"腹部膨満、ガス発生、腹痛、及び/又は鼓腸を治療し又は予防する組成物を製造するための、ガラクト-オリゴ糖及びポリフルクトースの使用。ガラクト-オリゴ糖:ポリフルクトースの量が、5:95から95:5の比を有する、請求項1に記載の使用。ガラクト-オリゴ糖:ポリフルクトースの量が、90:10から45:55の比を有する、請求項2に記載の使用。ガラクト-オリゴ糖がトランスガラクト-オリゴ糖であり、及び/又はポリフルクトースがイヌリンである、請求項1~3のいずれか一項に記載の使用。ポリフルクトースが、平均重合度20以上のイヌリンである、請求項1~4のいずれか一項に記載の使用。組成物が、食品組成物又は食品サプリメント組成物である、請求項1~5のいずれか一項に記載の使用。組成物が、乳児用栄養食である、請求項6に記載の使用。乳児用栄養食が、乳児用調合乳又は乳児用調製乳である、請求項7に記載の使用。本発明者等は、驚くべきことに、GOS特にTOS及びポリフルクトース特にイヌリンを一緒に投与した場合、腸内ビフィドバクテリア数の増加で説明することができず、したがって従来技術例えば、Boehm他2002前掲のTOS又はイヌリンHPで記述されたビフィズス菌の作用に起因するものではない、いくつかの有益な効果をもたらすことを見出した。特に、GOSとポリフルクトースの混合物を投与した後、形成されたSCFA総量が増し、アセテート及びラクテートの相対量が増し、乳児の便のpHが低下し、それによってこれらの効果がビフィドバクテリアの相対量の増加に相関しないことを見出したことは、予期せぬことであった。有益なSCFA量及びプロフィルとラクテートの量の増加の他に、ガス発生の減少が観察された。さらに、ラクテートそのものは、プロスタグランジンE1及びプロスタグランジンE2の分泌が増加することがわかったので、結腸に対してこれまで知られていなかった有益な効果を発揮することがわかった。この効果は、SCFA、特にアセテートに関して前に報告されただけであったWillemsen他2003Gut5214421447。したがってラクテートを含む組成物、及びラクテート生成を刺激するプレバイオティクスを含む組成物は、ムチン生成を刺激するために、また粘膜バリアの完全性を支持するために使用することができる粘膜保護。ラクテートはさらに、結腸筋の自然発生的な収縮及び緊張を低下させ、その結果、痙攣及び痛みを緩和することがわかった。したがってプレバイオティク組成物は、ビフィドバクテリアの数を増加させず又は実質的に増加させず、その一方で全SCFA量を増加させ、SCFAプロフィルに有益な変化をもたらしアセテートの増加、ブチレート及びプロピオネートの減少、乳酸を増加させ有益な収縮及び緊張低減効果、及び粘膜刺激効果をもたらす、便のpHを低下させ、ガスの発生を減少させ、SCFAをより漸進的に形成し結腸遠位部での形成も含む、即ち発酵産物の全体的に最適なパターンL-ラクテートがより多く、ブチレートがより少ないなどという点が新規である。これらの変化の全ては、結腸環境を、母乳保育の乳児のものにより類似したものにする。したがって本発明の一実施形態は、母乳保育の乳児の結腸環境に本質的に類似している結腸環境をもたらす組成物を調製するための、GOSとポリフルクトースの混合物の有効量での使用を、本明細書で提供する。見出された有益な効果は、GOS又はポリフルクトース例えばTOS又はイヌリンを単独で投与した場合よりも、同時投与した場合のほうでかなり明らかであり、GOS及びポリフルクトースが相乗的に作用することを示していた。従来技術では、TOSとイヌリンの投与の個々の効果を、これら2タイプの化合物の同時投与と直接比較する研究は行われておらず、明らかに、そのような独立した個々の研究を互いに比較することはできず、相乗効果を特定するのに不適切である。GOSとポリフルクトース例えばTOS及びイヌリンとのこの新規な相乗的相互作用、及びこれらの同時投与のインビボ効果は、結腸及び/又は腹部痙攣、腹部膨満、鼓腸、腹痛、便秘、IBS、IBD、アレルギー、及び/又は腸の粘膜保護の増大といった治療や予防など、GOSとポリフルクトースの両方を適切な相乗的量で含む組成物の新しい使用をもたらす。さらに、ラクテートD-ラクテート及び/又はL-ラクテート、好ましくはL-ラクテートを含む組成物を使用して、これらの症状又は障害の1種又は複数を治療し又は予防することができる。したがって、意外なことに、腸内細菌叢によるプレバイオティクスの特定の混合物GOS及びポリフルクトースの発酵は、強化され且つ動態的に有利なSCFA及びラクテートの形成をもたらし、代謝最終産物の改善されたパターンももたらす。その結果、粘液生成に対する効果や抗炎症効果、痛みの知覚に対する効果、及び腹部痙攣/疝通に対する効果など結腸の弛緩及び自然発生的収縮の両方を介して、多くの有利な効果が得られる。これらプレバイオティク混合物を含む栄養組成物は、IBDやIBSなど腸に問題のある成人、又は栄養不良に起因して腸バリアの完全性が低下している成人に使用することもできる。定義多糖は、鎖長が少なくとも10単位である単糖単位の炭水化物鎖を指す。対照的にオリゴ糖は、その鎖長が10単位未満である。重合度又はDPは、オリゴ又は多糖鎖の糖単位の総数を指す。平均DPは、組成物中のオリゴ糖又は多糖鎖の平均DPを指し、このとき可能性ある単糖又は二糖は考慮しない存在する場合には、除去することが好ましい。組成物の平均DPは、組成物同士を区別するのに使用する。さらに、組成物中のグルコース単位やフルクトース単位などの糖単位は、区別される。ポリフルクトース又はポリフルクタン又はフルクト多糖は、重合度が10以上であるβ結合フルクトース単位の鎖を含む多糖炭水化物を指し、例えば、イヌリン例えばイヌリンHP、レバン、及び/又は混合型ポリフルクタンを含む下記参照。イヌリン又は非加水分解イヌリン又はイヌリンHPは、本明細書では、鎖の大部分少なくとも90、好ましくは少なくとも95の重合度DPが10以上であるグルコース末端フルクトース鎖を指すのに使用する。したがってイヌリンは、GFn但し、Gはグルコシル単位を表し、Fはフルクトシル単位を表し、nは互いに結合しているフルクトシル単位の数であり、nは9以上であると呼ぶことができる。G/F比は約0.1から0である。しかしイヌリン分子の少量は、末端グルコース単位を持たなくでよい。平均DPは、本明細書では好ましくは少なくとも15であり、より好ましくは20以上であり、例えば20、21、22、23、25、30、40、60、70、100、150以上である。イヌリンでは、フルクトース単位がβ2→1結合により結合している。適切なイヌリンは、例えば、平均DP>23のRaftiline登録商標HPOraftiとして市販されている。加水分解イヌリン又はオリゴフルクトースは、DPが10よりも低いグルコース及びフルクトース末端フルクトース鎖の混合物を指す。したがって、加水分解イヌリンを、GFn鎖とFn鎖の混合物と呼ぶことができる但しGはグルコシル単位であり、Fはフルクトシル単位であり、n=1~8である。加水分解イヌリンは、β1-2フルクトシル-フルクトース結合の切断から得られた、イヌリンの酵素又は酸性加水分解産物又は部分加水分解産物である。加水分解イヌリンという用語は、合成により作製され又は組換えにより作製された、同じ構造体を有するイヌリンも包含する。レバン又はレブラン又はレブリン又はレブロサンは、フルクトース単位がβ2→6結合により結合しているポリフルクトースからなる多糖を指す。出発時にグルコース部分が存在することができるが、必ずしも必要ではない。重合度は10よりも高い。混合型ポリフルクタンでは、フルクトース単位はβ2→1及びβ2→6結合により結合する。混合型ポリフルクタンは、分枝状であり、DP>10を有する。GOS又はガラクトオリゴ糖、又はトランス-ガラクトオリゴ糖又はTOSは、DPが10以下であり且つ平均DPが2、3、4、5、又は6であるガラクトース単位からなるオリゴ糖を指す。グルコース単位は、鎖の還元端に存在することができる。GOSは、少なくとも2/3ガラクトース単位を含有することが好ましい。β-1-4グリコシド結合によるトランス-ガラクトオリゴ糖TOSが最も好ましい。そのようなGOSは、例えば、β-1-4グリコシド結合及びβ-1-6グリコシド結合によるトランス-ガラクトオリゴ糖を含むVivinal登録商標GOSBorculoDomoIngredients,Zwolle,オランダから市販されているに見出されるものである。SCFA又は短鎖脂肪酸は、細菌性腸内発酵の最終生成物として生成された、炭素鎖の長さがC6までの脂肪酸を指し、例えばアセテートC2やプロピオネートC3、ブチレート及びイソブチレートC4、バレレート及びイソバレレートC5などである。iC4~5という表現は、イソブチレート、バレレート、及びイソバレレートを合わせたものを指す。相乗的に有効な量は、同時投与したときに1種又は複数の特定の生理学的効果本明細書の他の部分に記述されるをもたらすGOS及びポリフルクトース例えばTOS及びイヌリンの量、即ちこの同時投与の全体的効果が、GOS又はポリフルクトースの個々の投与の効果を合わせたものよりも著しく大きい量を指す。例えば、GOS単独投与の効果がXであり、ポリフルクトース単独投与の効果がYである場合、GOSとポリフルクトースの同時投与の効果はXYよりも大きく、例えば1/2の濃度のGOSと1/2の濃度のポリフルクトースを合わせた同時投与の効果は、1/2X1/2Yよりも大きい効果を有する。2種以上の物質の同時投与は、これら物質を、同じ時間に同時に又は短時間のスパンで別々に又は逐次使用、例えば何分又は何時間以内で投与される1つの組成物又は別々の組成物部品のキット;組み合わせた組成物としてとして、一個人に投与することを指す。腸溶は、本明細書では、被験体の胃腸管への直接的な送達を指す例えば経口的に、或いはチューブ、カテーテル、又はストーマを介して。含むという用語は、述べられている部分、ステップ、又は組成物の存在を指定することと解釈されるが、1種又は複数の追加の部分、ステップ、又は組成物の存在を排除するものではない。乳児は、本明細書では、0~36月齢、好ましくは0~18月齢、又はより好ましくは0~12月齢のヒトを指す。母乳保育の乳児は、ヒトの母乳でのみ育てられた乳児を指す。非又は一部母乳保育の乳児は、ヒトの母乳だけで育てられたわけではない乳児を指す。これには、1日当たり少なくとも1本の哺乳瓶約80mlの調合乳で育てられた乳児が含まれる。パーセンテージ又は平均は、他に特に指定しない限り、又は別の基準を意味することが明らかでない限り、一般に、平均の重量パーセンテージを指す。一実施形態では、本発明は、GOSとポリフルクトースの両方を適切な相乗的に有効な量で含む組成物の、いくつかの新規な使用を提供する。本発明による使用及び方法本明細書に記述される様々な使用では、被験体が好ましくはヒト被験体であり、より好ましくは、12月齢までの乳児である新生児などの乳児である。特に、哺乳瓶で保育され又は一部哺乳瓶で保育された乳児を指す。或いは被験体は、子供、10代、又は成人でもよい。特に、疲労、うつ病、又はふさぎ込みをもたらす可能性もある、炎症性腸疾患IBDや過敏性腸症候群IBS、鼓腸、腹部痙攣、疝痛、腹部膨満、腹痛などであるがこれらに限定することのない腸の問題を、本発明による組成物を使用して予防及び/又は治療することができる。また、粘膜生成を強化することができ、腸の最適状態には及ばない機能から生ずるアレルギーを予防し又は治療することもできる。栄養不良、手術、化学療法からもたらされた結果としてバリア機能が損なわれた患者では、腸バリア機能も改善することができる。TOS及びイヌリンを含む組成物など、GOSとポリフルクトースの両方を含む組成物は、一実施形態において、被験体の大腸でSCFAの生成を誘発するために、また投与後に生成されたSCFAの腸及び/又は便での総量を著しく増加させるために、且つ/又は生成された腸及び/又は便のSCFAの相対量を著しく修正するために、特に全SCFAからの腸及び/又は便のアセテートの相対量を増加させるために、且つ/又は生成された腸内ラクテートの量絶対及び相対を著しく増加させるために、且つ/又は腸内ガスの発生を著しく減少させ又は防止するために、且つ/又は結腸の遠位部分までSCFAの生成を広げるために、且つ/又は大腸内のpH及び便のpHを著しく低下させるために、使用することができる。また、全SCFAに対する腸及び/又は便のブチレート、イソブチレート、バレレート、及び/又はイソバレレートの合計を、減少させることができる。これらの効果は、腸内ビフィドバクテリアの総数及び/又は相対数に著しい影響を及ぼすことなく、投与後に実現される。任意の疾患又は障害、或いはこれら腸の作用の1つ又は複数に関連し又は伴う不快感を、治療し又は予防するための組成物が、本明細書で提供される。本発明は、腹部膨満、ガス発生、腹痛、及び/又は鼓腸を治療し又は予防する組成物を製造するための、ガラクト-オリゴ糖及びポリフルクトースの使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、アレルギー、湿疹、又はアトピー性疾患を治療し又は予防する組成物を製造するための、ガラクトオリゴ糖及びポリフルクトースの使用を提供する。他の実施形態では、本発明は、疝痛の治療及び/予防をし、且つ/又は結腸の収縮、好ましくは緊張性及び/又は相動性収縮を緩和させる組成物を製造するための、ガラクト-オリゴ糖及びポリフルクトースの使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、過敏性腸症候群又は炎症性腸疾患を治療し又は予防する組成物を製造するための、ガラクト-オリゴ糖及びポリフルクトースの使用を提供する。さらに他の実施形態では、本発明は、大腸の腸バリア機能及び/又は大腸での粘液生成を増大させる組成物を製造するための、ガラクト-オリゴ糖及びポリフルクトースの使用を提供する。他に特に指示しない限り、著しい増加例えばSCFA、アセテート、又はラクテートのは、本明細書では、GOS又はポリフルクトース例えばイヌリンを単独で投与したときに生成された量と比較した場合、少なくとも5、好ましくは少なくとも10、より好ましくは少なくとも20、又はそれ以上の増加を指す。同様に他に特に指示しない限り、著しい減少例えばガス発生のとは、ポリフルクトース例えばイヌリンを単独で投与したときに生成された量と比較した場合、少なくとも5、好ましくは少なくとも10、より好ましくは少なくとも20、25、50、又はそれ以上例えば70、80、90、100の減少を指す。GOS及びポリフルクトース組成物の発酵産物として生成されたSCFAの総量の増加は、被験体の便サンプルのpHの著しい低下として測定することもでき、これは、大腸におけるpHのインビボ低下を反映している。乳児では、TOS及びポリフルクトース例えばイヌリンを同時投与した後に、便のpHが約5.8以下に、例えばpH5.6、5.5、又は5.4、又は5.2に低下し、一方、標準的な調合乳で保育した乳児のpHは、約6付近又はそれ以上、例えば約pH5.9、6.8、又はさらに7.0であることがわかった。したがってpHの著しい低下は、標準的な調合乳で保育された乳児と比較した場合、少なくとも15又は0.9単位のpHの低下であることを指す。適切な量でのGOSとポリフルクトースとの同時投与の別の有益な効果は、SCFAの組成が、GOS又はポリフルクトースを投与したときとは著しく異なることである。特に、ブチレートの相対量が著しく減少するのに対し、アセテートの相対量は著しく増加する。したがって組成物は、全SCFA量だけではなく相対的なSCFAの割合も変化させるのに使用することができる。TOS及びポリフルクトース例えばイヌリンを同時投与した乳児では、その相対的なSCFAレベルが、母乳保育の乳児に見出されるレベルにより類似しており、アセテート:プロピオネート:ブチレートの比が一般に約80~85:10~15:1~5であるのに対し、標準的な調合乳で保育した乳児では、その比が一般に約69~74:16~19:5~6である実施例に示されるように。したがって、本発明による組成物によって、特にアセテートの相対量が増加し、プロピオネート及びブチレートの相対量が減少する。GOS及びポリフルクトースの同時投与の結果、アセテート:プロピオネート:ブチレートの割合は、調合乳で保育した乳児の場合よりも母乳保育した乳児の場合に非常に厳密に類似する高レベルのブチレート及びプロピオネートと比較的低レベルのアセテートを生成する。相対的なSCFAの割合に及ぼす効果は、例えば実施例に記述されるようなインビボ研究又はインビトロ発酵系を使用した、投与後の様々な時点での便サンプルのガスクロマトグラフィなど、当技術分野で知られている方法によって測定することができる。著しく修正されたSCFA組成物又は著しく増加した量のアセテートは、GOS又はポリフルクトースを投与しない場合、或いはGOS又はポリフルクトースを個々に投与した場合よりも、少なくとも約4、5、10、15、又はそれ以上高いアセテートの量全SCFAに対するを指す。プロピオネート及び/又はブチレートの相対量は、GOS又はポリフルクトースを投与しない場合、或いはGOS又はポリフルクトースを個々に投与した場合よりも低いことが好ましい。一実施形態では、本発明による組成物は、腸及び/又は便のアセテートを全SCFAの約85よりも高く、例えば86、87、88、90、又はそれ以上増加させるのに適している。GOS及びポリフルクトースを同時投与したときに観察された、さらに別の有益な効果とは、GOSのみ又はポリフルクトースのみ投与したときに見られた分枝状SCFAの割合に比べ、分枝状SCFAが著しく減少することである。本明細書で使用する分枝状SCFAの著しい減少は、プレバイオティクスで保育されない乳児に見られる濃度に比べ、少なくとも70減少すること、又は便内の割合が全SCFAの1.5未満になることを指す。全SCFAに対する分枝状SCFAの割合は、分枝状SCFAの合計、即ちイソブレート及びイソバレレート及びバレレートを合わせた量を、全SCFAの合計、即ちアセテート及びプロピオネート及びブチレート及びイソブチレート及びイソバレレート及びバレレートなどを合わせた量で割ることによって、測定することができる。分枝状SCFAは有害であるので、分枝状SCFAの割合が減少することは、被験体の健康に有益である。これは、タンパク質の発酵によりpHが上昇し且つH2Sなどの有害な薬剤の形成を引き起こすため、望ましくないタンパク質の分解が少ないことを示している。ブチレートの著しい減少は、プレバイオティクスで保育されない乳児に見られる濃度と比べ、少なくとも50減少することに関し、又は便内の割合が全SCFAの4未満になる。一実施形態では、本発明による組成物は、腸内及び/又は便のブチレート、イソブチレート、バレレート、及びイソバレレートの合計を全SCFAの7よりも低く、例えば全SCFAの6.5、6、5、4又はそれ以下に減少させるのに適している。別の実施形態では、GOS及びポリフルクトースを含む組成物は、結腸内の発酵の長さを延ばすのに適している。特に細菌性発酵は、結腸の遠位部分でのSCFA生成によって示されるように、同時投与後の結腸の最も遠位にある部分でさらに活性になる。結腸の遠位部分は、GOSのみ又はポリフルクトースのみ含む組成物の投与の後、SCFAが全く生成されないかごくわずかしか生成されない。さらに、結腸の始まりでの速い発酵が、同時投与後に見られるが、これは抗病原効果に特に重要なことであり、母乳保育の乳児にも観察されることである。全体的にこれは、組成物が、被験体の結腸全体を通して比較的均一な発酵パターンを確立し且つ/又は維持するのに、また発酵及びSCFA生成を結腸の遠位部分にまで拡張するのに適していることを示している。したがって、SCFA及びおそらくその他の発酵産物、特にラクテートも、結腸全体を通して、また結腸の始部、中間部、及び終部で生成される。他の実施形態では、試験被験体及び対照被験体、即ちGOS単独又はポリフルクトース単独又はプレバイオティクスを含まない同等の基本的組成物を与えたものの便サンプルを分析することによって再び決定することができるように、GOS及びポリフルクトースの相乗的な量での同時投与を、ラクテート生成を著しく増加させるために使用することができる。ラクテートの著しい増加は、GOS又はポリフルクトースが投与されない被験体に比べ、GOS及びポリフルクトースを含む組成物を同時投与された被験体では少なくとも5、10、20、又はさらに50以上のラクテートが生成されることを指す。例えば、6g/lのTOS/イヌリン混合物90:10が補われた標準的な調合乳で保育された乳児は、16週目で約16のラクテート酸全体に対するとしてを生成するのに対し、標準的な調合乳で保育された乳児は約0.6を生成し、母乳保育の乳児は約35のラクテートを生成した。母乳保育の乳児により生成されたラクテートの量に一致しないが、標準的な調合乳にTOS及びイヌリン混合物を補うことにより、ラクテートの生成に著しい増加が生じた。実施例に見られるように、ラクテートは、予期しない有益な効果を発揮することがわかった。アセテートと同様に、プロスタグランジンE1及びプロスタグランジンE2の生成が増加し、その結果、上皮ムチン発現が高まった。腸粘膜は、伝染性病原体、アレルゲン、及び発癌物質に対するバリアとして働くので、ヒトの健康に重要な役割を演ずる。したがって、粘膜の発生及び/又は完全性にポジティブな影響を及ぼす組成物を使用して、新生児で健康な粘膜を構築するのを助けることができ、また哺乳瓶で保育された又は部分的に哺乳瓶で保育された乳児、及び適正に機能しない腸粘膜によりもたらされた又はそのような腸粘膜に関連した症状又は疾患に罹っている被験体で、健康な粘膜を確立するのを助けることができる。例えば、炎症性腸疾患IBD、例えば大腸炎やクローン病などや過敏性腸症候群IBSなどの腸の問題を、治療し又は予防することができ、或いは病原体の粘膜への結合及び/又は進入を減少させることができ、或いは喘息発症などのその他の免疫学的問題を、予防し又は低減することができる。また、栄養不良、手術、化学療法などの結果もたらされる腸バリアの完全性の損失も、予防し又は低減することができる。さらに、自然発生的収縮及び腹部緊張は、D-又はL-ラクテート投与の後、用量依存的な手法で著しく低下した。したがって本発明による組成物は、腸内ラクテートレベルを増加させ、それによって腹痛や疝痛、腹部収縮、腹部緊張などの症状を治療し又は予防するのに使用することができる。ラクテートそのものは、これまで知られていない効果を発揮することがわかったので、本発明の目的は、上述の症状及び障害を治療し又は予防するのに使用することができる、ラクテートを適切な量で含む組成物を提供することでもある。一実施形態では、組成物は、ラクテートのみを適切な量で含み、一方別の実施形態では、本明細書で記述されるGOS及びポリフルクトース組成物は、腸内ラクテートレベルをさらに増加させるためにラクテートをさらに含む。本発明によるそのようなある組成物は、TOS及びイヌリンを相乗的に有効な量で含み、ラクテートを適切な量でさらに含む。一実施形態では、腸内及び/又は便のラクテートを、約10mmol/kg便よりも多く増加させるのに適した組成物が提供される。便サンプルの分析を指す場合、これは、実際のインビボ効果の間接的な測定と理解される。同様に、インビトロアッセイを実施することができ、細菌集団をインビトロ成長させ、適切な量の組成物を培養物に添加する。特に、実施例で記述されるインビトロ発酵系を使用することができる。したがって、GOS及びポリフルクトースを含む組成物の同時投与は、下記の生理学的効果の1種又は複数を実現するのに使用することができる:-全SCFAの著しい増加-pHの著しい低下-著しく変性されたSCFA組成物-分枝状SCFAの著しい減少-生成されたSCFA1モル当たりのガス生成の著しい減少-結腸の最遠位部分での発酵も含む、より長くより均一な発酵、及び/又は-結腸の最遠位部分でのSCFAの多量の初期形成及び/又は乳酸形成-結腸の始部、中間部、及び終部でのSCFAの生成の促進-乳酸絶対及び/又は相対の著しい増加、及び/又は-形成された全乳酸の比としての、L-ラクテートの相対量の増加。好ましい実施形態では、GOS及びポリフルクトースの両方を含む組成物を使用した場合、GOS又はポリフルクトースのみを含み或いはGOSもポリフルクトースも含まない組成物を投与したときに比べ、少なくとも、2、3、4、5、6、7、8、9、又は全てのこれらの効果を著しく修正する。特に、少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、又は全てのこれらの効果は、GOS及びポリフルクトースを個々に投与した効果の合計よりも、GOS及びポリフルクトースを同時投与した相乗的に有効な量後に著しく大きい。したがって本発明による相乗的組成物は、相乗的に有効な量の投与の後、乳児の大腸で健康な微生物叢を構築及び/又は維持するのに特に適している。好ましい実施形態では、生後1週間以内に相乗的に有効な量のGOS及びポリフルクトースが補われた調合乳などの基本的組成物だけで、乳児を保育する。したがって好ましい組成物は、乳児用の規定食組成物である。別の実施形態では、乳児に本発明による組成物を部分的にのみ与える。一実施形態では、組成物は、ガス発生、鼓腸、大腸炎、腹部膨満、腹部痙攣、腹痛、IBS、IBD、アレルギーの1種又は複数から選択された症状を治療し又は予防するのに使用し、且つ/又は粘膜保護として使用する。したがってGOS及びポリフルクトースは、鼓腸、過剰なガス発生、大腸炎、腹部膨満、腹部痙攣、腹痛、IBS、IBD、アレルギー、低下した腸バリア機能の治療の際、及び/又は粘膜保護として、同時に、個別に、又は逐次に使用するための組成物又は組み合わせた組成物の調製に使用することができる。被験体は、この場合、乳児から子供、10代、成人にまで及ぶ任意の被験体でよい。GOS及びポリフルクトースが相乗的に有効な量で添加される基本的組成物は、被験体の年齢、投与形態、及び治療し又は予防される主な症状に応じて異なることが明らかである。例えば乳児の場合、基本的組成物は、液体又は粉末形態の乳児用調合乳又は乳児用調製乳が好ましいが、成人の場合は、栄養補給組成物液体、半液体、又は固体又はチューブ形態での食物摂取がより適切である可能性がある。好ましい実施形態では、GOS及びポリフルクトースは、形成された腸内SCFAの総量を著しく増加させ、且つ/又は腸内SCFA組成を著しく向上させ特にSCFAの総量に対するアセテートのパーセンテージを著しく増加させ、且つ/又はラクテートの生成を著しく増加させ、且つ/又は腸内pHを低下させ、且つ/又は腸内ガス発生を著しく減少させるのに適切な、相乗的に有効な量で同時投与する。疝痛及び/又は腹部痙攣、腹部膨満及び/又は鼓腸、腹痛、IBS、IBD、及び/又はアレルギーの治療及び/又は予防をするための、相乗的に有効な量のGOS及びポリフルクトースを含む組成物の使用が提供される。粘膜保護の増大、及び腸バリアの強化のための、そのような組成物の使用も提供される。必ずしも1つの組成物を指す必要はなく、GOS及びポリフルクトースは別個の組成物中に存在することができ、同時投与したときに相乗的に有効な量をもたらすものであることが理解される。SCFAレベル、プロフィル、及び腸内pHのこれらの変化により、組成物は、下記の下流の有益な効果の1つ又は複数を引き起こすことができる:aSCFA生成部位での腸浸透性が低下する。これは、疾患を予防し健康を維持するのに、特にアレルギーの発症を予防するのに重要である。GOS及びポリフルクトースの同時投与がより均一な発酵を引き起こし、発酵を結腸の遠位部分にまで拡張するという知見は、この点に関して重要であるが、それは結腸の遠位部分も含めた腸の浸透性を均等に低下させることができ、それによって腸を健康な状態で均等に維持できるからである。b腸の運動性又は蠕動運動が高まり、それによって、調合乳で保育される乳児で観察される一般的な問題である便秘を低減させ、又は予防する。c自然発生的な収縮及び結腸筋の緊張の量の低下により、痙攣が少なくなり、腹痛が少なくなる。d特に被験体が乳児である場合、被験体の骨鉱化及び骨発生に重要な、カルシウムイオン吸収が増加する。e疲労やうつ病、気分の変動などの健康悪化の2次症状を低下させることができる。f腸粘膜の粘液生成が著しく高くなり、それによって病原体の結合及びコロニー化に対する保護がもたらされる。特に、ラクテートのレベルは粘液生成に対して正に相関することがわかった。したがって本発明による組成物は、粘膜生成を刺激するのに使用することができる。g胆汁代謝は、母乳保育の乳児で観察されるレベル及び/又はパターンに変更することができる。h腸病原性微生物の成長は、結腸全体に沿って阻害される。したがって、相乗的に有効な量のGOS及びポリフルクトースを含む組成物は、上記生理学的効果の1つ又は複数を維持し又は確立するために例えば新生児、未熟児、又は成熟児、或いは非又は一部母乳保育の乳児、或いは成人などのその他の被験体で、また健康な大腸環境及び大腸の最適な活性を確実にし又は確立することによって、被験体の健康を維持し又は改善するために使用することができる。特に、疝痛及び/又は腹部痙攣、腹部膨満及び/又は鼓腸、腹痛、IBS、IBD、及び/又はアレルギー、腸病原性感染例えば細菌、ウイルス、真菌、下痢、湿疹、アレルギーによって誘発される喘息、及びその他のアトピー性疾患、及び/又は便秘などの疾患、障害、又は症状の発生率、持続時間、及び/又は重症度は、本発明による組成物の投与によって低下させ、無くし、又は予防することができる。本発明による組成物は、結腸の収縮、好ましくは相動的及び/又は緊張性収縮を緩和させるために使用してもよい。本発明による組成物上述の使用に適した組成物は、ポリフルクトース及びGOSを相乗的に有効な量で含む。組成物は、GOS/ポリフルクトースを、3/97から97/3、好ましくは5/95から95/5、より好ましくは90/10から45/55に及ぶ比で含む。例えば10/90や20/80、30/70、40/60、50/50、55/45、60/40、70/30、80/20、85/15、90/10など、これら端点間の個々の比の全てが本明細書に包含される。最適な相乗効果を実現するのに必要とされる投薬量及びGOS/ポリフルクトースの比は、組成物のタイプと投与する方法及び頻度に応じて変えることができる。しかし2~3の例を以下に示す。当業者なら、最良の生理学的効果を実現するのに各組成物の投薬量はどれだけ必要であるか、またどのGOS/ポリフルクトースの比が最も適切であるか、容易に決定することができる。例えば、主な目的が、GOS及びポリフルクトースを含む組成物の経口投与によってSCFAの全レベルを高めることである場合、当業者は、様々な組成物GOS及びポリフルクトースを合わせたもの、GOS単独、ポリフルクトース単独を含むを作製し、当技術分野で知られているインビボ又はインビトロ試験を使用して、高SCFAレベルを誘発する際のそれらの効率を比較することになる。日用量又は1日当たりの投薬量に言及するとき、これは、投薬量を被験体に一度に投与しなければならないことを示すものではないと理解される。相乗的に有効な量の乳児用調合乳は、例えば、約4g/l、5g/l、又はそれ以上のGOS及びポリフルクトース混合物を含む基本的組成物例えば標準的な乳児用調合乳であって、GOSとポリフルクトースとの比が本明細書の他の部分で述べたように変えることができるものからなるものでよい例えば、90GOS:10ポリフルクトース。ポリフルクトースは、例えば、レバン及び/又はイヌリンである。組成物に使用されるレバンやイヌリンなどのポリフルクトースは、天然源植物又は細菌から抽出することができ、或いは当技術分野で知られているデノボ合成によって又は組換えDNA技法によって作製することができる。イヌリンの抽出、サイズ分離、及び精製方法については、例えばDeLeenheer、US6569488及びUS5968365に記載されている。組換え生成方法は、例えばUS6559356に記載されている。合成は、一般に、スクロース分子及びフルクトシル転写酵素活性を有する酵素の使用を含む。組成物での使用に適するイヌリンも、既に市販されており、例えばRaftiline登録商標HP,Oraftiがある。植物イヌリンは、一般に、細菌性イヌリンよりも非常低い重合度を有する細菌での100000までと比較した場合、150までである。植物源には、キク科Compositaeなどの双子葉植物種が含まれる。主にその根、球根、他は塊茎で比較的大量のイヌリンを生成する種の例は、チコリ、アスパラガス、ダリア、キクイモ、ニンニクなどであるKaur及びGuptaJBiosci200227703714参照。イヌリンは、好ましくはオリゴフルクトースを含むべきではないので、加水分解は避けるべきであり、或いは存在するオリゴフルクトース及び/又は単糖又は二糖を、使用前に除去すべきである。PDが少なくとも10、15、20、50、70、100、120、130、150、200、300、500、又はそれ以上のポリフルクトースが特に好ましい。レバンなどのポリフルクトースは、10以上のPDが維持される限り、長すぎる鎖に関連した粘度の問題が回避されるように加水分解することができる。レバンは、植物例えば単子葉植物や酵母、真菌、細菌などの天然源から得ることもでき、或いは化学的に又は組換えDNA技術を使用して作製することもできる。GOSは、植物例えばチコリ、大豆や細菌などの天然源から得ることができ、或いは当技術分野で知られるように、合成によって又は組換えDNA技術によって作製することができる。GOSは、β-ガラクト-オリゴ糖又はα-ガラクト-オリゴ糖、或いは両方の混合物でよい。特に、ガラクトース残基は、β1-4及びβ1-6グリコシド結合トランスGOS又はTOSにより結合される。組成物での使用に適するGOSも、例えばVivinal登録商標GOS,BouculoDomoIngredients,Zwolle,オランダなどが、既に市販されている。GOSは、β-ガラクトシダーゼで酵素作用によりラクトースを処理することによって、又はポリグルカンからの加水分解によって、ラクトースから得ることもできる。好ましい実施形態では、TOSを使用する。一実施形態では、好ましいポリフルクトースがイヌリンHPであり、したがってTOSとイヌリンHPとの組合せも、本明細書では好ましい実施形態である。提供されるその他の組成物は、特に上述の使用のため、ラクテートを適切な量で含む組成物である。ラクテートの適切な量は様々でよく、例えば1日当たり1から30gに及ぶ可能性がある。本発明による組成物は、食品組成物、食品サプリメント組成物、又は医薬品組成物でよい。ポリフルクトース及びGOS及び/又はラクテートの他に、追加の成分を含むことができる。食品組成物又は食品サプリメント組成物の場合、その追加の成分は、食品グレードであり且つ生理学的に許容されるものであるべきである。食品は、追加の栄養摂取又は食品サプリメント組成物を必要としない液体、固体、又は半固体の栄養組成物、特に総合食品組成物食品代用品を指す。食品サプリメント組成物は、その他の手段による栄養摂取に完全に変わるものではない。食品及び食品サプリメント組成物は、好ましい実施形態では、経腸的に、好ましくは経口的に1日数回投与されることが好ましいベビーフード又は食品サプリメント、未熟児用の食品又は食品サプリメント、乳児用食品、幼児用食品などである。食品又は食品サプリメント組成物は、非又は一部母乳保育の乳児に特に適している。また組成物は、固形食への適応期間の乳児、又は母乳から哺乳瓶へと変化していく乳児に有利に投与される。また組成物は、人乳強化サプリメントの一部でもよい。一実施形態では、組成物は、例えば当技術分野で知られているように、特に欧州委員会が命令する91/321/EEC及びその改正案に記載されているような、乳児用調合乳又は乳児用調製乳であるが、有効量のポリフルクトース及びGOSを含むように改質することができる。乳児用調合乳又は乳児用調製乳は、ラクトース不耐性乳児用の場合、乳牛乳、ヤギ乳など、乳児用調合乳IMF、又は大豆をベースにすることができ、或いは、アレルギー又は吸収に関する問題を有する乳児用の場合、窒素源としてアミノ酸を含有することができる。したがって、市販されている乳児用調合乳又は乳児用調製乳は、乳タンパク質又は大豆タンパク質ベース、脂肪、ビタミン、消化性炭水化物、及びミネラルを、推奨される1日量で含み、粉末、液体濃縮物、又はすぐに与えられる状態の組成物を含むことができる。改質された乳児用調合乳又は乳児用調製乳の投与の結果、便のpH、細菌組成物、SCFAの生成及びプロフィル、ガス生成などの分析によって決定することができるように、母乳保育の乳児の場合と類似した大腸環境がもたらされる。組成物が飲料である場合、好ましくは1日に消費され又は投与される体積1日有効用量を含むが約100から1500mlであり、より好ましくは1日当たり約450から1000mlである。調合乳が固体である場合、好ましくは1日に消費され又は投与される量1日有効量を含むが約15から220g/日であり、好ましくは約70から150kg/日の調合乳粉末である。GOS及びポリフルクトースの1日有効量は、乳児の場合、約1から30g/日に及び、好ましくは約2から10g/日に及び、成人の場合は約5から約20g/日に及ぶ。本発明による食品又は食品サプリメント組成物は、ビタミンA、B1、B2、B3、B5、B12、C、D、E、Kなどやプロバイオティクス例えばビフィドバクテリア、ラクトバシリなど、その他のプレバイオティクス、繊維、ラクトフェリン、免疫グロブリン、ヌクレオチドなどのその他の活性成分をさらに含むことができる。タンパク質や脂質、及びその他の炭水化物例えば消化性炭水化物、非消化性炭水化物、可溶性又は不溶性炭水化物は、様々な量で存在させることができる。乳児用栄養食中に存在する典型的な不溶性の非消化性炭水化物は、大豆多糖、難消化性デンプン、セルロース、及びヘミセルロースである。乳児用栄養食に使用される典型的な可溶性の消化性炭水化物は、例えばマルトデキストリン、ラクトース、マルトース、グルコース、フルクトース、スクロース、及びその他の単糖又は二糖、或いはこれらの混合物である。組成物は、例えばグルコースやラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロース、又はセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ナトリウムサッカリン、タルカム、炭酸マグネシウムなどの、その他の不活性成分及び担体を含んでもよい。組成物は、水、電解質、必須及び非必須アミノ酸、微量元素、ミネラル、繊維、甘味料、香料、着色剤、乳化剤、及び安定剤大豆レシチン、クエン酸、モノ-又はジ-グリセリドのエステル、保存剤、結合剤、芳香剤などを含んでもよい。特に乳児用食品又は食品サプリメント用の組成物に適した脂質は、乳脂肪、植物脂質、例えばキャノーラ油、ベニバナ油、ヒマワリ油、オリーブ油、魚油など、或いは適切な脂肪酸ポリ不飽和且つ/又は飽和を含む画分又はこれらの混合物である。特に乳児用食品又は食品サプリメント用の組成物に適したタンパク質には、カゼイン、乳清、脱脂練乳、大豆、牛肉、コラーゲン、トウモロコシ、及びその他の植物タンパク質、又は加水分解したタンパク質、遊離アミノ酸などが含まれる。乳児用食品又は食品サプリメント組成物に含まれるタンパク質は、アレルギーのリスクを低下させるため、広範にわたって加水分解され且つ又は一部加水分解すされることが好ましい。本発明による乳児用食品組成物は、ミネラルの推奨される1日量など、栄養的に有意な量で、毎日又は毎週の食事に不可欠な全てのビタミン及びミネラルを含むことが好ましい。食品又は食品サプリメント組成物は、一実施形態では、食品ベースを基にして即ち食品ベースから開始して又は食品ベースを含めて作製してもよい。例えば、ミルク、ヨーグルト、ヨーグルトをベースにした飲料、又はバターミルクを含むがこれらに限定することのない発酵乳製品などの乳製品を、基にすることができ又は含むことができる。そのような組成物は、有効量のポリフルクトース及びGOS又はTOSを適切な食品又は食品ベースに添加することによって、それ自体が知られている手法により調製することができる。適切なその他の食品ベースは、植物ベース、肉ベースなどでよい。本発明による食品又は食品サプリメント組成物は、治療として且つ/又は予防的に使用することができる。即ち、被験体の胃腸の問題又は疾患を診断した後に投与することができ、或いは、症状が出る前に投与することができる例えば、胃腸の問題を引き起こし易いハイリスク患者に。例えば、便秘や鼓腸、アレルギー、疝痛、腹痛、腹部痙攣、IBD、IBSなどの、大腸の疾患又は最適状態には及ばない機能に関連した症状が観察された場合、組成物の投与は、健康な大腸環境を再び確立し、又はそのような症状の発症を予防するのを助ける。一実施形態では、組成物は、健康な微生物叢及び/又は健康な大腸環境の発生を支持するために、予防的に投与される。健康な大腸環境とは、便の分析及びガス生成により決定することができるような、正常な腸の生理現象及び活性、特に栄養、水の正常な吸収、病原体の結合、コロニー化、及び感染などに対する粘膜の耐性を指す。特に、最適な生理現象及び活性を指す。大腸の任意の最適ではない機能により、記述される症状が生じ、便の分析及び/又はガス生成によって決定することができる。最適ではない機能による腸疾患又は障害を本明細書に含める。IBDや大腸炎、IBS、及び/又は増加したバリアの完全性などの腸障害又は最適ではない腸機能の症状を、治療し又は予防するための医薬品組成物は、薬物や生物活性タンパク質、又はペプチド、プロバイオティクス、及びその他のものなど、追加の生物活性成分を含むことができる。食品又は食品サプリメント組成物に関して記述される実施形態は、医薬品組成物にも適用される。本発明による組成物は、投与方法に応じて、液体や固体、半固体、錠剤、粉末などの任意の剤形にすることができる。被験体への投与は経口が好ましいが、いくつかの用途の場合、直腸又はチューブ供給胃、十二指腸、或いは小腸又は大腸にチューブを直接進入させるが適切である可能性がある。本発明の別の実施形態は、上述のように、相乗的に有効な量のGOS又はTOS及びポリフルクトースを適切な組成物ベースに添加することによって、本発明による組成物を製造するための方法を提供することである。以下の非限定的な実施例は、GOSとポリフルクトースとの相乗効果について述べている。他に特に指示しない限り、本発明の実施は、分子生物学、薬理学、免疫学、ウイルス学、微生物学、又は生化学の標準的な従来方法を用いることになる。そのような技法は、参照により全て本明細書に援用されるSambrook及びRussellMolecularCloningALaboratoryManual第3版ColdSpringHarborLaboratoryPressNYVolume1及び2Ausubel他CurrentProtocolsinMolecularBiologyCurrentProtocolsUSA及びRemingtonsPharmaceuticalSciencesMackPublishingCompanyPhiladelphiaPa第17版MicrobiologyALaboratoryManualJamesCappuccinoLaboratoryMethodsinFoodMicrobiologyWHarriganAcademicPressに記載されている。インビトロ発酵研究は、発酵パターンに対する相乗効果を示す1.1材料及び方法微生物微生物を、哺乳瓶で保育した乳児の新鮮な便から得た。1から4月齢に及ぶ乳児からの新鮮な便物質を溜め、保存培地に2時間以内入れた。組成物/基質基質として、プレバイオティクスTOS;TOSVivinalGOS,BorculoDomoIngredients,オランダ及びイヌリンraftilinHP,Orafti,ベルギーの9/1w/wの比の混合物;イヌリン;オリゴフルクトース及びイヌリンの1/1w/wの比の混合物、又は無しブランクを使用した。培地McBainMacFarlane培地:緩衝ペプトン水3.0g/l、酵母抽出物2.5g/l、ムチン刷子縁0.8g/l、トリプトン3.0g/l、L-システイン-HCl0.4g/l、胆汁酸塩0.05g/l、K2HPO43H2O2.6g/l、NaHCO30.2g/l、NaCl4.5g/l、MgSO47H2O0.5g/l、CaCl20.228g/l、FeSO47H2O0.005g/l。500mlのスコットボトルに培地を満たし、121°Cで15分間滅菌した。緩衝培地:K2HPO43H2O2.6g/l、NaHCO30.2g/l、NaCl4.5g/l、MgSO47H2O0.5g/l、CaCl20.228g/l、FeSO47H2O0.005g/l。pHを、K2HPO4又はNaHCO3を用いて6.3±0.1に調節した。500mlのスコットボトルに培地を満たし、121°Cで15分間滅菌した。保存培地:緩衝ペプトン20.0g/l、L-システイン-HCl0.5g/l、チオグリコール酸ナトリウム0.5g/l、1リットル当たりレサズリン錠剤を1個。pHを、1MNaOH又はHClを用いて6.7±0.1に調節した。培地をマイクロ波で沸騰させた。30mlの血清ボトルに25mlの培地を満たし、121°Cで15分間滅菌した。新鮮な便を保存培地と混合した。新鮮な便は、4°Cで数時間、この形で保存することができる。便懸濁液:便の保存溶液を、13000rpmで15分間、遠心分離にかけた。上澄みを除去し、便を、McBainMacFarlane培地と1:5の重量比で混合した。発酵便懸濁液3.0mlを、ボトル内で、85mgのグルコース又はプレバイオティクと合わせ又は何も添加せずブランク、完全に混合した。t=0サンプルを引き出した0.5ml。得られた懸濁液2.5mlを、緩衝培地60mlで満たされた60mlのボトル内で、透析チューブ内に引き込んだボトルを十分に閉じ、37°Cでインキュベートした。サンプルを、3、24、及び48時間後に皮下注射器で透析チューブから0.2ml又は透析緩衝液1.0mlから得て、即座に氷上に置いて発酵を停止させた。短鎖脂肪酸及びラクテートの決定実施例2を参照されたい。値は、ブランクに対して補正した。ガスの決定t=3、t=24、及びt=48で、ボトルのゴムキャップに皮下6ml注射器を刺し、ガス圧が0バールになるまでこの注射器によりヘッドスペースからガスを引き出すことによって、60mlボトルのヘッドスペース内のガス圧をガス圧メータDruckmessumformer,Econtronicドイツにより測定した。注射器内の体積は、形成されたガスの体積であった。値をブランクに対して補正した。1.2結果インビトロ発酵を、下記のサンプルを使用して実施した:1.8.5mgのTOSVivinalGOS,BorculoDomoIngredients社製,オランダ2.85mgのイヌリンRaftilinHP,Orafti社製,ベルギー3.85mgのTOS/イヌリンであって、そのTOS/イヌリンの比が9/1w/wであるもの、及び4.85mgのOFraftiloseP95,Orafti社製,ベルギー/イヌリンraftilinHPであって、OF/イヌリンの比が1/1w/wであるもの。生成されたSCFAの総量結果を図1に示す。図1は、TOS/イヌリンの混合物が、単一成分の場合よりも繊維1g当たり著しく高い量のSCFAをもたらしたが、同様にオリゴフルクトースOF及びイヌリンの混合物の場合よりも高いことを示している。また、比が1/1である85mgのTOS/イヌリンについても試験をしたがデータは図示せず、やはり相乗効果が示された。L-及びD-ラクテートの生成L-及びD-ラクテートは、t=3でのみ決定することができた。表1は、その時点で形成された代謝最終産物を示す。やはり、単一成分のTOS及びイヌリンと比べた場合、相乗的により高いラクテートの形成が、混合物であるTOS/イヌリンの場合に観察される。OF及びイヌリンとの混合物と比べた場合、ラクテートのパーセンテージ酸全体に対して及びL-/D-ラクテートの比は、TOS/イヌリン混合物の場合のほうが高い。SCFAの相対量図2は、48時間後の発酵産物のパターンを示す。TOS/イヌリンの混合物は、単一成分の場合よりも著しく高い酢酸パーセンテージを示しており、これはオリゴフルクトースOF及びイヌリンの混合物の場合よりも高い。母乳保育の乳児の便は、高い酢酸パーセンテージを示しており、したがってTOS/イヌリンの混合物は、母乳保育の乳児の場合に最も類似している発酵産物パターンをもたらす。ガス発生結果を図3に示す。ガスの発生に関し、TOSとTOS/イヌリン混合物とは、形成されたSCFA1mmol当たり最も低い量のガスを形成する。イヌリンとOF/イヌリン混合物とは、さらに多量のガス発生を示す。SCFA1mmol当たりで発生されたガスの量は、TOS/イヌリン混合物で最も低い。SCFA形成の動態表2は、SCFA形成の動態を示す。TOS/イヌリンの組合せは、24時間から48時間の間で多量のSCFAを形成することが依然として示され、これは、結腸の遠位部分で依然としてSCFAが形成され、結腸浸透性、粘膜形成、及び抗病原体効果などに対して有益な効果を発揮することを示している。また最初の3時間で、人乳オリゴ糖の場合のようにデータは図示せず最も多い量のSCFAが形成される。結腸の始まりでの素早い発酵は、抗病原体効果のため重要なものである。TOS/イヌリンに関する臨床研究:アセテートの相対的な増加及びブチレートの相対的な減少は、ビフィドバクテリアの増加に相関していない。TOS及びイヌリンは相乗効果を発揮する2.1材料及び方法それぞれの妊娠期間の最後の3カ月にある、母乳保育を決めた63名の妊婦と母乳保育を選択しない57名を募集した。出生時の体重が正常であり、先天的異常、先天的疾患、又は胃腸疾患のない乳児を、分娩後3日以内に登録した。研究は、医療センターSt.Radboud,Nijmegen,オランダの倫理委員会によって承認された。文書にされたインフォームドコンセントを、研究への登録前に両親から得た。母乳保育しないことを決めた母親の乳児を、無作為に且つ二重盲検的に2つの調合乳グループOSF、SFの一方に割り当てた。標準的な調合乳のグループSF;n=19には、通常の非サプリメントの乳児用調合乳を与えたNutrilonI,Nutricia社製,オランダ。標準希釈131g/lでの標準的な調合乳の主な組成データを表3に示す。プレバイオティク調合乳のグループOSF;n=19には、6g/lのトランスガラクト-オリゴ糖TOS;VivinalGOS,BorculoDomoIngredients社製,Zwolle,オランダ及びイヌリンPF;RaftilineHP,Orafti活性食品成分activefoodingredient,Tienen,ベルギーの混合物が補われた同様の標準的な乳児用調合乳を与えた。混合物は、90TOS及び10イヌリンポリフルクトースを含んでいた。研究用調合乳を、研究期間中に任意に与えた。母乳保育を決めた母親には、研究の過程で母乳を与え続けるよう奨励し、必要に応じて授乳コンサルタントが支援した。母乳保育の終わりに、それぞれの乳児に2種の調合乳の一方を与えた。それぞれの訪問中に未使用の調合乳の缶の数を数え、消費した調合乳の量と記録された食物摂取とを比較することによって、コンプライアンスの評価をした。アンケート母親の人口学的、臨床的、及び人体測定学的データを、分娩前に収集した。分娩に関する情報を、分娩後5日目に母親から得た。乳児の食物摂取、調合乳耐性、便の特徴、健康及び人体測定学的な情報を、出産後5日、10日、28日、及びその後は4週間ごとに1度、研究が終了するまでのアンケートから得た。便サンプル両親に、その乳児から、出生後5日目、10日目、28日目、及びその後は4週ごとに1回、便のサンプルを採取するよう依頼した。サンプルは、両親が排便後にできる限り早くおむつから採取し、便容器GreinerLabortechnik社製,オランダに収集し、即座に-20°Cで貯蔵し、調査員が持ち運び用フリーザに入れて実験室に輸送した。便サンプルの調製SCFAの決定のため、サンプル1gを、MilliQ中に10×希釈した氷水中で解凍し、ストマッカーIULInstruments社製,Barcelona,スペインを使用して10分間均質化した。350μlの均質化した便を、200μlの5v/vギ酸、100μlの1.25g/l2-エチル酪酸SigmaAldrich社製,Zwijndrecht,オランダ、及び350μlのMilliQと混合した。サンプルを、14000rpmで5分間遠心分離にかけて、大きい粒子を除去し、上澄みを-20°Cで貯蔵した。FISH分析及び乳酸測定のため、サンプルを氷水中で解凍し、リン酸緩衝生理食塩液pH7.4PBS中に10×w/v希釈し、ストマッカーを使用して10分間均質化した。均質化した便を、-20°Cで貯蔵した。蛍光insituハイブリダイゼーションFISH分析を、多少変更した状態で記述されるようにLangendijk他1995ApplEnvironMicrobiol6130693075実施した。パラホルムアルデヒド固定サンプルを、ゼラチンで被覆したスライドガラスPTFE被覆8-ウェル[1cm2/ウェル]オブジェクトスライド,CBNlabsuppliers社製,Drachten,オランダに塗布し、空気乾燥した。乾燥したサンプルを、96エタノール中で10分間脱水した。ハイブリダイゼーション緩衝液20mmTris-HCl、0.9MNaCl、0.1SDS[pH7.1]を、10ng/lのCy3標識したビフィドバクテリウム特異的プローブBifl64mod5CATCCGGYATTACCACCCと共に予熱し、乾燥サンプルに添加した。Bif164modは、プローブSGBifa0164aA18Langendijik他1995ApplEnvironMicrobiol6130693075の修正版である。スライドを、暗く湿気のあるチャンバ内で、50°Cで一晩インキュベートした。ハイブリダイゼーション後、スライドを50mlの予熱した洗浄緩衝液20mMTris-HCl、0.9MNaCl[pH7.2]中で30分間洗浄し、MilliQ中で簡単に濯いだ。全ての細菌を染色するため、サンプルを、PBS中に溶かした0.25ng/lの4’、6’-ジアミノ-2-フェニルインドールDAPIと共に、室温で5分間インキュベートした。DAPI染色後、スライドをMilliQ中で簡単に濯ぎ、乾燥し、VectashieldVectorLaboratories社製,Burlingame,CA,米国に装着し、カバースリップで覆った。スライドを、自動画像分析ソフトウェアAnalysis3.2,SoftImagingSystems社製,Munster,ドイツを搭載したOlympusAX70エピ蛍光顕微鏡を使用して、自動的に分析した。サンプル当たりのビフィドバクテリウムのパーセンテージは、25カ所の無作為に選択された顕微鏡的位置を分析することによって決定した。各位置で、DAPIフィルターセットSP100,ChromaTechnology社製,Brattleboro,米国を用いて全ての細胞を数え、Cy3フィルターセット41007,ChromaTechnology社製.Brattleboro,米国を使用して全てのビフィドバクテリアを数えることにより、ビフィドバクテリアのパーセンテージを決定した。短鎖脂肪酸の分析短鎖脂肪酸SCFA、酢酸、プロピオン酸、n-酪酸、イソ酪酸、及びn-吉草酸を、水素炎イオン化検出器を備えたVarian3800ガスクロマトグラフィGCVarian社製,WalnutCreek,米国により定量的に決定した。サンプル0.5μlを、担体ガスとしてヘリウムを使用して3.0psi、カラムStabilwax,15×0.53mm,膜厚1.00μm,Restek社製,米国内に80°Cで注入した。サンプル注入後、炉を16°C/分の速度で160°Cに加熱し、その後、20°C/分の速度で220°Cに加熱し、最後に1.5分間、220°Cの温度で維持した。インジェクタ及び検出器の温度は200°Cであった。2-エチル酪酸を、内部標準物質として使用した。ラクテート分析均質化した便を氷上で解凍し、14000rmpで5分間遠心分離にかけ、100μlの上澄みを100°Cで10分間加熱して、全ての酵素を不活性化した。ラクテートは、D-及びL-ラクテート-デヒドロゲナーゼを含むL-乳酸検出キットを使用してBoehringerMannheim社製,Mannheim,ドイツ、酵素作用により決定した。ラクテートは、十分大量の便サンプルでのみ決定した。pH分析-20°Cで貯蔵した後、便サンプルを解凍し、Inlab423pH電極MettlerToledo社製,Coulumbo,米国を備えたHandylabpHメータScottGlas社製,Mainz,ドイツを使用して、便のpHを室温で直接測定した。データ分析研究の前、パワー計算は、介入調合乳グループと標準調合乳グループとの間でのビフィドバクテリアのパーセンテージの差が30であり、このときSDが25であることを検出するために、1グループ当たり13名の乳児が含まれるべきであることを示していた。調合乳グループで予測された30の低下が理由で、計算よりも多くの乳児を研究に含めた。統計パッケージSPSSバージョン11/0を使用して、結果の統計分析を行った。全ての値について、正規分布プロットの目視検査によりその正規性をチェックした。これらグループ間でのビフィドバクテリアのパーセンテージ、pH、SCFAの相対量、及びラクテートの差を、分散分析を使用して有意性に関して試験した。有意差である場合P<0.05、ボンフェローニ事後試験を使用してこれらの群を比較した。母乳保育及び哺乳瓶保育を二重盲検的に割り当てること、及び十分な無作為化を確実にすることは可能ではないので、母乳保育グループと調合乳保育グループとを比較する統計分析は行われていなかった。母乳保育グループからのデータは、乳児がその時点で母乳だけで保育されている場合にのみ与えられる。2.2結果合計で、120名-プログループの乳児が含まれた。57名の乳児は、生後すぐに調合乳保育を開始し、調合乳グループの間で均等に分けた。生後すぐに母乳で保育された63名の乳児のうち、24名については16週齢になる前に調合乳保育に切り替え、5名は離脱した。研究被験体の特徴を、表4に示す。調合乳グループの中で、9名の乳児が、出生から16週以内で研究から離脱したSFで4名、OSFグループで5名。離脱の理由には、疝痛、牛乳アレルギーの疑い、便秘、及び実施上の問題が含まれていた。便ビフィドバクテリア保育グループの、5日齢、10日齢、4、8、12、及び16週齢における便のビフィドバクテリアのパーセンテージを表5に示し、量を表5に示す。OSFグループは、全ての生後経過時間での合計細菌数から、SFグループよりも高いビフィドバクテリアを有する傾向があるが、その差は、統計上異なるものではなかった。意外なことに、母乳保育の乳児でのビフィドバクテリアのパーセンテージも比較的低く、調合乳保育グループに準じていた。予備データは、BF及びOSFグループでのラクトバシリの増加も示すが、便細菌叢中のラクトバシリの量はビフィドバクテリアよりも少なくとも1桁少なく、パターン全体はごくわずかしか変化しない。pH結果調合乳保育乳児の便に関して測定されたpH値を、表6に示す。最低のpHは、母乳で保育した乳児に見られた。OSF調合乳で保育した乳児の便の、便pHは、SFグループよりも低かったp<0.045、5日齢を除く全ての生後経過時間。SCFA結果便中のSCFAの総量を、以下の表5に示す。全SCFAからの異なるSCFAのパーセンテージを、表6に示す。調合乳グループ間での全SCFA濃度に見出される統計的有意差はない。また、SCFAの量は、その他の保育グループの場合と同等である。しかし、早くも10日が過ぎると、標準調合乳で保育した乳児と比べたときに、OSF又は母乳で保育した乳児との間でSCFAプロフィルの差を見ることができる。GOS及びポリフルクトースを含有する調合乳で保育された乳児、及び母乳で保育された乳児は、標準調合乳で保育した乳児と比べた場合、より高いパーセンテージのアセテート、及びより低いパーセンテージのプロピオネート、ブチレート、iC4-6SCFAを有する。ラクテート結果全てのグループのラクテート濃度mmol/kg便を、表5に示す。早くも5日齢から、OS調合乳図示せず及び母乳グループは、標準調合乳グループと比べた場合により高い量のラクテートを有する。ラクテートの相対量SCFA及びラクテートの合計に対するパーセンテージとしては、母乳保育の乳児で最も高く、標準調合乳保育の乳児で最も低い。TOS/イヌリンを含有する調合乳で保育された乳児は、中間的な相対量のアセテートを有する。16週齢のOSF保育の乳児におけるラクテートのパーセンテージ酸全体に対しては、SFの乳児の場合と著しく異なっている。P005SFとの比較;SF標準的な調合乳、OSFGOSイヌリンが補われたSFBF母乳。上記事項は、このGOSとポリフルクトースとの組合せで保育された乳児の便において、pHが低下すること、より多くのラクテートが形成されること、母乳保育の乳児によく似ている酸アセテート及びラクテートパターンが形成されること、及びこの効果は、ビフィドバクテリアの定量的増加が原因であるとすることができないことを実証している。Muc-2、PGE1、及びPGE2発現に対するラクテート及びSCFA混合物の有益な効果3.1材料及び方法ラクテート及びSCFA混合物の効果を、以下の変更点、即ちラクテート及びアセテート/プロピオネート/ブチレート90/5/5混合物について試験をしたこと以外、WillemsenLEMKoetsierMAvanDeventerSJHvanTolEAFGut5214421447に記載される通りに分析した。粘液生成実験では、CCD18及びT83細胞の同時培養を使用したのに対し、PGE1及びPGE2生成実験では、CCD18の単一培養を使用した。3.2結果90/5/5アセテート/プロピオネート/ブチレートの混合物中のSCFAとL-ラクテートの用量は、図4Aに見られるように、CCD18とT84細胞の同時培養中で、MUC-2発現を依存的に誘発した。またPGE1及びPGE2の濃度は、図4Bに見られるように、CCD18細胞で増加する。添加された有機酸がより高い濃度であるとき、その増加は統計的に有意なものになる。ラクテートが結腸収縮に及ぼす影響4.1材料及び方法オスのウィスターラットCKP/Harlan,Wageningen/Horst,オランダを、制御された温度及び光サイクルの条件下で収容し、食物ペレット及び水に自由に触れることができるようにした。動物に、N2O、O2、及びイソフルランの混合物で麻酔をかけ、腹部を切開し、結腸をすぐに取り出した。組織を、クレブス-ヘンゼライト緩衝液pH7.4組成単位mM:118.0NaCl、4.75KCl、1.18MgSO4、2.5CaCl2、10グルコース、1.17KH2PO4、及び24.9NaHCO3に入れた。結腸を遠位部分と近位部分とに切断し、クレブス-ヘンゼライト緩衝液で濯ぎ、それと同時に内容物の便を静かに搾り出した。可能な限りインビボ状態に近付けるため、95O2-5CO2を連続通気したクレブス-ヘンゼライト緩衝液が入っている20mlウォータジャケット37°C器官浴Schuler,HSE社製,ドイツ内の、等力トランスデューサF30型372,HSE社製,ドイツに、1cmの完全に無傷な切片を長手方向に結合した。切片を徐々に延ばして静止張力1gにし、断続的に洗浄しながら45分間平衡にした。静止時及び種々の刺激に対する応答時の切片の張力を、トランスデューサ増幅器モジュールHSE社製,ドイツにより増幅し、マルチペンレコーダRikadenki,HSE社製,ドイツで記録した。切片を、40mMKClと共に5分間インキュベートし、収縮応答を測定した。KClは、5分間隔で3回続けて洗浄することにより、洗い流した。次いで切片を、アセテート又はL-乳酸ナトリウムの濃度を100mMまで上昇させながらインキュベートした。酸溶液は、蒸留水で新たに調製した。NaOHをアセテートに添加して、中性pHを得た。脂肪酸とのインキュベーションの終了時、40mMKClを添加して、KClに対する収縮応答が脂肪酸の影響を受けるか否か決定した。新たなインキュベーションの前に、断続的に洗浄しながら、切片を新鮮なクレブス-ヘンゼライト緩衝液中で45分間平衡にした。実験プロトコルは、結腸の2つの近位切片及び2つの遠位切片からなるものであった。データ分析n=3のため、刺激によって誘発される収縮レベルを、5分間のインキュベーション後の張力gと定義した。同一切片近位又は遠位から得られたデータを使用して、平均値を計算し、各切片は、それ自体の対照サンプルとしての働きをした。4.2結果図5からわかるように、酢酸ナトリウム、及び特にL-乳酸ナトリウムは、緊張性収縮の張力を低下させる。緩和効果は、結腸の近位部分におけるよりも、結腸の遠位部分でのほうが高い。また、自然発生的な収縮、相動性収縮の回数は、酢酸ナトリウム及びL-乳酸ナトリウムを添加したときに結腸の近位部分で減少し、一方、結腸の遠位部分では何の効果も観察されない。しかし結腸の近位部分では、KClに対する応答としての緊張性収縮が、25mMの酢酸ナトリウム又はL-乳酸ナトリウムが存在する場合又は存在しない場合で同等である。より高い濃度では、KClを添加した後であっても、著しい緩和が観察される。"