"関節リウマチに罹患している対象の治療方法であって、前記対象に、ある量のラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩と、ある量のメトトレキセートとを定期的に投与することを含み、前記量が、一緒に服用されるとき、前記対象の治療に有効である方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩の前記量およびメトトレキセートの前記量が、一緒に服用されるとき、各薬剤を単独で投与するより前記対象の治療に有効である請求項1に記載の方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩の前記量およびメトトレキセートの前記量が、一緒に服用されるとき、前記対象において関節リウマチの臨床症状を軽減するのに有効である請求項1または2に記載の方法。ラキニモドの薬学的に許容される塩がラキニモドナトリウムである、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩の定期的な投与が経口的に実施される、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。投与されるラキニモドの量が0.0005~10mg/kg/日である請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。投与されるラキニモドの量が0.1~2.0mg/日である請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。メトトレキセートの定期的な投与が経口的に実施される請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。投与されるメトトレキセートの量が0.02~1.0mg/kg/日である請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。投与されるメトトレキセートの量が1~3mg/日である請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。非ステロイド性抗炎症薬NSAIDs、サリチル酸塩、遅効性薬、金化合物、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、遅効性薬の組合せ、副腎皮質ステロイド、細胞毒性薬、免疫抑制薬および/または抗体の投与をさらに含む請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩およびメトトレキセートの定期的な投与が、関節リウマチに関連する症状を実質的に消失させる請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩およびメトトレキセートの定期的な投与が、関節リウマチに関連する症状の重症度を軽減させる請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩およびメトトレキセートの定期的な投与が、関節リウマチに関連する症状に冒された関節の数を減少させる請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。前記症状が炎症である請求項12から14のいずれか一項に記載の方法。前記症状が、パンヌス組織の形成である請求項12から14のいずれか一項に記載の方法。前記症状が軟骨損傷である請求項12から14のいずれか一項に記載の方法。前記症状が骨吸収である請求項12から14のいずれか一項に記載の方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩およびメトトレキセートの定期的な投与が、前記対象の蛋白尿を減少させる請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。蛋白尿の減少が、24時間尿蛋白、24時間蛋白/クレアチニン比、スポット尿蛋白/クレアチニン比、24時間尿アルブミン、24時間アルブミン/クレアチニン比、スポット尿アルブミン/クレアチニン比によって、または尿試験紙によって測定される、請求項19に記載の方法。ラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩およびメトトレキセートの定期的な投与が、尿沈渣を消失させる請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。単独で服用されるときのラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩の前記量、および単独で服用されるときのメトトレキセートの前記量のそれぞれが、前記対象の治療に有効である請求項1から21のいずれか一項に記載の方法。単独で服用されるときのラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩の前記量、単独で服用されるときのメトトレキセートの前記量、および単独で服用されるときのそうした各量が、いずれも、前記対象の治療に有効でない請求項1から21のいずれか一項に記載の方法。対象が、ラキニモド療法を開始するより前にメトトレキセート療法を受療中である請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。前記対象が哺乳動物である請求項1から24のいずれか一項に記載の方法。前記哺乳動物がヒトである請求項25に記載の方法。関節リウマチに罹患している対象の治療においてメトトレキセートと組み合わせて使用するためのラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩。関節リウマチに罹患している対象の治療において使用するための、ある量のラキニモドまたは薬学的に許容されるその塩とある量のメトトレキセートとを含む医薬組成物。本発明は、以下の実験詳細を参照することでより深く理解されるが、当業者なら、詳述される特定の実験は、その後に続く請求項においてより十分に記載される本発明を例示するものに過ぎないことが容易に理解されよう。実験詳細例1:35日間のDBA/10lahsdマウス半確立II型コラーゲン関節炎MTTC/TV-9において経口的にPO毎日QD投与した抗炎症薬の効果の評価序文マウスDBA/1lacJ、1J、またはB10R111は、エンドトキシンまたは組換え型IL-1で同時追加免疫を行いおよび行うことなく、0日目、15、16または21日目の免疫化Bendele、2001を含む様々な方法を使用して、ウシII型コラーゲンTrentham、1977に対して免疫化した場合、確実に多発性関節炎になる。発生する疾患は、普通は対称性でなく、足/関節の任意の組合せが冒され得る。マウスの小さい足首のカリパス測定は難しいため、多くの場合、組織学的スコア記録法と共に主観的臨床スコア記録システムを使用する。治療は、予防的な場合一般に16日目~21日目に始まるも、治療的な場合病変を認めた後もあり、使用する免疫化プロトコールおよび所望の破壊の程度に応じて、10日から数週間に延長することがある。冒された関節の病変は、インターロイキン1受容体アンタゴニストIL-1raや可溶性TNF受容体などのラットコラーゲン関節炎生物学的製剤において生じる病変に似ているWooley、1993;Bakker、1997;Joosten、1994;Joosten、1996;Geiger、1993。II型コラーゲンで免疫化し、IL-1などのサイトカインを同時に与えたマウスでは、疾患出現率および重症度の増大が示されているHom、1991;Hom、1988。この研究は、マウスにおける半確立II型コラーゲン関節炎に関連する炎症、軟骨破壊、および骨吸収の抑制において、単独で、または潜在的抗炎症薬としてのメトトレキセートMTXと組み合わせてpo、qd投与した潜在的抗炎症薬ラキニモド0.2、1または5mg/kgの効力を判定するように設計されている。マウスII型コラーゲン関節炎は、ヒトにおける関節リウマチ用の、当分野で求められている動物モデルであるBendele、2001。ここで、半確立II型コラーゲン関節炎の雄DBA/1OlaHsdマウスには、研究18日目~33日目に、ビヒクル、ラキニモド0.2、1もしくは5mg/kg、メトトレキセート0.5mg/kg、MTX、またはMTX0.5mg/kgと組み合わせたラキニモド0.2もしくは1mg/kgを経口的POに毎日QD投薬した。マウスを34日目に屠殺した。評価可能な効力は、動物体重、毎日の臨床関節炎スコア、曲線下面積AUCとして示される関節炎スコア、ならびにマウスの前足、後足、および膝についての病理組織診断1~3、5、および8群のみに基づくものとした。病理組織診断結果は、4つの足、膝のみ、または6箇所の関節膝を含めるとして示した。血清抗II型コラーゲン抗体レベルも評価した1~3、6、および8群のみ。すべての動物が研究終了まで生存した。動物到着時に5~7週齢であり、研究18日目に体重が約17~22グラムとなった74匹の雄DBA/1OlaHsdHarlanInc.を入手した。マウスは、最初の免疫化の時点で少なくとも6週齢であった。材料:ビヒクル中の薬剤および薬物、II型コラーゲンElastinProducts、フロイント完全アジュバント補充結核菌M.tuberculosisを含有、4mg/mlDifco。一般研究計画1.動物10/関節炎群、4/正常群、収容数5/ケージは、すべての動物が少なくとも7週齢になる、到着後の8日間気候順化した。2.マウスは、イソフルランで麻酔し、尾の付け根に、ウシII型コラーゲンElastinProducts、ミズーリ州Owensville2mg/mlを含有する150μlのウシII型コラーゲン入りフロイント完全アジュバント注射Sigmaを打った0日目および21日目。3.マウスは、研究18日目に体重によって治療群に無作為化した。4.MTXは、BolderBioPATH,Inc.より、MWIから購入した1mg/ml保存液として提供を受け、10ml/kgでの投薬用に0.05mg/mlの1CMC溶液として調製した。5.投与液はすべて、マウスに10ml/kg0.3ml/30gで送達されるように調製した。6.治療は、研究18日目に開始し、表1に従って毎日1日1回続けるpo、qd。7.治療期間の間、表2に従い、足のそれぞれ右前、左前、右後、左後について臨床スコアを記録した。8.21日目~35日目には、関節炎の発症が起こった。関節炎18、20、22、24、26、28、30、32日目に、さらに34日目最終日の組織収集の前にマウスを秤量した。9.剖検時に、全群の動物から心臓穿刺によって血清のための採血を行い、頸椎脱臼によって屠殺した。前足、後足、および膝を摘出し、10NBFに浸した。全血を室温で約2時間凝固させた後、13,000rpmで8分間スピンにかけた。10.関節の処理:固定液中で1~2日、次いで脱灰液中で4~5日経過後、関節を処理し、包埋し、薄片にし、トルイジンブルーおよびHEで染色した動物1匹あたり2枚のスライド。前足と後足、および膝だけを最初に処理した6箇所の関節/マウス。11.形態病理法:病理組織診断は、1~3、5および8群だけについて実施した。固定液中で1~2日、さらに脱灰用の5ギ酸中で4~5日経過後、組織をトリミングし、パラフィン包埋処理し、8μmの薄片にし、トルイジンブルーTブルーで染色した。後足、前足、および膝は、包埋し、前額面で薄片を作製した。各動物の6箇所の関節を病理組織診断側面図用に処理した。12.組織処理および評価:a.関節を脱灰液に浸し、b.関節をトリミングし、洗浄し、組織を処理し、c.関節を包埋し、d.組織を薄片にし、組織を染色し、e.組織病理学的評価、およびf.データ処理、QC、グラフを作成し、報告する。II型コラーゲン関節炎に罹患したマウス関節の組織病理学的スコア記録法II型コラーゲン関節炎の病変を有するマウスの足または足首をスコア記録する際、変化の重症度ならびに罹患した個々の関節の数を考慮しなければならない。中手骨/中足骨/指または足根骨/脛足根骨のいくつもの関節の可能性のうち、足または足首の1~3箇所の関節だけが罹患しているとき、変化の重症度に応じて、以下のパラメータ表3~6について1、2または3の最大スコアを自由裁量によって割り当てた。3箇所を超える関節が関わっている場合、以下の基準表3~6を、最も重度に罹患した関節/大多数の関節に適用した。各動物について、扱った6箇所の関節それぞれの炎症、パンヌス、軟骨損傷、および骨損傷スコアを求めた。総合計全6関節動物スコアおよび6関節平均動物スコアに加えて、個々のパラメータそれぞれについて合計および平均を求めた。データは、足4関節または膝2関節の平均としても示した。次いで、種々の群についてのパラメータを疾患対照動物と比較する。統計的分析研究18日目~34日目についての投薬曲線下面積AUCを求めることにより、足スコアの臨床データ動物平均を分析した。AUCの算出については、各マウスの1日毎平均スコアをMicrosoftExcelに入力し、疾患発症後の治療日から最終日の間の面積を計算した。各群の平均を求め、治療動物および正常動物の値を比較することにより、関節炎対照の抑制パーセントを算出した。臨床および病理組織診断データの統計的分析は、スチューデントのt検定を使用し、有意性をp≦0.05に設定して実施した。臨床パラメータおよびAUCの抑制パーセントは、次式を使用して算出する。抑制=B/A×100、ここで、A=疾患対照平均-正常平均B=治療平均-正常平均結果この研究は、ヒト関節リウマチの動物モデルにおいて経口的に毎日投与した抗炎症薬の効果を評価するものである。結果は、関節リウマチ症状に対するラキニモドとメトトレキセートとの組合せの効果が、各薬剤単独の相加的効果を有意に上回っていることを示している。関節炎による体重減少は、1mg/kgのラキニモドMTXでの治療により、ビヒクル処置した疾患対照と比べて有意に抑制された62抑制。この群についての体重減少は、MTXで治療したマウスと比べても有意に抑制された69。他のすべての治療群についての体重減少に、ビヒクル対照との有意差はなかった。ビヒクル処置した疾患対照マウスは、研究27日目には疾患出現率が100となった。0.2mg/kgのラキニモドで治療したマウスは、研究28日目には疾患出現率が100となった。MTX、1mg/kgのラキニモド、または0.2mg/kgのラキニモドMTXで治療した動物は、疾患出現率が研究終了時に90と低下していた。疾患出現率の低下は、5mg/kgのラキニモド出現率70または1mg/kgのラキニモドMTX60で治療したマウスでも見られた。1日毎臨床関節炎スコアは、MTX有意27~34日目、0.2mg/kgのラキニモド28~34日目、1mg/kgのラキニモド25~34日目、5mg/kgのラキニモド24~34日目、0.2mg/kgのラキニモドMTX24~34日目、または1mg/kgのラキニモドMTX24~34日目で治療したマウスについて、ビヒクル対照と比べて有意に減少した。1日毎臨床スコアは、0.2mg/kgのラキニモドMTX29~34日目または1mg/kgのラキニモドMTX26~34日目での治療によって、MTXだけで治療したマウスと比べても有意に減少した。ビヒクル対照群において疾患が発生するより前に、0.2mg/kgのラキニモド23日目、1mg/kgのラキニモド22~24日目、または5mg/kgのラキニモド22~23日目で治療したマウスにおいて1日毎臨床関節炎スコアが有意に増加した図3。曲線下面積AUCとして示した臨床関節炎スコアは、MTX50減少、0.2mg/kgのラキニモド32、1mg/kgのラキニモド52、5mg/kgのラキニモド69、0.2mg/kgのラキニモドMTX82、または1mg/kgのラキニモドMTX95で治療したマウスについて、ビヒクル対照と比べて有意に減少した。臨床関節炎スコアAUCは、0.2mg/kgのラキニモドMTX65または1mg/kgのラキニモドMTX90での治療によって、MTXで治療したマウスと比べても有意に減少した。抗TTCレベルについての血清分析は、1~3、6、および8群だけのマウスで行った。血清分析によって、ビヒクル対照マウスは、抗TTCレベルが27,062.50単位/mlであることが判明した。血清抗TTCレベルは、5mg/kgのラキニモド、1mg/kgのラキニモドMTX、またはMTXで治療しても、ビヒクル対照と比べて有意な影響を受けなかった。疾患対照動物は、大部分の関節において、II型コラーゲン誘発関節炎で見られる変化と一致した、病理組織診断の変化を伴い、スコアは、最小限から重度の範囲であった。顕微鏡的な変化として、滑膜および関節周囲組織への好中球および単核炎症細胞の浸潤炎症、辺縁帯パンヌスおよび骨吸収、ならびに軟骨損傷プロテオグリカン減少、軟骨細胞死、およびコラーゲンマトリクス破壊が挙げられる。全足病理組織診断パラメータは、1mg/kgのラキニモド合計スコアの61の減少、1mg/kgのラキニモドMTX96、またはMTX46で治療したマウスでは、ビヒクル対照と比べて、正常に向かって有意に減少した。1mg/kgのラキニモドMTXでの治療では、MTXで治療したマウスと比べても、全足病理組織診断パラメータが有意に減少した93。全膝病理組織診断パラメータは、1mg/kgのラキニモドMTX合計スコアの97の減少で治療したマウスでは、ビヒクル対照と比べて、正常に向かって有意に減少した。この群の治療では、MTXで治療したマウスと比べても、全膝病理組織診断パラメータが有意に減少した95。1mg/kgのラキニモドでの治療では、ビヒクル対照と比べて、膝炎症51減少、パンヌス59、軟骨損傷62、および合計膝スコア57が有意に減少した。全6関節平均病理組織診断パラメータは、1mg/kgのラキニモド合計スコアの60の減少、1mg/kgのラキニモドMTX96、またはMTX43で治療したマウスでは、ビヒクル対照と比べて、正常に向かって有意に減少した。1mg/kgのラキニモドMTXでの治療では、MTXで治療したマウスと比べても、全6関節病理組織診断パラメータが有意に減少した93図1および2。図1および図2に示すように、ラキニモドをメトトレキセートと組み合わせて投与すると、DBA/1OlaHsdマウスの6箇所の関節足4箇所と膝2箇所で、炎症、パンヌス、軟骨損傷、および骨吸収を含めた、関節リウマチに関連する種々の症状の重症度が、対照群、メトトレキセート単独治療群、およびラキニモド単独治療群と比べて有意に軽減される。図1は、ラキニモドをメトトレキセートと組み合わせて投与すると、試験対象の6箇所の関節においてパンヌスおよび骨損傷が実質的に消失し、対象の平均スコアがほぼゼロに減少したことを示している。図2は、ラキニモドをメトトレキセートと組み合わせて投与すると、試験対象において、関節リウマチに関連する全体としての症状が実質的に消失し、対象の累積スコアが96に減少したことを示している。すなわち、これらの結果は、ラキニモドをメトトレキセートと組み合わせて投与すると、進行性関節リウマチに罹患している対象の治療において、各薬剤を単独で投与するよりもかなり効果的であることを示している。本発明者らは、意外にも、ラキニモドとメトトレキセートが、進行性関節リウマチの治療において相乗的に働くことを見出した。[参考文献]1RheumatoidArthritisTheMerckManual7thEditionpp4164232013028299506202AdoubleblindrandomizedrepeatdosedoseescalationstudyofABR215062versusplaceboinhealthyvolunteersandpatientswithmultiplesclerosisActiveBiotechResearchABSwedenFinalClinicalTrialReportJanuary2002303506207AnopensafetystudyonlaquinimodinpatientswithmultiplesclerosisActiveBiotechResearchABSwedenFinalClinicalTrialReportApril200740430067275106101DeterminationoftheeffectsofABR212616ABR215050ABR215062andABR215757ontheactivitiesofCYP1A2andCYP3A4incryopreservedhumanhepatocytesInVitroTechnologiesUSAFinalReportFebruary200450430518275108102DeterminationoftheeffectsofABR215062onCYP1A2andCYP3A4incryopreservedhumanhepatocytesInVitroTechnologiesUSAFinalReportAugust200469830089PNU215045PNU215062EffectsoncytochromeP450enzymesinfemaleSpragueDawleyratsLundResearchCenterABActiveBiotechGroupSwedenFinalReportNovember199879830133PNU215062EffectsoncytochromeP450enzymesinfemaleSpragueDawleyratsLundResearchCenterABActiveBiotechGroupSwedenFinalReportNovember19988AtwoperiodopenlabelonesequencecrossoverstudyinhealthysubjectstoassessthepotentialinteractionoffluconazoleonlaquinimodpharmacokineticsPRACSInstituteCeteroResearchNDUSAFinalReportJune20099ArnettFEdworthySBlochDMcShaneDFriesJCooperNHealeyLKaplanSLiangMLuthraHTheAmericanRheumatismAssociation1987revisedcriteriafortheclassificationofrheumatoidarthritisArthritisRheum313152410BakkerACJoostenLABArntzOJHelsenMABendeleAMvandeLooAJvandenBergWBGenetherapyofmurinecollageninducedarthritislocalexpressionofthehumaninterleukin1receptorantagonistproteinpreventsonsetArthritisRheum199740893900199711BendeleAMAnimalModelsofRheumatoidArthritisJMusculoskelNeuronInteract137738512GeigerTTwobinHConsentivargasAZingelOArnoldJRordorfCGlattMVosbeckKNeutralizationofinterleukin1BactivityinvivowithamonoclonalantibodyalleviatescollageninducedarthritisinDBA1miceandpreventstheassociatedacutephaseresponseClinExpRheumatol19931151552213HomJBendeleAMCarlssonDInvivoadministrationwithIL1acceleratesthedevelopmentofcollageninducedarthritisinmiceJImmunol918814183484114HomJGliszcznskiVLColeHWBendeleAMInterleukin1mediatedaccelerationoftypeIIcollageninducedarthritisEffectsofantiinflammatoryorantiarthriticdrugsAgentsActions19913330030915JoostenLABHelsenMMAvandeLooFAJandvandenBergWBAmeliorationofestablishedtypeIIcollageninducedarthritiswithantiIL1AgentsActions199441C174C17616JoostenLABHelsenMMAvandeLooFAJandvandenBergWBAnticytokinetreatmentofestablishedtypeIIcollageninducedarthritisinDBA1miceArthritisRheum19963979780917PCTInternationalApplicationPublicationNoWO2007047863publishedApril262007internationalfilingdateOctober18200618PCTInternationalApplicationPublicationNoWO2007146248publishedDecember212007internationalfilingdateJune12200719PolmanCetalTreatmentwithlaquinimodreducesdevelopmentofactiveMRIlesionsinrelapsingMSNeurology6498799120SandbergWollheimMetal48weekopensafetystudywithhighdoseorallaquinimodinpatientsMultScler11S15421TQTLAQ122ADoubleBlindRandomizedParallelGroupThoroughQTQTcTrialinHealthyMenandWomentoAssesstheEffectofLaquinimodonCardiacRepolarizationUsingaClinicalandaSupratherapeuticDoseComparedtoPlacebowithMoxifloxacinasaPositiveControlPRACSInstituteCeteroResearchNDUSAFinalReportJune200922TrenthamDETownesASKangAHAutoimmunitytotypeIIcollagenanexperimentalmodelofarthritisJExpMed197714685786823USPatentNo6077851issuedJune202000toBjorketal24WooleyPHWhalenJDChapmanDLBergerAERichardKAAsparDGandStaiteNDTheeffectofaninterleukin1receptorantagonistproteinontypeIIcollageninducedarthritisandantigeninducedarthritisinmiceArthritisRheum19933613051314"