"a前記生物学的生成物を含む少なくとも1つの画分を含み、前記生物学的生成物から分離することが望ましい生物学的生成物含有溶液の1つまたは複数の成分を含む少なくとも1つの画分を含む2つ以上の画分に溶液を分離することができる第1の単位操作へ生物学的生成物含有溶液を連続移動する工程前記第1の単位操作は少なくとも1つの入口と少なくとも1つの出口を有し、前記少なくとも1つの入口と少なくとも1つの出口間の流体は連続して流れることを可能にすることが企図される;b前記第1の単位操作の少なくとも1つの出口からの流出物を前記第1の単位操作の少なくとも1つの出口からの流出物注入用の少なくとも1つの入口を有する第2の単位操作へ連続移動する工程前記第1の単位操作からの前記流れは前記生物学的生成物を含み、前記第2の単位操作は、前記少なくとも1つの入口から注入された生成物を、前記生物学的生成物を含む少なくとも1つの画分および前記生物学的生成物から除去することが望ましい前記少なくとも1つの入口から注入された生成物の1つまたは複数の成分を含む少なくとも1つの画分を含む2つ以上の画分に分離することができ、前記第2の単位操作はさらに、少なくとも1つの出口を有し、前記少なくとも1つの入口と少なくとも1つの出口間の連続流を可能にすることが企図され、前記第2の単位操作のスループットは前記第1の単位操作から注入された流出流と等しい;c前記生物学的生成物を含む溶液を回収する工程を含む生物学的生成物の産生プロセス。各移動工程において独立して、移動工程が前単位操作からの流れを中間保存容器に誘導することを含み、前記容器は1つの全ロットプロセス中に前単位操作から注入された容量と当量または半分未満の保持能を有する、請求項1によるプロセス。a生物反応器内の生物学的生成物を含む馴化培地を産生する工程;b前記馴化培地から細胞および細胞残屑を連続除去して、前記生物学的生成物を含む精製溶液を産生する工程;c1前記生物学的生成物と錯体を形成できるアフィニティーリガンドと前記生成物溶液とを接触させる工程および2前記接触工程において形成された前記アフィニティーリガンドと前記生物学的生成物の錯体を分離して、精製した生物学的生成物溶液を産生する工程;d1インキュベーション容器内で前記精製した生物学的生成物溶液の少なくとも一部を回収する工程2前記精製した生物学的生成物溶液pHを、前記溶液に含まれる任意のウイルスを不活性化するpH算出値に調節する工程、および3前記精製した生物学的生成物溶液pHを再調節してウイルス不活性化した生物学的生成物溶液を産生する工程、を含む低pHインキュベーションプロセスを含む第2の単位操作へ精製した生物学的生成物溶液を連続移動する工程;eアニオン交換クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、ナノ濾過、限外濾過/ダイアフィルトレーション、マイクロ濾過、またはそれらの任意の順の組み合わせから選択されるプロセスを含む追加単位操作の少なくとも1つへ前記ウイルス不活性化した生物学的生成物溶液を連続移動する工程f前記生物学的生成物を含む溶液を回収する工程を含む連続プロセスシステムにおける生物学的生成物の製造法。前記工程bにおける細胞および細胞残屑の除去が遠心分離を含む、請求項3による方法。前記第1の単位操作が、疑似移動床アフィニティークロマトグラフィープロセスである、請求項3による方法。所定期間、a生物学的生成物溶液を第1のインキュベーション容器内へ連続移動する工程;b溶液条件を前記第1の容器内の所望のインキュベーション条件に調節する工程;c生物学的生成物溶液を前記第1の容器から少なくとも1つの保持容器内へ連続移動し、前記少なくとも1つの保持容器内に溶液を保持する工程;d生物学的生成物溶液を保持容器から再調節容器内へ連続移動する工程;e前記再調節容器内の溶液条件を生物学的生成物溶液の所望のポストインキュベーション条件に調節する工程;前記少なくとも1つの保持容器内の生物学的生成物溶液の滞留時間、さらに前記第1の容器から前記少なくとも1つの保持容器への移動時間、さらに前記少なくとも1つの保持容器から前記再調節容器への移動時間を、前記所定期間に適合するように制御して、前記インキュベーション条件が前記ポストインキュベーション条件と異なる、を含む所望の溶液条件で溶液をインキュベートする方法。a各容器容量≦流速×所望の耐性時間となるように生物学的生成物溶液を一連のインキュベーション容器内へ連続移動する工程、b各容器の装填後、該容器への移動を中断して溶液条件を前記容器内の所望のインキュベーション条件に調節する工程、c工程bにおける所望のインキュベーション条件の達成後、制御したインキュベーション期間、容器を保持する工程、d工程cにおける前記インキュベーション期間後、前記インキュベーション条件と異なる所望のポストインキュベーション条件に該容器内の溶液条件を再調節する工程、およびe所望のポストインキュベーション条件の達成後、前記一連のインキュベーション容器から生物学的生成物溶液を連続移動する工程、を含む所望の溶液条件で制御期間および所望の耐性時間窓内に生物学的生成物溶液をインキュベートする方法。1つまたは複数の前記容器が前記容器内の溶液の均一性を確認するための混合手段をさらに含む、請求項6または請求項7による方法。前記混合手段がロッキングテーブルである、請求項8による方法。1つまたは複数の前記容器がさらに周囲環境と前記容器内側をつなぐ排気口を含む、請求項6または請求項7の方法。フィルターが前記排気口と周囲環境の間に設置され、前記排気口は前記出口の開閉弁をさらに含む、請求項10の方法。a前記弁マニホールドを横断し、入口端と出口端、分岐入口を前記中央路と接続するプライミング路、および分岐出口を前記中央路と接続するバイパス路を有する中央路を含む少なくとも3つの流体伝送路を提供する弁マニホールド前記通路はそれぞれ、通路を独立して開閉する独立して操作可能な弁の少なくとも1つを有し、前記中央路入口は前処理単位操作からのスループット注入に適しており、前記プライミング路入口は前記プライミング路および前記中央路装填用の流体注入に適している、b少なくとも1つの入口と少なくとも1つの出口を有する少なくとも1つのサージ容器前記弁マニホールドの中央路出口に接続されている前記サージ容器入口、および前記少なくとも1つのサージ容器は、前記弁マニホールド中央路入口に接続されている単位操作のスループット保持能を有するを含む連続プロセスにおける製造プロセスの2つ以上の単位操作を接続する装置。前記サージ容器がさらに周囲環境と前記容器内側をつなぐ排気口を含む、請求項12の装置。フィルターが前記排気口と周囲環境の間に設置され、前記排気口は前記出口の開閉弁をさらに含む、請求項13の装置。サージ容器出口がポンプに接続されている、請求項14の装置。前記バイパス路出口が前記弁マニホールド中央路入口に接続されている単位操作のスループット保持能を有するバイパス回収容器に接続されている、請求項12乃至請求項15の任意の装置。a前記弁マニホールドを横断し、入口端と出口端、分岐入口を前記中央路と接続するプライミング路、分岐入口を前記中央路と接続するサージ容器入口路、分岐出口を前記中央路と接続するサージ容器出口路、および分岐出口を前記中央路と接続するバイパス路を有する中央路を含む少なくとも5つの流体伝送路を提供する弁マニホールド前記5つの通路はそれぞれ、通路を独立して開閉する独立して操作可能な弁の少なくとも1つを有し、前記中央路入口は前処理単位操作からのスループット注入に適しており、前記プライミング路入口は前記プライミング路および前記中央路装填用の流体注入に適している、b少なくとも1つの入口と少なくとも1つの出口を有する少なくとも1つのサージ容器該サージ容器入口は前記弁マニホールドのサージ容器出口路に接続されており、サージ容器出口は前記弁マニホールドのサージ容器入口路に接続されており、前記少なくとも1つのサージ容器は前記弁マニホールド中央路入口に接続されている単位操作のスループット保持能を有するを含む連続プロセスにおける製造プロセスの2つ以上の単位操作を接続する装置。前記少なくとも1つのサージ容器がさらに周囲環境と前記容器内側をつなぐ排気口を含む、請求項17の装置。フィルターが前記排気口と周囲環境の間に設置され、前記排気口は前記出口の開閉弁をさらに含む、請求項18の装置。前記弁マニホールドの前記サージ容器出口とサージ容器入口路間の接続が、前記接続に沿って流体の流れを調節するポンプを備えている、請求項19の装置。前記バイパス路出口が前記弁マニホールド中央路入口に接続されている単位操作のスループット保持能を有するバイパス回収容器に接続されている、請求項17乃至請求項20の任意の装置。a以下を含む第1の単位操作を実行するための第1の装置:1複数の弁モジュール各モジュールはモジュールを横断する中央路、および中央路を弁モジュールの外側と接続する複数の分枝路を有し、前記通路はそれぞれ、通路を独立して開閉する独立して操作可能な弁の少なくとも1つを有し、前記中央路弁は前記中央路の入口端を前記中央路出口端から分離し、少なくとも2つの分枝路接続は弁モジュールへの入口を中央路弁の入口側の中央路と分離し、少なくとも2つの分枝路は中央路弁の出口側の中央路から伸びて弁モジュールから流出物を分離する;2複数の溶液導管各導管は接続し、各弁モジュールの分枝路を分離している、および3複数のクロマトグラフィーカラム各カラムは入口と出口を有し、前記カラム入口は弁モジュール中央路の入口端に接続されており、前記カラム出口は、前記複数カラムが介在弁モジュールを介して連結するように異なる弁モジュール中央路出口端に接続され、最終カラム出口は連続介在弁モジュールを介して一連の第1のカラムの入口に接続している;b以下を含む第2の単位操作を実行するための第2の装置:11つまたは複数のインキュベーション容器それぞれが少なくとも1つの入口と少なくとも1つの出口を有し、前記1つまたは複数のインキュベーション容器は統合して少なくとも前記第1の単位操作の流出保持能を有する;2入口と出口を含む弁モジュール入口路は前記弁モジュール入口に接続されており、1つまたは複数の入口分枝路は前記入口路と接続し、各入口分枝路は前記入口路から伸びて、前記1つまたは複数のインキュベーション容器の1つの入口に接続し、前記入口分枝路はそれぞれ、通路を独立して開閉する独立して操作可能な弁の少なくとも1つを有し、弁モジュールはさらに弁モジュール出口に続く出口路を含み、1つまたは複数の分枝路出口は前記出口路と接続し、各分枝路出口は前記出口路から伸びて前記1つまたは複数のインキュベーション容器の1つの出口に接続し、前記分枝路出口はそれぞれ、通路を独立して開閉する独立して操作可能な弁の少なくとも1つを有する、ならびにc前記第1の装置の出口を前記第2の装置の入口に接続する第3の装置であり、前記第3の装置は以下を含む:1前記弁モジュールを横断し、入口端と出口端、分岐入口を前記中央路と接続するプライミング路、分岐入口を前記中央路と接続するサージ容器入口路、分岐出口を前記中央路と接続するサージ容器出口路、および分岐出口を前記中央路と接続するバイパス路を有する中央路を含む少なくとも5つの流体伝送路を提供する弁モジュール前記5つの通路はそれぞれ、通路を独立して開閉する独立して操作可能な弁の少なくとも1つを有し、前記中央路入口は前記第1の単位操作装置の前記複数の弁モジュールの分枝路出口にそれぞれ接続されており、前記プライミング路入口は前記プライミング路および前記中央路装填用の流体注入に適している、2少なくとも1つの入口と少なくとも1つの出口を有する少なくとも1つのサージ容器該サージ容器入口は前記弁モジュールのサージ容器出口路に接続されており、サージ容器出口は前記弁モジュールのサージ容器入口路に接続されており、前記少なくとも1つのサージ容器は前記第1の単位操作装置の流出保持能を有し、前記弁モジュールの前記中央路出口は前記第2の単位操作を実行するための前記装置の弁モジュールの入口に接続されているを含む連続プロセスシステム。前記少なくとも1つのサージ容器ならびに/または前記1つもしくは複数のインキュベーション容器がさらに周囲環境と前記容器内側をつなぐ排気口を含む、請求項22のシステム。フィルターが前記排気口と周囲環境の間に設置され、前記排気口は前記出口の開閉弁をさらに含む、請求項23のシステム。前記弁マニホールドの前記サージ容器出口とサージ容器入口路間の接続が、前記接続に沿って流体の流れを調節するポンプを備えている、請求項24のシステム。前記バイパス路出口が前記弁マニホールド中央路入口に接続されている単位操作のスループット保持能を有するバイパス回収容器に接続されている、請求項22乃至請求項25の任意のシステム。前記第1の単位操作を実行するための前記装置の複数の弁モジュールがマスター弁マニホールドに組み込まれている、請求項22のシステム。前記1つまたは複数のインキュベーション容器が、容器の中身の混合手段を備えている、請求項27のシステム。前記手段がロッカーテーブルである、請求項28のシステム。任意の前記容器が単回使用容器である、請求項22のシステム。本発明は、生物学的生成物プロセスの少なくとも2つ以上の工程を連続させる生物学的生成物の製造に適応できるプロセスを提供する。連続プロセスによって、製造業者は、材料をあまり用いず、バッチ操作に必要な装置より縮小規模で装置に依存して、製造プロセスを行うことが可能である。連続プロセスによって、製造プロセス全体における不稼働時間が短縮され、したがって大量製剤原料の産生または最終生成物梱包を実行する製造開始時からの循環時間が短縮される。本発明がより明白に理解され得るように、以下の略語および用語を以下に定義するように使用する。本明細書で使用する場合、生物学的生成物という用語は、存在する生物学的生成物の生物学的プロセスを介して、または化学的もしくは触媒改変を介して作製した目的の生成物を指す。生物学的プロセスとしては、細胞培養、発酵、代謝、呼吸等が挙げられる。生物学的生成物は、典型的にはタンパク質を含む。目的の生物学的生成物としては、例えば、抗体、抗体断片、タンパク質、ホルモン、ワクチン、天然タンパク質断片ワクチンとして使用される細菌毒素の断片、例えば、破傷風毒素等、融合タンパク質またはペプチド抱合体例えば、副単位ワクチン等、ウイルス様粒子VLP等が挙げられる。本明細書で使用する場合、生物医薬品という用語は、薬品または治療薬として使用するため生理的に許容されるように精製および製法される生物学的生成物を指す。本明細書で使用する場合、単位操作という用語は、目的の生成物を含む組成物に望ましくない成分が実質的に含まれないことを確実にするように設計された、または目的の生成物から望ましくない要素を分離するように設計された製造プロセス工程を指す。例えば、生物反応器内の、作製後の生物医薬品の製造におけるかかる単位操作は、細胞培養生物反応器からの出口の浄化のための主要回収操作遠心分離、マイクロ濾過、デプス濾過等;例えば、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーHIC、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーIMAC等による捕獲クロマトグラフィー;低pH例えば、pH3.0~3.5または例えば、ウイルス不活性化、タンパク質折り畳み、凝集体解離等を達成するための他の溶液条件でのインキュベーション;ウイルス、細菌、微粒子および他の汚染物質または不純物を濾過するマイクロまたはナノ濾過等;生成物濃度の接線流濾過例えば、限外濾過による;緩衝液交換例えば、ダイアフィルターによる;変異生成物例えば、四量体抗体生成物を含有する溶液中の二重鎖二量体のクリアランスのための研磨または中間クロマトグラフィーまたは膜吸着操作例えば、イオン交換による;凝集クリアランス;DNAまたは宿主細胞タンパク質のクリアランス;ウイルス吸着;生成物特異性不純物の除去;大量保存用の濾過例えば、0.2マイクロン濾過;および類似した操作を挙げ得るが、これらに限定されない。単一の単位操作は、同操作における複数の目標を達成するように設計し得る。前処理または前処理プロセスという用語は、生物学的プロセスまたは他の反応による活性生物学的生成物の作製に関する生物医薬品製造の工程1つまたは複数を指す。通常、単離して生物医薬品にプロセス化する生物学的生成物は発酵の結果であるか、または組換え形質転換宿主細胞の発現産物である。したがって、製造プロセスの前処理部分は典型的には、内生標的タンパク質を天然で生成する原核生物内または真核生物細胞内のいずれか、または、より一般的には、外因性標的タンパク質1つまたは複数を発現するように組換えDNA技術によって形質転換されている原核生物または真核宿主細胞内の標的タンパク質抗体、活性タンパク質またはタンパク質断片、融合タンパク質、ウイルス様粒子等の産生に関する。細胞培養中の生物学的生成物作製に関与する前処理プロセスは、発酵槽または生物反応器内で実行され、前処理プロセスは、バッチプロセス例えば、発酵槽内で増殖させたバッチまたは供給-バッチ細胞培養であっても連続プロセス例えば潅流細胞培養であってもよい。後処理または後処理プロセスという用語は、典型的には大量製剤原料の産生に起因する不純物および汚染物質から生物学的生成物を分離することを必要とする生物学的生成物の前処理プロセス後の工程を指す。後処理プロセスとは、望ましくない成分および不純物から離した生物学的生成物の精製のため、病原菌例えば、ウイルス、内毒素の濾過または不活性化のため、製剤化および梱包のため原液から生物学的生成物の捕獲に必要な一部または全工程を指す。本明細書で使用する場合、連続プロセスという用語は、前処理工程単位操作からの出口は後処理工程単位操作へ移動し、次プロセス工程を開始する前に前処理プロセス工程の実行が完了する必要がない2つ以上の連続プロセス工程を有する任意のプロセスを指す。連続プロセスにおいて、標的生成物の一部は、常にプロセスシステムを介して移動する。理想的には、可能な限り、連続プロセスの毎工程または単位操作が同時におよび実質的に同じ産生速度で実行されるように、連続プロセスを通過する流れを調節する。このようにして循環時間短縮を最大化し、最短完了時間を達成する。したがって、連続移動または連続移動したという表現は、前処理単位操作は直接または他の成分を介して生成物ストリームを第2後処理単位操作へ移動し、後処理単位操作は前処理単位操作の実行が完了する前に開始するすなわち、2つの単位操作が部分を含む全プロセス実行の少なくとも一部において同時に2つの連続単位操作が、流入する生成物ストリームをプロセス化する2つの単位操作間を接続するかまたはつなぐことを意味する、前処理単位操作から後処理単位操作へ移動する生成物ストリームを指す。本明細書に記載の連続プロセス技術CPTは、存在するバッチ生物医薬品製造プロセスにおいて根本的な改善を示し、資本および時間節約ならびにプロセス柔軟性および拡張性における実質的な便益を実現する。CPT採用によって、生物医薬品産生施設において従来のバッチ製造プロセスよりはるかに少ない資本投資でトンスケールレベルで生物学的生成物の産生実行に対処することを可能にする。CPTはさらに臨床試験における生物医薬品の製造のより迅速かつ費用効果的な達成を可能にする。生物学製造能を確立するために必要な資本投資の削減によって、資本回収および操作費削減が改善され、最終的により安価の生物医薬品に至る。早期臨床試験製造の有効性を改善することによって、より多くの新規生物医薬品が臨床試験に参入可能になり、大企業の開発パイプラインが改善され、小企業の概念実証を達成する時間およびコストが削減される。新薬開発の加速および新薬産生費削減は、生物医薬品の質かつ性能に有意な影響を及ぼす。本明細書に記載のCPTプロセスは、ここで複数の使い捨て生物反応器を利用することによって可能であるトンスケール流出に対処する手段を提供する。本明細書に記載の連続プロセス法を採用することによって、生物学的生成物の製造業者は、大規模、ステンレス鋼装置を用いた従来のバッチ法によるトンスケール生物医薬品産生が可能な新規施設の建設に必要な典型的な5億ドル/5年投資を回避できる。連続プロセス稼働に必要な装置規模の縮小に基づき、資本投資の最大80削減および産生力拡大時間の約2年への短縮を達成できる。新規生物学的生成物を開発している企業は、資金調達の拡大および実験室規模の量から前臨床試験および臨床試験に必要な大量な生成物の製造という課題に直面している。開発時点における失敗リスクが高いためすなわち、臨床試験に参入する生物医薬品のうち市販承認を得るのは20未満である、新薬候補を開発する企業および投資家は、生成物候補を臨床試験に進ませる上で絶対的に必要な資本以上を費やしたがらない。さらに、新規生物医薬品のヒト臨床試験の開始前の製造および開発活動にはほぼ常に余裕時間がないため、臨床的供給品を産生するストリームラインおよび加速能は開発の前IND段階において有意な値を有する。ヒト臨床試験における使用用の臨床的供給品のGMP製造の必要条件によって、最も初期の計画コストが上昇し、GMP標準達成の遅延または失敗は、資金調達または計画した臨床試験を進める承認獲得を困難とする一因となる可能性がある。連続プロセスの使用は、本明細書に記載したような使い捨て技術の利用と併せて、資本支出削減に役立ち、臨床的製造の達成を加速してきた。使い捨てベースの臨床的製造施設の構築費は、従来の臨床的製造施設費3~5千万ドルと比較し、1.5~2千万ドルほどに縮小し得る。本明細書に記載のCPTプロセスは、必要な量の生成物を産生する上で必要な装置規模を縮小して製造プロセス全体をより柔軟およびより運搬可能にすることによって、これらのコストをさらに削減でき、さらに臨床的製造プロセスを加速することもできる。本明細書に開示されたこれらの改善によって、臨床的供給製造の必要な投資条件が弱まり、時間が短縮され、社内製造能を有する大企業ならびに生成物の製造を外注し得る小企業の両方において生物医薬品の早期開発回収プロファイルが改善される。この改善された回収プロファイルによって、より有望な生物学的生成物候補の臨床試験参入が可能になる:大企業は、より多くの生成物候補を早期試験に進めることが可能になり、薬品開発パイプラインに進む薬品候補数が上昇し;ならびに資金調達もしくは提携目標に事前に必要なヒト臨床試験に基づく概念実証を示そうとしている小企業もしくは新興生物医薬品企業は、この難題をより乗り越えることができるようになる。使い捨てを可能にする遂行生物医薬品製造プロセス内への使い捨てまたは単回使用技術の導入は、標準的な再利用可能な技術からの重要なシフトを構成する。使い捨て技術の利用は、資本投資を削減し、開発を加速し、産生装置の再使用による汚染を抑える業界全体の必要性に促進される。小規模における使い捨て技術の採用、臨床的製造適応は、遂行の相対的容易性ならびに資本および時間節約の有意な便益の両方のおかげで比較的迅速である。上記のように、十分に大型の使い捨て精製装置の利用可能性がないことによって、使い捨て技術を用いてより大規模プロセスを遂行するボトルネックが存在する。本明細書に記載のCPTプロセスによって、使い捨てをより完全に使用することが可能になる。連続プロセスによって、プロセスに必要な現在の大型装置規模を縮小し、生物反応収容力を増大現時点で2,000リットルを5,000リットル以上へ移動することが可能になる。連続プロセスによって、後処理プロセスが進行し、単回使用使い捨て装置を含む利用可能な装置が利用される;さらに、CPTの貫流能によって生産性が適合し、最大生物反応器を有意に超え、完全使い捨てプロセス進出を高めることが可能になる。従来のバッチプロセスを連続プロセスへ代えることによって、生物医薬品産業の発展法およびその生成物の製造法は根本的に変化する。使い捨て成分の使用に特異的に適応した連続プロセスの立体構造を本明細書に開示する。多くの場合、使い捨て成分は、永続的、再利用可能な装置より低耐性かまたは低性能であり、使い捨て成分を使用することができてそれらの特性の任意の違いがシステムによって適応されるように連続プロセスのいくつかの特性は設計されている。1例として、単回使用プラスチック管をステンレス鋼管に代用して使用し得るが、単位操作から単位操作への全圧低下耐性はプラスチック管においてステンレス鋼管より低い。本発明では、ステンレス鋼管をプラスチック管で代用することによって管の失敗またはシステムの性能の損失がないようにシステムを通気し、所定の接続を雰囲気圧へ戻す上で有用なサージ容器等の特性を遂行する。連続単位操作生物学的生成物の製造プロセスにおける単位操作は、連続多カラムまたは多段操作によって便益を提供することができる。これは、バッチ操作を連続逆流疑似移動床SMBクロマトグラフィーに代えることによって捕獲クロマトグラフィー工程に示されている。バッチ操作において、捕獲クロマトグラフィー操作タンパク質Aアフィニティークロマトグラフィーを用いたIgG標的のタンパク質A捕獲等の数工程を連続実施する:生物反応器から精製した馴化培地は、捕獲クロマトグラフィーカラム、続いて洗浄、溶出、清浄再生、および並列工程に適用し、次工程開始前に各工程を完了する。SMB多カラムシステムに複数カラムを使用し、複数工程を異なるカラム上で同時に実行する。連続流を利用し、多カラムシステムは除去されるカラム能を可能にし、したがって、バッチ捕獲クロマトグラフィーによって生物反応器供給に適合するようにカラムサイズを拡大する代わりに小径カラムを用いて大型生物反応器容量をプロセス化させる。かかるSMB多カラムシステムの操作を図10A~10Eに例証する。多数の相互接続するカラムへ複数の溶液および緩衝液の流れを調節し、広範囲の分離溶剤を用いた拡張性、連続クロマトグラフィー操作を可能にするための統合された一連の弁および接続弁カセットを提供する市販のSMBシステムBioSMB登録商標システム、TarponBiosystems,Inc.,Worcester,MAUSが開発されている。BioSMB登録商標システムは、プログラム可能および調節可能であり、実質的に任意の単カラムバッチ操作を連続多カラム操作に代える上で有用である。BioSMB登録商標システムによってまた、交換可能な管、カラム、および弁膜を特徴とする使い捨て成分が完全に使用され、これらはすべて新規成分の設置システムから迅速に切断でき、それによってシステムの不稼働時間を削減または実質的に削減する。BioSMB登録商標システムの中心は、流体対処において総合回路として稼働する弁カセットであり、単回使い捨て形態の一連の弁への連続プロセスを可能にすることを必要とする多くの弁を組み込むかかる一連の弁を図10A~10Eに図解的に例証し、各正方形108項は弁を示す。したがって、単一弁カセットまたはマニホールドに保管された一連の54弁108を示すが、より大きな弁カセットまたはより小さな反復弁モジュールを使用することができることが理解されるであろう。例えば、市販のBioSMB登録商標システム弁マニホールドは、別々に操作可能な弁240を特徴とする。この弁カセットは、生物医薬品適応の厳密な必要条件を満たす上で適したロバストおよびクリーニング可能な機器であることが証明されている。図1に本発明による連続プロセスの最も広範の態を図示する。連続プロセスにおいて、プロセス工程カスケードまたは単位操作UOは、互いに連続して直結している。第1の単位操作3の出口は、ライン2を通過させて次単位操作4の入口へ直結し、第2の単位操作4からの流れを単位操作4の出口から第3の単位操作5の入口へ進める。この例証は、ライン管または流路2によって相互接続する3つのプロセス段階または単位操作3、4、5および単ポンプ1によって稼働する生成物の流れを示す。生物医薬品生成物において、プロセスにて結果的に例えば、単位操作5後、患者へ即投与可能な形態で生物学的生成物の医薬上許容される製剤になる。概略図に示すように、各単位操作は次単位操作へ連結する:第1の単位操作3に、バッチ工程であり得る前工程からの流出物またはポンプ1のスループットを注入する;第1の単位操作3のスループットは次単位操作4の入口に誘導し、単位操作4のスループットは第3の単位操作5の入口に誘導する。図解の各UOはいくつかのプロセス工程を表し得ることが理解され、追加の単位操作は全プロセスが結集するまで一連の単位操作に加え得ることがさらに理解されるであろう。本発明の連続プロセス法において、1つの単位操作のスループットは、接続した単位操作を連続実行し得るように、さらなるプロセスを開始するため次単位操作へ生成物を導入する前に1つの単位操作が完了するのを待つ必要なく、所望の目的の生成物を1つの単位操作から次単位操作へ移動するように次単位操作の入口に接続されている。生物反応器サイズは、生物学的生成物の製造プロセスにおいてプロセス化しなければならない溶剤の初回容量を設定する。バッチプロセスにおいて、生成物質量は最も有意な要因であるが、連続プロセスにおいて、プロセス化する溶剤容量によってすべての後処理操作の規模が決定される。したがって生成物の力価が高いほど、連続プロセスを採用することによって得られる利点は多い。宿主細胞産生、溶剤条件、増殖循環等の最適化によって得られる力価は10~13g/Lまたは13g/L超であるが、現在、5グラム生成物/リットル5g/Lがタンパク質生成物モノクローナル抗体等において高力価とみなされている。本発明による連続プロセスシステムは、1つの単位操作から次単位操作への一定流量または相互接続する単位操作のすべてを通過する一定流量を必要としないことが指摘される。任意の数の理由において、単位操作または単位操作間を通過する流速を調節または中断する必要があり得る。連続プロセスでは、2つの単位操作間のつながりは、第1の単位操作または前処理単位操作が直接または他の成分を介して生成物ストリームを第2の後処理単位操作へ移動し、前処理単位操作の実行が完了する前に後処理単位操作が開始するすなわち、製造の少なくとも一部の実行において、2つの連続単位操作が生成物を同時にプロセス化することのみを必要とする。連続プロセスでは連結する単位操作のすべてを通過する均一性または干渉されない流れを必要としないが、システムを通過する流れを可能な限り連続させて維持するようにプロセスシステムを稼働できることが好ましい。連続プロセス全体の単位操作間の干渉されない流れを高度に達成する特性を本明細書に記載する。図2Aは生物医薬品の例示的な製造プロセスのブロックフロー図である。例証するプロセスにおいて、生物医薬品の例は、モノクローナル抗体である。図解の各ブロックは単位操作を示し、図示する一連の操作10~18は、理想的にはプロセスの停止または中断が起こらず、バッチプロセスにおけるように前操作が完了するのを待って単位操作を遅らせる必要がないように、連続して、可能な限り同時に実行する接続した単位操作カスケードを示す。図2Aに示す一連の具体的な単位操作は典型的であり、モノクローナル抗体プロセスに適している。異なる生物学的生成物は、異なる単位操作、または異なる順で実施する類似した単位操作を含むプロセスによって製造されることが理解されるであろう。例えば、標的生物学的生成物が細菌培養において産生し、宿主細胞内の凝集物または封入体として初めに作製される場合、主要回収は、遠心分離または超濾過、細胞溶解、封入体ハーベスト、凝集物の解離例えば、カオトロピック剤を用いて、およびタンパク質折り畳みこれらはすべて捕獲クロマトグラフィー操作前に起こるを介する細胞ペレットとしてかかる単位操作に関与し得る。さらに、捕獲クロマトグラフィー単位操作は、特定のタンパク質生成物に調節され、免疫グロブリン定常断片Fcに選択的結合するタンパク質A以外の適切なアフィニティーリガンドに関与する場合もあり、異なるクロマトグラフィーと一緒に例えば、IMAC、HIC、イオン交換等に関与する場合もある。同様に、異なる生成物の後処理プロセスは、異なる工程および異なる一連の単位操作に適切に関与し得る。所望の生物学的生成物の産生に適したプロセス段階の設計は、当業者の能力内である;生物学的生成物の連続プロセスを可能にするプロセス段階単位操作のつながりは本発明の対象である。図2Aに例証するモノクローナル抗体プロセスを再び参照して、第1のブロック10は、細胞培養が、例えば、抗体を発現し、好ましくは細胞培養液内に分泌する形質転換宿主細胞例えば、酵母細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞等を増殖させて産生する生物反応器を示す。分泌された生物学的生成物を含む馴化培地は通常、次単位操作11へ移動前に、例えば、遠心分離および/またはマイクロ濾過またはデプス濾過によって精製し、細胞および細胞残屑を除去する。次ブロック11は、タンパク質Aアフィニティークロマトグラフィーを用いて免疫グロブリンを有利に実施する捕獲クロマトグラフィー工程を示す。タンパク質Aクロマトグラフィー工程11のスループットは次単位操作12へ連続して供給され、これはこの例証においてウイルス不活性化工程である。タンパク質A溶剤上で捕獲する抗体は一般に低pH溶出液例えば、pH3.0~pH3.5の100mMグリシンを用いて溶出するため、低pHウイルス不活性化は、タンパク質A捕獲および溶出液から連続して続く論理的な単位操作である。ウイルス不活性化からのスループット12は、次クロマトグラフィー工程に負荷する適した条件すなわち、pHに溶液を調節後に次単位操作13へ連続移動し、これはこの例証においてカチオン交換クロマトグラフィーであり、生成物関連不純物凝集物ならびに悪化もしくは不適切に結合した抗体等を除去するように設計される。カチオン交換は抗体産生プロセスにおけるこの段階の論理的単位操作であるが、他の生物学的生成物の場合は別タイプのクロマトグラフィー操作がより効果的であり得る。例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーHIC、セラミックヒドロキシアパタイトCHT、または他のタイプのクロマトグラフィー工程は、特定の目的でこの段階で代え得る。カチオン交換クロマトグラフィー工程13からのスループットを次単位操作14へ連続移動し、これはこの例証において限外濾過/ダイアフィルトレーション工程である。限外濾過は、接線流膜上で生成物を保持し、続いて緩衝液交換に使用するダイアフィルターによって抗体生成物を濃縮するように設計される。緩衝液を交換中に容量および濃度が一定に保たれるように、浸透を介する水/緩衝液の除去と同率で所望の新規緩衝液を追加する。限外濾過/ダイアフィルトレーション工程14からのスループットを次単位操作15へ連続移動し、これはこの例証においてアニオン交換クロマトグラフィーであり、正味の負電荷を有する不純物DNA、内毒素、ウイルス、および宿主細胞タンパク質等を除去するように設計される。抗体は通常、比較的高い等電点を有し、したがって条件は、不純物が正味の負電荷を示す間に抗体生成物が正味の正電荷を有するように容易に調節し得るしたがって、抗体はアニオン交換カラムまたは膜の正電荷溶剤/膜を介して流れる。アニオン交換クロマトグラフィー工程15からのスループットを次単位操作16へ連続移動し、これはこの例証において例えば、ウイルス除去用に設計される20nm~40nm滅菌膜フィルターを用いたナノ濾過工程である。ナノ濾過工程16からのスループットを次単位操作17へ移動し、これはこの例証において任意選択的な濃縮/緩衝液交換、続いてマイクロ濾過0.2μmフィルターであり、大量保存溶液18へ精製モノクローナル抗体を注入するように設計される。保存安定剤18中の大量精製抗体は、必要に応じて滅菌濾過、ならびに滅菌バイアル、注射器もしくは生物医薬品生成物としての配布用の他の容器に抗体を装填する製剤の追加等、さらなる操作を実施する滅菌充填操作へ即移動可能である。図2Aに例証する製造プロセスにおいて、クロマトグラフィー工程は、連続操作を可能にする上記BioSMB登録商標システムTarponBiosystems,Inc.,Worcester,MAUS等のプログラム可能な多カラム調節システムを用いて有利に稼働される。好ましい限外濾過/ダイアフィルトレーション工程システムは、Cadence登録商標システムPallCorp.,PortWashington,NYUSである。総合弁カセットBioSMB登録商標システムに特徴されるもの等は最終ナノ濾過およびマイクロ濾過工程の連続操作調節においても適応できる。図2Bを参照して、各単位操作図の経過時点を図2Aに示し、前単位操作の終了前に連続単位操作が開始する特徴は連続プロセスによって得られた利点を例証する。一方、バッチ操作を用いて実行される製造プロセスの場合は、回収した生成物が次バッチ工程へ移動できる前に各時間的経過の実行が完了していずれの時間的経過も重複しない必要がある。例証した規模のバッチ製造は完了までに4日以上かかる。一方、連続プロセス法は、同時に実行する接続した単位操作の実質的な期間と時間的経過を重複させることが可能である。連続プロセスを最大化する場合、4日間のバッチ製造プロセスは約24時間で完了する。図3を参照して、連続4つの単位操作UOを図解的に例証する。例証したシステムは、連続操作に役立つ追加特性を2つ備えている。1つの特徴は、2つの単位操作間を接続したサージ容器7であり、第2の単位操作4の流出物を容器7内で回収する。容器7は、通気性であるが微生物は排除する滅菌等級フィルター8、例えば、0.2マイクロンフィルター付きである。弁9が通気のために開口している場合、容器7内圧は環境雰囲気圧と等しい。容器の中身は、雰囲気圧で、サージ容器7なしで実行するクローズドシステムにおける後処理単位操作5および6を介して維持された流れからの逆圧を克服する上で必要な圧力より低圧でポンプ1を介して次単位操作5に供給できる。連続プロセスに利用する単回使用装置、適切なサージ容器7および伝達ライン管、2は、一般的に低耐久物質プラスチック等から作製される。かかる例において、容器7はポリ袋サージ袋であっても通気式ペットボトルであってもよい。かかるプラスチック物質および単位操作間で接続するものは、例えば、ステンレス鋼容器および管より逆圧増強耐性に乏しい;したがって、全圧を低下させて1つの操作から次の操作への流れを維持する上で必要な圧力を低下させるためのサージ容器の使用は、流れの連続性調節だけではなく、システムの統合性の保持ならびに物質もしくは接続不良の回避において高度に有利である。図3を再度参照して、システム全体を通過する連続流に役立つ第2の特徴は、任意の単位操作UOからの流れを切り替えることを可能にする伝達管20と併せたバイパス回収容器21の設置であり、例えば、障害物、後処理汚染、接続不良、インキュベーション継続の必要性の決定、または連続プロセスの通常操作における類似不調によって次の意図された単位操作への流れの移動が可能ではない場合に部分的にプロセス化した生成物が喪失しないようにする。バイパス回収容器21設置は、1つまたは複数の単位操作において部分的にプロセス化しているが、汚染、流れの遮断、漏出、後処理単位操作の不用意等によって、生成物の流れが生成物注入に適さなくなった後処理段階を通過した場合に喪失する生成物の回収手段を提供する。バイパス容器21内で捕獲した部分的にプロセス化した生成物は、迂回した時点で単位操作カスケード内に導入でき、したがって、製造プロセスを停止、初期化およびやり直さなければならない場合に起こる収率の損失および再プロセス費を回避する。有利に、分岐返還ライン図示せずおよび必要に応じてポンプは、バイパス容器21内で回収する生成物溶液の返還を単位操作カスケードにおける任意の時点に提供し得る。図4に、図3のサージ容器7およびバイパス回収容器21を特徴とする製造プロセスを例証するが、この図中、サージ容器7は、前処理単位操作31の流れをライン2を通過させて次単位操作32に、あるいは中間サージ容器7に誘導する、によって表した十分な弁および接続を提供する弁モジュール34を介してプロセスに接続されている。したがって、このシステムは、前処理単位操作31と後処理単位操作32間の任意選択的な中間単位操作としてサージ容器7を処理する。図において、[UO]nは、反復弁モジュール33によって調節した、前処理に位置する入口と出口を有する複数のn単位操作を表す。好ましくは、例証した反復弁モジュールすなわち、33、34、35は同一モジュールとなり、これは単位操作間の接続および流路を標準化し、プロセスプログラミングを簡略化し、容易に交換可能な単位操作の流れを調節する成分を提供する。図5を参照して、サージ容器機構7が分岐単位操作として接続するが、サージ容器7の使用は、入口ライン2を通過させてサージ容器7に続くかあるいは分岐ライン20を通過させて後処理単位操作32に直接誘導する弁モジュール33を介して調節した前処理単位操作31からの接続を提供することによって任意選択的に作製される、本発明による連続プロセスの代替実施形態を図解的に例証する。各単位操作UOは、単位操作の各工程を実行する上で必要であり、適している流入液緩衝液、洗浄溶液、溶出緩衝液、平衡溶液、溶媒等を提供する一連の容器containersまたは容器reservoirsに接続されている。流入液の回収を30項および36項に図示する;勿論、複数の単位操作にいくつかの単位操作の共通溶液を接続し得るが、各セットの流入液は特定の単位操作の工程に調節されるため、各セットの流入液は異なる。各種流入液の流れは、好ましくは1つの単位操作から次単位操作例えば、33、34へのつながりを調節する同じ弁マニホールドであり得る総合弁マニホールド図示せずを介して有利に調節し得る。図5に非常用バイパス回収容器21も提供し、各単位操作から容器21に続く接続は弁モジュール33、34を介して行われる。図6を参照して、複数のサージ容器7がシステムに接続されており、多数の弁を有するマスター弁マニホールド40が一連の単位操作UO全体、サージ容器7、およびバイパス回収タンクもしくは容器21を相互接続する、本発明による連続プロセスの代替実施形態を図解的に例証する。図7を参照して、製造プロセスまたは3つの単位操作41、42、43を含む製造プロセスの一部を図示する。単位操作と他の特性をつなぐ接続は、分岐弁モジュール44、45、46によって調節される。好ましくは、各弁モジュールは同一であり、接続を均一にし、任意の各弁モジュール交換を簡略化する。より好ましくは、単位操作をつなぐ接続は1つのマスター弁マニホールド図示せずに組み込まれ、全単位操作を単一の総合切替弁プログラムによって実行する。図7において、各弁モジュール44、45、46は、所望の特性に流れを方向づける通路および適切な弁を有する。第1の単位操作41の流出は、その関連弁モジュール44の中央路から通じた入口ライン2を通過させて次単位操作42に直接誘導する。中央弁閉口およびバイパスライン47への側弁開口は、第1の単位操作41の流出をバイパス回収容器21へ切り替える回路を提供する。弁モジュール44は、プライミング緩衝液において分岐制御可能な流路も有し、次単位操作42への一定流量の維持に役立ち、前単位操作41から即供給できない場合、中断または迂回させる。第2の単位操作42は、その弁モジュール45を介してサージ容器7に接続する。他の弁モジュール44、46と類似した形態の弁モジュール45は、バイパス回収およびプライミング緩衝液流路も提供する。滅菌等級フィルター8およびピンチ弁9を介して通気したサージ容器7は、システムのこの部分の圧力を雰囲気圧に戻す。したがって、サージ容器7からの流出物は、ポンプ1を介して次単位操作43に低下する低圧でポンプできる。サージ容器7からの流出物は、弁モジュール46を通過させて単位操作43に誘導してもよいし、弁の適切な操作によってライン47を通過させてバイパス回収容器へ迂回させてもよい。他の弁モジュール44、45におけるように、最終例証した弁モジュール46、プライミング緩衝液における分岐流路も提供する。図8は、本発明による連続製造プロセスにおいて、3つの連続単位操作UOの代替実施形態を示す。この実施形態では、サージ容器7は図7のように、直通入口ライン48を通過させて第2の単位操作から注入される流れに接続されている。サージ容器7は、前処理単位操作42と後処理単位操作43間の非任意の工程である。図9を参照して、製造プロセスにおける3つの連続単位操作UOを例証する。反復弁モジュール44、45は、分岐回路上にサージ容器7を設置する追加の通路および弁を有し、したがって、サージ容器7へ流れを切り替え、それによって任意選択的な後処理単位操作42または43へ流れを切り替える。かかる回路は前処理単位操作から次の後処理単位操作への流れを遅らせるかまたは、後処理単位操作によって生じた逆圧を均一化する手段を提供する。図7、8、および9に例証する接続スキームは、単位操作をつなぐための総合反復弁モジュールを利用する利点を示す。生成物ストリームは、代替プロセス、追加のプロセス、もしくは保持するための代替的な通路、または後処理システムの失敗もしくは不調の場合に部分的にプロセス化した生成物の非常回収用に転用することができる。サージ容器は、生成物含有流体を回収する上で役立ち、ポンプから制御形態で非加圧型サージ容器から前記流体を回収する。この特徴によって、通常、低圧力定格の使い捨て成分をプロセス中の任意の時点に使用することができるように、一連の単位操作全体における累積降圧これは各単位操作の降圧の合計となるをより低く維持できる。サージ容器の別の機能は、前単位操作が安定した着実な生成物の流れを作らない場合でも次単位操作内にポンプを介して安定した流れを作ることである。多くの単位操作、例えば、捕獲クロマトグラフィーにおいて、生成物ストリームは、必ずしもシステムから連続して流出するわけではない。代わりに、単位操作からの流出物は、代わりに反復間隔で流入し得る。平均して連続的な流れがあるが、例えば、多カラムプロセスの循環性質は生成物を間欠的に流れさせる。単位操作からの生成物ストリーム流出におけるこれらの変動は、サージ容器に介在することによって弱まり、これによって、後処理単位操作内への流入物を制御してより均一化する手段が操作者に付与される。図9に示すように各単位操作に接続する任意選択的なサージ袋回路の提供によって、1つまたは複数の成分操作が後処理単位操作へ移動する連続する安定した流出物を提供しない場合でも、連続プロセス内に一連の単位操作を作製する機序が得られることを見ることができる。したがって、サージ容器は連続プロセス設計に有用な特徴となる。サージ容器には、操作者が、前単位操作に起因する流れにおけるいずれの変動作用も最小限に抑えることを可能にする容量が収容される。例えば、前単位操作が多カラムクロマトグラフィープロセスSMBプロセス等である場合、サージ容器の収容能は、好ましくはSMBプロセスの溶出液の複数例えば、3つの連続ピークを収めることができるように選択する。サージ容器は、好ましくは、サージ容器内に汚染物質を注入せずにサージ容器から排気する手段を備えている。これを達成する1つの方法図7、8、9に例証は、滅菌等級マイクロフィルター8、例えば、0.2μm孔径フィルター付き出口のあるサージ容器を提供することである。次いで、該フィルター出口は、好ましくは排気を制御する弁9、例えば、ピンチ弁を備えている。システムからの排気は、全装置および機器内を換気する開始手順中に特に重要である。生物学的生成物の連続捕獲任意の生物学的生成物の製造プロセスにおける初回単位操作の1つは捕獲工程であり、これは典型的には製造プロセスの主要回収工程に続く。上記のように、捕獲単位操作は、一般的にアフィニティークロマトグラフィープロセスであるが、標的生物学的生成物によって、他の任意の適切な分離技術疎水性相互作用クロマトグラフィーHIC、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーIMAC、イオン交換クロマトグラフィー等を有利に使用することもできる。アフィニティー捕獲および溶出は、カラム負荷すなわち、標的を含む供給ストリームと共に、洗浄、および溶出を含む連続工程を必要とし、カラムを交換せずにシステムが反復循環を施行できるように溶出後にクロマトグラフィー溶剤の清浄再生および平衡がしばしば所望される。疑似移動床クロマトグラフィーは、捕獲単位操作において連続プロセス法を提供する。捕獲対象の連続精製には、BioSMB登録商標クロマトグラフィーシステムTarponBiosystems,Inc.に特徴される弁マニホールド等の統合弁モジュールの採用が役立つ。コンピュータ補助弁マニホールドは、供給ストリーム、洗浄緩衝液、溶出緩衝液、清浄緩衝液、および平衡緩衝液間のカラム供給の自動切替のためにプログラムして、疑似移動床分離を作製することができる。かかるシステムを図10A~10Eに図解的に例証し、これは、捕獲溶剤を負荷した6つのカラム図10Aの1、2、3、4、5、6を参照されたいを用いて実行した4つのゾーンSMBクロマトグラフィー単位操作を示す。6つのカラムは、総合弁マニホールドを介して相互に連結し、これは、個別に操作可能な一連の弁108として示し、したがって、図10A~10Eに示した配置は54弁108を示す。図10Aを参照して、弁マニホールドは例証したシステムにおいて、例えば、適応するように、少なくとも5つの入口、生成物供給ストリーム101からの入口、洗浄溶液102、溶出液103、清浄液104、および平衡緩衝液105を有する。生成物を回収し、廃棄物を取り除く出口ラインそれぞれ106および107も示す。カラムクロマトグラフィー精製プロセスの連続操作を連続した図10A~10Eの考慮によって例証する。図10Aを参照して、供給ストリーム101は、第1のアフィニティー分離カラム1に通じた弁108の適切な操作によって形成される流体経路に沿った弁マニホールドを介して方向づける。第1のカラム1は、弁マニホールドを介して第2のカラム2の入口に接続した出口を有し、両カラムに、少なくとも第1のカラム1床がアフィニティー捕獲した生物学的生成物で満たされるまで供給ストリームから流入物を注入する。図10Bを参照して、第1のカラム1床が満たされた後、弁マニホールドの弁調節を切り替えて、第1のカラム1への流入物を供給ストリーム101から洗浄溶液102にシフトする。同時に、供給ストリーム101路は第1のカラム1からではなく供給ストリーム101からの直接の流入物に切り替えられている弁マニホールドを通過するが、第2のカラム2に供給ストリーム101を注入し続ける。第2のカラム2からの流出物は、弁マニホールドの弁108の適切な操作によって、連続する次カラム3の入口に誘導する。カラム出口を通過する連続流は、廃棄ライン107を通って迂回するが、回収可能な生成物がカラムから溶出している以外であり、この場合のカラムのスループットは、弁マニホールドを介して、生成物回収ライン106に誘導する。廃棄ライン107は実践的に複数ラインであり得、カラム出口においてより制御し単なる溶出した生成物ではない回収手段を操作者に提供することが理解されるであろう。例えば、かかる補助ラインは、溶媒回収または再利用可能であり得るまたは回収可能な再利用可能な成分を含み得る任意の流出物の回収に使用し得る。好ましくは、弁マニホールド内の弁操作およびその結果の通路切替は、連続カラム全体に沿って配位している。より好ましくは、切替弁は、切替が自動的に起こるようにコンピュータプログラムによって制御し、連続する捕獲クロマトグラフィー段階は、中断またはシステムの不稼働時間なしで実施する。かかるプログラム可能な切替および自動の配位した切替は、上記BioSMB登録商標精製システムにおいて達成される。したがって、BioSMB登録商標システム、またはその特性を有する配位システムは、生物医薬品精製プロセスにおける他の単位操作に適応し得、したがって、製造プロセス連続プロセスの全単位操作作製に適した装置を提供し得る。図10Cを参照して、弁マニホールドにおける弁108のプログラムした切り替えによって、第1のカラム1に注入された流入物は溶出緩衝ストリーム103に変化する。第1のカラム1上に固定化した捕獲した生物学的生成物はカラムから溶出し始め、カラム1からの流出物溶出液は、カラム1出口の弁108後処理の適切な切り替えによって生成物回収ライン106に誘導される。生成物回収ライン106に沿って方向づけられた溶液は、次単位操作図示せずに有利へ移動する。例として、図2Aに例証する抗体生成物における製造プロセスを参照して、カラムは抗体捕獲に適したクロマトグラフィー溶剤タンパク質A/セファロース等で満たされ、回収ライン106から回収する溶液は所望の生成物抗体を含むが、例えば、溶出緩衝液103が、抗体をタンパク質Aアフィニティーカラムから溶出する典型的な手段である低pH緩衝液pH3.0~pH3.5である場合、低pH溶液でもあり得る。したがって、低pH溶液中で標的生成物を注入する場合、抗体は低pHで最終的に変性するため次単位操作はpHを再調節する緩衝液交換を含む場合もあり、pH再調節の前に低pH単位操作を捕獲クロマトグラフィー単位操作から直接供給する場合もある。図2Aに例証するように、抗体生物医薬品プロセスにおける有利な低pH単位操作は、連続する低pHウイルス不活性化である。したがって、タンパク質生物学的生成物の産生プロセスにおける連続単位操作の有利な対は、捕獲クロマトグラフィー単位操作、続いて低pHウイルス不活性化単位操作を含む。図10Cを再び参照して、同時に生成物は、入口を溶出緩衝液103へ切り替え後に第1のカラム1から溶出し、連続する第2のカラム2への流入物を洗浄緩衝液102へ切り替えた。第3のカラム3は供給ストリーム101で負荷し続け、その流れは連続する第4のカラム4の入口に誘導する。図10Dを参照して、生成物を揮散する第1のカラム1の入口を弁マニホールドを介して切り替え、使用の別循環にアフィニティー溶剤を再生するように設計された清浄液を注入する次ゾーンシフトを例証する;同時に、ある循環中の洗浄緩衝液を注入後、生成物で満たしたカラム2図10Cに溶出緩衝液103を注入し、生成物がカラム2から溶出し、弁マニホールドの弁108の適切な操作によって、生成物回収ライン106を通って回収され、連続プロセスシステムにおいて後処理単位操作に直接移動し得る。連続する第3のカラム3に本明細書に例証した循環中の洗浄緩衝液102を注入し、第4のカラム4は供給ストリーム101で負荷し続けてカラム床の生成物で満たす。第4のカラム4からの流れは、弁マニホールドを介して第5のカラム5の入口に直結して該カラムの生成物負荷を開始する。図10Eを参照して、生成物を揮散する第1のカラム1が、反応性アフィニティーリガンド用に清浄し、入口を弁マニホールドを介して切り替え、使用の別循環にアフィニティー溶剤を調製するように設計された平衡緩衝液106を注入する、すなわち、次循環中の供給ストリーム101を注入する図10Dに示す循環後の次ゾーンシフトを例証する;同時に、入口ラインは弁マニホールドを介して切り替わり、完全に溶出した第2のカラム2の入口は清浄液104に接続されている。ある循環中の洗浄緩衝液を注入後、生成物で満たした第3のカラム3図10Dに溶出緩衝液103を注入し、生成物がカラム3から溶出し、弁マニホールドの弁108の適切な操作によって、生成物回収ライン106を通って回収される。連続プロセスシステムにおいて、生成物回収ライン106は、生成物溶液を後処理単位操作に直接移動し得る。連続する第4のカラム4に本明細書に例証した循環中の洗浄緩衝液102を注入し、第5のカラム5は供給ストリーム101で負荷し続けてカラム床の生成物で満たす。第5のカラム5からの流れは、弁マニホールドを介して第6のカラム6の入口に直結して該カラムの生成物負荷を開始する。この循環後、連続する第1のカラム1に直結している第6のカラム6の入口および第6のカラム6の出口に供給ストリーム弁を切り替えて精製、洗浄、溶出、清浄、および平衡の新規循環を開始して、前カラム6からの生成物供給の流れを再生および再平衡した第1のカラム1上で捕獲することができる。切り替え可能な通路の弁マニホールド総合回路、すなわち、数工程を有する多カラム単位操作における連続カラムへの供給のため流路を切り替えるようにプログラムできる一連の操作可能な弁を用いてクロマトグラフィープロセス工程の多カラム操作を調節する連続捕獲クロマトグラフィープロセスについて上述してきた。例証するために、供給ストリームから抗体生成物を分離するタンパク質Aアフィニティークロマトグラフィーの文脈においてかかるシステムを記載してきたが、図10A~10Eに例証した一連の弁としてのかかる装置は、任意のタイプのクロマトグラフの操作サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、タンパク質Aと別タイプのリガンドを使用するアフィニティークロマトグラフィー、金属イオンキレート化、疎水性相互作用クロマトグラフィー等における多カラム、連続プロセス作製に使用し得ることが理解されるであろう。連続する低pHウイルス不活性化上述のように、一連の単位操作を含む生物医薬品の製造プロセス設計において、早期工程は一般的に捕獲クロマトグラフィー工程である。図2Aに例証する抗体産生プロセスにおいて、タンパク質A捕獲クロマトグラフィー工程は生物反応器から抗体の主要回収直後に進む。多くの捕獲クロマトグラフィー操作において、特にタンパク質Aアフィニティークロマトグラフィーにおいて、アフィニティー捕獲溶剤からの溶出は、クロマトグラフィーカラムを通過する緩衝液pHを低下させることによって行う。タンパク質A/抗体錯体は、低pH、例えば、約pH3.0~pH3.5で解離する。したがって、タンパク質Aカラムからの溶出液は低pH溶液である。抗体生成物は、存在する場合、低pHで30分間±5分間超、著しい分解を被る;他方、低pHインキュベーションは、溶液に存在し得る非常に良好なウイルス不活性化法である。抗体生成物において医薬品としての使用が意図されている場合、ウイルス不活性化は、製造プロセス全体における必須工程であり、捕獲クロマトグラフィー工程が抗体生成物を含む低pH溶出液に至る場合、低pHウイルス不活性化のために設計される単位操作に溶出液を直接移動することが連続プロセスにおいて有利であろう。図11を参照して、連続する低pHウイルス不活性化のために設計される単位操作を図解的に例証する。単位操作に、例えば、入口54を介して総合多弁弁ブロックまたはマニホールド40内に低pH供給物を注入し、連続する保持/インキュベーション容器50、51、52の1つへ供給物が移動するように設計する。弁マニホールド4は、弁マニホールド40に接続されている任意の保持/インキュベーション容器50、51、52への依存的および代替的な移動に適したチャネリングおよび図によって表した一連の弁を備えている。図11に例証する単位操作の目的は、生成物溶液を溶液中であり得るウイルス不活性化に適したpHでインキュベートさせることである。例えば、抗体生成物溶液において、事前に選択したpH3.5未満に制御したpH例えば、±0.2pH単位での30分間±5分間のインキュベーションによって、公認標準に準じて生ウイルスレベルは低下し、抗体生成物の分解または変性が許容される。ウイルス不活性化工程は、典型的には生ウイルスが対数値3以上低下、すなわち、少なくとも10,000倍低下するように設計される。図11を再度参照して、生成物溶液アリコートは、入口54を通ってインキュベーション容器52へ移動する。容器は、前単位操作のすべてまたは任意の一部のスループット移動注入用にサイズ化し得る。使い捨て装置を利用する連続プロセスにおいて、容器50、51、52は、有利に、ポリ袋、ボトル、フラスコ等であり得る。同様に、弁マニホールド40およびマニホールド自体の部分に続く管等のシステムの他の成分は、単回使用物質製であり得る。例えば、弁システムは一連の弁操作装置および関連通路を覆う取り替え可能なシート膜によって形成し得る柔軟膜並置が弁制御路のクローズドシステムに至り、このパターンは一連の開閉弁の異なる組み合わせによって決定する例えば、BioSMB登録商標精製システムTarponBiosystems,Inc.,Worcester,MAUSに特徴される弁カセットを参照されたい。溶液pHを精密モニタリングするため、各容器は、pHセンサー図示せず、ならびに所望の範囲内にpHを調節するための酸性および/または塩基性溶液注入用の入口ポート図示せずを備える。例えば、正確なpHリーディングを行い得、任意のpH調節が容器内で回収した全アリコートに影響するように、容器50、51、52内に導入された抗体生成物溶液が十分に混合し続けることが重要であり得る。かかる例において、容器は、図11に図示するプロペラタイプの混合ヘラ棒53である混合手段を備えるが、代替的に生成物溶液を所望のレベルで均一化する上で適した任意の手段であり得る。磁気混合棒、スワールフラスコ、ロッキングテーブル等はすべて適切であり、本明細書において企図される。弁モジュール40を介する可変取水路は各保持/インキュベーション容器50、51、52へ流入させることができる。各インキュベーション容器の中身は、この単位操作の出口55に別々に誘導することができる。図11の図解において、入口54を通って単位操作に入る溶液を第3のインキュベーション容器52に誘導する一方、第1のインキュベーション容器の中身は出口55に誘導し、例えば、次単位操作へ移動する。図11の点線は、入口54からの溶液を容器50および51に誘導し、容器51および52の中身を出口55に誘導し、例えば、次単位操作へ移動するために利用可能であるが未使用の通路を表す。例証したラインの他、弁モジュール40を、溶液をある容器から別の容器へ移動する弁調節およびポンプ図示せずと共に提供し得る。一連の容器を通過するこの移動は、例えば、pHまたは他の溶液条件の段階的調節がこの単位操作に所望される場合に実行し得る。別の実施形態では、第1の容器52は、インキュベーションを低pHで使用することができ、次いで、第2および次容器は、例えば、pHを漸増するための緩衝液交換、生成物のカオトロピック剤曝露、または良好な溶液条件下でタンパク質を再構築または折り畳むインキュベーション等のさらなるプロセスにおいて使用することができる。図12および13を参照して、連続する一連の3つの保持/インキュベーション容器50を通過する生成物溶液の移動を例証する。図12に、総合弁システムを操作することによって連続移動が制御されるように弁モジュール40を介する流れとして保持/インキュベーション容器50間の移動路を示す。図13において、ある容器50から次容器への連続移動は、弁モジュール40を用いて制御されないが、他の一部の手段、例えば、流出、手動の移動、または供給源容器内センサー例えば、タイマー、充填度センサー、または特定pHに達した場合に移動操作信号を送るpHセンサーによって引き起こされる移動によって起こる。タンパク性生成物の低pH曝露に許容される時間窓は、典型的には狭い例えば、305分間。曝露時間が短すぎると十分にウイルス不活性化せず、曝露時間が長すぎると生成物の分解度が高くなる。連続プロセスによって、密度の濃い時間耐性内の低pHウイルス不活性化単位操作の操作が可能になる。好ましい方法は、半連続形態の単位操作を介するパケットまたは生成物溶液アリコート移動に関与する。低pHウイルス不活性化工程に進む単位操作が捕獲クロマトグラフィー操作例えば、抗体生成物におけるタンパク質Aアフィニティークロマトグラフィーである場合、生成物は連続溶出液ピークとして低pHウイルス不活性化単位操作に入る。所定のインキュベーション期間例えば、上に論じる例において30分間5分間内に回収することができる低pHプロセスにおける溶出液ピーク数のプーリングによって、適切なインキュベーション時間を付与し、次単位操作への連続移動を実行できる。例として、生成物供給がタンパク質Aクロマトグラフィーカラムから溶出したモノクローナル抗体である連続ウイルス不活性化システムにおいて、該ウイルス不活性化単位操作は、以下のように有利に実行し得る:1.タンパク質Aからの溶出液pH範囲はpH3.5~pH4.5である。プールを回収してプロセス化後例えば、低pHインキュベーション期間と同期間のタンパク質A期間からの溶出ピーク、pHを酸滴定によって、保持/インキュベーション容器内で低pHウイルス不活性化条件例えば、pH3.3に調節する;2.酸滴定は、穏やかに混合してpHを連続モニタリングしながら、低pHウイルス不活性化が達成されるpH設定点まで希釈酸例えば、1MHClを追加することによって行う;3.適切なpHに達した後、容器内の生成物溶液含量を必要な不活性化時間例えば、30分間保持する;4.必要なインキュベーション時間後好ましくは別の後処理保持容器への移動後、別のpH調節工程を使用して、不活性化した溶液のpHを次単位操作への移動に適したpH例えば、pH5.0まで上昇させるカチオン交換クロマトグラフィーカラム上に負荷する等例えば、図2A、13項を参照されたい;5.生成物溶液を次単位操作へ移動後、保持容器1つまたは複数を清浄およびすすぎ洗いして別のタンパク質A溶出液プールを負荷することもでき、容器1つまたは複数を廃棄して新規容器をシステムに接続して次のタンパク質A溶出液プールを注入し、それらを低pH不活性化工程を介して運ぶこともできる。容器から容器への生成物溶液の物理的移動を回避するため、上記の一連に記載されているプールしたタンパク質A溶出液を含む容器の移動は、適切なコントローラーおよび弁カセットを用いて達成できる。これは、図10A~図10Eに例証するシステムにおける弁カセットを用いて達成するクロマトグラフィーカラムの疑似移動に直接類似する。代替的な1つの実施形態では、タンパク質A溶出液は、カスケード表示の連続して混合した保持袋容器を介して流れることができ、これらの最初のものは、タンパク質A溶出液pH調節を達成し、最終物は、次単位操作前に不活性化した溶液のpH再調節を達成する。袋は、低pHウイルス不活性化を達成する適切な滞留時間を確実にするようにサイズ化する。連続プロセス設計製造プロセス全体の単位操作が連続形態で実行できるよう効果的につなぐため、操作の各段階の性能の定量分析が必要であることが理解され得る。生成物の収率および純度の分析法を開発して実行しなければならない。かかる方法は、プロセスを介して生成物純度を評価するSDS-PAGE除去、非除去法、精製プロセスによって宿主細胞タンパク質のクリアランスを評価する宿主細胞タンパク質ELISA、生成物の濃度および収率を決定するHPLCまたは吸光度法を含み得る。多カラム逆流連続クロマトグラフィープロセス設計SMBプロセス等には、バッチプロセスと同じ基礎的なプロセス情報が必要である。この情報としては、供給溶液力価中の生成物濃度、平衡結合力静的結合力および連続プロセス全体が挙げられる。クロマトグラフィー溶剤、生成物および溶液条件に依存する質量移動動力学に関する情報もシステムのサイズ化に必要である。一般に、これは、破過曲線分析から得ることができる。この理由から、優れた設計のバッチプロセスは、連続多カラムまたは多段精製プロセス設計の非常に良好な開始点である。低pH不活性化工程において、許容されるウイルス不活性化時間枠の決定および確認のために分析法が必要である。限外濾過/ダイアフィルトレーションUF/DF工程において図2A、14項を参照されたい、各種流速および生成物濃度での膜貫通型圧関数として流動上のベンチスケール接線流濾過TFFシステムから有用データを得ることができる。ナノ濾過および最終0.2マイクロン濾過工程において図2A、16項および17項を参照されたい、流動関数としての降圧上および各膜機器における負荷力上で有用なデータを得ることができる。プロセスの各単位操作において得られたかかるバッチプロセスデータを用いて、連続プロセス操作を設計できる。第1の設計選択はプロセス時間である。バッチプロセスと逆に、プロセス時間がプロセス設計の結果である場合、連続プロセスではプロセス時間の事前選択が可能である。プロセス時間が長いほど、連続単位操作を通過する流速は低く、システム全体は使用した装置規模の面でコンパクトになる可能性がある。他方、プロセス時間が長すぎると、受容不可能なレベルに達するある段階で生成物が分解し得る。供給流速は、プロセス化する必要がある容量およびプロセス時間の結果である。プロセス化する必要がある容量は、バッチまたはロットサイズと称する。CPTプロセスQmへの最小供給流速は、以下の方程式を用いて最大プロセス時間tから算出する:式中、Apは必要な生成物量である;Cpは供給中の生成物濃度である;およびYは、全プロセス収率である。細胞培養上清中の抗体生成物の初回力価が1g/Lである場合、精製プロセスの全プロセス収率は60であり、達成する最小供給流速は3日間であり、100g生産目標は39mL/分である。システムが生産目標を楽に達成するように稼働できることを確実にするため、対象CPTプロセス供給流速は、最小流速より少なくとも10高い値、すなわち約45mL/分に設定する。供給流速が決定された後、CPTプロセス設計を、第1の単位操作設計、例えば、捕獲工程タンパク質Aアフィニティークロマトグラフィー工程等で開始できる。連続SMBクロマトグラフィー工程において、設計アルゴリズムはクロマトグラフィー溶剤の最小疑似輸送速度を決定することから開始する。これは、質量移動耐性のない場合、理想のプラグ流れがあり、他の任意の非理想の変数が存在しない場合、全生成物を結合させる溶剤の輸送速度である。質量移動耐性に適合して他の非理想要因または制限に対処するため、最小輸送速度を超えるようにクロマトグラフィー溶剤の実際の疑似輸送速度を選択する。典型的には、実施者は安全範囲5~40の範囲で選択する。次いで、負荷するゾーン内のクロマトグラフィー溶剤容量は、負荷するゾーンにおけるカラムを通過する流速および必要な滞留時間に依存し、これは主に質量移動現象拡散等に依存する。必要な滞留時間および供給流速が既知の場合、負荷するゾーンにおける必要な樹脂容量を算出できる。第1の単位操作の設計を完了後、この工程からの生成物の流速は、各接続工程の水力性能が適合するように、プロセスにおける第2の単位操作の流入速度と等しく設定することができる。第1の単位操作と類似した設計アルゴリズムをプロセスにおける各単位操作に適用できる。各単位操作におけるバッチデータを使用して、前後の単位操作をつなぐ単位操作用の連続操作設計を開発することができる。精製プロセス全体における全単位操作においてこのプロセスが完了する場合、初回CPTプロセス設計は完了する。この初回設計から、製造プロセスの全工程における適切な装置および使い捨ては、初回CPT設計の変数および要求に適合するようにサイズ化、特化、および順序付けできる。初回設計を確立後、反復実験を介して各プロセス工程を最適化し、任意の所望の属性容量生産性または緩衝液利用等を最大化することができる。継ぎ目のないストリームラインの連続プロセスを確立するため、各単位操作のサイズおよびスループットは、プロセス化する総容量または質量の代わりに流速水力性能によって決定される。各工程において、最適化は、単位操作のサイズおよび水力性能を決定する原理および現象の試験に関与する。例えば、連続多カラムSMBを用いたクロマトグラフィー工程の最適化は、プロセス工程の性能に及ぼす分離要因Sおよび輸送単位数NTUの影響試験に関与する。分離要因Sは、生成物供給速度に関する床輸送速度に起因する輸送力の測定値であり、以下のとおり定義する:式中、ψ供給およびψ床はそれぞれ液相および固相の流速であり床の場合、ψ床は疑似輸送速度である、Q静的は溶剤の結合力であり、C供給は供給濃度である。移動単位数NTUは逆流クロマトグラフィーシステムにおける質量移動動力学の測定値として使用し、以下のとおり定義する:式中、koLはシステムの全質量移動係数であり、Vはカラム容量であり、aはカラム容量で割った粒子の表面積と等しい比表面積である。NTUはシステムおよび特徴的な質量移動時間における滞留時間比である。各種NTU値およびS値での性能を評価する実証研究を介して、所望の生産性を達成するために、対象の分離または性能を満たしつつ各工程において最適プロセス条件を同定できる例えば、タンパク質Aクロマトグラフィー工程における宿主細胞タンパク質除去。この最適化の他、総合プロセスのロバストの一部の予備変数を確立するために、単位操作の安定性およびかく乱に対する感受性を調査する上で有利となる。例えば、最適プロセス条件は受容不可能な実施に至る条件に近すぎる場合があり、この場合の条件は最適および許容可能にロバスト実施を得るように調節される。最後に、この段階中、各単位操作の降圧に特別注意を払うべきである。これは単位操作カスケードにおける制限要因となり得るため、サージ容器の設置は、カスケードにおけるシステムの臨界圧を均一化し、それによって所望の後処理流速を維持するために必要な降圧を調節する重要な機器となる。流入供給率に対する各工程のロバストは、実際の操作中に実験される操作条件範囲への適合能を確実にするために重要になる。この目的には、本明細書に記載の非常用回収容器の使用手順を含む連続ライン全体の停止および開始手順の開発が含まれる。製造プロセスの連続操作中、試料は、プロセスの各時点で回収して、予期した生成物およびプロセス属性すなわち、純度、収率は、CPTプロセスによって達することを検証し得る。最終精製大量生成物を分析し得、SDS-PAGEおよびHPLCによって生成物純度を決定し、ELISAによって具体的な不純物例えば、宿主細胞タンパク質のクリアランスを決定し、生成物濃度によって全収率の決定が可能になる。参考文献:RossetAJ,NeuzilRWandBroughtonDB.Industrialapplicationofpreparativechromatography,in:RodriguesAE,TondeurDeds.,PercolationProcesses:TheoryandApplication,Rockville,MD,SijthoffNoordhoffPress;1981.VanWalsemHJandThompsonMC,Simulatedmovingbedintheproductionoflysine,J.Biotech,1997;59:127-132.TroutBandBissonW,Continuousmanufacturingofsmallmoleculepharmaceuticals:theultraleanwayofmanufacturing,presentedatMITLeadersforGlobalOperationsConference;Cambridge,MA;Dec3-4,2009.BisschopsMetal,Single-usecontinuous,counter-current,multicolumnchromatography.BioProcessInternational,June2009;7Supp5:18-23.CoffmanJ.DevelopmentofaProteinASMBstepforaMabwithupto10g/Ltiters,presentedatBioManufacturingandDevelopmentconference;Boston,MA;Nov1-3,2010.前述の発明を実施するための形態から、柔軟および実用的な連続プロセス法を実行してより効率的およびより安価に実行する実質的に任意の生物医薬品製造プロセスを行うことができることが明らかである。本明細書に記載の連続プロセス特性はまた、製造プロセスの実行時間を著しく短縮する。いくつかの実施形態を上述したが、本発明の開示または添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、記載したプロセスおよび装置の修正および変更を行い得ることが当業者によって理解されるであろう。上に引用した論文および刊行物は、参照することによって本明細書に組み込まれる。"