"天然型可溶性プロレニン受容体と結合するモノクローナル抗体。天然型可溶性プロレニン受容体と免疫沈降させることができる、請求項1に記載の抗体。カイコ由来の組換ヒトプロレニン受容体を抗原として用いて得られたことを特徴とする、請求項1又は請求項2に記載の抗体。93A1Bモノクローナル抗体である、請求項1に記載の抗体。請求項1~請求項4のいずれか1項に記載の抗体を含有する妊娠高血圧症の発症を予測するための薬剤。請求項1~請求項4のいずれか1項に記載の抗体を含有する天然型可溶性プロレニン受容体測定キット。ヒト体液中の可溶性プロレニン受容体を測定するための請求項5に記載のキット。125~8000pg/mLR2=0.99の範囲の可溶性プロレニン受容体又はPRRを測定するための請求項5又は請求項6に記載のキット。更に、最低検出濃度限界が24pg/mLである、請求項5~請求項7のいずれか1項に記載のキット。被験者由来のヒト体液を請求項1~請求項4のいずれか1項に記載の抗体と接触させるステップ;及び、該抗体と結合した天然型可溶性プロレニン受容体を検出又は定量するステップ、を備える、天然型可溶性プロレニン受容体の測定方法。妊娠高血圧症の発症を予測するための情報を得る方法、又は妊娠高血圧症の発症を予測する方法であって:a妊娠初期の患者由来の体液中の可溶性プロレニン受容体を検出又は定量すること;及び、b測定された可溶性プロレニン受容体の存在又はレベルと該患者の妊娠中期及び/又は後期における妊娠高血圧症発症との関連付けをすることを含む方法。可溶性プロレニン受容体のレベルが高い場合、該患者が妊娠中期及び/又は後期に妊娠高血圧症を発症する可能性が高いことを示す、請求項11に記載の方法。妊娠高血圧症の発症を予測するための情報を得る方法又は妊娠高血圧症の発症a該患者由来の試料を調整するステップ;b少なくとも1つの可溶性プロレニン受容体に特異的に結合する抗体に該試料を接触させるステップ、c該タンパク質の該抗体への結合を検出して試料中の可溶性プロレニン受容体のを検出又は定量するステップ;d可溶性プロレニン受容体のレベルから妊娠高血圧症の発症を予測するステップ、ここで、可溶性プロレニン受容体レベルが高いことが、被検患者が妊娠高血圧症を発症しやすいことを示す。患者由来の体液が、血液、血漿、血清、又は尿である、請求項11~請求項13のいずれか1項に記載の方法。請求項6~請求項9のいずれか1項に記載のキットを用いて可溶性プロレニン受容体を定量することを特徴とする、請求項11~請求項14のいずれか1項に記載の方法。本発明のモノクローナル抗体、当該抗体を含有する妊娠高血圧症の発症を予測するための薬剤、及び当該抗体を用いた測定キットは、生体中のsPRRの測定が可能であることから、sPRRと疾患との関係を解明する重要な測定手段を提供するものである。また、本発明の妊娠高血圧症予測方法は、妊娠初期のsPRR濃度から、妊娠中期と妊娠後期の血圧を予測できることから、妊婦の健康管理等に有用である。抗体本発明の抗体は、以下の方法により得ることができる。まず、本発明の抗体の作製に使用する免疫原は、PRRタンパク質の全部、又はその一部を有するポリペプチド例えば、配列番号3又は4に記載のペプチドをコードするDNAを含む発現ベクター例えば、pGEX大腸菌用、pcDNA3.1動物細胞発現用等を大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞等好ましくは、カイコ細胞に形質転換し、形質転換した大腸菌等の宿主微生物培養細胞を適切な培地例えば、LB培地等で培養して発現させることにより得ることができる。また、当該配列を有するペプチドを化学合成したものを用いることも可能である。上記抗原を用いた動物の免疫は、上記抗原をリン酸ナトリウム緩衝液PBSに溶解し、必要に応じて免疫賦活剤例えば、鉱油若しくはアルミニウム沈殿物と加熱死菌若しくはリポ多糖体、フロインドの完全アジュバント、又は、フロインドの不完全アジュバント等と共に、非ヒト哺乳動物例えば、ウサギ、ラット、マウス等又は鳥類に免疫することにより行われる。動物への免疫原の投与は、例えば、皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射、筋肉内注射又は足蹠注射により行うことができる。使用する免疫原の量は、抗体を産生できる量であれば特に限定は無いが、好ましくは、0.1~1000μgであり、より好ましくは、1~500μgであり、より更に好ましくは、10~100μgである。免疫は、1回又は適当な間隔をあけて数回行うことができる。好ましくは、1~5週間に1回の免疫を複数回好ましくは、合計2~5回行うことができる。ポリクローナル抗体は、十分な抗体価を示す動物の血清から精製することにより得ることができる。モノクローナル抗体の作製は、上記方法により免疫した免疫感作動物の脾臓等から得た抗体産生細胞と、骨髄腫系細胞ミエローマ細胞を融合することにより得られるハイブリドーマを培養することにより得ることができる。当該融合方法としては、例えば、ミルステインらの方法Galfre,G.Milstein,C.,MethodsEnzymol.73:3-46,1981を挙げることができる。または、本発明の抗体を産生するハイブリドーマは、独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター茨城県つくば市東1-1-1つくばセンター中央第6に寄託されたハイブリドーマHumanpRRHybridoma93A1B寄託微生物の受領日2011年11月17日、受領番号はFERMAP-22200から入手することができる。抗体は、ハイブリドーマをinvitroで培養し、培養液を精製することによって得ることができる。ヒト型キメラ抗体作製本発明の抗体がヒト型キメラ抗体の場合、sPRRと結合する非ヒト動物モノクローナル抗体例えば、93A1Bモノクローナル抗体のVH及びVLをコードするDNAを調製し、これをヒト免疫グロブリンの定常領域cDNAと結合して発現ベクターに組み込み、適当な宿主細胞に当該ベクターを導入して発現させることにより得ることができるMorrison,S.L.ら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81,6851-6855,1984。受領番号FERMAP-22200のハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体のH鎖とL鎖の相補認識領域CDRを有する抗体ヒト化抗体の作製本発明の抗体がヒト化抗体の場合は、sPRRと結合する非ヒト動物モノクローナル抗体例えば、93A1Bモノクローナル抗体のVH及びVLのCDRをコードするアミノ酸配列をヒト抗体のVH及びVLのFRに移植したV領域をコードするDNAを構築し、構築したDNAをヒト由来免疫グロブリンの定常領域cDNAと結合して発現ベクターに組み込み、適当な宿主細胞に当該ベクターを導入して発現させることにより得ることができるL.Rieohmannら,Nature,332,323,1988:Kettleborough,C.A.ら,ProteinEng.,4,773-783,1991;ClarkM.,Immunol.Today.,21,397-402,2000参照。非ヒト動物モノクローナル抗体のCDRは、上述の方法によって得られた非ヒト動物モノクローナル抗体のVH及びVLをコードするDNA配列から予測されるアミノ酸配列と、既知の抗体のVH及びVLの全アミノ酸配列とを比較して得ることができる。既知の抗体のアミノ酸配列は、例えば、プロテインデータバンク等のデータベースに登録されている抗体のアミノ酸配列より得ることができる。また、ヒト化抗体のFRとしては、移植後の抗体が本発明の効果を奏するものであれば特に限定は無いが、好ましくは、ヒト化抗体の可変領域以下、V領域というがCDRが由来する非ヒト動物モノクローナル抗体のV領域と類似の立体構造となるヒト抗体のFR、又は、使用する非ヒト動物モノクローナル抗体のFRのアミノ酸配列と相同性が高いヒト抗体FRである。使用するヒト化抗体のV領域をコードするDNA配列は、非ヒト動物モノクローナル抗体のCDRのアミノ酸配列とヒト抗体のFRのアミノ酸配列を結合したアミノ酸配列に対応するDNA配列として設計する。ヒト化抗体のV領域をコードするDNAは、設計したDNA配列を基に、当業者周知の方法によって作製することができる。ヒト抗体ヒト抗体は、例えば、ヒト抗体ファージライブラリー又はヒト抗体産生トランスジェニックマウスを利用することにより得ることができる富塚ら,NatureGenet.,15,146-1561997。ヒト抗体ファージライブラリーを利用する場合、例えば、SPRR又は本発明の抗体が認識するエピトープ配列を有するペプチドを固相に固定化し、ファージ抗体ライブラリーを反応させて、非結合のファージを洗浄除去した後、結合したファージを回収することにより、所望のクローンを得ることができるパンニング。また、得られたファージを増幅させ、増幅させたライブラリーについて更にパニングを繰り返し行うことにより、得られたクローンの精度を上げることができる。得られたクローンのVH遺伝子及びVL遺伝子を解析することにより、これらの遺伝子配列を有する完全なヒト抗体を作製することもできる。ヒト抗体産生トランスジェニックマウスは、内因性免疫グロブリンIg遺伝子をノックアウトしたマウスにヒト抗体のIg遺伝子を導入したマウスである。ヒト抗体産生トランスジェニックマウスは、例えば、以下の方法により得ることができる。ヒト-マウスハイブリッド細胞を48時間コルセミド紡錘糸形成阻害剤処理することにより、1から数本の染色体が核膜に包まれた構造体である、ミクロセルを形成する。サイトカラシンB存在下で単離されたミクロセルを染色体受容細胞マウスES細胞とポリエチレングリコールにより融合し、ミクロセルハイブリッドES細胞を作製し、マウス胚へ注入する。ヒト抗体産生トランスジェニックマウスを免疫動物として、上述の抗SPRR抗体作製方法に準じて抗原好ましくは、本発明の抗体が認識するエピトープ配列を有するペプチドを免疫することにより、抗sPRRヒト抗体を得ることができる。抗体断片の作製Fab’2断片分子量約10万の抗原結合活性を有する抗体断片は、本発明のIgG抗体例えば、93A1Bモノクローナル抗体をペプシンで処理することにより、H鎖の234番目のアミノ酸残基で切断して得ることができる。Fab’断片は、上述の方法により得られたFab’2をジチオスレイトール処理して得ることができる。また、本発明のFab’断片は、本発明の抗体のFab’をコードするDNAから得ることができる。Fab断片H鎖のN末端側の約半分の領域とL鎖の全領域がジスルフィド結合により結合された分子量約5万の抗原結合活性を有する抗体断片は、本発明の抗体をパパインで処理することにより、H鎖の224番目のアミノ酸残基で切断して得ることができる。また、本発明のFab断片は、本発明の抗体のFabをコードするDNAから得ることができる。scFvは、本発明の抗体のVH及びVLをコードするcDNAの間にリンカー配列をコードするDNAを挿入して、scFvをコードするDNAを構築することにより得ることができる。リンカーの長さは、VHとVLが会合することができる長さであれば特に限定は無いが、好ましくは10~20残基であり、より好ましくは15残基である。また、リンカーの配列は、VHとVLの二つのドメインのポリペプチド鎖の折りたたみを阻害しないものであれば特に限定は無いが、好ましくは、グリシン及び/又はセリンからなるリンカーであり、より好ましくは、GGGGSG:グリシン、S:セリン又はその繰り返し配列である。dsFvは、VH及びVL中のそれぞれ1アミノ酸残基をシステイン残基に置換し、当該システイン残基間をジスルフィド結合により結合させることにより得ることができる。Diabodyは、上述のscFvをコードするDNAにおいて、リンカーのアミノ酸配列が8残基以下好ましくは5残基となるように構築することにより得ることができる。バイスペシフィックなDiabodyは、異なる2種類のscFvのVH及びVLのDNAを組み合わせてscFvを作製することにより得ることができる。本発明のCDRを含むペプチドは、本発明の抗体のVH又はVLのCDRのアミノ酸配列を有するペプチドとして設計することにより得ることができる。標識抗体又はその断片への標識の結合は当分野において一般的な方法により行うことができる。例えば、タンパク質又はペプチドを蛍光標識する場合、タンパク質又はペプチドをリン酸緩衝液で洗浄した後、DMSO、緩衝液等で調整した色素を加え、混合した後室温で10分間静置することにより結合させることができる。また、市販の標識キットとして、ビオチン標識キットBiotinLabelingKit-NH2、BiotinLabelingKit-SH:株式会社同仁化学研究所、アルカリフォスファターゼ標識用キットAlkalinePhosphataseLabelingKit-NH2、AlkalinePhosphataseLabelingKit-SH:株式会社同仁化学研究所、ペルオキシダーゼ標識キットPeroxidaseLaberingKit-NH2、PeroxidaseLaberingKit-NH2:株式会社同仁化学研究所、フィコビリプロテイン標識キットAllophycocyaninLabelingKit-NH2、AllophycocyaninLabelingKit-SH、B-PhycoerythrinLabelingKit-NH2、B-PhycoerythrinLabelingKit-SH、R-PhycoerythrinLabelingKit-NH2、R-PhycoerythrinLabelingKit-SH:株式会社同仁化学研究所、蛍光標識キットFluoresceinLabelingKit-NH2、HiLyteFluor登録商標555LabelingKit-NH2、HiLyteFluor登録商標647LabelingKit-NH2:株式会社同仁化学研究所、DyLight547、DyLight647テクノケミカル株式会社、Zenon登録商標AlexaFluor登録商標抗体標識キット、Qdot登録商標抗体標識キットインビトロゲン社、EZ-LabelProteinLabelingKitフナコシ株式会社等を用いて標識することもできる。また、標識した抗体又はその断片の検出は、適宜標識に適した機器を使用することにより行うことができる。キットまた、本発明は、sPRRと特異的に結合する抗体を含有するsPRR測定キットに関する。具体的には、本発明は、sPRRと特異的に結合する第一抗体が固定化した、固相、ハプテン、磁気ビーズ及び不溶性担体からなる群より選択される担体を含むことを特徴とする免疫化学測定のキットに関する。本発明のキットは、上述の方法に従って作製した抗体又は標識化した抗体を用いて、酵素免疫測定法EIA法、簡易EIA法、酵素結合イムノソルベントアッセイ法ELISA法、ラジオイムノアッセイ法RIA法、蛍光免疫測定法FIA法等の標識化免疫測定法;ウェスタンブロッティング法等のイムノブロッティング法;金コロイド凝集法等のイムノクロマト法;イオン交換クロマトグラフィ法、アフィニティクロマトグラフィ法等のクロマトグラフィ法;比濁法TIA法;比ろう法NIA法;比色法;ラテックス凝集法LIA法;粒子計数法CIA法;化学発光測定法CLIA法、CLEIA法;沈降反応法;表面プラズモン共鳴法SPR法;レゾナントミラーディテクター法RMD法;比較干渉法用のキットとして当業者に慣用の技術を用いて製造することができる。例えば、本発明のキットは、抗sPRRモノクローナル抗体固相化プレート、ビオチン標識抗sPRRポリクローナル抗体溶液、ストレプトアビジンPOD溶液、洗浄液、TMB試薬、2MHCl、標準物質sPRRペプチドを備えるキットとして製造することができる。また、別の例として、本発明のキットは、抗sPRRモノクローナル抗体、抗sPRRモノクローナル抗体結合金コロイド、ウサギ免疫グロブリン結合金コロイド、及び、テストプレートを備えるキットとして製造することができる。当該キットにおいて、テストプレートは、検体を挿入する検体採取部、抗sPRRモノクローナル抗体結合金コロイドを含む感作金コロイド塗布部、抗sPRRモノクローナル抗体を含む判定部テストライン、抗ウサギ免疫グロブリンポリクローナル抗体を含む判定部リファレンスライン、吸収剤、及び、メンブレンフィルターを備えていてもよい。妊娠高血圧症発症予測方法一の態様において、本発明は、妊娠高血圧症の発症を予測するための情報を得る方法又は妊娠高血圧症の発症を予測する方法であって:a妊娠初期の患者由来の体液中のsPRRを検出又は定量するステップ;及び、b測定されたsPRRの存在又はレベルと該患者の妊娠中期及び/又は後期における妊娠高血圧症発症との関連付けをするステップを含む方法に関する。本明細書の全体に亘って、妊娠高血圧症の発症を予測するための情報を得る方法は、妊娠高血圧症の発症を予測する方法と読み替えてもよい。本明細書において、妊娠高血圧症の発症とは、妊娠中期及び/又は後期に妊娠高血圧症と診断される症状を示すことを意味する。具体的には、妊娠20週以降に血圧が上昇高血圧、あるいは高血圧の症状と共に尿中にタンパク質蛋白尿が検出されることを意味する。妊娠高血圧症には、妊娠高血圧高血圧のみ、妊娠高血圧腎症高血圧蛋白尿、加重型妊娠高血圧腎症妊娠前からの高血圧妊娠後蛋白尿、子癇高血圧けいれんを含む。本明細書において、妊娠初期とは、妊娠1カ月~4カ月を意味し、妊娠中期とは、妊娠5カ月~7カ月を意味し、妊娠後期とは、妊娠8カ月~10カ月を意味する。本発明の方法において、患者由来の体液中のsPRRの検出又は定量は、抗体分子を用いた公知の方法に基づき行うことができる。このような方法としては、例えば、酵素免疫測定法EIA法、簡易EIA法、酵素結合イムノソルベントアッセイ法ELISA法、ラジオイムノアッセイ法RIA法、蛍光免疫測定法FIA法等の標識化免疫測定法;ウェスタンブロッティング法等のイムノブロッティング法;金コロイド凝集法等のイムノクロマト法;イオン交換クロマトグラフィ法、アフィニティクロマトグラフィ法等のクロマトグラフィ法;比濁法TIA法;比ろう法NIA法;比色法;ラテックス凝集法LIA法;粒子計数法CIA法;化学発光測定法CLIA法、CLEIA法;沈降反応法;表面プラズモン共鳴法SPR法;レゾナントミラーディテクター法RMD法;比較干渉法等を挙げることができる。よって、より具体的には、本発明の妊娠高血圧症の発症を予測するための情報を得る方法は、例えば、以下のステップにより行うことができる:a該患者由来の試料を調整するステップ;b少なくとも1つのsPRRに特異的に結合する抗体に該試料を接触させるステップ、c該タンパク質の該抗体への結合を検出して試料中のsPRRのを検出又は定量するステップ;dsPRRのレベルから妊娠高血圧症の発症を予測するステップ、ここで、sPRRレベルが高いことが、被検患者が妊娠高血圧症を発症しやすいことを示す。本明細書において、少なくとも1つのsPRRに特異的に結合する抗体に該試料を接触させるステップ及び該タンパク質の該抗体への結合を検出して試料中のsPRRのを検出又は定量するステップは、例えば、サンドイッチELISAにより実施する場合には、固相に固定化されたsPRRに特異的に結合する抗体に被験試料を接触させ、洗浄後、sPRRに特異的に結合する標識抗体を添加して非結合抗体を洗浄により除去した後、当該抗体の標識を検出又は定量することにより行うことができる。また、イムノクロマトにより行う場合には、固定化されていないsPRRに特異的に結合する標識抗体に被験試料を接触させた後、当該混合物をsPRRに特異的に結合する別の抗体が特定部位に固定化された担体と接触させ、当該部位における標識抗体の集積を検出又は定量することにより行うことができる。これらの方法においては、予め適宜既知の濃度に段階希釈されたsPRR標準物質を用いて検量線を作成し、検体中の測定値から当該検量線を基にsPRRの濃度を計算して求めてもよい。また、必要に応じて、被験者由来の体液に加えて、妊娠していない対象由来の体液、あるいは妊娠高血圧症を発症しなかった患者由来の体液又は発症しないと信じられている患者由来の体液をネガティブコントロールとして、同様にsPRRの濃度を測定してもよいし、かつ/あるいは、妊娠高血圧症を発症した患者又は発症することが知られている患者由来の体液をポジティブコントロールとして、同様にsPRRの濃度を測定してもよい。検出又は定量は、妊娠高血圧症発症との関連付けがそれぞれsPRRの存在により行われるのか又はレベルにより行われるのかに応じて決定してもよい。例えば、妊娠高血圧症発症との関連付けがsPRRの存在/不存在に依存する場合には、存在/不存在を検出することが望ましい。また、妊娠高血圧症発症との関連付けがsPRRのレベルに依存する場合には、sPRRのレベルを定量することが望ましい。また、妊娠高血圧症発症との関連付けが発症指標としてのsPRRの閾値レベルを超えるか否かに依存する場合には、閾値レベルを超えるsPRR濃度を検出してもよいし、sPRRのレベルを定量した上で閾値レベルを超えるか否かを判定してもよい。なお、本明細書において、レベルとは、数値化される指標を意味し、例えば、濃度あるいはその代わりとして用いることができる指標を意味する。よって、レベルは蛍光等の測定値そのものであってもよいし、濃度に換算された値であってもよい。本明細書において、妊娠高血圧症の発症を予測するために、測定されたsPRRの発現レベルと患者の発症と関係において用いられる関連付けをするという用語は、被験者におけるsPRRの存在又はレベルを、妊娠高血圧症を発症した患者又は発症することが知られている患者ポジティブコントロール、あるいは、妊娠高血圧症を発症しなかった患者又は発症しないと信じられている患者ネガティブコントロールにおけるsPRRのレベルと比較することを意味する。比較対象となる患者におけるsPRRのレベルは、例えば、本発明の開示により、又は、既に発症の有無が判明している患者由来の妊娠初期の試料におけるsPRRのレベルを測定することにより、あるいは、他の指標による評価と組み合わせて評価することにより知ることができる。本発明のsPRRのレベルを利用して、患者が妊娠中期及び/又は後期に妊娠高血圧症を発症する可能性を予測することができる。発症因子と発症との関連付けは、統計的分析により行うことができる。統計学的有意性は、2以上の集団を比較し、信頼区間及び/又はp値を決定することにより決定されるDowdyandWearden,StatisticsforResearch,JohnWielySons,NewYord,1983。本発明の信頼区間は、例えば、90、95、98、99、99.5、99.9又は99.99であってもよい。また、本発明のp値は、例えば、0.1、0.05、0.025、0.02、0.01、0.005、0.001、0.0005、0.0002又は0.0001であってもよい。例えば、本発明の方法により検出されたsPRRは、その存在/不存在により患者の妊娠高血圧症の発症と関連付けることができる。また、別の例として、本発明のsPRRについて発症指標としての閾値レベルを設定し、患者由来の試料におけるsPRRのレベルを、閾値レベルと比較することにより関連付けてもよい。このような閾値レベルは、例えば、感度が、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、又は、98以上となるように設定することができる。また、閾値レベルは、特異度が、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、又は、98以上となるように設定することができる。あるいは、関連付けは、妊娠高血圧症の発症の可能性の高さに関するいくつかのグループ群クラスを設定し、患者由来の試料におけるsPRRのレベルから、当該クラスのうち一つのクラスに分類し、分類されたクラスに属する患者に特異的な妊娠高血圧症に関する既知の性質妊娠高血圧症の発症率等から当該患者の妊娠高血圧症の発症の可能性を予測することにより関連付けてもよい。よって、より具体的には、本発明は以下の方法を含む:妊娠高血圧症の発症を予測するための情報を得る方法又は妊娠高血圧症の発症を予測する方法であって:a妊娠初期の患者由来の体液中のsPRRを定量すること;及び、b測定されたsPRRのレベルと該患者の妊娠中期及び/又は後期における妊娠高血圧症発症との関連付けをすることを含む方法、ここで、前記関連付けは、以下の方法を含む:c定量されたsPRRのレベルから、妊娠高血圧症の発症クラスのうち一つのクラスに分類すること、ここで、当該分類結果は定量されたsPRRのレベルに依存している;及びd分類された当該一つの反応クラスに属する妊娠高血圧症の発症に特異的な既知の性質から当該患者の妊娠高血圧症の発症を予測すること。本明細書において、妊娠高血圧症の発症クラスのうち一つのクラスに分類するとは、被験患者由来の試料におけるsPRRのレベルに応じて当該被験患者をグループ分けすることを意味する。当該グループ分けは、絶対的又は相対的な指標により振り分けることができる。例えば、対象患者のsPRRの定量値から、当該患者を予め決められたsPRRの定量値を示すグループに振り分けることにより行ってもよいし、又は、対象患者を含む不特定の患者群におけるsPRRのレベルを定量した上で、相対的な定量レベルの差から、患者を2以上のグループに分けてもよい。また、クラス分けは、妊娠していない対象におけるsPRRのレベルとの差の大小を指標として行ってもよい。好ましくは、比較した場合にsPRRの定量値が多いレベルが高いほど妊娠高血圧症の発症の可能性が高いクラスに分類される。発症予測の判定は、それにより患者の状態の経過又は転帰を予測する方法を意味し、状態の経過又は転帰を100の正確さで予測可能であることを意味するものではない。発症予測の判定は、ある経過又は転帰が起こる可能性が増大しているか否かを意味するものであり、当該経過又は転帰が起こらない場合を基準として起こりやすいことを意味するものではない。即ち、発症予測の判定結果は、本発明のsPRRレベルが上昇又は減少している患者において、そのような特徴を示さない患者に比較して、ある特定の経過又は転帰がより生じやすいということを意味する。本発明の方法は、妊娠高血圧症の発症を予測するものであり、発症の予測は妊娠高血圧に罹患するする危険性を判断するものである。本発明において使用する患者由来の試料としては、sPRRを検出することができる体液を使用することができ、血液、血漿、血清、リンパ液、尿、漿液、髄液、関節液、眼房水、涙液、唾液またはそれらの分画物若しくは処理物を挙げることができる。本発明の予測方法における分析は、定性的、定量的または半定量的に行うことができる。また、sPRRは、患者の妊娠高血圧症発症の指標となることから、妊娠高血圧症治療薬のスクリーニングにおいて、患者の発症の改善の指標として用いることができる。例えば、被験者に被験薬を投与し、又は、高血圧モデル動物に被験薬を投与し、一定時間後のsPRRレベルを測定することにより、当該治療薬が妊娠高血圧症の発症を改善するものであるか否かを判定することができる。より具体的には、添加又は投与により、sPRRレベルが減少する被験薬を、妊娠高血圧症を改善又は発祥を抑制する治療薬として選別することができる。以下、本発明をより詳細に説明するため実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。また、以下の実施例に記載するプロスペクティブコホート研究は、東京女子医科大学の倫理委員会の承認を受けて行った。実施例1ヒト血中sPRR測定法の確立1組換ヒトPRRの調製抗原として大量の組換ヒトPRRを取得するため、該タンパク質をバキュロ-ウイルス-カイコ発現系シスメックス社、兵庫、日本を用いて発現させた。手順の詳細は既に報告された通りであるKiyonoMら、FEBSLett583,1127-11312009。簡単に説明すると、PRR移入ベクターpM03シスメックス社を構築した。PRRをコードするcDNAは以前報告されたプラスミドベクターであるpCAGGS-hProRenRcKaneshiroYら、JAmSocNephrol18,1789-952007から得た。この移入ベクターをBmNPVCPdstrain、シスメックス社と共にBombyxmori培養細胞BmN細胞にコトランスフェクトした。BmN細胞中のPRR-Hisタグ遺伝子を含む組換バキュロウイルスを増幅させた後、蚕の蛹に感染させた。注入の6日後、蛹を52mLの均質化緩衝液20mMTris-HCl、pH8.0、0.15MNaCl、1mMEDTA、1mMEGTA、10グリセロール、1mMDTT、1mMフェニルメチルスルホニルフッ化物、10mMベンズアミド中でホモジナイズし、4°C、100,000×gで1時間遠心分離し、上清を廃棄した。ペレットを、1のトリトンX-100を含む52mLの溶解緩衝液20mMTris-HCl、pH8.0、150mMNaClに再懸濁させた。4°Cで1時間攪拌後、上清を4°C、100,000×gで1時間遠心分離し、上清を廃棄した。ペレットを1のN-ラウロイルサルコシンを含む溶解緩衝液52mLに再懸濁させた。懸濁液を上述と同じ手順で再度、攪拌、遠心分離して上清を回収した。回収した上清をNi-アガロースカラムに添加し、該カラムを洗浄緩衝液50mMTris-HCl、pH8.0、0.3MNaCl、0.2N-ラウロイルサルコシンで洗浄した。PRR-Hisタグタンパク質は溶出緩衝液50mMTris-HCl、pH8.0、0.3MNaCl、0.2N-ラウロイルサルコシンで溶出させた。溶出液は濃縮し、20mMNaP,150mMNaCl,0.2N-ラウロイルサルコシン、pH7.5で置換した。2ヒトPRR発現CHO細胞の構築A-549細胞から、illustraTMQuickPrepTMMicroRNA精製キットGEヘルスケアジャパン、東京、日本を用いて全RNAを抽出し、first-strandcDNA合成キットGEヘルスケアジャパンを用いてcDNAを生成させた。それぞれ、順にEcoRI及びXhoIの制限酵素切断部位を有する、フォワードプライマー:5’-AAGAATCCAGCCTGGACGAGTCCGAGCG-3’配列番号1、及びリバースプライマー:5’-AACTCGAGATCCATTCGAATCTTCTGGTTT-3’配列番号2を用いて、ヒトPRRcDNAをPCRで増幅させた。PCR増幅に続いて、PCR産物はEこRI及びXhoIで消化され、c末にヒスチジンタグを有するpcDNA3.1ベクターに挿入された。続いて、得られたプラスミド構造物をリポフェクトアミン2000インビトロゲン、カリフォルニア、米国を用いて、チャイニーズハムスター卵巣細胞CHO-K1にトランスフェクトし、安定発現株を1mg/mLG418PAAラボラトリーズ、パシング、オーストラリアで選択した。3抗PRR抗体の調製ウサギを人工ペプチドであるSVTLRQLRNRLFQENSVL配列番号3、及びIGKRYGEDSEQFRDASKI配列番号4とキャリアタンパク質であるウシサイクログロブリンの結合物で免疫した。これらのペプチド配列は、ヒトPRRタンパク質のそれぞれ148番目のセリンS148から165番目のロイシンL165、及び222番目のイソロイシンI222から239番目のイソロイシンI239に対応する配列である。免疫したウサギの血清から、各抗原を結合させた活性化チオールセファロース4Bビーズカラムアマシャムバイオサイエンス社を用いて、これらの配列に対するイムノグロブリンIgGフラクションを得た。得られた精製IgGはPoAb-148及びPoAb-222と名付けた。続いて、組換ヒトPRRをマウスに注射した。免疫マウスから得られた脾細胞をメラノーマ細胞株X63-Ag8.653と融合させた。大腸菌でグルタチオンS-トランスフェラーゼタグ融合蛋白質として発現させたsPRRをグルタチオンセファロース4Bビーズ上のクロマトグラフィーGEヘルスケアジャパンにより精製した。ELISAを用いてハイブリドーマ細胞の上清の抗体を精製GSTタグ化sPRRとの反応性でスクリーニングし、幾つかの陽性クローンを限界希釈法により選択した。得られた単一クローン93A1Bを本実験に用いた。このハイブリドーマは、HumanpRRHybridoma93A1Bとして、独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター茨城県つくば市東1-1-1つくばセンター中央第6に寄託した。寄託微生物の受領日は2011年11月17日であり、受領番号はFERMAP-22200である。4ウェスタンブロッティング及び免疫沈降分析カイコ由来の組換ヒトPRRを同定し、PRR組換体の発現を確認するため、ウェスタンブロッティングを行った。組換ヒトPRR、PRRのcDNAが導入されたCHO細胞、及びその培養液は、2SDS、10グリセロール、50mMTris-HClpH6.8、100mMジチオスレイトール溶液中に溶解し、煮沸して抗His抗体及びPoAb-222によるウェスタンブロット分析に使用した。抗体が溶液中の条件下で天然のsPRRと反応する能力を有するか否かを確認するため、免疫沈降ウェスタンブロッティング分析を行った。抗体の反応性は免疫沈降ウェスタンブロッティングにより評価した。PRRトランスフェクタントの上清をPoAb-148又は93A1Bと共にインキュベートし、共にプロテインGセファロースGEヘルスケアジャパンを添加した。更にインキュベートした後、遠心分離を行い、得られたペレットを三回洗浄した。次いでペレットを溶解し、93A1Bを用いてウェスタンブロット分析を行った。5sPRRの定量のためのELISAシステムの構築sPRR濃度を測定するため、PoAb-148及び93A1Bを組み合わせたサンドイッチsPRRELISAシステムを構築した。PoAb-148は捕捉抗体として、93A1Bは検出抗体として用いた。5-1標準物質組換ヒトPRRタンパク質の純度は、MultiGauge富士フィルム、東京、日本により濃度的に証明され、タンパク質濃度はウシ血清アルブミンを指標とした電気泳動により決定した。更に、sPRRcDNAがトランスフェクトされたCHO-K1細胞の培養上清をELISAシステムの標準物質workingstandardとして用いた。5-2サンドイッチELISAマイクロタイタープレート96穴の各穴に、0.5μgの精製PoAb-148を含有する100mMのカーボネート緩衝液pH9.5を100μL添加し、4°Cで一晩静置して該プレートをコートした。その後、プレートをPBS-Tで洗浄し、200μLの1w/vウシ血清アルブミンBSA、0.05NaN3を含むPBSを各穴に加えて、4°Cで一晩静置してブロックした。PBS-Tにより二度洗浄後、被験サンプルと標準物質である組換sPRRを1BSAを含有するPBS-Tで段階希釈した溶液100μL/穴を、コートされたマイクロタイタープレートに加え、4°Cで一晩静置した。本試験はデュプリケートで行った。PBS-Tで4回洗浄後、100μLの西洋ワサビペルオキシダーゼHRP-結合93A1BマウスIgGFab’を各穴に添加し、4°Cで1時間静置した。PBS-Tで穴を5回洗浄後、100μLの新たに調製したテトラメチルベンジジン溶液を各穴に基質として添加し、暗室、室温で30分間静置した。100μLの1MH2SO4を添加して反応を停止させた。溶液の450nmにおける吸光度をELISAリーダーE-Max;モレキュラーデバイス、カリフォルニア、米国で測定した。5-3ELISAの精度回収率評価イントラアッセイintraassay及びインターアッセイinterassayでELISAの精度を評価するために、3つの品質管理QCを構築して、高、中、低レンジの標準カーブをカバーした。イントラアッセイ精度は、各QCサンプルを一枚のプレートで測定することを24回繰り返して決定し、インターアッセイ精度は、各QCサンプルについて、6つの異なるプレートを用いた5重穴測定を行うことにより決定した。更に、血液サンプル中の回収率を評価するため、異なる既知の濃度の組換PRRをヒト血漿、血清又は10ウシ胎仔血清FCS含有TIL培地に添加したサンプルを測定し、測定濃度と理論濃度の差から回収率を評価した。キットの感度は米国臨床検査標準委員会評価プロトコルNCCLS法で示されたガイドラインに従って決定した。6培養液中及び健常人の血液サンプル中のPRRの検出と定量ELISAアッセイが天然のsPRRに対して定量的であるか否かを決定するため、2つの実験を行った。一つ目はsPRRcDNAで形質転換されたCHO細胞の培養培地、及び、形質転換されていないCHO細胞の培養培地におけるsPRRを測定した。PRR形質転換細胞、及びCHO細胞の各々5×104細胞を、10FBSPAAラボラトリーズを含むTIL培地免疫生物研究所、群馬、日本に播種し、24時間後に無血清のTIL培地と交換した。3日間培養後、各穴の上清を回収し、測定した。また、ヒトATP6AP2遺伝子に対するsiRNAオリゴヌクレオチド、及びコントロールsiRNAは、それぞれサーモサイエンティフィック社及びアンビオン社から購入した。これらのsiRNAオリゴヌクレオチドの導入はリポフェクトアミンRNAiMAX試薬インビトロジェン社を用いて行った。siRNAを形質転換した、又は形質転換していないヒト有足細胞株の培養培地を以下の方法で調整し、同様に測定した。不死化ヒト有足細胞株は温度感受性SV40T-遺伝子及びテロメラーゼ遺伝子を形質転換することにより構築したSaleemMAら、JAmSocNephrol,13:630-638,2002。有足細胞は33°Cで増殖させ、37°Cに変更して14日以上経過後に分化させた。実験のため、6~10回継代細胞を細胞プレート上に播種し37°C、5CO2条件下、10ウシ胎児血清ギブコ、東京、日本又は1mg/mLエンドトキシンフリーウシ血清アルブミン、及びインスリン-トランスフェリン亜セレン酸ナトリウム添加剤シグマを含有する標準RPMI1640培地シグマ、東京、日本中で少なくとも14日間、細胞が分化し樹状の形態を呈するまで培養した。有足細胞を37°C、5CO2条件下で14日間培養後、実験に使用したSakodaMら、AmJHypertens,23:575-580,2010。本発明のELISAキットは培地中のFBS由来のsPRRをも検出してしまうことから、コントロールとして非培養培地のsPRRも測定した。更に、健常人のEDTA血漿及び血清中のsPRR濃度を決定した。血液サンプルは、株式会社ベリタス東京、日本より購入した。統計分析は、one-wayfactorialANOVAとposthocScheffe’sFtestを用いて行った。7結果7-1ウェスタンブロッティング及び免疫沈降分析組換ヒトPRR、PRRのcDNAが導入されたCHO細胞、及びその培養液をウェスタンブロッティングした結果を図1A及びBに示す。PRRの分子量は35kDaと見積もられ、その可溶化形態は29kDaと見積もられた。ウェスタンブロットの結果から、これらの見積りに該当するタンパク質を確認することができた。また、免疫沈降ウェスタンブロッティングの結果を図1Cに示す。ELISAに用いたPoAb-148抗体及び93A1B抗体はいずれもsPRR形質転換体を培養した培地由来のsPRRを免疫沈降させることができた。7-2ELISAの標準曲線と精度回収率評価sPRRELISAシステムの標準用量反応曲線は、log/logスケールで125から8000pg/mLの範囲に亘って直線を示し、その直線性は極めて優れていたR2=0.99図2A。また、3つのQC用サンプル高濃度H、中濃度M、低濃度L決定した精度の結果を表1及び表2に示す。また、回収率評価の結果を表3に示す。表1にも示される通り、イントラアッセイ精度のCVは高濃度サンプルで3.1、中濃度サンプルで5.4、低濃度サンプルで5.5を示した。また、表2に示すインターアッセイの結果では、CVは高濃度サンプルで3.0、中濃度サンプルで2.4、低濃度サンプルで7.5を示した。これらの結果から、本ELISAシステムは精度の観点から十分信頼性のおけるものであることが証明された。表3にも示す通り、回収率はヒトEDTA血漿サンプルの50回希釈で86.8以上、ヒト血清サンプルで91.2以上、10FCS添加TIL培地ではほぼ100の回収率であった。アッセイの感度は、NCCLS法により24pg/mLと計算された。7-3培養液中及び健常人の血液サンプル中のPRRの検出と定量sPRR形質転換細胞の培養上清中におけるsPRRの濃度は126.3ng/mLであり、CHO細胞の培養液における濃度である5.6ng/mLよりは非常に高い値となった図2B。また、siRNAを形質転換した、又は形質転換していないヒト有足細胞株の培養培地についてsPRRを測定した結果を図2Cに示す。グラフ中、点々のある範囲は、培地中に含まれるsPRRの濃度を示す。各培養培地の測定値から、当該範囲を差し引いた値が実際の各細胞から放出されたsPRRの濃度を示すと考えられる。siRNaを形質転換していない有足細胞株の培養上清におけるsPRRの濃度は8.4ng/mLであり、これはsiRNAを形質転換した有足細胞の培養上清の結果である0.4ng/mLと比較して非常に高い値となった。健常人から得られた、ヒトEDTA血漿及び20の血清サンプル男性10人、女性10人におけるsPRRの濃度を測定した結果を図3に示す。EDTA血漿サンプルは、15.2から35.1ng/mLの範囲であり、平均値は22.3ng/mLであった。一方で、血清サンプルは12.6から33.1ng/mLの範囲であり、平均値は22.3ng/mLであった図3A。EDTA血漿と血清の間には相関が認められたR=0.757。男性と女性の間で顕著な違いは見られなかった図3B。また、同様にヒト尿、マウス血漿、マウス血清、ラット血漿、ラット血清をサンプルとして濃度測定試験及び回収試験を行った結果、同様にsPRRの濃度を測定可能であることが示された結果は非図示。8結論これらの結果から、本発明のsPRR定量システムは、ヒトを対象として利用可能であることが示された。実施例2妊婦におけるsPRR測定1対象とする妊婦とサンプル取得方法2010年1月から2010年12月までの間に東京女子医大に最初に診察に訪れた妊娠16週と0日の妊婦が本試験に登録された。全ての参加者の出産予定日EDDは超音波により確認した。治験対象患者選定基準は正常な血圧BP収縮期血圧<140mmHg、かつ、拡張期血圧<90mmHgとした。基準を満たした423人の患者が本試験に登録された。6人の患者は早期流産のため、34人の患者は試験への参加を拒否したか他院で出産したため、合計40人の患者が試験から除外された。最後に、383人の患者が本試験で分析された。妊娠中に亘って、出産前の3回の検診において血漿サンプルを得た。最初のサンプルは、妊娠16週と0日よりも前妊娠初期に、二番目のサンプルは、妊娠16週と0日から妊娠27週と6日の間妊娠中期に、三番目のサンプルは妊娠28週と0日以降妊娠後期に得た。各血液サンプリングにおいて、座位の状態で右腕を心臓と同じ高さにして5分間休息の後、自動血圧計オムロンBP203RVIIIオシロメーター;オムロンコーリン株式会社、東京、日本を用いて血圧を測定した。血漿サンプルを用いて、sPRRの濃度を妊娠初期に311人の患者で測定し、妊娠中期に289人の患者で測定し、妊娠後期に313人の患者で測定した。血圧データは、妊娠初期に383人すべての患者で、妊娠中期に382人の患者で、妊娠後期に365人の患者で測定した。試験参加者の臨床特性を表1に示す。2分析方法連続型変数妊娠各期間の血圧、血漿中sPRR濃度の比較には、ペアt検定を用いた。多重比較の調整にはボンフェロー二の補正を適用した。sPRRの妊娠中の血圧予測能を評価するため、妊娠初期のsPRRと、妊娠初期、中期、及び後期の血圧との相関を単変量及び多変数回帰により調べた。同様に、妊娠中期のsPRRと、妊娠中期及び後期の血圧、並びに、妊娠後期のsPRRと、妊娠後期の血圧との関係についても調べた。全ての分析はSTATAソフトウェアバージョン11.0;StataCorporation、CollegeStation,テキサス州により行った。3結果3-1血圧図4は妊娠各期における収縮期血圧、拡張期血圧及び平均血圧の経時変化を示す。収縮期血圧の平均値±SDは、妊娠初期、中期、及び後期において、それぞれ109±11.5、107±10.5、及び111.2±10.9mmHgであった。拡張期血圧の平均値±SDは、妊娠初期、中期、及び後期において、それぞれ64.4±8.5、62.5±7.5、及び65.8±8.1mmHgであった。平均±SD血圧は、妊娠初期、中期、及び後期において、それぞれ79.3±9.0、77.5±7.9、及び80.9±8.4mmHgであった。血圧が測定されていた時の妊娠初期、中期、及び後期の平均妊娠期間±SDは、それぞれ、11.8±1.5、24.8±1.4、及び35.6±0.9週であった。全ての血圧測定収縮期、拡張期、及び平均において、血圧は妊娠中期が妊娠初期又は妊娠後期と比較して有意に低かった。妊娠後期の血圧は妊娠初期の血圧と比較して有意に高かった。3-2sPRR濃度sPRR濃度に対する頻度ヒストグラムを図5に示す。この頻度ヒストグラムから、sPRRレベルが、通常、妊娠期の全てに亘って分布していることが示された。sPRR濃度は妊娠初期及び中期と比較して、妊娠後期で有意に高い濃度を示した。3-3sPRR濃度と血圧との相関表5は血漿中の可溶性プロレニン受容体sPRRレベルと血圧との関連を単変量及び多変数回帰した結果を示す。非調整モデルでは、妊娠初期の血漿中のsPRR濃度が優位に妊娠中期の収縮期血圧、拡張期血圧、及び平均血圧値と相関したそれぞれ順に、CE0.16mmHg、95CI:0.009、0.32;CE0.15mmHg、95CI:0.04、0.26;及びCE0.15mmHg、95CI:0.04、0.27。更にsPRR濃度は同様に妊娠後期の平均血圧と有意に相関したCE0.13mmHg、95CI:0.009、0.25が、妊娠初期のどの血圧とも相関しなかった。妊娠中期の血漿中のsPRR濃度は妊娠中期及び後期のどの血圧値とも相関しなかった。最後に、妊娠後期のsPRR濃度は、妊娠中期の収縮期血圧、拡張期血圧、及び平均血圧と有意に相関したそれぞれ順に、CE0.21mmHg、95CI:0.07、0.34;CE0.16mmHg、95CI:0.06、0.26;及びCE0.18mmHg、95CI:0.07、0.28。調整モデルでは、妊娠初期の血漿中のsPRR濃度は、妊娠中期の収縮期血圧、拡張期血圧、及び平均血圧を有意に予測可能なものであったそれぞれ順に、CE0.18mmHg、95CI:0.05、0.32、p=0.008;CE0.15mmHg、95CI:0.04、0.26、p=0.001;及びCE0.15mmHg、95CI:0.04、0.27、p=0.001。妊娠中期の血漿中のsPRR濃度は、妊娠中期及び後期のどの血圧とも相関しなかった。妊娠後期の血漿中のsPRR濃度は、妊娠後期の収縮期血圧、拡張期血圧、及び平均血圧と有意に相関したそれぞれ順に、CE0.18mmHg、95CI:0.03、0.32、p=0.015;CE0.15mmHg、95CI:0.04、0.25、p=0.008;及びCE0.15mmHg、95CI:0.05、0.26、p=0.001。これらの結果から、妊娠初期の血漿中のsPRR濃度は、妊娠中期及び後期の全ての血圧値収縮期血圧、拡張期血圧、及び平均血圧の上昇の予測評価に利用可能であることが示された。一方で、妊娠中期のsPRR濃度は妊娠後期の血圧とは相関しなかった。また、妊娠後期ではsPRR濃度は全ての血圧値収縮期血圧、拡張期血圧、及び平均血圧と有意に相関していることが示された。よって、特に、妊娠初期の血漿中のsPRRが妊娠中期及び後期の血圧上昇のマーカーとして有用であることが示された。"