"下記の式のd-ネビボロール及び/又はl-ネビボロールの合成のための方法であって、下記の工程:a6-フルオロ-2-カルボキシル酸エステル1、式中、R1は、直鎖又は分岐C1-5アルキル基である、のエナンチオマーの混合物を加水分解して、酸2及びエステル3の混合物を与える工程、bかくして得られた酸2及びエステル3を、エポキシドの混合物4及び5のそれぞれの合成のために使用する工程、cエポキシドの混合物4及び5を分割resolveさせて、化合物67及び89をそれぞれ得る工程、dアミノアルコール6及び8をエポキシド7及び9と反応させて、l-ベンジルネビボロール10及びd-ベンジルネビボロール11を得る工程、eベンジル保護基を除去する工程を含み、工程aにおいて、立体選択的酵素的加水分解反応によって加水分解して、>70のエナンチオマー過剰度を伴うR酸2及び>70のエナンチオマー過剰度を伴うSエステル3の混合物を与え、かつ、工程cにおいて、エポキシドの混合物4及び5を、それらをベンジルアミンと立体障害アルコールの中で反応することによって、動力学的に分割させて、実施することを特徴とする、上記方法。前記酵素的加水分解反応が、オフィオストマOphiostoma属から得られた、そして特にOphiostomanovo-ulmiのAJ3株に由来するエステラーゼの使用により実施される、請求項1に記載の合成方法。前記酵素的加水分解反応が、8及び11の間に包含されるpHで行われる、請求項2に記載の方法。前記酵素的加水分解反応が、8.5及び10の間に包含されるpHで行われる、請求項3に記載の方法。前記酵素的加水分解反応が、10°及び35°Cの間に包含される温度で行われる、請求項2に記載の方法。前記酵素的加水分解反応が、20°及び25°Cの間に包含される温度で行われる、請求項5に記載の方法。前記酵素的加水分解反応が、水性環境の中で又は水非混和性溶媒の存在下で行われる、請求項2に記載の方法。エステルの混合物1の酵素的加水分解反応が、R酸2及びSエステル3の両方の成分において>80又は>90のエナンチオマー過剰度を伴う混合物を産するように進行する、請求項2に記載の方法。前記酸2が、RRRSエポキシドの混合物4へと変換され、片や、前記エステル3が、SSSRエポキシドの混合物5へと変換される、請求項1に記載の方法。ベンジルアミンでのエポキシドの混合物4及び5の動力学的分割が、イソプロパノール、sec-ブタノール、tert-ブタノール、2-メチル-2-ブタノール、イソアミルアルコール、2-メチル-2-ペンタノールから選択される立体障害アルコールの中で行われる、請求項1に記載の方法。エポキシドの混合物4のベンジルアミンとの動力学的分解が、イソプロパノール、sec-ブタノール、tert-ブタノール、2-メチル-2-ブタノール、イソアミルアルコール、2-メチル-2-ペンタノールから選択される立体障害アルコールの中で行われ、アミノアルコールRS6のみを得て、一方で、エポキシドRR7が、変化しないで回収される、請求項10に記載の方法。エポキシドの混合物5のベンジルアミンとの動力学的分解が、イソプロパノール、sec-ブタノール、tert-ブタノール、2-メチル-2-ブタノール、イソアミルアルコール、2-メチル-2-ペンタノールから選択される立体障害アルコールの中で行われ、アミノアルコールSR8のみを得て、一方で、エポキシドSS9が、変化しないで回収される、請求項10に記載の方法。前記立体障害アルコールが、2-メチル-2-ブタノールである、請求項11又は12に記載の方法。アミノアルコールRS6が、エポキシドSS9と反応して、l-ベンジル化ネビボロール10を得るか、及び/又は、アミノアルコールSR8が、エポキシドRR7と反応して、d-ベンジル化ネビボロール11を得る、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法。化合物10及び11が、1:1比で混合され、ベンジル基から脱保護化されて、最終産物ネビボロールを得る、請求項14に記載の方法。前記最終産物ネビボロールが、塩酸で塩化され、対応する塩酸塩を得る、請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。それゆえに、産業的使用に適しかつクロマトグラフィ分離の使用を回避する新規の合成方法を開発する必要性、及び限定された数の合成工程を維持しながらもかなりの百分率の中間体化合物を排除する必要性が、著しく感じられる。今まさに、驚くべきことにネビボロールの合成のためのより効果的な方法スキーム1を見出した。その方法は、本明細書において強調された以前知られていた合成経路のための欠点を排除することを可能にする。すなわち、それは、aエポキシドエナンチオマーのペアRR/SSRS/SRの又は他のジアステレオ異性体中間体の調製用HPLCによる分離を、回避又は相当低減させる、b望ましくない異性体で代表される産物の損失を目立って低減させ、結果的に全体的な収量の増加を伴う。6-フルオロクロマン-2-カルボン酸エステルの2つのエナンチオマーの混合物の処理は、Ophiostoma属から得られ得る真菌エステラーゼリパーゼによって行われる。好ましい種は、Ophiostomanovo-ulmi由来のエステラーゼであり、その文献においてナプロキセン又はケトプロフェン化合物のエステルに対する立体選択的活性についてすでに記載されている。水性又は水性/有機性媒質の中で実施される反応は、選択的様式で2つのエナンチオマーの中から1つのカルボン酸への加水分解へと導き、一方で、他の1つは、エステルの形態のままである。その反応は、迅速にかつ高い立体選択性を伴って進行する。かくして産生された2つの化合物は、酸-塩基抽出によって容易に分離することができる。それゆえに、本発明の目的は、ネビボロールの調製のための方法であって、その方法は、下記の工程を含む:a.酵素的加水分解反応によって、6-フルオロ-2-カルボン酸エステル1、式中R1は、直鎖又は分岐C1-5アルキル基である、のエナンチオマーの混合物を分割して、酸2及びエステル3の混合物を得る工程、式中、R酸2が、>70のエナンチオマー過剰度で存在し、かつSエステル3が、>70のエナンチオマー過剰度で存在し、エナンチオマー過剰度が、両方の成分において、好ましくは>80であり、さらにより好ましくは90である、b.かくして得られた酸2及びエステル3をエポキシドの混合物4及び5の合成のために使用する工程、c.1ベンジルアミンによるエポキシドの混合物4及び5に対する立体障害アルコールの中での動力学的分割をして、化合物67及び89をそれぞれ得てそれらの分離をする工程、c.2c.1で記載した動力学的分割に代えて、エポキシドの混合物4及び5のクロマトグラフィ分離及び、引き続いてのRSエポキシドのベンジルアミンでの反応をしてアミノアルコールRS6を得ること及び引き続いてのエポキシドSRのベンジルアミンでの反応をしてアミノアルコールSR6を得ることの工程、d.アミノアルコールRS6をエポキシド9と反応させてl-ベンジルネビボロール10を得ること及びアミノアルコールSR8をエポキシド7と反応させてd-ベンジルネビボロール11を得ることの工程、e.脱保護化して、ベンジル基の除去を伴い、ネビボロール形成を伴う工程。本発明の最後まで、直鎖又は分岐C1-5アルキル基として定義されるR1は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、アミル、tert-アミルから選択されるラジカルを表し、好ましくは、メチル、エチル、プロピルから選択されるラジカルであり、さらにより好ましくは、エチル基である。本発明によれば、ネビボロール化合物は、スキーム1に記載される6-フルオロクロマン-2-カルボン酸エステル1のラセミ混合物から出発する方法により得られる。6-フルオロクロマン-2-カルボキシレート1は、Ophiostoma属から得られ得る真菌エステラーゼリパーゼにより触媒されるエナンチオ選択性加水分解を通じて高い立体選択性を伴ってそれの2つのエナンチオマーへと分割され得る。好ましい種は、Ophiostomanovo-ulmi由来のエステラーゼであり、その文献においてナプロキセン又はケトプロフェン化合物のエステルに対する立体選択的活性についてすでに記載されている。酵素は、単離され及び結晶化された発現タンパク質の形態で、M.N.IsupovらによってActaCrystallographica-BiologicalCrystallographySectionD60,p.1879-18822004に記載されている。酵素は、欧州特許第B1-0687305号WO94/20634、欧州特許第0693134号、米国特許第5912164号、及び欧州特許第1626093号にもまた記載されている。大腸菌の中での酵素発現は、M.N.Isupovら前出によって又は欧州特許第B1-0687305号WO94/20634において記載されるように実施してもよい。この株は、活性の良好な例を提供するが、広範な種類の関連する株においてむしろ広がった性質の活性があれば、本発明の範囲はこれにのみ限定されることを意図しない。Ophistoma属の微生物及びそれらの酵素的活性は、6-フルオロクロマン-2-カルボキシル化エチルのラセミエステルを立体選択的方法で加水分解し、それによってエナンチオマーRがかなり富化された、例えば45~50の変換で93~100のエナンチオマー過剰度での酸をもたらし、かつ富化された残存エステルがエナンチオマーSのままとなるために、使用してもよい。それゆえに、R6-フルオロクロマン-2-カルボン酸2は、>70のエナンチオマー過剰度で、好ましくは>80のエナンチオマー過剰度で及びさらに好ましくは>90のエナンチオマー過剰度で産生され、一方で、S6-フルオロカルボン酸は、エステル3の形態のままであり、>70のエナンチオマー過剰度で、好ましくは>80のエナンチオマー過剰度で及びさらに好ましくは>90のエナンチオマー過剰度を伴う。反応は、エナンチオマーの任意の混合物に対して行ってもよいが、一般的にラセミ体を使用する。この反応のために使用されるエステルは、6-フルオロ-2-カルボン酸エステル1であり、式中、R1は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、アミル、tert-アミルから包含される群から、好ましくはメチル、エチル、プロピルから、さらに好ましくはエチル基から選択される、直鎖又は分岐C1-5アルキル基である。反応は、好ましくはpH8~11で、好ましくは8.5~10.0で行われる。温度は、10及び35°Cの間に、しかし好ましくは20及び25°Cの間に包含されていてもよい。反応混合物は、水性環境の中に、又は水非混和性溶媒の存在下にあっていてもよい。両方の化合物の回収は、当業者に知られた方法によって、好ましくは一連の酸-塩基抽出を通じて可能である。両方の化合物は次いで、ネビボロール合成スキーム1のために使用される。当業者に知られた方法を通じてWO2007041805に記載されたものに類似して、非限定的な例によって、酸2は、それらの間でジアステレオ異性体となる、エポキシドRS及びRRの混合物4へと転換され、一方で、エステル3は、エポキシドSRSSの混合物5へと変換される。エポキシドの混合物4のベンジルアミンでの立体障害アルコール溶媒例えば、イソプロパノール、sec-ブタノール、tert-ブタノール、2-メチル-2-ブタノール、イソアミルアルコール、2-メチル-2-ペンタノールの中での開環の反応を実施することによって、単独でのアミノアルコールRS6の形成を伴う動力学的分割を受け、一方で、エポキシドRR7は、変化せずに回収される。同じ手順を、混合物5に適用させ、アミノアルコールSR8及びエポキシドSS9を産生する。記載された動力学的分割に代えて、エポキシドの混合物4は、2つのエポキシドRS及びRRへと、及びエポキシドの混合物5は、2つのエポキシドSR及びSSへと、クロマトグラフィによって分離してもよく、引き続いて、エポキシドRSは、ベンジルアミンと反応して、アミノアルコールRS6を得て、一方で、エポキシドSRは、ベンジルアミンと反応して、アミノアルコールSR8を得る。最後に、アミノアルコール6のエポキシド7との反応は、l-ネビボロールのN-ベンジル化誘導体10を産生し、同様にアミノアルコール8のエポキシド9の反応は、d-ネビボロールのN-ベンジル化誘導体11を産生する。化合物10及び11は、等モル量でプールされ、結晶化によって精製されそれによって原料のエステル/酸の不完全なエナンチオマー純度に由来する望まれないジアステレオ同位体化合物により構成されるあらゆる不純物を除外する、脱ベンジル化され、及び引き続いて塩化されて所望の最終ネビボロール塩を得る。本発明は、以降において下記の実施例により詳細に記載され、純粋に例示によるものであり、限定的な目的のためではない。例1欧州特許第0687305号に記載されるように、Ophiostomanovo-ulmiにおいて本来は発現するエステラーゼを含む組換え大腸菌の株を、当業者に周知の技術に従って培養する。細胞画分を超音波によって溶解し、溶解物は遠心されて無細胞上清溶液を得る。1.6mLのOphiostomanovo-ulmiから得られたエステラーゼリパーゼ酵素を含有する溶液6800単位/mL及び約25gのエチル6-フルオロクロマン-2-カルボン酸1の25mLの脱イオン水及び100mLのTween80の中での懸濁液を、500mLの0.1NNaHCO3緩衝溶液pH9.7に加え、任意でpHを2NNaOHで9.7の値へと調整する。かくして得られた混合物を穏やかに攪拌する。pHは、2NNaOH溶液の制御された添加により9.7の値で自動的に維持される。反応の進展は、HPLCによって制御される。加水分解反応の最後で、混合物をジクロロメタンで抽出し、それによってエステルを有機相中に得る。水性溶液を1N塩酸でpH1へと酸性化し、次いでジクロロメタンで酸の回収のために抽出する。2つの有機相を、別々に塩水で洗い、及び濃縮してそれぞれ12.2gのエチルエステル及び11.0gの酸を得る。エナンチオマー比HPLC:Sエステル3/Rエステル:95.31/4.69R酸2/S酸:95.36/4.64DMF中で25°Cでの酸の混合物酸2を含むについての旋光能の評価は、当該混合物が左旋回性であることを示し、欧州特許第0334429号においてR異性体について報告されたものと合致する。分析方法:Kromasil5-AmyCoat4.6×250mmカラム;溶出液:Aヘキサン0.1TFA、Bイソプロパノール、均一溶媒A/B85/15;流量:1mL/分、温度:40°C;検出器:280nmでのUV。例2.アシルメルドラム誘導体の調製28gの分割されたR酸を250mL無水ジクロロメタン中に溶解し、結果として得られた溶液に、1.4当量の塩化オキサリル及びDMF滴下を添加する。溶液を攪拌下で室温でN2下で維持し、1.5時間後に溶媒を蒸発させ、油分を得て、200mL無水ジクロロメタン中へと再溶解させる。別個に、メルドラム酸1.05当量及びピリジン2当量を無水ジクロロメタン150mL中に溶解して攪拌下0°Cで15分間おく。この溶液に以前形成した酸塩化物を添加する。添加の最後で、混合物を攪拌下0°Cで1時間、及び他に45分室温で置く。次いで、それを他の500mLジクロロメタンで希釈し及び有機相をH2O2×200mL、2NHCl100mL、水、及び塩水で洗浄して、Na2SO4上で乾燥させる。20体積のジイソプロピルエーテルdiisopropyleterで溶かし込んだ油分が得られ、濾過され及び乾燥された茶色の固体40g、HPLC純度=81、λ=280nmを得る。得られた個体を、さらなる精製をせずに引き続いての反応において使用する。例3.βーケトエステルの調製40グラムの粗製アシルメルドラム誘導体Rを、攪拌下で110mLtert-ブタノールとともに置き、HPLCによる制御が原料産物の消滅を呈示するまで、結果として得られる混合物を80°Cへと1時間加熱する。反応の最後で、tert-ブタノールを減圧下で蒸発させ、それを500mLエチルアセテートで溶かし込んで、有機相を飽和NaHCO3溶液で、中性までH2Oで、塩水で洗浄してそれをNa2SO4上で乾燥させる。次いで、溶媒を蒸発させ、粗製βーケトエステルHPLC純度=69、λ=280nmを油分として得て、さらなる精製をせずに引き続いての反応において使用する。例4.クロロβーケトエステルの調製28gの粗製βーケトエステルRを250mLエチルアセテート中に溶解して、この溶液に0.26当量のMgClO42を添加する。30分後、0.95当量のN-クロロスクシンイミドを2時間で添加する。添加の最後で、結果として得られる混合物を1時間の間室温で攪拌する。次いで、形成された固体を除去し、他の350mLのエチルアセテートでの希釈の後に、清澄な溶液を分液漏斗へと移送し、有機相を塩水、H2Oで洗浄して、Na2SO4上で乾燥させる。溶媒を蒸発させ、34gの粗製塩素誘導体HPLC純度=79.40、λ=280nmを得て、さらなる精製をせずに引き続いての反応において使用する。例5.αークロロケトンclorochetoneの調製34gの粗製βーケトエステルRをHCOOH100mL、CH3COOH120mL及びH2O30mLで還流し、1.5時間後HPLCによる制御が反応の最後を呈示する。次いで、混合物を減圧下で蒸発させ、エチルアセテートに溶かし込んで、有機相を塩水、飽和NaHCO3、H2Oで洗浄して、Na2SO4上で乾燥させる。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、21gのα-クロロ-ケトンHPLC純度=60、λ=280nmを油分として得て、そのままでtelquel、さらなる精製をせずに引き続いての反応において使用する。例6.αークロロアルコールの調製前出の反応から得られた油分の21gを15体積のMeOH中に溶解し、この溶液に2.0当量のNaBHOCOCH33をスパチュラで添加して、それを磁気攪拌下で室温で保持する。45分後に他の当量のNaBHOCOCH33を添加する。最後の添加から1時間後、HPLCによる制御が反応の最後を表す。溶媒を減圧下で蒸発させ、全部をエチルアセテートとともに分液ロートへと移送して、有機相をH2O及び塩水で洗浄して、Na2SO4上で乾燥させる。21gの油分が得られ、フラッシュクロマトグラフィシリカ/粗製物比:30:1、溶出液:石油エーテル/AcOEt92:8によって精製され、14.2gのαークロロ-アルコールを得るHPLC純度=86.5、λ=280nm。例7.RRRSエポキシド4の調製14gのα-クロロ-アルコールを20体積の無水Et2O中に溶解して、この溶液に2.8gの前出のNaHを、石油エーテルで洗浄したものを、添加する。1時間後、TCLシリカゲル、溶出液:石油エーテル/AcOEt85:15が原料クロロアルコールの消滅TCL中の1個のブロット及び2つのエポキシドの形成TCL上の2個の明確に異なったブロットを表す。次いで、反応混合物を他の30体積のEt2Oで希釈して、全部を100mLの1MNaHSO4中に注ぎ、勢いのよい攪拌を維持する。有機相をNaHCO3、H2O、塩水で洗浄して、Na2SO4上で乾燥させる。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、11.4gのエポキシドの混合物を油分としてHPLC純度>98、λ=280nm、51:48の比にて得る。キラルHPLCでの分析において示された、その比においてわずか2個の主要ピークのみが存在することは、R酸からジアステレオ異性体RRRSエポキシドの混合物へと進む反応シーケンスにおいて、立体中心キラリティの明白な保持を伴って、ラセミ化がもたらされなかったことを示す。SRSSエポキシドの混合物5を、例2~7に記載されたものと同様に、エステル3から開始し、加水分解の後に対応する酸へと向かって、調製する。この場合では、かくして得られた酸についてのDMF中で25°Cでの旋光能の評価は、それが右旋回性であることを示し、欧州特許第0334429A1号においてS異性体について報告されたものと合致する。例8.SSSRエポキシドの混合物に対する動力学的分割SSSRエポキシドの混合物4.50g,22.5mmol及びベンジルアミン3.8mL,35mmolの2-メチル-2-ブタノール38mL中の溶液を、室温で12時間の間混合する。反応の最後で、形成されたSRアミン8を真空下で濾過し、そして乾燥させる1.90g,6.30mmol。濾過された溶液をシクロヘキサン250mL中に注ぎ、そしてかくして得られた溶液を1MNaHSO4100mL及びH2O50mL×2で洗浄して、次いで減圧下で濃縮して1.306.00mmolgのSSエポキシド9を得る。RSRRの混合物に対する動力学的分割を、例8に記載されたものと同様に行う。例9.l-ベンジルネビボロールSSSRの合成化合物RS-2-ベンジルアミノ-1-6-フルオロクロマン-2-イルエタノール及びSSエポキシドを絶対エタノール6mL中に溶解して、原料試薬の消滅まで還流で維持する。反応の最後で、混合物を放置して室温に到達させ、そして溶媒を減圧下で除去する。例10.d-ベンジルネビボロールRRRSの合成化合物SR-2-ベンジルアミノ-1-6-フルオロクロマン-2-イルエタノール及びRRエポキシドを例9でのように処理してd-ベンジルネビボロールを得る。例11.d,l-ベンジルネビボロールの合成例9に記載されたl-ベンジルネビボロール3.00g及び例10に記載されたd-ベンジルネビボロール3.00gをプールして、かくして得られた混合物6.0gを結晶化によって精製し、5.0gのN-ベンジルネビボロールを得た83、HPLC純度=99.6。結晶化による精製の間に、原料エチル6-フルオロクロマン-2-カルボン酸1の不完全なエナンチオ選択性加水分解に由来する望ましくない異性体からなる不純物もまた除去される。例12.ネビボロール塩酸塩の合成化合物d,l-ベンジルネビボロール5.0g,410mmolをメタノール400mL並びに20PdOH2/C1b/w中に溶解する。混合物を攪拌下で水素雰囲気下で維持する。反応の最後で、触媒を多孔隔膜上で濾過して、濃縮HCl36mLを濾液に添加する。溶液を減圧下で濃縮して得られた残渣を絶対エタノール50mLとともに加熱処理する。得られた固体を濾過して真空下で乾燥させる1.0g、収量:82、HPLC純度:99.9。"