"i5.0~8.0の範囲のpHを有するpH緩衝化生理食塩水、ii1100~17,400の範囲の分子量を有するポロキサマーおよびiii1以上の多糖-タンパク質コンジュゲートを含む、製剤。7,500~15,000の範囲の分子量を有する、請求項1に記載のポロキサマー。7,500~10,000の範囲の分子量を有する、請求項1に記載のポロキサマー。前記ポロキサマーがポロキサマー188又はポロキサマー237である、請求項1に記載の製剤。製剤中のポロキサマーの最終濃度が製剤の0.001重量/容量~5重量/容量である、請求項1~4のいずれか一項に記載の製剤。製剤中のポロキサマーの最終濃度が製剤の0.025重量/容量~1重量/容量である、請求項1~4のいずれか一項に記載の製剤。製剤中のポロキサマー188の最終濃度が製剤の0.05重量/容量~1.0重量/容量であるか、または製剤中のポロキサマー237の最終濃度が製剤の0.1重量/容量~1.0重量/容量である、請求項1~4のいずれか一項に記載の製剤。pH緩衝化生理食塩水が5.2~8.0の範囲のpHを有する、請求項1~7のいずれか一項に記載の製剤。前記緩衝液がTris、リン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、MES、MOPS、HEPES、酢酸塩またはクエン酸塩からなる群から選択される、請求項1~8のいずれか一項に記載の製剤。前記緩衝液が5mM~50mMの最終濃度のヒスチジンであるか、または1mM~20mMの最終濃度のコハク酸塩である、請求項1~9のいずれか一項に記載の製剤。前記生理食塩水が20nM~170nMの濃度で存在する、請求項1~10のいずれか一項に記載の製剤。前記タンパク質が担体タンパク質CRM197である、請求項1~11のいずれか一項に記載の製剤。前記多糖-タンパク質コンジュゲートが1以上の肺炎球菌多糖を含む、請求項1~12のいずれか一項に記載の製剤。前記多糖-タンパク質コンジュゲート製剤が、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型1多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型3多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型4多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型5多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6A多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6B多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型7F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型9V多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型14多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型18C多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19A多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型22F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型23F多糖、およびCRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型33F多糖を含む15価肺炎球菌コンジュゲート15vPnC製剤である、請求項1~13のいずれか一項に記載の製剤。前記製剤がさらにアジュバントを含む、請求項1~14のいずれか一項に記載の製剤。前記アジュバントがアルミニウムベースのアジュバントである、請求項15に記載の免疫原性組成物。前記アジュバントがリン酸アルミニウムである、請求項16に記載の製剤。0.112~0.130mgのアルミニウム元素、140~160mM塩化ナトリウムおよび18~22mMのL-ヒスチジン緩衝液を含む、請求項17に記載の製剤。3.6~4.4μgの6Bを除いて1.8~2.2μgの各糖;約32μgのCRM197担体タンパク質;0.125mgのアルミニウム元素0.5mgリン酸アルミニウムアジュバント;約150mM塩化ナトリウムおよび約20mML-ヒスチジン緩衝液を含有するように処方された単一の0.5mL用量である、請求項18に記載の製剤。前記製剤が、さらに、m-クレゾール、フェノール、2-フェノキシエタノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、またはチメロサールである保存剤を含む、請求項1~19のいずれか一項に記載の製剤。請求項1~20のいずれか一項に記載の製剤を含む、バイアルまたはプレフィルシリンジ。本発明は、1以上の多糖-タンパク質コンジュゲートを有する免疫原性組成物の撹拌-誘導凝集を阻害する新規な製剤に関する。本発明の製剤は、シリコーン油相互作用、剪断力、出荷撹拌、熱安定性等のような因子に対して免疫原性組成物を安定化させる。従って、本発明は、i5.0~8.0の範囲のpHを有するpH緩衝化生理食塩水、ii1100~17,400の範囲の分子量を有するポロキサマーおよびiii1以上の多糖-タンパク質コンジュゲートを含む製剤に向けられる。ある実施形態において、ポロキサマーは7,500~15,000または7,500~10,000の範囲の分子量を有する。ある実施形態において、該製剤のポロキサマーはポロキサマー124、ポロキサマー188、ポロキサマー237、ポロキサマー338およびポロキサマー407からなる群から選択される。1つの特別な実施形態において、ポロキサマーはポロキサマー188またはポロキサマー237である。もう1つの実施形態において、該製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.001重量/容量~5重量/容量である。もう1つの実施形態において、製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.025重量/容量~4重量/容量、0.025重量/容量~1重量/容量、0.025重量/容量~0.5重量/容量、または0.025重量/容量~0.15重量/容量である。もう1つの実施形態において、製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.05重量/容量~4重量/容量、0.05重量/容量~1重量/容量、0.05重量/容量~0.5重量/容量、または0.05重量/容量~0.15重量/容量である。他の実施形態において、製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.01重量/容量、0.05重量/容量、0.1重量/容量、0.5重量/容量、1.0重量/容量または5.0重量/容量である。なおもう1つの実施形態において、製剤中のポロキサマー188の最終濃度は製剤の0.05重量/容量~1.0重量/容量であり、または製剤中のポロキサマー237の最終濃度は製剤の0.1重量/容量~1.0重量/容量である。ある実施形態において、本発明の製剤のpH緩衝化生理食塩水は、5.2~8.0、5.2~7.5、または5.8~7.0のpHを有する緩衝液を含む。ある実施形態において、緩衝液はリン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、酢酸塩、クエン酸塩、MES、MOPS、TRISまたはHEPESである。ある実施形態において、緩衝液は1mM~50mMの濃度で存在する。ある実施形態において、緩衝液は5mM~50mMの最終濃度のヒスチジンである。1つの特別な実施形態において、ヒスチジン緩衝液の最終濃度は20mMである。ある実施形態において、pH緩衝化生理食塩水中の塩は塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムまたはその組合せを含む。1つの特別な実施形態において、pH緩衝化生理食塩水中の塩は塩化ナトリウムである。1つの実施形態において、塩は20mM~170mMの濃度で存在する。ある実施形態において、多糖-タンパク質コンジュゲート製剤のタンパク質はCRM197、破傷風トキソイド、コレラトキソイド、百日咳トキソイド、E.coliの熱不安定性トキソイドLT、ニューモリシントキソイド、肺炎球菌表面タンパク質APspA、肺炎球菌接着タンパク質APsaA、StreptococcusからのC5aペプチダーゼ、Haemophilusinfluenzaeタンパク質D、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニンKLH、ウシ血清アルブミンBSAおよびツベルクリンの精製されたタンパク質誘導体PPDからなる群から選択される。ある実施形態において、製剤の多糖-タンパク質コンジュゲートは1以上の肺炎球菌多糖を含む。ある実施形態において、該1以上の肺炎球菌多糖はS.pneumoniae血清型1多糖、S.pneumoniae血清型2多糖、S.pneumoniae血清型3多糖、S.pneumoniae血清型4多糖、S.pneumoniae血清型5多糖、S.pneumoniae血清型6A多糖、S.pneumoniae血清型6B多糖、S.pneumoniae血清型7F多糖、S.pneumoniae血清型8多糖、S.pneumoniae血清型9N多糖、S.pneumoniae血清型9V多糖、S.pneumoniae血清型10A多糖、S.pneumoniae血清型11A多糖、S.pneumoniae血清型12F多糖、S.pneumoniae血清型14多糖、S.pneumoniae血清型15B多糖、S.pneumoniae血清型17F多糖、S.pneumoniae血清型18C多糖、S.pneumoniae血清型19A多糖、S.pneumoniae血清型19F多糖、S.pneumoniae血清型20多糖、S.pneumoniae血清型22F多糖、S.pneumoniae血清型23F多糖、およびS.pneumoniae血清型33F多糖からなる群から選択される。1つの実施形態において、多糖-タンパク質コンジュゲート製剤は、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型1多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型3多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型4多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型5多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6A多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6B多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型7F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型9V多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型14多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型18C多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19A多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型22F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型23F多糖、およびCRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型33F多糖を含む15価肺炎球菌コンジュゲート15vPnC製剤である。ある実施形態において、製剤はさらにアジュバントを含む。1つの実施形態において、アジュバントはアルミニウムベースのアジュバント、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムまたは硫酸アルミニウムである。1つの特別な実施形態において、アルミニウムアジュバントはリン酸アルミニウムである。ある実施形態において、製剤は0.001mg~0.250mgのアルミニウム元素を含む。ある実施形態において、製剤は0.001mg~0.250mgのアルミニウム元素、好ましくは、0.112mg~0.130mgのアルミニウム元素、140~160mMの塩化ナトリウムおよび18~22mMのL-ヒスチジン緩衝液を含む。例示的な実施形態において、製剤は:3.6~4.4μgの6Bを除いて1.8~2.2μgの各糖;約32μgのCRM197担体タンパク質;0.125mgのアルミニウム元素0.5mgのリン酸アルミニウムアジュバント;150mM塩化ナトリウムおよび20mML-ヒスチジン緩衝液を含有するように処方された単一の0.5mLの用量である。ある実施形態において、製剤は、さらに、m-クレゾール、フェノール、2-フェノキシエタノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、またはチメロサールを含む。ある実施形態において、製剤は、バイアル、バイアルストッパー、バイアルクロージャー、ガラスクロージャー、ゴムクロージャー、プラスチッククロージャー、プレフィルシリンジ、シリンジストッパー、シリンジプランジャーを含めたシリンジ、フラスコ、ビーカー、メスシリンダー、ファーメンター、バイオリアクター、チューブ、パイプ、バッグ、ジャー、アンプル、カートリッジおよびディスポーザブルペンからなる群から選択される容器手段内に含有される。ある実施形態において、容器手段はシリコン処理されており、好ましくは焼き付かれている。本発明は、部分的には、多糖-タンパク質コンジュゲートを含有する製剤中での界面活性剤としてのポロキサマーの使用が、撹拌誘導凝集を緩和し、かつ予期せぬことに、ポリソルベートのような他の界面活性剤よりも優れた特性を提供するという発見に基づく。本発明は、多糖-タンパク質コンジュゲートのような免疫原性組成物の安定性を改良し、および免疫原性組成物の微粒子形成例えば、凝集、沈殿を阻害する当分野における継続した要望に取り込むものである。実施例に記載されたように、初期の研究は、0.1w/vの濃度のポロキサマー188のワクチン製剤への添加が熱的、機械的応力等に際して凝集体の形成を緩和し得るか否かを調べるものであった。多数の振盪研究ならびにシミュレートされた出荷研究ISTA標準テストは、現行のISTA標準方法を用いる回転振盪およびシミュレートされた出荷実験に続いて凝集を緩和するポロキサマー188の能力を示した。従って、本発明は、多糖-タンパク質コンジュゲートを有する製剤を安定化させる製剤に向けられ、該製剤はpH緩衝化生理食塩水、ここに、当該緩衝液は5.0~8.0のpHを有し、1100~17,400の分子量を有するポロキサマー、および1以上の多糖-タンパク質コンジュゲートを含む。ある実施形態において、多糖-タンパク質コンジュゲート製剤は容器手段に含まれる。本明細書中で定義されるように、用語CpG含有ヌクレオチド、CpG含有オリゴヌクレオチド、CpGオリゴヌクレオチド、および同様な用語が、非メチル化CpG部位を含有する長さが6~50ヌクレオチドのヌクレオチド分子をいう。例えば、Wangetal.,2003,Vaccine21:4297参照。本明細書中で定義されるように、用語多糖は、限定されるものではないが、糖、オリゴ糖、多糖、リポ多糖リポ-オリゴ糖LOS、リポ多糖LPS、グリコシレート、グリココンジュゲート等を含めた、免疫学的および細菌ワクチン分野で通常使用されるいずれの抗原性糖エレメントまたは抗原性ユニットも含めることを意図する。本明細書中で定義されるように、多糖-タンパク質コンジュゲート、肺炎球菌コンジュゲート、7価肺炎球菌コンジュゲート7vPnC、13価肺炎球菌コンジュゲート13vPnC、および15価肺炎球菌コンジュゲート15vPnCは、液状製剤、凍結液状製剤および固体例えば、凍結-乾燥または凍結乾燥製剤を含む。用語PCV15とは15価肺炎球菌コンジュゲートもいい、かつ用語15vPnCと相互交換可能に用いられる。本明細書中で定義されるように、用語析出、沈殿、微粒子製剤、混濁および凝集は相互交換可能に用いることができ、多糖-タンパク質コンジュゲートの凝集をもたらすいずれの物理的相互作用または化学的反応もいうことを意図する。凝集例えば、タンパク質凝集のプロセスは、しばしば、熱、圧力、pH、撹拌、剪断力、凍結-解凍、脱水、重金属、フェノール性化合物、シリコンオイル、変性剤等を含めた多数の物理化学的応力によって影響される。本明細書中で定義されるように、本発明の界面活性剤は、免疫原性組成物製剤の表面張力を低下させるいずれの分子または化合物でもある。ポロキサマーは、ポリオキシエチレンポリエチレンオキサイドの2つの親水性鎖によって両側から挟まれたポリオキシプロピレンポリプロピレンオキサイドのある種の疎水性鎖から構成される非イオン性トリブロックコポリマーである。ポロキサマーは商品名プルロニックPluronic登録商標によっても知られている。ポリマーブロックの長さは慣用化することができるゆえに、わずかに異なる特性を有する多くの異なるポロキサマーが存在する。上位概念的用語ポロキサマーでは、これらのコポリマーはポロキサマーについては文字P、続いての、3桁の数字で慣用的に命名され、最初の2桁の数字×100はポリオキシプロピレンコアの近似的な分子質量を与え、および最後の桁の数字×10はパーセンテージのポリオキシエチレン含有量を与える例えば、P407=4,000g/モルのポリオキシプロピレン分子質量および70ポリオキシエチレン含有量を有するポロキサマー。プルロニック商品名では、これらのコポリマーの暗号は室温でのその物理的形態を定義するための文字L=液体、P=ペースト、F=フレーク固体で開始し、続いて2または3桁の数字が伴う。数字の表示における最初の桁3桁の数字における2つの数字に300を掛けたものは、疎水性物の近似的な分子量を示し;および最後の数字×10はパーセンテージのポリオキシエチレン含有量を与える例えば、L61=1,800g/モルのポリオキシプロピレン分子質量および10ポリオキシエチレン含有量を有するプルロニック登録商標。例えば、米国特許第3740421号参照。ポロキサマーの例は一般式:HOC2H4OaC3H6ObC2H4OaHを有し、ここに、aおよびbのブロックは以下の値を有する:本明細書中で用いるように、分子量の単位はダルトンDaまたはg/モルである。ある実施形態において、製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.001重量/容量~5重量/容量である。もう1つの実施形態において、製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.025重量/容量~4重量/容量、0.025重量/容量~1重量/容量、0.025重量/容量~0.5重量/容量、または0.025重量/容量~0.15重量/容量である。もう1つの実施形態において、製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.05重量/容量~4重量/容量、0.05重量/容量~1重量/容量、0.05重量/容量~0.5重量/容量、または0.05重量/容量~0.15重量/容量である。他の実施形態において、製剤中のポロキサマーの最終濃度は製剤の0.01重量/容量、0.05重量/容量、0.1重量/容量、0.5重量/容量、1.0重量/容量または5.0重量/容量である。もう1つの実施形態において、製剤中のポロキサマー188の最終濃度は製剤の0.05重量/容量~1.0重量/容量であって、製剤中のポロキサマー237の最終濃度は製剤の0.1重量/容量~1.0重量/容量である。界面活性剤は、好ましくは、担体タンパク質にコンジュゲートされない。製剤はpH緩衝化生理食塩水も含有する。緩衝液は、例えば、TRIS、酢酸塩、グルタミン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、炭酸塩、グリシン酸塩、ヒスチジン、グリシン、コハク酸塩、HEPES4-2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジンエタンスルホン酸、MOPS3-N-モルホリノプロパンスルホン酸、MES2-N-モルホリノエタンスルホン酸およびトリエタノールアミン緩衝液からなる群から選択することができる。緩衝液は4~10、5.2~7.5、または5.8~7.0の範囲のpHに溶液を緩衝化することができる。緩衝液は、さらに、例えば、特に、医薬製剤が非経口使用である場合、非経口使用のためのUSP適合性緩衝液から選択することができる。緩衝液の濃度は1mM~50mMまたは5mM~50mMの範囲となる。生理食塩水すなわち、NaClを含有する溶液が好ましいが、製剤に適した他の塩は、限定されるものではないが、CaCl2、KClおよびMgCl2を含む。限定されるものではないが、スクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトールおよびグリセロールを含めた非イオン性等張剤を塩の代わりに用いてもよい。適当な塩の範囲は、限定されるものではないが、25mM~500mMまたは40mM~170mMを含む。好ましい実施形態において、ワクチン組成物は塩化ナトリウムとでL-ヒスチジン緩衝液中に処方される。本発明の製剤はさらなる界面活性剤を含有してもよい。好ましい界面活性剤は、限定されるものではないが:通常は、Tweenといわれるポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤、特に、ポリソルベート20およびポリソルベート80;線状EO/POブロックコポリマーのような、DOWFAX商標商品名下で販売される、エチレンオキサイドEO、プロピレンオキサイドPO、および/またはブチレンオキサイドBOのコポリマー;反復するエトキシオキシ-1,2-エタンジイル基の数が変化し得るオクトキシノール、オクトキシノール-9TritonX-100、またはt-オクチルフェノキシポリエトキシエタノールが特に注目される;オクチルフェノキシポリエトキシエタノールIGEPALCA-630/NP-40;ホスファチジルコリンレシチンのようなリン脂質;Tergitol商標NPシリーズのようなノニルフェノールエトキシレート;トリエチレングリコールモノラウリルエーテルBrij30のような、Brij界面活性剤として知られたラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪エーテル;およびソルビタントリオレエートSpan85、およびソルビタンモノラウレートのような通常、SPANとして知られたソルビタンエステルを含む。本発明のある実施形態において、本発明の製剤はさらにアジュバントで処方される。アジュバントは、免疫原または抗原と共に投与された場合に免疫応答を増強させる物質である。免疫アジュバントは、例えば、抗体力価または細胞媒介免疫応答を誘導しないこと、または弱い誘導、抗原に対する抗体力価を増加させること、および/または個体において免疫応答を達成するのに効果的な抗原の量を低下させることを含めた、単独で投与した場合に弱く免疫原性である抗原への免疫応答を増強させることができる。従って、アジュバントは、しばしば、免疫応答をブーストするために与えられ、これは当業者によく知られている。組成物の有効性を高めるための適当なアジュバントは、限定されるものではないが:1水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム等のようなアルミニウム塩ミョウバン;2例えば、aモデル110YマイクロフルイダイザーMicrofluidics,Newton,MAのようなマイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に処方されるMTP-PEの種々の量を含有してもよい5スクワレン、0.5Tween80、および0.5Span85を含有するMF59国際特許出願公開第WO90/14837号、bより大きな粒子サイズのエマルジョンを生じさせるためにサブミクロンエマルジョンにミクロ流体化された、または渦巻かせた、10スクワレン、0.4Tween80、5プルロニック-ブロックポリマーL121、およびthr-MDPを含有するSAF、c2スクワレン、0.2Tween80、および米国特許第4,912,094号に記載された3-O-デアシル化モノホスホリル脂質AMPL商標、トレハロースジミコレートTDM、および細胞壁骨格CWS、好ましくはMPLCWSDetox商標からなる群からの1以上の細菌細胞壁成分を含有するRibi商標アジュバント系RASCorixa,Hamilton,MT;およびdMontanideISAのような、限定されるものではないが、N-アセチル-ムラミル-L-スレオニル-D-イソグルタミンthr-MDP、N-アセチル-ノルムラミル-L-アラニン-2-1’-2’ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリルオキシ-エチルアミンMTP-PE等を含めたムラミルペプチド、または細菌細胞壁成分のような他の特異的免疫刺激剤の有りまたは無しでの水中油型エマルジョン処方;3用いてもよいQuilAまたはSTIMULON商標QS-21Antigenics,Framingham,MA例えば、米国特許第5,057,540号参照のようなサポニンアジュバント、またはISCOMコレステロール、サポニン、リン脂質、および両親媒性タンパク質の組合せによって形成された免疫刺激複合体および米国特許第5,254,339号に記載されたタンパク質を含まない以外はISCOMと実質的に同一の構造を有するCSLLimited,Parkville,AustraliaIscomatrix登録商標のようなそれから生じた粒子;4CorixaHamilton,Mont.から入手可能であって、米国特許第6,113,918号に記載された、アミノアルキルグルコサミンリン酸塩化合物AGP、またはその誘導体またはアナログのような細菌リポ多糖、合成リピドA;1つのそのようなAGPは、水性形態として、または安定なエマルジョンとして処方される、以前はRC529として知られていた529としても知られた2-[R-3-テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ]エチル2-デオキシ-4-O-ホスホノ-3-O-[R-3-テトラデカノイルオキシテトラデカノイル]-2-[R-3-テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ]-b-D-グルコピラノシドである;5いずれかの合成ヌクレオチド間結合を用いて修飾されたオリゴヌクレオチド、修飾された塩基および/または修飾された糖を有するものを含めた、CpGモチーフ米国特許第6,207,646号を含有するオリゴヌクレオチドのような合成ポリヌクレオチド例えば、Suretal.,1999,JImmunol.162:6284-93;Verthelyi,2006,MethodsMolMed.127:139-58;およびYasudaetal.,2006,CritRevTherDrugCarrierSyst.23:89-110参照;6インターロイキンその突然変異体形態を含めた、例えば、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18等;米国特許第5,723,127号、インターフェロン例えば、α、βおよびγインターフェロン、顆粒球コロニー刺激因子GCSF、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSF、マクロファージコロニー刺激因子M-CSF、腫瘍壊死因子TNF、共刺激性分子B7-1およびB7-2等、およびMCP-1、MIP-1α、MIP-1β、およびRANTESのようなケモカインのようなサイトカインおよびリンホカイン;および7補体成分C3dのトリマーのような補体;を含む。他のアジュバントはAmphigen、Avridine、L121/スクワレン、D-ラクチド-ポリラクチド/グリコシド、プルロニックポリオール、ムラミルジペプチド、欧州特許第1,296,713号および第1,326,634号に記載された殺されたBordetella、Mycobacteriumtuberculosis、IC-31IntercellAG,Vienna,Austria、百日咳トキシンPT、またはE.coli熱不安定性トキシンLT、特にLT-K63、LT-R72、PT-K9/G129を含む;例えば、国際特許公開番号WO93/13302およびWO92/19265参照。もう1つの実施形態において、アジュバントは前記アジュバントの2、3またはそれ以上の混合物、例えば、SBAS23-デアシル化モノホスホリルリピドAおよびQS21も含有する水中油型エマルジョンである。ある実施形態において、アジュバントはアルミニウム塩である。アルミニウム塩アジュバントはミョウバン沈殿ワクチンまたはミョウバン吸着ワクチンであってよい。アルミニウム-塩アジュバントは当分野でよく知られており、例えば、Harlow,E.andD.Lane1988;Antibodies:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryおよびNicklas,W.1992;Aluminumsalts,ResearchinImmunology143:489-493に記載されている。アルミニウム塩は、限定されるものではないが、水和アルミナ、アルミナ水和物、アルミナ三水和物ATH、アルミニウム水和物、アルミニウム三水和物、アルハイドロゲルalhydrogel、スーパーフォスSuperfos、アムフォゲルAmphogel、水酸化アルミニウムIII、ヒドロキシリン酸硫酸アルミニウムリン酸アルミニウムアジュバントAPA、アモルファスアルミナ、三水和アルミナ、またはトリヒドロキシアルミニウムを含む。APAはヒドロキシリン酸アルミニウムの水性懸濁液である。APAは塩化アルミニウムおよびリン酸ナトリウムを1:1容量比率でブレンドして、ヒドロキシリン酸アルミニウムを沈殿させることによって製造される。ブレンディングプロセスの後、該材料を高剪断ミキサーでサイズを低下させて、2~8μmの範囲の標的凝集体粒子サイズを達成する。次いで、生成物を生理食塩水に対して透析濾過し、および蒸気滅菌する。ある実施形態において、商業的に入手可能なAlOH3例えば、デンマーク国/AccurateChemicalandScientificCo.,Westbury,NYのアルハイドロゲルまたはスーパーフォスを用いて、50~200gタンパク質/mg水酸化アルミニウムの比率でタンパク質を吸着させる。タンパク質の吸着は、もう1つの実施形態においては、タンパク質のpI等電点pHおよび培地のpHに依存する。より低いpIを有するタンパク質は、より高いpIを有するタンパク質よりも強く正に荷電したアルミニウムイオンに吸着される。アルミニウム塩は2~3週間にわたってゆっくりと放出されるAgの貯蔵所を確立し、マクロファージの非特異的活性化および補体の活性化に関与でき、および/または恐らくは尿酸の刺激を通じた先天性免疫メカニズムを刺激することができる。例えば、Lambrechtetal.,2009,CurrOpinImmunol21:23参照。本発明の多糖-タンパク質コンジュゲート形成はいずれの公知の多糖および担体タンパク質も含むことができる。多糖の例は肺炎球菌多糖、ナイセリア多糖、および連鎖球菌多糖を含む。ある実施形態において、1以上の肺炎球菌多糖はS.pneumoniae血清型1多糖、S.pneumoniae血清型2多糖、S.pneumoniae血清型3多糖、S.pneumoniae血清型4多糖、S.pneumoniae血清型5多糖、S.pneumoniae血清型6A多糖、S.pneumoniae血清型6B多糖、S.pneumoniae血清型7F多糖、S.pneumoniae血清型8多糖、S.pneumoniae血清型9N多糖、S.pneumoniae血清型9V多糖、S.pneumoniae血清型10A多糖、S.pneumoniae血清型11A多糖、S.pneumoniae血清型12F多糖、S.pneumoniae血清型14多糖、S.pneumoniae血清型15B多糖、S.pneumoniae血清型17F多糖、S.pneumoniae血清型18C多糖、S.pneumoniae血清型19A多糖、S.pneumoniae血清型19F多糖、S.pneumoniae血清型20多糖、S.pneumoniae血清型22F多糖、S.pneumoniae血清型23F多糖、およびS.pneumoniae血清型33F多糖からなる群から選択される。本発明は、S.pneumoniaeの多数の血清型から得られる多糖を含有する多価肺炎球菌多糖-タンパク質コンジュゲートワクチンに特に適している。7価肺炎球菌コンジュゲートワクチンPrevnar登録商標は血清型4、6B、9V、14、18C、19Fおよび23Fからの多糖を含有する。米国特許出願公開第U.S.2006/0228380A1号は、血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19Fおよび23Fを含めた13価肺炎球菌コンジュゲートワクチンを記載する。中国特許出願公開第CN101590224A号は、血清型1、2、4、5、6A、6B、7F、9N、9V、14、18C、19A、19Fおよび23F含めた14価肺炎球菌コンジュゲートワクチンを記載する。米国仮特許出願第61/302726号は血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23Fおよび33Fを含めた15価肺炎球菌コンジュゲートワクチンを記載する。ある実施形態においては、多糖-タンパク質コンジュゲート製剤は、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型4多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6B多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型9V多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型14多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型18C多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19F多糖およびCRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型23F多糖を含む7価肺炎球菌コンジュゲート7vPnC製剤である。ある他の実施形態においては、多糖-タンパク質コンジュゲー製剤は、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型4多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6B多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型9V多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型14多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型18C多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型23F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型1多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型3多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型5多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6A多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型7F多糖およびCRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19A多糖を含む13価肺炎球菌コンジュゲート13vPnC製剤である。1つの実施形態おいて、多糖-タンパク質コンジュゲー製剤は、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型1多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型3多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型4多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型5多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6A多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型6B多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型7F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型9V多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型14多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型18C多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19A多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型19F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型22F多糖、CRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型23F多糖、およびCRM197ポリペプチドにコンジュゲートしたS.pneumoniae血清型33F多糖を含む15価肺炎球菌コンジュゲート15vPnC製剤である。Streptococcuspneumoniaeからの被膜多糖は当業者に公知の標準的技術によって調製することができる。例えば、多糖は細菌から単離することができ、公知の方法例えば、欧州特許第EP497524号および第EP497525号参照によって、好ましくはミクロ流体化によって、ある程度のサイズとすることができる。多糖は、多糖試料における粘度を低下させる、および/またはコンジュートされた生成物の濾過性を改良するようなサイズとすることができる。1つの実施形態において、各肺炎球菌多糖血清型は大豆ベースの媒体中で成長させる。次いで、個々の多糖は遠心、沈殿、および限外濾過を含めた標準的な工程を通じて精製される。例えば、米国特許出願公開第2008/0286838号および米国特許第5,847,112号参照。担体タンパク質は、好ましくは、非毒性かつ非反応原性であって、十分な量および純度で得ることができるタンパク質である。担体タンパク質はS.pneumoniae多糖とコンジュゲートまたは接合させて、多糖の免疫原性を増強させることができる。担体タンパク質は標準的なコンジュゲーション手法を受けることができるはずである。本発明の特別な実施形態において、CRM197は担体タンパク質として使用される。1つの実施形態において、各被膜多糖は同一の担体タンパク質にコンジュゲートされる各被膜多糖分子は単一の担体タンパク質にコンジュゲートされる。もう1つの実施形態において、被膜多糖は2以上の担体タンパク質にコンジュゲートされる各被膜多糖分子は単一の担体タンパク質にコンジュゲートされる。そのような実施形態において、同一血清型の各被膜多糖は、典型的には、同一担体タンパク質にコンジュゲートされる。CRM197はジフテリアトキシンの非毒性変種すなわち、トキソイドである。1つの実施形態において、それは、カザミノ酸および酵素エキスベースの培地中で成長させたCorynebacteriumdiphtheria株C7β197の培養から単離される。もう1つの実施形態において、CRM197は、米国特許第5,614,382号に記載された方法に従って組換えによって調製される。典型的には、CRM197は限外濾過、硫酸アンモニウム沈殿およびイオン交換クロマトグラフィーの組合せを通じて精製される。いくつかの実施形態において、CRM197は、PfenexExpressionTechnology商標PfenexInc.,SanDiego,CAを用いてPseudomonasfluorescensにおいて調製される。他の適当な担体タンパク質は、DTジフテリアトキソイド、TT破傷風トキソイドまたはTTの断片C、百日咳トキソイド、例えば、国際特許出願公開第WO2004/083251号に記載されたコレラトキソイド、E.coliLT、E.coliST、およびPseudomonasaeruginosaからのエキソトキシンAのようなさらなる不活化細菌トキシンを含む。外膜複合体cOMPC、ポリン、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌表面プロテインAPspA;国際特許出願公開第WO02/091998号参照、肺炎球菌接着タンパク質PsaA、A群またはB群連鎖球菌例えば、米国特許第6,951,653号、米国特許第6,355,255号および米国特許第6,270,775号に記載された1以上のSCP変種のような酵素的に不活性な連鎖球菌C5aペプチダーゼSCP、またはHaemophilusinfluenzaeプロテインD、なんらかの方法で解毒されたply、例えば、dPLY-GMBS国際特許出願公開第WO04/081515号参照またはdPLY-フォーマルformolを含めた肺炎球菌ニューモリシンKuoetal.,1995,InfectImmun63;2706-13、PhtA、PhtB、PhtD、PhtE、およびPhtタンパク質の融合、例えば、PhtDE融合、PhtBE融合国際特許出願公開第WO01/98334号および第WO03/54007号参照を含めたPhtXのような細菌外膜タンパク質を用いることもできる。オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニンKLH、ウシ血清アルブミンBSAまたはツベルクリンの精製されたタンパク質誘導体PPD、N.meninigitidisからのPorB、PDHaemophilusinfluenzaeプロテインD;例えば、欧州特許第EP0594610B号、またはその免疫学的機能同等体、合成ペプチド欧州特許第EP0378881号および第EP0427347号参照、熱ショックタンパク質国際特許出願公開第WO93/17712号および第WO94/03208号参照、百日咳タンパク質国際特許出願公開第WO98/58668号および欧州特許第EP0471177号参照、サイトカイン、リンホカイン、成長因子もしくはホルモン国際特許出願公開第WO91/01146号参照、N19タンパク質Baraldoietal.,2004,InfectImmun72:4884-7参照のような種々の病原体由来抗原からの多数のヒトCD4T細胞エピトープを含む人工タンパク質Falugietal.,2001,EurJImmunol31:3816-3824参照、鉄摂取タンパク質国際特許出願公開第WO01/72337号参照、C.difficileのトキシンAまたはB国際特許出願公開第WO00/61761号参照、およびフラゲリンBen-Yedidiaetal.,1998,ImmunolLett64:9参照のような他のタンパク質も担体タンパク質として用いることもできる。CRM176、CRM228、CRM45Uchidaetal.,1973,JBiolChem218:3838-3844;CRM9、CRM45、CRM102、CRM103およびCRM107、およびGeneticallyEngineeredToxins,Ed:Frankel,MaecelDekkerInc,1992においてNichollsおよびYouleによって記載された他の突然変異;Asp、GlnまたはSerに対するGlu-148および/またはGlyに対するAla158の欠失または突然変異、および米国特許第4,709,017号または米国特許第4,950,740号に開示された他の突然変異;少なくとも1以上の残基Lys516、Lys526、Phe530および/またはLys534の突然変異、および米国特許第5,917,017号または米国特許第6,455,673号に開示された他の突然変異;または米国特許第5,843,711号に開示された断片のような他のDT突然変異体を用いることもできる。次いで、例えば、還元的なアミノ化を介して精製された多糖を化学的に活性化して、担体タンパク質と反応できる多糖を作成する。一旦活性化されたなら、各被膜多糖を公知のカップリング技術によって別々に担体タンパク質例えば、CRM197にコンジュゲートして、糖コンジュゲートを形成しまたは、別法として、各被膜多糖を同一担体タンパク質にコンジュゲートする、および単一の投与製剤に処方する。1つの実施形態において、多糖の化学的活性化および担体タンパク質への引き続いてのコンジュゲーションは米国特許第4,365,170号、第4,673,574号および第4,902,506号に記載された手段によって達成される。簡単に述べれば、その化学は、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、または過ヨウ素酸を含めた過ヨウ素酸塩のような、末端ヒドロキシル基をアルデヒドに酸化するいずれかの酸化剤との反応による肺炎球菌多糖の活性化を含む。該反応は、反応性アルデヒド基の形成を伴う、炭水化物の近接ヒドロキシル基のランダム酸化的開裂に至る。1つの実施形態において、タンパク質担体例えば、CRM197へのカップリングは、直接的アミノ化を介するタンパク質のリシル基への還元的アミノ化によるものであり得る。例えば、コンジュゲーションは、活性化された多糖および担体タンパク質の混合物をシアノホウ水素化ナトリウムのごとき還元剤と反応させることによって行われる。次いで、未反応アルデヒドを、ホウ水素化ナトリウムのような強力な還元剤の添加でキャップする。もう1つの実施形態において、コンジュゲーション方法は、糖をテトラフルオロホウ酸1-シアノ-4-ジメチルアミノピリジニウムCDAPで活性化してシアネートエステルを形成することに依拠することができる。従って、活性化された多糖は、担体タンパク質上のアミノ基に、直接的に、またはスペーサーリンカーを介してカップリングさせることができる。例えば、スペーサーは、例えば、GMBSを用いるマレイミド活性化担体タンパク質または例えば、ヨードアセチミド[例えば、エチルヨードアセチミドHCl]またはブロモ酢酸N-スクシンイミジルまたはSIAB、またはSIA、またはSBAPを用いるハロアセチル化担体タンパク質との反応の後に得られたチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオレート化多糖を与えるための、シスタミンまたはステアミンであり得る。好ましくは、CDAP化学によって作成されてもよいシアネートエステルをヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジドADHとカップリングさせ、およびアミノ誘導体化多糖を、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド例えば、EDACまたはEDC化学を用いて担体タンパク質にコンジュゲートする。そのようなコンジュゲートは国際特許出願公開第WO93/15760号、第WO95/08348号および第WO96/29094号;およびChuetal.,1983,Infect.Immunity40:245-256に記載されている。他の適当な技術はカルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、p-ニトロ安息香酸、N-ヒドロキシスクシンイミド、S-NHS、EDC、TSTUを用いる。国際特許出願公開第WO98/42721号に多くが記載されている。コンジュゲーションは、カルバメート結合を形成するための、多糖の遊離ヒドロキシル基とCDIとの反応Bethelletal.,1979,J.Biol.Chem.254:2572-4;Hearnetal.,1981,J.Chromatogr.218:509-18参照、続いてのタンパク質との反応によって形成できるカルボニルリンカーを含むことができる。これは、第一級ヒドロキシル基へのアノマー末端の還元、第一級ヒドロキシル基の任意の保護/脱保護、CDIカルバメート中間体を形成するための第一級ヒドロキシル基とCDIとの反応、およびCDIカルバメート中間体とタンパク質上のアミノ基とのカップリングを含むことができる。1つの実施形態において、処方に先立ち、各肺炎球菌被膜多糖抗原をS.pneumoniaeから個々に精製し、活性化して、反応性アルデヒドを形成し、次いで、還元的アミノ化を用いて共有結合により担体タンパク質CRM197にコンジュゲートさせる。被膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーションの後、多糖-タンパク質コンジョゲートを種々の技術の1以上によって精製する多糖-タンパク質コンジョゲートの量に対して豊富化させる。これらの技術の例は当業者によく知られており、濃縮/透析濾過操作、限外濾過、沈殿/溶出、カラムクロマトグラフィー、および深部濾過を含む。例えば、米国特許第6,146,902号参照。個々の糖コンジュゲートを精製した後、それらを配合して、本発明の免疫原性組成物を処方する。これらの肺炎球菌コンジュゲートを別々のプロセスによって調製し、単一投与製剤に原体処方する。本発明の多糖-タンパク質コンジュゲートの処方は当分野で認められた方法を用いて達成される。例えば、15の個々の肺炎球菌コンジュゲートを、生理学的に許容されるビヒクルで処方して、組成物を調製することができる。そのようなビヒクルの例は、限定されるものではないが、水、緩衝化生理食塩水、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、脂質ポリエチレングリコールおよびデキストロース溶液を含む。各ワクチン用量中のコンジュゲートの量は有意な有害効果なくして免疫保護応答を誘導する量として選択される。そのような量は肺炎球菌血清型に依存して変化させることができる。一般に、各用量は0.1~100μgの各多糖、特に0.1~10μg、より特別には1~5μgを含むことになる。例えば、各用量は100、150、200、250、300、400、500、または750ng、または1、1.5、2、3、4、5、6、7、7.5、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、20、22、25、30、40、50、60、70、80、90または100μgを含むことができる。1つの実施形態において、アルミニウム塩の用量は10、15、20、25、30、50、70、100、125、150、200、300、500または700μg、または1、1.2、1.5、2、3、5mg以上である。なおもう1つの実施形態において、前記したミョウバン塩の用量は組換えタンパク質のμg当たりである。特別なワクチンについての成分の最適量は対象における適切な免疫応答の観察を含む標準的な実験によって確認することができる。例えば、もう1つの実態態様においては、ヒトワクチン接種のための用量は動物実験からのヒトデータへの外挿によって決定される。もう1つの実施形態において、用量は経験的に決定される。本発明の特別な実施形態において、PCV-15ワクチンは、個々にCRM197にコンジュゲートされた血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23Fおよび33Fの肺炎球菌被膜多糖の滅菌液体製剤である。各0.5mLの用量を処方して、:4μgの6Bを除いて、2μgの各多糖;約32μgのCRM197担体タンパク質例えば、32μg±5μg、±3μg、±2μg、または±1μg;0.125mgのアルミニウム元素0.5mgのリン酸アルミニウムアジュバント;および塩化ナトリウムおよびL-ヒスチジン緩衝液を含有させる。塩化ナトリウム濃度は約150mM例えば、150mM±25mM、±20mM、±15mM、±10mM、または±5mMおよび約20mM例えば、20mM±5mM、±2.5mM、±2mM、±1mM、または±0.5mML-ヒスチジン緩衝液である。多糖-タンパク質コンジュゲートは、典型的には、pH緩衝化生理食塩水中の多数の血清型のブレンドに合わせ、次いで、生理食塩水中であってよいアジュバントと合わせる。ポロキサマーはプロセスにおいていずれの段階で加えてもよい。1つの実施形態において、該プロセスは15の血清型のブレンドをヒスチジン、生理食塩水、およびポロキサマー中に合わせ、次いで、このブレンドされた材料をAPAおよび生理食塩水と合わせることからなる。特定の実施形態において、製剤は250ug/mLのAPAリン酸アルミニウムアジュバントと共に、pH5.8のヒスチジン20mM、生理食塩水150mMおよびポロキサマー1880.1w/vからなる。現在の努力は、5.8~7.0のpH範囲を調べ、リストされた製剤が撹拌誘導凝集を緩和することを示した。ポロキサマー188についての範囲の知見は、現在、0.025~0.15の範囲を調べている途中である。本発明の組成物はS.pneumoniaeからの1以上のタンパク質を含むこともできる。含ませるのに適したS.pneumoniaeタンパク質の例は国際特許出願公開第WO02/083855号および第WO02/053761号で確認されるものを含む。前記した製剤は1以上のさらなる医薬上許容される希釈剤、賦形剤または医薬上許容される担体を含むこともできる。本明細書中で用いるように、用語医薬上許容される担体は、ヒトまたは他の脊椎動物宿主への投与に適合する、いずれかのおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸着遅延剤等を含める意図である。適当な担体は当業者に明らかであり、かなり、投与の経路に依存する。液状製剤のための医薬上許容される担体は水性または非水性溶液、懸濁液、エマルジョンまたは油である。非水性溶媒の例はプロピングリコール、ポリエチレングリコール、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである。水性担体は水に加えてアルコール性/水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液を含む。油の例は動物、植物、または合成起源のもの、例えば、落花生油、大豆油、オリーブ油、ヒマワリ油、魚肝油、もう1つの魚油、または乳または卵からの脂質である。免疫原性組成物製剤に存在させることができる賦形剤は、限定されるものではないが、保存剤、化学的安定化剤および懸濁化もしくは分散剤を含む。典型的には、安定化剤、保存剤等は、標的化受容者例えば、ヒト対象における効能についての最良の処方を決定するために最適化される。保存剤の例はm-クレゾール、2-フェノキシエタノール、ベンジルアルコール、チメロサール、クロロブタノール、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化硫黄、没食子酸プロピル、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノール、およびパラクロロフェノールを含む。安定化成分の例はカザミノ酸、スクロース、ゼラチン、フェノールレッド、N-Zアミン、二リン酸一カリウム、ラクトース、ラクトアルブミン加水分解物、および粉乳を含む。ある実施形態において、免疫原性組成物製剤は、例えば、液体、粉末、エアロゾル、錠剤、カプセル剤、腸溶被覆錠剤もしくはカプセル剤、または坐薬の形態でのヒト対象への投与のために調製される。従って、免疫原性組成物製剤は、限定されるものではないが、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、エマルジョン、ペースト、およびインプラント可能な除放もしくは生分解性製剤を含むこともできる。もう1つの実施形態において、本発明の製剤は、経口投与され、従って、経口投与に適した形態に、すなわち、固体または液状製剤として処方される。固体経口製剤は錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、ペレット等を含む。液状経口製剤は溶液、懸濁液、分散液、エマルジョン、油等を含む。ある実施形態において、製剤は単一用量バイアル、多用量バイアルまたはプレフィルシリンジである。本発明の免疫原性組成物は、溶媒、緩衝液、アジュバント、または前記したタイプの医薬製剤で有用な他の成分のような慣用的な生理学的に許容される担体、希釈剤および賦形剤の選択によって制限されない。適当なpH、等張性、安定性および他の慣用的な特徴を有する前記成分からのこれらの医薬上許容される組成物の調製は当分野の技量内のものである。ある実施形態において、本発明は容器手段に含まれた免疫原性組成物の製剤に向けられる。本明細書中に規定されるように、本発明の容器手段は、研究、加工、開発、処方、製造、貯蔵および/または投与の間に免疫原性組成物を含有する、保持する、混合する、ブレンドする、分注する、注射する、導入する、霧化する等するのに用いられるいずれの組成物も含む。例えば、本発明の容器手段は、限定されるものではないが、一般的な実験室ガラス器具、フラスコ、ビーカー、メスシリンダー、ファーメンター、バイオリアクター、チューブ、パイプ、バッグ、ジャー、バイアル、バイアルクロージャー例えば、ゴムストッパー、スクリューオンキャップ、アンプル、シリンジ、シリンジストッパー、シリンジプランジャー、ゴムクロージャー、プラスチッククロージャー、ガラスクロージャー等を含む。本発明の容器手段は、製造の材料によって制限されず、ガラス、金属例えば、スチール、ステンレススチール、アルミニウム等およびポリマー例えば、熱可塑性樹脂、エラストマー、熱可塑性樹脂-エラストマーのような材料を含む。当業者であれば、前記した容器手段は限定的なリストでは断じてなく、組成物の研究、加工、開発、処方、製造、貯蔵および/または投与の間に、免疫原または免疫原性組成物を含有し、保持し、混合し、ブレンドし、分注し、注射し、導入し、霧化するなどを行うために用いられる種々の容器手段に関して当業者へのガイドラインとして役立つに過ぎないことを認識するである。本発明での使用が考えられるさらなる容器手段は、UnitedStatesPlasticCorp.Lima,Ohio、VWRWestChester,Pa.、BDBiosciencesFranklinLakes,N.J.、FisherScientificInternationalInc.Hampton,N.H.およびSigma-AldrichSt.Louis,Mo.のような研究室器具の販売業者および製造業者からの公表されたカタログ中に見出すことができる。従って、本発明の新規な製剤は、それらが、組成物の研究、加工、開発、処方、製造、貯蔵および/または投与の種々の段階を通じて容器手段に含まれた免疫原性製剤を安定化し、およびその沈殿を阻害する点で特に有利である。本発明の新規な製剤は物理的/熱的ストレス例えば、温度、湿度、剪断力等に対して免疫原性組成物を安定化させるのみならず、免疫原性組成物と容器/クロージャーシステム例えば、シリコン処理された容器手段との不適合性のような負の因子または影響に対して免疫原性組成物の安定化を増強させ、およびその沈殿を阻害する。本発明の免疫原性組成物の安定性は、当業者によく知られており、かつ当業者にとってルーチン的である標準的な技術を用いて容易に決定される。例えば、免疫原性組成物は、限定されるものではないが、光散乱、光学密度、沈降速度遠心、沈降平衡遠心、円二色性CD、ローリーLowryアッセイ、ビシンコニン酸BCAアッセイ、抗体結合等を含めた方法によって、安定性、凝集、免疫原性、微粒子形成、タンパク質濃度喪失等についてアッセイされる。添付の記載および図面を参照して本発明の種々の実施形態を記載してきたが、本発明はそれらの正確な実施形態に限定されず、および添付の特許請求の範囲に定義された本発明の範囲または精神に逸脱することなく当業者によって種々の変形および修飾をそこでなすことができるのは理解されるべきである。以下の実施例は本発明を説明するが、本発明を限定するものではない。実施例1:S.pneumoniae被膜多糖の調製肺炎球菌を培養する方法は当分野でよく知られている。例えば、Chase,1967,MethodsofImmunologyandImmunochemistry1:52参照。肺炎球菌被膜多糖を調製する方法はやはり当分野でよく知られている。例えば、欧州特許第EP0497524号参照。肺炎球菌血清サブタイプの単離体はATCCから入手可能である。細菌は、血液-寒天上でアルファ溶血性である被包非運動性グラム陽性のランセット形状の双球菌として同定される。サブタイプは特定の抗血清を用いるQuelling反応に基づいて区別される。例えば、米国特許第5,847,112号参照。細胞バンクPCV-15に存在するS.pneumococcus血清型の各々を表す細胞バンクは、凍結したバイアル中にてMerckCultureCollectionRahway,NJから得た。接種解凍された種培養を、適当な予め滅菌された成長培地を含有するシードファーメンターに移した。シード発酵培養を温度およびpHを制御してシードファーメンター中で成長させた。シードファーメンターの全用量を、予め滅菌した成長培地を含有する生産ファーメンターに移した。生産発酵生産発酵は当該プロセスの最後の細胞培養段階であった。温度、pHおよび撹拌速度を制御した不活化発酵プロセスは不活化剤の添加を介して終了させた。不活化の後、バッチを不活化タンクに移動させ、そこで、それを制御された温度および撹拌に維持した。精製細胞デブリスを、遠心および濾過の組合せを用いて除去した。バッチを限外濾過し、および透析濾過した。次いで、バッチを、不純物を除去し、および多糖を回収する溶媒ベースの分画に付した。実施例2:肺炎球菌多糖-CRM197コンジュゲートの調製活性化プロセス異なる血清型糖を、通常のプロセスフローを用いて精製されたCRM197担体タンパク質に個々にコンジュゲートする。このプロセスにおいて、糖を溶解させ、目標分子質量のサイズとし、化学的に活性化し、および限外濾過によって緩衝液交換する。次いで、精製されたCRM197を活性化された糖とコンジュゲートさせ、および得られたコンジュゲートを最終0.2μm膜濾過に先立って限外濾過によって精製する。pH、温度、濃度および時間のような各工程内のいくつかのプロセスパラメーターは、本実施例に記載されているように血清型特異的である。工程1:溶解精製された多糖を2~3mg/mLの濃度まで水に溶解させた。溶解した多糖を、0~1000バールに予め設定した圧力で機械的ホモゲナイザーを通過させた。サイズ低下に続いて、糖を濃縮し、および10kDaMWCOウルトラフィルター上で滅菌水にて透析濾過した。透過物を捨て、および保持物を酢酸ナトリウム緩衝液、50mM最終濃度で4.1のpHに調整した。血清型4および5について、pH5.0の100mM酢酸ナトリウムを用いた。血清型4については、溶液を50°±2°Cでインキュベートした。加水分解は、20~24°Cまで冷却することによって停止させた。工程2:過ヨウ素酸塩反応肺炎球菌糖活性化について必要な過ヨウ素酸ナトリウムのモル等量は、全糖含有量を用いて決定した。徹底的に混合しつつ、温度を2~6°Cとした5、7Fおよび19Fを除いて、全ての血清型について20~24°Cにて酸化を3~20時間の間進行させた。工程3:限外濾過酸化された糖を濃縮し、10kDaMWCOウルトラフィルター上の10mMリン酸カリウム、pH6.4血清型5については10mM酢酸ナトリウム、pH4.3で透析濾過した。透過物を捨て、および保持物を3Mリン酸カリウム緩衝液の添加によって6.3~8.4のpHに調整した。コンジュゲーションプロセス工程1:コンジュゲーション反応濃縮された糖を、0.2-2対~1の充填比率にてCRM197担体タンパク質と混合した。ブレンドされた糖-CRM197混合物を0.2μmフィルターを通して濾過した。コンジュゲーション反応を、シアノホウ水素化ナトリウム溶液を加えることによって開始して、糖のモル当たり1.8~2.0モルのシアノホウ水素化ナトリウムを達成した。反応混合物を20~24°C血清型3、5、6A、7F、19A、および19Fについては8~12°Cにて48~120時間インキュベートした。工程2:ホウ水素化物反応コンジュゲーションインキュベーションの最後に、反応混合物を、1.2M炭酸水素ナトリウム緩衝液、または3Mリン酸カリウム緩衝液血清型5を除くいずれかで4~8°C、および8~10のpHに調整した。コンジュゲーション反応は、ホウ水素化ナトリウム溶液を加えて、糖のモル当たり0.6~1.0モルのホウ水素化ナトリウム血清型5については0モルのホウ水素化物を添加を達成することによって停止させた。反応混合物を45~60分の間インキュベートした。工程3:限外濾過工程反応混合物を、最小の20容量の100mMリン酸カリウム、pHの8.4緩衝液で100kDaMWCOウルトラフィルターにて透析濾過した。100kDaウルトラフィルターからの保持物を、20~24°Cにて、最小の20の二容量の150mM塩化ナトリウムで300kDaMWCOウルトラフィルターにて透析濾過した。透過物は捨てた。工程4:滅菌濾過300kDaMWCO透析濾過からの保持物を0.2μmフィルターを通して濾過し、および放出テスト、インプロセス制御、および処方血清型19Fを除くのために適当な容量にてホウ珪酸ガラス容器に充填した。血清型19Fコンジュゲートを0.2μmフィルターを通して保持タンクに入れ、および20~24°Cでインキュベートした。インキュベーションに続き、20~24°Cにて、最小の20二容量の150mM塩化ナトリウムでの300kDaMWCOウルトラフィルターにてコンジュゲートを透析濾過した。透過物を捨て、および保持物を0.2μmフィルターを通して濾過し、および放出テスト、インプロセス制御、および処方のために適切な容量にてホウ珪酸ガラス容器に充填した。最終の原体濃縮物を2~8°Cで貯蔵した。実施例3:15価肺炎球菌コンジュゲートワクチンの処方原体濃縮物の必要な容量は、バッチ容量および原体糖濃度に基づいて計算した。塩化ナトリウム、L-ヒスチジン、pH5.8を含有する緩衝液を含む賦形剤例えば、ポロキサマーの添加によって、合わせた15コンジュゲートを目標吸着濃度までさらに希釈した。十分な混合の後、ブレンドを0.2μmの膜を通して滅菌濾過した。原体リン酸アルミニウムとのそのブレンディングの間およびその後、滅菌処方原体を穏和に混合した。処方されたワクチンを2~8°Cで貯蔵した。実施例4:撹拌誘導凝集に対する賦形剤の効果回転撹拌実験の後に、15価肺炎球菌コンジュゲートワクチン-15PCV-15の安定性を種々の賦形剤およびpH条件で調べた。PCV-15は、0.25mg/mLリン酸アルミニウムアジュバントAPAを含む20mMヒスチジンpH5.8および150mM塩化ナトリウム中で調製した。64μg/mLのCRM197タンパク質は、64μg/mLの合計多糖濃度について、4μg/mLの肺炎球菌多糖PnP型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F、および33F、および8μg/mLの型6Bにコンジュゲートした。回転撹拌実験では、PCV-15製剤骨格は、pH5.8、6.2、および7.0にて、界面活性剤およびオスモライト、およびオスモライトと組み合わせた界面活性剤の添加で調製した。塩化ナトリウム濃度は、オスモライトの濃度に依存して、150mMから100mMまたは50mMいずれかまでに調整した。撹拌実験は、4°Cでの24時間の回転直立および側面撹拌を用いて設計した。凝集は視覚的におよび静的光散乱で観察した。処方材料:PCV-15製剤材料は実施例1~3に記載されたように調製した。処方された材料は、全ての撹拌実験が完了するまで2~8°Cで貯蔵した。以下の製剤を、0.25mg/mLリン酸アルミニウムアジュバントAPAおよび64μg/mL多糖:CRMコンジュゲート:1.150mMNaCl、pH5.82.150mMNaCl、pH6.03.150mMNaCl、pH6.24.150mMNaCl、pH6.65.150mMNaCl、pH6.86.150mMNaCl、pH7.07.3スクロース、100mMNaCl、pH5.88.3スクロース、100mMNaCl、0.02PS-80、pH5.89.6スクロース、50mMNaCl、pH5.810.6スクロース、50mMNaCl、0.02PS80、pH5.811.3スクロース、100mMNaCl、pH6.212.3スクロース、100mMNaCl、0.02PS-80、pH6.213.6スクロース、50mMNaCl、pH6.214.6スクロース、50mMNaCl、0.02PS80、pH6.215.6トレハロース、50mMNaCl、0.02PS-80、pH6.216.6スクロース、50mMNaCl、0.1ポロキサマー188、pH6.217.0.5スクロース、150mMNaCl、0.02PS-80、pH5.818.0.5スクロース、150mMNaCl、0.1ポロキサマー188、pH5.819.0.5スクロース、150mMNaCl、0.02PS-80、pH5.820.0.5トレハロース、150mMNaCl、0.02PS-80、pH5.821.0.5スクロース、150mMNaCl、0.02PS-20、pH5.822.0.5トレハロース、150mMNaCl、0.02PS-20、pH5.823.0.5スクロース、150mMNaCl、pH5.824.0.5トレハロース、150mMNaCl、pH5.825.150mMNaCl、0.02PS-80、pH5.826.150mMNaCl、0.02PS-20、pH5.827.150mMNaCl、0.02PS-80、pH6.228.150mMNaCl、0.1ポロキサマー188、pH5.829.150mMNaCl、0.1ポロキサマー188、pH6.230.150mMNaCl、0.04CTAB、pH5.831.50mMNaCl、6スクロース、0.1ポロキサマー188、pH7.032.150mMNaCl、0.1ポロキサマー188、pH7.0を含む20mMヒスチジン中で調製した。撹拌実験手法撹拌実験の目的は、バイアルを撹拌条件に付し、次いで、これらの条件が凝集体形成に対して有する効果を決定することにある。該実験は親水性表面非研磨との相互作用および製剤の最終容器成分および空気界面への暴露を通じてのPCV-15製剤の直接的撹拌を表す。PCV-15製剤を、13mmストッパーを備えた0.75mLの充填容量の非硫酸塩処理2mLバイアルに充填した。回転、振動、および転倒撹拌方法について、バイアルを4°Cおよび25°Cにて24時間直立および側面撹拌を行った。バイアルを、バイアルを7×7フリーザーボックスに最初に入れた直立回転撹拌を除いて直接的に撹拌機器に付着させた。最大スピードでの実験室スケールの多目的ローテーターを回転撹拌で用い、他方1,500rpmにおけるデジタル渦巻を振動撹拌で用いた。最大スピードでのRoto-ShakeGenieを転倒撹拌で用いた。観察は回転撹拌方法では8時間まで、および振動および転倒撹拌方法では9時間までで1時間間隔で行い、最終の観察は全ての3つの撹拌方法について24時間に記録した。バイアルを回転方法では二連で、および処方材料の限定された入手可能性のため振動および転倒方法では一連で撹拌した。全てのバイアルを対照としての非撹拌バイアルと比較した。加えて、回転撹拌方法では、3硫酸塩処理2mLバイアルに0.75mLの製剤を充填した。バイアルを24時間の間最大スピードで直立および側面撹拌し、および同一条件下で撹拌した非硫酸塩処理バイアルとの比較のために4°Cにて10-bi生成物カートンの有りおよび無しでパッケージした。10-bi生成物カートンは、10までのバイアルを保持することができ、かつ球状の1つの生成物を含有する最終の市販の生成物パッケージの1つのタイプである。結果pH5.8、6.0、6.2、6.6、6.8および7.0でのPCV-15製剤1の撹拌の後、pHの変化が、特に、側面撹拌後において凝集の形成を妨げるのに有意に十分ではなかった。界面活性剤PS-80の添加は、個々に、およびオスモライトスクロースと組み合わせて、いくつかの撹拌実験においては、直立および側面撹拌誘導凝集を妨げたが、全ての撹拌の実験においてはそうというのではなかった。界面活性剤PS-20を個々にV114製剤に加えることはまた、いくつかの撹拌実験においては、直立および側面撹拌誘導凝集を妨げたが、全ての撹拌実験でそうというのではなかった。しかしながら、PS-20をpH5.8にてオスモライトスクロースまたはトレハロースと共に加えると、直立および側面撹拌誘導凝集が妨げられた。最後に、界面活性剤ポロキサマー188は、pH5.8、6.2、および7.0にて、個々に、およびオスモライトスクロースと組み合わせて撹拌誘導凝集を妨げた。結論種々の界面活性剤、オスモライト、およびpH条件を用いる撹拌実験の完了の後に、界面活性剤PS-20は、pH5.8にて、オスモライトスクロースおよびトレハロースと組み合わせて撹拌誘導凝集を妨げることができた。しかしながら、界面活性剤ポロキサマー188は、pHとは無関係に、個々に、およびオスモライトスクロースと組み合わせて、撹拌誘導凝集を妨げることができた。実施例5:撹拌誘導凝集に対する温度、pH、塩濃度およびスクロースの効果熱的ストレスに続いてのいくつかの製剤でのPCV-15に対する回転撹拌損傷のインパクトを実験した。回転撹拌実験では、pH、塩濃度を変化させ、およびスクロースを加えることによって、PCV-15をいくつかの製剤処方にて調製した表1。次いで、これらの製剤を3つの群:4°C;一週間の間の37°Cストレス、および45日間の25°Cストレスに分けた。4°Cの群を直ちに撹拌に付し、他方、他の2つの群を前記条件に従ってインキュベートし、次いで、撹拌に付した。回転側面撹拌を用いる4°Cでの24時間の撹拌実験を設計した。目視観察を全ての試料で用いて、微粒子を検出し、および4°Cおよび37°Cの試料を静的光散乱でテストして、試料中の粒子サイズの分布を見た。方法:製剤の調製:製剤は、10mMヒスチジンpH7.0および生理食塩水中で貯蔵し、次いで、表1に規定されたように処方された前記多糖-タンパク質コンジュゲートからクラスIIBiosafetyキャビネット中で無菌的に調製した。回転撹拌:この実験は、親水性表面非研磨との相互作用、および最終容器成分および空気/液体界面への製剤の暴露を通じてのPCV-15製剤の直接的撹拌を表す。PCV-15製剤を、13mmストッパーを備えた0.75mLの充填容量の非硫酸塩処理2mLバイアルに充填した。バイアルを、必要であれば、熱的ストレス条件に付し、次いで、4°Cにて24時間、側面で撹拌した。最大スピードでの実験室スケールの多目的ローテーターを回転撹拌で用いた。バイアルを側面撹拌用のローテーターに直接的に付着させた。観察は24時間において行った。結果:4°Cにおける24時間のバイアル中での回転撹拌に続いてのPCV-15製剤表1の結果、ストレス条件にかかわらず、ポロキサマー188の不存在下で沈殿が形成された。ポロキサマー188の添加の結果、微粒子は観察されなかった表2。15のバイアルを各条件で調べた。対照実験は、APAの存在下または不存在下にて、20mMヒスチジンpH5.8、150mMNaClで4°Cにて行った。結果は匹敵するものであり、APAの存在は撹拌誘導凝集の阻害に寄与しないことを示す。静的光散乱も4°Cおよび37°Cの試料に対して行って、サイズ分布を見た。ポロキサマー188無しの製剤においては、より大きな微粒子の集団が観察された。ポロキサマー188のみを含有する製剤は、非撹拌試料で見られた集団に匹敵する粒子の1つの集団を有した図1A~4B。結論:0.1の最終濃度におけるポロキサマー188は、撹拌に先立って製剤に熱ストレスを掛けた場合にさえバイアル中の撹拌誘導凝集を緩和できた。実施例6:ISTA標準テストの間における撹拌誘導凝集の防止に対する界面活性剤のインパクト導入:ISTA標準3A実験の目的は、バイアル製剤を、ルーチン的出荷の間に観察される振動ストレスおよび潜在的な降下ストレスに暴露することにある。実験では、PCV15をいくつかの製剤にて調製し、次いで、ISTA3A手法に付した。国際安全輸送協会手法3AEastLansing,MI参照。ISTA標準プロセスを利用し、結果は、先進国に出荷する場合に材料が経験する予測された条件により沿ったものである。次いで、試料を2~8°Cで貯蔵した。2~8°Cでの貯蔵に続き、試料を微粒子の検出のために目視により精査し、次いで、加えて、粒子サイズ分布について静的光散乱SLSによって分析した。方法:製剤の調製:製剤は、10mMヒスチジンpH7.0および生理食塩水中に保存し、次いで、表3に規定されたように処方された前記多糖-タンパク質コンジュゲートからクラスIIBiosafetyキャビネットにて無菌的に調製した。ISTA標準撹拌実験:バイアルをISTA3A手法に付した。用いた材料はISTA手法3Aにおいて特定されたものであり、ゲルシッパーベース拡大されたポリスチレンEPS熱的シッパーに対するベース;PolarPackゲル、28オンス製品の温度を維持するのに用いる冷蔵剤;0°Cの低温アラームおよび25°Cの高温アラームを備えたPCS50913TempTaleモニター;PCS50900波型パッド、スロット付き;各々、製品カートンおよびゲル荷送人シャットを保持するのに用いるTapeScotchテープおよびパッキングテープ;10×製品カートン5列のうち2列を分離する円状製品を備えた5×2パターンの10のストッパー付きのかつ襞付きバイアルを保持するために設計されたカートン;およびPCS50837ゲルシッパー蓋EPSで作成された蓋を含む。以下のカートンの調製を行った:閉じた1側面にスコッチテープでテーピングすることによって1つの10×製品カートンを組み立てた。黒色の永久的なマーカーを付けた全ての側面の10×製品カートンの外観が損なわれた。PCV15製剤の10バイアルを得た。V114DP製剤の全ての10バイアルをProQuad10×製品カートンに入れた。閉じた10×製品カートンの開放端部にテーピングした。包装された10×製品カートンを4つの冷蔵されたPolarPakゲル、28オンスの間のゲルシッパー内部に、底部に2つのゲルおよび頂部に2つのゲルにて置いた。カートンの調製が完了した直後に、貯蔵/予備テストコンディショニングのためにTegrantCorporationMontgomeryville,PAに移した。テストが行われるまで、全ての材料を以下の温度条件に入れた:PolarPackゲル冷蔵剤、5°C±3°Cで冷蔵、PCV15製剤のバイアル5°C±3°C;PolarPackゲル冷蔵剤、-20°C±5°Cで凍結、全ての他の温度は室温。全ての材料を24時間にわたってこれらの温度貯蔵条件とした。以下の詰め込みpackoutをTegrantCorporationで行った:ゲルシッパーベースを入手した。1つの冷蔵されたPolarPackゲル、28オンスをゲル荷送人底部に平坦においた。1つのTempTaleをゲル荷送人内壁のエッジに接触するPolarPackゲルの頂部に置き、それをひっくり返した。スロット付きの1つの波型パッドを冷蔵されたPolarPackゲルおよびTempTaleの頂部に置いた。PCV15製剤を充填した製品カートンを波型パッドの頂部に置いた。TempTaleをPCV15製剤を充填した製品カートンの頂部層中に置いた。スロット付きの1つの波型パッドを、PCV15製剤を充填した製品カートンの頂部に置いた。1つのTempTaleを底部としてのゲル荷送人壁の対向するエッジに接触する波型パッド中に置き、それをひっくり返した。1つの冷蔵されたPolarPackゲル、28オンスを波型パッドおよびTempTaleの頂部に平坦に置いた。2つの凍結されたPolarPackゲル、28オンスを、冷蔵されたPolarPackゲルの頂部に置いた。ゲルシッパー蓋をゲルシッパーベース上に置いた。閉じたゲルシッパーを包装テープでテーピングした。ISTA3Aテスト手法に従い、分布テストのために、詰め込まれたゲルシッパーをMid-AtranticPackagingMontgomeryville,PAに移した。ISTAテストに加えて、バイアルのサブセットを先に記載した回転振盪条件にやはり暴露した。最大スピードの実験室スケールの多目的ローテーターを回転撹拌で用いた。側面撹拌のためにバイアルをローテーターに直接付着させた。24時間において観察を行った。結果:回転撹拌の結果:4°Cに置ける24時間のバイアル中での回転撹拌に続いてのPCV15製剤の結果、ポロキサマー188の不存在下で沈殿が形成された。界面活性剤ポロキサマー188の添加の結果、微粒子は観察されなかった表4。ISTA標準テスト結果:ISTA標準3A手法に続いてのV114製剤表3を凝集体につき目視で調べた。ポロキサマー188またはポリソルベートPSを含有する製剤は凝集体の出現を緩和した表5。目視精査に加えて、試料のサブセットに対して静的光散乱も行って、サイズ分布を調べた。界面活性剤無しの対照製剤は、増大した粒子サイズ、ならびにISTAテストに続いての粒子のより広い分布の双方に導いた図5A~B。ポロキサマー188を含有する製剤は、ISTAテストへの暴露の後に、より均一な製品を示した図5C~D。結論:多数の製剤を回転および振動ストレスの双方に暴露し、目視で、ならびに粒子サイズ分布のための静的光散乱を利用して観察した。結果は、界面活性剤ポリソルベートまたはポロキサマー188の添加は振動ストレスによって引き起こされた撹拌誘導凝集を緩和できることを示すISTA標準3A結果。しかしながら、ポロキサマー188のみは、V114製剤に関連した振動および回転ストレスの双方を緩和することができる。実施例7:ポロキサマーの範囲の知見PCV-15を、0.25mg/mLリン酸アルミニウムアジュバントAPAを含む20mMヒスチジンpH5.8および150mM塩化ナトリウムでのバイアルイメージとして実施例1~3に記載されたように調製した。回転撹拌実験では、PCV-15は、リン酸アルミニウムアジュバントAPAへの界面活性剤の添加にて調製した。回転側面撹拌を用いる4°Cでの24時間の撹拌実験を設計した。バイアルを通過する光のビームの経路チンデルTindel効果は、微粒子の検出を可能とした。方法:製剤の調製:クラスIIBiosafetyキャビネット中で、無菌的に、実施例1~3に記載されたように製剤を調製した。撹拌実験の開始まで製剤を4°Cで貯蔵した。回転撹拌:撹拌実験の目的は、バイアルを撹拌条件に付し、次いで、それらの条件が凝集体形成に対して有する効果を決定することにある。PCV-15製剤を、13mmストッパーを備えた、0.75mLの充填容量の非硫酸塩処理2mLバイアルに充填した。バイアルを4°Cにて24時間側面にて撹拌した。最大スピードでの実験室スケールの多目的ローテーターを回転撹拌で用いた。バイアルを側面撹拌のためのローテーターに直接的に付着させた。24時間において観察を行った。結果:4°Cでの24時間のバイアル中での回転撹拌後のPCV15製剤の結果、ポロキサマー188の不存在下における、またはPS80の存在下における沈殿の形成がもたらされた。0.025および0.15の間の濃度における界面活性剤ポロキサマー188の添加の結果、微粒子は観察されなかった。しかしながら、より高い濃度0.1および0.15においては、わずかなヘイズの外観ファニングが、空気/液体の界面が生じたバイアルの領域で観察された表7。結論:界面活性剤ポロキサマー188は、0.025~0.15w/vの間の濃度においてバイアル中の撹拌誘導凝集を妨げることができた。実施例8:撹拌誘導凝集に対する保存剤の効果15価肺炎球菌コンジュゲートワクチン-15PCV-15の安定性を、回転撹拌実験の後に、単独で、または界面活性剤と組み合わせた種々の保存剤で実験した。PCV-15は、0.25mg/mLのリン酸アルミニウムアジュバントAPAを含む20mMヒスチジンpH5.8および150mM塩化ナトリウム中にて調製した。64μg/mLにおけるCRM197タンパク質は、64μg/mLの合計多糖濃度について、4μg/mLの肺炎球菌多糖PnP型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F、および33F、および8μg/mLの型6Bにコンジュゲートした。回転撹拌実験は実施例4に記載されたように行った。PCV-15製剤骨格は、単独で、またはポロキサマー188と組み合わせて、特定の濃度のフェノール、2-フェノキシエタノール、m-クレゾール、ベンジルアルコール、またはクロロブタノールで調製した。いくつかの保存剤を特定の溶媒に溶解させた。回転側面撹拌を用いる4°Cでの24時間の撹拌実験を設計した。凝集を目視で観察し、いくつかの場合においては、静的光散乱で観察した。結果:4°Cにおける24時間のバイアル中での回転撹拌後のPCV15製剤は、一般に、ポロキサマー188の不存在下における沈殿の形成をもたらした。界面活性剤0.1ポロキサマー188の添加の結果、テストした保存剤のいずれでも微粒子は観察されなかった。静的光散乱も代表的な試料に対して行って、サイズの分布を見た。ポロキサマー188無しの製剤では、より大きな微粒子の集団が観察された。m-クレゾールまたはフェノールいずれかを含むポロキサマー188を含有する製剤は、非撹拌試料で見られた集団に匹敵する粒子の1つの集団を有した図6A~C。結論:テストした種々の保存剤は、撹拌誘導凝集を阻害するポロキサマー188の能力に対して有害な効果を有しなかった。実施例9:撹拌誘導凝集に対するpHおよび緩衝液の効果15価肺炎球菌コンジュゲートワクチン-15PCV-15の安定性を、回転撹拌実験後に種々の緩衝液およびpH条件で実験した。PCV-15は、0.25mg/mLのリン酸アルミニウムアジュバントAPAを含む20mMの特定の緩衝液および150mMの塩化ナトリウム中で調製した。64μg/mLのCRM197タンパク質を、64μg/mLの合計多糖濃度について、4μg/mLの肺炎球菌多糖PnP型1、3、4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F、および33F、および8μg/mLの型6Bにコンジュゲートさせた。回転撹拌実験では、PCV-15製剤骨格は、pH5.2、5.4、5.6、5.8、6.0、6.2、6.6、6.8、7.0および8.0での、界面活性剤およびオスモライト、およびオスモライトと組み合わせた界面活性剤の添加にて調製した。回転側面撹拌を用いる4°Cの24時間の撹拌実験を設計した。凝集は目視で観察した。結果:4°Cでの24時間のバイアル中での回転撹拌後のPCV15製剤の結果、テストした緩衝液およびpH条件についてポロキサマー188の不存在下で沈殿の形成がもたらされた。界面活性剤0.1ポロキサマー188の添加の結果、テストした緩衝液およびpH条件のいずれでも微粒子は観察されなかった。結論:テストした種々の緩衝液およびpH条件は、撹拌誘導凝集を阻害するポロキサマー188の能力に対する有害効果を有しなかった。実施例10:撹拌誘導凝集に対する種々の分子量範囲のポロキサマーの効果15価肺炎球菌コンジュゲートワクチン-15PCV-15の安定性を、回転撹拌実験後に種々の商業的に入手可能なポロキサマーで実験した。PCV-15は、0.25mg/mLのリン酸アルミニウムアジュバントAPAを含む20mMヒスチジンpH5.8および150mM塩化ナトリウム中で調製した。64μg/mLのCRM197タンパク質は、64μg/mLの合計多糖濃度について、4μg/mLの肺炎球菌多糖PnP型1、3,4、5、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F、および33F、および8μg/mLの型6Bにコンジュゲートした。回転撹拌実験では、PCV-15製剤骨格は、特定の濃度のポロキサマー237、ポロキサマー338、またはポロキサマー407の添加で調製した。回転側面撹拌を用いる4°Cでの24時間の撹拌実験を設計した。凝集を目視で観察した。結果:0.1ポロキサマー237を含む4°Cの24時間でのバイアル中での回転撹拌後のPCV15製剤の結果、微粒子は観察されなかった。テストした他の条件の結果、非常に小さな微粒子がもたらされたが、ポロキサマー無しの対照製剤よりも有意な改良であった。静的光散乱を0.1のポロキサマー237でも試料に対して行って、サイズ分布を見た。この製剤は、非撹拌試料で見られた集団と匹敵するものであった図7。結論:変化させた分子量範囲のポロキサマーは、撹拌誘導凝集を阻害するそれらの能力において異なっていた。条件の最適化は完全な阻害を可能とするはずである。"