"HER受容体の不活性化状態に結合する単離された抗体またはその断片であって、該抗体はリガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル変換の両方を阻害する、抗体またはその断片。不活性化状態におけるHER受容体を安定化する、請求項1に記載の単離された抗体またはその断片。HER受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、リガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル変換の両方を阻害する、抗体またはその断片。HER受容体の不活性化状態に結合する、請求項3に記載の単離された抗体またはその断片。不活性化状態におけるHER受容体を安定化する、請求項4に記載の単離された抗体またはその断片。HER受容体がHER1、HER2、HER3およびHER4からなる群から選択される、請求項2に記載の単離された抗体またはその断片。抗体がモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および合成抗体からなる群から選択される、請求項3に記載の単離された抗体またはその断片。HER受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、抗体の結合は、不活性化状態におけるHER受容体を安定化し、HERリガンドは、HER受容体上のリガンド結合部位に同時に結合することができる、抗体またはその断片。リガンド結合部位へのHERリガンド結合が、活性状態へのHER受容体における構造変化を誘導しない、請求項8に記載の単離された抗体またはその断片。リガンド結合部位へのHERリガンド結合がシグナル変換を活性化しない、請求項8に記載の単離された抗体またはその断片。HERリガンドが、ニューレグリン1NRG、ニューレグリン2、ニューレグリン3、ニューレグリン4、ベタセルリン、ヘパリン結合上皮細胞増殖因子、エピレグリン、上皮細胞増殖因子、アンフィレグリンおよび形質転換増殖因子アルファからなる群から選択される、請求項8に記載の単離された抗体またはその断片。HER受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、抗体の結合は、HER受容体が共受容体と二量体化して、受容体-受容体複合体を形成することができないように、不活性化状態においてHER受容体を安定化する、抗体またはその断片。受容体-受容体複合体を形成できないことが、シグナル変換の活性化を防止する、請求項12に記載の単離された抗体またはその断片。シグナル変換がリガンド非依存性シグナル変換である、請求項12に記載の単離された抗体またはその断片。シグナル変換がリガンド依存性シグナル変換である、請求項12に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体の不活性な立体構造に結合する単離された抗体またはその断片であって、該抗体はリガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル変換の両方を阻害する、抗体またはその断片。不活性化状態におけるHER3受容体を安定化する、請求項16に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、リガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル変換の両方を阻害する、抗体またはその断片。HER3受容体の不活性化状態に結合する、請求項18に記載の単離された抗体またはその断片。不活性化状態におけるHER3受容体を安定化する、請求項18に記載の単離された抗体またはその断片。抗体がモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および合成抗体からなる群から選択される、請求項18に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、抗体の結合は、不活性化状態におけるHER3受容体を安定化し、HER3リガンドは、HER3受容体上のリガンド結合部位に同時に結合する、抗体またはその断片。リガンド結合部位へのHER3リガンド結合が、活性状態へのHER3受容体における構造変化を誘導しない、請求項22に記載の単離された抗体またはその断片。リガンド結合部位へのHER3リガンド結合が、シグナル変換を活性化しない、請求項22に記載の単離された抗体またはその断片。HER3リガンドが、ニューレグリン1NRG、ニューレグリン2、ベタセルリン、ヘパリン結合上皮細胞増殖因子およびエピレグリンからなる群から選択される、請求項22に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、リガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル変換の両方を阻害する、抗体またはその断片。HER3受容体の不活性化状態に結合する、請求項26に記載の単離された抗体またはその断片。不活性化状態におけるHER3受容体を安定化する、請求項27に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープに結合する単離された抗体またはその断片であって、不活性なHER3受容体に結合し、リガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル変換の両方を阻害する、抗体またはその断片。不活性化状態におけるHER3受容体を安定化する、請求項28に記載の単離された抗体またはその断片。立体構造的エピトープがアミノ酸残基265-277、315ドメイン2の、571、582-584、596-597、600-602、609-615ドメイン4のまたはそれらのサブセットを含む、請求項29に記載の単離された抗体。抗体またはそれらの断片のVHが、少なくとも1つの以下のHER3残基:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597に結合する、請求項29に記載の単離された抗体。抗体またはそれらの断片のVLが、少なくとも1つの以下のHER3残基:Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615に結合する、請求項29に記載の単離された抗体。第1のHER受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含む第1のHER受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、HER受容体リガンドの非存在下で第1のHER受容体への抗体またはその断片の結合は、第1のHER受容体および第2のHER受容体を発現する細胞中の第1のHER受容体-第2のHER受容体タンパク質複合体のリガンド非依存性形成を減少させる、抗体またはその断片。第1のHER受容体が、第2のHER受容体と二量体化して、第1のHER受容体-第2のHER受容体タンパク質複合体を形成することができないように、不活性化状態において第1のHER受容体を安定化する、請求項34に記載の単離された抗体またはその断片。第1のHER受容体-第2のHER受容体タンパク質複合体を形成できないことがシグナル変換の活性化を防止する、請求項35に記載の単離された抗体またはその断片。第1のHERが、HER1、HER2、HER3およびHER4からなる群から選択される、請求項35に記載の単離された抗体またはその断片。第2のHERが、HER1、HER2、HER3およびHER4からなる群から選択される、請求項35に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、HER3リガンドの非存在下でHER3受容体への抗体またはその断片の結合は、HER2およびHER3を発現する細胞中のHER2-HER3タンパク質複合体のリガンド非依存性形成を減少させる、抗体またはその断片。HER3受容体が、HER2受容体と二量体化して、HER2-HER3タンパク質複合体を形成することができないように、不活性化状態においてHER3受容体を安定化する、請求項39に記載の単離された抗体またはその断片。HER2-HER3タンパク質複合体を形成できないことがシグナル変換の活性化を防止する、請求項40に記載の単離された抗体またはその断片。第1のHER受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含む第1のHER受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、HERリガンドの存在下で第1のHER受容体への抗体またはその断片の結合は、第1のHER受容体および第2のHER受容体を発現する細胞中の第1のHER受容体-第2のHER受容体タンパク質複合体のリガンド依存性形成を減少させる、抗体またはその断片。HER受容体が、第1のHERリガンドの存在下で第2のHER受容体と二量体化して、第1のHER受容体-第2のHER受容体タンパク質複合体を形成することができないように、不活性化状態において第1のHER受容体を安定化する、請求項42に記載の単離された抗体またはその断片。第1のHER受容体-第2のHER受容体タンパク質複合体を形成できないことが、シグナル変換の活性化を防止する、請求項43に記載の単離された抗体またはその断片。HERリガンドが、ニューレグリン1NRG、ニューレグリン2、ニューレグリン3、ニューレグリン4、ベタセルリン、ヘパリン結合上皮細胞増殖因子、エピレグリン、上皮細胞増殖因子、アンフィレグリンおよび形質転換増殖因子アルファからなる群から選択される、請求項42に記載の単離された抗体またはその断片。第1のHERが、HER1、HER2、HER3およびHER4からなる群から選択される、請求項42に記載の単離された抗体またはその断片。第2のHERが、HER1、HER2、HER3およびHER4からなる群から選択される、請求項42に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、HERリガンドの存在下でHER3受容体への抗体またはその断片の結合は、HER2およびHER3を発現する細胞中のHER2-HER3タンパク質複合体のリガンド依存性形成を減少させる、抗体またはその断片。HER3受容体が、HERリガンドの存在下でHER2受容体と二量体化して、HER2-HER3タンパク質複合体を形成することができないように、不活性化状態においてHER3受容体を安定化する、請求項48に記載の単離された抗体またはその断片。HER2-HER3タンパク質複合体を形成できないことがシグナル変換の活性化を防止する、請求項49に記載の単離された抗体またはその断片。リガンドが、ニューレグリン1NRG、ニューレグリン2、ベタセルリン、ヘパリン結合上皮細胞増殖因子およびエピレグリンからなる群から選択される、請求項48に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、HER3リガンド非依存性リン酸化アッセイにより評価されるとき、HER3のリン酸化を阻害する、抗体またはその断片。HER3リガンド非依存性リン酸化アッセイにHER2増幅細胞を使用し、HER2増幅細胞がSK-Br-3細胞である、請求項52に記載の単離された抗体またはその断片。HER3受容体のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基を含むHER3受容体の立体構造的エピトープを認識する単離された抗体またはその断片であって、HER3リガンド依存性リン酸化アッセイにより評価されるとき、HER3のリン酸化を阻害する、抗体またはその断片。HER3リガンド依存性リン酸化アッセイにニューレグリンNRGの存在下で刺激MCF7細胞を使用する、請求項54に記載の単離された抗体またはその断片。少なくとも1×107M-1、108M-1、109M-1、1010M-1、1011M-1、1012M-1、1013M-1の解離KDを有する、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。ホスホ-HER3およびホスホ-Aktからなる群から選択されるインビトロリン酸化アッセイにより測定されるとき、HER3のリン酸化を阻害する、請求項56に記載の単離された抗体またはその断片。表1に記載されている抗体と交差競合する、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。表1に記載されている抗体と同じ立体構造的エピトープに結合する単離された抗体またはその断片。抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、FabおよびscFvからなる群から選択される、上記請求項のいずれかに記載の単離された抗体またはその断片。抗体がヒトである、上記請求項のいずれかに記載の単離された抗体またはその断片。ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域を含む、上記請求項のいずれかに記載の単離された抗体またはその断片。ヒトHER3およびカニクイザルHER3の両方に結合する、上記請求項のいずれかに記載の単離された抗体またはその断片。IgGアイソタイプである、上記請求項のいずれかに記載の単離された抗体またはその断片。アミノ酸がそれぞれのヒトVHまたはVL生殖細胞系列配列由来の抗体フレームワークに置換されているフレームワークを含む、上記請求項のいずれかに記載の単離された抗体またはその断片。表1におけるいずれかの抗体のKabatまたはChothiaにより計算された1、2、3、4、5または6つのCDRを含むHER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。配列番号:4、配列番号:10、配列番号:22、配列番号:28、配列番号:40、配列番号:46、配列番号:58、配列番号:64、配列番号:76、配列番号:82、配列番号:94、配列番号:100、配列番号:112、配列番号:118、配列番号:130、配列番号:136、配列番号:148、配列番号:166、配列番号:184、配列番号:202、配列番号:220、配列番号:238、配列番号:256、配列番号:274、配列番号:292、配列番号:310、配列番号:328、配列番号:346および配列番号:364からなる群から選択される重鎖CDR3を含むHER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:15を含むVHおよび配列番号:14を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:33を含むVHおよび配列番号:32を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:51を含むVHおよび配列番号:50を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:69を含むVHおよび配列番号:68を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:87を含むVHおよび配列番号:86を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:105を含むVHおよび配列番号:104を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:123を含むVHおよび配列番号:122を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:141を含むVHおよび配列番号:140を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:159を含むVHおよび配列番号:158を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:177を含むVHおよび配列番号:176を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:195を含むVHおよび配列番号:194を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:213を含むVHおよび配列番号:212を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:231を含むVHおよび配列番号:230を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:249を含むVHおよび配列番号:248を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:267を含むVHおよび配列番号:266を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:285を含むVHおよび配列番号:284を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:303を含むVHおよび配列番号:302を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:321を含むVHおよび配列番号:320を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:339を含むVHおよび配列番号:338を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:357を含むVHおよび配列番号:356を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。抗体が、配列番号:375を含むVHおよび配列番号:374を含むVL、またはそれらと97-99同一性を有するアミノ酸配列を含む、HER3受容体に対する単離された抗体またはその断片。配列番号:493を有する可変重鎖配列を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:494を有する可変軽鎖配列を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:493を有する可変重鎖配列および配列番号:494を有する可変軽鎖配列を含む単離された抗体またはその断片。CDR1、CDR2およびCDR3を含む変異体重鎖可変領域を有するHER3受容体に対する単離された抗体またはその断片であって、該変異体は、CDR1、CDR2またはCDR3の1つにおいて少なくとも1から4つのアミノ酸変化を有する、抗体またはその断片。配列番号:2の重鎖可変領域CDR1;配列番号:3のCDR2;配列番号:4のCDR3;配列番号:5の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:6のCDR2;および配列番号:7のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:20の重鎖可変領域CDR1;配列番号:21のCDR2;配列番号:22のCDR3;配列番号:23の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:24のCDR2;および配列番号:25のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:38の重鎖可変領域CDR1;配列番号:39のCDR2;配列番号:40のCDR3;配列番号:41の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:42のCDR2;および配列番号:43のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:56の重鎖可変領域CDR1;配列番号:57のCDR2;配列番号:58のCDR3;配列番号:59の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:60のCDR2;および配列番号:61のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:74の重鎖可変領域CDR1;配列番号:75のCDR2;配列番号:76のCDR3;配列番号:77の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:78のCDR2;および配列番号:79のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:92の重鎖可変領域CDR1;配列番号:93のCDR2;配列番号:94のCDR3;配列番号:95の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:96のCDR2;および配列番号:97のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:110の重鎖可変領域CDR1;配列番号:111のCDR2;配列番号:112のCDR3;配列番号:113の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:114のCDR2;および配列番号:115のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:128の重鎖可変領域CDR1;配列番号:129のCDR2;配列番号:130のCDR3;配列番号:131の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:132のCDR2;および配列番号:133のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:146の重鎖可変領域CDR1;配列番号:147のCDR2;配列番号:148のCDR3;配列番号:149の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:150のCDR2;および配列番号:151のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:164の重鎖可変領域CDR1;配列番号:165のCDR2;配列番号:166のCDR3;配列番号:167の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:168のCDR2;および配列番号:169のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:182の重鎖可変領域CDR1;配列番号:183のCDR2;配列番号:184のCDR3;配列番号:185の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:186のCDR2;および配列番号:187のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:200の重鎖可変領域CDR1;配列番号:201のCDR2;配列番号:202のCDR3;配列番号:203の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:204のCDR2;および配列番号:205のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:218の重鎖可変領域CDR1;配列番号:219のCDR2;配列番号:220のCDR3;配列番号:221の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:222のCDR2;および配列番号:223のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:236の重鎖可変領域CDR1;配列番号:237のCDR2;配列番号:238のCDR3;配列番号:239の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:240のCDR2;および配列番号:241のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:254の重鎖可変領域CDR1;配列番号:255のCDR2;配列番号:256のCDR3;配列番号:257の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:258のCDR2;および配列番号:259のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:272の重鎖可変領域CDR1;配列番号:273のCDR2;配列番号:274のCDR3;配列番号:275の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:276のCDR2;および配列番号:277のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:290の重鎖可変領域CDR1;配列番号:291のCDR2;配列番号:292のCDR3;配列番号:293の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:294のCDR2;および配列番号:295のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:308の重鎖可変領域CDR1;配列番号:309のCDR2;配列番号:310のCDR3;配列番号:311の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:312のCDR2;および配列番号:313のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:326の重鎖可変領域CDR1;配列番号:327のCDR2;配列番号:328のCDR3;配列番号:329の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:330のCDR2;および配列番号:331のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:344の重鎖可変領域CDR1;配列番号:345のCDR2;配列番号:346のCDR3;配列番号:347の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:348のCDR2;および配列番号:349のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。配列番号:362の重鎖可変領域CDR1;配列番号:363のCDR2;配列番号:364のCDR3;配列番号:365の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:366のCDR2;および配列番号:367のCDR3を含む単離された抗体またはその断片。Fab、Fab2’、Fab2’、scFv、VHH、VH、VL、dAbからなる群から選択されるHER3に結合する、前記請求項のいずれかに記載の抗体の断片。前記請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。さらなる治療剤をさらに含む、請求項115に記載の医薬組成物。さらなる治療剤が、HER1阻害剤、HER2阻害剤、HER3阻害剤、HER4阻害剤、mTOR阻害剤およびPI3キナーゼ阻害剤からなる群から選択される、請求項116に記載の医薬組成物。さらなる治療剤が、マツズマブEMD72000、アービタックス登録商標/セツキシマブ、ベクチビックス登録商標/パニツムマブ、mAb806、ニモツズマブ、イレッサ登録商標/ゲフィチニブ、CI-1033PD183805、ラパチニブGW-572016、タイケルブ登録商標/トシル酸ラパチニブ、タルセバ登録商標/エルロチニブHCLOSI-774、PKI-166およびTovok登録商標からなる群から選択されるHER1阻害剤;ペルツズマブ、トラスツマブ、MM-111、ネラチニブ、ラパチニブまたはトシル酸ラパチニブ/タイケルブ登録商標からなる群から選択されるHER2阻害剤;MM-121、MM-111、IB4C3、2DID12U3PharmaAG、AMG888Amgen、AV-203Aveo、MEHD7945AGenentechおよびHER3を阻害する小分子からなる群から選択されるHER3阻害剤;ならびにHER4阻害剤である、請求項117に記載の医薬組成物。さらなる治療剤が、テムシロリムス/Torisel登録商標、リダフォロリムス/デフォロリムス、AP23573、MK8669、エバロリムス/Affinitor登録商標からなる群から選択されるmTOR阻害剤である、請求項117に記載の医薬組成物。さらなる治療剤が、GDC0941、BEZ235、BMK120およびBYL719からなる群から選択されるPI3キナーゼ阻害剤である、請求項117に記載の医薬組成物。癌を発現するHER3を有する対象を選択すること、前記請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片を含む有効量の組成物を対象に投与することを含む、癌を処置する方法。対象がヒトである、請求項121に記載の方法。癌を発現するHER3を有する対象を選択すること、前記請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片を含む有効量の組成物を対象に投与することを含む、HERシグナル伝達経路が介在する癌を処置する方法であって、該癌は、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌、末梢神経鞘腫瘍、神経鞘腫、頭頸部癌、膀胱癌、食道癌、グリア芽腫、軟組織の明細胞肉腫、悪性中皮腫、神経線維腫症、腎臓癌および黒色腫からなる群から選択される、方法。該癌が乳癌である、請求項123に記載の方法。癌を発現するHER3を有する対象を選択すること、HER3に結合する表1に記載されている抗体またはそれらの断片の組合せを含む有効量の組成物を該対象に投与することを含む、癌を処置する方法。癌を発現するHER3を有する対象を選択すること、HER3に結合し、HER3リガンド依存性シグナル変換およびリガンド非依存性シグナル変換を阻害する抗体またはその断片を含む有効量の組成物を該対象に投与することを含む、癌を処置する方法。薬物としての使用のための、前記請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。乳癌、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌、末梢神経鞘腫瘍、神経鞘腫、頭頸部癌、膀胱癌、食道癌、グリア芽腫、軟組織の明細胞肉腫、悪性中皮腫、神経線維腫症、腎臓癌および黒色腫からなる群から選択されるHER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、前記請求項のいずれかに記載の抗体またはその断片。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:15のVHおよび配列番号:14のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:33のVHおよび配列番号:32のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:51のVHおよび配列番号:50のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:69のVHおよび配列番号:68のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:87のVHおよび配列番号:86のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:105のVHおよび配列番号:104のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:123のVHおよび配列番号:122のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:141のVHおよび配列番号:140のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:151のVHおよび配列番号:158のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:177のVHおよび配列番号:176のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:195のVHおよび配列番号:194のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:213のVHおよび配列番号:212のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:231のVHおよび配列番号:230のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換またはリガンド非依存性シグナル変換経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号:249のVHおよび配列番号:248のVLを有する抗体。HER3リガンド依存性シグナル変換ま本発明の詳細な説明定義本発明がより容易に理解されるよう、特定の用語を最初に定義する。さらなる定義は、詳細な説明全体を通して示される。本明細書において用いるシグナル変換またはシグナル伝達活性の語句は、一般的にタンパク質-タンパク質相互作用、例えば受容体への成長因子の結合によって開始され、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達をもたらす生化学的因果関係をいう。HER3に関して、該伝達は、シグナル伝達を引き起こす一連の反応における1以上のタンパク質上の1以上のチロシン、セリンまたはスレオニン残基の特異的リン酸化を含む。最後から2番目のプロセスは通常、核の事象を含み、遺伝子発現の変化をもたらす。HER受容体は、HER受容体ファミリーに属し、EGFR、HER2、HER3およびHER4受容体ならびに将来的に該ファミリーに特定される他のメンバーを含む受容体タンパク質チロシンキナーゼである。HER受容体は、一般的に、HERリガンドに結合し得る細胞外ドメイン;親油性膜貫通ドメイン;保存されている細胞内チロシンキナーゼドメイン;および、リン酸化され得るいくつかのチロシン残基を含むカルボキシル末端シグナル伝達ドメインを含む。好ましくは、HER受容体は、天然配列ヒトHER受容体である。HER1、ErbB1、上皮細胞増殖因子受容体およびEGFRなる用語は、本明細書において互換的に使用され、天然変異体形態例えば、HumphreyらPNAS8742074211において欠失変異体EGFRを含む、例えば、CarpenterらAnnRevBiochem56881914において記載されているEGFRを示す。erbB1は、EGFRタンパク質産物をコードする遺伝子を示す。HER2およびErbB2なる用語は、本明細書において互換的に使用され、例えば、SembaらPNAS8264976501およびYamamotoらNature319230234遺伝子バンク受入番号X03363において記載されているヒトHER2タンパク質を示す。erbB2なる用語はヒトErbB2をコードする遺伝子を示し、neuはラットp185neuをコードする遺伝子を示す。本明細書におけるHER4およびErbB4なる用語は、例えば、1999年4月22日公開WO99/19488に記載されているアイソフォームを含む、例えば、EP特許出願第599,274号;PlowmanらProcNatlAcadSciUSA9017461750およびPlowmanらNature366473475において記載されている受容体ポリペプチドを示す。本明細書において使用されるErbB3としても知られているHER3またはHER3受容体なる用語は哺乳動物HER3タンパク質を示し、her3またはerbB3は哺乳動物her3遺伝子を示す。好ましいHER3タンパク質は、細胞の細胞膜に存在するヒトHER3タンパク質である。ヒトHER3遺伝子は、米国特許第5,480,968号およびPlowmanらProcNatlAcadSciUSA8749054909に記載されている。受入番号NP_001973ヒトにおいて定義されるヒトHER3は、配列番号:1として以下で示される。全命名法は、全長未成熟HER3アミノ酸1-1342に対してである。未成熟HER3は位置19と20間で開裂され、成熟HER3タンパク質20-1342アミノ酸となる。本明細書において使用されるHERリガンドなる用語は、HER受容体、例えば、HER1、HER2、HER3およびHER4に結合し、活性化するポリペプチドを示す。HERリガンドの例は、限定はしないが、ニューレグリン1NRG、ニューレグリン2、ニューレグリン3、ニューレグリン4、ベタセルリン、ヘパリン結合上皮細胞増殖因子、エピレグリン、上皮細胞増殖因子、アンフィレグリンおよび形質転換増殖因子アルファを含む。該用語は、天然ポリペプチドの生物学的に活性な断片および/または変異体を含む。本明細書において使用されるHER3リガンドなる用語は、HER3に結合し、活性化するポリペプチドを示す。HER3リガンドの例は、限定はしないが、ニューレグリン1NRGおよびニューレグリン2、ベタセルリン、ヘパリン結合上皮細胞増殖因子およびエピレグリンを含む。該用語は、天然ポリペプチドの生物学的に活性な断片および/または変異体を含む。HER-HERタンパク質複合体は、任意の組合せにおいてHER共受容体を含む非共有結合的オリゴマー例えば、HER1-HER2、HER1-HER3、HER1-HER4、HER2-HER3、HER3-HER4などである。該複合体は、これらの受容体の両方を発現する細胞がHERリガンド、例えば、NRGに暴露されたとき、またはHER受容体が活性であるか、もしくは過剰発現されるとき、形成され得る。HER2-HER3タンパク質複合体は、HER2受容体およびHER3受容体を含む非共有結合的オリゴマーである。該複合体は、これらの受容体の両方を発現する細胞がHER3リガンド、例えば、NRGに暴露されたとき、またはHER2が活性であるか、もしくは過剰発現されるとき、形成され得る。本明細書において使用されるHER3活性またはHER3活性化なる語句は、オリゴマー形成の増加例えば、複合体を含むHER3の増加、HER3リン酸化、立体構造再配列例えば、リガンドにより誘導されるもの、およびHER3媒介下流シグナル伝達を示す。HER3の文脈において使用される安定化または安定は、リガンド結合がもはやHER3を活性化できないように、HER3へのリガンド結合のブロックなしでHER3の不活性化状態または立体構造を直接的に維持固定する、つなぎ止める、保持する、優先的に結合する、支持するする抗体またはその断片を示す。実施例に記載されているアッセイ、例えば、Biacoreアッセイは、安定化HER3受容体に対するリガンド結合を測定するために使用することができる。本明細書において使用されるリガンド依存性シグナル伝達なる用語は、リガンドを介するHER例えば、HER3の活性化を示す。HER3活性化は、下流シグナル伝達経路例えば、PI3Kが活性化されるようなオリゴマー形成例えば、ヘテロ二量体化および/またはHER3リン酸化の増加により証明される。抗体またはその断片は、実施例に記載されているアッセイを使用して測定されるとき、未処理コントロール細胞と比較して、抗原結合タンパク質例えば、抗体に暴露された刺激細胞中のリン酸化HER3の量を統計的に有意に減少させる。HER3を発現する細胞は、天然細胞系例えば、MCF7であってよく、またはHER3タンパク質をコードする核酸を宿主細胞に導入することにより組換え的に生産され得る。細胞刺激は、活性化HER3リガンドの外因的付加を介して、または活性化リガンドの内因的発現により起こり得る。細胞におけるニューレグリン誘導HER3活性化を減少させる抗体またはその断片は、実施例に記載されているアッセイを使用して測定されるとき、未処理コントロール細胞と比較して、HER3チロシンリン酸化を統計的に有意に減少させるものである。これは、NRGおよび興味ある抗体へのHER3の暴露に続くHER3ホスホチロシンレベルに基づいて測定することができる。HER3タンパク質を発現する細胞は、天然細胞または細胞系例えば、MCF7であってよく、または組換え的に生産され得る。本明細書において使用されるリガンド非依存性シグナル伝達なる用語は、リガンド結合のための必要条件の非存在下での細胞性HER3活性例えば、リン酸化を示す。例えば、リガンド非依存性HER3活性化は、HER3ヘテロ二量体パートナー、例えば、EGFRおよびHER2におけるHER2過剰発現または活性化変異の結果であり得る。抗体またはその断片は、未処理コントロール細胞と比較して、抗原結合タンパク質例えば、抗体に暴露された細胞におけるリン酸化HER3の量を統計的に有意に現象させ得る。HER3を発現する細胞は、天然細胞系例えば、SK-Br-3であってよく、またはHER3タンパク質をコードする核酸を宿主細胞に導入することにより組換え的に生産され得る。本明細書において使用されるブロックするなる用語は、相互作用またはプロセスを停止または防止すること、例えば、リガンド依存性またはリガンド非依存性シグナル伝達を停止することを示す。本明細書において使用される認識するなる用語は、立体構造的エピトープを見つける、および相互作用する例えば、結合する抗体またはその断片を示す。本明細書において使用される同時に結合するなる語句は、HER抗体と一緒にHER受容体上のリガンド結合部位に結合することができるHERリガンドを示す。これは、抗体および抗体の両方がHER受容体に互いに結合することができることを意味する。説明のみの目的のために、HER3リガンドNRGは、HER3抗体と一緒にHER3受容体に結合することができる。リガンドおよび抗体の同時結合を測定するためのアッセイ例えば、Biacoreは、実施例の部に記載されている。本明細書において使用されるできないなる用語は、特定の事象を行わない抗体またはその断片を示す。例えば、シグナル変換を活性化できない抗体またはその断片は、シグナル変換を引き起こさないものである;構造変化を誘導できない抗体またはその断片は、HER受容体における構造変化を引き起こさないものである;HER受容体が二量体化できないような、不活性化状態におけるHER受容体を安定化する抗体またはその断片は、タンパク質-タンパク質複合体を形成しないものである。本明細書において使用される抗体なる用語は、例えば結合、立体障害、安定化/不安定化、空間分布によってHER3エピトープと相互作用し、シグナル伝達を阻害する抗体全体をいう。天然の抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも2つの重H鎖および2つの軽L鎖を含む糖タンパク質である。各々の重鎖は、重鎖可変領域本明細書においてVHと略すおよび重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、3つのドメイン、CH1、CH2およびCH3で構成される。各々の軽鎖は、軽鎖可変領域本明細書においてVLと略すおよび軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、1つのドメイン、CLで構成される。VHおよびVL領域は、より保存されたフレームワーク領域FRと称される領域と共に散在する、相補性決定領域CDRと称される超可変性の領域にさらに細分することができる。各々のVHおよびVLは、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順番で並んだ3つのCDRおよび4つのFRで構成される:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞例えばエフェクター細胞および古典的補体系の第一成分Clqを含む宿主の組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。抗体の用語は、例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、一本鎖Fvs、ジスルフィド連結Fvs、Fab断片、Fab’断片、および抗イディオタイプ抗-Id抗体例えば本発明の抗体に対する抗-Id抗体を含む、ならびに上記のいずれかのエピトープ結合性断片を含む。抗体は、いかなるアイソタイプ例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY、クラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2またはサブクラスのものであってもよい。軽鎖および重鎖は共に、構造上および機能上の相同性の領域に分けられる。定常および可変の用語は、機能的に用いられる。この点に関し、軽鎖VLおよび重鎖VH部分の両方の可変ドメインが抗原認識および特異性を決定することが理解される。逆に、軽鎖CLおよび重鎖CH1、CH2またはCH3の定常ドメインは、重要な生物学的特性、例えば分泌、経胎盤移動性、Fc受容体結合、補体結合等を与える。慣例により、定常領域ドメインの番号付けは、それが抗体の抗原結合部位またはアミノ末端からより遠く離れるにつれて大きくなる。N-末端は可変領域であり、C-末端は定常領域である;CH3およびCLドメインは、それぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を実際に含む。本明細書において使用される抗体断片なる語句は、例えば結合、立体障害、安定化/不安定化、空間分布によってHER3エピトープと特異的に相互作用し、シグナル伝達を阻害する能力を保持している、抗体の1以上の断片をいう。結合断片の例としては、これらに限定されないが、Fab断片、VL、VH、CLおよびCH1ドメインからなる一価の断片;Fab2断片、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結した2つのFab断片を含む二価の断片;VHおよびCH1ドメインからなるFd断片;抗体の単一のアームのVLおよびVHドメインからなるFv断片;VHドメインからなるdAb断片WardらNature341544546;および単離された相補性決定領域CDRが挙げられる。さらに、Fv断片の2つのドメインであるVLおよびVHは別々の遺伝子によってコードされているが、それらは、組換え方法を用いて、VLおよびVH領域が対になって一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖単鎖FvscFvとして知られる;例えば、BirdらScience242423426;およびHustonらProcNatlAcadSci8558795883を参照として作成されることを可能にする合成リンカーによって連結することができる。かかる単鎖抗体も、抗体断片なる用語の中に包含されることを意図されている。これらの抗体断片は当業者に公知の常套の方法を用いて得られ、該断片はインタクトな抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。抗体断片は、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、細胞内抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、v-NARおよびビス-scFv例えば、HollingerandHudsonNatureBiotechnology2311261136を参照の中に組み込むこともできる。抗体断片は、ポリペプチド、例えばフィブロネクチンIII型Fn3に基づく足場フィブロネクチンポリペプチドモノボディを記載する米国特許第6,703,199号を参照の中に移植することができる。抗体断片は、相補的軽鎖ポリペプチドと共に抗原結合領域のペアを形成するタンデムなFvセグメントのペアVH-CH1-VH-CH1を含む単鎖分子の中に組み込むことができるZapataらProteinEng810571062;および米国特許第5,641,870号。エピトープなる用語は、免疫グロブリンに特異的に結合するか、あるいは分子と相互作用することができるあらゆるタンパク質決定因子を含む。エピトープ決定因子は、一般的に、分子、例えば、アミノ酸または炭水化物または糖側鎖の化学的に活性な表面群からなり、特異的三次元構造特性、ならびに特異的電荷特性を有し得る。エピトープは、直線的または立体構造的であり得る。直線的エピトープなる用語は、タンパク質および相互作用する分子例えば、抗体間の相互作用の全ての部分が、タンパク質の一次アミノ酸配列連続的なに沿って直線的に起こるエピトープを示す。抗原上の所望のエピトープが決定されると、例えば、本発明に記載されている技術を使用して、エピトープに対する抗体を作製することができる。あるいは、開発プロセス中、抗体の作製および特性化は、望ましいエピトープについての情報を解明し得る。この情報から、次に、同じエピトープに結合する抗体を競合的にスクリーニングすることができる。これをなし遂げるアプローチは、お互いに競合的に結合する抗体を見つける交差競合試験を行うことである、例えば、抗体は、抗原への結合に対して競合する。交差競合に基づく結合抗体に対するハイスループットプロセスは、国際特許出願WO2003/48731に記載されている。当業者により理解されるとおり、抗体が特異的に結合する実質的にすべてのものは、エピトープであり得る。エピトープは、抗体が結合する残基を含むことができる。立体構造的エピトープなる用語は、不連続的なアミノ酸が三次元立体構造に集合するエピトープを示す。立体構造的エピトープにおいて、相互作用の部分は、お互いから分離されるタンパク質上のアミノ酸残基にわたって起こる。1つの態様において、エピトープは、本願明細書の実施例に記載されているものである。1つの態様において、立体構造的エピトープは、配列番号:1のiHER3アミノ酸残基265-277および315ドメイン2のおよびiiHER3アミノ酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615ドメイン4のまたはそれらのサブセットにより定義される。当業者により理解されるとおり、分子の形状を作る残基または側鎖により占有される空間は、エピトープであるかを決定するための手助けとなる。一般的に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、タンパク質および/または高分子の複雑な混合物中において、標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。所与のポリペプチドのエピトープを含む領域は、当該技術分野において周知のエピトープマッピング手法のいずれかを用いて同定することができる。例えば、EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiologyVol66HumanaPressTotowaNewJerseyを参照されたい。例えば、直線的エピトープは、例えばタンパク質分子の部分に相当する多数のペプチドを固体支持体上で同時に合成し、該ペプチドが支持体に付着している間に該ペプチドを抗体と反応させることによって、決定し得る。かかる手法は当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許第4,708,871号;GeysenらProcNatlAcadSciUSA839984002GeysenらProcNatlAcadSciUSA8278182GeysenらMolImmunol23709715に記載されている。同様に、立体構造的エピトープは、例えば、水素/重水素交換、x線結晶学および二次元核磁気共鳴によってアミノ酸の空間的高次構造を決定することにより、容易に同定される。例えば、前掲のEpitopeMappingProtocolsを参照されたい。タンパク質の抗原性領域も、標準的な抗原性および疎水性プロット、例えばOxfordMolecularGroupから入手可能なOmigaversion1.0ソフトウェアプログラムを使用して計算されるプロットを用いて同定することができる。このコンピュータプログラムは、抗原性プロファイルの決定のためにHopp/Woods法、HoppらProcNatlAcadSciUSA7838243828を採用し;疎水性プロットのためにKyte-Doolittle法、KyteらJMoIBiol157105132を採用している。本明細書において使用されるパラトープなる用語は、エピトープへの結合を決定する結合領域の一般的な構造を示す。この構造は、結合領域がエピトープに結合し得るか否か、どのような形かに影響する。パラトープは、抗原決定因子に結合する、抗体またはその断片に関与する抗体の抗原部位を示すことができる。パラトープはまた、抗体のイディオトープおよびエピトープに結合する相補性決定領域CDR領域を示す。1つの態様において、パラトープは、配列番号:1のiHER3アミノ酸残基265-277および315ドメイン2の、およびiiHER3アミノ酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615ドメイン4のまたはそれらのサブセットを含む立体構造的エピトープに結合する抗体の領域である。1つの態様において、パラトープは、CDR配列を含む抗体の領域である。1つの態様において、パラトープは、表1に記載されている配列を含む。1つの態様において、パラトープは、HER3残基と結合する少なくとも1つのアミノ酸残基を含む:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597。1つの態様において、パラトープは、HER3残基と結合する少なくとも1つのアミノ酸残基を含む:Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。当業者により理解されるとおり、抗体またはその変異体のパラトープは、本出願により示されている方法において決定することができる。本明細書において用いるモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体組成物なる語句は、実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、または同じ遺伝源に由来する、抗体、抗体断片、二特異性抗体等を含むポリペプチドをいう。かかる用語は、単一の分子構成の抗体分子の調製物をも含む。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性およびアビディティーを示す。本明細書において用いるヒト抗体なる語句は、フレームワークおよびCDR領域の両方がヒト起源の配列に由来するものである可変領域を有する抗体を含む。さらに、該抗体が定常領域を含む場合、該定常領域もかかるヒト配列、例えばヒト生殖系列配列に由来するものであるか、またはヒト生殖系列配列の突然変異したバージョンであるか、あるいは、該抗体は、例えば、Knappikらに記載されるヒトフレームワーク配列の解析から得られるコンセンサスフレームワーク配列を含むものである。免疫グロブリン可変ドメイン、例えば、CDRの構造および位置は、周知の番号付け体系、例えば、Kabat番号付け体系、Chothia番号付け体系、またはKabatおよびChothiaの組み合わせを用いて定義することができる例えば、SequencesofProteinsofImmunologicalInterestUSDepartmentofHealthandHumanServicesedsKabatらLazikaniらJMolBio273927948KabatらSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5theditNIHPublicationno913242USDepartmentofHealthandHumanServicesChothiaらJMolBiol196901917ChothiaらNature342877883およびAlLazikaniらJMolBiol273927948を参照されたい。本発明のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基例えば、インビトロのランダムなもしくは部位特異的突然変異誘発によって又はインビボの体細胞突然変異によって導入される突然変異、または安定性もしくは製造を促進するための保存的置換を含んでもよい。本明細書において使用されるヒトモノクローナル抗体なる語句は、フレームワークおよびCDR領域の両方がヒト配列由来である可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を示す。1つの態様において、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られたB細胞を含むハイブリドーマによって生産される。本明細書において使用される組換えヒト抗体なる語句は、組換えの手段によって調製、発現、作成または単離される全てのヒト抗体、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックまたは染色体導入である動物例えば、マウスまたは該動物から調製されたハイブリドーマから単離される抗体、ヒト抗体を発現するよう形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離される抗体、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、および、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の全てまたは一部を他のDNA配列へスプライスすることを含む他のいずれかの手段によって調製、発現、作成または単離される抗体を含む。かかる組換えヒト抗体は、フレームワークおよびCDR領域がヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に由来するものである可変領域を有する。しかし、特定の態様においては、かかる組換えヒト抗体は、インビトロの突然変異誘発または、ヒトIg配列に関してトランスジェニックである動物を用いる場合には、インビボの体細胞突然変異誘発に供することができ、それにより、該組換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列のVHおよびVL配列に由来し且つ関連するが、インビボのヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然には存在しない可能性がある配列となり得る。2つの実体間の特異的結合は、少なくとも102M-1、少なくとも5x102M-1、少なくとも103M-1、少なくとも5x103M-1、少なくとも104M-1、少なくとも5x104M-1、少なくとも105M-1、少なくとも5x105M-1、少なくとも106M-1、少なくとも5x106M-1、少なくとも107M-1、少なくとも5x107M-1、少なくとも108M-1、少なくとも5x108M-1、少なくとも109M-1、少なくとも5x109M-1、少なくとも1010M-1、少なくとも5x1010M-1、少なくとも1011M-1、少なくとも5x1011M-1、少なくとも1012M-1、少なくとも5x1012M-1、少なくとも1013M-1、少なくとも5x1013M-1、少なくとも1014M-1、少なくとも5x1014M-1、少なくとも1015M-1、または少なくとも5x1015M-1の平衡定数KAkon/koffでの結合を意味する。抗体例えばHER3結合抗体と特異的にまたは選択的に結合するとの語句は、タンパク質および他の生物学的物質の異種性集団中における同族の抗原例えばヒトHER3の存在を決定する結合反応をいう。上記平衡定数KAに加えて、本発明のHER3結合抗体は、通常、5x10-2M未満、10-2M未満、5x10-3M未満、10-3M未満、5x10-4M未満、10-4M未満、5x10-5M未満、10-5M未満、5x10-6M未満、10-6M未満、5x10-7M未満、10-7M未満、5x10-8M未満、10-8M未満、5x10-9M未満、10-9M未満、5x10-10M未満、10-10M未満、5x10-11M未満、10-11M未満、5x10-12M未満、10-12M未満、5x10-13M未満、10-13M未満、5x10-14M未満、10-14M未満、5x10-15M未満、もしくは10-15M未満またはそれより小さい解離速度定数KDkoff/konをも有し、非特異的抗原例えばHSAに対するその結合親和性よりも少なくとも2倍大きい親和性でHER3と結合する。一つの態様において、抗体またはそれらの断片は、本明細書に記載される方法または当業者に公知の方法例えば、BIAcoreアッセイ、ELISA、FACS、SETBiacoreInternationalABUppsalaSwedenを用いて評価される3000pM未満、2500pM未満、2000pM未満、1500pM未満、1000pM未満、750pM未満、500pM未満、250pM未満、200pM未満、150pM未満、100pM未満、75pM未満、10pM未満、1pM未満の解離定数Kdを有する。本明細書において使用されるKassocまたはKaの用語は、特定の抗体-抗原相互作用の会合速度をいい、他方、本明細書におい使用されるKdisまたはKdの用語は、特定の抗体-抗原相互作用の解離速度をいう。本明細書において用いるKDの用語は、Kaに対するKdの比即ちKd/Kaから得られ、モル濃度Mとして表される解離定数をいう。抗体についてのKD値は、当該分野において十分に確立された方法を用いて決定することができる。抗体のKDを決定する方法は、表面プラズモン共鳴法を用いること、またはバイオセンサー系、例えばBiacore登録商標システムを用いることである。本明細書において使用される親和性なる用語は、単一の抗原性部位における抗体と抗原の間の相互作用の強さをいう。各々の抗原性部位内において、抗体アームの可変領域は、多数の部位において弱い非共有結合的力を介して抗原と相互作用する;相互作用が大きければ大きいほど、アビディティーは強くなる。本明細書において使用されるアビディティーなる用語は、抗体-抗原複合体の全体的安定性または強度の有益な尺度をいう。それは3つの主な要因:抗体エピトープアビディティー;抗原および抗体両方の価数;および相互作用する部分の構造的配置によって制御される。究極的に、これらの要因は、抗体の特異性、即ち、特定の抗体が正確な抗原エピトープに結合している可能性を規定する。本明細書において使用される価数なる用語は、ポリペプチドにおいて起こり得る標的結合部位の数を示す。それぞれの標的結合部位は、1つの標的分子または標的分子上の特定の部位すなわち、エピトープに特異的に結合する。ポリペプチドが2つ以上の標的結合部位を含むとき、それぞれの標的結合部位は、同じか、または異なっている分子に特異的に結合し得る例えば、異なる分子、例えば、異なる抗原、または同じ分子上の異なるエピトープに結合し得る。本明細書において使用されるアンタゴニスト抗体なる語句は、HER3に結合し、HER3シグナル伝達の生物学的活性を中和する、例えば、ホスホ-HER3またはホスホ-Aktアッセイにおいて、例えば、HER3誘導シグナル伝達活性を低下、減少および/または阻害する抗体を示す。アッセイの例は、以下の実施例により詳細に記載されている。したがって、当分野で既知の方法論および本明細書に記載されている方法論にしたがって決定されるとき、1つ以上のこれらのHER3機能特性例えば、生化学的、免疫化学的、細胞、生理学的または他の生物学的活性などを阻害する抗体は、抗体の非存在下で例えば、または不適切な特異性のコントロール抗体が存在するときに見られるものと比較して、特定の活性における統計的に有意な減少に関すると理解する。HER3活性を阻害する抗体は、測定されるパラメーターの少なくとも10、少なくとも50、80または90による、このような統計的に有意な減少をもたらし、1つの態様において、本発明の抗体は、細胞性HER3リン酸化のレベルの減少により証明されるとき、HER3機能活性の95、98または99以上阻害し得る。単離された抗体なる語句は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体をいう例えば、HER3に特異的に結合する単離された抗体は、HER3以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まないものである。しかし、HER3に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原に対する交差反応性を有するものであってもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞性物質および/または化学物質を実質的に含まないものであってもよい。保存的に改変された変異体なる語句は、アミノ酸および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関し、保存的に改変された変異体とは、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいうか、あるいは核酸がアミノ酸配列をコードしない場合には本質的に同一の配列をいう。遺伝暗号の縮重のため、多数の機能的に同一の核酸が所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンGCA、GCC、GCGおよびGCUはすべてアミノ酸アラニンをコードする。したがって、あるコドンによってアラニンが特定されるあらゆる位置において、該コドンは、コードされるポリペプチドを変化させることなく、記載した対応するコドンのいずれかに変更することができ、かかる核酸変異はサイレント変異であり、保存的に改変された変異の一種である。本明細書における、ポリペプチドをコードするすべての核酸配列は、該核酸のあらゆる可能なサイレント変異をも表す。当業者は、核酸中の各々のコドン通常メチオニンの唯一のコドンであるAUG、および通常トリプトファンの唯一のコドンであるTGGを除くを改変して機能的に同一の分子を生み出し得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各々のサイレント変異が、記載された各々の配列中に潜在している。ポリペプチド配列に関し、保存的に改変された変異体は、アミノ酸の、化学的に類似するアミノ酸による置換をもたらす、ポリペプチド配列に対する個々の置換、欠失または付加を含む。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は当該技術分野において周知である。かかる保存的に改変された変異体は、本発明の多型変異体、種間ホモログおよび対立遺伝子に対して追加的なものであり、これらを除外しない。以下の8つのグループは、互いに保存的置換であるアミノ酸を含む:1アラニンA、グリシンG;2アスパラギン酸D、グルタミン酸E;3アスパラギンN、グルタミンQ;4アルギニンR、リジンK;5イソロイシンI、ロイシンL、メチオニンM、バリンV;6フェニルアラニンF、チロシンY、トリプトファンW;7セリンS、スレオニンT;および8システインC、メチオニンM例えば、CreightonProteinsを参照。いくつかの態様において、保存的配列改変なる用語は、あるアミノ酸配列を含む抗体の結合特性に有意な影響を与えず、また有意に変化もさせないアミノ酸改変をいうために使用される。交差競合するおよび交差競合なる用語は、標準的な競合結合アッセイにおいて他の抗体または結合物質とHER3との結合に干渉する抗体または結合物質の能力を意味するために本明細書において互換的に使用される。抗体または結合物質が別の抗体または結合分子とHER3との結合に干渉することができる能力または程度、およびそれを本発明による交差競合と言えるか否かは、標準的な競合結合アッセイを用いて決定することができる。1つの適切なアッセイとしては、表面プラズモン共鳴の技術を用いて相互作用の程度を測定することができるBiacoretechnology例えば、BIAcore3000装置を用いることによるの使用が挙げられる。交差競合を測定するための別のアッセイは、ELISAに基づくアプローチを用いるものである。本明細書において使用される最適化されたなる用語は、産生細胞または生物、一般的には真核細胞、例えばピキアの細胞、トリコデルマの細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞CHOまたはヒト細胞において好適なコドンを用いたアミノ酸配列をコードするよう変更されたヌクレオチド配列をいう。最適化されたヌクレオチド配列は、親配列としても知られる出発ヌクレオチド配列によって元々コードされていたアミノ酸配列を完全に又は可能な限り多く保持するよう、操作される。様々な種のHER3に対する抗体の結合能力を評価するための標準的なアッセイは、当該技術分野において公知であり、例えば、ELISA、ウエスタンブロットおよびRIAが挙げられる。適切なアッセイは、実施例において詳細に記載されている。抗体の結合動態例えば結合親和性も、当該技術分野において公知の標準的なアッセイ、例えば、Biacore解析またはFACS相対的親和性によって評価することができる。HER3の機能的特性に対する抗体の効果を評価するためのアッセイ例えば、受容体結合アッセイ、Her経路の調節は、実施例においてさらに詳細に記載されている。2以上の核酸またはポリペプチド配列に関し、パーセント同一またはパーセント同一性なる語句は、同一である2以上の配列または部分配列をいう。以下の配列比較アルゴリズムの1つを用いて、または手動アラインメントおよび目視検査によって測定される比較ウィンドウまたは指定した領域にわたる最大の対応に対して比較および整列された場合に、2つの配列が同一であるアミノ酸残基またはヌクレオチドの特定されたパーセンテージ即ち、特定された領域にわたる60の同一性、所望により65、70、75、80、85、90、95または99同一、あるいは、特定されていない場合には、配列全体にわたるを有していれば、2つの配列は実質的に同一である。所望により、同一性は、長さが少なくとも約50ヌクレオチドまたは10アミノ酸である領域にわたって、またはより好ましくは長さが100から500または1000またはそれ以上のヌクレオチドまたは20、50、200またはそれ以上のアミノ酸である領域にわたって存在する。配列比較に関し、通常は1つの配列が参照配列としての役割を果たし、試験配列は該参照配列と比較される。配列比較アルゴリズムを用いる場合、試験配列および参照配列をコンピュータに入力し、必要であれば部分配列の座標を指定し、そして配列アルゴリズムプログラムのパラメーターを指定する。デフォルトのプログラムパラメーターを用いてもよく、あるいは代替のパラメーターを指定してもよい。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメーターに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を算出する。本明細書において使用される比較ウィンドウは、2つの配列ある配列と参照配列が最適に整列された後、ある配列を同じ数の連続する位置の参照配列と比較し得る、20から600、通常約50から約200、より通常には約100から約150からなる群より選択される連続する位置の数のいずれかのセグメントへの言及を含む。比較のための配列のアラインメントの方法は、当該技術分野において周知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、SmithandWatermanAdvApplMath2482cの局所的相同性アルゴリズムによって、NeedlemanandWunschJMolBiol48443の相同性アラインメントアルゴリズムによって、PearsonandLipmanProcNat’lAcadSciUSA852444の類似性検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実行WisconsinGeneticsSoftwarePackageGeneticsComputerGroup575ScienceDrMadisonWIにおけるGAP、BESTFIT、FASTA、およびTFASTAによって、または、手動アラインメントおよび目視検査例えば、BrentらCurrentProtocolsinMolecularBiologyを参照によって、行うことができる。パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの2つの例は、それぞれAltschulらNucAcidsRes2533893402およびAltschulらJMolBiol215403410に記載されている、BLASTおよびBLAST2.0アルゴリズムである。BLAST解析を行うためソフトウェアは、米国国立生物工学情報センターNationalCenterforBiotechnologyInformationを通じて公的に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードと整列した場合に一致するかまたはいくつかの正の値の閾値スコアTを満たすクエリー配列中の長さWの短いワードを同定することにより、最初に高スコア配列ペアHSPを同定することを含む。Tは、隣接ワードスコア閾値前掲のAltschulらと称される。これらの初期隣接ワードヒットは、それらを含むより長いHSPを見出す検索を開始するための種としての役割を果たす。ワードヒットは、累積アラインメントスコアを増大させ得る限り、各配列に沿って両方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメーターM一致する残基のペアに対する報酬スコア;常に>0およびNミスマッチ残基に対するペナルティスコア;常に<0を用いて算出される。アミノ酸配列については、累積スコアを算出するためにスコアリングマトリックスが用いられる。各方向におけるワードヒットの伸長は、以下の場合に停止される:累積アラインメントスコアがその最大達成値から数Xだけ減少するとき;1以上の負のスコアを与える残基アラインメントの蓄積のため、累積スコアがゼロ以下となるとき;または、いずれかの配列の末端に到達するとき。BLASTアルゴリズムのパラメーターW、TおよびXは、アラインメントの感度および速度を決定する。BLASTNプログラムヌクレオチド配列用は、11のワード長W、10の期待値E、M=5、N=-4および両鎖比較をデフォルトとして用いている。アミノ酸配列に関して、BLASTPプログラムは、3のワード長、および10の期待値E、およびBLOSUM62スコアリングマトリックスHenikoffandHenikoffProcNatlAcadSciUSA8910915を参照、50のアラインメントB、10の期待値E、M=5、N=-4、および両鎖比較をデフォルトとして用いている。BLASTアルゴリズムは、2つの配列間の類似性の統計解析をも実行する例えば、KarlinandAltschulProcNatlAcadSciUSA9058735787を参照。BLASTアルゴリズムによって提供される類似性の一つの尺度は、2つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の一致が偶然に起こる可能性の指標を提供する最小合計確率PNである。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が約0.2未満、より好ましくは約0.01未満、最も好ましくは約0.001未満であるとき、核酸は参照配列と類似すると考えられる。2つのアミノ酸配列間のパーセント同一性も、ALIGNプログラムバージョン2.0に組み込まれているEMeyersandWMillerComputApplBiosci41117のアルゴリズムを使用し、PAM120重み付き残基表、12のギャップ長ペナルティおよび4のギャップペナルティを用いて決定することができる。加えて、2つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、GCGソフトウェアパッケージwwwgcgcomにおいて入手可能中のGAPプログラムに組み込まれているNeedlemanandWunschJMolBiol48444453アルゴリズムを使用し、Blossom62マトリックスまたはPAM250マトリックスのいずれか、および16、14、12、10、8、6または4のギャップ重みおよび1、2、3、4、5または6の長さ重みを用いて決定することができる。上記した配列同一性のパーセンテージ以外の、2つの核酸配列またはポリペプチドが実質的に同一であることの別の指標は、以下に記載する通り、第一の核酸にコードされるポリペプチドが、第二の核酸にコードされるポリペプチドに対して作成された抗体と免疫学的に交差反応性であることである。したがって、例えば2つのペプチドが保存的置換のみによって異なる場合、ポリペプチドは通常、第二のポリペプチドと実質的に同一である。2つの核酸配列が実質的に同一であることの別の指標は、以下に記載する通り、該2つの分子またはそれらの相補体がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。2つの核酸配列が実質的に同一であることのさらなる別の指標は、同じプライマーを用いて該配列を増幅できることである。本明細書において、核酸なる語句は、ポリヌクレオチドなる用語と互換的に用いられ、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよび一本鎖または二本鎖いずれかの形態におけるその重合体をいう。該用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、かつ、参照ヌクレオチドと同様の様式で代謝される、合成、天然および非天然の、既知のヌクレオチド類似体または改変された骨格残基または結合を含む核酸を包含する。かかる類似体の例としては、これらに限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミダート、メチルホスホナート、キラル-メチルホスホナート、2-O-メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸PNAが挙げられる。特に断りの無い限り、特定の核酸配列は、明示される配列のみならず、その保存的に改変された変異体例えば縮重コドン置換および相補配列をも黙示的に包含する。具体的には、以下において詳細に記載する通り、縮重コドン置換は、1以上の選択されたまたは全てのコドンの3番目の位置が混合塩基および/またはデオキシイノシン残基によって置換されている配列を生成することによって達成し得るBatzerらNucleicAcidRes195081OhtsukaらJBiolChem26026052608およびRossoliniらMolCellProbes89198。作動可能に連結なる語句は、2以上のポリヌクレオチド例えば、DNAのセグメント間の機能的関係をいう。通常、それは転写調節配列と転写される配列との機能的関係をいう。例えば、プロモーターまたはエンハンサー配列は、それが適切な宿主細胞または他の発現系においてコード配列の転写を刺激または調節する場合、該コード配列に作動可能に連結している。一般的に、転写される配列に作動可能に連結しているプロモーター転写調節配列は、該転写される配列と物理的に連続しており、即ち、それはシス作用性である。しかし、いくつかの転写調節配列、例えばエンハンサーは、それが転写を増強するコード配列と物理的に連続しているかまたは近接して位置している必要がない。本明細書において、ポリペプチドおよびタンパク質なる用語は、アミノ酸残基の重合体をいうために互換的に用いられる。該用語は、天然アミノ酸の重合体および非天然アミノ酸の重合体のみならず、1以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工的化学的模倣物であるアミノ酸重合体に適用される。特に断りのない限り、特定のポリペプチド配列は、その保存的に改変された変異体をも黙示的に包含する。対象なる用語は、ヒトおよび非ヒト動物を含む。非ヒト動物は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳類および非哺乳類、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類を含む。特記した場合を除き、本明細書において患者または対象なる用語は互換的に用いられる。抗癌剤なる用語は、細胞増殖性障害、例えば癌を処置するために用いることができるあらゆる物質を意味し、細胞傷害性物質、化学療法剤、放射線治療および放射線治療剤、標的化された抗癌剤、および免疫治療剤を含む。腫瘍とは、悪性であるか良性であるかに関わらず、腫瘍性の細胞成長および増殖、ならびに全ての前癌性および癌性の細胞および組織をいう。抗腫瘍活性の用語は、腫瘍細胞の増殖速度、生存度または転移活性の低下を意味する。抗腫瘍活性を示す一つの可能な方法は、治療の間に生じる異常細胞の増殖速度の低下、または腫瘍サイズ安定性または減少を示すことである。かかる活性は、これらに限定されないが、異種移植モデル、同種移植モデル、MMTVモデル、および抗腫瘍活性を研究するために当分野で知られている他の既知のモデルを含む受け入れられたインビトロまたはインビボの腫瘍モデルを用いて評価することができる。悪性腫瘍の用語は、非良性腫瘍または癌をいう。本明細書において用いる場合、癌の用語は、調節解除された又は制御されない細胞増殖に特徴付けられる悪性腫瘍を含む。例示的な癌としては、以下が挙げられる:癌腫、肉腫、白血病およびリンパ腫。癌の用語は、原発性悪性腫瘍例えば、その細胞が対象の体における元の腫瘍の部位以外の部位へ移動していないものおよび二次悪性腫瘍例えば、転移、即ち元の腫瘍の部位とは異なる二次的部位への腫瘍細胞の移動から生じるものを含む。本発明の様々な側面を、以下のセクションおよびサブセクションにおいてさらに詳細に説明する。HER受容体の構造および活性化のメカニズム全4つのHER受容体は、細胞外リガンド-結合ドメイン、1回膜貫通ドメインおよび細胞質チロシンキナーゼ含有ドメインを有する。HER受容体の細胞内チロシンキナーゼドメインは高度に保存されているが、HER3のキナーゼドメインは、重要なアミノ酸の置換を含み、したがってキナーゼ活性を欠いているGuyらPNAS9181328136。HER受容体のリガンド誘導二量体化は、キナーゼの活性化、C-末端テールにおけるチロシン残基上の受容体リン酸転移、次に細胞内シグナル伝達エフェクターの補充および活性化を誘導するYardenandSliwkowskiNatureRev2127137JorissenらExpCellRes2843153。HERの細胞外ドメインの結晶構造は、リガンド誘導受容体活性化のプロセスへのいくつかの見識を提供しているSchlessingerCell110669672。それぞれのHER受容体の細胞外ドメインは、4つのサブドメインからなり:サブドメインIおよびIIIはリガンド-結合部位の形成において協力するが、サブドメインIIおそらくサブドメインIVもは直線的受容体-受容体相互作用を介する受容体二量体化に参加する。リガンド結合HER1の構造において、サブドメインIIにおけるβヘアピン二量体化ループと称されるは、パートナー受容体の二量体化ループと相互作用し、受容体二量体化GarrettらCell110763773OgisoらCell110775787を仲介する。対照的に、不活性なHER1、HER3およびHER4の構造において、二量体化ループは、リガンドの非存在下で受容体二量体化を防止するサブドメインIVとの分子内相互作用に関与するChoandLeahyScience29713301333FergusonらMolCell12541552BouyanらPNAS1021502415029。HER2の構造は、HER中でユニークである。リガンドの非存在下で、HER2は、他のHER受容体と相互作用するように利用できる、隆起型二量体化ループを有するHER1のリガンド活性化状態に似ている立体構造を有するChoらNature421756760GarrettらMolCell11495505。これは、HER2の増強されたヘテロ二量体化能力を説明し得る。HER受容体結晶構造は、HER受容体ホモおよびヘテロ二量体化に対するモデルを提供するが、他者に対するいくつかのHERホモおよびヘテロ二量体の普及FranklinらCancercell5317328ならびに受容体二量体化および自己阻害におけるドメインのそれぞれの立体構造の役割BurgessらMolCell12541552MattoonらPNAS101923928のための背景は、若干あいまいなままである。以下に記載されるとおり、HER3x線結晶構造は、さらなる見識を提供する。HER3構造および立体構造的エピトープ抗原結合タンパク質、例えば、抗-HER3抗体が結合する立体構造的エピトープは、本明細書において提供されている。初めて、抗体と複合体化されたHER3の細胞外ドメインの切断形態残基20-640の三次元構造は示された。HER3-MOR09823Fab複合体およびHER3-MOR09825はそれぞれ、3.2Åおよび3.4Å分解能で決定され、図5Aに示される。本明細書における記載はまた、初めて、HER3の不活性化状態に結合し、不活性化状態における受容体を安定化する抗体またはその断片を示す。本発明の抗体はまた、HER3受容体とHER3リガンド、例えばニューレグリンとの同時結合が可能である。理論に束縛はされないが、作用機序のための1つの可能なモデルは、HER3が一般的に不活性閉、連結または活性な開状態において存在することである。リガンド結合は、HER3がヘテロ二量体パートナーに結合することができ、下流シグナル伝達における活性化をもたらす活性な開状態において存在するように、構造変化を誘導する。抗体、例えば、MOR09823は、HER3の不活性な連結状態に結合するが、リガンド結合部位をブロックしない。抗体、例えば、MOR09823は、活性な立体構造への移行のためのHER3に必要なリガンド誘導構造再配列を防止し、それによりシグナル変換を防止することにより、HER3を阻害する。1つの態様において、本発明の抗体またはその断片は、HER3の不活性な連結状態に結合するが、リガンド結合部位をブロックしない。別の態様において、抗体またはその断片は、活性な立体構造への移行のためのHER3に必要なリガンド誘導構造再配列を防止し、それによりシグナル変換を防止することにより、HER3を阻害する。別の態様において、抗体またはその断片は、不活性化状態または立体構造におけるHER3受容体を安定化する直接的に維持する、固定する、つなぎ止める、保持する、優先的に結合する、または支持する。1つの態様において、不活性なHER3受容体は、細胞表面HER3受容体の喪失を引き起こすように、選択的内在化または分解に影響されやすい。実施例の部において存在する生物学的データは、これらの態様を提供する。HER3の結晶は、適当な宿主細胞においてHER3またはその変異体をコードするヌクレオチド配列を発現し、次に、関連HER3標的化Fabの存在下で精製されたタンパク質を結晶化することにより調製され得る。好ましくは、HER3ポリペプチドは、細胞外ドメインヒトポリペプチドのアミノ酸20から640または好ましくはアミノ酸20-640を含むその切断型を含むが、膜貫通および細胞内ドメインを欠いている。HER3ポリペプチドはまた、例えば、抽出および精製を手助けするために、融合タンパク質として生産され得る。融合タンパク質パートナーの例は、グルタチオン-S-トランスフェラーゼGST、ヒスチジンHIS、ヘキサヒスチジン6HIS、GAL4DNA結合および/または転写活性化ドメインおよびベータ-ガラクトシダーゼを含む。それはまた、融合タンパク質パートナーと興味あるタンパク質配列間にタンパク質分解切断部位を含み、融合タンパク質配列の除去を可能にするために便利であり得る。発現後、タンパク質は、例えば、固定化モデルアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、および/またはゲル濾過により、精製および/または濃縮され得る。タンパク質は、本明細書に記載されている技術を使用して結晶化され得る。一般的に、結晶化プロセスにおいて、タンパク質溶液を含む1滴を結晶化バッファーと混合し、密封容器中で平衡にしてもよい。平衡は、既知の技術、例えば。水滴または座滴方法によりなし遂げられ得る。これらの方法において、該滴は、結晶化バッファーの非常に広大な容器のそばで上記水滴または座滴であり、平衡は蒸気拡散を介して達する。あるいは、平衡は、例えば、油存在下で、半透膜を介する他の方法により、または自由接合面拡散により起こり得る例えば、ChayenらNatureMethods5147153参照。結晶が得られたとき、構造は既知のx線回折技術により解かれ得る。多数の技術は、空間的に近い相に対して化学的に修飾された結晶、例えば、重原子誘導体化により修飾されたものを使用する。実際には、結晶を、結晶に拡散し、タンパク質の表面に結合することができる重金属原子塩または有機金属化合物、例えば、塩化鉛、金チオマレート、チメロサールまたは酢酸ウラニルを含む溶液に浸す。次に、結合した重金属原子の位置を、浸された結晶のx線回折分析により決定することができる。結晶の原子散乱中心によるX線の単色ビームの回折において得られたパターンを、数学的等式により解き、数学的座標を得ることができる。回折データを使用して、結晶の繰り返し単位の電子密度図を計算する。相情報を得る別の方法は、分子置換として知られている技術を使用することである。この方法において、回転および並進アルゴリズムは、関連構造由来のサーチモデルを適用し、興味あるタンパク質に対する空間的に近い方向を得るRossmannActaCrystalA467382参照。電子密度図を使用して、結晶の単位格子内の個々の原子の位置を確立するBlundelらProteinCrystallographyAcademicPress。本記載は、初めて、HER3および抗-HER3抗体のFabの三次元構造を記載する。HER3の細胞外ドメインの空間的に近いドメイン境界は以下のとおりである;ドメイン1:アミノ酸20-207;ドメイン2:アミノ酸208-328;ドメイン3:アミノ酸329-498;およびドメイン4:アミノ酸499-642。HER3および抗体の三次元構造はまた、可能性のあるHER3モジュレーターに対する標的結合部位の同定を可能にする。好ましい標的結合部位は、HER3の活性化に関与するものである。1つの態様において、標的結合部位はHER3のドメイン2およびドメイン4内に位置する。したがって、ドメイン2またはドメイン4のいずれか、好ましくは両方のドメインに結合する抗体またはその断片は、互いにドメインを解離から防止することにより、またはドメインの関連位置を修飾することにより、HER3活性化を修飾することができる。したがって、ドメイン2またはドメイン4内のアミノ酸残基への抗体またはその断片の結合は、タンパク質を活性化を防止する立体構造をとらせ得る。本明細書における記載はまた、初めて、HER3リガンド、例えば、ニューレグリンに同時に結合することができる抗体またはその断片を示す。いくつかの態様において、抗体またはその断片がHER3を共受容体限定はしないが、HER1、HER2およびHER4を含むとの相互作用から防止するように、抗体またはその断片はHER3の特異的な立体構造状態を認識する。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、不活性または閉状態におけるHER3受容体を安定化することにより、HER3を共受容体との相互作用から防止する。1つの態様において、抗体またはその断片は、HER3のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基へ結合することにより、HER3受容体を安定化する。不活性化状態において、ドメイン2内に位置する二量体化ループは暴露されず、したがって他の共受容体限定はしないが、HER1、HER2およびHER4を含むとの二量体化のために利用できない。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、配列番号:1のiHER3アミノ酸残基265-277および315ドメイン2のおよびiiHER3アミノ酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615ドメイン4のまたはそれらのサブセットを含む立体構造的エピトープを有するヒトHER3タンパク質に結合する。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、配列番号:1のアミノ酸残基265-277および315ドメイン2のおよびiiHER3アミノ酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615ドメイン4の内または重複のアミノ酸に結合する。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、配列番号:1のアミノ酸265-277および315ドメイン2のおよびiiHER3アミノ酸残基571、582-584、596-597、600-602、609-615ドメイン4のまたはそれらのサブセット内のアミノ酸および/またはからなるアミノ酸配列に結合する。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、ドメイン2およびドメイン4の移動度を限定し、不活性または閉立体構造を安定化するように、立体構造的エピトープに結合する。活性な立体構造を形成できないことは、シグナル変換を活性化しなくなる。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、ドメイン2内の二量体化ループを塞ぎ、それにより受容体-受容体相互作用のために利用できなくさせるように、立体構造的エピトープに結合する。ホモまたはヘテロ二量体を形成できないことは、シグナル変換を活性化しなくなる。別の局面において、抗体またはその断片は、HER受容体、例えば、HER3受容体の立体構造的エピトープに結合する。1つの態様において、抗体またはその断片は、不活性化状態におけるHER3受容体を安定化する。別の態様において、抗体またはその断片は、HER3受容体の活性状態に結合し、不活性化状態として不活性化状態にする。したがって、抗体またはその断片は、HER3の活性または不活性化状態のいずれかに結合することができるが、不活性化状態の形成を支持し、HER3の活性状態を不活性化状態にし、シグナル変換を活性化しなくなる。別の局面において、抗体またはその断片は、HER3受容体が共受容体と二量体化して、受容体-受容体複合体を形成することができないように、抗体またはその断片の結合が不活性化状態においてHER3受容体を安定化するHER受容体、例えば、HER3受容体の立体構造的エピトープに結合する。受容体-受容体複合体を形成できないことは、リガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル変換の両方の活性化を防止する。別の局面において、抗体またはその断片は、HER3受容体への抗体またはその断片の結合が共受容体との二量体化を可能にし、不活性な受容体-受容体複合体を形成するHER受容体、例えば、HER3受容体の立体構造的エピトープに結合する。不活性な受容体-受容体複合体の形成は、リガンド非依存性シグナル変換の活性化を防止する。例えば、リガンド非依存性シグナル変換において、HER3は不活性化状態において存在し得るが、しかしながら、HER2の過剰発現は、HER2-HER3複合体形成を引き起こすが、しかしながら、これらの得られた複合体は不活性であり、リガンド非依存性シグナル変換の活性化を防止する。描写された構造はまた、HER3と抗体またはその断片例えば、MOR09823との相互作用接合面のための特定のコアHER3アミノ酸残基を同定することを可能にする。これは、MOR09823タンパク質VH鎖の5Å内である残基として定義された。コア残基は以下のとおりである:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597。構造はまた、抗体またはその断片例えば、MOR09823との相互作用接合面に対する境界HER3アミノ酸残基を同定するために使用することができる。これらの残基は、MOR09823タンパク質VH鎖から5-8ÅであったHER3残基でありうる。境界残基は以下のとおりである:Pro262、Val264、Tyr265、Phe270、Leu272、Thr278、Lys314、Gly316、Glu321、Asn566、Ser568、Gly569、Ser570、Thr572、Arg580、Asp581、Gly582、Gly595、Gly598、Ile600。描写された構造はまた、特定のコアHER3アミノ酸残基と抗体またはその断片例えば、MOR09823との相互作用接合面に対する特定のコアHER3アミノ酸残基を同定することを可能にする。これは、MOR09823タンパク質VL鎖の5Å内である残基として定義された。コア残基は以下のとおりである:Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。構造はまた、抗体またはその断片例えば、MOR09823との相互作用接合面に対する境界HER3アミノ酸残基を同定するために使用することができる。これらの残基は、MOR09823タンパク質VL鎖から5-8ÅであったHER3残基であった。境界残基は以下のとおりである:Asn266、Thr269、Asp571、Arg580、Asp581、His584、Pro590、Ala596、Pro599、Tyr601、Tyr603、Asp605、Gln607、Cys610、Asn616、Cys617、Cys621、Gly623、Pro624。表11および12MOR09823ならびに表13および14MOR09825においてそれぞれ見ることができるとおり、重鎖は、主に、ドメイン4のアミノ酸残基とのわずかな相互作用にてエピトープのドメイン2内のアミノ酸残基への抗原結合タンパク質の結合に関与するが、軽鎖は、主に、ドメイン2内のアミノ酸残基とのわずかな相互作用にてエピトープのドメイン4内のアミノ酸残基への結合に関与する。そのため、当業者は、現在の教示を考慮すると、抗原結合タンパク質の残基および領域は、HER3に結合する抗原結合タンパク質の能力との過度の干渉なしに変化することができると予測することができる。コア相互作用接合面アミノ酸は、HER3パートナータンパク質から5Å以下である少なくとも1つの原子を有する全てのアミノ酸残基であると決定した。5Åは、ファンデルワールス半径および可能な水媒介水素結合内の原子を考慮して、コア領域カットオフ距離として決定した。境界相互作用接合面アミノ酸は、HER3パートナータンパク質から8Å以下であるが、コア相互作用リストに含まれない少なくとも1つの原子を有する全てのアミノ酸残基であると決定した。いくつかの態様において、上記残基のいずれかに結合するか、上記残基のいずれかを覆うか、または上記残基のいずれかとの相互作用からMOR09823を防止するあらゆる抗原結合タンパク質を、HER3に結合するか、またはHER3を中和するために使用することができる。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、少なくとも1つの以下のHER3残基配列番号:1に結合するか、または少なくとも1つと相互作用する:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、少なくとも1つの以下のHER3残基配列番号:1に結合するか、または少なくとも1つと相互作用する:Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、少なくとも1つの以下のHER3残基配列番号:1に結合するか、または少なくとも1つと相互作用する:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597、Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、以下のHER3残基配列番号:1の組合せに結合するか、または組合せと相互作用する:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597、Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、以下のHER3残基配列番号:1の全てに結合するか、または全てと相互作用する:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597、Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、1つ以上の上記残基と5オングストローム内である。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、1つ以上の上記残基と5から8オングストロームである。いくつかの態様において、抗体またはその断片は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45または50個の上記残基と相互作用するか、残基をブロックするか、残基と8オングストローム内である。HER3およびHER3:MOR09823の複合体に対する3D構造の有用性は、例えば、より詳細に他のHER3抗体を探索するためのフレームワークを提供する。HER3の3D構造は、いくつかは細胞増殖を阻害し、いくつかは細胞増殖を刺激し、いくつかは細胞増殖における影響を有さないため、モノクローナル抗体に対するエピトープをマッピングする、およびそれらの作用様式を推測することを可能にする。MOR09823に対する立体構造的エピトープは、HER3のドメイン2および4に位置している。この受容体の3D構造の有用性は、これらの阻害剤の正確な作用機序の決定およびHER3受容体機能との干渉に対する新規アプローチの設計を容易にする。1つの態様において、本発明の抗体は、MOR09823と同じ立体構造的エピトープに結合する。いくつかの態様において、表1に記載されている抗体のいずれかにより結合される立体構造的エピトープは、とりわけ有用である。1つの態様において、HER3立体構造的エピトープは、HER3に結合する抗体またはその断片を単離するために利用することができる。1つの態様において、HER3立体構造的エピトープは、HER3に結合する抗体またはその断片を作製するために利用することができる。1つの態様において、HER3立体構造的エピトープは、HER3立体構造的エピトープに結合する抗体またはその断片を作製するために免疫原として利用することができる。1つの態様において、HER3立体構造的エピトープを動物に投与することができ、次に、HER3に結合する抗体を動物から得ることができる。いくつかの態様において、抗体と接触するか、または抗体に埋まる残基を含むドメイン/領域は、HER3例えば、野生型抗原における特定の残基を変異し、抗体またはその断片が変異または変異体HER3タンパク質に結合することができるか否かを決定するか、または野生型からの親和性の変化を測定することにより同定することができる。多くの個々の変異を作ることにより、結合において直接的役割を果たすか、または変異が抗体と抗原間の結合に影響することができるような抗体に十分に密接に近接している残基は、同定することができる。これらのアミノ酸の情報から、抗体と接触しているか、または抗体により覆われている残基を含む抗原HER3のドメインまたは領域を、解明することができる。既知の技術、例えば、アラニン-スキャンニングを使用する変異誘発は、機能的に関連したエピトープを定義することを手助けすることができる。アルギニン/グルタミン酸スキャニングプロトコールを利用する変異誘発もまた、使用することができる例えば、NaneviczらJBiolChem2702161921625およびZupnickらJBiolChem2812046420473参照。一般的に、アルギニンおよびグルタミン酸は、荷電しており、巨大であり、したがって変異が導入される抗原の領域における抗原結合タンパク質と抗原間の結合を破壊する可能性を有するため、野生型ポリペプチドにおけるアミノ酸に対して一般的に個々に置換されている。野生型抗原において存在するアルギニンは、グルタミン酸と置換される。種々のこのような個々の変異体は回収され、回収された結合結果を分析して、残基が結合に影響することを決定することができる。一連の変異体HER3抗原は、単一の変異を有するそれぞれの変異体抗原にて作製することができる。種々のHER3抗体またはその断片とそれぞれの変異体HER3抗原との結合は測定することができ、選択された抗体またはその断片が野生型HER配列番号:13に結合する能力と比較することができる。抗体またはその断片と本明細書において使用される変異または変異体HER3間の結合における変化例えば、減少または増加は、結合アビディティーの変化例えば、既知の方法、例えば、実施例において以下に記載されるBiacore試験またはビーズに基づくアッセイにより測定されるとき、EC50、および/または抗原結合タンパク質の全結合能力における変化例えば、減少例えば、抗原結合タンパク質濃度対抗原濃度のプロットにおけるBmaxの減少により証明されるときが存在することを意味する。結合における有意な変化は、変異された残基が抗体またはその断片への結合に関与することを示す。いくつかの態様において、結合における有意な減少は、結合アビディティー、EC50、および/または抗体またはその断片と変異体HER3抗原間の能力が、抗体またはその断片と野生型HER3例えば、配列番号:1間の結合と比較して、10以上、20以上、40以上、50以上、55以上、60以上、65以上、70以上、75以上、80以上、85以上、90以上または95以上減少していることを意味する。いくつかの態様において、抗体またはその断片の結合は、野生型HER3タンパク質例えば、配列番号:1と比較して、1個またはそれ以上例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上の変異を有する変異体HER3タンパク質に対して、有意に減少または増加している。変異体型は配列番号:1において示される野生型配列に対して言及されるが、HER3の対立遺伝子またはスプライス変異体において、アミノ酸が異なり得ることが理解される。HER3のこのような対立遺伝子型に対する有意に改変された結合例えば、より低いまたはより高い結合を示す抗体またはその断片もまた考えられる。抗体の一般的な構造局面に加えて、パラトープとエピトープ間のさらに特異的な相互作用は、構造的アプローチを介して実施され得る。1つの態様において、CDRの構造は、抗体がエピトープに結合することができ、パラトープに寄与する。このようなパラトープの形は、多くの方法において決定され得る。従来の構造試験アプローチ、例えば、NMRまたはX線結晶学を使用することができる。これらのアプローチは、パラトープ単独の形、またはエピトープに結合しているものを試験することができる。あるいは、分子モデルは、コンピューター内で作成することができる。構造は、市販のパッケージ、例えば、AccelrysからのInsightIIモデリングパッケージで手助けされる、相同性モデリングを介して作成することができる。簡潔には、それは、調査される抗体の配列を使用して、既知の構造のタンパク質のデータベース、例えば、ProteinDataBankに対して検索することができる。それは既知の構造を有する同種タンパク質を同定した後、これらの同種タンパク質をモデリング鋳型として使用する。それぞれの可能性のある鋳型をアラインし、したがって、鋳型中の構造ベースの配列アラインメントを生産することができる。次に、未知の構造を有する抗体の配列をこれらの鋳型とアラインし、未知の構造を有する抗体に対する分子モデルを作成することができる。当業者により理解されるとおり、コンピューター内でこのような構造を作成するための多数の代替方法が存在し、これらのうちのいずれかが使用され得る。例えば、QUANTAPolygenCorpWalthamMassを使用するHardmanらの米国特許第5,958,708号およびCHARMBrooksらJCompChem4187に記載されているものと同様のプロセスが、使用され得る出典明示によりその内容について本明細書に包含させる。可能なパラトープがエピトープに結合するか否か、どのように結合するかを決定するにおいて重要なパラトープの形だけでなく、エピトープとパラトープ間の相互作用自体は、変異体抗体の設計における良い情報の供給源でもある。当業者により理解されるとおり、この相互作用を試験することができる種々の方法が存在する。1つの方法は、上記されているであろう作成された構造モデルを使用して、次に、とりわけ、パラトープとそのエピトープ間の立体構造および方向空間についてMonteCarlo検索を実施することができるドッキングモジュールを有するプログラム、例えば、InsightIIを使用することである。結果は、エピトープがパラトープと相互作用する場所を予測することができ、または該相互作用するか否かを予測することができるということである。1つの態様において、エピトープの断片または変異体のみを、関連の相互作用を決定することを助けるために使用される。1つの態様において、全体のエピトープは、パラトープとエピトープ間の相互作用のモデリングにおいて使用される。これらのモデル構造の使用を介して、それは、どの残基がエピトープとパラトープ間の相互作用において最も重要であるかを予測することができる。したがって、1つの態様において、それは、抗体の結合特性を改変するために変化させる残基を容易に選択することができる。例えば、パラトープにおける特定の残基の側鎖がエピトープの結合を立体的に妨げ、したがって、これらの残基をより小さい側鎖を有する残基に改変することが有益であり得ることが、ドッキングモデルから明らかであり得る。これは、多数の方法において決定することができる。例えば、それは、2つのモデルを単に試験し、官能基および近接に基づく相互作用を評価し得る。あるいは、それは、より有益なエネルギー相互作用を得るために、上記エピトープおよびパラトープの繰り返しペアリングを行い得る。それはまた、抗体の種々の変異体に対するこれらの相互作用を決定し、抗体がエピトープに結合し得る代替方法を決定することができる。それはまた、所望の特定の特性を有する抗体を得るために、抗体の構造を改変するべきであるかどうかを決定するように種々のモデルと組み合わせることができる。上記決定されたモデルは、種々の技術を介して試験することができる。例えば、さらに試験して変異体のエネルギーを決定するために、相互作用エネルギーは、上記プログラムで決定することができる。また、クーロンおよびファンデルワールス相互作用を使用して、エピトープおよび変異体パラトープの相互作用エネルギーを決定する。部位特異的変異誘発はまた、抗体構造における予測される変化が、実際に結合特性において所望の変化をもたらすかどうかを確かめるために使用される。あるいは、変化は、モデルが正しいことを証明するか、またはパラトープとエピトープ間に起こり得る一般的な結合テーマを決定するために、エピトープに作られ得る。当業者により理解されるとおり、これらのモデルは、本願の態様の抗体およびその変異体を作製するために必要な情報を提供するが、おそらくインビトロ試験を介するコンピューター内のモデルの日常的な試験を行うことが望ましい。加えて、当業者に理解されるとおり、何らかの修飾はまた、抗体の活性に対してさらなる副作用を有し得る。例えば、より良い結合をもたらすことが予測される変化がより良い結合を誘導し得るが、それはまた、抗体の活性を減少または改変させ得る他の構造変化を引き起こし得る。これが事実であるか否かの決定は当分野で日常的であり、多数の方法においてなし遂げることができる。例えば、活性は、ELISA試験を介して試験することができる。あるいは、サンプルは、表面プラズモン共鳴装置の使用を介して試験することができる。HER3抗体本発明は、HER3の立体構造的エピトープを認識する抗体を提供する。本発明は、HER3に対する抗体のクラスが、リガンド依存性およびリガンド非依存性HER3シグナル変換経路の両方をブロックするという驚くべき知見に基づく。HER3の特定の立体構造エピトープに結合する抗体のクラスは、表1に記載されている。1つの態様において、該抗体は、リガンド依存性およびリガンド非依存性HER3シグナル伝達の両方を阻害する。別の態様において、該抗体はHER3に結合し、リガンド結合部位へのHERリガンド結合をブロックしないすなわち、リガンドおよび抗体の両方が、HER3に同時に結合することができる。本発明は、HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルのHER3に特異的に結合する抗体であって、配列番号:15、33、51、69、87、105、123、141、159、177、195、213、231、249、267、285、303、321、339、357および375のアミノ酸配列を有するVHドメインを含む抗体を提供する。本発明は、HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルのHER3に特異的に結合する抗体であって、配列番号:14、32、50、68、86、104、122、140、158、176、194、212、230、248、266、284、302、320、338、356および374のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む抗体を提供する。本発明はまた、HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルのHER3に特異的に結合する抗体であって、以下の表1に示すVHCDRのいずれかのアミノ酸配列を有するVHCDRを含む抗体を提供する。特に、本発明は、HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルのHER3に特異的に結合する抗体であって、以下の表1に示すVHCDRのいずれかのアミノ酸配列を有する1つ、2つ、3つ、4つ、5つまたはそれ以上のVHCDRを含むあるいは該VHCDRからなる抗体を提供する。本発明の他の抗体は、突然変異しているが、CDR領域において、表1に記載される配列中に示されるCDR領域と少なくとも60、70、80、90、95または98同一性パーセントを有するアミノ酸を含む。いくつかの態様において、それは、表1に記載される配列中に示されるCDR領域と比較した場合にCDR領域においてわずか1、2、3、4または5個のアミノ酸が突然変異しているが、元の抗体のエピトープに対するその特異性を依然として維持している突然変異体アミノ酸配列を含む。本発明の他の抗体は、突然変異しているが、フレームワーク領域において、表1に記載される配列中に示されるフレームワーク領域と少なくとも60、70、80、90、95または98の同一性パーセントを有するアミノ酸を含む。いくつかの態様において、それは、表1に記載される配列中に示されるフレームワーク領域と比較した場合に、フレームワーク領域においてわずか1、2、3、4、5、6または7個のアミノ酸が突然変異しているが、元の抗体のエピトープに対するその特異性を依然として維持している突然変異体アミノ酸配列を含む。本発明はまた、HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルのHER3に特異的に結合する抗体のVH、VL、全長重鎖および全長軽鎖をコードする核酸配列を提供する。本発明のHER3抗体は、HER3のドメイン2およびドメイン4由来のアミノ酸残基を含むHER3の立体構造的エピトープに結合する。表1:本発明のHER3抗体の例本発明の他の抗体は、アミノ酸またはアミノ酸をコードする核酸が変異されているが、表1に記載の配列と少なくとも60、70、80、90、95、96、97、98および99の同一性を有するものを含む。いくつかの実施形態では、表1に記載の配列に示されている可変領域と比較した場合、可変領域において1、2、3、4または5以下のアミノ酸が変異されているが、実質的に同一の治療活性を保持している変異アミノ酸配列を含む。これらの抗体またはそれらの断片の各々はHER3に結合できるので、VH、VL、全長軽鎖および全長重鎖配列アミノ酸配列およびアミノ酸配列をコードする配列を組み合わせて適合させて、本発明の他のHER3結合抗体を作成できる。かかる組み合わせて適合させたHER3結合抗体は、当該技術分野で知られている結合アッセイ例えばELISA、および実施例の節に記載の他のアッセイを用いて試験してもよい。これらの鎖が組み合わせて適合されている場合、特定のVH/VL対の対由来のVH配列は、構造的に類似したVH配列で置換されるべきである。同様に、特定の全長重鎖/全長軽鎖の対由来の全長重鎖配列は、構造的に類似した全長重鎖配列で置換されるべきである。同様に、特定のVH/VLの対由来のVL配列は、構造的に類似したVLで置換されるべきである。同様に、特定の全長重鎖/全長軽鎖の対由来の全長軽鎖配列は、構造的に類似した全長軽鎖配列で置換されるべきである。したがって、一態様では、本発明は:配列番号15、33、51、69、87、105、123、141、159、177、195、213、231、249、267、285、303、321、339、357および375からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;ならびに配列番号14、32、50、68、86、104、122、140、158、176、194、212、230、248、266、284、302、320、338、356および374からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し;HER3例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルに特異的に結合するものである、単離されたモノクローナル抗体またはそれらの断片を提供する。別の態様では、本発明は、表1に記載の重鎖および軽鎖CDR1、CDR2およびCDR3、またはそれらの組合せを含む、HER3結合抗体を提供する。該抗体のVHCDR1のアミノ酸配列は、配列番号:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134、146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362および368に示される。該抗体のVHCDR2のアミノ酸配列は、配列番号:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363および369に示される。該抗体のVHCDR3のアミノ酸配列は、配列番号:4、10、22、28、40、46、58、64、76、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364および370に示される。該抗体のVLCDR1のアミノ酸配列は、配列番号:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365および371に示される。該抗体のVLCDR2のアミノ酸配列は、配列番号:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366および372に示される。該抗体のVLCDR3のアミノ酸配列は、配列番号:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、133、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367および373に示される。CDR領域は、Kabat系を用いて描写されるKabatらSequencesofProteinsofImmunologicalInterestFifthEditionUSDepartmentofHealthandHumanServicesNIHPublicationNo913242ChothiaらJMolBiol196901917ChothiaらNature342877883およびAlLazikaniらJMolBiol273927948。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:2の重鎖可変領域CDR1;配列番号:3のCDR2;配列番号:4のCDR3;配列番号:5の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:6のCDR2;および配列番号:7のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:20の重鎖可変領域CDR1;配列番号:21のCDR2;配列番号:22のCDR3;配列番号:23の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:24のCDR2;および配列番号:25のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:38の重鎖可変領域CDR1;配列番号:39のCDR2;配列番号:40のCDR3;配列番号:41の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:42のCDR2;および配列番号:43のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:56の重鎖可変領域CDR1;配列番号:57のCDR2;配列番号:58のCDR3;配列番号:59の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:60のCDR2;および配列番号:61のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:74の重鎖可変領域CDR1;配列番号:75のCDR2;配列番号:76のCDR3;配列番号:77の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:78のCDR2;および配列番号:79のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:92の重鎖可変領域CDR1;配列番号:93のCDR2;配列番号:94のCDR3;配列番号:95の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:96のCDR2;および配列番号:97のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:110の重鎖可変領域CDR1;配列番号:111のCDR2;配列番号:112のCDR3;配列番号:113の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:114のCDR2;および配列番号:115のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:128の重鎖可変領域CDR1;配列番号:129のCDR2;配列番号:130のCDR3;配列番号:131の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:132のCDR2;および配列番号:133のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:146の重鎖可変領域CDR1;配列番号:147のCDR2;配列番号:148のCDR3;配列番号:149の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:150のCDR2;および配列番号:151のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:164の重鎖可変領域CDR1;配列番号:165のCDR2;配列番号:166のCDR3;配列番号:167の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:168のCDR2;および配列番号:169のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:182の重鎖可変領域CDR1;配列番号:183のCDR2;配列番号:184のCDR3;配列番号:185の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:186のCDR2;および配列番号:187のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:200の重鎖可変領域CDR1;配列番号:201のCDR2;配列番号:202のCDR3;配列番号:203の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:204のCDR2;および配列番号:205のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:218の重鎖可変領域CDR1;配列番号:219のCDR2;配列番号:220のCDR3;配列番号:221の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:222のCDR2;および配列番号:223のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:236の重鎖可変領域CDR1;配列番号:237のCDR2;配列番号:238のCDR3;配列番号:239の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:240のCDR2;および配列番号:241のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:254の重鎖可変領域CDR1;配列番号:255のCDR2;配列番号:256のCDR3;配列番号:257の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:258のCDR2;および配列番号:259のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:272の重鎖可変領域CDR1;配列番号:273のCDR2;配列番号:274のCDR3;配列番号:275の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:276のCDR2;および配列番号:277のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:290の重鎖可変領域CDR1;配列番号:291のCDR2;配列番号:292のCDR3;配列番号:293の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:294のCDR2;および配列番号:295のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:308の重鎖可変領域CDR1;配列番号:309のCDR2;配列番号:310のCDR3;配列番号:311の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:312のCDR2;および配列番号:313のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:326の重鎖可変領域CDR1;配列番号:327のCDR2;配列番号:328のCDR3;配列番号:329の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:330のCDR2;および配列番号:331のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:344の重鎖可変領域CDR1;配列番号:345のCDR2;配列番号:346のCDR3;配列番号:347の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:348のCDR2;および配列番号:349のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:362の重鎖可変領域CDR1;配列番号:363のCDR2;配列番号:364のCDR3;配列番号:365の軽鎖可変領域CDR1;配列番号:366のCDR2;および配列番号:367のCDR3を含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:15のVHおよび配列番号:14のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:33のVHおよび配列番号:32のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:51のVHおよび配列番号:50のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:69のVHおよび配列番号:68のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:87のVHおよび配列番号:86のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:105のVHおよび配列番号:104のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:123のVHおよび配列番号:122のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:141のVHおよび配列番号:140のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:159のVHおよび配列番号:158のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:177のVHおよび配列番号:176のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:195のVHおよび配列番号:194のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:213のVHおよび配列番号:212のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:231のVHおよび配列番号:230のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:249のVHおよび配列番号:248のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:267のVHおよび配列番号:266のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:285のVHおよび配列番号:284のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:303のVHおよび配列番号:302のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:321のVHおよび配列番号:320のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:339のVHおよび配列番号:338のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:357のVHおよび配列番号:356のVLを含む。特定の態様において、HER3に結合する抗体は、配列番号:375のVHおよび配列番号:374のVLを含む。1つの態様において、HER3抗体はアンタゴニスト抗体である。1つの態様において、HER3に結合する抗体は、表1に記載されている抗体である。本明細書で用いる場合、抗体の可変領域または全長鎖がヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子を用いる系から獲得される場合、該ヒト抗体は、特定の生殖系列配列の産物であるかまたはそれに由来する、重鎖もしくは軽鎖可変領域または全長重鎖もしくは軽鎖を含む。かかる系は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを対象とする抗原で免疫するか、あるいは対象とする抗原でファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることを含む。ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の産物であるかまたはそれに由来するヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較して、ヒト抗体配列と配列において最も近いすなわち、最大の同一性ヒト生殖系列免疫グロブリン配列を選択することにより、それ自体同定できる。特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列の産物であるかまたはそれに由来するヒト抗体は、例えば、天然に存在する体細胞変異あるいは部位特異的突然変異の意図的導入のために、生殖系列配列と比較した場合、アミノ酸の相違を含有してもよい。しかしながら、VHまたはVLフレームワーク領域において、選択されたヒト抗体は典型的には、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも90同一であり、かつ、他の種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列例えば、マウス生殖系列配列と比較した場合、ヒトであるとヒト抗体を同定するアミノ酸残基を含有する。場合によっては、ヒト抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも60、70、80、90、もしくは少なくとも95、またはさらに少なくとも96、97、98もしくは99同一でありうる。典型的には、組換えヒト抗体は、VHまたはVLフレームワーク領域においてヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、10以下のアミノ酸の相違を示すだろう。場合によっては、ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、5以下、または4、3、2あるいは1以下のアミノ酸の相違を示しうる。典型的な数のHER3抗体に対するVHおよびVL生殖細胞系列配列を使用する種々の生殖細胞系列バージョンを、Kabatを使用して、表2に示す。CDR位置は、ボールド体において強調されている。生殖細胞系列配列で表において使用される表記は、以下のとおりである:MOR10701-VH_3-07は、VH生殖細胞系列配列3-07命名法はVbaseにしたがうのフレームワーク領域におけるMOR10701CDRループを意味し、MOR10703-VK_L1は、VKがカッパ軽鎖であるVK_L1由来の生殖細胞系列フレームワーク領域におけるMOR10703からのCDRを意味する。表2:典型的な抗体の選択された数の異なる生殖細胞系列バージョン表3:JHセグメント表4:JKセグメントJHセグメントとVH-生殖細胞系列配列の組合せを使用することができる。組合せの典型的な例は、表5に示される。表5:JHセグメントとVH-生殖細胞系列配列の組合せの典型的な例JKセグメントとVL-生殖細胞系列配列の組合せを使用することができる。組合せの典型的な例は、表6に示される。表6:JKセグメントとVL-生殖細胞系列配列の組合せの典型的な例VHをJHと、VKをJKと組み合わせたとき、VHまたはJHとVKまたはJKとの任意の組合せを使用することができる。1つの態様において、VH生殖細胞系列領域のいずれかを、それぞれの抗体に対するVKVL生殖細胞系列領域のいずれかと組み合わせることができる。組合せの典型的な数の例を表7に示す。表7:生殖細胞系列配列の組合せの典型的な例1つの態様において、本発明は、Xaa1-HCDR1-Xaa2-HCDR2-Xaa3-HCDR3-Xaa4の配列重鎖HCDR1、HCDR2、HCDR3は、表1および2から選択される任意の重鎖CDRであるの配列を含む重鎖可変領域に関する。説明の目的のみのために、該配列は:Xaa1-SYAMS-Xaa2-AINSQGKSTYYADSVKG-Xaa3-WGDEGFDI-Xaa4配列番号:493、Xaa1は、任意の30個のアミノ酸のフレームワーク領域である;Xaa2は、任意の14個のアミノ酸のフレームワーク領域である;Xaa3は、任意の32個のアミノ酸のフレームワーク領域である;Xaa4は、任意の11個のアミノ酸のフレームワーク領域である;であり得る。1つの態様において、本発明は、Xaa1-LCDR1-Xaa2-LCDR2-Xaa3-LCDR3-Xaa4の配列軽鎖LCDR1、LCDR2、LCDR3は、表1および2から選択される任意の軽鎖CDRであるの配列を含む軽鎖可変領域に関する。説明の目的のみのために、該配列は:Xaa1-RASQGISNWLA-Xaa2-GASSLQS-Xaa3-QQYSSFPTT-Xaa4配列番号:494、Xaa1は、任意の23個のアミノ酸のフレームワーク領域である;Xaa2は、任意の15個のアミノ酸のフレームワーク領域である;Xaa3は、任意の32個のアミノ酸のフレームワーク領域である;およびXaa4は、任意の10個のアミノ酸のフレームワーク領域であるであり得る。本明細書に開示される抗体は、一本鎖抗体、二重特異性抗体、ドメイン抗体、ナノ抗体およびユニボディの誘導体でありうる。一本鎖抗体scFvは、VLドメインおよびVHドメインが対合して一価分子を形成する、VHドメインに連結したVLドメインを含む、単一のポリペプチド鎖からなる。一本鎖抗体は、当該技術分野で知られている方法により調製できる例えば、BirdらScience242423426およびHustonらProcNatlAcadSciUSA8558795883を参照。disbudは2つの鎖からなり、各鎖は、短いペプチドリンカーにより結合され、同一ポリペプチド鎖上で軽鎖可変領域に結合された重鎖可変領域を含み、同一鎖上の2つの領域はお互いに対合しないが、他方の鎖の相補ドメインと二重特異性分子を形成するものである。二重特異性抗体の調製方法は、当該技術分野で知られている例えば、HolligerらProcNatlAcadSciUSA9064446448およびPoljakらStrucure211211123を参照。ドメイン抗体dAbsは、抗体の重鎖あるいは軽鎖のいずれかの可変領域に相当する、抗体の小さい機能的結合単位である。ドメイン抗体は、細菌、酵母およびほ乳類細胞系で良好に発現する。ドメイン抗体およびそれらの産生方法のさらなる詳細は、当該技術分野で知られている例えば、米国特許第6,291,158号;同第6,582,915号;同第6,593,081号;同第6,172,197号;同第6,696,245号;欧州特許第0368684号および同第0616640号;国際公開第05/035572号,同第04/101790号,同第04/081026号,同第04/058821号,同第04/003019号および同第03/002609号を参照。ナノ抗体は抗体の重鎖に由来する。ナノ抗体は典型的に、単一の可変ドメインおよび2つの定常ドメインC2およびC3を含み、元の抗体の抗原結合能を保持する。ナノ抗体は当該技術分野で知られている方法により調製できる例えば、米国特許第6,765,087号,同第6,838,254号,国際公開第06/079372号を参照。ユニボディはIgG4の1つの軽鎖および1つの重鎖からなる。ユニボディはIgG4抗体のヒンジ領域の除去により作製できる。ユニボディおよびそれらの調製方法のさらなる詳細は、国際公開第2007/059782号に見出される。相同抗体さらに別の実施形態では、本発明は、表1に記載の配列と相同なアミノ酸配列であって、HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルHER3に結合し、表1に記載の抗体の所望の機能的特性を保持している抗体またはそれらの断片を提供する。例えば、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単離されたモノクローナル抗体またはその機能的断片であって、該重鎖可変領域は配列番号15、33、51、69、87、105、123、141、159、177、195、213、231、249、267、285、303、321、339、357および375からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも90もしくは少なくとも95同一であるアミノ酸配列を含み;該軽鎖可変領域は配列番号14、32、50、68、86、104、122、140、158、176、194、212、230、248、266、284、302、320、338、356および374からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80、少なくとも90もしくは少なくとも95同一であるアミノ酸配列を含み;HER3例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルHER3に結合し、リン酸化アッセイまたはHERシグナル伝達例えば、実施例に記載されているホスホ-HER3アッセイ、ホスホ-Aktアッセイ、細胞増殖およびリガンド阻害アッセイの他の測定において測定できる、β-プロペラ1依存性Wntタンパク質のシグナル伝達活性を阻害する抗体を提供する。また、可変重鎖および軽鎖親ヌクレオチド配列;ならびにほ乳類細胞での発現のために最適化された全長重鎖および軽鎖配列も本発明の範囲内である。本発明の他の抗体は、変異されたアミノ酸または核酸を含むが、上述の配列と少なくとも60、70、80、90、95または98同一性を有する。いくつかの実施形態では、上述の配列に示される可変領域と比べると1、2、3、4または5以下のアミノ酸が可変領域においてアミノ酸欠失、挿入または置換により変異している、変異アミノ酸配列を含む。他の実施形態では、VHおよび/またはVLアミノ酸配列は、表1に記載の配列と50、60、70、80、90、95、96、97、98または99同一でありうる。他の実施形態では、VHおよび/またはVLアミノ酸配列は、1、2、3、4または5以下のアミノ酸位置でのアミノ酸置換を除き同一でありうる。表1に記載の抗体のVHおよびVL領域と高いすなわち、80以上の同一性を有するVHおよびVL領域を有する抗体は、突然変異誘発例えば部位特異的またはPCR介在突然変異誘発により得ることができ、次いで本明細書に記載の機能的アッセイを用いて保持される機能について、コードされる変化された抗体を試験できる。他の実施形態では、重鎖および/または軽鎖ヌクレオチド配列の可変領域は、上記の配列と60、70、80、90、95、96、97、98または99同一でありうる。本明細書で用いる場合、2つの配列間の同一性パーセントは、2つの配列の最適なアラインメントのために導入することが必要なギャップ数、および各ギャップの長さを考慮に入れて、当該配列により共有される同一の位置の数の関数であるすなわち、同一性は同一位置の数/位置の総数×100に等しい。2つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、下記非限定的な例に記載の通り、数学的なアルゴリズムを用いて実施できる。さらにまたはあるいは、本発明のタンパク質配列はさらにクエリー配列として用いて、公開データベースに対する検索を実行し、例えば関連配列を同定できる。例えば、かかる検索は、AltschulらJMolBiol21540310のBLASTプログラムversion2.0を用いて実行することができる。保存的修飾を有する抗体特定の実施形態では、本発明の抗体は、CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む重鎖可変領域ならびにCDR1、CDR2およびCDR3配列を含む軽鎖可変領域を有し、これらのCDR配列の一以上は、本明細書に記載の抗体に基づいて特定されるアミノ酸配列またはその保存的修飾を有し、そして本発明のHER3結合抗体の所望の機能的特性を保持するものである。したがって、本発明は、CDR1、CDR2およびCDR3配列を含む重鎖可変領域ならびにCDR1、CDR2およびCDR3配列を含む軽鎖可変領域からなる、単離されたHER3モノクローナル抗体またはその断片であって:該重鎖可変領域CDR1アミノ酸配列が、配列番号:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134、146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362および368ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され;該重鎖可変領域CDR2アミノ酸配列が、配列番号:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363および369ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され;該重鎖可変領域CDR3アミノ酸配列が、配列番号:4、10、22、28、40、46、58、64、76、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364および370ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され;該軽鎖可変領域CDR1アミノ酸配列が、配列番号:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365および371ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され;該軽鎖可変領域CDR2アミノ酸配列が、配列番号:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366および372ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され;該軽鎖可変領域CDR3アミノ酸配列が、配列番号:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、133、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367および373ならびにそれらの保存的修飾からなる群から選択され;HER3に特異的に結合し、リン酸化アッセイまたは他のHERシグナル伝達の他の測定例えば、実施例に記載されているホスホ-HER3アッセイ、ホスホ-Aktアッセイ、細胞増殖およびリガンド結合アッセイにおいて測定できる、HERシグナル伝達経路を阻害することによりHER3活性を中和する、抗体またはそれらの断片を提供する。同じエピトープに結合する抗体本発明は、表1および図7に記載されているHER3結合抗体と同じエピトープと相互作用する例えば、結合、立体障害、安定化/不安定化、空間分布による抗体を提供する。したがって、さらなる抗体は、HER3結合アッセイにおいて、本発明の他の抗体と交差競合する例えば、統計的に有意な様式において競合的に阻害する能力に基づいて同定することができる。試験抗体がHER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルHER3への本発明の抗体の結合を阻害する能力は、該試験抗体がHER3の結合に対して抗体と競合することができる;このような抗体は、非限定的な理論によると、競合する抗体と同じ、または関連する例えば、構造的に類似の、または空間的に隣接しているHER3タンパク質上のエピトープに結合し得るということを証明する。特定の態様において、本発明の抗体と同じHER3上のエピトープに結合する抗体はヒトモノクローナル抗体である。このようなヒトモノクローナル抗体は、本明細書に記載されているとおりに調製し、単離することができる。1つの態様において、抗体またはその断片は、ドメイン2内に存在する二量体化ループの暴露を防止する不活性な立体構造におけるHER3を保持するように、HER3のドメイン2およびドメイン4の両方に結合する。これは、他のファミリーメンバー、例えば、HER1、HER2およびHER4とのヘテロ二量体化を防止する。抗体またはその断片は、リガンド依存性およびリガンド非依存性HER3シグナル変換の両方を阻害する。別の態様において、抗体またはその断片は、HER3リガンド、例えば、ニューレグリンの同時結合をブロックすることなく、HER3のドメイン2およびドメイン4の両方に結合する。理論を提供することは必要ではないが、HER3のドメイン2およびドメイン4の両方への抗体またはそれらの断片の結合は、HER3上のリガンド結合部位をブロックすることなく、不活性な立体構造におけるHER3を保持することが可能である。したがって、HER3リガンド例えば、ニューレグリンは、抗体またはその断片と同時にHER3に結合することができる。本発明の抗体またはその断片は、リガンド結合を防止することなく、HER3のリガンド依存性および非依存性活性化の両方を阻害する。これは、以下の理由のための利点と考えられる:i別個の腫瘍型がそれぞれのメカニズムにより駆動されるため、治療抗体は、HER3活性化すなわちリガンド依存性またはリガンド非依存性の単一のメカニズムを標的化する抗体よりも、腫瘍の広範な範囲において臨床的有用性を有する。ii治療抗体は、HER3活性化の両方のメカニズムが同時に関与する腫瘍型において有効である。HER3活性化すなわちリガンド依存性またはリガンド非依存性の単一のメカニズムを標的化する抗体は、これらの腫瘍型においてあまり、もしくは全く有効性を示さない。iiiリガンド結合を防止することなく、HER3のリガンド依存性活性化を阻害する抗体の有効性は、リガンドの濃度を増加することにより、有害に影響される可能性が少ない。これは、HER3リガンドの非常に高い濃度により駆動される腫瘍型における有効性の増加、またはHER3リガンドの上方制御が介在する薬物耐性不利益の減少のいずれかに置き換わる。iv不活性な形態を安定化することによりHER3活性化を阻害する抗体は、HER3活性化の代替メカニズムにより駆動される薬物耐性があまり起こらない。結果として、本発明の抗体は、治療抗体の存在が臨床的に有効である状態を処置するために使用され得る。操作および修飾された抗体本発明の抗体はさらに、修飾された抗体を設計するための出発物質として、本明細書に示される一以上のVHおよび/またはVL配列を有する抗体を用いて調製でき、この修飾された抗体は、出発抗体とは異なる特徴を有しうる。一方または両方の可変領域すなわち、VHおよび/またはVL、例えば一以上のCDR領域および/または一以上のフレームワーク領域における一以上の残基を修飾することにより、抗体を操作できる。さらにまたはあるいは、例えば抗体のエフェクター機能を変化させるために、定常領域内の残基を修飾することにより、抗体を操作できる。実施できる可変領域操作の一種が、CDR移植である。抗体は、6つの重鎖および軽鎖相補性決定領域CDRに位置するアミノ酸残基によって主として標的抗原と相互作用する。このため、CDR内のアミノ酸配列は、CDR外の配列よりも個々の抗体間でより多様である。CDR配列はほとんどの抗体-抗原相互作用に関与するため、異なる特徴を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列上に移植した特定の天然に存在する抗体由来のCDR配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然に存在する抗体の特徴を模倣する組換え抗体を発現することが可能である例えば、RiechmannらNature332323327JonesらNature321522525QueenらProcNatlAcadUSA861002910033;Winterの米国特許第5,225,539号,ならびにQueenらの米国特許第5,530,101号;同第5,585,089号;同第5,693,762号および同第6,180,370号を参照。したがって、本発明の別の実施形態は、配列番号:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134、146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362および368からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR1配列;配列番号:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363および369からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR2配列;配列番号:4、10、22、28、40、46、58、64、76、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364および370からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR3配列をそれぞれ含む重鎖可変領域;ならびに配列番号:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365および371からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR1配列;配列番号:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366および372からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR2配列;および配列番号:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、135、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367および373からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるCDR3配列をそれぞれ有する軽鎖可変領域を含む、単離されたHER3結合モノクローナル抗体またはそれらの断片に関する。それゆえ、かかる抗体は、モノクローナル抗体のVHおよびVLCDR配列を含有するが、これらの抗体とは異なるフレームワーク配列を含有しうる。かかるフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公開DNAデータベースまたは公表された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子のための生殖系列DNA配列は、Vase]ヒト生殖系列配列データベースwwwmrccpecamacukvbaseでインターネット上で入手可能、ならびに、それぞれの内容が出典明示により本明細書に明確に組み込まれる;KabatらSequencesofProteinsofImmunologicalInterestFifthEditionUSDepartmentofHealthandHumanServicesNIHPublicationNo913242ChothiaらJMolBiol196901917ChothiaらNature342877883およびAlLazikaniらJMolBiol273927948TomlinsonらJfolBiol227776798およびCoxらEurJImmunol24827836において、見出しうる。本発明の抗体に使用するためのフレームワーク配列の例は、選択された本発明の抗体により用いられるフレームワーク配列、例えば、コンセンサス配列および/または本発明のモノクローナル抗体により使用されるフレームワーク配列と構造的に類似のものである。VHCDR1、2および3配列ならびにVLCDR1、2および3配列は、フレームワーク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子において見られるものと同一の配列を有するフレームワーク領域上に移植でき、あるいは該CDR配列は、生殖系列配列と比較して一以上の変異を含有するフレームワーク領域上に移植できる。例えば、場合によっては、抗体の抗原結合能力を維持または向上するために、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であるということが見出されている例えば、Queenらの米国特許第5,530,101号;同第5,585,089号;同第5,693,762号および同第6,180,370号を参照。別の種類の可変領域修飾は、VHおよび/またはVLCDR1、CDR2および/またはCDR3領域内のアミノ酸残基を変異させることにより、対象とする抗体の一以上の結合特性例えば親和性を改善することであり、親和性成熟として知られる。部位特異的突然変異誘発またはPCR介在突然変異誘発を実施して変異を導入でき、抗体結合または他の対象とする機能的特徴に対する効果は、本明細書に記載され、実施例に提供される通り、インビトロおよびインビボアッセイで評価できる。上記に議論されるような保存的修飾を導入してもよい。突然変異は、アミノ酸置換、付加または欠失でありうる。さらにCDR領域内の典型的には1、2、3、4または5以上の残基が変化される。したがって、別の実施形態では、本発明は、配列番号:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134,146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362および368を有する群から選択されるアミノ酸配列または配列番号:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134、146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362および368と比較して1、2、3、4または5個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列からなるVHCDR1領域;配列番号:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363および369からなる群から選択されるアミノ酸配列または配列番号:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363および369と比較して1、2、3、4または5個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するVHCDR2領域;配列番号:4、10、22、28、40、46、58、64、76、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364および370からなる群から選択されるアミノ酸配列または配列番号:4、10、22、28、40、46、58、64、76、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364および370と比較して1、2、3、4または5個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するVHCDR3領域を有する重鎖可変領域;配列番号:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365および371からなる群から選択されるアミノ酸配列または配列番号:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365および371と比較して1、2、3、4または5個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するVLCDR1領域;配列番号:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366および372からなる群から選択されるアミノ酸配列または配列番号:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366および372と比較して1、2、3、4または5個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するVLCDR2領域;ならびに配列番号:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、135、139、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367および373からなる群から選択されるアミノ酸配列または配列番号:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、135、139、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367および373と比較して1、2、3、4または5個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有するVLCDR3領域からなる、単離されたHER3結合モノクローナル抗体またはそれらの断片を提供する。別のフレームワークまたはスキャフォールドへの抗体断片の移植生じるポリペプチドが少なくとも一つのHER3に特異的に結合する結合領域を含む限り、多種多様の抗体/免疫グロブリンフレームワークまたはスキャフォールドが使用できる。かかるフレームワークまたはスキャフォールドは、ヒト免疫グロブリンの5種の主なイディオタイプまたはそれらの断片を含み、また、好ましくはヒト化性状を有する、他の動物種の免疫グロブリンを含む。新たなフレームワーク、スキャフォールドおよび断片が、当業者により発見および開発され続けている。一態様では、本発明は、本発明のCDRが移植できる非免疫グロブリンスキャフォールドを用いた、非免疫グロブリンをベースとする抗体を生成することに関する。標的HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルHER3に特異的な結合領域を含む限り、既知または将来的な非免疫グロブリンフレームワークおよびスキャフォールドが使用できる。既知の非免疫グロブリンフレームワークまたはスキャフォールドには、フィブロネクチンCompoundTherapeuticsIncWalthamMA、アンキリンMolecularPartnersAGZurichSwitzerland、ドメイン抗体DomantisLtdCambridgeMAおよびAblynxnvZwijnaardeBelgium、リポカリンPierisProteolabAGFreisingGermany、小モジュラー免疫医薬TrubionPharmaceuticalsIncSeattleWA、マキシボディAvidiaIncMountainViewCA、プロテインAAffibodyAGSweden、およびアフィリンガンマクリスタリンまたはユビキチンScilProteinsGmbHHalleGermanyが挙げられるが、これらに限定されるものではない。フィブロネクチンスキャフォールドはフィブロネクチンIII型ドメイン例えば、フィブロネクチンIII型ドメインの第10モジュール10Fn3ドメインに基づく。フィブロネクチンIII型ドメインは、それら自体が互いをパックしてタンパク質のコアを形成する、2つのベータシート間に分布する7または8個のβ鎖を有し、さらにベータ鎖と互いに結合し、溶媒に曝されるループCDRに類似するを含む。ベータシートサンドイッチの各端に、かかるループが少なくとも3個存在し、該端はベータ鎖の方向に垂直なタンパク質の境界である米国特許第6,818,418号を参照。これらのフィブロネクチンをベースとするスキャフォールドは、免疫グロブリンではないが、全体的な折りたたみは、最も小さな機能的抗体断片であり、ラクダおよびラマIgGの全抗原認識ユニットを含む、重鎖可変領域のものと極めて関連している。この構造のため、非免疫グロブリン抗体は、抗体のものと性質および親和性において類似する抗原結合特性を模倣する。これらのスキャフォールドは、インビボでの抗体の親和性成熟のプロセスと類似の、インビトロでのループランダム化およびシャッフル戦略において用いることができる。これらのフィブロネクチンをベースとする分子は、該分子のループ領域が標準的なクローニング技術を用いる本発明のCDRで置換する場合に、スキャフォールドとして用いることができる。アンキリン技術は、異なる標的に結合するために用いることができる可変領域を保持するためのスキャフォールドとして、アンキリン由来反復モジュールを備えるタンパク質を用いることに基づく。アンキリン反復モジュールは、2つの逆平行αヘリックスおよびβターンからなる33アミノ酸のポリペプチドである。可変領域の結合は、多くの場合、リボソームディスプレイを用いて最適化される。アビマーは、HER3などの天然のAドメイン含有タンパク質に由来する。これらのドメインは、本来タンパク質間相互作用のために用いられ、ヒトでは250種以上のタンパク質が構造的にAドメインに基づいている。アビマーは、アミノ酸リンカーを介して結合した多数の異なるAドメインモノマー2~10個からなる。標的抗原に結合しうるアビマーは、例えば米国特許出願公開第20040175756号、同第20050053973号、同第20050048512号および同第20060008844号に記載された方法論を用いて作成できる。アフィボディ親和性リガンドは、プロテインAのIgG結合ドメインの1個のスキャフォールドに基づいた3ヘリックスバンドルからなる、小さく単純なタンパク質である。プロテインAは、黄色ブドウ球菌由来の表面タンパク質である。このスキャフォールドドメインは58アミノ酸からなり、そのうち13個がランダム化されて、多数のリガンド変異体を有するアフィボディライブラリーを生じる例えば、米国特許第5831012号参照。アフィボディ分子は抗体を模倣し、150kDaである抗体の分子量と比較して、それらは6kDaの分子量を有する。その小さなサイズにもかかわらず、アフィボディ分子の結合部位は抗体のものと同様である。アンチカリンは、PierisProteoLabAG社により開発された製品である。それらは、化学的に感受性または不溶性の化合物の生理学的輸送または貯蔵に通常関与する広範なグループの小さく強固なタンパク質であるリポカリンに由来する。多様な天然リポカリンがヒト組織または体液中に生じる。タンパク質構造は免疫グロブリンに類似しており、強固なフレームワークの上端に超可変ループを有する。しかしながら、抗体またはその組換え断片とは異なり、リポカリンは、単一免疫グロブリンドメインよりも僅かに大きな160~180アミノ酸残基を有する単一ポリペプチド鎖からなる。結合ポケットを構成する4個のループのセットは、顕著な構造可塑性を示し、多様な側鎖に耐容性である。したがって結合部位は、高い親和性および特異性で異なる形の所定の標的分子を認識するため、特許方法で再形成してよい。リポカリンファミリーの一タンパク質である、PierisBrassicaeのビリン結合タンパク質BBPは、4個のループのセットを変異させてアンチカリンを開発するために使用されている。アンチカリンについて記載する特許出願の一例は、PCT国際公開第199916873号である。アフィリン分子は、タンパク質および低分子に対する特異的親和性について設計されている、小さな非免疫グロブリンタンパク質である。新たなアフィリン分子は、各々異なるヒト由来スキャフォールドタンパク質に基づく、2個のライブラリーから極めて速やかに選択しうる。アフィリン分子は免疫グロブリンタンパク質に対して何ら構造的相同性を示さない。現在、2種のアフィリンスキャフォールドが使用されており、一方はヒトの構造的眼レンズタンパク質であるガンマクリスタリンであり、他方はユビキチンスーパーファミリータンパク質である。いずれのヒトスキャフォールドも極めて小さく、高い温度安定性を示し、pH変化および変性剤にほぼ耐性である。この高い安定性は、主として該タンパク質の伸長ベータシート構造のためである。ガンマクリスタリン由来タンパク質の例は国際公開第200104144号に記載されており、ユビキチン様タンパク質の例は国際公開第200410638号に記載されている。タンパク質エピトープ模倣物PEMは、タンパク質間相互作用に関与する主な二次構造である、タンパク質のベータヘアピン二次構造を模倣する、中間サイズの環状ペプチド様分子MW1-2kDaである。いくつかの態様において、Fc領域を変えることにより、FabがサイレントIgG1形態に変換される。例えば、表1における抗体は、IgG形態に変換されうる。ヒトまたはヒト化抗体本発明は、HER3例えば、ヒトおよび/またはカニクイザル/マウス/ラットHER3に特異的に結合する完全ヒト抗体を提供する。キメラ抗体またはヒト化抗体と比較して、本発明のヒトHER3結合抗体は、ヒト対象に投与した時、さらに低下した抗原性を有する。ヒトHER3結合抗体は、当該技術分野で知られている方法を用いて生成できる。例えば、非ヒト抗体を操作されたヒト抗体に変換するために用いられるヒト化技術。米国特許出願公開番号第20050008625号は、非ヒト抗体のものに対して同じ結合特性を維持しあるいはより良い結合特性を提供しながら、抗体中のヒト可変領域で非ヒト抗体可変領域を置換するためのインビボでの方法について記載している。この方法は、完全ヒト抗体による非ヒト参照抗体の可変領域のエピトープガイド置換に依存する。得られるヒト抗体は、一般に、参照非ヒト抗体と構造的に関連しないが、参照抗体と同じ抗原上の同じエピトープと結合する。簡潔には、試験抗体と抗原の結合に応答するレポーター系の存在下で、限定量の抗原との結合について、コンペティターと参照抗体試験抗体の多様なハイブリッドのライブラリーとの間の細胞における競合を設定することによって、連続エピトープガイド相補性置換アプローチが可能となる。該コンペティターは、一本鎖Fv断片などの、参照抗体またはその誘導体でありうる。コンペティターはまた、参照抗体と同じエピトープに結合する抗原の天然または人工リガンドであってもよい。コンペティターに唯一要求されることは、それが参照抗体と同じエピトープと結合し、抗原結合について参照配列と競合することである。試験抗体は、非ヒト参照抗体と共通する1つの抗原結合V領域およびヒト抗体のレパートリーライブラリーのような多様な供給源からランダムに選択された他のV領域を有する。参照抗体と共通のV領域は、抗原上の同じエピトープに同じ配向で試験抗体を配置するガイドとして作用し、したがって選択は参照抗体に対して最も高い抗原結合忠実度に偏向している。多様なレポーターシステムを用いて、試験抗体と抗原間の所望の相互作用を検出できる。例えば、相補レポーター断片は、抗原および試験抗体とそれぞれ連結して、試験抗体が抗原に結合する場合にのみ、断片相補性によるレポーター活性化が生じる。試験抗体-および抗原-レポーター断片融合体がコンペティターと共に発現される場合、レポーター活性化は、抗原に対する試験抗体の親和性と比例する、コンペティターと競合する試験抗体の能力に依存することとなる。他の用いられるレポーターシステムは、米国特許出願番号第10/208,730号公開番号第20030198971号に開示される再アクチベーターの自己阻害レポーター再活性化システムRAIR、あるいは米国特許出願番号第10/076,845号公開番号第20030157579号に開示される競合活性化を含む。連続エピトープガイド相補性置換システムにより選択を行い、コンペティター、抗原およびレポーター成分とともに試験抗体を単独で発現する細胞を同定する。これらの細胞において、各試験抗体は、限定量の抗原との結合について、コンペティターと一対一で競合する。レポーターの活性は、試験抗体と結合する抗原の量に比例し、したがって抗原に対する試験抗体の親和性および試験抗体の安定性に比例する。試験抗体は、試験抗体として発現した場合の参照抗体の活性と比較したその活性に基づいてまず選択される。1回目の選択の結果は、ハイブリッド抗体のセットであり、これはそれぞれ、参照抗体由来の同じ非ヒトV領域およびライブラリー由来のヒトV領域を含み、そして参照抗体と同じ抗原上のエピトープに結合する。1回目で選択した一以上のハイブリッド抗体は、参照抗体のものと同等またはそれ以上の抗原に対する親和性を有する。第2のV領域置換工程において、第1段階で選択したヒトV領域は、同種ヒトV領域の多様なライブラリーでの残留非ヒト参照抗体V領域のヒト置換の選択のためのガイドとして用いられる。1回目で選択したハイブリッド抗体は、2回目の選択のためのコンペティターとして用いてもよい。2回目の選択の結果は、参照抗体とは構造的に異なるが、同じ抗原への結合に関して参照抗体と競合する、完全ヒト抗体のセットである。選択したヒト抗体のいくつかは、参照抗体と同じ抗原上の同じエピトープに結合する。これらの選択したヒト抗体のうち、一以上が参照抗体のものと同等またはそれ以上の親和性で同じエピトープと結合する。上記のマウスまたはキメラHER3結合抗体の1つを参照抗体として用いて、この方法は、同じ結合特異性および同じまたはより良い結合親和性を有する、ヒトHER3に結合するヒト抗体を生成するために容易に使用できる。加えて、かかるヒトHER3結合抗体はまた、通常ヒト抗体を製造している企業、例えばKaloBiosIncから商業的に入手可能である。ラクダ抗体ラマ種Lamapaccos、LamaglamaおよびLamavicugnaなどの新世界メンバーを含む、ラクダおよびヒトコブラクダCamelusbactrianusおよびCalelusdromaderiusファミリーのメンバーから得た抗体タンパク質は、サイズ、構造の複雑性およびヒト対象に対する抗原性について、特徴付けられている。天然に見出されるほ乳類のこのファミリー由来の特定のIgG抗体は軽鎖を欠き、それゆえ、他の動物由来の抗体における2つの重鎖および2つの軽鎖を有する典型的な4鎖の四次構造とは構造的に異なる。国際特許出願第PCT/EP93/02214号1994年3月3日公開の国際公開第94/04678号を参照されたい。VHHと同定される小さな1個の可変ドメインであるラクダ抗体の領域を遺伝子操作によって入手して、標的に高い親和性を有し、ラクダナノ抗体として知られる低分子量抗体由来タンパク質を得ることができる。1998年6月2日公開の米国特許第5,759,808号を参照されたい:StijlemansらJBiolChem27912561261DumoulinらNature424783788PleschbergerらBioconjugateChem14440448CortezRetamozoらIntJCancer8945662およびLauwereysらEMBOJ1735123520も参照されたい。ラクダ抗体および抗体断片の操作されたライブラリーは、例えばAblynxGhentBelgiumから商業的に入手可能である例えば、US20060115470;DomantisUS20070065440、US20090148434。非ヒト起源の他の抗体として、ラクダ抗体のアミノ酸配列を組換え的に変化させて、ヒト配列により似た配列を得てもよい、すなわち、ナノ抗体をヒト化してよい。したがって、ヒトに対するラクダ抗体の天然の低い抗原性をさらに低下させうる。ラクダナノ抗体はヒトIgG分子の約10分の1の分子量を有し、該タンパク質はわずか数ナノメートルの物理的直径を有する。小さなサイズの一つの帰結は、より大きな抗体タンパク質には機能的に不可視の抗原部位に結合するというラクダ抗体の能力であり、すなわちラクダナノ抗体は、従来の免疫学的技術を用いると隠される抗原を検出する試薬として、そして可能性のある治療薬物として、有用である。したがって、小さなサイズのさらに別の帰結は、ラクダナノ抗体、標的タンパク質の溝または小さな割れ目の特定の部位に結合することの結果として、阻害でき、したがって伝統的な抗体のものよりも伝統的な低分子量薬物の機能により似た能力を提供できることである。低分子量およびコンパクトなサイズは、さらに、極めて熱安定であり、極端なpHおよびタンパク分解に安定であり、かつ低い抗原性をラクダナノ抗体にもたらす。別の帰結は、ラクダナノ抗体は循環系から組織に容易に移動することおよび血液脳関門を通過して神経組織に作用する障害を処置しうることである。ナノ抗体はさらに、薬物の血液脳関門通過を促進しうる。2004年8月19日公開の米国特許番号第20040161738号を参照されたい。ヒトへの低抗原性と組み合わさったこれらの特徴は、大きな治療的可能性を示す。さらに、これらの分子は、大腸菌などの原核生物において十分に発現され、バクテリオファージで融合タンパク質として発現され、かつ機能的である。したがって、本発明の特徴は、HER3に対する高い親和性を有するラクダ抗体またはナノ抗体である。本明細書における特定の実施形態では、ラクダ抗体またはナノ抗体はラクダ科動物において天然に生産され、すなわち他の抗体について本明細書に記載の技術を用いて、HER3またはそのペプチド断片でラクダを免疫して産生される。あるいは、HER3結合ラクダナノ抗体が操作される、すなわち例えば、本明細書の実施例に記載の通り、標的としてHER3を用いるパニング手法を用いて、適切に変異誘発したラクダナノ抗体タンパク質を提示する、例えばファージディスプレイライブラリーから選択して産生される。操作されたナノ抗体は、45分から2週間の受容対象における半減期を有するように、さらに遺伝子工学操作によりカスタマイズしてもよい。特定の実施形態では、ラクダ抗体またはナノ抗体は、例えば国際特許出願第PCT/EP93/02214号に記載の通り、本発明のヒト抗体の重鎖または軽鎖のCDR配列を、ナノ抗体またはシングルドメイン抗体フレームワーク配列内に移植することにより、獲得される。1つの態様において、ラクダ抗体またはナノボディは、少なくとも1つの以下のHER3残基に結合する:Asn266、Lys267、Leu268、Thr269、Gln271、Glu273、Pro274、Asn275、Pro276、His277、Asn315、Asp571、Pro583、His584、Ala596、Lys597。1つの態様において、ラクダ抗体またはナノボディは、少なくとも1つの以下のHER3残基に結合する:Tyr265、Lys267、Leu268、Phe270、Gly582、Pro583、Lys597、Ile600、Lys602、Glu609、Arg611、Pro612、Cys613、His614、Glu615。二重特異性分子および多価抗体別の局面において、本発明は、本発明のHER3結合抗体またはその断片を含むビパラトープ、二重特異性または多特異的分子を特徴とする。本発明の抗体またはその断片は少なくとも2つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を産生するように、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質例えば、受容体に対する別の抗体またはリガンドに誘導体化または連結され得る。実際に、本発明の抗体は、2つ以上の異なる結合部位および/または標的分子に結合するビパラトープまたは多特異的分子;このようなビパラトープまたは多特異的分子を産生するように2つ以上の他の機能性分子に誘導体化または連結され得る。本発明の二重特異性分子を作るために、本発明の抗体は、二重特異性分子をもたらすように、1つ以上の他の結合分子、例えば、別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合模擬物に例えば、化学的カップリング、遺伝学的融合、非共有結合またはその他により機能的に連結され得る。さらなる臨床的利益は、1つの抗体内で2つ以上の抗原の結合により提供され得るColomaらMerchantらAltらZuoらLuらLuらMarvinらMarvinらShenらWuらDimasiらMichaelsonら。NatureBiotech15159163AltらFEBSLetters4549094ZuoらProteinEngineering13361367LuらJBC27928562865LuらJBC2801966519672MarvinらActaPharmacologicaSinica26649658MarvinらCurrOpinDrugDiscDevelop9184193ShenらJImmunMethods2186574WuらNatBiotechnol1112901297DimasiらJMolBiol393672692およびMichaelsonらmAbs1128141。本発明の二重特異性分子は、当該技術分野で知られている方法を用いて、構成要素である結合特異性をコンジュゲートすることにより調製されうる。例えば、二重特異性分子の各結合特異性は別々に生成でき、次いで互いにコンジュゲートできる。結合特異性がタンパク質あるいはペプチドである場合、様々なカップリングまたは架橋剤が共有結合コンジュゲーションのために使用できる。架橋剤の例には、プロテインA、カルボジイミド、N-スクシンイミジル-S-アセチル-チオアセテートSATA、5,5’-ジチオビス2-ニトロ安息香酸DTNB、o-フェニレンジマレイミドoPDM、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDPおよびスルホスクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロへキサン-l-カルボキシレートスルホ-SMCCが挙げられる例えば、KarpovskyらJExpMed1601686LiuらProcNatlAcadSciUSA828648を参照。他の方法は、PaulusBehringInsMittNo78118132BrennanらScience2298183およびGlennieらJImmunol13923672375に記載のものを含む。コンジュゲート剤はSATAおよびスルホ-SMCCであり、両者ともPierceChemicalCo.から入手可能である。結合特異性が抗体である場合、それは2個の重鎖のC末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によりコンジュゲートされうる。特定の実施形態では、コンジュゲーションより前に、奇数、例えば1個のスルフヒドリル残基を含有するようにヒンジ領域が修飾される。あるいは、両方の結合特異性は同じベクター内でコードされ、同じ宿主細胞で発現されそして組み立てられてもよい。この方法は、二重特異性分子が、mAbxmAb、mAbxFab、FabxFab’2またはリガンドxFab融合タンパク質である場合に特に有用である。本発明の二重特異性分子は、1つの一本鎖抗体および結合決定因子を含む一本鎖分子、または、2つの結合決定因子を含む一本鎖二重特異性分子でありうる。二重特異性分子は、少なくとも2つの一本鎖分子を含みうる。二重特異性分子を調製するための方法は、例えば、米国特許第5,260,203号;米国特許第5,455,030号;米国特許第4,881,175号;米国特許第5,132,405号;米国特許第5,091,513号;米国特許第5,476,786号;米国特許第5,013,653号;米国特許第5,258,498号;および米国特許第5,482,858号に記載されている。二重特異性分子とそれらの特定の標的との結合は、例えば、酵素結合免疫吸着測定法ELISA、ラジオイムノアッセイREA、FACS解析、バイオアッセイ例えば、増殖阻害またはウェスタンブロットアッセイにより確認できる。これらのアッセイはそれぞれ、一般に、対象とする複合体に特異的な標識付き試薬例えば、抗体を用いることにより、特定の対象とするタンパク質-抗体複合体の存在を検出する。別の態様では、本発明は、HER3に結合する本発明の抗体の少なくとも2つの同一または異なる断片を含む多価化合物を提供する。該抗体断片は、タンパク質融合または共有もしくは非共有結合によって一体に連結されうる。例えば、本発明の抗体を、本発明の抗体の定常領域、例えばFcまたはヒンジ領域に結合する抗体と架橋することにより、四価化合物が獲得できる。トリマー化ドメインは、例えば、Borean特許EP1012280B1において記載されている。ペンタ化モジュールは、例えば、PCT/EP97/05897に記載されている。1つの態様において、ビパラトープ/二重特異性は、HER3のドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基に結合する。別の態様において、本発明は、単一のモノクローナル抗体が、抗原結合部位が2つ以上の抗原に結合するように修飾されている二重機能抗体、例えば、HER3および別の抗原例えば、HER1、HER2およびHER4の両方に結合する二重機能抗体に関する。別の態様において、本発明は、同じ立体構造を有する抗原、例えば、閉塞的なまたは不活性な状態におけるHER3の同じ立体構造を有する抗原を標的化する二重機能抗体に関する。閉塞的なまたは不活性な状態におけるHER3の同じ立体構造を有する抗原の例は、限定はしないが、HER1およびHER4を含む。したがって、二重機能抗体は、HER3およびHER1;HER3およびHER4、またはHER1およびHER4の両方に結合し得る。二重機能抗体の二重結合特異性は、さらに、二重活性、または活性の阻害に置き換えられ得る例えば、JennyBostromらScience32316101614参照。延長された半減期を有する抗体本発明は、インビボで延長された半減期を有する、HER3タンパク質の特異的に結合する抗体を提供する。多くの要因がインビボでのタンパク質の半減期に影響しうる。例えば、腎臓ろ過、肝臓における代謝、タンパク質分解酵素プロテアーゼによる分解および免疫原性応答例えば、抗体によるタンパク質中和ならびにマクロファージおよび樹状細胞による取り込み。多様な戦略を用いて本発明の抗体の半減期を延長することができる。例えば、ポリエチレングリコールPEG、reCODEPEG、抗体スキャフォールド、ポリシアル酸PSA、ヒドロキシエチルデンプンHES、アルブミン結合リガンドおよび糖質障壁との化学的結合;アルブミン、IgG、FcRnおよびトランスフェリンなどの血清タンパク質と結合するタンパク質との遺伝的融合;ナノ抗体、Fab、DARPin、アビマー、アフィボディおよびアンチカリンなどの血清タンパク質と結合する他の結合部分とのカップリング遺伝的または化学的;rPEG、アルブミン、アルブミンのドメイン、アルブミン結合タンパク質およびFcとの遺伝的融合;またはナノ担体、遅延放出製剤または医薬デバイスへの導入による。インビボでの抗体の血清循環を延長するため、多機能リンカー有りまたは無しで、高分子量PEGなどの不活性ポリマー分子を本抗体またはそれらの断片に、抗体のNもしくはC末端またはリシン残基のイプシロンアミノ基とPEGの部位特異的コンジュゲーションにより結合してもよい。抗体をペグ化するため、本抗体またはそれらの断片は、典型的には、PEGの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコールPEGと、一以上のPEG基が抗体またはそれらの断片に結合するような条件下で、反応させる。ペグ化は、反応性PEG分子または同様の反応性水溶性ポリマーを用いたアシル化反応またはアルキル化反応により実施できる。本明細書で用いる場合、用語ポリエチレングリコールは、モノC1-C10アルコキシ-もしくはアリールオキシ-ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール-マレイミドなどの、他のタンパク質を誘導体化するために用いられているあらゆる形態のPEGを含む。特定の実施形態では、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。生物学的活性の最小限の損失をもたらす直鎖または分枝鎖ポリマー誘導体化が用いられる。コンジュゲーションの程度は本抗体とPEG分子の適切なコンジュゲーションを確保するために、SDS-PAGEおよび質量分析により密接にモニターできる。未反応のPEGは、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーにより抗体-PEGコンジュゲートから分離できる。PEG誘導体化抗体は、当業者によく知られている方法を用いて、例えば本明細書に記載のイムノアッセイにより、結合活性およびインビボでの有効性を試験してもよい。タンパク質をペグ化する方法は、当該技術分野において知られており、本発明の抗体に適用できる。例えば、NishimuraらによるEP0154316およびIshikawaらによるEP0401384を参照されたい。他の修飾されたペグ化技術は、tRN合成酵素およびtRNAを含む再構成系を介して生合成タンパク質に化学的に特定された側鎖を導入する、再構成化学的直交操作技術ReCODEPEGを含む。この技術は、大腸菌、酵母および哺乳類細胞において30個を超える新しいアミノ酸の取り込みを可能とする。tRNAは非天然アミノ酸をアンバーコドンが位置する任意の位置で取り込み、アンバーを終止コドンから化学的に特定したアミノ酸の取り込みを伝達するものに変換する。組換えペグ化技術rPEGも血清半減期延長のために用いることができる。この技術は、既存の医薬タンパク質の末尾に300~600アミノ酸の構造不定のタンパク質を遺伝的に融合することを含む。かかる構造不定のタンパク質鎖の見かけの分子量は、その実際の分子量よりも約15倍大きいため、該タンパク質の血清半減期は大きく延長される。化学的コンジュゲーションおよび再精製を必要とする従来のPEG化と対照的に、製造工程がかなり単純化され、産物が均一である。ポリシアル化がもう一つの技術であり、これは天然ポリマーポリシアル酸PSAを用いて活性時間を延長し、治療ペプチドおよびタンパク質の安定性を改善する。PSAはシアル酸糖のポリマーである。タンパク質および治療ペプチド薬物送達に用いられる場合、ポリシアル酸は、コンジュゲーションにより保護的な微小環境を提供する。これは循環中の治療タンパク質の活性時間を延長し、免疫系により認識されるのを防ぐ。PSAポリマーは人体において天然に見出される。これはある種の細菌によって採用されており、それらの細胞壁を覆うために数百万年にわたって進化させてきた。これらの天然ポリシアル化細菌は、分子擬態のおかげで、体の防御システムの追跡を免れることができる。天然の究極のステルス技術であるPSAは、かかる細菌から大量に、あらかじめ定められた物理的特徴で容易に産生できる。細菌のPSAは、人体におけるPSAと化学的に同一であるため、タンパク質と結合させても、完全に非免疫原性である。別の技術は抗体に連結したヒドロキシエチルデンプンHES誘導体の使用を含む。HESはロウトウモロコシデンプン由来の修飾された天然ポリマーであり、体の酵素により代謝できる。HES溶液は通常、不充分な血液量を代替し、血液のレオロジー特性を改善するために投与される。抗体のHES化は、分子の安定性の上昇により、ならびに腎クリアランスの低下によって循環半減期の延長を可能とし、増加した生物学的活性をもたらす。HESの分子量などの様々なパラメーターを変化させることにより、広範なHES抗体コンジュゲートを設計できる。インビボでの延長された半減期を有する抗体は、IgG定常ドメインまたはそのFcRn結合断片好ましくはFcまたはヒンジFcドメイン断片に、一以上のアミノ酸修飾すなわち置換、挿入または欠失を導入して生成してもよい。例えば国際公開第98/23289号;同第97/34631号;および米国特許第6,277,375号を参照されたい。さらに、インビボでより安定であるかまたはインビボでより延長された半減期を有する抗体または抗体断片を作成するために、抗体をアルブミンとコンジュゲートさせてもよい。本技術は当該技術分野でよく知られており、例えば国際公開第93/15199号、同第93/15200号および同第01/77137号;ならびに欧州特許413,622を参照されたい。HER3抗体またはそれらの断片はまた、1つ以上のヒト血清アルブミンHSAポリペプチドまたはその部分に融合され得る。成熟形態において585個のアミノ酸のタンパク質であるHSAは、血清の浸透圧の有意な割合の原因であり、内因性および外因性リガンドの担体としても機能する。担体分子としてのアルブミンの役割およびその不活性性質は、インビボでポリペプチドの担体およびトランスポーターとしての使用のために望ましい特性である。種々のタンパク質のための担体としてのアルブミン融合タンパク質の成分としてのアルブミンの使用は、WO93/15199、WO93/15200およびEP413622に提案されている。ポリペプチドへの融合のためのHSAのN-末端断片の使用はまた、提案されているEP399666。したがって、遺伝的または化学的融合または複合体化により、アルブミンに対する抗体またはそれらの断片は、安定化する、または保存可能期間を延長する、および/または溶液中で、インビトロでおよび/またはインビボで長期間、分子の活性を保持することができる。別のタンパク質へのアルブミンの融合は、HSAをコードするDNAまたはそれらの断片がタンパク質をコードするDNAに連結されるように、遺伝子操作により成し遂げられ得る。次に、適当な宿主は、融合ポリペプチドを発現するように適当なプラスミド上に配列されるように、融合ヌクレオチド配列で形質転換またはでトランスフェクトされる。発現は、例えば、原核生物または真核細胞からインビトロ、または、例えば、トランスジェニック生物からインビボでもたらされ得る。HSA融合に属するさらなる方法は、例えば、出典明示により本明細書に包含させるWO2001077137およびWO200306007において見出すことができる。特定の態様において、融合タンパク質の発現は、哺乳動物細胞系、例えば、CHO細胞系において行われる。低または高pHでの抗体の受容体への改変された異なる結合はまた、本発明の範囲内であると考えられる。例えば、抗体の親和性は、低pH、例えば、リソソーム内の低pHで受容体への結合を維持するように、抗体のCDR内のさらなるアミノ酸、例えば、ヒスチジンを含むように抗体を修飾することにより、修飾され得る例えば、TomoyukiIgawaらNatureBiotechnology2812031207参照。抗体結合体本発明は、異種タンパク質またはポリペプチドまたはそれらの、好ましくは少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90または少なくとも100アミノ酸の断片に組換え技術によって融合された、または化学的に結合され共有および非共有の結合を含むて融合タンパク質を生成するHER3タンパク質に特異的に結合する抗体またはそれらの断片を提供する。特に、本発明は、ここに記載される抗体の断片例えば、Fab断片、Fd断片、Fv断片、Fab2断片、VHドメイン、VHCDR、VLドメインまたはVLCDR、および異種タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドを含む融合タンパク質を提供する。タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドを融合または結合するための方法は、当業者に公知である。例えば、米国特許番号5,336,603号、5,622,929号、5,359,046号、5,349,053号、5,447,851号、および5,112,946号明細書;欧州特許番号EP307,434号およびEP367,166号明細書;国際公開番号WO96/04388およびWO91/06570号公報;AshkenaziらProcNatlAcadSciUSA881053510539ZhengらJImmunol15455905600およびVilらProcNatlAcadSciUSA891133711341を参照のこと。追加の融合タンパク質は遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エクソンシャッフリング、および/またはコドンシャッフリングまとめてDNAシャッフリングと呼ばれるの技術を経て生成されてもよい。DNAシャッフリングは、発明の抗体またはそれらの断片例えば、高い親和性および低い解離速度の抗体またはそれらの断片の活性を改変するために用いられ得る。一般に、米国特許番号5,605,793号;5,811,238号;5,830,721号;5,834,252号;および5,837,458号;PattenらCurrOpinionBiotechnol872433HarayamaTrendsBiotechnol167682HanssonらJMolBiol28726576およびLorenzoandBlascoBiotechniques24308313を参照各々の特許および出版物はその全体が出展明示として本明細書に組み込まれる。抗体またはそれらの断片、またはコード化抗体またはそれらの断片は、組換の前にエラープローンPCR、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法によってランダム変異導入に供されて改変され得る。HER3タンパク質に特異的に結合する抗体またはそれらの断片をコードするポリヌクレオチドは、1個以上の異種分子の、1個以上の成分、モチーフ、片、部分、ドメイン、断片等と再結合し得る。さらに、抗体またはそれらの断片は、精製を促進するペプチドのような、マーカー配列と融合し得る。好ましい実施形態において、マーカーアミノ酸配列はヘキサ-ヒスチジンペプチドであり、多数のものが市販されている中でも、とりわけpQEベクターQIAGENInc9259EtonAvenueChatsworthCA91311で提供されるタグのようなものである。GentzらProcNatlAcadSciUSA86821824に記載のように、例えば、ヘキサ-ヒスチジンは融合タンパク質の便利な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグは、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質WilsonらCell37767由来のエピトープに相当するヘマグルチニンHAタグ、およびフラッグタグを含むが、これらに限定されるものではない。他の実施形態において、本発明の抗体またはそれらの断片は診断または検出剤と結合する。このような抗体は、特定の治療の有効度を測定するといった、臨床試験手順の一部として、発現、成長、発育および/または疾病もしくは疾患の重症度を監視または予見するために有用となり得る。そのような診断および検出は抗体に、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなどのような、しかしこれらに限定されない様々な酵素;ストレプトアビジン/ビオチンおよびアビジン/ビオチンのような、しかしこれらに限定されない補欠分子族;ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンなどのような、しかしこれらに限定されない蛍光物質;ルミノールなどのような、しかしこれらに限定されない発光物質;ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンなどのような、しかしこれらに限定されない生物発光体;ヨウ素131I、125I、123Iおよび121I、炭素14C、硫黄35S、三重水素3H、インジウム115In、113In、112Inおよび111In、テクネチウム99Tc、タリウム201Tl、ガリウム68Ga、67Ga、パラジウム103Pd、モリブデン99Mo、キセノン133Xe、フッ素18F、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn、および117Tinなどのような、しかしこれらに限定されない放射性物質;および様々な陽電子放射断層撮影に使用する陽電子放出金属、および放射性でない常磁性金属イオン、などを含むがこれらに限定されない検出可能な物質を組み合わせることによって達成できる。本発明はさらに、治療的部分と結合した抗体またはそれらの断片の使用を包含する。抗体またはそれらの断片は、細胞毒素、例えば細胞増殖抑制剤または細胞破壊剤、治療剤、または放射性金属イオン、例えばアルファ放射体などの治療的部分、と結合し得る。細胞毒素または細胞毒性薬は細胞に有害ないかなる剤を含む。さらに、抗体またはそれらの断片は、既知の生物学的応答を変更する治療的部分または薬物部分と結合し得る。治療的部分または薬物部分は古典的な化学治療薬に制限されると解釈されるものではない。例えば、薬物部分は所望の生物活性を有するタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質は、例えば、アブリン、リシンA、緑膿菌外毒素、コレラ毒素、またはジフテリア毒素などの毒素;腫瘍壊死因子、α-インターフェロン、β-インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノゲン活性化因子、アポトーシス剤、血管新生阻害剤などのタンパク質;または例えばリンフォカインなどの生物反応修飾物質、を含み得る。一の実施形態において、抗-HER3抗体、またはそれらの断片は、細胞毒素、薬物例えば免疫抑制剤または放射性毒素などの治療的部分と結合する。このような結合体は本明細書において免疫結合体と称する。1つ以上の細胞毒素を含む免疫結合体は、免疫毒素と称する。細胞毒素または細胞毒性薬は細胞に有害例えば、死滅させるないかなる剤を含む。例として、タキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、tコルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1-デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにこれらの類似体または相同体が含まれる。治療剤にはまた、例えば、代謝拮抗物質例えば、メトトレキサート、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、シタラビン、5-フルオロウラシルデカルバジン、アルキル化剤例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチンBSNUおよびロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンC、ならびにcis-ジクロロジアミン白金IIDDPシスプラチン、アントラサイクリン例えば、ダウノルビシン以前のダウノマイシン、及びドキソルビシン、抗生物質例えば、ダクチノマイシン以前のアクチノマイシン、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アンスラマイシンAMC、ならびに有糸分裂阻害剤例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチンも含まれる例えば、SeattleGeneticsUS20090304721参照。本発明の抗体と結合できる治療的細胞毒素の他の例として、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、メイタンシンおよびアウリスタチン、ならびにこれらの誘導体が含まれる。カリケアマイシン抗体結合体の一例は、市販されるMylotargTmWyethAyerst。細胞毒素は当分野で利用できるリンカー技術を用いて、本発明の抗体と結合できる。細胞毒素を抗体に結合させるために用いられているリンカーの型の例として、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィドおよびペプチド含有リンカーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。リンカーは、例えば、リソソームコンパートメントlysosomalcompartment内で低いpHにより開裂されやすい、または、カテプシン例えば、カテプシンB、C、Dなどの、腫瘍組織で優先的に発現されるプロテアーゼなどの、プロテアーゼにより開裂されやすい、ものから選ぶことができる。抗体への治療剤の結合のための細胞毒素の型、リンカーおよび方法のさらなる考察のために、SaitoらAdvDrugDelivRev55199215TrailらCancerImmunolImmunother52328337PayneCancerCell3207212AllenNatRevCancer2750763PastanandKreitmanCurrOpinInvestigDrugs310891091SenterandSpringerAdvDrugDelivRev53247264を参照のこと。本発明の抗体はまた、放射性同位体と結合して、放射性免疫結合体とも呼ばれる、細胞毒性放射性医薬品を生成することができる。診断または治療の用途のために抗体と結合できる放射性同位体の例は、ヨウ素131、インジウム111、イットリウム90およびルテチウム177を含むが、これらに限定されるものではない。放射性免疫結合体を調製する方法は当分野にて確立されている。放射性免疫結合体の例は商業的に利用可能であり、Zevalin登録商標DECPharmaceuticalsおよびBexxar登録商標CorixaPharmaceuticalsを含み、さらに類似の方法も本発明の抗体を用いる放射性免疫結合体の調製のために使用できる。いくらかの実施形態において、大環状キレート剤は、リンカー分子を介して抗体と付着できる1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-N,N’,N’’,N’’’-四酢酸DOTAである。そのようなリンカー分子は当分野において周知であり、それぞれの全体が出展明示により組み込まれる、DenardoらClinCancerRes4248390PetersonらBioconjugChem105537およびZimmermanらNuclMedBiol2694350に記載される。抗体に治療的部分を結合させるための技術は周知であり、例えば、ArnonらMonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapyinMonoclonalAntibodiesAndCancerTherapyReisfeldらpp24356HellstromらAntibodiesForDrugDeliveryinControlledDrugDeliveryRobinsonらpp62353ThorpeAntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapyAReviewinMonoclonalAntibodies84BiologicalAndClinicalApplicationsPincheraらpp475506AnalysisResultsAndFutureProspectiveOfTheTherapeuticUseOfRadiolabeledAntibodyInCancerTherapyinMonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapyBaldwinらpp30316およびThorpeらImmunolRev6211958を参照のこと。抗体はまた、特に免疫測定法または標的抗原の精製に有用な固相担体に付着させ得る。このような固相担体はガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンを含むが、これらに限定されるものではない。抗体組合せ別の局面において、本発明は、他の治療剤、例えば、別の抗体、小分子阻害剤、mTOR阻害剤またはPI3キナーゼ阻害剤と共に使用される本発明のHER3抗体またはその断片に関する。例は、限定はしないが、以下のものを含む:HER1阻害剤:HER3抗体またはその断片は、限定はしないが、マツズマブEMD72000、Erbitux登録商標/セツキシマブImclone、Vectibix登録商標/パニツムマブAmgen、mAb806およびニモツズマブTheraCIM、イレッサ登録商標/ゲフィチニブAstrazeneca;CI-1033PD183805Pfizer、ラパチニブGW572016GlaxoSmithKline、Tykerb登録商標/トシル酸ラパチニブSmithKlineBeecham、Tarceva登録商標/エルロチニブHCLOSI774OSIPharmaおよびPKI-166NovartisおよびBoehringerIngelheimにより商標Tovok登録商標の下に販売されているN-[4-[3-クロロ-4-フルオロフェニルアミノ]-7-[[3’’S’’-テトラヒドロ-3-フラニル]オキシ]-6-キナゾリニル]-4ジメチルアミノ-2-ブテンアミドを含むHER1阻害剤と共に使用することができる。HER2阻害剤:HER3抗体またはその断片は、限定はしないが、ペルツズマブGenentechにより商標Omnitarg登録商標の下に販売されている、トラスツマブGenentech/RocheによりHerceptin登録商標の下に販売されている、MM-111、ネラチニブHKI-272としても知られている、2E-N-[4-[[3-クロロ-4-[ピリジン-2-イルメトキシ]フェニル]アミノ]-3-シアノ-7-エトキシキノリン-6-イル]-4-ジメチルアミノブタ-2-エナミド、およびPCT公開WO05/028443に記載されている、トシル酸ラパチニブまたはラパチニブGlaxoSmithKlineにより商標Tykerb登録商標の下に販売されているを含むHER2阻害剤と共に使用することができる。HER3阻害剤:HER3抗体またはその断片は、限定はしないが、MM-121、MM-111、IB4C3、2DID12U3PharmaAG、AMG888Amgen、AV-203Aveo、MEHD7945AGenentechおよびHER3を阻害する小分子を含むHER3阻害剤と共に使用することができる。HER4阻害剤:HER3抗体またはその断片は、HER4阻害剤と共に使用することができる。PI3K阻害剤:HER3抗体またはその断片は、限定はしないが、4-[2-1H-インダゾール-4-イル-6-[[4-メチルスルホニルピペラジン-1-イル]メチル]チエノ[3,2-d]ピリミジン-4-イル]モルホリンGDC0941としても知られている、PCT公開第WO09/036082およびWO09/055730に記載されている、2-メチル-2-[4-[3-メチル-2-オキソ-8-キノリン-3-イル-2,3-ジヒドロイミダゾ[4,5-c]キノリン-1-イル]フェニル]プロピオニトリルBEZ235またはNVP-BEZ235としても知られている、およびPCT公開WO06/122806に記載されている、BMK120およびBYL719を含むPI3キナーゼ阻害剤と共に使用することができる。mTOR阻害剤:HER3抗体またはその断片は、限定はしないが、テムシロリムスPfizerにより商標Torisel登録商標の下に販売されている、リダフォロリムス形式的にデフェロリムスとして知られている、1R,2R,4S-4-[2R-2[1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R、23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R-1,18-ジヒドロキシ-19,30-ジメトキシ-15,17,21,23、29,35-ヘキサメチル-2,3,10,14,20-ペンタオキソ-11,36-ジオキサ-4-アザトリシクロ[30.3.1.04,9]ヘキサトリアコンタ-16,24,26,28-テトラエン-12-イル]プロピル]-2-メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィナート、デフォロリムス、AP23573およびMK8669AriadPharmとしても知られている、およびPCT公開WO03/064383に記載されている、エバロリムスRAD001Novartisにより商標Afinitor登録商標の下に販売されている、本発明のHER3抗体またはその断片の投与と同時、投与前または投与後のいずれかで投与され得る1つ以上の治療剤を含むmTOR阻害剤と共に使用することができる。本発明の抗体の作成方法i抗体をコードする核酸本発明は、上記HER3結合抗体鎖のセグメントまたはドメインを含むポリペプチドをコードする実質的に精製された核酸分子を提供する。本発明の核酸のいくつかは、HER3抗体重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列、および/または軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、核酸分子は、表1に同定されたものである。他の本発明の核酸分子のいくつかは、表1に同定されたもののヌクレオチド配列と実質的に例えば、少なくとも65、80、95または99同一であるヌクレオチド配列を含む。適切な発現ベクターから発現される場合、これらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、HER3抗原結合能を示しうる。上記HER3結合抗体の重鎖または軽鎖由来の少なくとも1個のCDR領域、および通常3個全てのCDR領域をコードするポリヌクレオチドも、本発明において提供される。他のポリヌクレオチドのいくつかは、上記HER3結合抗体の重鎖および/または軽鎖の可変領域の全てまたは実質的に全てをコードする。コードの縮重のため、多様な核酸配列が各免疫グロブリンアミノ酸配列をコードする。本発明の核酸分子は、抗体の可変領域および定常領域の両方をコードし得る。本発明の核酸配列のいくつかは、表1に記載されているHER3抗体の成熟重鎖可変領域配列と実質的に例えば、少なくとも80、90または99同一の成熟重鎖可変領域配列をコードするヌクレオチドを含む。他の核酸配列のいくつかは、表1に記載されているHER3抗体の成熟軽鎖可変領域配列と実質的に例えば、少なくとも80、90または99同一の成熟軽鎖可変領域配列をコードするヌクレオチドを含む。ポリヌクレオチド配列は、新たな固相DNA合成またはHER3結合抗体またはその結合断片をコードする既存の配列例えば下記実施例に記載の配列のPCR変異導入法によって作成できる。核酸の直接化学合成は、当分野で既知の、Narangら1979MethEnzymol6890のホスホトリエステル法;BrownらMethEnzymol681091979のホスホジエステル法;BeaucageらTetraLett2218591981のジエチルホスホラミダイト法;および米国特許4,458,066の固相担体法などの方法によって実施できる。PCRによるポリヌクレオチド配列への変異の導入は、例えば、PCRTechnologyPrinciplesandApplicationsforDNAAmplificationHAErlichFreemanPressNYNY1992PCRProtocolsAGuidetoMethodsandApplicationsInnisらAcademicPressSanDiegoCA1990MattilaらNucleicAcidsRes19967およびEckertらPCRMethodsandApplications117に記載のとおりに実施できる。上記HER3結合抗体を製造するための発現ベクターおよび宿主細胞も本発明において提供される。HER3結合抗体鎖または結合断片をコードするポリヌクレオチドを発現するため、多様な発現ベクターが使用できる。ウイルス性および非ウイルス性発現ベクターのどちらも、哺乳類宿主細胞において抗体を製造するために使用することができる。非ウイルス性ベクターおよび系は、プラスミド、典型的にはタンパク質もしくはRNAを発現するための発現カセットを有する、エピソームベクターおよびヒト人工染色体例えば、HarringtonらNatGenet153451997を参照を含む。例えば、HER3結合ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの哺乳類例えばヒト細胞での発現に有用な非ウイルス性ベクターは、pThioHisA、BC、pcDNA3.1/His、pEBVHisA、BC、InvitrogenSanDiegoCA、MPSVベクターおよび他のタンパク質を発現するために当分野で既知の多様な他のベクターを含む。有用なウイルス性ベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、SV40に基づくベクター、パピローマウイルス、HBPEpsteinBarrウイルス、ワクシニアウイルスベクターおよびSemlikiForestウイルスSFVを含む。BrentらsupraSmithAnnuRevMicrobiol49807およびRosenfeldらCell68143参照。発現ベクターの選択は、ベクターが発現される、意図する宿主細胞に依存する。典型的には、発現ベクターは、HER3結合抗体鎖または断片をコードするポリヌクレオチドと作動可能に連結しているプロモーターおよび他の調節配列例えば、エンハンサーを含む。いくつかの態様において、誘導性プロモーターを用いて、誘導条件下以外での挿入配列の発現を防止する。誘導性プロモーターは、例えばアラビノース、lacZ、メタロチオネインプロモーターまたは熱ショックプロモーターを含む。形質転換された生物の培養は、発現産物が宿主細胞によってより耐容性である配列をコードするために集団に圧力を加えることなしに、非誘導性条件下で拡大されうる。プロモーターに加えて、HER3結合抗体鎖または断片の効果的な発現のために、他の調節要素も要求または所望される。これらの要素は典型的には、ATG開始コドンおよび隣接リボソーム結合部位または他の配列を含む。加えて、発現の効率は、使用する細胞系に適切なエンハンサーを含めることで向上し得る例えば、ScharfらResultsProblCellDiffer20125およびBittnerらMethEnzymol153516を参照。例えば、SV40エンハンサーまたはCMVエンハンサーを使用して、哺乳類宿主細胞における発現を増加させ得る。発現ベクターは、挿入されたHER3結合抗体配列によってコードされるポリペプチドとの融合タンパク質を形成する挿入シグナル配列位置も提供し得る。非常に多くの場合、挿入されたHER3結合抗体配列は、ベクターに含まれる前にシグナル配列と連結される。HER3結合抗体軽鎖および重鎖可変ドメインをコードする配列を受け取るために使用されるベクターは、定常領域またはそれらの一部をコードする場合もある。このようなベクターは定常領域を有する融合タンパク質として可変領域の発現が可能であり、それにより無傷の抗体またはそれらの断片の製造を導く。典型的には、かかる定常領域はヒトである。HER3結合抗体鎖を有し、そして発現する宿主細胞は、原核または真核細胞であってよい。大腸菌は、本発明のポリヌクレオチドをクローニングおよび発現するのに有用な原核宿主の一つである。使用に適した他の微生物宿主は、枯草菌などの桿菌、およびサルモネラ属、セラチア属および多様なシュードモナス属などの他の腸内細菌、を含む。これらの原核宿主において、典型的には宿主細胞に適合性の発現調節配列例えば複製起点を含む発現ベクターも作成できる。加えて、ラクトースプロモーター系、トリプトファンtrpプロモーター系、ベータ-ラクタマーゼプロモーター系またはファージラムダ由来のプロモーター系などの、任意の数の多様な周知のプロモーターが存在している。典型的には、プロモーターは、任意にはオペレーター配列で、発現を制御し、転写および翻訳を開始し完了するためのリボソーム結合部位などを有する。酵母のような他の微生物もまた、本発明のHER3結合ポリペプチドを発現するために使用できる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用できる。いくつかの好ましい実施形態において、本発明のHER3結合抗体を発現、製造するために、哺乳類宿主細胞が使用される。例えば、それは内因性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞系例えば、実施例に記載の1D6.C9骨髄腫ハイブリドーマクローンまたは外因性発現ベクターを有する哺乳類細胞系例えば、以下に例示するSP2/0骨髄腫細胞であってよい。これらはあらゆる通常の死に至るものかあるいは通常もしくは異常な不死動物またはヒト細胞系を含む。例えば、CHO細胞系、多様なCos細胞系、HeLa細胞、骨髄腫細胞系、形質転換B細胞およびハイブリドーマを含む、無傷な免疫グロブリンを分泌できる多数の好適な宿主細胞系が開発されている。ポリペプチドを発現するための哺乳類組織細胞培養の使用は、一般に、例えば、WinnackerFROMGENESTOCLONESVCHPublishersNYNY1987に記載されている。哺乳類宿主細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーターおよびエンハンサー例えば、QueenらImmunolRev8949681986を参照などの発現制御配列ならびにリボソーム結合部位、RNAスプライシング部位、ポリアデニル化部位および転写終止配列などの必要なプロセッシング情報部位を含み得る。これらの発現ベクターは、通常、哺乳類遺伝子または哺乳類ウイルス由来のプロモーターを含む。好適なプロモーターは、構造性、細胞型特異的、発生段階特異的、および/または調節可能もしくは制御可能であり得る。有用なプロモーターは、メタロチオネインプロモーター、構造性アデノウイルス後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性MMTVプロモーター、SV40プロモーター、MRPpolIIIプロモーター、構造性MPSVプロモーター、テトラサイクリン誘導性CMVプロモーター例えばヒト初期CMVプロモーター、構造性CMVプロモーターおよび当分野で既知のプロモーターとエンハンサーの組合せを含むが、これらに限定されない。目的のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主の型に依存して変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは一般に、原核細胞について利用されるが、一方で、リン酸カルシウム処理またはエレクトロポレーションは他の細胞宿主に使用できる一般に、Sambrookらsupraを参照。他の方法は、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム処理、リポソーム介在形質転換、インジェクションおよびマイクロインジェクション、弾道法、ビロソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン:核酸複合体、裸DNA、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質VP22との融合体ElliotandO’HareCell882231997、DNAの薬剤向上取り込みおよびエクスビボ形質導入を含む。組換えタンパク質の長期間高収率生産のために、安定な発現がしばしば所望される。例えば、HER3結合抗体鎖または結合断片を安定的に発現する細胞系は、ウイルス性複製起点または内因性発現要素および選択可能なマーカー遺伝子を含む本発明の発現ベクターを用いて製造できる。ベクターの導入後、富化培地中で細胞を1~2日間増殖させた後、選択培地に移す。選択可能なマーカーの目的は、選択に対する耐性を与えることであり、その存在が選択培地中で導入した配列の発現に成功している細胞の増殖を可能とする。耐性で、安定な、トランスフェクトされた細胞は、細胞型に適切な組織培養技術を用いて増殖できる。ii本発明のモノクローナル抗体の生成モノクローナル抗体mAbsは、慣用的なモノクローナル抗体方法論、例えば、KohlerandMilstein1975Nature256495の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む多様な技術によって作成できる。モノクローナル抗体を作成するための多くの技術、例えば、Bリンパ球のウイルス性または発がん性遺伝子による形質転換が使用できる。ハイブリドーマを調製するための動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ作成は、十分に確立された方法である。融合体についての免疫化プロトコールおよび免疫した脾細胞の単離のための技術は、当分野で既知である。融合パートナー例えばマウス骨髄腫細胞および融合手法も既知である。本発明のキメラまたはヒト化抗体は、上記のとおりに調製したマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製できる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするDNAは、目的のマウスハイブリドーマから得られ、非マウス例えばヒト免疫グロブリン配列を含むように、標準的な分子生物学の技術を用いて操作できる。例えばキメラ抗体を作成するために、当分野で既知の方法を用いて、マウス可変領域をヒト定常領域と連結させることができる例えば、Cabillyetalの米国特許第4,816,567号を参照。ヒト化抗体を作成するために、当分野で既知の方法を用いて、マウスCDR領域をヒトフレームワークに挿入できる。例えば、Winterの米国特許第5225539号およびQueenらの米国特許5530101;5585089;5693762および6180370を参照。いくらかの実施形態において、本発明の抗体はヒトモノクローナル抗体である。このような、HER3に対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系よりもヒト免疫系の一部を担持するトランスジェニックまたはトランスクロモソームマウスを用いて生成できる。これらのトランスジェニックおよびトランスクロモソームマウスは、それぞれHuMAbマウスおよびKMマウスと本明細書において称するマウスを含み、集合的に、ヒトIgマウスと称する。HuMAbマウス登録商標MedarexIncは、内因性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的変異と共に、再配列されていないヒト重鎖μおよびγおよびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子小座を含む例えば、LonbergらNature368856859参照。したがって、マウスはマウスIgMまたはκの低下した発現を示し、免疫化に応答して、導入したヒト重鎖および軽鎖トランスジーンがクラススイッチおよび体細胞変異を起こして、高い親和性のヒトIgGκモノクローナルを作成するLonbergらsuprareviewedinLonbergHandbookofExperimentalPharmacology11349101LonbergandHuszarInternRevImmunol136593、およびHardingandLonbergAnnNYAcadSci764536546。HuMAbマウスの作成および使用ならびにこのようなマウスによって担持されるゲノム修飾は、出展明示により全体が本明細書に組み込まれる、TaylorらNucleicAcidsResearch2062876295ChenらInternationalImmunology5647656TuaillonらProcNatlAcadSciUSA9437203724ChoiらNatureGenetics4117123ChenらEMBOJ12821830TuaillonらJImmunol15229122920TaylorらInternationalImmunology579591およびFishwildらNatureBiotechnology14845851にさらに記載される。さらに、LonbergおよびKayの米国特許第5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,789,650;5,877,397;5,661,016;5,814,318;5,874,299;および5,770,429号、Suraniらの米国特許第5,545,807号、LonbergおよびKayのPCT公開WO92103918、WO93/12227、WO94/25585、WO97113852、WO98/24884およびWO99/45962およびKormanらのPCT公開WO01/14424参照。他の実施形態において、本発明のヒト抗体は、ヒト重鎖トランスジーンおよびヒト軽鎖トランスクロモソームを担持するマウスのようなトランスジーンおよびトランスクロモソーム上にヒト免疫グロブリン配列を担持するマウスを用いて、産生できる。このようなマウスは、本明細書においてKMマウスと称し、IshidaらのPCT公開WO02/43478に詳細に記載されている。さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する別のトランスジェニック動物系が当分野で利用可能であり、本発明のHER3結合抗体の産生に使用できる。例えば、XenomouseAbgenixIncと称される別のトランスジェニック系が使用できる。このようなマウスは、例えばKucherlapatiらの米国特許第5,939,598;6,075,181;6,114,598;6,150,584および6,162,963号に記載されている。さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する別のトランスクロモソーム動物系が当分野で利用可能であり、本発明のHER3結合抗体の産生に使用できる。例えば、TCマウスと称されるヒト重鎖トランスクロモソームおよびヒト軽鎖トランスクロモソームの両方を担持するマウスが使用でき;このようなマウスはTomizukaらProcNatlAcadSciUSA97722727に記載されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖トランスクロモソームを担持するウシが当分野で既知でありKuroiwaらNatureBiotechnology20889894、本発明のHER3結合抗体の産生に使用できる。本発明のヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のスクリーニングライブラリーのファージディスプレイ法を用いて調製してもよい。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ法は、当分野で確立されており、下記実施例に記載されている。例えば、Ladnerらの米国特許第5,223,409;5,403,484および5,571,698号;Dowerらの米国特許第5,427,908および5,580,717号;McCaffertyらの米国特許第5,969,108および6,172,197号;Griffithsらの米国特許第5,885,793;6,521,404;6,544,731;6,555,313;6,582,915および6,593,081参照。本発明のヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト抗体応答が免疫化によって発生され得るようにヒト免疫細胞が再構築されているSCIDマウスを用いて調製できる。このようなマウスは、例えばWilsonらの米国特許第5,476,996および5,698,767号に記載されている。iiiフレームワークまたはFc操作操作された本発明の抗体は、例えば抗体の特性を改善するために、VHおよび/またはVL内のフレームワーク残基に修飾が施されているものを含む。典型的には、このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば一つのアプローチは、1個以上のフレームワーク残基を対応する生殖系配列に復帰変異することである。より具体的には、体細胞変異を起こした抗体が、その抗体から由来する生殖系配列とは異なるフレームワーク残基を含み得る。このような残基は、抗体フレームワーク配列と抗体に由来する生殖系配列を比較することで同定できる。フレームワーク領域配列をその生殖系配置に戻すため、体細胞変異は、例えば部位特異的変異誘発による生殖系配列への復帰変異であり得る。このような復帰変異された抗体も、本発明に含まれる。他の型のフレームワーク修飾は、T細胞エピトープを除去するための、フレームワーク領域内または1個以上のCDR領域内の1以上の残基での突然変異を含み、それによって抗体の潜在的な免疫原性を低下させる。このアプローチは脱免疫化とも称され、Carrらの米国特許公開20030153043号により詳細に記載されている。フレームワークまたはCDR領域内で行われる修飾に加えてまたはそれとは別に、本発明の抗体は、典型的には、血清半減期、補体結合、Fcレセプター結合および/または抗原依存的細胞毒性などの、抗体の1個以上の機能的特徴を変化させるための、Fc領域内の修飾を含むように操作し得る。さらに、本発明の抗体は、化学的に修飾例えば、1個以上の化学的部分を抗体に付着させることができるさせるかまたはその糖鎖形成を変化させ、再度抗体の1個以上の機能的特徴を変化させるために、修飾し得る。これらの実施形態の各々については以下にさらに詳細に記載する。Fc領域での残基の番号は、KabatのEU指数によるものである。1つの実施形態において、CH1のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基数が変化、例えば増加または減少するように修飾される。このアプローチはBodmerらの米国特許第5,677,425号にさらに記載されている。CH1のヒンジ領域内のシステイン残基数を変化させて、例えば、軽鎖と重鎖の会合を促進し、あるいは抗体の安定性を上昇または低下させる。別の実施形態において、抗体のFcヒンジ領域を変異して、該抗体の生物学的半減期を減少させる。さらに具体的には、1個以上のアミノ酸変異は、Fc-ヒンジ断片のCH2-CH3ドメイン界面領域に導入され、それにより、抗体が天然Fc-ヒンジドメインSpA結合と比較して改善されたブドウ球菌タンパク質ASpA結合を有する。このアプローチは、Wardらの米国特許第6,165,745号にさらに詳細に記載されている。さらに他の実施形態において、少なくとも1個のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換してFc領域を変化させて、抗体のエフェクター機能を変化させる。例えば、1個以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置換して、抗体がエフェクターリガンドについて変化した親和性を有するが親抗体の抗原結合能を保持するようにできる。親和性が変化されたエフェクターリガンドは、例えばFcレセプターまたは補体のC1成分であり得る。このアプローチは、Winterらの米国特許第5,624,821および5,648,260号にさらに詳細に記載されている。別の実施形態において、アミノ酸残基から選択される1個以上のアミノ酸は、抗体が変化したC1q結合および/または低下もしくは消滅した補体依存的細胞傷害性CDCを有するように、異なるアミノ酸残基で置換され得る。このアプローチはIdusogieらの米国特許第6,194,551号にさらに詳細に記載されている。別の実施形態において、1個以上のアミノ酸残基が変化させて、それにより抗体の補体を固定化する能力を変化させる。このアプローチは、Bodmeretal.のPCT公開WO94/29351にさらに詳細に記載されている。さらに別の実施形態において、Fc領域は、1個以上のアミノ酸を修飾することにより修飾して、抗体の抗体依存的細胞傷害性ADCCを仲介する能力を向上しおよび/またはFcγレセプターに対する抗体の親和性を向上させる。このアプローチはPrestaのPCT公開WO00/42072にさらに詳細に記載されている。さらに、FcγRl、FcγRII、FcγRIIIおよびFcRnに対するヒトIgG1上の結合部位がマッピングされており、改善された結合を有する変異体が記載されているShieldsRLらJBiolChen27665916604。さらに別の実施形態において、抗体のグリコシル化を修飾させる。例えば、非グリコシル化抗体を作成するすなわち抗体がグリコシル化を欠くことができる。グリコシル化は、例えば抗体の抗原に対する親和性を上昇させるために、変化され得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の1個以上のグリコシル化部位を変化することによって実施できる。例えば、1個以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の削除をもたらし、それによってこの部位でのグリコシル化を削除する、1個以上のアミノ酸置換が行われ得る。このような非グリコシル化は、抗体の抗原に対する親和性を上昇させ得る。このようなアプローチは、Coらの米国特許第5,714,350および6,350,861号にさらに詳細に記載されている。さらにまたはあるいは、フコシル残基の量が減少している低フコシル化抗体または増加した二分GlcNac構造を有する抗体などの、グリコシル化の型が変化した抗体を作成できる。このような変化したグリコシル化パターンは、抗体のADCC能を増加することが示されている。このような炭水化物修飾は、例えば、変化されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現することによって、達成できる。変化されたグリコシル化機構を有する細胞は、当分野において記載されており、本発明の組換え抗体を発現し、それによって変化したグリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用できる。例えば、HangらのEP1,176,195は、細胞系で発現される抗体が低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードするFUT8遺伝子が機能的に破壊されている細胞系を記載する。PrestaによるPCT公開WO03/035835は、Asn297結合糖にフコースを結合させる能力が低下し、また宿主細胞において発現される抗体の低フコシル化をもたらすCHO細胞系変異体であるLecl3細胞を記載するShieldsRLらJBiolChem2772673326740参照。UmanaらによるPCT公開WO99/54342は、細胞系で発現される抗体が増加した二分GlcNac構造を示し、抗体の増加したADCC活性をもたらすように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ例えばベータ1,4-NアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIIIGntIIIを発現するように操作された細胞系を記載するUmanaら1999NatBiotech17176180も参照。別の実施形態において、抗体を修飾してその生物学的半減期を上昇させる。多様なアプローチが可能である。例えば、Wardの米国特許第6,277,375号に記載のとおり、下記変異の1つ以上を導入できる:T252L、T254S、T256F。あるいは、生物学的半減期を上昇させるために、Prestaらの米国特許第5,869,046および6,121,022号に記載のとおり、CH1またはCL領域内で抗体を変化させて、IgGのFc領域のCH2ドメインの2個のループから得たサルベージレセプター結合エピトープを含める。iv改変された抗体を操作する方法上記のとおり、本明細書に示すVHおよびVL配列または全長重鎖および軽鎖配列を有するHER3結合抗体を用いて、全長重鎖および/または軽鎖配列、VHおよび/またはVL配列、またはそれに結合した定常領域を修飾して、新たなHER3結合抗体を作成できる。したがって、本発明の他の態様において、本発明のHER3結合抗体の構造的特徴を用いて、ヒトHER3との結合およびHER3の1個以上の機能的特徴の阻害などの、本発明の抗体の少なくとも1個の機能的特徴を保持する、構造的に関連したHER3結合抗体を作成する。例えば、本発明の抗体またはその変異体の1個以上のCDR領域を既知のフレームワーク領域および/または他のCDRと組換え的に結合して、上記のとおり、本発明のさらなる組換え操作されたHER3結合抗体を作成できる。他の型の修飾は、前節に記載のものを含む。操作方法の出発物質は、本明細書で提供されるVHおよび/またはVL配列の1個以上またはそのCDR配列の1個以上である。操作された抗体を作成するためには、本明細書で提供されるVHおよび/またはVL配列の1個以上またはそのCDR配列の1個以上を有する抗体を実際に作成するすなわちタンパク質として発現する必要はない。むしろ、配列に含まれる情報を出発物質として用いて、元の配列に由来する第二世代配列を作成し、当該第二世代配列が調製され、タンパク質として発現される。したがって、他の実施形態において、本発明は、配列番号:2、8、20、26、38、44、56、62、74、80、92、98、110、116、128、134、146、152、164、170、182、188、200、206、218、224、236、242、254、260、272、278、290、296、308、314、326、332、344、350、362および368からなる群から選択されるCDR1配列;配列番号:3、9、21、27、39、45、57、63、75、81、93、99、111、117、129、135、147、153、165、171、183、189、201、207、219、225、237、243、255、261、273、279、291、297、309、315、327、333、345、351、363および369からなる群から選択されるCDR2配列;および/または配列番号:4、10、22、28、40、46、58、64、75、82、94、100、112、118、130、136、148、154、166、172、184、190、202、208、220、226、238、244、256、262、274、280、292、298、310、316、328、334、346、352、364および370からなる群から選択されるCDR3配列を有する重鎖可変領域抗体配列;ならびに配列番号:5、11、23、29、41、47、59、65、77、83、95、101、113、119、131、137、149、155、167、173、185、191、203、209、221、227、239、245、257、263、275、281、293、299、311、317、329、335、347、353、365および371からなる群から選択されるCDR1配列;配列番号:6、12、24、30、42、48、60、66、78、84、96、102、114、120、132、138、150、156、168、174、186、192、204、210、222、228、240、246、258、264、276、282、294、300、312、318、330、336、348、354、366および372からなる群から選択されるCDR2配列;および/または配列番号:7、13、25、31、43、49、61、67、79、85、97、103、115、121、133、139、151、157、169、175、187、193、205、211、223、229、241、247、259、265、277、283、295、301、313、319、331、337、349、355、367および373からなる群から選択されるCDR3配列を有する軽鎖可変領域抗体配列からなるHER3結合抗体を作成する方法であって;重鎖可変領域抗体配列および/または軽鎖可変領域抗体配列内の少なくとも1個のアミノ酸残基を変化させて、少なくとも1個の変化した抗体配列を作成し;そして変化した抗体配列をタンパク質として発現させる、方法を提供する。変化した抗体配列はまた、固定されたCDR3配列または米国公開US20050255552号に記載の最小必須結合決定部分およびCDR1およびCDR2配列の多様性を有する抗体ライブラリーをスクリーニングすることによっても調製できる。スクリーニングは、ファージディスプレイ技術などの、抗体ライブラリーから抗体をスクリーニングするための適切ないかなるスクリーニング技術に従って、実施できる。標準的な分子生物学技術を用いて、変化した抗体配列を調製し、発現させることができる。変化した抗体配列によってコードされる抗体は、本明細書に記載のHER3結合抗体の1個、数個または全ての機能的特性を保持するものであり、ここで該機能的特性は、ヒトおよび/またはカニクイザルHER3との特異的結合;抗体がHER3と結合し、ホスソ-HERアッセイにおけるHERシグナル伝達活性の阻害によってHER3の生物活性を中和すること、を含むがこれらに限定されない。変化した抗体の機能的特性は、当分野において利用可能でありそして/または本明細書に記載の標準的なアッセイ、例えば実施例に記載のもの例えば、ELISAを用いて、評価できる。本発明の抗体を操作する方法のある実施形態において、HER3結合抗体コーディング配列の全部または一部にわたってランダムにまたは選択的に変異を導入でき、そして得られた修飾HER3結合抗体は、結合活性および/または本明細書に記載の他の機能的特性についてスクリーニングされ得る。変異方法は当分野において記載されている。例えば、ShortによるPCT公開WO02/092780は、飽和変異誘発、合成ライゲーションアセンブリまたはそれらの組合せを用いた抗体変異体の作成およびスクリーニング法を記載する。あるいは、LazarらによるPCT公開WO03/074679は、抗体の物理化学的特性を最適化するための計算スクリーニング法を用いる方法を記載する。本発明の抗体の特徴づけ本発明の抗体は多様な機能的アッセイによって特徴付けられる。例えば、本明細書に記載されるホスホ-HERアッセイにおけるHERシグナル伝達の阻害による生物活性を中和する能力、HER3タンパク質例えば、ヒトおよび/またはカニクイザルHER3との親和性、エピトープ結合、タンパク質分解に対する耐性、およびHER3下流シグナル伝達を阻止する能力によって、特徴付けられることができる。様々な方法を用いてHER3-介在シグナル伝達を測定できる。例えば、HERシグナル伝達経路は、iホスホ-HER3の測定、iiHER3または他の下流シグナル伝達タンパク質例えばAktのリン酸化反応の測定、iii本明細書に記載されているリガンド阻害アッセイ、ivヘテロ二量体形成、vHER3依存性遺伝子発現サイン、vi受容体内在化、およびviiHER3駆動細胞表現型例えば、増殖によって監視できる。HER3と結合する抗体の能力は、目的の抗体を直接ラベルして検出でき、あるいは該抗体はラベルされていなくてもよく、当分野で既知の多様なサンドイッチアッセイ形式を用いて間接的に検出できる。いくつかの実施形態において、本発明のHER3結合抗体は、参照HER3結合抗体とHER3ポリペプチドまたはタンパク質の結合を阻止しまたはそれと競合する。これらは上記完全ヒトHER3結合抗体であり得る。これらはまた、参照抗体と同じエピトープと結合する他のマウス、キメラまたはヒト化HER3結合抗体であってもよい。参照抗体結合を阻止しまたはそれと競合する能力は、試験下のHER3結合抗体が参照抗体によって定義されるものと同じまたは類似のエピトープと、あるいは参照HER3結合抗体が結合するエピトープと十分に近接しているエピトープと結合することを示す。このような抗体は、参照抗体について同定された有利な特性を共有している可能性が特に高い。参照抗体を阻止しまたはそれと競合する能力は、例えば競合結合アッセイによって測定できる。競合結合アッセイにより、試験下の抗体は、HER3ポリペプチドまたはタンパク質などの共通の抗原と参照抗体の特異的結合を阻害する能力について試験される。過剰の試験抗体が実質的に参照抗体の結合を阻害する場合、試験抗体は抗原との特異的結合について参照抗体と競合する。実質的阻害は、試験抗体が参照抗体の特異的結合を通常少なくとも10、25、50、75または90低下させることを意味する。HER3タンパク質との結合について、参照HER3結合抗体とHER3結合抗体との競合を評価するために使用できる多数の既知の競合結合アッセイが存在する。例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイRIA、固相直接または間接酵素イムノアッセイEIA、サンドイッチ競合アッセイStahliらMethodsinEnzymology9242253参照;固相直接ビオチン-アビジンEIAKirklandらJImmunol13736143619参照;固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイHarlowLane上記を参照;I-125ラベルを用いた固相直接ラベルRIAMorelらMolecImmunol25715を参照;固相直接ビオチン-アビジンEIACheungらVirology176546552;および直接標識化RIAMoldenhauerらScandJImmunol327782を含む。典型的には、このようなアッセイは、固体表面と結合した精製抗体または未標識化試験HER3結合抗体および標識化参照抗体のいずれかを有する細胞の使用を含む。競合阻害は試験抗体の存在下での固体表面または細胞と結合したラベルの量を測定して測定される。通常、試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイによって同定された抗体競合抗体は、参照抗体と同じエピトープと結合する抗体および参照抗体が結合するエピトープと立体障害が起こる程度に十分に近接している隣接エピトープと結合する抗体を含む。選択したHER3結合モノクローナル抗体が固有のエピトープと結合するかを決定するため、商業的に入手可能な試薬例えば、PierceRockfordILからの試薬を用いて各抗体をビオチニル化できる。未標識モノクローナル抗体およびビオチニル化モノクローナル抗体を用いた競合試験は、HER3ポリペプチド被覆ELISAプレートを用いて実施できる。ビオチニル化MAb結合は、ストレプ-アビジン-アルカリフォスファターゼプローブで検出できる。精製されたHER3結合抗体のアイソタイプを決定するため、アイソタイプELISAを実施できる。例えば、マイクロタイタープレートのウェルを1μg/mlの抗ヒトIgGで、4°Cで一夜被覆できる。1のBSAでブロックした後、プレートを1μg/ml以下のモノクローナルHER3結合抗体または精製したアイソタイプコントロールと、周囲温度で1~2時間反応させる。次いでウェルをヒトIgG1またはヒトIgM特異的アルカリフォスファターゼ複合化プローブと反応できる。次いでプレートを現像し、分析して、精製した抗体のアイソタイプを決定できる。モノクローナルHER3結合抗体とHER3ポリペプチドを発現する生きた細胞との結合を示すため、フローサイトメトリーが使用できる。簡潔には、0.1のBSAおよび10の胎児ウシ血清を含むPBS中の多様な濃度のHER3結合抗体とHER3を発現する細胞系標準的な成長条件下で増殖するを混合し、4°Cで1時間インキュベートできる。洗浄後、細胞を一次抗体染色と同じ条件下でフルオレセイン標識化抗ヒトIgG抗体と反応させる。1個の細胞を通過させる光および側面散乱特性を用いるFACScanによって試料を分析できる。蛍光顕微鏡を用いる別のアッセイを、フローサイトメトリーアッセイに加えてまたはそれと代えて使用してもよい。細胞は、上記の通り正確に染色でき、蛍光顕微鏡で試験できる。この方法は、個々の細胞の可視化が可能であるが、抗原の密度に依存する感受性が消え得る。本発明のHER3結合抗体はさらに、ウェスタンブロッティングによってHER3ポリペプチドまたは抗原性断片との反応性について試験できる。簡潔には、精製したHER3ポリペプチドもしくは融合タンパク質またはHER3を発現する細胞由来の細胞抽出物を調製し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供することができる。電気泳動後、分離した抗原をニトロセルロース膜に移し、10胎児ウシ血清でブロックし、試験モノクローナル抗体で探索する。ヒトIgG結合は、抗ヒトIgGアルカリフォスファターゼを用いて検出でき、BCIP/NBT基質錠SigmaChemCoStLouisMOで現像できる。多くの読出し装置を、リガンド誘導ヘテロ二量体形成の細胞ベースのアッセイにおけるHER3抗体の有効性および特異性を評価するために使用することができる。活性は、1つ以上の以下のものにより評価することができる:i標的細胞系、例えばMCF-7乳癌細胞における他のEGFファミリーメンバーでのHER2のリガンド誘導ヘテロ二量体化の阻害。細胞溶解物からのHER2複合体の免疫沈降は受容体特異的抗体で行うことができ、複合体内の他のEGF受容体の非存在/存在および生物学的に関連するリガンドを、他のEGF受容体に抗体でプローブすることにより、以下の電気泳動法/ウエスタントランスファーで分析することができる。iiリガンド活性化ヘテロ二量体によるシグナル伝達経路の活性化の阻害。HER3との結合は、受容体のEGFファミリーの他のメンバーに対して重要であり、リガンド結合後の最大の細胞性応答を誘導するようである。キナーゼ欠損HER3の場合、HER2は、機能性チロシンキナーゼドメインを提供し、シグナル伝達を可能にし、増殖因子リガンドの結合後に起こる。したがって、HER2およびHER3を共発現する細胞は、阻害剤の非存在および存在下でリガンド、例えばヘレグリンで処理することができ、HER3チロシンリン酸化の効果は、処理された細胞溶解物からのHER3の免疫沈降および次に抗-ホスホチロシン抗体を使用するウェスタンブロッティングを含む多くの方法によりモニタリングすることができる詳細のためにAgusopcit参照。あるいは、ハイスループットアッセイは、抗-HER3受容体抗体でコーティングされた96-ウェルプレートのウェル上に溶解された溶解物からHER3を捕捉することにより展開することができ、チロシンリン酸化レベルは、例えば、WaddletonらAnalBiochem309150157により具体化されるユーロピウム-標識抗-ホスホチロシン抗体を使用して測定することができる。このアプローチのよい広範な拡張において、活性化受容体ヘテロ二量体、例えば、マイトージェン-活性タンパク質キナーゼMAPKおよびAktの下流を活性化させることが知られているエフェクター分子は、処理された溶解物から免疫沈降し、これらのタンパク質の活性化形態を検出する抗体でブロットすることにより、または、これらのタンパク質が特異的な基質を修飾/活性化する能力を分析することにより、直接的に分析され得る。iiiリガンド誘導細胞増殖の阻害。種々の細胞系、例えば、多数の乳癌および前立腺癌細胞系は、ErbB受容体の組合せを共発現することが知られている。アッセイは、DNA合成トリチウムチミジン取り込み、細胞数の増加結晶バイオレット染色などに基づいて読出し装置で24/48/96ウェルフォーマットにおいて行われ得る。多くの読出し装置は、リガンド非依存性ホモおよびヘテロ二量体形成の細胞ベースのアッセイにおいてHER3抗体の有効性および特異性を評価するために使用することができる。例えば、HER2過剰発現は、キナーゼドメインのリガンド非依存性活性化を引き起こし、自発的二量体形成を引き起こす。過剰発現されたHER2は、ホモ二量体または他のHER分子、例えば、HER1、HER3およびHER4とのヘテロ二量体のいずれかを産生する。抗体またはその断片が腫瘍表現型がHER3ヘテロ二量体細胞シグナル伝達のリガンド活性化に少なくとも部分的に依存することが知られているヒト腫瘍細胞系、例えば、BxPC3膵臓癌細胞などの腫瘍異種移植片のインビボ増殖をブロックする能力。これは、単独で、または問題になっている細胞系に対して適当な細胞毒性剤と組み合わせて、免疫不全マウスにおいて評価することができる。機能アッセイの例はまた、以下の実施例の部にも記載されている。予防的および治療的使用本発明は、有効量の本発明の抗体を必要とする対象に投与することにより、HER3シグナル伝達経路と関連する疾患または障害を処置する方法を提供する。特定の態様において、本発明は、有効量の本発明の抗体を必要とする対象に投与することにより、癌例えば、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌、末梢神経鞘腫瘍、神経鞘腫、頭頸部癌、膀胱癌、食道癌、グリア芽腫、軟組織の明細胞肉腫、悪性中皮腫、神経線維腫症、腎臓癌および黒色腫を処置または予防する方法を提供する。いくつかの態様において、本発明は、有効量の本発明の抗体を必要とする対象に投与することにより、HERシグナル伝達経路と関連する癌を処置または予防する方法を提供する。特定の態様において、本発明は、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌、末梢神経鞘腫瘍、神経鞘腫、頭頸部癌、膀胱癌、食道癌、グリア芽腫、軟組織の明細胞肉腫、悪性中皮腫、神経線維腫症、腎臓癌および黒色腫を含むがこれらに限定されない、HERシグナル伝達経路に関連する癌の治療の方法を提供する。HER3抗体はまた、呼吸器疾患、骨粗鬆症、骨関節症、多発性嚢胞腎、糖尿病、統合失調症、血管疾患、心疾患、非発癌の増殖性疾患、線維症およびアルツハイマー病などの神経変性疾患を含むがこれらに限定されない、HERシグナル伝達の以上または血管に関連する他の障害の治療または予防に使用できる。HER3結合抗体との併用療法に好適な剤は、ErbBシグナル伝達経路を調節できる、当分野で既知の標準治療剤を含む。HER2に対してケアする薬剤の標準の適当な例は、限定はしないが、ハーセプチンおよびタイケルブを含む。EGFRに対してケアする薬剤の標準の適当な例は、限定はしないが、イレッサ、タルセバ、アービタックスおよびベクチビックスを含む。HER3結合抗体との組合せ処置のために適当であり得る他の薬剤は、限定はしないが、受容体チロシンキナーゼ、G-タンパク質共役受容体、増殖/生存シグナル変換経路、核ホルモン受容体、アポトーシス経路、細胞周期および血管形成を調節するものを含む。診断的使用一の態様において、本発明は、生物学的サンプル例えば、血液、血清、細胞、組織または癌に罹患しているかまたは癌を発症するリスクを有する個体由来のサンプルにおける、HER3タンパク質および/または核酸発現ならびびにHER3タンパク質機能を測定するための、診断アッセイを含む。競合アッセイなどの診断アッセイは、共通の結合パートナー上の限られた数の結合部位について試験サンプルと分析物が競合するラベルアナログトレーサーの能力に依存する。結合パートナーは一般に、競合の前または後に非可溶化され、次いで結合パートナーに結合しているトレーサーおよび分析物を結合していないトレーサーおよび分析物から分離する。この分離は傾斜法結合パートナーが予め非可溶化された場合または遠心分離法競合反応後に結合パートナーを沈殿させる場合によって実施される。試験サンプル分析物の量は、マーカー物質の量によって測定したとき、結合したトレーサーの量に反比例する。既知量の分析物で用量応答曲線を作成し、試験結果と比較して、試験サンプル中に存在する分析物の量を定量的に決定する。これらのアッセイは、検出マーカーとして酵素が使用される場合にはELISAと呼ばれる。この形態のアッセイにおいて、抗体とHER3結合抗体間の競合的結合は、血清サンプル中の抗体、より具体的には血清サンプル中の中和抗体の物差しである結合HER3タンパク質、好ましくは本発明のHER3エピトープをもたらす。このアッセイの重要な利点は、測定が抗体を直接中和することで行われることであるすなわち、HER3タンパク質、特にエピトープの結合と干渉するもの。このようなアッセイ、特にELISA試験の形態のアッセイは、臨床的環境および通常の血液スクリーニングに相当に利用される。本発明の別の態様は、個体におけるHER3核酸発現またはHER3タンパク質活性を測定するための方法であって、それによってその個体に適切な治療または予防薬を選択する方法を提供する本明細書において薬理ゲノミクスと称する。薬理ゲノミクスは、個体の遺伝子型例えば特定の剤に応答する個体の能力を測定するために試験した個体の遺伝子型に基づいて、個体の治療または予防処置のための剤例えば薬物を選択できる。本発明のさらに別の態様は、臨床試験におけるHER3タンパク質の発現または活性に対する剤例えば薬物の影響を監視することに関する。医薬組成物HER3結合抗体無傷または結合断片を含む医薬組成物または無菌組成物を製造するためには、HER3結合抗体無傷または結合断片を、医薬上許容される担体または賦形剤と混合する。組成物は追加的に癌乳癌、結腸直腸癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌、末梢神経鞘腫瘍、神経鞘腫、頭頸部癌、膀胱癌、食道癌、グリア芽腫、軟組織の明細胞肉腫、悪性中皮腫、神経線維腫症、腎臓癌および黒色腫の治療または予防に好適な1以上の治療剤を含めることができる。治療および診断剤の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液、ローションまたは懸濁液の形態で、生理的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造され得る例えば、HardmanらGoodmanandGilman‘sThePharmacologicalBasisofTherapeuticsMcGrawHillNewYorkNYGennaroRemingtonTheScienceandPracticeofPharmacyLippincottWilliamsandWilkinsNewYorkNYAvisらPharmaceuticalDosageFormsParenteralMedicationsMarcelDekkerNYLiebermanらPharmaceuticalDosageFormsTabletsMarcelDekkerNYLiebermanらPharmaceuticalDosageFormsDisperseSystemsMarcelDekkerNYWeinerandKotkoskieExcipientToxicityandSafetyMarcelDekkerIncNewYorkNY参照。治療のための投与計画の選択は、該物質の血清または組織ターンオーバー速度、症状のレベル、該物質の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近性を含む幾つかの要因に左右される。ある実施形態においては、投与計画は、許容される副作用レベルと調和させて、患者に送達される治療用物質の量を最大にする。したがって、送達される生物学的製剤の量は、部分的には、個々の物質および治療される状態の重症度に左右される。抗体、サイトカインおよび小分子の適当な用量を選択する際の指針は入手可能である例えば、WawrzynczakAntibodyTherapyBiosScientificPubLtdOxfordshireUKKresinaMonoclonalAntibodiesCytokinesandArthritisMarcelDekkerNewYorkNYBachMonoclonalAntibodiesandPeptideTherapyinAutoimmuneDiseasesMarcelDekkerNewYorkNYBaertらNewEnglJMed348601608MilgromらNewEnglJMed34119661973SlamonらNewEnglJMed344783792BeniaminovitzらNewEnglJMed342613619GhoshらNewEnglJMed3482432LipskyらNewEnglJMed34315941602参照。適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことまたは治療に影響を及ぼすと予想されることが当分野で既知であるまたは疑われるパラメーターおよび要因を用いて、臨床医によってなされる。一般に、投与は、最適用量より若干少ない量から開始され、ついで、いずれかの負の副作用との対比において所望のまたは最適な効果が達成されるまで、少しずつ投与量を増加させる。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症サイトカインのレベルが含まれる。本発明の医薬組成物における有効成分の実際の投与レベルは、患者にとって毒性となることなく個々の患者、組成物および投与方法に関する所望の治療応答を達成するのに有効な有効成分量が得られるよう様々なレベルとなり得る。選択される投与レベルは、使用される本発明の個々の組成物またはそれらのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時点、使用される個々の化合物の排泄速度、治療の持続期間、使用される個々の組成物と組合せて使用される他の薬物、化合物および/または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全身健康状態および既往歴ならびに医学分野で公知の他の要因を含む種々の薬物動態学的要因に左右される。本発明の抗体またはそれらの断片を含む組成物は、連続的注入により、または例えば1日、1週間または週1~7回の間隔での投与により投与され得る。投与は、静脈内、皮下、局所、経口的、鼻腔内、直腸、筋肉内、脳内に、または吸入により行われ得る。特定の投与プロトコールは、有意な望ましくない副作用を回避する最大用量または投与頻度を含むものである。週当たりの合計用量は、少なくとも0.05μg/kg体重、少なくとも0.2μg/kg、少なくとも0.5μg/kg、少なくとも1μg/kg、少なくとも10μg/kg、少なくとも100μg/kg、少なくとも0.2mg/kg、少なくとも1.0mg/kg、少なくとも2.0mg/kg、少なくとも10mg/kg、少なくとも25mg/kg、または少なくとも50mg/kgであり得る例えば、YangらNewEnglJMed349427434HeroldらNewEnglJMed34616921698LiuらJNeurolNeurosurgPsych67451456PortieljiらCancerImmunolImmunother52133144を参照のこと。抗体またはそれらの断片の所望の用量は、モル/kg体重に基づいた抗体またはポリペプチドの場合とほぼ同じである。抗体またはそれらの断片の所望の血漿濃度は、モル/kg体重に基づいた抗体の場合とほぼ同じである。該用量は、少なくとも15μg、少なくとも20μg、少なくとも25μg、少なくとも30μg、少なくとも35μg、少なくとも40μg、少なくとも45μg、少なくとも50μg、少なくとも55μg、少なくとも60μg、少なくとも65μg、少なくとも70μg、少なくとも75μg、少なくとも80μg、少なくとも85μg、少なくとも90μg、少なくとも95μg、または少なくとも100μgであり得る。対象に投与される投与回数は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11もしくは12またはそれ以上であり得る。本発明の抗体またはそれらの断片の場合、患者に投与される投与量は0.0001mg/kg~100mg/kg患者の体重1kg当たりのmgであり得る。該投与量は、0.0001mg/kg~20mg/kg、0.0001mg/kg~10mg/kg、0.0001mg/kg~5mg/kg、0.0001~2mg/kg、0.0001~1mg/kg、0.0001mg/kg~0.75mg/kg、0.0001mg/kg~0.5mg/kg、0.0001mg/kg~0.25mg/kg、0.0001~0.15mg/kg、0.0001~0.10mg/kg、0.001~0.5mg/kg、0.01~0.25mg/kg、または0.01~0.10mg/kg患者の体重1kg当たりのmgであり得る。本発明の抗体またはそれらの断片の投与量は、キログラムkg単位の患者の体重とmg/kg単位の投与用量とを掛け算することにより算出され得る。本発明の抗体またはそれらの断片の投与量は、150μg/kg未満、125μg/kg未満、100μg/kg未満、95μg/kg未満、90μg/kg未満、85μg/kg未満、80μg/kg未満、75μg/kg未満、70μg/kg未満、65μg/kg未満、60μg/kg未満、55μg/kg未満、50μg/kg未満、45μg/kg未満、40μg/kg未満、35μg/kg未満、30μg/kg未満、25μg/kg未満、20μg/kg未満、15μg/kg未満、10μg/kg未満、5μg/kg未満、2.5μg/kg未満、2μg/kg未満、1.5μg/kg未満、1μg/kg未満、0.5μg/kg未満、または0.5μg/kg患者の体重1kg当たりのμgであり得る。本発明の抗体またはそれらの断片の単位用量は0.1mg~20mg、0.1mg~15mg、0.1mg~12mg、0.1mg~10mg、0.1mg~8mg、0.1mg~7mg、0.1mg~5mg、0.1~2.5mg、0.25mg~20mg、0.25~15mg、0.25~12mg、0.25~10mg、0.25~8mg、0.25mg~7mg、0.25mg~5mg、0.5mg~2.5mg、1mg~20mg、1mg~15mg、1mg~12mg、1mg~10mg、1mg~8mg、1mg~7mg、1mg~5mg、または1mg~2.5mgであり得る。本発明の抗体またはそれらの断片の投与量は、対象において少なくとも0.1μg/ml、少なくとも0.5μg/ml、少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/mlまたは少なくとも400μg/mlの血清力価を達成し得る。あるいは、本発明の抗体またはそれらの断片の投与量は、対象において少なくとも0.1μg/ml、少なくとも0.5μg/ml、少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/mlまたは少なくとも400μg/mlの血清力価を達成し得る。本発明の抗体またはそれらの断片の投与は反復可能であり、それらの投与は、少なくとも1日間、2日間、3日間、5日間、10日間、15日間、30日間、45日間、2ヶ月間、75日間、3ヶ月間または少なくとも6ヶ月間、隔てられ得る。個々の患者に対する有効量は、治療される状態、患者の全身健康状態、投与の方法、経路および用量ならびに副作用の重症度などの要因によって様々となり得る例えば、MaynardらAHandbookofSOPsforGoodClinicalPracticeInterpharmPressBocaRatonFlaDentGoodLaboratoryandGoodClinicalPracticeUrchPublLondonUK参照。投与の経路は、例えば、局所または皮膚適用、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病変内への注射または注入、あるいは徐放系またはインプラントによるものであり得る例えば、SidmanらBiopolymers22547556LangerらJBiomedMaterRes15167277LangerChemTech1298105EpsteinらProcNatlAcadSciUSA8236883692HwangらProcNatlAcadSciUSA7740304034;米国特許第6,350,466および6,316,024号参照。必要に応じて、該組成物は、可溶化剤、および注射部位の疼痛を低減するための局所麻酔薬、例えばリドカインをも含み得る。また、例えば吸入器またはネブライザーの使用およびエアゾール化剤の配合により、肺投与も行われうる。例えば、米国特許第6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540および4,880,078号;ならびにPCT公開番号WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346およびWO99/66903号公報各々の全体を出典明示により本明細書に組み入れる参照。また、本発明の組成物は、当技術分野で公知の種々の方法の1以上を用いて、1以上の投与経路で投与されうる。当業者に理解されるとおり、投与の経路および/または方法は、所望の結果に応じて様々となろう。本発明の抗体またはそれらの断片に関する選択される投与経路には、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば注射または注入が含まれる。非経口投与は経腸および局所投与以外の投与方法に相当しうるものであり、通常は注射によるものであり、限定的なものではないが静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨内の注射および注入を包含する。あるいは、本発明の組成物は、経口経路を解して、例えば、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、経直腸、舌下または局所的に投与することができる。1つの態様において、本発明の抗体またはそれらの断片は注入により投与される。別の態様において、本発明の多特異的エピトープ結合タンパク質は皮下に投与される。本発明の抗体またはそれらの断片が制御放出または徐放系で投与される場合には、制御放出または徐放を達成するためにポンプが使用され得る例えば、LangersupraSeftonCRCCritRefBiomedEng1420BuchwaldらSurgery88507SaudekらNEnglJMed321574参照。本発明の治療用物質の制御放出または徐放を達成するためには、高分子物質が使用され得る例えば、MedicalApplicationsofControlledReleaseLangerandWiseCRCPresBocaRatonFlaControlledDrugBioavailabilityDrugProductDesignandPerformanceSmolenandBallWileyNewYorkRangerandPeppasJMacromolSciRevMacromolChem2361参照また、LevyらScience228190DuringらAnnNeurol25351HowardらJNeurosurg71105;米国特許第5,679,377号;米国特許第5,916,597号;米国特許第5,912,015号;米国特許第5,989,463号;米国特許第5,128,326号;PCT公開番号WO99/15154号公報;およびPCT公開番号WO99/20253号公報も参照。徐放製剤において使用される重合体の具体例には、限定的なものではないが以下のものが含まれる:ポリ2-ヒドロキシエチルメタクリラート、ポリメチルメタクリラート、ポリアクリル酸、ポリエチレン-コ-ビニルアセタート、ポリメタクリル酸、ポリグリコリドPLG、ポリ無水物、ポリN-ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、ポリラクチドPLA、ポリラクチド-コ-グリコリドPLGA、およびポリオルトエステル。1の実施形態において、徐放製剤において使用される高分子は不活性であり、浸出性不純物を含有せず、貯蔵時に安定であり、無菌であり、生分解性である。制御放出または徐放系は予防または治療標的に接近して配置され、したがって、全身投与量のごく一部を要するに過ぎない例えば、GoodsoninMedicalApplicationsofControlledReleasesupravol2pp115138参照。制御放出系はLangerによる総説において考察されている。本発明の1以上の抗体またはそれらの断片を含む徐放製剤を製造するためには、当業者に既知の任意の技術が用いられ得る。例えば、米国特許第4,526,938号,PCT公開WO91/05548号公報、PCT公開WO96/20698号公報、NingらRadioimmunotheraphyOncology39179189、SongらPDAJournalofPharmaceuticalScienceTechnology50372397、CleekらProInt’lSympControlRelBioactMater24853854、およびLamらProcInt’lSympControlRelBioactMater24759760各々の全体を出典明示により本明細書に組み入れる参照。本発明の抗体またはそれらの断片を局所投与する場合、それは、軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ、ローション剤、ゲル剤、シャンプー、噴霧剤、エアゾール剤、溶液剤水剤、乳剤または当業者によく知られた他の形態で製剤化され得る。例えば、Remington’sPharmaceuticalSciencesandIntroductiontoPharmaceuticalDosageForms19thedMackPubCoEastonPa参照。非噴霧可能局所剤形の場合、局所適用に適しており幾つかの場合には水より大きな粘性率を有する担体または1以上の賦形剤を含む粘性ないし半固体または固体形態が典型的に使用される。適当な製剤には、溶液剤水剤、懸濁剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、散剤、リニメント剤、ロウ剤などが含まれるがこれらに限定されるものではなく、これらは、所望により、滅菌され、または例えば浸透圧のような種々の特性に影響を及ぼすための補助物質例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、バッファーまたは塩と混合される。他の適当な局所剤形には、噴霧可能なエアゾール剤が含まれ、この場合、有効成分は、いくつかの場合には固体または液体不活性担体と組合されており、加圧揮発性物質例えば、気体プロペラント、例えばフレオンとの混合物として、またはスクィーズボトル内に充填される。所望により、医薬組成物および剤形に保湿剤または湿潤剤も加えられうる。そのような追加的成分の具体例は当分野で周知である。抗体またはそれらの断片を含む組成物を鼻腔内に投与する場合には、それは、エアゾール形態、噴霧剤、ミストまたは滴剤の形態で製剤化され得る。特に、本発明にしたがって使用するための予防または治療剤は、加圧パックからのエアロゾルスプレー提示または噴霧器の形態において、適当な高圧ガス例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当なガスの使用で便利に送達することができる。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達するような値を提供することにより決定され得る。吸入器または吸入器における使用のためのカプセルおよびカートリッジ例えば、ゼラチンからなるは、化合物および適当な粉末ベース、例えば、ラクトースまたはデンプンの粉末混合物を含んで製剤化され得る。第2の治療剤、例えばサイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質または放射線による共投与または治療のための方法は当分野で既知である例えば、HardmanらGoodmanandGilman’sThePharmacologicalBasisofTherapeutics10supthedMcGrawHillNewYorkNYPooleandPetersonPharmacotherapeuticsforAdvancedPracticeAPracticalApproachLippincottWilliamsWilkinsPhilaPaChabnerandLongoCancerChemotherapyandBiotherapyLippincottWilliamsWilkinsPhilaPa参照。治療用物質の有効量は、少なくとも10、少なくとも20、少なくとも約30、少なくとも40または少なくとも50、症状を軽減し得る。本発明の抗体またはそれらの断片と組合せて投与されうる追加的な療法例えば、予防または治療剤は、本発明の抗体またはそれらの断片から5分未満を隔てて、30分未満を隔てて、1時間未満を隔てて、約1時間を隔てて、約1~約2時間を隔てて、約2時間~約3時間を隔てて、約3時間~約4時間を隔てて、約4時間~約5時間を隔てて、約5時間~約6時間を隔てて、約6時間~約7時間を隔てて、約7時間~約8時間を隔てて、約8時間~約9時間を隔てて、約9時間~約10時間を隔てて、約10時間~約11時間を隔てて、約11時間~約12時間を隔てて、約12時間~18時間を隔てて、18時間~24時間を隔てて、24時間~36時間を隔てて、36時間~48時間を隔てて、48時間~52時間を隔てて、52時間~60時間を隔てて、60時間~72時間を隔てて、72時間~84時間を隔てて、84時間~96時間を隔てて、または96時間~120時間を隔てて投与され得る。それらの2以上の療法は患者の1回の同じ来院時に投与され得る。本発明の抗体またはそれらの断片およびその他の療法は周期的に投与されうる。周期的療法は、ある期間にわたる第1療法例えば、第1の予防または治療剤の投与、およびそれに続く、ある期間にわたる第2療法例えば、第2の予防または治療剤の投与、および場合によってはそれに続く、ある期間にわたる第3療法例えば、予防または治療剤などの投与、ならびにこの連続的投与の反復を含み、該周期は、それらの療法の1つに対する耐性の発生を低減するため、および/またはそれらの療法の1つの副作用を回避または軽減するため、および/またはそれらの療法の効力を改善するためのものである。ある実施形態において、本発明の抗体またはそれらの断片は、インビボにおける適切な分布が確保されるよう製剤化され得る。例えば、血液-脳関門BBBは多数の高親水性化合物を排除する。本発明の治療用化合物が所望によりBBBを通過することを保証するために、それらは例えばリポソーム中に製剤化されうる。リポソームの製造方法に関しては、例えば、米国特許第4,522,811、5,374,548および5,399,331号を参照のこと。リポソームは、標的化薬物送達を促進するよう特定の細胞または器官へ選択的に輸送される1以上の部分を含み得る例えば、RanadeJClinPharmacol29685を参照のこと。典型的な標的化部分には、ホラートまたはビオチン例えば、Lowらの米国特許第5,416,016号を参照のこと;マンノシドUmezawaらBiochemBiophysResCommun1531038;抗体BloemanらFEBSLett357140OwaisらAntimicrobAgentsChemother39180;界面活性剤プロテインA受容体BriscoeらAmJPhysiol1233134;p120SchreierらJBiolChem2699090;KKeinanenMLLaukkanenFEBSLett346123JJKillionIJFidlerImmunomethods4273も参照が含まれる。本発明は、本発明の抗体またはそれらの断片を含む医薬組成物を、単独でまたは他の療法と組合せて、それを要する対象に投与するための方法を提供する。本発明の組合せ療法の療法例えば、予防または治療剤は同時または連続的に対象に投与され得る。本発明の組合せ療法の療法例えば、予防または治療剤は周期的にも投与され得る。周期的療法は、ある期間にわたる第1療法例えば、第1の予防または治療剤の投与、およびそれに続く、ある期間にわたる第2療法例えば、第2の予防または治療剤の投与、ならびにこの連続的投与の反復を含み、該周期は、それらの療法例えば、剤の1つに対する耐性の発生を低減するため、および/またはそれらの療法例えば、剤の1つの副作用を回避または低減するため、および/またはそれらの療法の効力を改善するためのものである。本発明の組合せ療法の療法例えば、予防または治療剤は同時に対象に投与され得る。同時なる語は、厳密に同一時点での療法例えば、予防または治療剤の投与に限定されるものではなく、本発明の抗体またはそれらの断片がその他の療法と共に作用して、それらがそれ以外の様態で投与された場合に比べて増加した利益をもたらし得るように或る順序および時間間隔で、本発明の抗体を含む医薬組成物が対象に投与されることを意味する。例えば、各療法は、同時に、または異なる時点においていずれかの順序で連続的に対象に投与され得るが、それらは、所望の治療または予防効果が得られるよう時間的に十分に接近して投与されるべきである。各療法は、任意の適当な形態および任意の適当な経路で、別々に対象に投与されうる。種々の実施形態においては、該療法例えば、予防または治療剤は、15分未満を隔てて、30分未満を隔てて、1時間未満を隔てて、約1時間を隔てて、約1~約2時間を隔てて、約2時間~約3時間を隔てて、約3時間~約4時間を隔てて、約4時間~約5時間を隔てて、約5時間~約6時間を隔てて、約6時間~約7時間を隔てて、約7時間~約8時間を隔てて、約8時間~約9時間を隔てて、約9時間~約10時間を隔てて、約10時間~約11時間を隔てて、約11時間~約12時間を隔てて、24時間を隔てて、48時間を隔てて、72時間を隔てて、または1週間を隔てて、対象に投与され得る。他の実施形態において、2以上の療法例えば、予防または治療剤は患者の同一来院時に投与され得る。該組合せ療法の予防または治療剤は同一医薬組成物中で対象に投与され得る。あるいは、該組合せ療法の予防または治療剤は別々の医薬組成物中で同時に対象に投与され得る。該予防または治療剤は、同じまたは異なる投与経路により対象に投与され得る。本発明は完全に説明され、さらに以下の実施例および請求項により例示されるが、これは一例であり、さらなる限定を意味するものではない。実施例1:抗体に関する方法、材料およびスクリーニングi細胞系BXPC-3、SK-Br-3、BT-474、MDA-MB-453、FaDuおよびMCF-7細胞系は、ATCCから購入し、10ウシ胎児血清FBSを補った増殖培地中で慣例通りに維持した。ii組換えヒト、カニクイザル、マウスおよびラットHER3ベクターの作製マウスHER3細胞外ドメインを、マウス脳cDNAClontechからPCR増幅し、配列をNM_010153との比較により立証した。ラットHER3ECDを、Rat-2細胞mRNAから逆転写し、配列をNM_017218との比較により立証した。カニクイザルHER3cDNA鋳型を、種々のカニクイザル組織由来のRNAを使用して作製しZyagenLaboratories、RT-PCR産物をpCR登録商標-TOPO-XLInvitrogenにクローンニングし、両方の鎖をシーケンシングした。ヒトHER3は、ヒト胎児の脳cDNAライブラリー由来でありSource、配列は、NM_001982との比較により立証した。タグ化組換えタンパク質を作製するために、ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルHER3を、PwoTaqポリメラーゼRocheDiagnosticsを使用してPCR増幅した。増幅されたPCR産物をゲル精製し、インフレームN-末端CD33リーダー配列およびC-末端TAG、例えば、FLAGTAGを含むように以前に修飾されているpDonR201Invitrogengatewayエントリーベクターにクローニングした。TAGは、抗-TAGモノクローナル抗体を介して単量体タンパク質の精製を可能にする。標的遺伝子の両側には、Gateway登録商標クローニング技術Invitrogenを使用してGateway適合専売目的ベクター例えば、pcDNA3.1に組換え可能にする、AttB1およびAttB2が配置された。組換え反応はCMVプロモーターを含む専売目的ベクターでのGatewayLR反応を使用して行い、TAG発現ベクターを作製したが、市販されているあらゆるベクターを使用することができる。C-末端因子X切断部位のHER3ECD上流およびヒトIgGヒンジおよびFcドメインを融合したさらなる組換えHER3タンパク質を作製し、Fc-タグ化タンパク質を作った。これをなし遂げるために、種々のHER3ECDをPCR増幅し、因子X部位-Hinge-hFcのインフレームC-末端融合を含むように修飾されたベクター例えば、pcDNA3.1にクローニングした。作製されたオープンリーディングフレームの両側には、Gateway登録商標組換えクローニング技術Invitrogenにてさらなるクローニングのために、AttB1およびAttB2部位が配置された。LRGateway反応は、HER3-FcをCMVプロモーターを含む目的発現構築物中に移入するために使用した。HER3点変異発現構築物を標準部位特異的な変異誘発プロトコールを使用して作製し、得られたベクター配列を証明した。表8.HER3発現ベクターの作製。HER3のアミノ酸番号付けは、NP_001973ヒト、NP_034283マウスおよびNP_058914ラットに基づく。iii組換えHER3タンパク質の発現所望のHER3組換えタンパク質を以前に懸濁培養に適合されたHEK293由来細胞系において発現させ、Novartis専売無血清培地において増殖させた。小規模発現検査は、リポフェクションに基づいて一過性6-ウェル-プレートトランスフェクションアッセイにおいて取り組んだ。一過性トランスフェクションを介する大規模タンパク質生産を、WaveTMバイオリアクターシステムWaveBiotechにおいて10-20Lスケールで行った。DNAポリエチレンイミンPolysciencesを、1:3w:wの比率でプラスミド担体として使用した。細胞培養上清をトランスフェクション7-10日後に回収し、精製の前に交差流濾過および透析濾過により濃縮した。ivタグ化タンパク質精製組換えタグ化HER3タンパク質例えば、TAG-HER3を、細胞培養上清を回収し、10kDaカットオフフィルターFreseniusでの交差流濾過により10倍に濃縮することにより精製した。抗-TAGカラムを、1mLの樹脂あたり10mgの抗体の最終比率で抗-TAGモノクローナル抗体をCNBr活性化セファロース4Bに結合させることにより調製した。濃縮した上清を、1-2mL/分の流速で35mlの抗-タグカラムに付した。PBSで基線洗浄後、結合した物質を100mMのグリシンpH2.7で溶離し、中和し、無菌濾過した。タンパク質濃度は、280nmでの吸光度を測定し、0.66AU/mgの理論的因子を使用して変換することにより決定した。精製されたタンパク質は、SDS-PAGE、N-末端シーケンシングおよびLC-MSにより最終的に特徴付けた。vFcタグ精製濃縮した細胞培養上清を1ml/分の流速で50mlのProteinASepharoseFastFlowカラムに付した。PBSで基線洗浄後、カラムを、10カラム容量の10mMNaH2PO4/30v/vイソプロパノール、pH7.3、次に5カラム容量のPBSで洗浄した。最後に、結合した物質を50mMCitrate/140mMNaClpH2.7で溶離し、中和し、無菌濾過した。vi過剰発現する細胞系の作製細胞表面上に高レベルのHER3を発現する細胞系を作製するために、ヒトEGFRのアミノ酸残基669-1210にインフレームにおいて融合したヒトHER3のアミノ酸残基20-667の上流にCD33リーダー配列をコードする挿入物を含む哺乳動物発現ベクターを構築した。哺乳動物細胞において発現されるとき、得られたキメラタンパク質は、N-末端HER3細胞外および膜貫通ドメインおよびC-末端EGFR細胞質ドメインを含む。HER3/1ベクターをCHO-S細胞Invitrogenにトランスフェクトし、安定なプールが抗生物質選択後に生じた。得られた細胞系CHOHER3/1は、細胞表面上に高レベルのHER3細胞外ドメインを発現した。viiHuCALGOLD登録商標パニングヒトHER3を認識する抗体の選択のために、多数のパニング戦略を使用した。ヒトHER3タンパク質に対する治療的抗体を、抗体変異体タンパク質の供給源として、市販されているファージディスプレイライブラリーであるMorphoSysHuCALGOLD登録商標ライブラリーを使用して高結合アフィニティーを有するクローンを選択することによって作製した。ファージミドライブラリーは、HuCAL登録商標コンセプトKnappikらJMolBiol2965786に基づくものであり、ファージ表面上でFab提示するためのCysDisplay登録商標技術を使用するLohningによるWO01/05950。抗-HER3抗体の単離ために、標準ならびにRapMATパニング戦略を、固相、溶液、全細胞および差示的全細胞パニングアプローチを使用して行った。viii固相パニング抗-HER3抗体を同定するために、種々の固相パニング戦略を、異なる組換えHER3タンパク質を使用して行った。それぞれのラウンドの固相パニングを行うために、MaxisorpplatesNuncをHER3タンパク質でコーティングした。タグ化タンパク質を、抗-Fcヤギまたはマウス抗-ヒトIgG、JacksonImmunoResearch、抗-Tag抗体で以前にコーティングされたプレートを使用してか、または受動的な吸着を介してのいずれかで捕獲した。コーティングされたプレートをPBSで洗浄し、ブロックした。コーティングされたプレートをPBSで2回洗浄し、震盪器上でHuCALGOLD登録商標ファージ-抗体を室温で2時間で加えた。結合したファージを溶離し、大腸菌TG-1に加え、ファージ感染のためにインキュベートした。次に、感染した細菌を単離し、寒天プレート上に播種した。コロニーをプレートから掻き取り、ファージをレスキューし、増幅した。それぞれのHER3パニング戦略は、個々のラウンドのパニングを含み、ユニークな抗原、抗原濃度および洗浄ストリンジェンシーを含んだ。ix溶液相パニングそれぞれのラウンドの溶液相パニングを、ニューレグリン1-β1RDSystemsの存在または非存在下で種々のビオチン化組換えHER3タンパク質を使用して行った。タンパク質を、製造業者の指示にしたがってEZ-連結スルホ-NHS-LCビオチン化キットPierceを使用してビオチン化した。800μlのストレプトアビジン連結電磁ビーズDynabeads、DynalをPBSで1回洗浄し、ChemiblockerChemiconで一晩ブロックした。HuCALGOLD登録商標ファージ-抗体および適当なビオチン化HER3を反応チューブ中でインキュベートした。ストレプトアビジン電磁ビーズを20分間で加え、磁性粒子分離器Dynalで回収した。結合したファージを、DTT含有バッファーをそれぞれのチューブに加えることによりDynabeadsから溶離し、大腸菌TG-1に加えた。ファージ感染を、固相パニングに記載されている方法と同一の方法において行った。それぞれのHER3パニング戦略は、個々のラウンドのパニングを含み、ユニークな抗原、抗原濃度および洗浄ストリンジェンシーを含んだ。x細胞ベースのパニング細胞パニングのために、HuCALGOLD登録商標ファージ-抗体を、回転器上で室温で2時間、約107個の細胞とインキュベートし、次に遠心分離した。細胞ペレットを単離し、ファージを細胞から溶離した。上清を回収し、上記プロセスにより続けた大腸菌TG-1培養物に加えた。2つの細胞ベースの戦略を使用して、抗-HER3抗体を同定した:a全細胞パニング:該戦略において、種々の無傷な細胞系を抗原として使用した。b差示的全細胞パニング:該戦略において、抗原は、連続して、細胞および組換えHER3タンパク質からなった例として1981.09参照。細胞ベースのパニングは、上記のとおりに行い、一方、組換えタンパク質を抗原として利用するときに、固相パニングプロトコールを使用した。洗浄は、PBS2-3XおよびPBST2-3Xを使用して行った。xiRapMATTMライブラリー作製およびパニングライブラリー多様性を維持すると同時に、抗体結合アフィニティーを増加させるために、溶液および固相の両パニングの第2ラウンドアウトプットをRapMATTMプロセスに入れ、一方、全細胞および差示的全細胞パニング戦略の第3ラウンドアウトプットを入れたPrasslerらImmunotherapy1571583。RapMATTMライブラリーを、パニングを介して選択されたファージのFabをコードする挿入物を、提示ベクターpMORPH登録商標25_bla_LHCへサブクローニングすることにより作製し、さらに、H-CDR2RapMATTMライブラリーおよびL-CDR3RapMATTMライブラリーのいずれかを作製するために、特異的な制限酵素を使用することにより消化した。挿入物を、プール組成にしたがって、H-CDR2またはL-CDR3に対するTRIM成熟カセットVirnekasらNucleicAcidsResearch2256005607で置き換えた。ライブラリーサイズは、8x106-1x108個のクローンの範囲であると概算された。RapMAT抗体-ファージを生産し、以前に記載された実験方法を使用して、溶液、固相または細胞ベースのパニングの2つのさらなるラウンドに付した。実施例2:抗-HER3IgGの一過性発現懸濁液適合HEK293-6E細胞を、BioWave20において、約2×106の生存細胞/mLの密度にまで培養した。細胞を関連無菌DNA:PEI-MIXで一時的にトランスフェクトし、さらに増殖した。トランスフェクションの7日後に、Freseniusフィルター0.2μmを使用する交差流濾過によって細胞を取り出した。無細胞材料を、10kDaカットオフフィルターFreseniusを使用する交差流濾過で濃縮し、濃縮物をstericupフィルター0.22μmを介して無菌濾過した。無菌上清を4°Cで貯蔵した。実施例3:抗-HER3IgGの精製AEKTA100explorerAirクロマトグラフィーシステムで、6°Cで、冷却キャビネットにおいて、25mlのself-packedMabSelectSuRe樹脂全て、GEHealthcareとともにXK16/20カラムを使用して、IgGの精製を行った。5barの圧力制限でのローディングを除き、全ての流動速度は、3.5ml/分であった。カラムを3カラム容量のPBSで平衡にし、2.0mL/分で濾過発酵上清を負荷した。カラムを8カラム容量のPBSで洗浄した。IgGを、50mMクエン酸塩/70mMNaClpH4.5で開始し、12カラム容量において50mMクエン酸塩/70mMNaClpH2.5に直線的に下がるpH勾配で、次に同じpH2.5バッファーの2カラム容量一定の工程で溶離した。IgG含有画分をプールし、即座に中和し、無菌濾過したMilliporeSteriflip、0.22um。OD280を測定し、タンパク質濃度を、配列データに基づき計算した。プールを、凝集SEC-MALSおよび純度SDS-PAGEおよびMSについて別々に試験した。実施例4:大腸菌におけるHuCAL登録商標-Fab抗体の発現および精製TG-1細胞におけるpMORPH登録商標X9_Fab_MHによってコードされるFab断片の発現を、34μg/mLのクロラムフェニコールを補った500mLの2xYT培地を使用して、震盪器フラスコ培養物中で行った。培養は、OD600nmで0.5に達するまで30°Cで震盪した。発現は、30°Cで20時間の0.75mMのIPTGイソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシドの添加により誘導した。細胞をリゾチームを使用して破壊した。His6-タグ化Fab断片をIMACBio-Radを介して単離した。1xダルベッコPBSpH7.2へのバッファー交換、をPD10カラムを使用して行った。サンプルを無菌濾過0.2μmした。タンパク質濃度を、UV-分光光度法によって測定した。サンプルの純度を、変性、還元15SDS-PAGEにおいて分析した。Fab調製物の均質性を、校正基準でサイズ排除クロマトグラフィーHP-SECによって天然状態で決定した。実施例5:溶液平衡滴定SETによるHER3抗体親和性KD測定溶液における親和性決定は、本質的に、以前に記載されているとおりに行ったFriguetらJImmunolMethods7730519。SET方法の感度および精度を改善するために、古典的なELISAからECLベースの技術にそれを移したHaenelらAnalbiochem33918284。以前に記載された非標識HER3-Tagヒト、ラット、マウスまたはカニクイザルを、SETによる親和性決定のために使用した。特注フィッティングモデルを適用するXLfitソフトウェアIDBusinessSolutionsでデータを評価した。それぞれのIgGのKD決定のために、以下のモデルを使用したPiehlerらJImmunolMethods201189206にしたがい修正された。[IgG]:適用した総IgG濃度x:適用した総可溶性抗原濃度結合部位Bmax:抗原なしのIgGの最大シグナルKD:親和性実施例6:FACSによる抗体細胞結合測定ヒト癌細胞上に発現される内因性ヒト抗原への抗体の結合をFACSにより評価した。抗体EC50値を決定するために、SK-Br-3細胞をアキュターゼで回収し、FACSバッファーPBS/3FBS/0.2NaN3にて1×106細胞/mLに希釈した。1x105細胞/ウェルを96-ウェルプレートNuncのそれぞれのウェルに加え、4°Cで210gで5分間遠心し、上清を除去した。試験抗体の連続希釈物FACSバッファーで1:4希釈工程において希釈されたをペレット状の細胞に加え、氷上で1時間インキュベートした。細胞を100μLのFACSバッファー3回洗浄し、ペレット化した。FACSバッファーで1/200に希釈されたPE結合ヤギ抗-ヒトIgGJacksonImmunoResearchを細胞に加え、氷上で1時間インキュベートした。さらなる洗浄工程を100μLのFACSバッファーで3回、次に、210gで4°Cで5分間の遠心分離工程を行った。最後に、細胞を200μLのFACSバッファーに再懸濁し、蛍光値をFACSArrayBDBiosciencesで測定した。細胞表面結合抗-HER3抗体の量を平均チャネル蛍光を測定することにより評価した。実施例7:HER3ドメインおよび変異体結合96ウェルMaxisorpプレートNuncを、4°Cで一晩で、200ngの適当な組換えヒトタンパク質HER3-タグ、D1-2-タグ、D2-タグ、D3-4-タグ、D4-タグ、HER3K267A-タグ、HER3L268A-タグ、HER3K267A/L268Aおよびタグ化された不適切なコントロールで被覆した。次に、全てのウェルをPBS/0.1Tween-20で3回洗浄し、PBS/1BSA/0.1Tween-20で1時間ブロックし、PBS/0.1Tween-20で3回洗浄した。抗-HER3抗体を10μg/mLの最終濃度にまで関連ウェルに加え、適当なウェルに加え、室温で2時間インキュベートした。プレートをPBS/0.1Tween-20で3回洗浄し、次に、PBS/1BSA/0.1Tween-20において1/10000に希釈された適当なペルオキシダーゼ連結検出抗体を加えた。使用された検出抗体は、ヤギ抗-マウスPierce、31432、ウサギ抗-ヤギPierce、31402およびヤギ抗-ヒトPierce、31412であった。プレートを室温で1時間インキュベートし、PBS/0.1Tween-20で3回洗浄した。100μlのTMB3,3’、5,5’テトラメチルベンジジン基質溶液BioFxを6分間で全てのウェルに加え、50μlの2.5H2SO4で反応を停止させた。それぞれの組換えタンパク質へのHER3抗体結合の程度を、SpectraMaxプレートリーダーMolecularDevicesを使用してOD450を測定することにより決定した。適宜、用量応答曲線は、GraphpadPrismを使用して分析した。実施例8:水素/重水素交換質量分析を使用するHER3エピトープマッピング材料D2Oバッファーを、重水Sigmaに25mMのTBSpH7.5/500mMのNaClを溶解することにより作製した。還元溶液は、水中で50mMのギ酸バッファーpH4、500mMのTCEPおよびクエンチ溶液0.5v/vトリフルオロ酢酸TFAであった。バッファーAは、水中で0.25ギ酸/10メタノール/10エチレングリコールであり、バッファーBは、水中で0.25ギ酸アセトニトリルであった。全ての化学薬品はSigmaから購入し、HPLC勾配溶媒はFisherScientificから購入した。液体処理およびクロマトグラフィー自動水素-重水素交換質量分析HDXMS実験は、WalesらAnalChem7810051014により記載されている方法および装置に基づいて設計した。要するに、全ての液体処理操作は、2°Cで維持された冷蔵エンクロージャー中に入れられたPalHTS液体-ハンドラーLEAPTechnologiesを使用した。6-ポート注入バルブおよび洗い場を液体-ハンドラーレール上に搭載し、クロマトグラフィーシステムへのサンプル注入およびシリンジ洗浄を容易にした。クロマトグラフィーシステムは、分析カラム100μmx~60mm、Kinetex2.6μmC18、Phenomenexとして、さらなる10-ポートバルブ、2.1mmx30mmPoroszymeペプシンカラムAppliedBiosystems、逆相0.5mmx2mmCapTrapカートリッジMichromBioresources、および自己パックエレクトロスプレーエミッターからなった。10-ポートバルブヘッド、トラップカートリッジおよび分析カラムを、アルミニウムから構築された別々のエンクロージャー中に入れ、ペルチェスタックにより-5°Cで維持した。バルブおよびカラムを、サンプルを質量分析計のエレクトロスプレーオン化ESI供給源に導入前に、タンパク質消化、ペプチド脱塩および逆相クロマトグラフィーを一列に可能にする方法で配置したLTQOrbitrapThermoScientific。操作のために必要な流体の流れは、2つの別々のHPLCポンプにより提供した。第1のHPLCSurveyorMSpumpThermoScientificは、125μL/分の一定流速でバッファーAを送達し、10-ポートバルブを介して搭載された逆相トラップカートリッジ上に固定されたペプシンカートリッジを通してサンプルを移動させるように使用した。ローディングおよび脱塩期間後、10-ポートバルブを、勾配ポンプAQUITYUPLCWatersの助けで、逆相トラップカートリッジから、分析カラムを介して質量分析計のイオン供給源にサンプルを溶離するように切り替えた。固定された酵素カートリッジを単離し、勾配溶離中に浪費した。勾配ポンプは、5μL/分で35分にわたる0から40の移動相Bおよび5μL/分で10分にわたる40から95の移動相Bの直線的勾配セグメントを送達した。ポンプからの勾配流量は、勾配溶離のためのトラップカートリッジおよび分析カラムを介する実際の流量が~1μL/分であるように、受動スプリッターを使用して10-ポートバルブで分けた。全クロマトグラフィー稼働は、洗浄および平衡工程を含んで70分の長さであった。質量分析オンライン消化から得られるタンパク質分解断片の同定の目的のために、いくつかのデータ依存性MS/MS実験を行った。これらの獲得のために、タンデムMSスペクトルは、LTQ-Orbitrapハイブリッド質量分析計のLTQ分析器で獲得した。前駆質量選択は、Orbitrap分析器によって獲得したMSスキャンに基づいた。重水素化レベル決定の目的ために行われる単段階MS獲得は、Orbitrapm/z400-2000にわたる分析器によって60,000の分解能で獲得した。タンパク質およびタンパク質:Fab複合体の調製HER3タンパク質を、50μgのHER3-Tagを25mMTBSpH7.5/500mMNaClで希釈することにより調製し、50μLの最終容量を得た。タンパク質:Fab複合体を、Fab試験で1:1モル比において50μgのHER3-Tagを混合することにより調製した。次に、タンパク質:Fab混合物を、25mMTBSpH7.5/500mMNaClで50μLの最終容量に希釈した。タンパク質:Fab複合体を調製し、4°Cで少なくとも2時間インキュベートした。サンプル、希釈剤、クエンチおよび還元溶液を含む4つの96-ウェルプレートを、それぞれの実験の開始前に、液体-ハンドラーに負荷した。交換実験のために、50μLのHER3またはHER3:Fab複合体を150μLのD2Oバッファーで希釈した。混合物を、200μLの還元バッファーを1分間で加えることにより還元し、600μLのクエンチバッファーでクエンチした。全ての液体処理工程後の全容量は~1mLであった。混合後、クエンチされた溶液を、自動的に消化し、分離し、LCMSにより分析されるクロマトグラフィーシステムに注入した。サンプルおよびコントロール間の重水素化における平均変化を、サンプルおよびコントロール間の重水素取込レベルの差として計算した。データ処理OrbitrapRAWファイルを、社内プログラムRawXtractを使用してmzXMLファイルに変換した。次に、タンデムMS獲得をSEQUESTYatesLabScrippsResearchInstituteLaJollaCAを使用して探索し、検索結果をDTASelect2.0YatesLabScrippsResearchInstituteLaJollaCAを使用して自動的にフィルターにかけた。ペプチド配列同定を使用して、社内で作製されたプログラムを使用して、それぞれの同定された配列に対する単一イオンクロマトグラムを自動的に抽出し、クロマトグラフィーピークにわたって平均スペクトルを作成した。平均スペクトルをなめらかにし、重心をとった。重水素摂取のレベルを、重水素サンプルおよび非重水素基準間の重量の差としてとった。処理データを手動で確認し、調整して、自動処理工程からの不正確および誤差を正した。重水素取込レベルを、それぞれのペプチドにわたって重水素量を非局在化することにより、タンパク質配列のそれぞれの残基に割り当てたすなわち、観察される重水素化レベルを、ペプチド中のアミノ酸の数で割る。残基が2つ以上のペプチドによりカバーされるとき、残基をカバーする全てのペプチドの標準化重水素取込を平均化した。実施例9:ヒトHER3/MOR09823FabおよびヒトHER3/MOR09825Fab複合体のx線結晶構造決定本実施例は、3.2Åおよび3.4Åの分解能でそれぞれ決定されたMOR09823のFab断片およびMOR09825のFab断片に結合した全長HER3の結晶構造を示す。さらに、タグ化ヒトHER3をPBSpH7.3にて平衡化されたHiLoad26/60Superdex200PrepGradeカラムGEHealthcareにて精製した。大腸菌発現MOR09823およびMOR09825Fabを、細胞をリゾチームで溶解することにより単離し、His6-タグ化Fab断片をHisTrap_HPGEHealthcareカラムで捕獲した。さらに、MOR09823Fab-断片を、25mMTrispH7.5、150mMNaClにて平衡化されたSuperdex7516/60カラムGEHealthcareを使用してゲル濾過クロマトグラフィーにより精製した。HER3Fab複合体を、1.3-1.8:1HER3およびFabのそれぞれに対して0.9および1.4mg/ml-1cm-1の計算された減衰係数を使用して280nmでの吸光度により概算された濃度のモル比において、Fabをタグ化HER3と混合し、25mMTrispH7.5、150mMNaClにて平衡化されたSuperdex20010/300カラムGEHealthcareにて複合体を精製することにより調製した。ピーク画分をSDS-PAGEおよびLCMSにより分析した。それぞれの複合体に対して、およそ等モル比にてHER3およびFabの両方を含む画分をプールし、濃縮した。HER3/MOR09823結晶を、150nlのHER3/MOR09823複合体および150nlの貯蔵溶液100mMクエン酸ナトリウムpH5.6、20PEG4000および20イソプロパノールを含む滴から座滴蒸気拡散により293Kで成長させた。結晶をさらなる8グリセロールを含む貯蔵溶液に移し、液体窒素にて瞬間冷凍した。HER3/MOR09825結晶を、150nlのHER3/MOR09825複合体および150nlの貯蔵溶液100mMビス-トリスpH6.5、16PEG10,000を含む滴から座滴蒸気拡散により293Kで成長させた。結晶を100mMビス-トリスpH6.5、18PEG10,000および22グリセロールに移し、液体窒素にて瞬間冷凍した。データを、AdvancedPhotonSourceArgonneNationalLaboratoryでビームライン17-IDで回収した。HER3/MOR09823Fab複合体データを処理し、良い統計値で、セル寸法a=124.16、b=139.44、c=180.25Åで空間群I222においてHKL2000HKLResearchIncを使用して3.2Åで取った。HER3/MOR09823Fab構造は、Fabの断片およびサーチモデルとしての公開されたHER3ECD構造で、PhaserMcCoyらJApplCryst40658674を使用する分子置換により解いた。非対称ユニットあたり1分子のHER3/MOR09823Fab複合体を含む最終モデルを、COOTEmsleyCowtanActaCryst6021262132において構築し、BUSTERGlobalPhasingLTDを使用して、結合距離および結合角のそれぞれに対して0.010Åおよび1.37°のrmsdで19.0および24.5のそれぞれのRおよびRfree値に精密化した。PyMOLSchroedingerLLCにて同定されるMOR09823Fab中のあらゆる原子の5Å内の原子を含むHER3の残基は、表11および12に記載されている。HER3/MOR09825Fab複合体データを処理し、良い統計値で、セル寸法a=124.23、b=140.94、c=180.25Åで空間群I222においてautoPROCGlobalPhasingLTDを使用して3.4Åで取った。HER3/MOR09825Fab構造は、サーチモデルとしてHER3/MOR09823Fab構造で、PhaserMcCoyらJApplCryst40658674を使用する分子置換により解いた。非対称ユニットあたり1分子のHER3/MOR09825Fab複合体を含む最終モデルを、COOTEmsleyCowtanActaCryst6021262132において構築し、BUSTERGlobalPhasingLTDを使用して、結合距離および結合角のそれぞれに対して0.009Åおよび1.21°のrmsdで18.8および24.9のそれぞれのRおよびRfree値に精密化した。PyMOLSchroedingerLLCにて同定されるMOR09825Fab中のあらゆる原子の5Å内の原子を含むHER3の残基は、表13および14に記載されている。実施例10:ホスホ-HER3のインビトロ細胞アッセイMCF-7細胞を、DMEM/F12、15mMHEPES、L-グルタミン、McCoy’s5a中で10FCSおよびSK-Br-3、10FCS、1.5mML-グルタミンに慣例通りに維持した。完全培地において培養したサブコンフルエントMCF7またはSK-Br-3細胞をアキュターゼPAALaboratoriesで回収し、5x105個の細胞/mLの最終濃度で適当な増殖培地に再懸濁した。次に、100μLの細胞懸濁液を96-ウェル平底プレートNuncのそれぞれのウェルに加え、5x104個の細胞/ウェルの最終密度を得た。MCF7細胞を約3時間で付着させ、培地を0.5FBSを含む飢餓培地と交換した。次に、全てのプレートを37°Cで一晩インキュベートし、37°Cで80分間で適当な濃度のHER3抗体適当な培地において希釈されたで処理した。MCF7細胞を、最後の20分間、50ng/mLのニューレグリン1-β1EGFドメインRDSystemsで処理し、HER3リン酸化を刺激した。全ての培地を穏やかに吸引し、細胞を1mMCaCl2および0.5mMMgCl2Gibcoを含む氷冷PBSで洗浄した。細胞に50μLの氷冷溶解バッファー20mMTrispH8.0/137mMNaCl/10グリセロール/2mMEDTA/1NP-40/1mMオルトバナジウム酸ナトリウム/アプロチニン10μg/mL/ロイペプチン10μg/mLを加えることにより溶解し、30分間震盪しながら氷上でインキュベートした。次に、溶解物を回収し、1800gで4°Cで15分間で回転させ、細胞残屑を除去した。20μLの溶解物を前調製された捕獲プレートに加えた。HER3捕獲プレートを、4°Cで一晩でPBSで希釈された20μLの4μg/mLのMAB3481捕捉抗体RDSystemsでコーティングされた炭素プレートMesoscaleDiscoveryを使用して製造し、次に1xTrisバッファーMesoscaleDiscovery/0.1Tween-20中の3ウシ血清アルブミンでブロックした。HER3を、震盪しながら1時間室温でプレートをインキュベートすることにより溶解物から捕獲し、溶解物を吸引し、ウェルを1xTrisバッファーMesoscaleDiscovery/0.1Tween-20で洗浄した。リン酸化HER3を、1BSA/1xTris/0.1Tween-20中で調製された0.75μg/mLのビオチン化抗-ホスホチロシン抗体RDSystemsを使用して、室温で1時間震盪しながらインキュベートすることにより検出した。ウェルを1xTris/0.1Tween-20で4回洗浄し、ビオチン化タンパク質を、室温で1時間、1BSA/1xTris/0.1Tween-20で希釈されたS-Tag標識化ストレプトアビジンMesoscaleDiscoveryとインキュベートすることにより検出した。それぞれのウェルを吸引し、1xTris/0.1Tween-20で4回洗浄し、界面活性剤MesoscaleDiscoveryを有する20μLのReadバッファーTを加え、シグナルをMesoscaleSectorImagerを使用して定量化した。抗体MOR06391またはMOR03207を、シグナル伝達実験においてアイソタイプコントロールとして含んだ。実施例11:ホスホ-AktS473のインビトロ細胞アッセイ完全培地において培養したサブコンフルエントSK-Br-3およびBT-474細胞をアキュターゼPAALaboratoriesで回収し、5x105個の細胞/mLの最終濃度で適当な増殖培地に再懸濁した。次に、100μLの細胞懸濁液を96-ウェル平底プレートNuncのそれぞれのウェルに加え、5x104個の細胞/ウェルの最終密度を得た。次に、全てのプレートを37°Cで一晩インキュベートし、37°Cで80分間で適当な濃度のHER3抗体適当な培地において希釈されたで処理した。全ての培地を穏やかに吸引し、細胞を1mMCaCl2および0.5mMMgCl2Gibcoを含む氷冷PBSで洗浄した。細胞に50μLの氷冷溶解バッファー20mMTrispH8.0/137mMNaCl/10グリセロール/2mMEDTA/1NP-40/1mMオルトバナジウム酸ナトリウム/アプロチニン10μg/mL/ロイペプチン10μg/mLを加えることにより溶解し、30分間震盪しながら氷上でインキュベートした。次に、溶解物を回収し、1800gで4°Cで15分間で回転させ、細胞残屑を除去した。20μLの溶解物を、3BSA/1xTris/0.1Tween-20で以前にブロックされたマルチスポット384-ウェルホスホ-Akt炭素プレートMesoscaleDiscoveryに加えた。プレートを震盪しながら2時間室温でプレートをインキュベートし、溶解物を吸引し、ウェルを1xTrisバッファーMesoscaleDiscovery/0.1Tween-20で洗浄した。リン酸化Aktを、1BSA/1xTris/0.1Tween-20で50倍に希釈された20μLのSULFO-TAG抗-ホスホ-AktS473抗体MesoscaleDiscoveryを使用して、室温で2時間震盪しながらインキュベートすることにより検出した。ウェルを1xTris/0.1Tween-20で4回洗浄し、界面活性剤MesoscaleDiscoveryを有する20μLのReadバッファーTを加え、シグナルをMesoscaleSectorImagerを使用して定量化した。抗体MOR06391またはMOR03207を、シグナル伝達実験においてアイソタイプコントロールとして含んだ。実施例12:細胞系増殖アッセイSK-Br-3細胞を、10ウシ胎児血清で修飾され、補われたMcCoy’s5A培地で日常的に培養し、BT-474細胞を10FBSを補ったDMEMで培養した。サブコンフルエント細胞をトリプシン処理し、PBSで洗浄し、増殖培地で5x104個の細胞/mLに希釈し、5000個の細胞/ウェルの密度で96-ウェル透明底黒色プレートCostar3904に置いた。細胞を37°Cで一晩インキュベートし、適当な濃度のHER3抗体10または1μg/mLの典型的な最終濃度を加えた。プレートを6日間インキュベーターに戻し、CellTiter-GloPromegaを使用して細胞生存能力を評価した。100μLのCellTiter-Glo溶液をそれぞれのウェルに加え、10分間穏やかに震盪しながら室温でインキュベートした。発光の量を、スペクトルMaxプレートリーダーMolecularDevicesを使用して決定した。それぞれの抗体で得られた増殖阻害の程度を、それぞれのHER3抗体で得られる発光値を標準アイソタイプコントロール抗体MOR06391と比較することにより計算した。増殖アッセイのために、MCF-7細胞を、4mML-グルタミン/15mMHEPES/10FBSを含むDMEM/F121:1で慣例通りに培養した。サブコンフルエント細胞をトリプシン処理し、PBSで洗浄し、4mML-グルタミン/15mMHEPES/10μg/mLのヒトトランスフェリン/0.2BSAを含むDMEM/F121:1で1x105個の細胞/mLに希釈した。細胞を5000個の細胞/ウェルの密度で96-ウェル透明底黒色プレートCostarに置いた。次に、適当な濃度のHER3抗体10または1μg/mLの典型的な最終濃度を加えた。10ng/mLのNRG1-β1EGFドメインRDSystemsもまた適当なウェルに加え、細胞増殖を刺激した。プレートを6日間インキュベーターに戻し、CellTiter-GloPromegaを使用して細胞生存能力を評価した。それぞれの抗体で得られた増殖阻害の程度を、背景ニューレグリンなし発光値を引き、それぞれの抗-HER3抗体で得られる値を標準アイソタイプコントロール抗体MOR06391と比較することにより計算した。実施例13:リガンドブロッキング細胞アッセイ10FBSおよび1μg/mLのインスリンSigmaを補ったMEMで培養したMCF-7細胞を濯ぎ、小容量のFACSmax細胞解離バッファーGenlantisに回収し、5mLのFACSバッファーPBS/1FBS/0.1アジ化ナトリウムを加えた。細胞密度をカウントし、1x106個の細胞/mLの最終濃度に調整した。100μlの細胞懸濁液を96-ウェルプレートのそれぞれのウェルに加え、細胞を遠心分離220g、3分、4°Cにてペレット化した。細胞ペレットを、FACSバッファー100から0.1nMの範囲である典型的な最終抗体濃度に希釈された100μLの適当な試験抗体に再懸濁し、プレートを45分間氷上でインキュベートした。リガンドブロッキング抗体MAB3481RDSystemsをポジティブコントロールとして含んだ。細胞を染色バッファーで2回洗浄し、FACSバッファーで希釈された10nMのNRG1-β1EGFドメインRDSystemsを加え、45分間氷上でインキュベートした。細胞を染色バッファーで2回洗浄し、結合したニューレグリンを、細胞を10nMの抗-ヒトNRG1-β1EGFドメイン抗体RDSystemsと45分間氷上でインキュベートすることにより検出した。細胞を染色バッファーで2回洗浄し、FACSバッファーにて1/500希釈されたPE-結合抗-ヤギ抗体JacksonImmunoResearchと45分間氷上でインキュベートした。次に、細胞を遠心分離にてペレット化し、ペレットを200μLのFACSバッファーに再懸濁した。それぞれのサンプルを定量するために、10,000個の生存細胞をLSRIIFlowCytometerBDBiosciences上でカウントし、平均チャネル蛍光を測定することにより細胞表面結合ニューレグリンの量を評価した。実施例14:リガンドブロッキング生化学的アッセイ本方法は、ニューレグリンに結合するHER3/抗体複合体の能力を試験するための、表面プラズモン共鳴SPR-ベースのバイオセンサーBiacoreTMGEHealthcareUppsalaSwedenの有用性を含む。BiacoreTMは、表面プラズモン共鳴SPRの減少を利用し、結合相互作用を検出し、測定する。典型的なBiacore実験において、相互作用する分子ニューレグリンの1つはマトリックス上に固定されるが、相互作用するパートナーHER3は表面上を流れる。結合相互作用は、センサー表面上の質量における増加およびセンサー表面の近接における培地の屈折率における対応する直接的変化をもたらす。屈折率またはシグナルの変化を、複合体の結合および解離によって共鳴単位R.U.シグナル変化において記録し、非浸潤性方法において、連続的に、リアルタイムでモニタリングし、該結果をセンサーグラムの型において報告する。BiacoreTMT100GEHealthcareUppsalaSwedenを使用して、本明細書において報告されている全ての実験を行った。センサー表面調製および相互作用分析を25°Cで行った。バッファーおよびBiacore試薬は、GEHealthcareから購入した。10mMHepes、pH7.4/150mMNaCl、0.05P20、0.5BSAを含むランニングバッファーを、アッセイで利用した。NRG-1β1細胞外ドメインRDSystemsを、EZ-連結スルホ-NHS-LC-LC-ビオチンPierceと5:1のモル比で45分間、氷上でインキュベートした。反応を過剰のエタノールアミンの添加を介してクエンチし、脱塩スピンカラムZebaを使用してビオチン化-NRGから非結合ビオチンを除去した。ビオチン化-NRGを、約3000R.U.のssDNA-ストレプトアビジンビオチン捕獲キットであらかじめ固定されたセンサーチップCAP上に捕獲し、400-600R.Uの範囲のニューレグリン表面密度を生じた。ssDNA-ストレプトアビジンのみがフローセル表面上に存在するように、参照フローセルを、ビオチン化-NRGを注入工程から省くことにより作製した。HER3/抗体複合体を、適当な試験抗体の濃度0-50nMを増加させながら10nMヒトHER3-Fcを室温で15分間インキュベートすることにより作製し、BiacoreTMと10°Cでインキュベートした。相互作用分析は、60μL/分の流速で180秒間連続して参照およびニューレグリン表面上に、HER3/抗体複合体を注入することにより行った。複合体解離を、60μL/分の流速で180秒間モニタリングした。30μL/分の流速で、8Mグアニジン:1MNaOH3:1の120秒注入、次に、30アセトニトリル/0.25MNaOHの120秒注入を使用するそれぞれの分析サイクルの最後に、表面再生を行った。実施例15:インビボPD試験BxPC3およびBT-474細胞を培養し、実施例16および17に記載されているメス無胸腺nu/nuBalb/CマウスHarlanLaboratoriesに注入した。腫瘍が適当なサイズに達したとき、動物を腫瘍の質について試験した。潰瘍化腫瘍を有する動物または液体で満たされた腫瘍を有する動物を、試験から除いた。残りの動物に、抗体を外側尾静脈注射を介して静脈内に投与した。所定の時点で、動物をCO2窒息を介して殺し、全血を心穿刺を介して回収し、1.5mLのEppendorf回収チューブに入れた。腫瘍組織を即座に切断し、ねじぶた付きポリプロピレンサンプルチューブに入れ、液体窒素で瞬間凍結した。溶解物を調製するまで、組織を-80°Cで貯蔵した。実施例16:インビボBT-474有効性試験移植の時まで、BT-474細胞を、抗生物質を含まない10加熱不活性化ウシ胎児血清を含むDMEM中で培養した。細胞接種の1日前に、血清エストロゲンレベルを維持するように、メス無胸腺nu/nuBalb/CマウスHarlanLaboratoriesに、持続放出17β-エストラジオールペレットInnovativeResearchofAmericaを皮下に移植した。17β-エストラジオールペレット移植の1日後に、5×106個の細胞を、ハンクス液中に50フェノールレッドフリーマトリゲルBDBiosciencesを含む懸濁液中で、4番目の乳房脂肪体に同所注射した。懸濁液中に細胞を含む注射の全容量は200μLであった。細胞移植後20日間、約200mm3の腫瘍体積を有する動物を有効性試験に登録した。一般的に、1グループあたり全10匹の動物を有効性試験に登録した。単剤試験において、動物に、MOR10701またはMOR10703のいずれかを外側尾静脈注射を介して静脈内に投与した。開始負荷用量の40mg/kgを、第1の投与で投与した。開始投与後、動物に、試験期間中、一日おきのスケジュールで20mg/kgで投与した。組合せ試験において、動物に、MOR10701またはMOR10703のいずれか20mg/kg、iv、q2dおよび準最適な用量のトラスツマブ1mg/kg、iv、2qwを投与した。試験期間中、腫瘍体積を、週に2回キャリパーにより測定した。処置/コントロールT/Cパーセント値を、以下の式を使用して計算した:T/C=100×△T/△C、△T>0のとき式中:T=試験の最終日の薬物処置グループの平均腫瘍体積;△T=試験最終日の薬物処置グループの平均腫瘍体積-投与の開始日の薬物処置グループの平均腫瘍体積;C=試験最終日のコントロールグループの平均腫瘍体積;および△C=試験最終日のコントロールグループの平均腫瘍体積-投与の開始日のコントロールグループの平均腫瘍体積体重を週に2回測定し、用量を体重にて調整した。体重変化を、BW現在-BW開始/BW開始×100として計算した。データは、処置開始日からの体重変化パーセントとして示す。全てのデータは、平均±標準誤差SEMとして示した。デルタ腫瘍体積および体重は、統計分析のために使用した。グループ間の比較を、一元配置ANOVA、次に、posthocTukeyを使用して行った。全ての統計評価のために、有意レベルは、p<0.05であった。ビヒクルコントロールグループと比較しての有意性が報告される。実施例17:インビボBxPC3有効性試験移植の時まで、BxPC3細胞を、抗生物質を含まない10加熱不活性化ウシ胎児血清を含むRPMI-1640培地で培養した。メス無胸腺nu/nuBalb/CマウスHarlanLaboratoriesに、10×106個の細胞を、50マトリゲルを含む50リン酸緩衝生理食塩水の混合物中で、皮下に移植した。懸濁液中に細胞を含む注射の全容量は200μLであった。腫瘍が約200mm3のサイズに達したとき、動物を有効性試験に登録した。一般的に、1グループあたり全10匹の動物を試験に登録した。動物が登録前に異常な腫瘍増殖特性を示したとき、それらを登録から除外した。動物に、外側尾静脈注射を介して静脈内に投与した。開始負荷用量の40mg/kgを、第1の用量で投与した。開始用量後、動物に、試験期間処置下で25日間中、一日おきのスケジュールで20mg/kgで投与した。腫瘍体積およびT/C値は、以前に詳細に記載されているとおりに、計算した。実施例18:ホスホ-AktS473インビボPDアッセイ約50mm3の凍結腫瘍例えば、BT-474またはBXPC-3組織を氷上で解凍し、ホスファターゼRocheおよびプロテアーゼ阻害剤Rocheを含む100-300μLのT-PERバッファーPierceを、それぞれのサンプルに加えた。加えられる溶解バッファーの容量は、腫瘍サンプルのサイズに依存させた。組織を1.5mLの乳棒FisherScientificを使用して破壊し、得られた懸濁液を15分間氷上でインキュベートし、-80°Cで一晩凍結した。サンプルを解凍し、13000gで4°Cで15分間回転させ、上清タンパク質濃度をBCAアッセイThermoScientificにより定量した。組織上清を溶解バッファーMesoscaleDiscoveryで希釈し、25μgを、以前にBlockingSolution-AMesoscaleDiscoveryでブロックされているマルチ-スポット96-ウェルホスホ-Akt炭素プレートMesoscaleDiscoveryに加えた。プレートを、室温で1時間震盪しながらインキュベートし、溶解物を吸引し、ウェルをTris洗浄バッファーMesoscaleDiscoveryで4回洗浄した。リン酸化Aktを、室温で1時間震盪しながらインキュベートすることにより、抗体希釈バッファーで希釈された25μLのSULFO-TAG抗-ホスホ-AktS473抗体MesoscaleDiscoveryを使用して検出した。ウェルをTris洗浄バッファーで4回洗浄し、150μLのReadバッファーT界面活性剤を含むMesoscaleDiscoveryを加え、シグナルをMesoscaleSectorImagerを使用して定量した。実施例19:ホスホHER3Y1197インビボPDアッセイ約50mm3の凍結腫瘍例えば、BXPC-3組織を氷上で解凍し、ホスファターゼRocheおよびプロテアーゼ阻害剤Rocheを含む100-300μLのT-PERバッファーPierceを、それぞれのサンプルに加えた。組織を1.5mLの乳棒FisherScientificを使用して破壊し、得られた懸濁液を15分間氷上でインキュベートし、-80°Cで一晩凍結した。サンプルを解凍し、13000gで4°Cで15分間回転させ、上清タンパク質濃度をBCAアッセイThermoScientificにより定量した。組織上清を溶解バッファーで希釈し、150μgを、以前に4μg/mLMAB3481RDSystemsで一晩被覆され、3ミルクでブロックされているマルチ-スポット96-ウェル炭素プレートMesoscaleDiscoveryに加えた。プレートを、室温で2時間震盪しながらインキュベートし、溶解物を吸引し、ウェルをTris洗浄バッファーMesoscaleDiscoveryで4回洗浄した。リン酸化HER3を、バッファーで1/8000希釈された抗-HER3pY1197を使用して結合させた。室温で1時間インキュベーション後、ウェルをTris洗浄バッファーで洗浄し、抗-pY1197抗体を、室温で1時間震盪しながらインキュベートすることにより、ブロッキングバッファーで1/1000希釈されたS-Tag標識化抗-ウサギ抗体MesoscaleDiscoveryを使用して検出した。ウェルをTris洗浄バッファーで4回洗浄し、150μLの1/4希釈ReadバッファーT界面活性剤を含むMesoscaleDiscoveryを加え、シグナルをMesoscaleSectorImagerを使用して定量した。実施例20:インビトロ薬物組合せ試験標的化治療と組み合わせるためのHER3-標的化抗体の能力を評価するために、MOR09825またはMOR10703を、細胞生存能力アッセイにおいて、トラスツマブ、ラパチニブ、BEZ235、BKM120、BYL719、RAD001、エルロチニブおよびセツキシマブと組み合わせた。約1000-1500個のSK-Br-3McCoy’s、MDA-MB-453RPMI、FaDuEMEMまたはL3.3RPMI細胞を、2FBSを補った適当な培養培地において384-ウェルプレートに播種し、37°Cで一晩付着させた。次に、それぞれのプレートが、二次元マトリックスにおいてそれぞれの薬物の用量応答曲線を含むように、適当な薬物組合せラパチニブ、BKM120およびBYL719のための、典型的な最終薬物濃度は、3μMから13nMの範囲であり;RAD001では、27nMから0.0041nMの範囲であり;エルロチニブでは、1μMから0.0025nMの範囲であり;MOR1073では、100nmから0.01nmの範囲であり;セツキシマブでは、100nMから0.0015nMの範囲であり;トラスツマブでは、300nMから0.046nMの範囲であったをウェルに加えた。プレートを、3-6日間、インキュベーターに戻し、CellTiter-GloPromegaを使用して細胞生存能力を評価した。CellTiter-Glo溶液をそれぞれのウェルに加え、室温で10分間穏やかに震盪しながらインキュベートした。発光量をSpectraMaxプレートリーダーMolecularDevicesを使用して測定した。それぞれの組合せで得られる増殖阻害の程度を計算し、組合せ活性は、Loewes相加モデルを使用して強調した。実施例21:L3.3細胞におけるインビボ薬物組合せ試験移植時まで、膵臓L3.3細胞を、10加熱不活性化ウシ胎児血清を含むDMEM培地中で培養した。メスFoxn1ヌードマウスHarlanLaboratoriesに、3×106個の細胞をFBSフリーDMEM中で皮下に移植した。懸濁液中に細胞を含む注射の全容量は100μLであった。細胞移植後12日間、全てのグループに対して約100mm3の平均腫瘍体積を有する動物を有効性試験に登録した。一般的に、1グループあたり全8匹の動物を有効性試験に登録した。動物が登録前に異常な腫瘍増殖特性を示したとき、それらを登録から除外した。動物に、試験期間処置下で14日間中、一日おきのスケジュールで20mg/kgで外側尾静脈注射を介してMOR10703を静脈内に投与した。エルロチニブを50mg/kgPOで、単剤またはMOR10703と組み合わせてのいずれかでの1日スケジュールで投与した。腫瘍体積およびT/C値は、以前に詳細に記載されているとおりに、計算した。結果および議論集合的に、これらの結果は、抗体の1つのクラスが、HER3の立体構造的エピトープのドメイン2およびドメイン4内のアミノ酸残基に結合し、不活性な、または閉塞的な立体構造においてHER3を安定化することを示す。これらの抗体の結合は、リガンド依存性およびリガンド非依存性シグナル伝達の両方を阻害する。これらの抗体はまた、同時に、HER3リガンドに結合することができる。i親和性決定抗体親和性は、上記溶液平衡滴定SETにより決定した。該結果は表9に要約され、MOR10701に対する滴定曲線の例は図1に含まれる。該データは、多くの抗体がヒト、カニクイザル、ラットおよびマウスHER3としっかりと結合することを同定したことを示す。表9:溶液平衡滴定SETにより決定される抗-HER3IgGのKD値。Huヒト、Cyカニクイザル、MuマウスおよびraラットiiSK-Br-3細胞EC50決定HER3を発現する細胞に結合する同定された抗体の能力を、HER2増幅細胞系SK-Br-3への結合に対するEC50値を計算することにより決定した図2および表10参照。表10:SK-Br-3細胞上の抗-HER3IgGのFACSEC50値。n.d.決定されないiiiHER3ドメイン結合抗-HER3抗体のサブセットは、ELISAアッセイにおいて、ヒトHER3の種々の細胞外ドメインに結合する能力に対して特徴付けた。これをなし遂げるために、HER3の細胞外ドメインを4つの構成的ドメインに分類し、上記のとおり非依存性タンパク質として、これらのドメインの種々の組合せをクローンし、発現させ、精製した。該戦略を使用して、以下のドメインを成功裏に可溶性タンパク質として作製した:ドメイン1および2D1-2、ドメイン2D2、ドメイン3および4D3-4ならびにドメイン4D4。多くの内部に製造されたマウス抗-ヒトHER3抗体8D7、1F5および8P2もまた、それぞれの単離されたドメインの完全性を証明するために、ポジティブコントロールとして試験した。図3に示されるとおり、MOR09823およびMOR09825の両方が、HER3細胞外ドメインに成功裏に結合することが観察されたが、単離されたドメインへの結合が、これらの抗体でのこのアッセイにおいてわずかにしか観察されなかった。該結合パターンに対するいくつかの可能性のある説明が存在する:aMOR09823およびMOR09825が、ドメイン境界にわたる直線状エピトープに結合し得、したがって、ドメインが単離されたタンパク質として発現されるとき、結合エピトープの部分を喪失する。bMOR09823およびMOR09825が、多数のドメインと架橋する非直線状エピトープに結合し得る。結果として、成分ユニットへのHER3の分離が、結合部位を破壊し得る。cHER3の型/立体構造が、HER3の全長細胞外ドメインのみが該型/立体構造を採用することができるが、単離されたドメインは該立体構造を完全にとることができないような、HER3へのMOR09823およびMOR09825の結合の成分であり得る。vi水素/重水素交換質量分析を使用するHER3エピトープマッピングHER3エピトープを、さらに、MOR09823、MOR09824、MOR09825およびMOR09974のFabバージョンの存在および非存在下でHER3ECDのHDX-MS分析により探索した。図4Aは、結合Fabの非存在下で、HER3ECD配列の約69が少なくとも1つのペプチドによりカバーされていたことを示す。範囲内のGapは、これらの領域内の残基のグリコシル化またはドメイン2において特に明らかであるシステインリッチ領域におけるジスルフィド結合の不十分な減少のためであり得る。興味深いことに、それぞれのFabが個々の保護パターンを生じたが、強い保護の1つの領域は、一貫してMOR09823、MOR09824、MOR09825およびMOR09974図4B参照で観察され、これらの高度に関連したファミリーの抗体が、同一の様式でHER3に結合することを示した。最も強い保護は、ドメイン2の残基269-286TFQLEPNPHTKYQYGGVC配列番号:146に対して観察され、該近接残基がmAb結合に重要であり得ることを示した。公開されたHER3結晶構造ChoLeahyScience29713301333上へのFab保護残基のマッピングは、残基269-286がドメイン2内の機能的に重要なβ-ヘアピンループ内および近位であることを強調する図4C参照。viiHER3/MOR09823結晶構造HER3細胞外ドメインへ結合したMOR09823Fab断片の3.2Å分解能x線結晶構造を、関連抗体のファミリーにより認識されるHER3エピトープをさらに定義するために解明した図5A参照。加えて、ヒトHER3へ結合したMOR09825Fab断片の3.4Å構造を解明した。MOR09823/HER3およびMOR09825/HER3結晶構造の両方において、HER3は、連結不活性な立体構造図5A、B、CおよびD参照内である。該立体構造は、ドメイン2におけるβ-ヘアピン二量体化ループが介在するドメイン2および4間の有意な相互作用接合面により特徴付けられる。HER3の観察される立体構造は、ニューレグリンの非存在下でのHER3細胞外ドメインの結晶構造を公開したChoetalScience29713301333により以前に記載された構造と類似である。ニューレグリンはHER3を活性化することができるため、HER3の連結立体構造は、不活性であると推定される。関連EGFRファミリーメンバーHER4BouyainらProcNatlAcadSciUSA1021502415029およびHER1MolecCell11507517が結晶化されているとき、同様の連結立体構造もまた、観察されている。不活性な連結状態におけるHER3のドメイン1から4の間の空間的関連は、伸長した活性な状態の関連と有意に異なっている。この知見は、共に伸長した活性な状態である関連EGFRファミリーメンバーHER2およびリガンド結合HER1ChoらNature421756760OgisoらCell110775787GarrettらCell110763773の結晶構造に基づく。伸長した状態において、ドメイン2β-ヘアピン二量体化ループは、4との阻害相互作用から放出され、したがって、その二量体化パートナータンパク質と自由に相互作用することができる。したがって、ドメイン2β-ヘアピン二量体化ループは、連結不活性な状態を維持すること、および伸長した状態におけるEGF受容体の二量体化を介在することの両方において機能的に重要であり、細胞内キナーゼドメインの活性化をもたらす。したがって、MOR09823/HER3およびMOR09825/HER3結晶構造図5参照は、MOR09823およびMOR09825の両方が、HER3の不活性な立体構造を安定化することにより機能することを示唆する。結晶構造はまた、MOR09823およびMOR09825の両方により認識されるHER3エピトープが、ドメイン2および4の両方由来の残基を含む非直線状エピトープであること示した図5CおよびD、表11、12、13および14参照。したがって、高度に関連した抗体のファミリーにより認識されるHER3エピトープは、以下のとおりに定義することができる:ドメイン2:残基265-277、315ドメイン4残基:571、582-584、596-597、600-602、609-615MOR09823またはMOR09825によるドメイン2および4の両方の結合は、結果として、HER3の連結立体構造を安定化し、したがって、そのシグナル伝達する能力をアンタゴナイズする。結晶構造において観察されるMOR09823/MOR09825結合モードは、本発明者らの他のエピトープマッピング試験と一致する。具体的には、ELISAドメイン結合実験は、MOR09823およびMOR09825の親和性が、無傷なHER3細胞外タンパク質に対して、あらゆる単離されたドメイン例えば、D1、D1-D2、D3またはD3-D4断片よりも、有意に良いことを証明する図3参照。抗体認識エピトープの部分としてドメイン2β-ヘアピンを同定するHER3HDX-MSデータ図4B参照の証明もある。最後に、両方の結晶構造は、HER1と類似によりドメイン1および3にマッピングされているHER3のリガンド結合表面OgisoらCell110775787GarrettらCell110763773が、MOR09823またはMOR09825結合のいずれかにより閉塞されないことを示す図5B参照。これは、MOR09823もMOR09825もMCF7細胞へのニューレグリン結合をブロックしないこと図9参照、およびHER3/MOR09823複合体が、biacore試験において固定されたニューレグリンに結合することができること図10参照という、本発明者らの知見と一致する。表11:MOR09823Fab重鎖およびヒトHER3間の相互作用。FabVH残基は、その直線状アミノ酸配列配列番号:15に基づいて番号付けされる。HER3残基は、NP_001973に基づいて番号付けされる。示されるHER3残基は、MOR09823Fabにおける原子の5Å内の少なくとも1つの原子を有する。表12:MOR09823Fab軽鎖およびヒトHER3間の相互作用。FabVL残基は、その直線状アミノ酸配列配列番号:14に基づいて番号付けされる。HER3残基は、NP_001973に基づいて番号付けされる。示されるHER3残基は、MOR09823Fabにおける原子の5Å内の少なくとも1つの原子を有する。表13:MOR09825Fab重鎖およびヒトHER3間の相互作用。FabVH残基は、その直線状アミノ酸配列配列番号:51に基づいて番号付けされる。HER3残基は、NP_001973に基づいて番号付けされる。示されるHER3残基は、MOR09825Fabにおける原子の5Å内の少なくとも1つの原子を有する。表14:MOR09825Fab軽鎖およびヒトHER3間の相互作用。FabVL残基は、その直線状アミノ酸配列配列番号:50に基づいて番号付けされる。HER3残基は、NP_001973に基づいて番号付けされる。示されるHER3残基は、MOR09825Fabにおける原子の5Å内の少なくとも1つの原子を有する。MOR09823/MOR09825結晶構造の目視検査は、HER3残基Lys267およびLeu268が種々の抗体CDRと多数の相互作用を形成することを強調し、それらが抗体結合に重要であり得ることを示唆した。結果として、抗体結合に対する影響を評価するために、Lys267および/またはLeu268をアラニンに変異し、発現させ、得られた組換えタンパク質を精製した。ELISA結合アッセイは、Lys267またはLeu268のいずれかの変異がHER3へのMOR10703結合を破壊することを示し図5F、両方の残基がHER3エピトープの不可欠な部分であることを示唆し、したがって、MOR09823/MOR09825とHER3間の提案される相互作用をサポートした。viii細胞シグナル伝達の阻害リガンド依存性HER3活性における抗-HER3抗体の効果を確認するために、ニューレグリンでの刺激前に、MCF7細胞をIgGとインキュベートした。阻害曲線の例は、図6Aにおいて説明され、表15に要約される。HER2-媒介HER3活性化における抗-HER3抗体の効果もまた、HER2増幅細胞系SK-Br-3を使用して試験した図6Bおよび表15。表15:MCF7およびSK-Br-3細胞における抗-HER3IgGのpHER3IC50および阻害値の範囲HER3活性の阻害が下流細胞シグナル伝達Aktに影響するか否かを決定するために、リン酸化もまた、抗-HER3抗体での処置後に、HER2増幅細胞において測定した図7および表16参照。表16:SK-Br-3BT-474およびMCF7細胞における抗-HER3IgGのpAktS473IC50および阻害値の範囲要約すれば、MOR09823、MOR09824、MOR09825、MOR09974、MOR10701、MOR10702、MOR10703、MOR12609およびMOR12610は、それぞれ、リガンド依存性およびリガンド非依存性の両方における細胞HER3活性を阻害することができる。ix増殖阻害MOR09823、MOR09824、MOR09825、MOR09974、MOR10701、MOR10702およびMOR10703全てが、HER3活性および下流シグナル伝達を阻害したため、それらを、リガンド依存性および非依存性インビトロ細胞増殖をブロックする能力について試験したデータの例は図8に示され、表17に要約される。試験された抗-HER3抗体は、全て細胞増殖の有効な阻害剤であった。表17:SK-Br-3、BT-474およびMCF7細胞における10μg/mlの抗-HER3IgGでの処置後の増殖阻害xリガンドブロッキング評価リガンド結合をブロックする記載されている抗-HER3抗体の能力を、MOR09823またはMOR09825のいずれかで以前に処理されたMCF7細胞へのニューレグリンの結合を試験することにより評価された。MOR09823またはMOR09825のいずれかの存在は、MCF7細胞に結合するニューレグリンの能力において有意な効果を有さなかったが、実験において使用されたポジティブコントロールMab3481は、ニューレグリン結合に深く干渉することができた図9参照。これらの結果は、MOR09823はドメイン2および4と相互作用するが、ニューレグリンとHER3の相互作用のための主な接触点は、ドメイン1および3内に主に集中すると仮定されるので、結晶構造と一致する。ニューレグリンがHER3の不活性な立体構造に結合することができるときKaniらBiochemistry441584215857、MOR09823およびMOR09825は、シグナル伝達のために必要なHER3ドメイン再配列を防止することにより、または受容体二量体化を干渉することにより機能する可能性がある。xiリガンドブロッキング評価生化学的MOR09823およびニューレグリンが、同時にHER3に結合することができるか否かを探索するために、生化学的アッセイをBiacoreTM技術を使用して確立した。相互作用分析は、ビオチン捕獲キットGEHealthcareを利用してBiacoreTMセンサーチップCAPGEHealthcareの表面上にビオチン化ニューレグリンを捕獲することにより行った。HER3複合体は、MOR09823、105.5ThermoScientificまたはヒトIgGのいずれかの濃度の増加とともに、ヒトHER3-Fcとインキュベートすることにより作製した。前形成HER3/抗体複合体を参照および活性な表面上に注入し、ニューレグリンとHER3の相互作用を観察した。コントロールIgGは、HER3/ニューレグリン複合体形成への影響はなかったが、105.5が、リガンドブロッキング抗体としての種類を確認するニューレグリンに結合するHER3の能力を有意に阻害することを観察した図10。対照的に、HER3/MOR09823複合体は、ニューレグリンに結合することができ、MOR09823がリガンド結合を防止しないことを証明した。興味深いことに、MOR09823/HER3複合体を注入したとき、RU値の用量依存的増加が唯一観察された。このデータは、ニューレグリン、HER3およびMOR09823を含むトリマー複合体がチップ表面上に作製されることを示す。MOR09823結合がHER3のリガンド結合部位を閉塞しないため、該トリマー複合体が形成する能力は、HER3/MOR09823結晶構造により予測され、ニューレグリンおよびMOR09823の結合が相互排他的でないことを示唆する。別の態様において、抗体またはそれらの断片は、HER3リガンド、例えば、ニューレグリンの同時結合をブロックすることなく、HER3のドメイン2およびドメイン4の両方に結合する。理論を提供する必要はないが、HER3のドメイン2およびドメイン4の両方へ結合する抗体またはそれらの断片が、HER3上のリガンド結合部位をブロックすることなく、不活性な立体構造におけるHER3を保持することを可能にする。したがって、HER3リガンド例えば、ニューレグリンは、抗体として同時にHER3に結合することができる。本発明の抗体またはその断片は、リガンド結合を防止することなく、HER3のリガンド依存性および非依存性活性化の両方を阻害すう。これは、以下の理由のために利点であると考えられる:i別個の腫瘍型は、それぞれのメカニズムにより駆動しているため、治療抗体は、HER3活性化の単一のメカニズムすなわちリガンド依存性またはリガンド非依存性を標的化する抗体よりも、腫瘍の広範なスペクトルにおける臨床的有用性を有する。ii治療抗体は、HER3活性化の両方のメカニズムが同時に含まれる腫瘍型において有効である。HER3活性化の単一のメカニズムすなわちリガンド依存性またはリガンド非依存性を標的化する抗体は、これらの腫瘍型においてほとんど有効性を示さない。iiiリガンド結合を防止することなく、HER3のリガンド依存性活性化を阻害する抗体の有効性は、リガンドの濃度を増加することにより有害に影響する可能性が低い。これは、非常に高い濃度のHER3リガンドにより駆動される腫瘍型における有効性の増加、または耐性がHER3リガンドの上方制御を介在する薬物耐性負荷の減少のいずれかに変わる。iv不活性な形態を安定化することによりHER3活性化を阻害する抗体は、HER3活性化の代替メカニズムにより駆動される薬物耐性になりにくい。結果として、本発明の抗体は、既存の治療抗体が臨床的に有効でない状態を処置するために使用され得る。xiiHER3活性のインビボ阻害および腫瘍増殖に対する効果記載されている抗-HER3抗体のインビボ活性を決定するために、MOR09823を、BxPC-3およびBT-474腫瘍モデルの両方において試験した。MOR09823は、腫瘍pHER3レベルにおける有意な減少により証明されるHER3活性を阻害することが証明された図11。HER3のシグナル伝達下流を、同様に、BxPC-3およびBT-474の両方におけるpAktレベルの減少により証明されるとおり阻害した図11。HER2駆動BT-474有効性試験において、反復MOR10701処置は、腫瘍増殖の74阻害を生じたが図12A参照、MOR10703は83阻害を生じた。BxPC3腫瘍増殖モデルにおいて、MOR10701およびMOR10703の両方は、リガンド駆動腫瘍増殖を非常に有効に阻害した図13参照。xiiiインビトロ薬物組合せおよび細胞増殖に対する影響腫瘍細胞増殖は、頻繁に多数のシグナル伝達経路により駆動するため、本発明者らは、MOR09823またはMOR10703と種々の標的化薬物との組合せが、細胞増殖のブロックにおいて有利である否かを評価した。選択した標的化薬物は、主にHER2トラスツマブ、ラパチニブ、EGFRセツキシマブ、エルロチニブ、PI3K/mTORBEZ235、PI3KBKM120、PIK3CABYL719およびmTORRAD001を阻害したが、これらの標的はヒト腫瘍において一般的に活性化されるためであった。アイソボログラム分析図14参照は、MOR09823およびMOR10703が、トラスツマブ、ラパチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、BEZ235、BKM120、BYL719およびRAD001と相乗的薬物組合せを示したことを示した。このデータは、HER3シグナル伝達の阻害が、受容体チロシンキナーゼまたはPI3Kシグナル伝達経路を標的化する阻害剤に対して特定の利益があることを示唆する。xivインビボMOR10703薬物組合せHER3阻害は、受容体チロシンキナーゼ標的化薬剤とインビトロで協同したので、本発明者らは、トラスツマブおよびエルロチニブと組み合わせてのMOR10701またはMOR10703のいずれかの影響をインビボで評価した。BT-474異種移植片図15A参照において、最適に満たない用量のトラスツマブ1mg/kgとMOR10701またはMOR1070320mg/kgのいずれかの組合せは、腫瘍退行を誘導するために十分であったそれぞれ、T/C=-50および-37。L3.3膵臓異種移植片において、1日のエルロチニブ50mg/kgとMOR1070320mg/kgの組合せは、腫瘍静止状態をもたらしたT/C=3、図15B参照。両方のモデルにおいて、2つの薬物の組合せは、いずれかの薬物単独よりも有意により有効であり、したがって、本発明者らが先にインビトロで見出したErbB-標的化薬剤とHER3-標的化抗体を組み合わせることの利益をサポートした。要約すれば、HER3の不活性な立体構造を安定化する抗体のファミリーのユニークな能力は、HER3がリガンド依存性または非依存性のいずれかで活性化されるモデルにおいて、有意なインビボ効力をもたらす。さらに、該抗体ファミリーによるHER3阻害は、多種多様の標的化治療と組み合わせて有益なようである。参考文献の取り込み特許、特許出願、文書、テキストブックなどを含む本明細書に引用される全ての文献、およびそれらに引用される文献は、それらが引用されたいない限り、それら全体において出典明示により本明細書に包含させる。均等前記明細書は、当業者が本発明を実施することが可能であるために十分であると考えられる。前記および実施例は、本発明の特定の好ましい態様を列挙しており、本発明者らによる考慮された最も良い形式を記載している。しかしながら、たとえ、前記明細書において文章で詳細であろうとも、本発明は多数の方法において実施され得、本発明は特許請求の範囲およびそれらのあらゆる同等物にしたがって解釈されるべきであると解される。"