アミノ酸配列NH2SSKITHRIHWESASLLRCOOHSEQIDNO1を有するペプチドであって、Rで示されるC末端残基が式Iに表される側鎖を有する、ペプチド:。試料中の請求項1に基づくペプチドの有無および/または濃度を測定する工程を含む、分析方法。試料が生体試料である、請求項2記載の方法。生体試料が、血液試料、血漿試料、ヘパリン加血漿試料、EDTA血漿試料、血清試料、尿試料、唾液試料、涙液試料、脳脊髄液試料、腹水試料、組織試料および生検材料からなる群より選択される、請求項3記載の方法。生体試料がヘパリン加血漿試料である、請求項4記載の方法。測定する工程が、MALDITOF、SELDITOF、LCMSもしくはLCMSMSなどの質量分析法に基づく方法を用いて、またはELISA、RIA、FIAもしくはDELFIAなどの免疫化学的アッセイを用いて実施される、請求項2~5のいずれか一項記載の方法。請求項1記載のペプチドに特異的な抗体。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項7記載の抗体。請求項1記載のペプチドおよび/または請求項7もしくは請求項8記載の抗体を含む、診断における使用のための製品パッケージ。プロテアーゼ阻害剤;請求項1記載のペプチドの濃度を測定するための説明書;SEQIDNO2のペプチド;SEQIDNO3のペプチド;SEQIDNO2に特異的な抗体;SEQIDNO3に特異的な抗体の一つまたは複数をさらに含む、請求項9記載の製品パッケージ。a診断される対象からの試料を用意する工程;b該試料中の請求項1記載のペプチドの濃度を測定する工程;およびc該濃度を、健常な対照者からの同様の試料中の請求項1記載のペプチドの濃度に基づく参照値と比較する工程を含む、神経疾患または神経精神疾患の診断方法であって、前記試料中の濃度が前記参照値よりも低いことが、神経疾患または神経精神疾患の存在を示唆する、方法。d前記試料中のの配列を有するペプチドの濃度を測定する工程;およびe該濃度を、健常な対照者からの同様の試料中の同一のペプチドの濃度に基づく参照値と比較する工程をさらに含む、請求項11記載の方法であって、前記試料中の濃度が前記参照値よりも高いことが、神経疾患もしくは神経精神疾患の存在をさらに示唆する、請求項11記載の方法。濃度を測定する工程が請求項2~6のいずれか一項記載の方法によって実施される、請求項11~12のいずれか一項記載の方法。疾患が、自閉症、アスペルガー症候群、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、統合失調症、うつ病および双極性障害から選択される、請求項11~13のいずれか一項記載の方法。疾患が自閉症である、請求項14記載の方法。診断方法における、請求項1記載のペプチドの使用。前記方法が自閉症の診断のためである、請求項16記載の使用。a診断される対象からの試料を用意する工程;b該試料中の補体因子Iの活性のレベルを測定する工程;およびc該活性を、健常な対照者からの同様の試料中の該補体因子Iの活性のレベルに基づく参照値と比較する工程を含む、自閉症の診断方法であって、前記試料中の活性が前記参照値よりも高いことが、前記対象における自閉症の存在を示唆する、方法。試料が、血液試料、血漿試料、ヘパリン加血漿試料、EDTA血漿試料、血清試料、尿試料、唾液試料、涙液試料、脳脊髄液試料、腹水試料、組織試料および生検材料からなる群より選択される、請求項18記載の方法。請求項15記載の方法を実施する工程、および結果を統合する工程をさらに含む、請求項18または19記載の方法。請求項18または19記載の方法を実施する工程、および結果を統合する工程をさらに含む、請求項15記載の方法。それを必要とする対象に補体因子I阻害剤を投与する工程を含む、自閉症の治療方法。補体因子I阻害剤が、6アミジノ2ナフチルpグアニジノベンゾエートジメタンスルホネートFUT175、セルピン、ベンゼンスルホニルフルオライド、Pefabloc登録商標SC、スラミン、WAP型阻害剤、エラスターゼ特異的阻害剤エラフィンから選択される、請求項22記載の方法。自閉症の治療用の薬剤の製造のための、補体因子I阻害剤の使用。補体因子I阻害剤が、6アミジノ2ナフチルpグアニジノベンゾエートジメタンスルホネートFUT175、セルピン、ベンゼンスルホニルフルオライド、Pefabloc登録商標SC、スラミン、WAP型阻害剤、エラスターゼ特異的阻害剤エラフィンから選択される、請求項24記載の使用。自閉症の治療における使用のための補体因子I阻害剤。6アミジノ2ナフチルpグアニジノベンゾエートジメタンスルホネートFUT175、セルピン、ベンゼンスルホニルフルオライド、Pefabloc登録商標SC、スラミン、WAP型阻害剤、エラスターゼ特異的阻害剤エラフィンより選択される、請求項26記載の使用のための補体因子I阻害剤。スラミンである、請求項26記載の使用のための補体因子I阻害剤。FUT175である、請求項26記載の使用のための補体因子I阻害剤。エラフィンである、請求項26記載の使用のための補体因子I阻害剤。a治療に先立って、対象における請求項1記載のバイオマーカーのレベルのベースライン値を測定する工程;b評価される治療を該対象に施す工程;cbに続いて、該対象における請求項1記載のバイオマーカーのレベルを測定する工程;ならびにdaおよびcで得られたレベルを比較する工程を含む、対象における自閉症の治療の有効性を評価するための方法であって、請求項1記載のバイオマーカーのレベルの増加が、治療的応答を示唆する、方法。a治療に先立って、対象における補体因子I活性のレベルのベースライン値を測定する工程;b評価される治療を該対象に施す工程;cbに続いて、該対象における補体因子I活性のレベルを測定する工程;ならびにdaおよびcで得られたレベルを比較する工程を含む、対象における自閉症の治療の有効性を評価するための方法であって、該補体因子Iの活性の低下が、治療的応答を示唆する、方法。請求項32記載の方法を実施する工程、および結果を統合する工程をさらに含む、請求項31記載の方法。請求項31記載の方法を実施する工程、および結果を統合する工程をさらに含む、請求項32記載の方法。定義自閉症および自閉症スペクトラム障害ASDという用語は本発明の文脈において同一の意味を有して、DSMIV基準米国精神医学会精神障害の診断と統計の手引き:AmericanPsychiatricAssociationDiagnosticandStatisticalManualofMentalDisordersに基づく自閉症の診断を指す。本発明の文脈における感度という用語は、そうであることが正しく同定された実際の陽性の対象の割合例えば、症状を有すると正しく同定された自閉症対象のパーセントを意味する。本発明の文脈における特異性という用語は、そうであることが正しく同定された実際の陰性の対象の割合例えば、自閉症でないと正しく同定された健常対象のパーセントを意味する。本明細書において、バイオマーカーは、時に、観察された概算の分子量を名称として用いて同定される。表IIは、観察された分子量/名称、配列、およびSEQIDNOの間の相関性を示す。発明の詳細な説明新規の修飾されたペプチドバイオマーカー第一の局面において、本発明はアミノ酸配列を有する修飾されたペプチドを開示し、式中、Rで示されるC末端残基の側鎖はアルギニンに通常存在するNH2CNH分子を欠き、これによってR残基の側鎖は式Iに示される通りの構造を有する:。側鎖の修飾の性質をさらに例証するために、図1を参照する。式Iの側鎖を有するアミノ酸はオルニチンとして公知であるが、通常はポリペプチドでは発現しない。分析方法第二の局面において、本発明は、好ましくは生体試料における第一の局面のペプチドの有無および/または濃度を分析するための方法を開示する。分析は、質量分析法に基づく方法MALDITOF、SELDITOF、LCMS、LCMSMSなどを含むまたは適切な公知の免疫化学的な方法ELISA、RIA、DELFIAなどを含むなどの、このような分析に適した当技術分野において公知の任意の手段によって実施することができる。SELDITOFにおいて抗体でコーティングされたチップを用いるなど、分析のために免疫化学的方法と質量分析法に基づく方法とを組み合わせることも可能である。いくつかの場合において、試料は分析の前に濃縮または精製してもよい。濃縮は尿および脳脊髄液などの薄い試料において特に好ましい。このような濃縮および/または精製は、例えば、限外濾過バイオマーカーの保持が望ましい場合は、好ましくは約10~15kDの適切なMWカットオフを用いる;またはより高い分子量のタンパク質を除去するために約10kDのMWカットオフを用いることもできるを用いることによって、タンパク質の選択的な沈殿によって、または試料中の液体のすべてまたは一部を蒸発させることによって実施することができる。クロマトグラフィーの技術も、試料を濃縮するためおよび精製を実施するための双方に有効である。pH7におけるCM10表面への結合特性実施例3は、クロマトグラフィーによる精製スキームを最適化するための適切な起点を提供する。好ましくは、生体試料は、血液試料、血漿試料、ヘパリン処理した血漿試料、EDTA血漿試料、血清試料、尿試料、唾液試料、涙液試料、脳脊髄液試料、腹水試料、組織試料および生検材料から選択される。より好ましくは、生体試料はヘパリン血漿試料である。最も好ましくは、生体試料は、EDTA無添加の阻害剤カクテルThermoScientificUSAからのHaltプロテアーゼ阻害剤例えば、10μLmL血漿およびPefablock登録商標SCPentapharmLtdSwitzerland例えば、20μLmL血漿などのプロテアーゼ阻害剤で処理したヘパリン血漿試料である。抗体第三の局面において、本発明は第一の局面のペプチドに特異的な抗体に関する。本明細書に示されるペプチド自体の開示を助けとして、当業者は本ペプチドに対する特異的なポリクローナルまたはモノクローナル抗体を得て、かつ特徴決定するために、当技術分野において周知の方法を応用することができる。診断用の製品第四の局面において、第一の局面のペプチドおよび/または第三の局面の抗体を含む診断用の製品キットなどが開示される。好ましくは、診断用の製品は使用のための説明書;プロテアーゼ阻害剤;SEQIDNO2のペプチド;SEQIDNO3のペプチド;SEQIDNO2に特異的な抗体;SEQIDNO3に特異的な抗体の一つまたは複数をさらに含む。ペプチドは陽性対照/参照試料として用いられてよく、抗体は分析の免疫学的方法での使用のための検出試薬として用いられてよい。診断方法第五の局面において、第一の局面のペプチドマーカーの測定に基づいて、好ましくは第二の局面の方法を用いて、神経疾患および/または神経精神疾患の診断方法が開示される。SEQIDNO1のペプチドマーカーは、WO2004079371に開示されるもののように公知の診断マーカー好ましくはSEQIDNO2およびSEQIDNO3の測定と好都合に組み合わせることができる。第一の局面のペプチドマーカーからの結果とさらなるマーカーを組み合わせると、改善された特性および/または感度を有する診断方法が提供される。診断において有用であるためには、上記のマーカーまたはマーカーの濃度が参照値カットオフとしても公知であると比較されなければならない。適切には、参照値は健常な対照者からの最も好ましくは同様の方法および同様の試料を用いて同一のマーカーの濃度を測定することによって、またはより好ましくは健常な対照者の群からの平均値を得ることによって得られる。第一の局面のマーカーは健常な対照において見出されるが、自閉症などの神経疾患および/または神経精神疾患を有する対象では存在しないかまたはより低い濃度である傾向がある。大半の現実の症例では健常な集団および疾患を有する集団のマーカー濃度はある程度、部分的にオーバーラップするので、当業者は、疾患の存在を示唆するものと見なされる参照値からの差のレベルはケースによって様々であることを認識する。より大きな差を求めることは診断方法の特異性を高めるが、感度を引き替えにする;より小さな差を求めることは特異性の低下を犠牲にして感度を高める例証として図4を参照。特異性および感度の望ましいレベルは状況によって異なる:例えば、疾患の事前の疑いのない対象を検査するスクリーニング手順においては、多数の偽陽性を避けるために極めて高い特異性が必要である;既に疾患を有している疑いのある対象を検査する際は、代わりに高い感度が優先されてより低い特異性が受け入れられる場合がある。一つまたは複数のマーカーの測定された濃度も、濃度をアッセイするために用いられる特定の分析方法の特徴、さらには試料のタイプおよび試料の取り扱いに応じて異なる可能性がある。これらの考慮すべき事項はすべて、当業者に周知である。同様に、上記に示した問題点例えば、カットオフ値の測定に対する解決策は、本明細書の教示と単なる慣例的な実験法および最適化とを組み合わせることによって当業者の想到の範囲内である。カットオフ値の決定に有用な統計学的なツールは受信者動作特性ROC曲線として公知であり、これは次のように作成することができる。すべての対象患者および対照を測定されたパラメータに従ってランク付けする。表の上部から始めて、新しい各測定値について順に、すべての対象について感度および100-特異性を算出する感度=posP/allP、ここで、posPはこの測定値を用いて病気を有すると分類される患者患者は病気を有する対象を意味するの数であり、特異性はnegC/allCであり、ここでnegCは病気を有すると分類されない対照である。これらの値を、100-特異性=xとして、感度をyとするxyの図にプロットするとROC曲線が得られる。カットオフは、病気の罹患率、特に病気の重症度の度合いを含む実際の状況に関して常に調整されるが、統計学的なプログラム臨床の状況に関しては何も把握しないは通常、ROC曲線の左上の隅からの距離を最小限にする、即ち、100-感度2100-特異性2を最小限にすることによってカットオフを算出し、ここでは二乗を意味するピタゴラスの定理。図5~8に示す基準カットオフを意味する、感度および選択性の値は、この方法を用いることによって得られた。バイオマーカーの組み合わせに関して、患者と対照の判別に寄与するという意味で、事実上独立であるものを選別することが重要である少なくともある程度-つまり例えば、あるピークは、別のピークと結合してはいるが、判別力に寄与する付加価値を有する。例えば、判別分析またはロジスティック回帰など、いくつかの公知の統計学的な方法を用いることができる。さらなる詳細のために、httpwwwmedcalcorgmanualindexphpにおいてオンラインで閲覧可能なMedCalc登録商標ソフトウェアMedCalcSoftwareMariakerkeBelgiumのマニュアルを参照されたい。上記のことを考慮して、例示的な分析が実施された実施例5。分析により、新規の1978マーカーSEQIDNO1が、公知のマーカーである2021SEQIDNO3および1865SEQIDNO2では判別力が同等である、自閉症の対象と自閉症でない対象との区別において大きな可能性を有することが明確に示された表III、図3、5および6。新規の1978マーカーと公知のマーカーである1865および2021の一つまたは双方を組み合わせると診断方法が改善されるという仮説を検証するために、1978と2021の組み合わせ図7、ならびに1865、1978および2021の組み合わせ図8についてもROC曲線を作成した判別分析後。図5および図6の曲線に対する図7のROC曲線の比較から、新規の1978マーカーを公知の2021マーカーと組み合わせると、いずれかのマーカー単独よりもより優れた結果が得られることが明らかである。この分析に第二の公知のマーカーである1865を加えるとさらに優れた結果が得られる図7との比較における図8。好ましくは、診断される神経疾患または神経精神疾患は、自閉症、アスペルガー症候群、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、統合失調症、うつ病および双極性障害から選択される。より好ましくは、診断される神経疾患または神経精神疾患は自閉症である。第七の局面において、a診断される対象からの試料を用意するまたは得る工程;b該試料中の補体因子Iの活性のレベルを測定する工程;およびc該活性を、健常な対照者からの同様の試料中の補体因子Iの活性のレベルに基づく参照値と比較する工程を含む、自閉症の診断方法が提供され、ここで、前記試料中の活性が前記参照値よりも高いことが、対象における自閉症の存在を示唆する。第七の局面の方法における試料は、血液試料、血漿試料、ヘパリン加血漿試料、EDTA血漿試料、血清試料、尿試料、唾液試料、涙液試料、脳脊髄液試料、腹水試料、組織試料および生検材料からなる群より選択され得る。好ましくは、試料は血漿試料である。補体因子Iの活性のレベルの測定は、実施例6に記載される蛍光アッセイを用いて実施され得るセクション6122参照。測定のためのその他の方法も当然、用いてよい。補体因子Iの参照値は、必要な変更を加えて上記に開示する通り得ることができる。第七の局面の方法は、自閉症を診断するための第五の局面の方法を実施する工程、および自閉症のより高い感度および/または選択性の診断を得るために結果を統合する工程をさらに含み得る。統合は、例えば、補体因子I活性が決定因子と見なされる場合に上記のROC法を用いて実施され得る。自閉症の診断のための第五の局面の方法は、第七の局面の方法を実施する工程、ならびに自閉症のより感度の高いおよび/または選択性の診断を得るために結果を統合する工程をさらに含み得る。本発明は、診断方法、好ましくは自閉症を診断するための方法における、第一の局面のペプチドの使用をさらに開示する。自閉症の治療Momeniらは、自閉症スペクトラム障害を有する小児が血漿中に高い補体因子I活性を有することを開示しているAutismResearchandTreatmentVolume2012ArticleID868576doi1011552012868576実施例6。補体因子Iは、補体タンパク質C3bの分解に関与する、ヒト血漿中に存在するセリンプロテアーゼである。補体因子I活性の欠乏はヒトにおいて感染の発生数の増加に関連する。前掲の論文において、Momeniらは、ASD群における補体因子I活性の平均レベルが、典型的に発育した健常な小児の対照群におけるよりも有意に高いことを示し、補体因子Iの活性がASDの発症に影響を及ぼすことを示唆している。そこで、補体因子Iの阻害剤を用いた自閉症のための治療が提供される。6アミジノ2ナフチルpグアニジノベンゾエートジメタンスルホネートFUT175、セルピン、Pefabloc登録商標SCなどのベンゼンスルホニルフルオライド、スラミン、エラスターゼ特異的阻害剤エラフィンなどのWAP型阻害剤を含む、いくつかの補体因子I阻害剤化合物および化合物の分類が公知である実施例7。当業者は、単なる慣例的な実験法および最適化によって補体因子I阻害剤の適切な投与の確立を実施することができる。ヒトにおける使用に関する安全投与間隔が公知である公知の化合物の場合は、実験法における通常の起点は該間隔である。治療の有効性機能の改善は、611の実施例において記載したパラダイムに基づいて繰り返される例えば、週1回評価により、ベースライン即ち、治療開始前と比較して追跡調査することができる。FUT175は経口投与してよい。投与は01mgkg日から開始されてよく1日2回用量に分割、必要な場合は025mgkg日1日2回または4回用量に分割およびその後05mgkg日1日4回用量に分割に増量することができる。スラミンは、週1回の静脈注射当たり01gから開始して、静脈内注射により投与してよい。必要ならば、用量は01gずつ段階的に増量して注射1回当たり1gまで増量される。エラフィンは、10mgを1日2回から開始して、静脈内注射により投与してよい。必要ならば、用量は注射1回当たり20mg、100mg、200mgおよび続いて400mgに増量する。自閉症の治療の有効性を評価するための方法第十一の局面において、a治療に先立って、対象における第一の局面に基づくバイオマーカーのレベルのベースライン値を測定する工程;b評価する治療を該対象に施す工程;cbに続いて、該対象における第一の局面の該バイオマーカーのレベルを測定する工程;ならびにdaおよびcで求められたレベルを比較する工程を含む、対象における自閉症の治療の有効性を評価するための方法が提供され、ここで、第一の局面に基づくバイオマーカーのレベルの上昇が、該治療に対する治療的応答を示唆する。数値の測定は、第五の局面において開示する方法で実施することができる。第十二の局面において、a治療に先立って、対象における補体因子I活性のレベルのベースライン値を測定する工程;b評価される治療を該対象に施す工程;cbに続いて、該対象における補体因子I活性のレベルを測定する工程;ならびにdaおよびcで測定されたレベルを比較する工程を含む、対象の自閉症の治療の有効性を評価するための方法が提供され、ここで、補体因子Iの活性の低下が、治療に対する治療的応答を示唆する。数値の測定は、第七の局面において開示する方法で実施することができる。第十一の局面の方法は、第十二の局面の方法を実施する工程、ならびに向上した感度および/または選択性を得るために結果を統合する工程をさらに含み得る。第十二の局面の方法は、第十一の局面の方法を実施する工程、ならびに向上した感度および/または選択性を得るために結果を統合する工程をさらに含み得る。結論とする見解以下の実施例は非限定的と見なされるべきである。本明細書で用いられる参考資料は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。1.患者および対照の選択自閉症スペクトラム障害ASDを有するすべての小児は、自閉症の臨床専門家により検査を受けた。小児精神科医が、小児神経内科医または小児心理学者による検査も受けたすべての小児を調べた。すべての立ち会い医はDSMIV基準米国精神医学会精神障害の診断と統計の手引きに基づく自閉症の診断に同意した。対照群は、同一の地域から募集された、神経疾患および/または神経精神疾患の徴候を持たない健常な小児から構成された。検査時点で過去2週間に何らかの種類の感染症を有した対照小児は本試験から除外した。年齢および性別に有意な差異はなかった。ASD群の小児は自閉症リハビリセンターから募集した。2.試料採取静脈血を3mLヘパリン試験管VacutainerSystemBectonDickinsonIncPlymouthUKに採取して、直ちに4°Cにおいて1300gで10分間の遠心分離によって血漿を分離した。続いて、EDTA無添加の阻害剤カクテルThermoScientificUSAからのHaltプロテアーゼ阻害剤10μLmL血漿および追加でPefablockSCPentapharmLtdSwitzerland20μLmLを、得られた血漿の試料に加えた。得られた血漿を少量ずつ小分けして、直ちにドライアイスで凍結処理して、その後、さらなる保管のために-80°Cに移した。採血から凍結処理までの手順全体を20分以内に完了した。3.質量分析による分析SELDITOFCM10プロテインチップアレイ表面を、BioRadからの標準プロトコルに従って調製した。8スポットのCM10プロテインチップアレイCOOH官能基を有するを緩衝液低ストリンジェントな01M酢酸ナトリウム、pH4100μLで5分間、平衡化して、1回、反復した。血漿希釈液1:50希釈の調製にはリン酸ナトリウム緩衝液25mM、pH70を使用した。希釈した血漿をバイオプロセッサーのウェルに適用した。チップアレイを強振盪しながら45分間、インキュベートした。インキュベート後、試料を150μLの25mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH7希釈の緩衝液と同一で3回洗浄処理して、その後、150μLの1mMHEPESN2ヒドロキシエチルピペラジンN2エタンスルホン酸、pH7で2回、素早くすすいだ。チップアレイをバイオプロセッサーから回収して、風乾した。その後、飽和CHCA25mgmLの08μLを各スポットに加えて風乾させて、この工程をもう1回、反復した。その後、チップアレイをBioRadプロテインチップリーダーSELDIシステムパーソナルエディションPCS4000リーダーにより解析した。チップアレイの解析に先立って、約1000~7000Daの範囲の7つの異なるペプチドの混合物であるBioradのオールインワンペプチド標準を用いることによって外部較正を実施した。試験では、22名の対照および25名の患者からの試料を上記の通りSELDITOFにより分析した。測定したデータは自然対数により標準化した表I、図3。健常な対照小児およびASDの群からのスペクトルにおいて、観察された分子量1865、1978および2021を有するいくつかの示差的に発現したペプチドが検出された。8名の対象4名の異なる患者および4名の異なる対照からの代表的なSELDITOFスペクトルを図2に示す。表I約1865、1978および2021の分子量MWをそれぞれ有するマーカーの、標準化した自然対数ピーク強度4.示差的に発現したバイオマーカーの構造の決定実施例3の示差的に発現したバイオマーカーの構造を、MALDITOFTOFMSを用いることによって決定し、LCFTICRMSMSの情報によって確認した。関心対象のペプチドSELDITOFによって同定されて、対照群と自閉症群で有意に異なったものを同定して配列を決定した。血漿試料100μLを緩衝液25mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH70300μLおよびアセトニトリルAcN100μLで希釈して十分に混合した後、カットオフ10kDaのMicroconメンブレンMilliporeBedfordMAUSAを使用して限外濾過を実施した。限外濾過液をSpeedvac遠心分離器で乾燥処理して、続いて、緩衝液25mMリン酸ナトリウム、pH70の10μLで再構成して、ZipTip登録商標C18カラムMilliporeBedfordMAUSAで脱塩した。再構成した試料5μLを、調製したSELDITOFCM10ターゲットBioradUSAに適用して、インキュベートし、洗浄処理して乾燥した。飽和MatrixCHCA25mgmL10μLを試料スポットに加えて、風乾させ、この工程をもう1回、反復した。ペプチドの検証のために使用したMALDITOFMSの装置はUltraflexIITOFTOFBrukerDaltonikGmbHBremenGermanyであった。この装置はSmartBeam商標レーザーを備えていた。スペクトルはすべて、リフレクトロンモードを用いて取得した。MSMSスペクトルを取得するために、レーザーで惹起した解離によるポストソース分解PSDTOFTOFを実施した。MALDIアプローチのための選択の標的はSELDITOFターゲットBioRadUSAであった。SELDITOFターゲット上の調製したマトリックス/試料スポットをUltraflexIIに導入して、調製した試料スポットからのMSスペクトルを記録した。用いた較正は、外部近接較正externalnearneighborcalibrationであった。較正に用いた試料は、質量が1000から5000Daの範囲にわたるペプチドの混合物であった。取得したペプチドの質量TOFMSデータから、後続の実験/配列決定に備えてペプチド候補を手作業で選択した。スペクトルはデータ処理ソフトウェアFlexAnalysis商標で注釈を付けて、最後にデノボで配列解析を支援するソフトウェアBioTools商標により解釈した。示差的に発現したペプチドの結果を以下の表IIに示す。表II示差的に発現したペプチドの構造決定5.示差的に発現したバイオマーカーの、診断における価値実施例3で得られた結果表Iの統計学的分析は、MedCalc登録商標ソフトウェアMedCalcSoftwareMariakerkeBelgiumなどのコンピュータプログラムを用いて実施した。すべてのマーカーが対照群と自閉症群との間で統計学的な有意差p<005を示した両側t検定。表IIIを参照されたい。表III表IIに示すデータの統計学的分析新規のマーカー1978は、公知のマーカーである2021および1865では同等の判別力を有する、自閉症の対象と自閉症でない対象の区別において、大きな可能性を明確に示した。マーカー1978について、受信者動作特性ROC曲線を作成した図5。比較のため、公知のマーカー2021についてもROC曲線を作成した図6。上記のバイオマーカーの組み合わせの有用性を分析するために、臨床において病気の診断に用いることができると予想される判別に対する寄与に応じて、ピーク対数値に異なる重みを与えて、判別分析を用いた。表IVROC曲線作成のためのマーカーの組み合わせに関する判別分析図7および8のROC曲線は、新規マーカー1978と公知のマーカーとの組み合わせが判別力の向上をもたらすことを明確に示している。6.自閉症患者では補体因子Iが過活性である。この試験はMomeniらAutismResearchandTreatmentVolume2012ArticleID868576doi1011552012868576によって以前に刊行されている。該刊行物は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。一部の重要な部分を以下に再現する。61材料および方法611参加者ASDを有する30名の小児および典型的な対照小児30名が本試験に参加した。ASD群は男児23名および女児7名を含み、平均年齢は45歳年齢範囲3~9歳であった。対照群は男児13名および女児17名を含み、平均年齢は60歳年齢範囲3~12歳であった表V。表V参加者の年齢/歳、性別および投薬ASDと対照との差。年齢についてはMannWhitneyのU検定、年齢カテゴリーおよび性別についてはFisherの直接検定。ASD群の小児は、イラン、テヘランのUniversityofSocialWelfareandRehabilitationSciencesのAutismRehabilitationCentreから募集した。親からインフォームドコンセントを取得した後、血液を採取した。ASDを有するすべての小児を自閉症の臨床専門家が検査した。小児精神科医および小児神経科医または小児心理学者がすべての小児を検査した。すべての立ち会い医がDSMIV基準に基づく自閉症の診断に同意した。但し、欧州および米国/カナダで適用される自閉症診断観察尺度ADOSおよび自閉症診断面接改訂版を用いる診断手順は、イランで適用される診断過程では用いられなかった。この欠陥は、2007年以降発表禁止の、米国小児科学会により述べられた自閉症におけるコア行動に精通した小児神経学者/小児精神科医による広範な臨床経験によって補われた。対照群は、ASDを有する小児と同一の地域から募集された神経発生的な疾患の徴候を示さない典型的に発育した健常な小児からなった。検査時点の過去2週間以内に何らかの種類の感染/感染症を有した小児は本試験から除外した。試験は、IranUniversityofMedicalSciencesTehranの倫理委員会より承認されたMT1247。612手順6121血液試料の採取血液試料は小児科の看護師が採取して、自閉症と診断された小児からの血液試料は小児精神病の分野において特別な訓練を受けた小児精神科医の監督下にて採取された。静脈血を3mLのEDTA試験管VacutainerSystemBectonDickinsonIncPlymouthUKに採取して、その後、直ちに4°Cにおいて1300gで10分間の遠心分離によって血漿を分離した。続いて、阻害剤カクテル血漿1mL当たり30μLを得られた血漿試料に加えたカクテル阻害剤溶液:20MTris、09MNaEDTA、02Mベンズアミジン、92μME64、および48μMペプスタチン;SigmaStLouisMichUSA。血漿は-80°Cで保存した。6122アッセイ蛍光発生基質の加水分解に基づく方法は、TsiftoglouおよびSimJournalofImmunologyvol173no1pp3673752004およびGuptaらJournalofAutismandDevelopmentalDisordersvol26no4pp4394521996によって以前に説明されている。以下のアッセイ手順は、血漿中の補体因子IfIのアッセイに最適であることが見出された。血漿20μLを緩衝液100mMリン酸緩衝液、pH75、1mMEDTA、1mMDTTおよび1mMアジ化ナトリウムを含む80μLと共に、温度平衡に達するように37°Cで10分間、インキュベートした。続いて、25mMリン酸緩衝液、pH74中、基質液200μMBocAspProArg7アミノ4メチルクマリン;BachemBubendorfSwitzerland100μLを加えて、混合液を37°Cで60分間、インキュベートした図9参照。反応を15M酢酸1mLの添加によって阻害して、7アミノ4メチルクマリンの遊離を分光蛍光光度計Hitachif2000;λex;360nm;λem:440nm;スリット幅:25で測定した。測定はすべて無作為化して二反復で実施した。基質の不在下での血漿の使用により、アッセイにおけるバックグラウンドの蛍光をモニターして、基質の存在下で得られる数値から引き算した。613データの分析および統計血漿中fI活性は対数正規分布を示し、従って、ASD群と対照群の差の分析時には対数値を用いた。年齢中央値の5歳を用いて二分したおよび性別について調整するために、要因ANOVAを用いた。<005の値を統計学的に有意と判断した。Statistica80StatSoft著作権、TulsaOklaUSAを用いた。血漿fI活性のアッセイ内およびアッセイ間の変動は、次式を用いて1回の測定の標準誤差S方法として表した:式中、diはi回目の対の測定の差であり、nは差の数である。S方法は変動係数として表された。62結果ASD群の小児の血漿fIが有意に高い活性を示した幾何学平均95信頼限界:対照群:361135~967に比べて、523154~1776;ANOVAP=0015、年齢および性別について調整した;図10a。性別および年齢に関して統計学的に有意な相互作用は見出されず、fI活性と年齢または性別の間に有意な関連性は見出されなかったANOVA;性別に関してp=025および2つの年齢群に関して042、図10b。ASD群では重度の自閉症を有する数人の小児が運動亢進および暴力的な行動を抑制するためにRisperdalの投薬下にあり、数名は注意力を向上させるためにRitalinの投薬下にあった表V。実験計画を調節する目的で投薬を中止することは倫理的に問題であった。実験者らは図10aに示すデータとASD群の小児が受けていた投薬のタイプを関連付けた。実験者らは投薬と散布図のデータの分布の間にいかなる明らかな関連性も認めなかったが、パターンにおけるいくつかの差が投薬の影響を受け得たことを排除することはできない。数値はASDを有する小児において統計学的に有意に高く、性別との弱い相関性があった。しかし、年齢群の間には統計学的な有意差は見出されなかった。方法上のアッセイ内誤差は小さく、05であった。アッセイ間の方法上の誤差は13であった。実験者らは、ほぼ同一年齢の対照群に比べて、ASDを有する小児において有意に高い補体因子I酵素活性を見出した。このことは、実験者らが知る限り、ASDを有する小児におけるfI活性の機能障害に関する最初の報告である。統計学的に有意ではなかったが、男児は女児よりも高いfI活性を示す傾向があり、対照群とASD群の差は、図10に示す通り、小児の年齢が低ければ低いほどより明白であった。補体系の経路における調節因子としてのfIの役割に起因して、fIの異常はASDの発症において役割を担っている可能性がある。この経路の異常により、個人は様々な炎症に対してより脆弱となる。7補体因子I阻害剤を用いた自閉症の治療スラミン自閉症と診断された患者に、週1回の静脈内注射当たり01gから開始して、スラミンを投与する。必要ならば、用量を01gずつ段階的に増量して注射1回当たり1gまで増量する。投与は、監督臨床医によって個別にさらに調整される。重度の副作用がある場合は、用量を下げるか治療を中断する。機能の改善は、上記の611で記載したパラダイムに基づいて週1回の評価によりベースラインと比較して追跡調査する。治療のコース期間中、ベースラインと比較して、機能における有意な改善を観察する。FUT1756アミジノ2ナフチルpグアニジノベンゾエートジメタンスルホネート自閉症と診断された患者にFUT175を経口投与する。投与は01mgkg日1日2回用量に分割で開始して、必要ならば025mgkg日1日2回または4回用量の分割に、その後、05mgkg日1日4回用量に分割に増量する。投与は監督臨床医によって個別にさらに調整される。機能の改善は、上記の611で記載したパラダイムに基づいて週1回の評価によりベースラインと比較して追跡調査する。治療のコース期間中、ベースラインと比較して、機能における有意な改善を観察する。エラフィン自閉症と診断された患者に、10mgを1日2回から開始して、エラフィンを静脈内注射により投与する。必要ならば、用量は注射1回当たり20mg、100mg、200mgおよび続いて400mgまで増量する。投与は監督臨床医によって個別にさらに調整される。重度の副作用がある場合は、用量を下げる、または治療を中断する。機能の改善は、上記の611で記載したパラダイムに基づいて週1回の評価によりベースラインと比較して追跡調査する。治療のコース期間中、ベースラインと比較して、機能における有意な改善を観察する。