"眼の角膜混濁を治療する方法であって、EP2アゴニスト、EP4アゴニストおよびその組み合わせからなる群より選択される治療有効量の化合物を含む組成物を投与することにより、角膜混濁を治療する方法。角膜混濁は光学的角膜切除術PRK、レーシックLASIK、またはレーザー上皮細胞屈折矯正術LASEKにより発生する請求項1に記載の方法。化合物はEP2アゴニストである請求項1に記載の方法。化合物はEP4アゴニストである請求項1に記載の方法。化合物は点眼薬、軟膏、クリームまたは眼内移植によって局所的に投与される請求項1に記載の方法。以下の構造の治療有効量の化合物を含む組成物を投与することにより眼の角膜混濁を治療する方法であって、式中、破線はそれぞれ二重結合の存在または非存在を示し、R1、R2およびR3はそれぞれ独立してHまたはC1-C6は直鎖アルキルから選択され、R4はH、C1-C6アルキル、C1-C6アルケニル、その塩、またはそのアミンであり、XおよびYはそれぞれ独立してH、OH、=O、Cl、Br、IまたはCF3から選択され、Z1およびZ2はそれぞれ独立してCHまたはNから選択され、W1およびW2はそれぞれ独立してCH、CH2、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールから選択され、mは0~4であり、pは0または1であり、oは0~4であり、およびVはCH3、アリール、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールであって、投与により角膜混濁を治療する方法。Vはであり、式中、R5はハロゲン、C1-C6アルキル、またはC1-C6アルケニルであり、nは0~7であり、およびUはSまたはOである請求項6に記載の方法。nは1、UはSおよびR5はClである請求項6に記載の方法。W2はチオフェンである請求項6に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項6に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項6に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項6に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項6に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項6に記載の方法。当該角膜に組成物を投与することにより角膜の透明性を維持する方法であって、当該組成物はEP2アゴニスト、EP4アゴニスト、およびその組み合わせからなる群から選択される化合物を含む方法。組成物をPRK、LASIK、またはLASEKから選択される施術の前、最中または後に投与する請求項15に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項15に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項15に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項15に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項15に記載の方法。化合物は以下の構造である請求項15に記載の方法。治療有効量のEP2アゴニスト、EP4アゴニスト、またはその組み合わせを含む組成物を投与することにより眼内で線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害し、投与により線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害する方法。線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害することにより、角膜混濁を予防または減少させる請求項22に記載の方法。線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害することにより、角膜の透明性を維持する請求項22に記載の方法。組成物を矯正方法の前、最中または後に投与する請求項22に記載の方法。矯正方法はPRK、LASIK、またはLASEKである請求項24に記載の方法。特定の用語については本明細書で使用するとき以下に記載する次の定義を参照することを意図する。用語の定義が使用されることの多い意味と異なる場合、特に明示しない限り、本出願では以下の定義を使用することを意図する。約は限定する数、パラメータまたは指数のプラスまたはマイナス10パーセントを意味する。アルキルは、本明細書で使用するとき、1~最大約100個の炭素原子がある直鎖、分岐鎖、または環状ヒドロカルビル基を意味する。1~4、またはC1-C4のような数字の範囲は、本明細書ではいかなる場合も、所与の範囲の各整数を意味し、例えばC1-C4アルキルは、アルキル基が炭素原子1個だけ、炭素原子2個、炭素原子3個、または炭素原子4個を含み得る。しかしアルキルという用語はまた、炭素原子に数値範囲がない場合も含む。置換アルキルは水素、重水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、複素環式、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、ハロゲン、ハロアルキル、シアノ、ニトロ、アミノ、低級アルキルアミノ、低級ジアルキルアミノ、アミド、アジド、アシル-COR6、アルコキシメチル、メルカプト-S-R6、スルホキシ-SO-R6、スルホニル-SO2-R6、スルホンアミド-SO2NR62、カルボナート-OCO-O-R6、オキシアシル-OCO-R6、カルボキシル-COOH、エステル-COOR6、カルバマート-OCO-NR62から一般的に選択される置換基を持つアルキル部分を意味し、R6はHまたは低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、アリール、ヘテロアリール、複素環等である。低級アルキルは、本明細書で使用するとき、1~約4個、または1~約6個の炭素原子があるアルキル部分を意味する。アルケニルは、本明細書で使用するとき、少なくとも1つの炭素炭素二重結合、および約2~最大約100個の炭素原子を持つ直鎖、分岐鎖または環式ヒドロカルビル基を意味する。置換アルケニルは、上述の1つ以上の置換基をさらに持つアルケニル基を意味する。低級アルケニルは、本明細書で使用するとき、1~約6個の炭素原子を持つアルケニル部分を意味する。アルキニルは、本明細書で使用するとき、少なくとも1つの炭素炭素三重結合、および約2~最大約100個の炭素原子を持つ直鎖または分岐鎖ヒドロカルビル基を意味する。置換アルキニルは、上述の1つ以上の置換基をさらに持つアルキニル基を意味する。低級アルキニルは、本明細書で使用するとき、2~約4個または2~約6個の炭素原子を持つアルキニル部分を意味する。シクロアルキルは、本明細書で使用するとき、約3~最大約8個の炭素原子を一般的に含む環式すなわち環を含むアルキル部分を意味する。置換シクロアルキルは、上述の1つ以上の置換基をさらに持つシクロアルキル基を意味する。アリールは、本明細書で使用するとき、6~最大14個の炭素原子を持つ芳香族基を意味し、置換アリールは上述の1つ以上の置換基をさらに持つアリール基を意味する。ヘテロアリールは、本明細書で使用するとき、環構造の部分として1つ以上のヘテロ原子例えばN、O、S等を含み、環構造に計5~最大14個の原子すなわち炭素原子およびヘテロ原子を持つ芳香族部分を意味する。置換ヘテロアリールは、上述の1つ以上の置換基をさらに持つヘテロアリール基を意味する。複素環式または複素環は、本明細書で使用するとき、環構造の部分として1つ以上のヘテロ原子を含み例えばN、O、S等、3~最大14個の炭素原子を持つ非芳香族環式すなわち環を含む基を意味する。置換複素環式または置換複素環は上述の1つ以上の置換基をさらに持つ複素環式基または複素環を意味する。ハロゲンまたはハロゲン化物は、本明細書で使用するとき、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物F、Cl、BrまたはIを意味する。フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードはまた、トリフルオロメチルといったハロゲン化された置換基を意味するとき、用いられ得る。ヒドロキシアルキルは、本明細書で使用するとき、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル等のようなアルキル-OHを意味する。アルキルアシルは、本明細書で使用するとき、エタノン、プロパノン等のようなアルキルケトンを意味する。薬学的に許容される塩は、本明細書で使用するとき、親化合物の活性を保つ任意の塩を意味し、投与される対象に、および親化合物と比較して投与される文脈で、その他の有害かつ都合の悪い影響を与えない。薬学的に許容される塩はまた、酸、もう1つ別の塩、または酸または塩に変換するプロドラッグを投与した結果、invivoで形成され得る任意の塩を意味する。さらに、薬学的に許容される塩は、生物学的な効果および遊離塩基の特性を保ち、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、pトルエンスルホン酸、サリチル酸等のような無機酸と反応することにより得られる塩を意味する。酸性の官能基の薬学的に許容される塩は有機塩基または無機塩基に由来する。塩は一価または多価イオンを含み得る。具体的には無機イオン、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウムを対象とする。有機塩はアミン類、具体的にはモノ-、ジ-およびトリアルキルアミン類またはエタノールアミン類といったアンモニウム塩で作られ得る。塩はまたカフェイン、トロメタミンおよび類似の分子と形成され得る。塩酸またはいくつかの他の薬学的に許容される酸は、アミンまたはピリジン環のような塩基性基を含む化合物と塩を形成する。用語治療有効量は、本明細書で使用するとき、研究者、獣医師、医師またはその他の臨床医が見つける医薬組成物を必要とする対象の生物学的または医薬的反応を引き出す医薬組成物の量を意味する。本開示は角膜混濁を治療するすなわち予防するまたは減少させるための組成物または方法を提供し、EP2アゴニスト、EP4アゴニストまたはその組み合わせを含む。また、角膜の透明性を維持し、線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害する方法も開示する。角膜混濁はまた、角膜薄濁、角膜白濁、角膜の不透明性、および角膜上皮下の混濁を意味する。角膜混濁は、例えばエキシマレーザーフォトアブレーションの後に創傷が治癒する過程によって誘発される角膜実質の変化に起因する。角膜の筋線維芽細胞の産生は、角膜混濁を形成する役割を担う初期の生物学的イベントであることが最近明らかになっている。筋線維芽細胞は収縮性の高い細胞で、減少した透明度が細胞内のクリスタリン生成の低下に起因し得る。治癒過程で、TGF-β1が静止状態の角膜実質細胞を角膜の線維芽細胞および筋線維芽細胞へと形質転換するトリガーをかけ、細胞外基質タンパク質類の新しい合成を刺激する。EP2アゴニストおよびEP4アゴニストがTGF-β1が誘導する線維芽細胞から筋線維芽細胞への形態学的な形質転換を防ぐことができることがわかっている。いかなる特定の理論に縛られることを望むものではないが、透明性を少なくする筋線維芽細胞の数の減少により、角膜の混濁の発現を減少すると考えられる。したがって、EP2および/またはEP4アゴニストの投与により、線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を減少させることができ、角膜混濁の形成を予防または減少させることができる。この点について、1つの実施形態では治療有効量のEP2および/またはEP4アゴニストを投与することにより、線維芽細胞から筋線維芽細胞への形質転換を阻害する方法を提供する。EP2および/またはEP4アゴニストは当該形質転換を阻害し、さらに角膜混濁の形成を治療する。もう1つ別の実施形態では、治療有効量のEP2および/またはEP4アゴニストを含む開示の組成物は角膜の透明性を維持するために眼に投与することができる。いかなるEP2および/またはEP4アゴニストも開示の方法に用いることができる。つまり、請求される方法では、EP2受容体に選択的な化合物すなわち化合物I、II、およびIIIおよびEP4受容体に選択的な化合物すなわち化合物IVおよびV、およびEP2受容体とEP4受容体の双方を刺激する非選択的な化合物を使用できる。特定の実施形態では、以下の構造式Iの治療有効量の化合物を含む組成物を投与することを含む方法を本明細書に開示し、式中、破線はそれぞれ二重結合の存在または非存在を示し、R1、R2およびR3はそれぞれ独立してHまたはC1-C6は直鎖アルキルから選択され、R4はH、C1-C6アルキル、C1-C6アルケニル、その塩、またはそのアミンであり、XおよびYはそれぞれ独立してH、OH、=O、Cl、Br、IまたはCF3から選択され、Z1およびZ2はそれぞれ独立してCHまたはNから選択され、W1およびW2はそれぞれ独立してCH、CH2、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールから選択され、mは0~4であり、pは0または1であり、oは0~4であり、およびVはCH3、アリール、アリールまたは置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールである。1つの実施形態では、Vは以下であり、式中、R5はハロゲン、C1-C6アルキル、またはC1-C6アルケニルであり、nは0~7であり、およびUはSまたはOである。もう1つ別の実施形態では、nは1であり、UはSであり、R5はClである。1つの実施形態では、W2はチオフェンである。もう1つ別の実施形態では、化合物は以下の構造である。もう1つ別の実施形態では、化合物は以下の構造である。実施形態ではさらに以下の構造の化合物を提供する。特定の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物Iを含む。もう1つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物IIを含む。もう1つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物IIIを含む。もう1つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物IVを含む。もう1つ別の実施形態では、組成物は治療有効量の以下の化合物Vを含む。特定の実施形態では、化合物を組み合わせて用いることができる。例えば、1つの実施形態では、2つ以上のEP2アゴニストを投与する。もう1つ別の実施形態では、2つ以上のEP4アゴニストを投与する。もう1つ別の実施形態では、EP2アゴニストおよびEP4アゴニストを投与する。いかなる化合物の数および組み合わせも、開示の方法にしたがって用いることができる。本明細書に開示の方法で使用するのに適した開示の化合物およびその他の化合物を調製する方法は、例えば、Dondeら、10,10-DialkylProstanoicAcidDerivativesasAgentsforLoweringIntraocularPressure、米国特許第6,875,787号、Dondeら、10,10-DialkylProstanoicAcidDerivativesasAgentsforLoweringIntraocularPressure、米国特許公開2004/0235958、Dondeら、TreatmentofInflammatoryBowelDisease、米国特許公開2005/0164992に認めることができ、それぞれ参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。開示の組成物は眼に局在的に、すなわち局所的または眼内に投与されることができる。局所的な処方として、軟膏、クリーム、ゲル、溶液、懸濁液等が挙げられる。例えば、治療を必要とする眼に開示の溶液を1回以上滴下投与することによって、溶液の局所的な投与ができる。眼内への投与は、眼の前部に生分解性の移植片を配置することによって可能である。開示の化合物を含む医薬組成物の調製は、治療有効量の本開示に記載の少なくとも1つの化合物、または活性成分として薬学的に許容可能な塩を、通常の眼に許容可能な医薬賦形剤を混合することによって、および眼球への局所的な使用に適した単位剤形を調製することによって可能である。治療に効率的な量は、一般的には液体製剤中に約0.0001~約5w/v、好ましくは約0.001~約1.0w/vである。特定の実施形態では、点眼液は主要なビヒクルとして生理食塩溶液を用いて調製できる。他の実施形態では、ビヒクルとして、限定されないが、ポリビニルアルコール、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポロキサマー類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよび精製水が挙げられる。このような点眼液のpHは、好ましくは、適切な緩衝系で約4.5~約8.0または約6.5~7.2で維持されるものである。製剤はまた、通常の薬学的に許容可能な防腐剤、等張化剤および界面活性剤を含んでもよい。点眼液に使用するのに適した防腐剤として、限定されないが、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀および硝酸フェニル水銀が挙げられる。界面活性剤の例としてTween80が挙げられる。等張化剤は必要性または要求にしたがって添加してもよい。適した等張化剤として、限定されないが、塩類、特定の塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、グリセリンまたはその他の適した眼に許容可能な等張化剤が挙げられる。結果として得られる製剤が眼に許容可能であれば、pHを調節するための種々の緩衝液および方法を用いることができる。したがって、緩衝液として、酢酸塩緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸塩緩衝液およびホウ酸緩衝液が挙げられる。必要に応じて製剤のpHを調節するために酸または塩基を用いてもよい。組成物はさらに1つ以上の眼に許容可能な抗酸化剤を含むことができる。適した抗酸化剤として、限定されないが、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチルヒドロキシアニソールおよびブチルヒドロキシトルエンが挙げられる。眼の製剤中に含まれ得るその他の賦形剤にはキレート剤がある。許容可能なキレート剤の非限定的な例として、エデンテート二ナトリウムがあるが、その他のキレート剤を適切にまたは組み合わせて用いてもよい。特定の実施形態では、表1に示す量で成分を用いることができる。上述のように、局所投与に加えてまたはその代わりに、組成物は眼内への移植片を経由して投与することができる。移植片は角膜を治療するための任意の適切な眼部位、一般的には前部に配置することができる。こうした眼内への移植片の配置または挿入は当該技術分野に公知である。移植片は好まれる薬剤の遊離プロファイル、使用される特定のEP2および/またはEP4アゴニスト、治療される眼の状態、および患者の病歴にしたがって変更することができる。移植片の大きさ長さ、幅、奥行きが過剰に組織を傷つけず、移植片を移植または挿入される患者の現状の視覚を不当に物理的に妨げることなく、挿入または移植できる程度であれば、当該移植片は前部の眼球領域または部位すなわち角層化の挿入に挿入または移植するのに適している。開示の移植片は生分解性のポリマーの中に分散される本明細書に開示の化合物を少なくとも1つ含む。このような移植片の産生は当該分野に良く知られており、眼内移植片を作る方法はいずれも本明細書に熟慮されるものである。用いられる生分解性のポリマーマトリックスの選択は所望される遊離動態、患者の耐性等によって変更される。考えられるポリマーの特性として、限定されないが、移植部位での生体適合性および生分解性、対象の活性薬剤との適合性、および処理温度が挙げられる。生分解性のポリマーマトリックスは通常、移植片の少なくとも約10、少なくとも約20、少なくとも約30、少なくとも約40、少なくとも約50、少なくとも約60、少なくとも約70、少なくとも約80、または少なくとも約90重量パーセントを含む。1つの変動では、生分解性のポリマーマトリックスは移植片の約40重量を含む。使用され得る生分解性のポリマーマトリックスは、限定されないが、有機エステル類またはエーテル類のようなモノマー類から作られるポリマー類であり、分解すると、生理学的に許容可能な分解生成物となる。無水物類、アミド類、オルソエステル類等が単体でもしくはその他のモノマーと結合して用いられることもある。ポリマー類は一般的に縮合ポリマーである。ポリマー類は架橋されてもよいし、架橋されていなくともよい。架橋されている場合、通常、せいぜいわずかに架橋されている程度で、架橋の割合は5未満であり、通常1未満である。大部分で炭素と水素の他に、ポリマー類は酸素および窒素、具体的には酸素を含む。酸素はカルボン酸エステル等のように、オキシ、例えばヒドロキシ、またはエーテル、カルボニル、例えば、非オキソカルボニルとして示され得る。窒素はアミド、シアノ、およびアミノとして示され得る。ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー類、ホモポリマー類またはコポリマー類のいずれか、および多糖類を用いることができる。ポリエステル類のうち、D-乳酸、L-乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、カプロラクトンおよびその組み合わせのホモポリマー類またはコポリマー類が挙げられる。グリコール酸および乳酸のコポリマー類が具体的な対象であり、生分解性の割合はグリコール酸と乳酸の比によって制御される。polylactic-co-glycolicacidPLGA中の各モノマーの割合は0~100、約15~85、約25~75、または約35~65であり得る。好ましい変動では50/50PLGAコポリマーを用いる。特定の実施形態では、50/50PLGAのランダムコポリマーを用いる。局所的または眼内投与のために、同じもしくは別々の組成物中に、その他の活性剤を本明細書に開示される化合物と共役して利用することができる。このようなその他の活性剤として、限定されないが、ACE阻害薬、内因性サイトカイン、基底膜に影響を与える薬剤、内皮細胞の成長に影響を与える薬剤、アドレナリン作動性のアゴニストまたはブロッカー、コリン作動性のアゴニストまたはブロッカー、アルドース還元酵素阻害剤、鎮痛剤、麻酔薬、抗アレルギー薬、抗炎症薬、降圧薬、昇圧薬、抗菌薬、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗原虫薬、抗感染症薬、抗腫瘍薬、代謝拮抗薬、抗血管新生薬、チロシンキナーゼ阻害薬、抗生物質、鎮痛剤、抗アレルギー薬、抗寄生虫薬、抗アメーバ剤、抗真菌薬、血管新生阻害化合物抗緑内障剤、抗腫瘍薬、代謝拮抗薬、免疫抑制剤、プロテアーゼ阻害薬、および種々の増殖因子が挙げられる。開示の組成物はPRK、LASIK、またはLASEKのような矯正方法の施術前、最中、後に投与することができる。施術後の投与として矯正方法の完了時、および/または施術から数時間、数日、数週間、数ヶ月後に1回の用量が挙げられる。角膜混濁の発現を予防または低下させることのできる期間に、投与を継続することができる。さらに、必要に応じて組成物を片目または両目に投与することができる。同じような状態に置かれた患者に一般的に発現する角膜混濁の量または重症度が全体的に減少しまたは予防されるとき、角膜混濁は治療されたことになる。例えば、矯正方法の後に一般的に発現する角膜混濁の程度は、治療している近視の状態の重症度に比例する。そのため、近視の状態が重症の患者では、角膜混濁の発現が同じような状態に置かれた患者に一般的に発現する量より少なければすなわち、約90、80、70、50、40、30、20、または10未満、治療したと考えられる。したがって、治療には矯正方法の後に角膜混濁の発現を予防または減少させることを含む。点眼製剤は、点眼器を装着した容器のように、眼に容易に適用するために計量の適用に適した剤形に梱包することができる。滴下に適した容器は通常、適した不活性、非毒性のプラスチック材料で作られ、一般的に約0.5~約15mlの溶液を含有する。1つの梱包に1つ以上の単位用量を含有してもよい。本明細書に用いられる患者は任意の哺乳動物であり得、一般的にはヒトである。ヒトの年齢、性別または民族は問わない。実施例1EP2およびEP4アゴニストはTGF-β1が誘導する筋線維芽細胞の形質転換を阻害する。方法。ヒト胎児皮膚線維芽細胞、ヒト成人皮膚線維芽細胞および成人のケラチノサイトをアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関ATCCから購入した。細胞を5のCO2存在下、37°Cで、10ウシ胎児血清、1ペニシリンおよびストレプトマイシンと共に、高グルコースダルベッコ変法イーグル培地DMEMに培養した。EP2およびEP4アゴニスト媒介シグナル伝達を試験するために、セルを10cmの培養皿に蒔いた。培養密度が90に達したとき、EP2アゴニスト化合物IIIおよびEP4アゴニスト化合物Iによってそれぞれ100nMと10nMで、または指示した時間ポイントでビヒクルによって細胞を処理した。細胞可溶化液をウエスタンブロット法解析に用いた。事前に設置したカバーグラスを有する6ウェルのプレートに成人の皮膚ケラチノサイトを蒔いた。80の培養密度のケラチノサイトは、100nMのEP2アゴニスト化合物III、または10nMのEP4アゴニスト化合物Iで、2.5時間にわたり、Akt阻害剤のある場合とない場合とで処理した。BrdUを培養の最後の30分で添加した。その後、細胞は抗BrdU免疫細胞化学で染色し、4’,6-ジアミジノ-2-フェニルインドールDAPIで共に染色した。BrdU陽性細胞は、200倍の拡大率下で少なくとも5フィールド内にDAPIで染色した細胞で定量化した。筋線維芽細胞の形質転換アッセイを実施するために、成人皮膚線維芽細胞を培養密度が70になるまで培養し、リン酸緩衝塩類溶液PBSで洗浄し、血清のない培地で48時間飢餓状態にした。飢餓状態の後、細胞は、新鮮な血清のない培地SigmaAldrich社、米国のTGF-β1中、2ng/mlのTGF-β1単独、または100nMの化合物V、10nMの化合物II、またはビヒクルと組み合わせて96時間にわたり処置した。細胞可溶化液は試験の最後に回収し、ウエスタンブロット法を実施し、筋線維芽細胞のマーカーであるα平滑筋アクチンα-SMAの発現をモニターした。細胞は氷冷のPBSで3回洗浄し、脱リン酸化酵素阻害薬およびプロテアーゼ阻害剤Invitrogen社、サンディエゴ、カリフォルニア州を含有する溶解緩衝液で溶解した。可溶化液中のタンパク質レベルを定量化したビシンコニン酸BCAタンパク質アッセイキット、ピアス社、米国。ウエスタンブロット法について、等量のタンパク質を各レーンに適用し、電気泳動にかけた。電気泳動溶解の後のゲル結合タンパク質を硝酸セルロース膜上に移し、その後抗pAKT、抗pERK1/2、およびHRP共役第二抗体でハイブリダイズした。標的タンパク質に関連する蛍光シグナルを蛍光感受性フィルムCellsignalingTechnology社、ビバリー、マサチューセッツ州の曝露上に検知した。膜はベンダーが提供する緩衝液で取り除かれ、抗AKT、抗ERK1/2、およびHRP共役第二抗体と同じ手順にかけた。α-SMAの発現レベルを計測するために、マウスの抗α-SMA抗体を1:1000希釈で用いたSigmaAldrich社、米国。ハウスキーピング遺伝子であるβアクチンもまた、負荷量の内部対照として同じ膜上に定量化した。筋線維芽細胞の形質転換アッセイを実施するために、成人皮膚線維芽細胞を培養密度が70になるまで培養し、PBSで洗浄し、血清のない培地で48時間飢餓状態にした。飢餓状態の後、細胞は、新鮮な血清のない培地SigmaAldrich社、米国のTGF-β1中、2ng/mlのTGF-β1単独、または100nMの化合物III、10nMの化合物I、またはビヒクルと組み合わせて96時間にわたり処置した。細胞可溶化液は試験の最後に回収し、ウエスタンブロット法を実施し、筋線維芽細胞のマーカーであるα平滑筋アクチンα-SMAの発現をモニターした。正常な筋線維芽細胞は、血清のない培地図1~2に培養後6日経過しても、検知できるα-SMA筋線維芽細胞のマーカーのない細い紡錘形であった。この期間、TGF-β1による処置では細胞の大きさが数倍に増加し、筋線維芽細胞の典型的な生体マーカーである細胞質のα-SMA陽性張力線維を誘導した。EP4またはEP2アゴニストと共におこなったTGF-β1の処置では、α-SMA陽性張力線維が有意に減少したが、細胞の大きさは有意に変化しなかった。ウエスタンブロット法の結果は、TGF-β1がわずかに検知可能な基礎レベルからα-SMAの発現を顕著に増加させた形態学的な変化は一貫しており、EP2アゴニストによる処置ではα-SMAの発現が約50まで減少し、EP4アゴニストでは75近くまで減少した。明示しない限り、成分の量を示す全数字、分子量、反応状態といった特性、本明細書および請求項に用いるもの等は、用語約によって全例に修正されることを理解されたい。したがって、反対のことを明示しない限り、本明細書および付随する請求項に記載の数字によるパラメータは、本発明によって得られようとする所望の特性によっては変更し得る近似値である。少なくとも、請求項の範囲に均等論を適用することを制限するものではなく、各数字によるパラメータは報告される有意な数字の数の観点から、および通常の丸め技法を適用することにより、少なくとも解釈されるものである。本発明の広義の範囲に記載されている数字の範囲およびパラメータは近似値であるとはいうものの、特定の実施例に記載の数値はできるだけ正確に報告する。しかしながら、いずれの数値も生来、個々の試験測定に認められる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を含む。本発明を記述する文脈具体的には以下の請求項の文脈に用いる用語a、an、theおよび類似の指示対象は、他に明示しない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数と複数の両方を含むと理解されるものである。本明細書に値の範囲を詳述するのは、範囲内に収まる各値を個別に言及する簡略な方法としての役割を果たすことを意図するだけである。明示しない限り、個別の値は本明細書にあたかも個々に詳述されたかのように、本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法は残らず、他に明示しない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書中の任意および全実施例、または例示を示す言い回し例えば~のようなを用いることは、本発明をもっと明らかにすることを意図するだけであり、別に請求された本発明の範囲を制限しない。本明細書のいかなる言い回しも、本発明の実施に不可欠の請求されていない任意の要素を示していると解釈されるものではない。本明細書に開示される発明の代替要素または実施形態の群は、制限であると解釈されるものではない。各群の要素は個別に、または群のその他の要素もしくは本明細書に認められるその他の要素と組み合わせて言及され、請求され得る。群の1つ以上の要素は、利便性および/または特許要件の理由から、群に含まれたり、群から削除されたりすることが予想される。このような包含または削除が生じるとき、本明細書は修正された群を含むとみなされ、添付の請求範囲に用いる全マーカッシュ群の記述を満たす。本発明の特定の実施形態は、本発明を実施するために発明者に公知の最良の態様を含んで、本明細書に記載される。記述の実施形態の変形形態が以下に先の記述を読む当業者に明白になることは当然である。技術に長けた当業者がこのような変形形態を適切に用いることを期待し、本発明が本明細書に具体的に記述されたものとは別の方法で実施されることを意図する。したがって、本発明は、準拠法によって許可される本明細書に添付の請求項に詳述される主題の修正およびそれに相当するものをすべて含む。さらに、可能性のあるあらゆる変形形態の中の上述した要素の組み合わせはいずれも、他に明示しない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、本発明に包含される。本明細書に開示される特定の実施形態は、言い回し~からなるまたは本質的に~からなるを用いた請求項の中でさらに制限され得る。請求項に用いられるとき、出願時または補正ごとに加えられるかして、移行用語~からなるは、請求項に明記されていない要素、ステップ、または成分はいずれも除外する。移行用語本質的に~からなるは、明記された材料またはステップ、および基本的かつ新規の特徴複数可に実質的に影響を与えないものに請求の範囲を制限する。このように請求された本発明の実施形態は、固有にまたは特別に記述され、本明細書に有効である。さらに、当該明細書にわたって特許および印刷された刊行物に対する参照はいずれも、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。最後に、本明細書に開示される発明の実施形態は本発明の原理を説明することを理解されたい。使用され得るその他の修正は本発明の範囲内にある。本発明の代替構成が、実施例の方法により、限定されないが、本明細書の教示にしたがって利用され得る。したがって、本発明は正確に示され記述されるものに限定されない。"