第二の異種性のイソプレノイド合成酵素に由来する第二のドメインに結合した、第一のイソプレノイド合成酵素に由来する第一のドメインを含むキメライソプレノイド合成酵素ポリペプチドであって、該キメライソプレノイド合成酵素が、該第二の異種性のイソプレノイド合成酵素に由来する第二のドメインの非存在下では産生されないイソプレノイド反応産物の産生を触媒することのできるものである、キメライソプレノイド合成酵素。少なくとも2つの異なるイソプレノイド反応産物を触媒することができる、請求項1記載のキメライソプレノイド合成酵素。第二の異種性のイソプレノイド合成酵素の第二のドメインが、該キメライソプレノイド合成酵素のイソプレノイド反応産物の比率も決定する、請求項1記載のキメライソプレノイド合成酵素。第一のイソプレノイド合成酵素に由来する第一のドメインが、植物のイソプレノイド合成酵素であり、第二の異種性イソプレノイド合成酵素の第二のドメインが、植物のイソプレノイド合成酵素に由来するものである、請求項1記載のキメライソプレノイド合成酵素。aタバコヒヨシアマスHyoscyamusCH4キメライソプレノイド合成酵素;bタバコヒヨシアマスHyoscyamusCH10キメライソプレノイド合成酵素;cタバコヒヨシアマスHyoscyamusCH11キメライソプレノイド合成酵素;dタバコヒヨシアマスHyoscyamusCH12キメライソプレノイド合成酵素;eタバコヒヨシアマスHyoscyamusCH13キメライソプレノイド合成酵素;またはfタバコヒヨシアマスHyoscyamusCH14キメライソプレノイド合成酵素からなる群より選択される、請求項4記載のキメライソプレノイド合成酵素。抗真菌剤の製造を触媒する、請求項1記載のキメライソプレノイド合成酵素。抗細菌剤の製造を触媒する、請求項1記載のキメライソプレノイド合成酵素。抗腫瘍剤の製造を触媒する、請求項1記載のキメライソプレノイド合成酵素。請求項1記載のキメライソプレノイド合成酵素のポリペプチドをコードするDNA。請求項9記載のDNAを含むベクター。請求項9記載のDNAを含む細胞。大腸菌である、請求項11記載の細胞。非対称的な位置に置かれた同種性のドメインを含むキメライソプレノイド合成酵素であって、該キメライソプレノイド合成酵素が、該ドメインがイソプレノイド合成酵素ポリペプチドにおける本来の部位に置かれている場合は産生されないイソプレノイド反応産物の産生を触媒することのできるものである、キメライソプレノイド合成酵素ポリペプチド。キメライソプレノイド合成酵素ポリペプチドを製造するための方法であって、a細胞内で発現するような位置に置かれた請求項9記載のDNAで形質転換された細胞を提供する段階、b該DNAを発現させるための条件下で該形質転換細胞を培養する段階、およびc該キメライソプレノイド合成酵素、を回収する段階を含む方法。キメライソプレノイド合成酵素タバコの5エピアリストロキン合成酵素に由来するドメインをコードする遺伝子の一部を、ヒヨシアマスHyoscyamusベティスピラジエン合成酵素に由来するドメインをコードする遺伝子の一部と置き換えることによって、キメラ合成酵素を発現するよう設計されたプラスミドを作製した。これらのプラスミドは、バクテリアで発現されるため、バクテリア破砕液を調製して、セスキテルペン合成酵素活性を測定した。セスキテルペン合成酵素測定には、アリストロキンとベティスピラジエンの反応産物を区別する銀化薄層クロマトグラフィーTLC解析が含まれるBackとChappell、JBiolChem27073751995。図4Aに示されているように、14のキメラ合成酵素構築物が作製され、以下のように測定された。タバコ5エピアリストロキン合成酵素TEASとヒヨシアマスHyoscyamusベティスピラジエン合成酵素HVSに対する完全長のcDNAを、pBluescriptSKストラタジーン社StratageneのEcoRIXhoI部位にクローニングして、それぞれ、pBSKTEASとpBSKHVSプラスミドを作製したBackとChappell、JBiolChem27073751995。これらの発現プラスミドのTEASおよびHVScDNA挿入配列は、翻訳開始コドンがEcoRI制限酵素部位に隣接し、3ポリAがpSKプラスミドのXhoI部位に隣接する方向になっていた。キメラ合成酵素CH1、CH2、CH5、およびCH7は、タバコとヒヨシアマスの遺伝子の間に見られる、保存されたHindIIIとNdeI制限酵素部位を使用して構築された。CH1は、TEAS遺伝子の5末端部位EcoRIからHindIIIの断片に相当する部位を、HVS遺伝子の3末端部位HindIIIからKpnIの断片に相当する部位とともに、前もってEcoRIとKpnIで制限酵素消化したバクテリア発現ベクターpGBTT19ゴールドバイオテクノロジー社GoldBiotechnologyにライゲーションして調製した。CH2は、TEAS遺伝子の5末端部位EcoRIからNdeIの断片に相当する部位を、HVS遺伝子の3末端部位NdeIからKpnIの断片に相当する部位とともに、pGBTT19にライゲーションして調製した。CH5は、HVS遺伝子の5末端部位EcoRIからHindIIIの断片に相当する部位を、TEAS遺伝子の3末端部位HindIIIからKpnIの断片に相当する部位とともに、pGBTT19にライゲーションして調製した。CH7は、HVS遺伝子の5末端部位EcoRIからNdeIの断片に相当する部位を、TEAS遺伝子の3末端部位NdeIからKpnIの断片に相当する部位とともに、pGBTT19にライゲーションして調製した。CH3、CH4、CH12、およびCH13は、HVS遺伝子の特定の部分を増幅するために設計されたプライマーを用いて、従来からのポリメラーゼ連鎖反応PCR法を用いて構築した。また、方向性をもつクローニングを容易にし、オープンリーディングフレームを維持するために、プライマーは、都合のよい制限酵素部位を含むように設計した。CH3は、以下のようにして構築した。TEAS遺伝子のEcoRIClaI制限酵素断片を単離して、HVS遺伝子のClaIKpnI断片にライゲーションした。このHVSのClaIKpnI断片は、DNA鋳型としてpBSKHVSを用い、5d3ClaI制限酵素部位に下線が施されているを順方向プライマーに、5d3を逆方向プライマーpBSKのマルチクローニング部位にあるT7配列に相当するに用いたPCR法によって調製した。この結果生じた制限酵素断片を、pGBTT19ベクターのEcoRIKpnI部位の中にライゲーションした。CH4およびCH13も、同じ方法で構築したが、順方向の増幅プライマーとして、それぞれ、5d3HincII性下インコ嘘部位に下線が施されている、および5d3XbaI制限酵素部位に下線が施されているを用いた。CH12は、TEAS遺伝子のClaIKpnI断片を有する、CH4の最初の1326ヌクレオチドに対応するPCR断片を、pGBTT19ベクターのEcoRIKpnI部位にライゲーションして調製した。CH4断片は、順方向増幅プライマー、5d3EcoRI制限酵素部位に下線を付し、翻訳開始コドンが太字になっていると、逆方向プライマー、5d3ClaI制限酵素部位に下線が施されているとを用いて調製した。キメラ合成酵素CH6、CH8、CH9、CH10、CH11、およびCH14は、以下のようにして構築した。HVS遺伝子のEcoRIHindIII断片と、CH3のHindIIIKpnI断片にライゲーションしてCH6を作製した。CH8は、HVSのEcoRINdeI断片を、CH3のNdeIKpnI断片とライゲーションして作出された。CH9は、CH5のEcoRINdeI断片を、HVSのNdeIKpnI断片とライゲーションして作出された。CH10は、HVSのEcoRIHindIII断片を、CH4のHindIIIKpnI断片とライゲーションして構築された。CH11は、HVSのEcoRINdeI断片を、CH4のNdeIKpnI断片にライゲーションして構築された。そして、CH14は、CH13のEcoRINdeI断片を、対応するpBSKHVSのDNA断片と置換して作製された。ジデオキシヌクレオチド鎖終結キットを製造業者USバイオケミカル社USBiochemicalCorpの指示にしたがって用い、二本鎖DNAシークエンシングによって、キメラ構築物のヌクレオチドの結合部分を確認した。キメラ合成酵素は、大腸菌TB1細胞の中で発現させた。細菌細胞を増殖させ、遺伝子発現を誘導し、セスキテルペン合成酵素の酵素活性を測定し、また、バクテリアの破砕液における全蛋白質を測定するための実験を、BackとChappellによって説明された方法ArchBiochemBiophys3155271994;JBiolChem27073751995にしたがって行った。ベンゼンヘキサンジエチルエーテル50501中15硝酸銀に浸漬した展開用G60シリカTLCプレートによって、反応産物を分離した。定性的な評価をするためには、En3hance表面フルオログラフィースプレーデュポン社Dupontによって、TLCプレートにスプレーしてから、-70°Cで2~5日間、コダックKodakXAR5フィルムに感光させた。定量的な評価を行うためには、TLCプレートのレーン全長から05mmの帯域を掻き取ってシンチレーション用バイアル瓶に入れ、パッカードPackard1500液体シンチレーション計測器を用いて放射活性を測定した。また、TEAS、HVS、CH4、およびCH14構築物をバクテリア破砕液で発現させてできる合成酵素活性によって生成される主要な反応産物を、チャッペルChappellらPhytochemistry2622591987によって説明された条件にしたがい、ガスクロマトグラフィーGCおよびガスクロマトグラフィー質量分析GCMSによって確認した。さらに、5エピアリストロキンについて公開されたものAnkeとStrenerPlantaMed573441991およびベティスピラジエンについて推定された断片化パターンEnzellら、MassSpectrometryRev33951984と、質量分析プロファイルを比較した。図4A~Bで示されているように、タバコのTEAS遺伝子の発現によって生じる主要な反応産物は、5エピアリストロキンであり、また、ベティスピラジエンが、HVS遺伝子の発現によって生じる主要な反応産物であることが判明した。CH1およびCH2の発現によって生成される主な反応産物もまた、pBSKHVSプラスミドから発現されたHVSについて観察されたのと同じ酵素特異的活性を有しており、HVS特異的すなわち、ベティスピラジエンであった。これらの結果から、TEASおよびHVSのアミノ末端部分が、HVSのカルボキシ末端に関して機能的に同等であり、反応産物の特異性に寄与しないことが示された。HVSアミノ末端とTEASカルボキシ末端とを有するCH7は、CH2と逆の構築物であり、これによって生じる合成酵素活性は、TEAS特異的な産物すなわち、5エピアリストロキンの発現をもたらすと予想された。免疫検出測定法によって、CH7の発現によって産生された合成酵素蛋白質は、正しいサイズで、予想された量存在するが、酵素活性は検出されないことが明らかにされた。酵素活性がないことは、蛋白質のカルボキシ末端部位とアミノ末端部位との相互作用が、酵素活性に寄与していることを示していた。このような解釈はさらに、CH5とCH6構築物の発現によって生成された酵素の特異的活性を比較することによって裏付けられる。CH5では、免疫検出によって判定したところ、データは示されていない発現蛋白質の絶対的なレベルは、他の構築物と同じであったのに、他のキメラ合成酵素よりも、合成酵素の酵素活性の特異的活性が10倍低い産物が発現された。HVSのカルボキシ末端領域を置換すると、CH6によって生成された合成酵素の特異的活性が回復することが分かった。CH2とCH3キメラ合成酵素の比較によって、最終産物形成の特異性が、TEASおよびHVS遺伝子内のNdeIとClaI制限酵素部位に対応する、約181アミノ酸のドメインの中に存在しているという証拠が提供された。CH4の発現は、思いがけず、TEASとHVS両酵素を反映した反応産物を生成することのできるキメラ合成酵素蛋白質の産生をもたらした。本発明者らは、この結果を、タバコ5エピアリストロキン合成酵素の261から379番目のアミノ酸が、TEAS特異的産物すなわち、cDNAのNdeIからHincIIまでの断片に相当する領域の原因となり、また、ヒヨシアマス蛋白質の379から442番目のアミノ酸が、HVS特異的産物すなわち、cDNAのHincIIからClaIまでの断片に相当する領域の原因になることを示していると解釈した。本発明者らの解釈は、CH11とCH12の発現産物を評価することによって確かめられた。CH11は、ヒヨシアマス遺伝子のNdeIからHincIIまでの断片を、対応するタバコの遺伝子断片と置換したものの代表で、HVSおよびTEAS特異性を有する酵素の産生をもたらした。CH12は、タバコ遺伝子のHincIIからClaIまでの断片を、対応するヒヨシアマス遺伝子断片と置換したものの代表で、HVSおよびTEAS特異性を有する酵素の産生をもたらした。CH11をCH13と比較すると、TEAS特異的産物の原因となるタバコの酵素のドメインの特徴を、さらに精密に調べられる。CH13が、多機能酵素であることが判明したことにより、タバコcDNAのNdeIからXbaIまでの制限酵素部位の間にあるDNA断片によってコードされる81個のアミノ酸が、主なTEAS特異的産物の形成にとって充分であることが示された。この解釈は、CH14のNdeIXbaIHVScDNA制限酵素断片の中に含まれているドメインをTEAS遺伝子の断片と置換することによって確かめられた図4A。図4Bに示されているように、バクテリアで発現された野生型タバコTEAS遺伝子およびヒヨシアマスHVS遺伝子の主な反応産物を、Rf値が041および031である硝酸銀TLCプレートに移動させたが、これらのRf値は、以前、これらの産物をそれぞれ5エピアリストロキンおよびベティスピラジエンと特徴づけたときと同じ値であるBackとChappellJBiolChem27073751995Backら、ArchBiochemBiophys3155271994。GCおよびGCMS分析によって、主なTEAS反応産物は、5エピアリストロキンGC分析からの全ピーク領域の割合に基づくと、全産物の70、および二環型のセスキテルペン20204mzにおけるMイオンであることが示された。主なHVS反応産物は、ベティスピラジエン9041mzに基底ピークを有し、175、108、94、および68mzにおける一連の推定可能なイオンを有する、204mzにおけるMイオンであり、また、CH4の主な反応産物は、5エピアリストロキン18、二環型セスキテルペン43、およびベティスピラジエン32であった。さらに、ヒスチジンの標識をつけた組換え合成酵素蛋白質のアフィニティー精製による研究から、他に5つの少量の反応産物があり、この5つのすべてが、全ての反応測定における相対的存在量が同じで、全産物の約1ずつを示すことが明らかになった。比率決定ドメイン多機能なキメラ酵素によって産生される主な反応産物の相対比を較べて、合成酵素蛋白質の別のドメインを同定した図4A。例えば、構築物CH4、CH10、CH11、およびCH12を発現させて生じた反応産物は、TEAS特異的なものが60~70、HVS特異的なものが30~40という比率で生成された。これに対し、構築物CH13とCH14の発現からは、逆の比率で反応産物が生じた。この結果から、XbaIからHincIIドメインに包含される領域が、多機能キメラ合成酵素によって生成される反応産物の相対比率に影響を与えることが示された。これらの結果は、合成酵素ペプチドの中にある2つの別の離れたドメインが、生成される反応産物のタイプを決めるのに直接寄与し、また本発明者らが比率決定ドメインと呼ぶ別のドメインによって阻害されることを示している図5。部位特異的突然変異誘発産物の特異性と比率決定ドメインの補足的な分析は、従来の部位特異的突然変異誘発法を用いて行った。この分析結果を、表1に示す下記。例えば、アリストロキン特異的ドメインの中に見られるDDXXDモチーフは、TEASおよびHVSを含むさまざまなテルペン生合成酵素に見られる保存配列である。この酸性アミノ酸のクラスターは、他の場合ならば疎水性ポケットにあるはずのFPPの二リン酸部分を中和するのに必要な金属補助因子を配位結合させると言われている。DDXXDモチーフの最初のアスパラギン酸残基D301を、グルタミン酸全体的な電荷は保存される残基、またはバリン酸性電荷の正味が減る残基で置換するすなわち、D301E、およびD301Vと、不活性な酵素が形成される。また、第二のアスパラギン酸D302の、グルタミン酸残基すなわち、D302Eでの保存的置換では、キメラ合成酵素の酵素活性が95不活性化され、多機能酵素の産物分布が僅かに変化する結果となった。荷電アミノ酸残基例えば、ヒスチジンまたはリジンの重要性を仮定した報告を解析して、比率決定ドメイン内の置換を誘発する部位すなわち、K347I、H360S、H364Sを推量したところ、これらの部位は、TEASとHVSの一次配列を比較したときに、最も大きな電荷の違いを表すアミノ酸を示していた。解析した3つの突然変異はいずれも、全体的な触媒活性にも、形成される産物の比にも影響を与えなかった。HVS特異的なドメイン内でのアミノ酸置換は、HVS蛋白質とTEAS蛋白質の二次構造予測の比較をもとに選択した。変異したアミノ酸は、主に、電荷という要件のために、これら2つの蛋白質の二次構造モデルにおける構造的な歪みに不均化をもたらすように見えた。しかし、表1上記に示されているように、荷電したアミノ酸から非荷電のアミノ酸すなわち、T408→A、K420→M、H422→A、または電荷の少ないアミノ酸N436→S、A437→T、V438→Iへの置換を含む置換は、全体的な酵素活性には影響を与えず、いずれの産物の合成比率にも影響を与えなかった。非活性合成酵素非活性合成酵素を作出するために、図6で概要を示したように、HVSのエクソン4に相当する不活性ドメインを、対応するCH3の活性ドメインと置換する。CH3は、TEASのエクソン6に相当する不活性ドメインをもち、所期の置換を行うために都合のよいNdeIとXbaIという制限酵素部位を持っているため、バクテリアの中で、高レベルに過剰発現させることができる。本明細書で説明されている標準的な分子的技術を用いて、ドメイン交換が行われる。特別の例において、261から342番目のアミノ酸を含み、プライマーの中に適当なNdeIとXbaI部位を含んでいる、エクソン4に相当するHVScDNAのPCR増幅産物を、CH3の対応領域と置換する。このような構築物を作製するに当たっては、適当なアミノ酸残基と適正なオープンリーディングフレームを維持するように注意が払われ、構築物の発現を調べるときには、免疫ブロッティング、ならびに酵素測定法によって、バクテリア破砕液の可溶性画分と不溶性画分における蛋白質のレベルを測定することが必要である。さらに、大規模の酵素反応を行い、反応産物をヘキサンの中に抽出して、HPLC法で産物を精製する。非活性酵素の反応産物の補足的な評価を、TLCを用い、また、実験試料のRf値を、TEASおよびHVS酵素によって生成されたRf値と比較して行う。反応産物例えば、ゲルマクリン、またはゲルマクリン様反応産物の維持時間も、標準的な方法によって、GC、GCMS、およびNMRを用いてモニターする。非活性合成酵素は、EAS反応およびVS反応に対する、化学的に合理的な説明を確認するのに充分な量のゲルマクリン反応中間産物または、その誘導体を提供するのに有用であり、また、全体的な合成酵素反応スキーマの中で、新しい最終段階を導入するために用いることができる鋳型キメラ合成酵素を産生する。キメラのカスビンおよびカジネン合成酵素キメライソプレノイド合成酵素はまた、立体化学的特性が変化した、新規の大環状イソプレノイド、またはイソプレノイドを作製するためにも有用である。例えば、シクロプロピル側基をもつ大環状ジテルペンの合成を触媒するジテルペン合成酵素であるカスビン合成酵素、また、二環型セスキテルペンの合成を触媒するセスキテルペン合成酵素であるカジネン合成酵素などのイソプレノイド合成酵素は、立体化学的特性が変化した大環状イソプレノイド、またはイソプレノイド反応産物を産生することのできる酵素を作製するために有用なドメインを提供する。このようなキメラ合成酵素を製造するための一般的なスキーマが、図7と8に示されている。このようなキメラのカスビンおよびカジネン合成酵素を構築するために、従来の制限酵素部位と、上記したような選択領域のPCR増幅を用いて、非活性アミノ末端ドメインおよび、その他の必要な合成酵素ドメインを、カスビン合成酵素およびカジネン合成酵素のアミノ末端ドメインと置換する。カスビン合成酵素のN末端にあるプラスチド標的配列に相当する配列が、これらの構築物では欠失している。キメラ構築物をバクテリアで発現させ、バクテリアの破砕液で、キメラ合成酵素活性を調べ、また、上記のように、例えば、銀化TLCを用いて、反応産物の特徴を調べる。バクテリアにおいて、高レベルの合成酵素活性を維持する構築物、およびまたは、アリストロキン、およびベティスピラジエンの標準とは異なったRf値をもって移動する活性生成反応産物は、本発明において有用である。GCによって、反応産物の維持時間も解析し、必要なGCMSおよびNMRも行う。また、独自の反応産物をもたらす、カスビン合成酵素とカジネン合成酵素のこれらのドメインにも、図4Aで示した実験法に類似した方法を用いて、微細なマッピングを行うことができる。その他のキメライソプレノイド合成酵素の製造本明細書で説明されている標準的な分子的手法を用いて、既知の、または新規に単離された合成酵素に由来するドメインを含むその他のキメラ合成酵素を容易に製造することができる。例えば、当業者に既知の適当な酵素アッセイ法例えば、本明細書で説明されているものを用いて、または標準的な免疫検出技術によって、このようなキメラ合成酵素の活性を調べてもよい。標準的なクローニング法、および当技術分野において周知の技術を用いて、付加的な合成酵素コード配列を単離することも可能である。例えば、既知の合成酵素ポリペプチドのアミノ酸配列の全部または一部を用いて、合成酵素縮退オリゴヌクレオチドプローブすなわち、所定のアミノ酸配列に対して可能なコーディング配列のすべてを混合したものを含む合成酵素特異的なオリゴヌクレオチドプローブを容易に設計することができると考えられる。これらのオリゴヌクレオチドは、どちらかのDNA鎖の配列および合成酵素の塩基配列の適当な部位をもとにすることができる。例えば、アウスウベルAusubelら、1996、分子生物学の最新プロトコールCurrentProtocolsinMolecularBiology、WileyInterscienceニューヨーク、およびバーガーとキンメルBergerandKimmel、分子クローニング技術の手引きGuidetoMolecularCloningTechniques、1987、AcademicPressニューヨークに、このようなプローブを設計し、調製するための方法が提供されている。合成酵素の相補配列にハイブリダイズすることができるプローブとして、または、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応PCRクローニング法など、さまざまな増幅技術に対するプライマーとして用いることによって、これらのオリゴヌクレオチドは、合成酵素遺伝子を単離するために有用になる。ハイブリダイゼーション技術とスクリーニングの手順は、当業者に周知であり、例えば、アウスウベルAusubelら前記;バーガーとキンメルBergerandKimmel前記;チェンChenら、ArchBiochemBiophys3242551995;およびサムブルックSambrookら、分子クローニング:実験マニュアルMolecularCloningALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratoryPressニューヨーク、で説明されている。必要に応じて、異なるオリゴヌクレオチドプローブを組み合わせて、組換えDNAライブラリーのスクリーニングに用いることもできる。このオリゴヌクレオチドは、当技術分野において既知の方法を用いて、検出できるように標識し、組換えDNAライブラリーからのフィルターレプリカを探索するために用いることができる。当技術分野において周知の方法、例えば、アウスウベルAusubelら前記によって、組換えDNAライブラリーを調製するか、商業的な供給源から取得することができる。上で考察したように、合成酵素のオリゴヌクレオチドは、例えば、PCRを用いた増幅クローニング法におけるプライマーとして使用することもできる。PCR法は、当技術分野において周知であり、例えば、PCR技術PCRTechnologyErlichedStocktonPressLondon1989PCRプロトコール:方法と応用への手引きPCRProtocolsAGuidetoMethodsandApplications、イニスらInnisetaledsAcademicPressIncNewYork1990および、アウスウベルAusubelら前記において説明されている。プライマーは、増幅された産物が適当なベクターの中にクローニングされるよう、例えば、適当な制限酵素部位が、本明細書において説明されているような増幅された断片の5末端と3末端に含まれるように、選択的に設計されている。必要に応じて、PCRRACE法、すなわち、cDNA末端の迅速な増幅RapidAmplificationofcDNAEnds法例えば、イニスInnisら、前記参照のことを用いて、合成酵素遺伝子を単離することができる。この方法によって、合成酵素の配列に基づくオリゴヌクレオチドプライマーが、3方向、または5方向に向けられ、重複するPCR断片を生成するために用いられる。これらの重複する3および5末端RACE産物を組み合わせて、本来の完全長cDNAを作製する。この方法は、イニスInnisら、前記;およびフローマンFrohmanら、ProcNatlAcadSciUSA858998において記述されている。適当な生物から、有用な合成酵素配列を単離することができる。合成酵素のポリペプチド群との配列の関連性の確認は、従来からのさまざまな方法、例えば、配列比較によって行うことができる。さらに、本明細書で説明されているいずれかの技術によって、合成酵素蛋白質の活性を評価することができる。キメライソプレノイド合成酵素のポリペプチド発現適当な発現ベクターに組み込まれたキメラ合成酵素DNA例えば、上術されているキメラ合成酵素のcDNA、またはインビボにおいてキメラ合成酵素ポリペプチドの発現が上昇するように作製されたプラスミド構築物によって適当な宿主細胞を形質転換して、キメラ合成酵素ポリペプチドを作出することができる。分子生物学の分野における当業者は、非常に多様な発現ベクターのいずれかを用いて組換え蛋白質が提供できることを認識していると思われる。用いる宿主細胞が正確に何であるかは、本発明にとって重要ではない。キメラ合成酵素蛋白質は、例えば大腸菌TB1などの原核生物宿主で産生されてもよく、または、例えばパン酵母Saccharomycescerevisiae、哺乳動物の細胞例えば、COS1、またはNIH3T3細胞、もしくは、藻類、樹木種、観賞植物種、温帯果実種、熱帯果実種、野菜種、マメ科植物種、単子葉類、双子葉類、または商業上もしくは農業上重要な植物で、これらに限定されない植物を含む、多くの植物細胞のいずれかなどの真核生物宿主で産生されてもよい。適当な植物宿主の特別の例としては、針葉樹、ペチュニア、トマト、ジャガイモ、タバコ、アラビドプシスArabidopsis、レタス、ヒマワリ、ナタネ、アマ、綿花、サトウダイコン、セロリ、ダイズ、アルファルファ、ウマゴヤシMedicago、ハス、アズキVigna、キュウリ、ニンジン、ナス、カリフラワー、ホースラディッシュ、アサガオ、ポプラ、クルミ、リンゴ、アスパラガス、イネ、トウモロコシ、キビ、タマネギ、オオムギ、カモガヤ、オートムギ、ライムギ、およびコムギが含まれるが、これらに限定はされない。このような細胞は、米国基準培養株コレクションAmericanTypeCultureCollectionメリーランド州ロックビルを含む広い範囲の供給源から;または数多い種苗会社、例えばWアトリーブーピー種苗会社WAtleeBurpeeSeedCoペンシルバニア州ウォーミンスター、パーク種苗会社ParkSeedCoサウスカロライナ州グリーンウッド、ジョニー種苗会社JohnnySeedCoメイン州アルビオン、またはノースラップキング種苗会社NorthrupKingSeedsサウスカロライナ州ハーストビルのいずれかから入手することができる。有用な宿主細胞の説明および由来生物が、VasilIK植物の細胞培養と体細胞遺伝学CellCultureandSomaticCellGeneticsofPlants第I、II、III、実験手順とその応用、AcademicPressニューヨーク、1984;DixonRA植物細胞培養実用的方法PlantCellCultureAPracticalApproachIRLPressOxfordUniversity1985Greenら植物組織と細胞培養PlantTissueandCellCultureAcademicPressNewYork1987GrasserandFraleyScience2441293に記載されている。原核生物で発現させるために、キメラ合成酵素ポリペプチドをコードするDNAを、原核生物宿主での発現をもたらすことができる調節シグナルに機能的に結合されたベクターに組み込む。必要に応じて、コーディング配列は、その5末端に、発現された蛋白質を宿主細胞の細胞周辺腔へ分泌させ、それによって、蛋白質の回収と、その後の精製を容易にさせることのできる既知のシグナル配列をコードする配列を含んでいてもよい。最も頻繁に用いられる原核生物は、大腸菌のさまざまな菌株であるが、別の微生物の菌株を用いてもよい。複製開始点、選抜マーカー、および微生物宿主と親和性のある生物種に由来する調節配列を含むプラスミドベクターが用いられる。このようなベクターの例が、パウエルズPouwelsら前記、またはアウスウベルAusubelら前記に記載されている。一般的に用いられている原核生物の調節配列調節因子ともいわれるは、本明細書においては、リボソーム結合部位配列とともに、選択的にはオペレーターを伴った、転写開始に関するプロモーターを含むものと定義される。蛋白質の発現を誘発するために一般的に用いられるプロモーターには、ベータラクタマーゼペニシリナーゼ、ラクトースlacプロモーターシステムChangetalNature1981056、トリプトファンTrpプロモーターシステムGoeddeletalNuclAcidsRes84057、およびtacプロモーターシステムが含まれ、また、ラムダ由来のPLプロモーターと、N遺伝子リボソーム結合部位とが含まれる。キメラ合成酵素ポリペプチドを産生するために特異的なバクテリア発現システムは、大腸菌pET発現システムノバジェンNovagene社である。この発現システムによって、キメラ合成酵素ポリペプチドをコードするDNAをpETベクターの中に、発現が可能なように設計された方向に挿入する。キメラ合成酵素遺伝子が、T7の調節シグナルの制御下に置かれているため、キメラ合成酵素の発現は、宿主細胞の中で、T7RNAポリメラーゼの発現を誘導することによって誘発される。これは、典型的には、IPTG誘導に応答して、T7RNAポリメラーゼを発現させる宿主菌株を用いて行われる。組換えキメラ合成酵素ポリペプチドが産生されたら、次に、当技術分野において既知の標準的な方法、例えば、本明細書において説明されている方法によって、これを単離する。キメラ合成酵素ポリペプチドを製造するための、別のバクテリアの発現システムは、pGEX発現システムファルマシアPharmacia社である。このシステムは、遺伝子または遺伝子断片を、迅速に精製し、機能的な遺伝子産物を回収できる融合蛋白質として高レベルで発現されるように設計されたGST遺伝子融合システムを用いている。目的のキメラ合成酵素蛋白質は、日本住血吸虫Schistosomajaponica由来のグルタチオンSトランスフェラーゼ蛋白質のカルボキシ末端に融合させることにより、グルタチオンセファロース4Bを用いたアフィニティークロマトグラフィーによって、バクテリアの破砕液から容易に精製される。グルタチオンを用いた溶出によって、穏やかな条件の下で、融合蛋白質を回収することができる。融合蛋白質からのグルタチオンSトランスフェラーゼドメインの切断は、このドメインの上流に、部位特異的プロテアーゼの認識部位が存在することによって容易になる。例えば、pGEX2Tプラスミドで発現された蛋白質は、トロンビンで切断され、pGEX3Xプラスミドで発現された蛋白質は、第Xa因子で切断される。真核生物での発現では、形質転換の方法と、キメラ合成酵素ポリペプチドを発現させるためのベクターの選択は、選択した宿主システムに依存している。多くの生物の形質転換およびトランスフェクション法が、例えば、パン酵母、サッカロマイセスセレビシアエSaccharomycescerevisiaeについて、例えば、アウスウベルAusubelら、前記;WeissbachとWeissbach、植物分子生物学の方法MethodsforPlantMolecularBiology、AcademicPress1989;Gelvinら、植物分子生物学マニュアルPlantMolecularBiologyManual、KluwerAcademicPublishers1990;KindleKProcNatlAcadSciUSA871228;PotrykusIAnnuRevPlantPhysiolPlantMolBiology42205;およびバイオラドBioRad社カリフォルニア州ハーキュリー技術会報1687バイオリスティックパーティクル輸送システムで説明されている。発現ベクターは、例えば、クローニングベクター:実験マニュアルCloningVectorsALaboratoryManualPHPouwelsら、1985、補遺、1987;GrasserとFraley、前記;クローンテックClonetech社、分子生物学カタログカタログ199293分子生物学者のためのツールToolsforMolecularBiologist、カリフォルニア州パロアルト;および、上記で引用された参考文献において提供されているものから選択されうる。好ましい真核生物の発現システムの一つに、pMAMneo発現ベクタークローンテックClonetech社で形質転換されたマウス3T3線維芽宿主細胞がある。pMAMneoは、デキサメタゾンで誘導できるMMTVLTRプロモーターに連結したRSVLTRエンハンサー、哺乳動物のシステムでの複製が可能になるSV40複製開始点、選抜可能なネオマイシン遺伝子、およびSV40のスプライシング、ならびにポリアデニル化部位を提供する。キメラ合成酵素ポリペプチドをコードするDNAを、pMAMneoベクターの中に、発現が可能になるよう設計された方向に挿入する。そして、組換えキメラ合成酵素ポリペプチドを、下記で説明するようにして単離する。pMAMneo発現ベクターと関連して用いることのできる、別の好ましい宿主細胞には、COS細胞とCHO細胞が含まれるそれぞれ、ATCC寄託番号CRL1650とCCL61。または必要に応じて、キメラ合成酵素ポリペプチドは、安定的に形質転換された哺乳動物の細胞系で産生される。哺乳動物細胞の安定的な形質転換に適した多くのベクターを一般に使用することができる。例えば、Pouwelsら、前記を参照のこと。また、このような細胞系を構築するための方法も、例えば、アウスウベルAusubelら、前記におけるように、一般的に使用することができる。一つの例においては、キメラ合成酵素ポリペプチドをコードするcDNAを、ジヒドロ葉酸レダクターゼDHFR遺伝子を含む発現ベクターにクローニングする。プラスミド、すなわちキメラ合成酵素をコードする遺伝子が、宿主細胞ゲノムの中に組み込まれたものを、アウスウベルAusubelら、前記で説明されているようにして、001~300μMのメトトレキセートを細胞培養培地に入れることによって選抜する。この優性選抜は、ほとんどの細胞型で行うことができる。DHFRが介在する、形質転換された遺伝子の増幅によって、組換え蛋白質の発現を上昇させることができる。遺伝子増幅されたものを有する細胞系を選択するための方法が、アウスウベルAusubelら、前記で説明されており、このような方法には、一般的に、含有するメトトレキセートの濃度を次第に上昇させた培地の中での培養を延長することが含まれる。この目的で一般的に用いられる、DHFRを含む発現ベクターには、pCVSEIIDHrFおよびpAdD26SVが含まれるアウスウベルAusubelら、前記で説明されている。上述の宿主細胞のいずれか、または好ましくは、DHFR欠失CHO細胞系例えば、CHODHFR細胞、ATCC寄託番号CRL9096が、安定的に形質転換された細胞系のDHFR選抜、またはDHFRが介在する遺伝子増幅にとって好ましい宿主細胞である。キメラ合成酵素ポリペプチドは、好ましくは、安定的に形質転換された植物細胞系または遺伝子導入植物によって産生される。植物細胞を安定的に形質転換するのに適した、または遺伝子導入植物を構築するのに適した数多くのベクターが、一般的に利用可能であるが、このようなベクターは、パウエルズPouwelsら前記、WeissbachとWeissbach、前記、およびGelvinら、前記において説明されている。このような細胞系を構築するための方法は、例えば、WeissbachとWeissbach前記およびGelvinら前記において説明されている。典型的には、植物発現ベクターは、15および3の調節配列の転写制御下にあるクローン化されたキメラ合成酵素、ならびに2優性の選抜マーカーを有する。このような植物発現ベクターは、必要に応じて、プロモーター調節領域例えば、誘導的もしくは構成的な発現、環境もしくは発達段階によって調節される発現、病原体もしくは傷害によって誘導される発現、または細胞もしくは組織特異的な発現をもたらすもの、転写開始部位、リボソーム結合部位、RNAプロセッシングシグナル、転写終結部位、およびまたはポリアデニル化シグナルも含むことができる。本発明のキメラ合成酵素DNA配列は、必要に応じて、さまざまな方法で、他のDNA配列と組み合わせてもよい。本発明のキメラ合成酵素DNA配列を、正常には、合成酵素蛋白質と結合している遺伝子配列の全部または一部とともに用いてもよい。その構成部分において、宿主細胞における転写と翻訳を促進することが可能な転写開始調節領域を有するDNA構築物の中に、キメラ合成酵素蛋白質をコードするDNA配列を結合させる。一般的に、この構築物は、本明細書において考察されているキメラ合成酵素蛋白質を産生するために備えられた、植物中で機能する調節領域を含んでいる。キメラ合成酵素蛋白質、またはその機能的断片をコードするオープンリーディングフレームを、その5端で、自然には、合成酵素の構造遺伝子の5上流領域に見られるような転写開始調節領域に結合させる。構成的または誘導的な調節を行うための、その他多くの転写開始領域を使用することができる。発生的、細胞、組織、ホルモン、環境的、または病原体によって誘導される発現が望ましい場合に施用するため、適当な5上流域の非コーディング領域が、別の遺伝子から、例えば、種子の発生、胚発生、葉の発生、または病原体に対する応答の過程で調節される遺伝子から得られる。また、本発明のDNA構築物においては、転写終結調節領域も提供される。転写終結領域は、合成酵素蛋白質をコードするDNA配列、または異なる遺伝子供給源に由来する簡便な転写終結領域によって提供されうる。転写終結領域は、好ましくは、転写終結領域が由来する構造遺伝子の3側の、少なくとも1~3kbの配列を含む。このような遺伝子操作された植物は、下記で考察するような、さまざまな工業的および農業的施用にとって有用である。重要なのは、本発明は、裸子植物および被子植物に施用できることであり、新しい、または改良された、いかなる形質転換法または再生法にも容易に施用できることである。本発明に係る有用な植物のプロモーターの一例は、カウリモウイルスのプロモーター、例えば、カリフラワーモザイクウイルスCaMVのプロモーターである。これらのプロモーターは、ほとんどの植物組織での高レベルの発現を付与し、これらのプロモーターの活性は、ウイルスにコードされている蛋白質に依存しない。CaMVは、35Sプロモーターおよび19Sプロモーターの起源である。遺伝子導入植物のほとんどの組織において、CaMVの35Sプロモーターは、強力なプロモーターである例えば、Odellら、Nature313810を参照のこと。CaMVプロモーターはまた、単子葉植物でも活性が高い例えば、Dekeyserら、PlantCell2591TeradaとShimamotoMolGenGenet220389を参照のこと。その上、このプロモーターの活性は、CaMVの35Sプロモーターを重複させることによって、さらに上昇させることができる例えば、Keyら、Science2361299Owら、ProcNatlAcadSciUSA844870およびFangら、PlantCell1141を参照のこと。この他の有用な植物のプロモーターには、ノパリン合成酵素プロモーターAnら、PlantPhysiol88547およびオクトピン合成酵素プロモーターFrommら、PlantCell1977が含まれるが、これらに限定はされない。ある施用については、適当な組織の中で、適当なレベルまたは適当な発生時期にキメラ合成酵素遺伝子産物を産生させることが望ましいかもしれない。この目的のために、それぞれが、環境、ホルモン、およびまたは発生上のシグナルに応答して調節されることが示されている、調節配列に具体化された明確な特徴を有する遺伝子プロモーターの取り合せがある。これらには、熱調節される遺伝子発現例えば、Callisら、PlantPhysiol88965TakahashiとKomedaMolGenGenet219365および、Takahashiら、PlantJ2751を参照のこと、光調節される遺伝子発現例えば、Kuhlemeierらによって説明されている、エンドウのrbcS3APlantCell1471;Schaeffnerとsheenによって説明されている、トウモロコシのrbcSプロモーターPlantCell3997;または、Simpsonらによって説明されている、エンドウに存在するクロロフィルab結合蛋白質遺伝子EMBOJ42723、ホルモン調節される遺伝子発現例えば、MarcotteらPlantCell1969によって説明されている、コムギのEm遺伝子に由来するアブシジン酸ABA応答性配列;StraubらPlantCell6617Shenら、PlantCell7295によって、オオムギとアラビドプシスに関して説明されている、ABAによって誘導されるHVA1とHVA22、およびrd29Aプロモーター、ならびに傷害誘導による遺伝子発現例えば、Siebertzらによって説明されているwunIPlantCell1961、または器官特異的な遺伝子発現Roshalらによって説明されている、塊茎特異的な貯蔵蛋白質遺伝子EMBOJ61155;Schernthanerらによって説明されている、トウモロコシ由来の23kDaのゼイン遺伝子EMBOJ71249;もしくは、Bustosらによって説明されている、インゲンマメのβファセオリン遺伝子PlantCell1839;本明細書によって参照として組み込まれる米国特許出願第08471983号、第08443639号、および第08577483号において、Chappellらによって説明されている、病原体に誘導される遺伝子発現をもたらす遺伝子プロモーターが含まれる。また、植物発現ベクターは、選択的に、例えば、効率的なRNA合成と蓄積にとって重要であることが判明しているイントロンなどのRNAプロセッシングシグナルを含むことができるCallisら、GenesandDev11183。RNAのスプライス配列の位置は、植物における導入遺伝子の発現レベルに劇的な影響を与えることができる。この事実から考えると、遺伝子発現のレベルを調節するために、導入遺伝子のキメラ合成酵素ポリペプチドをコードする配列の上流または下流に、イントロンを置くことができよう。前記の5調節制御配列に加えて、発現ベクターは、一般的に、植物遺伝子の3領域に存在する調節制御領域を包含することもできるThornburgら、ProcNatlAcadSciUSA84744Anら、PlantCell1115。例えば、mRNAの安定性を高めるために、発現ベクターの中に、3ターミネーター領域を包含させることができる。このようなターミネーター領域の一つに、ジャガイモのPI~IIターミネーター領域に由来するものがある。さらに、一般的に用いられるターミネーターには、オクトピンまたはノパリンの合成酵素のシグナルに由来するものがある。植物の発現ベクターは、典型的には、形質転換された細胞を同定するために用いられる優性の選抜マーカーも含んでいる。植物システムにとって有用な選抜用遺伝子には、抗生物質抵抗性遺伝子、例えば、ハイグロマイシン、カナマイシン、ブレオマイシン、G418、ストレプトマイシン、またはスペクチノマイシンをコードする遺伝子が含まれる。光合成に必要な遺伝子も、光合成欠損株の選抜マーカーとして用いることができる。または、クラゲの、アエクオレアビクトリアAequoreavictoriaに由来する緑色蛍光蛋白質を選抜マーカーとして用いることもできるSheenら、PlantJ87771995Chiuら、CurrentBiology6325。最後に、除草剤抵抗性をコードする遺伝子を選抜マーカーとして用いることもできるが、有用な除草剤抵抗性遺伝子には、ホスフィノトリシンphosphinothricinアセチルトランスフェラーゼ酵素をコードし、広範な適用範囲をもつ除草剤の商標登録バスタBastaホエヒストHoechst社、ドイツのフランクフルトに対する抵抗性を付与するbar遺伝子が含まれる。特定の選抜用薬剤に対する植物細胞の感受性を判定し、また、この薬剤が、形質転換細胞の全部ではなくとも、そのほとんどを効果的に死滅させる濃度を判定することによって、選抜マーカーの効率的な使用が容易になる。タバコの形質転換に対する有用な抗生物質濃度には、例えば、75~100μgmlカナマイシン、20~50μgmlハイグロマイシン、または5~10μgmlブレオマイシンが含まれる。除草剤抵抗性に関する形質転換体を選抜するために有用な方法が、例えば、Vasilら、前記によって説明されている。分子生物学の技術分野、特に、植物分子生物学の技術分野の当業者には、遺伝子発現のレベルは、プロモーターの組合せや、RNAプロセッシングシグナル、および終結因子に依存するだけでなく、選抜マーカーの遺伝子発現のレベルを高めるために、これらの因子が、どのように用いられているかに依存する。植物の形質転換植物の発現ベクターの構築に当たって、植物宿主の中にベクターを導入するためにいくつかの標準的な方法を用いることができ、それによって、遺伝子導入植物を作出することができる。これらの方法には、1アグロバクテリウム媒介による形質転換AツメファシエンスAtumefaciensまたはAリゾゲネスARhizogenes例えば、LichtensteinとFuller、遺伝子工学GeneticEngineering、第6巻、PWJRigby編、ロンドン、AcademicPress1987および、LichtensteinCPとDraperJ、DNAクローニングDNACloning、第II巻、DMGlover編、オクスフォード、IRIPress1985を参照のこと、2パーティクル輸送システム例えば、GordonKammら、PlantCell2603または、バイオラドBioRad社カリフォルニア州ハーキュリー技術会報1687、前記を参照のこと、3マイクロインジェクションプロトコール例えば、Greenら、前記を参照のこと、4ポリエチレングリコールPEG法例えば、Draperら、PlantCellPhysiol23451または、例えば、ZhangとWuTheorApplGenet76835を参照のこと、5リポソームが媒介するDNA取り込み例えば、Freemanら、PlantCellPhysiol251353を参照のこと、6エレクトロポレーションプロトコール例えば、Gelvinら、前記;Dekeyserら、前記;Frommら、Nature319791SheenPlantCell21027または、JangとSheen、PlantCell61665を参照のこと、および7ボルテックス法例えば、Kindle、前記を参照のことが含まれる。形質転換の方法は、本発明にとって重要ではない。効率的な形質転換を提供する方法であれば、いかなる方法を用いてもよい。作物やその他の宿主細胞を形質転換するために、より新しい方法が使用できれば、それらを直接用いることができる。以下は、特定の技術の一つのである、アグロバクテリウム媒介による植物形質転換の概略を示す実施例である。この技術によると、植物細胞のゲノムの中に移行すべき遺伝子を操作するための一般的な処理は2つの段階で行われる。まず、大腸菌の中で、クローニングとDNAの改変が行われ、目的の遺伝子構築物を含むプラスミドを、接合またはエレクトロポレーションによって、アグロバクテリウムの中に移行させる。次に、この結果できたアグロバクテリウム菌株を用いて、植物細胞を形質転換させる。このように、汎用化された植物発現ベクター用に、プラスミドは、アグロバクテリウムの中での複製を可能にする複製開始点と、大腸菌において機能する高コピー数複製開始点とを有する。これによって、アグロバクテリウムに移行させ、その後、植物に導入する前に、大腸菌の中で、導入遺伝子の製造および試験を容易に行うことができる。一つは、バクテリアでの選抜を行うために、例えば、ストレプトマイシンに抵抗性の遺伝子を、もう一つは、植物の中で機能する抵抗性遺伝子、例えば、カナマイシン抵抗性、または除草剤抵抗性をコードする遺伝子を、ベクターに含ませることができる。また、ベクター上には、1個以上の導入遺伝子を付加し、またアグロバクテリウムの移行機能によって認識されると、植物に移行するDNA領域の範囲が定められる、方向性をもったTDNAの境界配列を付加するための制限酵素部位が存在する。別の実施例においては、クローニングされたDNAが沈着しているタングステン製のミクロ発射物を細胞の中に打ち込むことによって植物細胞を形質転換する。打ち込みに用いられるバイオリスティック装置バイオラドBioRad社において、火薬の装填22口径のパワーピストンツールチャージPowerPistonToolChargeまたは空気発破により、プラスチック製のマクロ発射物が銃身を通過する。その上にDNAが沈積しているタングステン粒子の懸濁液のアリコートを、プラスチックマクロ発射物の前部に配置する。後者は、マクロ発射物が通り抜けるのには小さすぎる穴の開いたアクリル製の停止板のところで発火する。その結果、プラスチック製のマクロ発射物は、停止板に打ち付けられて、タングステン製のミクロ発射物が、停止板の穴を通り抜けて、その標的に向かって進み続ける。本発明にとって、標的は、植物細胞、組織、種子、または胚のいずれであってもよい。細胞の中に導入された、ミクロ発射物上のDNAは、核またはクロロプラストのいずれかに組み込まれる。一般的に、植物細胞における導入遺伝子の移行および発現は、当業者にとって、今や日常的な作業であり、植物における遺伝子発現実験を行い、農業的または商業的な利益をもたらす改良された植物変種を作出するための主要な手段となっている。トランスジェニック植物の再生植物発現ベクターで形質転換された植物細胞は、例えば、単細胞、カルス組織、または葉片から、標準的な植物組織培養技術によって再生させることができる。ほとんどの植物から、さまざまな細胞、組織、および器官をうまく培養して、全植物体を再生させることができ、このような技術は、例えば、Vasil、前記;Greenら、前記;WeissbachとWeissbach、前記;およびGelvinら、前記において説明されている。特定の実施例において、EAS4プロモーターおよびノパリン合成酵素ターミネーターの制御下にあり、選抜マーカー例えば、カナマイシン抵抗性を有しているクローン化されたキメラ合成酵素ポリペプチドを、アグロバクテリウムに形質転換する。ベクターを有するアグロバクテリウムによる葉片例えば、タバコの葉片の形質転換を、HorschらScience2271229によって説明されているようにして行う。数週間後例えば、3~5週間後、カナマイシン例えば、100μgmlを含む植物組織培養培地上で、形質転換されたと推定されるものを選抜する。次に、カナマイシン抵抗性の実生を、発根させるためのホルモンを含まない植物組織培養培地上に置く。そして、温室で生育させるために、カナマイシン抵抗性植物体を選抜する。必要に応じて、自殖させた遺伝子導入植物から採取した種子を、土を含まない培地に播いて、温室で育てることもできる。ホルモンを含まずカナマイシンを含む培地上に、表面滅菌した種子を播いて、カナマイシン抵抗性の後代を選抜する。導入遺伝子の組み込みの解析を、標準的な手法で行う例えば、Ausubel、前記;Gelvinら、前記を参照のこと。次に、標準的な免疫ブロットおよびDNA検出技術によって、選抜マーカーを発現させているトランスジェニック植物をスクリーニングする。陽性のトランスジェニック植物およびそのトランスジェニック後代は、いずれも、同じ導入遺伝子について構築されたその他のトランスジェニック植物体に較べてユニークである。植物のゲノムDNAへの導入遺伝子DNAの組み込みは、ほとんどの場合無作為で、組み込まれた部位が、導入遺伝子の発現レベルや、組織および発生における発現パターンに大きく影響する可能性がある。このため、最も適当な発現プロファイルをもつ植物体を同定し、選抜するためには、通常、各導入遺伝子について、数多くのトランスジェニック系統をスクリーニングする。トランスジェニック系統は、導入遺伝子の発現レベルに関して、広く評価される。まず、発現陽性植物を同定し定量するために、RNAレベルでの発現が評価される。RNA解析を行うための標準的な技術が用いられ、これには、導入遺伝子のRNA鋳型のみを増幅するように設計されたオリゴヌクレオチドプライマーを用いたPCR増幅アッセイ法、および導入遺伝子特異的なプローブを用いた溶液ハイブリダイゼーションアッセイ法例えば、Ausubel、前記を参照のことが含まれる。次に、RNA陽性植物体を、キメラ合成酵素特異的な抗体を用いたウエスタン免疫ブロット解析例えば、Ausubel、前記を参照のことによって、蛋白質発現に関する解析を行う。さらに、遺伝子導入組織の中での発現部位の位置を見るために、それぞれ、導入遺伝子特異的なヌクレオチドプローブと抗体を用いて、標準的なプロトコールに従ったインサイチューハイブリダイゼーションおよび免疫細胞化学法を行うことができる。いずれかの細胞または遺伝子導入植物体例えば、上記したものの中で、組換えキメラ合成酵素蛋白質が発現されると、例えば、アフィニティークロマトグラフィーを用いて、それを単離することができる。一つの実施例において、例えば、Ausubel前記で説明されているようにして、または、いずれかの標準的な技術によって産生された抗キメラ合成酵素抗体をカラムに付着させ、ポリペプチドを単離するために用いることができる。アフィニティークロマトグラフィーを行う前に、標準的な方法例えば、Ausubel前記を参照のことによって、キメラ合成酵素を産生する細胞の破砕および分画を行うことができる。単離されたら、必要に応じて、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって例えば、Fisher、生化学および分子生物学における実験技術LaboratoryTechniquesInViochemistryAndMolecularBiology、WorkとBurdon編、Elsevier、1980を参照のこと、さらに組換え蛋白質を精製することができる。ポリペプチドの発現および精製に関するこれらの一般的な技術を用いて、有用なキメラ合成酵素の断片または相同化合物を産生し単離することもできる。用途本明細書において説明されている本発明は、さまざまな農業上、薬学上、工業上、および商業上の目的にとって有用である。例えば、方法、DNA構築物、蛋白質、ならびに本明細書において説明されている細菌、酵母および植物を含む遺伝子導入生物は、イソプレノイド合成酵素を改良し、製造し、産生するために有用である。上記に示した本発明者らの結果は、キメラ合成酵素を提供することによって、イソプレノイド合成酵素活性を調整することが可能なことを明らかにしている。このような方法で、さまざまな合成酵素反応産物を改変し、制御し、または操作することができ、数多くの合成酵素反応産物、例えば、新規のモノテルペン、ジテルペン、およびセスキテルペンを産生させることができる。このような化合物は、ファイトアレキシン、殺虫剤、香水、ならびに抗細菌剤および抗菌剤などの薬剤として有用である。例えば、抗菌、抗細菌、抗マラリア、および抗腫瘍特性を有する化合物を産生するのに有用な、数多くのキメライソプレノイド合成酵素を作製することができる。例えば、抗菌イソプレノイドの産生を触媒することができるキメラ合成酵素を産生するために、カスビン合成酵素のC末端部位MauとWest、ProcNatlAcadSci9184971994を、TEAS、HVS、またはCH9のN末端ドメインに結合させる。抗細菌性化合物の産生を触媒することができるキメラ合成酵素を産生するために、シクロファルネセノンcyclofarnesenone合成酵素Habtermarianら、JNatProd561401993のC末端部位を、TEAS、HVS、またはCH9のN末端ドメインに結合させる。抗マラリア性化合物の産生は、アルテミシアンartemisian合成酵素ElFeralyら、JNatProd521961989に由来するC末端ドメインと、TEAS、HVS、またはCH9に由来するN末端ドメインとを有するキメラ合成酵素を用いて行われる。抗腫瘍化合物を産生することができる合成酵素は、タクサジエンtaxadiene合成酵素Koeppら、JBiolChem27086861995、またはヘレナリンhelenalin合成酵素Leeら、Sciecnce1965331977のC末端部位を、TEAS、HVS、またはCH9のN末端ドメインに結合させることによって産生される。本発明はまた、殺虫剤を精製することのできるキメラ合成酵素を産生するために有用である。このようなキメラ合成酵素は、カジネン合成酵素Chenら、ArchBiochemBiophys3242551995のC末端部位を、TEAS、HVS、またはCH9のN末端ドメインに結合させることによって作製される。最後に、キメラ合成酵素は、新規の調味料および香料を作出するためにも有用である。ある特定の実施例において、新規の調味料および香料を産生するために、リモネン合成酵素Colbyら、JBiolChem268230161993のC末端部位を、TEAS、HVS、またはCH9のC末端ドメインに結合させることによって作製される。本明細書において言及されている全ての出版物および特許は、各々の出版物または特許が、特別にまたは個別に、参照として組み入れられているのと全く同じように、本明細書において参照として組み入れられる。その他の態様前記の説明から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確認することができ、さまざまな用法や条件に適合させるために、本発明にさまざまな変更や修正を加えることができると思われる。したがって、この他の態様も、請求の範囲に包含される。