"次の一般式1式中、G1及びG2の少なくとも一方はセロビオース残基を示し、残余は単糖残基又は2糖以上のオリゴ糖残基を示し、X1及びX2は、それぞれ水素原子、単糖残基又は2糖以上のオリゴ糖残基を示す。で表されるチオグリコシド化合物。X1及びX2が、水素原子である請求項1記載のチオグリコシド化合物。G1及びG2の少なくとも一方がセロビオース残基であり、残余が単糖残基又はセロビオース以外の2~4糖残基である請求項2記載のチオグリコシド化合物。G1及びG2のいずれか一方がセロビオース残基であり、他方が単糖残基又はセロビオース以外の2糖残基である請求項2記載のチオグリコシド化合物。G1又はG2のいずれか一方がセロビオース残基であり、他方が単糖残基である請求項2記載のチオグリコシド化合物。請求項1~5のいずれか1項記載のチオグリコシド化合物にセルラーゼを作用させることを特徴とするセロビオヒドロラーゼI及び/又はセロビオヒドロラーゼIIの活性測定法。セロビオヒドロラーゼI及びセロビオヒドロラーゼIIの分別活性測定法である請求項6記載の測定法。請求項1~5のいずれか1項記載のチオグリコシド化合物にセルラーゼを作用させることを特徴とするセルラーゼ中のセロビオヒドロラーゼI及び/又はセロビオヒドロラーゼII含有量の測定法。セロビオヒドロラーゼI及びセロビオヒドロラーゼIIの含有量の測定法である請求項8記載の測定法。請求項1~5のいずれか1項記載のチオグリコシド化合物を含有するセロビオヒドロラーゼI及び/又はセロビオヒドロラーゼIIの活性測定試薬。セロビオヒドロラーゼI及びセロビオヒドロラーゼIIの分別活性測定試薬である請求項10記載の試薬。このようにCBHI及びCBHIIの反応の特異性を明確に識別できる簡便な基質は存在せず、従って、CBHIとCBHIIの反応特性に関する多くの課題、例えばCBHIとCBHIIの分別活性測定法、セルラーゼ中のCBHIとCBHIIの含有量の測定等は手つかずの状況にあった。従って、本発明の課題は、CBHIとCBHIIの反応特異性を識別できる新たな基質及びそれを用いたCBHI及びCBHIIの活性測定法を提供することにある。そこで本発明者は、CBHIとCBHIIの新たな基質を見出すべく種々検討したところ、セロビオース残基と単糖又はオリゴ糖とをチオエーテル結合で連結させたチオグリコシド化合物が、その構造によりCBHI又はCBHIIのいずれか一方に高い反応性を有し、これらのチオグリコシド化合物を用いればセルラーゼ中のCBHI及びCBHIIの活性は含有量が分別して測定できることを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、次の一般式1式中、G1及びG2の少なくとも一方はセロビオース残基を示し、残余は単糖残基又は2糖以上のオリゴ糖残基を示し、X1及びX2は、それぞれ水素原子、単糖残基又は2糖以上のオリゴ糖残基を示す。で表されるチオグリコシド化合物を提供するものである。また本発明は、上記一般式1で表されるチオグリコシド化合物にセルラーゼを作用させることを特徴とするセロビオヒドロラーゼI及び/又はセロビオヒドロラーゼIIの活性測定法を提供するものである。また、本発明は、上記一般式1で表されるチオグリコシド化合物にセルラーゼを作用させることを特徴とするセルラーゼ中のセロビオヒドロラーゼI及び/又はセロビオヒドロラーゼII含有量の測定法を提供するものである。また、本発明は、上記一般式1で表されるチオグリコシド化合物を含有するセロビオヒドロラーゼI及び/又はセロビオヒドロラーゼIIの活性測定試薬を提供するものである。本発明のチオグリコシド化合物1は、CBHI又はCBHIIのいずれか一方に対する反応性が高い。従って、チオグリコシド化合物1を用いれば、セルラーゼ中のCBHI及びCBHIIの分別活性測定及び酵素液中の両者の含有量比が簡便に測定できる。本発明のチオグリコシド化合物は、前記一般式1で表され、セロビオース残基の非還元末端及び/又は還元末端にチオグリコシド結合を介して単糖又はオリゴ糖が結合した化合物である。一般式1中、G1及びG2の少なくとも一方はセロビオース残基を示し、残余は単糖残基又は2糖以上のオリゴ糖残基を示す。ここで、2糖以上のオリゴ糖残基は、セロビオース以外の2~4糖のオリゴ糖残基が好ましい。CBHI及びCBHIIのいずれか一方に対する高い反応性を考慮すれば、G1及びG2のいずれか一方がセロビオース残基であり、他方が単糖残基又はセロビオース以外の2~4糖残基が好ましい。さらにG1及びG2のいずれか一方がセロビオース残基であり、他方が単糖残基であるのが、合成のし易さ、セロビオースを作用させた後の遊離成分の定量のし易さ等の点で好ましい。前記単糖残基としてはグルコース、ガラクトース等の単糖残基が挙げられる。また、2糖以上のオリゴ糖残基としては、Gal-Glc、Xyl-Glc等が挙げられる。これらの糖残基のうち、グルコースまたはガラクトース残基が特に好ましい。一般式1中、X1及びX2は、それぞれ水素原子、単糖残基又は2糖以上のオリゴ糖残基を示す。このうち、水素原子、単糖残基又はセロビオース以外の2~4糖残基が好ましく、特に水素原子が好ましい。ここで単糖残基及び2糖以上のオリゴ糖残基としては、前記G1及びG2で示したものと同じものが挙げられる。一般式1におけるより好ましい態様としては、X1及びX2が水素原子であり;G1及びG2の少なくとも一方がセロビオース残基であり、残余が単糖残基又はセロビオース以外の2~4糖残基であるチオグリコシド化合物である。また、X1及びX2が水素原子であり;G1及びG2のいずれか一方がセロビオース残基であり、他方が単糖残基又はセロビオース以外の2糖残基であるチオグリコシド化合物がさらに好ましい。さらに、X1及びX2が水素原子であり;G1又はG2のいずれか一方がセロビオース残基であり、他方が単糖残基であるチオグリコシド化合物が特に好ましい。本発明のチオグリコシド化合物1は、例えば次の反応式に従って製造することができる。本発明のチオグリコシド化合物1は、例えば次の反応式に従って製造することができる。X1a、X2a、G1a及びG2aは、前記のX1、X2、G1及びG2の水酸基が保護された糖残基を示す。ただし、X1及びX2が水素原子の場合は、X1a及びX2aは水素原子である。すなわち、保護されたアセチルチオオリゴ糖又はアセチルチオ単糖2に、単糖又はオリゴ糖3を反応させて保護されたチオグリコシド化合物1aを得、次いで保護基を脱離させることにより、本発明のチオグリコシド化合物1が得られる。水酸基の保護基としては、ベンゾイル基、アセチル基等のアシル基が用いられる。また、化合物2と化合物3の縮合反応に際しては、化合物3の水酸基をトリフルオロメタンスルホニル基、p-トルエンスルホニル基、メタンスルホニル基等に活性化するのが好ましい。縮合反応は、トリフルオロメタンスルホニル基等の活性体を用いた場合にはピリジン等の溶媒中、0°C~室温で撹拌すればよい。また、保護基の脱離反応は、例えばナトリウムアルコキシド等の塩基の存在下に加水分解反応に付せばよい。得られたチオグリコシド化合物1は、イオン交換樹脂、カラムクロマトグラフィー等により精製するのが好ましい。本発明のチオグリコシド化合物1は、一般式1中の硫黄原子のいずれか一方にセロビオース残基を有するため、CBHI及びCBHIIの基質となる。そして、チオグリコシド化合物1は、CBHIとCBHIIに対する反応性が大きく相違するため、CBHI及び/又はCBHIIの活性測定、セルラーゼ中のCBHI及び/又はCBHIIの含有量の測定に有用であり、特にCBHI及びCBHIIの分別活性測定、セルラーゼ中のCBHI及びCBHIIの分別含有量の測定に有用である。チオグリコシド化合物1を用いてCBHI及び/又はCBHII活性又はその含有量を測定するには、チオグリコシド化合物1にCBHI及びCBHIIを含有するセルラーゼを作用させ、分解により得られた単糖類又はオリゴ糖類の含有量を定量すればよい。CBHIに特異性の高いチオグリコシド化合物1を用いた場合には、CBHI活性が選択的に測定できる。一方、CBHIIに特異性の高いチオグリコシド化合物1を用いた場合にはCBHII活性が選択的に測定できる。分解により生じた単糖類又はオリゴ糖類の定量は、常法、例えばイオンクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーにより行うことができる。なお、酵素反応は、セルラーゼの種類によって異なるが、セルラーゼが作用する条件、例えばpH5~9、20~60°Cの条件で5分~2時間行えばよい。チオグリコシド化合物1を含有する試薬は、CBHI及び/又はCBHII活性測定試薬、特にCBHI及びCBHII分別活性測定試薬として有用である。この試薬には、チオグリコシド化合物1の他、緩衝剤、プロトコール等が含まれる。次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は何らこれら実施例に限定されるものではない。以下の実施例において、NMRは、Bruker社製AVANCE500、AV400を用い、室温にて測定した。CDCl3を溶媒に用いたとき、内部標準物質としてテトラメチルシランTMS=0ppmを用いた。CD3ODおよびD2Oを溶媒に用いたときは、それぞれCH3ODおよびHODを基準にした。シグナルの同定に際し、次の略号を使用した。ssingletddoubletttripletmmultipletdddoubletofdoubletsbrbroad。質量分析装置ESIFTMSは、Bruker社製APEXII70eを用いた。旋光度計は、日本分光社製のP-1020-GTを用いた。カラムクロマトグラフィーの充填剤として、ナカライテスク株silicagel60230~400meshを用いた。TLCはMerck社製silicagel60F254を用いた。さらに、溶媒及び試薬は市販の試薬グレードを用いた。また、次の略号を使う。アセチルAcアリールArベンゾイルBzベンゾイルクロライドBzClN,N-ジメチルホルムアミドDMFエチルEt酢酸エチルEtOAcジェミナルgemノルマルヘキサンnhexaneメチルMeメタノールMeOHフェニルPhピリジンPyr室温rtトリフルオロメタンスルホニルTf以下に実施例の目的化合物を示す。非還元末端に4-チオグルコースを有するオリゴ糖134の合成手順を示す。非還元末端に4-チオセロビオースを有するオリゴ糖25の合成手順を示す。実施例1チオグリコシドを有する化合物1~5の合成1化合物10の合成Dガラクトース180g100mmolをピリジンに溶かし、BzClを-40°Cで7分かけて滴下した。-40°Cで30分攪拌した後、12時間かけて10°Cまで昇温した。さらに室温で7時間攪拌した後、反応液を氷で冷やした2N塩酸水で洗い、酢酸エチルで抽出した。減圧濃縮後、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:トルエン1:10から1:4にて精製し、化合物と、化合物を得た。異性体混合物である化合物は、再度カラムクロマトグラフィーで精製しそれぞれのアノマーを単離した。化合物1HNMRδ28544945145547858960768371673073776578478879780380881213CNMRδ62567267570570890912821283712841128512861286512872128951290312921293129712981298612991130213331334133613381646165516601666ESIFTMScalcdforC34H28O10Na6191580found6191579αD161化合物1HNMRδ27342944245547855161261971776479081313CNMRδ6236716857347389311253128212841285128561286012891290129412971298912992130213331334133613381648165316571666αD2412化合物13の合成化合物をピリジンに溶かし、Tf2Oを0°Cにて加えた。0°Cで30分攪拌した後さらにTf2Oを追加した。引き続き30分0°Cで攪拌した後、nhexaneとEtOAcで希釈し、氷水で洗い、酢酸エチルにて抽出した。減圧濃縮後、得られた残渣は真空で1時間乾燥させスラリー状の化合物953mgを得た。これはこれ以上精製をせず次の反応に用いた。クルードの化合物と化合物非特許文献1,2参照をDMFに溶解し、Et2NHを-5°Cで加えた。-5°Cで12時間攪拌した後、室温でさらに20分間攪拌した。反応液はnhexaneとEtOAcで希釈し、氷水で洗い、酢酸エチルにて抽出した。減圧濃縮後、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:ノルマルヘキサン1:3から1:1にて精製し、化合物と原料を得た。1HNMRδ15518519519719920120834234634736036036537740042943544346948448849250050651352058861868072876978478879880380681313CNMRδ19920392047204920542074586156186346716776987165717272072373073476676781290510111284512849128612891291129712978129811299133313351336134216411654165616601689169316951696169917021705ESIFTMScalcdforC60H62O26SNa12533148found12533146αD4513化合物14の合成クルードの化合物と化合物を用いて、化合物の合成と同様に反応及び精製を行い、化合物の回収率換算の収率を得た。1HNMRδ16018319520235035035538539346246847548748949449851956061768172777078578879980380681313CNMRδ2002042052064606206346736836967177247367588189051284128512861289129112971297812982129913331335133613411642165416571659169251693217001702ESIFTMScalcdforC48H46O18SNa9652303found9652304αD9214化合物15の合成クルードの化合物と化合物8を用いて、化合物の合成と同様に反応及び精製を行い、化合物を得た。1HNMRδ1561841970197219920521734535034836237838540741342744146747248448849450151052253455961868172877078478879880380681313CNMRδ199204205205720642065207458608620634664671691699708710717723737764767812905101412791284512849128612891291129712978129811299133313351336134216411654165616601689169516961699170017011703ESIFTMScalcdforC60H62O26SNa12533148found12533147αD5374化合物1の合成化合物をMeOHに溶解し、05MNaOMe/MeOHを加え、室温にて4時間攪拌した。Dowex50WX8cationexchangeresinを用いて中和した後、濾過した。ResinをMeOHで洗浄後、濾液と洗液を集め減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィークロロホルム:メタノール10:1から1:1にて精製し、化合物を得た。1HNMRδ274276307313320325323327325330328332331334335339344351354359361371374374378375381378383385391396430and432438438and44050613CNMRδ455458601602609612and61369970671672173474175775876476587663783785790838and8399259641031ESIFTMScalcdforC18H32O15SNa5431360found5431350αD435化合物3の合成化合物を用いて、化合物1の合成と同様に反応及び精製を行い、化合物を得た。1HNMRδ270273301305307316319320324323329328333336341347350350356355359359364371376376381382386391395436and43843850513CNMRδ476and479628629631and633715742759793794and823724735751777785857and860943982ESIFTMScalcdforC12H22O10SNa3810831found3810826αD5086化合物4の合成化合物を用いて、化合物の合成と同様に反応及び精製を行い、化合物を得た。1HNMRδ286288319336343341345342345352352368368376380377389390395397404408437and438449450and45251713CNMRδ456458602603610612613688706710716720and721733741756758766783785789838and8409259641036ESIFTMScalcdforC18H32O15SNa5431360found5431357αD1247化合物17αの合成クトース1水和物にピリジンを加え、BzClを-40°Cで激しく攪拌下、11分かけて滴下した。反応液は-40°Cで30分攪拌した後、12時間かけて10°Cに昇温した。反応液を氷で冷やした2N塩酸水で洗い、酢酸エチルで抽出した。減圧濃縮後、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:トルエン1:20から1:7にて精製し、化合物、、を得た。異性体混合物である化合物は、再度カラムクロマトグラフィーで精製しそれぞれのアノマーを単離した。1HNMRδ25339741642143844749045447048349853654159265671676678681013CNMRδ61863467469270270471173573982090110231283512841128512861287129012921294129612971298512987129931302133151332213331336133716441653816541165571655816559ESIFTMScalcdforC54H46O17Na9892633found9892631αD4908化合物20の合成化合物をピリジンに溶かし、Tf2Oを0°Cにて加えた。0°Cで30分攪拌した後さらにTf2Oを追加した。引き続き30分0°Cで攪拌した後、nhexaneとEtOAcで希釈し、氷水で洗い、酢酸エチルにて抽出した。減圧濃縮後、得られた残渣は真空で1時間乾燥させスラリー状のトリフレート体813mgを得た。これはこれ以上精製をせず次の反応に用いた。クルードのトリフレート体と化合物をDMFに溶解し、Et2NHを-5°Cで加えた。-5°Cで12時間攪拌した後、室温でさらに20分間攪拌した。反応液はnhexaneとEtOAcで希釈し、氷水で洗い、酢酸エチルにて抽出した。減圧濃縮後、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:トルエン1:10から1:3にて精製し、化合物と原料を得た。1HNMRδ1581946195420236037338739840641241742142943744244848949349649852052553455257065671676578479480381013CNMRδ20020522055205946661962064268169970070270371173173675375881382290010201281128212831283512840128512861287129012911293129612975129771298612990133213331336133716441652165471655116561661169291693217001703ESIFTMScalcdforC68H64O25SNa13353355found13353353αD5299化合物21の合成クルードのトリフレート体と化合物を用いて、化合物の合成と同様に反応及び精製を行い、化合物の回収率換算の収率を得た。1HNMRδ15319619719920120520831836236938339140341241641842242843844044544745245648349249449750551451752553455257065671576478579480280913CNMRδ1992046205420572065206720704656166176196426786997017702170287127167217307317327527668088229001007102012821283128361283812843128471285912862128712897129041292129312971297512982129871299213321336164416521654165516561662169016931695016953169917021705ESIFTMScalcdforC80H80O33SNa16234200found16234184αD22910化合物2の合成化合物をMeOHに溶解し、05MNaOMe/MeOHを加え、室温にて4時間攪拌した。Dowex50WX8cationexchangeresinを用いて中和した後、濾過した。ResinをMeOHで洗浄後、濾液と洗液を集め減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィークロロホルム:メタノール100:1から1:1にて精製し、化合物を得た。1HNMRδ283and28431832432932833533434034134635035036036136637538037938638639239239840240744244844950913CNMRδ457605606611612697718721724736744745750751768776795804837and8389229661027ESIFTMScalcdforC18H32O15SNa5431360found5431357αD11111化合物5の合成化合物を用いて、化合物の合成と同様に反応及び精製を行い、化合物を得た。1HNMRδ28131732132532832432933133634034034834835335235635636036536236936937338038338438740040344044145645751213CNMRδ46959860061561269469570071272272573173874274374775475575976478178583691895710221025ESIFTMScalcdforC24H42O20SNa7051888found7051883αD40試験例本実験に用いたセルラーゼ、は、セルラーゼ高生産であるT.reeseiATCC66589株を10アビセル、4硫酸アンモニウムを用いて2Lジャーファーメンターにより培養し、遠心分離により得られた培養上清液よりHPLCにより部分精製したものを用いた。CBHI及びCBHIIともに不純物を含んだ粗酵素である。1CBHI及びCBHIIの分別活性測定法まず、合成した5種類の化合物1~5を用いて、50mM酢酸バッファー、100μg/mL基質、100μg/mL酵素、反応液600μLの条件で50°C、30分間反応させ、氷上で急冷して反応を停止した。反応生成物である遊離グルコース量を、表1の条件でDIONEXイオンクロマトグラフィーを用いて測定した。以後、遊離グルコース量の分析にはDIONEXイオンクロマトグラフィーを用いて行った。その結果、表2のように、化合物1ではCBHIIの活性がCBHIに比べて約2倍高く、化合物2ではCBHIの活性がCBHIIに比べて約4倍高い結果を示した。また、化合物3に対する活性は両酵素で観察されず、化合物4に対しては両酵素ともに低い活性を示した。化合物5に対しては、CBHI及びCBHIIとも高い活性を示した。以上の結果から、化合物1、2、4、5は、CBHI及びCBHIIの基質として利用できることが判明した。100μgmLの化合物、5μgmL、05μgmL、005μgmLのCBHIまたはCBHIIを用いて、50°Cで0、15、30、45、60、90、120、180分間反応させたときの遊離グルコース量を測定した。その結果、CBHIおよびCBHIIの遊離グルコース量は、5μgmL、05μgmL及び005μgmLの酵素濃度において、0から60分の間で直線相関を示した表3、4、図1から図4。以上の結果から、CBHIおよびCBHIIは化合物1および化合物2を用いることにより、個別に活性測定ができることが分かった。2粗酵素液中のCBHIおよびCBHIIの濃度組成比の評価法各々100μgmL濃度のCBHICBHIIの混合比率を1000、7525、5050、2575、0100に変化させ、化合物および化合物に対して反応させたときの遊離グルコース量を測定した。その結果、遊離グルコース量はCBHIおよびCBHIIの比率と直線相関を示した。そこで、この直線相関の得られた近似直線を検量線として用いることで、酵素液中の比率を明らかにできることが分かった。化合物1および2を用いることにより、未精製の酵素液CBHIおよびCBHII以外のセルラーゼが不純物として含まれるような粗酵素液であっても、CBHIとCBHIIの比率が精度よく測定できることが分かった。本法を用いることにより、どのような粗酵素液またはセルラーゼ製剤であっても、その中に含まれるCBHIとCBHIIの割合を明らかにすることができるとともに、どのような組成比のときに、セルロースの効果的な分解が可能になるかの解析ができ、バイオマスの糖化利用において大きな進展をもたらすことが期待される。"