"リンカーLを通してアマトキシンに結合される標的結合部分を含む複合体であって、該リンカーLが、iアマトキシンアミノ酸1のγC原子、特にアミド結合iiアマトキシンアミノ酸3のδC原子に結合される酸素原子、特にエステル結合、エーテル結合若しくはウレタン結合又は、iiiアマトキシンアミノ酸4の6C原子、特にアマトキシンアミノ酸4の6C原子に結合される酸素原子を通してアマトキシンに結合され、いずれの場合も、該リンカーLが尿素部分を通して標的結合部分に結合される、複合体。前記複合体が、次の構造iアマトキシンγCONHLNHCONH標的結合部分iiアマトキシンδCOCOLNHCONH標的結合部分iiiアマトキシンδCOLNHCONH標的結合部分ivアマトキシンδCOCONHLNHCONH標的結合部分及びvアマトキシン6COLNHCONH標的結合部分、の1つから選択される構造を有する、請求項1に記載の複合体。前記標的結合部分が、該標的結合部分に存在するアミノ基を通してリンカーLに結合され、ここで該アミノ基が前記尿素部分の一部を形成する、請求項1又は2に記載の複合体。前記アマトキシンが、αアマニチン、βアマニチン、γアマニチン、εアマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、又はアマヌリン酸amanullinicacidから、又はそれらの塩若しくは類似体から選択される、請求項1~3のいずれか1項に記載の複合体。前記リンカーLが、任意に置換された、アルキレン、ヘテロアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、又はヘテロアラルキレン基である、請求項1~4のいずれか1項に記載の複合体。前記リンカーLが、次の部分ジスルフィド、エーテル、アミン、エステル、カルボキサミド、ウレタン、及び尿素部分、の1つから選択される部分を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の複合体。前記標的結合部分が、腫瘍細胞上に存在するエピトープに特異的に結合する、特に前記標的結合部分が、上皮細胞接着分子EpCAMのエピトープに特異的に結合する、請求項1~6のいずれか1項に記載の複合体。前記標的結合部分がi抗体又はその抗原結合性フラグメントii抗体様タンパク質及び、iii核酸アプタマー、から成る群から選択される、請求項1~7のいずれか1項に記載の複合体。前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、二重特異性抗体、四重特異性抗体tetrabody、ナノボディ、キメラ抗体、脱免疫化deimmunized抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体から選択される、請求項8項に記載の複合体。前記抗原結合性フラグメントが、Fab、Fab2、Fd、Fv、一本鎖Fv、及びジスルフィド結合FvsdsFvから成る群から選択される、請求項8又は9に記載の標的結合部分毒素複合体。医薬としての使用のための、請求項1~10のいずれか1項に記載の複合体。患者における癌の治療のための請求項1~11のいずれか1項に記載の複合体であって、該癌が、膵癌、胆管細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、腎癌、悪性黒色腫、白血病、及び悪性リンパ腫から成る群から選択される、複合体。請求項1~10のいずれか1項に記載の複合体、並びに1又は2以上の医薬的に許容される希釈剤、担体、賦形剤、フィラー、結合剤、潤滑剤、滑剤、崩壊剤、吸着剤及び又は保存剤をさらに含む、医薬組成物。iアマトキシンアミノ酸1のγC原子、特にアミド結合iiアマトキシンアミノ酸3のδC原子に結合される酸素原子、特にエステル結合、エーテル結合若しくはウレタン結合又はiiiアマトキシンアミノ酸4の6C原子、特にアマトキシンアミノ酸4の6C原子に結合される酸素原子を通してアマトキシンに結合されるリンカーLを含む、アマトキシン複合分子であって、いずれの場合も、リンカーLが、カルバミン酸誘導体NHCOX式中、Xは、標的結合部分の一級アミンと置換できる脱離基であるを含む、アマトキシン複合分子。Xがtブチルオキシ、スクシンイミジルオキシ、1Oスクシンイミジルオキシ3スルホナートスルホNHS、O4ニトロフェニルオキシ、O3ニトロフェニルオキシ、O24ジニトロフェニルオキシ、O24ジクロロ6ニトロフェニルオキシ、ペンタフルオロフェニルオキシ、ペンタクロロフェニルオキシ、O245トリクロロフェニルオキシ、O34ジヒドロ3ヒドロキシ4オキソ123ベンゾトリアジン3イル、Oエンド1ヒドロキシ5ノルボルネン23ジカルボキシミド1イル、1フタルイミドイルオキシ、1ベンゾトリアゾリルオキシ、17アザベンゾトリアゾリルオキシ、及びNイミダゾリル、から選択される、請求項14に記載のアマトキシン複合分子。請求項1~12のいずれか1項に記載の複合体を合成するための方法であって、請求項14又は15に記載のアマトキシン複合分子を、一級アミノ基を含む標的結合部分と反応させる工程を含む、方法。従って、血漿中で安定であり、それにより非標的細胞への有害な副作用が最小化される標的結合部分アマトキシン複合体が、先行技術において非常に必要であった。第一の態様において、本発明は、リンカーLを通してアマトキシンに結合された標的結合部分を含む複合体であって、ここでリンカーLが、iアマトキシンアミノ酸1のγC原子、特にアミド結合iiアマトキシンアミノ酸3のδC原子に結合される酸素原子、特にエステル結合、エーテル結合又はウレタン結合又はiiiアマトキシンアミノ酸4の6C原子、特にアマトキシンアミノ酸4の6C原子に結合される酸素原子を通してアマトキシンに結合され、いずれの場合にも、リンカーLが尿素部分を通して標的結合部分に結合される複合体に関する。第二の態様において、本発明は、本発明の複合体を含む医薬組成物に関する。他の態様において、本発明は、iアマトキシンアミノ酸1のγC原子、特にアミド結合iiアマトキシンアミノ酸3のδC原子に結合される酸素原子、特にエステル結合、エーテル結合若しくはウレタン結合又はiiiアマトキシンアミノ酸4の6C原子、特にアマトキシンアミノ酸4の6C原子に結合される酸素原子を通してアマトキシンに結合されるリンカーLを含む、アマトキシン複合分子であって、いずれの場合にも、リンカーLが、カルバミン酸誘導体NHCOX式中、Xは、標的結合部分の一級アミンと置換できる脱離基であるを含む、アマトキシン複合分子に関する。さらに他の態様において、本発明は、本発明の複合体を合成するための方法であって、本発明のアマトキシン複合分子を、一級アミノ基を含む標的結合部分と反応させる工程を含む方法に関する。本発明の詳細な説明本発明を以下に詳細に記載する前に、本明細書中に記載される特定の方法、プロトコール及び試薬は変更可能であり、よって本発明はこれらに限定されない、と理解すべきである。本明細書中の用語は単に特定の実施形態を記載する目的であり、本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本発明の範囲は添付の請求項によってのみ限定されると理解すべきである。他に特に記載しない限り、本明細書中の全技術及び科学用語は、当業者に一般的に理解される同一の意味を有する。好ましくは、本明細書中の用語は、AmultilingualglossaryofbiotechnologicaltermslUPACRecommendations、Leuenberger、HGW、Nagel、BandKolbl、Heds1995、HelveticaChimicaActa、CH4010Basel、Switzerland、に記載される通り定義される。以下の本明細書及び請求項を通して、文脈上別の解釈が必要な場合を除き、用語含む、及び変化形、例えば、含む及び含む等は、所定の数又は工程又は数又は工程の群を含み、任意の他の数又は工程又は数又は工程の群を排除しないことを示すと理解されたい。本明細書を通して複数の文献が記載される。本明細書中の上記又は下記の文献特許、特許出願、科学出版物、製造者の説明書、説明書、GenBank受入番号配列寄託等、全て含むはそれぞれ、その全体が各特許法下で可能な限り参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で考察される刊行物は、本出願の出願日前の刊行物の開示のためにのみ提供され、本発明が先行発明を理由として前記開示に先行しないと解されるべきではない。本発明をさらに記載する。以下に、本発明の異なる態様をより詳細に記載する。定義される各態様は、明らかに逆を示さない限り、任意の他の態様と組み合わせることができる。特に、好ましい又は有利なものとして示される任意の特徴は好ましい又は有利なものとして示される任意の他の特徴と組み合わせることができる。第一の態様において、本発明は、リンカーLを通してアマトキシンに結合される標的結合部分を含む複合体であって、リンカーLが、ivアマトキシンアミノ酸1のγC原子、特にアミド結合vアマトキシンアミノ酸3のδC原子に結合される酸素原子、特にエステル結合、エーテル結合又はウレタン結合又はviアマトキシンアミノ酸4の6C原子、特にアマトキシンアミノ酸4の6C原子に結合される酸素原子を通してアマトキシンに結合され、いずれの場合にも、リンカーLが尿素部分を通して標的結合部分に結合される、複合体に関する。本発明において、用語複合体とは、共有結合により結合する少なくとも2つの異なる分子を含む分子を意味する。本明細書において、用語標的結合部分とは、特異的に標的分子又は標的エピトープに結合することができる任意の分子又は分子の部分を意味する。本願の好ましい標的結合部分は、i抗体又はその抗原結合性フラグメントii抗体様タンパク質及びiii核酸アプタマーである。本発明における使用に適した標的結合部分は、典型的には、40000Da40kDa又はそれ以上の分子量を有する。本明細書において、第一の化合物例えば、抗体の第二の化合物例えば、抗原、例えば、標的タンパク質等に対する解離定数KQが、100μΜ又はそれ未満、好ましくは、50μΜ又はそれ未満、好ましくは、30μΜ又はそれ未満、好ましくは、20μΜ又はそれ未満、好ましくは、10μΜ又はそれ未満、好ましくは、5μΜ又はそれ未満、より好ましくは、1μΜ又はそれ未満、より好ましくは、900nM又はそれ未満、より好ましくは、800nM又はそれ未満、より好ましくは、700nM又はそれ未満、より好ましくは、600nM又はそれ未満、より好ましくは、500nM又はそれ未満、より好ましくは、400nM又はそれ未満、より好ましくは、300nM又はそれ未満、より好ましくは、200nM又はそれ未満、さらに好ましくは、100nM又はそれ未満、さらに好ましくは、90nM又はそれ未満、さらに好ましくは、80nM又はそれ未満、さらに好ましくは、70nM又はそれ未満、さらに好ましくは、60nM又はそれ未満、さらに好ましくは、50nM又はそれ未満、さらに好ましくは、40nM又はそれ未満、さらに好ましくは、30nM又はそれ未満、さらに好ましくは、20nM又はそれ未満、さらに好ましくは、10nM又はそれ未満の場合に、第一の化合物は、第二の化合物に特異的に結合すると考える。本願の用語標的分子及び標的エピトープとは各々、標的結合部分によって特異的に結合される抗原及び抗原のエピトープを各々意味する。好ましくは、標的分子は、腫瘍関連抗原、特に、非腫瘍細胞の表面と比較して増加濃度で且つ又は異なる立体配置で1又は2以上の腫瘍細胞型の表面上に存在する抗原又はエピトープである。好ましくは、1又は2以上の腫瘍細胞型の表面上に存在するが、非腫瘍細胞の表面上に存在しない抗原又はエピトープである。特定の実施形態において、標的結合部分は、HER2neu又は上皮細胞接着分子EpCAMのエピトープに特異的に結合する。他の実施形態において、抗原又はエピトープは、好ましくは自己免疫疾患に関与する細胞上に発現される。特に、斯かる実施形態において、標的結合部分はIL6受容体IL6Rのエピトープに特異的に結合する。本明細書において、用語抗体又はその抗原結合性フラグメントとは、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、免疫上特異的に抗原を結合する抗原結合部位を含む分子を意味する。また、例えば、標的分子、例えば、標的タンパク質Her2neu又はEpCAMに特異的に結合するファージ提示法を含む技術を介して選択される免疫グロブリン様タンパク質もまた含まれる。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及びIgY、クラス例えば、lgG1、lgG2、lgG3、lgG4、lgA1及びlgA2又はサブクラスとすることができる。本発明の使用に適した抗体及びその抗原結合性フラグメントは、ポリクローナル、モノクローナル、一価、二重特異性、ヘテロ複合体、多選択性、ヒト、ヒト化特に、CDR移植、脱免疫化、又はキメラ抗体、一本鎖抗体例えば、scFv、Fab断片、Fab2断片、Fab発現ライブラリーによって産生される断片、二重特異性抗体又は四重特異性抗体tetrabodiesHolligerPetal、1993、ナノボディ、抗イディオタイプ抗Id抗体例えば、本発明の抗体への抗Id抗体を含む、並びに前述の任意のエピトープ結合断片を含むが、それらに限定されない。一部の実施形態において、抗原結合性フラグメントは、本発明のヒト抗原結合抗体断片であり、Fab、Fab及びFab2、Fd、一本鎖FvsscFv、一本鎖抗体、ジスルフィド結合FvsdsFv及びVL又はVH領域を含む断片を含むが、それらに限定されない。一本鎖抗体を含む抗原結合抗体断片は、可変領域単独又は次のヒンジ領域、CL、CH1、CH2、及びCH3領域の全体又はその一部と組み合わせて可変領域を含むことができる。本発明は、可変領域のヒンジ領域、CL、CH1、CH2、及びCH3領域との任意の組み合わせもまた含む抗原結合性フラグメントもまた含む。本発明で使用可能な抗体は、鳥類及び哺乳類を含む任意の動物起源由来とすることができる。好ましくは、抗体は、ヒト、ゲッ歯類例えば、マウス、ラット、モルモット、又はウサギ、ニワトリ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、又はイヌ起源由来である。抗体がヒト又はマウス起源であることが特に好ましい。本明細書において、ヒト抗体とは、例えば、KucherlapatiJakobovits等の米国特許第5939598号に記載される通り、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体、及びヒト免疫グロブリンライブラリーから単離される抗体、或いは1又は2以上のヒト免疫グロブリンを遺伝子導入した動物由来であり内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。用語抗体様タンパク質とは、標的分子に特異的に結合する操作されたタンパク質例えば、ループの突然変異誘発によるを意味する。典型的には、斯かる抗体様タンパク質は、タンパク質スキャフォールドに両端において結合された少なくとも1つの可変ペプチドループを含む。斯かる二重構造制限は、抗体に匹敵するレベルまで、抗体様タンパク質の結合親和性を非常に増大する。可変ペプチドループの長さは、典型的には、10~20個のアミノ酸から成る。スキャフォールドタンパク質は、良好な溶解特性を有する任意のタンパク質とすることができる。好ましくは、スキャフォールドタンパク質は、小分子球状タンパク質である。抗体様タンパク質は、制限なくアフィボディaffibodies、アンチカリンanticalin、及び設計アンキリン反復タンパク質を含むBinzetal2005。抗体様タンパク質は、突然変異の大型のライブラリー由来、例えば、大型のファージ提示法ライブラリーから選択することができ、通常の抗体と類似し、単離できる。また、抗体様結合タンパク質は、球状タンパク質中の表面露呈残部の組み合わせ突然変異誘発によって得られる。用語核酸アプタマーとは、インビトロinvitroでの選択又はSELEX試験管内進化法の反復を介して操作された、標的分子に結合する核酸分子を意味するBrodyandGold、2000を参照。核酸アプタマーは、DNA又はRNA分子とすることができる。アプタマーは、修飾、例えば、修飾ヌクレオチド、例えば、2フッ素置換ピリミジン等を含むことができる。本明細書において、化合物の化学誘導体又は端的に誘導体とは、化合物と類似だが、化合物に存在しない少なくとも1つの化学基を含み、且つ又は化合物に存在する少なくとも1つの化学基が欠如する、化学構造を有する種を意味する。誘導体に対してその化合物は、親化合物として知られる。典型的には、誘導体は、1又は2以上の化学反応段階で親化合物から産生することができる。本明細書において、化合物の類似体は、構造上化合物に関連するが同一ではなく、少なくとも化合物の1つの活性を示す。類似体に対して斯かる化合物は、親化合物として知られる。上記活性は制限なく他の化合物への結合活性抑制活性、例えば、酵素抑制活性毒性効果活性化活性、例えば、酵素活性化活性を含む。類似体が斯かる活性を親化合物と同程度まで提示することは必要でない。化合物が親化合物の活性の少なくとも1より好ましくは、少なくとも5、より好ましくは、少なくとも10、より好ましくは、少なくとも20、より好ましくは、少なくとも30、より好ましくは、少なくとも40、より好ましくは、少なくとも50程度まで関連した活性を提示する場合、本願で類似体と見なされる。従って、本明細書中のアマトキシンの類似体とは、図1に示されるαアマニチン、βアマニチン、γアマニチン、εアマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、及びアマヌリン酸amanullinicacidのいずれか1つと構造上関連し、αアマニチン、βアマニチン、γアマニチン、εアマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、及びアマヌリン酸の少なくとも1つと比較して、哺乳類RNAポリメラーゼIIに対する抑制活性の少なくとも1より好ましくは、少なくとも5、より好ましくは、少なくとも10、より好ましくは、少なくとも20、より好ましくは、少なくとも30、より好ましくは、少なくとも40、より好ましくは、少なくとも50を提示する化合物を意味する。本発明の使用に適したアマトキシンの類似体は、αアマニチン、βアマニチン、γアマニチン、εアマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、又はアマヌリン酸のいずれか1つよりも、哺乳類RNAポリメラーゼIIに対してさらに強い抑制活性を提示することができる。抑制活性は、50抑制が生じる濃度IC50値を定量することによって測定できる。哺乳類RNAポリメラーゼIIに対する抑制活性は、細胞増殖に対する抑制活性を測定することによって間接的に測定できる。細胞増殖の抑制の測定に適したアッセイは、実施例に記載される。半合成類似体とは、出発原料として自然源例えば、植物原料、細菌培養物、又は細胞培養物由来の化合物を使用して化学合成によって得られた類似体を意味する。典型的には、本発明の半合成類似体は、テングタケ科のキノコから単離される化合物を出発原料として合成される。一方、合成類似体とは、小分子典型的には、石油化学構成要素からいわゆる全合成によって合成される類似体を意味する。通常、生物学的過程の補助なしに斯かる全合成は行われる。本明細書において、アプタマー複合体とは、上記選択肢の標的結合部分が核酸アプタマーiiiである、標的結合部分毒素複合体を意味する。本発明においてリンカーとは、2つの成分を結合している分子を意味し、成分はそれぞれ、リンカーの一端に結合されている。リンカーは、2つの成分間の距離を増大し、これらの成分間、例えば、本願の場合標的結合部分とアマトキシンとの間等の立体障害を減少する。リンカーの不存在下で、アマトキシンの標的結合部分への直接結合は、RNAポリメラーゼIIと相互作用するアマトキシンの能力を減少する可能性がある。特定の実施形態において、リンカーは骨格に1~30原子例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、又は30原子の連続鎖を有し、すなわち、リンカーの長さは、アマトキシン部分と標的結合部分との間の原子又は結合の数によって測定される最短連結として定義され、リンカー骨格の一面は、アマトキシンと反応し、他面は標的結合部分と反応している。本発明において、リンカーは好ましくは、任意に置換されたC120アルキレン、C120ヘテロアルキレン、C220アルケニレン、C220ヘテロアルケニレン、C220アルキニレン、C220ヘテロアルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、又はヘテロアラルキレン基である。リンカーは、1又は2以上の構造要素、例えば、カルボキサミド、エステル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、尿素、チオ尿素、炭化水素部分等を含むことができる。リンカーは、これらの構造要素の2つ又は3つ以上の組み合わせもまた含むことができる。これらの構造要素はそれぞれ、1度のみならず、例えば、2、3、4、5、又は6回リンカー中に存在することができる。一部の実施形態において、リンカーはジスルフィド結合を含むことができる。リンカーは、単一工程又は2又は3以上の後続工程において、アマトキシン及び標的結合部分に結合されなければならない、と理解されたい。そのために存在し得るリンカーは、好ましくは近位及び遠位末端に2つの基を有することができ、それらはi結合される成分の1つに存在する基、好ましくは、アマトキシン又は標的結合ペプチド上の活性化基と共有結合を形成できる、又はiiアマトキシン上の基と共有結合を形成するよう活性化されている又は活性化できる。従って、化学基はリンカーの遠位末端及び近位末端に位置し、斯かるカップリング反応の結果、例えば、エステル、エーテル、ウレタン、ペプチド結合等であることが好ましい。本発明において、用語アマトキシンとは、テングタケ属から単離されWielandTandFaulstichHWielandTFaulstichHCRCCritRevBiochem1978Dec53185260に記載される8個のアミノ酸から成るあらゆる環状ペプチドを含み、さらに、天然化合物の基本構造に従って構成要素から構築される、そのあらゆる化学誘導体さらにそのあらゆる半合成類似体さらにそのあらゆる合成類似体環状、8個のアミノ酸、さらに、ヒドロキシル化アミノ酸の代わりに非ヒドロキシル化アミノ酸を含むあらゆる合成又は半合成類似体、さらに、チオエーテルスルホキシド部分がスルフィド、スルホンと置換されている、又は硫黄と異なる原子、例えば、アマニチンのカルバ類似体の場合炭素原子と置換されている、あらゆる合成又は半合成類似体を含み、いずれの場合にも、任意の斯かる誘導体又は類似体は、哺乳類RNAポリメラーゼIIを阻害することによって機能上活性がある。機能上、アマトキシンは、哺乳類RNAポリメラーゼIIを阻害するペプチド又はデプシペプチドと定義される。好ましいアマトキシンは、上記リンカー分子又は標的結合部分と反応できる官能基例えば、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基、チオール又はチオール捕捉capturing基を有するアマトキシンである。特に本発明の複合体に適したアマトキシンは、図1に示されるαアマニチン、βアマニチン、γアマニチン、εアマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、及びアマヌリン酸、及びその塩、化学誘導体、半合成類似体、及び合成類似体である。本発明の使用に特に好ましいアマトキシンは、αアマニチン、βアマニチン、及びアマニンアミドである。本発明において、用語尿素部分を通して標的結合部分に結合とは、標的結合部分がNHCONH基を通して直接リンカーに結合される、リンカーと標的結合部分との間の結合を意味する。本発明の特定の実施形態において、複合体は、次の構造アマトキシンγCONHLNHCONH標的結合部分アマトキシンδCOCOLNHCONH標的結合部分アマトキシンδCOLNHCONH標的結合部分アマトキシンδCOCONHLNHCONH標的結合部分及びアマトキシン6COLNHCONH標的結合部分、の1つから選択される構造を有する。本発明の特定の実施形態において、標的結合部分は、標的結合部分に存在するアミノ基を通してリンカーLに結合され、ここで斯かるアミノ基は尿素部分の一部を形成する。本発明の特定の実施形態において、アマトキシンは、αアマニチン、βアマニチン、γアマニチン、εアマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、又はアマヌリン酸、又はその塩又は類似体から選択される。本発明の特定の実施形態において、リンカーLは、1又は2以上の基、特にアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、及びヘテロアラルキレン基、のリストから選択される、1、2又は3個の基を含み、ここで、各基は任意に独立して置換することができる。用語アルキレンとは、1~10個の炭素原子を有する基を含む、1~20個の炭素原子を有する、二価の直鎖飽和炭化水素基を意味する。特定の実施形態において、アルキレン基は、低アルキレン基とすることができる。用語低アルキレンとは、1~6個の炭素原子、特定の実施形態において、1~5又は1~4個の炭素原子を有するアルキレン基を意味する。アルキレン基の例は、メチレンCH2、エチレンCH2CH2、nプロピレン、nブチレン、nペンチレン、及びnヘキシレンを含むが、それらに限定されない。用語アルケニレンとは、2~20の炭素原子を有する二価の直鎖基であって、炭素炭素結合の少なくとも1つが二重結合であり、一方他の結合は単結合又はさらなる二重結合とすることができる基を意味する。本明細書中、用語アルキニレンとは、2~20の炭素原子を有する基であって、少なくとも1つの炭素炭素結合が三重結合であり、一方他の結合は単結合、二重結合又はさらなる三重結合とすることができる基を意味する。アルケニレン基の例は、エテニレンCHCH、1プロペニレン、2プロペニレン、1ブテニレン、2ブテニレン、3ブテニレン等を含む。アルキニレン基の例は、エチニレン、1プロピニレン、2プロピニレン等を含む。本明細書において、シクロアルキレンは、任意の安定した単環又は多環系の一部である二価の環を意味することを目的とし、ここで斯かる環は3~12の炭素原子を有するが、ヘテロ原子を有さず、斯かる環は完全に飽和されている。用語シクロアルケニレンは、任意の安定した単環又は多環系の一部である二価の環を意味することを目的とし、ここで斯かる環は3~12の炭素原子を有し、ヘテロ原子を有さず、斯かる環は少なくとも一部が不飽和である任意のアリーレン基は除く。シクロアルキレンの例は、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、及びシクロヘプチレンを含むが、それらに限定されない。シクロアルケニレンの例は、シクロペンテニレン及びシクロヘキセニレンを含むが、それらに限定されない。本明細書において、用語ヘテロシクロアルキレン及びヘテロシクロアルケニレンとは、任意の安定した単環又は多環系の一部である二価の環を意味することを目的とし、ここで斯かる環は3~約12の原子を有し、斯かる環は炭素原子及び少なくとも1つのヘテロ原子、特にN、O及びSから成る群から独立して選択される少なくとも1つのヘテロ原子から成り、ヘテロシクロアルキレンは完全に飽和された斯かる環を意味し、ヘテロシクロアルケニレンは、少なくとも一部が不飽和である環任意のアリーレン又はヘテロアリーレン環を除くを意味する。用語アリーレンとは、任意の安定した単環又は多環系の一部である二価の環又は環系を意味することを目的とし、ここで斯かる環又は環系は3~20の炭素原子を有するが、ヘテロ原子を有さず、4n2π電子ルールによって定義されるように斯かる環又は環系は芳香族部分から成り、フェニレンを含む。本明細書において、用語ヘテロアリーレンとは、任意の安定した単環又は多環系の一部である二価の環又は環系を意味し、ここで斯かる環又は環系は3~20の原子を有し、斯かる環又は環系は、4n2π電子ルールによって定義されるように芳香族部分から成り、炭素原子及び1又は2以上の窒素、硫黄、及び又は酸素ヘテロ原子を含む。本発明において、用語置換とは、示される原子の通常の価数、又は置換された基の適した原子の価数を超えず、置換が安定した化合物を生じるという条件で、リンカーの骨格に存在する1又は2以上の水素が示される選択肢の基の1つと置き換えられていることを示すことを目的とする。用語任意に置換とは、本明細書中、リンカーが、本明細書で定義される1又は2以上の置換基と非置換又は置換であることを意味することを目的とする。置換基がケト又はオキソ、すなわち、0基、チオ又はイミノ基等の場合、リンカー骨格原子上の2つの水素は置換されている。代表的な置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、アシル、アロイル、ヘテロアロイル、カルボキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、アルコキシカルボニル、ハロゲン、チオエステル、シアノ、ホスホリル、アミノ、イミノ、チオアミド、スルフヒドリル、アルキルチオ、アシルチオ、スルホニル、硫酸、スルホン酸、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、アジド、ハロアルキル、誘発性ペルフルオロアルキル例えば、トリフルオロメチル等、ハロアルコキシ、アルキルスルファニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホノアミノ、ホスホリル、リン酸、ホスホン酸、ホスフィン酸、アルキルカルボキシ、アルキルカルボキシアミド、オキソ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ任意には、例えば、アルキル、アリール、又はヘテロアリールによって一又は二置換、イミノ、カルボキサミド、カルバモイル任意に一又は二置換、例えば、アルキル、アリール、又はヘテロアリールによる、アミジノ、アミノスルホニル、アシルアミノ、アロイルアミノ、チオウレイド、アリールチオウレイド、アルキルチオウレイド、シクロアルキルチオウレイド、アリールオキシ、アルアルコキシaralkoxy、或いはOCH2nOH、OCH2nNH2、OCH2nCOOH、CH2nCOOH、COOCH2nR、CH2nNHCOOR、又はNRSO2R{式中、nは14であり、Rは独立して水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、C結合ヘテロシクロアルキル、C結合ヘテロシクロアルケニル、アリール、及びヘテロアリールから選択される多置換が可能である}を含む。当業者は、置換基、例えば、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキル等、又は官能基、例えば、OH、NHR等は、適切な場合に置換できる、ことを理解するであろう。当業者はまた、適切な場合に、置換部分も置換できることを理解するであろう。本発明の特定の実施形態において、リンカーL、特に段落[0042]又は[0081]に示されるリンカーLはアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、ヘテロアルキニレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、及びヘテロアラルキレン基のリストから選択されるm基を含む。かかるリストの各基は、任意に独立して置換でき、リンカーはさらに、次の部分ジスルフィドSS、エーテルO、チオエーテルS、アミンNH、エステルOCO又はCOO、カルボキサミドNHCO又はCONH、ウレタンNHCOO又はOCONH、及び尿素部分NHCONHの1つから独立して選択されるn部分を含み、ここでmn1である。特定の実施形態において、mは2であり、nは1である、又はmは3であり、nは2である。特定の実施形態において、リンカーは2又は3個の非置換アルキレン基、1又は2個の、非置換アルキレン基に結合しているジスルフィド、エーテル、チオエーテル、アミン、エステル、カルボキサミド、ウレタン又は尿素部分を各々含む。特定の実施形態において、リンカーL、特に[0042]に示されるリンカーLは、C、O、N及びSから独立して選択される2~20個の原子、特に2~16個の原子、より特に5~14個の原子、さらに特に6~12個の原子の直鎖である。特定の実施形態において、直鎖中の少なくとも原子の60は、C原子である。特定の実施形態において、直鎖中の原子は、単結合によって結合される。特定の実施形態において、直鎖中のC原子は独立して任意に置換されたメチレン基CH2の一部である。特に、斯かる実施形態において、任意の置換基はハロゲン及び6アルキル、特にメチルから独立して選択される。特定の実施形態において、リンカーL、特に[0042]又は[0081]に示されるリンカーLは、次のリンカー、アマトキシン側CH22標的結合部分側、アマトキシン側CH23標的結合部分側、アマトキシン側CH24標的結合部分側、アマトキシン側CH25標的結合部分側、アマトキシン側CH26標的結合部分側、アマトキシン側CH27標的結合部分側、アマトキシン側CH28標的結合部分側、アマトキシン側CH29標的結合部分側、アマトキシン側CH210標的結合部分側、アマトキシン側CH211標的結合部分側、アマトキシン側CH212標的結合部分側、アマトキシン側CH216標的結合部分側、アマトキシン側CH22SSCH22標的結合部分側、アマトキシン側CH23SSCH22標的結合部分側、アマトキシン側CH22SSCH23標的結合部分側、アマトキシン側CH23SSCH23標的結合部分側、アマトキシン側CH24SSCH24標的結合部分側、アマトキシン側CH22CMe2SSCH22標的結合部分側、アマトキシン側CH22SSCMe2CH22標的結合部分側、アマトキシン側CH22OCH22標的結合部分側、アマトキシン側CH22OCH22OCH22標的結合部分側、アマトキシン側CH22OCH22OCH22OCH22標的結合部分側、アマトキシン側CH22OCH22OCH22OCH22OCH22標的結合部分側、の基から選択される。本発明の特定の実施形態において、標的結合部分は、特異的に、腫瘍細胞上に存在するエピトープに結合する。本発明の特定の実施形態において、標的結合部分は、特異的にHer2neu又は上皮細胞接着分子EpCAMのエピトープに結合する。本発明の特定の実施形態において、標的結合部分は抗体又はその抗原結合性フラグメント、抗体様タンパク質、及び核酸アプタマーから成る群から選択される。本発明の特定の実施形態において、抗体又はその抗原結合性フラグメントは、二重特異性抗体、四重特異性抗体、ナノボディ、キメラ抗体、脱免疫化抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体から選択される。本発明の特定の実施形態において、抗原結合性フラグメントは、Fab、Fab2、Fd、Fv、一本鎖Fv、及びジスルフィド結合FvsdsFvから成る群から選択される。特定の実施形態において、抗体は、ハーセプチン又はHEA125、又はハーセプチン又はHEA125の抗原結合性フラグメントを含む抗体断片である。特定の実施形態において、1つ以上のアマトキシン分子が1つの標的結合部分に結合される。複合体中のアマトキシンの数の増加は、毒性もまた増大するであろう。従って、特定の実施形態において、アマトキシンに対する標的結合部分の比は、1標的結合部分に対して、2~15アマトキシン分子、特に2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、又は15である。抗体二量体、例えば、IgG等の場合、比の算出の目的のため、二量体は1つの標的結合部分と見なす。本発明の特定の実施形態において、複合体は、医薬としての使用のためである。本発明の特定の実施形態において、複合体は、患者における癌の治療のためである。斯かる癌は、膵癌、胆管細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、腎癌、悪性黒色腫、白血病、及び悪性リンパ腫から成る群から選択される。本明細書において、患者とは、本明細書中の標的結合部分毒素複合体の処理から利益を得る任意の哺乳類又は鳥とすることができる、ことを意味する。好ましくは、患者は、実験動物例えば、マウス又はラット、家畜例えば、モルモット、ウサギ、ニワトリ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、又はイヌを含む、又はヒトを含む霊長類から成る群から選択される。患者はヒトであることが特に好ましい。本明細書において、疾患又は疾病の治療、治療又は治療とは、次のa疾病の重症度の軽減b治療される疾病に特有の症状の進行の制限又は防止c治療される疾病に特有の症状の悪化の抑制d疾病に以前に罹患した患者における、斯かる疾病の再発の制限又は防止及びe以前に疾病症状を示した患者における、斯かる症状の再発の制限又は防止、の1又は2以上を達成することを意味する。本明細書において、治療は、本発明の複合体又は医薬組成物の患者への投与を含むことができ、投与はインビボinvivoでの投与、及び生体外exvivoでの組織、例えば、静脈移植片等への直接投与を含む。特定の実施形態において、本発明の複合体の治療上有効量が使用される。治療上有効量とは、目的を達成することに十分である治療薬の量である。所定の治療薬の有効量は、例えば、要素、薬剤の性質、投与経路、治療薬を受ける動物のサイズ及び種類、及び投与目的等によって変化する。各個体の場合における有効量は、当技術分野で確立された方法の当業者によって経験的に決定することができる。第二の態様において、本発明は、本発明の複合体、さらに、1又は2以上の医薬的に許容される希釈剤、担体、賦形剤、フィラー、結合剤、潤滑剤、滑剤、崩壊剤、吸着剤及び又は保存剤を含む医薬組成物に関する。医薬的に許容されるとは、連邦又は州政府の規制当局によって認可される、或いは米国薬局方又は動物、特にヒトにおける使用のための他の一般的に認められる薬局方に列記されることを意味する。特定の実施形態において、医薬組成物は、全身に投与される医薬の形態で使用される。これは、非経口形態を含み、注射可能な他のもの及び注入剤を含む。注射可能形態は、アンプルの形態で、又はいわゆる使用できる状態の注射可能な、例えば、使用できる状態のシリンジ又は使い捨てのシリンジとして製剤される、或いはそれとは別に複数回の吸引withdrawal用に穿刺式puncturableフラスコ中で製剤される。注射可能形態の投与は、皮下sc、筋内im、静脈内iv又は皮内ie投与の形態とすることができる。特に、各々適した注射製剤を、結晶の懸濁剤、溶液、ナノ粒子又はコロイド分散系、例えば、ヒドロゾルとして製造することが可能である。注射可能製剤は、さらに、濃縮物として製造でき、水性等張希釈剤で溶解又は分散できる。注入剤はまた、等張液、脂肪性エマルジョン、リポソーム製剤及びマイクロエマルジョンの形態で調製できる。注射可能剤と同様に、注入製剤もまた希釈用の濃縮物の形態で調製できる。注射可能製剤はまた、入院患者及び外来治療患者両者において、例えば、ミニポンプによって連続注入剤の形態で適用できる。非経口製剤に、例えば、アルブミン、血漿、増量剤、界面活性物質、有機希釈剤、pHに影響する物質、複合物質またはポリマー物質を、特に、タンパク質またはポリマーに対して本発明の標的結合部分毒素複合体の吸着に影響する物質として加えることが可能であるか、あるいは、材料、例えば注射装置またはパッケージング材料、例えばプラスチックまたはガラスに対して本発明の標的結合部分毒素複合体の吸着を減少させる目的で、それらを加えることもできる。本発明の標的結合部分毒素複合体は、非経口剤中のマイクロ担体又はナノ粒子、例えば、ポリmethアクリル酸、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリアミノ酸又はポリエーテルウレタンベースの細かく分散された粒子に結合させることができる。非経口製剤は、例えば、本発明の標的結合部分毒素複合体が前記医薬品に、微細分散、分散および懸濁のそれぞれの形態で、あるいは結晶の懸濁剤として導入される場合、複数単位原理multipleunitprincipleに基づいて、あるいは、本発明の標的結合部分毒素複合体が、後に移植される製剤、例えば錠剤またはロッド中に封入される場合、単一単位原理singleunitprincipleに基づいてデポー調製物として変更することもできる。単一単位および複数単位製剤のこれらの植込錠又はデポー医薬は、いわゆる生分解性ポリマー、例えば、乳酸及びグリコール酸のポリエステル、ポリエーテルウレタン、ポリアミノ酸、ポリmethアクリル酸又は多糖から構成されることが多い。非経口剤として製剤化される、本発明の医薬組成物の製造中に添加される補助剤及び担体は、好ましくは、滅菌水aquasterilisata、pH値影響物質等、例えば、有機又は無機酸又は塩基並びにその塩、pH値調節用緩衝物質、等張化用物質、例えば、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、グルコース及びフルクトース、界面活性剤tensides及び界面活性剤surfactants、各々、及び乳化剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンの脂肪酸の部分エステル例えば、Tween登録商標又は、例えば、ポリオキシエチレンの脂肪酸エステル例えば、Cremophor登録商標、脂肪油、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油又はヒマシ油、脂肪酸の合成エステル、例えばオレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルおよび中性油例えば、Miglyol登録商標、ならびにポリマー補助剤、例えば、ゼラチン、デキストラン、ポリビニルピロリドン、有機溶媒の溶解性を増加する添加剤、例えば、プロピレングリコール、エタノール、ΝΝジメチルアセトアミド、プロピレングリコール又は複合体形成物質、例えば、クエン酸及び尿素、保存剤、例えば、安息香酸ヒドロキシプロピルエステル及びメチルエステル、ベンジルアルコール、抗酸化剤、例えば、亜硫酸ナトリウム及び安定剤、例えば、EDTAである。好ましい実施形態において懸濁剤として本発明の医薬組成物を製剤化する場合、本発明の標的結合部分毒素複合体の沈殿を防止するための増粘剤、又は、沈渣の再懸濁能を保証するための界面活性剤及び多価電解質、及び又は複合体形成剤、例えば、EDTAが添加される。活性成分と様々なポリマーとの複合体を達成することもまた可能である。斯かるポリマーの例は、ポリエチレングリコール、ポリスチレン、カルボキシメチルセルロース、Pluronics登録商標又はポリエチレングリコールソルビット脂肪酸エステルである。本発明の標的結合部分毒素複合体は、包接化合物の形態で、例えば、シクロデキストリンと共に、液体製剤に取り込むこともまたできる。特定の実施形態において、分散剤はさらなる補助剤として添加できる。凍結乾燥物lyophilisateの製造に、スキャフォールド剤、例えばマンニット、デキストラン、ショ糖、ヒトアルブミン、乳糖、PVP又は種々のゼラチンを使用できる。さらなる態様において、本発明は、膵癌、胆管細胞癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、腎癌、悪性黒色腫、白血病、又は悪性リンパ腫の治療のための、それを必要とする患者における方法を対象とし、患者への本発明の複合体又は医薬組成物の有効量の投与を含む。他の態様において、本発明は、本発明の複合体の合成のための中間体としてのアマトキシン複合分子に関し、当該アマトキシン複合分子は、iアマトキシンアミノ酸1のγC原子、特にアミド結合iiアマトキシンアミノ酸3のδC原子に結合される酸素原子、特にエステル結合、エーテル結合又はウレタン結合又はiiiアマトキシンアミノ酸4の6C原子、特にアマトキシンアミノ酸4の6C原子に結合される酸素原子を通してアマトキシンに結合されるリンカーLを含み、いずれの場合にも、リンカーLが、カルバミン酸誘導体NHCOX式中、Xは、標的結合部分の一級アミンと置換できる脱離基であるを含む。一実施形態において、アマトキシン複合分子は、次の構造iアマトキシンγCONHLNHCOXiiアマトキシンδCOCOLNHCOXiiiアマトキシンδCOLNHCOXivアマトキシンδCOCONHLNHCOX及びvアマトキシン6COLNHCOX、の1つから選択される構造を有する。特定の実施形態において、アマトキシンは、αアマニチン、βアマニチン、γアマニチン、εアマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、又はアマヌリン酸、或いはその塩又は類似体から選択される。特定の実施形態において、リンカーLは、任意に置換されたアルキレン、ヘテロアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキニレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、アラルキレン、又はヘテロアラルキレン基である。特定の実施形態において、リンカーLは、次の部分ジスルフィド、エーテル、アミン、エステル、カルボキサミド、ウレタン、及び尿素部分、の1つから選択される部分を含む。特定の実施形態において、官能基Xはtブチルオキシ、スクシンイミジルオキシ、1Oスクシンイミジルオキシ3スルホナートスルホNHS、O4ニトロフェニルオキシ、O3ニトロフェニルオキシ、O24ジニトロフェニルオキシ、O24ジクロロ6ニトロフェニルオキシ、ペンタフルオロフェニルオキシ、ペンタクロロフェニルオキシ、O245トリクロロフェニルオキシ、O34ジヒドロ3ヒドロキシ4オキソ123ベンゾトリアジン3イル、Oエンド1ヒドロキシ5ノルボルネン23ジカルボキシミド1イル、1フタルイミドイルオキシ、1ベンゾトリアゾリルオキシ、17アザベンゾトリアゾリルオキシ、及びNイミダゾリル、から選択される。さらなる態様において、本発明は、本発明のアマトキシン複合体を合成するための方法に関し、本発明のアマトキシン複合分子を、一級アミノ基を含む標的結合部分と反応させる工程を含む。以下に、本発明を非限定的実施例によってより詳細に説明する。実施例1αアマニチンハーセプチン抗体複合体HerDSC300134の合成116NHboc6アミノヘキシルαアマニチンHDP300132の合成アルゴン下及び室温で、真空乾燥したαアマニチンを、900μlの乾燥ジメチルスルホキシドDMSO中に3000mg326μmol、溶解した。カリウムtertブチレート366mg326μmol及び7318mg2612μmol、8当量のNHBocアミノヘキシルブロミドFuka89171を添加した。室温で6時間後、反応混合物を、DMSO中の50μlの033M酢酸溶液でpH5まで酸性化した。揮発性物質を真空内で蒸発させ、1000μlメタノール中に残渣を溶解し、20mlのジエチルエーテルで希釈した。沈殿物を回収し、1000μlメタノール中に取り出した。斯かる溶液を、1000μlの水で希釈し、LaPrepHPLCカラムKromasil100C18、250mmx20mm、10pm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出上での精製のために使用した。溶媒A95水5メタノール005トリフルオロ酢酸溶媒B10水90メタノール005トリフルオロ酢酸勾配05min100A520min0A2040min0A198分の保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。粉末159mg43収率。MS1119MH1141MNa1266アミノヘキシルαアマニチンHDP300134の合成990mg885μmοΙの6NHboc6アミノヘキシルαアマニチンHDP300132を、250μlのトリフルオロ酢酸中に溶解した。反応混合物をアルゴン下で環境温度で撹拌した。2分後、酸を真空内で20°Cで除去し、残渣を乾燥した。未精製アマニチンエーテルをLaPrepHPLC上で精製した。カラムKromasil100C18、d10mm、10pm、メタノール水005TFA、流速6mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール005トリフルオロ酢酸溶媒B10水90メタノール005トリフルオロ酢酸勾配05min100A525min50A2530min0A3035min0A3540min100A、4045min100A同一保持時間145minでの画分を回収し、溶媒を蒸発させた。910mg99収率の白色粉末。MS1019MH1041MNa1.3HDP300134抗体誘導体HerDSC300134の合成スキーム1スキーム1及び実施例に示される他のスキームにおいて、ハーセプチンは、ハーセプチン抗体タンパク質の残りの部分を表しているR3及びR4と共に、1つのリジン側鎖を示している模式的な式によって表される。131異なる毒素ペイロードでの、66アミノヘキシル6ヒドロキシサクシニミジルαアマニチンハーセプチン複合体HerDSC300134の合成表2500mgの66アミノヘキシルαアマニチンHDP300134を、538μlの乾燥ジメチルホルムアミドDMFに溶解した。室温でのアルゴン下及び撹拌下で、DMF中のジヒドロキシスクシンイミドカーボネートDSCの186μlの溶液100μlDMF中、256mgと100μlのトリエチルアミンをすみやかに添加した。反応混合物を室温で撹拌した。12時間後、60mlの低温のジエチルエーテルを添加した。αアマニチン66アミノヘキシル6ヒドロキシサクシニミジルカーボネートの沈殿物を回収し、数回ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥した。残存している固体を750μlDMFに取り出した溶液A。1140mgハーセプチンを、190mlのリン酸緩衝食塩水PBS、pH74に溶解した溶液B。表2ハーセプチン溶液の3つの試料を、αアマニチン66アミノヘキシル6ヒドロキシサクシニミジルカーボネート溶液の異なる量で処理する3つのハーセプチンアマニチンリンカー溶液を4°Cで14時間振盪し、それぞれSephadexG25ゲル濾過クロマトグラフィーXK16カラム2mlminによって分離した。G25カラムを、500mlPBS溶液、pH74で予洗した。HerDSC300134複合体画分をUV吸収によって検出した。タンパク質濃度をRotiQuantAssayCarlRothGermanyによって測定した。ハーセプチンのアマニチンペイロードを、A280nm及びA310nmでのUV吸収測定によって測定した。実施例2αアマニチンハーセプチン抗体複合体HerDSC300256の合成211イソシアナート6BocNHアミノヘキサンHDP300247の調製250g1156mmolNHBoc16ヘキサメチレンジアミンAidrich79229を、35mlジクロロメタンに溶解した。水中の35mlの飽和NaHCO3溶液を添加した。1143g385mmolビストリクロロメチルカーボネートtriphosgeneの添加後、反応混合物を勢いよく0°Cで30分間撹拌した。有機層を分離し、水性相を15mlジクロロメタンで3回抽出した。結合有機相をMgSO4中で乾燥し、蒸発させた。油性残渣を、Kugelrohrオーブン中で150°C且つ059mbarで分画した。223g80の透明油MS242M22δONHboc6アミノヘキシルカルバモイルαアマニチンHDP300253の合成アルゴン雰囲気下で、1343mg146μmolの真空乾燥したαアマニチンを、1000μlの乾燥ジメチルホルムアミドDMFに溶解した。708mg292μmolのNHBoc6イソシアナートアミノヘキサン及び1846mg292μmolのジブチルジラウリルスタネートを添加し、反応混合物を環境温度で撹拌した。23時間後、さらなる1343mg146μmolのNHBoc6イソシアナートアミノヘキサンを添加した。52時間後、反応混合物を200μlメタノールで加水分解し、蒸発させ乾燥させた。残渣を1200μlのDMSOに溶解し、LaPrepHPLCカラムKromasil100C18、10μlτι、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出上で精製した。溶媒A95水5メタノール溶媒B5水95メタノール勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。同一保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。906mg53収率の白色固体。MS1161MH1183MNaδO6アミノヘキシルカルバモイルαアマニチンHDP300256の合成906mg78μmolのHDP300253を、250μlのトリフルオロ酢酸に溶解し、2分間環境温度で撹拌した。反応混合物を蒸発させ、乾燥させ、残渣を15mlのアセトニトリルで2度共蒸発coevaporatedさせた。固体をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μm、250mmx20mm、アセトニトリル水、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5アセトニトリル。溶媒B5水95アセトニトリル。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。保持時間1217分での画分を回収し、蒸発させ白色固体を得た。875mg95収率。MS1061MH1083MNa24HDP300256抗体誘導体HerDSC300256の合成スキーム2241HDP300256ハーセプチン複合体HerDSC300256[33]の合成100mgのHDP300256を、108μlの乾燥ジメチルホルムアミドDMFに溶解した。室温でアルゴン下及び撹拌下で、DMF256mgin100μlDMF中のジヒドロキシスクシンイミドカーボネートDSCの100μlの溶液と、20μlのトリエチルアミンとをすみやかに添加した。反応混合物を、室温で撹拌した。一晩のインキュベーション後に、30mlの低温のジエチルエーテルを添加した。沈殿物を回収し、数回ジエチルエーテルで洗浄し真空中で乾燥した。残存している固体を143μlのDMFに取り出した溶液A。120mgのハーセプチンを、60mlのリン酸緩衝食塩水PBS、pH74に溶解した溶液B。溶液A及び溶液Bを混合した。ハーセプチンアマニチンリンカー溶液を、4°Cで14時間振盪し、SephadexG25ゲル濾過クロマトグラフィーXK16カラム2mlminによって分離した。G25カラムを500mlPBS溶液、pH74で予洗した。HerDSC300256複合体画分を、UV吸収によって検出した。タンパク質濃度を、RotiQuantAssayCarlRothGermanyによって測定した。ハーセプチンのアマニチンペイロードを、A280nm及びA310nmのUV吸収の測定によって測定した。各ハーセプチン分子に関する33アマニチン分子の毒素ペイロードを、算出した。実施例3Dアマニチンハーセプチン抗体複合体HerDSC300304の合成31BocNHヘキサメチレンジアミノKアマニチンアミドHDP300299アルゴン下で、465mg505molの真空乾燥したβアマニチンを、1000μlの乾燥ジメチルホルムアミドDMFに溶解した。DMF中の100μlのBocNHヘキサメチレンジアミンの015M溶液と、DMF中の100μlのジイソプロピルエチルアミンDIPEAの015M溶液を、環境温度で添加した。DMF中の030Mのベンゾトリアゾール1イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファートPyBOPの100μlの溶液の最終添加後に、反応混合物を20時間撹拌し100μlの水で加水分解した。反応混合物を蒸発させ、真空内で乾燥させ、残渣を1000μlのジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。精製をLaPrepHPLC上で行ったカラムKromasil100C18、10μm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。同一保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。445mg80収率の白色固体。MS1119MH1141MNa326ヘキサメチレンジアミノβアマニチンアミドHDP300304414mg370μmolのBocNHヘキサメチレンジアミノβアマニチンアミドHDP300299を、500μlのトリフルオロ酢酸TFAに溶解し、2分間撹拌した。過剰TFAを真空内で蒸発させ、残渣を1000μlアセトニトリルの2回量と共に共蒸発させた。残存している固体をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、A295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。同一保持時間13431402分での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣を2000μlの水に取り出し、溶液を液体窒素で凍結させ、一晩凍結乾燥させた。400mg95収率の白色の泡。MS1018MH1041MNa33HDP300304抗体誘導体HerDSC300304の合成スキーム3331HDP300304ハーセプチン複合体HerDSC300304[47]の合成133mgHDP300304を、144μlの乾燥ジメチルホルムアミドDMFに溶解した。アルゴン下及び撹拌下で室温で、DMF中の134μlのジヒドロキシスクシンイミドカーボネートDSC溶液100μlDMF中、256mgと、26μlのトリエチルアミンをすみやかに添加した。反応混合物を室温で撹拌した。12時間後、30mlの低温のジエチルエーテルを添加した。沈殿物を回収し、数回ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥した。残存している固体を、200μlDMFに取り出した溶液A。120mgハーセプチンを、40mlリン酸緩衝食塩水PBS、pH74に溶解した溶液B。溶液A及び溶液Bを混合した。ハーセプチンアマニチンリンカー溶液を、4°Cで14時間振盪し、SephadexG25ゲル濾過クロマトグラフィーXK6カラム2mlminによって分離した。G25カラムを500mlのPBS溶液、pH74で予洗した。HerDSC300304複合体画分を、UV吸収によって検出した。タンパク質濃度を、RotiQuantAssayCarlRothGermanyによって測定した。ハーセプチンのアマニチンペイロードを、A280nm及びA310nmでのUV吸収の測定によって測定した。各ハーセプチン分子に関する47アマニチン分子の毒素ペイロードを算出した。実施例4アマニチンハーセプチン複合体の他の構造実施例5インビトロinvitroでの異なるHER2良性及びHER2悪性腫瘍細胞株へのハーセプチンアマニチン複合体の細胞毒性HerDSC300134、HerDSC300256、Herエステル300001、HerDCC300252及びHerDCC300127の細胞毒性活性を、インビトロinvitroで、HER2良性腫瘍細胞株SKOV3ovar、SKBR3乳房、NCIN87胃及びHER2悪性腫瘍細胞株MDAMB231乳房及び化学発光BrdU取り込みアッセイRocheDiagnosticsで評価した。細胞生存率を、インキュベーションの72時間~96時間後に、異なる濃度のハーセプチンアマニチン複合体で37°C且つ5CO2で、BMGLabtechOptimaマイクロプレートリーダーにおいて、抗BrdUHRP抗体での固定且つ透過性細胞の測定によって測定した。用量反応曲線のEC50値を、GraphpadPrism40ソフトウェアによって算出した図25。インビトロinvitroでの血漿中のハーセプチンアマニチン複合体の安定性51血漿インキュベーション後のアマニチンの遊離35μΜのハーセプチンアマニチン複合体を、ウォーターバス中、37°Cで、マウス血漿中で最長14日間インキュベートした。試料を異なる時点で回収し、ELISA方法によって遊離された低分子アマニチン化合物に関して分析した。従って、遊離されたアマニチン及びアマニチン代謝物を、異なる時点で80EtOHで抽出した。溶液を5分間の10000gの遠心分離によってクリアにし、上清を70°Cで保存した。白色LumitracGreinerマイクロウェルプレートを、ウサギ抗アマニチン抗血清で一晩4°Cでコーティングした。プレートをPBS中の3BSAで1時間37°Cでブロックし、3回005TweenPBSで洗浄した。所定の濃度のアマニチン試料及びアマニチン溶液を、1BSAPBS中の1nMビオチニルアマニチンと混合し、コーティングしたウェル中で1時間37°Cでインキュベートした。ウェルを3回005TweenPBSで洗浄した。ストレプトアビジンHRPSigmaAldrichストック溶液PBS中1mgmlを、3BSAPBS中で11000に希釈し、50μlを各ウェルに添加した。37°Cでの1時間のインキュベーション後に、ウェルを3回005TweenPBSで洗浄した。50μlのルミノール溶液Applichemを、各ウェルに添加し、発光シグナルをBMGLabtechOptimaリ-ダーによって測定した。遊離されたアマニチン化合物の量を、直線回帰によって算出した図6~7。52血漿インキュベーション後の細胞毒性活性ハーセプチンアマニチン複合体を、37°Cのウォーターバスで、ヒト血漿中で最長11日間インキュベートした。試料を異なる時点で回収し、インビトロinvitroでHER2良性SKOV3細胞への残存している細胞毒性効力に関して、化学発光BrdU取り込みアッセイRocheDiagnosticsによって分析した。ハーセプチンアマニチン複合体の異なる濃度での、37°C、5CO2でのインキュベーションの72時間後に、BMGLabtechOptimaマイクロプレートリーダーにおいて、抗BrdUHRP抗体での固定及び透過性細胞の測定によって細胞生存率を測定した。用量反応曲線のEC50値を、GraphpadPrism40ソフトウェアによって算出した図8。HER2良性癌細胞によるマウス異種移植モデルにおける、ハーセプチンアマニチン複合体の抗腫瘍性活性6週齢のインタクトメスBALBcnunu胸腺欠損マウスを購入しJanvier、ランダムに8匹のマウスの3つの群に分けた。25x106SKOV3細胞をscでそれぞれのマウスの側腹部に注射した。腫瘍接種の19日後に50pgkgの用量でハーセプチンアマニチン複合体を一度ivで注射し、一方負の対照群にはビヒクルNaCl緩衝剤を注射した。パラメータ、例えば、生存、体重及び腫瘍サイズ等を記録した図9を参照。実施例6さらなるαアマニチンリンカー化合物HDP300353、HDP300354、HDP300355、HDP300409、HDP300410、HDP300411及びHDP300412の調製61アマニチンリンカーHDP3003536116NHboc6アミノ34ジチアヘキシルαアマニチンHDP300341の合成678mg738μmolの真空乾燥したαアマニチンを500μlジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。水DMSO11の1867mg5902μmol、8当量のNHbocアミノ34ジチアヘキシルブロミドと、738μl738μmol、1当量LiOH01Mを、アルゴン下で添加した。1、35、45、65及び8時間後、さらなる等量の01MLiOH溶液を添加した。未精製反応混合物を、LaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx10mm、メタノール水005TFA、流速65mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール、005トリフルオロ酢酸。溶媒B10水90メタノール、005トリフルオロ酢酸。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。208214分の保持時間での画分を回収し、溶媒を真空中で蒸発させた。129mg15収率の白色固体。MS1154MH6126O6アミノ34ジチアヘキシルαアマニチンHDP300353の合成129mg112μmolの6O6アミノ34ジチアヘキシルαアマニチンHDP300341を、200μlトリフルオロ酢酸TFAに溶解した。反応混合物をアルゴン下、環境温度で撹拌した。1分後、トリフルオロ酢酸を1000μlトルエンで希釈し、蒸発乾燥させた。温度は20°Cを超えるべきでない。このプロセスを1000μlトルエン及び1000μlアセトニトリルで反復した2x。未精製αアマニチンエーテルをLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μm、250mmx10mm、メタノール水005TFA、流速65mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール、005トリフルオロ酢酸。溶媒B10水90メタノール、005トリフルオロ酢酸。勾配05min100A525min50A2530min0A3035min0A3540min100A、4045min100A。161170分の保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣を水中で凍結乾燥した。039mg30収率、TFA塩の黄色固体。MS1054MH62アマニチンリンカーHDP3003546216ONHboc7アミノ45ジチアヘプチルαアマニチンHDP300349の合成567mg617μmolの真空乾燥したαアマニチンを、250μlの乾燥ジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。1900mg5800μmol、93当量のNHboc7アミノ4、5ジチアヘプチルブロミドHDP300345を、室温、アルゴン雰囲気下で添加した。水DMSO11中の617μl610μmol、1当量の01MLiOHをすみやかに添加した。反応混合物を35時間撹拌し、水DMSO11中のさらなる10μl1300mg397μmοΙ63当量NHboc7アミノ4,5ジチアヘプチルブロミドHDP300345及び617μl01MLiOHを添加した。8時間後、未精製反応混合物をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール、005トリフルオロ酢酸。溶媒B10水90メタノール、005トリフルオロ酢酸。勾配05min100A520min0A2030min0A3035min100A3540min100A。194210分の保持時間での画分を回収し、室温で蒸発乾燥させた。483mg67収率の白色粉末。MS1168MH6226O7アミノ4,5ジチアヘプチルαアマニチンHDP300354の合成483mg413μmοΙ6ONHboc7アミノ4,5ジチアヘプチルαアマニチンHDP300349を、200μlトリフルオロ酢酸TFAに溶解した。反応混合物を1分間アルゴン下で撹拌し、環境温度で蒸発乾燥させた。残渣を1000μlトルエン及び1000μlアセトニトリルで共蒸発させた。残存している固体をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μm、250mmx10mm、メタノール水005TFA、流速65mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール、005トリフルオロ酢酸。溶媒B10水90メタノール、005トリフルオロ酢酸。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。171175分の保持時間での画分を回収し、蒸発させた。残渣を水中で凍結乾燥した。036mg70収率、TFA塩の黄色固体。MS1068MH63アマニチンリンカーHDP3003556316ONHboc7アミノ3,3ジメチル4,5ジチアヘプチルαアマニチンHDP300350の合成567mg617μmolの真空乾燥したαアマニチンを、250μlの乾燥ジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。アルゴン下で、水DMSO11中の1800mg5162μmοΙ、98当量のNHboc7アミノ3,3ジメチル4,5ジチアヘプチルブロミドHDP300348及び617μl610μmol、1当量の01MLiOHを添加した。2時間後、反応混合物を繰り返し10μl1200mg344μmol56当量のNHboc7アミノ3,3ジメチル4,5ジチアヘプチルブロミドHDP300345及び617μlの01MLiOHで処理した。8時間後、混合物をDMSOで希釈し、LaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール、005トリフルオロ酢酸。溶媒B10水90メタノール、005トリフルオロ酢酸。勾配05min100A520min0A2030min0A3035min100A3540min100A。205210分の保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。051mg7収率転換αアマニチンに基づく48収率。MS1196MH6326O7アミノ3,3ジメチル4,5ジチアヘプチルαアマニチンHDP300355の合成051mg043μmolHDP300350を、200μlトリフルオロ酢酸TFAに溶解し、1分間環境温度で撹拌した。トリフルオロ酢酸を1000μlトルエンで希釈し、20°Cで蒸発乾燥させた。斯かるプロセスを1000μlトルエン及び1000μlアセトニトリルで反復した2x。反応混合物をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μηι、250mmx10mm、メタノール水005TFA、流速65mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール、005トリフルオロ酢酸。溶媒B10水90メタノール、005トリフルオロ酢酸。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。182186分の保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。残渣を水中で凍結乾燥した。015mg27収率、TFA塩の黄色固体。MS1096MH64アマニチンリンカーHDP3004096416ONHboc12アミノドデシルαアマニチンHDP300404の合成667mg726μmolの真空乾燥したαアマニチンを、250μlの乾燥ジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。水DMSO11中の2100mg5810μmοΙ、8当量のNHboc12アミノドデシルブロミドHDP300383及び726μl726μmol、1当量の01MLiOHを添加した。6時間後、365μlの01MLiOHを添加し、2時間後に混合物をDMSO中の726μlの01M酢酸溶液でクエンチした。未精製反応生成物をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。220227分の保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。596mg68収率の白色固体。MS1202MH6426O12アミノドデシルαアマニチンHDP300409の合成596mg496μmolHDP300404を200μlトリフルオロ酢酸TFAに溶解し、1分環境温度で撹拌した。反応混合物を1000μlトルエン及びアセトニトリルで共蒸発させ、残存している固体をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx20mm、アセトニトリル水、流速26mlmin、A295nmでの検出。溶媒A95水5アセトニトリル。溶媒B5水95アセトニトリル。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。保持時間186192分での画分を回収し、蒸発させた白色固体を得た。603mg99収率、TFA塩。MS1102MH65アマニチンリンカーHDP3004106516ONHboc11アミノ3,6,9トリオキサウンデシルαアマニチンHDP300405の合成667mg726μmolの真空乾燥したαアマニチンを、250μlの乾燥ジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。水DMSO11中の2051mg5810μmol、8当量のNHboc11アミノ3,6,9トリオキサウンデシルブロミドHDP300391及び726μl726μmol、1当量の01MLiOHを添加した。反応を環境温度、アルゴン雰囲気下で行った。6時間後に、さらなるLiOH塩基05当量を添加した。混合物を8時間後に、DMSO中の726μlの01M酢酸溶液でクエンチし、LaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。181186分の保持時間での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。468mg54収率の固体。MS1194MH6526O11アミノ3,6,9トリオキサウンデシルαアマニチンHDP300410の合成468mg392molのHDP300405を200μlトリフルオロ酢酸TFAに溶解し、1分間環境温度で撹拌した。反応混合物をトルエン及びアセトニトリルで共蒸発させ、未精製固体をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。保持時間186192分での画分を回収し蒸発させた。残存している固体を水中で凍結乾燥させた。244mg52収率、TFA塩。白色粉末MS1102MH66アマニチンリンカーHDP3004116616ONHboc16アミノヘキサデシルαアマニチンHDP300406の合成667mg726μmolの真空乾燥したαアマニチンを、750μlの乾燥ジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。2400mg5810μmol、8当量のNHboc16アミノヘキサデシルブロミドHDP300398を室温、アルゴン下で添加した。水DMSO11中の726μl726μmol、1当量の01MLiOHを添加し、反応混合物を50°Cまで加熱した。6時間後に、さらなるLiOH塩基365μlを添加し、反応混合物を8時間後にDMSO中の726μlの01M酢酸溶液でクエンチした。凝固反応混合物を、DMSOで希釈し、LaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。234241分の保持時間での画分を回収し溶媒を蒸発させた。441mg48収率の白色固体。MS1258MH6626O16アミノヘキサデシルαアマニチンHDP300411の合成441mg350μmolのHDP300406を、200μlトリフルオロ酢酸TFAに溶解し、2分間環境温度で撹拌した。反応混合物を2回1000μlトルエン及び1000μlアセトニトリルで共蒸発させ、固体残渣をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。205212分の保持時間での画分を回収し蒸発させた。残渣を水中で凍結乾燥した。244mg52収率、TFA塩。MS1102MH67アマニチンリンカーHDP3004126716ONHboc2アミノエチルαアマニチンHDP300317の合成2000mg218μmolの真空乾燥したαアマニチンを、900μlの乾燥ジメチルスルホキシドDMSOに溶解した。DMSO中の1000μl218μmol、1当量のカリウムtブチレートの0218M溶液及び3900mg1741μmol、8当量NHboc2アミノエチルブロミドFlukaから得られたを室温で添加した。4及び6時間後に、さらなる1及び2等量のカリウムtブチレート及びNHboc2アミノエチルブロミドを添加した。混合物を23時間後にDMSO中の726μlの01M酢酸溶液でクエンチし、LaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10pm、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。保持時間132145分での画分を回収し、溶媒を蒸発させた。386mg16収率の白色固体。MS1062MH6726O2アミノエチルαアマニチンHDP300412の合成386mg336μmolHDP300317を200μlトリフルオロ酢酸TFAに溶解し、2分間室温で撹拌した。反応混合物を1000μlトルエン及び1000μlアセトニトリルで共蒸発させ、固体をLaPrepHPLC上で精製したカラムKromasil100C18、10μlτι、250mmx20mm、メタノール水005TFA、流速26mlmin、λ295nmでの検出。溶媒A95水5メタノール。溶媒B5水95メタノール。勾配05min100A520min0A2025min0A2527min100A2735min100A。保持時間205212分での画分を回収し、蒸発させた。残渣を水中で凍結乾燥した。154mg44収率、TFA塩の白色固体。MS962MH"