"オルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤と、全体的な細胞ポリアミン含量を減少させるためのポリアミン経路を調節する薬剤と、を含む抗癌腫併用療法の有効性を予測するための方法であって、該併用療法で治療しようとする患者における組織ポリアミンレベル又は組織ポリアミン流入を評価することを含み、高組織ポリアミンレベル又は流入が、該治療の有効性が低いことを予測する、方法。全体的な細胞ポリアミン含量を減少させるためのポリアミン経路を調節する薬剤が、スペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストである、請求項1に記載の方法。前記組織ポリアミンレベル又は組織ポリアミン流入が、直腸粘膜組織、前立腺組織又は尿から決定される、請求項1に記載の方法。前記組織ポリアミンレベル又は組織ポリアミン流入が高くない場合に、前記併用療法で前記患者を治療することをさらに含む、請求項1に記載の方法。前記併用療法の前又は開始時に前記患者を低ポリアミン食に供することをさらに含む、請求項1に記載の方法。少なくとも一方のODC1プロモーター遺伝子アレルの位置316で前記患者の遺伝子型を調べる試験の結果を得ることをさらに含む、請求項1に記載の方法。前記結果が、前記遺伝子型を含有するレポートを受け取るか又は該遺伝子型を明らかにする患者病歴を取得することにより得られる、請求項6に記載の方法。前記試験が、前記患者のODC1プロモーター遺伝子の一方のアレルで位置316のヌクレオチド塩基を決定する、請求項6に記載の方法。前記試験が、前記患者のODC1プロモーター遺伝子の両アレルで位置316のヌクレオチド塩基を決定する、請求項6に記載の方法。前記オルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤が、α-ジフルオロメチルオルニチンDFMOである、請求項1から請求項9の何れか1項に記載の方法。前記スペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストが、アスピリン非含有非ステロイド抗炎症剤NSAIDである、請求項2から請求項10の何れか1項に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、選択的COX-2阻害剤である、請求項11に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、スリンダク又はセレコキシブである、請求項11に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、スリンダクである、請求項13に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、セレコキシブである、請求項13に記載の方法。オルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤及びスペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストを含む抗癌腫併用療法の有効性を予測するための方法であって、該併用療法で治療しようとする患者による食事性ポリアミン摂取を評価することを含み、高レベルの食事性ポリアミン摂取が、該治療の有効性が低いことを予測する、方法。全体的な細胞ポリアミン含量を減少させるためのポリアミン経路を調節する薬剤が、スペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストである、請求項16に記載の方法。前記食事性ポリアミンレベルが患者食事歴から判定される、請求項16に記載の方法。高食事性ポリアミンレベルが300μmolポリアミン/日以上として定義される、請求項16に記載の方法。前記食事性ポリアミンレベルが高くない場合、前記併用療法で前記患者を治療することをさらに含む、請求項16に記載の方法。前記併用療法開始前又は開始時に低ポリアミン食に前記患者を供することをさらに含む、請求項16に記載の方法。少なくとも1つのODC1プロモーター遺伝子アレルの位置316で前期患者の遺伝子型を決定する試験の結果を得ることをさらに含む、請求項16に記載の方法。前記結果が、前記遺伝子型を含有する報告を受け取るか又は該遺伝子型を明らかにする患者病歴を取得することにより得られる、請求項22に記載の方法。前記試験が、前記患者のODC1プロモーター遺伝子の一方のアレルで位置316のヌクレオチド塩基を決定する、請求項22に記載の方法。前記試験が、前記患者のODC1プロモーター遺伝子の両アレルで位置316のヌクレオチド塩基を決定する、請求項22に記載の方法。前記オルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤がα-ジフルオロメチルオルニチンDFMOである、請求項16から請求項25の何れか1項に記載の方法。前記スペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストがアスピリン非含有非ステロイド抗炎症剤NSAIDである、請求項17から請求項26の何れか1項に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、選択的COX-2阻害剤である、請求項27に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、スリンダク又はセレコキシブである、請求項27に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、スリンダクである、請求項29に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、セレコキシブである、請求項29に記載の方法。27.a患者による食事性ポリアミン摂取及び/又は該患者における組織ポリアミンレベルもしくは流入を評価することと、bオルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤と、全体的な細胞ポリアミン含量又は流入を減少させるためのポリアミン経路を調節する薬剤と、の併用有効量を該患者に投与することと、を含む、癌腫のある患者を治療するための方法。全体的な細胞ポリアミン含量を減少させるための前記ポリアミン経路を調節する薬剤が、スペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストである、請求項32に記載の方法。前記食事性ポリアミンレベルが患者食事歴から判定される、請求項32に記載の方法。高食事性ポリアミンレベルが300μmolポリアミン/日以上として定義される、請求項32に記載の方法。前記組織ポリアミンレベル又は流入が、直腸粘膜組織、前立腺組織又は尿から決定される、請求項32に記載の方法。前記併用療法開始前又は開始時に前記患者を低ポリアミン食に供することをさらに含む、請求項32に記載の方法。少なくとも一方のODC1プロモーター遺伝子アレルの位置316で前記患者の遺伝子型を決定する試験の結果を得ることをさらに含む、請求項32に記載の方法。前記結果が、前記遺伝子型を含有する報告を受け取るか又は該遺伝子型を明らかにする患者病歴を取得することにより得られる、請求項38に記載の方法。前記試験が、前記患者のODC1プロモーター遺伝子の一方のアレルで位置316のヌクレオチド塩基を決定する、請求項38に記載の方法。前記試験が、患者のODC1プロモーター遺伝子の両アレルで位置316のヌクレオチド塩基を決定する、請求項38に記載の方法。前記オルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤がα-ジフルオロメチルオルニチンDFMOである、請求項32から請求項41の何れか1項に記載の方法。前記スペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストがアスピリン非含有非ステロイド抗炎症剤NSAIDである、請求項33から請求項42の何れか1項に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、選択的COX-2阻害剤である、請求項43に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、スリンダク又はセレコキシブである、請求項43に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、スリンダクである、請求項45に記載の方法。前記アスピリン非含有NSAIDが、セレコキシブである、請求項45に記載の方法。DFMOが全身的に投与される、請求項42に記載の方法。スリンダク又はセレコキシブが全身的に投与される、請求項45に記載の方法。前記DFMO又は前記アスピリン非含有NSAIDが、経口、動脈内又は静脈内投与される、請求項42に記載の方法。前記DFMOが経口投与される、請求項50に記載の方法。DFMOの有効量が500mg/日である、請求項51に記載の方法。前記DFMOが静脈内投与される、請求項50に記載の方法。DFMOの有効量が約0.05から約5.0g/m2/日である、請求項53に記載の方法。前記DFMO及び前記アスピリン非含有NSAIDが経口投与用に製剤化される、請求項50に記載の方法。前記DFMO及び前記アスピリン非含有NSAIDが硬もしくは軟カプセル又は錠剤として製剤化される、請求項55に記載の方法。前記DFMO及び前記アスピリン非含有NSAIDが12時間ごとに投与される、請求項45に記載の方法。前記DFMO及び前記アスピリン非含有NSAIDが24時間ごとに投与される、請求項45に記載の方法。スリンダクの有効量が約10から約1500mg/日である、請求項46に記載の方法。スリンダクの有効量が約10から約400mg/日である、請求項59に記載の方法。スリンダクの有効量が150mg/日である、請求項59に記載の方法。DFMOがスリンダクの前に投与される、請求項45に記載の方法。DFMOがスリンダクの後に投与される、請求項45に記載の方法。DFMOがスリンダクの前及び後に投与される、請求項45に記載の方法。DFMOがスリンダクと同時に投与される、請求項45に記載の方法。DFMOが少なくとも2回目に投与される、請求項45に記載の方法。スリンダクが少なくとも2回目に投与される、請求項45に記載の方法。前記患者が固形腫瘍を有し、前記方法が該固形腫瘍の切除をさらに含む、請求項45に記載の方法。DFMO及びスリンダクが前記切除の前に投与される、請求項68に記載の方法。DFMO及びスリンダクが前記切除の後に投与される、請求項68に記載の方法。前記癌腫が、結腸直腸癌、乳癌、膵臓癌、脳腫瘍、肺癌、胃癌、血液癌、皮膚癌、精巣癌、前立腺癌、卵巣癌、肝臓癌又は食道癌、子宮頸癌、頭頸部癌、非メラノーマ皮膚癌、神経芽細胞腫及び膠芽細胞腫である、請求項1から請求項70の何れか1項に記載の方法。前記癌腫が結腸直腸癌である、請求項71に記載の方法。前記結腸直腸癌がステージIである、請求項72に記載の方法。前記結腸直腸癌がステージIIである、請求項72に記載の方法。前記結腸直腸癌がステージIIIである、請求項72に記載の方法。前記結腸直腸癌がステージIVである、請求項72に記載の方法。a患者による食事性ポリアミン摂取及び/又は該患者における組織ポリアミンレベルを評価することと、bオルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤とスペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストとの併用有効量を該患者に投与することと、を含む、以前に癌腫と診断されたことがある患者の再発を予防するための方法。前記患者が、癌腫瘍の外科的切除を以前に受けたことがある、請求項77に記載の方法。a患者による食事性ポリアミン摂取及び/又は該患者における組織ポリアミンレベルを評価することと、bオルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤とスペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストとの併用有効量を該患者に投与することと、を含む、患者における癌腫瘍を切除可能にする方法。段階bの後に、前記患者から前記腫瘍を切除することをさらに含む、請求項79に記載の方法。a患者による食事性ポリアミン摂取、該患者における組織ポリアミンレベル又は組織ポリアミン流入を評価することと、bオルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤とスペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストとの併用有効量を該患者に投与することと、を含む、癌腫の家族歴を有する患者において癌腫を予防するための方法。場合によっては患者のODC1プロモーター遺伝子型に基づき、例えばオルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤及びスペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストを含む抗癌腫併用療法など、ポリアミン阻害物質による化学的予防に対する補助的なストラテジーとして、いくつかの局面において、外因性ポリアミンを調節することが利用され得る。例えばオルニチンデカルボキシラーゼODC阻害剤と、全体的な細胞ポリアミン含量を減少させるためのポリアミン経路を調節する薬剤と、を含む抗癌腫併用療法の有効性を予測するために、いくつかの局面において、組織ポリアミンレベル又は組織ポリアミン流入を評価することが使用され得る。本発明はまた、いくつかの局面において、癌の発症を予防するための及び/又は、新規異常陰窩巣の形成、新規腺腫性ポリープの形成又は異形成のある新規腺腫などの癌リスク因子の発現を予防するための、前癌症状を示す個体への治療用化合物の送達も含む。このカテゴリーの細胞には、患者のODC1プロモーター遺伝子型に少なくとも一部基づき、癌状態に進行する可能性があることを示す、ポリープ及びその他の前癌病変、前悪性、前腫瘍性又は他の異常な表現型が含まれる。I.ポリアミン代謝過剰なポリアミン形成は、長年にわたり、上皮癌腫形成、特に結腸直腸癌腫形成と関連付けられてきた。ポリアミンは、転写、RNA安定化、イオンチャネルゲーティングその他を含む様々なプロセスに関与するユビキタスな小分子であるWallace、2000。ポリアミン合成における最初の酵素であるオルニチンデカルボキシラーゼODCは、哺乳動物において正常な発現及び組織修復に必須であるが、殆どの成体組織では下方制御されているGerner及びMeyskens、2004。ポリアミン代謝及び輸送の調節に複数の異常があるとポリアミンレベルが上昇するが、これは一部の組織において腫瘍形成を促進し得るThomas及びThomas、2003。結腸及び他の癌のリスクが高いことと関連する症候群である、家族性腺腫性ポリープ症FAPを有するヒトの腸上皮組織において、ポリアミン代謝が上方制御されるGiardielloら、1997。FAPは、腺腫性大腸ポリポーシスAPC腫瘍抑制因子遺伝子における突然変異により起こり得、APCシグナル伝達は、ヒト細胞Fultz及びGerner、2002及びFAPのマウスモデルErdmanら、1999の両方でODC発現を制御することが示されている。野生型APC発現によりODC発現が低下し、一方で突然変異体APCによりODC発現が上昇する。ODCのAPC-依存性制御のメカニズムには、転写活性化因子c-MYC及び転写抑制因子MAD1を含むE-ボックス転写因子が含まれるFultz及びGerner、2002;Martinezら、2003。他の研究者により、c-MYCがODC転写を制御することが示されたBellofernandezら、1993。ポリアミン代謝に関与する一部の遺伝子は、殆どの生物での最適発育のための必須遺伝子であり、非増殖及び/又は成体細胞及び組織において下方制御されるGerner及びMeyskens、2004。他所で総説されているように、ポリアミンは、ある部分、遺伝子発現パターンに影響を及ぼすことによって、特異的な細胞表現型に影響を与えるChildsら、2003。下記で述べるように、ODC活性即ちポリアミン合成の律速酵素の阻害及び/又は細胞ポリアミンレベル低下を含むストラテジーは、ヒトにおける結腸直腸ポリープ再発の予防において顕著な有効性が明らかになっている。本研究による疫学的及び実験的な結果から、ODCにおける遺伝多型によるポリアミンホメオスタシスの条件付制御が明らかとなり、316ODCSNPが結腸腺腫再発に対する保護的なものであり得、結腸癌診断後の生存に有害であり得るというモデルが示唆される。結腸癌予後を判定するためにこの情報を使用し得る。癌進行/再発のリスクが高い患者を同定することにより、三次予防管理ストラテジーの早期実現を導入することができる。さらに、この研究は、三次癌予防療法から恩恵を受ける、ハイリスクであるがそれ以外は最適に処置されている局所結腸直腸癌患者を同定するために使用することができる。患者の食事に依存して、ポリアミン、例えばプトレッシンが多くの一般的な食品に存在し、例えばオレンジジュースではおよそ400ppmのプトレッシンを含有するという事実により、過剰ポリアミンの問題がさらに複雑化し得る。この点で、高ポリアミン食は禁忌であり、本明細書中で提供される実施態様の一部に対して、このような食事は回避すべきものである。II.食事性ポリアミン摂取の評価ポリアミン含量が高いものを含む様々な食品の1日の平均摂取量を記録する患者の病歴を得ることによって、対象の食事性摂取を正確に推定することができる。例えば、FredHutchinsonCancerResearchCenterの食物摂取頻度調査票FFQ及びこの手段に対する分析アルゴリズムを使用することができる。KristalAR,Shattock,A.L.及びWilliams,A.E.:Foodfrequencyquestionnairesfordietinterventionresearch.Washington,DC:InternationalLifeSciencesInstitute,Proceedingofthe17thNationalNutrientDatabankConference,Baltimore,MD,1992,1992;SchakelSF,Buzzard,IM.及びGebhardt,S.E.:Proceduresforestimatingnutrientvaluesforfoodcompositiondatabases.JFoodCompAnal10:102-14,1997。食事性ポリアミン摂取量を推定するために、UniversityofMinnesotaNutritionCoordinatingCenterNCCNutrientDatabaseを食品含量データの主な情報源とし、開発し、FFQにリンクさせたポリアミン食品含量データベースを使用し得るZoumas-MorseC,RockCL,QuintanaELら:DevelopmentofapolyamineDatabaseforassessingdietaryintake.JAmDietAssoc107:1024-7、2007。個々の食品中のスペルミン、スペルミジン及びプトレッシンに対する値を使用し得るが、あるいは、食事性の総ポリアミン摂取の主要な貢献因子として食事中のプトレッシンを単独で評価し得る。結果をエネルギーで補正することもできる。III.組織ポリアミンレベルの評価直腸粘膜組織、前立腺組織及び尿を含む様々な異なる組織供給源を用いて、生検から組織ポリアミン含量を決定することができる。好ましくは、組織は、不快感及び回復時間を最小限に抑える、比較的非侵襲性の組織生検プロセスが可能なものである。文献に記載のように、使用されてきた特定のソースは直腸粘膜である。MeyskensFL,GernerEW,EmersonSら:Effectofalpha-difluorometyilornithineonRectalMucosallevelsofpolyaminesinarandomized,double-blindedtrialforcoloncancerprevention.JournaloftheNationalCancerInstitute90:1212-1218,1998;BoyleJO,MeyskensFL,Jr.,GarewalHSら:Polyaminecontentsinrectalandbuccalmucosaeinhumanstreatedwithoraldifluoromethylornithine.CancerEpidemiolBiomarkersPrev1:131-5,1992,これらは両者とも本明細書中に参照により組み込まれる。試料に氷冷食塩水をフラッシュし、使用まで-80°Cで凍結保存し得る。適切なアッセイ用に試料を処理し、内部標準として1,7-ジアミノヘプタンを用いた逆相高速液体クロマトグラフィーなどの許容可能な方法によって、ポリアミン含量プトレッシン、カダベリン、ヒスタミン、スペルミジン、スペルミンならびにプトレッシン、スペルミジン及びスペルミンのモノアセチル誘導体について評価する。MeyskensFL,GernerEW,EmersonSら:Effectofalpha-difluoromethylornithineonRectalMucosallevelsofpolyaminesinarandomized,double-blindedtrialforcoloncancerprevention.JournaloftheNationalCancerInstitute90:1212-1218,1998;SeilerN,KnodgenB:High-performanceliquidchromatographicprocedureforthesimultaneousdeterminationofthenaturalpolyaminesandtheirmonoacetylderivatives.J.Chromatogr.221:227-235,1980、これらは両者とも本明細書中に参照により組み込まれる。市販のBCAタンパク質アッセイキットPierce、Rockford、ILに記載のものなど、当技術分野で公知の技術を用いて試料中の総タンパク質含量を調べることができる。IV.低ポリアミン食対象の組織ポリアミンレベルが高いか又は食事から摂取されるポリアミンが許容できないほど高いことが分かった場合、その対象は、本発明によるオルニチンデカルボキシラーゼ阻害剤及びスペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼ発現アゴニストを含む治療レジメンの前に又はその一部として、それらのポリアミン摂取を減少させることが推奨され得る。組織ポリアミン又は食事性摂取が中程度である対象でも、低ポリアミン食から利益を得ることができる。食品のポリアミン含量は多岐にわたるが、一般的に、ポリアミン摂取を減少させたい場合、次の食品は避けるべきである:オレンジ、グレープフルーツ、ナシ、バナナ、チーズ、ジャガイモ、プディング、塩漬け肉、ソーセージ、豚肉煮込み、タラ、魚のフライ、アンチョビ、エンドウ、豆類、タマネギ、トマト、赤ワイン、ナッツ類、ハーブ類、レンティル。これらの食品の少なくとも一部の摂取量を減少させ、オレンジ、グレープフルーツ、チーズ及びトマトなどの数種類を排除することによって、ポリアミンレベルに対して大きな影響が与えられ得る。V.家族性腺腫性ポリポーシス遺伝性ポリポーシス症候群である家族性腺腫性ポリポーシスFAPは、腺腫性大腸ポリポーシスAPC腫瘍抑制因子遺伝子の生殖系列突然変異の結果であるSuら、1992。発現が様々であるこの常染色体優性状態は、孤発性の結腸癌に対する平均診断年齢よりも20年早く、40歳までに腺癌に一様に進行する数百の結腸腺腫の発生に関与するBussey、1990。発症前のFAP個体の先行研究において、正常な家族構成員対照と比較した場合、正常に見える結腸直腸生検組織中でポリアミン、スペルミジン及びスペルミンならびにそれらのジアミン前駆体プトレッシンレベルの上昇が検出されているGiardielloら、1997。哺乳動物ポリアミン合成における第一の酵素であり律速酵素であるオルニチンデカルボキシラーゼODCの活性もFAP患者由来の見かけ上正常な結腸粘膜生検組織において上昇しているGiardielloら、1997;Luk及びBaylin、1984。ポリアミンが最適な細胞増殖に必要なので、これらの知見は興味深いPegg、1986。さらに、癌原物質で処理したげっ歯類動物において、酵素で活性化される不可逆的阻害剤DFMOを用いたODC活性の抑制によって、結腸癌腫形成が抑制されるKingsnorthら、1983;Temperoら、1989。下記で詳述するように、FAPと共通する変異APC/apc遺伝子型を有するMin多発性腸腫瘍マウスは、ヒトFAP患者に対する有用な実験動物モデルであるLipkin、1997。Minマウスは、生後120日までに消化管全体にわたり100個を超える胃腸腺腫/腺癌を発生させ得、GI出血、閉塞を引き起こし、死に至る。DFMO及びスリンダクの併用療法は、これらのマウスにおいて腺腫を減少させるために有効であることが示された米国特許第6,258,845号;Gerner及びMeyskens、2004。結腸又は小腸の何れかでの腫瘍形成におけるDFMO単独、スリンダク単独又はDFMO及びスリンダクの併用の何れかによるMinマウスの処置の結果を図9から11に示す。VI.オルニチンデカルボキシラーゼ-1遺伝多型ポリアミン合成における第一の酵素であるオルニチンデカルボキシラーゼODCの活性は正常な発育に必要であり、結腸直腸癌を含む多くの癌において上昇している。本明細書中で、CRC症例中での結腸直腸癌CRC-特異的生存率と316ODC一塩基多型SNPの関連を調べ、結腸癌細胞におけるその機能的意義を調べた。ヒトODC1遺伝子のイントロン-1における一塩基多型SNPは、ODC1転写に影響を及ぼしGuoら、2000、結腸直腸腺腫CRAリスクに対する遺伝的マーカーとして研究されてきたMartinezら、2003;Barryら、2006;Hubnerら、2008。報告されたマイナーA-アレル頻度はおよそ25であり、人種/民族間の差にもかかわらず、ODC1遺伝子型分布は、各人種内でハーディーワインベルグ平衡にあるO’Brienら、2004;Zellら、2009。ODC1マイナーA-アレルに対してホモ接合である個体は、メジャーG-アレルの個体と比較して腺腫再発リスクが低いMartinezら、2003;Hubnerら、2008。さらに、ODC1A-アレルAA又はGA遺伝子型であるがGG遺伝子型ではない及びアスピリン使用の報告は、結腸ポリープ再発減少と関連付けられておりMartinezら、2003;Barryら、2006;Hubnerら、2008、進行性腺腫のリスクが統計学的に有意に50低かったBarryら、2006。E-ボックス転写因子のODCアレル特異的結合を調べ、2個のE-ボックス間に位置する316ODCSNPの機能的意義を評価した図2Aで示されるE-ボックス2及び3。各細胞株遺伝子型は、この領域においてコンセンサスPst1制限部位に影響を与える。図2Bは、ヒト結腸HT29細胞から生成されたポリメラーゼ連鎖反応PCR産物が、ある程度はPst1切断に感受性があることを示しており、これらの細胞が少なくとも1つのODCA-アレルを含有することが示唆された。同じプライマーを用いてヒト結腸HCT116細胞から生成されるPCR産物はPstIの作用に対して不感受性であり、これらの細胞に含有されるのはODCG-アレルのみであることが示唆された。直接DNA配列決定によりこの結果を確認した。ウエスタンブロッティングを行うことによって、HT29及びHCT116細胞例えばMAD1及びMAD4における転写活性化因子c-MYC及びいくつかの転写抑制因子を含む特異的E-ボックス結合タンパク質の発現を確証した図3A。これらのタンパク質に対する抗体を用いて、ODCプロモーターの316周辺領域のクロマチン免疫沈降CHIPの分析を行った。図3Bで示されるように、c-MYC、MAD1又はMAD4に対する抗体によるクロマチン免疫沈降後に得られたHT29DNAから、ODCプロモーター特異的PCR産物が合成された。同様のクロマチン免疫沈降後にHCT116DNAから合成されたPCR産物は、HT29DNAから合成されたものと比較して実質的に少なかった。これらの結果の定量から、ODC-Gアレルのみを含有したHCT116細胞と比較して、1つのODC-Aアレルを含有したHT29細胞においてODCSNP領域へのc-MYC、MAD1及びMAD4結合が4から14倍大きかったことが示された。ODCアレル特異的プロモーター活性を評価した。E-ボックス活性化因子及び抑制因子の発現に依存して316ODCSNPがODC発現に影響を及ぼすという仮説を次のように検証した。転写活性化因子c-MYC又は抑制因子MAD1の何れかを発現するベクターと組み合わせてODCアレル特異的プロモーターコンストラクトを用いて結腸癌由来HT29細胞に対して一過性同時形質移入を行った図4A及びB。示される標準誤差バーは、1回の代表的実験内の三つ組み測定における変動を反映しており、これは再現されている。これらの実験で使用したアレル特異的プロモーターレポーターには、図2Aで示される3個のE-ボックス全てが含まれた。図4Aで示されるように、3個のコンセンサスE-ボックス及びODC-Aアレルを含有するプロモーターに対して、c-MYC発現が最大の刺激作用を有していたwtE-ボックス1316A、P=0.0014。上流E-ボックスの欠失によりプロモーター活性が低下したが、c-MYC発現がこの活性を刺激し続けたmutE-ボックス1316A、P=0.0013。316SNP位置のAからGへの置換によって、無傷の5’フランキングコンセンサスE-ボックスがあっても、c-MYCのプロモーター活性刺激能が低下した。5’フランキングコンセンサスE-ボックスの突然変異は、ODC-Gアレルとの組み合わせで、プロモーター活性をさらに低下させた。c-MYCではなくMAD1をODCアレル特異的プロモーターレポーターとともに同時形質移入した場合図4B、抑制因子は、3個全てのE-ボックス及び野生型316A-アレルを含有したODCプロモーターの活性のみを低下させることができたP=0.027。上流E-ボックスの欠失mutE-ボックス1316Aにより、ODCプロモーター活性に対するMAD1の効果が顕著に低下した。316位置でのAからGへの置換によって、2又は3個のE-ボックスの何れかを含有するプロモーターがMAD1抑制に反応しなくなった。VII.ジフルオロメチルオルニチンDFMOエフロルニチンとしても知られるDFMOは次の化学式、2-ジフルオロメチル-dl-オルニチンを有する。これは、ポリアミン生合成経路の律速酵素であるオルニチンデカルボキシラーゼODCの、酵素により活性化される不可逆的阻害剤である。このポリアミン合成阻害の結果、この化合物は、多くの器官系における癌形成の阻止、癌発育の抑制及び腫瘍の縮小化に有効となる。これは、他の抗腫瘍薬との相乗作用も有する。DFMOはマウスにおいてAPC依存性腸腫瘍形成を抑制することが示されているErdmanら、1999。ヒトに経口DFMOを毎日投与することによって、多くの上皮組織においてODC酵素活性が阻害され、ポリアミン含量が低下するLoveら、1993;Gernerら、1994;Meyskensら、1994;Meyskensら、1998;Simoneauら、2001;Simoneauら、2008。近年、発明者らは、非ステロイド性抗炎症剤NSAIDスリンダクと組み合わせて、DFMOが、ランダム化臨床試験においてプラセボと比較した場合、結腸腺腫を有する個体間で腺腫再発率を顕著に低下させることが報告されていることを報告したMeyskensら、2008。DFMOは最初、CentredeRechercheMerrell、Strasbourgにより合成され;現在のFDA承認には次のものが含まれる:アフリカ睡眠病。高用量全身IV剤-市販されていないSanofi/WHO。多毛症アンドロゲン誘発性の過剰毛髪発育局所製剤。経口製剤は現在のところ承認されていない。良性前立腺肥大の治療におけるDFMO及びその使用は、米国特許第4,413,141号及び同第4,330,559号という2つの特許に記載されている。米国特許第4,413,141号は、インビトロ及びインビボの両方でのODCの強力な阻害剤であるものとしてDFMOを記載する。DFMOの投与により、プトレッシン及びスペルミジンが通常は活発に産生される細胞においてこれらのポリアミン濃度が低下する。さらに、DFMOは、標準的腫瘍モデルで試験した際に、腫瘍細胞増殖を遅延させることができることが分かっている。米国特許第4,330,559号は、良性前立腺肥大の治療のためのDFMO及びDFMO誘導体の使用を記載する。急速な細胞増殖を特徴とする多くの疾患状態のように、良性前立腺肥大にはポリアミン濃度の異常な上昇が付随する。この参考文献内に記載される治療薬を経口又は非経口の何れかで患者に投与することができる。DFMOは、顕著な抗腫瘍効果を継続的に与え得る可能性がある。この薬物は、ヒトに対して0.4g/m2/日という低用量では比較的毒性がなく、同時に腫瘍においてプトレッシン合成の阻害を引き起こす。ラット腫瘍モデルにおける研究から、末梢血小板数を抑制することなく、DFMO点滴により腫瘍プトレッシンレベルが90低下し得ることが明らかになる。DFMOとともに認められる副作用には4g/M2/日の高用量での聴力に対する影響が含まれるが、これは投与を中断すると解決する。聴力におけるこれらの影響は、1年以下の投与の場合、0.4g/M2/日という低用量では認められないMeyskensら、1994。さらに、薬物を中断すると解決する眩暈/目まいの例が数例見られる。DFMOの高治療用量>1.0g/m2/日を用いた研究において及び主に以前に化学療法を受けたことがある癌患者又は骨髄に障害がある患者において、血小板減少症が主に報告されている。一般に、限られた臨床試験において、DFMO療法に付随する毒性は他のタイプの化学療法ほど重くないが、用量に関連して血小板減少症を促進させることが分かった。さらに、ラットにおける研究から、12日間にわたるDFMOの連続点滴により、対象と比較して血小板数が顕著に減少することが分かった。他の研究から、血小板減少症が連続i.v.DFMO療法の主要な毒性であるという同様の所見が得られている。これらの知見から、DFMOが、巨核球の骨髄前駆細胞のODC活性を顕著に抑制し得ることが示唆される。DFMOは、上皮創傷治癒などの増殖性修復プロセスを阻害し得る。第III相臨床試験では、ジフルオロメチルオルニチンDFMOスリンダク又は対応するプラセボでの36ヶ月にわたる治療後の腺腫性ポリープ再発を評価した。一時的難聴は、DFMOによる治療の既知の毒性であり、従って、連続空気伝導聴力図を分析するために、包括的アプローチを開発した。周波数での反復測定による対象内相関を考慮しながら、一般化推定方程式法により、空気伝導純音閾値の変化に関して治療群間の平均差を推定した。290名の対象に基づき、プラセボで処置した対象と比較して、ベースライン値、年齢及び周波数に対して調整して、DFMOスリンダクで治療した対象間で0.50dBの平均差があった95信頼区間、-0.64から1.63dB;P=0.39。500から3,000Hzの通常の会話音域で、0.99dB-0.17から2.14dB;P=0.09という推定差が検出された。用量強度はモデルに対する情報を追加しなかった。DFMOスリンダク群では151名中14名9.3、プラセボ群では139名中4名2.9で、試験した全領域にわたり、2以上の連続した周波数でベースラインからの少なくとも15dBの聴覚低下が見られたP=0.02。治療終了後、少なくとも6ヶ月で行ったフォローアップ空気伝導から、治療群間で1.08dBの聴覚閾値で調整済み平均差が示された-0.81から2.96dB;P=0.26。プラセボ群と比較して、臨床的に意義のある難聴があったDFMOスリンダク群の対象の割合に有意差はなかった。薬物曝露からの聴器毒性の推定寄与リスクは8.4である95信頼区間,-2.0から18.8;P=0.12。プラセボで処置した患者と比較して、DFMOスリンダクで治療した患者に対する平均閾値の差は<2dBである。この研究の結果は、その全体において参照により本明細書中に組み込まれるMcLarenら、2008に詳細に記載されている。本明細書中で、DFMO及びスリンダクなどの薬物で治療する患者の聴器毒性を軽減し及び/又は予防する方法が提供される。VIII.NSAIDNSAIDは、ステロイドではない抗炎症剤である。抗炎症作用に加えて、これらは、鎮痛、解熱及び血小板抑制作用を有する。これらは最初、慢性関節炎状態及び疼痛及び炎症を伴うある種の軟組織障害の治療において使用された。これらは、プロスタグランジンの前駆体である環状エンドペルオキシドへとアラキドン酸を変換するシクロオキシゲナーゼを阻害することによりプロスタグランジンの合成を阻止することによって作用する。プロスタグランジン合成阻害はそれらの鎮痛、解熱及び血小板抑制作用の主な要因であり;それらの抗炎症効果には他のメカニズムが関与し得る。ある種のNSAIDのみ、リポキシゲナーゼ酵素もしくはホスホリパーゼCも阻害し得るか又はT細胞機能も調節し得るAMADrugEvaluationsAnnual,1814-5,1994。アスピリン、イブプロフェン、ピロキシカムReddyら、1990;Singhら、1994、インドメタシンNarisawa、1981及びスリンダクPiazzaら、1997;Raoら、1995を含む非ステロイド性抗炎症剤NSAIDは、AOM-処置ラットモデルにおいて効果的に結腸癌腫形成を抑制する。NSAIDは、活性化Ki-rasを有する腫瘍の発生も抑制するSingh及びReddy、1995。NSAIDは、腫瘍細胞におけるアポトーシスの誘導を介して癌腫形成を抑制すると思われるBediら、1995;Lupulescu、1996;Piazzaら、1995;Piazzaら、1997b。多くの研究から、アポトーシスの誘導を含むNSAIDの化学予防特性が、それらのプロスタグランジン合成阻害能の機能であることが示唆されるDuBoisら、1996;Lupulescu、1996;Vane及びBotting、1997において概説。しかし、研究から、NSAIDがプロスタグランジン依存性及び非依存性メカニズムの両方を通じて作用し得ることが示されるAlbertsら、1995;Piazzaら、1997a;Thompsonら、1995;Hanif、1996。NSAIDスリンダクの代謝産物である、スルホン化スリンダクはCOX-阻害活性を欠くが、それでも腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導しPiazzaら、1995;Piazzaら、1997b、一部の癌腫形成げっ歯類モデルにおいて腫瘍発生を阻害するThompsonら、1995;Piazzaら、1995、1997a。一部のNSAIDはヒト臨床試験においてそれらの効果について試験されている。イブプロフェンの第IIa相臨床試験1ヶ月が完了しており、300mg/日という用量でも、平坦粘膜におけるプロスタグランジンE2PGE2レベルの顕著な低下が見られた。イブプロフェンの300mgという用量は非常に低く治療用量は、1日に1200から3000mgの範囲又はそれ以上、長期間でも毒性が見られる可能性は少ない。しかし、動物の化学的予防モデルにおいて、イブプロフェンは他のNSAIDよりも効果が低い。A.スリンダク及びその主要な代謝産物、スルホン化スリンダク及びスリンダク硫化物スリンダクは、次の化学名を有する非ステロイド、抗炎症性インデン誘導体である;Z-5-フルオロ-2-メチル-1-4メチルスルフィニルフェニルメチレン1H-インデン-3-酢酸Physician’sDeskReference、1999。スルフィニル部分は、インビボで可逆性の還元によりスルフィド代謝産物に変換され、不可逆的酸化によりスルホン代謝産物エクシスリンドに変換される。その全体において参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第6,258,845号を参照のこと。Ki-ras活性化も阻害するスリンダクは、COX阻害能が異なる2つの異なる分子に代謝されるが、それでも両者ともアポトーシスの誘導を介して化学予防効果を発揮することができる。スルホン化スリンダクはCOX-阻害活性を欠きプロスタグランジン合成依存性に殆どがアポトーシスの誘導を促進すると思われる。入手可能な証拠から、スルフィド誘導体が生物学的に活性のある化合物の少なくとも1つであることが示される。これに基づき、スリンダクはプロドラッグとみなされ得る。スリンダクClinoril登録商標は例えば150mg及び200mg錠剤として入手可能である。成人に対する最も一般的な投与量は1日2回150から200mgであり、最大1日用量は400mgである。経口投与後、薬物の約90が吸収される。空腹状態の患者では約2時間でピーク血漿濃度に到達し、食後投与の場合は3から4時間で到達する。スリンダクの平均半減期は7.8時間であり、スルフィド代謝産物の平均半減期は16.4時間である。米国特許第3,647,858号及び同第3,654,349号はスリンダクの調製を包含するが、両者ともそれらの全体において本明細書中に参照により組み込まれる。スリンダクは、変形性関節症、関節リウマチ、強直性脊椎炎、急性痛風及び急性肩痛の兆候及び症状の短期的及び長期的緩和のために適用される。スリンダク400mg/日によりもたらされる鎮痛及び抗炎症効果は、アスピリン4g/日、イブプロフェン1200mg/日、インドメタシン125mg/日及びフェニルブタゾン400から600mg/日により達成される効果に匹敵する。スリンダクの副作用には、患者のほぼ20における軽度の胃腸への影響が含まれ、腹痛及び吐き気が最も頻度の高い訴えである。CNS副作用が見られるのは患者の10以下であり、眠気、頭痛及び神経過敏が最もよく報告される。皮膚発疹及び掻痒が起こるのは患者のうち5である。スリンダクによる長期治療により、出血、潰瘍形成及び穿孔などの重篤な消化管毒性が起こり得る。癌及び特に結腸直腸ポリープの化学的予防法のためのスリンダク使用の可能性について、詳細に研究されてきた。2つの最近の米国特許第5,814,625号及び同第5,843,929号は、ヒトにおけるスリンダクの化学予防の使用の可能性について詳述している。両特許ともそれらの全体において本明細書中に組み込まれる。米国特許第5,814,625号で主張されるスリンダクの用量は、10mgから1500mg/日の範囲であり、好ましい用量は50mgから500mg/日である。しかし、高用量において、化学的予防における単剤としてのスリンダクの使用に伴うより大きな問題は、その周知の毒性及びやや高い不耐性のリスクである。60代を超えると副作用発生率が高くなるので、高齢者は特に脆弱であると思われる。この年齢群は結腸直腸癌が発生する可能性が最も高く、従って化学的予防法により利益を受ける可能性が最も高いことに注意されたい。スリンダク及びそのスルホン代謝産物エクシスリンドはいくつかの癌タイプの予防及び治療について試験され、臨床試験が継続中である。ClinicalTrials.gov,U.S.NationalInstitutesofHealthデータベースから、2010年5月10日現在で次の概要が提供される。B.ピロキシカム4-ヒドロキシ-2-メチル-N-2-ピリジル-2H-1,2-ベンゾチアジン-3-カルボキサミド1,1-ジオキシドの化学名を有する、関節リウマチ及び変形性関節症の治療において定着している非ステロイド抗炎症剤。筋骨格障害、月経困難症及び術後疼痛の治療においてもその有用性が明らかにされている。これは半減期が長いので、1日1回投与が可能である。この薬物は、直腸投与される場合、有効であることが示されている。副作用として報告される主訴は胃腸に関するものである。ピロキシカムは、動物モデルにおいて有効な化学的予防薬であることが示されているがPollard及びLuckert、1989;Reddyら、1987、最近のIIb臨床試験において副作用が明らかとなった。NSAIDの副作用の大規模メタ解析からも、ピロキシカムが他のNSAIDよりも副作用が大きいことが示されているLanzaら、1995。スリンダクは、家族性腺腫性ポリポーシスFAP患者において腺腫を退縮させることが示されているもののMuscatら、1994、孤発性の腺腫における少なくとも1つの研究からこのような効果がないことが示されているLadenheimら、1995。DFMO及びピロキシカムの併用は、結腸癌腫形成のAOM処置ラットモデルにおいて相乗的な化学予防効果があることが分かっているがReddyら、1990、各薬剤を個別に投与した場合、DFMOはKi-ras突然変異及び腫瘍形成に対してピロキシカムよりも大きな抑制効果を発揮したReddyら、1990。ある研究において、AOM処置ラットに対するDFMO又はピロキシカムの投与により、Ki-ras突然変異を有する腫瘍数が90からそれぞれ36及び25に減少したSinghら、1994。両薬剤とも、既存の腫瘍において生化学的活性のあるp21rasの量も低下させた。C.NSAIDの併用様々なNSAIDの併用療法も様々な目的で使用されている。2以上のNSAIDをより低用量で使用することによって、より高用量の個々のNSAIDに付随する副作用又は毒性を抑えることができる。例えば、いくつかの実施態様において、スリンダクをセレコキシブと一緒に使用し得る。いくつかの実施態様において、NSAIDSの一方又は両方が選択的COX-2阻害剤である。単独で又は併用において使用し得るNSAIDSの例としては、次のものが挙げられるがこれらに限定されない:イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナク、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、イソキシカム、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、セレコキシブロフェコキシブバルデコキシブパレコキシブ、ルミラコキシブ又はエトリコキシブ。IX.エフロルニチン/スリンダク併用療法低用量で併用で与えられた化学的予防薬の前臨床試験は、さらなる毒性が殆どなく、腺腫の予防において顕著な有効性を示しており、このことから再発性腺腫の予防に対してリスクベネフィット比を向上させるためのストラテジーが示唆される。上述のように、FAPと共通する突然変異APC/apc遺伝子型を有するMin多発性腸腫瘍マウスは、ヒトFAP患者に対する有用な実験動物モデルとなるLipkin、1997。Minマウスは、生後120日までに消化管全体にわたり100個を超える胃腸腺腫/腺癌を発生させ得、GI出血、閉塞を引き起こし、死に至る。DFMO及びスリンダクの併用療法は、これらのマウスにおいて腺腫を減少させるのに有効であることが示された米国特許第6,258,845号;Gerner及びMeyskens、2004。結腸又は小腸の何れかでの腫瘍形成に対して、DFMO単独、スリンダク単独又はDFMO及びスリンダク併用の何れかでMinマウスを処置した結果を図9から10で示す。図9は、未処置対照と比較した、この3種類の治療群の結腸における、大きさ別の平均腫瘍数を示す。図10は、未処置対照と比較した、この3種類の治療群の小腸における、大きさ別の平均腫瘍数を示す。図11は、高悪性度腺腫数が治療法、単独又は併用によってどのように変動するかを示す。X.患者プロファイルに基づくポリアミン抑制療法の有効性CRA患者間での、経口D,L-α-ジフルオロメチルオルニチンDFMO、エフロルニチン及びスリンダクの長期連日投与による、ポリアミン抑制併用療法の有効性が明らかになったがMeyskensら、2008、治療には、中等度の無症候性聴器毒性が付随しMcLarenら、2008、ベースライン時心血管系リスクが高い患者では心血管系イベントがより多かったZellら、2009。プラセボと比較して、エフロルニチン及びスリンダク治療後では、腺腫再発、組織ポリアミン反応又は毒性プロファイルに対してODC1遺伝子型が与える影響が異なることが明らかになった。2010年5月14日出願の、EugeneGerner,JasonZell,ChristineMclaren,FrankMeyskens,HodaAnton-Culver及びPatriciaA.Thompsonによる米国仮出願、題名CarcinomaDiagnosisandTreatment,BasedonODC1Genotype、これはその全体において参照により組み込まれる。腺腫≧3mm切除歴がある375名の患者を無作為に指名して、経口ジフルオロメチルオルニチンDFMO500mg及びスリンダク150mgを1日1回又は適合するプラセボを36ヶ月間投与し、ベースライン時及び試験実施医療機関での低用量アスピリン81mg使用によって層別化した。ランダム化又は試験脱落から3年後にフォローアップ大腸内視鏡検査を行った。対数の二項分布回帰により群間で結腸直腸腺腫再発について比較した。プラセボ投与を受けた患者と活性薬投与を受けた患者との転帰を比較すると、a1以上の腺腫再発はそれぞれ41.1及び12.3でありリスク比、0.30;95信頼区間、0.18-0.49;P<0.001;b1以上の進行性腺腫を有するのはそれぞれ患者の8.5及び0.7でありリスク比、0.085;95信頼区間、0.011-0.65;P<0.001;c複数の腺腫>1を有するのは、最終的な大腸内視鏡検査でそれぞれ17名13.2と1名であった0.7;リスク比、0.055;0.0074-0.41;P<0.001。重篤な有害事象グレード≧3はプラセボ群の患者の8.2で起こり、それに対して活性薬介入群では11で起こったP=0.35。ベースラインからの聴覚変化を報告した患者の割合に有意差はなかった。経口低用量DFMO及びスリンダクの併用によって、少ない副作用で再発性腺腫性ポリープを顕著に減少させることができる。この試験の詳細は下記及びその全体において参照により本明細書中に組み込まれるMeyskensら、2008で詳細に論じる。267名の患者が試験終了時の大腸内視鏡検査を完了した後、DataSafetyMonitoringBoardDSMBによりこの試験は中止された試験がその有効性エンドポイントに達したため。DSMBは安全性及び有効性エンドポイントを全て監視した。実施例セクションでさらに詳細に論じるように、この試験には、多施設第III相結腸腺腫予防試験からの患者データの分析が含まれた。その全体において参照により本明細書中に組み込まれるMeyskensら、2008も参照のこと。A.ODC1遺伝子型分布UCIrvineCRCGene-EnvironmentStudyから確認された全部で440名の結腸直腸癌CRC症例を症例のみ分析において使用した。フォローアップ期間中央値は11年であった。270例の61結腸癌症例、162例の37直腸癌症例及び8例2の位置不明のCRC症例があった。結腸及び直腸癌症例に対する臨床病理学的データを表1で示す。全CRC症例間のODC316遺伝子型分布は、53GG、41GA及び7AAであった。CRC例においてODC316遺伝子型分布は、家族歴の有無にかかわらず同様であった。年齢P=0.38、性別P=0.56、家族歴P=0.94、結腸直腸内の部位P=0.55、組織学P=0.46又は腫瘍グレードP=0.73別でODC遺伝子型分布において有意差はなかった。ODC遺伝子型分布は、診断時のステージにより有意差はなかった:ステージI49GG、42GA、8AA、ステージII56GG、38GA、6AA、ステージIII51GG、43GA、6AA、ステージIV59GG、37GA、4AAP=0.87。ODC遺伝子型分布は民族による有意差が明らかになった:白人382例:53GG、41GA、6AA、マイナー-Aアレル頻度=26、アフリカ系アメリカ人7例:71GG、29GA、0AA、マイナー-Aアレル頻度=15、ヒスパニック系21例:57GG、43GA、0AA、マイナー-Aアレル頻度=21及びアジア系27例:33GG、41GA、26AA、マイナー-Aアレル頻度=46P=0.009。しかし、各人種内で、ODC遺伝子型分布はハーディーワインベルグ平衡になった白人P=0.36、アフリカ系アメリカ人P=0.66、ヒスパニック系P=0.21、アジア人系P=0.35。B.腺腫再発ODC1遺伝子型分布は、126GG55、87GA38及び15AA7であった。ベースライン臨床特性から表1で示されるように差が明らかとなった。年齢、性別、人種、アスピリン使用、治療、ODC1遺伝子型及び治療という予測因子を用いた回帰モデルにおいて、治療は、腺腫再発、組織ポリアミン反応及び聴器毒性の差異に関与する唯一の因子であった。腺腫再発に対するフルモデルにおいてODC1遺伝子型及び治療に対して統計学的に有意な相互作用が検出されP=0.021、プラセボ患者間の腺腫再発パターンは、GG-50、GA-35、AA-29であり、一方、エフロルニチン/スリンダク患者ではGG-11、GA-14、AA-57であった。このモデルにおけるODC1遺伝子型と治療との間で統計学的に有意な相互作用が検出されたP=0.038。ODC1遺伝子型は完全回帰モデルにおいて組織プトレッシンレスポンス又はスペルミジン:スペルミン比レスポンスと有意な関連はなかったデータは示さず。。完全回帰モデルにおける治療に関連する腺腫再発に対する調整済み相対的リスクRRは、0.3995CI0.24-0.66であった。心血管系又は消化管系有害事象に関して、治療とODC1遺伝子型群との間で有意な関連はなかった表3及び4。ここで、少なくとも1つのA-アレルを有するアスピリン投与CRA患者間で再発性腺腫のリスクが低下したことを示す以前の報告とは異なり、エフロルニチン及びスリンダクの腺腫抑制効果は、メジャーGホモ接合ODC1遺伝子型を有する場合により大きいことが認められたMartinezら、2003;Barryら、2006;Hubnerら、2008。ODC1遺伝子型分布は以前のアスピリンに基づく臨床試験での報告と同様でありMartinezら、2003;Barryら、2006;Hubnerら、2008、以前の報告と一致して、A-アレルは、プラセボ群において、有意ではない、より低い再発性腺腫リスクと関連があったMartinezら、2003;Hubnerら、2008。これらの結果から、ODC1A-アレルキャリアでは、GG遺伝子型患者と比較して、エフロルニチン及びスリンダクでの長期曝露に対する反応性の点が異なり、A-アレルキャリアは腺腫再発に関してベネフィットが少なく、特にAAホモ接合型では聴器毒性を発生するリスクが高くなる可能性があることが明らかになる。C.生存解析440例のCRC症例のうち、解析時に138例31が死亡していた。AA/AG遺伝子型を有する例で死亡例が74例54であったことと比較して、GG遺伝子型を有する症例で死亡例は64例46であった。死因は138例の死亡CRC症例のうち102例については入手可能であった。85例83のCRC症例は、CRCが死因であった。少なくとも1つのA-アレルODCGA/AAを有する例10年生存率=76;P=0.031と比較して、ODCG-アレルに対してホモ接合のCRC症例全てにおいて統計学的に有意なCRC特異的生存率の向上が認められた10年生存率=84。ステージ別のCRC特異的生存率解析から、AJCCステージIP=0.055、IIP=0.61又はIVP=0.65CRCに対して、生存率の違いにおいて有意差が認められなかったことが明らかになった。しかし、ステージIIIのCRCの症例の間で、ODCGG遺伝子型はCRC特異10年生存率の向上と関連しており、ODCGA/AA遺伝子型の例では60であるのに対して75であった;P=0.024図1。結腸癌症例の間で、ODCGA/AA例と比較して、ODCGG遺伝子型を有する例に対して統計学的に有意なCRC特異的生存率ベネフィットが認められ10年生存率=87対79;P=0.029;これは直腸癌症例では見られなかったODCGG例の場合10年生存率=78、一方でODCGA/AA例の場合72;P=0.42。年齢歳、性別、民族、CRC家族歴、診断時TNMステージ、結腸内の腫瘍部位、組織学的サブタイプならびに手術、放射線療法及び化学療法による治療について調整した後のODC遺伝子型に基づく、全CRC症例間のCRC特異的予測生存率は、次の通りであった:ODCGGハザード比HR=1.00基準値、ODCGAHR=1.73及びODCAA遺伝子型HR=1.73P-トレンド=0.0283。結腸症例のみの間で、CRC特異的生存率解析から、上記の臨床的変数に対する調整後、ODC316SNPがCRC特異的生存率の独立予測因子であることが明らかになった。ODCGG結腸癌症例と比較して、死亡のCRC特異リスクHRは、ODCGA遺伝子型の場合2.311.15-4.64であり、ODCAA遺伝子型の場合3.730.93-14.99であったP-トレンド=0.006表2。これらの結腸癌症例の全生存期間解析はCRC特異的生存率解析と一致した表2。直腸癌症例間で、CRC特異的生存率解析から、上述の臨床的変数に対して調整後に、ODC316SNPがCRC特異的生存率の独立予測因子ではないことが明らかになった。ODCGG直腸癌症例と比較してHR=1.00、基準値、CRC特異的死亡リスクHRは、ODCGAヘテロ接合体の場合1.720.83-3.57であり、ODCAAホモ接合体の場合1.930.56-6.67であったP-トレンド=0.12。上述のように、ODC316遺伝子型分布は民族間で異なっていた。偶然を除き、観察された死亡リスクは、ODC遺伝子型に基づく相違を反映すると思われるが、しかしリスクは特定の民族グループに限定され得る。従って、白人結腸癌症例の間で多変量解析を行い、この単一民族内の遺伝子型特異的死亡リスクを評価した。234例の白人結腸癌症例中、CRC-関連死が37例あった。多変量CRC特異的生存率解析から、上述の関連臨床変数に対して調整後、ODC316SNPが、白人結腸癌症例においてCRC特異的生存率の独立予測因子であることが明らかになった。ODCGG遺伝子型の例と比較してHR=1.00、基準値、CRC特異的死亡リスクHRは、ODCGA遺伝子型の場合は2.671.22-5.82であり、ODCAA遺伝子型の場合は6.281.46-26.95であったP-トレンド=0.0018。CRC症例における遺伝子型特異的生存率の差は結腸癌症例に限定され、ODCGG遺伝子型の症例と比較してHR=1.00、基準値、調整済みのCRC-SSハザード比HRは、ODCGA症例の場合2.311.15-4.64であり、ODCAA症例の場合3.730.93-14.99であったP-トレンド=0.006。結腸癌細胞において、2個のE-ボックスに隣接するODC316SNPにより、ODCプロモーター活性が予測される。E-ボックス活性化因子c-MYC及び抑制因子MAD1及びMAD4は、培養細胞中で、メジャーG-アレルと比較してマイナーA-に選択的に結合する。11年間のフォローアップ期間がある結腸直腸癌症例でのこの母集団ベース分析に基づいて、結腸癌症例において、316ODCSNPが結腸直腸癌特異的生存率に関連することが認められた。年齢、性別、民族、腫瘍ステージ、CRC家族歴、腫瘍部位、組織学ならびに手術、放射線療法及び化学療法による治療に対する調整後、結腸癌症例において、ODCAアレルが付加される度に即ちODCGGからGA、そしてAAへ、CRC特異的死亡リスクの統計学的に有意な上昇が認められたP-トレンド=0.006。D.転写因子のアレル特異的制御結腸癌上皮細胞において、G-、アレルと比較してA-を含有するプロモーターエレメントへのE-ボックス転写因子の結合が多いことにより証明されるように、ODC316SNPが機能的に意義があることが示されている。活性化因子c-MYC及び抑制因子MAD1の両者とも、G-アレルよりもA-を含有するレポーターエレメントにおけるプロモーター活性に対してより大きな影響を示す。これらの結果から、E-ボックス転写因子によるODCのアレル特異的制御が示唆される。ODCタンパク質酵素活性はODC316SNP遺伝子型により明らかな影響は受けず、ODC316SNP遺伝子型はODC転写に影響を及ぼすと発明者らは考える。結腸細胞において、正常結腸粘膜で発現される遺伝子である野生型APCの条件付き発現が、c-MYCを抑制し、MAD1発現を向上させることが示されているFultz及びGerner、2002。さらに、316SNP依存性に野生型APCがODCプロモーター活性を制御することができることが報告されているMartinezら、2003。野生型APCは、FAPに罹患していない個体の見かけ上正常な結腸粘膜において発現され、一方で孤発性の結腸腺腫の大分部は、APCに突然変異又は欠失があるという所見が認められるIwamotoら、2000。MYCは、正常腸粘膜では発現レベルが低いが、APCMin/マウスの腸腺腫では上昇している。腸上皮MYC発現の条件付きノックアウトにより、APCMin/マウスにおいて腸腫瘍形成が抑制されるIgnatenkoら、2006。上述のように、発明者らのグループによる先行研究Martinezら、2003及びその他Hubnerら、2008から、臨床予防試験において結腸ポリープ再発に対して、特にアスピリン使用者において、ODCA-アレルに関する予防的役割が明らかになった。しかし、本明細書中で提示される母集団ベース研究において、ODCA-アレルは低生存率と関連があった。この明らかな矛盾は、本明細書中で示される結果により説明され得、このことから、E-ボックス活性化因子及び抑制因子の両者とも選択的にODCA-アレルに結合することが示される。E-ボックス抑制因子を発現する正常上皮から腫瘍上皮への遷移はODCA-アレルを有する個体において遅延し得る。この効果は、ポリアミン合成抑制の結果によるものであり得る。しかし、形質転換上皮がE-ボックス活性化因子c-MYCなどを発現し始めたら、ODCA遺伝子型を有する個体において癌進行が起こる可能性が高くなり得る。結腸癌特異的死亡リスクに対する結果は、前立腺癌リスクが、遺伝子環境相互作用の結果として特定の個人の間でODCA-アレルと関連があり得ることを示す結果と一致するO’Brienら、2004;Visvanathanら、2004。このような結腸癌進行は、前立腺癌に対して既に明らかにされているように、ポリアミン合成の促進によるものであり得るSimoneauら、2008。ODCSNPなどの因子が癌腫形成に対して促進及び抑制効果両方を有し得るというこの知見は特別なものではない。例えば、形質転換増殖因子-βTGF-βは、癌腫形成及び癌進行において多様な役割を有するDerynckら、2001;Pardali及びMoustakas、2007;Roberts及びWakefield、2003。形質転換された細胞におけるTGF-βは、細胞増殖を抑制し、アポトーシスを誘導する。また、これはヒト腫瘍全てによって過剰発現され、末期癌の進行、具体的には腫瘍浸潤及び転移に関連する。ヒト結腸直腸腫瘍におけるODC活性を報告する1つの研究から、高レベルのODC発現が生存率向上と顕著に関連することが明らかになったMatsubaraら、1995。このことから、ODC過剰発現がヒト結腸直腸腺腫の形成を促進するにもかかわらず、既存病変において、ODC過剰発現により増殖が促進され、抗増殖治療に対する反応性向上と関連する可能性があることが示唆される。しかし、その研究には、ODC遺伝子型による層別化は含まれておらず、これらの効果がODC遺伝子型に独立であるか否かは分からない。CRC特異的死亡率とのODC316SNPの関連が認められるのは、結腸癌の症例に限定されていた。結腸癌症例の間で、白人については特に強い効果が認められた。他の報告と同様に、ODC316SNPアレル頻度は民族によって大きく異なるO’Brienら、2004。生存率解析が白人即ちこのような解析に対して十分な検出力がある唯一の民族グループのみに限定された場合、ODC316SNPの関連は有意であり、コホート全体に対して認められた推定値よりも大きかった。疫学的研究は、併発状態におけるデータ不足、一般状態及び使用される特定の化学療法レジメンを含め、他の母集団ベース分析と同じ制限を有する。さらに、家族性結腸直腸癌のUCIrvineGene-EnvironmentStudyの参加者から得られた組織生検試料はパラフィン包埋検体であり、従って高速液体クロマトグラフィーHPLCによる組織ポリアミン定量の正確な評価には使用できない。中央値16ヶ月という、CRC診断から試験登録までの遅延があったため、CRC生存者のうち比較的健康な群が優先されがちであるという選択バイアスの可能性もある。本発明において考慮されなかったポリアミン代謝に影響を及ぼす他の因子により発明者らの所見が説明され得る。例えば、アスピリンはポリアミンアセチル化及び輸出を活性化し、細胞及び組織ポリアミン含量を減少させるためにODCA-アレルとともに作用するGernerら、2004;Martinezら、2003;Babbarら、2006。まとめると、結腸癌症例でのCRC特異的死亡率におけるODC316SNPの臨床的帰結が認められた。さらに、ヒト結腸癌細胞におけるこの遺伝子のc-MYC-及びMAD1-依存性転写におけるODC316SNPの機能的意義がより詳細に理解される。総合すると、これらの実験的及び疫学的知見から、結腸腺腫への進行において以前報告されていた役割とは異なる、結腸癌の進行におけるODC316SNPの役割が示唆される。これらの知見は、結腸癌進行リスクを評価するために使用することができ、患者特異的薬理遺伝学的管理、サーベイランスモニタリングを指導し、二次及び三次結腸癌予防に対する新規の標的となるアプローチを知らせるために使用し得る。E.要約腺腫再発に対する完全モデルにおいてODC1遺伝子型及び治療に対して統計学的に有意な相互作用が検出されP=0.021、プラセボ患者間の腺腫再発パターンはGG-50、GA-35、AA-29であり、それに対してエフロルニチン/スリンダク患者では:GG-11、GA-14、AA-57であった。ここで、エフロルニチン及びスリンダクの腺腫抑制効果は、少なくとも1つのA-アレルを有するアスピリン投与CRA患者における再発性腺腫リスク低下を示す以前の報告と対照的に、メジャーGホモ接合ODC1遺伝子型の患者でより大きかったMartinezら、2003;Barryら、2006;Hubnerら、2008。これらの結果から、ODC1A-アレルキャリアが、GG遺伝子型患者と比較して、エフロルニチン及びスリンダクでの長期曝露に対する反応性の点で異なり、A-アレルキャリアは腺腫再発に関してベネフィットが少なく、特にAAホモ接合型では聴器毒性を発生するリスクが高くなる可能性があることが明らかになる。XI.DFMO及びスリンダクによる治療と食事性ポリアミン摂取との間の相互作用下記実施例セクションで詳細に記載する研究において、発明者らは、結腸直腸腺腫予防臨床試験で、再発性腺腫のリスクにおいてDFMOスリンダクによる治療と食事性ポリアミン摂取との間の有意な相互作用を認めた。ポリアミン摂取量が下位4分の3に相当する患者では81のリスク低下が認められるのに対して、食事性ポリアミン摂取量が上位4分の1に相当する患者は、DFMOスリンダクでの治療後、異時性腺腫リスク低下が示されなかった。この実験において、ベースライン時で、最大食事性ポリアミン摂取群の患者は組織ポリアミンレベルがより高く、大きな腺腫43.6対26.4、P=0.016及び進行性腺腫52.7対35.9、P=0.028の割合がより大きかった表2。さらに、最大食事性ポリアミン摂取群の患者のより多くの割合が高悪性度腺腫を有したが32.7対20.4、P=0.060、この差は有意ではなかった。これらの結果は全般的に、食事性ポリアミン摂取増加が腸腺腫異形成のグレード上昇と顕著に関連しているというマウスモデル研究の結果を反映する。IgnatenkoNA,BesselsenDG、RoyUKら:Dietarnyputrescinereducestheintestinalanticarcinogenicactivityofsulindacinamurinemodeloffamilialadenomatouspolyposis.NutrCancer56:172-81,2006。別の動物実験において、食事を介したビフィドバクテリウムロンガムBifidobacteriumlongumの投与によってポリアミン吸収が低下した結果、細胞増殖速度ならびにODC活性を抑制することにより、結腸腫瘍発生率、腫瘍多発性が顕著に抑制され、腫瘍サイズが縮小することが認められた。SinghJ,RivensonA,TomitaMら:Bifidobacteriumlongum,alacticacid-producingintestinalbacteriuminhibitscoloncancerandmodulatestheintermediatebiomarkersofcoloncarcinogenesis.Carcinogenesis18:833-41,1997。これらの結果から、食事性ポリアミン摂取量が上位4分の1に相当する患者においてベースライン組織スペルミン及びスペルミジンレベルが上昇した。これらの知見は、全般的に、食事性のプトレッシン補充がAPCMin/マウスにおける腸組織プトレッシンレベルを上昇させたというIgnatenkoにより行われた実験的研究と一致する。IgnatenkoNA,BesselsenDG,RoyUKら:Dietaryputrescinereducestheintestinalanticarcinogenicactivityofsulindacinamurinemodeloffamilialadenomatouspolyposis.NutrCancer56:172-81,2006。しかし、本分析において、組織プトレッシンレベルは、ベースラインの食事性ポリアミン摂取とは関連がなかった。これは、身体組織に保持される割合が食事性スペルミジンの場合は40であるのに対して、食事性プトレッシンのうち身体組織に保持されるのは僅か10であるからであり得る。HughesEL,GrantG,PusztaiAら:Uptakeandinter-organdistributionofdietarypolyaminesintherat.BiochemSocTrans26:S369,1998。外部から得られたポリアミンは、細胞外間隙から細胞に輸送され、細胞内に入ると、外因性プトレッシンはスペルミジン及びスペルミンへと迅速に変換されるこれらは相互交換可能。MilovicV,TurhanowaL,FaresFAら:S-adenosylmethioninedecarboxylaseactivityandutilizationofexogenousputrescineareenhancedincoloncancercellsstimulatedtogrowbyEGF.ZGastroenterol36:947-54,1998。試験の目的の1つは、異時性腺腫リスク低下における食事性ポリアミン摂取及びDFMOスリンダクによる治療の相互作用を評価することであり、統計学的に有意な相互作用が認められたP=0.01。ここで、発明者らは、DFMOスリンダクによる低食事性ポリアミン群における81の異時性腺腫リスク低下を報告したが、これは70腺腫リスク低下が認められた親試験と比較して実質的なリスク低下である。これは、食事性ポリアミン摂取の制限が結腸直腸腫瘍の予防に有用である可能性があることを強調する。発明者らはまた、低食事性ポリアミン群における進行性腺腫の94リスク低下にも注目したが、これは、親実験で報告されたものと同様であった。しかし最大食事性ポリアミン群において、DFMOスリンダク対プラセボでのベネフィットは認められなかった[RR、1.04;95CI、0.32-3.36]。マウスの実験的研究において、NSAIDによる、ODCの阻害、スペルミジン/スペルミンN1-アセチルトランスフェラーゼの誘導及びポリアミン輸送の誘導は、細胞内ポリアミン含量及びアポトーシスの減少に寄与した。細胞へのスペルミジン添加によってアポトーシスが阻止され、細胞数が保持され、このことから、発明者らの研究で認められたように、外因性ポリアミンがNSAIDの有効性を反転させ得ることが示唆される。IgnatenkoNA,BesselsenDG,RoyUKら.:Dietaryputrescinereducestheintestinalanticarcinogenicactivityofsulindacinamurinemodeloffamilialadenomatouspolyposis.NutrCancer56:172-81,2006;HughesA,SmithNI,WallaceHM:Polyaminesreversenon-steroidalanti-inflammatorydrug-inducedtoxicityinhumancolorectalcancercells.BiochemJ374:481-8,2003。これらのデータは、外因性ポリアミンがポリアミンホメオスタシスを支配し、DFMO及びスリンダクの有効性に影響を与えることを示すマウス実験による結果を補強する。低食事性ポリアミン群即ち試験母集団の下位4分の3において、プラセボと比較して、DFMOスリンダクによって腺腫再発リスクが低下することから、ODC阻害がこの群での結腸癌の化学的予防における有望なアプローチとして確認される。ポリアミン制御の他のソースが考慮されるべきである。ODC1における遺伝的多型は、結腸直腸癌生存率と関与することが示されており、DFMOスリンダクによる治療後の腺腫再発リスクに影響を及ぼし得る。ZellJA,ZiogasA,IgnatenkoNら:Associationsofapolymorphismintheornithinedecarboxylasegenewithcolorectalcancersurvival.ClinCancerRes15:6208-16,2009;ZellJA,McLarenCE,ChenW-Pら:OrnithinedecarboxylaseOdc-1genepolymorphismeffectsonbaselinetissuepolyaminelevelsandadenomarecurrenceinarandomizedphaseIIIadenomapreventiontrialofDFMOsulindacversusplacebo.JClinOncol26S:Abstract1502,2008。従ってODC1遺伝子型と食事性ポリアミン摂取との間の相互作用は、ポリアミンホメオスタシスに影響を与え得る。しかし、発明者らは、ODC遺伝子型により本分析を層別化する十分な分析力がない。ここで、発明者らは、ベースライン時の食事性ポリアミン摂取と組織ポリアミンレベルとの間の関係を明らかにすることによって、以前に確立されたポリアミンデータベースを検証する。ナッツ類、ある種のチーズ及び肉を含むいくつかの食品においてポリアミン含量が高い。肉の消費は、ポリアミン消費に取って代わるものであるが、食事性ポリアミンの相当量がオレンジジュース、トウモロコシ及びエンドウなどの様々な食品からも得られる。総ポリアミン摂取及び1日の総アルギニンに対して観察された関連性rs=0.64は、動物由来タンパク質摂取に対して認められたものよりも大きかったrs=0.49。このアルギニンと食事性ポリアミンとの間の関係は、食事性アルギニンにより誘発される腸腫瘍形成をDFMO及びNSAIDなどのポリアミン-阻害物質により抑制することができることを示す、APCMin/マウスにおける以前の研究を裏付ける。ZellJA,IgnatenkoNA,YerushalmiHFら:Riskandriskreductioninvolvingarginineintakeandmeatconsumptionincolorectaltumorigenesisandsurvival.IntJCancer120:459-68,2007。この研究にはいくつかの制限がある。主要な制限は、再発リスクの分析において被験者数が比較的少数n=188であることである。このように少数であったため、この研究は、特に最大食事性ポリアミン群において詳細なサブセット分析を行うのに十分な分析力がなかった。また、認められるべきこととして、この試験計画が、ベースラインの食事性ポリアミン摂取に基づく層別化を含まなかった。特に発明者らの分析がベースラインの食事に関する質問表に基づき、本研究中に様々な時間間隔におけるものでないことを考えれば、人々の食生活が時間とともに変化し得、これが発明者らの結果に影響し得ることが認識される。しかし、中年から高齢層の患者は一般に食事パターンが安定しており一定であるので、生命にかかわる新しい医学的状態がない場合、3年間の試験中に中年から高齢層では大きな食事の変化の可能性が低いことが推定されることに着目されたい。従って、この分析における単回の最初のFFQからのデータを使用することは妥当である。自己報告に基づく食事評価法は全て、正確性に限界があり、精密な摂取測定を与えるというよりも、この研究において分析されるように精々高摂取と低摂取を区別することができる程度である。患者のほぼ50が、ポリアミンの体内プールを調整し得るアスピリンを服用していたが、最終的な推定をアスピリン使用に対して調整し、発明者らは、ロジスティック回帰モデルにおいてベースラインの食事性ポリアミン摂取とアスピリンとの間で有意な相互作用を認めなかった。親研究において、3年間の治療期間にわたるDFMOポリアミン合成の選択的阻害剤及びスリンダクNSAIDの併用の前向きランダム化プラセボ比較臨床試験の結果、プラセボと比較して、全異時性腺腫の再発が70減少し、進行性及び多重腺腫の再発が>90減少した。この食事性ポリアミン分析で与えられる知見から、低量から通常量の食事性ポリアミン摂取を報告している患者間で、異時性腺腫のリスクが81低下し、進行性腺腫が94減少したことが明らかとなり、このことから、食事性ポリアミンが腺腫予防における重要な因子であり得ることが示唆される。ポリアミン阻害物質による化学的予防に対する補助的ストラテジーとして外因性ポリアミンの調節を使用し得、例えばポリアミン-阻害物質を用いた二次及び三次結腸直腸癌予防試験が展開される。XII.遺伝多型分析実施例セクションに記載される具体的な方法を含む、下記で提供される方法を用いて、患者のODC1プロモーター遺伝子の316位置での遺伝子型を決定することができる。これらの方法は、当業者により適用されるように分子生物学の原理及び技術を用いてさらに改変し、最適化し得る。このような原理及び技術は、例えば参照により本明細書中に組み込まれるSmallら、2002で教示される。一塩基多型SNPの同定のために使用される一般的方法を下記で与える。Kwok及びChen2003及びKwok2001の参考文献は、これらの方法のいくつかの概要を提供し、これらは両者とも参照により具体的に組み込まれる。ODC1に関連するSNPの特徴は、これらの方法又はその適切な改法の何れかの使用であり得る。このような方法には、部位の直接又は間接的配列決定、その部位の個々のアレルが制限部位を生成させるか又は破壊する制限酵素の使用、アレル特異的ハイブリッド形成プローブの使用、遺伝多型の異なるアレルによりコードされるタンパク質に特異的な抗体の使用又は何らかの他の生化学的解釈が含まれる。A.DNA配列決定一般に使用される、遺伝多型の特徴評価の方法は、遺伝多型に隣接し、遺伝多型を含む遺伝子座の直接的DNA配列決定である。サンガー法としても知られるジデオキシ連鎖停止法Sangerら、1975又はマクサムギルバート法としても知られる化学分解法Maxamら、1977の何れかを用いてこのような分析を遂行することができる。望ましい遺伝子の回収を容易にするために、ポリメラーゼ連鎖反応などのゲノム配列特異的増幅技術と組み合わせて配列決定を使用し得るMullisら、1986;欧州特許出願第50,424号;欧州特許出願第84,796号、欧州特許出願第258,017号、欧州特許出願第237,362号;欧州特許出願第201,184号;米国特許第4,683,202号;同第4,582,788号;及び同第4,683,194号、これらは全て参照により本明細書中に組み込まれる。B.エキソヌクレアーゼ抵抗性多型部位に存在するヌクレオチドの正体を調べるために使用することができる他の方法は、特別なエキソヌクレアーゼ抵抗性ヌクレオチド誘導体を利用する米国特許第4,656,127号。多型部位のすぐ3’側にあるアレル配列に相補的なプライマーは、研究対象下のDNAとハイブリッド形成する。DNAにおける多型部位が、存在する特定のエキソヌクレオチド抵抗性ヌクレオチド誘導体と相補的であるヌクレオチドを含有する場合、誘導体はハイブリッド形成されるプライマーの末端にポリメラーゼにより組み込まれる。このような組み込みにより、プライマーがエキソヌクレアーゼ切断に対して抵抗性になり、それによってその検出が可能になる。エキソヌクレオチド抵抗性誘導体の正体が分かっているので、DNAの多型部位に存在する特異的ヌクレオチドを決定することができる。C.ミクロシークエンシングDNAにおける多型部位をアッセイするためのいくつかの他のプライマー誘導性ヌクレオチド組み込み手段が記載されているKomherら、1989;Sokolov,1990;Syvanen1990;Kuppuswamyら、1991;Prezantら、1992;Ugozzollら、1992;Nyrenら、1993。これらの方法は、多型部位において塩基と塩基とを区別するための標識付加デオキシヌクレオチドの組み込みによる。シグナルは組み込まれるデオキシヌクレオチド数に比例するので、同じヌクレオチドの分析中に生じる多型の結果、その分析の長さに比例するシグナルが得られるSyvanenら、1990。D.溶液中での伸長仏国特許第2,650,840号及びPCT出願第WO91/02087号は、多型部位のヌクレオチドの正体を決定するための溶液ベースの方法を考察する。これらの方法に従い、多型部位のすぐ3’側にあるアレル配列に相補的なプライマーを使用する。その部位のヌクレオチドの正体は、多型部位のヌクレオチドと相補的である場合、プライマーの末端に組み込まれる標識化ジデオキシヌクレオチド誘導体を使用して決定される。E.ジェネティックビットGeneticBit分析又は固相伸長PCT出願第W092/15712号は、標識化ターミネーター及び、多型部位の3’側の配列に相補的なプライマーの混合物を使用する方法を記載する。組み込まれる標識化ターミネーターは、評価している標的分子の多型部位に存在するヌクレオチドに相補的であり、従って同定される。この方法では、このプライマー又は標的分子は固相に固定される。F.オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイOLAこれは、異なる方法論を利用する別の固相法であるLandegrenら、1988。標的DNAの1本鎖の隣接配列とハイブリッド形成可能な2つのオリゴヌクレオチドを使用する。これらのオリゴヌクレオチドのうち一方が生合成され、その一方で他方が検出可能に標識される。的確な相補配列が標的分子中に見つけられる場合、オリゴヌクレオチドが、それらの末端が隣接し、ライゲーション基質を形成するように、ハイブリッド形成する。ライゲーションにより、アビジンを使用することによって標識化オリゴヌクレオチドの回収が可能となる。PCRと組み合わせた、この方法に基づく他の核酸検出アッセイも記載されているNickersonら、1990。この方法では、標的DNAの指数関数的増幅を達成するためにPCRを使用し、次いでOLAを用いてこの標的DNAを検出する。G.リガーゼ/ポリメラーゼが介在するジェネティックビットGeneticBit分析米国特許第5,952,174号は、標的分子の隣接配列に対してハイブリッド形成可能な2つのプライマーも含む方法を記載する。標的が固定された固体支持体上でハイブリッド形成生成物が形成される。ここで、1ヌクレオチド分のスペースによりプライマーが互いに分離されるようにハイブリッド形成が起こる。ポリメラーゼ、リガーゼ及び、少なくとも1つのデオキシヌクレオシド三リン酸を含有するヌクレオシド三リン酸混合物の存在下でこのハイブリッド形成生成物をインキュベートすると、隣接するハイブリッド形成オリゴヌクレオチドの何れかのペアのライゲーションが可能になる。リガーゼを添加すると、その結果、シグナル生成に必要な2つの事象である伸長及びライゲーションが起こる。これにより、伸長又は連結の何れかのみを使用する方法よりも特異性が高く、ノイズが少なくなり、そしてポリメラーゼに基づくアッセイとは異なり、この方法では、シグナルを固相に連結させるための第二のハイブリッド形成及びライゲーション段階と組み合わせることによって、ポリメラーゼ段階の特異性が向上している。H.侵出開裂反応InvasiveCleavageReaction特定の遺伝多型について細胞DNAを評価するために、侵出開裂反応を使用することができる。INVADER登録商標と呼ばれる技術はこのような反応を使用する例えば、参照により組み込まれる、deArrudaら、2002;Stevensら、2003。一般に、3種類の核酸分子がある:1標的部位上流のオリゴヌクレオチド上流オリゴ、2標的部位を包含するプローブオリゴヌクレオチドプローブ及び3標的部位のある1本鎖DNA標的。これらの上流オリゴ及びプローブは重複しないが、連続配列を含有する。プローブは、フルオレセインなどの供与体フルオロフォア及びダブシルなどのアクセプター色素を含有する。上流オリゴの3’末端のヌクレオチドは、プローブ-標的2量体の最初の塩基対と重複侵出する。次いで、構造特異的5’ヌクレアーゼによりプローブが切断され、フルオロフォア/クエンチャーペアの分離が起こり、検出できる蛍光量が増加する。Luら、2004参照。一部の例では、固体表面上で又はアレイ方式でアッセイが行われる。I.SNPを検出するための他の方法遺伝多型検出及び同定のためのいくつかの他の具体的方法を下記で与えるが、これらは、本発明におけるODC1遺伝子の多型を同定することと組み合わせて、そのまま又は適切な改変を行って使用され得る。参照により本明細書中に組み込まれるNCBIのSNPウェブサイト、WorldWideWebatncbi.nlm.nih.gov/SNP上にもいくつかの他の方法が記載されている。特定の実施態様において、集団において任意の遺伝子座で拡張したハプロタイプを決定し得、これによって正確にどのSNPが冗長であるか及びどれが関連研究に必須であるかを同定できるようになる。後者はハプロタイプタグSNPhtSNPと呼ばれ、連鎖不平衡の遺伝子又は領域のハプロタイプを捕捉するマーカーである。それぞれ、例示的方法として、参照により本明細書中に組み込まれるJohnsonら2001及びKe及びCardon2003を参照のこと。VDA-アッセイは、TaKaRaLATaq試薬及び他の標準的反応条件を用いたロングPCR法によるゲノムセグメントのPCR増幅を利用する。長い増幅によって、約2,000から12,000bpの大きさのDNAが増幅され得る。変異体検出用アレイVDAと産物とのハイブリッド形成は、AffymetrixHighThroughputScreeningCenterによって行い、コンピュータソフトウェアで分析することができる。チップアッセイと呼ばれる方法は、標準的又はロングPCRプロトコールによるゲノムセグメントのPCR増幅を使用する。ハイブリッド形成産物は、VDA参照により本明細書中に組み込まれる、Halushkaら1999により分析される。SNPは一般に、ハイブリッド形成パターンのコンピュータ分析に基づき、確実又は可能性が高いとして分類される。ヌクレオチド配列決定などの代替的検出法との比較により、確実なSNPは100確証され、可能性が高いSNPの場合、この方法によって確証されるのは73である。他の方法は、単に、関連制限酵素での消化後、PCR増幅を含む。さらに他のものは、既知のゲノム領域からの精製PCR産物の配列決定を含む。また別の方法において、個々のエクソン又は大きなエクソンの重複断片をPCR増幅する。プライマーは公開又はデータベース配列から設計し、次の条件を用いてゲノムDNAのPCR-増幅を行う:200ngDNAテンプレート、プライマー各0.5μM、dCTP、dATP、dTTP及びdGTP各80μM、5ホルムアミド、1.5mMMgCl2、Taqポリメラーゼ0.5U及びTaq緩衝液0.1体積。サーマルサイクリングを行い、様々な条件下、例えば15尿素入りで5グリセロールを含むか又は含まない5又は10ポリアクリルアミドゲルでのPCR-1本鎖高次構造多型PCR-SSCP分析によって、得られたPCR産物を分析する。電気泳動を一晩行う。移動変化を示すPCR産物を再増幅し、ヌクレオチド変異を同定するために配列決定する。CGAP-GAIDEMIGLACEと呼ばれる方法において、配列及びアラインメントデータPHRAP.aceファイルより、配列ベースコールに対する品質スコアPHRED品質ファイルより、距離情報PHYLIPdnadist及びneighbourプログラムより及びベースコールデータPHRED’-d’スイッチよりをメモリに加える。配列をアラインし、得られたアセンブリの各垂直チャンクスライスを不一致に対して調べる。このようなスライスは何れもSNP候補と考えられるDEMIGLACE。DEMIGLACEでは、真の多型に当てはまる可能性が少ないスライスを排除するために多くのフィルターが使用される。これらには、i隣接配列品質スコアが40以上低下する場合、所定スライス中の配列をSNPの検討から除外する;iiピーク幅がそのヌクレオチドタイプに対する全てのベースコールの15パーセンタイル以下であるコールを除外する;iiiコンセンサスとの不一致を多数有する配列領域を不適格とし、SNP計算に加えない;ivコールされるピーク中でピーク面積の25以上を占める代替コールがある何れのベースコールも検討から除外する;vある1つの読み取り方向でのみ起こる変動を除外する、フィルターが含まれる。PHRED品質スコアをスライス中の各ヌクレオチドに対して誤識別値に変換する。標準ベイズ法を使用して、ある一定の位置でヌクレオチド異質性の証拠がある事後確率を計算する。CU-RDFRESEQと呼ばれる方法において、各SNPに対する特異的プライマーを用いて、血液から単離されるDNAからPCR増幅を行い、使用されなかったプライマー及び遊離ヌクレオチドを除去するための典型的なクリーンアッププロトコールの後、同じ又はネステッドプライマーを用いて直接配列決定を行う。DEBNICKと呼ばれる方法において方法-B、クラスター化EST配列の比較分析を行い、蛍光を用いたDNA配列決定により確認する。DEBNICKと呼ばれる関連法方法-Cにおいて、ミスマッチ部位でphredクオリティーが>20であり、SNPの5’-FLANK及び3’側の5塩基にわたり平均phredクオリティーが≧20で、SNPの5’及び3’側の5塩基でミスマッチがなく、各アレルの出現が少なくとも2回であるクラスター化EST配列の比較分析を行い、トレースを調べることにより確認する。ERORESEQにより同定される方法において、電子公開されているSTSに対して新しいプライマーセットを設計し、10種類の様々なマウス系統からDNAを増幅させるために使用する。次に、各系統からの増幅産物をゲル精製し、33P-標識ターミネーターを用いた標準的なジデオキシ、サイクル配列決定技術を用いて配列決定する。次いでddATPで停止した反応を全て、配列決定ゲルの隣接レーンに載せ、続いてddGTP反応物全てを同様に載せる。放射線写真を目視で走査することによりSNPを同定する。ERORESEQ-HTとして認識される別の方法において、電子公開されているマウスDNA配列に対して新しいプライマーセットを設計し、10種類の様々なマウス系統からDNAを増幅するために使用する。エキソヌクレアーゼI及びエビアルカリホスファターゼで処理することによって、各系統からの増幅産物を配列決定用に調製する。ABIPrismBigDyeTerminatorReadyReactionキットPerkin-Elmerを用いて配列決定を行い、配列試料を3700DNAAnalyzer96キャピラリーシークエンサーにかける。FGU-CBTSCA2-SNPは、プライマーSCA2-FP3及びSCA2-RP3を用いて、SNP含有領域をPCR増幅した方法である。5mMTris、25mMKCl、0.75mMMgCl2、0.05ゼラチン、プライマー各20pmol及びTaqDNAポリメラーゼ0.5Uの最終濃度を含有する50mLの反応体積でおよそ100ngのゲノムDNAを増幅させる。試料を変性させ、アニーリングさせ、伸長させて、例えばQIAquickゲル抽出キットQiagenを用いてアガロースゲルから切り出されたバンドからPCR産物を精製し、PCRプライマーを用いてABIPrism377自動DNAシークエンサー上でダイターミネーター化学法を用いて配列決定する。JBLACKSEQ/RESTRICTとして認識される方法において、ゲノムDNAを用いて2種類の独立したPCR反応を行う。第一の反応由来の産物を配列決定により分析し、これによりユニークなFspI制限部位が示される。FspIで消化することにより第二のPCR反応産物において突然変異を確認する。KWOK1として記載される方法において、ダイターミネーター化学法を用いたPCR産物の直接DNA配列決定による、無作為に選択した4個体の高品質ゲノム配列データを比較することによって、SNPを同定するKwokら、1996参照。KWOK2として認識される関連法において、バクテリア人工染色体BAC又はPIベースの人工染色体PACなどの重複する大きなインサートクローン由来の高品質ゲノム配列データを比較することによって、SNPを同定する。次に、このSNPを含有するSTSを構築し、プールDNA配列決定により、様々な集団におけるSNPの存在を確認するTaillon-Millerら、1998参照。KWOK3と呼ばれる別の同様の方法において、重複する大きなインサートクローンBAC又はPACからの高品質のゲノム配列データを比較することによってSNPを同定する。このアプローチにより見出されるSNPは、2つのドナー染色体間のDNA配列変動に相当するが、一般集団におけるアレル頻度が決定されたことはない。方法KWOK5において、ダイターミネーター化学法でのPCR産物の直接DNA配列決定によるホモ接合DNA試料及び1以上のプールDNA試料の高品質ゲノム配列データを比較することによってSNPを同定する。使用するSTSは、一般利用可能なデータベースで見出される配列データから作製される。具体的に、全ての遺伝子座でホモ接合であることが示されている全胞状奇胎CHM及び80名のCEPH親からのDNA試料に対するPCRによりこれらのSTSが増幅されるKwokら、1994参照。別のこのような方法であるKWOKOverlapSnpDetectionWithPolyBayesにおいて、ラージインサートヒトゲノムクローン配列の重複領域の自動コンピュータ分析によりSNPを発見する。データ取得のために、大規模配列決定センターから直接クローン配列を得る。これが必要であるのは、ベースクオリティー配列がGenBankに存在しない/GenBankから入手不可能なためである。生データ処理には、整合性に対する、クローン配列及び付随するベースクオリティー情報の分析が含まれる。関連ベースクオリティー配列のない終了したベースパーフェクトbaseperfect、エラー率10,000bp中1未満配列に一定のベースクオリティー値40を割り当てるエラー率10,000bp中1個。ベースクオリティー値内のドラフト配列を除外する。処理した配列をローカルデータベースに入力する。マスクされる既知のヒトリピート配列がある各配列も保存する。リピートマスキングは、プログラムMASKERAIDにより行われる。重複検出:プログラムWUBLASTで推定重複を検出する。その後、偽の重複検出結果、即ち、真の重複ではなく、配列重複ゆえに生じるクローン配列ペア間の類似性を除外するために、いくつかのフィルタリング段階を行う。重複の全長、全体的類似度パーセント、ベースクオリティー値が高いヌクレオチド間で異なる配列数ハイクオリティーミスマッチ。結果は、WashingtonUniversityGenomeSequencingCenterでのゲノムクローンの制限断片マッピングの結果、重複に関する完了者の報告及びNCBIでの配列コンティグ構築の取り組みの結果とも比較する。SNP検出:POLYBAYESSNP検出ソフトウェアを用いて候補となるSNP部位に対してクローン配列の重複ペアを分析する。配列決定エラーに対立するものとして、真の配列変動を示す可能性について、配列ペア間の配列の相違をスコア化する。この過程には、両配列に対してベースクオリティー値が存在する必要がある。高スコア候補を抽出する。検索は置換型の一塩基変動に対して制限される。POLYBAYESソフトウェアにより候補SNPの信頼スコアを計算する。KWOKにより識別される方法TaqManアッセイにおいて、90例のランダム個体に対して遺伝子型を決定するためにTaqManアッセイを使用する。KYUGENQlとして識別される方法において、指定集団のDNA試料をプールし、PLACE-SSCPにより分析する。プール分析における各アレルのピークの高さをヘテロ接合体におけるものにより補正し、続いてアレル頻度の計算に対して使用する。10より高いアレル頻度は、この方法によって高い信頼性をもって定量される。アレル頻度=0ゼロとは、個体間でアレルが見出されたが、プールの試験では対応するピークが見られないことを意味する。アレル頻度=0-0.1とは、プールにおいてマイナーアレルが検出されるが、ピークが低すぎて信頼性をもって定量できないことを指す。KYUGEN方法1として識別されるさらに別の方法において、PCR産物を蛍光色素で後標識し、SSCP条件下で自動キャピラリー電気泳動システムにより分析するPLACE-SSCP。一連の実験において、2種類のプールDNA日本人プール及びCEPH親プールとともに又はそれらなしで4以上の個々のDNAを分析する。目視によりアレルを同定する。遺伝子型が異なる個々のDNAの配列決定を行い、SNPを同定する。ヘテロ接合体におけるピーク高を用いたシグナルバイアス補正後、プール試料においてピーク高からアレル頻度を推定する。PCRに対して、両鎖の後標識のためにプライマーの末端に5’-ATT又は5’-GTTを有するようにタグの付加を行う。緩衝液10mMTris-HCl、pH8.3又は9.3、50mMKCl、2.0mMMgCl2、プライマー各0.25μM、dNTP各200μM及び抗Taq抗体と予め混合されているTaqDNAポリメラーゼ0.025単位/Lを含有する反応混合液中でDNA試料10ng/uLを増幅する。DNAポリメラーゼIのクレノウ断片の交換反応により、PCR産物の2本の鎖をR110及びR6Gで修飾されたヌクレオチドで別々に標識する。EDTA添加によって反応を停止させ、ウシ腸アルカリホスファターゼを添加することによって、取り込まれなかったヌクレオチドを脱リン酸化する。SSCPの場合:蛍光標識PCR産物及びTAMRA-標識内部マーカーのアリコートを脱イオン化ホルムアミドに添加し、変性させる。ABIPrism310GeneticAnalyzerを用いてキャピラリーにおいて電気泳動を行う。データ回収及びデータ処理のためにGenescanソフトウェアP-EBiosystemsを用いる。SSCPにおいて異なる遺伝子型を示したものを含む個々のDNA2から11に対して、ABIPrism310シークエンサーにおいてビッグダイターミネーター化学を用いて直接配列決定を行う。ABIPrism310から得た複数の配列トレースファイルを処理し、Phred/Phrapによりアラインし、Consedviewerを用いて調べる。Polyphredソフトウェア及び目視によりSNPを同定する。KYUGENとして認識されるさらに別の方法方法2において、変性HPLCDHPLC又はPLACE-SSCPInazukaら、1997により遺伝子型が異なる個体を探し、SNPを同定するためにそれらの配列を決定する。両鎖の後標識のためにそれらの末端で5’-ATT又は5’-GTTによりタグ付加したプライマーを用いてPCRを行う。WAVEDNA断片分析システムTransgenomicを用いてDHPLC分析を行う。PCR産物をDNASepカラムに注入し、WAVEMakerプログラムTransgenomicを用いて決定された条件下で分離する。DNAポリメラーゼIのクレノウ断片の交換反応により、PCR産物の2本の鎖をR110及びR6Gで修飾されたヌクレオチドで別々に標識する。EDTA添加によって反応を停止させ、ウシ腸アルカリホスファターゼを添加することによって取り込まれなかったヌクレオチドを脱リン酸化する。SSCP後に、続いてABIPrism310GeneticAnalyzerを用いてキャピラリー中で電気泳動を行う。GenescanソフトウェアP-EBiosystems。DHPLC又はSSCPにおいて異なる遺伝子型を示したものを含む個々のDNAに対して、ABIPrism310シークエンサーにおいてビッグダイターミネーター化学を用いて直接配列決定を行う。ABIPrism310から得た複数の配列トレースファイルを処理し、Phred/Phrapによりアラインし、Consedviewerを用いて調べる。Polyphredソフトウェア及び目視によりSNPを同定する。UnigeneにおけるEST配列のトレースクロマトグラムデータをPHREDで処理する。可能性のあるSNPを同定するために、各UnigeneクラスターについてプログラムPHRAP、BRO及びPOAによって生成された多重配列アラインメントから一塩基ミスマッチが報告される。BROは、間違って報告される可能性があるEST方向を補正し、一方POAは、偽SNPを生じさせ得る遺伝子混合/キメラを指す非線形アラインメント構造を同定し、分析する。生クロマトグラム高、尖鋭度、重複及び間隔;配列決定エラー率;コンテクスト感受性context-sensitivity;cDNAライブラリ起源などのデータを評価しながら、ベイズ推論を使用し、配列決定エラー、ミスアラインメント又は曖昧性、ミスクラスター化又はキメラEST配列に対して真の遺伝多型に対する証拠を比較検討する。XIII.製剤処方及び投与経路本開示の治療用化合物は、様々な方法、例えば経口により又は注射例えば皮下、静脈内、腹腔内などにより投与し得る。投与経路に依存して、活性化合物は、その化合物を不活性化し得る酸及びその他の天然の状態の作用から化合物を保護する材料中で被覆され得る。これらはまた、疾患又は創傷部位の連続かん流/点滴により投与し得る。非経口投与以外の方法により治療用化合物を投与するためには、その化合物の不活性化を防ぐための材料で化合物を被覆するか又は不活性化を防ぐための材料とともにその化合物を同時投与する必要があり得る。例えば、適切な担体、例えばリポソーム又は希釈剤中で本治療用化合物を患者に投与し得る。医薬的に許容可能な希釈剤としては、生理食塩水及び水性緩衝液溶液が挙げられる。リポソームとしては、水中油中水CGF乳剤ならびに従来のリポソームが挙げられるStrejanら、1984。本治療用化合物はまた、非経口、腹腔内、髄腔内又は脳内投与することもできる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びそれらの混合物中及び油中で分散液を調製し得る。通常の保管及び使用状態下で、これらの調製物には、微生物の増殖を防ぐための保存料が含有され得る。注射としての使用に適切な医薬組成物としては、滅菌水溶液水溶性である場合又は分散液及び、滅菌水溶液又は分散液の即時調整のための滅菌粉末が挙げられる。全ての例において、組成物は滅菌状態でなければならず、容易にシリンジに吸い取ることができる程度に流動性がなければならない。これは、製造及び保管の条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌などの微生物の混入作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオールグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど、適切なそれらの混合物及び植物油を含有する溶媒又は分散媒であり得る。例えば、レシチンなどの被覆を使用することによって、分散液の場合は要求される粒子サイズの維持によって及び界面活性剤の使用によって、的確な流動性を維持することができる。様々な抗菌及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって微生物作用の防御を達成することができる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば糖類、塩化ナトリウム又はポリアルコール、例えばマンニトール及びソルビトールなど、を含むことが好ましいであろう。吸収を遅延させる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムを又はゼラチンを組成物中に含めることによって、注射用組成物の持続的吸収を行うことができる。滅菌注射溶液は、上述の成分の1つ又は組み合わせとともに、適切な溶媒中で、必要とされる量、治療用化合物を組み込み、続いて必要に応じてろ過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散液は、基本的な分散媒及び上述のもののうち必要とされる他の成分を含有する滅菌担体に本治療用化合物を組み込むことにより調製する。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、その予めろ過滅菌した溶液から活性成分即ち治療用化合物何らかのさらなる望ましい成分の粉末が得られる真空乾燥及び凍結乾燥である。例えば不活性希釈剤又は吸収可能な可食担体とともに本治療用化合物を経口投与することができる。本治療用化合物及び他の成分を硬又は軟殻ゼラチンカプセルに封入するか、圧縮して錠剤にするか又は対象の食餌中に直接組み込むこともできる。経口による治療薬投与の場合、本治療用化合物を賦形剤とともに組み込み、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、縣濁液、シロップ剤、ウエハース剤などの形態で使用し得る。本組成物及び調製物中の治療用化合物のパーセンテージは、当然ではあるが変動し得る。このような治療上有用な組成物中の本治療用化合物の量は、適切な投与量が得られるようなものである。投与し易くし、投与量を均一にするために、非経口組成物を投与単位形態で製剤化することは特に有利である。投与単位形態とは、本明細書中で使用される場合、治療しようとする対象に対して統一された投与量として適した物理的に個別化された単位を指し;各単位は、必要とされる医薬担体と結び付いて望ましい治療効果をもたらすように計算された所定量の治療用化合物を含有する。本発明の投与単位形態に対する規格は、a本治療用化合物及び達成しようとする特定の治療効果の独特の特徴及びb患者における選択された状態の治療に対するこのような治療用化合物の化合の技術分野に固有の制限に左右され、これらに直接依存する。本治療用化合物は、皮膚、眼又は粘膜に局所投与することもできる。あるいは、肺への局所的送達が望ましい場合、乾燥粉末又はエアロゾル製剤中での吸入によって本治療用化合物を投与し得る。患者における状態に関連する状態を治療するのに十分な治療的有効投与量で活性化合物を投与する。例えば、実施例及び図面で示されるモデルシステムなど、ヒトにおける疾患の治療での有効性を予測し得る動物モデル系において化合物の有効性を評価することができる。対象に投与される本開示の化合物又は本開示の化合物を含む組成物の実際の投与量は、年齢、性別、体重、状態の重症度、治療される疾患のタイプ、以前の又は現在の治療的介入、対象の特発性疾患などの身体的及び生理学的因子ならびに投与経路により決定され得る。これらの因子は、熟練者により決定され得る。投与責任医師は一般的に組成物中の活性成分濃度及び個々の対象に対する適切な用量を決定する。何らかの合併症のイベントにおいて個々の医師により投与量が調整され得る。有効量は一般的に、1日1回以上の投与で、1日又は数日にわたり、約0.001mg/kgから約1000mg/kg、約0.01mg/kgから約750mg/kg、約100mg/kgから約500mg/kg、約1.0mg/kgから約250mg/kg、約10.0mg/kgから約150mg/kgと変動する当然ではあるが投与形式及び上記で論じた因子に依存する。。他の適切な用量範囲としては、1mgから10000mg/日、100mgから10000mg/日、500mgから10000mg/日及び500mgから1000mg/日が挙げられる。いくつかの特定の実施態様において、この量は10,000mg/日未満、750mgから9000mg/日の範囲である。有効量は、1mg/kg/日未満、500mg/kg/日未満、250mg/kg/日未満、100mg/kg/日未満、50mg/kg/日未満、25mg/kg/日未満又は10mg/kg/日未満であり得る。あるいは、これは、1mg/kg/日から200mg/kg/日の範囲であり得る。例えば、糖尿病患者の治療に関して、単位投与量は、未処置対象と比較した場合に血中グルコースを少なくとも40低下させる量であり得る。別の実施態様において、単位投与量は、非糖尿病対象の血糖値の±10であるレベルに血中グルコースを低下させる量である。他の非限定例において、用量はまた、投与1回あたり、約1μg/kg/体重、約5μg/kg/体重、約10μg/kg/体重、約50μg/kg/体重、約100μg/kg/体重、約200μg/kg/体重、約350μg/kg/体重、約500μg/kg/体重、約1mg/kg/体重、約5mg/kg/体重、約10mg/kg/体重、約50mg/kg/体重、約100mg/kg/体重、約200mg/kg/体重、約350mg/kg/体重、約500mg/kg/体重から約1000mg/kg/体重以上及びこれらにおいて導き出せる何らかの範囲も含み得る。本明細書中で列挙される数字から導き出せる範囲の非限定例において、約5mg/kg/体重から約100mg/kg/体重、約5μg/kg/体重から約500mg/kg/体重などの範囲を上述の数字に基づき投与し得る。ある種の実施態様において、本開示の医薬組成物は、本開示の化合物を例えば少なくとも約0.1含み得る。その他の実施態様において、本開示の化合物は、単位重量の約2から約75の間又は約25から約60の間、例えばこれらにおいて導き出せる何らかの範囲を占め得る。薬剤の単回又は複数回投与が企図される。複数回投与量の送達のための望ましい時間間隔は、通常の実験のみを使用して、当業者により決定され得る。例として、対象におよそ12時間の間隔で1日2回投与し得る。いくつかの実施態様において、薬剤を1日1回投与する。通常のスケジュールで薬剤を投与し得る。本明細書中で使用される場合、通常のスケジュールとは、予め定められた指定の期間を指す。通常のスケジュールは、このスケジュールが予め定められたものである限り、長さが同一であるか又は異なる期間を包含し得る。例えば、通常のスケジュールは、1日2回、毎日、2日ごと、3日ごと、4日ごと、5日ごと、6日ごと、毎週、毎月又はそれらの間の日数もしくは週数の何らかのセットを含み得る。あるいは、予め定められた通常スケジュールは、第1週に1日2回、次いで数ヶ月にわたり毎日などの投与を含み得る。その他の実施態様において、本発明は、薬剤が経口で摂取され得、そのタイミングが食物摂取に依存するか又は依存しないことを提供する。従って、例えば、対象がいつ食べたか、いつ食べるのかにかかわらず、薬剤が毎朝及び/又は毎夕摂取され得る。XIV.併用療法単一組成物又は両薬剤を含む医薬製剤を用いて又は、一方の組成物が本発明の化合物を含み、他方が第二の薬剤を含み、同時投与される2種類の個別の組成物もしくは製剤を使用して、有効な併用療法を達成し得る。あるいは、本治療薬を先に投与し、続いて分単位から月単位の範囲の間隔で他方の薬剤を投与し得る。様々な併用投与を使用し得るが、Aが第一の薬剤例えば、DFMOに相当し、Bが第二の薬剤例えばスリンダクに相当するものとして、これらの非限定例を下記で述べる:A/B/AB/A/BB/B/AA/A/BA/B/BB/A/AA/B/B/BB/A/B/BB/B/B/AB/B/A/BA/A/B/BA/B/A/BA/B/B/AB/B/A/AB/A/B/AB/A/A/BA/A/A/BB/A/A/AA/B/A/AA/A/B/A。XV.実施例次の実施例は、本発明の好ましい実施態様を明らかにするために含まれる。当業者にとって当然のことながら、続く実施例で開示される技術は本発明の実施において良好に機能することが本発明者により発見された代表的技術を表し、従ってその実施に対する好ましい方式を構成すると考えられ得る。しかし、当業者は、本開示に照らして、開示される具体的な実施態様において多くの変更がなされ得、それでも本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、同様の結果を得ることができることを認識するであろう。実施例1-疫学的研究:CRC特異的生存率とODC316SNPとの関連実験計画:本研究には、集団ベースのUCIrvineGene-EnvironmentStudyofFamilialCRC1994から1996年に診断、2008年3月までフォローアップからの440例の偶発CRC症例が含まれた。一次アウトカムは、ODC遺伝子型GG対AA/GAによるCRC特異的生存率CRC-SSであった。ヒト結腸癌細胞株において、ウエスタンブロッティング及びクロマチン免疫沈降CHIPアッセイを介してE-ボックス転写因子のODCアレル特異的結合を調べた。転写活性化因子c-MYC又は抑制因子MAD1の何れかを発現するベクターと組み合わせてプロモーターコンストラクトを用いて、ODCアレル特異的プロモーター活性を調べた。結果:CRC症例間の遺伝子型特異的生存率の相違は結腸癌症例に限定されており、ODCGG遺伝子型症例と比較してHR=1.00、基準値、ODCGAの場合、調整済みCRC-SSハザード比HRは2.311.15-4.64であり、ODCAA症例の場合、3.730.93-14.99であったP-トレンド=0.006。結腸癌細胞において、2個のE-ボックスが隣接するODC316SNPは、ODCプロモーター活性を予測する。E-ボックス活性化因子-MYC及び抑制因子MAD1及びMAD4は、培養細胞において、メジャーG-、アレルと比較してマイナーA-に選択的に結合する。試験対象母集団。発明者らは、1994年から1996年の間に行われ、2008年3月までフォローアップを行った、UniversityofCalifornia、IrvineGene-EnvironmentStudyofFamilialColorectalCancerPeelら、2000;Zellら、2007に登録された侵襲性CRCの偶発症例について研究を行った。結腸直腸癌症例の大規模集団ベースコホートにおけるHNPCC発生率を調べるために親研究を計画した。2008年4月のデータファイルを使用して、CancerSurveillanceProgramofOrangeCounty/SanDiegoImperialOrganizationforCancerControlの集団ベースの癌登録を通じて参加者を特定した。親研究においてPeelら、2000、1994年から1996年の間にOrangeCounty、CAで全年齢でCRCと診断された対象全てを確認した。SanDiego及びImperialCounties、CAで1994年から1995年の間に<65歳で診断された対象全ても確認した。次に、対象が本研究にふさわしかった場合確認時に生存しており、連絡先がある。及びその対象の担当医師が連絡許可を拒否しなかった場合、その対象に連絡を取った。試験エントリー時に、対象は血液採取及び医学的情報の公開を許可する同意書に署名した。この研究は、UCIrvine治験審査委員会93-257により承認を受けた。既に記載のように、地域癌登録データベースとの連携を通じて生命状態及びフォローアップを含む臨床及び人工統計学的データを得たPeelら、2000;Zellら、2007;Zellら、2008。腫瘍、結節、転移TNMステージ決定は、利用可能な場合は既存のAJCCコードであり、以前に報告されているように、疾患コードの範囲の変換によるものであったLeら、2008。登録時に行った電話インタビュー中に第一度近親者中の癌の家族歴を自己報告により確認したZellら、2008;Ziogas及びAnton-Culver、2003。Amsterdam基準により判定した遺伝性非ポリポーシス結腸癌HNPCCの22例を同定し、本分析から除外した。CRC診断から試験エントリー即ち家族歴インタビューの日までの時間の中央値は16ヶ月であった95CI12-23ヶ月。DNA抽出物及びODC316SNP遺伝子型決定。製造者の説明書に従い、QIAGENQIAampDNAMidi又はMiniキットQiagenを使用して2.0mLの赤血球細胞クロット試料からDNAを抽出した。316に多型塩基を含有する172bp断片を増幅するように設計されたオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、ODC316SNPの遺伝子型決定を行ったAppliedBiosystems、FosterCity、CA。異なる5’標識6-カルボキシフルオレセイン又はVIC及び同じ3’クエンチャー色素6-カルボキシテトラメチルローダミンを用いてアレル特異的TaqManプローブを合成した23。各PCR反応液全部で5μLは、以前に報告されるとおり、10ngの参加者DNA、プライマー各30pmol、TaqManプローブ各12.5pmol及び1xTaqManUniversalPCRMasterMixAppliedBiosystems、FosterCity、CAを含有したMartinezら、2003;Guoら、2000。統計学的解析-集団ベース研究。ODCGG遺伝子型とODCGA/AA遺伝子型との推定1:1比に基づいて被験者数を決定したMartinezら、2003;Barryら.2006;Hubnerら、2008;Guoら、2000。UCIrvineGene-EnvironmentStudyofFamilialCRCにおける1154例の結腸及び直腸癌症例からのデータの以前の分析から、10年間のCRC特異的生存率が66と概算されたことが明らかになったZellら、2008。発明者らは、発明者らの被験数計算に対して、ODC遺伝子型のみに基づき、CRC特異的生存率において15以上の差があるという考えを提示した。従って、80検出力で5有意レベルで、提示した2群間の10年CRC特異的生存率の差:第1群で55であり第2群で70、を検出するために全部で315名の対象が必要があった。481検体のDNA試料のうち440検体の遺伝子型決定に成功した。41検体8.5では、DNA濃度が低いこと及び/又はDNA品質が低いことによりODC316遺伝子型を決定できなかったが、遺伝子型決定に成功した例と失敗した例との間で臨床病理学的な相違は認められなかった。従って、本研究は、主要エンドポイントに対処するのに十分に分析力が与えられている。ピアソンのカイ二乗検定又は名義変数に対するフィッシャーの正確確立検定及び連続変数に対するスチューデントのt検定を用いて、結腸及び直腸症例間の人口統計学的、臨床及び病理学的変数の比較を行った。結腸直腸癌特異的生存率は、CRCそれ自身による死亡として定義し、次の場合はデータ取得を打ち切った:フォローアップ終了時の生存、フォローアップ不能又はCRCを除く何れかの原因による死亡。全生存期間OSは、あらゆる原因による死亡により定めた。カプランマイヤー法を用いて結腸及び直腸癌症例に対して生存曲線を作成し、単変量解析のためにログランク検定により分析した。診断からの時間を用いて、CRC症例、結腸癌症例及び直腸癌症例の全てに対してコックス比例ハザードモデル法を行い、ODC遺伝子型に基づく全体的及びCRC特異的死亡の調整済みリスクの概略を調べた。コックスモデルにおいて、次の共変量に対して調整して、生存におけるODC遺伝子型GG、GA又はAAの影響を分析した:年齢、性別、民族、CRC家族歴、診断時のTNMステージ、結腸内の腫瘍部位,組織学的サブタイプならびに外科手術、放射線療法及び化学療法による治療。ダミー変数を用いてこのモデルにおける各変数をコード化した。SAS9.2統計ソフトウェアSASInstitute、Cary、NCを用いて全分析を行った。両側P値<0.05の場合、統計学的有意とみなした。実施例2-実験的研究:結腸癌細胞におけるODC316SNP制御細胞培養。マッコイ5A培地Invitrogen、Carlsbad、CA中でヒト結腸癌細胞株HT29及びHCT116を維持した。使用した培地は全て、10FBS1ペニシリン/ストレプトマイシン溶液Invitrogen、Carlsbad、CAを補給した。37°Cで5CO2の湿潤雰囲気中で培養物を維持した。遺伝子型決定アッセイ。HT29及びHCT116細胞からのDNA試料をPCR-RFLP法に供して、多型PstI部位を検出した。次のプライマー:5’-TCTGCGCTTCCCCATGGGGCT-3’配列番号1及び5’-TTTCCCAACCCTTCG-3’配列番号2を用いてPCRにより配列を増幅させた。各反応液には、最終体積25μL中、1μLDNA、プライマー各4pmol、2xPCRPreMixes緩衝液G12.5μLEPICENTREBiotechnologies、Madison、WI及びTaqDNAポリメラーゼ0.5単位が含有されていた。PCR産物の予想サイズは351bpであった。増幅後、37°Cで2時間、30μL中で10単位のPstIにより10から20μLのPCR産物を消化した。PstI部位を含有するHT29細胞GA由来のDNAから156及び195bpの2つの断片が生じた。ウエスタンブロット分析。細胞を回収し、溶解させ、12.5SDS-PAGEゲル上でタンパク質を分離した。電気泳動によりHybond-Cメンブレン上にタンパク質を転写した。BlottoATTBS溶液中5ブロッキンググレード粉乳によってメンブレンをブロッキング処理し、BlottoA中で1:300希釈した一次抗体SantaCruzBiotechnology、SantaCruz、CAを用いて調べた。4°Cで一晩一次抗体をインキュベートし、次に適切なHRPタグ付加二次抗体1:1000希釈とともに室温にて1時間インキュベートした。ECLウエスタン検出試薬AmershamBiosciences、Piscataway、NJを用いて化学発光検出を行い、BiomaxXARフィルムKodak上で曝露した。クロマチン免疫沈降CHIP。製造者により推奨されるように、市販のキットを用いて、CHIPアッセイを行ったUpstateBiotech、LakePlacid、NY、USA。簡潔に述べると、細胞を1ホルムアルデヒドで処理し、DNA及びタンパク質を架橋し、超音波処理により200から1000bpの間の長さになるようにDNA-タンパク質複合体を破壊した。プロテアーゼ阻害剤を含有する免疫沈降IP希釈緩衝液で細胞溶解液を10倍希釈した。c-MYC、MAD1及びMAD4に対する抗体SantaCruzBiotechnology、SantaCruz、CAを使用してクロマチンを沈殿させ、一方でさらなる試料を抗体なし-Ab対照群とした。試料を回転させながら4°Cで一晩免疫沈降させた。60μLのサケ精子DNA/プロテインAアガローススラリーを添加し、回転させながら4°Cで1時間インキュベートして、続いて穏やかに遠心分離1000rpm、1分することによって、免疫複合体を得た。プロテインAアガロースペレットを低塩緩衝液、高塩緩衝液、LiCl緩衝液及びTE緩衝液で洗浄した。次いで、250μLの溶出緩衝液0.1MNaHCO3、1SDSを2回添加することによって複合体を溶出し、投入DNA及び-AbDNA対照を含め、全試料に対して65°Cで4時間加熱することによって、0.2MNaClを用いてDNA-タンパク質架橋を無効にした。30μLのddH2O中でDNAを再懸濁した。PCR産物及びその大きさを視覚化するために、標準的PCR反応を行った。PCRのために使用されるODCプライマーの配列は5’-CCTGGGCGCTCTGAGGT-3’配列番号317mer及び5’-AGGAAGCGGCGCCTCAA-3’配列番号417merであった。ABI7700配列検出システム上でTaqMan遺伝子発現アッセイキットAppliedBiosystems、FosterCity、CAを用いて定量的リアルタイムPCRを行った。相対的結合の計算に関する詳細は、製造者のウェブサイトhttp://www.appliedbiosystems.comで見ることができる。一過性形質移入。補足ファイル中で詳述されるように製造者のプロトコールに従い、LipofectAMINE試薬Invitrogen、Carlsbad、CAを用いて一過性形質移入を行った。HCT116及びHT29細胞に対して、0.01μgのウミシイタケ-TKプラスミドとともに1μgのpGL3-ODC/A又はpGL3-ODC/Gプラスミドにより形質移入を行ったMartinezら、2003。ウミシイタケ-TKプラスミドはPromegaMadison、WIから購入し、全てのプロモーター-レポーター形質移入実験において形質移入効率対照群として使用した。c-MYC実験の場合、ODCpGL3-プラスミドをpcDNA3.0又はCMV-c-MYC発現ベクターの何れかと同時形質移入したOriGene、Rockville、MD。MAD1実験の場合は、ODCプラスミドをpcDNA3.1又はpcDNA-MAD1の何れかと同時形質移入した。c-MYC及びMAD1同時形質移入に対して、pGL3ベクターにクローニングしたODC遺伝子の最初の1.6kbを含有するODCプロモーターレポーターコンストラクトを調製した。このコンストラクトには、E-ボックス1-485から-480bpインタクトwtE-ボックス1又は欠失mutE-ボックス1が含まれた。さらに、316ODCSNPの両変異体を使用し、全部で4種類の異なるコンストラクトを作製した。インキュベート6時間後、20FBSを含有する完全培地を細胞に補充し、一晩増殖させた。翌日、形質移入後、20FBS-含有完全培地から10FBS-含有培地に置き換えた。形質移入から48時間後、PBSで細胞を洗浄し、DualLuciferaseアッセイキットPromega、Madison、WIのPassiveLysis緩衝液中で溶解させた。製造者により記載のようにTurnerDesignsTD-20/20照度計を用いて二重ルシフェラーゼ活性を測定し、相対的ルシフェラーゼ単位RLUとして示した。3つ組みで実験を行い、少なくとも2回繰り返した。統計学的解析-実験的研究。一過性形質移入実験の場合、2試料t検定を使用したMicrosoftExcelMicrosoftCorp.、Redmond、WA。第一のE-ボックスエレメントの有無が異なるODCプロモーターコンストラクト:a野生型wtE-ボックス1316G、b突然変異体mutE-ボックス1316G、cwtE-ボックス1316A及びdmutE-ボックス1316Aを用いて、HT29結腸癌細胞中でODCアレル特異的プロモーター活性に対するc-MYC発現の影響を調べた。各プロモーターコンストラクトに対して、pcDNA3.0プラスミドを同時形質移入した細胞とCMV-c-MYC発現ベクターで形質移入した細胞との間で、2試料t検定を使用してプロモーター活性を比較した。同様に、ODCアレル特異的プロモーター活性に対するMAD1発現の影響を調べるために、2試料t検定を使用して、pcDNA3.1プラスミドを同時形質移入したプロモーターコンストラクトのプロモーター活性の効果とpcNA-MAD1プラスミドで形質移入したものの効果とを比較した。両側P値<0.05の場合、統計学的に有意とみなした。実施例3-ODC1遺伝子型の異なる影響本研究は、多施設第III相結腸腺腫予防試験由来の患者データの分析を含むMeyskensら、2008。375名の患者が登録され、267名の患者において試験終了時の大腸内視鏡検査を完了した後、DataSafetyMonitoringBoardDSMBにより中止された試験がその有効性エンドポイントに達したため。DSMBは全ての安全性及び有効性エンドポイントを監視した。ODC1SNPの重要性を示すデータ2に照らしてプロトコールを改変した場合、2002年11月以降、遺伝子型決定分析のために228名の同意のある試験患者において血液標本を回収したこの日付前にランダム化した246名の患者のうち159名及びこの日付の後にランダム化した129名の患者のうち69名を含む。。既に記載されるようにGuoら、2000、アレル特異的TaqManプローブを用いて患者由来ゲノムDNAに対してODC1rs2302615遺伝子型決定を行った。無作為に選択した8検体の直腸粘膜生検標本のうち3検体を使用して、既に記載されるようにMeyskensら、1998;Seiler及びKnodgen、1980直腸組織ポリアミン含量を調べた。25から45の範囲の反応値に対して組織ポリアミン反応を行った。優性モデル:AA/GA対GG患者下でODC1遺伝子型を分析した。2つの遺伝子型群にわたる非正規分布する連続変数においてウイルコクスン順位和検定を行った。カイ二乗検定又はフィッシャーの正確確率検定を使用して、ベースラインカテゴリー変数と遺伝子型群との間の関連性を評価した。遺伝子型相互作用によって、予測因子:治療群、年齢、性別、人種白人対その他、アスピリン使用、ODC1遺伝子型優性モデルにおける及び治療に相当する項とともに主要エンドポイント腺腫再発において対数二項分布回帰を行った。副次評価項目直腸組織ポリアミン反応、毒性に対して、完全対数二項分布モデルを用いて、治療群、遺伝子型及び治療と遺伝子型との間の相互作用の影響を調べた。SAS9.2統計ソフトウェアSASInc.、Cary、NCを用いて統計学的解析を行った。患者は、臨床試験組み入れ及び標本採取/分析に対するインフォームドコンセントに署名した。この研究は、UCIrvine治験審査委員会IRB治験実施計画書2002-2261による全員参加の委員会審査及び参加試験施設の各地域IRBによる審査後、承認を受けた。ODC1遺伝子型分布は:126GG55、87GA38及び15AA7であった。ベースラインの臨床的特徴から、表1で示されるように相違が明らかになった。完全回帰モデルでの調整後の治療に関連する腺腫再発に対する相対リスクRRは0.39であった95CI0.24-0.66。プラセボ又は治療薬の投与を受けている患者において、それぞれODC1GG患者では23対22で、ODC1GA患者では20対21で、ODC1AA患者では07名中0対577名中4名で聴器毒性が起こった。実施例4-食事性ポリアミン摂取分析患者集団、親研究の説明。この研究は、他所に記載のような、多施設結腸腺腫予防試験からの患者データ及び標本の分析を含む。MeyskensFL,McLarenC.E.、PelotD.,FujikawaS.ら:Difluoromethylornithineplussulindacforthepreventionofsporadiccolorectaladenomas:arandomizedplacebo-controlled,double-blindtrial.CancerPreventionResearch1:32-38,2008。これは、結腸直腸腺腫の病歴がある患者における、スリンダク150mgの連日投与と組み合わせたDFMO500mgの連日投与対プラセボのランダム化二重盲検、プラセボ比較第IIb相臨床試験として開始され、その後2003年に第III相臨床試験へと拡大された。375名の患者をランダム化して、DFMO及びスリンダク又はプラセボの何れかを投与した。試験施設及び以前の低用量アスピリン使用について層別化を行った。計画した治療期間は36ヶ月であった。ベースライン及び試験終了時に内視鏡検査を行い、8検体の直腸粘膜組織生検をそれぞれ入手した。ベースラインインタビュー時に臨床データを回収し、試験チャートに記録した。試験開始時に患者が記入した食物摂取頻度調査票を回収した。2回目の中間解析時に臨床有効性エンドポイントが達成されたので本研究は中止され、従って、267名の患者が本臨床試験を完遂した。MeyskensFL,McLarenC.E.,PelotD.,FujikawaS.ら.:Difluoromethylornithineplussulindacforthepreventionofsporadiccolorectaladenomas:arandomizedplacebo-controlled,double-blindtrial.CancerPreventionResearch1:32-38,2008。食事性ポリアミン摂取。FredHutchinsonCancerResearchCenter食物摂取頻度調査票FFQを用いて、この臨床試験における参加者の食事性摂取を推定したが、この手段に対する解析アルゴリズムは他所で公開されている。KristalAR,Shattock,A.L.及びWilliams,A.E.:Foodfrequencyquestionnairesfordietinterventionresearch.Washington,DC:InternationalLifeSciencesInstitute,.Proceedingofthe17thNationalNutrientDatabankConference,Baltimore,MD,1992.,1992;SchakelSF,Buzzard,IM.及びGebhardt,S.E.:Proceduresforestimatingnutrientvaluesforfoodcompositiondatabase.JFoodCompAnal10:102-14,1997。このFFQに列挙される370種類の食品中の食事性ポリアミンを推定するために、ポリアミン食品含量データベースを開発し、FFQと連結し、Zoumas-Morseらにより記載されるように、このためにUniversityofMinnesotaNutritionCoordinatingCenterNCCNutrientDatabaseを食品含量データの主な情報源とした。Zoumas-MorseC,RockCL,QuintanaELら:Developmentofapolyaminedatabaseforassessingdietaryintake.JAmDietAssoc107:1024-7,2007。個々の食品中のスペルミン、スペルミジン及びプトレッシンに対する値を計算し、nmol/gとして表した。食事性プトレッシンは総食事性ポリアミン摂取に対する主要な寄与因子であった。1日の総食事性ポリアミン含量は、食事性プトレッシン、スペルミン及びスペルミジンを添加することに由来し、最上位75から1004分の1の群と下位4分の3の群0から25、25から50及び50から75にさらに分類した。この分析において結果をエネルギーで調整した。組織ポリアミン分析。以前に記載のように直腸組織ポリアミン含量を調べた。MeyskensFL,GernerEW,EmersonSら:Effectofalpha-difluoromethylornithineonRectalMucosallevelsofpolyaminesinarandomized,double-blindedtrialforcoloncancerprevention.JournaloftheNationalCancerInstitute90:1212-1218,1998;BoyleJO,MeyskensFL,Jr.,GarewalHSら:Polyaminecontentsinrectalandbuccalmucosaeinhumanstreatedwithoraldifluoromethylornithine.CancerEpidemiolBiomarkersPrev1:131-5,1992、両者とも本明細書中に参照により組み込まれる。無作為に選択した8検体の直腸粘膜生検標本のうち3検体を用いてポリアミン含量を評価した。これらの方法により、プトレッシン、カダベリン、ヒスタミン、スペルミジン、スペルミンならびに、プトレッシン、スペルミジン及びスペルミンのモノアセチル誘導体を測定した。腫瘍のない直腸生検組織を回収し、氷冷生理食塩水をフラッシュし、-80°Cで凍結保存した。試料を処理し、次いで内部標準として1,7-ジアミノヘプタンを用いて逆相高速液体クロマトグラフィーによりポリアミン含量についてアッセイした。SeilerN,KnodgenB:High-performanceliquidchromatographicprocedureforthesimultaneousdeterminationofthenaturalpolyaminesandtheirmonoacetylderivatives.J.Chromatogr.221:227-235,1980、これは本明細書中に参照により組み込まれる。BCAタンパク質アッセイキットPierce、Rockford、ILを用いて各試料中のタンパク質含量を測定した。nmolポリアミン/mgタンパク質としてデータを表した。統計学的解析。年齢、性別、民族、アスピリン使用歴及びポリープの位置、大きさ及び組織学などの変数の記述的分析を行った。ポリープの大きさ及び組織学的なグレードを考慮に入れた進行性腺腫と呼ばれる変数を生成し、絨毛性組織構造があるか又は大きさ>1cmの何れの腺腫も進行性腺腫として分類されるようにした。食事性及び組織ポリアミンデータが正規分布しなかったので、最大と低食事性ポリアミン摂取群における数字データの比較のためにノンパラメトリックのウィルコクスン順位和検定を使用した。最大低食事性ポリアミン摂取群と低食事性ポリアミン摂取群における名義データの比較のために独立性に対するカイ二乗検定を使用した。スピアマン順位相関係数rsを使用して、ベースライン時の食事性ポリアミン摂取とタンパク質摂取、動物由来タンパク質及びアルギニンとの間の関係を評価した。ロジスティック回帰モデルを使用して、異時性腺腫の再発リスクを計算した。ロジスティック回帰を使用して、異時性腺腫の再発リスクを推定した。結果変数として異時性腺腫の存在を用いてモデルを形成し、予測因子には、食事性ポリアミン群、DFMOスリンダク対プラセボによる治療、低用量アスピリンの使用対照なし及び食事性ポリアミン群と治療との間の相互作用に相当する項が含まれた。統計学的解析は全て、SAS9.2統計ソフトウェアSASInc.、Cary、NCを用いて行った。倫理的配慮。この研究には、第III相結腸直腸腺腫予防の親試験からのデータ及び組織の分析が含まれた。MeyskensFL,McLarenC.E.,PelotD.,FujikawaS.ら:Difluoromethylornithineplussulindacforthepreventionofsporadiccolorectaladenomas:arandomizedplacebo-controlled,double-blindtrial.CancerPreventionResearch1:32-38,2008、これは本明細書中に参照により組み込まれる。親試験は、UCIrvine治験審査委員会IRB治験実施計画書2002-2261による全員参加の委員会審査及び参加試験施設の各地域IRBによる審査後、承認を受けた。全患者が、試験への組み入れ及び研究目的での標本採取/分析に対するインフォームドコンセントに署名した。本試験母集団の特徴。食事性ポリアミンデータは、375名のベースライン試験患者のうち222名及び試験終了時の大腸内視鏡検査を完了した患者267名のうち188名について入手可能であった。本試験母集団の臨床的特徴を表5で示す。患者群は年齢、性別、人種/民族、アスピリン使用、以前のポリープ数、ポリープ歴及びポリープ部位が同様であった。本試験母集団の平均年齢は試験エントリー時に60歳±8歳標準偏差SDであり、47歳から75歳の範囲であった。患者のうち多くの割合が男性であり[16474]、それに対して女性は58名26であった。多くの患者が非ヒスパニック系白人[19286]であり、続いてヒスパニック系[125]、アフリカ系アメリカ人[84]及びアジア系アメリカ人[73]であった。93名の患者42から低用量アスピリン使用歴があることが報告され、それに対して129名がアスピリン未使用者58であった。93名の患者42においてはベースライン時の腺腫が1個のみであり、ベースライン時ポリープ総数は1から16個の範囲であった。次のポリープタイプが報告された:管状腺腫170例77、管状絨毛腺腫30例13、未分類腺腫13例6、絨毛腺腫6例3、上皮内癌腫2例<1及び高度異形成の腺腫1例<1。ポリープ部位が次のように報告された:直腸n=43、19、左結腸n=87、39、横行結腸31、14、右結腸35、16及び盲腸26、12。ベースライン時の食事性ポリアミン及び選択される臨床的特徴。1日の総食事性ポリアミン摂取の中央値は233,261nmol/日48,692から740,446の範囲であった。上位4分の1の患者は、318,016nmolポリアミン/日を超える報告をした者であった他は全て低ポリアミン摂取群として分類した。。タンパク質の1日の総摂取量全栄養源から、動物由来タンパク質及びアルギニンの中央値はそれぞれ72.8g、51.8g及び4.0gであった。ベースライン時、1日の総タンパク質摂取量rs=0.62、P<0.0001;図12、1日の総動物由来タンパク質摂取量rs=0.49、P<0.0001及び1日の総アルギニン摂取量rs=0.64、P<0.0001;図13で1日の総食事性ポリアミン摂取量を補正した。食事性アルギニン摂取量は個々の食事性ポリアミン成分スペルミンrs=0.90、P<0.0001及びスペルミジンrs=0.74、P<0.0001とよく相関し、食事性プトレッシンとの相関はそれほど大きくなかったrs=0.44、P<0.0001。低食事性ポリアミン群におけるベースライン時のポリープの平均数は2.61±2.32SDであり、これに対して最大食事性ポリアミン群では2.41±1.90SDであり、これは有意ではなかったP=0.98。ベースライン時に、最大食事性ポリアミン群で1cmを超える腺腫43.6対26.4;P=0.016、より高グレードの腺腫32.7対20.4P=0.060の割合がより大きく、進行性腺腫の割合がより高かった52.7対35.9;P=0.028。左側腺腫対右は、最大食事性ポリアミン群49に対して、低食事性ポリアミン群61.1内の患者間でより多かったが、この相違は統計学的に有意ではなかった表6。食事性ポリアミン摂取及び直腸組織ポリアミン。ベースライン時に、平均直腸組織スペルミジン及びスペルミンレベルは低食事性ポリアミン群の患者間でより低かった表3。平均組織スペルミジンレベルは、2.49対2.95nmol/mgP=0.024であり、平均スペルミンレベルは、低及び最大食事性ポリアミン群の患者に対してそれぞれ7.90対8.92nmol/mgP=0.039であった。2つの食事性ポリアミン群にわたり、プトレッシン又はスペルミジン:スペルミン比の組織レベルにおいて統計学的有意差はなかった表7。食事性ポリアミン及びポリープ再発における治療効果。発明者らの本研究の主要な目的は、腺腫再発における食事性ポリアミンとDFMOスリンダクによる治療との間の相互作用を分析することであった。食事性ポリアミン摂取データが入手可能であり、試験終了時の大腸内視鏡検査結果がある完全な試験データを有する188名の患者において分析を行い、ポリープ再発に対する影響を評価した。異時性ポリープ再発に対するロジスティック回帰モデルにおいて、食事性ポリアミン群と治療との間の相互作用に相当する項とともに、治療群DFMOスリンダク対プラセボ、アスピリン使用及び食事性ポリアミン摂取群を予測因子として使用した。全患者間で、DFMOスリンダクでの治療と異時性腺腫リスクがある食事性ポリアミン群との間で有意な相互作用が認められたP=0.01。リスク推定値は、下位4分の3の食事性ポリアミン群全体の患者に対して同様であり、従って最終分析n=188は2つのポリアミン摂取群とした。発明者らは、低食事性ポリアミン群でDFMOスリンダクでの治療による異時性腺腫の有意なリスク低下が認められたが対プラセボ[RR、0.19;95CI0.09-0.40;P<0.0001];最大食事性ポリアミン群ではプラセボと比較して治療による差は認められなかった[RR、1.04;95CI、0.32-3.36;P=0.94]。低食事性ポリアミン群において、次のエンドポイントに関してDFMOスリンダク治療について有意なリスク低下が認められた対プラセボ:大きな腺腫[RR、0.11;95CI、0.01-0.88;P=0.03]、高悪性度腺腫[RR、0.09;95CI、0.01-0.71;P=0.02]及び進行性腺腫[RR、0.06;95CI、0.008-0.44;P=0.005]表8。本明細書中で開示及び主張される方法は全て、本開示に照らして不用な実験を行うことなく、為され、実行され得る。好ましい実施態様に関して本発明の方法を説明してきたが、本発明の概念、精神及び範囲から逸脱することなく、本方法に対して及び本明細書中に記載の方法の段階において又は段階の順序において、変更が適用され得ることは当業者にとって明らかである。より具体的には、同じ又は同様の結果を達成しながら、化学的及び生理学的に関連するある一定の物質で本明細書中に記載の物質を置き換え得ることが明らかとなろう。当業者にとって明らかなこのような同様の代替物及び変形は全て、付属の特許請求の範囲により定義されるとおりの本発明の精神、範囲及び概念内に包含されるものとする。参考文献次の参考文献は、それらが、本明細書に記載のものに対する補足となる例示的な手法的又はその他の詳細を提供する程度に、具体的に参照により本明細書中に組み込まれる。米国特許第3,647,858号米国特許第3,654,349号米国特許第4,330,559号米国特許第4,413,141号米国特許第4,582,788号米国特許第4,656,127号米国特許第4,683,194号米国特許第4,683,202号米国特許第5,814,625号米国特許第5,843,929号米国特許第5,952,174号米国特許第6,258,845号Albertsら、J.Cell.Biochem.Supp.,22:18-23,1995AMADrugEvaluationsAnnual,1814-1815,1994.Babbarら、Biochem.J.,394:317-24,2006.Babbarら、J.Biol.Chem.,27848:47762-47775,2003.Barryら、J.Natl.CancerInst.,9820:1494-500,2006.Bediら、CancerRes.,559:1811-1816,1995.Bellofernandezら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、90:7804-8,1993.Bussey、Hepatology,121:175-6.1990Childsら、Cell.Molec.LifeSci.,60:1394-1406,2003.deArrudaら、ExpertRev.Mol.Diagn.,25:487-496,2002.Derynckら、NatureGenetics,29:117-29,2001.DuBoisら、CancerRes.,56:733-737,1996.Erdmanら、Carcinogenesis,20:1709-13,1999.欧州出願第201,184号欧州出願第237,362号欧州出願第258,017号欧州出願第50,424号欧州出願第84,796号仏国出願第2,650,840号Fultz及びGerner,Mol.Carcinog.,34:10-8,2002.Gerner及びMeyskens,NatureRev.Cancer,4:781-92.,2004.Gernerら、CancerEpidemoil.BiomarkersPrev.,3:325-330,1994.Giardielloら、CancerRes.,57:199-201,1997.Guoら、CancerRes.,6022:6314-6317,2000.Halushkaら、Nat.Genet.,223:239-247,1999.Hanifら、BiochemicalPharmacology,52:237-245,1996.Hubnerら、Clin.CancerRes.,148:2303-9,2008.Ignatenkoら、CancerBiol.Ther.,512:1658-64,2006.Inazukaら、GenomeRes,711:1094-1103,1997.Iwamotoら、Carcinogenesis,21:1935-40,2000.Johnsonら、Nat.Genet.,292:233-237,2001.Ke及びCardonBioinformatics,192:287-288,2003.Keller及びGiardiello,CancerBiol.Ther.,24Suppl1:S140-9,2003.Kingsnorthら、CancerRes.,439:4035-8,1983.Komherら、Nucl.Acids.Res.17:7779-7784,1989.Kuppuswamyら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:1143-1147,1991.Kwok及びChen,CurrIssuesMol.Biol,Apr;52:43-60,2003.Kwokら、Genomics、231:138-144,1994.Kwok,Annu.Rev.GenomicsHum.Genet.,2:235-258,2001.Kwokら、Genomics,311:123-6,1996.Ladenheimら、Gastroenterology,108:1083-1087,1995.Landegrenら、Science,241:1077-1080,1988.Lanzaら、Arch.Intern.Med,155:1371-1377,1995.Leら、CancerEpidemiol.BiomarkersPrev.,17:1950-62,2008.Lipkin,JCellBiochem.Suppl,28-29:144-7,1997.Lippman,Nat.Clin.Pract.Oncol,310:523,2006.Loveら、J.Natl.CancerInst.,85:732-7,1993.Luら、EukaryotCell.,36:1544-56,2004.Luk及びBaylin,N.Engl.J.Med.,3112:80-83,1984.Lupulescu,CancerDetect.Prev.,206:634-637,1996.Martinezら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,100:7859-64,2003.Matsubaraら、ClinicalCancerRes.,1:665-71,1995.Maxamら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,74:560,1977.McLarenら、CancerPrev.Res.,17:514-21,2008.Meyskensら、CancerPrev.Res.,11:32-8,2008.Meyskensら、J.Natl.CancerInst.,8615:1122-1130,1994.Meyskensら、J.Natl.CancerInst.,9016:1212-8,1998.Mullisら、ColdSpringHarborSymp.Quant.Biol.51:263-273,1986.Muscatら、Cancer,74:1847-1854,1994.Narisawaら、CancerRes.,415:1954-1957,1981.Nickersonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:8923-8927,1990.Nyrenら、Anal.Biochem.208:171-175,1993.O’Brienら、Molec.Carcinog.,412:120-3,2004.Pardali及びMoustakas,BiochimicaetBiophysicaActa,1775:21-62,2007.PCT出願第W091/02087号PCT出願第W092/15712号Peelら、J.Natl.CancerInst.,92:1517-22,2000.Pegg,Biochem.,2342:249-262,1986.Physician’sDeskReference,MedicalEconomicsData,Montville,N.J.,1745-1747,1999Piazzaら、CancerRes.,55:3113116,1995.Piazzaら、CancerRes.,57:2452-2459,1997a.Piazzaら、CancerRes.,57:2909-2915,1997b.Pollard及びLuckert,CancerRes.,49:6471-6473,1989.Prezantら、Hum.Mutat.,1:159-164,1992.Psaty及びPotter,N.Engl.J.Med.,3559:950-2,2006.Raoら、CancerRes.,55:1464-1472,1995.Reddyら、CancerRes.,50:2562-2568,1990.Reddyら、CancerRes.,47:5340-5346,1987.Riceら、MolCancerTher.,29:885-92,2003.Roberts及びWakefield,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,100:8621-3,2003.Sangerら、J.Molec.Biol,94:441,1975.Seiler及びKnodgen,J.Chromatogr.,2212:227-235,1980.Simoneauら、CancerEpidemiol.BiomarkersPrev.,17:292-9,2008.Simoneauら、J.Natl.CancerInst.,93:57-9,2001.Singh及びReddy,Annals.NYAcad.Sci,768:205-209,1995.Singhら、Carcinogenesis,15:1317-1323,1994.Smallら、N.Engl.J.Med,347:1135-1142,2002.Sokolov,Nucl.AcidsRes.18:3671,1990.Stevensら、Biotechniques,34:198-203,2003.Strejanら、CellImmunol.,841:171-184,1984.Suら、Science,256:668-670,1992.Syvanenら、Genomics8:684-692,1990.Taillon-Millerら、GenomeRes,87:748-754,1998.Temperaら、CancerRes.,4921:5793-7,1989.Thomas及びThomas,J.CellMol.Med.,7:113-26,2003.Thompsonら、J.Natl.CancerInst.,87:125-1260,1995.Ugozzollら、GATA9:107-112,1992.Vane及びBotting,AdvExpMedBiol.,433:131-8,1997.Visvanathanら、J.Urol.,1712Pt1:652-5,2004.Wallace,Eur.J.Clin.Invest.,30:1-3,2000.Zellら、CancerEpidemiol.BiomarkersPrev.,17:3134-40,2008.Zellら、CancerPrev.Res.,23:209-12,2009.Zellら、Clin.CancerRes.,1519:6208-16,2009.Zellら、Intl.J.Cancer,120:459-68,2007.Ziogas及びAnton-Culver,Am.J.Prev.Med.,24:190-8,2003."