"水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体およびエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体、あるいは水酸基とエポキシ基とを含有する架橋性ビニル単量体、を含むビニル単量体の重合体からなる多孔質粒子、前記多孔質粒子に結合したリガンド、ならびに開環エポキシ基を有することを特徴とする、アフィニティークロマトグラフィー用充填剤。前記リガンドが、プロテインA、プロテインAのイムノグロブリン結合ドメイン、または、その変異体を少なくとも1個含むタンパク質である、請求項1に記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤。前記ビニル単量体が、X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体20~90質量部、X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体0~40質量部、M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体1~40質量部、およびM-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体0~70質量部から構成される但し、X-1、X-2、M-1およびM-2の合計は100質量部である。、請求項1または2に記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤。前記開環エポキシ基は、前記重合体に含まれるエポキシ基をチオグリセロールにより開環させて得られる、請求項1~3のいずれか1つに記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤。前記多孔質粒子が、前記ビニル単量体100質量部と、P-1炭素数7~14である直鎖状、分岐鎖状および環状のアルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、エステル、炭素数8~10のアルキルベンゼンから選ばれる少なくとも1つのポロジェン但し、ポロジェンの合計量は100~400質量部であり、P-1はポロジェンの合計量100質量中に10質量以上である。を必須成分とする水系混合物と、を懸濁重合して得られる、請求項1~4のいずれか1つに記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤。水銀ポロシメータで孔径10~5000nmの範囲に相当する細孔を測定したときの前記多孔質粒子の細孔容積が1.00~1.90ml/gである、請求項1~5のいずれか1つに記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤。前記多孔質粒子の粒子径が35~100μmである、請求項1~6のいずれか1つに記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤。請求項1~7のいずれか1つに記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を用いて、前記充填剤にイムノグロブリンを吸着させる工程、および前記イムノグロブリンを溶出させる工程を含む、イムノグロブリンを単離する方法。請求項1~7のいずれかに記載のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤が充填された、アフィニティークロマトグラフィー用充填カラム。しかしながら、アガロース粒子は、一般に弾性率が低いため、高速で媒体を流したときにカラムの圧力が高くなるという欠点を有しており、圧力特性に劣る。また、アガロース粒子は、一般に、天然の海草から長く複雑な工程を経て製造されるために、一定の品質のものを得るのが困難であるという欠点がある。一方、スチレン-ジビニルベンゼンのようなビニル単量体の重合体からなる多孔質粒子は、親水性が低いために、リガンドの活性が低く、標的分子に対する動的結合容量が低いという欠点を有する。また、ビニル単量体の重合体からなる多孔質粒子の細孔にアガロースのような糖鎖を結合した粒子は、アガロース粒子同様、長く複雑な工程を経て製造されるために、アフィニティークロマトグラフィーとして使用できるような品質のものは高価であったり、一定の品質のものが得られにくいという欠点を有する。さらに、従来のようなゲル濾過クロマトグラフィーや逆相液体クロマトグラフィーに用いられていた水酸基含有架橋性ビニル単量体の重合体からなる多孔質粒子は、アフィニティークロマトグラフィー用充填剤としての高い動的結合容量と圧力特性の両立を達成できるものではない。そこで、本発明は、タンパク質の動的結合容量が高く、圧力特性にも優れる、タンパク質精製に有用なアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を提供することを目的とする。本発明の一態様に係るアフィニティークロマトグラフィー用充填剤は、水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体およびエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体、あるいは水酸基とエポキシ基とを含有する架橋性ビニル単量体、を含むビニル単量体の重合体からなる多孔質粒子、前記多孔質粒子に結合したリガンド、ならびに開環エポキシ基を有することを特徴とする。上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤において、前記リガンドが、プロテインA、プロテインAのイムノグロブリン結合ドメイン、または、その変異体を少なくとも1個含むタンパク質であることができる。上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤において、前記ビニル単量体が、X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体20~90質量部、X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体0~40質量部、M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体1~40質量部、およびM-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体0~70質量部から構成される但し、X-1、X-2、M-1およびM-2の合計は100質量部である。ことができる。上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤において、前記開環エポキシ基は、前記重合体に含まれるエポキシ基をチオグリセロールにより開環させて得ることができる。上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤において、前記多孔質粒子が、前記ビニル単量体100質量部と、P-1炭素数7~14である直鎖状、分岐鎖状および環状のアルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、エステル、炭素数8~10のアルキルベンゼンから選ばれる少なくとも1つのポロジェン但し、ポロジェンの合計量は100~400質量部であり、P-1はポロジェンの合計量100質量中に10質量以上である。を必須成分とする水系混合物と、を懸濁重合して得ることができる。上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤において、水銀ポロシメータで孔径10~5000nmの範囲に相当する細孔を測定したときの前記多孔質粒子の細孔容積が1.00~1.90ml/gであってもよい。上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤において、前記多孔質粒子の粒子径が35~100μmであってもよい。本発明の別の一態様に係るイムノグロブリンを単離する方法は、上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤を用いて、前記充填剤にイムノグロブリンを吸着させる工程、および前記イムノグロブリンを溶出させる工程を含む。本発明の別の一態様に係るカラムは、上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤が充填されたアフィニティークロマトグラフィー用充填カラムである。本発明に係るアフィニティークロマトグラフィー用充填剤によれば、タンパク質の動的結合容量が高く、しかも圧力特性に優れた、タンパク質精製に有用なアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を提供することが可能となる。以下、本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤について、具体的に説明する。1.アフィニティークロマトグラフィー用充填剤本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤は、水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体およびエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体、あるいは水酸基とエポキシ基とを含有する架橋性ビニル単量体、を含むビニル単量体の重合体からなる多孔質粒子、前記多孔質粒子に結合したリガンド、ならびに開環エポキシ基を有する。1.1.多孔質粒子の構成本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する多孔質粒子は、水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体およびエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体を必須成分とするビニル単量体の共重合体、あるいは水酸基とエポキシ基とを含有する架橋性ビニル単量体のみを必須成分とするビニル単量体の単独重合体からなる担体粒子である。該重合体にはエポキシ基が含まれることから、該重合体からなるリガンド結合前における多孔質粒子はエポキシ基を含む。リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量は、0.05~4.0mmol/gである。1.1.1.水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体は、1分子中に、2個以上の重合性ビニル基エチレン性不飽和結合を有する基と、1個以上の水酸基とを有し、かつエポキシ基を有さない架橋性の単量体である。水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体を用いて、多孔質粒子を親水化し、適切な弾性率に制御することにより、タンパク質の動的結合容量が高く、しかも圧力特性に優れたアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を得ることが出来る。水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体としては、好ましくは脂肪族ポリビニル単量体であり、さらに好ましくは多価アルコールのメタアクリレートである。水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体としては、具体的には、グリセリンジメタアクリレート、トリメチロールエタンジメタアクリレート、トリメチロールプロパンジメタアクリレート、ブタントリオールジメタアクリレート、ペンタエリスリトールジメタアクリレート、ペンタエリスリトールトリメタアクリレート、ジペンタエリスリトールジメタアクリレート、ジペンタエリスリトールトリメタアクリレート、ジペンタエリスリトールテトラメタアクリレート、ジペンタエリスリトールペンタメタアクリレート、イノシトールジメタアクリレート、イノシトールトリメタアクリレート、イノシトールテトラメタアクリレートなどが挙げられる。その他、各種糖類の2置換以上のメタアクリレート、例えば、グルコースジメタアクリレート、グルコーストリメタアクリレート、グルコーステトラメタアクリレート、マンニトールジメタアクリレート、マンニトールトリメタアクリレート、マンニトールテトラメタアクリレート、マンニトールペンタメタアクリレートなども挙げられる。さらに、ジアミノプロパノール、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、グルコサミンなどの多価アミノアルコールとメタアクリル酸との脱水縮合反応物と同様の構造を有する水酸基含有架橋性ビニル単量体なども挙げられる。水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体として、特に好ましくは、グリセリンジメタアクリレート、ペンタエリスリトールトリメタアクリレート、イノシトールトリメタアクリレートであり、最も好ましくは、グリセリンジメタアクリレートである。耐アルカリ性を考慮すると、メタクリレート類、アクリルアミド類、メタクリルアミド類が好ましい。耐アルカリ性を考慮した場合、特に好ましい水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体は、グリセリンジメタクリレート、ペンタエリスリトールトリメタクリレート、イノシトールトリメタクリレートであり、最も好ましくは、グリセリンジメタクリレートである。1.1.2.エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体は、1分子中に、1個の重合性ビニル基と、1個以上のエポキシ基とを有する非架橋性の単量体である。エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体が有するエポキシ基の数は、1分子中に1~3個が好ましく、1個がより好ましい。エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体は、水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体およびエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体を含むビニル単量体の共重合体から得られる多孔質粒子のリガンド結合前に、適切な量のエポキシ基を導入するための必須成分である。エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体としては、1分子中に、1個の重合性ビニル基と、1個のエポキシ基とを有する非架橋性の単量体が工業的に容易に入手できる。このようなエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体としては、例えば、グリシジルメタアクリレート、4-ヒドロキシブチルメタアクリレートグリシジルエーテル、3,4-エポキシシクロヘキシルメチルメタアクリレート、α-メタアクリル-ω-グリシジルポリエチレングリコール等のメタアクリル酸エステル類;ビニルベンジルグリシジルエーテル等の芳香族ビニル化合物;アリルグリシジルエーテル、3,4-エポキシ-1-ブテン、3,4-エポキシ-3-メチル-1-ブテン等が挙げられ、グリシジルメタアクリレート、4-ヒドロキシブチルメタアクリレートグリシジルエーテルが特に好ましい。そのほか、ビニル単量体として、水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体およびエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体のかわりに、水酸基とエポキシ基とを含有する架橋性ビニル単量体を単独で使用できる。水酸基とエポキシ基とを含有する架橋性ビニル単量体としては、例えば、ペンタエリスリトールジメタアクリレートグリシジルエーテル、イノシトールジメタアクリレートグリシジルエーテル、イノシトールトリメタアクリレートグリシジルエーテルなどを例示できる。なお、水酸基とエポキシ基とを含有する架橋性ビニル単量体を、上記水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体およびエポキシ基含有非架橋性ビニル単量体とともに用いてもよい。1.1.3.好ましいビニル単量体ビニル単量体は、X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体20~90質量部、X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体0~40質量部、M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体1~40質量部、およびM-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体0~70質量部から構成される但し、X-1、X-2、M-1およびM-2の合計は100質量部であることが好ましい。X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体の具体例、好適な例は、上記1.1.1.水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体で、述べたとおりである。X-1は、好ましくは20~90質量部、より好ましくは25~85質量部、最も好ましくは30~80質量部である。X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体が20質量部以上90質量部以下であると、タンパク質の動的結合容量に優れる。X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体は、1分子中に、2個以上の重合性ビニル基を有し、水酸基もエポキシ基も有さない架橋性の単量体である。X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体は、X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体を補って使用し、適切な弾性率に制御することにより、圧力特性を向上することが出来る場合がある。X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体としては、芳香族ポリビニル単量体、脂肪族ポリビニル単量体が好適であり、芳香族ポリビニル単量体としては、ジビニルベンゼンが好ましく、脂肪族ポリビニル単量体としては多価メタアクリレート化合物が好ましい。多価メタアクリレート化合物としては、例えば、エチレングリコールジメタアクリレート、ジエチレングリコールジメタアクリレート、トリエチレングリコールジメタアクリレート、テトラエチレングリコールジメタアクリレート、プロピレングリコールジメタアクリレート、ジプロピレングリコールジメタアクリレート、トリプロピレングリコールジメタアクリレート、テトラプロピレングリコールジメタアクリレート、1,4-ブタンジオールジメタアクリレート、1,6-ヘキサンジオールジメタアクリレート、トリメチロールプロパントリメタアクリレート、ペンタエリスリトールテトラメタアクリレートなどが挙げられ、トリメチロールプロパントリメタクリレート、ペンタエリスリトールテトラアクリレートが特に好ましい。X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体は、好ましくは0~40質量部であり、より好ましくは0~20質量部である。X-2が40質量部を超えると、タンパク質の動的結合量が低くなる場合がある。X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体とX-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体とは、混合物として工業的に供給されることがあり、本発明の範囲内で、これらをそのまま使用することもできる。M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体の具体例、好適な例は、上記1.1.2.エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体で、述べたとおりである。M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体は、好ましくは1~40質量部、より好ましくは2~30質量部、最も好ましくは3~15質量部である。M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体が1質量部以上40質量部以下であると、得られる重合体からなる多孔質粒子に含まれるエポキシ基含有量が適切な量となる。M-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体としては、親水性ビニル単量体が好ましく、水酸基含有非架橋性ビニル単量体がさらに好ましい。M-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体として、親水性モノマーを用いた場合には、アフィニティークロマトグラフィー用充填剤の親水性を補い、高い標的分子の動的結合容量を発現できることがある。親水性ビニル単量体のうち、水酸基非含有非架橋性の親水性ビニル単量体としては、例えば、ジメチルアクリルアミド、アクリロイルモルホリン、メトキシエチルメタアクリレート、ダイアセトンメタアクリルアミド、N-ビニル-2-ピロリドンなどが挙げられる。水酸基含有非架橋性ビニル単量体としては、例えば、グリセロールモノメタアクリレート、トリメチロールエタンモノメタアクリレート、トリメチロールプロパンモノメタアクリレート、ブタントリオールモノメタアクリレート、ペンタエリスリトールモノメタアクリレート、ジペンタエリスリトールモノメタアクリレート、イノシトールモノメタアクリレート、ヒドロキシエチルメタアクリレート、ヒドロキシエチルメタアクリルアミドなどが挙げられ、グリセロールモノメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシエチルアクリルアミド、ポリエチレングリコールメタアクリルエステルが好ましく、グリセロールモノメタクリレートが最も好ましい。M-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体は、好ましくは0~70質量部であり、より好ましくは0質量部を超え40質量部以下である。M-2が70質量部を超えると、圧力特性に劣る場合がある。好ましいビニル単量体における好適な量比の具体例としては、X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体25~85質量部、X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体0~20質量部、M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体2~30質量部、およびM-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体0~70質量部から構成されるビニル単量体、又は、X-1水酸基を含有しエポキシ基を含有しない架橋性ビニル単量体30~80質量部、X-2水酸基もエポキシ基も含有しない架橋性ビニル単量体0~20質量部、M-1エポキシ基含有非架橋性ビニル単量体3~15質量部、およびM-2エポキシ基を含有しない非架橋性ビニル単量体0質量部を超え40質量部以下から構成されるビニル単量体が挙げられる。但し、いずれのビニル単量体の具体例においても、X-1、X-2、M-1およびM-2の合計は100質量部である。1.1.4.多孔質粒子の製造多孔質粒子は、公知のシード重合、懸濁重合などにより製造することができる。シード重合法として、特公昭57-24369号公報記載の二段膨潤重合法も好適に用いられる。重合に際しては、上記単量体の他、水、ポロジェンを必須成分とし、重合開始剤、高分子分散剤、界面活性剤、塩、シード粒子、水溶性重合禁止剤などを必要に応じて使用する。多孔質粒子の製造における好ましい重合法は、上述のビニル単量体100質量部と、P-1炭素数7~14である直鎖状、分岐鎖状および環状のアルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、エステル、炭素数8~10のアルキルベンゼンから選ばれる少なくとも1つのポロジェンと、を必須成分とする水系混合物の懸濁重合法である。このとき、さらにP-2としてP-1以外のポロジェンを併用してもよい。ポロジェンの使用量は、好ましくはモノマー100質量部に対して合計で100~400質量部である。P-1の使用量は、ポロジェンの合計量100質量中に10質量以上であることが好ましい。P-1のポロジェンを具体的に例示すると、アルコールとして、1-ヘプタノール、2-ヘプタノール、3-ヘプタノール、4-ヘプタノール、2,4-ジメチル-3-ペンタノール、5-メチル-2-ヘキサノール、2-エチル-1-ヘキサノール、2-オクタノール、3-オクタノール、5-メチル-3-ヘプタノール、1-ノナノール、3,5,5-トリメチルヘキサノール;エーテルとして、ヘキシルメチルエーテル、ジブチルエーテル、シネオール;アルデヒドとして、ヘプタナール、オクタナール、2-エチル-1-ヘキサナール、ノナナール、3,5,5-トリメチルヘキサナール、1-デカナール、ドデカナール;ケトンとして、2-ヘプタノン、3-ヘプタノン、4-ヘプタノン、2,4-ジメチル-3-ペンタノン、4,4-ジメチル-2-ペンタノン、5-メチル-2-ヘキサノン、2-オクタノン、3-オクタノン、5-メチル-3-ヘプタノン、2,6-ジメチル-4-ヘプタノン、2-ノナノン、3-ノナノン、4-ノナノン、3,3,5-トリメチルシクロヘキサノン、2-デカノン、3-デカノン、2-ウンデカノン、4-t-ペンチルシクロヘキサノン、2-ヘキシルシクロペンタノン、2-ヘプチルシクロペンタノン、ジシクロヘキシルケトン;エステルとして、蟻酸ヘキシル、酢酸ペンチル、酢酸イソペンチル、プロピオン酸ブチル、プロピオン酸イソブチル、酪酸プロピル、酪酸イソプロピル、イソ酪酸プロピル、イソ酪酸イソプロピル、吉草酸エチル、イソ吉草酸エチル、ピバル酸エチル、ヘキサン酸メチル、酢酸ヘキシル、酢酸シクロヘキシル、酢酸-2-エチルブチル、プロピオン酸イソペンチル、酪酸ブチル、イソ酪酸ブチル、酪酸イソブチル、イソ酪酸イソブチル、吉草酸プロピル、イソ吉草酸プロピル、ヘキサン酸エチル、ヘプタン酸メチル、酢酸ヘプチル、プロピオン酸ヘキシル、酪酸ペンチル、酪酸イソペンチル、イソ酪酸ペンチル、イソ酪酸イソペンチル、吉草酸イソブチル、ヘキサン酸プロピル、ヘキサン酸イソプロピル、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、酢酸オクチル、酢酸イソオクチル、酢酸-2-エチルヘキシル、酪酸ヘキシル、酪酸シクロヘキシル、吉草酸ペンチル、イソ吉草酸イソペンチル、ヘキサン酸ブチル、ヘキサン酸イソブチル、オクタン酸エチル、ノナン酸メチル、酢酸ノニル、ヘキサン酸ペンチル、ノナン酸エチル、2-エチルヘキサン酸プロピル、3,5,5-トリメチルヘキサン酸エチル、デカン酸メチル、δ-ドデカノラクトン、酢酸デシル、デカン酸エチル、酢酸シトロネリル、ドデカン酸メチル、酢酸ドデシル、ドデカン酸エチル;アルキルベンゼンとして、キシレン、エチルベンゼン、クメン、n-プロピルベンゼン、n-ブチルベンゼン、t-ブチルベンゼン、sec-ブチルベンゼン、iso-ブチルベンゼン、エチルトルエン、シメン、メシチレンなどが挙げられる。P-1のポロジェンとしては、親水性を阻害せず、リガンドの活性を高く維持できることから、アルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、エステルが好ましく、ケトン、エステルがさらに好ましく、炭素数7~10のケトン、エステルが最も好ましい。P-2はP-1以外のポロジェンであり、多孔質粒子の細孔容積を調整するために加えても良い成分である。20°CにおけるP-2の水への溶解度は20以下であることが好ましい。ポロジェンの構成として、P-2のポロジェン、すなわち炭素数7未満の直鎖および分岐のアルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、エステル、炭素数8未満のアルキルベンゼンを主成分とすると、タンパク質分離などに適した大きな細孔径とはならず、また、細孔容積が小さくなる場合がある。また、炭素数14を超えるアルコール、エーテル、アルデヒド、ケトン、エステル、または、炭素数10を超えるアルキルベンゼンを主成分とすると、細孔容積が小さくなるか、あるいは、多孔質でない微小な粒子が形成される場合がある。P-1を含むポロジェンの合計量は、上記単量体全量100質量部に対し、通常100~400質量部であり、好ましくは150~300質量部である。ポロジェンの合計量が100質量部未満であると、タンパク質分離などに適した大きな細孔径とはならず、また、細孔容積が小さくなる。ポロジェンの合計量が400質量部を超えると、細孔容積が過大になるか、あるいは、多孔質でない微小な粒子が形成される。P-1はポロジェンの合計量に対して10質量以上であることが好ましく、20質量以上であることが好ましい。P-1がポロジェンの合計量中に10質量以下であると、細孔容積が小さくなることがある。懸濁重合における重合溶媒は、水である。水には、本発明の効果を損なわない範囲で、アルコール等の有機溶媒等が含まれていてもよい。水の量は、単量体全量100質量部に対し、好ましくは200~10000質量部、より好ましくは500~5000質量部である。水の量が上記の範囲内であると重合中の粒子同士の合一が抑制され、粒子径の制御が容易であり、生産性に優れる。重合開始剤としては、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、過硫酸アンモニウムなどの過硫酸塩、過酸化水素、t-ブチルハイドロパーオキサイド、t-ブチルパーオキシマレイン酸、コハク酸パーオキサイド、2,2’-アゾビス2-N-ベンジルアミジノプロパン塩酸塩などの水溶性開始剤;ベンゾイルパーオキサイド、ラウロイルパーオキサイド、クメンハイドロパーオキサイド、ジイソプロピルパーオキシジカーボネート、クミルパーオキシネオデカノエート、クミルパーオキシオクタノエート、t-ブチルパーオキシ-2-エチルヘキサノエート、3,5,5-トリメチルヘキサノイルパーオキサイド、アゾビスイソブチロニトリル、アゾビスイソバレロニトリルなどの油溶性開始剤;有機パーオキサイドと亜硫酸ナトリウム、ロンガリット、アスコルビン酸ナトリウムなどの還元剤を併用したレドックス系開始剤などが使用でき、好ましくは油溶性開始剤または油溶性のレドックス開始剤であり、生産性の点からより好ましくは油溶性開始剤である。開始剤の量は、単量体全量100質量部に対し、好ましくは0.01~10質量部、より好ましくは0.05~5質量部である。これら重合開始剤は、水、単量体混合物あるいはポロジェンに溶解して重合系に供してもよいし、室温および加熱中の重合系に単独で添加してもよい。過硫酸塩など、重合中に酸性または塩基性を示す開始剤を使用し、かつ、エポキシ基の加水分解を防止する必要がある場合は、pHを中性付近に維持する緩衝溶液中で懸濁重合することが好ましい。紫外線、電子線などを照射することにより開始剤を使用せずに懸濁重合することも可能であり、公知の光ラジカル開始剤を使用することも可能である。高分子分散剤としては、ケン化度80~95のポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの水溶性ポリマーを使用することができる。界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンドデシルエーテル硫酸エステル塩などのアニオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンアルキルエーテルなどの非イオン性界面活性剤などを使用することができる。塩としては、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウムなどが好適に使用できる。シード粒子としては、重量平均分子量1,000~100,000程度のポリスチレン粒子、ポリアルキルメタアクリレート粒子などを使用することができる。水溶性重合禁止剤としては、ヨウ化カリウムなどのヨウ化物塩、亜硝酸ナトリウムなどの亜硝酸塩、チオ硫酸ナトリウムなどのチオ硫酸塩、スルホン化ナフトヒドロキノンアンモニウム塩などの水溶性キノン化合物などが好適に使用できる。シード重合では、シード粒子の大きさと量、単量体の量、ポロジェンの量を調整することにより、本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤として必要な粒子径を有する多孔質粒子を得ることができる。懸濁重合では、高分子分散剤および界面活性剤の種類と量、攪拌速度、攪拌翼および重合容器の形状と大きさを調整することにより、本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤として必要な粒子径を有する多孔質粒子を得ることができる。多孔質粒子の細孔容積は、単量体とポロジェンとの比を変えることで調節することが公知である。他に、重合時に使用する塩や重合禁止剤の種類と量、重合温度などによっても多孔質粒子の細孔容積を調節することができる。アフィニティークロマトグラフィー用充填剤としての多孔質粒子の細孔容積は、リガンド結合前の多孔質粒子の細孔容積と、結合するリガンドの量によって調節することができる。重合の温度および時間は、レドックス系開始剤以外の開始剤を使用する場合、好ましくは40~100°Cで30分~24時間、より好ましくは60~90°Cで1~10時間である。重合完結後、シード粒子および/またはポロジェンの良溶媒を用いて洗浄することが、後述のリガンドの結合が容易となる点から、好ましい。洗浄溶媒としては、アセトン、エタノール、イソプロピルアルコールなどが好適に使用できる。また、必要に応じて、洗浄の前後に、超音波分散機などを用いて、多孔質粒子を分散しても良い。さらに、デカンテーション、ろ過などの方法により、小粒子や粗大粒子を除去することが、圧力特性の向上やタンパク質などの動的結合容量の向上の点から好ましい。1.1.5.エポキシ基含有量リガンド結合前の多孔質粒子に含まれるエポキシ基は、リガンドを結合するための官能基であり、また、さらに開環後にアフィニティークロマトグラフィー用充填剤としての親水性向上の元となる官能基である。リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量は、0.05~4.0mmol/gであり、好ましくは0.08~2.5mmol/gであり、最も好ましくは0.10~1.5mmol/gである。リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量が0.05mmol/g以上であるとリガンドの結合量が適度であり、タンパク質の動的結合容量の低下が抑制される。リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量が4.0mmol/g以下であると、保存中におけるリガンドの活性の低下が抑制され、タンパク質の動的結合容量の低下も抑制される。リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量は、多孔質粒子に塩酸を過剰に添加して塩酸を付加反応することによりエポキシ基を開環し、残余の塩酸を過剰量の水酸化ナトリウム水溶液で中和した後、残余の水酸化ナトリウムを塩酸で逆滴定することにより定量することが出来る。リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量は、エポキシ基含ビニル単量体の量、重合温度、重合時間、重合液のpH、さらには、重合後の開環処理などによって、調整することが出来る。1.2.アフィニティークロマトグラフィー用充填剤の構成本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤は、前記多孔質粒子、前記多孔質粒子に結合したリガンド、および開環エポキシ基を含む。本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤の一実施形態としては、上記特定の重合体からなる多孔質粒子にリガンドを結合し、該重合体に含まれるエポキシ基を開環させて得られる開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子を含む。前記リガンド結合多孔質粒子の体積平均粒子径は35~100μmであることが好ましく、かつ、水銀ポロシメータで孔径10~5000nmの範囲に相当する細孔を測定したときの細孔容積が1.00~1.90ml/gであることが好ましい。1.2.1.リガンドリガンドは、標的物に対して適度なアフィニティーを有するものであれば、その種類は特に限定されないが、例えば、プロテインA、プロテインG、アビジン等のタンパク質;インシュリン等のペプチド;モノクローナル抗体等の抗体;酵素;ホルモン;DNA;RNA;ヘパリン、ルイスX、ガングリオシド等の糖質;イミノジ酢酸、合成色素、2-アミノフェニル硼素酸、4-アミノベンズアミジン、グルタチオン、ビオチンやその誘導体のような低分子化合物を用いることができる。上記に例示したリガンドはその全体を用いてもよいが、リコンビナント、酵素処理等によって得られるそのフラグメントを用いてもよい。また、人工的に合成されたペプチドやペプチド誘導体であってもよい。イムノグロブリンの分離または精製に好適なリガンドとしては、例えばプロテインAおよびプロテインGであり、さらに好ましくはプロテインAのイムノグロブリン結合ドメインであり、最も好ましくはプロテインAのイムノグロブリン結合ドメインの末端に、4個以上の連続するヒスチジン単位を含むペプチドを付加したタンパク質であり、このようなタンパク質としては、例えば、後述する一般式1または一般式2で表されるイムノグロブリン結合タンパク質が挙げられる。なお、本発明において、タンパク質とは、ペプチド構造単位を有するあらゆる分子をいい、例えば、天然型タンパク質の部分的断片や天然型タンパク質のアミノ酸配列を人為的に改変した変異体を含む概念である。また、イムノグロブリン結合ドメインとは、単独でイムノグロブリン結合活性を有するポリペプチドの機能単位を表し、イムノグロブリン結合タンパク質とは、イムノグロブリンに特異的な親和性を有し、かつ、イムノグロブリン結合ドメインを含むタンパク質を表す。イムノグロブリン結合とはイムノグロブリン分子の相補性決定領域CDR以外の領域、特にFcフラグメントに結合することを表す。本発明において、アフィニティークロマトグラフィーに関連して使用される用語リガンドとは、アフィニティークロマトグラフィーの標的物質と結合する部分のことを表す。1.2.2.イムノグロブリン結合ドメインプロテインAのイムノグロブリン結合ドメインは、天然型のイムノグロブリン結合ドメインであってもよいし、または、組換え型のイムノグロブリン結合ドメインであってもよい。プロテインAのイムノグロブリン結合ドメインは、Aドメイン、Bドメイン、Cドメイン、Dドメイン、Eドメイン、およびZドメインから選ばれる少なくとも1種であることが好ましい。Aドメイン、Bドメイン、Cドメイン、Dドメイン、およびEドメインのアミノ酸配列は例えば、MoksT,AbrahmsL,etal.,StaphylococcalproteinAconsistsoffiveIgG-bindingdomains,EurJBiochem.1986,156,637-643のFig.1に記載されている。該文献はこの参照により開示に含まれる。また、上記文献に記載された各ドメインのアミノ酸配列と70以上好ましくは90以上の相同性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質も、本発明におけるプロテインAのイムノグロブリン結合ドメインとして使用することができる。組換え型のイムノグロブリン結合ドメインは、イムノグロブリン結合活性において、改変前のイムノグロブリン結合ドメインと同等のものとして扱うことができ、例えば、天然型のプロテインAのイムノグロブリン結合ドメインのアミノ酸配列と70以上好ましくは90以上の相同性を保持することが好ましい。具体例としては、ニルソンビーNilssonB.他、プロテインエンジニアリングProteinengineering、1987年、第1巻、2号、107-113頁に記載されているZドメイン配列番号1、HoberSらによる米国特許出願2006/0194955A1に記載されているアルカリ耐性を有するZドメインの変異体mutantが挙げられる。本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤に用いられるリガンドは、複数の同一または異なる種類のイムノグロブリン結合ドメインを有していてもよい。例えば、上記リガンドは、プロテインAのイムノグロブリン結合ドメインとして、Dドメイン-Aドメインnここで、nは1以上の整数好ましくは1~6を示し、DドメインとAドメインとの間には任意のアミノ酸配列が存在していてもよい。、すなわち、AドメインおよびDドメインを含む繰り返し単位を含むものであってもよい。また、本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤は使用時にアルカリ水溶液に接触する機会を有するため、上記リガンドは、プロテインAのZドメインを含む繰り返し単位を含むものであってもよい。また、本発明において、リガンドは、上記各ドメイン、またはそのフラグメントもしくは変異体を、単独でまたは組み合わせて2個以上含むことができる。本発明において、イムノグロブリン結合ドメインのフラグメントとは、当該ドメインのアミノ酸配列の一部を有するものであり、且つイムノグロブリン結合活性を有するものをいう。好ましくは、イムノグロブリン結合ドメインのフラグメントとは、当該ドメインのアミノ酸配列と90以上、より好ましくは95以上の配列同一性を有し、且つイムノグロブリン結合活性を有するものをいう。また本発明において、イムノグロブリン結合ドメインの変異体とは、好ましくは当該ドメインのアミノ酸配列と90以上、より好ましくは95以上の配列同一性を有し、且つイムノグロブリン結合活性を有するものをいう。イムノグロブリン結合ドメインは、例えばZドメイン、またはそのフラグメントもしくは変異体から選ばれる少なくとも1個を含むことができる。Zドメインについては、ニルソンビーNilssonB.他、プロテインエンジニアリングProteinengineering、1987年、第1巻、2号、107-113頁に記載されている。また、本発明において、リガンドは、Zドメイン、またはそのフラグメントもしくは変異体を単独でまたは組み合わせて2個以上好ましくは4~10個含むことができる。Zドメインの変異体としては、例えば、特許第4391830号に記載された配列を有するタンパク質が挙げられる。例えば、特許第4391830号の請求項1には、配列番号1で規定される2以上の反復単位Zドメインを含み、23位のアミノ酸残基がスレオニンであるタンパク質が記載されている。また、ZドメインのフラグメントZフラグメントとは、Zドメインのアミノ酸配列の一部を有するものであり、例えば、Zドメインのアミノ酸配列の90以上を有するものであることが好ましく、95以上を有するものであることがより好ましく、且つイムノグロブリン結合活性を有するものをいう。また、Zドメインの変異体とは、例えば、Zドメインのアミノ酸配列と90以上の相同性を有するものであり、95以上の相同性を有するものであるのが好ましく、且つイムノグロブリン結合活性を有するものをいう。Zドメインの変異体は、Zドメインと比較してアルカリ耐性が改良されたものであることが好ましい。この場合、Zドメインの変異体がZドメインと比較してアルカリ耐性が改良されているかどうかは、後述する実施例記載の方法にて確認することができる。1.2.3.イムノグロブリン結合タンパク質1好ましいリガンドの一例であるイムノグロブリン結合タンパク質以下、タンパク質1ともいう。は、下記一般式1で表される。R-R21式中、Rは4~20個のヒスチジンが連続した部位を含む4~300個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を示し、R2はプロテインAのイムノグロブリン結合ドメインを少なくとも1個含む50~500個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を示すここで、R2がRに結合する末端はイムノグロブリン結合ドメインのC末端またはN末端である。。上記一般式1において、Rで表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は8~100個であることが好ましく、Rに含まれるヒスチジンが連続した部位のヒスチジンの数は4~8個であることが好ましい。また、上記一般式1において、R2で表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は120~480個であることが好ましい。上記一般式1において、Rで表されるアミノ酸配列およびR2で表されるアミノ酸配列のうち少なくとも一方が、リジン、アルギニン、およびシステインから選ばれる1種のアミノ酸を含む1~50個のアミノ酸からなるドメインtを含むことが好ましい。この場合、上記アミノ酸配列中に同一または異なるドメインtが複数含まれていてもよい。また、上記一般式1において、R-は下記一般式2で表される基であることが好ましい。R1-r-2式中、R1は4~20個のヒスチジンが連続した部位を含む4~100個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を示しここで、R1において、前記ヒスチジンが連続した部位の末端がrと結合する。、rは7~200個のアミノ酸からなる任意のアミノ酸配列を示す。上記一般式2において、R1で表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は4~25個であることが好ましく、R1に含まれるヒスチジンが連続した部位のヒスチジンの数は4~8個であることが好ましく、rで表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は10~50個であることが好ましい。また、上記一般式2に示されるrで表されるアミノ酸配列中には、TEVドメインが含まれていてもよい。rで表されるアミノ酸配列中にTEVドメインが含まれていることにより、TEVプロテアーゼによる切断によってRとR2との分離が可能になるうえ、TEVドメインは、担体への固定化量が多く、かつ、当該担体のイムノグロブリン保持能力を高めるという効果を実現するために好ましい配列である。また、rで表されるアミノ酸配列中に、TEVドメインの変異体Mutant該TEVプロテアーゼで切断できるか否かと関係なく、TEVドメインのアミノ配列と70以上、好ましくは90以上の相同性を有する。が含まれていてもよい。本発明で用いるタンパク質1を構成するアミノ酸の総個数は、好ましくは54~800であり、粒子に結合させる用途に使用する場合、80~600であるのがより好ましい。1.2.4.イムノグロブリン結合タンパク質2リガンドは、耐アルカリ性のイムノグロブリン結合性タンパク質であってもよい。耐アルカリ性のイムノグロブリン結合性タンパク質として、好ましいリガンドの他の一例であるイムノグロブリン結合タンパク質以下、タンパク質2ともいう。は、下記一般式3で表される。R-R23式中、Rは4~20個のヒスチジンが連続した部位を含む4~300個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を示し、R2はZドメイン、またはそのフラグメントもしくは変異体を含む50~500個のアミノ酸からなる、イムノグロブリンと結合可能なアミノ酸配列を示すここで、R2がRに結合する末端はイムノグロブリン結合ドメインのC末端またはN末端である。。上記一般式3において、Rで表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は8~100個であることが好ましく、Rに含まれるヒスチジンが連続した部位のヒスチジンの数は4~8個であることが好ましい。また、上記一般式1において、R2で表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は120~480個であることが好ましい。また、上記一般式3において、R-は下記一般式4で表される基であることが好ましい。R1-r-4式中、R1は4~20個のヒスチジンが連続した部位を含む4~100個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を示しここで、R1において、前記ヒスチジンが連続した部位の末端がrと結合する。、rは7~200個のアミノ酸からなる任意のアミノ酸配列を示す。また、上記一般式2と同様に、上記一般式4におけるrで表されるアミノ酸配列中には、TEVドメインが含まれていてもよい。rで表されるアミノ酸配列中にTEVドメインが含まれていることにより、TEVプロテアーゼによる切断によってRとR2との分離が可能になるうえ、TEVドメインは、本発明の効果担体への固定化量が多く、かつ、当該担体のイムノグロブリン保持能力を高めることを実現するために好ましい配列である。また、rで表されるアミノ酸配列中に、TEVドメインの変異体Mutant該TEVプロテアーゼで切断できるか否かと関係なく、TEVドメインのアミノ配列と70以上、好ましくは90以上の相同性を有する。が含まれていてもよい。上記一般式4において、R1で表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は4~25個であることが好ましく、R1に含まれるヒスチジンが連続した部位のヒスチジンの数は4~8個であることが好ましく、rで表されるアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数は10~50個であることが好ましい。上記一般式3において、Rで表されるアミノ酸配列およびR2で表されるアミノ酸配列のうち少なくとも一方が、リジン、アルギニン、およびシステインから選ばれる1種のアミノ酸を含む1~50個のアミノ酸からなるドメインtを含むことが好ましい。この場合、上記アミノ酸配列中に同一または異なるドメインtが複数含まれていてもよい。本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤において、リガンドとしてタンパク質2を用いた場合、アルカリ性条件下での洗浄例えば水酸化ナトリウム等のアルカリ性液を用いた洗浄に対して高い耐性を有する。その理由としては、ヒスチジンが連続した部位をZドメインに付加したことにより、多孔質粒子とZドメインの結合位置がヒスチジン連続部位のない場合とは異なること、および固定化後のZドメインに何らかの構造変化が起こり、アルカリ耐性が高くなったことなどが考えられる。実際の理由を実験により確認することはできていないが、耐アルカリ性の実験結果は、ヒスチジン連続部位を付加することによる作用効果があることを示している。なお、本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を用いてイムノグロブリンを単離する場合、例えば、本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を用いて、前記充填剤にイムノグロブリンを吸着させる工程第一の工程、および前記イムノグロブリンを溶出させる工程第二の工程により、イムノグロブリンを単離することができ、さらに前記充填剤をアルカリ性液でCIP洗浄する工程第三の工程を経るのが好ましい。第一の工程では、上記アフィニティークロマトグラフィー用充填剤を充填したカラム等にイムノグロブリンを含有する溶液を、該充填剤のリガンドにイムノグロブリンが吸着する条件にて流す。ここで、上記イムノグロブリンを含有する溶液とは、イムノグロブリンを含有する任意の溶液であればよく、例えば、血清等の生体由来の検体、ハイブリドーマ培地の上清等が挙げられる。上記イムノグロブリンが吸着する条件としては、例えば、イムノグロブリン濃度0.1~10g/L、溶液のpH5~9、カラム中の滞留時間0.5~50分、温度0~40°Cが挙げられる。この第一の工程では、溶液中のイムノグロブリン以外の物質のほとんどは吸着されずカラムを通過する。通常、一部の弱く保持された物質を除去するため、充填剤をNaClなどの塩を含む中性の緩衝液、例えば、リン酸二水素ナトリウム/リン酸水素二ナトリウム溶液、クエン酸/リン酸水素二ナトリウム溶液、塩酸/トリスヒドロキシメチルアミノメタン溶液、HEPES/水酸化ナトリウム溶液等、で洗浄する。第二の工程では、pH2~5の適切な緩衝液、例えば、例えば、クエン酸/クエン酸ナトリウム溶液、酢酸/酢酸ナトリウム溶液、塩酸/グリシン溶液等、を流しイムノグロブリンを溶出させる。第三の工程では、アルカリ性液で充填剤を洗浄CIP洗浄する。ここで使用されるアルカリ性液としては、例えば、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、トリエチルアミン、水酸化テトラブチルアンモニウム等が挙げられる。1.2.5.タンパク質1および2の製造本発明で用いるタンパク質1および2を製造するための標準技術としては、例えば、FrederickM.AusbelらによるCurrentProtocolsInMolecularBiologyやSambrookら編集のMolecularCloningColdSpringHarborLaboratoryPress,3rdedition,2001などに記載されている公知の遺伝子組換え技術を利用することができる。例えば、本発明で用いるタンパク質1または2は、米国特許第5,151,350号明細書に記載されている遺伝子組換え技術を用いて製造することができる。すなわち、目的の改変タンパク質タンパク質1または2をコードする核酸配列を含有させた発現ベクターを大腸菌などの宿主に形質転換し、当該細胞を適切な液体培地で培養することにより、培養後の細胞から、本発明で用いるタンパク質1または2を大量かつ経済的に取得することができる。好ましい発現ベクターとしては、細菌内で複製可能な既知のベクターのいずれをも用いることができ、例えば、米国特許第5,151,350号明細書に記載されているプラスミドや、Sambrookら編集のMolecularCloningColdSpringHarborLaboratoryPress,3rdedition,2001などに記載されているプラスミドが挙げられる。また、宿主中に核酸を導入することにより宿主を形質転換させるためには、当該技術分野において知られるいずれの方法を用いてもよく、例えば、Sambrookら編集のMolecularCloningColdSpringHarborLaboratoryPress,3rdedition,2001などに記載されている公知の方法を利用することができる。形質転換した細菌を培養して、発現されたタンパク質を回収する方法は、当業者によく知られている。具体的には、所望のアミノ酸配列をコードするDNAを数十塩基からなる合成オリゴヌクレオチドに分割して合成し、それらをDNAリガーゼによるライゲーション反応によって繋げてプラスミドに挿入することにより、目的の発現ベクターを取得することができる。その際に、当該タンパク質を大腸菌で効率良く発現させる目的で、大腸菌の至適コドンを用いた核酸配列を採用することは、当業者によって一般的に行われる方法である。また、後述する本発明の実施例に示されるようにStraphylococcusaureusのゲノムDNAからPCRPolymeraseChainReaction技術を用いて所望のアミノ酸配列をコードするDNA配列を構築することが可能である。例えば、上記製造方法で用いる核酸は、イムノグロブリン結合タンパク質タンパク質1または2あるいはその等機能変異体をコードし得る。本発明において、イムノグロブリン結合タンパク質の等機能変異体functionalvariantとは、部分的なアミノ酸の付加、削除、置換、アミノ酸残基の化学的修飾等により改変されたイムノグロブリン結合タンパク質であって、改変前のイムノグロブリン結合タンパク質のアミノ酸配列と70以上、好ましくは90以上の相同性を保持し、かつ、イムノグロブリン結合活性において、改変前のイムノグロブリン結合タンパク質と同等のものとして扱うことができるものを意味する。すなわち、上記核酸としては、本明細書におけるタンパク質1または2をコードする核酸が含まれる。また、上述したように、本発明で用いるタンパク質1および2は、イムノグロブリン結合ドメインを1個以上好ましくは2~12個、より好ましくは4~10個を含むタンパク質であってもよい。この様なタンパク質をコードするcDNAは、1個のイムノグロブリン結合ドメインをコードするcDNA相補的DNAを所定の個数、直列に連結することにより、容易に作成することができる。こうして作成したcDNAを適切な発現プラスミドに挿入して利用することにより、イムノグロブリン結合ドメインを1個以上含むタンパク質を容易に製造することができる。例えば、後述する実施例において示される配列番号4のアミノ酸配列を有するタンパク質SPATKや配列番号2のアミノ酸配列を有するタンパク質SP4Z、配列番号2または配列番号4において1個または数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつイムノグロブリン結合活性を有するタンパク質は、本発明で用いるイムノグロブリン結合タンパク質として好適である。1.2.6.リガンドの結合上記担体と上記リガンドの結合方法としては、多孔質粒子に含まれるエポキシ基をそのままリガンドとの結合部位として利用することが、プロセスとして簡便であり、好ましい。その他に、多孔質粒子に含まれるエポキシ基を開環して生成するアルコール性水酸基をトシル基などで活性化してから、リガンドを結合する方法や、多孔質粒子に含まれるエポキシ基または、当該エポキシ基の開環により生成する基からさらにリンカーを伸ばしてから、当該リンカーを介して多孔質粒子にリガンドを結合しても良い。リガンドの結合条件は、リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量、リガンドの種類により異なるが、当業者にとっての公知の方法を採用することができる。リガンドがタンパク質である場合は、タンパク質のN末端のアミノ基、タンパク質に含まれるリジン、システインがエポキシとの反応点になりうる。タンパク質を結合する場合、例えば、タンパク質の等電点に近いバッファー類の水溶液を用い、必要により塩化ナトリウムや硫酸ナトリウムなどの塩を添加し、タンパク質と多孔質粒子を混合しながら、0~40°Cで1~24時間反応させて、リガンドであるタンパク質を結合することができる。リガンドの結合量は、リガンドの種類、標的分子の種類などによって、適宜調節されるが、プロテインAのような抗体結合性タンパク質をリガンドとして結合する場合、多孔質粒子1g当たり、好ましくは10~200mg、より好ましくは25~100mgである。プロテインAのような抗体結合性タンパク質をリガンドとして結合する場合、多孔質粒子1g当たりのリガンドの結合量が10mg以上であると動的結合容量に優れ、200mg以下であると、結合した抗体の溶出のための溶出液の量が適量となる。1.2.7.開環エポキシ基本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成するリガンド結合多孔質粒子は、開環エポキシ基を有する。この開環エポキシ基は、上記特定の重合体からなる多孔質粒子にリガンドを結合した後に、該重合体に含まれるエポキシ基、すなわち、リガンドと結合したエポキシ基以外の残余のエポキシ基を開環させて得られる。これは、多孔質粒子をアフィニティークロマトグラフィー用充填剤として使用する前に、多孔質粒子の表面のエポキシ基が実質的に全て開環していることを意味する。なお、多孔質粒子の表面のエポキシ基が実質的に全て開環しているとは、開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子に残留するエポキシ基が、具体的には、好ましくは0.04mmol/g未満、さらに好ましくは0.02mmol/g未満であることを意味し、エポキシ基が残留していないことが最も好ましい。開環エポキシ基の残留量が0.04mmol/g未満であると、保存安定性に優れる。エポキシ基が開環して生成する開環エポキシ基であるアルコール性水酸基は、粒子表面を親水化し、タンパク質などの非特異吸着を防止すると共に、水中で粒子の靱性を向上させ、高流速下の粒子の破壊を防止する役割を果たす。多孔質粒子中のエポキシ基の開環方法としては、例えば、水溶媒中で、酸またはアルカリにより、加熱または室温で攪拌する方法を挙げることができる。また、メルカプトエタノール、チオグリセロールなどのメルカプト基を有するブロッキング剤やモノエタノールアミンなどのアミノ基を有するブロッキング剤で、エポキシ基を開環させても良い。最も好ましい開環エポキシ基は、多孔質粒子に含まれるエポキシ基をチオグリセロールにより開環させて得られる開環エポキシ基である。チオグリセロールは、原料としてメルカプトエタノールなどよりも毒性が低く、チオグリセロールが付加したエポキシ開環基は、アミノ基を有するブロッキング剤による開環基よりも非特異吸着が低い上に、動的結合量が高くなるといった利点を有する。1.2.8.粒子径、細孔容積本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子の粒子径は、35~100μmであることが好ましく、より好ましくは38~75μmである。粒子径が35μm以上であると、圧力特性に優れる。100μm以下であると、動的結合容量が高い充填剤が得られる。開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子の粒子径は、上述の通り、多孔質粒子を重合する際の条件で調整することができる。なお、本発明における粒子径とは、レーザ回折散乱式粒度分布測定装置により得られる体積平均粒子径である。本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子は、水銀ポロシメータで孔径10~5000nmの範囲に相当する細孔を測定したときに、好ましくは1.00~1.90ml/g、より好ましくは1.05~1.85ml/gの細孔容積を有する。細孔容積が上記範囲内であると、タンパク質の動的結合容量が高い充填剤が得られる。また、細孔容積が1.90ml/g以下であると、圧力特性に優れる。本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子は、好ましくは80~150m2/g、より好ましくは100~140m2/gの比表面積を有する。ここで、比表面積が80m2/g以上であると、動的結合容量高い充填剤が得られる。一方、150m2/g以下であると、充填剤の強度に優れ、高流速下での充填剤の破壊が抑制され、カラム圧力の上昇が抑制される。本発明における比表面積とは、水銀ポロシメータにより得られる細孔径10~5000nmの細孔の有する表面積を粒子の乾燥質量で除した値である。本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子は、好ましくは75~300nm、より好ましくは80~250nmの体積平均細孔径を有する。ここで、体積平均細孔径が75nm以上であると、高流速下の動的結合容量低下が抑制される。一方、300nm以下であると、流速にかかわらず動的結合容量に優れた充填剤が得られる。本発明における体積平均細孔径とは、水銀ポロシメータにより得られる細孔径10~5000nmの細孔の体積平均細孔径である。本発明のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子の湿潤状態の1個の粒子を微小硬度計で測定したときの弾性率は、好ましくは3.0~10.0MPa、さらに好ましくは5.0~8.0MPaである。3.0MPa以上であると、圧力特性に優れる。10.0MPa以下であると、タンパク質の動的結合容量に優れた充填剤が得られる。本発明における弾性率は、水スラリー状態のアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子の1滴を微小硬度計のステージに乗せ、湿潤状態の1個の粒子について、微小硬度計のプローブを粒子の真上から当てて粒子を直径の5変形させたときに測定される応力単位Nを粒子径と同じ直径の円の面積単位m2で除した値である。2.実施例以下、本実施形態にかかるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤を、実施例を挙げてさらに具体的に説明する。また、以下の記載は本発明の態様を概括的に示すものであり、特に理由なく、かかる記載により本発明は限定されるものではない。2.1.評価方法2.1.1.エポキシ基含有量リガンド結合前の多孔質粒子のエポキシ基含有量は、重合で使用したエポキシ基含有モノマー量より計算されるエポキシ基モル数が2.00mmolとなるように、質量濃度約10で正確な質量濃度がわかっている多孔質粒子水分散体をポリエチレンボトルに質量で測り取り、これに濃度38の塩化カルシウム水溶液25mLおよび2規定の塩酸2.00mLを加えて、75°Cで2時間30分攪拌することによりエポキシ基を開環し、冷却後、2規定の水酸化ナトリウム水溶液2.50mLで中和し、さらにpHメーターでpHをモニターしながら0.1規定の塩酸で逆滴定することにより定量した。2.1.2.粒子径レーザ回折散乱式粒度分布測定装置ベックマンコールター社製LS13320により、粒子の体積平均粒子径を測定した。2.1.3.細孔容積、比表面積、体積平均細孔径40°Cで24時間真空乾燥させて乾燥粒子を得、水銀ポロシメータ島津製作所社製オートポアIV9520にて乾燥粒子の細孔容積、比表面積、および体積平均細孔径細孔径を求めた。測定範囲は細孔径範囲で10~5000nmとした。2.1.4.弾性率水スラリー状態の開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子の1滴を微小硬度計フィッシャーインストルメンツ社製HM2000のステージに乗せ、湿潤状態の1個の粒子について、微小硬度計のプローブを粒子の真上から当てて粒子を直径の5変形させたときに測定される応力単位Nを記録した。また、プローブの位置と応力のグラフから応力=0となるプローブの位置を最小自乗法で算出し、これを対象粒子の直径とした。記録した応力を対象粒子の直径の円の面積単位m2で除した値を測定した1粒子の弾性率とした。測定は任意に選んだ5個の粒子について実施し、個々の弾性率の平均値を求めて、アフィニティークロマトグラフィー用充填剤を構成する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子の弾性率とした。2.1.5.タンパク質の動的結合容量GEヘルスケアバイオサイエンス社製AKTAprimeplusを用いて、線流速300cm/hrにおけるタンパク質ヒトIgG抗体の動的結合容量を測定した。カラム容量は4mL5mmΦ×200mm長、ヒトIgG抗体EquitechBio社製HGG-1000は20mMリン酸バッファーpH7.5で5mg/mLに希釈したものを使用し、溶出先端10ブレークスルーのときのヒトIgG抗体吸着量とカラム充填体積から動的結合容量を求めた。以下、動的結合容量はDBCと記載することがある。2.1.6.圧力特性測定する開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなる充填剤を内径16mm、充填高さ100mmとなるようにカラムに充填し、このカラムをGEヘルスケアバイオサイエンス社製AKTApilotに接続し、純水を線流速で50cm/hrずつ段階的に上げながら流したときに、一定線流速で流している1分間に0.05MPaを超える経時的な圧力増加が見られたときの線流速を圧密流速として記録した。3000cm/hrでもこのような圧力増加が見られない場合、測定を中止し、>3000cm/hrと記録した。また、カラムの絶対圧力が1.9MPaに達した場合、このような圧力増加が見られない場合でも測定を中止し、1.9MPaに達したときの線流速を記録した。圧密流速は、900cm/hr以上が好ましく、1200cm/hr以上がより好ましく、1800cm/hr以上がさらに好ましく、2700cm/hr以上が最も好ましい。2.1.7.プロテインA結合量多孔質粒子に結合したリガンドであるプロテインASPAの結合量は、ビシンコニン酸BCA試薬を用いた試薬セットで定量した。具体的には、固形分換算で1mgの充填剤をテストチューブに採取し、これをThermoFisherScientific社旧PIERCE社のBCAProteinAssayKitで定量した。反応は、37°Cで30分間、転倒混和することによって行った。検量線は、多孔質粒子に結合させたプロテインAと同一のロットのものを用いて作成した。2.2.実験例2.2.1.実施例1i多孔質粒子の懸濁重合4091gの純水にポリビニルアルコールクラレ社製PVA-2178.52g、ドデシル硫酸ナトリウム花王社製エマール10G2.13gおよび炭酸ナトリウム4.26gを添加し、一晩撹拌して水溶液S-1-1を調製した。さらに重合当日、S-1-1の30gを別に抜き取り、残りのS-1-1に亜硝酸ナトリウム2.13gを溶解して、水溶液S-2-1を調製した。次に、グリセリンジメタクリレート新中村化学工業社製125g、グリシジルメタクリレート三菱レーヨン社製17.9g、グリセロールモノメタクリレート日本油脂社製35.9gを2-オクタノン東洋合成社製86.4gおよびアセトフェノン和光純薬工業社製253gに溶解させ、単量体溶液を調製した。なお、単量体の全質量を100質量部としたときの、各単量体の部数は、グリセリンジメタクリレート70質量部、グリシジルメタクリレート10質量部、グリセロールモノメタクリレート20質量部である。S-1-130gに2、2’-アゾイソブチロニトリル和光純薬工業社製2.2gを添加して分散し、開始剤分散液とした。次いで、準備した水溶液S-2-1および単量体溶液をバッフル付きの7Lセパラブルフラスコ内に投入し、温度計、攪拌翼、および冷却管を装着して、温水バスにセットし、窒素雰囲気下、220rpmで撹拌を開始した。続いて、セパラブルフラスコを温水バスにより加温し、内温が85°Cに到達したところで、開始剤分散液を添加し、85°Cに温度を保持しつつ、5時間攪拌を行った。次いで、反応液を冷却したのち、かかる反応液をヌッチェでろ過し、純水とイソプロピルアルコールで洗浄した。洗浄した粒子をポリビンに移し、水に分散してデカンテーションを3回行い、小粒子を除いた。以上の操作により水に分散した12.5質量の多孔質粒子1粒子乾燥質量123gを得た。多孔質粒子1のエポキシ基含有量は、0.47mmol/gであった。iiリガンドの作製2.2.1.1.SP4Z発現ベクターの構築イムノグロブリン結合タンパク質SP4Z発現ベクターを下記のステップで構築した。図2は、SP4Zベクターの構築方法を説明する図である。1ステップ1単量体ZドメインをコードするDNAを出発物質として、NcoI切断部位およびEcoRI切断部位を有する単量体ZドメインベクターA-pETM11SP1Zを構築した。2ステップ2次に、A-pETM11ベクターにもう一個Zドメインを付加して、EcoRI切断部位およびSacI切断部位を有する2量体ZドメインベクターAB-pETM11SP2Zを構築した。3ステップ3次いで、AB-pETM11ベクターに更にもう一個Zドメインを付加して、SacI切断部位およびHindIII切断部位を有する3量体ZドメインベクターABC-pETM11SP3Zを構築した。4ステップ4最後に、ABC-pETM11ベクターに4個目のZドメインを付加して、HindIII切断部位およびXhoI切断部位を有するpETM11-SP4Zのベクターを構築した。2.2.1.2.SP1Z-pETM11ベクター終止コドン有りの単量体Zドメインベクターの構築SPZKDNA配列番号3をテンプレートとし、フォワードプライマーとしてプライマー153配列番号5およびリバースプライマーとしてプライマー156配列番号8を用いてPCRを実施した。プライマー153およびプライマー156にはそれぞれ、NcoI切断部位およびSacIの制限酵素切断部位が含まれる。PCRの条件は以下の通りである。段階1:94°C1分間1サイクル、段階2:94°C30秒間、55°C30秒間、72°C2.5分間25サイクル、段階3:72°C10分間1サイクル、その後4°Cで保持した。PCR生成物はGEヘルスケアバイオサイエンス社製生成キットでPCR精製した。次に、NcoI制限酵素およびSacI制限酵素を用いて切断されたpETM11ベクターとPCR生成物とのライゲーションを行った。制限酵素による消化反応は、NewEnglandBiolabs製NcoI制限酵素およびSacI制限酵素を用いて37°C1時間行い、GEヘルスケアバイオサイエンス社製生成キットでPCR精製した。ライゲーション反応は、T4DNAリガーゼInvitrogen社製で室温にて終夜行った。ライゲーションで得られたベクターをDH5acompetentcellBiomedalLifeScience社製で形質転換させ、得られた形質転換体を、カナマイシンを含むLB培地で37°C終夜培養し陽性Colonyからプラスミドを抽出し、挿入されたDNAフラグメントの配列が正しいことを3730DNASequencerAppliedBiosystems社製で確認した。2.2.1.3.A-pETM11ベクター終止コドン無しの単量体Zドメインベクターの構築プライマー153,156の代わりに、フォワードプライマーとしてプライマー153およびリバースプライマーとしてプライマー154配列番号6を用いて、実験2.2.1.2.と同様にA-pETM11ベクターを構築した。なお、DNAフラグメントの挿入は、pETM11のNcoI切断部位およびEcoRI切断部位を利用している。2.2.1.4.SP2Z-pETM11ベクター終止コドン有りの2量体Zドメインベクターの構築フォワードプライマーとしてプライマー155配列番号7およびリバースプライマーとしてプライマー156を用いて、PCRでEcoRI切断部位およびSacI切断部位を有する単量体ZドメインのDNAを調製し、A-pETM11のEcoRI切断部位およびSacI切断部位に挿入して構築した。実験は実験2.2.1.2.と同様の条件で行った。2.2.1.5.AB-pETM11ベクター終止コドンなしの2量体Zドメインベクターの構築フォワードプライマーとしてプライマー155およびリバースプライマーとしてプライマー157配列番号9を用いて、PCRでEcoRI切断部位およびSacI切断部位を有する終止コドンなしの単量体ZドメインのDNAを調製し、A-pETM11のEcoRI切断部位およびSacI切断部位に挿入して、AB-pETM11ベクターを構築した。実験は実験2.2.1.2.と同様の条件で行った。2.2.1.6.SP3Z-pETM11ベクター終止コドン有りの3量体Zドメインベクターの構築フォワードプライマーとしてプライマー158配列番号10およびリバースプライマーとしてプライマー161配列番号13を用いて、PCRでSacI切断部位およびXhoI切断部位を有する単量体ZドメインのDNAを調製し、AB-pETM11のEcoRI切断部位およびSacI切断部位に挿入して構築した。実験は実験2.2.1.2.と同様の条件で行った。2.2.1.7.ABC-pETM11ベクター終止コドン無しの3量体Zドメインベクターの構築フォワードプライマーとしてプライマー158およびリバースプライマーとしてプライマー159配列番号11を用いて、PCRでSacI切断部位およびHindIII切断部位を有する終止コドン無しの単量体ZドメインのDNAを調製し、AB-pETM11のSacI切断部位およびHindIII切断部位に挿入して、ABC-pETM11ベクターを構築した。実験は実験2.2.1.2.と同様の条件で行った。2.2.1.8.SP4Z-pETM11ベクター終止コドン有りの4量体Zドメインベクターの構築プライマー160配列番号12およびプライマー161を用いて、PCRでHindIII切断部位およびXhoI切断部位を有する単量体ZドメインのDNAを調製し、ABC-pETM11のHindIII切断部位およびXhoI切断部位に挿入して、SP4Z-pETM11ベクターを構築した。実験は実験2.2.1.2.と同様の条件で行った。2.2.1.9.SP4Zの発現および精製得られたSP4Z-pETM11ベクターをE.coliBL21株細胞STRATAGENE製に導入し、18°Cで1mMのIPTGSigma-Aldrich製を添加し、15時間インキュベートして、組み換え型イムノグロブリン結合タンパク質SP4Zを発現させた。誘導に先立って、吸光度OD600が約0.6に到達するまで上記細胞を37°Cでインキュベートした。タンパク質発現後、細胞を回収し、pH8.0のトリス緩衝液中で破砕した。得られた組み換え型イムノグロブリン結合タンパク質SP4Zは、NiアフィニティクロマトグラフィーNi-NTAニトリロトリ酢酸粒子、キアゲン社製によって精製された。精製されたイムノグロブリン結合タンパク質は陰イオン交換クロマトグラフィーQ-セファロースFF、GEバイオサイエンス社製によって、さらに精製された。SDS-PAGEによって確認されたイムノグロブリン結合タンパク質の純度は96であった。また、得られた組み換え型イムノグロブリン結合タンパク質SP4Zは、MALDI-TOFマススペクトル分析により、それぞれアミノ酸配列が一致したことにより、図1に示すアミノ酸配列配列番号2を有することが確認された。なお、図1において、RおよびR2は上記一般式1及び3におけるRおよびR2に対応し、R1およびrは上記一般式2及び4におけるR1およびrに対応する。r中の下線部はTEVドメインTEVプロテアーゼペプチド結合加水分解合成酵素切断部位を示す。iii多孔質粒子とリガンドとの結合粒子乾燥質量換算で1gの多孔質粒子1、0.1gのSP4Zが25mLの0.1Mリン酸バッファーpH6.8に分散した混合液を調製し、10°Cで24時間転倒混和し、SP4Zを多孔質粒子1に結合させた。生成した粒子を濾過した後、1Mチオグリセロール25mLと混合し30°Cで4時間反応させ、残余のエポキシ基を開環し、PBS/0.5Tween20で洗浄後、PBSで洗浄し、開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤1A-1を得た。ThermoScientificPierceBCAProteinAssaykitで定量測定を行ったところ、前記粒子に結合したSP4Zの量は41mg/g粒子であった。結果を表2に示す。iv評価A-1の粒子径は54μm、細孔容積は1.26mL/g、比表面積は111m2/g、体積平均細孔径は101nmであった。弾性率は5.6MPaであった。タンパク質ヒトIgG抗体の動的結合容量は40mg/mL、圧力流速は2700cm/hrであった。2.2.2.実施例2実施例1の懸濁重合で、攪拌回転数を300rpmとした以外は、同様にして多孔質粒子2を得て、開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤2A-2を製造、評価した。結果を表2に示す。多孔質粒子2のエポキシ基含有量は、0.45mmol/gであった。A-2の粒子径は31μm、細孔容積は1.438mL/g、比表面積は132m2/g、体積平均細孔径は110nmであった。弾性率は6.4MPaであった。タンパク質ヒトIgG抗体の動的結合容量は40mg/mL、圧力流速は1100cm/hrであった。2.2.3.実施例3i多孔質粒子の懸濁重合300gの純水にポリビニルアルコールクラレ社製PVA-2170.600g、ドデシル硫酸ナトリウム花王社製エマール10G0.030gおよび硫酸ナトリウム1.50gを添加し、一晩撹拌して水溶液S-1-2を調製した。さらに重合当日、S-1-2の5gを別に抜き取り、残りのS-1-2に亜硝酸ナトリウム0.150gを溶解して、水溶液S-2-2を調製した。次に、グリセリンジメタクリレート新中村化学工業社製8.19g、グリシジルメタクリレート三菱レーヨン社製3.51gを2-オクタノン東洋合成社製6.25gおよびアセトフェノン和光純薬工業社製18.3gに溶解させ、単量体溶液を調製した。なお、単量体の全質量を100質量部としたときの、各単量体の部数は、グリセリンジメタクリレート70質量部、グリシジルメタクリレート30質量部である。S-1-25gに2、2’-アゾイソブチロニトリル和光純薬工業社製0.149gを添加して分散し、開始剤分散液とした。次いで、得られた水溶液S-2-2および単量体溶液をバッフル付きの0.5Lセパラブルフラスコ内に投入し、温度計、攪拌翼、および冷却管を装着して、温水バスにセットし、窒素雰囲気下、680rpmで撹拌を開始した。続いて、セパラブルフラスコを温水バスにより加温し、内温が85°Cに到達したところで、開始剤分散液を添加し、85°Cに温度を保持しつつ、5時間攪拌を行った。次いで、反応液を冷却したのち、かかる反応液をヌッチェでろ過し、純水とイソプロピルアルコールで洗浄した。洗浄した粒子をポリビンに移し、水に分散してデカンテーションを3回行い、小粒子を除いた。以上の操作により水に分散した12.5質量の多孔質粒子3粒子乾燥質量8.7gを得た。多孔質粒子3のエポキシ基含有量は、1.7mmol/gであった。iiリガンドの作製後述する調製例1~5により、図3に示されるアミノ酸配列を有するイムノグロブリン結合タンパク質SPATK配列番号4を調製した。1ステップ1StaphylococusaureusのゲノムDNAをテンプレートとして、制限酵素NcoIサイトを有するプライマーPrimer11、及び制限酵素BamH1とHindIIIサイトを有するプライマーPrimer12を用いてPCRでD-AドメンをコードするDNAを得た。このDNAを制限酵素NcoIおよびHindIIIで切断し、同じく制限酵素NcoIおよびHindIIIで切断されたpETM11にライゲーションしてSPAKプラスミドを構築した。2ステップ2次に、上記に得られたSPAKプラスミドをテンプレートとして制限酵素BamHIサイトを有するプライマーPrimer13と制限酵素HindIIIサイトを有するプライマーPrimer14を用いてPCRで新たなD-AドメンをコードするDNAを得た。このDNAを制限酵素BamHIおよびHindIIIで切断し、同じく制限酵素BamHIおよびHindIIIで切断された上記に得られたSPAKプラスミドにライゲーションしてSPATKプラスミドを構築した。3SPAKプラスミドの構築StaphylococusaureusのゲノムDNAをテンプレートとして、Primer11とPrimer12を用いてPCRを実施した。PCRの条件は以下の通りである。段階1:94°C1分間1サイクル、段階2:94°C30秒間、53°C30秒間、72°C2.5分間25サイクル、段階3:72°C10分間1サイクル、その後4°Cで保持した。PCR生成物はGEヘルスケアバイオサイエンス社製の精製キットで精製した。次に、NcoI制限酵素およびHindIII制限酵素を用いて切断した。pETM11ベクターについて同じくNcoI制限酵素およびHindIII制限酵素で切断した。制限酵素による消化反応は、NewEnglandBiolabs製NcoI制限酵素およびHindIII制限酵素を用いて行い、GEヘルスケアバイオサイエンス社製精製キットで精製した。ライゲーション反応は、T4DNAリガーゼInvitrogen社製で室温にて終夜行った。ライゲーションで得られたベクターをDH5acompetentcellBiomedalLifeScience社製に形質転換させ、陽性colonyのプラスミドSPAKプラスミドの配列が正しいことを3730DNASequencerAppliedBiosystems社製で確認した。4SPATKプラスミドの構築の構築SPAKプラスミドをテンプレートとしてPrimer13とPrimer14を用いてPCRで新たなD-AドメンをコードするDNAを得た。PCRの条件は段階1:94°C1分間1サイクル、段階2:94°C30秒間、55°C30秒間、72°C2.5分間25サイクル、段階3:72°C10分間1サイクル、その後4°Cで保持した。PCR生成物はGEヘルスケアバイオサイエンス社製の精製キットで精製した。次に、BamHI制限酵素およびHindIII制限酵素用いてこのDNAを切断した。SPAKプラスミドについても同じくBamHI制限酵素およびHindIII制限酵素で切断した。制限酵素による消化反応は、NewEnglandBiolabs製BamHI制限酵素およびHindIII制限酵素を用い、GEヘルスケアバイオサイエンス社製精製キットで精製した。ライゲーション反応は、T4DNAリガーゼInvitrogen社製で室温にて終夜行った。ライゲーションで得られたベクターをDH5acompetentcellBiomedalLifeScience社製に形質転換させ、陽性colonyのプラスミドSPATKプラスミドの配列が正しいことを3730DNASequencerAppliedBiosystems社製で確認した。5SPATKの発現および精製得られたSPATKプラスミドをE.coliBL21株細胞STRATAGENE製に形質転換した。18°Cで1mMのIPTGSigma-Aldrich製を添加し、15時間インキュベートして、組み換え型イムノグロブリン結合タンパク質SPATKを発現させた。誘導に先立って、吸光度OD600が約0.6に到達するまで上記細胞を37°Cでインキュベートした。タンパク質発現後、細胞を回収し、pH8.0のトリス緩衝液中で破砕した。得られた組み換え型イムノグロブリン結合タンパク質SPATKは、NiアフィニティクロマトグラフィーNi-NTAニトリロトリ酢酸粒子、キアゲン社製によって精製された。精製されたイムノグロブリン結合タンパク質は陰イオン交換クロマトグラフィーQ-セファロースFF、GEバイオサイエンス社製によって、さらに精製された。SDS-PAGEによって確認されたイムノグロブリン結合タンパク質の純度は96であった。また、得られた組み換え型イムノグロブリン結合タンパク質SPATKは、MALDI-TOFマススペクトル分析により、それぞれアミノ酸配列が一致したことにより、図3に示すアミノ酸配列を有することが確認された。iii多孔質粒子とリガンドとの結合粒子乾燥質量換算で1gの多孔質粒子3、0.1gのSPATKが25mLの0.1Mリン酸バッファーpH6.8に分散した混合液を調製し、10°Cで24時間転倒混和し、SPATKを多孔質粒子3に結合させた。生成した粒子を濾過した後、1Mチオグリセロール25mLと混合し30°Cで4時間反応させ、残余のエポキシ基を開環し、PBS/0.5Tween20で洗浄後、PBSで洗浄し、開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤3A-3を得た。ThermoScientificPierceBCAProteinAssaykitで定量測定を行ったところ、前記粒子に結合したSPATKの量は44mg/g粒子であった。結果を表2に示す。iv評価A-3の粒子径は50μm、細孔容積は1.07mL/g、比表面積は104m2/g、体積平均細孔径は68nmであった。弾性率は6.6MPaであった。タンパク質ヒトIgG抗体の動的結合容量は39mg/mL、圧力流速は>3000であった。2.2.4.実施例4~6実施例3において、単量体の全質量を100質量部としたときの、各単量体の部数を、表2の通りとした以外は、同様にして開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤4~6A-4~6を得、評価した。結果を表2に示す。2.2.5.実施例7実施例3において、硫酸ナトリウムを使用せず、亜硝酸ナトリウム1.50gとし、単量体の全質量を100質量部としたときの各単量体の部数を、表2の通りとした以外は、同様にして開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤7A-7を得、評価した。結果を表2に示す。2.2.6.比較例1~2実施例3において、単量体の全質量を100質量部としたときの、各単量体の部数を、表3の通りとした以外は、同様にして比較アフィニティークロマトグラフィー用充填剤1~2B-1~2を得、評価した。結果を表3に示す。2.2.7.実施例8i多孔質粒子の懸濁重合4257gの純水にポリビニルアルコールクラレ社製PVA-2178.51g、ドデシル硫酸ナトリウム花王社製エマール10G0.425gおよび硫酸ナトリウム21.3gを添加し、一晩撹拌して水溶液S-1-6を調製した。さらに重合当日、S-1-6の20gを別に抜き取り、残りのS-1-6にヨウ化カリウム2.13gを溶解して、水溶液S-2-6を調製した。次に、ペンタエリスリトールトリアクリレート60質量およびペンタエリスリトールテトラアクリレート40質量からなる単量体新中村化学工業社製商品名NKエステルA-TMM-3LM-N104g、4-ヒドロキシブチルアクリレートグリシジルエーテル日本化成社製20.7g、ヒドロキシエチルアクリルアミド興人社製82.9gを2-オクタノン東洋合成社製134gおよびアセトフェノン和光純薬工業社製169gに溶解させ、単量体溶液を調製した。なお、単量体の全質量を100質量部としたときの、各単量体の部数は、ペンタエリスリトールトリアクリレート30部、ペンタエリスリトールテトラアクリレート20部、4-ヒドロキシブチルアクリレートグリシジルエーテル10部、ヒドロキシエチルアクリルアミド40部である。S-1-620gに2、2’-アゾイソブチロニトリル和光純薬工業社製1.92gを添加して分散し、開始剤分散液とした。次いで、準備した水溶液S-2-6および単量体溶液をバッフル付きの7Lセパラブルフラスコ内に投入し、温度計、攪拌翼、および冷却管を装着して、温水バスにセットし、窒素雰囲気下、300rpmで撹拌を開始した。続いて、セパラブルフラスコを温水バスにより加温し、内温が80°Cに到達したところで、開始剤分散液を添加し、80°Cに温度を保持しつつ、5時間攪拌を行った。次いで、反応液を冷却したのち、かかる反応液をヌッチェでろ過し、純水とイソプロピルアルコールで洗浄した。洗浄した粒子をポリビンに移し、水に分散してデカンテーションを3回行い、小粒子を除いた。以上の操作により水に分散した12.5質量の多孔質粒子8粒子乾燥質量107gを得た。多孔質粒子8のエポキシ基含有量は、0.29mmol/gであった。iiリガンドの作製、iii多孔質粒子とリガンドとの結合、iv評価実施例1と同様にして、作製、評価した。結果を表4に示す。2.2.8.実施例9実施例8において、ペンタエリスリトールトリアクリレート60質量およびペンタエリスリトールテトラアクリレート40質量からなる単量体新中村化学工業社製商品名NKエステルA-TMM-3LM-N96.7g、4-ヒドロキシブチルアクリレートグリシジルエーテル日本化成社製19.3g、ヒドロキシエチルアクリルアミド興人社製77.3gを2-オクタノン東洋合成社製139gおよびアセトフェノン和光純薬工業社製175gに溶解させ、単量体溶液を調製し、2、2’-アゾイソブチロニトリル和光純薬工業社製の質量を2.69gとした以外は、同様にして開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤9A-9を得、評価した。結果を表4に示す。2.2.9.実施例10実施例9において、内温が85°Cに到達したところで、開始剤分散液を添加し、85~90°Cに温度を保持しつつ、5時間攪拌を行った以外は、同様にして開環エポキシ基を有するリガンド結合多孔質粒子からなるアフィニティークロマトグラフィー用充填剤10A-10を得、評価した。結果を表4に示す。表2~4によれば、実施例1~10の充填剤を用いた場合、比較例1~2の充填剤を用いた場合と比較して、リガンドの保持量が多く、圧力特性に優れていることが理解できる。2.2.10.比較例3実施例1の懸濁重合で、グリセリンジメタクリレート新中村化学工業社製125g、グリシジルメタクリレート三菱レーヨン社製17.9gの代わりに、グリシジルメタクリレート142.9gを使用した以外は、同様にして、単量体溶液を調製、重合を実施した。なお、単量体の全質量を100質量部としたときの、各単量体の部数は、グリシジルメタクリレート80質量部、グリセロールメタクリレート20質量部である。次いで、反応液を冷却したのち、かかる反応液をヌッチェでろ過し、純水とイソプロピルアルコールで洗浄しようとしたが、ろ過の途中で溶剤を含んだ白色塊状物となり、詰まりが生じて次の工程に進むことができなかった。本実施形態に係る説明は以上である。本発明は、上述した実施形態に限定されるものではなく、さらなる種々の変形が可能である。また本発明は、実施形態で説明した構成と実質的に同一の構成例えば、機能、方法および結果が同一の構成、あるいは目的および結果が同一の構成を含む。また、本発明は、実施形態で説明した構成の本質的でない部分を置き換えた構成を含む。また、本発明は、実施形態で説明した構成と同一の作用効果を奏する構成または同一の目的を達成することができる構成を含む。また、本発明は、実施形態で説明した構成に公知技術を付加した構成を含む。"