走査し、所定の導波モードの共振ピークを収集する方法で、スキャンインターロゲーションシステムを通じて収集することができる。センサ内の位置の関数としての共振ピーク又は光強度は最後に再構成され、センサの共振バンドを形成することができる。バイオセンサーでは、光の特定の波長が発生したとき、又は光が特定の角度でバイオセンサーに当たるように生成されたとき、外部結合した光は、センサ面での又は近くの屈折率変化の関数として変化し、この変化が撮像システムにより収集された各センサの共振帯域の特性のシフトを引き起こす。さらに、培養後のセンサ全体にわたる細胞の平らでない付着を、共振バンドを用いて直接可視化することができる例えば、図1に共振バンドを丸で囲んだところを参照されたい。理想のマルチウェルマイクロバイオセンサーでは、各センサの位置は相対的に他のバイオセンサーへ正規化され、すなわち、センサはマイクロプレート内の行又は列に亘って各ウェルの中心を通って整列している。よって、得られた共振バンドの画像が細胞接着又は刺激に応答している細胞の変化に係る内部リファレンスとして使用することができる。従って、所定モードの各センサの共振バンドは、DMR又は細胞効果を評価するために、このバンドに関連する使用することができる追加のパラメータを提供する。これらのサブセットは以下で議論される。1バンド形状:使用することができる他のバイオセンサーの出力パラメータは、所定のモードの各バイオセンサーの共振バンドの形状である。その形状は、各センサの大面積にわたる強度分布によって定義される。その形状は、大面積にわたる刺激に応答した付着細胞の均質性又は細胞の変化のインデックスとして用いることができる例えば、図1に示すように、各共振バンドは約200ミリメートル×3000ミリメートルの寸法でセンサ全体にわたる応答を表す。2位置:所定モードの各センサの共振ピークの位置と同様に、各共振バンドの位置はバイオセンサーの出力パラメータとして使用することができる。その強度は、各バンドの最大強度で中心位置を生成するイメージングソフトウェアを用いて定量化することができる。このような位置の強度は、刺激又は分子治療への応答における細胞の変化を調べるために使用することができる。3強度:ちょうど共振バンドの位置として、外部結合した光の強度は、イメージングシステムを用いて収集したバイオセンサーの出力パラメータとして使用することができる。バンド全体の平均強度又はイメージングバンド内の各画素の絶対強度は、細胞接着の品質を検査し、細胞応答を評価するために使用することができる。4分布:イメージングシステムを用いて収集された角度又は波長の外部結合した光の分布は、バイオセンサー出力パラメータとして使用され得る。このパラメータは、細胞がなく又はプローブ分子を固定化していない場合、センサ自体の表面特性を評価するために用いることができ、さらに、センサ表面の照射領域を横切って細胞接着の品質を検査するめに用いることができる。また、このパラメータはまた、領域全体にわたる細胞密度が同一である場合に細胞に分子効果の均一性を調べるために用いることができ、又は、細胞密度が照射領域に亘って他とは区別できる一つの領域である場合に分子誘発細胞応答上の細胞密度の効果を調べるために用いることができる。5幅:所定モードの共振ピークのPWHMように、イメージングシステムを使用して得られた共振バンドの幅は、バイオセンサー出力パラメータとして使用することができる。このパラメータは、共振ピークのためにのみ利用可能である唯一のPWHMの代わりにセンサの照射領域の複数の地域での複数のバンド幅を得ることを除いて、共振ピークのPWHM値のものに対してほぼ同一の特徴や、その後の有用な情報コンテンツを共有する。共振バンド画像によって得られた他のパラメータと同様に、幅は上記の用途に使用することができる。すべてのこれらのパラメータは、本明細書に開示されるバイオセンサーを使用して、任意の細胞アッセイの任意のアプリケーションのために独立して、又は一緒に使用することができる。任意のサブセット又は組み合わせでパラメータを使用することは、細胞受容体アッセイのためのシグネチャや、その後のEGF受容体ベースアッセイのための特定のシグネチャのような、特定のアッセイ上の所定のアッセイ又は所定のバリエーションのためのシグネチャを生成することができる。vi.生細胞内の動的質量再分配DMRシグナル:細胞標的を通じた刺激に対する細胞応答は、下流シグナル伝達ネットワークの空間的及び時間的ダイナミクスによって符号化され得る。これにより、リアルタイムの細胞シグナル伝達の一体化の監視は、細胞生物学及び生理学の理解において有用な生理学的に関連のある情報をもたらし得る。共振導波路回折格子RWGバイオセンサーを含む光バイオセンサーは、細胞物質の動的再分配に関連する一体化された細胞応答を検出可能であり、細胞シグナル伝達の研究に非侵襲的手段をもたらす。全ての光バイオセンサーは、それらがセンサ表面又はセンサ表面の非常に近傍の局所的な屈折率の変化を測定可能な点で共通している。原理上は、細胞内のリガンド起因の変化を特徴付けるためにエバネッセント波を用いることが可能である故に、ほとんど全ての光バイオセンサーが細胞検知に適用可能である。エバネッセント波は、電磁場であり、溶液表面界面における光の全反射によって生成され、通常は、侵入深さ又は感知体積として知られる深度特性にて溶液内に短い距離~数100ナノメートル延在する。最近、理論的及び数学的モデルが開発され、これらはリガンドを用いた刺激に応答する生細胞内で測定される光信号のパラメータ及び性質を記述する。これらのモデルは、既知の細胞生物物理学と組み合わされた3層導波路システムに基づいており、リガンド起因光信号を、受容体を通して媒介された特定の細胞プロセスと関連付ける。バイオセンサーが入射光によって照明されている領域に配されている細胞の平均応答を測定する故に、細胞の融合層は、最適なアッセイ結果を達成するために用いられ得る。バイオセンサーの短い侵入深さと比較して細胞の寸法が大きい故に、センサ構成は、非従来的な3層システムとして考えられる:基板、回折格子構造を有する導波路フィルム、及び細胞層。従って、有効屈折率すなわち、検出シグナルにおけるリガンド起因の変化は、一次まで、細胞走の下部の屈折率の変化と直接的に比例し得る。ここで、SCは細胞層に対する感受性であり、Δncはバイオセンサーによって検出された細胞層のリガンド起因の局所的屈折率変化である。細胞内の所定の体積の屈折率がタンパク質等の生体分子の濃度によって主に決まるので、Δncは、検知体積内の細胞標的又は分子集合体の局地的濃度のリガンド起因の変化に直接比例すると仮定され得る。センサ表面から延在するエバネッセント波の指数関数的に減衰する特性を考慮して、リガンド起因光信号は、以下の式によって支配される。ここで、ΔZCは細胞内への侵入深さであり、αは特異的屈折率増加タンパク質に関して約0.18/mL/gであり、ziは質量再分配が発生する距離であり、dは細胞層内の1つのスライスの仮想的な厚さである。ここで、細胞層は、垂直方向において等間隔のスライスに分割される。上記式は、それぞれが応答全体に対して同等でない寄与を有する、リガンド起因の光信号がセンサ表面から異なった距離において発生する質量再分配の合計である。さらに、波長又は角度変化に関して検出された信号は、センサ表面と垂直に発生する質量再分配に主に感受性を有する。その動的な性質の故に、これは、動的質量再分配DMRシグナルとも称される。vii.細胞及びバイオセンサー:細胞は、複数の細胞経路又は機構に依存して、それらが受診する情報を符号化して統合する。タンパク質標的への検体の結合を特に測定する光バイオセンサーを用いた親和性分析と異なり、生細胞はさらに非常に複雑で動的である。細胞のシグナル伝達を研究するために、細胞はバイオセンサーの表面に接触させられ得、これは細胞の培養によって達成され得る。これらの培養された細胞は、3つのタイプの接触態様を介してバイオセンサー表面に取り付けられ得る:3つのタイプとは、焦点接着、密接接触closecontact及び細胞外基質接触であり、それぞれが独自の表面からの離間距離特性を有している。結果として、通常は、基本的な細胞膜は、~10-100nm程度表面から離れて配される。懸濁細胞suspensioncellに関して、細胞は、細胞表面受容体の共有結合、もしくは細胞表面受容体の特異的結合によって、又は重力による単純な定着によって、バイオセンサー表面に接触され得る。このため、バイオセンサーは、細胞の下部を検知することが可能である。多くの場合、細胞は表面依存接着及び増殖を呈す。豊富な細胞アッセイを実現するために、バイオセンサー表面は、細胞接着及び増殖を促進するためのコーティングを必要とし得る。しかし、表面特性は、細胞の生物学的状態への直接的な影響を有し得る。例えば、表面結合リガンドは、細胞によって与えられる力の下でどれくらい変形するかを決定付ける基板材料の機械的適合性のように、細胞の応答に影響を与え得る。培養条件時間、血清濃度、密集度等が異なることによって、得られた細胞状態は、1の表面と他の表面との差異、及び1の条件と他の条件との差異であり得る。従って、細胞状態を調節する特別な取り組みは、バイオセンサーベースの細胞アッセイを開発するために必要であり得る。細胞は、比較的大きな寸法通常は数十μの範囲を有する動的な物体である。刺激なしであっても、細胞は常に微動細胞以下の分解能の低速度撮影の顕微鏡検査によって、及びナノメートルレベルの生体インピーダンス測定によって、組織培養において見られるような動態的変動及び細胞構造の再構築している。非刺激条件下において、RWGバイオセンサーで分析した場合、細胞はほとんど正味0のDMR応用を普通は生成する。これは、部分的に光バイオセンサーの低い空間的分解能の故であり、レーザ光点の大きなサイズ及び結合光の長い伝播距離によって決まる。レーザ光点のサイズは、観察される領域のサイズを決め、通常は一度に1の分析点のみが観察され得る。従って、バイオセンサーは、通常は、光入射領域に配されている大量の細胞の平均化された応答を測定する。細胞は単一細胞レベルで微動をするが、大量の細胞は、正味0の平均DMR応答をもたらす。さらに、細胞間マクロ分子は、高度に組織化されて空間的に束縛され、ほ乳類細胞内の場所を最適化する。細胞上及び細胞内のタンパク質のしっかりと制御された局在化は、特定の細胞機能及び応答を決定する。なぜならば、この局在化は、細胞が適切なパートナーと相互作用するタンパク質の特異性及び効率性を調節することを可能にしかつタンパク質活性化及び不活性化機構を空間的に分離することを可能にする故である。この制御故に、非刺激条件下において、感知体積内の細胞の局地的質量濃度は平衡状態に達し得、正味0の光学的応答をもたらす。一貫性のある光学的応答を達成するために、観察される細胞は、細胞のほとんどが単一の分裂周期を終えたばかりになるような期間、従来の培養条件下で培養され得る。生細胞は、外因的なシグナルを感知して応答する優れた能力を有する。細胞シグナル伝達は、環境的キュー環境信号environmentalcueが単一の明確に定義された応答をもたらす応答の線状鎖をトリガする直線ルートを介して機能すると考えられていた。しかし、調査は、外部刺激に対する細胞応答がさらに非常に複雑であることを示した。細胞が受信した情報が、処理されて、リン酸化及びシグナル伝達タンパク質の位相的再配置の複雑な時間的及び空間的パターンに符号化され得ることが明らかになった。タンパク質の適切な場所への空間的及び時間的標的付けは、タンパク質-タンパク質間の相互作用の特異性及び効率性を調節すること、ひいては細胞シグナル伝達及び応答のタイミング及び強度を記述することに不可欠である。細胞骨格認識、細胞周期チェック点及びアポトーシス等の重要な細胞判定は、精密な時間的制御及び活性化しているシグナルトランスデューサーの相対的な空間的分布に依存している。従って、G-タンパク質結合受容体GPCR等の細胞標的で媒介された細胞シグナル伝達は、規則的で調節された態様において通常は進行し、一連の空間的及び時間的事象からなり、これらの多くは、細胞の局所細胞物質における局在的質量濃度又は再分配の変化をもたらす。これらの変化及び再分配は、感知体積内で発生した場合、光バイオセンサーを用いてリアルタイムで直接追跡され得る。viii.DMRシグナルは生細胞の生理学的な応答:受容体生物学を研究するための従来の薬理学的手法と比較して、リガンドが細胞システム内で発現した受容体に対して特異性を有する場合、リガンド起因DMRシグナルは受容体特異性を有し、用量依存性を有し、かつ飽和可能性を有することが示されている。多数のGタンパク質結合受容体CPCRリガンドについて、有効性EC50の値によって測定は、従来の方法を用いて測定されたものとほとんど同一と認められる。さらに、DMRシグナルは、期待された脱感作パターンを呈し、脱感作及び再感作は、全てのGPCRと共通である。さらに、DMRシグナルは、従来の技術で取得されたのと同様のGPCRリガンドの忠実度を維持する。さらに、バイオセンサーは、完全アゴニスト、部分的アゴニスト、逆アゴニスト、拮抗物質アンタゴニスト、及びアロステリック調節因子を区別可能である。これらをもとに、これらの発見は、DMRが生細胞の生理学的応答を監視可能であることを示す。ix.DMRシグナルは、生細胞内のリガンド-受容体ペアのシステム細胞生物学systemscellbiology情報を含む。:リガンドを用いた細胞の刺激は、一連の空間的及び時間的事象をもたらす。これらの非限定的な例は、リガンド結合、受容体活性化、タンパク質補充、受容体内在化及び再利用、第2メッセンジャー代替、細胞骨格再構築、遺伝子発現、並びに細胞付着変化を含む。細胞事象の各々が、それぞれの特性反応速度kinetics、期間、大きさ、質量移動を有している故に、かつバイオセンサーが感知体積内の質量再分配に関連する細胞事象に主に感受性がある故に、細胞事象はDMRシグナル全体とは異なる寄与をし得る。化学生物学、細胞生物学、及び生物物理学の手法は、リガンド起因DMRシグナルの細胞機構を解明するために使用され得る。最近は、特定の細胞シグナル伝達コンポーネント内の介入治療interventionのために直接化学薬品を使用する化学生物学が、生物学的疑問を解決するために使用されている。このことは、様々な異なったタイプの細胞標的の活性を特に制御する多数のモジュレーターの識別の故に重要である。この手法は、受容体表皮成長因子EGF受容体、及びGq-及びGs-結合受容体を含むによって媒介されたシグナル伝達及びそのネットワークの相互作用をマッピングするのに適している。EFGRは、受容体チロシンキナーゼのファミリーに属している。EGFは、結合して、EGFRの内因性タンパク質チロシンキナーゼ活性を刺激し、主にMAPK、Akt及びJNK経路に関与するシグナル伝達カスケードを開始する。EGF刺激において、A431細胞内の質量再分配をもたらす多くの事象がある細胞株が内因的にEGFRを過剰発現する。EGFRシグナル伝達は、細胞の状態に依存することが知られている。結果として、EGF起因DMRシグナルも細胞状態に依存する。0.1のウシ胎児血清内で20時間経て得られた休眠細胞において、EGF刺激は、3つの異なった順次的なフェーズを伴うDMRシグナルをもたらす:i増加するシグナルを伴う増加ポジティブフェーズP-DMR、ii遷移フェーズ、及びiii減衰フェーズN-DMR。化学生物学及び細胞生物学の研究は、EGF起因DMRシグナルが主にRas/MAPK経路に結合されることを示しており、これはMEKを介して進行して、細胞脱離をもたらす。2つの証拠は、P-DMRが、主に、細胞表面において活性化された受容体への細胞内標的の補充の故であることを示している。第1に、ダイナミン又はクラスリン活性の遮断は、P-DMR事象の大きさに小さな影響を与える。ダイナミン及びクラスリン、EGFR活性の2つの下流コンポーネント、はEGFR内在化及びシグナル伝達の実行において重要な役割を果たす。第2に、MEK活性の遮断は、P-DMR事象を部分的に減衰させる。MEKは、MAPK経路において重要なコンポーネントであり、これは、最初に細胞質から細胞膜に移動し、EGF刺激の後に、受容体を伴った内在化が起こる。他方、N-DMR事象は、細胞脱離及び受容体内在化の故である。蛍光像は、EGF刺激が、大量の内在化された受容体及び細胞脱離をもたらすことを示している。受容体内在化又はMEK活性の遮断が細胞脱離を防止すること、及び受容体内在化がダイナミン及びクラスリンの両方を必要とすることが知られている。このことは、ダイナミン又はクラスリン活性の遮断が、受容体内在化及び細胞脱離の両方を抑制すべきであり、MEK活性の遮断が、受容体内在化ではなく細胞脱離のみを抑制すべきであることを示している。予想通り、ダイナミン又はクラスリン抑制物質は、EGF起因N-DMRを完全に阻害し~100、MEK抑制物質は、N-DMRを部分的にのみ減衰させる~80。蛍光像は、MEKではなくダイナミンの活性の遮断が受容体内在化を減じることを確認する。x.DMRシグナルは、生細胞におけるリガンド作用のシステム細胞薬理情報を含む。:DMRシグナルが、細胞の底部内の細胞物質の動的再分配を含む多くの細胞事象の寄与からなる一体化した細胞応答であるので、DMRシグナル等のリガンド起因のバイオセンサーシグナルは、システム細胞薬理情報を含む。GPCRは、細胞内においてしばしばリッチなrich挙動を呈し、多くのリガンドが有効なバイアスをもたらして細胞の機構の特定の部分に有利に作用し得かつ経路的にバイアスされた効果を呈し得ることが知られている。従って、リガンドは、受容体の下流の細胞事象がどのように測定されてリガンド薬理に関する読み出し情報1又は複数として使用されるかに基づいて複数の効果を有し得る可能性は十分ある。実際、ほとんど経路的にバイアスされておりかつ単一のシグナル伝達事象のみをアッセイする従来の細胞アッセイにとって、GPCRリガンドのシグナル伝達ポテンシャルを系統的に表すことは困難である。しかし、無標識バイオセンサー細胞アッセイが細胞シグナル伝達の事前情報を必要とせず、経路的にバイアスされておらずかつ経路感受性があるので、これらのバイオセンサー細胞アッセイは、リガンド選択性シグナル伝達及び任意のリガンドのシステム細胞薬理の研究に適している。xi.イオンチャネルモジュレーターのための無標識バイオセンサー及びバイオセンサー細胞ベースアッセイ:無標識細胞ベースアッセイは、一般に生きている細胞における化合物によって誘導される応答を監視するためのバイオセンサーを採用している。化合物は、天然又は合成、精製又は未精製の混合物であり得る。バイオセンサーは、一般的に分子認識事象又は定量信号にバイオセンサーと接触した細胞におけるリガンド誘導の変化を変換するために、光学、電気熱量、音響又は磁気トランスデューサ等のトランスデューサを利用している。本発明に適用可能なバイオセンサーは、表面プラズモン共鳴SPR、共振導波路格子RWGバイオセンサー、共振ミラー、エリプソメータ、生体インピーダンスシステム等の光バイオセンサーシステムや電気バイオセンサーシステムを含むが、これらに限定されない。イオンチャネルは重要な薬物標的である。なぜならば、それらが生理的過程の非常に広いスペクトルを制御する上で重要な役割を果たしているためであり、それらの機能不全が病態につながるからである。しかし、歴史的には、このタンパク質のクラスを標的とする薬の開発は困難であった。通常は、小分子ライブラリにおいては豊富ではない扱いやすい案内構造を識別するために開発された新しい、機能、ハイスループットスクリーニングHTS戦略は有望な結果が得られている。自動化された細胞ベースのHTSアッセイは、蛍光法を用いて高密度フォーマットプレート読み取り機で膜電位や細胞内カルシウムの変動を監視して、イオンチャネルの多くの異なる種類に設定され得る。新しく自動化されたパッチクランプ技術は第2のクリーニングを提供し、これはチャネルレベルでの活性の合致を確認し、イオンチャネルスーパーファミリー全体で選択性を決定し、作用機序についての洞察を提供する。同じ第1及び第2のアッセイは、効果的に医薬品化学のリード開発を支援している。しかし、これらのアプローチは、イオンチャネル調節が細胞の機能と生理機能にどのように影響を与えることの洞察をほとんど提供しない。B.方法:本明細書に開示される方法、本方法で使用することができる組成物及び化合物は、材料、物質、分子、リガンドなどの異なる多くのクラスから生じ得る。また、開示することはこれらのクラスの特定のサブセットであり、例えば、KATPチャネルの活性化のためのマーカーとしてのピナシジルなどのマーカーと呼ばれる無標識バイオセンサーアッセイに特有のものである。分子の混合物等のこれらのクラスの混合物も開示され、開示された方法で使用することができることが理解される。特定の方法では、未知の分子、試験分子、薬剤候補分子と同様に既知の分子を使用することができる。特定の方法や状況において、修飾、調節又はモジュレーターは、KATPモジュレーター、JAKモジュレーター、又はROCKモジュレーター等の役割や、同様に、これらのすべての潜在性としての役割を果たす。同様に、既知のモジュレーターを使用することができる。特定の方法において、例えば、細胞、組成物は、同様に、細胞株、細胞過程から細胞応答を生成することができる細胞パネル、細胞標的に関与している。本明細書で説明しているように細胞が培養されそして細胞培養が使用され得る。本明細書に記載の方法はバイオセンサーを使用するアッセイを含む。特定のアッセイでは、それらはアゴニズム又はアンタゴニズムモードのいずれかで実行される。しばしばアッセイは、材料、物質、又は分子等の1つ以上のクラスでの細胞処理に関与している。また、本明細書で議論し、対象物も同様に扱うことができることが理解される。特定の方法では、例えば、分子細胞間で接触させことが行われる。開示された方法は、DMRの応答のように、バイオセンサーの応答として明示できる細胞応答等の応答が検出される。これら及び他の応答を測定することができる。特定の方法では、バイオセンサーからの信号は、豊富なバイオセンサーシグナルや豊富なDMRシグナルとすることができる。無標識バイオセンサーを利用する開示された方法は、一次プロファイル、二次プロファイル、及び調節プロファイルなどのプロファイルを生成することができる。これらのプロファイル等は、本明細書で説明例えば、分子に関する決定を行うために使用することができ、クラスのいずれかを使用することができる。また、本明細書に開示されるものは、分子、細胞、材料又は物質等の化合物又は組成物のライブラリ及びパネルである。また、マーカーパネルと細胞パネル等の特定パネルが開示される。開示される方法は、例えば、バイオセンサーシグナル、DMRシグナル、正規化、コントロール、正のコントロール、モジュレーション比較、インデックス、バイオセンサーインデックス、DMRインデックス、分子バイオセンサーインデックス、分子DMRインデックス、分子インデックス、モジュレーターバイオセンサーインデックス、モジュレーターDMRインデックス、分子調節インデックス、既知モジュレーターバイオセンサーインデックス、既知モジュレーターDMRインデックス、マーカーバイオセンサーインデックス、マーカーDMRインデックス、マーカーのバイオセンサーシグナルの調節、DMRシグナルの調節、増強、及びインデックス類似性、等の様々な側面を利用することができる。本明細書に開示される任意の組成物、化合物、又はその他は、本方法で特徴づけることができる。より高い、阻害等の言葉で特徴付けに依存する方法が開示されている。特定の方法では、受容体又は細胞標的が使用される。特定の方法は、シグナル伝達経路に関する情報だけでなく、分子で処理した細胞や他の細胞プロセスを提供することができる。特定の実施形態では、特定の効能や効果は、特徴的になり、直接の作用例えば薬剤候補分子のはアッセイされ得る。1.KATPモジュレーター及び薬物標的としてのmitoKATPをスクリーニングする方法:薬物標的としてミトコンドリアATP感受性カリウムイオンチャネルmitoKATPを使用する方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、本方法は、肝疾患を予防又は治療することができる化合物を同定することができる。いくつかの実施形態では、該化合物は、mitoKATPチャネルモジュレーターである。また、肝細胞におけるmitoKATPチャネルモジュレーターを選別するために無標識バイオセンサーの細胞アッセイを使用する方法も、本明細書で開示される。また、肝細胞においてmitoKATPイオンチャネルモジュレーターをスクリーニングする方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、スクリーニングは、無標識アッセイを使用して実行される。無標識アッセイは基準として既知KATPオープナーの使用に依存させてもよい。いくつかの実施形態では、KATPオープナーはピナシジルである。開示された方法に従って示されているように、ピナシジルは、形質転換された肝細胞株のHepG2C3A内の豊富な動的質量再分配DMRシグナルを提供する。肝細胞におけるピナシジルのDMRシグナルはmitoKATP経路モジュレーターを含むmitoKATPモジュレーターを選別するために使用することができる。また、肝疾患を治療又は予防するためのmitoKATPモジュレーターの使用の方法も開示される。開示された方法に従って示されているように、肝細胞株HepG2C3A内のピナシジルDMRシグナルがKir6.2/SUR2のKATPイオンチャンネルに関連付けられており、KATPイオンチャネルは主にミトコンドリア内に配置されている。ピナシジルDMRシグナルは、アクチンの再造形、ROCK活性及びJAKの活性にリンクされることができる。mitoKATPモジュレーターはまた、よく知られている肝毒性薬物リファンピンにより誘導されるCYP3A4酵素活性誘導を抑制することができる。したがって、mitoKATPチャネルは肝臓疾患を治療又は予防するための新薬の開発につながるような標的にすることができる。また、本明細書に開示された分子の抑制物質方法は、分子を抑制物質する方法であって、a.無標識バイオセンサーの分析に使用されるバイオセンサー表面上でKATP細胞株を培養するステップと、b.分子で前記細胞株をインキュベートして分子処理した細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記分子処理した細胞株を分析して分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記分子データ出力と既知のKATPモジュレーターデータ出力とを比較して分子-KATPモジュレーターの比較を産生するステップと、を含むことを特徴とする。また、本明細書に開示された分子の抑制物質方法は、分子を抑制物質する方法であって、a.無標識バイオセンサーの分析に使用されるバイオセンサー表面上でKATP細胞株を培養するステップと、b.マーカー及び分子で前記細胞株をインキュベートしてインキュベートしている細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記インキュベートしている細胞株を分析してマーカー-分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記マーカー-分子データ出力とマーカー-KATPモジュレーターデータ出力とを比較してマーカー-分子/マーカー-KATPモジュレーターの比較を産生するステップと、を含むことを特徴とする。また、本明細書に開示された分子のアッセイ法は、分子をアッセイする方法であって、a.無標識バイオセンサーの分析に使用されるバイオセンサー表面上でA431、HT29、A549、及びHepG2の4つの異なる細胞株を培養するステップと、b.分子で前記細胞株の各々をインキュベートして4つのインキュベートしている細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記インキュベートしている細胞株の各々を分析して各インキュベートしている細胞株に対する分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記分子データ出力とROCK抑制物質のデータ出力とを比較して各細胞株に対する分子-ROCK抑制物質の比較を産生するステップと、を含むことを特徴とする。また、本明細書に開示された対象物の処理法は、対象物を処理被験者を治療する方法であって、肝疾患の治療の必要性である対象物にKATPモジュレーターを投与するステップと、を含むことを特徴とする。また、本明細書に開示された肝毒性の減少法は、対象物における肝毒性を減少させる方法であって、KCOの機能が対象物に与えられた薬物の肝臓毒性を減少させる前記KCOを対象物に投与するステップを含むことを特徴とする。いくつかの実施形態では、KATP細胞株はミトコンドリアATP感受性カリウムイオンチャネルmitoKATPを含むことができる。いくつかの実施形態において、細胞株は、肝細胞を含むことができる。いくつかの実施形態において、肝細胞は肝細胞を含むことができる。いくつかの実施形態において、肝細胞は肝ウイルスに感染され得る。いくつかの実施形態において、肝ウイルスは、A、B、C、D、Eの型肝炎、単純ヘルペス、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、黄熱病ウイルス、又はアデノウイルスであり得る。いくつかの実施形態において、細胞は、非ウイルス性感染症に感染源から得ることができる。いくつかの実施形態において、非ウイルス性感染症は、トキソプラズマ、レプトスピラ、Q熱、又はロッキー山紅斑熱を含むことができる。いくつかの実施形態において、細胞は、化学物質、毒素、又は薬物であるか又はそれらの影響を受ける源から得ることができる。いくつかの実施形態において、化学物質又は毒素は、アルコール、パラセタモール、アモキシシリン、抗結核薬、ミノサイクリン、メチルドパ、ニトロフラントイン、イソニアジド又はケトコナゾールを含むことができる。いくつかの実施形態において、既知KATPモジュレーターデータ出力は、培養した前記KATP細胞株で前記KATPモジュレーターをインキュベートしてKATPモジュレーターデータ出力を生成する無標識バイオセンサーで、前記インキュベートした細胞株を解析することにより、産生されることができる。いくつかの実施形態において、方法は、前記比較において分子データ出力及びKATPモジュレーターデータ出力が類似していることを示すとき、潜在的KATPモジュレーターを識別するステッップを更に含むことができる。いくつかの実施形態において、KATP細胞株は、HepG2細胞又はHepG2C3A細胞株から選択することができる。いくつかの実施形態において、既知KATPモジュレーターは、カリウムチャネルオープナーKCOを含むことができる。いくつかの実施形態において、KCOは、ジアゾキシド、ピナシジル、クロマカリム又はニコランジルを含むことができる。いくつかの実施形態において、KATPモジュレーターは、KATP抑制物質を含むことができる。いくつかの実施形態において、KATP抑制物質は、スルホニルウレア又はU-37883Aを含むことができる。いくつかの実施形態において、スルホニル尿素は、トルブタミド、トラザミド又はグリピジドを含むことができる。いくつかの実施形態において、マーカー-KATPモジュレーターデータ出力は、培養した前記KATP細胞株で前記マーカー及び前記KATPモジュレーターをインキュベートして、マーカー-KATPモジュレーターデータ出力を生成する無標識バイオセンサーで、前記インキュベートした細胞株を解析することにより、産生されることができる。いくつかの実施形態において、方法は、前記比較においてマーカー-分子データ出力及びマーカー-KATPモジュレーターデータ出力が類似していることを示すとき、潜在的KATPモジュレーターを識別するステッップを更に含むことができる。いくつかの実施形態において、マーカーはROCK1モジュレーター又はROCK2モジュレーターを含むことができる。いくつかの実施形態において、ROCK1モジュレーター又はROCK2モジュレーターはROCK1抑制物質又はROCK2抑制物質を含むことができる。いくつかの実施形態において、ROCK1抑制物質又はROCK2抑制物質は、Y-27632を含むことができる。いくつかの実施形態において、マーカーはJAKモジュレーターを含むことができる。いくつかの実施形態において、JAKモジュレーターは、JAK抑制物質を含むことができる。いくつかの実施形態において、JAK抑制物質は、AG490を含むことができる。いくつかの実施形態において、マーカーは、チトクロムP450酵素モジュレーターを含むことができる。いくつかの実施形態において、チトクロムP450酵素モジュレーターは、チトクロムP450活性化物質を含むことができる。いくつかの実施形態において、チトクロムP450酵素は、CYP2D6又はCYP3A4を含むことができる。いくつかの実施形態において、チトクロムP450活性化物質は、リファンピシンを含むことができる。いくつかの実施形態において、方法は、ROCK経路の活性化に対する分子をアッセイするステップを更に含むことができる。いくつかの実施形態において、アッセイのステップは、a.無標識バイオセンサーの分析に使用される表面上でROCK抑制物質応答性細胞株を培養するステップと、b.分子で前記細胞株をインキュベートしてインキュベートする細胞株を産生するステップと、c.無標識バイオセンサーで前記インキュベートする細胞株を分析して分子データ出力を産生するステップと、d.同一の前記細胞株における前記分子データ出力と既知のROCK抑制物データ出力とを比較して分子-ROCK抑制物の比較を産生するステップと、を含むことができる。いくつかの実施形態において、ROCK抑制物質応答性細胞株は、既知のROCK抑制物質によるROCKの基礎活性を阻害することが豊富なバイオセンサーシグナルを生成するような細胞株を含むことができる。いくつかの実施形態において、細胞株は、A431、A549、又はHT29から選択されることができる。いくつかの実施形態において、方法は、少なくとも2つのマーカーを使用して独立して実行されることができる。いくつかの実施形態において、マーカーは少なくともEC70、EC80、EC90、EC95、及びEC100の濃度で添加されることができる。いくつかの実施形態において、ROCK抑制物質はY27632とすることができ、KATPモジュレーターはLY-294002とすることができる。いくつかの実施形態において、ROCK抑制物質のデータ出力は、各細胞株とROCK抑制物質をインキュベートし、各細胞株に対するROCK抑制物質のデータ出力を生成する無標識バイオセンサーで各培養細胞株を解析することにより産生することができる。いくつかの実施形態において、方法は更に、KATPモジュレーターデータ出力を生成するステップと、各細胞株について分子-KATP抑制物質の比較を生成するステップと、を含むことができる。いくつかの実施形態において、方法は、更に追加のイオンチャネルアッセイを行うステップを含むことができる。いくつかの実施形態において、追加のイオンチャネルアッセイは、従来の又は自動化されたパッチクランプするステップを含むことができる。いくつかの実施形態において、KATPモジュレーターはmitoKATPモジュレーターを含むことができる。いくつかの実施形態において、肝疾患はJAK又はKATPから下流のRhoキナーゼシグナルに関与し得る。いくつかの実施形態において、KATPチャネルはKir6.2及びSUR2チャネルであることができる。いくつかの実施形態において、KCOがピナシジルであることができる。C.定義:本発明の様々な実施例は、図面がある場合は図面を参照して詳細に説明される。様々な実施例への言及は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。さらに、本明細書で説明されている任意の例は、限定することを意図したものではなく、本発明の多くの可能な実施例のいくつかを単に説明するものである。1.A本明細書及び特許請求の範囲に使用されているa、an、及びthe等の単数系の用語は明示されない限り複数の対象を含む。従って、例えば抑制物質は2つ以上の抑制物質の混合物等を含む。2.省略形Abbreviation当業者には広く知られている省略形が使用されることがある例えば、時間に対するh又はhr、グラムに対するg又はgm、ミリリットルに対するmL、室温に対するrt、ナノメートルに対するnm、モルに対するMなど。3.約About例えば、組成物内の成分数、濃度、体積、処理温度、処理時間、収率、流速、圧力などの値、及びその範囲であって本開示の実施例に記載されているものに約が修飾されている場合、その数量は変化することを示し、当該変化は、例えば、化合物、組成物、濃縮物、又は使用する製剤を作製するのに使用される典型的な測定手順及び取扱手順によって、これら手順における故意でない間違いによって、製品、原料、出発材料の純度、又は本方法を実施するのに使用される成分の差によって、及びこれらと同様の要因によって生じ得る。さらに、用語約は特定の初期濃度又は初期混合における組成物又は製剤の老化によって変化する量及び特定の初期濃度又は初期混合における組成物又は製剤の混合又は処理によって変化する量を含む。用語約が修飾されているかに関わらず、特許請求の範囲はこれら数量に均等なものを含む。4.細胞のパネルに亘ってとマーカーのパネルに対して細胞のパネルに亘ってとマーカーのパネルに対しての句は、細胞のパネルにおける各細胞に作用する分子の一次のプロファイルとマーカーパネルを変調する分子の変調プロファイルを審査する体系的なプロセスを言う。マーカー/細胞のペアでは、プロセスは、最初に細胞の各タイプに独立して作用する分子の一次的プロファイルを調べることから始まり、続いて、同一細胞内の分子の存在下でマーカーの二次的プロファイルを調べる。用語の対しては、マーカー誘発性バイオセンサー応答を調節する分子の能力を表すために具体的に使用されている。5.アゴニスト:アゴニストは、細胞内であってもよい細胞による応答を生成する細胞における受容体と結合する分子等の作用をもたらす分子又は物質である。6.アンタゴニスト:アンタゴニストは、受容体に結合する分子等のアゴニストの作用等を阻害遮断等する分子又は物質であり、アゴニストが結合するのを防止し、アゴニストの作用を阻害する。7.活性化物質:活性化物質は、基本の状態に比べて、状態の増加をもたらす。例えば、EGFは、EGFRの活性化物質であり、EGFRへのEGFの結合は、シグナル伝達事象をもたらす。8.アッセイすることAssayingアッセイすること、アッセイする等の用語は細胞又は分子などの物質の特性を判定するための分析をいい、当該特性は例えばリガンド又はマーカーなどの1つ以上の外因性刺激により刺激された際の細胞の光学応答又は生体インピーダンス応答の有無、量、範囲、速度、動態、又は種類である。刺激に対する細胞応答のバイオセンサーシグナルを生成することがアッセイであってもよい。9.応答をアッセイするAssayingtheresponse応答をアッセイすること等の用語は、当該応答を特性化する手段を使用することを意味する。例えば、分子が細胞に接触させられる場合、当該分子にさらされた当該細胞の応答をアッセイするのにバイオセンサーが使用されることができる。10.付着する付着するAttach、付着attachment、接着adhere、付着されadhered、固定されたimmobilized等の用語は、例えば、本開示の表面修飾物質、相溶剤、細胞、リガンド候補分子等のエンティティを、物理吸着、化学結合等のプロセス若しくはそれらの組み合わせのプロセスによって、表面に固定若しくは固着せしめることを通常意味する。特に、細胞の付着cellattachment、細胞の付着celladhesion等の用語は、表面との細胞の相互作用若しくは表面への結合を意味する。当該相互作用又は結合は、細胞固定材料、相溶剤例えば、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミン、ゼラチン、ポリリジン等若しくはそれら双方を用いて培養し又は相互作用せしめること等によって行われる。付着性細胞、固定された細胞等の用語は、基板の外部表面に関連付けられ、基板の外部表面上に固定され、又は特定の接触を維持する原核細胞若しくは真核細胞等の細胞、細胞株又は細胞システムを意味する。培養後のかかるタイプの細胞は、洗浄媒質交換処理、すなわち、多くの細胞ベースの分析に必須である処理に対して抵抗力を有し、耐性を有し得る。11.アゴニニストモード及びアンタゴニストモードアゴニストモード等の用語は、例えばDMRシグナルなどのバイオセンサーシグナルのきっかけとなる分子の能力を判定するために細胞が分子にさらされるようなアッセイをいい、一方、アンタゴニストモードは、マーカーに応答する細胞のバイオセンサーシグナルを変調又は調節する分子の能力を判定するために細胞が分子の存在するマーカーにさらされるようなアッセイをいう。12.バイオセンサーBiosensorバイオセンサー等の用語は、生物学的成分に物理化学的検出成分を組み合わせた検体を検出するデバイスをいう。典型的な場合バイオセンサーは3つの部分からなり、当該部分は、生物学的成分又は要素例えば、組織、微生物、病原体、細胞、又はこれらの組合せ、検出要素光学的、圧電的、電気化学的、温度的、又は磁気的などの物理化学的手法において機能するもの、及び両成分に関するトランスデューサである。当該生物学的成分又は要素は、例えば、生細胞、病原体、又はこれらの組合せであることができる。実施例において、光学バイオセンサーは、生細胞、病原体、又はこれらの組合せにおける分子認識事象又は分子刺激事象を定量化可能なシグナルへ変換する光学トランスデューサを含み得る。13.バイオセンサー細胞アッセイを中心とした細胞プロファイル薬理学バイオセンサー細胞アッセイを中心とした細胞プロファイル薬理学等の用語は、無標識バイオセンサーの細胞アッセイを用いて分子の薬理学を決定する方法である。14.バイオセンサーインデックスBiosensorindexバイオセンサーインデックス等の用語は、バイオセンサーデータの集合からなるインデックスをいう。バイオセンサーインデックスは、一次プロファイル又は二次プロファイルなどのバイオセンサープロファイルの集合であり得る。当該インデックスは任意の種類のデータを含み得る。例えば、プロファイルのインデックスは、N-DMRデータ点、P-DMRデータ点、その両方、又はインピーダンスデータ点からなることができる。当該インデックスはプロファイル曲線に関する全てのデータ点であってもよい。15.バイオセンサー応答Biosensorresponseバイオセンサー応答、バイオセンサー出力信号、バイオセンサーシグナル等の用語は、細胞を有するセンサシステムの細胞応答に対する応答をいう。バイオセンサーは細胞応答を定量化可能なセンサ応答へ変換する。バイオセンサー応答は、RWG又はSPRなどの光学バイオセンサーによって測定された刺激に対する光学応答又は電気バイオセンサーによって測定された刺激に対する細胞の生体インピーダンス応答である。本開示の実施例において、バイオセンサー応答は刺激に対する細胞応答に直結しているため、当該バイオセンサー及び当該細胞応答は同じ意味で使用され得る。16.バイオセンサーシグナルBiosensorsignalバイオセンサーシグナル等の用語は、バイオセンサーを用いて測定された細胞のシグナルであって、刺激に対する細胞の応答によって生成されたものをいう。17.バイオセンサー表面バイオセンサー表面等は、それに培養される細胞を有することができるバイオセンサーのあらゆる表層でもある。バイオセンサー表面は、組織培養処理され、又は細胞間マトリックス物質例えばフィブロネクチン、ラミニン、コラーゲン、等で被覆され、又は合成的材料例えば、ポリリジンで被覆され得る。18.細胞Cell細胞等の用語は、半透膜によって外部を囲まれた原形質の小さく通常は顕微鏡でしか見ることができない原形質のかたまりをいい、細胞は選択的に1つ以上の核及び様々なオルガネラを含み、細胞は生命体の全ての基本的な働きを単独で又は他の同様のかたまりと相互作用して行うことができ、細胞は独立して働くことができる生命体の最小の構造単位を形成し、細胞は人工の細胞構造、細胞モデルシステム、及び同様の人工細胞系を含む。細胞は異なる細胞型を含むことができ、当該細胞型は例えば、特定の疾患に関する細胞、特定の起源に由来する細胞型、特定の標的に関する細胞型、又は特定の生理機能に関する細胞型である。さらに、細胞は、天然の細胞、人工の細胞、形質転換細胞、不死化細胞、一次細胞、胚性幹細胞、成体幹細胞、癌幹細胞、又は細胞から派生した幹細胞であってもよい。細胞の少なくとも2種類を含む細胞系を使用することもできる。細胞系は自然に又は共培養を経由して形成することができる。ヒトは約210の既知の異なる細胞型からなる。どのように細胞が準備されるか例えば、人工的に作り出された、形質転換された、不死化された、又はヒトの体から新鮮分離されたなど、及び、どこで例えば、異なる年齢のヒトの体又は異なる病期のヒトの体など細胞が得られたかを考慮すると、当該細胞型の数はほぼ無限である。19.細胞株:細胞株等の用語は、少なくとも1つの共通の特性や培養にて継代することができる機能を持っていることによってグループ化することができる細胞を言う。20.細胞背景細胞背景等の用語は、特定の状態を有する一種の細胞である。例えば、細胞の異なるタイプは、異なる細胞背景例えば細胞受容体の差動発現又は組織化を有する。また、異なる状態を有するが同じタイプの細胞は、異なる細胞背景を有する。細胞の同じタイプで異なる状態は、培養例えば止められ又は増殖中又は静止性状態の細胞周期又は処理例えば異なる薬理学的試薬で処理された細胞で達成されることができる。21.細胞培養するCellculture細胞培養又は細胞培養することは、管理された状況下において原核細胞又は真核細胞が培養されるプロセスをいう。細胞培養するは、多細胞真核生物、特に動物細胞から派生した細胞を培養することだけでなく、複合組織及び複合器官を培養することもいう。22.細胞パネルCellpanel細胞パネル等の用語は、少なくとも2つの細胞型を含むパネルをいう。当該細胞はここに開示されたものの任意の組合せであり得る。23.細胞応答CellularResponse細胞応答等の用語は、刺激に対する細胞の応答をいう。24.細胞プロセスCellularprocess細胞プロセス等の用語は細胞内において又は細胞によって起こる応答をいう。細胞プロセスの例は、増殖、アポトーシス、壊死、分化、細胞シグナル変換、極性変化、移動、又は形質転換を含むが、これらに限定されない。25.細胞標的Cellulartarget細胞標的等の用語はタンパク質又は核酸などのバイオポリマーであって、当該バイオポリマーの活性が外部刺激によって変形されることができるものをいう。細胞標的は、酵素、キナーゼ、イオンチャネル、及び受容体のような最も普及しているタンパク質である。26.特性化することCharacterizing特性化すること等の用語は、リガンド、分子、マーカー、又は細胞などの物質の特徴に関する情報を収集することをいい、例えばリガンド、分子、又は細胞に対するプロファイルを得ることをいう。27.含むComprise本明細書及び特許請求の範囲を通して、単語含む、含んでいる、及びその変形は、含むがこれに限定されないという意味であり、例えば他の添加物、成分、整数、又はステップを除外するという意味ではない。28.基本的に構成されているConsistingessentiallyof実施例において、基本的に構成されているとは、例えば、表面組成、バイオセンサー表面上における表面組成、製剤又は組成物を構成又は使用する方法、及び本開示の物質、デバイス、又は装置について説明するものであり、これらが、特許請求の範囲に記載された成分又はステップに加えて、ここに開示されている組成物、物質、装置、及び方法を作製構成及び使用することに関する基礎的かつ新規な特徴に大きな影響を与えない他の成分又はステップを含み得ることをいい、当該他の成分又はステップは、例えば、特定の反応剤、特定の添加剤若しくは材料、特定の作用物質、特定の細胞若しくは細胞株、特定の表面改質剤若しくは表面調節剤、特定のリガンド候補、又はこれらと同様の変更可能な構造体、材料、若しくはプロセスである。当該本開示の成分又はステップの基礎的な特徴に大きな影響を与え得る項目又は本開示に望ましくない特性を与え得る項目は、例えば、バイオセンサー表面に対する細胞の親和性低下、細胞表面受容体又は細胞内受容体に対する刺激の親和性異常、リガンド候補又は同様の刺激に対する異常な細胞活性又は逆の細胞活性、及びこれらと同様の特性を含む。29.成分Componentsここに開示されているのは、開示された組成物を準備するのに使用される成分と、本明細書に開示された方法に使用される組成物自体と、である。これら及び他の材料は本明細書に開示されており、かつ、これら材料の組合せ、サブセット、相互作用、グループ等が開示されている場合において、これら分子の各々、集合的組合せ、及びその置換のうちの特定のものが明確に開示されていなくても、その各々は詳細に検討されて本明細書に記載されているものとする。従って、分子クラスA、B、及びCと分子クラスD、E、及びFとが開示され、分子の組合せ例A-Dが開示されているならば、各々が個別に記載されていない場合であってもその各々は個別かつ集合的に検討されており、すなわち組合せA-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E、及びC-Fも開示されていることを意味する。同様にこれらのサブセット又は組合せも開示されているものとする。従って、例えば、A-E、B-F、及びC-Eのサブグループも開示されているものとする。このコンセプトは、ここに開示された組成物を作製及び使用する方法におけるステップこれらに限定されないを含む本願の全ての特徴に適用される。従って、実行されることができる様々な追加ステップが存在するならば、これら追加ステップの各々は開示された方法の任意の特定の実施例又は実施例の組合せに伴って実行されることができるものとする。30.接触させることContacting接触させること等の用語は、少なくとも2つのもの、例えば分子、細胞、マーカー、化合物若しくは組成物、少なくとも2つの組成物、又は製品若しくは機械を含むこれらの任意のものの間に分子相互作用が起こり得る場合において、分子相互作用が起こり得るように近接させることを意味する。例えば、接触させることは、少なくとも2つの組成物、分子、製品、又は物質を、接触させるすなわちこれらが近接して混合又は触れるような状態にさせることをいう。例えば、組成物Aの溶液と培養された細胞Bとを有しており、組成物Aの溶剤を培養された細胞B上に注入することは、組成物Aを細胞培養物Bに接触させることである。細胞をリガンドに接触させることは、リガンドを、当該細胞に対して、当該細胞が当該リガンドへのアクセスを有する状態を保証させることである。ここに開示されている全てのものは、他のものに接触することができるものとする。例えば、細胞は、マーカーすなわち分子、バイオセンサー等に接触することができる。31.化合物及び組成物:化合物及び組成物は当該技術分野におけるその標準的な意味を有している。特定の指定物、例えば分子、物質、マーカー、細胞、又は試薬であってこれら指定物を含むもの、これら指定物で構成されているもの、及びこれら指定物で基本的に構成されているものが開示されているものとする。従って、特定の指定マーカーが使用される場合、当該マーカーを含む組成物、当該マーカーで構成されている組成物、又は当該マーカーで基本的に構成されている組成物も開示されているものとする。特定の指定物が作製される場合、当該指定物の化合物も開示されているものとする。例えば、EGFなどの特定の生物学的材料が開示されているならば、化合物の形態をとったEGFも開示されているものとする。32.コントロールControlコントロール、コントロールレベル、又はコントロール細胞等の用語は、変化が測定される基準として定義されるものをいい、例えば、コントロールは実験によるものではなく所定のパラメータセットによるものであり、又はコントロールは前処理レベル若しくは後処理レベルに基づくものである。これらは試験の実行と同時、試験の実行前、若しくは試験の実行後に実行されるものであるか、又は予め決められた基準であり得る。例えば、コントロールは、並行試験として主体物、客体物、試薬等が試験手順、試験用の作用物質、試験変数等の不備不作為を除いて処理される場合の試験結果、及び、試験効果の判断における比較基準として使用される試験結果をいう。従って、コントロールは、手順、作用物質、変数等に関する効果を判定するのに使用されることができる。例えば、細胞上の試験分子の効果が対象であるならば、a当該分子の存在下における当該細胞の特性を記録し、baを実行した後に既知の活性若しくは活性不足を備えたコントロール分子又はコントロール組成物例えばアッセイバッファ溶液賦形剤を追加してその効果を記録し、そして試験分子のコントロールに対する効果を比較することができる。特定の状況においては、一旦コントロールが実行されると当該コントロールは基準として使用されることができ、再度コントロール実験が行われる必要はなく、他の状況においては、コントロール実験は比較が行われる度に毎回実行されなければならない。33.チトクロムP450酵素モジュレーター:チトクロムP450酵素モジュレーターは、P450活性を増加又は減少させる、P450を調節する機能を有する任意の分子である。既知P450のモジュレーターとしてはリファンピシンがあるが、これに限定されない。34.チトクロムP450酵素活性化物質:チトクロムP450酵素活性化物質は、P450活性を増加させる、P450を調節する機能を有する任意の分子である。既知P450活性化物質としてはリファンピシンがあるが、これに限定されない。35.チトクロムP450酵素抑制物質:チトクロムP450酵素抑制物質は、P450活性を低下させる、P450を調節する機能を有するが任意の分子である。36.データ出力:データ出力は、無標識バイオセンサー等の分析マシンを用いたアッセイを実行した後に生じる収集された結果をいう。例えば、無標識バイオセンサーのデータ出力は、DMRシグナルであり得る。データ出力は、例えば、インデックスへ操作処理され得ることが理解される。データ出力として、アッセイが分子、KATPチャネル、Rhoキナーゼ、マーカー、抑制物質、KATP抑制物質、マーカー-分子、マーカー-KATP抑制物質等を用いて実施される様々な種類のデータ出力が存在し得ることが理解される。分子-KATP抑制物質の比較を生成する分子データ出力とKATP抑制物質データ出力との比較等、任意の2つの出力の比較がなされ得ることが理解される。通常は、このような比較は、DMRデータ出力とDMRデータ出力とのように、類似のデータ出力間で実施される。37.定義済み経路経路を定義された等の用語は、例えばGαq経路、Gαs経路、Gαi経路、G12/13EGFR上皮細胞増殖因子受容体経路又はPKCプロテインキナーゼC経路などの特定経路である。38.調整解除された無秩序PI3K経路細胞株:調整解除された無秩序PI3K経路細胞株は、経路内の重要なシグナル伝達カスケードタンパク質1又は複数の変化の故にPI3K経路が過反応する細胞株である。これらの変化は、限定するものではないが、刺激されていない細胞内のRas及びPI3Kの構成的活性化をもたらすK-RasPI3Kの上流タンパク質の変異、又は同様にPI3Kの構成的活性化をもたらすPTENPI3Kの下流のネガティブ調節遺伝子調節因子の機能喪失を含む。例えば、調整解除された無秩序なPI3K経路細胞下部は、刺激されていない細胞内で構成的に活性化されるK-Ras変異体を含むA549細胞下部であるKrypuyMetalHighresolutionmeltinganalysisfortherapidandsensitivedetectionofmutationsinclinicalsamplesKRAScodon12and13mutationsinnonsmallcelllungcancerBMCCancer20066e295。PI3K経路に関連しているタンパク質は、限定するわけではないが、1AKT及びPI3Kファミリーであるもの及びこれらの調節因子である:AKT1,AKT2,AKT3,APPL,BTK,CTMP,GNB1,GRB10,GRB2,HSPB1,HSPCA,HSPCB,ILK,INPP5DSHIP,INPPL1,MAPK8IP1JIP1,MTCP1,PDK2,PDPK1,PIK3CAp110a,PIK3CBp110b,PIK3CG,PIK3R1p85a,PIK3R2p85b,PIK3R3,PRKCA,PRKCB1,PRKCZ,PTEN,TCL1A,TCL1B;2IGF-1又は他のRTKシグナル伝達経路:CSNK2A1,ELK1,FOS,GRB2,HRAS,IGF1,IGF1R,IRS1,JUN,MAP2K1,MAPK3,MAPK8,PIK3CB,PTPN11,RAF1,KRAS,RASA1,SHC1,SOS1,SRF;3アクチン組織及び細胞遊走のPI3Kサブユニットp85関連調節因子:AICDA,CDC42,CUTL1,PAK1,PDGFRA,RAC1,RHOA,WASL,ZFYVE21;4PTEN依存細胞サイクル停止因子及びアポトーシス因子:AKT1,CDKN1Bp27,CUTL1,FASLG,FOXO3A,GRB2,ILK,ITGB1,MAPK1,MAPK3,PDK1,PDK2,PTEN,PTK2,RBL2,SHC1,SOS1,ZFYVE21;5BADリン酸化関連の抗アポトーシス経路:AKT1,ASAH1,BAD,CUTL1,GRB2,HRAS,IGF1R,IRS1,MAP2K1,MAPK1,MAPK3,PRKAR1B,RAF1,RPS6KA1,SHC1,SOS1,YWHAH,ZFYVE21;並びに、6mTORシグナル伝達経路に関連するタンパク質:AKT1,CUTL1,EIF3S10,EIF4A1,EIF4B,EIF4E,EIF4EBP1,EIF4G1,FKBP1A,FRAP1,MKNK1,PDK1,PDK2,PR48,PTEN,RHEB,RPS6,RPS6KB1,TSC1,TSC2,ZFYVE21、を含む。39.検出するDetect検出する等の用語は、本開示の装置及び方法の能力であって、分子又はマーカーに誘発された細胞応答を発見又は検知し、かつ異なる分子に対する当該検知された応答を区別する能力をいう。40.薬剤候補分子の直接作用Directaction直接作用等の用語は、細胞上において独立して作用する薬剤候補分子の結果をいう。41.DMRシグナルDMRシグナル等の用語は、光学バイオセンサーを用いて測定された細胞のシグナルであって、刺激の際に細胞の応答によって生成されたものをいう。42.DMR応答DMRresponseDMR応答等の用語は、光学バイオセンサーを用いたバイオセンサー応答をいう。DMRは動的質量再分布すなわち動的な細胞物質の再分布をいう。P-DMRはポジティブなDMR応答であり、N-DMRはネガティブなDMR応答であり、PR-DMRは回復したP-DMR応答である。43.薬剤候補分子Drugcandidatemolecule薬剤候補分子等の用語は、薬剤又はファーマコフォアとして機能する能力を試験される試験分子をいう。この分子は鉛分子と考慮されてもよい。44.効能Efficacy効能等の用語は、理想的又は最適な条件下での所望の効果の大きさを生成する能力をいう。効能は、現実の条件下での変化に関するものである有効性effectivenessに関する概念とは区別されるものである。効能は、分子レベル、細胞レベル、組織レベル、又は系レベルにおける応答を起こす能力と受容体占有率との間の関係である。45.より高くHigher阻害するinhibit等の単語より高く増大するincrease、上昇するelevate、上昇elevation等の用語、又はこれらの変形は、例えばコントロールと比較して、基礎レベルよりも大きく高く増大上昇することをいう。低いlow、より低いlower、低下するreduce、減少するdecrease、低下reduction等の用語、又はこれらの変形は、例えばコントロールと比較して、基礎レベルよりも小さく低く減少低下することをいう。例えば、基礎レベルは、アゴニスト又はアンタゴニストなどの分子を細胞に加える前すなわち当該分子の非存在下における通常の生体内レベルである。阻害する、阻害形態等の用語は低下させる又は抑制することをいう。46.HepG2C3A細胞株:HepG2C3A用語はHepG2細胞株に関連した腫瘍細胞である細胞株である。47.HepG2細胞株:HepG2細胞株はATCC番号HB-8065は、ヒト肝細胞癌細胞株及び分化肝細胞癌で15歳の白人アメリカ人の男性の肝臓組織から派生した永久細胞株である。これらの細胞は形態学的に上皮であり、55のモデルの染色体数を有しており、ヌードマウスにおける腫瘍形成性ではない。細胞は、様々な主要な血漿タンパク質、例えば、アルブミン、トランスフェリン、急性期タンパク質フィブリノーゲン、α2-マクログロブリン、α1-アンチトリプシン、トランスフェリン、プラスミノゲンを分泌する。細胞はヒト成長ホルモンの刺激に応答する。HepG2細胞は分極ヒト肝細胞の研究のためのinvitroモデルシステムに適している。別のよく特徴付けられた偏肝細胞株は、ラット肝由来のハイブリッド細胞株WIF-Bを含む。適切な培養条件によって、HepG2細胞は、invivoで毛細胆管BC及び類洞ドメインにそれぞれ類似するアピカル及び側底細胞表面ドメインの制御可能形成を伴う豊富な形態学的及び機能的な分化を表すhttpwwwATCCorgのサマリーを参照。48.JAKヤヌスキナーゼ媒介シグナル伝達:JAK媒介シグナル伝達は、JAKと相互作用する分子又は物質の上流へ又は下流へ向かうシグナルを言う。ピナシジル等の内因性ATP感受性カリウムKATPイオンチャネルのためのオープナーは、JAKヤヌスキナーゼ媒介シグナル伝達の活性化物質であり得る。JAK及びSTATシグナル伝達及び転写タンパク質Signaltransductionandtranscpriptionproteinは、成長、生存、分化及び病原体抵抗を調節する、多くのサイトカイン受容体システムの重要な成分である。例えば、IL-6又はgp130ファミリーがあり、B細胞分化、原形質細胞発生plasmacytogenesis及び急性期反応を共同規制する。サイトカイン結合は、受容体の二量体化を誘導し、関連するJAKを活性化し、自体と受容体をリン酸化する。受容体とJAK上のリン酸化部位は、Stat3等のSH2含有STATのための、並びにSH2含有タンパク質のための、並びに、MAPキナーゼ、PI3キナーゼ/Akt及び他の細胞経路へ受容体をリンクするアダプタのためのドッキング部位として機能する。ヤヌスキナーゼの変異は、ヒトの血液悪性腫瘍における主要な分子の事象である。Jak2偽性キナーゼドメイン内で特有の体細胞突然変異V617Fは、真性多血症患者の>90で、そして本態性血小板血症、特発性骨髄線維症の患者の大部分で発生している。この変異は、造血前駆細胞の悪性形質転換を導く病的な活性化Jak2キナーゼをもたらす。急性巨核芽球性白血病患者の一部に存在するいくつかのJAK3偽性キナーゼドメインの変異も、JAK3恒常的活性を与える。JAK1における体細胞の機能獲得型変異は、成人T細胞急性リンパ芽球性白血病の約20に発見されている。49.JAK活性化物質:JAK活性化物質は、JAKを活性化する機能を有する任意の分子である。50.JAK抑制物質:JAK抑制物質は、JAKを阻害する機能を有する任意の分子である。既知のJAK抑制物質としては、AG490があるが、これに限定されない。51.JAKモジュレーター:JAKモジュレーターは、JAK活性を増加又は減少させる、JAKを調節する機能を有する任意の分子である。既知のJAKモジュレーターとしては、AG490があるが、これに限定されない。52.分子の存在下分子の存在下等の用語は、培養された細胞が分子に接触又はさらされていることをいう。当該接触又はさらすことは刺激が細胞に接触する前又は同時に行われ得る。53.インデックスIndexインデックス等の用語はデータの集合をいう。例えば、インデックスは1つ以上の変調プロファイルを含む一覧、表、ファイル、又はカタログであり得る。インデックスはデータの組合せから生成されることもできる。例えば、DMRプロファイルは、P-DMR、N-DMR、及びRP-DMRを含み得る。インデックスは、完成したプロファイルのデータ、P-DMRデータ、N-DMRデータ、RP-DMRデータ、これらの任意のデータ点、又はこれら若しくは他のデータの組合せを用いて生成され得る。インデックスはこのような情報の集合である。典型的な場合、インデックスを比較する際のインデックスは同様のデータすなわちP-DMRとP-DMRデータである。i.バイオセンサーインデックスBiosensorindexバイオセンサーインデックス等の用語は、バイオセンサーデータの集合からなるインデックスをいう。バイオセンサーインデックスは、一次プロファイル又は二次プロファイルなどのバイオセンサープロファイルの集合であり得る。当該インデックスは任意の種類のデータを含み得る。例えば、プロファイルのインデックスは、N-DMRデータ点、P-DMRデータ点、その両方、又はインピーダンスデータ点からなることができる。当該インデックスはプロファイル曲線に関する全てのデータ点であってもよい。ii.DMRインデックスDMRインデックス等の用語はDMRデータの集合からなるバイオセンサーインデックスをいう。54.分子の不在と存在下で細胞/マーカーの動態応答分子運動の不在と存在下で細胞/マーカーの応答等の句は、分子の不在と存在下でマーカーによって誘導される全体のアッセイ又は一部のアッセイの細胞応答の時系列を指し、例えばパターン認識分析を使用して、薬理学や分子の作用形態を調べるために直接使用することができる。55.既知の分子Knownmolecule既知の分子等の用語は、既知の薬理学的/生物学的/生理学的/病態生理学的な活性を有する分子をいい、その正確な作用モードは既知の場合未知の場合がある。56.既知のモジュレーターKnownmodulator既知のモジュレーター等の用語は、標的の内の少なくとも1つが既知であり既知の親和性を有するモジュレーターをいう。例えば、既知のモジュレーターはβ2-アドレナリン受容体アゴニストであり得る。既知のモジュレーター又はこれと同様の用語は、標的の少なくとも1つが既知の親和性と共に知られているモジュレーターである。例えば、既知のモジュレーターは、PI3K抑制物質、PKA抑制物質、GPCRアンタゴニスト、GPCRアゴニスト、RTK抑制物質、表皮成長因子受容体中和抗体、ホスホジエステラーゼ抑制物質、PKC抑制物質又は活性剤等であってもよい。57.既知のモジュレーターのバイオセンサーインデックスKnownmodulatorbiosensorindex既知のモジュレーターのバイオセンサーインデックス等の用語は、既知のモジュレーターに対して収集されたデータによって生成されたモジュレーターのバイオセンサーインデックスをいう。例えば、既知のモジュレーターのバイオセンサーインデックスは、細胞パネル上において作用する既知のモジュレーターのプロファイル、及びマーカーパネルに対する既知のモジュレーターの変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネル内の細胞用である。58.既知のモジュレーターのDMRインデックスKnownmodulatorDMRindex既知のモジュレーターのDMRインデックス等の用語は、既知のモジュレーターに対して収集されたデータによって生成されたDMRインデックスをいう。例えば、既知のモジュレーターのDMRインデックスは、細胞パネル上において作用する既知のモジュレーターのプロファイル、及びマーカーパネルに対する既知のモジュレーターの変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネル内の細胞用である。59.リガンドLigandリガンド等の用語は、物質、組成物、又は分子であって、生物学的目的を果たす生体分子に結合して当該分子との錯体を形成することができるものをいう。リガンドとその標的分子との間の実際の不可逆的な共有結合は生物系においては希少である。受容体に結合するリガンドは化学的配座すなわち受容体タンパク質の立体形状を変化させる。受容体タンパク質の配座状態は受容体の機能状態を決定する。結合傾向すなわち結合強度は親和性と呼ばれている。リガンドは、基質、ブロッカー、抑制物質、活性化物質、及び神経伝達物質を含む。放射性リガンドは放射標識付きリガンドであり、一方、蛍光リガンドは蛍光標識付きリガンドであり、その両方は、受容体生物学及び受容体生物化学の研究用のトレーサとしてしばしば使用されるリガンドと考慮されてもよい。リガンドとモジュレーターはほぼ同じ意味で使用される。60.ライブラリLibraryライブラリ等の用語は集合をいう。ライブラリはここに開示された全てものの集合であり得る。例えば、インデックスの集合であるインデックスライブラリ、プロファイルの集合であるプロファイルライブラリ、DMEインデックスの集合であるDMRインデックスライブラリ、分子の集合である分子ライブラリ、細胞の集合である細胞ライブラリ、及びマーカーの集合であるマーカーライブラリであってもよい。ライブラリは、例えば、ランダム又は非ランダムのもの、判定された又は未判定のものであってもよい。例えば、ここに開示されているのは既知のモジュレーターのバイオセンサーインデックス又はDMRインデックスのライブラリである。61.肝細胞:肝細胞等の用語は、肝組織から由来するか又は得られた細胞を言う。肝細胞は、原発性肝細胞、肝細胞等C3A形質転換された肝細胞、及びF2N4細胞等の不死化肝細胞を含むことができる。実施形態では、肝細胞は、繊維芽細胞NIH3T3等のヘルパー細胞を含むことができる。ヒト又はラットの肝星細胞とクッパー細胞に適したヘルパー細胞の例としては、NIH3T3繊維芽細胞、マウス3T3-J2の線維芽細胞やヒトの線維芽細胞等の繊維芽細胞を含む。62.長期間アッセイ長期間アッセイなどの用語は、生きた細胞上の特定の分子の長期的な影響を研究するために使用される。1つの長期的アッセイの特定のタイプは、長期的バイオセンサー細胞アッセイである。一実施形態では、細胞の各タイプは、長期間例えば、8時間、16時間、24時間、32時間、48時間、及び72時間、分子にさらされている。この長期間アッセイは、細胞の健康な状態例えば、生存率、アポトーシス、細胞周期の調節、細胞接着調節、増殖上の分子の影響を判断するために使用される。また、この長期間アッセイは、事象又はシグナル伝達経路の分子誘導性の細胞を研究するために直接使用することができる初期の細胞シグナル応答分子刺激後の例えば、30分、60分、120分、180分が含まれている。別の実施形態において、マーカーの存在下での長期間バイオセンサー細胞アッセイは、分子とマーカーの間に細胞生物学、生理学上の長期的な影響のクロスレギュレーションを試験するために使用される。マーカー群は、分子にて、分子の後又は前に追加することができる。例えば、マーカー例えば、H2O2は細胞パネル内の細胞の少なくとも1種類のアポトーシスをトリガしたときに、1分子が保護であるかどうかを決定するためにそのような長期間アッセイを使用することができる。逆に、このような長期的観点アッセイは分子によって誘発される細胞事象例えば、アポトーシス、又は壊死に対するマーカーの保護又は相乗的な役割を決定するために用いることができることも事実である。63.長期的なバイオセンサーシグナル長期的なバイオセンサーシグナルが長期間アッセイから生産バイオセンサーシグナルである。64.長期DMRシグナル長期DMRシグナル等の用語は、長期的な光バイオセンサー、細胞アッセイから生成された光学バイオセンサーシグナルである。65.マーカーMarkerマーカー等の用語は、バイオセンサーの細胞アッセイにおけるシグナルを生成するリガンドをいう。さらに、当該シグナルは、少なくとも1つの特定の細胞シグナル伝達経路及び/又は少なくとも1つの特定の標的介した少なくとも1つの特定の細胞プロセスの特性でなければならない。当該シグナルは、ポジティブ若しくはネガティブ、又はその組合せ振動であり得る。66.マーカーパネルMarkerpanelマーカーパネル等の用語は、少なくとも2つのマーカーを含むパネルをいう。当該マーカーは異なる経路、同一の経路、異なる標的、又は同一の標的に対するものであり得る。67.マーカーバイオセンサーインデックスマーカーバイオセンサーインデックス等の用語は、マーカーに対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサーインデックスをいう。例えば、マーカーバイオセンサーインデックスは、細胞のパネル上で作用するマーカーのプロファイル、及びマーカーパネルに対するマーカーの変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネルにおける細胞用である。68.マーカーDMRインデックスマーカーDMRインデックス等の用語は、マーカーに対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサーのDMRインデックスをいう。例えば、マーカーDMRインデックスは、細胞パネル上で作用するマーカーのプロファイル、及びマーカーパネルに対するマーカーの変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネルにおける細胞用である。69.材料材料は、物理的な対象の組織に入る何か化学的なものであるか、生化学的なものであるか、生物学的なものであるか又はそれらを混合したものの現実の一部である。70.媒体媒体は、細胞が培養されることができるいかなる混合物でもある。細胞増殖培養液は、微生物又は細胞が培養を経験する対象である。71.模倣するMimic本明細書で使用されている模倣する等の用語は、対象となる客体物の1つ以上の機能を実行することをいう。例えば、分子模倣体は分子の1つ以上の機能を実行する。72.変調するModulate変調すること又はその変形は、細胞標的を介した細胞活性を増大、減少、又は維持することを意味する。これらの単語の内の1つが使用されている場合、コントロールから1、5、10、20、50、100、500、若しくは1000増加する、又はコントロールから1、5、10、20、50、若しくは100減少し得ることが開示されているものとする。73.モジュレーターModulatorモジュレーター等の用語は、細胞標的の活性を制御するリガンドをいう。モジュレーターは標的タンパク質などの細胞標的に結合するシグナル変調分子である。74.変調比較Modulationcomparison変調比較等の用語は、一次プロファイル及び二次プロファイルを正規化した結果をいう。75.変調プロファイルModulationprofile変調プロファイル等の用語は、分子の存在下におけるマーカーの二次プロファイルと分子の非存在下におけるマーカーの一次プロファイルとの間の比較をするものである。当該比較物は、例えば、二次プロファイルから一次プロファイルを差し引くこと又は一次プロファイルから二次プロファイルを差し引くこと、すなわち一次プロファイルに対して二次プロファイルを正規化することによるものである。76.モジュレーターのバイオセンサーインデックスModulatorbiosensorindexモジュレーターのバイオセンサーインデックス等の用語は、モジュレーターに対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサーインデックスをいう。例えば、モジュレーターのバイオセンサーインデックスは、細胞パネル上で作用するモジュレーターのプロファイル、及びマーカーパネルに対するモジュレーターの変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネルにおける細胞用である。77.モジュレーターのDMRインデックスModulatorDMRindexモジュレーターのDMRインデックス等の用語は、モジュレーターに対して収集されたデータによって生成されたDMRインデックスをいう。例えば、モジュレーターのDMRインデックスは、細胞パネル上で作用するモジュレーターのプロファイル、及びマーカーパネルに対するモジュレーターの変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネルにおける細胞用である。78.マーカーのバイオセンサーシグナルを変調するModulatethebiosensorsignalofamarkerマーカーのバイオセンサーシグナルを変調する等の用語は、マーカーを用いた刺激に対する細胞のバイオセンサーシグナル又はプロファイルの変化を引き起こすことをいう。79.DMRシグナルを変調するModulatetheDMRsignalDMRシグナルを変調する等の用語は、マーカーを用いた刺激に対する細胞のDMRシグナル又はプロファイルの変化を引き起こすことをいう。80.分子本明細書で使用されている分子等の用語は、生物学的、生物化学的、又は化学的存在であって、確定的な分子量を有する分子又は化学分子の形態をとって存在するものをいう。分子等の用語は、化学的、生物化学的、又は生物学的分子をいい、そのサイズは問わない。いくつかの分子は炭素を含まない酸素分子などの単純な気体分子及びいくつかの硫黄ベースのポリマーなどのより複雑な分子を含むが、多くの分子は有機分子と呼ばれる形態をとるもの炭素原子を含む分子であり、特に共有結合によって接続されているものである。一般用語の分子は、タンパク質、核酸、炭水化物、ステロイド、有機薬剤、小さな分子、受容体、抗体、及び脂質などの分子における多数の記述的クラス又はグループを含む。適切な場合は、1つ以上のこれらのより記述的な用語タンパク質などの多くのものは分子のグループと重複して記載されているが、分子のサブグループに対する本方法の用途のために、分子がタンパク質などのサブクラスと一般クラスとしての分子との両方を示すことなく、本明細書において使用される。明記されない限り、単語分子は、特定の分子及びその塩例えば薬剤学的に許容できる塩を含む。81.分子混合物Moleculemixture分子混合物等の用語は、少なくとも2つの分子を含む混合物をいう。当該2つの分子は、構造的に異なるものすなわち光学異性体enantiomers、組成的に異なるもの例えば、プロテインアイソフォーム、グリコフォーム、又は異なるポリエチレングリコールPEGの変形物を有する抗体など、又は構造的及び組成的に異なるもの例えば、未浄化の天然抽出物又は未浄化の合成化合物であり得るが、これらに限定されない。82.分子のバイオセンサーインデックスMoleculebiosensorindex分子のバイオセンサーインデックス等の用語は、分子に対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサーインデックスをいう。例えば、分子のバイオセンサーインデックスは、細胞パネル上で作用する分子のプロファイル、及びマーカーパネルに対する分子の変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネルにおける細胞用である。83.分子のDMRインデックスMoleculeDMRindex分子のDMRインデックス等の用語は、分子に対して収集されたデータによって生成されたDMRインデックスをいう。例えば、分子のDMRインデックスは、細胞パネル上で作用する分子のプロファイル、及びマーカーパネルに対する分子の変調プロファイルからなることができ、各マーカーパネルは細胞パネルにおける細胞用である。84.分子インデックスMoleculeindex分子インデックス等の用語は分子に関するインデックスをいう。85.分子処理された細胞Molecule-treatedcell分子処理された細胞等の用語は、分子にさらされた細胞をいう。86.分子変調インデックスMoleculemodulationindex分子変調インデックス等の用語は、細胞パネル上で作用するマーカーパネルのバイオセンサー出力シグナルを変調する分子の能力を表示するインデックスをいう。当該変調インデックスは、分子の存在下におけるマーカーを用いた刺激の際の細胞応答の特定のバイオセンサー出力シグナルのパラメータを、分子の非存在下におけるものに対して正規化することによって生成される。87.分子薬理Moleculepharmacology分子薬理等の用語は、システム細胞生態systemscellbiology又はシステム細胞薬理systemscellpharmacologyをいい、すなわち細胞上で作用する分子の作用モードである。分子薬理は、毒性、特定の細胞プロセス例えば、増殖、分化、活性酸素種シグナル伝達に影響を与える能力、又は特定の細胞標的例えば、KATPチャネル、PKA、PKC、PKG、JAK2、MAPK、MEK2、若しくはアクチンを修飾する能力これらに限定されないによってしばしば特性化される。88.生来細胞天然の細胞は、遺伝子工学によらなかったいかなる細胞でもある。天然の細胞は一次細胞、不滅にされた細胞、形質転換細胞株、幹細胞、又は、幹細胞を誘導した細胞であり得る。89.通常のKATP経路細胞株:通常のKATP経路細胞株は、KATP経路が規制緩和されていない、よって、構成的に活性化されていない細胞株である。しかし、かかる細胞株は依然としてKATP経路の恒常的活性化を導くことができない特定のタンパク質変異体を含むことができる。90.正規化することNormalizing正規化すること等の用語は、例えば少なくとも1つの共通変数を除去するために、データ、プロファイル、又は応答を調節することを意味する。例えば、2つの応答が生成され、その一方が細胞上で作用するマーカーに対するものであり、他方が細胞上で作用するマーカー及び分子に対するものである場合、正規化することとは、分子の非存在下におけるマーカー誘発された応答と分子の存在下における当該応答とを比較してマーカーのみによる応答を除去することをいい、これによって正規化された応答はマーカーに対する分子の変調による応答を示すこととなる。変調比較はマーカーの一次プロファイル及び分子の存在下におけるマーカーの二次プロファイル変調プロファイルを正規化することによって得られる。91.非ウイルス性感染症:非ウイルス性感染症等の用語は、細胞が細菌や寄生虫等のウイルスではない生物に感染した状態を言う。これは、細胞がウイルス以外の生物で汚染された状態を意味する。92.任意のOptional任意の、任意で等の用語は、その後に記載されている事象又は状況が発生する場合と発生しない場合があることを意味し、かつ当該記載が当該事象又は状況の発生する例と発生しない例とを含むことを意味する。例えば、任意で組成物は組合せを含むとの表現は、当該組成物が異なる分子の組合せを含む場合と組合せを含まない場合とがあることを意味し、この表現は当該組合せと当該組合せではないことすなわち当該組合せの個別のメンバーとの両方を含む。93.又は本明細書で使用されている又は等の用語は、特定の一覧の中の1のメンバー及び当該一覧のメンバーの任意の組合せを含むことを意味する。94.パネルPanelパネル等の用語は、所定の組の試料例えば、マーカー、細胞、又は経路をいう。パネルはライブラリから試料を選定して作成され得る。95.パニングパニング等の用語は、一つ以上の受容体又は細胞標的の存在のための一つ細胞又は細胞群をスクリーニングすることを意味する。96.経路:本明細書で使用される経路は、細胞内で起こる化学反応の一連である。経路内において、1つの分子又は物質は修飾されて他の分子又は物質に導かれてなり、そして調節される。しばしば、キナーゼ等の酵素は、これらの修飾に関与している。経路は、細胞内だけでなく、細胞小器官から細胞小器官に、細胞表面から核に発生する、又は細胞質から細胞小器官や細胞小器官への細胞質に生じ得る。修飾や調節は、化学的例えば、リン酸化又は物理的ある場所から別の場所への例えば、転座なものが含まれる。97.期間期間は、時間の経過を表している任意の期間をいう。例えば、1秒、1分、1時間、1日及び1週は、全ての期間である。98.プロファイルプロファイル等の用語は、細胞等の組成物に対して収集されたデータをいう。プロファイルは、本明細書において説明されているように、無標識バイオセンサーから収集され得る。i.一次プロファイルPrimaryprofile一次プロファイル等の用語は、バイオセンサー応答又はバイオセンサー出力シグナルであり、すなわち分子が細胞に接触した際に得られたプロファイルをいう。典型的な場合、一次プロファイルは、最初の細胞応答を正味ゼロすなわち基準線のバイオセンサーシグナルに対して正規化した後に得られる。ii.二次プロファイルSecondaryprofile二次プロファイル等の用語は、分子の存在下におけるマーカーに対する細胞のバイオセンサー応答又はバイオセンサー出力シグナルをいう。二次プロファイルは、マーカー誘発された細胞応答すなわちバイオセンサー応答を変調する分子の能力を示すものとして使用されることができる。iii.変調プロファイルModulationprofile変調プロファイル等の用語は、分子の存在下におけるマーカーの二次プロファイルと分子の非存在下におけるマーカーの一次プロファイルとの間の比較をするものである。当該比較物は、例えば、二次プロファイルから一次プロファイルを差し引くこと又は一次プロファイルから二次プロファイルを差し引くこと、すなわち一次プロファイルに対して二次プロファイルを正規化することによるものである。99.正のコントロールPositivecontrol正のコントロール等の用語は、データ収集条件がデータ収集を導き得ることを示すコントロールをいう。100.刺激後刺激後等の用語、細胞アッセイにおける分子と細胞の刺激後の時間をいう。101.潜在的KATP抑制物質:潜在的KATP抑制物質は、分子が本明細書で説明として既知KATP抑制物質に類似していると判定された任意の分子である。既知のKATP抑制物質としてはスルホニル尿素があるが、これに限定されない。既知KATP抑制物質は、比較のために参照する分子として用いることができる。102.潜在的KATPモジュレーター:潜在的KATPモジュレーターは、任意の分子、化合物又は同様アッセイにおけるKATP修飾薬に機能が本明細書に開示されている組成物である。103.潜在的RhoキナーゼROCK抑制物質潜在的RhoキナーゼROCK抑制物質は、分子が本明細書に記載した既知ROCK抑制物質に類似していると判定された任意の分子である。既知のROCK抑制物質Y27632、H-89、H-8が含まれるが、これらに限定されない。104.KATP抑制物質及び既知のKATP抑制物質:KATP抑制物質は、KATPの抑制物質であることが決定されている任意の分子である。既知のKATP抑制物質としては、スルホニル尿素、これらに限定されない。既知KATP抑制物質は、比較のために参照する分子として用いることができる。105.KATP細胞株:KATP細胞株等の用語は、少なくとも1つのKATPチャネルを発現する細胞の種類をいう。KATP細胞株の非限定的な例は、HepG2又はHepG2C3Aである。mitoKATP等の用語は、ミトコンドリアにおけるKATPを言うとを理解されている。106.KATP抑制物質:KATP抑制物質は、KATPチャネルを開放から抑制する機能を有する任意の分子、化合物、又は組成物である。107.KATPモジュレーター:KATPモジュレーターは、KATPチャネルを開く又は開口から抑制する、KATPチャネルを調節する機能を有する任意の分子、化合物、又は組成物である。108.カリウムチャネルオープナーKCO:カリウムチャネルオープナーは、KATPチャネルを開く機能を有する任意の分子、化合物、又は組成物である。109.増強するPotentiate増強する、増強された等の用語は、分子によって引き起こされた細胞内のマーカーのバイオセンサー応答の特定のパラメータを増大することをいう。分子の存在下における同一の細胞内におけるマーカーの二次プロファイルと同一のマーカーの一次プロファイルとを比較することによって、当該分子による細胞のマーカー誘発されたバイオセンサー応答の変調を計算することができる。ポジティブな変調は、マーカーに誘発されたバイオセンサーシグナルを増大させる分子を意味する。110.プロファイルプロファイル等の用語は、細胞等の組成物に対して収集されたデータをいう。プロファイルは、本明細書において説明されているように、無標識バイオセンサーから収集され得る。111.パルス刺激アッセイパルス刺激アッセイ等の用語は、細胞が非常に短い時間例えば、数秒又は数分だけ分子にさらされている場合に、使用され得る。このパルス刺激アッセイは、細胞/標的に作用する分子の動態を研究するのと同様に、マーカーによって誘発されるバイオセンサーシグナルへの影響を研究するために使用することができる。パルス刺激アッセイは、単に分子を添加した直後、所定の時間で液体ハンドリング装置によって細胞アッセイバッファ溶液で分子溶液を交換することにより行うことができる。112.効力Potency効力等の用語は、所定の強度の効果を得るのに必要な量で表された分子活性の測定結果をいう。効力は親和性及び効能に比例する。親和性は受容体に結合する薬物分子の能力である。113.刊行物本願を通して、様々な刊行物が参照されている。これら刊行物の開示内容は、当該技術分野の状況をより完全に説明するために、その全てにおいて、参照することにより本願に組み込まれているものとする。開示された参照物は、当該参照物の属する文中において記載されている材料においても、個別かつ詳細に参照することにより本明細書に組み込まれているものとする。114.パルス刺激アッセイパルス刺激アッセイ等の用語は、細胞が非常に短い時間例えば、数秒又は数分だけ分子にさらされている場合に、使用され得る。このパルス刺激アッセイは、細胞/標的に作用する分子の動態を研究するのと、同様に、マーカーによって誘発されるバイオセンサーシグナルへの影響を研究するために使用することができる。パルス刺激アッセイは、単に分子を添加した直後、所定の時間で液体ハンドリング装置によって細胞アッセイバッファ溶液で分子溶液を交換することにより行うことができる。115.範囲Ranges範囲は、1の約に修飾された特定の値から、及び/又は他の約に修飾された特定の値まで、として本明細書において表現されることができる。このように範囲が表現された場合、他の実施例は、一方の特定の値から他方の特定の値までか、一方の特定の値以上か、又は他方の特定の値以下を含む。同様に、値が、先行詞約を使用することによって、近似値として表現された場合、この特定の値は他の実施例を形成する。さらに、当該範囲の終点の各々は、その他の終点に関連してかつ当該他の終点とは独立して重要なものである。さらに、本明細書には多数の値が開示されており、当該値の各々は、その値に加えて約に修飾された特定の値として本明細書に開示されているものとする。例えば、値10が開示されているならば、約10も開示されているものとする。さらに、当業者に適切に理解されるように、1の値が当該値以下と開示されている場合、当該値以上及びその値間の可能な範囲も開示されているものとする。例えば、値10が開示されているならば、10以下及び10以上も開示されているものとする。さらに、本願を通して、データは多数の異なる形式で与えられており、このデータは、終点、始点、及び当該データ点の任意の組合せを表すものであるとする。例えば、特定のデータ点10及び特定のデータ点15が開示されているならば、10より大きい、15より大きい、10以上、15以上、10未満、15未満、10以下、15以下、10、及び15が10と15との間と同様に考慮され開示されているものとする。さらに、2つの特定の単位間の各単位も開示されているものとする。例えば、10及び15が開示されているならば、11、12、13、及び14も開示されているものとする。116.受容体Receptor受容体等の用語は、細胞の原形質膜又は細胞質に組み込まれているタンパク質分子であって、可動性のシグナル伝達分子又はシグナル分子が結合し得るものをいう。受容体に結合する分子はリガンドと呼ばれ、ペプチド神経伝達物質など、ホルモン、調合薬、又は毒素であることができ、さらに受容体は、当該結合が起きた際に、通常は細胞応答を開始する構造変化に進入する。しかし、いくつかのリガンドは応答を誘発することなく受容体を遮断するのみである例えばアンタゴニスト。受容体におけるリガンド誘発変化は、当該リガンドの生物学的活性を構成する生理学的変化を引き起こす。117.豊富なバイオセンサーシグナルRobustbiosensorsignal豊富なバイオセンサーシグナルはバイオセンサーシグナルであって、その振幅がノイズレベル又はネガティブコントロール応答よりも十分に例えば、3倍、10倍、20倍、100倍、又は1,000倍大きいシグナルである。しばしば、当該ネガティブコントロール応答はアッセイバッファ溶液すなわち賦形剤を加えた後の細胞のバイオセンサー応答である。当該ノイズレベルは他の溶液を加えない場合の細胞のバイオセンサーシグナルである。細胞が他の溶液を加える前から溶液に浸されているのは影響しない。118.豊富なDMRシグナルRobustDMRsignal豊富なDMRシグナル等の用語は豊富なバイオセンサーシグナルのDMRの形態をとったものをいう。119.Rho媒介シグナル伝達:Rho媒介シグナル伝達は、Rhoキナーゼと相互作用する分子又は物質の上流又は下流の任意のシグナル伝達を言う。ピナシジル等の内因性ATP感受性カリウムKATPイオンチャネルのためのオープナーは、Rho媒介シグナル伝達の活性化物質であり得る。120.Rhoキナーゼ抑制物質:RhoキナーゼROCK抑制物質は、例えば、Y-27632等のRhoキナーゼ、ROCKキナーゼ抑制物質IIIROCKout、Rhoキナーゼ抑制物質、IV、H89、H8ファミリーを阻害することが決定されている任意の分子又は物質である。121.ROCK抑制物質応答性細胞株ROCKキナーゼ抑制物質応答性細胞株は、既知のROCK抑制物質によるROCKの基礎活性を阻害するが、細胞内で検出可能なバイオセンサーシグナルを導く任意の細胞株である。例えば、A549はまた、ROCK抑制物質応答性細胞株である。K-RAS変異体を活性化する存在に起因したA549、規制緩和PI3K/AKT活性が含まれて刺激されていない。ROCKはPI3Kの下流標的である。したがって、Y27632又はH89等の既知ROCK抑制物質によるROCKの阻害基礎活性は、A549細胞における豊富なDMRシグナルを導き得る。122.ROCK抑制物質:ROCK抑制物質は、ROCKを阻害する機能を有する任意の分子である。既知ROCK抑制物質としては、Y27632、H-89、H-8があるが、これらに限定されない。123.ROCKモジュレーター:ROCKモジュレーターは、ROCK活性を増加又は減少させる、ROCKを調節する機能を有する任意の分子である。有名なROCKモジュレーターとしてはY27632、H-89、H-8があるが、これらに限定されない。124.応答Response応答等の用語は刺激に対する反応をいう。125.サンプルSampleサンプル又はこれと同様の用語は動物、植物、真菌などであって、天然物、天然抽出物等、動物由来の組織若しくは器官、細胞対象物内のもの、対象物から直接取出したもの、又は培養状態を維持している細胞若しくは培養された細胞株由来の細胞、細胞溶解物又は溶解物の一部若しくは細胞抽出物、又は細胞若しくは細胞材料例えば、ポリペプチド又は核酸から派生した1つ以上の分子を含む溶液をいい、これらは本明細書に記載されているようにアッセイされる。サンプルは体液又は排出物例えば、血液、尿、便、唾液、涙、胆汁であるがこれらに限定されないであって細胞又は細胞成分を含むものであってもよい。126.媒体を含んでいる血清媒体を含んでいる血清などの用語は、血清例えばウシ胎児血清を含むあらゆる細胞培地である。Fetalウシ血清又はウシ胎仔血清は、血漿タンパクフィブリノーゲンがフィブリンに変わって、クロットに残るプロセスである血液の凝析の後に残るプラズマの一部であること。ウシ胎児血清はウシの胎児の血液から調製された血清であり、ウシの胚から引き出される血液から由来する。ウシ胎児血清FBSは抗体において低くて、より多くの増殖因子を含むことのために最も広く使われている血清であり、そして、多くの異なる応用の可転性を考慮に入れる。FBSが、真核細胞を培養する際に使われる。127.血清枯渇媒体血清枯渇媒体は、血清を含まない細胞培地である。128.短い期間短い期間等の用語は、基準培養の下の細胞の重複より概して短い時間である。129.短期アッセイ短期アッセイなどの用語は、生きた細胞上の特定の分子の短期的な影響を研究するために使用される。短期アッセイの特定のタイプは、短期的なバイオセンサー細胞アッセイである。一実施形態では、細胞の各タイプは、時間の短い期間例えば、5分、10分、30分、45分、60分、90分、180分、240分の分子にさらされている。この短期的なアッセイは、しばしば分子が誘導する細胞シグナリング事象又は経路を研究し、マーカー誘発細胞応答を調節する分子の能力を研究するために直接使用することができる初期の細胞シグナル応答を検出するために使用される。130.シグナル伝達:シグナル伝達は、経路内の他の分子又は物質の他の変性をもたらす、経路内の1の分子又は物質の変性をいう。131.シグナル伝達経路定義された経路を等の用語は、シグナル例えば外因のリガンドを受信することから細胞の応答例えば細胞標的の発現増大までの細胞の経路である。場合によっては、受容体に結合するリガンドによって生じる受容体活性化は、リガンドに対する細胞応答に直結する。例えば、KCO、ピナシジルは、イオンチャネルの部分である細胞表面受容体を活性化することができる。KATPチャネルに結合するピナシジルは、当該受容体の一部であるカリウム選択性イオンチャネルを開く。KATP活性化は、負の電荷を帯びたカリウムイオンが、細胞へ進入して、チャネルが存在する細胞に応じて様々な作用を促進することを可能にする。しかし、多くの細胞表面受容体において、リガンド-受容体相互作用は細胞の応答に直結していない。活性化された受容体は、細胞の挙動におけるリガンドの最終的な生理学的効果が生成される前に、まず細胞内部の他のタンパク質と相互作用しなければならない。しばしば、いくつかの相互作用する細胞タンパク質の鎖の挙動は受容体の活性化に従って変更される。受容体活性化によって誘発された細胞変化のすべてのセットはシグナル伝達機序すなわちシグナル伝達経路と呼ばれる。当該シグナル伝達経路は比較的単純であるか、又は非常に複雑であるかである。132.インデックスの類似性:インデックスの類似性又はこれと同様の用語は、2つのインデックス又は少なくとも3つのインデックスの類似性を表す用語であり、1つは分子に関し、インデックスのパターンに基づきかつ/又はスコアのマトリクスに基づいている。スコアのマトリクスは、対応する細胞内の異なった分子の一次プロファイルのシグネチャsignature、及びマーカーの各々に対する異なった分子の変化プロファイルの特性及び割合等のそれらの対照部分counterpartに強く関連している。例えば、より高いスコアがより類似している特性に与えられ、より低いか又は負のスコアが非類似な特性に与えられる。分子変化インデックスにあるのは、変化の3つのタイプ、ポジティブ正、ネガティブ負及びニュートラルのみであるので、類似性マトリクスは比較的単純である。例えば、単純なマトリクスは、同一の変化例えば、ポジティブ変化に1のスコアを付与し、非類似の変化に-1のスコアを付与する。代替的に、異なったスコアが異なった基準を用いて変化のタイプに与えられ得る。例えば、10、20、30、40、50、60、100、200等のポジティブ変化に、1、2、3、4、5、6、10、20のスコアが対応して与えられ得る。反対に、ネガティブ変化対しては、同様であるが反対符号のスコアが与えられ得る。133.安定したStable医薬組成物に関して使用される場合、安定した等の用語は、当業者の間では、特定の保存条件下での所定期間の活性材料の喪失が特定の量未満、通常は10未満であることを意味する。組成物が安定していると考慮されるのに必要な時間は、製品の用途に関係しており、かつ製品の生産、品質管理及び検査のための保管、最終的な使用の前に再度保管される卸売業者への輸送又は消費者への直接の輸送における商業的実用性によって定められる。数ヶ月の安全率を含めると、医薬品の最低製品寿命は通常1年であり、18ヶ月よりも長いのが好ましい。本明細書で使用されている用語安定したは、これら市場の実情と、2度から8度の間の冷蔵状態などの容易に達成可能な環境条件で製品を保管及び輸送する能力と、を考慮している。134.物質Substance物質等の用語は任意の物理的客体物をいう。材料は物質である。分子、リガンド、マーカー、細胞、タンパク質、及びDNAは物質と考えられる。機械又は製品は、物質そのものではなく、物質から作られているものと考えられる。135.対象物Subject本明細書を通して使用されている対象物等の用語は固体を意味する。従って、対象物は、例えば、犬、猫などの家畜化された動物、家畜類牛、馬、豚、羊、ヤギなど、実験動物マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど、哺乳類、ヒト以外の哺乳類、霊長類、ヒト以外の霊長類、齧歯動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び他の動物を含むことができる。1つの対象物の態様は、霊長類又はヒトなどの哺乳類である。対象物はヒト以外であってもよい。136.懸濁細胞:懸濁細胞は、好ましくは細胞が付属しないか又は培養の間、基質の表層に付着しない媒体で培養される細胞又は細胞株を意味する。しかし、懸濁細胞は、一般に、化学的例えば、共有結合不略又は抗体-細胞表面受容体相互作用、又は物理的手段例えば、重力の力によるバイオセンサーが包埋されるウェルの底へ沈降によって、バイオセンサー表面に接触させることができる。このように、懸濁細胞がまた、バイオセンサー細胞の分析のために使われることができる。137.試験分子試験分子等の用語は、当該試験分子に関するいくつかの情報を得る手法において使用される分子をいう。試験分子は未知の分子又は既知の分子であることができる。138.処理治療することTreating処理すること、処理等の用語は少なくとも2つの意味で使用されることができる。第1に、処理すること、処理等の用語は投与すなわち対象物に向けてとられる行為をいう。第2に、処理すること、処理等の用語は2つのものを混合することをいい、当該2つのものは例えば分子及び細胞などの2つ以上の物質である。この混合は、当該少なくとも2つの物質を接触し得る状態にさせる。例えば、細胞を処理して高い密集度を達成するは、細胞が密集度に達するように細胞を世話又は操作することを意味する。治療、処置等の用語が疾病に関する文脈において使用される場合、これらは例えば治癒又は症状の軽減を暗示するものではない。治療学的用語又はこれと同様の用語が治療すること、治療等の用語に伴って使用される場合、基礎疾患の症状が軽減すること及び/又は基礎的な1つ以上の細胞的原因、生理学的原因、若しくは生物化学的原因、若しくは症状を起こす機序が軽減されることを意味する。この文脈において使用される軽減とは、単に疾病の生理学的状態だけでなく、疾病の分子状態を含む疾病の状態が比較的低減されることを意味すると、理解される。139.トリガTriggerトリガ等の用語は応答などの事象を起こす又は開始する動作や作用をいう。140.未知分子未知の分子等の用語は、未知の生物学的、薬理学的、生理学的、病態生理学的な活性を有する分子である。141.値Values組成物、要素、添加物、細胞型、マーカーなどの態様及びそれらの範囲のために開示された特定かつ好ましい値は、説明のためだけのものであり、それらは、定義された他の値又は定義された範囲中の他の値を除外するものではない。本開示の組成物、装置及び方法は、それらが有するどんな値又は値のどんな組み合わせ、特定の値、さらなる特定の値及びここに開示された好ましい値のものも含む。従って、ここに開示された方法、組成物、製品及び機械は、本明細書に記載された様々な成分、ステップ、分子及び組成物等を含み、これらで構成され、又は本質的にこれらで構成されるような態様にて結合され得る。それらは、例えば、ここに定義したようなリガンドを含む分子を特性化する方法、ここに定義したようなインデックスを生成する方法、又は、ここに定義したような創薬の方法において使われることができる。142.ウイルス感染:ウイルス感染等の用語は、細胞がウイルスに感染した状態をいう。これは、細胞がウイルスに汚染された状態を意味する。D.例:1.実験手順例1-5:i.試薬:キナーゼ抑制物質ライブラリ、イオンチャネルモジュレーターライブラリ及びラトランクリンAはBIOMOLInternationalLP社プリマスミーティング、ペンシルバニア州から購入し、これらを除いて、すべての化合物はSigmaAldrich社から購入した。細胞培養試薬はすべてGIBCO細胞培養製品から購入した。ii.細胞培養:すべての細胞株はATCCから購入し、ATCCの指示に従って維持された。細胞は、ATCCの指示に従って週1-2回に継代培養した。15未満の継代細はすべての実験に使用した。iii.RT-PCR:HepG2C3A細胞の総RNAは、Qiagen社からのRNeasyキットCat75144を用いて、細胞15~30万個の細胞の集約的な単層で1つのT-75フラスコから抽出された。全RNA抽出の可能なDNA混入は、RNaseフリーのDNaseセットCat79254、Qiagen社を用いて消化された。RT-PCRに用いたプライマー配列はAmJRespirCellMolBiol26135143及びFASEBJ1318331838からのものであった。全てのプライマーは、SigmaAldrich社によって合成された。RT-PCRは、Qiagen社からのワンステップRT-PCRキットCat210212を用いて行った。PCR条件は以下の通りであった。50°Cで30分間、95°Cで15分間、続いて、94°Cで1分間の60サイクル、57°Cで1.5分及び72°Cで2分、72°Cで10分間の最終延長とした。iv.RNAiノックダウン:全てのsiRNAは、予測ノックダウン効率の序列に基づいて、SigmaAldrich社から事前に設計されたsiRNAデータベースから選択された。TsiRNAIDは、SUR1RefseqID:NM_000352に対しSASI_Hs01_00092347、SASI_Hs01_00092348及びSASI_Hs01_00092349で、SUR2RefseqID:NM_005691に対しSASI_Hs01_00061301、SASI_Hs01_00061302及びSASI_Hs01_00061303で、Kir6.1RefseqID:NM004982に対しSASI_Hs01_00113357、SASI_Hs01_00113358及びSASI_Hs01_00113359で、Kir6.2RefseqID:NM000525に対しSASI_Hs01_00220256、SASI_Hs01_00220257及びSASI_Hs01_00220258で、SASI_Hs01_00065573、SASI_Hs01_00065571、SASI_Hs01_00065570に対しROCK1RefseqID:NM_005406で、ROCK2RefseqID:NM_004850に対しSASI_Hs01_00204253、SASI_Hs01_00204252、SASI_Hs01_00204251で、SASI_Hs01_00174614、SASI_Hs01_00174613に対しJAK1ReqID:NM_002227で、SASI_Hs02_00338675、SASI_Hs01_00041547に対しJAK2ReqID:NM_004972で、AK3ReqID:NM_000215に対しJSASI_Hs01_00118128、SASI_Hs02_00302103である。siRNAの形質移入は、製造元の指示に従って、SigmaAldrich社からN-TERのナノ粒子siRNA形質移入システムCatN2913を用いて実行された。簡単に説明すると、5000個の細胞を、Epic384ウェルプレートの各ウェルに播種した。翌日、細胞を50nMのsiRNAでトランスフェクトし、新鮮な細胞培養培地と交換する前に、24時間培地を含むsiRNA中でインキュベートした。エピック細胞アッセイを形質移入の48時間後に行った。ウェスタンブロット実験のために、C3A細胞を、6ウェル組織培養処理プレートに3x105/ウェルで播種した。細胞を、播種後20時間、ROCK1又はROCK2のsiRNAランク1を用いて最終濃度50nMでトランスフェクトした。形質移入24時間後に、培地を含む形質移入試薬を除去し、新鮮な培地に交換した。形質移入48時間後に、細胞をウェスタンブロットのために細胞を溶解した。v.免疫沈降及びウエスタンブロット:ROCK1及びROCK2のウェスタンブロットのために、各サンプルの120μlの細胞溶解液を40μlの4×SDSサンプルバッファと混合し、そして5分間100°Cで沸騰させた。タンパク質を10SDSゲル上で分離し、各サンプルの15μlをゲルに添加した。膜を、1時間、ウサギ抗ROCK1sc-5560又はウサギ抗ROCK2sc-5561又はヤギ1時間抗アクチンsc-16161:500希釈でブロットし、その後、ヤギ抗ウサギ又はウマ抗ヤギ抗体1:2000希釈で複合化した第2HRPで15分間ブロットした。Kir6.2のために、1億C3A細胞を1NP40溶解バッファに溶解し、タンパク質Aセファロースシグマ、P3391とで複合化したヤギ抗Kir6.2をsc-11228、G16で免疫沈降した。タンパク質を10SDSゲル上で分離し、全細胞溶解物又はミトコンドリア溶解物の30μlをゲルに添加した。膜をヤギ抗Kir6.2をsc-11228、1:200で1時間ブロットし、その後、ヤギ抗ウサギ又はウマ抗ヤギ抗体1:2000希釈で複合化した第2HRPで30分間ブロットした。ミトコンドリアC3Aを、Invitrogenからの培養細胞用ミトコンドリア単離キットCatKHM3031を使用して1億C3A細胞から単離した。vi.ヒト肝細胞:ヒト初代肝細胞がXenoTechH1500.H15AロットNo.770から購入された。メーカーの指示に従って、細胞を解凍しXenotech肝細胞単離キットCat:K2000を用いて精製した。細胞50,000個/ウェルは、1日目に10FBSを含むガラクトースフリーMFEプレーティングミディアムコーニング社製を用いて、コラーゲンIをコーティングした96ウェルプレートBDBioscience社、Cat354407に播種された。培地は2日目に0.25mg/mlマトリゲルBDBioscience社、Cat356234を用いて、10FBSを含むMFE維持培地に変更された。細胞は1日目から8日目まで5CO2により37°Cでインキュベートされた。5日目から、細胞は、CYP3A4の誘導のために10μMのリファンピシンCatR3501、SigmaAldrich社製で、又はCYP1A2の誘導のために50μMのオメプラゾールCatO104、SigmaAldrich社で、又は72時間DMSOの等量で、処理した。8日目には、CYP3A4及びCYP1A2のアッセイがP450-Glo登録商標CYP3A4アッセイキット又はP450-Glo商標CYP1A2アッセイキットCatV8902とV8772、Promega社を使用して行われた。細胞数はCytoTox96登録商標非放射性細胞毒性アッセイCatG1780、Promega社を用いて正規化された。vii.PCR-アレイ:ヒト肝細胞を上記のように培養した。5日目に、細胞を採取し、そして全RNAを、カラムDNase消化Cat79254上でQiagen社のRNeasyミニキットCat74104を用いて抽出した。各サンプルのRNA濃度を、クワント-IT商標RiboGreen登録商標RNAアッセイキットInvitrogen社、CatR11490を用いて定量し、PCR-アレイ実験まで-80°Cで保存した。アレイプレートヒト癌の薬剤耐性及び代謝PCRアレイ、CatPAHS-004、SABioscience社、フレデリック、メリーランド州を、SABioscience社マニュアル部品1022Aに従って調製した。1μgの総RNAを96ウェルアレイプレートごとに使用し、それぞれの全RNAサンプルを複製でテストした。PCR-Arrayを、ソフトウェアSDS2.3を用いて、96ウェル標準ブロックでABI-7900HT上で行った。PCR条件を、ユーザマニュアル部品1022Aで提案されているように設定した。SABioscience社オンライン分析ツールを用いてデータを分析した。viii.光バイオセンサーシステム及び細胞アッセイ:Epic登録商標の波長インターロゲーションシステムwavelengthinterrogationsystemコーニング社、コーニング、ニューヨーク州を全細胞の検出に使用した。このシステムは、温度制御装置、光学検出部、ロボットによるオンボード液体ハンドリングユニットから構成されている。検出部は、統合された光ファイバを中心とし、約15秒の時間間隔で、細胞応答の運動測定を可能にする。化合物溶液を、オンボードの液体ハンドリングユニットすなわち、ピペッティングを使用して導入した。RWGバイオセンサーは、センサー表面に近い局所屈折率の微細な変化を検出することが可能である。細胞内の局所屈折率はバイオマス例えば、タンパク質、分子複合体の密度とその分布の関数であるので、バイオセンサーは、非侵襲的にネイティブ細胞内のリガンド誘導動的質量再分配を検出するために、そのエバネッセント波を利用している。エバネッセント波は細胞内にて約150nmの特性検知体積を導く距離に亘って延びて指数関数的に減衰しているので、受容体活性化を通して媒介された任意の光学応答は、バネッセント波がサンプリングされている細胞一部にわたる平均値を表していることを示唆している。受容体活性化下流の多くの細胞事象の集合はリガンド誘導DMRの動態及び振幅を決定する。バイオセンサー細胞アッセイのために、化合物溶液を、HBSS1×ハンクス平衡塩溶液、プラス20mMのHepes、pH7.1で保存され濃縮された溶液を希釈することによって作成し、そして、384ウェルのポリプロピレンコンパウンド保存プレートに移し複合ソースプレートを調製した。二段階アッセイを行った際には、次の2つの化合物ソースプレートを個別に作成した。並行して、細胞をHBSSで2回洗浄して、30μLのHBSS中で維持し、細胞アッセイプレートを調製した。そして、細胞アッセイプレート及び複合ソースプレートの両方を、リーダシステムのホテルでインキュベートした。インキュベーションの後、細胞アッセイマイクロプレート内のすべてのバイオセンサーのベースラインの波長を記録し、ゼロに正規化した。その後、2ないし10分の連続記録を実行してベースラインを確立し、そして、細胞が定常状態に達していることを確認した。次に、細胞応答は、オンボード液体ハンドラを用いて細胞アッセイプレート中に化合物溶液の10μlを転送することによって引き起こされた。すべての研究を、制御された温度28°Cで行った。それぞれ少なくとも3つの複製した少なくとも2つの独立した実験の組を実施した。変動のアッセイ係数は<10であることが分かった。2.例1:肝細胞内のミトコンドリアKATPチャネルの存在:KATPチャネルは細胞の代謝レベルを細胞膜興奮性にリンクする分子センサーとしての役割を果たす。KATPチャネルは細胞内MgADPとの相互作用によって活性化され、ATPの高レベルによって阻害される。KATPチャネルは細胞膜とミトコンドリア内膜と核膜に発見されている。KATPチャネルの発現を確認し肝細胞株HepG2C3A内の特定のKATPチャネルサブユニットを決定するために、HepG2C3A細胞から単離された全RNAでの、Kir6.1、Kir6.2、SUR1、SUR2A及びSUR2Bに特定なプライマーを用いて、RT-PCRを実行した。図1に示されているように、Kir6.1、Kir6.2、SUR2A及びSUR2BはHepG2C3A細胞で発現されたが、SUR1サブユニットではなかった。全ての細胞パッチクランプ記録はHepG2C3A細胞内のいかなるKの選択的な電流を検出することができなかった、KATPチャネルは細胞膜に存在しないかもしれないことを示す。ミトコンドリアKATPチャネルは、ラット肝細胞で報告されている。ウェスタンブロットに続くHepG2C3A細胞からのミトコンドリアの単離は、全細胞溶解液及びミトコンドリア溶解液におけるKir6.2の存在を示した図2。3.例2:無標識細胞アッセイで肝細胞のKATPチャネルを検出する。:無標識RWGバイオセンサー細胞アッセイは、与えられた細胞集団中の化合物により誘導される質量再分配を測定する。得られたシグナルは、複数の細胞シグナル伝達事象の和であり得る。しかし、KATPチャネルは、内向き整流Kチャネルであり、生理的条件下で細胞内MgADP及び特定KCOsによって活性化され得る。チャンネル組成の特定KCOsの可用性及び無標識RWGバイオセンサーの感度は、KATPチャネルの活性化及びそれに続く細胞内シグナル伝達事象を直接監視する事を可能にするものである。肝細胞内の無標識mitoKATPチャネルアッセイの実現可能性及び特殊性を実証するためには、我々はピナシジル図3A、Kir6.2/SUR2特定KCOによって誘導さHepG2C3A細胞の用量依存的な応答をまず測定した。図3Bは、ピナシジル誘発DMRシグナルの振幅と動態の両方が濃度依存性であることを示している。ピナシジルによって活性化されたmitoKATPチャネルは内因的に発現されている故に、我々は、任意の特定KATPチャネルサブユニットのノックダウンがピナシジル誘発DMRシグナルの減少をもたらすことができると推測した。図4に示すように、SUR1特定siRNAで移入されたHepG2C3A細胞はピナシジル誘発DMRシグナルに影響を与えなかったが、一方、SUR2特定siRNAの形質移入ではピナシジル誘発DMRシグナルの大幅な削減を導いた。同様に、図5は、Kir6.1特定siRNAではピナシジル誘発DMRシグナルに影響を与えなかったが、一方、Kir6.2特定siRNAの形質移入の細胞はコントロールと比較して有意にDMRシグナルを減少させたことを示す。KATPチャネルは、トラザミド、トルブタミド、グリピジド等の一般的なスルホニル尿素薬によって遮断され得る。図6は、HepG2C3A細胞におけるピナシジル誘発DMRシグナルがこれらのスルホニル尿素のパネルによって用量依存的に阻害され得ることを示している。特筆すべきは、KATPチャネルを含むKir6.1を選択的に阻害することが報告されている非スルホニル尿素ブロッカーU-37883Aは、ピナシジル誘発DMRシグナルには影響を与えなかった。一緒に、これらの実験は、無標識細胞アッセイが肝細胞におけるmitoKATPチャネルの活性化を検出することができ、そして原因であるmitoKATPチャネルの分子組成物がおそらくKir6.2とSUR2であることを示す。4.例3:肝細胞におけるmitoKATPシグナル伝達はROCK活性にリンクされている。:RhoキナーゼROCK1及びROCK2は、小さいGTPアーゼRhoAの開始シグナル伝達経路に重要な役割を果たしている。Rhoキナーゼは、細胞骨格の組織、細胞増殖、アポトーシス等の様々な細胞機能に関与することが知られていた。図7に示すように、ROCK抑制物質とのプレインキュベーションpre-incubationは、Y-27632は、用量依存的に誘導されピナシジルDMRシグナルを減少させた。ROCK1又はROCK2特定siRNAどちらかの形質移入は、ピナシジル誘発DMRシグナルを大幅に減少させた図8A及び8B。ROCK1及びROCK2特定抗体を用いたウェスタンブロットは、HepG2C3A細胞におけるROCK1及びROCK2タンパク質レベル図8C及び8Dのノックダウンを確認した。2つの異なるアクチンフィラメント分裂剤のカラシンB又はラトランクリンAでのプレインキュベーションはまた、HepG2C3A細胞内でピナシジル誘発DMRシグナルを用量依存的に低減することができる。これらの結果は、mitoKATPチャネルが肝細胞におけるシグナル伝達活性をROCKにリンクされて開始されたことを示している。5.例4:肝細胞におけるmitoKATPシグナル伝達はJAKの活性にリンクされている。ヤヌスキナーゼJAK1、2、3はサイトカイン媒介細胞内シグナル伝達に関与するタンパク質チロシンキナーゼである。それらは細胞の生存、増殖、分化、アポトーシス等細胞機能の様々にとって重要である。図10は、JAK抑制物質でのプレインキュベーションAG490がHepG2C3A細胞においてピナシジル誘発DMRシグナルを用量依存的に減少させたことを示す。図11に示すように、JAK2又はJAK3特定siRNAがピナシジル誘発DMRシグナルを著しく減衰させた一方で、JAK1特定siRNAの形質移入は、ピナシジル誘発DMRシグナルに影響を及ぼさなかった。これらの結果は、mitoKATPチャネルシグナル伝達の活性化は、JAK特にJAK2及びJAK3の活性にリンクされていることを示す。6.例5:mitoKATPモジュレーターはCYP3A4活性のリファンピシン誘導を抑制する。:リファンピシンは、RNAの合成を妨げ、細菌やウイルス性疾患を治療するために使用されているリファマイシンの形態に由来する半合成抗生物質である。リファンピシンは、一般的に結核やハンセン病を含むマイコバクテリウム感染症を治療するために使用され、また、フシジン酸との組み合わせで、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌MRSAの治療に一定の役割を有する。これは、髄膜炎髄膜炎菌感染に対する予防的治療で使用されている。リファンピシンは、細菌の細胞内におけるDNA依存性RNAポリメラーゼを、そのβ-サブユニットに結合することにより、阻害し、そしてメッセンジャーRNAmRNAの転写とそれに続くタンパク質への翻訳を防止する。その親油性の性質は、中枢神経系への配分及び血液脳関門を介した浸透を必要とする結核性の髄膜炎型を治療するための良い候補になる。しかし、リファンピンは主に薬物の肝毒性に関連する有害作用を呈し、リファンピシンを投与された患者は、多くの場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼASTを含む肝機能検査を受けている。リファンピシンは肝チトクロムP450酵素CYP2D6及びCYP3A4等の強力な誘導因子であり、この酵素系を介して肝臓によって排除される多くの薬剤の代謝を増加させる。これは、ホルモン避妊の低減効果等の多数の薬物相互作用をもたらす。例えば、リファンピシンは、副腎ホルモン、甲状腺ホルモン、ビタミンDを含む内在性基質の代謝を高め得る。コラーゲンI-マトリゲルサンドイッチ条件下で培養したヒト初代肝細胞を用いて、CYP酵素活性に関するmitoKATPモジュレーターと同様にリファンピンの影響が研究された。図12Aに示すように、ピナシジルは約2倍の最大誘導を有するCYP3A4の誘導を用量依存的に引き起こした。予想されたように、リファンピシンはCYP3A4の3倍の誘導を導いた。しかし、ピナシジルも用量依存的にリファンピシン誘導を抑制した図12B。同様の観察がmitoKATPブロッカーグリピジドで観察された図12Cと図12D。一方、ピナシジル及びグリピジド両方はCYP1A2活性にほとんど影響を与えなかった。まとめると、これらのデータは、mitoKATPモジュレーターが肝臓毒素リファンピシンのCYP3A4酵素誘導活性を抑制することができ、mitoKATPイオンチャネルが肝臓毒素誘発損傷に対して保護的であることを示す。E.参考文献1FangYFerrieAMFontaineNHMauroJandBalakrishnanJBiophysJ91192519402FangYFerrieAMFontaineNHandYuenPKAnalChem77572057253FangYAssaysandDrugdevelopmentTechnologies45835954WO2006108183A2FangYFerrieAMFontaineNMYuenPKandLahiriJOpticalbiosensorsandcells"