配列番号1:5’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’または配列番号1と比較して75、80、85、90、95もしくは95超、96、97、98、99の同一性を有し、かつ配列番号1としてIRS-1遺伝子発現を阻害する能力を保存している9~30個のヌクレオチドからなる任意の機能保存配列を有する治療的有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチド含み、後眼部内への投与によってそれを必要としている対象に投与される、少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。配列番号1の前記機能保存配列は5’-TATCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号2である、請求項1に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。配列番号1の前記機能保存配列は以下からなる群から選択される、請求項1に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物:5’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCTGC-3’配列番号35’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCTG-3’配列番号45’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCT-3’配列番号55’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGC-3’配列番号65’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATG-3’配列番号75’-TCTCCGGAGGGCTCGCCAT-3’配列番号85’-CTCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号95’-TCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号105’-CCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号115’-CGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号125’-GGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号135’-GAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号145’-AGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号155’-GGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号165’-GCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号175’-CTCGCCATGCTGCT-3’配列番号185’-TCGCCATGCTGCT-3’配列番号195’-CGCCATGCTGCT-3’配列番号20。前記オリゴヌクレオチドは約0.01mg/ml~約100mg/mlの濃度である、請求項1~3のいずれか1項に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。1回の投与につき注射される組成物の体積は1~500μlの範囲である、請求項1~4のいずれか1項に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。前記後眼部内への投与は硝子体内注射である、請求項1~5のいずれか1項に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。前記組成物は、1週間に最高1回、好ましくは2週間に1回、より好ましくは3週間に1回、さらにより好ましくは1ヶ月に1回、なおさらにより好ましくは2ヵ月に1回注射される、請求項1~6のいずれか1項に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。前記組成物は単位用量の形態で包装されている、請求項1~7のいずれか1項に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。前記組成物は無菌である、請求項1~8のいずれか1項に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。前記単位用量は使い捨て注射器である、請求項8または請求項9に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。前記病的血管新生に関連する病気は、ブドウ膜炎、脈絡膜炎、網脈絡膜炎、脈絡網膜炎、網膜変性、AMD、網膜剥離、網膜血管新生、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症ROP、糖尿病性網膜症、後部外傷、網膜血管病変、眼内炎、黄斑浮腫、網膜の炎症性病変、網膜に影響を及ぼす全身性病変であってもよい、請求項1~10のいずれか1項に記載の少なくとも1種の眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療および/または予防に使用される医薬組成物。従って、本発明は、治療的有効量のGS-101を含み、それを必要としている対象に眼内経路によって投与される、病的血管新生に関連する眼の内部の眼障害を治療するための医薬組成物またはその治療に使用される医薬組成物に関する。本発明の一実施形態では、前記眼内経路とは、眼の内部への投与、好ましくは後眼部内への投与、より好ましくは硝子体内への投与を指す。好ましくは、前記投与は注射である。一実施形態では、本発明の組成物によって治療される眼障害は、病的網膜血管新生に関連する網膜の障害である。本発明によれば、本組成物は、眼内注射に適した形態に製剤化される。第1の実施形態によれば、本組成物は水溶液である。水溶液の例としては、GS-101のNaCl溶液、好ましくは0.9NaCl溶液が挙げられるが、これらに限定されない。第2の実施形態によれば、本組成物はインプラント内に含まれている。第3の実施形態によれば、本組成物は、徐放システム、組成物もしくは装置に関連している。第4の実施形態によれば、本組成物は、GS-101および高分子剤を含んでいてもよい。本発明によれば、GS-101は、配列番号1:5’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’または配列番号1と比較して75、80、85、90、95もしくは95超、96、97、98、99の同一性を有し、かつ配列番号1として病的血管新生を阻害する能力を保存している9~30個のヌクレオチドからなる任意の機能保存配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドである。同一性または同一のという用語は、2つ以上のヌクレオチド配列間の関係において使用されている場合、2つ以上の塩基からなる鎖間の一致数によって決定されるヌクレオチド配列間の配列類似性の程度を指す。同一性とは、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラムすなわちアルゴリズムによって扱われるギャップアラインメント存在すればを有する2つ以上の配列のより短い配列間の完全な一致率の尺度である。関連するヌクレオチド配列の同一性は、公知の方法によって容易に計算することができる。そのような方法としては、ComputationalMolecularBiologyLeskAMedOxfordUniversityPressNewYork1988、BiocomputingInformaticsandGenomeProjectsSmithDWedAcademicPressNewYork1993、ComputerAnalysisofSequenceDataPart1GriffinAMandGriffinHGedsHumanaPressNewJersey1994、SequenceAnalysisinMolecularBiologyvonHeinjeGAcademicPress1987、SequenceAnalysisPrimerGribskovMandDevereuxJedsMStocktonPressNewYork1991およびCarilloetalSIAMJAppliedMath481073に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間の最大の一致を与えるように設計されている。同一性の決定方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに記述されている。好ましいコンピュータプログラムによる2つの配列間の同一性決定方法としては、GAPDevereuxetalNuclAcidRes12387、GeneticsComputerGroup社、ウィスコンシン大学、ウィスコンシン州マディソン、BLASTP、BLASTNおよびFASTAなどのGCGプログラムパッケージが挙げられる。BLASTXプログラムは、国立生物工学情報センターNCBIおよび他の提供源BLASTManualAltschuletalNCIBNLMNIHメリーランド州ベセズダ20894、Altschuletal、上記参照から公的に入手可能である。また、周知のSmithWatermanアルゴリズムを使用して同一性を決定してもよい。配列番号1の機能保存配列の例は、配列番号25’-TATCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’である。配列番号1の機能保存配列の他の例は、以下の配列である:5’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCTGC-3’配列番号35’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCTG-3’配列番号45’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGCT-3’配列番号55’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATGC-3’配列番号65’-TCTCCGGAGGGCTCGCCATG-3’配列番号75’-TCTCCGGAGGGCTCGCCAT-3’配列番号85’-CTCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号95’-TCCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号105’-CCGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号115’-CGGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号125’-GGAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号135’-GAGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号145’-AGGGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号155’-GGCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号165’-GCTCGCCATGCTGCT-3’配列番号175’-CTCGCCATGCTGCT-3’配列番号185’-TCGCCATGCTGCT-3’配列番号195’-CGCCATGCTGCT-3’配列番号20一実施形態によれば、9~30個のヌクレオチドからなる前記機能保存配列は、C末端およびN末端において他の核酸間に配列番号1または配列番号2を含む配列である。また、前記機能保存配列は、配列番号1または配列番号2の9~12個の隣接ヌクレオチド断片であってもよい。本医薬組成物は、眼内経路のための任意の医薬的に許容される賦形剤と共に、上記GS-101または上記その機能保存配列を含んでいてもよい。本発明の一実施形態では、前記眼内経路は、眼の内部への投与、好ましくは後眼部内への投与、より好ましくは硝子体内への投与である。好ましくは、前記投与は硝子体内注射である。本発明は、医薬的に許容される賦形剤と共に上記GS-101または上記その機能保存配列を含む治療的有効量の組成物を、それを必要としている対象に投与することを含み、前記組成物は眼内経路によって投与される、当該対象における眼の内部の病的血管新生に関連する病気の治療方法にも関する。本発明の一実施形態では、前記眼内経路は、眼の内部への投与、好ましくは後眼部内への投与、より好ましくは硝子体内への投与である。好ましくは、前記投与は硝子体内注射である。一実施形態では、眼の内部の病的血管新生に関連する前記病気は、ブドウ膜炎、脈絡膜炎、網脈絡膜炎、脈絡網膜炎、網膜変性、AMD、網膜剥離、網膜血管新生、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症ROP、糖尿病性網膜症、後部外傷、網膜血管病変、眼内炎、黄斑浮腫、網膜の炎症性病変、および網膜に影響を及ぼす全身性病変の中から選択される。一実施形態によれば、上記GS-101またはその機能保存配列は、本発明の組成物中に、約0.01mg/ml~約100mg/ml、好ましくは0.1mg/ml~80mg/ml、より好ましくは6~60mg/ml、さらにより好ましくは約8~約12mg/mlの濃度で存在する。一実施形態によれば、1回の投与につき注射される本組成物の体積は、1~500μl、好ましくは約5~400μl、より好ましくは5~300μlの範囲である。一実施形態によれば、注射される本組成物の体積は約50μlである。一実施形態によれば、1回の投与につき注射されるGS-101の量は、10~5000μg、好ましくは約50~4000μg、より好ましくは50~3000μgの範囲である。一実施形態によれば、注射されるGS-101の量は約500μgである。一実施形態では、本医薬組成物は、眼内投与が硝子体内への投与となるような組成物である。一実施形態によれば、本組成物は、3週間に最高1回、好ましくは4週間に最高1回、さらにより好ましくは8週間に1回注射される。実施例に示すように、本発明の組成物により、3週間に最高1回の注射を行う最適な治療が得られる。内皮細胞がGS-101と共に生体外でインキュベートされる場合、その効果がインキュベートから24時間後に最大となり、かつ単に一過性であるため、この結果は驚くべきものである。一実施形態によれば、当該患者は、2~5ヶ月、好ましくは3ヶ月の間、3週間に1回の注射、好ましくは4週間に1回の注射で治療される。一実施形態によれば、治療期間は3~6ヶ月である。患者の視力の低下が認められた場合に治療を再開してもよい。本発明の一実施形態では、本明細書に上述されている前記医薬組成物は、単位用量の形態で包装されている。別の実施形態では、前記単位用量は使い捨て注射器である。前記単位用量が無菌であると有利である。定義本発明によれば、以下の用語は以下の意味を有する。約とは、そのように数値化された数、パラメータまたは特性の±10を意味する。眼の内部とは、眼の前部または後部を含む眼球内に位置する任意の領域を意味し、一般に、眼球内に存在する任意の機能性例えば視覚のため組織または構造組織、あるいは眼球の内部を部分的もしくは完全に覆う組織層または細胞層が挙げられるが、これらに限定されない。領域の具体例としては、前眼房、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、黄斑および網膜ならびに眼の後方領域もしくは部位に血管新生するか神経分布する血管および神経が挙げられる。好ましい実施形態によれば、眼の内部とは、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、黄斑および網膜ならびに眼の後方領域もしくは部位に血管新生するか神経分布する血管および神経を含む後眼部を意味する。好ましくは、眼の内部の疾患という表現は、網膜および/または脈絡膜および/または黄斑および/または後眼房の疾患を指す。病的血管新生に関連する病気または病的血管新生に関連する病気は、望ましくない血管新生が存在する疾患であり、以下の疾患:ブドウ膜炎、脈絡膜炎、網脈絡膜炎、脈絡網膜炎、網膜変性、AMD、網膜剥離、網膜血管新生、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症ROP、糖尿病性網膜症、後部外傷、網膜血管病変、眼内炎、黄斑浮腫、網膜の炎症性病変、網膜に影響を及ぼす全身性病変が挙げられ、場合により同じ病変の治療のための他の治療法と併用して治療される。特に、本発明は、血液およびリンパの血管新生に取り組むことを目的とする。疾患を治療することとは、臓器、組織もしくは細胞機能の欠損または欠如に関連する疾患、障害または病気の少なくとも1つの悪影響または症状を予防すなわち、起こらないようにする、減少または軽減することを意味する。治療的有効量とは、標的に対して顕著なマイナスもしくは有害な副作用を引き起こすことなく、1病的血管新生に関連する疾患、障害または病気の発症を遅らせるまたは予防する、2病的血管新生に関連する疾患、障害または病気の1つ以上の症状の進行、激化または悪化を減速または停止する、3病的血管新生に関連する疾患、障害または病気の症状を改善させる、4病的血管新生に関連する疾患、障害または病気の重症度または発生率を低下させる、あるいは5病的血管新生に関連する疾患、障害または病気を治癒することを目的とした薬剤の濃度または量を意味する。予防もしくは予防的措置のために、病的血管新生に関連する疾患、障害または病気の発症前に治療的有効量を投与してもよい。代わりまたは追加として、治療措置のために、病的血管新生に関連する疾患、障害または病気の開始後に治療的有効量を投与してもよい。一実施形態では、当該標的は眼の内部であり、本実施形態では、GS-101の治療的有効量は、眼の内部の病的血管新生に関連する病気の少なくとも1つの症状を減少させるのに有効な量である。眼内にとは、眼内投与経路を意味する。一実施形態では、眼内投与経路は、眼の内部への投与、好ましくは後眼部内への投与、より好ましくは硝子体内への投与である。好ましい眼内経路は硝子体内注射である。本発明によれば、眼内経路は、有効成分すなわち、GS-101またはその機能保存配列のかなり低量で治療的に正確な投与を実現し、最適な治療が得られるという点で特に興味深い。実際に、実施例に示すように、本発明の組成物では3週間に最高1回の注射で最適な治療が得られる。細胞がGS-101と共にインキュベートされた場合、その効果はインキュベートから24時間後に最大となり、かつ単に一過性であるため、この結果は驚くべきものである。対象とは、哺乳類、好ましくはヒトを指すが、例えばペットなどの動物を指すこともできる。実施例1:実験的手法手順および実験計画書は施設内治験審査委員会によって承認されたものであり、施設のガイドラインとフランスおよびカナダの実験動物の管理と使用に関するガイドラインに従って行った。餌および水を自由に与えながら標準的な条件24°C、12:12時間の明暗周期に動物を維持した。ラットにおける酸素誘発性網膜症酸素誘発性網膜症OIRラットモデルを先に記載したように使用した。一腹子数の新生児SDラットCharlesRiverLaboratories社、カナダのケベック州StConstantを、出生直後に80酸素医療グレード100O2と酸素メーターMaxO2Ceramatec、OM25-MEモデル、Medicana社、カナダケベック州モントリオールで測定した室内空気との混合物に曝露した。簡単に言うと、30分間の間隔で正常酸素条件下21O2において3回中断しながら、生まれてから生後14日目まで毎日22.5時間、高酸素80O2への曝露を続けた。高酸素に曝露した後、P14で、動物を以下の実験に割り当てた。P14およびP16で、片方の眼に溶媒のみ無菌の0.9NaCln=8、またはスクランブルGS-101オリゴヌクレオチド2mg/ml、2μgの送達、n=4もしくは0.5mg/ml0.5μgの送達、n=7、1mg/ml1μgの送達、n=8および2mg/ml2μgの送達、n=8の濃度のGS-101配列番号2のいずれか一方を含有する1μlの硝子体内注射で動物を処理した。注射前に、ラットをハロセン約2.5で麻酔し、約60ゲージのガラス毛細管に取り付けた10μlのハミルトン注射器で注射した。処置期間中、ラットを周期的な照明環境80ルクス、12時間の暗期/12時間の明期に維持した。最後に、高酸素環境で育てられた成体ラットに生じることが知られている肺の合併症を回避できるように、一腹子の母親を24時間ごとに正常酸素条件下と高酸素条件下に交互に置いた。次いで、P18で、全ての動物を安楽死させ、その眼を摘出し、前眼部を切開し、眼杯を4ホルマリンで一晩固定した。上に詳述した用量は、推定される眼の体積成体で約50μlに対して生後3週間目で約25μlに基づいている。新生児ラットにおける発生的網膜血管新生P1およびP3で、溶媒のみ無菌の0.9NaCln=6または0.5mg/ml0.5μgの送達、n=8の濃度のGS-101を含有する1μlを、ハロセン麻酔下で片方の眼に注射した。子ラットの眼の体積は、ヒトの成人の眼の体積の約0.3である。網膜のフラットマウント次いで、網膜を単離し、アデノシンジホスファターゼADPaseで染色するためにフラットマウントを調製した。標本を乗せて撮影した40倍、Axiophot顕微鏡、CarlZeissMeditec社、ドイツのオーバーコッヘン。発生実験のために、ImageProPlus45MediaCybernetics社、メリーランド州シルバースプリングを用いて網膜血管新生の面積および密度を評価した。OIR実験のために、以下の判断基準:血管増殖、血管房状分岐、網膜外血管新生、中心血管収縮、網膜出血および血管の捻じれを評価する網膜評価法を用いて網膜症の重症度を評価した。さらに、血管房状分岐それ自体を網膜のフラットマウント上で評価した。統計分析ダネット多重比較法GraphPadSoftware社、米国カリフォルニア州サンディエゴを用い、分散分析ANOVAで統計分析を行った。P<0.05を有意であるとみなした。OIRに罹患したラットにおいて網膜血管新生を阻害するために後眼房に必要なGS-101の有効濃度を決定するために、GS-101をラットの眼に注射した。図1に示すように、0.5μgの用量で病的血管新生が減少した。ラットの眼の体積25μlを考慮すると、これは、OIRのラットモデルにおいて網膜血管新生を減少させるためには20μg/mlの濃度が必要であることを示唆している。結果VascArea:血管面積表1に示されているように、GS-101の眼内注射により、OIRのラットモデルにおいて有効であることが分かっている濃度では網膜の血管新生の正常な進化は変化しない図1。従って、GS-101の安全性が認められる。実施例2:実験的手法この調査では、アフリカミドリザルにおけるレーザー誘発性脈絡膜血管新生CNVを滲出型加齢黄斑変性症AMDのモデルとして使用して、GS-101の有効性を評価した。試験化合物生理食塩水に懸濁させた被験物質GS-101配列番号210μgのGS-101/1μlの0.9NaCl溶液は、CridPharma社フランスのStGelyduFescから提供されたものである。サルにおけるレーザー誘発性脈絡膜血管新生この調査では、体重が4.15~5.81kgの範囲で、年齢が4~12歳と推定される3匹の雄の成体アフリカミドリザルを使用した。1日目に、全ての動物に対して、両眼の耳側血管アーケード内の黄斑の解剖学的周辺部に、中心窩から約1.5乳頭径で同心円状に離間したレーザーによる火傷を6箇所与えた。800mWのレーザーエネルギー、100msのパルス幅および50μmのスポットサイズを有するIridexOculightTX532nmレーザーを用いでレーザースポットを印加した。眼底写真を見直して、レーザー病変の黄斑周辺部配置を確認した。レーザー光凝固の直後に、10μg/μlのGS-101の無菌溶液を50μlの注射体積で硝子体内IVTに投与した。基準日および22日目に、直接的外観検査、細隙灯生体顕微鏡検査および間接的網膜検影法で眼を調べた。22~23日目にOS左眼、次いでOD右眼の眼底画像および血管造影図を収集した。血管造影図の段階的評価22/23日目に収集した一連のフルオレセイン血管造影図に対して血管造影図の段階的評価を行い、一連の血管造影図間で眼の組織からフルオレセインを排出させるように連日で行った。各病変部位における後期フルオレセイン漏出の程度、すなわちCNVに関連する血管造影の変化を、以下のようにI~IVの尺度で評価した:-I=過蛍光は認められない-II=後期血管造影図中に過蛍光が認められるが、漏出および有意な残留染色は認められない-III=早期または移行時の過蛍光、後期漏出および有意な残留染色が認められる-IV=早期または移行時の過蛍光および処置領域の境界を越えて広がる後期漏出が認められる評価は、治療群から遮蔽されたままの2人の調査官によって行われた。血管造影図のImageJ評価ImageJRasbandWS、ImageJ、米国国立衛生研究所、米国メリーランド州ベセズダを用いて最初の血管造影図jpgファイルをさらに評価した。血管造影図中のバックグラウンド補正したスポット強度の評価により、相対的な後期フルオレセイン強度を定量化した。統計的方法段階IVもしくは段階IIIのいずれかまたは段階IIIとIVの両方の病変の発生にはいを割り当て、任意の他の段階にいいえを割り当てて過去の溶媒対照データと比較するフィッシャーの直接確率計算法を用いて、病変の段階的I~IV評価を分析した。段階Iもしくは段階IIのいずれかまたは段階IとIIの両方の発生を同じ方法で評価した。レーザー誘発性CNVモデルの検証により、ヒトでない霊長類における他のCNVモデル化研究と同様に、臨床的に有意なCNVが段階IIIおよび段階IVの病変指数で表されることが実証された。22/23日目に、GS-101を投与した眼と溶媒を投与した眼との間で、CNV発生率に対するレーザー出力の効果を比較した。TukeyKramerHSDを用いた多重比較と共に、Box-Cox変換値に対して一方向ANOVAを用い、バックグラウンド補正した平均フルオレセイン強度およびCNV複雑領域のImageJに基づく分析を行った。全ての統計を統計分析ソフトウェアJMPSASInstitute社、ノースカロライナ州ケアリーを用いて行った。P値<0.5を統計的に有意であるとみなした。結果以下の表2に示すように、溶媒を投与した眼よりもIVTGS101を投与した眼において段階III/IVのCNV病変の有意に低い発生率が観察されたp=0.000183。表2は、血管造影図評価の総合的結果を示す。より低い強度のCNVを表す段階IIの病変の発生率の評価により、溶媒を投与した眼に対してIVTGS101を投与した眼における低い発生率も実証されたp=0.006545。対照の眼と比較してIVTGS101を投与した眼では、22/23日目に段階IVの病変は全く残っていなかった。さらに、段階IIIの病変の発生率は大きく減少した。フルオレセイン血管造影図のImageJ分析によってCNVの発生率を評価して、IVTGS101および溶媒処理した眼の病変における相対的な後期フルオレセイン強度の比較を行った。図2に示すように、GS-101のIVT送達により、溶媒を投与した眼と比較して後期フルオレセイン信号強度の有意な減少が誘発されたp=0.0000025。これらのGS-101効果から、眼の後極への直接送達の顕著な抗血管新生効果は明らかである。これらの発見により、GS-101によるIVT治療は、滲出型AMDおよび他の血管新生網膜疾患のための強力な抗血管新生治療を提供し得ることが示唆されている。実施例3:実験的手法細胞培養および治療EGM-2MV完全培地でヒトの内皮細胞hECを培養した。約80の集密で培地を破棄し、血清欠乏性培地と共に細胞層を3回洗浄した。次いで、5のCO2中、37°Cで、1の血清を含有する培地と共に細胞層を一晩インキュベートした。インキュベート後に、10μMの最終濃度でGS-101本発明の配列番号2またはスクランブルオリゴヌクレオチドPBS溶液を培養物に添加し、指示された時間にわたってインキュベートを続けた。タンパク質の定量化上記のとおり、5CO2中、37°Cで、GS-101またはスクランブルオリゴヌクレオチドと共にヒトのECをインキュベートした。指示された時間でインキュベートした後、細胞を氷冷したPBSで3回洗浄し、タンパク質抽出緩衝液PEB20mMのトリス-HClpH7.5、150mMのNaCl、1mMのEDTA、1mMのEGTA、1のトリトン、25mMのピロリン酸ナトリウム、1mMのβ-グリセロリン酸塩、1mMのNa3Vo4、1μg/mlのロイペプチン、1μMのPMSFに懸濁した。ブラッドフォード法でタンパク質含有量を測定した。製造者の説明書に従ってPathScanTotalIRS1サンドイッチELISAキットCellSignalingtechnology社により抽出物中のIRS-1濃度を測定した。二つ組で行った3回の別個の実験からデータを収集し、対照細胞溶媒と共にインキュベートした細胞に対して表した。結果ELISAによるIRS-1タンパク質の定量化の結果が図3に示されている。これらの結果から、GS-10110μMの単回用量で処理したヒトの内皮細胞が以下を含有していることが分かった:-6時間のインキュベート後に対照に対して31.40±9.071p=0.0258、N=3少ないIRS-1タンパク質含有量、-12時間のインキュベート後に対照に対して23.80±7.052p=0.0279、N=3少ないIRS-1タンパク質含有量、-24時間のインキュベート後に対照に対して61.30±12.99p=0.0092、N=3少ないIRS-1タンパク質含有量、-48時間のインキュベート後に対照に対して53.50±16.45p=0.0313、N=3少ないIRS-1タンパク質含有量、-72時間のインキュベート後に対照に対して41.10±13.78p=0.0406、N=3少ないIRS-1タンパク質含有量。10μMのスクランブルオリゴヌクレオチドで処理したヒトの内皮細胞のIRS-1タンパク質含有量において有意な変化p>0.05は観察されなかった。これらの結果から、IRS-1の阻害はGS-101とのインキュベートから24時間後に最大となり、一過性であることが分かる。従って、このような生体外での結果から、アンチセンスの効果が一過性であり、よって制限的であるため、硝子体内注射でGS-101アンチセンスの使用が推奨されていなかったものと思われる。