L-セレノメチオニンをtRNAと結合できる能力を有するメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素をコードする遺伝子が導入されていることを特徴とする、ピキア属に属する形質転換酵母菌株。酵母菌株がピキアパストリスPichiapastorisに属する菌株であることを特徴とする、請求項1に記載の形質転換酵母菌株。酵母菌株が、下記1~3のいずれかに記載の菌株である請求項1に記載の形質転換酵母。1L-セレノメチオニン耐性で、かつL-セレノメチオニン化タンパク質生産能力を有することを特徴とする、ピキア属に属する酵母菌株。2さらにセレン酸耐性であることを特徴とする、上記1に記載の酵母菌株。3酵母菌株がピキアパストリスPichiapastorisに属する菌株であることを特徴とする、1または2に記載の酵母菌株。L-セレノメチオニンをtRNAと結合できる能力を有するメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素が大腸菌由来であることを特徴とする、請求項3に記載の酵母菌株。さらに、X線結晶構造解析の対象タンパク質の遺伝子が導入されていることを特徴する、請求項1~4のいずれか1項に記載の酵母菌株。請求項1~5のいずれか1項に記載の酵母菌株を、L-セレノメチオニン含有培地に培養し、得られる培養物からL-セレノメチオニン化タンパク質を採取することを特徴とする、セレノメチオニン化タンパク質の製造方法。本発明の課題は、上記の現状に鑑み、酵母においてL-セレノメチオニン化セレノメチオニン化タンパク質を大量生産するための手段を提供することにある。本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、本来セレノメチオニンに感受性である酵母に自然変異により耐性を付与し、L-セレノメチオニン化タンパク質を生産する酵母を新たに作出し、該酵母がL-セレノメチオニン化タンパク質を効率よく生産することを実証するとともに、さらにメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素遺伝子を酵母に導入して得た形質転換体が良好なL-セレノメチオニン化タンパク質生産性を有することを見いだし、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、以下のとおりである。1L-セレノメチオニン耐性で、かつL-セレノメチオニン化タンパク質生産能力を有することを特徴とする、ピキア属に属する酵母菌株。2さらにセレン酸耐性であることを特徴とする、上記1に記載の酵母菌株。3酵母菌株がピキアパストリスPichiapastorisに属する菌株であることを特徴とする、上記1または2に記載の酵母菌株。4L-セレノメチオニンをtRNAと結合できる能力を有するメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素をコードする遺伝子が導入されていることを特徴とする、ピキア属に属する形質転換酵母菌株。5酵母菌株がピキアパストリスPichiapastorisに属する菌株であることを特徴とする、上記4に記載の形質転換酵母菌株。6酵母菌株が、上記1~3のいずれかに記載の菌株である上記4に記載の形質転換酵母。7L-セレノメチオニンをtRNAと結合できる能力を有するメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素が大腸菌由来であることを特徴とする、上記6に記載の酵母菌株。8さらに、X線結晶構造解析の対象タンパク質の遺伝子が導入されていることを特徴する、上記1~7に記載の酵母菌株。9上記1~6のいずれかに記載の酵母菌株を、L-セレノメチオニン含有培地に培養し、得られる培養物からL-セレノメチオニン化タンパク質を採取することを特徴とする、セレノメチオニン化タンパク質の製造方法。本発明によれば、酵母を用いて、L-セレノメチオニン化タンパク質を効率よく安価に大量生産することができる。本発明の技術は、タンパク質のX線結晶構造解析におけるタンパク質生産を可能にし、種々の医薬品開発に大いに貢献しうる。本発明は、L-セレノメチオニン耐性で、かつL-セレノメチオニン化タンパク質生産能力を有するピキア属に属する酵母菌株に関するものであり、また、L-セレノメチオニンをtRNAと結合できる能力を有するメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素をコードする遺伝子が導入されたピキアPichia属に属する形質転換酵母菌株に関するものである。前者の酵母菌株は、L―セレノメチオニン含有培地で、ピキア属酵母を培養し、コロニーを生ずる菌株を選抜し、さらに、L-セレノメチオニン化タンパク質の生産能を検定して得られたものである。該酵母菌株の性質におけるL-セレノメチオニン耐性とは、L-セレノメチオニン100μg/ml含有培地で増殖可能である性質をいう。L-セレノメチオニン含有する培地で、単に生残するのみの菌株は除外される。具体的な酵母菌株としては、ピキアパストリスPichiapastorisSMR-1株、同SMR-37株、同SMR-94株が挙げられ、これら菌株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに、それぞれ順に寄託番号FERMP―20807、FERMBP―10787、FERMBP―10788として寄託されている。これら菌株のうちSMR-94はセレノメチオニンの取り込みが優れており、X線結晶構造解析時の位相決定のためのタンパク質生産において特に優れている。また、後者の形質転換酵母において導入する遺伝子であるL-セレノメチオニンをtRNAと結合できる能力を有するメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素遺伝子としては、例えば、大腸菌のメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素をコードする遺伝子が挙げられる。該遺伝子の配列は既知でありGenbankなど;配列番号1参照、該遺伝子は、例えば、市販の大腸菌の染色体DNAを鋳型として、該遺伝子の配列を基に作成したプライマーを使用して、PCR増幅することにより取得することができる。しかし、L-セレノメチオニンをtRNAと結合できる能力を有するものであれば、特に大腸菌由来のもののみには限定されない。上記メチオニンアミノアシルtRNA合成酵素遺伝子をピキアPichia属酵母に導入するためには、通常の遺伝子組み換え手段に従えばよく、例えば、上記メチオニンアミノアシルtRNA合成酵素をコードする遺伝子をプラスミド等の発現ベクターに挿入し、該ベクターを用いて、ピキア属の菌株を形質転換する。使用する宿主としては、例えばピキアパストリスPichiapastorisが挙げられる。また、これらピキア属菌はL-セレノメチオニン耐性株でなくとも、セレノメチオニン化タンパク質を生産可能ではあるが、L-セレノメチオニン耐性株であることがより好ましい。上記SMR-1株、同SMR-37株、同SMR-94株は宿主としていずれも好適である。以上説明した本発明のピキア属の菌株乃至形質転換株は、L-セレノメチオニンを取り込み、該菌株が産生するタンパク質の構成アミノ酸残基のうちメチオニン残基をセレノメチオニン化し、セレノメチオニン化タンパク質を生産するが、本発明によれば、ピキア属の菌株が本来的に生産するタンパク質の他に、ヒト等の他の生物由来のタンパク質もセレノメチオニン化することができる。これには、X線結晶構造解析を行う対象とするタンパク質をコードする遺伝子DNAを、本発明のピキア属菌株乃至形質転換株に導入する。この解析対象タンパク質の遺伝子DNAの導入も通常の遺伝子組み換え手段に従えばよい。このようにして得られた形質転換体は、解析対象のタンパク質を発現するが、この発現タンパク質は、セレノメチオニン化されている。セレノメチオニン化タンパク質を得るには、上記のようにして得られた本発明の形質転換酵母をL-セレノメチオニン含有培地で培養し、培養物からセレノメチオニン化タンパク質を回収することにより行う。またタンパク質の回収と精製は、セレノメチオニン化されていないタンパク質を発現した場合と同様の手法で行なうことができる。このようにして得られたセレノメチオニン化タンパク質は、異常分散法によるX線結晶構造解析に供することができる。以下に、本発明の実施例を示すが、本発明は、実施例により限定されるものではない。実施例1セレノメチオニン耐性酵母の育種PpastorisSMD1168はセレノメチオニン感受性であるが、以下の方法によりセレノメチオニン耐性株を取得した。具体的にはSMD1168を5mLのYPDDifco液体培地に接種し30°Cで一晩培養後、遠心により菌体を回収し5mLの滅菌水を加えてよく撹拌し再度遠心分離することで菌体を洗浄した。この操作を2回繰り返した。得られた洗浄菌体を再度5mLの滅菌水に懸濁した。この菌体042OD600分を313μgmLのLセレノメチオニンを含むSDMet寒天培地に塗布し、30°Cで6日間静置培養することでコロニーを得た。さらに、この取得したコロニーを、選択培地として、100μgmlのLセレノメチオニンを含む以下のSDMet寒天培地に植菌して再び培養して、生育した株を取得した。SDMet寒天培地2寒天、2グルコース、067YeastNitrogenBasewoaminoacidDifco、20mgLL塩酸アルギニン、Lヒスチジン塩酸水和物、Lメチオニン、Lトリプトファン、ウラシル、30mgLLイソロイシン、L塩酸リジン、Lチロシン、50mgLLフェニルアラニン、100mgLアデニンヘミスルフェイト塩、Lロイシン、150mgLLバリン、200mgmlLトレオニン以上の組成からLメチオニンを除いたもの変異処理前の酵母であるSMD1168は100μgmlのLセレノメチオニンを含むSDMet寒天培地では生育できないが得られた酵母は生育可能であったことより、取得株はLセレノメチオニン耐性株であることが確認できた。実施例2セレン酸を用いたセレノメチオニン含有糖タンパク質を生産する酵母のスクリーニング実施例1で得られた160個のLセレノメチオニン耐性株から、さらにセレン酸ナトリウムを利用した以下の方法により2次スクリーニングを行なった。具体的には、得られた160個のLセレノメチオニン耐性株をYPDDifco寒天培地に塗布し30°Cで一晩培養を行った。生育した菌体は滅菌水に懸濁し10OD600に調整後、5倍ずつ5段階の希釈を行った。調整した菌体溶液は10mMのセレン酸を含むYPD寒天培地に3μlずつ滴下し30°Cで2日間培養を行った。その結果、元株のSMD1168株ではセレン酸耐性を示したのに対し、SMR1を含む大半のLセレノメチオニン耐性株がセレン酸感受性であった。しかし160株のLセレノメチオニン耐性株のうち、SMR37はセレン酸超感受性を示し、SMR94はセレン酸耐性を示した図1。上記Lセレノメチオニン耐性株のうち、良好な性質を示すピキアパストリスPichiapastorisSMR1、SMR37、SMR94は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにそれぞれ寄託番号FERMP―20807、寄託番号FERMBP―10787、寄託番号FERMBP―10788として寄託した。実施例3セレノメチオニン化されたヒトリゾチームの発現セレノメチオニン化タンパク質の発現は以下の方法で行った。ヒトリゾチーム遺伝子は酵母での発現に適したコドン使用になるよう設計された化学合成された遺伝子を鋳型としたMurakietalAgricBiolChem50713723、およびJigamietalGene43273279。ヒトリゾチームの分泌シグナルをScerevisiaeのαファクターの分泌シグナルに置換しグリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼTDH3プロモーターで発現するようなプラスミドを構築し、実施例2において取得した耐性株SMR1、SMR37、及びSMR943をそれぞれ形質転換した。これら耐性株への遺伝子導入は塩化リチウム法を用いた。すなわち、これら耐性株をそれぞれ50mlのYPDで培養を行い約108細胞mlまで増殖した培養液を遠心により集菌し滅菌水、100mM塩化リチウム溶液で順次洗浄し、最終的に400μlの100mM塩化リチウム溶液に菌体を懸濁した。この菌体懸濁液50μlに240μlの50ポリエチレングリコールPEG3350、36μlの1M塩化リチウム、25μlの2mgmlサケ精子DNA、50μlのStuIで制限酵素処理したリゾチーム発現ベクターを加えよく撹拌し、30°Cで30分間、42°Cで20分間静置した。この菌体液から遠心により上清を除き、1mlの滅菌水で懸濁し、以下のSDHis寒天培地に塗布し、30°Cで3日間培養した後に形質転換体を選抜した。SDHis寒天培地2寒天、2グルコース、067YeastNitrogenBasewoaminoacidDifco、20mgLL塩酸アルギニン、Lヒスチジン塩酸水和物、Lメチオニン、Lトリプトファン、ウラシル、30mgLLイソロイシン、L塩酸リジン、Lチロシン、50mgLLフェニルアラニン、100mgLアデニンヘミスルフェイト塩、Lロイシン、150mgLLバリン、200mgmlLトレオニン以上の組成からLヒスチジン塩酸水和物を除いたものこれら形質転換体でヒトリゾチームの分泌発現を行った。具体的には各形質転換体を5mLのYPD液体培地に接種し30°Cで一晩培養した。増殖した形質転換体を洗浄し、200mLの以下の発現用液体培地にさらに50μgmlのLセレノメチオニンを含有させた培地に、OD600が001となるように接種し30°Cで5日間振盪培養を行った。発現用液体培地134YeastNitrogenBasewoaminoacidDifco、100mMリン酸カリウム緩衝液pH60、2グルコース、10mgLmyoイノシトール、90mgLアデニンヘミスルフェイト、ウラシル、Lアルギニン塩酸塩、Lヒスチジン塩酸水和物、Lトリプトファン、Lイソロイシン、Lリジン塩酸塩、Lチロシン、Lロイシン、120mgLLシステイン、150mgLLフェニルアラニン、200mgLLプロリン、Lアラニン、300mgLLアスパラギン酸、Lグルタミン酸、Lグルタミン、コハク酸、340mgLチアミン、450mgLLバリン、600mgLLトレオニン、1200mgLLセリン培養後、培養液から遠心分離にて培養上清を回収し、これを限外濾過で濃縮し、透析により脱塩を行った。透析後の粗酵素溶液は陰イオン交換クロマトグラフィーを行うことでヒトリゾチームの精製酵素を得た。実施例4タンパク質に含まれるセレン元素の確認得られたリゾチームにセレノメチオニンが含まれていることの確認は質量分析計を用いて行った。すなわち精製酵素をトリプシン消化することでペプチド断片化し、ペプチドマスフィンガープリンティング法により質量分析を行った。メチオニンを含むペプチド断片は予想される質量よりも硫黄元素とセレン元素の質量差分である48増加した位置にピークが観測された。この結果はリゾチーム発現ベクターを導入した3株SMR1、SMR37、SMR94すべてにみられ、それらの結果を図2に示す。さらに上記3株から得られたリゾチームについて、アミノ酸組成分析を行なった。リゾチーム5μgまたは10μgを酸加水分解後、20mM塩酸200μlに溶解しそのうち50μlをアミノ酸分析計日立L8500形アミノ酸分析計にて定量分析を行った。メチオニンがセレノメチオニンに置換された場合その分だけメチオニンの含量が減ることになり、減ったメチオニンの量がセレノメチオニンの含量に換算できる。システイン、トリプトファン、プロリン以外のアミノ酸組成からメチオニンの割合を算出したところ、野生型酵母で発現したリゾチームでは19molmolproteinであるのに対し、SMR1では14molmolprotein、SMR37では05molmolprotein、SMR94では07molmolproteinであった表1。このことから上記3株のいずれのもLセレノメチオニンをタンパク質に転移する能力を有していることが明らかとなり、SMR94では65のメチオニンが、またSMR37では75のメチオニンがセレノメチオニンに置換されていることが示唆された。またこの質量差がセレン元素であることの確認をX線吸収微細構造XAFSにより定性分析を行った。すなわちSMR94株より精製酵素を濃縮し、高エネルギー加速器研究機構の放射光ビームラインBL5AでX線を照射したところ、セレン原子特有のK殻吸収端が観測された図3。以上より、取得した酵母はLセレノメチオニン耐性であるとともに、Lセレノメチオニンをタンパク質に転移する能力を有していることが明らかとなった。実施例5大腸菌メチオニンアミノアシルtRNA合成酵素遺伝子のクローニング大腸菌でのセレノメチオニン含有タンパク質の発現は一般的方法であり、その発現タンパク質のセレノメチオニン含有率はほぼ100に近い。表1に示した通り酵母で発現させたセレノメチオニン化タンパク質は依然としてメチオニンが多く含まれていることが推察される。そこでセレノメチオニン含有率の向上を目的として、大腸菌のメチオニンアミノアシルtRNA合成酵素遺伝子のクローニングを行った。大腸菌ゲノムデータベースhttpgenolistpasteurfrColibriに記載されている情報をもとにメチオニルtRNA合成酵素をコードする遺伝子をPCR法によって増幅し単離した。単離したmetGの塩基配列を配列番号1に示す。具体的には大腸菌BL21株ノバジェン社の染色体DNAを調製しPCRの鋳型とした。metGを増幅するためのプライマーとして、5’gcgcTTCGAAatgactcaagtcgcgaag3’と5’gcgcTCTAGActaGCTAGCtttcacctgatgacccg3’を使用した。増幅された約2kbpのDNA断片をBstBIとXbaIで消化し同様に処理したベクターpGAPzαA:インビトロジェン社製に導入することでpGZmetGCを得た。得られたベクターにHAタグをコードするDNA断片を導入することでMetGタンパク質のC末端側にHAタグが融合されたタンパク質を発現するベクターpGZmetGCHAを得た。実施例6大腸菌メチオニルtRNA合成酵素遺伝子が導入された酵母の育種酵母への遺伝子導入は塩化リチウム法を用いた。すなわち、実施例1と同様に、ピキアパストリスPichiapastorisSMR1株を塩化リチウム溶液で懸濁した後、この細胞にAvrIIで制限酵素処理したpGZmetGCHAを接触させた。接触後菌体液から遠心により上清を除き、1mlのYPD培地を加え30°Cで4時間震盪培養を行った。培養液を選択培地に塗布し、形質転換体を30°Cで3日間培養後に選抜した。得られた形質転換体でのMetGタンパク質の発現の確認を行った。すなわち形質転換体を5mlYPD培地に接種し、30°Cで24時間振盪培養を行った。その後109細胞分を遠心にて回収しガラスビーズにより細胞を破砕した。破砕液を試料としてSDSポリアクリルアミド電気泳動及びPVDF膜への転写を行い、抗HA抗体を用いた免疫染色を行った。これにより抗HA抗体特有のシグナルが得られたことよりMetGタンパク質の細胞内での発現を確認した。MetGタンパク質発現の確認ができた形質転換体について、実施例3と同様にリゾチーム発現ベクターを導入し、セレノメチオニン含有タンパク質の発現、精製を行った。精製標品は実施例4に示したように、質量分析計にてセレノメチオニン含有の確認を行った。対照実験としてMetGタンパク質を発現しない宿主から得たリゾチームも同様に解析を行った。その結果、図4に示されるように、メチオニンを含むペプチドに対して、セレノメチオニンを含んだペプチドを示すピーク強度が約10増加したことから、大腸菌tRNA合成酵素によってセレノメチオニンをタンパク質に転移していることが裏付けられた。実施例7大腸菌メチオニルtRNA合成酵素遺伝子および大腸菌メチオニンtRNAが導入された酵母の育種さらに効率を向上させるため、大腸菌メチオニンアミノアシルtRNA合成酵素の基質となる大腸菌由来メチオニンtRNAのクローニングを行なった。大腸菌ゲノムデータベースhttpgenolistpasteurfrColibriに記載されている情報をもとにメチオニルtRNA合成酵素をコードする遺伝子をPCR法によって増幅し単離した。具体的にはDH5α株TOYOBO社製の染色体DNAを調製しPCRの鋳型とした。metGを増幅するためのプライマーとして、5’gcgcCTCGAGatgactcaagtcgcgaag3’および5’gcgcTCTAGAttatttcacctgatgaccc3’を使用した。増幅された約2kbpのDNA断片はXbaIおよびXhoIで消化し、同様に処理したpBluescriptIISKに導入することでpBSmetGを得た。このpBSmetGを鋳型とし、実施例5で使用したプライマー配列番号2および配列番号5を用いてPCR反応を行うことでmetG遺伝子を増幅した。これをBstBI、XbaIで消化し、同様に処理したpGAPZαAインビトロジェン社製に導入することで、pGZmetGを得た。さらにこのプラスミドにtRNAを含むDNA断片の挿入を行った。具体的にはpUCEctRNAをHidIII、EcoRIで処理し同様に処理したpBluscriptIISKに導入し、pBSEctRNAを作成した。これをBamHIで消化しtRNAmetを含むDNA断片を精製し、pGZmetGのBglII認識部位に挿入することで、pGZEctRNAmetGを作成した。得られたプラスミドは実施例6と同様の方法で、ピキアパストリスPichiapastorisSMR37株、SMR94株にそれぞれ導入し、形質転換体SMR37tR、SMR94tRを得た。