a配列番号2の1~688のアミノ酸残基配列を有する天然配列アミノペプチダーゼb2324をコードするDNA分子又はbaのDNA分子の相補鎖に対して少なくとも80の配列同一性を有し、且つアミノペプチダーゼをコードする、染色体遺伝子に欠損を有するグラム陰性細菌細胞。a配列番号2の1~688のアミノ酸残基配列と比較した場合に少なくとも80のポジティブスコアを示すポリペプチドをコードするDNA又はbaのDNAの相補鎖を有する染色体遺伝子に欠損を有するグラム陰性細菌細胞であって、前記ポリペプチドがアミノペプチダーゼである、グラム陰性細菌細胞。配列番号1の1~2067のヌクレオチド配列を有する天然配列yfcK遺伝子に対し、少なくとも80の配列同一性を有を有し、且つアミノペプチダーゼをコードする、染色体遺伝子に欠損を有するグラム陰性細菌細胞。サルモネラ属又は腸内細菌科である、請求項1ないし3のいずれか1項に記載の細胞。大腸菌である、請求項4に記載の細胞。プロテアーゼをコードする少なくとも一の遺伝子に欠損を有する、請求項5に記載の細胞。天然配列yfcK遺伝子に欠損を有する、請求項5に記載の細胞。細胞に対して異種性であるポリペプチドをコードする核酸を有する、請求項1ないし7のいずれか1項に記載の細胞。ポリペプチドが哺乳動物のポリペプチドである、請求項8に記載の細胞。ポリペプチドがヒトのポリペプチドである、請求項9に記載の細胞。ポリペプチドがヒト成長ホルモンである、請求項10に記載の細胞。a請求項8ないし11のいずれか1項に記載の細胞を培養し、b細胞からポリペプチドを回収することを含む、異種ポリペプチド生産方法。培養を醗酵槽の中で行い、細胞の周縁質又は培養培地からポリペプチドを回収する、請求項12に記載の方法。ライセートを形成する細胞破壊により回収を行い、無傷のポリペプチドをライセートから精製する、請求項12又は13に記載の方法。精製段階の前にライセートをインキュベートする、請求項14に記載の方法。請求項1ないし11のいずれか1項に記載の細胞を培養することを含む、ポリペプチドからのアミノ酸残基のN末端切断を防ぐ方法であって、細胞がポリペプチドをコードする核酸を、該核酸が発現される条件下で含む方法。ポリペプチドを細胞から回収する、請求項16に記載の方法。細胞から単離したポリペプチドからN末端アミノ酸を切断する方法であって、a配列番号2の1~688のアミノ酸残基配列を有する天然配列アミノペプチダーゼb2324をコードするDNA分子又はbaのDNA分子の相補鎖に対し、少なくとも80の配列同一性を有する核酸によりコードされるアミノペプチダーゼに、ポリペプチドを接触させることを含む方法。細胞から単離したポリペプチドからN末端アミノ酸を切断する方法であって、配列番号2の1から688のアミノ酸残基配列を有する天然配列アミノペプチダーゼb2324に対して少なくとも80の配列同一性を有するアミノペプチダーゼに、ポリペプチドを接触させることを含む方法。ポリペプチドをアミノペプチダーゼでインキュベートする、請求項18又は19に記載の方法。ポリペプチドに天然配列アミノペプチダーゼb2324を接触させる、請求項18ないし20のいずれか1項に記載の方法。a配列番号2の1~688のアミノ酸残基配列を有する天然配列アミノペプチダーゼb2324をコードするDNA分子又はbaのDNA分子の相補鎖に対して少なくとも80の配列同一性を有し、アミノペプチダーゼをコードする核酸を持つグラム陰性細菌細胞を培養することを含む切断ポリペプチド生産方法であって、細胞が、N末端にアミノ酸が付加された対応する非切断ポリペプチドをコードする核酸を有し、培養を、遺伝子を発現又は過剰発現し、且つ非切断ポリペプチドをコードする核酸を発現する条件下で行い、発現後に非切断ポリペプチドとアミノペプチダーゼが接触していない場合、非切断ポリペプチドとアミノペプチダーゼを接触させて切断ポリペプチドを生産する方法。配列番号1の1~2067のヌクレオチド配列を有する天然配列yfcK遺伝子に対し、少なくとも80の配列同一性を有し、且つアミノペプチダーゼをコードするする核酸を持つグラム陰性細菌細胞を培養することを含む切断ポリペプチド生産方法であって、細胞が、N末端にアミノ酸が付加された、対応する非切断ポリペプチドをコードする核酸を有し、培養を、遺伝子を発現又は過剰発現し、且つ非切断ポリペプチドをコードする核酸を発現する条件下で行い、発現後に非切断ポリペプチドとアミノペプチダーゼが接触していない場合、非切断ポリペプチドとアミノペプチダーゼを接触させることにより切断ポリペプチドを生産する方法。天然配列yfcK遺伝子を有する大腸菌細胞を培養し、非切断ポリペプチドに天然配列アミノペプチダーゼb2324を接触させる、請求項22又は23に記載の方法。ポリペプチドが細胞に対して異種性である、請求項22ないし24のいずれか1項に記載の方法。ポリペプチドが哺乳動物のポリペプチドである、請求項22ないし24のいずれか1項に記載の方法。細胞が、プロテアーゼをコードする少なくとも一の遺伝子に欠損を有している、請求項22又は23に記載の方法。培養条件が、アミノペプチダーゼをコードする核酸が過剰発現する条件である、請求項22又は23に記載の方法。接触をインキュベーションにより行う、請求項22又は23に記載の方法。アミノペプチダーゼをコードする核酸が細菌細胞由来のものである、請求項22又は23に記載の方法。アミノペプチダーゼをコードする核酸が細菌細胞に導入される、請求項22又は23に記載の方法。培養を醗酵槽内で行い、アミノペプチダーゼに接触させる前に細胞から非切断ポリペプチドを回収する、請求項22又は23に記載の方法。細胞の周縁質又は培養培地からポリペプチドを回収する、請求項32に記載の方法。ライセートを形成する細胞破壊により回収を行い、ライセートから切断ポリペプチドを精製する、請求項32又は33に記載の方法。精製段階の前にライセートをインキュベートする、請求項34に記載の方法。少なくとも1時間、約20~40°Cでライセートをインキュベートする、請求項34又は35に記載の方法。本発明は、以下の実施例を参照することにより、さらに十分に理解されるであろう。しかし、それらは、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきものではない。すべての文献及び特許の引例は出典明示によりここに取り込む。実施例1材料及び方法ゲノム配列決定プロジェクトBlattner等、上掲の結果であるGenBankのリストにより同定されたb2324をコードするyfcK遺伝子のDNA配列を上流と下流で挟み込んでPCR増幅した。ついで、これら融合配列をP1形質導入によりW3110株の染色体上で組換え、PCRにより欠失についてスクリーニングしMetcalf等Gene13817て株61G3を産生した。この61G3株は、遺伝子型W3310ΔfhuAΔ169phoAΔE15deoC2degPkanRilvG2096ΔyfcKを有する。特に、P1由来のファージP1kcによる形質導入JMillerExperimentsinMolecularGeneticsColdSpringHarborNYColdSpringHarborLaboratory1972及びトランスポゾン遺伝学を使用する技術により複数の段階を踏んでこの株を構築した。使用した元の宿主は、F-λのK-12株である大腸菌K-12W3110であるBachmannBactRev36525557BachmannDerivationsandGenotypesofSomeMutantDerivativesofEscherichiacoliK12p11901219FCNeidhardt等編Escherichiacoli及びSalmonellatyphimuriumCellularandMolecularBiologyvol2AmericanSocietyforMicrobiologyWashingtonDC1987。ゲノム中へのtonAfhuA変異の導入は、1994年4月19日発行の米国特許第5304472号に詳述されている。ilv遺伝子内へのTn10挿入は、P1形質導入より導入されたものである。イソロイシン/バリン栄養素要求性は、ilvG2096R変異を有する株で増殖させたP1ファージを使用して栄養非要求性プロトトロフィーになるまで形質導入しLawther等ProcNatlAcadSciUSA78922925、これにより、野生型大腸菌K-12をバリンに対して感受性にするフレームシフトが修復された。degP41kanr変異は米国特許第5304472号に記載されている。IlvG2096R遺伝子座は、40μmg/mLのバリン0.3mMに対する33B6宿主の耐性により確認できる。2つの欠失変異体、phoAΔE15及びΔargF-lac169は、米国特許第5304472号に開示されている。deoC2変異はMark等MolGenGenet155145152に開示されている。株61G3の完全な誘導を図1に示す。ついでこの株を、振盪フラスコ及び10-Lの醗酵槽の両方でN末端フェニルアラニンを持つhGHを発現し分泌するhGH4Rと命名された発現プラスミドにより形質転換した。phGH4Rの構築は、Chang等Gene55189196に詳述されている。この形質転換により、JJGH1が生じた。細胞をAndersen等、BiotechnologyandBioengineering75212218に記載されているようにして培養した。hGHが産生した後に超音波処理することにより粗いライセートを形成し、そのライセートを37°Cで0~24時間、及び室温で0~42時間インキュベートした。これよりも高い温度の使用は、アッセイ法によるdes-phe及びdes-phe-prohGHの検出能力を向上させることになるが、hGHの精製には好ましくない。通常、hGHの精製は、これらの切断形態の量を抑えるために低温で行われる。対照群として、phGH4Rで形質転換した親株遺伝子型W3110ΔfhuAΔ169phoAΔE15deoC2を有する16C9を用いて同じ実験を実施した。株61G3におけるdegPおよびilvG変異はアミノペプチダーゼの活性に効果を持たないため、この株は本目的に適している。ついで対照群試料及び実験試料を遠心分離して微粒子を除去し、可溶相をLC-MS液体クロマトグラフィー、質量分析により分析した。hGHの無傷のdes-phe及びdes-phe-pro型の質量をモニターした。結果図2と4は、対照株16C9/phGH4Rでの室温及び37°Cでのインキュベーションの結果をそれぞれ示し、図3と5は、ノックアウトされたアミノペプチダーゼを有するJJGH1による室温及び37°Cでのインキュベーションの結果をそれぞれ示す。4つの図に対する実際の数を下の表に示す温度=37°Cの場合と温度=室温の場合。37°Cでのインキュベーションを15時間行った後には、フェニルアラニン切断不純物が殆ど存在しないこと、また、インキュベーションを行っていない場合ですら、不純物の量が少ないことが分かる。また、室温でのインキュベーションでも、全ての時間のインキュベーションにおいて対照群と比較して、JJGH1細胞系に、N末端フェニルアラニンが欠損した変異ポリペプチドの量に減少が見られることが分かる。無傷のポリペプチドの精製は、常套的又は既知のクロマトグラフィー手段により容易に実施することができる。この結果は、ΔyfcK株を使用してポリペプチドのN末端切断を防ぐことができることを示している。