"式I:の化合物であって、式中、は、単結合または二重結合を表し、但しが単結合を表す場合には、Uおよび/またはU’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hを表し;Wおよび/またはW’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、OH、-OR、-OCOR、-COOR、-OCOOR、-OCONRR’、N10およびC11が環に含まれる環状カルバメート、-NRCONRR’、-OCSNHR、N10およびC11が環に含まれる環状チオカルバメート、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO3-、-NRSOOR’、-NRR’、N10およびC11が環に含まれる環状アミン、-NROR’、-NRCOR’、-N3、-CN、Hal、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、が二重結合を表す場合には、UおよびU’は存在せず、Wおよび/またはW’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hを表すことを条件とし、R1、R2、R1’、R2’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、H、Hal、あるいはHal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、q=0、1または2であるSOqRを表し、または、R1とR2、および/またはR1’とR2’とがそれぞれ合わさって、二重結合=CH2または=CH-CH3を表し、YおよびY’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hまたは-ORを表し、Mは、CHまたはNを表し;ALKおよびALK’は、C1-C6アルキレン基を示し、RおよびR’は、互いに独立して、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基またはアリール基を表し、L1は、単結合、またはiが2から40の範囲の整数を表す、酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した-OCH2CH2i-基、または-O-、-NH-または-NC1-C4アルキル-を表すDを介してフェニル環またはピリジル環に接続した-D-C1-C6ALK-基を表し、L2は、-C1-C6ALK-基、またはjが1から40の範囲の整数を表す、-CH2CH2Oj-CH2CH2-基、またはjが1から40の範囲の整数を表し、ならびにRは、HまたはC1-C4アルキル基を表す、-CH2CH2O-単位を介して窒素原子に接続した-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-基を表し、Qは、単結合またはC=O基を表し、kは、0から40の範囲の整数を表し、Gは、-OR基または-NRR’基を表し、RおよびR’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、N、OおよびSから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、ならびにC1-C4アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも1個の置換基で場合により置換されていてもよいC4-C10ヘテロシクロアルキル基を形成し、RCG1は、-SZa基または-C=O-ZbRb基を表し、Zaは、Ac、RaまたはSRaを表し、Raは、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、NO2、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表し、Zbは、単結合、-O-または-NH-を表し、ならびにRbは、H、あるいはC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Zbは、単結合を表し、およびRbは、Halを表し、但しL1が単結合を表す場合には、RCG1は-SZaを表すことを条件とする、化合物。U=U’および/またはW=W’および/またはR1=R1’および/またはR2=R2’および/またはY=Y’および/またはフェニル核またはピリジル核に接続するALKおよびALK’という2個の基が同じである、請求項1に記載の化合物。式IAまたはIB:の請求項1に記載の化合物。式IA:の請求項3に記載の化合物。YおよびY’が、C1-C4アルコキシ基を表す、請求項1から4に記載の化合物。MがNを表す、請求項1から5に記載の化合物。L1が単結合を表す場合、L2が、-CH2CH2OjCH2CH2-または-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-を表す、請求項1から6の一項に記載の化合物。Gが、-OH基、-OC1-C6アルキル基、-NH2基、-NHC1-C6アルキル基または-NC1-C6アルキル2基を表すか、または、Gが、-NRR’基を表し、ここで、RとR’が、これらが結合している窒素原子とともに、N、OおよびSから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、ならびにC1-C4アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも1個の置換基で場合により置換されていてもよいC4-C10ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項1から7の一項に記載の化合物。L1=-D-C1-C6ALK-およびL2=-C1-C6ALK-;またはL1=-OCH2CH2i-およびL2=-C1-C6ALK-;またはL1=単結合およびL2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-;またはL1=-D-C1-C6ALK-およびL2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-;またはL1=-D-C1-C6ALK-およびL2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-である、請求項1から8の一項に記載の化合物。L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=単結合、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=CO、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRbである、請求項1から8に記載の化合物。-COZbRbが、-COOH、-COOC1-C6アルキル、または基を表し、IGが、少なくとも1個の誘導基またはを表す、請求項1から10に記載の化合物。-SZaが、-SHまたは-SSC1-C6アルキルまたは-SS-ヘテロアリールを表す、請求項1から10に記載の化合物。以下:の1つから選択される、請求項1に記載の化合物。複合体を調製する方法であって、i場合により緩衝化した、場合により修飾剤を用いて修飾した結合剤の水溶液、および請求項1から13のうち一項に定義されている通りの式Iの化合物の溶液を接触させ、放置して反応させる工程であって、式Iの化合物の化学基RCG1は、結合剤に存在する化学基RCG2に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、前記化学基RCG2は、必要に応じて、共有結合の生成を伴って、式Iの化合物が結合剤に接続するように修飾剤によって導入されている工程、ii次いで、場合により、工程iで生成した複合体を式Iの化合物および/または未反応の結合剤および/または生成し得る任意の凝集物から分離する工程を含む、方法。-SZa型の反応性化学基RCG1を含む式Iの誘導体存在下、結合剤が、RCG1が-SHを表す場合には、ジスルフィド化学基;RCG1が-SZaを表し、ZaがHではない場合には、チオール化学基;RCG1が-SHを表す場合には、マレイミド化学基またはハロアセトアミド化学基を含み、-C=O-ZbRb型の反応性化学基RCG1を含む式Iの誘導体存在下、式Iの誘導体が、結合剤のアミノ官能基、特に、抗体のリシンLys残基の側鎖に担持されるε-アミノ基と反応する、請求項14に記載の方法。反応性化学基RCG1が-SH型である場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε-アミノ基、が含まれる場合、後者は、式の化合物式中、Rは、C1-C6アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、C3-C7シクロアルキル基、C4-C10ヘテロシクロアルキル基を表す;式のペグ化類似体、または式のスルホン酸類似体を表し、X3、X4、X5、X6は、HまたはC1-C6アルキル基を表し、X1およびX2は、-H、-CONX8X9、-NO2を表し、X8およびX9は、HまたはC1-C6アルキル基を表し、X7は、-SO3-MまたはHを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、ならびにaは0から4の範囲の整数を示し、およびbは、0から2000の範囲の整数を示す。から選択される;または、スクシンイミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート;スルホスクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート;Rは、-CH2n-基、-CH2n-シクロヘキシル-基、-シクロへキシル-CH2n-基を表し、ならびにnは1から10の範囲の整数である;bは0から2000の整数である;スクシンイミジル-N-ブロモアセテート;スクシンイミジル-3-N-ブロモアセトアミドプロピオネート;bは0から2000の整数であるから選択される修飾剤によって修飾され、反応性化学基RCG1が-SZa型であり、ZaがHではない場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε-アミノ基、が含まれる場合、後者は、式の化合物から選択される修飾剤によって修飾され、ここで、-Halは、ハロゲン原子を表し;-X10は、ハロゲン原子または-COOX14基、ニトロ、非置換またはハロゲン化C1-C8アルキル、非置換またはハロゲン化C1-C8アルコキシ、非置換またはハロゲン化C2-C8アルケニル、非置換またはハロゲン化C2-C8アルキニル、非置換C3-C8シクロアルキル、非置換アリール、あるいはアミノ、ハロゲン原子、非置換またはハロゲン化C1-C8アルキル基、非置換またはハロゲン化C1-C8アルコキシから選択される1から3個の置換基で置換されたアリールを表し;-X11、X12、X13は、それぞれ独立して、水素原子を表すか、または、X10を表していてもよく;または、X10とX11が一緒に、非置換か、または1から5個のC1-C4アルキル基で置換されたC2-C5アルキレン環を形成するか;または、X10またはX11が、X12と一緒に、非置換か、または1から5個のC1-C4アルキル基で置換されたC1-C5アルキレン環を形成し、ならびにX14は、-HまたはC1-C8アルキル基であり、またはX10=X11=X12=X13=Hであり、反応性化学基RCG1が-SH型である場合、および結合剤がチオール官能基を、特に、アミノ官能基を担持する結合剤の変異によってまたは化学修飾することによってシステインを導入した後に、担持する場合、結合剤は、チオール官能基ジスルフィド官能基に変換されるように修飾されるが、より具体的には、式の化合物X1およびX2は、-H、-CONX8X9または-NO2を表し、X8およびX9は、HまたはC1-C6アルキル基を表すから選択される修飾剤を用いることによって修飾される、請求項14または15に記載の方法。請求項14から16の一項に記載の方法を介し得られ得る複合体。請求項14から16の一項に記載の方法を介し得られ得る複合体溶液、または請求項17に定義される複合体を含む複合体溶液。式のダイマーがMのパラ位において共有結合する結合剤を調製するための、請求項1から13の一項に記載の式Iの誘導体の使用。結合剤が抗体である、請求項19に記載の使用。ダイマーが式:を有する、請求項19または20に記載の使用。抗癌剤として使用するための請求項1から13の一項に記載の化合物。抗癌剤として使用するための請求項17に記載の複合体。抗癌剤として使用するための請求項18に記載の複合体溶液。式P2:の化合物であって、式中、L1、L2、Q、k、ALK、ALK’およびGは、請求項1から9の一項に定義したとおりであり、LGおよびLG’は、脱離基を表し、X’はRCG1を表す、化合物。請求項1から13の一項に記載の化合物の調製における中間体化合物としての、請求項25に記載の化合物の使用。請求項1から13の一項に定義される化合物と結合剤とを反応させた後に、式のダイマーがMのパラ位に共有結合した結合剤。腫瘍に関連する癌細胞または間質細胞上に位置する抗原または抗原群に対して親和性を有する、請求項27に記載の結合剤。抗体、好ましくはモノクローナル抗体である、請求項27または28に記載の結合剤。本発明が解決することを意図している技術課題は、ピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーの新規複合体を提案することである。定義以下の定義を適用する。複合体:少なくとも1個の細胞毒性化合物分子が共有結合している細胞結合剤;細胞結合剤:生物学的標的への親和性を有する分子であり、例えば、リガンド、タンパク質、抗体、さらに具体的には、モノクローナル抗体、タンパク質または抗体のフラグメント、ペプチド、オリゴヌクレオチドまたはオリゴ糖であってもよい。結合剤は、細胞毒性剤として生物学的活性のある化合物を、生物学的標的に向かわせる機能を有する;生物学的標的:この腫瘍に関連する癌細胞または間質細胞の表面に優先的に位置する抗原または抗原群。これらの抗原は、おそらく、例えば、成長因子受容体、変異した腫瘍抑制剤遺伝子または癌遺伝子の産物、血管形成に関連する分子、接着分子であり得る;リンカー:細胞毒性化合物を結合剤に共有結合させるための一連の原子アルキル基:アルカンから水素原子を取り除くことによって得られる飽和脂肪族炭化水素系基。アルキル基は、直鎖または分枝鎖であってもよい。あり得る例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、2,2-ジメチルプロピル、ヘキシルが挙げられる;シクロアルキル基:環構造に関わる炭素原子を3から8個含む環状アルキル基。あり得る例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基およびシクロヘキシル基が挙げられる;アリール基:ヘテロ原子を含まない単環または二環の芳香族基。さらに具体的には、フェニル基またはナフチル基である;ヘテロアリール基:環構造に関わる少なくとも1個のヘテロ原子O、S、Nを含み、炭素原子に接続して環を形成する、単環または二環の芳香族基。さらに具体的には、ピリジル基、ピローリル基、チエニル基、フリル基、ピリミジニル基またはトリアゾリル基である;ヘテロシクロアルキル基:環構造に関わる少なくとも1個のヘテロ原子O、S、Nを含み、炭素原子に接続して環を形成する、シクロアルキル基。さらに具体的には、ピペラジノ基、N-メチルピペラジノ基、モルホリノ基、ピペリジノ基またはピロリジノ基である;アルコキシ基:-O-アルキル基、アルキル基は上に定義したとおりである;アルカノイルオキシ基:-O-CO-アルキル基、アルキル基は上に定義したとおりである;アルキレン基:アルカンから2個の水素原子を取り除くことによって得られる実験式-CmH2m-の飽和二価の基。あり得る例としては、メチレン基-CH2-、エチレン基-CH2CH2-、プロピレン基-CH2CH2CH2-、ブチレン基-CH2CH2CH2CH2-、イソブチレン基およびヘキシレン基-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-基が挙げられる。アルキレン基は、さらに具体的には、式-CH2m-であってもよく、mは、整数を表す。値の範囲には、限界値が含まれている例えば、1から6の範囲のiという種類の範囲は、限界値1と6を含む。。さらに、この範囲は、範囲に含まれる全ての点も記載している。従って、1から6の範囲のiは、1、2、3、4、5および6という値を記述している。使用される省略語EtOAc:酢酸エチル;ALK:アルキレン基;Cx-CyALK:Cx-Cyアルキレン;TLC:薄層クロマトグラフィー;MSC:メタンスルホニルクロリド;DBU:1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン;DCC:N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド;DCM:ジクロロメタン;DEAD:ジエチルアゾジカルボキシレート;DIC:N,N’-ジイソプロピルカルボジイミド;DIPEA:N,N-ジイソプロピルエチルアミン;DMA:ジメチルアセトアミド;DMAP:4-ジメチルアミノピリジン;DME:ジメトキシエタン;DMF:ジメチルホルムアミド;DMSO:ジメチルスルホキシド;eWLnm:波長WLでのモル吸光係数;EEDQ:2-エトキシ-1-エトキシカルボニル-1,2-ジヒドロキノリン;EDCI:N-3-ジメチルアミノプロピル-N’-エチルカルボジイミド;EDTA:エチレンジアミンテトラ酢酸;Fmoc:フルオレニルメトキシカルボニル;Hal:ハロゲン原子;HOBt:1-ヒドロキシベンゾトリアゾール;HEPES:4-2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジンエタンスルホン酸;WL:波長;Me:メチル;NHS:N-ヒドロキシスクシンイミド;NMP:N-メチルピロリジノン;RP:減圧;Rf:保持因子;SEC:立体排除クロマトグラフィー;RT:室温;TBDMS:tert-ブチルジメチルシリル;TEA:トリエチルアミン;TFA:トリフルオロ酢酸;TIPS:トリイソプロピルシリル;THF:テトラヒドロフラン;tR:保持時間。図面図1SPDPによる結合剤の修飾。図2イミノチオランによる結合剤の修飾。図3脱グリコシル化後の実施例8の複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトル。図4実施例9の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトルHRMS。図5実施例10の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトルHRMS。図6実施例11の脱グリコシル化されていない複合体に関する解析が済んだ高解像度質量スペクトルHRMS。これらの図は、それぞれの複合体について、0から8個のトマイマイシンダイマーを含む種の分布を示すD0:ダイマーなし;Dx:x個のダイマー。発明の簡単な説明本発明は、式Iの化合物に関し、式中、は、単結合または二重結合を表し、但しが単結合を表す場合には、Uおよび/またはU’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hを表し;Wおよび/またはW’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、OH、-OR、-OCOR、-COOR、-OCOOR、-OCONRR’、N10およびC11が環に含まれる環状カルバメート、-NRCONRR’、-OCSNHR、N10およびC11が環に含まれる環状チオカルバメート、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO3-、-NRSOOR’、-NRR’、N10およびC11が環に含まれる環状アミン、-NROR’、-NRCOR’、-N3、-CN、Hal、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、が二重結合を表す場合には、UおよびU’は存在せず、Wおよび/またはW’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hを表すことを条件とし、R1、R2、R1’、R2’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、H、Hal、あるいはHal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、SOqRq=0、1または2を表し、または、R1とR2、および/またはR1’とR2’とがそれぞれ合わさって、二重結合=CH2または=CH-CH3を形成し、YおよびY’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hまたは-ORを表し、Mは、CHまたはNを表し;ALKおよびALK’は、C1-C6アルキレン基を示し、RおよびR’は、互いに独立して、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基またはアリール基を表し、L1は、単結合、または酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した-OCH2CH2i-基iは、2から40、好ましくは2から10の範囲、好ましくは3の整数を表す。、またはDを介してフェニル環またはピリジル環に接続した-D-C1-C6ALK-基Dは、-O-、-NH-または-NC1-C4アルキル-を表す。を表し、L2は、-C1-C6ALK-基、または-CH2CH2Oj-CH2CH2-基jは、1から40、好ましくは1から10の範囲、好ましくは2または3の整数を表す。、または-CH2CH2O-単位を介して窒素原子に接続した-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-基jは、1から40、好ましくは1から10の範囲、好ましくは2または3の整数を表し、Rは、HまたはC1-C4アルキル基を表す。を表し、Qは、単結合またはC=O基を表し、kは、0から40、好ましくは1から40、より好ましくは1から10の範囲の整数を表し、Gは、-OR基または-NRR’基を表し、RおよびR’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、N、OおよびSから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、C1-C4アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも1個の置換基で場合により置換されていてもよいC4-C10ヘテロシクロアルキル基を形成し、RCG1は、-SZa基または-C=O-ZbRb基を表し、Zaは、Ac、RaまたはSRaを表し、Raは、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、NO2、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表し、Zbは、単結合、-O-または-NH-を表し、Rbは、H、あるいはC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Zbは、単結合を表し、Rbは、Halを表し、但しL1が単結合を表す場合には、RCG1は-SZaを表すことを条件とする。さらに具体的には、これらは式IAまたはIBの化合物である。また、本発明は、i修飾剤を用いて場合により修飾した、結合剤の水溶液場合により緩衝化した水溶液と、式Iの化合物の溶液とを接触させ、放置して反応させ、ii次いで、場合により、工程iで生成した複合体を式Iの化合物および/または未反応の結合剤および/または生成し得る任意の凝集物から分離することとを含む、複合体を調製する方法に関する。式Iの化合物の化学基RCG1は、結合剤に存在する化学基RCG2に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、この化学基RCG2が、必要に応じて、修飾剤によって共有結合の生成により結合剤に式Iの化合物が接続するように、導入される。また、本発明は、上述の方法によって得られ得る複合体および複合体溶液に関する。また、本発明は、以下の式のダイマーのMのパラ位に共有結合する結合剤を調製するための、式Iの誘導体の使用に関する。化合物、複合体および複合体溶液を抗癌剤として使用し得る。また、本発明は、式P2の化合物に関し、式中、L1、L2、Q、k、ALK、ALK’およびGは、すでに定義したとおりであり、LGおよびLG’は、脱離基を表し、X’はRCG1を表す。また、本発明は、本発明の化合物と結合剤とを反応させた後、以下の式のダイマーがMのパラ位において共有結合した結合剤にも関する。本発明は、式Iの化合物に関し、式中、は、単結合または二重結合を表し、但しが単結合を表す場合には、Uおよび/またはU’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hを表し;Wおよび/またはW’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、OH、-OR、-OCOR、-COOR、-OCOOR、-OCONRR’、N10およびC11が環に含まれる環状カルバメート、-NRCONRR’、-OCSNHR、N10およびC11が環に含まれる環状チオカルバメート、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO3-、-NRSOOR’、-NRR’、N10およびC11が環に含まれる環状アミン、-NROR’、-NRCOR’、-N3、-CN、Hal、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表し、が二重結合を表す場合には、UおよびU’は存在せず、Wおよび/またはW’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hを表すことを条件とし、R1、R2、R1’、R2’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、H、Hal、あるいはHal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、SOqRq=0、1または2を表し、または、R1とR2、および/またはR1’とR2’とがそれぞれ合わさって、二重結合=CH2または=CH-CH3を形成し、YおよびY’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hまたは-ORを表し、Mは、CHまたはNを表し;ALKおよびALK’は、C1-C6アルキレン基を示し、RおよびR’は、互いに独立して、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基またはアリール基を表し、L1は、単結合、または酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した-OCH2CH2i-基iは、2から40、好ましくは2から10の範囲、好ましくは3の整数を表す。、またはDを介してフェニル環またはピリジル環に接続した-D-C1-C6ALK-基Dは、-O-、-NH-または-NC1-C4アルキル-を表す。を表し、L2は、-C1-C6ALK-基、または-CH2CH2Oj-CH2CH2-基jは、1から40、好ましくは1から10の範囲、好ましくは2または3の整数を表す。、または-CH2CH2O-単位を介して窒素原子に接続した-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-基jは、1から40、好ましくは1から10の範囲、好ましくは2または3の整数を表し、Rは、HまたはC1-C4アルキル基を表す。を表し、Qは、単結合またはC=O基を表し、kは、0から40、好ましくは1から40、より好ましくは1から10の範囲の整数を表し、Gは、-OR基または-NRR’基を表し、RおよびR’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、N、OおよびSから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、C1-C4アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも1個の置換基で場合により置換されていてもよいC4-C10ヘテロシクロアルキル基を形成し、RCG1は、-SZa基または-C=O-ZbRb基を表し、Zaは、Ac、RaまたはSRaを表し、Raは、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、NO2、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表し、Zbは、単結合、-O-または-NH-を表し、Rbは、H、あるいはC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Zbは、単結合を表し、Rbは、Halを表し、但しL1が単結合を表す場合には、RCG1は-SZaを表すことを条件とする。従って、式Iの化合物は、以下の形態で存在していてもよい。また、本発明は、式I’の化合物に関し、式中、は、単結合または二重結合を表し、但しが単結合を表す場合には、は、単結合を表し、Uおよび/またはU’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hを表し;Wおよび/またはW’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、OH、-OR、-OCOR、-COOR、-OCOOR、-OCONRR’、N10およびC11が環に含まれる環状カルバメート、-NRCONRR’、-OCSNHR、N10およびC11が環に含まれる環状チオカルバメート、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO3-、-NRSOOR’、-NRR’、N10およびC11が環に含まれる環状アミン、-NROR’、-NRCOR’、-N3、-CN、Hal、トリアルキルホスホニウム基またはトリアリールホスホニウム基を表すことを条件とし、R1、R2、R1’、R2’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、H、Hal、あるいはHal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、SOqRq=0、1または2を表し、または、R1とR2、および/またはR1’とR2’とがそれぞれ合わさって、二重結合=CH2または=CH-CH3を形成し、YおよびY’は、同じであっても異なっていてもよく、互いに独立して、Hまたは-ORを表し、Mは、CHまたはNを表し;ALKおよびALK’は、C1-C6アルキレン基を示し、RおよびR’は、互いに独立して、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基またはアリール基を表し、L1は、単結合、または酸素原子を介してフェニル環またはピリジル環に接続した-OCH2CH2i-基iは、2から40、好ましくは2から10の範囲の整数を表す。、またはDを介してフェニル環またはピリジル環に接続した-D-C1-C6ALK-基Dは、-O-、-NH-または-NC1-C4アルキル-を表す。を表し、L2は、-C1-C6ALK-基、または-CH2CH2Oj-CH2CH2-jは、1から40、好ましくは1から10の範囲の整数を表す。、または-CH2CH2O-単位を介して窒素原子に接続した-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-基jは、1から40、好ましくは1から10の範囲の整数を表し、Rは、HまたはC1-C4アルキル基を表す。を表し、Qは、単結合またはC=O基を表し、kは、0から40、好ましくは1から40、より好ましくは1から10の範囲の整数を表し、Gは、-OR基または-NRR’基を表し、RおよびR’は、すでに定義されたとおりであるか、またはこれらが結合している窒素原子とともに、N、OおよびSから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、C1-C4アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも1個の置換基で場合により置換されていてもよいC4-C10ヘテロシクロアルキル基を形成し、RCG1は、-SZa基または-C=O-ZbRb基を表し、Zaは、Ac、RaまたはSRaを表し、Raは、H、あるいは、Hal、CN、NRR’、CF3、OR、NO2、アリール基またはヘテロアリール基から選択される1個以上の置換基で場合により置換されたC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表し、Zbは、単結合、-O-または-NH-を表し、Rbは、H、あるいはC1-C6アルキル基、C3-C8シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表すか、または、Zbは、単結合を表し、Rbは、Halを表し、但しL1が単結合を表す場合には、RCG1は-SZaを表すことを条件とする。用語Lは、によって定義されるリンカーを示す。さらに具体的には、L1が単結合を表す場合、L2は、-CH2CH2Oj-CH2CH2-または-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-を表し、および/またはkは2ではない。さらに具体的には、MがNを表す場合、-D-C1-C6ALK-は、望ましくは-O-C1-C6ALK-を表す。さらに具体的には、フェニル核またはピリジル核に接続するALKおよびALK’という2個の基がメチレン基を示す。さらに具体的には、Dは、-O-、-NH-または-NMe-を表す。上の式IおよびI’において、フェニル核またはピリジル核に接続するそれぞれのアルキレン基従って、例えば、ALKおよびALK’という2個の基は、同じであってもよく、異なっていてもよく、別の例によれば、-D-C1-C6ALK-のALK基は、フェニル核またはピリジル核に接続するALK基と同じであってもよく、異なっていてもよい。ALKは、例えば、-CH2-、-CH2CH2-、CH2CMe2-、-CH2CH2CH2-のいずれかから選択されてもよい。YおよびY’は、さらに具体的には、C1-C4アルコキシ基、特にメトキシ基を表す。RおよびR’は、さらに具体的には、互いに独立して、HまたはC1-C6アルキル基を表していてもよい。ある具体的な実施形態によれば、フェニル核またはピリジル核に接続するU=U’および/またはW=W’および/またはR1=R1’および/またはR2=R2’および/またはY=Y’および/またはALKおよびALK’という2個の基が同じである対称形ダイマー、調製するのが簡単である。。さらに具体的には、WとW’は同じであるか、または異なっており、OH、OMe、OEt、NHCONH2、SMeを表す。Rは、HまたはC1-C4アルキル基、特にMeを表していてもよい。Mは、さらに具体的には、窒素原子Nを表す。さらに具体的には、R1とR2、および/またはR1’とR2’とがそれぞれ合わさって、二重結合=CH2または=CH-CH3、さらに具体的には、=CH-CH3を形成する。Gは、-OR基、さらに具体的には、-OH基または-OC1-C6アルキル基、特に-OMeを表していてもよい。また、Gは、-NRR’基を表していてもよく、ここで、RおよびR’は、互いに独立して、HまたはC1-C6アルキル基を表す。さらに具体的には、従って、Gは、-NH2基、-NHC1-C6アルキル基または-NC1-C6アルキル2基、特に、-NCH32基を表していてもよい。また、Gは、-NRR’基を表していてもよく、ここで、RおよびR’は、これらが結合している窒素原子とともに、N、OおよびSから選択される別のヘテロ原子を環に含んでいてもよく、C1-C4アルキル基、ハロゲン原子およびヒドロキシル基から選択される少なくとも1個の置換基で場合により置換されていてもよいC4-C10ヘテロシクロアルキル基を形成する。ヘテロシクロアルキル基は、特に、ピペラジノ、N-メチルピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノおよびピロリジノから選択されてもよい。kは、0から40の範囲の整数を表す。kは、値0になってもよい窒素原子に接続するGが末端にあるPEG鎖はない。。本発明の化合物の中で、窒素原子に接続するGが末端にあり、kが1から40の範囲、望ましくは1から10、望ましくは1から5の範囲のPEG鎖を特記し得る。また、少なくとも1個のPEG鎖を含むもの、即ち、kが1から40、好ましくは1から10、望ましくは1から5の範囲であり、および/またはL1=-OCH2CH2i-および/またはL2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-または-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-であるものを特記し得る。例として与えられているものを含め、式IおよびI’の化合物は、塩基の形態、または医薬的に許容される酸との付加塩の形態で存在していてもよく、また、これらの塩基またはこれらの塩の水和物または溶媒和物の形態で存在していてもよい。さらに具体的には、式IAまたはIBの化合物を特記し得る。さらに、以下を区別する。L1=-D-C1-C6ALK-およびL2=-C1-C6ALK-の化合物である第1のサブグループ;L1=-OCH2CH2i-およびL2=-C1-C6ALK-の化合物である第2のサブグループ;L1=単結合およびL2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-の化合物である第3のサブグループ;L1=-D-C1-C6ALK-およびL2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-の化合物である第4のサブグループ;L1=-D-C1-C6ALK-およびL2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-の化合物である第5のサブグループ。また、以下の化合物群も特記し得る。L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=単結合、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-SZa;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=単結合、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-OCH2CH2i-、L2=-C1-C6ALK-、Q=CO、k=1-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=単結合、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=CO、k=1-10、G=OR、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=単結合、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb;L1=-D-C1-C6ALK-、L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-、Q=CO、k=0-10、G=NRR’、RCG1=-C=OZbRb。上に定義した化合物群において、iは、さらに具体的には、2から10の範囲の整数、特に3の整数を表し、jは、さらに具体的には、1から10の範囲の整数、特に、2または3の整数を表し、kは、さらに具体的には、0の整数を表すか、または1から5の範囲の整数を表す。表Iは、具体的なリンカーLと、これらに対応する化合物の例も記載する。この表のそれぞれの化合物は、M=CHベンゼンまたはM=Nピリジンの形態で存在していてもよい。M=Nの化合物は、水溶性が高い。この表では、例は、形態IAで与えられているが、形態IBで存在し得る。L、L1、L2、kおよびGは、表Iに記載されているもの、または例の中から選択されてもよい。記載されている化合物は、結合剤に存在する反応性化学基RCG2に対して反応性である反応性化学基RCG1を含む。RCG1とRCG2の反応によって、共有結合の生成による結合剤に対する式Iの化合物の接続が生じる。従って、式Iの化合物は、結合剤に対して複合体化することができる。RCG1は、以下のものを表す。iZaがHまたは-SRa基を表し、Raが、C1-C6アルキル基、C3-C7シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表す、反応性基-SZa;iiZbが、単結合、-O-または-NH-、さらに特定的には-O-を表し、Rbは、H、またはC1-C6アルキル基、C3-C7シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基またはC4-C10ヘテロシクロアルキル基を表す、反応性基-C=O-ZbRb。さらに具体的には、-SZaは、-SHまたは-SSC1-C6アルキル特に、-SSMe、または-SS-ヘテロアリール、特に、X1およびX2は、以下に定義される。を表していてもよい。さらに具体的には、-SZaは、-SHまたは-SSC1-C6アルキル、特に-SSMeを表していてもよい。さらに具体的には、-ZbRbは、-OH酸官能基、-OC1-C6アルキル、特に、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH=CH2エステル官能基を表していてもよく、または-ZbRbは、または基を表していてもよく、ここで、IGは、少なくとも1個の電子誘導基、例えば、-NO2または-Hal、特に-Fを表す。例えば、以下の基のいずれかであってもよい。別の種類の-C=OZbRb基は、以下である。反応性基-SHおよびは、良好な反応性を示す。さらに具体的には、-ZbRbは、-OH酸官能基、-OC1-C6アルキル、特に、-OCH3、-OCH2CH3を表していてもよく、または、-ZbRbは、を表していてもよい。さらに具体的には、RCG1は、例に記載されるいずれかから選択されてもよい。RCG2の例として、抗体表面に存在するリシン残基の側鎖に担持されるリシンのε-アミノ基、ヒンジ領域の糖基または鎖内ジスルフィド結合の還元による、システインのチオールを挙げてもよいGarnettM.C.etal.,AdvancedDrugDeliveryReviews2001,53,171-216。もっと最近では、他の手法、例えば、変異によるシステインの導入JunutulaJ.R.etal.,NatureBiotechnology2008,26,925-932;WO09026274または他の化学種を可能にする非天然アミノ酸の導入deGraafA.J.et.,BioconjugateChem.2009,PublicationDateWeb:February3,2009Review;DOI:10.1021/bc800294a;WO2006/069246およびChinJ.W.etal.,JACS2002,124,9026-9027ReCode登録商標技術による。が考慮されてきた。抗体とともに使用されるこれらの接続様式は、これらの構造の関数として既知の標的となるあらゆる薬剤に適用可能である。新しい反応性化学基RCG2を導入するように、標的となる薬剤を化学修飾することも可能である。従って、修飾剤を用いて抗体をどのように修飾するかは、当業者にはよく知られている特に、WO2005/077090の14ページを参照。修飾によって、複合体化反応を改良し、さまざまなRCG1基を使用することが可能になる。ジスルフィド基を導入するための修飾剤修飾剤は、式の活性化エステルNHSであってもよく、式中、Rは、C1-C6アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、C3-C7シクロアルキル基、C4-C10ヘテロシクロアルキル基を表し、例えば、ジチオピリジル反応性基RCG2を導入するように、N-ピリジルジチオプロピオネートSPDPまたはN-スクシンイミジルピリジルジチオブチラートSPDB、即ち、4-2-ピリジルジチオブタン酸のN-ヒドロキシスクシンイミジルエステルを使用することが可能でありBourdonM.A.etal.,Biochem.J.1978,173,723-737;US5208020を参照、次いで、ジスルフィド結合を含む複合体のために新しい-S-S-結合を生成するように、ピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーのリンカーに存在する-SH型の反応性化学基RCG1と反応させることができる実施例1を参照。N-ヒドロキシスクシンイミド基は、アミド結合を生成するように、抗体に存在するアミノ基と優先的に反応する。修飾剤の別の例は、WO2004/016801に式を有するものが記載されており、例えば、N-スクシンイミジル4-5-ニトロ-2-ピリジルジチオペンタノエートSNPP、またはWO2009/134976に記載される式を有するペグ化類似体、またはWO2009/134977に記載されている式を有するスルホン酸類似体を使用することが可能であり、式中、-X3、X4、X5、X6は、HまたはC1-C6アルキル基を表し、-X1およびX2は、-H、-CONX8X9、-NO2を表し、X8およびX9は、HまたはC1-C6アルキル基を表し、-X7は、-SO3-MまたはHを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、-aは0から4の範囲の整数を示し、bは、0から2000の範囲の整数、好ましくは、1から200の範囲の整数を示し;aおよびbは、それぞれ0から4、または0から2000の間のあらゆる値であってもよい。好ましくは、式の化合物の中で、a=1、X3=MeおよびX2=NO2およびX1=X4=X5=X6=X7=Hである。マレイミド基を導入するための修飾剤別の修飾剤は、の活性化エステルNHSであってもよく、式中、Rは、-CH2n-基、-CH2n-シクロヘキシル-基、-シクロヘキシル-CH2n-基を表し、nは、1から10の範囲の整数を表し、例えば、スクシンイミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートSMCCEP0306943による。、またはスルホ-SMCCスルホスクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートを使用することが可能である。あり得る他の例としては、例えば、N-スクシンイミジル3-マレイミドプロパノエート;例えば、N-スクシンイミジル6-3-マレイミドプロピオンアミドヘキサノエート;bは、0から2000、好ましくは1から200の範囲の整数であるbは、0から2000の間のあらゆる値であってもよい。。例えば、N-スクシンイミジル3-2-{2-[3-マレイミドプロピオニルアミノ]-エトキシ}エトキシプロパノエートまたはSMPEG2;例えば、マレイミドエチルN-スクシンイミジルサクシネート;例えば、N-スクシンイミジル4-4-マレイミドフェニルブタノン、または例えば、N-スクシンイミジル3-マレイミドベンゾエートが挙げられる。チオール基を導入するための修飾剤WO90/06774に記載されている修飾剤の別の例は、式を有し、式中、-Halは、ハロゲン原子を表し;-X10は、ハロゲン原子または-COOX14基、ニトロ、非置換またはハロゲン化C1-C8アルキル、非置換またはハロゲン化C1-C8アルコキシ、非置換またはハロゲン化C2-C8アルケニル、非置換またはハロゲン化C2-C8アルキニル、非置換C3-C8シクロアルキル、非置換アリール、またはアミノ、ハロゲン原子、非置換またはハロゲン化C1-C8アルキル基、非置換またはハロゲン化C1-C8アルコキシから選択される1から3個の置換基で置換されたアリールを表し;-X11、X12、X13基は、それぞれ独立して、水素原子を表すか、または、X10を表していてもよく;または、X10とX11とで、非置換か、または1から5個のC1-C4アルキル基で置換されたC2-C5アルキレン環を形成するか;または、X10およびX11と、X12とを合わせて、非置換か、または1から5個のC1-C4アルキル基で置換されたC1-C5アルキレン環を形成し、X14は、-HまたはC1-C8アルキル基であるか、またはX10=X11=X12=X13=Hである。好ましくは、Halは、塩素原子または臭素原子を表す。可能なX10-X13は、以下の表に掲げる。好ましいイミノチオランの例は、以下である。ハロアセトアミド基を導入するための修飾剤修飾剤の別の例は、スクシンイミジル-4-N-ヨードアセチルアミノベンゾエートSIABまたは類似化合物スクシンイミジル-N-ヨードアセテートSIAスクシンイミジル-N-ブロモアセテートSBA、またはスクシンイミジル-3-N-ブロモアセトアミドプロピオネートSBAPまたはWO2009/134976に記載の同様のペグ化化合物を含む。であり、bは、すでに記載したとおりである。図1および図2は、SPDPまたは上の好ましいイミノチオールを用いた結合剤のアミノ基の修飾を示す。従って、RCG1が-SHを表す場合には、結合剤にジスルフィドRCG2基-SSR、特にピリジルジスルフィド型の基を導入することが可能である。同様に、RCG1がジスルフィドを表す場合即ち、RCG1=-SZaであり、ZaがHではなく、例えば、Za=である。場合には、例えば、イミノチオランを用い、結合剤にチオール-SHRCG2基を導入することが可能である。また、対応する芳香族ジスルフィドを用いる反応によって、これらのチオール-SHRCG2基をジスルフィド-SSRRCG2基、特にピリジルジスルフィド型の基に修飾することも可能である。両者の場合において、RCG1とRCG2の反応によって生成する共有結合は、開裂可能なジスルフィド結合である。また、RCG1が-SHを表す場合には、マレイミドまたはハロアセトアミド型例えば、ブロモ-またはヨードアセトアミドのRCG2基を結合剤表面に導入することも可能である。この場合には、RCG1とRCG2の反応によって生成する共有結合は、開裂不可能なスルフィド結合である。従って、-SZa型の反応性化学基RCG1を含む式Iの誘導体存在下、結合剤は、RCG1が-SHを表す場合には、ジスルフィド化学基;RCG1が-SZaを表し、ZaがHではない場合には、チオール化学基;RCG1が-SHを表す場合には、マレイミド化学基またはハロアセトアミド化学基を含み、-C=O-ZbRb型の反応性化学基RCG1を含む式Iの誘導体存在下、式Iの誘導体が、結合剤のアミノ官能基、特に、抗体のリシンLys残基の側鎖に担持されるε-アミノ基と反応する。さらに具体的には、反応性化学基RCG1が-SH型である場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε-アミノ基が含まれる場合、後者は、以下の式の化合物から選択される修飾剤によって修飾され、式中、Rは、C1-C6アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、C3-C7シクロアルキル基、C4-C10ヘテロシクロアルキル基;以下の式のペグ化類似体または以下の式のスルホン酸類似体を表し、ここで、X3、X4、X5、X6は、HまたはC1-C6アルキル基を表し、X1およびX2は、-H、-CONX8X9、-NO2を表し、X8およびX9は、HまたはC1-C6アルキル基を表し、X7は、-SO3-MまたはHを表すか、または、四級アンモニウム基を表し、aは0から4の範囲の整数を示し、bは、0から2000の範囲の整数を示すか、または、スクシンイミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート;スルホスクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート;Rは、-CH2n-基、-CH2n-シクロヘキシル-基、-シクロへキシル-CH2n-基を表し、nは1から10の範囲の整数である。bは0から2000の整数である。スクシンイミジル-N-ブロモアセテート;スクシンイミジル-3-N-ブロモアセトアミドプロピオネート;bは0から2000の整数である。から選択される。反応性化学基RCG1が-SZa型であり、ZaがHではない場合、および結合剤にアミン官能基、特に、抗体のリシン残基の側鎖に担持されるε-アミノ基、が含まれる場合、後者は、すでに記載されている以下の式の修飾剤によって修飾される。反応性化学基RCG1が-SH型である場合、および結合剤にチオール官能基、特に、アミノ官能基を担持する結合剤の変異によってまたは化学修飾することによってシステインを導入した後に、担持する場合、結合剤は、チオール官能基が、ジスルフィド官能基に変換される。例えば、以下の式の化合物式中、X1およびX2は、-H、-CONX8X9または-NO2を表し、X8およびX9は、HまたはC1-C6アルキル基を表す。から選択される修飾剤を使用することが可能である。以下の表IIは、すでに述べた方法に従った、結合剤のアミノ基の修飾を示す。単純化のために、以下の省略語を使用する。従って、本発明の化合物を、式のダイマーがMのパラ位において共有結合した結合剤の調製に使用し得る。さらに具体的には、結合剤は抗体である。さらに具体的には、ダイマーは、式を有する。式Iの化合物を調製する方法式Iの化合物を、スキーム1に従って調製し得る。化合物P1,P’1およびP2を一緒に反応させてP3を得る。LGおよびLG’は、脱離基を示す。脱離基との用語は、P2とP1またはP’1との不均一反応において、ALKとLGまたはLG’とを接続する共有結合の電子の非共有電子対を取り去ったまま残る原子または原子群を示す。脱離基は、さらに具体的には、ハロゲン原子特に、塩素または臭素、メシレート基、トシレート基またはノシレート基、または-OPPh3から選択される。中間体化合物P2も、本発明の一部分を形成する。RCG1を含む式Iの化合物の調製において、X’は、このRCG1基を表していてもよく、この場合、P3は、式Iの化合物を表す。また、X’は、-SZa型のRCG1基の前駆体または-C=OZbRbであってもよく、この場合には、1つ以上の化学反応を用いることによって、X’をRCG1に変換することが必要である。ある改変例によれば、X’→RCG1の変換は、P2上で行われてもよい。従って、Za=Hの化合物P3または改変例P2の化合物の場合、対応するリンカーの前駆体を用い、Za=-SC1-C6アルキルであるX’=-SZa基を導入し、次いで、ジスルフィド官能基-SSC1-C6アルキルをチオール官能基-SHに還元することが好ましい。このために、例えば、トリス2-カルボキシエチルホスフィンを使用し得る。この観点で、BurnsJ.A.et.,J.Org.Chem.1991,568,2648-2650を参照。-SSC1-C6アルキル→-SHの変換は、特に、表Iの化合物1から19に適用し得る。RCG1が-SH基を表すX’→RCG1の変換によってP3から式Iの化合物を調製する場合、X’が、イミン官能基に対するチオール官能基の付加物に対応する、Za=である-SZa基を表す化合物P3も生成し得る。同様に、RCG1=-C=OZbRbである基を含む式Iの化合物を製造する場合、1つ以上の化学反応を用いることによって、X’=-C=OZbRbである基をRCG1=-C=OZbRbである基に変換することが可能である。特に、-C=OZbRbがである場合、化合物P3または改変例P2の化合物にX’基=-C=OO-C1-C4アルキルまたは-C=OO-アリルを導入し、次いで、-C=OOH基に変換し、最後に、N-N’-ジスクシンイミジルカーボネートまたはNHSと反応させることが可能である。-COOアルキル/アリルから-COOHへの変換は、アミン捕捉剤、例えば、モルホリン存在下、塩基例えば、LiOHまたはパラジウム触媒例えば、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウムを用いる処理によって行われてもよい。N,N’-ジスクシンイミジルとの反応は、塩基例えば、DIPEA存在下で行われ、NHSとの反応は、カップリング剤例えば、DCC存在下で行われる。同様に、-C=OZbRb=である場合には、-C=OZbRb=-COOH基を導入し、次いで、N,N’-カルボニルジイミダゾールと反応させることが可能であるJACS1958,80,4423;JACS1960,82,4596。このX’=-C=OZbRb→RCG1=-C=OZbRbの変換は、特に、表Iの実施例20から36の化合物に適用し得る。化合物P1およびP’1は、特許出願WO00/12508、WO00/12507、WO2005/040170、WO2005/085260、WO07085930またはWO2009/016516に記載されているか、または全合成によって利用可能であるMoriM.etal.,Tetrahedron,1986,42,3793-3806。P1および/またはP’1が、式のトマイマイシンを表す場合、後者は、FR1516743の教示に従ってStreptomycescroceus株の助けを借りて、または全合成によって調製されてもよいJ.Antibiotics1983,XXXVI3,276-282Z.TozukaStudiesontomaymycin.TotalsynthesesoftheantitumorantibioticsE-andZ-tomaymycinsを参照。市販の化合物P1/P’1も存在する。W/W’基を導入するために、イミン官能基=二重結合を種々の化合物HW/HW’例えば、H2O、アルコールROHに付加することが可能である。Q=単結合の場合P2の調製i.極性溶媒例えば、DMFまたはTHF中、塩基例えば、K2CO3存在下でのP4の二級アミン官能基-NH-と、式LG-CH2CH2Ok-CH2CH2-GLG=脱離基の試薬との求核反応。式HO-CH2CH2Ok-CH2CH2-Gの化合物から、当業者に既知の化学反応を用いて-OH基を脱離基LGと交換することによって、LG-CH2CH2Ok-CH2CH2-G試薬が得られる。例えば、LGがメシレート基を表す場合には、三級アミン例えば、TEAのような塩基存在下、メタンスルホニルクロリドが使用される。LGがIを表す場合には、例えば、D.Marquisetal.J.Org.Chem.1995,24,7984-96に従って、ヨウ化ナトリウムを用い、メシレートをIと置換する。式HOCH2CH2Ok-CH2CH2OCH3のPEG-アルコールは市販されている例えば、AmericancompanyQuantaBioDesign,Ltd.のカタログを参照。RがMeではないHOCH2CH2Ok-CH2CH2ORである他のPEG-アルコールは、市販されており、または、HOCH2CH2Ok-CH2CH2OHから、当業者に既知の化学反応を用いて入手可能である。同様に、G=NRR’であり、k≧1である特定の化合物は市販されており、例えば、である。ii.LGおよびLG’の導入。メシレート基の場合には、三級アミン例えば、TEAのような塩基存在下、MSCが使用される。Q=-C=Oの場合P2の調製i.P4と、式T-C=O-CH2CH2Ok-CH2CH2-Gのカルボン酸誘導体とのアミド化反応。カルボン酸誘導体は、ハロゲン化アシルT=-Halであってもよい。ある改変例によれば、活性化エステル例えば、T=-ONHSが使用されるか、または、カップリング剤存在下、カルボン酸T=-OHが使用される。式HOC=O-CH2CH2Ok-CH2CH2ORのPEG-酸を、J.Huskens,J.A.Peters,H.vanBekkum,Tetrahedron1993,15,3149-64に従って、式HO-CH2CH2Ok-1-CH2CH2ORの対応するPEG-アルコールk=1から11のものが市販されている。から、アクリル酸ナトリウムに加えることによって調製し得る。GがNRR’基であり、k≧1である場合も、同様に、式H-OCH2CH2k-1-CH2CH2NRR’の対応する化合物から出発する。同様に、HOC=O-CH2CH2-NRR’k=0の化合物は市販されている。ii.LGおよびLG’の導入。メシレート基の場合には、三級アミン例えば、TEAのような塩基存在下、MSCが使用される。P4の調製X’=-C=O-ZbRbの場合i.保護基PGの導入。ノシレート基の場合には、三級アミン例えば、TEAまたはピリジンのような塩基存在下、2-ニトロベンゼンスルホニルクロリドが使用される。ii.PG基およびPG’基の脱保護。例えば、PG基およびPG’基がTBDMSの場合、塩酸またはTFA存在下。ある改変例によれば、ALK=ALK’=-CH2-の場合、P5は、を表していてもよい。次いで、脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基を-CH2OHに還元する工程と置き換えられる。このために、WO2007/085930の62-63ページに与えられている還元条件を適用し得る。後で記載するとおり、ジエステルを用い、次いで、還元を適用することからなるこの改変例を他のP5まで一般化し得る。さらに、エステル官能基の還元は、P4上で行われてもよいが、場合により、ある改変例によれば、P5上でも行われてもよい。iii.極性溶媒例えば、DMFまたはTHF中、塩基例えば、K2CO3存在下での保護されたアミン官能基-NHPGと、式LG-L2-C=O-ZbRbの試薬との求核反応。L2=C1-C6ALKの場合、式Br-C1-C6ALK-C=O-OMeのブロモ-アルキルエステルは市販されている。L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2-の場合、式HO-CH2CH2Oj-CH2CH2-C=OZbRbの対応するPEG-アルコールから出発し、LGを導入し得る。このような化合物は、市販されており、または、J.Huskens,J.A.Peters,H.vanBekkum,Tetrahedron1993,15,3149-64に従って、式HO-CH2CH2Oj-Hの対応するPEG-ジオールj=1から11まで市販されている。から、アクリル酸ナトリウムに加えることによって得てもよい。iv.PG基の脱保護。例えば、PGがノシレート基の場合、チオフェノールおよび塩基例えば、炭酸セシウム存在下。X’=-SZaの場合L2=C1-C6ALKの場合i.PG基およびPG’基がTBDMSである場合、好ましくは、酸性媒体中、例えば、塩酸またはTFA存在下での保護基PGおよびPG’の脱保護。ある改変例によれば、ALK=ALK’=-CH2-の場合、P5は、を表していてもよい。次いで、アルコール官能基の脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基の-CH2OH官能基への還元反応、次いで、アミン官能基の脱保護工程と置き換えられる。このために、WO2007/085930の62-63ページに与えられている還元条件を適用し得る。ii.式HC=O-ALK-SZaのアルデヒドを用いた還元的アミノ化iii.A.F.Abdel-Magidetal.,J.Org.Chem.1996,61,3849-62に従って、還元剤例えば、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを用い、好ましくは酢酸中、中間体アミンを系中で還元する。L2=-CH2CH2Oj-CH2CH2NR-ALK-の場合i.保護基PGの導入。ノシレート基の場合には、三級アミン例えば、TEAまたはピリジンのような塩基存在下、2-ニトロベンゼンスルホニルクロリドが使用される。ii.PG基およびPG’基の脱保護。例えば、PG基およびPG’基がTBDMSの場合、塩酸またはTFA存在下。ある改変例によれば、ALK=ALK’=-CH2-の場合、P5は、を表していてもよい。次いで、脱保護工程は、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用い、エステル官能基を-CH2OH官能基に還元する工程と置き換えられる。このために、WO2007/085930の62-63ページに与えられている還元条件を適用し得る。iii.極性溶媒例えば、DMFまたはTHF中、塩基例えば、K2CO3存在下での保護されたアミン官能基-NHPGと、式LG-CH2CH2Oj-CH2CH2N3の試薬との求核反応。WO07/085930に従って、式HO-CH2CH2Oj1-Hの対応するPEG-ジオールj=0から10まで市販されている。から出発して、このような化合物を得てもよい。iv.例えば、Staudinger反応に従って、トリフェニルホスフィンおよび水存在下、アジド基の還元。v.式HC=O-ALK-SZaのアルデヒドを用いた還元的アミノ化;vi.A.F.Abdel-Magidetal.,J.Org.Chem.1996,61,3849-62に従って、還元剤例えば、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを用い、好ましくは酢酸中、中間体アミンを系中で還元する。vii.二級アミン官能基のアルキル化viii.PG基の脱保護。例えば、PGがノシレート基の場合、例えば、チオフェノールおよび塩基例えば、炭酸セシウム存在下。P5の調製L1=-D-C1-C6ALK-、D=OまたはNHの場合i.極性溶媒例えば、DMFまたはTHF中、塩基例えば、K2CO3存在下での官能基-DHと、式BrC1-C6ALK-NHbocのboc保護されたブロモ-アミンとの求核反応例えば、WO07085930の63ページの条件を参照。ii.好ましくは、酸性媒体中、例えば、塩酸またはTFA存在下でのアミンの選択的脱保護。選択的脱保護を行うことができない場合、例えば、PG基およびPG’基がTBDMSである場合には、アルコールの選択的な再保護が必要である。ある改変例によれば、ALK=ALK’=-CH2-の場合には、式の化合物P5を得るように、式のジエステルを用いたブロモ-アミンの求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でP4の調製に使用する。L1=-NC1-C4アルキル-C1-C6ALK-の場合i.極性溶媒例えば、DMFまたはTHF中、塩基例えば、K2CO3存在下での官能基-NH-と、式R-Halのハロゲン化アルキルR=C1-C4アルキルとの求核反応。ある改変例によれば、ALK=ALK’=-CH2-の場合、式の化合物P5を得るように、式のジエステルを用いたハロゲン化アルキルの求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でP4の調製に使用する。L1=-OCH2CH2i-の場合i.極性溶媒例えば、DMFまたはTHF中、塩基例えば、K2CO3存在下での、-OH官能基の1つその他の2つは、保護基を示すPGで保護されている。と、離核性基LG例えば、Halまたはメシレートを含む式LG-CH2CH2-OCH2CH2i-1-N3のアジド-PEG試薬との求核反応例えば、WO07085930の63ページの条件を参照。ii.例えば、トリフェニルホスフィンを用い、極性溶媒例えば、THF中、アジド基の還元。ある改変例によれば、ALK=ALK’=-CH2-の場合、式の化合物P5を得るように、式のヒドロキシ-ジエステルを用いたアジド-PEG試薬の求核置換を行うことが可能であり、これを得られたままの形態でP4の調製に使用する。L1=単結合の場合i.アルコール基の保護式のハロ-ジオールから、P5を得てもよい。ハロ-ジオールおよび対応する保護されたジオールの例は、WO2009/016516の48ページのスキーム1に記載されているスキーム1の化合物2および3。保護されたジオールの2つの例は、CASNos.181225-40-1および181225-41-2のジオールである。対応する二酸またはジエステル化合物、例えば、CASNo.193010-40-1の還元によって、ハロ-ジオールを得てもよい。また、ピリジンM=Nの場合には、LiebigsAnnalenderChemie1991,10,987-988またはTetrahedron2005,617,1755-1763スキーム1の化合物3を参照。当業者は、特定のリンカーL1およびL2について与えられている以下に記載する実施例の操作条件から着想を得ると思われ、これらのリンカーを他のリンカーL1およびL2に応用することができる。複合体を調製する方法複合体は、i修飾剤を用いて場合により修飾した、結合剤の水溶液場合により緩衝化した水溶液と、式Iの化合物の溶液とを接触させ、放置して反応させ、ii次いで、場合により、工程iで生成した複合体を式Iの化合物および/または未反応の結合剤および/または生成し得る任意の凝集物から分離することからなる、方法によって得られる。式Iの化合物の化学基RCG1は、結合剤に存在する化学基RCG2に対して、特に抗体に存在するアミノ基に対して反応性であり、この化学基RCG2が、必要に応じて、修飾剤によって共有結合の生成を介して結合剤に式Iの化合物が接続するように、導入される。ある改変例によれば、工程iiにおいて、工程iで作られた複合体を、未反応の結合剤および溶液中に存在し得る任意の凝集物から分離する。別の改変例によれば、工程iiにおいて、工程iから得た複合体を、式Iの未反応の化合物および生成し得る凝集物、および溶液中に残る任意の未反応結合剤とからのみ分離する。結合剤の水溶液は、少なくとも1種類のバッファー例えば、リン酸カリウムまたはN-2-ヒドロキシエチルピペラジン-N’-2-エタンスルホン酸HEPESバッファーで緩衝化されていてもよい。バッファーは、結合剤の性質によって変わる。式Iの化合物を極性有機溶媒例えば、DMSOまたはDMAに溶解する。反応は、一般的に、20°Cから40°Cの温度で行われる。反応時間は、1から24時間の範囲であってもよい。結合剤と式Iの化合物との反応は、反応の進行を決定するように、屈折率検出器および/または紫外線検出器を備えるSECによってモニタリングされてもよい。架橋度が十分ではない場合、反応物を長い時間放置してもよく、および/または式Iの化合物を加えてもよい。複合体化に使用可能な特定の条件に関するさらなる詳細について、実施例の章に与えられている一般的な方法を参照し得る。当業者は、工程iiの分離のために、種々のクロマトグラフィー技術を自由に使用し、例えば、立体排除クロマトグラフィーSECによって、吸着クロマトグラフィー例えば、イオン交換、IECによって、疎水性相互作用クロマトグラフィーHICによって、アフィニティクロマトグラフィーによって、セラミックヒドロキシアパタイトのような混合支持体のクロマトグラフィーによって、またはHPLCによって、複合体を精製し得る。透析または血液透析濾過による精製を用いてもよい。凝集物との用語は、2つ以上の結合剤の間で生成し得る会合を意味し、結合剤は、複合体化によって修飾される可能性がある。凝集物は、溶液中の高濃度の結合剤、溶液のpH、高い剪断力、架橋ダイマーの数およびこの疎水性、温度のような多くのパラメータの影響を受けて生成する可能性がありJMembraneSci.2008,318,311-316の緒言に引用されている参考文献を参照、これらのパラメータの一部の影響は、時折、正確に説明されていない。タンパク質または抗体の場合、AAPSJournal,ProteinAggregationandBioprocessing2006,83,E572-E579を参照し得る。凝集物の含有量は、SECのような既知の技術によって決定されてもよいこの観点で、AnalyticalBiochemistry1993,2122,469-480を参照。工程iまたはiiの後、複合体溶液に対し、超濾過および/または血液透析濾過の工程iiiを行ってもよい。これらの工程の後、このようにして水溶液中の複合体を得る。抗体抗体この観点で、Janewayetal.Immunobiology,5thedition,2001,GarlandPublishing,NewYorkを参照は、特許出願WO04043344、WO08010101、WO08047242、WO05009369号抗CA6に特に記載されているものから選択されてもよい。抗体は、特に、モノクローナル、ポリクローナル、または多重特異的であってもよい。また、抗体フラグメントであってもよい。また、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であってもよい。複合体複合体は、一般的に、結合剤に接続した約1から10のピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーを含むこれは、架橋度または薬物対抗体比つまりDARである。。この数は、結合剤およびダイマーの性質の関数として変動し、また、複合体化に用いられる操作条件例えば、結合剤に対するダイマーの当量数、反応時間、溶媒および共溶媒の性質の関数としても変動する。結合剤とダイマーを接触させると、異なるDARによって互いに個々に識別される幾つかの複合体と、おそらく未反応の結合剤不完全な反応の場合と、おそらく凝集物とを含む混合物が得られる。DARは、例えば、UV分光法によって最終的な溶液で決定されるため、平均DARに対応する。結合剤が抗体である場合、UV分光法が、DARを決定するために用いられる方法であってもよい。この方法は、AntonyS.Dimitroved,LLC,2009,TherapeuticAntibodyandProtocols,vol.525,445,SpringerScienceに提示されている方法から着想を得ている。この方法は、分離工程iiの後の複合体溶液の吸光度をWL1およびWL2と呼ばれる2種類の波長で測定することからなる。複合体化する前のピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーの覆われていない抗体の以下に示すモル吸光係数を使用する。複合体溶液のWL1およびWL2での吸光度AWL1およびAWL2は、SECスペクトルのいずれかの対応するピークを測定するDARSECを計算することができる。か、または標準的なUV分光計を用いることによって測定するDARUVを計算することができる。。吸光度は、以下の形式で表されてもよい。AWL1=CD×eDWL1CA×eAWL1AWL2=CD×eDWL2CA×eAWL2この式について、CDおよびCAは、それぞれ、溶液中のピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーに関連する複合体部分の濃度および抗体に関連する複合体部分の濃度を示す。eDWL1およびeDWL2は、それぞれ、複合体化前のピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーの波長WL1およびWL2でのモル吸光係数を示す。eAWL1およびeAWL2は、それぞれ、覆われていない抗体の2種類の波長WL1およびWL2でのモル吸光係数を示す。覆われていない抗体との用語は、ピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーに接続していない抗体即ち、複合体化工程の前の抗体を意味する。これらの2つの式の解は、以下のように導かれる。cD=[eAWL1×AWL2-eAWL2×AWL1]/[eDWL2×eAWL1-eAWL2×eDWL1]cA=[AWL1-cD×eDWL1]/eAWL1ここで、平均DARは、cD/cAに対応している。ピロロ[1,4]ベンゾジアゼピンダイマーの場合、考慮される2つの波長は、WL1=280nmおよびWL2=320nmである。平均DARは、好ましくは、1から10、好ましくは1.5から7である。複合体を抗癌剤として使用し得る。結合剤が存在しているため、複合体は、健康な細胞よりも腫瘍細胞に対して非常に選択的になる。これによって、抗癌活性を有する式Iの化合物を、これらの腫瘍細胞に近い環境へと向かわせるか、または細胞の中に直接向かわせることができるこの観点で、癌処理におけるモノクローナル抗体複合体の使用を記載する以下の刊行物を参照:Antibody-drugconjugatesforcancertherapyCarterP.J.etal.,CancerJ.2008,14,154-169;Targetedcancertherapy:conferringspecificitytocytotoxicdrugsChariR.,Acc.Chem.Res.2008,41,98-107。固形癌または液体癌を治療することが可能である。複合体を緩衝化した水溶液の形態で、一般的に1から10mg/mlの濃度で配合する。この溶液をそのまま灌流形態で注入してもよく、または再び希釈して灌流溶液を作成し得る。方法A:高速液体クロマトグラフィー-質量分析法LMSC陽および/または陰エレクトロスプレーイオン化モードES/-で、WatersUPLC-SQD機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件:カラム:ACQUITYBEHC18-1.7μm-2.1×50mm;溶媒:A:H2O0.1ギ酸B:CH3CN0.1ギ酸;カラム温度:50°C;流速:1ml/分;勾配2分:0.8分でBが5から50;1.2分:B100;1.85分:B100;1.95:B5。方法B:高速液体クロマトグラフィー-質量分析法LMSC陽および/または陰エレクトロスプレーモードES/-で、U.V.DAD200<WL<400nm検出器を用い、WatersZQ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件:カラム:PhenomenexKinetexC18100A3×50mm、粒子直径2.6μm;溶媒:A:H2O0.1ギ酸B:CH3CN;カラム温度:50°C;流速:1ml/分;勾配6分:6Bで0.80分間;3.9分でBが6から100;4.80分:B100;5分:B6;6分:B6。方法C:高速液体クロマトグラフィー-質量分析法LMSC陽および/または陰エレクトロスプレーモードES/-で、U.V.DAD200<WL<400nm検出器を用い、WatersZQ機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件:カラム:PhenomenexKinetexC183×100mmカラム、粒子直径2.6μm;溶媒:A:H2O0.1ギ酸B:CH3CN;カラム温度:50°C;流速:0.8ml/分;勾配8.2分:4Bで0.15分間;6.85分でB6から100;7.1分:B100;7.4分:B4;8.2分:B4。方法D:複合体の脱グリコシル化および質量分析法HRMS脱グリコシル化は、グリコシダーゼを用いた酵素による消化技術である。500μlの複合体100μlのトリスHCl50mMバッファー10μlのグリコシダーゼ-F酵素凍結乾燥した酵素100単位/水100μlから出発して行う。混合物をボルテックスによって撹拌し、37°Cで一晩維持する。これで、脱グリコシル化したサンプルをHRMSで分析する準備ができた。状況に依存して、サンプルのHRMS分析を、あらかじめ脱グリコシル化をせずに行ってもよい。両方の場合に、陽エレクトロスプレーモードESで、WatersXevoQ-Tof機を用いて質量スペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件:AcquityUPLCWatersBEH300C42.1×150mmカラム、粒子直径1.7μm;溶媒:A:H2O0.1ギ酸:B:CH3CN0.1ギ酸;カラム温度70°C:流速0.5ml/分;勾配10分:B20で2分50秒;2分50秒でBが20から80;8分50秒:B80;8分55秒:B20;10分:B20。方法E:高速液体クロマトグラフィー-質量分析法LMSC陽および/または陰エレクトロスプレーイオン化モードES/-で、U.V.DAD210<WL<400nm検出器を用い、WatersUPLC-SQDラインでスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件:カラム:ACQUITYUPLCBEHC18-1.7μm-2.1×30mm;溶媒:A:H2O0.1ギ酸B:CH3CN0.1ギ酸;カラム温度:45°C;流速:0.6ml/分;勾配2分:1分でBが5から50;0.3分でBが50から100;1.45分:B100;0.3分でBが100から5;2分:B100。方法F:高速液体クロマトグラフィー-質量分析法LMSC陽および/または陰エレクトロスプレーモードES/-で、U.V.DAD200<WL<400nm検出器を用い、WatersZQラインでスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件:カラム:XSelectCSHWatersC183×75mm、粒子直径3.5μm;溶媒:A:H2O0.1ギ酸B:CH3CN0.1ギ酸;カラム温度:50°C;流速:0.8ml/分;勾配6分:B6を0.80分;3.9分でBが6から100;4.80分:B100;5分:B6;6分:B6。方法G:高速液体クロマトグラフィー-質量分析法LMSC陽および/または陰エレクトロスプレーイオン化モードES/-で、WatersUPLC-SQD機でスペクトルを得た。クロマトグラフィーの条件:カラム:ACQUITYBEHC18-1.7μm-2.1×50mm;溶媒:A:H2O0.1ギ酸B:CH3CN0.1ギ酸;カラム温度:50°C;流速:0.8ml/分;勾配2.5分:1.8分でBが5から100;2.40分:B100;2.45分:B100B;0.05分でBが100から5。抗体hu2H11WO2008010101の15ページでhu532H11としても知られ、アミノ酸配列番号24を有するVhを含む抗体である。またはhu532H11の直接的な突然変異生成によって得られる抗体hu2H11R35R74WO2011039721の20ページを参照。アミノ酸配列番号18を有するVhと、配列番号16を有するVlとを含む抗体である。を使用する。第1章:新規トマイマイシン誘導体[実施例1]1.1.4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン20mgの4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンを900μLのMeOHおよび400μLのDMFに溶解し、これに17.5mgのトリス2-カルボキシエチルホスフィン塩酸塩および15.8mgのNaHCO3の水370μL溶液を加える。得られた混合物を室温で1時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーInterchromPuriflashSilica15/35U2Gで9:1DCM/アセトニトリル混合物中、0から10MeOHの勾配を用いて精製する。望ましい生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。7mgの4-{2-[メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンをこのようにして得る:LC/MSA:tr=1.06分;[MH]:m/z941;[MH2OH]:m/z959。1.2.4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン30mgの4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンおよび65.5μLのジイソプロピルエチルアミンのDCM200μL溶液を-20°Cに冷却し、これに19.4μLのMSCを加える。20分間撹拌した後、混合物を加水分解し、有機相を水で洗浄し、次いで、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮する。得られた残渣36mgを400μLのDMFに溶解し、これを、39.6mgのK2CO3および15.8mgのKIとともに、26mgのトマイマイシンのDMF425μL溶液に加える。混合物を30°Cで12時間撹拌し、次いで、沈殿が生じるまで加水分解する。不溶性物質を焼結式漏斗による濾過によって除去し、DCMで洗浄し、有機相を合わせ、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF25-8gで、DCM中、0から10MeOHの勾配を用いて精製する。望ましい生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮し、1/1ジオキサン/水混合物に入れ、再び減圧下で濃縮する。23mgの4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンをこのようにして得る。1HNMR500MHz,クロロホルム-d:broadsignals:1.20to1.78m,12H;2.40s,3H;2.70to3.10m,10H;3.34m,4H;3.49to3.70m,8H;3.71s,3H;3.91m,2H;4.00s,6H;4.27m,4H;5.27m,4H;5.60m,2H;6.86s,2H;7.00m,2H;7.56s,2H;7.65d,J=4.4Hz,2H。LC/MSA:Tr=0.81分;[MH]:m/z987。1.3.4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン100mgの4-[2-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピルアミノ-エトキシ]-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンのDMF2mL溶液に、99mgの1-ヨード-2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エタンB.BenAroyaBarNir,J.F.KadlaCarbohydratePolymers,2009,76,60-67および54mgのK2CO3を加える。60°Cで12時間後、混合物に40mgの1-ヨード-2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エタンを加え、さらに55mgのK2CO3を加える。得られた混合物を80°Cでさらに24時間撹拌する。減圧下で濃縮する後、このようにして得た未精製生成物を、最小限の量のMeOHに溶解し、MegaBE-SCX,1GM6MLVarianに入れる。この相をMeOHで洗浄した後、目的生成物を2NアンモニアMeOH溶液で溶出させる。MeOH相を減圧下で濃縮し、次いで、再びMegaBE-SCX,2GM12MLVarianに同じプロトコルに従って入れる。メタノール/NH3相を減圧下で濃縮し、得られた残渣をシリカフラッシュクロマトグラフィーMerckSuperVarioFlash10gカラム,Si6015-40μmで、DCM中、0から10MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。30mgの4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンをこのようにして得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.27s,6H;2.40s,3H;2.75s,2H;2.80t,J=5.9Hz,2H;3.00t,J=5.9Hz,2H;3.23s,3H;3.40m,2H;3.47to3.55m,8H;4.12t,J=5.9Hz,2H;4.45d,J=5.9Hz,4H;5.30t,J=5.9Hz,2H;6.85s,2H。LC/MSA:tr=0.44分;[MH]:m/z479;[M-HHCO2H]-:m/z523。1.4.4-[2-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピルアミノ-エトキシ]-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン390mgの4-[2-アミノ-エトキシ]-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンWO07085930の101ページに記載されている4-2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-エトキシ-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンのboc基の脱保護後に調製された。のTHF2mL懸濁物に、270μlの2-メチルジチオ-イソブチルアルデヒドおよび730μLのチタンイソプロポキシドを加える。20分後、さらなる270μlの2-メチルジチオ-イソブチルアルデヒドおよび730μLのチタンイソプロポキシドを加え、混合物を室温で2時間撹拌する。次いで、混合物に6mLのエタノールを追加し、室温で20分間撹拌し、次いで、124mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加える。45分間撹拌した後、さらなる124mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加え、1時間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮し、EtOAcおよび水で希釈する。得られた沈殿を濾別し、1MHCl水溶液に溶解する。得られた水相を5M水酸化ナトリウム水溶液を用いて塩基性pHにし、DCNで3回抽出し、有機相を合わせ、減圧下で濃縮する。322mgの4-[2-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピルアミノ-エトキシ]-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンを得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.26s,6H;1.81broadm,1H;2.39s,3H;2.67broads,2H;2.94broadt,J=5.7Hz,2H;4.11t,J=5.7Hz,2H;4.45d,J=5.5Hz,4H;5.32t,J=5.5Hz,2H;6.85s,2H。LC/MSA:tr=0.24分;[MH]:m/z347。[実施例2]2.1.4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブタン酸28mgのエチル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブタノエートをTHF527μlおよび水61μlに溶解し、この溶液に、32μlの1M水酸化リチウム水溶液を加える。混合物を室温で1時間30分撹拌し、さらなる5μlの1M水酸化リチウム水溶液をこの混合物に加える。室温で1時間30分撹拌した後、800μlのリン酸カリウムバッファーpH=3を加えることによって、pHが3に近くなるまで混合物を酸性化し、次いで、DCMで5回抽出する。有機相を合わせ、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF10-4gで、DCM中、3から20MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。10.2mgの4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾ-ジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブタン酸を得る。LC/MSB:tr=3.08分;[MH]:m/z939。2.2.エチル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ1-エチル}-アミノ-ブタノエート50.4mgのS-2-エタ-E-イリデン-8-ヒドロキシ-7-メトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2.1-c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オンのDMF4ml溶液に、77mgのK2CO3、30.7mgのヨウ化カリウムおよび67mgのエチル4-[2-2,6-ビス-メタンスルホニルオキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブチレートを加える。混合物を30°Cで18時間加熱し、次いで、室温まで冷却し、0.45μm膜によって濾過し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF15-12gで、DCM中、0から10MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。51mgのエチル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]エチル}-アミノ-ブタノエートを得る。LC/MSB:tr=3.20分;[MH]:m/z967。2.3.エチル[2-2,6-ビス-メタンスルホニルオキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブチレート51mgのエチル4-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブタノエートのDCM5ml溶液をあらかじめ-25°Cに冷却しておき、これに110μlのジイソプロピルエチルアミンおよび34μlのMSCを加える。混合物を-15°Cで1時間撹拌し、次いで、5mlの水で洗浄する。水相を5mlのDCMで抽出する。有機相を合わせ、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮する。69mgのエチル4-[2-2,6-ビス-メタンスルホニルオキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブチレートを得る。LC/MSB:tr=2.87分;[MH]:m/z615。2.4.エチル4-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブタノエート180mgのエチル4-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-ブタノエートのアセトニトリル18ml溶液に、207mgの1-ヨード-2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エタンおよび192μLのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を80°Cで3日間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーMerckSuperVarioFlash15gカラム、Si6015-40μmで、DCM/MeOH/水混合物40/5/0.5を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。51mgのエチル4-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-ブタノエートを得る。LC/MSB:tr=0.70分;[MH]:m/z459。2.5.エチル4-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-ブタノエート390mgのエチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-ブタノエートのアセトニトリル10ml溶液に、アルゴン下、766mgの炭酸セシウムおよび160μLのチオフェノールを加える。混合物を室温で17時間撹拌し、次いで、空隙率4の焼結物を通して濾過する。ケーキをEtOAcを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮し、MegaBE-SCX,2GM12MLカートリッジVarianで精製し、MeOHを用いて洗浄し、2NアンモニアMeOH溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。183mgのエチル4-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-ブタノエートを得る。LC/MSB:tr=0.68分;[MH]:m/z313。2.6.エチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼン-スルホニル-アミノ]-ブタノエート767mgのN-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミドのDMF15ml溶液に、アルゴン下、344μlのエチル3-ブロモ-ブチレートおよび1.38gのK2CO3を加える。混合物を40°Cで約20時間撹拌し、次いで、空隙率4の焼結物を通して濾過する。ケーキをEtOAcを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮する。未精製生成物をシリカフラッシュクロマトグラフィーMerckSuperVarioPrep90gカラム,Si6015-40μmで、DCM中、0から10MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。395mgのエチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-ブタノエートを得る。LC/MSB:tr=2.72分;[MH]:m/z498;[MHCO2H-H]-:m/z542。2.7.N-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド1.3gのジエチル4-[2-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ-エトキシ]-ピリジン-2,6-ジカルボキシレートのエタノール200mL溶液に、315mgの水素化ホウ素ナトリウムおよび941mgのCaCl2を順に加える。混合物を室温で1時間30分撹拌し、次いで、この混合物に50mlの水を加える。エタノールを減圧下で除去し、得られた残渣に50mlの水を加え、水相をEtOAcで3回抽出する。有機相を合わせ、飽和NaCl溶液で洗浄し、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮する。1.06gのN-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミドを得る。LC/MSA:tr=0.57分;[MH]:m/z384。2.8.ジエチル4-[2-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミノ-エトキシ]-ピリジン-2,6-ジカルボキシレート957mgのジエチル4-2-アミノ-エトキシ-ピリジン-2,6-ジカルボキシレート一塩酸塩をDCM30mlおよびピリジン734μlに溶解し、この溶液をあらかじめ約5°Cに冷却し、これに798mgの2-ニトロベンゼンスルホニルクロリドを加える。混合物を室温まで加温し、2時間撹拌する。さらなる244μlのピリジンおよび665mgの2-ニトロベンゼンスルホニルクロリドをこれに加え、15時間撹拌を続ける。混合物を水25mlで洗浄し、水相を25mlのDCMで2回抽出する。有機相を合わせ、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーMerckEasyVarioPrep150gカラム、Si6015-40μmで、DCM中、0から10EtOAcの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。960mgのジエチル4-[2-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ-エトキシ]-ピリジン-2,6-ジカルボキシレートを得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.35t,J=7.2Hz,6H;3.41t,J=5.2Hz,2H;4.22t,J=5.2Hz,2H;4.39q,J=7.2Hz,4H;7.50s,2H;7.80m,2H;7.92m,1H;8.04m,2H;8.40m,1H。LC/MSC:tr=3.50分;[MH]:m/z468。2.9.ジエチル4-2-アミノ-エトキシ-ピリジン-2,6-ジカルボキシレート一塩酸塩2.64gのジエチル4-2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-エトキシ-ピリジン-2,6-ジカルボキシレートWO07085930の101ページに記載されている。のジオキサン27ml溶液に、20.7mlの4N塩酸ジオキサン溶液を加える。混合物を室温で約20時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。蒸発残渣を約70mlのジオキサンに取り、次いで、再び減圧下で濃縮する。この操作を3回繰り返す。混合物を50mlのtert-ブチルメチルエーテルに取り、得られた懸濁物を空隙率4の焼結物を通して濾過する。ケーキをtert-ブチルメチルエーテルを用いて洗浄し、減圧下、室温でデシケーター内で乾燥させる。2gのジエチル4-2-アミノ-エトキシ-ピリジン-2,6-ジカルボキシレート一塩酸塩を得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.35t,J=7.2Hz,6H;3.26m,2H;4.39q,J=7.2Hz,4H;4.45m,2H;7.77s,2H;8.16broadm,3H。LC/MSC:tr=2.39分;[MH]:m/z283。[実施例3]3.1.3-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパン酸30mgのメチル3-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエートをTHF576μlおよび水67μlに溶解し、この溶液に、35μlの1M水酸化リチウム水溶液を加える。混合物を室温で1時間30分撹拌し、次いで、4mlのDCMに取り、リン酸カリウムバッファーpH=3を加えることによって、pHが3に近くなるまで混合物を酸性化する。混合物をDCMで4回抽出し、有機相を合わせ、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF10-4gで、DCM中、10から20MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。13mgの3-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパン酸を得る。LC/MSB:tr=3.07分;[MH]:m/z925。3.2.メチル3-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシ]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエート84mgのS-2-エタ-E-イリデン-8-ヒドロキシ-7-メトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2.1-c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オンのDMF5ml溶液に、128mgのK2CO3、51mgのKIおよび110mgのメチル3-[2-2,6-ビス-メタンスルホニルオキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエートを加える。混合物を30°Cで18時間加熱し、次いで室温まで冷却し、0.45μm膜によって濾過し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF15-24gで、DCM中、0から10MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。33mgのメチル3-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエートを得る。LC/MSB:tr=3.21分;[MH]:m/z939。3.3.メチル3-[2-2,6-ビス-メタンスルホニルオキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエート80mgのメチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエートのDCM8ml溶液をあらかじめ-25°Cに冷却しておき、これに183μlのジイソプロピルエチルアミンおよび57μlのメタンスルホニルクロリドを加える。混合物を-15°Cで1時間撹拌し、次いで、5mlの水で洗浄する。水相を5mlのDCMで抽出する。有機相を合わせ、MgSO4脱水し、減圧下で濃縮する。110mgのメチル3-[2-2,6-ビス-メタンスルホニルオキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエートを得る。LC/MSB:tr=2.67分;[MH]:m/z587。3.4.メチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエート284mgのメチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-プロパノエートのアセトニトリル28ml溶液に、356mgの1-ヨード-2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エタン、330μlのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を80°Cで3日間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF25-40gで、DCM中、5から10MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。165mgのメチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-プロパノエートを得る。LC/MSB:tr=0.44分;[MH]:m/z431。3.5.メチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-プロパノエート155mgのメチル3-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロパノエートのアセトニトリル6ml溶液に、アルゴン下、325mgの炭酸セシウムおよび67μlのチオフェノールを加える。混合物を室温で4時間撹拌し、次いで、空隙率4の焼結物を通して濾過する。ケーキをEtOAcを用いて洗浄し、濾液を減圧下で濃縮し、MegaBE-SCX,2GM12MLカートリッジVarianで精製し、MeOHを用いて洗浄し、2NアンモニアMeOH溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。82mgのメチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-プロパノエートを得る。LC/MSB:tr=0.33分;[MH]:m/z285。3.6.メチル3-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロパノエート670mgのtert-ブチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-プロパノエートのDCM20ml溶液に、2mlのTFAを加える。混合物を室温で6時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、DCMに取り、再び減圧下で濃縮する。得られた残渣を10mlのMeOHに溶解し、これに、5°Cで、7mlの2Mトリメチルシリルジアゾメタンのヘキサン溶液を加える。混合物を5°Cで1時間30分撹拌し、次いで、200μlの酢酸を加える。混合物を水30mlおよびEtOAc30mlに入れる。水相を30mlのEtOAcで2回抽出する。有機相を合わせ、飽和NaCl溶液で洗浄し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF15-24gで、DCM中、0から10MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。155mgのメチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-プロパノエートを得る。LC/MSC:tr=2.56分;[MH]:m/z470。3.7.tert-ブチル3-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロパノエート0.8gのジエチル4-{2-[2-tert-ブトキシカルボニル-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-エトキシ}-ピリジン-2,6-ジカルボキシレートのエタノール80mL溶液に、152mgの水素化ホウ素ナトリウムおよび447mgのCaCl2を順に加える。混合物を室温で撹拌し、次いで、反応終了時に20mlの水を加える。減圧下でエタノールを除去し、得られた残渣に100mlの水を加え、水相をEtOAcで3回抽出する。有機相を合わせ、飽和NaCl溶液で洗浄し、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮する。670mgのtert-ブチル3-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロパノエートを得る。LC/MSC:tr=3分;[MH]:m/z512。3.8.ジエチル4-{2-[2-tert-ブトキシカルボニル-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-エトキシ}-ピリジン-2,6-ジカルボキシレート10.6gのtert-ブチル3-[2-メタンスルホニルオキシ-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロピオネートのDMF220ml溶液に、16.2gのK2CO3および5.6gのジエチル4-ヒドロキシ-ピリジン-2,6-ジカルボキシレートを加える。混合物を60°Cで20時間加熱し、次いで、減圧下で濃縮し、200mlの水および200mlのEtOAcに入れる。水相をEtOAcで2回抽出する。有機相を合わせ、飽和NaCl溶液で洗浄し、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーMerckEasyVarioPrep600gカラム、Si6015-40μmで、DCM中、0から20EtOAcの勾配によって精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。6.56gのジエチル4-{2-[2-tert-ブトキシカルボニル-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-エトキシ}-ピリジン-2,6-ジカルボキシレートを得る。LC/MSC:tr=4.14分;[MH]:m/z596。3.9.tert-ブチル3-[2-メタンスルホニルオキシ-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロピオネート9.2gのtert-ブチル3-[2-ヒドロキシ-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロピオネートのDCM92ml溶液に、8.1mlのジイソプロピルエチルアミンを加える。混合物を-5°Cまで冷却し、2.34mlのMSCのDCM10ml溶液を滴下する。室温まで加温した後、混合物を約2時間撹拌し、次いで、100mlの水を追加する。水相をDCMで2回抽出し、有機相を合わせ、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF40-240gで、DCM中、0から5の酢酸エチルの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。10.62gのtert-ブチル3-[2-メタンスルホニルオキシ-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロピオネートを得る。LC/MSC:tr=3.77分;[MNa]:m/z475。3.10tert-ブチル3-[2-ヒドロキシ-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロピオネート8.7gのN-2-ヒドロキシ-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミドSkerlj,R.T.;Nan,S.;Zhou,Y.;Bridger,G.J.TetrahedronLett.2002437569-7571のDMF87ml溶液に、アルゴン下、8.8mlのtert-ブチル3-ブロモプロピオネートおよび14.6gのK2CO3を加える。混合物を40°Cで15時間撹拌し、次いで、さらなる5mlのtert-ブチル3-ブロモプロピオネートを加える。混合物を40°Cで一晩加熱し、次いで、空隙率4の焼結物を通して濾過する。ケーキを酢酸エチルで洗浄し、次いで、濾液を減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーMerckEasyVarioPrep400gカラム、Si6015-40μmで、DCM中、0から10EtOAcの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。9.54gのtert-ブチル3-[2-ヒドロキシ-エチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル-アミノ]-プロピオネートを得る。LC/MSC:tr=3.39分;[MNa]:m/z397。[実施例4]4.1.4-[2-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-エトキシ]-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン4-[2-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-エトキシ]-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンから出発し、実施例1と同様に調製する。1HNMR500MHz,DMSO-d6:1.22s,6H;1.69d,J=7.0Hz,6H;2.28to2.44m,6H;2.36m,3H;2.71s,2H;2.77t,J=6.7Hz,2H;2.88to3.08m,6H;3.42to3.55m,12H;3.86s,6H;3.88m,2H;4.10s,4H;4.15t,J=5.7Hz,2H;5.17d,J=13.2Hz,2H;5.23d,J=13.2Hz,2H;5.55m,2H;6.93s,2H;7.06s,2H;7.38s,2H;7.76d,J=4.4Hz,2H。LC/MSA:tr=0.68分;[MH]:m/z1042;[M2H]2:m/z521.5ベースピーク。4.2.4-[2-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エチル}-アミノ-エトキシ]-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン4-{2-[2-2-ヨード-エトキシ-エトキシ]-エチル}-モルホリンおよび4-[2-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピルアミノ-エトキシ]-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジンから出発し、実施例1と同様に調製する。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.26s,6H;2.36m,4H;2.39s,3H;2.43t,J=5.9Hz,2H;2.74s,2H;2.79t,J=5.9Hz,2H;3.00t,J=5.9Hz,2H;3.46to3.55m,12H;4.12t,J=5.9Hz,2H;4.45d,J=5.9Hz,4H;5.30t,J=5.9Hz,2H;6.84s,2H。LC/MSE:tr=0.33分;[MH]:m/z534。4.3.4-{2-[2-2-ヨード-エトキシ-エトキシ]-エチル}-モルホリン1.12gの2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エタノールおよび940μlのジイソプロピルエチルアミンのDCM6ml溶液を0°Cまで冷却し、これに440μlのメタンスルホニルクロリドのDCM3mL溶液を同じ温度で加える。混合物を0°Cで1時間撹拌し、次いで、水8mlで洗浄する。有機相をMgSO4で脱水し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を30mlのアセトンに溶解し、次いで、1.42gのヨウ化ナトリウムを追加する。還流状態で5時間撹拌した後、不溶性物質を焼結式漏斗による濾過によって除去する。濾液を減圧下で濃縮し、次いで、ジクロロメタンに入れる。不溶性物質を再び濾過によって除去し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF25-40gで、DCM中、0から5MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。1.09gの4-{2-[2-2-ヨード-エトキシ-エトキシ]-エチル}-モルホリンを得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:2.39m,4H;2.45t,J=5.9Hz,2H;3.32t,J=6.4Hz,2H;3.47to3.60m,10H;3.67t,J=6.4Hz,2H。LC/MSA:tr=0.29分;[MH]:m/z330。[実施例5]5.1.N-ヒドロキシスクシンイミジル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエート65mgの4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタン酸をTHF3.8mLに溶解し、これに、67μlのDIPEAおよび33mgのN,N’-ジスクシンイミジルカーボネートを加える。室温で1時間後、8mLのDCMを加え、得られた有機相を水で2回洗浄し、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF10-8gで、DCM中、0から7.5メタノールの勾配を用いて精製する。35mgのN-ヒドロキシスクシンイミジル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートをこのようにして得る。LC/MSF:tr=3.54分;[MH]:m/z1108;[MH2OH]:m/z1126;[M2H2OH]:m/z1144。5.2.4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロ-ピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタン酸メチル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートから出発し、実施例2と同様に調製する。LC/MSE:tr=1.05分;[MH]:m/z1011;[MH2OH]:m/z1029;[M2H2OH]:m/z1047。5.3.メチル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートエチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートから出発し、実施例2と同様に調製する。LC/MSE:tr=1.14分;[MH]:m/z1025;[MH2OH]:m/z1043;[M2H2OH]:m/z1061。5.4.メチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエート460mgのtert-ブチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートのDCM7ml溶液に、1.14mlのTFAを加える。混合物を室温で15時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮する。得られた残渣に3.8mlのMeOHを加え、これに、5°Cで3.1mlの2Mトリメチルシリルジアゾメタンのヘキサン溶液を加える。混合物を5°Cで1時間撹拌し、次いで、100μlの酢酸を加える。減圧下で濃縮した後、得られた残渣をシリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF25-40gで、DCM中、2から10MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ減圧下で濃縮する。265mgのメチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートを得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:配座異性体の50-50混合物:1.67to1.86m,2H;2.27t,J=7.3Hz,1H;2.36t,J=7.3Hz,1H;2.57t,J=6.7Hz,1H;2.66t,J=6.7Hz,1H;3.23s,3H;3.31to3.75m,21H;4.14t,J=5.6Hz,1H;4.19t,J=5.6Hz,1H;4.45m,4H;5.30m,2H;6.84s,1H;6.86s,1H。LC/MSG:tr=0.62分;[MH]:m/z517;[M-HHCO2H]-:m/z561。5.5.tert-ブチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエート560mgのtert-ブチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-ブタノエートのDMF4ml溶液に、658mgのN-ヒドロキシスクシンイミジル3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパノエート参照。M.A.Miller,N.B.Malkar,D.Severynse-Stevens,K.G.Yarbrough,M.J.Bednarcik,R.E.Dugdell,M.E.Puskas,R.Krishnan,K.D.JamesBioconjugateChem.,2006,17,267-274のDMF4mL溶液を加える。混合物を室温で15時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーAnalogixSuperFlashSiO2SF40-80gで、DCM中、0から10の10アンモニアMeOH溶液の勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。460mgのtert-ブチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートを得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:配座異性体の50-50混合物:1.39s,4.5H;1.40s,4.5H;1.63to1.81m,2H;2.16t,J=7.3Hz,1H;2.25t,J=7.3Hz,1H;2.57t,J=6.7Hz,1H;2.66t,J=6.7Hz,1H;3.23s,3H;3.31to3.74m,18H;4.14t,J=5.7Hz,1H;4.19t,J=5.7Hz,1H;4.45m,4H;5.30m,2H;6.84s,1H;6.86s,1H。LC/MSG:tr=0.80分;[MH]:m/z559;[M-HHCO2H]-:m/z603。5.6.tert-ブチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-ブタノエートtert-ブチル3-ブロモ-ブチレートおよびN-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミドから出発し、実施例2と同様に調製する。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.39s,9H;1.62t,J=7.2Hz,2H;1.84broadm,1H;2.22t,J=7.2Hz,2H;2.55t,J=7.2Hz,2H;2.86t,J=5.7Hz,2H;4.07t,J=5.7Hz,2H;4.45d,J=5.7Hz,4H;5.29t,J=5.7Hz,2H;6.85s,2H。LC/MSA:tr=0.40分;[MH]:m/z341;ベースピーク:m/z156。[実施例6]6.1.エチル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートエチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートから出発し、実施例5と同様に調製する。1HNMR500MHz,DMSO-d6:配座異性体の50-50混合物:1.11to1.18m,3H;1.54to1.82m,8H;2.24d,J=7.3Hz,1H;2.32d,J=7.3Hz,1H;2.53to2.68m,4H;2.87to3.07m,4H;3.20s,1.5H;3.21s,1.5H;3.31to4.27m,32H;5.16d,J=13.2Hz,2H;5.22d,J=13.2Hz,2H;5.55q,J=7.0Hz,2H;6.94s,2H;7.08s,2H;7.37s,2H;7.76d,J=4.4Hz,2H。LC/MSA:tr=0.86分;[MH]:m/z1039;ベースピーク:m/z376。6.2.エチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートエチル3-[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチルアミノ]-ブタノエートから出発し、実施例5と同様に調製する。1HNMR400MHz,DMSO-d6配座異性体の50-50混合物:1.16t,J=7.1Hz,1.5H;1.17t,J=7.1Hz,1.5H;1.67to1.97m,2H;2.25t,J=7.3Hz,1H;2.34t,J=7.3Hz,1H;2.57t,J=6.8Hz,1H;2.66t,J=6.8Hz,1H;3.23s,3H;3.32to3.74m,18H;4.04q,J=7.1Hz,1H;4.05q,J=7.1Hz,1H;4.14t,J=5.7Hz,1H;4.19t,J=5.7Hz,1H;4.45m,4H;5.30m,2H;6.84s,1H;6.86s,1H。LC/MSA:tr=0.47分;[MH]:m/z531;ベースピーク:m/z376;[M-HHCO2H]-:m/z575。[実施例7]7.1.メチル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートメチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートから出発し、実施例5と同様に調製する。LC/MSE:tr=0.88分;[MH]:m/z1080;[MH2OH]:m/z1098;[M2H2OH]:m/z1116。7.2.メチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートtert-ブチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートから出発し、実施例5と同様に調製する。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.83m,2H;2.33m,2H;2.42m,4H;2.48t,J=5.8Hz,2H;2.61m,2H;3.40m,2H;3.49to3.55m,10H;3.56m,4H;3.62s,3H;3.69broadt,J=6.6Hz,4H;4.21t,J=5.6Hz,2H;4.49d,J=5.3Hz,4H;4.90t,J=5.3Hz,2H;6.87s,2H。LC/MSG:tr=0.50分;[MH]:m/z572;ベースピーク:m/z198;[M-HHCO2H]-:m/z616。7.3.tert-ブチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートN-ヒドロキシスクシンイミジル3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパノエートから出発し、実施例5と同様に調製する。1HNMR400MHz,DMSO-d6:1.42s,9H;1.78m,2H;2.22m,2H;2.42m,4H;2.48t,J=5.8Hz,2H;2.61m,2H;3.39m,2H;3.48to3.55m,10H;3.56m,4H;3.69broadt,J=6.6Hz,4H;4.21t,J=5.6Hz,2H;4.49d,J=5.3Hz,4H;4.90t,J=5.3Hz,2H;6.87s,2H。LC/MSG:tr=0.65分;[MH]:m/z614;ベースピーク:m/z240。7.4.N-ヒドロキシスクシンイミジル3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパノエート830mgの3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパン酸をTHF50mLに溶解し、これに1.1gのN,N’-ジスクシンイミジルカーボネートおよび1.5mLのDIPEAを加える。室温で24時間後、200mLのDCMを加え、得られた有機相を体積が半分になるまで減圧下で濃縮し、次いで、水で2回洗浄し、MgSO4で脱水し、減圧下で濃縮する。1.05gのN-ヒドロキシスクシンイミジル3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパノエートをこのようにして得る。1HNMR400MHz,DMSO-d6:2.39m,4H;2.45t,J=5.9Hz,2H;2.81s,4H;2.92t,J=6.0Hz,2H;3.45to3.57m,14H;3.72t,J=6.0Hz,2H。LC/MSG:trELSD=0.49分;[MH]:m/z389。7.5.3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパン酸1gのtert-ブチル3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパノエートのDCM50ml溶液に、4mlのTFAを加える。混合物を室温で10時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮し、MegaBE-SCX,25GM150MLカートリッジVarianで精製し、MeOHを用いて洗浄し、2NアンモニアMeOH溶液を用い、予想生成物を外す。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。830mgの3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパン酸を得る。LC/MSE:trELSD=0.16分;[MH]:m/z292。7.6.tert-ブチル3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパノエート989mgの2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エタノールの無水THF2.8mL溶液に、1.04mgのナトリウムを加える。40°Cで2時間15分撹拌した後、793μLのtert-ブチルアクリレートを加える。40°Cでさらに2時間加熱した後、反応混合物を室温で20分間放置し、次いで、減圧下で濃縮し、シリカフラッシュクロマトグラフィーMerckSuperVarioPrep70gカラム、Si6015-40μmで、DCM中、0から6MeOHの勾配を用いて精製する。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下で濃縮する。1gのtert-ブチル3-{2-[2-2-モルホリン-4-イル-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロパノエートを得る。LC/MSE:trELSD=0.59分;[MH]:m/z348。RCG1=-SZaZa=SMeまたはRCG1=-C=OZbRbZbRb=OMeである式IAの化合物を用いた、MDA-MB-231、MDA-A1およびHCT116細胞株の増殖阻害に関する評価指数関数的な成長段階にあるMDA-MB-231細胞、MDA-A1細胞またはHCT116細胞をトリプシン処理し、それぞれの培地MDA細胞の場合、DMEM/F12Gibco番号21331、10FCSGibco番号10500-056、2nMグルタミンGibco番号25030;HCT116細胞の場合、DMEMGibco番号11960、10FCSGibco番号10500-056、2mMグルタミンGibco番号25030に再び懸濁させる。細胞懸濁物を、血清を含む完全培地の入ったCytostar96ウェル培養プレートGEHealthcareEurope、番号RPNQ0163に、密度が5000細胞/ウェルMDA-MB-231、MDA-A1、HCT116になるように播種する。4時間インキュベートした後、トマイマイシンダイマーの連続希釈物を、ウェルに各濃度について3つ組で加える。5CO2雰囲気下、細胞毒性剤が存在する状態で、細胞を37°Cで3日間培養する。4日目に、14C-チミジン0.1μCi/ウェル、PerkinElmer番号NEC56825000の10μlの溶液を各ウェルに加える。実験開始から96時間後、Microbeta放射線カウンターPerkinElmerを用い、14C-チミジンの組み込み量を測定する。データは、細胞毒性剤で処理した細胞を用いて得られた計測数と、コントロールウェルの細胞培地のみで処理された。を用いて得られた計測数との比率を決定することによって、生存率の形態で表す。RCG1=-SZaであり、Za=SMeであるか、またはRCG1=-C=OZbRbであり、ZbRb=OMeである試験化合物は、強力な抗癌活性を有することがわかり、このことは、別のZbRb基で特徴づけられる同様の化合物が、少なくとも同一の活性を有する傾向があることを示唆している。第2章:新規トマイマイシン複合体[実施例8]4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンを含むSPDBで修飾された複合体hu2H11の調製リン酸カリウム濃度が0.05M、NaClが0.05M、pH=6.5のエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAが2mMである水系バッファー2.37ml中、24mgのhu2H11WO2008010101の15ページでは、hu532H11と記載されている抗体。アミノ酸配列番号24を有するVhを含む抗体である。に、磁気撹拌しつつ、320μgのSPDBWO2010/076474の7ページに記載されている。を62μLのDMAに溶解したものを加える。室温で4時間後、修飾された抗体を、濃度が0.05MN-2-ヒドロキシエチル-ピペラジン-N’-2-エタンスルホン酸HEPES、0.05MNaClおよびpH=8の2mMエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAの水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたSephadexG25PD-10GEカラムでゲル濾過によって精製する。修飾された抗体を等分し、これをジチオスレイトールDTTで処理し、ジチオピリジン基を開裂させる。修飾された抗体を、放出されたピリジンチオールとともに、ピリジンチオールの吸光係数e343nm=8080M-1cm-1、ジチオピリジン基の吸光係数e280nm=5100M-1cm-1およびhu2H11の吸光係数e280nm=206941M-1cm-1を用い、分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で3.2のジチオピリジン基を、濃度7.08mg/mLで決定した。濃度が0.05MN-2-ヒドロキシエチル-ピペラジン-N’-2-エタンスルホン酸HEPES、0.05MNaClおよびpH=8の2mMエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAの水系バッファー3.2mL中、12mgの上の修飾された抗体に、713μLのDMAおよび1.22mgの4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンを、磁気撹拌しつつ、87μLのジメチルアセトアミドDMAに溶解したものを加える。30°Cで12時間後、混合物をMillex登録商標-SV0.45μMPVDFDuraporeMilliporeで濾過し、20N-メチルピロリドンNMPを含むリン酸食塩水バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたSuperdex商標200分取グレードカラムHiload商標26/60GEカラムで精製する。目的のフラクションを合わせ、AmiconUltra-15Ultracel50kMilliporeで濃縮し、次いで、10スクロースおよび5NMPを含み、ヒスチジン濃度が10mMのpHで=6.5の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたSephadexG-25PD10、GEカラムで濾過する。得られた複合体3.5mLを、4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチルジスルファニル-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンの吸光係数e320nm=7843M-1cm-1およびe280nm=4436M-1cm-1ならびにhu2H11の場合のe280nm=206941M-1cm-1を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で2.9のトマイマイシン4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンダイマーを、濃度1.74mg/mLで決定した。[実施例9]4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンを含むSNPPで修飾された複合体hu2H11R35R74の調製リン酸カリウム濃度が0.05M、NaClが0.05MおよびpH=6.5のエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAが2mMである水系バッファー8.2ml中、100mgのhu2H11R35R74WO2011039721の20ページを参照に、磁気撹拌しつつ、1.3mgのSNPPWO2004/016801の36ページに記載されている。を186μLのDMAに溶解する。室温で4時間後、修飾された抗体の溶液を4つにわけ、濃度が0.05MのN-2-ヒドロキシエチル-ピペラジン-N’-2-エタンスルホン酸HEPES、0.05MNaClおよびpH=8の2mMエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAの水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいた4種類のSephadexG25カラムPD-10GEカラムでゲル濾過によって精製する。このようにして得られた4種類の濾液を混合し、均質化した後、修飾された抗体を、ニトロピリジンチオールの吸光係数e280nm=3344M-1cm-1およびe325nm=10964M-1cm-1およびhu2H11R35R74の場合e280nm=219528M-1cm-1を用い、分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で4.47のジチオ-ニトロピリジン基を、濃度6.27mg/mLで決定した。濃度が0.05MN-2-ヒドロキシエチル-ピペラジン-N’-2-エタンスルホン酸HEPES、0.05MNaClおよびpH=8の2mMエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAの水系バッファー23.24ml中、87mgの上の修飾された抗体に、4.38mLのDMAおよび17.73mgの4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンを加え、磁気撹拌しつつ、1.43mLのジメチルアセトアミドDMAに溶解する。30°Cで17時間後、混合物をSteriflip登録商標0.45μmPVDFDuraporeMilliporeで濾過し、20N-メチルピロリドンNMPを含むリン酸食塩水バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたSuperdex商標200分取グレードカラムHiload商標26/60GEカラムで3インジェクションによって精製する。目的のフラクションを合わせ、AmiconUltra-15Ultracel50kMilliporeで濃縮し、次いで、10スクロースおよび5NMPを含み、ヒスチジン濃度が10mMのpH=6.5の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたSephadexG-25HiPrep26/10脱塩、GEカラムで濾過する。得られた複合体28mLを、hu2H11R35R74の吸光係数e280nm=219528M-1cm-1を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で3.13のトマイマイシン4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンダイマーを、濃度1.99mg/mLで決定した。[実施例10]4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンを含むSPDBで修飾された複合体hu2H11R35R74の調製hu2H11R35R74から出発し、実施例8と同様に調製し、抗体分子あたり、平均で2.92のトマイマイシン4-{2-[{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エチル}-2-メチル-2-メチル-2-メルカプト-プロピル-アミノ]-エトキシ}-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジンダイマーを決定した。[実施例11]N-ヒドロキシスクシンイミジル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートを用いた複合体hu2H11R35R74の調製1.59mgのhu2H11R35R74を、pH=6.6のリン酸カリウムの濃度が0.043Mである水系バッファー150μLに溶かし、この溶液に、6μLの1MHEPES水溶液を加えた後、濃度が0.05MN-2-ヒドロキシエチル-ピペラジン-N’-2-エタンスルホン酸HEPES、0.05MNaClおよびpH=8の2mMエチレンジアミンテトラ酢酸EDTAの水系バッファー267μLを加え、100μLのDMA、次いで、83μgのN-ヒドロキシスクシンイミジル4-[2-2,6-ビス-[S-2-エタ-E-イリデン-7-ジメトキシ-1,2,3,11a-テトラヒドロピロロ[2,1c][1.4]ベンゾジアゼピン-5-オン-8-イルオキシメチル]-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートを5μlのDMAに溶解した。30°Cで4時間後、混合物を、10スクロースおよび5NMPを含み、ヒスチジン濃度が10mMのpH=6.5の水系バッファーであらかじめ平衡状態にしておいたSephadexG-25NAP-5GEカラムで濾過する。得られた複合体1mLを、エチル4-[[2-2,6-ビス-ヒドロキシメチル-ピリジン-4-イルオキシ-エチル]-3-{2-[2-2-メトキシ-エトキシ-エトキシ]-エトキシ}-プロピオニル-アミノ]-ブタノエートの吸光係数e322nm=7971M-1cm-1およびe280nm=5219M-1cm-1を用いた分光法によってアッセイし、抗体分子あたり、平均で4.18のトマイマイシンダイマーを濃度1.14mg/mLで決定した。細胞毒性複合体hu2H11または、それぞれhu2H11R35R74を用いた、MDA-MB-231細胞株の増殖阻害に関する評価指数関数的な成長段階にあるMDA-MB-231細胞をトリプシン処理し、培地DMEM/F12Gibco番号21331、10FCSGibco番号10500-056、2nMグルタミンGibco番号25030に再び懸濁させる。細胞懸濁物を、血清を含む完全培地の入ったCytostar96ウェル培養プレートGEHealthcareEurope、番号RPNQ0163に、密度が5000細胞/ウェルになるように播種する。4時間インキュベートした後、抗体-細胞毒性剤免疫複合体の連続希釈物を、ウェルに濃度を10-7から10-12Mまで減らしつつ加える各濃度について3つ組。5CO2雰囲気下、抗体-細胞毒性剤免疫複合体が存在する状態で、細胞を37°Cで3日間培養する。4日目に、14C-チミジン0.1μCi/ウェル、PerkinElmer番号NEC56825000の10μLの溶液を各ウェルに加える。実験開始から96時間後、Microbeta放射線カウンターPerkinElmerを用い、14C-チミジンの組み込み量を測定する。データは、免疫複合体で処理した細胞を用いて得られた計測数と、コントロールウェルの細胞培地のみで処理された。を用いて得られた計測数との比率を決定することによって、生存率の形態で表す。アステリスクで示されている特定の実施形態において、覆われていない抗体hu2H11またはそれぞれhu2H11R35R74を、実験開始時に濃度1μMでウェルに加え、すでに記載したように増殖阻害を測定した。"