"少なくとも5mgmLのCDRAPと、荷電アミノ酸とを備え、前記CDRAPタンパク質が直接に溶解されている安定水性製剤。前記アミノ酸は、pH6から8までにおいて正味電荷を有する請求項1に記載の製剤。緩衝剤をさらに備えている請求項1又は2に記載の製剤。浸透圧修飾剤をさらに備えている請求項1~3のいずれか1項に記載の製剤。安定剤をさらに備えている請求項1~4のいずれか1項に記載の製剤。賦形剤をさらに備えている請求項1~5のいずれか1項に記載の製剤。pH6から8までである請求項1~6のいずれか1項に記載の製剤。前記荷電アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン、リジン及びグルタミン酸からなる群から選択される請求項1に記載の製剤。凍結乾燥freezedriedlyophilized又はスプレードライされ得る請求項1~8のいずれか1項に記載の製剤。前記製剤の成分により繰り返しの凍結融解サイクルに対する安定性が付与されている請求項1~9のいずれか1項に記載の製剤。治療に用いるための請求項1~10のいずれか1項に記載の製剤。炎症性疾患、好ましくは骨関節炎の治療に用いるための請求項1~11のいずれか1項に記載の製剤。請求項1~12のいずれか1項に記載の製剤を備えているキット。少なくとも30mgmLのCDRAPを備え、前記緩衝剤は、リン酸カリウム、Tris塩化物、ヒスチジン、アルギニン及びグルタミン酸塩からなる群から選択され、前記アミノ酸は、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩好ましくはグルタメートリン酸塩、アルギニン好ましくはアルギニンリン酸塩又はアルギニン塩化物、ヒスチジン好ましくはヒスチジン塩化物又はヒスチジンリン酸塩、リジン及びグリシンからなる群から選択される請求項1~13のいずれか1項に記載の製剤。少なくとも30mgmLのCDRAPと、50mMのTris塩化物及び25のグルタミン酸塩;50mMのヒスチジン及び25のグリシン、25のグルタミン酸塩若しくは25のリジンと;300mMのヒスチジン塩化物pH60;50mM、100mM、200mM若しくは300mMのヒスチジンリン酸塩pH60;350mMのアルギニン塩化物pH60350mMのアルギニンリン酸塩pH60350mMのアルギニンリン酸塩pH74又は300mMのグルタミン酸カリウムpH60とを備えている請求項1~14のいずれか1項に記載の製剤。なお、図3~図11において、棒グラフの凡例に加えられた番号は、グラフに示された各ブロックのバーに関する左から右。例えば、0は左の外側のバーに関し、1は0で示されたバーの隣のバーに関する等である。以下の実施例は、本発明を説明する。高用量の注射により引き起こされる痛み等の副作用を低減するように、患者に低用量の注射を可能とするために、高濃度のCDRAPの安定製剤を目標とする発明者等の検討に基づいて、種々の製剤がCDRAPタンパク質の安定化における影響について試験された。それらの製剤のいくつかは、以下の実施例に代表的に示される。しかしながら、本明細書で述べられるように、発明者等の目的を用いて始める場合、それぞれのタンパク質が異なる特性を有するので、どの成分が適するものであるという一例から結論は出せないため、その目的に合う製剤の適当な成分を見出すための実験を行う必要がある。実施例実施例1:rhCDRAPのための種々の緩衝剤系の分析rhCDRAPは、36の緩衝剤系に対して透析された緩衝剤は50mM塩化カリウム、50mMヒスチジン塩化物又は50mMTris塩化物、それぞれpH6.0で、各緩衝剤は、0.1Tween20を含む又は含まないスクロース、マンニトール、グリシン、リジン及びグルタミン酸から選択される安定剤を含む又は含まない。濾過により30mgmLにまでrhCDRAPを透析する物質濃縮するプロセスの間、サンプルは、UV/Visにより分析された。安定製剤は、凍結融解サイクルによりストレスが与えられた。各サイクルの後、サンプルに遠心法を行い、rhCDRAPはUV/Visにより定量化された。透析2.0mlのrhCDRAPバルク材料350mMアルギニン/リン酸塩pH7.4は、6~8kDaの分子量のカットオフチューブを用いて、適度に撹拌しながら4°Cで24時間、500mLの所望の緩衝剤に対して透析された。16時間後、透析緩衝剤は、500mLの新鮮な緩衝剤に交換された。その結果生じたタンパク質溶液は、更なる分析のために2~8°Cで保存された。UV-Visサンプル中のタンパク質量は、13000rcfで5分間、透析されたrhCDRAPに対して遠心法を行った後に、UV/Visにより測定された。対応するサンプル緩衝剤は、ブランクの減算のために測定された。タンパク質濃度mgmlの算出のために、280nmにおける吸光度及び280nmにおけるrhCDRAPの特定の吸収率1649mLが用いられた。rhCDRAPの濃度の増大透析されたrhCDRAPは、2mLの遠心濃縮機に移された。遠心ステップ4000rcf4°Cの後、rhCDRAP溶液の容量を減らした。残存するrhCDRAP溶液の容量を測定し、rhCDRAP濃度をUV/Visにより定量化した。熱安定性凍結融解サイクルrhCDRAPの熱安定性を、超低温フリーザーを用いて5°Cから-25°Cの5回の凍結融解サイクルを行って評価した。冷却及び加熱速度は、1.0°Cminであり、各サイクルの間には15分の等温ステップを行った。そのタンパク質溶液を、分析まで4°C~8°Cで保存した。濃度が30mgmLの300μlrhCDRAPを1.5mLPPバイアルの中に移し、上述のように規定された凍結融解ステップによりストレスを与えた。実施例2:種々の緩衝剤系中のrhCDRAPの安定性実施例1の全ての緩衝剤系の安定化効果を測定した。リン酸カリウム緩衝剤系以下の物質を最終質量が1kgとなり、緩衝剤濃度が50mMになるようにWFIに溶解した。pHは、KOH及びHClをそれぞれ加えることによりpH60に調整した。a6.8gのリン酸カリウム、12.4gのKClを含み、1.0gのTween80を含まないb6.8gのリン酸カリウム、50gのスクロース、4.9gのKClを含み、1.0gのTween80を含まないc6.8gのリン酸カリウム、50gのマンニトール、1.0gのTween80を含む及び含まないd6.8gのリン酸カリウム、25gのグリシン、1.0gのTween80を含む及び含まないe6.8gのリン酸カリウム、25gのグルタミン酸、1.0gのTween80を含む及び含まないf6.8gのリン酸カリウム、25gのリジン、1.0gのTween80を含む及び含まないg61.0gのアルギニン、リン酸でpH7.4に調整コントロール必要であれば、塩化カリウムにより300~400mOsmkgの等張性を調整した。各緩衝剤のモル浸透圧濃度を表1に示す。表1:リン酸カリウム緩衝剤のモル浸透圧濃度rhCDRAPを表1に示された緩衝剤系に基づくリン酸カリウムに対して透析し、濾過ユニットでの遠心法により濃縮した。規定された緩衝剤の連続的な低減の後、維持された容量のタンパク質溶液を測定し、rhCDRAP濃度をUV/Visにより定量化した。図3は、5mgmLのCDRAP溶液の透析の前及び後、並びに10、20及び30mgmLに濃縮した後の、CDRAPの濃度を示す。アルギニン/リン酸緩衝剤をコントロールとした。図3に示すように、アルギニン/リン酸塩緩衝剤系中の製剤は、全ての濃縮ステップにおいて最適な可溶性を示した。最も高い濃縮ステップでさえ、測定されたタンパク質量は、rhCDRAPの理論上の量に達した。従って、rhCDRAPのためのアルギニン/リン酸塩中に同量のタンパク質があるため、この緩衝剤は、最も好ましい可溶化溶液の1つである。アルギニン/リン酸塩と対照的に、製剤の緩衝剤としてのリン酸カリウムの使用は、十分な可溶性に達するための特別な添加物を必要とした。50mMのリン酸カリウム等張状態に達するためにイオン性添加物として塩化カリウムを含むが、10mgmLのrhCDRAPまでは良好な可溶性を示したので、30mgmLのrhCDRAP及びそれ以上のレベルの濃度における可溶性に達するために添加物の追加の必要がある。広い範囲の安定剤から、スクロースのみが30mgmLの濃度においてさえもrhCDRAPの優れた可溶性を引き起こす。他は、種々の濃縮ステップにおける部分的に目に見える沈殿したタンパク質が生じた凝集現象を示した。Tris緩衝剤系可溶性増強剤としてのTween80を含める又は含めないで、スクロース、マンニトール、グリシン、グルタミン酸及びリジン等の種々の安定剤とTris塩化物をWFIに溶解し、最終重量を1kgにし、緩衝剤濃度を50mMとした。それぞれ、追加のHClを用いることにより、pH6.0に調整した。a6.05gのTrisbase、9.7gのNaClを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないb6.05gのTrisbase、50gのスクロース、3.9gのNaClを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないc6.05gのTrisbase、50gのマンニトールを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないd6.05gのTrisbase、25gのグリシンを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないe6.05gのTrisbase、25gのグルタミン酸を含み、1.0gのTween80を含む及び含まないf6.05gのTrisbase、25gのリジンを含み、1.0gのTween80を含む及び含まない必要であれば、塩化カリウムにより300~400mOsmkgの等張性を調整した。各緩衝剤のモル浸透圧濃度を表2に示す。表2:Tris緩衝剤のモル浸透圧濃度rhCDRAPを上記のリン酸カリウム緩衝剤の場合において記載したように、透析し30mgmLにまで濃縮した。最適な可溶性のためのコントロールとして350mMアルギニンリン酸塩緩衝剤を用いた。リン酸カリウム緩衝剤の場合と比較して、2.5グルタミン酸を含む50mMTris塩化物を除くすべてのTris塩化物緩衝剤は、5mgmL以上のCDRAPで乏しい可溶性を示した。ヒスチジン緩衝剤系可溶性増強剤としてのTween80を含める又は含めないで、スクロース、マンニトール、グリシン、グルタミン酸及びリジン等の種々の安定剤とヒスチジン塩化物50mM、pH6.0を他の2つの緩衝剤系における上記と同様の方法を用いて分析した。a7.76gのL-ヒスチジン塩化物、12.4gのKClを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないb7.76gのL-ヒスチジン塩化物、50gのスクロース、4.9gのKClを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないc7.76gのL-ヒスチジン塩化物、50gのマンニトールを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないd7.76gのL-ヒスチジン塩化物、25gのグリシンを含み、1.0gのTween80を含む及び含まないe7.76gのL-ヒスチジン塩化物、25gのグルタミン酸を含み、1.0gのTween80を含む及び含まないf7.76gのL-ヒスチジン塩化物、25gのリジンを含み、1.0gのTween80を含む及び含まない必要であれば、等張性を調整した。最終モル浸透圧濃度を表3に示す。表3:ヒスチジン塩化物緩衝剤のモル浸透圧濃度rhCDRAPを上記緩衝剤系において透析し、30mgmLにまで濃縮した411を比較。リン酸カリウム及びTris緩衝剤の両方と比較し、ヒスチジン塩化物緩衝剤では、アルギニンリン酸塩と並んで、rhCDRAPの最も良好な可溶性を生じさせた。5mgmL以上のrhCDRAPが凝集した50mMヒスチジン/-Tween80を除いて、他の全ての緩衝剤は、pH6.0及び中性pH周辺の等張緩衝剤で30mgmLまで非常に良好な可溶性を示した。また、分析した緩衝剤系でTween80の使用によるrhCDRAPの可溶性に対する影響はなかった。結論凝集することなく30mgmLまで高濃度のタンパク質を提供するCDRAPの最も良好な結果は、以下の通りであった。それは、a5スクロースを含む50mMリン酸カリウム、b2.5グルタミン酸を含む50mMTris塩化物、c2.5グリシンを含む50mMヒスチジン、d2.5グルタミン酸を含む50mMヒスチジン,e2.5リジンを含む50mMヒスチジン、f5マンニトールを含むヒスチジン、及びg350mMアルギニンリン酸塩である。ほとんど全ての実験された製剤において、所望の濃度を5mgmLに下げると、タンパク質の安定性を得られたが、濃度を30mgmLに上げると、クリアされるためのハードルを得た。実施例3:凍結融解サイクルによる種々の緩衝剤系中のrhCDRAPの熱安定性の評価実施例1では、pH6.0で30mgmLまでのrhCDRAPのための7つの緩衝剤の形態を評価した。これらの緩衝剤形態は、ストレス状態、すなわち凍結融解サイクルにおけるrhCDRAPの安定性の維持について試験された。rhCDRAPを、a5スクロースを含む50mMリン酸カリウム、b2.5グルタミン酸を含む50mMTris塩化物、c2.5グリシンを含む50mMヒスチジン、d2.5グルタミン酸を含む50mMヒスチジン、e2.5リジンを含む50mMヒスチジン、f5マンニトールを含むヒスチジン、及びg350mMアルギニンリン酸塩の緩衝剤系で透析し、続いて、rhCDRAPを~30mgmLにまで濾過ユニットでの遠心法により濃縮した。300μlを1.5mLのPPバイアルに移した。その製剤に5回の凍結融解サイクルによりストレスを与え、凝集したrhCDRAPを遠心法を行った後に除去し、残った可溶性rhCDRAPをUV/Visにより定量化した。rhCDRAPを全ての試験される緩衝剤系中に30mgmL程度に首尾よく濃縮した。図6は、50mMリン酸カリウム/5スクロース中のrhCDRAPを除く全ての製剤において、凍結融解サイクルによりタンパク質濃度に負の影響はないことを示す。50mMリン酸カリウム/5スクロースの場合のみ3回の凍結融解プロセスの後にrhCDRAPの顕著な低減が認められ、一時的に濁った乳状体の分散が見られた。他の全ての製剤において、それぞれの凍結融解サイクルの後に溶液は清澄であり、UV/Visによる定量化の結果と組み合わせて、高濃度のrhCDRAPの可溶性及び安定性の問題は解決した。驚くことに、少なくとも1つのアミノ酸を含む緩衝剤系だけは、凍結融解サイクルの後にrhCDRAPの熱安定性を示した。実施例4:rhCDRAP30mgmLに対する種々のアミノ酸の安定化効果実施例2及び3では、アミノ酸を含む緩衝液中の30mgmLのrhCDRAPの優れた安定性を示したので、この特別なアミノ酸の効果を以下の実施例で試験した。ヒスチジン及びアルギニン等の塩基性アミノ酸、グリシン等の中性アミノ酸、及びグルタミン酸等の産生アミノ酸に対して、rhCDRAPの安定化効果についての試験を行った。全てのバルク溶液を、塩又は他の賦形剤の添加なしにpH6.0で等張に調製する。pHを塩酸及びリン酸を用いて調整した。さらに、350mMアルギニンリン酸塩をpH60及びpH7.4で試験した。表4:種々の緩衝剤中で凍結融解サイクルによりストレスが与えられたrhCDRAPrhCDRAPを表4に示す緩衝剤系で透析し、続いて、rhCDRAPを~30mgmLの濃度に濾過ユニットでの遠心法により濃縮した。300μlを1.5mLのPPバイアルに移した。表4に示した製剤に対して、上記の実施例に従って、5回の凍結融解サイクルによりストレスを与えた。遠心法を行った後に凝集したrhCDRAPを除去し、残った可溶性rhCDRAPをUV/Visにより定量化した。図7は、1つの除いて、全ての緩衝剤系の優れた安定化効果、及び凍結融解サイクルでのrhCDRAPの可溶性を示す。150mMグリシンで透析されたrhCDRAPは、透析ステップの際に量的に凝集した。従って分析された唯一の非荷電アミノ酸であるpH60のグリシンは、rhCDRAPバルク緩衝剤の調製のためのアミノ酸の使用において、アミノ酸の電荷が重要な技術的性質であることを示す。しかしながら、リン酸緩衝剤及び塩化物緩衝剤の両方は、同様であった。実施例5:グリシン中のrhCDRAPの可溶性における種々のpHの影響中性の性質のため、pH60の等張グリシン溶液中のrhCDRAPの乏しい可溶性を実施例4では示した。そこで、本発明者等は、グリシンが非荷電であるがpHの変化に起因するより高い正味電荷及びCDRAPそれぞれのより高い正味電荷をrhCDRAPが備える場合のCDRAPの可溶性の結果を測定した。図8は、pKs値による、種々のpH値でのグリシン及びrhCDRAPの両方の正味電荷を示す。この試験において、rhCDRAPをpH4.0、pH6.0及びpH8.0における150mMのグリシンに対して透析した。リン酸及び水酸化ナトリウムのそれぞれを用いて、pH値を調整した。pH6及びpH8の緩衝剤の中で透析されたrhCDRAPは、凝集の強い傾向を示した。これらの溶液は、非乳状の清澄な外観を示すグリシンpH4溶液と対照的に、乳状の外観を有した。rhCDRAPを30mgmLpH4.0に濃縮し、続いて、5回の凍結融解サイクルによりストレスを与えた。その後、遠心法により凝集したrhCDRAPを除去し、残存した可溶性rhCDRAPをUV/Visにより定量化した。遠心工程の際にフィルタが塞がる結果として、pH6.0及びpH8.0のrhCDRAP溶液により低い濃度で直接にストレスを与えた。図9は、酸性条件下、例えばpH40でのタンパク質の正味電荷が生じることに起因する自己安定したrhCDRAPの影響を示す。グリシンはpH4.0において非荷電であるが、rhCDRAPの十分な可溶性を達成できる。pH6~8の範囲において、CDRAPを有する製剤は、安定化させる賦形剤として荷電アミノ酸を含まなければならないが、より低いpH、例えばpH40において、rhCDRAPは、荷電アミノ酸を加えなくともそれ自体を安定化できる。実施例6:安定化rhCDRAPにおけるヒスチジンの影響上記の実施形態では、荷電アミノ酸が、pH6.0等のほぼ中性pHにおいて30mgmLに達する高濃度のrhCDRAPの安定化のための優れたツールであることを証明した。同定された緩衝剤の範囲を決定するために、この実施例では、最も適当な例のヒスチジンで、CDRAPに対する緩衝剤成分の濃度の依存性を示す。従って、以下の表5に示すように0mMから300mMまでの範囲のヒスチジンを含むヒスチジンリン酸塩でrhCDRAPを透析した。さらに、それらの製剤を、十分な量の塩化カリウムの添加により生理的モル浸透圧濃度に調整した。表5:L-ヒスチジン緩衝剤の種々の濃度、塩化カリウムを用いて等張状態に調整する前のモル浸透圧濃度rhCDRAPを30mgmLpH6.0に濃縮し、続いて、5回の凍結融解サイクルによりストレスを与えた。遠心法を行った後に凝集したrhCDRAPを除去し、残存した可溶性rhCDRAPをUV/Visにより定量化した。図10は、pH60のヒスチジンリン酸塩中のrhCDRAPの可溶性がヒスチジンの濃度に厳密に依存したことを示す。pH6.0の0mMヒスチジンは、rhCDRAPを安定化しなかったが、より高い濃度では、ヒスチジンのモル濃度の増大に相関して、可溶性の顕著な改善を引き起こした。凍結融解実験を繰り返されたそれらは、200mmoll以上のL-ヒスチジンを含む緩衝剤が、安定な30mgmLのrhCDRAP溶液を提供したことを示した。図11に示すように、塩化カリウムの添加は、ヒスチジンリン酸塩中のrhCDRAPの可溶性に影響しなかった。従って、塩化カリウムを用いて、医薬的CDRAP製剤を等張なモル浸透圧濃度に調整することは、高濃度のrhCDRAPの可溶性及び安定性に負の影響を与えることなく用いられ得る。実施例7:GDF-5誘導性ALP活性の阻害MCHT細胞を96wellプレートに30000cellswellの濃度で播き、培養培地10FCS、グルタミンを含むαMEMで一晩培養した。その次の日、rhGDF5及びrhCDRAPを用いた刺激を、各ウェルの培養培地を160μlの特定の刺激培地に交換することにより開始した。全ての基準及びサンプルを4つずつ作製した。以下の濃度のrhGDF51200ngml、400ngml、1332ngml、445ngml、148ngmlの完全培養培地中のrhGDF5の希釈系列を、検量線の作製のために調製した。rhCDRAPを介するALP活性の阻害の分析のために、細胞を400ngmlのrhGDF5及び1~10μMのrhCDRAPを用いて同時刺激した。細胞を刺激培地で3日間培養した後、それらに0.2gのMgCl2x6H2Oを含む2mLのノニデットP40を加えて、インキュベータで16時間インキュベートすることにより溶解した。50μlの溶解物を新しい96wellプレートに移し、50μlの基質緩衝液0.222gのPNPPを含むジエタノールアミン緩衝液、Pierce社製を加え、37°Cで45分間インキュベートした。その後、0.5MのNaOHを加えることにより反応を停止した。プレートリーダーで405nmの吸光度を測定した。バックグラウンドのALP活性を未処理細胞で測定し、全ての基準及びサンプルから差し引いた。検量線を全てのサンプルにおけるALP活性の算出に用いた。実施例8:軟骨細胞のCDRAP刺激及びqRTPCRによる分析軟骨を全膝置換の手術を受けている患者に由来するヒトの関節軟骨から単離した。軟骨を骨から切断し、小片に切り分けた。軟骨の小片を、1ペニシリン/ストレプトマイシンを含み1プロナーゼを含むDMEM/F12を用いて37°Cで1時間消化した。室温で5分間、200×gで遠心法を行った後、軟骨小片をPBSで1回洗浄した。それらを、0.07のコラゲナーゼAを含む培養培地10FCS及び1ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM/F12を用いて37°Cで一晩消化した。その次の日、その細胞懸濁液を、100、70及び40μmのセルストレーナに連続的に通して濾過した。その細胞を遠心沈殿し、培養培地に再建濁し、6wellプレートに250000cellswellの濃度で播いた。細胞を37°C、5CO2、90の湿度で、それらがコンフルエントに達するまで培養した約1週間。培地を2日毎に交換した。CDRAPを用いた刺激のために、細胞を無血清培地で一晩飢餓状態にした。CDRAP0.5~5μMを無血清培地DMEM/F12に添加し、細胞を24時間培養した。続いて、細胞を溶解し、製造者の説明書に従って、RNeasyMiniKitを用いてRNAを溶出した。1μgのRNAをQuantiTectReverseTranscriptionKitを用いたcDNAの調製のために用いた。4μlの希釈したcDNA1:5希釈、10μlのQuantiFastSYBRGreenPCRMix、4μlのヌクレアーゼを含まない水、及び2μlのprimermixを用いて、標準条件でLightcyclerを使用した50サイクルのRTPCRを行った。以下のプライマーを用いた。それは、18SrRNAMMP13forwardGGGTTCCTGATGTGGGTGAATAMMP13reverseGCCATCGTGAAGTCTGGTAである。その結果物をハウスキーパー18SrRNAで正規化した。"