チーズ酵素分解物を有効成分とする、ガストロカイン産生促進剤。ガストロカイン産生促進作用を奏する有効量のチーズ酵素分解物、および担体を含み、経口投与または経管投与によりガストロカインの産生を促進するための組成物。前記チーズ酵素分解物が、1種又は2種以上のプロテアーゼ又はペプチダーゼによる酵素分解物である、請求項1に記載のガストロカイン産生促進剤又は請求項2に記載の組成物。前記チーズ酵素分解物が、Bacillusstearothermophilus由来のプロテアーゼ、Aspergillusoryzae由来のペプチダーゼ、Aspergillusniger由来のプロテアーゼの何れか1種若しくは2種以上による酵素分解物である請求項1又は3に記載のガストロカイン産生促進剤又は請求項2又は3に記載の組成物。ガストロカインの投与は組織、特に消化管の損傷に対する修復に有効であると考えられるが、経口摂取時における胃での分解や製造工程における熱処理によりガストロカインの活性が低下するという問題が予想される。従って、ガストロカインの経口投与ではなく、ガストロカインの産生を組織において促進させることができれば、上記問題点が解決され、より有効に利用されることが期待される。また、大腸や皮膚等の組織のように、従来ガストロカインの産生レベルが低いとされていた組織においても、ガストロカインの産生を高めることができれば、胃に限定されずに各種組織の損傷を治療/または予防することが期待される。しかしながら、これまでに生体におけるガストロカインの産生を促進する物質の報告はなされていない。本願発明者らはEMCについてさらに研究を進めたところ、EMCがガストロカインの産生を促進する効果を有することを見いだし、本発明を完成させた。本発明のガストロカイン産生促進剤はチーズ酵素分解物を有効成分とするものである。すなわち、本発明は、1チーズ酵素分解物を有効成分とする、ガストロカイン産生促進剤、2ガストロカイン産生促進作用を奏する有効量のチーズ酵素分解物、および担体を含み、経口投与または経管投与によりガストロカインの産生を促進するための組成物、3前記チーズ酵素分解物が、1種又は2種以上のプロテアーゼ又はペプチダーゼによる酵素分解物である、前記1に記載のガストロカイン産生促進剤又前記2に記載の組成物、4前記チーズ酵素分解物が、Bacillusstearothermophilus由来のプロテアーゼ、Aspergillusoryzae由来のペプチダーゼ、Aspergillusniger由来のプロテアーゼの何れか1種若しくは2種以上による酵素分解物である前記1又は3に記載のガストロカイン産生促進剤又は前記2又は3に記載の組成物、からなる。本発明のガストロカイン産生促進剤等は、EMCを有効成分とするものであって、ガストロカイン1、ガストロカイン2の遺伝子発現を高め、これら物質の生産を促進する。ガストロカイン産生促進剤の有効成分であるEMCはチーズの酵素分解物であり、食品として日常的に摂取可能であり、胃における活性低下も少ない。また、大腸における遺伝子発現の昂揚は、EMCの直接作用ではなく、消化管からの吸収及び全身循環を介した間接作用と考えられるので、大腸組織の修復のみならず皮膚潰瘍や褥瘡等の予防や治療にも有効である。このように、本発明によると、損傷された胃組織の修復のみならず、大腸その他皮膚など各組織の損傷に対する治療剤や予防剤として安全に使用しうる新規組成物が提供される。本発明のガストロカイン産生促進剤は、チーズ酵素分解物を有効成分とする。チーズ酵素分解物EMCは、グリーンチーズや熟成後あるいは熟成途中のナチュラルチーズ、プロセスチーズにリパーゼや酸性及び中性プロテアーゼなどの微生物、動物由来の各種酵素を添加して熟成を促進させたものである。EMCは、例えば、特許文献5などに記載された公知の製造法などに従って製造され得る。EMCの原料となるチーズは、前記のとおり、グリーンチーズをはじめとする種々のチーズであり、ナチュラルチーズやプロセスチーズ、チーズ様食品、チーズフード、及びこれらに属しないチーズ類と称されるチーズであり得る。また、チーズの原料も特に限定されるものでなく、牛の乳はもちろんのこと、羊、山羊などの各種哺乳動物の乳の他ヒトの乳であり得る。また、その製造方法も限定されない。未熟成のチーズはもちろんのこと、乳酸菌やカビなどの各種微生物によって発酵又は熟成させたチーズなど種々のチーズが利用できる。チーズを分解する酵素として、リパーゼやプロテアーゼ、ペプチダーゼなどチーズ中の脂肪やタンパク質を分解できる酵素のうち1つあるいは複数の酵素が用いられる。酵素の種類は問われない。リパーゼとして、胃液に存在するトリアシルグリセロールリパーゼやプレガストリックエステラーゼレンコニュージーランド社製など、ヒトなどの哺乳動物の体液やその組織、昆虫、植物、細菌などから分離された各種のリパーゼの1種類又は複数種類が使用される。プロテアーゼ又はペプチダーゼとして、消化管内に分泌されるペプシンやトリプシン、キモトリプシン、など、ヒトなど哺乳動物の体液やその組織、昆虫、植物、細菌などから分離された各種のプロテアーゼ又はペプチダーゼの1種又は複数種が使用される。また、リパーゼ単独で処理することよりもプロテアーゼ又はペプチダーゼ単独で処理することが好ましい。リパーゼとプロテアーゼ又はペプチダーゼの双方により処理することも好ましい。プロテアーゼやペプチダーゼには、タンパク質の途中からペプチド結合を切断するエンド型のプロテアーゼペプチダーゼ又はC末端又はN末端側から1つずつアミノ酸を切り離すエキソ型プロテアーゼペプチダーゼがある。例えば、食品グレードのプロテアーゼ又はペプチダーゼとして、エンド型プロテアーゼ、エキソ型プロテアーゼ、エンド型/エキソ型プロテアーゼ複合酵素、エキソ型ペプチダーゼ/エンド型プロテアーゼ複合酵素、プロテアーゼ/ペプチダーゼ複合酵素、及びペプチダーゼ等が挙げられる。エンド型プロテアーゼとして、例えば、キモシンEC34234、Maxiren、modifiedyeastKluyveromyceslactis由来、GISTBROCADESNV、AlcalaseRBacilluslicheniformis由来、ノボ社、エスペラーゼBlentus由来、ノボ社、ニューラーゼRBacillussubtilis由来、ノボ社、モルシンFAspergillussaitoi由来、キッコーマン社、プロタメックスバクテリア由来、ノボ社、PTN60Sブタ膵臓トリプシン、ノボ社、プロテアーゼSアマノGBacillusstearothermophilus由来、天野エンザイムなどが、エンド型/エキソ型プロテアーゼ複合酵素として、ニューラーゼAAspergillusniger由来、天野エンザイム、エキソ型ペプチダーゼ/エンド型プロテアーゼ複合酵素としては、例えばフレーバーザイムAspergillusoryzae由来、ノボ社などが挙げられる。他に、エンド型プロテアーゼとして、例えば、トリプシンCASNo9002077、EC34214、ウシ膵臓由来、Product、キモトリプシンノボ社、ベーリンガー社、プロテアーゼNアマノGBacillussubtilis由来;天野エンザイム、ビオプラーゼBacillussubtilis由来、ナガセ産業、パパインW-40天野エンザイム、エキソ型プロテアーゼとして、膵カルボキシペプチダーゼ、小腸刷子縁のアミノペプチダーゼなども挙げられる。また、プロテアーゼ/ペプチダーゼ複合酵素として、例えばプロテアーゼAアマノGAspergillusoryzae由来、天野エンザイムが、ペプチダーゼとして、例えばウマミザイムGAspergillusoryzae由来、CASNo9001610;天野エンザイムが挙げられる。プロテアーゼ又はペプチダーゼの種類により至適pHや温度、タンパク質分解能、アミノ酸の切断部位が異なる。このことから、プロテアーゼ又はペプチダーゼで分解する場合には、エンド型やエキソ型などの分解タイプ、タンパク質分解能、至適pHや至適温度等の異なるプロテアーゼ又はペプチダーゼを2種以上、好ましくは3種以上組み合わせるのが好ましい。チーズの分解に使用できる酵素は上記に記載された商品名、製造元に限定されない。本発明において好適に用いられるプロテアーゼ又はペプチダーゼとして、Bacillusstearothermophilus由来のプロテアーゼ、例えばプロテアーゼSアマノG天野エンザイム、Aspergillusoryzae由来のペプチダーゼ、例えばウマミザイムG同社製、Aspergillusniger由来のプロテアーゼ、例えばニューラーゼA同社製である。これらのうち1種の酵素あるいは2種以上の酵素を用いるのが好ましく、とりわけ、前述の3種のプロテアーゼを併用するのが望ましい。酵素による分解は、原料とするチーズを水又は温湯に分散又は溶解し、これに酵素を添加して酵素反応酵素分解を行わせることにより実施される。酵素による反応条件は、酵素が失活しない限り特に制限を受けない。分解を促進する観点では、用いる酵素の至適条件が好ましいが、適宜、処理するチーズや目標とするEMCの作用効果に応じて、反応時のpHや反応温度、酵素や基質チーズの濃度、反応時間が調整される。酵素分解開始時のpHは、例えば30~75であり、好ましくは45~70であり得る。反応時間は、例えば05~300時間であり、好ましくは1~20時間であり、さらに好ましくは1~5時間であり得る。反応温度は、例えば20~57°Cであり、好ましくは30~52°Cであり、さらに好ましくは40~50°Cであり得る。また、2種以上の酵素を用いて分解する場合、全ての酵素を一度に使用してチーズを分解してもよいし、酵素を順次使用してチーズを分解してもよい。プロテアーゼによって分解する場合には乳酸菌発酵を伴うことができる。乳酸菌としては、ラクトコッカス属乳酸菌を好ましく用いることができる。ラクトコッカス属乳酸菌に属する細菌種として、例えば、ラクトコッカスガルビエLactococcusgarvieae、ラクトコッカスラクティスLactococcuslactis、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズラクティスLactococcuslactissubsplactis、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズクレモリスLactococcuslactissubspcremoris、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズホルディニアLactococcuslactissubsphordniae、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズラクティスバイオバラエティージアセチラクティスLactococcuslactissubsplactisbiovardiacetylactis、ラクトコッカスピシウムLactococcuspiscium、ラクトコッカスプランタラムLactococcusplantarum、ラクトコッカスラフィノラクティスLactococcusraffinolactisなどが挙げられるが、これらに限定されない。とりわけ、Lactococcuslactissubsplactis、Lactococcuslactissubspcremoris、Lactococcuslactissubsplactisbiovardiacetylactisの3種類の菌を用いるのがより好ましい。乳酸発酵により、酵素処理工程におけるpHを酸性側に維持することが可能となる。また、酵素処理工程におけるpHを酸性側に維持する方法として、乳酸発酵に代えて、クエン酸、グルコン酸、塩酸、酢酸、乳酸、リン酸など、医薬品や食品に通常用いられる有機酸、無機酸を添加する方法が用いられる。酸性側に維持する場合のpHは、pH35~60、好ましくはpH40~56である。有効成分であるチーズ酵素分解物は、前述のように、チーズを酵素分解することによって得られる酵素分解物である。本発明において、有効成分として用いられるチーズ酵素分解物は、本発明の活性が維持される限り、前記酵素分解物から得られた処理物を含む。その処理物には、例えば、前記酵素分解物をろ過もしくはフィルター除菌して得られる濾液や上清液、ろ過もしくはフィルター除菌して得られる残査、前記濾液や残査、酵素分解物、上清液をエバポレーター等により濃縮した濃縮物、ペースト化物、又は乾燥物凍結乾燥物を含むが含まれる。また、前記酵素分解物や前記処理物をさらに溶媒で希釈した可溶画分又は不溶画分を抽出物として得ることもできる。前記抽出物作製における抽出溶媒には、水やアルコール類、炭化水素類、エステル類、エーテル類、有機酸類、有機塩基類、無機酸類、無機塩基類、超臨界流体が例示され、1種又は2種以上の混合溶媒が用いられる。本発明の組成物は有効量のチーズ酵素分解物と担体を含む。本発明の組成物はチーズ酵素分解物および担体のみを含む構成であってもよく、あるいは、少なくともチーズ酵素分解物および担体を含む構成であってもよい。ここで有効量とは、組成物を摂取した場合に、ガストロカイン産生促進効果やトレフォイルファクター1産生促進効果、HSP70産生促進効果がそれぞれ認められる量を意味する。その下限量は0001mg/体重kgであり、001mg/体重kgであり、01mg/体重kgであり、05mg/kg体重であり、10mg/kg体重であり、20mg/kg体重であり、5mg/kg体重であり、10mg/体重であり得る。また、その上限量は20000mg/kg体重であり、10000mg/体重であり、5000mg/kg体重であり、1000mg/kg体重であり、500mg/kg体重であり、100mg/kg体重であり、50mg/kg体重であり得る。組成物中の含有量は上記有効量のチーズ酵素分解物を含むように調整される。その含有量はその形態や剤型、投与方法等によっても異なり、その下限量は、例えば、0001w/wであり、0005w/wであり、001w/wであり、005w/wであり、01w/w、05w/wであり、10w/wであり、20w/wであり、50w/wであり得る。その上限量は、例えば、999w/wであり、990w/wであり、900w/wであり、500w/wであり、250w/wであり、200w/wであり、100w/wであり得る。また、当該組成物の一日摂取量は年齢、症状、体重、用途などによって適宜定められる。本発明の組成物は医薬用組成物又は飲食用組成物のいずれの形態としても利用できる。例えば、医薬品として直接摂取することにより、また特定保健用食品等の特別用途食品、栄養機能食品やサプリメントとして直接摂取することにより大腸や皮膚等における組織損傷の治療効果及び/又は予防効果が期待される。医薬用組成物やサプリメント用組成物の剤型として、例えば、経口投与可能な剤型である錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等が挙げられる。また、飲食用組成物の形態も特に限定はなく、液体、ペースト、ゲル、固体、粉末等の各形態が例示される。本発明の組成物の投与経路は、経口投与のほか、経管投与経鼻胃管、胃瘻、十二指腸瘻等を経由等であり得る。本明細書において担体とは、チーズ酵素分解物を組成物中に担持ないし保持するための物質を言う。担体は薬理学的または食品学的に許容される物質であればよく、医薬の製剤技術分野において通常使用しうる医薬組成物の製造に用いられる公知の補助剤製剤補助剤を含む。例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などである。また、本発明の組成物は、各種食品、例えば、牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、栄養食品、冷凍食品、加工食品その他の市販食品等でもあり得る。本発明の組成物は、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を含み得る。タンパク質として、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α-カゼイン、β-カゼイン、κ-カゼイン、β-ラクトグロブリン、α-ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質及びこれらの分解物が例示される。糖質としては、例えば、デンプン、テキストリンや可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテルなどの各種加工デンプン、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂、パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンA、カロチン類、ビタミンB群、ビタミンC、ビタミンD群、ビタミンE、ビタミンK群、ビタミンP、ビタミンQ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられる。ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、エリソルビン酸などが挙げられる。また、本発明の組成物は、バター、乳清ミネラル、クリーム、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分、カゼインホスホペプチド、アルギニン、リジン等のペプチドやアミノ酸も含み得る。さらに、本発明の組成物は、非ステロイド系抗炎症剤や抗潰瘍剤、消化酵素剤などいわゆる各種用途に用いられる主薬成分を含み得る。チーズ酵素分解物は、DNAマイクロアレイを用いた遺伝子発現解析において、ラット消化管においてガストロカイン1、ガストロカイン2、トレフォイルファクター1及び熱ショックタンパク質70の遺伝子発現を高めることが確認されている。トレフォイルファクター1は正常なヒトの胃において発現が認められる。ラットにおいては胃及び十二指腸で発現が認められ、回腸や結腸における発現は認められない。またヒト乳がんのおよそ半数に発現が認められるが、胃がんでは逆に半数に発現の消失が認められる。発現部位などから、胃部の修復促進機構に関係していると推定されている。一方、ラット酢酸誘導大腸炎においてトレフォイルファクター1遺伝子の一過性の強い発現誘導が起き、修復期や正常組織では発現が認められないため、修復の開始において重要な機能を持っていることが示唆されているItohHetalTcDNAcloningofratpS2peptideandexpressionoftrefoilpeptidesinaceticacidinducedcolitisBiochemJ3189399441996。また、トレフォイルファクター1のノックアウトマウスにおいて若齢期の胃幽門洞の粘膜層が薄くなる、又は胃幽門洞周囲に腺がんが発生するなどの特徴を示すことが知られているLefebvreOetalGastricmucosaabnormalitiesandtumorigenesisinmicelackingthepS2trefoilproteinScience2742592621996。さらに、トレフォイルファクター1は尿中に見出されカルシウム-シュウ酸結晶の形成を阻害し、尿道結石を抑制するとの報告もあるChutipongtanateSetalIdentificationofhumanurinarytrefoilfactor1asanovelcalciumoxalatecrystalgrowthinhibitorJClinInvest115361336222005。熱ショックタンパク質70HeatShockProteins:HSP70は、多くの生物種、各組織において、熱や酸化などのストレスがかかることにより発現誘導される、約72kDaのタンパク質である。シャペロンタンパク質のひとつと考えられ、小胞体におけるタンパク質の高次構造形成に関係していると言われているFickerEetalRoleofthecytosolicchaperonesHsp70andHsp90inmaturationofthecardiacpotassiumchannelhERGCircRes92e87e1002003、およびKaliaSKetalBAG5inhibitsparkinandenhancesdopaminergicneurondegenerationNeuron449319452004。HSP70発現の上昇は、胃炎胃潰瘍の発生を抑制しYamanakaAetalGGAprotectshumangastricmucosafromdiclofenacinducedinjuryviainductionofheatshockprotein70Digestion751481552007、およびTanakaKetalMolPharmacol719859932007、がん患者やピロリ菌の感染者においてHSP70の発現が減少することが報告されているPiotrPetalHelicobacter11961042006。チーズ酵素分解物は、ガストロカイン1産生促進効果、ガストロカイン2産生促進効果、に加えてトレフォイルファクター1の産生促進効果及び熱ショックタンパク質70の産生促進する効果を有するので、細胞増殖作用、組織損傷時における組織細胞の保護作用、がん細胞のアポトーシス促進作用、カルシウム-シュウ酸結晶の形成阻害作用、小胞体におけるタンパク質の高次構造形成作用等の各種作用が期待される。従って、ガストロカイン産生低下に伴う疾患、例えば各種組織障害痔、口内炎、辱創、外傷等、大腸炎、大腸や小腸の潰瘍など、尿道結石の予防及び/又は治療等への応用が可能である。チーズ酵素分解物は古くから使用されてきたものであり、公知の工程により安定して製造可能な物質である。したがって、本発明のガストロカイン産生促進剤は簡便かつ効率よくガストロカイン産生促進剤を調製できるという利点も有する。EMCの調製1チーズを乳酸菌スターター及び3種類のプロテアーゼで酵素処理を行い、EMCを調製した。スターター培養液の調製20gのスキムミルク粉末生化学用、和光純薬工業を200mlの蒸留水に溶解、滅菌して、10wvの脱脂粉乳培地を調製した。ここに約01gのスターター菌Lactococcuslactissubsplactis、Lactococcuslactissubspcremoris、Lactococcuslactissubsplactisbiovardiacetylactisの3種類の菌を含むを接種し、37°Cで16時間培養した。EMCの調製ミートチョッパーにて粉砕したデンマークスキムチーズ熟成期間6ヶ月に蒸留水を50wvとなるように添加し、さらに上記の方法で調製したスターター培養液最終濃度015~03wt、塩化ナトリウム及びプロテアーゼSアマノGBacillusstearothermophilus由来、天野エンザイムを添加した。このものを発酵温度34°Cで2日間撹拌し、加水分解した発酵開始時のpHは55であった。。次に、クエン酸水溶液でpHを41に調整し、ニューラーゼA及びウマミザイムGAspergillusoryzae由来プロテアーゼ、天野エンザイム社製を添加した。さらに、34°Cで5日間、撹拌して分解した。分解終了後、水酸化ナトリウム水溶液にてpHを50に調整し、110°Cにて10分間加熱して酵素を失活させ、凍結乾燥してEMC約60gを得た。EMCの調製に用いた配合表を下記に示す。配合表デンマークスキムチーズ1000g滅菌水740gスターター培養液200g塩化ナトリウム02gプロテアーゼSアマノG06gクエン酸32gニューラーゼA03gウマミザイムG03g水酸化ナトリウム14gEMCの調製2国産ゴーダチーズに滅菌水を加えたものに、前記EMCの調製1で調製したスターター培養液、塩化ナトリウムを添加し撹拌後、プロテアーゼAアマノSDAspergillusoryzae由来プロテアーゼ、天野エンザイム社製、リパーゼプレガストリックエステラーゼ、レンコニュージーランド社製を添加し、34°Cで振とうすることにより分解を行った。48時間後、クエン酸にてpHを41に調整し、モルシンFAspergillussaitoi由来酸性プロテアーゼ、キッコーマン社製及びウマミザイムGAspergillusoryzae由来プロテアーゼ、天野エンザイム社製をそれぞれ添加し、34°Cで振とうすることによりさらに分解を行った。4日後、水酸化ナトリウムでpHを50に調整し、110°Cにて15分間加熱して酵素を失活させ、チーズ酵素分解物を得た。EMCの調製に用いた配合表を下記に示す。配合表国産ゴーダチーズ1000g滅菌水505gスターター培養液180g塩化ナトリウム22gプロテアーゼAアマノSD06gリパーゼ02gクエン酸35gモルシンF02gウマミザイムG03g水酸化ナトリウム15gEMCの調製3チーズ酵素分解物の調製3国産チェダーチーズに滅菌水を加えたものに、EMCの調製1と同様に調製したスターター培養液、塩化ナトリウムを添加し撹拌後、プロテアーゼAアマノSDAspergillusoryzae由来、天野エンザイム、リパーゼプレガストリックエステラーゼ、レンコニュージーランド社製を添加し、34°Cで振とうすることにより分解を行った。48時間後、クエン酸にてpHを41に調整し、ニューラーゼRBacillussubtilis由来、ノボ社及びウマミザイムGAspergillusoryzae由来プロテアーゼ、天野エンザイム社製をそれぞれ添加し、34°Cで振とうすることにより分解を行った。4日後、水酸化ナトリウムでpHを50に調整し、110°Cにて15分間加熱して酵素を失活させ、チーズ酵素分解物を得た。EMCの調製に用いた配合表を下記に示す。配合表国産チェダーチーズ1000g滅菌水505gスターター培養液200g塩化ナトリウム03gプロテアーゼAアマノSD06gリパーゼ02gクエン酸33gニューラーゼR02gウマミザイムG03g水酸化ナトリウム15g消化管における遺伝子発現変動に対するEMCの効果1材料及び方法供試動物SD系ラット、雄6週齢を実験に使用し、1週間の馴化飼育を経て試験日前日の夕方17時より16時間の絶食を行った。試験当日に、体重を基準にしてラットを4群EMC投与群30分後屠殺用及び60分後屠殺用の2群及び対照群30分後屠殺用及び60分後屠殺用の2群の全4群n=5に群分けした。EMCの投与及び各組織の採取EMC投与群には、前記EMCの調製1で調製したEMCを注射用水にて100mg/mlの濃度に懸濁した試料の10ml/kg体重を経口投与したEMCの投与量として1g/kg体重。また、対照群には、注射用水の10ml/kg体重を経口投与した。EMC又は注射用水を投与後、30分後及び60分後にEMC投与群、対照群ともに各群5匹のラットを頸椎脱臼にて屠殺し、中位大腸、遠位大腸を摘出した。遺伝子発現変動の網羅的解析以下の手法を用いて、各組織のDNAマイクロアレイ解析アフィメトリクス社を行った。摘出した各組織は約1cm角の切片にして10倍体積のRNA安定化溶液RNAlaterTM、Ambion社試薬に浸し、4°Cで一夜、インキュベーションした後に取り出して、RNAを抽出するまで-80°Cで保存した。各組織からの全RNAの抽出はRNeasyキットQiagen社を用い、添付の手順書に従って操作を行った。各群5個体の全RNAをそれぞれ同量ずつ混合し、以下のようにDNAマイクロアレイ解析用試料を調製した。調製方法はアフィメトリクス社の推奨する試薬を用い、手順書に従って行なった。各全RNA試料よりAmbionTMWTExpressionKitAmbion社を用いて、T7プロモーター配列を含むランダムプライマーによりcDNAを合成後、それを鋳型としてT7RNAポリメラーゼでcRNAを合成、さらにcRNAより一本鎖センス鎖cDNAを作製した。続いて、WholeTranscriptcDNA標識用試薬WTTerminalLabelingKit、Affymetrix社を添付の手順書に従って用い、1本鎖cDNAの断片化及び3 ́末端のビオチン標識を行った。ビオチン標識した一本鎖cDNAは全転写産物発現解析GeneアレイGeneChipTMRatGene10STArray、Affymetrix社に対してハイブリダイゼーションさせた。ハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション用オーブンGeneChipTMHybridizationOven640、Affymetrix社を使用して45°Cで16時間行った。さらに自動洗浄染色装置GeneChipTMFluidicsStation450、Affymetrix社を用いてアレイを洗浄し、その後ストレプトアビジン-フィコエリスリンによりアレイ上に結合した一本鎖cDNAを蛍光標識した。なお、自動洗浄染色装置の制御は機器制御ソフトウェアAffymetrixTMGeneChipTMCommandConsoleTMSoftwareVer2以降、AGCCともいう、Affymetrix社にて行った。なお、ガストロカイン1のmRNA配列は、NCBIのNucleotideデータベースにGenBankアクセッション番号AY45695にfoveolinprecursorとして、ガストロカイン2のmRNA配列は、同GenBankアクセッション番号AY943907にblottinprecursorとして、トレフォイルファクター1のmRNA配列は、同GenBankアクセッション番号D83231にpS2peptideとして、HSP70のmRNA配列は、同GenBankアクセッション番号L16764にheatshockprotein70としてそれぞれ開示されている。蛍光標識操作後のアレイはレーザースキャナーGeneChipTMScanner3000、Affymetrix社を用いてスキャニングして画像データを得た。尚レーザースキャナーによる画像データの取り込みはAGCCソフトウェアにより行なった。採取された画像データは解析ソフトウェアExpressionConsolever11、Affymetrix社を用いて標準化を行い、さらにGeneSpringGX解析ソフトウェアGeneSpringGXVer11、AgilentTechnologies社を用いて各群間の遺伝子発現量に関する比較解析を行った。こうして得られた各群の遺伝子発現量について、さらに、対照群の注射用水投与30分後vehicle30minの各遺伝子発現量を10とした場合の遺伝子発現量比を算出した。2結果中位大腸の遺伝子発現量比を図1に、遠位大腸の遺伝子発現量比を図2に示す。中位大腸対照群は、注射用水投与の30分後vehicle30min、60分後vehicle60minで遺伝子発現量に差はみられなかった。一方EMC投与群は、EMC投与の30分後EMC30minにおいて、ガストロカイン1、ガストロカイン2、トレフォイルファクター1及び熱ショックタンパク質HSP70をコードする遺伝子mRNAの遺伝子発現がそれぞれ対照群vehicle30minの遺伝子発現よりも高い値を示した。特に、ガストロカイン1及びガストロカイン2の遺伝子発現量は、対照群の23~24倍の遺伝子発現量であった。また、EMC投与の60分後EMC60minは対照群vehicle60minと同等のレベルの遺伝子発現量であった。遠位大腸対照群は、注射用水投与の30分後vehicle30min、60分後vehicle60minで遺伝子発現量に差はみられなかった。一方EMC投与群は、EMC投与の30分後EMC30minにおいて、ガストロカイン1及びガストロカイン2の遺伝子発現量は、対照群vehicle30minの43~44倍の遺伝子発現量であった。また、EMC投与の60分後EMC60minであっても、対照群vehicle60minの15~18倍の遺伝子発現量であった。経口摂取した物質が大腸に到達するまでの時間がラットで160分であると言われているMUchidaetalJPharmacolSci110pp227230。ところが、上記実験によると中位大腸及び遠位大腸において、EMCの経口投与30分後に高いガストロカイン遺伝子の発現が認められた。また、遠位大腸においては、中位大腸における発現量よりも高い発現量が認められた。この結果は、経口投与されたEMCによる遺伝子発現の促進作用は大腸への直接作用ではなく、EMCあるいはその消化物が十二指腸や小腸から吸収されて全身循環し、大腸にてガストロカイン遺伝子の発現を高めたことを示している。このことから、摂取されたEMCは、胃組織や大腸組織のみならず、皮膚やその他の組織においても、ガストロカイン1及びガストロカイン2の産生を促進しうると考えられる。以上のように、EMCは従来ガストロカインの産生レベルが低いとされていた大腸組織においてガストロカインガストロカイン1及びガストロカイン2をコードする遺伝子の発現を促進するのみならず、さらにトレフォイルファクター1をコードする遺伝子の発現及び熱ショックタンパク質をコードする遺伝子の発現を促進し、これらのタンパク質の産生を促すことが示された。