適切な株のバックグラウンド中でミカミノースmycaminoseまたはアンゴロサミンangolosamineの合成を方向付けること、およびアグリコンaglyconeまたはシュードアグリコンpseudoaglyconeへのその引き続いての移入を方向付けることが可能である、遺伝子の組み合わせを含む遺伝子カセット。ミカミノースの合成および移入を方向付けることが可能である遺伝子の組み合わせを含み、a少なくとも1つの遺伝子が、angorf14、tylMIII、tylMI、tylB、tylAI、tylAII、tylIa、angAI、angAII、angMIII、angB、angMI、eryGおよびeryKからなる群より選択され;かつb少なくとも1つの遺伝子が、tylMII、angMII、desVII、eryCIII、eryBV、spnP、およびmidIからなる群より選択されるグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子である、請求項1記載の遺伝子カセット。遺伝子カセット中の遺伝子の1つがtylIaである、請求項2記載の遺伝子カセット。遺伝子カセット中の遺伝子の1つがangorf14である、請求項2記載の遺伝子カセット。eryCIII、tylMIIおよびangMIIからなる群より選択される1つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子と組み合わせた、angAI、angAII、angorf14、angMIII、angBおよびangMIを含む、請求項2または4記載の遺伝子カセット。eryCIII、tylMIIおよびangMIIからなる群より選択される1つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子と組み合わせた、tylAI、tylAII、tylMIII、tylB、tylIaおよびtylMIを含む、請求項2または3記載の遺伝子カセット。アンゴロサミンの合成および移入を方向付けることが可能である遺伝子の組み合わせを含み、a少なくとも1つの遺伝子が、angMIII、angMI、angB、angAI、angAII、angorf14、angorf4、tylMIII、tylMI、tylB、tylAI、tylAII、eryCVI、spnO、eryBVI、およびeryKから選択され;かつb少なくとも1つの遺伝子が、eryCIII、tylMII、angMII、desVII、eryBV、spnPおよびmidIからなる群より選択されるグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子である、請求項1記載の遺伝子カセット。angMII、tylMIIおよびeryCIIIからなる群より選択される1つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子を組み合わせた、angMIII、angMI、angB、angAI、angAII、angorf14およびspn0を含む、請求項7記載の遺伝子カセット。angMII、tylMIIおよびeryCIIIからなる群より選択される1つまたは複数のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子を組み合わせた、angMIII、angMI、angB、angAI、angAII、angorf4、およびangorf14を含む、請求項7記載の遺伝子カセット。C5位にミカミノースまたはアンゴロサミンのいずれかを含むエリスロマイシンまたはアジスロマイシンの産生のためのプロセスであって、上記の請求項1~9のいずれか一項に記載の遺伝子カセットで菌株を形質転換する段階、および該エリスロマイシンまたはアジスロマイシンの産生のための適切な条件下で菌株を培養する段階を含む、プロセス。菌株が放線菌、シュードモナスPseudomonas、粘液細菌myxobacteria、および大腸菌から選択される、請求項10記載のプロセス。宿主株がSエリスラエアSerythraea由来のermEでさらに形質転換される、請求項10記載のプロセス。宿主株が放線菌である、請求項10または11記載のプロセス。宿主株がSエリスラエアSerythraea、ストレプトマイセスグリセオフスカスStreptomycesgriseofuscus、ストレプトマイセスシナモネンシスStreptomycescinnamonensis、ストレプトマイセスアルバスStreptomycesalbus、ストレプトマイセスリビダンスStreptomyceslividans、ストレプトマイセスハイグロスコピカス種Streptomyceshygroscopicussp、ストレプトマイセスハイグロスコピカス変異株アスコマイセティカスStreptomyceshygroscopicusvarascomyceticus、ストレプトマイセスロンギスポロフラバスStreptomyceslongisporoflavus、サッカロポリスポラスピノサSaccharopolysporaspinosa、ストレプトマイセスツクバエンシスStreptomycestsukubaensis、ストレプトマイセスコエリコロールStreptomycescoelicolor、ストレプトマイセスフラジエStreptomycesfradiae、ストレプトマイセスリモサスStreptomycesrimosus、ストレプトマイセスアベルミティリスStreptomycesavermitilis、ストレプトマイセスユーリサーマスStreptomyceseurythermus、ストレプトマイセスベネズエレStreptomycesvenezuelae、およびアミコラトプシスメジテラネイAmycolatopsismediterraneiから選択される、請求項13に記載のプロセス。宿主株がSエリスラエアである、請求項14記載のプロセス。宿主株がSエリスラエアのSGQ2、Q421または18A1から選択される、請求項15記載のプロセス。組換え株へのアグリコンおよびまたはシュードアグリコン基質の供給をさらに含む、請求項10~16のいずれか一項記載のプロセス。アグリコンおよびまたはシュードアグリコンが、以下からなる群より選択される、請求項17に記載のプロセス:3OミカロシルエリスロノリドmycarosylerythronolideB、エリスロノリドB、6デオキシエリスロノリドB、3Oミカロシル6デオキシエリスロノリドB、チラクトンtylactone、スピノシンシュードアグリコン、3OラムノシルエリスロノリドB、3Oラムノシル6デオキシエリスロノリドB、3OアンゴロサミニルエリスロノリドB、15ヒドロキシ3OミカロシルエリスロノリドB、15ヒドロキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ6デオキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ3Oミカロシル6デオキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ3OラムノシルエリスロノリドB、15ヒドロキシ3Oラムノシル6デオキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ30アンゴロサミニルエリスロノリドB、14ヒドロキシ3OミカロシルエリスロノリドB、14ヒドロキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ6デオキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ3Oミカロシル6デオキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ3OラムノシルエリスロノリドB、14ヒドロキシ3Oラムノシル6デオキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ3OアンゴロサミニルエリスロノリドB。生成された化合物を単離する段階をさらに含む、請求項10~18のいずれか一項記載のプロセス。以下の化学式Iの化合物:R1は以下から選択され、H、CH3、C2H5、いずれかの基が1つまたは複数のヒドロキシル基により任意で置換されてもよい、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシアルキル基およびアルキルチオアルキル基から選択されるα分枝C3~C8基、アルキル基がα分枝C2~C5アルキル基であるC5~C8シクロアルキルアルキル基、いずれかが1つもしくは複数のヒドロキシル、または1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキル基またはC5~C8シクロアルケニル基、飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよく、かつ、1つまたは複数のC1~C4アルキル基、ハロ原子またはヒドロキシル基によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環、C1~C4アルキル基、C1~C4アルコキシ基およびC1~C4アルキルチオ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、ならびにシアノから選択される少なくとも1つの置換基により任意で置換されてもよいフェニル、または、R17CH2であって、ここで、R17は、H、C1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、各アルキルまたはアルコキシ基において1~6個の炭素原子を含むアルコキシアルキルまたはアルキルチオアルキルであり、ここで該アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基またはアルキニル基のいずれかは、1つもしくは複数のヒドロキシル基または1つもしくは複数のハロ原子によって置換されてもよく;または、いずれかが1つもしくは複数のC1C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキルもしくはC5~C8シクロアルケニルであり;または、飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよく、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素もしくは硫黄含有複素環であり;または、化学式SA16の基であって、ここで、A16はC1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、C3~C8シクロアルキル、C5~C8シクロアルケニル、フェニルもしくは置換フェニルであり、ここで置換基はC1~C4アルキル、C1~C4アルコキシもしくはハロであり、または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよく、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環であり、R2、R4、R5、R6、R7およびR9は各々独立してH、OH、CH3、C2H5またはOCH3であり、R3HまたはOHであり、R8H、、ラムノース、2Oメチルラムノース、23ビスOメチルラムノース、234トリOメチルラムノース、オレアンドロース、オリオース、ジジトキソースdigitoxose、オリボースまたはアンゴロサミンであり;R10HまたはCH3またはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり、R11H、、ミカロース、C4Oアシルミカロースまたはグルコースであり、R12HまたはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり、R13HまたはCH3であり、R15Hまたはであり、R16HまたはOHであり、R14HまたはCNRcRdであり、ここでRcおよびRdの各々は、独立してH、C1~C10アルキル、C2~C20アルケニル、C2~C10アルキニル、m、またはmであり、ここでmは0~4の範囲の整数であり、かつここでH以外の該Rc基およびRd基の各々は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはRcおよびRdは一緒になって4~7員環の飽和環または5~10員環のヘテロアリール環を形成してもよく、ここで飽和環およびヘテロアリール環は、RcおよびRdが結合する窒素に加えて、O、SおよびNから選択される1個または2個のヘテロ原子を含んでもよく、かつ飽和環は1個もしくは2個の炭素炭素二重結合または三重結合を含んでもよく、かつ該飽和環およびヘテロアリール環は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはR2およびR17は一緒になって炭酸環を形成し;各Qはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、OCQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、C1~C6アルコキシ、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり、かつ該アリール置換基およびヘテロアリール置換基は、ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、およびC1~C6アルコキシから独立して選択される1個または2個の置換基によって置換されてもよく;各Q1、Q2およびQ3はH、OH、C1~C10アルキル、C1~C6アルコキシ、C2~C10アルケニル、C2~C10アルキニル、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり;ここで化合物が5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAまたはDではないという条件であり、または該化合物は上記のいずれかの変種であり、ここでC11におけるCHOR14がメチレン基CH2、ケト基CO、または1011オレフィン結合によって置換され;または該化合物は1つまたは複数のケチド単位の酸化状態が異なる上記のいずれかの変種でありすなわち、CO、CH、アルケンCH、およびCH2基からなる群からの代替物の選択;ここで化合物は5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンDからなる群より選択されないという条件である。以下の化学式IIの化合物:R1は以下から選択され:H、CH3、C2H5、いずれかが1つまたは複数のヒドロキシル基により任意で置換されてもよい、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシアルキル基およびアルキルチオアルキル基から選択されるα分枝C3~C8基;アルキル基がα分枝C2~C5アルキル基であるC5~C8シクロアルキルアルキル基、いずれかが1つもしくは複数のヒドロキシル、または1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキル基またはC5~C8シクロアルケニル基、飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよく、かつ1つまたは複数のC1~C4アルキル基、ハロ原子またはヒドロキシル基によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環、C1~C4アルキル基、C1~C4アルコキシ基およびC1~C4アルキルチオ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、ならびにシアノから選択される少なくとも1つの置換基により任意で置換されてもよいフェニル、または、R17CH2であって、ここで、R17は、H、C1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、各アルキルまたはアルコキシ基において1~6個の炭素原子を含むアルコキシアルキル、またはアルキルチオアルキルであり、ここで該アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基またはアルキニル基のいずれかは、1つもしくは複数のヒドロキシル基または1つもしくは複数のハロ原子によって置換されてもよく;または、いずれかが1つもしくは複数のC1C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキルもしくはC5~C8シクロアルケニルであり;または、飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよく、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素もしくは硫黄含有複素環であり;または、化学式SA16の基であって、ここで、A16はC1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、C3~C8シクロアルキル、C5~C8シクロアルケニル、フェニルもしくは置換フェニルであり、ここで置換基はC1~C4アルキル、C1~C4アルコキシもしくはハロであり、または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよく、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環であり、R2、R4、R5、R6、R7およびR9は各々独立してH、OH、CH3、C2H5またはOCH3であり、R3HまたはOHであり、R8H、、ラムノース、2Oメチルラムノース、23ビスOメチルラムノース、234トリOメチルラムノース、オレアンドロース、オリオース、ジジトキソース、オリボースまたはアンゴロサミンであり;R10HまたはCH3またはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり、R11H、、ミカロース、C4Oアシルミカロースまたはグルコースであり、R12HまたはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり、R13HまたはCH3であり、R15Hまたはであり、R16HまたはOHであり、R14HまたはCNRcRdであり、ここでRcおよびRdの各々は、独立してH、C1~C10アルキル、C2~C20アルケニル、C2~C10アルキニル、m、またはmであり、ここでmは0~4の範囲の整数であり、かつここでH以外の該Rc基およびRd基の各々は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはここでRcおよびRdは一緒になって4~7員環の飽和環または5~10員環のヘテロアリール環を形成してもよく、ここで飽和環およびヘテロアリール環は、RcおよびRdが結合する窒素に加えて、O、SおよびNから選択される1個または2個のヘテロ原子を含んでもよく、かつ該飽和環は1個もしくは2個の炭素炭素二重結合または三重結合を含んでもよく、かつ該飽和環およびヘテロアリール環は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはR2およびR17は一緒になって炭酸環を形成し;各Qはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、OCQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、C1~C6アルコキシ、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり、かつここで該アリール置換基およびヘテロアリール置換基は、ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、およびC1~C6アルコキシから独立して選択される1個または2個の置換基によって置換されてもよく;各Q1、Q2およびQ3はH、OH、C1~C10アルキル、C1~C6アルコキシ、C2~C10アルケニル、C2~C10アルキニル、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり;または該化合物は上記のいずれかの変種であり、ここでC12におけるCHOR14がメチレン基CH2、ケト基CO、または1112オレフィン結合によって置換され;または該化合物は1つまたは複数のケチド単位の酸化状態が異なる上記のいずれかの変種すなわち、CO、CH、アルケンCH、およびCH2基からなる群からの代替物の選択である。R2、R4、R5、R6、R7およびR9がすべてCH3である、請求項20または21記載の化合物。R11Hまたは、かつR14Hである、請求項22記載の化合物。R1がヒドロキシル基により任意で置換されるC2H5である、請求項23記載の化合物。R12Hである、請求項24記載の化合物。R1C2H5である、請求項25記載の化合物。発明の概要本発明は、対応する天然に存在する化合物とC5位のグリコシル化が異なる、エリスロマイシンおよびアジスロマイシンの調製および単離のためのプロセスおよび組換え株に関する。特定の局面において、本発明は、C5位にアンゴロサミンまたはミカミノースを取り込むエリスロマイシンおよびアジスロマイシンの調製および単離のためのプロセスおよび組換え株に関する。特に、本発明は、5Oデデソサミニル5Oミカミノシルエリスロマイシンまたは5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルエリスロマイシンおよび5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンまたは5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルアジスロマイシン、特に、5Oデデソサミニル5Oミカミノシルエリスロマイシンおよび5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシン、および具体的には、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンB、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンC、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンD、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンA、および5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンの調製および単離のためのプロセスおよび組換え株に関する。本発明はさらに、それによって産生される、5Oデデソサミニル5Oミカミノシル、アンゴロサミニルエリスロマイシンおよびアジスロマイシンに関する。発明の詳細な説明本発明は、天然に存在する化合物とC5位のグリコシル化が異なる、エリスロマイシンおよびアジスロマイシンの調製および単離のためのプロセスおよび組換え株に関する。これらは、本明細書において本発明の化合物と呼ばれ、文脈が他を指示しない限り、このような言及は以下を含む:5Oデデソサミニル5Oミカミノシルエリスロマイシン、5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルエリスロマイシン、5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシン、および5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルアジスロマイシン、具体的には5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンA、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンC、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンB、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンD、5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシン、5Oデデソサミニル5OアンゴロサミニルエリスロマイシンA、5Oデデソサミニル5OアンゴロサミニルエリスロマイシンB、5Oデデソサミニル5OアンゴロサミニルエリスロマイシンC、5Oデデソサミニル5OアンゴロサミニルエリスロマイシンD、5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルアジスロマイシン、およびC3位でさらにグリコシル化が変化しWO0179520を参照されたい、かつアグリコンバックボーンもまた変化していてもよい、これらの類似体WO9801571、EP1024145、WO9313663、WO9849315を参照されたい。本発明は、本発明の化合物の調製および単離のためのプロセスおよび組換え株に関する。特に、本発明は、天然に存在する化合物とC5位のグリコシル化が異なる、エリスロマイシンおよびアジスロマイシンの調製および単離のためのプロセスおよび組換え株を提供し、このプロセスは、本明細書に記載されるような遺伝子カセットで菌株を形質転換する段階、およびこのエリスロマイシンまたはアジスロマイシンの産生のための適切な条件下でこの株を培養する段階を含む。好ましい態様において、この菌株は放線菌、シュードモナス、粘液細菌myxobacterium、または大腸菌である。代替的な好ましい態様において、この宿主株は、SエリスラエアSerythraeaからのermE遺伝子でさらに形質転換される。より高度に好ましい態様において、宿主株は放線菌である。より高度に好ましい態様において、宿主株は、SエリスラエアSerythraea、ストレプトマイセスグリセオフスカスStreptomycesgriseofuscus、ストレプトマイセスシナモネンシスStreptomycescinnamonensis、ストレプトマイセスアルバスStreptomycesalbus、ストレプトマイセスリビダンスStreptomyceslividans、ストレプトマイセスハイグロスコピカス種Streptomyceshygroscopicussp、ストレプトマイセスハイグロスコピカス種変異株アスコマイセティカスStreptomyceshygroscopicusvarascomyceticus、ストレプトマイセスロンギスポロフラバスStreptomyceslongisporoflavus、サッカロポリスポラスピノサSaccharopolysporaspinosa、ストレプトマイセスツクバエンシスStreptomycestsukubaensis、ストレプトマイセスコエリコロールStreptomycescoelicolor、ストレプトマイセスフラジエStreptomycesfradiae、ストレプトマイセスリモサスStreptomycesrimosus、ストレプトマイセスアベルミティリスStreptomycesavermitilis、ストレプトマイセスユーリサーマスStreptomyceseurythermus、ストレプトマイセスベネズエレStreptomycesvenezuelae、およびアミコラトプシスメジテラネイAmycolatopsismediterraneiから選択される。特定の態様において、宿主株はSエリスラエアである。代替的な特定の態様において、宿主細胞は、SエリスラエアのSGQ2、Q421または18A1から選択される。本発明はさらに、それによって産生される、新規な5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルエリスロマイシンおよび5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルアジスロマイシンに関する図1。この方法論は、部分的には、実施例3および6に記載されるようなSエリスラエア変異株SGQ2これは、eryA、eryCIII、eryBVおよびeryCIVにゲノム変異を有するWO0179520およびSエリスラエアQ421BIOT2166実施例1~4およびSエリスラエア18A1BIOT2634実施例6中での遺伝子カセットの発現を含む。詳細な説明は実施例1~11に与えられる。本発明は、糖部分の生合成およびアグリコンまたはシュードアグリコンへのその引き続く移動を指向することが可能である遺伝子の組み合わせを含む発現プラスミドを用いる、SGQ2WO0179520を参照されたいまたはQ421または18A1などのSエリスラエアの株その調製は以下に記載されるを含むがこれらに限定されない放線菌の形質転換を含むプロセスに関する。特定の態様において、本発明は、適切な菌株バックグラウンドにおけるミカミノースまたはアンゴロサミンの合成を指向することが可能である遺伝子の組み合わせを含む遺伝子カセットに関する。特定の態様において、本発明は、適切な菌株バックグラウンドにおけるミカミノースの合成を指向することが可能である遺伝子の組み合わせを含む遺伝子カセットに関する。この遺伝子カセットは、以下から選択されるがこれらに限定されない遺伝子を含んでもよい:angorf14、tylMIII、tylMI、tylB、tylAI、tylAII、tylIa、angAI、angAII、angMIII、angB、angMI、eryG、eryK、ならびに、tylMII、angMII、desVII、eryCIII、eryBV、spnP、およびmidIからなる群より選択されるがこれらに限定されないグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子。好ましい態様において、この遺伝子カセットは、ミカミノースの合成を指向することが可能である1つまたは複数の遺伝子を組み合わせたtylIaを含む。好ましい態様において、この遺伝子カセットは、ミカミノースの合成を指向することが可能である1つまたは複数の遺伝子を組み合わせたangorf14を含む。より好ましい態様において、この遺伝子カセットは、例えば、eryCIII、tylMII、angMIIであるがこれらに限定されない1種または複数のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子と組み合わせた、angAI、angAII、angorf14、angMIII、angB、angMIを含む。代替的な態様において、この遺伝子カセットは、例えば、eryCIII、tylMII、およびangMIIであるがこれらに限定されないグリコシルトランスフェラーゼと組み合わせた、tylAI、tylAII、tylMIII、tylB、tylIa、tylMIを含む。好ましい態様において、この菌株はSエリスラエア株である。特定の態様において、本発明は、angMIII、angMI、angB、angAI、angAII、angorf14、angorf4、tylMIII、tylMI、tylB、tylAI、tylAII、eryCVI、spnO、eryBVI、およびeryKを含むがこれらに限定されないアンゴロサミンの合成を指向することが可能である遺伝子、ならびにeryCIII、tylMII、angMII、desVII、eryBV、spnPおよびmidIを含むがこれらに限定されない1種または複数のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子を含む遺伝子カセットに関する。好ましい態様において、この遺伝子カセットは、例えば、angMII、tylMII、またはeryCIIIであるがこれらに限定されないグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子と組み合わせた、angMIII、angMI、angB、angAI、angAII、angorf14、spnOを含む。代替的な好ましい態様において、この遺伝子カセットは、angMII、tylMII、およびeryCIIIからなる群より選択される1種または複数のグリコシルトランスフェラーゼと組み合わせた、angMIII、angMI、angB、angAI、angAII、angorf4、angorf14を含む。好ましい態様において、この菌株はSエリスラエア株である。1つの態様において、本発明のプロセスはさらに、組換え株へのアグリコンおよびまたはシュードアグリコン基質以下の定義を参照されたいの、形質転換された放線菌株の培養への供給、本発明の化合物への基質の転換、および任意でこの化合物単離を含み、このアグリコンまたはシュードアグリコンは、3OミカロシルエリスロノリドB、エリスロノリドB、6デオキシエリスロノリドB、3Oミカロシル6デオキシエリスロノリドB、チラクトンtylactone、スピノシンシュードアグリコン、3OラムノシルエリスロノリドB、3Oラムノシル6デオキシエリスロノリドB、3OアンゴロサミニルエリスロノリドB、15ヒドロキシ3OミカロシルエリスロノリドB、15ヒドロキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ6デオキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ3Oミカロシル6デオキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ3OラムノシルエリスロノリドB、15ヒドロキシ3Oラムノシル6デオキシエリスロノリドB、15ヒドロキシ30アンゴロサミニルエリスロノリドB、14ヒドロキシ3OミカロシルエリスロノリドB、14ヒドロキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ6デオキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ3Oミカロシル6デオキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ3OラムノシルエリスロノリドB、14ヒドロキシ3Oラムノシル6デオキシエリスロノリドB、14ヒドロキシ3OアンゴロサミニルエリスロノリドBを含むがこれらに限定されない群より選択される。このプロセスは、実施例1~11に例示される。しかし、当業者は、代替的な態様において、宿主細胞は、天然または組換え的のいずれかで、所望のアグリコン鋳型を発現することができることを認識する。本明細書において用いられるように、シュードアグリコンpseudoaglyconeという用語は、複数がグリコシル化される生成物の部分的にグリコシル化された中間体をいう。当業者は、代替的な宿主株が使用可能であることを認識する。好ましい細胞は、原核細胞または真菌細胞または哺乳動物細胞である。特に好ましい宿主細胞は原核細胞、より好ましくは、放線菌、シュードモナス、粘液細菌、および大腸菌などの宿主株である。宿主細胞は、エリスロマイシンまたは密接に関連する14員マクロライドを天然に産生しない場合に、SエリスラエアからのermE遺伝子などのマクロライド生成物に自己耐性を付与する遺伝子を導入することが必要である可能性があることが認識される。さらにより好ましくは、宿主細胞は、放線菌、なおさらにより好ましくは、Sエリスラエア、ストレプトマイセスグリセオフスカス、ストレプトマイセスシナモネンシス、ストレプトマイセスアルバス、ストレプトマイセスリビダンス、ストレプトマイセスハイグロスコピカス種、ストレプトマイセスハイグロスコピカス種変異株アスコマイセティカス、ストレプトマイセスロンギスポロフラバス、サッカロポリスポラスピノサ、ストレプトマイセスツクバエンシス、ストレプトマイセスコエリコロール、ストレプトマイセスフラジアエ、ストレプトマイセスリモサス、ストレプトマイセスアベルミティリス、ストレプトマイセスユーリサーマス、ストレプトマイセスベネズエレ、およびアミコラトプシスメジテラネイを含むがこれらに限定されない株である。より高度に好ましい態様において、宿主細胞はSエリスラエアである。本発明の組換え培地に供給される基質はエリスロマイシン生合成の天然の中間体ではないことは、当業者には容易に理解される。従って、この基質は、アグリコンバックボーン実施例8~11を参照されたいまたは3位に結合した糖またはその両方で修飾可能である。WO0179520は、デソサミニルトランスフェラーゼEryCIIIがシュードアグリコン基質に関して緩和した特異性を示し、3Oラムノシルエリスロノリドを対応する3Oラムノシルエリスロマイシンに転換することを示す。適切な修飾された基質はまた、化学的半合成法によって製造されてもよい。代替的には、エリスロマイシン産生ポリケチドシンターゼ、DEBSを操作して修飾エリスロマイシンを産生する方法は当業者に周知である例えば、WO9313663、WO9801571、WO9801546、WO9849315、KatoYら、2002。同様に、WO0179520は、3位に代替的な糖を有するエリスロライドを得るための方法を記載している。それゆえに、本発明の化合物という用語は、C5位に代替的な糖をさらに有する、以前に記載したすべてのこのような非天然アグリコン化合物を含む。これらの文書のすべては参照として本明細書に組み入れられる。C5位にミカミノシル部分を含む本発明の化合物は、グリコシル化WO0179520もまた参照されたい、アシル化または化学修飾を含むがこれらに限定されない、ミカミノシル部分のC4ヒドロキシル基で修飾可能であることは当業者に容易に認識される。従って、本発明は、5位に天然に存在しない糖、特にOミカミノシルまたはOアンゴロサミニル残基、またはその誘導体もしくは前駆体、具体的にはOアンゴロサミニル残基またはその誘導体を有する、エリスロマイシンの類似体および関連するマクロライドを提供する。エリスロマイシンの類似体という用語は、aエリスロマイシンA、B、CおよびD;b参照として本明細書に組み入れられる、EP1024145において議論されるようなアジスロマイシンおよび他の誘導体のような半合成誘導体;c遺伝子操作およびその半合成誘導体によって産生される改変体を含む。遺伝子操作によって産生される改変体には、参照として本明細書に組み入れられる、WO9801571、EP1024145、WO9313663、WO9849315およびWO0179520において開示されるか、またはこれらによって開示される方法によって産生可能な改変体が含まれる。本発明の化合物には、C5位の天然の糖がミカミノースまたはアンゴロサミンで置換されるエリスロマイシンの改変体が含まれ、およびまた、以下の化学式IエリスロマイシンおよびIIアジスロマイシンの化合物およびその薬学的に許容される塩が含まれる。化学式IおよびIIには、すべての可能性が網羅されるように、立体化学は示されておらず、これは、本明細書の他の箇所に示されるようないくつかのまたはすべての位置における天然の立体化学を含む。特に、任意のCH基の立体化学は、一般的に独立して選択可能である。R1はH、CH3、C2H5または以下のiから選択され;R2、R4、R5、R6、R7およびR9は各々独立してH、OH、CH3、C2H5またはOCH3であり;R3HまたはOHでありR8H、、ラムノース、2Oメチルラムノース、23ビスOメチルラムノース、234トリOメチルラムノース、オレアンドロース、オリオース、ジジトキソース、オリボースまたはアンゴロサミンであり;R10HまたはCH3またはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり;R11H、、ミカロース、C4Oアシルミカロースまたはグルコースであり;R12HまたはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり;R13HまたはCH3であり;R15Hまたはであり;R16HまたはOHであり;R14HまたはCNRcRdであり、ここでRcおよびRdの各々は、独立してH、C1~C10アルキル、C2~C20アルケニル、C2~C10アルキニル、m、またはmであり、ここでmは0~4の範囲の整数であり、かつH以外の上記Rc基およびRd基の各々は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはRcおよびRdは一緒になって4~7員環の飽和環または5~10員環のヘテロアリール環を形成してもよく、ここで上記飽和環およびヘテロアリール環は、RcおよびRdが結合する窒素に加えて、O、SおよびNから選択される1個または2個のヘテロ原子を含んでもよく、および上記飽和環は1個もしくは2個の炭素炭素二重結合または三重結合を含んでもよく、ならびに上記飽和環およびヘテロアリール環は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはR2およびR17は一緒になって炭酸環を形成し;各Qはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、OCQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、C1~C6アルコキシ、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり、かつ上記アリール置換基およびヘテロアリール置換基は、ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、およびC1~C6アルコキシから独立して選択される1個または2個の置換基によって置換されてもよく;各Q1、Q2およびQ3はH、OH、C1~C10アルキル、C1~C6アルコキシ、C2~C10アルケニル、C2~C10アルキニル、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり;化合物が5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAまたはDではないという条件である。本発明はまた、化学式IまたはIIに従う化合物を提供し、ここで:i置換基R1は以下から選択され:いずれかが1つまたは複数のヒドロキシル基で任意で置換されてもよい、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシアルキル基およびアルキルチオアルキル基から選択されるα分枝C3~C8基;アルキル基がα分枝C2~C5アルキル基であるC5~C8シクロアルキルアルキル基;いずれかが1つもしくは複数のヒドロキシル、または1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキル基またはC5~C8シクロアルケニル基;飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つまたは複数のC1~C4アルキル基、ハロ原子またはヒドロキシル基によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環;C1~C4アルキル基、C1~C4アルコキシ基およびC1~C4アルキルチオ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、ならびにシアノから選択される少なくとも1つの置換基で任意で置換されてもよいフェニル、あるいは;R1がR17CH2であって、ここで、R17は、H、C1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、各アルキルまたはアルコキシ基において1~6個の炭素原子を含むアルコキシアルキル、またはアルキルチオアルキルであり、そして上記アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基またはアルキニル基のいずれかは、1つもしくは複数のヒドロキシル基または1つもしくは複数のハロ原子によって置換されてもよく;またはそれらのいずれかが1個もしくは複数のC1C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキルもしくはC5~C8シクロアルケニルであり;または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素もしくは硫黄含有複素環であり;または化学式SA16の基であって、ここで、A16はC1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、C3~C8シクロアルキル、C5~C8シクロアルケニル、フェニルもしくは置換フェニルであり、ここで置換基はC1~C4アルキル、C1~C4アルコキシもしくはハロであり、または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基、もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環であり;iiC11エリスロマイシンまたはC12アジスロマイシンにおけるCHOHはメチレン基CH2、ケト基CO、または1011オレフィン結合エリスロマイシンもしくは1112オレフィン結合アジスロマイシンによって置換され;iii置換基R11はHまたはミカロースまたはC4Oアシルミカロースまたはグルコースであり;または、1つまたは複数のケチド単位の酸化状態が異なる化学式IまたはIIに従う化合物すなわち、以下の基:CO、CH、アルケンCH、およびCH2からの代替物の選択を提供し、ここで、任意のCHの立体化学もまた独立して選択可能であり、この化合物は5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンA、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンD、および5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンからなる群より選択されないという条件である。本発明のこの局面によって利用可能にされる新規な5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルエリスロマイシンおよびアジスロマイシンには、これらがアンゴラマイシンまたはメデルマイシンではないという条件で、R15基においてR11R16Hであるものが含まれるがこれらに限定されないKinumakiおよびSuzuki、1972;Ichinoseら、2003。好ましい態様において、本発明は、化学式IまたはIIに記載の化合物を提供し、ここで:R1H、CH3、C2H5であるか、または以下から選択される:いずれかが1つまたは複数のヒドロキシル基で任意で置換されてもよい、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシアルキル基およびアルキルチオアルキル基から選択されるα分枝C3~C8基;アルキル基がα分枝C2~C5アルキル基であるC5~C8シクロアルキルアルキル基;いずれかが1つもしくは複数のヒドロキシル、または1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキル基またはC5~C8シクロアルケニル基;飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つまたは複数のC1~C4アルキル基、ハロ原子またはヒドロキシル基によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環;C1~C4アルキル基、C1~C4アルコキシ基およびC1~C4アルキルチオ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、ならびにシアノから選択される少なくとも1つの置換基で任意で置換されてもよいフェニル、あるいはR1はR17CH2であって、ここで、R17は、H、C1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、各アルキルまたはアルコキシ基において1~6個の炭素原子を含むアルコキシアルキル、またはアルキルチオアルキルであり、ここで上記アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基またはアルキニル基のいずれかは、1つもしくは複数のヒドロキシル基または1つもしくは複数のハロ原子によって置換されてもよく;またはいずれかが1個もしくは複数のC1C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキルもしくはC5~C8シクロアルケニルであり;または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素もしくは硫黄含有複素環であり;または化学式SA16基であって、ここで、A16はC1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、C3~C8シクロアルキル、C5~C8シクロアルケニル、フェニルもしくは置換フェニルであり、ここで置換基はC1~C4アルキル、C1~C4アルコキシもしくはハロであり、または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基、もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環であり、R2、R4、R5、R6、R7およびR9はすべてCH3であり、R3HまたはOHであり、R8Hもしくはであるか、またはラムノース、2Oメチルラムノース、23ビスOメチルラムノース、234トリOメチルラムノース、オレアンドロース、オリオース、ジジトキソース、オリボースまたはアンゴロサミンから選択され;R10HまたはCH3であり、R11Hもしくはであり、R12HまたはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり、R13HまたはCH3であり、R14HまたはCNRcRdであり、ここでRcおよびRdの各々は、独立してH、C1~C10アルキル、C2~C20アルケニル、C2~C10アルキニル、m、またはmであり、ここでmは0~4の範囲の整数であり、およびH以外の上記Rc基およびRd基の各々は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはRcおよびRdは一緒になって4~7員環の飽和環または5~10員環のヘテロアリール環を形成してもよく、ここで上記飽和環およびヘテロアリール環は、RcおよびRdが結合する窒素に加えて、O、SおよびNから選択される1個または2個のヘテロ原子を含んでもよく、および上記飽和環は1個もしくは2個の炭素炭素二重結合または三重結合を含んでもよく、ならびに上記飽和環およびヘテロアリール環は1~3個のQ基によって置換されてもよく;またはR2およびR17は一緒になって炭酸環を形成し;各Qはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、OCQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、C1~C6アルコキシ、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり、および上記アリール置換基およびヘテロアリール置換基は、ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、アジド、CQ1、COQ1、OCOQ1、NQ2CQ3、CNQ2Q3、NQ2Q3、ヒドロキシ、C1~C6アルキル、およびC1~C6アルコキシから独立して選択される1個または2個の置換基によって置換されてもよく;各Q1、Q2およびQ3はH、OH、C1~C10アルキル、C1~C6アルコキシ、C2~C10アルケニル、C2~C10アルキニル、m、およびmから独立して選択され、ここでmは0~4の範囲の整数であり;この化合物は5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAまたはDではないという条件であり、R15Hまたはであり、R16HまたはOHであり、この化合物は5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンA、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンD、および5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンからなる群より選択されないという条件である。さらに好ましい態様において、本発明の化合物は化学式Iに従う化合物を提供し、ここで:R1H、CH3、C2H5であり、または以下から選択される:そのいずれかが1つまたは複数のヒドロキシル基で任意で置換されてもよい、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシアルキル基およびアルキルチオアルキル基から選択されるα分枝C3~C8基;アルキル基がα分枝C2~C5アルキル基であるC5~C8シクロアルキルアルキル基;いずれかが1つもしくは複数のヒドロキシル、または1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキル基またはC5~C8シクロアルケニル基;飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つまたは複数のC1~C4アルキル基、ハロ原子またはヒドロキシル基によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環;C1~C4アルキル基、C1~C4アルコキシ基およびC1~C4アルキルチオ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、ならびにシアノから選択される少なくとも1つの置換基で任意で置換されてもよいフェニル、あるいはR1はR17CH2であって、ここで、R17は、H、C1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、各アルキルまたはアルコキシ基において1~6個の炭素原子を含むアルコキシアルキル、またはアルキルチオアルキルであり、ここで上記アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基またはアルキニル基のいずれかは、1つもしくは複数のヒドロキシル基または1つもしくは複数のハロ原子によって置換されてもよく;またはいずれかが1個もしくは複数のC1C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、C3~C8シクロアルキルもしくはC5~C8シクロアルケニルであり;または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素もしくは硫黄含有複素環であり;または化学式SA16基であって、ここで、A16はC1~C8アルキル、C2~C8アルケニル、C2~C8アルキニル、C3~C8シクロアルキル、C5~C8シクロアルケニル、フェニルもしくは置換フェニルであり、ここで置換基はC1~C4アルキル、C1~C4アルコキシもしくはハロであり、または飽和しているか、または完全にもしくは部分的に不飽和であってもよい、かつ1つもしくは複数のC1~C4アルキル基、もしくはハロ原子によって任意で置換されてもよい、3~6員環の酸素または硫黄含有複素環であり、R2、R4、R5、R6、R7およびR9はすべてCH3であり、R3HまたはOHであり、R8Hもしくはであるか、またはラムノース、2Oメチルラムノース、23ビスOメチルラムノース、234トリOメチルラムノース、オレアンドロース、オリオース、ジジトキソース、オリボースまたはアンゴロサミンから選択され;R10HまたはCH3であり、R11Hもしくはであり、R12HまたはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり、R13HまたはCH3であり、R14Hであり、R15Hまたはであり、R16HまたはOHであり、この化合物は5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンA、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンD、および5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンからなる群より選択されないという条件である。より好ましい態様において、本発明は化学式Iに従う化合物を提供し、ここで:R1ヒドロキシル基により任意で置換されるC2H5であり、R2、R4、R5、R6、R7およびR9はすべてCH3であり、R3HまたはOHであり、R8Hまたはであり、R10HまたはCH3であり、R11Hもしくはであり、R12HまたはCRAであり、ここでRAC1~C6アルキル、C2~C6アルケニルまたはC2~C6アルキニルであり、R13HまたはCH3であり、R14Hであり、R15Hまたはであり、R16HまたはOHであり、この化合物は5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンDからなる群より選択されないという条件である。より好ましい態様において、本発明は化学式Iに従う化合物を提供し、ここで:R1ヒドロキシル基により任意で置換されるC2H5であり、R2、R4、R5、R6、R7およびR9はすべてCH3であり、R3HまたはOHであり、R8Hまたはであり、R10HまたはCH3であり、R12Hであり、R13HまたはCH3であり、R14Hであり、R15Hまたはであり、R16HまたはOHである。高度に好ましい態様において、本発明は化学式Iに従う化合物を提供し、ここで:R1C2H5であり、R2、R4、R5、R6、R7およびR9はすべてCH3であり、R3HまたはOHであり、R8Hまたはであり、R10HまたはCH3であり、R12Hであり、R13HまたはCH3であり、R14Hであり、R15Hまたはであり、R16HまたはOHであり、この化合物は5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンDからなる群より選択されないという条件である。さらに、当業者は、本発明の方法を使用して、ミカミノースおよびアンゴロサミンが他のアグリコンまたはシュードアグリコン、例えばしかし非限定的にチラクトンまたはスピノシンアグリコンに加えられてもよいことを認識する。これらの他のアグリコンまたはシュードアグリコンは天然に存在する構造であってもよいし、またはこれらはアグリコンバックボーン中で修飾されてもよく、このような修飾された基質は、化学的半合成法によってKanekoら、2000およびそこに引用される参考文献、または代替的に、PKS操作を介して産生されてもよく、このような方法は当技術分野において周知である例えば、WO9313663、WO9801571、WO9801546、WO9849315、KatoYら、2002。それゆえに、さらなる態様において、本発明は、5Oアンゴロサミニルチラクトン、5Oミカミノシルチラクトン、17Oアンゴロサミニルスピノシンおよび17Oミカミノシルスピノシンを提供する。その上、宿主細胞選択のプロセスは、遺伝子を欠失、または不活性化、または付加、または操作する任意の段階をさらに含む。このプロセスは、本発明の化合物、特に、5Oデデソサミニル5Oミカミノシルエリスロマイシンおよび5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシン、具体的には、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンA、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンC、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンB、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンDおよび5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンの調製および単離のための組換え宿主株の改善を含む。このアプローチは、基質3OミカロシルエリスロノリドBから5Oデデソサミニル5Oミカミノシルエリスロマイシンへの転換を最適化するために、SエリスラエアSGQ2の染色体にeryBVI変異を導入することによって、実施例1において例示される。さらなる局面において、本発明は遺伝子カセットの構築に関する。これらの遺伝子カセットを単離するために使用されるクローニング方法は、PCTGB03003230において使用されるものと類似しており、pUC1819プラスミド中で遺伝子をプレアセンブルするよりもむしろ発現ベクター中で直接的に遺伝子カセットをアセンブルすることによって、以前に記載されたアプローチWO0179520とは顕著に異なっており、従って、遺伝子発現の単離のためのより迅速なクローニング手順を提供する。これらの遺伝子カセットを単離するためのストラテジーは実施例1~実施例11に例示される。このストラテジーの図式的概観は図2に与えられる。本発明の別の局面は、遺伝子カセット中の遺伝子の順番を変化させることによって遺伝子発現の増強を可能にし、この遺伝子には、tylMI、tylMIII、tylB、eryCVI、tylAI、tylAII、eryCIII、eryBV、angAI、angAII、angMIII、angB、angMI、angorf14、angorf4、eryBVI、eryK、eryG、angMII、tylMII、desVII、midI、spnO、spnN、spnPおよび同様の機能を有する遺伝子が含まれるがこれらに限定されず、多数の順列の配置を可能にする図2。本発明において概略されるクローニングストラテジーはまた、遺伝子発現を増強するために、遺伝子カセットの3ターミネーター配列と組み合わせたヒスチジンタグの導入を可能にする実施例1を参照されたい。当業者は、当技術分野において周知である他のターミネーター配列が使用可能であろうことを認識する。例えば、参照として本明細書に組み入れられる、BussiereおよびBastia、BertramらおよびKieserらを参照されたい。本発明の別の局面は、発現を増強するために、遺伝子およびまたはアセンブルされた遺伝子カセットを発現するためのPtipAAliら、2002およびまたはPptrSalahBeyら、1995などの代替的なプロモーターの使用を含む。本発明の別の局面は、実施例6に例示されるような、遺伝子発現を増強するための、アセンブルされた遺伝子カセット中でのプロモーター配列の多重使用を記載する。本発明の別の局面は、活性化された糖脂質の内因性産生を増強するために、遺伝子カセットへの、tylAIなどのNDPグルコースシンターゼおよびtylAIIなどのNDPグルコース46デヒドラターゼをコードする遺伝子の付加を記載する。当業者は、等価な糖生合成経路遺伝子の代替的な供給源が使用されてもよいことを認識する。この状況において、代替的な供給源には以下が含まれるがこれらに限定されない:tyAI相同体:ストレプトマイセスベネズエレのDesIIIアクセッション番号AAC68682、ストレプトマイセスグリセウスStreptomycesgriseusのGrsDアクセッション番号AAD31799、ストレプトマイセスアベルミティリスのAveBIIIアクセッション番号BAA84594、サッカロポリスポラスピノサのGttアクセッション番号AAK83289、ストレプトマイセスノガラテルStreptomycesnogalaterのSnogJアクセッション番号AAF01820、ストレプトマイセスガリラレウスStreptomycesgalilaeusのAclYアクセッション番号BAB72036、ストレプトマイセスシアノゲヌスStreptomycescyanogenusのLanGアクセッション番号AAD13545、ストレプトマイセスビオラセオルベルStreptomycesviolaceoruberのGraorfl6アクセッション番号AAA99940、ストレプトマイセスアンチビオティカスStreptomycesantibioticusのOleSアクセッション番号AAD55453、ストレプトマイセスグリセウスStreptomycesgriseusのStrDアクセッション番号A26984およびSユーリサーマスのAngAI。tyAII相同体:ストレプトマイセステネブラリウスStreptomycestenebrariusのAprEアクセッション番号AAG18457、S.スピノサのGdHアクセッション番号AAK83290、S.ベネズエラエのDesIVアクセッション番号AAC68681、SエリスラエアのGdHアクセッション番号AAA68211、S.アベルミティリスのAveBIIアクセッション番号BAA84593、ストレプトマイセスコエリコロールのScf8108Cアクセッション番号CAB61555、S.シアノゲヌスのLanHアクセッション番号AAD13546、S.ビオラセオルベルSviolaceoruberのGraorfl7アクセッション番号S58686、S.アンチビオティカスのOleEアクセッション番号AAD55454、SグリセウスのStrEアクセッション番号P29782およびSユーリサーマスのAngAII。同様に、tylMIII、angAIII、eryCII、tylMII、angMII、tylB、angB、eryCI、tylMI、angMI、eryCVI、tylIa、angorf14、angorf4、spnO、eryBVI、eryBV、eryCIII、desVII、midI、spnNおよびspnPに対する活性化糖生合成遺伝子相同体のための代替的な供給源は、当業者に容易に認識され、かつ使用可能である。本発明のもう1つの局面は、EryCIIIのような遺伝子カセット中の代替的なグリコシルトランスフェラーゼの使用を説明する。当業者は、代替的なグリコシルトランスフェラーゼが使用されてもよいことを認識する。この状況において、代替的なグリコシルトランスフェラーゼには、TylMIIアクセッション番号CAA57472、DesVIIアクセッション番号AAC68677、MegCIII、MegDIアクセッション番号AAG13908、SユーリサーマスのAngMIIが含まれるがこれらに限定されない。本発明の1つの局面において、遺伝子カセットは、キメラグリコシルトランスフェラーゼGTをさらに含んでもよい。これは、天然のGTが、所望の類似体の合成のために必要とされる糖およびアグリコンの組み合わせを認識しない場合に特に有益である。それゆえに、この局面において、本発明はキメラGTの使用を具体的に意図し、ここでGTの一部は、適切な菌株バックグラウンド中で発現される場合に、上記発現カセット中で合成が遺伝子によって指向される糖の認識のために特異的であり、かつGTの一部はアグリコンまたはシュードアグリコン鋳型に対して特異的であるHuおよびWalker、2002。当業者は、異なるストラテジーが部位特異的組み込みベクターなどの宿主株への遺伝子カセットの組み込みのために使用されてもよいことを認識するSmovkinaら、1990;Leeら、1991;Matsuuraら、1996;VanMellaertら、1998;Kieserら、2000。代替として、遺伝子カセットを含むプラスミドが、相同組換え部位を使用して、染色体上の任意の天然の部位に組み込まれてもよい。さらに、Sエリスラエアを含む多数の放線菌については、遺伝子カセットが、自己複製プラスミド上に導入されてもよいKieserら、2000;WO9801571。本発明のさらなる局面は、本発明の化合物の産生のため、および任意で上記化合物の単離のためのプロセスを提供する。本発明のさらなる局面は、実施例1に例示されるような、本発明の化合物の産生を最適化するための異なる発酵の使用である。本発明のもう1つの局面は、遺伝子カセットへの、eryKおよびまたはeryGのようなery遺伝子の付加である。当業者は、プロセスが、遺伝子eryGミカロース糖上のメチル化の原因であるおよびまたはeryKC12における水酸化の原因であるの操作によって、特異的エリスロマイシンすなわち、A、B、C、Dまたはアジスロマイシンの産生のために最適化可能であることを認識する。従って、A型の産生を最適化するために、eryKの余分のコピーが遺伝子カセットに含まれてもよい。逆に、エリスロマイシンB類似体が必要とされるならば、これは、Sエリスラエア宿主株からのeryK遺伝子の欠失によって、または遺伝子およびもしくはその機能的相同体が存在しない異種宿主中で操作することによって達成可能である。同様に、エリスロマイシンDアナログが必要とされるならば、これは、Sエリスラエア宿主株からのeryG遺伝子とeryKの両方の欠失によって、または遺伝子およびもしくはその機能的相同体が存在しない異種宿主中で操作することによって達成可能である。同様に、エリスロマイシンCアナログが必要とされるならば、これは、Sエリスラエア宿主株からのeryG遺伝子の欠失によって、または遺伝子およびもしくはその機能的相同体が存在しない異種宿主中で操作することによって達成可能である。この状況において、好ましい宿主細胞株は、原核細胞株、真菌細胞株または哺乳動物細胞である。より好ましくは、宿主細胞株は放線菌、シュードモナス、粘液細菌、または大腸菌である。より好ましい態様において、宿主細胞株は、放線菌、なおさらにより好ましくは、サッカロポリスポラエリスラエアSaccharopolysporaerythraea、ストレプトマイセスコエリコロール、ストレプトマイセスアベルミティリス、ストレプトマイセスグリセオフスカス、ストレプトマイセスシナモネンシス、ストレプトマイセスフラジエ、ストレプトマイセスユーリサーマス、ストレプトマイセスロンギスポロフラバス、ストレプトマイセスハイグロスコピカス、サッカロポリスポラスピノサ、ミクロモノスポラグリセオルビダMicromonosporagriseorubida、ストレプトマイセスラサリエンシスStreptorrayceslasaliensis、ストレプトマイセスベネズエレ、ストレプトマイセスアンチビオティカス、ストレプトマイセスリビダンス、ストレプトマイセスリモサス、ストレプトマイセスアルバス、アミコラトプシスメジテラネイ、ノカルジア種Nocardiasp、ストレプトマイセスツクバエンシス、およびアクチノプラネス種ActinoplanesspN902109を含むがこれらに限定されない。なおより好ましい態様において、宿主細胞株は、サッカロポリスポラエリスラエア、ストレプトマイセスグリセオフカス、ストレプトマイセスシナモネンシス、ストレプトマイセスアルバス、ストレプトマイセスリビダンス、ストレプトマイセスハイグロスコピカス種、ストレプトマイセスハイグロスコピカス種変異株アスコマイセティカス、ストレプトマイセスロンギスポロフラバス、サッカロポリスポラスピノサ、ストレプトマイセスツクバエンシス、ストレプトマイセスコエリコロール、ストレプトマイセスフラジエ、ストレプトマイセスリモサス、ストレプトマイセスアベルミティリス、ストレプトマイセスユーリサーマス、ストレプトマイセスベネズエレ、およびアミコラトプシスメジテラネイから選択される。最も高度に好ましい態様において、宿主細胞はサッカロポリスポラエリスラエアである。本発明は、本発明の化合物、特にC5位のグリコシル化が天然の化合物とは異なる、ヒトまたは動物の健康における使用のために抗微生物剤として有用である、エリスロマイシンおよびアジスロマイシン類似体、例えば、ただし非限定的には、新規な5Oデデソサミニル5Oミカミノシルまたはアンゴロサミニルエリスロマイシン、および5Oデデソサミニル5Oミカミノシルまたはアンゴロサミニルアジスロマイシンの調製および単離のための方法を提供する。さらなる局面において、本発明は、本明細書に開示される任意のプロセスによて入手可能であるような新規な生成物を提供する。一般的方法大腸菌XL1BlueMRStratagene、大腸菌DH10BGibcoBRLおよび大腸菌ET12567は、Sambrookら1989によって記載されるように2xYT培地中で増殖させた。ベクターpUC18、pUC19およびLitmus28はNewEnglandBiolabsから入手した。大腸菌形質転換体は100μgmLアンピシリンを用いて選択した。サッカロポリスポラエリスラエアNRRL2338red変異型株は以前に記載されたとおりであったGaisserら、1997、Gaisser、1998。プラスミドを含むSエリスラエアは、25~40μgmLチオストレプトンまたは50μgmLアプラマイシンを用いて選択した。抗生物質の産生を調べるために、Sエリスラエア株は、以前に記載されたようにGaisserら、1997スクロースコハク酸培地Caffreyら、1992中で増殖させ、細胞は遠心分離によって収集した。ストレプトマイセスロケイStreptomycesrocheiATCC21250の染色体DNAは、標準的な手順Kieserら、2000を使用して単離した。3OミカロシルエリスロノリドBまたはチラクトンの供給は、25~50mgLの間の濃度で実行した。DNA操作および配列決定DNA操作、PCRおよび電気穿孔法手順は、Sambrookら1989に記載されるように実行した。Sエリスラエアのプロトプラスト形成および形質転換手順は、以前に記載されたものと同様であったGaisserら、1997。サザンハイブリダイゼーションは、DIGDNA標識キットBoehringerMannheimを使用してジゴキシゲニンを用いて標識したプローブを用いて実行した。DNA配列決定は、ABIPrism3700DNA分析装置を用いる二本鎖鋳型上での自動化DNA配列決定を使用して、以前に記載されたように実行したGaisserら、1997。抽出および質量分析法各発酵ブロスの1mLを収集し、pH9に調整した。抽出のために、等量の酢酸エチル、メタノール、またはアセトニトリルを加え、少なくとも30分間混合し、かつ遠心分離した。酢酸エチルを用いる抽出については、有機層を乾燥までエバポレートし、次いで05mLエタノールに再溶解した。メタノール抽出およびアセトニトリル抽出については、遠心分離後に上清を収集し、分析のために使用した。高分解能スペクトルを、BrukerBioApexIIFTICRBrukerBremenFRG上で得た。全ブロスのアリコート1mLを、CH3CN1mLとともに30分間インキュベートした。この混合物を、遠心分離によって清澄化し、上清をLCMSによって分析した。HPLCシステムは、40°Cに加熱したLuna5μmC18BDS46×250mmカラムPhenomenexMacclesfieldUKを装着したAgilentHP1100を含んだ。グラジエント溶液は、1mL分の流速で、19分間にわたる、25移動相B~75移動相Bであった。移動相Aは10mM酢酸アンモニウムおよび015ギ酸を含む10アセトニトリル:90水であり、移動相Bは10mM酢酸アンモニウムおよび015ギ酸を含む90アセトニトリル:10水であった。記載されたHPLCシステムは、陽イオンモードで操作するBrukerDaltonicsEsquire3000エレクトロスプレー質量分析装置に接続した。抽出および精製のプロトコール:5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAのNMR分析のために、発酵ブロスを遠心分離によって清澄化し、上清および細胞を供給した。上清を、Diaion登録商標HP20レジンSupelcoのカラム16×15cmに適用し、10Me2COH2Oで洗浄し2×2L、次いでMe2CO35Lで溶出した。細胞を、均質になるまで等量のMe2COMeOH1:1と混合した。少なくとも30分後、スラリーを遠心分離によって清澄化し、上清をデカントした。ペレット化した細胞を、同様に再度Me2COMeOH1:1で抽出した。細胞抽出物をHP20カラムからのMe2COと合わせ、溶媒を真空中で除去して、水性濃縮物を得た。水分をEtOAcで抽出し3×、溶媒を真空中で除去して粗抽出物を得た。残渣をCH3CNMeOH中に溶解し、そしてPhenomenex212×250mmLuna5μmC18BDSカラムを21mL分で溶出するGilsonHPLCを使用する逆相C18液体クロマトグラフィーの反復ラウンドによって精製した。325B~63Bの直線状グラジエントを用いる溶出を使用してマクロライドを濃縮し、次いで30Bを用いるイソクラティク溶出によって個々のエリスロマイシンを分離した。移動相Aは20mM酢酸アンモニウムであり、移動相Bはアセトニトリルであった。高解像度質量スペクトルは、BrukerBioApexIIFTICRBrukerBremenGermany上で得た。5OアンゴロサミニルチラクトンのNMR分析のために、5の前培養物を接種した各400mLのSSDM培地を含む4個の2Lフラスコを用いて、以前に記載されたように生物転換bioconversion実験を実行した。チラクトンの供給は50mgLで実行した。培養物を遠心分離し、上清のpHを約9に調整し、その後3倍等量の酢酸エチルを用いる抽出を行った。細胞ペレットを、等量のアセトンメタノールの混合物5050、体積体積で2回抽出した。抽出液を合わせて、真空中で濃縮した。得られた水性画分を酢酸エチルで3回抽出し、抽出物を合わせて、乾燥するまでエバポレートした。この半精製抽出物をメタノール中に溶解し、21mm×250mmProdigyODS3カラムPhenomenexMacclesfieldUKを使用するGilson315システム上での調製用HPLCによって精製した。移動相は、30CH3CN、70H2Oからなり、20分間にわたって70CH3CNまで直線的に増加する2成分系として、21mL分の流速でポンプで送られた。配列情報実施例1:遺伝子カセットpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtylIatylMIeryCIIIを使用する、3OミカロシルエリスロマイシンBの5Oデデソサミニル5Oミカミノシルエリスロマイシンへの生物転換pSG143の単離プラスミドpSG142Gaisserら、2000をXbaIで消化し、フィルインfillin反応を標準的なプロトコールを使用して実行した。DNAを再ライゲーションし、大腸菌DH10Bを形質転換するために使用した。構築物pSG143を単離し、XbaI部位の除去を配列分析によって確認した。pUC18eryBVcasの単離遺伝子eryBVは、プライマーcasOleG21国際公開公報第0179520号およびを、ならびにpSG142Gaisserら、2000を鋳型として使用してPCRにより増幅した。PCR断片を標準的な手順を使用してクローニングし、プラスミドpUC18eryBVを、eryBVの開始コドンと重複するNdeI部位、ならびに終止コドンの後のXbaI部位およびBglII部位下線を付したを用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。ベクターpSGLit1の単離このベクターの単離はPCTGB03003230に記載されている。pSGLitleryCIIIの単離プラスミドpSGCIIIWO0179520をNdeIBglIIで消化し、挿入断片を単離し、pSGLit1のNdeIBglII処理ベクター断片とともにライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、プラスミドpSGLit1eryCIIIを標準的な手順を使用して単離した。この構築物を、制限消化および配列分析を使用して確認した。このクローニングストラテジーは、EryCIIIのC末端のhisタグの導入を可能にする。pSGLit1tylMIIの単離プラスミドpSGTYLM2WO017952をNdeIBglIIで消化し、挿入断片を単離し、pSGLit1のNdeIBglII処理ベクター断片とともにライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、プラスミドpSGLit1tylMIIを標準的な手順を使用して単離した。この構築物を、制限消化および配列分析を使用して確認した。このクローニングストラテジーは、TylMIIのC末端のhisタグ導入を可能にする。pSG144の単離プラスミドpSGLit1を単離し、NdeIBglIIで消化し、約13kbインサートを単離した。プラスミドpSG143をNdeIBglIIで消化し、ベクターバンドを単離し、pSGLit1からの約13kbバンドとライゲーションし、次に大腸菌DH10Bの形質転換を行った。プラスミドpSG144図2を単離し、構築物をDNA配列分析によって確認した。このベクターは、pSGset1の代わりにベクターpSG144を使用するPCTGB03003230と類似して、pUC誘導ベクターWO0179520における事前のアセンブリーなしで、発現ベクター中での直接的な遺伝子カセットのアセンブリーを可能にする図2。プラスミドpSG144は、チオストレプトン耐性遺伝子とeryRHSとの間のXbaI部位が欠失しており、かつeryBVの末端のhisタグがpSG142から除去されており、pSG144においてeryBV末端のXbaI部位により置換されているという点で、pSG142とは異なる。これは、遺伝子の直接的クローニングを容易にし、eryBVを置き換え、次いでカセットを構築するためである。pSG144eryCIIIの単離eryCIIIを、標準的なプロトコールを使用し、プライマーcasOleG21WO0179520およびcaseryCIII2WO0179520を、ならびに鋳型としてpSGCIIIGaisserら、2000を用いるPCR反応によって増幅した。約13kbのPCR産物を単離し、標準的な技術を使用してpUC18にクローニングした。プラスミドpUCCIIIcassを単離し、配列を確認した。プラスミドpUCCIIIcassのインサート断片をNdeIXbaI消化後に単離し、NdeIXbaI消化したpSG144のベクター断片とライゲーションした。大腸菌DH10Bプラスミドの形質転換後、標準的な技術を使用してpSG144eryCIIIを単離した。pUC19tylAIの単離プライマーを、鋳型としてのストレプトマイセスフラジエのゲノムDNAとともに使用してtylAIを増幅した。増幅した生成物を標準的なプロトコールを使用してクローニングし、プラスミドpUCl9tylAIを単離した。DNA配列分析によってインサートを確認した。公開されていた配列との違いを図3に示す。pSGLit2の単離プラスミドLitmus28をSpeIXbaIで消化し、ベクター断片を単離した。プラスミドpSGLit1damをXbaIで消化し、インサートバンドを単離し、Litmus28のSpeIXbaI消化ベクター断片とライゲーションし、その後標準的な技術を使用する大腸菌DH10Bの形質転換を行った。プラスミドpSGLit2を単離し、構築物を、制限消化および配列分析によって確認した。このプラスミドを使用して、Damメチル化およびShineDalgarno領域に感受性である5領域を付加することが可能であり、このようにして、遺伝子カセットのアセンブリーのために、開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの3のXbaI部位を用いてもともとクローニングした遺伝子を転換した。この転換は、大腸菌ET12567へのこのライゲーションの形質転換、次にdamDNAおよびXbaI消化物の単離を含む。このストラテジーについての例は以下に概説する。pSGLit2tylAIの単離プラスミドpSGLit2およびpUC19tyl4IをNdeIXbaIで消化し、pUC19tylAIのインサートバンドおよびpSGLit2のベクターバンドを単離し、ライゲーションし、そして大腸菌ET12567を形質転換するために使用した。プラスミドpSGLit2tylAIdamを単離した。pUC19tylAIIの単離プライマーを、ならびに鋳型としてのストレプトマイセスフラジエを、標準的なプロトコールを適用するPCR反応のために使用して、tylAIIを増幅した。約1kbのサイズのDNA断片を単離し、標準的な技術を使用して、SmaIで切断したpUC19にクローニングした。この構築物のDNA配列決定は、5末端の12ヌクレオチドが、PCR反応中に存在するエキソヌクレアーゼ反応によっておそらく除去されたことを示した。公開されていた配列と比較した、クローニングした断片のアミノ酸配列の比較を図4に示す。pSGLit2tylAIIの単離欠落した5ヌクレオチドを付加するために、pSGLit2をPacIXbaIで消化し、ベクター断片を単離し、そしてpUC19tylAIIのPacIXbaI消化インサート断片とライゲーションした。ライゲーションしたDNAを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、プラスミドpSGLit2tylAIIdamを単離した。プラスミドpUCl9eryCVIの単離eryCVIを、プライマーを、ならびに鋳型としてのプラスミドpNCO62Gaisserら、1997を使用するPCRによって増幅した。このPCR産物を、標準的な技術を使用して、SmaI消化したpUC19にクローニングし、プラスミドpUCl9eryCVIを単離し、配列分析によって確認した。プラスミドpSGLit2eryCVIの単離プラスミドpUCl9eryCVIをNdeIXbaIで消化し、pSGLit2のNdeIXbaI消化したベクター断片でライゲーションし、次に大腸菌ET12567の形質転換を行った。プラスミドpSGLit2eryCVIdamを単離した。プラスミドpSG144tylAIの単離プラスミドpSG144およびpUC19tylAIをNdeIXbaIで消化し、pUC19tylAIのインサートバンドおよびpSG144のベクターバンドを単離し、ライゲーションし、そして大腸菌DH10Bを形質転換するために使用した。プラスミドpSG144tylAIを標準的なプロトコールを使用して単離した。プラスミドpSG144tylAItylAIIの単離プラスミドpSGLit2tylAIIdamをXbaIで消化し、XbaI消化したプラスミドpSG144tylAIとライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、プラスミドpSG144tylAItylAIIを単離し、標準的なプロトコールを使用して確認した。プラスミドpSGLit2tylMIIIの単離プラスミドpUC18tylM3WO0179520に記載される単離物をNdeIXbaIで消化し、インサートバンドおよびNdeIXbaI消化したpSGLit2のベクターバンドを単離し、ライゲーションし、そして大腸菌ET12567を形質転換するために使用した。プラスミドpSGLit2tylMIIIdamを標準的なプロトコールを使用して単離した。この構築物を、制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIIの単離プラスミドpSGLit2tylMIIIdamをXbaIで消化し、インサートバンドを、XbaI消化したプラスミドpSG144tylAItyIAIIとライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIIno36を標準的なプロトコールを使用して単離した。この構築物を、制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSGLit2tylBの単離プラスミドpUC18tylBWO0179520に記載される単離物をPacIXbaIで消化し、インサートバンドおよびPacIXbaI消化したpSGLit2のベクターバンドを単離し、ライゲーションし、そして大腸菌ET12567を形質転換するために使用した。プラスミドpSGLit2tylBno1damを標準的なプロトコールを使用して単離した。この構築物を、制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBプラスミドpSGLit2tylBdamをXbaIで消化し、インサートバンドをXbaI消化したプラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIIとライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBno5を標準的なプロトコールを使用して単離し、制限消化および配列分析によって確認した。pUCl8tylIaの単離プライマーを使用して、ORF1シトクロムP450からORF2の末端TylBまでを含むtyl領域アクセッション番号u08223empro2を有するプラスミドを鋳型として使用してtylIaを増幅した。プラスミドpUCtylIano1を標準的な手順を使用して単離し、この構築物を配列分析を使用して確認した。プラスミドpSGLit2tylIaの単離プラスミドpUCtylIano1をNdeIXbaIで消化し、インサートバンドおよびNdeIXbaI消化したpSGLit2のベクターバンドを単離し、ライゲーションし、そして大腸菌ET12567を形質転換するために使用した。プラスミドpSGLit2tylIano54damを標準的なプロトコールを使用して単離した。この構築物を配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtylIaプラスミドpSGLit2tylIadamをXbaIで消化し、インサートバンドをXbaI消化プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBとライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtylIano3を標準的なプロトコールを使用して単離し、制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSGLit1tylMIeryCIIIの単離標準的な手順を使用して、プラスミドpUCtylMIWO0179520に記載される単離物をPacI消化し、インサートバンドをPacI消化したpSGLit1eryCIIIのベクター断片とライゲーションした。プラスミドpSGLit1tylMIeryCIIIno20を単離し、その方向を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtyl1atylMIeryCIIIの単離プラスミドpSGLit1tylMIeryCIIIno20をXbaIBglIIで消化し、インサートバンドを単離し、プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtylIano3のXbaIBglII消化ベクターフラグメントとライゲーションした。プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtyl1atylMIeryCIIIを標準的な手順を使用して単離し、この構築物を、制限消化および配列決定を使用して確認した。標準的な手順を用いて、プラスミド調製物を使用して、Sエリスラエア変異株を形質転換した。pSGKC1の単離基質3OミカロシルエリスロノリドBの、35ジOミカロシルエリスロノリドBへの転換を妨害するために、さらなる染色体変異をSエリスラエアSGQ2WO0179520に記載される単離物に導入して、菌株バックグラウンド中でのLミカロースの生合成を妨害した。鋳型としてコスミド2またはプラスミドpGG1WO0179520を用い、かつプライマーを用いて、標準的なプロトコールを使用するPCR増幅を使用することによって、eryBVI遺伝子の約07kbのDNAフラグメントをクローニングすることによりプラスミドpSGKC1を単離した。eryクラスターの右手部位を含むコスミド2を、既存のコスミドライブラリーGaisserら、1997から、標準的な技術を使用して、eryBVをプローブとして用いるスクリーニングによって単離した。標準的な方法を使用して、増幅したDNAフラグメントを単離し、EcoRV消化したpKC1132Biermanら、1992にクローニングした。ライゲーションしたDNAを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、プラスミドpSGKC1を標準的な分子生物学的技術を使用して単離した。この構築物をDNA配列分析によって確認した。SエリスラエアQ421Biot2166の単離プラスミドpSGKC1を使用し、標準的な技術を使用してSエリスラエアSGQ2を形質転換し、次にアプラマイシンを用いる選択を行った。チオストレプトンアプラマイシン耐性形質転換体SエリスラエアQ421を単離した。SエリスラエアQ421pSG144tylAItylAIItylMIIItylBtyl1atylMIeryCIIIを使用する生物転換3OミカロシルエリスロノリドBを使用する生物転換アッセイを、一般的方法に記載されるように実行する。ミカミノシルエリスロマイシンAの改善レベルを、SエリスラエアQ421pSG144tylAItylAIItylMIIItylBtyl1atylMIeryCIIIを使用する生物転換アッセイにおいて、以前に観察された生物転換レベルWO0179520と比較して検出する。実施例2:遺伝子カセットpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtylIatylMItylMIIを使用するミカミノシルチラクトンの単離プラスミドpSGLit1tylMItylMIIの単離標準的な手順を使用して、pUCtylMI国際公開公報第0179520号において記載される単離物をPacI消化し、インサートを、PacI消化したpSGLit1tylMIIのベクター断片とライゲーションした。プラスミドpSGLit1tylMItylMIIno16を単離し、この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtylIatylMItylMIIプラスミドpSGLit1tylMItylMIIno16をXbaIBglIIで消化し、インサートバンドを単離し、プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtylIano3のXbaIBglII消化ベクター断片とライゲーションした。プラスミドpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtyl1atylMItylMIIを標準的な手順を使用して単離し、この構築物を、制限消化および配列分析を使用して確認した。標準的なプロトコールを使用して、このプラスミドを単離し、Sエリスラエア変異体株の形質転換のために使用した。遺伝子カセットpSG144tylAItylAIItylMIIItylBtyl1atylMItylMIIを使用する生物転換供給されたチラクトンからミカミノシルチラクトンへの転換を、SエリスラエアQ421pSG144tylAItylAIItylMIIItylBtyl1atylMItylMIIを使用する生物転換アッセイにおいて評価した。生物転換アッセイは標準的なプロトコールを使用して実行した。培養物の分析は、プロトン化チラクトンの存在と一致する5688MHである主要イオンを示した。このイオンの断片化は、プロトン化ミカミノースから予測されるように、mz174の娘イオンを与えた。培養抽出物の分析の間にチラクトンは検出されず、このことは、供給されたチラクトンの生物転換が完了したことを示した。最近、TylIaの相同体がアノイリニバチルスサーモアエロフィルスAneurinibacillusthermoaerophilusL42091TPfoestlら、2003におけるdTDP3アセトアミド36ジデオキシαDガラクトースの生合成経路において同定され、その機能は、dTDP6デオキシDキシロヘクス4ウロースからdTDP6デオキシDキシロヘクス3ウロースを合成することが可能である新規な型のイソメラーゼと仮定された。実施例3:遺伝子カセットpSG1448279521441936eryCIIIpSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBangMIeryCIIIを使用する、3OミカロシルエリスロノリドBから5Oデデソサミニル5Oミカミノシルエリスロマイシンへの生物転換プラスミドLit14を単離することによるangMIIIのクローニング遺伝子angMIIIを、プライマーを使用するPCRによって増幅した。アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド5B2を鋳型として使用した。14kbPCR断片PCRno1を標準的な手順およぼEcoRV消化したプラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit14をangMIIIの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGLit214の単離プラスミドpSGLit14をNdeIXbaIで消化し、約14kb断片を単離し、pSGLit2のNdeIXbaI消化DNAにライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、プラスミドpSGLit214no7damを単離した。この構築物をXbaIで消化し、遺伝子カセットの構築のために使用した。プラスミドLit28を単離することによるangMIIのクローニング遺伝子angMIIを、プライマーを使用するPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド5B2を鋳型として使用した。13kbPCRフラグメントPCRno2を、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit28を、angMIIの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpLitangMIIBglIIを単離することによるangMIIのクローニング遺伝子angMIIを、プライマーを使用するPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド5B2を鋳型として使用した。13kbPCRフラグメントを、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLitangMIIBglIIno8を、angMIIの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの代わりのBglII部位を用いて単離し、このようにしてhisタグの付加を可能にした。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGLit1angMIIの単離プラスミドLitangMIIBglIIをNdeIBglIIで消化し、NdeIBglII消化したpSGLit1のベクターフラグメントとライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、プラスミドpSGLit1angMIIdamを標準的な手順を使用して単離した。プラスミドLit36を単離することによるangMIのクローニング遺伝子angMIを、プライマーを使用してPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド5B2を鋳型として使用した。075kbPCRフラグメントPCRno3を、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit36を、angMIの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGlit236no8の単離プラスミドLit36をNdeIXbaIで消化し、約08kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit2のDNAにライゲーションした。このライゲーションを大腸菌ET12567を形質転換するために使用し、プラスミドpSGLit236no8damを単離した。この構築物をXbaIで消化し、約1kb断片を遺伝子カセットのアセンブリーのために使用した。プラスミドLit419を単離することによるangBのクローニング遺伝子angBを、プライマーを使用してPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド4H2を鋳型として使用した。12kbPCRフラグメントPCRno4を、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit419を、angBの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGlit2419の単離プラスミドLit419をNdeIXbaIで消化し、約12kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit2のDNAにライゲーションした。このライゲーションを大腸菌ET12567を形質転換するために使用し、プラスミドpSGLit2419no24damを単離した。この構築物をXbaIで消化し、約12kb断片を遺伝子カセットのアセンブリーのために使用した。プラスミドLit52を単離することによるorf14のクローニング遺伝子orf14を、プライマーを使用してPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド4H2を鋳型として使用した。10kbPCRフラグメントPCRno5を、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit52を、ORF14の開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGlit252no24の単離プラスミドLit52をNdeIXbaIで消化し、約1kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit2のDNAにライゲーションした。このライゲーションを大腸菌ET12567を形質転換するために使用し、プラスミドpSGLit252no24damを単離した。この構築物をXbaIで消化し、約1kb断片を遺伝子カセットのアセンブリーのために使用した。プラスミドpSGlit279no15の単離プラスミドLit79をNdeIXbaIで消化し、約1kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit2のDNAにライゲーションした。このライゲーションを大腸菌ET12567を形質転換するために使用し、プラスミドpSGLit279no15damを単離した。この構築物をXbaIで消化し、約1kb断片を遺伝子カセットのアセンブリーのために使用した。プラスミドLit82を単離することによるangAIorf2のクローニング遺伝子angAIを、プライマーを使用してPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド4H2を鋳型として使用した。約10kbPCRフラグメントPCRno8を、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit82を、angAIの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドLit79を単離することによるangAIIorf3のクローニング遺伝子angAIIを、プライマーを使用してPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド4H2を鋳型として使用した。約10kbPCRフラグメントを、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit79を、angAIIの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGlit282no18pSGLit2angAIの単離プラスミドLit82をNdeIXbaIで消化し、1kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit2のDNAにライゲーションした。このライゲーションを大腸菌ET12567を形質転換するために使用し、プラスミドpSGlit282no18damを単離した。プラスミドpSG14482pSG144angAIの単離プラスミドLit82をNdeIXbaIで消化し、約1kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSG144のDNAにライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、プラスミドpSG14482dampSG144angAIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG1448279pSG144angAIangAIIの単離プラスミドpSGLit279大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、1kb断片を単離し、XbaI消化したpSG14482pSG144angAIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG1448279pSG144angAIangAIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG144827914pSG144angAIangAIIangMIIIの単離プラスミドpSGLit214大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、14kb断片を単離し、XbaI消化したpSG1448279pSG144angAIangAIIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG144827914pSG144angAIangAIIangMIIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG144827914419pSG144angAIangAIIangMIIIangBの単離プラスミドpSGLit2419大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、約12kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914pSG144angAIangAIIangMIIIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG144827914419pSG144angAIangAIIangMIIIangBを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG14482791441936pSG144angAIangAIIangMIIIangBangMIの単離プラスミドpSGLit236大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、約08kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914419pSG144angAIangAIIangMIIIangBのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG14482791441936pSG144angAIangAIIangMIIIangBangMIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG14482791441936eryCIIIpSG144angAIangAIIangMIIIangBangMIeryCIIIの単離プラスミドpSGLit1eryCIII大腸菌ET12567から単離したをXbaIBglIIで消化し、約12kb断片を単離し、XbaI消化しおよびBglIIで部分消化したpSG14482791441936pSG144angAIangAIIangMIIIangBangMIのベクター断片にライゲーションした。このBglII部分消化は、angB中のBglII部位の存在のために必要であった。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG14482791441936eryCIIIno9pSG144angAIangAIIangMIIIangBangMIeryCIIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。eryCIIIは末端にhisタグを有する。SエリスラエアQ421pSG14482791441936eryCIIIno9pSG144angAIangAIIangMIIIangBangMIeryCIIIを使用する、3OミカロシルエリスロノリドBから5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAへの転換Sエリスラエア株Q421pSG14482791441936eryCIIIを増殖させ、供給した3OミカロシルエリスロノリドBを用いる生物転換を、一般的方法に記載したように実行した。培養物を分析し、mz750を有する少量の化合物を検出し、これは5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAの存在と一致した。プラスミドpSG144827952pSG144angAIangAIIorf14の単離プラスミドpSGLit252大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、約1kb断片を単離し、XbaI消化したpSG1448279pSG144angAIangAIIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG144827952pSG144angAIangAIIorf14を単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG14482795214pSG144angAIangAIIorf14angMIIIの単離プラスミドpSGLit214大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、約14kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827952pSG144angAIangAIIorf14のベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG14482795214pSG144angAIangAIIorf14angMIIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG14482795214419pSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBの単離プラスミドpSGLit2419大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、12kb断片を単離し、XbaI消化したpSG14482795214pSG144angAIangAIIorf14angMIIIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG14482795214419pSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。プラスミドpSG1448279521441936eryCIIIpSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBangMIeryCIIIの単離プラスミドpSG14482791441936eryCIIIno9をBglIIで消化し、約2kb断片を単離し、BglII消化したpSG14482795214419pSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG1448279521441936eryCIIIpSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBangMIeryCIIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。eryCIIIは末端にhisタグを有する。この構築物を使用し、標準的な手順を用いてSエリスラエアSGQ2を形質転換した。3OミカロシルエリスロノリドBから5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAへの生物転換Sエリスラエア株SGQ2pSG1448279521441936eryCIIIを増殖させ、供給した3OミカロシルエリスロノリドBを用いる生物転換を、一般的方法に記載したように実行した。培養物を分析し、mz750を有する少量の化合物の改善された量を検出し、これは5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAの存在と一致した。同様の結果を、遺伝子カセットpSG1448279521441936eryCIIIを含むSエリスラエア株Q421を用いて得た。mz750を有する16mgの化合物を精製し、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAの構造をNMR分析によって確認した表1および図1を参照されたい。実施例4:ミカミノシルチラクトンの単離プラスミドpSG1448279521441936tylMIIpSG144angAIangAIIorf14angMIIIangB36tylMIIの単離プラスミドpSG14482791441936tylMIIno9をBglIIで消化し、約2kb断片を単離し、BglII消化したpSG14482795214419pSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを大腸菌DH10Bを形質転換するために使用し、標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG1448279521441936tylMIIpSG144angAIangAIIorf14angMIIIangBangMItylMIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析によって確認した。tylMIIは末端にhisタグを有する。チラクトンからミカミノシルチラクトンへの生物転換Sエリスラエア株Q421pSG1448279521441936tylMIIを増殖させ、供給したチラクトンを用いる生物転換を、一般的方法に記載したように実行した。培養物を分析し、mz568を有する化合物を検出し、これはミカミノシルチラクトンの存在と一致した。実施例5:3OミカロシルエリスロノリドBの生物転換による、遺伝子カセットpSG144827914spnO52p41936tylMIIを使用する5Oデデソサミニル5OアンゴロサミニルエリスロマイシンAの単離プラスミドconvno1の単離活性制御遺伝子カセット中でのプロモーター配列の複数使用のために、240bp断片を、プライマーならびに鋳型としてプラスミドpSG142Gaisserら、2000使用するPCRによって増幅した。02kbPCR断片PCRno5を標準的なプロトコールおよびEcoRV消化したプラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドconvno1を単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGLit3relig1の単離プラスミドconvno1をNdeIBglIIで消化し、約02kb断片を単離し、BamHINdeI消化したpSGLit2のベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSGLit3relig1を単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSGlit3419の単離プラスミドLit419をNdeIXbaIで消化し、12kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit3のDNAにライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSGlit3419no23を単離した。この構築物をXbaIで消化し、14kb断片を遺伝子カセットのアセンブリーのために使用した。プラスミドLit64を単離することによるorf4のクローニング遺伝子orf4を、プライマーを使用してPCRによって増幅し、アンゴラマイシン生合成経路の断片を含むコスミド4H2を鋳型として使用した。25kbPCRフラグメントPCRno6を、標準的な手順およびEcoRV消化プラスミドLitmus28を使用してクローニングした。プラスミドLit64を、orf4の開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGlit264no9の単離プラスミドLit64をNdeIXbaIで消化し、DNAを単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit2のDNAにライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSGlit264no9を単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpUC19spnOを単離することによるspnOのクローニングサッカロポリスポラスピノサの生合成遺伝子クラスターからのspnO遺伝子を、プライマーならびに鋳型としてのSスピノサのゲノムDNAを使用するPCRによって増幅した。約15kbPCR断片を、標準的な手順およびSmaI消化したプラスミドpUC19を使用してクローニングした。プラスミドpUC19spnOno2を、spnOの開始コドンと重複するNdeI部位および終止コドンの後のXbaI部位を用いて単離した。この構築物を配列分析によって確認した。プラスミドpSGlit2spnOno4の単離プラスミドpUC19spnOをNdeIXbaIで消化し、15kb断片を単離し、NdeIXbaI消化したpSGLit2のDNAにライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌ET12567を形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSGLit2spnOno4を単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827914spnOpSG144angAIangAIIangMIIIsynOの単離プラスミドpSGLit2spnOno4大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、15kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914pSG144angAIangAIIangMIIIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSG144827914spnOpSG144angAIangAIIangMIIIsynOを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827914spnO52pSG144angAIangAIIangMIIIspnOangorf14の単離プラスミドpSGLit252no24大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、1kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914spnOpSG144angAIangAIIangMIIIsynOのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSG144827914spnO52pSG144angAIangAIIangMIIIspnOangorf14を単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827914spnO52p419pSG144angAIangAIIangMIIIspnOangorf14pangBの単離プラスミドpSGLit3419no23大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、約14kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914spnO52pSG144angAIangAIIangMIIIsynOangorf14のベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSG144827914spnO52p419pSG144angAIangAIIangMIIIspnOangorf14pangBを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。pはこの構築物中の複数のプロモーター部位の存在を強調するために、angBの前のプロモーター領域の存在を示す。プラスミドpSG144827914spnO52p41936eryCIIIpSG144angAIangAIIangMIIIspnOorf14pangBangMIeryCIIIの単離プラスミドpSG144827911936eryCIIIno9をBglIIで消化し、約2kb断片を単離し、BglII消化したpSG144827914spnO52p419pSG144angAIangAIIangMIIIspnOorf14pangBのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSG144827914spnO52p41936eryCIIIpSG144angAIangAIIangMIIIspnOorf14pangBangMIeryCIIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。eryCIIIは末端にhisタグ融合物を有する。pはこの構築物中の複数のプロモーター部位の存在を強調するために、angBの前のプロモーター領域の存在を示す。このプラスミド構築物を使用して、標準的な手順を用いてSエリスラエアの変異株を形質転換した。3OミカロシルエリスロノリドBから5Oデデソサミニル5Oアンゴロサミニルエリスロマイシンへの生物転換Sエリスラエア株Q421pSG144827914spnO52p41936eryCIIIを増殖させ、供給した3OミカロシルエリスロノリドBを用いる生物転換を、一般的方法に記載したように実行した。培養物を分析し、アンゴロサミニルエリスロマイシンD、BおよびAの存在とそれぞれ一致する、mz704、mz718およびmz734を有するピークを観察した。実施例6:5Oアンゴロサミニルチラクトンの産生プラスミドpSG144827914spnO52p41936tylMIIpSG144angAIangAIIangMIIIspnOorf14pangBangMItylMIIの単離プラスミドpSG14482791441936eryMIIno9をBglIIで消化し、約2kb断片を単離し、BglII消化したpSG144827914spnO52p419pSG144angAIangAIIangMIIIspnOorf14pangBのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的な手順を使用してプラスミドpSG144827914spnO52p41936tylMIIpSG144angAIangAIIangMIIIspnOorf14pangBangMItylMIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。tylMIIは末端にhisタグ融合物を有する。このプラスミドを使用し、標準的なプロトコールを適用してSエリスラエアの変異株を形質転換した。pはこの構築物中の複数のプロモーター部位の存在を強調するために、angBの前のプロモーター領域の存在を示す。Sエリスラエア18AIBIOT2634の単離PKSおよびPKS後遺伝子の大部分を含む欠失を、eryCIの部分を含むSエリスラエアのeryクラスターの左方向側の領域に導入するために、完全なermE遺伝子およびeryBI遺伝子の断片を、eryBVII遺伝子、完全なeryK遺伝子およびeryKに隣接したDNAの断片を含むeryクラスターの右方向側RHSの領域を用いて一緒にクローニングした。この構築物は、これらの2つのDNAの領域間に欠失を含む株の単離を生じる、LHS領域とRHS領域の両方におけるゲノムへの相同組換えを可能にするはずである。LHS断片2201bpを、Sエリスラエア染色体DNAを鋳型として、かつプライマーを使用してPCR増幅した。プライマーBIdelNdeはNdeI制限部位を含み下線部、プライマーBIdelSpeは、次のクローニング工程のために使用されるSpeI制限部位を含む。PCR産物をpUC19のSmaI制限部位にクローニングし、プラスミドpLSB177を標準的な手順を使用して単離した。この構築物を配列分析によって確認した。同様に、RHS2158bpを、Sエリスラエア染色体DNAを鋳型として、かつプライマーを使用するPCRによって増幅した。プライマーBVIIdelSpeはSpeI制限部位を含み、プライマーBVIIdelEcoはEcoRV制限部位を含む。PCR産物を、KpnIに隣接して配置されるSpeIおよびXbaIに隣接して配置されるEcoRVを有する方向でpUC19のSmaI制限部位にクローニングした。プラスミドpLSB178を単離し、配列分析によって確認した。標準的な方法を使用して、プラスミドpLSB177をNdeIおよびSpeIで消化し、~22kb断片を単離し、かつ同様にプラスミドpLSB178をNdeIおよびSpeIで消化し、~46kb断片を単離した。標準的な方法を使用して、両方の断片をライゲーションし、pUC19中でSpeI部位において合わせたLHSおよびRHSを一緒に含むプラスミドpLSB188を単離した。pLSB188からのNdeIXbaI断片~44kbpを単離し、SpeIおよびNdeI処理したpCJR24とともにライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的な方法を使用してプラスミドpLSB189を単離した。プラスミドpLSB189を使用してSエリスラエアP2338を形質転換し、形質転換体をチオストレプトンを使用して選択した。SエリスラエアDel18を単離し、6mlTSB培地に接種し、2日間増殖させた。5接種物を使用してこの株を3回継代培養した。100μlの最終培養物を使用してR2T20寒天にプレートし、次に30°Cでインキュベーションを行って胞子形成させた。標準的な手順を使用して、胞子を収集し、濾過し、希釈し、そしてR2T20寒天にプレートした。コロニーを、チオストレプトンの付加のあるなしで、R2T20プレート上でレプリカプレート作製した。チオストレプトン上でもはや増殖可能ではなかったコロニーを選択し、TSB培地中でさらに増殖させた。Sエリスラエア18AIを単離し、PCRおよびサザンブロット分析を使用して確認した。この株をLB1BIOT2634と名付けた。さらなる分析のために、エリスロマイシンの産生を、一般的方法において記載したように評価し、エリスロマイシン産生の欠如を確認した。生物転換アッセイにおいては、この株は、供給されたエリスロノリドBをさらに処理せず、エリスロマイシンDは予想された通りC12位で水酸化されてエリスロマイシンCを与え、このことは、EryKがなお機能的であったことを示した。チラクトンから5Oアンゴロサミニルチラクトンへの生物転換菌株SエリスラエアSGQ2pSG144827914spnO52p41936tylMIIを増殖させ、供給されたチラクトンを用いる生物転換を、一般的方法において記載したように実行した。培養物を抽出および分析した。アンゴロサミニルチラクトンの存在と一致する化合物を検出した。20mgのこの化合物を精製し、この構造をNMR分析によって確認した。アンゴロサミニルチラクトンと一致する化合物はまた、遺伝子カセットpSG144827914spnO52p41936tylMIIをSエリスラエア株Q421またはSエリスラエア18A1において発現させた場合に得られた。プラスミドpSG144827914spnOp52pSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14の単離プラスミドpSGLit352大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、挿入断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914spnOpSG144angAIangAIIangMIIIsynOのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827914spnOp52pSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14を単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827914spnOp52419pSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14angBの単離プラスミドpSGLit2419大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、挿入断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914spnOp52pSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14のベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827914spnOp52419pSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14angBを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827914spnOp5241936pSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14angBangMIの単離プラスミドpSGLit236大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、挿入断片を単離し、XbaI消化したpSG144827914spnOp52419pSG144angAIangAIIangMIIIsynOpangorf14angBのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827914spnOp5241936pSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14angBangMIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827914spnOp5241936angMIIpSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14angBangMIangMIIの単離プラスミドpSGLit1angMII大腸菌ET12567から単離したをXbaIBglIIで消化し、挿入断片を単離し、XbaIで消化しかつBglIIで部分消化したpSG144827914spnOp5241936pSG144angAIangAIIangMIIIsynOpangorf14angBangMIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827914spnOp5241936angMIIpSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14angBangMIangMIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。このプラスミドを使用して、標準的な手順を用いてSエリスラエアの変異株を形質転換した。SエリスラエアQ421pSG144827914spnOp5241936angMIIpSG144angAIangAIIangMIIIspnOpangorf14angBangMIangMIIを使用する生物形質転換チラクトンを供給する生物形質転換実験を、一般的方法において記載したように実行し、培養物を分析する。アンゴロサミニルチラクトンを検出する。プラスミドpSG144827964pSG144angAIangAIIangorf4の単離標準的なプロトコールを使用して、プラスミドpSG1448279pSG144angAIangAIIをXbaIで消化し、アルカリホスファターゼで処理した。このベクター断片を、XbaI処理したプラスミドpSGLit264no9とともにライゲーションのために使用し、次に標準的なプロトコールを使用して、大腸菌DH10Bの形質転換を行った。プラスミドpSG144827964pSG144angAIangAIIangorf4を標準的な手順を使用して単離し、この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827964p52pSG144angAIangAIIangorf4pangorf14の単離プラスミドpSGLit352大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、挿入断片を単離し、XbaI消化したpSG144827964pSG144angAIangAIIangorf4のベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827964p52pSG144angAIangAIIangorf4pangorf14を単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827964p5214pSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIの単離プラスミドpSGLit214大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、14kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827964p52pSG144angAIangAIIangorf4pangorf14のベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827964p5214pSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827964p5214419pSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIangBの単離プラスミドpSGLit2419大腸菌ET12567から単離したをXbaIで消化し、14kb断片を単離し、XbaI消化したpSG144827964p5214pSG144angAIangAIIpangorf4pangorf14angMIIIのベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827964p5214419pSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIangBを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。プラスミドpSG144827964p521441936angMIIpSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIangBangMIangMIIの単離プラスミドpSG144827914spnOp5241936angMIIをBglIIで消化し、約22kb断片を単離し、BglII処理したpSG144827964p5214419のベクター断片にライゲーションした。このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG144827964p521441936angMIIpSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIangBangMIangMIIを単離した。この構築物を制限消化および配列分析を使用して確認した。このプラスミドを使用して、標準的な手順を用いてSエリスラエアの変異株を形質転換した。SエリスラエアQ421pSG144827964p521441936angMIIpSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIangBangMIangMIIを用いる、チラクトンの生物転換チラクトンを供給する生物形質転換実験を、一般的方法において記載したように実行し、培養物を分析する。アンゴロサミニルチラクトンを検出する。実施例7:遺伝子カセットpSG144へのeryKのクローニングプラスミドpUC19eryKの単離eryKを増幅するために、プライマーを使用し、PCR産物をpUC19eryCVIについて記載したようにクローニングした。プラスミドpUC19eryKを単離した。プラスミドpLSB111pCJR24eryKの単離プラスミドpUC19eryKをNdeIXbaIで消化し、挿入バンドを、NdeIXbaI消化したpCJR24とともにライゲーションした。プラスミドpLSB111pCJR24eryKを単離し、この構築物を制限消化を用いて確認した。プラスミドpLSB115の単離プラスミドpLSB111pCJR24eryKをNdeIXbaIで消化し、挿入断片を、NdeIXbaI消化したpSGLit2のベクター断片とともにライゲーションし、プラスミドpLSB115を標準的なプロトコールを使用して単離した。このプラスミドを、制限消化およびDNA配列決定を使用して確認した。プラスミドpSG14482795214eryKの単離大腸菌ET12567からのプラスミドpLSB115をXbaIで消化し、挿入断片を、XbaI処理したpSG14482795214pSG144angAIangAIIangorf14angMIIIのベクター断片とともにライゲーションした。標準的な手順を用いて、このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG14482795214eryKpSG144angAIangAIIangorf14angMIIIeryKを単離した。この構築物を制限消化を使用して確認した。プラスミドpSG14482795214eryK419の単離大腸菌ET12567からのプラスミドpSGLit2419をXbaIで消化し、挿入断片を、XbaI処理したpSG14482795214eryKのベクター断片とともにライゲーションした。標準的な手順を用いて、このライゲーションを使用して大腸菌DH10Bを形質転換し、標準的なプロトコールを使用してプラスミドpSG14482795214eryK419pSG144angAIangAIIangorf14angMIIIeryKangBを単離した。この構築物を制限消化を用いて確認した。プラスミドpSG14482795214eryK41936eryCIIIの単離プラスミドpSG1448279521441936eryCIIIをBglIIで消化し、約21kb断片を、BglII処理したpSG14482795214eryK419のベクター断片とともにライゲーションした。プラスミドpSG14482795214eryK41936eryCIIIを標準的な手順を使用して単離し、この構築物を制限消化を用いて確認した。このプラスミドを使用して、標準的な手順を用いてSエリスラエアの変異株を形質転換した。3OミカロシルエリスロノリドBから5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAへの生物転換Sエリスラエア株Q421pSG14482795214eryK41936eryCIIIを増殖させ、3OミカロシルエリスロノリドBを供給する生物転換を、一般的方法において記載したように実行する。この培養物を分析し、mz750を有する化合物が検出され、このことは、5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAの存在と一致した。実施例8:13デセチル13メチル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよびB;13デセチル13イソプロピル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよびB;13デセチル13secブチル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよびBの産生13デセチル13メチル3OミカロシルエリスロノリドB、13デセチル13イソプロピル3OミカロシルエリスロノリドBおよび13デセチル13secブチル3OミカロシルエリスロノリドBの産生DEBS1のローディングモジュールがアベルメクチン生合成クラスターのローディングモジュールによって置き換えられている、DEBS1遺伝子、DEBS2遺伝子およびDEBS3遺伝子を含むpCJR24ベースのプラスミドである、プラスミドpLS025WO03033699を使用して、標準的な技術を使用してSエリスラエアJC2ΔeryCIII以前に記載された技術およびプラスミドRoweら、1998;Gaisserら、2000を使用して単離したを形質転換した。形質転換体JC2ΔeryCIIIpLS025を単離し、培養物を標準的なプロトコールを使用して増殖させた。SエリスラエアJC2ΔeryCIIIpLS025の培養物を、一般的方法の節に記載されている方法を使用して抽出し、粗抽出物中の3OミカロシルエリスロノリドB、13デセチル13メチル3OミカロシルエリスロノリドB、13デセチル13イソプロピル3OミカロシルエリスロノリドBおよび13デセチル13secブチル3OミカロシルエリスロノリドBをLCMS分析によって確認する。13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよびB;13デセチル13イソプロピル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよびB;13デセチル13secブチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよびBの産生SエリスラエアJC2ΔeryCIIIpLS025の培養物を、一般的方法の節に記載した方法を使用して抽出し、粗抽出物を5mlのメタノールに溶解し、次にSエリスラエア株SGQ2pSG1448279521441936eryCIIIの上清に、標準的な技術を使用して供給する。13デセチル13メチル3OミカロシルエリスロノリドB、13デセチル13イソプロピル3OミカロシルエリスロノリドBおよび13デセチル13secブチル3OミカロシルエリスロノリドBから、13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンB;13デセチル13イソプロピル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび13デセチル13イソプロピル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンB;13デセチル13secブチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび13デセチル13secブチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンBへの生物転換を、LCMS分析によって確認する。実施例9:13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンB13デセチル13メチル3OミカロシルエリスロノリドBの産生DEBS1遺伝子、DEBS2遺伝子およびDEBS3遺伝子を含むpCJR24ベースのプラスミドである、プラスミドpIB023特許出願第01250430号を使用して、標準的な技術を使用してSエリスラエアJC2ΔeryCIIIを形質転換した。形質転換体JC2ΔeryCIIIpIB023を単離し、培養物を標準的なプロトコールを使用して増殖させ、抽出し、そして粗抽出物を、一般的方法の節に記載した方法を使用してアッセイした。3OミカロシルエリスロノリドB、および13デセチル13メチル3OミカロシルエリスロノリドBをLCMS分析によって確認する。13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンA、13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンBの産生SエリスラエアJC2ΔeryCIIIpIB023の培養物を、一般的方法の節に記載した方法を使用して抽出し、粗抽出物を5mlのメタノールに溶解し、次にSエリスラエア株SGQ2pSG1448279521441936eryCIIIの上清に、標準的な技術を使用して供給する。13デセチル13メチル3OミカロシルエリスロノリドBから、13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンAおよび13デセチル13メチル5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンBへの生物転換を、LCMS分析によって確認する。実施例10:5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンの産生アジスロマイシンアグリコンを、EP1024145A2PfizerProductsIncGrotonConnecticutに記載される方法を使用して調製した。Sエリスラエア株SGT2pSG142を、以前に記載された技術およびプラスミド構築物を使用して単離したGaisserら、2000。供給実験を、以前に記載された方法Gaisserら、2000を使用して、Sエリスラエア変異体SGT2pSG142を用いて実行し、このようにして、アジスロマイシンアグリコンを3Oミカロシルアジスロマイシンに転換する。生物形質転換実験を、SエリスラエアSGC2pSG1448279521441936eryCIIIを使用して実行し、3Oミカロシルアジスロノリドを含む粗抽出物を、標準的な微生物学的技術を使用して加える。3Oミカロシルアジスロノリドから5Oデデソサミニル5Oミカミノシルアジスロマイシンへの生物転換を、LCMS分析によって確認する。実施例11:5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンCの産生Sエリスラエア変異体SGP1SGQ2ΔeryGの単離eryGにおける染色体欠失を作製するために、構築物pSGΔG3を以下のように単離した:断片1をプライマーを使用して増幅し、かつSエリスラエアのゲノムDNAを鋳型として使用した。断片2をプライマーを使用して増幅し、かつSエリスラエアのゲノムDNAを鋳型として使用した。両方のDNA断片をSmaI切断したpUC19に、標準的な技術を使用してクローニングし、プラスミドpUCPCR1およびpUCPCR2を単離し、そして増幅断片の配列を確認した。プラスミドpUCPCR1を、EcoRIXbaIを使用して消化し、挿入バンドDNAを単離し、EcoRIXbaI消化したpUC19にクローニングした。プラスミドpSGΔG1を標準的な方法を使用して単離し、SphIXbaIで消化し、次にSphIXbaI消化したpUCPCR2の挿入断片をライゲーションを行った。プラスミドpSGΔG2を標準的な手順を使用して単離し、SphIHindIIIで消化し、そしてチオストレプトン耐性をコードする遺伝子を含むpCJR24Roweら、1998のSphIHindIII断片とライゲーションした。プラスミドpSGΔG3を単離し、以前に記載された方法Gaisserら、1997;Gaisserら、1998を使用して、Sエリスラエア株SGQ2のゲノム中でeryGを欠失させるために使用し、Sエリスラエア変異体SGP1SGQ2ΔeryGを作製する。5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンCの産生Sエリスラエア株SGP1SエリスラエアSGQ2ΔeryGを標準的な技術を使用して単離し、結果として以前に記載したカセット構築物pSG1448279521441936eryCIIIを形質転換するために使用する。Sエリスラエア株SGP1pSG1448279521441936eryCIIIを単離し、実施例2と同様に生物形質転換のために使用し、アッセイを上記のように実行して、3OミカロシルエリスロノリドBから5Oデデソサミニル5OミカミノシルエリスロマイシンCへの転換を、LCMC分析によって確認する。実施例12:3OアンゴロサミニルエリスロノリドBの産生SエリスラエアQ421pSG144827914spnOp5241936angMIIエリスロノリドBを供給する生物形質転換実験を、一般的方法に記載されるように実行し、培養物を分析した。アンゴロサミニル化エリスロノリドBを検出した。約30mgの3OアンゴロサミニルエリスロノリドBを単離し、その構造をNMR分析によって確認した。Sエリスラエア18A1pSB144827964p521441936angMIIpSG144angAIangAIIangorf4pangorf14angMIIIangBangMIangMIIを用いるエリスロノリドBの生物転換エリスロノリドBを供給する生物形質転換実験を、一般的方法に記載されるように実行し、培養物を分析した。アンゴロサミニル化エリスロノリドBに特徴的なピークを検出した。参考文献