タンパク質と、界面活性剤と、ラジカル消去剤、キレート剤、または連鎖停止剤の群から選択される少なくとも1つの抗酸化剤とを含む、液体医薬製剤。前記少なくとも1つの抗酸化剤がラジカル消去剤の群から選択される、請求項1記載の液体医薬製剤。前記ラジカル消去剤が、アスコルビン酸、BHT、BHA、亜硫酸ナトリウム、pアミノ安息香酸、グルタチオン、および没食子酸プロピルから選択される、請求項2記載の液体医薬製剤。前記タンパク質が、治療用タンパク質、好ましくは抗体、より好ましくはモノクローナル抗体である、請求項1~3のいずれか一項記載の液体医薬製剤。前記キレート剤が、EDTAおよびクエン酸から選択される、請求項1~4のいずれか一項記載の液体医薬製剤。前記連鎖停止剤が、メチオニン、ソルビトール、エタノール、およびNアセチルシステインから選択される、請求項1~5のいずれか一項記載の液体医薬製剤。前記界面活性剤が、ポリソルベートおよびポロキサマーの群から選択される、請求項1~7のいずれか一項記載の液体医薬製剤。前記ポリソルベートが、ポリソルベート20またはポリソルベート80である、請求項7記載の液体医薬製剤。タンパク質を含む液体医薬製剤において界面活性剤の分解を防止するための、ラジカル消去剤、キレート剤、または連鎖停止剤からなる群より選択される抗酸化剤の使用。前記ラジカル消去剤が、アスコルビン酸、BHT、亜硫酸ナトリウム、pアミノ安息香酸、グルタチオン、および没食子酸プロピルから選択される、請求項9記載の抗酸化剤の使用。前記キレート剤が、EDTAおよびクエン酸から選択される、請求項9または10記載の抗酸化剤の使用。前記連鎖停止剤が、メチオニン、ソルビトール、エタノール、およびNアセチルシステインの群から選択される、請求項9~11のいずれか一項記載の抗酸化剤の使用。前記タンパク質が、治療用タンパク質、好ましくは抗体、より好ましくはモノクローナル抗体である、請求項9~12のいずれか一項記載の抗酸化剤の使用。前記界面活性剤が、ポリソルベートおよびポロキサマーの群から選択される、請求項9~13のいずれか一項記載の抗酸化剤の使用。前記ポリソルベートが、ポリソルベート20および/またはポリソルベート80である、請求項14記載の抗酸化剤の使用。本明細書に使用される医薬製剤または製剤との用語は、例えば、哺乳動物、例えば治療が必要なヒトに投与される薬学的に許容される添加剤と共に、治療的に有効な量の活性のある医薬成分、例えばポリペプチドまたは抗体を含む、混合物または溶液を意味する。本明細書に使用されるポリペプチドとの用語は、アミノ酸のポリマーを意味し、特定の長さのものは意味しない。したがって、ペプチド、オリゴペプチド、およびタンパク質断片は、ポリペプチドの定義に含まれる。抗体との用語は、抗体全体および抗体断片を含むがこれらには限定されない、様々な形態の抗体構造を包含する。本発明に係る抗体は、本発明に係る特有の性質が維持されている限り、好ましくはヒト化抗体、キメラ抗体、またはさらに遺伝子操作された抗体である。抗体断片は、全長抗体の一部、好ましくはその可変ドメイン、または少なくともその抗原結合部位を含む。抗体断片の例には、二重特異性抗体、単鎖抗体分子、抗体断片から形成された多特異性multispecific抗体が含まれる。scFv抗体は、例えば、HoustonJSMethodsinEnzymol2034696に記載される。本明細書に使用されるモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体製剤との用語は、単一のアミノ酸組成の抗体分子の調製物を指す。キメラ抗体との用語は、1つの起源または種に由来する可変領域、すなわち結合領域と、異なる起源または種に由来する定常領域の少なくとも一部とを含む、通常、組換えDNA技術によって調製された抗体を指す。マウス可変領域とヒト定常領域を含むキメラ抗体が好ましい。本発明によって包含される他の好ましい形態のキメラ抗体は、定常領域が、元の抗体の定常領域から、特にC1q結合および/またはFc受容体FcR結合に関して、本発明に係る特性を生じるように修飾されたまたは変化したものである。そのようなキメラ抗体は、クラススイッチ抗体とも呼ばれる。キメラ抗体は、免疫グロブリン可変領域をコードするDNAセグメントと免疫グロブリン定常領域をコードするDNAセグメントを含む免疫グロブリン遺伝子の発現産物である。キメラ抗体を産生するための方法には、当技術分野に周知である従来の組換えDNAおよび遺伝子トランスフェクション技術が含まれる。例えば、MorrisonSLetalProcNatlAcadSciUSA8168516855;米国特許第5202238号および同第5204244号を参照のこと。本明細書に使用されるヒト抗体との用語は、ヒト生殖系の免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は、当技術分野で周知であるvanDijkMAandvandeWinkelJGCurrOpinChemBiol5368374。ヒト抗体はまた、免疫化すると、内因性の免疫グロブリン産生が無い場合にヒト抗体の完全レパートリーの産生または選択が可能である、トランスジェニック動物例えばマウスにおいても産生され得る。生殖系変異型マウスへの、ヒト生殖系の免疫グロブリン遺伝子アレイのトランスファーにより、抗原を投与するとヒト抗体の産生が生じる例えば、JakobovitsAetalProcNatlAcadSciUSA9025512555;JakobovitsAetalNature362255258;BruggemannMetalYearImmunol73340を参照のこと。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーにおいて産生され得るHoogenboomHRandWinterGJMolBiol227381388;MarksJDetalJMolBiol222581597。ColeetalとBoerneretalの技術はまた、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能であるColeetalMonoclonalAntibodiesandCancerTherapyAlanRLissp77;およびBoernerPetalJImmunol1478695。本発明に係るキメラ抗体およびヒト化抗体について既に述べたように、本明細書に使用されるヒト抗体の用語はまた、定常領域が、特にC1q結合および/またはFcR結合に関して、例えばクラススイッチ、すなわちFc部分の変化または変異例えば、IgG1からIgG4および/またはIgG1/IgG4変異等により、本発明に係る特性を生じるように修飾された抗体を含む。薬学的に許容される添加剤との用語は、医薬品の製造に使用される緩衝剤、溶媒、等張化剤、安定剤、抗酸化剤、界面活性剤、またはポリマー等の、治療活性を有さず且つ許容される毒性を有する、任意の成分を指す。それらは、米国の食品医薬品局によって推奨されるものを含む確立された政府の基準に従うヒトへの投与に対して、一般に安全である。本明細書に使用される緩衝剤との用語は、医薬調製物のpHを安定化する、薬学的に許容される添加剤を意味する。適した緩衝剤は当技術分野に周知であり、文献において見出すことができる。好ましい薬学的に許容される緩衝剤には、ヒスチジン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、およびリン酸緩衝剤、またはそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。最も好ましい緩衝剤には、クエン酸、Lヒスチジン、またはLヒスチジンとLヒスチジン塩酸塩の混合物が含まれる。他の好ましい緩衝剤は、酢酸緩衝剤である。使用される緩衝剤から独立して、pHは、当技術分野に既知の酸または塩基、例えば、塩酸、酢酸、リン酸、硫酸、およびクエン酸、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウム等で調整され得る。本明細書に使用される等張化剤との用語は、製剤の張度を調節するために使用される、薬学的に許容される添加剤を意味する。張度は一般に、通常のヒト血清の浸透圧に対する、溶液の浸透圧に関する。製剤は、低張性、等張性、または高張性であり得る。製剤は典型的に、好ましくは等張性である。等張性の製剤は、液体、または例えば凍結乾燥形態等の固体形態から再構成された液体であり、生理的塩溶液および血清等の比較した他の溶液と同じ張度を有する溶液を意味する。適した等張化剤には、塩、アミノ酸、および糖が含まれるが、これらに限定されない。好ましい等張化剤は、塩化ナトリウム、トレハロース、スクロース、またはアルギニンである。張度は、半透膜によって分離される二つの溶液の浸透圧の程度である。浸透圧は、半透膜を超えて内向きに流れる水を妨げるよう溶液にかかる圧力である。膜を横断することができない溶質のみが浸透圧を及ぼすため、浸透圧と張度は、このような溶質によってのみ影響を受ける。膜を自由に横断できる溶質は膜の両側において常に同じ濃度で存在するため、このような溶質は張度に影響しない。等張化剤または安定剤との関連におけるアミノ酸との用語は、カルボキシル基に対しα位に位置するアミノ部分を有する、薬学的に許容される有機分子を意味する。アミノ酸の例には、アルギニン、グリシン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリンが含まれる。等張化剤または安定剤との関連における好ましいアミノ酸は、アルギニン、トリプトファン、メチオニン、ヒスチジン、またはグリシンである。本明細書に使用される糖sugarとの用語は、単糖またはオリゴ糖を意味する。単糖は、例えばアミノ糖等の単純糖simplesugarおよびそれらの誘導体を含む、酸によって加水分解できない単量体の炭水化物である。単糖の例には、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、ソルボース、リボース、デオキシリボース、ノイラミン酸が含まれる。オリゴ糖は、分枝または一本鎖のいずれかの、グリコシド結合を介して連結された、複数の単量体糖ユニットmonomericsaccharideunitからなる炭水化物である。オリゴ糖内の単量体糖ユニットは、同じでもまたは異なっていてもよい。単量体糖ユニットの数により、オリゴ糖は、二糖、三糖、四糖、五糖等である。多糖とは対照的に、単糖およびオリゴ糖は水溶性である。オリゴ糖の例には、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトースおよびラフィノースが含まれる。好ましい糖は、スクロースおよびトレハロースである。本明細書に使用される界面活性剤surfactantとの用語は、撹拌および剪断等の機械的ストレスからタンパク質製剤を保護するために使用される、薬学的に許容される添加剤を意味する。薬学的に許容される界面活性剤の例には、ポロキサマー、ポリソルベート、ポリオキシエチレンアルキルエーテルBrij、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテルTritonX、またはドデシル硫酸ナトリウムSDSが含まれる。好ましい界面活性剤は、ポリソルベートおよびポロキサマーである。本明細書に使用されるポリソルベートとの用語は、典型的にはエチレンオキシドと共重合された、ソルビトールおよびその無水物のオレイン酸エステルを意味する。好ましいポリソルベートは、ポリソルベート20ポリソルビタンモノラウレート、Tween20、またはポリソルベート80ポリソルビタンモノラウレート、Tween80である。本明細書に使用されるポロキサマーとの用語は、ポリPEOの2つの疎水性鎖が隣接する、ポリPPOの中央の疎水性鎖から構成された、非イオン性トリブロックコポリマーを指し、PPOまたはPEOの各鎖は、異なる分子量であってもよい。ポロキサマーはまた、商標名であるPluronicによっても知られている。好ましいポロキサマーは、PPO鎖が1800gmolの分子質量を有し且つPEO含量が80であるポロキサマーである、ポロキサマー188である。抗酸化剤との用語は、活性のある医薬成分の酸化を防止する、薬学的に許容される添加剤を意味する。これには、キレート剤、活性酸素消去剤および連鎖停止剤が含まれる。抗酸化剤は、EDTA、クエン酸、アスコルビン酸、ブチルヒドロキシトルエンBHT、ブチルヒドロキシアニソールBHA、亜硫酸ナトリウム、pアミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、メチオニン、エタノール、およびNアセチルシステインを含むが、これらに限定されない。実験部長期研究試験研究1タンパク質の非存在下プラセボで、240mMのトレハロース、およびPS20またはPS80の002またはwvのいずれかと、pH6で、20mMHisHisHClSAAjinomotoOmnichemNVLouvainlaNeuveBelgiumを用いて、製剤を調製した。0001のBHTFlukaChemmieAGSteinenheim、001のEDTAFlukaChemmieAGSteinenheim、10mMのメチオニンSAAjinomotoOmnichemNVLouvainlaNeuveBelgiumを製剤に添加した。この製剤を022μmのMillexGVPVDFシリンジフィルターユニットMilliporeBedfordMAUSAを用いて濾過し、滅菌された標準6mLφ20mmタイプI透明ガラスインジェクションバイアルSchottformavitrumAGStGallenSwitzerlandに無菌的に入れて24mLにし、Teflon登録商標でコートされたインジェクションストッパーDaikyoSeikoTokyoJapanで閉じ、アルミニウムクリンプキャップで封をした。バイアルを5°C、25°Cおよび40°Cで保存した。試料は3ヶ月にわたって分布する時点で分析した。試験研究2タンパク質の非存在下プラセボで、240mMのトレハロース、およびPS20の002またはwvのいずれかと、pH6で、20mMのHisHisHClSAAjinomotoOmnichemNVLouvainlaNeuveBelgiumを用いて製剤を調製した。以下の抗酸化剤:0005のBHTFlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerland、01のEDTAFlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerland、20mMのメチオニンSAAjinomotoOmnichemNVLouvainlaNeuveBelgium、20mMのクエン酸FlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerland、05のアスコルビン酸AcrosorganicsGeelBelgium、01のグルタチオンFlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerland、02の亜硫酸ナトリウムMerckKGaADarmstadtGermany、05のソルビトールFlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerland、05のNアセチルシステインFlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerland、001の没食子酸プロピルFlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerland、001のpアミノ安息香酸FlukaChemmieAGSteinenheimSwitzerlandを試験し、かつポロキサマー188を製剤に添加した。製剤に300ppmのH202または100ppmのFeCl2のいずれかを添加した。この製剤を022μmMillexGVPVDFシリンジフィルターユニットMilliporeBedfordMAUSAを用いて濾過し、滅菌された標準6mLφ20mmタイプI透明ガラスインジェクションバイアルSchottformavitrumAGStGallenSwitzerlandに無菌的に入れて24mLにし、Teflon登録商標でコートされたインジェクションストッパーDaikyoSeikoTokyoJapanで閉じ、アルミニウムクリンプキャップで封をした。バイアルを25°Cおよび40°Cで保存した。試料は3週間にわたって分布する時点で分析した。ポリソルベートの定量化HPLCELSDをベースにした方法または蛍光ミセル法のいずれかを使用して、製剤中のポリソルベート濃度の定量化を行った。HPLCELSD法HPLCELSD法は、製剤中のポリソルベートを分析するために、HewittetalHewittDZhangTKaoYH2008Quantitationofpolysorbate20inproteinsolutionsusingmixedmodechromatographyandevaporativelightscatteringdetectionJChromatogrA1215156160によって記載された方法に基づいた。Watersの30μmミックスモードカラムOasisMAXを使用した。ポリソルベートピーク領域を決定し、較正曲線と比較した。潜在的なアッセイ干渉を除くため、較正基準は、試料中に存在した全ての添加剤を含んだ。蛍光ミセル法蛍光ミセルアッセイ法は、抽出試料中のポリソルベート濃度を決定するために使用した。アッセイ法は、ポリソルベートミセルの疎水性コア中への、蛍光色素、Nフェニル1ナフチルアミンNPNの取り込みに基づく。NPNは水性環境で蛍光量子収率が低いのに対し、非極性の設定では高い収率が観察される。試験は、750mLニッティドリアクションコイルknittedreactioncoilDionexSunnyvaleCAを介してWaters474蛍光検出器に連結された、Waters2695HPLCMilfordMAを用いたフローインジェクションアッセイFIAとして組み立てた。蛍光検出器は、励起波長350nm、発光波長420nmに設定した。移動相は、015Mの塩化ナトリウム、005MのTRIS、pH80、5のアセトニトリル、15ppmのBrij35、および50mMのNPNNフェニル1ナフチルアミンからなる。定量化のために、ポリソルベートピーク領域を決定し、較正曲線と比較した。潜在的なアッセイ干渉を除くため、較正基準は、試料中に存在した全ての添加剤を含んだ。過酸化物の決定過酸化物の決定は、酸性条件下でのFe2からFe3への急速なヒドロペルオキシドを介した酸化、および560nmで強く吸収するキシレノールオレンジとの複合体に依拠するFOXIIアッセイHaEWangWWangYJ2002Peroxideformationinpolysorbate80andproteinstabilityJPharmSci9122522264に基づく、ThermoFischerの市販の過酸化物定量キットであるPeroXOquantによって行った。タンパク質なしの製剤を過酸化物の決定のために使用した。結果:過酸化物の濃度は、製剤溶液中で増加することが見出された図1Aおよび図1B。この増加は、バルクおよび水溶液において他者により以前に認められていたが、薬学的に関連する状態において同じ報告は記載されていない。ポリソルベート濃度は、経時的に製剤溶液中で減少し、より高い温度でより顕著であることが見出された図2Aおよび図2B。追加の成分を含めることにより、それが存在しない場合と比較して、水性製剤におけるポリソルベートの安定性が改善され得る。これは、BHT、メチオニン、およびEDTAが添加された製剤中のポリソルベート含量を試験することにより証明された。これらの添加が、ポリソルベートの分解を最小限にすることに正の効果を有することは明らかである図3Aおよび図3B。以下の成分は、ポリソルベート分解を最小限にするそれらの可能性についてさらにスクリーニングした:試験した抗酸化剤は、概して、キレート剤例えば、EDTA、クエン酸、活性酸素消去剤例えば、アスコルビン酸、BHT、亜硫酸ナトリウム、pアミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、および連鎖停止剤例えば、メチオニン、ソルビトール、エタノール、およびNアセチルシステインのカテゴリーのものであった図4。ポリソルベート分解を含む積極的な酸化ストレス条件、すなわち300ppmH202および100ppmFeCl2に対して製剤を試験した。温度が高くなり且つ時間が長くなるに伴って、ポリソルベート分解がより顕著になることが、再び確認された。特にラジカル消去剤は、キレート剤および連鎖停止剤と比べて非常に重要な役割を担っているようであり、上述の全ての添加剤は改善を示し、すなわちポリソルベート分解を最小限にした。