"Siglec-15に結合可能であり且つ破骨細胞の形成及び/又は破骨細胞による骨吸収を抑制する単離抗体、又は該抗体の機能性断片であって:a配列番号106に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH1と、配列番号107に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH2と、配列番号80、55、65、35、又は45のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH3と、を含む重鎖;及びb配列番号83又は73に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL1と、配列番号108に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL2と、配列番号90、60、100、70、40、50、又は109のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL3と、を含む軽鎖、を含む、単離抗体、又は該抗体の機能性断片。配列番号78、53、63、33、又は43のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を、該CDRH1が含む、請求項1に記載の単離抗体、又は該抗体の機能性断片。配列番号104、54、94、64、34、44、又は79のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を、該CDRH2が含む、請求項1又は2に記載の単離抗体、又は該抗体の機能性断片。配列番号88、58、68、38、又は48のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を、該CDRL1が含む、請求項1乃至3のいずれか一つに記載の単離抗体、又は該抗体の機能性断片。配列番号89、59、69、39、又は49のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を、該CDRL2が含む、請求項1乃至4のいずれか一つに記載の単離抗体、又は該抗体の機能性断片。請求項1乃至5のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片であって、該抗体のCDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列が:aそれぞれ、配列番号103、104、105、88、89、及び90、又はそれらに対して少なくとも80、90、又は95の配列同一性を持つ配列;bそれぞれ、配列番号53、54、55、58、59、及び60、又はそれらに対して少なくとも80、90、又は95の配列同一性を持つ配列;cそれぞれ、配列番号93、94、95、98、99、及び100、又はそれらに対して少なくとも80、90、又は95の配列同一性を持つ配列;dそれぞれ、配列番号63、64、65、68、69、及び70、又はそれらに対して少なくとも80、90、又は95の配列同一性を持つ配列;eそれぞれ、配列番号33、34、35、38、39、及び40、又はそれらに対して少なくとも80、90、又は95の配列同一性を持つ配列;fそれぞれ、配列番号43、44、45、48、49、及び50、又はそれらに対して少なくとも80、90、又は95の配列同一性を持つ配列;あるいはgそれぞれ、配列番号78、79、80、88、89、及び90、又はそれらに対して少なくとも80、90、又は95の配列同一性を持つ配列、を含むことを特徴とする、単離抗体又は該抗体の機能性断片。請求項1乃至6のいずれか一つに記載の単離抗体あるいは該抗体の機能性断片であって、前記抗体が:a1配列番号102に示される20乃至140番目のアミノ酸残基、配列番号52に示される20乃至137番目のアミノ酸残基、配列番号92に示される20乃至138番目のアミノ酸残基、配列番号62に示される20乃至136番目のアミノ酸残基、配列番号32に示される20乃至136番目のアミノ酸残基、配列番号42に示される20乃至135番目のアミノ酸残基、又は配列番号77に示される20乃至138番目のアミノ酸残基、を含むアミノ酸配列と、a2a1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a3a1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a4a1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される重鎖可変領域;並びにb1配列番号87に示される20乃至134番目のアミノ酸残基、配列番号57に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、配列番号97に示される20乃至133番目のアミノ酸残基、配列番号67に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、配列番号37に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、又は配列番号47に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、を含むアミノ酸配列と、b2b1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b3b1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b4b1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される軽鎖可変領域、を含む、単離抗体あるいは該抗体の機能性断片。請求項1乃至7のいずれか一つに記載の単離抗体あるいは該抗体の機能性断片であって、前記抗体が:a1配列番号102、52、92、62、32、42、又は77のいずれか一つに示される配列を含むアミノ酸配列と、a2a1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a3a1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a4a1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される重鎖;並びにb1配列番号87、57、97、67、37、又は47のいずれか一つに示される配列を含むアミノ酸配列と、b2b1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b3b1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b4b1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される軽鎖、を含むことを特徴とする、単離抗体あるいは該抗体の機能性断片。該抗体が、配列番号102を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号87を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、請求項1乃至8のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。該抗体が、配列番号52を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号57を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、請求項1乃至8のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。該抗体が、配列番号92を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号97を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、請求項1乃至8のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。該抗体が、配列番号62を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号67を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、請求項1乃至8のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。該抗体が、配列番号32を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号37を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、請求項1乃至8のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。該抗体が、配列番号42を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号47を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、請求項1乃至8のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。該抗体が、配列番号77を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号87を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、請求項1乃至8のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。Fab、Fab’2、Fab’、及びFvからなる群から選択される、請求項1乃至15のいずれか一つに記載の抗体の機能性断片。scFvであることを特徴とする、請求項1乃至7のいずれか一つに記載の抗体。骨代謝異常を治療及び/又は予防するために使用される、請求項1乃至17のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片。骨代謝異常を治療又は予防するための医薬を製造するための、請求項1乃至17のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片の使用。請求項1乃至17のいずれか一つに記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片の治療上有効な量を投与する、骨代謝異常の患者を治療する方法。請求項1乃至17に記載の抗体又は該抗体の機能性断片の少なくとも一つを含む、医薬組成物。骨代謝異常の治療及び/又は予防薬であることを特徴とする、請求項21に記載の医薬組成物。骨代謝異常の治療及び/又は予防用医薬組成物であって:請求項1乃至17に記載の抗体又は該抗体の機能性断片の少なくともいずれか一つ;並びに、ビスホスホネート、活性型ビタミンD3、カルシトニン及びその誘導体、エストラジオール等のホルモン製剤、SERMsselectiveestrogenreceptormodulators、イプリフラボン、ビタミンK2メナテトレノン、カルシウム製剤、PTHparathyroidhormone製剤、非ステロイド性抗炎症剤、可溶性TNFレセプター製剤、抗TNF-α抗体又は該抗体の機能性断片、抗PTHrPparathyroidhormone-relatedprotein抗体又は該抗体の機能性断片、IL-1レセプターアンタゴニスト、抗IL-6レセプター抗体又は該抗体の機能性断片、抗RANKL抗体又は該抗体の機能性断片、及びOCIFosteoclastogenesisinhibitoryfactorからなる群から選択される少なくともいずれか一つ、を含有することを特徴とする、骨代謝異常の治療及び/又は予防用医薬組成物。該骨代謝異常が、骨粗鬆症、関節リウマチに伴う骨破壊、癌性高カルシウム血症、多発性骨髄腫や癌の骨転移に伴う骨破壊、巨細胞腫、歯根膜炎による歯の喪失、人工関節周囲の骨融解、慢性骨髄炎における骨破壊、骨ページェット病、腎性骨異栄養症、及び骨形成不全症からなる群から選択される、請求項18に記載の抗体又は機能性断片、請求項19に記載の使用、請求項20に記載の方法、あるいは請求項22又は23に記載の医薬組成物。該骨代謝異常が、骨粗鬆症、関節リウマチに伴う骨破壊、又は癌の骨転移に伴う骨破壊であることを特徴とする、請求項24に記載の抗体、機能性断片、使用、方法、又は医薬組成物。該骨粗鬆症が、閉経後骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、ステロイドや免疫抑制剤等の治療用薬剤の使用による続発性骨粗鬆症、又は関節リウマチに伴う骨粗鬆症であることを特徴とする、請求項25に記載の抗体、機能性断片、使用、方法、又は医薬組成物。ポリヌクレオチドであって:a請求項1乃至17に記載の抗体又は該抗体の機能性断片のいずれか一つをコードするヌクレオチド配列;あるいはbaのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列、を含む、ポリヌクレオチド。請求項27に記載のポリヌクレオチドであって、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列をコードするヌクレオチド配列がaそれぞれ、配列番号101に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号101に示される205乃至261番目のヌクレオチド、配列番号101に示される358乃至387番目のヌクレオチド、配列番号86に示される124乃至165番目のヌクレオチド、配列番号86に示される211乃至231番目のヌクレオチド、及び配列番号86に示される328乃至363番目のヌクレオチド;bそれぞれ、配列番号51に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号51に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号51に示される352乃至378番目のヌクレオチド、配列番号56に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号56に示される202乃至222番目のヌクレオチド、及び配列番号56に示される319乃至348番目のヌクレオチド;cそれぞれ、配列番号91に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号91に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号91に示される352乃至381番目のヌクレオチド、配列番号96に示される124乃至165番目のヌクレオチド、配列番号96に示される211乃至231番目のヌクレオチド、及び配列番号96に示される328乃至360番目のヌクレオチド;dそれぞれ、配列番号61に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号61に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号61に示される352乃至375番目のヌクレオチド、配列番号66に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号66に示される202乃至222番目のヌクレオチド、及び配列番号66に示される319乃至348番目のヌクレオチド;eそれぞれ、配列番号31に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号31に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号31に示される352乃至375番目のヌクレオチド、配列番号36に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号36に示される202乃至222番目のヌクレオチド、配列番号36に示される319乃至348番目のヌクレオチド;fそれぞれ、配列番号41に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号41に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号41に示される352乃至372番目のヌクレオチド、配列番号46に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号46に示される202乃至222番目のヌクレオチド、配列番号46に示される319乃至348番目のヌクレオチド;又は、gそれぞれ、配列番号76に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号76に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号76に示される352乃至381番目のヌクレオチド、配列番号86に示される124乃至165番目のヌクレオチド、配列番号86に示される211乃至231番目のヌクレオチド、及び配列番号86に示される328乃至363番目のヌクレオチド、を含む、ポリヌクレオチド。請求項27に記載のポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドが:a1配列番号101に示される58乃至420番目のヌクレオチド、配列番号51に示される58乃至411番目のヌクレオチド、配列番号91に示される58乃至414番目のヌクレオチド、配列番号61に示される58乃至408番目のヌクレオチド、配列番号31に示される58乃至408番目のヌクレオチド、配列番号41に示される58乃至405番目のヌクレオチド、又は配列番号76に示される58乃至414番目のヌクレオチド、を含むヌクレオチド配列と、a2a1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、a3a1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列;並びに、b1配列番号86に示される58乃至402番目のヌクレオチド、配列番号56に示される58乃至387番目のヌクレオチド、配列番号96に示される58乃至399番目のヌクレオチド、配列番号66に示される58乃至387番目のヌクレオチド、配列番号36に示される58乃至387番目のヌクレオチド、又は配列番号46に示される58乃至387番目のヌクレオチド、を含むヌクレオチド配列と、b2b1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、b3b1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列、を含む、ポリヌクレオチド。請求項29に記載のポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドが:a1配列番号1015191613141、又は76のいずれか一つに示される配列のヌクレオチド配列と、a2a1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、a3a1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される重鎖をコードするヌクレオチド配列;及びb1配列番号86、56、96、66、36、又は46のいずれか一つに示される配列を含むヌクレオチド配列と、b2b1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、b3b1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される軽鎖をコードするヌクレオチド配列、を含む、ポリヌクレオチド。請求項27乃至30のいずれか一つに記載の少なくとも一つのポリヌクレオチドを含む、ベクター。請求項27乃至30のいずれか一つに記載の少なくとも一つのポリヌクレオチドを含む、形質転換細胞。請求項31に記載の少なくとも一つのベクターを含む、形質転換細胞。請求項32又は33に記載の形質転換細胞を培養し、培養物を回収し、前記培養物から抗体を精製する工程を含む、請求項1乃至17に記載の抗体の生産方法。本発明の目的は、破骨細胞の分化成熟と活性を阻害する物質、及び骨代謝異常の治療及び/又は予防薬を提供することにある。本発明者らは、骨代謝異常の治療及び/又は予防効果を有する物質を発見する目的で、破骨細胞の分化、成熟及び活性化の機構の解明を目指した研究を行った結果、破骨細胞の分化、成熟に伴いSiglec-15遺伝子の発現が上昇することを見出した。また、本発明者らは、Siglec-15と特異的に結合する抗体により、破骨細胞の分化が抑制されることを見出し、本発明を完成させた。複数の実例において、本発明の抗体が破骨細胞に対して有する有効性は当技術分野で公知の抗体よりも高い。すなわち、本発明は、以下の態様を包含する。本発明の第1の態様においては、a配列番号71に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH1と、配列番号72に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH2と、配列番号35、45、55、又は65のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH3と、を含む重鎖;及びb配列番号73に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL1と、配列番号74に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL2と、配列番号40、50、60、又は70のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL3と、を含む軽鎖、を含む、Siglec-15に結合可能であり且つ破骨細胞の形成及び/又は破骨細胞による骨吸収を抑制する単離抗体、又は該抗体の機能性断片を提供する。本発明の第2の態様においては、a配列番号106に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH1と、配列番号107に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH2と、配列番号55、35、45、65、又は80のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRH3と、を含む重鎖;及びb配列番号73又は83に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL1と、配列番号108に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL2と、配列番号60、40、50、70、90、100、又は109のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含むCDRL3と、を含む軽鎖、を含む、Siglec-15に結合可能であり且つ破骨細胞の形成及び/又は破骨細胞による骨吸収を抑制する単離抗体、又は該抗体の機能性断片を提供する。好ましくは、前記CDRH3は配列番号35に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含み、前記CDRL3は配列番号40に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH3は配列番号45に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含み、前記CDRL3は配列番号50に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH3は配列番号55に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含み、前記CDRL3は配列番号60に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH3は配列番号65に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含み、前記CDRL3は配列番号70に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH3は配列番号80に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含み、前記CDRL3は配列番号109に対して少なくとも80の配列同一性好ましくは、配列番号90又は100のいずれか一つに対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。好都合には、前記CDRH1は配列番号33、43、53、63、又は78に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。好ましくは、前記CDRH2は配列番号34、44、54、64、79、94、又は104に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。有利には、前記CDRL1は配列番号38、48、58、68、又は88に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。好都合には、前記CDRL2は配列番号39、49、59、69、又は89に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。好ましくは、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列は、それぞれ配列番号33、34、35、38、39、及び40に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列は、それぞれ配列番号43、44、45、48、49、及び50に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列は、それぞれ配列番号53、54、55、58、59、及び60に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列は、それぞれ配列番号63、64、65、68、69、及び70に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列は、それぞれ配列番号78、79、80、88、89、及び90に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列は、それぞれ配列番号93、94、95、98、99、及び100に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。あるいは、前記CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列は、それぞれ配列番号103、104、105、88、89、及び90に対して少なくとも80の配列同一性を持つ配列を含む。特に好ましくは、前記抗体又は機能性断片は、上記配列に対して少なくとも90若しくは95の配列同一性を持つCDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及び/又はCDRL3配列を含む。好ましくは、前記抗体は:a1配列番号32に示される20乃至136番目のアミノ酸残基、配列番号42に示される20乃至135番目のアミノ酸残基、配列番号52に示される20乃至137番目のアミノ酸残基、配列番号62に示される20乃至136番目のアミノ酸残基、配列番号77に示される20乃至138番目のアミノ酸残基、配列番号92に示される20乃至138番目のアミノ酸残基、又は配列番号102に示される20乃至140番目のアミノ酸残基、を含むアミノ酸配列と、a2a1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a3a1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a4a1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される重鎖可変領域;並びにb1配列番号37に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、配列番号47に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、配列番号57に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、配列番号67に示される20乃至129番目のアミノ酸残基、配列番号87に示される20乃至134番目のアミノ酸残基、又は配列番号97に示される20乃至133番目のアミノ酸残基、を含むアミノ酸配列と、b2b1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b3b1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b4b1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される軽鎖可変領域、を含む。特に好ましくは、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は上記配列に対して少なくとも99の配列同一性を持つ。有利には、前記抗体は:a1配列番号32、42、52、62、77、92、又は102のいずれか一つに示される配列を含むアミノ酸配列と、a2a1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a3a1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、a4a1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される重鎖;並びにb1配列番号37、47、57、67、87、又は97いずれか一つに示される配列を含むアミノ酸配列と、b2b1のアミノ酸配列に対して少なくとも90の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b3b1のアミノ酸配列に対して少なくとも95の配列同一性を持つアミノ酸配列と、b4b1のアミノ酸配列に1若しくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列と、からなる群から選択される軽鎖、を含む。特に好ましくは、前記重鎖及び軽鎖は、上記の配列に対して少なくとも99の配列同一性を持つ。好都合には、前記抗体は、配列番号32を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号37を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。あるいは、前記抗体は、配列番号42を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号47を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。あるいは、前記抗体は、配列番号52を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号57を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。あるいは、前記抗体は、配列番号62を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号67を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。あるいは、前記抗体は、配列番号77を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号87を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。あるいは、前記抗体は、配列番号92を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号97を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。あるいは、前記抗体は、配列番号102を含むアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号87を含むアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む。好都合には、本発明の抗体の前記機能性断片は、Fab、Fab’2、Fab’、及びFvからなる群から選択される。好ましくは、前記抗体はscFvである。本発明の第3の態様においては、骨代謝異常を治療及び/又は予防するために使用される、本発明の第1又は第2の態様に記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片を提供する。本発明の第4の態様においては、骨代謝異常を治療又は予防するための医薬を製造するための、本発明の第1又は第2の態様に記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片の使用法を提供する。本発明の第5の態様においては、本発明の第1又は第2の態様に記載の単離抗体又は該抗体の機能性断片の治療上有効な量を投与することを含む、骨代謝異常の患者を治療する方法を提供する。本発明の第6の態様においては、本発明の第1又は第2の態様に記載の抗体又は該抗体の機能性断片の少なくとも一つを含む医薬組成物を提供する。好都合には、前記医薬組成物は骨代謝異常の治療及び/又は予防薬である。本発明の第7の態様においては、本発明の第1又は第2の態様の抗体又は該抗体の機能性断片の少なくともいずれか一つ、並びに、ビスホスホネート、活性型ビタミンD3、カルシトニン及びその誘導体、エストラジオール等のホルモン製剤、SERMsselectiveestrogenreceptormodulators、イプリフラボン、ビタミンK2メナテトレノン、カルシウム製剤、PTHparathyroidhormone製剤、非ステロイド性抗炎症剤、可溶性TNFレセプター製剤、抗TNF-α抗体又は該抗体の機能性断片、抗PTHrPparathyroidhormone-relatedprotein抗体又は該抗体の機能性断片、IL-1レセプターアンタゴニスト、抗IL-6レセプター抗体又は該抗体の機能性断片、抗RANKL抗体又は該抗体の機能性断片、及びOCIFosteoclastogenesisinhibitoryfactorからなる群から選択される少なくともいずれか一つを含有することを特徴とする、骨代謝異常の治療及び/又は予防用医薬組成物を提供する。好ましくは、前記骨代謝異常は、骨粗鬆症、関節リウマチに伴う骨破壊、癌性高カルシウム血症、多発性骨髄腫や癌の骨転移に伴う骨破壊、巨細胞腫、歯根膜炎による歯の喪失、人工関節周囲の骨融解、慢性骨髄炎における骨破壊、骨ページェット病、腎性骨異栄養症、及び骨形成不全症からなる群から選択される。有利には、前記骨代謝異常は、骨粗鬆症、関節リウマチに伴う骨破壊、又は癌の骨転移に伴う骨破壊である。好都合には、前記骨粗鬆症は、閉経後骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、ステロイドや免疫抑制剤等の治療用薬剤の使用による続発性骨粗鬆症、又は関節リウマチに伴う骨粗鬆症である。本発明の第8の態様においては、a本発明の第1又は第2の態様に記載の抗体又は該抗体の機能性断片をコードするヌクレオチド配列;あるいはbaのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列、を含むポリヌクレオチドを提供する。好都合には、CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2、及びCDRL3の配列をコードする前記ヌクレオチド配列は:aそれぞれ、配列番号31に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号31に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号31に示される352乃至375番目のヌクレオチド、配列番号36に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号36に示される202乃至222番目のヌクレオチド、及び配列番号36に示される319乃至348番目のヌクレオチド;bそれぞれ、配列番号41に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号41に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号41に示される352乃至372番目のヌクレオチド、配列番号46に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号46に示される202乃至222番目のヌクレオチド、及び配列番号46に示される319乃至348番目のヌクレオチド;cそれぞれ、配列番号51に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号51に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号51に示される352乃至378番目のヌクレオチド、配列番号56に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号56に示される202乃至222番目のヌクレオチド、及び配列番号56に示される319乃至348番目のヌクレオチド;dそれぞれ、配列番号61に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号61に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号61に示される352乃至375番目のヌクレオチド、配列番号66に示される124乃至156番目のヌクレオチド、配列番号66に示される202乃至222番目のヌクレオチド、及び配列番号66に示される319乃至348番目のヌクレオチド;eそれぞれ、配列番号76に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号76に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号76に示される352乃至381番目のヌクレオチド、配列番号86に示される124乃至165番目のヌクレオチド、配列番号86に示される211乃至231番目のヌクレオチド、及び配列番号86に示される328乃至363番目のヌクレオチド;fそれぞれ、配列番号91に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号91に示される205乃至255番目のヌクレオチド、配列番号91に示される352乃至381番目のヌクレオチド、配列番号96に示される124乃至165番目のヌクレオチド、配列番号96に示される211乃至231番目のヌクレオチド、及び配列番号96に示される328乃至360番目のヌクレオチド;又はgそれぞれ、配列番号101に示される148乃至162番目のヌクレオチド、配列番号101に示される205乃至261番目のヌクレオチド、配列番号101に示される358乃至387番目のヌクレオチド、配列番号86に示される124乃至165番目のヌクレオチド、配列番号86に示される211乃至231番目のヌクレオチド、及び配列番号86に示される328乃至363番目のヌクレオチド、を含む。好ましくは、前記ポリヌクレオチドは:a1配列番号31に示される58乃至408番目のヌクレオチド、配列番号41に示される58乃至405番目のヌクレオチド、配列番号51に示される58乃至411番目のヌクレオチド、配列番号61に示される58乃至408番目のヌクレオチド、配列番号76に示される58乃至414番目のヌクレオチド、配列番号91に示される58乃至414番目のヌクレオチド、又は配列番号101に示される58乃至420番目のヌクレオチド、を含むヌクレオチド配列と、a2a1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、a3a1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列;並びに、b1配列番号36に示される58乃至387番目のヌクレオチド、配列番号46に示される58乃至387番目のヌクレオチド、配列番号56に示される58乃至387番目のヌクレオチド、配列番号66に示される58乃至387番目のヌクレオチド、配列番号86に示される58乃至402番目のヌクレオチド、又は配列番号96に示される58乃至399番目のヌクレオチド、を含むヌクレオチド配列と、b2b1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、b3b1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列、を含む。有利には、前記ポリヌクレオチドは:a1配列番号31、41、51、61、76、91、又は101のいずれか一つに示される配列のヌクレオチド配列と、a2a1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、a3a1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される重鎖をコードするヌクレオチド配列;及びb1配列番号36、46、56、66、86、又は96のいずれか一つに示される配列を含むヌクレオチド配列と、b2b1のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列と、b3b1のヌクレオチド配列に1若しくは数個のヌクレオチドが付加、欠失又は置換されたヌクレオチド配列と、からなる群から選択される軽鎖をコードするヌクレオチド配列、を含む。本発明の第9の態様においては、本発明の第8の態様に記載の少なくとも一つのポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。本発明の第10の態様においては、本発明の第8の態様に記載の少なくとも一つのポリヌクレオチドを含む形質転換細胞を提供する。本発明の第11の態様においては、本発明の第9の態様に記載の少なくとも一つのベクターを含む形質転換細胞を提供する。本発明の第12の態様においては、本発明の第10又は第11の態様に記載の形質転換細胞を培養し、培養物を回収し、前記培養物から抗体を精製する工程を含む、本発明の第1又は第2の態様に記載の抗体の生産方法を提供する。本明細書において、2個の配列間の同一性のは、デフォルトのパラメータを用いたBLASTPアルゴリズムver.2.2.2S.F.Altschul、T.L.Madden、A.A.Schaffer、J.Zhang、Z.Zhang、W.Miller、及びD.J.Lipman著、GappedBLASTandPSIBLAST:anewgenerationofproteindatabasesearchprograms、NucleicAcidsRes.1997年、第25巻、p.3389-3402を用いて測定される。特にBLASTアルゴリズムは、www.ncbi.nlm.nih.gov/blastというURLを用いてインターネット上でアクセスできる。本発明によれば、破骨細胞の分化成熟、及びその活性の阻害を作用機序とする、骨代謝異常の治療及び/又は予防薬を得ることができる。本明細書中において、遺伝子という語には、DNAのみならずmRNA、cDNA及びcRNAも含まれるものとする。本明細書中において、ポリヌクレオチドという語は核酸と同じ意味で用いており、DNA、RNA、プローブ、オリゴヌクレオチド、及びプライマーも含まれている。本明細中において、ポリペプチドと蛋白質は区別せずに用いている。本明細書中において、RNA画分という語は、RNAを含んでいる画分をいう。本明細中において、細胞という語には、動物個体内の細胞、培養細胞も含んでいる。本明細中において、Siglec-15という語は、Siglec-15蛋白質と同じ意味で用いている。本明細書中において、破骨細胞の形成は、破骨細胞の分化又は破骨細胞の成熟と同じ意味で用いている。本明細書中における抗体の機能性断片とは、抗原との結合活性を有する抗体の部分断片を意味しており、Fab、Fab’2、及びscFv等を含む。また、Fab’2を還元条件下で処理した抗体の可変領域の一価の断片であるFab’も抗体の機能性断片に含まれる。但し、抗原との結合親和性を有している限りこれらの分子に限定されない。また、これらの機能性断片には、抗体蛋白質の全長分子を適当な酵素で処理した断片のみならず、遺伝子改変された抗体遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された蛋白質も含まれる。抗体分子の重鎖又は軽鎖にはそれぞれ3箇所の相補性決定領域CDRがあることが知られている。相補性決定領域は超可変ドメインとも呼ばれ、重鎖又は軽鎖の可変領域内にあって、一次構造の変異性が特に高い部位であり、抗体の重鎖又は軽鎖のポリペプチド内のそれぞれ3ヶ所に分離して存在している。本明細書中においては、重鎖の各CDRを、重鎖ポリペプチドのアミノ末端N末端側から順にCDRH1、CDRH2、CDRH3と表記する。軽鎖の各CDRを、軽鎖ポリペプチドのアミノ末端側から順にCDRL1、CDRL2、CDRL3と表記する。これらの6箇所のCDRは抗体の立体構造内で相互に近接し、抗原結合の特異性を決定している。本明細書において、ストリンジェントな条件でハイブリダイズするとは、DNAを固定したフィルターを用いて市販のハイブリダイゼーション溶液例えばExpressHybHybridizationSolutionクロンテック社製中、68°Cでハイブリダイズするか、又は、0.7-1.0MのNaCl存在下68°Cでハイブリダイゼーションを行った後、0.1-2×SSC溶液1×SSCとは150mMのNaCl、15mMクエン酸ナトリウムからなるを用い、68°Cで洗浄することにより同定することができる条件又はそれと同等の条件でハイブリダイズすることをいう。結合可能という語は、Siglec-15に関する抗体について用いる場合、抗体が生理条件で優先的にSiglec-15と結合できることを意味している。実施形態の一部においては、特異的という語と同義である。すなわち実施形態の一部においては、抗体は、Siglec-15に対して他の関連ポリペプチドに対するよりも大きい親和性例えば、1.5倍、2倍、5倍、10倍、100倍、103倍、104倍、105倍、106倍大きい親和性を有する。本明細書の一部の形態において、数個のとは、2乃至4の数を意味する。1Siglec-15Siglec-15を免疫原として用いる場合、ヒト、ヒト以外の哺乳動物例えば、モルモット、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなどあるいはニワトリの単球細胞あるいは骨髄細胞からSiglec-15を直接精製して使用するか、あるいは上記の細胞の細胞膜画分を調製して使用することができる。また、Siglec-15をinvitroにて合成する、あるいは遺伝子操作により宿主細胞に産生させることによって得ることができる。遺伝子操作では、より具体的には、Siglec-15のcDNAを発現可能なベクターに組み込んだ後、転写と翻訳に必要な酵素、基質、及びエネルギー物質を含む溶液中でSiglec-15を合成する、あるいは他の原核生物又は真核生物の宿主細胞を形質転換させることによってSiglec-15を発現させることにより、該蛋白質を得ることが出来る。ヒトSiglec-15のcDNAのヌクレオチド配列は、GenBankにアクセッション番号NM_213602で登録されている。マウスSiglec-15のcDNAのヌクレオチド配列は、GenBankにアクセッション番号XM_884636で登録されている。2抗Siglec-15抗体通常の抗体の構造は当分野で公知であるため、簡単に概略を述べるに留める。免疫グロブリンのモノマーは、ジスルフィド結合で連結した2つの重鎖と2つの軽鎖とを含む。各重鎖は、2つの軽鎖のうち1つとジスルフィド結合で直接結合してペアになっている。各重鎖は定常領域抗体のアイソタイプによって異なる及び可変領域を含んでいる。可変領域は3つの超可変領域相補性決定領域を含んでおり、これらの超可変領域はCDRH1、CDRH2、及びCDRH3と表記され、フレームワーク領域内に保持されている。各軽鎖は定常領域及び可変領域を含んでおり、可変領域は重鎖可変領域と同様にフレームワーク領域に保持された3つの超可変領域CDRL1、CDRL2、及びCDRL3と表記するを含んでいる。重鎖と軽鎖との各ペアが持つこれらの超可変領域は協同して、標的抗原に結合可能な抗原結合部位をつくる。重鎖と軽鎖とのペアが持つ結合特異性は、重鎖及び軽鎖のCDR1、CDR2、及びCDR3配列によって決まる。したがって、特定の結合特異性をもたらすCDR配列すなわち、重鎖及び軽鎖のCDR1、CDR2、及びCDR3配列のセットが明らかになると、そのCDR配列のセットを、任意の抗体定常領域に連結された任意の別の抗体フレームワーク領域内の適当な位置に挿入することによって、原則的に、同じ抗原結合特異性を持つ異なる抗体を提供することができる。好ましい形態においては、抗体MOR09281、MOR09892、MOR09898、MOR10110、MOR12574、MOR13154、及びMOR13156を提供する。これらの抗体のアミノ酸配列の詳細は、表4乃至7及び10乃至12に示す。ただし、本発明はこれらの好ましい抗体に限定されない。通常、本発明の抗Siglec15抗体においては、重鎖及び軽鎖のCDR1及びCDR2の配列は配列番号71乃至74に示されるコンセンサス配列に従う。あるいは、重鎖のCDR1及びCDR2配列の配列は配列番号106及び107に示されるコンセンサス配列に従ってもよく、軽鎖CDR2配列の配列は配列番号108に従ってもよく、軽鎖CDR1配列の配列は配列番号73又は83に従ってもよい。軽鎖CDR3配列の配列は、配列番号109に示されるコンセンサス配列に従ってもよい。特に好ましくは、抗体は、配列番号109に示されるコンセンサス配列に従う軽鎖CDR3配列を有し、重鎖CDR3配列は、配列番号80に示される配列を有する。本発明の好適な抗体の一部MOR09281、MOR09892、MOR09898、及びMOR10110のCDR1、CDR2、及びCDR3配列を、具体的に表8に示す。本発明のその他の好適な抗体MOR12574、MOR13154、及びMOR13156のCDR1、CDR2、及びCDR3配列を、具体的に表13に示す。すなわち、そのような好適な抗体類由来の配列を持つCDR1~3を含む抗体を提供する。但し本発明の好適な抗体類の配列間には高レベルの配列同一性が存在するため、別々の好適な抗体に由来するCDR配列を持つ抗体を提供することも本発明の範囲に含まれる。例えば、MOR09281のCDR1配列とMOR09892のCDR2配列とMOR09898のCDR3配列とを持つ重鎖、及びMOR10110のCDR1配列とMOR09281のCDR2配列とMOR09892のCDR3配列とを持つ軽鎖を含む抗体を提供してもよい。本発明の形態の一部においては、CDR1~3のアミノ酸配列が表8及び13に示されるものから異なるが、尚少なくとも80あるいは、実施形態の一部においては少なくとも90又は95の配列同一性を保持することも理解されよう。形態の一部においては、1つの抗体のあるCDRのある位置のアミノ酸残基が、別の抗体の同じCDRの相当する位置のアミノ酸残基と交換される。例えば、アミノ酸配列NYAMS配列番号75を含むCDR1配列すなわち、MOR09892の重鎖CDR1配列の3番目のアミノ酸で3番目のアミノ酸が置換されたMOR09281の重鎖CDR1配列を含む重鎖を含む抗体を提供してもよい。別の実施形態においては、CDR中の1つ又は複数のアミノ酸残基が別のアミノ酸で置換される。置換は、同一のアミノ酸ファミリー内における置換であるという意味で保存的であり得る。天然のアミノ酸は以下の4つのファミリーに分類でき、保存的置換はこれらのファミリー内で起こると予想される。1塩基性側鎖を持つアミノ酸:リジン、アルギニン、ヒスチジン。2酸性側鎖を持つアミノ酸:アスパラギン酸、グルタミン酸3非荷電極性側鎖を持つアミノ酸:アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン。4非極性側鎖を持つアミノ酸:グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、システイン。別の実施形態においては、抗体が持つCDRの1つ又は複数に1つ又は複数のアミノ酸残基を付加又は欠失させる。そのような付加又は欠失は、CDRのN又はC末端あるいはCDR内部の位置に生じる。アミノ酸を付加、欠失、又は置換して抗体のCDRのアミノ酸を改変することによって、標的抗原に対する結合親和性の増大や凝集の低下などの様々な効果を得ることができる。このように改変したCDR配列を含む本発明の抗体もSiglec-15に結合し、破骨細胞の形成及び/破骨細胞の骨吸収を抑制することは理解されよう。本明細書の実施例5及び6に開示される結合試験及び生物活性試験で検定することができる。抗体の定常領域は、抗体MOR09281、MOR09892、MOR09898、MOR10110、MOR12574、MOR13154、及びMOR13156について具体的に開示されるものとは異なっていてもよい。例えば、任意のアイソタイプIgA、IgD、IgE、IgG、又はIgMのFc領域を有する抗体を提供してもよい。好ましくは、前記抗体はヒト抗体である。抗体、抗体の作製法、及び抗体の使用法は一般的に公知であり、Antibodies:ALaboratoryManualE.Harlow及びD.Lane著、ColdSpringHarborLaboratoryPress、ColdSpringHarbor、NewYork、1999年等に開示されている。抗体の作製は、当分野で公知の標準的な方法を用いて行うことができる。抗体としてはモノクローナル抗体、一本鎖抗体、抗体の機能性断片などが挙げられるが、これらに限定されない。抗体の機能性断片には標的抗原に結合可能な任意の抗体断片が包含され、Fab断片、Fab’2断片、Fab’断片、及びFv断片が包含される。抗体の生産は、種々の宿主例えば、ヤギ、ウサギ、ラット、マウス、ヒト等を用いて行うことができる。これらの宿主の免疫化は、標的抗原本発明においてはSiglec-15あるいは該抗原の断片又はオリゴペプチド免疫原性を持つものを注射することによって行うことができる。宿主種ごとに、種々のアジュバントを用いて免疫学的応答を増大させることができる。これらのアジュバントとしては、フロイントアジュバント、ミネラルゲル水酸化アルミニウム等、表面活性物質例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノールが挙げられるが、これらに限定されない。ヒトに用いるアジュバントとしては、BCGBacilleCalmette-Guerin及びCorynebacteriumparvumが特に有用である。Siglec-15に対するモノクローナル抗体の調製は、培養した継代細胞株に抗体分子を生産させる任意の方法で行うことができる。例えばハイブリドーマ法、ヒトB細胞ハイブリドーマ法、EBVハイブリドーマ法Koehlerら著、Nature1975年、第256巻、p.495-497;Kosborら著、Immunol.Today1983年、第4巻、p.72;Coteら著、PNASUSA1983年、第80巻、p.2026-2030;Coleら著、MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy、AlanR.LissInc.、NewYork、p.77-96、1985年が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、一本鎖抗体の生産法を用いることができる。一本鎖抗体scFvは、リンカーペプチド通常は約5~25アミノ酸の長さで連結された重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。scFvの合成は、遺伝子組み換え法を用いて、例えばscFvをコードするベクターを大腸菌などの宿主生物中で発現させることによって行うことができる。抗体の生産は、invivoでリンパ球集団による生産を誘導することによっても、又は組み換え体免疫グロブリンライブラリーや特異性が高い結合試薬のセットをスクリーニングすることによっても行うことができるOrlandiら著、PNASUSA1989年、第86巻、p.3833-3837;G.Winterら著、Nature1991年、第349巻、p.293-299。抗原結合断片例えば、抗体分子をペプシン消化して生産可能なFab’2断片や、Fab’2断片のジスルフィド架橋を還元して作製可能なFab断片を作製することもできる。あるいはFab発現ライブラリーを構築して、所望の特異性を有するモノクローナルFab断片を迅速簡便に同定することもできるHuseら著、Science1989年、第256巻、p.1275-1281。種々のイムノアッセイを用いてスクリーニングを行い、所望の特異性を有する抗体を同定する事ができる。当分野では、特異性が既知のポリクローナル又はモノクローナル抗体を用いた競合的結合アッセイや免疫放射線アッセイ用の多数のプロトコールが公知である。通常、これらのイムノアッセイでは、Siglec-15あるいはその任意の断片又はオリゴペプチドと特異的抗体との間で起こる複合体形成を測定する。互いに干渉しない2種類のSiglec-15エピトープに特異的なモノクローナル抗体を利用して、モノクローナル系のtwositeイムノアッセイを用いることができるが、競合的結合アッセイを採用してもよいMaddoxら著、J.Exp.Med.1983年、第158巻、p.1211-1216。3.抗Siglec-15抗体を含有する医薬上述の2.抗Siglec-15抗体の項に記載の抗Siglec-15抗体は、Siglec-15の生物活性を中和する。Siglec-15の生物活性を中和するそのような抗体は、invivoにおけるSiglec-15の生物活性すなわち、破骨細胞の分化及び/又は成熟を阻害することから、破骨細胞の分化及び/又は成熟の異常に起因する骨代謝異常の治療及び/又は予防薬として用いることができる。ここで骨代謝異常は、正味の骨喪失骨減少症又は骨溶解症によって特徴付けられるいずれの障害であってもよい。一般に、抗Siglec-15抗体による治療及び/又は予防効果は、骨吸収を抑制する必要がある場合に適用される。抗Siglec-15抗体で治療及び/又は予防可能な骨代謝異常としては、骨粗鬆症閉経後骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、ステロイドや免疫抑制剤等の治療用薬剤の使用による続発性骨粗鬆症、又は関節リウマチに伴う骨粗鬆症、関節リウマチに伴う骨破壊、癌性高カルシウム血症、多発性骨髄腫や癌の骨転移に伴う骨破壊、巨細胞腫、歯根膜炎による歯の喪失、人工関節周囲の骨融解、慢性骨髄炎における骨破壊、骨ページェット病、腎性骨異栄養症、骨形成不全症などを挙げることができる。但し破骨細胞による正味の骨喪失を伴う疾患であれば、これらに限定されない。invitroでの抗Siglec-15抗体によるSiglec-15の生物活性の中和活性は例えば、Siglec-15を過剰発現している細胞の破骨細胞への分化の抑制活性で測定することができる。例えば、マウス単球由来細胞株RAW264.7細胞又はRAW264細胞に種々の濃度で抗Siglec-15抗体を添加し、RANKLあるいはTNF-α刺激による破骨細胞への分化の抑制活性を測定することができる。また、骨髄由来初代培養細胞に種々の濃度で抗Siglec-15抗体を添加し、RANKL、TNF-α、又は活性型ビタミンD3刺激による破骨細胞への分化の抑制活性を測定することができる。さらに、正常ヒト破骨前駆細胞NormalHumanNaturalOsteoclastPrecursorCells、三光純薬より購入可能、カタログ番号2T-110に種々の濃度で抗Siglec-15抗体を添加し、RANKL又はM-CSF刺激による破骨細胞への分化の抑制活性を測定することができる。このような破骨細胞の分化抑制効果は、破骨細胞の酒石酸耐性酸性フォスファターゼTRAP活性の抑制を指標として測定できる。また、TRAP陽性多核破骨細胞の形成の抑制、すなわち破骨細胞の細胞融合の抑制を指標としても、破骨細胞の分化抑制効果を測定することができる。さらに、大腿骨及び/又は脛骨由来の細胞を用いたピットアッセイ実験Takadaら著、BoneandMineral1992年、第17巻、p.347359において、大腿骨及び/又は脛骨由来の細胞に種々の濃度で抗Siglec-15抗体を添加して象牙切片上のピットの形成を観察することによって、invitroにおける破骨細胞による骨吸収の抑制活性を測定することができる。invitroにおける破骨細胞による骨吸収の抑制活性の測定系としては、ユーロピウムが結合したヒトコラーゲンをコーティングしたプレートを使用することも可能である。invivoでの実験動物を利用した抗Siglec-15抗体の骨代謝異常に対する治療又は予防効果は、骨粗鬆症モデル動物又はSiglec-15を過剰発現しているトランスジェニック動物に抗Siglec-15抗体を投与し、破骨細胞の変化を測定することで確認することができる。Siglec-15の生物活性を中和する上記の抗体は、医薬として、特に骨粗鬆症、関節リウマチに伴う骨破壊、癌の骨転移に伴う骨破壊等の骨代謝異常の治療又は予防を目的とした医薬組成物として、あるいはこのような疾患の免疫学的診断のための抗体として有用である。関節リウマチRAの治療において、疾患の発症に伴って発生する骨喪失が大きな課題になっている。RAに伴うこの骨喪失においては、破骨細胞が中心的な役割を果たしていることが報告されている。RAにおける破骨細胞の誘導分化、成熟、活性化、及び骨破壊の原因に最も重要と考えられているサイトカインはRANKLとTNF-αであるE.Romasら著、Bone2002年、第30巻、p.340-346。RANKLのデコイレセプターであるOCIF/OPGではRANKLで誘導される破骨細胞形成は抑制できるが、TNF-αで誘導される破骨細胞形成は抑制されない。その一方で、本発明における抗Siglec-15抗体によって、RANKLで誘導される破骨細胞形成とTNF-αで誘導される破骨細胞形成の両方が効果的に抑制される。したがって、本発明の抗Siglec-15抗体によって、RAなどにおけるTNF-αで誘導される骨喪失と骨破壊が、RANKLブロッカーOCIF/OPG、抗RANKL抗体など以上に強力に抑制できることが期待される。抗Siglec-15抗体は、一つの例としては、骨代謝異常の治療又は予防に対しては該抗体単独で、あるいは少なくとも一つの他の骨疾患治療剤と併用して投与することができる。また一つの例として、抗Siglec-15抗体は治療上有効な量の骨代謝異常治療薬剤と併用して投与することができる。抗Siglec-15抗体と治療薬剤とは同時投与、別時投与、あるいは連続投与してもよい。抗Siglec-15抗体と併用して投与できる治療剤としては、ビスホスホネート、活性型ビタミンD3、カルシトニン及びその誘導体、エストラジオール等のホルモン製剤、SERMsSelectiveestrogenreceptormodulators、イプリフラボン、ビタミンK2メナテトレノン、カルシウム製剤、PTHparathyroidhormone製剤、非ステロイド性抗炎症剤、可溶性TNFレセプター製剤、抗TNF-α抗体又は該抗体の機能性断片、抗PTHrPparathyroidhormone-relatedprotein抗体又は該抗体の機能性断片、IL-1レセプターアンタゴニスト、抗IL-6レセプター抗体又は該抗体の機能性断片、抗RANKL抗体又は該抗体の機能性断片、及びOCIFosteoclastogenesisinhibitoryfactor等を挙げることができるがこれらに限定されない。別の例としては、治療薬剤は本発明の別の抗Siglec-15抗体である。すなわち、本発明の2種類の抗Siglec-15抗体を投与する。骨代謝異常の状態やどの程度の治療及び/又は予防を目指すかによって、2、3あるいはそれ以上の種類の治療薬剤を投与することもできるし、それらの治療薬剤は同じ製剤の中に封入することによって同時に供給することができる。それらの治療薬剤と抗Siglec-15抗体とは同じ製剤の中に封入することによって同時に供給することもできる。また、それらの治療薬剤は治療及び/又は予防用キットとして封入することによって同時に供給することもできる。また、それらの治療薬剤と抗Siglec-15抗体は別々に供給することもできる。遺伝子治療において投与する場合には、蛋白質性の骨疾患治療剤の遺伝子と抗Siglec-15抗体の遺伝子は、同じあるいは別々のプロモーター領域の下流に挿入することができ、同じあるいは別々のベクターに導入することができる。抗Siglec-15抗体又は該抗体の断片に対して骨疾患治療剤を結合させることによって、Targeteddrugconjugates:principlesandprogressM.C.Garnet著、AdvancedDrugDeliveryReviews2001年、第53巻、p.171-216に記載の標的型薬物複合体を製造することができる。この目的には、抗体分子のほか、破骨細胞の認識性を完全消失していない限り、任意の抗体断片を適用可能であるが、例えば、Fab、Fab’2、Fv等の断片を例として挙げることができる。本発明においても同様に、抗体及び該断片を使用することができる。抗Siglec-15抗体又は該抗体の断片と骨疾患治療剤との結合様式は、Targeteddrugconjugates:principlesandprogressM.C.Garnet著、AdvancedDrugDeliveryReviews2001年、第53巻、p.171-216、BioconjugateTechniquesG.T.Hermanson著、AcademicPress、California、1996年、及びPolymerConjugateswithAnticancerActivityPutnam及びJ.Kopecek著、AdvancesinPolymerScience1995年、第122巻、p.55123等に記載される種々の形態があり得る。すなわち、抗Siglec-15抗体と骨疾患治療剤とが化学的に直接あるいはオリゴペプチド等のスペーサーを介して結合される様式や、適当な薬物担体を介して形成される複合体を挙げることができる。薬物担体の例としては、リポソームや水溶性ポリマーを挙げることができる。これら薬物担体を介して形成される複合体としては、より具体的には、抗体と骨疾患治療剤とが1つのリポソームに包含され、該リポソームと抗体とが相互に結合した様式、及び、骨疾患治療剤が水溶性ポリマー分子量1000乃至10万程度の化合物に化学的に直接あるいはオリゴペプチド等のスペーサーを介して結合され、該水溶性ポリマーに抗体が結合した様式、を例として挙げることができる。抗体又はその断片と骨疾患治療剤又は薬物担体リポソーム、水溶性ポリマー等との結合は、BioconjugateTechniquesG.T.Hermanson著、AcademicPress、California、1996年及びPolymerConjugateswithAnticancerActivityPutnam及びJ.Kopecek著、AdvancesinPolymerScience1995年、第122巻、p.55-123に記載の方法等の当業者周知の方法により実施することができる。骨疾患治療剤のリポソームへの包含は、Liposomes:FromPhysicstoApplicationsD.D.Lasic著、ElsevierSciencePublishersB.V.、Amsterdam、1993年等に記載の方法等の当業者周知の方法により実施することができる。骨疾患治療剤の水溶性ポリマーへの結合は、PolymerConjugateswithAnticancerActivityD.Putnam及びJ.Kopecek著、AdvancesinPolymerScience1995年、第122巻、p.55-123に記載の方法等の当業者周知の方法により、実施することができる。抗体又はその断片と蛋白質性の骨疾患治療剤又はその断片との複合体は、上記の方法のほか、遺伝子工学的に、当業者周知の方法により作製することができる。本発明は、治療及び/又は予防に有効な量の抗Siglec-15抗体と薬学上許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤、及び/又は補助剤とを含む医薬組成物も提供する。本発明は、治療及び/又は予防に有効な量の抗Siglec-15抗体と治療及び/又は予防に有効な量の少なくとも一つの骨疾患治療剤と薬学上許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤、及び/又は補助剤とを含む医薬組成物も提供する。骨疾患治療剤としては、ビスホスホネート、活性型ビタミンD3、カルシトニン及びその誘導体、エストラジオール等のホルモン製剤、SERMsselectiveestrogenreceptormodulators、イプリフラボン、ビタミンK2メナテトレノン、カルシウム製剤、PTHparathyroidhormone製剤、非ステロイド性抗炎症剤、可溶性TNFレセプター製剤、抗TNF-α抗体又は該抗体の機能性断片、抗PTHrPparathyroidhormone-relatedprotein抗体又は該抗体の機能性断片、IL-1レセプターアンタゴニスト、抗IL-6レセプター抗体又は該抗体の機能性断片、抗RANKL抗体又は該抗体の機能性断片、及びOCIFosteoclastogenesisinhibitoryfactor等を挙げることができるがこれらに限定されない。別の例としては、治療剤は本発明の別の抗Siglec-15抗体である。すなわち、前記医薬組成物は本発明の2種類の抗Siglec-15抗体を含んでなる。本発明の医薬組成物において許容される製剤に用いる物質としては、投与量や投与濃度において、医薬組成物を投与される者に対して非毒性のものが好ましい。本発明の医薬組成物は、医薬組成物又はその成分のpH、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、色、無菌性、安定性、溶解率、徐放率、吸収率、又は浸透率を変えたり、保持したりできる製剤用の物質を含むことができる。製剤用の物質としては以下のものを挙げることができるが、これらに制限されない。グリシン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン及びリジン等のアミノ酸類;抗菌剤;アスコルビン酸、硫酸ナトリウム、又は亜硫酸水素ナトリウム等の抗酸化剤;リン酸、クエン酸、ホウ酸緩衝液、炭酸水素ナトリウム、トリス-塩酸TrisHcl溶液等の緩衝剤;マンニトールやグリシン等の充填剤;エチレンジアミン四酢酸EDTA等のキレート剤;カフェイン、ポリビニルピロリジン、β-シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン等の錯化剤;グルコース、マンノース、及びデキストリン等の増量剤;単糖類、二糖類等の他の炭水化物;着色剤;香味剤;希釈剤;乳化剤;ポリビニルピロリジン等の親水ポリマー;低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロレキシジン、ソルビン酸、及び過酸化水素等の防腐剤;グリセリン、プロピレングリコール、及びポリエチレングリコール等の溶媒;マンニトール及びソルビトール等の糖アルコール;懸濁剤;ソルビタンエステル、ポリソルベート20やポリソルベート80等のポリソルベート、トリトンTriton、トロメタミンtromethamine、レシチン、及びコレステロール等の界面活性剤;スクロースやソルビトール等の安定化増強剤;塩化ナトリウム、塩化カリウム、及びマンニトールソルビトール等の弾性増強剤;輸送剤;希釈剤;賦形剤;及び/又は薬学上の補助剤。これらの製剤用の物質の添加量は、抗Siglec-15抗体の重量に対して0.01~100倍添加するのが好ましく、特に0.1~10倍添加するのが好ましい。製剤中の好適な医薬組成物の組成は当業者によって、適用疾患、適用投与経路などに応じて適宜決定することができる。医薬組成物中の賦形剤や担体の形態は液体でも固体でもよい。適当な賦形剤や担体は注射用の水や生理食塩水、人工脳脊髄液や非経口投与に通常用いられている他の物質でもよい。また、中性の生理食塩水や血清アルブミンを含む生理食塩水を担体に用いることもできる。医薬組成物にはpH7.0-8.5のTris緩衝液、pH4.0-5.5の酢酸緩衝液を含むことができる。また、これらの緩衝液にソルビトールや他の化合物を含むこともできる。本発明の医薬組成物には抗Siglec-15抗体を含む医薬組成物並びに、抗Siglec-15抗体及び少なくとも一つの骨疾患治療剤を含む医薬組成物を挙げることができる。本発明の医薬組成物は選択された組成と必要な純度とを持つ薬剤として、凍結乾燥品あるいは液体として準備される。抗Siglec-15抗体を含む医薬組成物並びに、抗Siglec-15抗体及び少なくとも一つの骨代謝異常治療薬剤を含む医薬組成物は、スクロースのような適当な賦形剤を用いた凍結乾燥品として成型されることもできる。本発明の医薬組成物は非経口投与用に調製することもできるし、経口による消化管吸収用に調製することもできる。製剤の組成及び濃度は投与方法によって決定することができる。本発明の医薬組成物に含まれる、抗Siglec-15抗体のSiglec-15に対する親和性が高い即ち、Siglec-15に対する解離定数Kd値が低いほど、ヒトへの投与量を少なくしても薬効を発揮することができるので、この結果に基づいて本発明の医薬組成物のヒトに対する投与量を決定することもできる。投与量は、ヒト抗Siglec-15抗体をヒトに対して投与する際には、約0.1~100mg/kgを1~180日間に1回投与すればよい。本発明の医薬組成物の剤形としては、注射剤、点滴剤、坐剤、経鼻剤、舌下剤、経皮吸収剤などを挙げることができる。4.本発明のその他の発明物上記2抗Siglec-15抗体の項目に記載の抗Siglec-15抗体をコードする配列を含むポリヌクレオチドも提供する。好ましい抗体MOR09281、MOR09892、MOR09898、MOR10110、MOR12574、MOR13154、及びMOR13156をコードするヌクレオチド配列の詳細は、表4乃至7及び10乃至12に示されている。但し、本発明のポリヌクレオチドが表4乃至7及び10乃至12に示されるものに限定されないことは理解されよう。具体的には、上記の項目2に記載の通り、複数のCDRが別々の好適な抗体に由来する抗体やCDRに1つ又は複数のアミノ酸が付加、欠失、又は置換された抗体も、本発明の抗Siglec-15抗体に含まれる。本発明のポリヌクレオチドとしては、そのような抗体をコードするものも含まれる。また、核酸コードの縮重が原因で、表4乃至7及び10乃至12に示されるヌクレオチド配列以外のヌクレオチド配列も同じアミノ酸配列をコードする。上記の項目2に示される抗体の一つをコードするヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドが保有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをも提供する。尚、ストリンジェントな条件でハイブリダイズするという語の定義は上記されている。前記ポリヌクレオチドは、その他のヌクレオチド配列としてプロモーター及び/又はその他の発現調節配列、ポリA尾部をコードする配列、最小限の非翻訳領域、Kozakコンセンサス配列等を含んでいてもよい。一部の実施形態においては、このようなポリヌクレオチドを含有するベクターを提供する。ベクターの例としては、プラスミド、コスミド、ウィルスベクターが挙げられ、バクテリオファージも包含される。これらのベクターは、前記ポリヌクレオチド自体に加えて、複製開始点、遺伝マーカー、抗生物質耐性遺伝子、cos部位、クローニング部位、ターゲティング配列などの配列を含有していてもよい。実施形態の多くにおいては、ベクターは、宿主細胞内で複製し、抗Siglec-15抗体をコードするポリヌクレオチド配列を宿主細胞に発現させるのに充分なエレメントを含んでなる。よって、別の実施形態においては、上記のポリヌクレオチド例えば、細胞ゲノムに組み込まれる又は上記のベクターを含有する形質転換細胞を提供する。適当な宿主細胞としては、バクテリア細胞大腸菌等や真核細胞酵母細胞、ヒト細胞株等が挙げられる。これらの形質転換細胞を用いて、細胞を培養し、本発明のSiglec-15抗体をコードするヌクレオチド配列を発現させ、培地から抗体を精製することによって、本発明のSiglec-15抗体を合成することができる。以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、下記実施例において遺伝子操作に関する各操作は、モレキュラークローニングMolecularCloningJ.Sambrook、E.F.Fritsch、及びT.Maniatis著、ColdSpringHarborLaboratoryPress、1989年に記載の方法により行うか、又は、市販の試薬やキットを用いる場合には附属の指示書に従って使用した。細胞培養及び一過性形質転換ヒト胎児腎臓HEK293FreeStyleTM細胞をFreestyle293培地インビトロジェン社中で培養した。細胞パニングの目的には、使用説明書に従って293fectinインビトロジェン社を用い、プラスミドDNAプラスミドpcDNA3.1/ヒトSiglec-15ヒトSiglec-15をコードする:アクセッション番号Q6ZMC9、プラスミドpcDNA3.1/マウスSiglec-15マウスSiglec-15をコードする:アクセッション番号NP_001094508、pcDNA3.1等でHEK293FreeStyleTM細胞を形質転換した。形質転換したHEK293FreeStyleTM細胞を2日間培養した後に回収し、さらに細胞パニングを行った。組み換え体ヒトSiglec-15-Fc及びマウスSiglec-15-Fcの調製可溶型ヒトSiglec-15/phIgFc用の発現ベクターを、Gatewayテクノロジーインビトロジェン社によって構築した。ヒトSiglec-15の細胞外ドメインアクセッション番号Q6ZMC9、1-260をコードするDNA断片をPCRで増幅し、pDNOR221インビトロジェン社に対するエントリークローンを構築した。次にこのエントリークローンとヒトFc配列をコードするDNAを含有するデスティネーションベクターとの間でLR反応を行った。こうして構築したプラスミド中のヒトSiglec-15-FcのDNA配列は、DNA配列解析によって確認した。可溶型ヒトSiglec-15/phIgFcの発現ベクターを含有するHEK293FreeStyleTM内で、ヒトSiglec-15-Fcは一過的に発現した。可溶型ヒトSiglec-15-Fcを発現するHEK293FreeStyleTM細胞の培養液1.5LをSterivex-GVフィルターミリポア社でろ過し、Dulbecco’sPBSD-PBS、インビトロジェン社製で予め平衡化したHiTrapProteinAカラムアマシャムバイオサイエンス社にろ液をかけた。ヒトSiglec-15-Fcを0.1Mクエン酸ナトリウム緩衝液pH3.0で溶出し、1MのTrisで中和した。ヒトSiglec-15-Fc画分を2.5ml分取して、50mM塩酸アルギニンを含むリン酸塩緩衝生理食塩水pH7.0、A-PBSで平衡化しておいたPD-10脱塩カラムアマシャムバイオサイエンス社にかけ、A-PBSで溶出して、溶媒をA-PBSに置換したサンプル3.5mLを得た。以上の操作で調製したサンプルは、使用するまで-80°Cで凍結保存した。可溶型マウスSiglec-15/phIgFc用の発現ベクターを、Gatewayテクノロジーインビトロジェン社によって構築した。マウスSiglec-15の細胞外ドメインアクセッション番号NP_001094508、1-258をコードするDNA断片をPCRで増幅し、pDNOR221インビトロジェン社に対するエントリークローンを構築した。次に、このエントリークローンとヒトFc配列をコードするDNAを含有するデスティネーションベクターとの間でLR反応を行った。こうして構築したプラスミド中のマウスSiglec-15-FcのDNA配列は、DNA配列解析で確認した。可溶型マウスSiglec-15/phIgFcの発現ベクターを含有するHEK293FreeStyleTMにおいて、マウスSiglec-15-Fcは一過的に発現した。マウスSiglec-15-Fcを発現するHEK293FreeStyleTM細胞の培養液1.8LをSterivex-GVフィルターミリポア社でろ過し、Dulbecco’sPBSD-PBS、インビトロジェン社で予め平衡化したHiTrapProteinAカラムアマシャムバイオサイエンス社にろ液をかけた。0.1Mクエン酸ナトリウム緩衝液pH3.0でマウスSiglec-15-Fcを溶出して1MのTrisで中和した。回収したマウスSiglec-15-Fc画分を、メンブレンを用いた遠心濃縮器AmiconUltra-15ミリポア社で2.5mlまで濃縮した。緩衝液を、0.01のTween-20を加えたOtsukaPhysiologicalSalineforInjection大塚製薬と交換した。このサンプルは、使用するまで-80°Cで凍結保存した。HuCALGOLDライブラリー由来の抗体作製A.ファージディスプレイライブラリー治療用の抗ヒトSiglec-15抗体を作製する目的で、MorphoSysHuCALGOLDファージディスプレイライブラリーを用いたセレクションを行った。HuCALGOLD登録商標はHuCAL登録商標コンセプトに基づくFabライブラリーでありKnappikら著、J.Mol.Biol.2000年、第296巻、p.57-86;Krebsら著、J.Immunol.Methods2001年、第254巻p.67-84;Rotheら著、J.Mol.Biol.2008年、第376巻、第4号、p.1182-200、6種類のCDRが何れも多様化diversificationしており、CysDisplayTM法を用いてFab断片をファージ表面に連結しているWO0105950。B.HuCALGOLD登録商標を用いたパニングMOR09012、MOR08656、及びMOR08662を以下のように単離した。セレクションには、293fectinインビトロジェン社を用い、プラスミドpcDNA3.1/ヒトSiglec-15又はプラスミドpcDNA3.1/マウスSiglec-15で形質転換したHEK293FreeStyleTM細胞を用いてHuCALGOLD登録商標抗体ライブラリーに対して生細胞パニングを行った後、pH溶出し、Siglec-15陰性のHEK293FreeStyleTM細胞を用いたポスト吸着postadsorptionステップを行って無関係な抗体ファージを除去した。最後に残った抗体ファージを用いて大腸菌細胞を形質転換し、寒天プレートに播種して一晩インキュベートした。翌日にプレートからバクテリアのコロニーをかき取り、ファージを回収して増幅した。96穴Maxi-sorpプレートヌンク社、透明上のヤギ抗ヒトFc抗体JacksonImmunoResearch社カタログ番号109-005-098でキャプチャーした組み換え体ヒトSiglec-15-Fcを用いて、HuCALGOLD登録商標抗体ライブラリーのキャプチャーパニングを行った。ヒトFc及びヤギIgGのバインダーを除去するために、ヒトIgGJacksonImmunoResearch社、カタログ番号009-000-003及びヤギIgGJacksonImmunoResearch社、カタログ番号005-000-003の両方をセレクション溶液に添加した。Tween-20/PBS及びPBSで洗浄した後、結合したファージを溶出した。溶出したファージで対数増殖期中期の大腸菌細胞を形質転換し、グルコース及びクロラムフェニコールを添加したLBLB-CG寒天に播種した。一晩インキュベートした後、コロニーをかき取り、15グリセロールを添加したLB-CG中で保存した。MOR09281の単離は以下の通り行った。改善した親和性を持つFabを得るためには、固相Fcキャプチャー及びディファレンシャル生細胞パニングdifferentialwholecellpanningsで得られたファージを用いてLCDR3の多様化を行った後、さらにセレクションラウンドselectionroundsを行った。全パニング法の産物を、組み換え体ヒトSiglec15-hFcを用いたELISAで1次スクリーニングした。陽性クローンについては、ELISA及びFACSで2次スクリーニングを行った。セレクションされたクローンをまとめ、精製した。C.大腸菌によるHuCALGOLD登録商標Fab抗体のミクロスケール発現microexpressionpMORPH登録商標x23_FabがコードするFab断片の大腸菌によるミクロスケール発現は、丸底96穴培養プレートコーニング社上で行った。大腸菌コロニーを培地に植菌した。培養液が僅かに濁るまで培養プレートをインキュベートした。次に、追加の培地を添加した。培養プレートをさらに一晩インキュベートした。翌日に、リゾチームRoche社2.5mg/mlを添加したBEL緩衝液プロテアーゼ阻害剤カクテルRoche社、カタログ番号11873580001を培養プレートの各ウェルに添加し、培養プレートを振とうした。大腸菌を溶菌した後、スキムミルク/TBSTakaraBio社溶液を添加し、培養プレートをさらに振とうした。調製された大腸菌溶菌液を用いて、ヒトSiglec-15バインダーのELISAスクリーニングを行った。D.Siglec-15バインダーのELISAスクリーニング96穴MaxiSorpTMマイクロタイタープレートヌンク社のウェルを、1.25μg/mlのヤギ抗ヒトFc抗体JacksonImmunoResearch社、カタログ番号109-005-098で一晩コーティングした。翌日にPBSで洗浄後、マイクロタイタープレートをスキムミルク/PBSでブロッキングした。PBSで洗浄後、1μg/mlの組み換え体ヒトSiglec-15-Fcをマイクロタイタープレートに添加した。ウェルをTween-20/Tris緩衝生理食塩水TakaraBio社、TBSTで3回洗浄した後、上記の大腸菌溶菌液を添加した。プレートを緩やかに振とうした後、TBSTで洗浄した。次に、アルカリフォスファターゼを結合した抗ヒトFabJacksonImmunoResearch社、カタログ番号109-035-097をTBSTで希釈し、プレートに添加した。プレートを緩やかに振とうした後、TBSTで洗浄した。AttophosSubstrateSetRoche社によって結合を検出し、プレートリーダーMolecularDevices社、SpectraMaxM5を用いて蛍光Excitation:440nm、Emission:550nmを測定した。HuCAL登録商標IgG2の構築、発現、及び精製A.IgG2への変換全長IgGを発現するために、pMORPHx登録商標9Fab発現ベクター中の重鎖可変ドメイン断片VH及び軽鎖可変ドメイン断片VLを、適当なヒトIgG2用pMOPRH登録商標2_h_Igベクターにサブクローニングした。VHドメイン断片をpMORPH登録商標2_h_IgG2にサブクローニングするには制限酵素MfeI及びBlpIを用い、VLドメイン断片をpMORPH登録商標2_h_IgκにサブクローニングするにはEcoRV及びBsiWIを用い、VLドメイン断片をpMORPH登録商標2_h_Igλ2にサブクローニングするにはEcoRV及びHpaIを用いた。ライゲーション、形質転換、及びDNA調製を行った後に得られたIgG発現プラスミドを、制限酵素解析及びシーケンシングで確認した。B.ヒトIgG2の一過性発現及び精製HKB11真核細胞を等量のIgG重鎖及び軽鎖発現ベクターpMORPH登録商標2で形質転換した。細胞培養上清の回収を通常は形質転換後3~7日目に行った。滅菌ろ過後、溶液を標準的なプロテインAアフィニティークロマトグラフィーMabSelectSURE、GEHealthcare社にかけた。特に断りのない限り、1×Dulbecco’sPBSpH7.2、インビトロジェン社又はクエン酸緩衝液100mMクエン酸、150mMのNaCl、pH5.0で緩衝液交換し、サンプルを滅菌ろ過した孔径0.2μm。蛋白質濃度をUV分光光度法で測定した。変性条件、還元条件、非還元条件のSDSPAGE、又はAgilentBioAnalyzerを用いた非変性条件のHPSECで、IgGの純度を分析した。スクリーニング及び抗体の解析A.Siglec-15-FCを用いたキャプチャーELISA384穴MaxiSorpTMマイクロタイタープレートのウェルをヤギ抗ヒトIgGDianova社、カタログ番号109-005-098、PBSで1:1,000希釈したものでコーティングした。翌日にマイクロタイタープレート振とう機上でウェルを洗浄し、MPBSTでブロッキングした。ウェルをPBSTで洗浄した後、組み換え体ヒト又はマウスSiglec15ヒトFc融合蛋白質を添加した。インキュベート後、プレブロッキングしたBELextract調製については実施例1C参照又は精製Fab/IgGを添加した。マイクロタイタープレート振とう機上でプレートをインキュベートした後、PBSTで洗浄した。Fabが結合した抗原を検出するためには、PBSTでプレートを洗浄し、抗FabAPDianova社、カタログ番号109055097、PBSで1:5000希釈したものを添加した。インキュベート後にプレートをTBSTで洗浄し、AttoPhosAttoPhosSubstrateSet、Roche社11681982001、TBSで1:10希釈したものを添加し、TECANマイクロタイタープレートリーダーEmission:535nm、Excitation:430nmで蛍光を測定した。B.FACS解析HEK293T細胞をVerseneインビトロジェン社15040066で剥離して洗浄し、FACS緩衝液PBS/3FCSに再懸濁した。HEK293FreeStyleTM非付着細胞を洗浄し、FACS緩衝液に再懸濁した。1×105~1×106細胞/ウェルになるように丸底96穴プレートに移し、300gで5分間ペレット化し、希釈したBELextract実施例1C参照又は精製抗体に再懸濁した。細胞と抗体との混合物を4°Cで1時間インキュベートした。細胞を300gで5分間遠心してからFACS緩衝液に懸濁するという洗浄を2回行った。本研究の過程で、非形質転換細胞に抗体が結合するのを防ぐために洗浄ステップを5回に増やした。検出抗体溶液FACS緩衝液で1:100に希釈したものに細胞を再懸濁した。4°Cで1時間インキュベートした後、FACS緩衝液で細胞を2回洗浄し、FACS緩衝液に再懸濁し、FACSArray装置で解析した。データ解析はFlowJoソフトウェアを用いて行った。陰性コントロールとしてはMOR03207抗リゾチーム抗体を用いた。ヒト抗体はヤギ抗ヒトPEJacksonImmunoResearch社109-116-097を用いて検出した。候補抗体の親和性増強affinitymaturationA.親和性増強ライブラリーの作製選択された抗体断片の親和性と生物活性とを増大させる目的で、トリヌクレオチドに基づく変異導入法trinucleotidedirectedmutagenesisVirnekasら著、1994年を用いたカセット変異導入法によって、CDR3L及びCDRH2領域の最適化を並行して行った。但しフレームワーク領域には変更を加えなかった。親和性増強用のクローニング前に、各親Fab断片を、それぞれの発現ベクターpMORPH登録商標x9_FHからCysDisplay登録商標ベクターpMORPH登録商標25_LHCにXbaI/EcoRIで移し替えた。CDRL3又はCDRH2を多様化した後、得られた7種類のライブラリーに由来するライゲーション混合物を4mlの大腸菌細胞インビトロジェン社、Carlsbad、CA、USAにエレクトロポレーションし、1種類のライブラリーにつき約107~108個の独立コロニーを得た。このライブラリーサイズによって、ライブラリーが理論上の多様性をカバーしていることが保証された。ライブラリーの増幅は以前に報告された通りRauchenbergerら著、2003年行った。品質管理の目的で、シングルクローンをランダムに回収してシーケンシングを行った。B.固相Fcキャプチャーパニング上記のように親和性増強ライブラリーから回収された1×1012個のファージに対して、固相Fcキャプチャーパニングによるセレクションを下記のように行った。MaxiSorpTMプレートF96MaxiSorpTM、ヌンク社442402の適当数のウェルを330μlのFcγ断片特異的抗ヒトIgG10μg/mlPBS中、JacksonImmunoResearch社、カタログ番号109-005-098で一晩コーティングした。コーティングしたウェルを翌日にマイクロタイタープレート振とう機上でPBSで洗浄し、MPBSTでブロッキングした。次にウェルをPBSで洗浄し、330μlの抗原溶液を加えてインキュベートした。ローテーター上で室温で2時間、ミルクパウダーとTween20と0.1mg/mlヤギγグロブリンJacksonImmunoResearch社、カタログ番号009-000-002とを添加したPBS溶液でファージをプレブロッキングした。セレクション工程を行うためには、MaxiSorpTMプレートから抗原溶液を除去し、ウェルをPBSで洗浄した。プレブロッキングしたファージをそれぞれの対応するウェルに添加し、プレートをマイクロタイタープレート振とう機上でインキュベートした。インキュベート後にファージ溶液を除去し、PBST及びPBSでウェルを数回洗浄した。最後の洗浄ステップ後にPBSを除去し、続けて溶出を行った。特異的に結合したファージを、インキュベート時間10分、室温でTris/HClpH8.0中のDTTで溶出した。溶出液を用いて、対数増殖期の大腸菌TG1Fを形質転換した。形質転換した大腸菌をクロラムフェニコール及びグルコースを添加したLB寒天プレートに播種してインキュベートした。翌日にバクテリアのコロニーをかき取り、YT培地に再懸濁した。CDRL3の増強パニングmaturationpanning及びCDRH2の増強パニングにおいては、複数のセレクションラウンドを行った。セレクションラウンド毎に、抗原濃度を下げて洗浄回数と強度とを上げることでパニングのストリンジェンシーを強めた。C.ディファレンシャル生細胞パニングDifferentialWholeCellPanningsディファレンシャル生細胞マチュレーションパニングDifferentialWholeCellmaturationPanningsは、本質的に以下の通り行った。ディファレンシャル生細胞パニングdWCPは、組み換え体抗原を用いた固相Fcキャプチャーパニング実施例4Bを参照及び形質転換細胞を用いた下記の生細胞パニングを改変して設計された。生細胞パニングWCPは、ヒトSiglec-15で一過的に形質転換したHEK293FreeStyleTM細胞を用いて行った。このSiglec-15発現細胞を洗浄し、再懸濁し、プレブロッキングした。各増強ライブラリーから回収した約1×1012個のファージをプレブロッキングした。ブロッキング後、1×106個のSiglec-15発現細胞をペレット化し、プレブロッキングしたファージ溶液に再懸濁し、インキュベートした。次のセレクションラウンドでは、細胞数を減らして5×105個とした。洗浄ステップで非特異的ファージを除去することによりパニング工程中の洗浄ストリンジェンシーを強めた。洗浄のためには、細胞を遠心してペレット化し、再懸濁し、ローテーター上でインキュベートした。洗浄後、特異的に結合したファージを細胞から溶出した。遠心した後、細胞ペレットから上清を分離し、2MのTris塩基緩衝化されていないものでpHを中和した。セレクションされたファージを用いた大腸菌TG1Fの形質転換は、固相パニングの記載と同様に行った実施例4B参照。セレクションラウンドはFcキャプチャーパニング又は生細胞パニングと同様に行った。D.親抗体MOR09012、MOR08656、及びMOR08662は、それぞれMOR09892、MOR09898、又はMOR10110の親抗体である。親和性増強のステップを経ずにその後の分析を行う候補として、MOR09281を選択した。前記抗体のアミノ酸配列、それらをコードする核酸配列、及びそれらの構造に関する情報を、表1乃至7にまとめた。各抗体の相補性決定領域CDRのアミノ酸配列を、表8に示す。抗体MOR09281、MOR09892、MOR09898、及びMOR10110において、CDR1及びCDR2のアミノ酸配列は、以下に示すコンセンサス配列に従う。重鎖CDR1のコンセンサス配列は、X1YX2MX3配列番号71であるX1はN又はSであり、X2はW又はAであり、X3はS、H、T、又はNである。重鎖CDR2のコンセンサス配列は、X4ISYSX5SX6TYYADSVKG配列番号72であるX4はL、Y、又はFであり、X5はS又はGであり、X6はT又はNである。軽鎖CDR1のコンセンサス配列は、SGDX7LX8X9X10YX11X12配列番号73であるX7はN又はAであり、X8はG、P、又はRであり、X9はS又はNであり、X10はY、R、又はKであり、X11はA又はVであり、X12はY、H、又はSである。軽鎖CDR2のコンセンサス配列は、X13X14NX15RPS配列番号74であるX13はG又はDであり、X14はT又はDであり、X15はN、D、又はKである。結合活性分析A.ELISAによる結合活性分析96穴Immobilizeraminoプレートヌンク社のウェルに1μg/mlの組み換え体ヒトSiglec-15-Fc、マウスSiglec-15-Fc、又はヒトFcJacksonImmunoResearch社、009000008を0.1mL添加し、一晩4°Cに置いた。翌日に0.05Tween-20/PBSPBSTで洗浄後、室温で1.5時間、5BSA/PBSでプレートをブロッキングした。PBSTで洗浄後、プレートに1μg/mlの抗Siglec-15抗体MOR09281、MOR09892、MOR09898、MOR10110、MOR09012、MOR08656、MOR08662及びヒトIgGJacksonImmunoResearch社、カタログ番号009-000-003、陰性コントロールとして使用を0.1mL添加し、室温で1時間置いた。PBSTで洗浄後、ペルオキシダーゼを結合した抗ヒトFab抗体JacksonImmunoResearch社、カタログ番号112-035-097をPBSTで5000倍希釈したものをプレートに0.1mL添加し、プレートを室温に1.5時間置いた。PBSTで洗浄後、ELISAPODABTSKitナカライテスク社、カタログ番号02893-60を用いて結合を検出した。反応時間は4分であった。プレートリーダーMolecularDevices社、SpectraMaxM5を用いて、450nm及び650nmの吸光度を測定した。ELISAの結果を図1に示す。MOR09281、MOR09892、MOR09898、MOR10110、MOR09012、MOR08656、及びMOR08662は、組み換え体ヒトSiglec-15-FcにもマウスSiglec-15-Fcにも結合したが、ヒトFcには結合しないことが示された。バイオアッセイA.マウス破骨細胞形成試験A1.マウス骨髄非付着細胞の調製5~8週齢の雄ddYマウスより大腿骨と脛骨を摘出し、軟組織を除去した。この大腿骨あるいは脛骨の両端を切り落とし、23ゲージの注射針付きシリンジによりD-PBSを注入して骨髄細胞を押し出した。室温で1000rpmで5分間遠心して上清を捨てた。細胞のペレットに1mlのhemolyticbufferRedBloodCellLysingBuffer、シグマ社製を加えて懸濁し、得られた懸濁液を室温で5分間放置した。10のウシ胎児血清FBSを含有するMEM-α培地インビトロジェン社製20mlを加え、懸濁液を室温で1000rpmで5分間遠心して上清を捨てた。細胞のペレットに5ng/mlのM-CSFRDSystems社製と10のFBSとを含有するMEM-α培地10mlを加えて懸濁した。次いで、得られた懸濁液をセルストレイナー40μmNylon、BDファルコン社製に通して凝集物を除いた。この細胞を75cm2-Tフラスコ付着細胞用に移して、CO2インキュベーター中で1晩培養した。1晩培養後、T-フラスコに付着していない細胞を回収して、マウス骨髄非付着細胞として使用した。A-2.マウス骨髄非付着細胞から破骨細胞への分化に抗Siglec-15抗体が及ぼす影響RANKLによる刺激実施例1及び4において調製した抗Siglec-15抗体の影響を、マウス骨髄非付着細胞を用いた破骨細胞分化試験によって評価した。実施例6A-1の上記方法によって調製したマウス骨髄非付着細胞を10のFBSと10ng/mlのM-CSFとを含むα-MEM培地で1.5×105細胞/mlに調製したものを、96穴プレートの各ウェルに200μl播種して、CO2インキュベーター中で2日間培養した。96穴プレート中の古い培養液を除去して、ヒトRANKLRANKL、ぺプロテック社製を終濃度20ng/ml、M-CSFを10ng/mlになるように添加した10FBS含有MEM-α培地100μlを各ウェルに添加した。この細胞培養液に、各抗Siglec-15抗体MOR09281、MOR09012、MOR09892、MOR08656、MOR09898、MOR08662、及びMOR10110を3~100ng/mlの濃度になるように添加して、更に3日間CO2インキュベーター中で培養した。培養終了後に、形成された破骨細胞の酒石酸耐性酸性フォスファターゼTRAP活性を次の方法で測定した。96穴プレートの各ウェルの培地を吸引除去して、1のTritonX-100を含む50mMクエン酸ナトリウム緩衝液pH6.150μlを各ウェルに加えた。次にプレートをプレート振とう機で5分間振とうして細胞を溶解した。これらの各ウェルに基質溶液5mg/mlのp-nitrophenylphosphate及び0.46の酒石酸ナトリウムを含有する50mMクエン酸ナトリウム緩衝液pH6.150μlを加えてプレートを室温で10分間インキュベートした。インキュベート後に96穴プレートの各ウェルに1N水酸化ナトリウム溶液50μlを加えて酵素反応を停止した。酵素反応停止後に各ウェルの405nmの吸光度を測定してTRAP活性の指標にした。結果を図2乃至8に示す。MOR09012MOR09892の親抗体、MOR08656MOR09898の親抗体、及びMOR08662MOR10110の親抗体については、有意なTRAP活性の抑制は認められなかった。一方、MOR09281、MOR09892、MOR09898、及びMOR10110については、13ng/ml以上の濃度で用量依存的なTRAP活性の抑制が有意に認められた。この結果より、抗Siglec-15抗体MOR09281、MOR09892、MOR09898、及びMOR10110は破骨細胞の形成破骨細胞の分化と成熟を抑制する活性を有することが示された。また、親抗体MOR09012、MOR08656、及びMOR08662を親和性増強することによって、破骨細胞形成の抑制活性がより高い抗体それぞれMOR09892、MOR09898、及びMOR10110が得られたことが示された。B.ヒト破骨細胞を用いたOsteoLyseAssayBヒト型抗ヒトSiglec-15モノクローナル抗体添加が正常ヒト破骨前駆細胞の骨吸収活性に及ぼす影響コラーゲンコートプレートを用いた評価破骨細胞はカテプシンKなどのプロテアーゼを放出して、骨組織の構成成分であるI型コラーゲンを分解することが知られている。OsteoLyseAssayKitLonza社製、カタログ番号PA-1500は、ユーロピウムが結合したヒトコラーゲンをコーティングした96穴プレート96-wellOsteoLysecellcultureplateを提供しており、同プレート上で破骨細胞を培養した際に上清に遊離される蛍光コラーゲン断片量を測定することにより、破骨細胞の骨吸収活性をinvitroで評価することが可能である。正常ヒト破骨前駆細胞NormalHumanNaturalOsteoclastPrecursorCells、三光純薬より購入、カタログ番号2T-110を、細胞に添付のプロトコールに従い96-wellOsteoLysecellcultureplateに1×104細胞/ウェルとなるように播種した。なお培地は、ウシ胎児血清終濃度10、ヒトRANKL終濃度10又は20ng/ml、及びヒトM-CSF終濃度33ng/ml等を含むOPGM添加因子セットOsteoclastSingleQuotTMKit、三光純薬より購入、カタログ番号PT-9501を添加した破骨前駆細胞用基礎培地OPBM、三光純薬より購入、カタログ番号PT-8201を用いた。この培養上清中に、実施例1及び4で調製したヒト型抗ヒトSiglec-15モノクローナル抗体MOR09281、09012、09892、08656、09898、08662、及び10110を終濃度4、20、100、又は500ng/mlとなるように添加して、CO2インキュベーター中で4又は5日間培養した。培養上清10μlを採取し、OsteoLyseAssayKitに付属のFluorophoreReleasingReagentを200μl添加して、時間分解蛍光光度計ALVOMX、パーキンエルマー社製、Excitation:340nm、Emission:615nmを用いて蛍光強度RFUを測定することにより、培養上清中に放出された遊離蛍光コラーゲン断片量を定量した。結果を図9乃至13に示す。その結果、RANKL添加により増加する蛍光コラーゲン断片量が、抗Siglec-15抗体によって、4ng/mlから500ng/mlの範囲で濃度依存的に減少した。重要な発見は、親和性が改善された抗体MOR09892、09898、及び10110がそれぞれの親抗体MOR0901208656、及び08662よりも低濃度で骨吸収活性を抑制したことである。このことから、抗体の結合親和性を改善することによって生物活性の改善ももたらされることが示唆される。その他の抗体の調製とアッセイA.抗体の調製MOR09281を得た実施例1と同様にしてMOR09268を調製し、実施例2に従ってIgG2に変換した。MOR09268は、MOR12574、MOR13154、及びMOR13156の親抗体である。これらの3つの抗体を作製するための親和性増強は、実施例4に記載のプロトコールに従って行った。前記抗体のアミノ酸配列、それらをコードする核酸配列、及びそれらの構造に関する情報を、表9乃至12にまとめた。前記各抗体の相補性決定領域CDRのアミノ酸配列を、表13に示す。抗体MOR09281、MOR09892、MOR09898、MOR10110、MOR09268、MOR12574、MOR13154、及びMOR13156において、重鎖CDR1及びCDR2並びに軽鎖CDR2のアミノ酸配列は、以下のコンセンサス配列に従う。重鎖CDR1のコンセンサス配列は、X16YX17MX18配列番号106であるX16はN、S、又はTであり、X17はW又はAであり、X18はS、H、T、又はNである。重鎖CDR2のコンセンサス配列は、X19IX20X21X22X23X24X25X26X27TX28YAX29X30VKG配列番号107であるX19はL、Y、F、N、又はTであり、X20はS、A、F、又はEであり、X21はY、G、又はIであり、X22はK又はアミノ酸無しであり、X23はE又はアミノ酸無しであり、X24はS又はAであり、X25はS又はGであり、X26はS又はYであり、X27はT、N、V、S、又はAであり、X28はY又はNであり、X29はD又はAであり、X30はS又はGである。軽鎖CDR2のコンセンサス配列は、X31X32X33X34RPS配列番号108であるX31はG、D、又はYであり、X32はT、D、又はVであり、X33はN又はTであり、X34はN、D、又はKである。抗体MOR12574、MOR13154、及びMOR13156は、いずれも同じ軽鎖CDR1配列の、TGTSSDVGDYNYVS配列番号83を持つ。抗体MOR12574、MOR13154、及びMOR13156は、いずれも同じ軽鎖CDR2配列の、YVTNRPS配列番号89を持つ。抗体MOR12574、MOR13154、及びMOR13156は、いずれも同じ重鎖CDR3配列の、RGPGMGNMDI配列番号80を持つ。抗体MOR12574、MOR13154、及びMOR13156において、軽鎖CDR3のアミノ酸配列は下記のコンセンサス配列に従う。QSYAX35X36X37X38X39X40X41V配列番号109X35はP又はGであり、X36はL又はAであり、X37はS又はPであり、X38はS又はFであり、X39はS又はNであり、X40はH又はアミノ酸無しであり、X41はI又はLであるB.ヒト破骨細胞を用いたOsteoLyseAssayヒト型抗ヒトSiglec-15モノクローナル抗体が正常ヒト破骨前駆細胞の骨吸収活性に及ぼす影響コラーゲンコートプレートを用いた評価正常ヒト破骨前駆細胞NormalHumanNaturalOsteoclastPrecursorCells、三光純薬より購入、カタログ番号2T-110を、細胞に添付のプロトコールに従い96-wellOsteoLysecellcultureplateLonza社、カタログ番号PA-1500に1×104細胞/ウェルとなるように播種した。なお培地は、ウシ胎児血清終濃度10、ヒトRANKL終濃度10又は20ng/ml、及びヒトM-CSF終濃度33ng/ml等を含むOPGM添加因子セットOsteoclastSingleQuotTMKit、三光純薬より購入、カタログ番号PT-9501を添加した破骨前駆細胞用基礎培地OPBM、三光純薬より購入、カタログ番号PT-8201を用いた。この培養上清にMOR09268を終濃度3又は30μg/mlとなるように添加し、CO2インキュベーター中で6日間培養した。同様に、MOR12574、MOR13154、又はMOR13156を終濃度4、20、100、又は500ng/mlとなるように培養上清に添加して、CO2インキュベーター中で5日間培養した。培養上清10μlを採取し、OsteoLyseAssayKitに付属のFluorophoreReleasingReagentを200μl添加した。時間分解蛍光光度計ALVOMX、パーキンエルマー社製、Excitation:340nm、Emission:615nmを用いて蛍光強度RFUを測定することにより、培養上清中に放出された遊離蛍光コラーゲン断片量を定量した。MOR09268、MOR12574、MOR13154、及びMOR13156の結果を、それぞれ図42、43、44、及び45に示す。図42乃至45に示すように、RANKL添加により増加する蛍光コラーゲン断片数が、抗Siglec-15抗体によって濃度依存的に減少した。卵巣摘出ラットを用いた抗Siglec-15モノクローナル抗体の生物活性評価A.動物実験のプロトコール12週齢雌性F344ラット日本チャールスリバー社より入手に両側卵巣摘除を施術し、溶媒投与群及び抗Siglec-15モノクローナル抗体投与群の2群に分ける。また偽手術群についても1群設定する。抗体投与群については、実施例2又は7の抗Siglec-15モノクローナル抗体を、各1mg/kgの用量で腹腔内に週3回、手術翌日から4週間反復投与する。溶媒投与群及び偽手術群には、溶媒として0.01のTween20を含有するPBSを腹腔内に投与する。投与開始4週後に絶食下で24時間採尿を行い、尿検体は測定まで-80°Cで保存する。採尿終了後にラットを安楽死させ、各ラットから腰椎を摘出する。B.腰椎骨密度の測定摘出した腰椎に付着している軟組織を除去し、第4~6腰椎を切り出す。エタノール中で振とう後に風乾することにより得られた腰椎を脱脂及び脱水し、骨密度測定装置DCS-600EX、アロカ社製を用いて骨密度を測定する。偽手術群に対し、卵巣摘除群では有意な腰椎骨密度の減少が認められ、抗体投与群では卵巣摘除による骨密度の減少が有意に抑制されるであろう。C.尿中デオキシピリジノリン排泄量の測定I型コラーゲン架橋の各種代謝産物は骨の代謝回転、特に骨吸収を鋭敏に反映する。なかでもデオキシピリジノリンは主として骨のコラーゲンに局在することから、骨吸収の指標として信頼性が高いとされている。凍結保存していた尿検体を融解し、遠心操作により不溶物質を沈殿させて上清を得る。この上清中に含まれるデオキシピリジノリン量を、オステオリンクスDPDDSファーマバイオメディカル社製を用いて測定する。また、クレアチニン-テストワコー和光純薬工業社製を用いて上清中のクレアチニン含量も測定し、クレアチニン補正を行ったデオキシピリジノリン量を算出する。偽手術群に対し、卵巣摘除群では尿中デオキシピリジノリン排泄量が有意に増加し、卵巣摘除ラットでは破骨細胞による骨吸収が亢進していることが示唆されるであろう。一方、抗体投与群では、卵巣摘除によるデオキシピリジノリン排泄量の増加が抑制されるであろう。この結果から、Siglec-15に特異的に結合するモノクローナル抗体が破骨細胞の骨吸収を抑制することが動物モデルでも確認され、この骨吸収抑制作用により卵巣摘除ラットの腰椎骨密度減少が抑制されることが強く示唆されるであろう。"