"タンパク質の一次アミノ酸配列を変えることなく前記タンパク質の機能を調節する方法であって、前記方法は、a前記タンパク質のコドン使用頻度を変える工程と、b精製タンパク質を得るために、変えられた前記コドン使用頻度を使用して前記タンパク質を発現させる工程と、c前記変えられたコドン使用頻度を用いて発現されるタンパク質と、前記変えられたコドン使用頻度を用いずに発現されるタンパク質とを比較する工程とを備え、機能の増強又は新たな機能の同定は、前記タンパク質の前記機能が調節されたことを示すことを特徴とする方法。タンパク質の一次アミノ酸配列を変えることなく、増強された又は新たな機能を備えるタンパク質を調製する方法であって、前記方法は、a前記タンパク質のコドン使用頻度を変える工程と、b精製タンパク質を得るために、変えられた前記コドン使用頻度を使用して前記タンパク質を発現させる工程と、c前記変えられたコドン使用頻度を用いて発現されるタンパク質と、前記変えられたコドン使用頻度を用いずに発現されるタンパク質とを比較する工程とを備え、機能の増強又は新たな機能の同定は、増強された機能及び新たな機能を備えるタンパク質が調節されたことを示すことを特徴とする方法。請求項1又は2記載の方法によって調製される前記タンパク質。独特な二次または三次構造を有する請求項3記載のタンパク質。変えられたコドンを有する合成遺伝子であって、前記合成遺伝子が発現される時、増強された機能又は新たな機能を有するタンパク質を生成することを特徴とする合成遺伝子。請求項5記載の合成遺伝子を備えることを特徴とするベクター。請求項5記載の合成遺伝子を備えることを特徴とする発現系。請求項5記載の合成遺伝子を備えることを特徴とする宿主細胞。請求項3又は4記載のタンパク質及び適切な担体を備えることを特徴とする組成物。請求項3又は4記載のタンパク質及び薬学的に許容可能なキャリヤーを備えることを特徴とする医薬組成物。本発明はタンパク質の空間構造を調節する方法を提供する。まず、上流の構築に於いて、宿主コドンの使い方に基づいて、目的タンパク質をコードするアミノ酸コドンを選び出す。その中から空間構造が変えられる組合せを選んで、形質導入できる、多種の異なるベクターを構築する。これにより、適当的なベクターや宿主が選ばれる。また、プロモータのコドン配列と目的タンパク質のコドン配列とを組み合わせることにより、ベクターのプロモータに対して、スクリーニングを行う。適当な発現宿主を選択して、目的タンパク質を発現させ、再生、純化した後、活性と空間構造を検定する。本発明は、タンパク質を構築する過程に於いて、目的タンパク質のアミノ酸をコードするコドンの変化、選択されるベクター、プロモータの変化及び宿主発現ベクターの選択、変性及び再生試薬及び工業技術の条件などは全て目的タンパク質の空間構造を調節できる因子であることを見出した。そこで、タンパク質の空間構造を調節して、新たな機能を獲得する、また活性を高めることは系統的に調節された結果である。本発明は、一次アミノ酸配列を変えることなく、タンパク質の構造を調節する方法を提供する。以下のステップを含む:a上記タンパク質をコードするコドンを変える、b変えられたコドンにより、目的タンパク質を発現させ、及び精製する、また、c変えられたコドンによる発現されたタンパク質は、元のコドンによる発現されたタンパク質を比べると、その機能が増強され、または、新たな機能を有する。即ち、タンパク質の機能が変えられる。一つの実施例において、コドンの変化によりタンパク質の発現量が高められる。本発明は、一次アミノ酸配列を変えることなく、機能が増強され、または、新たな機能を有するタンパク質を調製する方法を提供する。以下のステップを含む:a上記タンパク質をコードするコドンを変える、b変えられたコドンにより、目的タンパク質を発現させ、及び精製する、また、c変えられたコドンによる発現されたタンパク質は、元のコドンによる発現されたタンパク質を比べると、その機能が増強され、または、新たな機能を有する。一つの実施例において、コドンの変化によりタンパク質の発現量を高められる。本発明は以上記載される方法により調製されたタンパク質も提供する。具体的には、上記のタンパク質は独特な二次または三次構造を有する。本発明は変えられるコドンにより合成される遺伝子を提供する。それを発現させると、元の機能が増強され、または新たな機能を生じる。具体的には、本発明は上記の遺伝子を含有するベクターを提供する。より具体的には、本発明は上記の遺伝子を含有する発現システムを提供する。また、本発明は上記の遺伝子を含有する宿主細胞を提供する。本発明は元の機能が増強される、または新たな機能を有する上記タンパク質の生産方法を提供する。以下のステップを含む:選択されたコドンを含む組換え遺伝子を適当宿主に挿入して、その宿主細胞を適当的な培養条件で培養し、発現産物を収穫する。該プロセスに於いて、人工遺伝子配列を適当なベクターに入れる。また、発酵液からタンパク質を抽出し、或いは封入体を収集して、収穫するタンパク質を変性及び再生する。本発明は何れかの上記方法で生産されたタンパク質を提供する。本発明は何れかの上記方法で生産されたタンパク質及び適当なキャリヤーを含む組成物を提供する。本発明は何れかの上記方法で生産されたタンパク質及び適当な薬用キャリヤーを含む薬用組成物を提供する。本発明の意味は以下の通りである。本発明の技術を用いて、治療作用を持つ遺伝子を遺伝子組換え技術により、タンパク質を創造する過程において、タンパク質の空間構造を調節して、そのタンパク質に該遺伝子の機能を持たせ、または、従来の遺伝子組換え技術により生産されたタンパク質が持たない機能や活性を持たせる。インターフェロンを例として、人類IFNα遺伝子を逆転写発現ベクターに構築され、PDORIFNα発現ベクターを得る。そして、2215細胞に形質移入し、細胞の培養液中のHBsAg、HBeAgを測定する。結果として、rSIFNcoはHBsAg、HBeAgに対して抑制率がそれぞれ62、677になることが示された。しかし、通常遺伝子組換え技術により得られた組換えインターフェロンタンパク質は体外でinvitroHBsAg、HBeAgの分泌を抑制する作用を有しない。また、逆転写ウィルスベクターにより人類IFNα2の発現ベクターが構築され、HIV細胞株―A301細胞内に形質移入して発現し、IFNα2が完全にHIV―DNAの複製と転写を抑制できることは証明される。しかし、インターフェロンを用いて、HIV感染を治療する場合には、その効果は有限である。下記の例を通して、本発明をよりよく理解することになる。しかしながら、当業者の分かるように、議論される具体的な方法と結果は請求の範囲に記載される発明の例証のみである。インターフェロンの構造を新たに構築するIFNconは人類IFNαのサブタイプの保存性conservativeアミノ酸に基づいて、遺伝工学の方法により構築された新たなインターフェロン分子である。アメリカ特許4695263、4897471に於いて、このインターフェロンが記載された。rSIFNcoは幅広いインターフェロン活性を持ち、強い抗ウィルス、抗腫瘍及び自然キラー細胞の活性を有する。本発明に於いて、大腸菌のコドンの頻度codonusageに基づいて、その遺伝子コドン配列を新たに設計し、PHY4ベクターに構築し、PBADプロモータを用いて、下流の発現を調節する。宿主は大腸菌とする。産物は6molLグアニジン塩酸により変性→4molLアルギニン再生→POROSHSM―カチオンカラム交換クロマトグラフィ→銅イオン親和クロマトグラフィの純化を経て、高い純度の目的タンパク質が得られる。B型肝炎のHBVDNA、及びHBsAg、HBeAgの分泌を抑制する二重の実験により、IFNconlと比べると、rSIFNcoはIFNconlが持たないHBsAgHBeAgの分泌の抑制作用を有する。また、HBVコア前ゲノムCPプロモータとシス調節配列と共にルシフェラーゼの上流に置いて、リポートプラスミドを構築して、HepG2細胞に形質移入する。そして、異なるインターフェロンでその細胞を処理して、ルシフェラーゼのリポート遺伝子の発現量を測定した結果、rSIFNcoはルシフェラーゼのリポート遺伝子の発現量の抑制率が68であり、対照としてのIFNconl及びIFNα2bはそれぞれただ35及び27である。そこで、HBcAgを抑制する作用が明らかに高くなる。また、円二色性スペクトルによりrSIFNcoとIFNconlとの二次構造が違うことは証明されている。以下は具体的な比較実験:1円二色性スペクトルの比較実験場所:四川大学の分析測定センター装置:J500CCircularDichroismequipment2rSIFNcoはHBV-DNAの複製、およびHBsAgとHBeAgの分泌を抑制する。材料溶媒及び調製方法:実験の薬物を調整する時、各バイアルに生理食塩水を1mlずつ入れて、溶解した後、異なる濃度のMEM培養液と混合される。現場で混合する。対照薬品:ScheringPlough会社製IFNα2bIntronAは凍結乾燥製剤で、3×106U各が培養液で3×106IUmlになるように混合する。Amgen社製INFERGEN水溶液は、9μg、03ml各、9×106IUに相当量が、培養液で9×106IUmlになるように混合し、4°Cの冷蔵庫に保存された。2215細胞:HBVのDNAを人肝癌細胞HepG2にクローンした2215細胞株、米国MountSinai医学センターで構築された。試薬:MEMパウダー、アメリカGibco社製;牛胎児血清、アメリカHycloneLab社製;G418Geneticin、MEMで調製、アメリカGibco社製;Lグルタミル、JINGKE化学試薬会社の輸入品;HBsAg、HBeAg固相放射免疫キット、中国アイソトープ会社北方免疫試薬研究所から入手;Biograncetina、華北製薬工場製;Lipofectin、アメリカGibco社製。実験用品及び装置:培養ボトル、デンマークTunclonTM;96ウェル培養プレート、24ウェル培養プレート、アメリカCorning社製;二酸化炭素の孵卵器、アメリカShel-Lab製品。MEM培養液100ml:牛胎児血清10、グルタミン003、G418380μgml、Biograncetina50Uml。実験方法2215細胞の培養:2215細胞がコンフルエントになった培養ボトルに膵酵素025を入れて、37°Cで3分消化し、培養液を入れてピペッティングして、1:3で継代培養、10日でコンフルエントになる。毒性実験:実験は薬物なし細胞対照群と異なる試薬濃度群と分けられる。細胞消化、10万個細胞mlになるように細胞溶液を調製する、96ウェル培養プレートに播く、200μlウェル、37°C5CO2で24時間培養する、細胞が一層になってから、実験を行う。rSIFNcoは培養液で18×107IUmlになるように調製され、2倍に希釈して96ウェルの細胞培養プレートに入れ、同濃度を3ウェルずつに入れ、4日毎に同濃度の薬液を交換する。細胞変性を指標として、8日後に顕微鏡でそれらを観察する:完全破壊が4;75が3;50が2;25が1;変化なしが0とする。異なる濃度の薬液で平均の細胞変性の程度及び抑制率を計算する。ReedMuench法により半数有毒濃度TC50と最大無毒濃度TC0を計算する。Alog50薬物濃度Blog50薬物濃度Blog50薬物濃度Clog希釈倍数3空間構造が変えられたrSIFNcoが2215細胞培養でのHBsAg、HBeAgに対する選択指数SI。4ttestにより各希釈濃度HBsAg、HBeAgと対照群のcpmの差異を計算する。Southernblot:12215細胞内のHBV-DNAの抽出:試薬を入れてから、2215細胞を8日培養して、培養液を吸って細胞を回収する。それに細胞溶解液を入れて、細胞を溶解する。同体積フェノール:クロロホルム:イソアミルアルコール1:1:1で2回抽出して、10000gで高速遠心し、上清を取り、無水エタノールで核酸を沈殿させて、真空乾燥し、20μlTEバッファーに溶解する。2電気泳動:6×DNAサンプルバッファー液を入れて、サンプルを15アガロースゲルにIVcm、固定電圧で14-18時間電気泳動する。3変性、ハイブリダイゼーション:ゲルをそれぞれHCl、変性液、中和液に浸す。4トランスメンブレン:手順によりDNAをHybond-N膜にトランスファする。ドットブロットハイブリダイゼーションと共に膜を焼き、ハイブリダイズ、感光する。それをスキャンして、gelproソフトウェアで相対密度を分析して、抑制率及びIC50を計算する。結果本発明は実験の結果表1、表2、表3を参照の示すように:最大な毒なし濃度を2215細胞に入れたサンプルを8日培養し、rSIFNcoの90±0×106IUmlサンプルはHBeAgに対して平均抑制率が460±525P<0001,IC50が454±132×106IUml、選択指数SIが396であった。HBsAgに対して平均抑制率が448±66,IC50が649±042×106IUml、選択指数SIが277である。従って、rSIFNcoはB型肝炎の表面抗原とe抗原を明らかに抑制する活性を有するが、対照群インターフェロンとINFERGENは上記活性を有していなかった。臨床症例に於いても、慢性活動性B型肝炎の患者はrSIFNcoを用いて、B型肝炎の表面抗原とe抗原を低減して、または正常のレベルに回復する。異なるインターフェロンによるB型肝炎ウィルスの遺伝子の発現を抑制効果の比較B型肝炎ウィルスHBVDNAはトランスアクティベイティングタンパク質の共通配列を有する。このタンパク質の結合活性はインターフェロンによって調節される。HBVを形質導入された肝細胞はインターフェロンによりHBV遺伝子の発現が抑制される。本研究の目的は異なるインターフェロンによるHBV転写に対する影響を調べる。HBVのエンハンサーEnHI、EnHIIとコアプロモータに調節される蛍のルシフェラーゼ遺伝子を含むリポートプラスミドreportorplasmidにより、一時的に人肝癌細胞に形質導入して、三種のインターフェロンの転写活性への影響を調べた。材料と方法1インターフェロン:IFNconlInfergen、IFNHui-YangrSIFNco及びIFN-beta1b。2リポートプラスミド:PCRでI、EnHIIとコアプロモータを含むDNA断片を用意して、末端をブランティングして、それをpGL3―BasicPromega、WIUSAのエンハンサーとプロモータなしの蛍のルシフェラーゼ遺伝子のSmaIサイトにクローニングして、生じたリポートプラスミドはpGL3―HBVLucと命名される。3細胞培養とDNAの形質移入:HepG2細胞をDMEM培養液に培養して、培養液に10FBS、100Umlペニシリン、100μgmlストレプトマイシンを追加する。細胞を30°C5CO2のインキュベータに置く。Boehringerの脂質体形質移入キットを用いて、pGL3―HBVLucリポートプラスミドを細胞に形質移入する。18時間を経て、形質移入の薬剤を有する培地を吸って、インターフェロンが有る、またはない新鮮な培地を入れて、また48時間培養する。4ルシフェラーゼの分析:インターフェロンを入れて48時間後、細胞を回収、破砕する。該細胞溶解産物のタンパク質濃度をBio-Radタンパク質分析キットで測定して、Promegaのルシフェラーゼリポート分析システムにより、製造者に提供されたプロトコールに従って、ルシフェラーゼ活性の測定を行った。実験結果異なるインターフェロンにより溶菌産物のルシフェラーゼの発現以上の結果の示すように:rSIFNcoはB型肝炎ウィルス遺伝子の発現を効果的に抑制できる。rSIFNcoを用いた体温変化と副作用従来のインターフェロンを用いると多くの副作用がある。その副作用は、例えば吐き気、筋肉痛、食欲不振、脱髪、白血球や血小板の減少などである。方法:受検者は2群に分けられる。A群の10名の受検者は9μgのrSIFNcoを注射する、B群の11名の受検者は9μgのINFERGENを注射する。注射後、2群の受検者は全て48時間の臨床観察を行う。注射1時間後、第一回観察結果を記録して、そして2時間ごとに一回の観察記録を行う。表4には9μgのrSIFNcoと9μgのINFERGENとを注射して、その副作用の比較を記録したものを示す。結論:rSIFNcoを注射する受検者の副作用がより小さくて、その副作用は一般的なインフルエンザ様の症状で、例えば、頭痛、虚弱、悪寒、筋肉痛、発汗、関節痛。INFERGENを注射した受検者の副作用は明らかにrSIFNcoを注射した受検者より悪かった。図4A1、4A2、4B1、4B2から分かるように、B群受検者の体温は明らかにA群検験者より高い、rSIFNcoがINFERGENより良い耐性を有することが明らかになった。rSIFNcoの結晶成長及び結晶学パラメータの測定rSIFNcoの結晶研究。系統的な模索や実験を経て、二種類の結晶を獲得した図5-7を参照。1結晶成長rSIFNcoタンパク質を純水で、終濃度3mgmlになるように溶解する。最初の結晶条件の捜索はHampton社のHamptonResearchCrystalScreenIandIIを使う。蒸気拡散法を用いて、液500μl、液滴1μlタンパク質1μl液、温度293K。表5に示すように、二種類の異なるタイプの小さい結晶が得られてきた。2.データの採集と処理結晶IはX線回折データの収集と最初の結晶学分析を行って、結晶学のパラメータの測定が完成された。回折データ収集は常温で行って、結晶I条件Iを薄い壁の石英管に封入した。BrukerAXSSmartCCD探測機を用いて、NoniusFR591のX線発生器より産生されたCuKα放射線λ=15418Åを光源として使用した。光源の出力は2000KW40Kv×50mA、波長100Å、感光時間60秒、Δφ=2Å、結晶と探測機の間の距離は50mmである。データ処理はBruker社のProteumProcedurePackageにより行った。結晶の回折グラフ局部は図7に示す。処理結果は表6に示す。また、発表されたインターフェロンタンパク質の結晶化条件に基づいて、rSIFNcoの結晶化を試みたが、何れも結晶が成長しなかった。rSIFNcoと最も接近する一次構造87同等huIFNα2bのスクリーンは非常に複雑である。三回接種を経て、結晶は05×05×03mmまでに成長し、その解像力が29Åで、空間群がP21で、晶胞も大きく、非対称単位内に六つの分子があり、溶解は約60であった。"