出発細胞を目的細胞に変換するための転写因子を探索する転写因子探索方法であって、目的細胞において重要度に応じて転写因子をランク付けする転写因子重要度ランク付け工程と前記転写因子重要度ランク付け工程によって上位にランク付けられた複数の転写因子の中から、前記複数の転写因子によって構成される目的細胞に特異的な転写因子ネットワークの最上流に位置する転写因子を決定する最上流転写因子決定工程と、を含むことを特徴とする転写因子探索方法。前記最上流転写因子決定工程が、前記上位にランク付けられた複数の転写因子遺伝子を過剰発現させることで発現が誘導される転写因子遺伝子を特定する転写因子遺伝子過剰発現を含むことを特徴とする請求項1記載の転写因子探索方法。前記転写因子重要度ランク付け工程が、目的細胞以外の細胞の転写因子遺伝子発現に対する目的細胞の転写因子遺伝子発現比情報によって転写因子をランク付けする発現比情報転写因子ランク付け、及び/又は文献情報データベースから、目的細胞に特異的に発現している転写因子情報を取得し、前記転写因子情報を基に転写因子をランク付ける文献情報転写因子ランク付け、を含むことを特徴とする請求項1または2記載の転写因子探索方法。前記各工程の少なくとも一つの工程がコンピューターの使用を含むことを特徴とする請求項1から3のいずれか一項に記載の転写因子探索方法。出発細胞を目的細胞に変換する細胞変換方法であって、出発細胞に、目的細胞に特異的な転写因子ネットワークの最上流に位置する転写因子を導入する転写因子導入工程を含み、前記転写因子導入工程において、請求項1から4のいずれか一項の転写因子探索方法で探索された最上流転写因子を導入することを特徴とする細胞変換方法。さらに、出発細胞に特異的な転写因子ネットワークの発現を抑制する出発細胞転写因子ネットワーク発現抑制工程を含むことを特徴とする請求項5記載の細胞変換方法。さらに、目的細胞に特異的な転写因子ネットワークにおいて発現する遺伝子を修飾する遺伝子修飾工程を含むことを特徴する請求項5または6記載の細胞変換方法。目的細胞の製造方法であって、出発細胞を目的細胞に変換する細胞変換工程を含み、前記細胞変換工程が、請求項5から7のいずれか一項に記載の細胞変換方法によって実施されることを特徴とする製造方法。請求項1から8のいずれか一項に記載の転写因子探索方法に使用されるプログラム。請求項9記載のプログラムが格納された記録媒体。非特許文献1に記載されるようなiPS細胞の登場で、再生医療の実用化が現実的になってきたが、iPS細胞を用いた場合、癌化の問題がある。そこで、再生医療において、iPS細胞を経ずに目的細胞変換する非特許文献2~5に記載されるような技術が重要になる。しかしながら、これらの従来の細胞変換技術は、目的細胞に変換するための転写因子を見つけるために長期間にわたる多大な労力を必要とするという問題がある。そこで、本発明は、目的細胞への変換を短期間で効率良く実施できる転写因子探索方法を提供することを、目的とする。前記目的を達成するために、本発明は、出発細胞を目的細胞に変換するための転写因子を探索する転写因子探索方法であって、目的細胞において重要度に応じて転写因子をランク付けする転写因子重要度ランク付け工程と前記転写因子重要度ランク付け工程によって上位にランク付けられた複数の転写因子の中から、前記複数の転写因子によって構成される目的細胞に特異的な転写因子ネットワークの最上流に位置する転写因子を決定する最上流転写因子決定工程と、を含むことを特徴とする。ここで、複数の転写因子の数は、そこに含まれる最上流に位置する転写因子を出発細胞に導入した際に目的細胞への変換が達成されるために十分な数であり、例えば2~100、好ましくは5~50、より好ましくは10~20である。本発明の転写因子探索方法によれば、出発細胞を目的細胞に変換するための転写因子を短期間で効率良く見つけ出すことができ、その結果、目的細胞を短期間で効率良く得ることが可能となる。本発明の転写因子探索方法において、前記最上流転写因子決定工程が、前記上位にランク付けられた複数の転写因子遺伝子を過剰発現させることで発現が誘導される転写因子遺伝子を特定する転写因子遺伝子過剰発現を含むことが好ましい。本発明の転写因子探索方法において、前記転写因子重要度ランク付け工程が、目的細胞以外の細胞の転写因子遺伝子発現に対する目的細胞の転写因子遺伝子発現比情報によって転写因子をランク付けする発現比情報転写因子ランク付け、及び/又は文献情報データベースから、目的細胞に特異的に発現している転写因子情報を取得し、前記転写因子情報を基に転写因子をランク付ける文献情報転写因子ランク付け、を含むことが好ましい。発現比情報転写因子ランク付けの結果と文献情報転写因子ランク付けの結果を統合して転写因子重要度ランク付け工程を実施する方法は、特に制限されない。例えば、発現比情報転写因子ランク付けの結果としてスコアを算出し、文献情報転写因子ランク付けの結果としてスコアを算出し、前記の各スコアの結果から、転写因子重要度ランク付けのスコアを算出してもよい。前記発現比情報転写因子ランク付け工程において、前記転写因子遺伝子発現比情報が、CAGE法およびマイクロアレイ法の少なくとも一方の方法で得られた情報であることが好ましい。CAGE法は具体的にはNatureMethods32006211222に記載されている。本発明の転写因子探索方法において、例えば、前記各工程の少なくとも一つの工程がコンピューターの使用を含んでもよい。次に、本発明の細胞変換方法は、出発細胞を目的細胞に変換する細胞変換方法であって、出発細胞に、目的細胞に特異的な転写因子ネットワークの最上流に位置する転写因子を導入する転写因子導入工程を含み、前記転写因子導入工程において、前記本発明の転写因子探索方法で探索された最上流転写因子を導入することを特徴とする。本発明の細胞変換方法において、さらに、出発細胞に特異的な転写因子ネットワークの発現を抑制する出発細胞転写因子ネットワーク発現抑制工程を含むことが好ましい。本発明の細胞変換方法において、さらに、目的細胞に特異的な転写因子ネットワークにおいて発現する遺伝子を修飾する遺伝子修飾工程を含むことが好ましい。次に、本発明の製造方法は、目的細胞の製造方法であって、出発細胞を目的細胞に変換する細胞変換工程を含み、前記細胞変換工程が、前記本発明の細胞変換方法によって実施されることを特徴とする。次に、本発明のプログラムは、前記本発明の転写因子探索方法に使用されるプログラムである。次に、本発明の記録媒体は、前記本発明のプログラムが格納された記録媒体である。なお、本発明において、プログラムは、コンピュータープログラムをいう。例えば、本発明のプログラムによれば、前記本発明の転写因子探索方法をコンピューター上で実行可能である。本発明において、出発細胞は、特に制限されず、例えば、ヒト線維芽細胞、ヒト角化細胞ケラチノサイト、ヒトiPS細胞等があげられる。本発明において、細胞変換の目的となる目的細胞は、例えば、免疫細胞、脂肪細胞、各種臓器又は器官を構成する細胞があげられる。前記免疫細胞は、例えば、単球、マクロファージ細胞、NKT細胞、ヘルパーT細胞、レギュラトリーT細胞、B細胞等があげられる。前記脂肪細胞は、例えば、白色脂肪細胞、褐色脂肪細胞等があげられる。各種臓器又は器官を構成する細胞は、例えば、神経細胞、膵臓ベータ細胞、肝細胞、心筋細胞、網膜細胞等があげられる。また、前記目的細胞は、例えば、例示した細胞への分化が容易な体性幹細胞神経幹細胞、造血肝細胞などもあげられる。細胞変換における転写制御ネットワークの基本概念図1及び図2を基に、細胞変換における転写制御ネットワークの基本概念を説明する。まず、細胞内の遺伝子の転写制御は、複数の転写因子から構成されているコア転写ネットワークにより制御されている。コア転写ネットワークは、細胞間で共通する細胞の基本的な機能を制御するための共通ネットワークCommonnetworkと、個々の細胞において特異的な機能を制御するための特異的ネットワークSpecificnetworkとから構成されている。図1に、出発細胞StartCell及び目的細胞TargetCellのコア転写ネットワークを示す。図1に示すように、出発細胞StartCell及び目的細胞TargetCellには、共通ネットワークCommonnetworkが存在する。一方、出発細胞StartCellには、出発細胞に特異的な転写因子ネットワーク又は出発細胞特異的ネットワークStartcellspecificnetworkが存在し、同様に、目的細胞TargetCellには、目的細胞に特異的な転写因子ネットワーク又は目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkが存在する。図2に示すように、出発細胞StartCellを目的細胞TargetCellに変換するために、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkを出発細胞StartCellに導入し、かつ持続的に発現させることができる。このようにした結果、出発細胞StartCellにおいて出発細胞特異的ネットワークStartcellspecificnetworkが消失し、図中で曲線で囲った共通ネットワークCommonnetworkと目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkとから構成される目的細胞のコア転写ネットワークが形成され、その結果、出発細胞StartCellを目的細胞TargetCellに変換できる。ここで、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkの出発細胞StartCellへの導入のためには、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkを構成する全ての転写因子を導入する必要はなく、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkの最上流に位置する転写因子を導入すればよい。ここで、最上流に位置する転写因子とは、ネットワークを構成する全ての転写因子の発現を制御する転写因子をいう。なお、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkにおける最上流の転写因子の数は、出発細胞に導入した際に目的細胞への変換が達成されるために十分な数であり、1の場合もあれば、1より多い場合もある。上記の最上流転写因子決定工程において上位にランク付けられたしたがって、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkを構成する蓋然性が高い複数の転写因子遺伝子の発現は、その中に含まれる遺伝子によってコードされる最上流に位置する転写因子によって制御されている。複数の転写因子の全てが単一の目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkを構成している場合には、最上流に位置する転写因子の数は1となり、複数の転写因子遺伝子が複数の目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkを構成している場合には、最上流に位置する転写因子の数は1より多くなる。また、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkの出発細胞StartCellへの導入と併せて、出発細胞特異的ネットワークStartcellspecificnetworkの発現を抑制すれば、細胞変換効率は更に向上するため、好ましい。出発細胞特異的ネットワークStartcellspecificnetworkの発現抑制は、特に制限されないが、例えば、出発細胞特異的ネットワークStartcellspecificnetworkの最上流に位置する転写因子の発現を抑制すればよく、発現抑制の手法は、例えば、遺伝子ノックダウン法、RNA干渉法RNAi等の公知の遺伝子発現抑制方法を適用できる。さらに、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkの各転写因子の遺伝子がメチル化等の修飾を受けることが必要な場合、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkが導入された出発細胞StartCellにおいて、目的細胞特異的ネットワークTargetcellspecificnetworkの各転写因子の遺伝子が修飾されるようにすることが好ましい。本発明による出発細胞から目的細胞への変換を、主にタンパク質である転写因子をコードする遺伝子の転写の制御に関して説明した。しかし、それによる遺伝子発現の制御例えば、遺伝子発現の促進または抑制によって目的細胞への変換が達成される物質本発明において、発現制御因子ということがあるであれば、特に、転写因子のみに限定されない。前記発現制御因子は、例えば、転写因子に代えて、転写因子でない他のタンパク質であってもよく、または、タンパク質以外の物質であってもよい。さらには、発現制御は転写レベルのものに限定されず、翻訳または翻訳後レベルのものであってもよい。発現制御は、例えば、転写後のRNAに影響を与えるmiRNAなどによってRNA量を制御するものであってもよいし、また、例えば、エピゲノムに影響を与えるlncRNAやクロマチンリモデリング因子によってゲノム状態を制御してRNA発現を制御するものであってもよい。このような態様も本発明に含まれる。つぎに、本発明の実施例について、以下説明する。なお、本発明は、下記の実施例により制限および限定されない。本実施例は、出発細胞を線維芽細胞とし、目的細胞を単球細胞とし、細胞変換のための転写因子を探索し、探索された転写因子を用いて実際に細胞変換を実施した例である。発現比情報転写因子ランク付け工程マイクロアレイデータを、Illumina社が提供するソフトウェアであるIlluminaBeadsstudioを用いて、標準化quintilenormalizationを行った。標準化後のデータから、単球で発現の高かった遺伝子の上位30を抽出し、さらにその中から転写因子を選択した。選択した転写因子を、線維芽細胞と単球細胞とでの発現比をもとに順位付けランク付けを行った。ランク付けの結果を、下記の表1に示す。下記表1において、ランク付けされた転写因子は、単球細胞で上位30に入る発現を示し、かつ線維芽細胞での発現量と比較して5倍以上高い発現を示すものである。なお、プローブが複数ある場合、複数回名前が挙がる場合がある。文献情報転写因子ランク付け工程医学系論文データベースMEDLINEより、各論文の要旨中にReprogramming、differentiation、transformationの言葉を含むものを抽出し、それらで、別途、文献情報転写因子ランク付け工程用のデータベースを構築した。構築したデータベースから、さらに、要旨中に単球Monocyteと共に現れる転写因子名の数共起数をカウントし、共起数の多い方から順位付けランク付けを行った。下記表2は、単球Monocyteと共に現れる転写因子名の共起数ランキング上位50位までを示す。転写因子重要度ランク付け工程発現比情報転写因子ランク付け工程のスコアRfcと、文献情報転写因子ランク付け工程によるスコアRcoを統合して転写因子重要度ランク付けをするため、スコアRfc及びスコアRcoの各逆数を算出し、それぞれの逆数を足し合わせて、その転写因子の重要度をあらわすImportanceScoreとした。下記表3に、ISの高い転写因子から順に上位20転写因子をコア転写制御ネットワーク構成因子の候補としたものを示す。最上流の転写因子ネットワークインデユーサーの決定レンチウイルスをベクターとした過剰発現試験により、転写因子重要度ランク付け工程で得られた各転写因子表3の中から、単球に特異的なネットワークの上流に位置する転写因子ネットワークインデユーサーを決定した。前記レンチウイルスをベクターとした過剰発現試験は、下記のように行った。プラスミド作製第3世代レンチウイルスベクター作製用SINベクターCSIIRfAIRES2Venus150ngと、前記表3に示す各転写因子のエントリークローンそれぞれ100ngとを用いてGatewayテクノロジーLR反応により、それぞれの遺伝子のORFをSINベクターに組み換えた。遺伝子を組み換えたSINベクターと、パッケージングプラスミドpCAGHIVgppCMVVSVGRSVRevとを、PureYieldmidiプラスミド精製キットを用いて抽出精製した。レンチウイルス作製4×106細胞の293T細胞をポリリジンコートの10cmディッシュに、OptiMEMを用いて播種した。293T細胞播種から24時間後、培地を、新鮮なOptiMEMに交換した。SINベクタープラスミド85μgpCAGHIVgp5μgpCMVVSVGRSVRev5μgOptiMEM600μlFuGeneHD50μlを混合し、室温で15分静置し、DNAと試薬との混合物を、293T細胞に滴下した。トランスフェクション24h後に培地を、OptiMEMに交換した。さらに、24時間後および48時間後に培地を回収した。回収された培地を、045μmフィルターでフィルタリングし、19600rpmで超遠心し、ウイルスペレット化した。上清を除去し、ペレットをHBSS100μlに懸濁した。得られたレンチウイルスは使用まで80°Cで保存した。タイター測定HBSSで600倍に希釈したレンチウイルス150μlに、キャリアーRNAを含むBufferRAV1600μlを加え、70°Cで5分間インキュベートした。600μlのエタノール96~100を加えボルテックスした後、NucleoSpinRNAVirusColumnsにウイルス溶液を通しカラムにウイルスのRNAを吸着させた。500μlのBufferRAWでカラムを洗浄し、次に600μlのBufferRAW3で同様にカラムを洗浄した。200μlのBufferRAW3でカラムを洗浄しカラムからエタノールを可能な限り除去した。70°Cに加温したElutionBuffer50μlをカラムに加え、室温で2分間インキュベートした後、遠心分離によりRNAを溶出した。次に4μlのDNaseI5UμlTaKaRaRecombinantDNaseI、6μlの10×DNaseIBufferを溶出したウイルスRNAに加え、37°C、30分間インキュベートした。qRTPCRTaKaRaOneStepSYBRPrimeScriptRTPCRKitIIを、次のようにおこなった。2×OneStepSYBRRTPCRBuffer45μl、PrimeScript1stepEnzymeMix204μl、PCRForwardPrimer04μl、PCRReversePrimer04μl、ROXReferenceDye02μl、RNaseFreedH2O28μl、DNaseI処理したウイルスRNA08μlを混合し、リアルタイムPCRにかけた。プログラムは、42°C5分、95°C10秒、95°C5秒から60°C34秒を40サイクルで行った。Ct値を、あらかじめタイター既知のウイルスを用いて作製した検量線から計算されたタイター算出式、[Titer×2×107]に当てはめ、タイターを算出した。タイター測定の際は、任意のタイター既知のウイルスをポジティブコントロールCtposiとして使用し、測定誤差を補正した。遺伝子導入NB1RGB細胞1×105細胞を24h培養し、8μgmlのポリブレンを加えた培地に交換し、10MOIで前記表3に示す各転写因子の遺伝子を導入した各レンチウイルスベクターを感染させた。感染後24時間後、MEMalpha培地に交換し、さらに7日間培養した。qRTPCR解析変換細胞5×105細胞から、FastPureRNAKitを用いてtotalRNAを抽出した。抽出されたtotalRNAは、PrimeScript登録商標II1ststrandcDNASynthesisKitを用いて逆転写し、SYBR登録商標PremixExTaq商品名を用いて、ABI7500リアルタイムPCRシステムで解析した。遺伝子発現は、GAPDH遺伝子を内部標準として、ΔΔCt法で算出した。前記表3に示す各転写因子の遺伝子のプライマーの配列は、下記表4に示すとおりである。図3に、その結果を示す。図3Aに示すように、過剰発現した結果、他の遺伝子若しくは自己遺伝子の発現が誘導される転写因子として、SPI1、CEBPA、IRF8及びMNDAの4個の転写因子が、単球の特異的転写ネットワークの最上流に位置する遺伝子として決定された。図3Bは、前記の4個の転写因子の遺伝子を外因的に過剰発現させることにより、発現する内因性の遺伝子の関係を模式的に示した図である。図3Bに示すように、前記の4個の遺伝子の過剰発現により、他の内因性遺伝子の発現が誘導されており、CEBPAに関しては、自己の外因的な過剰発現により自己の内因的な発現が誘導されている。また、単球の特異的な転写ネットワークの中流に位置する転写因子として、NR4A2が決定された。転写因子導入による細胞変換前述のようにして決定された4個の転写因子の遺伝子を、ヒト線維芽細胞に導入して単球に細胞変換した。細胞変換された細胞について、単球細胞と比較して評価した。なお、具体的な操作および条件は、以下のとおりである。細胞培養CD14陽性ヒト単球細胞Lonza2W400Cは、RPMI1640培地10FBS50μM2Mercaptoethanol1mMSodiumPyruvate10mMHEPES100UmlPenicillin100μgmlStreptomycinで培養した。ヒト新生児皮膚線維芽細胞は、MEMALPHA培地10FBSで培養した。マイクロアレイ解析1×107細胞のCD14陽性ヒト単球細胞、NB1RGB細胞、前記の4個の転写因子の導入細胞から、FastPureRNAKitTakara9190でtotalRNAを回収した。回収されたtotalRNA500ngからIllumina登録商標TotalPrep商品名RNAAmplificationKitを用いて、ビオチン化cRNAを合成した。合成されたビオチン化cRNA100ngを、IlluminabeadsarrayHumanWG6v30にハイブリダイゼーションした。マイクロアレイ解析は、3biologicalreplicatesで行った。前記ヒト新生児皮膚線維芽細胞への前記4個の転写因子の導入は、NB1RGB細胞に導入する転写因子を、前記4個の転写因子CEBPSPI1IRF8及びMNDAとした以外は、前述のレンチウイルスをベクターとした過剰発現試験と同様にして行った。具体的には、下記のように行った。プラスミド作製前記表3に示す各転写因子に代えて、前記4個の転写因子CEBPSPI1IRF8及びMNDAを使用した以外は、前述と同様にしてプラスミド作製を行った。すなわち、第3世代レンチウイルスベクター作製用SINベクターCSIIRfAIRES2Venus150ngと、CEBPSPI1IRF8及びMNDAのエントリークローンそれぞれ100ngとを用いてGatewayテクノロジーLR反応により、それぞれの遺伝子のORFをSINベクターに組み換えた。遺伝子を組み換えたSINベクターと、パッケージングプラスミドpCAGHIVgppCMVVSVGRSVRevとを、PureYieldmidiプラスミド精製キットを用いて抽出精製した。レンチウイルス作製前述のレンチウイルスをベクターとした過剰発現試験と同様にして、レンチウイルス作製を行った。すなわち、4×106細胞の293T細胞をポリリジンコートの10cmディッシュに、OptiMEMを用いて播種した。293T細胞播種から24時間後、培地を、新鮮なOptiMEMに交換した。SINベクタープラスミド85μgpCAGHIVgp5μgpCMVVSVGRSVRev5μgOptiMEM600μlFuGeneHD50μlを混合し、室温で15分静置し、DNAと試薬との混合物を、293T細胞に滴下した。トランスフェクション24h後に培地を、OptiMEMに交換した。さらに、24時間後および48時間後に培地を回収した。回収された培地を、045μmフィルターでフィルタリングし、19600rpmで超遠心し、ウイルスペレット化した。上清を除去し、ペレットをHBSS100μlに懸濁した。得られたレンチウイルスは使用まで80°Cで保存した。タイター測定前述のレンチウイルスをベクターとした過剰発現試験と同様にして、タイター測定を行った。すなわち、HBSSで600倍に希釈したレンチウイルス150μlに、キャリアーRNAを含むBufferRAV1600μlを加え、70°Cで5分間インキュベートした。600μlのエタノール96~100を加えボルテックスした後、NucleoSpinRNAVirusColumnsにウイルス溶液を通しカラムにウイルスのRNAを吸着させた。500μlのBufferRAWでカラムを洗浄し、次に600μlのBufferRAW3で同様にカラムを洗浄した。200μlのBufferRAW3でカラムを洗浄しカラムからエタノールを可能な限り除去した。70°Cに加温したElutionBuffer50μlをカラムに加え、室温で2分間インキュベートした後、遠心分離によりRNAを溶出した。次に4μlのDNaseI5UμlTaKaRaRecombinantDNaseI、6μlの10×DNaseIBufferを溶出したウイルスRNAに加え、37°C、30分間インキュベートした。qRTPCRTaKaRaOneStepSYBRPrimeScriptRTPCRKitIIを、次のようにおこなった。2×OneStepSYBRRTPCRBuffer45μl、PrimeScript1stepEnzymeMix204μl、PCRForwardPrimer04μl、PCRReversePrimer04μl、ROXReferenceDye02μl、RNaseFreedH2O28μl、DNaseI処理したウイルスRNA08μlを混合し、リアルタイムPCRにかけた。プログラムは、42°C5分、95°C10秒、95°C5秒から60°C34秒を40サイクルで行った。Ct値を、あらかじめタイター既知のウイルスを用いて作製した検量線から計算されたタイター算出式、[Titer×2×107]に当てはめ、タイターを算出した。タイター測定の際は、任意のタイター既知のウイルスをポジティブコントロールとして使用し、測定誤差を補正した。遺伝子導入NB1RGB細胞に、前記表3に示す各転写因子の遺伝子に代えて、前記4個の転写因子の遺伝子を導入した各レンチウイルスベクターを感染させた以外は、前述と同様にして遺伝子導入を行った。すわなち、NB1RGB細胞1×105細胞を24h培養し、8μgmlのポリブレンを加えた培地に交換し、10MOIで前記の遺伝子及び各転写因子を導入した各レンチウイルスベクターを感染させた。感染後24時間後、MEMalpha培地に交換し、さらに7日間培養した。qRTPCR解析前記4個の転写因子が導入された変換細胞を使用した以外は、前述のレンチウイルスをベクターとした過剰発現試験と同様にして、前記qRTPCR解析を行った。すなわち、変換細胞5×105細胞から、FastPureRNAKitを用いてtotalRNAを抽出した。抽出されたtotalRNAは、PrimeScript登録商標II1ststrandcDNASynthesisKitを用いて逆転写し、SYBR登録商標PremixExTaq商品名を用いて、ABI7500リアルタイムPCRシステムで解析した。遺伝子発現は、GAPDH遺伝子を内部標準として、ΔΔCt法で算出した。前記4個の転写因子の遺伝子のプライマーの配列は、下記表4に示すとおりである。貪食能解析変換細胞をCC2コートのスライドチャンバーに播種し、24時間後に、赤色蛍光色素標識ラテックスビーズ02μmを終濃度0002となるように加え、24時間培養した。24時間培養した細胞は、PBSで2回洗浄、封入し、蛍光顕微鏡で観察した。炎症反応解析変換細胞、線維芽細胞、陰性対照細胞培養液中に、終濃度10μgmlになるようにLPSを添加し、24時間培養した。24時間培養した細胞を回収し、FastPureRNAKitでRNAを抽出し、上記方法に準じてqRTPCR解析を行った。各遺伝子のプライマー配列は、下記表4に示すとおりである。プライマー配列単球マーカーの発現前記の4個の転写因子SPI1CEBPAMNDAIRF8をヒト線維芽細胞に導入して得られた変換細胞と、単球の類似性とを評価するために、遺伝子導入後8日後の変換細胞からRNAを回収し、6個の単球マーカーの発現を、qRTPCRで解析した。その結果を図4のグラフに示す。なお、6個の単球マーカーは、TYROBPHLADRAMMP9CSF1RLILRB3CSF2Rである。図4に示すように、6個の遺伝子のすべてが線維芽細胞と比べて4倍以上発現が上昇した。貪食能解析結果単球の特徴的な機能のひとつである貪食能を解析するために、変換細胞にラテックスビーズを加えてビーズを24時間貪食させた。なお、対照として、転写因子を導入していない細胞を用いた。その結果を図5に示す。図5に示すように、対照の細胞陰性対照ではほとんどビーズの貪食が見られなかったが、4個の転写因子を導入した変換細胞4因子導入細胞では多くのビーズが細胞内に貪食された図中矢印。炎症反応解析結果単球に特徴的な機能である炎症反応を、リポポリサッカライドLPSを用いて検証した。ヒト線維芽細胞、陰性対照ウイルス導入細胞転写因子非導入細胞、4因子導入細胞前記4個の転写因子を導入して変換した細胞の各培養液中に、終濃度10μgmlでLPSを添加し、添加後24時間の細胞を回収してRNAを抽出し、6個の代表的な炎症反応に関わる遺伝子の発現変動を調べた。6個の炎症反応に関わる遺伝子は、TNFIL6IL1AIL1BIL8及びCCL2である。その結果を、図6に示す。図6に示すように、陰性対照と4因子導入細胞を比較すると、6個中4個の遺伝子が、陰性対照よりも有意に変動したPvalue005Pvalue001。マイクロアレイ解析全体の遺伝子発現の類似性を確認するために、変換細胞をIlluminabeadsarrayを用いてマイクロアレイ解析を行った。その結果を図7に示す。なお、単球のマイクロアレイデータより、単球とヒト線維芽細胞を比較して、単球で遺伝子の発現比が23倍以上高くかつt検定のPvalue003のものを単球特異的遺伝子、線維芽細胞で遺伝子の発現比が23倍以上高くかつt検定のPvalue003のものを線維芽細胞特異的遺伝子とした。図7に示すように、単球特異的な遺伝子のうち、526の遺伝子が4因子導入細胞で、線維芽細胞より発現が22倍以上高くかつt検定のPvalue005であった。一方で、線維芽細胞特異的遺伝子のうち572の遺伝子が4因子導入細胞で、線維芽細胞より発現が22倍以上低くかつt検定のPvalue005であった。モチーフ活性解析転写因子は、遺伝子のプロモーター領域に存在する転写因子結合配列モチーフに結合して発現制御を行なう。転写因子結合モチーフには、その配列を認識する複数の転写因子が結合し得る。モチーフ活性とは、各細胞において、各々の転写因子結合モチーフがどの程度転写制御に寄与しているかを表す指標である。ひとつのモチーフを考えた場合、そのモチーフには発現を正に制御する転写因子も負に制御する転写因子も含めて、複数の転写因子が結合する場合が多いので、これら全ての影響をすべて合算した結果としてモチーフ活性が得られる。本発明者らは、モチーフ活性解析のために、MARAMotifAcitvityResponseAnalysisと名づけたアルゴリズムを開発したNatureGenetics41553562。本発明者が構築したプロモーター発現のモデルでは、時間tにおけるプロモーターpの理論的な発現量eptは、下記の式Iで表すことができる。ept=constantΣmNpmAmtIept:時間tにおけるプロモーターpの理論的な発現量Npm:プロモーターpにおけるモチーフmの反応効率Amt:時間tにおけるモチーフmの活性上記に示すように、Npmはプロモーターpにおけるモチーフmの反応効率と定義し、モチーフmの出現数と類似度、他の動物種との保存度、位置指向性の重みから計算できる。Amtは時間tにおけるモチーフmの活性である。プロモーター発現量eptは、各モチーフについて反応効率とモチーフ活性を掛け算してそれを全て合算したものに定数を足したものとなる。プロモーター発現量eptは、CAGEまたはマイクロアレイから得られた実測値を使うことができる。よって、この式を時間tで活性のある全プロモーター遺伝子に対して適用すると、全ての調べ得るモチーフについてその活性を計算で求めることができる。したがって、モチーフ活性解析により、そのモチーフに対応する転写因子とその直接の下流遺伝子のネットワークを調べることができる。そこで、上記マイクロアレイデータを用い、4因子導入細胞前記の4個の転写因子を導入して変換した細胞、陰性対照ウイルス導入細胞転写因子非導入細胞、ヒト線維芽細胞、単球の各細胞のモチーフ活性を測定した。単球と線維芽細胞を比較した場合、単球で活性がより高いモチーフ上位10モチーフについて、その活性の変化を調べた。その結果を、図8のグラフに示す。図8に示すように、10モチーフ中、8モチーフの活性が上昇していた。ジーンオントロジーGO解析4因子導入細胞前記4個の転写因子を導入して変換した細胞において発現上昇した遺伝子の機能を調べるために、ジーンオントロジー解析を行った。具体的には、前記マイクロアレイ解析において同定された、単球特異的遺伝子と4因子導入細胞でヒト線維芽細胞よりも発現が上昇している遺伝子とについて、DAVID3を用いて、濃縮されているジーンオントロジーGOを解析した。下記表5に、単球と4因子導入細胞で、ヒト線維芽細胞と比較した際に有意に濃縮されているGOを示す。下記表5に示すように、4因子導入細胞で有意に濃縮されている8個のGOのうち、6個のGOが単球と一致した。