"明細書中に記載の発明。1つの態様において、本発明は、式Ia:[式中、L-はリガンドユニットであり;-Aa-Ww-Yy-はリンカーユニットLUであり、ここで、該リンカーユニットは、以下のものを含む:-A-はストレッチャーStretcherユニットであり、aは0または1であり、各-W-は独立してアミノ酸ユニットであり、wは0~12の範囲の整数であり、-Y-はスペーサーユニットであり、およびyは0、1または2であり;pは1~約20の範囲であり;および-Dは式DEおよびDFを有する薬物ユニットであり:ここで、独立して、各位置において:R2はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R3はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、式-CRaRbn―を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、H、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され;R6はHおよびC1-C8アルキルから選択され;]R7はH,C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、H、OH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環およびO-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R10はアリールまたはC3-C8複素環から選択され;ZはO、S、NHまたはNR12であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13はC2-C8アルキルであり;R14はHまたはC1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、COOH、-CH2n-NR162、-CH2n―SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;ここで、nは0~6の範囲の整数であり;R18は-CR82-CR82-アリール、-CR82-CR82-C3-C8複素環、および-CR82-CR82-C3-C8炭素環から選択される]を有する薬物-リンカー-リガンド化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。もう1つの態様において、式Ib:[式中:R2は水素および-C1-C8アルキルから選択され;R3は水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4は水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され、ここで、R5は-Hおよびーメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、-H、-C1-C8アルキルおよび-C3-C8炭素環から選択され;nは2、3、4、5および6から選択されかつそれらが結合した炭素分子と共に環を形成し;R6はHおよび-C1-C8アルキルから選択され;R7はH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環および-O-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよび-C1-C8アルキルから選択され;R10はアリール基または-C3-C8複素環から選択され;ZはーO-、-S-、-NH-、または-NR12-であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13は-C2-C8アルキルであり;R14はHまたは-C1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、-COOH、-CH2n-NR162、-CH2n―SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、-C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;およびnは0~6の範囲の整数である]を有する薬物化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。式Ibの化合物は患者において癌、自己免疫疾患または感染症を治療するのに有用であるか、あるいは切断可能薬物ユニットを有する薬物-リンカー、薬物-リンカー-リガンド結合体、および薬物-リガンド結合体の合成用の中間体として有用である。もう1つの態様において、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物が提供される。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物を有する有効量の薬物-リガンド結合体、および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リガンド化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含み、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-リガンド結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する薬物-リンカー化合物の合成用の中間体として用いることができる薬物化合物が提供される。もう1つの態様において、薬物-リンカー-リガンド結合体の合成用の中間体として用いることができる薬物-リンカー化合物が提供される。もう1つの態様において、式Ia’:[式中:AbはCD30、CD40、CD70、およびLewisY抗原に結合するものを含めた抗体を含み、AはストレッチチャーStretcherユニットであり、aは0または1であり、各Wは独立してアミノ酸ユニットであり、wは0~12の範囲の整数であり、Yはスペーサーユニットであり、およびyは0、1または2であり、pは1~約20の範囲であり、およびDは式DEおよびDFから選択される薬物ユニットであり:ここで、独立して、各位置において:R2はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R3はH,C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、H、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは、2、3、4、5および6から選択され;R6はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R7はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、H、OH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環およびO-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R10はアリールまたはC3-C8複素環から選択され;ZはO、S、NHまたはNR12であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13はC2-C8アルキルであり;R14はHまたはC1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;R18は-CR82-CR82-アリール、-CR82-CR82-C3-C8複素環、および-CR82-CR82-C3-C8炭素環から選択され;nは0~6の範囲の整数であり]を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。1つの実施形態において、Abは、ErbBレセプターに結合する、またはレセプター1~35の1以上に結合する抗体ではない:1BMPR1B骨形態形成タンパク質レセプター-タイプIB,Genbankアクセッション番号NM001203;2E16LAT1,SLC7A5,Genbankアクセッション番号NM003486;3STEAP1前立腺の6回膜貫通上皮抗原,Genbankアクセッション番号NM012449;40772PCA125,MUC16,Genbankアクセッション番号AF361486;5MPFMPF,MSLN,SMR,巨核細胞増強因子,メソテリン、Genbankアクセッション番号NM005823;6Napi3bNAPI-3B,NPTIIb、SLC34A2,溶質キャリアーファミリー34リン酸ナトリウム,メンバー2,タイプIIナトリウム-依存性リン酸トランスポーター3b,Genbankアクセッション番号NM006424;7Sema5bFLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,セマフォリン5bHlog,semaドメイン,7回トロンボスポンジンリピートタイプIおよびタイプI-様.膜貫通ドメインTMおよび短い細胞質ドメイン,セマフォリン5B,Genbankアクセッション番号AB040878;8PSCAhlg2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKENcDNA2700050C12,RIKENcDNA2700050C12遺伝子,Genbankアクセッション番号AY358628;9ETBRエンドセリンタイプBレセプター,Genbankアクセッション番号AY275463;10MSG783RNF124,仮想タンパク質FLJ20315,Genbankアクセッション番号NM017763;11STEAP2HGNC8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前立腺癌関連遺伝子1,前立腺癌関連タンパク質1,前立腺2の6回膜貫通上皮抗原,6回膜貫通前立腺タンパク質,Genbankアクセッション番号AF455138;12TrpM4BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,一過性レセプター潜在的カチオンチャネル,サブファミリーM,メンバー4,Genbankアクセッション番号NM017636;13CRIPTOCR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,テラトカルシノーマ-由来成長因子,Genbankアクセッション番号NP003203またはNM003212;14CD21CR2補体レセプター2またはC3DRC3d/エプスタインバールウイルスレセプターまたはHs.73792,Genbankアクセッション番号M26004;15CD79bIGb免疫グロブリン-関連β,B29,Genbankアクセッション番号NM000626;16FcRH2IFGP4,IRTA4,SPAP1ASH2ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質1a,SPAP1B,SPAP1C,Genbankアクセッション番号NM030764;17HER2Genbankアクセッション番号M11730;18NCAGenbankアクセッション番号M18728;19MDPGenbankアクセッション番号BC017023;20IL20RαGenbankアクセッション番号AF184971;21BrevicanGenbankアクセッション番号AF229053;22Ephb2RGenbankアクセッション番号NM004442;23ASLG659Genbankアクセッション番号AX092328;24PSCAGenbankアクセッション番号AJ2974236;25GEDAGenbankアクセッション番号AY260763;26BAFF-RGenbankアクセッション番号NP443177.1;27CD22Genbankアクセッション番号NP-001762.1;28CD79aCD79A,CD79α,免疫グロブリン-関連α,IgβCD79Bと共有結合相互作用し、かつIgM分子とで表面上に複合体を形成し、B-細胞分化に関与するシグナルを変換するB細胞-特異的タンパク質,Genbankアクセッション番号NP001774.1;29CXCR5バーキットリンパ腫レセプター1,CXCL13ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、HIV-2感染および、恐らくは、AIDS、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるGプロテイン-結合レセプター,Genbankアクセッション番号NP001707.1;30HLA-DOBペプチドに結合し、それらをCD4Tリンパ球に提示するMHCクラスII分子Ia抗原のβサブユニット,Genbankアクセッション番号NP002111.1;31P2X5プリン作動性レセプターP2Xリガンド型イオンチャネル5,細胞外ATPによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る,Genbankアクセッション番号NP002552.2;32CD72B―細胞分化抗原CD72,Lyb-2、Genbankアクセッション番号NP001773.1;33LY64リンパ球抗原64RP105、ロイシンリッチリピートLRRファミリーのタイプI膜タンパク質はB-細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する,Genbankアクセッション番号NP005573.1;34FCRH1Fcレセプター-様タンパク質1、C2タイプIg-様およびITAMドメインを含有する免疫グロブリンFcドメインに対する推定レセプターはB-リンパ球分化において役割を有するであろう,Genbankアクセッション番号NP443170.1;または35IRTA2免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連2、B細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター;トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのB細胞悪性疾患で起こる,Genbankアクセッション番号NP112571.1。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニット部位を有する有効量の薬物-抗体結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物を有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む癌を治療する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞を殺し、またはその複製を阻害する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物を有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を治療する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、癌を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫抗体を発現する細胞の増殖を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、自己免疫疾患を予防する方法を提供する。さらにもう1つの態様において、本発明は、有効量の薬物-リンカー-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。なおもう1つの態様において、本発明は、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する有効量の薬物-抗体結合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、感染症を予防する方法を提供する。もう1つの態様において、薬物-抗体結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する薬物-リンカー化合物の合成用の中間体として用いることができる薬物化合物が提供される。もう1つの態様において、薬物-リンカー-抗体結合体の合成用の中間体として用いることができる薬物-リンカー化合物が提供される。1つの態様において、本発明は、式Ic:[式中:Abは抗原1~35の1以上に結合する抗体であり:1BMPR1B骨継体形成タンパク質レセプター-タイプIB,Genbankアクセッション番号NM001203;2E16LAT1,SLC7A5,Genbankアクセッション番号NM003486;3STEAP1前立腺の6回膜貫通上皮抗原,Genbankアクセッション番号NM012449;40772PCA125,MUC16,Genbankアクセッション番号AF361486;5MPFMPF,MSLN,SMR,巨核細胞増強因子,メソテリン、Genbankアクセッション番号NM005823;6Napi3bNAPI-3B,NPTIIb、SLC34A2,溶質キャリアーファミリー34リン酸ナトリウム,メンバー2,タイプIIナトリウム-依存性リン酸トランスポーター3b,Genbankアクセッション番号NM006424;7Sema5bFLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,セマフォリン5bHlog,semaドメイン,7回トロンボスポンジンリピートタイプIおよびタイプI-様.膜貫通ドメインTMおよび短い細胞質ドメイン,セマフォリン5B,Genbankアクセッション番号AB040878;8PSCAhlg2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKENcDNA2700050C12,RIKENcDNA2700050C12遺伝子,Genbankアクセッション番号AY358628;9ETBRエンドセリンタイプBレセプター,Genbankアクセッション番号AY275463;10MSG783RNF124,仮想タンパク質FLJ20315,Genbankアクセッション番号NM017763;11STEAP2HGNC8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前立腺癌関連遺伝子1,前立腺癌関連タンパク質1,前立腺2の6回膜貫通上皮抗原.6回膜貫通前立腺タンパク質,Genbankアクセッション番号AF455138;12TrpM4BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,一過性レセプター潜在的カチオンチャネル,サブファミリーM,メンバー4,Genbankアクセッション番号NM017636;13CRIPTOCR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,テラトカルシノーマ-由来成長因子,Genbankアクセッション番号NP003203またはNM003212;14CD21CR2補体レセプター2またはC3DRC3d/エプスタインバールウイルスレセプターまたはHs.73792,Genbankアクセッション番号M26004;15CD79bIGb免疫グロブリン-関連β,B29,Genbankアクセッション番号NM000626;16FcRH2IFGP4,IRTA4,SPAP1ASH2ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質1a,SPAP1B,SPAP1C,Genbankアクセッション番号NM030764;17HER2Genbankアクセッション番号M11730;18NCAGenbankアクセッション番号M18728;19MDPGenbankアクセッション番号BC017023;20IL20RαGenbankアクセッション番号AF184971;21BrevicanGenbankアクセッション番号AF229053;22Ephb2RGenbankアクセッション番号NM004442;23ASLG659Genbankアクセッション番号AX092328;24PSCAGenbankアクセッション番号AJ297436;25GEDAGenbankアクセッション番号AY260763;26BAFF-RGenbankアクセッション番号NP443177.1;27CD22Genbankアクセッション番号NP-001762.1;28CD79aCD79A,CD79α,免疫グロブリン-関連α,IgβCD79Bと共有結合相互作用し、かつIgM分子とで表面上に複合体を形成し、B-細胞分化に関与するシグナルを変換するB細胞-特異的タンパク質,Genbankアクセッション番号NP001774.1;29CXCR5バーキットリンパ腫レセプター1,CXCL13ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、HIV-2感染および、恐らくは、AIDS、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるGプロテイン-結合レセプター,Genbankアクセッション番号NP001707.1;30HLA-DOBペプチドに結合し、それらをCD4Tリンパ球に提示するMHCクラスII分子Ia抗原のβサブユニット,Genbankアクセッション番号NP002111.1;31P2X5プリン作動性レセプターP2Xリガンド型イオンチャネル5,細胞外ATPによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る,Genbankアクセッション番号NP002552.2;32CD72B―細胞分化抗原CD72,Lyb-2、Genbankアクセッション番号NP001773.1;33LY64リンパ球抗原64RP105、ロイシンリッチリピートLRRファミリーのタイプI膜タンパク質はB-細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する,Genbankアクセッション番号NP005573.1;34FCRH1Fcレセプター-様タンパク質1、C2タイプIg-様およびITAMドメインを含有する免疫グロブリンFcドメインに対する推定レセプターはB-リンパ球分化において役割を有するであろう,Genbankアクセッション番号NP443170.1;または35IRTA2免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連2、B細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター;トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのB細胞悪性疾患で起こる,Genbankアクセッション番号NP112571.1;AはストレッチャーStretcherユニットであり、aは0または1であり、各Wは独立してアミノ酸ユニットであり、wは0~12の範囲の整数であり、Yはスペーサーユニットであり、およびyは0、1または2であり、pは1~約20の範囲であり、およびDは式DEおよびDFから選択される薬物部分であり:ここで、DEおよびDFの波線はA、WまたはYへの共有結合付着部位を示し、独立して各位置において:R2はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R3はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、H、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され;R6はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R7はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、H、OH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環およびO-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R10はアリールまたはC3-C8複素環から選択され;ZはO、S、NHまたはNR12であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、C3-C8複素環、-R13Om―R14,または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13はC2-C8アルキルであり;R14はHまたはC1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;R18は-CR82-CR82-アリール、-CR82-CR82-C3-C8複素環、および-CR82-CR82-C3-C8炭素環から選択され;およびnは0~6の範囲の整数である]を有する抗体-薬物結合体ともいう薬物-リンカー-抗体結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。もう1つの態様において、本発明の抗体-薬物結合体ADCの抗体はErbB2遺伝子によってコードされるレセプターに特異的に結合する。もう1つの態様において、抗体-薬物結合体の抗体はhuMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7およびhuMAb4D5-8トラスツズマブから選択されるヒト化抗体である。もう1つの態様において、本発明は、本発明の抗体-薬物結合体化合物;容器;およびErbB2レセプターの過剰発現によって特徴付けられる癌を治療するのに当該化合物を用いることができることを示すパッケージインサートまたはラベルを含む製品を含む。もう1つの態様において、本発明は、治療有効量の本発明の抗体-薬物結合体化合物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物において癌を治療する方法を含み、ここで、該癌はErbB2レセプターの過剰発現によって特徴付けられ、抗-ErbB2抗体での治療に応答せず、または応答しにくい。もう1つの態様において、薬物部分の相当量は、抗体-薬物化合物が抗体-薬物結合体の抗体に対して特異的な細胞-表面レセプターを持つ細胞に進入するまで抗体から切断されず、抗体-薬物結合体が細胞に進入する場合には、薬物部分は抗体から切断される。もう1つの態様において、抗体-薬物結合体化合物の生物学的利用能または哺乳動物における該化合物の細胞内代謝産物は、抗体-薬物結合体化合物の薬物部分を含む薬物化合物と比較した場合に、または薬物部分を有しない化合物のアナログと比較した場合に改善されている。もう1つの態様において、薬物部分は化合物の抗体から、または化合物の細胞内代謝産物から哺乳動物において細胞内で切断される。もう1つの態様において、本発明は、有効量の本発明の抗体-薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩、および薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤を含む薬学的組成物を含む。該組成物は、さらに、治療有効量のチューブリン-形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびDNA結合剤のような化学治療剤を含むことができる。もう1つの態様において、本発明は、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害するのに有効な、一定量の本発明の抗体-薬物結合体化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物で腫瘍細胞または癌細胞を処理することを含む、腫瘍細胞または癌細胞を殺し、またはその増殖を阻害する方法を含む。もう1つの態様において、本発明は、細胞培養基中の哺乳動物細胞を本発明の抗体薬物結合体化合物に曝露することを含む細胞増殖を阻害する方法を含み、ここで、該抗体薬物結合体化合物は細胞に進入し、薬物は抗体薬物結合体化合物の残りから切断され;それにより、細胞の増殖は阻害される。もう1つの態様において、本発明は、本発明の抗体-薬物結合体化合物、および薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤の処方を患者に投与することを含み、癌を治療する方法を含む。もう1つの態様において、本発明は:a細胞を本発明の抗体-薬物結合体化合物に曝露し;次いで、b抗体-薬物結合体化合物の細胞への結合の度合いを測定する;ことを含む、癌細胞を検出するアッセイを含む。添付の図面、図およびスキームと合わせて、例示的実施形態の以下の詳細な記載を参照することによって本発明は最良に理解されるであろう。以下の議論は記述的であり、説明的かつ例示的であって、いずれかの添付の請求の範囲によって定義される範囲を限定するものと取られるべきではない。4.例示的な実施形態の詳細な説明4.1定義および略語特記しない限り、本明細書中で用いる以下の用語およびフレーズは以下の意味を有することを意図する:商品名を本明細書中で用いる場合、出願人が独立して、商品名の製品処方、ジェネリック医薬品、および商品名製品の活性な医薬成分を含めることを意図する。本明細書中における用語抗体は最も広い意味で用い、所望の生物学的活性を呈する限り、無傷なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つの無傷の抗体から形成された多価抗体例えば、二重特異性抗体および抗体フラグメントを具体的にカバーする。抗体は、特異的抗原を認識し、それに結合することができる免疫系によって生じるタンパク質である。その構造の点で記載すると、抗体は、典型的には、4つのアミノ酸鎖、2つの重鎖および2つの軽鎖よりなるY―形状のタンパク質を有する。各抗体は主に2つの領域:可変領域、および定常領域を有する。Yのアームの端部に位置した可変領域は標的抗原に結合し、それと相互作用する。この可変領域は、特定の抗原上の特異的結合部位を認識し、それに結合する相補性決定領域CDRを含む。Yのテイルに位置した定常領域は免疫系によって認識され、それと相互作用するJaneway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik2001ImmunoBiology,第5版,GarlandPublishing,NewYork。標的抗原は、一般的には、複数抗体上のCDRによって認識される、エピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合する各抗体は異なる構造を有する。かくして、1つの抗原は1を超える対応する抗体を有する。本明細書中で用いる用語抗体とは、全長免疫グロブリン分子または全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な、すなわち、癌細胞、限定されるものではないが、自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を生産する細胞を含めた標的のような、注目する標的の抗原またはその部分に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子もいう。本明細書中に開示された免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子のいずれかのタイプ例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、およびIgA、クラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2またはサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンはいずれかの種に由来するものであり得るものである。しかしながら、一つの態様においては、免疫グロブリンは、ヒト、ネズミまたはウサギ起源のものである。もう一つの態様において、抗体はポリクローナル、モノクローナル、二特異的、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、一本鎖抗体、Fv、Fabフラグメント、Fab’フラグメント、Fab’2フラグメント、Fab発現ライブラリーによって生産されたフラグメント、抗-イディオタイプ抗-Id抗体、CDR、および癌細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原に免疫特異的に結合する前記のいずれかのエピドープ-結合フラグメントである。本明細書中で用いる用語モノクローナル抗体とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体をいい、すなわち、該集団を含む個々の抗体は微量に存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対して向けられる。さらに、異なる決定基エピトークに対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体によって汚染せずに合成できる点で有利である。修飾語モノクローナルは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体の特徴を示し、いずれかの特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用すべきモノクローナル抗体はKohleretal.1975Nature256:495によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作成できるか、あるいは組換えDNA方法によって作成することができる米国特許第4816567号参照。また、モノクローナル抗体は、例えば、Clacksonetal.1991Nature,352:624-628およびMarksetal.1991J.Mol.Biol.,222:581-597に記載された技術を用いてファージー抗体ライブラリーから単離することもできる。本明細書中におけるモノクローナル抗体が、具体的には、重鎖および/軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体に属する抗体における対応する配列と同一またはそれに相同あり、他方、鎖の残りはもう一つの種に由来するか、あるいはもう一つの抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるか、またはそれと相同であるキメラ抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントを、それらが所望の生物学的活性を呈する限り含む米国特許第mp-4816567号;およびMorrisonetal.1984Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855。モノクローナル抗体MAbsを生産するのに種々の方法が使用されてきた。単一タイプの抗体を生産するクローン化された細胞系をいうハイブリドーマ技術はマウスネズミ、ハムスター、ラットおよびヒトを含めた種々の種の細胞を用いる。MAbsを調製するためのもう1つの方法は、組換えDNA技術を含めた遺伝子工学を用いる。これらの技術から作成されたモノクローナル抗体は、とりわけ、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む。キメラ抗体は1を超えるタイプの種からのDNAコーディング領域を組み合わせる。例えば、キメラ抗体はマウスからの可変領域およびヒトからの定常領域を誘導し得る。ヒト化抗体は、非ヒト部分を含むが、圧倒的に、ヒトに由来する。キメラ抗体のように、ヒト化抗体は完全にヒトの定常領域を含むことができる。しかしながら、キメラ抗体とは異なり、可変領域は部分的にヒトに由来し得る。ヒト化抗体の非ヒト、合成部分は、しばしば、ネズミ抗体におけるCDRに由来する。いずれの場合においても、これらの領域は、抗体が特異的抗原を認識しそれに結合するのを可能とするのに非常に重要である。記載したように、ネズミ抗体を用いることができる。診断および短期間療法で有用であるが、ネズミ抗体は、有害な免疫原性の応答の危険性を増加させることなく、ヒトに長期間投与することができない。ヒト抗マウス抗体HAMAと呼ばれるこの応答は、ヒト免疫系がネズミ抗体を外来性のものとして認識し、それを攻撃する場合に起こる。HAMA応答は毒性ショックまたは死滅さえ引き起こしかねない。キメラおよびヒト化抗体は、投与された抗体の非ヒト部分を最小化することによって、HAMA応答の尤度を低下させる。さらに、キメラおよびヒト化抗体は、抗体依存性細胞の細胞傷害性のような二次的ヒト免疫応答を活性化する追加の利点を有する。抗体フラグメントは、好ましくは、その抗原―結合または可変領域を含む無傷抗体の部分を含む。抗体フラグメントの例はFab、Fab’、Fab’2、およびFvフラグメント;二重特異性抗体;線状抗体;単一鎖抗体分子;および抗体フラグメントから形成された多特異的抗体を含む。無傷抗体は、抗原―結合可変領域ならびに軽鎖定常ドメインCLおよび重鎖定常ドメイン、CH1、CH2およびCH3を含むものである。定常ドメインは天然配列ドメイン例えば、ヒト天然配列定常ドメインまたはそのアミノ酸配列変種であり得る。無傷抗体は、抗体のFc領域天然配列Fc領域またはアミノ酸配列変種Fc領域に帰すことができる生物学的活性をいう1以上のエフェクター機能を有することができる。抗体エフェクター機能の例はC1q結合;補体依存性細胞傷害性;Fcレセプター結合;抗体―依存性細胞―媒介細胞傷害性ADCC;ファゴサイトーシス;細胞表面レセプター例えば、B細胞レセプター;BCRなどのダウンレギュレーションを含む。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、無傷抗体は異なるクラスに帰属させることができる。無傷抗体の五つの主なクラス:IgA、IgD、IgE、IgGおよびIgMがあり、これらのいくつかはさらにサブクラスイソタイプ、例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgAおよびIgA2に分けることができる。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、各々、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。サブユニットの構造および異なるクラスの免疫グロブリンの三次元立体配置はよく知られている。表現ErbB2およびHER2は本明細書中においては相互交換的に使用され、例えば、Sembaetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82;6497-65011985およびYamamotoetal.,1986Nature,319:230-234Genbankアクセッション番号X03363に記載されたヒトHER2タンパク質をいう。用語ErbB2とはヒトErbB2をコードする遺伝子をいい、neuとはネズミp185neuをコードする遺伝子をいう。好ましいErbB2は天然配列ヒトErbB2である。ErbBレセプターに対する抗体は、例えば、SantaCruzBiotechnology,Inc.California,USAを含めた多数の源から商業的に入手可能である。ErbBリガンドは、ErbBレセプターに結合しおよび/またはそれを活性化するポリペプチドを意味する。ErbBリガンドは上皮成長因子EGFSavageetal.1972J.Biol.Chem.,247:7612-7621;形質転換成長因子αTGF-αMarquardtetal.1984Science223:1079-1082;神経線維腫またはケラチノサイトオートクリン成長因子としても知られたアムフィレグリンShoyabetal.1989Science243;1074-1076;Kimuraetal.,Nature,348:257-2601990およびCooketal.,Mol.Cell.Biol.,11:2547-25571991;βセルリンShingetal.,Science,259:1604-16071993およびSasadaetal.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,190:11731993;ヘパリン-結合上皮成長因子HB-EGFHigashiyamaetal.,Science,251:936-9391991;エピレグリンToyodaetal.,J.Biol.Chem.,270:7495-75001995;およびKomurasakietal.,Oncogene,15:2841-28481997;へレグリン後記参照;ニューグリン-2NRG-2Carrawayetal.,Nature,387:512-5161997;ニューレグリン-3NRG-3Zhangetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.,94:9562-95671997;ニューレグリン-4NRG-4Hararietal.,Oncogene,18:2681-891999またはクリプトCR-1Kannanetal.,J.Biol.Chem.,2726:3330-33351997のような天然配列ヒトErbBリガンドであり得る。EGFRに結合するErbBリガンドはEGF、TGF-α、アムフィレグリン、βセルリン、HB-EGFおよびエピレグリンを含む。ErbB3に結合するErbBリガンドはヘレグリンを含む。ErbB4に結合することができるRbBリガンドはベタセグリン、エピレグリン、HB-EGF、NRG-2、NRG-3、NRG-4およびヘレグリンを含む。ErbBリガンドは合成ErbBリガンドであってもよい。合成リガンドは特定のErbBレセプターに特異的であり得るか、または特定のErbBレセプター複合体を認識することができる。合成リガンドの例は、合成ヘレグリン/EGFキメラブレグリンである例えば、ここに引用して援用するJonesetal.,1999FEBSLetters,447:227-231参照。ヘレグリンHRGは米国特許第5641869号またはMarchionnietal.,Nature,362:312-3181993に開示されたヘレグリン遺伝子産物によってコードされたポリペプチドをいう。ヘレグリンの例はヘレグリン-α、ヘレグリン-β1、ヘレグリン-β2、およびヘレグリン-β3Holmesetal.,Science,256:1205-12101992;および米国特許第5641869号;neu分化因子NDFPelesetal.,Cell69:205-2161992;アセチルコリンレセプター―誘導活性ARIAFallseta;.,1993Cell72:801-815;神経膠成長因子GGFMarchionnieta.,Nature,362;312-3181993;感覚および運動ニューロン由来因子SMDFHoetal.,J.Biol.Chem.,270:14523-145321995;γ―ヘレグリンSchaeferetal.,Oncogene,15:1385-13941997を含む。該用語は、そのEGF-様ドメインフラグメント例えば、HRGβ1177-244のような、天然配列HRGポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントおよび/またはアミノ酸配列変種を含む。ErbBへテロ-オリゴマーは、少なくとも二つの異なるErbBレセプターを含む非共有結合的に会合したオリゴマーである。ErbBダイマーは、二つの異なるErbBレセプターを含む非共有結合的に会合したオリゴマーである。そのような複合体は、二以上のErbBレセプターを発現する細胞がErbBリガンドに曝露されると形成できる。ErbBダイマーのようなErbBオリゴマーは免疫沈澱によって単離することができ、例えば、Soliwkowskietal.,J.Biol.Chem.,26920,14661-146651994に記載されたSDS-PAGEによって分析される。そのようなErbBへテロ-オリゴマーの例はHER1/HER2ともいうEGFR-ErbB2、ErbB2-ErbB3HER2/HER3およびErbB3-ErbB4HER3/HER4複合体を含む。さらに、ErbBへテロ-オリゴマーは、ErbB3、ErbB4またはEGFRErbB1のような異なるErbBレセプターと組み合わされた2以上のErbB2のレセプターを含むことができる。サイトカインレセプターサブユニット例えば、gp130のような他のタンパク質をヘテロ-オリゴマーに含むことができる。天然配列ポリペプチドは、天然に由来する、ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するもの、例えば腫瘍―会合抗原レセプターである。そのような天然配列ポリペプチドは天然から単離することができるか、あるいは組換えまたは合成手段によって生産することができる。かくして、天然配列ポリペプチドは天然に生じるヒトポリペプチド、ネズミポリペプチド、またはいずれかの他の哺乳動物種からのポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。用語アミノ酸配列変種とは、天然配列ポリペプチドはある程度異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。通常、アミノ酸配列変種は天然リガンドの少なくとも一つのレセプター結合ドメインと、または腫瘍―会合抗原のような天然レセプターの少なくとも一つのリガンド結合ドメインと少なくとも約70相同性を保有し、好ましくは、それらはそのようなレセプターまたはリガンド結合ドメインと少なくとも約80、より好ましくは少なくとも約90相同であろう。アミノ酸配列変種は天然アミノ酸配列のアミノ酸配列内のある位置において置換、欠失および/または挿入を保有する。配列同一性は、配列を整列させ、ギャップを導入して、必要であれば、最大のパーセント配列同一性を達した後に、同一であるアミノ酸配列変種における残基のパーセンテージと定義される。整列のための方法およびコンピュータプログラムは当該分野でよく知られている。一つのそのようなコンピュータプログラムは、1991年12月10日に、合衆国著作権局、Washington,DC20559におけるユーザー文書提示に申請されたGenentech,Inc.によって著作されたAlign2である。抗体―依存性細胞―媒介細胞傷害性およびADCCとは、FcレセプターFcRを発現する非特異的細胞傷害性細胞例えば、ナチュラルキラーNK細胞、好中球、およびマクロファージが標的細胞上の結合した抗体を認識し、引き続いて、標的細胞の溶解を引き起こす細胞―媒介反応をいう。ADCCを媒介する一次細胞であるNK細胞はFcγRIIIのみを発現し、他方、単球はFcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIを発現する。造血系細胞上でのFcR発現はRavetchandKinet,1991Annu.Rev.Immunol,9:457-92の464頁の表3にまとめられる。注目する分子のADCC活性を評価するためには、米国特許第5500362号または第5821337号に記載されたもののようなインビトロADCCアッセイを行うことができる。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は末梢血液単核細胞PBMCおよびナチュラルキラーNK細胞を含む。別法として、加えて、注目する分子のADCC活性は、例えば、Clynesetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:652-6561998に開示されたもののような動物モデルにおいてインビボにて評価することができる。用語FcレセプターまたはFcRは、抗体のFc領域に結合するレセプターを記載するために用いられる。好ましいFcRは天然配列ヒトFcRである。さらに、好ましいFcRは、IgG抗体に結合するものガンマレセプターであり、これらのレセプターの対立遺伝子変種および、別法として、スプライスされた形態を含めたFcγRI、FcγRII、およびFcγRIIIサブクラスのレセプターを含む。FcγRIIレセプターはその細胞質ドメインにおいて種として異なる同様なアミノ酸配列を有するFcγRIIA活性化レセプターおよびFcγRIIB阻害レセプターを含む。活性化レセプターFcγRIIAはその細胞質ドメインに免疫レセプターチロシン-ベースの活性化モチーフITAMを含む。阻害レセプターFcγRIIBはその細胞質ドメインにおける免疫レセプターチロシン-ベースの阻害モチーフITIMを含むDaeron,Annu.Rev.Immunol.,15:203-2341997におけるreviewM.参照。FcRはRavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol.,9:457-921991;Capeletal.,Immunomethods,4:25-341994;およびdeHaasetal.,J.Lab.Clin.Med,.126:330-411995にレビューされている。将来同定されるべきものを含めた他のFcRは本明細書中においては用語FcRに含まれる。また、該用語は、胎児への母性IgGの移動を担う新生児レセプターFcRnも含むGuyeretal.,J.Immunol.,117:5871976およびKimetal.,J.Immunol.,24:2491994。補体依存性細胞疾患性またはCDCとは、補体の存在下で標的を溶解させる分子能力をいう。補体活性化経路は、同属抗原と複合体化した分子例えば、抗体への補体系の第一の成分C1qの結合によって開始される。補体活性化を評価するためには、例えば、Gazzano-Santoroetal.,J.Immunol.Methods,202:1631996に記載されたCDCアッセイを行うことができる。用語可変は、可変ドメインのある部分が抗体の中で配列においてかなり異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性において用いられる。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一には分布していない。それは軽鎖および重鎖可変ドメインにおける共に超可変領域と呼ばれる三つのセグメントに濃縮される。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域FRと呼ばれる。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、β―シート構造に結合するループを形成し、ある場合には、該構造の部分を形成する三つの超可変領域によって結合された、大いにβ―シート立体配置を採用する四つのFRを含む。各鎖における超可変領域はFRによって近接して一緒に保持され、他の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原―結合部位の形成に寄与するKabatetal.1991SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版、PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD参照。定常ドメインは抗原への抗体の結合に直接的に関与しないが、抗体依存性細胞傷害性ADCCにおける抗体の参画のような種々のエフェクター機能を呈する。用語超可変領域は、本明細書中で用いる場合、抗原―結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は一般には、相補性決定領域またはCDRからのアミノ酸残基例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基24-34L1、50-56L2および89-97L3、および重鎖可変ドメインにおける31-35H1、50-65H2および95-102H3;Kabatetal、前掲および/または超可変ループからの残基例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基26-32L1、50-52L2および91-96L3、および重鎖可変ドメインにおける26-32H1、53-55H2および96-101H3;ChothiaandLesk1987J.Mol.Biol.,196:901-917からのアミノ酸残基を含む。フレームワーク領域またはFR残基は、本明細書中で定義された超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。抗体のパパイン消化は、各々が単一抗原―結合部位を持つFabフラグメントと呼ばれる二つの同一の抗原―結合フラグメントおよびその名称が容易に結晶化するその能力を反映する残存Fcフラグメントを生じる。ペプシンショインは、二つの抗原―結合部位を有し、依然として抗原を架橋することができるFab’2フラグメントを生じる。Fvは、完全な抗原-認識および抗原-結合部位を含有する最小抗体フラグメントである。この領域は、密に非共有結合会合した1つの重鎖および1つの軽鎖可変ドメインのダイマーよりなる。それは、各可変ドメインの3つの超可変領域が相互作用して、VH-VLダイマーの表面の抗原-結合部位を規定するこの立体配置にある。集合的に、6つの超可変領域は抗体に対する抗原-結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメインまたは抗原に対して特異的な3つの超可変領域のみを含むFvの半分でさえ、抗原を認識し結合する能力を有するが、全結合部位よりも低い親和性においてである。Fabフラグメントもまた軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一の定常ドメインCH1を含有する。Fab’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの1以上のシステインを含めた、重鎖CH1ドメインのカルボキシ末端における少数の残基の付加によってFabフラグメントとは異なる。Fab’-SHは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも1つの遊離チオール基を担うFab’についての本明細書中における命名である。Fab’2抗体フラグメントは、元来、それらの間にヒンジシステインを有するFab’フラグメントの対として生産された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。いずれかの脊椎動物種からの抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパκおよびラムダλと呼ばれる2つの明瞭に区別されるタイプの1つに帰属させることができる。単一鎖FvまたはscFv抗体フラグメントは抗体のVHおよびVLドメインを含み、ここで、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、Fvポリペプチドは、さらに、scFvが抗原結合のための所望の構造を形成するのを可能とするVHおよびVLドメインの間にポリペプチドリンカーを含む。scFvのレビューについては、ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113,RosenburgandMoore編,Springer-Verlag,NewYork,pp.269-3151994におけるPluckthun参照。用語二重特異性抗体diabodyとは、2つの抗原-結合部位を持つ小さな抗体フラグメントをいい、そのフラグメントは同一ポリペプチド鎖VH-VLにおける可変軽鎖ドメインVLに連結された可変重鎖ドメインVHを含む。同一鎖上の2つのドメインの間の対合を可能とするにはあまりにも短いリンカーを用いることによって、ドメインはもう1つの鎖の相補的ドメインと対合し、2つの抗原-結合部位を作り出すことを強いられる。二重特異性抗体は、例えば、EP404,097;WO93/11161;およびHollingeretal.1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448により十分に記載されている。非-ヒト例えば、げっ歯類抗体のヒト化形態は、非-ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、受容者の超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性および容量を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類のような非-ヒト種ドナー抗体の超可変領域に由来する残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン受容者抗体である。いくつかの場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域FR残基は対応する非-ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は受容者抗体またはドナー抗体に見出されない残基を含むことができる。これらの修飾は抗体の性能をさらに精錬するためになされる。一般に、ヒト化抗体は少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては非-ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、FRの全てまたは実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のそれである。ヒト化抗体は、所望により、免疫グロブリン定常領域Fcの少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。さらなる詳細については、Jonesetal.1986Nature,321:522-525;Riechmannetal.1988Nature332:323-329;およびPresta,1992Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596参照。ヒト化抗-ErbB2抗体は、ここに引用して明示的に援用する米国特許第5821337号の表3に記載されたhuMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7およびhuMAb4D5-8HERCEPTIN登録商標;ヒト化520C9WO93/21319および本明細書中にて後に記載するヒト化2C4抗体を含む。単離された抗体は、同定され、かつその天然環境の成分から分離されおよび/または回収されたものである。その天然環境の汚染成分は抗体についての診断または治療用途に干渉する物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含むことができる。好ましい実施形態において、抗体は1Lowry方法によって測定して抗体の95重量以上、最も好ましくは99重要以上、2スピンニングカップシクエネーターの使用によってN-末端または内部アミノ酸配列の少なくとも15残基を得るのに十分な程度まで、または3クーマシーブルーまたは、好ましくは、銀染色を用いて還元または非還元条件下でSDS-PAGEによって均一なまで精製されるであろう。単離された抗体は、組換え細胞内のインサイチュでの抗体を含む。というのは、抗体の天然環境の少なくとも1つの成分は存在しないからである。しかしながら、通常、単離された抗体は少なくとも1つの精製工程によって調製される。注目する抗原に結合する抗体は、該抗体が抗原を発現する細胞を標的とするのに有用であるように、十分な親和性でもってその抗原に結合することができるものである。アポトーシスを誘導する抗体は、アネキシンVの結合、DNAのフラグメント化、細胞の収縮、小胞体の膨張、細胞フラグメント化、および/またはアポトーシスボディと呼ばれる膜小胞の形成によって判断してプログラムされた細胞死を誘導するものである。細胞は腫瘍細胞、例えば、乳房細胞、卵巣細胞、胃細胞、子宮内膜細胞、唾液腺細胞、肺細胞、腎臓細胞、結腸細胞、甲状腺細胞、膵臓細胞または膀胱細胞である。アポトーシスに関連した細胞事象を評価するために種々の方法が入手可能である。例えば、ホスファチジルセリンPSトランスロケーションはアネキシン結合によって測定することができ;DNAフラグメント化はDNAラダリングを通じて評価することができ;およびDNAフラグメント化に伴う核/クロマチン凝縮は低ジプロイド細胞のいずれかの増加によって評価することができる。疾患は本発明の治療から利益を受けるであろういずれもの症状である。これは、哺乳動物にとって問題とする疾患の素因となる病理学的疾患を含めた慢性および急性疾患または疾病を含む。ここに治療すべき疾患の非限定的例は良性および悪性腫瘍;白血病およびリンパ性悪性疾患、特に、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌または膀胱癌;ニューロン、神経膠、神経膠星状細胞、視床下部および他の腺、マクロファージ、上皮、間質および胞胚腔疾患;および炎症、脈管および免疫学的疾患を含む。用語治療有効量とは、哺乳動物において疾病または疾患を治療するのに効果的な薬物の量をいう。癌の場合には、薬物の治療有効量は癌細胞の数を減少させ;腫瘍サイズを減少させ;末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害しすなわち、幾分遅くし、好ましくは停止させる;腫瘍転移を阻害しすなわち、幾分遅くし、好ましくは停止させ;腫瘍成長を幾分阻害し;および/または癌に関連する兆候の1以上を幾分軽減することができる。薬物が存在する癌細胞の成長を予防しおよび/またはそれを殺すことができる程度まで、それは細胞静止性および/または細胞傷害性であり得る。癌療法では、効率は、例えば、病気の進行に対する時間TTPを評価しおよび/または応答速度RRを決定することによって測定することができる。用語実質量とは、収集または試料の集団の大部分、すなわち>50をいう。用語細胞内代謝産物とは、抗体薬物結合体ADC上の細胞内部の代謝プロセスまたは反応に由来する化合物をいう。代謝プロセスまたは反応はADCのペプチドリンカーのタンパク質分解切断のような酵素プロセス、またはヒドラゾン、エステルまたはアミドのような官能基の加水分解であり得る。細胞内代謝産物は、限定されるものではないが、細胞への進入、拡散、摂取または輸送後に細胞内切断を受けた抗体および遊離薬物を含む。用語細胞内で切断されたおよび細胞内切断とは、それにより、共有結合、例えば、薬物部分Dおよび抗体Abの間のリンカーが破壊され、その結果、抗体から解離された遊離薬物が細胞内に入る、薬物-リガンド結合体、薬物-リンカー-リガンド結合体、抗体薬物結合体ADC上の細胞内の代謝プロセスまたは反応をいう。薬物-リガンド結合体、薬物-リンカー-リガンド結合体またはADCの切断された部位は、かくして、細胞内代謝産物である。用語生物学的利用能とは、患者に投与された薬物の与えられた量の前身利用性すなわち、血液/血漿レベルをいう。生物学的利用能は、投与された投与形態から一般的循環に到達する薬物の時間速度および合計量程度双方の測定を示す絶対的用語である。用語細胞傷害性活性とは、抗体薬物結合体化合物または抗体薬物結合体化合物の細胞内代謝産物の細胞殺傷、細胞静止または抗-増殖効果をいう。細胞傷害性活性は、細胞の半分が生き残る単位容量当たりの濃度モラーまたは質量であるIC50値として表すことができる。用語癌および癌性は、未調節細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態をいい、それを記載する。腫瘍は1以上の癌性細胞を含む。癌の例は、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性疾患を含む。そのような癌のより特別な例は扁平細胞癌例えば、上皮扁平細胞癌、小細胞肺癌を含めた肺癌、非-小細胞肺癌NSCLC、肺の腺癌および肺の扁平癌腫、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含めた胃癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫ならびに頭部および頸部癌を含む。ErbB2-発現癌は、抗-ErbB2抗体がそれに結合することができ、癌に関して治療効果を有するように、その細胞の表面において十分なレベルのErbB2を生産するものである。ErbB2レセプターの過剰な活性化によって特徴付けられる癌は、癌細胞中のErbB2レセプター活性化の程度が同一組織タイプの非-癌性細胞におけるそのレセプターの活性化のレベルを有意に超えるものである。そのような過剰な活性化はErbB2レセプターの過剰発現に由来し得るか、および/または癌細胞におけるErbB2レセプターを活性化させるのに利用できるErbB2リガンドの正常なレベルよりも大であり得る。そのような過剰な活性化は癌細胞の悪性状態を引き起こしかねず、および/またはそれによって引き起こされ得る。いくつかの実施形態において、癌を診断または予後アッセイに付して、ErbB2レセプターの増幅および/または過剰発現が起こり、その結果、ErbB2レセプターのそのような過剰な活性化がもたらされるか否かを判断する。別法として、あるいは加えて、癌を診断または予後アッセイに付して、ErbB2リガンドの増幅および/または過剰発現が癌で起こりつつあり、それがレセプターの過剰な活性化に帰せられるか否かを判断することができる。そのような癌のサブセットにおいて、レセプターの過剰な活性化はオートクリン刺激経路に由来し得る。ErbB2レセプターを過剰発現する癌は、同一組織タイプの非癌性細胞と比較して、その細胞表面において有意に高いレベルのErbB2レセプターを有するものである。そのような過剰発現は遺伝子増幅によって、または増大した転写または翻訳によって引き起こされ得る。ErbB2レセプター過剰発現は、例えば、免疫組織化学アッセイ;IHCを介して細胞の表面に存在するErbB2タンパク質の増大したレベルを評価することによって診断または予後アッセイで決定することができる。別法として、あるいは加えて、例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーションFISH;WO98/45479参照、サザンブロッティング、リアルタイム定量PCRRT-PCRのようなポリメラーゼ鎖反応PCR技術を介して細胞におけるErbB2-コーディング核酸のレベルを測定することができる。ErbB2リガンドの過剰発現は、例えば、腫瘍バイオプシにおいて、または前記したIHC、FISH、サザンブロッティング、PCRまたはインビボアッセイのような種々の診断アッセイによって患者におけるリガンドまたはそれをコードする核酸のレベルを評価することによって診断的に決定することができる。また、血清のような生物学的流体中の放出された抗原例えば、ErbB2細胞外ドメインを測定することによってErbB2レセプター過剰発現を研究することができる例えば、米国特許第4933294号;WO91/05264;米国特許第5401638号;およびSiasetal.,1990J.Immunol.Methods,132:73-80参照。前記アッセイとは別に、種々の他のインビボアッセイが当業者に利用できる。例えば、患者の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体で所望により標識されていてもよい抗体へ曝露することができ、患者における細胞への抗体の結合は、例えば、放射能についての外部スキャンニングによって、または抗体に従前に曝露された患者から採取したバイオプシを分析することによって評価することができる。HER2を過剰発現する腫瘍は細胞当たりの発現されたHER2分子のコピーの数に対応する免疫組織化学スコアによってランク付けされ、生化学的に決定することができる:0=0~10,000コピー/細胞、1=少なくとも約200,000コピー/細胞、2=少なくとも約500,000コピー/細胞、3=約1~2×106コピー/細胞。チロシンキナーゼのリガンド-独立性活性化に導く3レベルにおけるHER2の過剰発現Hudziaketal.,1987Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84:7159-7163は、乳癌のほぼ30で起こり、これらの患者においては、再発-フリー生存および総じての生存は減少するSlamonetal.,1989Science,244:707-712;Slamonetal.,1987Science,235:177-182。逆に、ErbB2レセプターの過剰発現によって特徴付けられない癌は、診断アッセイにおいて、同一組織タイプの非癌性細胞と比較してErbB2レセプターの正常なレベルよりも高く発現しないものである。本明細書中で用いる用語細胞傷害性剤とは、細胞の機能を阻害し、または妨げ、および/または細胞の破壊を引き起こす物質をいう。該用語は放射性同位体例えば、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、60C、およびLuの放射性同位体、化学療法剤、およびその合成アナログおよび誘導体を含めた、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子とキシンまたは酵素的に活性なトキシンのようなトキシンを含むことを意図する。1つの態様において、該用語は放射性同位体を含めることを意図しない。化学療法剤は、癌の治療で有用な化学化合物である。化学療法剤の例はチオテパおよびCYTOXAN登録商標シクロホスファミドのようなアルキル化剤;ブスルファン、イムプロスルファンおよびピポスルファンのようなアルキルスルホネート;ベンゾドパ、カルボクオメ、メツレドパ、およびウレドパのようなアジリジン;アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミンを含めたエチレンイミドおよびメチルアメルアミン;TLK286TELCYTATM;アセトゲミン特にブラタシンおよびブラタシノン;デルタ-9-テトラヒドロカンナビノールドロナビノール、MARINOL登録商標;β-ラパショール;ラパショール;コルヒチン;ブテリン酸;合成アナログトポテカンHYCAMTIN登録商標、CPT-11イリノテカン、CAMPTOSAR登録商標、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および9-アミノカンプトテシンを含めたカンプトテシン;ブリオスタチン;カリスタチン;そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含めたCC-1065;ホドフィロトキシン;ポドフィリン酸;テニポシド;クリプトフィシン特にクリプトフィシン1およびクリプトフィシン8;ドラスタチン;合成アナログ、KW-2189およびCB1-TM1を含めたドゥオカルマイシン;エレウテロビン;パンクラチスタチン;サルポディクチイン;スポンジスタチン;クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキサイド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドミムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードのようなナイトロジェンマスタード;カルムスチン、クロロドトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムヌスチンのようなニトロソ尿素;クロドロネートのようなビスホスホネート;エネジイン抗生物質例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンガンマ1IおよびカリケアミシンオメガI1例えば、Agnew,ChemIntl.Ed.Engl.,33:183-1861994参照、およびアンナマイシンのようなアントラサイクリン、AD32、アルカルビシン、ダウノルビシン、ドキシラゾキサン、DX-52-1、エピルビシン、GPX-100、イダルビシン、KRN5500、メノガリル、ダイネミシンAを含めたダイネミシン、エスペラミシン、ネオカルジノスタチンフロモフォアおよび関連するクロモプロテインエンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、デトルビシン、6-ジアザ-5-オクソ-L-ノルロイシン、ADRIAMYCIN登録商標ドキソルビシンモルフォリノ-ドキソルビシン、シアノモルフォリノ-ドキソルビシン、2-ピロリノ-ドキソルビシン、リポソームドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む、エソルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンCのようなマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトミブリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、およびゾルビシンのような抗生物質;デノプテリン、プテロプテリン、およびトリメトトレキセートのような葉酸アナログ;フルダラビン、6-メルカプトプリン、チアミプリンおよびチオグアニンのようなプリンアナログ;アンシタビン、アザシチジン、6-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビンおよびフロキウリジンのようなピリミジンアナログ;カルステロン、ドロモスタノロンプロピオン酸、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクチンのようなアンドロゲン;アミノグルテチミド、ミトタンおよびトリロスタンのような抗-アドレナル;フォリン酸ロイコボリンのような葉酸補充物;アセグラトン;ALIMTA登録商標、LY231514プレメトレキセド、メトトレキセートのようなジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、5-フルオロウラシル5-FUのような抗-代謝産物、およびUFT、S-1およびカペシタビンのようなそのプロドラッグ、およびラルチトレキセドTOMUDEXRM,TDXのようなチミジレートシンターゼ阻害剤およびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ阻害剤のような抗-葉酸抗-新形成剤;エニルラシルのようなジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼのような阻害剤;アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;アムサクリン;ベストラブシル;ビスアントレン;エダトラキセート;デフォファミン;デメコルシン;チアジクオン;エルフォールニチン;エリプチニウム酢酸;エポチロン;エトグルシド;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダイニン;マイタンシンおよびアンサミトシンのようなマイタンシノイド;マイトグアゾン;マイトアントレン;モピダンモール;ニトラエリン;ペントスタチン;フェナメット;ピラルビシン;ロソキサントロン;2-エチルヒドラジド;プロカルバジン;PSK登録商標多糖複合体JHSNaturalProducts,Eugene,OR;ラゾキサン;リゾキシン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テヌアゾニン酸;トリアジクオン;2,2’,2-トリクロロトリエチルアミン;トリコテセン特にT-2トキシン、ベルラクリンA、ロリジンAおよびアンギジン;ウレタン;ビンデシンELDISINE登録商標、FILDESIN登録商標;ダカルバジン;マンノムスチン;マイトブロニトール;ミトラクトール;ピポブロマン;ガシトシン;アラビノシドAra-C;シクロホスファミド;チオテパ;タキソイドおよびタキセン、例えば、TAXOL登録商標パクリタキセルBristol-MyersSquibbOncology,Prinseton,N.J.、ABRAXANETMクレモフォール-フリー、パクリタキセルのアルブミン-作成ナノ粒子処方AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg,Illinois、およびTAXOTERE登録商標ドキセタキセルRhone-PoulencRorer,Antony,フランス;クロランブシル;ゲムシタビンGEMZAR登録商標;6-チオグアニン;メルカプトプリン;白金;シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンのような白金アナログまたは白金-ベースのアナログ;ビンブラスチンVELBAN登録商標;エトポシドVP-16;イフォスファミド;マイトキサントロン;ビンクリスチンONCOVIN登録商標;ビンカアルカロイド;ビノレルビンNAVELBINE登録商標;ノバントロン;エダトレキセート;ダウノマイシン;アミノプテリン;キセロータ;イバンドロメート;トポイソメラーゼ阻害剤RFS2000;ジフルオロメチルオルニチンDMFO;レチノイン酸のようなレチノイド;前記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体;並びにCHOPのような前記の2以上の組合せ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの組合せ療法のための省略、およびFOLFOX、5-FUおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチンELOXATINTMとの治療レジメン用の省略を含む。また、この定義には、例えば、タモキシフェンNOLVADEX登録商標タモキシフェンを含む、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、4-ヒドロキシタムキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストロンおよびFARESTON登録商標、トレミフェンを含めた、抗-エストロゲン、および選択的エストロゲンレセプターモジュレーターSERMのような腫瘍に対するホルモン作用を調節しまたはそれを阻害するように作用する抗-ホルモン剤;例えば、45-イミダゾール、アミノグルテチミド、MEGASE登録商標メゲステロール酢酸、AROMASIN登録商標エキセメスタン、フォルメスタニーム、ファドロゾール、RIVISOR登録商標ボロゾール、FEMARA登録商標レトロゾール、およびARIMIDEX登録商標アナストロゾールのような副腎におけるエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤;およびフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリンのような抗-アンドロゲン;ならびにトロキサシタビン1,3-ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ;アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、PKC-α、Raf、H-Ras、および上皮成長因子レセプターEGF-Rのような、アブフェラント細胞増殖に関与するシグナリング経路において遺伝子の発現を阻害するもの;遺伝子療法ワクチン、例えば、ALLOVECTIN登録商標ワクチン、LEUVECTIN登録商標ワクチンおよびVAXID登録商標ワクチンのようなワクチン;PROLEUKIN登録商標rIL-2;LURTOTECAN登録商標トポイソメラーゼ1阻害剤;ABARELIX登録商標rmRH;および前記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体が含まれる。本明細書中で用いるように、用語EGFR-標的化薬物とは、EGFRに結合し、所望により、EGFR活性化を阻害する治療剤をいう。そのような剤の例はEGFRに結合する抗体および小分子を含む。EGFRに結合する抗体の例はMAb579ATCCCRLHB8506、MAb455ATCCCRLHB8507,MAb225ATCCCRL8508、MAb528ATCCCRL8509米国特許第4943533号、Mendelsohnetal.参照、およびキメラ化225C225またはセツキシマブ;ERBITUX登録商標および再形成ヒト225H225のようなその変種WO96/40210,ImcloneSystemsInc.参照;タイプII突然変異体EGFRに結合する抗生物質米国特許第5,212,290号;米国特許第5891996号に記載された、EGFRに結合するヒト化およびキメラ抗体;およびABX-EGFのような、EGFRに結合するヒト抗生物質WO98/50433,Abgenix参照を含む。該抗-EGFR抗体は細胞傷害性剤と組み合わせることができ、かくして、免疫結合体を生じる例えば、EP659,439A2,MerckPatentGmbH参照。EGFRに結合する小分子の例はZD1839またはゲフィチニブIRESSATM;AstraZeneca、エルロチミブHClCP-358774,TARCEVATM;Genentech/OSIおよびAG1478、AG1571SU5271;Sugenを含む。チロシンキナーゼ阻害剤は、ErbBレセプターのようなチロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性をある程度阻害する分子である。そのような阻害剤の例は先行するパラグラフで述べたEGFR-標的化薬物ならびにPD153035、4-3-クロロアニリノキナゾリンのようなキナゾリン、ピリドピリミジン、ピリミドピリミジン、CGP59326、CGP60261およびCGP62706のようなピロロピリミジン、およびピラゾロピリミジン、4-フェニルアミノ-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン、クルコミンジフェルロイルメタン、4,5-ビス4-フルオロアニリノフタルイミド、ニトロチオフェン部位を含有するチルフォスチン;PD-0183805Warner-Lambert;アンチセンス分子例えば、ErbB-コーディング核酸に結合するもの;キノキサリン米国特許第5,806,396号;トリフォスチン米国特許第5804396号;ZD6474AstraZeneca;PTK-787Novartis/ScheringAG;CI-1033Pfizerのような汎-ErbB阻害剤;アフィニタックISIS3521;Isis/Lilly;イミアチニブメシレートGleevac;Novartis;PKI166Novartis;GW2016GlaxoSmithKline;CI-1033Pfizer;EKB-569Wyeth;セマキサニブSugen;ZD6474AstraZeneca;PTK-787Novartis/ScheringAG;INC-1C11Imclone;または以下の特許出願のいずれかに記載されたもの:米国特許第5804396号;WO99/09016AmericanCyanamid;WO98/43960AmericanCyanamid;WO97/38983WarnerLambert;WO99/06378WarlerLambert;WO99/06396WarnerLambert;WO96/30347Pfizer,Inc;WO96/33978Zeneca;WO96/3397Zeneca;およびWO96/33980Zenecaを含む。抗-脈管剤は、血管の発達をある程度ブロックし、またはそれに干渉する化合物をいう。抗-脈管因子は、例えば、脈管形成を促進するのに慣用する成長因子または成長因子レセプターに結合する小分子または抗体であり得る。1つの実施形態において、抗-脈管形成因子は血管内皮成長因子VEGFに結合する抗体である。用語サイトカインは、細胞間メディエーターとしてもう1つの細胞に作用する1つの細胞集団によって放出されたタンパク質についての上位概念的用語である。そのようなサイトカインの例はリンホカイン、モノカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンである。該サイトカインの中には、ヒト成長ホルモン、N-メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンのような成長ホルモン;副甲状腺ホルモン;チロキシン;インスリン;プロインスリン;レラキシン;プロレラキシン;卵胞刺激ホルモンFSH、甲状腺刺激ホルモンTSH、および黄体ホルモンLHのような糖タンパク質ホルモン;肝成長因子;線維芽成長因子;プロラクチン;胎盤ラクトゲン;腫瘍壊死因子-αおよび-β;ムレリアン-阻害物質;マウスゴナドトロピン関連ペプチド;インヒリン;アクチビン;血管内皮成長因子;インテグリン;トロンボポエチンTPO;NGF-βのような神経成長因子;血小板-成長因子;TGF-αおよびTGF-βのような形質転換成長因子TGF;インスリン-様成長因子-Iおよび-II;エリスロポエチンEPO;骨誘導因子;インターフェロン-α、-βおよび-γのようなインターフェロン;マクロファージ-CSFM-CSFのようなコロニー刺激因子CSF;顆粒球-マクロファージ-CSFGM-CSF;および顆粒球-CSFG-CSF;IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12のようなインターロイキンIL;TNF-αまたはTNF-βのような腫瘍壊死因子;およびLIFおよびキットリガンドKLを含めた他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書中で用いるように、用語サイトカインは天然源からの、または組換え細胞培養からのタンパク質、および天然配列サイトカインの生物学的な活性な同等体を含む。本出願で用いる用語プロドラッグとは、親薬物と比較して腫瘍細胞に対して細胞傷害性が低く、かつより活性な親形態で酵素的にまたは加水分解的に活性化されまたは変換されることができる薬学的に活性な物質の前駆体または誘導形態をいう。例えば、Wilman,ProdrugsinCancerChemotherapyBiochemicalSocietyTransactions,14、pp.375-382,615thMeatingBelfvst1986およびStellaetal.,Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery、DirectedDrugDelivery,Borchardtetal.編pp.247-267,HumanaPress1985参照。本出願のプロドラッグは、限定されるものではないが、ホスフェート-含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルフェート-含有プロドラッグ、ペプチド-含有プロドラッグ、D-アミノ酸修飾プロドラッグ、グルコシル化プロドラッグ、β-ラクタム-含有プロドラッグ、所望により置換されていてもよいフェノキシアセタミド-含有プロドラッグ、または所望により置換されていてもよいフェニールアセタミド-含有プロドラッグ、5-フルオロシトシン、およびより活性な細胞傷害性遊離薬物へ変換できる他の5-フルオロウリジンオプロドラッグを含む。本発明で用いるためのプロドラッグ継体へ誘導体化することができる細胞傷害性薬物の例は、限定されるものではないが、前記した化学療法剤を含む。リポソームは、抗-CD30、CD40、CD70またはLewisY抗体および、所望により、化学療法剤を含めた薬物の哺乳動物への送達に有用な種々のタイプの脂質、リン脂質および/または界面活性剤から構成された小さな小胞である。リポソームの成分は生体膜の脂質配置に似た、二相形成にて通常は配置される。用語パッケージインサートは、そのような治療製品の使用に関連する適応症、用法、投与量、投与、禁忌および/または警告についての情報を含む治療製品の商業的パッケージに慣用的に含まれる指令書をいうように用いられる。単離された核酸分子は、それが通常は抗体核酸の天然源に会合する少なくとも1つの汚染核酸分子から同定され、それから分離された核酸分子である。単離された核酸分子はそれが天然で見出される形態または状況以外である。単離された核酸分子は、従って、それが天然細胞に存在する核酸分子から区別される。しかしながら、単離された核酸分子は、例えば、核酸分子が天然細胞のそれとは異なる染色体位置にある抗体を通常は発現する細胞に含まれる核酸分子を含む。表現制御配列とは、特定の宿主生物において操作可能に連結したコーディング配列の発現に必要なDNA配列をいう。原核生物に適した制御配列は、例えば、プロモーター、所望により、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核生物細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用することが知られている。核酸は、それがもう1つの核酸配列と機能的に関係となっている場合に操作可能に連結されている。例えば、プレ配列または分泌リーダー用のDNAは、もしそれがポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されるならば、該ポリペプチド用のDNAに操作可能に連結される;プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響するならば、コーディング配列に操作可能に連結されている;あるいはリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易とするように位置していれば、コーディング配列に操作可能に連結されている。一般には、操作可能に連結しているは、連結されたDNA配列が隣接しており、分泌リーダーの場合には、隣接し、かつリーディング相にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接している必要がない。連結は便宜な制限部位における連結によって達成することができる。もしそのような部位が存在しなければ、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを慣用的プラクティスに従って用いることができる。本明細書中で用いるように、表現細胞、細胞系、および細胞培養は相互交換的に使用され、全てのそのような表示は子孫を含む。かくして、単語形質転換体および形質転換した細胞は一次対象細胞および導入の数に関することなくそれに由来する培養を含む。また、全ての子孫は、慎重なまたは不注意の突然変異のため、DNA含有量において正確には同一ではないであろうことは理解される。元来形質転換された細胞に付きスクリーニングされるのと同一の機能または生物学的活性を有する突然変異体子孫は含まれる。区別される表示該とされる場合,それは文脈から明瞭であろう。ここで、自己免疫疾患は、個体自体の組織またはその共-分離または発現または結果としてのそれからの状態から生起する、およびそれに向けられた疾病または疾患である。自己免疫疾患または疾病の例は、限定されるものではないが、関節炎慢性関節リウマチ、若年性慢性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、および剛直性脊椎炎、乾癬、アトピー性皮膚炎を含めた皮膚炎;慢性自己免疫蕁麻疹を含めた慢性特発性蕁麻疹、原発性筋炎/皮膚筋炎、毒性上皮壊死症、全身強皮症、および硬化症、炎症性腸疾患IBDクローン病,潰瘍性結腸炎に関連する応答、および壊疽性膿皮症の同時分離を伴うIBD炎症性腸疾患、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎、および/または上強膜炎、成人呼吸窮迫症候群ARDSなどの呼吸窮迫症候群、髄膜炎、アナフィラキシーおよびアレルギー性鼻炎などIgEが介在する疾患、ラスムッセン脳炎などの脳炎、ブドウ膜炎、顕微鏡的大腸炎および膠原性大腸炎などの大腸炎、膜性糸球体腎炎、特発性膜性糸球体腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎MPGN;1型と2型など、および急速進行性糸球体腎炎などの糸球体腎炎GN、アレルギー性疾患、湿疹、喘息、T細胞浸潤および慢性炎症反応に関与する疾患、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全症、皮膚の全身性エリテマトーデスなどの全身性エリテマトーデスSLE、腎炎、脳炎、小児期、非腎性、円板状、脱毛症などのループス、若年発症糖尿病、脊髄多発性硬化症などの多発性硬化症MS、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカインおよびTリンパ球が介在する急性過敏症および遅延型過敏症関連の免疫反応、結核、サルコイドーシス、ヴェゲナー肉芽腫症などの肉芽腫症、無顆粒球症、血管炎大血管の血管炎リウマチ性多発筋痛および巨細胞性高安動脈炎など、中血管の血管炎川崎病および結節性多発動脈炎など、CNS中枢神経系脈管炎、ならびにチャーグストラウス血管炎すなわちチャーグストラウス症候群CSSなどANCA抗好中球細胞質抗体が関連する血管炎など、再生不良性貧血、クームス試験陽性貧血、ダイアモンドブラックファン貧血、自己免疫性溶血性貧血AIHAなどの免疫性溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球癆PRCA、第VIII因子欠乏症、血友病A、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球の血管外遊出に関与する疾患、CNS炎症性疾患、多臓器障害症候群、重症筋無力症、抗原抗体複合体が介在する疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン病、グッドパスチャー症候群、ランバートイートン筋無力症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーブンスジョンソン症候群、臓器移植拒絶反応パネル反応性抗体価高値に対する前治療、組織内のIgA沈着、および腎移植、肝移植、腸管移植、心臓移植などが原因の拒絶反応など、移植片対宿主病GVHD、水疱性類天疱瘡、天疱瘡尋常性、落葉状、および天疱瘡粘膜類天疱瘡など、自己免疫性多内分泌腺症、ライター病、全身強直症候群、免疫複合体腎炎、IgM多発ニューロパシーまたはIgM介在性ニューロパシー、特発性血小板減少性紫斑病ITP、血栓性血小板減少性紫斑病TTP、自己免疫性血小板減少症などの血小板減少症例えば、心筋梗塞患者が発症するものなど、自己免疫性の精巣炎と卵巣炎など精巣および卵巣の自己免疫性疾患、原発性甲状腺機能低下症;自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎橋本病、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブス病、自己免疫性多腺性症候群または多腺性内分泌障害症候群、インスリン依存性小児糖尿病などの1型糖尿病インスリン依存性糖尿病IDDMとも呼ぶ、ならびにシーハン症候群などの自己免疫性内分泌疾患;自己免疫性肝炎、リンパ肺臓性間質性炎HIV、NSIP非特異的間質性肺炎に対する閉塞性細気管支炎非移植、ギランバレー症候群、ベルジェ病IgA腎症、原発性胆汁性肝硬変、セリアックスプルーグルテン腸症、同時分離した疱瘡状皮膚炎を伴う治療抵抗性スプルー、クリオグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症ALS;ルーゲーリッグ病、冠動脈疾患、自己免疫性内耳疾患AIED自己免疫性難聴、眼球クローヌスミオクローヌス症候群OMS、治療抵抗性多発性軟骨炎などの多発性軟骨炎、肺胞蛋白症、アミロイドーシス、巨細胞性肝炎、強膜炎、重症度不明の単クローン性免疫グロブリン血症MGUS、末梢性ニューロパシー、腫瘍随伴症候群、てんかん、片頭痛、不整脈、筋障害、ろう、盲、周期性麻痺、およびCNSチャネロパシーなどのチャネロパシー;自閉症、炎症性ミオパシー、ならびに巣状分節性糸球体硬化症FSGS。アルキルはノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有するC1-C18炭化水素である。その例はメチルMe、-CH3,エチルEt、-CH2CH3、1-プロピルn-Pr、-n-プロピル、-CH2CH2CH3、2-プロピルi-Pr、i―プロピル、-CHCH32、1-ブチルn-Bu、n-ブチル、-CH2CH2CH2CH3、2-メチル-1-プロピルi-Bu、i-ブチル、-CH2CHCH32、2-ブチルs-Bu、s-ブチル、-CHCH3CH2CH3、2-メチル-2-プロピルt-Bu、t-ブチル、-CCH33、1-ペンチルn-ペンチル、-CH2CH2CH2CH2CH3、2―ペンチル-CHCH3CH2CH2CH3、3-ペンチル-CHCH2CH32、2-メチル-2-ブチル-CCH32CH2CH3、3-メチル-2-ブチル-CHCH3CHCH32、3-メチル-1-ブチル-CH2CH2CHCH32、2-メチル-1-ブチル-CH2CHCH3CH2CH3、1-ヘキシル-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、2-ヘキシル-CHCH3CH2CH2CH2CH3、3-ヘキシル-CHCH2CH3CH2CH2CH3、2-メチル-2-ペンチル-CCH32CH2CH2CH3、3-メチル-2-ペンチル-CHCH3CHCH3CH2CH3、4-メチル-2-ペンチル-CHCH3CH2CHCH32、3-メチル-3-ペンチル-CCH3CH2CH32、2-メチル-3-ペンチル-CHCH2CH3CHCH32、2,3-ジメチル-2-ブチル-CCH32CHCH32、3,3-ジメチル-2-ブチル-CHCH3CCH33である。アルケニルは不飽和の少なくとも1つの部位、すなわち、炭素-炭素、sp2二重結合をもつノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有するC2-C18炭化水素である。その例は、限定されるものではないが:エチレンまたはビニル-CH=CH2、アリル-CH2CH=CH2、シクロペンテニル-C5H7、および5-ヘキセニル-CH2CH2CH2CH2CH=CH2を含む。アルキニルは不飽和の少なくとも1つの部位、すなわち、炭素-炭素、sp三重結合を持つノルマル、第二級、第三級、または環状炭素原子を含有するC2-C18炭化水素である。その例は、限定されるものではないが、アセチレン-C≡CHおよびプロパルギル-CH2C≡CHを含む。アルキレンとは、1~18の炭素原子の、かつ親アルカンの同一または2つの異なる炭素原子から2つの水素原子を除くことによって誘導される2つの一価基中心を有する飽和した分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基をいう。典型的なアルキレン基は、限定されるものではないが、メチレン-CH2-、1,2-エチル-CH2CH2-、1,3-プロピル-CH2CH2CH2-、1,4-ブチル-CH2CH2CH2CH2-等を含む。アルケニレンとは、2~18の炭素原子の、かつ親アルケンの同一または2つの異なる炭素原子から2つの水素原子を除くことによって誘導された2つの一価基中心を有する不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基をいう。典型的なアルケニレン基は、限定されるものではないが、1,2-エチレン-CH=CH-を含む。アルキニレンとは、2~18の炭素原子の、かつ親アルキンの同一または2つの異なる炭素原子から2つの水素原子を除くことによって誘導された2つの一価基中心を有する不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基をいう。典型的なアルキニレン基は、限定されるものではないが、アセチレン-C≡C-、プロパルギル-CH2C≡C-、および4-ペンチニル-CH2CH2CH2C≡CH-を含む。アリールは、親芳香族環系の単一炭素原子から1つの水素原子を除くことによって誘導された6~20の炭素原子の一価芳香族炭化水素を意味する。いくつかのアリール基はArとして例示的構造で示される。典型的なアリール基は、限定されるものではないが、ベンゼン、置換されたベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル等から誘導された基を含む。アリールアルキルとは、炭素原子、典型的には末端またはsp3炭素原子に結合した水素原子の1つがアリール基で置き換えられた非環状アルキル基をいう。典型的なアリールアルキル基は、限定されるものではないが、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンイジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イル等を含む。該アリールアルキル基は、6~20の炭素原子を含み、例えば、該アリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含めたアルキル部位は1~6の炭素原子であって、アリール部位は5~14の炭素原子である。ヘテロアリールアルキルは、炭素原子、典型的には末端またはsp3炭素原子に結合した水素原子の1つがヘテロアリール基で置き換えられた非環状アルキル基をいう。典型的なヘテロアリールアルキル基は、限定されるものではないが、2-ベンズイミダゾリルメチル、2-フリルエチル等を含む。該ヘテロアリールアルキル基は6~20の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含めたアルキル部位は1~6の炭素原子であって、ヘテロアリール部位は5~14の炭素原子およびN、O、PおよびSから選択される1~3のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部位は3~7環員を有する単環であり得る2~6の炭素原子、または7~10の環員4~9の炭素原子およびN、O、PおよびSから選択される1~3のヘテロ原子を有する二環、例えば:ビシクロ[4,5]、[5,5]、[5,6]、または[6,6]系。置換されたアルキル、置換されたアリールおよび置換されたアリールアルキルは、1以上の水素原子が各々独立して置換基で置換された、各々、アルキル、アリール、およびアリールアルキルを意味する。典型的な置換基は、限定されるものではないが、を含み、ここで、各Xは独立してハロゲン:F、Cl、BrまたはIであり;および各Rは独立して-H、C2-C18アルキル、C6-C20アリール、C3-C14複素環、保護基またはプロドラッグ部位である。前記したアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基もまた同様に置換されていてもよい。ヘテロアリールおよび複素環とは、1以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素および硫黄である環系をいう。複素環基は1~20の炭素原子、およびN、O、PおよびSから選択され他1~3のヘテロ原子を含む。複素環は3~7の環員2~6の炭素原子、およびN、O、PおよびSから選択される1~3のヘテロ原子を有する単環、または7~10の環員4~9の炭素原子、およびN、O、PおよびSから選択される1~3のヘテロ原子を有する二環、例えば、ビシクロ[4,5]、[5,5],[5,6]、または[6,6]系であってよい。複素環はPaquette,LeoA.;PrincplesofModernHeterocyclicChemistryW.A.Benjamin,NewYork,1968、特に1、3、4、6、7および9章;TheChemistryofHeterocyclicCompounds,ASeriesofMonographsJohnWileySons,NewYork,1950~現在、特に13、14、16、19および28章;およびJ.Am.Chem.Soc.196082:5566に記載されている。複素環の例は、その例として、限定されるものではないが、ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジルピペリジル、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス-テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、6H-1,2,5-チアジアジニル、2H,6H-1,5,2-ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、2H-ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、β-カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾポリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンズオキサゾリルおよびイサチノイルを含む。例としてかつ限定されるものではないが、炭素結合複素環はピリジンの位置2、3、4、5または6、ピリダジンの位置3、4、5または6、ピリミジンの位置2、4,5または6、ピラジンの位置2、3、5または6、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールまたはテトラヒドロピロールの位置2、3、4または5、オキサゾール、イミダゾールまたはチアゾールの位置2、4または5、イソオキサゾール、ピラゾールまたはイソチアゾールの位置3、4または5、アジリジンの位置2または3、アゼチジンの位置2、3または4、キノリンの位置2、3、4、5、6、7または8、またはイソキノリンの位置1、3、4、5、6、7または8で結合される。なおより典型的には、炭素結合複素環は2-ピイジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、または5-チアゾリルを含む。その例として、かつ限定されるものではないが、窒素結合複素環はアジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、3-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、1H-インダゾールの位置1、イソインドールまたはイソインドリンの位置2、モルホリンの位置4、およびカルバゾールまたはβ-カルボリンの位置9で結合している。なおより典型的には、窒素結合複素環は1-アジリジル、1-アゼテジル、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、および1-ピペリジニルを含む。炭素環は、単環としての3~7の炭素原子、または二環としての7~12の炭素原子を有する飽和または不飽和環を意味する。単環炭素原子は3~6の環原子、なおより典型的には5または6の環原子を有する。二環炭素環は、例えば、ビシクロ[4,5]、[5,5]、[5,6]または[6,6]系として配置された7~12の環原子、またはビシクロ[5,6]または[6,6]系として配置された9または10の環原子を有する。単環炭素環の例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、1-シクロペンタ-1-エニル、1-シクロペンタ-2-エニル、1-シクロペンタ-3-エニル、シクロヘキシル、1-シクロヘキサ-1-エニル、1-シクロヘキサ-2-エニル、1-シクロヘキサ-3-エニル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。リンカー、リンカーユニットまたはリンクは、薬物部分へ抗体を共有結合付着させる共有結合または炭素の鎖を含む化学部位を意味する。種々の実施形態において、リンカーはLUとして特定される。リンカーはアルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイルのような二価基、-CR2nOCR2n-、アルキルオキシの反復ユニット例えば、ポリエチレンオキシ、PEG、ポリメチレンオキシおよびアルキルアミノの反復ユニット例えば、ポリエチレンアミノ、JeffamineTMのような部位;およびスクシネート、スクシンアミド、ジグリコレート、マロネートおよびカプロアミドを含めた二酸エステルおよびアミドを含む。用語キラルとは、鏡像パートナーの非-重ね性の特性を有する分子をいい、他方、用語アキラルとは、それらの鏡像パートナー上に重ねることができる分子をいう。用語立体異性体とは、同一の化学構成を有するが、空間における原子または基の配置に関して異なる化合物をいう。ジアステレオマーはキラリティーの2以上の中心を持ち、その分子が相互の鏡像ではない立体異性体をいう。ジアステレオマーは異なる物理的特性、例えば、融解点、沸点、スペクトロ特性および反応性をいう。ジアステレオマーの混合物は電気泳動およびクロマトグラフィーのような高分解能分析手法下で分離することができる。エナンチオマーとは、相互に重ね合わせることのできない鏡像である化合物の2つの立体異性体をいう。本明細書中で用いる立体化学の定義および約束は、一般には、S.P.Parker編,McGraw-HillDictionaryofChemicalTerms1984McGraw-HillBookCompany,NewYork;およびEliel,E.andWilen,S.,StereochemistryofOgranicCompounds1994JohnWileySons,Inc.,NewYorkに従う。多くの有機化合物は光学的に活性な形態で存在し、すなわち、それらは面-偏光した光の面を回転させる能力を有する。光学的な活性な化合物を記載するにおいて、接頭辞DおよびL、またはRおよびSを用いて、そのキラル中心の周りの分子の絶対立体配置を示す。接頭辞dおよびlまたはおよび-を使用して、化合物による面-偏光された光の回転の符号を示し、-または1は化合物が左旋性であることを意味する。またはdの接頭辞を持つ化合物は右旋性である。与えられた化学構造に対しては、これらの立体異性体は、それらは相互に鏡像である以外は同一である。具体的立体異性体はエナンチオマーということもでき、そのような異性体の混合物は、しばしば、エナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの50:50混合物はラセミ混合物またはラセミ体といい、これは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性がない場合に起こり得る。用語ラセミ混合物およびラセミ体は光学活性を欠く、2つのエナンチオマー種の等モル混合物をいう。患者の例は、限定されるものではないが、ヒト、ラット、マウス、モルモット、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、鳥類および家禽を含む。例示的な実施形態において、患者はヒトである。アリールとは、炭素環芳香族基をいう。アリール基の例は、限定されるものではないが、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルを含む。炭素環芳香族基または複素環芳香族基は置換されていないか、または、限定されるものではないが、-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-アリール、-COR’、-OCOR’、-COOR’、-CONH2、-CONHR’、-CONR’2、-NHCOR’、-SO2R’、-SOR’、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NHR’、-NR’2および-CNを含めた1以上の基で置換することができ;ここで、該R’は独立してH、-C1-C8アルキルおよびアリールから選択される。本明細書中で用いる用語C1-C8アルキルとは、1~8の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の、飽和または不飽和炭化水素をいう。代表的なC1-C8アルキル基は、限定されるものではないが、-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、-n-ヘキシル、-n-ヘプチル、-n-オクチル、-n-ノニルおよび-n-デシルを含み;他方、分岐したC1-C8アルキルは、限定されるものではないが、-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、2-メチルブチルを含み、不飽和のC1-C8アルキルは、限定されるものではないが、-ビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニル、1-ヘキシル、2-ヘキシル、3-ヘキシル、-アセチレニル、-プロピニル、-1-ブチニル、-2-ブチニル、-1-ペンチニル、-2-ペンチニル、-3-メチル-1-ブチニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンテニル、ネオペンチル、n-ヘキシル、イソへキシル、2-メチルペンチル、3-メチルペンチル、2,2-ジメチルブチル、2,3-ジメチルブチル、2,2-ジメチルペンチル、2,3-ジメチルペンチル、3,3-ジメチルペンチル、2,3,4-トリメチルペンチル、3-メチルヘキシル、2,2-ジメチルヘキシル、2,4-ジメチルヘキシル、2,5-ジメチルヘキシル、3,5-ジメチルヘキシル、2,4-ジメチルペンチル、2-メチルヘプチル、3-メチルヘプチル、n-ヘプチル、イソヘプチル、n-オクチル、およびイソオクチルを含む。C1-C8アルキル基は置換されていないか、あるいは限定されるものではないが、-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-アリール、-COR’、-OCOR’、-COOR’、-CONH2、-CONHR’、-CONR’2、-NHCOR’、-SO3R’、-SO2R’、-SOR’、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NHR’、-NR’2および-CNを含めた1以上の基で置換することができ;ここで、各R’は独立して、H、-C1-C8アルキルおよびアリールから選択される。C3-C8炭素環は3-、4-、5-、6-、7-または8-員の飽和または不飽和の非-芳香族炭素環である。代表的なC3-C8炭素環は、限定されるものではないが、-シクロプロピル、-シクロブチル、-シクロペンチル、-シクロペンタジエニル、-シクロヘキシル、-シクロヘキセニル、-1,3-シクロヘキサジエニル、-1,4-シクロヘキサジエニル、-シクロヘプチル、-1,3-シクロヘプタジエニル、-1,3,5-シクロヘプタトリエニル、-シクロオクチルおよび-シクロオクタジエニルを含む。C3-C8炭素環は置換されていないか、または限定されるものではないが、-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-アリール、-COR’、-OCOR’、-COOR’、-CONH2、-CONHR’、-CONR’2、-NHCOR’、-SO2R’、-SOR’、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NHR’、-NR’2および-CNを含めた1以上の基で置換することができ;ここで、各R’は独立して、H、-C1-C8アルキルおよびアリールから選択される。C3-C8カルボシクロとは、炭素環基の水素原子の1つが結合で置き換えられた前記定義のC3-C8炭素環基をいう。C1-C10アルキレンは式-CH21-10の直鎖の飽和炭化水素基である。C1-C10アルキレンの例はメチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、へプチレン、オクチレン、ノニレンおよびデカレンを含む。アリーレンは、2つの共有結合を有し、以下の構造式に示されたオルト、メタまたはパラ立体配置であり得る:[式中、該フェニル基は置換されていないか、または限定されるものではないが、-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-アリール、-COR’、-OCOR’、-COOR’、-CONH2、-CONHR’、-CONR’2、-NHCOR’、-SO2R’、-SOR’、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NHR’、-NR’2および-CNを含めた4つまでの基で置換することができ;ここで、各R’は独立して、H、-C1-C8アルキルおよびアリールから選択される。]C3-C8複素環とは、環炭素原子の1~4が独立してO、SおよびNよりなる群から選択されるヘテロ原子で置換された芳香族または非-芳香族C3-C8炭素環をいう。C3-C8複素環の代表的な例は、限定されるものではないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、プラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピロリジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルを含む。C3-C8複素環は、置換されていないか、または限定されるものではないが、-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-アリール、-COR’、-OCOR’、-COOR’、-CONH2、-CONHR’、-CONR’2、-NHCOR’、-SO2R’、-SOR’、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NHR’、-NR’2および-CNを含めた7つまでの基で置換することができ;ここで、各R’は独立して、H、-C1-C8アルキルおよびアリールから選択される。C3-C8ヘテロシクロとは、炭素環基の水素原子の1つが結合で置き換えられた前記定義のC3-C8複素環基をいう。C3-C8複素環は置換されていないか、あるいは限定されるものではないが、-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-アリール、-COR’、-OCOR’、-COOR’、-CONH2、-CONHR’、-CONR’2、-NHCOR’、-SO2R’、-SOR’、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NHR’、-NR’2および-CNを含めた6つまでの基で置換することができ;ここで、各R’は独立して、H、-C1-C8アルキルおよびアリールから選択される。例示的な化合物は薬物化合物または薬物-リンカー化合物である。例示的結合体は、薬物-リガンド結合体または薬物-リンカー-リガンド結合体からの切断可能な薬物ユニットを有する薬物-リガンド結合体である。いくつかの実施形態において、例示的化合物および例示的結合体は単離されたまたは精製された形態におけるものである。本明細書中で用いるように、単離されたはa植物または動物細胞または細胞培養のような天然源またはb合成有機化学反応混合物の他の成分から分離されたを意味する。本明細書中で用いるように、精製されたは、単離された場合に、該単離体が該単離体の重量の少なくとも95、もう1つの態様においては、少なくとも98の例示的化合物または例示的結合体を含有することを意味する。ヒドロキシル保護基の例は、限定されるものではないが、メトキシメチルエーテル、2-メチルエトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、ベンジルエーテル、p-メトキシベンジルエーテル、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリイソプロピルシリルエーテル、t-ブチルジメチルシリルエーテル、トリフェニルメチルシリルエーテル、アセテートエステル、置換されたアセテートエステル、ピバロレート、ベンゾエート、メタンスルホネートおよびp-トルエンスルホネートを含む。脱離基とは、もう1つの官能基によって置換することができる官能基をいう。そのような脱離基は当該分野でよく知られており、その例は、限定されるものではないが、ハライド例えば、クロライド、ブロマイド、イオダイド、メタンスルホニルメチル、p-トルエンスルホニルトシル、トリフルオロメチルスルホニルトリフレート、およびトリフルオロメチルスルホネートを含む。本明細書中で用いるように、フレーズ薬学的に受容可能な塩とは、例示的化合物または例示的結合体の薬学的に受容可能な有機または無機塩をいう。該例示的化合物および例示的結合体は少なくとも1つのアミノ基を含有し、従って、酸付加塩はこのアミノ基とで形成することができる。例示的な塩は、限定されるものではないが、スルフェート、シトレート、アセテート、オキサレート、クロライド、ブロマイド、イオダイド、ニトレート、ビスルフェート、ホスフェート、酸ホスフェート、イソニコチネート、ラクテート、サリシレート、酸シトレート、タルトレート、オレエート、タンネート、パントテネート、ビタルトレート、アスコルベート、スクシネート、マレエート、ゲンチシネート、フマレート、グルコネート、グルクロネート、サッカレート、ホルメート、ベンゾエート、グルタメート、メタンスルホネート、エタンスルホネート、ベンゼンスルホネート、p-トルエンスルホネート、およびパモエートすなわち、1,1’-メチレン-ビス-2-ヒドロキシ-3-ナフトエート塩を含む。薬学的に受容可能な塩はアセテートイオン、スクシネートイオンまたは他の対イオンのようなもう1つの分子を含めることができる。該対イオンは親化合物上の電荷を安定化させるいずれの有機または無機部位であってもよい。さらに、薬学的に受容可能な塩はその構造において1を超える荷電した電子を有することができる。複数の荷電した電子が薬学的に受容可能な塩である場合は複数の対イオンを有することができる。よって、薬学的に受容可能な塩は1以上の荷電した電子および1以上の対イオンを有することができる。薬学的に受容可能な溶媒和物または溶媒和物とは、1以上の溶媒分子および本発明の化合物、例えば、例示的化合物または例示的結合体の会合をいう。薬学的に受容可能な溶媒和物を形成する溶媒の例は、限定されるものではないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、DMSO、酢酸エチル、酢酸およびエタノールアミンを含む。以下の略語を本明細書中で用い、示された定義を有する:AEはオーリスタチンEであり、BocはN-t-ブトキシカルボニルであり、citはシトルリンであり、dapはドラプロインであり、DCCは1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミドであり、DCMはジクロロメタンであり、DEAはジエチルアミンであり、DEADはジエチルアゾジカルボキシレートであり、DEPCはジエチルホスホリルシアニデートであり、DIADはジイソプロピルアゾジカルボキシレートであり、DIEAはN,N-ジイソプロピルエチルアミンであり、dilはドライソロイシンであり、DMAPは4-ジメチルアミノピリジンであり、DMEはエチレングリコールジメチルエーテルまたは1,2-ジメトキシエタンであり、DMFはN,N-ジメチルホルムアミドであり、DMSOはジメチルスルホキシドであり、doeはドラフェニンであり、dovはN,N-ジメチルバリンであり、DTNBは5,5’-ジチオビス2-ニトロ安息香酸であり、DTPAはジエチレントリアミンペンタ酢酸であり、DTTはジチオスレイトールであり、EDCIは1-3-ジメチルアミノプロピル-3-エチルカルボジイミド塩酸塩であり、EEDQは2-エトキシ-1-エトキシカルボニル-1,2-ジヒドロキノリンであり、ES-MSは電子スプレイ質量分析であり、EtOAcは酢酸エチルであり、FmocはN-9-フルオレニルメトキシカルボニルであり、glyはグリシンであり、HATUはO-7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-N,N、N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり、HOBtは1-ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、HPLCは高圧液体クロマトグラフィーであり、ileはイソロイシンであり、lysはリシンであり、MeCNCH3CNはアセトニトリルであり、MeOHはメタノールであり、Mtrは4-アニシルジフェニルメチルまたは4-メトキシトリチルであり、norは1S,2R--ノルエフェロリンであり、PABはp-アミノベンジルであり、PBSはリン酸-緩衝化生理食塩水pH7.4であり、PEGはポリエチレングリコールであり、Phはフェニルであり、Pnpはp-ニトロフェニルであり、MCは6-マレイミドカプロイルであり、pheはL-フェニルアミンであり、PyBropはブロモトリス-ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートであり、SECはサイズ-排除クロマトグラフィーであり、Suはスクシンイミドであり、TBTUはO-ベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N,N-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートであり、TFAはトリフルオロ酢酸であり、TLCは薄層クロマトグラフィーであり、UVは紫外線であり、およびvalはバリンである。以下のリンカー略語を本明細書中で用い、示された定義を有する:ValCitはバリン-シトルリン、プロテアーゼ切断可能リンカーにおけるジペプチド部位であり;PABはp-アミノベンジルカルバモイルであり;MevcはN-メチル-バリンシトルリンであり、ここで、該リンカーペプチド結合はカテプシンBによるその切断を妨げるように修飾されている;MCPEG6-OHはマレイミドカプロイル-ポリエチレングリコールであり;SPPは4-2-ピリジルチオペンタン酸N-スクシンイミジルであり;およびSMCCは4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボン酸N-スクシンイミジルである。用語治療するまたは治療は、文脈により他のことが示されない限り、治療的処置および予防的または防止的手段を共にいい、ここで、目的は癌の発生または拡大のような望まない生理学的変化または疾患を妨げまたは遅らせる少なくすることである。本発明の目的では、利益になるまたは望まれる臨床的結果は、限定されるものではないが、検出可能または検出不可能を問わず、兆候の軽減、病気の程度の低下、病気の安定化されたすなわち、悪くならない状態、病気進行の遅延または遅れ、病気状態の緩和または軽減、および緩解部分的または全体を問わないを含む。治療は、また、もし治療を受けないならば予測される生存と比較して延長される生存も意味することができる。治療を必要とするものは、疾患または疾病をすでに持つもの、ならびに疾患または疾病を有する傾向があるもの、または疾患または疾病を予防すべきものを含む。癌の文脈において、用語治療するは:腫瘍細胞、癌細胞の増殖の予防、または腫瘍の予防;腫瘍細胞または癌細胞の複製の予防、総じての腫瘍負荷の低下、または癌性細胞の数の減少、および病気に関連する1以上の兆候の軽減のいずれかまたは全てを含む。自己免疫疾患の文脈においては、用語治療するは:限定されるものではないが、自己免疫抗体を生産する細胞を含めた自己免疫疾患状態に関連する細胞の複製の予防、自己免疫-抗体負荷の低下および自己免疫疾患の1以上の兆候の軽減のいずれかまたは全てを含む。感染症の文脈においては、用語治療するは:感染症を引き起こす病原体の成長、増殖または複製の予防、および感染症の1以上の兆候の軽減のいずれかまたは全てを含む。以下の細胞傷害性薬物の略語が本明細書中で用いられ、示された定義を有する:MMAEはモノ-メチルオーリスタチンEMW718であり;MMAFはN-メチルバリン-バリン-ドライソロイシン-ドラプロイン-フェニルアラニンMW731.5であり;MMAF-DMAEAはC-末端フェニルアラニンへのアミド結合におけるDMAEAジメチルアミノエチルアミンを持つMMAFMW801.5であり;MMAF-TEGはフェニルアラニンにエステル化したテトラエチレングリコールを持つMMAFであり;MMAF-NtBuはMMAFのC-末端へアミドとして結合されたN-t-ブチルであり;AEVBはオーリスタチンEバレリルベンジルヒドラゾン、AEのC-末端を介する酸不安定リンカーMW732であり;およびAFPはオーリスタチンFのC-末端フェニルアラニンMW732を持つp-フェニレンジアミンのモノアミドである。4.2本発明の化合物4.2.1式Iaの化合物1つの態様において、本発明は式Ia:[式中、L-はリガンドユニットであり;-Aa-Ww-Yy-はリンカーユニットLUであり、ここで、該リンカーユニットは以下のものを含む:-A-はストレッチャーStretcherユニットであり、aは0または1であり、各-W-は独立してアミノ酸ユニットであり、wは0~12の範囲の整数であり、-Y-はスペーサーユニットであり、およびyは0、1または2であり;pは1~約20の範囲であり;および-Dは式DEおよびDF:を有する薬物ユニットであり、ここで、独立して、各位置において:R2はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R3はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、H、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され;R6はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R7はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、H、OH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環およびO-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R10はアリールまたはC3-C8複素環から選択され;ZはO、S、NHまたはNR12であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり、R13はC2-C8アルキルであり;R14はHまたはC1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;R18は-CR82-CR82-アリール、-CR82-CR82-C3-C8複素環、および-CR82-CR82-C3-C8炭素環から選択され、およびnは0~6の範囲の整数である]を有する薬物-リンカー-リガンド結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。もう1つの実施形態において、本発明は、式Ib:[式中:R2は水素および-C1-C8アルキルから選択され;R3は水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4は水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され、ここで、R5は-Hおよび-メチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、-H、-C1-C8アルキルおよび-C3-C8炭素環から選択され、およびnは2、3、4、5および6から選択され、それらが結合する炭素原子とで環を形成し;R6はHおよび-C1-C8アルキルから選択され;R7はH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環から選択され;各R8は独立して、H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環および-O-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよび-C1-C8アルキルから選択され;R10はアリール基または-C3-C8複素環から選択され;Zは-O-、-S-、-NH-または-NR12-であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13は-C2-C8アルキルであり;R14はHまたは-C1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、-COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、-C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;およびnは0~6の範囲の整数である]を有する薬物化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。なおもう1つの実施形態において、本発明は式Ia’:式Ia’[式中:Abは抗体であり、AはストレッチャーStretcherユニットであり、aは0または1であり、各Wは独立してアミノ酸ユニットであり、wは0~12の範囲の整数であり、Yはスペーサーユニットであり、およびyは0、1または2であり、pは1~約20の範囲であり、およびDは式DEおよびDF:から選択される薬物部分であり、ここで、独立して、各位置において:R2はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R3はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、H、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され;R6はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R7はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は独立して、H、OH、C1-C8アルキル、C3-C8およびO-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R10はアリールまたはC3-C8複素環から選択され;ZはO、S、NH、またはNR12であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13はC2-C8アルキルであり;R14はHまたはC1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;R18は-CR82-CR82-アリール、-CR82-CR82-C3-C8複素環、および-CR82-CR82-C3-C8炭素環から選択され;およびnは0~6の範囲の整数である]を有する薬物-リンカー-リガンド結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。Abは1以上の薬物ユニットに共有結合したいずれかの抗体である。AbはCD30、CD40、CD70、LewisY抗原に結合する抗体を含む。もう1つの実施形態において、AbはErbBレセプターに、または1以上のレセプター1~35に結合する抗体を含まない:1BMPR1B骨形態形成タンパク質レセプター-タイプIB,Genbankアクセッション番号NM001203;2E16LAT1,SLC7A5,Genbankアクセッション番号NM003486;3STEAP1前立腺の6回膜貫通上皮抗原,Genbankアクセッション番号NM012449;40772PCA125,MUC16,Genbankアクセッション番号AF361486;5MPFMPF,MSLN,SMR,巨核細胞増強因子,メソテリン、Genbankアクセッション番号NM005823;6Napi3bNAPI-3B,NPTIIb、SLC34A2,溶質キャリアーファミリー34リン酸ナトリウム,メンバー2,タイプIIナトリウム-依存性リン酸トランスポーター3b,Genbankアクセッション番号NM006424;7Sema5bFLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,セマフォリン5bHlog,semaドメイン,7回トロンボスポンジンリピートタイプIおよびタイプI-様.膜貫通ドメインTMおよび短い細胞質ドメイン,セマフォリン5B,Genbankアクセッション番号AB040878;8PSCAhlg2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKENcDNA2700050C12,RIKENcDNA2700050C12遺伝子,Genbankアクセッション番号AY358628;9ETBRエンドセリンタイプBレセプター,Genbankアクセッション番号AY275463;10MSG783RNF124,仮想タンパク質FLJ20315,Genbankアクセッション番号NM017763;11STEAP2HGNC8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前立腺癌関連遺伝子1,前立腺癌関連タンパク質1,前立腺2の6回膜貫通上皮抗原,6回膜貫通前立腺タンパク質,Genbankアクセッション番号AF455138;12TrpM4BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,一過性レセプター潜在的カチオンチャネル,サブファミリーM,メンバー4,Genbankアクセッション番号NM017636;13CRIPTOCR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,テラトカルシノーマ-由来成長因子,Genbankアクセッション番号NP003203またはNM003212;14CD21CR2補体レセプター2またはC3DRC3d/エプスタインバールウイルスレセプターまたはHs.73792,Genbankアクセッション番号M26004;15CD79bIGb免疫グロブリン-関連β,B29,Genbankアクセッション番号NM000626;16FcRH2IFGP4,IRTA4,SPAP1ASH2ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質1a,SPAP1B,SPAP1C,Genbankアクセッション番号NM030764;17HER2Genbankアクセッション番号M11730;18NCAGenbankアクセッション番号M18728;19MDPGenbankアクセッション番号BC017023;20IL20RαGenbankアクセッション番号AF184971;21BrevicanGenbankアクセッション番号AF229053;22Ephb2RGenbankアクセッション番号NM004442;23ASLG659Genbankアクセッション番号AX092328;24PSCAGenbankアクセッション番号AJ297436;25GEDAGenbankアクセッション番号AY260763;26BAFF-RGenbankアクセッション番号NP443177.1;27CD22Genbankアクセッション番号NP-001762.1;28CD79aCD79A,CD79α,免疫グロブリン-関連α,IgβCD79Bと共有結合相互作用し、かつIgM分子とで表面上に複合体を形成し、B-細胞分化に関与するシグナルを変換するB細胞-特異的タンパク質,Genbankアクセッション番号NP001774.1;29CXCR5バーキットリンパ腫レセプター1,CXCL13ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、HIV-2感染および、恐らくは、AIDS、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるGプロテイン-結合レセプター,Genbankアクセッション番号NP001707.1;30HLA-DOBペプチドに結合し、それらをCD4Tリンパ球に提示するMHCクラスII分子Ia抗原のβサブユニット,Genbankアクセッション番号NP002111.1;31P2X5プリン作動性レセプターP2Xリガンド型イオンチャネル5,細胞外ATPによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る,Genbankアクセッション番号NP002552.2;32CD72B―細胞分化抗原CD72,Lyb-2、Genbankアクセッション番号NP001773.1;33LY64リンパ球抗原64RP105、ロイシンリッチリピートLRRファミリーのタイプI膜タンパク質はB-細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する,Genbankアクセッション番号NP005573.1;34FCRH1Fcレセプター-様タンパク質1、C2タイプIg-様およびITAMドメインを含有する免疫グロブリンFcドメインに対する推定レセプターはB-リンパ球分化において役割を有するであろう,Genbankアクセッション番号NP443170.1;または35IRTA2免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連2、B細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター;トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのB細胞悪性疾患で起こる,Genbankアクセッション番号NP112571.1。1つの実施形態において、-Ww-は-Val-Cit-である。もう1つの実施形態において、R3、R4およびR7は、独立して、イソプロピルまたはsec-ブチルであって、R5は-Hである。例示的実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R5は-Hであって、R7はsec-ブチルである。さらにもう1つの実施形態において、R2およびR6は各々メチルであって、R9は-Hである。なおもう1つの実施形態において、R8の各出現は-OCH3である。例示的実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R2およびR6は各々メチルであり、R5は-Hであり、R7はsec-ブチルであり、R8の各出現は-OCH3であって、R9は-Hである。1つの実施形態において、Zは-O-または-NH-である。1つの実施形態において、R10はアリールである。例示的実施形態において、R10は-フェニルである。例示的実施形態において、Zが-O-である場合、R11は-H、メチルまたはt-ブチルである。1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-NR162であり、およびR16は-C1-C8アルキルまたは-CH2n-COOHである。もう1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-SO3Hである。1つの態様において、AbはcAC10、cBR96、cS2C6、c1F6、c2F2、hAC10、hBR96、hS2C6、h1F6、およびh2F2である。式Iaの例示的実施形態は以下の構造を有する:[式中、Lは抗体であり、Valはバリンであって、Citはシトルリンである]。薬物負荷はp、例えば、式Ia、Ia’およびIcの分子中の抗体当たりの薬物分子の平均数によって表される。薬物負荷はリガンド例えば、AbまたはmAb当たり1~20薬物Dの範囲であり得る。式Iaおよび式Ia’の組成物は1~20の薬物の範囲と結合体した抗体のコレクションを含む。結合体化反応の調製における抗体当たりの薬物の平均数は質量分析、ELISAアッセイおよびHPLCのような慣用的な手段によって特徴付けることができる。pの換算でリガンド-薬物-結合体の定量的分布も決定することができる。いくつかの例において、pが他の薬物負荷を持つリガンド-薬物-結合体からのある値である均一なリガンド-薬物-結合体の分離、精製および特徴付けは逆相HPLCまたは電気泳動のような手段によって達成することができる。4.2.2式Ibの薬物化合物もう1つの態様において、本発明は式Ib:[式中:R2は-水素および-C1-C8アルキルから選択され;R3は-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4は-水素、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、-アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され、ここで、R5は-Hおよび-メチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、-H、-C1-C8アルキルおよび-C3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され、それらが結合している炭素原子とで環を形成し;R6は-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;R7は-H、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環、アリール、-C1-C8アルキル-アリール、-C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、-C3-C8複素環および-C1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、-H、-OH、-C1-C8アルキル、-C3-C8炭素環および-O-C1-C8アルキルから選択され;R9は-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;R10はアリール基または-C3-C8複素環から選択され;Zは-O-、-S-、-NH-または-NR12-であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11は-H、C1-C20アルキル、アリール、-C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13は-C2-C8アルキルであり;R14は-Hまたは-C1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、-H、-COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、-H、-C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;およびnは0~6の範囲の整数である]を有する薬物化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。1つの実施形態において、R3、R4およびR7は、独立して、イソプロピルまたはsec-ブチルであって、R5は-Hである。例示的実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R5は-Hであって、R7はsec-ブチルである。もう1つの実施形態において、R2およびR6は各々メチルであって、R9は-Hである。なおもう1つの実施形態において、R8の各出現は-OCH3である。例示的実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R2およびR6は各々メチルであり、R5は-Hであり、R7はsec-ブチルであり、R8の各出現は-OCH3であって、R9は-Hである。1つの実施形態において、Zは-O-または-NH-である。1つの実施形態において、R10はアリールである。例示的実施形態において、R10は-フェニルである。例示的実施形態において、Zが-O-である場合、R11は-H、メチルまたはt-ブチルである。1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-NR162であり、およびR16は-C1-C8アルキルまたは-CH2n-COOHである。もう1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-SO3Hである。その各々がADCにおける薬物部分Dとして用いることができる式Ibの例示的化合物は以下の構造:を有する化合物、およびその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を含む。式Icの化合物もう1つの態様において、本発明は、1以上の薬物ユニット部位に共有結合した抗体を含む式Ic:を有する抗体-薬物結合体化合物ADCを提供する。抗体-薬物結合体化合物はその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を含む。式Ic化合物は以下のように定義される:Abは1以上の腫瘍-関連抗原レセプター1~35に結合する抗体である:1BMPR1B骨形態形成タンパク質レセプター-タイプIB,Genbankアクセッション番号NM001203;2E16LAT1,SLC7A5,Genbankアクセッション番号NM003486;3STEAP1前立腺の6回膜貫通上皮抗原,Genbankアクセッション番号NM012449;40772PCA125,MUC16,Genbankアクセッション番号AF361486;5MPFMPF,MSLN,SMR,巨核細胞増強因子,メソテリン、Genbankアクセッション番号NM005823;6Napi3bNAPI-3B,NPTIIb、SLC34A2,溶質キャリアーファミリー34リン酸ナトリウム,メンバー2,タイプIIナトリウム-依存性リン酸トランスポーター3b,Genbankアクセッション番号NM006424;7Sema5bFLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,セマフォリン5bHlog,semaドメイン,7回トロンボスポンジンリピートタイプIおよびタイプI-様.膜貫通ドメインTMおよび短い細胞質ドメイン,セマフォリン5B,Genbankアクセッション番号AB040878;8PSCAhlg2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKENcDNA2700050C12,RIKENcDNA2700050C12遺伝子,Genbankアクセッション番号AY358628;9ETBRエンドセリンタイプBレセプター,Genbankアクセッション番号AY275463;10MSG783RNF124,仮想タンパク質FLJ20315,Genbankアクセッション番号NM017763;11STEAP2HGNC8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前立腺癌関連遺伝子1,前立腺癌関連タンパク質1,前立腺2の6回膜貫通上皮抗原,6回膜貫通前立腺タンパク質,Genbankアクセッション番号AF455138;12TrpM4BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,一過性レセプター潜在的カチオンチャネル,サブファミリーM,メンバー4,Genbankアクセッション番号NM017636;13CRIPTOCR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,テラトカルシノーマ-由来成長因子,Genbankアクセッション番号NP003203またはNM003212;14CD21CR2補体レセプター2またはC3DRC3d/エプスタインバールウイルスレセプターまたはHs.73792,Genbankアクセッション番号M26004;15CD79bCD79B,CD79β,IGb免疫グロブリン-関連β,B29,Genbankアクセッション番号NM000626;16FcRH2IFGP4,IRTA4,SPAP1ASH2ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質1a,SPAP1B,SPAP1C,Genbankアクセッション番号NM030764;17HER2Genbankアクセッション番号M11730;18NCAGenbankアクセッション番号M18728;19MDPGenbankアクセッション番号BC017023;20IL20RαGenbankアクセッション番号AF184971;21BrevicanGenbankアクセッション番号AF229053;22Ephb2RGenbankアクセッション番号NM004442;23ASLG659Genbankアクセッション番号AX092328;24PSCAGenbankアクセッション番号AJ297436;25GEDAGenbankアクセッション番号AY260763;26BAFF-RB細胞-活性化因子レセプター、BLySレセプター3,BR3,NP443177.1;27CD22B細胞レセプターCD22-Bイソ型,NP-001762.1;28CD79aCD79A,CD79α,免疫グロブリン-関連α,IgβCD79Bと共有結合相互作用し、かつIgM分子とで表面上に複合体を形成し、B-細胞分化に関与するシグナルを変換するB細胞-特異的タンパク質,Genbankアクセッション番号NP001774.1;29CXCR5バーキットリンパ腫レセプター1,CXCL13ケモカインによって活性化され、リンパ球移動および液性防御で機能し、HIV-2感染および、恐らくは、AIDS、リンパ腫、骨髄腫および白血病も発生において役割を演じるGプロテイン-結合レセプター,Genbankアクセッション番号NP001707.1;30HLA-DOBペプチドに結合し、それらをCD4Tリンパ球に提示するMHCクラスII分子Ia抗原のβサブユニット,Genbankアクセッション番号NP002111.1;31P2X5プリン作動性レセプターP2Xリガンド型イオンチャネル5,細胞外ATPによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与し得、欠陥は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る,Genbankアクセッション番号NP002552.2;32CD72B―細胞分化抗原CD72,Lyb-2、Genbankアクセッション番号NP001773.1;33LY64リンパ球抗原64RP105、ロイシンリッチリピートLRRファミリーのタイプI膜タンパク質はB-細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスに罹った患者における増大した病気活性に関連する,Genbankアクセッション番号NP005573.1;34FCRH1Fcレセプター-様タンパク質1、C2タイプIg-様およびITAMドメインを含有する免疫グロブリンFcドメインに対する推定レセプターはB-リンパ球分化において役割を有するであろう,Genbankアクセッション番号NP443170.1;または35IRTA2免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連2、B細胞発生およびリンパ腫形成における可能な役割を持つ推定免疫レセプター;トラスローケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのB細胞悪性疾患で起こる,Genbankアクセッション番号NP112571.1。AはストレッチャーStretcherユニットであり、aは0または1であり、各Wは独立してアミノ酸ユニットであり、wは0~12の範囲の整数であり、Yはスペーサーユニットであり、およびyは0、1または2であり、pは1~約8の範囲であり、およびDは式DEおよびDFから選択される薬物部分であり;ここで、DEおよびDFの波線はA、WまたはYへの共有結合部位を示し、独立して、各一において:R2はH、およびC1-C8アルキルから選択され;R3はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、かつ式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、H、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され;R6はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R7はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、H、OH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環およびO-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R10はアリールまたはC3-C8複素環から選択され;ZはO、S、NHまたはNR12であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13はC2-C8アルキルであり;R14はHまたはC1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;R18は-CR82-CR82-アリール、-CR82-CR82-C3-C8複素環、および-CR82-CR82-C3-C8炭素環から選択され;およびnは0~6の範囲の整数である。1つの実施形態において、-Ww-は-Val-Cit-である。もう1つの実施形態において、R3、R4およびR7は、独立して、イソプロピルまたはsec-ブチルであって、R5は-Hである。例示的実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R5は-Hであって、R7はsec-ブチルである。さらにもう1つの実施形態において、R2およびR6は各々メチルであって、R9は-Hである。なおもう1つの実施形態においてR8の各出現は-OCH3である。例示的実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R2およびR6は各々メチルであり、R5は-Hであり、R7はsec-ブチルであり、R8の各出現は-OCH3であって、R9は-Hである。1つの実施形態において、Zは-O-または-NH-である。1つの実施形態において、R10はアリールである。例示的実施形態において、R10は-フェニルである。例示的実施形態において、Zが-O-である場合、R11は-H、メチルまたはt-ブチルである。1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-NR162であり、およびR16は-C1-C8アルキルまたは-CH2n-COOHである。もう1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-SO3Hである。式IcADCの例示的実施形態は以下の構造:[式中、Abは1以上の腫瘍-関連抗原レセプター1~35に結合する抗体であり;Valはバリンであり;Citはシトルリンである]を有する。薬物負荷はp、式Iの分子中の抗体当たりの薬物の平均数によって表される。薬物負荷は抗体AbまたはmAb当たり1~20薬物Dの範囲であり得る。式IのADCの組成物は1~20のある範囲の薬物と結合体した抗体のコレクションを含む。結合体化反応からのADCの調製における抗体当たりの薬物の平均数は、UV/可視分光分析、質量分析、ELISAアッセイ、およびHPLCのような慣用的手段によって特徴付けることができる。pの換算でのADCの定量的分布もまた決定することができる。いくつかの例において、pが他の薬物負荷でのADCからのある値である均一なADCの分離、精製および特徴付けは逆相HPLCまたは電気泳動のような手段によって達成することができる。いくつかの抗体薬物結合体では、pは抗体上の付着部位の数によって限定することができる。例えば、該付着がシステインチオールである場合、前記した例示的実施形態におけるように、抗体はただ1つまたは数個のシステインチオール基を有することができるか、あるいはそれを介してリンカーが結合することができるただ1つのまたは数個の十分に反応性のチオール基を有することができる。典型的には、薬物部分の理論的最大値よりも少数が結合体化反応の間に抗体に結合体化する。抗体は、例えば、薬物-リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しない多くのリシン残基を含むことができる。最も反応性のリシン残基のみがアミン-反応性リンカー試薬と反応することができる。一般に、抗体は、もしあれば、薬物部分に連結させることができる多くの遊離かつ反応性のシステインチオール基を含有することができない。本発明の化合物の抗体中のほとんどのシステインチオール残基はジスルフィドブリッジとして存在し、ジチオスレイトールDTTのような還元剤で還元しなければならない。加えて、抗体は変性条件に付して、リシンまたはシステインのような反応性求核性基を明らかとしなければならない。ADCの負荷薬物/抗体比率は:i抗体に対するモル過剰の薬物-リンカー中間体またはリンカー試薬の限定、ii結合体化反応時間または温度の限定、およびiiiシステインチオール修飾のための部分的または限定された還元条件を含めたいくつかの異なる方法で制御することができる。1を超える求核性基が薬物-リンカー中間体、リンカー試薬、続いて薬物部分試薬と反応する場合、得られる生成物は抗体に結合した1以上の薬物部分が分布したADC化合物の混合物である。抗体当たりの薬物の平均数は、抗体に特異的であって、該薬物に特異的なデュアルELISA抗体アッセイによって混合物から計算することができる。個々のADC分子は質量分析によって混合物中で同定することができ、HPLC、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離することができるEffectofdrugloadingonthepharmacology,pharmacokinetics,andtoxicityofananti-CD30antibody-drugconjugate,Hamblett,K.J.,etal.,AbstractNo.624,AmericanAssociationforCancerResearch:2004AnnualMeeting,March27-31,2004,ProceedingsoftheAACR,Volume45,March2004;ControllingtheLocationofDrugAttachmentinAntibody-DrugConjugates,AlleyS.C.,etal.,AbstractNo.627,AmericanAssociationforCancerResearch;2004AnnualMeeting,March27-31,2004,ProceedingsoftheAACR,Volume45,March2004。かくして、単一の負荷値を持つ均一なADCは電気泳動またはクロマトグラフィーによって結合体化混合物から単離することができる。4.3リンカーユニットリンカーユニットLUは、薬物ユニットおよびリガンドユニットを連結させて薬物-リンカー-リガンド結合体を形成するのに用いることができるか、あるいは腫瘍関連抗原に対して向けられた免疫結合体の形成で有用な二官能性化合物である。そのような免疫結合体は毒性薬物の腫瘍細胞への選択的送達を可能とする。1つの実施形態において、薬物-リンカー化合物および薬物-リンカー-リガンド結合体のリンカーユニットは式:[式中:-A-はストレッチャーStretcherユニットであり;aは0または1であり;各-W-は独立してアミノ酸ユニットであり;wは独立して0~12の範囲の整数であり;-Y-はスペーサーユニットであり;およびyは0、1または2である]を有する。薬物-リンカー-リガンド結合体において、該リンカーは薬物部分およびリガンドユニットを連結することができる。4.3.1ストレッチャーStretcherユニットストレッチャーユニット-A-は、存在する場合、リガンドユニットをアミノ酸ユニット-W-に連結することができる。この点において、リガンドLはストレッチャーの官能基とで結合を形成することができる官能基を有する。天然で、または化学的操作を介してリガンド上に存在させることができる有用な官能基は、限定されるものではないが、スルフヒドリル-SH、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、炭化水素のアノマーヒドロキシル基、およびカルボキシルを含む。1つの態様において、リガンド官能基はスルフヒドリルおよびアミノである。スルフヒドリル基はリガンドの分子内ジスルフィド結合の還元によって生じさせることができる。別法として、スルフヒドリル基は、2-イミノチオランTraut試薬またはもう1つのスルフヒドリル生成試薬を用いる、リガンドのリシン部位のアミノ基の反応によって生じさせることができる。1つの実施形態において、ストレッチャーユニットはリガンドユニットの硫黄原子との結合を形成する。硫黄原子はリガンドのスルフヒドリル基から由来することができる。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式IIIaおよびIIIbの四角ブラケット内に描かれ、ここで、L-、-W-、-Y-、-D、wおよびyは前記定義の通りであり、R17は-C1-C10アルキレン-、-C3-C8カルボシクロ-、-O-C1-C8アルキル-、-アリーレン-、-C1-C10アルキレン-アリーレン-、-アリーレン-C1-C10アルキレン-、-C1-C10アルキレン-C3-C8カルボシクロ-、-C3-C8カルボシクロ-C1-C10アルキレン-、-C3-C8ヘテロシクロ-、-C1-C10アルキレン-C3-C8ヘテロシクロ-、-C3-C8ヘテロシクロ-C1-C10アルキレン-、-CH2CH2Or-、および-CH2CH2Or-CH2-から選択され;およびrは1~10の範囲の整数である。III-VIのような式Iaの全ての例示的実施形態から、明示的に示されていなくても、1~20の薬物部分がリガンドに連結されるp=1~20。例示的なストレッチャーユニットは、R17が-CH25-である式IIIaのものである:もう1つの例示的ストレッチャーユニットは、R17が-CH2CH2Or-CH2-であって;およびrが2である式IIIaのそれである:なおもう1つの例示的ストレッチャーユニットは、R17が-CH25-である式IIIbのそれである:もう1つの実施形態において、ストレッチャーユニットは、リガンドユニットの硫黄原子およびストレッチャーユニットの硫黄原子の間のジスルフィド結合を介してリガンドユニットに連結される。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式IVの四角ブラケット内に描かれ、ここで、R17、L-、-W-、-Y-、-D、wおよびyは前記定義の通りである。さらにもう1つの実施形態において、ストレッチャーの反応性基はリガンドの第一級または第二級アミノ基とで結合形成できる反応性部位を含有する。これらの反応性部位の例は、限定されるものではないが、スクシンイミドエステル、4-ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、アンヒドライド、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネートおよびイソチオシアネートのような活性化されたエステルを含む。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式VaおよびVbの四角ブラケット内に描かれ、ここで、-R17-、L-、-W-、-Y-、-D、wおよびyは前記定義の通りである;さらにもう1つの態様において、ストレッチャーの反応性基は、リガンド上に存在することができる修飾された炭水化物の-CHO基に対して反応性である反応性部位を含む。例えば、炭水化物は過ヨウ素酸ナトリウムのような試薬を用いて穏和に酸化することができ、酸化された炭水化物の得られた-CHOユニットは、ヒドラジド、オキシム、第一級または第二級アミン、ヒドラジン、チオセニカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびKaneko,T.etal.1991BioconjugateChem2:133-41によって記載されたもののようなアリールヒドラジドのような官能性を含むストレッチャーと縮合させることができる。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは式VIa、VIbおよびVIcの四角ブラケット内に描かれ、ここで、-R17-、L-、-W-、-Y-、-D、wおよびyは前記定義の通りである。4.3.2アミノ酸ユニットアミノ酸ユニット-W-は、存在する場合、もしスペーサーユニットが存在すればストレッチャーユニットをスペーサーユニットに連結させ、もしスペーサーユニットが不存在であれば、スペーサーユニットを薬物部分に連結させ、もしストレッチャーユニットおよびスペーサーユニットが不存在であれば、リガンドユニットを薬物にユニットに連結させる。Ww-はジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、へプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチドユニットである。各-W-ユニットは独立して四角ブラケット中の以下に示す式を有し、およびwは0~12の範囲の整数であり:[式中、R19は水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、sec-ブチル、ベンジル、p-ヒドロキシベンジル、-CH2OH、-CHOHCH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-CH23NHC=NHNH2、-CH23NH2、-CH23NHCOCH3、-CH23NHCHO、-CH24NHC=NHNH2、-CH24NH2、-CH24NHCOCH3、-CH24NHCHO、-CH23NHCONH2、-CH24NHCONH2、-CH2CH2CHOHCH2NH2、2-ピリジルメチル、3-ピリジルメチル-、4-ピリジルメチル-、フェニル、シクロヘキシル、である]。アミノ酸ユニットは腫瘍-関連プロテアーゼを含めた1以上の酵素によって酵素的に切断して、薬物ユニット-Dを遊離させることができ、これは、1つの実施形態において、インビボで放出に際してプロトン化されて薬物Dを供する。例示的なWwユニットは式VII-IX:[式中、R20およびR21は以下の通りである:[式中、R20、R21およびR22は以下の通りである:[式中、R20、R21、R22およびR23以下の通りである:。例示的なアミノ酸ユニットは、限定されるものではないが、R20がベンジルであって、R21が-CH24NH2である;R20がイソプロピルであって、R21が-CH24NH2である;R20がイソプロピルであって、R21が-CH23NHCONH2である式VIIのユニットを含む。もう1つの例示的アミノ酸ユニットは、R20がベンジルであり、R21がベンジルであって、R22が-CH24NH2である式VIIIのユニットである。有用な-Ww-ユニットを設計することができ、特定の酵素、例えば、腫瘍-関連プロテアーゼによる酵素切断につきそれらの選択性を最適化することができる。1つの実施形態において、-Ww-ユニットは、その切断がカテプシンB、CおよびD、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒されるものである。1つの実施形態において、-Ww-はジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドである。R19、R20、R21、R22またはR23が水素以外である場合、R19、R20、R21、R22またはR23が結合される炭素原子はキラルである。R19、R20、R21、R22またはR23が結合する各炭素原子は、独立して、SまたはR立体配置におけるものである。アミノ酸ユニットの1つの態様において、アミノ酸ユニットはバリン-シトルリンである。もう1つの態様において、アミノ酸ユニットはフェニルアラニン-リシンすなわち、fkである。アミノ酸ユニットのさらにもう1つの態様において、アミノ酸ユニットはN-メチルバリン-シトルリンである。さらにもう1つの態様において、アミノ酸ユニットは5-アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニンリシン、テトライソキノリンカルボキシレートリシン、シクロヘキシルアラニンリシン、イソネペコチン酸リシン、β-アラニンリシン、グリシンセリンバリングルタミン酸およびイソネペコチン酸である。ある実施形態において、アミノ酸ユニットは天然アミノ酸を含むことができる。他の実施形態において、アミノ酸ユニットは非-天然アミノ酸を含むことができる。4.3.3スペーサーユニットスペーサーユニット-Y-は、存在する場合、アミノ酸ユニットが存在するときにはアミノ酸ユニットを薬物部分に連結させる。別法として、スペーサーユニットは、アミノ酸ユニットが不存在の場合には、ストレッチャーユニットを薬物ユニットに連結させる。スペーサーユニットもまた、アミノ酸ユニットおよびストレッチャーユニット双方が不存在の場合には、薬物部分をリガンドユニットに連結させる。スペーサーユニットは2つの一般的タイプ:自己-犠牲的および非自己-犠牲的のものである。非自己-犠牲的スペーサーユニットは、スペーサーユニットの一部または全てが、薬物-リンカー-リガンド結合体または薬物-リンカー化合物からのアミノ酸の、特に酵素的な切断後に薬物部分に結合したままであるものである。非自己-犠牲的スペーサーユニットの場合は、限定されるものではないが、グリシン-グリシンスペーサーユニットおよびグリシンスペーサーユニット共にスキーム1に示す後記を含む。グリシン-グリシンユニットまたはグリシンスペーサーユニットを含有する例示的化合物が腫瘍-細胞関連-プロテアーゼ、癌-細胞-関連プロテアーゼまたはリンパ球-関連プロテアーゼを介する酵素切断を受ける場合、グリシン-グリシン-薬物部分またはグリシン-薬物部分はL-Aa-Ww-から切断される。1つの実施形態において、独立した加水分解反応が標的細胞内で起こり、グリシン-薬物部分結合を切断し、薬物を遊離させる。もう1つの実施形態において、-Yy-は、そのフェニレン部分が、Qが-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであって;mが0~4の範囲の整数であるQmで置き換えられたp-アミノベンジルアルコールPABユニットスキーム2および3参照である。スキーム11つの実施形態において、非自己-犠牲的スペーサーユニット-Y-が-Gly-Gly-である。もう1つの実施形態において、非自己-犠牲的スペーサーユニット-Y-は-Gly-である。1つの実施形態において、スペーサーユニットが存在しないy=0、薬物-リンカー化合物または薬物-リンカーリガンド結合体、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。別法として、自己-犠牲的スペーサーユニットを含有する例示的化合物は別の加水分解工程に対する必要性無くして-Dを放出することができる。この実施形態において、-Y-はPAB基のアミノ窒素原子を介して-Ww-に連結され、かつカルボネート、カルバメートまたは他の基を介して直接的に-Dに連結されたPAB基である。いずれかの特定の理論またはメカニズムに拘束されるつもりはないが、スキーム2は、Tokietal.2002JOrg.Chem.67:1866-1872によって支持されるカルバメートまたはカルボネート基を介して直接的に-Dに結合されたPAB基の薬物放出の可能なメカニズムを示す。スキーム2[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;mは0~4の範囲の整数であり;およびpは1~約20の範囲である。]いずれかの特定の理論またはメカニズムに拘束されるつもりはないが、スキーム3は、エーテルまたはアミン結合を介して直接的に-Dに結合したPAB基の薬物放出の可能なメカニズムを示す。スキーム3[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;mは0~4の範囲の整数であり;およびpは1~約20の範囲である。]自己-犠牲的スペーサーの他の例は、限定されるものではないが、2-アミノイミダゾール-5-メタノール誘導体Hayetal.1999Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237およびオルトまたはパラ-アミノベンジルアセタールのような、PAB基に電子的に同様である芳香族化合物を含む。置換されたおよび置換されていない4-アミノ酪酸アミドRodriguesetal.,ChemistryBiology,1995,2,223、適当に置換されたビシクロ[2.2.1]およびビシクロ[2.2.2]環系Storm,etal.,J.Amer.Chem.Soc.,1972,94,5815および2-アミノフェニルプロピオン酸アミドAmsberry,etal.,J.Org.Chem.,1990,55,5867のような、アミド結合の加水分解に際して環化を受けるスペーサーを用いることができる。グリシンのa-位置において置換されたアミン-含有薬物の脱離Kingsbury,etal.,J.Med.Chem.,1984,27,1447もまた例示的化合物で有用な自己-犠牲的スペーサーの例である。1つの実施形態において、スペーサーユニットはスキーム4に示された分岐ビスヒドロキシメチルスチレンBHMSユニットであり、これは、複数の薬物を取り込み、放出するのに用いることができる。スキーム4[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;mは0~4の範囲の整数であり;nは0または1であり;およびpは1~約20の範囲である。]もう1つの実施形態において、該-D部位は同一である。さらにもう1つの実施形態において、該-D部位は異なる。1つの態様において、スペーサーユニット-Yy-は式X~XII:[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;およびmは0~4の範囲の整数である];によって表される。式Ia’およびIcの抗体-薬物結合体化合物の例は:[式中、wおよびyは各々0である]、を含む。4.4薬物ユニット部位抗体薬物結合体ADCの薬物部分Dは、微小管ダイナミックス、GTP加水分解、および核および細胞分裂に干渉しWoykeetal.2001Antimicrob.AgentsandChemother.4512:3580-3584、抗癌米国特許第5663149号および抗真菌活性Pettitetal.1998Antimicrob.AgentsChemother.42:2961-2965を有することが示されているドラスタチン/オーリスタチンタイプのものである米国特許第5635483号;第5780588号。Dは、y=1または2である場合はスペーサーユニットとで、y=0である場合にはアミノ酸ユニットのC-末端カルボキシル基とで、wおよびy=0の場合にはストレッチャーユニットのカルボキシル基とで、およびa、wおよびy=0の場合には薬物ユニットのカルボキシル基とで結合を形成することができる窒素原子を有する薬物ユニット部位である。用語薬物ユニットおよび薬物部分は同義であって、本明細書中においては相互交換的に用いることができることが理解されるべきである。1つの実施形態において、-Dは式DEまたはDFいずれかである:[式中、独立して、各位置において:R2はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R3はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R4はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、かつ式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、H、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され;R6はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R7はH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、アリール、C1-C8アルキル-アリール、C1-C8アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびC1-C8アルキル-C3-C8複素環から選択され;各R8は、独立して、H、OH、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環およびO-C1-C8アルキルから選択され;R9はHおよびC1-C8アルキルから選択され;R10はアリールまたはC3-C8複素環から選択され;ZはO、S、NH、またはNR12であり、ここで、R12はC1-C8アルキルであり;R11はH、C1-C20アルキル、アリール、C3-C8複素環、-R13Om-R14、または-R13Om-CHR152から選択され;mは1~1000の範囲の整数であり;R13はC2-C8アルキルであり;R14はHまたはC1-C8アルキルであり;R15の各出現は、独立して、H、COOH、-CH2n-NR162、-CH2n-SO3H、または-CH2n-SO3-C1-C8アルキルであり;R16の各出現は、独立して、H、C1-C8アルキル、または-CH2n-COOHであり;R18は-CR82-CR82-アリール、-CR82-CR82-C3-C8複素環、および-CR82-CR82-C3-C8炭素環から選択され;およびnは0~6の範囲の整数である]1つの実施形態において、R3、R4およびR7は、独立して、イソプロピルまたはsec-ブチルであって、R5は-Hである。例示的な実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R5はHであって、R7はsec-ブチルである。もう1つの実施形態において、R2およびR6は各々メチルであって、R9はHである。なおもう1つの実施形態において、R8の各出現は-OCH3である。例示的な実施形態において、R3およびR4は各々イソプロピルであり、R2およびR6は各々メチルであり、R5はHであり、R7はsec-ブチルであり、R8の各出現は-OCH3であって、R9はHである。1つの実施形態において、Zは-O-または-NH-である。1つの実施形態において、R10はアリールである。例示的実施形態において、R10は-フェニルである。例示的な実施形態において、Zが-O-である場合、R11はH、メチルまたはt-ブチルである。1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-NR162であって、R16は-C1-C8アルキルまたは-CH2n-COOHである。もう1つの実施形態において、Zが-NHである場合、R11は-CHR152であり、ここで、R15は-CH2n-SO3Hである。例示的な薬物ユニット-Dは以下の構造を有する薬物ユニット:およびおよびその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を含む。1つの態様において、限定されるものではないが、前記したトリエチレングリコールエステルTEGのような親水性基をR11において薬物ユニットに結合させることができる。理論に拘束されるつもりはないが、該親水性基は薬物ユニットの内部化および非-凝集を助ける。4.5リガンドユニットリガンドユニットL-は、その範囲内に、レセプター、抗原、または与えられた標的-細胞集団と会合した他の受容性部位と結合し、または反応的に会合し、またはそれと複合体化するリガンドLのいずれかのユニットを含む。リガンドは、治療的にまたはそうでなければ生物学的に修飾されることが求められる細胞集団の部位に結合し、または該部位と複合体化し、または反応する分子である。1つの態様において、リガンドユニットは、薬物を、リガンドユニットがそれと反応する特定の標的細胞集団へ送達するように作用する。そのようなリガンドは、限定されるものではないが、例えば、抗体、抗体フラグメント、より小さな分子量のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド、レクチン、糖タンパク質、非-ペプチド、ビタミン、限定されるものではないが、トランスフェリンのような栄養-輸送分子、またはいずれかの他の細胞結合分子または物質を含む。リガンドユニットは、ストレッチャーユニット、アミノ酸ユニット、スペーサーユニット、または薬物ユニットに対する結合を形成することができる。リガンドユニットは、リガンドのヘテロ原子を介してリンカーに対する結合を形成することができる。リガンドユニットに存在することができるヘテロ原子は、1つの実施形態においては、リガンドのスルフヒドリル基からの硫黄、1つの実施形態においては、リガンドのカルボニル、カルボキシルまたはヒドロキシル基からの酸素、および1つの実施形態においては、リガンドの第一級または第二級アミノ基からの窒素を含む。これらのヘテロ原子はリガンドの天然状態におけるリガンド、例えば、天然に生じる抗体に存在することができ、あるいは化学的修飾を介してリガンドに導入することができる。1つの実施形態において、リガンドはスルフヒドリル基を有し、該リガンドは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合する。さらにもう1つの態様において、リガンドは、1以上のスルフヒドリル基を導入するように化学的に修飾することができる1以上のリシン残基を有する。リガンドユニットは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合する。リシンを修飾するのに用いることができる試薬は、限定されるものではないが、S-アセチルチオ酢酸N-スクシンイミジルSATAおよび2-イミノチオラン塩酸塩Traut試薬を含む。もう1つの実施形態において、リガンドは、1以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾することができる1以上の炭水化物基を有することができる。リガンドユニットは、スルフヒドリル基の硫黄原子を介して、ストレッチャーユニットのようなリンカーユニットに結合することができる。さらにもう1つの実施形態において、リガンドは、アルデヒド-CHO基を供するように酸化することができる1以上の炭水化物基を有することができる例えば、Laguzza,etal.,J.Med.Chem.,1989,323,548-55参照。対応するアルデヒドは、ストレッチャー上の反応性部位とで結合を形成することができる。リガンド上のカルボニル基と反応することができるストレッチャー上の反応性部位は、限定されるものではないが、ヒドラジンおよびヒドロキシルアミンを含む。薬物ユニットの結合または会合のためのタンパク質の修飾用の他のプロトコルは、ここに引用して援用する、Coliganetal.,CurrentProtocolsinProteinScience,vol.2,JohnWileySons2002に記載されている。有用な非-免疫反応性タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドリガンドは、限定されるものではないが、トランスフェリン、上皮成長因子EGF、ボンベシン、ガストリン、ガストリン-放出ペプチド、血小板-由来成長因子、IL-2、IL-6、TGF-αおよびTGF-βのようなトランスフォーミング成長因子TGF、ワクシニア成長因子VGF、インスリンおよびインスリン-様成長因子IおよびII、レクチン、および低密度リポタンパク質からのアポプロテインを含む。有用なポリクローナル抗体は、免疫化動物の血清に由来する抗体分子の不均一な集団である。当該分野でよく知られた種々の手法を、注目する抗原に対するポリクローナル抗体の生産で用いることができる。例えば、ポリクローナル抗体の生産のために、限定されるものではないが、ウサギ、マウス、ラットおよびモルモットを含めた種々の宿主動物を、注目する抗原またはその誘導体での注射によって免疫化することができる。宿主種に応じて、限定されるものではないが、フロイントの完全および不完全アジュバント、水酸化アルミニウムのような鉱物ゲル、リソレシチンのような表面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペッドヘモシアニン、ジニトロフェノール、およびBCGbacilleCalmette-GuerinおよびCorynebacteriumparvumのような潜在的に有用なヒトアジュバントを含めた種々のアジュバントを用いて、免疫学的応答を増加させることができる。そのようなアジュバントも当該分野でよく知られている。有用なモノクローナル抗体は、特定の抗原決定基例えば、癌細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸またはそのフラグメントに対する抗体の均一な集団である。注目する抗原に対するモノクローナル抗体mAbは、培養中の連続細胞系による抗体分子の生産を供する当該分野で知られたいずれかの技術を用いることによって調製することができる。これらは、限定されるものではないが、KoehlerandMilsteinによって元来記載されたハイブリドーマ技術1975,Nature256,495-497、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術Kozboretal.,1983,ImmunologyToday4:72、およびEBV-ハイブリドーマ技術Coleetal.,1985,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,Inc.,pp.77-96を含む。そのような抗体はIgG、IgM、IgE、IgAおよびIgDを含めたいずれかの免疫グロブリンクラスおよびそのいずれかのサブクラスであってもよい。本発明で用いるmAbを生産するハイブリドーマはインビトロまたはインビボで培養することができる。有用なモノクローナル抗体は、限定されるものではないが、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメント、またはキメラヒト-マウスまたは他の種モノクローナル抗体を含む。ヒトモノクローナル抗体は当該分野で知られた多数の技術のいずれによって作成することもできる例えば、Tengetal.,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.80,7308-7312;Kozboretal.,1983,ImmunologyToday4,72-79;およびOlssonetal.,1982,Meth.Enzymol.92,3-16。抗体は二特異的抗体でもあり得る。二特異的抗体を作製する方法は当該分野で知られている。全長二特異的抗体の伝統的な生産は2つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の共発現に基づき、そこでは、2つの鎖は異なる特異性を有するMilsteinetal.,1983,Nature305:537-539。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな分類のため、これらのハイブリドーマクアドローマは、そのうち1つのみが正しい二特異的構造を有する10の異なる抗体分子の潜在的混合物を生じる。同様な手法が国際公開番号WO93/08829およびTrauneckeretal.,EMBOJ.10:3655-36591991に開示されている。異なるアプローチに従い、所望の結合特異性を持つ抗体可変ドメイン抗体-抗原組合せ部位を免疫グロブリン定常ドメインの配列に融合させる。融合は、好ましくは、ヒンジの少なくとも一部、CH2およびCH3領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。融合の少なくとも1つに存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第一の重鎖定常領域CH1を有するのが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードする配列を持つ核酸および、所望であれば、免疫グロブリン軽鎖は別々の発現ベクターに挿入され、適当な宿主生物に共-トランスフェクトされる。これは、構築で用いる3つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率を供する場合の実施形態において、3つのポリペプチドフラグメントの相互割合を調整するにおいて大きな柔軟性を提供する。しかしながら、等しい比率の少なくとも2つのポリペプチド鎖の発現の結果高い収率が得られる場合、または比率が特定の有意性のものでない場合、2つのまたは全ての3つのポリペプチド鎖についてのコーディング配列を1つの発現ベクターに挿入することが可能である。このアプローチの実施形態において、二特異的抗体は、1つのアームにおける第一の結合特異性を持つハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他のアームにおける第二の結合特異性を供するハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対を有する。この非対称構造は、望まない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二特異的化合物の分離を容易とする。というのは、二特異的分子の1つの半分のみここに引用して援用する国際公開番号WO94/04690が分離の容易な方法を提供するからである。二特異的抗体を生じさせるためのさらなる詳細については、Sureshetal.,MethodsinEnzymology,1986,121:210;Rodriguesetal.,1993,J.ofImmunology151:6954-6961;Carteretal.,1992,Bio/Technology10:163-167;Carteretal.,1995,J.ofHematotherapy4:463-470;Merchantetal.,1998,NatureBiotechnology16:677-681参照。そのような技術を用い、二特異的抗体を、本明細書中で定義した病気の治療または予防で用いるために調製することができる。二機能性抗体もまた欧州特許出願番号EPA0105360に記載されている。この文献で開示されるように、ハイブリッドまたは二機能的抗体は生物学的に、すなわち、細胞融合技術によって、または特に架橋剤またはジスルフィド-ブリッジ形成試薬にて化学的に誘導することができ、それは全抗体またはそのフラグメントを含むことができる。そのようなハイブリッド抗体を得るための方法は、例えば、共にここに引用して援用する国際公開WO83/03679および欧州特許公開番号EPA0215577に開示されている。抗体は、癌細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫特異的に結合する抗体の機能的に活性なフラグメント、誘導体またはアナログ、または腫瘍細胞またはマトリックスに結合した他の抗体であり得る。この点に関し、機能的に活性なは、該フラグメント、誘導体またはアナログが、該フラグメント、誘導体またはアナログがそれから誘導された抗体が認識したのと同一の抗原を認識する抗-抗-イディオタイプ抗体を誘導することができることを意味する。具体的には、例示的な実施形態において、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、フレームワーク、および該抗原を特異的に認識するCDR配列に対してC-末端側にあるCDR配列の欠失によって増強させることができる。いずれのCDR配列が抗原に結合するかを決定するために、CDR配列を含有する合成ペプチドを、当該分野で知られたいずれかの結合アッセイ方法によって抗原との結合アッセイで用いることができる例えば、BIAコアアッセイ例えば、Kabatetal.,1991,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第15版,NationalInstituteofHealth,Bethesda,Md;KabatEetal.,1980,J.ofImmunology1253:961-969参照。他の有用な抗体は、限定されるものではないが、可変領域、軽鎖定常領域を含有するFab’2フラグメントのような抗体のフラグメントを含み、重鎖のCH1ドメインは、Fab’2フラグメントのジスルフィドブリッジを減少させることによって生じさせることができる、抗体分子およびFabフラグメントのペプシン消化によって生じさせることができる。他の有用な抗体は抗体の重鎖および軽鎖ダイマー、または例えば、米国特許第4946778号;Bird,1988,Science242:423-42;Hustonetal.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883;およびWardetal.,1989,Nature334:544-54に記載されたFvsまたは単一鎖抗体SCAのようなそのいずれかの最小フラグメント、または抗体と同一の特異性を持ついずれかの他の分子である。加えて、標準的な組換えDNA技術を用いて作製する、ヒトおよび非-ヒト部分双方を含むキメラおよびヒト化モノクローナル抗体のような組換え抗体は有用な抗体である。キメラ抗体は、ネズミモノクローナルおよびヒト免疫グロブリン定常領域に由来する可変領域を有するもののような、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である例えば、ここに引用してその全体を援用するCabillyetal.,米国特許第4816567号;およびBossetal.,米国特許第4,816397号参照。ヒト化抗体は、非-ヒト種からの1以上の相補性決定領域CDR、およびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する非-ヒト種からの抗体分子である例えば、ここに引用してその全体を援用するQueen,米国特許第5,585,089号参照。そのようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、その各々をここに引用してその全体を援用する、例えば、国際公開番号WO87/02671;欧州特許出願番号184,187;欧州特許公開番号171496;欧州特許公開番号173494;国際公開番号WO86/01533;米国特許第4816567号;欧州特許公開番号12,023;Berteretal.,1988,Science240:1041-1043;Liuetal.,1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:3439-3443;Liuetal.,1987,J.Immunol.139:3521-3526;Sunetal.,1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:214-218;Nishimuraetal.,1987,Cancer.Res.47:999-1005;Woodetal.,1985,Nature314:446-449;およびShawetal.,1988,J.Natl.CancerInst.80:1553-1559;Morrison,1985,Science229:1202-1207;Oietal.,1986,BioTechniques4:214;米国特許第5225539;Jonesetal.,1986,Nature321:552-525;Verhoeyanetal.,1988Science239:1534;およびBeidleretal.,1988,J.Immunol.141:4053-4060に記載された方法を用いて、当該分野で知られた組換えDNA技術によって生産することができる。完全なヒト抗体は特に望ましく、内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現できないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて生産することができる。トランスジェニックマウスを選択された抗原、例えば、本発明のポリペプチドの全てまたは部分で通常の様式で免疫化する。該抗原に向けられたモノクローナル抗体は慣用的なハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。トランスジェニックマウスによって保有されたヒト免疫グロブリン導入遺伝子はB細胞の分化の間に再変性され、引き続いて、クラススイッチングおよび体細胞突然変異を受ける。かくして、そのような技術を用い、治療的に有用なIgG、IgA、IgMおよびIgE抗体を生産することが可能である。ヒト抗体を生産するためのこの技術の概観についてはLonbergandHuszar1995,Int.Rev.Immunol.13:65-93参照。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を生産するためのこの技術、およびそのような抗体を生産するためのプロトコルの詳細な議論については、例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する米国特許第5625126号;第5633425号;第5569825号;第5661016号;第5545806号参照。他のヒト抗体は、例えば、Abgenix,Inc.Freemont,CAおよびGenpharmSanJose,CAから商業的に入手することができる。選択されたエピトープを認識する完全にヒトの抗体は、ガイドされた選択といわれる技術を用いて生じさせることができる。このアプローチにおいては、選択された非-ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を用いて、同一エピトープを認識する完全にヒトの抗体の選択をガイドするJespersetal.1994Biotechnology12:899-903。また、ヒト抗体はファージディスプレイライブラリーを含めた当該分野で知られた種々の技術を用いて生産することもできるHoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:5811991;Quan,M.P.andCarter,P.2002.Theriseofmonoclonalantibodiesastherapeutics.InAnti-IgGandAllergicDisease,Jardieu,P.M.andFickJr.,R.B編,MarcelDekker,NewYork,NY,20章,pp.427-469。他の実施形態において、抗体は抗体の融合タンパク質、またはその機能的に活性なフラグメントである、例えば、そこでは、抗体は共有結合例えば、ペプチド結合を介して、N-末端またはC-末端いずれかにおいて、抗体ではないもう1つのタンパク質のアミノ配列好ましくはタンパク質の少なくとも10、20または50アミノ酸部分における、その部分に融合される。好ましくは、抗体またはそのフラグメントは定常ドメインのN-末端において他のタンパク質に共有結合連結される。抗体は、共有結合が抗体がその抗原結合免疫特異性を保持するのを可能とする限り、いずれかのタイプの分子の共有結合によって修飾されるアナログおよび誘導体を含む。例えば、限定されるものではないが、抗体の誘導体およびアナログは、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペジル化、リン酸化、アミド化、公知の保護/ブロッキング基により誘導体化、タンパク質分解切断、細胞抗体ユニットまたは他のタンパク質への連結などによって、さらに修飾されたものを含む。限定されるものではないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、スナカマイシンの存在下での代謝的合成を含めた多数の化学的修飾のいずれかを、公知の技術によって行うことができる。加えて、アナログまたは誘導体は1以上の非天然アミノ酸を含有することができる。抗体は、Fcレセプターと相互作用するアミノ酸残基における修飾例えば、置換、欠失または負荷を有する抗体を含む。特に、抗体は、抗-FcドメインおよびFcRnレセプターの間の相互作用に関与することが同定されたアミノ酸残基における修飾を有する抗体を含む例えば、ここに引用してその全体を援用する国際公開番号WO97/34631参照。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、例えば、GenentechSanFrancisco,CAから商業的に入手することができるか、あるいは、例えば、化学合成または組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、GenBankデータバンクまたはそのようなデータバンク、文献刊行物から、またはルーチン的なクローニングおよび配列決定によって得ることができる。特異的な実施形態において、癌の治療または予防用の公知の抗体を用いることができる。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は商業的に入手することができるか、あるいは例えば組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。癌細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、GenBankデータベースまたはそのようなデータベース、文献刊行物から、またはルーチン的なクローニングおよび配列決定によって得ることができる。癌の治療で入手可能な抗体の例は、限定されるものではないが、ヒト化抗-HER2モノクローナル抗体、転移性乳癌を持つ患者の治療のためのHERCEPTIN登録商標トラスツズマブ;Genentech;非-ホジキンリンパ腫を持つ患者の治療のためのキメラ抗-CD20モノクローナル抗体であるRITUXAN登録商標リツキシマブ;Genentech;卵巣癌の治療のためのネズミ抗体であるOvaRexAltaRexCorporation,MA;結直腸癌の治療のためのネズミIgG2a抗体であるPanorexGlaxoWellcome,NC;頭部および頸部癌のような、上皮成長因子陽性癌の治療のための抗-EGFRIgGキメラ抗体であるCetuximabErbituxImcloneSystemsInc.,NY;肉腫の治療のためのヒト化抗体であるVitaxinMedImmune,Inc.MD;慢性リンパ系白血病CLLの治療のためのヒト化IgG1抗体であるCampathI/HLeukosite,MA;急性骨髄性白血病AMLの治療のためのヒト化抗-CD33IgG抗体であるSmartMI95ProteinDesignLabs,Inc.,CA;非-ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗-CD22IgG抗体であるLymphoCideImmunomedics,Inc.,NJ;非-ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗-HLA-DR抗体であるSmartID10ProteinDesignLabs,Inc.,CA;非-ホジキンリンパ腫の治療のための放射性標識ネズミ抗-HLA-Dr10抗体であるOncolymTechniclone,Inc.,CA;ホジキン病または非-ホジキンリンパ腫の治療のためのヒト化抗-CD2mAbであるAllomuneBioTransplant,CA;肺および結直腸癌の治療のための抗-VEGFヒト化抗体であるAvastinGenentech,Inc.,CA;非-ホジキンリンパ腫の治療のための抗-CD22抗体であるEpratuzamabImmunomedics,Inc.,NJandAmgen,CA;および結直腸癌の治療のためのヒト化抗-CEA抗体であるCEAcideImmunomedics,NJを含む。癌の治療で有用な他の抗体は、限定されるものではないが、以下の抗原に対する抗体を含む:CA125卵巣、CA15-3癌腫、CA19-9癌腫、L6癌腫、LewisY癌腫、LewisX癌腫、αフェトプロテイン癌腫、CA242結直腸、胎盤アルカリ性ホスファターゼ癌腫、前立腺特異的抗原前立腺、前立腺酸ホスファターゼ前立腺、上皮成長因子癌腫、MAGE-1癌腫、MAGE-2癌腫、MAGE-3癌腫、MAGE-4癌腫、抗-トランスフェリンレセプター癌腫、p97メラノーマ、MUC1-KLH乳癌、CEA結直腸、gp100メラノーマ、MART1メラノーマ、PSA前立腺、IL-2レセプターT-細胞白血病およびリンパ腫、CD20非-ホジキンリンパ腫、CD52白血病、CD33白血病、CD22リンパ腫、ヒト絨毛ゴナドトロピン癌腫、CD38多発性ミエローマ、CD40リンパ腫、ムチン癌腫、P21癌腫、MPGメラノーマ、およびNeu癌遺伝子産物癌腫。いくつかの特異的な有用な抗体は、限定されるものではないが、BR96mAbTrail,P.A.,Willner,D.,Lasch,S.J.,Henderson,A.J.,Hofstead,S.J.,Casazza,A.M.,Firestone,R.A.,Hellstroem,I.,Hellstroem,K.E.,CureofXenograftedHumanCarcinomasbyBR96-DoxorubicinImmunoconjugatesScience1993,261,212-215、BR64Trail,PA,Willner,D,Knipe,J.,Henderson,A.J.,Lasch,S.J.,Zoeckler,M.E.,Trailsmith,M.D.,Doyle,T.W.,King,H.D.,Casazza,A.M.,Braslawsky,G.R.,Brown,J.P.,Hofstead,S.J.,Greenfield,R.S.,Firestone,R.A.,Mosure,K.,Kadow,D.F.,Yang,M.B.,Hellstrom,K.E.,andHellstrom,I.EffectofLinkerVariationontheStability,Potency,andEfficacyofCarcinoma-reactiveBR64-DoxorubicinImmunoconjugatesCancerResearch1997,57,100-105,S2C6mAbのようなCD40抗原に対するmAbFrancisco,J.A.,Donaldson,K.L.,Chace,D.Siegall,C.B.,andWahl,A.F.Agonisticpropertiesandinvivoantitumoractivityoftheanti-CD-40antibody,SGN-14CancerRes.2000,60,3225-3231、1F6mAbおよび2F2mAbのようなCD70抗原に対するmAb、およびAC10のようなCD30抗原に対するmAbBowen,M.A.,Olsen,K.J.,Cheng,L.,Avila,D.,andPodack,E.R.FunctionaleffectsofCD30onalargegranularlymphomacelllineYTJ.Immunol.,151,5896-5906,1993;Wahletal.,2002CancerRes.6213:3736-42を含む。腫瘍関連抗原に結合する多くの他の内部化抗体を用いることができ、それらはレビューされているFranke,A.E.,Sievers,E.L.,andScheinberg,D.A.,Cellsurfacereceptor-targetedtherapyofacutemyeloidleukemia:areviewCancerBiotherRadiopharm.2000,15,459-76;Murray,J.L.,Monoclonalantibodytreatmentofsolidtumors:acomingofageSeminOncol.2000,27,64-70;Breitling,F.,andDubel.S.,RecombinantAntibodies,JohnWiley,andSons,NewYork,1998。ある実施形態において、抗体はトラスツズマブ全長,ヒト化抗-HER2MW145167、HerceptinFab’2酵素的に抗-HER2から誘導MW100000、4D5全長,ネズミ抗HER2ハイブリドーマから、rhu4D5一過的に発現された全長ヒト化抗体、rhuFab4D5組換えヒト化FabMW47738、4D5Fc8全長,ネズミ抗HER2,突然変異したFcRn結合ドメインを持つ、またはHgHingeless全長ヒト化4D5,セリンに突然変異した重鎖ヒンジシステインを持つ;E.coliで発現従って、非-グリコシル化ではない。もう1つの特別な実施形態において、自己免疫疾患の治療または予防のための公知の抗体が本発明の組成物および方法に従って用いられる。自己免疫抗体を生産するのを担う細胞の抗原に対して免疫特異的な抗体はいずれかの組織例えば、大学の科学者または会社から得ることができるか、あるいは例えば、化学合成または組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。もう1つの実施形態において、有用な抗体は自己免疫疾患の治療で免疫特異的であり、限定されるものではないが、抗-核抗体;抗-dsDNA;抗-ssDNA、抗-カルジオリピン抗体IgM、IgG;抗-リン脂質抗体IgM、IgG;抗-SM抗体;抗-ミトコンドリア抗体;甲状腺抗体;ミクロソーム抗体;チログロブリン抗体;抗-SCL-70;抗-Jo;抗-U1RNP;抗-La/SSB;抗-SSA;抗-SSB;抗-ペリタル細胞抗体;抗-ヒストン;抗-RNP;C-ANCA;P-ANCA;抗-動原体;抗-フィブリラリン、および抗-GBM抗体を含む。ある実施形態において、有用な抗体は、活性化されたリンパ球で発現されるレセプターまたはレセプター複合体双方に結合することができる。該レセプターまたはレセプター複合体は免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、TNFレセプタースーパーファミリーメンバー、インテグリン、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、主要組織適合性タンパク質、レシチン、または補体制御タンパク質を含むことができる。適当な免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーの非限定的例はCD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD22、CD28、CD79、CD90、CD152/CTLA-4、PD-1およびICOSである。適当なTNFレセプタースーパーファミリーメンバーの非限定的例はCD27、CD40、CD95/Fas、CD134/OX40、CD137/4-1BB、TNF-R1、TNFR-2、RANK、TACI、BCMA、オステオプロテゲリン、Apo2/TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRAIL-R3、TRAIL-R4およびAPO-3である。安定なインテグリンの非限定的例はCD11a、CD11b、CD11c、CD18、CD29、CD41、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e、CD49f、CD103およびCD104である。適当なレクチンの非限定的例はC-タイプ、S-タイプおよびI-タイプのレクチンである。1つの実施形態において、リガンドは、自己免疫疾患に関連する活性化されたリンパ球に結合する。もう1つの特別な実施形態において、ウイルスまたは微生物抗原に対して免疫特異的な有用なリガンドはモノクローナル抗体である。抗体はキメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体であり得る。本明細書中で用いるように、用語ウイルス抗原は、限定されるものではないが、免疫応答を誘導することができるいずれかのウイルスペプチド、ポリペプチドタンパク質例えば、HIVgp120、HIVnef、RSVF糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルスペマグルチミン、HTLVタックス、単純疱疹ウイルス糖タンパク質例えば、gB、gC、gDおよびgEおよびB型肝炎表面抗原を含む。本明細書中で用いるように、用語微生物抗原は、限定されるものではないが、免疫応答を誘導することができるいずれかの微生物ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖、多糖または脂質分子例えば、LPSおよび被膜多糖5/8を含めた細菌、真菌、病原性原生動物、または酵母ポリペプチドを含む。ウイルスまたは微生物抗原に対して免疫特異的抗体は、例えば、BDBiosciencesSanFrancisco,CA、ChemiconInternational,Inc.Temecula,CA、またはVectorLaboratories,Inc.Burlingame,CAから商業的に入手することができるか、あるいは例えば、化学合成または組換え発現技術のような当業者に知られたいずれかの方法によって生産することができる。ウイルスまたは微生物抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、GenBankデータバンクまたはそのようなデータバンク、文献刊行物から、またはルーチン的クローニングおよび配列決定によって得ることができる。特別な実施形態において、有用なリガンドは本明細書中で開示した方法に従ってウイルスまたは微生物感染の治療または予防で有用なものである。ウイルス感染または微生物感染の治療で有用な入手可能な抗体の例は、限定されるものではないが、RSV感染を持つ患者の治療で有用なヒト化抗-呼吸器系シンシチウムウイルスRSVモノクローナル抗体であるSYNAGISMedImmune,Inc.,MD;HIV感染の治療で有用なCD4融合抗体であるPRO542Progenics;B型肝炎ウイルスの治療で有用なヒト抗体であるOSTAVIRProteinDesignLabs,Inc.,CA;サイトメガロウイルスCMVの治療で有用なヒト化IgG1抗体であるPROTOVIRProteinDesignLabs,Inc.,CA;および抗-LPS抗体を含む。感染症の治療で有用な他の抗体は、限定されるものではないが、細菌の病原性株Streptococcuspyogenes,Streptococcuspneumoniae,Neisseriagonorrheae,Neisseriameningitidis,Corynebacteriumdiphtheriae,Clostridiumbotulinum,Clostridiumperfringens,Clostridiumtetani,Hemophilusinfluenzae,Klebsiellapneumoniae,Klebsiellaozaenas,klebsiellarhinoscleromotis,Staphylococcaureus,Vibriocolerae,Escherichiacoli,Pseudomonasaeruginosa,CampylobacterVibriofetus,Aeromonashydrophila,Bacilluscereus,Edwardsiellatarda,Yersiniaenteroclitica,Yersiniapestis,Yersiniapseudotuberculosis,Shigelladysenteriae,Shigellaflexneri,Shigellasonnei,Salmonellatyphimurium,Treponemapallidum,Treponemapertenue,Treponemacarateneum,Borreliavincentii,Borreliaburgdorferi,Leptospiraicterohemorrhagiae,Mycobacteriumtuberculosis,Pneumocystiscarinii,Francisellatularensis,Brucellaabortus,Brucellasuis,Brucellamelitensis,Mycoplasmaspp.,Rickettsiaprowazeki,Rickettsiatsutsugumushi,Chlamydiaspp.,;病原性真菌Coccidioidesimmitis,Aspergillusfumigatus,Candidaalbicans,Blastomycesdermatitis,Cryptococcusneoformans,Histoplasmacapsulatum;原生動物Entomoebahistolytica,Toxoplasmagondii,Trichomonastenas,Trichomonashominis,Trichomonasvaginalis,Tryoanosomagambiense,Trypanosomarhodesiense,Trypanosomacruzi,Leishmaniadonovani,Leishmaniatropica,Leishmaniabraziliensis,Pneumocystispneumonia,Plasmodiumvivax,Plasmodiumfalciparum,Plasmodiummalaria;または蠕虫Enterobiusvermicularis,Trichuristrichiura,Ascarislumbricoides,Trichinellaspiralis,Strongyloidesstercoralis,Schistosomajaponicum,Schistosomamansoni,Schistosomahaematobiumおよび鉤虫からの抗原に対する抗体を含む。ウイルス病の治療のための本発明で有用な他の抗体は、限定されるものではないが、その例として:ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス1、単純疱疹ウイルス2、アデノウイルス、パポバウイルス、エンテロウイルス、ピコルナウイルス、パルボウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎、麻疹、呼吸器系シンチウムウイルス、風疹、アルボウイルス、ラブドウイルス、アレナウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、非-A/非-B肝炎ウイルス、リノウイルス、コロナウイルス、ロトウイルス、およびヒト免疫不全ウイルスを含めた病原性ウイルスの抗原に対する抗体を含む。癌の診断および治療のための効果的な細胞標的を発見する試みにおいて、研究者は、1以上の正常な非-癌性細胞上と比較して、癌細胞の1以上の特別なタイプの表面に特異的に発現される膜貫通またはそうでなければ腫瘍-関連ポリペプチドを同定しようとした。しばしば、そのような腫瘍-関連ポリペプチドは、非-癌性細胞の表面上と比較して、癌細胞の表面により豊富に発現される。そのような腫瘍-関連細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、抗体-ベースの療法を介して破壊のために標的癌細胞に特異的に結合する能力を生起させた。式Ic抗体薬物結合体ADCにおけるAbを含み、癌の治療で有用であり得る抗体は、限定されるものではないが、腫瘍-関連抗原TAAに対する抗体を含む。そのような腫瘍-関連抗原は当該分野で知られており、当該分野でよく知られた方法および情報を用いて抗体を生じさせるのに用いるために調製することができる。TAAの例は1~35を含むが、以下にリストするTAA1~35に限定されない。便宜のために、その全てが当該分野で知られているこれらの抗原に関連する情報を以下にリストし、それは名称、別名Genbankアクセッション番号および主な文献を含む。抗体によって標的化された腫瘍-関連抗原は、リストされた対応する配列配列番号:1~35で同定された配列または引用された文献で同定された配列に対して少なくとも約70、80、85、90または95配列同一性を保有する全てのアミノ酸配列変種およびイソ型を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列変種を有するTAAは、対応するリストした配列配列番号:1~35で見出された配列を有するTAAと実質的に同一の生物学的特性または特徴を呈する。例えば、変種配列を有するTAAは、一般には、対応するリストした配列を持つTAAに特異的に結合する抗体に対して特異的に結合できる。該配列および開示は、ここに明示的に引用して特に一体化させる。腫瘍-関連抗原1~351BMPR1B骨形態形成タンパク質レセプター-タイプIB,Genbankアクセッション番号NM001203,tenDijke,P.,etal.Science2645155:101-1041994,Oncogene1411:1377-13821997;WO2004063362クレーム2;WO2003042661クレーム12;US2003134790-A1頁38-29;WO2002102235クレーム13;頁296;WO2003055443頁91-92;WO200299122実施例2;頁528-530;WO2003029421クレーム6;WO2003024392クレーム2;図112;WO200298358クレーム1;頁183;WO200254940頁100-101;WO200259377頁349-350;WO200230268クレーム27;頁376;WO200148204実施例;図4NP001194骨形態形成タンパク質レセプター、タイプIB/pid=NP001194.1-相互参照:MIM:603248;NP001194.1;NM0012031502aa配列番号:12E16LAT1,SLC7A5,Genbankアクセッション番号NM003486;Biochem.Biophys.Res.Commun.2552,283-2881999,Nature3956699:288-2911998,Gaugitsch,H.W.,etal.1992J.Biol.Chem.26716:11267-11273;WO2004048938実施例2;WO2004032842実施例IV;WO2003042661クレーム12;WO2003016475クレーム1;WO200278524実施例2;WO200299074クレーム19;頁127-129;WO200286443クレーム27;頁222,393;WO2003003906クレーム10;頁293;WO200264798クレーム33;頁93-95;WO200014228クレーム5;頁133-136;US2003224454図3;WO2003025138クレーム12;頁150;NP003477溶質キャリアーファミリー7カチオン性アミノ酸トランスポーター,yシステム,メンバー5/pid=NP003477.3-Homosapiens相互参照:MIM:600182;NP003477.3;NM015923;NM0034861507aa配列番号:23STEAP1前立腺の6回膜貫通上皮抗原,Genbankアクセッション番号NM012449CancerRes.6115,5857-58602001,Hubert,R.S.,etal.1999Proc.Natl.Acad.Sci.USA.9625:14523-14528;WO2004065577クレーム6;WO2004027049図1L;EP1394274実施例11;WO2004016225クレーム2;WO2003042661クレーム12;US2003157089実施例5;US2003185830実施例5;US2003064397図2;WO200289747実施例5;頁618-619;WO2003022995実施例9;図13A,実施例53;頁173,実施例2;図2A;NP036581前立腺の6回膜貫通上皮抗原相互参照:MIM:604415;NP036581.1;NM0124491339aa配列番号:340772PCA125,MUC16,Genbankアクセッション番号AF361486J.Biol.Chem.27629;27371-273752001;WO2004045553クレーム14;WO200292836クレーム6;図12;WO200283866クレーム15;頁116-121;US2003124140実施例16;US2003091580クレーム6;WO200206317クレーム6;頁400-408;相互参照:GI:34501647;AAK74120.3;AF36148616995aa配列番号:45MPFMPF,MSLN,SMR,巨核細胞増強因子,メソテリン,Genbankアクセッション番号NM005823Yamaguchi,N.,etal.Biol.Chem.2692,805-8081994,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.9620:11531-115361999,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.931:136-1401996,J.Biol.Chem.27037:21984-219901995;WO2003101283クレーム14;WO2002102235クレーム13;頁287-288;WO2002101075クレーム4;頁308-309;WO200271928頁320-321;WO9410312頁52-57;相互参照MIM:601051;NP005814.2;NM0058231622aa配列番号:56Napi3bNAPI-3B,NPTIIb,SLC34A2,溶質キャリアーファミリー34リン酸ナトリウム,メンバー2,タイプIIナトリウム-依存性リン酸トランスポーター3b,Genbankアクセッション番号NM006424J.Biol.Chem.27722:19665-196722002,Genomics622:281-2841999,Feild,J.A.,etal.1999Biochem,Biophys.Res.Commun.2583:578-582;WO2004022778クレーム2;EP1394274実施例11;WO2002102235クレーム13;頁326;EP875569クレーム6;頁17-19;WO200157188クレーム20;頁329;WO2004032842実施例IV;WO200175177クレーム24;頁139-140;相互参照:MIM:604217;NP006415.1;NM0064241690aa配列番号:67Sema5bFLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,Semaphorin5bHlog,semaドメイン,7回トロンボスポンジンリピートタイプ1およびタイプ1-様,膜貫通ドメインTMおよび短い細胞質ドメイン,セマフォリン5B,Genbankアクセッション番号AB040878,NagaseT.,etal.2000DNARes.72:143-150;WO2004000997クレーム1;WO2003003984クレーム1;WO200206339クレーム1;頁50;WO200188133クレーム1;頁41-43,48-58;WO2003054152クレーム20;WO2003101400クレーム11;受託:Q9P283;EMBL;AB040878;BAA95969.1.Genew;HGNC:10737;1093aa配列番号:78PSCAhlg2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKENcDNA2700050C12,RIKENcDNA2700050C12遺伝子,Genbankアクセッション番号AY358628;US2003129192クレーム2;US2004044180クレーム12;US2004044179クレーム11;US2003096961クレーム11;US2003232056実施例5;WO2003105758クレーム12;US2003206918実施例5;EP1347046クレーム1;WO2003025148クレーム20;相互参照:GI:37182378;AAQ88991.1;AY3586281141aa配列番号:89ETBRエンドセリンタイプBレセプター,Genbankアクセッション番号AY275463;NakamutaM.,etal.,Biochem.Biophys.Res.Commun.17,34-39,1991;OgawaY.,etal.Biochem.Biophys.Res.Commun.178,248-255,1991;AraiH.,etal.Jpn.Circ.J.56,1303-1307,1992;AraiH.,etal.J.Biol.Chem.268,3463-3470,1993;SakamotoA.,YanagisawaM.,etal.Biochem.Biophys.Res.Commun.178,656-663,1991;ElshourbagyN.A.,etal.J.Biol.Chem.268,3873-3879,1993;HaendlerB.,etal.J.Cardiovasc.Pharmacol.20,s1-S4,1992;TsutsumiM.,etal.Gene228,43-49,1999;StrausbergR.L.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.99,16899-16903,2002;BourgeoisC.,etal.J.Clin.Endocrinol.Metab.82,3116-3123,1997;OkamotoY.,etal.Biol.Chem.272,21589-21596,1997;VerheijJ.B.,etal.Am.J.Med.Genet.108,223-225,2002;HofstraR.M.W.,etal.Eur.J.Hum.Genet.5,180-185,1997;PuffenbergerE.G.,etal.Cell79,1257-1266,1994;AttieT.,etal.,Hum.Mol.Genet.4,2407-2409,1995;AuricchioA.,etal.Hum.Mol.Genet.5:351-354,1996;AmielJ.,etal.Hum.Mol.Genet.5,355-357,1996;HofstraR.M.W.,etal.Nat.Genet.12,445-447,1996;SvenssonP.J.,etal.Hum.Genet.103,145-148,1998;FuchsS.,etal.Mol.Med.7,115-124,2001;PingaultV.,etal.2002Hum.Genet.111,198-206;WO2004045516クレーム1;WO2004048938実施例2;WO2004040000クレーム151;WO2003087768クレーム1;WO2003016475クレーム1;WO2003016475クレーム1;WO200261087図1;WO2003016494図6;WO2003025138クレーム12;頁144;WO200198351クレーム1;頁124-125;EP522868クレーム8;図2;WO200177172クレーム1;頁297-299;US2003109676;US6518404図3;US5773223クレーム1a;31-34欄;WO2004001004;442aa配列番号:910MSG783RNF124,仮想タンパク質FLJ20315,Genbankアクセッション番号NM017763;WO2003104275クレーム1;WO2004046342実施例2;WO2003042661クレーム12;WO2003083074クレーム14;頁61;WO2003018621クレーム1;WO2003024392クレーム2;図93;WO200166689実施例6;相互参照:LocusID:54894;NP060233.2;NM0177631783aa配列番号:1011STEAP2HGNC8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前立腺癌関連遺伝子1,前立腺癌関連タンパク質1、前立腺2の6回膜貫通上皮抗原,6回膜貫通前立腺タンパク質,Genbankアクセッション番号AF455138,Lab.Invest.8211:1573-15822002;WO2003087306;US2003064397クレーム1;図1;WO200272596クレーム13;頁54-55;WO200172962クレーム1;図4B;WO2003104270クレーム11;WO2003104270クレーム16;US2004005598クレーム22;WO2003042661クレーム12;US2003060612クレーム12;図10;WO200226822クレーム23;図2;WO200216429クレーム12;図10;相互参照:GI:22655488;AAN04080.1;AF4551381490aa配列番号:1112TrpM4BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,一過性レセプター潜在的カチオンチャネル,サブファミリーM,メンバー4,Genbankアクセッション番号NM017636Xu,X.Z.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.9819:10692-106972001、Cell1093:397-4072002,J.Biol.Chem.27833:30813-308202003;US2003143557クレーム4;WO200040614クレーム14;頁100-103;WO200210382クレーム1;図9A;WO2003042661クレーム12;WO200230268クレーム27;頁391;US2003219806クレーム4;WO200162794クレーム14;図1A~D;相互参照:MIM:606936;NP060106.2;NM01763611214aa配列番号:1213CRIPTOCR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,テラトカルシノーマ-由来成長因子,Genbankアクセッション番号NP003203またはNM003212,Ciccodicola,A.,etal.EMBOJ.87:1987-19911989,Am.J.Hum.Genet.493:555-5651991;US2003224411クレーム1;WO2003083041実施例1;WO2003034984クレーム12;WO200288170クレーム2;頁52-53;WO2003024392クレーム2;図58;WO200216413クレーム1;頁94-95,105;WO200222808クレーム2;図1US5854399実施例2;17-18欄;US5792616図2;相互参照:MIM:187395;NP003203.1;NM0032121188aa配列番号:1314CD21CR2補体レセプター2またはC3DRC3d/エプスタインバールウイルスレセプターまたはHs.73792Genbankアクセッション番号M26004,Fujisakuetal.1989J.Biol.Chem.2644:2118-2125;WeisJ.J.etal.J.Exp.Med.167,1047-1066,1988;MooreM.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.84,9194-9198,1987;Barel.M.,etal.Mol.Immunol.35,1025-1031,1998;WeisJ.J.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.83,5639-5643,1986;SinhaS.K.,etal.1993J.Immunol.150,5311-5320;WO2004045520実施例4;US2004005538実施例1;WO2003062401クレーム9;WO2004045520実施例4;WO9102536図9.1~9.9;WO2004020595クレーム1;受託:P20023;Q13866;Q14212;EMBL;M26004;AAA35786.11033aa配列番号:1415CD79bCD79B,CD79β,IGb免疫グロブリン-関連β、B29,Genbankアクセッション番号NM000626または11038674,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.20031007:4126-4131、Blood20021009:3068-3076、Mulleretal.1992Eur.J.Immunol.226:1621-1625;WO2004016225クレーム2,図140;WO2003087768,US2004101874クレーム1,頁102;WO2003062401クレーム9;WO200278524実施例2;US2002150573クレーム5、頁15;US5644033;WO2003048202クレーム1,頁306および309;WO99/558658、US6534482クレーム13,図17A/B;WO200055351クレーム11,1145-1146;相互参照:MIN:147245;NP000617.1;NM0006261229aa配列番号:1516FcRH2IFGP4,IRTA4,SPAP1ASH2ドメイン含有リン酸アンカータンパク質1a,SPAP1B,SPAP1C,Genbankアクセッション番号NM030764,GenomeRes.1310:2265-22702003,Immunogenetics542:87-952002,Blood998:2662-26692002,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.9817:9772-97772001,Hu,M.J.,etal.2002Biochem.Biophys.Res.Commun.2803:768-775;WO2004016225クレーム2;WO2003077836;WO200138490クレーム5;図18D-1~18D-2;WO2003097803クレーム12;WO2003089624クレーム25;相互参照:MIM:606509;NP110391.2;NM0307641508aa配列番号:1617HER2ErbB2,Genbankアクセッション番号M11730,CoussensL.,etal.Science19852304730:1132-1139;YamamotoT.,etal.Nature319,230-234,1986;SembaK.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.82,6497-6501、1985;SwierczJ.M.,etal.J.CellBiol.165,869-880,2004;KuhnsJ.J.,etal.J.Biol.Chem.274,36422-36427,1999;ChoH.-S.,etal.Nature421,756-760,2003;EhsaniA.,etal.1993Genomics15,426-429;WO2004048938実施例2;WO2004027049図1I;WO2004009622;WO2003081210;WO2003089904クレーム9;WO2003016475クレーム1;US2003118592;WO2003008537クレーム1;WO2003055439クレーム29;図1A~B;WO2003025228クレーム37;図5C;WO200222636実施例13;頁95-107;WO200212341クレーム68;図7;WO200213847頁71-74;WO200214503頁114-117;WO200153463クレーム2;頁41-46;WO200141787頁15;WO200044899クレーム52;図7;WO200020579クレ-ム3;図2US5869445クレーム3;31-38欄;WO9630514クレーム2;頁56-61;EP1439393クレーム7;WO2004043361クレーム7;WO2004022709;WO200100244実施例3;図4;受託:P04626;EMBL;M11767;AAA35808.1.EMBL;M11761;AAA35808.1.1255aa配列番号:1718NCACEACAM6,Genbankアクセッション番号M18728;BarnettT.,etal.Genomics3,59-66,1988;TawaragiY.,etal.Biochem.Biophys.Res.Commun.150,89-96,1988;StrausbergR.L.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.99:16899-16903,2002;WO2004063709;EP1439393クレーム7;WO2004044178実施例4;WO2004031238;WO2003042661クレーム12;WO200278524実施例2;WO200286443クレーム27;頁427;WO200260317クレーム2;受託:P40199;Q14920;EMBL;M29541;AAA59915.1.EMBL;M18728344aa配列番号:1819MDPDPEP1,Genbankアクセッション番号BC017023,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.9926:16899-169032002;WO2003016475クレーム1;WO200264798クレーム33;頁85-87;JP05003790図6~8;WO9946284図9;相互参照:MIM:179780;AAH17023.1;BC017023_1411aa配列番号:1920IL20RαIL20Ra,ZCYTOR7,Genbankアクセッション番号AF184971;ClarkH.F.,etal.GenomeRes.13,2265-2270,2003;MungallA.J.,etal.Nature425,805-811,2003;BlumbergH.,etal.Cell104,9-19,2001;DumoutierL.,etal.J.Immunol.167,3545-3549,2001;Parrish-NovakJ.,etal.J.Biol.Chem.277,47517-47523,2002;PletnevS.,etal.2003Biochemistry42:12617-12624;SheikhF.,etal.2004J.Immunol.172,2006-2010;EP1394274実施例11;US2004005320実施例5;WO2003029262頁74-75;WO2003002717クレーム2;頁63;WO200222153頁45-47;US2002042366頁20-21;WO200146261頁57-59;WO200146232頁63-65;WO9837193クレーム1;頁55-59;受託:Q9UHF4;Q6UWA9;Q96SH8;EMBL;AF184971;AAF01320.1.553aa配列番号:2021BrevicanBCAN,BEHAB,Genbankアクセッション番号AF229053GaryS.C.,etal.Gene256,139-147,2000;ClarkH.F.,etal.GenomeRes.13,2265-2270,2003;StrausbergR.L.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.99,16899-16903,2002;US2003186372クレーム11;US2003186373クレーム11;US2003119131クレーム1;図52;US2003119122クレーム1;図52;US2003119126クレーム1;US2003119121クレーム1;図52;US2003119129クレーム1;US2003119130クレーム1;US2003119128クレーム1;図52;US2003119125クレーム1;WO2003016475クレーム1;WO200202634クレーム1;911aa配列番号:2122EphB2RDRT,ERK,Hek5,EPHT3,Tyro5、Genbankアクセッション番号NM004442Chan,J.andWatt,V.M.,Oncogene66、1057-10611991Oncogene105:897-9051995、Annu.Rev.Neurosci.21:309-3451998、Int.Rev.Cytol.196:177-2442000;WO2003042661クレーム12;WO200053216クレーム1;頁41;WO2004065576クレーム1;WO2004020583クレーム9;WO2003004529頁128132;WO200053216クレーム1;頁42;相互参照:MIM:600997;NP004433.2;NM0044421987aa配列番号:2223ASLG659B7h,Genbankアクセッション番号AX092328US20040101899クレーム2;WO2003104399クレーム11;WO2004000221図3;US2003165504クレーム1;US2003124140実施例2;US2003065143図60;WO2002102235クレーム13;頁299;US2003091580実施例2;WO200210187クレーム6;図10;WO200194641クレーム12;図7b;WO200202624クレーム13;図1A~1B;US2002034749クレーム54;頁45-46;WO200206317実施例2;頁320-321,クレーム34;頁321-322;WO200271928頁468-469;WO200202587実施例1;図1;WO200140269実施例3;頁190-192;WO200036107実施例2;頁205-207;WO2004053079クレーム12;WO2003004989クレーム1;WO200271928頁233-234,452-453;WO0116318;282aa配列番号:2324PSCA前立腺幹細胞抗原前駆体,Genbankアクセッション番号AJ297436ReiterR.E.,etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.95,1735-1740,1998;GuZ.,etal.Oncogene19,1288-1296,2000;Biochem.Biophys.Res.Commun.20002753:783-788;WO2004022709;EP1394274実施例11;US2004018553クレーム17;WO2003008537クレーム1;WO200281646クレーム1;頁164;WO2003003906クレーム10;頁288;WO200140309実施例1;図17;US2001055751実施例1;図1b;WO200032752クレーム18;図1;WO9851805クレーム17;頁97;WO9851824クレーム10;頁94;WO9840403クレーム2;図1B;受託:O43653;EMBL;AF043498;AAC39607.1.123aa配列番号:2425GEDAGenbankアクセッション番号AY260763;AAP14954脂肪腫HMGIC融合-パートナー-様タンパク質/pid=AAP14954,1-Homosapiens種:HomosapiensヒトWO2003054152クレーム20;WO2003000842クレーム1;WO2003023013実施例3,クレーム20;US2003194704クレーム45;相互参照:GI:30102449;AAP14954.1;AY2607631236aa配列番号:2526BAFF-RB細胞-活性化因子レセプター,BLySレセプター3,BR3,Genbankアクセッション番号NP443177.1;NP443177BAFFレセプター/pid=NP443177.1-HomosapiensThompson,J.S.,etal.Science2935537,2108-21112001;WO2004058309;WO2004011611;WO2003045422実施例;頁32-33;WO2003014294クレーム35;図6B;WO2003035846クレーム70;頁615-616;WO200294852136-137欄;WO200238766クレーム3;頁133;WO200224909実施例3;図3;相互参照:MIM:606269;NP443177.1;NM0529451184aa配列番号:2627CD22B-細胞レセプターCD22-Bイソ型,Genbankアクセッション番号NP-001762.1;Stamenkovic,I.andSeed,B.,Nature3456270、74-771990;US2003157113;US2003118592;WO2003062401クレーム9;WO2003072036クレーム1;図1;WO200278524実施例2;相互参照:MIM:107266;NP001762.1;NM0017711847aa配列番号:2728CD79aCD79A,CD79α,免疫グロブリン-関連α,IgβCD79Bに共有結合相互作用し、IgM分子と表面で複合体を形成し、B-細胞分化に関与するシグナルを変換するB細胞-特異的タンパク質PROTEINSEQUENCEFullmpggpgv...dvqlekp1..226;226aa,pI:4.84,MW:25028TM:2[P]GeneChromosome:19q13.2,Genbankアクセッション番号NP001774.1;WO2003088808,US20030228319;WO2003062401クレーム9;US2002150573クレーム4;頁13-14;WO9958658クレーム13,図16;WO9207574図1;US5644033;Haetal.1992J.Immunol.1485:1526-1531;Muelleretal.1992Eur.J.Biochem.22:1621-1625;Hashimotoetal.1994Immunogenetics404:287-295;Preud’hommeetal.1992Clin.Exp.Immunol.901:141-146;Yuetal.1992J.Immunol.1482633-637;Sakaguchietal.1988EMBOJ.711:3457-3464;226aa配列番号:2829CXCR5バーキットリンパ腫レセプター1,CXCL13ケモカインによって活性化され、リンパ細胞の移動および液性防御で機能し、HIV-2感染および、おそらくは、AIDS、リンパ腫、骨髄腫、および白血病の発症で役割を演じるGプロテイン-カップルドレセプターPROTEINSEQUENCEFullmnypltl...atslttf1..372;372aa,pI:8.54MW:41959TM:7[P]遺伝子染色体:11q23.3,Genbankアクセッション番号NP001707.1;WO2004040000;WO2004015426;US2003105292実施例2;US6555339実施例2;WO200261087図1;WO200157188クレーム20,頁269;WO200172830頁12-13;WO200022129実施例1,頁152-153,実施例2,頁254-256;WO9928468クレーム1,頁38;US5440021実施例2,49-52欄;WO9428931頁56-58;WO9217497クレーム7;図5;Dobneretal.1992Eur.J.Immunol.22:2795-2799;Barellaetal.1995Biochem.J.309:773-779;372aa配列番号:2930HLA-DOBペプチドに結合し、それらをCD4Tリンパ球に提示するMHCクラスII分子Ia抗原のβサブユニットPROTEINSEQUENCEFullmgsgwvp...vllpqsc1..273;273aa,pI:6.56MW:30820TM:1[P]遺伝子染色体:6p21.3、Genbankアクセッション番号NP002111.1;Tonnelleetal.1985EMBOJ.411:2839-2847;Jonssonetal.1989Immunogenetics296:411-413;Becketal.1992J.Mol.Biol.228:433-441;Strausbergetal.2002Proc.Natl.Acad.SciUSA99:16899-16903;Serveniusetal.1987J.Biol.Chem.262:8759-8766;Becketal.1996J.Mol.Biol.255:1-13;Naruseetal.2002TissueAntigens59:512-519;WO9958658クレーム13,図15;US615340835-38欄;US5976551168-170欄;US6011146145-146欄;Kasaharaetal.1989Immunogenetics301:66-68;Larhammaretal.1985J.Biol.Chem.26026:14111-14119;273aa配列番号:3031P2X5プリン作動性レセプターP2Xリガンド型イオンチャネル5,細胞内ATPによってゲートが開閉されるイオンチャネルはシナプス伝達および神経形成に関与でき、欠乏は原発性排尿筋不安定性の病理生理学に寄与し得るPROTEINSEQUENCEFullmgqagck...lephrst1..422;422aa,pI:7.63,MW:47206TM:1[P]遺伝子染色体:17p13.3,Genbankアクセッション番号NP002552.2;Leetal.1997FEBSLett.4181-2:195-199;WO2004047749;WO2003072035クレーム10;Touchmanetal.2000GenomeRes.10:165-173;WO200222660クレーム20;WO2003093444クレーム1;WO2003087768クレーム1;WO2003029277頁82;422aa配列番号:3132CD72B-細胞分化抗原CD72,Lyb-2PROTEINSEQUENCEFullmaeaity...tafrfpd1..359;359aa,pI:8.66,MW:40225TM:1[P]遺伝子染色体:9p13.3,Genbankアクセッション番号NP001773.1;WO2004042346クレーム65;WO2003026493頁51-52,57-58;WO200075655頁105-106;VonHoegenetal.1990J.Immunol.14412:4870-4877;Strausbergetal.2002Proc.Natl.Acad.SciUSA99:16899-16903;359aa配列番号:3233LY64リンパ球抗原64RP105,ロイシンリッチのリピートLRRファミリーのタイプI膜タンパク質はB-細胞の活性化およびアポトーシスを調節し、機能の喪失は全身エリテマトーデスを持つ患者において増大した病気活性に関連するPROTEINSEQUENCEFullmafdvsc...rwkyqhi1..661;661aa,pI:6.20,MW:74147TM:1P遺伝子染色体:5q12,Genbankアクセッション番号NP005573.1;US2002193567;WO9707198クレーム11,頁39-42;Miuraetal.1996Genomics383299-304;Miuraetal.1998Blood92:2815-2822;WO2003083047;WO9744452クレーム8,頁57-61;WO200012130頁24-26;661aa配列番号:3334FCRH1Fcレセプター-様タンパク質1、C2タイプIg-様およびITAMドメインを含有する免疫グロブリンFcドメインに対する推定レセプターはB-リンパ球の分解において役割を有し得るPROTEINSEQUENCEFullmlprlll...vdyedam1..429;429aa,pI:5.28,MW:46925TM1[P]遺伝子染色体:1q21-1q22,Genbankアクセッション番号NP_443170.1;WO2003077836;WO200138490クレーム6,図18E-1~18-E-2;Davisetal.2001Proc.Natl.Acad.SciUSA9817:9772-9777;WO2003089624クレーム8;EP13470476クレーム1;WO2003089624クレーム7;429aa配列番号:3435IRTA2免疫グロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連2、B細胞の発生およびリンパ腫形成において可能な役割を持つ推定免疫レセプター;トランスロケーションによる遺伝子の脱調節はいくつかのB細胞悪性疾患で起こるPROTEINSEQUENCEFullmllwvil...assaphr1..977;977aa,pI:6.88MW:106468TM:1[P]遺伝子染色体:1q21,Genbankアクセッション番号NP112571.1;WO2003024392クレーム2,図97;Nakayamaetal.2000Biochem.Biophys.Res.Commun.2771:124-127;WO2003077836;WO200138490クレーム3,図18B-1~18B-2;977aa配列番号:35また:全て個々に引用してその全体を援用する、WO04/0455162004年6月3日;WO03/0001132003年1月3日;WO02/0164292002年2月28日;WO02/165812002年2月28日;WO03/0243922003年3月27日;WO04/0162252004年2月26日;WO01/403092001年6月7日、および2003年11月17日に出願された米国仮特許出願第60/520842号[COMPOSITIONSANDMETHODSFORTHETREATMENTOFTUMOROFHEMATOPOIETICORIGIN]も参照されたし。実施形態において、リガンド-リンカー-薬物結合体は式IIIaを有し、ここで、該リガンドはCD30、CD40、CD70、LewisY抗原のうちの少なくとも1つに結合するものを含めた抗体Abであり、w=0、y=0であり、Dは式Ibを有する。式IIIaの例示的結合体はR17が-CH25-である場合を含む。また、Dが実施例3における化合物2の構造を有する式IIIaのそのような結合体およびそのエステルも含まれる。また、約3~約8、1つの態様においては、約3~約5の薬物部分Dを含有する式IIIaのそのような結合体、すなわち、pが約3~8の範囲の値、例えば、約3~5である式Iaの結合体も含まれる。このパラグラフに記載した構造的特徴の組合せを含有する結合体も本発明の化合物の範囲内として考えられる。もう1つの実施形態において、リガンド-リンカー-薬物結合体は式IIIaを有し、ここで、リガンドはCD30、CD40、CD70、LewisY抗原1つに結合する抗体Abであり、w=1、y=0であって、Dは式Ibを有する。R17が-CH25-である式IIIaのこのような結合体が含まれる。または、Wが-Val-Cit-であり、および/またはDが実施例3における化合物2の構造を有する式IIIaのそのような結合体およびそのエステルも含まれる。また、約3~約8、好ましくは約3~約5の薬物部分Dを含有する式IIIaのそのような結合体、すなわち、pが約3~8、好ましくは約3~5の範囲の値である式Iaの結合体も含まれる。また、このパラグラフに記載した構造的特徴の組合せを含む結合体は例示的である。実施形態において、リガンド-リンカー-薬物結合体は式IIIaを有し、ここで、該リガンドはCD30、CD40、CD70、LewisY抗原の1つに結合する抗体Abであり、w=1、y=1であり、およびDは式Ibを有する。R17が-CH25-である式IIIaの結合体が含まれる。また、Wが-Val-Cit-であり;Yが式Xを有し;Dが実施例3における化合物2の構造およびそのエステルを有し;pが約3~約8、好ましくは約3~約5の薬物部分Dである式IIIaのそのような結合体も含まれる。このパラグラフに記載された構造的特徴の組合せを含む結合体もまた本発明の化合物の範囲内で考えられる。さらなる実施形態は、Abが前記した腫瘍-関連抗原1~35TAA化合物の1つに結合する抗体である抗体薬物結合体ADC、またはその薬学的に受容可能なその塩または溶媒和物である。もう1つの実施形態は単離され精製された形態であるTAA化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である。もう1つの実施形態は、一定量のTAA化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者、例えば、過剰増殖疾患を持つヒトに投与することを含み、該量は腫瘍細胞または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害するのに効果的なものであることを特徴とする、腫瘍または癌細胞を殺傷し、またはその増殖を阻害する方法である。もう1つの実施形態は、単独、または有効量のさらなる抗癌剤と共に、一定量のTAA化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者、例えば、過剰増殖疾患を持つヒトに投与することを含み、該量は癌を治療するのに効果的であることを特徴とする、癌を治療する方法である。もう1つの実施形態は、一定量のTAA化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者、例えば、過剰増殖疾患を持つヒトに投与することを含み、該量は自己免疫疾患を治療するのに効果的であることを特徴とする、自己免疫疾患を治療する方法である。本発明で用いるのに適した抗体は、抗体の合成につき当該分野で知られたいずれかの方法によって、特に、化学合成によって、または組換え発現によって生産することができ、好ましくは、組換え発現技術によって生産される。4.5.1組換え抗体の生産本発明の抗体は、抗体の合成で有用であることが当該分野で知られたいずれかの方法、特に、化学合成によって、または組換え発現によって生産することができる。抗体、またはそのフラグメント、誘導体またはアナログの組換え発現は、該抗体をコードする核酸の構築を必要とする。もし抗体のヌクレオチド配列が知られていれば、抗体をコードする核酸を例えば、Kutmeieretal.,1994,BioTechniques17:242に記載されたように化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ、これは、抗体をコードする配列の一部を含有する重複するオリゴヌクレオチドを合成し、それらのオリゴヌクレオチドをアニールし、連結し、次いで、例えば、PCRによって連結されたオリゴヌクレオチドを増幅することを含む。別法として、抗体をコードする核酸分子は適当な源から作成することができる。もし特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが入手できないが、抗体の配列が知られていれば、抗体をコードする核酸は、例えば、配列の3’および5’末端にハイブリダイズすることができる合成プライマーを用いるPCR増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いるクローニングによって、適当な源例えば、抗体cDNAライブラリー、または免疫グロブリンを発現するいずれかの組織または細胞から作成したcDNAライブラリーから得ることができる。もし特定の抗原を特異的に認識する抗体が商業的に入手できないならばまたはそのような免疫グロブリンをコードする核酸をクローニングするためのcDNAライブラリー用の源、特定の抗原に特異的な抗体は当該分野で知られたいずれかの方法によって、例えば、患者、またはウサギまたはマウスのような適当な動物モデルを免疫化して、ポリクローナル抗体を作り出すことによって、またはより好ましくは、例えば、KohlerandMilstein1975,Nature256:495-497によって記載されたように、またはKozboretal.1983,ImmunologyToday4:72またはColeetal.1985inMonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,Inc.,pp.77-96によって記載されているように、モノクローナル抗体を作り出すことによって作成することができる。別法として、抗体の少なくともFab部分をコードするクローンは、特異的抗原に結合するFabフラグメントのクローンにつき例えば、Huseetal.,1989,Science246:1275-1281に記載されているようにFab発現ライブラリーをスクリーニングすることによって、または抗体ライブラリーをスクリーニングすることによって例えば、Clacksonetal.,1991,Nature352:624;Haneetal.,1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:4937得ることができる。一旦抗体の少なくとも可変ドメインをコードする核酸配列が得られたならば、それは、抗体の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含有するベクターに導入することができる例えば、国際公開番号WO86/05807;WO89/01036;および米国特許第5122464号参照。完全な抗体分子の発現を可能とする完全な軽鎖または重鎖を含有するベクターが入手できる。次いで、抗体をコードする核酸を用いて、鎖内ジスルフィド結合に参画する1以上の可変領域システイン残基をスルフヒドリル基を含有しないアミノ酸残基で置き換えるまたは欠失させるのに必要なヌクレオチド置換または欠失を導入することができる。そのような修飾は、ヌクレオチド配列への特異的な突然変異または欠失の導入用に当該分野で知られたいずれかの方法、例えば、限定されるものではないが、化学的突然変異誘発およびインビトロ部位特異的突然変異誘発Hutchinsonetal.,1978,J.Biol.Chem.253:6551によって行うことができる。加えて、適当な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子と共に適当な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることによるキメラ抗体Morrisonetal.,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.81:851-855;Neubergeretal.,1984,Nature312:604-608;Takedaetal.,1985,Nature314:452-454の生産用に開発された技術を用いることができる。キメラ抗体は、異なる部分が、ネズミモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有するもの、例えば、ヒト化抗体のような異なる動物種に由来する分子である。別法として、単一鎖抗体の生産のために記載された技術米国特許第4,694,778号;Bird,1988,Science242:423-42;Hustonetal.,1988、Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883;およびWardetal.,1989、Nature334:544-54を、単一鎖抗体を生産するように適合させることができる。単一鎖抗体は、アミノ酸ブリッジを介してFv領域の重鎖および軽鎖フラグメントを連結させ、その結果、単一鎖ポリペプチドを得ることによって形成される。また、E.coliにおける機能的Fvフラグメントの組み立てのための技術を用いることもできるSkerraetal.,1988,Science242:1038-1041。特異的エピトープを認識する抗体フラグメントは公知の技術によって作ることができる。例えば、そのようなフラグメントは、限定されるものではないが、抗体分子のペプシン消化によって生産することができるFab’2フラグメント、およびFab’2フラグメントのジスルフィドブリッジを低下させることによって作ることができるFabフラグメントを含む。一旦抗体をコードする核酸配列が得られたならば、抗体の生産用のベクターを、当該分野でよく知られた技術を用いて組換えDNA技術によって生産することができる。当業者によく知られた方法を用いて、抗体コーディング配列および適当な転写および翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法は、例えば、インビトロ組換えDNA技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えを含む。例えば、Sambrooketal.1990、MolecularCloniong,ALaboratoryManual,第2版,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborNYおよびAusubeletal.,編,1998,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons,NYに記載された技術を参照されたし。抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターまたは抗体のヌクレオチド配列を従来技術例えば、エレクトロポレーション、リポソームトランスフェクション、およびリン酸カルシウム沈殿によって宿主細胞に導入することができ、次いで、従来技術によってトランスフェクトされた細胞を培養して、抗体を得る。特別な実施形態において、抗体の発現は構成的、誘導的または組織特異的プロモーターによって調製される。組換え抗体を発現するのに用いる宿主細胞はEscherichiacoliのような細菌細胞、または好ましくは特に全組換え免疫グロブリン分子の発現用の真核生物細胞いずれかであり得る。特に、ヒトサイトメガロウイルスからの主要即時型遺伝子プロモーターエレメントのようなベクターと組み合わせて、チャイニーズハムスター卵巣細胞CHOのような哺乳動物細胞は免疫グロブリン用の効果的な発現システムであるFoeckingetal.,198、Gene45:101;Cockettetal.,1990.BioTechnology8:2。種々の宿主-発現ベクターシステムを利用して、免疫グロブリン抗体を発現させることができる。そのような宿主-発現システムは、それによって抗体のコーディング配列を生産し、引き続いて精製することができるビヒクルを表すが、また、適当なヌクレオチドコーディング配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に、インサイチュにて抗体免疫グロブリン分子を発現することができる細胞も表す。これらは、限定されるものではないが、免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNAまたはコスミドDNA発現ベクターで形質転換された細菌例えば、E.coliおよびB.subtilisのような微生物;免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母例えば、SaccharomycesPichia;免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター例えば、バキュロウイルスで感染させた昆虫細胞系;組換えウイルス発現ベクター例えば、カリフラワーモザイクウイルス例えば、CaMVおよびタバコモザイクウイルスTMVを感染させた、または免疫グロブリンコーディング配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター例えば、Tiプラスミドで形質転換した植物細胞系;または哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター例えば、メタロチオネインプロモーターまたは哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター例えば、アデノウイルス後期プロモーター;ワクシミアウイルス7.5Kプロモーターを含有する組換え発現構築体を保有する哺乳動物細胞系例えば、COS、CHO、BH、293、293T、3T3細胞を含む。細菌系においては、発現すべき抗体に意図された使用に応じて、多数の発現ベクターを有利には選択することができる。例えば、大量のそのようなタンパク質を生産する場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指令するベクターが望ましいであろう。そのようなベクターは、限定されるものではないが、抗体コーディング配列が、融合タンパク質が生産されるようにlacZコーディング領域とインフレームにて個々にベクターに連結できるE.coli発現ベクターpUR278Rutheretal.,1989、EMBO,J.2:1791;pINベクターInouyeInouye,1985、NucleicAcidsRes.13:3101-3109;VanHeekeSchuster,1989,J.Biol.Chem.24:5503-5509;等を含む。また、pGEXベクターを用いて、グルタチオンS-トランスフェラーゼGSTとの融合タンパク質として外来性ポリペプチドを発現することができる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であって、吸着、およびマトリックスグルタチオン-アガロースビーズへの結合、続いての、遊離グルタチオンの存在下での溶出によって容易に精製することができる。pGEXベクターは、クローン化された標的遺伝子産物がGST部位から放出できるように、トロンビンまたは第Xa因子プロテアーゼ切断部位を含めるように設計される。昆虫系においては、Autographacalifornica核ポリヘドロシスウイルスAcNPVまたはDrosophilaMelanogasterからの同様なウイルスを、外来性遺伝子を発現させるためのベクターとして用いる。ウイルスはSpodopterafrugiperda細胞内で成長する。抗体コーディング配列は、ウイルスの非-必須領域例えば、ポリヘドリン遺伝子に個々にクローン化することができ、かつAcNPVプロモーター例えば、ポリヘドリンプロモーターの制御下に置くことができる。哺乳動物宿主細胞において、多数のウイルス-ベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして用いられる場合、注目する抗体コーディング配列を、アデノウイルス転写/翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび三部リーダー配列に連結させることができる。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非-必須領域例えば、領域E1またはE3への挿入の結果、生きており、かつ感染した宿主において免疫グロブリン分子を発現することができる組換えウイルスが得られる例えば、LoganShenk,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:355-359参照。また、特異的な開始シグナルが挿入された抗体コーディング配列の効果的な翻訳で必要であり得る。これらのシグナルは、ATG開始コドンおよび隣接する配列を含む。さらに、開始コドンは、全インサートの翻訳を確実とするために、所望のコーディング配列のリーディングフレームと相内になければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは種々の起源、天然および合成のものであり得る。発現の効率は、適当な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネ―ターなどを含めることによって増強することができるBittneretal.,1987,MethodsinEnzymol.153:51-544参照。加えて、宿主細胞株は、挿入された配列の発現を変調するように選択することができ、あるいは所望の特異的様式で遺伝子産物を修飾し、プロセッシングする。タンパク質産物のそのような修飾例えば、グリコシル化およびプロセッシング例えば、切断は、タンパク質の機能で重要であり得る。異なる宿主細胞は翻訳後プロセッシングおよびタンパク質および遺伝子産物の修飾について特徴的かつ特異的なメカニズムを有する。適当な細胞系または宿主系発現すべき外来性タンパク質の正しい修飾およびプロセッシングを確実とするように選択することができる。この目的で、遺伝子産物の一次転写体、グリコシル化およびリン酸化の適切なプロセッシングのための細胞マシーナリーを保有する真核生物宿主細胞を用いることができる。そのような哺乳動物宿主細胞は、限定されるものではないが、CHO、VERY、BH、Hela、COS、MDCK、293、293T、3T3、WI38、BT483、Hs578T、HTB2、BT20およびT47D、CRL7030およびHs578Bstを含む。組換えタンパク質の長期の高収率生産のためには、安定な発現が好ましい。例えば、抗体を安定に発現する細胞系を作製することができる。ウイルスの複製起点を含有する発現ベクターを用いるよりはむしろ、適当な発現制御エレメント例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など、および選択マーカーによって制御されるDNAで形質転換することができる。外来性DNAの導入に続いて、作製された細胞は、豊富化された培地中で1~2日間増殖させることができ、次いで、選択培地にスイッチする。組換体プラスミド中の選択マーカーは耐性を選択に付与し、細胞がプラスミドをその染色体に組み込み、増殖して、今度は、クローン化し、細胞系へ拡大培養することができるフォーカスを形成するのを可能とする。この方法は、抗体を発現する細胞系を作製するのに有意に用いることができる。そのような作製された細胞系は、抗体と直接的にまたは間接的に相互作用する腫瘍抗原のスクリーニングおよび評価で特に有用であり得る。限定されるものではないが、単純疱疹ウイルスチミジンキナーゼWigleretal.,1977,Cell11:223、ヒポキサンチン-ホスホリボシルトランスフェラーゼSzybalskaSzybalski,192,Proc.Natl.Acad.Sci.USA48:202、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼLowyetal.,1980,Cell22:817遺伝子を、各々、tk-、hgprt-、またはaprt-細胞で使用することができる。また、抗代謝産物耐性は以下の遺伝子についての選択の基礎として用いることができる:メトトレキセートに対する耐性を付与するDHFRWigleretal.,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:357;O’Hareetal.,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:1527;ミコフェノール酸に対する耐性を付与するgptMulliganBerg,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:2072;アミノグリコシドG-418に対する耐性を付与するneoClinicalPharmacy12:488-505;WuandWu,1991,Biotherapy3:87-95;Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596;Mulligan,1993,Science260:926-932;およびMorganandAnderson,1993,Ann.Rev.Biochem,62:191-217;May,1993,TIBTECH115:155-215およびヒグロマイシンに対する耐性を付与するhygroSanterreetal.,1984,Gene30:147。用いることができる組換えDNA技術の当該分野で通常知られている方法はAusubeletal.編,1993,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons,NY;Kriegler,1990,GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY;および12および13章,Dracopolietal.編,1994,CurrentProtocolsinHumanGenetics,JohnWileySons,NY.;Colberre-Garapinetal.,1981,J.Mol.Biol.150:1に記載されている。抗体の発現レベルはベクター増幅によって増大させることができるレビューについては、BebbingtonandHentschel,TheuseofvectorsbasedongeneamplificationfortheexpressionofclonedgenesinmammaliancellsinDNAcloning,Vol.3.AcademicPress,NewYork,1987参照。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養に存在する阻害剤のレベルの増大は、マーカー遺伝子のコピーの数を増大させる。増幅された領域が抗体のヌクレオチド配列に関連するので、抗体の生産も増大するCrouseetal.,1983,Mol.Cell.Biol.3:257。宿主細胞は2つの発現ベクターで共-トランスフェクトすることができ、第一のベクターは重鎖由来ポリペプチドをコードし、第二のベクターは軽鎖由来ポリペプチドをコードする。2つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの同等な発現を可能とする同一の選択マーカーを含有することができる。別法として、単一ベクターを用いて、重鎖および軽鎖ポリペプチド双方をコードさせることができる。そのような状況において、軽鎖は重鎖の前において、過剰な毒性フリー重鎖を回避すべきであるProudfoot,1986,Nature322:52;Kohler,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:2197。重鎖および軽鎖についてのコーディング配列はcDNAまたはゲノムDNAを含むことができる。一旦抗体が組換えにより発現されたならば、それは、例えば、クロマトグラフィー例えば、イオン交換、アフィニティー、特にプロテインA後の特異的抗原に対する親和性による、およびサイジングカラムクロマトグラフィー、遠心、分別溶解性によって、またはタンパク質の精製用のいずれかの他の標準技術によって、抗体の精製のための当該分野で知られたいずれかの方法を用いて精製することができる。さらにもう1つの例示的実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。いずれの場合においても、ハイブリッド抗体は、好ましくは、選択するハプテンに対して特異的な1以上の結合部位との、または標的抗原、例えば、腫瘍、自己免疫疾患、感染性生物、または他の病気状態に関連する抗原に対して特異的な1以上の結合部位とのデュアル特異性を有する。4.5.2抗体の生産抗体の生産は抗-CD30抗体を参照して説明するが、TNFレセプターファミリーの他のメンバーに対する抗体を生産することができ、同様に修飾することができるのは当業者に明らかであろう。抗体の生産のためのCD30の使用は例示的なものに過ぎず、限定する意図のものではない。抗体の生産で用いるべきCD30抗原は、例えば、所望のエピトープを含有する、CD30の細胞外ドメインまたはその部分の可溶性形態であり得る。別法として、それらの細胞表面においてCD30を発現する細胞例えば、L540T細胞表現型を持つホジキンリンパ腫由来細胞系およびL428B細胞表現型を持つホジキンリンパ腫由来細胞を用いて抗体を作製することができる。抗体を作製するのに有用なCD30の他の形態は当業者に明らかであろう。もう1つの例示的実施形態において、抗体の生産で用いるべきErbB2抗原は、例えば、所望のエピトープを含有する、ErbB2の細胞外ドメインまたはその部分の可溶性形態であり得る。別法として、それらの細胞表面でErbB2を発現する細胞例えば、ErbB2を過剰発現するように形質転換されたNIH-3T3細胞;またはSK-BR-3細胞のような癌腫細胞系、Stancovskietal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:8691-86951991参照を用いて抗体を作製することができる。抗体を作製するのに有用なErbB2の他の形態は当業者に明らかであろう。iポリクローナル抗体ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連抗原およびアジュバントの複数皮下scまたは腹腔内ip注射によって動物において生起させる。二機能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステルシステイン残基を通じての結合体化、N-ヒドロキシスクシンイミドリシン残基を通じる、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、SOCl2、またはRおよびR1が異なるアルキル基であるR1N=C=NRを用いて、関連抗原を、免疫化すべき種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペッドヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤に結合体化するのが有用であろう。例えば、100μgまたは5μgのタンパク質または結合体各々、ウサギまたはマウス用と3容量のフロイントの完全アジュバントを合わせ、該溶液を皮内に複数部位に注射することによって、動物を抗原、免疫原性結合体、または誘導体に対して免疫化する。1ヵ月後、複数部位における皮下注射によって、フロイントの完全アジュバント中のペプチドまたは結合体の元の量の1/5~1/10を動物にブースター注射する。7~14日後、動物から採血し、血清を抗体力価につきアッセイする。力価がプラトーとなるまで動物にブースター注射する。好ましくは、動物に、同一の抗原の結合体であるが、異なるタンパク質に結合体したおよび/または異なる架橋剤を通じるものをブースター注射する。また、結合体は、タンパク質融合として組換え細胞培養で作製することができる。また、ミョウバンのような凝集剤を適切には用いて、免疫系を増強する。iiモノクローナル抗体モノクローナル抗体は実質的に均一な抗体の集団から得られ、すなわち、集団を含む個々の抗体は、微量に存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除いて同一である。かくして、修飾語モノクローナルは、区別される抗体の混合物ではない抗体の特性を示す。例えば、モノクローナル抗体は、Kohleretal.,Nature,256:4951975によって最初に記載されたハイブリドーマを用いて作成することができるか、あるいは組換えDNA方法によって作製することができる米国特許第4816567号。ハイブリドーマ方法においては、マウス、またはハムスターのような他の適当な宿主細胞を前記したように免疫化して、免疫化で用いられるタンパク質に特異的に結合する抗体を生産する、または生産することができるリンパ球を誘導する。別法として、リンパ球はインビトロで免疫化することができる。次いで、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用いてリンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成するGoding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103AcademicPress,1986。かく調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは、未融合の親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する1以上の物質を含有する適当な培養基に接種し、増殖させる。例えば、もし親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼHGPRTまたはHPRTを欠くならば、ハイブリドーマのための培養基は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含みHAT培地、その物質はHGPRT-欠乏細胞の増殖を妨げる。好ましい骨髄腫細胞は、効果的に融合し、選択された抗体-生産細胞によって抗体の安定な高レベル生産を支持し、かつHAT培地のような培地に感受性であるものである。これらのうち、好ましい骨髄腫細胞系は、SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,CaliforniaUSAから入手可能なMOPC-21およびMPC-11マウス腫瘍、およびAmericanTypeCultureCollection,Rockville,MarrylandUSAから入手可能なSP-2またはX63-Ag8-653細胞に由来するもののようなネズミ骨髄腫系である。また、ヒト骨髄腫およびマウス-ヒトへテロ骨髄腫細胞系もまた、ヒトモノクローナル抗体の生産について記載されているKozbor,J.Immunol.,133:30011984;およびBrodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987。ハイブリドーマ細胞が増殖する培養基は、抗原に対して向けられたモノクローナル抗体の生産につきアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生産されたモノクローナル抗体の結合特異性は免疫沈澱によって、またはラジオイムノアッセイRIAまたは酵素-結合免疫吸着検定法ELISAのようなインビトロ結合アッセイによって決定される。モノクローナル抗体の結合アフィニティーは、Munsonetal.,Anal.Biochem.,107:2201980のScatchard分析によって測定することができる。所望の特異性、アフィニティーおよび/または活性の抗体を生産するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは限界希釈手法によってサブクローン化し、標準的な方法によって増殖させることができるGoding,MonoclonalAntibodies,PrinciplesandPractice,pp.59-103AcademicPress,1986。この目的での適当な培養基は、例えば、D-MEMまたはRPMI-1640培地を含む。加えて、ハイブリドーマ細胞は動物において腹水液腫瘍としてインビボで増殖させることができる。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインA-Sepharose、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーのような慣用的な抗体精製手法によって培養基、腹水液または血清から分離する。モノクローナル抗体をコードするDNAは、例えば、ネズミ抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって慣用的手法を用いて容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞はそのようなDNAの好ましい源として供される。一旦単離されれば、DNAは発現ベクターに入れることができ、これは、次いで、そうでなければ抗体タンパク質を生産しない、E.coli細胞、シミアンCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、または骨髄腫細胞のような宿主細胞にトランスフェクトして、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得る。抗体をコードするDNAの細菌における組換え発現についてのレビュー論文はSkerraetal.,Curr.OpinioninImmunol.,5:256-2621993およびPluckthun,Immunol.Revs.,130:151-1881992を含む。さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体フラグメントはMcCaffertyetal.,Nature,348:552-5541990に記載された技術を用いて生じさせた抗体ファージライブラリーから単離することができる。Clacksonetal.,Nature,352:624-6281991およびMarksetal.,J.Mol.Biol.,222:581-5971991は、ファージライブラリーを用いる、各々、ネズミおよびヒト抗体の単離を記載する。引き続いての刊行物は、鎖シャッフリングMarksetal.,Bio/Technology,10:779-7831992、ならびにコンビナトーリアル感染、および非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略としてのインビボ組換えWaterhouseetal.,Nuc.Acids.Res.,21:2265-22661993によって、高アフィニティーnM範囲ヒト抗体の生産を記載する。かくして、これらの技術はモノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する活力のある代替法である。DNAは、例えば、相同ネズミ配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインに対するコーディング配列で置き換えることによって米国特許第4816567号;およびMorrison,et.al.1984Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851、または非-免疫グロブリンポリペプチドに対するコーディング配列の全てまたは一部を免疫グロブリンコーディング配列に共有結合により連結することによって修飾することもできる。典型的には、そのような非-免疫グロブリンポリペプチドを、抗体の定常ドメインに代えて置換し、あるいは抗体の1つの抗原-組合せ部位の可変ドメインに代えて置換して、抗原に対する特異性を有する1つの抗原-組合せ部位、および異なる抗原に対する特異性を有するもう1つの抗原-組合せ部位を含むキメラ二重特異性抗体を作る。iiiヒト化抗体ヒト化抗体は、非-ヒトである源からそれに導入された1以上のアミノ酸残基を有することができる。これらの非-ヒトアミノ酸残基は、しばしば、輸入残基と言われ、それは、典型的には、輸入可変ドメインから取られる。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列に代えて超可変領域配列で置換することによって、Winterおよび共同研究者の方法に従って実質的に行うことができるJonesetal.,Nature321:522-5251986;Riechmannetal.,Nature,332:323-3271988;Verhoeyenetal.,Science239:1534-15361988。従って、そのようなヒト化抗体はキメラ抗体であり米国特許第4,816,567号、ここで、実質的に無傷ヒト可変ドメインよりも少ないモノが非-ヒト種からの対応する配列によって置き換えられている。現実的には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域残基および、恐らくは、いくつかのFR残基がげっ歯類抗体における類似の部位からの残基によって置き換えられたヒト抗体である。ヒト化抗体を作成するにおいて用いるべきヒト可変ドメイン軽鎖および重鎖双方の選択は、抗原性を低下させるのに非常に重要である。いわゆるベスト-フィット方法に従って、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は公知のヒト可変-ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯類のそれと最も近いヒト配列はヒト化抗体についてのヒトフレームワーク領域FRとして許容されるSimsetal.,J.Immunol.,151:22961993;Chothiaetal.,J.Mol.Biol.,196:9011987。もう1つの方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を用いる。同一のフレームワークを数個の異なるヒト化抗体で用いることができるCarteretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:42851992;Prestaetal.,J.Immunol.,151:26231993。もう1つの実施形態において、抗体は抗原に対する高い親和性および他の好都合な生物学的特性の保持でヒト化することができる。ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを用いる親配列および種々の概念的ヒト化産物の分析のプロセスによって調製することができる。三次元免疫グロブリンモデルは通常入手でき、当業者が精通している。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元立体配座構造を示し、提示するコンピュータプログラムが入手できる。これらの表示の精査は、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基のありそうな役割の分析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析を可能とする。このようにして、FR残基が標的抗原に対する増大した親和性のような所望の抗体特徴が達成されるように、需要者および輸入配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基は抗原結合への影響に直接的にかつ最も実質的に関与する。種々の形態のヒト化抗体が考えられる。例えば、ヒト化抗体はFabのような抗体フラグメントであり得る。別法として、ヒト化抗体は無傷IgG1抗体のような無傷抗体であり得る。実施例は例示的ヒト化抗-ErbB2抗体の生産を記載する。ヒト化抗体は、例えば、ヒト可変重鎖ドメインに取りこまれた非ヒト超可変領域残基を含み、さらに、Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD1991に記載された可変ドメインナンバリング系を利用する69H、71Hおよび73Hよりなる群から選択される位置におけるフレームワーク領域FR置換を含むことができる。1つの実施形態において、ヒト化抗体は位置69H、71Hおよび73Hの2つまたは全てにおいてFR置換を含む。もう1つの例は、HERCEPTIN登録商標処方からの精製されたトラスツズマブ抗体の調製を記載する。ivヒト抗体ヒト化に対する代替法として、ヒト抗体を作り出すことができる。例えば、今日、免疫化に際して、内因性免疫グロブリン生産の不存在下でヒト抗体の十分なレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物例えば、マウスを生産することが可能である。例えば、キメラおよび生殖系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域JH遺伝子のホモ接合性欠失の結果、内因性抗体の生産の完全な阻害がもたらされると記載されている。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子のそのような生殖系列突然変異体マウスへの導入の結果、抗原調製に際して、ヒト抗体が生産される。例えば、Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:25511993;Jakobovitsetal.,Nature,362:255-2581993;Bruggermannetal.,YearinImmuno.,7:331993;および米国特許第5,591,669号、第5,589,369号および第5,545,807号参照。別法として、ファージディスプレイ技術McCaffertyetal.,Nature348:552-5531990を用いて、未免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変Vドメイン遺伝子レパートリーからインビトロにてヒト抗体および抗体フラグメントを生じさせることができる。この技術に従い、抗体Vドメイン遺伝子をM13またはfdのようなフィラメント状バクテリオファージの主要または従たるコートタンパク質遺伝子いずれかにイン-フレームをクローン化し、ファージ粒子の表面で機能的抗体フラグメントとして表示される。フィラメント状粒子はファージゲノムの一本鎖DNAコピーを含有するので、抗体の機能的特性に基づく選択の結果、それらの特性を呈する抗体をコードする遺伝子が選択される。かくして、ファージはB-細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは種々のフォーマットで行うことができる;それらのレビューについては、例えば、Johnson,KevinS.andChiswell,DavidJ.,CurrentOpinioninStructuralBiology3:564-5711993参照。V-遺伝子セグメントの数個の源がファージディスプレイで用いることができる。Clacksonetal.,Nature,352:624-6281991は、免疫化マウスの脾臓に由来するV遺伝子の小さなランダムコンビナトーリアムライブラリーから抗-オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。未免疫化ヒトドナーからのV遺伝子のレパートリーを構築し、自己-抗原を含めた抗原の多様なアレイに対する抗体をMarksetal.,J.Mol.Biol.222:581-5971991、またはGriffithetal.,EMBOJ.12:725-7341993によって記載された技術に実質的に従って単離することができる。また、米国特許第5565332号および第5573905号参照。先に議論したように、ヒト抗体はインビトロで活性化されたB細胞によって作り出すこともできる米国特許第5567610号および第5229275号参照。ヒト抗-CD30抗体は米国特許出願第10/338,366号に記載されている。v抗体フラグメント抗体フラグメントの生産のために種々の技術が開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは無傷抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された例えば、Morimotoetal.,JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-1171992;およびBrennanetal.,Science,229:811985参照。しかしながら、これらのフラグメントは、今日、組換え宿主細胞によって直接的に生産され得る。例えば、抗体フラグメントは先に議論した抗体ファージライブラリーから単離することができる。別法として、Fab’-SHフラグメントはE.coliから直接的に回収し、化学的にカップリングさせてFab’2フラグメントを形成することができるCarteretal.,Bio/Technology10:163-1671992。もう1つのアプローチに従うと、Fab’2フラグメントは組換え宿主細胞培養から直接的に単離することができる。抗体フラグメントの生産のための他の技術は当業者にあきらかであろう。他の実施形態において、選択された抗体は一本鎖FvフラグメントscFv。WO93/16185;米国特許第5,571,894号;および米国特許第5,587,458号参照。抗体フラグメントは、例えば、米国特許第5,641,870号に記載されたような線状抗体であってもよい。そのような線状抗体フラグメントは一特異的または二特異的であってもよい。vi二特異的抗体二特異的抗体は、少なくとも2つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的二特異的抗体はCD30タンパク質の2つの異なるエピトープに結合することができる。別法として抗-CD30アームを、FcγRICD64、FcγRIICD32およびFcγRIIICD16のような、IgGに対するFcレセプターFcγRに結合するアームと組み合わせて、CD30-発現細胞に対する細胞防御メカニズムに焦点を当てることができる。また、二特異的抗体を用いて、CD30を発現する細胞に対して細胞傷害性剤を局所化することもできる。全長二特異的抗体の伝統的生産は2つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の発現に基づき、ここで、2つの鎖は異なる特異性を有するMillsteinetal.,Nature,305:537-5391983。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダム分類のため、これらのハイブリドーマクアドローマは、10の異なる抗体分子の潜在的混合物を生じ、そのうち1つのみが正しい二特異的構造を有する。通常アフィニティークロマトグラフィー工程によってなされる正しい分子の精製はかなり面倒であり、生成物の収率は低い。同様な手法がWO93/08829、およびTrauneckeretal.,EMBOJ.,10:3655-36591991に開示されている。異なるアプローチに従って、所望の結合特異性抗体-抗原組合せ部位を持つ抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させる。該融合は、好ましくは、ヒンジ、CH2およびCH3領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。融合の少なくとも1つに存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第一の重鎖定常領域CH1を有するのが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードするDNAおよび、所望であれば、免疫グロブリン軽鎖を別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に共トランスフェクトする。これは、構築で用いる3つのポリペピチド鎖の等しくない比率が最適の収率を供する場合の実施形態において3つのポリペプチドフラグメントの相互の割合を調整するにおいて大きな柔軟性を提供する。しかしながら、等しい比率の少なくとも2つのポリペプチド鎖の発現の結果、高い収率が得られる場合、または比率が特定の重要性のものでない場合、1つの発現ベクターに2つまたは全ての3つのポリペプチド鎖に対するコーディング配列を挿入することができる。このアプローチの1つの実施形態において、二特異的抗体は、1つのアームにおける第一の結合特異性を持つハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他のアームにおける第二の結合特異性を供するハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対よりなる。この非対称構造は、望まない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二特異的化合物の分離を容易とすることが見出された。というのは、二特異的分子の1つの半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在は分離の容易な方法を提供するからである。このアプローチはWO94/04690に開示されている。二特異的抗体を作り出すことのさらなる詳細については、例えば、Sureshetal.,MethodsinEnzymology,121:2101986参照。米国特許第5,731,168号に記載されたもう1つのアプローチによると、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養から回収されたヘテロダイマーのパーセンテージを最大化するように作成することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのCH3ドメインの少なくとも一部を含む。この方法においては、第一の抗体分子の界面からの1以上の小さなアミノ酸側鎖はより大きな側鎖で置き換えられる例えば、チロシンまたはトリプトファン。大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの例えば、アラニンまたはスレオニンで置き換えることによって、大きな側鎖に対する同一または同様なサイズの保証キャビティを第二の抗体分子の界面に作り出す。これは、ホモダイマーのような他の望まない最終産物よりもヘテロダイマーの収率を増加させるメカニズムを提供する。抗体フラグメントから二特異的抗体を作り出す技術もまた文献に記載されている。例えば、二特異的抗体は化学結合を用いて調製することができる。Brennanetal.,Science,229:811985は、無傷抗体がタンパク質分解により切断されてFab’2フラグメントを生じる手法を記載する。これらのフラグメントはジチオール複合体化剤ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されて、隣接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を妨げる。ついで、生じたFab’フラグメントをチオニトロベンゾエートTNB誘導体に変換する。ついで、メルカプトエチルアミンでの還元によって、Fab’-TNB誘導体の1つをFab’-チオールに再度変換し、等モル量の他のFab’-TNB誘導体と混合して、二特異的抗体を形成する。生じた二特異的抗体は、酵素の選択的固定化のための剤として用いることができる。最近の進歩は、E.coliからのFab’-SHフラグメントの直接的回収を容易とし、これは化学的にカップリングして二特異的抗体を形成することができる。Shalabyetal.,J.Exp.Med.,175:217-2251992は十分にヒト化された二特異的抗体Fab’2分子の生産を記載する。各Fab’フラグメントはE.coliから別々に分泌され、インビトロにて指向性化学カップリングに付され、二特異的抗体を形成した。組換え細胞培養から直接的に二特異的抗体フラグメントを作成し、それを単離する種々の技術も記載されている。例えば、二特異的抗体はロイシンジッパーを用いて生産されている。Kostelnyetal.,J.Immunol.,1485:1547-15531992。FosおよびJunタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは遺伝子誘導によって2つの異なる抗体のFab’部分に連結された。抗体ホモダイマーはヒンジ領域が還元されて、モノマーを形成し、次いで、再度酸化されて、抗体ヘテロダイマーを形成した。この方法が抗体ホモダイマーの生産にも利用することができる。Hollingeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-64481993によって記載された二重特異性抗体技術は、二特異的抗体フラグメントを作成するための代替メカニズムを提唱した。フラグメントは、同一鎖上の2つのドメインの間での対合を可能とするには余りにも短いリンカーによって、軽鎖可変ドメインVLに連結された重鎖可変ドメインVHを含む。従って、1つのフラグメントのVHおよびVLドメインは、もう1つのフラグメントの相補的VLおよびVHドメインと強いて対合させ、それにより、2つの抗原-結合部位を形成する。単一鎖FvsFvダイマーの使用によって二特異的抗体フラグメントを作成するためのもう1つの戦略も報告されている。Gruberetal.,J.Immunol.,152:53681994参照。2を超える価数を持つ抗体が考えられる。例えば、三特異的抗体を調製することができる。Tuttetal.,J.Immunol.147:601991。vii他のアミノ酸配列の修飾本明細書中に記載された抗体のアミノ酸配列の修飾が考えられる。例えば、抗体の結合親和性および/または他の生物学的特性を改良するのが望ましいであろう。適当なヌクレオチド変化を抗体の核酸に導入することによって、またはペプチド合成によって、抗体のアミノ酸配列変種を調製する。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および/または該残基への挿入および/または該残基の置換を含む。欠失、挿入および置換のいずれかの組合せは最終構築体に到達されるようになされ、但し、最終構築体は所望の特徴を保有するものとする。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置の変化のような、抗体の翻訳後プロセスを改変することもできる。突然変異誘発に対して好都合な位置である抗体のある残基または領域を同定するための有用な方法は、CunninghamandWellsScience,244:1081-10851989によって記載されたアラニン走査突然変異誘発と呼ばれる。ここで、標的残基の残基または基が同定され例えば、arg、asp、his、lysおよびgluのような荷電残基、中性または負に荷電されたアミノ酸最も好ましくはアラニンまたはポリアラニンによって置き換えて、アミノ酸と抗原との相互作用に影響させる。次いで、置換に対する機能的感受性を示すそれらのアミノ酸位置は、さらなるまたは他の変種を置換の部位において、または該部位のためにさらなるまたは他の変種を導入することによって精錬される。かくして、アミノ酸配列変動を導入するための部位は予め決定されているが、突然変異自体の性質は予め決定する必要がない。例えば、与えられた部位における突然変異の性能の分析するためには、ala走査またはランダム突然変異誘発を標的コドンまたは領域で行い、発現された抗体変種は所望の活性につきスクリーニングされる。アミノ酸配列挿入は長さが1つの残基から100以上の残基を含有するポリペプチドの範囲のアミノ-および/またはカルボキシル-末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例はN-末端メチオニル残基を持つ抗体、または細胞傷害性ポリペプチドに融合した抗体を含む。抗体分子の他の挿入変種は、抗体の血清中半減期を増加させる抗体のN-またはC-末端の例えば、ADEPTのための酵素またはポリペプチドへの融合を含む。もう1つのタイプの変種はアミノ酸置換変種である。これらの変種は異なる残基によって置き換えられた抗体分子における少なくとも1つのアミノ酸残基を有する。置換突然変異誘発のための最も興味のある部位は超可変領域を含むが、FR改変も考えられる。抗体の生物学的特性における実質的修飾は、a例えば、シートまたはラセン立体配座としての、置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造、b標的部位における分子の電荷または疎水性、またはc側鎖の嵩高性を維持するに対するそれらの効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に生じる残基は通常側鎖の特性に基づいて群に分けられる:1疎水性:ノルロイシン、met.ala、val、leu、ile;2中性親水性:cys、ser、thr;3酸性:asp、glu;4塩基性:asn、gln、his、lys、arg;5鎖の向きに影響する残基:gly、pro;および6芳香族:trp、tyr、phe。非-保存的置換はもう1つのクラスに代えてのこれらのクラスの1つのメンバーを交換することを含む。特に好ましいタイプの実質的変種は、親抗体ヒト化またはヒト抗体の1以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる開発のために選択された得られた変種は、それからそれらが生じた親抗体に対して改良された生物学的特性を有する。そのような置換変種を生じさせるための便宜な方法は、ファージディスプレイを用いるアフィニティー突然変異を含む。簡単に述べれば、数個の超可変領域部位例えば、6~7部位を、各部位における全ての可能なアミノ酸置換を生じさせるために突然変異させる。各生じた抗体変種を、各粒子内にパッケージされたM13の遺伝子IIIに対する融合としてのフィラメント状ファージ粒子からの一価様式で表示される。次いで、ファージ-表示変種を本明細書中に開示されたそれらの生物学的活性例えば、結合親和性につきスクリーニングする。修飾用の候補超可変領域部位を同定するために、アラニン走査突然変異誘発を行って、抗原結合に有意に貢献する超可変領域残基を同定することができる。別法として、あるいは加えて、抗原-抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体および抗原の間の接触点を同定するのが有意であろう。そのような接触残基および隣接残基は、ここに技巧を凝らした技術に従った置換についての候補である。一旦そのような変種が生じたならば、変種のパネルを本明細書中に記載されたスクリーニングに付し、1以上の関連アッセイにおいて優れた特性を持つ抗体をさらなる開発のために選択することができる。エファクター機能に関して本発明の抗体を修飾して、例えば、抗原-依存性細胞-媒介細胞傷害性ADCCおよび/または抗体の補体依存性細胞傷害性CDCを増強するのが望ましいであろう。これは、抗体のFc領域に1以上のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。別法として、または加えて、システイン残基をFc領域に導入することができ、それにより、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能とする。各生じたホモダイマー抗体は改良された内部化能力および/または増大した補体-媒介細胞殺傷および抗体-依存性細胞傷害性ADCCを有することができよう。Caronetal.J.Exp.Med.176:1191-11951992およびShopes,B.J.Immunol.148:2918-29221992参照。増大した抗-腫瘍活性を持つホモダイマー抗体は、Wolffetal.CancerResearch53:2560-25651993に記載されたように、ヘテロ二官能性架橋剤を用いて調製することもできる。別法として、デュアルFc領域を有し、それにより、増強された補体溶解およびADCC能力を有することができる抗体を作成することができる。Stevensonetal.Anti-CancerDrugDesign3:219-2301989参照。抗体の血清中半減期を増加させるための、例えば、米国特許第5739277号に記載されているように、サルベージレセプター結合エピトープを抗体特に、抗体フラグメントに組み込むことができる。本明細書中に用いるように、用語サルベージレセプター結合エピトープとは、IgG分子のインビボ血清中半減期を増大させることを担うIgG分子のFc溶液のエピトープをいう例えば、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4。viiiグリコシル化変種本発明のADCにおける抗体はそれらの定常領域における保存された位置でグリコシル化することができるJefferisandLund,1997Chem.Immunol.65:111-128;WrightandMorrison,1997TibTECH15:26-32。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖はタンパク質の機能Boydetal.,1996Mol.Immunol.32:1311-1318;WittweandHoward,1990Biochem.29:4175-4180、および糖タンパク質の立体配座および示された三次元表面に影響し得る糖タンパク質の部分の間の分子内相互作用HefferisandLund,前掲;WyssandWagner,1996CurrentOpin.Biotech.7:409-416に対して影響する。また、オリゴ糖は与えられた糖タンパク質を特異的認識構造に基づいてある種の分子に標的化するように働くこともできる。例えば、無ガラクトシル化IgGにおいては、オリゴ糖部位はCH2空間間からフリップアウトし、末端N-アセチルグルコサミン残基はマンノース結合タンパク質に結合するのに利用できるようになったと報告されている。Malhotraetal.,1995NatureMed.1:237-243。チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞で生じたCAMPATH-1Hヒトリンパ球のCDw52抗原を認識する組み換えヒト化ネズミモノクローナルIgG1抗体からのオリゴ糖のグリコペプチダーゼによる除去の結果、補体媒介溶解において完全な還元CMCLが起こりBoydetal.,1996Mol.Immunol.32:1311-1318、他方、ノイラミニダーゼを用いるシアル酸残基の選択的除去の結果、DMCLは喪失されなかった。また、抗体のグリコシル化は抗体-依存性細胞傷害ADCCに影響することが報告されている。特に、β1,4-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIIIGnTIIIのテトラサイクリン-調節発現、GlcNAcを二等分するグリコシルトランスフェラーゼ触媒形成が伴うCHO細胞は改良されたADCC発生を有すると報告されたUmanaetal.1999MatureBiotech.17:176-180。抗体のグリコシル化は典型的にはN-結合かO-結合いずれかである。N-結合とは、炭水化物部位のアスパラギン残基の側鎖への付着をいう。Xがプロリン以外のいずれかのアミノ酸であるポリペプチド配列アスパラギン-X-セリンおよびアスパラギン-X-スレオニンは、アスパラギン側鎖への炭水化物部位酵素付着のための認識配列である。かくして、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は可能なグリコシル化部位を生じる。O-結合グリコシル化とは、糖N-アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシリソースのうちの1つのヒドロキシルアミノ酸、最も普通にはセリンまたはスレオニンへの付着をいうが、5-ヒドロキシプロリンまたは5-ヒドロキシリシンを用いることもできる。抗体のグリコシル化変種は、抗体のグリコシル化パターンが改変された変種である。改変とは、抗体で見出される1以上の炭水化物部位の欠失、抗体への1以上の炭水化物部位の付加、グリコシル化の組成グリコシル化パターンの変化、グリコシル化の程度等を意味する。抗体へのグリコシル化部位の付加は、便宜には、それがN-結合グリコシル化部位のための前記ポリペプチド配列の1以上を含有するようにアミノ酸配列を改変することによって達成される。改変は、1以上のセリンまたはスレオニン残基のO-結合グリコシル化部位のための元の抗体への付加、または該残基による置換によってなすこともできる。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然グリコシル化部位内でのアミノ酸改変によって達成することができる。アミノ酸配列は、通常、基礎となる核酸配列を改変することによって改変される。これらの方法は、限定されるものではないが、天然源からの単離天然に生じるアミノ酸配列変種の場合または先に調製された抗体の変種または非-変種バージョンのオリゴヌクレオチド-媒介または部位特異的突然変異誘発、PCR突然変異誘発、およびカセット突然変異誘発を含む。抗体のグリコシル化パターンを含めたグリコシル化は、アミノ酸配列または基礎となるヌクレオチド配列を改変することなく改変することもできる。グリコシル化は抗体を発現するのに用いる宿主細胞に大いに依存する。組換え糖タンパク質、例えば、抗体の発現で用いる潜在的療法としての細胞型はまれには天然細胞であるので、抗体のグリコシル化パターンにおける有意な変動を予測することができる。例えば、Hseetal.,1997J.Biol.Chem.272:9062-9070参照。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え生産の間にグリコシル化に影響する因子は増殖の態様、培地処方、培養密度、酸素付加、pH、精製スキーム等を含む。オリゴ糖生産に関与するある種の酵素の導入または過剰発現を含めた特定の宿主生物で達成されるグリコシル化パターンを改変するために種々の方法が提唱されてきた米国特許第5047335号;第5510261号;第5278299号。グリコシル化、またはある種のタイプのグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼHEndoHを用いて糖タンパク質から酵素的に除去することができる。加えて、組換え宿主細胞を遺伝的に作成し、例えば、多糖のあるタイプをプロセッシングするにおいて欠陥を作り出すことができる。これらおよび同様な技術は当該分野でよく知られている。抗体のグリコシル化構造は、レクチンクロマトグラフィ、NMR、質量分析、HPLC、GPC、単糖組成分析、順次の酵素消化、および高pHアニオン交換クロマトグラフィーを用いて電荷に基づいてオリゴ糖を分離するHPAEC-PADを含めた、炭水化物分析の従来技術によって容易に分析することができる。分析目的でのオリゴ糖を放出する方法も知られており、限定されるものではないが、ペプチド-N-グリコシダーゼF/エンド-β-ガラクトシダーゼを用いて通常行われる酵素処理、主としてO-結合構造を放出するために相当なアルカリ性の環境を用いる脱離、およびN-およびO-結合オリゴ糖双方を放出するために無水ヒドラジンを用いる化学的方法を含む。4.5.2a抗体-薬物結合体ADCのためのスクリーニングトランスジェニック動物および細胞系は、LewisY.CD30、CD40およびCD70を含めたタンパク質の過剰発現に関与する病気または疾患の予防的または治療的処置として能力を有する抗体薬物結合体ADCをスクリーニングするのに特に有用である。トランスジェニック動物および細胞系は、HER2の過剰発現に関連する病気または疾患の予防的または治療的処置としての能力を有する抗体薬物結合体ADCをスクリーニングするのに特に有用であるUS6632979。有用なADCについてのスクリーニングはトランスジェニック動物である範囲にわたっての容量の候補ADCを投与し、次いで、評価すべき病気または疾患に対するADCの効果につき種々の時点でアッセイすることを含むことができる。別法として、あるいは加えて、もし適用可能であれば、病気のインデューサーへの曝露に先立って、またはそれと同時に薬物を投与することができる。培地下で平行して、または高スループットスクリーニングフォーマットにて、候補ADCを系列的にかつ個々にスクリーニングすることができる。ADCを病気または疾患の予防的または治療的処置についての有用性につきスクリーニングすることができる速度は、データの検出/測定/分析を含めた、合成またはスクリーニング方法の速度によってのみ制限される。1つの実施形態は、a安定な腎臓細胞癌細胞からの細胞を非-ヒト動物に移植し、bADC薬物候補を非-ヒト動物に投与し、次いで、c移植された細胞系からの腫瘍の形成を阻害する候補の能力を決定することを含むスクリーニング方法である。もう1つの実施形態は、a安定なホジキン病細胞系からの細胞をADC薬物候補と接触させ、次いで、bCD40のリガンド活性化をブロックするADC候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。もう1つの実施形態は、a安定なホジキン病細胞系からの細胞をADC薬物候補と接触させ、次いで、b細胞死滅を誘導するADC候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。1つの実施形態において、アポトーシスを誘導するADC候補の能力が評価される。1つの実施形態は、a安定な癌細胞系からの細胞を非-ヒト動物に移植し、bADC薬物候補を非-ヒト動物に投与し、次いで、c移植された細胞系からの腫瘍の形成を阻害する候補の能力を測定することを含むスクリーニング方法である。また、本発明は、a安定な乳癌細胞系からの細胞を薬物候補と接触させ、次いで、b安定な細胞系の増殖を阻害するADC候補の能力を評価することを含む、HER2の過剰発現によって特徴付けられる病気または疾患の治療のためのADC候補をスクリーニングする方法に関する。もう1つの実施形態は、a安定な癌細胞系からの細胞をADC薬物候補と接触させ、次いで、bHER2のリガンド活性化をブロックするADC候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。1つの実施形態において、ヘレブリン結合をブロックするADC候補の能力が評価される。もう1つの実施形態において、リガンド-刺激チロシンリン酸化をブロックするADC候補の能力が評価される。もう1つの実施形態は、a安定な癌細胞系からの細胞をADC薬物候補と接触させ、次いで、b細胞死滅を誘導するADC候補の能力を評価することを含むスクリーニング方法である。1つの実施形態において、アポトーシスを誘導するADC候補の能力が評価される。もう1つの実施形態は、a天然ヒトHER2タンパク質またはそのフラグメントをその乳腺細胞において過剰発現するトランスジェニック非-ヒト哺乳動物にADC薬物候補を投与し、ここで、そのようなトランスジェニック動物は、そのゲノムに安定に組み込まれた、その発現を該乳腺に向ける転写調節配列に操作可能に連結された、天然ヒトHER2の生物学的活性を有する天然ヒトHER2をコードする核酸配列またはそのフラグメントを有し、かつ抗-HER2抗体試料に応答しない、または貧弱にしか応答しない乳房腫瘍を発症し、あるいは該ADC薬物候補を、該トランスジェニック非-ヒト哺乳動物から移植された腫瘍を担う非-ヒト哺乳動物に投与し;次いで、b標的病気または疾患に対するADC候補の効果を評価することを含むスクリーニング方法である。限定されるものではないが、該病気または疾患は乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓および膀胱癌のようなHER2-過剰発現癌であり得る。該癌は、好ましくは、細胞当たり少なくとも約500,000コピー、より好ましくは細胞当たり少なくとも約2,000,000コピーにてHER2を発現した乳癌である。ADC薬物方法は、例えば、当該分野でよく知られ、後に記載するアッセイ方法を用い、細胞死滅および/またはアポトーシスを誘導するそれらの能力につき評価することができる。1つの実施形態において、候補ADCは、ある範囲の用量にわたって、トランスジェニック動物に投与し、次いで、経時的に化合物に対する動物の生理学的応答を評価することによってスクリーニングされる。投与は、評価すべき化合物の化学的性質に応じて、経口であるか、または適当な注射によることができる、いくつかの場合において、化合物の効率を増強させるであろう共因子と組み合わせて化合物を投与するのが適当であろう。もし対象トランスジェニック動物から由来する細胞系を用いて、種々の疾患を治療するのに有用な化合物につきスクリーニングするならば、テスト化合物を適当な時期に細胞培養基に加え、適当な生化学および/または組織学的アッセイを用い、化合物に対する細胞応答を経時的に評価する。いくつかの場合において、化合物の効率を増強させる共因子と組み合わせて注目する化合物を培養基に適応するのが適切であろう。かくして、本明細書中において、腫瘍の発症に場合によって関連する細胞増殖および/または分化の病因において、その存在が異常な細胞機能に相関する、標的タンパク質を特異的に標的とし、それに結合するADCを同定するためのアッセイが提供される。ErbB例えば、ErbB2レセプターのリガンド活性化をブロックするADCを同定するために、例えば、注目するErbBレセプターがそれとでErbBヘテローオリゴマーを形成するもう1つのErbBレセプターと組み合わせてErbBErbB2レセプターを発現する細胞へのErbBリガンド結合をブロックする化合物の能力を測定することができる。例えば、HER2を過剰発現するトランスジェニック動物から単離され、かつそれとでHER2がヘテロ-オリゴマーを形成するもう1つのErbBレセプターを発現するようにトランスフェクトされた細胞をADCと共にインキュベートし、すなわち、培養し、次いで、標識されたErbBリガンドに曝露することができる。次いで、ErbBヘテロ-オリゴマーにおけるErbBレセプターへのリガンド結合をブロックする化合物の能力を評価することができる。例えば、候補ADCによって、HER2を過剰発現し、かつここにトランスジェニック非-ヒト哺乳動物例えば、マウスから確立された乳癌細胞系へのヘレグリンHRGの阻害は、24-ウェル-プレート様式で氷上で単層培養を用いて行うことができる。抗-ErbB2モノクローナル抗体を各ウェルに加え、30分間インキュベートすることができる。次いで、125I-標識rHRGβ1177-22425,000cpmを加えることができ、インキュベーションを4~16時間継続することができる。用量応答曲線を調製することができ、IC50値細胞傷害性活性を注目する化合物について評価することができる。別法として、あるいは加えて、ErbBヘテロ-オリゴマーに存在するErbB授与体のErbBリガンド-刺激チロシンリン酸化をブロックするADCの能力を評価することができる。例えば、ここにトランスジェニック動物から確立された細胞形をテストADCと共にインキュベートすることができ、次いで、所望により、検出可能な標識と結合体されていてもよい抗-ホスホチロシンモノクローナル抗体を用い、ErbBリガンド-依存性チロシンリン酸化活性につき評価することができる。また、米国特許第5766863号に記載されたキナーゼレセプター活性化アッセイもまた、ErbBレセプター活性化、および化合物によるその活性のブロッキングを測定するのに利用できる。1つの実施形態において、実質的に後に記載するように、MCF7細胞においてp180チロシンリン酸化のHRG刺激を阻害するADCにつきスクリーニングすることができる。例えば、HER2-トランスジェニック動物から確立された細胞形を24-ウェルプレートで平板培養することができ、化合物を各ウェルに加え、室温にて30分間インキュベーションとすることができ、次いでrHRGβ1177-244を最終濃度0.2nMまで各ウェルに加えることができ、インキュベーションを約8分間継続することができる。培地を各ウェルから吸引することができ、100μLのSDS試料緩衝液5,SDS,25mMDTT、および25mMトリス-HCl,pH6.8を加えることによって反応を停止させることができる。各試料25μLを4~12グラジエントゲルNovex上で電気泳動に付すことができ、次いで、電気泳動により二フッ化ポリビニリデン膜に移すことができる。1μg/mL脳抗ホスホチロシン免疫ブロットを発色させることができ、Mr-180,000における圧倒的な反応性バンドの強度を反射率デンシトメトリーによって定量することができる。レセプターリン酸化の疎外を評価するための代替方法は、Pharm.およびBiomed.Anal.のSadicketal.1998Jour.のKIRAキナーゼレセプター活性化アッセイである。p180チロシンリン酸化のHRG刺激を阻害することが知られているHER2に対するよく確立されたモノクローナル抗体のいくつかをこのアッセイにおいて陽性対照として用いることができる。反射率デンシトメトリーによって測定されたp180チロシンリン酸化のHRG刺激の阻害に対する用量-応答曲線を作成することができ、注目する化合物についてのIC50を計算することができる。また、例えば、実質的にSchaeferetal.1997Oncogene15:1385-1394に記載されているように、HER2-トランスジェニック動物に由来する細胞系に対するテストADCの増殖阻害効果を評価することもできる。このアッセイによると、細胞を種々の濃度にてテスト化合物で4日間処理し、クリスタルバイオレットまたはレドックス色素AlamarBlueで染色することができる。化合物とのインキュベーションは、MDA-MB-175細胞についてのモノクローナル抗体2C4によって表示されたものと同様なこの細胞系に対する増殖阻害効果を示すことができるSchaeferetal.,前掲。さらなる実施形態において、外因性HRGはこの阻害を有利には逆行させない。注目する抗原を特異的に標的とする増殖阻害効果を同定するために、トランスジェニック動物に由来する注目する抗原を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する化合物につきスクリーニングすることができ、米国特許第5677171号に記載されたアッセイを行うことができる。このアッセイによると、注目する抗原を過剰発現する癌細胞は、10胎児ウシ血清、グルタミンおよびペニシリンストレプトマイシンを補足したF12およびDMEM培地の1:1混合物中で増殖させる。細胞を35mm細胞培養皿中で20,000細胞で平板培養し2mL/35mm皿、テスト化合物を種々の濃度で加える。6日後に、電子COULTERTM細胞カウンターを用い、実処理細胞と比較した、細胞の数をカウントする。細胞の増殖を約20~100または約50~100だけ阻害する化合物を増殖阻害化合物として選択することができる。細胞死滅を誘導する化合物につき選択するために、例えば、PI、トリパンブルーまたは7AADで摂取によって示された膜一体性の喪失は対照に対して評価することができる。該PI摂取アッセイは、トランスジェニック動物の注目する腫瘍組織から単離された細胞を用いる。このアッセイによると、細胞を、10加熱-不活化FBSHycloneおよび2mML-グルタミンを補足したダルベッコウの修飾イーグル培地D-MEM:ハムのF-1250:50中で培養する。かくして、アッセイは補体および免疫エフェクター細胞の不存在下で行われる。細胞は100×20mm皿中にて皿当たり3×106の密度にて摂取し、一晩付着させる。次いで、倍地を除去し、新鮮な培地単独、または種々の濃度の化合物を含有する倍地で置き換える。細胞を3日の間インキュベートする。各処理の後、単層をPBSで洗浄し、トリプシン処理によって脱着させる。次いで、細胞を1200rpmにおいて4°Cで5分間遠心し、ペレットを3mL冷Ca2結合緩衝液10mMHepes,pH7.4,140mMNaCl,2.5mMCaCl2、細胞クランプを除去するために、35mmストレイナー-キャップを付した12×75mmチューブに小分けするチューブ当たり1mL,処理群当たり3チューブ。次いで、チューブにPI10μg/mLを受けさせる。FACSCANTMフローサイトメーターおよびFACSCONVERTTMCellQuestソフトウエアBectonDickinsonを用いて試料を分析することができる。PI摂取によって測定して細胞死滅の統計学的に有意なレベルを誘導する化合物を細胞死滅-誘導化合物として選択することができる。アポトーシスを誘導する化合物につき選択するために、トランスジェニック動物の注目する腫瘍組織から確立された細胞を用いるアネキシン結合アッセイを行う。細胞を培養し、先のパラグラグで議論したようにさらに摂取する。次いで、培地を除去し、新鮮な培地単独、または10μg/mL抗体薬物結合体ADCを含有する培地で置き換える。3日のインキュベーション時間の後、単層をPBSで洗浄し、トリプシン処理によって脱着される。次いで、細胞を遠心し、Ca2結合緩衝液に再度懸濁し、細胞死滅アッセイについて前記で議論したようにチューブに小分けする。次いで、チューブに標識したアネキシン例えば、アネキシンV-FITC1μg/mL受けさせる。FACSTANTMフローサイトメーターおよびFACSCONVERTTMCellQuestソフトウエアBectonDickinsonを用いて試料を分析することができる。対照に対して統計学的に有意なレベルのアネキシン結合を誘導する化合物をアポトーシス-誘導化合物として選択する。4.5.3インビトロ細胞増殖アッセイ一般に、抗体薬物結合体ADCの細胞傷害性または細胞静止活性は:細胞培養基中のADCの抗体に、レセプタータンパク質を有する哺乳動物細胞を曝露し;約6時間~約5日の期間、細胞を培養し、次いで、細胞生存率を測定することによって測定される。細胞-ベースのインビトロアッセイを用いて生存率増殖、細胞傷害性、および本発明のADCのアポトーシスの誘導カスパーゼ活性化を測定した。抗体薬物結合体のインビトロ能力は、細胞増殖アッセイ実施例18,図7~10によって測定した。CellTiter-Glo登録商標ルミネセント細胞生存率アッセイは商業的に入手可能でありPromegaCorp.,Madison,WI、これはColelpteraluciferaseの組換え発現に基づく均一アッセイ方法である米国特許第5583024号;第5674713号および第5700670号。この細胞増殖アッセイは、存在するATP、代謝的に活性な細胞のインジケーターの定量に基づいて培養中の生きた細胞の数を測定するCrouchetal.1993J.Immunol.Meth.160:81-88,米国特許第6602677号。CellTiter-Glo登録商標アッセイは96ウェルフォーマットで行い、それを自動化高スループットスクリーニングHTSで使用できるようにするCreeetal.1995AntiCancerDrugs6:398-404。均一なアッセイ手法は、血清-補足培地中で培養される細胞へ直接的に単一試薬CellTiter-Glo登録商標Reagentを加えることができる。細胞洗浄、培地の除去、および複数のピペッティング工程は必要とされない。該システムは、試薬の添加および混合の後に、10分以内に384ウェルフォーマットにて15細胞/ウェルと少数を検出する。細胞はADCで連続的に処理することができるか、あるいはそれらは処理し、ADCから分離することができる。一般に、簡単に、すなわち、3時間処理した細胞は連続的に処理した細胞と同一の能力効果を示した。均一添加-混合-測定フォーマットの結果、細胞が溶解し、存在するATPの量に比例したルミネセントシグナルが発生する。ATPの量は培養に存在する細胞の数に直接的に比例する。CellTiter-Glo登録商標アッセイは、用いた細胞型および培地において、一般には5時間よりも大きな半減期を有する、ルシフェラーゼ反応によって生じたグロー-タイプのルミネセントシグナルを発生する。生きた細胞は相対的ルミネッセンス単位RLUで反映される。基質BeetleLuciferinは、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱カルボキシル化され、同時にATPからAMPへの変換およびフォトンの発生が伴う。延長された半減期は、試薬インジェクターを用いる必要性を排除し、多数プレートの連続的またはバッチ様式のプロセッシングに対する柔軟性を提供する。この細胞増殖アッセイは種々のマルチウェルフォーマット、例えば、96または384ウェルフォーマットで用いることができる。データはルミノメーターまたはCCDカメライメージングデバイスによって記録することができる。ルミネセンス出力は、経時的に測定された相対的光単位RLUとして表される。抗体薬物結合体の抗-増殖効果は細胞増殖によって測定され、これは4つの異なる乳癌細胞系に対する前記したインビトロ細胞殺傷アッセイである図7~10。IC50値は、HER2レセプタータンパク質を過剰発現することが知られているSK-BR-3およびBT-474につき確立された。表2aはSK-BR-3細胞に対する細胞増殖アッセイにおける例示的抗体薬物結合体の能力IC50測定を示す。表2bは、BT-474細胞に対する細胞増殖アッセイにおける例示的抗体薬物結合体の能力IC50測定を示す。抗体薬物結合体:トラスツヅマブ-MC-vc-PAB-MMAF、3.8MMAF/Ab;トラスツズマブ-MC-N-Mevc-PAB-MMAF、3.9MMAF/Ab;トラスツズマブ-MC-MMAF、4.1MMAF/Ab;トラスツヅマブ-MC-vc-PAB-MMAE、4.1MMAE/Ab;トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAE、3.3MMAE/Ab;およびトラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAF、3.7MMAF/AbはMCF-7細胞の増殖を阻害しなかった図9。抗体薬物結合体:トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAE、4.1MMAE/Ab;トラスツヅマブ-MC-vc-PAB-MMAE、3.3MMAE/Ab;トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAF、3.7MMAF/Ab;トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAF、3.8MMAF/Ab:トラスツズマブ-MC-N-Mevc-PAB-MMAF、3.9MMAF/Ab;およびトラスツズマブ-MC-MMAF、4.1MMAF/AbはMDA-MB-468細胞の増殖を阻害しなかった図10。MCF-7およびMDA-MB-468細胞はHER2レセプタータンパク質を過剰発現しない。従って、本発明の抗-HER2抗体薬物結合体はHER2を発現する細胞の阻害に対して選択性を示す。H=トラスツズマブ7C2=トラスツズマブとは異なるエピトープに結合する抗-HER2ネズミ抗体Fc8=FcRnに結合しない突然変異体Hg=重鎖ヒンジシステインがセリンに突然変異したヒンジレス全長ヒト化4D5、E.coliで発現したがって、非-グリコシル化。抗-TFFab=抗-組織因子抗体フラグメントMDA-MB-468細胞に対する活性。驚くべきかつ予期せぬ発見において、以下の表2aおよび2bにおけるADCのインビトロ細胞増殖活性の結果は、一般には、抗体当たり低い薬物部分の平均数を持つADCが効率、例えば、IC50<0.1μgADC/mLを示したことを示す。結果は、少なくともトラスツズマブADCについては、抗体当たりの薬物部分の最適比率は8未満であり得、約2~5であり得る。4.5.4インビボ血漿クリアランスおよび安定性ADCの薬物動態学血漿クリアランスおよび安定性をラットおよびマカクザルで調べた。血漿中濃度を経時的に測定した。表2cはラットにおける抗体薬物結合体および他の投与された試料の薬物動態学データを示す。ラットはErbBレセプター抗体についての非-特異的モデルである。というのは、該ラットはHER2レセプタータンパク質を発現することが知られていないためである。表2cラットにおける薬物動態学H=注記した以外はシステイン[cys]を介して連結されたトラスツズマブ注記した以外は2mg/kg用量AUCinfは、投与の時間から無限までの血漿濃度-時間曲線下面積であり、測定されたもの薬物、ADCへの合計曝露の尺度である。CLは単位時間における測定されたものから除去された血漿の容量と定義され、体重に対して正規化することによって表される。T1/2時間はその排除相の間に測定された体中の薬物の半減期である。結合体時間は、別のELISA免疫アフィニティーテストによって検出された全抗体と比較したADCの相対量であるAnalyticalMethodsforBiotechnologyProducts,Ferraioloetal.,p85-98inPharmacokineticsofDrugs1994P.G.WellingandL.P.Balant,編,HandbookofExperimentalPharmacology,Vol.110,Springer-Verlag。結合体の計算は単純にADCのAUCinf÷AUCinf合計Abであり、リンカー安定性の一般的インジケーターであるが、他の因子およびメカニズムも有効であり得る。図11は抗体薬物結合体:H-MC-vc-PAB-MMAF-TEGおよびH-MC-vc-PAB-MMAFのSprague-Dawleyラットへの投与の後における血漿濃度クリアランス実験のグラフを示す。合計抗体およびADCの濃度は経時的に測定した。図12は2段階血漿濃度クリアランス実験のグラフを示し、ここで、ADCは異なる用量で投与され、合計抗体およびADCの濃度は経時的に測定された。インビボ効率本発明のADCのインビボ効率は、高発現HER2トランスジェニック外植体マウスモデルによって測定した。同種異系移植片を、HERCEPTIN登録商標療法に応答しない、または貧弱にしか応答しないFo5mmtvトランスジェニックマウスから増殖させた。対象をADCで1回処理し、3~6週間にわたってモニターして、腫瘍倍化までの時間、log細胞殺傷、および腫瘍修飾を測定した。続いての用量-応答および多用量実験を行った。腫瘍はneu、HER2のラットホモログの突然変異的に活性化された形態を発現するトランスジェニックマウスにおいて容易に生起するが、乳癌で過剰発現されたHER2は突然変異せず、非突然変異HER2を過剰発現するトランスジェニックマウスにおいては腫瘍形成は余り頑強ではないWebsteretal.1994Semin.CancerBiol.5:69-76。非突然変異HER2での腫瘍形成を改善するために、上流ATGを欠失して、そのような上流ATG:においてトランスローケーションの開始を妨げ、そうでなければ、HER2の下流真正開始コドンからの翻訳開始の頻度を低下させるHER2cDNAプラスミドを用いてトランスジェニックマウスを生産した例えば、Childetal.1999J.Biol.Chem.274:24335-24341。加えて、キメライントロンを5’末端に加え、これは従前に報告されているように発現のレベルをやはり増強させるはずであるNeubergerWilliams1988NucleicAcidsRes.16:6713;BuchmanandBerg1988Mol.Cell.Biol.8:4395;Brinsteretal.1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:836。キメライントロンはPromegaベクター、pCI-neo哺乳動物発現ベクターbp890-1022に由来した。cDNAの3’-末端には、ヒト成長ホルモンエクソン4および5およびポリアデニル化配列が近接する。さらに、FVBマウスを用いた。なぜならば、この株は腫瘍発症により感受性だからである。MMTV-LTRからのプロモーターを用いて、乳腺での組織-特異的HER2発現を確実とした。動物にAIN76Aダイエットを与えて、腫瘍形成に対する罹患性を増大させたRaoetal.1997BreastCancerRes.andTreatment45:149-158。表2d異種同系移植片マウスモデル-MMTV-HER2Fo5における腫瘍測定乳房腫瘍、無胸腺ヌードマウス注記しない以外は日1T=0において単一用量H=注記しない以外はシステイン[cys]を介して連結されたトラスツズマブ7C2=トラスツズマブとは異なるエピトープと結合する抗-HER2マウス抗体Fc8=FcRnに結合しない突然変異体Hg=重鎖ヒンジシステインがセリンに突然変異した、ヒンジレス全長ヒト化4D5、E.coliにおいて発現したがって、非-グリコシル化2H9=抗-EphB2R11D10=抗-0772P。用語TiはT=0における腫瘍を持つ実験群における動物の数を群における合計動物で割ったものである。用語PRは腫瘍の部分的緩解を獲得する動物の数を群におけるT=0での腫瘍を持つ動物で割ったものである。用語CRは腫瘍の完全な緩解を達成する動物の数を群におけるT=0での腫瘍を持つ動物で割ったものである。用語Log細胞殺傷は倍化する腫瘍容量についての日数で表した時間から倍化する対照腫瘍容量についての日数で表した時間を引いて、賦形剤を投与した対照動物において倍化する腫瘍容量についての時間に3.32を掛けたもので割ったものである。log-細胞-殺傷計算は、処理から得られた腫瘍成長の遅延、および対照群の腫瘍容量の倍化時間を考慮する。ADCの抗-腫瘍発生は:>3.4かなり活性=2.5~3.4=1.7~2.4=1.0~1.6不活性=0のlog-細胞-殺傷値で分類される。図13は、賦形剤、トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAE1250μg/m2およびトラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAF555μg/m2を日0に投与したMMTV-HER2Fo5乳癌同種異系移植片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍容量変化を意味するH=トラスツズマブ。腫瘍の成長は、成長の対象賦形剤レベルと比較してADCでの処理によって遅延された。図14は10mg/kg660μg/m2のトラスツズマブ-MC-MMAEおよび1250μg/m2トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAEを日0に投与したMMTV-HER2Fo5乳癌同種異系移植片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的平均腫瘍容量変化を示す。図15は、650μg/m2トラスツズマブ-MC-MMAFを投与したMMTV-HER2Fo5乳癌同種異系移植片を持つ無胸腺ヌードマウスにおける経時的平均腫瘍容量変化を示す。表2dおよび図13~15は、ADCが、元来MMTV-HER2トランスジェニックマウスにおいて生起したHER2陽性腫瘍Fo5の同種異系移植片において強力な抗-腫瘍発生を有することを示す。抗体単独例えば、トラスツズマブはこのモデルにおいて有意な抗-腫瘍活性を有しないEricksonetal.米国特許第6632979号。図13~15に示すように、腫瘍の成長は、成長の対照賦形剤レベルと比較してADCでの処理によって遅延された。驚くべきかつ予期せぬ発見において、表2dにおけるADCのインビボ抗-腫瘍活性の結果は、一般には、抗体当たりの薬物部分の低い平均数を持つADCが効率、例えば、腫瘍倍化時間>15日および平均log細胞殺傷>1.0を示したことを示す。図16は、抗体薬物結合体、トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAFについては、平均腫瘍容量が減少し、進行せず、ここで、MMAF:トラスツズマブ比率は2および4であり、他方、賦形剤緩衝液よりも低い速度ではあるが、腫瘍は5.9および6の比率で進行したことを示す。このマウス異種移植片モデルにおける腫瘍進行の速度は賦形剤およびトラスツズマブにつきほぼ同一、すなわち、3日であった。結果は、少なくともトラスツズマブADCでは、抗体当たりの薬物部分の最適比率は約8未満となり得、約2~約4であり得ることを示唆する。4.5.5げっ歯類毒性抗体薬物結合体およびADC-マイナス対照、賦形剤を、急性毒性ラットモデルで評価した。ADCの毒性はADCを持つ雄および雌のSprague-Dawleyラットの処理、種々の器官に対する効果の引き続いての精査および分析によって調べた。肉眼での観察は、体重の変化および病巣および出血の兆候を含むものであった。臨床的微病理学パラメーター血清化学および血液学、組織病理学、および剖検を投与した動物で行った。ADCを投与した後のマウスにおいて、体重喪失、または賦形剤のみを投与した動物のマウス体重変化は全身または局所化毒性の肉眼でのおよび一般的インジケーターであると考えられる。図17~19は、ラット体重に対する投与後における種々のADCおよび対照賦形剤の効果を示す。肝臓毒性は上昇した肝臓酵素、上昇した数の有糸分裂およびアポトーシス図の増大した数および肝細胞壊死によって測定した。血液リンパ系毒性は白血球、主として顆粒球好中球、および/または血小板の枯渇、およびリンパ系器官の関与、すなわち、萎縮またはアポトーシス活性によって観察した。毒性は有糸分裂およびアポトーシス図の増大した数および変性腸炎のような胃腸管病巣によっても記載した。調べた肝臓負傷の指標である酵素は:ASTアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ-局所化/細胞質;肝臓、心臓、骨格筋、腎臓-肝臓:7000:1の血漿比率-T1/2:17時間ALTアラニンアミノトランスフェラーゼ-局所化:細胞質;肝臓、腎臓、心臓、骨格筋-3000:1の肝臓:血漿比率-T1/2:42時間;日周期性変動GGTg-グルタミルトランスフェラーゼ-局所化:高い分泌または吸収能力を持つ細胞の原形質膜:肝臓、腎臓、腸-腎臓負傷の貧弱なプレディクター;通常単管疾患で上昇を含む。トラスツズマブ-MC-val-cit-MMAF、トラスツズマブ-MCMe-val-cit-PAB-MMAF、トラスツズマブ-MC-MMAFおよびトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAFの毒性プロフィールを雌Sprague-Dawleyラットで調べた実施例19。ヒト化トラスツズマブ抗体は認識可能にラット組織に結合せず、いずれの毒性も非特異的と考えられよう。840および2105ug/m2MMAFの用量レベルにおける変種を2105ug/m2におけるトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAFと比較した。群1、2、3、4,6および7における動物各々、賦形剤、9.9424.90mg/kgトラスツズマブ-MC-val-cit-MMAF,10.69mg/kgトラスツズマブ-MCMe-val-cit-PAB-MMAF、および10.1725.50mg/kgトラスツズマブ-MC-MMAFは、実験の間に体重が増加した。群5および8における動物各々、26.78mg/kgトラスツズマブ-MCMe-val-cit-PAB-MMAFおよび21.85mg/kgトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAFは実験の間に体重を喪失した。実験日5では、群2、6および7における動物の体重の変化は群1動物から有意には異ならなかった。群3、4,5および8における動物の体重の変化は群1の動物から実質的に異なった実施例19。トラスツズマブ-MC-MMAFで処理したラット群6および7は双方の用量レベルにおいて賦形剤-処理対照動物から区別できず;すなわち、この結合体はこのモデルにおいて優れた安全性プロフィールを示した。トラスツズマブ-MC-val-cit-MMAFで処理したラット自己-犠牲PAB部位無し;群2および3はMMAF結合体に典型的な用量-依存性変化を示し;変化の程度は全長MC-val-cit-PAB-MMAF結合体群8と比較して低かった。日5での血小板カウントは、群8高用量トラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAFの動物における15と比較して群3高用量トラスツズマブ-MC-val-cit-MMAFの動物においてベースライン値のほぼ30であった。ビリルビンの肝臓酵素ASTおよびALTの上昇、および血小板減少症の程度は用量-依存的にトラスツズマブ-MCMe-val-cit-PAB-MMAFで処理した動物群4および5において最も明らかであった;群5の動物高用量群は、日5において、ベースライン値のほぼ10倍のALTのレベルを示し、血小板は剖検の時点においてほぼ90だけ低下した。雌SpragueDawleyラットにも高レベルにて実施例19、高用量実験:群2、3、4トラスツズマブ-MC-MMAF、および賦形剤対照群1を投与した。肝臓酵素ALT、ASTおよびGGTの用量-依存性上昇を含めた中程度の毒性シグナルが観察された。日5では、最高容量群における動物はALTの2倍上昇およびASTの5倍上昇を示し;GGTも上昇した6U/L。酵素レベルは日12に正規化に向けた傾向を示す。日5には全ての3つの用量の群において穏和な顆粒球増加症があり、血小板カウントは全ての動物において実質的に不変のままであった。形態学的変化は穏和であり;4210μg/m2用量レベル群2で処理した動物は肝臓、脾臓、胸腺、腸および骨髄の顕著ではない履歴を示した。穏和に増大したアポトーシスおよび有糸分裂活性は5500μg/m2用量レベルで処理した動物において、各々、胸腺および肝臓で観察された群3。骨髄は正常細胞であったが、顆粒球過形成の証拠を示し、これは、これらの動物における末梢血液カウントで観察された絶対的顆粒球減少症と合致する。群4における最高用量での動物は定性的に同一の特徴を示した:肝臓における有糸分裂活性は、幾分、群3における動物と比較して増大したように見える。また、骨髄外造血が脾臓および肝臓で観察された。EphB2Rはマウスおよびヒトの間で密接な相同性があるタイプ1のTMチロシンキナーゼレセプターであり、結直腸癌細胞で過剰発現される。2H9はEphB2Rに対する抗体である。裸の抗体は腫瘍増殖に対して効果を有さないが、2H9-val-cit-MMAEはEphB2R発現細胞を殺し、CXF1103ヒト結腸腫瘍を用いるマウス異種移植片モデルにおいて効率を示したMaoetal.2004CancerRes.64:781-788。2H9および7C2は共にマウスIgG1抗-HER2抗体である。2H9-MC-val-cit-PAB-MMAF3.7MMAF/Ab、7C2-MC-val-cit-PAB-MMAF4MMAF/Ab、およびトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAF5.9MMAF/Abの毒性プロフィールを比較した。各免疫結合体または免疫結合体の薬物部分の構造における差は薬物動態学および、結局は安全性プロフィールに影響し得る。ヒト化トラスツズマブ抗体はラット組織に認識可能に結合せず、いずれの特性も非特異的と考えられるであろう。マカクザル毒性/安全性ラット毒性/安全性実験と同様に、マカクザルをADCで処理し、続いて、肝臓酵素測定、および種々の器官に対する効果の精査および分析を行った。肉眼での観察は体重の変化および病巣および出血の兆候を含んだ。臨床病理学パラメーター血清化学および血液学、組織病理学、および剖検を投与した動物で行った実施例19。抗体薬物結合体、H-MC-vc-PAB-MMAEH=システインを介して連結したトラスツズマブ連結はテストした用量レベルのいずれにおいても肝臓毒性の証拠を示さなかった。末梢血液顆粒球は1100mg/m2の単一用量の後の枯渇を示し、投与から14日後に完全な回復を伴った。抗体薬物結合体H-MC-vc-PAB-MMAFは550一過性および880mg/m2用量レベルにおける肝臓酵素の上昇を示し、顆粒球減少症の証拠を示さず、および血小板の用量-依存性一過性群2および3の減少を示した。4.6本発明の化合物の合成例示的化合物および例示的結合体はスキーム5~16にて後に概説する合成手法を用いて作成することができる。後により詳細に記載するように、例示的化合物または例示的結合体は、便利には、薬物およびリガンドへの結合用の反応性部位を有するリンカーを用いて調製することができる。1つの態様において、リンカーは、限定されるものではないが、抗体のようなリガンドに存在する求核性基に対して反応性である親電子性基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基を含む。抗体の求核性基のへテロ原子はリンカー上の親電子性基に対して反応性であって、リンカーユニットに対する共有結合を訂正する。有用な親電子性基は、限定されるものではないが、マレイミドおよびハロアセトアミド基を含む。新電子性基は抗体付着用の便宜な部位を提供する。もう1つの実施形態において、リンカーは、抗体に存在する親電子性基に対して反応性である求核性基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な親電子性基は、限定されるものではないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基を含む。リンカーの親電子性基のヘテロ原子は抗体上の親電子性基と反応し、抗体ユニットに対する共有結合を形成することができる。リンカー上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジドを含む。抗体上の親電子性基はリンカーに対する付着用の便宜な部位を提供する。カルボン酸官能基およびクロロホルメート官能基もまたリンカー用の有用な反応性部位である。なぜならば、それらは薬物の第二級アミノ基と反応して、アミド結合を形成できるからである。また、反応性部位として有用なのは、カルバメート結合を形成するための、限定されるものではないが、N-メチルバリンのような薬物のアミノ基と反応することができるp-ニトロフェニルカルボネートのようなリンカー上のカルボネート官能基である。典型的には、ペプチド-ベースの薬物は、2以上のアミノ酸および/またはペプチドフラグメントの間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。そのようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野においてよく知られた液相合成方法E.SchroderandK.Lubke,ThePeptides,volume1,pp76-136,1965AcademicPressに従って調製することができる。親電子マレイミド基を有する例示的ストレッチャーの合成はスキーム8~9において以下に示す。リンカーの合成で有用な一般的合成方法はスキーム10で記載する。スキーム11はval-cit基、親電子性マレイミド基およびPAB自己-犠牲スペーサー基を有するリンカーユニットの構築を示す。スキーム12は、PAB自己-犠牲スペーサー基を含むまたは含まない,phe-lys吸入基、親電子マレイミド基を有するリンカーの合成を示す。スキーム13は薬物-リンカー化合物の合成のための一般的概説を表し、他方、スキーム14は薬物-リンカー化合物を調製するための別の経路を表す。スキーム15はBHMS基を含有する分岐したリンカーの合成を示す。スキーム16は薬物-リンカー-抗体結合体を形成するための薬物-リンカー化合物への抗体の付着を概説し、スキーム14は、例えば、限定されるものではないが、抗体当たり2または4の薬物を有する薬物-リンカー-交代結合体の合成を示す。後により詳細に記載するように、例示的結合体は、薬物およびリガンドに結合するための2以上の反応性部位を有するリンカーを用いて便宜には調製される。1つの態様において、リンカーは抗体のようなリガンドに存在する求核性基に対して反応性である親電子基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、スルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基を含む。抗体の求核性基のヘテロ原子はリンカー上の親電子性基に対して反応性であって、リンカーユニットへの共有結合を形成する。有用な親電子性基は、限定されるものではないが、マレイミドおよびハロアセタミド基を含む。親電子性基は抗体付着のための便宜な部位を提供する。もう1つの実施形態において、リンカーは、抗体のようなリガンドに存在する親電子性基に対して反応性である求核性基を有する反応性部位を有する。抗体上の有用な親電子性基は、限定されるものではないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基を含む。リンカーの求核性基のヘテロ原子は抗体上の親電子性基と反応し、抗体ユニットへの共有結合を形成することができる。リンカー上の有用な求核性基は、限定されるものではないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドを含む。抗体上の親電子性基はリンカーに対する付着用の便宜な部位を提供する。4.6.1薬物部分の合成典型的には、ペプチド-ベースの薬物は2以上のアミノ酸および/またはペプチドフラグメントの間のペプチド結合を形成することによって調製することができる。そのようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野でよく知られた液相合成方法に従って調製することができるE.SchroederandK.Ludke,ThePeptides、volume1,pp76-136,1965,AcademicPress参照。オーリスタチン/ドラスタチン薬物部分は:米国特許第5635483号;米国特許第5780588号;Pettitetal.1989J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465;Pettitetal.1998Anti-CancerDrugDesign13:243-277;およびPettitetal.1996J.Chem.Soc.PerkinTrans.15:859-863の一般的方法に従って調製することができる。1つの実施形態において、薬物は、適当な縮合条件下で、好ましくは、ワン-ポット反応において、ほぼ化学量論的当量のジペプチドおよびポリペプチドを合わせることによって調製される。このアプローチは以下のスキーム5~7で示される。スキーム5は式Ibの薬物化合物の合成用の有用な中間体であるN-末端ポリペプチドユニットFの合成を示す。スキーム5スキーム5に示したように、例えば、PyBropおよびジイソプロピルエチルアミンの存在下にて、またはDCCを用い、安定なカップリング条件下で、保護されたアミノ酸Aここで、PGはアミン保護基を表し、R4は水素、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、-O-C1-C8アルキル、-アリール、アルキル-アリール、アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環、アルキル-C3-C8複素環から選択され、ここで、R5はHおよびメチルから選択され;あるいはR4およびR5は一緒になって式-CRaRbn-を有し、ここで、RaおよびRbは、独立して、水素、C1-C8アルキルおよびC3-C8炭素環から選択され、nは2、3、4、5および6から選択され、それらが結合している炭素分子とで環を形成するをt-ブチルエステルBここで、R6は-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;およびR7は水素、C1-C8アルキル、およびC3-C8炭素環、-O-C1-C8アルキル、-アリール、アルキル-アリール、アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環およびアルキル-C3-C8複素環から選択されるとカップリングさせる例えば、Miyazaki,K.etal.Chem.Pharm.Bull.1995,4310,1706-1718参照。適当な保護基PG、およびアミノ基を保護基で保護するための適当な合成方法は当該分野でよく知られている。例えば、Greene,T.W.andWuts,P.G.M.,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,第2版,1991,JohnWileySons参照。例示的保護されたアミノ酸AはPG-Ileおよび、特に、PG-Valであり、他方、他の適当な保護されたアミノ酸は、限定されるものではないが、PG-シクロヘキシルグリシル、PG-シクロヘキシルアラニン、PG-アミノシクロパンー1-カルボン酸、PG-アミノイソ酪酸、PG-フェニルアラニン、PG-フェニルグリシン、およびPG-tert-ブチルグリシンを含む。Zは例示的な保護基である。Fmocはもう1つの例示的保護基である。例示的t-ブチルエステルBはドライソロイシンt-ブチルエステルである。ジペプチドCは、例えば、クロマトグラフィーを用いて精製し、引き続いて、例えば、PGがベンジルオキシルカルボニルである場合にはエタノール中のH2および10Pd-Cを用い、あるいはFmoc保護基の除去のためのジメチルアミンを用いて脱保護することができる。得られたアミンDはアミノ酸BBとで容易にペプチド結合を形成するここで、R1は-H、-C1-C8アルキルおよび-C3-C8炭素環から選択され;およびR2は-Hおよび-C1-C8アルキルから選択され;あるいはR1およびR2は一緒になって、RaおよびRbが独立して、-H、-C1-C8アルキルおよび-C3-C8炭素環から選択され,nが2、3、4、5および6から選択される式-CRaRbn-を有し、かつそれらが結合する窒素原子と一緒になって環を形成し;およびR3は水素、C1-C8アルキル、C3-C8炭素環、-O-C1-C8アルキル、-アリール、アルキル-アリール、アルキル-C3-C8炭素環、C3-C8複素環、およびアルキル-C3-C8複素環から選択される。N,N-ジアルキルアミノ酸は商業的に入手可能なN,N-ジメチルバリンのような、BBについての例示的アミノ酸である。他のN,N-ジアルキルアミノ酸は高知の手法を用いて還元的にビス-アルキル化によって調製することができる例えば、Bowman,R.E.,Stroud,H.HJ.Chem.Soc.,1950,1342-1340参照。Fmoc-Me-L-ValおよびFmoc-Me-L-グリシンはN-モノアルキル誘導体の合成で有用な2つの例示的アミノ酸BBである。アミンDおよびアミノ酸BBは、塩基としてのトリエチルアミンと共にカップリング試薬DEPCを用いてポリペプチドEを供するように反応する。EのC-末端保護基は、引き続いて、HClを用いて脱保護して、式Fのポリペプチド化合物を得る。スキーム5に示された説明的DEPCカップリング方法およびPyBropカップリング方法は、各々、一般的手法Aおよび一般的手法Bに低下に概説する。接触水素化を介するZ-保護アミンの脱保護のための説明的方法は一般的手法Cにて以下に概説する。一般的手法A:DEPCを用いるペプチド合成。N-保護またはN,N-ジ置換アミノ酸またはペプチドD1.0当量およびアミンBB1.1当量はジクロロメタン0.1~0.5Mのような非プロトン性有機溶媒で希釈する。次いで、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン1.5当量のような有機塩基、続いて、DEPC1.1当量を加える。HPLCまたはTLCによってモニターしつつ、得られた溶液は好ましくはアルゴン下で12時間まで撹拌する。溶媒を室温にて真空中で除去し、例えば、HPLCまたはフラッシュカラムクロマトグラフィーシリカゲルカラムを用いて租生成物を精製する。関連画分を合わせ、真空中で濃縮して、ポリペプチドEが得られ、これを真空下で一晩乾燥する。一般的手法B:PyBropを用いるペプチド合成。所望によりカルボキシル保護基を有してもよいアミノ酸B1.0当量をジクロロメタンまたはDMEのような非プロトン性有機溶媒で希釈して、0.5および1.0mMの間の濃度の溶液が得られ、次いで、ジイソプロピルエチルアミン1.5当量を加える。Fmoc-またはZ保護アミノ酸A1.1当量を一度に固体として加え、次いで、PyBrop1.2当量に得られた混合物に加える。反応をTLCまたはHPLCにてモニターし、続いて、一般的手法Aに記載されたのと同様に仕上げ処理手法を行う。一般的手法C:接触水素化を介するZ-除去。Z-保護アミノ酸またはペプチドCをエタノールで希釈して、厚壁丸底フラスコのような適当な容器中で0.5および1.0mMの間の溶液を得る。炭素上の10パラジウムを加え5~10w/w、反応混合物を水素雰囲気下に置く。反応の進行はHPLCを用いてモニターし、一般には1~2時間内で完了する。反応混合物を予め洗浄したセライトのパッドを通して濾過し、セライトを濾過の後にメタノールのような極性有機溶媒で再度洗浄する。溶離剤溶液を真空中で濃縮して残渣が得られ、これを有機溶媒、好ましくはトルエンで希釈する、次いで、有機溶媒を真空中で除去して、脱保護されたアミンCを得る。スキーム6は式KのC-末端ジペプチドを作成するのに有用な方法、および式Kのジペプチド結合を式Fのポリペプチドとカップリングさせて、式Ibの薬物化合物を作成する方法を示す。スキーム6ジペプチドKは、スキーム5に示すように、ポリエチルアミンの存在下で、例えば、DEPCのようなペプチド化学でよく知られた縮合剤を用いて、修飾されたアミノ酸Boc-ドラプロインG例えば、Pettit,G.R.,etal.Synthesis,1996,719-725と式Hのアミンとの縮合によって容易に調製することができる。次いで、式Kのジペプチドを一般的手法Dを用いて式Fのポリペプチドとカップリングさせて、式LのFmoc-保護薬物化合物が得られ、これは、引き続いて、一般的手法Eを用いて脱保護して、式Ibの薬物化合物を得ることができる。一般的手法D:薬物合成。ジペプチドK1.0当量およびポリペプチドF1当量の混合物をジクロロメタンのような非プロトン性有機溶媒で希釈して、0.1M溶液が形成され、次いで、トリフルオロ酢酸のような強酸1/2v/vを加え、窒素雰囲気下で得られた混合物を0°Cにて2時間撹拌する。反応をTLCまたは、好ましくはHPLCを用いてモニターすることができる。溶媒を真空中で除去し、得られた残渣を好ましくはトルエンを用いて共沸により2回乾燥する。得られた残渣を高真空下で12時間乾燥し、次いで、ジクロロメタンのような非プロトン性有機溶媒で希釈する。次いで、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン1.5当量のような有機塩基を加え、引き続いて、残渣に対する化学的官能性に応じてPyBrop1.2当量またはDEPC1.2当量いずれかを加える。反応混合物をTLCまたはHPLCいずれかでモニターし、完了に際して、反応を一般的手法Aに記載したのと同様または同一の仕上げ手法に付す。一般的手法E:ジエチルアミンを用いるFmoc-除去。Fmoc-保護薬物Lをジクロロメタンのような非プロトン性有機溶媒で希釈し、得られた溶液にジエチルアミン1/2v/vを加える。反応の進行をTLCまたはHPLCによってモニターし、典型的には、2時間以内に完了する。反応混合物を真空中で濃縮し、得られた残渣を好ましくはトルエンを用いて共沸乾燥し、次いで、高真空下で乾燥して、脱保護されたアミノ基を有する薬物Ibを得る。スキーム7は式IbのMMAF誘導体を製造するのに有用な方法を示す。スキーム7ジペプチドOは、スキーム5および6に示すように、トリエチルアミンの存在下、例えば、DEPCのようなペプチド化学でよく知られた縮合剤を用い、修飾されたアミノ酸Boc-ドラプロインG例えば、Pettit,G.R.,etal.Synthesis,1996,719-725参照と式Mの保護されたアミノ酸との縮合によって容易に調製することができる。次いで、一般的手法Dを用いて、式Oのジペプチドを式Fのポリペプチドとカップリングさせて、式PのFmoc-保護MMAF化合物を作製することができ、これは、引き続いて、一般的手法Eを用いて、式IbのMMAF薬物化合物を得ることができる。かくして、前記方法は本発明で用いることができる薬物を製造するのに有用である。4.6.2薬物リンカーの合成本発明の薬物-リンカー化合物を調製するために、薬物をリンカー上の官能性部位と反応させる。一般には、スペーサーユニット-Y-およびストレッチャーユニット-A-が共に存在する場合、リンカーは構造:を有することができる。別法として、リンカーは、スペーサーユニット-Y-が存在しない場合、構造:を有することができる。また、リンカーは、ストレッチャーユニット-A-およびスペーサーユニット-Y-が共に存在しない場合、構造:を有することもできる。また、リンカーは、アミノ酸ユニットWおよびスペーサーユニットYが共に存在しない場合、構造:を有することもできる。一般には、適当なリンカーは、任意のストレッチャーユニットおよび任意のスペーサーユニットに連結したアミノ酸ユニットを有する。反応性部位1はスペーサーの末端に存在し、反応部位2はストレッチャーの末端に存在する。もしスペーサーユニットが存在しなければ、反応性部位1はアミノ酸ユニットのC-末端に存在する。本発明の例示的実施形態において、反応性部位No.1は薬物の窒素原子に対して反応性であって、反応性部位No.2はりガンド上のスルフヒドリル基に対して反応性である。反応性部位1および2は異なる官能基に対して反応性であり得る。本発明の1つの態様において、反応性部位No.1はである。本発明のもう1つの態様において、反応性部位No.1はである。本発明のさらにもう1つの態様において、反応性部位No.1は式:を有するp-ニトロフェニルカルボネートである。本発明の1つの態様において、反応性部位No.2はチオール-許容基である。適当なチオール-許容基は式:[式中、Xは脱離基、好ましくはO-メシル、O-トシル、-Cl、-Br、または-I;あるいは式:を有するマレイミド基を表す]を有するハロアセタミド基を含む。有用なリンカーはMolecularBiosciencesInc.Boulder,COのような商業的源を介して得ることができるか、あるいは以下のスキーム8~10にまとめたように調製することができる。スキーム8[式中、Xは-CH2-または-CH2OCH2-であり;Xが-CH2-である場合、nは0~10の範囲の整数であり;あるいはXが-CH2OCH2-である場合、1~10である。]スキーム9に示した方法はMitsunobu条件下でマレイミドをグリコールと合わせて、ポリエチレングリコールマレイミドストレッチャー例えば、Walker,M.A.J.Org.Chem.1995,60,5352-5が得られ、引き続いて、p-ニトロフェニルカルボネート反応部位基をインストールする。スキーム9[式中、Eは-CH2-または-CH2OCH2-であり;およびeは0~8の範囲の整数である。]別法として、PEG-マレイミドおよびPEG-ハロアセタミドストレッチャーはFrisch,etal.,BioconjugateChem.1996,7,180-186によって記載されたように調製することができる。スキーム10はマレイミドストレッチャー基および、所望により、p-アミノベンジルエーテル自己-犠牲スペーサーを含有する例示的リンカーユニットの一般的合成を示す。スキーム10[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;mは0~4の範囲の整数であり;およびnは0~10の範囲の整数である。]有用なストレッチャーは、有機合成の公知の技術を利用することによって、以下に記載するMolecularBiosciencesBoulder,COから商業的に入手可能な中間体を用いてリンカーに取りこむことができる。式IIIaのストレッチャーはスキーム11および12に記載したように以下の中間体とアミノ酸ユニットのN-末端と反応させることによってリンカーに導入することができる。[式中、nは1~10の範囲の整数であって、Tは-Hまたは-SO3Naである][式中、nは0~3の範囲の整数である]式IIIbのストレッチャーユニットは、以下の中間体とアミノ酸ユニットのN-末端とを反応させることによってリンカーに取りこむことができる。[式中、Xは-Brまたは-Iである]および式IVのストレッチャーユニットは以下の中間体とアミノ酸ユニットのN-末端とを反応させることによってリンカーに導入することができる。式Vaのストレッチャーユニットは、以下の中間体とアミノ酸ユニットのN-末端とを反応させることによってリンカーに導入させることができる。他の有用なストレッチャーは公知の手法に従って合成することができる。以下に示す式の網のオキシストレッチャーは、Jones,D.S.etal.,TetrahedronLetters,2000,4110,1531-1533;およびGilon,C.etal.,Tetrahedron,1967,2311,4441-4447に記載された手法に従ってアルキルハライドとN-Boc-ヒドロキシルアミンと反応させることによって調製することができる。[式中、-R17-は-C1-C10アルキレン、-C3-C8カルボシクロ-、-O-C1-C8アルキル-、-アリーレン-、-C1-C10アルキレン-アリーレン-、-アリーレン-C1-C10アルキレン-、-C1-C10アルキレン-C3-C8カルボシクロ-、-C3-C8カルボシクロ-C1-C10アルキレン-、-C3-C8ヘテロシクロ-、-C1-C10アルキレン-C3-C8ヘテロシクロ-、-C3-C8ヘテロシクロ-C1-C10アルキレン-、-CH2CH2Or-、-CH2CH2Or-CH2-から選択され;およびrは1~10の範囲の整数である]以下に示す式のイソチオシアネートストレッチャーは、Angew.Chem.,1975,8714:517に記載されたイソチオシアナトカルボン酸塩化物から調製することができる。[式中、-R17-は本明細書中に記載した通りである。]スキーム11はマレイミドストレッチャーおよび、所望により、p-アミノベンジル自己-犠牲スペーサーを有するval-citジペプチドリンカーを得るための方法を示す。スキーム11[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;およびmは0~4の範囲の整数である。]スキーム12はマレイミドストレッチャーユニットおよびp-アミノベンジル-犠牲スペーサーユニットを有するphe-lysMtrジペプチドリンカーユニットの合成を示す。出発物質ADlysMtrは商業的に入手可能であるBachem,Torrance,CAか、あるいはDubowchik,etal.TetrahedronLetters199738:5257-60に従って調製することができる。スキーム12[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;およびmは0~4の範囲の整数である]スキーム13に示すように、リンカーを式Ibの薬物化合物のアミノ基と反応させて、アミドまたはカルバメート基を含有する薬物-リンカー化合物を形成することができ、薬物ユニットをリンカーユニットに連結させる。反応部位No.1がリンカーAJにおけるようにカルボン酸基である場合、カップリング反応をHATUまたはPyBropおよび適当なアミン塩基を用いて行うことができ、その結果、薬物ユニットおよびリンカーユニットの間のアミド結合を含む薬物-リンカー化合物AKが得られる。反応部位No.1がリンカーALにおけるようにカルボネートである場合、リンカーをDMF/ピリジンの混合物中のHOBtを用いて薬物にカップリングさせて、薬物ユニットおよびリンカーユニットの間のカルバメート結合を含有する薬物-リンカー化合物AMを得ることができる。別法として、反応性部位No.1がリンカーANにおけるように良好な脱離基である場合、リンカーを求核性置換プロセスを介して薬物のアミン基とカップリングさせて、薬物ユニットおよびリンカーユニットの間にアミン結合AOを介する薬物-リンカー化合物を得ることができる。薬物-リンカー化合物を形成するための薬物をリガンドに連結させるのに有用な例示的方法はスキーム13に示され、一般的手法G-Hに概説する。スキーム13一般的手法G:HATUを用いるアミド形成。薬物Ib1.0当量およびカルボン酸反応性部位1.0当量を含有するN-保護リンカーをジクロロメタンのような適当な有機溶媒で希釈し、得られた溶液をHATU1.5当量および有機塩基、好ましくは、ピリジン1.5当量で処理する。反応混合物を不活性雰囲気、好ましくはアルゴン下で6時間撹拌し、その間に、HPLCを用いて反応混合物をモニターする。反応混合物を濃縮し、得られた残渣をHPLCを用いて精製して、式AKのアミドを得る。手法H:HOBtを用いるカルバメート形成。p-ニトロフェニルカルボネート反応性部位1.1当量および薬物Ib1.0当量を有するリンカーALの混合物をDMFのような非プロトン性有機溶媒で希釈して、50~100mMの濃度を有する溶液が得られ、得られた溶液をHOBt2.0当量で処理し、不活性雰囲気、好ましくはアルゴン下に置く。反応混合物を15分間撹拌し、次いで、ピリジン1/4v/vのような有機塩基を加え、HPLCを用いて反応の進行をモニターする。リンカーは典型的には16時間以内で消費される。次いで、反応混合物を真空中で濃縮し、得られた残渣を、例えば、HPLCを用いて精製して、カルバメートAMを得る。薬物-リンカー化合物を調製する代替方法をスキーム14に概説する。スキーム14の方法を用い、薬物を、付着したストレッチャーユニットを有しない部分的リンカーユニット例えば、ZAに付着させる。これはFmoc-保護N-末端を有するアミノ酸ユニットを有する中間体APを供する。次いで、Fmoc基を除去し、次いで、PyBropまたはDEPCを用いて触媒されるカップリング反応を介して、得られたアミン中間体AQをストレッチャーユニットに付着させる。ブロモアセタミドストレッチャーARまたはPEGマレイミドストレッチャーASいずれかを含有する薬物-リンカー化合物の構築をスキーム14に示す。スキーム14[式中、Qは-C1-C8アルキル、-O-C1-C8アルキル、-ハロゲン、-ニトロまたは-シアノであり;およびmは0~4の範囲の整数である。]分岐スペーサーを含有するリンカーユニットの調製で有用な方法をスキーム15に示す。スキーム15スキーム15は、マレイミドストレッチャーユニットおよびビス4-ヒドロキシメチルスチレンBHMSユニットを有するval-citジペプチドリンカーの合成を示す。BHMS中間体AWの合成は従前の文献の手法から改良されFirestoneetal.およびCrozet,M.P.に対する国際公開番号WO9813059;Archaimbault,G.;Vanelle,P.;Nouguier,R.TetrahedronLett.198526:5133-5134参照、出発物質として、商業的に入手可能なジエチル4-ニトロベンジルホスホネートATおよび商業的に入手可能な2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5-オンAUを利用する。リンカーAYおよびBAはスキーム9に記載された方法を用いて中間体AWから調製することができる。4.6.3樹状リンカー該リンカーは、限定されるものではないが、抗体のようなリガンドへの分岐多機能的リンカー部位を介して1を超える薬物部分の共有結合付着用の樹状タイプリンカーであり得るSunetal.2002BioorganicMedicinalChemistryLetters12:2213-2215;Sunetal.2003BioorganicMedicinalChemistry11:1761-1768。樹状リンカーは抗体に対する薬物のモル比率、すなわち、薬物-リンカー-リガンド結合体の能力に関連する負荷を増加させることができる。かくして、システイン作製抗体が唯一の反応性システインチオール基を担う場合、多数の薬物部分を樹状リンカーを介して付着させることができる。樹状リンカー試薬の以下の例示的実施形態は9つまでの求核性薬物部分試薬がクロロエチルナイトロジェンマスタード官能基との反応により結合体化されるのを可能とする:4.6.4抗体への薬物部分の結合体化スキーム16は、抗体当たり約2~約4の薬物を有する薬物-リンカー-リガンド結合体を作製するのに有用な方法を示す。抗体をジチオスレイトールDTTのような還元剤で処理して、システインジスルフィド残基のいくつかまたは全てを還元し、高度に求核性のシステインチオール基-CH2SHを形成する。かくして、Klussman,etal.2004,BioconjugateChemistry154:765-773の頁766の結合体化方法に従い、部分的に還元された抗体を薬物-リンカー化合物、またはリンカー試薬と、マレイミドまたはα-ハロカルボニルのような親電子性官能基と反応させる。スキーム16例えば、pH8.0の500mMホウ酸ナトリウムおよび500mM塩化ナトリウムに溶解させた抗体、例えば、AC10を過剰の100mMジチオスレイトールDTTで処理する。37°Cにおける約30分間のインキュベーションの後、緩衝液をSephadexG25樹脂での溶出によって交換し、1mMDTPAを含むPBSで溶出させた。溶液の280nmにおける吸光度からの還元された抗体の濃度、およびDTNBAldrich、Milwaukee、WIとの反応によるチオール濃度を測定し、および412nmにおける吸光度の測定によって、チオール/Ab値をチェックする。PBSに溶解させた還元された抗体を氷上で冷却する。既知の濃度によってアセトニトリルおよび水に溶解させた、DMSO中の薬物リンカー、例えば、MC-val―cit-PAB-MMAEをPBS中の冷却された還元抗体に加える。約1時間後、過剰のマレイミドを加えて、反応をクエンチし、いずれの未反応抗体チオール基もキャップする。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、ADC、例えば、AC10-MC-vc-PAB-MMAEを、PBS中のG25樹脂を通す溶出によって精製し、脱塩し、滅菌条件下で0.2μmフィルターを通して濾過し、貯蔵のために凍結する。種々のリンカー、および薬物部分、MMAEおよびMMAFにて、種々の抗体薬物結合体ADCを調製した。以下の表は、実施例27のプロトコルによって調製し、かつHPLCおよび薬物負荷アッセイによって特徴付けられたADCの例示的部分である。4.7組成物および投与の方法他の実施形態において、有効量の例示的化合物および/または例示的結合体および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む組成物を記載する。便宜のために、薬物ユニットおよび薬物-リンカー化合物を例示的化合物ということができ、他方、薬物-リガンド結合体および薬物-リンカー-リガンド結合体を例示的結合体ということができる。組成物は動物またはヒト投与に適している。本組成物は、該組成物が患者に投与されるのを可能とするいずれかの形態とすることができる。例えば、組成物は固体、液体または気体エアロゾルの形態とすることができる。典型的な投与の経路が、限定されるものではないが、経口、局所、非経口、舌下、直腸、膣、目、腫瘍内、および鼻腔内を含む。非経口投与は皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技術を含む。1つの態様において、組成物は非経口投与された。さらにもう1つの態様において例示的化合物および/または例示的結合体または組成物は静脈内投与される。薬学的組成物は例示的化合物および/または例示的結合体が患者への組成物の投与に対して生物学的に利用できるように処方することができる。組成物は一以上の投与単位の形態をとることができ、そこでは、例えば、錠剤を単一の投与形態とすることができ、エアロゾルの形態の例示的化合物および/または例示的結合体の容器は複数の投与単位を保持することができる。薬学的組成物を調製するのに用いる物質は用いる量において非毒性であり得る。薬学的組成物上の有効成分部位の最適な投与量は種々の因子に依存するであろうことは当業者に明らかであろう。関連する因子、限定されるものではないが、動物例えば、ヒトのタイプ、例示的化合物または例示的結合体の特定の形態、投与の方法、および使用する組成物を含む。薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤は、当該組成物が、例えば、錠剤または粉末の形態であるように粒状であり得る。キャリア部位は液体とすることができ、当該組成物が、例えば、経口シロップまたは注射液体である。加えて、キャリア部位は気体状または粒状として、例えば、吸入投与で有用なエアロゾル組成物を供することができる。経口投与を意図した場合、組成物は好ましくは固体または液体形態であり、ここで、半固体、半液体、懸濁液およびゲル形態が、固体または液体いずれかとしてここに考えられる形態内に含まれる。経口投与用の固体組成物として、該組成物は粉末、顆粒、圧縮錠剤、丸剤、カプセル、チューインガム、ウェーハーなどの形態に処方することができる。そのような固体組成物は、典型的には、一以上の不活性希釈剤を含有する。加えて、一以上の以下のものを存在させることができる:カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、マイクロクリスタリンセルロース、またはゼラチンのような結合剤;澱粉、ラクトースまたはデキストリンのような賦形剤、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモゲル、コーンスターチ等のような崩壊剤;ステアリン酸マグネシウムまたはステロテックスSterotexのような滑沢剤;コロイド状二酸化ケイ素のようなグライダント;スクロースまたはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、サルチル酸メチルまたはオレンジフレーバーのようなフレーバー剤、および着色剤。組成物がカプセル、例えば、ゼラチンカプセルの形態の場合、それは、前記タイプの物質に加えて、ポリエチレングリコール、シクロデキストリンまたは脂肪油のような液体キャリアを含有することができる。組成物は液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、エマルジョンまたは懸濁液の形態とすることができる。液体は経口投与または注射による送達で有用であり得る。経口投与を意図した場合、組成物は甘味剤、保存剤、色素/着色剤およびフレーバー促進剤のうちの一以上を含むことができる。注射による投与用の組成物においては、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝液、安定化剤および等張剤のうちの1以上を含めることもできる。液体組成物は、それが溶液、懸濁液または他の同様な形態であるか否かを問わず、以下のものの1以上を含めることができる:注射用水、セーライン溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウムのような滅菌希釈剤、溶媒または懸濁化媒体として働くことができる合成物またはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒のような不揮発性油;ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤;アスコルビン酸または二亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤:エチレンジアミンテトラ酢酸のようなキレート化剤;アセテート、シトレートまたはホスフェートのような緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような等張性の調製用の剤。非経口組成物は、ガラス、プラスチックまたは他の材料から作成されたアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは多用量バイアルに封入することができる。生理食塩水が、例示的なアジュバントである。注射組成物は好ましくは滅菌されている。特定の疾患または疾患の治療で効果的な例示的化合物および/または例示的結合体の量は疾患または疾患の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定することができる。加えて、インビトロまたはインビボアッセイは、所望により、最適な投与量範囲を同定するのを助けるのに使用することができる。組成物で使用されるべき正確な用量もまた投与経路、および病気または疾患の重症度に依存し、実行者および各患者の状況の判断に従って決定すべきである。組成物は、適当な用量が得られるように有効量の例示的化合物および/または例示的結合体を含む。典型的には、この量は組成物の重量の少なくとも約0.01の例示的化合物および/または例示的結合体である。経口投与が意図される場合、この量は組成物の約0.1重量~約80重量の範囲で変化させることができる。1つの態様において、経口組成物は該組成物の重量の約4~約50の例示的化合物および/または例示的結合体を含むことができる。さらにもう1つの態様において、本発明の組成物は、非経口投与単位が約0.01重量~約2重量の例示的化合物および/または例示的結合体を含有するように調製される。非経口投与では、組成物は動物の体重kg当たり約0.01~約100mgの例示的化合物および/または例示的結合体を含むことができる。1つの態様において、組成物は動物の体重kg当たり約1~約100mgの例示的化合物および/または例示的結合体を含むことができる。もう1つの態様において、投与される量は約0.1~約25mg/kg体重の例示的化合物および/または例示的結合体の範囲であろう。一般に、患者に投与される例示的化合物および/または例示的結合体の用量は、典型的には、約0.01mg/kg~約2000mg/kgの動物体重である。1つの態様において、患者に投与される用量は約0.01mg/kg~約10mg/kgの動物体重であり、もう1つの態様において、患者に投与される用量は約0.1mg/kgおよび約250mg/kgの動物体重の間であり、さらにもう1つの態様において、患者に投与される用量は約0.1mg/kgおよび約20mg/kgの動物体重の間であり、さらにもう1つの態様において、投与される用量は約0.1mg/kg~約10mg/kgの動物体重の間であり、およびさらにもう1つの態様において、投与される用量は約1mg/kg~約10mg/kgの動物体重の間である。例示的化合物および/または例示的結合体または組成物はいずれかの便宜な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚ライニング例えば、口粘膜、直腸および腸粘膜等を通じての吸収によって投与することができる。投与は全身または局所であり得る。種々の送達システムが知られており、例えば、リポソーム、ミクロ粒子、マイクロカプセル、カプセル等への封入を用いて、例示的化合物および/または例示的結合体または組成物を投与することができる。ある実施形態において、1を超える例示的化合物および/または例示的結合体または組成物を患者に投与する。特別な実施形態において、1以上の例示的化合物および/または例示的結合体または組成物を治療を必要とする領域に局所投与するのが望ましくあり得る。これは、例えば、限定されるものではないが、外科的処置の間における局所的注入;例えば、外科的処置後における創傷包帯と組み合わせた局所適用によって;注射によって;カテーテルによって;坐薬によって;またはインプラントによって達成することができ、インプラントはシアラスティックsialastic膜のような膜、または線維を含めた多孔性、非多孔性またはゼラチン状物質である。1つの実施形態において、投与は癌、腫瘍または神経性またはプレ-神経性組織の部位または前者の部位における直接的注射によることができる。もう1つの実施形態において、投与は自己免疫疾患の発現の部位または前者の部位における直接的注射によることができる。ある実施形態において、1以上の例示的化合物および/または例示的結合体または組成物を、脳室内およびクモ膜下腔内注射を含めたいずれかの適当な経路によって中枢神経系に導入するのが望ましくあり得る。脳室内注射が、例えば、Ommaya貯蔵器のような貯蔵器に付着させた脳室内カテーテルによって促進することができる。肺投与も、例えば、吸入器またはネビュライザー、およびエアロゾル化剤での処方を用いることによって、あるいはフルオロカーボンまたは合成肺界面活性剤での灌流を介して使用することもできる。さらにもう1つの実施形態において、例示的化合物および/または例示的結合体または組成物は制御放出システムで送達することができ、限定されるものではないが、ポンプまたは種々のポリマー材料を用いることができる。さらにもう1つの実施形態において、制御放出システムは例示的化合物および/または例示的結合体または組成物の標的、例えば、脳近隣に置くことができ、かくして、全身用量のフラクションのみを必要とする例えば、Goodson、inMedicalApplicationsofControlledRelease、前掲、vol.2、pp.115-1381984参照。LangerScience249:1527-15331990によるレビューで議論された他の制御放出システムを用いることもできる。用語キャリアとは、それと共に例示的化合物および/または例示的結合体が投与される希釈剤、補助剤または賦形剤をいう。そのような医薬キャリアは、石油、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等のような動物、植物または合成起源のものを含めた、水および油のような液体であり得る。キャリアは生理食塩水、アカシヤガム、ゼラチン、澱粉ペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素等であり得る。加えて、助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤および着色剤を用いることができる。1つの実施形態において、患者に投与する場合、例示的化合部および/または例示的結合体がまたは組成物および薬学的に受容可能なキャリアは滅菌されている。水は、例示的化合物および/または例示的結合体が静脈内投与される場合の例示的キャリアである。また、セーライン溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液の、特に、注射溶液のための液体キャリアとして使用することもできる。また、適当な医薬キャリアは澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等のような賦形剤を含むこともできる。本発明の組成物が、所望であれば、少量の湿潤剤または乳化剤、またはpH緩衝材を含有することもできる。本発明の組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、ペレット、カプセル、液体含有カプセル、粉末、徐放処方、坐薬、エマルジョン、エアロゾル、スプレー、懸濁液、または使用に適したいずれかの他の形態を採ることができる。適当な医薬キャリアの他の例は、E.W.MartinによるRemington’sPharmaceuticalSciencesによって記載される。ある実施形態において、例示的化合物および/または例示的結合体は、動物、特にヒトへの静脈内投与に適合した薬学的組成物としてのルーチン的手法に従って処方される。典型的には、静脈内投与用のキャリアまたは賦形剤は滅菌等張水性緩衝溶液である。必要な場合、組成物が安定化剤を含有することもできる。静脈内投与用の組成物は、所望により、注射の部位における疼痛を和らげるためにリグノカインのような局所麻酔剤を含めることもできる。一般に、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェ剤のような気密的にシールした容器中の凍結乾燥粉または水を含まない濃縮物として別々に供給されるか、あるいは単位投与形態にて混合される。例示的化合物および/または例示的結合体を注入によって投与する場合、それは、例えば、滅菌医薬グレード水またはセーラインを含有する注入ボトルで分注ことができる。例示的化合物および/または例示的結合体が注射によって投与される場合、注射用の滅菌水またはセーラインのアンプルを、成分が投与に先立って混合できるように供することができる。経口送達用の組成物は、例えば、錠剤、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、顆粒、粉末、エマルジョン、カプセル、シロップまたはエリキシルの形態とすることができる。経口投与される組成物は1以上の任意の剤、例えば、フルクトース、アスパルテームまたはサッカリンのような甘味剤;ペパーミント、冬緑油、またはチェリーのようなフレーバー剤;着色剤;および保存剤を含有させて、医薬的に味の良い製剤を供することができる。さらに、錠剤または丸剤形態の場合、組成物は被覆して、胃腸管中での崩壊および吸収を遅らせ、それにより、長時間にわたる維持された作用を供することができる。浸透圧的に活性な駆動化合物を囲う選択的に透過性膜もまた経口投与される化合物に適している。これらの後のプラットフォームにおいて、カプセルの周囲の環境からの流体は、膨潤して、開口を通じて剤または剤組成物を置き換える駆動化合物によって吸収される。これらの送達プラットフォームは、中程度の放出処方のスパイクされたプロフィールとは反対に実質的に0次送達プロフィールを供することができる。グリセロールモノストアレートまたはグリセロールステアレートのような時間-遅延物質も用いることができる。組成物は局所投与を意図することができ、その場合、キャリアは溶液、エマルジョン、軟膏またはゲル基材の形態とすることができる。経皮投与を用いるとすれば、組成物は経皮パッチまたはイオントフォレシスデバイスの形態とすることができる。局所処方は約0.05~約50w/v組成物の単位用量当たりの重量の、もう1つの態様において、0.1~10w/vのある濃度の例示的化合物および/または例示的結合体を含むことができる。組成物は、例えば、直腸で融解し、例示的化合物および/または例示的結合体を放出する坐薬の形態で直腸投与を意図することができる。組成物は、固体または液体投与単位の物理的形態を修飾する種々の物質を含むことができる。例えば、組成物は有効成分の周りにコーティングシェルを形成する材料を含むことができる。コーティングシェルを形成する物質は典型的には不活性であり、例えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択することができる。別法として、有効成分はゼラチンカプセルに封入することができる。組成物は気体状投与単位よりなることができ、例えば、それはエアロゾルの形態とすることができる。用語エアロゾルは、圧縮パッケージよりなるシステムに対してコロイド状性質のものの範囲の種々のシステムを命名するのに用いられる。送達は液化または圧縮ガス、或いは有効成分を分注する適当なポンプシステムによることができる。固体、液体または気体形態であるかを問わず、本発明の組成物は癌、自己免疫疾患または感染症の治療で用いる薬理学的剤を含むことができる。4.8例示的結合体の治療的使用例示的化合物および/または例示的結合体は、患者において、癌、自己免疫疾患または感染症を治療するのに有用である。4.8.1癌の治療例示的化合物および/または例示的結合体は、患者において、腫瘍細胞または癌細胞の増殖を阻害し、腫瘍または癌細胞においてアポトーシスを引き起こし、または癌細胞を治療するのに有用である。例示的化合物および/または例示的結合体は、それに従い、動物癌の治療のために種々の設定で用いることができる。薬物-リンカー-リガンド結合体を用いて、薬物または薬物ユニットを腫瘍細胞または癌細胞に送達することができる。理論に拘束されるつもりはないが、1つの実施形態において、例示的結合体のリガンドユニットは癌細胞または腫瘍細胞-関連抗原に結合し、またはそれと会合し、例示的結合体はレセプター-媒介エンドサイトーシスを通じて腫瘍細胞または癌細胞に摂取することができる。抗原を腫瘍細胞または癌細胞に付着させることができ、あるいは腫瘍細胞または癌細胞と会合した細胞内マトリックスタンパク質であり得る。一旦細胞内部に入れば、リンカーユニット内の1以上の特異的ペプチド配列は1以上の腫瘍細胞または癌細胞-関連プロテアーゼによって加水分解的に切断され、その結果、薬物または薬物-リンカー化合物が放出される。次いで、放出された薬物または薬物-リンカー化合物は細胞内を自由に移動し、細胞傷害性または細胞静止活性を誘導する。別の実施形態において、薬物または薬物ユニットは腫瘍細胞または癌細胞の外部で例示的結合体から切断され、薬物または薬物-リンカー化合物は引き続いて細胞に進入する。1つの実施形態において、リガンドユニットは腫瘍細胞または癌細胞に結合する。もう1つの実施形態において、リガンドユニットは、腫瘍細胞または癌細胞の表面にある腫瘍細胞または癌細胞抗原に結合する。もう1つの実施形態において、リガンドユニットは、腫瘍細胞または癌細胞と会合した細胞外マトリックスタンパク質である腫瘍または癌細胞抗原に結合する。特定の腫瘍細胞または癌細胞に対するリガンドユニットの特異性は、最も効果的に治療される腫瘍または癌を決定するのに重要であり得る。例えば、BR96リガンドユニットを有する例示的結合体は肺、乳房、結腸、卵巣および膵臓のものを含めた抗原陽性含羞を治療するのに有用であり得る。抗―CD30または抗-CD40リガンドユニットを有する例示的結合体は血液学的悪性疾患を治療するのに有用であり得る。例示的結合体で治療することができる他の特定のタイプの癌は、限定されるものではないが、表3に介されるものを含む。表3固体腫瘍は限定されるものではないが以下のものを含む:線維肉腫粘液肉腫脂肪肉腫軟骨肉腫骨肉腫脊索腫血管肉腫内皮肉腫リンパ管肉腫リンパ管内皮肉腫滑膜腫中皮腫ユーイング腫瘍平滑筋肉腫横紋筋肉腫結腸癌結腸直腸癌腎癌膵癌骨癌乳癌卵巣癌前立腺癌食道癌胃癌口腔癌鼻癌咽喉癌扁平上皮癌基底細胞癌腺癌汗腺癌脂腺癌乳頭癌乳頭腺癌嚢胞腺癌髄様癌気管支原性癌腎細胞癌肝癌胆管癌絨毛癌セミノーマ胎児性癌ウィルムス腫瘍子宮頚部癌子宮癌精巣癌肺小細胞癌膀胱癌肺癌上皮癌神経膠腫多形性神経膠芽細胞腫星細胞腫髄芽腫頭蓋咽頭腫脳室上衣細胞腫松果体腫血管芽腫聴神経腫希突起神経膠腫髄膜腫皮膚癌黒色腫神経芽腫網膜芽腫以下を含む血液の癌。ただしこれらに限定されない:急性リンパ芽球性白血病ALLB細胞性急性リンパ芽球性白血病T細胞性急性リンパ芽球性白血病急性骨髄芽球性白血病AML急性前骨髄球性白血病APL急性単芽球性白血病急性赤白血病急性巨核芽球性白血病急性骨髄単球性白血病急性非リンパ性白血病急性未分化白血病慢性骨髄性白血病CML慢性リンパ性白血病CLLヘアリー細胞白血病多発性骨髄腫急性白血病および慢性白血病:リンパ芽球性骨髄性myelogenousリンパ性骨髄性myelocytic白血病リンパ腫:ホジキン病非ホジキンリンパ腫多発性骨髄腫ワルデンストロームマクログロブリン血症重鎖病真性多血症。例示的結合体は結合体化-特異的腫瘍または癌標的化を提供し、かくして、これらの化合物の一般的毒性を低下させる。リンカーユニットは血液中の例示的結合体を安定化させ、なお、細胞内で腫瘍-特異的プロテアーゼによって切断することができ、薬物を遊離する。4.8.2癌についての多様式療法限定されるものではないが、腫瘍、転移、または制御されない細胞増殖によって特徴付けられる他の病気または疾患を含めた癌は、例示的結合体および/または例示的化合物の投与によって治療し、または予防することができる。他の実施形態において、癌を治療または予防する方法が提供され、それは有効量の例示的結合体および化学治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む。1つの実施形態において、化学治療剤は、それに関して癌の治療が難治性であることが判明していないものである。もう1つの実施形態において、化学治療剤が、それに関して癌の治療が難治性であることが判明しているものである。例示的結合体は、癌に対しての治療として外科的処置も受けた患者に投与することができる。1つの実施形態において、治療のさらなる方法は放射線療法である。特別な実施形態において、例示的結合体は、化学治療剤と共に、または放射線療法と共に投与される。もう1つの特別な実施形態において、化学治療剤または放射線療法は例示的結合体の投与に先立って、またはそれに引き続いて投与され、1つの態様において、少なくとも1時間、5時間、12時間、1日、1週間、1ヶ月先立ってまたは引き続いて、さらなる態様において、例示的結合体の投与に数ヶ月例えば、3ヶ月まで先立ってまたは引き続いて投与される。化学療法剤は一連の期間にわたって投与することができる。表4にリストされた化学治療剤のいずれか1つまたは組合せを投与することができる。放射線に関しては、いずれかの放射線療法プロトコルを、治療するべき癌のタイプに応じて用いることができる。例えば、限定されるものではないが、X-線放射線を投与することができ;特に、高エネルギーメガボルトその1MeVエネルギーを超える放射線を深い腫瘍で用いることができ、電子線および正中電圧x-線放射線を皮膚癌で用いることができる。ラジウム、コバルトおよび他の元素の放射性同位体のようなガンマ-線を発する放射性同位体も投与することができる。加えて、例示的化合物および/または例示的結合体での癌の治療方法が、化学療法または放射線療法があまりにも毒性であることが判明し、または判明する可能性がある場合、例えば、治療すべき対象にとって許容できないまたは我慢できない副作用をもたらす場合、化学療法または放射線療法の代替法として提供される。治療すべき動物は、所望により、いずれの治療が許容できまたは我慢できるかが判明するのに従い、外科的処置、放射線療法または化学療法のようなもう1つの癌治療で治療することもできる。例示的化合物および/または例示的結合体もまた、限定されるものではないが、白血病およびリンパ腫を含めたある種の癌の治療のためのように、インビトロまたはエクスビボ様式で用いることもでき、そのような治療はオートゴラス幹細胞移植を含む。これは、動物のオートゴラス造血幹細胞が収穫され、全ての癌細胞をパージし、次いで、伴う高容量放射線療法と共に、またはそれなくして、高容量の例示的化合物および/または例示的結合体の投与を介して動物の残りの骨髄細胞集団を根絶し、幹細胞グラフトを動物に逆注入する多工程プロセスを含むことができる。次いで、骨髄の機能が回復し、動物が回復する間、サポートするケアを供する。4.8.3癌についての多薬物療法有効量の例示的結合体および抗癌剤であるもう1つの治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む癌を治療する方法が開示される。適当な抗癌剤は、限定されるものではないが、メトトレキセード、タキソール、L-アスパラギナーゼ、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシ尿素、シタラビン、シクロホスファミド、イフォスファミド、ニトロソ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、デカルバジン、プロカルリジン、トポテカン、ナイトロジェンマスタード、サイトヒサン、エトポシド、5-フルオロウラシル、BCNU、イリノテカン、カンプトテシン、ブレオマイシン、ドキソルミシン、イラルミシン、ダウノルミシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、マイトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む。1つの態様において、抗癌剤は、限定されるものではないが、表4にリストされた薬物を含む。表44.8.4自己免疫疾患の治療例示的結合体は、自己免疫疾患を生じる細胞を殺し、またはその複製を阻害するのに、または自己免疫疾患を治療するのに有用である。例示的結合体は、それに従って、患者において自己免疫疾患の治療のために種々の設定で用いることができる。薬物-リンカー-リガンド結合体を用いて、薬物を標的細胞に送達することができる。理論に拘束されるつもりはないが、1つの実施形態において、薬物-リガンド結合体は標的細胞の表面の抗原に会合し、レセプター-媒介エンドサイトーシスを通じて例示的結合体は標的-細胞内に摂取される。一旦細胞内に入れば、リンカーユニット内の1以上の特異的ペプチド配列は酵素的にまたは加水分解的に切断され、その結果、薬物は放出される。次いで、放出された薬物は自由にサイトゾル中を移動し、細胞傷害性または細胞静止活性を誘導する。別の実施形態において、薬物は標的細胞の外側で例示的結合体から切断され、薬物は引き続いて細胞に進入する。1つの実施形態において、リガンドユニットは自己免疫抗原に結合する。1つの態様において、抗原は、自己免疫疾患に関与する細胞の表面にある。もう1つの実施形態において、リガンドユニットは、細胞の表面にある自己免疫抗原に結合する。1つの実施形態において、リガンドは、自己免疫疾患状態に関係する活性化された活性化されたリンパ球に結合する。さらなる実施形態において、例示的結合体は、特定の自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を生じる細胞を殺し、または該細胞の増殖を阻害する。例示的結合体で治療できる自己免疫疾患のタイプは限定されるものではないが、Th2リンパ球関連疾患例えば、アトピー性皮膚炎、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身硬化症、および移植片vs宿主病;Th1リンパ球-関連疾患例えば、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、ハシモト甲状腺炎、グラベ病、原発性胆汁性肝硬変、ヴェゲナー肉芽腫症、および結核;活性化されたBリンパ球―関連疾患例えば、全身エリテマトーテス、グッドパスツール症候群、慢性関節リウマチ、およびI型糖尿病;および表5に介されたものを含む。表5慢性活動性肝炎アジソン病アレルギー性胞隔炎アレルギー反応アレルギー性鼻炎アルポート症候群アナフィラキシー強直性脊椎炎抗リン脂質抗体症候群関節炎回虫症アスペルギルス症アトピー性アレルギーアトピー性皮膚炎アトピー性鼻炎ベーチェット病愛鳥家肺気管支喘息カプラン症候群心筋症セリアック病シャーガス病慢性糸球体腎炎コーガン症候群寒冷凝集素症先天性風疹感染クレスト症候群クローン病クリオグロブリン血症クッシング症候群皮膚筋炎円板状ループスドレスラー症候群イートンランバート症候群エコーウイルス感染脳脊髄炎内分泌性眼症エプスタインバーウイルス感染ウマ慢性肺気腫エリテマトーデスエヴァンズ症候群フェルティ症候群線維筋痛フックス毛様体炎胃萎縮消化器アレルギー巨細胞性動脈炎糸球体腎炎グッドパスチャー症候群移植片対宿主病グレーブス病ギランバレー症橋本病溶血性貧血ヘノッホシェーンライン紫斑病特発性副腎萎縮特発性肺線維症IgA腎症炎症性腸疾患インスリン依存性糖尿病若年性関節炎若年性糖尿病1型ランバートイートン症候群蹄葉炎扁平苔癬ルポイド肝炎ループス狼瘡リンパ球減少症メニエール病混合性結合組織病多発性硬化症重症筋無力症悪性貧血多腺性症候群初老期認知症原発性無ガンマグロブリン血症原発性胆汁性肝硬変乾癬乾癬性関節炎レイノー現象反復流産ライター症候群リウマチ熱関節リウマチサンプター症候群住血吸虫症シュミット症候群強皮症シャルマン症候群シェーグレン症候群全身強直症候群交感性眼炎全身性エリテマトーデス高安動脈炎側頭動脈炎甲状腺炎血小板減少症甲状腺中毒症中毒性表皮壊死融解症インスリン抵抗性B型1型糖尿病潰瘍性大腸炎ブドウ膜炎尋常性白斑ワルデンストロームマクログロブリン血症ヴェゲナー肉芽腫症。4.8.5自己免疫疾患の多薬物療法有効量の例示的結合体および自己免疫疾患の治療で知られたもう1つの治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む自己免疫疾患を治療する方法も開示される。1つの実施形態において、抗-自己免疫疾患剤は、限定されるものではないが、表6にリストされた剤を含む。表6サイクロスポリンサイクロスポリンAニコフェニレートモフェティルシロリムスタクロリムスエナメルセプトプレドニゾンアザチオプリンメトトレキセートシクロホスファミドプレドニゾンアミノカプロン酸クロロキンヒドロキシクロロキンヒドロクロチゾンデキサメタゾンクロラムブシルDHEAダナゾールブロモシリプチンメレキシカムインフリキシバム。4.8.6感染症の治療例示的結合体は感染症を生じる細胞を殺傷し、または該細胞の増殖を阻害するのに、または感染症を治療するのに有用である。例示的結合体は、それに従い、患者において感染症の治療のために種々の設定で用いることができる。薬物-リンカー-リガンド結合体は、薬物を標的細胞に送達するのに用いることができる。1つの実施形態において、リガンドユニットは感染症の細胞に結合する。1つの実施形態において、結合体は特定の感染症を生じる細胞を殺し、またはその増殖を阻害する。例示的結合体で治療することができる感染症の特定のタイプは、限定されるものではないが、表7で開示されたものを含む。表7細菌性疾患:ジフテリア百日咳潜在性菌血症尿路感染胃腸炎蜂巣炎喉頭蓋炎気管炎アデノイド肥大咽後膿瘍膿痂疹膿瘡肺炎心内膜炎化膿性関節炎肺炎球菌腹膜炎菌血症髄膜炎急性化膿性髄膜炎尿道炎子宮頚管炎直腸炎咽頭炎卵管炎精巣上体炎淋疾梅毒リステリア症炭疽ノカルジア症サルモネラ腸チフス熱赤痢結膜炎副鼻腔炎ブルセラ症野兎病コレラ腺ペスト破傷風壊死性小腸炎放線菌症嫌気性混合感染梅毒回帰熱レプトスピラ症ライム病鼡咬熱結核リンパ節炎ハンセン病クラミジアクラミジア肺炎トラコーマ封入体結膜炎全身性真菌疾患:ヒストプラスマ症コクシジオイド症ブラストミセス症スポロトリコーシスクリプトコッカス症全身性カンジダ症アスペルギルス症ムコール症足菌腫クロモミコーシスリケッチア症:チフスロッキー山紅斑熱エールリッヒア症東半球ダニ媒介性リケッチア症リケッチア痘症Q熱バルトネラ症寄生虫症:マラリアバベシア症アフリカ睡眠病シャーガス病リーシュマニア症ダムダム熱トキソプラズマ症髄膜脳炎角膜炎赤痢アメーバ症ジアルジア症クリプトスポリジウム症イソスポーラ症シクロスポリン症微胞子虫症回虫症鞭虫感染鉤虫感染蟯虫感染眼球幼虫移行症旋毛虫症糸状虫症リンパ性糸状虫症ロア糸状虫症河川盲目症イヌ糸状虫感染住血吸虫症水泳者そう痒ウェステルマン肺吸虫肝臓寄生吸虫肝蛭症肥大吸虫症タイ肝吸虫症条虫感染包虫症多包虫症ウイルス疾患:麻疹亜急性硬化性全脳炎感冒ムンプス風疹ばら疹第五病水痘RS呼吸器合胞体ウイルス感染クループ細気管支炎伝染性単核症灰白髄炎ヘルパンギーナ手足口病ボルンホルム病陰部ヘルペス性器疣贅無菌性髄膜炎心筋炎心膜炎胃腸炎後天性免疫不全症候群AIDSヒト免疫不全ウイルスHIVライ症候群川崎症候群インフルエンザ気管支炎ウイルス性マイコプラズマ肺炎急性熱性呼吸器疾患急性咽頭結膜熱流行性角結膜炎単純ヘルペスウイルス1型HSV-1単純ヘルペスウイルス2型HSV-2帯状疱疹巨細胞封入体病狂犬病進行性多巣性白質脳症クールー病致死性家族性不眠症クロイルフェルトヤコブ病ゲルストマンストロイスラーシャインカー病熱帯性痙攣性不全対麻痺西部ウマ脳炎カリフォルニア脳炎セントルイス脳炎黄熱デング熱リンパ性脈絡髄膜炎ラッサ熱出血熱ハンタウイルス性肺症候群マールブルグウイルス感染エボラウイルス感染痘瘡。4.8.7感染症の多薬物療法例示的結合体、および抗感染症剤であるもう1つの治療剤をそれを必要とする患者に投与することを含む感染症を治療する方法が開示される。1つの実施形態において、抗―感染症剤は、限定されるものではないが、表8にリストされた剤である。表8β-ラクタム抗生物質:ペニシリンGペニシリンVクロキサシリンリクロキサシリンメチシリンナフシリンオキサシリンアムピシリンアモキシシリンバカムピシリンアズロシリンカルベニシリンメズロシリンピペラシリンチカルシリンアミノグリコシド:アミカシンゲンカマイシンカナマイシンネオマイシンネチルミシンストレプトマイシントブラマイシンマクロライド:アジスロマイシンクラリスロマイシンエリスロマイシンリンコマイシンクリンダマイシンテトラサイクリン:デメクロサイクリンドキシサイクリンミノサイクリンオキシテトラサイクリンテトラサイクリンキノロン:シノキサシンナリジキシン酸フルオロキノロン:シプロフロキサシンエノキサシングレパフロキサシンレボフロキサシンロメフロキサシンノルフロキサシンオフロキサシンスパルフロキサシントロバフロキサシンポリペプチド:バシドラシンコリスチンポリミキシンBスルホンアミド:スルフイソオキサゾールスルファメトキサゾールスルファジアジンスルファメチゾールスルフアセタミド雑多な抗菌剤:トリメトプリムスルファメタゾールクロラムフェニコールバンコマイシンメトロニダゾールキヌプリスチンダルフォプリスチンリファムピンスペクチノマイシンニトロフラントイン抗ウイルス剤:一般的抗ウイルス剤:イドキスラジンビダラビントリフルリジンアシクリビールファムシシクロビールペンシシクロビールバラシクロビールガンシシクロビールフォスカルメットリバビリンアマンタジンリマンタジンシドフォビールアンチセンスオリゴヌクレオチド免疫グロブリンインターフェロンHIV感染のための薬剤:テノフォビールエムトリシタビンジドブジンジダノシンザルシタビンスタブジンラミブジンネビラビンレラビルジンサキナビールリトナビールインディナビールネルフィナビール。5.実施例実施例1-化合物ABの調製Fmoc-val-cit-PAB-OH14.61g、24.3ミリモル、1.0当量、Firestoneetal.に対する米国特許第6214345号をDMF120mL、0.2Mで希釈し、この溶液にジエチルアミン60mLを加えた。反応をHPLCによってモニターし、2時間以内に完了することが見出された。反応混合物を濃縮し、音波処理下で、酢酸エチル約100mLを用いて得られた残渣を十分間にわたって沈殿させた。エーテル200mLを加え、沈殿をさらに5分間音波処理した。溶液を30分間撹拌することなく放置し、次いで、濾過し、高真空下で乾燥して、Val-cit-PAB-OHが得られ、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。収率:8.84g96。Val-cit-PAB-OH8.0g、21ミリモルをDMF110mLで希釈し、得られた溶液をMC-OSuWillneretal.、1993BioconjugateCChem.4:521;6.5g、21ミリモル、1.0当量で処理した。HPLCによると、反応は2時間後に完了した。反応混合物を濃縮し、得られた油を酢酸エチル50mLを用いて沈殿させた。15分間音波処理した後、エーテル400mLを加え、全ての大きな粒子が破壊されるまで混合物をさらに音波処理した。次いで、溶液を濾過し、固体を乾燥して、全ての灰色がかった白色固体中間体を得た。収率:11.63g96;ES-MSm/z757.9[M-H]。Fmoc-val-cit-PAB-OH14.61g、24.3ミリモル、1.0当量、Firestoneetal.に対する米国特許第6214345号をDMF120mL、0.2Mで希釈し、この溶液にジエチルアミン60mLを加えた。反応をHPLCによってモニターし、2時間以内で完了することが判明した。反応混合物を濃縮し、音波処理下で、酢酸エチル約100mLを用いて得られた残渣を10分間にわたって沈殿させた。エーテル200mLを加え、沈殿をさらに5分間音波処理した。溶液を撹拌することなく30分間放置し、次いで、濾過し、高真空下で乾燥して、Val-cit-PAB-OHが得られ、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。収率:8.84g96。Val-cit-PAB-OH8.0g、21ミリモルをDMF110mLで希釈し、得られた溶液をMC-OSuWillneretal.、1993BioconjugateChem.4:521;6.5g、21ミリモル、1.0当量で処理した。反応はHPLCによると2時間後に完了した。反応混合物を濃縮し、得られた油を酢酸エチル50mLを用いて沈殿させた。15分間の音波処理の後、エーテル400mLを加え、全ての大きな粒子が破壊されるまで混合物をさらに音波処理した。次いで、溶液を濾過し、固体を乾燥して、灰色がかった白色固体中間体を得た。収率:11.63g96;ES-MSm/z757.9[M-H]。灰色がかった白色固体中間体8.0g、14.0ミリモルをDMF120mL、0.12Mで希釈し、得られた溶液にビス4-ニトロフェニルカルボネート8.5g、28.0ミリモル、2.0当量およびDIEA3.66mL、21.0ミリモル、1.5当量を加えた。反応はHPLCによると1時間以内に完了した。反応混合物を濃縮して油が得られ、これをEtOAcで沈殿させ、次いで、EtOAc約25mLでトリチュレートした。溶質をさらにエーテル約200mLで沈殿させ、15分間でトリチュレートした。固体を濾過し、高真空下で乾燥して、化合物ABが得られ、これはHPLCによると93の純度であり、これをさらに精製することなく次の工程で用いた。収率:9.7g94。実施例2-化合物1の調製フェニルアラニンt-ブチルエステルHCl塩868mg、3ミリモル、N-Boc-ドラプロイン668mg、1当量、DEPC820μL、1.5当量、およびDIEA1.2mLをジクロロメタン3mLで希釈した。室温約28度摂氏にて二時間の後、反応混合物をジクロロメタン20mLで希釈し、順次、飽和水性AQ、NaHCO32×10mL、飽和aq.NaCl2×10mLで洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに再度懸濁させ、酢酸エチルへのフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、白色固体としてジペプチドを得た:684mg46。ES-MSm/z491.3[MH]t-ブチルエステルの存在下における選択的Boc切断では、前記ジペプチド500mg、1.28ミリモルをジオキサン2mLで希釈した。4MHCl/ジオキサン960μL、3当量を加え、反応混合物を室温にて一晩撹拌した。ほとんど完了したBoc脱保護は、最少量のt-ブチルエステル切断にてRP-HPLCによって観察された。混合物を氷浴で乾燥し、トリエチルアミン500μLを加えた。10分後、混合物を冷却浴から除去し、ジクロロメタン20mLで希釈し、順次、飽和aq.NaHCO32×10mL、飽和aq.NaCl2×10mLで洗浄した。有機層を濃縮して、黄色フォームを得た:287mg57。中間体をさらに精製することなく用いた。PentapeptideCompoundsandUsesRelatedTheretoなる発明の名称のWO02/088172に記載されたように調製された;0.73ミリモルトリペプチドFmoc-Meval-val-dil-O-t-Buを室温にてTFA3mL、ジクロロメタン3mLで二時間処理した。混合物を濃縮乾固し、残渣をトルエン3×20mLで共蒸発させ、真空中で一晩乾燥した。残渣をジクロロメタン5mLで希釈し、脱保護されたジペプチド287mg、0.73ミリモル、続いてDIEA550μL、4当量、DEPC201μL、1.1当量に加えた。室温で2時間後、反応混合物を酢酸エチル50mLで希釈し、順次、10aq.クエン酸2×20mL、飽和aq.NaHCO32×10mL、飽和aq.NaCl10mLで洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに再度懸濁させ、酢酸エチルにてフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、Fmoc-Meval-val-dil-dap-phe-O-t-Buを白色固体として得た:533mg71。Rf0.4EtOAc。ES-MSm/z1010.6[MH]生成物200mg、0.2ミリモルをジクロロメタン3mL、ジエチルアミン1mLで希釈した。反応混合物を室温にて一晩撹拌した。溶媒を除去して油が得られ、これをジクロロメタン中の段階的グラジエント0~10MeOHへのフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、化合物1を白色固体として得た:137mg87。Rf0.310MeOH/CH2Cl2。ES-MSm/z788.6[MH]実施例3-化合物2の調製化合物2は、室温での7時間における4MHCl/ジオキサン4mLでの処理によって化合物130mg、0.038ミリモルから調製した。溶媒を除去し、残渣を真空中で一晩乾燥して、化合物2を吸湿性白色固体として得た:35mgHCl塩として計算して120。ES-MSm/z732.56[MH]実施例4-化合物3の調製Fmoc-Meval-val-dil-dap-phe-O-t-Bu実施例2、50mgを4MHCl/ジオキサン4mLで室温にて16時間処理した。溶媒を除去し、残渣を真空中で一晩乾燥して、50mgの吸湿性白色固体中間体を得た。白色固体中間体20mg、0.02ミリモル、1.5当量をジクロロメタン1mLで希釈し;DEPC5μL、0.03ミリモル、1.5当量を加え、続いて、DIEA11μL、0.06ミリモル、3当量、およびt-ブチルアミン3.2μL、0.03ミリモル、1.5当量を加えた。室温での2時間後、反応はRP-HPLCによると不完全であることが判明した。より多くのDEPC10μLおよびt-ブチルアミン5μLを加え、反応をさらに4時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン15mLで希釈し、順次、水5mL、0.1Maq.HCl10mL、飽和aq.NaCl10mLで洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンで希釈し、ジクロロメタン中の段階的グラジエント0~5MeOHでのフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、Fmoc保護中間体を白色固体として得られた。7.3mg36Rf0.7510MeOH/CH2Cl2。Fmoc保護中間体をジクロロメタン0.5mLで希釈し、ジエチルアミン0.5mLで室温にて3時間処理した。反応混合物を濃縮乾固した。生成物を、ジクロロメタン中の段階的グラジエント0~10MeOHでのフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって単離して、化合物3を白色固体として得た:4mg70。Rf0.210MeOH/CH2Cl2。ES-MSm/z787[MH]、809[MNa]。実施例5-化合物4の調製Boc-L-フェニルアラニン265mg、1ミリモル、1当量およびトリエチレングリコールモノメチルエーテル164μL、1ミリモル、1当量をジクロロメタン5mLで希釈した。次いで、DCC412mg、2ミリモル、2当量を加え、続いて、DMAP10mgを加えた。反応混合物を室温にて一晩撹拌した。沈殿を濾過した。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルで希釈し、酢酸エチルでのシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物を含有する画分を引き出し、濃縮し、真空中で乾燥して、白色固体を得た:377mg91。Rf0.5EtOAcES-MSm/z434[MNa]Boc保護基の除去は、4MHCl/ジオキサン6mLを含むジオキサン10mLでの前記物質の室温での六時間の処理によって行った。溶媒を真空中で除去し、残渣を真空中で乾燥して、白色固体を得た。フェニルアラミン-トリエチレングリコールモノメチルエーテルエステルのHCl塩236mg、0.458ミリモル、1当量およびN-Boc-ドラプロイン158mg、0.55ミリモル、1.2当量をジクロロメタン3mLで希釈した。DEPC125μL、1.5当量を混合物に加え、続いて、DIEA250μL、3当量を加えた。室温での2時間後、反応混合物を酢酸エチル30mLで希釈し、順次、飽和aq.NaHCO32×10mL、10aq.クエン酸2×10mL、飽和aq.NaCl10mLで洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに再度懸濁させ、酢酸エチルでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、白色フォーム中間体を得た:131mg50。Rf0.25EtOAc。ES-MSm/z581.3[MH]。Boc脱保護はジクロロメタン2mL、TFA0.5mL中で室温にて2時間行った。溶媒を真空中で除去し、残渣をトルエン3×25mLで共蒸発させ、次いで、真空中で乾燥させ、138mgのジペプチドTFA塩を得た。Fmoc-Meval-val-dil-OH実施例2、147mg、0.23ミリモル、1当量、およびジペプチドTFA塩138mgをジクロロメタン2mLで希釈した。混合物にDEPC63μL、1.5当量を加え、続いて、DIEA160μL、4当量を加えた。室温での2時間後に、反応混合物をジクロロメタン30mLで希釈し、順次、10aq.クエン酸2×20mL、飽和aq.NaCl20mLで洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンに再度懸濁し、ジクロロメタン中の段階的グラジエント0~5MeOHでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、白色フォームを得た:205mg81。Rf0.410MeOH/CH2Cl2。ES-MSm/z1100.6[MH]、1122.4[MNa]。Fmoc保護基をジクロロメタン6mL中のジエチルアミン2mLでの処理によって除去した。室温での6時間の後、溶媒での真空を除去し、ジクロロメタン中の段階的グラジエント0~10MeOHでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって生成物を単離した。関連画分を合わせ、濃縮した。ジクロロメタン/ヘキサン1:1からの蒸発の後、化合物4を白色フォームとして得た:133mg80。Rf0.1510MeOH/CH2Cl2。ES-MSm/z878.6[MH]。実施例6-化合物5の調製Fmoc-Meval-val-dil-OH実施例2、0.50g、0.78ミリモルおよびdap-phe-OMeHCl0.3g、0.78ミリモル、Pettit、G.R.、etal.Anti-CancerDrugDesign1998、13、243-277に従って調製をCH2Cl210mLに溶解させ、続いて、ジイソプロピルエチルアミン0.30mL、1.71ミリモル、2.2当量を加えた。DEPC0.20mL、1.17、1.5当量を加え、内容物をAr上で放置した。反応はHPLCによると1時間以内に完了した。混合物を濃縮して油とし、100EtOAcで溶出するSiO2クロマトグラフィー300×25mmからのによって精製した。生成物を白色フォーム状固体として単離した。収率:0.65g87。ES-MSm/z968.35[MH]、991.34[MNa];UVλmax215、265nm。塩化メチレン5mL中のFmoc-保護ペプチド0.14g、0.14ミリモルをジエチルアミン2mLで処理し、内容物を室温にて2時間放置した。HPLCによると完了した反応を濃縮して油とし、2mLのDMSO中に取り、分取用HPLCC12-RPカラム、5μ、100Å、0.1TFAを含有する水中のMeCNの直線グラジエント、40分での10~100、続いて、100での20分間、25mL/分の流速に注入した。生成物を含有する画分を蒸発させ、トリフルオロアセテート塩についての白色粉末を得た。収率:0.126g98。Rf0.28100EtOAc;ES-MSm/z746.59[MH]、768.51[MNa];UVλmax215nm。実施例7-化合物6の調製化合物5のトリフルオロアセテート塩0.11g、0.13ミリモル、化合物AB0.103g、0.14ミリモル、1.1当量およびHOBt3.4mg、26μモル、0.2当量をDMF/ピリジン各々、2mL/0.5mLに懸濁させた。ジイソプロピルエチルアミン22.5μL、0.13ミリモル、1.0当量を加え、黄色溶液をアルゴン下で撹拌した。3時間後、さらに1.0当量のDIEAを加えた。24時間後、0.5当量の活性化されたリンカーを反応混合物に含めた。合計40時間後、反応を完了した。内容物を蒸発させ、DMSO中に取り、分取用HPLCC12-RPカラム、5μ、100Å、0.1TFAを含有する水中のMeCNの直線グラジエント、40分の10~100、続いて、100における20分、50mL/分の流速に注入した。所望の画分を蒸発させて、生成物を黄色油として得た。塩化メチレン約2mLおよび過剰のエーテルを加えて、化合物6を白色沈殿として得られ、これを濾過し、乾燥した。収率:90mg52。ES-MSm/z1344.32[MH]、1366.29[MNa];UVλmax215、248nm。実施例8-化合物7の調製化合物4133mg、0.15ミリモル、1当量、化合物AB123mg、0.167ミリモル、1.1当量、およびHOBt4mg、0.2当量をDMF1.5mLで希釈した。2分後、ピリジン5mLを加え、反応をRP-HPLCを用いてモニターした。反応は18時間以内に完了したことが示された。反応混合物をジクロロメタン20mLで希釈し、順次、10aq.クエン酸2×10mL、水10mL、飽和aq.NaCl10mLで洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンに再度懸濁させ、ジクロロメタン中の段階的グラジエント0~10MeOHでのシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。関連画分を合わせ、濃縮して、化合物7を白色フォームとして得た:46mg21。Rf0.1510MeOH/CH2Cl2。ES-MSm/z1476.94[MH]。実施例9-MC-Val-Cit-PAB-MMAFt-ブチルエステル8の調製化合物183mg、0.11ミリモル、化合物AB85mg、0.12ミリモル、1.1当量、およびHOBt2.8mg、21μモル、0.2当量を乾燥DMF1.5mLおよびピリジン0.3mL中にアルゴン下で取った。30時間後、HPLCによると反応は実質的に完了したことが判明した。混合物を蒸発させ、最少量のDMSO中に取り、分取用HPLCC12-RPカラム、5μ、100Å、0.1TFAを含有する水中のMeCNの直線グラジエント、40分の10~100、続いて、100における20分、25mL/分の流速によって精製して、化合物8を白色固体として得た。収率:103mg71。ES-MSm/z1387.06[MH]、1409.04[MNa];UVλmax205、248nm。実施例10-MC-val-cit-PAB-MMAF9の調製化合物845mg、32μモルを塩化メチレン6mLに懸濁させ、続いて、TFA3mLに加えた。得られた溶液を2時間放置した。反応混合物を真空中で濃縮し、分取用HPLCC12-RPカラム、5μ、100Å、0.1TFAを含有する水中のMeCNの直線グラジエント、40分の10~100、続いて、100における20分、25mL/分の流速によって精製した。所望の画分を濃縮して、マレイミドカプロイド-バリン-シトルリン-p-ヒドロキシメチルアミノベンゼン-MMAFMC-val-cit-PAB-MMAF9を灰色がかった白色固体として得た。収率:11mg25。ES-MSm/z1330.29[MH]、1352.24[MNa];UVλmax205、248nm。実施例11-MC-val-cit-PAB-MMAFtert-ブチルアミド10の調製化合物3217mg、0.276ミリモル、1.0当量、化合物AB204mg、0.276ミリモル、1.0当量、およびHOBt11mg、0.0828ミリモル、0.3当量をピリジン/DMF6mLで希釈した。この混合物にDIEA0.048mLを加え、混合物を約16時間撹拌した。揮発性有機物を真空中で蒸発させた。粗残渣を段階的グラジエントDCM中の0~5~10メタノールでのChromatotron登録商標放射状薄層クロマトグラフィーによって精製して、MC-val-cit-PAB-MMAFtert-ブチルアミド10を得た。収率:172mg45;ES-MSm/z1386.33[MH]、1408.36[MNa];UVλmax215、248nm。実施例12-AC10およびMC-MMAEの結合体化によるAC10-MC-MMAEの調製pH8.0の500mMホウ酸ナトリウムおよび500mM塩化ナトリウムに溶解させたAC10を過剰の100mMジチオスレイトールDTTで処理する。37°Cにおける30分間のインキュベーションの後、SephadexG25樹脂での溶出によって緩衝液を交換し、1mMDTPAを含むPBSで溶出させた。溶液の280nmにおける急高度からの還元された抗体濃度、およびDTNBAldrich、Milwaukee、WIとの反応によるチオール濃度を測定し、次いで、412nmにおける吸光度を測定することによってチオール/Ab値をチェックする。PBSに溶解させた還元抗体を氷上で冷却する。DMSOに溶解させた薬物リンカー試薬、マレイミドカプロイド-モノメチルオーリスタチンE、すなわち、MC-MMAEをアセトニトリルおよび水に既知の濃度で希釈し、PBS中の冷却された還元抗体AC10に加える。約1時間後、過剰のマレイミドを加えて、反応をクエンチし、いずれの未反応抗体チオール基もキャップする。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、AC10-MC-MMAEを精製し、PBS中のG25樹脂を通す溶出によって脱塩し、滅菌条件下で0.2μMフィルターを解して濾過し、貯蔵のために凍結する。実施例13-AC10およびMC-MMAFの結合体化によるAC10-MC-MMAFの調製実施例12の手法に従い、AC10およびMC-MMAFの結合体化によってAC10-MC-MMAFを調製した。実施例14-AC10およびMC-val-cit-PAB-MMAEの結合体化によるAC10-MC-val-cit-PAB-MMAEの調製実施例12の手法に従って、AC10およびMC-val-cit-PAB-MMAEの結合体化によって、AC10-MC-val-cit-PAB-MMAEを調製した。実施例15-AC10およびMC-val-cit-PAB-MMAF9の結合体化によるAC10-MC-val-cit-PAB-MMAFの調製実施例12の手法に従い、AC10およびMC-val-cit-PAB-MMAF9の結合体化によってAC10-MC-val-cit-PAB-MMAFを調製した。実施例16-選択された化合物の細胞傷害性の測定MMAFおよび化合物1~5の細胞傷害性活性をLewisY陽性細胞系OVCAR-3について評価し、H3396乳房含羞、L2987肺含羞およびLS174t結腸含羞LewisY陽性細胞系を細胞傷害性につきアッセイすることができる。化合物1~5の細胞傷害性を評価するために、細胞を150μLの培養基中にウェル当たりほぼ5~10、000で接種することができ、次いで、アッセイの最初に四連にて段階的用量の化合物1~5で処理した。細胞傷害性アッセイはテスト化合物の付加後通常96時間行う。50μLのレサズリン色素をインキュベーションの最後の4~6時間の間に各ウェルに加えて、培養の最後に目に見える細胞を評価することができる。色素の還元は、各々、535nmおよび590nmの励起および発光波長を用いて蛍光分光分析によって測定した。分析では、処理された細胞によるレザズリン還元の程度を未処理対照細胞のそれと比較することができる。1時間の曝露アッセイの間、細胞に1時間薬物をパルスし、次いで、洗浄することができる;細胞傷害性効果は96時間のインキュベーション後に測定することができる。実施例17-選択された化合物についてのインビトロ傷害性データ図10は、CD30細胞系Karpas299についての一般的手法Iに記載されたようにアッセイした化合物7~10のcAC10結合体の細胞傷害性効果を示す。2つの別々の実験のデータを示す。化合物7および9のcAC10結合体はcAC10-val-cit-MMAEよりもわずかに活性であることが判明した。表10他の実験において、BR96-val-cit-MMAFは遊離MMAFよりも少なくとも250倍優れていた。一般的手法I-細胞傷害性の測定。例示的結合体7~10の細胞傷害性を評価するために、150μLの培養基中にウェル当たりほぼ5~10,000にて細胞を摂取し、次いで、アッセイの最初に四連にて段階的用量の例示的結合体7~10で処理した。細胞傷害性アッセイは、テスト化合物の添加後96時間行った。インキュベーションの最後の4~6時間の間に、50μLのレサズリン色素を各ウェルに加え、培養の最後に目に見える細胞を評価した。色素の還元は、各々、535nmおよび590nmの励起及び発光波長を用いる蛍光分光測定によって測定した。分析では、処理した細胞によるレサズリン還元の程度を未処理対照細胞のそれと比較した。実施例18-インビトロ細胞増殖アッセイADCの効率は、以下のプロトコルを使用する細胞増殖アッセイによって測定することができるPromegaCorp.TechnicalBulletinTB288;Mendozaetal.2002CancerRes.62:5485-5488:1.培地中に約104細胞SKBR-3、BT474、MCF7またはMDA-MB-468を含有する100μLの細胞培養のアリコットを96-ウェルの不透明な壁のプレートの各ウェルに沈積させた。2.対照細胞を培地を含有させ、かつ細胞無くして調製した。3.ADCを実験ウェルに加え、3~5日間インキュベートした。4.プレートをほぼ30分間で室温に平衡化させた。5.各ウェルに存在する細胞培養基の容量にCellTiter-Glo試薬の容量を加えた。6.内容物をオービタルシェーカーで2分間混合して、細胞の溶解を誘導した。7.プレートを室温にて10分間インキュベートして、ルミネセンスシグナルを安定化させた。8.ルミネセンスを記録し、RLU=相対的ルミネセンス単位としてグラフに報告する。実施例19-ラットにおける血漿クリアランス抗体薬物結合体および全抗体の血漿クリアランス薬物動態学をSprague-DawleyラットCharlesRiverLaboratories,各々、250-275グラムで調べた。動物にボーラス尾静脈注射IVPushによって投与した。ほぼ300μLの全血を頸静脈を介して、または尾に刺して各時点:投与後0プレ用量、10および30分;1、2、4、8、24および36時間;および2、3、4、7、14、21、28日においてリチウム/ヘパリン抗凝固剤容器に収集した。全抗体はELISA-ECD/GxhuFc-HRPによって測定した。抗体薬物結合体はELISA-MMAE/MMAF/ECD-Bio/SA-HRPによって測定した。実施例20-サルにおける血漿クリアランスラン抗体薬物結合体及び全抗体の血漿クリアランス薬物動態学はマカクザルで実験することができる。図12は、日1および日21に投与された、異なる用量:0.5、1.5、2.5および3.5mg/kgにおけるマカクザルへのH-MC-vc-MMAEの投与後における2-段階血漿濃度クリアランスを示す。全抗体およびADCの濃度は経時的に測定したcitH=トラスツズマブ。実施例21―トランスジェニック外植体マウスにおける腫瘍容量インビボ効率トランスジェニック実験に適した動物はTaconicGermantown,N.Y.のような標準的な商業的源から得ることができる。多くの株が適当であるが,腫瘍形成に対するそれらのより高い罹患性のためFVB雌マウスが好ましい。接合ではFVB雄を用いることができ、精管切除CD.1ウマを用いて偽妊娠を刺激した。精管切除マウスはいずれかの商業的供給業者から得ることができる。創始体をFVBマウスまたは129/BL6×FVBp53ヘテロ接合性マウスいずれかで育種することができる。p53対立遺伝子においてヘテロ接合性を持つマウスを用いて、腫瘍形成を潜在的に増加させることができる。いくつかのF1腫瘍は混合株のものである。創始腫瘍はFVBのみであり得る。腫瘍Fo5mmtvトランスジェニックマウスから調製した同種異系移植片を有する動物をADCのIV注射によって単一または複数用量で処理することができる。腫瘍容量は注射後の種々の時点で評価することができる。実施例22-t-ブチルエステルを介するMC-MMAFの合成合成1:MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu化合物1,128.6mg,0.163ミリモルをCH2Cl20.500mLに懸濁させた。6-マレイミドかプロン酸68.9mg,0.326ミリモルおよび1,3-ジイプロピルカグボジイミド0.0505L,0.326ミリモルを加え、続いてピリジン0.500mLを加えた。反応混合物を1.0時間撹拌した。HPLC分析は出発化合物1の完全な消費を示した。減圧下で揮発性有機物を蒸発させた。CH2Cl2中の0~5メタノールの段階グラジエントを用い、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーを介して単離した。合計96mgの純粋なMC-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu1260収率を回収した。ES-MSm/z981.26[MH];1003.47[MMa];979.65[M-H]-。MC-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu化合物12,74mg,0.0754ミリモルを室温にてCH2Cl22.0mLおよびTFA1mLに懸濁させた。2.5時間後、HPLC分析は出発物質の完全な消費を示した。減圧下で揮発性有機物を蒸発させ、PhenomenexC12SynergiMax-RP80Åカラム250×21.20mmを用いて、生成物を分取用RP-HPLCを介して単離した。溶離剤:30分間にわたる直線グラジエント10~90MeCN/0.05TFAaq、次いで、さらに20分間のイソクラティック90MeCN/0.05TFAaq。ES-MSm/z925.33[MH];947.30[MNa];923.45[M-H]-。実施例23a-ジメトキシベンジルエステルを介するMC-MMAF11の合成合成2:Fmoc-L-フェニルアラニン-2,4-ジメトキシベンジルエステルFmoc-Phe-ODMBの調製三口5-L丸底フラスコにFmoc-L-フェニルアラニン200g,516ミリモルBachem、2,4-ジメトキシベンジルアルコール95.4g,567ミリモル,Aldrich、およびCH2Cl22.0Lを充填した。N,N-ジメチルホルムアミドt-ブチルアセタール155mL,586ミリモル,FlukaをN2下で20分間にわたって得られた懸濁液に加え、その結果、透明な溶液が得られた。次いで、反応を室温にて一晩撹拌し、その時点の後、TLC分析0.42,ヘプタン/EtOAc=2:1は、反応が完了したことを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して、淡黄色油が得られ、これをCH2Cl2200mLに再度溶解させ、シリカゲルの短プラグ25cm×25cm,CH2Cl2を通して精製して、無色フォーム250gを得た。MeCN1Lを得られたフォームに加え、それによりバッチを全体的に溶解させた。次いで、それを濃縮乾固し、MeCN1Lに再度溶解させ、得られた懸濁液を1時間撹拌し、濾過し、フィルターケーキをMeCN2×200mLで濯いで、Fmoc-L-フェニルアラニン-2,4-ジメトキシベンジルエステルを白色固体として得た113.58g,41,HPLC分析によると95.5AUC。データ:HPLCL-フェニルアラニン-2,4-ジメトキシベンジルエステルPhe-ODMBの調製500mL丸底フラスコにFmoc-L-フェニルアラニン-2,4-ジメトキシベンジルエステル26.00g,48.3ミリモル、CH2Cl2150mLおよびジエチルアミン75mL,Acrosを充填した。混合物を室温にて撹拌し、HPLCを完了にてモニターした。4時間後、混合物を濃縮した浴温度<30°C。残渣をCH2Cl2200mLに再度懸濁し、濃縮した。これを1回反復した。残渣にMeOH20mLを加え、これはゲルの形成を引き起こした。この残渣をCH2Cl2200mLで希釈し、濃縮し、減圧下で曇った油が一晩で放置した。残渣をCH2Cl2100mLに懸濁させ、次いで、トルエン120mLを加えた。混合物を濃縮し、残渣を一晩真空下に放置した。データ:HPLC、1HNMRFmoc-ドラプロインFmoc-Dapの調製Boc-ドラプロイン58.8g,0.205モルを1,4-ジオキサン256mL,1.02モル,Ardrich中の4NHClに懸濁させた。1.5時間撹拌した後、TLC分析は反応が完了したことを示し10MeOH/CH2Cl2、混合物をほとんど濃縮乾固した。さらなる1,4-ジオキサンを充填し50mL、混合物を濃縮乾固し、真空下で一晩乾燥した。得られた白色固体をH2O400mLに溶解させ、機械的スターラー及び温度プローブを備えた3-Lの三口丸底フラスコに移した。N,N-ジイソプロピルエチルアミン214.3mL,1.23モル,Acrosを1分間にわたって加え、20.5~28.2°C内部の発熱を引き起こした。混合物を氷浴中で冷却し、1,4-ジオキサンを加えた400mL。1,4-ジオキサン400mL中のFmoc-OSu89.90g,0.267モル,AdvancedChemTechの溶液を15分間にわたって滴下漏斗から加え、反応温度を9°C未満に維持した。混合物を室温まで温め、19時間撹拌し、その後、混合物をロータリー蒸発によって水性スラリー390gまで濃縮した。懸濁液をH2O750mLおよびEt2O750mLで希釈し、豊富な白色沈殿が形成された。層を分離し、固体を有機層と共に保った。濃塩酸30mLを用いて水性層を酸性化し、EtOAc3×500mLで抽出した。合わせた抽出物をMgSO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、59.25gの黄色油Aを得た。Et2O抽出物を飽和NaHCO3200mLで1回抽出し、固体を水性層と共に保った。濃塩酸50mLを用いて水性懸濁液を酸性化し、Et2O50mLで抽出し、固体を有機層と共に保った。有機層を濾過し、濃縮して、32.33gの黄色油Bを得た。2つの油AおよびBを合わせ、CH2Cl23.5L、次いで3MeOH/CH2Cl29Lで溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、68.23gのFmoc-ドラプロインを白色フォームとして得た81,HPLCAUCによると97.5純度。Fmoc-Dap-Phe-ODMBの調製粗製Phe-ODMB48.3ミリモルを5分間で無水DMF105mL,Acrosに懸濁し、Fmoc-Dap19.80g,48.3ミリモルを加えた。混合物を氷浴中で冷却し、TBTU17.08g,53.20ミリモル,MatrixInnovationsを加えた。N,N-ジイソプロピルエチルアミン25.3mL,145.0ミリモル,Acrosをシリンジを介して3分間にわたって加えた。1時間後、氷浴を取り除き、混合物を30分間にわたって温めた。混合物を水1Lに注ぎ、酢酸エチル300mLで抽出した。分離後、水性層を酢酸エチル2×150mLで再度抽出した。合わせた有機層をブライン150mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過濾紙して、不溶物無機物およびいくらかのジベンゾフルベンを除去した。濃縮後、残渣41gをシリカ41gに吸着させ、クロマトグラフィー22cm×8cmカラム;65ヘプタン/EtOAc2.5L;33ヘプタン/EtOAc3.8Lによって精製して、29.4gの生成物を白色フォーム86,HPLCによると92純度として得た。データ:HPLC,1HNMP,TLC1:1EtOAc/ヘプタンRf=0.33,バニリン染色において赤色Dap-Phe-ODMBの調製1-L丸底フラスコにFmoc-Dap-Phe-ODMB27.66g、CH2Cl2122mLおよびジエチルアミン61mL,Acrosを充填した。溶液を室温にて撹拌し、HPLCによって完了をモニターした。7時間後、混合物を濃縮した浴温度<30°C。残渣をCH2Cl2300mLに懸濁させ、濃縮した。これを2回反復した。残渣にMeOH20mLおよびCH2Cl2300mLを加え、溶液を濃縮した。残渣をCH2Cl2100mLおよびトルエン400mLに懸濁させ、濃縮し、残渣を真空下で放置して、クリーム様残渣を得た。データ:HPLC,1HNMR,MS。Fmoc-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMBの調製粗製Dap-Phe-ODMB39.1ミリモルを5分間で無水DMF135mL,Acrosに懸濁させ、Fmoc-MeVal-Val-Dil-OH24.94g,39.1ミリモル,調製については実施例2を参照を加えた。混合物を氷浴中で冷却し、TBTU13.81g,43.0ミリモル,MatrixInnovationsを加えた。N,N-ジイソプロピルエチルアミン20.5mL,117.3ミリモル,Acrosを2分間にわたってシリンジを介して加えた。1時間後、氷浴を取り除き、混合物を30分間にわたって温めた。混合物を水1.5Lに注ぎ酢酸エチル480mLで希釈した。15分間放置した後、層を分離し、水性層を酢酸エチル300mLで抽出した。合わせた有機層をブライン200mLで洗浄し、乾燥しMgSO4、濾過濾紙して、不溶物およびいくらかのジベンゾフルベンを除去した。濃縮の後、残渣49gをフラスコから掻き落とし、シリカ49gに吸着させ、クロマトグラフィー15cm×10cmdiaカラム;2:1EtOAc/ヘプタン3L、EtOAc5L;250mL画分によって精製して、31.84gのFmoc-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMBを白色フォームとして得た73,HPLCAUCにより93純度。データ:HPLC、TLC2:1EtOAc/ヘプタン,Rf=0.21,バニリン染色において赤色MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMBの調製1-Lの丸底フラスコをFmoc-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMB28.50g、CH2Cl280mLおよびジエチルアミン40mLを充填した。混合物を室温にて一晩撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣をシリカ30gに吸着し、フラッシュクロマトグラフィー15cm×8cmdiaカラム;2MeOH/DCM2L、3MeOH/DCM1L、6MeOH/DCM4L;250mL画分によって精製して、15.88gのMeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMBを白色フォームとして得た69,HPLCAUCにより96純度。データ:HPLC,TLC6MeOH/DCM、Rf=0.24,バニリン染色において赤色MC-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMBの調製50mLの丸底フラスコにMeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMB750mg,0.85ミリモル、無水DMF4mL、マレイミドカプロン酸180mg、0.85ミリモル、およびTBTU300mg,0.93ミリモル、MatrixInnovationsを室温で充填した。N,N-ジイソプロピルエチルアミン450μL,2.57ミリモルをシリンジを介して加えた。1.5時間後、混合物を水50mLに注ぎ、酢酸エチル30mLで希釈した。NaClを加え、分離を改良した。層の分離の後、水性層を酢酸エチル25mLで抽出した。合わせた有機層を乾燥しMgSO4、濾過し、濃縮した。得られた油1gをフラッシュクロマトグラフィー[100mLシリカ;25ヘプタン/EtOAc100mL,10ヘプタン/EtOAc200mL,EtOAc1.5L]によって精製して、MC-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMB13を白色フォームとして得た521mg,57,HPLCAUCにより94純度。データ:1HNMR,HPLCMC-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-OHMC-MMAF11の調製50mLの丸底フラスコにMC-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-ODMB化合物13,428mg,0.39ミリモル、2.5TFA/CH2Cl220mLに溶解させた。溶液はピンク色~紫色に2分間にわたって変色した。完了はHPLCおよびTLCによってモニターした6MeOH/DCM,KMnO4染色。40分後、3滴の水を加え、曇ったピンク色~紫色混合物を濃縮して521mgのピンク色算さを得た。クロマトグラフィー15IPA/DCMによる精製により、270mgのMC-MMAF73,HPLCにより92純度を白色固体として得た。実施例23b-mc-MMAFのアナログの合成MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu化合物1,35mg,0.044ミリモルをDMF0.250mLに懸濁させた。4-2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-ピロール-1-イル-安息香酸11mg、0.049ミリモルおよびHATU17mg、0.044ミリモルを加え、続いて、DIEA0.031mL,0.17ミリモルを加えた。反応混合物を2.0時間撹拌した。HPLC分析は出発化合物1の完全な消費を示した。生成物はPhenomenexC12SynergiMax-RP80Åカラム250×21.20mmを用いて、分取用RP-HPLCを介して単離した。溶離剤;8分間にわたる直線グラジエント10~80MeCN/0.05TFAaq、次いで、さらに12分間のイソクラティック80MeCN/0.05TFAaq。合計20mgの純粋な生成物14が単離された0.02ミリモル,46収率。ES-MSm/x987.85[MH];1019.41[MNa];985.54[M-H]-。MB-MeVal-Val-Dil-Dap-Phe-OtBu化合物14,38mg,0.0385ミリモルをCH2Cl21mLおよびTFA1mLに懸濁させた。混合物を2.0時間撹拌し、次いで、揮発性有機物を減圧下で蒸発させた。生成物をPhenomenexC12SynergiMax-RP80Åカラム250×21.20mmを用いる分取用Rp-HPLCによって精製した。溶離剤:8分間にわたる直線グラジエント10~80MeCN/0.05TFAaq、ついで、さらに12分間のイソクラティック80MeCN/0.05TFAaq。合計14.4mgのMB-MMAF生成物が単離された0.015ミリモル,40収率。ES-MSm/z930.96MH];952.98[MNa];929.37[M-H]-。実施例23c-MC-MeVal-Cit-PAB-MMAF16の調製CH2Cl280mL中のFmoc-MeVal-OH3.03g,8.57ミリモルおよびN,N’-ジスクシイミジルカルボネート3.29g,12.86ミリモルの室温懸濁液にDIEA4.48mL,25.71ミリモルを加えた。この反応混合物を3.0時間撹拌して、次いで、分液ロートに注ぎ、そこで、有機混合物を0.1MHClaqで抽出した。粗製有機残渣を減圧下で濃縮し、20~100酢酸エチル/ヘキサン直線グラジエントを用いるシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって生成物を単離した。合計2.18gの純粋なFmoc-MeVal-OSu4.80ミリモル,56収率を回収した。DME13mLおよびTHF6.5mL中のFmoc-MeVal-OSu2.18g,4.84ミリモルの室温懸濁液に、H2O13mL中のL-シトルリン0.85g,4.84ミリモルおよびNaHCO30.41g,4.84ミリモルの溶液を加えた。懸濁液を室温にて16時間撹拌し、次いで、それをtert-BuOH/CHCl3/H2Oに抽出し、1MHClでpH2~3に酸性化した。有機相を分離し、乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、その結果、2.01gのFmoc-MeVal-Cit-COOHが得られ、これをさらに精製することなく用いた。粗製Fmoc-MeVal-Cit-COOHを2:1CH2Cl2/MeOH100mLに懸濁し、それにp-アミノベンジルアルコール0.97g,7.9ミリモルおよびEEDQ1.95g,7.9ミリモルを加えた。この懸濁液を125時間撹拌し、次いで、揮発性有機物を減圧下で除去し、10MeOH/CH2Cl2を用いるシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製した。純粋なFmoc-MeVal-Cit-PAB-OH0.55g、0.896ミリモル,18.5収率を回収した。ES-MSm/z614.48[MH]。CH2Cl240mL中のFmoc-MeVal-Cit-PAB-OH0.55g,0.896ミリモルの懸濁液にSTRATOSPHEREStmピペリジン-樹脂-結合>5ミリモル/g,150mgを加えた。室温で16時間撹拌した後、混合物をMeOHで予め洗浄したセライトを通して濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルおよびヘキサンでトリチュレートした。得られた固体物質MeVal-Cit-PAB-OHをCH2Cl220mLに懸濁させ、それにMC-OSu0.28g,0.896ミリモル、DIEA0.17mL,0.99ミリモル、およびDMF15mLを加えた。この懸濁液を16時間撹拌したが、反応混合物のHPLC分析は不完全な反応を示し、そこで、懸濁液を減圧下で6mLの容量まで濃縮し、次いで、10NaHCO3aq溶液を加え、懸濁液をさらに16時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、0~10MeOH/CH2Cl2グラジエントを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製し、その結果,42mg0.072ミリモル,8収率のMC-MeVal-Cit-TAB-OHを得た。CH2Cl210mL中のMC-MeVal-Cit-PAB-OH2.37g,4.04ミリモルおよびビスニトロフェニルカルボネート2.59g,8.52ミリモルの懸濁液にDIEA1.06mL,6.06ミリモルを加えた。この懸濁液を5.5時間撹拌し、減圧下で濾過し、ジエチル-テルでのトリチュレーションによって精製した。MC-MeVal-Cit-PAB-OCO-pNP147mg,0.196ミリモルを1:5ピリジン/DMF溶液3mLに懸濁させ、それにHOBt5mg、0.039ミリモル、DIEA0.17mL,0.978ミリモルおよびMMAF化合物2,150mg、0.205ミリモルを加えた。この反応混合物を室温にて16時間撹拌し、次いで、PhenomenexC12SynergiMax-RP80Åカラム250×21.20mmを用いる分取用RP-HPLC×3によって精製した。溶離剤:30分間にわたる直線グラジエント10~90MeCN/0.05TFAaq、次いで、さらに20分間のイソクラティック90MeCN/0.05TFAaq。MC-MeVal-Cit-PAB-MMAF16が黄色固体として得られた24.5mg,0.0182,0.45収率。ES-MSm/z1344.95[MH]:1366.94;[MNa]。実施例23d-スベリル-Val-Cit-PAB-MMAF17のスクシンイミドエステルの調製化合物17化合物1300mg,0.38ミリモル、Fmoc-Val-Cit-PAB-pNP436mg,0.57ミリモル,1.5当量を5mLの無水ピリジンに懸濁させた。HOBt10mg,0.076ミリモル,0.2当量を加え、続いて、DIEA199μL,1.14ミリモル,3当量を加えた。反応混合物を10分間音波処理し、次いで、室温にて一晩撹拌した。ピリジンを減圧下で除去し、残渣をCH2Cl2に再度懸濁した。混合物を、CH2Cl2中の0~10のMeOHの段階的グラジエントでのシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって分離した。生成物を含有する画分を引き出し、濃縮し、真空中で一晩乾燥して、317mg59収率のFmoc-Val-Cit-PAB-MMAF-OtBuを得た。ES-MSm/z1415.8[MH]。Fmoc-Val-Cit-PAB-MMAF-OtBu100mgを20TFA/CH2Cl210mL中で2時間撹拌した。混合物をCH2Cl250mLで希釈した。有機層を、順次、水2×30mLおよびブライン1×30mLで洗浄した。有機相を濃縮し、10MeOH/CH2Cl2でのシリカゲルのパッドに負荷した。生成物を30MeOH/CH2Cl2で溶出させた。真空中で一晩乾燥した後、Fmoc-Val-Cit-PAB-MMAFを白色固体として得た。38mg,40。ES-MSm/z1357.7[M-H]-。Fmoc-Val-Cit-PAB-MMAF、67mgをCH2Cl22mL、ジエチルアミン2mLおよびDMF2mLに懸濁させた。混合物を室温にて2時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をピリジン2mL、次いで、トルエン2×5mLで共蒸発させ、真空中で乾燥した。Val-Cit-PAB―MMAFが茶色がかった油として得られ、さらに精製することなく用いた。67mgのFmoc-Val-Cit-PAB-MMAFから調製した全てのVal-Cit-PAB-MMAFをピリジン2mLに懸濁させ、ピリジン1mL中のジスクシンイミジルスベレート74mg,0.2ミリモル,4当量の溶液に加えた。反応混合物を室温にて撹拌した。3時間後、エーテル20mLを加えた。沈殿を収集し、さらなる量のエーテルで洗浄した。赤味がかった固体を30MeOH/CH2Cl2に懸濁させ、溶離剤として30MeOH/CH2Cl2を用いるシリカゲルのパッドを通して濾過した。化合物17が白色固体として得られた:20mg29収率。ES-MSm/z1388.5[M-H]-。実施例24-mcMMAF抗体-薬物結合体のインビボの効率Karpas-299ALCL異種移植片におけるcAC10-mcMMAFの効率:抗体cAC10-mcF4当たり平均4つの薬物部分を持つcAC10-mcMMAFのインビボ効率を評価するために、Karpas-299ヒトALCL細胞を免疫不全C.B-17SCIDマウスに皮下移植したマウス当たり5×106細胞。式0.5×L×W2式中、LおよびWは2つの二方向測定のより長い方およびより短い方であるを用いて腫瘍容量を計算した。実験動物における平均腫瘍容量がほぼ100mm3範囲48~162に到達すると、マウスを3つの群群当たり5匹のマウスに分け、未処理のまま放置するか、あるいは1または2mg/kgのcAC10-mcF4いずれかの尾静脈を介する単一静脈内注射を与えた図1。未処理マウスにおける腫瘍は療法の開始から7日以内に迅速に>1,000mm3の平均容量まで成長した。対照的に、cAC10-mcF4処理腫瘍の全ては、1mg/kg群においては3/5および完全な腫瘍応答が得られる2mg/kg群においては5/5の迅速な退行を示した.2mg/kg群における完全な応答体の1つにおいて腫瘍はほぼ4週間後に再発したが、療法から10週間後において、この群における残りの4/5応答体、および1mg/kg群での3つの完全な応答体においては検出可能な腫瘍はなかった。L2987NSCLC異種移植片におけるcBR96-mcMMAFの効率:cBR96はLeY抗原を認識するキメラ抗体である。抗体cBR96-mcF4当たり4つの薬物を持つcBR96-mcMMAFのインビボ効率を評価するために、L2986非-小細胞肺癌NSCLC腫瘍フラグメントを無胸腺ヌードマウスに移植した。腫瘍が平均してほぼ100mm3となれば、マウスを3つの群:未処理および2つの療法群に分けた。療法では、図3aに示すように、マウスにcBR96-mcF4を3または10mg/kg/注射にて4日ごとに合計4回の注射q4dx4を投与した。図3bに示すように、マウスにはcBR96-mcF4または非-結合対象結合体、cAC10-mcF4を10mg/kg/注射にて4日ごとに合計4回の注射q4dx4を投与した。図3aおよび3bに示すように、BR96-mcF4は対照と比較して顕著な腫瘍成長の遅延を生じた。図2は皮下L540CYにおけるcAC10-mcMMAFのインビボの単一容量の効率アッセイを示す。この実験では、未処理群では4匹のマウス、および処理群の各々では10匹のマウスがいた。実施例25-MC-MMAF抗体-薬物結合体のインビトロ効率CD30細胞系に対するcAC10-抗体-薬物結合体の活性。図4aおよび16bは代表的な実験からの用量-応答曲線を示し、そこでは、Karpas299退形成大細胞リンパ腫およびL428ホジキンリンパ腫の培養を、系列的に希釈されたcAC10-mcMMAF図4aまたはcAC10-vcMMAF図4bと共に96時間インキュベートした。培養を50μMのレサズリン[7-ヒドロキシ-3H-フェノキサジン-3-オン10-オキサイド]で4時間標識し,蛍光を測定した。データは、4-パラメータ用量-応答曲線フィット手法を用いてGraphPadPrismバージョン4.00にてデータを換算した。IC50値は、未処理対照培養と比較して増殖が50低下した濃度と定義される。各濃度は四連でテストした。Ley細胞系に対するcBR96-抗体-薬物結合体の活性。図5aおよび5bは代表的な実験からの用量-応答曲線を示し、そこでは、H3396乳房癌腫およびL2987非小細胞肺癌腫9の培養を、系列的に希釈されたcBR96-mcMMAF図5aまたは-vcMMAF図5bと共に96時間インキュベートした。培養を50μMレサズリンで4時間標識し,蛍光を測定した。4-パラメータ用量-応答曲線フィット手法を用い、GraphPadPrismバージョン4.00にてデータを換算した。IC50値は、未処理対照培養と比較して増殖が50低下した濃度と定義される。各濃度は四連でテストする。CD70腎臓細胞癌種細胞系に対するc1F6-抗体-薬物結合体の活性。図6aおよび6bは代表的な実験からの用量-応答曲線を示し、そこではCaki-1および786-O細胞の培養を、系列的に希釈されたc1F6-mcMMAF図6aまたは-vcMMAF図6bと共に96時間インキュベートした。培養を50μMレサズリンで4時間標識し,蛍光を測定した。4-パラメータ用量-応答曲線フィット手法を用い、GraphPadPrismバージョン4.00にてデータを換算した。IC50値は、未処理対照培養と比較して増殖が50低下する濃度と定義される。各濃度は四連でテストされる。実施例26-トラスツズマブの精製440mgのHERCEPTIN登録商標huMAb4D5-8,rhuMAbHER2,米国特許第5821337号抗体を含有する1つのバイヤルを50mLMES緩衝液25mMMES,50mMNaCl,pH5.6に溶解させ、同一緩衝液で平衡化してあるカチオン交換カラムSepharoseS.15cm×1.7cmに負荷した。次いで、カラムを同一緩衝液5カラム容量で洗浄した。トラスツズマブを、緩衝液のNaCl濃度を200mMまで上昇させることによって溶出させた。抗体を含有する画分をプールし、10mg/mLまで希釈し、50mmリン酸カリウム、50mMNaCl、2mMEDTA、pH6.5を含有する緩衝液に透析した。実施例27-トラスツズマブおよびMC-MMAEの結合体化によるトラスツズマブ-MC-MMAEの調製pH8.0の500mMホウ酸ナトリウムおよび500mM塩化ナトリウムに溶解させたトラスツズマブを過剰の100mMジチオスレイトールDTTで処理する。37°Cでの約30分間のインキュベーションの後、緩衝液をSephadexG25樹脂上での溶出によって交換し、1mMDTPAを含むPBSで溶出させる。溶液の280nmにおける吸光度からの還元抗体濃度およびDTNBAldrich,Milwaukee,WIとの反応によるチオール濃度を測定し、および412nmにおける吸光度を測定することによって、チオール/Ab値をチェックする。PBSに溶解させた還元抗体を氷上で冷却する。DMSOに溶解させた薬物リンカー試薬、マレイミドカプロイル-モノメチルオーリスタチンEMMAE、すなわち、MC-MMAEを既知の濃度にてアセトニトリルおよび水に溶解させ、PBS中の冷却された還元抗体トラスツズマブに加える。約1時間後、過剰のマレイミドを加えて、反応をクエンチし、いずれの未反応抗体チオール基もキャップする。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、PBS中のG25樹脂を通す溶出によってトラスツズマブ-MC-MMAEを精製し、脱塩し、滅菌条件下で0.2μmフィルターを通して濾過し、貯蔵のために凍結させる。実施例28-トラスツズマブおよびMC-MMAFの結合体化によるトラスツズマブ-MC-MMAFの調製実施例27の手法に従い、トラスツズマブおよびMC-MMAFの結合体化によってトラスツズマブ-MC-MMAFを調製した。実施例29-トラスツズマブおよびMC-val-cit-PAB-MMAEの結合体化によるトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAEの調製実施例27の手法に従い、トラスツズマブおよびMC-val-cit-PAB-MMAEの結合体化によって、トラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAEを調製した。実施例30-トラスツズマブおよびMC-val-cit-PAB-MMAF9の結合体化によるトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAFの調製実施例27の手法に従い、トラスツズマブおよびMC-val-cit-PAB-MMAF9の結合体化によってトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAFを調製した。実施例31-ラット毒性遊離薬物およびADCの急性毒性プロフィールを、青年Sprague-Dawleyラット各々75~125gm,CharlesRiverLaboratoriesHollister,CAで評価した。動物に日1に注射し、ベースライン、日3および日5において完全な化学および血液学的プロフィールが得られ、日5において完全な剖検が行われた。肝臓酵素測定を全ての動物について行い、以下の組織:胸骨、肝臓、腎臓、胸腺、脾臓、大および小腸につき各群に対して3つのランダムな動物でルーチン的組織学を行った。実験群は以下の通りであった:トラスツズマブ-MC-val-cit-MMAF、トラスツズマブ-MCMe-val-cit-PAB-MMAF、トラスツズマブ-MC-MMAFおよびトラスツズマブ-MC-val-cit-PAB-MMAFについて、MMAFのMWとして731.5およびヘルセプチンのMWとして145167を用いてμgのMMAF/m2を計算した。体表面積を以下のようにして計算した:[{グラムで表した体重の0.667乗×11.8}/10000]GuidanceforIndustryandReviewers,2002。10mL/kgの用量容量にて、実験日1に、単一静脈内ボーラス尾-静脈注射によって用量溶液を投与した。動物の体重を実験日1の投与後に、およびその後毎日動物の体重を測定した。血液学的分析のために、EDTAを含有する試験管に全血を収集した。臨床化学分析のために、全血を血清セパレーター試験管に収集した。血液試料を実験日4、実験日3、および実験日5に投与後に収集した。全血を剖検時にヘパリンナトリウムを含有する試験管にも収集し、可能な後の分析のために血漿を-70°Cで凍結した。以下の組織を収集し、剖検時に中性緩衝化ホルマリンに入れた:肝臓、腎臓、心臓、胸腺、脾臓、脳、胸骨、および胃、大腸および小腸を含めたGI管の切片。胸骨、小腸、大腸、肝臓、胸腺、脾臓及び腎臓を調べた。各時点における肝臓関連血清酵素レベルを正常な雌Sprague-Dawleyラットからの範囲第5~95番目100分位数と比較した。各時点における白血球細胞および血小板カウントを正常な雌Sprague-Dawleyラットからの範囲5番目および95番目100分位数と比較した。正常な雌Sprague-Dawleyラットにおける高用量実験:群1:賦形剤群2:トラスツズマブ-MC-MMAF,52.24mg/kg,4210μg/m2群3:トラスツズマブ-MC-MMAF,68.25mg/kg,5500μg/m2群4:トラスツズマブ-MC-MMAF,86.00mg/kg,6930μg/m2。11匹の動物からの組織をルーチン的組織学のために提出した。これらの動物は、トラスツズマブ-MC-MMAF免疫結合体を用いる急性用量-範囲毒性実験の一部であった。動物は投与後12日間追跡した。実施例32-マカクザル毒性/安全性4匹の2雄,2雌ナイーブなMacacafascicularisマカクザツの3つの群を、トラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAEおよびトラスツズマブ-MC-vc-PAB-MMAFにつき実験した。静脈内投与は実験の日1および22に行った。H=トラスツズマブ。投与は他の種に関連するように動物の表面積で表し、すなわち、μg/m2における用量は種から独立しており、かくして、種の間で比較可能であるADCの処方はPBS、5.4mMリン酸ナトリウム、4.2mMリン酸カリウム、140mM塩化ナトリウム、pH6.5を含有した。各投与後5分、6時間、10時間、および1、3、5、7、14、21日に、血液学分析プレ用量のために血液を収集した。赤血球RBCおよび血小板PLTカウントは光散乱方法によって測定した。白血球WBCカウントはペルオキシダーゼ/高塩基球方法によって測定した。網状赤血球カウントはカチオン性色素での光散乱方法によって測定した。細胞カウントはAdvia120装置で測定した。ALTアラニンアミノトランスフェラーゼおよびASTアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼはOlympusAU400装置にて、TotalAbELISA-ECD/GxhuFc-HRP.Conj.AbELISA-MMAE/MMAF/ECD-Bio/SA-HRPテストを用いて、UV/NADH;IFCC方法によってU/Lで測定した。実施例33-抗-ErbB2モノクローナル抗体4D5の生産、特徴付けおよびヒト化ErbB2の細胞外ドメインに特異的に結合するネズミモノクローナル抗体4D5はFendlyetal.1990CancerResearch50:1550-1558に記載したように生産した。簡単に述べれば、Hudziaketal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:7158-71631987に記載したように生産されたNIH3T3/HER2-3400細胞ほぼ1×105のErbB2分子/細胞を発現を、25mMEDTAを含有するリン酸緩衝化生理食塩水PBSで収穫し、これを用いてBALB/cマウスを免疫化した。週0、2、5および7に、0.5mLのPBS中の107細胞の腹腔内注射をマウスに与えた。32P-標識ErbB2を免疫沈澱させた抗血清を持つマウスに、週9および13に、小麦胚アグルチニン-SepharoseWGAで精製ErbB2膜抽出物の腹腔内注射を与えた。これに続いて、0.1mLのErbB2調製物の静脈内注射を与え、脾臓細胞をマウス骨髄腫系X63-Ag8.653と融合させた。ハイブリドーマ上清を、ELISAおよびラジオ免疫沈澱によってErbB2-結合につきスクリーニングした。エピトープマッピングおよび特徴付けモノクローナル抗体4D5が結合したErbB2エピトープは競合結合分析によって測定したFendlyetal.CancerResearch50:1550-15581990。PANDEXTMScreenMachineを用い、交差-ブロッキング実験を直接的蛍光によって無傷細胞に対して行って、蛍光を定量した。確立された手法を用い、モノクローナル抗体はフルオレセインイソチオシアネートFITCで結合体したWofsyetal.SelectedMethodsinCellularImmunology,p.287,MishelandSchiigi編SanFrancisco:W.J.FreemanCo.1980。NIH3T3/HER2-3400細胞の密集単層をトリプシン処理し、1回洗浄し、0.5ウシ血清アルブミンBSAおよび0.1NaN3を含有する冷PBSに1.75×106細胞/mLで再度懸濁した。最終濃度の1ラテックスIDC,Portland,ORを加えて、PANDEXTMプレート膜の閉鎖を低下させた。懸濁液中の細胞、20μL、および20μLの精製されたモノクローナル抗体100μg/mL~0.1μg/mLをPANDEXTMプレートウェルに加え、氷上で30分間インキュベートした。20μL中のFITC-標識モノクローナル抗体の所定の希釈を各ウェルに加え、30分間インキュベートし、洗浄し、PANDEXTMによって蛍光を定量した。モノクローナル抗体は、もし各々が無関係なモノクローナル抗体で対照と比較して50以上だけ他の結合をブロックしたならば、エピトープを共有すると考えられた。この実験においては、モノクローナル抗体4D5にはエピトープIが割り当てられた約529~約625のアミノ酸残基,ErbB2細胞外ドメイン内で包括的。乳癌細胞系SK-BR-3を用いて、モノクローナル抗体4D5の増殖阻害特徴を評価したHudziaketal.1989Molec.Cell.Biol.93:1165-1172参照。簡単に述べれば、0.25vol/volトリプシンを用いることによってSK-BR-3細胞を脱着させ、mL当たり4×105細胞の密度にて完全な培地に懸濁させた。100μLのアリコット4×104細胞を96-ウェルミクロ希釈プレートに平板培養し、細胞を接着させ、次いで、100μLの培地単独、またはモノクローナル抗体最終濃度5μg/mLを含有する培地を加えた。72時間後、プレートをPBSpH7.5で2回洗浄し、クリスタルバイオレットメタノール中0.5で染色し、Sugarmanetal.1985Science230:943-945に記載されたように相対的細胞増殖につき分析した。モノクローナル抗体4D5は約56だけSK-BR-3相対的細胞増殖を阻害した。また、MCF7細胞の全細胞溶解物からのMr180,000範囲のタンパク質のHRG-刺激チロシンリン酸化を阻害するその能力につきモノクローナル抗体4D5を評価したLewisetal.1996CancerResearch56:1457-1465。MCF7細胞は相対的に低いレベルにおけるを除き、全ての公知のErbBレセプターを発現すると報告されている。ErbB2、ErbB3、およびErbB4はほとんど同一の分子サイズを有するので、全-細胞溶解物をウェスターンブロット分析によって評価する場合、いずれのタンパク質がチロシンリン酸化されるようになるかを区別するのは可能ではない。しかしながら、これらの細胞はHRGチロシンリン酸化アッセイで理想的である。なぜならば、用いるアッセイ条件下では、外因的に加えられたHRGの不存在下では、それらはMr180,000の範囲において低レベル~検出できないレベルのチロシンリン酸化タンパク質を呈するからである。MCF7細胞を24-ウェルプレートで平板培養し、ErbB2に対するモノクローナル抗体を各ウェルに加え、室温にて30分間インキュベートし;次いで、rHRGβ1177-244を最終濃度0.2nMまで各ウェルに加え、インキュベーションを8分間継続した。培地を各ウェルから注意深く吸引し、100μLのSDS試料緩衝液5SDS,25mMDTT、および25mMトリス-HCl,pH6.8を加えることによって反応を停止させた。各試料25μLを4~12グラジエントゲルNovexで電気泳動に付し、次いで、二フッ化ポリビニリデン膜に電気泳動により移した。抗ホスホチロシン4G10,UBIから,1μg/mLで使用免疫ブロットを発色させ、Mr180,000における圧倒的な反応性バンドの強度を従前に記載されているように反射率デンシトメトリーによって定量したHolmesetal.1992Science256:1205-1210;Sliwkowskietal.J.Biol.Chem.269:14661-146651994。モノクローナル抗体4D5はMr180,000においてHRG-誘導チロシンリン酸化シグナルの発生を阻害した。しかしながら、HRGの不存在下では、Mr180,000範囲ではタンパク質のチロシンリン酸化を刺激することができなかった。また、この抗体はEGFRFendlyetal.CancerResearch50:1550-15581990、ErbB3、またはErbB4と交差反応しない。モノクローナル抗体4D5は50だけチロシンリン酸化のHRG刺激をブロックできた。外因性rHRGβ1の存在下または不存在下におけるMDA-MB-175およびSK-BR-3細胞に対するモノクローナル抗体4D5の増殖阻害活性を評価したSchaeferetal.Oncogene15:1385-13941997。MDA-MB-175細胞におけるErbB2レベルは正常な乳房上皮細胞で見出されたレベルよりも4~6倍高く、ErbB2-ErbB4レセプターはMDA-MB-175細胞において構成的にチロシンリン酸化される。モノクローナル抗体4D5は、外因性HRGの存在下および不存在下双方において、MDA-MB-175細胞の細胞増殖を阻害できなかった。4D5による細胞増殖の阻害はErbB2発現レベルに依存するLewisetal.CancerImmunol.Immunother.37:255-2631993。SK-BR-3細胞における66の最大阻害は検出できた。しかしながら、この効果は外因性HRGによって克服できた。ここに引用してその全開示を援用する米国特許第5821337号に記載されているように、遺伝子変換突然変異誘発戦略を用い、ネズミモノクローナル抗体4D5をヒト化した。以下の実験で用いるヒト化モノクローナル抗体4D5はhuMAb4D5-8と命名する。この抗体はAgG1イソタイプのものである。引用した文献本発明は、その範囲が、本発明の少数の態様の説明を意図する実施例に開示された特別な実施形態によって限定されず、機能的に同等であるいずれの実施形態も本発明の範囲内のものである。事実、示され、本明細書中に記載されたものに加えて本発明の種々の変形は当業者に明らかとなり、かつ添付の請求の範囲の範囲内に入ることを意図する。本明細書中で引用した全ての文献は、あたかも各個々の刊行物または特許または特許出願が全ての目的で引用によるその全体が特異的にかつ個々に取り込まれることが指令されるように、同一程度まで全ての目的で、引用によりその全体が援用される。"