"以下の工程a~dを備えた組織染色方法を用いることを特徴とする抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定方法。a抗体を成分として含む医薬品における抗体を蛍光物質で標識し、該蛍光標識された抗体を組織試料と接触させる工程;b前記抗体が接触した組織部位に励起光を照射し、蛍光画像を取得する工程;c前記蛍光画像と同一視野及び同一焦点における、前記蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域よりも短波長側又は長波長側の近傍領域の自家蛍光画像を取得する工程;d前記蛍光画像の蛍光輝度から、前記自家蛍光画像の蛍光輝度を除く画像処理をし、補正蛍光画像を取得する工程;抗体を成分として含む医薬品における抗体が、がんの増殖制御因子又は転移制御因子を認識する抗体であることを特徴とする請求項1記載の判定方法。がんの増殖制御因子又は転移制御因子がHER2humanepidermalgrowthfactorreceptor2であることを特徴とする請求項2記載の判定方法。がんが、乳がんであることを特徴とする請求項2又は3記載の判定方法。蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域とその近傍領域の波長の差が100nm以内であることを特徴とする請求項1~4のいずれか記載の判定方法。蛍光物質が、蛍光粒子であることを特徴とする請求項1~5のいずれか記載の判定方法。蛍光粒子が、量子ドット蛍光粒子であることを特徴とする請求項6記載の判定方法。さらに以下の工程e~gを備えたことを特徴とする請求項6又は7記載の判定方法。e抗体が接触した組織部位の細胞数をカウントする工程;f蛍光画像を基に、蛍光粒子1粒子を特定し、該蛍光粒子1粒子に対応する補正蛍光画像内の蛍光粒子1粒子の平均蛍光輝度を計測する工程;g補正蛍光画像内の全蛍光輝度を、前記蛍光粒子1粒子の平均蛍光輝度で除して蛍光粒子数を求め、該蛍光粒子数を工程eでカウントした細胞数で除し、1細胞あたりの蛍光粒子数を算出する工程;蛍光粒子が有する明滅性を利用して、蛍光粒子1粒子を特定することを特徴とする請求項8記載の判定方法。以下のA~Dを備えたことを特徴とする抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定システム。A蛍光物質で標識された抗体を成分として含む医薬品における抗体;B励起光照射手段;C蛍光画像取得手段;D蛍光画像取得用バンドパスフィルタ;抗体を成分として含む医薬品における抗体が、がんの増殖制御因子又は転移制御因子を認識する抗体であることを特徴とする請求項10記載の判定システム。がんの増殖制御因子又は転移制御因子がHER2humanepidermalgrowthfactorreceptor2であることを特徴とする請求項11記載の判定システム。さらに、E細胞核蛍光画像を取得するバンドパスフィルタ;を備えたことを特徴とする請求項10~12のいずれか記載の判定システム。蛍光物質が、蛍光粒子であることを特徴とする請求項10~13のいずれか記載の判定システム。蛍光粒子が、量子ドット蛍光粒子であることを特徴とする請求項14記載の判定システム。量子ドット等の蛍光粒子は、自身が有する光安定性と定量的な解析に威力を発揮することから、蛍光免疫染色における新たなツールとして期待が高まっているが、現時点では定量的な解析としては培養細胞に限定されている。その理由として、培養細胞では細胞の自家蛍光が弱いため、量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度を十分高いSシグナル/Nノイズ比として算出できるのに対し、生体組織では培養細胞に比べ非常に強い自家蛍光を有するため、量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度を十分高いS/N比として算出できないことが大きな原因である。生体組織の長波長の自家蛍光は、短波長の自家蛍光と比べ量が少ないものの、観察において自家蛍光の影響を無視することはできず、定量的な解析は困難であった。さらに、乳がんの診断においてHER2タンパク質の検出に用いる抗体とHER2タンパク質を標的とした治療薬抗体の抗原決定基エピトープが異なることから、現在の抗HER2抗体を用いたIHC法は、トラスツズマブの抗原決定基を含むHER2が過剰発現したトラスツズマブ投与適応患者を選定する方法として不十分であると考えられた。本発明の課題は、生体組織の定量的な組織染色法により、トラスツズマブ等の抗体医薬の有効成分である抗体や、有効成分の標的部位へのターゲットのための抗体が認識するタンパク質を高精度に定量することにより、かかる抗体を成分として含む医薬品による治療有効性の判定方法を提供することにある。本発明者らは、量子ドット蛍光粒子で直接標識したトラスツズマブを用いた生体組織染色法を行うことにより、トラスツズマブ投与適応患者をより正確に選定することができると考えた。そして、生体組織染色法における自家蛍光の影響を除く方法を鋭意検討する中で、量子ドット蛍光粒子Qdot705で標識されたトラスツズマブの有効成分である抗HER2抗体トラスツズマブQD705で免疫染色した乳がん組織試料を波長が488nmの励起光で照射し、量子ドット蛍光粒子の蛍光画像量子ドット蛍光粒子の蛍光自家蛍光を、蛍光波長の取得領域が695~740nmのバンドパスフィルタを通して取得した後、かかる蛍光画像と全く同じ焦点面及び同じ視野で自家蛍光のみの自家蛍光画像を、蛍光波長の取得領域が640~690nmのバンドパスフィルタを通して取得し、蛍光静止画像の各ピクセルの蛍光輝度から、自家蛍光画像において相当する各ピクセルの蛍光輝度を引くことによって、蛍光静止画像から自家蛍光画像自家蛍光を引いた量子ドット蛍光粒子の蛍光のみの画像補正蛍光画像を取得できることを見いだした。また、補正蛍光画像に含まれる量子ドット蛍光粒子の粒子数を特定するために、量子ドット特有のブリンキング明滅性を利用した。すなわち、1粒子の量子ドット蛍光粒子であれば、20秒間の励起光照射時間においてoff-state滅状態は約4秒になるため、約4秒間のoff-state滅状態を持つ粒子の平均輝度を量子ドット蛍光粒子1粒子の蛍光輝度として算出したところ、補正蛍光画像において1細胞あたりの量子ドット蛍光粒子の粒子数を算出できることが確認された。また、乳がん患者の乳腺組織において、トラスツズマブQD705で検出される量子ドット蛍光粒子数を算出することにより、IHC-DAB法よりも広いレンジでHER2タンパク質の発現量を定量できることが確認された。さらに、トラスツズマブQD705で検出される量子ドット蛍光粒子数とトラスツズマブによる治療効果との相関が認められた。本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。すなわち本発明は、1a抗体を成分として含む医薬品における抗体を蛍光物質で標識し、該蛍光標識された抗体を組織試料と接触させる工程;b前記抗体が接触した組織部位に励起光を照射し、蛍光画像を取得する工程;c前記蛍光画像と同一視野及び同一焦点における、前記蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域よりも短波長側又は長波長側の近傍領域の自家蛍光画像を取得する工程;d前記蛍光画像の蛍光輝度から、前記自家蛍光画像の蛍光輝度を除く画像処理をし、補正蛍光画像を取得する工程;を備えた組織染色方法を用いることを特徴とする抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定方法や、2抗体を成分として含む医薬品における抗体が、がんの増殖制御因子又は転移制御因子を認識する抗体であることを特徴とする上記1記載の判定方法や、3がんの増殖制御因子又は転移制御因子がHER2humanepidermalgrowthfactorreceptor2であることを特徴とする上記2記載の判定方法や、4がんが、乳がんであることを特徴とする上記2又は3記載の判定方法や、5蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域とその近傍領域の波長の差が100nm以内であることを特徴とする上記1~4のいずれか記載の判定方法や、6蛍光物質が、蛍光粒子であることを特徴とする上記1~5のいずれか記載の判定方法や、7蛍光粒子が、量子ドット蛍光粒子であることを特徴とする上記6記載の判定方法や、8さらにe抗体が接触した組織部位の細胞数をカウントする工程;f蛍光画像を基に、蛍光粒子1粒子を特定し、該蛍光粒子1粒子に対応する補正蛍光画像内の蛍光粒子1粒子の平均蛍光輝度を計測する工程;g補正蛍光画像内の全蛍光輝度を、前記蛍光粒子1粒子の平均蛍光輝度で除して蛍光粒子数を求め、該蛍光粒子数を工程eでカウントした細胞数で除し、1細胞あたりの蛍光粒子数を算出する工程;を備えたことを特徴とする上記6又は7記載の判定方法や、9蛍光粒子が有する明滅性を利用して、蛍光粒子1粒子を特定することを特徴とする上記8記載の判定方法に関する。また本発明は、10A蛍光物質で標識された抗体を成分として含む医薬品における抗体;B励起光照射手段;C蛍光画像取得手段;D蛍光画像取得用バンドパスフィルタ;を備えたことを特徴とする抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定システムや、11抗体を成分として含む医薬品における抗体が、がんの増殖制御因子又は転移制御因子を認識する抗体であることを特徴とする上記10記載の判定システムや、12がんの増殖制御因子又は転移制御因子がHER2humanepidermalgrowthfactorreceptor2であることを特徴とする上記11記載の判定システムや、13さらに、E細胞核蛍光画像を取得するバンドパスフィルタ;を備えたことを特徴とする上記10~12のいずれか記載の判定システムや、14蛍光物質が、蛍光粒子であることを特徴とする上記10~13のいずれか記載の判定システムや、15蛍光粒子が、量子ドット蛍光粒子であることを特徴とする上記14記載の判定システムに関する。本発明によると、例えば、自家蛍光の影響を除き、量子ドット蛍光粒子で標識したトラスツズマブを用いた組織染色法により、従来の乳がんの診断方法の一つとして用いられている組織染色法IHC-DAB法よりも広いレンジでHER2タンパク質の発現量を定量することが可能となり、IHC-DAB法に代わる高感度で定量的な新たな乳がんの病理診断を行うことができる。さらに、量子ドット蛍光粒子で標識したトラスツズマブの有効成分である抗HER2抗体によるHER2タンパク質の検出レベルと、トラスツズマブによる治療効果との相関が認められたことから、本発明によりトラスツズマブの治療効果を予測することが可能となることが期待される。このように本発明によると、トラスツズマブに限らず、抗体を成分として含む医薬品全般の有効性をも判定できる。また、本発明の抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定方法と従来技術のFISH法等とを組み合わせることで、乳がんにおけるHER2の遺伝子コピー数とHER2タンパク質量を共に定量的に評価することが可能となり、乳がんにおけるがん治療を進める上で有効である。本発明の抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定方法としては、抗体を成分として含む医薬品における抗体を蛍光物質で標識し、該蛍光標識された抗体を組織試料と接触させる工程a;前記抗体が接触した組織部位に励起光を照射し、蛍光画像を取得する工程b;前記蛍光画像と同一視野及び同一焦点における、前記蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域よりも短波長側又は長波長側の近傍領域の自家蛍光画像を取得する工程c;前記蛍光画像の蛍光輝度から、前記自家蛍光画像の蛍光輝度を除く画像処理をし、補正蛍光画像を取得する工程d;を備えた組織染色方法を用いる方法但し、医師による診断行為を除く。であれば特に制限されないが、さらに、抗体が接触した組織部位の細胞数をカウントする工程e;蛍光画像を基に、蛍光粒子1粒子を特定し、該蛍光粒子1粒子に対応する補正蛍光画像内の蛍光粒子1粒子の平均蛍光輝度を計測する工程f;補正蛍光画像内の全蛍光輝度を、前記蛍光粒子1粒子の平均蛍光輝度で除して蛍光粒子数を求め、該蛍光粒子数を工程eでカウントした細胞数で除し、1細胞あたりの蛍光粒子数を算出する工程g;を備えることが好ましく、また、本発明の抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定システムとしては、A蛍光物質で標識された抗体を成分として含む医薬品における抗体;B励起光照射手段;C蛍光画像取得手段;D蛍光画像取得用バンドパスフィルタ;を備えたシステムであれば特に制限されないが、さらに、E細胞核蛍光画像を取得するバンドパスフィルタ;を備えたシステムが好ましく、上記抗体を成分として含む医薬品が投与される対象としては、例えばがん患者、感染症患者、自己免疫疾患患者等を挙げることができ、これらの中でもがん患者を好適に例示することができる。がん患者に投与される、抗体を成分として含む医薬品における抗体としては、がんの増殖制御因子又は転移制御因子等を標的抗原とし該標的抗原に結合する抗体を有効成分とし、該抗体ががん細胞に結合することによってがん細胞の増殖を抑える、又はがん細胞を死滅させる抗体を挙げることができる。また、抗体を成分として含む医薬品としては、前記抗体を有効成分とする医薬品の他、抗がん剤、抗ウィルス剤、抗生物質等を有効成分とし、がん細胞へのデリバリー手段として抗体が含まれる医薬品等を挙げることができる。上記抗体医薬品としては、例えばシナジスSynagis、レミケードRemicade、リツキサンRituxan、トラスツズマブTrastuzumab等を挙げることができ、これら中でもトラスツズマブを好適に例示することができる。上記がんとしては、大腸がん、直腸がん、腎がん、乳がん、前立腺がん、子宮がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、血液がん、肝がん、膵がん、皮膚がん、肺がん、乳がん等を挙げることができる。また、がんの増殖制御因子又は転移制御因子のうち、がんの増殖制御因子としては、例えば表皮増殖因子EGF:epidermalgrowthfactor、EGF受容体EGFR、血小板由来増殖因子PDGF:plateletderivedgrowthfactor、PDGF受容体PDGFR、インスリン様増殖因子IGF:insulinlikegrowthfactor、IGF受容体IGFR、線維芽細胞増殖因子FGF:fibroblastgrowthfactor、FGF受容体FGFR、血管内皮増殖因子VEGF:vascularendotherialgrowthfactor、VEGF受容体VEGFR、肝細胞増殖因子HGF:hepatocytegrowthfactor、HGF受容体HGFR、神経栄養因子NT:neurotropin、形質転換増殖因子βTGFβ:transforminggrowthfactorβファミリー、ヒト上皮成長因子受容体1、2、3若しくは4HER1、2、3若しくは4:humanepidermalgrowthfactorreceptor123or4、マクロファージコロニー刺激因子CSF1:macrophagecolonystimulatingfactor1、CSF1受容体CSF1R等の細胞増殖を調節する因子、並びに、サイクリンcyclin、サイクリン依存性キナーゼCDK:cyclindependentkinase、サイクリンA、サイクリンB、サイクリンD、サイクリンE、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16INK、p15、p21、p27、RBretinoblastoma等の細胞周期を調節する因子を挙げることができ、がんの転移制御因子としては、例えばマトリックスメタロプロテアーゼ1MMP1、マトリックスメタロプロテアーゼ2MMP2、PAR1proteaseactivatedreceptor1、CXCR4chemokineC-X-Cmotifreceptor4、CCR7chemokineC-Cmotifreceptor7等を挙げることができ、これらの中でもHER2を標的とするトラスツズマブが広く用いられているため、HER2を好適に例示することができる。抗体を成分として含む医薬品の有効性を判定するために、例えば遺伝子診断法を併用することが好ましく、酵素と基質の発色反応を利用した免疫組織化学法等の従来の判定方法と比較検討することもできる。遺伝子診断法としては、例えばPCR法、サザンハイブリダイゼーション法、FISH法等を挙げることができ、酵素と基質の発色反応利用した免疫組織化学法としては、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼHRPとHRPの基質であるDAB3,3’diaminobenzidine、アルカリホスファターゼALPとALPの基質であるBCIPINBT5bromo4chloro3indolylphosphatenitrobluetetrazolium、β-ガラクトシダーゼとβ-ガラクトシダーゼの基質であるX-gal5bromo4chloro3indolylβgalactopyranoside等を用いた方法を挙げることができる。これらの中でも乳がんにおけるトラスツズマブの有効性を判定する場合、FISH法及び/又はHRPとDABを用いた免疫組織化学IHC-DAB法の併用を好適に例示することができる。本発明の抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定方法、及び抗体を成分として含む医薬品の有効性の判定システムにおいて、有効性を判定する対象となる医薬品としては、抗体を有効成分として含む医薬品に限定されず、抗がん剤、抗ウィルス剤、抗生物質等を有効成分とし、がん細胞へのデリバリー手段としてがん細胞特異的タンパク質を認識する抗体が含まれる医薬品や、有効成分が標的とする因子タンパク質の関連するシグナル伝達経路の因子を標的とする抗体を含む医薬品等を挙げることができる。上記抗体を成分として含む医薬品における抗体がHER2である場合、HER2のシグナル伝達経路の下流に存在する因子として、例えば細胞増殖に関与する因子Ras、Raf等や、抗アポトーシス因子PI3K、AKT等を挙げることができる。上記工程aにおいて、抗体を成分として含む医薬品における抗体としては、がんの増殖制御因子や転移制御因子やがん細胞特異的タンパク質などを特異的に認識する抗体が好ましく、モノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよい。また抗体のクラスやサブクラスは特に制限されず、クラスとしては、IgA、IgG、IgE、IgD、IgM等を挙げることができ、サブクラスとしては、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等を挙げることができる。また、ここでいう抗体という用語は、任意の抗体断片または誘導体を含む意味で用いられ、例えば、Fab、Fab’2、CDR、ヒト化抗体、多機能抗体、単鎖抗体ScFvなどを含む。かかる抗体は、公知の方法で製造することができる例えば、HarlowELaneDAntibodyColdSpringHarborLaboratoryPressを参照。上記工程aにおける蛍光物質としては、選択された波長の紫外光、可視光等の放射線による照射により蛍光を発する物質であれば特に制限されないが、例えば、有機蛍光物質としてはフルオレセイン、ローダミン、Cy-5、Cy-3、アレクサ等が挙げられ、無機蛍光物質としては、蛍光シリカナノ粒子、量子ドット蛍光粒子等の蛍光粒子を挙げることができる。そして、長波長側の方が自家蛍光の影響は少ないため、近赤外領域側、特に近赤外領域の蛍光を発する蛍光物質を用い、該蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域が近赤外領域側570~800nm、特に近赤外領域700~800nmであることが好ましい。上記有機蛍光物質は、励起光による褪色が急速に生じるため、長時間励起光を照射する解析には不向きであるため、光安定性に富み、長時間励起光を照射しても安定である蛍光粒子、中でも量子ドット蛍光粒子を用いることが好ましい。蛍光粒子としては、励起光の照射により蛍光を発する粒子であればよく、その素材等も制限されず素材自体が蛍光を発するものでも、蛍光物質が含まれた粒子や蛍光物質がコーティングされたことにより、蛍光を発することができる粒子でもよい。また、蛍光粒子の形やサイズは特に限定されず、方形、円盤状、多面体、球状等を挙げることができるが、球状が好ましく、そのサイズは、直径0.00001nm~1mm、好ましくは直径0.001nm~100μm、更に好ましくは直径0.01nm~10μmであり、蛍光粒子が発する蛍光の波長も適宜選択することができる。蛍光粒子は特開平9-241634や特開2010-242059などに開示された方法により作製することもできるが、ポリスチレン粒子をポリスチレンコア粒子の存在下で適切な蛍光色素またはスチレンの蛍光色素の重合により染色することで調製されたSPHERO蛍光粒子ベイバイオ社製や、蛍光粒子Estapor登録商標標準マイクロ粒子MerckChime社製等の市販品を入手することもできる。蛍光粒子の中でも、コロイド状量子ドットQD:QuantumDotとも呼ばれる量子ドット蛍光粒子が、蛍光粒子は非常に鋭い発光スペクトルと高い量子効率を併せもつという特性を有することから好ましい。量子ドット蛍光粒子は発光性の半導体ナノ粒子で、直径の範囲は1~20nmであり、生物学および医学診断の分野における蛍光イメージングに利用されている。量子ドット蛍光粒子には、輪郭が明確で3次元かつナノサイズの半導体結晶に電子が量子的に閉じ込められており、量子ドット蛍光粒子のサイズが小さくなると半導体のバンドギャップが大きくなるため、サイズによって半導体の光ルミネセンス発光波長を可視スペクトル全体にわたって調節することが可能である。本発明にける量子ドット蛍光粒子としては、発光性の半導体ナノ粒子であればよく、そのサイズは、励起光及び蛍光の波長から、粒子サイズを適宜調節することが好ましい。かかる量子ドット蛍光粒子として、例えば、半導体シェルZnSで被覆された半導体素材CdSeのナノクリスタルである、Qdot登録商標525、Qdot565、Qdot585、Qdot605、Qdot625、Qdot655、Qdot705、Qdot800全てInvitrogen社製等を利用することができる。取得する蛍光波長が800nmを越えるとカメラの感度が落ちるため、近赤外領域の蛍光を発する量子ドット蛍光粒子のうち、705nmの蛍光を発する量子ドット蛍光粒子Qdot705を用いることが好ましい。上記工程aにおいて、抗体を蛍光物質で標識する方法としては、該抗体に対して親和性を有する抗体二次抗体を介する方法、ビオチン-アビジン法、チオール基-マレイミド基のカップリング反応法、既存の化学リンカーを用いる方法、架橋剤EDC等を用いた架橋反応法、イオン結合法等を挙げることができるが、上記抗体がヒト化抗体、又はヒト抗体である場合、これらの中でもチオール基-マレイミド基のカップリング反応法を好適に例示することができる。上記工程aにおける組織試料としては、ホルマリン固定パラフィン切片や凍結切片等の固定組織試料切片を例示することができ、病理組織試料、末梢血組織試料、組織から分離された細胞や体液から分離された細胞のセルブロック試料、末梢血白血球又は細胞の浮遊試料を沈降又は遠沈して作成されるセルブロック試料、組織の捺印試料、末梢血、体液、滲出液、細胞を含む液体の塗沫試料等を挙げることができる。上記工程aにおいて、前記蛍光標識された抗体を組織試料と接触させる方法としては特に制限されず、前記接触により抗原-抗体反応が生じることから、接触時の温度は、0~40°Cが好ましい。また接触時間は、用いる組織試料の種類、抗体の濃度、タイターの高さ、上記接触反応温度、標的因子抗原の量、局在部位等により異なり、特に限定されず適宜選択されるが、10分~12時間、好ましくは10分~2時間を挙げることができる。また、抗体の非特異的な結合を防ぐために、抗体と組織試料とを接触させる前に、FBS、BSA、IgG等でブロッキング処理を行うことができる。上記工程bにおける励起光の励起波長としては、蛍光物質が発光する蛍光波長よりも短波長であり、人体に対する安全性の面から好ましくは400~700nm、より好ましくは450~650nm、特に一般的な励起波長に用いられる488nm、532nm、又は635nmを具体的に挙げることができる。上記工程bにおける蛍光画像としては、蛍光静止画像や、蛍光静止画像及び該蛍光静止画像に対応する蛍光動画像を挙げることができる。上記蛍光静止画像は、一般的なPC等のコンピュータをコントローラとして用い、CCDカメラの撮影条件の制御、取得蛍光静止画像の画像化と表示、光源の光量の制御等を行うことができる蛍光顕微鏡を用いて取得することができる。蛍光物質が発光する蛍光輝度が飽和しないように、励起光側のフィルター、ダイクロイックミラー等の必要な設定を行い、さらには励起光の露光時間が0.03から30~60秒になるように設定するのが好ましい。蛍光物質の蛍光各画素輝度が飽和していないかどうか確認する方法として、予め指定した輝度値又は輝度値の最大値に対する予め指定した割合の輝度値例えば8ビット画像ならば255が最大値であるので、220という数値や、輝度の最大値の90を設定し、その値を越えたときに飽和していると判断してもよい。また、このとき1つの画素のみでなく、画像全体の予め指定した割合の複数の画素を用いて判断してもよい。蛍光静止画像における蛍光物質の蛍光輝度が1粒子由来であるかどうかを特定する場合に、必要に応じて蛍光動画像を取得することができる。上記蛍光動画像としては、上記蛍光静止画像と同一視野及び同一焦点における動画像を2~500msecの分解能で50~200フレーム取得するのが好ましい。上記蛍光画像を取得するバンドパスフィルタとして、蛍光物質が発する赤、シアン、オレンジ、緑、青等の特定の波長の蛍光のみを透過するように選択されるバンドパスフィルタを用い、上記蛍光物質の全蛍光輝度の25以上、好ましくは50以上、より好ましくは75以上を取得できるバンドパスフィルタを使用するのが望ましい。さらに、上記蛍光画像を取得するバンドパスフィルタは、上記蛍光物質の蛍光輝度の30を30nm以内、好ましくは15nm以内、より好ましくは5nm以内の波長領域で取得できるバンドパスフィルタを使用するのが望ましい。例えば705nmの蛍光を発する蛍光物質を使用する場合、上記蛍光画像を取得するバンドパスフィルタは、蛍光波長の取得領域が695~740nmであるバンドパスフィルタであることが好ましい。上記工程cにおいて、自家蛍光画像を取得する方法としては、蛍光物質が発する蛍光波長を取得するために用いたバンドパスフィルタを、該バンドパスフィルタよりも短波長側又は長波長側の近傍領域、好ましくは短波長側の近傍領域の波長を取得できるバンドパスフィルタに代え、上記蛍光静止画像と同一視野及び同一焦点条件下で画像を取得し、蛍光物質の蛍光を含まず、自家蛍光のみが含まれた画像を取得する方法を挙げることができる。長波長の蛍光は、短波長の蛍光と比べ屈折が小さく、短波長の蛍光よりも遠くで焦点を結ぶため、上記蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域と自家蛍光画像を取得する波長領域の波長が大きく異なると、上記蛍光静止画像に含まれる自家蛍光の焦点と、自家蛍光画像の自家蛍光の焦点とのずれが大きくなってしまう。このため、上記蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域とその近傍領域の波長の差は、130nm以内、好ましくは120nm以内、より好ましくは110nm以内の領域、特に100nm以内を好適に例示することができる。本発明の蛍光画像や自家蛍光画像を取得するために用いるバンドパスフィルタとしては、具体的に蛍光波長の取得領域が505~545nm、565~595nm、585~630nm、640~690nm、695~740nm、760~800nm等のバンドパスフィルタを挙げることができ、例えば蛍光波長の取得領域が695~740nmのバンドパスフィルタを用いて上記蛍光静止画像を取得する場合、自家蛍光画像を取得するバンドパスフィルタは、蛍光波長の取得領域が640~690nmであるバンドパスフィルタが好ましい。上記自家蛍光画像を取得するための撮影条件は、上記蛍光静止画像と該自家蛍光画像の同じ領域の自家蛍光の輝度を比較し、任意のROI、例えば25×25ピクセルの自家蛍光の最大値が蛍光静止画像よりも自家蛍光画像の方が1.1~1.3倍、好ましくは1.2倍になるように設定する。すなわち、自家蛍光画像の方が蛍光静止画像よりも10~30、特に20程度自家蛍光の輝度を高い値にすることが好ましい。上記工程dにおいて、補正蛍光画像を取得する方法としては、蛍光静止画像及び自家蛍光画像をJPEGやTIF等の画像ファイルに変換した後、ImageJhttprsbinfonihgovij、PhotoshopAdobe社製、AfterEffectAdobe社製、G-Count株式会社ジーオングストローム社製等の画像解析ソフトを用いて、自家蛍光画像の輝度を基に蛍光静止画像の輝度から自家蛍光の輝度を除く処理を挙げることができる。なお、画像ファイルに変換する際、すべての蛍光分布が入るように閾値を選択するのが好ましい。上記工程eにおいて、抗体が接触した組織部位の細胞数をカウントする方法としては、DAPI、ヘキスト、PIPropidiumIodide等のDNAに結合して蛍光を発する核酸染色剤で細胞核を染色した後、蛍光画像と同一視野における染色された細胞核数の総数をカウントする方法を挙げることができるが、蛍光物質が発する蛍光波長の取得領域が近赤外領域である場合、蛍光特性が類似している赤色の蛍光を発するPIよりも青色の蛍光を発するDAPI、又はヘキストを用いることが好ましい。上記工程fにおいて、蛍光粒子1粒子を特定する方法としては、例えば蛍光画像における蛍光粒子の蛍光輝度を測定し、蛍光1粒子が発する蛍光の輝度情報を基に上記蛍光粒子が何粒子に相当するか求める方法や、蛍光粒子が有するブリンキング明滅性を利用する方法等を挙げることができるが、蛍光粒子が量子ドット蛍光粒子である場合、ブリンキング明滅性を利用する方法が好ましい。ここでブリンキング明滅性とは、励起光を照射したときの照射時間もしくは照射量に対して発光強度が突然殆どゼロOFFとなる滅時間消滅時間が数msec~5sec近く続き、再び元の発光強度を得ることを繰り返す性質のことをいう。また、ブリンキング明滅性を利用した蛍光粒子1粒子を特定する方法とは、蛍光静止画像又は蛍光動画像を基に、励起光を任意の時間、例えば10~100秒照射した場合の蛍光粒子の消滅時間を測定し、該蛍光粒子が1粒子であるかの評価を行い、蛍光粒子1粒子を特定する方法のことをいう。例えば蛍光粒子として705nmの蛍光を発する量子ドット蛍光粒子を用いる場合、励起光を20秒間照射した場合の量子ドット蛍光1粒子の消滅時間は約4秒となり、すなわち消滅時間が約4秒である蛍光粒子を1粒子由来の量子ドット蛍光粒子であると特定できる。ここで量子ドット蛍光粒子が消滅したかどうかを判断するために、量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度の閾値を適宜設定することができ、例えば量子ドット蛍光粒子の最大蛍光輝度の0~30、好ましくは5~15、より好ましくは10を閾値として設定する。特定した1粒子に対応する補正蛍光画像内の蛍光輝度を、ImageJ、Photoshop、AfterEffect、GCount等の画像解析ソフトを用いて測定する。上記測定により1粒子の平均蛍光輝度の算出は、労力と正確性を考慮すると、2~200蛍光粒子、好ましくは5~10蛍光粒子を用いて行う。上記工程gにおいては、1細胞あたりの蛍光粒子数を算出する。1細胞あたりの蛍光粒子数は、上記補正蛍光画像から得られた量子ドット蛍光粒子の全蛍光輝度の値画面内の全蛍光輝度、上記細胞核染色画像から得られた細胞数、及び量子ドット蛍光粒子1粒子あたりの平均蛍光輝度の値1粒子蛍光輝度を、式[画面内の全蛍光輝度/1粒子蛍光輝度/細胞数=画像内の全蛍光粒子数/細胞数=蛍光粒子数/細胞]に入力することにより算出することができる。上記工程a~dを備えた本発明の判定方法により、判定対象の組織試料と正常組織試料の補正蛍光画像をそれぞれ取得し、両補正蛍光画像内の蛍光輝度を比較して、判定対象の組織試料の補正蛍光画像における蛍光輝度の方が高い場合、医薬品に含まれる抗体が認識するタンパク質が多いことが示唆されるため、判定対象を、かかる医薬品による治療効果が見込まれると判定することや、かかる医薬品投与適用患者として好適であると判定することができる。また、上記工程a~gを備えた本発明の判定方法により、判定対象の組織試料と正常組織試料の1細胞あたりの蛍光粒子数をそれぞれ算出し、両者を比較して、判定対象の組織試料における1細胞あたりの蛍光粒子数の方が多い場合、医薬品に含まれる抗体が認識するタンパク質が多いことが示唆されるため、判定対象を、かかる医薬品による治療効果が見込まれると判定することや、かかる医薬品の投与適用患者として好適であると判定することができる。例えば、乳がんの抗体医療品であるトラスツズマブの有効成分である抗HER2抗体を量子ドット蛍光粒子で標識し、かかる量子ドット蛍光粒子標識抗体を用い、1細胞あたりのトラスツズマブにより検出される蛍光粒子数を求め、その数を指標にして、トラスツズマブ投与適応患者を選定することや、トラスツズマブの治療効果を予測することができる。前記本発明の判定システムにおける励起光照射手段としては、水銀ランプ100V、水銀ランプ200V、キセノンランプ75V、キセノンランプ150V、ハロゲンランプ12V100W、タングステンランプ6V30W、キセノンランプ[波長250~1,000nm]、タングステンランプ[波長250~1,000nm]、Cr:LiSAFランプ[波長430nm]、ヘリウム-カドミニウムレーザー[波長325、442nm]、UVアルゴンレーザー[波長351、364nm]、アルゴンイオンレーザー[波長488、514nm]、ヘリウムネオンレーザー[波長543、594、633nm]、クリプトンイオンレーザー[波長568、647nm]、LD励起CW/Q-CW連続発振/準連続発振固体レーザー[波長375nm、405、440、473、488、505、515、532、561、594、635、785、1064nm]等を挙げることができ、これら中でも、人体に対する安全性の面から400~700nmの励起波長、好ましくはLD励起CW/Q-CW固体レーザー[波長488、532、635nm]を好適に例示することができる。また、本発明の判定システムにおける蛍光画像取得手段としては、蛍光顕微鏡や共焦点レーザー走査型蛍光顕微鏡等を挙げることができる。かかる蛍光画像取得手段により、取得できる蛍光画像としては、蛍光静止画像と自家蛍光画像、必要に応じて蛍光動画像を挙げることができる。また、本発明の判定システムにおける蛍光画像取得用バンドパスフィルタとしては、蛍光静止画像蛍光動画像及び自家蛍光画像の取得用バンドパスフィルタを挙げることができ、また、細胞核蛍光画像を取得するバンドパスフィルタとしては、使用する核酸染色剤の蛍光特性によって異なり、例えばDAPIの最大蛍光波長が461nm、ヘキスト33342、及びヘキスト33258の最大蛍光波長が465nm、PIPropidiumIodideの最大蛍光波長が617nmであることから、それら波長を十分カバーするバンドパスフィルタを用いることが好ましい。以下実施例により、本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はかかる実施例により制限されるものではない。[IHC-QDs法を用いて免疫染色した組織試料の作製法]ヒト乳がん病理組織として、IHC-DAB法に基づいた評価が、Score0が6例、Score1が6例、Score2が11例、Score3が14例の計37例を選択した。また、症例の背景は、表1に示すように偏りの無い様に配慮した。上記37例の組織について一般的な病理組織診断に用いる方法で、組織試料を調製した。すなわち、がん患者の乳房組織検体をホルマリンを用いて固定し、アルコールで脱水処理をした後、キシレン処理を行い、高温のパラフィン中に浸しパラフィン包埋を行い、組織試料を作製した図1a。続いて上記組織試料を2~4μmの切片にし、キシレンで脱パラフィン処理を行い、アルコール処理を行った後、脱イオン水で洗浄した。抗体が効率的に固定組織内の抗原部位へアクセスできるようにするために、上記試料の賦活化を10mMクエン酸溶液pH6.0中で121°C、15分間条件下で行い、固定組織構造を緩める処理を施した。続いて上記試料を脱イオン水、リン酸緩衝生理食塩水PBSで順次洗浄した後、705nmの蛍光を発する量子ドット蛍光粒子Qdot705で標識されたトラスツズマブの有効成分であるHER2抗体トラスツズマブQdot70515nMを含むPBS溶液中で25°C、3時間抗体反応を行った。ここでは、トラスツズマブにQdot705を標識する方法として、還元されたトラスツズマブのチオール基と量子ドット蛍光粒子のマレイミド基との間のカップリング反応を用いた図1b。なお、コントロールとしてQdot705で標識されたヒトIgGヒトIgGQdot705を用いた。PBS溶液で4回洗浄した後、細胞数をカウントするためにDAPI染色2μgmlPBSを25°C、10分間行うことで細胞核を染色した。PBSで3回洗浄した後、封入し、免疫染色IHC-QDs法を行った組織試料を作製した図1a。[蛍光免疫組織染色法の問題点]上記実施例1で作製した免疫染色した組織試料について、共焦点ユニット横河電機社製、蛍光顕微鏡オリンパス社製、及びElectronMultiplierCCDEMCCDカメラAndor社製を組み合わせた装置を用いて488nmの励起光を照射した後、波長取得領域が695-740nmのバンドパスフィルタを用いて量子ドット蛍光粒子トラスツズマブに標識の蛍光画像蛍光静止画像を取得した。図2には、IHC-DAB法によりScore3と評価された病例を例として示しているが、コントロールとしてヒトIgGQdot705を用いた場合は量子ドット蛍光粒子による蛍光は殆ど観察されないのに対して、トラスツズマブQdot705を用いた場合、量子ドット蛍光粒子による蛍光が観察された。これらの結果は、HER2タンパク質にトラスツズマブが特異的に結合していることを裏付けており、トラスツズマブQdot705は乳がん細胞に発現するHER2タンパク質を特異的に検出できることを示している。他方、量子ドット蛍光粒子による蛍光に加えて自家蛍光によるバックグラウンドが存在することから、自家蛍光を排除する必要性が生じた。自家蛍光は組織試料の種類や組織試料内の場所によって大きく異なるため、一定の閾値を決められない。従って、量子ドット蛍光粒子トラスツズマブに標識の蛍光輝度を正確に計測するためには、自家蛍光を排除する必要がある。生体組織染色における自家蛍光の影響を除く方法として、a励起光照射による自家蛍光褪色法、又はbコントラスト調整法等が知られている図3。上記a励起光照射による自家蛍光褪色法に関して、量子ドット蛍光粒子が有する光安定性により、長時間光照射しても量子ドット蛍光粒子由来の輝度は褪色させず、自家蛍光のみを褪色させることは可能だが、自家蛍光の完全褪色には長時間必要であり、また照射面のみの自家蛍光しか褪色できないという欠点もある。また上記bコントラスト調整法では量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度が自家蛍光の輝度と比べ十分強い場合は自家蛍光のみの輝度を消すことは可能だが、量子ドット蛍光粒子の輝度が自家蛍光の輝度と十分差が無い場合、コントラストの調整により量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度が消えてしまうことが考えられる。さらに、自家蛍光は試料の種類や場所によって大きく異なるため、一定の閾値を決められない。[自家蛍光を除いた補正蛍光画像の作成]必要なのは、バックグラウンドである自家蛍光の蛍光強度がゼロ0の蛍光静止画像である。そうすれば、蛍光静止画像内の全蛍光を量子ドット蛍光粒子由来の蛍光として計算することができる。上記実施例2のコントラスト調整法は、蛍光強度の割り算であるため、割り算ではゼロ0は作れず、したがってゼロ0を作り出せる引き算を用いた画像処理方法が必要となる。そこで、蛍光静止画像の自家蛍光を除く画像処理方法として、以下に示す方法を考案した。まず、励起波長が488nmの励起光レーザーを用いて量子ドット蛍光粒子で免疫染色した乳がん組織試料に照射し、量子ドット蛍光粒子の蛍光画像量子ドット蛍光粒子の蛍光自家蛍光を、蛍光波長の取得領域が695~740nmのバンドパスフィルタで取得した後、かかる蛍光画像と全く同じ焦点面及び同じ視野で自家蛍光のみの自家蛍光画像を、蛍光波長の取得領域が640~690nmのバンドパスフィルタで取得する。続いて、かかる蛍光画像量子ドット蛍光粒子の蛍光自家蛍光及び自家蛍光画像を512×512ピクセルで取り込み、256階調のJPEG画像に変換した後図4a、蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子の蛍光自家蛍光の各ピクセルに含まれる輝度情報0-255の値から自家蛍光画像自家蛍光に含まれる輝度情報0-255の値を引くことで、量子ドット蛍光粒子の蛍光のみの画像補正蛍光画像を作成する方法である。かかる補正蛍光画像を作成するために、まず様々な波長範囲における自家蛍光の蛍光波長特性を調べた。量子ドット蛍光粒子で免疫染色しないがん組織試料を488nmの励起波長で励起した後、蛍光波長の取得領域が505~545nm、565~595nm、585~630nm、640~690nm、695~740nm、及び760~800nmのバンドパスフィルタ計6種類を用いて、同一視野及び同一焦点の自家蛍光画像を取得した。かかる6種類のバンドパスフィルタで取得した自家蛍光画像全てに関して、同一領域の512×512ピクセルの画像をJPEG画像へ変換し、かかるJPEG画像において、同一領域の512×420ピクセルトータル210540ピクセルの画像を切り出した後、かかる画像内の蛍光輝度の平均値を求め、自家蛍光画像の蛍光輝度平均値/ピクセルを算出した値1。また、上記6種類のバンドパスフィルタで取得したそれぞれの自家蛍光画像において、自家蛍光が存在しない背景バックグラウンドの画像を背景蛍光画像として取得し、かかる背景蛍光画像の蛍光輝度を測定した。かかる測定では、25×25ピクセルの背景蛍光画像における蛍光輝度を任意の3領域で求め、背景蛍光画像の蛍光輝度平均値/ピクセルを算出した値2。なお、かかる3領域は、上記6種類のバンドパスフィルタで取得した各自家蛍光画像において、同一領域を測定した。上記1及び2の値を用い、背景蛍光の蛍光輝度を除いた自家蛍光の蛍光輝度平均値以下、単に自家蛍光の蛍光輝度というは、式×ピクセル数=×ピクセル数を基に算出した。上記6種類のバンドパスフィルタそれぞれの自家蛍光の蛍光輝度を算出し、それぞれのバンドパスフィルタが取得する蛍光波長幅505~545nm:40nm、565~595nm:30nm、585~630nm:45nm、640~690nm:50nm、695~740nm:45nm、760~800nm:40nmで除することにより、波長幅あたりの自家蛍光の蛍光輝度平均値を算出した。かかる波長あたりの自家蛍光の蛍光輝度を、それぞれのバンドパスフィルタが取得する蛍光波長の中心にプロットし、点線で結ぶことにより、自家蛍光の蛍光波長特性を示す図を作成した図4b。次に、上記自家蛍光の蛍光波長特性に量子ドット蛍光粒子の蛍光波長特性を対応付けるために、上記実施例1に記載の方法により量子ドット蛍光粒子で免疫染色した乳がん組織試料を、488nmの励起光で励起し、蛍光波長の取得領域が695~740nmのバンドパスフィルタを用いて蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光を取得した。続いて、かかる蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光と同一視野及び同一焦点の蛍光動画像を取得し、かかる蛍光動画像を用いて下記の実施例4で示す方法量子ドット蛍光粒子が有する明滅反応を利用する方法により量子ドット蛍光粒子の1粒子を特定した。その後、蛍光静止画像を用いて、特定した量子ドット蛍光粒子の1粒子の蛍光輝度を測定した。すなわち、自家蛍光と重なっていない量子ドット蛍光粒子の1粒子に注目し、かかる1粒子の蛍光が全て網羅されるようなピクセル範囲についての蛍光輝度を求め、蛍光静止画像の蛍光輝度/ピクセルを算出した値3。また、蛍光静止画像において、自家蛍光も量子ドット蛍光粒子の蛍光も存在しない背景バックグラウンドの画像を背景蛍光画像として取得し、かかる背景蛍光画像の蛍光輝度を測定した。かかる測定では、量子ドット蛍光粒子1粒子の蛍光輝度を測定したときと同じピクセル数を有する任意の3領域の蛍光輝度を求め、背景蛍光画像の蛍光輝度平均値/ピクセルを算出した値4。上記値3及び値4を用いて、背景蛍光の蛍光輝度を除いた量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度以下、単に量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度というは、式×ピクセル数=×ピクセル数を基に算出した。さらに、蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光において、量子ドット蛍光粒子の蛍光を含まない自家蛍光のみの領域から、量子ドット蛍光粒子1粒子の蛍光輝度を測定したときと同じピクセル数を有する任意の3領域の蛍光輝度を求め、自家蛍光画像の蛍光輝度平均値/ピクセルを算出した値5。かかる値5を用い、自家蛍光の蛍光輝度に対する量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度は、式量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度/[自家蛍光画像の蛍光輝度平均値/ピクセル]×ピクセル数=[値3値4]×ピクセル数/[値5値4]×ピクセル数を基に算出した。以上の操作を15の異なる蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光に対して行い、得られた計15蛍光粒子分の値から、その平均値自家蛍光の蛍光輝度に対する量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度平均値を求めた結果、1.88±0.10平均値±semとして算出された。量子ドット蛍光粒子Qdot705の蛍光輝度変化は、例えばインビトロジェンのホームページhttpwwwinvitrogenjpqdotindexshtmlに掲載されているパンフレットファイル名:200820CBQdotの記載を参考にし、Qdot705の蛍光輝度を示す面積/自家蛍光の蛍光輝度を示す面積比が、1.88になるように量子ドット蛍光粒子や自家蛍光の蛍光輝度を示す面積を決定し、自家蛍光とともにQdot705の蛍光波長特性を示す図を作成した図4b。なお、かかる面積の決定には、便宜的に蛍光波長が695~740nmの自家蛍光の蛍光輝度を示す面積を四角形とみなして行った。Qdot705の蛍光輝度を示す面積/自家蛍光の蛍光輝度を示す面積比が1.88であることは、蛍光静止画像において全蛍光輝度量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度自家蛍光の蛍光輝度のうち、バックグランドとなる自家蛍光の蛍光輝度が占める割合は50を超えることを示しており、量子ドット蛍光粒子の蛍光輝度を定量するためには、自家蛍光の蛍光輝度を除く必要があることが再確認された。自家蛍光を除いた補正蛍光画像は、以下の手順にしたがって作成した。すなわち、IHC-QDs法を行った組織試料に対して488nm励起光を40秒間照射し、蛍光波長の取得領域が695~740nmのバンドパスフィルタにより取得した蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光40s/frame×1枚、及び上記蛍光静止画像と同一視野及び同一焦点で蛍光波長の取得領域が640~690nmのバンドパスフィルタにより取得した自家蛍光画像40s/frame×1枚を得た。また、細胞数をカウントするために、400nm励起光で組織試料を励起し、蛍光波長の取得領域が420~500nmのバンドパスフィルタにより取得した細胞核画像DAPIより検出を得た図5右下。蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光と自家蛍光画像内の同じ領域の自家蛍光を比較し、任意のROI例25×25ピクセルの自家蛍光の最大値が蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光×1.2倍=自家蛍光画像になるようにする。すなわち、自家蛍光画像の方が蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光と比べ、約20程度自家蛍光の輝度が高い値になるようにする。このように自家蛍光由来の輝度を調整した状態でJPEG像に変換する図5左上、及び右上。なお、JPEG像へ変換する際、すべての蛍光が取り込まれるように閾値を設定した。自家蛍光を除き、量子ドット蛍光粒子のみの補正蛍光画像を取得するために、蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光-自家蛍光画像の処理をPhotoshopの画像解析ソフトを用いて行った図5左下。この際、量子ドット蛍光粒子1個分の輝度が消えていないこと、また自家蛍光部分の蛍光強度が引き算後、ゼロ0になっていることを任意の複数領域で確認した。このようにして、IHC-DAB法による病理診断を行った組織試料における蛍光静止画像量子ドット蛍光粒子自家蛍光、及び補正蛍光画像を取得した図6。[量子ドット蛍光粒子1粒子あたりの平均蛍光輝度の算出法]量子ドット蛍光粒子の1粒子あたりの平均蛍光輝度を算出するために、蛍光輝度が1粒子由来であるかどうかを決定する必要があるが、ここでは量子ドット特有のブリンキング明滅性を利用した。ブリンキング明滅の境界となる閾値として、量子ドット蛍光粒子の最大蛍光輝度の10を設定すると図7の矢頭参照、1粒子の量子ドット蛍光粒子であれば、20秒間の照射時間においてoff-state滅状態は約4秒になる図7。そのため、約4秒間のoff-state滅状態を持つ粒子の平均強度を測定すれば、1粒子蛍光輝度が得られる。そこで、蛍光静止画像に対応する蛍光動画像を取得するために、励起光を照射した後に200~400ミリ秒の分解能で100枚の連続した蛍光静止画像を蛍光波長の取得領域が690~730nmのバンドパスフィルタを用いて取得し、蛍光動画像200~400ms/frame×100枚を得た。上記蛍光動画像を用いて、約4秒間のoff-stateを持つ粒子を蛍光粒子1粒子として特定した後、特定した後、静止画像において対応する粒子の蛍光輝度をImageJ画像解析ソフトを用いて決定した。これを5~10個の粒子に対して行ない、1粒子あたりの平均蛍光輝度を算出した。[1細胞あたりの粒子数の算出法]補正蛍光画像から得られた量子ドット蛍光粒子の全蛍光輝度の値画面内の全蛍光輝度と、細胞核染色画像DAPIより検出から測定した細胞数と、さらには量子ドット蛍光粒子1粒子あたりの平均蛍光輝度の値1粒子蛍光輝度を、式[画面内の全蛍光輝度/1粒子蛍光輝度/細胞数=画像内の全蛍光粒子数/細胞数=蛍光粒子数/細胞]に入力することで、1細胞あたりの量子ドット蛍光粒子数を算出することができる。さらに、コントロールである量子ドット蛍光粒子で標識されたヒトIgGを用いた場合でも同様に行ない、トラスツズマブに標識した量子ドット蛍光粒子数/細胞-ヒトIgGに標識した量子ドット蛍光粒子数/細胞を行うことにより、量子ドット蛍光粒子数トラスツズマブを標識から非特異的な粒子数を除き、1細胞あたりの真の蛍光粒子数を算出した。[乳がんにおける従来の診断方法とIHC-QDs法との比較]IHC-QDs法により算出されたトラスツズマブの有効成分であるHER2抗体が認識するHER2タンパク質量が、HER2遺伝子コピー数と関連性があるかどうかを調べるために、FISH法によりHER2遺伝子コピー数を測定した。FISH法は、以下に示した操作手順により行った。IHC-QDs法を行った上記37例の組織試料についてヘモディーHemo-Deで室温、10分間、3回処理を行うことで脱パラフィン処理した後、100エタノールで室温、5分間、2回洗浄し、脱水処理を行った。DNAプローブの到達性を向上させるために、上記組織試料に対して以下に示した1~3の処理、すなわち1細胞膜及び核膜のタンパク質の除去0.2NHClで室温、20分間、2ホルマリンによる架橋構造の分解1MNaSCNで80°C、30分間、及び3細胞膜及び核膜のタンパク質、特にコラーゲンの分解25mgプロテアーゼ[2500-3000units/mg][ペプシン]/1MNaCl[pH2.0]50mlで37°C、60分間、を順次行った。DNAを1本鎖に変性させるために、上記組織試料を変性溶液70ホルムアミド/SSC[150mMNaCl、15mMクエン酸ナトリウム]で72°C、5分間処理をした後、HER2遺伝子検出用DNAプローブ及びヒト17番染色体セントロメア検出用プローブパスビジョンHER-2DNAプローブキットAbbottJapan社製を用いたハイブリダイゼーション処理を、37°C、2日間行った。ハイブリダイゼーション処理した後、細胞数をカウントするためにDAPI染色2μgmlPBSを25°C、10分間行い細胞核を染色した。従来技術の組織染色法であるIHC-DAB法により算出したHER2タンパク質量IHC-DABscoreとFISH法により算出されたHER2遺伝子コピー数FISHscoreとを比較した場合、両者に定量的な関係はなかった図8、a。他方、IHC-QDs法により算出された蛍光粒子標識トラスツズマブで検出した蛍光粒子数IHC-QDsscoreとFISHscoreとを比較した場合、IHC-QDsscoreとFISHscoreは強く相関していた相関係数R=0.7009、p<0.001図8、b。すなわち、IHC-QDs法により算出されたトラスツズマブで検出されるHER2タンパク質量とHER2遺伝子コピー数がともに定量的に評価され、両者が相関付けられた。この結果は、これまではIHC-DABscoreが2を示す症例の病理判断をFISH法により再検討する必要があったが、IHC-QDs法により算出されたIHC-QDsscoreは、FISH法により算出されたFISHscoreと定量的な関係にあるため、FISH法による再検討を必要としない。また、IHC-DAB法と比べ、より簡素化した操作手順で行う事ができる点においてもIHC-QDs法は優れている図9。さらに図10には、IHC-DABscoreとIHC-QDsscoreとを比較した結果を示すが、IHC-DAB法では同一の判定基準例えばScore2又はScore3とされていた症例においても、IHC-QDsscoreを求めた場合非常に幅の広いレンジで検出されることがわかった。これらの結果は、IHC-DAB法とIHC-QDs法とは免疫組織染色法という点では同じであるにもかかわらず、従来技術のIHC-DAB法は、HER2タンパク質の発現量を4段階のみでしか評価できず不十分な評価法であるのに対し、IHC-QDs法は、IHC-QDsscoreを算出することによって高精度かつ定量的に評価できることを示している。さらに、図10の点線で囲った3病例については、IHC-DAB法ではscore2の判定基準を示す一方、IHC-QDs法では極めて低い値であり、その値はIHC-DAB法によるscore0、又はscore1の病例と同程度であった。このことは、IHC-QDs法で用いた治療薬としての抗HER2抗体トラスツズマブとIHC-DAB法で用いた診断薬としての抗HER2抗体のエピトープが異なることが原因である可能性が考えられる。従って、治療薬に含まれる抗体を用いた組織染色による診断方法は、治療薬に含まれる抗体のエピトープと異なる抗体を用いたIHC-DAB法等の診断方法と比べ、治療薬を投与する適応患者を選定する上で有効であると考えられる。トラスツズマブ単剤療法病例における治療効果とIHC-QDsscore又はFISHscoreとの対比]トラスツズマブ単剤療法による治療効果を示す指標として、Response薬剤の治療効果、又はTTPTimeToProgression;薬剤投与により腫瘍増殖が制御されている期間の2つの指標が世界的に広く使用されている。上記2つの指標に加え、IHC-QDs法により算出したトラスツズマブで検出されるHER2タンパク質量IHC-QDsscoreが治療効果を示す指標となり得るかどうかを検証した。そこで、遠隔転移が確認され、かつトラスツズマブ単剤療法が施行されていた表2に示す6症例について、IHC-QDsscoreを算出し、TTPとの関連性について調べたところ、IHC-QDsscoreとTTPは強く相関していた相関係数R=0.69図11b。他方、FISHscoreとTTPには相関は認められなかった図11a。これらの結果から、量子ドット蛍光粒子で標識したトラスツズマブを用いたIHC-QDs法により、乳がん組織におけるHER2を標的としたトラスツズマブの治療効果を予測できることが示されるとともに、従来技術のFISH法を用いてトラスツズマブの治療効果を予測することは、困難であることを示された。"