"哺乳動物におけるztnf4活性を阻害する方法において、aBR43x2の細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;bTACIの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;cBCMAの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;d配列番号10の配列を含んでなるポリペプチド;e配列番号2のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;f配列番号4のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;g配列番号6のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;h配列番号8のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;i配列番号10のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;k配列番号4のポリペプチド;l配列番号6のアミノ酸残基1~166のアミノ酸残基;およびm配列番号8のアミノ酸残基1~150のアミノ酸残基;から成る群から選択されるある量の化合物を哺乳動物に投与することを含んでなる方法。前記化合物がペプチド結合により結合された第1部分と第2部分とから成る融合タンパク質であり、前記第1部分がa配列番号8の配列を含んでなるポリペプチド;b配列番号2のアミノ酸残基25~58を含んでなるポリペプチド;c配列番号6のアミノ酸残基34~66を含んでなるポリペプチド;d配列番号6のアミノ酸残基71~104を含んでなるポリペプチド;e配列番号6のアミノ酸残基25~104を含んでなるポリペプチド;f配列番号8のアミノ酸残基8~37を含んでなるポリペプチド;g配列番号8のアミノ酸残基41~88を含んでなるポリペプチド;h配列番号8のアミノ酸残基8~88を含んでなるポリペプチド;から成る群から選択されるポリペプチドを含んでなり、そして前記第2部分が他のポリペプチドを含んでなる、請求項1に記載の方法。前記第1部分が、a配列番号2のアミノ酸残基59~120;b配列番号6のアミノ酸残基105~166;およびc配列番号8のアミノ酸残基89~150;から成る群から選択されるポリペプチドをさらに含んでなる、請求項2に記載の方法。前記第1部分が、aBR43x2の細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;bTACIの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;およびcBCMAの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;から成る群から選択される、請求項2に記載の方法。前記第1部分が、a配列番号4のポリペプチド;b配列番号6のアミノ酸残基1~154;およびc配列番号8のアミノ酸残基1~48;から成る群から選択される、請求項2に記載の方法。前記第2部分が免疫グロブリン重鎖定常領域である、請求項2に記載の方法。前記抗体または抗体フラグメントが、aポリクローナル抗体;bネズミモノクローナル抗体;c上記bに由来するヒト化抗体;およびdヒトモノクローナル抗体;から成る群から選択される、請求項1に記載の方法。前記抗体フラグメントが、F、F、Fab’、Fab、Fv、scFv、および最小認識ユニットから成る群から選択される、請求項7に記載の方法。前記哺乳動物が霊長類である、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性がBリンパ球に関連する、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性が活性化Bリンパ球に関連する、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性が休止Bリンパ球に関連する、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性が抗体産生に関連する、請求項1に記載の方法。前記抗体産生が自己免疫疾患に関連する、請求項13に記載の方法。前記自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、多発性硬化症、または慢性関節リウマチである、請求項14に記載の方法。前記ztnf4活性がぜん息、気管支炎または気腫に関連する、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性が末期腎不全に関連する、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性が腎臓病に関連する、請求項1に記載の方法。前記腎臓病が糸球体腎炎、脈管炎、腎炎または腎盂腎炎である、請求項18に記載の方法。前記腎臓病が腎臓新形成、多発性骨髄腫、リンパ腫、軽鎖神経疾患またはアミロイドーシスに関連する、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性がエフェクターT細胞に関連する、請求項1に記載の方法。前記ztnf4活性が免疫応答の緩和に関連する、請求項21に記載の方法。前記ztnf4活性が免疫抑制に関連する、請求項21に記載の方法。前記免疫抑制が移植片拒絶、移植片対宿主病または炎症に関連する、請求項21に記載の方法。前記活性が自己免疫疾患に関連する、請求項24に記載の方法。前記自己免疫疾患がインスリン依存性真性糖尿病または膠原病である、請求項25に記載の方法。前記ztnf4活性が炎症に関連する、請求項26に記載の方法。前記炎症が関節の疼痛、腫脹、貧血、または敗血症性ショックである、請求項27に記載の方法。BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合を阻害する方法において、aBR43x2の細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;bTACIの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;cBCMAの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;d配列番号10の配列を含んでなるポリペプチド;e配列番号2のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;f配列番号4のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;g配列番号6のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;h配列番号8のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;i配列番号10のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;j配列番号18のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;k配列番号20のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;k配列番号4のポリペプチド;l配列番号6のアミノ酸残基1~166のアミノ酸残基;およびm配列番号8のアミノ酸残基1~150のアミノ酸残基;から成る群から選択されるある量の化合物を投与することを含んでなる方法。前記化合物がペプチド結合により結合された第1部分と第2部分とから成る融合タンパク質であり、前記第1部分がa配列番号8の配列を含んでなるポリペプチド;b配列番号2のアミノ酸残基25~58を含んでなるポリペプチド;c配列番号6のアミノ酸残基34~66を含んでなるポリペプチド;d配列番号6のアミノ酸残基71~104を含んでなるポリペプチド;d配列番号6のアミノ酸残基25~104を含んでなるポリペプチド;f配列番号8のアミノ酸残基8~37を含んでなるポリペプチド;g配列番号8のアミノ酸残基41~88を含んでなるポリペプチド;h配列番号8のアミノ酸残基8~88を含んでなるポリペプチド;から成る群から選択されるポリペプチドを含んでなり、そして前記第2部分が他のポリペプチドを含んでなる、請求項29に記載の方法。前記第1部分が、a配列番号2のアミノ酸残基59~120;b配列番号6のアミノ酸残基105~166;およびc配列番号8のアミノ酸残基89~150;から成る群から選択されるポリペプチドをさらに含んでなる、請求項30に記載の方法。前記第1部分が、aBR43x2の細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;bTACIの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;およびcBCMAの細胞外ドメインを含んでなるポリペプチド;から成る群から選択される、請求項30に記載の方法。前記第1部分が、a配列番号4のポリペプチド;b配列番号6のアミノ酸残基1~154;およびc配列番号8のアミノ酸残基1~48から成る群から選択される、請求項30に記載の方法。前記第2部分が免疫グロブリン重鎖定常領域である、請求項30に記載の方法。前記抗体または抗体フラグメントが、aポリクローナル抗体;bネズミモノクローナル抗体;c上記bに由来するヒト化抗体;およびdヒトモノクローナル抗体;から成る群から選択される、請求項29に記載の方法。前記抗体フラグメントが、F、F、Fab’、Fab、Fv、scFv、および最小認識ユニットから成る群から選択される、請求項35に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合がBリンパ球に関連する、請求項29に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合が活性化Bリンパ球に関連する、請求項29に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合が休止Bリンパ球に関連する、請求項29に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合が抗体産生に関連する、請求項29に記載の方法。前記抗体産生が自己免疫疾患に関連する、請求項29に記載の方法。前記自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、多発性硬化症、または慢性関節リウマチである、請求項41に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンドの結合がぜん息、気管支炎または気腫に関連する、請求項29に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合が末期腎不全に関連する、請求項29に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合が腎臓病に関連する、請求項29に記載の方法。前記腎臓病が糸球体腎炎、脈管炎、腎炎または腎盂腎炎である、請求項45に記載の方法。前記レセプター-リガンド結合が腎臓新形成、多発性骨髄腫、リンパ腫、軽鎖神経疾患またはアミロイドーシスに関連する、請求項29に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合がエフェクターT細胞に関連する、請求項29に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合が免疫応答の緩和に関連する、請求項48に記載の方法。前記レセプター-リガンド結合が免疫抑制に関連する、請求項49に記載の方法。前記免疫抑制が移植片拒絶、移植片対宿主病または炎症に関連する、請求項50に記載の方法。前記活性が自己免疫疾患に関連する、請求項50に記載の方法。前記自己免疫疾患がインスリン依存性真性糖尿病または膠原病である、請求項52に記載の方法。前記BR43x2、TACIまたはBCMAのレセプター-リガンド結合が炎症に関連する、請求項50に記載の方法。前記炎症が関節の疼痛、腫脹、貧血、または敗血症性ショックである、請求項54に記載の方法。配列番号2のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド分子。配列番号1の単離されたポリヌクレオチド分子。下記の作用可能に連鎖された因子:転写プロモーター;請求項56に記載のポリヌクレオチド分子;および転写ターミネーター;を含んでなる発現ベクター。前記ポリヌクレオチド分子に作用可能に連鎖された分泌レセプター-リガンドの結合配列をさらに含んでなる、請求項58に記載の発現ベクター。前記培養された細胞が前記ポリヌクレオチドセグメントによりコードされる前記ポリペプチドを発現する、請求項58に記載の発現ベクターが導入された培養された細胞。ポリペプチドを産生する方法において、請求項58に記載の発現ベクターが導入された細胞を培養し;これにより前記細胞は前記ポリヌクレオチド分子によりコードされる前記ポリペプチドを発現し;そして前記発現されたポリペプチドを回収する;ことを含んでなる方法。配列番号2の配列を有する単離されたポリペプチド。薬学上許容されるビヒクルと組み合わせた、請求項62に記載のポリペプチド。発明の詳細な説明本発明を詳細に説明する前に、下記の用語を定義することはその理解の助けとなるであろう:親和標識:は、本明細書において、第2ポリペプチドの精製または検出を提供するか、あるいは基質への第2ポリペプチドの結合部位を提供するために、第2ポリペプチドに結合させることができるポリペプチドのセグメントを表すために使用される。原理的には、抗体または他の特異的な結合因子が利用可能な任意のペプチドまたはタンパク質を親和標識として使用することができる。親和標識は下記のものを包含する:ポリヒスチジントラクト、プロテインANilsson他、EMBOJ4:1075、1985;Nilsson他、MethodsEnzymol198:3、1991、グルタチオンSトランスフェラーゼSmithおよびJohnson、Gene67:31、1988、GluGlu親和標識Grussenmeyer他、ProcNatlAcadSciUSA82:79524、1985、サブスタンスP、FlagTMペプチドHopp他、Biotechnology6:120410、1988、ストレプチアビジン結合ペプチド、または他の抗原性エピトープまたは結合ドメイン。一般に、Ford他、ProteinExpressionandPurification2:95107、1991、参照。親和標識をコードするDNAは、商業的供給会社から入手可能である例えば、PharmaciaBiotech、ニュージャージイ州ピスカタウェイ。アレレ変異型:同一染色体遺伝子座を占有する遺伝子の2またはそれ以上のオールタネイト形態の任意のもの。アレレの変動は突然変異により自然に起こり、そして集団内に表現型の多形性を生じさせることがある。遺伝子の突然変異はサイレントコードされたポリペプチドの非変化であるか、あるいは変更されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。アレレ変異型という用語は、また、本明細書において遺伝子のアレレ変異型によりコードされるタンパク質を表すために使用される。また、アレレの変動のために参照アミノ酸配列と異なる同一種からの同一タンパク質が包含される。アミノ末端およびカルボキシル末端:は、本明細書において、ポリペプチド内の位置を表すために使用される。この関係が許す場合、これらの用語は近接性または相対的位置を表すためにポリペプチドの特定の配列または部分を参照して使用される。例えば、ペプチド内の参照配列に対してカルボキシル末端に位置するある種の配列は、参照配列のカルボキシル末端に対して近接して位置するが、完全なポリペプチドのカルボキシル末端に必ずしも存在しない。相補体/抗相補体の対:は、適当な条件下に非共有結合的にアソシエートした安定な対を形成する、非同一部分を表す。例えば、ビオチンおよびアビジンまたはストレプトアビジンは、相補体/抗相補体の対のプロトタイプのメンバーである。他の典型的な相補体/抗相補体の対は、レセプター/リガンドの対、抗体/抗原またはハプテンまたはエピトープの対、センス/アンチセンスポリヌクレオチドの対、およびその他を包含する。相補体/抗相補体の対の引き続く解離を望む場合、補体/抗補体の対は好ましくは<109/Mの結合アフィニティーを有する。コンティグcontig:は、他のポリヌクレオチドに対して同一であるか、あるいは相補的な配列の隣接するストレッチを有するポリヌクレオチドを表す。隣接する配列は、それらの全体においてあるいはポリヌクレオチドの部分的ストレッチに沿って、ポリヌクレオチド配列の所定のストレッチをオーバーラップさせると言われる。例えば、ポリヌクレオチド配列5ATGGTTAGCTT3に対する代表的なcontigは5TAGCTTgagtct3および3gtcgacTACCGA3である。ポリヌクレオチド分子の相補体:は、相補的塩基配列を有しかつ参照配列に比較して逆の向きを有するポリヌクレオチド分子である。例えば、配列5ATGCACGGG3は5CCCGTGCAT3に対して相補的である。縮重ヌクレオチド配列または縮重配列:は、1またはそれ以上の縮重コドンを含むヌクレオチド配列ポリペプチドをコードする参照ポリヌクレオチド分子に比較してを表す。縮重コドンはヌクレオチドの異なるトリプレットを含有するが、同一アミノ酸残基をコードするすなわち、GAUおよびGACのトリプレットの各々はAspをコードする。発現ベクター:その転写を提供する追加のセグメントに作用可能に連鎖された、問題のポリペプチドをコードするセグメントからなる、線状または円形のDNA分子。このような追加のセグメントは、プロモーターおよびターミネーターの配列を包含し、そして、また、1またはそれ以上の複製起点、1またはそれ以上の選択可能なマーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、およびその他を包含することができる。発現ベクターは、一般に、プラスミドまたはウイルスDNAから誘導されるか、あるいは双方の因子を含有することができる。イソ型:は、異なる遺伝子からまたは同一遺伝子からオールタネイトスプライシングにより製造できるタンパク質の異なる型を意味する。ある場合において、イソ型はそれらの輸送活性、発生されており発現時間、組織分布、細胞中の位置またはこれらの特性の組合わせにおいて異なる。単離されたポリヌクレオチドオチド:は、ポリヌクレオチドがその自然の遺伝的環境から取出され、こうして、他の余分または望ましくないコーディング配列を含まず、そして遺伝子操作されたタンパク質の産生系内で使用するために適当な形態であることを表す。このような単離された分子は、それらの自然環境から分離されたものであり、そしてcDNAおよびゲノムのクローンを包含する。本発明の単離されたDNA分子は、それらが通常アソシエートされる他の遺伝子を含まないが、天然に存在する5および3の非翻訳領域、例えば、プロモーターおよびターミネーター、およびその他を包含することができる。アソシエートされた領域の同定は、当業者にとって明らかであろう例えば、DynanおよびTijan、Nature316:77478、1985、参照。単離されたポリペプチドまたはタンパク質:は、その自然環境、例えば、血液および動物の組織、以外の条件において見出されるポリペプチドまたはタンパク質である。好ましい形態において、単離されたポリペプチドは他のポリペプチド、特に動物由来の他のポリペプチドを実質的に含まない。高度に精製された形態、すなわち、95より大きい純度、より好ましくは99より大きい純度のポリペプチドを提供することが好ましい。この関係において使用するとき、用語単離されたは別の物理的形態、例えば、二量体、あるいはグリコシル化または誘導化された形態の同一のポリペプチドの存在を排除しない。作用可能に連鎖された:は、DNAセグメントについて言及するとき、セグメントがそれらの意図する目的のために調和して機能するように、例えば、転写がプロモーターにおいて開始し、コーディングセグメントを通してターミネーターに進行するように、セグメントが配置されていることを示す。オーソログ:は、異なる種からのポリペプチドまたはタンパク質の機能的対応物である、1つの種から得られたポリペプチドまたはタンパク質を表す。オーソログ間の配列の差は種形成の結果である。ポリヌクレオチド:は、5→3末端の方向に読んだ、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド塩基の一本鎖または二本鎖のポリマーである。ポリヌクレオチドはRNAおよびDNAを包含し、天然源から単離され、invitroで合成されるか、あるいは天然の分子と合成の分子との組合わせから製造することができる。ポリヌクレオチドのサイズは、塩基対略号bp、ヌクレオチドnt、またはキロ塩基kbとして表される。この関係が許す場合、後者の2つの用語は一本鎖または二本鎖であるポリヌクレオチドを記載することができる。この用語を二本鎖の分子に適用するとき、それは全体の長さを表すために使用され、そして用語塩基対に等しいと理解されるであろう。当業者は認識するように、二本鎖ポリヌクレオチドの2つの鎖はわずかに長さが異なることがあり、そして酵素の切断の結果その末端は食い違うことがある;こうして、二本鎖ポリヌクレオチド内のすべてのヌクレオチドは対合していなことがある。このような不対末端は一般に20ヌクレオチド長さを超えないであろう。ポリペプチド:は、自然にまたは合成的に生産された、ペプチド結合により結合されたアミノ酸残基のポリマーである。約10アミノ酸残基より小さいポリペプチドは普通にペプチドと呼ばれる。プロモーター:は、RNAポリメラーゼの結合を提供しかつ転写を開始させるDNA配列を含有する遺伝子の部分を表す。プロモーター配列は普通に、しかし常にではないが、遺伝子の5非コーディング領域の中に見出される。タンパク質:は、1または2以上のポリペプチド鎖を含んでなる高分子である。タンパク質は、また、非ペプチド成分、例えば、炭水化物基を含んでなることができる。炭水化物および他の非ペプチド置換基を細胞によりタンパク質に付加することができ、細胞においてタンパク質は産生され、そして細胞の型とともに変化するであろう。タンパク質はアミノ酸主鎖構造により本明細書において定義される;置換基、例えば、炭水化物基は一般に特定されないが、それにもかかわらず、存在することができる。レセプター:は、生物活性分子すなわち、リガンドに結合し、細胞上のリガンドの作用を伝達する、細胞関連タンパク質を表す。レセプターへのリガンドの結合は、エフェクタードメインと、細胞中の1またはそれ以上の他の分子との間の相互作用を引き起こす、レセプターにおけるコンフォメーションの変化を生ずる。この相互作用は、引き続いて、細胞の代謝の変更に導く。レセプター-リガンドの相互作用に関係する代謝の事象は、遺伝子の転写、リン酸化、脱リン酸化、細胞増殖、サイクル的AMP産生の増加、細胞のカルシウムの移動化、膜脂質の移動化、細胞接着、イノシトール脂質の加水分解、およびリン脂質の加水分解を包含する。BR43x2は、本明細書においていっそう詳細に説明するように、TNFレセプターの特性を有する。分泌シグナル配列:は、ポリペプチド分泌ペプチドをコードするDNA配列を表し、それは、より大きいポリペプチドの1成分として、より大きいポリペプチドが合成される細胞の分泌経路を通してそのポリペプチドを向ける。通常、より大きいポリペプチドは、分泌経路を通る移行の間に切断されて、分泌ペプチドを除去する。可溶性レセプター:細胞膜に結合しないレセプターポリペプチド。最も普通には、可溶性のレセプターはトランスメンブランおよび細胞質ドメインを欠如するリガンド結合性レセプターのポリペプチドである。可溶性レセプターは、追加のアミノ酸残基、例えば、ポリペプチドの精製を提供するまたは基質へのポリペプチドの結合部位を提供する親和標識を含んでなることができる。多数の細胞表面のレセプターは、タンパク質分解により産生されるか、あるいは選択的にスプライスされたmRNAから翻訳される、天然に存在する、可溶性対応物を有する。レセプターのポリペプチドは、それぞれ、膜の定着またはシグナルトランスダクションを提供する、これらのセグメントの十分な部分を欠如するとき、トランスメンブランおよび細胞内ポリペプチドのセグメントを実質的に含まないと言われる。不正確な分析法例えば、ゲル電気泳動により決定されたポリマーの分子量および長さは、近似値であると理解されるであろう。このような値を約XまたはほぼXとして表すとき、Xの記載する値は±10の正確さであると理解されるであろう。本明細書において引用するすべての参考文献の教示は、それらの全体において引用することによって本明細書の一部とされる。本発明は、1192bpのDNA配列配列番号1およびレセプターTACIのイソ型である対応するポリペプチド配列配列番号2の発見に一部分に基づく。イソ型はBR43x2と表示された。BR43x2の可溶性形態は配列番号4に開示され、可溶性レセプターをコードするポリヌクレオチドは配列番号3に開示される。本明細書においていっそう詳しく説明されるように、本発明のBR43x2レセプターをコードするポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、ヒトRPMI1788ライブラリーおよびNまたはC末端的に標識化された、ビオチン-またはFITC標識化腫瘍壊死因子リガンドztnf4、現在ニュートロカインαWIPO公開WO98/39361として知られている、BLySMoore他、前掲、BAFFSchneider他、前掲、TALL-1Shu他、前掲またはTHANKMukhopadhyay他、前掲を使用するシグナルトラップクローニングにより、最初に同定された。陽性プールはリガンド結合により同定され、単一クローンに破壊され、cDNA単離され、配列決定された。BR43x2の推定されたアミノ酸配列配列番号2に表示されているを既知の腫瘍壊死因子レセプターと比較すると、BR43x2はTACIのイソ型であり、単一の、低度に保存された、システインに富んだ擬反復を有することが示された。構造的には、TNFレセプターファミリーは、歴史的にシステインに富んだ擬反復と呼ばれる、いくつかのモジュールから構成された細胞外部分により特徴づけられる。プロトタイプのTNFRファミリーメンバーは4つのこれらの擬反復を有し、各々は交互に約29~43の残基長さを有する。典型的な擬反復は6システイン残基を有する。それらは共通のモジュールに由来するように思われ、正確に反復しないので、擬反復と呼ばれる:擬反復1、2、3および4は互いに区別する特徴ある配列を有する。p55TNFレセプターの結晶構造は、各擬反復が1つのフォルディングドメインに対応し、すべての4つの擬反復が同一第3構造的の折りたたまれ、ジサルファイド結合により内部に一緒に保持されることを示した。TACIは2つのシステインに富んだ擬反復を有するvonBuelowおよびBram、前掲を含有し、第1はTNFレセプターファミリーの他のメンバーとともに構造の中に保存され、第2は低度に保存される。本発明のBR43x2イソ型は第1のTACIシステインに富んだ擬反復を欠如し、第2の、低度に保存された反復のみを保持する。配列番号2に表示されるようなBR43x2の推定されたアミノ酸配列の配列の解析は、細胞外ドメイン配列番号2の残基1~120を有する成熟タンパク質の存在を示し、このタンパク質は1つのシステインに富んだ擬反復pseudorepeat配列番号2の残基25~58、トランスメンブランドメイン配列番号2の残基121~133および細胞質ドメイン配列番号2の残基134~247を含有する。BR43x2のシステインに富んだ擬反復は6つのシステイン残基配列番号2の残基25、40、43、47、54および58、保存されたアスパラギン酸残基配列番号2の残基34および2つのロイシン残基配列番号2の残基36および37を有し、TACIの第1システインに富んだ擬反復配列番号6と46の同一性およびBCMAのシステインに富んだ擬反復配列番号8と35の同一性を共有する図1。システインに富んだ擬反復は下記のモチーフにより表すことができる:CX[QEK][QEKNRDHS][QE]X{0-2}[YFW][YFW]DXLLX{2}C[IMLV]XCX{3}CX{6-8}CX{2}[YF]C配列番号10、ここでCはアミノ酸残基システインを表し、Qはグルタミンを表し、Eはグルタミン酸を表し、Kはリシンを表し、Nはアスパラギンを表し、Rはアルギニンを表し、Dはアスパラギン酸を表し、Hはヒスチジンを表し、Sはセリンを表し、Yはチロシンを表し、Fはフェニルアラニンを表し、Wはトリプトファンを表し、Lはロイシンを表し、Iはイソロイシンを表し、Vはバリンを表し、そしてXはシステイン以外の任意の天然に存在するアミノ酸残基を表す。正方形の括弧中のアミノ酸残基[]は、その位置において許容されたアミノ酸残基の変動を示す。中括弧{}は、その位置において許容されたアミノ酸残基の数を示す。本発明は、また、配列番号10により提供されるような32~40アミノ酸残基長さの可溶性ポリペプチドを提供する。可溶性BR43x2レセプターは、配列番号4の残基1~120により表され、1つのシステインに富んだ擬反復配列番号4の残基25~58を含有し、配列番号2に記載されているようなBR43x2のトランスメンブランおよび細胞質ドメインを欠如する。当業者は認識するように、これらのドメイン境界は近似であり、既知のタンパク質との整列およびタンパク質フォルディングの予測に基づく。これらの特徴は、配列番号1および3のDNA配列によりコードされるレセプターはTNFレセプターファミリーの1メンバーであることを示す。BR43x2発現を検出するために予測されるBR43x1に対するヌクレオチドプローブに対応するmRNAの組織分布のノザンブロット分析およびドットブロット分析は、脾臓、リンパ節、CD19細胞における発現、混合リンパ球反応細胞、DaudiおよびRaji細胞における弱い発現を示した。TACIについて報告されたようにvonBuelowおよびBram、前掲、逆転写酵素PCRを使用して、BR43x1はB細胞のみにおいて検出され、そして活性化されたT細胞において検出されなかった。対応するTACI配列と100オーバーラップするBR43x2プローブを使用して、TACIおよびBR43x2は脾臓、リンパ節および小腸、胃、唾液腺、虫垂、肺、骨髄、胎児脾臓、CD19細胞、およびRaji細胞において検出された。ノザンブロット分析を使用して、BCMAは小腸、脾臓、胃、結腸、虫垂、リンパ節、気管、および精巣において検出された。BCMAはまた腺リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および副甲状腺腫瘍において検出され、CD8、CD19、MLR細胞、Daudi細胞、RajiおよびHut78細胞においてかすかに検出された。また、ネズミztnf4配列番号19および同様なヒトTACI、BCMA、およびBR43x2を使用してノザンブロット分析を実施し、ネズミztnf4の発現は主として脾臓および胸腺において検出された。ネズミztnf4はまた肺において発現され、そしてかすかな発現は皮膚および心臓において検出された。本発明は、また、本明細書に開示するBR43x2ポリペプチドをコードする、DNAおよびRNA分子を包含する、ポリヌクレオチド分子を提供する。当業者は容易に認識するように、遺伝暗号のデジェネラシーにかんがみて、かなりの配列変動はこれらのポリヌクレオチド分子の間で可能である。配列番号11は、配列番号4の可溶性BR43x2ポリペプチドをコードするすべてのDNAを包含する縮重DNA配列である。同様に、配列番号12は、配列番号2のBR43x2ポリペプチドをコードするすべてのDNAを包含する縮重DNA配列である。当業者は認識するように、配列番号12の縮重配列は、また、UをTと置換することによって配列番号4をコードするすべてを含むRNA配列を提供する。こうして、BR43x2ポリペプチドをコードする配列番号11のヌクレオチド1~ヌクレオチド360、配列番号12のヌクレオチド1~741を含んでなるポリヌクレオチドおよびそれらのRNA同等物は、本発明に包含される。縮重ヌクレオチド位置を表すために配列番号11および12内で使用した1文字コードを表1に記載する。分解能はコード文字により表されるヌクレオチドである。補体は1またはそれ以上の相補的ヌクレオチドのコードである。例えば、コードYはCまたはTを表し、そしてその補体RはAまたはGを表し、AはTに対して相補的であり、そしてGはCに対して相補的である。所定のアミノ酸についてすべての可能なコドンを包含する、配列番号11および12において使用する縮重コドンを、表2に記載する。当業者は認識するように、各アミノ酸をコードするすべての可能なコドンを代表する縮重コドンを決定するとき、多少の不明確さが導入される。例えば、セリンの縮重コドンWSNは、ある環境において、アルギニンAGRをコードすることができ、そしてアルギニンの縮重コドンMGNは、ある環境において、セリンAGYをコードすることができる。同様な関係はフェニルアラニンおよびロイシンをコードするコドンの間に存在する。したがって、縮重配列に包含される、いくつかのポリヌクレオチドは変異型アミノ酸配列をコードすることができるが、当業者は、配列番号2および4のアミノ酸配列を参照することによって、このような変異型配列を容易に同定することができる。変異型配列は、本明細書において記載するように、機能性について容易に試験することができる。また、当業者は認識するように、異なる種は優先的コドンの使用を示すことができる。一般に、下記の文献を参照のこと:Grantham他、NuclAcidsRes8:1893912、1980;Haas他、CurrBiol6:31524、1996;WainHobson他、Gene13:35564、1981;GrosjeanおよびFiers、Gene18:199209、1982;Holm、NuclAcidsRes14:307587、1986;Ikemura、JMolBiol158:57397、1982。本発明において使用するとき、用語優先的コドンの使用または優先的コドンは、ある種の細胞において最も頻繁に使用され、こうして各アミノ酸をコードする可能なコドンの1つまたはわずかの代表的なものに好んで使用される、タンパク質翻訳コドンを言及する、この分野の用語である表2参照。例えば、アミノ酸のスレオニンThrはACA、ACC、ACG、またはACTによりコードされることができるが、哺乳動物細胞において、ACCは最も普通に使用されるコドンである;他の種、例えば、昆虫細胞、酵母、ウイルスまたは細菌において、異なるThrコドンは優先的であることができる。特定の種の優先的コドンを、この分野において知られている種々の技術により、本発明のポリヌクレオチドの中に導入することができる。組換えDNAの中への優先的コドンの導入は、例えば、特定の細胞の型または種内のタンパク質の翻訳を効率よくすることによって、タンパク質の産生を増強することができる。したがって、配列番号11に開示されている縮重コドンの配列は、この分野において普通に使用されかつ本明細書において開示する、種々の細胞の型および種におけるポリヌクレオチドの発現を最適化するための鋳型として働く。優先的コドンを、本明細書において開示するように、種々の種における発現について試験し、発現のために最適化し、そして機能性について試験することができる。BR43x2のシステインに富んだ擬反復の中に高度に保存されたアミノ酸を、新しいファミリーメンバーを同定するツールとして使用することができる。例えば、種々の組織源または細胞系統から得られたRNAからの、前述の、細胞外リガンド結合性ドメインをコードする配列を増幅するために、逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応RT-PCRを使用することができる。特に、BR43x2配列から設計された高度に保存されたプライマーはこの目的に有用である。本発明の好ましい態様の範囲内において、単離されたポリヌクレオチドは、ストリンジェント条件下に、配列番号3の同様なサイズの領域またはそれ対して相補的配列に対してハイブリダイゼーションするであろう。一般に、ストリンジェント条件は、規定されたイオン強度およびpHにおいて、特定の配列の熱的融点Tmよりも約5°C低いように選択される。Tmはターゲット配列の50が完全に合致するプローブにハイブリダイゼーションする温度規定されたイオン強度およびpHにおいてである。典型的にはストリンジェント条件は、pH7において塩濃度が約003Mまででありかつ温度が少なくとも約60°Cである条件である。前述したように、本発明の単離されたポリヌクレオチドはDNAおよびRNAを包含する。DNAおよびRNAを製造する方法はこの分野においてよく知られている。一般にRPMI1788細胞、PBMNC、B細胞または扁桃腺組織からRNAを単離することが好ましいが、また、DNAは他の組織からのRNAを使用して製造することができるか、あるいはゲノムDNAとして単離することができる。全RNAはグアジニウムイソチオシアネート抽出および引き続くCsCl勾配の遠心により製造することができるChirgwin他、Biochemistry18:5294、1979。ポリARNAは全RNAからAvivおよびLederの方法ProcNatllAcadSciUSA69:140812、1972により製造される。相補的DNAcDNAはポリARNAから既知の方法により製造される。次いでBR43x2ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、例えば、ハイブリダイゼーションまたはPCRにより、同定し、単離する。当業者は認識するように、配列番号1および3に開示する配列はヒト遺伝子の単一アレレ表し、そしてアレレの変動およびオールタネイティブスプライシングが起こることが期待される。配列番号1および3に示すDNA配列のアレレ変異型は、サイレント突然変異を含有するものおよび突然変異がアミノ酸配列の変化を生ずるものを包含し、本発明の範囲内に入り、そして配列番号2および4のアレレ変異型であるタンパク質もまた本発明の範囲内に入る。この分野において知られている標準的手順に従い異なる個体または組織からのcDNAまたはゲノムライブラリーをプロービングすることによって、アレレ変異型およびこれらの配列のスプライス変異型をクローニングすることができる。本発明は、また、配列番号2および4のポリペプチドおよびそれらの種オーソログに対して実質的に類似する、単離されたBR43x2ポリペプチドを提供する。用語実質的に類似するは、本明細書において、配列番号2および4に示す配列またはそれらのオーソログに対して50、好ましくは60、より好ましくは少なくとも80の配列の同一性を有するポリペプチドを表すために使用される。このようなポリペプチドは配列番号2に示す配列またはそれらのオーソログに対して好ましくは少なくとも90、最も好ましくは少なくとも95配列の同一性を有する。配列の同一性の百分率は慣用法により決定される。例えば、下記の文献を参照のこと:Altschul他、BullMathBio48:60366、1986およびHenikoffおよびHenikoff、ProcNatlAcadSciUSA89:109159、1992。簡単に述べると、表3アミノ酸は標準的1文字コードにより示されているに示すように10のギャップオープニングペナルティー、1のギャップエクステンションペナルティー、およびHenikoffおよびHenikoff前掲のブロサムblosum62スコアリングマトリックスを使用して、2つのアミノ酸配列を整列させて整列スコアを最適化する。ポリヌクレオチド分子の配列の同一性は、上に開示した比を使用する同様な方法により決定される。実質的に相同性のタンパク質およびポリペプチドは、1またはそれ以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有するとして特性決定される。これらの変化は好ましくは小さい特質を有する、すなわち、保存的アミノ酸置換表4参照およびタンパク質またはポリペプチドのフォルディングまたは活性に影響を実質的に与えない他の置換;小さい欠失、典型的には1~約30アミノ酸の欠失;およびアミノ末端およびカルボキシル末端のエクステンション、例えば、アミノ末端のメチオニン残基、約20~25残基までの小さいリンカーペプチド、または親和標識を有する。親和標識を含んでなるポリペプチドは、さらに、BR43x2ポリペプチドと親和標識との間にタンパク質分解切断部位を含むことができる。好ましいこのような部位は、トロンビン切断部位および因子Xa切断部位を包含する。20の標準的アミノ酸に加えて、非標準的アミノ酸例えば、4-ヒドロキシプロリン、6-N-メチルリシン、2-アミノイソ酪酸、イソバリンおよびα-メチルセリンを本発明のBR43x2ポリペプチドのアミノ酸残基と置換することができる。制限された数の非保存的アミノ酸、遺伝暗号によりコードされないアミノ酸、および非天然アミノ酸をBR43x2ポリペプチドのアミノ酸残基と置換することができる。また、本発明のタンパク質は、天然に存在しないアミノ酸残基を含んでなることができる。天然に存在しないアミノ酸は、限定されずに、下記のものを包含する:トランス-3-メチルプロリン、24-メタノプロリン、シス-4-ヒドロキシプロリン、トランス-4-ヒドロキシプロリン、N-メチルグリシン、アロ-スレオニン、メチルスレオニン、ヒドロキシエチルシステイン、ヒドロキシエチルホモシステイン、ニトログルタミン、ホモグルタミン、ピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、デヒドロプロリン、3-および4-メチルプロリン、33-ジメチルプロリン、tert-ロイシン、ノルバリン、2-アザフェニルアラニン、3-アザフェニルアラニン、4-アザフェニルアラニン、および4-フルオロフェニルアラニン。天然に存在しないアミノ酸残基をタンパク質の中に組込む、いくつかの方法はこの分野において知られている。例えば、化学的にアミノアシル化されたサプレッサーtRNAを使用してナンセンス突然変異を抑制する、invitro系を使用することができる。アミノ酸を合成し、tRNAをアミノアシル化する方法はこの分野において知られている。大腸菌EcoliS30抽出物および商業的に入手可能な酵素および他の試薬を含んでなる、無細胞系において、ナンセンス突然変異を含有するプラスミドの転写および翻訳は実施される。タンパク質をクロマトグラフィーにより精製する。例えば、下記の文献を参照のこと:Robertson他、JAmChemSoc113:2722、1991;Ellman他、MethodsEnzymol202:301、1991;Chung他、Science259:806-809、1993;およびChung他、ProcNatlAcadSciUSA90:1014510149、1993。第2の方法において、突然変異したmRNAおよび化学的にアミノアシル化されたサプレッサーtRNAのマイクロインジェクションにより、キセノプスオオサイトXenopusoocytes中で翻訳を実施するTurcatti他、JBiolChem271:19991-8、1996。第3の方法において、置換すべき天然アミノ酸例えば、フェニルアラニンの非存在においてかつ所望の天然に存在しない1またはそれ以上のアミノ酸例えば、2-アザフェニルアラニン、3-アザフェニルアラニン、4-アザフェニルアラニンまたは4-フルオロフェニルアラニンの存在において、大腸菌Ecoli細胞を培養する。天然に存在しないアミノ酸をその天然対応物の代わりにタンパク質の中に組込む。Koide他、Biochem33:7470-6、1994、参照。invitro化学的修飾により、天然に存在するアミノ酸残基を天然に存在しない種に変換することができる。化学的修飾を部位特異的突然変異誘発と組合わせて、置換の範囲をさらに拡張することができるWynnおよびRichards、ProteinSci2:395-403、1993。制限された数の非保存的アミノ酸、遺伝暗号によりコードされないアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、および非天然のアミノ酸をBR43x2アミノ酸残基と置換することができる。本発明のBR43x2ポリペプチドにおける必須アミノ酸は、この分野において知られている手順、例えば、部位特異的突然変異誘発またはアラニン走査突然変異誘発に従い同定することができるCunninghamおよびWells、Science244:10815、1989;Bass他、ProcNatlAcadSciUSA88:4498-502、1991。後者の技術において、単一のアラニンの突然変異を分子中のすべての残基において導入し、そして、後述するように、生ずる突然変異体分子を生物学的活性について試験して、分子の活性に対して決定的であるアミノ酸残基を同定する。また、下記の文献を参照のこと:Hilton他、JBiolChem271:4699708、1996。また、リガンド-レセプターまたは他の生物学的相互作用の部位は、構造の物理的解析により決定することができ、例えば、核磁気共鳴、結晶学、電子回折またはフォトアフィニティー標識化のような技術と、推定上の接触部位のアミノ酸の突然変異との組合わせにより決定することができる。例えば、下記の文献を参照のこと:deVos他、Science255:30612、1992;Smith他、JMolBiol224:899904、1992;Wlodaver他、FEBSLett309:5964、1992。必須アミノ酸の同定は、また、関係するポリペプチドとの相同性から推定することができる。保存されたシステイン、アスパラギン酸およびロイシン残基が混乱されないかぎり、BR43x2のシステインに富んだ擬反復内で追加のアミノ酸置換を行うことができる。他のシステインに富んだ擬反復の配列を参照することによって、BR43x2のシステインに富んだ擬反復内で追加のアミノ酸置換を行うことが好ましい。配列番号10は、このような整列に基づく許容可能なアミノ酸配列を示す、一般化されたシステインに富んだ擬反復である。このドメイン内の置換は本明細書において記載する限定に付される。既知の突然変異誘発およびスクリーニングの方法、例えば、下記の文献に記載されている方法を使用して、多重アミノ酸置換を行い、試験することができる:ReidhaarOlsonおよびSauer、Science241:537、1988またはBowieおよびSauer、ProcNatllAcadSciUSA86:21526、1989。簡単に述べると、これらの著者らはポリペプチド中の2またはそれ以上の位置を同時にランダム化し、機能的ポリペプチドについて選択し、次いで突然変異化ポリペプチドを配列決定して、各位置における許容可能な置換のスペクトルを決定する方法を開示している。使用できる他の方法は下記の方法を包含する:ファージディスプレイ例えば、Lowman他、Biochem30:108327、1991;Ladner他、米国特許第5223409号;Huse、WIPO公開WO9206204および領域特異的突然変異誘発Derbyshire他、Gene46:145、1986;Ner他、DNA7:127、1988。開示したBR43x2のDNAおよびポリペプチド配列の変異型は、下記の文献に開示されているように、DNAシャフリングにより発生させることができる:Stemmer、Nature370:38991、1994、Stemmer、ProcNatllAcadSciUSA91:1074751、1994およびWIPO公開WO9020078。簡単に述べると、親DNAをランダムフラグメント化し、次いでPCRを使用してリアセンブリーして、ランダムに導入された点突然変異を生じさせることによって、invitro相同的組換えにより変異型DNAを発生させる。親DNAのファミリー、例えば、アレレ変異型または異なる種からのDNAを使用して、追加の可変性をプロセスの中に導入することによって、この技術を修飾することができる。所望の活性について選択またはスクリーニングし、次いで突然変異誘発およびアッセイをさらに反復して、所望の突然変異を選択すると同時に有害な変化に対して選択することによって、配列を急速に進化させる。本明細書に開示する突然変異誘発法を大きい処理量の自動化スクリーニング法と組合わせて、宿主細胞においてクローニングされ、突然変異化ポリペプチドの活性を検出することができる。活性ポリペプチド例えば、免疫応答間のB細胞の応答を減少させ、自己抗体の産生を阻害または減少させるをコードする突然変異化DNA分子を宿主細胞から回収し、現代的装置を使用して急速に配列決定することができる。これらの方法は、問題のポリペプチドにおける個々のアミノ酸残基の重要性の急速な決定を可能とし、未知構造のポリペプチドに適用することができる。前述の方法を使用して、配列番号2の残基1~120に対して実質的に相同的である種々のポリペプチドまたはそれらのアレレ変異型を同定しおよび/または製造することができ、そして野生型タンパク質のB細胞の抑制特性を保持することができる。このようなポリペプチドは腫瘍壊死因子レセプターのスーパーファミリーの他のメンバー、親和標識またはその他からの追加のアミノ酸およびドメイン包むことができる。TNFRのスーパーファミリーの他のメンバーの機能的ドメインを含有する、BR43x2ポリペプチドまたは融合構築物は、修飾されたB細胞抑制能力を示すハイブリッド腫瘍壊死因子レセプターを構築する。さらに、本発明は、他の種からの対応物のレセプターおよびポリヌクレオチドオーソログを提供する。これらの種は下記のものを包含するが、これらに限定されない:哺乳動物、トリ、両生類、爬虫類、魚類、昆虫および他の脊椎動物および無脊椎動物の種。他の哺乳動物種からのBR43x2レセプター、例えば、ネズミ、ブタ、ヒツジ、ウシ、イヌ、ウマ、および他の霊長類のレセプターは特に重要である。本発明により提供される情報および組成物を慣用クローニング技術と組み合わせて使用することによって、ヒトBR43x2レセプターのオーソログをクローニングすることができる。例えば、レセプターを発現する組織または細胞型から得られたmRNAを使用して、cDNAをクローニングすることができる。本明細書に開示する配列から設計されたプローブを使用するノザンブロットをプロービングすることによって、mRNAの適当な源を同定することができる。次いで陽性の組織または細胞系統のmRNAから、ライブラリーを調製する。次いで種々の方法、例えば、完全なまたは部分的ヒトcDNAを使用するか、あるいは開示された配列をベースとする縮重プローブの1またはそれ以上の組を使用してプロービングする方法により、レセプターをコードするcDNAを単離することができる。また、本明細書に開示する配列から設計されたプローブを使用するPCRにより、cDNAをクローニングすることができる。追加の方法において、cDNAライブラリーを使用して宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることができ、そして問題のcDNAの発現をレセプターに対する抗体で検出することができる。また、同様な技術をゲノムクローンの単離に適用することができる。全長のレセプターポリペプチド、可溶性レセプターポリペプチド、ポリペプチドフラグメント、および融合ポリペプチドを包含する、本発明のレセプターポリペプチドを、慣用技術に従い、遺伝子操作された宿主細胞において製造することができる。適当な宿主細胞は、外因的DNAで形質転換またはトランスフェクトし、培養において増殖させることができる細胞の型であり、そして細菌、真菌細胞、および培養された高等真核細胞を包含する。真核細胞、特に多細胞微生物の培養された細胞は好ましい。クローニングされたDNA分子を操作し、外因的DNAを種々の宿主細胞の中に導入する技術は、下記の文献に記載されている:Sambrook他、MolecularCloning:ALaboratoryManual、第2版、ColdSpringHarborLaboratoryPress、ColdSpringHarbor、NY、1989、およびAusubel他編、CurrentProtocolsinMolecularBiology、JohnWileyandSons,Inc、NY、1987。一般に、BR43x2ポリペプチドをコードするDNA配列は、発現ベクター内に一般に転写プロモーターおよびターミネーターを含む、その発現に必要な他の遺伝因子に作用可能に連鎖される。ベクターは、また、1またはそれ以上の選択可能なマーカーおよび1またはそれ以上の複製起点を普通に含有するが、当業者は認識するように、ある種の系内で選択可能なマーカーを別々のベクター上に提供し、そして宿主細胞のゲノムの中への組込みにより外因的DNAの複製を得ることができる。プロモーター、ターミネーター、選択可能なマーカー、ベクターおよび他の因子の選択は、当業者のレベル内の日常的設計事項である。多数のこのような因子は文献に記載されており、そして商業的供給会社から入手可能である。BR43x2ポリペプチドを宿主細胞の分泌経路の中に向けるために、分泌シグナル配列また、リーダー配列、プレプロ配列または前配列として知られているを発現ベクターの中に準備する。分泌シグナル配列はBR43x2ポリペプチドのそれであることができるか、あるいは他の分泌されたタンパク質例えば、t-PAから誘導するか、あるいは新規に合成することができる。分泌シグナル配列をBR43x2DNA配列に作用可能に連鎖して、すなわち、2つの配列を正しいリーディングフレームで結合して、新しく合成されたポリペプチドを宿主細胞の分泌経路の中に向けるように位置させる。分泌シグナル配列は普通に問題のポリペプチドをコードするDNA配列に対して5に配置されるが、ある種の分泌シグナル配列は問題のDNA配列の中のどこかに位置決定することができる例えば、Welch他、米国特許第5037743号;Holland他、米国特許第5143830号、参照。培養された哺乳動物細胞は本発明において適当な宿主である。外因的DNAを哺乳動物の宿主細胞の中に導入する方法は下記の方法を包含する:リン酸カルシウム仲介トランスフェクションWigler他、Cell14:725、1978;CorsaroおよびPearson、SomaticCellGenetics7:603、1981;GrahamおよびVanderEb、Virology52:456、1973、エレクトロポレーションNeumann他、EMBOJ1:8415、1982、DEAE-デキストリン仲介トランスフェクションAusubel他、前掲、およびリポソーム仲介トランスフェクションHawley-Nelson他、Focus15:73、1993;Ciccarone他、Focus15:80、1993、およびウイルスベクターMillerおよびRosman、BioTechniques7:98090、1989;WangおよびFiner、NatureMed2:7146、1996。培養された哺乳動物細胞における組換えポリペプチドの産生は、例えば、下記の特許文献に記載されている:Levinson他、米国特許第4713339号;Hagen他、米国特許第4784950号;Palmiter他、米国特許第4579821号;およびRingold、米国特許第4656134号。適当な培養された哺乳動物細胞は下記のものを包含する:COS1ATCCNoCRL1650、COS7ATCCNoCRL1651、BHKATCCNoCRL1632、BHK570ATCCNoCRL10314、293ATCCNoCRL1573;Graham他、JGenVirol36:59-72、1977;JurkatATCCNoCRL8129、BaF3ネズミ骨髄に由来するインターロイキン-3依存的前リンパ系細胞系統、下記の文献を参照のこと:PalaciosおよびSteinmetz、Cell41:72734、1985;MatheyPrevot他、MolCellBiol6:41355、1986およびチャイニーズハムスター卵巣例えば、CHOK1;ATCCNoCRL61細胞系統。追加の適当な細胞系統はこの分野において知られており、そして公衆の寄託機関、例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクションAmericanTypeCultureCollectionバージニア州マンナッサス、から入手可能である。一般に、強い転写プロモーター、例えば、SV-40またはサイトメガロウイルスからのプロモーターは好ましい。例えば、米国特許第4956288号参照。他の適当なプロモーターは、メタロチオネイン遺伝子からのプロモーター米国特許第4579821号および米国特許第4601978号およびアデノウイルスの主要な後期プロモーターを包含する。薬剤選択を一般に使用して、外来DNAが挿入された、培養された哺乳動物細胞について選択する。このような細胞は普通にトランスフェクタントと呼ばれる。例えば、選択因子の存在において培養され、問題の遺伝子をそれらの子孫に移行させることができる細胞は、安定なトランスフェクタントと呼ばれる。好ましい選択可能なマーカーは、抗生物質のネオマイシンに対する耐性をコードする遺伝子である。選択はネオマイシン型薬剤、例えば、G-418またはその他の存在において実施される。また、選択系を使用して、問題の遺伝子の発現レベルを増加することができる、増幅と呼ぶ方法。低いレベルの選択因子の存在においてトランスフェクタントを培養し、次いで選択因子の量を増加して、導入された遺伝子の産物を高いレベルで産生する細胞について選択することによって、増幅は実施される。好ましい増幅可能な選択可能なマーカーは、メトトレキセートに対する耐性を付与する、ジヒドロフォレートリダクターゼである。他の薬剤耐性遺伝子例えば、ヒグロマイシン耐性、多薬剤耐性、プロマイシンアセチルトランスフェラーゼを使用することもできる。因子によるトランスフェクションのセットに加えて、変更された表現型を導入するオールタネイティブマーカー、例えば、緑色蛍光タンパク質、または細胞表面のタンパク質、例えば、CD4、CD8、クラスIのMHC、胎盤アルカリ性ホスファターゼを使用して、FACSソーティングまたは磁気ビーズ分離技術により、トランスフェクトされない細胞からトランスフェクトされた細胞をソーティングすることができる。植物細胞、昆虫細胞およびトリの細胞を包含する、他の高等真核細胞を宿主細胞として使用することもできる。植物細胞中で遺伝子を発現するのためのベクターとしてアグロバクテリウムリゾゲネスAgrobacteriumrhizogenesを使用することは、Sinkar他、JBiosciBangalore11:4758、1987、において概観されている。昆虫細胞の形質転換およびその中の外来ポリペプチドの産生は、Guarino他、米国特許第5162222号およびWIPO公開WO9406463に開示されている。オートグラファトカリフォルニカAutographacalifornica核多角体病ウイルスAcNPVから普通に誘導される、組換えバキュロウイルスで、昆虫細胞を感染させることができる。下記の文献を参照のこと:King、LAおよびPossee、RDTheBaculovirusExpressionSystem:ALaboratoryGuide、London、ChapmanHall、OReilly、DR他、BaculovirusExpressionVectors:ALaboratoryManual、NewYork、OxfordUniversityPress、1994;およびRichardson、CD編、BaculovirusExpressionProtocols、MethodsinMolecularBiology、Totowa、NJ、HumanaPress、1995。組換えバキュロウイルスを作る第2の方法は、Luckowが記載するトランスポゾンをベースとする系を利用するLuckow、VA、他、JVirol67:456679、1993。この系はBactoBacキットLifeTechnologies、マリイランド州ロックビレで販売されている。この系は転移ベクター、pFastBac1商標LifeTechnologiesを利用し、ここでpFastBac1商標はバクミドbacmidと呼ばれる大きいプラスミドとして大腸菌Ecoliの中に維持されたバキュロウイルスのゲノムの中にBR43x2ポリペプチドをコードするDNAを動かすために、Tn7トランスポゾンを含有する。下記の文献を参照のこと:HillPerkins、MSおよびPossee、RD、JGenVirol71:9716、1990;Bonning、BC、他、JGenVirol75:15516、1994;および、Chazenbalk、GD、およびRapoport、B、JBiolChem270:15439、1995。さらに、転移ベクターは、発現されたBR43x2ポリペプチドのC末端またはN末端におけるエピトープ標識、例えば、GluGluエピトープ標識をコードするDNAとのインフレーム融合物を含むことができるGrussenmeyer、T、他、ProcNatlAcadSci82:79524、1985。この分野において知られている技術を使用して、BR43x2を含有する転移ベクターを大腸菌Ecoliの中に形質転換し、そして組換えバキュロウイルスを示す中断されたlacZ遺伝子を含有するバクミドについてスクリーニングする。組換えバキュロウイルスのゲノムを含有するバクミドDNAを普通の技術に従い単離し、そしてスポドプテラフルギペルダSpodopterafrugiperda細胞、例えば、Sf9細胞をトランスフェクトする。BR43x2を発現する組換えベクターを引き続いて生成させる。この分野において普通に使用されている方法により、組換えウイルスの系統を作る。宿主細胞、典型的にはヨトウガ、スポドプテラフルギペルダSpodopterafrugiperdaから誘導された細胞系統を感染させるために、組換えウイルスを使用する。一般に、下記の文献を参照のこと:GlickおよびPasternak、MolecularBiotechnology:PrincipleandApplicationsofRecombinantDNA、ASMPress、Washington、DC、1994。他の適当な細胞系統は、トリコデルマニTrichodermaniに由来するHighFiveO商標細胞系統Invitrogenである米国特許第5300435号。商業的に入手可能な無血清培地を使用して、細胞を増殖させかつ維持する。適当な培地はSf9細胞についてSf900II商標LifeTechnologiesまたはESF921商標ExpressionSystem;およびトリコデルマニTni細胞についてExcellO450商標JRHBioscience、カンサス州レネクサまたはExpressFiveO商標LifeTechnologiesである。細胞をほぼ2~5×105細胞の接種密度から1~2×106細胞の密度に増殖させ、この時組換えウイルスの系統を01~10、より典型的には約3付近の感染の多重度で添加する。使用する手順は一般に入手可能な実験室のマニュアルに記載されているKing、LAおよびPossee、RD、前掲;OReilly、DR、他、前掲;Richardson、CD、前掲。本明細書に記載する方法に従い、上清からのBR43x2ポリペプチドの引き続く精製を実施することができる。酵母細胞を包含する真菌細胞を本発明において使用することもできる。これに関して特に興味ある酵母種は、サッカロミセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、ピキアパストリスPichiapastoris、およびピキアメタノリカPichiametanolicaを包含する。外因的DNAでサッカロミセスセレビシエScerevisiaeを形質転換し、それから組換えポリペプチドを生産する方法は、例えば、下記の特許文献に記載されている:Kawasaki、米国特許第4599311号;Kawasaki他、米国特許第4931373号;Brake、米国特許第4870008号;Welch他、米国特許第5037743号;およびMurry他、米国特許第4845075号。選択可能なマーカーにより決定された表現型、普通の薬剤耐性または特定の栄養例えば、ロイシンの非存在において増殖する能力により、形質転換された細胞を選択する。サッカロミセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeにおいて使用するために好ましいベクター系は、Kawasaki他米国特許第4931373号により開示されているPOT1ベクター系であり、これによりグルコースを含有する培地中の増殖により形質転換細胞を選択することができる。酵母において使用するために適当なプロモーターおよびターミネーターは、解糖酵素遺伝子例えば、Kawasaki、米国特許第4599311号;Ingsman他、米国特許第4615974号;およびBitter、米国特許第4977092号、参照およびアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子からのものを包含する。また、米国特許第4990446号;米国特許第5063154号;米国特許第5139936号および米国特許第4661454号、参照。ハンゼヌラポリモルファHansenulapolymorpha、シゾサッカラロミセスポンベSchizosaccharomycespombe、クルイベロマイセスラクチスKluyveromyceslactis、クルイベロマイセスフラギリスKluyveromycesfrgilis、ウスチラゴマイディスUstilagomaydis、ピキアパストリスPichiapastoris、ピキアメタノリカPichiametanolica、ピキアグイレルモンディイPichiaguillermondiiおよびカンジダマルトサCandidamaltosaを包含する、他の酵母のための形質転換系はこの分野において知られている。例えば、Gleeson他、JGenMicrobiol132:34593465、1986およびCregg、米国特許第4882279号、参照。McKnight他、米国特許第4935349号の方法に従い、アスペルギルスAspergillus細胞を利用することができる。アクレモニウムクリソゲヌムAcremoniumchrysogenumは、Sumino他、米国特許第5162228号に開示されている。ニューロスポラNeurosporaを形質転換する方法は、Lambowitz、米国特許第4486533号に開示されている。例えば、組換えタンパク質の生産のための宿主としてピキアメタノリカPichiametanolicaを使用することは、WIPO公開WO9717450、WO9717451、WO9802536、およびWO9802565に開示されている。ピキアメタノリカPmetanolicaの形質転換において使用するDNA分子は二本鎖、円形のプラスミドとして普通に製造され、これらは好ましくは形質転換の前に線状化される。ピキアメタノリカPmetanolicaにおけるタンパク質の生産のために、プラスミド中のプロモーターおよびターミネーターはピキアメタノリカPmetanolicaの遺伝子、例えば、ピキアメタノリカPmetanolicaのアルコール利用遺伝子AUG1またはAUG2のそれであることが好ましい。他の有用なプロモーターは、ジヒドロキシアセトンシンターゼDHAS、ホルメートデヒドロゲナーゼFMD、およびカタラーゼCAT遺伝子のプロモーターを包含する。宿主染色体の中へのDNAの組込みを促進するために、宿主DNA配列により双方の末端においてフランクされたプラスミドの全体の発現セグメントを有することが好ましい。ピキアメタノリカPichiametanolicaにおいて使用するために好ましい選択可能なマーカーはピキアメタノリカPmetanolicaのADE2遺伝子であり、これはホスホリボシル-5-アミノイミダゾールカルボキシラーゼAIRC;EC41121をコードし、これはアデニンの非存在においてade2宿主細胞を増殖させる。メタノールの使用を最小としようとする、大規模の工業的方法のために、双方のメタノール利用遺伝子AUG1およびAUG2が欠失されている、宿主細胞を使用することが好ましい。分泌されたタンパク質の生産のために、液胞プロテアーゼ遺伝子PEP4およびPRB1を欠如する宿主細胞は好ましい。問題のポリペプチドをコードするDNAを含有するプラスミドをピキアメタノリカPmetanolica細胞の中に導入することを促進するために、エレクトロポレーションを使用する。25~45kV/cm、好ましくは約375kV/cmの電界強度を有する、指数的に減衰する、パルス電界、および1~40ミリセカント、最も好ましくは約20ミリセカントの時間定数tを使用する、エレクトロポレーションにより、ピキアメタノリカPmetanolica細胞を形質転換することが好ましい。細菌大腸菌Escherichiacoli、バシラスBacillusおよび他の属の株を包含する、原核宿主細胞は、また、本発明において有用である。これらの宿主を発現させ、その中でクローニングされた外来DNA配列を発現する技術はこの分野においてよく知られている例えば、Sambrook他、前掲参照。大腸菌Ecoliのような細菌においてBR43x2ポリペプチドを発現させるとき、ポリペプチドを、典型的には不溶性粒子として、細胞質の中に保持させることができるか、あるいは細菌の分泌配列によりペリプラスミック空間の中に向けることができる。前者の場合において、細胞を溶解し、粒子を回収し、例えば、グアニジンイソチオシアネートまたは尿素を使用して、変性する。次いで変性されたポリペプチドをリフォルディングさせ、変性物の希釈により、例えば、尿素の溶液および還元されたグルタチオンおよび酸化されたグルタチオンとの組合わせに対する透析、および引き続く緩衝化生理食塩水に対する透析により、二量体化させることができる。後者の場合において、細胞を崩壊させて例えば、超音波処理または浸透圧ショックによりペリプラスミック空間の内容物を解放し、これにより変性およびリフォルディングの必要性を排除することによって、ポリペプチドをペリプラスミック空間から可溶性の、機能的形態で回収することができる。形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を、慣用手順に従い、栄養素および選択した宿主細胞の成長に必要な他の成分を含有する培地中で培養する。規定された培地および複合培地を包含する、種々の適当な培地は、この分野において知られており、そして一般に炭素源、窒素源、必須アミノ酸、ビタミンおよび無機質を含む。培地は、また、必要に応じて、成長因子または血清のような成分を含有することができる。一般に、外因的に添加されたDNAを含有する細胞について成長培地を選択する。この選択は、例えば、薬剤選択または必須栄養素の欠如により実施され、必須栄養素は発現ベクター上に担体されるか、あるいは宿主細胞の中に共トランスフェクトされた選択可能なマーカーにより補足される。炭素、窒素および微量栄養素の適切な源を含む培地中で約25°C~35°Cの温度において、ピキアメタノリカPmetanolica細胞を培養する。慣用の手段、例えば、小さいフラスコの震盪または発酵槽のスパージにより、液体培地を十分にエアレーションする。ピキアメタノリカPmetanolicaのために好ましい培地は、YEPD2のD-グルコース、2のBacto商標ペプトンDifcoLaboratories、ミシガン州デトロイト、1のBacto商標酵母エキスDifcoLaboratories、0004のアデニンおよび0006のL-ロイシンである。分画および/または慣用の精製方法および培地を使用して、発現された組換えBR43x2ポリペプチドまたはキメラBR43x2ポリペプチドを精製することができる。試料の分画のために、硫酸アンモニウム沈降および酸またはカオトロープ抽出を使用することができる。典型的な精製工程は、ヒドロキシアパタイト、サイズ排除、FPLCおよび逆相高性能液体クロマトグラフィーを包含することができる。適当なアニオン交換媒質は、誘導化デキストラン、アガロース、セルロース、ポリアクリルアミド、特製シリカ、およびその他を包含する。PEI、DEAE、QAEおよびQ誘導体は好ましく、DEAE高速流れセファローズPharmacia、ニュージャージイ州ピスカタウェイは特に好ましい。典型的なクロマトグラフィー媒質は、フェニル、ブチル、またはオクチル基で誘導化された媒質、例えば、フェニル-セファローズFFPharmacia、トヨパールブチル650TosoHaas、ペンシルベニア州モントゴメリヴィレ、オクチル-セファローズPharmaciaおよびその他;またはポリアクリル樹脂、例えば、AmberchromCG71TosoHaasおよびその他を包含する。適当な固体支持体は、ガラスビーズ、シリカをベースとする樹脂、セルロース樹脂、アガロースビーズ、架橋アガロースビーズ、ポリスチレンビーズ、架橋ポリアクリルアミド樹脂、およびその他を包含し、これらはこれらを使用する条件下に不溶性である。これらの支持体は、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基および/または炭水化物部分によるタンパク質の結合を可能とする反応性基で修飾することができる。化学的カップリングの例は、臭化シアン活性化、N-ヒドロキシスクシンイミド活性化、エポキシド活性化、スルフヒドリル活性化、ヒドラジド活性化、およびカーボジイミドの化学的カップリングのためのカルボキシルおよびアミノ誘導体を包含する。これらおよび他の固体の媒質はこの分野においてよく知られており、かつ広く使用されており、そして商業的供給会社から入手可能である。レセプターのポリペプチドを固体の媒質に結合する方法は、この分野においてよく知られている。特定の方法の選択は日常的設計事項であり、そして一部分選択した支持体の性質により決定される。例えば、下記の文献を参照のこと:AffinityChromatography:PrincipleMethods、PharmaciaLKBBiotechnology、スイス国ウップサラ、1988;およびscopes、R編ProteinPurification:Principlesandpractice、SpringerVerlag、NewYork、1987。本発明のポリペプチドは、それらの物理的性質を利用することによって、単離することができる。例えば、固定化金属イオン吸着IMACクロマトグラフィーを使用して、ポリヒスチジン標識からなるものを包含する、ヒスチジンに富んだタンパク質を精製することができる。簡単に述べると、ゲルにまず2価の金属イオンを負荷してキレート化剤を形成するSulkowski、TrendsinBiochem3:17、1985。ヒスチジンに富んだタンパク質は、使用する金属イオンに依存して、異なるアフィニティーでこのマトリックスに吸着され、競合的溶離、pHの低下、または強いキレート剤の使用により溶離されるであろう。他の精製法は、レクチンアフィニティークロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーによるグリコシル化タンパク質の精製を包含するMethodsinEnzymol、Vol182、′′GuidetoProteinPurification′′、MDeutscher編、AcademicPress、サンディエゴ、1990、pp52939。本発明の追加の態様の範囲内において、問題のポリペプチドと親和標識例えば、マルトース結合性タンパク質、FLAG-タグAspTyrLysAspAspAspAspLys配列番号13、GluGluタグGluGluTyrMetProMetGlu配列番号14免疫グロブリンドメインとの融合物を構築して、精製を促進することができる。タンパク質の再フォルディングおよび必要に応じて再酸化手法を好都合に使用することができる。汚染する高分子、特に他のタンパク質および核酸に関して>80の純度、より好ましくは>90、なおより好ましくは999より大きい純度にタンパク質を精製すること、そしてタンパク質は感染因子および発熱因子を含有しないことが好ましい。好ましくは、精製されたタンパク質は他のタンパク質、特に動物由来の他のタンパク質を実質的に含まない。BR43x2ポリペプチドまたはそのフラグメントは、また、化学的合成により製造することができる。BR43x2ポリペプチドはモノマーまたはマルチマーであることができ、グリコシル化されているか、あるいはされていないことができ、ペギル化されているか、あるいはされていないことができ、そして初期のメチオニンアミノ酸残基を含むか、あるいは含まないことができる。典型的なBR43x2ポリペプチドは下記のモチーフに相当するアミノ酸配列を有しかつ本明細書に記載する限定に付される、32~40残基長さのポリペプチドを包含する:XXCX[QEK][QEKNRDHS][QE]X{0-2}[YFW][YFW]DXLLX{2}C[IMLV]XCX{3}CX{6-8}CX{2}[YF]C配列番号10。BR43x2ポリペプチドは、独占的固相合成、部分的固相法、フラグメント縮合または古典的溶液合成により合成することができる。ポリペプチドは好ましくは、例えば、Merrifield、JAmChemSoc85:2149、1963、に記載されているように、固相ペプチド合成により製造される。アルファ-アミノ末端が保護されたアミノ酸を使用して、この合成は実施される。不安定性側鎖を有する3官能性アミノ酸を、また、適当な基で保護して、ポリペプチドの組立ての間に望ましくない化学的反応が起こるのを防止する。アルファ-アミノ保護基を選択的に除去して、引き続いてアミノ末端において反応が起こるようにする。アルファ-アミノ保護基を除去する条件は、側鎖の保護基を除去しない。アルファ-アミノ保護基は、段階的ポリペプチド合成の分野において有用であることが知られている基である。アシル型保護基例えば、ホルミル、トリフルオロアセチル、アセチル、アリール型保護基例えば、ビオチニル、芳香族ウレタン型保護基[例えば、ベンジルオキシカルボニルCbz、置換ベンジルオキシカルボニルおよび9-フルオレニルメチルオキシ-カルボニルFmoc]、脂肪族ウレタン保護基[例えば、t-ブトキシカルボニルtBco、イソプロピルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル]およびアルキル型保護基例えば、ベンジル、トリフェニルメチルが包含される。好ましい保護基はtBocおよびFmocである。選択される側鎖の保護基はカップリングの間に無傷に止まらなくてはならず、そしてアミノ末端の保護基の脱保護の間に、またはカップリング条件の間に除去されてはならない。側鎖の保護基は、また、合成の完結後に、仕上げられたポリペプチドを変更しなであろう反応条件を使用して除去されなくてはならない。tBoc化学において、3官能性アミノ酸のための側鎖の保護基は大部分ベンジルに基づく。Fmoc化学において、側鎖の保護基は大部分ブチルまたはトリチルに基づく。tBoc化学において、好ましい側鎖の保護基はアルギニンについてトシル、アスパラギン酸についてシクロヘキシル、システインについて4-メチルベンジルおよびアセトアミドメチル、グルタミン酸、セリンおよびスレオニンについてベンジル、ヒスチジンについてベンジルオキシメチルおよびジニトロフェニル、リシンについて2-Cl-ベンジルオキシカルボニル、トリプトファンについてホルミルそしてチロシンホルミル2-ブロモベンジルである。Fmoc化学において、好ましい側鎖の保護基は、アルギニンについて22578-ペンタメチルクロマン-6-スルホニルPmcまたは22467-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニルPbf、アスパラギン、システイン、グルタミンおよびヒスチジンについてトリチル、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニンおよびチロシンについてt-ブチル、リシンおよびトリプトファンについてtBocである。ホスホペプチドの合成のために、ホスフェート基の直接的または組立て後の組込みを使用する。直接的組込みの戦略において、セリン、スレオニンまたはチロシン上のホスフェート基は、Fmoc化学においてメチル、ベンジル、またはt-ブチルにより保護するか、あるいはtBoc化学においてメチル、ベンジルまたはフェニルにより保護することができる。ホスフェート保護なしのホスホチロシンの直接的組込みをFmoc化学において使用することができる。組立て後の組込みの戦略において、セリン、スレオニンまたはチロシンの非保護のヒドロキシル基を固相上でジ-t-ブチル-、ジベンジル-またはジメチル-NN-ジイソプロピル-ホスホアミダイトで誘導化し、次いでt-ブチルヒドロ-ペルオキシドで酸化する。固相合成は、通常、アルファ-アミノ保護側鎖保護アミノ酸を適当な固体の支持体にカップリングさせることによってカルボキシル末端から実施される。クロロメチル、クロロトリチルまたはヒドロキシメチル樹脂に結合させるとき、エステル結合が形成し、そして生ずるポリペプチドはC末端に遊離のカルボキシル基を有するであろう。あるいは、アミド樹脂、例えば、ベンズヒドリルアミンまたはp-メチルベンズヒドリルアミン樹脂tBoc化学についておよびリンクRinkアミドまたはPAL樹脂Fmoc化学についてを使用するとき、アミド結合が形成し、そして生ずるポリペプチドはC末端にカルボキシアミド基を有するであろう。これらの樹脂は、ハンドルまたはリンカーを含むか、あるいは含まない、結合した第1アミノ酸を含むか、あるいは含まない、ポリスチレン-またはポリアミド-をベースとするか、あるいはポリエチレングリコール-グラフト化されているかどうかにかかわらず、商業的に入手可能であり、そしてそれらの製造は下記の文献に記載されている:Stewart、他、′′SolidPhasePeptideSynthesis′′第2版、PierceChemicalCo、イリノイ州ロックフォード、1984およびBayerおよびRapp、ChemPeptProt3:3、1986;およびAtherton、他、SolidPhasePeptideSynthesis:APracticalApproach、IRLPress、Oxford、1989。必要に応じて側鎖において、およびアルファ-アミノ基において保護された、C末端のアミノ酸を、種々の活性化剤、例えば、ジシクロヘキシルカーボジイミドDCC、NN-ジイソプロピルカーボジイミドDIPCDIおよびカルボニルジイミダゾールCDIを使用して、ヒドロキシメチル樹脂に結合させる。それはクロロメチルまたはクロロトリチル樹脂に直接的にそのセシウムテトラメチルアンモニウム塩の形態で、あるいはトリエチルアミンTEAまたはジイソプロピルエチルアミンDIEAの存在において結合させることができる。アミド樹脂への第1アミノ酸の結合は、カップリング反応の間のアミド結合の形成と同一である。樹脂の支持体への結合後、保護化学例えば、tBoc、Fmocに依存して種々のの試薬を使用して、アルファ-アミノ保護基を除去する。Fmoc除去の程度は、300~320nmにおいて、あるいは導電性セルによりモニターすることができる。アルファ-アミノ保護基を除去した後、残りの保護されたアミノ酸を要求される順序で段階的にカップリングして、所望の配列を得る。種々の活性化剤、例えば、下記のものをカップリング反応に使用することができる:DCC、DIPCDI、2-クロロ-13-ジメチルイミジウムヘキサフルオロホスフェートCIP、ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス-ジメチルアミノ-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートBOPおよびそのピロリジン類似体PyBOP、ブロモ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートPyBrOP、O-ベンゾトリアゾール-1-イル-1133-テトラメチル-ウロニムヘキサフルオロホスフェートHBTUおよびそのテトラフルオロボレート類似体TBTUまたはそのピロリジン類似体HBPyU、O-7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-1133-テトラメチル-ウロニムヘキサフルオロホスフェートHATUおよびそのテトラフルオロボレート類似体TATUまたはそのピロリジン類似体HAPyU。カップリング反応において使用する最も普通の触媒添加剤は、4-ジメチルアミノピリジンDMAP、3-ヒドロキシ-34-ジヒドロ-4-オキソ-123-ベンゾトリアジンHODhbt、N-ヒドロキシベンゾトリアゾールBOBtおよび1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾールHOAtを包含する。各保護されたアミノ酸は過剰量>20当量で使用し、そしてカップリングは通常N-メチルピロリドンNMP中で、あるいはDMF、CH2Cl2またはそれらの混合物中で実施する。各段階において、例えば、Kaiser、他、AnalBiochem34:595、1970、に記載されているように、ニンヒドリン反応により、カップリング反応の完結の程度をモニターすることができる。所望のペプチドが完全に組立てられた後、適切な掃去剤とともに試薬を使用してペプチド-樹脂を切り放す。掃去剤例えば、H2O、エタンジチオール、フェノールおよびチオアニソールとともにTFAにより、Fmocペプチドは通常切り放し、脱保護される。tBocペプチドは通常液状HFで1~2時間-5~0°Cにおいて切り放し、脱保護され、これはポリペプチドを樹脂から切り放し、側鎖の保護基の大部分を除去する。掃去剤、例えば、アニソール、ジメチルサルファイドおよびp-チオクレゾールを通常液状HFとともに使用して、切り放しの間にポリペプチドの中に存在するアミノ酸残基のアルキル化およびアシル化からカチオンが形成するのを防止する。トリプトファンのホルミル基およびヒスチジンのジニトロフェニル基を、HFの切り放し前にDMF中で、それぞれ、ピペリジンおよびチオフェニルにより、除去することが必要である。システインのアセトアミドメチル基は、酢酸水銀IIにより除去するか、あるいはヨウ素、トリフルオロ酢酸タリウムIIIまたはテトラフルオロホウ酸銀これは同時にシステインをシスチンに酸化するにより除去することができる。tBocペプチドの切り放しおよび脱保護のために使用される他の強酸は、トリフルオロメタンスルホン酸TFMSAおよびトリメチルシリルトリフルオロアセテートTMSOTfを包含する。本発明は、さらに、種々の他のポリペプチド融合物および1またはそれ以上のポリペプチド融合物を含んでなる関係するマルチマータンパク質を提供する。可溶性BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドは、2つの定常領域ドメインを含有しかつ可変領域を欠如する、免疫グロブリン重鎖定常領域、典型的にはFcフラグメントとの融合物として発現させることができる。このような融合物を製造する方法は、米国特許第5155027号および米国特許第5567584号に開示されている。このような融合物は典型的にはマルチマー分子として分泌され、ここでFc部分は互いにジサルファイド結合されておりそして2つの非Igポリペプチドは互いに密接して配列されている。免疫グロブリン-BR43x2TACIまたはBCMAポリペプチド融合物を遺伝子操作された細胞において発現させて、種々のマルチマーBR43x2アナローグを産生することができる。補助的ドメインをBR43x2TACIまたはBCMAポリペプチドに融合させて、それらのドメインを特異的細胞、組織、または高分子にターゲットすることができる。また、本明細書において記載するようにトキシンを使用して、融合物をつくることができる。このようにして、ポリペプチドおよびタンパク質を療法および診断の目的でターゲットすることができる。BR43x2ポリペプチドを2またはそれ以上の分子、例えば、精製のために親和標識およびターゲッティングドメインに融合することができる。また、ポリペプチド融合物は、特にドメイン間の、1またはそれ以上の切断部位を含んでなることができる。下記の文献を参照のこと:Tuan他、ConnectTissRes34:19、1996。例えば、invitroアッセイツールとして、溶液から同種リガンドをアフィニティー精製するために、細胞表面上にリガンドを結合するために、あるいはリガンドの刺激をブロックするために投与することによってinvivoにおけるBR43x2アンタゴニストとして、この型の融合物を使用することができる。アッセイにおいて使用するために、融合タンパク質を支持体にFc領域を介して結合し、そしてELISAフォーマットにおいて使用することができる。また、本発明は、親和標識または標識との融合タンパク質を形成するために使用する、可溶性BR43x2レセプターを提供する。可溶性BR43x2親和標識融合タンパク質は、例えば、BR43x2リガンド、ならびに自然リガンドのアゴニストおよびアンタゴニストを同定するために使用される。標識化された、可溶性BR43x2を使用して、リガンド、アゴニストまたはアンタゴニストを発現する細胞を蛍光免疫サイトメトリーまたは免疫組織化学により同定する。組織または特定の細胞系統上のリガンドの分布を研究し、レセプター/リガンドの生物学の洞察を提供するために、可溶性融合タンパク質は有用である。リガンド、アゴニストまたはアンタゴニストを精製するために、レセプター-リガンドの結合を促進する条件典型的には生理学的温度、pH、およびイオン強度下にリガンド、アゴニストまたはアンタゴニストを含有する試料に、BR43x2-Ig融合タンパク質を添加する。次いで固体支持体例えば、不溶性樹脂ビーズ上に固定化された、プロテインAを使用する混合物により、レセプター-リガンド複合体を分離する。次いで慣用化学技術、例えば、塩またはpH勾配を使用して、リガンド、アゴニスト、アンタゴニストを溶離する。別法において、融合タンパク質それ自体を固体支持体に結合することができ、結合および溶離は前述したように実施する。使用条件下に安定である固体支持体、例えば、アガロース、架橋したアガロース、ガラス、セルロース樹脂、シリカをベースとする樹脂、ポリスチレン、架橋したポリアクリルアミド、または同様な物質のビーズにレセプターポリペプチドを固定化する方法はこの分野において知られている。固体支持体にポリペプチドを結合させる方法はこの分野において知られており、そしてアミン化学、臭化シアン活性化、N-ヒドロキシスクシンイミド活性化、エポキシド活性化、スルフヒドリル活性化、およびヒドラジン活性化を包含する。生ずる媒質は一般にカラムの形態であり、そしてリガンドを含有する流体をカラムに1またはそれ以上の回数通過させて、リガンドをレセプターポリペプチドに結合させる。次いでリガンド-レセプターの結合を崩壊させるために塩濃度、カオトロープ因子MgCl2、またはpHの変化を使用して、リガンドを溶離する。宿主細胞からの可溶性レセプターの輸送を向けるために、分泌ペプチド、例えば、t-PA分泌ペプチドをコードする第2DNAセグメントに、可溶性レセプターDNAを結合する。分泌されたレセプタードメインの精製を促進するために、抗体または他の特異的結合因子を利用できる、NまたはC末端のエクステンション、例えば、親和標識または他のポリペプチドまたはタンパク質をレセプターポリペプチドに融合することができる。本発明の機能的可溶性、膜結合レセプターを発現する細胞をスクリーニングアッセイにおいて使用する。種々の適当なアッセイはこの分野において知られている。これらのアッセイはターゲット細胞における生物学的応答の検出に基づく。対照値に比較した代謝変化は、BR43x2仲介代謝をモジュレートする被検化合物を示す。1つのこのようなアッセイは細胞増殖アッセイである。細胞を被検化合物の存在または非存在下に培養し、そして、例えば、トリチウム化チミジンの組込みの測定または3-45-ジメチルチアゾル-2-イル-25-ジフェニルテトラゾリウムヌロミドMTTの代謝的破壊に基づく比色アッセイにより、細胞増殖を検出するMosman、JImmunolMeth65:55-63。他のアッセイのフォーマットにおいて、リポーター遺伝子を発現するようにさらに操作される細胞を使用する。レセプター結合経路に対して応答性であるプロモーター因子にリポーター遺伝子を結合させ、アッセイにおいて、リポーター遺伝子の転写の活性化を検出する。細胞抽出物について容易にアッセイされる多数のリポーター遺伝子、例えば、大腸菌EcolilacZ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼCATおよび血清応答因子SREはこの分野において知られている例えば、Shaw他、Cell56:56372、1989参照。好ましいこのようなリポーター遺伝子はルシフェラーゼ遺伝子であるdeWet他、MolCellBiol7:725、1987。ルシフェラーゼ遺伝子の発現は、この分野において知られている方法を使用するルミネセンスにより検出される例えば、Baumgartner他、JBiolChem269:29094101、1994;SchenbornおよびGoiffin、PromegaNotes41:11、1993。ルシフェラーゼ活性アッセイキットは、例えば、PromegaCorp、ウイスコンシン州マディソンから商業的に入手可能である。この型のターゲット細胞系統を使用して、化学物質、コンディショニングした培地、菌類ブロス、土壌試料、水試料、およびその他のライブラリーをスクリーニングことができる。例えば、1連の細胞コンディショニング培地の試料をターゲット細胞についてアッセイして、リガンドを産生する細胞を同定する。次いで陽性細胞を使用して、哺乳動物発現ベクターにおいてcDNAライブラリーを産生し、これをプールに分割し、宿主細胞の中にトランスフェクトし、発現させる。次いでトランスフェクトされた細胞からの培地試料をアッセイし、引き続いてプールに分割し、再トランスフェクトし、継代培養し、陽性細胞を再アッセイして、リガンドをコードするクローニングされたcDNAを単離する。リガンド結合性レセプターまたは抗体、補体/抗補体の対の一方のメンバーまたはその結合性フラグメント、および商業的に入手可能なバイオセンサー計器BIAcore商標、PharmaciaBiosensor、ニュージャージイ州ピスカタウェイを使用してアッセイシステムを好都合に使用することができる。このようなレセプター、抗体、補体/抗補体の対のメンバーまたはフラグメントをレセプターのチップの表面上に固定化する。この計器の使用は、Karlsson、JImmunolMethods145:22940、1991およびCunninghamおよびWells、JMolBiol234:55463、1993、に開示されている。例えば、アミンまたはスルフヒドリルの化学を使用して、BR43x2ポリペプチド、フラグメント、抗体または補体/抗補体のメンバーを、フローセル内の金薄膜に結合させたデキストラン繊維に共有結合させる。被験試料をセルに通過させる。リガンド、エピトープ、または補体/抗補体の反対のメンバーが試料の中に存在する場合、それは、それぞれ、固定化されたレセプター、抗体またはメンバーに結合し、媒質の屈折率を変化させ、これは金薄膜の表面のプラズモンの共鳴の変化として検出される。このシステムは、オンおよびオフの割合の測定これから結合アフィニティーを計算することができるおよび結合の化学量論的評価を可能とする。リガンド結合性ポリペプチドを、また、この分野において知られている他のアッセイシステムにおいて使用することができる。このようなシステムは、結合アフィニティーを測定するスキャッチャード分析Scatchard、AnnNYAcadSci51:66072、1949、参照および比色アッセイCunningham他、Science253:54548、1991;Cunningham他、Science245:82125、1991、参照を包含する。TACIおよびBCMAに対する可溶性I125-ztnf4についてのスキャッチャードプロット分析を図2に示し、表5におけるTNFRファミリーの他のメンバーの結合定数と比較する。レセプターとして、BR43x2ポリペプチドの活性化はシリコンをベースとするバイオセンサーミクロフィジオメーターにより測定することができる。このミクロフィジオメーターは、レセプター結合に関連する細胞外酸性化速度またはプロトン外分泌および引き続く生理学的細胞応答を測定する。典型的な装置は、Cytosensor商標Microphysiometer製造会社:MolcularDivices、カリフォルニア州サニイヴァイルである。種々の細胞応答、例えば、細胞増殖、イオン輸送、エネルギー産生、炎症性応答、調節およびレセプターの活性化、およびその他をこの方法により測定することができる。例えば、下記の文献を参照のこと:McConnell他、Science257:190612、1992;Pitchford他、MethEnzymol228:84108、1997;Arimilli他、JImmunolMeth212:4959、1998;VanLifde他、EurJPharmacol346:8795、1998。付着性または非付着性真核または原核細胞をアッセイするために、ミクロフィジオメーターを使用することができる。細胞培地の細胞外酸性化の経時的変化を測定することによって、ミクロフィジオメーターは、種々の刺激、例えば、BR43x2ポリペプチドのアゴニスト、リガンドまたはアンタゴニストに対する細胞の応答を直接測定する。好ましくは、BR43x2ポリペプチドを発現しない対照真核細胞に比較して、BR43x2を発現する真核細胞の応答を測定するためにミクロフィジオメーターを使用する。BR43x2を発現する真核細胞は、本明細書において記載するように、BR43x2がトランスフェクトされ、BR43x2刺激性刺激に対して応答性である細胞をつくる、細胞;またはBR43x2を自然に発現する細胞、例えば、脾臓組織に由来するBR43x2を発現する細胞を含んでなる。対照に関する、細胞外酸性化の変化、例えば、BR43x2を発現する細胞の応答の増加または減少により測定された差は、BR43x2モジュレート細胞応答の直接的測定である。そのうえ、このようなBR43x2モジュレート応答を種々の刺激下にアッセイすることができる。また、ミクロフィジオメーターを使用して、BR43x2ポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストを同定する方法が提供される。この方法は、BR43x2ポリペプチドを発現する細胞を準備し、細胞の第1部分を被検化合物の非存在下に培養し、細胞の第2部分を被検化合物の存在下に培養し、そして、例えば、細胞の第1部分に比較した細胞の第2部分の細胞応答の増加または減少を検出することを含んでなる。細胞外酸性化速度の測定可能な変化として、細胞応答の変化は示される。この方法を使用して、BR43x2ポリペプチドのアンタゴニストおよびアゴニストを急速に同定することができる。組織または特異的細胞系統に対するリガンドの分布を研究するとき、そしてレセプター/リガンドの生物学の洞察を提供するために、可溶性BR43x2は有用である。リガンドを支持するターゲット細胞を破壊するメカニズムとして、それらのリガンドに対するTNFレセプターの特異性を利用することができる。例えば、毒性化合物をBR43x2可溶性レセプターまたはBR43x2融合物にカップリングすることができる。毒性化合物の例は、ターゲット細胞を不活性化する放射性薬品;化学療法剤、例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、およびシトキサン;トキシン、例えば、リシン、ジフテリア、シュードモナスエキソトキシンAおよびアブリン;および細胞障害性T細胞表面分子に対する抗体を包含するであろう。FACS分析FlowCytometryandSorting、Melamed他、編、Wiley-Liss、1990およびImmunofluorescnceandCellSorting、CurrentProtocolsinImmunology、Vol1、Coligann他、編、JohnWileySons、1997により、ztnf45ng/mlはBR43x2配列番号2、TACI配列番号6、BCMA配列番号8およびBR43x1配列番号9に結合することが見出された。FITC標識化可溶性ztnf4は、また、FACS分析を使用して、なかでも、下記のものに特異的に結合することが示された:PBMNC、扁桃腺細胞中のBリンパ球、B細胞リンパ腫細胞Raji、バーキットヒトリンパ腫、ATCCCCL86、Ramosバーキットヒトリンパ腫細胞系統、ATCCCRL1596、Daudiバーキットヒトリンパ腫、ATCCCCL213およびRPMI1788Bリンパ球細胞系統、ATCCCCL156。HL60ATCC前骨髄細胞系統、ATCCCCL240との結合は見られなかった。PBMNCおよび扁桃腺細胞からのB細胞に対する結合の特異性は、CD19、IgD、IgM、およびCD20を包含するB細胞特異的分子に対する抗体との共染色により確証された。CD40Lに対するztnf4の類似性は、より広い組織分布が見られることを示唆した。例えば、サイトカイン増殖およびT細胞増殖を使用して、単球、樹枝状細胞、および精製されたT細胞に対するztnf4のアフィニティーを試験し、そしてztnf4のアフィニティーは試験した他の型の細胞に対するztnf4の結合または生物学的作用を検出することができなかった。したがって、リガンドおよびレセプターによるB細胞に対する特異性は、自己免疫、B細胞癌、免疫調節、IBDおよび抗体仲介病理学、例えば、ITCP、重症筋無力症およびその他、腎疾患、間接的T細胞免疫応答、移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患の研究および治療のために、リガンドおよびレセプターが有用であることを示唆する。ztnf4はB細胞を活動性し、B細胞を増殖させ、抗体を産生させ、invitroにおいて活動性マーカーをアップレギュレートすることが示された下記実施例参照。これらの作用は、IL-4または他のサイトカインを介する共刺激あるいはB細胞抗原レセプターまたはB細胞を活性化する他の細胞表面レセプター、すなわち、CD40による刺激に必要である。他の腫瘍壊死因子のリガンド、例えば、gp39およびTNFβはまたB細胞増殖を刺激する。こうして、本発明のポリペプチドをターゲッティングしてB細胞の応答を特異的に調節し、他の細胞集団に影響を与えないで免疫応答の間に、活性化されたB細胞を阻害することができ、これは疾患の治療において好都合である。さらに、本発明のポリペプチドはB細胞の発生、他の細胞の発生、抗体産生およびサイトカイン産生をモジュレートするために使用することができる。また、BR43x2ポリペプチドはアポトーシスおよび/または細胞内のアネルギーを誘導するとき使用することができる。本発明のポリペプチドは、また、ztnf4の増殖作用を中和することによってT細胞およびB細胞をモジュレートすることができる。可溶性BR43x2、TACIおよび/またはBCMAの存在下にztnf4に対する細胞の応答を測定するために、バイオアッセイおよびELISAを利用することができる。他のアッセイは、細胞応答の測度としてサイトカイン産生の変化を測定するアッセイを包含する例えば、下記の文献を参照のこと:CurrentProtocolsinImunology、JohnEColigan他、編、NIH、1996。他の細胞応答、例えば、抗体イソ型、単球の活性化、NK細胞の形成、抗原提示細胞の機能、アポトーシスを測定するアッセイ。本発明のBR43x2ポリペプチドは、ztnf4の作用を中和して、前B細胞またはB細胞白血病、例えば、形質細胞白血病、慢性または急性リンパ球白血病、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫、プラスマ細胞腫、内皮骨髄腫および巨細胞骨髄腫;およびリンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫ztnf4ポリペプチドの増加が関連づけられるの治療に有効であろう。可溶性BR43x2は腫瘍の進行および生き残りを阻害するための療法的養生法において有用な成分であろう。ノザンブロット分析において、ztnf4はCD8細胞、単球、樹枝状細胞、活性化単球において発現されることが示された。これが示唆するように、ある自己免疫疾患において、細胞障害性T細胞はztnf4の過剰産生を通してB細胞の産生を刺激する。Bリンパ球の作用を選択的にブロックする免疫抑制タンパク質は、疾患の治療において使用される。自己抗体の産生はいくつかの自己免疫疾患に対して普通であり、疾患の組織分布および悪化に寄与する。また、自己抗体は免疫複合沈着合併症に導き、腎不全、神経痛性症候および死を包含する、全身性エリテマトーデスの多数の症候に導く。細胞応答に対して独立である抗体のモジュレーションは、また、多数の疾患の状態において有益であろう。また、B細胞は慢性関節リウマチにおける関節炎発生性免疫グロブリンの分泌においてある役割を演ずるKorganow他、Immunity10:45161、1999。それ自体、ztnf4抗体産生の阻害は自己免疫疾患、例えば、重症筋無力症および慢性関節リウマチの治療において有益であろう。免疫抑制治療剤、例えば、Bリンパ球の活性を選択的にブロックまたは中和する可溶性BR43x2はこのような目的に有効であろう。本発明のBR43x2可溶性レセプターポリペプチドにおけるこれらの能力を確認するために、このようなBR43x2ポリペプチドはこの分野において知られておりかつ本明細書に記載するアッセイを使用して評価される。本発明は、自己免疫疾患に関連するか、あるいは関連しない、末期腎疾患に関連するB細胞の作用を選択的にブロックまたは中和するために、BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、融合物、抗体、アゴニストまたはアンタゴニストを使用する方法を提供する。このような方法は、また、免疫学的腎疾患の治療のために有用である。このような方法は、下記のような疾患に関連する糸球体腎炎の治療に有用であろう:膜性腎症、IgA腎症またはベルガー病、IgM腎症、グッドパスチャー病、感染後糸球体腎炎、脈管増殖性疾患、微少変化ネフローゼ症候群。このような方法は、また、狼瘡、多発性関節炎、ヘノッホシェーンライン、硬皮症、HIV関係疾患、アミロイドーシスまたは溶血尿毒症症候群のような疾患に関連する二次的糸球体腎炎または脈管炎を治療するための療法上の応用として働くであろう。本発明の方法は、また、慢性腎盂腎炎、鎮痛剤乱用、腎石灰症、他の薬剤により引き起こされる腎症、腎石症、または慢性もしくは急性間質性腎炎に関連する間質性腎炎または腎盂腎炎を治療する療法的応用の一部分として有用であろう。本発明の方法は、また、腎臓動脈狭窄または閉塞およびコレステロール性塞栓症または腎臓塞栓症を包含する、高血圧性または大きい血管の疾患の治療におけるBR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、融合物、抗体、アゴニストまたはアンタゴニストの使用を包含する。本発明は、また、腎臓または泌尿器科の新形成、多発性骨髄腫、リンパ腫、軽鎖神経疾患またはアミロイドーシスを診断または治療する方法を提供する。本発明は、また、ぜん息および他の慢性気道疾患、例えば、気管支炎および気腫を治療するためにBR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、融合物、抗体、アゴニストまたはアンタゴニストを使用して活性化B細胞をブロックまたは阻害する方法を提供する。また、免疫抑制において使用するために、特に移植片対宿主疾患および移植片拒絶反応のために療法的に使用するために、BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、融合物、抗体、アゴニストまたはアンタゴニストを使用してエフェクターT細胞の応答を阻害または中和する方法が提供される。追加の使用は、免疫応答、特にリンパ球の活性化または調節において見出されるであろう。BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、融合物、抗体、アゴニストまたはアンタゴニストは、免疫欠損症を治療する療法において有用であろう。BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、融合物、抗体、アゴニストまたはアンタゴニストは、インスリン依存性真性糖尿病IDDMおよび膠原病のような自己免疫疾患を治療する療法的プロトコルにおいて有用であろう。本発明の方法は、慢性炎症性疾患の治療、特に関節痛、腫脹、貧血および他の関連する症候を軽減するためにならびに敗血性ショックを治療するために追加の療法上の価値を有するであろう。抗原で免疫化した動物に本発明のポリペプチドを投与し、次いでztnf4を注射し、この分野において知られている方法に従い遅延型過敏性およびinvitro増殖およびサイトカイン産生を包含する、抗体アイソタイプの産生およびB細胞およびT細胞の応答を測定することによって、免疫応答に対する可溶性BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドの作用を測定することができる。したがって、本発明は、ある量の化合物を哺乳動物に投与することを含んでなる哺乳動物におけるztnf4活性を阻害する方法を提供し、前記化合物はa配列番号4のポリペプチド;b配列番号8のポリペプチド;c融合タンパク質;d配列番号6のアミノ酸残基1~残基166のポリペプチド;e配列番号8のアミノ酸残基1~残基150のポリペプチド;f配列番号4のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;およびg配列番号10のポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント;から成る群から選択される。融合タンパク質の例は、可溶性BR43x2配列番号4、TACI配列番号6のアミノ酸残基1~残基166またはBCMA配列番号8のアミノ酸残基1~残基150と他のポリペプチド、好ましくは免疫グロブリン重鎖定常領域Fcフラグメントとの融合物を包含する。本発明は、BR43x2、TACIまたはBCMAレセプター-リガンドの結合を阻害する方法を提供する。このような方法は、ztnf4活性が活性化Bリンパ球に関連する場合、前B細胞またはB細胞の癌を治療するために特に有用であろう。このような方法は、また、ztnf4活性が抗体産生、特に、自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症または慢性関節リウマチに関連する抗体産生に関連する場合において有用であろう。本発明は、また、BR43x2のアゴニストおよびアンタゴニストを提供する。BR43x2アゴニストとして同定される化合物は、invitroおよびinvivoにおけるターゲット細胞の増殖および発生を変更するために有用である。例えば、アゴニスト化合物は、単独でまたは他のサイトカインおよびホルモンと組み合わせて、規定された細胞培地の化合物として有用である。こうして、培養におけるBR43x2を支持するBリンパ球細胞の成長および/または発生を特異的に変更するとき、アゴニストは有用である。アゴニストおよびアンタゴニストは、また、Bリンパ球のエフェクター機能、特にBリンパ球の活性化および分化の研究において有用であることを証明することができる。アンタゴニストはリガンド-レセプターの相互作用のための研究試薬として有用である。BR43x2アンタゴニストとして同定された化合物は、また、体液性免疫応答を促進するために有用である。B細胞の応答は、細菌、ウイルス、原生動物および寄生生物の感染を包含する感染症を戦うとき重要である。感染性微生物に対する抗体は、抗原に結合させ、次いで補体仲介溶解または細胞仲介攻撃により病原体を固定化することができる。BR43x2アンタゴニストは体液性応答を増強する働きをし、そして感染症の危険にある個体のために有効な治療剤であるか、あるいはワクチン接種に対する補助物質として有効であろう。本発明は、また、BR43x2ポリペプチドに結合するか、あるいはBR43x2ポリペプチドが結合するリガンドに結合し、これによりBR43x2の機能を阻害または排除する、アンタゴニストを提供する。このようなBR43x2アンタゴニストは、抗体;BR43x2ポリペプチドまたはそのリガンドに結合するオリゴヌクレオチド;レセプターに結合する能力を保持するが、リガンドまたはレセプターのシグナリングを生じない、BR43x2リガンドの天然または合成のアナローグを包含する。このようなアナローグはペプチドまたはペプチド様化合物であることができる。BR43x2ポリペプチドに結合しかつシグナリングを妨害する天然または合成の小さい分子は、また、アンタゴニストとして考えられる。それ自体、BR43x2アンタゴニストは、BR43x2レセプターまたはリガンドからのブロッキングシグナルが有益である、ある種の疾患を治療する治療剤として有用であろう。アンタゴニストは、リガンド-レセプターの相互作用を特性決定する研究試薬として有用である。BR43x2は、EBV誘導および自発的バーキットリンパ腫およびいくつかのB細胞骨髄腫を包含する形質転換されたB細胞系統上で発現される。BR43x2機能の阻害は、B細胞リンパ腫または多発性骨髄腫の治療において有用であろう。BR43x2アンタゴニスト、例えば、BR43x2可溶性レセプターまたは抗体は、腫瘍の進行を仲介するために治療的に使用することができるであろう。アゴニストおよびアンタゴニストの活性は、レセプター/リガンドの結合の効力を測定する活性アッセイにより測定することができる。NfKB、NFAT-1およびAP-1のためのリポーター遺伝子構築物を高いレベルで共発現する、安定にトランスフェクトされたB細胞系統、例えば、Baf3ネズミ前B細胞系統、PalaciosおよびSteinmetzy、前掲、およびMatheyPrevot他、前掲がつくられ、これらはBR43x2を発現する。また、TACIおよびBCMAを発現する細胞系統は、同様な方法により、Jurkatおよび他のBリンパ腫細胞系統において調製された。ztnf4はこれらの構築物においてリポーター遺伝子を通してシグナリングすることが見出された。可溶性BR43x2および抗体を使用して、結合を測定することができる。本発明のタンパク質をアッセイするinvivoアプローチは、ウイルスデリバリー系を包含する。この目的のために典型的なウイルスは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルスおよびアデノ関連ウイルスAAVを包含する。二本鎖DNAウイルスであるアデノウイルスは、異種核酸のデリバリーのための、現在最良の研究されている遺伝子転移ベクターである概観については下記の文献を参照のこと:Becker他、MolCellBiol43:16189、1994;およびDouglasおよびCuriel、ScienceandMedicine4:4453、1997。アデノウイルスはいくつかの利点を提供する:アデノウイルスはi比較的大きいインサート収容することができる;ii高い力価に成長することができる;iii広い範囲の哺乳動物細胞型を感染することができる;そしてiv多数の異なるプロモーターを含有する入手可能なベクターとともに使用することができる。また、アデノウイルスは血流中で安定であるので、静脈内注射により投与することができる。アデノウイルスゲノムの一部分を欠失することによって、異種DNAの大きい7kbまでのインサートを収容することができる。これらのインサートは直接的結合によりまたは共トランスフェクトされたプラスミドとの相同的組換えによりウイルスDNAの中に組込むことができる。典型的な系において、必須E1遺伝子をウイルスベクターから欠失されており、そしてE1遺伝子が宿主細胞ヒト293細胞系統が典型的であるにより提供されないかぎり、ウイルスは複製しないであろう。無傷の動物に静脈内投与されるとき、アデノウイルスは主として肝臓をターゲットとする。アデノウイルスデリバリー系がE1遺伝子欠失を有する場合、ウイルスは宿主細胞中の複製することができない。しかしながら、宿主組織例えば、肝臓は異種タンパク質を発現し、プロセシングするそして、シグナル配列が存在する場合、分泌するであろう。分泌されたタンパク質は高度に脈管化した肝臓中の循環の中に入り、そして感染した動物に対する作用を測定することができる。また、invitroタンパク質産生のためにアデノウイルス系を使用することができる。細胞が急速に分裂しない条件下にアデノウイルス感染した非293細胞を培養することによって、細胞は延長時間の間タンパク質を産生することができる。例えば、BHK細胞を細胞ファクトリー中でコンフルエンスに成長させ、次いで問題の分泌されたタンパク質をコードするアデノウイルスベクターに暴露させる。次いで細胞を無血清条件下に成長させ、この条件下に感染した細胞は有意な細胞分裂なしに数週間生存することができる。あるいは、アデノウイルスベクターが感染した293S細胞は比較的高い細胞密度において懸濁培養において成長して、有意な量のタンパク質を産生することができるGarnier他、Cytotechnol15:14555、1994参照。いずれのプロトコルを使用しても、発現され、分泌された組織学的タンパク質は細胞培養上清から反復して単離することができる。感染した293S細胞産生プロトコルにおいて、分泌しないタンパク質をまた効果的に得ることができる。ある種の疾患の状態において本発明の可溶性BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドのinvivo効能を試験するために、よく確立された動物モデルは入手可能である。特に、多数の自己免疫疾患の動物モデル、例えば、SLE全身性エリテマトーデスのモデルとして働くMRL-lpr/lprまたはNZB×NZWF1コンジェニックマウス系統において、可溶性BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドおよびポリペプチドフラグメントを試験することができる。このような動物モデルはこの分野において知られている、例えば、下記の文献を参照のこと:AutoimmuneDiseaseModelsAGuidebook、CohenおよびMiller、編、AcademicPress。ニュージーランドブラックNZBマウスとニュージーランドホワイトNZWマウスとの間の交雑の子孫は、ヒトにおけるSLEに密接に類似する自発的形態のSLEを発生する。NZBWとして知られている子孫のマウスは1月齢においてT細胞に対するIgM自己抗体を発生し始め、5~7月齢までに、Ig抗DNA自己抗体は優性免疫グロブリンである。ポリクローナルB細胞機能亢進は自己抗体の過剰産生に導く。これらの自己抗体、特に一本鎖DNAに対して向けられた自己抗体は、タンパク尿、窒素血症、および腎不全からの死として臨床的に発現する、糸球体腎炎の発生に関係づけられる。腎不全は自発的SLEの影響を受けたマウスおよびNZBWにおける死の主要な原因であり、このプロセスは慢性でありかつ遮断性である。この疾患は雄よりも雌においていっそう急速でありかつ重く、平均の生存期間は雄について406日に比較してわずかに245日である。雌マウスの多くは7~9月齢までに症候性タンパク尿であるが、あるものは症候を発生するとき非常に若いか、あるいは老いていることがある。NZBWマウスにおいて見れられる致死的免疫腎炎はヒトSLEにおいて見られる糸球体腎炎に非常に類似し、この自発的ネズミモデルを潜在的SLE療法の試験のために非常に魅力的とするPuttermanおよびNaparstek、MurineModelsofSpontaneousSystemicLupusErythematousus、AutoimmuneDeseaseModels:AGuidebook、chapter14、pp21734、1994;Mohan他、JImmunol154:147080、1995;およびDaikh他、JImmunol159:310408、1997。症候の改善および疾患の過程の変更に対するTACI、BR43x2またはBCMAの効能を評価するために、これらのマウスに可溶性TACIIG、BR43x2Ig、BCMAIgまたは他の可溶性および融合タンパク質を投与することは実施例の節において後述される。実験的アレルギー性脳脊髄炎EAEのためのマウスモデルは、免疫仲介疾患のメカニズム、および潜在的療法上の関与の両方を研究するために道具として使用されてきている。このモデルはヒト多発性硬化症に類似し、神経タンパク質、例えば、ミエリン塩基性タンパク質MBPまたはプロテオリピドタンパク質PLPへのT細胞の活性化の結果として脱髄を産生する。抗原の接種はCD4、クラスIIMHC-制限T細胞Th1の誘導に導く。EAEのプロトコルの変化は、モデルの急性、慢性-回帰性、または受動-転移変異型を産生することができるWeihberg他、JImmunol162:181826,1999;Mijaba他、CellImmunol186:94102、1999;およびGlabinski、MethEnzym288:18290、1997。症候の改善および疾患の過程の変更に対するTACI、BR43x2またはBCMAの効能を評価するために、これらのマウスに可溶性TACI-IG、BR43x2-Ig、BCMA-Igまたは他の可溶性および融合タンパク質を投与することは実施例の節において後述される。コラーゲン誘導関節炎CIAモデルにおいて、マウスはヒト慢性関節リウマチRAに密接に類似する慢性炎症性関節炎を発生する。CIAはRAと同様な免疫学的および病理学的特徴を共有するので、CIAは潜在的ヒト抗炎症化合物をスクリーニングするための理想的モデルである。CIAモデルを使用する他の利点は、病原性のメカニズムが知られていることである。II型コラーゲン上のT細胞およびB細胞エピトープが同定され、免疫仲介関節炎に関係する種々の免疫学的遅延型過敏性および抗コラーゲン抗体および炎症性サイトカイン、ケモカイン、およびマトリックス分解酵素のパラメーターが決定され、モデルにおける被験化合物の効能を評価するために使用することができるWooley、CurrOpinRheum3:40720、1999;Williams他、Immunology89:9784788、1992;Myers他、LifeSci61:186178、1997;およびWang他、Immunology92:8955959、1995。症候の改善および疾患の過程の変更に対するTACI、BR43x2またはBCMAの効能を評価するために、これらのマウスに可溶性TACIIG、BR43x2Ig、BCMAIgまたは他の可溶性および融合タンパク質を投与することは実施例の節において後述される。マウスにオバルブミンを注射し、そしてぜん息に類似する気管支におけるぜん息性応答を産生する抗原でマウス経鼻的で再刺激するとき、気管支の感染、例えば、ぜん息のためにモデルをつくることができる。症候の改善および疾患の過程の変更に対するTACI、BR43x2またはBCMAの効能を評価するために、これらのマウスに可溶性TACIIG、BR43x2Ig、BCMAIgまたは他の可溶性および融合タンパク質を投与することは実施例の節において後述される。invivoモデルについての他の使用は、動物に対する抗原チャレンジのデリバリーおよび引き続く可溶性BR43x2TACIまたはそのリガンドの投与およびT細胞およびB細胞の応答の測定を包含する。T細胞依存的およびT細胞独立的免疫応答は、Perez-Melgosa他、JImmunol163:11237、1999に記載されているように、測定することができる。正規の抗原チャレンジ例えば、オバルブミンまたはコラーゲンに対して暴露される動物における免疫応答および引き続くBR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドまたは可溶性Ig-融合物の投与を実施して、B細胞の応答に対する作用を測定することができる。薬物速度論の研究を放射能標識化、可溶性BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドまたは融合物に関連して使用して、このようなポリペプチドのinvivoの分布および半減期を測定することができる。さらに、invivoにおける腫瘍および腫瘍発生に対する可溶性BR43x2、TACIまたはBCMAの作用を測定するために、動物モデルを使用することができる。また、自己免疫疾患、腎疾患、B細胞およびT細胞の疾患のための代理マーカーとしてBR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドを使用することが提供される。このような患者から採血し、血液中のBR43x2、TACIまたはBCMA可溶性レセプターおよびそれらのリガンドを検出することができる。本発明は、また、抗体を提供する。例えば、問題のポリペプチド、または天然源から単離されたポリペプチドを含有する発現ベクターの産物を抗原として使用して、BR43x2または配列番号8のアミノ酸配列を有するペプチドに対する抗体を得ることができる。特に有効な抗体は、BR43x2または配列番号10のアミノ酸配列を有するペプチドに特異的に結合する。抗体が106/Mまたはそれより大きい、好ましくは107/Mまたはそれより大きい、より好ましくは108/Mまたはそれより大きい、最も好ましくは109/Mまたはそれより大きい結合アフィニティーKaでBR43x2ポリペプチドまたは配列番号8のポリペプチド、ペプチドまたはエピトープに結合する場合、抗体はBR43x2または配列番号10のアミノ酸配列を有するペプチドに特異的に結合する。抗体の結合アフィニティーは、例えば、スキャッチャード分析Scatchard、AnnNYAcadSci51:660、1949により、容易に決定することができる。適当な抗体は、BR43x2、特にBR43x2の細胞外ドメイン配列番号2のアミノ酸残基1~120に結合する抗体および配列番号10のアミノ酸配列を有するペプチドに結合する抗体を包含する。抗原性BR43x2エピトープ支持ペプチドおよびポリペプチドを使用して、抗BR43x2抗体を製造することができる。本発明の抗原性エピトープ支持ペプチドおよびポリペプチドは、配列番号2内の少なくとも9、好ましくは15~約30アミノ酸の配列を含有する。しかしながら、本発明のアミノ酸配列のより大きい部分を含んでなり、30~50アミノ酸、または本発明のポリペプチドのアミノ酸配列の全体までの任意の長さのアミノ酸を含有する、ペプチドまたはポリペプチドは、また、BR43x2に結合する抗体を誘導するために有効である。水性溶媒中の実質的な溶解度を提供するようにエピトープ支持ペプチドのアミノ酸配列を選択することが望ましいすなわち、配列は比較的親水性の残基を含むが、疎水性残基を回避することが好ましい。親水性ペプチドは疎水性プロットから予測することができる、例えば、下記の文献を参照のこと:HoppおよびWoods、ProcNatAcadSciUSA78:38248、1981およびKyteおよびDoolittle、JMolBiol157:105142、1982。そのうえ、プロリン残基を含有するアミノ酸配列は、また、抗体産生に望ましいことがある。組換えBR43x2タンパク質または天然源から単離されたBR43x2に対するポリクローナル抗体は、この分野においてよく知られている方法を使用して製造することができる。例えば、下記の文献を参照のこと:Green他、ProductionofPolyclonalAntsera,inImmunochemicalProtocolsManson、編、pp15HumanaPress1992、およびWilliams他、ExpressionofforeignproteinsinEcoliusingplasmidvectorsandpurificationofspecificpolyclonalantibodies,inDNACloning2:ExpressionSystems、第2版、Glover他編、p15OxfordUniversityPress1995。アジュバント、例えば、明礬水酸化アルミニウムまたはフロインド完全アジュバントまたはフロインド不完全アジュバントを使用して、BR43x2ポリペプチドの免疫原性を増加することができる。免疫化に有効なポリペプチドは、また、融合ポリペプチド、例えば、BR43x2またはその一部分と免疫グロブリンまたはマルトース結合性タンパク質との融合物を包含する。ポリペプチド免疫原は全長の分子またはその一部分であることができる。ポリペプチドの一部分がハプテン様である場合、このような一部分は免疫化のために好都合には高分子担体例えば、キーホールリンペットヘモシアニンKLH、ウシ血清アルブミンBSAまたは破傷風トキソイドに結合または連鎖することができる。ポリクローナル抗体は典型的には動物、例えば、ウマ、雌牛、イヌ、ニワトリ、割合、マウス、ウサギ、ハムスター、モルモット、ヤギまたはヒツジ中で発生させるが、本発明の抗BR43x2抗体は類人猿の抗体に由来することができる。ヒヒにおいて診断的、療法的に有効な抗体を発生させる一般的技術は、例えば、下記の文献に記載されている:Goldenberg、国際特許公開NoWO9111465、およびLosman他、IntJCancer46:310、1990。また、抗体はトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニックヒツジ、雌牛、ヤギまたはブタにおいて発生させることができ、そして酵母および真菌中の修飾された形態でならびに哺乳動物細胞および昆虫細胞中で発現させることができる。あるいは、モノクローナル抗BR43x2抗体を発生させることができる。特異的抗原に対する齧歯類モノクローナル抗体は、この分野において知られている方法により得ることができる例えば、下記の文献を参照のこと:Kohler他、Nature256:495、1975;Coligan他編、CurrentProtocolsinImunology、Vol1、pp251267JohnWileySons1991;Picksley他、ProductionofmonoclonalantibodiesagainstproteinsexpressedinEcoli,inDNACloningExpressionSystems、第2版、Glover他編、p63OxfordUniversityPress1995。簡単に述べると、モノクローナル抗体は次のようにして得ることができる。BR43x2遺伝子産物を含んでなる組成物をマウスに注射し、血清試料を取出すことによって抗体産生を確認し、脾臓を取出してBリンパ球を獲得し、Bリンパ球を骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを産生し、ハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を産生する陽性クローンを選択し、抗原に対する抗体を産生するクローンを培養し、そしてハイブリドーマ培養物から抗体を単離する。さらに、本発明の抗BR43x2抗体はヒトモノクローナル抗体に由来することができる。抗原チャレンジに応答して特異的ヒト抗体を産生するように操作されたトランスジェニックマウスから、ヒトモノクローナル抗体は得られる。この技術において、内因的重鎖および軽鎖遺伝子座のターゲッテッド崩壊を含有する胚幹細胞系統に由来したマウスの中に、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子座の因子を導入する。トランスジェニックマウスはヒト抗原に対して特異的なヒト抗体を合成することができ、そしてこのマウスを使用してヒト抗体分泌ハイブリドーマを産生することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得る方法は、例えば、下記の文献に記載されている:Green他、NatGenet7:13、1994;Lonberg他、Nature368:856、1994;およびTaylor他、IntImmun6:579、1994。種々のよく確立された技術により、モノクローナル抗体をハイブリドーマ培養物から単離し、精製することができる。このような単離技術は、プロテインAセファローズを使用するアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびイオン交換クロマトグラフィーを包含する例えば、下記の文献を参照のこと:Coligen、pp2712712およびpp291293;Baines他、PurificationofImmunoglobulinGIgG,inMethodsinMolecularBiology、Vol10、pp79104TheHumanaPressInc1992。特定の用途に、抗BR43x2抗体のフラグメントを製造することが望ましい。このような抗体フラグメントは、例えば、抗体のタンパク質分解的加水分解により、得ることができる。抗体フラグメントは、慣用法に従い全抗体のペプシンまたはパパイン消化により得ることができる。例示として、抗体をペプシンで酵素的に消化してFab2と表示する5Sフラグメントを形成することによって、抗体フラグメントを製造することができる。チオール還元剤を使用して、このフラグメントをさらに切断して、35SFab1価フラグメントを産生することができる。必要に応じて、ジサルファイド結合の切断から生ずるスルフヒドリル基のブロッキング基を使用して、切断反応を実施することができる。別法として、ペプシンを使用する酵素的切断は2つの1価FabフラグメントおよびFcフラグメントを直接的に産生する。これらの方法は、例えば、下記の文献に記載されている:Goldenberg、米国特許第4331647号;Nisonoff他、ArchBiochemBiophys89:230、1960;Porter、BiochemJ73:119、1959;Edelman他、inMethodsinEnzymology、Vol1、p422AcademicPress1967;およびColigan、前掲。フラグメントが無傷の抗体により認識される抗原に結合するかぎり、抗体を切断する他の方法、例えば、重鎖を分離して1価の軽-重鎖フラグメントを形成する方法、フラグメントをさらに切断する方法、または他の酵素的、化学的または遺伝学的技術を使用することもできる。例えば、FvフラグメントはVHおよびVL鎖のアソシエーションを含んでなる。下記の文献に記載されているように、このアソシエーションは非共有結合であることができる:Inbar他、ProcNatAcadSciUSA69:2659、1972。あるいは、可変鎖は細胞間ジサルファイド結合により結合するか、あるいは化学物質、例えば、グルタルアルデヒドにより架橋することができる例えば、下記の文献を参照のこと:Sandhu、CritRevBiotch12:437、1992。Fvフラグメントは、ペプチドリンカーにより接続されたVHおよびVL鎖を含んでなることができる。オリゴヌクレオチドにより接続されたVHおよびVLドメインをコードするDNA配列を含んでなる構造的遺伝子を構築することによって、これらの一本鎖抗原結合性タンパク質scFvは製造される。構造遺伝子を発現ベクターの中に挿入し、次いで発現ベクターを宿主細胞、例えば、大腸菌Ecoliの中に導入する。これらの組換え宿主細胞は、2つのVドメインを架橋するリンカーペプチドを有する単一のポリペプチド鎖を合成する。scFvを産生する方法は、例えば、下記の文献に記載されている:Whitlow他、Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology2:97、1991;また、Bird他、Science242:423、1988;Ladner他、米国特許第4946778号;Pack他、BioTechnology11:1271、1993;およびSandhu、前掲。例示として、リンパ球をinvitroにおいてBR43x2ポリペプチドに暴露し、ファージまたは同様なベクター中の抗体表示ライブラリーを選択することによって、scFvを得ることができる例えば、固定化または標識化BR43x2タンパク質またはペプチドを使用する。潜在的BR43x2ポリペプチド結合性ドメインを有するペプチドをコードする遺伝子は、ファージ上でファージ表示または細菌、例えば、大腸菌Ecoli上で表示されたランダムペプチドライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる。ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、多数の方法、例えば、ランダム突然変異誘発およびランダムポリヌクレオチド合成により得ることができる。これらのランダムペプチド表示ライブラリーを使用して、既知のターゲットと相互作用するペプチドについてスクリーニングすることができる。このターゲットはタンパク質またはポリペプチド、例えば、リガンドまたはレセプター、生物学的または合成的高分子、または有機または無機の物質であることができる。このようなランダムペプチド表示ライブラリーをつくりかつスクリーニングする技術はこの分野において知られているLadner他、米国特許第5223409号、Ladner他、米国特許第4946778号、Ladner他、米国特許第5403484号、Ladner他、米国特許第5571698号、およびKay他、PhageDisplayofPeptidesandPoteinsAcademicPress,Inc1996そしてランダムペプチド表示ライブラリーおよびこのようなライブラリーをスクリーニングするキットは、例えば、Clontechカリフォルニア州パロアルト、InvitrogenIncカリフォルニア州サンディエゴ、NewEnglandBiolabs,Incマサチュセッツ州ベバーリイ、およびPharmaciaLKBBiotechnologyIncニュージャージイ州ピスカタウェイから商業的に入手可能である。本明細書に開示するBR43x2配列を使用して、ランダムペプチド表示ライブラリーをスクリーニングして、BR43x2に結合するタンパク質を同定することができる。抗体フラグメントの他の形態は、単一の相補性決定領域CDRをコードするペプチドである。問題の抗体のCDRをコードする遺伝子を構築することによって、CDRペプチド最小認識単位を得ることができる。このような遺伝子は、例えば、抗体産生細胞のRNAから可変領域を合成するPCRにより製造される例えば、下記の文献を参照のこと:Larrick他、Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology2:106、1991;CourtenayLuck、GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies,inMonoclonalAntibodies:Production,EngineeringandClinicalApplication、Ritter他、編、p166CambridgeUniversityPress1995;およびWard他、GeneticManipulationandExpressionofAntibodies,inMonoclonalAntibodies:PrinciplesandApplications、Birch他、編、p137WileyLiss,Inc1995。あるいは、抗BR43x2抗体はヒト化モノクローナル抗体から誘導することができる。マウス相補的決定領域をマウス免疫グロブリンの重および軽可変鎖からヒト可変ドメインの中に転移することによって、ヒト化モノクローナル抗体を産生する。次いでヒト抗体の典型的な残基を、ネズミ対応物のフレームワーク領域において置換する。ヒトモノクローナル抗体に由来する抗体成分の使用は、ネズミ定常領域の免疫原性に関連する潜在的問題を排除する。ネズミ免疫グロブリン可変領域をクローニングする一般的技術は、例えば、下記の文献に記載されている:Orlandi他、ProcNatAcadSciUSA86:3833、1989。ヒト化モノクローナル抗体を産生する技術は、例えば、下記の文献に記載されている:Jones他、Nature321:522、1986;Carter他、ProcNatAcadSciUSA89:4285、1992;Sandhu、CritRevBiotch12:437、1992;Singer他、JImmun150:2844、1993;Sudhir編、AntibodyEngineeringProtocolsHumanaPress,Inc1995;Kelley、EngineeringTherapeuticAntibodies,inProteinEngineeringPrinciplesandPractice、Cleland他編、pp399434JohnWileySons,Inc1996;およびQueen他、米国特許第5693762号1997.xxx。ポリクローナル抗イディオタイプ抗体は、動物を抗BR43x2抗体または抗体フラグメントで標準的技術に従い免疫化することによって製造することができる。例えば、下記の文献を参照のこと:Green他、ProductionofPolyclonalAntisera,inMethodsInMolecularBiology:ImmunochemicalProtocols、Manson編、pp112HumanaPress1992。また、Coligan、前掲、pp241247参照。あるいは、モノクローナル抗イディオタイプ抗体は、前述の技術に従い、免疫原として抗BR43x2抗体または抗体フラグメントを使用して製造することができる。別法として、ヒト化抗イディオタイプ抗体または類人猿抗イディオタイプ抗体は前述の技術に従い製造することができる。抗イディオタイプ抗体を製造する方法は、例えば、下記の文献に記載されている:Irie、米国特許第5208146号、Greene他、米国特許第5637677号、およびVarthakaviおよびMinocha、JGenVirol77:1875、1996。本発明における抗体またはポリペプチドは、また、薬剤、トキシン、放射性核種およびその他と直接的または間接的に複合化することができ、そしてこれらの複合体はinvivoの診断または療法の応用において使用することができる。例えば、対応する抗相補的分子例えば、それぞれ、レセプターまたは抗原を発現する組織または器官を同定または処置するために、本発明のポリペプチドまたは抗体を使用することができる。さらに詳しくは、BR43x2ポリペプチドまたは抗BR43x2抗体、またはそれらの生物活性フラグメントまたは部分を検出可能なまたは細胞障害性分子にカップリングさせ、そして抗相補的分子を発現する細胞、組織または器官を有する哺乳動物に送達することができる。適当な検出可能な分子をポリペプチドまたは抗体に直接的または間接的に結合させることができ、そしてこのような分子は放射性核種、酵素、基質、コファクター、インヒビター、蛍光マーカー、化学発光マーカー、磁気粒子、およびその他を包含する。適当な細胞障害分子をポリペプチドまたは抗体に直接的または間接的に結合させることができ、そしてこのような分子は細菌または植物のトキシン例えば、ジフテリアトキシン、シュードモナスエキソトキシンPseudomonasexotoxin、リシン、アブリンおよびその他、ならびに治療用放射性核種、例えば、ヨウ素-131、レニウム-188またはイットリウム-90ポリペプチドまたは抗体に直接的に結合されているか、あるいは、例えば、キレート化部分の手段により間接的に結合されているを包含する。また、ポリペプチドまたは抗体を細胞障害性薬剤、例えば、アドリアマイシンに結合させることができる。検出可能なまたは細胞障害性分子の間接的結合のために、検出可能なまたは細胞障害性分子を補体/抗補体の対の1メンバーに結合することができ、ここで他方のメンバーをポリペプチドまたは抗体の部分に結合させる。これらの目的に対して、ビオチン/ストレプトアビジンは典型的な補体/抗補体の対である。可溶性BR43x2ポリペプチドまたは抗体を薬剤、放射性核種およびその他に直接的または間接的に複合化することができ、そしてこれらの複合体をinvivoの診断または療法的応用に使用することができる。例えば、対応する抗相補的分子例えば、それぞれ、レセプターまたは抗原を発現する組織または器官を同定または処置するために、本発明のポリペプチドまたは抗体を使用することができる。さらに詳しくは、BR43x2ポリペプチドまたは抗BR43x2抗体、またはそれらの生物活性フラグメントまたは部分を検出可能なまたは細胞障害性分子にカップリングさせ、そして抗相補的分子を発現する細胞、組織または器官を有する哺乳動物に送達することができる。適当な検出可能な分子をポリペプチドまたは抗体に直接的または間接的に結合させることができ、そしてこのような分子は放射性核種、酵素、基質、コファクター、インヒビター、蛍光マーカー、化学発光マーカー、磁気粒子、およびその他を包含する。適当な細胞障害分子をポリペプチドまたは抗体に直接的または間接的に結合させることができ、そしてこのような分子は細菌または植物のトキシン例えば、ジフテリアトキシン、シュードモナスエキソトキシンPseudomonasexotoxin、リシン、アブリンおよびその他、ならびに治療用放射性核種、例えば、ヨウ素-131、レニウム-188またはイットリウム-90ポリペプチドまたは抗体に直接的に結合されているか、あるいは、例えば、キレート化部分の手段により間接的に結合されているを包含する。また、ポリペプチドまたは抗体を細胞障害性薬剤、例えば、アドリアマイシンに結合させることができる。検出可能なまたは細胞障害性分子の間接的結合のために、検出可能なまたは細胞障害性分子を補体/抗補体の対の1メンバーに結合することができ、ここで他方のメンバーをポリペプチドまたは抗体の部分に結合させる。これらの目的に対して、ビオチン/ストレプトアビジンは典型的な補体/抗補体の対である。このようなポリペプチド-トキシン融合タンパク質または抗体/フラグメント-トキシン融合タンパク質は、ターゲッテッド細胞を組織の阻害または離解のために使用することができる例えば、癌細胞または組織を処理するために。あるいは、ポリペプチドが多重機能のドメインすなわち、活性化ドメインまたはリガンド結合性ドメイン、ターゲッティングドメインを有する場合、ターゲッティングドメインのみを含む融合タンパク質は検出可能分子、細胞障害性分子または相補的分子を問題の細胞または組織の型に向けるために適当であることがある。ドメインの融合タンパク質のみが相補的分子を含む場合、抗相補的分子を検出可能なまたは細胞障害性分子に複合化することができる。こうして、このようなドメイン-相補的分子の融合タンパク質は、一般的抗相補的-検出可能/細胞障害性分子の複合体の細胞/組織-特異的デリバリーのための一般的ターゲッティングベヒクルを表す。本明細書に記載する生物活性ポリペプチドまたは抗体複合体は静脈内、動脈内または管内に送出すことができるか、あるいは意図する作用部位に局所的に導入することができる。HisまたはFLAG商標標識化されている、可溶性BR43x2ポリペプチドに対して、抗体をつくることができる。また、大腸菌Ecoli産生MBP-融合タンパク質に対して、抗体を製造することができる。あるいは、このようなポリペプチドはヒトIgとの融合タンパク質を包含することができるであろう。特に、His標識化、またはFLAG商標標識化可溶性BR43x2に対するポリペプチド抗体を含有する抗血清を、ヒトまたは霊長類組織上の免疫組織化学によるBR43x2の組織分布の分析において使用することができる。また、これらの可溶性BR43x2ポリペプチドを使用してマウスを免疫化して、可溶性ヒトBR43x2ポリペプチドに対してモノクローナル抗体を産生することができる。可溶性ヒトBR43x2ポリペプチドに対するモノクローナル抗体をまた使用して、リガンド/レセプターのカップリングを模擬して、リガンド/レセプター対を活性化または不活性化することができる。例えば、架橋性抗可溶性CD40モノクローナル抗体は、抗IgMまたはLPSで次善的に活性化されたB細胞系統に対する刺激シグナルを提供し、増殖および免疫グロブリンの産生を生ずることが証明された。これらの同一モノクローナル抗体は、溶液中で使用するとき、レセプターの活性化をブロックすることによって、アンタゴニストとして作用する。BR43x2に対するモノクローナル抗体を使用して、組織分布の研究により同定された特異的細胞系統上の分布、調節および生物学的相互作用を決定することができる。本発明は、また、単離され、精製されたBR43x2、TACIおよびBCMAポリヌクレオチドのプローブまたはプライマーを提供する。このようなポリヌクレオチドのプローブはRNAまたはDNAであることができる。DNAはcDNAまたはゲノムDNAであることができる。ポリヌクレオチドのプローブは一本鎖または二本鎖のDNAまたはRNA、一般に合成オリゴヌクレオチドであるが、クローニングしたcDNAまたはゲノム配列から発生させることができ、一般に少なくとも16ヌクレオチド、よりしばしば17ヌクレオチド~25またはそれより多いヌクレオチド、時には40~60ヌクレオチド、ある場合においてBR43x2遺伝子またはcDNAの実質的な部分、ドメインまたはさらに全体を含んでなるであろう。プローブおよびプライマーは一般に合成オリゴヌクレオチドであるが、クローニングされたcDNAまたはゲノム配列またはその補体から発生させることができる。分析用プローブは一般に少なくとも20ヌクレオチド長さであるが、多少短いプローブ14~17ヌクレオチドを使用することができる。PCRプライマーは少なくとも5ヌクレオチド長さ、好ましくは15またはそれより多いヌクレオチド、より好ましくは20~30ヌクレオチドである。遺伝子を小さい領域を分析のためにターゲッティングするとき、短いポリヌクレオチドを使用することができる。遺伝子全体の分析のために、ポリヌクレオチドのプローブは全体のエクソンまたはそれより多くを含んでなることができる。この分野においてよく知られている技術を使用して、プローブを、例えば、酵素、ビオチン、放射性核種、蛍光体、化学発光体、常磁性プロトコルおよびその他標識化して検出可能なシグナルを提供することができ、これらは多数の源、例えば、MolecularProbes,Inc、Eugene、OR、およびAmershamCorp、イリノイ州アーリントンハイツ、から商業的に入手可能である。プローブを構築するために好ましい領域は、リガンド結合性領域、システインに富んだ擬反復、シグナル配列、およびその他を包含する。ポリヌクレオチドのプローブを発生させる技術およびハイブリダイゼーション技術はこの分野において知られており、例えば、下記の文献を参照のこと:Ausubel他、CurrentProtocolsinMolecularBiology、JohnWileyandSons,Inc、NY、1991。BR43x2、TACIおよびBCMAポリペプチドおよび抗体を、診断系において使用して、BR43x2、TACIおよびBCMAおよびBR43x2、TACIおよびBCMAリガンドポリペプチド、例えば、ztnf4の存在を検出することができる。このような検出法から誘導される情報は種々の疾患におけるBR43x2ポリペプチドの意味の洞察を提供し、BR43x2レベルの変更が有意である疾患の診断ツールとして働くであろう。BR43x2、TACIおよびBCMAレセプターポリペプチドのレベルの変更は、癌、自己免疫疾患および感染症を包含する病理学的状態を示すことができる。基本的アッセイにおいて、一本鎖プローブ分子を生物学的試料から単離されたRNAと、プローブとターゲットBR43x2TACIまたはBCMARNA種との間の塩基対合を促進する温度およびイオン強度の条件下に、インキュベートする。非結合プローブをハイブリダイゼーションした分子から分離した後、ハイブリッドの量を検出する。RNA検出のよく確立されたハイブリダイゼーション法は、ノザン分析およびドット/スロットブロットハイブリダイゼーションを包含する例えば、下記の文献を参照のこと:Ausbel前掲およびWu他編、′′AnalysisofGeneExpressionattheRNALevel′′、MethodsinGeneBiotechnology、pp225239CRCPress,Inc、1997。核酸プローブを放射性同位元素、例えば、32Pおよび35Sで直接標識化することができる。あるいは、BR43x2RNAを非放射線的ハイブリダイゼーション法で検出することができる例えば、下記の文献を参照のこと:Isaac編、ProtocolsforNucleicAcidAnalysisbyNonradioactiveProbes、HumanaPress,Inc、1993。典型的には、非放射線的検出は、色素形成または化学発光基質の酵素的変換により達成される。例示的非放射性成分はビオチン、フルオレセイン、およびジゴキシゲニンを包含する。BR43x2、TACI、およびBCMAオリゴヌクレオチドプローブは、また、invivo診断に有用である。例示として、18F標識化オリゴヌクレオチドを被検体に投与し、陽電子放射断層撮影法により可視化することができるTavitian他、NatureMedicine4:467、1998。多数の診断手順は、ポリメラーゼ連鎖反応PCRを利用して検出方法の感度を増加する。PCRを実施する標準技術はよく知られている一般に、下記の文献を参照のこと:Mathew編、ProtocolsinhumanMolecularGeneticsHumanaPress,Inc、1991、White編、PCRProtocols:CurrentMethodsandApplicationsHumanaPress,Inc、1993、Cotter編、MolecularDiagnosisofCancerHumanaPress,Inc、1996、HanausekおよびWalaszek編、TumorMarkerProtocolsHumanaPress,Inc、1998、Lo編、ClinicalApplicationsofPCRHumanaPress,Inc、1998、およびMeltzer編、PCRinBioanalysisHumanaPress,Inc、1998。特定のBR43x2ドメインまたはモチーフ、例えば、BR43x2、TACIまたはBCMAシステインに富んだ擬反復をコードする配列を増幅するために、PCRを設計することができる。診断アッセイのためのPCRの1つの変法は逆転写PCRRT-PCRである。RT-PCR技術において、RNAを生物学的試料から単離し、cDNAに逆転写し、そしてcDNAをBR43x2プライマーとインキュベートする例えば、下記の文献を参照のこと:Wu他編、′′RapidIsolationofSpecificcDNAsorGenesbyPCR′′、MethodsinGeneBiotechnology、pp1528CRCPress,Inc、1997。次いでPCRを実行し、産物を標準技術により分析する。例示として、RNAを生物学的試料から、例えば、前述のグアニジニウム-チオシアネート細胞溶解手順により単離する。あるいは、固相技術を使用して細胞ライゼイトからmRNAを単離することができる。ランダムオリゴヌクレオチド、dTの短いホモポリマー、またはBR43x2、TACIまたはBCMAアンチセンスオリゴマーを使用して、逆転写反応を単離されたRNAでプライムすることができる。オリゴ-dTプライマーは、対照ターゲット配列を提供できる、種々のmRNAヌクレオチド配列が増幅されるという利点を提供する。典型的には20塩基長さである、2つのフランキングオリゴヌクレオチドプライマーを使用してポリメラーゼ連鎖反応により、BR43x2、TACIまたはBCMA配列を増幅する。種々のアプローチを使用して、PCR増幅生成物を検出することができる。例えば、PCR生成物ゲル電気泳動により分画し、臭化エチジウム染色により可視化することができる。あるいは、分画したPCR生成物を膜に移し、検出可能に標識化されたBR43x2プローブとハイブリダイゼーションさせ、オートラジオグラフィーにより検査することができる。追加の別のアプローチは、ジゴキシゲニン標識化デオキシリボ核酸トリホスフェートを使用して化学発光を検出する方法、およびC-TRAK比色アッセイを包含する。他のアプローチは実時間定量的PCRであるPerkinElmerCetus、コネチカット州ノーウォーク。結合したリポーターおよびクエンチャー色素の両方を有するオリゴヌクレオチドから成る、蛍光発生プローブは、特異的に前方向プライマーと逆方向プライマーとの間をアニールする。TaqDNAポリメラーゼの5エンドヌクレアーゼ活性を使用して、リポーター色素をクエンチャー色素から分離し、配列特異的シグナルを発生させ、このシグナルは増幅が増加するにつれて増加する。PCR反応の間に、蛍光強度を連続的にモニターし、定量する。BR43x2、TACIまたはBCMAの発現を検出する他のアプローチはサイクリングプローブ技術CPTであり、ここで一本鎖DNAターゲットは過剰のDNA-RNA-DNAキメラプローブと結合して複合体を形成し、RNA部分をRNアーゼHで切断し、そして切断されたキメラプローブの存在を検出する例えば、下記の文献を参照のこと:Beggs他、JClinMicrobiol34:2985、1996、Bekkaoui他、Biotechniques20:240、1996。BR43x2、TACIまたはBCMA配列を検出する別の方法は、核酸配列をベースとする増幅NASBA、交差ハイブリダイゼーションにより鋳型の共同増幅CATCH、およびリガーゼ連鎖反応LCRのようなアプローチを利用することができる例えば、下記の文献を参照のこと:Mrshall他、米国特許第5686272号1997、Dyer他、JVirolMethods60:161、1996;Ehricht他、EurJBiochem243:358、1997およびChadwick他、JVirolMethods70:59、1998。他の標準的方法はこの分野において知られている。また、BR43x2、TACIまたはBCMAプローブおよびプライマーを使用して、組織試料におけるBR43x2、TACIまたはBCMA遺伝子の発現を検出し、位置決定することができる。このようなinsituハイブリダイゼーションの方法は、この分野においてよく知られている例えば、下記の文献を参照のこと:Choo編、InSituHybridizationProtocols、HumanaPress,Inc、1994、Wu他編、′′AnalysisofCellularDNAorAbundanceofmRNAbyRadioactiveInSituHybridizationRISH′′、MethodsinGeneBiotechnology、CRCPress,Inc、pp259278、1997、およびWu他編、′′LocalizationofDNAorAbundanceofmRNAbyFluorescenceInSituHybridizationRISH′′、MethodsinGeneBiotechnology、CRCPress,Inc、pp279289、1997。種々の追加の診断アプローチは当業者によく知られている例えば、下記の文献を参照のこと:Mathew編、ProtocolsinHumanMolecularGenetics、HumanaPress,Inc、1991;ColemanおよびTsongalis、MolecularDiagnostics、HumanaPress,Inc、1996およびElles、MolecularDiagnosisofGeneticDiseases、HumanaPress,Inc、1996。さらに、個々の染色体上の対応配列にハイブリダイゼーションさせるために、このようなポリヌクレオチドのプローブを使用することできるであろう。染色体の同定および/またはBR43x2遺伝子のマッピングは、遺伝子の機能および疾患の関連についての有用な情報を提供することができるであろう。多数のマッピング技術、例えば、体細胞ハイブリッドのマッピング、および蛍光insituハイブリダイゼーションFISHは当業者に入手可能である。好ましい方法は放射線ハイブリッドマッピングである。放射線ハイブリッドマッピングは、哺乳動物染色体の高い分解能の、連続的マップを構成するために開発された体細胞遺伝学的技術であるCox他、Science250:24550、1990。遺伝子の配列の部分的または完全な知識は、染色体放射線ハイブリッドマッピングパネルとともに使用するために適当なPCRプライマーの設計を可能とする。ヒトゲノム全体をカバーする、商業的に入手可能な放射線ハイブリッドマッピングパネル、例えば、StanfordG3RHPanelおよびGeneBridge4RHPanelResearchGenetics,Inc、アラバマ州ハンツヴィレが入手可能である。これらのパネルは、急速な、PCRをベースとする、染色体の位置決定および問題の領域内の遺伝子、配列タッグド部位STS、および他の非多形性および多形性マーカーの排列を可能とする。これは、問題の新しく発見された遺伝子と以前にマッピングされたマーカーとの間の比例的物理的距離を直接的に確立することを包含する。遺伝子の位置についての正確な知識は、下記の方法を包含する多数の方法において有効であることがある:1配列が現存するcontigの一部分であるかどうかを決定し、そして種々の形態の追加の取り囲む遺伝学的配列、例えば、YAC-、BAC-またはcDNAクローンを得ること、2sma染色体領域に対する結合を示す遺伝可能な疾患について可能な候補を提供すること、および3特定の遺伝子がどんな機能を有することができるかの決定を促進するために有益である相互参照モデル生物、例えば、マウスのため。また、染色体の位置決定はSTSを使用して実施することができる。STSはヒトゲノムにおいてユニークであるDNA配列であり、そして特定の染色体または染色体の領域のための参照点として使用することができる。すべての他のゲノム配列の存在下にこの部位を特異的に検出するために、PCRにおいて使用することができる、1対のオリゴヌクレオチドのプライマーにより、STSを定めることができる。STSはもっぱらDNA配列に基づくので、STSはデータベース、例えば、DatabaseofSequenceTaggedSitesdbSTS、GeneBankNationalCenterforBiologicalInformation、NationalInstitutesofHealth、マリイランド州ベセスダ、httpwwwncbinlmnihfov内に完全に記載することができ、問題の遺伝子配列を使用して、これらの短いゲノムランドマークSTS配列内に含有されるマッピングデータについて検索することができる。本発明は、また、診断用途において使用する試薬を提供する。例えば、BR43x2遺伝子、BR43x2DNAまたはRNAを含んでなるプローブ、またはそれらのサブ配列を使用して、BR43x2遺伝子が特定の染色体上に存在するかどうか、あるいは突然変異が起こったかどうかを決定することができる。BR43x2遺伝子座における検出可能な染色体異常は下記のものを包含するが、これらに限定されない:異数性、遺伝子コピー数の変化、挿入、欠失、制限部位の変化および再配列。これらの異常はコーディング配列内、イントロン内、またはフランキング配列内で起こることができ、上流のプロモーターおよび調節領域を包含し、そしてコーディング配列内の物理的変更または遺伝子発現レベルの変化として発現されることがある。一般に、これらの診断方法は下記の工程を含んでなる:a患者から遺伝的試料を取り;bポリヌクレオチドが相補的ポリヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションして第1反応産物を産生する条件下に、遺伝的試料をポリヌクレオチドのプローブまたはプライマーとインキュベートし、そしてiii第1反応産物を対照反応産物と比較する。第1反応産物と対照反応産物との間の差は患者における遺伝的異常性を示す。本発明において使用する遺伝的試料は、ゲノムDNA、cDNA、およびRNAを包含する。ポリヌクレオチドのプローブまたはプライマーはRNAまたはDNAであることができ、そして配列番号3の一部分、配列番号1の相補体、またはそれらのRNA同等物を含んでなるであろう。これに関して適当なアッセイ方法は、この分野において知られている分子遺伝的技術、例えば、制限フラグメント長さの多形性RFLPの解析、PCR技術を使用する短い縦列反復STRの解析、結合連鎖反応Barany、PCRMethodsandApplications1:5-16、1991、リボヌクレアーゼ光受容体アッセイ、およびこの分野において知られている他の遺伝的既知解析Sambrook他、ibidAusubel他、ibidMarian、Chest、108:255-65、1995。リボヌクレアーゼ保護アッセイ例えば、Ausubel他、ibid、ch4参照は患者のRNA試料に対するRNAプローブのハイブリダイゼーションを含んでなり、その後反応産物RNA-RNAハイブリッドをRNアーゼに暴露させる。RNAのハイブリダイゼーションした領域は消化から保護される。PCRアッセイにおいて、患者の遺伝的試料を1対のポリヌクレオチドのプライマーとインキュベートし、そしてプライマーの間の領域を増幅し、回収する。回収された産物のサイズまたは量の変化は、患者における突然変異体を示す。技術使用できる他のPCRをベースとする技術は、一本鎖コンフォメーション多形性SSCP解析であるHayashi、PCRMethodsandApplications1:34-8、1991。アンチセンス方法を使用してBR43x2、TACIまたはBCMA遺伝子の転写を阻害することができ、例えば、B細胞系統の発生および他の細胞との相互作用を阻害することができる。BR43x2、TACIまたはBCMAをコードするmRNAに結合しかつこのようなRNAの翻訳を阻害するように、BR43x2、TACIまたはBCMAをコードするポリヌクレオチド例えば、配列番号3に記載されているようなポリヌクレオチドのセグメントに対して相補的であるポリヌクレオチドを設計する。細胞培養物または被検体におけるBR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドをコードする遺伝子の発現を阻害するために、このようなアンチセンスポリヌクレオチドを使用する。BR43x2、TACIまたはBCMAを発現する操作されたマウストランスジェニックマウスと呼ぶおよびBR43x2、TACIまたはBCMAの機能の完全な非存在を示すマウスノックアウトマウスと呼ぶを、また、発生させることができるSnouwaert他、Science257:1083、1992;Lowell他、Nature366:740-42、1993;Capecchi、Science244:1288-92、1989;Palmiter他、AnnuRevGenet20:465-99、1986。例えば、偏在的にまたは組織特異的または組織制限的プロモーター下にBR43x2、TACIまたはBCMAを過剰に発現するトランスジェニックマウスを使用して、過剰発現が表現型を引き起こすかどうかを決定することができる。例えば、野生型BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、ポリペプチドフラグメントまたはその突然変異体の過剰発現は正常細胞のプロセスを変更し、表現型を生ずることができ、この表現型はBR43x2、TACIまたはBCMAの発現が機能的に関係する組織を同定し、そしてBR43x2、TACI、BCMAまたはそれらのアゴニストまたはアンタゴニストの療法上のターゲットを示すことができる。例えば、操作するために好ましいトランスジェニックマウスは、可溶性BR43x2、TACIまたはBCMAを過剰に発現するマウスである。そのうえ、このような過剰発現はヒト疾患とに類似性を示す表現型を生ずることがある。同様に、ノックアウトBR43x2、TACIまたはBCMAマウスを使用して、BR43x2がinvivoにおいて絶対的に要求されるかどうかを決定することができる。ノックアウトマウスの表現型は、BR43x2、TACIまたはBCMAアンタゴニスト、例えば、本明細書に記載するアンタゴニストが有することができるinvivo作用を予測させる。ヒトBR43x2、TACIまたはBCMAcDNAを使用して、ネズミBR43x2、TACIまたはBCMAmRNA、cDNAおよびゲノムDNAを単離し、これらを引き続いてノックアウトマウスの発生に使用する。BR43x2、TACIまたはBCMA遺伝子およびそれによりコードされるタンパク質をinvivo系において研究するために、これらのマウスを使用することができ、そして対応するヒト疾患のためのinvivoモデルとして、これらのマウスを使用することができる。そのうえ、本明細書に記載するBR43x2、TACIまたはBCMAに対して向けられたBR43x2、TACIまたはBCMAアンチセンスポリヌクレオチドまたはリボザイムのトランスジェニック発現を、前述のトランスジェニックマウスと同様に使用することができる。薬学的に有効量の本発明のBR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドは、慣用法に従い、非経口的、経口的、経鼻的、経直腸的、局所的、経皮的投与またはその他のために薬学上許容される担体を使用して処方することができる。処方物はさらに1種または2種以上の希釈剤、充填剤、乳化剤、保存剤、緩衝剤、賦形剤、およびその他を含むことができ、そして例えば、液体、粉末、乳濁液、坐剤、リポソーム、経皮パッチおよび錠剤のような形態で提供することができる。多数のバイオポリマー生物学をベースとする系の任意のものを含む、遅延または延長放出性デリバリー系、リポソームを使用する合成、およびポリマーのデリバリー系を、また、本明細書に記載する組成物とともに、利用してBR43x2ポリペプチドまたはアンタゴニストの連続的または長期間の源を提供することができる。このような遅延放出系は、例えば、経口的、局所的および非経口的使用のための処方物に適用可能である。用語薬学上許容される担体は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨害せずかつ宿主または患者に対して無毒である、担体媒質を意味する。当業者は、下記の文献に記載されているように、本発明の化合物を適当な方法で、許容される実施に従い処方することができる:Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy、Gennaro、編、MackPublishingCompany、ペンシルベニア州イーストン、第19版、1995。本明細書において使用するとき、BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチド、アゴニストまたはアンタゴニストの薬学的に有効量は所望の生物学的結果を誘導するために十分な量である。この結果は疾患の徴候、症候、または原因の軽減、あるいは生物学的系の任意の他の所望の変更であることができる。例えば、BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドの有効量は、臨床医または他の適格とされた観察者により認められた症候の主観的軽減または客観的同定可能な改善を提供する量である。例えば、このような有効量のBR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドまたは可溶性融合物は、免疫応答間のB細胞応答の減少、自己抗体産生の阻害または減少、SLE、MGまたはRAに関連する症候の阻害または減少を提供するであろう。有効量のBR43x2、TACIまたはBCMAは末梢血中のB細胞の百分率を減少させるであろう。BR43x2、TACIまたはBCMAポリペプチドの有効量は、治療すべき疾患または症候に依存して広く変化させることができる。投与すべきポリペプチドの量および処方物中のその濃度は、選択したベヒクル、投与経路、特定のポリペプチドの効力、患者の臨床的症状、処方物中の化合物の副作用および安定性に依存する。したがって、臨床医は、問題の患者または同様に患者を使用する臨床的経験に依存して、処方物の中に適当な濃度を含有する適当な調製物、ならびに処方物の投与量を使用するであろう。このような量は、一部分、治療すべき特定の症状、年齢、体重、および患者の一般的健康、および当業者にとって明らかな他の因子に依存するであろう。典型的には、投与量は01~100mg/被検体kgの範囲であろう。特定の化合物の投与量は、実験動物についての研究と組合わせたinvitroまたはexvivo研究から決定することができる。invitroまたはexvivoにおいて有効であることが見出された化合物の濃度は動物の研究のために手引きを提供し、ここで投与量は作用部位において同様な濃度を提供するように計算される。下記の非限定的実施例により、本発明をさらに例示する。実施例1.BR43x2の同定分泌トラップアプローチを使用してRPMIアレイから、TACIイソ型をクローニングした。20の96ウェルのプレートを使用して、RPMI1788活性化B細胞系統ライブラリーをアレイした。各ウェルは約100の大腸菌Ecoliコロニーを含有し、各コロニーは1つのcDNAクローンを含有した。TomTechQuadra9600を使用して96ウェルのフォーマットで、DNAミニプレプを調製した。次いで単離されたDNAを120プールにプールし、各プールは1600コロニーを表した。これらのプールをCos-7細胞の中にトランスフェクトし、12ウェルのプレートの中にプレートした。12μlのプールDNAおよび5μlのLipofectAMINEを92μlの無血清DMEM培地500mlのDMEM中の55mgのピルビン酸ナトリウム、146mgのL-グルタミン、5mgのトランスフェリン、25mgのインスリン、1μgのセレンおよび5mgのフェツイン中で混合し、室温において30分間インキュベートし、次いで400μlの無血清DMEM培地を添加した。12ウェルの組織培養プレート上にプレートした220000のCos-7細胞/ウェル上にDNA-LipofectAMINE混合物を添加し、37°Cにおいて5時間インキュベートした。インキュベーション後、500μlの20PBSDMEM培地500mlのDMEM中の100mlのFBS、55mgのピルビン酸ナトリウムおよび146mgのL-グルタミンを各ウェルに添加し、細胞を一夜インキュベートした。ビオチニル化、FLAGタッグドztnf4を使用して、分泌トラップスクリーンを実施した。細胞をPBSでリンスし、PBS中の18ホルムアルデヒドで15分間固定した。次いで細胞をTNTH2O中の01MのTris-HCl、015MのNaCl、および005のTween-20で洗浄した。細胞をPBS中の01Triton-Xで浸透させ、次いでTNT中で洗浄した。製造業者のインストラクションに従いNENRenaissance商標TSADirectKitNEN、マサチュセッツ州ボストンを使用して、TNB01MのTris-HCl、015MのNaClおよび05BlockingReagentで細胞を1時間ブロックした。細胞をTNTで洗浄し、15分間アビジンで、次いでビオチンVectorLabsCatSP2001ブロックし、それらの間においてTNTで洗浄した。細胞をTNB中の1μg/mlのztnf4/Flag/Biotinと1時間インキュベートし、次いでTNT中で洗浄した。次いで細胞をTNB中のストレプトアビジン-HRPNENの1:300希釈物と1時間インキュベートし、TNTで洗浄した。希釈緩衝液NEN中で1:50に希釈したフルオレセインチラミド試薬でハイブリダイゼーションを検出し、44分間インキュベートし、TNTで洗浄した。細胞をTNT中で1:5に希釈したVectashieldMountingMediaVectorLabs、カリフォルニア州バーリンゲイムで保存した。FITCフィルターを使用して蛍光顕微鏡により、細胞を可視化した。12プールはztnf4結合について陽性であった。プールD81600クローンを表すを破壊し、ztnf4結合について陽性の単一クローンD8-1を単離した。配列決定分析はクローンD8-1を明らかにし、このクローンはTACIのイソ型をコードするポリペプチド配列を含有し、ここでTACIのPhe21-Arg67第1システインに富んだ擬反復は単一アミノ酸残基、トリプトファンで置換されていた。このイソ型をBR43x2と表示し、そのポリヌクレオチド配列を配列番号1に表す。実施例2.リンパ球および単球中のBR43x1の位置決定逆転写PCRを使用して、TおよびB細胞および単球におけるBR43x1発現を位置決定した。オリゴヌクレオチドプライマーZC19980配列番号15およびZC199810配列番号165を使用して、CD19、CD3および単球cDNAをBR43についてスクリーニングした。逆転写酵素反応を94°Cにおいて3分間実施し、次いで30サイクルで94°Cにおいて30秒間、68°Cにおいて2分間、そして72°Cにおいて1分間実施し、次いで72°Cにおいて7分のエクステンションを実施した。抗体を使用するTACIについて報告されたようにvonBuelowおよびBram、前掲、期待したサイズの720bpのバンドはB細胞中でのみ検出され、活性化T細胞中で検出されなかった。実施例3.BR43リガンドztnf4を使用してB細胞の増殖アッセイ1×108凍結、アフェレスドapheresed末梢血単核細胞PBMCを含有するバイアルを37°Cの水浴中で急速融解し、50mlの管中の25mlのB細胞培地IscovesModifiedDulbeccosMedium、10熱不活性化胎仔ウシ血清、5L-グルタミン、5Pen/Strepの中に再懸濁させた。トリパンブルーGIBCOBRL、マリイランド州ガイサースバーグを使用して、細胞を生活能力について試験した。10mlのFicollHypaquePlusPharmaciaLKBBiotechnology,Inc、ニュージャージイ州ピスカタウェイを細胞懸濁液の下に層状にし、1800rpmにおいて30分間回転し、ブレーキをオフにして停止させた。次いで相間層を除去し、新しい50mlの管に移し、PBSで40mlの最終体積し、ブレーキをオンにして1200rpmにおいて10分間回転させた。単離されたB細胞の生活能力をトリパンブルーで試験した。B細胞をB細胞培地の中に1×106細胞/mlの最終濃度に再懸濁させ、96ウェルのU字形底のプレートFalcon、VWR、ワシントン州シアトルの中に180μl/ウェルでプレートした。細胞に下記の刺激因子の1つを添加して、最終体積を200ml/ウェルにした:可溶性、FLAGタッグドztnf-4sCFまたはztnf-4sNFを1mg~1ng/mlの10倍希釈で単独で、NaH2CO3、pH95中で希釈した10μg/mlの抗IgMヤギ抗ヒトIgMSouthernBiotechnologyAssociates,Inc、アラバマ州バーリンガムとともに;または10μg/mlの抗IgM、および10ng/mlの組換えヒトIL4PBSおよび01BSA中で希釈下。さらに、他のサイトカイン、例えば、IL-3およびIL-6ならびに可溶性CD40sCD40抗体Pharmngen、カリフォルニア州サンディエゴをその上試験した。対照として、細胞を01ウシ血清アルブミンBSAおよびPBS、10μg/mlの抗IgMまたは10μg/mlの抗IgMおよび10ng/mlのIL4または他のサイトカイン。次いで細胞を37°Cにおいて加湿インキュベーター中で72時間インキュベートした。収集前16時間に、1μCiの3H-チミジンをすべてのウェルに添加した。細胞を96ウェルのフィルタープレートUniFlterGFC、Packard、コネチカット州ベリデンの中に収集し、ここで細胞収集器Packardで細胞を収集し、製造業者のインストラクションに従い収集した。プレートを55°Cにおいて20~30分間乾燥し、ウェルの底を不透明プレートシーラーでシールした。各ウェルに025mlのシンチレーション流体MicroscintO、Packardを添加し、トップカウントマイクロプレートシンチレーションカウンターTopCountMicroplateScintillationCounterPackardを使用してプレートを読んだ。精製したB細胞を刺激した後、種々のB細胞マイトジェンに応答したIgG産生の誘導を測定するために、細胞を記載されているように製造し、9日間インキュベートした。IgG産生を測定するために、細胞上清を収集した。精製したB細胞を刺激した後、種々のB細胞マイトジェンに応答した細胞表面のマーカー活性化を測定するために、細胞を記載されているように製造したが、48時間だけインキュベートした。FACS分析により、細胞表面のマーカーを測定した。種々のB細胞マイトジェンで刺激したヒト精製B細胞の増殖を表6に要約する。IL4、IL310μg/mlおよびIL6とのztnf4の相乗作用はB細胞増殖について見られた。CD40を使用するとき、B細胞のシグナリングの2倍の増加が見られた。精製したB細胞を刺激した後、種々のB細胞マイトジェンに応答したIgG産生ng/mlの誘導を表7に要約する。精製したB細胞をztnf4単独、または抗IgMまたは抗IgMIL-4で刺激した後、細胞表面活性化マーカーの増加が見られた。最適または次善のT細胞マイトジェンの存在下にPBMNCの増殖に対する作用は存在しなかった。また、LPS刺激に応答した精製単球においてTNFα産生に対する作用は見られなかった。増殖しかつ免疫グロブリンを分泌するヒトBリンパ球の可溶性ztnf4共活性化を第3図に示す。5日間培養後、可溶性ztnf425ng/mlでIL4の存在下に、そしてIL4および抗IgM、抗CD40、または抗CD19を使用する刺激に応答する、精製したヒト末梢血B細胞増殖を第3A図に示す。9日間培養後、IL4またはIL4IL5の存在下に可溶性ztnf4で刺激したヒトB細胞から得られた上清中で測定されたIgMおよびIgGのレベルを第3B図に示す。これらの結果が示唆するように、可溶性ztnf4は他のB細胞刺激と共同して作用しかつそれ自体で弱く作用するB細胞活性化分子である。可溶性ztnf4はB細胞増殖およびIgG産生を促進する。接着分子、共同刺激分子および活性化レセプターのアップレギュレーションは、B細胞のAPC機能を促進する役割を示唆する。invitroにおいて5日間における10ng/mlのIL4の存在下に可溶性ztnf425ng/mlまたは対照タンパク質ユビクイチンを使用する、ヒト末梢血B細胞の刺激を第4図に示す。可溶性ztnf4特異的増殖の阻害について、精製TACIIg、BCMAIg、または対照Fcを試験した。実施例4.ztnf4結合を使用するTACIおよびBCMA形質転換BHK細胞の選択トランスフェクタントのプールの希釈クローニングにより、高いレベルのTACIタンパク質を発現するBHK細胞を選択した。トランスフェクタント細胞2×105を、結合緩衝液PBS、2BSA、002NaN3中で1μg/mlのビオチニル化ztnf4と、氷上で30分間インキュベートした。細胞を結合緩衝液で2×洗浄し、次いでSA-PECaltag結合緩衝液中の1:1000希釈と氷上で30分間インキュベートした。次いで細胞を結合緩衝液中で2×洗浄し、結合緩衝液の中に再懸濁させ、FACSFACSVantage、BectonDickinsonにより読んだ。TNF4の最高の結合を有するクローンを選択する。BCMAを発現するトランスフェクタントプールをビオチニル化ztnf4で表面標識化することによって、BCMAタンパク質を高いレベルで発現するBHK細胞を選択した。次いでストレプトアビジン-フィコ-エリトリンSA-PECaltagBurlingame、カリフォルニア州およびFACSVantageBectonDickinson上のFL2中の輝いた細胞の無菌ソーティングを実施した。次いで単一コロニーをztnf4結合についてスクリーニングした。実施例5.組織分布ヒト多重組織ノザンブロットMTNI、MTNIIおよびMTNIII:Clontechをプロービングして、ヒトBR43x2およびTACIの発現の組織分布を決定した。鋳型としてBR43x2配列番号1およびプライマーとしてオリゴヌクレオチドZC20061配列番号22およびZC20062配列番号23を使用して、ほぼ500bpのPCR由来プローブ配列番号21を増幅した。この配列はTACIの相同的領域と同一である。増幅を次のようにして実施した:1サイクルの94°Cにおいて10分間、30サイクルの94°Cにおいて30秒間、60°Cにおいて30秒間および72°Cにおいて30秒間、次いで1サイクルの72°Cにおいて10分間。PCR生成物をアガロースゲル電気泳動により可視化し、GelExtractionKitQiagen、カリフォルニア州チャツワースを製造業者のインストラクションに従い使用して500bpのPCR生成物を精製した。MULTIPRIMEDNA標識化キットAmersham、イリノイ州アーリントンハイツを製造業者のインストラクションに従い使用して、プローブを放射能標識化した。NUCTRAPプッシュカラムStratageneを使用して、プローブを精製した。EXPRESSHYBClontech溶液をハイブリダイゼーションのためにかつノザンブロットのハイブリダイゼーション溶液として使用した。106cpm/mlの標識化プローブを使用して65°Cにおいて、ハイブリダイゼーションを一夜実施した。次いでブロットを室温において2×SSCおよび01SDS中で洗浄し、次いで50°Cにおいて01×SSCおよび01SDS中で2回洗浄した。ほぼ15kbの転写物が脾臓、リンパ節および小腸において検出された。ヒト多重組織ノザンブロットMTNI、MTNIIおよびMTNIII:Clontechをプロービングして、ヒトTACIの発現の組織分布を決定した。鋳型としてDaudi細胞cDNAおよびプライマーとしてオリゴヌクレオチドZC21065配列番号25およびZC21067配列番号26を使用して、ほぼ257bpのPCR由来プローブ配列番号24を増幅した。増幅を次のようにして実施した:1サイクルの94°Cにおいて10分間、35サイクルの94°Cにおいて30秒間、60°Cにおいて30秒間および72°Cにおいて30秒間、次いで1サイクルの72°Cにおいて10分間。PCR生成物をアガロースゲル電気泳動により可視化し、GelExtractionKitQiagen、カリフォルニア州チャツワースを製造業者のインストラクションに従い使用して257bpのPCR生成物を精製した。MULTIPRIMEDNA標識化キットAmersham、イリノイ州アーリントンハイツを製造業者のインストラクションに従い使用して、プローブを放射能標識化した。NUCTRAPプッシュカラムStratageneを使用して、プローブを精製した。EXPRESSHYBClontech溶液をハイブリダイゼーションのためにかつノザンブロットのハイブリダイゼーション溶液として使用した。106cpm/mlの標識化プローブを使用して65°Cにおいて、ハイブリダイゼーションを一夜実施した。次いでブロットを室温において2×SSCおよび01SDS中で洗浄し、次いで50°Cにおいて01×SSCおよび01SDS中で2回洗浄した。ほぼ12kbの転写物が胃、小腸、リンパ節、気管、脾臓および精巣において検出された。8ハウスキーピング遺伝子に正規化した種々の組織からのRNAを含有するRNAMasterDotBlotsClontechを、また、TACIプローブ配列番号21またはBCMAプローブ配列番号24でプロービングし、前述したようにハイブリダイゼーションした。BR43x2TACIの発現は脾臓、リンパ節、小腸、胃、唾液腺、虫垂、肺、骨髄および胎児脾臓イン見られた。ヒト腫瘍パネルブロットVInvitrogenInc、カリフォルニア州サンディエゴおよびヒトリンパ腫ブロットInvitrogenを、前述したように、BR43x2TACIプローブ配列番号21またはBCMAプローブ配列番号24でプロービングした。TACIに対応する15kbの転写物が非ホジキンリンパ腫および耳下腺腫瘍において見出された。BCMAに対応する12kbの転写物が腺リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および耳下腺腫瘍において見出された。グアニジンイソチオシアネートChirgwin他、Biochemistry18:52-94、1979、次いでCsCl遠心工程を使用して、CD4、CD8、CD19および混合反応細胞CellPro、ワシントン州ボセルからの全RNAを調製した。オリゴdTセルロースクロマトグラフィーAvivおよびLeder、ProcNatAcadSciUSA69:1408-12、1972を使用して、ポリARNAを単離した。次いでノザンブロット分析を次のようにして実施した。約2mgの各ポリARNAを22Mのホルムアルデヒド/リン酸塩緩衝液50mMのNa2HPO4、50mMのNaH2PO4、50mMのNaOAc、1mMのEDTAおよび22Mのホルムアルデヒド中で変性し、ホルムアルデヒド/リン酸塩緩衝液中の15のアガロースミニゲルStratageneCloningSystems、カリフォルニア州ラジョラ電気泳動により分離した。RNAをニトランフィルターSchleicherSchuell、ニューハンプシャイヤー州ケーネ上に一夜ブロットし、フィルターをSTRATLALINKERue紫外線架橋装置StratageneCloningSystems中で紫外線架橋し1200ミリジュール、次いで80°Cにおいて1時間ベーキングした。ブロットをTACI配列番号21またはBCMA配列番号24プローブでプロービングした。TACIを表す15kbのバンドはCD19細胞においてのみ検出された。BCMAを表す12kbの転写物がCD8、CD19およびMLR細胞においてわずかに検出された。前述したように、K-562細胞赤血球系、ATCCCCL243、HUT78細胞T細胞、ATCCTIB161、Jurkat細胞T細胞、DAUDIバーキットヒトリンパ腫、Clontech、カリフォルニア州パロアルト、RAJIバーキットヒトリンパ腫、ClontechおよびHL60単球からのポリARNAを使用して作ったブロット上で、追加のノザンブロット分析を実施した。TACIに対応する15kbの転写物がRaji細胞において検出された。BCMAに対応する12kbの転写物がDauji、RajiおよびHut78細胞において検出された。PCRをベースとするスクリーンを使用して、ヒトまたはネズミTACIおよびヒトBCMAを発現する組織を同定した。ヒトおよびネズミRapid-Scan商標遺伝子発現パネルOriGeneTechnologies,Inc、マリイランド州ロックビレを製造業者のインストラクションに従いスクリーニングした。エクソン連結をスパンし、かつネズミTACIに対応する272bpのフラグメントを産生するように、オリゴヌクレオチドプライマーZC24200配列番号27およびZC24201配列番号28を設計した。発現は脾臓、胸腺、肺、乳房、心臓、筋肉、皮膚、副腎、胃、小腸、脳、卵、前立腺および胚において検出された。約500および800bpの追加のバンドが多数の組織において検出された。エクソン連結をスパンし、かつヒトTACIに対応する204bpのフラグメントを産生するように、オリゴヌクレオチドプライマーZC24198配列番号29およびZC24199配列番号30を設計した。発現は脾臓、脳、心臓、肝臓、結腸、肺、小腸、筋肉、胃、精巣、胎盤、唾液腺、副腎、膵臓、末梢血リンパ球および骨髄において検出された。エクソン連結をスパンし、かつヒトBCMAに対応する329bpのフラグメントを産生するように、オリゴヌクレオチドプライマーZC24271配列番号31およびZC24272配列番号32を設計した。発現は脳、脾臓、結腸、肺、小腸、胃、卵、精巣、唾液腺、副腎、前立腺、末梢血リンパ球、骨髄および胎児肝臓において検出された。エクソン連結をスパンし、かつネズミBCMAに対応する436bpのフラグメントを産生するように、オリゴヌクレオチドプライマーZC24495配列番号33およびZC24496配列番号34を設計した。発現は肝臓において検出された。実施例6.TACIIgおよびBCMAIg融合ベクターの製造Igガンマ1Fc4フラグメントの構築TACIIg融合タンパク質を製造するために、ヒトIgG1のFc領域ヒンジ領域およびCH2およびCH3ドメインを修飾してFcレセプターFcgRIおよび補体C1g結合機能を除去した。ヒトIgG1Fcのこの修飾されたバージョンをFc4と呼んだ。オリゴプライマーZC10134配列番号43およびZC10135配列番号44を使用するPCRにより、ヒト胎児肝臓ライブラリーClontechからFc領域を単離した。PCRを使用してFc領域内に突然変異を導入してFcgRI結合を減少させた。FcgRI結合部位LeuLeuGlyGlyをBaum他、EMBOJ13:39924001、1994に従いAlaGluGlyAla配列番号45のアミノ酸残基38~41突然変異させて、FcgRI結合を減少させたDuncan他、Nature332:5634、1988。オリゴヌクレオチドプライマーZC15345配列番号46およびZC15347配列番号47を使用して突然変異を導入した。50μlの最終体積に、570ngのIgFc鋳型、5μlの10×Pfu反応緩衝液Stratagene、8μlの125mMのdNTPs、31μlのdH2O、2μlの20mMのZC15345配列番号46およびZC15347配列番号47を添加した。等しい体積の鉱油を添加し、反応を94°Cに1分間加熱した。Pfuポリメラーゼ25単位、Stratageneを添加し、次いで25サイクルの94°Cにおいて30秒間、55°Cにおいて30秒間、72°Cにおいて1分間、および引き続いて72°Cにおいて7分間エクステンションを実施した。反応生成物を電気泳動させ、約676bpの予測されたサイズに対応するバンドが検出された。バンドをゲルから切除し、QIAGENQIAquickTMゲル抽出キットQiagenを製造業者のインストラクションに従い使用して回収した。また、PCRを使用してAla→Ser配列番号45のアミノ酸残基134およびPro→Ser配列番号45のアミノ酸残基135の突然変異を導入して、補体C1g結合および/または補体固定DuncanおよびWinter、Nature332:788、1988および停止コドンTAAを減少させた。鋳型としてFcγRI結合側突然変異IgFc配列を使用して、2回の第1ラウンドの反応を実施した。50μlの最終体積に、1μlのFcγRI結合側突然変異IgFc鋳型、5μlの10×Pfu反応緩衝液Stratagene、8μlの125mMのdNTPs、31μlのdH2O、2μlの20mMのZC15517配列番号48、配列番号45のヌクレオチド26において開始する5プライマーおよび2μlの20mMのZC15530配列番号49、配列番号45のヌクレオチド405において開始する3プライマーを添加した。第2反応は2μlの各20mMのストックのオリゴヌクレオチドプライマーZC15518配列番号50、配列番号45のヌクレオチド388において開始する5プライマーおよびZC15347配列番号47、3プライマーを含有して、Ala→Ser突然変異、XbaI制限部位および停止コドンを導入した。等しい体積の鉱油を添加し、反応を94°Cに1分間加熱した。Pfuポリメラーゼ25単位、Stratageneを添加し、次いで25サイクルの94°Cにおいて30秒間、55°Cにおいて30秒間、72°Cにおいて1分間、および引き続いて72°Cにおいて7分間エクステンションを実施した。反応生成物を電気泳動させ、それぞれ、約370および約395bpの予測されたサイズに対応するバンドが検出された。バンドをゲルから切除し、QIAGENQIAquickTMゲル抽出キットQiagenを製造業者のインストラクションに従い使用して回収した。第2ラウンドの反応を実施して上記フラグメントを結合し、5BamHI制限部位を付加した。50μlの最終体積に、30μlのdH2O、8μlの125mMのdNTPs、5μlの10×Pfuポリメラーゼ反応緩衝液Stratageneおよび1μlの2回の第1の2つのPCR生成物の各々を添加した。等しい体積の鉱油を添加し、反応を94°Cに1分間加熱した。Pfuポリメラーゼ25単位、Stratageneを添加し、次いで5サイクルの94°Cにおいて30秒間、55°Cにおいて30秒間、および72°Cにおいて2分間を実施した。温度を再び94°Cにし、2μlの各20mMのストックのZC15516配列番号51、配列番号45のヌクレオチド1において開始する5プライマーおよびZC15347配列番号47を添加し、次いで25サイクルの94°Cにおいて30秒間、55°Cにおいて30秒間および72°Cにおいて1分間、および引き続いて72°Cにおいて最後の7分間エクステンションを実施した。反応生成物をゲル電気泳動により可視化した。予測されたサイズに対応する789bpのバンドが検出された。TACIFc4およびBCMAFc4発現ベクターの構築酵母中の相同的組換えにより、TACIFc4およびBCMAFc4融合タンパク質を含有する発現プラスミドを構築した。配列番号5のヌクレオチド15~ヌクレオチド475のポリヌクレオチド配列を含むTACIcDNAのフラグメントをPCRにより単離した。TACIフラグメントの製造に使用した2つのプライマーは次の通りであった:140bpsの5ベクターフランキング配列およびTACIフラグメントのアミノ末端に対応する17bpsを含有するプライマー配列番号52;240bpsのフランキングFc4配列に対応する3末端およびTACIフラグメントのカルボキシル末端に対応する17bpを含有するプライマー配列番号53。100μlの最終体積に、10ngのTACI鋳型、10μlの10×Taqポリメラーゼ反応緩衝液PerkinElmer、8μlの25nMのdNTPs、78μlのdH2O、2μlの各20mMのストックのオリゴヌクレオチドプライマー配列番号52および配列番号53、およびtaqポリメラーゼ25単位、LifeTechnologyを添加した。等しい体積の鉱油を添加し、反応を94°Cに2分間加熱し、次いで25サイクルの94°Cにおいて30秒間、65°Cにおいて30秒間、65°Cにおいて30秒間、72°Cにおいて1分間、および引き続いて72°Cにおいて5分のエクステンションを実施した。配列番号7のヌクレオチド219~ヌクレオチド362のポリヌクレオチド配列を含むBCMAcDNAのフラグメントをPCRにより単離した。BCMAフラグメントの製造に使用した2つのプライマーは次の通りであった:40bpsの5ベクターフランキング配列およびBCMAフラグメントのアミノ末端に対応する17bpsを含有するプライマー配列番号54;および40bpsのフランキングFc4配列に対応する3末端およびBCMAフラグメントのカルボキシル末端に対応する17bpを含有するプライマー配列番号55。100μlの最終体積に、10ngのBCMA鋳型、10μlの10×Taqポリメラーゼ反応緩衝液PerkinElmer、8μlの25nMのdNTPs、78μlのdH2O、2μlの各20mMのストックのオリゴヌクレオチドプライマー配列番号54および配列番号55を添加した。等しい体積の鉱油を添加し、反応を94°Cに2分間加熱し、次いで25サイクルの94°Cにおいて30秒間、65°Cにおいて30秒間、72°Cにおいて1分間、および引き続いて72°Cにおいて5分のエクステンションを実施した。TACIおよびBCMA融合タンパク質の各々について1つの、Fc4フラグメントをコードするcDNAを含有するフラグメントを同様な方法において構築した。TACIについて、Fc4フラグメントの製造において使用した2つのプライマーは次の通りであった上流および下流:40bpsの5TACIフランキング配列およびFc4のアミノ末端に対応する17bpsを含有するオリゴヌクレオチドプライマー配列番号56;および40bpsのフランキングベクター配列に対応する3末端およびFc4フラグメントのカルボキシル末端に対応する17bpsを含有するオリゴヌクレオチドプライマー配列番号57。BCMAについて、Fc4フラグメントの製造において使用した上流プライマーは、40bpsの5BCMAフランキング配列およびFc4のアミノ末端に対応する17bpsを含有するオリゴヌクレオチドプライマー配列番号58。BCMA構築物についてFc4フラグメントの下流プライマーは、TACI-Fc4について前述のものと同一であった配列番号57。100μlの最終体積に、10ngの前述のFc4鋳型、10μlの10×Taqポリメラーゼ反応緩衝液PerkinElmer、8μlの25nMのdNTPs、78μlのdH2O、2μlの各20mMのストックのTACIについてオリゴヌクレオチド配列番号56および配列番号57およびBCMAについてオリゴヌクレオチド配列番号58および配列番号57、およびtaqポリメラーゼ25単位、LifeTechnologyを添加した。等しい体積の鉱油を添加し、反応を94°Cに2分間加熱し、次いで25サイクルの94°Cにおいて30秒間、65°Cにおいて30秒間、72°Cにおいて1分間、および引き続いて72°Cにおいて5分のエクステンションを実施した。分析のために08のLMPアガロースゲルSeaplaqueGTG上に1×TBE緩衝液とともに、前述の100μlのPCR反応の各々の10μlを展開させた。5μlの1MNaClおよび250μlの無水エタノールの添加により、各PCR反応の残りの90μlを沈降させた。プラスミドpZMP6をSmaIで切断して、それをポリリンカーとして線状化した。プラスミドpZMP6をプラスミドpCZR199AmericanTypeCultureCollection、バージニア州マンナッサス、ATCC98668から誘導され、そしてCMV即時型プロモーター、マウス免疫グロブリン重鎖遺伝子座の可変領域からのコンセンサスイントロン、コーディング配列の挿入のための多重制限部位およびヒト成長ホルモンターミネーターを含有する哺乳動物発現ベクターである。また、このプラスミドは大腸菌Ecoli複製起点、sCD40プロモーター、エンハンサーおよび複製起点を有する哺乳動物選択可能なマーカー発現単位、DHFR遺伝子およびsCD40ターミネーターを有する。メタロチオネインプロモーターをCMV即時型プロモーター、およびオープンリーディングフレームの5末端におけるKozac配列で置換することによって、ベクターpZMP6をpCZR199から構築した。100μlのコンピテント酵母細胞Scerevisiaeを、ほぼ1μgのTACIまたはBCMA細胞外ドメインおよび各々との組換えに適当なFc4PCRフラグメントの各々、および100ngのSmaI消化pZMP6ベクターを含有する10μlと組合わせ、02cmのエレクトロポレーションキュベットに移した。酵母/DNA混合物を075kV5kV/cm、∞オーム、25μFにおいてエレクトロパルスした。各キュベットに、600μlの12Mのソルビトールを添加し、酵母を2×300μlのアリコートでURA-Dプレート上にプレートし、30°Cにおいてインキュベートした。約48時間後、単一プレートからのUra酵母形質転換体を1μlのH2Oの中に再懸濁させ、短時間回転して酵母細胞をペレット化した。細胞ペレットを1mlの溶解緩衝液2トリトンX-100、1SDS、100mMNaCl、10mMTris、pH80、1mMEDTAの中に再懸濁させた。300μlの酸洗浄ガラスビーズおよび200μlのフェノール-クロロホルムを含有するエッペンドルフ管に、500μlの溶解混合物を添加し、1分の間隔で2または3回渦形成し、次いでエッペンドルフ遠心機中で最大速度で5分間回転した。300μlの水性相を新しい管に移し、DNAを600μlのエタノールEtOHで沈降させ、次いで4°Cにおいて10分間遠心した。DNAペレットを100μlのH2Oの中に再懸濁させた。05~2mlの酵母DNAプレプおよび40μlのDH10B細胞を使用して、エレクトロコンピテント大腸菌Ecoli細胞DH10B、GibcoBRLの形質転換を実施した。細胞を20kV、25mFおよび400オームにおいてエレクトロパルスした。エレクトロポレーション後、1mlのSOC2のバクトトリプトンDifco、ミシガン州デトロイト、05の酵母エキスDifco、10mMのNaCl、25mMのKCl、10mMのMgCl2、10mMのMgSO4、20mMのグルコースを4×LBAMPプレートLBブロスLennox、18のバクト寒天Difco、100mg/lのアンピシリン上に250μlのアリコートでプレートした。TACIFc4またはBCMAFc4について正しい発現構築物を収容する個々のクローンを制限消化により同定して、インサートの存在を確認し、種々のDNA配列が互いに対して正しく結合されていることを確証した。陽性クローンのインサートを配列分析した。QiagenMaxiKitQiagenを製造業者のインストラクションに従い使用して、より大きい規模のプラスミドDNAを単離する。実施例7.TACIFc4およびBCMAFc4の哺乳動物発現BHK570細胞ATCCNoCRL10314を10cmの培養皿の中にプレートし、DMEM/PBS培地DMEM、Gibco/BRL、高グルコースGibcoBRL、マリイランド州ガイサースバーグ、5胎仔ウシ血清Hyclone、ユタ州ローガン、1mML-グルタミンJRHBiosciences、カンサス州レネクサ、1mMピルビン酸ナトリウムGibcoBRL中で37°C、5CO2においてほぼ50~70のコンフルエンシーに成長させた。次いで細胞をLipofectamine商標GibcoBRLを使用して無血清SF培地処方物DMEM、10mg/mlのトランスフェリン、5mg/mlのインスリン、2mg/mlのフェツイン、1のL-グルタミンおよび1のピルビン酸ナトリウム中でプラスミドTACI-Fc4/pZMP6またはBCMAFc4/pZMP6でトランスフェクトした。TACIFc4/pZMP6またはBCMA-Fc4/pZMP6を15mlの管の中にSF培地で640μlの全最終体積に希釈した。35μlのLipofectamine商標GibcoBRLを605μlのSF培地と混合した。Lipofectamine商標混合物をDNA混合物に添加し、室温においてほぼ30分間インキュベートした。5mlのSF培地をDNA:Lipofectamine商標混合物に添加した。細胞を1回5mlのSF培地でリンスし、吸引し、DNA:Lipofectamine商標混合物に添加した。細胞を37°Cにおいて5時間インキュベートし、次いで64mlのDMEM/10FBS、1PSN培地を各プレートに添加した。プレートを37°Cにおいて一夜インキュベートし、DNA:Lipofectamine商標混合物を次の日に新鮮な5FBS/DMEM培地と置換した。トランスフェクション後5日に、細胞を選択培地DMEM/5FBS、1L-グルタミン、1ピルビン酸ナトリウム中でT-162フラスコの中に分割した。トランスフェクション後ほぼ10日に、各トランスフェクションからの2×150mmの培養皿のメトトレキセート耐性コロニーをトリプシン処理し、細胞をプールし、T-162フラスコの中にプレートし、大規模培養に移した。実施例9.ztnf4のトランスジェニック発現成体の生殖能力のある雄B6C3f1、青春期直前の生殖能力のある雌B6C3f1、精管切除雄B6D2f1、および成体生殖能力のある雌B6D2f1すべてはRaconicFarms、ニューヨーク州ジャマンウン、からを使用して、ztnf4遺伝子を発現するトランスジェニック動物を作った。PregnanntMaresSerumコナドトロピンSigma、ミゾリー州セントルイスおよびヒトChorionicGonadotrpinhCGSigmaを使用して、青春期直前の生殖能力のある雌を過剰排卵させた。引き続いて過剰排卵させた雌を成体の生殖能力のある雄と交配させ、膣栓の存在により交尾を確認した。受精卵を外科用スコープLeicaMZ12StereoMicroscope、Leica、ドイツ国ウェッツラー下に収集した。次いでヒアウロニダーゼおよび5CO2、5O2、および90N2と37°CにおいてインキュベートしたウィッテンW640培地表8;すべての試薬はSigmaChemicalCoから入手可能である中で卵を洗浄した。マイクロインジェクションまで、卵を37°C/5CO2において貯蔵した。配列番号36および配列番号37のオリゴヌクレオチドのプライマーを使用して最適化開始コドンおよびフランキング5PmeIおよび3AscI部位を導入するようにPCRにより、全長のヒトTACIリガンドBlys配列番号35をコードする858bpのオープンリーディングフレームを増幅した。このPmeI/AscIフラグメントをpKFO24、B細胞および/またはT細胞制限トランスジェニックベクター[IgEmエンハンサーpEmSRからの690bpのNotI/XbaI;Bodrug他、EMBOJ13:2124-30,1994、IgVhプロモーターpJH1X-からの536bpのHincII/XhoIフラグメント;Hu他、JExpMed177:1681-90、1993、SV4016SイントロンpEmSRからの171bpのXhoI/HindIIIフラグメント、PmeI/AscIポリリンカー、およびヒト成長ホルモン遺伝子ポリアデニル化シグナル627bpのSmaI/EcoRIフラグメント;Seeburg、DNA1:239-49、1982を含有する]の中にサブクローニングした。トランスジーンインサートをプラスミドバックボーンからNotI消化およびアガロースゲル精製により分離し、前述のB6C3F1Tacマウスの交配からの受精卵を本質的に以前に記載されているように擬妊娠雌の中にマイクロインジェクトし、移植したMalik他、MolCellBiol15:2349-58、1995。レシピエントを対でカゴに戻し、19~21日間妊娠させた。出産後、分娩後19~21日経過させた後、雌雄鑑別および離乳させ、05cmのバイオプシー遺伝子型別のために使用するをきれいなハサミで尾から切り取る。商業的に入手可能なキットDNeasy96TissueKit;Qiagen、カリフォルニア州バレンシアを製造業者のインストラクションに従い使用して、尾の切り取り物からゲノムDNAを調製した。トランスジェニックベクターのヒト成長ホルモンhGH3UTR部分に対して設計されたプライマーを使用するPCRにより、ゲノムDNAを分析した。プライマーZC17251配列番号38およびZC17252配列番号39をhGHの368塩基対のフラグメントを増幅する。ヒト配列に対してユニークな領域ヒトおよびマウス成長ホルモン3UTRDNA配列の整列から同定されたを使用して、PCR反応がマウス配列を増幅しないことを保証した。さらに、プライマーZC17156配列番号40およびZC17157配列番号41は、ベクター配列に対してハイブリダイゼーションしかつcDNAインサートを増幅し、hGHプライマーと一緒に使用することができる。これらの実験において、トランスジーンについて陽性の動物からのDNAを2つのバンド、すなわち、hGH3UTRフラグメントに対応する368塩基対のバンドおよびcDNAインサートに対応する可変サイズのバンドを発生させた。いったん動物がトランスジェニックTGであると確証されたとき、TG雌を野生型マウスと一緒に、またはTG雄を1つまたは2匹の野生型雌と一緒に配置することによって、動物を同系交配系統の中に戻し交雑させる。子供が生まれ、これらを離乳させ、雌雄で分離し、それらの尾を遺伝子型別のために切り取った。生きている動物におけるトランスジーンの発現をチェックするために、生存バイオプシーを実施する。RNA溶液ハイブリダイゼーションアッセイを使用するか、あるいはABIPrism7700PEAppliedBiosystems,Inc、フォスターシティー、カリフォルニア州上で製造業者のインストラクションに従い実時間PCRを実施することによって、各トランスジーンのmRNA発現レベルの分析を実施した。細胞増殖およびフローサイトメトリー基本系統のマウスを種々の週齢において分析した。リンパ系組織のフローサイトメトリーFACS分析のために、乳鉢および乳棒を使用してリン酸塩緩衝液PBS中で注意して崩壊することによって、骨髄BM細胞を大腿および脛骨から単離した。細胞を再懸濁させ、受動的沈降により骨断片を分離し、1000×gにおいてペレット化した。ガラススライドの間で無傷の組織を破砕することによって、脾細胞、胸腺細胞、またはリンパ節細胞を獲得し、次いで再懸濁させ、BMについてのように細胞をペレット化した。細胞をFACS洗浄緩衝液FACSWBハンク均衡塩溶液、1BSA、10mMのHepes、pH74の中に20×106細胞/mlの濃度に再懸濁させた後染色した。染色するために、1×106細胞を5mlの管に移し、1mlのFACSWBで洗浄し、次いで1000×gにおいてペレット化した。次いで細胞を氷上で飽和量の適当なFITC-、PE-および/またはTriColorTC-結合モノクローナル抗体の存在下にFACSWB中の全体積100mlで20分間インキュベートした。細胞を15mlのWBで洗浄し、ペレット化し、次いで400mlのWBの中に再懸濁させ、CellQuestソフトウェアBectonDickinson、カリフォルニア州マウンテンビューを使用してFACSCaliburフローサイトメーター上で分析した。前方向FSCおよび側面SSC光散乱装置の検出器を線形目盛り上に設定したが、これに対して対数検出器をすべての3つの蛍光チャンネルFL-1、FL-2、およびFL-3について使用した。単一色で染色された細胞集団を使用する各実験のために、FLチャンネルの間でオーバーラップするスペクトルを使用した。すべての細胞を収集し、ディスクにアンゲートungateし、CellQuestソフトウェアを使用してデータを分析した。FSC対SSCプロファイルに基づいて電子的にゲーティングしたデータにより、RBCおよび死んだ細胞を排除した。フルオレセインイソチオシアネートFITC結合抗CD8モノクローナル抗体mAbクローン53-67およびフィコエリトリンPE結合抗CD4クローンRM4-5、抗CD5クローン53-73。抗CD19クローン1D3、および抗シンデカンクローン281-2モノクローナル抗体をPharMingenカリフォルニア州サンディエゴから購入した。TriColorTC結合抗CD45R/B220モノクローナル抗体クローンRA3-6B2をCaltagから購入した。リンパ系区画においてztnf4を過剰に発現するトランスジェニックマウスは、増加した数の末梢B細胞、増加した形質細胞および増加したレベルの血清免疫グロブリンを発生させる。これらのトランスジェニック動物は、脾臓、リンパ節および胸腺において増加した数のB200細胞を有する。増加した数の脾B細胞は、慣用B-2細胞および通常稀な集団のB-1細胞の両方を包含する。一般に、B-1細胞は大部分腹膜および他の体腔に制限され、低いアフィニティーの自己反応性抗体を産生し、しばしば自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデスSLEの発生に関係づけられてきている。高齢のトランスジェニック動物は、自己抗体を産生し、全身性エリテマトーデスの特徴を示すタンパク尿および硬化性糸球体を発生する。第5A図は、後述するように調製し、抗B220-TCで染色し、フローサイトメトリーにより分析した脾臓上部パネル、腸間膜リンパ節中央パネル、および骨髄下部パネルの単細胞懸濁液を示す。B220細胞の百分率に血球計で計数した生きているトリパンブルー排除細胞の総数を掛けることによって、各組織におけるB220の数を計算した。各バーは個々のztnf4トランスジェニックマウスTg、陰影をつけたバーまたは非Tg同腹子対照マウス白抜きバーを表す。第5B図は、示した分子DC5、CD4およびCD8に対するモノクローナル抗体で染色し、次いでフローサイトメトリーにより分析した、ztnf4TG右側パネルまたは非TG同腹子左側列、脾臓中央列、および胸腺下部列から単離された細胞を示す。示されたデータはゲーティングして死亡した細胞およびRBCは排除されている。第5C図は、6~23週齢の範囲のztnf4トランスジェニックマウスからの血清中の全IgG、IgM、およびIgEのレベルを示す。第5D図は、対照同腹子からの正常の糸球体に比較して、ztnf4トランスジェニックマウスからのHE染色腎臓切片において同定された糸球体のアミロイド沈着および厚くなった糸球体間質を示す。第5E図は、Mckay他JExpMed190:16971710、1999の報告に類似する、ztnf4トランスジェニックマウスにおけるエフェクターT細胞の増加を示す。ztnf4を過剰発現するトランスジェニック動物の中に、可溶性TACIBR43x2またはBCMA-Ig融合物を注射したIP、IMまたはIV、リンパ球系組織のフローサイトメトリーFACS分析を使用して、脾臓、リンパ節および胸腺におけるB220細胞の数の変化を同定する。実施例10.直接的結合性ELISAinvitroにおけるztnf4の生物学的活性に結合しかつそれを阻害する可溶性TACIIgまたは可溶性BCMAIgの能力を特性決定するために、直接的結合性ELISAを開発した。96ウェルのプレートを1μg/mlのヤギ抗ヒトIgGJacksonLabs、マサチュセッツ州バールハーバーでELISAA緩衝液01MのNa2HCO3、pH96、002のNaN3中の被覆し、4°Cにおいて一夜インキュベートした。TACI、BCMA、および対照として無関係のTNFレセプター、例えば、ztnfr10配列番号42を10μg/mlから320ng/mlゼロに5倍希釈することによって力価決定し、25、05または01μg/mlのビオチニル化ztnf4または陰性対照としてオバルブミンと共インキュベートし、室温において1時間インキュベートした。次いで共インキュベートしたレセプター-ビオチニル化リガンド混合物を、ヤギ抗ヒトIgG被覆した96ウェルのプレートに添加した。次いでプレートを洗浄しELISAC、500μlのTween20SigmaChemicalCo、ミゾリー州セントルイス、200mgのNaN3、PBSで1リットルの最終体積にした、SuperblockPierce、イリノイ州ロックフォードでブロックした。次いでプレートを37°Cにおいて2時間インキュベートした。プレートを再びELISACで洗浄し、次いで100μl/ウェルのnetravidinHRPをELISABそれぞれ、1または2について5または10μgのBSASigma、250μlのTween20Sigma、100mgのNaN3、リン酸塩緩衝液pH72PBS、Sigmaで500mlの最終体積にした。あるいは、緩衝液はELISAC緩衝液中で1または2のBSAとして構成した中で1:10000に添加した。次いでプレートを室温において10分間OPDで展開し、492において読んだ。実施例11.生物学的活性のアッセイヒトB細胞の可溶性TACI-FC阻害、可溶性ztnf4の刺激を測定するために、生物学的活性のアッセイを展開した。CD19磁気ビーズおよびVarioMacs磁気分離システムMiltenyiBiotecAuburn、カリフォルニア州を製造業者のインストラクションに従いを使用して、B細胞を末梢血単核細胞PBMNCから単離した。精製したB細胞を可溶性ztnf425ng/mlおよび組換えヒトIL-410ng/ml、Pharmingenと混合し、丸底96ウェルのプレート上に1×105細胞/ウェルにおいてプレートしたトリプリケート。可溶性TACI-FCを5μg/mlから6ng/mlに希釈し、B細胞と5日間インキュベートし、第4日に1μCiの3H-チミジンAmersham/ウェルで一夜パルスした。対照として、可溶性TACI-FCをまたB細胞およびIL-4とztnf4の非存在下にインキュベートした。プレートをPackardプレート収集器で収集し、Packardリーダーにより計数した。TACI-Ig可溶性レセプターは、投与量従属的方法でinvitroにおいてB細胞増殖を刺激する可溶性ztnf4の能力を阻害した。10倍モル過剰のTACIIgは、IL4の存在下に可溶性ztnf4に応答してヒトB細胞の増殖を完全に阻害する。実施例12.ORIGINアッセイ正常個体に関する疾患の症状例えば、SLE、慢性関節リウマチを有する個体におけるztnf4のレベルを、電気化学的ルミネセンスアッセイにより測定した。10ng/ml、1ng/ml、01ng/ml、001ng/mlおよび0ng/mlにおいて可溶性ヒトztnf4から作成した標準曲線をORIGIN緩衝液Igen、マリイランド州ガイサースバーグ中で調製した。血清試料をORIGIN緩衝液中で希釈した。オリジンアッセイ緩衝液IGEN中で1μg/mlに希釈したビオチニル化ウサギ抗ヒトztnf4-NFBV抗体およびオリジンアッセイ緩衝液IGEN中で1μg/mlに希釈したルテニル化ウサギ抗ヒトztnf4-NFBVポリクローナル抗体と、標準および試料を室温において2時間インキュベートした。インキュベーション後、試料を渦形成し、04mg/mlのストレプトアビジンDynabeadsDynal、ノールウェイ国オスロを標準および試料の各々に50μl/管で添加し、室温において30分間インキュベートした。次いで試料を渦形成し、試料をOrigin分析装置Igenで製造業者のインストラクションに従い読んだ。Originアッセイは電気化学的ルミネセンスに基づき、これは何であるか、これはどのように働くか、そしてこれは何を語るかのECLのリードアウトを生成する。糸球体腎炎および自己免疫疾患の進行した段階に進行した、NZBWF1/JおよびMRL/Mpj-Faslp商標マウスからの血清試料において、増大したレベルのztnf4が検出された。実施例13.SLEの自発的モデルにおける可溶性TACI-IgNZBWマウスはほぼ7~9月齢において自発的SLEについて症候性となる。平均、B細胞自己抗体産生がNZBWマウスにおいて高いと考えられるとき、TACIFcをNZBWマウスに投与して、5週にわたってB細胞に対するその抑制作用をモニターした。100匹の、8週齢マウスNZB×NZWF1マウスJacksonLabsを15匹のマウスの6グループに分割した。処置前に、マウスを尿タンパク質について1回/月モニターし、血液をCBCおよび血清バンキングのために抜き出した。血清を自己抗体についてスクリーニングする。タンパク尿は糸球体腎炎の特徴あるサインであるので、尿タンパク質レベルをディップスティックにより規則的間隔で研究過程にわたってモニターした。処置前に、動物を秤量した。マウスがほぼ5月齢のとき投与を開始した。マウスにベヒクルのみPBSまたはヒトIgG-FC対照タンパク質を3回/週で5週間腹腔内注射した。血液を投与の間に2回収集し、投与後少なくとも2回収集する。タンパク尿についての尿ディップスティック値および体重を投与開始後2週毎に取った。血液、尿のディップスティック値および体重を安楽死時に収集した。脾臓、胸腺、胆嚢を有する肝臓、左腎臓および脳の重量を測定した。脾臓および胸腺をFACSおよび組織学のために分割した。顎下唾液腺、腸間膜リンパ節鎖、胆嚢を有する肝臓小葉、大脳皮質膜および大腸、胃、小腸、膵臓、右腎臓、副腎、気管および食道を有する舌、心臓および肺をまた組織学のために収集する。図6は、SLEの発生と相関するNZBWF1およびMRL/lpr/lprマウスからの血清中のztnf4のレベルの増加を示す。第6A図の上のパネルは、ztnf4血清レベルと週齢、10~40週齢範囲の68匹のNZBWF1マウス、および10週齢および30週齢のNZB/B対照マウスとの相関を示す。中央パネルは、対照NZB/Bマウスに比較して、NZBWF1マウスにおける3つの範囲、すなわち、微量~20mg/dlT-30、100~300ng/dlおよび2000mg/dlのタンパク尿の相関を示す。下のパネルは、対照NZB/Bマウスに比較して、NZBWF1マウスにおける抗dsDNA抗体の種々の力価とztnf4レベルとを示す。図6Bは、18~24週齢範囲の23匹のMRL/lpr/lprマウスおよび10匹の11週齢のMRL/MpJマウスに対して行った同一相関を示す。図7は尿分析の結果を示す。ディップスティックの読みが>100mg/dlである場合、マウスはタンパク尿を有すると考えた。APBS、BヒトIgGFC、100mg、CヒトIgGFC、20mg、DヒトTACI-IgG、100mg、およびEヒトTACI-IgG、20mg。可溶性TACI-IgG融合物で処置したマウスはタンパク尿の減少を示した。処置した動物からの末梢血の分析において、FC20および100mgおよびPBS処置マウスに比較したとき、処置開始後2週において、白血球およびリンパ球の計数はTACI-FC20および100mg処置マウスにおいて減少することが明らかにされた。処置後6週に抜き出した末梢血のFAC分析リンパ球ゲートは試料の中に存在するB細胞の百分率の減少を示し始め最後の処置を投与した後2週そして百分率の劇的な減少を示した。最後の処置を投与した後5週にB細胞レベルはなお減少したが、劇的ではなかった。表10は各処置グループ表10におけるマウスについて平均および標準偏差を提供する。末梢血中のB細胞レベルの百分率の減少は、また、処置の2週に入って観測された。実施例14.正常マウスにおける可溶性TACI-IgTACI-FCをBalbCマウスに投与して、正常マウスに対するその作用をモニターした。60匹の8週齢の雌BalbCマウスHSDを5匹の12グループに分割した。処置前に、マウスを秤量し、血液をCBCおよび血清バンキングのために抜き出した。グループ1~9にベヒクルのみPBSまたはヒトIgG-FC対照タンパク質またはTACI-FC4被験タンパク質を毎日12日間腹腔内注射IPし、第14日に殺した。グループ10および11に、3回/週2週間腹腔内注射し、第14日に殺した。血液を第7日および第12日に収集した。血液および体重を安楽死時に収集した。脾臓、胸腺、および脳の重量を測定した。脾臓および胸腺をFACSおよび組織学のために分割した。皮膚、脾臓、腸間膜LN鎖、顎下唾液腺、卵巣、子宮、頸、膀胱、腸間膜リンパ節鎖、胆嚢を有する肝臓小葉、大脳皮質膜および大腸、胃、小腸、膵臓、右腎臓、副腎、気管および食道を有する舌、心臓、胸腺、大腿筋肉、左および右大腿骨、脳を、また、組織学のために収集する。実施例13において前述したように、FC4またはPBS単独で処置しかつCBCによりFACSにより分析したものに比較して、すべてのTACI-FC4処置試料から採った末梢血細胞において第7日CBCによるおよび第12日FACSを使用するに、B細胞百分率の有意な減少が見られた。さらに、第14日にFC4処置したマウスからのものに比較して、TACI-FC4で処置した動物から採った脾臓中のB細胞は50減少した。実施例15.抗dsDNAELISA自己免疫性は高いレベルの抗二本鎖DNA抗体により特性決定される。ztnf4を過剰に発現するマウスおよびNZBWマウスの両方における抗dsDNA抗体のレベルを測定するために、ELISAアッセイを開発した。96ウェルのマイクロタイタープレートNuncをポリ-L-リシンSigma01MのTris緩衝液pH73中の20μl/mlで75μl/ウェルにおいて被覆し、室温において一夜インキュベートした。次いでプレートをdH2O中で洗浄し、ポリdAdTSigma01MのTris緩衝液pH73中の20μl/mlで75μl/ウェルにおいて被覆し、室温において60分間インキュベートした。次いでプレートをdH2O中で洗浄し、Tris緩衝液中の2BSASigmaで室温において30分間ブロックし、次いでdH2O中で最後に洗浄した。実施例10に記載するztnf4トランスジェニックマウスおよび実施例11に記載するNZBWマウスから、血清試料を採った。血清試料をTris緩衝液中の1BSA/2BGGCalbiochem中で1:50に希釈した。次いで希釈試料を被覆したプレートの中に1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200および1:640050μl/ウェルで滴定し、室温において90分間インキュベートした。次いでプレートをdH2O中で洗浄し、そして1BSA/2BGG中で1:1000に希釈したヤギ抗マウスIgGFcHRPCappelを50μl/ウェルにおいて添加した。プレートを室温において60分間インキュベートした。プレートをdH2O中で5×洗浄し、OPD、1タブレット/10mlのDnovoDで現像し、100μl/ウェルでプレートした。現像剤を1NH2SO4、100μl/ウェルで停止させ、ODを492nmにおいて読んだ。図8は、NZBWF132週齢およびMRL/lpr/lpr19週齢マウスからの血清中で検出されたレベルに比較して、2匹のztnf4トランスジェニックマウス23週齢、2匹の非トランスジェニック同腹交配体における抗dsDNAレベルを示す。実施例16.ELEの自発的モデルにおける可溶性TACIIg25匹の雌PLxSJLF1マウス12週齢、JacksonLabsに、完全フロインドアジュバント中で処方した125μg/マウスの抗原ミエリンプロテオリピドタンパク質、PLP、残基139~151を皮下注射した。マウスを5匹のマウスの5グループに分割する。百日咳トキシン400ngを第0日および第2日に腹腔内注射する。グループに1×、10×、または100×投与量のTACI、BCMAまたはBR43x2を与え、1つのグループにベヒクルのみを与え、そして1つのグループを処置しない。予防的処置は第0日に開始し、関与的処置は第7日に、あるいは臨床的徴候の発現において開始する。疾患の徴候、体重喪失、および麻痺はほぼ10~14日に発現し、約1週連続する。体重を収集し、それらの症状の程度に対応する臨床的スコアを割当てることによって、動物を評価する。EAEの臨床的徴候は接種の10~14日以内に出現し、ほぼ1週間持続する。研究の終わりにおいて、すべての動物をガスの過剰投与により安楽死させ、剖検する。脳および脊髄を組織学のために収集するか、あるいはmRNA分析のために凍結させる。体重および臨床的スコアのデータを個体およびグループによりプロットする。臨床的スコア0正常05弱い、尾の緊張が減少するが、非存在ではない。1力のない尾マウスを尾の基部で持ち上げるとき直立しない。2力のない、弱い脚尾を持ち上げることができない、後ろ脚で直立するが、脚は不安定である。3麻痺体重下に脚で座ることができず、脚でこいで後方に歩くことができない。4麻痺後ろ脚を後方に動かすことができない、歩こうとしたとき、脚を引きずる。5四肢麻痺前脚の麻痺または円形パターンの歩き、頭を傾けることができる。6瀕死完全に麻痺、食物または水に到達することができない、動物を殺す。実施例17.慢性関節リウマチのTACIFCおよびCIAモデル8週齢の雄DBA/1JマウスJacksonLabsを5マウス/移植片拒絶反応のグループに分割し、3週の間隔で50~100μlの1mg/mlのコラーゲンヒヨコまたはウシ由来を2回皮下注射する。1匹の対照にコラーゲンを注射しない。第1注射を完全フロインドアジュバント中で処方し、第2注射を不完全フロインドアジュバント中で処方する。第2注射時にまたはその前に、あるいは動物が少なくとも24時間持続する2またはそれより大きい臨床的スコアを発生した後、TACIFCを予防的に投与する。第2コラーゲン注射後、通常2~3週以内に、動物は関節炎の症候を示し始める。足の厚さをキャリパーで測定し、各足に対する臨床的スコア0~3を評価することによって、疾患の程度を各足において評価する。臨床的スコア、0正常、1足指の炎症、2軽度の足の炎症、3中程度の足の炎症、および4重度の足の炎症。1組の期間、使用7日間に確立された疾患を有するようになった後、動物を安楽死させる。足を組織学またはmRNA分析のために収集し、そして血清を免疫グロブリンおよびサイトカインのアッセイのために収集する。実施例18.中和性TACI抗体2匹の雌ニュージーランド白ウサギをペプチド、huztnf41SAGIAKLEEGPELQLAIPRE配列番号59またはhuztnf42SFKRGSALEEKENKELVKET配列番号60で免疫化することによって、ポリクローナル抗ペプチド抗体を調製した。AppliedBiosystems431A型ペプチド合成装置AppliedBiosystems,Inc、フォスターシティー、カリフォルニア州を製造業者のインストラクションに従い使用して、ペプチドを合成した。次いでペプチドを担体タンパク質キーホールリンペットヘモシアニンKLHにマレイミド活性化により複合化した。ウサギの各々に完全フロインドアジュバント中の200μgのペプチドを初期腹腔内ip注射を与え、次いで3週毎に不完全フロインドアジュバント中の100μgのペプチドをブースターip注射した。第2ブースター注射3回の全注射の投与後7~10日に、動物を放血させ、血清を収集した。次いで動物にブースター投与し、3週毎に放血させた。抗体ターゲットとして抗体配列番号59および60をつくるために使用した1μg/mlのペプチドを使用するELISA力価チェックにより、ztnf4ペプチド特異的ウサギ血清を特性決定した。huztnf4-1ペプチド配列番号59に対する2つのウサギ血清は、1:1E51:100000の希釈でそれらの特異的ペプチドに対する力価を有する。huztnf4-2ペプチド配列番号60に対する2つのウサギ血清は、1:1E5の希釈でそれらの特異的ペプチドに対して、そして組換え全長のタンパク質バキュロウイルスhuztnf4sNFBvにおいてつくられたN末端のFLAGタッグドztnf4およびBHK細胞においてつくられたC末端のFLAGタッグドztnf4に対して力価を有した。10mgの特異的ペプチド配列番号59または60/gのCNBrHAROSEを使用して調製されたCNBrHAROSE4Bタンパク質カラムPharmaciaLKBを使用してウサギ血清から、ztnf4ペプチド特異的ポリクローナル抗体をアフィニティー精製し、次いでPBS中の一夜20×透析した。抗体ターゲットとして1μg/mlの適当なペプチド抗原または組換え全長のタンパク質huztnf4sNFBvを使用するELISA力価チェックにより、ztnf4特異的抗体を特性決定した。その特異的抗原huztnf4-1ペプチド、配列番号59に対するウサギ抗huztnf4-1アフィニティー精製した抗体のより低い検出限界LLDは、5ng/mlの希釈である。その特異的抗原huztnf4-2ペプチド、配列番号60に対するウサギ抗huztnf4-2アフィニティー精製した抗体のより低い検出限界LLDは、05ng/mlの希釈である。組換えタンパク質huztnf4s-NF-Bvに対するウサギ抗huztnf4-2アフィニティー精製した抗体のより低い検出限界LLDは、5ng/mlの希釈である。マウスモノクローナル抗体をまた発生させ、ビオチン標識化可溶性ztnf4の阻害の阻害のために選択した。TACIモノクローナル抗体24814、24823、24824、または2463のいずれもBCMAに対するztnf4の結合をブロックしない。モノクローナル24823は、コンディショニングした培地を1:243に希釈したとき、10ng/mlのztnf4-ビオチンの結合を約50に減少させ、そして未希釈測定中で約2×に結合を減少させる。モノクローナル2463はコンディショニングした培地の1:243および1:181の希釈においてztnf4-ビオチンの結合を約50減に少させ、そして未希釈測定中で約5×に結合を減少させる。以上から、理解されるように、本発明の特定の態様を例示の目的で本明細書に記載したが、本発明の精神および範囲から逸脱しないで種々の変更が可能である。したがって、本発明は添付された特許請求の範囲による以外制限されない。"