1種類または複数種類の植物病原性真菌によって引き起こされる病徴を制御するための組成物であって、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、およびSEQIDNO7から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むポリペプチド分子、ならびに担体を含む、組成物。ポリペプチド分子が、SEQIDNO4と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項1記載の組成物。ポリペプチド分子がSEQIDNO4を含む、請求項1記載の組成物。ポリペプチド分子が、SEQIDNO5と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項1記載の組成物。ポリペプチド分子がSEQIDN05を含む、請求項1記載の組成物。ポリペプチド分子が、SEQIDNO6と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項1記載の組成物。ポリペプチド分子がSEQIDN06を含む、請求項1記載の組成物。ポリペプチド分子が、SEQIDNO7と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項1記載の組成物。ポリペプチド分子がSEQIDN07を含む、請求項1記載の組成物。種子処理組成物である、請求項1~9のいずれか一項記載の組成物。植物処理組成物である、請求項1~9のいずれか一項記載の組成物。土壌処理組成物である、請求項1~9のいずれか一項記載の組成物。植物病原性真菌が、フザリウムFusarium種、スクレロチニアSclerotinia種、リゾクトニアRhizoctonia種、またはピシウムPithium種のうちの1つである、請求項1~12のいずれか一項記載の組成物。フザリウム種、スクレロチニア種、リゾクトニア種、またはピシウム種のうちの1つによって引き起こされる植物における病徴を制御するための、請求項1~13のいずれか一項記載の組成物の使用。種子を処理する段階、植物を処理する段階、および植物成長基質を処理する段階のうちの1つまたは複数を含む、請求項14記載の使用。1種類または複数種類の植物病原性真菌によって引き起こされる病徴を制御するための、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、およびSEQIDNO7から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むポリペプチド分子を発現する微生物細胞の使用。ポリペプチド分子が、SEQIDNO4と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項16記載の使用。ポリペプチド分子がSEQIDN04を含む、請求項16記載の使用。ポリペプチド分子が、SEQIDNO5と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項16記載の使用。ポリペプチド分子がSEQIDN05を含む、請求項16記載の使用。ポリペプチド分子が、SEQIDNO6と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項16記載の使用。ポリペプチド分子がSEQIDN06を含む、請求項16記載の使用。ポリペプチド分子が、SEQIDNO7と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項16記載の使用。ポリペプチド分子がSEQIDN07を含む、請求項16記載の使用。微生物細胞が、真菌細胞、酵母細胞、または細菌細胞である、請求項16~24のいずれか一項記載の使用。真菌細胞が、スフェロデスミコパラシチカSphaerodesmycoparasiticaの細胞、またはペニシリウムPenicillium種の細胞である、請求項25記載の使用。酵母細胞が、ジゴサッカロミセスZygosaccharomyces種の細胞、サッカロミセスSaccharomyces種の細胞、ピキアPichia種の細胞、またはクルベロミセスKluveromyces種の細胞である、請求項25記載の使用。細菌細胞が、大腸菌Escherichiacoliの細胞、シュードモナスPseudomonas種の細胞、またはバチルスBacillus種の細胞である、請求項25記載の使用。SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、およびSEQIDNO7から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むポリペプチド分子を発現する、形質転換された植物細胞であって、フザリウム種による感染に対して抵抗性である、植物細胞。ポリペプチド分子が、SEQIDNO4と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。ポリペプチド分子がSEQIDNO4を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。ポリペプチド分子が、SEQIDNO5と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。ポリペプチド分子がSEQIDNO5を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。ポリペプチド分子が、SEQIDNO6と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。ポリペプチド分子がSEQIDNO6を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。ポリペプチド分子が、SEQIDNO7と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。ポリペプチド分子がSEQIDNO7を含む、請求項29記載の形質転換された植物細胞。油糧種子植物細胞、または穀類植物細胞、または豆類植物細胞である、請求項29~37のいずれか一項記載の形質転換された植物細胞。1種類または複数種類の植物病原性真菌によって引き起こされる病徴を制御するための単離されたタンパク質であって、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、およびSEQIDNO7から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含むポリペプチド分子を含む、単離されたタンパク質。ポリペプチド配列が、SEQIDNO4と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。SEQIDNO4を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。SEQIDNO5と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。SEQIDNO5を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。SEQIDNO6と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。SEQIDNO6を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。SEQIDNO7と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。SEQIDNO7を含む、請求項39記載の単離されたタンパク質。請求項39~47のいずれか一項記載のタンパク質をコードする、単離された核酸分子。請求項48記載の核酸分子で形質転換された微生物細胞。前記核酸分子がプロモーターに機能的に連結されている、請求項49記載の微生物細胞。真菌細胞、酵母細胞、または細菌細胞である、請求項49または50記載の微生物細胞。真菌細胞が、スフェロデスミコパラシチカの細胞、またはペニシリウム種の細胞である、請求項51記載の微生物細胞。酵母細胞が、ジゴサッカロミセス種の細胞、サッカロミセス種の細胞、ピキア種の細胞、またはクルベロミセス種の細胞である、請求項51記載の微生物細胞。細菌細胞が、大腸菌の細胞、シュードモナス種の細胞、またはバチルス種の細胞である、請求項51記載の微生物細胞。請求項48記載の核酸分子で形質転換された植物細胞。前記核酸分子がプロモーターに機能的に連結されている、請求項55記載の植物細胞。油糧種子植物細胞、穀類植物細胞、または豆類植物細胞である、請求項55または56記載の植物細胞。発明の詳細な説明スフェロデスミコパラシチカ子嚢菌門Ascomycetesメラノスポラ目Melanosporalesは、コムギまたはアスパラガスの圃場に起因するフザリウムアベナセウム、フザリウムグラミネアラム、およびフザリウムオキシスポラムの単離物から単離された菌寄生菌である。この種は、子嚢胞子のサイズ、形状紡錘形および三角形、ならびに壁装飾網状および平滑の独特な組み合わせを特徴とする。また、子嚢果子殻壁の表面上、菌糸周囲の子嚢果上、および菌糸から発生する不規則に分岐した分生子柄上の単純フィアライドから、分生子が産生される。Sミコパラシチカは、フィアロ型アナモルフを有し、かつ、子嚢果子殻壁の表面上に、または菌糸周囲の子嚢果上に不規則に散在して、および分生子柄上に単純フィアライドを産生する。Sミコパラシチカは、フザリウムの生きている菌糸に寄生するフック様構造を形成する。スフェロデスミコパラシチカの試料培養物は、アクセッション番号IDAC30100801で、InternationalDepositaryAuthorityofCanadaCollection1015ArlingtonStreetWinnipegCanadaR3E3R2に寄託されている。フザリウムアベナセウムテレオモルフ:ジベレラアベナセアGiberellaavenaceaに生体栄養的にbiotrophically寄生するスフェロデスミコパラシチカの試料培養物は、アクセッション番号IDAC30100802で、InternationalDepositaryAuthorityofCanadaCollectionに寄託されており、本明細書においてSMBstと呼ばれる。フザリウムグラミネアラムテレオモルフ:ジベレラゼアエGiberellazeaeに生体栄養的に寄生するスフェロデスミコパラシチカの試料培養物は、アクセッション番号IDAC30100803で、InternationalDepositaryAuthorityofCanadaCollectionに寄託されており、本明細書においてSMGstと呼ばれる。Sミコパラシチカの大サブユニットリボソームRNA遺伝子LSUからの1266bpDNA配列を、SEQIDN01に示す。Sミコパラシチカの小サブユニットリボソームRNA遺伝子SSUからの1233bpDNA配列を、SEQIDNO2に示す。本明細書において開示されるスフェロデスミコパラシチカにより産生される新規タンパク質は、抗真菌剤として有用である。これらの新規タンパク質は、フザリウム菌の感染を処理するか、寛解させるか、またはさもなければ制御するために使用され得る。Sミコパラシチカにより産生されるこれらの新規タンパク質は、フザリウムアベナセウム、フザリウムグラミネアラム、および/またはフザリウムオキシスポラムの感染を、処理するか、寛解させるか、またはさもなければ制御するため、ならびに植物の健康または成長を改善するために特に有用である。本明細書において開示される新規Sミコパラシチカタンパク質は、真菌感染、特にフザリウムの感染が発生する確率を減少させるための予防剤として使用され得る。本明細書において開示される新規Sミコパラシチカタンパク質は、フザリウム萎凋病またはフザリウム赤カビ病により影響を受けた植物を処理するために使用され得る。これらのタンパク質は、そのような状態が蔓延することを妨げるために、あるいはそのような状態が発生するリスクを減少させるための予防手段として、使用され得る。本明細書において開示される新規Sミコパラシチカタンパク質は、フザリウム菌の感染を処理するか、寛解させるか、またはさもなければ制御するために使用され得る。前記タンパク質は、処理を必要とする生物に対して、任意の適当な様式で適用され得る。例えば、前記タンパク質は、直接使用されてもよいし、あるいは、土壌システムもしくは無土壌成長システムへの適用のための接種材料例えば、顆粒組成物、泥炭ベースの組成物、種子への適用のための接種材料例えば、粉末組成物、顆粒組成物、泥炭ベースの組成物、液体組成物、または成長する植物への適用のための接種材料例えば、粉末組成物、液体ベースの組成物へとさらに加工されてもよい。本明細書において開示される製剤は、i1種または複数種の新規タンパク質を含む、1種または複数種の活性成分、ii1種または複数種の担体しばしば、高密度の活性成分を支持し、標的へと送達するために使用される不活性材料、ならびに任意でiii1種または複数種のアジュバントUV線からの防御により活性成分の機能を促進および維持する化合物、標的における雨耐性を確実にする化合物、湿気を保持するかもしくは乾燥に対して防御する化合物、および/または、HynesandBoyetchko2006ResearchinitiativesintheartandscienceofbiopesticideformulationsSoilBiolBiochem3884549により開示されるものなどの、標準的な農業設備を用いた生物農薬の散布および分散を促進する化合物を含む。Sミコパラシチカ由来の内部転写スペーサーInternalTranscribedSpacerリボソームDNAを、配列決定した。ITS領域からの560bpDNA配列を、SEQIDNO3に示す。スフェロデスミコパラシチカ由来の全細胞内タンパク質抽出物および全細胞外タンパク質抽出物は、フザリウム種、スクレロチニア種、リゾクトニア種、およびピシウム種の真菌胞子の発芽の有意な阻害を実証する。殺真菌効果を有する4種の新規タンパク質を、全タンパク質抽出物から単離し、1種は約79kDaの分子量を有してSEQIDNO4を含み、別の1種は約50kDaの分子量を有してSEQIDNO5を含み、別の1種は約36kDaの分子量を有してSEQIDNO6を含み、および4種目は約13kDaの分子量を有してSEQIDNO7を含んだ。本発明は、これらのタンパク質の1種または複数種を含む抗真菌剤を提供する。従来の分子生物学的技術が、4種の新規タンパク質の各々を単離し、特徴決定し、および作製するために使用されてもよい。例えば、本タンパク質についての遺伝子を同定するために、SミコパラシチカをFオキシスポラム濾液で曝露し、上方制御されたmRNAを標準的なノーザンブロットにより単離することができる。cDNAは、逆転写酵素PCRRTPCRによりmRNAから作製することができる。cDNAは、増幅し、精製し、および適切なベクター中に挿入することができる。このベクターを、適切な宿主細胞中に挿入してもよい。クローニングおよび発現は、同定されたタンパク質のためのプライマーを設計することによる、これらの新規な抗微生物タンパク質をコードする遺伝子の単離に焦点を合わせてもよい。当該タンパク質の大規模作製のための産業用株を生成するために、単離された遺伝子を、適当な/効率的なプロモーターを有する適当な発現ベクター酵母または細菌中にクローニングしてもよい。これらのベクターは、Promega、Invitrogen、Clontech、または他の会社から購入することができる。クローニングされた遺伝子を、そのタンパク質発現について試験してもよく、発現されたタンパク質は、Hisタグカラムまたは他のカラムを用いて精製されると考えられる。精製されたタンパク質を、ディスクプレートアッセイ法および/またはDrummondetal2000ThedevelopmentofmicrobiologicalmethodsforphytochemicalscreeningRecResDevPhytochem4143152によって開示されるマイクロタイタープレートアッセイ法により例示される方法を用いて、植物病原性真菌に対する抗真菌活性について試験してもよい。次に、遺伝子変異、またはエンハンサー、イントロン、もしくはタンパク質特異的プロモーターGA誘導性の付加、または付加欠失を含むrDNA技術を、タンパク質の作製を増強するために使用してもよい。Sanghyunetal2008TransgenicwheatexpressingabarleyclassIIchitinasegenehasenhancedresistanceagainstFusariumgraminearumJExptBotany5923712378およびTobiasetal2007CobombardmentintegrationandexpressionofricechitinaseandthaumatinlikeproteingenesinbarleyPlantCellReports26631639により例示されるような当業者に公知である技術を用いて、病原性真菌に対して抗真菌活性を有するトランスジェニック系統を作製するために、新規タンパク質、すなわち、13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてをコードする選択された遺伝子を、選択された植物ゲノム中に形質転換してもよい。これらの新規タンパク質での形質転換に適する作物植物は、特に、油糧種子作物、穀類作物、豆類作物、針葉樹種、および落葉樹種により例示される。例示的な油糧種子作物は、特に、キャノーラ、カラシナ、ナタネ、ダイズ、アマ、ヒマワリ、ベニバナ、トウゴマ、およびカメリナを含む。例示的な穀類作物は、特に、コムギ、オオムギ、オートムギ、ライコムギ、ライムギ、イネ、メイズ、モロコシ、およびキノアを含む。例示的な豆類作物は、特に、インゲン、エンドウ、ヒヨコマメ、レンズマメ、およびルピナスを含む。例示的な針葉樹種は、特に、マツ、トウヒ、モミ、およびツガを含む。例示的な落葉樹種は、特に、ポプラ、アスペン、カエデ、オーク、堅果を実らせる木、果樹、アカシア、およびユーカリを含む。本発明は、Sミコパラシチカにより産生される、SEQIDNO4を含む79kDaタンパク質、SEQIDNO5を含む50kDaタンパク質、SEQIDNO6を含む36kDaタンパク質、およびSEQIDNO7を含む13kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてを含む抗真菌組成物を提供する。あるいは、13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべては、13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてをコードする1種または複数種の核酸分子が提供された、形質転換された微生物により産生されてもよい。本発明はまた、植物の真菌病害を制御する方法、およびマイコトキシン解毒のための方法であって、以下で総称して抗真菌剤と呼ばれる13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてを、植物の部位に適用する段階を含む方法を、提供する。本発明の組成物は、例えば、植物の種子、および/または植物を成長させるために使用される成長培地例えば、土壌もしくは水、および/または植物の根、および/または植物の葉、またはこれらの任意の組み合わせへ適用されてもよい。本組成物で処理することができる例示的な作物植物は、種子作物、穀類作物、豆類作物、園芸作物、森林作物、および芝草などの農作物を含む。本発明は、抗真菌剤と、最終生成物の安定性および/または性能を確実にすると考えられる農学的に許容される担体および/または希釈剤の1種または複数種とを含む組成物を提供する。適当な担体は、特に、カオリナイト、ベントナイト、およびモンモリロナイトにより例示される粘土粉体、泥炭顆粒、泥炭粉末、炭素粉体、セルロース顆粒、およびおがくずにより例示される粉体、バーミキュライト、パーライト、軽石、メチルセルロース、タルクによって例示される。適当な希釈剤は、水によって、および、アルギナート、カラギーナン、寒天、カルボキシメチルセルロースなどにより例示される非粘性ゲルによって例示される。担体または希釈剤は、活性成分と適合性であるべきであり、農学的に許容されるべきであり、容易な粒子の分散および付着を可能にする優れた吸収力および適当な容積密度を有するべきである。本明細書における組成物は、当技術分野において確立された慣行に従って、水性スプレー、顆粒、および粉剤として適用されてもよい。水性スプレーは、通常、本発明の化合物の水和剤または乳剤製剤を、相対的に大量の水と混合して、分散液を形成させることにより調製される。水和剤は、抗真菌剤と固体担体と界面活性剤の微粉化された混合物を含んでもよい。固体担体は、通常、アタパルガイト粘土、カオリン粘土、モンモリロナイト粘土、珪藻土、微粉化されたシリカ、精製されたケイ酸塩、またはこれらの組み合わせの中から選択される。本明細書において有用であり得る界面活性剤は、湿潤能力、浸透能力、および/または分散能力を有する。それらは、典型的には、約05重量~約10重量の量で存在する。本明細書における界面活性剤は、例えば、アルキルベンゼンスルホナート、アルキルスルファート、ナフタレンスルホナートおよび縮合ナフタレンスルホナート、スルホン化リグニン、ならびに非イオン性界面活性剤から選択され得る。乳剤は、水に不混和性の溶媒と界面活性剤との混合物である液体担体中に、本発明の抗真菌剤を含んでもよい。本明細書において有用であり得る溶媒は、キシレン、アルキルナフタレン、石油蒸留物、テルペン溶媒、エーテルアルコール、有機エステル溶媒、またはこれらの適当な組み合わせのような芳香族炭化水素溶媒を含む。本発明の組成物が、汚染源および接種材料の分散を制御するために植物の破片もしくは落葉落枝に適用される場合、または発芽前保護のためとして土壌に適用される場合、顆粒製剤または粉体が、時にはスプレーよりも便利である。1つの態様において、本明細書において開示される抗真菌剤は、アルギナートペレット中に封入される。ペレットは、任意の適当な様式で調製されてもよい。例えば、1つの有用な方法は、Harvesonetal2002NovelUseofaPyrenomycetousMycoparasiteforManagementofFusariumWiltofWatermelonPlantDisease8610251030に記載されている。組成物は、抗真菌剤において有用である他の活性物質を含んでもよい。例えば、本明細書における組成物は、トリコデルマTrichoderma、硫黄、ニーム油、ローズマリー油、ホホバ油、枯草菌Bacillussubtilis、アリルアミン例えば、テルビナフィン、代謝拮抗物質例えば、フルシトシン、アゾール例えば、ケトコナゾール、イトラコナゾール、エキノカンジン例えば、カスポファンギン、ポリエン例えば、アンホテリシンB、全身性剤例えば、グリセオフルビン、またはこれらの組み合わせのような、他の抗真菌剤を含んでもよい。本明細書における組成物は、約01重量~約95重量の抗真菌剤、ならびに約01重量~約95重量の担体および/または界面活性剤を含有してもよい。播種前の植物種子に対する直接適用は、いくつかの場合において、非常に薄く、かつ種子の重量に基づいてほんの1または2重量以下を占める実質的に均一なコーティングを得るように、本発明の粉末化された固体化合物または粉剤のいずれかを種子と混合することによって達成されてもよい。しかしながら、いくつかの場合において、メタノールなどの植物毒性でない溶媒が、種子の表面上の本発明の化合物の均一な分布を容易にするための担体として、便利に使用される。本明細書における組成物は、植物における真菌感染の処理において有用であり得る。従って、本明細書における組成物は、本明細書において開示されるSEQIDNO4を含む79kDaタンパク質、SEQIDNO5を含む50kDaタンパク質、SEQIDNO6を含む36kDaタンパク質、およびSEQIDNO7を含む13kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてと、そのための許容される担体とを含んでもよい。本発明は、Sミコパラシチカの13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてを含む抗真菌組成物を作製するための例示的方法に関する。方法は、以下の段階を含む:aSミコパラシチカ胞子の胞子形成を誘導する段階;bSミコパラシチカを培養する段階;cSミコパラシチカ培養物からタンパク質を回収する段階、d13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてを、前記の回収されたSミコパラシチカタンパク質から分離および回収する段階;ならびにeSミコパラシチカタンパク質から回収された、13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてを含む組成物を調製する段階。SEQIDNO4を含む79kDaタンパク質、SEQIDNO5を含む50kDaタンパク質、SEQIDNO6を含む36kDaタンパク質、およびSEQIDNO7を含む13kDaタンパク質を、回収されたSミコパラシチカタンパク質から一緒に分離および回収してもよい。あるいは、13kDaタンパク質および/または36kDaタンパク質および/または50kDaタンパク質および/または79kDaタンパク質、またはこれらの任意の組み合わせを、回収されたSミコパラシチカタンパク質から個々に回収してもよい。本発明は、SミコパラシチカのSEQIDNO4を含む79kDaタンパク質、SEQIDNO5を含む50kDaタンパク質、SEQIDNO6を含む36kDaタンパク質、およびSEQIDNO7を含む13kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてを含む抗真菌組成物を作製するための別の例示的方法に関する。方法は、以下の段階を含む:f選択された微生物培養物を、Sミコパラシチカにより産生される13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてをコードする1種または複数種の遺伝子で形質転換する段階;g形質転換された微生物培養物を培養する段階;h形質転換された培養物からタンパク質を回収する段階、i13kDaタンパク質および/または36kDaタンパク質および/または50kDaタンパク質および/または79kDaタンパク質を、前記の回収されたタンパク質から分離および回収する段階;ならびにj13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてを含む組成物を調製する段階。13kDaタンパク質および/または36kDaタンパク質および/または50kDaタンパク質および/または79kDaタンパク質を、回収されたタンパク質から一緒に分離および回収してもよい。あるいは、13kDaタンパク質および/または36kDaタンパク質および/または50kDaタンパク質および/または79kDaタンパク質を、回収されたタンパク質から個々に回収してもよい。Sミコパラシチカにより産生される13kDaタンパク質、36kDaタンパク質、50kDaタンパク質、および79kDaタンパク質のうちの1種または複数種またはすべてをコードする1種または複数種の遺伝子で形質転換され得る適当な微生物培養物は、大腸菌Escherichiacoli、シュードモナスPseudomonas種、バチルスBacillus種などのような細菌培養物、ジゴサッカロミセスZygosaccharomyces種、サッカロミセスSaccharomyces種、ピキアPichia種、クルベロミセスKluveromyces種などのような酵母培養物、およびペニシリウムPenicillium種などにより例示される。実施例1:スフェロデスミコパラシチカ由来の細胞内および細胞外タンパク質の産生および抽出スフェロデスミコパラシチカ株IDAC30100802および/またはIDAC30100803を、本明細書において開示されるすべての研究の中で使用し、全体を通してそれぞれSMBstおよびSMGstと呼ぶ。SMBstおよびSMGstのストック培養物を調製し、ポテトデキストロースブロスPDB培養培地中に21°Cで維持した。各種類のストック培養物から細胞内および細胞外タンパク質を調製するために、PDB培養物から約3mlを、50mlPDB増殖培地を含有する250mlエルレンマイヤーフラスコへ移した。フラスコを7日間、回転式振盪機150rpm上で、室温でインキュベーションした。若い菌糸体を、Whatman登録商標No1濾紙Whatmanは、WhatmanInternationalLtdKentUKの登録商標であるで濾過した。Whatman登録商標No1濾紙上に収集された菌糸体を、細胞内タンパク質の抽出のために使用し、一方、濾過された培養培地を、菌糸体由来の細胞外タンパク質の回収のために使用した。実施例2:スフェロデスミコパラシチカ由来の細胞内タンパク質および細胞外タンパク質の分画、分離、および精製細胞内タンパク質抽出:細胞内タンパク質を、Chenetal2004HeatshockproteinsofthermophilicandthermotolerantfungifromTaiwanBotBullAcadSin45247257により開示される方法に従って抽出した。各試料由来の総量200mgの真菌菌糸体を、液体窒素中で、滅菌した磁器の乳鉢中で乳棒を用いて粉末化し、15mlの冷却した抽出緩衝液と混合した。菌糸体~200mgを、50mMトリスHClpH85;2ドデシル硫酸ナトリウムSDS;2βメルカプトエタノール;1mMフェニルメチルスルホニルフルオリド95アルコール中のPMSFからなる1mLの緩衝液を含有する粉砕チューブ中で、音波処理により粉砕した。ホモジェネートを、12000rpm、28°Cで10分間、遠心分離し、上清を収集した。4倍容量の冷アセトン20°Cを添加し、該試料を一晩、20°Cで冷凍した。沈殿物タンパク質をアセトン中で保存し、12000rpm、28°Cで5分間、遠心分離し、最終的に、50~100μlの試料緩衝液625mMトリスHClpH68;3SDS;10グリセロール;5βメルカプトエタノール中に溶解した。該タンパク質試料を新しい15mlエッペンドルフチューブに移し、さらなる研究に使用するまで80°Cで保存した。細胞外タンパク質抽出:濾過された培養培地を、細胞外タンパク質の供給源として使用し、3000ダルトンカットオフ膜を有するAmicon登録商標限外濾過遠心分離チューブAmiconは、MilliporeCorpBillericaMAUSAの登録商標であるにより、4000rpm、4°Cでの遠心分離によって濃縮した。ディスク拡散アッセイを用いて、全細胞外タンパク質を、真菌性病原体であるフザリウムオキシスポラムおよびフザリウムグラミネアラムに対する抗真菌活性について試験した。全細胞外タンパク質の抗真菌活性は、いくつかの改変を伴う、RobertsandSelitrennikoff1986IsolationandpartialcharacterizationoftwoantifungalproteinsfrombarleyBiochimBiophysActa880161170により記載されているような放射状ディスクプレート拡散アッセイによって、滅菌条件下で試験した。FオキシスポラムおよびFグラミネアラムに対する抗真菌活性についての全細胞外タンパク質の試験は、ポテトデキストロース寒天を含有するペトリ皿中で行った。活発に増殖中の真菌プレートからの菌糸体プラグをペトリ皿の中央に置き、滅菌濾紙ディスク直径5mmのWhatman登録商標濾紙no1を、寒天表面上の菌糸体コロニーの縁から05cm離れた距離に置いた。25μgの細胞外タンパク質を含有するアリコート60μLを、ディスクに添加した試験スポットは、図1Aおよび図1BにおいてTとして特定される。滅菌蒸留水および緩衝液を対照として用いた対照スポットは、図1Aおよび図1BにおいてCとして特定される。次に前記プレートを、室温で4日間インキュベーションし、菌糸体生長の阻害について調査した。菌糸体コロニーの面積を測定し、対照に対する菌糸体コロニーの生長面積の減少を算出することにより、真菌増殖の阻害を決定した。SMCD培養物から回収された全細胞外タンパク質は、FオキシスポラムおよびFグラミネアラムの両方において菌糸体生長を阻害した図1Aおよび図1B。発芽開始の3日後に、Fオキシスポラムの菌糸伸長において約22の阻害、およびFグラミネアラムの菌糸伸長において30の阻害が観察された図1。1日後、Fオキシスポラムの菌糸伸長の阻害は約30に増大し、他方、Fグラミネアラムにおける菌糸伸長の阻害は約35に増大した図1b。非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動非変性PAGE:Laemmli1970CleavageofstructuralproteinduringtheassemblyoftheheadofbacteriophageT4Nature227680685により教示される方法を用いて、タンパク質細胞内および細胞外を、不連続緩衝液システムにおいて10非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動非変性PAGEにより分離した。濃縮用ゲル375アクリルアミド/ビスアクリルアミド3008vvは、緩衝液として125mMトリスHCL、pH68を有し、分離用ゲル75アクリルアミド/ビスアクリルアミド3008vvは、緩衝液として375mMトリスHCl、pH88を有した。ゲルを、120Vで一晩、4°Cで、25mMトリスおよび192mMグリシン、pH83を含有するトリスグリシン電極緩衝液で泳動した。電気泳動後、銀染色法BioRad登録商標キットの方法に従ってゲルを染色した。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動SDSPAGE:非変性PAGEから溶出したタンパク質および全タンパク質のSDSPAGEを、Laemmli1970により教示される方法に従って、12ポリアクリルアミドゲル上で行った。タンパク質を、トリスグリシン緩衝液pH83中の5濃縮用ゲルpH68および12分離用アクリルアミドゲルpH88ならびに適切なマーカーを用いることにより分析した。SDS電気泳動の前に、前記タンパク質を、5βメルカプトエタノールを含有する等容量の試料緩衝液60mMトリスHCl緩衝液、4SDS、pH68と混合した。BioRad登録商標LaboratoriesCanadaLtdMontrealPQCanada;BioRadは、BioRadLaboratoriesIncHerculesCAUSAの登録商標であるから取得した標準マーカータンパク質の混合物を使用した。すべての試料を5分間95°Cで加熱して、室温まで冷却した。タンパク質を、銀染色法BioRad登録商標キットの方法により可視化した。タンパク質の分子量は、標準分子量マーカーの移動度との比較により概算した。細胞外タンパク質の高速タンパク質液体クロマトグラフィーFPLC:タンパク質を、製造業者の指示書に従って、FPLCAKTA登録商標精製システムAKTAは、GEHealthcareBioSciencesABLtdUppsalaSwedenの登録商標であるを用いて、Superdex登録商標75GL1030カラムSuperdexは、GEHealthcareBioSciencesABLtdUppsalaSwedenの登録商標であるを通して分画した。カラムを、滅菌水、および015MNaClを含有する50mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH70であらかじめ平衡化し、その後、タンパク質注入約500μLおよび10ml分の流速での同緩衝液によるタンパク質の溶出を行った。タンパク質を、015MNaClを含有する50mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH70を用いたゲル濾過を通して精製した。Superdex75でのゲル濾過により、タンパク質は別個のピークに分解された。08mlの画分を収集し、それらの純度をSDSPAGEにより確認した。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動SDSPAGE:FPLC画分から回収されたタンパク質のSDSPAGE12を、Laemmli1970により教示される方法に従って行った。すべてのピークを与えるFPLC画分をプールして、14容量の冷アセトン中での沈殿により回収し、20°Cで一晩保管した。12000gでの10分間の遠心分離の後、沈殿したタンパク質ペレットを、最少量30μLのアッセイ緩衝液中に溶解させた。タンパク質を、トリスグリシン緩衝液pH83中の5濃縮用ゲルpH68および12分離用アクリルアミドゲルpH88と適切なマーカーとを有するSDSPAGEにより分析した。SDS電気泳動の前に、前記タンパク質を、5βメルカプトエタノールを含有する等容量の試料緩衝液60mMトリスHCl緩衝液、4SDS、pH68と混合した。標準マーカータンパク質の混合物BioRad登録商標タンパク質マーカーBioRadLaboratoriesCanadaIncを使用した。すべての試料を、ゲル上へローディングする前に、5分間95°Cで加熱して、室温まで冷却した。タンパク質を、銀染色法BioRad登録商標銀染色キットBioRadLaboratoriesCanadaIncにより可視化した。タンパク質の分子量は、標準分子量マーカーの移動度との比較により概算した。FPLCから得られた分画されたタンパク質の分子量を、SDSPAGE12および16により決定した。非変性PAGE過程により分離された高分子量タンパク質バンドを構成する細胞外タンパク質を分離するために、5SDSPAGEを行った。10非変性ポリアクリルアミドゲルを用いた、SMBstおよびSMGstから抽出された細胞内タンパク質の非変性PAGE電気泳動により、上方バンドおよび下方バンドと表される2本のタンパク質バンドが分離された図2。非変性PAGEの各タンパク質バンドを、500~750μlの試料緩衝液625mMトリスHCl、pH68;1PMSF、1EDTA中に浸し、一晩4°Cで置いた。タンパク質を、12000gでの10分間の遠心分離により回収した。非変性PAGEから溶出した、分離されたタンパク質の分子量の決定のために、12ゲルを用いて、細胞内タンパク質のSDSPAGE分離を行った。細胞内試料の下方および上方バンドから溶出されたタンパク質により、およそ50および79kDaの2本の別個のバンドの存在が示された図3。10非変性ポリアクリルアミドゲルを用いた、SMBstおよびSMGstから抽出された細胞外タンパク質の非変性PAGE電気泳動により、EC1、EC2、EC3、およびEC4と表される4本のタンパク質バンドが分離された図4。非変性PAGEの各タンパク質バンドを、500~750μlの試料緩衝液625mMトリスHCl、pH68;1PMSF、1EDTA中に浸し、一晩4°Cで置いた。タンパク質を、12000gでの10分間の遠心分離により回収した。非変性PAGEから溶出した、分離されたタンパク質の分子量の決定のために、12ゲルを用いて、細胞外タンパク質のSDSPAGE分離を行った。4本のバンドから溶出されたタンパク質により、約:i79kDaEC1、ii50kDaCE2、iii36kDaEC3、および13kDaEC4の分子量を有する分離および精製されたタンパク質の存在が示された図5。AKTA登録商標精製システムを用いたFPLC高速タンパク質液体クロマトグラフィーにより決定された、Superdex75GL1030カラムでの細胞外タンパク質の4本のバンドの溶出プロフィールを、図5に示す。実施例3:Sミコパラシチカ培養物から回収された、精製された細胞内タンパク質および精製された細胞外タンパク質による、フザリウム種による菌糸体生長の阻害いくつかの改変を伴う、Robertsetal1986IsolationandpartialcharacterizationoftwoantifungalproteinsfrombarleyBiochimBiophysActa880161170により教示される方法に従った放射状ディスクプレート拡散アッセイにより、タンパク質の抗真菌活性を滅菌条件下で試験した。FオキシスポラムおよびFグラミネアラムに対する抗真菌活性についての単離されたタンパク質のアッセイを、ポテトデキストロース寒天を含有するペトリ皿中で行った。活発に増殖中の真菌プレートからの菌糸体プラグをペトリ皿の中央に置き、滅菌濾紙ディスク直径5mmのWhatman登録商標濾紙no1を、寒天表面上の、菌糸体コロニーの縁から05cm離れた距離に置いた。単離されたタンパク質60μLを、ディスクに添加した。滅菌蒸留水と抗真菌タンパク質のみを含まない緩衝液とを、対照として用いた。次いでプレートを、室温で3~4日間インキュベーションし、次に、もしあれば、ディスク周囲の阻害ゾーンについて調査した。この様式において、試験されるタンパク質が抗真菌剤である場合は、三日月形の真菌増殖の阻害ゾーンが、ディスクの周囲に出現すると考えられる。菌糸体コロニーの面積を測定し、対照水および緩衝液で処理されたプレートとの菌糸体コロニーの面積の減少を算出することにより、真菌増殖の阻害を決定した。50kDa細胞内タンパク質および79kDa細胞内タンパク質の両方が、Fオキシスポラム図7~図7およびFグラミネアラム図8~図8の菌糸伸長、すなわち菌糸体増殖を阻害した。79kDaタンパク質EC1、50kDaタンパク質EC2、および36kDaタンパク質EC3は、Fオキシスポラム図9~図9およびFグラミネアラム図10~図10の菌糸体生長を阻害した。13kDaタンパク質EC4は、Fグラミネアラム図11およびFオキシスポラム図11の菌糸体生長を阻害した。実施例4:Sミコパラシチカ培養物から回収された、精製された細胞外タンパク質による、フザリウム種による胞子発芽の阻害4種の細胞外Sミコパラシチカタンパク質EC1、EC2、EC3、およびEC4による、フザリウム種の胞子発芽に対する阻害効果を、Ghosh2006AntifungalPropertiesofHaemPeroxidasefromAcoruscalamusAnnBot9811451153およびYadavetal2007AnantifungalproteinfromEscherichiacoliJMedMicrobiol56637644により開示されるマイクロタイタープレートアッセイ法を用いて評価した。分画されたタンパク質の可能性のある毒性を、真菌FオキシスポラムおよびFグラミネアラムを用いて増殖阻害率アッセイで試験した。分画されたタンパク質のインビトロ抗真菌活性を、96ウェルマイクロタイタープレート中で決定した。マイクロプレートウェルにおいて、10μlのポテトデキストロースブロスPDB;DifcoLaboratoriesDetroitを、3μlのFオキシスポラムおよびFグラミネアラムの胞子懸濁液と混合した。タンパク質画分を含有する種々のピークの7μLのアリコートを、マイクロタイタープレート12~8ウェル中の懸濁液に添加した。水および緩衝液を、陰性対照として使用した。次いでマイクロタイタープレートを、室温で、暗所でインキュベーションした。24時間後に、倒立蛍光顕微鏡を用いて、処理されていないウェルおよび処理されたウェルの両方における胞子発芽の阻害について、観察を行った。顕微鏡内の、発芽胞子および未発芽胞子の数、ならびに菌糸体で覆われた面積の割合を使用して、増殖阻害を決定した。4種の細胞外タンパク質はすべて、FオキシスポラムおよびFグラミネアラムの胞子の発芽を有意に阻害した図12および図12。さらに、4種の細胞外タンパク質はすべて、FオキシスポラムおよびFグラミネアラムの菌糸体増殖について、これらの生物を固体培地上に別々にプレーティングした時、大きな阻害ゾーンを確立した図13。図14Aは、対照のFオキシスポラム胞子の発芽を示す顕微鏡写真であり、図14Aは、Fオキシスポラム胞子の発芽に対する50kDaタンパク質の阻害効果を示し、および図14Aは、Fオキシスポラム胞子の発芽に対する13kDaタンパク質の阻害効果を示す。図14Bは、対照のFグラミネアラム胞子の発芽を示す顕微鏡写真であり、図14Bは、Fグラミネアラム胞子の発芽に対する50kDaタンパク質の阻害効果を示し、および図14は、Fグラミネアラム胞子の発芽に対する13kDaタンパク質の阻害効果を示す。実施例5:Sミコパラシチカ培養物から回収された、結晶形成EC1およびEC3タンパク質の阻害効果結晶形成細胞外タンパク質EC179KDaおよびEC336KDaのマイコトキシン効果を、PDA上で活発に増殖中のFアベナセウムおよびFグラミネアラム培養物で評価した。Fアベナセウムを、菌糸体がプレートの表面を覆うまで、PDA寒天上で増殖させた。プレートの半分を、EC1結晶タンパク質およびEC3結晶タンパク質の混合物で処理し、その後プレートを、暗所で、23°Cで5日間インキュベーションした。プレートの処理されていない対照側図15と比較して、EC1EC3タンパク質混合物で処理された半分のプレート上で図15、有意な菌糸体の損傷が観察された。コムギ種子を、PDAプレートの表面の全域にまいた。種子が発芽した後、プレートにFグラミネアラムを接種した。プレートの半分を、EC1EC3タンパク質混合物で処理し、その後プレートを、暗所で、23°Cで5日間インキュベーションした。EC1EC3タンパク質混合物を受けた半分のプレート上では、真菌の増殖が無かった図16が、プレートの処理されていない側では、真菌の菌糸体が繁殖した図16。共焦点レーザー走査顕微鏡での、EC1EC3タンパク質混合物を受けた寒天の表面の調査により、多数の溶解した菌糸要素が示された図16中の矢印を参照されたい。Fグラミネアラムを、菌糸体がプレートの表面を覆うまで、PDA寒天上で増殖させた。プレートの半分を、EC1結晶タンパク質およびEC3結晶タンパク質の混合物で処理し、その後プレートを、暗所で、21°Cで5日間インキュベーションした。プレートの処理されていない対照側図17と比較して、EC1EC3タンパク質混合物で処理された半分のプレート上で図17、有意な菌糸体の損傷が観察された。走査電子顕微鏡での、EC1EC3タンパク質混合物を受けた寒天の表面の調査により、多数の溶解した菌糸要素が示された図18中の矢印を参照されたい。化学力顕微鏡での同表面の調査により、多数の壊れた菌糸要素およびアポトーシス溶解した細胞が示された図18中の矢印を参照されたい。実施例6:Sミコパラシチカ培養物から回収された、精製された細胞外タンパク質の配列決定および推定的同定EC179Kda、EC250Kda、EC336Kda、およびEC413KDaの細胞外タンパク質のバンドを、5、12、および16SDSPAGEゲルから切り出した。切り取ったタンパク質バンドを、MALDITOFMS装置を用いた配列決定およびペプチド特徴決定のために、ならびに、ペプチド配列をUniProtKBSwissProtおよびNCBIデータベースと比較することによる推定的同定のために、McGillUniversityおよびGenomeQuebecInnovationCentreRm704740DrPenfieldAvenueMontrealPQCanadaに送付した。MALDITOFMS分析により、EC1タンパク質を構成するアミノ酸の分離ができた図19。EC1タンパク質を構成するアミノ酸の配列はであると決定された。EC1の質量は、78688Da79kDaであると決定され、その正体は、RTXタンパク質毒素および関連するCa2結合タンパク質に類似していると予測された。EC2細胞外タンパク質バンドのMALDITOFMS分離により図20、EC2タンパク質を構成するアミノ酸配列の決定ができた:EC2の質量は、49443Da50kDaであると決定され、その正体は、β14グルカーゼタンパク質に類似していると予測された。EC3細胞外タンパク質バンドのMALDITOFMS分離により図21、EC3タンパク質を構成するアミノ酸配列の決定ができた:EC3の質量は、35578Da36kDaであると決定され、その正体は、キシラナーゼタンパク質に類似していると予測された。EC4細胞外タンパク質バンドのMALDITOFMS分離により図22、EC3タンパク質を構成するアミノ酸配列の決定ができた:EC4の質量は、2563Daであると決定されSDSPage分析により分子量が13kDaであると示されているため、これは切断された断片である、その正体は、仮想のセラトプラタニンCeratoplatanin毒素であると予測された。実施例6:スクレロチニアスクレロチオルム、リゾクトニアソラニ、およびピシウムウルティマムの菌糸体増殖および成長に対する、Sミコパラシチカ培養物から回収された、精製された細胞外タンパク質の効果Sミコパラシチカ培養物から回収された、精製された細胞外タンパク質EC179KDaおよびEC336KDaの静真菌効果およびマイコトキシン効果を、農作物に有意な損傷を引き起こす、広く一般的な3種のさらなる植物病原体で評価した。Sスクレロチオルム、Rソラニ、およびPウルティマムに対するEC1EC3細胞外Sミコパラシチカタンパク質の混合物1:1の阻害効果を、Ghosh2006およびYadavetal2007により開示されるマイクロタイタープレートアッセイ法を用いて評価した。Strometal2005CocultivationofantifungalLactobacillusplantarumMiLAB393andAspergillusnidulansevaluationofeffectsonfungalgrowthandproteinexpressionFEMSMicrobLet246119124により教示される方法に従って、36時間の増殖の後に菌糸体を収集し、生物量を秤量した。図23、図23、および図23は、PDA上で4日間、暗所で、26°Cで増殖させた、それぞれSスクレロチオルム、Rソラニ、およびPウルティマムの対照の培養物の顕微鏡写真である。図23、図23、および図23は、Sミコパラシチカにより産生されたEC179kDaおよびEC336kDa細胞外タンパク質の混合物1:1で修正されたPDA上で増殖させた、それぞれSスクレロチオルム、Rソラニ、およびPウルティマムの顕微鏡写真である。細胞外タンパク質混合物は、3種の植物病原体真菌培養物のすべてに、有意な菌糸体損傷を引き起こした図23、図23、図23。図24中のデータは、細胞外タンパク質混合物が、iSスクレロチオルムの増殖において、未処理の対照と比較して約80の阻害を引き起こしたこと、iiRソラニの増殖において、未処理の対照と比較して約85の阻害を引き起こしたこと、およびiiiPウルティマムの増殖において、未処理の対照と比較して約95の阻害を引き起こしたことを実証している。これらのデータにより、本明細書において開示されるSミコパラシチカの細胞外タンパク質は、広範な土壌病原性真菌および植物病原性真菌に対して静真菌効果およびマイコトキシン効果を有することが、実証される。本明細書において開示される研究により、SEQIDNO4を含む79kDaタンパク質、SEQIDNO5を含む50kDaタンパク質、SEQIDNO6を含む36kDaタンパク質、およびSEQIDNO7を含む13kDaタンパク質として同定される、Sミコパラシチカに由来する細胞外タンパク質が、フザリウム種、スクレロチニア種、リゾクトニア種、およびピシウム種などの様々な植物病原性真菌の胞子発芽を阻害するために有用であることが、明らかに実証される。本明細書において開示される研究により、植物病原性真菌の菌糸体をこれらの細胞外タンパク質の1種または複数種と接触させることが、菌糸体増殖の休止を引き起こして、溶解をもたらすことが、さらに実証される。従って、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、またはSEQIDNO7と少なくとも80の配列同一性を共有するアミノ酸配列を含む1種または複数種のポリペプチドをコードする1種または複数種の核酸分子で、植物細胞を形質転換することにより、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、またはSEQIDNO7に開示されるアミノ酸配列と少なくとも80の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む1種または複数種のポリペプチド分子を、植物細胞に産生させることができると考えられる。従って、そのような形質転換された細胞を植物中で培養した際に、該細胞を含む植物は、該細胞内で細胞外タンパク質の形成をもたらすポリペプチドを発現すると考えられる。そのような植物の表面にコロニー形成する過程中、および/または植物に感染する過程中に、細胞外タンパク質と接近したかおよび/または細胞外タンパク質と接触した植物病原性真菌は、阻害されるかまたは溶解されると考えられる。