"共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて試料溶液中にて分散しランダムに運動する発光粒子からの光を検出する光分析装置であって、前記試料溶液内に於ける前記光学系の光検出領域の位置を移動する光検出領域移動部と、前記光検出領域からの光を検出する光検出部と、前記試料溶液内に於いて前記光検出領域の位置を移動させながら前記光検出部にて検出された前記光検出領域からの光の時系列の光強度データを生成し、前記時系列の光強度データに於いて前記発光粒子の各々からの光信号を個別に検出する信号処理部とを含み、前記信号処理部が、前記時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出し、前記特性値を用いて前記発光粒子の各々からの光信号を個別に検出することを特徴とする装置。請求項1の装置であって、前記信号処理部が、前記発光粒子からの光信号を有する前記所定幅の時間区間の数を計数して、前記光検出領域の位置の移動中に検出された前記発光粒子の数を計数することを特徴とする装置。請求項1又は2の装置であって、前記光検出部がフォトンカウンティングにより前記光検出領域からの光を検出し、前記時系列の光強度データが時系列のフォトンカウントデータであることを特徴とする装置。請求項1乃至3のいずれかの装置であって、前記光検出領域移動部が前記発光粒子の拡散移動速度よりも速い速度にて前記光検出領域の位置を移動することを特徴とする装置。請求項1乃至4のいずれかの装置であって、前記単一の発光粒子からの光が存在している前記所定幅の時間区間に於ける前記光強度の特性値が前記単一の発光粒子からの光が存在していない前記所定幅の時間区間に於ける前記光強度の特性値よりも大きく、前記光強度の特性値が所定の閾値より大きいときに前記所定幅の時間区間に前記発光粒子からの光信号が存在すると判定されることを特徴とする装置。請求項3の装置であって、前記光強度の特性値が、前記所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の平均値、光子数の標準偏差、光子数の分散、光子数のエントロピー、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であることを特徴とする装置。請求項1乃至6のいずれかの装置であって、前記所定幅が、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長くなるよう設定され、且つ、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から別の発光粒子の前記光検出領域への進入時までの時間幅よりも短くなるよう設定されることを特徴とする装置。請求項1乃至7のいずれかの装置であって、前記信号処理部が前記検出された発光粒子の数に基づいて、前記試料溶液中の発光粒子の数密度又は濃度を決定することを特徴とする装置。共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて試料溶液中にて分散しランダムに運動する発光粒子からの光を検出する光分析方法であって、前記試料溶液内に於ける前記光学系の光検出領域の位置を移動する過程と、前記試料溶液内に於ける前記光検出領域の位置を移動させながら前記光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する過程と、前記時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出する過程と、前記所定幅の時間区間毎の光強度の特性値に基づいて個々の発光粒子からの光信号を個別に検出する過程とを含むことを特徴とする方法。請求項9の方法であって、更に、前記発光粒子からの光信号を有する前記所定幅の時間区間の数を計数して前記光検出領域の位置の移動中に検出された前記発光粒子の数を計数する過程を含むことを特徴とする方法。請求項9又は10の方法であって、前記光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する過程に於いて、前記光検出領域からの光がフォトンカウンティングにより検出され、前記時系列の光強度データが時系列のフォトンカウントデータであることを特徴とする方法。請求項9乃至11のいずれかの方法であって、前記光検出領域の位置を移動する過程に於いて、前記光検出領域の位置が前記発光粒子の拡散移動速度よりも速い速度にて移動されることを特徴とする方法。請求項9乃至12のいずれかの方法であって、前記単一の発光粒子からの光が存在している前記所定幅の時間区間に於ける前記光強度の特性値が前記単一の発光粒子からの光が存在していない前記所定幅の時間区間に於ける前記光強度の特性値よりも大きく、前記光強度の特性値が所定の閾値より大きいときに前記所定幅の時間区間に前記発光粒子からの光信号が存在すると判定されることを特徴とする方法。請求項11の方法であって、前記光強度の特性値が、前記所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の標準偏差、光子数の分散、光子数のエントロピー、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であることを特徴とする方法。請求項9乃至14のいずれかの方法であって、前記所定幅が、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長くなるよう設定され、且つ、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から別の発光粒子の前記光検出領域への進入時までの時間幅よりも短くなるよう設定されることを特徴とする方法。請求項9乃至15のいずれかの方法であって、更に、前記検出された発光粒子の数に基づいて、前記試料溶液中の発光粒子の数密度又は濃度を決定する過程を含むことを特徴とする方法。共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて試料溶液中にて分散しランダムに運動する発光粒子からの光を検出するための光分析用コンピュータプログラムであって、前記試料溶液内に於ける前記光学系の光検出領域の位置を移動する手順と、前記試料溶液内に於ける前記光検出領域の位置の移動中に前記光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する手順と、前記時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出する手順と、前記所定幅の時間区間毎の光強度の特性値に基づいて個々の発光粒子からの光信号を個別に検出する手順とをコンピュータに実行させることを特徴とするコンピュータプログラム。請求項17のコンピュータプログラムであって、更に、前記発光粒子からの光信号を有する前記所定幅の時間区間の数を計数して、前記光検出領域の位置の移動中に検出された前記発光粒子の数を計数する手順を含むことを特徴とするコンピュータプログラム。請求項17又は18のコンピュータプログラムであって、前記光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する手順に於いて、前記光検出領域からの光がフォトンカウンティングにより検出され、前記時系列の光強度データが時系列のフォトンカウントデータであることを特徴とするコンピュータプログラム。請求項17乃至19のいずれかのコンピュータプログラムであって、前記光学系の光検出領域の位置を移動する手順に於いて、前記光検出領域の位置が前記発光粒子の拡散移動速度よりも速い速度にて移動されることを特徴とするコンピュータプログラム。請求項17乃至20のいずれかのコンピュータプログラムであって、前記単一の発光粒子からの光が存在している前記所定幅の時間区間に於ける前記光強度の特性値が前記単一の発光粒子からの光が存在していない前記所定幅の時間区間に於ける前記光強度の特性値よりも大きく、前記光強度の特性値が所定の閾値より大きいときに前記所定幅の時間区間に前記発光粒子からの光信号が存在すると判定されることを特徴とするコンピュータプログラム。請求項19のコンピュータプログラムであって、前記光強度の特性値が、前記所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の標準偏差、光子数の分散、光子数のエントロピー、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であることを特徴とするコンピュータプログラム。請求項17乃至22のいずれかのコンピュータプログラムであって、前記所定幅が、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長くなるよう設定され、且つ、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から別の発光粒子の前記光検出領域への進入時までの時間幅よりも短くなるよう設定されることを特徴とする方法。請求項17乃至23のいずれかのコンピュータプログラムであって、更に、前記検出された発光粒子の数に基づいて、前記試料溶液中の発光粒子の数密度又は濃度を決定する手順を含むことを特徴とするコンピュータプログラム。上記のFCS、FIDA、PCHなどの光分析技術では、概して述べれば、計測された蛍光強度の時間的なゆらぎの大きさが統計的処理により算出され、そのゆらぎの大きさに基づいて試料溶液中の微小領域内に出入りする蛍光分子等の種々の特性が決定される。従って、上記の光分析技術に於いて有意な結果を得るためには、試料溶液中の観測対象となる蛍光分子等の濃度又は数密度は、平衡状態に於いて、一回の秒オーダーの長さの計測時間のうちに統計的処理が可能な数の蛍光分子等が微小領域内を入出するように、好適には、微小領域内に常に一個程度の蛍光分子等が存在しているように調製されていることが好ましい典型的には、コンフォーカルボリュームの体積は、1fL程度となるので、蛍光分子等の濃度は、1nM程度若しくはそれ以上であることが好ましい。。換言すれば、試料溶液中の観測対象粒子の濃度又は数密度が統計的処理の可能な程度よりも大幅に下回るときには例えば、1nMを大幅に下回るときには、観測対象物が微小領域内に計測時間のうちに稀にしか進入してこない状態が発生し、蛍光強度の計測結果に於いて、観測対象物が微小領域内に全く存在していない状態が長期間に亘って含まれると共に、有意な蛍光強度の観測量が少なくなるので、上記の如き蛍光強度の統計的なゆらぎに基づく光分析技術では、有意な又は精度の良い分析結果を望むことができなくなる。特許文献5、6に記載された共焦点顕微鏡の光学系を用いた蛍光性物質の検出方法では、上記の如き蛍光強度のゆらぎに関する統計的処理を行うことなく、数秒間に亘る計測時間に於ける有意な強度の蛍光信号の発生の有無により、試料中に於ける観測対象となる蛍光分子等の有無が特定でき、有意な強度の蛍光信号の頻度と試料中の蛍光分子等の粒子数とに相関が得られることが開示されている。特に、特許文献6では、試料溶液中を攪拌するランダムな流れを発生させると、検出感度が向上することが示唆されている。しかしながら、これらの方法に於いても、拡散により又はランダムな流れにより確率的に微小領域内に進入する蛍光分子等の存在を検出することに留まっており、微小領域内の蛍光分子等の粒子の振る舞いを把握することができず、例えば、粒子のカウンティングや粒子の濃度又は数密度を定量的に算出するといったことは達成されていない。また、特許文献7に記載された技術は、フローサイトメータに於けるフロー中の蛍光微粒子又は基板上に固定された蛍光微粒子の存在を個別に検出するものであり、試料溶液中に通常の状態にて溶解又は分散している分子やコロイドなどの粒子、即ち、試料溶液中にてランダムに運動している粒子の検出を行うための技術ではないので、試料溶液中に溶解又は分散した粒子の濃度又は数密度を定量的に算出するといったことは達成されていない。また、特許文献7の技術は、フローサイトメータに於ける計測或いは基板上への蛍光粒子の固定化処理といった過程を含むため、検査に必要な試料量は、FCS、FIDA、PCHなどの光分析技術の場合に比して大幅に多くなるとともに、実施者に於いて複雑で高度な操作技術が要求されると考えられる。かくして、本発明の一つの課題は、FCS、FIDA、PCHなどの光分析技術にて実行されている如き、統計的処理を含まず、従って、観測対象粒子の濃度又は数密度がそれらの光分析技術で取り扱われるレベルよりも低い試料溶液中の観測対象粒子の状態又は特性を検出することが可能な新規な光分析技術を提供することである。また、本発明のもう一つの課題は、上記の如き新規な光分析技術を実現する光分析装置、方法又はそのためのコンピュータプログラムであって、FCS、FIDA、PCHなどの光分析技術と同様に測定に必要な試料が微量例えば、数十μL程度であってもよく、また、測定時間が短く、観測対象粒子の濃度又は数密度等の特性を定量的に特定することが可能な光分析装置、光分析方法又は光分析用コンピュータプログラムを提供することである。概して述べれば、本発明に於いては、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系などの溶液中の微小領域からの光が検出可能な光学系を用いて、試料溶液中に分散してランダムに運動する光を発する粒子以下、発光粒子と称する。からの光を検出する光分析技術であって、試料溶液内に於いて光の検出領域である微小領域の位置を移動させながら、即ち、微小領域により試料溶液内を走査しながら、微小領域からの光を検出し、これにより、微小領域内を横切る発光粒子を個別に検出して、発光粒子のカウンティングや試料溶液中の発光粒子の濃度又は数密度に関する情報の取得を可能にする新規な方式の光分析技術が提案される。本発明によれば、一つの態様として、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて試料溶液中にて分散しランダムに運動する発光粒子からの光を検出する光分析装置であって、試料溶液内に於ける前記の光学系の光検出領域の位置を移動する光検出領域移動部と、光検出領域からの光を検出する光検出部と、試料溶液内に於いて光検出領域の位置を移動させながら光検出部にて検出された光検出領域からの光の時系列の光強度データを生成し、時系列の光強度データに於いて発光粒子の各々からの光信号を個別に検出する信号処理部とを含み、信号処理部が、時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出し、かかる特性値を用いて発光粒子の各々からの光信号を個別に検出することを特徴とする装置が提供される。かかる構成に於いて、試料溶液中に分散しランダムに運動する発光粒子とは、試料溶液中に分散又は溶解した原子、分子又はそれらの凝集体などの、光を発する粒子であって、基板などに固定されず、溶液中を自由にブラウン運動している粒子であれば任意の物であってよい。かかる発光粒子は、典型的には、蛍光性粒子であるが、りん光、化学発光、生物発光、光散乱等により光を発する粒子であってもよい。共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系の光検出領域とは、それらの顕微鏡に於いて光が検出される微小領域であり、対物レンズから照明光が与えられる場合には、その照明光が集光された領域に相当する共焦点顕微鏡に於いては、特に対物レンズとピンホールとの位置関係により確定される。発光粒子が照明光なしで発光する場合、例えば、化学発光又は生物発光により発光する粒子の場合には、顕微鏡に於いて照明光は要しない。。なお、本明細書に於いて、光信号という場合には、光を表す信号を意味している。上記から理解される如く、本発明の装置の基本的な構成に於いては、まず、試料溶液内に於いて光検出領域の位置を移動しながら、即ち、試料溶液内を光検出領域により走査しながら、逐次的に、光の検出が行われる。そうすると、移動する光検出領域が、ランダムに運動している発光粒子を包含したときには、発光粒子からの光が光検出部にて検出されるので、その光を捉えることにより、一つの発光粒子の存在が検出できることとなる。この点に関し、より詳細には、光検出部から時系列に出力される信号、即ち、光強度データに於いて、単一の発光粒子からの光が光検出部に到来している時間区間に於いて、光検出部の出力信号の値は、パルス状にて変化し、ノイズのみが生ずる発光粒子からの光が到来していない時間区間とは異なる特徴を有する。そこで、装置の信号処理部は、逐次的に光検出部により検出される信号から時系列の光強度データを生成し、かかる時系列の光強度データに於いて、所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出し、その特性値を用いて発光粒子の各々からの光信号を個別に検出するよう構成される。かかる特性値としては、単一の発光粒子からの光が存在している所定幅の時間区間に於けるその大きさが、単一の発光粒子からの光が存在していない所定幅の時間区間に於ける大きさよりも大きくなる任意の値が採用可能である。その場合、光強度の特性値が所定の閾値より大きいときに所定幅の時間区間に発光粒子からの光信号が存在すると判定される。そのような特性値は、例えば、所定幅の時間区間に於ける光強度の積算値、光強度の中央値、光強度の平均値、光強度の標準偏差、光強度の分散、光強度のエントロピー、光強度の最大値及び光強度の自己相関関数の相関時間を0としたときの値から算定される粒子数のうちのいずれかであってよい。なお、典型的には、光検出部は、フォトンカウンティングにより光検出領域からの光を検出し、従って、その場合、時系列の光強度データが時系列のフォトンカウントデータとなる。従って、光強度の特性値は、所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の平均値、光子数の標準偏差、光子数の分散、光子数のエントロピー、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であってよい。また、上記の如く所定幅の時間区間毎の特性値を用いて発光粒子の信号を検出する手法の場合、所定幅が一つの発光粒子の光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも短い場合には、一つの発光粒子の光が二つの以上の時間区間に亘って検出されることとなり、所定幅が複数の発光粒子の光の到来時間を包含するほど長い場合には、一つの時間区間に於いて、複数の発光粒子の情報が含まれることとなり、いずれも場合も、一つの時間区間に対して一つの発光粒子が対応する関係が成立しなくなるため、発光粒子の各々からの光信号を個別に検出するための信号処理が煩雑となる。そこで、上記の特性値を算出する時間区間の所定幅は、好適には、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長くなるよう設定され、且つ、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から別の発光粒子の光検出領域への進入時までの時間幅よりも短くなるよう設定される。換言すれば、時間区間の所定幅は、その下限が、一つの発光粒子の光信号の時間幅よりも実質的に長くなるように設定され、その上限が各時間区間に包含される発光粒子数が実質的に1個以下となるように設定される。なお、上記の表現に於いて、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長くなるよう設定或いは一つの発光粒子の光信号の時間幅よりも実質的に長くなるよう設定とは、所定幅が、殆どの発光粒子の光信号の時間幅よりも長く設定すること、即ち、誤差の範囲で所定幅よりも長い時間幅を有する発光粒子の光信号の存在が許されることを意味している。また、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から別の発光粒子の光検出領域への進入時までの時間幅よりも短くなるよう設定或いは各時間区間に包含される発光粒子数が実質的に1個以下となるように設定とは、殆どの時間区間に於いて見出される発光粒子数が1個以下となるよう設定すること、即ち、誤差の範囲で2個以上の発光粒子を包含する時間区間の存在が許されることを意味している。かかる構成によれば、発光粒子からの光が存在している一つの時間区間が決定された際、殆どの場合、その時間区間に含まれる光信号は、一つの発光粒子からの光信号であると判断でき、これにより、一つの発光粒子の存在が確認されることとなるので、発光粒子を個別に検出する処理が簡単となり、有利である。上記の如く、試料溶液中にてランダムに運動している発光粒子が個別に検出可能となると、発光粒子の溶液内での状態に関する種々の情報が取得されることとなる。具体的には、例えば、上記の本発明の装置に於いて、信号処理部が、個別に検出された発光粒子からの光信号の数を計数して光検出領域の位置の移動中に検出された発光粒子の数を計数するようになっていてよい発光粒子のカウンティング。その場合、上記の如く、所定幅の時間区間毎の光強度の特性値を用いて発光粒子を個別に検出する場合には、発光粒子からの光信号を有する所定幅の時間区間の数が発光粒子の数に対応するので、発光粒子からの光信号を有する所定幅の時間区間の数を計数して、光検出領域の位置の移動中に検出された発光粒子の数が計数される。かかる構成によれば、発光粒子の数と光検出領域の位置の移動量とを組み合わせることにより、試料溶液中の発光粒子の数密度又は濃度に関する情報が得られることとなる。特に、任意の手法により、例えば、所定の速度にて光検出領域の位置を移動するなどして、光検出領域の位置の移動軌跡の全体積を特定すれば、発光粒子の数密度又は濃度が具体的に算定できることとなる。勿論、絶対的な数密度値又は濃度値を直接的に決定するのではなく、複数の試料溶液又は濃度若しくは数密度の基準となる標準試料溶液に対する相対的な数密度若しくは濃度の比を算出するようになっていてもよい。また、上記の本発明の装置に於いて、試料溶液内での光検出領域の位置の移動速度は、発光粒子の特性又は試料溶液中の数密度又は濃度に基づいて適宜変更可能となっていてよい。当業者に於いて理解される如く、発光粒子から検出される光の態様は、発光粒子の特性又は試料溶液中の数密度又は濃度によって変化し得る。特に、光検出領域の移動速度が速くなると、一つの発光粒子から得られる光量は低減することとなるので、一つの発光粒子からの光が精度よく又は感度よく計測できるように、光検出領域の移動速度は、適宜変更可能となっていることが好ましい。更に、本発明の装置に於いて、試料溶液内での光検出領域の位置の移動速度は、好適には、検出対象となる発光粒子の拡散移動速度ブラウン運動による粒子の平均の移動速度よりも高く設定される。上記に説明されている如く、本発明の装置は、光検出領域が発光粒子の存在位置を通過したときにその発光粒子から発せられる光を検出して、発光粒子を個別に検出する。しかしながら、発光粒子が溶液中でブラウン運動することによりランダムに移動して、複数回、光検出領域を出入りする場合には、1つの発光粒子から複数回、発光粒子の存在を表す光信号が検出されてしまい、検出された光信号と1つの発光粒子の存在とを対応させることが困難となる。そこで、上記の如く、光検出領域の移動速度を発光粒子の拡散移動速度よりも高く設定し、これにより、1つの発光粒子を一つの発光粒子の存在を表す光信号に対応させることが可能となる。なお、拡散移動速度は、発光粒子によって変わるので、上記の如く、発光粒子の特性特に、拡散定数に応じて、本発明の装置は、光検出領域の移動速度が適宜変更可能であるよう構成されていることが好ましい。光検出領域の位置の移動は、任意の方式で為されてよい。例えば、レーザー走査型光学顕微鏡に於いて採用されているガルバノミラーを用いて光路を変更して光検出領域の位置が変更されるようになっていてよく、或いは、光検出領域を固定して、試料溶液の位置を例えば、顕微鏡のステージを移動するなどして動かして、光検出領域の試料溶液内に於ける位置を移動するようになっていてよい。光検出領域の位置の移動軌跡は、任意に設定されてよく、例えば、円形、楕円形、矩形、直線及び曲線のうちから選択可能であってよい。上記の本発明の装置に於いて試料溶液内に於ける光検出領域の位置を移動させながら光検出を行い、個々の発光粒子からの光信号を個別に検出するという特徴的な光分析技術の処理は、汎用のコンピュータによっても実現可能である。従って、本発明のもう一つの態様によれば、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて試料溶液中にて分散しランダムに運動する発光粒子からの光を検出するための光分析用コンピュータプログラムであって、試料溶液内に於ける前記の光学系の光検出領域の位置を移動する手順と、試料溶液内に於ける光検出領域の位置の移動中に光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する手順と、時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出する手順と、所定幅の時間区間毎の光強度の特性値に基づいて個々の発光粒子からの光信号を個別に検出する手順とをコンピュータに実行させることを特徴とするコンピュータプログラムが提供される。かかるコンピュータプログラムに於いても、個別に検出された発光粒子からの光信号の数を計数して又は発光粒子からの光信号を有する所定幅の時間区間の数を計数して光検出領域の位置の移動中に検出された発光粒子の数を計数する手順及び/又は検出された発光粒子の数に基づいて、試料溶液中の発光粒子の数密度又は濃度を決定する手順が含まれていてよい。典型的には、光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する手順に於いて、光検出領域からの光がフォトンカウンティングにより検出され、その場合、時系列の光強度データは時系列のフォトンカウントデータとなる。また、光検出領域の位置を移動する手順に於いて、光検出領域の位置が所定の速度にて或いは発光粒子の拡散移動速度よりも速い速度にて移動されるようになっていてよく、光検出領域の位置の移動速度は、発光粒子の特性又は試料溶液中の数密度又は濃度に基づいて設定されるようになっていてよい。光検出領域の位置の移動軌跡は、円形、楕円形、矩形、直線及び曲線のうちから選択可能であってよい。更に、上記のコンピュータプログラムに於いても、所定幅の時間区間に於ける光強度の特性値は、単一の発光粒子からの光が存在している場合には、単一の発光粒子からの光が存在していない場合よりも大きくなる値であってよく、光強度の特性値が所定の閾値より大きいときに所定幅の時間区間に発光粒子からの光信号が存在すると判定されてよい。そのような特性値は、具体的には、所定幅の時間区間に於ける光強度の積算値、光強度の中央値、光強度の平均値、光強度の標準偏差、光強度の分散、光強度のエントロピー、光強度の最大値及び相関時間を0とした光強度の自己相関関数値から算定される粒子数のうちのいずれかが採用されてよい。特に、時系列の光強度データが時系列のフォトンカウントデータであるときには、光強度の特性値は、所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の平均値、光子数の標準偏差、光子数の分散、光子数のエントロピー、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であってよい。更に、上記の時間区間の所定幅は、好適には、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長くなるよう設定され、且つ、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から別の発光粒子の光検出領域への進入時までの時間幅よりも短くなるよう設定される。更に、上記の本発明の装置又はコンピュータプログラムによれば、上記の如く、試料溶液内に於ける光検出領域の位置を移動させながら光検出を行って個々の発光粒子からの光信号を個別に検出する新規な光分析方法が実現される。従って、本発明の共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて試料溶液中にて分散しランダムに運動する発光粒子からの光を検出する光分析方法は、試料溶液内に於ける前記の光学系の光検出領域の位置を移動する過程と、試料溶液内に於ける光検出領域の位置を移動させながら光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する過程と、時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出する過程と、所定幅の時間区間毎の光強度の特性値に基づいて個々の発光粒子からの光信号を個別に検出する過程とを含むことを特徴とする。かかる方法に於いても、個別に検出された発光粒子からの光信号の数を計数して又は発光粒子からの光信号を有する所定幅の時間区間の数を計数して光検出領域の位置の移動中に検出された発光粒子の数を計数する過程及び/又は検出された発光粒子の数に基づいて、試料溶液中の発光粒子の数密度又は濃度を決定する過程が含まれていてよい。典型的には、光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する過程に於いて、光検出領域からの光がフォトンカウンティングにより検出され、その場合、時系列の光強度データは時系列のフォトンカウントデータとなる。また、光検出領域の位置を移動する過程に於いて、光検出領域の位置が所定の速度にて或いは発光粒子の拡散移動速度よりも速い速度にて移動されるようになっていてよく、光検出領域の位置の移動速度は、発光粒子の特性又は試料溶液中の数密度又は濃度に基づいて設定されるようになっていてよい。光検出領域の位置の移動軌跡は、円形、楕円形、矩形、直線及び曲線のうちから選択可能であってよい。更に、上記の方法に於いても、所定幅の時間区間に於ける光強度の特性値は、単一の発光粒子からの光が存在している場合には、単一の発光粒子からの光が存在していない場合よりも大きくなる値であってよく、光強度の特性値が所定の閾値より大きいときに所定幅の時間区間に発光粒子からの光信号が存在すると判定されてよい。そのような特性値は、具体的には、所定幅の時間区間に於ける光強度の積算値、光強度の中央値、光強度の平均値、光強度の標準偏差、光強度の分散、光強度のエントロピー、光強度の最大値及び相関時間を0とした光強度の自己相関関数値から算定される粒子数のうちのいずれかが採用されてよい。特に、時系列の光強度データが時系列のフォトンカウントデータであるときには、光強度の特性値は、所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の平均値、光子数の標準偏差、光子数の分散、光子数のエントロピー、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であってよい。更に、上記の時間区間の所定幅は、好適には、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長くなるよう設定され、且つ、実質的に、一つの発光粒子の前記光検出領域への進入時から別の発光粒子の前記光検出領域への進入時までの時間幅よりも短くなるよう設定される。上記の本発明による装置、方法又はコンピュータプログラムにより実現される光分析技術は、その光検出機構自体については、FCS、FIDA、PCHなどの光分析技術の場合と同様に、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光検出領域からの光を検出するよう構成されているので、試料溶液の量は、同様に微量であってよい。しかしながら、本発明に於いては、蛍光強度のゆらぎを算出するといった統計的処理が実行されないので、本発明の光分析技術は、発光粒子の数密度又は濃度がFCS、FIDA、PCH等の光分析技術に必要であったレベルよりも大幅に低い試料溶液に適用可能である。また、本発明では、溶液中に分散又は溶解した発光粒子の各々を個別に検出するようになっているので、その情報を用いて、定量的に、発光粒子のカウンティングや試料溶液中の発光粒子の濃度若しくは数密度の算定又は濃度若しくは数密度に関する情報の取得が可能となる。例えば、特許文献5,6に記載の技術では、所定時間内に於ける所定の閾値以上の強度を有する蛍光信号の頻度の集計値と試料溶液中の蛍光分子等の粒子数との相関を得ることが可能であるが、計測領域を通過する粒子の動的な振る舞い粒子が計測領域を真直ぐ通過したのか、粒子が計測領域内に滞留していたのかを把握することはできず、従って、所定の閾値以上の強度を有する蛍光信号と計測領域を通過する粒子との対応が不明確であったため、発光粒子のカウンティングは原理的に不可能であり、試料溶液中の粒子の濃度を精度よく決定することが困難であった。しかしながら、本発明によれば、光検出領域を通過する発光粒子と、その光信号の光検出部への到来の時間とを1対1に対応させて発光粒子を一つずつ検出するので、溶液中に分散してランダムに運動する発光粒子のカウンティングが可能となり、従前に比して、精度よく試料溶液中の粒子の濃度又は数密度を決定することが可能となる。本発明の光分析技術は、典型的には、タンパク質、ペプチド、核酸、脂質、糖鎖、アミノ酸若しくはこれらの凝集体などの生体分子、ウイルス、細胞などの粒子状の生物学的な対象物の溶液中の状態の分析又は解析の用途に用いられるが、非生物学的な粒子例えば、原子、分子、ミセル、金属コロイドなどの溶液中の状態の分析又は解析に用いられてもよく、そのような場合も本発明の範囲に属することは理解されるべきである。本発明のその他の目的及び利点は、以下の本発明の好ましい実施形態の説明により明らかになるであろう。以下、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。光分析装置の構成本発明による光分析技術を実現する光分析装置は、基本的な構成に於いて、図1Aに模式的に例示されている如き、FCS、FIDA等が実行可能な共焦点顕微鏡の光学系と光検出器とを組み合わせてなる装置であってよい。同図を参照して、光分析装置1は、光学系2~17と、光学系の各部の作動を制御すると共にデータを取得し解析するためのコンピュータ18とから構成される。光分析装置1の光学系は、通常の共焦点顕微鏡の光学系と同様であってよく、そこに於いて、光源2から放射されシングルモードファイバー3内を伝播したレーザー光Exが、ファイバーの出射端に於いて固有のNAにて決まった角度にて発散する光となって放射され、コリメーター4によって平行光となり、ダイクロイックミラー5、反射ミラー6、7にて反射され、対物レンズ8へ入射される。対物レンズ8の上方には、典型的には、1~数十μLの試料溶液が分注される試料容器又はウェル10が配列されたマイクロプレート9が配置されており、対物レンズ8から出射したレーザー光は、試料容器又はウェル10内の試料溶液中で焦点を結び、光強度の強い領域励起領域が形成される。試料溶液中には、観測対象物である発光粒子、典型的には、蛍光性粒子又は蛍光色素等の発光標識が付加された粒子が分散又は溶解されており、かかる発光粒子が励起領域に進入すると、その間、発光粒子が励起され光が放出される。放出された光Emは、対物レンズ8、ダイクロイックミラー5を通過し、ミラー11にて反射してコンデンサーレンズ12にて集光され、ピンホール13を通過し、バリアフィルター14を透過してここで、特定の波長帯域の光成分のみが選択される。、マルチモードファイバー15に導入されて、光検出器16に到達し、時系列の電気信号に変換された後、コンピュータ18へ入力され、後に説明される態様にて光分析のための処理が為される。なお、当業者に於いて知られている如く、上記の構成に於いて、ピンホール13は、対物レンズ8の焦点位置と共役の位置に配置されており、これにより、図1Bに模式的に示されている如きレーザー光の焦点領域、即ち、励起領域内から発せられた光のみがピンホール13を通過し、励起領域以外からの光は遮断される。図1Bに例示されたレーザー光の焦点領域は、通常、1~10fL程度の実効体積を有する本光分析装置に於ける光検出領域であり典型的には、光強度が領域の中心を頂点とするガウス様分布となる。実効体積は、光強度が1/e2となる面を境界とする略楕円球体の体積である。、コンフォーカルボリュームと称される。また、本発明では、1つの発光粒子からの光、例えば、一つの蛍光色素分子からの微弱光が検出されるので、光検出器16としては、好適には、フォトンカウンティングに使用可能な超高感度の光検出器が用いられる。光の検出がフォトンカウンティングによる場合、光強度の測定は、所定時間に亘って、逐次的に、所定の単位時間毎BINTIMEに、光検出器に到来するフォトンの数を計測する態様にて実行される。従って、この場合、時系列の光強度のデータは、時系列のフォトンカウントデータである。更に、上記の光分析装置の光学系に於いては、試料溶液内を光検出領域により走査する、即ち、試料溶液内に於いて焦点領域、即ち、光検出領域の位置を移動するための機構が設けられる。かかる光検出領域の位置を移動するための機構としては、例えば、図1Cに模式的に例示されている如く、反射ミラー7の向きを変更するミラー偏向器17が採用されてよい光検出領域の絶対的な位置を移動する方式。かかるミラー偏向器17は、通常のレーザー走査型顕微鏡に装備されているガルバノミラー装置と同様であってよい。或いは、別の態様として、図1Dに例示されている如く、試料溶液が注入されている容器10マイクロプレート9の水平方向の位置を移動し、試料溶液内に於ける光検出領域の相対的な位置を移動するステージ位置変更装置17aが採用されてもよい試料溶液の絶対的な位置を移動する方式。いずれの方式による場合も、所望の光検出領域の位置の移動パターンを達成するべく、ミラー偏向器17又はステージ位置変更装置17aは、コンピュータ18の制御の下、光検出器16による光検出と協調して駆動される。光検出領域の位置の移動軌跡は、円形、楕円形、矩形、直線、曲線又はこれらの組み合わせから任意に選択されてよいコンピュータ18に於けるプログラムに於いて、種々の移動パターンが選択できるようになっていてよい。。なお、図示していないが、対物レンズ8又はステージを上下に移動することにより、光検出領域の位置が上下方向に移動されるようになっていてもよい。観測対象物となる発光粒子が多光子吸収により発光する場合には、上記の光学系は、多光子顕微鏡として使用される。その場合には、励起光の焦点領域光検出領域のみで光の放出があるので、ピンホール13は、除去されてよい。また、観測対象物となる発光粒子が化学発光や生物発光現象により励起光によらず発光する場合には、励起光を生成するための光学系2~5が省略されてよい。発光粒子がりん光又は散乱により発光する場合には、上記の共焦点顕微鏡の光学系がそのまま用いられる。更に、光分析装置1に於いては、図示の如く、複数の励起光源2が設けられていてよく、発光粒子の励起波長によって適宜、励起光の波長が選択できるようになっていてよい。同様に、光検出器16も複数個備えられていてよく、試料中に波長の異なる複数種の発光粒子が含まれている場合に、それらから光をその波長によって別々に検出できるようになっていてよい。本発明の光分析技術の原理FCS、FIDA等の分光分析技術は、従前の生化学的な分析技術に比して、必要な試料量が極めて少なく、且つ、迅速に検査が実行できる点で優れている。しかしながら、FCS、FIDA等の分光分析技術では、原理的に、観測対象粒子の濃度や特性は、蛍光強度のゆらぎに基づいて算定されるので、精度のよい測定結果を得るためには、試料溶液中の観測対象粒子の濃度又は数密度が、図8Aに模式的に描かれているように、蛍光強度の計測中に常に一個程度の観測対象粒子が光検出領域CV内に存在するレベルであり、同図の右側に示されている如く、計測時間中に常に有意な光強度フォトンカウントが検出されることが要求される。もし観測対象粒子の濃度又は数密度がそれよりも低い場合、例えば、図8Bに描かれているように、観測対象粒子がたまにしか光検出領域CV内へ進入しないレベルである場合には、同図の右側に例示されている如く、有意な光強度フォトンカウントが、計測時間の一部にしか現れないこととなり、精度のよい光強度のゆらぎの算定が困難となる。また、観測対象粒子の濃度が計測中に常に一個程度の観測対象粒子が光検出領域内に存在するレベルよりも大幅に低い場合には、光強度のゆらぎの演算に於いて、バックグラウンドの影響を受けやすく、演算に十分な量の有意な光強度データを得るために計測時間が長くなる。そこで、本発明に於いては、観測対象粒子の濃度が、上記の如きFCS、FIDA等の分光分析技術にて要求されるレベルよりも低い場合でも、観測対象粒子の数密度又は濃度等の特性の検出を可能にする新規な原理に基づく光分析技術が提案される。本発明の光分析技術に於いて、実行される処理としては、端的に述べれば、光検出領域の位置を移動するための機構ミラー偏向器17又はステージ位置変更装置17aを駆動して、図2にて模式的に描かれているように、試料溶液内に於いて光検出領域CVの位置を移動しながら、即ち、光検出領域CVにより試料溶液内を走査しながら、光検出が実行される。そうすると、例えば、図2Aの如く、光検出領域CVが移動する間図中、時間to~t2に於いて一つの発光粒子図中、蛍光色素の存在する領域を通過する際t1には、図2Bに描かれている如く、パルス状の信号として、有意な光強度Emが検出されることとなる。かくして、上記の光検出領域CVの位置の移動と光検出を実行し、その間に出現する図2Bに例示されている如き有意な光強度、即ち、パルス状の信号を一つずつ検出することによって、発光粒子が個別に検出され、その数をカウントすることにより、計測された領域内に存在する発光粒子の数、或いは、濃度若しくは数密度に関する情報が取得できることとなる。かかる本発明の光分析技術の原理に於いては、蛍光強度のゆらぎの算出の如き、統計的な演算処理は行われず、発光粒子が一つずつ検出されるので、FCS、FIDA等では十分な精度にて分析ができないほど、発光粒子観測対象粒子の濃度が低い試料溶液でも、発光粒子の濃度若しくは数密度に関する情報が取得可能であることは理解されるべきである。なお、実際の光強度データフォトンカウントデータに於いては、図2Cにて例示されている如く、発光粒子からの光の他に、ノイズ光検出器の熱ノイズ、背景光が存在するので、発光粒子からの光信号とノイズとを区別して、発光粒子からの光信号の存在を検出する必要がある。そこで、そのような発光粒子からの光信号の存在を抽出する手法の一つとして、本実施形態に於いては、時系列光強度データ上に於いて、所定幅の時間区間毎に、逐次的に、時間区間内の光強度値光子数を用いて単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値が算出される。かかる光強度の特性値の大きさを参照すると、所定幅の時間区間毎に、単一の発光粒子からの光信号が存在しているか否かが検出できるので、これにより、発光粒子が一つずつ検出される。単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値は、典型的には、単一の発光粒子からの光の信号が存在すると、単一の発光粒子からの光の信号が存在していない場合ノイズのみしか存在していない場合に比して、増大する任意の値であってよく、例えば、所定幅の時間区間に於ける光強度の積算値、光強度の中央値、光強度の平均値、光強度の標準偏差値SD値、光強度の分散値、光強度のエントロピーEP値、光強度の最大値及び相関時間を0とした光強度の自己相関関数値から算定される粒子数などであってよい。特に、本実施形態では、光強度データは、フォトンカウンティングによるフォトンカウントデータなので、特性値は、所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の平均値、光子数の標準偏差値、光子数の分散値、光子数のエントロピー値、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であってよい。また、上記の特性値の算出のための時間区間の所定幅は、好適には、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長く、且つ、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から別の発光粒子の光検出領域への進入時までの時間幅よりも短く設定される。このように所定幅を設定すると、発光粒子の光信号の存在する一つの時間区間が、一つの発光粒子の存在に対応する、即ち、時間区間と発光粒子の存在が一対一の関係となるので、発光粒子のカウンティングに於ける処理が簡単となり有利である。もし時間区間の所定幅が一つの発光粒子の光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも短い場合には、一つの発光粒子の光信号が複数の時間区間に亘って存在することになり、複数の時間区間を一つの発光粒子に対応させるための処理が必要となる。また、もし時間区間の所定幅が一つの発光粒子の光検出領域への進入時から別の発光粒子の光検出領域への進入時までの時間幅よりも長い場合には、一つの時間区間に複数の発光粒子の光信号が存在することとなり、発光粒子を一つずつ検出することが困難となる。上記の所定幅の下限ωlowは、発光粒子が光検出領域の中心を直線的に通過すると仮定した場合下記の1試料溶液の光強度の測定及び図4参照、例えば、光検出領域の直径2Woと移動速度uとを用いて、ωlow=2Wo/u...1設定されてよい。所定幅の上限ωhighは、各時間区間に於いて包含される発光粒子数が実質的に1以下となる所定幅である。所定幅の上限ωhighは、下記のいずれかの手法により決定可能である。1発光粒子が試料溶液内に均等に分散していると仮定した場合所定幅ωの時間区間に於ける光検出領域の移動の間に検出される発光粒子数nは、n=cNASuω...2aにより与えられる。ここで、cは、発光粒子のモル濃度であり、NAは、アボガドロ数であり、Sは、光検出領域の断面積である。S~πWo2と近似して、所定幅ωの時間区間に於いて一つの発光粒子が存在するn=1と仮定すると、所定幅ωは、ω=1/cNAπWo2u...2bにより与えられる。従って、所定幅ωhighは、予想される発光粒子の濃度cを用いて、式2bにて算出される値ωか、発光粒子の存在位置のばらつきを考慮して、それよりも小さい値に設定されてよい。2所定幅の時間区間に発光粒子がポアソン分布にて進入すると仮定した場合所定幅ωの時間区間に於ける光検出領域の移動の間に検出される平均の発光粒子数nは、上記の式2aにて与えられる。一方、所定幅ωの時間区間に出現する発光粒子数がkである確率pkは、となるので、所定幅ωの時間区間に出現する発光粒子数が2以上である確率p>1、即ち、複数の発光粒子が一つの所定幅ωの時間区間に包含される割合は、となる。図2Dは、所定幅ωに対する式2dの変化の例を表した図であるc=10pM、u=15mm/s、Wo=1μmとして算出した。。同図を参照して、図示の例では、所定幅ω=200μ秒とすると、5の時間区間が複数の発光粒子を包含する可能性があることが理解される。かくして、所定幅ωhighは、予想される発光粒子の濃度cを用いて、上記の式2dに於いて、許容誤差を与える所定幅ωに設定されてよい。本発明の光分析装置の作動と処理操作過程図1Aに例示の光分析装置1を用いた本発明による光分析に於いては、具体的には、1発光粒子観測対象粒子を含む試料溶液の光強度の測定処理過程と、2測定された光強度の分析処理過程とが実行される。1試料溶液の光強度の測定本発明の光分析技術の観測対象物となる粒子は、溶解された分子等の、試料溶液中にて分散し溶液中にてランダムに運動する粒子であれば、任意のものであってよく、例えば、タンパク質、ペプチド、核酸、脂質、糖鎖、アミノ酸若しくはこれらの凝集体などの生体分子、ウイルス、細胞、或いは、金属コロイド、その他の非生物学的分子などであってよい。観測対象物となる粒子が光を発する粒子でない場合には、発光標識蛍光分子、りん光分子、化学生物発光分子が観測対象物となる粒子に任意の態様にて付加されたものが用いられる。試料溶液は、典型的には水溶液であるが、これに限定されず、有機溶媒その他の任意の液体であってよい。本発明の光分析に於ける光強度の測定は、測定中にミラー偏向器17又はステージ位置変更装置17aを駆動して、試料溶液内での光検出領域の位置の移動試料溶液内の走査を行う他は、FCS又はFIDAに於ける光強度の測定過程と同様の態様にて実行されてよい。操作処理に於いて、典型的には、マイクロプレート9のウェル10に試料溶液を注入して顕微鏡のステージ上に載置した後、使用者がコンピュータ18に対して、測定の開始の指示を入力すると、コンピュータ18は、記憶装置図示せずに記憶されたプログラム試料溶液内に於いて光検出領域の位置を移動する手順と、光検出領域の位置の移動中に光検出領域からの光を検出して時系列の光強度データを生成する手順に従って、試料溶液内の光検出領域に於ける励起光の照射及び光強度の計測が開始される。かかる計測中、コンピュータ18のプログラムに従った処理動作の制御下、ミラー偏向器17又はステージ位置変更装置17aは、ミラー7ガルバノミラー又は顕微鏡のステージ上のマイクロプレート9を駆動して、ウェル10内に於いて光検出領域の位置の移動を実行し、これと同時に光検出器16は、逐次的に検出された光を電気信号に変換してコンピュータ18へ送信し、コンピュータ18では、任意の態様にて、送信された光信号から時系列の光強度データを生成して保存する。なお、典型的には、光検出器16は、一光子の到来を検出できる超高感度光検出器であるので、光の検出が、フォトンカウンティングによる場合、時系列光強度データは、時系列のフォトンカウントデータであってよい。光強度の計測中の光検出領域の位置の移動速度は、任意に、例えば、実験的に又は分析の目的に適合するよう設定された所定の速度であってよい。検出された発光粒子の数に基づいて、その数密度又は濃度に関する情報を取得する場合には、光検出領域の通過した領域の大きさ又は体積が必要となるので、移動距離が把握される態様にて光検出領域の位置の移動が実行される。なお、計測中の経過時間と光検出領域の位置の移動距離とが比例関係にある方が測定結果の解釈が容易となるので、移動速度は、基本的に、一定速度であることが好ましいが、これに限定されない。ところで、光検出領域の位置の移動速度に関して、計測された時系列の光強度データからの発光粒子の個別の検出、或いは、発光粒子の数のカウンティングを、定量的に精度よく実行するためには、かかる移動速度は、発光粒子のランダムな運動、即ち、ブラウン運動による移動速度よりも速い値に設定されることが好ましい。本発明の光分析技術の観測対象粒子は、溶液中に分散又は溶解されて自由にランダムに運動する粒子であるので、ブラウン運動によって位置が時間と伴に移動する。従って、光検出領域の位置の移動速度が粒子のブラウン運動による移動に比して遅い場合には、図3Aに模式的に描かれている如く、粒子が領域内をランダムに移動し、これにより、光強度が図3Bの如くランダムに変化し既に触れた如く、光検出領域の励起光強度は、領域の中心を頂点として外方に向かって低減する。、個々の発光粒子に対応する有意な光強度の変化を特定することが困難となる。そこで、好適には、図4Aに描かれている如く、粒子が光検出領域を略直線に横切り、これにより、時系列の光強度データに於いて、図4Bに例示の如く、個々の発光粒子に対応する光強度の変化のプロファイルが略一様となり発光粒子が略直線的に光検出領域を通過する場合には、光強度の変化のプロファイルは、励起光強度分布と略同様となる。、個々の発光粒子と光強度との対応が容易に特定できるように、光検出領域の位置の移動速度は、粒子のブラウン運動による平均の移動速度拡散移動速度よりも速く設定される。具体的には、拡散係数Dを有する発光粒子がブラウン運動によって半径Woの光検出領域コンフォーカルボリュームを通過するときに要する時間Δtは、平均二乗変位の関係式2Wo2=6DΔt...4から、Δt=2Wo2/6D...5となるので、発光粒子がブラウン運動により移動する速度拡散移動速度Vdifは、概ね、Vdif=2Wo/Δt=3D/Wo...6となる。そこで、光検出領域の位置の移動速度は、かかるVdifを参照して、それよりも十分に早い値に設定されてよい。例えば、観測対象粒子の拡散係数が、D=2.0×10-10m2/s程度であると予想される場合には、Woが、0.62μm程度だとすると、Vdifは、1.0×10-3m/sとなるので、光検出領域の位置の移動速度は、その10倍以上の15mm/sと設定されてよい。なお、観測対象粒子の拡散係数が未知の場合には、光検出領域の位置の移動速度を種々設定して光強度の変化のプロファイルが、予想されるプロファイル典型的には、励起光強度分布と略同様となる条件を見つけるための予備実験を繰り返し実行して、好適な光検出領域の位置の移動速度が決定されてよい。2光強度の分析上記の処理により試料溶液の時系列の光強度データが得られると、コンピュータ18に於いて、記憶装置に記憶されたプログラム時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出する手順、所定幅の時間区間毎の光強度の特性値に基づいて個々の発光粒子からの光信号を個別に検出する手順に従った処理により、下記の如き光強度の分析が実行されてよい。i一つの発光粒子の検出時系列の光強度データに於いて、一つの発光粒子の光検出領域を通過する際の軌跡が、図4Aに示されている如く略直線状である場合、その発光粒子に対応する光強度の変化は、図4Bに模式的に描かれている如く、光学系により決定される光検出領域の光強度分布を反映したプロファイル通常、略釣鐘状を有し、発光粒子が通過していない期間のデータノイズがランダムに発生する状態とは顕著に異なる。そこで、既に触れた如く、本実施形態に於いては、時系列の光強度データ上に於ける所定幅の時間区間毎に光強度の特性値が算出される。光強度の特性値としては、時系列の光強度データが時系列のフォトンカウントデータである場合には、上記の如く、所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の平均値、光子数の標準偏差値、光子数の分散値、光子数のエントロピー値、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数の群の中から選択された値であってよい。各特性値について、より詳細には、光子数の合計値は、所定幅の時間区間に於ける光子数の合計値である。発光粒子の光信号が存在する時間区間の合計値は、その他の時間区間の合計値よりも発光粒子からの光子数だけ増大するので、或る時間区間の合計値の大きさが所定の閾値よりも大きいとき、その時間区間に於いて発光粒子の光信号が存在すると判定される。光子数の中央値、最大値は、それぞれ、所定幅の時間区間に見出される光子数の中央値、最大値である。発光粒子の光が光検出器に到来している期間は、通常のノイズのみが発生する場合より光子数が大きくなるので、発光粒子の光信号が存在する時間区間の中央値、最大値も増大する。従って、或る時間区間の中央値又は最大値の大きさが所定の閾値よりも大きいとき、その時間区間に於いて発光粒子の光信号が存在すると判定される。光子数の平均値は、所定幅の時間区間に於ける光子数の時間平均値である。上記の如く、発光粒子の光信号が存在する時間区間の合計値は、その他の時間区間の合計値よりも発光粒子からの光子数だけ増大するので、所定幅の時間区間に於ける光子数の時間平均値も増大する。従って、或る時間区間の平均値の大きさが所定の閾値よりも大きいとき、その時間区間に於いて発光粒子の光信号が存在すると判定される。光子数の標準偏差値、分散値及びエントロピー値は、それぞれ、所定幅の時間区間に於ける光子数の時間平均に於ける標準偏差値、分散値及び情報量のエントロピー値であり、所定幅の時間区間内に見出される光子数の時間変化のばらつきの程度を表す特性値である。或る時間区間に発光粒子の光信号が存在する場合、その他の時間区間に比して、光子数の時間変化が激しくなる。従って、発光粒子の光信号が存在する時間区間の光子数の標準偏差値、分散値、エントロピー値は、その他の時間区間の各値に比して増大するので、或る時間区間の各値が、所定の閾値よりも大きいとき、その時間区間に於いて発光粒子の光信号が存在すると判定される。なお、光子数のエントロピー値は、或る時点BINTIMEに於ける光子数がx個である確率がpxであったとき、或る時間区間に於いて光子数がx個の時点の数ixを用いて、-log2p0i0p1i1...pxix...pnin...7により与えられる値である。通常、光子数がx個である確率pxは、p0>p1>p2>...>px...>pnである。ノイズのみしか存在していない区間のエントロピー値は、-log2p0i0p1i1p2i2程度であるが、発光粒子の光信号が存在する区間では、-log2p0i0p1i1p2i2p3i3p4i4などとなり、値が増大する。所定幅の時間区間に於ける相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数とは、その時間区間に於ける粒子数に相当する量である。FCSの理論によれば、光強度の自己相関関数Cτは、により与えられるここで、τDは、並進拡散時間であり、ARは、ストラクチャパラメータであり、Nは、粒子数である。。上記の式に於いて、相関時間τ=0のときのC0から、粒子数Nは、1/C0-1により与えられる。この粒子数は、時間区間毎に見出される粒子数であると考えられるので、上記の特性値と同様に、所定の閾値よりも大きいとき、その時間区間に於いて発光粒子の光信号が存在すると判定される。ii発光粒子のカウンティング上記の発光粒子の検出処理に於いて、時間区間の所定幅が、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長く、且つ、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から別の発光粒子の光検出領域への進入時までの時間幅よりも短く設定されている場合、一つの発光粒子は、発光粒子の光信号が存在すると判定された一つの時間区間に対応するので、かかる時間区間の数を計数することにより、発光粒子の数が決定される。iii発光粒子の数密度又は濃度の決定発光粒子のカウンティングが為されると、光検出領域の通過した領域の総体積を用いて、発光粒子の数密度又は濃度が決定される。しかしながら、光検出領域の実効体積は、励起光又は検出光の波長、レンズの開口数、光学系の調整状態に依存して変動するため、設計値から算定することは困難である。そこで、本実施形態に於いては、発光粒子の濃度が既知の溶液対照溶液について、検査されるべき試料溶液の測定と同様の条件にて、上記に説明した光強度の測定、発光粒子の検出及びカウンティングを行い、検出された発光粒子の数と対照溶液の発光粒子の濃度とから、光検出領域の通過した領域の総体積、即ち、発光粒子の検出数と濃度との関係が決定されるようになっていてよい。対照溶液の発光粒子としては、好ましくは、観測対象粒子と同様の波長特性を有する発光標識蛍光色素等であってよい。具体的には、例えば、発光粒子の濃度Cの対照溶液について、対照溶液の発光粒子の検出数がNであったとすると、光検出領域の通過した領域の総体積Vtは、Vt=N/C...9により与えられる。また、対照溶液として、発光粒子の複数の異なる濃度の溶液が準備され、それぞれについて測定が実行されて、算出されたVtの平均値が光検出領域の通過した領域の総体積Vtとして採用されるようになっていてよい。そして、Vtが与えられると、発光粒子のカウンティング結果がnの試料溶液の発光粒子の数密度cは、c=n/Vt...10により与えられる。なお、光検出領域の体積、光検出領域の通過した領域の総体積は、上記の方法によらず、任意の方法にて、例えば、FCS、FIDAを利用するなどして与えられるようになっていてよい。また、本実施形態の光分析装置に於いては、想定される光検出領域の移動パターンについて、種々の標準的な発光粒子についての濃度Cと発光粒子の数Nとの関係式9の情報をコンピュータ18の記憶装置に予め記憶しておき、装置の使用者が光分析を実施する際に適宜記憶された関係の情報を利用できるようになっていてよい。かくして、上記の本発明の光分析技術によれば、試料溶液内に於いて光検出領域である微小領域の位置を移動させながら、即ち、試料溶液内を走査しながら、光検出領域内を横切る発光粒子を個別に検出し、或いは、かかる発光粒子のカウンティングを行うという手法によって、FCS、FIDA等に於いて実行される蛍光強度のゆらぎの演算等の統計的処理を含まず、従って、観測対象粒子の濃度又は数密度がFCS、FIDA等で取り扱われるレベルよりも低い試料溶液中の観測対象粒子の状態又は特性を検出することが可能となる。なお、本発明の光分析技術は、基本的には、FCS、FIDA等と同様の光学系を使用するので、FCS、FIDA等と組み合わせて実行されてもよい。例えば、複数種の物質を含む溶液中に於いて複数種の物質の間の相互作用等検出する場合などであって、物質の濃度差が大きいとき、例えば、一方の物質の濃度がnMオーダーであり、他方の物質がpMオーダーであるときなどに於いて、濃度の高い物質については、FCS又はFIDAにより測定及び分析を行い、濃度の低い物質については、本発明の光分析技術を用いて測定及び分析を行うといった分析態様が実行されるであろう。そのような場合、図1Aに例示されている如く、複数個の光検出器を準備しておくと有利である。上記に説明した本発明の有効性を検証するために、以下の如き実験を行った。なお、以下の実施例は、本発明の有効性を例示するものであって、本発明の範囲を限定するものではないことは理解されるべきである。発光粒子として、蛍光色素であるATTO633シグマ-アルドリッチ社CatNo18620を用い、本発明による試料溶液中の発光粒子の濃度の測定可能範囲を検証した。試料溶液としては、ATTO633を、その濃度が10fM、100fM、1pM、10pM、100pMとなるようにリン酸緩衝液0.05Tween20を含むをそれぞれ調製した。本発明の光分析技術による計測に於いては、光分析装置として、共焦点蛍光顕微鏡の光学系とフォトンカウンティングシステムを備えた1分子蛍光測定装置MF20オリンパス株式会社を用い、上記の1試料溶液の光強度の測定にて説明した態様に従って、上記の各試料溶液について、時系列の光強度データを取得した。対物レンズには、水浸対物レンズ40倍、NA=1.15、WD=0.26を用いた。なお、光検出器16は、一光子の到来を検出できる超高感度光検出器を用い、光の検出は、所定時間に亘って、逐次的に、所定の単位時間毎BINTIMEに、光検出器に到来するフォトンの数を計測する態様にて実行されるフォトンカウンティングとした。従って、時系列の光強度のデータは、時系列のフォトンカウントデータである。また、励起光は、633nmのレーザー光を用い、検出光波長は、バンドパスフィルターを用いて660-710nmとした。試料溶液中に於ける光検出領域の位置の移動速度は、15mm/秒とし、BINTIMEを10μ秒とし、2秒間の測定を3回行った。図5Aは、2秒間の測定により得られた時系列フォトンカウントデータの全体の例を示しており、図5Bは、2秒間の測定による時系列フォトンカウントデータのうちの一部を拡大して示している。上記の光強度の測定後、各試料溶液について取得された時系列のフォトンカウントデータに於ける発光粒子の光信号の検出は、図5Bに例示されている如く、時系列のフォトンカウントデータの全域を200μ秒の幅を有する時間区間に区分し、各時間区間に於いて、単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値として、光子数の合計値、光子数の中央値、光子数の平均値、光子数の標準偏差値SD値、光子数の分散値、光子数のエントロピー値、光子数の最大値及び相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数を算定した。その結果、例えば、図5Bにて示されている如く、目視にて発光粒子の光信号が存在すると判断できる区間Window30、Window32に於いて、例示の特性値は、発光粒子の光信号が存在していないと判断できる区間Window31の特性値よりも大きな値であった。かくして、時系列のフォトンカウントデータの全域に於ける時間区間毎に光強度の特性値を算出した後、上記の各特性値が、対応する所定の閾値を超えた時間区間に一つの発光粒子の光信号が存在するとの仮定の下、特性値の各々について、所定の閾値を超えた時間区間の数を計数した。図6は、上記の各溶液について、各特性値の所定の閾値を超えた時間区間の数を表している。それぞれの特性値の閾値は、以下の通りとした。光子数合計値100個光子数中央値4.5個光子数標準偏差値3.5個光子数分散値12.5個光子数エントロピー105光子数最大値13個粒子数自己相関関数値から算定0.4個なお、比較のため、時系列フォトンカウントデータに於いて、光子数が2を超える連続した時間領域の数が併記されている二値化領域数。図6を参照して、例示の特性値は、いずれも、試料溶液中の発光粒子濃度の増大と共に増大した。ただし、相関時間を0とした光子数の自己相関関数値から算定される粒子数については、発光粒子濃度が1pM未満では、顕著な変化は見られなかった。一方、二値化領域数については、測定に使用した試料溶液では、顕著な濃度依存性は得られなかった。かくして、上記の結果は、本発明に従って、光の計測を行って得られた時系列の光強度データに於いて所定幅の時間区間毎に単一の発光粒子からの光の有無を表す光強度の特性値を算出し、かかる特性値を参照することによって、発光粒子からの光が個別に検出され、その濃度が決定できることを示唆している。更に、上記の時系列フォトンカウントデータに於いて、特性値を算出する時間区間の幅による発光粒子の検出数の影響を検証した。図7は、発光粒子濃度が10pMの試料溶液の時系列フォトンカウントデータに於いて、特性値光子数合計値を算出する時間区間の幅を変更した場合の発光粒子の検出数特性値が所定の閾値を超えた時間区間の数を示している。同図を参照して、時間区間幅が100~200μ秒であるときに、発光粒子の検出数は、安定した。一方、時間区間幅が100μ秒を下回ると、粒子の検出数は、みかけ上増大した。本実験例の測定の条件では、単一の発光粒子が光検出領域を直線的に通過する際の所要時間は、約74μ秒と算定されるので、時間区間幅を単一の発光粒子が光検出領域を直線的に通過する際の所要時間よりも長くすることにより、一つの発光粒子が二つ以上の時間区間に亘って検出される回数が低減されたと考えられる。また、上記の結果に於いて、時間区間幅が200μ秒を上回ると、粒子の検出数は、みかけ上低減した。これは、時間区間幅を長くすると、複数の発光粒子の光信号が存在する時間区間の数が増えるためであると考えられる。実際、上記の溶液条件及び装置条件に於いて、式2dを用いて許容誤差を約5として算定される時間区間の所定幅の上限ωhighは、約200μ秒であった光検出領域の半径Wo~1μmに設定した。。これらの結果は、時間区間の幅を、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から脱出時までに要する時間幅よりも長く、且つ、実質的に、一つの発光粒子の光検出領域への進入時から別の発光粒子の光検出領域への進入時までの時間幅よりも短く設定することにより、一つの時間区間に一つの発光粒子を対応させることができることを示唆している。かくして、本発明の光分析技術によれば、従前の蛍光強度を利用した方法に於いて計測可能であった数密度又は濃度限界よりも低い濃度範囲まで、発光粒子の数密度又は濃度を決定可能であることが示された。更に、蛍光強度のゆらぎの算出などの統計的処理を含むFCS、FIDA、PCH等の光分析技術に於いて計測可能な粒子濃度の下限が1nM程度であったのに対し、本実施例の計測可能な粒子濃度の下限は、~10fMであり、従って、本発明によれば、FCS、FIDA、PCH等の光分析技術の場合よりも大幅に低い濃度域の粒子について計測可能であることが示された。"