"配列番号3に示されるアミノ酸配列またはその誘導体から本質的になる、単離された、または合成された抗腫瘍ペプチド。配列番号3に示されるアミノ酸配列の誘導体が、配列番号8、9および14~33からなる群から選択されるアミノ酸配列である、請求項1に記載の抗腫瘍ペプチド。請求項1または2に記載の1種以上の抗腫瘍ペプチド単数または複数と、医薬上許容される担体または希釈液とを含む、医薬組成物。腫瘍成長を阻害する方法であって、有効量の請求項1または2に記載のペプチドを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、方法。腫瘍が、黒色腫、結腸癌腫、肺癌腫、腎臓癌腫、乳房癌腫、頭頸部癌、胃および腸癌、前立腺癌、肝臓癌および膠芽腫からなる群から選択されるものである、請求項4に記載の方法。腫瘍または癌を治療する方法であって、有効量の請求項1または2に記載のペプチドを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、方法。癌が、黒色腫、結腸癌、肺癌、腎臓癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、胃および腸癌、前立腺癌、肝臓癌および膠芽腫からなる群から選択されるものである、請求項6に記載の方法。ペプチドが、腫瘍細胞の遊走および浸潤を阻害する、請求項5または7に記載の方法。腫瘍成長を阻害する方法であって、有効量の請求項3に記載の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、方法。腫瘍または癌を治療する方法であって、有効量の請求項3に記載の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、方法。被験体において腫瘍または癌成長を阻害するための医薬組成物の製造のための、請求項1または2に記載のペプチドの使用。癌が、黒色腫、結腸癌、肺癌、腎臓癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、胃および腸癌、前立腺癌、肝臓癌および膠芽腫からなる群から選択されるものである、請求項11に記載の使用。被験体において腫瘍または癌を治療するための医薬組成物の製造のための、請求項1または2に記載のペプチドの使用。癌が、黒色腫、結腸癌、肺癌、腎臓癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、胃および腸癌、前立腺癌、肝臓癌および膠芽腫からなる群から選択されるものである、請求項13に記載の使用。被験体において腫瘍または癌成長を阻害するための、請求項1または2に記載のペプチドの使用。癌が、黒色腫、結腸癌、肺癌、腎臓癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、胃および腸癌、前立腺癌、肝臓癌および膠芽腫からなる群から選択されるものである、請求項15に記載の使用。被験体において腫瘍または癌を治療するための、請求項1または2に記載のペプチドの使用。癌が、黒色腫、結腸癌、肺癌、腎臓癌、乳癌、脳癌、頭頸部癌、胃および腸癌、前立腺癌、肝臓癌および膠芽腫からなる群から選択されるものである、請求項17に記載の使用。癌細胞などの腫瘍性細胞の成長を阻害できるペプチドを同定し、提供することが、本発明の目的である。RebMab200ヒト化モノクローナル抗体huMX35に由来するペプチドが、いくつかのヒト腫瘍細胞株のinvitro成長に影響を及ぼし、また、同系モデルにおいてinvivo転移性成長も阻害することがわかった。ペプチドが、過度の接着hyper-adherenceから、細胞浸潤および転移の阻害にさらに翻訳される細胞遊走の阻害にわたる、重要な用量依存的反応刷り込む癌細胞を標的とすることがわかった。したがって、本発明の一態様は、配列番号3に示されるアミノ酸配列またはその誘導体によって同定される、ヒト化モノクローナル抗体RebMab200の相補性決定領域に由来するアミノ酸配列を含む、単離された、または合成された抗腫瘍ペプチドを提供することである。配列番号3に示されるアミノ酸配列の誘導体は、配列番号8、9および14~33からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み得る。本ペプチドは、黒色腫などのmAbMX35と反応しない腫瘍細胞に対してでさえ抗腫瘍活性を示し、腫瘍成長を阻害するか、または腫瘍もしくは癌を治療するための医薬組成物または方法において活性物質として使用できる。したがって、本発明の別の態様は、1種以上の抗腫瘍ペプチドと、医薬上許容される担体とを含む医薬組成物を提供することである。本発明のさらに別の態様は、必要とする被験体に、有効量の抗腫瘍ペプチドを投与するステップを含む、腫瘍成長を阻害する方法または癌を治療する方法を提供することである。定義以下の定義は、このような用語が与えられる範囲を含めた、明細書および特許請求の範囲の明確な、一貫した理解を提供するよう役立つ。語句腫瘍細胞細胞傷害性によって、成長阻害、細胞周期停止、細胞運動の阻害、細胞接着の増大、マトリックス基質による細胞浸潤の阻害、受容体によって誘導される細胞死、老化または死滅につながる細胞代謝およびシグナル伝達経路の干渉を含めた種々の効果が言及される。これらの効果は、invitroまたはinvivoのいずれかで研究され得る。本明細書において用語ペプチドとは、1個のアミノ酸のアミノ基および次のアミノ酸のカルボキシル基からのH2Oの分子の排除によって形成される共有結合によって接続される2個以上のアミノ酸で構成されている化合物を意味する。本発明の目的上、ペプチドは、アミノ酸残基の直鎖アレイであっても、環状アレイであってもよく、すなわち、直鎖ペプチドの末端またはペプチド内のアミノ酸の側鎖が、例えば、化学結合によって接続され得る。本発明の目的上、用語単離されたとは、その元の環境天然に存在する環境から取り出された生体物質例えば、核酸、ペプチドまたはタンパク質の状態または物質が元の環境からは別個に存在する状態を指す。例えば、植物または動物中に天然の状態で存在するペプチドは、単離されていないが、それが天然に存在する隣接するアミノ酸から離れている同じペプチドは、単離されたと考えられる。本発明の目的上、用語単離されたペプチドは、天然ペプチドに対応するよう、公知の方法によって調製または合成されたものを含み得る。本発明の目的上、語句合成ペプチドとは、公知のアミノ酸の化学反応によって、または上記のような生体物質の単離および精製によって調製されたペプチドを指す。語句に対応するとは、本明細書において、正確な位置が、類似性または相同性が測定される分子と同一であるかまたは異なっているかに関わらず、類似のまたは相同な配列を指すよう使用される。核酸またはアミノ酸配列アラインメントは、スペースを含み得る。したがって、用語に対応するとは、配列類似性を指すものであって、アミノ酸残基またはヌクレオチド塩基の番号付けを指すものではない。用語、本明細書において使用されるペプチドの誘導体単数または複数とは、参照ペプチドに関して行われた、例えば、そのアミノ酸配列における、修飾、置換、欠失および/または付加の変動を含むベプチドであって、参照ペプチドとの同定可能な関係を保持するペプチドを指す。修飾は、例えば、グリコシル化、ペグ化、PEGアルキル化、アルキル化、アセチル化、アミド化、グリコシル-ホスファチジルイノシタリゼーションphosphadylinositalization、ファルネシル化、ADP-リボシル化、硫酸化、脂質付着、水酸化および/またはリン酸化による化学修飾を含み得る。この用語は、用語機能的類似体と交換可能であると理解される。本明細書において、用語投与すること、投与および同様の用語は、妥当な医療において、目下提供される組成物を、治療効果を提供するような方法で被験体に送達する任意の方法を指す。本発明の一態様は、本組成物の治療上有効な量の、それを必要とする患者への静脈内投与を提供する。本明細書において、用語治療することは、腫瘍または癌を発生する傾向を有する患者または被験体におけるこのような腫瘍または癌の予防、および一度罹患した場合には、発生した腫瘍または癌の寛解もしくは排除またはこのような癌の特徴的な症状の軽減を含む。本明細書において、用語腫瘍または癌とは、腫瘍または癌のすべての種類を指す。いくつかの実施形態では、用語腫瘍とは、卵巣、肺、腎臓または結腸の癌腫、膠芽腫、黒色腫、星状細胞腫、肉腫、奇形癌腫、絨毛癌または造血器腫瘍を指す。同様に、用語癌とは、卵巣癌、肺癌、腎臓癌、皮膚癌、脳癌、子宮癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肝臓癌、腸癌、食道および胃癌、頭頸部癌または白血病を指す。用語腫瘍および癌は、互いに交換可能であり得る。本明細書において、用語被験体とは、そのための診断、予後または治療が望まれる任意の被験体、特に、哺乳動物被験体、例えば、ヒトを指す。この用語は、患者を指すよう使用される場合もある。本明細書において、用語担体、賦形剤または希釈剤とは、原薬ではない医薬組成物の任意の構成成分を指す。したがって、用語医薬上許容される担体とは、非毒性の、不活性の固体、半固体液体増量剤、希釈液、カプセル化物質、任意の種類の製剤補助物質または簡単に、生理食塩水などの滅菌水性媒体を指す。医薬上許容される担体として役立ち得る物質の一部の例として、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖、コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、ココアバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤、ピーナッツオイル、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブオイル、コーンオイルおよびダイズ油などのオイル、プロピレングリコールなどのグリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル、寒天、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、アルギン酸、発熱物質を含まない水、等張性生理食塩水、リンガー溶液、エチルアルコールおよびリン酸バッファー溶液ならびに医薬製剤において使用されるその他の非毒性の適合性物質が挙げられる。活性薬剤は、有効量で投与されることが好ましい。本明細書において、語句有効量とは、目下記載される方法で使用される場合に、合理的なベネフィット/リスク比に相応の、過度の有害な副作用毒性、刺激作用またはアレルギー反応などを伴わずに所望の治療反応をもたらすのに十分である構成成分の量を指す。例えば、治療上有効な量は、任意の医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット/リスク比で、腫瘍の退縮または腫瘍形成および転移の少なくとも部分的な停止を引き起こすための活性薬剤の十分な量であり得る。投与される実際の量ならびに投与の速度および時間的経過は、治療されている状態の性質および重篤度に応じて変わる。治療の処方、例えば、投与量、タイミングなどの決定は、一般開業医または専門医の責務の範囲内であり、通常、治療される障害、個々の患者の状態、送達部位、投与方法および開業医に公知のその他の因子を考慮する。技術およびプロトコールの例は、例えば、Remington’sPharmaceuticalSciencesに見出すことができる。本願を通じて、種々の実施形態の記載で含むという用語を使用するが、一部の特定の例では、実施形態が、代わりに本質的にからなるまたはからなるという言葉を使用して記載され得ることは当業者ならば理解されよう。別段に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、目下記載される対象が関連する技術分野における当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本教示をより理解するためであって、決して、教示の範囲を制限するものではないが、別段の指示のない限り、本明細書および特許請求の範囲中で使用される量、パーセンテージまたは割合を表すすべての数字およびその他の数値は、用語約によって、すべての例において変更されていると理解されるべきである。したがって、反対の指示のない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲において示される数的パラメーターは、得られるよう探し求められる所望の特性に応じて変わり得る近似値である。最低限でも、各数的パラメーターは、報告された有効桁の数字を踏まえて、また通常の四捨五入技術を適用することによって、少なくとも解釈されるべきである。ペプチドの調製目下記載される、30または25個未満のアミノ酸の範囲の大きさを有する生理活性ペプチド配列番号1~6は、PCT/US2009/000576に記載されるRebMab200huMX35の相補性決定領域CDR高頻度可変性ドメインから、生理活性ペプチドを単離、分離および精製するための公知の方法を用いて単離または分離してもよく、それらをさらに修飾することもできる。目下記載されるペプチドはまた、化学合成または組換えDNA技術を使用する製造によって調製してもよい。例えば、ペプチドは、当技術分野で公知のような、アジド、酸塩化物、酸無水物、化合物酸無水物、DCC、活性化エステル、ウッドワード試薬K、カルボニルイミダゾール、デオキシディクセイションdeoxidixation、DCC/HONB、BOP試薬などを使用する方法によって得ることができる。また、それらは、自動ペプチド合成装置を使用する化学合成によって調製できる。このような化学反応後に、公知の精製法によってペプチドを分離および精製してもよい。このような精製法の一例として、溶媒抽出、蒸留、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、再結晶化などの組合せを挙げることができる。さらに、大腸菌E.coliにおける組換え発現系を使用して、目下記載されるペプチドを、特定の酵素切断部位、例えば、エンテロキナーゼを有する融合タンパク質として発現させてもよい。次いで、細菌を破壊し、遠心分離すると、得られたスープは融合タンパク質を含有する。次いで、融合タンパク質を、特定の親和性カラム、例えば、Ni2またはグルタチオンカラムに載せ、溶出してもよい。溶出後、精製された融合タンパク質を、特定の酵素切断反応に付す。次いで、HPLCまたはイオン交換クロマトグラフィーによって、ペプチドを得られた混合物から精製する。従来の、分析化学、分子生物学的技術および細胞生物学的技術が関係する方法は、本明細書に列挙されるものを含めて多数の公知の参考文献において詳細に記載されている。本発明は、癌を患っている被験体の治療のための医薬組成物の製造のための、30または25個のアミノ酸より小さいペプチドの使用を提供する。本発明の医薬組成物中に含めるための抗腫瘍ペプチドの好ましい大きさは、最大で30または25個のアミノ酸、好ましくは、最大で20個のアミノ酸であり、10、9、8、7、6または5個のアミノ酸の長さを有するより小さい分子が特に有効である。誘導体、体内分布および薬物動態ペプチドの誘導体または機能的類似体は、例えば、L-アミノ酸残基のD-アミノ酸残基またはその他の非天然残基での置換によって調製してもよい。元のアミノ酸配列の多数の位置誘導体を作製することおよび特定の活性についてスクリーニングすることによって、例えば、D-アミノ酸を含む改善されたペプチドを同定し、本発明に従って使用することができる。誘導体または機能的類似体は、出発点と見なされる元のペプチドに機能的または構造的に似ているが、例えば、天然に存在しないアミノ酸またはポリアミドからなるペプチドミメティック化合物であり得る。保存的アミノ酸置換では、あるアミノ酸残基が、全般的に類似した特性大きさ、疎水性および/または電荷を有する別の残基で置換され、その結果、このような置換を有するペプチド配列の全体的な機能は、重大に影響を受けない可能性が高い。非保存的アミノ酸置換では、あるアミノ酸残基が、全般的に異なる特性大きさ、疎水性および/または電荷を有する別の残基で置換され、その結果、このような置換を有するペプチド配列の全体的な機能は、重大に影響を受け得る。誘導体はまた、参照ペプチドの少なくとも1個のアミノ酸を体系的に変更することによって提供することもできる。これは、例えば、アラニンスキャニングAlaスキャンおよび/または各アミノ酸が、19種またはセレノシステインおよびピロリジンpyrrolysineが含まれる場合には21種のその他のアミノ酸のうちの1種で順に置換される置換ネット分析replasementnetanalysisによって行うことができる。これらの方法を用いて、元のアミノ酸配列に基づいているが、各々、少なくとも1個のアミノ酸残基の変化または置換を含有する、多数の異なるペプチドを作製できる。このように、元のアミノ酸配列の多数の位置変異体が合成および/または酵素的に調製される。ペプチドミメティックは、元のアミノ酸間のペプチド結合の代替物を有するプソイドペプチドをさらに含む例えば、米国特許第6,689,753号明細書参照のこと。このようなペプチド結合の代替物として、それだけには限らないが、CH2、CH2CH2、CH=CH、C≡C、CH2NH、COCH2、CH2S、CH2S02およびNHCOが挙げられる。腫瘍細胞を直接的に標的とするペプチドの場合には、長期の血液循環が必要であり、したがって、安定性の増大のために誘導体および/またはコンジュゲートが合成される。本発明の一実施形態では、ペプチドは、安定化されたペプチドを得るためにさらに修飾またはコンジュゲートされる場合もある。D-アミノ酸またはプソイドアミノ酸の導入およびペプチド環化は、ペプチド安定性を増大するための最も一般的な戦略であるAdessiおよびSoto、CurrMedChem.99:963~78頁、2002年。一般的な修飾は、C-C環状ペプチドのもの配列番号3のRB10aにおいて実施され、配列番号8のRB9を生じさせたようなであり、これは、特定のファージディスプレイライブラリーでも発現される。ペプチドは、エンドペプチダーゼおよびエキソペプチダーゼによる分解を防ぐためのその他の方法で変更されてもよい。これらとして、N末端アセチル化、グリコシル化またはC末端アミド化修飾およびペプチド内の特に不安定な部位での非天然アミノ酸例えば、β-アミノおよびα-トリフルオロメチルアミノ酸の使用が挙げられる。ArapらScience279:377~380頁、1998年は、invivoで発達中の腫瘍へファージを標的化する3種の主なペプチドモチーフを同定した。CDCRGDCFCモチーフを保持するファージは、高度に選択的な方法で、癌腫、肉腫および黒色腫を含めたいくつかの腫瘍の種類にホーミングし、ホーミングは、同族ペプチドによって特異的に阻害される。ファージの脳および腎臓血管への選択的局在性を媒介できるペプチドが同定されており、これらの臓器に対して最大13倍の選択性を示している。脳に局在するファージによってディスプレイされるペプチドのうち1種を合成したところ、相同ファージの脳への局在性を特異的に阻害することがわかったPasqualiniおよびRuoslahti、Nature380:364~366頁、1996年;Pasqualiniら、Nat.Biotechnol.15:542~546頁、1997年。これらの実験もまた、ファージ認識のための腫瘍組織上の特異的標的を同定することとは別に、全身投与された同族ペプチドが、同じ標的を認識することを示し、これはまた、invivoでの十分な安定性を意味する。実際に、ペプチドは、グルタルアルデヒドで固定された赤血球上にコーティングされた場合に、静脈内注射された細胞の標的組織への選択的局在性を引き起こした。本発明の一実施形態では、より高い安定性および改善された薬物動態を可能にする、臨床試験において使用するためのペプチド誘導体および/またはコンジュゲートが提供される。このような誘導体および/またはコンジュゲートは、配列番号1~6、特に、配列番号3に示されるペプチド配列に基づいて合成してもよい。このような誘導体および/またはコンジュゲートを、腫瘍細胞細胞傷害性および遊走および転移の腫瘍細胞阻害について試験する。invivoでの半減期の増大および抗腫瘍活性に基づいて、一度、誘導体を選択すると、患者において試験される候補となる。抗転移性ペプチドの場合には、原発腫瘍が切除されたか、またはリンパ節転移のステージにあるか、または局所転移を有する限定された腫瘍発達を有するか、または化学療法を受けている患者のための臨床試験において有効または有用であることを期待できる。invitroおよびinvivoで抗腫瘍活性を有する選択されたペプチドは、並行して、invivo体内分布およびペプチド薬物動態について評価される必要がある。本発明の一実施形態では、目下記載されるペプチドを、その体内分布およびその薬物動態について評価できる。これらの研究のためには、ペプチドを、ビオチン、放射能または別の都合のよいタグを用いて適切に標識しなくてはならない。ビオチン化ペプチドは、ELISAプレート上でストレプトアビジンによって、または体液および組織ホモジネートとともにインキュベートされたセファロース-ストレプトアビジンビーズとの結合によって認識され得る。70アセトニトリル、0.5ギ酸、1mMビオチン水溶液によって達成され得るストレプトアビジンでコーティングされたマルチウェルプレートと堅く結合されたビオチン化ペプチドを溶出し、ペプチドをLC-MSによって同定する。例えば、RebMab200CDRH3の場合には、それがチロシンY残基を有するので125Iを用いて容易に標識できる。また、Pierce試薬を使用するビオチン化のためにN末端システイン残基を使用できる。生理活性ペプチドの構造に応じてその他の適した方法を使用してもよい。体内分布および特異的腫瘍細胞結合を評価するための別のアプローチは、発現ベクターとしてのバクテリオファージMl3の使用である。したがって、本発明の一実施形態では、目下記載されるペプチドをバクテリオファージM13を使用してその体内分布および特異的標的腫瘍細胞結合について評価できる。大腸菌Escherichiacoliにおけるトランスフェクションの際にファージを生成するプラスミドを、ペプチドをコードするオリゴヌクレオチドが、ファージタンパク質をコードするものに融合されるよう操作できる。ファージによって発現される一連の類似ペプチドも、種々のオリゴヌクレオチドを使用して構築できる。invivoにおけるファージ分布は、ウイルス力価測定によってたどることができる。腫瘍および正常組織における、ペプチドの薬物動態、体内分布および結果として起こる取り込みは、分子の大きさおよびリガンド特異性の両方によって変更することができ、分子の大きさは、薬物動態および臓器取り込みに、予測可能な方法で影響を及ぼす。分子の大きさの増大は、ペプチドのポリエチレングリコールペグ化または血清アルブミンとのコンジュゲーションによって達成できる。本発明の一実施形態では、ペプチドをコンジュゲートできる。大きいタンパク質>50kDaは、腎臓によって濾過されないので、PEGが、ペプチドコンジュゲートの流体力学半径を増大し、その腎クリアランスを防ぐのに役立ち得る。両方の場合において、コンジュゲートされたペプチドの活性を試験することは重要である。求核性アミノ酸例えば、システインまたは非天然アミノ酸を使用して、PEGもペプチド配列内に結合することができ、ペプチド機能を阻害しない場合には、特に不安定な内部残基を分解することからエンドペプチダーゼも排除してもよい。一実施形態では、目下記載されるペプチドは、融合タンパク質を形成できる。非共有結合相互作用も可能である。20個のアミノ酸配列の、抗組織因子FabのC末端への融合によって、invivoでアルブミンとの非共有結合が可能となり、ウサギにおいてFabの半減期を約40倍増大したMcFarlandら、CancerRes.671:254~61頁、2007年。同様の構築物は、エフェクターペプチドの半減期を増大するようアルブミンと結合されるペプチドQRLMEDICLPRWGCLWEDDFと、C末端で融合されたIg-CDRを使用して試験できる。ペプチドの、ヒトγ免疫グロブリンIgGのFcドメインとの遺伝子融合は、ペプチド分子の大きさを増大するための代替法である。Fc融合は、新生児Fc受容体FcRnのIgG保護機能を利用する。血清アルブミンは、腎クリアランスを逃れることに加えて、IgGとは異なる受容体の表面との結合によってFcRnを介して再循環される。アルブミンのアミノ酸位置34での遊離システインとの共有結合によるペプチドのアルブミンとの化学的コンジュゲーションも、治療用ペプチドの半減期を延長するのに効果的である。血漿中滞在時間を延長するために、さまざまな戦略が開発されている。直接腫瘍細胞傷害性のために選択されるペプチドは、免疫原性であってはならず、したがって、強い中和抗体反応を誘発できないか、または細胞免疫反応性のためもしくは過敏症反応の媒介のためにMHCによって提示され得ない。ペプチド構造へD-アミノ酸も組み込むことは、ペプチドのタンパク質分解切断および免疫反応性の両方を減少させなくてはならない。その他の種類の誘導体化も同様に、免疫原性について調べられなければならない。生物活性本発明との関連で生物活性は、ペプチドの、治療上有効な量の定義に関連して本明細書に列挙された1種以上の細胞傷害性効果を呼び起こす能力を指すよう使用される。特定の実施形態では、生物活性は、腫瘍性細胞成長または増殖を阻害する能力である。好ましい生物活性は、標的腫瘍例えば、癌細胞の成長の遅延または完全停止を含めた阻害である。別の好ましい生物活性として、標的腫瘍例えば、癌細胞の死滅をもたらす細胞傷害性活性がある。さらに別の好ましい生物活性は、腫瘍性細胞の細胞接着の増大である。本発明は、一態様では、例えば、ペプチドの活性を調べるためにペプチドをスクリーニングすること、結果を分析することおよび/または抗腫瘍活性を有する1種以上のペプチドを同定することを含む、1種以上のペプチドを同定するための方法および/または1種以上のペプチドの生物活性を調べるための方法を提供する。特定の腫瘍種に対するペプチドの有効性は、例えば、PolonelliらPLoSOne.36:e2371頁、2008年およびDobroffらTranslat.Onc.、3:204~217頁、2010年に記載されるように、例えば、腫瘍に由来する細胞を、invitroでペプチドの存在または不在に付すことによって、または腫瘍を投与されたマウスを処理し、腫瘍を経時的にモニタリングすることによってinvitroまたはinvivoのいずれかで調べることができる。いくつかの実施形態では、抗腫瘍ペプチドは、RebMab200に由来するもの、特に、RebMab200CDRに由来するもの、特に、配列番号8、9および14~33に示されるCDRH3配列番号3に由来するものである。好ましくは、ペプチドは、配列番号3RB10a、配列番号8RB9、配列番号9RB10、配列番号16RB9M3、配列番号24RB10A4、配列番号26RB10A6および配列番号31RB10M3に示されるものである。細胞成長の阻害は、invitroまたはinvivoいずれかでの、標的細胞、特に、癌細胞の大幅な減少を指す。さらなる情報は、MurakamiらWBSaunders:Philadelphia、1995年による、Cellcycleregulation,oncogens,andantineoplasticdrugsと題された、TheMolecularBasisofCancer、MendelsohnおよびIsrael編、第1章、特に、13頁に見出すことができる。細胞株の細胞接着は、陰性対照との比較において、細胞培養および種々の濃度のペプチドとともにインキュベーションした後に、細胞付着の増強が観察される場合にペプチド処理によって増大したといわれる。一実施形態では、用量依存性効果が観察される。すなわち、低用量のペプチドでは、細胞は、ペプチド濃度に反比例した速度でトリプシン/EDTAで剥がれる。invitroで特定の腫瘍細胞種に対する有効性についてペプチドを試験することに加えて、またはその代わりに、臨床医がinvivoでペプチドの抗腫瘍効果を試験することができる。invivo試験のために、腫瘍種に由来する細胞を、マウスなどの実験動物に注射する。次いで、動物をモニタリングして、腫瘍が、動物において注射の部位で生じたか、または別の場所で生じたかを調べる。腫瘍細胞接種後にペプチドを用いて処理された実験動物は、通常、腫瘍を発生しないか、または腫瘍形成を大幅に低減する。医薬組成物本明細書に記載された有効量のペプチドを含有する組成物を、治療を必要とする被験体に投与できる。組成物は、非経口的に、静脈内に、局所に、経口的に、頬側に、経鼻的に、経直腸的に、皮下に、筋肉内に、または腹膜内に投与できる。治療の組成物は、投与経路に適合するよう製剤できる。組成物は、錠剤、カプセル剤、溶液、散剤、吸入薬、ローション、チンキ、トローチ剤、坐剤または経皮パッチとして製剤できる。非経口、皮内または皮下投与のための溶液は、例えば、水、生理食塩水、グリセリン、硬化油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールまたはその他の合成溶剤などの滅菌希釈液;ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤;アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化薬;キレート化剤;酢酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤を含み得る。溶液は、アンプル、ディスポーザブルシリンジまたはプラスチックもしくはガラスバイアル中に貯蔵できる。注射または静脈内投与用の製剤は、溶媒または分散媒である担体を含み得る。適した担体として、水、生理食塩水、静菌性水、クレモホールEL商標BASF、Parsippany、NJリン酸緩衝生理食塩水PBS、エタノール、ポリオール例えば、グリセロール、グリコール、プロピレングリコールなどおよびそれらの混合物が挙げられる。これらの組成物は、注射を可能にするために、無菌で、流体でなくてはならない。流動性は、レシチンまたは界面活性剤などのコーティングを用いて維持できる。微生物混入は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸およびチメロサールなどの抗菌剤および抗真菌剤を含むことによって防ぐことができる。組成物の等張性を維持するために、マンニトール、ソルビトールなどの糖および多価アルコールおよび塩化ナトリウムを使用してもよい。無菌性は、溶液の濾過滅菌によって確実にすることができる。あるいは、溶液を、個々に濾過滅菌された構成成分から製造してもよい。濾過滅菌された構成成分を真空乾燥または凍結乾燥させて、滅菌散剤を製造できる。このような散剤を、滅菌担体溶液を用いて注射の前に再水和してもよい。経口組成物として、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、懸濁液および溶液が挙げられる。組成物は、不活性希釈液または食用担体を用いて形作ってもよい。カプセル剤は、適当な希釈液を、ペプチドまたはその製剤と組み合わせることおよびカプセルを混合物で充填することによって製剤できる。一般的な希釈剤として、粉末セルロースなどのデンプン、スクロース、フルクトースもしくはマンニトールなどの糖がある。錠剤は、湿式または乾式造粒によって、打錠によって、またはその他の公知の方法によって製造できる。錠剤のための組成物は、所望のペプチド/化合物に加えて、例えば、微晶質セルロースまたはゼラチンなどの結合剤;デンプンなどの賦形剤;糖例えば、ラクトース、フルクトース、グルコース、メチルセルロース、エチルセルロース;ゴム例えば、トラガカントゴム、アラビアガム;崩壊剤例えば、アルギン酸、プリモゲルPrimogelまたはコーンスターチ;滑沢剤例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステロートSterotes;磨砕剤例えば、コロイド状二酸化ケイ素;甘味剤例えば、スクロースまたはサッカリン;矯味剤例えば、ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香味料;または同様の性質の任意の化合物を含み得る。組成物の放出を遅延させるために、ポリ-D,L-ラクチド-コ-グリコリドまたはポリグリコリドなどの生分解性ポリマーをマトリックスとして使用してもよい。吸入による投与のためには、化合物を、例えば、適した噴射剤、例えば、ガスを含有する加圧容器ディスペンサーからのエアゾールスプレーの形態で、またはその他の公知の方法によって送達してもよい。例えば、投与はまた、例えば、鼻腔スプレーまたは坐剤を用いる経粘膜であってもよく、または例えば、軟膏salve、軟膏ointment、ゲルまたはクリームのような経皮手段によるものであってもよい。このような投与様式は、例えば、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体を含む製剤を使用し得る。徐放性製剤も調製できる。徐放性製剤の適した例として、ペプチドを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例として、ポリエステル、ハイドロゲル例えば、ポリ2-ヒドロキシエチル-メタクリレートまたはポリビニルアルコール、ポリラクチド米国特許第3,773,919号明細書、L-グルタミン酸およびγエチル-L-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRONDEPOT商標乳酸-グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドからなる注射用マイクロスフェアなどの分解性乳酸-グリコール酸コポリマーおよびポリ-D---3-ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン-酢酸ビニルおよび乳酸-グリコール酸などのポリマーは、100日にわたる分子の放出を可能にするが、特定のハイドロゲルは、タンパク質をより短い期間放出する。また、癌、好ましくは、転移性癌腫の治療のための医薬組成物の製造のための、抗腫瘍ペプチド、好ましくは、RebMab200に由来するものの使用も提供される。投与様式および治療方法本明細書に記載されたペプチドは、例えば、ボーラス注射によって、例えば、硬膜外領域との接触を延長するために連続注入によって、またはその他の公知の方法によって投与できる。ペプチドは、任意の時間、注入できる。投与量および投与のタイミングは、特定の被験体の必要に従って、例えば、疼痛を治療するための標準的な臨床プロトコールの枠組み内で変更できる。ペプチドはまた、くも膜下腔内経路による送達、および血流中への送達が可能である。さらに、埋め込み可能な、または身体に取り付け可能なポンプを使用して、本明細書に記載されたペプチドを制御された速度で送達することもできる。あるいは、技術分野で公知のデポー製剤または徐放性製剤によって長期投与を達成できる。ペプチド組成物の単回または複数回投与が実施でき、用量レベルおよびパターンは、治療医師によって選択される。いずれにしても、医薬製剤は、患者を効率的に治療するのに十分なペプチドの量を提供しなければならない。投与は、望ましくない細胞増殖の最初の現れで、または診断の少し後に始め、症状が実質的に減少するまで、およびその後の期間、継続しなくてはならない。癌のよく確立された症例では、負荷投与量とそれに続く維持量が必要となる。さらに、このような治療を必要とする被験体に、配列番号1~33によって表されるアミノ酸配列を含むか、またはからなる少なくとも1種の抗腫瘍ペプチドまたはその誘導体または機能的類似体の有効量を、医薬上許容される希釈剤と一緒に被験体に投与することを含む、腫瘍成長を治療または阻害する方法が提供される。本発明の医薬組成物中に含めるための抗腫瘍ペプチドの好ましい大きさは、最大で30個のアミノ酸、好ましくは、最大で20個のアミノ酸であるが、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6または5個のアミノ酸の長さのより小さい分子も特に有効であり得る。その他の治療計画を、本発明の抗腫瘍ペプチドの投与と組み合わせてもよい。例えば、このような抗腫瘍ペプチドを用いて治療される予定の患者がまた、放射線療法を受けてもよい。あるいは、またはさらに、患者に化学療法薬を投与してもよい。このような化学療法薬の調製および投薬スケジュールは、製造業者の使用説明書に従ってか、または熟練した開業医によって経験的に決定されるように使用され得る。このような化学療法のための調製および投薬スケジュールはまた、ChemotherapyService、M.C.Perry編、WilliamsWilkins、Baltimore、MD1992年に記載されている。化学療法薬は、本発明の抗腫瘍剤の投与に先立っても、それに続いてもよく、またはそれと同時に投与されてもよい。ErbB2、EGFR、ErbB3、ErbB4または血管内皮因子VEGFと結合する抗体などの腫瘍関連抗原にも対する抗体を投与することもまた、望ましいことであり得る。あるいは、またはさらに、同じものまたは2種以上の異なる癌関連抗原と結合する2種以上の抗体も、患者に同時投与してもよい。時には、1種以上のサイトカインを患者に投与することも有益であり得る。好ましい実施形態では、本明細書において、抗癌剤を、成長阻害剤と同時投与する。例えば、成長阻害剤を最初に投与し、続いて、本発明の抗腫瘍ペプチドを投与してもよい。同時投与または最初に、抗腫瘍ペプチドを投与することも考慮される。成長阻害剤の適した投与量は、目下使用されるものであり、成長阻害剤および本明細書におけるペプチドの組み合わされた作用相乗効果によって低下する場合もある。投与量治療のための適当な投与量は、決定されなくてはならない。個々の被験体を治療するのに必要な量または用量の決定は、当業者、例えば、開業医、薬剤師または研究者には日常的なものである。疾患の予防または治療のための、本明細書における抗腫瘍ペプチドの適当な投与量は、上記で定義されるような治療される疾患の種類、疾患の重篤度および経過、薬剤が予防目的で投与されるか、または治療目的で投与されるか、これまでの治療、患者の病歴および薬剤に対する応答ならびに主治医の裁量に応じて変わる。ペプチドは、一度に、または一連の治療にわたって、患者に適宜投与される。動物実験は、ヒト治療のための有効用量の決定のための信頼性のある指針を提供する。有効用量の種間スケーリングは、ToxicokineticsandNewDrugDevelopment、Yacobiら編、PergamonPress、NewYork1989年、42~96頁中、Mordenti,J.およびChappell,W.Theuseofinterspeciesscalingintoxicokineticsによって定められた原則に従って実施できる。ペプチドおよび/またはペプチド製剤の毒性および治療効力もまた、決定できる。非ヒト動物において、LD50集団の50に対する致死用量およびED50集団の50において治療上有効な用量を決定するためには、日常的なプロトコールが利用可能である。治療係数は、LD50/ED50の比として測定される。適した比として、例えば、約2、5、10、50または100を超える比が挙げられる。高い治療指数を有する、化合物、製剤および投与方法を決定できるが、これは、このような治療が、高い有効性を提供する投与量でほとんど毒性を有さないからである。非罹患組織、例えば、内皮組織への損傷を最小にしながら、化合物を罹患組織に送達するための手段が利用可能である場合には、毒性または望ましくない副作用を有する化合物を使用してもよい。一実施形態では、目下記載されるペプチドは、約920~930μΜのED50値を示す図7参照のこと。ヒトにおいて使用するための投与量範囲の策定では、例えば、以下に記載されるような実験動物を用いる研究から、ペプチド調製物の有効用量を推定できる。例えば、細胞培養アッセイにおける治療上有効な投与量として、例えば、約0.1mM~1mM、好ましくは、0.25mM~1mMのペプチドおよびその間の範囲が挙げられる。用量は、動物において、この範囲に入る阻害剤の循環血漿濃度を達成するよう策定できる。例示的用量は、細胞培養アッセイにおいて決定されるような、IC50すなわち、症状の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度を超える血漿濃度をもたらす。循環血漿濃度は、例えば、血液サンプルを得ることによって、また抗体ベースの特異的ELISAアッセイを使用して、または高性能液体クロマトグラフィーまたはマススペクトロスコピーを用いてサンプルを分析することによって決定できる。あるいは、用量は、以下に記載されるように、動物モデルにおける試験から推定できる。症状の軽減は、マウスが少なくとも約1μg/kgから最大10mg/kgの用量で、ペプチドまたは医薬組成物を投与される場合に観察される。例えば、用量は、遊離の、誘導体化されていないまたはコンジュゲートされていない、血漿加水分解および腎クリアランスに対して感受性であるペプチドについて、6mg/kgであり得る。動物およびヒトの投与量の相互関係身体表面の平方メートルあたりのミリグラムに基づくは、例えば、Freireichら、CancerChemother.Rep.1966年、50、219によって記載されている。身体表面積は、患者の身長および体重からおよそ決定できる。例えば、ScientificTables、GeigyPharmaceuticals、Ardley、NewYork、1970年、537頁を参照のこと。ヒト患者を治療するための有効用量は、使用されるペプチド誘導体の安定性およびその薬物動態に応じて変わるので、目下のところ推定できない。ペプチドは、被験体において疼痛を低減するのに有効な局所濃度を維持するために、一定の頻度で、または連続して投与できる。適当な用量は、投与方法に応じて、例えば、約1μg/kg/日から約10mg/kg/日で変わり得る。また、小さいペプチドの低い免疫原性を考慮すると、小さいペプチドを用いる最大100mg/kgの投薬が可能であり、治療を必要とする被験体の状態を考慮して、治療の必要性が緊急であると決定される一部の症例では、最大200mg/kg、500mg/kgまたはさらには1g/kgでさえの投薬も可能であろう。患者の用量は、患者が、医師、薬剤師または研究者の保護下にある間、最適化できる。例えば、記載されたペプチドの比較的低用量を、最初に投与できる。患者を、以下に記載するように症状および疼痛の感覚についてモニタリングできる。用量は、適当な反応が得られるまで増大できる。さらに、任意の特定の被験体のための特定の用量レベルは、被験体の年齢、体重、全身の健康、性別および食事、投与の回数、投与経路、排泄速度および組み合わせて提供されるその他の薬物に応じて変わり得る。以下の実施例は、例示のために提供されるのであって、特許請求の範囲を制限しようとするものではない。材料および方法腫瘍細胞株の調製および細胞培養マウスB16F10-Nex2.1黒色腫細胞を、ExperimentalOncologyUnit、FederalUniversityofSaoPauloUNIFESPでクローニングした。ヒト黒色腫A2058、ヒト結腸癌腫HCT-8、ヒト乳房癌腫MCF-7、MDAおよびSKBR3、ヒト子宮頸癌SiHaおよび卵巣癌腫OVCAR-3細胞は、LudwigInstituteforCancerResearch,SaoPaulo,Brazilによって提供された。すべての細胞株を、10mMのN-2-ヒドロキシエチル-ピペラジン-N-2-エタンスルホン酸HEPES、24mMの炭酸水素ナトリウム、40mg/Lのゲンタマイシン、pH7.2および10FCSを含むRPMI-1640培地中で、加湿雰囲気および5CO2下、37°Cで培養した。HeLa細胞ヒト子宮頸癌は、Dr.HugoP.Monteiro,DepartmentofBiochemistry,UNIFESPによって提供され、U87-MG細胞膠芽腫は、Dr.OsvaldoK.Okamoto、USPによって提供された。HeLaおよびU87-MG細胞は、上記で示したように補給したDMEM培地中で維持した。invitroおよびinvivoにおける腫瘍細胞成長invitro腫瘍細胞成長、細胞傷害性試験、生存細胞の決定およびマウス転移性モデルにおけるB16F10細胞を用いるinvivo保護実験の詳細は、PolonelliらPLoSOne.36:e2371頁、2008年およびDobroffらTranslat.Onc.、3:204~217頁、2010年に記載されている。細胞遊走アッセイ遊走研究のために、5×105または106個細胞を、6ウェルプレート上に分配し、それらを37°C/5CO2で2時間接着させた。培養培地を交換し、ペプチドを500μΜで一晩加えた。細胞単層をP1000チップで傷つけ、24時間インキュベートした。未処理細胞対照およびペプチド処理細胞の画像をJENOPTIKカメラで撮った。Pixcavatorソフトウェアバージョン5.0を使用して細胞数核を決定した。[実施例1]ペプチドの同定および調製可変領域のRebMab200huMX35配列PCT/US2009/000576を、CDRドメインについて研究し、対応するペプチドをペプチド合成のために選択した。高>95純度Peptide2.0Inc.Chantilly、VA、USAから購入を用いて、77種のペプチドを合成した。RB8AIYPGNGDTSYKQKFRG-NH2H2配列番号7RB9CARGETARATFAYWGQGC-NH2H3配列番号8RB10CARGETARATFAYWGQG-NH2H3配列番号9RB10aCARGETARATFAYWGQGH3配列番号3RB11GYTFTGYNIH-NH2H1配列番号10RB12SASQDIGNFLN-NH2L1配列番号11RB13YTSSLYS-NH2L2配列番号12RB14QQYSKLPLT-NH2L3配列番号13以下の配列に対応する、55のRB9誘導体化ペプチドを合成した。D-異性体アミノ酸、D-アラニンdA、D-シトルリンdCit、D-フェニルアラニンdFおよびD-アルギニンdRを、RB9およびRB10誘導体化ペプチドの両方に導入した。RB9M1CdARGETAdCitATFAYWGQdAC-NH2配列番号14RB9M2CdARGETAdCitATdFAYWGQdAC-NH2配列番号15RB9M3CdARGETARATFAYC-NH2配列番号16RB9M4CARGETAdCitATFAYWGQGC-NH2配列番号17RB9M5CdARGETARATFAYWGQGC-NH2配列番号18以下の配列に対応する、33種のRB9スクランブルペプチドを合成した:RB9スクランブルCGTFEYRAQAGWAGRTAC-NH2配列番号19RB9Sc2YWCRAAFTTEAGRACQGG-NH2配列番号20RB9Sc3CFTARAGWYATEARGGQC-NH2配列番号21以下の配列を有するRB10のアラニンスキャニングシリーズに対応する66種のその他のペプチドを合成した:RB10A1AARGETARATFAYWGQG-NH2配列番号22RB10A3CAAGETARATFAYWGQG-NH2配列番号23RB10A4CARAETARATFAYWGQG-NH2配列番号24RB10A5CARGATARATFAYWGQG-NH2配列番号25RB10A6CARGEAARATFAYWGQG-NH2配列番号26RB10A8CARGETAAATFAYWGQG-NH2配列番号27以下の配列を有するRB10のC末端ペプチド断片WGQGを除くも合成した:RB10C-tTFAYWGQG-NH2配列番号28配列に対応する44種のRB10誘導体化ペプチドを合成した:RB10M1CARGETAdCitATdFAYWGQdA-NH2配列番号29RB10M2CAdRGETAdRATdFAYWGQdA-NH2配列番号30RB10M3CdARGETARATFAYWGQG-NH2配列番号31RB10M4CdARGETAdCitATFAYWGQdA-NH2配列番号32配列に対応する11種のRB10スクランブルペプチドを合成した:RB10スクランブルCGTFEYRAQAGWAGRTA-NH2配列番号33手短には、RebMab200CDRL1、L2、L3およびH1について、抗腫瘍活性は見られなかった。アミド化されたRebMab200CDRH2配列番号7は、種々の特異性のいくつかのマウス抗体に由来する同様のH2断片と、最大1616個の同一アミノ酸を共有する。しかし、異なる特異性を有し、アポトーシスおよび血管新生阻害によって黒色腫細胞を死滅させたmAbC7IgMに由来するCDRH2については、先に記載された強力な活性とは対照的に、抗腫瘍効果を示さなかったPolonelliら、PLoSOne.36:e2371。保存された配列WGXGを含有する、拡張した形態のRebMab200のCDRH3配列番号3は、数種のその他の抗体に由来するH3配列と最大82の同一のアミノ酸を共有する。しかし、Kabatのものに基づくH3配列GETARATFAYは、多様な供給源に由来する、主に原核生物に由来するいくつかのタンパク質と部分8~9/10または完全同一性9/9を示し、Ig配列とはほとんど関連しない。驚くべきことに、拡張されたRebMab200のH3配列は、mAbMX35と反応しない腫瘍細胞例えば、黒色腫に対してでさえ抗腫瘍効果を示し、これは、マイクロ抗体として作用せず、腫瘍細胞との結合のために、おそらくは別の細胞表面受容体を使用することを示唆する。[実施例2]細胞接着アッセイペプチドRB9、RB10およびRB10aそれぞれ、配列番号8、9および3を用いる腫瘍細胞の処理によって、基板との接着の用量依存性増大を示す細胞が提供された96ウェルプレート、10FCSを含むRPMI培養培地。1mMのペプチド濃度で、ほとんどの腫瘍細胞は、過度の接着hyper-adherenceを示し、トリプシン/EDTAを用いる長期間の処理によってでさえ懸濁され得なかった。低用量では、細胞は、ペプチド濃度に反比例した速度でトリプシン/EDTAで剥がれる。おそらく、ペプチドRB9およびRB10は、細胞の細胞骨格動態に影響を及ぼし、そのようにして、細胞接着の増大をシグナル伝達した。このような反応は、マウスB16F10-Nex2.1黒色腫、ヒトU87MG膠芽腫、A5028黒色腫、SKBR3乳癌、SiHa子宮頸癌およびHCT結腸癌細胞において見られた図1、2、3および4。懸濁細胞および接着細胞の両方が生存していたと、トリパンブルー染色およびMTT[3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド;黄色テトラゾール]アッセイによって示され、これは、ペプチドが、直接的に細胞傷害性ではないが、腫瘍細胞の遊走および浸潤を阻害できる方法で細胞接着を強力に刺激することを示す。H1RB11、配列番号10、H2RB8、配列番号7、L1RB12、配列番号11、L2RB13、配列番号12、L3RB14、配列番号13ペプチドは、抗腫瘍活性を示さず、陰性対照として使用した。[実施例3]マウス黒色腫およびヒト膠芽腫細胞に対するペプチドRB9およびRB10の効果B16F10-Nex2.1細胞5×103個およびU87-MG細胞1×104個を、96ウェルプレートにおいて培養し、0.01~1mMすなわち、B16F10-Nex2.1細胞に対しては、0.01、0.05、0.1、0.25、0.7、0.8および1mMのRB9およびRB10;ならびにU87-MG細胞に対しては0.25、0.5、0.75および1mMのRB9およびRB10の種々の濃度のRB9配列番号8およびRB10配列番号9とともにインキュベートした。18時間インキュベートした後、トリプシン/EDTAを用いて剥がれた生存細胞を、トリパンブルー排除染色を使用してカウントした。すべてのアッセイは、2回の独立実験において3連で実施した。結果は、図1Aから1Dに示されている。[実施例4]ヒト乳癌SKBR3および黒色腫A2058細胞に対するRB9およびRB10の効果SKBR3細胞1×104個を、96ウェルプレートにおいて培養し、RB9配列番号8およびRB10配列番号9とともにインキュベートした。18時間インキュベートした後、トリプシン/EDTAを用いて剥がれた生存細胞を、トリパンブルー排除染色を使用してカウントした。アッセイは、2回の独立実験において3連で実施した。A2058ヒト黒色腫細胞1×104個を、5CO2を含む加湿チャンバー中、37°Cで4時間インキュベートした。ウェルに、0~1mMの範囲すなわち、0、0.25、0.5および1mMの種々のペプチドの濃度のRB9およびRB10を含有する新鮮培地を加え、24時間インキュベートした。次いで、培地を吸引し、37°Cで、30μl/ウェルのトリプシン-EDTAを用いて細胞を5分間剥がし、生存細胞を、トリパンブルーを使用し、Neubauerチャンバー中でカウントした。図2A~2Dに示されるように、それぞれ、630および610μΜのRB9およびRB10で、細胞の50がトリプシン-EDTA耐性であった。[実施例5]ペプチド処理された過度に接着性のHyper-adherentSiHa細胞の検出生存SiHa細胞1×104個/ウェルを、96ウェル培養プレート上に分配し、5CO2を含む加湿チャンバー中、37°Cで4時間インキュベートした。ウェルに、0~1mMの範囲すなわち、0、0.25、0.5および1mMの種々のペプチドの濃度のRB9配列番号8およびRB10配列番号9を含有する新鮮培地を加え、24時間インキュベートした。次いで、培地を吸引し、30μl/ウェルのトリプシン-EDTAを用いて細胞を37°Cで5分間剥がし、PBSを用いて穏やかに洗浄した。過度に接着性のHyper-adherent細胞を、新鮮培地中の、0.5mg/mLのMTT[3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド]とともに4時間インキュベートし、1容量の10SDS溶液を一晩添加してホルマザン結晶を可溶化した。570nmでプレートリーダーを使用して強度を測定した。図3Aおよび3Bに示されるように、RB10は、SiHa細胞株に対してRB9よりもより効果的であり、500μΜで、腫瘍細胞のそれぞれ、80および30をトリプシン処理に対して耐性にさせた。[実施例6]ペプチド処理された過度に接着性のHyper-adherentHCT細胞の検出生存HCT細胞1×104個/ウェルを、実施例5の同一プロトコールに従って、96ウェル培養プレート上に分配し、4時間インキュベートした。図4Aおよび4Bに示されるように、HCT細胞株では、RB10配列番号9の効果は、RB9配列番号8と同様であり、これでは、細胞の80が、500μΜのペプチドでトリプシン処理に対して耐性であった。[実施例7]RB9およびRB10のinvivo抗腫瘍効果ペプチドRB9およびRB10を、アポトーシスペプチドA4H3、細胞傷害性抗黒色腫mAbA4の真のマイクロ抗体Dobroffら、Translat.Onc.、3:204~217頁、2010年とともに、C57B1/6マウス6匹の動物/群に静脈内に注射されたB16F10-Nex2黒色腫細胞2×105個による肺コロニー形成に対するその保護効果について試験した。ペプチドを、腫瘍細胞投与の1、3、5、7、9、11日後に腹膜内投与した250μgi.p.。腫瘍投与の22日後のペプチド処理された動物の肺が、図5に示されている。ペプチド処理は、動物屠殺の10日前に中断した。ペプチドRB9配列番号8およびRB10配列番号9は、転移性黒色腫に対して成功裏に保護し、肺コロニー形成を大幅に低減した。C57B1/6マウス6匹の動物/群において静脈内に注射されたB16F10-Nex2黒色腫細胞2×l05個による肺コロニー形成に対するペプチドRB9およびRB10によるinvivo保護およびA4H3対照は、図6に示されている。RebMab200のその他の5種のCDR配列番号7、10、11、12、13は、invivoで非保護性であった。ペプチドを、上記と同じ方法で投与し、肺小結節の数を決定した。RB9およびRB10による保護は、ペプチド処理が動物屠殺の10日前に中断された場合にさえ、見られ、これは、腫瘍細胞遊走および浸潤に対する早期効果を示唆する。これらの結果は、huMX35について確立されたものを超える、これらのペプチドの反応性の広い範囲を示す。ペプチドRB9およびRB10は、懸濁液中で成長するヒト白血病HL-60細胞に対して軽度に細胞傷害性であり図7、OVCAR-3卵巣癌細胞に対して不活性であった図8。ペプチド処理した卵巣癌細胞は、試験されたその他の腫瘍細胞とは異なり、普通、トリプシン/EDTAで剥がれ、これは、これらの細胞において両ペプチドが効果がないことを示唆する。huMX35は、結合するが、OVCAR-3卵巣癌細胞に対して直接的に細胞傷害性ではないので示されていないデータ、この実験は、RB9およびRB10が、元のmAbと機能的に関連するマイクロ抗体に相当し得るという証拠を提供しない。競合実験は、細胞ELISAを使用して行ったが、RB10は、二次抗体すなわち、GEHealthcare製の抗ヒトIgGと反応し、したがって、この問題に答えるには異なる方法が必要となる。それにもかかわらず、ペプチドRB9およびRB10は、腫瘍細胞上に発現された受容体と反応し、基板との細胞骨格依存性細胞間接着に強く影響を及ぼした。このような接着の増大は、ペプチド処理した黒色腫細胞による肺コロニー形成の阻害と一致して、転移を阻害すると思われる。[実施例8]ヒト白血病細胞に対するRB9の効果生存HL-60細胞1×104個/ウェルを、96ウェル培養プレート上に分配し、4時間インキュベートし、0~1mMの範囲の種々の濃度のRB9配列番号8とともに24時間インキュベートした。細胞生存力は、トリパンブルーを用いてNeubauerチャンバー中でカウントすることによって直接的に測定するか、または比色定量MTTアッセイによって推定した。図7Aおよび7Bに示されるように、RB9は、920~930μΜで細胞生存力を50低減した。[実施例9]卵巣癌腫細胞に対するRB9の効果生存OVCAR-3細胞1×104個/ウェルを、96ウェル培養プレート上に分配し、4時間インキュベートし、0~1mMの範囲の種々の濃度のRB9配列番号8とともに24時間インキュベートした。細胞を、30μl/ウェルのトリプシン-EDTAを用いて37°Cで5分間剥がし、トリパンブルーを用いてNeubauerチャンバー中でカウントするか、または比色定量MTTアッセイによって推定した。図8に示されるように、RB9は、この系統に対して低い効果を有しており、MTTアッセイでは生存力の大幅な低下はなかった。図1~4に示されるように、1mMのRB9では、ほとんどの細胞が、過度の接着性hyper-adherentの効果によって影響を受けなかった。[実施例10]アラニンスキャニングシリーズおよび細胞間接着アッセイペプチドRB10配列番号9を、Ala-スキャン法を使用して各アミノ酸をアラニンによって置換し、このようにして、生物学的効果に対する、具体的には、1mMペプチドを用いて観察された過度の接着hyper-adherenceに対する各アミノ酸の役割を評価するのに役立つよう操作した。この目的上、生存黒色腫B16F10-Nex2細胞1×104個/ウェルを、96ウェル培養プレート上に分配し、4時間インキュベートした。1mMのRB10のアラニンスキャニングシリーズを含有する新鮮培地を添加し、24時間インキュベートした。処理された細胞を、30μl/ウェルのトリプシン-EDTAを用いて37°Cで5分間剥がし、PBSを用いて穏やかに洗浄した。細胞を、新鮮培地中の、0.5mg/mLのMTT[3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド]とともに4時間インキュベートし、1容量の10SDS溶液を一晩添加してホルマザン結晶を可溶化した。570nmでプレートリーダーを使用して強度を測定した。図9に示されるように、誘導体RB10A4配列番号24およびRB10A6配列番号26ならびにペプチドRB10aカルボキシ末端を有する配列番号3は、ペプチドRB10配列番号9が行ったように作用し、高いトリプシン/EDTA耐性細胞接着を誘導した。アラニン置換された誘導体RB10A1配列番号22、A3配列番号23、A8配列番号27およびあまり効率的ではないA5配列番号25は、RB10とは異なり、1mMペプチドを用いて処理された場合に、普通は剥がれる細胞を提供した。各ペプチドの100の値は、トリプシン処理されていない処理された細胞に相当した。[実施例11]腫瘍細胞浸潤の阻害500μlのRPMI中の、2×105個のB16F10-Nex2細胞の懸濁液を、0.5mMのRB9とともにインキュベートし、マトリゲルBecton-Dickinsonを用いてプレコーティングされた8μlのTranswellBecton-Dickinsonの上部チャンバーに添加した。transwell下部チャンバーにおいて、化学誘引物質として、RPMI中、10のFCSを使用した。5CO2を含む加湿雰囲気下、37°Cで24時間後、非浸潤細胞をスワブを用いて排除し、膜を越えた細胞をメタノールを用いて固定し、Giemsaを用いて染色した。細胞を各transwellメンブレンにおいてカウントし、浸潤細胞の数がパーセンテージとして表されている。RB9配列番号8ペプチドは、transwellシステムにおいてマトリゲルの腫瘍細胞浸潤を阻害できた。RB9によるB16F10-Nex2細胞浸潤の阻害は、用量依存性であり、25μMのRB9で60阻害した図20。[実施例12]ジヒドロエチジウムDHEアッセイにおいて示されるスーパーオキシドアニオン生成の増強マウス黒色腫の転移性同系モデルにおいて腹膜内に投与された場合に、保護効果が示され、invitro試験において示された処理された細胞の著しい過度の接着hyper-adherenceは、RB9配列番号8およびRB10配列番号9ペプチドが、細胞の細胞骨格動態に影響を及ぼすことによって、細胞遊走および浸潤を干渉することを示唆する。腫瘍細胞中のアクチンおよびペルオキシドなどの構成成分の内部相互作用に基づいて、さらにアポトーシスにつながる、RB10で処理された腫瘍細胞中のアニオンスーパーオキシドの生成を、ジヒドロエチジウムDHEアッセイによって調べた。1mMのRB10を用いて18時間または5mMのH2O2を用いて20分間、B16F10-Nex2細胞を処理した。次いで、ペプチドまたはH2O2を用いて処理された細胞および未処理細胞を、DHEとともにインキュベートした。蛍光顕微鏡Magnification600Xを使用して、酸化によるDHEのエチジウムへの変換が観察された。ジヒドロエチジウムを用いる反応は、これらの細胞において陽性であった図10。[実施例13]ペプチド安定性-ヒト血漿によるペプチドRB9分解ペプチドは、タンパク質分解活性および腎濾過のために血漿中で可変の半減期を有し、これは、薬物候補の薬物動態における関連態様である。これらの態様を研究するために、RB10配列番号9よりも可溶性であるペプチドRB92mg配列番号8を、200μLのMilliQ水中に溶解し、37°Cで1mLのヒト血漿とともにインキュベートし、全ペプチドが分解された場合の分解の動態学を最大24時間たどった。HPLCおよび質量スペクトルにおいてペプチドを分析するために、200μLのアリコートを、新しいエッペンドルフチューブに移し、タンパク質を20μLのトリフルオロ酢酸を用いて4°Cで5分間沈殿させた。14,000rpmで10分間遠心分離した後、LCESI-MSWatersにおいて上清を分析した。図11A~11Cは、HPLCおよび質量スペクトルペプチドピーク0時間および24時間後のその総分解を示す。RB9ペプチドの経時的血漿分解を調べるためのアッセイに関しては、ヒト血漿によるペプチド分解を、上記のようにHPLCおよび質量スペクトルにおいて30分毎にモニタリングした図12。37°Cで2時間のインキュベーション後に約50のRB9が切断された。比較のために、RB8を、血漿中で同様にインキュベートした。その半減期は、1時間未満であった。同じ方法を使用して、誘導体化手順後に血漿タンパク質分解に対するペプチド耐性をモニタリングしてもよい。RB9の半減期は、上記で研究されたその他のCDR由来のペプチドの半減期に匹敵するがPolonelliら、PLoSOne.36:e2371、2008年、やはり、マウス転移性モデルにおいてinvivo保護効果を有するよう、腫瘍細胞における十分な曝露を可能にした。[実施例14]腫瘍細胞遊走-創傷治癒アッセイ生存B16F10-Nex2細胞5×105個/ウェルを、6ウェル培養プレート上に分配し、5CO2を含む加湿チャンバー中、37°Cで一晩インキュベートした。細胞単層を傷つけるためにP1000チップを使用し、カメラJenoptikを使用し、ソフトウェアProgres2.8を用いて画像を直ちに撮った0時間。24時間後、同一視野の新規画像を得、記録した24時間。24時間後、未処理対照B16F10-Nex2細胞は、遊走して、単層を再構成した図13A。500μΜの濃度でのペプチドRB10配列番号9を用いて処理すると、1×106個の腫瘍細胞の遊走の100阻害が起こった図13B。500μMのRB9配列番号8およびRB10を用いて、またはRB10M3dAla2Ala置換、配列番号16を用いて、B16F10-Nex2黒色腫細胞の遊走の総阻害が観察された。アラニンスキャニングシリーズにおけるもののようなその他の置換およびその他の誘導体化およびスクランブルペプチドは、部分遊走阻害を示したか、または効果がなかった図16。この反応は、B16F10-Nex2細胞の遊走阻害に対するH3ペプチドの著しい特異性を示す。ペプチドRB9は、A2058ヒト黒色腫、HCT結腸癌腫およびSKBr3乳癌細胞の遊走を完全に阻害した。Ovcar-3細胞遊走を半阻害し、U87膠芽腫腫瘍細胞は不十分にしか阻害しなかった。SiHa子宮頸癌細胞に対しては、効果を示さなかった図17。ペプチドRB10またはRB10M3配列番号31は、U87膠芽腫細胞の部分遊走阻害ならびにHeLaおよびSiHa子宮頸癌細胞の完全またはほぼ完全な阻害を示した図18。ペプチドRB9は、正常な非腫瘍化細胞、マウス線維芽細胞細胞株3T3および2種の初代ヒト線維芽細胞の遊走には影響を及ぼさなかった図19。[実施例15]ペプチドRB10による腫瘍細胞遊走の用量依存的阻害生存B16F10-Nex2細胞3×105個/ウェルを、12ウェル培養プレート上に分配し、5CO2を含む加湿チャンバー中、37°Cで4時間インキュベートした。ウェルに、種々の濃度のRB10配列番号9を含有する新鮮培地を添加し、再度4時間インキュベートした。単層創傷を、実施例12において記載したように実施し、それに応じて画像を得た。24時間後、同一視野における新規画像を得、記録した24時間。図14に示されるように、遊走阻害は、用量依存的であり、RB10は、低濃度30μΜでさえ、遊走を30超阻害できた。図14に示されるように、500μΜでは、細胞遊走の100を阻害した。倍率×100。[実施例16]RB10成長阻害生存B16F10-Nex2細胞5×105個/ウェルを、6ウェルの培養プレート上に分配し、4時間インキュベートした。ウェルに、0または500μΜのRB10配列番号10を含有する新鮮培地を添加し、12時間インキュベートした。カメラJenoptikを使用し、ソフトウェアProgres2.8を用いて画像を撮った。ソフトウェアpixcavatorintelligentperceptionを使用して細胞数を検出した。0.5mMのRB10を用いて12時間後、黒色腫細胞は、39少ない細胞を有していた図15。これらの細胞は、依然として、増殖できたが、遊走できなかった。RB10のこれらの効果によって、何故ペプチドが、ともに感受性マウスにおける、黒色腫の転移性モデルに対して保護的であるが、皮下モデルにおける原発腫瘍の発生に対してはそうではないのかが説明されると思われる。倍率×100。[実施例17]Invivoペプチド毒性評価マウスにRB9配列番号8を連続7日間注射しi.p.によって300μg、組織病理学のために、その後、屠殺した。肝臓、肺、心臓、腎臓および脾臓において、毒性の徴候または形態学的変化は観察されなかった。また、ペプチドは、RB10M3配列番号31について図21に示されるように、溶血性ではなかった。本発明が関連する技術分野における当業者ならば、その本質的な性質から逸脱することなく種々の改変を行うことができることは理解されよう。添付の特許請求の範囲内に、すべてのこのような改変を包含するよう意図される。"