"ai配列番号5724C05および配列番号7524C05からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号5824C05および配列番号148Sh24C05Hv3-11N62Sからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号5924C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域;ii配列番号6024C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号6124C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号6224C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域、およびbi配列番号504D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号604D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号704D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域;およびii配列番号804D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号904D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号1004D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;ci配列番号1509D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号1609D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号1709D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域;およびii配列番号1809D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号1909D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号2009D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;di配列番号2511G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号2611G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号2711G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域;およびii配列番号2811G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号911G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号2911G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;ei配列番号3412A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号3512A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号3612A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域;およびii配列番号812A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号912A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号1012A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;fi配列番号4118H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号4218H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号4318H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域;およびii配列番号4418H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号4518H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号4618H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;およびgi配列番号5122A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号5222A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号3622A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域;およびii配列番号822A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号922A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号1022A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3含んでなる、免疫グロブリン軽鎖可変領域からなる群から選択される、免疫グロブリン重鎖可変領域および免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる、ヒトErbB3に結合する単離抗体。前記免疫グロブリン重鎖可変領域が、配列番号5724C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号5824C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号5924C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号6024C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号6124C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号6224C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる、請求項1に記載の抗体。前記免疫グロブリン重鎖可変領域が、配列番号5724C05および配列番号7524C05からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号148Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号5924C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号6024C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号6124C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号6224C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる、請求項1に記載の抗体。前記CDR配列がヒトおよびヒト化フレームワーク配列の間に挿入される、請求項1~3のいずれか一項に記載の抗体。前記抗体が抗原結合性断片である、請求項1~3のいずれか一項に記載の抗体。請求項1~3のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項1~3のいずれか一項に記載の免疫グロブリン軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項6に記載の核酸を含んでなる発現ベクター。請求項7に記載の核酸を含んでなる発現ベクター。請求項6に記載の核酸をさらに含んでなる、請求項9に記載の発現ベクター。請求項8に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項9に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項10に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項8に記載の発現ベクターをさらに含んでなる、請求項12を含んでなる宿主細胞。a前記宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項11または12に記載の宿主細胞を培養するステップと;b前記免疫グロブリン重鎖可変領域または前記免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる前記ポリペプチドを精製するステップを含んでなる、免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを生成する方法。a前記宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域および/または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項13または14に記載の宿主細胞を培養し、それによって抗体または前記抗体の抗原結合性断片を生成するステップと;b前記抗体または前記抗体の抗原結合性断片を精製するステップを含んでなる、ヒトErbB3に結合する抗体または前記抗体の抗原結合性断片を生成する方法。a配列番号5424C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号5624C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;b配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号168Sh24C05Kv1-17のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;c配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号166Sh24C05Kv1-16のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;d配列番号204D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号404D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;e配列番号1209D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号1409D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;f配列番号2211G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号2411G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;g配列番号3112A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号3312A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;h配列番号3818H02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号4018H02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域;およびi配列番号4822A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号5022A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域からなる群から選択される、免疫グロブリン重鎖可変領域および免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる、ヒトErbB3に結合する単離抗体。前記免疫グロブリン重鎖可変領域が配列番号5424C05のアミノ酸配列を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖可変領域が配列番号5624C05のアミノ酸配列を含んでなる、請求項17に記載の抗体。前記免疫グロブリン重鎖可変領域が配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖可変領域が配列番号168Sh24C05Kv1-17のアミノ酸配列を含んでなる、請求項17に記載の抗体。前記免疫グロブリン重鎖可変領域が配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖可変領域が配列番号166Sh24C05Kv1-16のアミノ酸配列を含んでなる、請求項17に記載の抗体。請求項17~20のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項17~20のいずれか一項に記載の免疫グロブリン軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項21に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項22に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項21に記載の核酸をさらに含んでなる、請求項24に記載の発現ベクター。請求項23に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項24に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項25に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項23に記載の発現ベクターをさらに含んでなる、請求項27に記載の宿主細胞。a前記宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項26または27に記載の宿主細胞を培養するステップと;b前記免疫グロブリン重鎖可変領域または前記免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる前記ポリペプチドを精製するステップとを含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを生成する方法。a前記宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域および/または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項28または29に記載の宿主細胞を培養し、それによって前記抗体または前記抗体の抗原結合性断片を生成するステップと;b前記抗体または前記抗体の抗原結合性断片を精製するステップとを含んでなる、ヒトErbB3に結合する抗体または前記抗体の抗原結合性断片を生成する方法。a配列番号13324C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号13524C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;b配列番号190Sh24C05Hv3-11N62SIgG1のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号206Sh24C05Kv1-17κのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;c配列番号190Sh24C05Hv3-11N62SIgG1のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号204Sh24C05Kv1-16κのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;d配列番号10904D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、番号11104D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;e配列番号11309D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号11509D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;f配列番号11711G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号11911G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;g配列番号12112A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号12312A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;h配列番号12518H02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号12718H024のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖;およびi配列番号12922A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号13122A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖からなる群から選択される、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含んでなる、ヒトErbB3に結合する単離抗体。前記免疫グロブリン重鎖が配列番号13324C05のアミノ酸配列を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖が配列番号13505C05のアミノ酸配列を含んでなる、請求項32に記載の抗体。前記免疫グロブリン重鎖が配列番号190Sh24C05Hv3-11N62SIgG1のアミノ酸配列を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖が配列番号206Sh24C05Kv1-17κのアミノ酸配列を含んでなる、請求項32に記載の抗体。前記免疫グロブリン重鎖が配列番号190Sh24C05Hv3-11N62SIgG1のアミノ酸配列を含んでなり、前記免疫グロブリン軽鎖が配列番号204Sh24C05Kv1-16κのアミノ酸配列を含んでなる、請求項32に記載の抗体。前記抗体が抗原結合性断片である、請求項17~20または32~35のいずれか一項に記載の抗体。請求項32~35のいずれか一項に記載の免疫グロブリン重鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項32~35のいずれか一項に記載の免疫グロブリン軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離核酸。請求項37に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項38に記載の核酸を含有する発現ベクター。請求項37に記載の核酸をさらに含んでなる、請求項40に記載の発現ベクター。請求項39に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項40に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項41に記載の発現ベクターを含んでなる宿主細胞。請求項39に記載の発現ベクターをさらに含んでなる、請求項43に記載の宿主細胞。a前記宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項42または43に記載の宿主細胞を培養するステップと;b前記免疫グロブリン重鎖可変領域または前記免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる前記ポリペプチドを精製するステップとを含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを生成する方法。a前記宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域および/または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを発現する条件下で、請求項44または45に記載の宿主細胞を培養し、それによって抗体または前記抗体の抗原結合性断片を生成するステップと;b前記抗体または前記抗体の抗原結合性断片を精製するステップを含んでなる、ヒトErbB3に結合する抗体または前記抗体の抗原結合性断片を生成する方法。表面プラズモン共鳴による測定で、200pM以下のKDを有する、請求項1~5、17~20、または32~36のいずれか一項に記載の抗体。腫瘍細胞を請求項1~5、17~20、または32~36のいずれか一項に記載の有効量の抗体に曝露して、前記腫瘍細胞の増殖を阻害または低下させるステップを含んでなる、腫瘍細胞の増殖を阻害または低下させる方法。哺乳類を請求項1~5、17~20、または32~36のいずれか一項に記載の有効量の抗体に曝露して、前記腫瘍の増殖を阻害または低下させるステップを含んでなる、哺乳類において腫瘍成長を阻害または低下させる方法。請求項1~5、17~20、または32~36のいずれか一項に記載の有効量の抗体をそれを必要とする哺乳類に投与するステップを含んでなる、哺乳類において癌を治療する方法。前記癌が、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、胃癌、皮膚癌、腎臓癌、および頭頸部癌、およびシュワン細胞腫からなる群から選択される、請求項51に記載の方法。前記癌が、乳癌、肺癌、および膵臓癌からなる群から選択される、請求項51に記載の方法。前記哺乳類がヒトである、請求項51に記載の方法。治療薬として使用し得る、改善された抗ErbB3抗体に対する必要性がある。本発明は、ヒトErbB3と特異的に結合する抗体ファミリーの発見に基づく。抗体は、ヒトErbB3と特異的に結合するCDRに基づく、ErbB3結合部位を含有する。治療薬として使用される場合、抗体は例えばヒト化されて改変され、ヒト患者に投与した際の免疫応答が低下または排除される。本明細書で開示される抗体は、ヒトErbB3の活性化を妨げまたは阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、ErbB3が、例えばNRG/HRGなどのリガンドに結合するのを妨げ、それによってErbB3の生物学的活性を中和する。別の実施形態では、抗ErbB3抗体はErbB3の二量体化を阻害し、それによってErbB3の生物学的活性を中和する。本明細書で開示される抗体を使用して、生体外または生体内で腫瘍細胞の増殖を阻害し得る。ヒト癌患者またはマウスモデルなどの動物モデルに投与されると、抗体はヒト患者または動物モデルにおいて腫瘍成長を阻害しまたは低下させる。本発明のこれらのおよびその他の態様および利点は、以下の図、詳細な説明、および特許請求の範囲によって例証される。本明細書の用法では、含むincludingは、制限がないことを意味し、言及される例は非限定的である。以下の図面を参照して、本発明をより完全に理解し得る。本明細書で開示されるErbB3抗体は、ヒトErbB3ポリペプチドに対する生物学的活性を中和するそれらの能力について選択された、特定のモノクローナル抗体の抗原結合部位に基づく。抗体はErbB3結合部位を画定する、免疫グロブリン可変領域CDR配列を含有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ErbB3が、例えばNRG/HRGなどのリガンドに結合するのを妨げ、それによってErbB3の生物学的活性を中和する。別の実施形態では、抗ErbB3抗体はErbB3の二量体化を阻害し、それによってErbB3の生物学的活性を中和する。なおも別の実施形態では、抗ErbB3抗体はErbB3のリン酸化および下流シグナル伝達を阻害する。これらの抗体は中和活性があることから、特定の癌細胞および腫瘍の成長および/または増殖阻害のために有用である。抗体を改変して、ヒト患者に投与した際の免疫応答を最小化または排除し得る。いくつかの実施形態では、抗体は検出可能な標識、または小分子毒素のようなエフェクター分子などのその他の部分に、融合またコンジュゲートされる。I.ErbB3に結合する抗体いくつかの実施形態では、抗体は、a構造CDRH1-CDRH2-CDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域、およびb免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなり、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は組み合わさって、ヒトErbB3に結合する単一結合部位を画定する。CDRH1は、配列番号504D01、配列番号1509D03、配列番号2511G01、配列番号3412A07、配列番号4118H02、配列番号5122A02、配列番号5724C05、および配列番号7524C05からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRH2は、配列番号604D01、配列番号1609D03、配列番号2611G01、配列番号3512A07、配列番号4218H02、配列番号5222A02、配列番号5824C05、および配列番号7Sh24C05Hv3-11N62Sからなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRH3は、配列番号604D01、配列番号1709D03、配列番号2711G01、配列番号3612A07、22A02、配列番号4318H02、および配列番号5924C05からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる。明細書全体を通じて、特定の配列番号に続けて、配列がそれに由来する抗体を括弧内に示す。例えば配列番号504D01は、配列番号5が抗体04D01に由来することを意味する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号504D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号604D01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号704H01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号1509H03のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号1609H03のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号1709H03のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号2511G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号2611G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号2711G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号3412A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号3512A07のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号12A07,22A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号4118H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号4218H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号4318H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号5122A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号5222A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号3612A07,22A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。特定の実施形態では、抗体は、配列番号5724C05または配列番号7524C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号5824C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号5924C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。特定の実施形態では、抗体は、配列番号5724C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号5824C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号5924C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号7524C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号5824C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号5924C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。特定の実施形態では、抗体は、配列番号5724C05または配列番号7524C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH1、配列番号148Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなるCDRH2、および配列番号5924C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRH3を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。好適には、CDRH1、CDRH2、およびCDRH3配列は、ヒトまたはヒト化免疫グロブリンFRの間に挿入される。抗体は、無処理抗体または抗原結合性抗体断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、a構造CDRL1-CDRL2-CDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域、およびb免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなり、IgG軽鎖可変領域およびIgG重鎖可変領域は組み合わさって、ヒトErbB3に結合する単一結合部位を画定する。CDRL1は、配列番号804D01、12A07、22A02、配列番号1809D03、配列番号2811G01、配列番号4418H02、および配列番号6024C05からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRL2は、配列番号904D01、11G01、12A07、22A02、配列番号1909D03、配列番号4518H02、および配列番号6124C05からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなり;CDRL3は、配列番号1004D01、12A07、22A02、配列番号2009D03、配列番号2911G01、配列番号4618H02、および配列番号6224C05からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号804D01、12A07、22A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号904D01、11G01、12A07、22A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号1004D01、12A07、22A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号1809D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号1909D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号2009D03のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号2811G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号904D01、11G01、12A07、22A02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号2911G01のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号4418H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号4518H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号4618H02のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる。一実施形態では、抗体は、配列番号6024C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL1、配列番号6124C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL2、および配列番号6224C05のアミノ酸配列を含んでなるCDRL3を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる。好適には、CDRL1、CDRL2、およびCDRL3配列は、ヒトまたはヒト化免疫グロブリンFRの間に挿入される。抗体は、無処理抗体または抗原結合性抗体断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、a構造CDRH1-CDRH2-CDRH3を含んでなるIgG重鎖可変領域、およびb構造CDRL1-CDRL2-CDRL3を含んでなるIgG軽鎖可変領域を含んでなり、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は組み合わさって、ヒトErbB3に結合する単一結合部位を画定する。CDRH1は、配列番号504D01、配列番号1509D03、配列番号2511G01、配列番号3412A07、配列番号4118H02、配列番号5122A02、配列番号5724C05、および配列番号7524C05からなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRH2は、配列番号604D01、配列番号1609D03、配列番号2611G01、配列番号3512A07、配列番号4218H02、配列番号5222A02、配列番号5824C05、および配列番号148Sh24C05Hv3-11N62Sからなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRH3は、配列番号704D01、配列番号1709D03、配列番号2711G01、配列番号3612A07、22A02、配列番号4318H02、および配列番号5924C05からなる群から選択されるアミノ酸配列である。CDRL1は、配列番号804D01、12A07、22A02、配列番号1809D03、配列番号2811G01、配列番号4418H02、および配列番号6024C05からなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRL2は、配列番号904D01、11G01、12A07、22A02、配列番号1909D03、配列番号4518H02、および配列番号6124C05からなる群から選択されるアミノ酸配列であり;CDRL3は配列番号1004D01、12A07、22A02、配列番号2009D03、配列番号2911G01、配列番号4618H02、および配列番号6224C05からなる群から選択されるアミノ酸配列である。別の実施形態では、抗体は、配列番号204D01、配列番号1209D03、配列番号2211G01、配列番号3112A07、配列番号3818H02、配列番号4822A02、配列番号5424C05、および配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sからなる群から選択される免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号404D01、配列番号1409D03、配列番号2411G01、配列番号3312A07、配列番号4018H02、配列番号5022A02、配列番号5624C5、配列番号166Sh24C05Kv1-16、および配列番号168Sh24C05Kv1-17からなる群から選択される免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号204D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号404D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号1209D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号1409D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号2211G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号2411G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号3112A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号3312A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号3818H02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号4018H02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号4822A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号5022A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号5424C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号5624C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号166Sh24C05Kv1-16のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域と、配列番号168Sh24C05Kv1-17のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、i配列番号10904D01、配列番号11309D03、配列番号11711G01、配列番号12112A07、配列番号12518H02、配列番号12922A07、配列番号13324C05、配列番号190Sh24C05Hv3-11N62SIgG1、および配列番号192Sh24C05Hv3-11N62SIgG2からなる群から選択される免疫グロブリン重鎖と、ii配列番号11104D01、配列番号11509D03、配列番号11911G01、配列番号12312A07、配列番号12718H02、配列番号13122A07、配列番号13524C05、配列番号204Sh24C05Kv1-16κ、および配列番号206Sh24C05Kv1-17κからなる群から選択される免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号10904D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号11104D01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号11309D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号11509D03のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号11711G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号11911G01のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号12112A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号12312A07のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号12518H02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号12718H02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号12922A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号13122A02のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号13324C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号13524C05のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号190Sh24C05Hv3-11N62SIgG1のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号Sh24C05Kv1-16κのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号192Sh24C05Hv3-11N62SIgG2のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号204Sh24C05Kv1-16κのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号190Sh24C05Hv3-11N62SIgG1のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号206Sh24C05Kv1-17κのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。別の実施形態では、抗体は、配列番号192Sh24C05Hv3-11N62SIgG2のアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖と、配列番号206Sh24C05Kv1-17κのアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖とを含んでなる。本明細書の用法では、特に断りのない限り、抗体という用語は、無処理抗体または修飾、遺伝子改変、または化学的にコンジュゲートされた抗原結合性断片をはじめとする、無処理抗体例えば無処理モノクローナル抗体または抗体の抗原結合性断片例えばモノクローナル抗体の抗原結合性断片を意味する。修飾または遺伝子改変されている抗体の例としては、キメラ抗体、ヒト化抗体、および多特異性抗体例えば二重特異性抗体が挙げられる。抗原結合性断片の例としては、Fab、Fab’、Fab’2、Fv、一本鎖抗体例えばscFv、ミニ抗体、および二特異性抗体が挙げられる。化学的にコンジュゲートした抗体の一例は、毒素部分にコンジュゲートした抗体である。図1は、4本のポリペプチド鎖を含有する無処理モノクローナル抗体の概略図を示す。ポリペプチド鎖の内2本は免疫グロブリン重鎖H鎖と称され、ポリペプチド鎖の内2本は免疫グロブリン軽鎖L鎖と称される。免疫グロブリン重軽鎖は、鎖間ジスルフィド結合によって結合する。免疫グロブリン重鎖は、鎖間ジスルフィド結合によって結合する。軽鎖は、1つの可変領域図1のVLと1つの定常領域図1のCLからなる。重鎖は、1つの可変領域図1のVHと少なくとも3つの定常領域図1のCH1、CH2、およびCH3からなる。可変領域は、抗体特異性を左右する。各可変領域は、フレームワーク領域FRとして知られている4つの比較的保存された領域で挟まれた、相補性決定領域CDRとして知られている3つの超可変領域を含有する。CDR1、CDR2、およびCDR3と称される3つのCDは、抗体結合特異性に寄与する。特定の実施形態では、ヒトErbB3に結合する単離抗体は、配列番号204D01、配列番号1209D03、配列番号2211G01、配列番号3112A07、配列番号3818H02、配列番号4822A02、配列番号5424C05、および配列番号154Sh24C05Hv3-11N62Sの全可変領域またはフレームワーク領域配列と、少なくとも70、75、80、85、90、95、98、または99同一であるアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなる。特定の実施形態では、ヒトErbB3に結合する単離抗体は、配列番号404D01、配列番号1409D03、配列番号2411G01、配列番号3312A07、配列番号4018H02、配列番号5022A02、配列番号5624C05、配列番号166Sh24C05Kv1-16、および配列番号168Sh24C05Kv1-17の全可変領域またはフレームワーク領域配列と少なくとも70、75、80、85、90、95、98、または99同一であるアミノ酸配列を含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなる。前述の各実施形態では、ヒトErbB3に一緒に結合する免疫グロブリン重鎖可変領域および/または軽鎖可変領域配列は、重鎖および/または軽鎖可変領域のフレームワーク領域にアミノ酸の変更例えば少なくとも1、2、3、4、5、または10個のアミノ酸の置換、欠損、または付加を含有してもよいことが本明細書で熟考された。いくつかの実施形態では、単離抗体は、350pM、300pM、250pM、200pM、150pM、100pM、75pM、50pM、20pM、10pM以下のKDで、hErbB3に結合する。特に断りのない限り、KD値は、表面プラズモン共鳴法によって測定される。表面プラズモン共鳴法は、例えば実施例3および12に記載される条件を使用して実施し得て、測定はそれぞれ25°Cおよび37°Cで実施された。いくつかの実施形態では、抗体は、hErbB3がNRG1-β1に結合するのを阻害する。例えば抗体は、実施例4および13に記載されるプロトコルを使用して分析した際に、約5nM、2nM以下のIC50最大阻害の50での濃度を有し得る。II.抗体の生成抗体を生成する方法は本明細書で開示され、当該技術分野で知られている。例えば本明細書で提供される配列情報を使用して、軽鎖可変領域および重鎖可変領域をコードするDNA分子を化学的に合成し得る。合成DNA分子は、例えば定常領域コード配列および発現調節配列をはじめとするその他の適切なヌクレオチド配列にライゲートして、所望される抗体をコードする、従来の遺伝子発現コンストラクトを生成し得る。定義された遺伝子コンストラクトの生成は、当該技術分野の通例の技術範囲内である。代案としては、本明細書で提供される配列は、その配列が、本明細書で提供される配列情報、またはハイブリドーマ細胞中のマウス抗体重軽鎖をコードする遺伝子に関する先行技術の配列情報に基づく、合成核酸プローブを使用して、従来のハイブリダイゼーション技術またはポリメラーゼ連鎖反応PCR技術によって、ハイブリドーマからクローンし得る。本明細書で開示される抗体をコードする核酸は、発現ベクターに組み込みライゲートし得て、それは従来の形質移入または形質転換技術を通じて宿主細胞に導入し得る。例示的な宿主細胞は、さもなければIgGタンパク質を産生しない、大腸菌E.coli細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、HeLa細胞、幼若ハムスター腎臓BHK細胞、サル腎培養細胞COS、ヒト肝細胞癌細胞例えばHepG2、および骨髄腫細胞である。形質転換宿主細胞は、宿主細胞が免疫グロブリン軽鎖および/または重鎖可変領域をコードする遺伝子を発現できるようにする条件下で培養し得る。特異的発現および精製条件は、用いられる発現系次第で変動する。例えば大腸菌E.coli中で遺伝子を発現させる場合、改変遺伝子を例えばTrpまたはTacなどの適切な細菌プロモーター、および原核生物シグナル配列から下流に配置させることで、それを最初に発現ベクターにクローンする。発現された分泌タンパク質は、屈折体または封入小体中に蓄積し、フレンチプレスまたは超音波処理による細胞の破砕後に採取し得る。次に屈折体を可溶化し、当該技術分野で既知の方法によって、タンパク質を再び折り畳んで切断する。本明細書で開示される抗体をコードするDNAコンストラクトを例えばCHO細胞などの真核eukayotic宿主細胞中で発現させる場合、それを最初に、適切な真核生物プロモーター、分泌シグナル、IgGエンハンサー、および様々なイントロンを含有する発現ベクターに挿入する。この発現ベクターは、定常領域の全部または一部をコードする配列を任意に含有して、重鎖および/または軽鎖の全部またはその一部が発現できるようにする。いくつかの実施形態では、重鎖および軽鎖可変領域の双方を含有する単一発現ベクターが発現される。遺伝子コンストラクトは、従来の技術を使用して、真核生物宿主細胞に導入し得る。宿主細胞は、VLまたはVH断片、VL-VHヘテロ二量体、VH-VLまたはVL-VH一本鎖ポリペプチド、完全長重または軽免疫グロブリン鎖、またはその部分を発現し、そのそれぞれが別の機能例えば細胞毒性を有する部分に付着してもよい。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、重鎖例えば重鎖可変領域または軽鎖例えば軽鎖可変領域の全部または一部を発現するポリペプチドを発現する、単一ベクターで形質移入される。別の実施形態では、宿主細胞は、a重鎖可変領域を含んでなるポリペプチドおよび軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドをコードし、またはb免疫グロブリン重鎖全体および免疫グロブリン軽鎖全体をコードする単一ベクターで形質移入される。なおも別の実施形態では、宿主細胞は1つを超える発現ベクター例えば重鎖または重鎖可変領域の全体または一部を含んでなるポリペプチドを発現する1つの発現ベクター、および軽鎖または軽鎖可変領域の全体または一部を含んでなるポリペプチドを発現する別の発現ベクターで同時形質移入される。免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなるポリペプチド、または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドを生成する方法は、免疫グロブリン重鎖可変領域を含んでなるポリペプチド、または免疫グロブリン軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドが発現できるようにする条件下において、発現ベクターで形質移入された宿主細胞を培養するステップを含んでなってもよい。重鎖可変領域を含んでなるポリペプチド、または軽鎖可変領域を含んでなるポリペプチドは、次に例えばグルタチオン-S-トランスフェラーゼGSTおよびヒスチジンタグのような親和性タグなどの当該技術分野で良く知られている技術を使用して、精製されてもよい。ヒトErbB3に結合するモノクローナル抗体または抗体の抗原結合性断片を生成する方法は、a完全長または部分的免疫グロブリン重鎖をコードする発現ベクター、および完全長または部分的免疫グロブリン軽鎖をコードする別個の発現ベクター;またはb双方の鎖例えば完全長または部分的鎖をコードする単一発現ベクターで形質移入された宿主細胞を双方の鎖が発現できるようにする条件下で、培養するステップを含んでなってもよい。無処理抗体または抗原結合性断片は、例えばプロテインA、プロテインG、グルタチオン-S-トランスフェラーゼGSTやヒスチジンタグのような親和性タグなどの当該技術分野で良く知られている技術を使用して、収集し精製し得る。単一発現ベクターから、または2つの別個の発現ベクターから重鎖および軽鎖を発現することは、当該技術分野の通常の技術の範囲内である。III.抗体の修飾抗体および抗体断片の抗原性を低下させまたは排除する方法は、当該技術分野で知られている。抗体をヒトに投与することが意図される場合、抗体は、好適にはヒト化されて、ヒトにおける抗原性が低下しまたは排除される。好適には、ヒト化抗体はそれが由来する抗原に対して、非ヒト化マウス抗体と同一のまたは実質的に同一の親和性を有する。1つのヒト化アプローチでは、その中でマウス免疫グロブリン定常領域がヒト免疫グロブリン定常領域で置換されている、キメラタンパク質が作られる。例えばMorrisonetal.,1984,Proc.Nat.Acad.Sci81:6851-6855,Neubergeretal.,1984,Nature312:604-608;米国特許第,893,625号明細書Robinson;米国特許第5,500,362号明細書Robinson;および米国特許第4,816,567号明細書Cabillyを参照されたい。CDRグラフトとして知られているアプローチでは、軽鎖および重鎖可変領域のCDRが、別の種からのフレームワークにグラフトされる。例えばマウスCDRをヒトFRにグラフトし得る。いくつかの実施形態では、抗ErbB3抗体の軽鎖および重鎖可変領域のCDRが、ヒトFRまたはコンセンサスヒトFR上にグラフトされる。コンセンサスヒトFRを作り出すために、いくつかのヒト重鎖または軽鎖アミノ酸配列からのFRを配列比較して、コンセンサスアミノ酸配列を同定する。CDRグラフトは米国特許第7,022,500号明細書Queen;米国特許第6,982,321号明細書Winter;米国特許第6,180,370号明細書Queen;米国特許第6,054,297号明細書Carter;米国特許第5,693,762号明細書Queen;米国特許第5,859,205号明細書Adair;米国特許第5,693,761号明細書Queen;米国特許第5,565,332号明細書Hoogenboom;米国特許第5,585,089号明細書Queen;米国特許第5,530,101号明細書;QueenJonesetal.1986Nature321:522-525;Riechmannetal.1988Nature332:323-327;Verhoeyenetal.1988Science239:1534-1536;およびWinter1998FEBSLett430:92-94に記載される。SUPERHUMANIZATION商標と称されるアプローチでは、ヒトCDR配列は、ヒトCDRとヒト化されるマウス抗体との構造的な類似性に基づいて、ヒト生殖細胞系遺伝子から選択される。例えば米国特許第6,881,557号明細書Foote;およびTanetal.,2002,J.IMMUNOL169:1119-1125を参照されたい。免疫原性を低下させるその他の方法としては、再形成、ハイパーキメラ化、およびベニアリング/表面再構成が挙げられる。例えばVaswamietal.,1998,AnnalsofAllergy,Asthma,Immunol.81:105;Roguskaetal.,1996,Prot.Engineer9:895-904;および米国特許第6,072,035号明細書Hardmanを参照されたい。ベニアリング/表面再構成アプローチでは、マウス抗体中の表面接近可能アミノ酸残基が、ヒト抗体中の同一位置でより頻繁に見られるアミノ酸残基によって置換される。このタイプの抗体表面再構成は、例えば米国特許第5,639,641号明細書Pedersenに記載される。マウス抗体をヒトにおける医療用途に適した形態に転換する別のアプローチは、ACTIVMAB商標技術Vaccinex,Inc.,Rochester,NYとして知られており、それはワクシニアウィルスベースのベクターが哺乳類細胞内で抗体を発現することを伴う。IgG重軽鎖に高レベルのコンビナトリアル多様性が生じるとされている。例えば米国特許第,706,477号明細書Zauderer;米国特許6,800,442Zauderer号明細書;および米国特許6,872,518号明細書Zaudererを参照されたい。マウス抗体をヒトでの使用に適した形態に転換する別のアプローチは、KaloBiosPharmaceuticals,Inc.PaloAlto,CAによって商業的に実施される技術である。この技術は、抗体を選択するためのエピトープ注目ライブラリーを作成する、独自仕様のヒト受容体ライブラリーの使用を伴う。マウス抗体をヒトでの医療用途に適した形態に修飾する別のアプローチは、XOMAUSLLC.によって商業的に実施されるHUMANENGINEERING商標技術である。例えば国際公開第93/11794号パンフレット、および米国特許第5,766,886号明細書;米国特許第5,770,196号明細書;米国特許第5,821,123号明細書;および国特許第5,869,619号明細書を参照されたい。上のアプローチのいずれかをはじめとするあらゆる適切なアプローチを使用して、本明細書で開示されるヒト抗体の免疫原性を低下させ、または排除し得る。多特異性抗体を作成する方法は、当該技術分野で知られている。多特異性抗体としては、二重特異性抗体が挙げられる。二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、関心のある抗原の2つの異なるエピトープに結合する。二重特異性抗体は、例えばMilsteinetal.,Nature305:537-5391983、国際公開第93/08829号パンフレット、Trauneckeretal.,EMBOJ.,10:3655-36591991、国際公開第94/04690号パンフレット、Sureshetal.,MethodsinEnzymology,121:2101986、国際公開第96/27011号パンフレット、Brennanetal.,Science,229:811985、Shalabyetal.,J.Exp.Med.,175:217-2251992、Kostelnyetal.,J.Immunol.,1485:1547-15531992、Hollingeretal.,PNAS,90:6444-6448,Gruberetal.,J.Immunol.,152:53681994、Wuetal.,Nat.Biotechnol.,2511:1290-1297、米国特許公開第2007/0071675号明細書、およびBostrometal.,Science323:1640-16442009に記載されるように、完全長抗体または抗体断片例えばFab’2二重特異性抗体および二特異性抗体として調製し得る。いくつかの実施形態では、抗体は標準生体外共役化学を使用して、小分子毒素または放射性核種などのエフェクター作用因子にコンジュゲートされる。エフェクター作用因子がポリペプチドである場合、抗体をエフェクターに化学的にコンジュゲートさせ、またはエフェクターに融合タンパク質として結合させ得る。融合タンパク質の構築は、当該技術分野の通常の技術の範囲内である。IV.抗体の使用本明細書で開示される抗体を使用して、例えば乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、肺癌例えば非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、皮膚癌、腎臓癌、頭頸部癌、およびシュワン細胞腫などの様々な形態の癌を治療し得る。癌細胞は、癌細胞の増殖を阻害または低下させるように、治療的有効量の抗体に曝露される。いくつかの実施形態では、抗体は、癌細胞の増殖を少なくとも40、50、60、70、80、90、95、98、99、または100阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、ヒトErbB3が、ニューレグリン/ヘレグリン、特にNRGβ1/NRG1-β1/NRGβ1/HRGβ1およびNRGα1/NRG1-α1/NRGα1/HRGα1などのErbB3リガンドへ結合するのを阻害することで、腫瘍細胞の増殖を阻害しまたは低下させる。抗体は、ヒト患者において腫瘍成長を阻害する方法で使用し得る。方法は、治療的有効量の抗体を患者に投与するステップを含んでなる。ErbB3の過剰発現および/または活性化に関係のある癌としては、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頸癌、肺癌例えば非小細胞肺癌、いくつかの形態の脳癌例えばシュワン細胞腫、メラノーマ、皮膚癌、腎臓癌、および胃腸癌例えば結腸直腸癌、膵臓癌、胃癌、頭頸部癌が挙げられる。本明細書の用法では、treat、treating、およびtreatmentは、哺乳類、例えばヒトにおける疾患治療を意味する。これはa疾患を阻害する、すなわちその進行を抑止する;およびb疾患を軽減する、すなわち疾患状態の退縮を引き起こす;およびc疾患を治癒させることを含む。概して活性構成要素の治療的有効量は、0.1mg/kg~100mg/kgであり、例えば1mg/kg~100mg/kg、1mg/kg~10mg/kgの範囲内である。投与量は、疾患のタイプと程度、または治療される適応症、患者の全般的健康、抗体の生体内効力、製剤処方、および投与経路などの変数に左右される。初期用量は、所望される血液レベルまたは組織レベルを迅速に達成するために、上限レベルを越えて増大させ得る。代案としては、初期用量は最適用量よりも低くあり得て、治療過程において1日量を徐々に増大させてもよい。ヒト用量は、例えば0.5mg/kg~20mg/kgで行われるようにデザインされた、従来の第I相用量漸増試験中で最適化し得る投与回数は、投与経路、投与量、および治療される疾患などの要素に応じて変動し得る。例示的な投与回数は、日に1回、週に1回、および隔週で1回である。望ましい投与経路は、例えば静脈輸液などの非経口経路である。モノクローナル抗体ベースの薬剤の処方は、当該技術分野の通常の技術の範囲内である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は凍結乾燥されて、投与時に緩衝食塩水で戻される。治療用途では、抗体は、好適には薬学的に許容できるキャリアと組み合わせられる。本明細書の用法では、薬学的に許容できるキャリアとは、過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答、またはその他の問題または合併症がなく、利点/リスクの比率が妥当な、ヒトおよび動物の組織と接触する用途に適した、緩衝液、キャリア、および賦形剤を意味する。キャリアは、製剤のその他の成分と適合性であり、受容者にとって有害でないという意味で、許容可能でなくてはならない。薬学的に許容できるキャリアとしては、製薬投与に適合する、緩衝液、溶剤、分散媒、コーティング、等張吸収遅延剤などが挙げられる。薬理的活性物質のためのこのような媒体および作用物質の使用は、当該技術分野で知られている。本明細書で開示される抗体を含有する医薬組成物は、投薬単位形態で提供し得て、あらゆる適切な方法で調製し得る。医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように処方されなくてはならない。投与経路の例は、静脈内IV、皮内、吸入、経皮、局所、経粘膜、および直腸内投与である。モノクローナル抗体投与の望ましい経路は、IV輸液である。有用な製剤は、製薬技術で良く知られている方法によって調製し得る。例えばRemington’sPharmaceuticalSciences,18thed.MackPublishingCompany,1990を参照されたい。非経口投与に適した製剤構成要素としては、注射用水、食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶剤などの無菌希釈剤;ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤;アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤;EDTAなどのキレート化剤;酢酸、クエン酸またはリン酸などの緩衝液;および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調節剤が挙げられる。静脈内投与のための適切なキャリアとしては、生理学的食塩水、静菌水、CremophorEL商標BASF,Parsippany,NJまたはリン酸緩衝食塩水PBSが挙げられる。キャリアは、製造および保存条件下で安定しているべきであり、微生物から保護されていなくてはならない。キャリアは、例えば水、エタノール、ポリオール例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレンpolyetheyleneグリコール、およびそれらの適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。医薬製剤は、好適には無菌である。滅菌は、例えば滅菌濾過膜を通した濾過によって達成し得る。組成物が凍結乾燥されている場合、濾過滅菌は凍結乾燥と水戻しに先だって、またはそれに続いて実施し得る。以下の実施例は単に例証的であり、本発明の範囲または内容をどのようにも制限することは意図されない。実施例1-抗hErbB3モノクローナル抗体の生成免疫化、融合、および一次スクリーニングは、反復複数部位免疫法RIMMSプロトコルに従って、MaineBiotechnologyServicesInc.で実施された。3匹のAJマウスおよび3匹のBalb/cマウスを組換えヒトErbB3/FcRDSystems、カタログ番号348-RBで免疫化した。切断rhErbB3免疫化A、またはそのリガンドである組換えヒトNRG1-β1/HRG1-β1-EGFドメインに架橋された切断rhErbB1RDSystems、カタログ番号396-HB免疫化Bのどちらかを用いて、2組の免疫化を実施した。血清による免疫化を通じて、酵素結合免疫吸着測定法ELISAで高い抗ErbB3活性を示す2匹のAJマウスを、引き続く融合のために選択した。適切なマウスから脾臓およびリンパ節を採取した。次にB細胞を採取して、骨髄腫細胞系と融合させた。融合生成物を40枚の96ウェルプレート上で、クロナリティー近くまで連続希釈した。得られた融合物からの合計5280の上清を組換えrhErbB3/Fcとの結合について、ELISAを使用してスクリーニングした。同一上清はまた、CHO細胞中で過剰発現されたヒトErbB3に対するそれらの結合についてもスクリーニングしたMesoscale電気化学発光アッセイによる。下述する生体外生化学的および細胞ベースアッセイによって、ErbB3に対する抗体を含有すると同定された300の上清をさらに特性解析した。ハイブリドーマパネルを選択し、ハイブリドーマをサブクローニングして拡大した。ハイブリドーマ細胞系を抗体発現のためにBioXCell元Bio-Expressに移し、標準条件下でプロテインG樹脂上の親和性クロマトグラフィーによって精製した。抗hErbB3モノクローナル抗体04D01を上述の免疫化Aから作り出した。抗hErbB3モノクローナル抗体09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05を上述の免疫化Bから作り出した。実施例2-抗hErbB3モノクローナル抗体の配列分析IsoStrip商標マウスモノクローナル抗体アイソタイプ判定キットを使用し、製造会社RocheAppliedScienceの使用説明書に従って、実施例1の各モノクローナル抗体の軽鎖アイソタイプおよび重鎖アイソタイプを判定した。全ての抗体は、κ軽鎖およびIgG1またはIgG2bIgG重鎖であると判定された。5’RACERapidAmplificationofcDNAEndsを使用して、マウスモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖可変領域を配列決定した。RNeasy登録商標Miniprepキットを使用して、供給業者Qiagenの使用説明書に従って、各モノクローナルハイブリドーマ細胞系から全RNAを抽出した。GeneRacer商標キットInvitrogenまたはSMARTer商標RACEcDNA増幅キットClontechのどちらかを使用して、製造会社の使用説明書に従って、5’RACEのためのランダムプライマーを使用して、5’末端を含有する完全長第一鎖cDNAを作り出した。KODHotStartPolymeraseNovagenまたはAdvantage2PolymeraseMixClontechを使用して、製造会社の使用説明書に従って、PCRによってκおよび重IgG1またはIgG2bIgG鎖の可変領域を増幅した。5’cDNA末端の増幅では、GeneRacer商標キットと併せて、GeneRacer商標5’プライマーである5’cgactggagcacgaggacactga3’配列番号136Invitrogenを5’プライマーとして使用した。5’cDNA末端の増幅では、SMARTer商標ACEcDNA増幅キットと併せて、5’CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT3’配列番号137と5’CTAATACGACTCACTATAGGGC3’配列番号138の混合物であるUniversalPrimerMixAプライマーClontechを5’プライマーとして使用した。重鎖可変領域は、上の5’プライマーと5’TATGCAAGGCTTACAACCACA3’配列番号139または5’GCCAGTGGATAGACAGATGGGGGTGTCG3’配列番号140のどちらかの3’IgG1定常領域特異的プライマーとを使用して増幅した。IgG2b配列は、5’AGGACAGGGGTTGATTGTTGA3’配列番号141、5’GGCCAGTGGATAGACTGATGGGGGTGTTGT3’配列番号142、または5’GGAGGAACCAGTTGTATCTCCACACCCA3’配列番号143のいずれかを用いて増幅した。κ鎖可変領域は、上の5’プライマーと、5’CTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT3’配列番号144または5’CGACTGAGGCACCTCCAGATGTT3’配列番号145のどちらかの3’κ定常領域特異的プライマーとを用いて増幅した。アガロースゲル電気泳動によって個々のPCR生成物を単離し、製造会社Qiagenの使用説明書に従ってQiaquick登録商標ゲル精製キットを使用して精製した。ZeroBlunt登録商標TOPO登録商標PCRクローニングキットを使用して、製造会社Invitrogenの使用説明書に従って、PCR生成物を引き続いてpCR登録商標4Bluntプラスミドにクローンし、標準分子生物学技術を通じて、DH5-α細菌Invitrogenに形質転換した。標準ジデオキシDNA配列決定方法を使用して、BeckmanGenomicsからのM13順方向5’GTAAAACGACGGCCAGT3’配列番号146およびM13逆方向5’CAGGAAACAGCTATGACC3’配列番号147プライマーを使用し、形質転換細菌クローンから単離されたプラスミドDNAを配列決定して、可変領域配列の配列を同定した。VectorNTIソフトウェアInvitrogenおよびIMGT/V-Questソフトウェアを使用して配列を分析し、可変領域配列を同定および確認した。マウスモノクローナル抗体の可変領域をコードする核酸配列、およびそれを画定するタンパク質配列を下に要約するアミノ末端シグナルペプチド配列は示されない。CDR配列Kabat定義は、アミノ酸配列中で太字/下線で示される。04D01抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号104D01抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号204D01抗体のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号304D01抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号409D03抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号1109D03抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号1209D03抗体のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号1309D03抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号1411G01抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号2111G01抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号2211D01抗体のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号2311G01抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号2412A07抗体配列番号30の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号3012A07抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号3112A07抗体配列番号32のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号3212A07抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号3318H02抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号3718H02抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号3818H02抗体のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号3918HD02抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号4022A02抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号4722A02抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号4822A02抗体のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号4922A02抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号5024C05抗体の重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号5324D05抗体の重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号5424C05抗体のκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号5524C05抗体のκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号56実施例1で作成された抗体について、免疫グロブリン重鎖可変領域を画定するアミノ酸配列を図2で配列比較する。適切な発現/分泌のためのアミノ末端シグナルペプチド配列は、示されない。CDR1、CDR2、およびCDR3Kabat定義は、ボックスによって同定される。図3は、各抗体について、別個のCDR1、CDR2、およびCDR3配列の配列比較を示す。実施例1の抗体について、免疫グロブリン軽鎖可変領域を画定するアミノ酸配列を図4で配列比較する。適切な発現/分泌のためのアミノ末端シグナルペプチド配列は、示されない。CDR1、CDR2、およびCDR3は、ボックスによって同定される。図5は、各抗体について、別個のCDR1、CDR2、およびCDR3配列の配列比較を示す。表1は、本明細書の実施例で考察される各配列の配列番号を示す、一致度チャートである。マウスモノクローナル抗体重鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表2に示す。マウスモノクローナル抗体κ軽鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表3に示す。表2および3では、免疫グロブリン重鎖および軽鎖について最長CDR配列を太字で示す。完全長重鎖またはκ鎖抗体配列を作り出すために、上の各可変配列をそれぞれの定常領域と組み合わせる。例えば完全長重鎖は、重可変配列とそれに続くマウスIgG1またはIgG2b重鎖定常配列を含んでなり、完全長κ鎖は、κ可変配列とそれに続くマウスκ軽鎖定常配列を含んでなる。マウスIgG1重鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号102マウスIgG1重鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号103マウスIgG2b重鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号104マウスIgG2b重鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号105マウスκ軽鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号106マウスκ軽鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号107以下の配列は本実施例で説明される各抗体について、実際のまたは熟考された完全長重鎖および軽鎖配列すなわち可変および定常領域配列の双方を含有するを表わす。抗体の適切な分泌のためのシグナル配列もまた、DNA配列の5’末端、またはタンパク質配列のアミノ末端に含まれる。可変領域配列を他の定常領域配列にライゲートして、活性完全長IgG重鎖および軽鎖を生成し得る。04D01の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号10804D01の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号10904D01の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号11004D01の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号11109D03の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG2b定常領域をコードする核酸配列配列番号11209D03の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG2b定常領域を画定するタンパク質配列配列番号11309D03の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号11409D03の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号11511G01の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号11611G01の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号11711G01の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号11811G01の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号11912A07の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号12012A07の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号12112A07の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号12212A07の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号12318H02の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号12418H02の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号12518H02の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号12618H02の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号12722A02の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号12822A02の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号12922A02の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号13022A02の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号13124C05の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号13224C05の完全長重鎖配列重鎖可変領域およびIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号13324C05の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域をコードする核酸配列配列番号13424C05の完全長軽鎖配列κ鎖可変領域および定常領域を画定するタンパク質配列配列番号135便宜のため、表4は、本実施例で考察される抗体の完全長配列と、配列表に示すものとの対応を示す、一致度チャートを提供する。実施例3-結合親和性Biacore登録商標T100Biacore装置を使用して、表面プラズモン共鳴によって、モノクローナル抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05と、組換えヒトErbB3/Fc融合タンパク質rhErbB3-Fcとの結合親和性および結合動態を測定した。標準カップリングプロトコルを使用して、供給業者の使用説明書に従って、アミンカップリングBIAcore、カタログ番号BR-1000-50によって、ウサギ抗マウスIgGsBiacore、カタログ番号BR-1008-38をカルボキシメチル化デキストランCM4センサーチップBiacore、カタログ番号BR-1005-34上に固定化した。0.05の界面活性剤P20Biacore、カタログ番号BR-1000-54を含有するPBSInvitrogen、カタログ番号14040-133を泳動用緩衝液として使用して、25°Cで分析を実施した。流速10μl/分で、個々のフローセル内において抗体を捕捉した。各抗体毎に注入時間を変えて、30~60RUのRmaxを得た。緩衝液または泳動用緩衝液で希釈したrhErbB3-Fcを参照表面抗体捕捉なしおよび活性表面試験抗体上に、60μl/分で300秒間逐次注入した。解離相を3600秒までモニターした。次にpH1.7の10mMグリシン-HClグリシンpH1.5Biacore、カタログ番号BR-1003-54およびpH2.0Biacore、カタログ番号BR-1003-55から作られたを2回にわたり流速60μl/分で60秒間注入して、表面を再生した。試験したrhErbB3-Fcの濃度範囲は、0.125nM~20nMであった。BIAevaluationソフトウェアBiacoreの動態学機能を使用して、二重参照減法で動態学パラメータを測定した。各抗体の動態学パラメータ、ka結合速度定数、kd解離速度定数、およびKD平衡解離定数を測定した。25°Cにおける、rhErbB3-Fcに対するモノクローナル抗体の動力学値を表5に要約する。表5のデータは、約350pM以下、250pM以下、200pM以下、150pM以下、100pM以下、50pM以下、または10pM以下のKDで、抗体がrhErbB3に結合することを実証する。実施例4-中和活性本実施例では、rhErbB3とNRG1-β1およびNRG1-α1との結合を阻害する能力について、実施例1で作成された抗体を試験した。hErbB3とNRG1-β1との結合の阻害について、電気化学発光ECLアッセイによって抗体を試験した。50μlのPBSInvitrogen、カタログ番号14040-133中の0.5μg/mLのrhErbB3/FcRDSystems、カタログ番号348-RBによって、MA240096ウェル標準結合プレートMesoScaleDiscovery、カタログ番号L15XA-6を4°Cで撹拌せずに一晩被覆した。次にプレートをPBS0.1Tween20SigmaP5927で3回洗浄し、200μlの5BSASeraCareLifeSciences、カタログ番号AP-4510-80含有PBSによって、室温で1.5時間ブロックした。プレートをPBSで3回洗浄した後、室温でさらに1時間撹拌しながら、25μlの抗体希釈液をプレートに添加した。リガンドNRG1-β1RDSystems、カタログ番号377-HB、26kDaを最終濃度0.25μg/mlでウェルに添加した。プレートをPBSで3回洗浄し、SULTO-TAGストレプトアビジンMesoScaleDiscovery、カタログ番号R32AD-5と共に1時間プレインキュベートされた、25μlの1μg/mL抗ヒトNRG1-β1ビオチン化抗体RDSystems、カタログ番号BAF377と共に、室温で撹拌しながら1時間インキュベートした。次にプレートをPBSで3回洗浄し、Sector登録商標Imager2400MesoScaleDiscovery装置上でプレートを分析する前に、150μlの1×読み取り緩衝液MesoScaleDiscovery、カタログ番号R92TC-1を各ウェルに添加した。NRG1-β1とErbB3の相互作用は、抗体04D01、12A07、18H02、22A02、および24C05によって阻害された図6A。NRG1-β1とrhErbB3の相互作用は抗体09D03よって促進されたが、抗体11G01によって同様には促進されなかった図6B。抗体すなわち04D01、12A07、18H02、22A02、および24C05について、NRG1-β1とrhErbB3との結合を中和する、マウス抗ヒトErbB3抗体のIC50値を計算し、表6に要約する。結果は、抗体04D01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、NRG1-β1とrhErbB3との結合を効率的に中和したことを示す。抗体09D03および11G01は、hNRG1-β1とhErbB3との結合を促進した。抗体は、hErbB3と、第2のErbB3リガンドであるNRG1-α1との結合の阻害に関するECLアッセイによって、試験した。NRG1-α1とrhErbB3の結合の阻害をアッセイするために、播種されるrhErbB3/FcRD4518-RBおよびリガンドNRG1-α1ThermoScientific、RP-317-P1AXの濃度をそれぞれ1μg/mlおよび1.5μg/mlに変更したこと以外は、NRG1-β1について使用したのと同一方法を使用した。NRG1-α1とrhErbB3の相互作用は、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05IgG1によって阻害され、抗体09D03によって促進された図7。実施例5-ErbB3ドメインIIへの結合本実施例では、hErbB3-ECDの二量体化ドメインドメイン2に対する結合について、実施例1で作成された抗体を試験した。Her2119個のアミノ酸、AA220~338位のドメイン2の代わりに、hErbB3118個のアミノ酸、210~327位ドメイン2を完全長Her2受容体にクローンした。ハイブリッドコンストラクトHer2/3d2をpLenti6.3にクローンし、ViraPower商標レンチウィルスサポートキットInvitrogen、カタログ番号K497000を使用して、293T細胞をレンチウィルス内へ一過性に形質移入することでパッケージ化した。CHO細胞に、Her2/3d2ハイブリッドタンパク質を発現するレンチウィルスを感染させた。これらの遺伝子改変CHO細胞上で、スルホ標識抗マウス抗体を用いたECLによって、抗ErbB3ハイブリドーマ上清とHer2/3d2との結合を試験した。ハイブリドーマ上清と、CHO細胞の細胞表面で発現されるキメラタンパク質Her2/3d2との結合に関するデータを図8に要約する。これらの結果は、抗体09D03および11G01が、ErbB3ドメインIIであるAA210-327に結合することを示す。実施例6-抗増殖性活性本実施例は、細胞のNRG1-β1依存性増殖を阻害する能力に関する、実施例1で作成された抗体の特性解析について述べる。ヒトHer2およびErbB3の双方を発現するように遺伝子改変されたBaF/3細胞系において、そしてHer2およびErbB3の双方を自然に発現してNRG1-β1刺激に応えて増殖するヒトMCF7乳癌細胞において、抗体を試験した。BaF/3細胞に、ヒトHer2またはヒトErbB3を発現するよう遺伝子改変された2種のレンチウイルスを感染させた。ブラストサイジン15μg/ml;Invitrogen、カタログ番号R21001を用いて、感染した細胞を選択し、個々のコロニーを単離して、双方の受容体の発現について試験した。Her2/ErbB3を発現するクローンを添加ブラストサイジン選択下の培養中で維持した。[80RPMI培地1640GIBCO、カタログ番号11875-093、10ウシ胎仔血清GIBCO、カタログ番号10438-026、および10WEHI細胞馴化培地{90ISCOVEの修正ダルベッコ培地GIBCO、カタログ番号12440053、10ウシ胎仔血清GIBCO、カタログ番号10438-0262mML-グルタミンGIBCO、カタログ番号25030-0810.0025mMメルカプトエタノールInvitrogen、カタログ番号21985-023}]。拮抗ErbB3抗体についてスクリーニングするために、細胞をPBSで洗浄し、ブラストサイジンおよびWEHI馴化培地の不在下で培養した。アッセイは、NRG1-β1100ng/mlおよび様々な濃度最終容積100μl中に0.018~5000ng/mlの抗体の存在下、96ウェルプレート5,000細胞/ウェル内で実施した。NRG1-β1刺激の3~4日間後に、MTT3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドアッセイを実施した。マウス抗ヒトErbB3抗体による、Her2/ErbB3-BaF/3のNRG1-β1依存性細胞増殖の用量依存的阻害の一例を図9に示す。モノクローナル抗体すなわち04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05によるNRG1-β1依存性Her2/ErbB3-BaF/3細胞系増殖阻害のデータを表7に要約する。表7の結果は、抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、Her2/ErbB3を発現するBaF/3細胞のNRG1-β1誘導性増殖を強力に阻害したことを示す。MCF7細胞ATCC、カタログ番号HTB-22は、ATCCによる推奨に従って維持された。96ウェルプレートに、5,000細胞/ウェルで細胞を播種した。細胞を血清不在下で、一晩飢餓状態にした。翌日、NRG1-β140ng/mlおよび様々な濃度最終容積100μl中に12.8pg/ml~20μg/mlの抗体を細胞に添加した。NRG1-β1刺激の3日後に、MTT3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドアッセイを実施した。マウス抗ヒトErbB3抗体による、MCF7細胞のNRG1-β1依存性増殖の用量依存的阻害の一例を図10に示す。モノクローナル抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05による、NRG1-β1依存性MCF7細胞増殖阻害のデータを表8に要約する。表8の結果は、抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、MCF7細胞のNRG1-β1誘導性増殖を強力に阻害したことを実証する。実施例1で作成された抗体はまた、ErbB3発現ヒト癌細胞の増殖を阻害する能力についても試験された。乳癌細胞SKBR-3はHer2を過剰発現し、Her2特異的阻害抗体に対して感受性である。SKBR3細胞ATCC、カタログ番号HTB-30は、ATCCによる推奨に従って維持された。5μg/mlの抗体存在下であるが外来性NRG1-β1不在下で、96ウェルプレートに5,000細胞/ウェルで細胞を播種した。3日間の培養後に、MTT3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドアッセイを実施した。マウス抗ヒトErbB3抗体による、SKBR-3細胞の細胞増殖阻害の一例を図11に示す。図11の結果は、抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、SKBR-3細胞の増殖を阻害したことを示す。実施例7-下流シグナル伝達の阻害本実施例は、PI3K活性化の読み取りとして、ErbB3と下流キナーゼAktのNRG1-β1依存性リン酸化を阻害する能力に関する、実施例1で作成された抗体の特性解析について述べる。これらの抗体はまた、指数関数的に増殖する細胞中における、ErbB3およびAktの定常状態リン酸化を阻害する能力についても試験された。乳癌細胞SKBR-3およびMCF7、そして前立腺癌細胞DU145は、ATCCの推奨に従って維持された。細胞を0FBS中で一晩飢餓状態にして、5μg/mlの抗体で1時間処理し、NRG1-β1刺激がそれに続いた。溶解産物は、RDSystemsカタログ番号DYC1769からのホスホ-ErbB3キットによるELISA、またはCellSignalingからのホスホ-AktELISAキットカタログ番号7143のどちらかを用いて分析した。SKBR-3細胞中における、ErbB3のNRG1-β1誘導性リン酸化のマウス抗ヒトErbB3抗体による阻害の一例を図12に示す。図12の結果は、抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、SKBR-3細胞中でNRG1-β1によって誘導されるErbB3リン酸化の少なくとも50を阻害したことを実証する。MCF7およびDU145細胞中における、AktのNRG1-β1誘導性リン酸化のマウス抗ヒトErbB3抗体による阻害の一例をそれぞれ図13Aおよび図13Bに示す。図13Aおよび13Bの結果は、MCF7およびDU145細胞の双方で、抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、NRG1-β1に応えたAktリン酸化を少なくとも80阻害することを実証する。指数関数的に増殖する細胞を5μg/mlの抗体の存在下で1時間処理することにより、乳癌細胞系SKBR-3および膵臓癌細胞系BxPC3中において、ErbB3およびAktの定常状態リン酸化状態を阻害する、抗ErbB3抗体の能力を試験した。これらの実験のウエスタンブロット分析は、抗体04D01、09D03、11G01、12A07,18H02、22A02、および24C05が、SKBR-3およびBxPC3細胞の双方で、AktおよびErbB3の定常状態レベルのリン酸化を阻害することを実証した。実施例8-NRG1-β1誘導性EGFRリン酸化の阻害本実施例では、実施例1で作成された抗体を卵巣癌細胞系NCI/ADR-RES中で、EGFRのNRG1-β1依存性リン酸化を阻害する能力について試験した。NCI/ADR-RES細胞DTP/DCTDNCI腫瘍リポジトリを0FBS中で一晩飢餓状態にして、抗体5μg/mlで1時間前処理し、15分間のNRG1-β120ng/ml刺激がそれに続いた。チロシン1068上におけるEGFRのリン酸化をウエスタンブロットによって分析した。本実験の結果は、NCI/ADR-RES細胞中において、抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、NRG1-β1に応えたEGFRリン酸化を阻害することを実証した。実施例9-EGF誘導性ErbB3リン酸化の阻害本実施例では、EGFR過剰発現,類表皮癌細胞系A431内で、ErbB3のEGF依存性リン酸化を阻害する能力について、実施例1で作成された抗体を試験した。A431細胞ATCC、カタログ番号CRL-1555を0FBSで一晩飢餓状態にして、抗体5μg/mlで1時間前処理し、15分間のEGFRDSystems、カタログ番号236-EG50ng/ml刺激がそれに続いた。ErbB3のリン酸化をウエスタンブロットによって分析した。本実験の結果は、A431細胞中において、抗体04D01、09D03、12A07、18H02、22A02、および24C05が、EGFに応えたErbB3リン酸化を様々な程度に阻害することを実証した。実施例10-NRG1-β1誘導性Her2/ErbB3ヘテロ二量体形成の阻害本実施例は、SKBR-3細胞中において、NRG1-β1に応えたHer2/ErbB3二量体の形成を阻害する能力に関する、実施例1で作成された抗体の特性解析について述べる。乳癌細胞SKBR-3を0FBSで一晩飢餓状態にして、5μg/mlの抗体で1時間処理し、NRG1-β1刺激30ng/ml、30分間がそれに続いた。溶解産物を抗Her2抗体RDSystems、カタログ番号BAF1129で免疫沈降させ、ポリクローナル抗ErbB3抗体SantaCruz、カタログ番号SC285を用いたウエスタンブロットによって分析した。本実験の結果は、抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、および24C05が、SKBR-3細胞中におけるNRG1-β1-誘導性Her2/ErbB3二量体形成を阻害することを実証する。実施例11-BxPC3腫瘍異種移植成長の阻害実施例1で作成されたマウスモノクローナル抗体が、膵臓BxPC3異種移植モデル中で、腫瘍成長を阻害する能力を試験した。10ウシ胎仔血清を含有するRMPI培地を使用して、ヒト膵臓BxPC3細胞を5CO2含有雰囲気内において37°Cで培養した。8週齢のメスCB。17SCIDマウスTaconicLabsに、マウスあたり10x106細胞で、50マトリゲルBDBiosciences、カタログ番号356237中のBxPC3細胞を側腹部に皮下接種した。ノギスを使用して、腫瘍測定を週に2回実施した。式:幅×幅×長さ/2を使用して、腫瘍体積を計算した。腫瘍がおよそ200mm3に達すると、それぞれ10匹ずつの9群にマウスを無作為化した。1つの群にはPBSを投与し、別の群にはヒトIgG対照huIgGを投与した。他の8群には、それぞれ04D01、09D03、18H02、11G01、24C05、22A02、または12A07の抗体の1つを投与した。全ての抗体は、腹腔内注射によって20mg/kg体重で6週間にわたり週2回投与した。腫瘍体積およびマウス体重を週に2回記録した。腫瘍成長阻害をANOVAを使用して分析し、PBS対照と比較した阻害率として表す。図14の結果は、このモデルにおいて抗体24C05が、腫瘍成長を76阻害することを示すp<0.001。抗体04D01、18H02、および11G01はまた、このモデルにおいて、腫瘍成長をそれぞれ64、71、および72p<0.001阻害する。抗体12A07および22A02が最小の活性すなわち約40の腫瘍成長阻害を実証したのに対し、抗体09D03はこのモデルで60の腫瘍成長阻害を与えた。実施例12-抗ErbB3抗体のヒト化A.ヒト化およびキメラ抗ErbB3抗体の構築本実施例は、24C05と命名されたマウス抗体のヒト化と、得られたヒト化抗体の特性解析について述べる。ヒト化抗ErbB3抗体は、SUPERHUMANIZATION商標法AranaTherapeuticsLtd.andHwang,W.Y.etal.2005METHODS36:35-42、またはいくつかのヒトフレームワーク残基がマウス残基に変更される復帰突然変異によるCDRグラフト法例えば米国特許第5,530,101号明細書;米国特許第5,693,761号明細書;米国特許第5,693,762号明細書;米国特許第5,585,089号明細書;米国特許第6,180,370号明細書;米国特許第7,022,500号明細書を参照されたいを使用してデザインされた。重鎖CDR1を除いて、ヒトフレームワーク上へのCDRグラフトには、KabatCDR定義を使用した。重鎖CDR1をグラフトするために、KabatおよびChothia定義の組み合わせを使用した。デザインされたアミノ酸配列はコドン最適化DNA配列に転換され、DNA2.0,Inc.によって合成され、以下をこの順で含む:5’HindIII制限部位、コザックコンセンサス配列、アミノ末端シグナル配列、ヒト化可変領域、ヒトIgG1またはκ定常領域、停止コドン、および3’EcoRI制限部位。さらにオーバーラップ伸長PCRを使用して、1本のヒト化重鎖Sh24C05Hv3-11重IgG1を変異させてヒト化を促進し、Sh24C05Hv3-11N62S重鎖IgG1がもたらされた。Sh24C05Hv3-11N62S重鎖のヒトIgG2バージョンもまた構築された。本明細書に記載されるSUPERHUMANIZATION商標法に従ってヒト化された抗ErbB3抗体鎖は、抗体鎖名の前に接頭辞Shを付けて命名される。本明細書に記載される復帰突然変異を用いたCDRグラフト法によってヒト化された抗ErbB3抗体鎖は、抗体鎖名の前に接頭辞Huを付けて命名される。キメラマウス可変領域およびヒト定常領域24C05重鎖ヒトIgG1および軽鎖ヒトκ鎖もまた構築された。マウス可変領域はオーバーラップ伸長PCRを使用してヒト定常領域と融合され、以下をこの順で含む:5’HindIII制限部位,コザックコンセンサス配列、アミノ末端シグナル配列、マウス可変領域、ヒトIgG1またはκ定常領域、停止コドン、および3’EcoRI制限部位。In-Fusion商標PCRクローニングClontechを使用して、HindIIIおよびEcoRI部位を通じて、ヒト化およびキメラ重鎖をpEE6.4LonzaBiologicsにサブクローニングした。In-Fusion商標PCRクローニングを使用して、HindIIIおよびEcoRI部位を通じて、ヒト化およびキメラκ軽鎖をpEE14.4LonzaBiologicsにサブクローニングした。ヒト化抗体鎖またはキメラ抗体鎖を293T細胞に一過性に形質移入して、抗体を作成した。引き続く生体外分析のために、抗体を精製し、または細胞培養液上清中で使用した。キメラおよびヒト化抗体とヒトErbB3との結合を下述するようにして測定した。得られた結果を下の表15に要約する。さらにまた、大量の精製ヒト化抗体を生成するために、GSシステム商標LonzaBiologicsを使用して、CHOK1SV細胞内でいくつかのヒト化抗体重および軽鎖の組み合わせを安定して発現させた。pEE6.4およびpEE14.4ベースのベクターを組み合わせて、単一発現ベクターを構築した。最初に、pEE6.4含有完全長ヒト化重鎖cDNAをNotIおよびSalIで消化して、hCMV-MIEプロモーター完全長ヒト化重鎖cDNASV40polyA断片を単離した。この断片を完全長ヒト化軽鎖cDNAを既に含有するpEE14.4ベクターに、NotI/SalI部位を通じて挿入し、それによって重および軽鎖を同時に発現する発現ベクターを作り出した。合わせた重および軽鎖ベクターを直線化して、CHOK1SV細胞に形質移入した。メチオニンスルホキシイミンの存在下で、安定クローンを選択した。ヒト化免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖可変領域との可能な各組み合わせを下の表9に示す.ヒト化24C05抗体の可変領域をコードする核酸配列、およびそれを画定するタンパク質配列を下に要約するアミノ末端シグナルペプチド配列は示されない。CDR配列Kabat定義は、アミノ酸配列中で太字で示され下線付きである。Sh24C05Hv3-7重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号149Sh24C05Hv3-7重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号150Sh24C05Hv3-11重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号151Sh24C05Hv3-11重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号152Sh24C05Hv3-11N62S重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号153Sh24C05Hv3-11N62S重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号154Sh24C05Hv3-21重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号155Sh24C05Hv3-21重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号156Sh24C05Hv3-23重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号157Sh24C05Hv3-23重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号158Sh24C05Hv3-30重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号159Sh24C05Hv3-30重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号160Hu24C05HvA重鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号161Hu24C05HvA重鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号162Sh24C05Kv1-9κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号163Sh24C05Kv1-9κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号164Sh24C05Kv1-16κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号165Sh24C05Kv1-16κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号166Sh24C05Kv1-17κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号167Sh24C05Kv1-17κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号168Sh24C05Kv1-33κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号169Sh24C05Kv1-33κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号170Sh24C05Kv1-39κ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号171Sh24C05Kv1-39κ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号172Hu24C05KvAκ鎖可変領域をコードする核酸配列配列番号173Hu24C05KvAκ鎖可変領域を画定するタンパク質配列配列番号174実施例12で作成された抗体について、免疫グロブリン重鎖可変領域を画定するアミノ酸配列を図15で配列比較する。適切な発現/分泌のためのアミノ末端シグナルペプチド配列は、示されない。CDR1、CDR2、およびCDR3Kabat定義は、ボックスによって同定される。実施例12の抗体について、免疫グロブリン軽鎖可変領域を画定するアミノ酸配列を図16で配列比較する。適切な発現/分泌のためのアミノ末端シグナルペプチド配列は、示されない。CDR1、CDR2、およびCDR3は、ボックスによって同定される。表10は、本明細書の実施例で考察される各配列の配列番号を示す、一致度チャートである。ヒト化マウスモノクローナル抗体重鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表11に示す。ヒト化マウスモノクローナル抗体κ軽鎖CDR配列Kabat、Chothia、およびIMGT定義を表12に示す。表11および12では、免疫グロブリン重鎖および軽鎖について最長CDR配列を太字で示す。完全長ヒト化重鎖またはκ鎖抗体配列を作り出すために、上の各可変配列をそれぞれのヒト定常領域と組み合わせる。例えば完全長重鎖は、重鎖可変配列と、それに続くヒトIgG1重鎖定常配列またはヒトIgG2重鎖定常配列を含んでなる。完全長κ鎖は、κ可変配列と、それに続くヒトκ軽鎖定常配列を含んでなる。ヒトIgG1重鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号175ヒトIgG1重鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号176ヒトIgG2重鎖定常領域をコードする核酸配列配列番号177ヒトIgG2重鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号178ヒトκ軽鎖定数領域をコードする核酸配列配列番号179ヒトκ軽鎖定常領域を画定するタンパク質配列配列番号180以下の配列は本実施例で説明される各抗体について、実際のまたは熟考された完全長重鎖および軽鎖配列すなわち可変および定常領域配列の双方を含有するを表わす。抗体の適切な分泌のためのシグナル配列もまた、DNA配列の5’末端、またはタンパク質配列のアミノ末端に含まれる。可変領域配列をその他の定常領域配列にライゲートして、活性完全長IgG重鎖および軽鎖を生成し得ることも本明細書で熟考された。完全長キメラ24C05重鎖マウス重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号181完全長キメラ24C05重鎖マウス重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号182完全長キメラ24C05軽鎖マウスκ鎖可変領域およびヒトκ定常領域をコードする核酸配列配列番号183完全長キメラ24C05軽鎖マウスκ鎖可変領域およびヒトκ定常領域を画定するタンパク質配列配列番号184完全長ヒト化sh24C05Hv3-7重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号185完全長ヒト化Sh24C05Hv3-7重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG定常領域を画定するタンパク質配列配列番号186完全長ヒト化Sh24C05Hv3-11重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号187完全長ヒト化Sh24C05Hv3-11重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号188完全長ヒト化Sh24C05Hv3-11N62SIgG1重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号189完全長ヒト化Sh24C05Hv3-11N62SIgG1重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号190完全長ヒト化Sh24C05Hv3-11N62SIgG2重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG2定常領域をコードする核酸配列配列番号191完全長ヒト化Sh24C05Hv3-11N62SIgG2重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG2定常領域を画定するタンパク質配列配列番号192完全長ヒト化Sh24C05Hv3-21重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号193完全長ヒト化Sh24C05Hv3-21重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号194完全長ヒト化Sh24C05Hv3-23重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号195完全長ヒト化Sh24C05Hv3-23重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号196完全長ヒト化Sh24C05Hv3-30重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号197完全長ヒト化Sh24C05Hv3-30重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号198完全長ヒト化Hu24C05HvA重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域をコードする核酸配列配列番号199完全長ヒト化Hu24C05HvA重鎖ヒト化重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域を画定するタンパク質配列配列番号200完全長ヒト化Sh24C05Kv1-9軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号201完全長ヒト化Sh24C05Kv1-9軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号202完全長ヒト化Sh24C05Kv1-16軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号203完全長ヒト化Sh24C05Kv1-16軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号204完全長ヒト化Sh24C05Kv1-17軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号205完全長ヒト化Sh24C05Kv1-17軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号206完全長ヒト化sh24C05Kv1-33軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号207完全長ヒト化Sh24C05Kv1-33軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号208完全長ヒト化Sh24C05Kv1-39軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号209完全長ヒト化Sh24C05Kv1-39軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号210完全長ヒト化Hu24C05KvA軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域をコードする核酸配列配列番号211完全長ヒト化Hu24C05KvA軽鎖ヒト化κ鎖可変領域およびヒト定常領域を画定するタンパク質配列配列番号212便宜上、表13は、本実施例で考察される各配列の配列番号を示す、一致度チャートを提供する。下の表14は、キメラ免疫グロブリン重および軽鎖を含有する抗体と、完全長ヒト化免疫グロブリン重および軽鎖の可能な各組み合わせを示す。完全長キメラ重鎖および軽鎖を含有する抗体コンストラクトを下に示す:キメラ24C05=完全長キメラ24C05重鎖マウス可変領域およびヒトIgG1定常領域配列番号182プラス完全長キメラ24C05軽鎖マウス可変領域およびヒトκ定常領域配列番号184ヒト化可変領域を含有する完全長免疫グロブリン重鎖および軽鎖を含有する可能な抗体コンストラクトの内4つを下に示す:Sh24C05-25N62SIgG1=ヒト化Sh24C05Hv3-11N62S重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域配列番号190プラスSh24C05Kv1-16軽鎖可変領域およびヒトκ定常領域配列番号204Sh24C05-25N62SIgG2=ヒト化Sh24C05Hv3-11N62S重鎖可変領域およびヒトIgG2定常領域配列番号192プラスSh24C05Kv1-16軽鎖可変領域およびヒトκ定常領域配列番号204Sh24C05-31N62SIgG1=ヒト化Sh24C05Hv3-11N62S重鎖可変領域およびヒトIgG1定常領域配列番号190プラスSh24C05Kv1-17軽鎖可変領域およびヒトκ定常領域配列番号206Sh24C05-31N62SIgG2=ヒト化Sh24C05Hv3-11N62S重鎖可変領域およびヒトIgG2定常領域配列番号192プラスSh24C05Kv1-17軽鎖可変領域およびヒトκ定常領域配列番号206B.ヒト化およびキメラ抗ErbB3モノクローナル抗体の結合親和性Biacore登録商標T100Biacore装置を使用して、表面プラズモン共鳴によって、実施例12で作成されたモノクローナル抗体の組換えヒトErbB3単量体タンパク質切断rhErbB3に対する、結合親和性および相互作用動態を測定した。単量体ErbB3は、rhErbB3-FcRDSystems、カタログ番号348-RBのプロテアーゼ切断によって得られた。標準カップリングプロトコルを使用して、供給業者の使用説明書に従って、アミンカップリングBiacore,カタログ番号BR-1000-50によって、ヤギ抗ヒトIgGFcJacksonImmunoResearch、カタログ番号109-005-098をカルボキシメチル化デキストランCM4センサーチップBiacore、カタログ番号BR-1005-34上に固定化した。0.05の界面活性剤P20Biacore、カタログ番号BR-1000-54を含有するPBSInvitrogen、カタログ番号14040-133を泳動用緩衝液として使用して、37°Cで分析を実施した。流速60μl/分で、個々のフローセル内において抗体を捕捉した。各抗体毎に注入時間を変えて、R30~60RUのRmaxを得た。緩衝液、または泳動用緩衝液で希釈した切断rhErbB3を参照表面抗体捕捉なしおよび活性表面試験抗体上に60μl/分で300秒間逐次注入した。解離相を1200秒までモニターした。次にpH2.25のグリシングリシンpH2.0Biacore、カタログ番号BR-1003-56およびpH2.5Biacore、カタログ番号BR-1003-55から作られたを2回にわたり60μl/分で60秒間注入して、表面を再生した。最初のスクリーニングのために、典型的に5.0および1.25nMである1または2つの濃度のみで、切断rhErbB3を試験した結果を表15に要約する。BIAevaluationソフトウェアBiacoreの動態学機能を使用して、二重参照減法で動態学パラメータを測定した。各抗体の動態学パラメータ、ka結合速度定数、kd解離速度定数、およびKD平衡解離定数を測定した。分泌抗体を含有する細胞培養液上清を使用して、最初のモノクローナル抗体をスクリーニングし、37°Cにおける切断rhErbB3に対するモノクローナル抗体の動力学値を表15に要約する。表15の結果は、ヒト化24C05抗体のキメラおよびそれぞれが、迅速な結合速度ka、非常に緩慢な解離速度kd、および非常に高い親和性KDを有することを実証する.特に抗体は、約87pMから約1nMの範囲にわたる親和性を有する。特定の精製モノクローナル抗体の結合親和性および動態もまた測定した。特定の抗体をさらに特性解析するために、0.3125nM~5.0nM2倍連続希釈濃度の切断rhErbB3を使用して、上述の表面プラズモン共鳴実験を実施した。特定の精製モノクローナル抗体すなわちSh24C05-1、Sh24C05-25、Sh24C05-25N62SIgG1、Sh24C05-25N62SIgG2、Sh24C05-31、Sh24C05-31N62SIgG1、およびSh24C05-31N62SIgG2の切断rhErbB3に対する37°Cにおける動力学値を表16に要約する。表16の結果は、37Cで試験すると、精製抗体が、約63pM~約160pMの範囲にわたる親和性を有することを実証する。C.その他の抗ErbB3抗体の比較公表された情報を使用して、ヒトErbB3の機能を阻害する3種のヒト抗体を構築し発現させた。Ab6と称される1つの抗体は、Schoeberlらに付与された米国特許第2009/0291085号明細書MerrimackPharmaceuticals,Inc.の開示に基づいて、ヒトIgG2/λ抗体として構築された..U1-53およびU1-59と称される2種の追加的抗体は、Rotheらに付与された米国特許第2008/0124345号明細書U3PharmaAGandAmgen,Inc.の開示に基づいて、ヒトIgG1/κ抗体として構築された。上述のように切断rhErbB3モノマーを使用して、Ab6、U1-53、およびU1-59抗体の動態学パラメータをBiacoreによって37°Cで測定したセクションB.ヒト化およびキメラ抗ErbB3モノクローナル抗体の結合親和性を参照されたい。各抗体について、Biacoreセンサーグラム図17および動力学値表17の双方を示す。表17の結果は、Sh24C05-31N62SIgG176pMの全体的平衡解離定数KDが、Ab6およびU1-59抗体のKDそれぞれ230pMp<0.01および530pMp<0.0005よりも低いすなわち親和性がより高いことを実証する。U1-53の平衡解離定数KDは、曲線適合が不良であったため測定できなかったU1-53の迅速なKoff速度を示す図17参照。表16および17を比較することで、Ab6、U1-53、およびU1-59抗体のKDをその他のヒト化24C05変種ともまた比較し得る。したがって本明細書で開示されるように、Sh24C05-31N62SIgG1の親和性は、Ab6およびU1-59の親和性よりも顕著に高い。実施例13-ヒト化抗ErbB3抗体の中和活性本実施例では、ECLアッセイによって、rhErbB3とNRG1-β1の結合を阻害する能力について、実施例12で作成されたヒト化抗体を試験した。50μlのPBSInvitrogen、カタログ番号14040-133中の0.5μg/mLrhErbB3/FcRDsystems、カタログ番号348-RBによって、マルチアレイ96ウェル標準結合プレートMesoScaleDiscovery、カタログ番号L15XA-3を室温で撹拌せずに1時間被覆した。次にプレートをPBS0.1Tween20SigmaP5927で3回洗浄し、200μlの100熱不活性化ウマ血清GIBCO、カタログ番号26050-088により、室温で1.5時間ブロックした。プレートをPBS0.1Tweenで3回洗浄した後、室温でさらに1時間撹拌しながら、25μlの抗体希釈液をプレートに添加した。リガンドNRG1-β3RDSystems、カタログ番号377-HB、26kDaを最終濃度0.25μg/mlでウェルに添加した。プレートをPBS0.1Tweenで3回洗浄し、SULTO-TAGストレプトアビジンMesoScaleDiscovery、カタログ番号R32AD-5と共に1時間プレインキュベートされた、25μlの1μg/mL抗ヒトNRG1-β1ビオチン化抗体RDSystems、カタログ番号BAF377と共に、室温で撹拌しながら1時間インキュベートした。次にプレートをPBS0.1Tweenで3回洗浄し、Sector登録商標Imager2400MesoScaleDiscovery装置上でプレートを分析する前に、150μlの1×読み取り緩衝液MesoScaleDiscovery、カタログ番号R92TC-1を各ウェルに添加した。NRG1-β1とrhErbB3の相互作用は、抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2によって阻害された図18A。Schoeberletal.前出に記載されるAb6IgG2抗体、およびRotheetal.前出に記載されるU1-53およびU1-59抗体もまた、ErbB3とNRG1-β1の結合を阻害する能力について試験した。図18Bに示すように、Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59の各抗体は、ErbB3とNRG1-β1の結合を阻害した。ヒト化24C05抗体すなわちSh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2による、NRG1-β1とhErbB3の結合中和について、IC50値を計算し表18に要約する。抗ErbB3ヒト抗体Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59のNRG1-β1中和活性に関するIC50値もまた、表18に示される。表18の結果は、抗体Sh24C05-25N62S-IgG1,Sh24C05-25N62S-IgG2,Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2が、NRG1-β1とrhErbB3の結合を効率的に中和したことを実証する。抗ErbB3ヒト抗体Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59もまた中和活性を示すが、ヒト化Sh24C05抗体すなわちSh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2は、U1-59またはAb6IgG2よりも優れた中和能力を有した。実施例14-抗増殖性活性本実施例では、ヒトHer2およびErbB3の双方を発現するように遺伝子改変されたBaF/3細胞系において、細胞のNRG1-β1依存性増殖を阻害する能力について、実施例12で作成されたヒト化抗体を試験した。WEHI馴化培地不在下であるがNRG1-β1100ng/ml存在下で、実施例6に記載されるHer2およびErbB3受容体を発現するBaF/3細胞を抗ErbB3抗体で処理した。アッセイは、NRG1-β1100ng/mlおよび様々な濃度最終容積100μl中に0.018~5000ng/mlの抗体の存在下、96ウェルプレート5,000細胞/ウェル内で実施した。NRG1-β1刺激の3~4日間後に、MTT3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドアッセイを実施した。結果は、Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2が、NRG誘導性Her2/ErbB3-BaF/3細胞増殖を用量依存様式で阻害することを実証する図19A。ヒト化24C05抗体すなわちSh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、Sh24C05-31N62S-IgG2による、NRG1-β1依存性Her2/ErbB3-BaF/3細胞系増殖阻害について、IC50値を計算し表19に要約する。表19の結果は、抗体Sh24C05-25N62S-IgG1,Sh24C05-25N62S-IgG2,Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2が、Her2/ErbB3を発現するBaF/3細胞のNRG1-β1-誘導性増殖を強力に阻害したことを実証する。抗ErbB3Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59抗体の阻害活性は、NRG1-β1依存性Her2/ErbB3-BaF/3細胞増殖アッセイ中でもまた試験した。図19Bに示すように、結果は、Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59抗体が、NRG誘導性Her2/ErbB3-BaF/3細胞増殖を用量依存様式で阻害することを実証した。抗体Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59によるNRG1-β1依存性Her2/ErbB3-BaF/3細胞増殖の阻害データを表19に要約する。表19の結果は、抗体Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59が、Her2/ErbB3-BaF/3細胞のNRG1-β1-誘導性増殖を阻害することを実証する。NRG1-β1依存性Her2/ErbB3-BaF/3細胞増殖アッセイにおける、試験された抗ErbB3抗体の阻害活性の比較は、ヒト化Sh24C05抗体の阻害活性が、Ab6IgG2、U1-53、およびU1-59抗体の阻害活性よりも優れていることを示す例えばU1-53では0.8128nMであったのに対して、Sh24C05-31N62S-IgG1のIC50は0.1245nMであった。実施例15-SKBR-3細胞中における下流シグナル伝達の阻害本実施例は、指数関数的に増殖するSKBR-3細胞中で全ErbB3を分解し、ErbB3のリン酸化を阻害する能力に関する、実施例12で作成されたヒト化抗体の特性解析について述べる。乳癌SKBR-3細胞は、ATCCの推奨に従って維持された。全血清条件で維持された細胞を40μg/mlの抗ErbB3抗体すなわちSh24C05-25N62S-IgG1,Sh24C05-25N62S-IgG2,Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2で、1、2、4または6時間処理した。溶解産物は、RDSystemsからのTotal-ErbB3およびホスホ-ErbB3キットのどちらかによるELISAそれぞれカタログ番号DYC234およびカタログ番号DYC1769を用いて分析した。結果はまた、抗ErbB3抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2が、指数関数的に増殖するSKBR-3細胞中のErbB3リン酸化の少なくとも50を阻害したことも実証する図20。結果はまた、抗ErbB3抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、およびSh24C05-31N62S-IgG2が、指数関数的に増殖するSKBR-3細胞中に存在する全ErbB3受容体の少なくとも50を分解したことも実証する図21。実施例16-BxPC3腫瘍異種移植成長の阻害実施例12で作成されたヒト化モノクローナル抗体が、膵臓BxPC3異種移植モデル中で、腫瘍成長を阻害する能力を試験した。10ウシ胎仔血清を含有するRMPI培地を使用して、ヒト膵臓BxPC3細胞を5CO2含有雰囲気内において37°Cで培養した。8週齢のメスCB.17SCIDマウスTaconicLabsに、マウスあたり10x106細胞で、50マトリゲルBDBiosciences、カタログ番号356237中のBxPC3細胞を側腹部に皮下接種した。ノギスを使用して、腫瘍測定を週に2回実施した。式:幅×幅×長さ/2を使用して、腫瘍体積を計算した。腫瘍がおよそ200mm3に達すると、それぞれ10匹ずつの8群にマウスを無作為化した。1つの群にはPBSを投与し、別の群にはhuIgG対照を投与し、および別の群にはmuIgG対照を投与した。残る5群にはそれぞれ抗体すなわちマウス24C05、Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1またはSh24C05-31N62S-IgG2の1つを投与した。全ての抗体は、腹腔内注射によって2mg/kg体重で7週間にわたり週2回投与した。腫瘍体積およびマウス体重を週に2回記録した。腫瘍成長阻害をANOVAを使用して分析し、PBS対照と比較した阻害率として表す。試験されたヒト化抗体は、生体内で活性であった。全ての4種のヒト化抗ErbB3抗体は、BxPC3モデル中において2mg/kgで投与すると、実験の28日目に、75~80の腫瘍成長阻害p<0.001すなわちSh24C05-25N62S-IgG1は75;Sh24C05-25N62S-IgG2は76;Sh24C05-31N62S-IgG1は79;およびSh24C05-31N62S-IgG2は80の範囲にわたる同様の有効性を有した図22。マウス抗体は、この実験で65の腫瘍成長阻害p<0.05を実証する。これらの結果は、本モデル中における、4種のヒト化抗体の同様の効力および活性を示唆する。ヒト化モノクローナル抗体U1-53、U1-59、およびAb6IgG2が、BxPC3異種移植モデル中で腫瘍成長を阻害する能力もまた試験した。上述のプロトコルを使用して、CB.17SCIDマウスにBxPC3腫瘍を生じさせた。腫瘍がおよそ200mm3に達すると、それぞれ10匹ずつの11群にマウスを無作為化した。1つの群にはPBSを投与し、別の群にはhuIgG対照を投与した。他の9群には、それぞれヒト化抗体すなわちSh24C05-31N62S-IgG1、U1-53、U1-59、またはAb6IgG2の1つを投与した。抗体は、腹腔内注射によって0.5mg/kg、1mg/kg、または5mg/kg体重のいずれかで、7週間にわたり週2回投与した。腫瘍体積およびマウス体重を週に2回記録した。腫瘍成長阻害をANOVAを使用して分析し、PBS対照と比較した阻害率として表す。ヒト化抗体すなわちSh24C05-31N62S-IgG1、U1-59、またはAb6IgG2の内1つによる処理に続いて、29日目に測定された腫瘍成長阻害データを表20に示す。結果は、Sh24C05-31N62S-IgG1が、BxPC3膵臓異種移植モデル中において、5mg/kgの用量で、29日目に最大腫瘍成長阻害76.5、p<0.001を示すことを実証する。U1-59およびAb6IgG2抗体は、BxPC3モデル中において、5mg/kgの用量で、それぞれおよそ60および41P<0.001の腫瘍成長阻害を実証した。結果はまた、Sh24C05-31N62S-IgG1が、BxPC3膵臓異種移植モデル中において、0.5mg/kg63.3,p<0.001の用量、および1mg/kg75.0,p<0.001の用量で、29日目に最大腫瘍成長阻害を示すことも実証する。U1-59およびAB6IgG2抗体は、BxPC3モデル中において、0.5mg/kgの用量で、それぞれおよそ33p<0.01および31p<0.05の腫瘍成長阻害を実証した。U1-59およびAB6IgG2抗体は、BxPC3モデル中において、1.0mg/kgの用量で、それぞれおよそ53p<0.001および2有意でないの腫瘍成長阻害を実証した。実施例17-Calu-3腫瘍異種移植成長の阻害実施例12で作成されたヒト化モノクローナル抗体が、Calu-3非小細胞肺癌異種移植モデル中で腫瘍成長を阻害する能力を試験した。実施例12に記載されるヒト化モノクローナル抗体U1-59およびAb6IgG2が、腫瘍成長を阻害する能力もまた同一モデル中で試験した。10ウシ胎仔血清を含有するEMEM培地を使用して、ヒト非小細胞肺癌Calu-3細胞を5CO2含有雰囲気内37°Cで培養した。8週齢のメスNCRヌードマウスTaconicLabsに、マウスあたり10x106細胞で、50マトリゲルBDBiosciences、カタログ番号356237中のCalu-3細胞を側腹部の皮下に接種した。ノギスを使用して、腫瘍測定を週に2回実施した。式:幅×幅×長さ/2を使用して、腫瘍体積を計算した。腫瘍がおよそ200mm3に達すると、それぞれ10匹ずつの11群にマウスを無作為化した。1つの群にはPBSを投与し、別の群にはmuIgG対照を投与した。他の9群には、それぞれヒト化抗体すなわちSh24C05-31N62S-IgG1、U1-59、またはAb6IgG2の1つを腹腔内注射によって5mg/kg、10mg/kgまたは20mg/kg体重のいずれかの用量で、4週間にわたり週2回投与した。腫瘍体積およびマウス体重を週に2回記録した。腫瘍成長阻害をANOVAを使用して分析し、PBS対照と比較した阻害率として表す。ヒト化抗体すなわちSh24C05-31N62S-IgG1、U1-59、またはAb6IgG2の内の1つによる処理に続いて、26日目に測定された腫瘍成長阻害データを表21に示す。Calu-3非小細胞肺癌異種移植モデルを使用した結果は、Sh24C05-31N62S-IgG1が、全ての用量すなわち5mg/kg、10mg/kg、および20mg/kg体重試験において、26日目に最大腫瘍成長阻害を示すことを実証する。例えば10mg/kgの用量では、Sh24C05-31N62S-IgG1は、Ab6IgG236、NSまたはU1-5957、P<0.001との比較で、26日目に最大腫瘍成長阻害62,P<0.001を示した。20mg/kgの用量でも、Sh24C05-31N62S-IgG1はまた、Ab6IgG248,P<0.001またはU1-5958,P<0.001との比較で、26日目に最大腫瘍成長阻害69,P<0.001を示した。実施例18-MDA-MB-453腫瘍異種移植成長の阻害実施例12で作成されたヒト化モノクローナル抗体が、HER2陽性breastモデルであるMDA-MB-453breast異種移植モデル中で、腫瘍成長を阻害する能力を試験した。実施例12に記載されるヒト化モノクローナル抗体U1-59およびAb6IgG2が、腫瘍成長を阻害する能力もまた同一モデル中で試験した。10ウシ胎仔血清を含有するLeibovitzATCC培地カタログ番号30-2008を使用して、ヒトBreastMDA-MB-453細胞を0CO2含有雰囲気内37°Cで培養した。8週齢のメスNODSCIDマウスTaconicLabsに、マウスあたり20x106細胞で、50マトリゲルBDBiosciences、カタログ番号356237中のMDA-MB-453細胞を側腹部の皮下に接種した。ノギスを使用して、腫瘍測定を週に2回実施した。式:幅x幅x長さ/2を使用して、腫瘍体積を計算した。腫瘍がおよそ200mm3に達すると、それぞれ10匹ずつの7群にマウスを無作為化した。1つの群にはPBSを投与し、別の群にはhuIgG対照を投与した。他の9群には、それぞれヒト化抗体すなわちSh24C05-31N62S-IgG1、U1-59、またはAb6IgG2の1つを投与した。Sh24C05-31N62S-IgG1は、腹腔内注射によって5mg/kg、10mg/kg、または20mg/kg体重のいずれかで、10週間を超えて週2回投与し;U1-59、またはAb6は、同一頻度で10mg/kgで投与した。腫瘍体積およびマウス体重を週に2回記録した。腫瘍成長阻害をANOVAを使用して分析し、PBS対照と比較した阻害率として表す。ヒト化抗体すなわちSh24C05-31N62S-IgG1、U1-59、またはAb6IgG2の内の1つによる処理に続いて、71日目に測定された腫瘍成長阻害データを表22に示す。MDA-MB-453異種移植モデルを使用した結果は、Sh24C05-31N62S-IgG1が、全ての用量すなわち5mg/kg、10mg/kg、および20mg/kg体重試験において、71日目に最大腫瘍成長阻害を示すことを実証する。結果はまた、10mg/kgの用量では、Sh24C05-31N62S-IgG1が、Ab6IgG262,P<0.001との比較で、71日目により大きな腫瘍成長阻害84、P<0.001を示すことも実証する。Sh24C05-31N62S-IgG1は、同一用量でU1-59と同等の腫瘍成長阻害を示した。参照による援用本明細書で言及される各特許文献および科学論文の開示全体は、あらゆる目的のために参照によって援用する。均等物本発明は、その趣旨または本質的特性を逸脱することなく、その他の特定形態で具現化されてもよい。したがって前述の実施形態は、本明細書に記載される本発明を限定せず、全ての点で例証的と見なされる。したがって本発明の範囲は、前述の説明ではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の均等物の意義と範囲内に入る全ての変更は、その中に包含されることが意図される。"