"配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15もしくは16の配列またはその断片もしくは誘導体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを腫瘍細胞に提供し、アンチセンスオリゴヌクレオチドが腫瘍細胞におけるdownregulatedinrenalcellcarcinomaDRRの発現を減少させることを含む、腫瘍細胞におけるDRRの発現を減少させる方法。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15もしくは16の配列またはその断片もしくは誘導体を含む、腫瘍細胞におけるdownregulatedinrenalcellcarcinomaDRRの発現を減少させるためのアンチセンスオリゴヌクレオチド。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15もしくは16の配列またはその断片もしくは誘導体をコードする配列、または腫瘍細胞におけるdownregulatedinrenalcellcarcinomaDRRの発現を減少させるのに好適なアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするDNAを含むDNA分子を腫瘍細胞に提供することを含む、腫瘍細胞におけるDRRの発現を減少させる方法。前記DNA分子がアンチセンスオリゴヌクレオチドの産生に適している発現ベクター中に挿入される、請求項3に記載の方法。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15もしくは16の配列またはその断片もしくは誘導体をコードする配列を含む発現ベクター。請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするベクターをそれを必要とする被験体に投与することを含む、癌を治療する方法。請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするベクターをそれを必要とする被験体に投与することを含む、癌の進行を遅らせる方法。前記アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/またはベクターが、外科的切除、化学療法、放射線療法、免疫療法および遺伝子療法からなる群から選択される1つまたは複数の癌療法と組み合わせて使用される、請求項6または7のいずれか一項に記載の方法。前記腫瘍細胞が神経膠腫細胞である、請求項1、3、4および6~8のいずれか一項に記載の方法。前記神経膠腫細胞が神経膠芽腫細胞である、請求項9に記載の方法。前記腫瘍細胞が神経膠腫細胞である、請求項2に記載のアンチセンスRNA。前記神経膠腫細胞が神経膠芽腫細胞である、請求項11に記載のアンチセンスRNA。請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするベクターおよび薬学的に許容されるキャリアーを含む、癌の治療のための医薬組成物。前記癌が神経膠腫である、請求項13に記載の医薬組成物。前記神経膠腫が悪性神経膠芽腫である、請求項14に記載の医薬組成物。請求項13~15のいずれか一項に記載の医薬組成物およびその使用説明書を含むキット。被験体に対する同時投与、分離投与または連続投与のための、神経膠腫の治療および/またはその進行の遅延に好適な第2の活性化合物をさらに含む請求項16に記載のキット。請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするベクターをそれを必要とする被験体に投与すること、および癌療法を同時に、分離して、または連続して投与し、該癌療法が外科的切除、化学療法、放射線療法、免疫療法および遺伝子療法からなる群から選択されることを含む、神経膠腫の治療のための該癌療法の効能を増進する方法。前記神経膠腫が悪性神経膠芽腫である、請求項18に記載の方法。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15または16の配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその断片もしくは誘導体を腫瘍細胞に提供し、アンチセンスオリゴヌクレオチドが腫瘍細胞におけるDRRの発現を減少させることを含む、それを必要とする被験体における悪性神経膠細胞浸潤を阻害する方法。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15もしくは16の配列またはその断片もしくは誘導体、または腫瘍細胞におけるDRRの発現を減少させるのに好適なアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするDNAを含むDNA分子を腫瘍細胞に提供することを含む、それを必要とする被験体における悪性神経膠細胞浸潤を阻害する方法。請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは請求項2に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするベクターを被験体に投与することを含む、それを必要とする被験体における悪性膠細胞浸潤を阻害する方法。被験体の神経膠腫細胞におけるDRR発現を測定して、DRR発現が細胞の浸潤性を示すことを含む、被験体における神経膠腫の診断または予後診断のための方法。DRRタンパク質またはmRNAを特異的に結合する分子と神経膠腫細胞を接触させること、および細胞におけるDRRタンパク質またはmRNAレベルを測定して、DRRを発現する細胞が浸潤性であることを含む、被験体における浸潤性神経膠腫細胞を可視化する方法。DRRRNAまたはタンパク質について特異的である検出可能に標識されたプローブ、DRRRNAまたはタンパク質へのプローブの結合を検出するためのレポーター手段、およびその使用説明書を含む、被験体における浸潤性神経膠腫の診断または予後診断のためのキット。DRRの発現を減少させる治療用核酸分子または治療用核酸分子をコードするDNAもしくはベクターをそれを必要とする被験体に投与することを含む、癌を治療する方法。前記癌の進行が遅延される、請求項27に記載の方法。悪性細胞浸潤が阻害される、請求項26または27のいずれか一項に記載の方法。悪性神経膠細胞浸潤が阻害される、請求項28に記載の方法。前記癌が神経膠腫、好ましくは悪性神経膠腫、およびより好ましくは神経膠芽腫である、請求項26~29のいずれか一項に記載の方法。前記治療用核酸分子がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項26~30のいずれか一項に記載の方法。前記治療用核酸分子が、DRRmRNAまたはその断片もしくは誘導体に相補的であるかまたは特異的にハイブリダイズする、請求項26~31のいずれか一項に記載の方法。DRRmRNAに相補的であるかまたは特異的にハイブリダイズする治療用核酸分子を腫瘍細胞に提供し、治療用核酸分子が腫瘍細胞におけるDRRの発現を減少させることを含む、腫瘍細胞におけるdownregulatedinrenalcellcarcinomaDRRの発現を減少させる方法。前記治療用核酸分子がアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、請求項33に記載の方法。前記治療用核酸分子がアルティマーおよびギャップマーの構造を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド含みならびに/または修飾されたヌクレオシドもしくはヌクレオチドを含むか、または前記治療用核酸分子がアプタマーを含む、請求項33または34のいずれか一項に記載の方法。前記修飾されたヌクレオシドまたはヌクレオチドがFANAである、請求項35に記載の方法。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15または16において記載される配列を有するオリゴヌクレオチド。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15または16において記載される配列を有するオリゴヌクレオチドをコードするDNA。配列番号:2、5、6、7、8、9、10、14、15または16において記載される核酸の配列を有するRNA。請求項37~39のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、DNAまたはRNAおよび薬学的に許容されるキャリアーを含む医薬組成物。本発明は、脳腫瘍浸潤の新規調節因子および神経膠腫特に悪性神経膠芽腫の治療における治療的介入のための標的としてのdownregulatedinrenalcarcinoma本明細書においてDRR、DRR1またはDRR-1と称されるの同定に関する。特に、神経膠腫腫瘍細胞におけるDRRの発現を減少させる分子を含む、神経膠腫を治療するおよび/または神経膠腫腫瘍細胞浸潤を阻害するための新規化合物、医薬組成物および方法が本明細書において提供される。本発明は、したがってDRRをコードする核酸分子の機能または効果の修飾における使用のための化合物特にオリゴヌクレオチドおよび類似種を提供する。いくつかの実施形態において、これは、DRRをコードする1つまたは複数の核酸分子と特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドの提供によって遂行される。その標的核酸とハイブリダイズする本発明の化合物は、概してアンチセンスと称され、したがってDRRの阻害のメカニズムはアンチセンス阻害と称される。典型的にはかかるアンチセンス阻害は、標的RNA分子が切断されるか、分解されるか、さもなくば操作不可能にされるようなオリゴヌクレオチドストランドまたはセグメントの水素結合に基づくハイブリダイゼーションに基づく。本発明は、DRRまたはその部分をコードする標的化特異的核酸分子DRRをコードするmRNA等を考慮する。本明細書において使用される時ハイブリダイゼーションは、オリゴマー化合物の相補的ストランドの対合を指す。本発明において、対合の好ましいメカニズムは、相補的なヌクレオシドまたはオリゴマー化合物のストランドのヌクレオチド塩基核酸塩基の間の、水素結合Watson-Crick水素結合、Hoogsteen水素結合または逆Hoogsteen水素結合であり得るを含む。例えば、アデニンおよびチミンは水素結合の形成を通して対合する相補的な核酸塩基である。ハイブリダイゼーションは変動的な状況下で起こり得る。本明細書において使用される時相補的なは、オリゴマー化合物の2つの核酸塩基との間の正確な対合についての能力を指す。例えば、オリゴヌクレオチドオリゴマー化合物の特定の位置の核酸塩基が、標的核酸の特定の位置の核酸塩基と水素結合することが可能であり、該標的核酸がDNA、RNAまたはオリゴヌクレオチド分子であるならば、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の水素結合の位置は相補的な位置であると判断される。各々の分子中の十分な数の相補的な位置が互いに水素結合できる核酸塩基によって占められる場合、オリゴヌクレオチドとさらなるDNA、RNAまたはオリゴヌクレオチド分子は、互いに相補的である。したがって、特異的にハイブリダイズ可能および相補的は、安定的で特異的な結合がオリゴヌクレオチドと標的核酸との間に起こるような十分な数の核酸塩基にわたる十分な程度の正確な対合または相補性を示すために使用される用語である。アンチセンス化合物の標的核酸例えばDRRmRNAへの結合が標的核酸の正常な機能を妨害して活性の喪失を引き起こす場合、この化合物は特異的にハイブリダイズ可能であり、特異的結合が所望される条件下すなわち、インビボのアッセイまたは治療的処理の事例で生理的状態下、およびインビトロアッセイの事例でアッセイが実行される条件下で、アンチセンス化合物の非標的核酸配列への非特異的結合を回避するような、十分な程度の相補性がある。アンチセンス化合物の配列が、特異的にハイブリダイズ可能なその標的核酸の配列に対して必ずしも100相補的である必要がないことは当該技術分野において理解される。さらに、介在するセグメントまたは隣接するセグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないように例えばループ構造またはヘアピン構造、オリゴヌクレオチドは1つまたは複数のセグメントにわたってハイブリダイズすることができる。本発明のアンチセンス化合物は、標的核酸内の標的部位に対して少なくとも70の配列相補性を含むことが好ましく、より好ましくはそれらは標的核酸配列に対して少なくとも80の配列相補性、少なくとも85の配列相補性、少なくとも90の配列相補性、または少なくとも95の配列相補性を含む。例えば、アンチセンス化合物の20の核酸塩基のうちの18が標的部位に対して相補的でありそれゆえ特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合物は、90パーセントの相補性を表わす。この例において、残りの非相補的な核酸塩基はクラスター化されるかまたは相補的な核酸塩基により散在させられ、互いにまたは相補的な核酸塩基に隣接している必要はない。それゆえ、標的核酸と完全な相補性の2つの領域が隣接する、4つの非相補的な核酸塩基を有する18の核酸塩基長のアンチセンス化合物は、標的核酸と77.8の全体的な相補性を有し、したがって本発明の範囲内に分類されるだろう。標的核酸の領域とのアンチセンス化合物のパーセント相補性は、当該技術分野において公知のBLASTプログラムbasiclocalalignmentsearchtoolsおよびPowerBLASTプログラムを使用してルーチンに決定することができるAltschuletal.,J.Mol.Biol.215:403-410,1990;ZhangandMadden,GenomeRes.7:649-656,1997。本発明において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件またはストリンジェントな条件というフレーズは、本発明の化合物がその標的配列へハイブリダイズするが他の配列には最小数でハイブリダイズする条件を指す。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、異なる環境および本発明の文脈において異なり、オリゴマー化合物が標的配列へハイブリダイズするストリンジェントな条件は、オリゴマー化合物の性質および組成ならびにそれらが調べられているアッセイによって決定される。ハイブリダイゼーション条件の非限定例は、50ホルムアミド、0.5ドデシル硫酸ナトリウムおよびブロッキング試薬を含有する、6×SSC緩衝液pH7.0の90mMクエン酸ナトリウムを含有する900mM塩化ナトリウム中で42°Cで16時間行なわれるハイブリダイゼーションである。次いで室温の0.1SDS含有1×SSCにより2回、次いで室温の0.1SDS含有0.1×SSC、および最終的に42°Cの0.5SDS含有0.1×SSCにより膜を洗浄する。アンチセンス薬物は、薬物特性を良好に操作するために化学的に修飾される典型的には小さな例えば12~21のヌクレオチド、または15~30のヌクレオチドDNA片またはRNA片である。アンチセンス薬物は標的RNAへの結合ハイブリダイズおよび二重らせんの形成後に働く。この二重らせんすなわち2ストランドの分子の形成は、RNAが正常に機能および/またはタンパク質を生ずることを阻止する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、RNaseH動員を介する標的mRNAの破壊、RNAプロセッシングまたは翻訳の干渉、核外輸送、折り畳みまたはリボソームスキャニングを含む多数の代替メカニズムを介してmRNA翻訳を阻害する。一旦アンチセンス薬物がその標的RNAに結合すれば、利用することができる少なくとも1ダースの公知のアンチセンスメカニズムがある。例えば、治療用分子は細胞内のタンパク質産生の調節に関与する非コードRNAmicroRNA等を標的化することができる。microRNAは、細胞の内部で生成され、遺伝子発現を制御するプロセスまたは経路において重要な機能を有すると思われる小さな天然に存在するRNA分子である。ヒトゲノムにおいて同定された約700のmicroRNAがあり、これらはすべてのヒト遺伝子のうちのおよそ3分の1の発現を調節すると考えられる。他のアンチセンス薬物は、例えば1つのタンパク質vs別のタンパク質の産生を支援するようにスプライシングを制御することができる。様々なタイプのアンチセンスオリゴヌクレオチドは公知であり、本発明の組成物および方法において使用することができる。公知のアンチセンス技術のいずれかを使用して、DRRを標的化しDRR発現を減少させ得ることが意図される。例えば、糖修飾ヌクレオシド例えば2’-O-修飾リボヌクレオシドまたはアラビノヌクレオシドおよび2’-デオキシヌクレオシドの互い違いのセグメントを有するオリゴヌクレオシド、ならびに/または糖修飾ヌクレオチドおよび2’-デオキシヌクレオチドの互い違いのセグメントを有するオリゴヌクレオチドは、アルティマーaltimerとして公知であり、アンチセンスオリゴヌクレオチドの調製物のために使用することができる。アルティマーは例えばPCT公開番号WO/2003/064441中で記載され、その内容は参照として本明細書に援用される。一実施形態において、本発明の治療用分子は、糖修飾ヌクレオシドおよび2’-デオキシヌクレオシドのセグメントを互い違いに含むオリゴヌクレオシドを含むアンチセンスであり、そこでセグメントまたはユニットの各々は独立して少なくとも1つの糖修飾ヌクレオシドまたは2’-デオキシヌクレオシドをそれぞれ含む。例えば、オリゴヌクレオシドは第1のセグメントおよび第2のセグメントを互い違いに含み、そこで第1のセグメントは少なくとも1つの糖修飾ヌクレオシドを含み、第2のセグメントは少なくとも1つの2’-デオキシヌクレオシドを含む。複数の実施形態において、オリゴヌクレオシドは、第1のセグメントおよび第2のセグメントを各々少なくとも2つ含み、その結果として少なくとも4つの互い違いのセグメントを含む。一実施形態において、オリゴヌクレオシドはリン酸塩を含むヌクレオシド間リンケージを含み、その結果としてオリゴヌクレオチドである。複数の実施形態において、糖修飾ヌクレオシドおよび/または2’-デオキシヌクレオシドはリン酸塩を含み、その結果として糖修飾ヌクレオチドおよび/または2’-デオキシヌクレオチドである。したがって、一実施形態において、本発明は、アラビノヌクレオチドおよび2’-デオキシヌクレオチドのセグメントまたはユニットを互い違いに含むオリゴヌクレオチドを提供し、そこで該セグメントまたはユニットの各々は独立して少なくとも1つのアラビノヌクレオチドまたは2’-デオキシヌクレオチドをそれぞれ含む。一実施形態において、オリゴヌクレオチドは少なくとも2つのアラビノヌクレオチドセグメントおよび少なくとも2つの2’-デオキシヌクレオチドセグメントを含み、その結果として少なくとも4つの互い違いのユニットを有する。一実施形態において、糖修飾オリゴヌクレオチドはDNA様立体配座を取り入れることができる。一実施形態において、糖修飾ヌクレオチドは、アラビノヌクレオチド、α-L-ロックされた核酸、シクロヘキセン核酸、および負の電荷を持つ2’-酸素原子を欠損するリボヌクレオチドからなる群から選択される。一実施形態において、負の電荷を持つ2’-酸素原子を欠損するリボヌクレオチドは、2’-アルキル-D-リボースおよび2’-SCH3-D-リボースからなる群から選択される。一実施形態において、セグメントは各々独立して約1~約6のアラビノヌクレオチドまたは2’-デオキシヌクレオチドを含む。さらなる実施形態において、セグメントは各々独立して約2~約5または約3~約4のアラビノヌクレオチドまたは2’-デオキシヌクレオチドを含む。さらなる実施形態において、セグメントは各々独立して約3のアラビノヌクレオチドまたは2’-デオキシヌクレオチドを含む。一実施形態において、上述のオリゴヌクレオチドは以下のものからなる群から構造を選択する。aAx-DynIbDy-AxnIIcAx-Dym-Ax-Dy-AxIIIdDy-Axm-Dy-Ax-DyIV式中、各々のm、xおよびyは各々独立して1以上の整数であり、nは2以上の整数であり、Aは糖修飾ヌクレオチドであり、Dは2’-デオキシリボヌクレオチドである。一実施形態において、上述の糖修飾ヌクレオチドはフッ素、ヒドロキシル基、アミノ基、シアン基、アジド基、-CH=CH2,-C≡CH基、アルキル基、官能基化されたアルキル基、アルコキシ基および官能基化されたアルコキシ基からなる群から選択される2’置換基を含む。一実施形態において、アルキル基は低級アルキル基である。一実施形態において、低級アルキル基は、メチル基、エチル基およびプロピル基からなる群から選択される。一実施形態において、官能基化されたアルキル基は、メチルアミノ基、エチルアミノ基およびプロピルアミノ基からなる群から選択される。一実施形態において、アルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基およびプロポキシ基からなる群から選択される。一実施形態において、官能基化されたアルコキシ基は-OCH2q-Rであり、式中、q=2、3または4であり、-Rは-NH2基,-OCH3基および-OCH2CH3基からなる群から選択される。一実施形態において、糖修飾ヌクレオチドはアラビノヌクレオチドである。さらなる実施形態において、2’置換基はフッ素であり、アラビノヌクレオチドは2’-フルオロアラビノヌクレオチド2’F-ANA;FANAとも略されるである。一実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは以下のものからなる群から選択される1つまたは複数のヌクレオチド間のリンケージを含む。aホスホジエステル;bホスホトリエステル;cホスホロチオエート;dホスホロジチオエート;eRp-ホスホロチオエート;fSp-ホスホロチオエート;gボラノホスフェート;hメチレンメチルイミノ3’CH2-NCH3-O5’;i3’-チオホルムアセタール3’S-CH2-O5’;jアミド3’CH2-CONH-5’;kメチルホスホネート;lホスホロアミダート3’-OPO2-N5’;およびma~lの任意の組み合わせ。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは約30以下のヌクレオチド、さらなる実施形態において、約8~約25のヌクレオチド、およびなおさらなる実施形態において、約18のヌクレオチドからなる。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは約12のヌクレオチド、約15のヌクレオチド、約18のヌクレオチド、約20のヌクレオチド、約25のヌクレオチド、または約30のヌクレオチドを有する。別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは約12~約30のヌクレオチド長である。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは構造I式中、x=1、y=1およびn=9を有し、その結果として以下の構造を有する。A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは構造II式中、x=1、y=1およびn=9を有し、その結果として以下の構造を有する。D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A-D-A。一実施形態において、上述のオリゴヌクレオチドは構造III式中、x=2、y=2およびm=3を有し、その結果として以下の構造を有する。A-A-D-D-A-A-D-D-A-A-D-D-A-A-D-D-A-A。一実施形態において、上述のオリゴヌクレオチドは構造IV式中、x=2、y=2およびm=3を有し、その結果として以下の構造を有する。D-D-A-A-D-D-A-A-D-D-A-A-D-D-A-A-D-D。一実施形態において、上述のオリゴヌクレオチドは構造I式中、x=3、y=3およびn=3を有し、その結果として以下の構造を有する。A-A-A-D-D-D-A-A-A-D-D-D-A-A-A-D-D-D。一実施形態において、上述のオリゴヌクレオチドは構造II式中、x=3、y=3およびn=3を有し、その結果として以下の構造を有する。D-D-D-A-A-A-D-D-D-A-A-A-D-D-D-A-A-A。一実施形態において、上述のオリゴヌクレオチドは構造III式中、x=4、y=3およびm=1を有し、その結果として以下の構造を有する。A-A-A-A-D-D-D-A-A-A-A-D-D-D-A-A-A-A。一実施形態において、上述のオリゴヌクレオチドは前記構造IV式中、x=4、y=3およびm=1を有し、その結果として以下の構造を有する。D-D-D-D-A-A-A-D-D-D-D-A-A-A-D-D-D-D。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオシドは、修飾ヌクレオシドを含む第3のセグメントをさらに含み、そこで該第3のセグメントは、a前記互い違いの第1のセグメントおよび第2のセグメントの5’末端、b前記互い違いの第1のセグメントおよび第2のセグメントの3’末端、またはcaおよびbの両方、に隣接する。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドを含む第3のセグメントをさらに含み、そこで該第3のセグメントは、a前記互い違いの第1のセグメントおよび第2のセグメントの5’末端、b前記互い違いの第1セグメントおよび第2のセグメントの3’末端、またはcaおよびbの両方、に隣接する。一実施形態において、修飾ヌクレオチドは修飾リボヌクレオチドである。一実施形態において、修飾リボヌクレオチドはその2’位での修飾を含む。一実施形態において、2’修飾は、メトキシ基、メトキシエチル基、フルオロ基およびプロピルアミノ基からなる群から選択される。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、2’F-ANAまたはFANA等のアラビノヌクレオチドANAおよびDNAの互い違いのセグメントを含むアルティマーである。本明細書において使用される時アラビノヌクレオチドは、アラビノフラノース糖を含むヌクレオチドを指す。好ましくは、アンチセンス分子において、特異的結合が所望される条件下インビボのアッセイまたは治療的処理の事例で生理的条件下、またはインビトロのアッセイの事例でアッセイが行われる条件下等で、アンチセンス分子の非標的配列への非特異的結合を回避するような、標的RNA例えばDRRに対する十分な程度の相補性がある。アンチセンス結合のための標的RNAは、タンパク質をコードする情報だけでなく、関連するリボヌクレオチド例えば、5’非翻訳領域、3’非翻訳領域、5’キャップ領域およびイントロン/エクソンジャンクションリボヌクレオチドを形成するも含むことができる。本発明のアンチセンス分子オリゴヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドは、糖間骨格リンケージホスホトリエステル、メチルホスホナート、3’-チオホルムアセタール、アミド、短鎖のアルキルもしくはシクロアルキル糖間リンケージまたは短鎖のヘテロ原子もしくはヘテロ環の糖間リンケージ、ホスホロチオエート等を含有するもの、ならびにCH2--NH--O--CH2骨格、CH2--NCH3--O--CH2骨格メチレンメチルイミノまたはMMIの骨格として公知、CH2--O--NCH3--CH2骨格、CH2--NCH3--NCH3--CH2骨格ならびにO--NCH3--CH2--CH2骨格式中ホスホジエステルはO-PO2--O--CH2であるを持つものを含み得る。代替の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ペプチド核酸PNA、時にはタンパク質核酸またはペプチド核酸と称される骨格を有することができ、その中のオリゴヌクレオチドのホスホジエステル骨格は、ヌクレオシド塩基がポリアミド骨格中のアザ窒素原子またはメチレン基に直接または間接的に結合されるポリアミド骨格に置き換えることができる例えばNielsenetal.,Science,1991,254:1497および米国特許第5,539,082号を参照されたい。リン酸ジエステル結合は、キラルな構造およびエナンチオマー特異的な構造に置換することができる。上で指摘されるように、オリゴヌクレオチドはさらに少なくとも1つの修飾ヌクレオチド塩基を含む種を含むことができる。したがって、通常は天然で見出されるもの以外のプリンおよびピリミジンを使用することができる。上で指摘されるように、糖修飾ヌクレオチドセグメント例えばANAセグメントのヌクレオチドは、そのペントフラノシル部分上での修飾を含むことができる。かかる修飾の例は、2’-O-アルキル-置換ヌクレオチドおよび2’-ハロゲン-置換ヌクレオチドである。本発明において有用な糖モイエティの2’位の修飾のいくつかの具体的な例は、OH、SH、SCH3、F、OCN、OCH2n、NH2またはOCH2nCH3式中、nは1~約10である;C1~C10の低級アルキル、置換された低級アルキル、アルカリールまたはアラルキル;Cl;Br;CN;CF3;OCF3;O-アルキル、S-アルキル、またはN-アルキル;O-アルケニル、S-アルケニル、またはN-アルケニル;SOCH3、SO2CH3;ONO2;NO2;N3;NH2;ヘテロシクロアルキル;ヘテロシクロアルカリール;アミノアルキルアミノ;ポリアルキルアミノ;置換されたシリル;RNA切断基;レポーター基;インターカレーター;オリゴヌクレオチドの薬物速度論的特性を改善するための基;またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善するための基および類似の特性を有する他の置換基である。糖修飾ヌクレオチドセグメントのヌクレオチドの1つまたは複数のペントフラノシル基は、他の糖、糖模倣体シクロブチル等、または糖に代わる他のモイエティによって置き換えることができる。ヌクレオシドは、糖例えば[デオキシ]リボース、アラビノースおよび誘導体と組み合わされた塩基例えばプリン[例えばAおよびG]またはピリミジン[例えばC、5-メチルC、TおよびU]を指す。ヌクレオチドは、その糖モイエティへリン酸基が付加されたヌクレオシドを指す。複数の実施形態において、これらの構造は、例えば塩基モイエティ、糖モイエティおよび/またはリン酸塩モイエティのいずれかにおける様々な修飾を含むことができる。本明細書において使用される時修飾ヌクレオチド/修飾ヌクレオシドは、定義された生来の形態とは異なり、したがってこの形態を除外したヌクレオチド/ヌクレオシドを指す。本明細書において使用される時オリゴヌクレオチドは、ともに連結された複数のヌクレオチドを含む配列を指す。オリゴヌクレオチドは、その骨格構造中におよび/または1つまたは複数のその構成要素ヌクレオチド中に修飾構造を含むことができる。複数の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは約1~200塩基長、さらなる実施形態において約5~約50塩基、約8~約40塩基、およびなおさらなる実施形態において、約12~約25塩基長である。当業者によって理解されるように、RNAという用語は糖としてリボースを持つ核酸を指すために特別に使用されるが、オリゴヌクレオチドはRNA、DNA、修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、FANAなどをカバーする幅広い用語である。一実施形態において、本発明の治療用分子はギャップマーを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。ギャップマーキメラのアンチセンスオリゴとしても公知は例えばPCT国際公開第WO/2002/20773号中に記載され、その内容は参照として本明細書に援用される。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その標的RNA配列と二重らせんを形成する、可変的な長さの1シリーズのデオキシリボースヌクレオチド残基が隣接するアラビノヌクレオチドまたは修飾アラビノヌクレオチド残基から構築されたキメラであり得る。かかる結果のアンチセンスオリゴヌクレオチド/RNA二重らせんは、RNaseHこの二重らせんを認識し、RNA標的部分を分解する酵素のための基質である。RNA標的のRNaseHを媒介とした切断はアンチセンスオリゴヌクレオチドの主要な作用メカニズムであると判断される。一実施形態において、治療用オリゴヌクレオチドは、s-D-2’-デオキシリボヌクレオチドDNAから構築された定義された配列が隣接する、2’-デオキシ-2’-フルオロ-s-D-アラビノヌクレオチドFANAから構築されたアンチセンスハイブリッドキメラである。一実施形態において、オリゴヌクレオチドは、修飾アラビノースおよび2’-デオキシ糖のキメラを含む。かかるオリゴヌクレオチドには[FANAウィング]-[DNAギャップ]-[FANAウィング]または5’ROFANA-px-DNA-py-FANA-pz-FANA3’OHの一般的な骨格組成を有し、より正確には以下の一般構造を有する。式中、x≧1、y≧1およびz≧0であり、Rは、水素、チオリン酸塩、およびかかるオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増進するリンカーモイエティからなる群から選択される。本発明の別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは以下の式を有する。式中、x≧1、y≧1およびz≧0であり;Rは、水素、チオリン酸塩、およびかかるオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増進するリンカーモイエティからなる群から選択され;Bは、アデニン、グアニン、ウラシル、チミン、シトシン、イノシンおよび5-メチルシトシンからなる群から選択され;ヌクレオチド間のリン酸塩結合でのYは、硫黄、酸素、メチル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ1~約20の炭素原子を有するアルキル基、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され;フラノース環でのX4’位は、酸素、硫黄およびメチレンCH2の群から選択され;糖環の2’位のZは、ハロゲンフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アルキル、ハロゲン化アルキル例えば-CH2F、アリル、アミノ、アリール、アルコキシ、およびアジドからなる群から選択される。本発明の別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは以下の式を有する。式中、x≧1、y≧1およびz≧0であり;Rは、水素、チオリン酸塩、およびかかるオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増進するリンカーモイエティからなる群から選択され;Bは、アデニン、グアニン、ウラシル、チミン、シトシン、イノシンおよび5-メチルシトシンからなる群から選択される。本発明の他の実施形態によれば、以下の式を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド標的化DRRが提供される。式中、x≧1、y≧1およびz≧0であり;Rは、水素、チオリン酸塩、およびかかるオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを増進するリンカーモイエティからなる群から選択され;Bは、アデニン、グアニン、ウラシル、チミン、シトシン、イノシンおよび5-メチルシトシンからなる群から選択され;ヌクレオチド間のリン酸塩結合でのYは、硫黄、酸素、メチル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ1~約20の炭素原子を有するアルキル基、メトキシおよびエトキシからなる群から選択され;フラノース環でのX4’位は、酸素、硫黄およびメチレンCH2の群から選択され;糖環の2’位のZは、ハロゲンフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシル、アルキル、ハロゲン化アルキル例えば-CH2F、アリル、アミノ、アリール、アルコキシおよびアジドからなる群から選択される。特定の実施形態において、Rはチオリン酸塩であり、アンチセンスオリゴヌクレオチドはホスホロチオエートである。他の実施形態において、WO/1999/67378中に記載されるように、FANAユニットから完全に構成されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本発明の組成物および方法において使用される。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、国際PCT公開第WO/1999/67378号中で記載されたもの等のP-D-アラビノヌクレオチドすなわちANAオリゴマーおよび2’-デオキシ-2’-フルオロ-s-D-アラビノヌクレオシドすなわち2’F-ANAオリゴマーからなる糖修飾オリゴマーを含むことができる。さらに他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、G-テトラッドまたはDRRを結合するユニークな3次元構造を形成することができ、少なくとも1つのアラビノース修飾ヌクレオチドを含むことができる核酸リガンドまたはアプタマーであり得る。例えば、アラビノース修飾ヌクレオチドは2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAであり得る。アラビノース修飾ヌクレオチドは、G-テトラッドのループまたは代わりにG-テトラッドのグアノシン残基において存在することができる。一実施形態において、アプタマーは、アラビノヌクレオチドに完全に置換される。例えば、5’-AAAAAAAAAAAAAAA-3’である。別の実施形態において、アンチセンスRNAは2’-デオキシリボヌクレオチドDNAおよび2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAから構築されたキメラである。本発明の他の実施形態において、本発明のアンチセンスRNAは、アラビノースヌクレオチドおよびデオキシリボースヌクレオチドの任意の組み合わせから選択される糖-リン酸塩骨格組成物を有するアプタマーである。特定の実施形態において、アラビノースヌクレオチドは2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAである。本発明の他の実施形態において、アラビノヌクレオチドは、フッ素基、ヒドロキシル基、アミノ基、アジド基、アルキル基、アルコキシ基およびアルコキシアルキル基からなる群から選択される2’置換基を含む。本発明のさらなる実施形態において、アルキル基は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、および官能基化されたアルキル基エチルアミノ基、プロピルアミノ基およびブチルアミノ基等からなる群から選択される。複数の実施形態において、アルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基および-OCH2q-R式中、q=2~4であり、-Rは-NH2基、-OCH3基または-OCH2CH3基である等の官能基化されたアルコキシ基からなる群から選択される。複数の実施形態において、アルコキシアルキル基はメトキシエチルおよびエトキシエチルからなる群から選択される。複数の実施形態において、2’置換基はフッ素であり、アラビノヌクレオチドは2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAである。一実施形態において、FANAヌクレオチドはアラF-N式中、N=U、T、C、GまたはAになり得る。本発明の他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは以下のものからなる群から選択される1つまたは複数のヌクレオチド間のリンケージを含むアプタマーである。aホスホジエステル;bホスホトリエステル;cホスホロチオエート;dメチルホスホネート;eボラノホスフェート;およびfa~eの任意の組み合わせ。さらに他の実施形態において、PCT国際公開第WO/2007/038869号中で記載されたもの等のオリゴヌクレオチドは本発明の組成物および方法において使用される。かかるオリゴヌクレオチドは、G-テトラッドまたはDRRを結合する他のユニークな3次元構造を形成することができ、少なくとも1つのアラビノース修飾ヌクレオチドを含むことができる核酸リガンドまたはアプタマーであり得る。一実施形態において、アラビノース修飾ヌクレオチドは2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAである。一実施形態において、アプタマーは、アプタマー中の任意の場所でアラビノヌクレオチドの任意の数を有することができ、例えば以下の通りである。5’-ADADADADADADADA-3’;5’-AADADDADDDAADAD-3’;5’-AAAADAAADADDDAD-3’;など式中、Aはアラビノヌクレオチドであり、Dは2’-デオキシリボヌクレオチドである。本発明の他の実施形態において、アプタマーはアラビノヌクレオチドにより完全に置換される。例えば以下の通りである。5’-AAAAAAAAAAAAAAA-3’。本発明の他の実施形態において、DRRを選択的に結合する可能な2’-デオキシリボヌクレオチドDNAおよび2-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAから構築されたキメラが提供される。他の実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、アラビノースおよびデオキシリボースのヌクレオチドの任意の組み合わせから選択される糖-リン酸塩骨格組成物を有する配列のいずれか1つのアプタマーである。アラビノースヌクレオチドは2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAであり得る。本発明の他の実施形態において、アラビノヌクレオチドは、フッ素基、ヒドロキシル基、アミノ基、アジド基、アルキル基、アルコキシ基、およびアルコキシアルキル基からなる群から選択される2’置換基を含む。本発明のさらなる実施形態において、アルキル基は、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、および官能基化されたアルキル基エチルアミノ基、プロピルアミノ基およびブチルアミノ基からなる群から選択される。複数の実施形態において、アルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基および-OCH2q-R式中、q=2~4であり、-Rは-NH2基、-OCH3基または-OCH2CH3基である等の官能基化されたアルコキシ基からなる群から選択される。複数の実施形態において、アルコキシアルキル基はメトキシエチルおよびエトキシエチルからなる群から選択される。複数の実施形態において、2’置換基はフッ素であり、アラビノヌクレオチドは2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAである。一実施形態において、FANAヌクレオチドは、アラF-G、アラF-T、アラF-C、アラF-AまたはアラF-Uである。本発明の他の実施形態において、アプタマーは以下のものからなる群から選択される1つまたは複数のヌクレオチド間のリンケージを含む。aホスホジエステル;bホスホトリエステル;cホスホロチオエート;dメチルホスホネート;eボラノホスフェート;およびfa~eの任意の組み合わせ。別の実施形態において、アプタマーは、好ましくはG-テトラッドを形成するアプタマーのループ、またはDRRを結合するユニークな3次元構造において、アプタマーのうちの少なくとも1つのヌクレオチドがアラビノース修飾ヌクレオチド、好ましくは2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANAにより置き換えられる。他の実施形態において、WO/2003/037909中で記載されたもの等のアンチセンスオリゴヌクレオチドは本発明の方法および組成物において使用することができる。簡潔には、かかるオリゴヌクレオチドは以下の構造を有する。[R’-XJa-R2]a式中、aは1以上であり;式中、各々のR1およびR2は独立して少なくとも1つのヌクレオチドであり;式中、Xは非環状リンカーである。一実施形態において、オリゴヌクレオチドは少なくとも1つの修飾デオキシリボヌクレオチドを含むすなわち、R1、R2または両方のいずれかは少なくとも1つの修飾デオキシリボヌクレオチドを含むことができる。一実施形態において、修飾デオキシリボヌクレオチドは、ANA、PS-ANA、PS-DNA、RNA-DNAおよびDNA-RNAのキメラ、PS-[RNA-DNA]およびPS-[DNA-RNA]のキメラ、PS-[ANA-DNA]およびPS-[DNA-ANA]のキメラ、RNA、PS-RNA、PDE-RNAまたはPS-RNAのアナログ、ロックされた核酸LNA、ホスホロジアミダートモルホリノ核酸、N3’-P5’ホスホロアミダートDNA、シクロヘキセン核酸、α-L-LNA、ボラノホスフェートDNA、メチルホスホネートDNA、およびその組み合わせからなる群から選択される。一実施形態において、ANAはFANA例えばPDE-FANAまたはPS-FANAである。一実施形態において、上述のPDE-RNAまたはPS-RNAアナログは、2’位で修飾されるRNAそこで2’-置換基は、アルキル、アルコキシ、アルキルアルコキシ、Fおよびその組み合わせからなる群から選択されるからなる群から選択される。一実施形態において、非環状リンカーは非環状ヌクレオシドおよび非ヌクレオチド性リンカーからなる群から選択される。複数の実施形態において、非環状ヌクレオシドはプリンセコヌクレオシドおよびピリミジンセコヌクレオシドからなる群から選択される。複数の実施形態において、プリンセコヌクレオシドはセコアデノシンおよびセコグアノシンからなる群から選択される。複数の実施形態において、ピリミジンセコヌクレオシドはセコチミジン、セコシチジンおよびセコウリジンからなる群から選択される。一実施形態において、非ヌクレオチド性リンカーはアミノ酸およびアミノ酸誘導体からなる群から選択されるリンカーを含む。複数の実施形態において、アミノ酸誘導体はaヘテロ環塩基がメチレンカルボニルリンカーを介して付加されるN-2-アミノエチルグリシンユニットPNAモノマーおよびbO-PNAユニットからなる群から選択される。本発明のさらなる態様によれば、以下の一般構造Ibのアンチセンスオリゴヌクレオチドキメラが提供される。式中、nは1以上である。上記の構造Ibを参照して、AON1はオリゴヌクレオチド鎖であり、それは複数の実施形態において、ANA例えばFANA、DNA、PS-DNA、5’-RNA-DNA-3’キメラに加えて、他のRNaseのHの作用可能なオリゴヌクレオチド、例えばアラビノ核酸2’-OH置換ANADamha,M.J.etal.J.Am.Chem.Soc.1998,120,12976、シクロヘキセン核酸WangJ.etal.J.Am.Chem.Soc.2000,122,8595、ボラノホスフェートをリンクしたDNARait,V.K.etal.AntisenseNucleicAcidDrugDev.1999,9,53、およびα-L-ロックされた核酸Sorensen,M.D.etal.J.Am.Chem.Soc.2002,124,2164またはその組み合わせからなる群から選択され;およびAON2はオリゴヌクレオチド鎖であり、それは複数の実施形態において、FANA、DNA、PS-DNA、5’-DNA-RNA-3’キメラに加えて、上記のもの等の他のRNaseのHの作用可能なオリゴヌクレオチドまたはその組み合わせからなる群から選択される。AON1およびAON2のヌクレオチド間のリンケージは、ホスホジエステル基、ホスホトリエステル基、ホスホロチオエート基、メチルホスホネート基、および/またはホスホロアミダート5’N-3’Pおよび5’P-3’N基を含むが、必ずしもこれらに限定されない。ANA-X-ANAキメラコンストラクト中のアラビノース糖のC2’原子へ直接付加された置換基は、フッ素基、ヒドロキシル基、アミノ基、アジド基、アルキル例えば2’-メチル、エチル、プロピル、ブチルなど基、およびアルコキシ基例えば2’-OMe、2’-OEt、2’-OPr、2’-OBu、2’-OCH2CH2OMeなどを含むが、これらに限定されない。他の実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは以下の構造を有する。式中、各々のm、n、qおよびaは独立して1以上の整数であり;式中、各々のRおよびR2は独立して少なくとも1つのヌクレオチドであり、式中、各々のZ1およびZ2は、酸素原子、硫黄原子、アミノ基およびアルキルアミノ基からなる群から独立して選択され;式中、各々のY1およびY2は、酸素、硫黄およびNHからなる群から独立して選択され;式中、R3は、H、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、プリン、ピリミジンおよびその組み合わせからなる群から選択される。複数の実施形態において、R3はアデニンもしくはグアニンまたはその誘導体である。複数の実施形態において、R3は、チミン、シトシン、5-メチルシトシン、ウラシルまたはその誘導体である。複数の実施形態において、上で言及された各々のR1およびR2は、ANA、PS-ANA、PS-DNA、RNA-DNAおよびDNA-RNAのキメラ、PS-[RNA-DNA]およびPS-[DNA-RNA]のキメラ、PS-[ANA-DNA]およびPS-[DNA-ANA]のキメラ、α-L-LNA、シクロヘキセン核酸、RNA、PS-RNA、PDE-RNAまたはPS-RNAアナログ、ロックされた核酸LNA、ホスホロジアミダートモルホリノ核酸、N3’-P5’ホスホロアミダートDNA、メチルホスホネートDNA、およびその組み合わせからなる群から独立して選択される。複数の実施形態において、上で言及された各々のR1およびR2は、ヌクレオチド間のリンケージを介して接続している少なくとも2つのヌクレオチドを独立して含むことができ、該ヌクレオチド間のリンケージは、ホスホジエステル基、ホスホトリエステル基、ホスホロチオエート基、メチルホスホネート基、ホスホロアミダート5’N-3’Pおよび5’P-3’N基およびその組み合わせからなる群から選択される。他の実施形態において、上で言及された各々のR1およびR2は独立してANAを含む。複数の実施形態において、上で言及されたANAは、フッ素基、ヒドロキシル基、アミノ基、アジド基、アルキル例えばメチル、エチル、プロピルおよびブチル基およびアルコキシ例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシおよびメトキシエトキシ基からなる群から選択される2’-置換基を含む。一実施形態において、2’-置換基はフッ素であり、前記ANAはFANAである。複数の実施形態において、アルキル基は、メチル基、エチル基、プロピル基およびブチル基からなる群から選択される。複数の実施形態において、アルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基およびメトキシエトキシ基からなる群から選択される。他の実施形態において、DRRを標的化する本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される。式中、R1、R2、n、a、Z1、Z2、Y1およびY2は上で定義された通りであり、各々のR4およびR5はプリン例えばアデニンおよびグアニン、またはその誘導体およびピリミジン例えばチミン、シトシン、ウラシルまたはその誘導体からなる群から独立して選択される。一実施形態において、R1およびR2はPDE-FANAであり;a=1である。一実施形態において、R1およびR2はPS-FANAであり;a=1である。一実施形態において、R1は[FANA-DNA]であり;R2は[DNA-FANA]であり;a=1である。一実施形態において、R1は[FANA-DNA]であり;R2はFANAであり;a=1である。一実施形態において、R1はFANAであり;R2は[DNA-FANA]であり;a=1である。一実施形態において、R1およびR2はPS-DNAであり;a=1である。一実施形態において、R1はPDE-[RNA-DNA]であり、R2はPDE-[DNA-RNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はRNAであり;R2は[DNA-RNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はS-[2’O-アルキルRNA-DNA]であり;R2はS-[DNA-2O-アルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はS-[2’O-アルキルRNA-DNA]であり;R2はS-[2’0-アルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はS-[2’O-アルキルRNA]であり;R2はS-[DNA-2’O-アルキルRNA]であり;aである=1。一実施形態において、R1はS-[2’O-アルコキシアルキルRNA-DNA]であり;R2はS-[DNA-2’O-アルコキシアルキルRNA]であり;a=1であり。一実施形態において、R1はS-[2’O-アルコキシアルキルRNA-DNA]であり;R2はS-[2’O-アルコキシアルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はS-[2’O-アルコキシアルキルRNA]であり;R2はS-[DNA-2’O-アルコキシアルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はPDE-[2’O-アルキル-RNA-DNA]であり;R2はPDE-[DNA-2’O-アルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はPS-[2’O-アルキル-RNA-DNA]であり;R2はPS-[DNA-2’O-アルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はPDE-[2’O-アルコキシアルキル-RNA-DNA]であり;R2はPDE-[DNA-2’O-アルコキシアルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1はPS-[2’O-アルコキシアルキル-RNA-DNA]であり;R2はPS-[DNA-2’O-アルコキシアルキルRNA]であり;a=1である。一実施形態において、R1およびR2はPDE-[FANA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方であり、n=4である。一実施形態において、R1はPS-[FANA]であり;R2はPDE-[FANA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方であり、n=4である。一実施形態において、R1はFANAであり;R2はPS-FANAであり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり、a=4である。一実施形態において、R1およびR2はPS-[FANA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方であり、n=4である。一実施形態において、R1はPS-[DNA]であり;R2はPDE-[DNA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方であり、n=4である。一実施形態において、R1はPDE-[DNA]であり;R2はPS-[DNA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方であり、n=である。一実施形態において、R1およびR2はPS-[DNA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方であり、n=4である。一実施形態において、R1およびR2はPDE-[FANA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iieを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方である。一実施形態において、R1はPS-[FANA]であり;R2はPDE-[FANA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iieを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方である。一実施形態において、R1はPDE-[FANA]であり;R2はPS-[FANA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iibを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方であり、n=4である。一実施形態において、R1およびR2はPS-[FANA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iieを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方である。一実施形態において、R1はPS-[DNA]であり;R2はPDE-[DNA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iieを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方である。一実施形態において、R1はDNAであり;R2はPS-DNAであり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Heを有する。一実施形態において、R1およびR2はPS-[DNA]であり;a=1であり;オリゴヌクレオチドは構造Iieを有し、その中でY1、Y2は酸素であり;Z1、Z2は酸素または硫黄の両方である。一実施形態において、a=2であり各々のR1およびR2は独立して少なくとも3つのヌクレオチドからなり、さらなる実施形態において、3~8のヌクレオチドからなる。一実施形態において、a=3であり各々のR1およびR2は独立して少なくとも2つのヌクレオチドからなり、さらなる実施形態において、各々のR1およびR2は独立して2~6のヌクレオチドからなる。一実施形態において、オリゴヌクレオチドは標的RNAに対するアンチセンスである。本文脈において、治療用分子という用語はDRR発現の減少または阻害における使用のための核酸分子を指す。治療用分子は例えば治療用オリゴヌクレオチドまたは治療用RNAであり得る。治療用分子の非限定例は、当該技術分野において標的RNAの発現を減少させることが公知であるような、アンチセンスRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アプタマー、リボザイムおよび他の核酸分子などを含む。一実施形態において、標的RNAはDRRmRNAもしくは断片またはその部分である。治療用分子は本明細書において治療用核酸分子とも称され、この用語は互換的に使用される。いくつかの実施形態において、治療用分子またはオリゴヌクレオチドは、DRRもしくは部分またはその断片をコードする1つまたは複数の核酸分子と特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを包含する。他の実施形態において、配列番号:1、2、5、6、7、8、9、10、14、15もしくは16またはその断片もしくは誘導体の配列を含むオリゴヌクレオチドが包含される。一実施形態において、本発明の治療用分子例えば治療用RNAまたは治療用オリゴヌクレオチドは、DRRmRNAの断片または部分に相補的であるかまたは特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドである。治療用分子が相補的であるかまたは特異的にハイブリダイズするDRRmRNAの断片または部分の非限定例は、以下のものを含む。DRRmRNAのヌクレオチド170~190;DRRmRNAのヌクレオチド175~195;DRRmRNAのヌクレオチド180~200;DRRmRNAのヌクレオチド185~205;DRRmRNAのヌクレオチド190~210;DRRmRNAのヌクレオチド195~215;DRRmRNAのヌクレオチド200~220;DRRmRNAのヌクレオチド205~225;DRRmRNAのヌクレオチド210~230;DRRmRNAのヌクレオチド215~235;DRRmRNAのヌクレオチド220~240;DRRmRNAのヌクレオチド225~245;DRRmRNAのヌクレオチド230~250;DRRmRNAのヌクレオチド235~255;DRRmRNAのヌクレオチド240~260;DRRmRNAのヌクレオチド245~265;DRRmRNAのヌクレオチド250~270;DRRmRNAのヌクレオチド255~275;DRRmRNAのヌクレオチド260~280;DRRmRNAのヌクレオチド265~285;DRRmRNAのヌクレオチド270~290;DRRmRNAのヌクレオチド275~295;DRRmRNAのヌクレオチド280~300;DRRmRNAのヌクレオチド285~305;DRRmRNAのヌクレオチド290~310;DRRmRNAのヌクレオチド295~315;DRRmRNAのヌクレオチド300~320;DRRmRNAのヌクレオチド305~325;DRRmRNAのヌクレオチド310~330;DRRmRNAのヌクレオチド315~335;DRRmRNAのヌクレオチド320~340;DRRmRNAのヌクレオチド325~345;DRRmRNAのヌクレオチド330~350;DRRmRNAのヌクレオチド335~355;DRRmRNAのヌクレオチド340~360;DRRmRNAのヌクレオチド345~365;DRRmRNAのヌクレオチド350~370;DRRmRNAのヌクレオチド355~375;DRRmRNAのヌクレオチド360~380;DRRmRNAのヌクレオチド365~385;DRRmRNAのヌクレオチド370~390;DRRmRNAのヌクレオチド375~395;DRRmRNAのヌクレオチド380~400;またはその断片、部分もしくは誘導体。他の実施形態において、治療用核酸分子は、DRRmRNAのヌクレオチド425~439に相補的であるか、もしくは特異的にヌクレオチドにハイブリダイズする配列、またはDRRmRNAのヌクレオチド420~444に相補的であるか、もしくは特異的にヌクレオチドにハイブリダイズする配列、またはDRRmRNAのヌクレオチド415~439に相補的であるか、もしくは特異的にヌクレオチドにハイブリダイズする配列、またはDRRmRNAのヌクレオチド424~439に相補的であるか、もしくは特異的にヌクレオチドにハイブリダイズする配列、DRRmRNAの423~439、422~439、421~439、もしくは420~439、または420~434の配列;またはその断片、部分もしくは誘導体を有する。いずれか末端での追加の1~3ヌクレオチド、またはより小さな断片、または列挙された配列および領域の誘導体にハイブリダイズする核酸も包含されることが理解されるべきである。加えて、核酸配列は治療用分子の機能のために必要とされる特別のヌクレオチドを含むことができる。さらに他の実施形態において、本発明の治療用分子は、アルティマー、ギャップマー、および/もしくはは1つまたは複数の修飾ヌクレオチド2’-デオキシ-2’-フルオロアラビノヌクレオチドFANA等を含むものの構造を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドであるか、または本明細書において記載されるようなアプタマーである。核酸分子および発現コンストラクト本発明は、一態様において、腫瘍細胞例えば神経膠腫細胞において標的遺伝子例えばDRRの発現を減少させるのに好適なアンチセンス分子を調製するための、核酸配列例えば治療用核酸分子、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、それをコードするDNA、それを生ずるベクターの使用に関する。本明細書において使用される時標的遺伝子の発現を減少させることという用語は、特異的かつ転写後様式で標的遺伝子の発現を遮断する、本治療用分子または治療用オリゴヌクレオチド例えば、アンチセンス、または他の治療用分子例えばアプタマーの能力を指す。一実施形態において、本発明は、本明細書において定義されるような治療用分子を調製するための、RNA配列またはオリゴヌクレオチド配列の使用に関する。治療用分子は、一実施形態において以下の基準のうちの1つまたは複数、および一実施形態において以下の基準のすべてによって特徴づけられる。標的mRNAと少なくとも50の配列同一性、もしくは少なくとも70の配列同一性、もしくは少なくとも80の配列同一性、もしくは少なくとも90の配列同一性を有すること;標的遺伝子のエクソン領域を標的化する配列を有すること;および/または標的遺伝子の5’末端の標的化ではなく標的遺伝子の3’末端の標的化についての優先性を示すこと。いくつかの実施形態において、標的遺伝子はDRRまたはDRRをコードする遺伝子の断片である。さらなる実施形態において、治療用分子は、以下の基準のうちの1つまたは複数、またはすべてによってさらに特徴づけることができる。15~25ヌクレオチドの間の、または18~22ヌクレオチドの間の、または19ヌクレオチドの、または19~33ヌクレオチドの間の、21~31ヌクレオチド、または29のヌクレオチドの核酸長を有すること;または30~50の間のGC含量を含む13~17ヌクレオチド;その3’末端でTTT配列を示すこと;二重鎖形態を採用する場合に二次構造を示さないこと;20°C未満のTm値融解温度を有すること;または配列番号:1、2、5~10または14~16において示されたヌクレオチドヌクレオチド配列は表1中で与えられる;ntはヌクレオチドを表わすを有すること。一実施形態において、治療用分子は15ヌクレオチドの核酸長を有する。別の実施形態において、治療用分子またはオリゴヌクレオチドは治療用核酸としての機能を改善するのに必要な付加ヌクレオチドを備えたDRRmRNAに相補的な15ヌクレオチドを含む。さらに他の実施形態において、治療用核酸分子は配列番号:1または2の配列を有する。別の実施形態において、治療用核酸分子は、DRRmRNAのヌクレオチド425~439に相補的であるか、もしくは特異的にヌクレオチドにハイブリダイズする配列、またはDRRmRNAのヌクレオチド420~444に相補的であるか、もしくはヌクレオチドに特異的にハイブリダイズする配列またはその断片もしくは誘導体、またはDRRmRNAのヌクレオチド415~439に相補的であるか、もしくはヌクレオチドに特異的にハイブリダイズする配列またはその断片もしくは誘導体、またはDRRmRNAのヌクレオチド424~439に相補的であるか、もしくはヌクレオチドに特異的ハイブリダイズする配列、DRRmRNAの423~439、422~439、421~439もしくは420~439または420~434を有する。いずれか末端での追加の1~3ヌクレオチド、またはより小さな断片、または列挙された配列の誘導体にハイブリダイズする核酸も包含されることが理解されるべきである。加えて、核酸配列は治療用分子の機能のために必要とされる特別のヌクレオチドを含むことができる。一実施形態において、本発明の治療用分子またはオリゴヌクレオチドは、本明細書において提供された配列例えば配列番号:1、2、5~10または14~16を含む。別の実施形態において、本発明の治療用分子またはオリゴヌクレオチドは、本明細書において提供された配列例えば配列番号:1、2、5~10または14~16からなる。別の実施形態において、本発明の治療用分子またはオリゴヌクレオチドには配列番号:14、15または16の配列を有する。表1例示的な核酸配列a太字および下線で示されるヌクレオチドはFANAヌクレオチドであり;他のヌクレオチドはDNAであり;-ホスホロチオエートPSリンケージを示す。別の実施形態において、本発明は、神経膠腫細胞中のDRRの発現を減少させるのに好適な治療用分子例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドを調製するための、以下の配列、配列番号:1、2、5、6、7、8、9、10、14、15もしくは16、またはその断片もしくは誘導体のいずれかを含有する核酸配列の使用に関する。本発明の文脈において、断片および誘導体という用語は、もしもたらされる分子の機能すなわち標的遺伝子のダウンレギュレーションが消失または阻害されなければ、5’末端もしくは3’末端のいずれか、両末端、または内部で伸長もしくは短縮されるか、または1つの端部で伸長されおよび他の端部で短縮されるという点で、もとの核酸とは異なり得る核酸を指す。断片および誘導体という用語は、もしもたらされる分子の機能が消失または阻害されなければ、他のヌクレオチドによってもとの配列のうちの1つまたは複数のヌクレオチドが置換される、および/または当業者に利用可能な方法によって化学的に修飾されるという点で、もとの核酸とは異なり得る核酸も指す。断片および誘導体は、典型的にはもとの核酸に少なくとも80、例えば少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも99の配列同一性を示すことができる。2つのヌクレオチド配列の間の配列同一性は、該配列をアライメントさせること、およびアライメントにおいて2つの配列が同じ核酸塩基を含有する位置の数vsアライメントにおける位置の総数を決定することによって計算することができる。DRR発現を減少または低下させる能力を保持する、表1中の核酸配列の断片および誘導体が包含されることを理解すべきである。例えば、表1中で与えられた配列からの約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18または約19の連続したヌクレオチドを含み、DRR発現を減少/低下させる能力を保持する核酸配列が包含される。上で与えられた配列またはその相補配列のいずれかを使用して、治療用分子例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば二本鎖RNA分子を調製できることは当業者に明らかである。当業者は上で開示される核酸特にRNAが提供される場合アンチセンスオリゴヌクレオチドを調製する方法を熟知していている。簡潔には、必要とされる核酸は、任意の利用可能な方法および必要に応じて適切な条件下でアニールされたストランドによって合成することができる。アニール条件例えば温度およびインキュベーション期間はそれぞれの核酸配列に従って合わせることができる。特定の実施形態において、本発明は、治療用分子アンチセンスオリゴヌクレオチド等を調製するための、配列番号:1、2、5、6、7、8、9、10、14、15または16、その断片または誘導体の配列を含有する核酸配列の使用に関する。別の実施形態において、本発明は、アンチセンス分子を調製するための、配列番号:1、2、5、6、7、8、9、10、14、15または16、その断片または誘導体の配列を含有するRNA配列の使用に関する。所望される機能すなわち、神経膠腫細胞中のDRRの発現の減少を発揮するために、上で定義されるような本発明のリボ核酸から調製された本発明に記載の治療用分子アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスRNA、アプタマー、リボザイムなどは、標的細胞好ましくはヒトGBM細胞の中へ送達される。動物細胞の中へリボ核酸を導入する複数の周知の方法があり、そのいずれかを本発明において使用することができ、宿主に依存する。最も単純なもので、核酸は標的細胞/標的組織の中へ直接注入することができる。他の方法は、核酸を含有する細菌のプロトプラストによる受容細胞の融合、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、塩化リチウム、リン酸カルシウム、DEAEデキストラン、陽イオン性脂質もしくはリポソームのような組成物の使用、または受容体媒介性エンドサイトーシス、微粒子銃の粒子砲撃遺伝子銃法、ウイルスベクターによる感染、電気穿孔および同種のもののような方法を含む。治療用分子を送達するのに好適な他の技法または方法は当該技術分野において公知である。安定化した分子の対流強化送達Kawakamietal.,JNeurosurg101:1004-1011,2004によって詳しく述べられたようにも使用することができる。他の可能性は、MeneiandBenoit,ActaNeurochir88:51-55,2003によって概説されたもののような、移植可能な薬物放出生体分解性マイクロスフェアの使用である。異なる上述の送達モードまたは方法の組み合わせも使用できることは明らかである。他のアプローチは、Ommayaリザーバーマイクロポンプで送達する核酸分子vs生体分解性マイクロスフェア中のカプセル化された核酸分子のいずれか、または両方のアプローチを同時に使用するものである。治療用分子アンチセンス技術によるインビボの遺伝子サイレンシングの達成の主な障害は、送達である。熱的安定性とヌクレアーゼ消化への抵抗性を改善するために、および核酸の細胞取り込みを増進するために、様々なアプローチが当該技術分野において試験された。これらは、ロックされた核酸のような化学物質修飾、ホスホロチオエート置換、2’-フルオロ置換、2’-Oメチル置換、様々なタイプのリポソーム中での核酸分子のカプセル化イムノリポソーム、PEG化イムノリポソーム、陽イオン性脂質およびポリマー、ナノ粒子またはデンドリマー、乳酸-グリコール酸コポリマーのポリマー性マイクロスフェア、移植可能な薬物を放出する生体分解性マイクロスフェア、保護剤をともなう核酸分子の共注入などを含む。これらの方法および当該技術分野において公知の他のものを本発明の方法において使用できることを理解すべきである。一態様において、任意で安定化、カプセル化、またはさもなくば上記のように修飾された本発明の核酸分子は、腫瘍の部位例えば原発性腫瘍および/または転移に送達される。局所的な送達を達成する様式は別記されるようなOmmayaリザーバーの使用である。腫瘍細胞に本核酸分子を標的化する他の方法は、抗体指向性の細胞タイプ特異的送達を使用することである。例えば、いくつかの核酸は、Fabプロタミン複合体Songetal.,NatBiotechnol23:709-717,2005等の特異的に腫瘍細胞を認識するFabと複合体化、またはイムノリポソーム中にカプセル化することができる。かかる抗体標的化核酸分子例えばナノ粒子の形態では、全身投与静脈注射、皮下注射、筋肉注射、経口投与、鼻孔吸入などまたは局所投与例えば、Ommayaリザーバーを使用して等の様々な手段によって投与することができる。特に、隔たった日または外科手術時に注射と共に対流送達を使用することができる。本核酸分子の吸入投与例えば鼻内スプレーまたはエアゾール混合物の形態でも用いることができる。他のオプションは送達のためのナノテクノロジーの使用である。核酸分子のインビボの送達、例えばむき出しの核酸分子または脂質カプセル化核酸分子の静脈内投与、大脳室内投与または鼻腔内投与が記載されている。イムノリポソームまたはウイルス粒子中にカプセル化されたベクターの静脈内投与も記載されており、当該技術分野において公知である。例えば上記されるように分子が細胞に直接適用される場合、治療用核酸分子の効果すなわち標的遺伝子の発現の減少は、一過性のみかもしれない。いくつかの事例において、それぞれの核酸分子をコードする核酸が発現ベクター中に組込まれるならば、有利であろう。好適なエレメントが提供されれば、以下に記載されるように、DNAは所望されるアンチセンス分子を形成できる対応するRNAへと転写される。したがって、本発明のさらなる態様によれば、発現コンストラクトは、本発明に記載の治療用分子をコードするヌクレオチド配列の宿主細胞の中への導入の促進、および/または発現の促進および/または維持の促進に提供される。発現コンストラクトはプラスミド、ウイルスまたはベクターの中へ挿入することができ、それは商業的に入手可能だろう。別の実施形態において、本発明は、それゆえ、本明細書において定義されるようなRNA分子を調製するための、DNA配列の使用に関する。例えば、DNA配列は、配列番号:1、2、5、6、7、8、9、10、14、15または16において示されたRNA配列に対応またはコードするDNA配列、リンカー、およびDNAに相補的な配列を含むことができる。好ましくはリンカーは4~15ヌクレオチド長、より好ましくはリンカーは4~10ヌクレオチド長、最も好ましくは4~8ヌクレオチド長である。リンカーは任意の好適なヌクレオチド配列からなることができる。一実施形態において、4~15ヌクレオチドリンカーによって分離されるDNA配列は、DRR遺伝子に由来する15ヌクレオチド配列、同じ15ヌクレオチド配列の逆の相補配列、およびその3’末端で示されるttt配列からなる。別の実施形態において、DNA配列は、本明細書において提供された方法における使用に適している発現ベクターの中へ挿入される。本明細書において定義されるような治療用核酸を形成する転写物を生ずることができる発現ベクターは、例えばクローニングベクター、バイナリーベクターまたは組込みベクターでありえる。本発明は、したがって本明細書において記載されたDNA配列のいずれかを含むベクターにも関する。発現ベクターは、好ましくは真核細胞発現ベクターもしくはレトロウイルスベクター、プラスミド、バクテリオファージまたは生物工学分野において典型的には使用される他のベクターである。かかるベクターは当業者に公知である。必要であるかまたは所望されるならば、DNA核酸は、真核細胞中のmRNAの合成を指令する調節エレメントに作動可能にリンクさせることができる。RNAの発現を駆動するために、これらのベクターは、通常RNAポリメラーゼIプロモーター、RNAポリメラーゼIIプロモーター、RNAポリメラーゼIIIプロモーター、T7RNAポリメラーゼプロモーターまたはSP6RNAポリメラーゼプロモーターを含み、RNAポリメラーゼIIIが哺乳類細胞において比較的多量の低分子RNAを発現し、一続きの3~6のウリジンを取り込むことで転写を終了するので、好ましくはRNAポリメラーゼIIIプロモーターH1プロモーターまたはU6プロモーター等を含む。タイプIIIプロモーターは転写されている配列の完全に上流の位置し、そのため治療用分子中にプロモーター配列を含むいかなる必要性も排除する。任意で、1つまたは複数の転写終結配列も発現ベクターにおいて取り込まれ得る。転写終結配列という用語は転写ユニットの末端の制御配列を包含し、それは一次転写産物の3’プロセッシングおよびポリアデニル化ならびに転写の終了を示す。追加の調節エレメント転写エンハンサーまたは翻訳エンハンサーは発現コンストラクト中に取り込まれ得る。治療目的のために、レトロウイルスベクターの使用は、いくつかの事例において、標的細胞の中へ所望される核酸を送達するのに最も適切であることが証明された。多くが当該技術分野において公知であるレトロウイルスベクターまたはアデノウイルスベクターも、本明細書において提供されたベクター、組成物および方法において使用できることを理解すべきである。上記の送達方法のいずれかまたはさもなくば当該技術分野において公知の方法によって、標的細胞の中へ本発明のDNA配列を含む発現ベクターを導入できることも理解すべきである。使用、組成物およびキット本発明に記載の治療用分子および/またはベクターは、癌、好ましくは神経膠腫、より好ましくは神経膠芽腫の治療のための薬剤として、または癌、好ましくは神経膠腫、より好ましくは神経膠芽腫を治療するための薬剤の製造のために使用することができる。本発明に記載の治療用分子および/またはベクターは、癌、例えば神経膠腫神経膠芽腫等の進行を遅延させるための薬剤としても使用することができる。本明細書において使用される時癌の進行を遅延させることという用語は、30以上、50以上、もしくは70以上まで癌再増殖を遅延させることおよび/または影響を受けた被験体の生存時期を増加させることを指す。一実施形態において、本発明に記載の治療用分子および/またはベクターを使用して、脳腫瘍浸潤例えば悪性神経膠細胞MGC浸潤を阻害することができる。本発明に記載の治療用分子および/またはベクターは、単独でまたは他の癌療法と組み合わせて使用することができる。他の癌療法の非限定例は、癌の切除、化学療法、放射線療法、免疫療法、および/または遺伝子に基づく治療法を含む。切除という用語は、腫瘍の一部またはすべての外科的な除去または削除を指す。放射線療法という用語は、放射線を使用する癌の治療を指す。化学療法という用語は、化学物質、いわゆる化学療法剤による癌の治療を指す。免疫療法という用語は、本明細書において使用される時、免疫療法剤の使用による癌細胞の排除に向けた免疫系の反応性の刺激を指す。遺伝子に基づく治療法という用語は、遺伝物質DNA、または場合によってはRNAの個人の中への移行に基づく癌の治療を指す。他のかかる癌療法の例は以下のものを含む。テモゾロマイド、ビンクリスチン、ビノレルビン、プロカルバジン、カルマスティン、ロムスチン、タキソル、タキソテール、タモキシフェン、レチノイン酸、5-フルオロウラシル、シクロフォスファミドおよびサリドマイドを含むが、これらに限定されない化学療法剤;活性化T細胞およびパルス樹状細胞であるが、これらに限定されない免疫療法剤;本明細書において定義されるようなRNA分子の送達と併用して、神経膠腫細胞中のCD3、CD7およびCD45の遺伝子導入。本発明に記載の治療用分子および/またはベクターは、単独でまたは1つまたは複数の追加の癌療法と組み合わせて投与することができる。後者は、治療用分子および/または発現ベクターの投与よりも前、後または同時に投与することができる。本発明のさらなる目的は、治療用分子例えば本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび/または発現ベクターの治療法上効果的な量および薬学的に許容されるキャリアーを含む医薬調製物である。治療法上効果的な量という用語は、本明細書において使用される時、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって探索されている組織、システム、動物またはヒトにおいて生物学的または医薬的な応答を誘発する、治療用分子複数可および/または発現ベクター複数可の量を意味する。別の実施形態において、それゆえ本発明は、本発明に記載の治療用分子および/または発現ベクターを含む、癌、好ましくは神経膠腫およびより好ましくは神経膠芽腫の治療のための医薬組成物および薬学的に許容されるキャリアーに関する。さらに他の実施形態において、本発明は、本発明に記載の治療用分子および/または発現ベクターを含む、癌、好ましくは神経膠腫およびより好ましくは神経膠芽腫の進行の遅延のための医薬組成物および薬学的に許容されるキャリアーに関する。さらなる実施形態において、本発明は、本発明に記載の治療用分子および/または発現ベクターを含む、癌浸潤、好ましくは神経膠腫およびより好ましくは神経膠芽腫の阻害のための医薬組成物および薬学的に許容されるキャリアーに関する。一実施形態において、本発明は、悪性神経膠細胞MGC浸潤の阻害のための医薬組成物に関する。上で論じられるように、本発明に記載の医薬組成物はさらに少なくとも1つの追加の癌療法を含むことができる。本発明に記載の医薬組成物は、例えば、丸薬、錠剤、ラッカー錠剤、糖衣錠、顆粒、ハードゼラチンカプセルおよびソフトゼラチンカプセル、水溶液、アルコール性溶液もしくは油性溶液、シロップ、乳化物または懸濁物の形態で経口投与、または例えば坐薬の形態で経直腸投与することができる。投与は、注射または点滴のための溶液の形態で非経口で、例えば皮下、筋肉内または静脈内でも実行することができる。他の好適な投与形態は、例えば経皮投与もしくは局所投与例えば軟膏、チンキ、スプレーまたは経皮療法システムの形態でまたは鼻内スプレーもしくはエアゾール混合物の形態での吸入投与、または、例えばマイクロカプセル、移植物もしくはウエハである。当該技術分野において公知のように医薬組成物の調製を実行することができる。例えば治療用分子および/または活性化合物は、1つまたは複数の固体または液体の医薬キャリアー物質および/または添加物または補助物質と共に、および所望されるならば治療的作用または予防的作用を有する薬学的に活性のある他の化合物と組み合わせて、次いでヒト医学において医薬品として使用できる好適な投与形態または投与量形態へと導かれる。医薬調製物は、多くが当該技術分野において公知の添加物、例えば充填剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、分散剤、防腐剤、甘味剤、着色剤、着香剤、芳香剤、増粘剤、希釈液、緩衝液物質、溶媒、溶解剤、デポー作用を達成するための薬剤、浸透圧を変化させるための塩、コーティング剤または抗酸化剤も含むことができる。本明細書において使用される時薬学的に許容されるキャリアーまたは賦形剤は、溶媒、分散媒質、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、ならびに生理的に適合性がある同種のもののいずれかおよびすべてを含む。一実施形態において、キャリアーは非経口投与に適している。あるいは、キャリアーは、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与および舌下投与または経口投与に適しているだろう。薬学的に許容されるキャリアーは、滅菌された注射可能な溶液または分散物の即時調製のための滅菌された水溶液または分散物および滅菌粉末を含む。薬学的に活性のある物質のためのかかる媒質および薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。任意の慣習的な媒質または薬剤が活性化合物と非混合性でない限りは、本発明の医薬組成物におけるその使用が意図される。補足の活性化合物も組成物の中へ取り込むことができる。治療用組成物は典型的には製造および保存の条件下で滅菌されて安定していなくてはならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは高薬物濃度に適する他の秩序構造として処方することができる。キャリアーは、例えば、水、エタノール、多価アルコール例えばグリセリン、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールおよび同種のものおよびその好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えばレシチン等のコーティングの使用によって、分散物の事例において必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。多くの事例において、組成物中に等張剤例えば糖、多価アルコールマンニトール、ソルビトール等または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射可能な組成物の吸収延長は、吸収を遅延させる薬剤例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含むことによって引き起こすことができる。さらに、本発明のオリゴヌクレオチドは、緩慢放出ポリマーを含む組成物において徐放性処方で例えば投与することができる。修飾オリゴヌクレオチドは、修飾オリゴヌクレオチドを急速な放出から保護するキャリアー移植物およびマイクロカプセル化された送達システムを含む、制御放出処方等により調製することができる。生物分解性の生体適合性ポリマーエチレンビニルアセタート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸および乳酸-グリコール酸コポリマーPLG等を使用することができる。多くのかかる処方の調製のための方法は、特許取得されているか、または概して当業者に公知である。滅菌された注射可能な溶液は、上で列挙された成分の1つのまたは組み合わせと共に適切な溶媒中で必要とされる量で活性化合物本発明の治療用分子を取り込み、必要に応じて続いてろ過滅菌することによって調製できる。概して、分散物は、基本的な分散媒および上で列挙されたものからの必要とされる他の成分を含む滅菌されたベヒクルの中へ活性化合物を取り込むことによって調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の事例において、調製の好ましい方法は、活性成分任意の追加の所望される成分の事前に滅菌ろ過されたその溶液から粉末を産出する真空乾燥および凍結乾燥である。本発明の治療用分子はそれらの可溶性を増進する1つまたは複数の追加の化合物と共に処方することもできる。使用される治療用分子および/または発現ベクターの投与量または量は、単独でまたは投与される1つまたは複数の活性化合物と組み合わせて、個々の事例に依存し、習慣に従って、最適の作用を達成するように個々の環境に適合される。したがって、それは、治療される障害の性質および重症度に、およびさらに治療されるヒトまたは動物の性別、年齢、体重および個々の反応性に、使用される化合物の作用の効能および継続期間に、治療法が急性もしくは慢性もしくは予防的であるかどうかに、または治療用分子および/または発現ベクターに加えて他の活性化合物が投与されるかどうかに依存する。投薬および投与のレジメンが当業者の理解範囲内にあることを理解すべきである。別の実施形態において、本発明は、RNA治療用ベクターもしくは発現ベクターまたは本発明に記載の医薬組成物、およびその使用説明書を含むキットを提供する。治療的方法理論により限定されるものではないが、ノックダウンしそれにより有意に腫瘍細胞におけるDRR発現を減少させる治療的利益が、隣接する健康な組織例えば神経膠腫の事例における脳の中への癌浸潤を減少または遅延させるように、脳の中への腫瘍の浸潤を阻害することによって例えば悪性神経膠細胞MGC浸潤の阻害によって媒介され得ることを本発明者は意図するが、これは、DRRが悪性神経膠腫の浸潤性構成要素において高く発現され、インビボおよびインビトロの浸潤アッセイにおいてMGCの浸潤を駆動するという本発明者の新規で予想外の所見に基づいている。細胞浸潤は、FAの連続的な形成および脱集合と共にアクチン細胞骨格およびMTの両方を利用する事象の周期を必要とする。FAターンオーバーにおけるMTの役割はよく確立されており、蓄積された証拠から、F-アクチンによって調整される突起中でFAに向けてMTが成長することが示唆される。正常な神経膠細胞および神経膠腫におけるFAの組成についてはあまり知られておらず、正常な神経膠細胞および神経膠腫におけるFAターンオーバーを調節する分子メカニズムは記載されていない。本明細書において報告された結果から、浸潤性MGCで観察されたDRRのデノボ発現は多くの急速なFA脱集合およびそれによる浸潤を引き起こすことが示唆される。DRR-アクチン会合が消失する場合に、MGCが腫瘍塊から分離する能力が無くなることには、臨床的な意味合いがある。実際、CD151特異的で転移を遮断する単クローン抗体は、細胞後部引き込みならびにそれによる細胞離脱および原発性腫瘍塊からの遊走の阻止によって、転移を阻害することが示されているZijlstraetal.,CancerCell13:221-34.2008。悪性神経膠腫浸潤は脳腫瘍治療失敗の根本原因である。新規機能的スクリーニング戦略の開発および浸潤の調節因子としてdownregulatedinrenalcellcarcinomaDRRの同定を本明細書において報告する。以下のことを本明細書において示す。DRRは浸潤をインビトロおよびインビボで駆動する;DRRは正常な神経膠細胞において発現されないが、神経膠腫の浸潤性構成要素において高く発現される;DRRはアクチンおよび微小管細胞骨格と会合し組織化する;ならびに、アクチンおよび微小管細胞骨格とのDRRのこれらの会合は接着斑FA脱集合および細胞浸潤にとって必須である。本結果は、MTがFA脱集合を促進し、この正常な生理的なプロセスにおいてDRRを新規演者として同定するという考え方をサポートする証拠を提供する。DRRがFA脱集合を調節する新規のアクチン/MT架橋物質であることを示した。これをサポートして、DRRがアクチン細胞骨格およびFAに局在しLC2サブユニットMAP1Aと相互作用することを示す。MTがFAに接近しそれらの脱集合を促進するように、DRR発現がアクチンおよびMTの両方の細胞骨格を組織化することを示す。DRR欠損またはDRR-アクチン会合もしくはDRR-LC2会合の消失によるこの複合体の破壊は、MTがFAに到達する能力が無くなることに加えてアクチンとMTとの間の調整の喪失も引き起こす。これらの所見から、DRRは、FAダイナミックスおよび細胞移動を調節する新規細胞骨格の架橋物質として同定される。上記の見解において、本発明は、本発明の治療用分子、ベクターまたは本明細書において記載されるような医薬組成物をそれを必要とする被験体に投与することを含む、該被験体において神経膠腫等の癌例えば神経膠芽腫を治療する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、治療用分子、ベクターまたは本明細書において提供されるような組成物をそれを必要とする被験体に投与することを含む、該被験体において神経膠腫等の癌例えば神経膠芽腫の進行を遅延させる方法に関する。被験体という用語は、本明細書において使用される時、好ましくはヒトを指すが、獣医学的適用は、例えば家畜、実験動物またはペット動物を標的とする本発明の範囲内でもある。本発明は、DRR発現をダウンレギュレートする、例えば50以上まで、70以上まで、または90以上までDRR発現を低下させる方法をさらに提供する。一実施形態において、DRR発現は約50、約60、約70、約80または約90まで低下または減少される。別の実施形態において、本発明は、それを必要とする被験体に治療用分子、ベクターまたは本発明の組成物を投与することを含む、腫瘍細胞、好ましくは神経膠腫神経膠芽腫等の細胞の移動または浸潤を阻害または減少させる方法に関する。本発明は、癌、特に神経膠腫好ましくは神経膠芽腫の治療のための、切除、化学療法、放射線療法、免疫療法、および/または遺伝子療法を含む群から選択される癌療法の効能を増進する方法であって、治療用分子、ベクターまたは本明細書において定義されるような組成物を投与し、および同時に、分離してまたは連続して該癌療法を投与することを含む方法をさらに提供する。癌療法の効能を増進するという用語は、本明細書において使用される時、慣習的癌治療の改良を指し、慣習的癌治療の間に適用される抗癌組成物の量、例えば放射線療法における放射線の量、化学療法における化学療法剤の量、免疫療法における免疫療法剤の量または遺伝子に基づく治療法におけるベクターの量の減少を含み、および/または慣習的癌療法の間に慣習的用量または量で適用された場合に慣習的療法および抗癌組成物の効能の増加を指す。一実施形態において、癌療法の効能の増進は治療法を受ける被験体の生存率の延長を指す。浸潤性脳腫瘍細胞のためのバイオマーカーとしてのDRRの使用も本明細書において提供される。DRR発現上昇の検出は、浸潤性腫瘍細胞の同定、ならびにDRR発現に基づいた腫瘍の診断および/または予後に使用することができる。したがって、悪性神経膠腫の診断および予後診断のための方法は、浸潤性についてのバイオマーカーとしてのDRRの使用と共に提供される。診断および予後への適用で使用されるキットも提供される。かかるキットは、1つまたは複数の容器ガラス瓶、チューブおよび同種のもの等を収容する仕切られたキャリアー、パッケージまたは容器を含むことができ、各々の容器複数可は方法において使用される個別のエレメントの1つを含む。例えば、容器複数可は検出可能に標識されたプローブまたは検出可能に標識できるプローブを含むことができる。プローブは、例えばDRRバイオマーカーについて特異的な抗体またはDRRに特異的にハイブリダイズするRNAでありえる。キットは、検出可能な標識例えば酵素標識、蛍光標識または放射性同位体標識に結合されたビオチン結合タンパク質例えばアビジンまたはストレプトアビジン等のレポーター手段を含む容器も含み得る。キットは、バイオマーカータンパク質のアミノ酸配列のすべてもしくは一部、またはかかるアミノ酸配列をコードする核酸分子、またはDRRバイオマーカーのmRNAに結合する核酸分子、またはDRRバイオマーカーのmRNAに結合する核酸分子をコードする核酸分子を含み得る。本発明のキットは、典型的には、上記の容器、および緩衝液、希釈液、フィルター、針、注射器を含む商業的見地および使用者の見地から所望される材料を含む1つまたは複数の他の容器、ならびに使用のための説明書と共にパッケージ添付文書を含むだろう。加えて、組成物が特異的な適用のために使用されることを示すために容器上にラベルが提供され得る。指示または他の情報もキットと共に含まれている添付文書に含むことができる。一実施形態において、本発明は、DRRタンパク質またはDRRmRNAを結合する、少なくとも1つの薬剤;および被験体における脳腫瘍細胞の浸潤性を決定するための少なくとも1つの薬剤の使用説明書を含むキットを提供する。要約すると、本発明は悪性神経膠腫を治療する抗DRR治療的アプローチの使用に関する。本治療的アプローチは、ヒト腫瘍細胞におけるDRR発現のノックダウンを目的とするアンチセンスアプローチ、ウイルスベクターアプローチ、または他の関連するアプローチに関連する、抗DRRの分子の使用に基づく。本アプローチの技術的可能性は、以下の非限定例を用いてさらに説明される。本発明は以下の実施例を参照することによってより容易に理解され、この実施例は本発明を説明するために提供され、いかなる様式でもその範囲を限定するようには解釈されない。特別に定義されない限りまたは文脈が明らかに規定しない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本発明の実行または試験において本明細書において記載されるものと類似または等価である任意の方法および材料を使用できることを理解すべきである。材料および方法機能的スクリーニングアッセイ正常なヒト成熟脳cDNAライブラリーClontechをpLibレトロウイルスベクターClontechの中へサブクローン化し、LipofectaminePLUS試薬Clontechを使用するPT67パッケージング細胞株のトランスフェクションに使用した。分泌性複製欠損性のレトロウイルスをトランスフェクション後24~72時間の上清から採取し、72時間の時間経過にわたり連続的に使用してWT-U251神経膠細胞株を形質導入した図1A。ヒト神経膠腫分析ヒト神経膠腫サンプルは、theBrainTumorResearchCentreTissueBankattheMontrealNeurologicalInstituteandHospitalMontreal、Quebec、カナダから得た。書面による承諾をすべての患者から得て、プロジェクトはtheInstitutionalEthicsBoardattheMontrealNeurologicalInstituteandHospitalによって承認された。細胞U251ヒト乏突起膠腫細胞株WT、ヒト神経膠腫細胞株U343MG、ラット星状細胞腫細胞株C6、DRR細胞およびDRR細胞を、10FBSおよびペニシリン-ストレプトマイシン抗生物質混合物を補足したDMEM高グルコース中で培養した。ヒト神経膠芽腫細胞株U87MGCavanee研究室、UniversityofCaliforniaatSanDiegoを、10不活性化FBSおよびペニシリン-ストレプトマイシン抗生物質混合物を補足したDMEM高グルコース中で増殖させた。抗体および試薬アミノ酸67~92に対して向けられた親和性精製ウサギポリクローナル抗DRR抗体は、Covanceによって生成された。マウス抗ビンキュリン抗体およびマウス抗チューブリン抗体、ノコダゾールならびにG418はSigmaから購入された。ラット抗チューブリン抗体およびマウス抗GFAP抗体はChemiconから購入された。ローダミン-ファロイジン、ウサギ抗FAKpY397抗体ならびにAlexa488コンジュゲート二次抗体、Alexa694コンジュゲート二次抗体およびAlexa647コンジュゲート二次抗体、ならびにLipofectamine2000はInvitrogenから購入した。トリ抗MAP2抗体はEncorBiotechnologyIncから購入した。GFP-パキシリンcDNAプラスミドはI.R.Nabi博士UniversityofBritishColumbiaからの寄贈であった。ヒト神経膠腫免疫標識固定したパラフィン包埋組織を5μmで切片にし、マウントした。スライドは、クエン酸緩衝液pH6.0、LabVision中で熱誘導性エピトープ回復を高圧下で120°C10分間行った。標識はすべてLabVision360Autostainer上で室温で実行した。抗体結合はストレプトアビジンまたはHRPにコンジュゲートしたLVポリマーを使用して増幅し、AECクロモゲンLabVisionを使用して可視化した。切片はすべてSurgipath560ヘマトキシロンで対比染色し、Aquatexでマウントした。DRR抗体対照は、抗原ペプチド競合、免疫前血清による免疫標識、および二次抗体単独の免疫標識を含む。細胞DRR細胞株は短いヘアピン型RNAPaddisonetal.,2002およびレトロウイルス形質導入を使用して生成された。遠位のC末端配列GCTCTCTCTCTTCGCCGGCCAATGCGGCAを使用して、短いヘアピンループを生成する。RT-PCRを使用してDRRmRNAレベルの減少を確認し、ウエスタンブロットを使用してタンパク質レベルの減少を実証した。DRRΔPEPEおよびDRRΔHREコンストラクトはStratageneQuikChangeSite-DirectedMutagenesisキットを使用して生成した。DRR、DRRΔPEPEおよびDRRΔHREの安定した細胞株は、メーカーのプロトコルに従って、Lipofectamine2000を使用して、DRR、DRRΔPEPEまたはDRRΔHRE発現ベクターによりWT-U251細胞をトランスフェクションすることによって生成した。トランスフェクションの72時間後、細胞を拡張し、0.6mg/mlのG418を補足したDMEM中で2数週間選択した。耐性コロニーをトリプシン処理し、選択培地中で拡張した。胎生18~19日目のラット海馬ニューロンはP.McPherson博士McGillUniversityからの寄贈であった。B-27、N-2、l-グルタミン500μMおよびペニシリン/ストレプトマイシン100ユニット/mlInvitrogenを補足したNeurobasal培地を、細胞に7日ごとに与えた。細胞増加、遊走および浸潤のアッセイ細胞をトリプシン処理し、CoulterZSeriesカウンターBeckman-Coulter,Inc.を使用してカウントした。同じ細胞株の2つのサンプルについて2回測定し、平均化した。細胞を6ウェルプレート中にプレーティングし、24、48、72および96時間後にカウントした。2D細胞遊走を査定するために、密集するまで細胞を増殖させ、ピペットチップを使用してスクラッチを生成した。スクラッチ後1~11時間で規則的な間隔で画像を捕捉した。以前に記載されるように、腫瘍スフェロイドはハンギングドロップ法を使用して生成し、I型コラーゲンマトリックス中に移植したWerbowetski-Ogilvieetal.,CancerResearch66:1464-1472,2006。移植されたスフェロイドは、以下の時間ポイント0、24、48および72時間後に画像化された。浸潤領域は、4つの異なる角度で極端な直径を計算し、時刻0でスフェロイドの極端な直径を引くことによって測定された。実験はすべて三重で実行され、それらは3つの独立した実験からのものである。図22中に示されるスクラッチアッセイのために、以下の手技を使用した。トランスフェクション後72時間で、細胞は単層に達した。200μlピペットを使用してスクラッチを実行する。細胞をPBSにより3回リンスし、新鮮な培地を細胞に加えた。画像は、スクラッチの開始時ならびに24時間および48時間で5×対物レンズにより捕捉した。各々の画像について、スクラッチの1つの側面と他の側面との間の距離を測定した。細胞遊走の距離μmは、各々の時間間隔でスクラッチの距離を測定し、時刻0でのスクラッチの距離からそれを引くことによって定量した。マウス脳腫瘍移植マウスを定位フレームKopfInstrumentsに固定し、頭皮において小さな切開を中線で行った。ブレグマから0.5mm前方、2mm側方に穿頭孔を作成した。マイクロリットル注射器HamiltonCompanyを穿頭孔を通して4.4mmの深さまで徐々に降ろし、3μlのPBS中に2×105細胞を含む細胞懸濁物を12分にわたって注入した。動物を注射1か月後に安楽死させて腫瘍増殖および浸潤を査定した。ウエスタンブロットおよび免疫沈降WT細胞、DRR細胞およびDRR細胞におけるDRR発現量を決定するために、80の密集度まで細胞を増殖させ、冷PBS中で洗浄し、RIPA緩衝液または2熱SDSにより溶解した。溶解物30μgを12ポリアクリルアミドゲル上で分離し、ニトロセルロース膜へ転写した。膜をウサギ抗DRR抗体およびマウス抗チューブリン抗体、続いて適切なHRPコンジュゲート二次抗体JacksonImmunoResearchによりプロービングした。ECLplus商標試薬検出キットを使用したPierce。免疫沈降実験を以前に記載されるようにHEK-293細胞において実行したAngers-Loustauetal.,MolecularCancerResearch2:595-605,2004。マウス脳内腫瘍移植動物実験はすべて施設の動物ケア委員会によって承認され、CanadianCouncilofAnimalCareのガイドラインに準拠していた。6週間齢のCD1nu/nuの無胸腺のマウスCharlesRiver,Canadaをケタミン、キシラジンおよびアセプロマジンを含む腹腔内投与によって麻酔をかけた。酵母2-ハイブリッドスクリーニング酵母2-ハイブリッドスクリーンをMatchmaker商標Two-HybridSystem3Clontechを使用して実行した。全長DRRをベイトとして使用してヒト脳cDNAライブラリーClontechをスクリーニングした。免疫細胞化学細胞をガラスのカバーグラスまたはフィブロネクチン10μg/mlをコートしたカバーグラス上で増殖させ、4PFAにより固定し、0.5TritonX-100により透過性にし、その後免疫標識した。以前に記載されたようにFA脱集合アッセイを実行したEzrattyEJetal.,Nat.CellBiol.7:581-590,2005。簡潔には、細胞を無血清培地中で24時間インキュベーションし、その後ノコダゾール10μM;4時間により処理した。無血清培地を使用して、可変的な時間経過5、15、30および60分に沿って薬物を洗浄した。蛍光標識された細胞をZeiss510共焦点顕微鏡63×対物レンズにより可視化した。ビンキュリンに染色された接着斑の数および表面積をImageJソフトウェアを使用して定量した。3つの独立した実験から少なくとも10の視野を定量した。免疫蛍光研究のために、上記のように、細胞を4PFAにより固定し、0.5TritonX-100により透過性にし、その後免疫染色のために加工した。細胞をマウス抗ビンキュリンにより標識して接着斑を可視化し、ローダミン-ファロイジンを使用してアクチンをした。蛍光標識された細胞を、63×対物レンズを使用してZeiss510共焦点顕微鏡により可視化した。共焦点ビデオ顕微鏡検WT細胞またはDRR細胞を35mmのガラス底培養用ディッシュMatTekCorporation上で播種し、その後GFP-パキシリンによりトランスフェクションした。トランスフェクション後24~48時間に、Zeiss510共焦点顕微鏡63×対物レンズを使用して1分ごとに170分間画像を捕捉した。5つのDRR細胞および5つの対照WT細胞を分析し、合計17のFAをDRR細胞について分析した。FAの中へのGFP-パキシリンの取り込みおよびFAからのその脱集合についての見かけの速度定数は、Webbetal.,2004中に記載された技法を使用して定量した。測定は5つの細胞、5~10のFA/細胞から得られた。対照細胞において、170分の画像間隔内で集合または脱集合したFAは同定されなかった。データは平均±標準誤差として示される。ヒト神経膠腫の初代培養外科的切除から得られた組織を1×リン酸緩衝生理食塩水PBSで2回リンスし、その後細胞培養ディッシュに移した。壊死組織および血管を腫瘍から分離した。次いで組織を切断し、1.25のトリプシン-EDTAの5mlにより37°Cで30分間インキュベーションし、その後、7.5mlの細胞培養培地20ウシ胎仔血清FBS、250U/mLペニシリンG、250μg/mL硫酸ストレプトマイシンおよび4.4μg/mLアンフォテリシンBFungizoneを補足したダルベッコ変法イーグル培地DMEMを、サンプルに加えて、トリプシン-EDTAを中和した。次いでサンプルを細胞こし器へ移した。5mlの細胞培養培地を細胞こし器へ添加し、プロセスを3回反復した。次いで懸濁液を4°Cで20分間1000rpmで遠心分離して細胞をペレットにする。上清を廃棄し、細胞ペレットは、3mlの赤血球溶解緩衝液155mMNH4Cl/5.7mMK2HPO4/0.1mMEDTA、pH=7.3で再懸濁した。細胞を室温で15分間インキュベーションし、次いで15mlの培養培地をサンプルへ添加し、完全に混合し、1000rpmで10分間遠心分離した。上清を廃棄し、細胞を培養培地中で再懸濁した。その後、使用前に20FBS、および2×抗生物質を補足したDMEM中で最低2週間細胞を増殖させた。2週間後に、細胞を10FBSおよび2×抗生物質を補足したDMEM中で培養した。培養は5CO2の加湿雰囲気において37°Cで維持した。細胞が密集に達したと同時に、0.05トリプシン-EDTAを使用してトリプシン処理した。細胞トランスフェクションおよび3次元浸潤アッセイ50000細胞を6ウェルディッシュ中に一晩プレーティングし、翌日、製造者の使用説明書に記載のGeneJuice商標Novagenを使用して2.5μgDNA;100μlのOptiMEM中の4μlのGeneJuice商標、GFPを単独でまたはDRRアンチセンス発現するプラスミドベクターにより、この細胞をトランスフェクションした。トランスフェクション後72時間で、細胞は、0.05トリプシン-EDTAを0.5mlウェルへ添加し、37°Cで30秒間インキュベーションすることによって剥がした。次いで1mlの培養培地により細胞を中和し、15mlのチューブへ移し、カウントした。腫瘍スフェロイドを生成するために、25000細胞を含む細胞培養培地のドロップ20μlを、逆さにしたペトリディッシュの蓋から懸濁した。ドロップの蒸発を阻止するために、5mlのPBSをディッシュの底に添加した。細胞凝集を形成するために、ハンギングドロップを37°Cで72時間インキュベーションした。凝集は、10mlの培養培地を含む2アガー/PBSpH7.4をコートしたペトリディッシュへ移し、さらに48時間の期間37°Cでインキュベーションして凝集をスフェロイドのように丸くさせた。次いで、スフェロイドを、液体のI型コラーゲン溶液2.5mg/ml0.012NHCL8:1:1の比で10×DMEMおよび0.1mMNaOHと混合したの中へ移植した。コラーゲン含有スフェロイドを37°Cで30分間凝固させ、その後0.5mlの組織培養培地を各々のウェルへ添加した。移植されたスフェロイドを、0、24、48、72および96時間の時間ポイント後に画像化した。浸潤領域は、4つの異なる角度で極端な直径を計算し、時刻0でのスフェロイドの極端な直径を引くことによって測定された。図17~22における実験については、トランスフェクションは以下のように行った。トランスフェクション前日、トランスフェクション時に75の密集度に到達するように細胞をプレーティングした。細胞培地はトランスフェクション前に新鮮培地と置き換えた。DRRオリゴマーとLipofectamine2000Invitrogenの複合体は製造者の使用説明書に従って調製した。簡潔には、Lipofectamineをopti-MEM中で穏やかに混合し、5分間室温で放置した。DRRオリゴマーをopti-MEMと最初に混合し細胞へ添加する最終的な濃度が20nMであるように、Lipofectamineと穏やかに混合した。Lipofectamine-DRRオリゴマー複合体を室温で20分間インキュベーションし、その後細胞へ添加した。トランスフェクションの翌日、新鮮な細胞培地をトランスフェクションした細胞へ添加した。細胞はトランスフェクション後72時間で固定または溶解した。アンチセンスオリゴヌクレオチド合成標準的なホスホアミダイト固相法条件を、すべての修飾オリゴヌクレオチドおよび非修飾オリゴヌクレオチドの合成のために使用したDamhaandOgilvie,1993、Agrawal,S.編、ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs:SynthesisandProperties,MethodsinMolecularBiology,Vol.20、TheHumanaPressInc.、Totowa、NJ、pp/81-114。合成は、UnylinkCPGサポートChemGenesを使用して、1μmolスケールでAppliedBiosystems3400DNA合成装置上で実行された。DNA0.1Mとして調製以外のホスホアミダイトはすべてアセトニトリルACNで0.15M溶液として調製された。5-エチルチオテトラゾールACN中で0.25Mを使用してカップリングのためのホスホアミダイトを活性化した。脱トリチル化は110秒間のCH2Cl2中の3のトリクロロ酢酸により遂行された。失敗配列failuresequenceのキャッピングは、テトラヒドロフランTHF中の無水酢酸およびTHF中の16のN-メチルイミダゾールにより達成された。硫黄化は1:1v/vピリジン/ACN中のキサンタンヒドリドの0.1M溶液を使用して遂行された。カップリング時間は、DNAアミダイトについて110秒グアノシンについて270秒、および2’F-ANAホスホアミダイトについて600秒であり、例外的にはグアノシンホスホアミダイトは900秒間カップルさせた。脱保護はオンカラム脱シアノエチル化工程により遂行され、3回の15分の無水の2:3TEA:ACN洗浄続いて1回のACN洗浄を使用した。固体支持体からの脱保護および切断は、室温RTで48時間の3:1NH4OH:EtOH、または65°Cで10分間の40メチルアミンのいずれかにより遂行されたBellon,L.,2000,Curr.Protocols.NucleicAcidChem.,3.6.1-3.6.13。粗製オリゴヌクレオチドの精製は、24アクリルアミドゲルを使用する分取変性ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動PAGE、またはVarianPursuit5逆相C118カラム5のACNを含む水中の100mmolトリエチルアンモニウムアセタートの静止相、およびHPLCグレードのアセトニトリルの移動相を使用するWaters1525HPLC上の逆相HPLCのいずれかによって、行われた。ゲルバンドをDEPC処理したオートクレーブ滅菌Millipore水中で一晩抽出し、凍結乾燥した。精製されたオリゴヌクレオチドはすべてGEHealthcareからのNap-25Sephadexカラムで脱塩した。配列は分析用変性PAGEおよび/またはESI-LCMSによって確認した。DRRmRNAを標的化する配列は、NCBIウェブサイト上で利用可能な出版済みのmRNA配列を使用してデザインした。DRRを標的化する効果的なアンチセンス配列は、IDThttp://www.idtdna.com/Scitools/Applications/AntiSense/Antisense.aspxsource=menuから利用可能なアンチセンスオリゴヌクレオチドAON配列選択ツールを使用してデザインした。予測したアンチセンス配列はBLASTアライメントツールNCBIを使用してチェックし、的外れのヒットがないことをチェックした。加えて、DRRmRNAのセクションのmRNA二次構造を、MFOLDツールhttp://mfold.rna.albany.edu/q=mfold/RNA-Folding-Formを使用して予測して、AON結合のためのmRNA接近容易性について調査した。DRRを標的化するAONを表1中に示すG4配列番号:14、G5配列番号:15およびG6配列番号:16、DRRを標的化しない対照AONも対照実験のために調製したG1配列番号:11、G2配列番号:12、G3配列番号:13。本明細書において提供されたDRRを標的化するAON配列例えば表1中に加えて、これらの方法を使用して他のDRRmRNA領域への相補的な配列を選択することによって、他のDRRを標的化するAON配列を選択することができるが、他のmRNA配列ではなくDRRmRNAについての特異性を確認しなくてはならない。DRRを標的化し、DRR発現を減少または低下させる任意のアンチセンス分子例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドも包含されることを理解すべきである。結果機能的スクリーニングアッセイによりDRRは浸潤のプロモーターとして同定されるMGCの浸潤性は3次元浸潤モデルを使用してアッセイすることができるDelDuca,D.etal.,JournalofNeurooncology67:295-303,2004。出発点としてこのモデルを使用して、脳cDNAライブラリー全体を発現させるためにMGCU251神経膠腫細胞株をレトロウイルスで形質導入することによる、新規の機能的スクリーニングアッセイを開発した。浸潤を促進する遺伝子を細胞にヘテロに発現させることができたならば、過浸潤性細胞として他の細胞から区別できるだろうと推論した。形質導入したMGCから腫瘍スフェロイドを生成し、それらの浸潤性を3次元浸潤モデルにおいて査定した。次いで、識別可能な過浸潤性細胞を捕捉し、培養において拡張し、もともと形質導入した遺伝子を同定した図1A。DRRはこの順遺伝学的アプローチを使用して、浸潤の強いプロモーターとして同定された。DRRがMGCの浸潤のエフェクターとして作用するか否かを試験するために、DRRを過剰発現するMGCDRR、図8および野生型WTMGCの両方から構成された混合腫瘍スフェロイドを生成し、各々の細胞株の浸潤パラメータを研究した図1B~E。MGCは内因的にDRRを発現するが、DRR細胞はWT細胞よりも240遠くに浸潤する。これとは対照的に、RNA干渉を使用してMGC中のDRR発現を減少させることDRR、図8は、浸潤の有意な低下を引き起こす図1F、GおよびJ。DRR発現を減少させることが他の神経膠細胞株において浸潤を低下させるかを試験するために、U343-DRR、C6-DRRおよびU87MG-DRRならびに安定した細胞株を開発し、それらの浸潤性を試験した。内在性DRRを発現する野生型対応細胞に比較して、DRR細胞株はすべて浸潤性の有意な低下を示した図11C~E。興味深いことには、DRR発現は細胞形態の重大な変化も引き起こし、DRR細胞は細長い紡錘体形状であったが、DRR細胞は丸かった図1H、IおよびK。2D遊走アッセイにおける実験も、細胞が移動する時の細胞形態の差異を示す。DRR細胞は長い細い突出により移動するが、WT細胞およびDRR細胞は一様な幅の広いラメラにより移動する図9。細長い紡錘状の細胞形状は、脳を介するMGCの移動の好ましい様式であることが示されているBeadleetal.,MolBiolCell.19:3357-68,2008。次いでマウスモデルにおいてDRRの浸潤プロモーターとしての役割を調べた。DRR腫瘍およびDRR腫瘍をマウスの梁下/尾状領域の中へ移植し、浸潤を査定した図1LおよびM。DRR腫瘍は隣接する柔組織の中へ浸潤することなくよく限局された塊として増殖し、これらの細胞は丸い形態を有する。反対にDRR腫瘍は高度に浸潤性である。これらの侵入性細胞大きく過色素性の細長い核によって区別されるは細長い形状を有し、腫瘍塊から分離し、柔組織を浸潤し、重要なことには脳梁に向かってその中へ移動する。白質路脳梁等の中への浸潤はヒト悪性神経膠腫によって使用される好ましい浸潤パラダイムであるPedersenetal.,Int.J.Cancer,62:767-71,1995。さらに、DRR腫瘍はDRR腫瘍よりも小さく図8B、C、以前に記載されるように細胞増加の低下が示唆されるWangetal.,GenesChromosomesCancer27:1-10,2000。細胞分裂におけるDRRの役割を査定し、細胞分裂がDRR発現と逆に相関していることも見出した図1N。MGCの浸潤および増加が時間的に排反事象であるという概念が記載されているGieseetal.,IntJCancer67:275-282.1996。したがって、DRRを細胞移動の調節因子として同定し、細胞浸潤の駆動力として同定した。インビトロおよびインビボの浸潤アッセイにおけるこの所見を検証し、細胞浸潤についてDRRの重要性を確認した。DRRは正常な神経膠においてではなく、ニューロンおよびヒト神経膠腫において発現されるインビトロおよびインビボの所見を臨床的に検証するために、正常なヒト脳および悪性神経膠腫におけるDRRの発現パターンを決定した。正常なヒト脳において、DRRは星状細胞またはオリゴデンドロサイトにおいてではなく、ニューロンにおいて強く発現されることが見出された図2A~F、高拡大画像については図10を参照されたい。培養されたラット胚ニューロンおよび神経膠のニューロンおよび神経膠のマーカーによる共標識からも、DRRが神経膠細胞においてではなくニューロンにおいて発現されることが示される図2G~L。抗原ペプチド競合、免疫前血清による免疫標識、および二次抗体単独の免疫標識を含むDRR抗体対照は陰性だった。各グレードの8例の悪性神経膠腫におけるDRR発現の分析は、DRRがすべての悪性神経膠腫において高く発現されているが一様にではないことを示す図2M。グレード2および3神経膠腫低増殖速度の高浸潤性腫瘍は、一様にDRRを発現する。これとは対照的に、グレード4神経膠腫高浸潤性かつ高増殖性は、示唆的なパターンでDRRを発現する。浸潤性の末梢の腫瘍細胞は一様にDRRを発現するが、中心部の増殖性腫瘍領域のDRR発現は変動を示した。8つのグレード4の神経膠腫のうちの5つの神経膠腫では中心部の腫瘍のDRR発現はほとんどまたはまったく示されなかったが、8つの腫瘍のうちの3つの腫瘍では中心部腫瘍はDRR陽性だった。総合すれば、これらのデータから、DRRは正常な神経膠細胞において発現されないが、悪性神経膠腫において着実で差異的な発現パターンを有することが示される。DRRは細胞骨格と会合する細胞移動を駆動するのにDRRはどのように機能するかを解明するために、細胞以下のレベルでのDRRを局在を調べた。内在性またはヘテロに発現されたDRRは、主にアクチンストレスファイバー、FAおよび膜ラッフルに沿って局在する図3A。従来の報告Wangetal.,GenesChromosomesCancer27:1-10,2000に一致して、DRRは核においても見出すことができる図12。これらの結果は、DRRが細胞骨格装置に対する直接的影響を通して、または核における調節性役割を通して、浸潤を促進し得ることを示唆する。この問題に取り組むために、アクチン会合のために必要とされる最小領域の同定によってアクチン細胞骨格からDRRを切りはなした。ヒトDRRの連続するN-末端短縮コンストラクトおよびC-末端短縮コンストラクトを生成し、蛍光タグを使用して局在についてアッセイした。アクチン会合を可能にする2つの最小領域が同定され、アミノ酸62~100および108~120であった図14。アクチン会合に必要とされるドメインが種にわたって保存されることが決定された。ヒト、マウス、ラットおよびゼブラフィッシュのDRRにわたって保存される62~100領域および108~120領域内のアミノ酸を同定し突然変異させた図13。両方のセグメントDRRΔPEPE中の保存されたプロリン-グルタミン酸塩PEモチーフのアラニンへの組み合わせ突然変異は、アクチン細胞骨格の有意な動揺を引き起こし、残りのストレスファイバーとのアクチン会合を消失させる図3A。これらの所見はDRRの細胞骨格会合が種にわたって保存されることを示す。細胞骨格とDRRの会合において役割を果たす分子を同定するために、正常脳ライブラリーの酵母2-ハイブリッドスクリーニングを使用してDRR結合パートナーを同定した。このアッセイを使用して、MAP1Aの軽鎖LC2サブユニットが候補DRR結合タンパク質として同定された。DRRおよびLC2がアクチンストレスファイバーおよび膜ラッフルに沿って共局在し、ヘテロに発現された場合共免疫沈降させることができることも示され図3BおよびC、これらのタンパク質が会合することと一致している。興味深いことには、DRRアクチン結合部位の突然変異は、LC2とDRR会合を増加させるように思われる図3B。いくつかの細胞において、DRRの非アクチン結合形態DRRΔPEPEが微小管に局在できることも見出されたデータ不掲載。次いで、短縮およびアミノ酸突然変異分析を使用して、DRRの非LC2結合形態を開発した。最小N末端ヒスチジン-グルタミン酸アルギニンHRE配列はLC2結合のために必要とされることが見出された図3B。この領域が突然変異されたDRRΔHRE場合、アクチン細胞骨格およびDRR変化の局在パターンの有意な動揺がある。核局在および拡散した細胞質内局在においてDRR発現の増加がある図3A。わずかなアクチン会合も観察された。要約すると、これらのデータは、DRRがアクチン細胞骨格、FAおよび核に局在することを示す。アクチン会合に必要とされる最小領域DRRΔPEPEが定義された。MAP1AのLC2サブユニットはDRR会合タンパク質として同定され、この会合はアミノ末端HRE領域の突然変異DRRΔHREによって破壊することができる。細胞骨格とDRRの会合は細胞移動のために必要とされるDRR-アクチンの会合およびDRR-LC2の会合を破壊する能力は、細胞骨格とDRRの会合が細胞移動の駆動に必要とされるかどうか決定する2つのアプローチを提供した。DRRΔPEPEまたはDRRΔHREを発現する安定した細胞株を生成し、3次元浸潤アッセイにおいて浸潤性について試験した。DRRアクチン会合の喪失はWT細胞に比較して浸潤の~3倍の減少を引き起こすことが見出され、DRRのこの変異型が機能的ドミナントネガティブとして作用していると示唆する図4。DRR-LC2の相互作用が破壊される場合も類似の所見が見られる図4。これらのデータすべてから、細胞浸潤の駆動にアクチンおよびLC2とDRRの会合が必要とされることを示す。DRRは接着斑ダイナミックスを調節する細胞移動のプロセスは調節されたFAダイナミックスを必要とするLauffenburgeretal.,Cell84:359-369,1996;Friedletal.,NatRevCancer3:362-74,2003。DRR発現がFAに影響を与えるかどうか決定するために、GFP-パキシリン融合タンパク質を発現し、共焦点ビデオ顕微鏡検査を使用して、FAダイナミックスに対するDRR発現の効果を研究した図5。非極性DRR細胞において、FAの形成および脱集合にかかる合計時間が40.05±3.00分であることが見出された図5A~C。FAの中へのGFP-パキシリン取り込みについての速度定数は6.2±0.9×103/分であり、GFP-パキシリン脱集合について速度定数は8.6±0.7×103/分であった。反対に、FAはWT対照細胞において動的ではなかった。170分の画像間隔内で形成または脱集合されたFAを検出することはできなかった図5D。これらのデータは、FAダイナミックスの増進によってDRRが細胞浸潤を駆動するメカニズムを強く支持する。FA脱集合は重合された微小管MTを必要とすることが立証されているKaverinaetal.,J.CellBiol.142:181-190,1998;Kaverinaetal.,J.CellBiol.146:1033-1044,1999;Krylyshkinaetal.,J.CellBiol.156:349-359,2002;Krylyshkinaetal.,J.CellBiol.161:853-859,2003;Ezrattyetal.,Nat.CellBiol.7:581-590,2005。DRRはMAP1AのLC2サブユニットと相互作用することおよびDRR過剰発現はFAの不安定化を引き起こすことが示されたので、DRRがFA脱集合を促進するかどうかを直接検査した。FA脱集合のMT対照は、微小管を脱集合する微小管の脱重合剤ノコダゾールを使用して検討することができる。ノコダゾール適用後には、脱集合に利用可能な微小管がないのでFAのサイズは増加する。ノコダゾールをウォッシュアウトすると、微小管は重合し、接着斑は脱集合するEzrattyetal.,Nat.CellBiol.7:581-590,2005。細胞外マトリックス構成要素のフィブロネクチン上にプレーティングしたDRRおよびDRR細胞を使用して、この実験を実行した。印象的な2つの観察があった。第一に、ノコダゾール適用およびMT脱重合に際して、DRR細胞は処理していない細胞と比較して、より多くより大きな接着斑を発達させる図6A。これとは対照的に、ノコダゾール処理した細胞vs処理していないDRR細胞図6AまたはWT細胞データ不掲載におけるFA数およびサイズの差異は観察されず、DRR欠損は大きく成熟したFAを引き起こすことが示唆される。第二に、DRRを過剰発現する細胞においてMTが再重合する場合、FAは5分内に脱集合し始めるが、DRR細胞またはWT細胞、データ不掲載におけるFAは15分後にのみ脱集合し始め、完全に脱集合しない図6A。同じ実験がDRRの非アクチン結合形態DRRΔPEPEまたはDRRの非LC2形態DRRΔHREにより実行された場合、FA脱集合動態はDRR欠損条件に類似した図6B、DRRΔHREについてはデータ不掲載。DRR発現はFA脱集合を促進するが、DRR欠損は安定的な成熟FAを引き起こすという所見は、FAダイナミックスの新規の調節因子としてDRRを指し示す。DRRはアクチンおよび微小管の細胞骨格を組織化するFA脱集合アッセイからの結果は、アクチン細胞骨格およびMAP1AのLC2サブユニットの両方とのDRRの会合はFA脱集合のために必要とされることを示唆する図6。DRRがこの結果をもたらし得る1つのメカニズムは、FAの近辺においてMTを配置することによってMTダイナミックスを変化させることであるKaverinaetal.,J.CellBiol.146:1033-1044,1999。この仮説を試験し、DRRがMTおよびアクチンの両方の細胞骨格を調節することを見出した。DRR発現は、アクチン細胞骨格の局在パターンに強く類似する高度に組織化されたMTシステムを引き起こす図7A。これとは対照的に、DRR欠損は、アクチン細胞骨格に類似しない不規則であまり組織化されないMT細胞骨格を引き起こす図7B。DRR欠損は、ストレスファイバー形成の喪失および外側のアクチンシステムの促進をともなうアクチン細胞骨格における重大な変化も引き起こす図7AおよびB。ストレスファイバーアクチンシステムの促進はアクトミオシン収縮およびしたがって細胞後部引き込みを可能にするVerkhovskyetal.,J.CellBiol.131:989-1002,1995。重要なことには、MTがFAに到達するためにDRR発現が必要とされることも見出された。DRR欠損細胞においてMTはFAに接近しない図7B。これとは対照的に、DRR発現はMTとFAとの間の接近した会合を引き起こす図7A。これらのデータすべてから、DRRがアクチンおよびMTの両方の細胞骨格の制御によるFAダイナミックスの新規の調節因子であることが強く示唆される図7C。DRR発現の減少はヒト神経膠腫浸潤を阻害するヒトの高グレードの神経膠腫を外科的に切除し、培養中に直ちに置いた。2週間後に、これらの細胞は、対照GFPベクターまたはDRR-RNAi配列番号:1ベクターはGFPも含むによりトランスフェクションされた。腫瘍スフェロイドはこれらの細胞から生成され、コラーゲンマトリックスの中へ移植された。明視野上部レーンおよび蛍光画像下部レーンを移植後1~14日で捕捉した図16。トランスフェクションしていない腫瘍図16Aおよび対照のGFPをトランスフェクションした腫瘍図16Bは容易に浸潤するが、DRR-RNAiをトランスフェクションした腫瘍図16Cは浸潤しない。図16Dは、スフェロイド縁部からの浸潤距離の定量化を示す。これらの結果は、DRR発現の減少がヒト神経膠腫浸潤を阻害することを示し、原発性脳腫瘍に罹患した被験体においてヒト脳腫瘍浸潤を阻害する治療用標的としてのDRRの第1の実証を表わす。複数のタイプのDRRアンチセンスオリゴヌクレオチドはDRR発現を減少させるDRR発現の減少において異なるDRRアンチセンスオリゴヌクレオチドの効能を比較した。アルティマーオリゴヌクレオチド互い違いのユニットを備えたオリゴヌクレオチド;かかるオリゴは例えばPCT公開第WO/2003/064441号中に記載されるおよびギャップマーオリゴヌクレオチドキメラのアンチセンスオリゴヌクレオチド;かかるオリゴは例えばPCT公開第WO/2002/20773中に記載されるを、対応する非DRR標的化対照と共に試験した。DRR細胞は、示されたDRRアンチセンスアンチセンスG4配列番号:14;アルティマー、アンチセンスG5配列番号:15;ギャップマーまたはアンチセンスG6配列番号:16;ギャップマー;非標的化対照アンチセンスCtlアンチセンスによりトランスフェクションされるか;またはトランスフェクションされないまま非トランスフェクションだった。オリゴヌクレオチドG1配列番号:11は非標的化アルティマー対照であり、オリゴヌクレオチドG2配列番号:12およびG3配列番号:13は非標的化ギャップマー対照である。トランスフェクション後72時間でDRR発現量をウエスタンブロットを使用して決定した図17。結果は、異なるアンチセンスオリゴヌクレオチドがDRR発現を減少させることに効果的であることを示す。次いで異なるDRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによるトランスフェクション後のDRRを過剰発現する細胞における細胞骨格アクチンおよび接着斑の変化を調査した図18。結果は、DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理によるDRR発現の減少が、細長い紡錘体形態から丸い形態への細胞のシフトを誘導したことを示す。DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理が大きな接着斑を引き起こすことも見出された。DRR細胞の遊走に対する異なるDRRアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果はインビトロのスクラッチアッセイを使用して分析された図19。結果は、時刻0での条件はすべて類似することを示すが、48時間内に対照DRR細胞におけるスクラッチはもはやはっきり表れない。これとは対照的に、DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理は、ギャップの閉鎖を阻止する。これらの結果は、DRR発現を減少させることが細胞の遊走を阻止することを実証する。DRR細胞浸潤をインビトロの3次元浸潤アッセイも使用して分析した図20。対照DRR腫瘍スフェロイドは高浸潤性であるが、DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理は腫瘍スフェロイドの浸潤を減じることが理解できた。浸潤の定量化から、DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理が浸潤の有意な低下に引き起こすと明らかにされる図20B。次いで異なるDRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによるトランスフェクション後のヒト神経膠芽腫細胞の細胞骨格アクチンおよび接着斑の変化を可視化した図21。DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理によるDRR発現の減少は、細長い紡錘体形態から丸い形態への細胞のシフトを誘導することが見出された。DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理は大きな接着斑を引き起こすことが見出された。ヒト神経膠芽腫細胞の遊走をインビトロのスクラッチアッセイを使用して分析した図22。結果は、24時間内に対照神経膠芽腫細胞においてスクラッチがほぼ閉鎖されているが、DRRアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理はギャップの閉鎖を阻止すること示す。これらの結果から、DRR発現の減少が神経膠芽腫遊走を阻止することが実証される。要約すると、浸潤のプロモーターを同定する新規の機能的スクリーニングアッセイが本明細書において実証され、このアッセイを使用してDRRが浸潤のプロモーターとして同定された。DRRがインビトロの3次元培養および浸潤のマウスモデルにおいてMGCの浸潤を促進することが本明細書において示される。正常なヒト脳および神経膠腫におけるDRR発現の特徴づけから、正常脳においてDRRは神経膠においてではなくニューロンにおいて多く発現されることが明らかにされる。これとは対照的に、DRRは低グレードおよび高グレードの神経膠腫の浸潤性領域において一様に高度に発現されるが、高グレードの神経膠腫の中心部増殖性領域における発現は可変的である。DRR発現の減少がヒト神経膠腫浸潤を阻害することも実証される。これらのすべての所見は、DRRが神経膠腫浸潤の重要な調節因子および神経膠腫の治療的処理のための標的であることを示す。加えて、DRRは浸潤性領域を示し、悪性神経膠腫をグレーディングする、有用なバイオマーカーである。他のグループによる最近の研究は、DRRおよび悪性神経膠腫をリンクさせ、DRR発現は低グレード神経膠腫に比較して高グレードの神経膠腫において減少していることを報告しているが、正常脳における発現は記載していなかったvandenBoometal.,Int.J.Cancer119:2330-2338,2006。DRRの抗増殖機能も他のグループによって報告されたWangetal.,GenesChromosomesCancer27:1-10,2000。腫瘍抑制因子としてのDRRの役割のこれらの報告とは対照的に、本明細書において、DRRが腫瘍細胞における浸潤の駆動力としての作用し、悪性神経膠腫の浸潤性領域において高度に発現されるという驚くべき予想外の所見を報告する。DRR発現が神経膠腫細胞における浸潤性表現型と関連し、DRR発現の減少がヒト神経膠腫浸潤を阻害することを初めて示す。したがって、本結果は、細胞増加の調節因子に加えて、細胞浸潤の駆動力としての、神経膠腫生物学におけるDRRについて中心的な役割を初めて示唆する。したがって、本結果は、細胞増加の調節因子に加えて、細胞浸潤の駆動力として、神経膠腫生物学におけるDRRの中心的な役割を初めて示唆する。本明細書において引用されたすべての文書および参照文献の内容の全体は、参照として本明細書に援用される。本発明はその具体的な実施形態と関連して記載されているが、さらなる修飾が可能であり、本出願は一般に本発明の原則に従って本発明のいかなる変形、使用または改造をカバーすることを意図し、本発明が属する当該技術分野内で公知または慣習的な実施の範囲内に生ずるような、および上文に記載される本質的特徴に適用され得るような、ならびに添付の請求項の範囲に従うような、本開示からのかかる逸脱を含むことが理解されよう。"