a単一cys変異、b追加的なジスルフィド架橋、またはc単一cys変異および追加的なジスルフィド架橋、を有する成長ホルモン化合物を含み、アルブミン結合残基が親水性スペーサーを介して前記GHに連結している成長ホルモンコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。式AWBGHを有する、請求項1に記載の成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩。親水性スペーサーが、a成長ホルモン化合物のN末端もしくはGln40もしくはGln141、またはbhGHのT3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55C、S57C、P59C、S62、E65C、Q69C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122C、G126C、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、E186C、G187CおよびG190Cのいずれか1つ、例えば、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cの任意の1つから選択される、成長ホルモン化合物中に存在する単一cys変異の硫黄残基に連結している、請求項1および2のいずれか一項に記載のコンジュゲート。GHが、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの少なくとも1つの間の追加的なジスルフィド架橋を有する、請求項1から3までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。Aが、から選択される、請求項2から4までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。Wが、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する、請求項2から5までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。Bが式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2でありX2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16、例えば0~6から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10、例えば0~6からから選択され、m2およびm5は、独立に、0~25、例えば、0~10から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16、例えば、0~10から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COHCNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する、請求項2から6までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。D1およびD2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、請求項7に記載のコンジュゲート。E1およびE2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、請求項7または8に記載のコンジュゲート。W1からW8までが、独立に、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキルまたはCNHC1~6アルキルまたは原子価結合からなる群から選択されアルキル基が、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりがCHの炭素原子からX4への付着点を示す、請求項2から9までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。R1、R2、R3、R4およびR5が、独立に、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基が、場合によって、COH、CNH2またはS2OHで置換されている、請求項7から10までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。X4が、原子価結合であり、W6がピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHのいずれかから選択され、が、CHの炭素原子からGHへの付着点を示す、請求項7から11までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。Bがから選択される、請求項2から12までのいずれか一項に記載のコンジュゲート。前記化合物がから選択される、請求項1に記載のコンジュゲート。式AWB1Uアリール、ヘテロアリール、置換されたマレイミドまたはNHCCH2CH2ピロリジン25ジオンなどのピロリジン25ジオンを含む、またはそれからなる、bD1l6D2を含み、D1およびD2が、独立に、O、N、NCR7または原子価結合から選択されR6およびR7が、独立に、水素またはC1~6アルキルを示す、cCl、Br、I、OH、OS2Me、OS2CF3、OTsなどの脱離基を含む、またはそれからなる、dCNHCH2CHCH2などのアリルアミンを含む、またはそれからなる、またはeNH2などのアミンを含む、またはそれからなるの化合物。成長ホルモンの欠乏に関連する種々の疾患を治療するために、ヒト成長ホルモンおよび密接に関連するその変異形を投与することを用いる。ポリペプチドであるので、成長ホルモンは非経口的に、すなわち、針を用いて投与する。成長ホルモンは、さらに、相対的に短い半減期を特徴とし、したがって、高頻度の投与が必要であり、患者には対応する疼痛および不自由が伴う。したがって、例えば、半減期の延長など、薬理学的性質が改善された成長ホルモン化合物を提供することが依然として必要とされている。本発明は、薬物動態学的性質および薬理学的性質が改善された新規の成長ホルモン化合物コンジュゲート、ならびにそれらを作出するための方法を提供する。皮下投与された医薬化合物の生物学的利用能は、吸収速度に関連し得る。化合物の、皮下の毛細血管のタイトジャンクションを通過する能力は、一部において、それらの物理的性質および化学的性質、ならびに分子サイズまたは化合物の流体力学的体積に関連し得る。タンパク質コンジュゲート、例えば40kDaのPEGを有するペグ化hGHは、150~250kDaの見かけの分子量を有する。アルブミンが共有結合したhGH分子は、87kDaの分子量を有し、一方アルブミンが非共有結合したhGH分子は、時々アルブミンから解離し、したがって、22kDaの分子量を有する。解離した状態で費やされる時間は、少なくともある程度はアルブミン結合部分の親和性に左右されると考えられる。したがって、アルブミンが非共有結合したhGH分子の吸収速度は、PEGhGHより速い可能性がある。吸収速度の増加は、アルブミンに対する親和性がより低いアルブミン結合部分を使用した場合に得ることができる。さらに、アルブミン結合部分をhGHに付着させるリンカーおよびまたはスペーサーの物理的性質および化学的性質が、化合物の機能性に影響を及ぼす。本出願人らは、驚いたことに、性質が改善された、例えば、invitroでの効力が高い、または、例えばinvivoでの半減期が増加している、または、例えば、おそらくinvivoにおける作用のプロファイルが引き延ばされているのと併せてタンパク質分解に対する抵抗性が増加しているGHコンジュゲートを得るために、単一cys変異およびまたは追加的なジスルフィド架橋を有する成長ホルモン化合物を、GHとアルブミン結合残基を分離する、一般にはmLogP0またはcLogP05を有する化学的部分を有する親水性スペーサーを介して、アルブミン結合残基に選択的に連結することができることを見いだした。親水性スペーサーを介してアルブミン結合残基を変異させた単一cysに連結することにより、生物活性を保持することができ、かつ上記の改善の1つまたは複数を得ることができる。そのような改善は、アルブミン結合残基を、親水性スペーサーを介して、追加的なジスルフィド架橋を有する成長ホルモンに、例えば、hGHのN末端、40位または141位に連結した場合にも得られる。成長ホルモン化合物は、単一cys変異と追加的なジスルフィド架橋の両方を含んでもよく、その態様では、アルブミン結合残基が親水性スペーサーを介して単一cys変異に連結している。広範な態様において、本発明は、a単一cys変異、b追加的なジスルフィド架橋、またはc単一cys変異および追加的なジスルフィド架橋を有する成長ホルモン化合物を含み、アルブミン結合残基が親水性スペーサーを介して前記GHに連結している成長ホルモンコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩に関する。本発明の一実施形態では、安定なhGH化合物は、追加的なジスルフィド結合を有する。その一方または両方が点変異によって野生型hGH配列に導入されるシステイン対の間にジスルフィド結合が形成される。本発明の別の実施形態では、安定なhGH化合物は、追加的なシステインを有する。システインは、点変異によって野生型hGH配列に導入される。本発明の別の実施形態では、安定なhGH化合物は、追加的なジスルフィド結合および1つまたは複数の追加的なシステインを有する。追加的なシステインと追加的なシステイン対の間に形成される追加的なジスルフィド結合は、点変異によって野生型hGH配列に導入される。さらに、本発明は、親水性スペーサーを介したアルブミン結合残基のヒト成長ホルモンへの導入を選択的に行うことができ、活性の大部分は保持されるという知見に基づく。アルブミン結合残基を、親水性スペーサーを介して、導入されたシステインに対応する位置およびまたは配列番号1の配列を有するhGHのグルタミン40位およびまたはグルタミン141位およびまたはN末端に導入することが好ましい。トランスグルタミナーゼ、具体的にはストレプトベルチシリウムモバラエンスまたはストレプトマイセスリジクス由来のTGaseを使用することにより、アルブミン結合残基を、親水性スペーサーを介して40位または141位に選択的に導入し、かつ、グルタミンがトランスグルタミナーゼの基質であるという事実にもかかわらず残りの11グルタミン残基は手をつけないままにすることができる。したがって、本発明の一実施形態では、成長ホルモン化合物は、親水性スペーサーを介して1つのアルブミン結合残基に連結している。一般には、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介して、hGHのN末端、または18位、30位、40位、42位、62位、69位、88位、95位、98位、99位、100位、101位、102位、108位、135位、141位または154位に付着している。他の実施形態では、単一cys変異および上記の位置のいずれか1つ、例えばhGHのN末端、40位または141位などに、2つのアルブミン結合残基が親水性スペーサーを介して付着している。本発明の成長ホルモン化合物コンジュゲートは、ペグ化されたhGHと比較して皮下吸収が速く、したがって、脂肪萎縮症をほとんど、または全くもたらさない。さらに、アルブミン結合残基および親水性スペーサーは、PEGとは対照的に、生分解性である。本発明のさらに別の目的は、本発明の方法に従って前記タンパク質をコンジュゲートすることによってGHの性質を改善するための方法をもたらすことである。別の態様では、本発明は、単一cys変異、追加的なジスルフィド結合を含む単離された成長ホルモン化合物または単一cys変異および追加的なジスルフィド結合を含む成長ホルモン化合物に関する。本発明の別の目的では、そのような化合物は可溶性である。定義本明細書において、成長ホルモン化合物という用語は、本明細書で使用される場合、哺乳動物起源の成長ホルモン、例えばヒト、ウシ、またはブタの成長ホルモン、ならびに組換え成長ホルモン、例えば組換え型のヒト、ウシ、またはブタの成長ホルモン、ならびにそのような成長ホルモンのバリアントおよび変異体を意味する。本明細書で使用される場合、GHおよび成長ホルモン化合物は、互換的である。GHが哺乳動物起源の成長ホルモンのバリアント、例えばhGHおよび組換えhGHである場合、前記バリアントは、成長ホルモン、例えばhGHの1つまたは複数のアミノ酸残基を、別の天然アミノ酸または非天然アミノ酸を有する配列で置換することによっておよびまたは成長ホルモン、例えばhGHの配列に1つまたは複数の天然アミノ酸または非天然アミノ酸を付加することによっておよびまたは、成長ホルモン、例えばhGHの配列から1つまたは複数のアミノ酸残基を欠失させることによって得られる化合物であると理解され、これらのステップのいずれも、場合によって、その後にさらに1つまたは複数のアミノ酸残基の誘導体化を続けることができる。一般には、GHは、hGHに対して少なくとも80の同一性を有し、一般には、本明細書におけるアッセイにおいて決定された通り、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも10を有する。本明細書において、アルブミン結合残基という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト血清アルブミンに非共有結合する残基を意味する。成長ホルモン化合物に付着したアルブミン結合残基のヒト血清アルブミンに対する結合親和性は、一般には、約10μMを下回る、または約1μMまでも下回る。12~40個の炭素原子を含有する直鎖親油性部分および分岐親油性部分、シクロペンタノフェナントレン骨格を持つ化合物、およびまたは10~45アミノ酸残基を有するペプチドなどの中でさまざまなアルブミン結合残基が公知である。アルブミン結合特性は、JBiolChem277、35035~35042頁、に記載の表面プラズモン共鳴によって測定することができる。親水性スペーサーという用語は、本明細書で使用される場合、成長ホルモン化合物とアルブミン結合残基を、30~50がNまたはOのいずれかである少なくとも5個の非水素原子を含む化学的部分で分離するスペーサーを意味する。本明細書において、アミノ基転移という用語および関連する用語は、グルタミンの側鎖のアミドの窒素が別の化合物由来の窒素、具体的には求核試薬を含有する別の窒素由来の窒素と交換される反応を示すものとする。トランスグルタミナーゼは、タンパク質グルタミンγグルタミルトランスフェラーゼとしても公知であり、以下の一般的な反応を触媒する。QCNH2は、グルタミン残基を含有するペプチドまたはタンパク質を示し得、QNH2はアミンを含有する求核試薬を示す。あるいは、QCNH2およびQNH2は、それぞれ、アミン受容体およびリジンを含有するペプチドまたはタンパク質を示し得る。しかし、本発明では、上に示されている通り、QCNH2はグルタミン残基を含有する成長ホルモンを示し、QNH2はアミンを含有する求核試薬を示す。有用なトランスグルタミナーゼの例としては、微生物トランスグルタミナーゼ、例えばストレプトマイセスモバラエンス、ストレプトマイセスシナモネウムおよびストレプトマイセスグリセオカルネウム由来のトランスグルタミナーゼ、およびストレプトマイセスラベンデュラエ由来のトランスグルタミナーゼおよびストレプトマイセスラダカヌム由来のトランスグルタミナーゼが挙げられる。以前のストレプトベルチシリウム属のメンバーは、現在はストレプトマイセス属に含まれることに留意するべきである。他の有用な微生物トランスグルタミナーゼが、枯草菌および種々の変形菌から単離されている。有用な微生物トランスグルタミナーゼの他の例は、その両方が参照により本明細書に組み込まれるWO9606931由来のトランスグルタミナーゼおよびWO9622366に開示されているトランスグルタミナーゼである。有用な非微生物のトランスグルタミナーゼとしては、モルモット肝臓トランスグルタミナーゼ、ならびにカレイ類のマダイ、および日本カキのマガキのような種々の海洋性の供給源由来のトランスグルタミナーゼが挙げられる。本明細書において、接近できないという用語は、それに到達することができないという意味で、何かが存在しない、または事実上存在しないことを示すものとする。コンジュゲートされるタンパク質において官能基が接近できないと明示されている場合、それは、前記官能基がタンパク質に存在しないこと、または、存在したとしても、何らかによって反応に関与することを妨げられていることを示すものとする。例として、前記官能基は、タンパク質の構造に深く埋もれていて、したがって、反応に関与することから遮蔽されている可能性がある。官能基を利用できるかどうかは、反応条件に左右されることが認識されている。例えば、変性剤の存在下で、または温度が上昇すると、タンパク質がほどけて、そうでなければ接近できない官能基が露出することが予測される。接近できないとは、対象とする特定の反応のために選択された反応条件において接近できないこと意味することが理解されるべきである。アルカンまたはアルキルという用語は、直鎖飽和炭化水素、分岐飽和炭化水素、およびまたは環式飽和炭化水素を示すものとする。別の炭素原子数が指定されていなければ、この用語は、1個から30個まで、例えば、1個から20個まで、例えば、1個から10個まで、例えば1個から5個までの炭素原子を有する炭化水素を示すものとする。アルキルおよびアルキレンという用語は、それぞれ、対応するラジカルおよびビラジカルを指す。C1~6アルキルという用語は、両端値を含めて1個から6個までの炭素原子を有する直鎖飽和炭化水素または分岐飽和炭化水素を指す。そのような基の例としては、これらに限定されないが、メチル、2プロピル、1ブチル、2ブチル、2メチル2プロピル、2メチル1ブチルおよびnヘキシルが挙げられる。C3~10シクロアルキルという用語は、一般には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、およびシクロデカニルを指す。アルケンという用語は、少なくとも1つの炭素炭素二重結合を含む直線炭化水素、分岐炭化水素およびまたは環式炭化水素を示すものとする。別の炭素原子数が指定されていなければ、この用語は、2個から30個まで、例えば2個から20個まで、例えば2個から10個まで、例えば2個から5個までの炭素原子を有する炭化水素を示すものとする。アルケニルおよびアルケニレンという用語は、それぞれ、対応するラジカルおよびビラジカルを指す。アルキンという用語は、少なくとも1つの炭素炭素三重結合を含む直線炭化水素、分岐炭化水素およびまたは環式炭化水素を示すものとし、これは、場合によって1つまたは複数の炭素炭素二重結合を含んでよい。別の炭素原子数が指定されていなければ、この用語は、2個から30個まで、例えば2個から20個まで、例えば2個から10個まで、例えば2個から5個までの炭素原子を有する炭化水素を示すものとする。アルキニルおよびアルキニレンという用語は、それぞれ、対応するラジカルおよびビラジカルを指す。同素環式芳香族化合物という用語は、ベンゼンおよびナフタレンなどの芳香族炭化水素を示すものとする。複素環化合物という用語は、5個、6個または7個の環原子を含み、そのうち1個、2個、3個または4個がN、OおよびまたはSから選択されるヘテロ原子である環式化合物を示すものとする。例としては、チオフェン、フラン、ピラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジンなどの複素環式芳香族化合物、ならびにそれらの部分的にまたは完全に水素化された等価物、例えば、ピペリジン、ピラゾリジン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペラジンおよびモルホリンが挙げられる。ヘテロアルカン、ヘテロアルケンおよびヘテロアルキンという用語は、上で定義されたアルカン、アルケンおよびアルキンの、前記部分の構造に1つまたは複数のヘテロ原子またはヘテロ基が挿入されているアルカン、アルケンおよびアルキンを示すものとする。ヘテロ基およびヘテロ原子の例としては、O、S、S、S2、CCおよびNが挙げられ、Rは水素またはC1~C6アルキルを表す。ヘテロアルカンの例としては、以下が挙げられる。ラジカルまたはビラジカルという用語は、それぞれ、1つまたは2つの水素原子が除去されている化合物を示すものとする。具体的に明示されている場合、ラジカルとは、より大きな原子団、例えばヒドロキシルが化合物から形式的に除去されることによって形成された部分も示し得る。ハロゲンという用語は、周期表の第7族メンバー、例えば、F、Cl、BrおよびIを示すものとする。本明細書において、アリールという用語は、環の少なくとも1つが芳香族である、炭素環式芳香族環ラジカルまたは融合した芳香族環系ラジカルを示すものとする。典型的なアリール基としては、フェニル、ビフェニルイル、ナフチルなどが挙げられる。ヘテロアリールまたはヘタリールという用語は、本明細書で使用される場合、単独でまたは組み合わせて、例えば5~7員の原子を有する芳香族環ラジカル、または例えば7員から18員までの原子を有する融合した芳香族環系ラジカルを指し、少なくとも1つの環が芳香族であり、窒素ヘテロ原子、酸素ヘテロ原子、または硫黄ヘテロ原子から選択される1つまたは複数のヘテロ原子を環原子として含有し、Nオキシドおよび一酸化硫黄および二酸化硫黄が許容できる複素環式芳香族置換である。例としては、フラニル、チエニル、チオフェニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピリミジニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、およびインダゾリルなどが挙げられる。名詞としてのコンジュゲートという用語は、修飾されたタンパク質、すなわち、前記タンパク質の性質を修飾するために、ある部分を結合させたタンパク質を示すものとする。動詞としては、この用語は、前記タンパク質の性質を修飾するために、ある部分をタンパク質に結合させるプロセスを示すものとする。単一cysまたは遊離のシステインという用語は、二重結合に関与しないシステイン残基を指す。したがって、タンパク質は、前記単一cysによって内部のジスルフィド架橋が導かれない限りは、1つまたは複数の追加的なジスルフィド架橋に加えて、1つまたは複数の単一cys残基を含んでよい。本明細書で使用される場合、プロドラッグという用語は、生物加水分解可能なアミドおよび生物加水分解可能なエステルを示し、aそのようなプロドラッグの生物加水分解可能な官能性が本発明による化合物に包含される化合物、およびb所与の官能基において生物学的に酸化または還元して本発明による原薬をもたらすことができる化合物も包含する。これらの官能基の例としては、14ジヒドロピリジン、Nアルキルカルボニル14ジヒドロピリジン、14シクロヘキサジエン、tertブチルなどが挙げられる。本明細書で使用される場合、生物加水分解可能なエステルという用語は、a親物質の生物活性に干渉しないが、その物質に例えば、作用の持続時間、作用の開始などのinvivoにおいて有利な性質を付与する、またはb生物学的に不活性であるがinvivoで対象によって生物学的有効成分に容易に変換される、原薬のエステルである。利点は、例えば、溶解性が増加すること、または、生物加水分解可能なエステルが経口摂取で腸から吸収され、血漿中で本発明による化合物に転換されることである。そのような多数の例が当技術分野で公知であり、その例としては、低級アルキルエステル、低級アシルオキシアルキルエステル、低級アルコキシアシルオキシアルキルエステル、アルコキシアシルオキシエステル、アルキルアシルアミノアルキルエステル、およびコリンエステルが挙げられる。本明細書で使用される場合、生物加水分解可能なアミドという用語は、a親物質の生物活性に干渉しないが、その物質に例えば、作用の持続時間、作用の開始などのinvivoにおいて有利な性質を付与する、またはb生物学的に不活性であるがinvivoで対象によって生物学的有効成分に容易に変換される、原薬のアミドである。利点は、例えば、溶解性が増加すること、または、生物加水分解可能なアミドが経口摂取で腸から吸収され、血漿中で本発明による化合物に転換されることである。そのような多数の例が当技術分野で公知であり、その例としては、低級アルキルアミド、αアミノ酸アミド、アルコキシアシルアミド、およびアルキルアミノアルキルカルボニルアミドが挙げられる。本明細書において、薬学的に許容される塩という用語は、患者にとって有害でない塩を示すものとする。そのような塩としては、薬学的に許容される酸付加塩、薬学的に許容される金属塩、アンモニウムおよびアルキル化されたアンモニウム塩が挙げられる。酸付加塩としては、無機酸ならびに有機酸の塩が挙げられる。適切な無機酸の代表的な例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸などが挙げられる。適切な有機酸の代表的な例としては、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモン酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、EDTA、グリコール酸、pアミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、pトルエンスルホン酸などが挙げられる。薬学的に許容される無機酸付加塩または有機酸付加塩のさらなる例としては、参照により本明細書に組み込まれるJPharmSci66、2頁、において列挙されている薬学的に許容される塩が挙げられる。金属塩の例としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩などが挙げられる。アンモニウム塩およびアルキル化されたアンモニウム塩の例としては、アンモニウム塩、メチルアンモニウム塩、ジメチルアンモニウム塩、トリメチルアンモニウム塩、エチルアンモニウム塩、ヒドロキシエチルアンモニウム塩、ジエチルアンモニウム塩、ブチルアンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩などが挙げられる。化合物の治療有効量は、本明細書で使用される場合、所与の疾患およびその合併症の臨床的な症状発現を治癒、緩和または部分的に静止するために十分な量を意味する。これを実現するために適した量が、治療有効量と定義される。それぞれの目的のための有効量は、疾患または傷害の重症度ならびに対象の体重および全身状態に左右される。適切な投与量の決定は、常套的な実験を用いて、値のマトリックスを構築し、そのマトリックスの種々のポイントを試験することによって実現することができ、それは全て訓練された医師または獣医師の通常の技術の範囲内であることが理解されよう。治療および治療することという用語は、本明細書で使用される場合、疾患または障害などの状態と闘うために患者を管理および介護することを意味する。この用語は、患者が罹患している所与の状態に対する治療の完全なスペクトル、例えば、症状または合併症を緩和するために活性化合物を投与すること、疾患、障害または状態の進行を遅らせること、症状および合併症を緩和または軽減すること、およびまたは疾患、障害または状態を治癒または排除することなど、ならびに状態を予防することを含むものとし、予防は、疾患、状態または障害と闘うために患者を管理および介護することであり、症状または合併症の発症を妨げるために活性化合物を投与することを含むと理解されるべきである。治療される患者は、哺乳動物特にヒトであることが好ましいが、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジおよびブタなどの動物を含んでもよい。広範な態様において、本発明は、a単一cys変異、b追加的なジスルフィド架橋、またはc単一cys変異および追加的なジスルフィド架橋、を有する成長ホルモン化合物を含み、アルブミン結合残基が親水性スペーサーを介して前記GHに連結している安定な成長ホルモンコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩に関する。単一cys変異が存在する場合、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介してCysの硫黄残基に連結している。追加的なジスルフィド架橋が存在する場合は、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介して成長ホルモン化合物内の位置、例えば、本明細書に記載のように、hGHの40位、141位またはN末端に連結している。2つ以上のアルブミン結合残基が、親水性スペーサーを介して成長ホルモン化合物に連結している場合は、そのようなアルブミン結合残基は、単一cys変異が存在する場合、それに連結する、または追加的なジスルフィド架橋のみが存在する場合は、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介して本明細書に記載のように、成長ホルモン化合物内の位置に連結している。一実施形態では、成長ホルモン化合物は、単一cys変異を1つ有する。別の実施形態では、成長ホルモン化合物は、単一cys変異を2つ有する。別の実施形態では、成長ホルモン化合物は、追加的なジスルフィド架橋を有する。別の実施形態では、成長ホルモン化合物は、単一cys変異を1つと、追加的なジスルフィド架橋を1つ有する。別の実施形態では、GHは、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す。別の実施形態では、GHは、hGHに対して少なくとも80、例えば少なくとも85、例えば少なくとも95の同一性、例えば、配列番号1に対して少なくとも96、例えば少なくとも97、例えば少なくとも98または例えば少なくとも99の同一性を有する。別の実施形態では、hGHに対する前記同一性は、本明細書のアッセイIにおいて決定された、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも10、例えば少なくとも20、例えば少なくとも40、例えば少なくとも60、例えば少なくとも80と結びついている。配列同一性についての実施形態のいずれか1つは、活性についての実施形態のいずれか1つと組み合わせることができる。例えば、hGHに対して少なくとも80の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも60と結びついているGHhGHに対して少なくとも90の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも40と結びついているGHhGHに対して少なくとも95の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80と結びついているGHなど。本明細書に記載のように、HGは、配列が追加的なN末端メチオニンを含むことを示すMetHGとして表すことができる。ある実施形態では、GHは、単一cys変異が導入された成長ホルモンバリアントである。別の実施形態では、GHは、単一cys変異に加えて1~5の変異を含有する成長ホルモン化合物を示す。別の実施形態では、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介して単一cys変異に連結している。ある実施形態では、単一cys変異は、GHのN末端、H1、H2、L2またはH3に位置する。別の実施形態では、単一cys変異はN末端に位置し、その変異は、例えばT3C、P5C、S7Cのいずれか1つである、または、単一cys変異はH1内に位置し、その変異は、例えば、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35Cのいずれか1つである、または単一cys変異はL1内に位置し、その変異は、例えば、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55、S57C、P59C、S62C、E65C、Q69Cのいずれか1つである、もしくはY42C、S55C、S57C、S62C、Q69Cのいずれか1つであることが好ましい、または、単一cys変異はH2、L2もしくはH3内に位置し、その変異は、例えば、hGHのE88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つである、または、単一cys変異はL3もしくはH4内に位置する。L3およびH4において、変異は、例えばE129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、V180Cのいずれか1つである、または、単一cys変異はC末端に位置し、その変異は、例えば、E186CG187CG190Cのいずれか1つである。hGHバリアントに単一cys変異が存在する場合、その変異は、対応するアミノ酸残基に位置する。特定の実施形態では、GHの単一cys変異は、hGHのT3、P5、S7、D11、H18、Q29、E30、E33、A34、Y35、K38、E39、Y42、S43、D47、P48、S55、S57、P59、S62、E65、Q69、E88、Q91、S95、A98、N99、S100、L101、V102、Y103、D107、S108、D112、Q122、G126、E129、D130、G131、P133、T135、G136、T142、D147、N149、D154、A155、L156、R178、E186、G187およびG190からなる群、例えば、T3、P5、S7、D11、H18、Q29、E30、E33、A34、Y35、E88、Q91、S95、A98、N99、S100、L101、V102、Y103、D107、S108、D112、Q122およびG126からなる群から選択される位置に相当する親GHに相当する位置に導入され、GHコンジュゲートは、前記単一システイン残基の側鎖にアルブミン結合部分をさらに含む。別の実施形態では、単一cys変異は、hGHのアミノ酸93~106またはhGHバリアントの対応する残基の範囲内に位置する。別の特定の実施形態では、単一cys変異は、L2の範囲内、例えばアミノ酸99~106またはアミノ酸99~103または対応する残基の範囲内に位置する。本発明の成長ホルモン化合物コンジュゲートに単一cys変異が存在する場合、典型的な単一cys変異はE30Cである。別の典型的な単一cys変異はY42Cである。別の典型的な単一cys変異はS55Cである。別の典型的な単一cys変異はS57Cである。別の典型的な単一cys変異はS62Cである。別の典型的な単一cys変異はQ69Cである。別の典型的な単一cys変異はS95Cである。別の典型的な単一cys変異はA98Cである。別の典型的な単一cys変異はN99Cである。別の典型的な単一cys変異はS100Cである。別の典型的な単一cys変異はL101Cである。別の典型的な単一cys変異はV102Cである。別の典型的な単一cys変異はS108Cである。rhGH受容体複合体の結晶構造に応じて、束は、4つの主要なヘリックス残基9から34までの第1のヘリックス、残基72から92まで、および残基94から100までの第2のヘリックス、残基106から128までの第3のヘリックス、ならびに残基155から184までの第4のヘリックスからなる。4つの主要なヘリックスは、タンパク質のコアと称される。ヘリックス領域の一部にならない残基は、ループ残基と定義され、可動領域、ループ、βターン、ヘアピンおよびコイルの一部になり得る。hGHがその結合性タンパク質と複合している場合、ヘリックスのわずかに異なる局在性が得られ、それが上で言及したヘリックスの定義である。さらに、本発明は、少なくとも1つの導入されたシステイン残基を含み、その残基が、hGHのヘリックス領域またはループ領域内の位置に相当する位置に導入されている、GHコンジュゲートに関する。具体的には、アミノ酸残基は、例えば、hGH単独のモデル構造において、またはその2つの受容体分子と複合したhGHのモデル構造において、その側鎖の25超が表面に露出している、好ましくはその側鎖の50超が表面に露出しているヘリックス領域またはループ領域の表面に露出した位置に導入することができる。好ましい実施形態では、ヘリックスまたはループ内の位置は、hGHの受容体結合部位の外側の位置に相当する。表面に露出した残基は、コンピュータによる化学アルゴリズムを使用して同定することができる。例えば、相対的な表面への接近可能性は、AccelrysIncによるコンピュータプログラムQuanta2005を用いて、公的に入手可能な構造由来の原子座標および初期状態のパラメータ設定を使用して算出することができる。アルゴリズムの背後の根本原理についての記載は、BLeeおよびFMRichards、TheInterpretationofProteinStructuresEstimationofStaticAccessibilityJMolBiol55、379~400頁を参照されたい。別の実施形態では、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介して追加的なジスルフィド架橋を有するGHに連結している。一般には、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介してhGHのN末端、40位または141位に連結している。別の実施形態では、GHは、ループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間に追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHは、システインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHは、ループセグメントとヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHは、ループセグメントとヘリックスBまたはヘリックス2をつなぐ追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHは、ヘリックス2とループ3を連結する追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHは、配列番号1のR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間に追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHの追加的なジスルフィド架橋は、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H18CY143C、H21CM170C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CS144C、F54CF146C、I58CQ141C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対の少なくとも1つの間にある。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のA17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間にある。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のD26CV102C、D26CY103C、S57CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間にある。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のH21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間にある。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のS57CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間にある。一般には、追加的なジスルフィド架橋はQ84CY143Cである。別の実施形態では、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介して単一cys変異および追加的なジスルフィド架橋を有するGHに連結している。一般には、アルブミン結合残基は、親水性スペーサーを介して単一cys変異に連結している。特定の実施形態では、GHは、アルブミン結合残基が親水性スペーサーを介して連結する追加的なジスルフィド架橋Q84CY143Cおよび単一cys変異L101Cを有する。別の実施形態では、GHは、追加的なジスルフィド結合と、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55C、S57C、P59C、S62、E65C、Q69C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122C、G126C、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、E186C、G187CおよびG190Cのいずれか1つ、例えばhGHのT3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つまたはhGH変異体の対応する残基から選択される単一cys変異とを有する。特定の実施形態では、GHは、追加的なジスルフィド結合および単一cys変異を有し、前記単一cys変異は、T3、P5、S7、D11、H18、Q29、E30、E33、A34、Y35、K38、E39、Y42、S43、D47、P48、S55、S57、P59、S62、E65、Q69、E88、Q91、S95、A98、N99、S100、L101、V102、Y103、D107、S108、D112、Q122、G126、E129、D130、G131、P133、T135、G136、T142、D147、N149、D154、A155、L156、R178、E186、G187およびG190からなる群、好ましくは、T3、P5、S7、D11、H18、Q29、E30、E33、A34、Y35、E88、Q91、S95、A98、N99、S100、L101、V102、Y103、D107、S108、D112、Q122およびG126の群から選択されるhGHの位置に相当する親GHに相当する位置に導入されている。GHコンジュゲートは、前記単一システイン残基の側鎖にアルブミン結合部分をさらに含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異、およびループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間の追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異、およびシステインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異と、アミノ酸残基128~154などのループセグメントと、ヘリックスBまたはヘリックス2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異と、ヘリックス2とループ3を連結する追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異と、配列番号1のR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間の追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異と、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H18CY143C、H21CM170C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CS144C、F54CF146C、I58CQ141C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対の少なくとも1つの間の追加的なジスルフィド架橋とを含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異と、配列番号1のA17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間の追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のD26CV102C、D26CY103C、S57CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間にある。別の実施形態では、GHは、単一cys変異と、配列番号1のH21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間の追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異と、配列番号1のS57CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間の追加的なジスルフィド結合とを含む。親水性スペーサーの溶解性は、そのLogP値によって説明することができる。分配係数としても公知のLogPは、平衡にある2種の不混和性溶媒の混合物の2つの相中の化合物の濃度比の対数である。一般には、溶媒の一方は水であり、一方第2の溶媒は、オクタン1オール、クロロホルム、シクロヘキサンおよびプロピレングリコールジペラルゴナートから選択される。これらの異なる溶媒において測定されたLogP値は、主に水素結合の影響で、差がある。オクタノールは、水素結合を供与し、受容することができるが、シクロヘキサンは不活性である。クロロホルムは水素結合を供与することができるが、PGDPは、水素結合を受容することのみできる。LogP値は、当技術分野で公知の標準の方法によって測定することができる。本発明の一実施形態では、親水性スペーサーは、オクタン1オール、クロロホルム、シクロヘキサンおよびプロピレングリコールジペラルゴナートのいずれにおいても、0を下回るLogP、例えば、05を下回るLogPを有する。別の実施形態では、親水性スペーサーは、オクタン1オール、クロロホルム、シクロヘキサンおよびプロピレングリコールジペラルゴナートのいすれにおいても1を下回るLogPを有する。あるいは、LogP値は、公開されているアルゴリズムを使用して、アルブミン結合剤部分または親水性スペーサー部分についてのmLogPおよびまたはcLogPとして算出することができるANewSubstituentConstant、Pi、DerivedfromPartitionCoefficients、CALipinskiらAdvancedDrugDeliveryReviews、23、3~25頁、ExperimentalandComputationalApproachestoEstimateSolubilityandPermeabilityinDrugDiscoveryandDevelopmentSettingsおよびIMoriguchi、SHirono、INakagome、HHirano、ChemPharmBull42、976~978頁、ComparisonofReliabilityofLogPValuesforDrugsCalculatedbySeveralMethods。本発明の一実施形態では、親水性スペーサーは、mLogP0を有する。別の実施形態では、成長ホルモン化合物は、親水性スペーサーを介して1つのアルブミン結合残基に連結している。別の実施形態では、成長ホルモン化合物は、成長ホルモン化合物の遊離のシステインとカップリングしている親水性スペーサーを介してアルブミン結合残基に連結している。別の実施形態では、成長ホルモン化合物は、1つまたは2つの親水性スペーサーを介して2つのアルブミン結合残基に連結している。したがって、一実施例では、一方のアルブミン結合残基が1つの親水性スペーサーを介して単一cys変異に連結し、他方のアルブミン結合残基が1つの親水性スペーサーを介して40位または141位のグルタミンに連結しているあるいは、2つのアルブミン結合残基が1つの親水性スペーサーを介して単一cys変異または40位、141位またはN末端のグルタミンに連結している。さらに別の実施形態では、成長ホルモン化合物は、1つまたは複数の親水性スペーサーを介して3つのアルブミン結合残基に連結している。ある実施形態では、親水性スペーサーは、少なくとも1つのOEGモチーフ、ラジカル8アミノ36ジオキサオクタン酸、すなわちNH2O2OCH2Cを含む。別の特定の実施形態では、親水性スペーサーは、少なくとも2つのOEGモチーフを含む。そのようなOEGモチーフの配向は、一実施形態では、Cが成長ホルモン化合物に最も近いが、成長ホルモン化合物およびアルブミン結合リンカーにつながっておらず、また、NHがアルブミン結合残基に最も近くなる配向である。2つのOEGモチーフを含むさらなる実施形態では、2つのモチーフは、同一の配向または異なる配向を有する。ある実施形態では、2つのそのようなOEGモチーフは、互いに隣接して位置するが、代替の実施形態では、そのようなOEGモチーフは、1つまたは複数の共有結合的に連結した原子によって分離されている。ある実施形態では、親水性スペーサーは、少なくとも1つのグルタミン酸残基を含む。アミノ酸であるグルタミン酸は、2つのカルボン酸基を含む。そのガンマカルボキシ基は、リジンのイプシロンアミノ基と、または、もし存在すれば、OEG分子のアミノ基と、または、もし存在すれば、別のGlu残基のアミノ基とアミド結合を形成するために用いることができる。代わりに、アルファカルボキシ基を、リジンのイプシロンアミノ基と、または、もし存在すれば、OEG分子のアミノ基と、または、もし存在すれば、別のGlu残基のアミノ基と同様のアミド結合を形成するために用いることができる。Gluのアミノ基は、今度は、アルブミン結合残基のカルボキシ基と、または、もし存在すれば、OEGモチーフのカルボキシ基と、または、もし存在すれば、別のGluのガンマカルボキシ基またはアルファカルボキシ基とアミド結合を形成することができる。1つのGluのアミノ基の、第2のGluのガンマカルボキシ基への連結は、ガンマGluモチーフと称することができる。ある実施形態では、親水性スペーサーは、少なくとも1つの混合OEGGluモチーフ2O2OCH2CNHCHOH2Cまたは少なくとも1つの混合GluOEGモチーフOH2CNH2O2OCH2Cまたはそれらの組み合わせを含み、そのようなGluOEGモチーフおよびOEGGluモチーフは、1つまたは複数の共有結合的に連結した原子によって分離されていてよい、または、ガンマGluを形成しいるGluのアミド結合によって互いに直接結合していてよい。別の態様では、本発明は、式AWBGHを有する成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩に関する。別の実施形態では、GHは、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す。別の実施形態では、GHは、hGHに対して少なくとも80、例えば少なくとも85、例えば少なくとも95、例えば少なくとも96、例えば少なくとも97、例えば少なくとも98または例えば少なくとも99の同一性を有する。別の実施形態では、hGHに対する前記同一性は、本明細書のアッセイIにおいて決定された、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも10、例えば少なくとも20、例えば少なくとも40、例えば少なくとも60、例えば少なくとも80と結びついている。配列同一性についての実施形態のいずれか1つは、活性についての実施形態のいずれか1つと組み合わせることができる。例えば、hGHに対して少なくとも80の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも60と結びついているGHhGHに対して少なくとも90の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも40と結びついているGHhGHに対して少なくとも95の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80と結びついているGHなど。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、GHのN末端、H1領域、H2領域、L2領域またはH3領域における単一cys変異のいずれか1つから選択される単一cys変異を有する。別のそのような実施形態では、単一cys変異は、N末端内に位置し、その変異は、例えばT3C、P5C、S7Cのいずれか1つである、または、単一cys変異はH1内に位置し、その変異は、例えば、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35Cのいずれか1つである、または、単一cys変異は、L1内に位置し、その変異は、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55、S57C、P59C、S62C、E65C、Q69Cのいずれか1つ、もしくは、好ましくはY42C、S55C、S57C、S62C、Q69Cのいずれか1つである、または単一cys変異は、H2、L2またはH3にあり、その変異は、hGHのE88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つである、または、単一cys変異は、L3もしくはH4にある。L3およびH4では、変異は、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、V180Cのいずれか1つである、またはC末端では、変異はE186CG187CG190のいずれか1つである。hGHバリアントに単一cys変異が存在する場合、変異は、対応するアミノ酸残基に位置する。別の実施形態は、GHにおける単一cys変異が、hGHのT3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55C、S57C、P59C、S62、E65C、Q69C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122C、G126C、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、E186C、G187CおよびG190Cのいずれか1つ、例えば、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cなどのいずれか1つから選択されるGHコンジュゲートを包含する。さらに別の実施形態では、単一Cys変異は、hGHのアミノ酸93~106またはhGHバリアントの対応する残基の範囲内に位置する。別の特定の実施形態では、単一Cys変異は、L2の範囲内、例えば、アミノ酸99~106またはアミノ酸99~103の範囲内、または対応する残基の範囲内に位置する。別の実施形態では、Aは、から選択される。別の実施形態では、Wは、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する。別の実施形態では、Bは、上記の1つまたは複数のOEGモチーフ、およびまたはガンマGluモチーフを含む、または、それからなる。別の実施形態では、Bは、式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COHCNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する。別の実施形態では、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~6である。別の実施形態では、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~6である。別の実施形態では、m2およびm5は、独立に、0~10である。別の実施形態では、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~10である。別の実施形態では、D1およびD2は、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される。別の実施形態では、E1およびE2は、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される。別の実施形態では、W1からW8までが、独立に、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合からなる群から選択されアルキル基が、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりがCHの炭素原子からX4への付着点を示す。別の実施形態では、R1、R2、R3、R4およびR5が、独立に、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されC1~6アルキル基が、場合によって、COH、CNH2またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、n1E1m2l2W3m3n2およびn3E2m5l4W5m6n4は、を示すから選択される。別の実施形態では、X4が、原子価結合であり、W6がピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHのいずれかから選択され、が、CHの炭素原子からGHへの付着点を示す。別の実施形態では、Bがから選択される。別の実施形態では、GHコンジュゲートはから選択される。別の態様では、本発明は、式AWBGHを有する成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩に関する。別の実施形態では、GHは、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す。別の実施形態では、GHは、hGHに対して少なくとも80、例えば少なくとも85、例えば少なくとも95、例えば少なくとも96、例えば少なくとも97、例えば少なくとも98または例えば少なくとも99の同一性を有する。別の実施形態では、hGHに対する前記同一性は、本明細書のアッセイIにおいて決定された、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも10、例えば少なくとも20、例えば少なくとも40、例えば少なくとも60、例えば少なくとも80と結びついている。配列同一性についての実施形態のいずれか1つは、活性についての実施形態のいずれか1つと組み合わせることができる。例えば、hGHに対して少なくとも80の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも60と結びついているGHhGHに対して少なくとも90の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも40と結びついているGHhGHに対して少なくとも95の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80と結びついているGHなど。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、ループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間に追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、システインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、アミノ酸残基128~154などのループセグメントと、ヘリックスBまたはヘリックス2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、ヘリックス2とループ3を連結する追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、配列番号1のR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間に追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、追加的なジスルフィド架橋は、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H18CY143C、H21CM170C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CS144C、F54CF146C、I58CQ141C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対の少なくとも1つの間にある。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、配列番号1のA17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間に追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のD26CV102C、D26CY103C、S57CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対の少なくとも1つの間にある。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、配列番号1のH21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間に追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、配列番号1のS57CY143C、Q84Y143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間に追加的なジスルフィド結合を含む。別の実施形態では、Aは、から選択される。別の実施形態では、Wは、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する。別の実施形態では、Bは、上記の1つまたは複数のOEGモチーフ、およびまたはガンマGluモチーフを含む、または、それからなる。別の実施形態では、Bは、式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COH、CNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する。別の実施形態では、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~6である。別の実施形態では、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~6である。別の実施形態では、m2およびm5は、独立に、0~10である。別の実施形態では、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~10である。別の実施形態では、D1およびD2は、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される。別の実施形態では、E1およびE2は、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される。別の実施形態では、W1からW8までが、独立に、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合からなる群から選択されアルキル基が、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりがCHの炭素原子からX4への付着点を示す。別の実施形態では、R1、R2、R3、R4およびR5が、独立に、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されC1~6アルキル基が、場合によって、COH、CNH2またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、n1E1m2l2W3m3n2およびn3E2m5l4W5m6n4は、から選択される。別の実施形態では、Bはから選択される。別の実施形態では、Aは、Bを介して、配列番号1の40位、141位、または成長ホルモン化合物のN末端残基に対応する位置でグルタミン残基に付着している。別の実施形態では、GHコンジュゲートはから選択される。別の態様では、本発明は、式AWBGHを有する成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩に関する。別の実施形態では、GHは、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す。別の実施形態では、GHは、hGHに対して少なくとも80、例えば少なくとも85、例えば少なくとも95、例えば少なくとも96、例えば少なくとも97、例えば少なくとも98または例えば少なくとも99の同一性を有する。別の実施形態では、hGHに対する前記同一性は、本明細書のアッセイIにおいて決定された、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも10、例えば少なくとも20、例えば少なくとも40、例えば少なくとも60、例えば少なくとも80と結びついている。配列同一性についての実施形態のいずれか1つは、活性についての実施形態のいずれか1つと組み合わせることができる。例えば、hGHに対して少なくとも80の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも60と結びついているGHhGHに対して少なくとも90の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも40と結びついているGHhGHに対して少なくとも95の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80と結びついているGHなど。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、追加的なジスルフィド結合、およびGHのN末端、H1領域、H2領域、L2領域またはH3領域における単一cys変異のいずれか1つから選択される単一cys変異を有する。別のそのような実施形態では、単一Cys変異は、N末端内に位置し、その変異は、例えばT3C、P5C、S7Cのいずれか1つである、または、単一Cys変異はH1内に位置し、その変異は、例えば、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35Cのいずれか1つである、または、単一Cys変異は、L1内に位置し、その変異は、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55、S57C、P59C、S62C、E65C、Q69Cのいずれか1つ、もしくは、好ましくはY42C、S55C、S57C、S62C、Q69Cのいずれか1つである、または単一Cys変異は、H2、L2またはH3にあり、その変異は、hGHのE88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つである、または、単一Cys変異は、L3もしくはH4にある。L3およびH4では、変異は、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、V180Cのいずれか1つである、またはC末端では、変異はE186CG187CG190Cのいずれか1つである。hGHバリアントに単一Cys変異が存在する場合、変異は、対応するアミノ酸残基に位置する。別の実施形態は、追加的なジスルフィド結合を有するGHコンジュゲートと、hGHのT3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55C、S57C、P59C、S62、E65C、Q69C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122C、G126C、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、E186C、G187CおよびG190Cのいずれか1つ、例えば、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cなどのいずれか1つから選択されるGHにおける単一cys変異とを含む。さらに別の実施形態では、単一cys変異は、hGHのアミノ酸93~106またはhGH変異体の対応する残基の範囲内に位置する。別の特定の実施形態では、単一cys変異は、L2の範囲内、例えば、アミノ酸99~106またはアミノ酸99~103の範囲内、または対応する残基の範囲内に位置する。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、ループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間の追加的なジスルフィド結合であり得る。別の実施形態では、GHは、単一cys変異体と、システインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、GHは、単一cys変異体と、アミノ酸残基128~154などのループセグメントと、ヘリックスBまたはヘリックス2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、単一cys変異体と、ヘリックス2とループ3を連結する追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、単一cys変異体と、配列番号1のR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間の追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、追加的なジスルフィド架橋は、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H18CY143C、H21CM170C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CS144C、F54CF146C、I58CQ141C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置にあるアミノ酸対の少なくとも1つの間にある。別の実施形態では、コンジュゲートのGHは、単一cys変異体と、配列番号1のA17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間の追加的なジスルフィド結合とを含む。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のD26CV102C、D26CY103C、S57CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、F92CT148CおよびまたはR94CD107Cに対応する位置にあるアミノ酸対の少なくとも1つの間にある。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のH21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、F54CY143C、F54CS144C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、S71CS132C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間にある。別の実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、配列番号1のS57CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144Cに対応する位置にあるアミノ酸対のうちの1つの間にある。別の実施形態では、GHは、L2における単一システインの変異と、アミノ酸残基128~154などのループセグメントと、ヘリックスBまたはヘリックス2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合とを含む。ある実施形態では、GHは、以下の群から選択される変異の組み合わせを含むA98CQ84CY143C、A98CS85CY143C、A98CS85CS144C、N99CQ84CY143C、N99CS85CY143C、N99CS85CS144C、S101CQ84CY143C、S101CS85CY143C、S101CS85CS144C、L101CQ84CY143C、L101CS85CY143C、L101CS85CS144C、C102CQ84CY143C、C102CS85CY143CおよびC102CS85CS144C。別の実施形態では、Aは、から選択される。別の実施形態では、Wは、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する。別の実施形態では、Bは、上記の1つまたは複数のOEGモチーフ、およびまたはガンマGluモチーフを含む、または、それからなる。別の実施形態では、Bは、式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COHCNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する。別の実施形態では、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~6である。別の実施形態では、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~6である。別の実施形態では、m2およびm5は、独立に、0~10である。別の実施形態では、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~10である。別の実施形態では、D1およびD2は、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される。別の実施形態では、E1およびE2は、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される。別の実施形態では、W1からW8までが、独立に、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合からなる群から選択されアルキル基が、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりがCHの炭素原子からX4への付着点を示す。別の実施形態では、R1、R2、R3、R4およびR5が、独立に、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されC1~6アルキル基が、場合によって、COH、CNH2またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、n1E1m2l2W3m3n2およびn3E2m5l4W5m6n4は、から選択される。別の実施形態では、X4が、原子価結合であり、W6がピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHのいずれかから選択され、が、CHの炭素原子からGHへの付着点を示す。別の実施形態では、Bはから選択される。別の実施形態では、GHコンジュゲートは式から選択される。一般には、本発明のコンジュゲートは、親水性スペーサー、例えば1つの親水性スペーサーを介して成長ホルモン化合物に連結した1つのアルブミン結合残基を有する。しかし、成長ホルモン化合物は、親水性スペーサーを介して2つのアルブミン結合残基に連結されていてよい。したがって、さらに別の態様では、本発明は、式AWBGHBWAの成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩に関する。さらに、他の態様では、本発明は、式AWBGHBWAの成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩に関する。さらに別の態様では、本発明は、式AWBGHBWAの成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩に関する。上記の式のコンジュゲートにおいて、Wは、Wと同じ群から選択され、Aは、Aと同じ群から選択され、Bは、Bと同じ群から選択され、WおよびW、AおよびA、ならびにBおよびBは、独立に、本明細書で定義されているそれぞれの群の任意の1つから選択されることが理解されるべきである。したがって、本明細書におけるW、A、およびBの任意の実施形態は、W、A、およびBの実施形態でもある。さらに、本明細書に記載の実施形態のいずれか1つは、独立に、式およびのコンジュゲートの両方、ならびに、適切な場合はその広範な態様および実施形態を指す。上記の実施形態ならびにこの下に記載される実施形態は、実施形態がある特定の態様または本発明の態様に関することが指定されていなければ、本明細書に記載の態様のいずれか1つならびに本明細書に記載の実施形態のいずれか1つを指すと見られるべきである。一実施形態では、GHは、hGHのバリアントであり、バリアントは、hGH配列の1つまたは複数のアミノ酸残基を別の天然アミノ酸または非天然アミノ酸で置換することによっておよびまたはhGH配列に1つまたは複数の天然アミノ酸または非天然アミノ酸を付加することによっておよびまたはhGH配列から1つまたは複数のアミノ酸残基を欠失させることによって得られる化合物であると理解され、これらのステップのいずれも、場合によって、その後にさらに1つまたは複数のアミノ酸残基の誘導体化を続けることができる。別の実施形態では、GHは、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す。別の実施形態では、GHは、hGHに対して少なくとも80、例えば少なくとも85、例えば少なくとも95、例えば少なくとも96、例えば少なくとも97、例えば少なくとも98または例えば少なくとも99の同一性を有する。別の実施形態では、hGHに対する前記同一性は、本明細書のアッセイIにおいて決定された、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも10、例えば少なくとも20、例えば少なくとも40、例えば少なくとも60、例えば少なくとも80と結びついている。配列同一性についての実施形態のいずれか1つは、活性についての実施形態のいずれか1つと組み合わせることができる。例えば、hGHに対して少なくとも80の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも60と結びついているGHhGHに対して少なくとも90の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも40と結びついているGHhGHに対して少なくとも95の同一性を有し、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80と結びついているGHなど。さらに別の実施形態では、GHはhGHである。別の実施形態では、Bは、上記の1つまたは複数のOEGモチーフおよびまたはガンマGluモチーフを含むまたはそれからなる。式またはのコンジュゲートの別の実施形態では、親水性スペーサーBは、式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2でありX2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COHCNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する。別の実施形態では、W1は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHCまたは原子価結合から選択される。一般には、W1は、CNH、NHCまたはCNHS2から選択される。別の実施形態では、W2は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHCまたは原子価結合から選択される。一般には、W2は、CNH、NHCまたはCNHS2から選択される。別の実施形態では、W3は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHCまたは原子価結合から選択される。一般には、W3は、CNH、NHCまたはCNHS2から選択される。別の実施形態では、W4は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHCまたは原子価結合から選択される。一般には、W4は、CNH、NHCまたはCNHS2から選択される。別の実施形態では、W5は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHCまたは原子価結合から選択される。一般には、W5は、CNH、NHCまたはCNHS2から選択される。別の実施形態では、W6は、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されアルキル基は、場合によってピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されは、CHの炭素原子からX4への付着点を示す。一般には、W6は、CNH、NHC、CNHS2またはNHCC1~6アルキルから選択される。別の実施形態では、D1、D2、Fは全て原子価結合であり、l6は0であり、W6は、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHのいずれかから選択され、は、CHの炭素原子からGHへの付着点を示す。別の実施形態では、R1は、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によってCOH、CNH2、S2OHで置換されている。一般には、R1は、COH、CNH2、またはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によって、COH、CNH2、またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、R2は、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によってCOH、CNH2、S2OHで置換されている。一般には、R2は、COH、CNH2、またはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によって、COH、CNH2、またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、R3は、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によってCOH、CNH2、S2OHで置換されている。一般には、R3は、COH、CNH2、またはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によって、COH、CNH2、またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、R4は、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によってCOH、CNH2、S2OHで置換されている。一般には、R4は、COH、CNH2、またはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によって、COH、CNH2、またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、R5は、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によってCOH、CNH2、S2OHで置換されている。一般には、R5は、COH、CNH2、またはC1~6アルキルから選択されアルキル基は、場合によって、COH、CNH2、またはS2OHで置換されている。別の実施形態では、E1は、OまたはN、または原子価結合から選択される。一般には、E1は、Oから選択される。別の実施形態では、E2は、OまたはN、または原子価結合から選択される。一般には、E2は、Oから選択される。別の実施形態では、E1およびE2は、どちらもOである。別の実施形態では、E1およびE2は、どちらもNである。別の実施形態では、Fは、フェニル、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合である。別の実施形態では、D1は、OまたはN、または原子価結合から選択される。一般には、D1は、Nから選択される。別の実施形態では、D2は、OまたはN、または原子価結合から選択される。一般には、D1は、Nから選択される。別の実施形態では、l1は、0~6、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、l2は、0~6、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、l3は、0~6、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、l4は、0~6、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、l5は、0~6、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、l6は、0~6、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、m1は、0~6、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、m2は、0~10、例えば、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10などである。別の実施形態では、m3は、0~5、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、m4は、0~5、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、m5は、0~10、例えば、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10などである。別の実施形態では、m6は、0~5、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、m7は、0~5、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、n1は、0~10、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、n2は、0~10、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、n3は、0~10、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、n4は、0~10、例えば、0、1、2、3、4、5または6などである。別の実施形態では、X1は、W1l1W2m1n1Om2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3Om5l4W5m6n4であり、n1Om2l2W3m3n2およびn3Om5l4W5m6n4は、を示すから選択される。別の実施形態では、前記親水性スペーサーのモル重量は、80ダルトンから1500Dまでにわたる、または300Dから1100Dまでにわたる。さらに別の実施形態では、Wが、W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1である式を有する。あるWの実施形態では、YはI7シクロヘキシルW8である。別の実施形態では、Yは、原子価結合である。ある実施形態では、W7は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHCまたは原子価結合から選択される。一般には、W7は、CNH、NHC、またはCNHS2から選択される。別の実施形態では、W8は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHCまたは原子価結合から選択される。一般には、W8は、CNH、NHC、またはCNHS2から選択される。別の実施形態では、l7は0または1である。別の実施形態では、本発明の親水性スペーサーBは、を示すから選択される。本発明の成長ホルモン化合物に付着したアルブミン結合残基または中の置換基Aは、アルブミンに非共有結合する親油性の残基である。一般には、アルブミン結合残基は、生理的なpHにおいて負に荷電しており、ヒト血清アルブミンに対する結合親和性は約10μMを下回る、または約1μMまでも下回る。本発明の成長ホルモン化合物の別の実施形態では、アルブミン結合残基は、直鎖アルキル基、分岐アルキル基、ωカルボン酸基またはωカルボン酸アイソスターを有する基から選択される。一般には、アルブミン結合残基は、6個から40個までの炭素原子を有する。別の実施形態では、アルブミン結合残基は、8個から26個までの炭素原子を有する。別の実施形態では、アルブミン結合残基は、8個から20個までの炭素原子を有する。別の実施形態では、Aは、14~26個の炭素原子を有し、ωカルボン酸基を含む。別の実施形態では、Aは、14~26個の炭素原子を有し、ωカルボン酸アイソスター、例えばテトラゾールを含む。別の実施形態では、Aは、から選択される。親水性スペーサーは、成長ホルモン化合物に1つのアルブミン結合残基を組み込むべきかまたは2つのアルブミン結合残基を組み込むべきかを制御することができるように、成長ホルモン化合物内のある位置に選択的に導入されることが好ましい。親水性スペーサーを、GH化合物のアミノ酸側鎖に付着させることができる。そのようなアミノ酸側鎖は、化学修飾されたGH化合物のアミノ酸側鎖であってよい。別の、そのようなアミノ酸側鎖は、酵素によって修飾されたGH化合物のアミノ酸側鎖であってよい。親水性スペーサーを、配列番号1の40位または141位に対応する位置のグルタミン残基に導入するために、トランスグルタミナーゼを使用することが好ましい。親水性スペーサーを選択的に導入する別のやり方は、成長ホルモン化合物、例えばhGHのN末端残基に導入することである。式の成長ホルモンコンジュゲートにおいて、断片AWBは、直鎖状または分岐状であってよい。一実施形態では、AWBは、直鎖ペプチドではない。別の実施形態では、アルブミン結合残基は親水性スペーサーを介して配列番号1の40位に対応する位置のグルタミン残基に付着している。別の実施形態では、アルブミン結合残基は親水性スペーサーを介して配列番号1の141位に対応する位置のグルタミン残基に付着している。別の実施形態では、アルブミン結合残基は親水性スペーサーを介して成長ホルモン化合物、例えばhGHのN末端残基に付着している。別の実施形態では、アルブミン結合残基は親水性スペーサーを介して成長ホルモン化合物、例えばhGHの40位、141位に対応する位置のグルタミン残基およびN末端残基に付着している。本発明の成長ホルモンコンジュゲートは、以下の式から選択される別の態様では、本発明は、本明細書に記載の成長ホルモン化合物などの成長ホルモンバリアントに関する。成長ホルモンバリアントは、治療剤として、または成長ホルモンコンジュゲートの調製における中間体として有用であり得る。成長ホルモン化合物は、当技術分野で公知の、または本明細書に記載の組換え方法によって作出することができる。ある実施形態では、成長ホルモン変異体は可溶性である。別の態様では、本発明は、本明細書に記載の成長ホルモンバリアントを含む組成物に関する。ある実施形態では、組成物は、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cの群から選択される単一cys変異を含む成長ホルモンバリアントを含む。本発明のある実施形態では、組成物の成長ホルモンバリアントは、成長ホルモン化合物のN末端、ヘリックス1、ループ1、ヘリックス2、ループ2、またはヘリックス3に、単一cys変異を有する。ある実施形態では、単一cys変異は、N末端内に位置し、その変異は、例えばP5C、S7Cの任意の1つである。ある実施形態では、単一cys変異は、H1内に位置し、例えば、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35Cの任意の1つである。ある実施形態では、単一cys変異は、L1内に位置し、その変異は、例えば、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55、S57C、P59C、S62C、E65C、Q69Cの任意の1つであり、またはY42C、S55C、S57C、S62C、Q69Cの任意の1つであることが好ましい。ある実施形態では、単一cys変異は、H2内に位置し、例えば、E88C、Q91C、S95CおよびA98Cのいずれか1つである。ある実施形態では、単一cys変異は、アミノ酸99~127の範囲内に位置する。ある実施形態では、単一cys変異は、L2内に位置し、例えば、N99C、S100C、L101C、V102CおよびY103Cのいずれか1つである。ある実施形態では、単一cys変異は、H3内に位置し、その変異は、例えば、hGHのD107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つである、またはL3もしくはH4内に位置し、その変異は、例えば、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、V180Cのいずれか1つである、またはC末端内に位置し、その変異は、例えば、E186CG187CおよびG190Cのいずれか1つである。hGHバリアントに単一cys変異が存在する場合、変異は、対応するアミノ酸残基に位置する。さらに別の実施形態では、単一cys変異は、hGHのアミノ酸93~106またはhGHバリアントの対応する残基の範囲内に位置する。別の特定の実施形態では、単一cys変異は、L2の範囲内、例えば、アミノ酸99~106またはアミノ酸99~104または対応する残基の範囲内に位置する。ある実施形態では、本発明による組成物は、単一cys変異および追加的なジスルフィド結合を含む成長ホルモンバリアントを含む。ある実施形態では、単一cys変異は、上記の単一cys変異のいずれか1つである。ある実施形態では、GHにおける単一cys変異は、hGHのT3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55C、S57C、P59C、S62、E65C、Q69C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122C、G126C、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、E186C、G187CおよびG190Cのいずれか1つ、例えば、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つまたは対応する残基から選択される。ある実施形態では、追加的なジスルフィド結合は、システイン変異の対の以下の群から選択されるR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188C。ある実施形態では、成長ホルモンバリアントは、単一システインと、以下のシステイン変異の対から選択される追加的なジスルフィド結合とを含むS57CY143C、Q84CY143C、S85CY143CおよびまたはS85CS144C。ある実施形態では、成長ホルモンバリアントは、L2における単一システインの変異と、アミノ酸残基128~154などのループセグメントと、ヘリックスBまたはヘリックス2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合とを含む。ある実施形態では、成長ホルモンバリアントは、以下の群から選択される変異の組み合わせを含むA98CQ84CY143C、A98CS85CY143C、A98CS85CS144C、N99CQ84CY143C、N99CS85CY143C、N99CS85CS144C、S101CQ84CY143C、S101CS85CY143C、S101CS85CS144C、L101CQ84CY143C、L101CS85CY143C、L101CS85CS144C、C102CQ84CY143C、C102CS85CY143CおよびC102CS85CS144C。ある実施形態では、成長ホルモンバリアントは、以下の群から選択される変異の組み合わせを含むA98CQ84CY143C、N99CQ84CY143C、S101CQ84CY143C、L101CQ84CY143CおよびC102CQ84CY143C。ある実施形態では、成長ホルモンバリアントは、変異L101C、Q84CおよびY143Cを含む。別の態様では、本発明は、治療において使用するための、親水性スペーサーを介してアルブミン結合残基と連結した成長ホルモン化合物を含む成長ホルモンコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩に関する。さらに、本発明の成長ホルモンコンジュゲートにおいて、GH、アルブミン結合残基、および親水性スペーサーは、上記の実施形態のいずれか1つから選択され、具体的には、成長ホルモンコンジュゲートは、式またはを有する。別の態様では、本発明は、親水性スペーサーを介してアルブミン結合残基と連結した成長ホルモン化合物を含む成長ホルモンコンジュゲート、または薬学的に許容される塩を、場合によって、薬学的に許容される賦形剤と併せて含む医薬組成物に関する。当技術分野で公知の同一性という用語は、配列を比較することによって決定される、2つ以上のタンパク質の配列間の関係を指す。当技術分野では、同一性は、2つ以上のアミノ酸残基の一続き間の一致の数によって決定されるタンパク質間の配列の関連性の程度も意味する。同一性は、特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラムによって取り組まれる、ギャップアラインメントを伴うより小さい2つ以上の配列間の完全な一致のパーセントを測定する。関連するタンパク質の同一性は、公知の方法によって容易に算出することができる。そのような方法としては、これらに限定されないが、ComputationalMolecularBiology、Lesk、AM編、OxfordUniversityPress、NewYork、1988BiocomputingInformaticsandGenomeProjects、Smith、DW編、AcademicPress、NewYork、1993ComputerAnalysisofSequenceData、Part1、Griffin、AM、およびGriffin、HG編、HumanaPress、NewJersey、1994SequenceAnalysisinMolecularBiology、vonHeinje、G、AcademicPress、1987SequenceAnalysisPrimer、Gribskov、MおよびDevereux、J編、MStocktonPress、NewYork、1991およびCarilloら、SIAMJAppliedMath、48、1073頁、に記載の方法が挙げられる。同一性を決定するための好ましい方法を設計して、試験する配列間の最も大きな一致をもたらす。同一性を決定するための方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに記載されている。2つの配列間の同一性を決定するための、好ましいコンピュータプログラムによる方法としては、GAPGeneticsComputerGroup、UniversityofWisconsin、Madison、Wis、BLASTP、BLASTN、およびFASTAを含めたGCGプログラムパッケージが含まれる。BLASTXプログラムは、NationalCenterforBiotechnologyInformationおよび他の供給源から公的に入手可能である。周知のSmithWatermanアルゴリズムも、同一性を決定するために使用することができる。例えば、コンピュータアルゴリズムであるGAPを使用して、パーセント配列同一性を決定しようとしている2つのタンパク質を、それらのそれぞれのアミノ酸が最適に一致するようにアラインメントする。ギャップ開始ペナルティの3倍として算出し平均対角項は、使用される比較行列の対角項の平均であり対角項は、特定の比較行列によって完全なアミノ酸の一致のそれぞれに割り当てられたスコアまたは数、ギャップ伸長ペナルティ倍、ならびにPAM250またはBLOSUM62などの比較行列を、アルゴリズムと併せて使用する。標準の比較行列を参照されたいBLOSUM62比較行列についてはHenikoffら、ProcNatlAcadSciUSA、89、10915~10919頁、を参照されたいもアルゴリズムで使用される。タンパク質配列を比較するための好ましいパラメータとしては、以下が挙げられるアルゴリズムNeedlemanら、JMolBiol、48、443~453頁、比較行列BLOSUM62、Henikoffら、ProcNatlAcadSciUSA、89、10915~10919頁、ギャップペナルティ12、ギャップ長ペナルティ4、類似性の閾値0。GAPプログラムは上記のパラメータを用いて有用である。上述のパラメータは、GAPアルゴリズムを用いてタンパク質を比較するための初期状態のパラメータである。本発明の化合物は、親化合物とも称される、対応するコンジュゲートしていない成長ホルモンと比較して、薬理学的性質が改善されている。そのような薬理学的性質の例としては、機能性invivo半減期、免疫原性、腎臓濾過、プロテアーゼからの保護およびアルブミン結合性が挙げられる。機能性invivo半減期という用語は、その通常の意味、すなわち、GHまたはGHコンジュゲートの生物活性の50が依然として体器官標的器官内に存在する時間、またはGHまたはGHコンジュゲートの活性がその最初の値の50である時間という意味で使用される。機能性invivo半減期を決定する代わりに、invivo血漿内半減期すなわち、GHまたはGHコンジュゲートの50が取り除かれる前に血漿中または血流中を循環する時間を決定することができる。血漿内半減期を決定することは、多くの場合、機能性半減期を決定することよりも単純であり、血漿内半減期の程度は、通常、機能性invivo半減期の程度のよい指標である。血漿内半減期に対する代替の用語としては、血清半減期、循環半減期、循環半減期、血清クリアランス、血漿クリアランス、およびクリアランス半減期が挙げられる。増加したという用語は、機能性invivo半減期または血漿内半減期とともに使用される場合、比較に適した条件下で決定したところ、親GHの半減期と比較してGHコンジュゲートの関連性のある半減期が統計的に有意に増加したことを示すために使用される。例えば、関連性のある半減期は、少なくとも約25、例えば、少なくとも約50、例えば、少なくとも約100、150、200、250、または500増加し得る。一実施形態では、本発明の化合物の半減期は、親GHの半減期と比較して、少なくとも約5h、好ましくは少なくとも約24h、好ましくは少なくとも約72h、および最も好ましくは少なくとも約7日間増加する。invivo血漿内半減期の測定は、文献に記載のいくつものやり方で行うことができる。invivo血漿内半減期の増加は、クリアランスの減少として、または平均滞留時間の増加として数量化することができる。適切なアッセイにおいて決定したところ、CLが親GHのCLの70未満、例えば50未満、例えば20未満、例えば10未満に減少した本発明のコンジュゲートしたGHは、invivo血漿内半減期が増加したといえる。適切なアッセイにおいて、MRTが、親GHのMRTの130超、例えば150超、例えば200超、例えば500超に増加した本発明のコンジュゲートしたGHは、invivo血漿内半減期が増加したといえる。クリアランスおよび平均滞留時間は、標準の薬物動態試験において、適切な試験動物を使用して評価することができる。所与のタンパク質に対して適切な試験動物を選択することは当業者の能力の範囲内である。ヒトにおける試験は、当然、最終試験を示す。適切な試験動物としては、正常な、雄のスプラーグドーリーラット、マウスおよびカニクイザルが挙げられる。一般には、マウスおよびラットには、単回の皮下ボーラス投与で注射するが、サルには、単回の皮下ボーラス投与で、または単回のiv投与で注射することができる。注射量は、試験動物に左右される。その後、CLおよびMRTを評価するために、必要に応じて、血液試料を1~5日にわたって取得する。血液試料は、ELISA技法によって分析することが都合よい。化合物の免疫原性という用語は、ヒトに投与されると、体液性、細胞性、またはその両方のいずれであろうと、有害な免疫応答を引き出す化合物の能力を指す。任意のヒトの亜集団内には、特定の投与されたタンパク質に対する感受性を示す個体がいる可能性がある。免疫原性は、感受性が高い個体における、成長ホルモンに対する抗体およびまたは成長ホルモンに反応するT細胞の存在を、当技術分野で公知の従来の方法を使用して数量化することによって測定することができる。一実施形態では、本発明のコンジュゲートしたGHは、感受性が高い個体において、その個体に対する親GHの免疫原性と比較して、少なくとも約10、好ましくは少なくとも約25、より好ましくは少なくとも約40、および最も好ましくは少なくとも約50減少した免疫原性を示す。プロテアーゼからの保護またはプロテアーゼから保護されたという用語は、本明細書で使用される場合、本発明のコンジュゲートしたGHが、血漿中のペプチダーゼまたはプロテアーゼに対して、親GHよりも抵抗性であることを示すものとする。血漿中に存在するプロテアーゼ酵素およびペプチダーゼ酵素は、循環しているタンパク質、例えば、成長ホルモンなどの循環しているペプチドホルモンなどの分解に関与することが公知である。そのようなプロテアーゼからの保護は、本明細書に記載の実施例Aの方法によって測定することができる。成長ホルモンは、例えば、トロンビン、プラスミン、スブチリシン、およびキモトリプシン様セリンプロテイナーゼによる分解を受けやすい可能性がある。これらのプロテアーゼの分解を決定するためのアッセイは、JBiotech、65、183頁、に記載されている。一実施形態では、GHコンジュゲートの加水分解の速度は、親GHの加水分解の速度の70未満、例えば40未満、例えば10未満である。哺乳動物種の循環血液中の最も豊富なタンパク質成分は血清アルブミンであり、これは通常、全血100ミリリットル当たりおよそ3~45グラムの濃度で存在する。血清アルブミンは、循環系においていくつかの重要な機能を有する、およそ65000ダルトンの血液タンパク質である。血清アルブミンは、血液に見いだされる種々の有機分子のトランスポーターとして、脂肪酸およびビリルビンなどの種々の代謝産物の血液を通じた主要なトランスポーターとして、また、その豊富さに起因して、循環血液の浸透圧調節因子として機能する。血清アルブミンは、1週間を超える半減期を有し、血清アルブミンに結合するタンパク質群にコンジュゲートすることが、タンパク質の血漿内半減期を増加させるための1つの手法になっている。アルブミン結合性は、参照により本明細書に組み込まれるJMedChem、43、1986頁、に記載の通り決定することができる。式またはの成長ホルモンコンジュゲートは、成長ホルモン活性を発揮し、循環している成長ホルモンの量を増加させることが有効である疾患または状況の治療において、そのようなものとして使用することができる。具体的には、本発明は、成長ホルモン欠乏症ターナー症候群プラダーウィリー症候群ヌーナン症候群ダウン症候群慢性腎疾患、若年性関節リウマチ嚢胞性線維症、HAART治療を受けている小児のHIV感染妊娠期間に比して背が低く生まれた背の低い小児出生時超低体重だがSGAで生まれた小児の低身長骨格形成異常低軟骨形成症軟骨無形成症特発性低身長成人GHD長骨、例えば、脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手骨、中足骨および指などにおける骨折もしくはそれの骨折頭蓋骨、手根部、および足根部などの海綿様骨における骨折もしくはそれの骨折例えば手、膝、または肩の腱または靭帯の外科手術を受けた後の患者仮骨延長を有する、もしくは仮骨延長を経験している患者例えば膝、股関節、肩、肘、手首または顎などにおいて、股関節もしくは円板の交換、半月板修復術、脊髄癒合または人工器官の固定を受けた後の患者爪、ねじおよび板などの骨接合材料が固定されている患者骨折が偽関節または変形治癒になっている患者例えば、脛骨または母趾からの骨切り術を受けた後の患者グラフトの移植を受けた後の患者外傷または関節炎によって引き起こされる膝の関節軟骨変性ターナー症候群の患者における骨粗鬆症男性の骨粗鬆症慢性的に透析を受けている成人患者APCDにおける栄養不良に関連する心臓血管疾患APCDにおける悪液質の反転APCDにおける癌APCDにおける慢性閉塞性肺疾患APCDにおけるHIVAPCDである高齢者APCDにおける慢性肝疾患、APCDにおける疲労症候群クローン病肝機能障害HIV感染している男性短腸症候群中心性肥満HIV関連リポジストロフィー症候群男性不妊症主要な待機的手術、アルコール薬物の解毒または神経外傷を受けた後の患者加齢虚弱高齢者変形性関節症外傷性の損傷を受けた軟骨勃起不全線維筋痛症記憶障害うつ病外傷性脳損傷くも膜下出血出生時超低体重メタボリックシンドロームグルココルチコイドミオパチーまたは小児におけるグルココルチコイド治療が原因の低身長を治療するための方法であって、治療有効量の式またはの成長ホルモンコンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。別の態様では、本発明は、筋肉組織、神経組織または創傷の治癒を加速する損傷を受けた組織への血流を加速または改善するまたは損傷を受けた組織における感染率を減少させるための方法であって、治療有効量の式またはの成長ホルモンコンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、上記の疾患などの、成長ホルモンの血漿レベルを増加させることが有効である疾患の製造における式またはの成長ホルモンコンジュゲートの使用に関する。典型的な非経口用量は、投与当たり体重1kg当たり109mgから約100mgの範囲である。典型的な投与用量は、投与当たり体重1kg当たり約00000001から約10mgまでである。正確な用量は、例えば、適応症、医薬品、頻度および投与形式、治療される対象の性別、年齢および全身状態、治療される疾患または状態の性質および重症度、所望の治療効果および当業者に明らかである他の因子に左右される。典型的な投薬頻度は、1日2回、1日1回、2日に1回、週2回、週1回である、またはさらに長い投薬間隔を伴う。本発明の融合タンパク質の半減期は延長されているので、投薬間隔が長い投薬レジメン、例えば、週2回、週1回またはさらに長い投薬間隔を伴う投薬レジメンは、本発明の特定の実施形態である。多くの疾患は、治療において、2種以上の医薬品を同時投与、または逐次的な投与のいずれかで使用して治療する。したがって、上記の疾患の1つを治療するための治療方法において、式またはの成長ホルモンコンジュゲートを、前記疾患の治療において通常使用される1種または複数種の他の治療的に活性のある化合物と組み合わせて使用することは本発明の範囲内である。類似性により、上記の疾患のための医薬品の製造において、式またはの成長ホルモンコンジュゲートを、前記疾患の1つの治療において通常使用される他の治療的に活性のある化合物と組み合わせて使用することも本発明の範囲内である。一般的な方法酵素によるコンジュゲーション本発明の成長ホルモンコンジュゲートの調製では、一般には、式のAWBGHコンジュゲートの調製において確立される共有結合の少なくとも1つを、下記の実施例において例示されているように、酵素を使用することによって調製する。そのような酵素は、例えば、トランスグルタミナーゼ、セリンプロテアーゼおよびシステインプロテアーゼからなる群から選択することができる。一般には、前記酵素は、トランスグルタミナーゼである。そのようなトランスグルタミナーゼは、例えば、微生物トランスグルタミナーゼ、組織トランスグルタミナーゼおよび第XIII因子およびそのバリアントからなる群から選択することができる。別の実施形態では、前記酵素は、システインプロテアーゼである。本発明の成長ホルモンコンジュゲートは、多くの異なる方法によって調製することができ、その非限定的な例が以下に示されている。本発明は、式のAWBGHコンジュゲートを調製するための方法も提供する。トランスグルタミナーゼ上記の通り、本発明のAWBGHコンジュゲートの調製において確立される共有結合の少なくとも1つは、トランスグルタミナーゼを使用することによって調製することができる。トランスグルタミナーゼとしては、微生物トランスグルタミナーゼ、例えば、ストレプトマイセス種Sモバラエンス、Sシナモネウム、Sグリセオカルネウム、SラベンデュラエおよびSラダカヌムから単離した微生物トランスグルタミナーゼなどを挙げることができる。他の有用な微生物トランスグルタミナーゼは、枯草菌および種々の変形菌から単離されている。有用な微生物トランスグルタミナーゼの他の例は、その両方が参照により本明細書に組み込まれるWO199606931およびWO199622366に開示されているものである。有用な非微生物のトランスグルタミナーゼとしては、モルモット肝臓トランスグルタミナーゼ、ならびにカレイ類のマダイ、および日本カキのマガキのような種々の海洋性の供給源由来のトランスグルタミナーゼが挙げられる。それらの機能的な類似体および誘導体も有用であり得る。一般には、本発明の方法において使用されるTGaseは、微生物トランスグルタミナーゼである。一実施形態では、TGaseは、例えば、WO2007020290およびWO2008020075に記載のSモバラエンス由来のもの、またはそのバリアントである。別の実施形態では、TGaseは、例えば、WO2008020075に記載のSラダカヌム由来のもの、またはその変異体である。本発明によるGHのAWBへのコンジュゲーションは、使用する基質に応じて、GH化合物の配列内の特定のリジン位またはグルタミン位における選択的な変更が生じる、TGaseに媒介される修飾によって実現することができる。基質としてアミンを使用することにより、グルタミンが修飾され、一方、第一級アミドを使用することにより、リジンが修飾される。hGHは、38位、41位、70位、115位、140位、145位、158位、168位および172位の9個のリジン残基を有し、22位、29位、40位、46位、49位、68位、69位、84位、91位、122位、137位、141位および181位の13個のグルタミン残基を有するが、修飾することにより、成長ホルモン結合性タンパク質に対する結合効力が減少し、したがって生物活性が低下するので、これらの全てが修飾に容易に利用可能なわけでも、修飾に適しているわけでもない。hGHとその結合性タンパク質との間のX線によるタンパク質結晶構造により、結合性タンパク質への結合には少なくとも4個のリジンが関与しており、グルタミンは1つのみが関与している可能性があることが示されている。これにより、アルブミン結合リンカーを選択的に導入するための標的としてグルタミンがより魅力的になる。これらの構造的な考察は、リジンに影響を及ぼす化学的な修飾はinvivo生物活性およびGHの肝臓の受容体に対する結合能に対する負の影響を有することが見いだされたと結論付けられているNCheneら、ReprodNutrDevelop29、1~25頁によって要約された所見により、さらに裏付けられる。化学反応Iある態様では、本発明は、GH化合物を、TGaseに触媒される化学反応を用いて性質修飾基で処理する、式の成長ホルモンコンジュゲートの調製に関する。最初に、アミノアルコールを用いた二段階の反応によってアルデヒド官能性またはケトン官能性を組み入れ、その後、過ヨウ素酸で処理して、酸化的切断によってアルデヒド官能性またはケト官能性を生じさせる。単に例示するための非限定的なアミノアルコールの例としては、13ジアミノ2プロパノールおよび1アミノ23ジヒドロキシプロパンが挙げられる。別の態様では、本発明は、式の成長ホルモンコンジュゲートの調製であって、GH化合物に由来するアルデヒドまたはケトンを性質修飾基由来のアニリンまたはヘテロアリールアミンで処理してアミンをもたらすことを含む調製に関する。ある実施形態では、GH化合物に由来するアルデヒドを、性質修飾基由来のアニリンまたはヘテロアリールアミンで処理する。GH化合物由来のアルデヒドまたはGH化合物に由来するアルデヒドもしくはケトンという用語は、アルデヒド官能基またはケトン官能基が共有結合的に付着したGH化合物、またはアルデヒド官能基またはケトン官能基が生じたGH化合物を示すものとする。以下に例示されている化合物などのGH化合物由来のアルデヒドの調製は、当業者に周知であり、任意のこれらの公知の手順を使用して、本明細書に開示されている発明を実現するために必要なGH化合物由来のアルデヒドを調製することができる。一実施形態では、以下に例示されている通りコンジュゲートAWBGHを調製するGHを用いたTGaseに媒介される酵素反応により、141位およびまたは40位のGlnが修飾され、がもたらされる。修飾されたGHを過ヨウ素酸で処理してアミノアルコールを切断してGH由来のアルデヒドをもたらす。GHアルデヒドとAWB1NH2のコンジュゲーションは、還元的アルキル化によって起こる。本明細書において例示されている還元的アルキル化は、当技術分野においてよく認識されており、それにより、Gln位およびまたは40位において修飾されたGH化合物がもたらされる。化学反応II一実施形態では、コンジュゲートAWBGHを、以下に例示されている通り、GHのN末端の還元的アミノ化を用いて調製するGHのAWB1CHOへのコンジュゲーションは、還元的アルキル化によって起こる。上に例示されている還元的アルキル化は、GHのN末端を修飾することに関して、当技術分野においてよく認識されている。化学反応III一実施形態では、コンジュゲートAWBGHを以下に例示されている通り調製するここで、システイン残基は、場合によって、混合ジスルフィドとして、小さな有機部分であるRで保護されている。混合ジスルフィドの非限定的な例としては、シスタミンシステインOHNH2ホモシステインOHNH2およびグルタチオンNHCH2COHNHCCH2CH2CHOHNH2の間のジスルフィドを挙げることができる。誘導体化プロセスでは、アルブミン結合性リンカーAWB1LGを利用し、LGは無機脱離基、例えばCl、Br、Iなど、または有機脱離基、例えばメシル酸またはトシラートなどを示す。GHとAWB1LGのコンジュゲーションは、求核置換によって起こる。化学反応IV一実施形態では、コンジュゲートAWBGHを以下に例示されている通り調製する上記のから得られた脱保護されたCysGH化合物をマレイミド置換されたアルブミン結合リンカーと反応させて、GHコンジュゲートAWB1NHCCH2CH2ピロリジン25ジオン3GHをもたらすことができ、ここで、親水性スペーサーB1は、以下の式を有する。X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5m7であり、X4は原子価結合であり、l1、l2、l3、l4およびl5は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COH、CNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、E1およびE2は、独立に、O、NR6、Nまたは原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1である。化学反応V一実施形態では、コンジュゲートAWBGHを以下に例示されている通り調製するWO2009024791に記載のSニトロシル化学反応を用いて、アルブミン結合剤を単一cysGH誘導体に付着させることができる。脱保護されたCysGH化合物を、DEANOnateなどのNO供与体を加えることによってSニトロシル化に供する。次いで、ニトロシル化された単一cysGHをアリルアミン置換されたアルブミン結合剤と反応させて、オキシムをもたらし、その後それを加水分解してGHコンジュゲートAWB1CNHCH2CCH2CysGHをもたらす。ここで、親水性スペーサーB1は、以下の式を有するX1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2でありX2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5m7であり、X4は原子価結合であり、l1、l2、l3、l4およびl5は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COH、CNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1である。天然のペプチドとの密接な関連性は、それにより、例えば任意の望ましくない抗体生成が起こる危険性が最小限になるので、一般に、この天然のペプチドのバリアントまたは類似体を投与することを含む治療介入に関しては利点とみなされる。GHは、カルボキシペプチダーゼY、およびWO2007093594に記載の適切な修飾された基質を使用することによって、それらのC末端において修飾することができる。BPeschkeらCTerminallyPEGylatedGHderivativesBioorgMedChem15、4382~4395頁、に記載されている二段階の手順では、C末端のアラニンを酵素によってNεリジンと交換し、その後、本発明によるアルブミン結合剤誘導体と反応させる。上記から明らかであるように、本発明は、さらに、コンジュゲートAWBGHの調製において適用される介在リンカーに関する。前記リンカー化合物は、式により説明することができる。AWB1U上記に基づいて、コンジュゲート部分は、適用されるコンジュゲーションの方法に応じて変動し、最後には、最終的なhGH化合物において同様に目に見えるようにすることができる。化合物、AWB1Uの別の実施形態では、AおよびWは、上記の実施形態のいずれかにおいて定義されている通りである。本明細書において化学反応IVとして上記されている方法を化合物AWB1Uに適用する場合、さらに、Uが、アリール、ヘテロアリール、置換されたマレイミドまたはNHCCH2CH2ピロリジン25ジオンなどのピロリジン25ジオンを含む、またはそれからなる実施形態として定義することができる。化合物AWB1Uの代替の実施形態では、Uは、D1l6D2を含み、D1およびD2は、独立にO、N、NCR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示す。同様に、本明細書において上記されている化学反応IIIの適用では、Uが、例えばCl、Br、I、OH、OS2Me、OS2CF3またはOTsなどの脱離基を含む、またはそれからなるリンカー化合物を適用する、または、脱離基がCl、BrおよびI、好ましくはBrから選択されるハロゲン化合物である式の化合物を適用することが好ましい。リンカー化合物の別の実施形態は、Uが、アリルアミン、例えばCNHCH2CHCH2などを含む、またはそれからなる式によって定義される本発明に従う。本明細書において化学反応Iとして上記されている方法に化合物AWB1Uを適用する場合、さらに、Uが、アミンを含む、またはそれからなる実施形態として定義することができる。代替の実施形態では、Uは、CHOなどのアルデヒドを含んでよい、またはそれからなってよい。化合物は、その後、Uをコンジュゲートすることができる受容体基を含む任意の種類の治療用化合物とコンジュゲートすることができる。好ましい実施形態では、治療用化合物は、ポリペプチドである。ペプチドは、受容体基として機能し得るアミノ酸残基、例えばGln残基、Phe残基およびCys残基などを天然に含んでよい。あるいは、そのようなアミノ酸残基をポリペプチドの適切な位置に導入することができる。医薬組成物別の目的は、本発明の成長ホルモンコンジュゲート、例えば式またはの成長ホルモンコンジュゲートなどを1015mgmLから200mgmLまで、例えば、1010mgmLから5mgmLの濃度で含み、20から100までのpHを有する医薬組成物もたらすことである。組成物は、緩衝系、保存料、等張化剤、キレート化剤、安定剤および界面活性物質などの医薬の賦形剤をさらに含んでよい。本発明の一実施形態では、医薬組成物は、水性組成物、すなわち、水を含む組成物である。そのような組成物は、一般には、溶液または懸濁液である。本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、水溶液である。水性組成物という用語は、少なくとも50wwの水を含む組成物と定義される。同様に、水溶液という用語は、少なくとも50wwの水を含む溶液と定義され、水性懸濁液という用語は、少なくとも50wwの水を含む懸濁液と定義される。別の実施形態では、医薬組成物は、医師または患者が使用する前に溶媒およびまたは希釈剤に加える、フリーズドライした組成物である。別の実施形態では、医薬組成物は、いかなる事前の溶解も伴わず使える状態である乾燥した組成物である。別の態様では、本発明は、01~100mgmLまたはそれを上回る濃度の成長ホルモンコンジュゲート、例えば、式またはの成長ホルモンコンジュゲートなどの水溶液および緩衝液を含み、約20から約100までのpHを有する医薬組成物に関する。本発明の別の実施形態では、組成物のpHは、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、および100からなる一覧から選択される。本発明の別の実施形態では、緩衝液は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、およびトリスアミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸、またはそれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定の緩衝液のひとつひとつが本発明の代替的な実施形態を構成する。本発明の別の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される保存料をさらに含む。本発明の別の実施形態では、保存料は、フェノール、oクレゾール、mクレゾール、pクレゾール、pヒドロキシ安息香酸メチル、pヒドロキシ安息香酸プロピル、2フェノキシエタノール、pヒドロキシ安息香酸ブチル、2フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、およびチメロサール、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、pヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロルフェネシンプロパン12ジオール、またはそれらの混合物からなる群から選択される。本発明の別の実施形態では、保存料は、01mgmLから20mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、保存料は、01mgmLから5mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、保存料は、5mgmLから10mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、保存料は、10mgmLから20mgmLまでの濃度で存在する。これらの特定の保存料のひとつひとつが本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物における保存料の使用は、当業者に周知である。便宜上、RemingtonTheScienceおよびPracticeofPharmacy、第20版、2000年を参照する。本発明の別の実施形態では、組成物は、等張化剤をさらに含む。本発明の別の実施形態では、等張化剤は、塩、糖または糖アルコール、アミノ酸、アルジトール、12プロパンジオール、13プロパンジオール、13ブタンジオールポリエチレングリコール、またはそれらの混合物からなる群から選択される。任意の糖、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンおよびカルボキシメチルセルロースNaを含めた単糖、二糖または多糖、または水溶性グルカンなどを使用することができる。一実施形態では、糖添加物はスクロースである。糖アルコールは、少なくとも1つのOH基を有するC4~C8の炭化水素と定義され、それらとしては、例えば、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、およびアラビトールが挙げられる。一実施形態では、糖アルコール添加物はマンニトールである。上記の糖または糖アルコールは、個々に、または組み合わせて使用することができる。糖または糖アルコールが液体の調製物に可溶性であり、かつ本発明の方法を使用して得られる安定化効果に悪影響を及ぼさない限りは、その使用量に対する固定された制限はない。一実施形態では、糖または糖アルコールの濃度は約1mgmLから約150mgmLの間である。本発明の別の実施形態では、等張化剤は、1mgmLから50mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、等張化剤は、1mgmLから7mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、等張化剤は、8mgmLから24mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、等張化剤は、25mgmLから50mgmLまでの濃度で存在する。これらの特定の等張化剤のひとつひとつが本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物における等張化剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、RemingtonTheScienceおよびPracticeofPharmacy、第20版、2000年を参照する。本発明の別の実施形態では、組成物は、キレート化剤をさらに含む。本発明の別の実施形態では、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸、クエン酸、およびアスパラギン酸の塩、ならびにそれらの混合物から選択される。本発明の別の実施形態では、キレート化剤は、01mgmLから5mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、キレート化剤は、01mgmLから2mgmLまでの濃度で存在する。本発明の別の実施形態では、キレート化剤は、2mgmLから5mgmLまでの濃度で存在する。これらの特定のキレート化剤のひとつひとつが本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物におけるキレート化剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、RemingtonTheScienceおよびPracticeofPharmacy、第20版、2000年を参照する。本発明の別の実施形態では、組成物は、安定剤をさらに含む。医薬組成物における安定剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、RemingtonTheScienceおよびPracticeofPharmacy、第20版、2000年を参照する。より詳細には、本発明の組成物は、治療的に活性な構成成分が、液体の医薬組成物の状態で貯蔵している間に凝集体の形成を示す可能性があるタンパク質を含む、安定化された液体の医薬組成物である。凝集体の形成とは、可溶性のままであるオリゴマー、または溶液から沈澱する大きな目に見える凝集体の形成をもたらすタンパク質分子間の物理的な相互作用を意味する。貯蔵している間は、液体の医薬組成物または組成物を、調製した後すぐには対象に投与しないことを意味する。それどころか、調製した後、後で対象に投与するために適した液体の形態または他の形態に再構成するために、貯蔵用に液体の形態、凍結した状態、または乾燥した形態のいずれかで包装する。乾燥した形態は、液体の医薬組成物または組成物を、フリーズドライを参照されたい、噴霧乾燥inSprayDryingHandbook、491~676頁BroadheadらDrugDevelIndPharm18、1169~1206頁、およびMumenthalerら、PharmRes、11、12~20頁、を参照されたい、または空気乾燥およびRoser、Biopharm4、47~53頁、のいずれかで乾燥することを意味する。液体の医薬組成物を貯蔵している間にタンパク質により凝集体が形成されることは、そのタンパク質の生物活性に悪影響を及ぼし、それにより医薬組成物の治療効果が減少する可能性がある。さらに、凝集体の形成により、注入系を用いてタンパク質を含有する医薬組成物を投与する場合に管材料、膜、またはポンプが遮断されることなどの他の問題が引き起こされる可能性がある。本発明の医薬組成物は、組成物を貯蔵している間のタンパク質による凝集体の形成を減少させるために十分な量のアミノ酸塩基をさらに含んでよい。アミノ酸塩基は、任意の所与のアミノ酸がその遊離塩基の形態で、またはその塩の形態で存在する1つのアミノ酸、または複数のアミノ酸の組み合わせを意味する。複数のアミノ酸の組み合わせを使用する場合、アミノ酸の全てがそれらの遊離塩基の形態で存在してよい、または、アミノ酸の全てがそれらの塩の形態で存在してよい、またはアミノ酸の一部がそれらの遊離塩基の形態で存在し、その他がそれらの塩の形態で存在してよい。一実施形態では、本発明の組成物の調製において使用するためのアミノ酸は、荷電した側鎖、例えば、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸などを保有するアミノ酸である。特定のアミノ酸の任意の立体異性体、またはこれらの立体異性体の組み合わせまたはグリシン、または、例えば、これに限定されないがイミダゾールなどの有機塩基は、その特定のアミノ酸または有機塩基がその遊離塩基の形態またはその塩の形態のいずれかで存在する限りは、本発明の医薬組成物中に存在してよい。一実施形態では、アミノ酸のL立体異性体を使用する。一実施形態では、L立体異性体を使用する。本発明の組成物は、これらのアミノ酸の類似体を用いて製剤化することもできる。アミノ酸類似体は、本発明の液体の医薬組成物を貯蔵している間のタンパク質による凝集体の形成を減少させるという所望の効果をもたらす天然に存在するアミノ酸の誘導体を意味する。適切なアルギニン類似体としては、例えば、アミノグアニジン、オルニチンおよびNモノエチルLアルギニンが挙げられ、適切なメチオニン類似体としては、エチオニンおよびブチオニンが挙げられ、適切なシステイン類似体としては、SメチルLシステインが挙げられる。他のアミノ酸と同様に、アミノ酸類似体は、それらの遊離塩基の形態またはそれらの塩の形態のいずれかで組成物に組み込まれる。本発明の別の実施形態では、アミノ酸またはアミノ酸類似体は、タンパク質の凝集を妨げるまたは遅らせるために十分な濃度で使用される。本発明の別の実施形態では、治療剤として作用するタンパク質が、メチオニン残基からメチオニンスルホキシドへの酸化を受けやすい少なくとも1つのメチオニン残基を含むタンパク質である場合、そのような酸化を阻害するためにメチオニンを加えることができる。阻害するは、ある期間にわたるメチオニンの酸化種の蓄積が最小になることを意味する。メチオニンの酸化を阻害することにより、タンパク質がその適切な分子形態に高度に保持される。メチオニンの任意の立体異性体またはそれらの任意の組み合わせを使用することができる。加える量は、メチオニン残基の酸化を阻害するために十分な量、したがってメチオニンスルホキシドの量が調節媒体にとって許容できる量であるべきである。一般には、これは、組成物が、約10~約30を超えないメチオニンスルホキシドを含有することを意味する。一般に、これは、加えたメチオニンのメチオニン残基に対する比率が、約11から約10001まで、例えば101から約1001などの範囲になるようにメチオニンを加えることによって得ることができる。本発明の別の実施形態では、組成物は、高分子量のポリマーまたは低分子化合物の群から選択される安定剤をさらに含む。本発明の別の実施形態では、安定剤は、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシセルロースヒドロキシセルロース、またはその誘導体、シクロデキストリン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸および2メチルチオエタノールのような硫黄を含有する物質、ならびに種々の塩から選択される。これらの特定の安定剤のひとつひとつが本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物は、その中に含まれる治療的に活性なタンパク質の安定性をさらに増強する追加的な安定化剤も含んでよい。本発明にとって特に興味深い安定化剤としては、これらに限定されないが、タンパク質を、メチオニンの酸化から保護するメチオニンおよびEDTA、ならびにタンパク質を、凍結融解または機械的せん断に伴う凝集から保護する非イオン性界面活性物質が挙げられる。本発明の別の実施形態では、組成物は、界面活性物質をさらに含む。本発明の別の実施形態では、界面活性物質は、界面活性剤、エトキシ化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシプロピレンポリオキシエチレンブロックポリマーF68、ポロキサマー188および407、TritonX100などのポロキサマー、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン誘導体およびポリエチレン誘導体、例えばアルキル化誘導体またはアルコキシル化誘導体など、モノグリセリドまたはそのエトキシ化誘導体、ジグリセリドまたはそのポリオキシエチレン誘導体、アルコール、グリセロール、レクチンおよびリン脂質、リン脂質の誘導体およびリゾリン脂質および、リゾホスファチジルおよびホスファチジルコリンのアルキル誘導体、アルコキシル誘導体、アルコキシ誘導体、例えば、リゾホスファチジルコリンのラウロイル誘導体およびミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、および、コリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、トレオニン、グリセロール、イノシトール、および正に荷電したDODAC、DOTMA、DCP、BISHOP、リゾホスファチジルセリンおよびリゾホスファチジルトレオニンである極性頭部基の修飾、およびグリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質、ドデシルホスホコリン、ニワトリ卵白リゾレシチン、フシジン酸誘導体、長鎖脂肪酸およびその塩C6~C12、アシルカルニチンおよび誘導体、リジン、アルギニンまたはヒスチジンのNαアシル化された誘導体、またはリジンまたはアルギニンの側鎖がアシル化された誘導体、リジン、アルギニンまたはヒスチジンおよび中性アミノ酸または酸性アミノ酸の任意の組み合わせを含むジペプチドのNαアシル化された誘導体、中性アミノ酸および2つの荷電アミノ酸の任意の組み合わせを含むトリペプチドのNαアシル化された誘導体、DSS、ドクサートカルシウム、CAS登録番号128494、ドクサートカリウム、CAS登録番号7491090、SDS、カプリル酸ナトリウム、コール酸、またはその誘導体、胆汁酸およびその塩およびグリシンコンジュゲートまたはタウリンコンジュゲート、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、NヘキサデシルNNジメチル3アンモニオ1プロパンスルホン酸、アニオン性の一価の界面活性物質、両性イオン性界面活性物質、非イオン性界面活性物質、プロピレンオキシドおよびエチレンオキシドをエチレンジアミンに逐次的に付加することによって得られる四官能性のブロック共重合であるポロキサミンから選択される、または界面活性物質は、イミダゾリン誘導体、またはそれらの混合物の群から選択することができる。これらの特定の界面活性物質のひとつひとつが本発明の代替的な実施形態を構成する。医薬組成物における界面活性物質の使用は、当業者に周知である。便宜上、RemingtonTheScienceおよびPracticeofPharmacy、第20版、2000年を参照する。他の成分が本発明の医薬組成物に存在してよい。そのような追加的な成分としては、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、張度調節剤、キレート化剤、金属イオン、油性ビヒクル、タンパク質および両性イオンを挙げることができる。そのような追加的な成分は、当然、本発明の医薬組成物の全体的な安定性に悪影響を及ぼさないべきである。本発明による成長ホルモンコンジュゲートを含有する医薬組成物は、そのような治療を必要とする患者に、いくつかの部位に、例えば、局所部位、例えば、皮膚部位および粘膜部位に、吸収をバイパスする部位に、例えば、動脈内投与、静脈内投与、心臓内投与で、および吸収に関与する部位に、例えば、皮膚内投与、皮下投与、筋肉内投与または腹部内投与で投与することができる。医薬本発明による組成物の投与は、いくつかの投与経路、例えば、そのような治療を必要とする患者への、舌への投与経路、舌下投与経路、頬側投与経路、口腔内投与経路、経口的投与経路、胃腸内投与経路、鼻への投与経路、肺、例えば、細気管支および肺胞への投与経路、またはそれらの組み合わせ、上皮への投与経路、皮膚への投与経路、経皮的投与経路、膣内投与経路、直腸内投与経路、眼、例えば、結膜への投与経路、尿管への投与経路、および非経口的な投与経路を通じてよい。本発明の組成物は、いくつかの剤形、例えば、液剤、懸濁剤、乳剤、マイクロエマルション、多層乳剤、泡状剤、膏薬、ペースト剤、貼付剤、軟膏剤、錠剤、コーティング錠剤、リンス剤、カプセル剤、例えば、硬ゼラチンカプセル剤および軟ゼラチンカプセル剤、坐剤、直腸用カプセル剤、滴剤、ゲル剤、噴霧剤、散剤、エアロゾル剤、吸入剤、点眼剤、眼軟膏剤、眼リンス剤、膣坐薬、膣リング、膣軟膏剤、注射液、insitu形質転換溶液、例えば、insituゲル化溶液、insitu硬化溶液、insitu沈殿溶液、insitu結晶化溶液、輸液、および移植片として投与することができる。本発明の組成物は、成長ホルモンコンジュゲートの安定性をさらに増強するため、生物学的利用能を増加させるため、溶解性を増加させるため、有害作用を減少させるため、当業者に周知の時間治療を実現するため、および患者のコンプライアンスを増加させるため、またはそれらの任意の組み合わせのために、例えば、共有結合性相互作用、疎水性相互作用および静電気的な相互作用によって、薬物担体、薬物送達システムおよび先進薬物送達システムにさらに配合する、または付着させることができる。担体、薬物送達システムおよび先進薬物送達システムの例としては、これらに限定されないが、ポリマー、例えば、セルロースおよび誘導体、多糖、例えば、デキストランおよび誘導体、デンプンおよび誘導体、ポリ、アクリル酸ポリマーおよびメタクリル酸ポリマー、ポリ乳酸およびポリグリコール酸およびそれらのブロック共重合体、ポリエチレングリコール、担体タンパク質、例えば、アルブミン、ゲル、例えば、熱ゲル化系、例えば、当業者に周知のブロック共重合体系、ミセル、リポソーム、ミクロスフェア、ナノ粒子、液晶およびその分散液、L2相およびその分散液、相挙動が当業者に周知の脂質水系、ポリマーミセル、多層乳剤、自己乳化型、自己マイクロエマルション化型、シクロデキストリンおよびそれらの誘導体、およびデンドリマーが挙げられる。本発明の組成物は、成長ホルモンコンジュゲートを、例えば、全て当業者に周知のデバイスである定量噴霧式吸入器、乾燥粉末吸入器およびネブライザーを使用して肺内投与するための固体、半固体、粉末および溶液の組成物において有用である。本発明の組成物は、特に、制御放出、持続的放出、長期放出、遅延型放出および緩慢な放出の薬物送達システムの組成物において有用である。より詳細には、これに限定されないが、組成物は、当業者に周知の非経口的な制御放出系および持続的放出系の組成物において有用である。皮下投与される制御放出系および持続的放出系がさらに好ましい。本発明の範囲を限定することなく、有用な制御放出系および組成物の例は、ヒドロゲル、油性ゲル、液晶、ポリマーミセル、ミクロスフェア、ナノ粒子である。本発明の組成物に有用な制御放出系を作出するための方法としては、これらに限定されないが、結晶化、縮合、共結晶化、沈殿、共沈澱、乳化、分散、高圧均質化、封入、噴霧乾燥、マイクロカプセル化、コアセルベーション、相分離、ミクロスフェアを作出するための溶媒の蒸発、押出しおよび超臨界流体プロセスが挙げられる。HandbookofPharmaceuticalControlledReleaseおよびDrugandthePharmaceuticalSciences99巻ProteinCompositionandDeliveryを一般的に参照する。非経口投与は、シリンジ、場合によって、ペン様のシリンジによる皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射または静脈内注射によって実施することができる。あるいは、非経口投与は、注入ポンプによって実施することができる。別の選択肢は、成長ホルモンコンジュゲートを鼻噴霧剤または肺噴霧剤の形態で投与するための、溶液または懸濁液であってよい組成物である。さらに別の選択肢として、本発明の成長ホルモンコンジュゲートを含有する医薬組成物は、経皮投与、例えば、無針注射による経皮投与、またはパッチ剤、場合によってイオン導入のパッチ剤からの経皮投与、または経粘膜的な経皮投与、例えば、頬側投与にも適合させることができる。安定化された組成物という用語は、物理的安定性が増加した組成物、化学的安定性が増加した組成物または物理的安定性および化学的安定性が増加した組成物を指す。タンパク質組成物の物理的安定性という用語は、本明細書で使用される場合、熱機械ストレスに曝露された結果として、およびまたは疎水性の表面および界面などの不安定化している界面および表面との相互作用の結果として、タンパク質が生物学的に不活性かつまたは不溶性のタンパク質の凝集体を形成する傾向を指す。水性タンパク質組成物の物理的安定性は、適切な容器に満たした組成物を、種々の温度で種々の期間にわたって機械的物理的ストレスに曝露させた後に目視検査およびまたは濁度測定によって評価する。組成物の目視検査は、暗い背景で鋭く焦点を合わせた光の中で実施する。組成物の濁度は、濁度の程度を、視覚的なスコアを、例えば0から3までの尺度で順位づけることによって特徴づける。組成物が昼光において視覚的な濁度を示す場合、それはタンパク質の凝集について物理的に不安定であると分類される。あるいは、組成物の濁度は、当業者に周知の単純な濁度測定によって評価することができる。水性タンパク質組成物の物理的安定性は、分光学的な作用剤またはタンパク質のコンフォメーションの状態のプローブを使用することによっても評価することができる。プローブは、タンパク質の非ネイティブな配座異性体に優先的に結合する小分子であることが好ましい。タンパク質の構造の小分子分光プローブの1つの例は、チオフラビンTである。チオフラビンTは、アミロイド線維を検出するために広範に使用されている蛍光色素である。原線維、およびおそらくさらに他のタンパク質の立体配置の存在下で、チオフラビンTは、線維タンパク質形態に結合すると、約450nmで最大の新しい励起を生じ、約482nmにおける放出が増強される。結合していないチオフラビンTは、本質的にその波長では非蛍光である。タンパク質の構造の、ネイティブな状態から非ネイティブな状態への変化のプローブとして他の小分子を使用することができる。例えば、タンパク質の露出した疎水性パッチに優先的に結合する疎水性パッチプローブ。疎水性パッチは、一般に、そのネイティブな状態ではタンパク質の三次構造の内部に埋もれているが、タンパク質がほどけ始める、または変性し始めるにつれて露出する。これらの小分子の例である分光プローブは、例えば、アントラセン、アクリジン、フェナントロリンなどの芳香族の疎水性色素である。他の分光プローブは、金属アミノ酸複合体、例えば、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、およびバリンなどの疎水性アミノ酸のコバルト金属複合体などである。タンパク質組成物の化学的安定性という用語は、本明細書で使用される場合、ネイティブなタンパク質構造と比較して生物学的効力が潜在的に低下している、かつまたは免疫原性が潜在的に増加している化学的分解産物の形成を導く、タンパク質の構造の化学的な共有結合性の変化を指す。ネイティブなタンパク質の種類および本質およびタンパク質が曝露されている環境に応じて、種々の化学的分解産物が形成され得る。化学的分解を排除することは、ほぼ確実に、完全に回避することができず、化学的分解産物の増加量は、当業者に周知の通り、多くの場合、タンパク質組成物を貯蔵している間および使用している間に見られる。大部分のタンパク質は、グルタミニル残基またはアスパラギニル残基の側鎖のアミド基が加水分解されて遊離のカルボン酸が形成されるプロセスである脱アミドを起こしやすい。他の分解経路は、2つ以上のタンパク質分子がアミド基転移およびまたはジスルフィド相互作用によって互いに共有結合した高分子量の形質転換生成物の形成を伴い、これが共有結合した二量体、オリゴマーおよびポリマーの分解生成物の形成につながる。酸化は、化学的分解の別のバリアントとして言及することができる。タンパク質組成物の化学的安定性は、種々の環境条件に曝露させた後に、化学的分解産物の量を種々の時間ポイントで測定することによって評価することができる。個々の分解生成物の量は、多くの場合、種々のクロマトグラフィー技法を用いて分解産物を分子サイズおよびまたは電荷に応じて分離することによって決定される。したがって、上に概説されている通り、安定化された組成物は、物理的安定性が増加した組成物、化学的安定性が増加した組成物または物理的安定性および化学的安定性が増加した組成物を指す。一般に、組成物は、有効期限に達するまで、使用する間および貯蔵の間、安定でなければならない。本発明の一実施形態では、式またはの成長ホルモンコンジュゲートを含む医薬組成物は、6週間を超える使用の間および3年を超える貯蔵の間、安定である。本発明の別の実施形態では、式またはの成長ホルモンコンジュゲートを含む医薬組成物は、4週間を超える使用の間および3年を超える貯蔵の間、安定である。本発明の別の実施形態では、式またはの成長ホルモンコンジュゲートを含む医薬組成物は、4週間を超える使用の間および2年を超える貯蔵の間安定である。さらに別の実施形態では、本発明の式またはの成長ホルモンコンジュゲートを含む医薬組成物は、2週間を超える使用の間および2年を超える貯蔵の間安定である。本明細書において引用されている、刊行物、特許出願および特許を含めた全ての参考文献は、これにより、参照のそれぞれが、個々にかつ具体的に参照により組み込まれることが示され、本明細書においてその全体が記載されたのと同じ程度に参照により組み込まれる。全ての見出しおよび小見出しは、本明細書では単に便宜上使用されており、どのような形でも本発明を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書において特に指定がある場合、または文脈から明らかに矛盾する場合を除き、可能性のあるその変形の全てにおける上記の要素の任意の組み合わせが本発明に包含される。aおよびanおよびtheという用語および同様の指示対象は、本発明の記載において使用される場合、本明細書において特に指定がある場合、または文脈から明らかに矛盾する場合を除き、単数と複数の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書において別段の指定のない限り、ただ単にその範囲内に入る別々の値のそれぞれについて個々に参照する簡潔な方法としての機能を果たすものとし、別々の値のそれぞれが、それが本明細書において個々に列挙されたかのように本明細書に組み込まれる。別段の指定のない限り、本明細書において提供される全ての正確な値は、対応するおおよその値を表す。本明細書において特に指定のある場合、または文脈から明らかに矛盾する場合を除き、本明細書に記載の方法は全て、任意の適切な順番で実施することができる。任意のかつ全ての実施例の使用、または本明細書において提供される例示的な言葉は、別段の指定のない限り、ただ単に本発明をより明らかにするもので、本発明の範囲に対する限定を提起するものではない。本明細書のどの言葉も、そう明記されていない限り、いかなる要素も本発明を実施するために必須であることを示すと解釈されるべきではない。本明細書への特許文書の引用および取り込みは、単に便宜上行われ、そのような特許文書の有効性、特許性およびまたは強制力のいずれの観点も反映しない。本発明を説明している非網羅的な実施形態の一覧が以下に提供される。実施形態の一覧実施形態1a単一Cys変異、b追加的なジスルフィド架橋、またはc単一Cys変異および追加的なジスルフィド架橋、を有する成長ホルモン化合物を含み、アルブミン結合残基が親水性スペーサーを介して前記GHに連結している成長ホルモンコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩。2GHが、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも80の同一性を有する、例えば、hGHに対して、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、または少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す、またはGHがhGHである、実施形態1に記載のコンジュゲート。3GHまたはGHコンジュゲートが、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80を有する、実施形態1に記載のコンジュゲート。4アルブミン結合残基が、親水性スペーサーを介して単一cys変異を有するGHに連結している、実施形態1から3のいずれか1つに記載のコンジュゲート。5単一cys変異が、GHのN末端、H1、H2、L2またはH3から選択される領域のいずれか1つの位置にある、実施形態4に記載のコンジュゲート。6GHが、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つから選択される単一cys変異を有する、実施形態5に記載のコンジュゲート。7アルブミン結合残基が、親水性スペーサーを介して追加的なジスルフィド架橋を有するGHに連結している、実施形態1から3のいずれか1つに記載のコンジュゲート。8追加的なジスルフィド結合が、ループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間にある、実施形態7のコンジュゲート。9GHが、システインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態7から8のいずれか1つに記載のコンジュゲート。10GHが、ループセグメントと、ヘリックスBまたはH2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態7から9のいずれか1つに記載のコンジュゲート。11追加的なジスルフィド結合がL3とH2をつなぐ、実施形態7から10のいずれか1つに記載のコンジュゲート。12追加的なジスルフィド架橋が、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置、例えば、Q84CY143Cなどにあるアミノ酸対の少なくとも1つの間にある、実施形態7から11のいずれか1つに記載のコンジュゲート。13アルブミン結合残基が、親水性スペーサーを介して単一cys変異および追加的なジスルフィド架橋を有するGHに連結している、実施形態1から3のいずれか1つに記載のコンジュゲート。14GHが、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、Y42C、S55C、S57C、S62C、Q69C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つから選択される単一cys変異を有する、実施形態13に記載のコンジュゲート。15追加的なジスルフィド結合が、ループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間にある、実施形態13から14のいずれか1つに記載のコンジュゲート。16GHが、システインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態13から15のいずれか1つに記載のコンジュゲート。17GHが、ループセグメントと、ヘリックスBまたはH2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態13から16のいずれか1つに記載のコンジュゲート。18追加的なジスルフィド結合が、アミノ酸残基128~154などのループセグメントと、ヘリックスBまたはH2をつなぐ、実施形態13から17のいずれか1つに記載のコンジュゲート。19追加的なジスルフィド架橋が、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置、例えばQ84CY143Cなどにあるアミノ酸対の少なくとも1つの間にある、実施形態13から18のいずれか1つに記載のコンジュゲート。20アルブミン結合残基がから選択される、実施形態1から19のいずれか1つに記載のコンジュゲート。21アルブミン結合残基と親水性スペーサーを連結する化学基が、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する、実施形態1から20のいずれか1つに記載のコンジュゲート。22親水性スペーサーが式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COH、CNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する、実施形態1から21のいずれか1つに記載のコンジュゲート。23X4が、原子価結合であり、W6がピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHのいずれかから選択され、が、CHの炭素原子からGHへの付着点を示す、実施形態1から22のいずれか1つに記載のコンジュゲート。24親水性スペーサーがから選択される、実施形態22に記載のコンジュゲート。25式AWBGHを有する成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩。26GHが、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも80の同一性を有する、例えば、hGHに対して、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、または少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す、またはGHがhGHである、実施形態25に記載のコンジュゲート。27GHまたはGHコンジュゲートが、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80を有する、実施形態25に記載のコンジュゲート。28単一Cys変異が、GHのN末端、H1、H2、L2またはH3から選択される領域のいずれか1つの位置にある、実施形態25から27のいずれか1つに記載のコンジュゲート。29GHが、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つから選択される単一Cys変異を有する、実施形態25から28のいずれか1つに記載のコンジュゲート。30Aが、から選択される、実施形態25から29のいずれか1つに記載のコンジュゲート。31Wが、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する、実施形態25から30のいずれか1つに記載のコンジュゲート。32Bが式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COHCNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する、実施形態25から31のいずれか1つに記載のコンジュゲート。33l1、l2、l3、l4、l5およびl6が、独立に、0~6であり、m1、m3、m4、m6およびm7が、独立に、0~6であり、m2およびm5が、独立に、0~10であり、n1、n2、n3およびn4が、独立に、0~10である、実施形態25から32のいずれか1つに記載のコンジュゲート。34D1およびD2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、実施形態25から33のいずれか1つに記載のコンジュゲート。35E1およびE2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、実施形態25から34のいずれか1つに記載のコンジュゲート。36W1からW8までが、独立に、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合からなる群から選択されアルキル基が、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりは、CHの炭素原子からX4への付着点を示す、実施形態25から35のいずれか1つに記載のコンジュゲート。37R1、R2、R3、R4およびR5が、独立に、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基が、場合によって、COH、CNH2またはS2OHで置換されている、実施形態25から36のいずれか1つに記載のコンジュゲート。38E1およびE2がOであるn1E1m22W3m3n2およびn3E2m5l4W5m6n4が、から選択される、実施形態25から37のいずれか1つに記載のコンジュゲート。39X4が、原子価結合であり、W6がピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHのいずれかから選択され、が、CHの炭素原子からGHへの付着点を示す、実施形態25から38のいずれか1つに記載のコンジュゲート。40Bがから選択される、実施形態25から39のいずれか1つに記載のコンジュゲート。41前記化合物がから選択される、実施形態25から40のいずれか1つに記載のコンジュゲート。42以下の式AWBGHを有する成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩。43GHが、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも80の同一性を有する、例えば、hGHに対して、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、または少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す、またはGHがhGHである、実施形態42に記載のコンジュゲート。44GHまたはGHコンジュゲートが、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80を有する、実施形態42に記載のコンジュゲート。45活性をinvitroBAFアッセイにおいて測定する、実施形態44に記載のコンジュゲート。46GHが、ループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間に追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態42から45のいずれか1つに記載のコンジュゲート。47GHが、システインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態42から46のいずれか1つに記載のコンジュゲート。48GHが、ループセグメントと、ヘリックスBまたはへリックス2などのヘリックスセグメントをつなぐ追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態42から47のいずれか1つに記載のコンジュゲート。49GHが、L3と、ヘリックスBまたはヘリックス2をつなぐ追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態42から48のいずれか1つに記載のコンジュゲート。50追加的なジスルフィド架橋が、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置、例えば、Q84CY143Cなどにあるアミノ酸の対の少なくとも1つの間にある、実施形態42から49のいずれか1つに記載のコンジュゲート。51Aが、から選択される、実施形態42から50のいずれか1つに記載のコンジュゲート。52Wが、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する、実施形態42から51のいずれか1つに記載のコンジュゲート。53Bが式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COH、CNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する、実施形態42から52のいずれか1つに記載のコンジュゲート。54l1、l2、l3、l4、lI5およびl6が、独立に、0~6であり、m1、m3、m4、m6およびm7が、独立に、0~6であり、m2およびm5が、独立に、0~10であり、n1、n2、n3およびn4が、独立に、0~10である、実施形態42から53のいずれか1つに記載のコンジュゲート。55D1およびD2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、実施形態42から54のいずれか1つに記載のコンジュゲート。56E1およびE2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、実施形態42から55のいずれか1つに記載のコンジュゲート。57W1からW8までが、独立に、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキルまたはCNHC1~6アルキルまたは原子価結合からなる群から選択されアルキル基が、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりは、CHの炭素原子からX4への付着点を示す、実施形態42から56のいずれか1つに記載のコンジュゲート。58R1、R2、R3、R4およびR5が、独立に、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基が、場合によって、COH、CNH2またはS2OHで置換されている、実施形態42から57のいずれか1つに記載のコンジュゲート。59E1およびE2がOであるn1E1m2l2W3m3n2およびn3E2m5l4W5m6n4が、から選択される、実施形態42から58のいずれか1つに記載のコンジュゲート。60Bがから選択される、実施形態42から59のいずれか1つに記載のコンジュゲート。61Aが、Bを介してhGH配列番号1の40位または141位に対応する位置、または成長ホルモン化合物のN末端残基のグルタミン残基に付着している、実施形態42から60のいずれか1つに記載のコンジュゲート。62前記化合物が式から選択される、実施形態42から61のいずれか1つに記載のコンジュゲート。63以下の式AWBGHを有する成長ホルモンコンジュゲート、およびその薬学的に許容される塩。64GHが、ヒト成長ホルモンのアミノ酸配列に対して少なくとも80の同一性を有する、例えば、hGHに対して、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、または少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列を含む成長ホルモン化合物を表す、またはGHがhGHである、実施形態63に記載のコンジュゲート。65GHまたはGHコンジュゲートが、hGHの成長ホルモン活性の少なくとも80を有する、実施形態64に記載のコンジュゲート。66単一Cys変異が、GHのN末端、H1、H2、L2またはH3から選択される領域のいずれか1つの位置にある、実施形態63から65のいずれかに記載のコンジュゲート。67GHが、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、K38C、E39C、Y42C、S43C、D47C、P48C、S55C、S57C、P59C、S62、E65C、Q69C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122C、G126C、E129C、D130C、G131C、P133C、T135C、G136C、T142C、D147C、N149C、D154C、A155C、L156C、R178C、E186C、G187CおよびG190Cのいずれか1つ、例えば、T3C、P5C、S7C、D11C、H18C、Q29C、E30C、E33C、A34C、Y35C、E88C、Q91C、S95C、A98C、N99C、S100C、L101C、V102C、Y103C、D107C、S108C、D112C、Q122CおよびG126Cのいずれか1つなどから選択される単一cys変異を有する、実施形態63から66のいずれか1つに記載のコンジュゲート。68追加的なジスルフィド結合が、ループセグメントとヘリックスセグメントとの間またはループセグメントの内部またはループセグメント間またはヘリックスセグメント間にある、実施形態63から67のいずれか1つに記載のコンジュゲート。69GHが、システインの少なくとも1つがアミノ酸残基128~154などのループセグメントに存在する追加的なジスルフィド結合を含む、実施形態63から68のいずれか1つに記載のコンジュゲート。70追加的なジスルフィド結合が、ループセグメントと、H2などのヘリックスセグメントをつなぐ、実施形態63から69のいずれか1つに記載のコンジュゲート。71追加的なジスルフィド結合がL3とへリックスH2をつなぐ、実施形態63から70のいずれか1つに記載のコンジュゲート。72追加的なジスルフィド架橋が、hGHのR16CL117C、A17CE174C、H21CM170C、D26CV102C、D26CY103C、N47CT50C、Q49CG161C、F54CY143C、F54CS144C、F54CF146C、S55CY143C、S57CY143C、I58CQ141C、I58CY143C、I58CS144C、P59CQ137C、P61CE66C、P61CT67C、S71CS132C、L73CS132C、L73CF139C、R77CI138C、R77CF139C、L81CQ141C、L81CY143C、Q84CY143C、Q84CS144C、S85CY143C、S85CS144C、P89CF146C、F92CF146C、F92CT148C、R94CD107C、V102CA105C、L156CF146C、L156CT148CおよびまたはV185CS188Cに対応する位置、例えば、Q84CY143Cなどにあるアミノ酸の対の少なくとも1つの間にある、実施形態63から71のいずれか1つに記載のコンジュゲート。73Aが、から選択される、実施形態63から72のいずれか1つに記載のコンジュゲート。74Wが、式W7YI7C3~10シクロアルキルW8または原子価結合であり、I7は0~6であり、W7はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s3、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs3は0または1であり、W8はCNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s4、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs4は0または1であるを有する、実施形態63から73のいずれか1つに記載のコンジュゲート。75Bが式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はI3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はI5W6m7であり、X4はFD1l6D2であり、l1、l2、l3、l4、l5およびl6は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、Fはアリール、ヘタリール、ピロリジン25ジオンまたは原子価結合であり、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、CN、OH、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルで置換されており、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COHCNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、D1、D2、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であり、W6は、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s1、C、CO、OC、NHCC1~6アルキル、CNHC1~6アルキルまたは原子価結合から選択されs1は0または1であり、C1~6アルキル基は、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりはCHの炭素原子からX4への付着点を示すを有する、実施形態63から74のいずれか1つに記載のコンジュゲート。76l1、l2、l3、l4、l5およびl6が、独立に、0~6であり、m1、m3、m4、m6およびm7が、独立に、0~6であり、m2およびm5が、独立に、0~10であり、n1、n2、n3およびn4が、独立に、0~10である、実施形態63から75のいずれか1つに記載のコンジュゲート。77D1およびD2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、実施形態63から75のいずれか1つに記載のコンジュゲート。78E1およびE2が、独立に、OまたはNまたは原子価結合から選択される、実施形態63から77のいずれか1つに記載のコンジュゲート。79W1からW8までが、独立に、CNH、NHC、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、NHCC1~6アルキル、またはCNHC1~6アルキルまたは原子価結合からなる群から選択されアルキル基が、場合によって、オキソ、ピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHで置換されておりは、CHの炭素原子からX4への付着点を示す、実施形態63から78のいずれか1つに記載のコンジュゲート。80R1、R2、R3、R4およびR5が、独立に、水素、COH、CNH2、S2OHまたはC1~6アルキルから選択されアルキル基が、場合によって、COH、CNH2またはS2OHで置換されている、実施形態63から79のいずれか1つに記載のコンジュゲート。81E1およびE2がOであるn1E1m2I2W3m3n2およびn3E2m5l4W5m6n4が、から選択される、実施形態63から80のいずれか1つに記載のコンジュゲート。82X4が、原子価結合であり、W6がピロリジン25ジオン、NHCCHCH2COOHまたはNHCCH2CHCOOHのいずれかから選択され、が、CHの炭素原子からGHへの付着点を示す、実施形態63から81のいずれか1つに記載のコンジュゲート。83Bがから選択される、実施形態63から82のいずれか1つに記載のコンジュゲート。841つのアルブミン結合残基が、親水性スペーサーを介して前記GHに連結している、実施形態1から83のいずれか1つに記載のコンジュゲート。85前記化合物が、から選択される、実施形態63から84のいずれか1つに記載のコンジュゲート。86親水性スペーサーがmLogP0を有する、実施形態1から85のいずれか1つに記載のコンジュゲート。87前記親水性スペーサーのモル重量が、80Dから1500Dまでにわたる、または300Dから1100Dまでにわたる、実施形態1から86のいずれか1つに記載のコンジュゲート。88前記アルブミン結合残基が親油性残基である、実施形態1から87のいずれか1つに記載のコンジュゲート。89前記アルブミン結合残基がアルブミンに非共有結合する、実施形態1から88のいずれか1つに記載のコンジュゲート。90前記アルブミン結合残基が生理的なpHで負に荷電している、実施形態1から89のいずれか1つに記載のコンジュゲート。91前記アルブミン結合残基のヒト血清アルブミンに対する結合親和性が、約10μMを下回る、または約1μMを下回る、実施形態1から90のいずれか1つに記載のコンジュゲート。92前記アルブミン結合残基が、直鎖アルキル基、分岐アルキル基、ωカルボン酸基またはωカルボン酸アイソスターを有する基から選択される、実施形態1から91のいずれか1つに記載のコンジュゲート。93前記アルブミン結合残基が、6個から40個までの炭素原子、8個から26個までの炭素原子または8個から20個までの炭素原子を有する、実施形態1から92のいずれか1つに記載のコンジュゲート。94前記アルブミン結合残基が、40個未満のアミノ酸残基を含むペプチドなどのペプチドである、実施形態1から93のいずれか1つに記載のコンジュゲート。952つのアルブミン結合残基が、親水性スペーサーを介して前記GHに連結している、実施形態1から94のいずれか1つに記載のコンジュゲート。96治療において使用するための、実施形態1から95のいずれか1つに記載のコンジュゲート。97場合によって薬学的に許容される賦形剤と組み合わせる、実施形態1から95のいずれか1つに記載のコンジュゲートを含む医薬組成物。98舌に、舌下に、頬側に、口腔内に、経口的に、胃腸内に、鼻に、肺に、上皮に、皮膚に、経皮的に、および非経口的に患者へ投与することができる、実施形態97の医薬組成物。99成長ホルモン欠乏症を治療する方法であって、有効量の治療有効量の実施形態1から95のいずれか1つに記載のコンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含む方法。100ターナー症候群プラダーウィリー症候群ヌーナン症候群ダウン症候群慢性腎疾患、若年性関節リウマチ嚢胞性線維症、HAART治療を受けている小児のHIV感染妊娠期間に比して背が低く生まれた背の低い小児出生時超低体重重だがSGAで生まれた小児の低身長骨格形成異常低軟骨形成症軟骨無形成症特発性低身長成人GHD長骨、例えば、脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手骨、中足骨および指などにおける骨折もしくはそれの骨折頭蓋骨、手根部、および足根部などの海綿様骨における骨折もしくはそれの骨折例えば手、膝、または肩の腱または靭帯の外科手術を受けた後の患者仮骨延長を有する、もしくは仮骨延長を経験している患者例えば膝、股関節、肩、肘、手首または顎などにおいて、股関節もしくは円板の交換、半月板修復術、脊髄癒合または人工器官の固定を受けた後の患者釘、ねじおよび板などの骨接合材料が固定されている患者骨折が偽関節または変形治癒になっている患者例えば、脛骨または母趾からの骨切り術を受けた後の患者グラフトの移植を受けた後の患者外傷または関節炎によって引き起こされる膝の関節軟骨変性ターナー症候群の患者における骨粗鬆症男性の骨粗鬆症慢性的に透析を受けている成人患者APCDにおける栄養不良に関連する心臓血管疾患APCDにおける悪液質の反転APCDにおける癌APCDにおける慢性閉塞性肺疾患APCDにおけるHIVAPCDである高齢者APCDにおける慢性肝疾患、APCDにおける疲労症候群クローン病肝機能障害HIV感染している男性短腸症候群中心性肥満HIV関連リポジストロフィー症候群男性不妊症主要な待機的手術、アルコール薬物の解毒または神経外傷を受けた後の患者加齢虚弱高齢者変形性関節症外傷性の損傷を受けた軟骨勃起不全線維筋痛症記憶障害うつ病外傷性脳損傷くも膜下出血出生時超低体重メタボリックシンドロームグルココルチコイドミオパチー小児におけるグルココルチコイド治療が原因の低身長治療する方法、筋肉組織、神経組織または創傷の治癒を加速する方法損傷を受けた組織への血流を加速または改善する方法または損傷を受けた組織における感染率を減少させる方法であって、有効量の治療有効量の実施形態1から95のいずれか1つに記載のコンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することを含む方法。101成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬品の製造における、実施形態1から95のいずれか1つに記載のコンジュゲートの使用。102ターナー症候群プラダーウィリー症候群ヌーナン症候群ダウン症候群慢性腎疾患、若年性関節リウマチ嚢胞性線維症、HAART治療を受けている小児のHIV感染妊娠期間に比して背が低く生まれた背の低い小児出生時超低体重だがSGAで生まれた小児の低身長骨格形成異常低軟骨形成症軟骨無形成症特発性低身長成人GHD長骨、例えば、脛骨、腓骨、大腿骨、上腕骨、橈骨、尺骨、鎖骨、中手骨、中足骨および指などにおける骨折もしくはそれの骨折頭蓋骨、手根部、および足根部などの海綿様骨における骨折もしくはそれの骨折例えば手、膝、または肩の腱または靭帯の外科手術を受けた後の患者仮骨延長を有する、もしくは仮骨延長を経験している患者例えば膝、股関節、肩、肘、手首または顎などにおいて、股関節もしくは円板の交換、半月板修復術、脊髄癒合または人工器官の固定を受けた後の患者釘、ねじおよび板などの骨接合材料が固定されている患者骨折が偽関節または変形治癒になっている患者例えば、脛骨または母趾からの骨切り術を受けた後の患者グラフトの移植を受けた後の患者外傷または関節炎によって引き起こされる膝の関節軟骨変性ターナー症候群の患者における骨粗鬆症男性の骨粗鬆症慢性的に透析を受けている成人患者APCDにおける栄養不良に関連する心臓血管疾患APCDにおける悪液質の反転APCDにおける癌APCDにおける慢性閉塞性肺疾患APCDにおけるHIVAPCDである高齢者APCDにおける慢性肝疾患、APCDにおける疲労症候群クローン病肝機能障害HIV感染している男性短腸症候群中心性肥満HIV関連リポジストロフィー症候群男性不妊症主要な待機的手術、アルコール薬物の解毒または神経外傷を受けた後の患者加齢虚弱高齢者変形性関節症外傷性の損傷を受けた軟骨勃起不全線維筋痛症記憶障害うつ病外傷性脳損傷くも膜下出血出生時超低体重メタボリックシンドロームグルココルチコイドミオパチー小児におけるグルココルチコイド治療が原因の低身長の治療、筋肉組織、神経組織または創傷の治癒の加速損傷を受けた組織への血流の加速または改善あるいは損傷を受けた組織における感染率の減少のための医薬品の製造における、実施形態1から95のいずれか1つに記載のコンジュゲートの使用。103式AWB1Uの化合物。104AおよびWが、上記の実施形態のいずれかにおいて定義されている通りである、実施形態103に記載の化合物。105Uが、アリール、ヘテロアリール、置換されたマレイミドまたはNHCCH2CH2ピロリジン25ジオンなどのピロリジン25ジオンを含む、またはそれからなる、実施形態103または実施形態104に記載の化合物。106Uが、D1l6D2を含み、D1およびD2が、独立に、O、N、NCR7または原子価結合から選択されR6およびR7が、独立に、水素またはC1~6アルキルを示す、実施形態103または実施形態104に記載の化合物。107Uが、Cl、Br、I、OH、OS2Me、OS2CF3、Otsなどの脱離基を含む、またはそれからなる、実施形態103または実施形態104に記載の化合物。108脱離基が、Cl、BrおよびI、好ましくはBrから選択される、ハロゲン化合物である、実施例107に記載の化合物。109Uが、CNHCH2CHCH2などのアリルアミンを含む、またはそれからなる、実施形態103または実施形態104に記載の化合物。110Uが、NH2などのアミンを含む、またはそれからなる、実施形態103または実施形態104に記載の化合物。111治療用化合物がポリペプチドである、実施形態103~110に記載の化合物。112治療用化合物が単一遊離シスチンを有するポリペプチドである、実施形態103~110に記載の化合物。113Uが、CHOなどのアルデヒドを含む、またはそれからなる、実施形態103または実施形態104に記載の化合物。114親水性スペーサーB1が式X1X2X3X4l1W2m1n1E1m2l2W3m3n2であり、X2はl3W4m4n3E2m5l4W5m6n4であり、X3はl5m7であり、X4は原子価結合であり、l1、l2、l3、l4およびl5は、独立に、0~16から選択され、m1、m3、m4、m6およびm7は、独立に、0~10から選択され、m2およびm5は、独立に、0~25から選択され、n1、n2、n3およびn4は、独立に、0~16から選択され、R1、R2、R3、R4およびR5は、独立に、水素、COH、CNH2、SOH、S2OH、NHCNH2、C1~6アルキル、アリールまたはヘタリールから選択されアルキル基、アリール基およびヘタリール基は、場合によってハロゲン、COH、CNH2、SOH、S2OH、CNまたはOHで置換されており、E1およびE2は、独立に、O、N、NR7または原子価結合から選択されR6およびR7は、独立に、水素またはC1~6アルキルを示し、W1~W5は、独立に、CNH、NHC、CNHCH2、CH2NHC、CNHS2、S2NHC、OCNH、NHCO、CCH2、CH2C、CCHCH、CHCHC、s2、C、CO、OC、または原子価結合から選択されs2は0または1であるを有する、実施形態103から113のいずれかに記載の化合物。1つの要素または複数の要素に関して、含む、有する、含むまたは含有するなどの用語を使用する本発明の任意の態様または実施形態の本明細書における説明は、特に指定のある場合、または文脈から明らかに矛盾する場合を除き、その特定の要素または複数の要素からなる、から本質的になる、またはを実質的に含む本発明の同様の態様または実施形態の裏づけを提供するものとすると本明細書に記載されている組成物は、特に指定のある場合、または文脈から明らかに矛盾する場合を除き、その要素からなる組成物も説明していると理解されるべきである。本発明は、本明細書で提示されている態様または特許請求の範囲において列挙されている主題の改変および等価物の全てを、適用法によって認可される最大の程度まで包含する。本発明は以下の実施例によってさらに例示されているが、その実施例は保護の範囲を限定すると解釈されるべきではない。前述の説明および以下の実施例に開示されている特徴は、どちらも、別々に、およびその任意の組み合わせで、本発明をその多様な形態で実現するための材料であってよい。略語amu原子質量単位CVカラム体積hr時間HzヘルツLリットルMモル濃度mbarミリバールmgミリグラムmin分mLミリリットルmMミリモルmmミリメートルmmolミリモルnmolナノモルmolモルμLマイクロリットルN正常nmナノメートルsec秒ppm百万分率ESIエレクトロスプレーイオン化iv静脈内mz質量電荷比MS質量分析HPLC高圧液体クロマトグラフィーRP逆相HPLCMS高圧液体クロマトグラフィー質量分析NMR核磁気共鳴分光法po経口的なrtまたはRT室温sc皮下のtr保持時間BoctertブチルオキシカルボニルOtButertブチルエステルtButertブチルBoc4ABZOH4tertブトキシカルボニルアミノ安息香酸DCMジクロロメタン、CH2Cl2、塩化メチレンDICジイソプロピルカルボジイミドDIPEANNジイソプロピルエチルアミンDMFNNジメチルホルムアミドDMSOジメチルスルホキシドDTTジチオスレイトールEDAC1エチル3カルボジイミド塩酸塩Et2OジエチルエーテルEtOAc酢酸エチルFmoc9Hフルオレン9イルメトキシカルボニルFmocGluOtBuNFmocグルタミン酸1tブチルエステルFmocLysOH6アミノ2ヘキサン酸FmocOEGOHエトキシエトキシ酢酸OEGエトキシエトキシアセチルFmocThxOHNFmocトランス4アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸H2O水HOBt1ヒドロキシベンゾトリアゾールMeCNアセトニトリルMeOHメタノールMTP3メチルチオ1プロパノールNaCl塩化ナトリウムNaOH水酸化ナトリウムNMPNメチルピロリジン2オンOEGエトキシエトキシ酢酸TFAトリフルオロ酢酸THFテトラヒドロフランTISトリイソプロピルシランCDCl3ジュウテリオクロロホルムCD3ODテトラジュウテリオメタノールDMSOd6ヘキサジュウテリオジメチルスルホキシドTNBSトリニトロベンゼンスルホン酸TSTUO1133テトラメチルウランテトラフルオロボレート実施例では、以下の一般的な方法も使用するhGH化合物を調製するための一般的な方法。成長ホルモン化合物をコードする遺伝子を、組換えによってプラスミドベクターに挿入した。その後、プラスミドベクターを使用して適切な大腸菌株を形質転換した。hGHまたはGH変異体は、N末端メチオニンを伴って、または、後でそれからMEAE配列を切断するMEAE融合物として発現させることができる。細胞ストックを25のグリセロール中で調製し、80°Cで貯蔵した。グリセロールストック株をLBプレートに接種し、その後、37°Cで一晩インキュベートした。発現のために、各プレートの内容物をLB培地で洗浄し、LB培地500mLに希釈した。培養物を37°Cで、220rpmで振とうしながら、OD60006に達するまでインキュベートした。続く誘導を、02mMのIPTGを使用して25°Cで6時間行った。最後に遠心分離によって細胞を回収した。その後、細胞を、005のTween20、25mMのEDTA、10mMのシステアミンおよび4mMの尿素を含有する10mMのトリスHCl、pH90に懸濁させ、細胞破砕器を使用して30kPSIで破砕した。遠心分離によって上清を採取し、その後、クロマトグラフィーによる精製に供した。イオン交換クロマトグラフィーおよび疎水性相互作用を用いて精製を行い、その後CHO細胞で発現させたヒトジペプチジルペプチダーゼIを使用してペプチドタグを除去した。最終的な精製をイソ沈殿およびイオン交換クロマトグラフィーによって実現した。精製は、これらに限定されないが、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーおよび当業者に公知の膜に基づく分離技法を用いることによっても実現することができる。精製された成長ホルモン化合物のタンパク質化学的な特徴付け。インタクトな精製タンパク質を、MALDIMSを使用して分析した。観察された質量は、アミノ酸配列から推定される理論的質量に対応した。予測された連結ジスルフィド結合は、トリプシンおよびAspNによって消化し、その後、消化物を、ジスルフィド結合をDTTで還元する前および還元した後にMALDIMS分析することを用いるペプチドマッピングによって実証することができる。GHおよびhGH化合物コンジュゲートのプロテアーゼ分解の速度を測定するためのアッセイ対象の化合物を、関連性のあるプロテアーゼにより、適切な緩衝液中、37°Cで、24時間に至るまで消化する。タンパク質分解をHPLCアッセイによって評価する。タンパク質分解1mgmLの炭酸水素アンモニウム緩衝液中試験化合物溶液100μLを、37°Cで24時間に至るまで酵素によって分解する。種々の時点で小口試料を取り、1のTFA中に10回希釈することによって試料を酸性化することにより、タンパク質分解反応を停止させる。これらの希釈された試料を逆相HPLCによって分析してタンパク質分解性の消化の程度を推定する。HPLC法上記の溶液10μLを、逆相VydacC42×150mmカラムに注入し、水中01のTFAから01のTFAを含有する100アセトニトリルまでの直線勾配を用いて、流速02ml分で30分にわたって溶出した。214nmのUV吸収でピークの検出を行った。tTの時点におけるインタクトな化合物の百分率を、tT時点のピーク領域およびt0におけるピーク領域から、×100として算出する。インタクトな化合物の百分率を、GraphPadPrimsソフトウェアver501を使用して時間に対してプロットする。半減期を、同じくGraphPadPrismソフトウェアによって、単相減衰として算出する。使用することができる酵素の例は、エラスターゼおよびキモトリプシンである。緩衝液の例は、50mMの炭酸水素アンモニウム、pH85である。キャピラリー電気泳動AgilentTechnologies3DCE系を使用してキャピラリー電気泳動を行った。AgilentTechnologies3DCEChemStationを使用してデータの取得および信号処理を行った。キャピラリーは、Agilentの645cm50μmidExtendedLightPathCapillaryであった。200nmでのUV検出を行った。流動電解質は、50mMのリン酸緩衝液、pH7であった。キャピラリーを、01MのNaOHを3分間、次いでMilliQ水を2分間、そして電解質を3分間用いて適当な状態にした。各流動後、キャピラリーをMilliQ水で2分間、次いでリン酸で2分間、そしてMilliQ水で2分間、で洗い流した。水圧注入を、50mbarで40秒行った。電位は25kVであった。キャピラリーの温度は30°Cであり、実行時間は105分であった。MaldiTof質量分析AutoflexMaldiTof計器を使用して分子量を決定した。アルファシアノ4ヒドロキシ桂皮酸を基質として使用して試料を調製した。RPHPLCAgilent1100システムで、Vydac218TP5446mm×250mm、5μMのC18シリカカラムを使用してRPHPLC分析を行った。214nm、254nm、280nmおよび301nmでUV検出した。カラムを、01トリフルオロ酢酸H2Oを用いて平衡化し、01トリフルオロ酢酸H2Oに対して0~90アセトニトリルの適切な勾配によって試料を溶出した。LCMS2つのPerkinElmerSeries200マイクロポンプ、PerkinElmerSeries200オートサンプラー、AppliedBiosystems785AUV検出器およびSedex75蒸発光散乱検出器を備えたPESciexAPI100質量分析計、またはPESciexAPI150質量分析計でLCMS分析を行った。WatersXterra30mm×50mm5μのC18シリカカラムから、室温、15ml分で溶出した。5のMeCN01のTFAH2Oを用いてカラムを平衡化し、5のMeCN01のTFAH2Oを用いて10分間、次いで、7分間にわたって90のMeCN01のTFAH2Oまでの直線勾配で溶出した。214nmでのUV検出および蒸発光散乱によって検出を行った。カラム溶出液の画分をPESciexAPI100質量分光計のイオンスプレーインターフェースに導入した。300~2000amuの質量範囲を実行中2秒ごとにスキャンした。タンパク質の数量化タンパク質の濃度を、NanoDropND1000UV分光光度計を使用して280nmにおける吸収を測定することによって推定した。誘導化部位を決定するための、酵素によるペプチドマッピング還元され、アルキル化されたタンパク質をAspNによって消化することを用いてペプチドマッピングを行った。まず、タンパク質を、DTTおよびヨードアセトアミドで標準の手順に従って処理した。アルキル化生成物を、HPLCを使用して精製した。その後、アルキル化され、精製された生成物を、エンドプロテアーゼであるAspNを酵素基質比1100で用いて一晩消化した。消化物を、C18カラムおよび標準のTFAMeCN緩衝系を使用してHPLCによって分離した。生じたペプチドマップを、誘導体化されていないhGHのペプチドマップと比較し、異なる保持時間の画分を採取し、Malditof質量分析を使用してさらに解析した。SDSpageSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動を、NuPAGE4~12ビストリスゲルを使用して行った。ゲルを銀染色またはクーマシー染色し、および必要に応じて、MMKurfurstinAnalBiochem200、244~248頁、に記載されている通り、PEGをヨウ化バリウムでも染色した。タンパク質クロマトグラフィーAktaExplorerクロマトグラフィーシステム、およびGEHealthCareのカラムでタンパク質クロマトグラフィーを行った。QSepharoseHP2610カラムを使用して陰イオン交換を行った。開始緩衝液は20mMのトリエタノールアミン緩衝液、pH85であり、溶出緩衝液は、開始緩衝液に02MのNaClを加えたものであった。一般に、化合物を、溶出緩衝液0~75の勾配で15のカラム容量にわたって溶出した。HiPrep2610カラムを使用して脱塩および緩衝液の交換を行った。TNBS試験DMF中10のDIPEAの溶液および1Mの水性TNBSの溶液を調製した。いくつかの樹脂ビーズを小さな試験管内に置き、各溶液を1~3滴加えた。簡単に混合した後、混合物を室温で10分間放置し、ビーズを検査した。強いオレンジ色または赤色のビーズにより、陽性の結果が示され黄色またはわずかにオレンジ色のビーズにより、わずかに陽性であることが示され、無色のビーズは陰性である。LogPの算出LogP値は、公開されているアルゴリズムを使用して、アルブミン結合剤部分およびまたは親水性スペーサー部分についてのmLogPおよびまたはcLogPとして算出することができるANewSubstituentConstant、∈、DerivedfromPartitionCoefficients、CALipinskiらAdvancedDrugDeliveryReviews、23、3~25頁、ExperimentalandComputationalApproachestoEstimateSolubilityandPermeabilityinDrugDiscoveryandDevelopmentSettingsおよびIMoriguchi、SHirono、INakagome、HHirano、ChemandPharmBull、42、976~978頁、ComparisonofReliabilityofLogPValuesforDrugsCalculatedbySeveralMethods。本明細書において、cLogPPomonaCollegeLogPは、BioByteCorpによって提供されるcLogPアルゴリズムのTriposバージョン42およびその関連する断片データベースのおよびバージョン22のSybyl70を用いて算出する。