"被験コムギ由来のゲノムDNAを鋳型として、アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の第3イントロン内に位置する配列番号1の1436位~1611位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドフォワードプライマーと、アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の第4エクソン又は第4イントロン内に位置する配列番号1の1643位~1837位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含むオリゴヌクレオチドリバースプライマーと、を含むプライマーセットを用いた核酸増幅を行い、Aゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子における挿入欠失変異を検出することを含む、被験コムギのAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異を検出する方法。前記フォワードプライマーが、配列番号1の1567位~1591位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含み、前記リバースプライマーが配列番号1の1740位~1764位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含む、請求項1に記載の方法。前記フォワードプライマーが、配列番号8で示される塩基配列を含み、前記リバースプライマーが配列番号9で示される塩基配列を含む、請求項2に記載の方法。前記核酸増幅によって得られる増幅断片を制限酵素で処理し、その切断パターンに基づいて、Aゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子における挿入欠失変異を検出する、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。制限酵素が5GGCC3を認識配列とするものである、請求項4に記載の方法。制限酵素がHaeIIIである、請求項5に記載の方法。請求項1~6のいずれか1項に記載の方法を用いて、Aゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異をヘテロ接合で有するコムギを判別し、それを戻し交配に用いることを含む、種子休眠性が強化されたコムギの育種方法。配列番号1の1436位~1611位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドフォワードプライマーと、配列番号1の1643位~1837位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含むオリゴヌクレオチドリバースプライマーと、を含む、コムギAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異検出用のオリゴヌクレオチドプライマーセット。前記フォワードプライマーが、配列番号1の1567位~1591位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含み、前記リバースプライマーが配列番号1の1740位~1764位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含む、請求項8に記載のプライマーセット。前記フォワードプライマーが、配列番号8で示される塩基配列を含み、前記リバースプライマーが配列番号9で示される塩基配列の相補配列を含む、請求項9に記載のプライマーセット。請求項8~10のいずれか1項に記載のプライマーセットと制限酵素とを含む、コムギAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異検出用のキット。制限酵素が5GGCC3を認識配列とするものである、請求項11に記載のキット。制限酵素がHaeIIIである、請求項12に記載のキット。本発明は、コムギの種子休眠性の強化に寄与する遺伝子変異を見出し、その変異のヘテロ接合体を判別できる変異検出方法を提供することを課題とする。本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、コムギ種子の発芽時に発現しているABA8ox遺伝子TaABA8ox1同祖遺伝子群のうち、発明者が欠失変異による種子休眠性の強化を見出しているTaABA8ox1A遺伝子について、ABA8ox活性の低下を引き起こす遺伝子変異を有する系統を、TILLING法によりコムギ遺伝資源から新たに見いだした。本発明者は、このTaABA8ox1A遺伝子変異を簡便に検出することができ、かつ植物試料中のTaABA8ox1A遺伝子変異の有無、特に、ヘテロ接合でこの遺伝子変異を有する個体を確実に判定判別することができれば、上記判定方法を利用して交配、特に、連続戻し交配を効率的に行うことにより、発芽時のABA8ox活性が低下した種子休眠性が強化された植物を確実に短期間で作出できるであろうと考えた。本発明は、このような着想に基づいて完成されたものである。すなわち、本発明は以下を包含する。1被験コムギ由来のゲノムDNAを鋳型として、アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の第3イントロン内に位置する配列番号1の1436位~1611位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドフォワードプライマーと、アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の第4エクソン又は第4イントロン内に位置する配列番号1の1643位~1837位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含むオリゴヌクレオチドリバースプライマーと、を含むプライマーセットを用いた核酸増幅を行い、Aゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子における挿入欠失変異を検出することを含む、被験コムギのAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異を検出する方法。この方法の好適な一実施形態においては、前記フォワードプライマーは、配列番号1の1567位~1591位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含み、前記リバースプライマーが配列番号1の1740位~1764位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含みうる。そのような前記フォワードプライマーとしては、例えば、配列番号8で示される塩基配列を含むものが挙げられ、前記リバースプライマーとしては、例えば、配列番号9で示される塩基配列を含むものが挙げられる。この方法では、前記核酸増幅によって得られる増幅断片を制限酵素で処理し、その切断パターンに基づいて、Aゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子における挿入欠失変異を検出することも好ましい。その場合、5GGCC3を認識配列とする制限酵素により増幅断片を処理することが特に好ましい。そのような制限酵素の例はHaeIIIである。2上記1の方法を用いて、Aゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異をヘテロ接合で有するコムギを判別し、それを戻し交配に用いることを含む、種子休眠性が強化されたコムギの育種方法。3配列番号1の1436位~1611位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドフォワードプライマーと、配列番号1の1643位~1837位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含むオリゴヌクレオチドリバースプライマーと、を含む、コムギAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異検出用のオリゴヌクレオチドプライマーセット。このプライマーセットの好適な一実施形態では、前記フォワードプライマーは、配列番号1の1567位~1591位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含み、前記リバースプライマーは配列番号1の1740位~1764位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含みうる。そのような前記フォワードプライマーとしては、配列番号8で示される塩基配列を含むものが挙げられ、前記リバースプライマーとしては、配列番号9で示される塩基配列の相補配列を含むものが挙げられる。4上記3のプライマーセットと制限酵素とを含む、コムギAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異検出用のキット。このキットの好適な一実施形態では、5GGCC3を認識配列とする制限酵素を含むことが特に好ましい。この制限酵素が好ましくはHaeIIIである。本発明によれば、TaABA8ox1A遺伝子の所定の機能抑制変異をヘテロ接合で有するコムギも明確に判別することができる。以下、本発明を詳細に説明する。1TaABA8ox1A遺伝子における挿入欠失変異とその検出方法本発明において、一部のコムギ品種系統が、TaABA8ox1A遺伝子の第3イントロンと第4エクソンにまたがる領域に、挿入欠失変異を有することが見出された図2。この挿入欠失変異は、野生型品種農林61号のTaABA8ox1A遺伝子のゲノム上の配列ゲノム配列、特に配列番号1を基準とする場合に配列番号1の1612位~1642位の配列内に、塩基の挿入及び欠失が認められる変異である。TaABA8ox1A遺伝子のこの挿入欠失変異の典型例は、具体的には、配列番号1の1612位~1642位の塩基配列5CTCTCCTCTGTGCGTGCAGGGTACCTGATTC3配列番号29が、塩基の挿入及び欠失によって5GCTTGGGAATCAGG3配列番号30の塩基配列に変化するものである。しかし同様の挿入欠失変異が存在する限り、検出対象のTaABA8ox1A遺伝子の当該変異部位にわずかな変異例えば、1~3塩基の欠失、挿入、及び/又は置換などがさらに生じていても本発明に係る方法による検出は可能である。本発明のTaABA8ox1A遺伝子の挿入欠失変異は、フレームシフトを引き起こすだけでなく、TaABA8ox1A遺伝子の転写産物からイントロンが切り出されないようにすることで正常な成熟mRNAの生成を妨げることが好ましい。TaABA8ox1A遺伝子のこの挿入欠失変異は、その結果、TaABA8ox1A遺伝子から発現されるTaABA8ox酵素活性を大きく低下又は喪失させることから、TaABA8ox1A遺伝子における機能抑制変異の1つである。TaABA8ox1同祖遺伝子群の機能抑制変異は、種子の発芽を抑制し、種子休眠性を強化する上で有用である。本発明では、コムギにおけるTaABA8ox1A遺伝子のこの挿入欠失変異以下、TaABA8ox1A挿入欠失変異とも呼ぶを検出する方法に関する。本発明は、TaABA8ox1A挿入欠失変異を任意の方法で検出することによる、コムギのTaABA8ox1A遺伝子の機能抑制変異を検出する方法にも関する。本発明において、遺伝子の機能抑制変異とは、TaABA8ox1A遺伝子等の目的の遺伝子によってコードされる遺伝子産物タンパク質等の活性を大きく低下させる限定するものではないが、例えば野生型遺伝子産物の活性の50未満、好ましくは10未満、より好ましくは5未満に低下させるか、又はその活性を喪失させるような、目的の遺伝子内の塩基配列変異を意味する。本発明に係る検出方法の適用対象となるコムギは、普通コムギTriticumaestivumに属する任意のコムギ植物であり得るが、栽培種の普通コムギの品種系統がより好ましい。本発明において品種系統とは、品種品種として確立された系統又は系統の両方を包含することを意味し、これは品種と系統を明確に区別することを意図しない。検出対象のコムギは、TaABA8ox1遺伝子典型的には、TaABA8ox1A遺伝子の機能抑制変異好ましくは、TaABA8ox1A挿入欠失変異を有することが期待されているか、又は予測されるコムギであってよい。TaABA8ox1A挿入欠失変異を有するコムギ品種としては、例えば、銘賢169号、通州小白玉、及び紅芒炸が挙げられる。また、TaABA8ox1A挿入欠失変異を有するコムギ品種系統例えば、銘賢169号、通州小白玉、及び紅芒炸をTaABA8ox1A遺伝子に関して野生型のコムギ品種系統や他の任意のコムギ品種系統と交配して得られる子孫コムギ例えば、F1~F5コムギ等について、本発明に係る検出方法を実施してもよい。本発明に係る方法では、被験コムギ由来のゲノムDNAを鋳型として使用する。ゲノムDNAは、被験コムギ個体より採取した任意の組織例えば、葉、茎、根、カルス、種子などから、植物分子生物学の分野で慣用されている手法に従って抽出し、必要に応じて精製することにより、調製することができる。コムギからのゲノムDNAの抽出は、例えば、市販の植物ゲノムDNA抽出キット例えば、DNeasyPlantMiniKitQIAGENやPlantGenomicDNAExtractionMiniVIOGENE等を用いて行うこともできる。このようにして調製される被験コムギ由来のゲノムDNAについては、核酸増幅反応の鋳型として用いる前にRNase処理等によりRNAを除去することも好ましい。本検出法では、このようにして調製される被験コムギ由来のゲノムDNAを鋳型として、TaABA8ox1A挿入欠失変異を検出する。好適な実施形態では、被験コムギ由来のゲノムDNAを鋳型として、アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の第3イントロン内であって、TaABA8ox1A挿入欠失変異部位の上流に位置する、配列番号1の1436位~1611位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含むように設計したオリゴヌクレオチドフォワードプライマーと、アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の第4エクソン又は第4イントロン内好ましくは第4イントロン内であって、TaABA8ox1A挿入欠失変異部位の下流に位置する、配列番号1の1643位~1837位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含むように設計したオリゴヌクレオチドリバースプライマーと、を含むプライマーセットを用いた核酸増幅を行うことにより、TaABA8ox1A挿入欠失変異を検出する。ここで配列番号1の塩基配列は、TaABA8ox1A挿入欠失変異を含まない野生型品種農林61号のTaABA8ox1A遺伝子のゲノム配列を示しており、本発明ではこの配列を領域指定の基準として用いる。本発明において、特定の塩基配列の相補配列とは、その特定の塩基配列からなるポリヌクレオチドに対する相補鎖アンチセンス鎖全長の塩基配列5から3方向に記載した配列を意味する。上記のオリゴヌクレオチドフォワードプライマーは、好適には、配列番号1の1567位~1591位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含む1種以上のオリゴヌクレオチドプライマーである。このようなフォワードプライマーの特に好ましい例としては、配列番号8で示される塩基配列配列番号1の1567位~1591位の塩基配列に相当を含むオリゴヌクレオチドプライマー、例えば実施例に記載のプライマーTaABAox1aS1が挙げられる。また上記のオリゴヌクレオチドリバースプライマーは、好適には、配列番号1の1740位~1764位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含む1種以上のオリゴヌクレオチドプライマーである。このようなリバースプライマーの特に好ましい例としては、配列番号9で示される塩基配列配列番号1の1740位~1764位の塩基配列の相補配列に相当を含むオリゴヌクレオチドプライマー、例えば実施例に記載のプライマーTaABAox1aA1が挙げられる。これらの好適なオリゴヌクレオチドフォワードプライマー及びオリゴヌクレオチドリバースプライマーを設計する配列番号1の1567位~1591位及び1740位~1764位の領域は、TaABA8ox1A遺伝子と他の同祖遺伝子群TaABA8ox1B及びTaABA8ox1Dとの間の配列相同性がかなり低いことから、それらのプライマーを用いた核酸増幅は、TaABA8ox1A遺伝子を特異的に増幅することができて有利である。本発明に係るオリゴヌクレオチドプライマーは、少なくとも15塩基長であるが、15~50塩基長が好ましく、15~30塩基長がさらに好ましい。このオリゴヌクレオチドプライマーは、特異性をより高める上では、18塩基長以上、好ましくは20塩基長以上、さらに好ましくは24塩基長以上であってよい。核酸増幅は、被験コムギ由来のゲノムDNAを鋳型とし、上記オリゴヌクレオチドフォワードプライマー及びオリゴヌクレオチドリバースプライマーとを含むプライマーセットを用いて、公知の任意の核酸増幅法に従って行えばよい。例えばPCRポリメラーゼ連鎖反応法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、ICANIsothermalandChimericprimerinitiatedAmplificationofNucleicacids法、SDAStrandDisplacementAmplification法などを利用することができる。本発明に係る方法における核酸増幅は、1つの反応液中に1組のプライマーセット又は2組以上のプライマーセットマルチプレックスPCRを含めて行ってもよい。核酸増幅を行う際の反応液組成や温度サイクル条件の各温度及び反応時間等は、当業者であれば、使用する核酸増幅法、プライマーのTm値、サーマルサイクラーの仕様などに合わせて適宜定めることができる。限定するものではないが、一例としては、98°Cで10秒変性、及び72°Cで1分~1分30秒アニーリング及び伸長反応を1サイクルとして20~40サイクル行う温度サイクル条件で核酸増幅を実施してもよい。上記のオリゴヌクレオチドフォワードプライマー及びオリゴヌクレオチドリバースプライマーを用いた核酸増幅により、上記TaABA8ox1A挿入欠失変異が含まれる領域が、被験ゲノムDNAから増幅される。そのような核酸増幅の結果として得られる増幅断片増幅産物は、任意の核酸分析手段によって確認することができる。例えば、そのような増幅断片を含む核酸増幅反応終了後の反応液を、ゲル電気泳動と染色例えば、0.5~4アガロースゲルでの電気泳動及び臭化エチジウム染色、蛍光又は放射同位元素等で標識したプライマーを使用した場合のゲル電気泳動と標識検出、キャピラリー電気泳動、自動シークエンサー等を用いた塩基配列決定、MALDITOFMS分析等に供し、その核酸分析結果から、目的の増幅産物が得られたかどうかを確認することができる。目的の増幅断片が得られたかどうかは、例えば挿入欠失変異を有しない野生型TaABA8ox1A遺伝子のゲノム配列配列番号1、図2や挿入欠失変異を有するTaABA8ox1A遺伝子のゲノム配列配列番号6、図2に基づいて予測される増幅断片の塩基配列やそのサイズ等と一致するかどうかにより判定することができる。被験ゲノムDNAが上記TaABA8ox1A挿入欠失変異を有していれば、核酸増幅により、TaABA8ox1A挿入欠失変異を含む増幅断片が生成される。そのようなTaABA8ox1A挿入欠失変異を含む増幅断片は、野生型のTaABA8ox1A遺伝子由来の増幅断片よりも明らかに小さい。例えば、配列番号6の配列内に示される17bpが欠失したTaABA8ox1A挿入欠失変異図2が存在する場合、配列番号8で示される塩基配列からなるフォワードプライマーと、配列番号9で示される塩基配列からなるリバースプライマーによって得られる増幅断片は、典型的には、181bp長である。これに対して、TaABA8ox1A挿入欠失変異が存在しない野生型の場合には、配列番号8で示される塩基配列からなるフォワードプライマーと、配列番号9で示される塩基配列からなる塩基配列からなるリバースプライマーによって得られる増幅断片は、典型的には198bpである。これらの増幅断片は、例えば比較的高濃度のアガロースゲルを用いた電気泳動により、そのサイズの違いから容易に判別することができる。本発明の方法ではさらに、核酸増幅によって得られる増幅断片を、適当な制限酵素で処理した後に電気泳動し、予測断片長のバンドにより構成される切断パターンが得られたかどうかに基づいて、TaABA8ox1A挿入欠失変異の有無をより簡便に判定してもよい。予め制限酵素で処理することにより、野生型TaABA8ox1A遺伝子とTaABA8ox1A挿入欠失変異を有するTaABA8ox1A遺伝子挿入欠失変異型TaABA8ox1A遺伝子との間で、より容易に識別可能な電気泳動結果が得られるようにすることができ、それにより判別をより確実かつ容易にすることができる。ここで用いる制限酵素は、増幅断片中に認識部位があるものから当業者が容易に選択することができるが、TaABA8ox1A挿入欠失変異部位付近に認識部位を有するものがより好ましい。限定するものではないが、制限酵素は、より好ましくは、TaABA8ox1A挿入欠失変異部位付近に認識部位を有し、かつ挿入欠失変異型TaABA8ox1A遺伝子は切断することができるが、野生型TaABA8ox1A遺伝子は切断しないものがより好ましい。そのような制限酵素としては、限定するものではないが、例えば、5GGCC3を認識配列とする制限酵素が挙げられる。5GGCC3を認識配列とする制限酵素としては、例えば、HaeIII、AcaIV、AspTIII、Asp742I、AvrBI、Bal475I、Bal3006I、Bce71I、Bco33I、Bfi458I、Bim19II、BliI、BluII、BsaRI、BseI、BseQI、BshI、BshAI、BshBI、BshCI、BshDI、BshEI、BshFI、BsiAI、BsiDI、BsiHI、BspANI、BspBRI、BspKI、BspRI、Bsp71I、Bsp137I、Bsp211I、Bsp226I、Bsp1261I、BssCI、BstCI、BstJI、BsuRI、Bsu1076I、Bsu1114I、BteI、ClmI、CltI、Csp2I、DsaII、FinSI、FnuDI、HhgI、MfoAI、MniI、NgoAII、NgoPII、NgoSII、NlaI、OchI、PaiI、PalI、Pde133I、PflKI、PhoI、PlaI、Ple214I、PpuI、Psp29I、SbvI、SfaI、SplIII、SuaI、SulI、TspZNI、TteAI、TtnI、Uba9I、Uba54I、Uba61I、Uba1097I、Uba1140I、Uba1146I、Uba1147I、Uba1150I、Uba1152I、Uba1153I、Uba1155I、Uba1169I、Uba1174I、Uba1175I、Uba1176I、Uba1178I、Uba1179I、Uba1207I、Uba1208I、Uba1209I、Uba1210I、Uba1214I、Uba1223I、Uba1228I、Uba1230I、Uba1231I、Uba1235I、Uba1288I、Uba1292I、Uba1293I、Uba1319I、Uba1322I、Uba1336I、Uba1377I、Uba1388I、Uba1392I、Uba1395I、Uba1408I、Uba1418I、Uba1422I、Uba1429I、Uba1449I、Uba1450I、Van91III、VhaI、Vha1168I、及びVniI等が挙げられる。好ましい一実施形態では、例えば、配列番号8で示される塩基配列からなるフォワードプライマーと、配列番号9で示される塩基配列からなる塩基配列からなるリバースプライマーによって得られる増幅断片典型的には181bpを、5GGCC3を認識配列とする制限酵素例えばHaeIIIで処理した場合、TaABA8ox1A挿入欠失変異図2が存在すれば、典型的には、122bpと59bpの切断断片が生成される。一方、TaABA8ox1A挿入欠失変異図2が存在しない野生型であれば、典型的には、198bpの増幅断片が切断されずに残る。このような切断パターンに基づいて、挿入欠失変異型TaABA8ox1A遺伝子を有するか、野生型TaABA8ox1A遺伝子を有するかを判定することにより、TaABA8ox1A挿入欠失変異を検出することができる。本発明に係る検出方法では、以上のようにして、被験コムギのゲノムにおける、TaABA8ox1A挿入欠失変異又は挿入欠失変異型TaABA8ox1A遺伝子を検出することができる。本発明に係る検出方法によれば、TaABA8ox1A挿入欠失変異をホモ接合で有する被験コムギだけでなく、当該挿入欠失変異をヘテロ接合で有する被験コムギについても、その変異を陽性検出することができる。例えば、TaABA8ox1A挿入欠失変異の存在を示す増幅断片又はその切断断片のパターンのみが示された場合には、その被験コムギはTaABA8ox1A挿入欠失変異についてホモ接合であると判定できる。TaABA8ox1A挿入欠失変異の存在を示す増幅断片又はその切断断片のパターンと、野生型TaABA8ox1A遺伝子の存在を示す増幅断片又はその切断断片のパターンとが両方示された場合には、その被験コムギはTaABA8ox1A挿入欠失変異についてヘテロ接合であると判定できる。野生型TaABA8ox1A遺伝子の存在を示す増幅断片又はその切断断片のパターンのみが示された場合には、その被験コムギはTaABA8ox1A挿入欠失変異を有さない野生型であると判定できる。このようにして検出されるTaABA8ox1A挿入欠失変異は、フレームシフトを生じ、好ましくは併せてイントロンの切り出しも妨げることにより、野生型TaABA8ox1A遺伝子によりコードされるアブシジン酸8位水酸化酵素のC末端アミノ酸配列を大幅に変更してしまう図5。アブシジン酸8位水酸化酵素はシトクロムP450スーパーファミリーに分類されるが、シトクロムP450ファミリーのヘム結合領域のCys残基よりC末端側には、6番目の基質の認識に関わる部位がある今井嘉郎、化学と生物、Vo36No81998、GotohJBiolChem267,83。植物のアブシジン酸8位水酸化酵素のアミノ酸配列を比較すると、ヘム結合領域のCys残基よりC末端側に高度に保存されたアミノ酸配列PFxxPxxGLがあるが、シロイヌナズナのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子CYP707A2の変異体cyp707a22では、7番目のイントロンにTDNAが挿入されることによりPFxxPxxGL配列を含むC末端領域が翻訳されなくなるKushiroetalEMBO2004。このcyp707a22変異体の種子発芽は、野生型に比較して顕著に遅延することから、アブシジン酸の代謝活性を失っていると考えられるKushiroetalEMBO2004。このようにC末端アミノ酸を欠失したアブシジン酸8位水酸化酵素は活性を喪失する可能性が高い。本発明のTaABA8ox1A挿入欠失変異を有するTaABA8ox1A遺伝子は、活性が大きく低下したか又は活性を喪失しているアブシジン酸8位水酸化酵素しか発現できず、その機能が抑制されている。従って本発明に係る検出方法では、TaABA8ox1A挿入欠失変異を検出することにより、被験コムギの有するAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子TaABA8ox1A遺伝子の機能抑制変異を検出することができる。本発明では、このようにしてTaABA8ox1A遺伝子における挿入欠失変異TaABA8ox1A挿入欠失変異を検出することにより、TaABA8ox1A遺伝子の機能抑制変異を有するコムギを選抜判別することができる。選抜されるコムギは、典型的には、TaABA8ox1A挿入欠失変異をホモ接合若しくはヘテロ接合で有するコムギ品種系統以下に限定するものではないが、例えば、銘賢169号、通州小白玉、及び紅芒炸など又はそれを少なくとも一方の育種親とする交配により得られる子孫コムギ例えば、F1~F5コムギ等であり得る。本発明はこのようなTaABA8ox1A遺伝子コムギAゲノムのABA8ox遺伝子の機能抑制変異を有するコムギの選抜判別方法も提供する。本発明に係る検出方法によりAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異としてTaABA8ox1A挿入欠失変異の存在が検出された被験コムギは、機能抑制変異型アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の供給源として育種において有利に利用できる。2種子休眠性を強化したコムギの育種方法本発明に係る検出方法によれば、上記のTaABA8ox1A挿入欠失変異を有するAゲノムの挿入欠失変異型アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子を保持する被験コムギを効率良く選抜することができる。本発明に係る検出方法では、そのようなAゲノムの挿入欠失変異型アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子又はその野生型遺伝子をホモ接合で有する個体だけでなく、ヘテロ接合で有する個体も、それぞれ判別し、選抜することができる。このようにして選抜されたAゲノムの挿入欠失変異型アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子を有するコムギは、TaABA8ox1同祖遺伝子群TaABA8ox1A、TaABA8ox1B、TaABA8ox1Dの2つ以上を機能抑制させた変異体を作出する上で、育種親として有利に使用できる。本発明では、このように選抜されたAゲノムの挿入欠失変異型アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子を有するコムギを、育種親として、コムギの育種に用いることができる。Aゲノムの挿入欠失変異型アブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子TaABA8ox1A挿入欠失変異をコムギに導入することに基づく育種では、発芽抑制種子休眠性の強化という目的の形質だけを導入するために、当該変異をヘテロ接合で有するコムギ個体を野生型個体に戻し交配することを繰り返す連続戻し交配を行うことが好ましい。本発明に係る方法によれば、TaABA8ox1A挿入欠失変異をヘテロ接合で有するコムギ個体ヘテロ接合体を、ホモ接合体や野生型と区別して検出判別することができるため、育種過程において後代検定を行う必要が無く、有利である。すなわち本発明は、TaABA8ox1A挿入欠失変異をコムギに導入することにより種子休眠性が強化されたコムギを育種する方法において、本発明に係る検出方法を用いてAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異をヘテロ接合で有するコムギ個体を判別し、判別したヘテロ接合のコムギ個体を少なくとも一方の育種親として戻し交配に用いることを含む方法も提供する。判別対象のコムギは、TaABA8ox1A挿入欠失変異をホモ接合又はヘテロ接合で有するか又は有する可能性があるコムギであってよく、既存の品種又は系統のコムギであっても突然変異誘発等により新たに得た品種又は系統であってもよい。判別対象のコムギはまた、そのようなTaABA8ox1A挿入欠失変異をホモ接合又はヘテロ接合で有しうるコムギを、野生型又は他のコムギ品種系統と交配するか又は自家交配して得られる子孫コムギであってもよい。子孫コムギは、F1個体であってもよいし、F2~F5個体であってもよいし、そのさらに後代の個体であってもよい。戻し交配は、特定の交配相手のコムギ植物との戻し交配を繰り返し行う連続戻し交配であることが好ましい。この場合、交配相手は反復親と呼ばれることがある。育種における交配相手のコムギは、特に限定されないが、野生型の他、機能抑制機能欠損又は機能低下した他のTaABA8ox1同祖遺伝子TaABA8ox1B、TaABA8ox1Dを有するコムギであってもよい。機能抑制機能欠損又は機能低下したTaABA8ox1B、D遺伝子を有するコムギと交配し、双方の機能抑制変異をコムギに導入することにより、コムギ個体全体としてのABA8ox活性を低下させ、それにより、発芽を効果的に抑制し、種子休眠性を強化することができる。このような育種において、TaABA8ox1A挿入欠失変異を有する特にヘテロ接合で有する子孫コムギを、本発明に係る検出方法を用いて確実に判別し、育種親として用いることは非常に有利である。TaABA8ox1同祖遺伝子群の機能抑制変異が2種以上集積した子孫コムギでは、アブシジン酸8位水酸化酵素の植物全体としての活性レベルが顕著に低下する。その結果、TaABA8ox1同祖遺伝子群の機能抑制変異が集積した子孫コムギでは、種子休眠性が強化される。本発明における種子休眠性のレベルは、種子休眠性の指標となる、吸水処理後の種子の発芽率で表すことができる。まず、発芽試験として、No2濾紙を2枚入れた直径9cmのシャーレに蒸留水を6mL添加し、その濾紙の上に被験コムギ育種親コムギ、子孫コムギ等が含まれるから採種した種子を並べることにより吸水を開始させ、その後、24時間毎に発芽粒数を調べ、累積発芽粒数を吸水刺激処理の7日後まで計数する。この発芽試験は、20°C暗所にて行う。吸水処理した種子の総数に対する発芽した種子の累積数の割合を、発芽率として算出する。種子休眠性を調べるコムギ種子は、限定するものではないが、例えば、開花後49日目の種子、又は開花後70日目の種子であってよい。吸水処理の7日後の発芽率累積発芽率が、子孫コムギの育種親のコムギ品種若しくは系統と比較して有意に低減しているか又は発芽率0であることが示される場合には、当該子孫コムギの種子休眠性が育種親よりも強化されていることが実証される。TaABA8ox1同祖遺伝子群の機能抑制変異が集積した子孫コムギでは、吸水処理後も種子の発芽を抑制することができることから、本育種方法によれば、TaABA8ox1同祖遺伝子群の機能抑制変異をコムギ個体に集積することにより、コムギ種子の発芽を抑制することができる。このようなコムギ種子発芽抑制方法も本発明の範囲に含まれる。3プライマー及びキット本発明は、本発明に係る検出方法に好適に用いることができるプライマーセットも提供する。プライマーセットとは、所定の領域を増幅することができる2つ以上のプライマーを組み合わせたものをいい、2つのプライマーからなるプライマーセットはプライマーペアと呼ぶことがある。本発明に係るそのようなプライマーセットの一実施形態は、配列番号1の1436位~1611位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドフォワードプライマーと、配列番号1の1643位~1837位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含むオリゴヌクレオチドリバースプライマーと、を含む、コムギAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異検出用のオリゴヌクレオチドプライマーセットである。このプライマーセットは、一実施形態では、配列番号1の1567位~1591位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列を含むオリゴヌクレオチドフォワードプライマーと、配列番号1の1740位~1764位の塩基配列上の連続した少なくとも15塩基の塩基配列の相補配列を含むオリゴヌクレオチドリバースプライマーとを含むことが好ましい。このプライマーセットのさらに好ましい一実施形態では、配列番号8で示される塩基配列を含むオリゴヌクレオチドフォワードプライマー、配列番号9で示される塩基配列の相補配列を含むオリゴヌクレオチドリバースプライマーとを含む。本発明に係るオリゴヌクレオチドプライマーは、少なくとも15塩基bp、好ましくは15~50塩基bp、より好ましくは15~30塩基bp、さらに好ましくは18~30塩基bp例えば20~30塩基bp又は24~30塩基bpの塩基長を有する。本発明に係るオリゴヌクレオチドプライマーは、当業者に周知の任意の化学合成法により作製することができ、例えば市販の自動DNA合成装置を使用して慣用手順により合成することができる。本発明に係るオリゴヌクレオチドプライマーは、オリゴヌクレオチドにさらに任意の修飾が施されたものでもよい。例えば本発明に係るオリゴヌクレオチドプライマーは、その5末端又は3末端に当該プライマーの検出や増幅を容易にするための標識物質例えば、蛍光分子、色素分子、放射性同位元素、ジゴキシゲニンやビオチン等の有機化合物など及び/又は付加配列LAMP法で用いるループプライマー部分等を含んでいてもよい。本発明に係るプライマーは、5末端でリン酸化又はアミン化されていてもよい。本発明に係るプライマーはまた、天然塩基のみを含んでもよいし、修飾塩基を含んでもよい。修飾塩基としては、デオキシイノシン、デオキシウラシル、S化塩基などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明に係るプライマーは、ホスホロチオエート結合やホスホロアミデート結合などを含む任意の誘導体オリゴヌクレオチドを含むものであってもよいし、ペプチド核酸結合を含むペプチド核酸PNAを含んでいてもよい。本発明に係るオリゴヌクレオチドプライマーは、DNAであってもRNAであってもよく、RNAである場合には、その塩基配列はDNA配列におけるTチミンをUウラシルに読み替えるものとする。本発明はまた、本発明に係るオリゴヌクレオチドプライマーセットと制限酵素を含むキットも提供する。好適な実施形態では、該キットは、コムギAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異検出用のものである。制限酵素は、限定するものではないが、例えば、5GGCC3を認識配列とするものである。5GGCC3を認識配列とする制限酵素の例は、本発明に係る検出方法において用いる制限酵素について上述した通りである。5GGCC3を認識配列とする制限酵素の特に好適な例は、HaeIIIである。このコムギAゲノムのアブシジン酸8位水酸化酵素遺伝子の機能抑制変異検出用のキットは、コムギの種子休眠性を強化する育種用にも非常に便利に使用できる。以下、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。下記で使用したコムギ品種又は系統は、独立行政法人農業食品産業技術総合研究機構作物研究所日本で保存されているもの又は農業生物資源ジーンバンクから分与されたものを用いた。[参考例1]コムギ品種農林61号のTaABA8ox1A遺伝子のゲノム配列の解析本発明者による国際出願PCTJP20100535565号明細書に記載のようにして、コムギ品種農林61号のTaABA8ox1A遺伝子のゲノム上の塩基配列ゲノム配列を決定した。簡単に説明すると、まずコムギ品種ChineseSpringチャイニーズスプリングの種子を発芽及び発根させ、得られた幼植物体からCTAB法で全RNAを抽出し、RNAを精製し、逆転写反応並びに5RACE及び3RACEを行い、増幅断片の塩基配列を決定した。得られた部分配列に基づいて設計した各遺伝子特異的プライマーを用いてPCR増幅及び塩基配列決定を行い、コムギのABA8ox1をコードすると推定された3つの遺伝子の全長cDNA配列を明らかにした。配列解析の結果、ChineseSpringから上記の通り単離された3つの遺伝子は、TaABA8ox1同祖遺伝子群を構成する3つのTaABA8ox1同祖遺伝子TaABA8ox1A、TaABA8ox1B、及びTaABA8ox1Dであることが示された。上記で単離したTaABA8ox1同祖遺伝子群のゲノム配列を明らかにするため、コムギ品種農林61号N61の葉より常法によりゲノムDNAを抽出精製し、それを鋳型として、遺伝子特異的プライマーを用いて高忠実性highfidelityPCRを行った。得られた増幅断片について塩基配列決定を行うことにより、同祖遺伝子TaABA8ox1A、TaABA8ox1B、TaABA8ox1Dのゲノム配列を決定した。農林61号のTaABA8ox1A遺伝子のゲノム配列を配列番号1に示す。また農林61号のTaABA8ox1A遺伝子の全長cDNA配列を配列番号2に示す。さらに配列番号3に、農林61号のTaABA8ox1A遺伝子の全長cDNA配列によってコードされるTaABA8ox1Aタンパク質の全長アミノ酸配列を示す。[参考例2]TaABA8ox1同祖遺伝子変異の集積本発明者は、コムギ品種新中長やタマイズミ等がTaABA8ox1D遺伝子中に挿入変異を有することを見出している特許文献1。しかし半数体倍加系統を用いた解析では、TaABA8ox1D挿入変異のみでは、種子休眠性に対する影響は認められなかった。これは他のTaABA8ox1同祖遺伝子群によってABA8ox活性が補完されるためと考えられる。そこで、TaABA8ox1D遺伝子中に挿入変異を有する品種タマイズミに変異原処理を行い、TaABA8ox1A又はTaABA8ox1Bに欠失変異が起きた個体の検出を行った。具体的には、まずタマイズミ種子に、変異原処理としてγ線照射又はアジ化ナトリウム処理を行った後、圃場に播種して生育させた。γ線照射は、乾燥種子に対してγ線を10Gyhで20時間照射することにより行った。アジ化ナトリウム処理は、吸水種子20°C、48時間を4mMアジ化ナトリウム溶液に2時間浸漬することにより行った。得られた植物体から自家受粉種子を採種し、その種子M2世代を圃場に播種した。γ線照射系統のM2世代2074系統、及びアジ化ナトリウム処理系統のM2世代545系統のそれぞれの植物体の葉からゲノムDNAを調製し、TaABA8ox1同祖遺伝子における遺伝子欠失変異の有無を検出した。その結果、γ線照射系統から、TaABA8ox1Aに対応するバンドが増幅されない個体TaABA8ox1ATaABA8ox1D変異体:以下、184G4とするを1個体見いだした。また184G4がタマイズミが有するTaABA8ox1D遺伝子中の挿入変異を保持していることが確認された。さらに184G4について、TaABA8ox1A中の遺伝子変異がどの領域で起きているかを調べた。その結果、複数のDNAマーカーによる解析で、TaABA8ox1Aに由来するバンドが認められなかったことから、184G4ではTaABA8ox1Aの座乗する領域が広く欠失していると考えられた。この個体184G4から自家受粉種子M3世代を採種し、その遺伝子型を各M3個体について調べたところ、同様のTaABA8ox1ATaABA8ox1D遺伝子変異が確認された。184G4では、TaABA8ox1Aが欠失し、またTaABA8ox1Dが挿入変異により機能喪失していることが示された。このことから、184G4ではTaABA8ox1同祖遺伝子のうち活性を有しているのはTaABA8ox1Bのみであるため、発芽時のABA8ox1活性が親品種タマイズミよりも低下していると考えられた。そこで次に、発芽能を調べるため、TaABA8ox1同祖遺伝子変異体184G4M4世代と親品種タマイズミを温室で栽培し、1穂ずつ開花日を穂にラベルした。種子M5世代が十分に成熟した開花後49日目、及び開花後70日目に、種子を採種し、20°C暗所で発芽試験を行った。発芽試験は、No2濾紙を2枚入れた直径9cmのシャーレに蒸留水を6mL添加し、種子を15粒ずつ並べて吸水させることにより行った。また、発芽試験は3連でintriplicate行った。吸水開始後は、24時間毎に発芽粒数を調べ、発芽した種子は取り除いた。種子総数15粒に対する発芽した種子の累積数の割合を、発芽率として算出した。その結果、184G4の種子発芽は、開花後49日目の種子、及び開花後70日目の種子はいずれも、親品種タマイズミと比較して明らかに抑制されていた。この結果から、TaABA8ox1A遺伝子を始めとするTaABA8ox1同祖遺伝子群の機能抑制変異例えば、機能欠失変異を集積することにより、種子休眠性を強めることができることが示された。特に、TaABA8ox1A遺伝子の機能抑制変異は、種子休眠性を強化する上で重要と思われる。[実施例1]TILLING法によるTaABA8ox1A遺伝子変異の検出TILLING法により、各種コムギ品種系統についてTaABA8ox1A遺伝子内の変異を探索した。TILLINGTargetingInducedLocalLesionINGenomes法は、突然変異誘発した個体集団などの、ある程度のサイズの集団内の各個体から目的の核酸領域をPCR増幅し、増幅産物を集団内で混合、変性及び再会合させ、SNPなどの変異の存在によって生じるミスマッチを酵素消化により切断することにより、集団内の変異を検出するという逆遺伝学的手法であるMcCallumCMetaNatureBiotechnology18455。具体的には、まず、510の品種系統のコムギ遺伝資源由来の葉から、DNeasyPlantMiniKitQIAGENを用いてゲノムDNAを抽出精製した。得られたゲノムDNAを鋳型として、TaABA8ox1同祖遺伝子群に対する遺伝子特異的プライマーTaABAox1S7:5CTCCCTCGGCTCCTGGGAAGAC3;配列番号4及びTaABA8ox1A遺伝子特異的プライマーTaABAox1A2GGCA:5CGTCGCCTCTATCGTGCCGTTGAT3;配列番号5の組合せを用いて、PrimeSTARHSDNAポリメラーゼTaKaRaによる高忠実性highfidelityPCRを行った。反応液組成は、酵素に添付される説明書に従った。PCR反応の温度サイクルは、変性を98°Cで10秒、アニーリング及び伸長反応を72°Cで1分30秒を35サイクル行った。次に、異なる品種系統のゲノムDNAを鋳型として増幅されたDNA断片をランダムに組み合わせて等量ずつ混合し、SURVEYORMutationDetectionKitforStandardGelElectrophoresisTransgenomic社の説明書に従って、DNAをハイブリダイズさせ、SURVEYORヌクレアーゼセロリ由来ヌクレアーゼで処理して、遺伝子変異の検出を試みた。変異を有するDNA断片が混合物に含まれていた場合、ハイブリダイゼーションにより形成されるヘテロ二重鎖約15kbは、SURVEYORヌクレアーゼによりミスマッチ部位で切断される。図1には、SURVEYORヌクレアーゼで処理したヘテロ二重鎖の電気泳動写真による遺伝子変異の検出の例を示す。図1に示されるように、農業生物資源ジーンバンクに登録されている3つの品種系統について、SURVEYORヌクレアーゼによる切断断片約05kb及び約10kbが示され、遺伝子変異の存在が検出された。通州小白玉TuushuukoshirodamaジーンバンクNoJP21749、銘賢169号Meiken169ジーンバンクNoJP21513、及び紅芒炸HongWangZhaジーンバンクNoJP21588の3つの品種系統について、TaABA8ox1A遺伝子内に変異を有することが示された。[実施例2]TaABA8ox1A変異部位の塩基配列の解析TILLING法により切断断片が認められた銘賢169号、紅芒炸、通州小白玉について、上記プライマーTaABAox1S7及びTaABAox1A2GGCAのプライマーペアでPCR増幅したDNA断片を、ZeroBluntTOPOベクターInvitrogenにクローニングし、16クローンの塩基配列を決定することにより、増幅断片の塩基配列を調べた。PCR増幅断片の塩基配列決定は、自動シークエンシングシステムABI3100AvantAppliedBiosystemsを用いたジデオキシヌクレオチドチェーンターミネーション法により行った。配列解析は、DNASYSHitachiSoftwareEngineeringCo、日本を用いて実施した。その結果、銘賢169号、紅芒炸及び通州小白玉におけるTaABA8ox1A遺伝子の塩基配列は同一であった配列番号6。さらに、他の品種系統との配列比較により、これらの塩基配列が、農林61号N61には認められない挿入欠失変異図2中、点線で囲まれた部分を有していることが示された。具体的には、銘賢169号、紅芒炸及び通州小白玉は、農林61号N61のTaABA8ox1A遺伝子のゲノム配列配列番号1の1616位~1642位に相当する領域内で17塩基を欠失していた図2。この挿入欠失変異は第3イントロンとその下流の第4エクソンにまたがって存在していた。図3には、TaABA8ox1A遺伝子内のこの挿入欠失変異の位置を、実施例で使用した各プライマーのTaABA8ox1遺伝子上の設計位置とともに示している。[実施例3]TaABA8ox1A挿入欠失変異品種系統におけるイントロン切り出しの欠損図2及び図3に示すように、上記実施例で検出されたTaABA8ox1A遺伝子内の挿入欠失変異TaABA8ox1A挿入欠失変異とも呼ぶの部位は第3イントロンと第4エクソンにまたがっており、イントロンの下流末端に通常存在するスプライスアクセプター部位を失っていると考えられた。そこで、TaABA8ox1A挿入欠失変異品種系統において、スプライシングによるTaABA8ox1A遺伝子の前駆RNAからのイントロンの切り出しが正常に行われるかどうかを調べた。まず、コムギ品種ChineseSpringチャイニーズスプリング、農林61号及び紅芒炸の種子を15°Cで6時間吸水させ、胚を採取した。胚からの全RNAの抽出は、TRIsol試薬Invitrogenを用いて使用説明書に従って行った。次に、全RNAからDynabeadsOlygo25resinDynalを用いてpolyRNAを精製し、MarathoncDNAAmplificationKitClontechの使用説明書に従い逆転写反応を行った。逆転写により得られた一本鎖DNAを鋳型として、TaABA8ox1同祖遺伝子群に対する遺伝子特異的プライマーTaABAox1S1:5AGGCCGTGGAGGACGTGGAGTACC3;配列番号7及び上記遺伝子特異的プライマーTaABAox1A2GGCA:5CGTCGCCTCTATCGTGCCGTTGAT3;配列番号5との組合せ図3を用いて、PrimeSTARHSDNAポリメラーゼTaKaRaによる高忠実性PCRを行った。反応液組成は、酵素に添付される説明書通りで行った。PCR反応の温度サイクルは、変性を98°Cで10秒、アニーリング及び伸長反応を72°Cで1分を35サイクル行った。このPCRにより得られた増幅断片を、15アガロースゲル1xTAEバッファーで電気泳動した。その結果、図4に示すように、ChineseSpring及び農林61号では、イントロンが正常に切り出された成熟mRNAが検出されたのに対し、紅芒炸では、イントロンが切り出されていない未成熟RNAのみが検出され、成熟mRNAは検出されなかった。TaABA8ox1A挿入欠失変異品種紅芒炸では、TaABA8ox1ARNAからのイントロンのスプライシングが正常に行われず、その結果、成熟mRNAが生成されていないと考えられる。そこで、増幅されたDNA断片について、実施例2と同じ手法で各断片の塩基配列を決定した。その結果、紅芒炸については、第3イントロンが切り出されていないRNA由来の増幅断片と、第3及び第4イントロンが切り出されていないRNA由来の増幅断片とが生成されたことが確認された。[実施例4]挿入欠失変異を含むTaABA8ox1A遺伝子の推定アミノ酸配列の解析実施例3で示すように、TaABA8ox1A挿入欠失変異を有する紅芒炸では、イントロンの切り出しが正常に行われていない。そのため、TaABA8ox1A挿入欠失変異品種系統において挿入欠失変異を有するTaABA8ox1A遺伝子から産生されるタンパク質挿入欠失変異型TaABA8ox1Aには、正常なTaABA8ox1Aタンパク質には含まれないアミノ酸配列が存在すると考えられる。図5に、挿入欠失変異型TaABA8ox1Aの推定アミノ酸配列第3イントロンが切り出されなかったものと、他のABA8oxタンパク質のアミノ酸配列との比較を示す。この挿入欠失変異型TaABA8ox1Aでは、第3イントロンが切り出されずに残存したことにより、イントロン配列にコードされるアミノ酸配列が追加され、併せてフレームシフトが生じて挿入欠失変異部位より下流領域のアミノ酸配列が変化している図5。これは第3イントロン及び第4イントロンが切り出されていない挿入欠失変異型TaABA8ox1Aでも同様である。したがって挿入欠失変異型TaABA8’ox1Aは、他の植物種のABA8ox1で保存されているABA8oxの機能発現に必要な領域ヘム結合領域等を含まないため、ABA8ox活性アブシジン酸分解活性は大きく低下することになる。[実施例5]TaABA8ox1A挿入欠失変異を特異的に検出するDNAマーカーの開発上記実施例で見出された銘賢169号、紅芒炸、及び通州小白玉のTaABA8ox1A挿入欠失変異を特異的に検出するDNAマーカーの作製を行った。ここでは、挿入欠失変異型TaABA8ox1A遺伝子とTaABA8ox1A正常型遺伝子とのヘテロ接合体を明確に見分けられるように、双方の遺伝子を異なる増幅断片として増幅することができるプライマーペアの作製を試みた。プライマーペアは、TaABA8ox1A挿入欠失変異部位を含む領域を増幅するように、挿入欠失変異型TaABA8ox1A遺伝子の挿入欠失変異部位の上流及び下流の塩基配列TaABA8ox1Aの挿入欠失変異型遺伝子と野生型遺伝子に共通の配列に基づいて設計した。具体的には、TaABA8ox1A遺伝子の第3イントロンの塩基配列を基に、TaABA8ox1A遺伝子特異的プライマーTaABAox1aS15GACGCGCTCCTAACTCAAGGGAAAC3配列番号8を設計し、第4イントロンの塩基配列を基に、TaABA8ox1A遺伝子特異的プライマーTaABAox1aA15CAGAGGGCTGTGAATGATGATGCTG3配列番号9を設計し、合成した。このプライマーペアDNAマーカー:aS1aA1とEXTaqHotStartDNAポリメラーゼTaKaRaを使用し、銘賢169号、紅芒炸、及び通州小白玉からそれぞれ調製したゲノムDNAを鋳型として、また、コントロールとしては農林61号及びChineseSpringよりそれぞれ調製したゲノムDNAを鋳型として、酵素に添付される反応条件でPCRを行った。PCR反応の温度サイクルは、変性を98°Cで10秒、アニーリング及び伸長反応を68°Cで45秒を35サイクル行った。得られた増幅断片aS1aA1の増幅断片は、挿入欠失変異型181bpと野生型198bpの間で長さが異なっている。そこでそれらの増幅断片を15アガロースゲル1xTAEバッファーで電気泳動したところ、挿入欠失変異型と野生型の増幅断片のバンドを判別することができた図6の左側レーン。さらに、aS1aA1の増幅断片を、制限酵素HaeIII認識配列:5GGCC3で酵素に添付の説明書に従って切断し、得られた切断断片を15アガロースゲル1xTAEバッファーで電気泳動した図6の右側レーン。図6に示すように、TaABA8ox1A挿入欠失変異をホモ接合で有する挿入欠失変異品種系統の銘賢169号、紅芒炸、及び通州小白玉では、aS1aA1の増幅断片がHaeIIIで切断され、122bpと59bpとの2本のバンドとして検出された。一方、野生型品種系統の農林61号及びChineseSpringの増幅断片にはHaeIIIの制限酵素切断部位がないため、増幅断片は切断されず、198bpの1本のバンドとして検出された。さらに、これらの挿入欠失変異に対応するバンドと野生型に対応するバンドは容易に区別可能であった。従って、挿入欠失変異型と正常型のTaABA8ox1A遺伝子を併せ持つヘテロ接合体の場合でも、aS1aA1の増幅断片をHaeIIIで切断するDNAマーカーaS1aA1HaeIIIを用いた判別によって、より明確な検出が可能になると思われた。[実施例6]aS1aA1HaeIIIによるヘテロ接合体の検出実施例5で開発したTaABA8ox1A挿入欠失変異を特異的に検出するDNAマーカーを用いて、コムギ品種タマイズミと銘賢169号とを交配したF1世代を材料に、各個体の遺伝子型を調べた。TaABA8ox1A挿入欠失変異を有しないコムギ品種タマイズミとTaABA8ox1A挿入欠失変異をホモ接合で有するコムギ品種銘賢169号とを交配して得られたF1世代の11個体より常法により抽出及び調製したゲノムDNAを鋳型として、実施例5と同様の手順で、TaABA8ox1A遺伝子特異的プライマーTaABAox1aS1及びTaABAox1aA1のプライマーペアを用いたPCR増幅を行った。得られた増幅断片を、実施例5と同様に、HaeIIIで処理した後、電気泳動を行ってTaABA8ox1A挿入欠失変異を示すバンドの有無を観察し、TaABA8ox1A遺伝子内の上記挿入欠失変異の有無を調べた。その結果を図7に示す。全てのF1個体について、TaABA8ox1Aの挿入欠失変異型と野生型のそれぞれを示すバンドが両方とも観察されたことから、それらがTaABA8ox1A挿入欠失変異をヘテロ接合で有することが確認された。したがって、DNAマーカーaS1aA1HaeIIIによる識別が、ヘテロ接合体の検出に有効であることが確認された。さらに、TaABA8ox1A挿入欠失変異を有しない野生型のコムギ品種タマイズミについてはTaABA8ox1Aの野生型のバンドのみが明瞭に観察され、またTaABA8ox1A挿入欠失変異をホモ接合で有するコムギ品種銘賢169号についてはTaABA8ox1Aの挿入欠失変異型のバンドのみが明瞭に観察された。そしてTaABA8ox1Aの挿入欠失変異型と野生型のバンドは、互いに明瞭に区別することができた。すなわちDNAマーカーaS1aA1HaeIIIは共優性マーカーである。本発明の方法により、TaABA8ox1A挿入欠失変異についてのホモ接合体変異型ホモ接合体及びヘテロ接合体変異型ヘテロ接合体、並びにTaABA8ox1A挿入欠失変異を有しない野生型ホモ接合体の個体を、各々区別して検出することができることが示された。なおプライマーTaABAox1aS1及びTaABAox1aA1は、TaABA8ox1A遺伝子、TaABA8ox1B遺伝子、TaABA8ox1D遺伝子の間で配列の相同性が比較的低い領域内に、TaABA8ox1A遺伝子配列特異的に設計している。したがってこれらのプライマーを核酸増幅に用いることにより、TaABA8ox1B遺伝子及びTaABA8ox1D遺伝子からの増幅を効果的に抑制し、バックグラウンドを低減することで、TaABA8ox1A挿入欠失変異の検出をより特異的なものにすることができた。"