"サンプル中の抗薬物抗体ADAを免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、aサンプル中の抗原の存在を確認すること;b存在するとき、該サンプル中の該抗原を中和すること;およびc該サンプル中の該ADAの存在または量を免疫検出することを含む、方法。治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体は標的抗原に対するものであり、該方法は、該患者由来のサンプル中で、-該治療抗体、-該抗原、および-該治療抗体に対する抗薬物抗体;の存在または量を決定し、患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは該処置に対する該応答性を示す、方法。該決定が、免疫測定法、好ましくはELISAまたは免疫捕獲により行われる、請求項2に記載の方法。該抗原がTNFαである、請求項1から3のいずれかに記載の方法。薬物が、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブおよびセルトリズマブペゴールから選択される抗-TNFα抗体である、請求項4に記載の方法。患者が自己免疫性または炎症性疾患を有する、請求項2から5のいずれかに記載の方法。該患者由来のサンプル中で、C反応性タンパク質CRPまたは赤血球沈降速度ESRの存在または量を決定することをさらに含む、請求項2から6のいずれかに記載の方法。患者の処置をモニターまたは調整するための、請求項2から7のいずれかに記載の方法。サンプルが体液サンプル、好ましくは血清または血漿サンプルである、請求項1から8のいずれかに記載の方法。抗-TNAアルファ処置を受けている患者をモニターするための請求項8に記載の方法であって、該方法は、該患者由来のサンプル中で、-該治療抗体、-該抗原、および-該治療抗体に対する抗薬物抗体;の存在または量を決定し、患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは、該患者が該処置に対して応答するか否かを示し、それにより、処置の調整を可能にする方法。TNFアルファレベルが10pg/ml未満であり、治療抗体レベルが1μg/mlを越えており、ADAレベルが50ng/ml未満であるとき、患者が応答性であり、該処置が持続または減少さえされるべきである、請求項10に記載の方法。不活性なTNFアルファのレベルが検出されるときの、前記請求項のいずれかに記載の方法。不活性なTNFアルファのレベルが10pg/mlを越えるとき、患者は該処置に対して非応答性である、請求項12に記載の方法。治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体はTNFアルファに対するものであり、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なTNFアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性が低いまたは低下していることを示すことを含む、方法。抗-TNFアルファ処置を受けている患者をモニターするための方法であって、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なTNFアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性を示すことを含む、方法。サンプル中で、-標的抗原に対する治療抗体、-該抗原、および-該治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量を検出するための試薬を含むキット。発明の詳細な説明本発明は、ADAを検出するための、および治療抗体処置を受けている患者をモニターするための組成物、キットおよび方法に関する。本発明は、信頼性のあるデータおよび情報を提供する改善されたADA検出方法を開示する。本発明者らは、サンプル中に存在する任意の抗原を中和するサンプルの前処理が、信頼性のあるADA評価のために必須であることを示した。本発明者らはまた、対象由来のサンプル中での3つのパラメーターADA、抗原、薬物の同時決定が、処置に対する患者の発展および応答の予測プロフィールを提供することを証明した。したがって、本発明は、治療抗体処置を受けている患者をモニタリングする効率的な方法を提供し、処置レジメンの適当な、および効率的な調整を可能にする。本発明は、以下の定義を参照することにより、よく理解される:定義本発明において治療抗体なる用語は、活性剤として対象に投与することができるあらゆる抗体を示す。このような治療抗体の特定の例は、炎症性疾患、例えば、リウマチ性関節炎または骨関節症の処置において使用される抗体である。これらは、具体的には、抗-TNFα抗体を含む。治療抗体なる用語はまた、標的抗原に選択的に結合する抗体誘導体または抗原特異的リガンド分子、例えば、抗体Fabフラグメントまたは抗体Fcフラグメント、合成受容体、可溶性受容体などを含む。ADAまたは抗薬物抗体なる用語は、対象において治療抗体に結合する抗体を示す。ADAは、可変領域または定常領域を含む治療抗体における種々のエピトープに結合し得る。本明細書において使用されるとき、対象または患者なる用語は、あらゆる哺乳動物対象または患者、好ましくはヒト対象または患者を示す。本明細書において使用されるとき、組合せ決定なる用語は、特定のマーカーを、同時に、または連続してのいずれかでサンプル中で評価することを示す。同時評価は必要ではないが、好ましく、より便利である。サンプルなる用語は、抗体を含み得るあらゆるサンプルを示す。該用語は、好ましくは、生物学的液体、例えば、血清、血漿もしくは全血液、またはそれらの誘導体例えば、生物学的液体の希釈、前処理、濃縮、溶解などから得られるものを示す。サンプルは、好ましくは、血漿、血液もしくは血清サンプルまたはそれらの希釈物である。ADA決定本発明は、サンプル中でADAを決定するための改善された方法に関する。この本発明の局面は、とりわけ、抗原それ自体がサンプル中でADAの定量決定に影響するということを見出したことから生じる。実験のセクションに示されるとおり、試験サンプル中で抗原の存在下で、ADAの測定される量は、実質的に過大評価され、該試験を役に立たない、信頼性のないものにする。本発明は、最初に、サンプル中で抗原を中和することにより、信頼性のある測定を得ることができることを示す。本発明は、したがって、サンプル中のインビトロ抗薬物抗体ADAを免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、aサンプル中の抗原の存在を確認すること;b存在するとき、該サンプル中の該抗原を中和すること;およびc該サンプル中の該ADAの存在または量を免疫検出することを含む、方法に関する。本発明はまた、サンプル中の抗薬物抗体ADAを免疫検出するための方法であって、該薬物は標的抗原に対する治療抗体であり、該方法は、a存在し得る該抗原を中和するために、サンプルを処理すること;およびb該サンプル中の該ADAの存在または量を免疫検出することを含む、方法に関する。抗原を中和する工程は、異なる技術により行うことができる。好ましくは、抗原は、サンプルの酸処理一般的に、後に酸の中和により、サンプル中の抗原を枯渇または捕獲することにより、または免疫中和により中和される。酸処理について、サンプルは、好ましくは、pHを4以下、さらに好ましくは約2.5から3.5に含まれる範囲に低下するように処理される。これは、反応前に、pHを上記好ましい範囲に低下するために適当な条件下例えば、濃度および強度で、酸溶液をサンプルに加えることにより成し遂げられ得る。適当な酸の例は、カルボン酸、例えば、酢酸、塩酸または硫酸を含む。好ましくは、酸処理後、サンプルのpHは、ADAを検出する前に、少なくとも部分的に中和される。該中和は、塩基性溶液をサンプルに加えることにより得ることができる。したがって、酸処理は、一般的に、-反応前に、酸溶液をサンプルに加え、pHを約4より下に低下させること;-室温で酸性サンプルをインキュベートすること;および-反応前に、塩基性溶液、例えば、TRISバッファーまたはリン酸バッファーまたは炭酸バッファーまたはホウ酸バッファーを酸性サンプルに加え、酸を中和し、pHを4より上、一般的に5から9、さらに一般的に6から8に回復させることを含む。抗原はまた、任意の適当な親和性試薬を使用する捕獲または枯渇により中和され得る。一般的に、サンプルを、抗原に対して特異的な結合試薬でコーティングされた支持体または該試薬を含む支持体と接触させる。通過または接触時に、抗原は、支持体により固定または保持され、回収されたか、または得られたサンプルには、実質的に遊離抗原が全くない。サンプルは、抗原に対して特異的な抗体でコーティングされたカラムを介して処理され得る。あるいは、例えば、抗体でコーティングされたビーズをサンプルに加え、所望により次に媒体から分離されるか、または取り出され得る。免疫中和は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体により行われ得る。好ましい態様において、抗原は、酸処理により中和される。ADAの免疫検出は、限定はしないが、ELISA、免疫捕獲、マイクロアレイタンパク質チップ、フローサイトメトリー例えば、Fidisまたはマルチプレックスドットを含む免疫アッセイの種々の型またはプラットフォームにより行うことができる。好ましい態様において、ADAは、ELISAまたは免疫捕獲により免疫検出される。このような方法において、捕獲試薬は支持体上に固定され、試験サンプルは支持体上に置かれ、サンプルの支持体およびADA間の免疫複合体の形成は、存在するとき、トレース試薬を使用して測定される。一般的に、ADAを決定するために、コーティングされた、または固定された捕獲試薬は、薬物それ自体すなわち、治療抗体である。トレース試薬は、任意の抗-ADAまたはADA特異的試薬、例えば、抗体例えば、ヤギまたはウサギ抗-ヒトIg抗体、または薬物の再開であり得る。トレース試薬は、それ自体標識されているか、または検出可能な暴露薬剤ストレプトアビジン/ビオチン;ペルオキシダーゼ;酵素標識、発光標識などを介してのいずれかであり得る。特定の態様において、捕獲試薬は薬物それ自体であり、トレース試薬は、標識化ストレプトアビジンのインキュベーション時に検出することができるビオチン化薬物である図1参照。捕獲試薬は、当分野でそれ自体既知の種々の技術、例えば、限定はしないが、吸着、物理的結合または化学結合により支持体上に固定され得る。化学結合は、例えば、N-末端および/もしくは外側のアミノ基を介して、および/または固定される試薬例えば、薬物または抗体のフェノール官能基または糖アルコール基を介して、成し遂げられ得る。支持体は、任意の適当なデバイス、例えば、プレート例えば、マルチウェル滴定プレート、スライド、皿、チューブ、カラムなどであり得る。支持体はまた、ビーズで作られていてもよい。別の態様において、反応は溶液中で行われる。この態様において、試薬は支持体上に固定されず、溶液中に直接混合される。実験のセクションにおいて説明されるとおり、本発明により処理されるサンプル中で測定されるADAのレベルは、信頼性があり、安定であるが、抗原を中和する前処理なしで得られる値は不正確であり、信頼性がない図2参照。本発明は、特に、対象において抗-TNF薬物に対するADAの存在を評価するために適している。よりさらに具体的には、本発明は、特に、限定はしないが、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブおよびセルトリズマブペゴールを含む、抗-TNFα治療抗体に対するADAを検出するために適している。患者モニタリング抗薬物抗体ADAは、治療抗体の効果を減少、低下または中和する。したがって、対象由来のサンプル中のこれらのADAの検出は、処置の過程にわたって患者をモニタリングする方法ならびに治療を改善する方法を示す。ADA力価が増加するとき、薬物の治療効果が減少または中和されることを予期することができる。このような状況において、次に、処置プロトコールを、例えば、異なる薬物を使用するように変化させることが推奨される。特定の局面において、したがって、本発明は、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、上記方法を使用して、該患者由来のサンプル中で、該治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量を決定することを含み;サンプル中のADAの存在または増加が対象の応答性の喪失を示す、方法に関する。別の局面において、本発明は、治療抗体処置を受けている患者をモニターするための方法であって、上記方法を使用して、該患者由来のサンプル中で、該治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量を決定することを含み;参照値または処置の初期段階で決定される値と比較してサンプル中のADAの存在または増加が処置に対する対象の応答性の喪失を示す、方法に関する。対象をモニターするため、または対象の応答性を評価するために、本発明において、ADAだけでなく、サンプル中の薬物および抗原もまた測定することがさらにより好ましい。実際に、本出願は、このような組合せ決定が、対象の状態の予測指標を提供することを示す。したがって、本発明はまた、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体が標的抗原に対するものであり、該方法は、該患者由来のサンプル中で、-該治療抗体、-該抗原、および-該治療抗体に対する抗薬物抗体;の存在または量を決定し、患者プロフィールを得ることを含み、該患者プロフィールは該処置に対する該応答性を示す、方法に関する。好ましくは、本発明において記載されているとおり、ADA決定は、抗原を中和するサンプルの処理後に行うべきである。したがって、上記方法において、抗原がサンプル中で検出されたとき、該ADAの存在を決定するさらなる工程を、抗原を中和するためのサンプルの処理後に、行う。ADAレベルおよび/または抗原のレベルが、参照値を越えて、または処置の初期段階で対象における決定される値と比較して増加しているとき;ならびに、治療抗体レベルが、参照値を越えて、または処置の初期段階で対象における決定される値と比較して減少しているとき、患者がもはや該処置に対してよく応答しておらず、該処置を適応させるべきであることを推測することができる。モニタリングスコアはまた、以下のとおりに、処置がまだ患者に適応しているか否かを該測定値から直接的に推測するために使用され得る。該方法は、好ましくは患者の処置の過程にわたって異なる時点で行わ、その結果、患者の応答性または処置の有効性をモニタリングでき、適宜、該処置は調整され得る。特定の態様において、検出は、治療抗体のそれぞれの投与の前に行うことができる。あるいは、検出は、1月間隔で3回行われ得る。長期間例えば、9ヶ月またはそれ以上治療抗体処置を受けている対象において、本発明の単一検出は、患者を応答者または非応答者として見なすために十分である。図5は、プロフィールがどのように患者の応答性を示すか、どの処置が非有効性とみなされ、変更されるべきであるかを示す。図5から決定することができるとおり、3つの主な状況は、区別され得る:T0:対象は病気であり、処置されていない。T1-T2:対象は処置され、処置に対して応答する。本発明者らにより試験されたサンプルは、ほとんどの処置された患者がこのカテゴリー範囲内に入ることを示す。T3について:対象は処置されるが、応答しない。治療抗体は、ADAにより中和される。処置は効率的ではなく、変更されるべきである。治療抗体、抗原およびADAは、あらゆる免疫検出方法を含む異なる技術、、例えば、ADA決定について上記されている、ELISA、免疫捕獲、マイクロアレイタンパク質チップ、フローサイトメトリー例えば、Fidisまたはマルチプレックスドットにより測定することができる。一般的に、全3つのマーカーは、同時に例えば、同じデバイスで試験される。しかしながら、決定は、別々に、または連続して行ってもよい。本発明は、特に、抗-TNFα処置を受けている患者をモニターするために適している。このような患者は、一般的に、自己免疫性または炎症性疾患、例えば、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、乾癬などに罹患している。モニタリングは、処置有効性の定期的な評価を可能にし、処置を続行してもよいか、または適応させるべきであるか医師が決定することを可能にする。この点において、評価は、好ましくは、対象中のTNFα、ADAおよび抗-TNFα治療抗体のレベルを評価することにより行われる。得られる値は、定性または定量のいずれかであり得る。それらは、参照値または処置の初期段階で同じ患者に対して記録されたレベルと比較され得る。特定の態様において、該値は、患者の直接的モニタリングを可能にするスコア-表を使用して評価される。第1の工程において、患者由来のサンプルを上記のとおり試験して、3つのマーカー:TNFα、抗-TNFαおよびADAのレベルを定量する。第2の工程において、スコア-表を使用して、それぞれのパラメーターの比率をスコアと関連させる。次に、それぞれのパラメーターからのスコアの合計:モニタリングスコア=TNFスコア抗-TNFスコアADAスコアからなる全体的なモニタリングスコアを得る。次に、モニタリングスコアは、モニタリング基準と比較されまたは読み取られ、それにより、対象の状態を提供し得る。この点において、本発明者らは、上記マーカー値を評価するために適当なモニタリング基準を確立した。これらの基準を以下に、抗-TNF治療に関して、提供する。さらなるスコア基準は、実施例に記載されている:それぞれのパラメーターに対するスコア-表モニタリング基準:例として、インフリキシマブで処置されたリウマチ性関節炎患者由来の血清サンプルを、本発明によって試験する。TNFα、抗-TNFαおよびADAの比率は、それぞれ50pg/ml、<0,1μg/mlおよび6600ng/mlである。TNFαの比率は、2のスコアと関連する。抗-TNFの比率は、5のスコアと関連する。ADAの比率は、22のスコアと関連する。したがって、モニタリングスコアは29であり、患者に対する提案は、別の処置への変更である。実験のセクションは、抗-TNFアルファ治療を受けている患者由来の300以上のヒト血清サンプルにおいて、本発明者らにより行われた試験の結果を報告する。それらは、上記方法にしたがって、患者の状態を確実に決定することができ、非応答者状態に向かうそれらの進行を検出および予期することができることを示す。したがって、本発明は、初めて、患者モニターし、それらの処置を調整するための信頼性のある方法を提供する。さらなる応答マーカーさらなる好ましい態様において、本発明の方法は、上記の値またはスコアを測定または例えば、臨床記録から集められ得るさらなる患者データと組み合わせて、試験をさらに精密化することを含む。特定の態様において、したがって、本発明の方法は、サイトカイン、ホルモンおよび成長因子、リウマチ因子および特定の抗体から選択され得る1つまたはいくつかのさらなる抗原の存在または量を決定することをさらに含む。このようなさらなる因子の特定の好ましい例は、以下のものを含む:-サイトカインおよびケモカイン:IL1、IL6、IL8、IL10、ILK12、IL17、IL23、GM-CSF、IFNガンマ、ProMPP1および/またはProMPP3;-自己免疫性抗体:抗核抗体二本鎖DNAdsDNAに対するANA抗体-生物学的パラメーターおよび血液学的パラメーター:C反応性タンパク質CRP、RFリウマチ因子、血清アミロイドA、IgG、IgA、IgM、ヘモグロビン、赤血球沈降速度ESR、白血球および血小板数、CD19-B細胞の数、CD3_、CD4_、CD8_、CD4_,CD25_、および/またはCD8_、HLA-DR_T細胞の数-患者パラメーター:例えば、性別、VS、年齢またはDAS28。体重、-処置パラメーター:薬量学バイオマーカー濃度TNF、抗-TNFおよびADAは、定量免疫測定法を使用して測定され、臨床データセットからのさらなるパラメーターと組み合わせてモニタリングスコアを作成する。アルゴリズムは、異なる重みWnを使用して、処置有効性モニタリングスコアを評価する。得られるモニタリングスコアは、それぞれの試験結果が1から10の10進数であるように尺度付けられる。例として、モニタリングスコアのアルゴリズムは、以下のとおりである:モニタリングスコア=W1×{TNF}W2×{抗-TNF}W3×{ADA}W4×{CRP}W5×{ESR}。Wn:処置の影響に対するこれらのパラメーターの重要性による、それぞれのパラメーターに対する重みである。{TNF}:TNFのスコア因子。測定されるTNFの濃度による、モニタリングスコアに対するTNF影響。{抗-TNF}:抗-TNFのスコア因子。測定される抗-TNFの濃度による、モニタリングスコアに対する抗-TNF影響。抗-TNFのスコア因子のスコア因子は、薬量学依存である臨床データセットにおいて利用できる情報。{ADA}:ADAのスコア因子。測定されるADAの濃度による、モニタリングスコアに対するADA影響。{CRP}:CRPのスコア因子。臨床データセットにより提供されるC反応性タンパク質の濃度による、モニタリングスコアに対するCRP影響。{ESR}:ESRのスコア因子。臨床データセットにより提供される赤血球沈降速度による、モニタリングスコアに対するESR影響。沈降速度は年齢および性別依存である;臨床データセットにおける情報。モニタリングスコアは、全臨床データセットと共に使用され、処置の経過についてそれらの決定において医師を手助けすることを意図する。モニタリングスコアは、1から10で尺度付けられる数である。モニタリングスコアによって、処置有効性の解釈を、例えば、図6に示されるとおり、行うことができる。処置変更のマーカーとしての不活性なTNFアルファ本発明者らは、検出されるTNFアルファの生物学的活性が、処置に対して応答しない患者であることを決定した図5のエリアT3およびT4、参照、該活性は、TNFアルファサンプルへの暴露時に標的細胞溶解を評価することにより検出した。本発明者らの結果は、驚くべきことに、該TNFアルファが生物学的に不活性であることを示す。これらの結果は全く予期されておらず、抗-TNFアルファ処置を受けている患者が循環不活性なTNFアルファを有していることは報告されていない。本発明者らの結果は、不活性なTNFアルファレベルが抗-TNF処置に対する患者の応答の喪失と相関することをさらに示す。このような不活性なTNFアルファの存在は、興味深い。本発明者らは、TNFアルファが最初に抗-TNAアルファ治療抗体により捕捉され、次にADAが治療抗体分子に結合したとき放出されるという仮説を立てる。ADAから放出されるTNFアルファは、ADA結合により引き起こされる立体構造または構造変化の結果として、不活性であるまたは不活性化される。したがって、抗-TNF治療を受けている患者における不活性なTNFアルファの投与は、患者の応答性を決定する、および処置を調整する例えば、処置を別の治療抗体または処置の別のクラスに変更するための新規かつ非常に信頼性のある手段を示す。特定の態様において、したがって、本発明は、治療抗体処置に対する患者の応答性を検出するための方法であって、該治療抗体はTNFアルファに対するものであり、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なTNFアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性が低いまたは低下していることを示すことを含む、方法に関する。特定の態様において、本発明はまた、抗-TNFアルファ処置を受けている患者をモニターするための方法であって、該方法は該患者由来のサンプル中で、不活性なTNFアルファの存在または量を決定し、該存在または量は、該処置に対する該患者の応答性を示すことを含む、方法に関する。不活性なTNFアルファの出現は、対象が処置を逃れ始めている徴候である。このような不活性なTNFアルファのレベルの増加は、患者が別の処置へ変更すべきであることを示す。この文脈において、不活性なTNFアルファは、インビトロで標的細胞溶解を引き起こさないTNFアルファを示す。不活性なTNFアルファは、さらに具体的には、不活性化TNFアルファ、例えば、抗体不活性化TNFアルファを含む。上記態様において、該方法は、試験サンプル中でTNFアルファの生物学的活性を検出する工程をさらに含み得る。あるいは、または加えて、該方法は、不活性なTNFアルファ分子の構造を検出する工程を含み得る。好ましい態様において、上記方法はまた、患者プロフィールを得るために抗-TNFアルファ治療抗体および抗薬物抗体の存在または量の決定を含み、該患者プロフィールは該処置に対する応答性を示す。さらなる好ましい態様において、該方法は、上記さらなるパラメーターを検出することをさらに含む。本発明のさらなる目的は、-サンプル中で、治療抗体に対する抗薬物抗体の存在または量を検出するための1つまたはいくつかの試薬;-サンプル中で、該治療抗体の標的抗原を中和する1つまたはいくつかの試薬を含むキットである。好ましい態様において、本発明は、ヒト血清サンプル中のヒトTNFα、抗-TNFα薬物好ましくは、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブまたはセルトリズマブペゴールおよび対応するADAの組合せ定量決定のための酵素免疫測定法ELISAキットまたは方法に関する。該キットは、医師が患者血清中のこれらの3つのパラメーターの割合の漸進的変化をモニターすることを可能にする。本発明のさらなる局面および利点は、以下の実験のセクションに記載されているが、これは、説明のためのみと考えられるべきである。実施例実験のセクションにおいて、全ての用量は、標準に関して較正された量である。TNFの用量pg/mlは、国際標準を用いて決定する。薬物の用量μg/mlは、製薬会社により与えられる濃度値を用いて決定する。ADAの用量ng/mlは、標準としてウサギポリクローナル抗体を用いて決定する。ウサギoriginHylaを、抗-TNF免疫グロブリンのFabもしくはFab’2フラグメントまたはヒトP75TNF受容体で免疫化する。ADAヒト標準の定量化は、ビウレットの方法比色分析によるタンパク質の用量により得られる。実施例A-ADAを検出する方法薬物をポリスチレンマイクロタイタープレート上に被覆する。最初に、酸溶液、例えば、酢酸溶液をサンプルに加える。酸性サンプルを、室温で約5分インキュベートする。次に、塩基性溶液、例えば、TRIS溶液を酸性サンプルに加え、酸溶液を中和する。次に、サンプル希釈されているか、または希釈されていないを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化薬物を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化薬物と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-エタネルセプト抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗薬物抗体の量の定義を可能にする。試験の原理を図1に示す。該結果を図2に示す。該結果は、驚くべきことに、抗原がサンプル中に存在するとき、ADAの定量化が大幅に過大評価されることを示す。対照的に、酸処理による抗原の中和後、ADAの定量化は正確であり、信頼性がある。ADAの用量中の抗原の存在は、誤って陽性結果を引き起こし得るADAにおける誤った用量を含む。結果として、抗原におけるプラスの用量中で、Adaの正確な結果を得るために、中和後に第2の試験ADAを行う必要がある。実施例B-エタネルセプトで処置された患者をモニターするための方法およびキット該試験は、血清または血漿上で行うべきである。TNFαは溶液中で不安定であるので、血液採取直後のサンプルを使用することが好ましい。決定を即座に行わないとき、サンプルは冷凍すべきである。何らかの非特異的結合を回避するために、6か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過すべきである。1.TNFαの用量モノクローナル抗-TNFα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-TNFαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-TNFα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、TNFαの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、pg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのTNFαの量の定義を可能にする。2.エタネルセプトの用量TNFαをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-ヒトIgGビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-IgG抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、エタネルセプトの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、μg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのエタネルセプトの量の定義を可能にする。3.抗-エタネルセプトの用量エタネルセプトをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化エタネルセプトを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化エタネルセプトと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-エタネルセプト抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗-エタネルセプト抗体の量の定義を可能にする。4.結果処置の過程中、3つのパラメーターTNF、エタネルセプト、抗-エタネルセプトの割合の漸進的変化を、ヒト対象において本発明にしたがってモニタリングした。Rheumatoid患者患者1由来の血清サンプルを、エタネルセプトの第1の注入前に試験した。該結果は以下に示される:これらの結果は、TNFのレベルおよびエタネルセプトのレベルが処置の過程中に増加することを示す。実施例C-アダリムマブで処置された患者をモニターするための方法およびキット該試験は、血清または血漿上で行った。TNFαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、6か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。1.TNFαの用量モノクローナル抗-TNFα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-TNFαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-TNFα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、TNFαの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、pg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのTNFαの量の定義を可能にする。2.アダリムマブの用量TNFαをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-ヒトIgGビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-IgG抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、アダリムマブの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、μg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのアダリムマブの量の定義を可能にする。3.抗-アダリムマブの用量アダリムマブをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化アダリムマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化アダリムマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-アダリムマブ抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗-アダリムマブ抗体の量の定義を可能にする。4.結果処置の過程中、3つのパラメーターTNF、アダリムマブ、抗-アダリムマブの割合の漸進的変化を、本発明を使用してモニタリングした。リウマチ性関節炎患者患者2由来の血清サンプルを、アダリムマブW0の第1の注入前、およびアダリムマブW6、W21、W30、W39の後の注入前に試験した。上記表は、アダリムマブのレベルが処置の過程中に該患者において増加し、約17μg/mlのレベルに達することを示す。TNFのレベルおよび抗-アダリムマブのレベルは増加しなかった。実施例D-インフリキシマブで処置された患者をモニターするための方法およびキット該試験は、血清または血漿上で行った。TNFαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、6か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。1.TNFαの用量モノクローナル抗-TNFα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-TNFαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-TNFα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、TNFαの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、pg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのTNFαの量の定義を可能にする。2.インフリキシマブの用量TNFαをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-ヒトIgGビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-IgG抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、μg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのインフリキシマブの量の定義を可能にする。3.抗-インフリキシマブの用量インフリキシマブをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化インフリキシマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化インフリキシマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-インフリキシマブ抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗-インフリキシマブ抗体の量の定義を可能にする。4.結果処置の過程中、3つのパラメーターTNF、インフリキシマブ、抗-インフリキシマブの割合の漸進的変化を、ヒト対象においてモニタリングした。第1のリウマチ性関節炎患者患者3において、血清サンプルは、インフリキシマブW2の第2の注入前およびインフリキシマブW6、W14、W28、W42、W56の後の注入前に試験した。該結果は、抗-インフリキシマブのレベルが、処置の過程中に増加し、高レベル>100ng/mlに達することを示す。TNFのレベルおよび抗-インフリキシマブのレベルは検出不可能であった。別のRheumatoid患者患者4において、血清サンプルは、インフリキシマブW2の第2の注入前およびインフリキシマブW5の第3の注入前に試験した。該結果は、抗-インフリキシマブのレベルが、処置の過程中に増加し、高レベル>100ng/mlに達することを示す。TNFのレベルは50pg/mlに増加し、インフリキシマブのレベルは0.1μg/mlまで下がる。実施例E-セルトリズマブペゴールで処置された患者をモニターするための方法およびキット該試験は、血清または血漿上で行った。TNFαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、6か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。1.TNFαの用量モノクローナル抗-TNFα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-TNFαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-TNFα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、TNFαの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、pg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのTNFαの量の定義を可能にする。2.セルトリズマブペゴールの用量TNFαをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化抗-PEG抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-PEG抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、μg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのセルトリズマブペゴールの量を定義させる3.抗-セルトリズマブペゴールの用量セルトリズマブペゴールをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化セルトリズマブペゴールを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化セルトリズマブペゴールと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-インフリキシマブ抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗-セルトリズマブペゴール抗体の量の定義を可能にする。4.抗-セルトリズマブペゴールの用量別法セルトリズマブペゴールをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化抗-ヒトIgGおよびビオチン化抗-ヒトIgMを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-ヒトIgGおよび抗-ヒトIgMと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-インフリキシマブ抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗-セルトリズマブペゴール抗体の量の定義を可能にする。実施例F-ゴリムマブで処置される患者をモニターするための方法およびキット該試験は、血清または血漿上で行った。TNFαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、6か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。1.TNFαの用量モノクローナル抗-TNFα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-TNFαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-TNFα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、TNFαの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、pg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのTNFαの量の定義を可能にする。2.ゴリムマブの用量TNFαをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-ヒトIgGビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-IgG抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、μg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのゴリムマブの量の定義を可能にする。3.抗-ゴリムマブの用量インフリキシマブをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化ゴリムマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化ゴリムマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-インフリキシマブ抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗-ゴリムマブ抗体の量の定義を可能にする。実施例G:TNFアルファの生物学的活性TNF活性は、L929細胞毒性アッセイBloquelCらHumGeneTher15189201を使用することにより評価した。TNF血清サンプルの連続希釈物をL929細胞とインキュベートし、生存細胞数をMTTダイイングアッセイにより決定した。該結果は、処置患者由来のTNFアルファが不活性である、すなわち、L929細胞の実質的な溶解を引き起こさないことを示す。実施例H-300人を越えるヒト患者のコホートにおける方法の検証該試験は、血清または血漿上で行った。TNFαは溶液中で不安定であるので、サンプルは、血液採取直後に使用するか、または冷凍した。何らかの非特異的結合を回避するために、6か月以上冷凍されたか、または濁っているサンプルは、遠心し、濾過した。それぞれの患者において、処置中の異なる時点で検出を行った。1.TNFαの用量モノクローナル抗-TNFα抗体をポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-TNFαビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-TNFα抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、TNFαの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、pg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのTNFαの量の定義を可能にする。2.インフリキシマブの用量TNFαをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。抗-ヒトIgGビオチン化抗体を加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化抗-IgG抗体と形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、インフリキシマブの量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、μg/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルのインフリキシマブの量の定義を可能にする。3.抗-インフリキシマブの用量インフリキシマブをポリスチレンマイクロタイタープレート8ウェルの4片上に被覆する。最初に、希釈サンプルを抗体被覆ウェルに加え、結合させる。インキュベーション後、非結合タンパク質を洗浄により除去する。ビオチン化インフリキシマブを加える。インキュベーション後、非結合抗体を洗浄により除去する。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンを加える。該ストレプトアビジンは、ビオチン化インフリキシマブと形成される複合体に結合する。インキュベーション後、ウェルを再び洗浄し、あらゆる過剰の抱合体を除去する。結合酵素は、基質TMB3,3’,5,5’テトラメチルベンジジンの添加により示される。色強度は、抗-インフリキシマブ抗体の量に比例する。H2SO40.25Mを添加して、酵素反応を停止させる。H2SO40.25Mによる該反応停止後、光学濃度は、450nmで分光光度計により読む。較正範囲は、ng/mLにおいて示されるそれぞれの患者サンプルの抗-インフリキシマブ抗体の量の定義を可能にする。4.さらなるパラメーター-[CRP]:CRP濃度、mg/Lにて示される-ESR:赤血球沈降速度、mm/hにて示される-薬量学:薬量学が正常であるか、薬量学が正常薬量学よりも高いかを知るため-年齢、性別、体重。5.スコア因子:{TNF}:測定されたTNFの濃度によるTNFのスコア因子。例として:10pg/mlより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は1である。10から100pg/mlの測定されたサンプルに対するスコア因子は4である。100pg/mlより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は10である。{抗-TNF}:測定された抗-TNFの濃度による抗-TNFのスコア因子。正常薬量学を有する患者において:0.1μg/mlより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は10である。0.1から0.5μg/mlの測定されたサンプルに対するスコア因子は6である。0.5から1.8μg/mlの測定されたサンプルに対するスコア因子は4である。1.8μg/mlより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は1である。増強させた薬量学を有する患者において:0.1μg/mlより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は12.5である。0.1から0.5μg/mlの測定されたサンプルに対するスコア因子は10である。0.5から1.8μg/mlの測定されたサンプルに対するスコア因子は7.5である。1.8μg/mlより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は1.25である。{ADA}:測定されたADAの濃度によるADAのスコア因子10ng/mlより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は1である。10から200ng/mlの測定されたサンプルに対するスコア因子は5である。200ng/mlより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は10である。{CRP}:臨床データセットにより提供されるC反応性タンパク質の濃度によるCRPのスコア因子6mg/Lより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は1である。6から50mg/Lの測定されたサンプルに対するスコア因子は4である。50mg/Lより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は10である。{ESR}:臨床データセットにより提供される赤血球沈降速度によるESRのスコア因子。沈降速度は年齢および性別に依存する。15mm/hより小さい測定されたサンプルに対するスコア因子は1である。15から20mm/hの測定されたサンプルに対するスコア因子は4である。20mm/hより大きい測定されたサンプルに対するスコア因子は10である。6.重みそれぞれのパラメーターからの全てのスコア因子は、処置に対するこれらのパラメーターの影響による重み因子Wnと関連する。例として:TNFの重み因子は15である。抗-TNFの重み因子は30である。ADAの重み因子は35である。CRPの重み因子は10である。ESRの重み因子は10である。7.結果:7.1.インフリキシマブで処置されたリウマチ性関節炎患者の分析本発明者らは、処置の過程中の異なる時点で、インフリキシマブで処置されたリウマチ性関節炎患者由来の血清サンプルを試験した。以下の表Aはそれぞれの患者について示す:-TNF、抗-TNFインフリキシマブおよびADA抗-インフリキシマブの測定されるレベル-臨床データセット:CRP、ESRおよび薬量学からの情報-それぞれのパラメーターに対するスコア因子-それぞれのパラメーターに対する重み因子-モニタリングスコアの結果-全臨床データセットによる処置に対する患者応答:応答R、非応答または非完全応答NR、処置開始時T0それぞれの患者に対する一連の結果は、処置中の異なる時点での測定値を示す。表A上記表Aに示される結果は、i低い、または検出不可能なTNFアルファ、ii検出可能な抗-TNFレベル、およびiii本質的に低い、または存在しないADAレベルを組合せた患者は、処置に対して応答しないことを示す。上記スコアおよび重み因子を使用して、3より小さいスコアを有する患者は応答者に分類することができる。このような患者において、該処置を続けてもよい用量は調整され得るが。5より大きいスコア値を有する全ての患者は、逃れる人、すなわち、抗-TNF処置が有効であったが、非応答者になっている患者に分類されるべきである。これらの患者において、処置は、関節の不可逆性分解を回避するために、迅速に変更されるべきである。3-5の患者は、注意深くモニタリングされるべきである。これらの患者は、次第に非応答者になっていく。処置は調整されるべきであり例えば、投与の用量またはタイミング、可能な変更は、進行に依存して考慮されるべきである。3より小さいスコアを有する1人の患者のみ患者89が非応答者であった。事実、該患者は、一次非応答者、すなわち、抗-TNF処置が有効でなかった患者である。このような患者は、本発明を使用して容易に同定することができる:該患者は応答者と同様のスコアを有するが、病気の患者の全臨床兆候を有する。これらの処置は変更されるべきである。7.2.インフリキシマブで処置された炎症性疾患を有する患者の分析本発明者らはまた、炎症性疾患強直性脊椎炎、クローン病、乾癬などの血清サンプルを試験した。患者をインフリキシマブで処置した。サンプルを処置の過程中の異なる時点で分析した。以下の表Bはそれぞれの患者について示す:-TNF、抗-TNFインフリキシマブおよびADA抗-インフリキシマブの測定されるレベル-臨床データセット:CRP、ESRおよび薬量学からの情報-それぞれのパラメーターに対するスコア因子-それぞれのパラメーターに対する重み因子-モニタリングスコアの結果-全臨床データセットによる処置に対する患者応答:応答R、非応答または非完全応答NR、処置開始時T0それぞれの患者に対する一連の結果は、処置中の異なる時点での測定値を示す。表B表Bに示される結果は、i低い、または検出不可能なTNFアルファ、ii検出可能な抗-TNFレベル、およびiii本質的に低い、または存在しないADAレベルを組合せた患者は、処置に対して応答しないことを示す。上記スコアおよび重み因子を使用して、3より小さいスコアを有する患者は応答者に分類することができる。該結果は、以下の表に要約される。患者24、32、40および80参照。このような一次非応答者において、TNFが疾患活性における小さな病因的役割を果たすことが推測される。本発明者らの結果は、応答者および非応答者を区別することができることを示す。本発明者らの結果は、患者の応答者から非応答者状態への進行が予想でき、それにより、実質的に改善された処置レジメンの実施を可能にすることをさらに示す。"