"対象における低酸素症に関連する状態を検出する方法であって、前記方法は、前記対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞リボ核酸RNAのレベルを決定することを含み、前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられた所定範囲より無細胞RNAのレベルが上か下である場合、前記対象は低酸素症に関連する状態を有することを示す、方法。対象における低酸素症に関連する状態の重症度を決定する方法であって、前記対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、前記p53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを、前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子のレベルと低酸素症に関連する状態の重症度とを相関させる所定範囲と比較することと、を含み、前記比較により、前記対象における低酸素症に関連する状態の重症度の決定を可能にする、方法。対象における低酸素症に関連する状態の治療的処置の効果を決定する方法であって、少なくとも1つの時点は前記処置の間または後である、2つ以上の時点に前記対象から取得した2つ以上の生体サンプルから、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを決定することを含み、i低酸素症に関連する状態において過剰発現するp53誘導性遺伝子の場合、前記2つ以上のサンプル間での前記p53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの減少は、前記治療的処置の効果を示し;ii低酸素症に関連する状態において抑制されるp53誘導性遺伝子の場合、前記2つ以上のサンプル間での前記p53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの増加は、前記治療的処置の効果を示す、方法。前記処置の開始前の時点に1つ以上の第1サンプルを採取し、前記処置中または処置後の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する、請求項3に記載の方法。前記処置中の時点に1つ以上の第1サンプルを採取し、前記1つ以上の第1サンプルの時点に続く処置中の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する、請求項3に記載の方法。前記処置中の時点に1つ以上の第1サンプルを採取し、前記処置が停止された後の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する、請求項3に記載の方法。低酸素症に関連する状態に罹患しており、治療的処置を受けて前記状態を治療すべき対象を選択する方法であって、前記対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルが、前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子と関連付けられている所定範囲より上または下である場合、前記治療的処置を受けるべき対象を選択することと、を含む方法。請求項1~7のいずれか一項に記載の方法を実施するためのキットであって、生体サンプルからの少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAを増幅するための少なくとも1つの試薬と、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法を実施するための指示と、を含むキット。前記少なくとも1つの試薬は、前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子と特異的にハイブリダイズするためのプライマーまたはプローブを含む、請求項8に記載のキット。生体サンプルから無細胞RNAを抽出するための少なくとも1つの試薬をさらに含む、請求項8または9に記載のキット。前記サンプルは体液サンプルである、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法または請求項8~10のいずれか一項に記載のキット。前記体液サンプルは血液サンプルである、請求項11に記載の方法またはキット。前記サンプルは血清サンプルである、請求項11に記載の方法またはキット。前記サンプルは血漿サンプルである、請求項11に記載の方法またはキット。少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルはRT-PCRで決定される、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法または請求項8~10のいずか一項に記載のキット。少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルはリアルタイム定量RT-PCRで決定される、請求項15に記載の方法またはキット。前記低酸素症に関連する状態は循環器疾患、癌、脳血管障害CVA、および胎児ストレスから選ばれる、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法または請求項8~10のいずれか一項に記載のキット。前記低酸素症に関連する状態は胎児ストレスである、請求項17に記載の方法またはキット。前記循環器疾患は心筋梗塞である、請求項17に記載の方法またはキット。前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は、TP53GeneBank受託番号Nm_000546、p21GeneBank受託番号Nm_000389、ERCC5GeneBank受託番号Nm_000123、MDM2GeneBank受託番号Nm_0006878、TP53I3GeneBank受託番号Nm_004881、NOTCH1GeneBank受託番号Nm_017617、PIGFGeneBank受託番号Nm_002643、BTG2GeneBank受託番号Nm_006763、ZMAT3GeneBank受託番号Nm_0022470、APAF1GeneBank受託番号Nm_013229、FASGeneBank受託番号Nm_152873、ANGPTL2GeneBank受託番号Nm_012098、PUMAGeneBank受託番号Nm_014417、IGFBP6GeneBank受託番号Nm_002178、GDF15GeneBank受託番号Nm_004864、BNIP3LGeneBank受託番号Nm_004331.2、TGFβ3GeneBank受託番号Nm_003239、VEGFGeneBank受託番号Nm_001025366、およびHIF-1αから選ばれる、請求項18または19に記載の方法またはキット。前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は、p21GeneBank受託番号Nm_000389、BTG2GeneBank受託番号Nm_006763、HIF-lαGeneBank受託番号Nm_001530、NOTCH1GeneBank受託番号Nm_017617、TGFβ3GeneBank受託番号Nm_003239、およびZMAT3GeneBank受託番号Nm_0022470から選ばれる、請求項20に記載の方法またはキット。前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子はp21GeneBank受託番号Nm_000389である、請求項20に記載の方法またはキット。前記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子はBTG2GeneBank受託番号Nm_006763である、請求項20に記載の方法またはキット。本発明の一態様において、本発明は、対象における低酸素症に関連する状態を検出する方法を提供する。この方法は、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞リボ核酸RNAのレベルを決定することを含み、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられている所定範囲より無細胞RNAレベルが上か下である場合、当該対象は低酸素症に関連する状態を有していることを示す。本発明の別の一態様において、本発明は、対象における低酸素症に関連する状態の重症度を決定する方法を提供する。この方法は、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、当該p53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子のレベルと低酸素症に関連する状態の重症度とを相関させる所定範囲と比較することを含み、この比較により、当該対象における低酸素症に関連する状態の重症度の決定を可能にする。本発明のさらに別の一態様において、本発明は、対象における低酸素症に関連する状態の治療的処置の効果を決定する方法を提供する。この方法は、少なくとも1つの時点は当該処置の間または後である、2つ以上の時点に当該対象から取得した2つ以上の生体サンプル中の、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを決定することを含む。ここで、i低酸素症に関連する状態において過剰発現するp53誘導性遺伝子の場合、当該2つ以上のサンプル間でのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの減少は、治療的処置の効果を示し;ii低酸素症に関連する状態において抑制されるp53誘導性遺伝子の場合、当該2つ以上のサンプル間でのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの増加は、治療的処置の効果を示す。本発明のさらに別の一態様において、本発明は、低酸素症に関連する状態に罹患しており、治療的処置を受けて当該状態を治療すべき対象を選択する方法を提供する。この方法は、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルが、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられている所定範囲より上または下である場合、当該治療的処置を受けるべき対象を選択することを含む。実施形態のリスト本発明のいくつかの非限定的な実施形態を、番号付けした段落の形態で以下に開示する。対象における低酸素症に関連する状態を検出する方法であって、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞リボ核酸RNAのレベルを決定することを含み、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられた所定範囲より無細胞RNAのレベルが上か下である場合、当該対象は低酸素症に関連する状態を有することを示す、方法。1.対象における低酸素症と関連する状態を検出する方法であって、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞リボ核酸RNAのレベルを決定することを含み、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられた所定範囲より無細胞RNAレベルが上か下である場合、当該対象は低酸素症に関連する状態を有することを表す、方法。2.対象における低酸素症と関連する状態の重症度を決定する方法であって、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、当該p53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子のレベルと低酸素症に関連する状態の重症度とを相関させる所定範囲と比較することと、を含み、この比較により、当該対象における低酸素症に関連する状態の重症度の決定を可能にする、方法。3.対象における低酸素症と関連する状態の治療的処置の効果を決定する方法であって、少なくとも1つの時点は当該処置の間または後である、2つ以上の時点に当該対象から取得した2つ以上の生体サンプルから、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを決定することを含む、方法。ここで、i低酸素症に関連する状態において過剰発現するp53誘導性遺伝子の場合、当該2つ以上のサンプル間でのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの減少は、治療的処置の効果を示し;ii低酸素症に関連する状態において抑制されるp53誘導性遺伝子の場合、2つ以上のサンプル間でのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの増加は、治療的処置の効果を示す。4.処置の開始前の時点に1つ以上の第1サンプルを採取し、処置中または処置後の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する、実施形態3に記載の方法。5.処置中の時点に1つ以上の第1サンプルを採取し、当該1つ以上の第1サンプルの時点に続く処置中の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する、実施形態3に記載の方法。6.処置中の時点に1つ以上の第1サンプルを採取し、処置が停止された後の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する、実施形態3に記載の方法。7.低酸素症に関連する状態に罹患しており、治療的処置を受けて当該状態を治療すべき対象を選択する方法であって、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルが、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子と関連付けられている所定範囲より上または下である場合、当該治療的処置を受けるべき対象を選択することと、を含む方法。8.実施形態1~7のいずれか一項に記載の方法を実施するためのキットであって、生体サンプルからの少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAを増幅するための少なくとも1つの試薬と、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法を実施するための指示と、を含むキット。9.上記少なくとも1つの試薬は、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子と特異的にハイブリダイズするためのプライマーまたはプローブを含む、実施形態8に記載のキット。10.生体サンプルから無細胞RNAを抽出するための少なくとも1つの試薬をさらに含む、実施形態8または9に記載のキット。11.上記サンプルは体液サンプルである、実施形態1~7のいずれか一項に記載の方法または実施形態8~10のいずれか一項に記載のキット。12.上記体液サンプルは血液サンプルである、実施形態11に記載の方法またはキット。13.上記サンプルは血清サンプルである、実施形態11に記載の方法またはキット。14.上記サンプルは血漿サンプルである、実施形態11に記載の方法またはキット。15.少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルをRT-PCRで決定する、実施形態1~7のいずれか一項に記載の方法または実施形態8~10のいずか一項に記載のキット。16.上記RT-PCRはリアルタイム定量RT-PCRである、実施形態15に記載の方法またはキット。17.低酸素症に関連する状態は循環器疾患、癌、脳血管障害CVA、および胎児ストレスから選ばれる、実施形態1~7のいずれか一項に記載の方法または実施形態8~10のいずれか一項に記載のキット。18.低酸素症に関連する状態は胎児ストレスである、実施形態17に記載の方法またはキット。19.上記循環器疾患は心筋梗塞である、実施形態17に記載の方法またはキット。20.上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は、TP53GeneBank受託番号Nm_000546、p21GeneBank受託番号Nm_000389、ERCC5GeneBank受託番号Nm_000123、MDM2GeneBank受託番号Nm_0006878、TP53I3GeneBank受託番号Nm_004881、NOTCH1GeneBank受託番号Nm_017617、PIGFGeneBank受託番号Nm_002643、BTG2GeneBank受託番号Nm_006763、ZMAT3GeneBank受託番号Nm_0022470、APAF1GeneBank受託番号Nm_013229、FASGeneBank受託番号Nm_152873、ANGPTL2GeneBank受託番号Nm_012098、PUMAGeneBank受託番号Nm_014417、IGFBP6GeneBank受託番号Nm_002178、GDF15GeneBank受託番号Nm_004864、BNIP3LGeneBank受託番号Nm_004331.2、TGFβ3GeneBank受託番号Nm_003239、VEGFGeneBank受託番号Nm_001025366、およびHIF-1αから選ばれる、実施形態18または19に記載の方法またはキット。21.上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は、p21GeneBank受託番号Nm_000389、BTG2GeneBank受託番号Nm_006763、HIF-lαGeneBank受託番号Nm_001530、NOTCH1GeneBank受託番号Nm_017617、TGFβ3GeneBank受託番号Nm_003239、およびZMAT3GeneBank受託番号Nm_0022470から選ばれる、実施形態20に記載の方法またはキット。22.上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子はp21GeneBank受託番号Nm_000389である、実施形態20に記載の方法またはキット。23.上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子はBTG2GeneBank受託番号Nm_006763である、実施形態20に記載の方法またはキット。いくつかの非限定的実施形態の詳細説明本発明は、種々のp53誘導性遺伝子の無細胞RNA濃度の変化、特に血中での変化が、低酸素症に関連する種々の状態、例えば胎児ストレス胎児に対して測定される低酸素濃度に現れる、子癇前症、虚血性心疾患、脳卒中脳血管障害CVA、心筋梗塞等と相関しているという知見に基づいている。したがって、理論に拘束されることは所望しないが、低酸素症は、p53およびp53誘導性遺伝子発現レベルに影響を及ぼすことが知られている。上記に基づき、本発明の発明者らは、低酸素症に関連する種々の疾患を予測するための有効な診断ツールとして、無細胞RNAが使用可能であると想定した。また、本発明は、低酸素症に関連する状態の治療の前後における、種々のp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの差に基づいて、低酸素症に関連する状態の治療の効果を評価するツールも企図している。よって、本発明の第1の態様によれば、対象における低酸素症に関連する状態を検出する方法が提供される。この方法は、当該対象から取得した生体サンプル中の、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞リボ核酸RNAのレベルを決定することを含み、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられた所定範囲より無細胞RNAレベルが上か下である場合、当該対象は低酸素症に関連する状態を有することを示す。本明細書で使用する検出という語は、対象から取得した生体サンプル中の無細胞RNAの有無を、定量的および定性的に決定することをいう。したがって、検出により、対象から取得した生体サンプル中の無細胞RNAのレベルに基づき、低酸素症に関連する病態例えば、心筋虚血;心筋梗塞の急性期最初の数時間~7日目、治癒過程期7~28日目、および治癒完了期29日目以降の存在または不存在を特定することが可能になる。本明細書で使用する低酸素症に関連する状態という語は、ある器官または組織の酸素レベルが、一般に当該器官への血流量が減少する結果、所定の正常な生理的レベルまたは範囲より下に減少する状態をいう。この血流量の減少は、以下の非限定的な状況が原因であり得る:i塞栓による血管遮断血栓;iiアテローム硬化症に起因する血管遮断;iii血管破損出血性脳卒中;iv例えば血管痙攣時や、場合によっては一過性脳虚血発作TIA時、およびくも膜下出血後に発生する血管収縮に起因する血管遮断。本教示による低酸素症は、慢性または一過性であり得る。低酸素症に関連する状態の例として、脳血管障害CVA、胎児ストレス例えば、出産前期分娩前または分娩期出生過程中に胎児にさらされる危険;胎児低酸素症胎児の低酸素レベルと同義、虚血性心疾患、心筋虚血虚血性心疾患とも呼ばれる、心筋梗塞MI等の急性冠動脈症候群本明細書に記載のように、これらの全病期を含む、心臓手術、脳外科手術、脳低酸素症、脳梗塞、手術例えば、術前低酸素症、術後低酸素症、外傷、肺疾患、肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患COPD、冠動脈疾患、末梢血管疾患[例えば、動脈硬化アテローム硬化症、移植加速型動脈硬化、深部静脈血栓症]、癌例えば子宮頸部、結腸、腎臓、肺、子宮、乳線、膵臓の細胞癌、リンパ腫、白血病を含むがこれらに限定されない、血管新生および血管新生関連の障害例えば糖尿病網膜症、黄斑変性、乾癬、関節リウマチを含むが、これらに限定されない、腎不全、骨格筋虚血、睡眠時無呼吸、睡眠時低酸素、ウイルス感染、細菌感染、喫煙、貧血、血液量減少、出血、高血圧、糖尿病、血管病変、レイノー病、内皮機能不全、局所灌流欠乏例えば四肢、消化管、腎臓の虚血、血栓症、凍傷、中毒症例えば一酸化炭素、重金属、高山病、乳児突然死症候群SIDS、喘息、先天性の循環器異常例えばファロー四徴症、および赤芽球症ブルーベビー症候群が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用する生体サンプルという語は、対象から取得される任意のサンプルをいう。こうしたサンプルは、好ましくは体液である。適切なサンプルの例として、血液、血漿、血清、羊水、喀痰、唾液、精液、尿、糞便、骨髄、および脳脊髄液CSFが挙げられるが、これらに限定されない。血清という語は、フィブリン塊および血球細胞を除去した後に得られ、循環血液中の血漿と区別される液体部分をいう。血漿という語は、血液のうち細胞を含まない液体部分であり、凝固の後に血清と区別される部分をいう。いくつかの実施形態では、生体サンプルは喀痰または唾液から選ばれる。生体サンプルは、通常、細胞画分を除去するように処理されるすなわち、後で詳述する無細胞RNA細胞になる。対象から生体サンプルを取得する手順は、当技術分野でよく知られている。このような手順の例として、採血、羊水穿刺、絨毛採取、および採尿が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用する対象という語は、特に哺乳類に属する任意の温血動物を指し、例として、ヒト、チンパンジー等の非ヒト霊長類、その他の類人猿およびサル種;ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマ等の家畜;イヌ、ネコ等の家畜化哺乳類;マウス、ラット、モルモット等のげっ歯類動物を含む実験動物が挙げられるが、これらに限定されない。この語は特定の年齢性別を意味しないため、成人と新生児を含み、男性か女性かを問わない。本発明の文脈における対象は、好ましくはヒトである。本明細書で使用する無細胞リボ核酸RNA分泌型circulatingRNA、あるいはciRNAとも呼ばれるという語句は、サンプルの無細胞画分内に存在するRNA例えばmRNAをいう。本明細書に記載の無細胞RNAは、完全細胞すなわち無傷の細胞膜を含む細胞に含まれるのでなく、概して粒子例えば、胎盤由来の合胞体栄養膜細胞微粒子、Rusterholzetal.,supra;orapoptoticbodies,Hasselmannetal.,ClinChem200147:1488-1489を参照に関連している。いくつかの実施形態では、無細胞RNAは無傷であるすなわち断片化されない。無細胞RNAサンプルは、当技術分野で知られている任意の方法に従って生体サンプルから抽出してよい実施例の一般的な材料および方法のセクションを参照。例えば、生体サンプルすなわち血液を取得した後、以前に説明されているようにサンプルを調製する例えば、上記Ngetal.を参照。手短に述べると、2サイクルの遠心分離例えば4°C、1,600×gで10分間により、サンプルから有核細胞を完全に除去する。得られた無細胞サンプル例えば血漿または血清を清潔なチューブ例えばエッペンドルフチューブに移し、TRIzolLS試薬インビトロジェン、カリフォルニア州カールズバッドおよびクロロホルムと混合し、遠心分離する例えば4°C、11,900×gで15分間。水層を新しいチューブに移し、1:1の比率で70エタノールと混合する。次に、製造者の推奨事項に従って、混合物をRNeasyミニカラムRNeasyミニキット、キアゲン、カリフォルニア州バレンシアに移し、RNaseのない水中でトータルRNAを溶出する。本発明による無細胞RNAの定量化は、当技術分野で知られている任意の方法および当該方法を用いた任意のキットで実施できる。こうした方法の非限定的な例をいくつか挙げると、逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応法RT-PCR、リアルタイムRT-PCR例えば、TaqMan登録商標およびAssays-on-Demand商標アプライドバイオシステムズ、米国カリフォルニア州フォスターシティー、MolecularBeacons、Scorpions登録商標、およびSYBR登録商標Greenモレキュラープローブス、血漿/血清分泌型RNA精製キットノルジェン製:www.norgenbiotek.com等、およびRNAマイクロアレイなどがある。いくつかの実施形態では、生体サンプル中の無細胞RNAのより正確な測定値を提供する目的で、さらに、無細胞RNAをいくつかのハウスキーピング遺伝子例えば、βアクチン、GAPDH、CypA、HPRT、Ki-67、SDHA、HPRT1、HBS1L、AHSP、β2-ミクログロブリンに対して正規化する。RNA定量化を実施するための試薬は、一般に、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子と特異的にハイブリダイズするための、少なくとも1つのプライマーおよび/またはプローブを含む。本明細書で使用する特異的にハイブリダイズするという語は、例えばRNA:RNA分子、RNA:DNA分子、および/またはDNA:DNA分子のような二本鎖分子を形成することをいう。特定遺伝子の無細胞RNAの増幅および/または検出は、一般に、少なくとも1つの配列特異的オリゴヌクレオチドの使用を伴う後述する実施例の一般的な材料および方法のセクションを参照。このオリゴヌクレオチドは、本発明のポリヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズ可能な、少なくとも10塩基、少なくとも15塩基、少なくとも20塩基、少なくとも25塩基、または少なくとも30塩基の長さであり得る。ハイブリッド二本鎖の検出は、配列特異的なプローブ例えばMGBプローブの使用を含む、いくつかの方法で実施できる。通常、プローブに標識またはタグを付けるコンジュゲートする。このような標識またはタグは、当技術分野において標準的に使用されており、放射性、蛍光、生体、酵素などのタグまたは標識がある。従来から使われているハイブリダイゼーションアッセイの例として、PCR、RT-PCR、RNaseプロテクション、in-siteハイブリダイゼーション、プライマー伸長法、ノーザンブロット、およびドットブロット解析が挙げられる下記実施例のセクションを参照。ある特定のp53誘導性遺伝子の検出に適した特定のプライマーおよびプローブの例を、下記実施例のセクションに示す。当業者であれば、本明細書に示される使用可能な遺伝子配列または当技術分野において使用可能な遺伝子配列に基づき、当技術分野で周知の方法を用いて、適切なプライマーおよびプローブを生成できると考えられる。本明細書で使用するp53誘導性遺伝子という語は、タンパク質53p53により直接的または間接的に発現が制御される遺伝子をいう。いくつかの実施形態では、p53による遺伝子制御は、遺伝子の転写速度に応じて例えば転写開始に影響を及ぼすことにより遺伝子の発現レベルが変わる転写制御により発生する。遺伝子が転写レベルで制御される場合、p53タンパク質は、DNA結合部位この部位はときおり遺伝子のプロモーター近くに位置するに結合するか調節結合部位を結合することにより、遺伝子の発現を制御して、遺伝子をオンにするすなわち遺伝子を活性化するか遺伝子を遮断するすなわち遺伝子を抑制することができる。いくつかの実施形態では、転写後修飾例えば、グリコシル化、アセチル化、脂肪酸アシル化、ジスルフィド結合形成等、RNA輸送、RNA翻訳例えば、翻訳開始、タンパク質輸送、タンパク質安定、mRNA分解すなわち転写安定の1つ以上のレベルで遺伝子の制御が発生して、遺伝子のクロマチン成分に影響を及ぼす例えば、RNAポリメラーゼおよび転写因子に対するクロマチンの到達性に影響する。本明細書で使用する少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられている所定範囲という語は、概して、p53誘導性遺伝子の濃度範囲であって、低酸素症に関連するどの状態にも罹患していない健常対象から取得したサンプルすなわち、低酸素症の影響を受けていない正常な対照サンプルにおいて測定される無細胞RNAのレベルを定義した範囲をいう。このような対照サンプルは、通常、年齢範囲、生理学的状態妊娠等、および性別が同一の対象から取得する。状況によっては、対照サンプルは、低酸素状態となる前の同一対象に由来する場合もある。例えば、低酸素症に関連する状態を発症しやすい対象から対照サンプルを取得する例えば妊娠前。いくつかの実施形態では、所定範囲とは、低酸素症に関連する状態の種々の病期例えばMIの場合、本明細書に記載するように、心筋梗塞の急性期、治癒過程期、治癒完了期の対象から取得したサンプルから測定される無細胞RNAのレベルを定義した、p53誘導性遺伝子の濃度範囲である。この所定範囲は、実験的に例えば、MI患者から取得した血液から無細胞RNAをサンプル採取することにより決定してよく、文献があれば文献から所定範囲を導いてもよい。したがって、本発明によれば、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の所定の濃度範囲上記に定義の通りに対して、測定した無細胞RNAのレベルが統計的に異なるすなわち所定範囲より上または下である場合、当該対象は低酸素症に関連する状態を有していることを示す。いくつかの実施形態では、低酸素症に関連する状態は、それぞれのあらゆる発生期における胎児ストレス、動脈硬化性血管疾患、心筋虚血、心筋梗塞、不安定狭心症、心臓突然死、冠動脈プラーク破裂、血栓症から選ばれる。本明細書で使用する虚血という語は、一般に動脈の遮断が原因で、器官への不十分な血液供給を伴う状態をいう。本明細書で使用する心筋虚血という語は、心臓の筋組織への血流量が不十分であるために生じる心機能障害をいう。虚血は、無症状または症候性であり得る。血流量が減少する原因は、例えば、冠動脈の狭窄冠動脈硬化症、血栓による閉塞冠動脈血栓症、あるいは、比較的頻度は低いが、心臓内の細動脈その他の小血管のびまん性狭窄などである。本明細書で使用する心筋梗塞MIという語急性心筋梗塞AMI、あるいは心臓発作とも呼ばれるは、長時間の虚血に続く心筋の不可逆的壊死をいう。心筋梗塞は、一般に、心筋に供給する動脈が閉塞または遮断することにより発生し、その結果、心筋が損傷または壊死するすなわち心臓発作。本発明の文脈では、心筋梗塞は、あらゆる病期例えば、本明細書に記載するような心筋梗塞の急性期、治癒過程期、治癒完了期を指す。本明細書で使用する胎児ストレスという語は、胎児が、妊娠に関連する合併症を発症する恐れのある任意の状態をいう。胎児ストレスには、栄養供給不足、および胎児発育停止が含まれるが、これらに限定されない。胎児ストレスは胎児の発達と脳機能に影響することがあり、早産児および緊急分娩例えば帝王切開に関連する妊娠結果において重要な役割を果たす。胎児ストレスに関連する状態の例として、異常妊娠、胎児低酸素症、胎児のストレス、子宮内胎児発育遅延IUGR、胎児発育不全FGR、胎児性アルコール症候群FAS、ニコチン摂取、アルコール摂取、栄養不良、母体糖尿病、高年齢出産、母体の過度な運動が挙げられるが、これらに限定されない。胎児ストレスに関連する妊娠関連の低酸素状態のさらなる例については、上記で詳しく例示している。いくつかの実施形態では、本明細書に定義される胎児ストレスは、妊娠関連の低酸素状態、例えば、子癇前症、子癇、軽度の子癇前症、慢性高血圧、EPH浮腫タンパク尿高血圧を伴う妊娠中毒症、妊娠性高血圧、混合型子癇前症慢性高血圧、慢性腎症、または狼瘡と混合した子癇前症を含む、HELLP症候群溶血、肝酵素上昇、血小板減少、腎症、妊娠糖尿病、胎盤低酸素症、胎児低酸素症、子宮内胎児発育遅延IUGR、胎児発育不全FGR、胎児性アルコール症候群FASと関係する低酸素症に関連する。いくつかの実施形態では、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は、以下の遺伝子から選ばれる:p21GeneBank受託番号U09579、VEGFGeneBank受託番号NM_001025366、HIF1αGeneBank受託番号NM_001530.2、MDM2EST=MDM2、GeneBank受託番号M92424およびTP53I3GeneBank受託番号NM_147184.1、Fas抗原/TNFR6GeneBank受託番号X89101、TNFR18GeneBank受託番号AI923712、GelsolinGeneBank受託番号X04412、btg1GeneBank受託番号X61123、EST=PIG8エトポシド誘導性、GeneBank受託番号R11732、T10mRNA/ヒトセントリン/SUMOGeneBank受託番号U83117、Apaf1GeneBank受託番号AL135220、ANGL2、EST=アンジオポエチン様GeneBank受託番号AF125175、および細胞質アデニル酸キナーゼGeneBank受託番号J04809、S100カルシウム結合タンパク質A4GeneBank受託番号M80563、cyclinG2GeneBank受託番号U47414、EST=RasインヒビターRin1GeneBank受託番号L36463、B細胞転座遺伝子2、抗増殖性GeneBank受託番号U72649、ERCC5GeneBank受託番号AW502004、H2BおよびH2Aヒストン遺伝子291A、GeneBank受託番号Z83336、Notch遺伝子相同体1、ショウジョウバエGeneBank受託番号AI566271、Eph受容体A2GeneBank受託番号M59371、肝細胞増殖因子様タンパク質遺伝子GeneBank受託番号U37055およびEST=α-Lフコシダーゼ前駆体GeneBank受託番号M29877、マンノシダーゼ2、αB1GeneBank受託番号U37248、ホスホマンノムターゼSec53p相同体GeneBank受託番号U86070、スペルミジンGeneBank受託番号U40369、ペルオキシソーム内在性膜タンパク質PMP34GeneBank受託番号AI871429、機能未知タンパク質/ヒトキユビリンGeneBank受託番号AF034611、アルギニノコハク酸合成酵素1GeneBank受託番号AA069289、リポコルチン1/ヒトアネキシンA1GeneBank受託番号ASW379702、EST=キサンチンデヒドロゲナーゼGeneBank受託番号U39487およびEST=プロスタグランジンシンターゼGeneBank受託番号M98539、ビオチンカルボキシラーゼ/ヒト神経酸性タンパク質GeneBank受託番号AI422580、Ly-6アロ抗原/ヒトジヒドロピリミジナーゼGeneBank受託番号D78014、ニューラルビジニン様タンパク質3NVP-3、GeneBank受託番号AI391924、EST=アリール-炭化水素受容体相互作用タンパク質GeneBank受託番号U78521、PIGF、ホスファチジルイノシトールグリカン、クラスF3AGeneBank受託番号W015279、EST=UNC-51様キナーゼ1GeneBank受託番号AL046256、Tobファミリー用DNA/ERBB2のトランスデューサーGeneBank受託番号D38305、TYROプロテインチロシンキナーゼ結合タンパク質GeneBank受託番号AI299346、p53-誘導型ジンクフィンガータンパク質Wig-1/ZMAT3mRNAGeneBank受託番号AI457344およびフレンドオブGATA-1friendofGATA-1FOG1GeneBank受託番号AF488691、T-複合体関連精巣発現3GeneBank受託番号AA781436、セレン結合タンパク質1GeneBank受託番号U29091、EST=BPM1/ヒトプレクチン1GeneBank受託番号Z54367、EST=Vamp2/ヒトシナプトブレビン2GeneBank受託番号M36205、Fas/APO-1細胞表面抗原GeneBank受託番号X63717、Bcl-2結合成分3bbc3/PUMA、GeneBank受託番号U82987、Bcl-6GeneBank受託番号U00115、BakGeneBank受託番号U16811、ATL由来PMA応答性ペプチドGeneBank受託番号D90070およびGADD45GeneBank受託番号M60974、BTG2GeneBank受託番号U72649、損傷特異的DNA結合タンパク質GeneBank受託番号U18300、ヒストン2A様タンパク質GeneBank受託番号U90551、PCNAGeneBank受託番号M15796、エンドグリンGeneBank受託番号X72012、バーシカンGeneBank受託番号U16306、重鎖4F2GeneBank受託番号M21904、SMAD7GeneBank受託番号AF010193、TGF-βスーパーファミリータンパク質GeneBank受託番号AB000584およびIGFBP6GeneBank受託番号M62402、Quiescin/QSCN6GeneBank受託番号L42379、アディポフィリンGeneBank受託番号X97324、多発性外骨腫症II型タンパク質GeneBank受託番号U72263、血管平滑筋αアクチンGeneBank受託番号X13839、スムーテリンGeneBank受託番号Z49989、神経フィラメントサブユニットNF-LGeneBank受託番号X05608、NBサイモシンβGeneBank受託番号D82345、LIMドメインタンパク質GeneBank受託番号X93510、リジルオキシダーゼ様タンパク質GeneBank受託番号U24389およびUDP-ガラクトース4エピメラーゼGALE、GeneBank受託番号L38668、cAMP活性化プロテインキナーゼBGeneBank受託番号Y12556、リソソームマンノシダーゼBGeneBank受託番号U05572、カルボキシエステラーゼliver、GeneBank受託番号Y09616、ABC3GeneBank受託番号U78735、ApolipoproteinC-IVLDL、GeneBank受託番号M20902、CARTGeneBank受託番号U20325、レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼGeneBank受託番号M12625、ロダネーゼGeneBank受託番号D87292、NECDIN関連タンパク質GeneBank受託番号U35139およびNSCL-2遺伝子GeneBank受託番号M96740、FEZI-T遺伝子GeneBank受託番号U60062、ニンジュリン1GeneBank受託番号U72661、アミロイド前駆体様タンパク質GeneBank受託番号U48437、c-Ha-rasGeneBank受託番号J00277、腸管VIPR関連タンパク質GeneBank受託番号X77777、ジアシルグリセロールキナーゼalpha、GeneBank受託番号X62535、仮想ser/thrプロテインキナーゼGeneBank受託番号U56998、DMキナーゼGeneBank受託番号L08835、DRAL-FHL2GeneBank受託番号L42176および活性化転写因子3GeneBank受託番号L19871、ZNF127-XpGeneBank受託番号U38315、LISCH7GeneBank受託番号AD000684、ジンクフィンガータンパク質7GeneBank受託番号M29580、Tip-1GeneBank受託番号U90913、核因子NF-116GeneBank受託番号HG3494、POM-ZP3GeneBank受託番号U10099、KIAAA0247GeneBank受託番号D87434、マンマグロビン1GeneBank受託番号U33147、ジスルフィド異性化酵素関連タンパク質GeneBank受託番号J05016およびOS4GeneBank受託番号U81556、不妊関連精子タンパク質GeneBank受託番号S58544、KIAA0147GeneBank受託番号D63481、SURF-1GeneBank受託番号Z35093、WD反復タンパク質HAN11GeneBank受託番号U94747、p53誘導性遺伝子3PIG3、GeneBank受託番号AF010309、MIC-1/GDF15、TGF-LファミリーのメンバーGeneBank受託番号AF019770、DDB2、ヌクレオチド除去修復に関与GeneBank受託番号U18300a、MYD88、ミエロイド分化GeneBank受託番号U70451a、レチノイン酸受容体LGeneBank受託番号X07282およびFas/APO1GeneBank受託番号Z70519、MAPK14GeneBank受託番号L35253、Bcl2関連Xタンパク質Bax、GeneBank受託番号L22474、FKBP4ペプチジル-プロリル-シス-トランス異性化酵素であり得る、GeneBank受託番号M88279、ミトコンドリアストレス70前駆体Mortalin2、GeneBank受託番号L15189a、p57KIP2CDKインヒビター1C、GeneBank受託番号U22398、DNAリガーゼ1LIG1、GeneBank受託番号M36067、DNA除去修復関連1ERCC5、GeneBank受託番号L20046a、G/TミスマッチチミンDNAグリコシラーゼTDG、GeneBank受託番号U51166、ホメオボックスタンパク質1HOXD3、GeneBank受託番号D111117aおよびMAP4K5JunN末端キナーゼの活性化因子、GeneBank受託番号U77129、タンパク質1の複製因子ARPA1、GeneBank受託番号M63488、Bcl2アンタゴニスト/キラー1BAK1、GeneBank受託番号U23765、TGF-L誘導性初期増殖応答遺伝子TIEG、GeneBank受託番号S81439a、MAP2K1MEK11.5キナーゼ、GeneBank受託番号L05624、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン2CSPG2、GeneBank受託番号U16306aおよびジンクフィンガータンパク質197p18タンパク質、ZNF197、GeneBank受託番号Z21707a、アデニル酸キナーゼ3GeneBank受託番号J04809、アルドラーゼAGeneBank受託番号NM_000034、アルドラーゼCGeneBank受託番号NM_0051654、エノラーゼ1ENO1、GeneBank受託番号NM_001428、グルコース輸送体1GeneBank受託番号NM_153369、グルコース輸送体3GeneBank受託番号NM_001009770、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼGeneBank受託番号NM_002046、ヘキソキナーゼ1GeneBank受託番号Nm_000188Xおよびヘキソキナーゼ2GeneBank受託番号Nm_000189X、インスリン様増殖因子2IGF-2、GeneBank受託番号NM_000612、IGF結合タンパク質1IGFBP-1、GeneBank受託番号uc001gkz.1、IGFBP-3GeneBank受託番号uc003tnr.1、乳酸デヒドロゲナーゼAGeneBank受託番号NM_005566、ホスホグリセリン酸キナーゼ1GeneBank受託番号NM_000291、ピルビン酸キナーゼMGeneBank受託番号M23725、トランスフォーミング増殖因子β3TGFβ3、GeneBank受託番号uc001doh.1、セルロプラスミンGeneBank受託番号NM_000096、エリスロポエチンGeneBank受託番号NM_000799、トランスフェリンGeneBank受託番号NM_001063およびトランスフェリン受容体GeneBank受託番号NM_003234、α1B-アドレナリン受容体GeneBank受託番号NM_000679、アドレノメデュリンGeneBank受託番号NM_001124、エンドセリン-1GeneBank受託番号NM_001101696、ヘムオキシゲナーゼ1GeneBank受託番号NM_002133、一酸化窒素シンターゼ2GeneBank受託番号uc002gzu.1およびVEGF受容体FLT-1GeneBank受託番号NM_001025366およびBCL2/アデノウイルスE1B19kd-相互作用タンパク質3様BNIP3L、GeneBank受託番号NM_004331.2。いくつかの実施形態では、p53誘導性遺伝子は、表1に示すTP53、P21、ERCC5、MDM2、TP53I3PIG3、NOTCH、PIGF、BTG2、ZMAT3WIG1、APAF1、FAS、ANGPTL2、PUMABBC3、IGFBP6、GDF15、BNIP3L、TGF-β3、VEGF、HIF1αから選ばれ、同じ表1に表示されているTaqMan登録商標遺伝子発現アッセイアプライドバイオシステムズを使用するか、または当業者に認められている同等の市販または設計されたプライマー/プローブを使用して定量化される。いくつかの実施形態では、p53誘導性遺伝子は、表3に示すTP53、P21、ERCC5、MDM2、TP53I3PIG3、NOTCH、PIGF、BTG2、ZMAT3WIG1、APAF1、FAS、ANGPTL2、PUMABBC3、IGFBP6、GDF15、BNIP3L、TGF-β3、VEGF、HIF1αから選ばれ、同じ表3に表示されているAssays-on-Demand商標アプライドバイオシステムズを使用するか、または当業者に認められている同等の市販または設計されたプライマー/プローブを使用して定量化される。さらなる態様によれば、本発明は、対象における低酸素症と関連する状態の重症度を決定する方法を提供する。この方法は、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、当該p53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを、当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子のレベルと低酸素症に関連する状態の重症度とを相関させる所定の値ある範囲の個別的な数でもよいと比較することを含み、この比較により、当該対象における低酸素症と関連する状態の重症度の決定を可能にする。さらなる態様によれば、対象における低酸素症と関連する状態の治療的処置の効果を決定する方法が提供される。この方法は、少なくとも1つの時点は当該処置の間または後である、2つ以上の連続した時点に当該対象から取得した2つ以上の生体サンプルから、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルを決定することを含む。ここで、i低酸素症に関連する状態において過剰発現するp53誘導性遺伝子の場合、当該2つ以上のサンプル間でのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの減少は、治療的処置の効果を示し;ii低酸素症に関連する状態において抑制されるp53誘導性遺伝子の場合、当該2つ以上のサンプル間でのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAレベルの増加は、治療的処置の効果を示す。本明細書で使用する治療的処置の効果という語は、低酸素症に関連する状態例えば、心筋梗塞を有している対象に対する、当該状態の治療を受けている当該対象の健康状態の改善を測定することによる、治療の成功の評価をいう。本発明によれば、当技術分野で知られている容認可能な任意の医療検査/手順を使用して、対象の医学的健康の評価を実施できる。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の発現レベルから、正常な遺伝子発現レベル、すなわち対照例えば、測定を受けている健常な被験者、または健常な被験者から前に取得した測定値において測定される当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の発現レベルへの復帰をもって、治療的処置の効果を明示する。本明細書で使用する、p53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルの減少または増加とは、本発明に従って測定した場合の統計的に有意な減少または増加をいう。統計的に有意な減少または増加の特定は、一般に使われている任意の統計的検定を用いて行ってよい。当業者であれば、p53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルの有意な減少または増加を特定するための、最適な統計的検定の選択方法を理解していると考えられる。ある実施形態では、この検定はカイ二乗検定である。別の実施形態では、この検定はt検定である。さらに別の実施形態では、この検定はマンホイットニー検定である。したがって、例えば、急性胸痛を起こしている対象から、入院時例えば、病院到着時からカテーテル留置または心筋梗塞の治療に使われる他の手技もしくは処置例えば抗血小板薬、ニトログリセリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、β遮断薬等までの間に最初の血漿サンプルまたは血清サンプルを取得し、数時間または数日ごとに追加のサンプルを逐次的に採取して、入院した対象に対する治療例えば、カテーテル留置手技、または本明細書に記載する心筋梗塞の治癒に使われる他の処置の効果をモニターする。いくつかの実施形態では、処置例えばカテーテル留置手技の開始後1~30日の期間、1日ごとおよび/または1時間ごとの頻度で追加のサンプルを採取する。いくつかの実施形態では、処置例えばカテーテル留置手技の開始から3~6時間後に追加のサンプルを採取する。ある実施形態では、処置例えばカテーテル留置手技の開始から約4時間後に追加のサンプルを採取する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように対象から取得した、2つ以上の生体サンプルからの少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを、対照例えば健常な対象から取得した少なくとも1つのp53誘導性遺伝子のRNAレベルと比較することにより、治療の効果をさらに特定する。こうした実施形態によれば、治療中または治療が完了した対象例えば、カテーテル留置手技から3~6時間経過したMI患者における少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の遺伝子発現値を、対照サンプル例えば健常な対象における少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の遺伝子発現値と比較することにより、治療的処置の効果を評価する。これらのサンプルの無細胞RNAを測定し、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子のレベルをサンプル間で比較することにより、対象の治療の効果を特定する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAの濃度を、性別体重年齢が類似した健常者から採取した基準の対照サンプルとも比較する。本発明によれば、細胞株例えばA2780ヒト卵巣癌細胞株から基準の対照を取得してもよい。いくつかの実施形態では、処置の開始前の時点に1つ以上の第1サンプルを採取し、処置中または処置後の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する。ある実施形態では、第2サンプルは処置の3~6時間後に採取する。ある実施形態では、この治療はカテーテル留置である。いくつかの実施形態では、1つ以上の第1サンプルは処置中の時点に採取し、当該1つ以上の第1サンプルの時点に続く処置中の時点に1つ以上の第2サンプルを採取する。いくつかの実施形態では、1つ以上の第1のサンプルは処置中の時点に採取し、1つ以上の第2のサンプルは処置が停止された後の時点に採取する。次に、上記1つ以上の第1のサンプルを上記1つ以上の第2のサンプルと比較して、p53誘導性遺伝子の発現の違いを特定する。この比較により、本明細書に記載のように治療効果を特定することができる。本発明の第3の態様によれば、低酸素症に関連する特定の状態に罹患しており、治療的処置を受けて当該状態を治療すべき対象を選択する方法が提供される。この方法は、当該対象から取得した生体サンプル中の少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを決定することと、当該レベルが当該少なくとも1つのp53誘導性遺伝子に関連付けられている所定範囲より上または下である場合、上記治療的処置を受けるべき対象を選択することを含む。本発明の第4の態様によれば、本明細書に定義される方法のいずれかを実施するためのキットが提供される。このキットは、生体サンプルからの少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAを増幅するための少なくとも1つの試薬と、本発明の方法を実施するための指示を含む。ある実施形態では、このキットは、生体サンプルから無細胞RNAを抽出するための少なくとも1つの試薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、無細胞RNAを増幅するための少なくとも1つの試薬は、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子と特異的にハイブリダイズするためのプライマーまたはプローブを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は以下のステップを含む:a対象から取得した生体サンプルから無細胞RNAを抽出することと、b少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の無細胞RNAのレベルを定量化することと、cステップbで取得した無細胞RNAのレベルを、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子の所定の濃度範囲および/または基準対照と比較すること。いくつかの実施形態では、低酸素症に関連する状態とは、胎児ストレスである。いくつかの実施形態では、低酸素症に関連する状態とは、心筋梗塞である。いくつかの実施形態では、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は以下から選ばれる:TP53GeneBank受託番号Nm_000546、p21GeneBank受託番号Nm_000389、ERCC5GeneBank受託番号Nm_000123、MDM2GeneBank受託番号Nm_0006878、TP53I3GeneBank受託番号Nm_004881、NOTCH1GeneBank受託番号Nm_017617、PIGFGeneBank受託番号Nm_002643、BTG2GeneBank受託番号Nm_006763、ZMAT3GeneBank受託番号Nm_0022470、APAF1GeneBank受託番号Nm_013229、FASGeneBank受託番号Nm_152873、ANGPTL2GeneBank受託番号Nm_012098、PUMAGeneBank受託番号Nm_014417、IGFBP6GeneBank受託番号Nm_002178、GDF15GeneBank受託番号Nm_004864、BNIP3LGeneBank受託番号Nm_004331.2、TGFβ3GeneBank受託番号Nm_003239、VEGFGeneBank受託番号Nm_001025366、およびHIF-1α。いくつかの実施形態では、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は以下から選ばれる:p21GeneBank受託番号Nm_000389、BTG2GeneBank受託番号Nm_006763、HIF-1αGeneBank受託番号Nm_001530、NOTCH1GeneBank受託番号Nm_017617、TGFβ3GeneBank受託番号Nm_003239、およびZMAT3GeneBank受託番号Nm_0022470。ある実施形態では、上記p53誘導性遺伝子の無細胞RNAを検出するために使用するプライマーもしくはプローブは、表2に示すプライマーもしくはプローブであるか、または、当技術分野から周知されている上記遺伝子用のプライマーおよびプローブから当業者が選択するプライマーおよびプローブである。いくつかの実施形態では、上記p53誘導性遺伝子の無細胞RNAを検出するために使用するプライマーもしくはプローブは、表3に示すプライマーもしくはプローブであるか、または、当技術分野から周知されている上記遺伝子用のプライマーおよびプローブから当業者が選択するプライマーおよびプローブである。いくつかの実施形態では、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子は、p21、BTG2、TGFβ3、NOTCH1、HIF1α、MDM2、およびZMAT3から選ばれる。ある実施形態では、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子はp21である。別の実施形態では、上記少なくとも1つのp53誘導性遺伝子はBTG2である。別段の定義がない限り、本明細書で使用される専門用語および/または科学用語はすべて、本発明が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されている意味と同じ意味を有する。本発明の実施形態の実施または試験において、本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料を使用できるが、代表的な方法および/または材料を以下に記述する。矛盾がある場合は、本特許明細書定義を含むが優先する。加えて、材料、方法、および例はあくまで例示的なものであり、必ず限定するものとは意図されていない。下記の実施例において、以上に詳述し下記請求項でクレームしている本発明の種々の実施形態および態様の実験的裏付けが確認される。いくつかの非限定的実施例の説明上記説明とともに下記実施例を参照して、本発明を非限定的に例示する。概して、本明細書で使用する命名法および本発明で利用する実験手順は、分子、生化学、微生物学、および組み換えDNAに関する手法を含む。このような手法は文献で十分に説明されている。例えば、以下の文献を参照のこと:MolecularCloning:AlaboratoryManualSambrooketal.,1989;CurrentProtocolsinMolecularBiologyVolumesI-IIIAusubel,R.M.,ed.1994;Ausubeletal.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileyandSons,Baltimore,Maryland1989;Perbal,APracticalGuidetoMolecularCloning,JohnWileySons,NewYork1988;Watsonetal.,RecombinantDNA,ScientificAmericanBooks,NewYork;Birrenetal.edsGenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries,Vols.1-4,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork1998;米国特許第4,666,828号;第4,683,202号;第4,801,531号;第5,192,659号;第5,272,057号に記載されている各種方法論;CellBiology:ALaboratoryHandbook,VolumesI-IIICellis,J.E.,ed.1994;CurrentProtocolsinImmunologyVolumesI-IIIColiganJ.E.,ed.1994;Stitesetal.eds,BasicandClinicalImmunology8thEdition,AppletonLange,Norwalk,CT1994;MishellandShiigieds,SelectedMethodsinCellularImmunology,W.H.FreemanandCo.,NewYork1980。利用可能な免疫測定法については、特許および科学文献で広範に説明されている。例えば、以下の文献を参照のこと:米国特許第3,791,932号;第3,839,153号;第3,850,752号;第3,850,578号;第3,853,987号;第3,867,517号;第3,879,262号;第3,901,654号;第3,935,074号;第3,984,533号;第3,996,345号;第4,034,074号;第4,098,876号;第4,879,219号;第5,011,771号;第5,281,521号;OligonucleotideSynthesisGait,M.J.,ed.1984;NucleicAcidHybridizationHames,B.D.,andHigginsS.J.,eds.1985;TranscriptionandTranslationHames,B.D.,andHigginsS.J.,Eds.1984;AnimalCellCultureFreshney,R.I.,ed.1986;ImmobilizedCellsandEnzymesIRLPress,1986;APracticalGuidetoMolecularCloningPerbal,B.,1984andMethodsinEnzymologyVol.1-317,AcademicPress;PCRProtocols:AGuideToMethodsAndApplications,AcademicPress,SanDiego,CA1990;Marshaketal.,StrategiesforProteinPurificationandCharacterization-ALaboratoryCourseManualCSHLPress1996。これらの文献はすべて、本明細書に完全に明記されているかの如く参照により組み入れられる。その他の一般的参考文献は、本明細書の各所に示す。これらの文献に記載の手順は、当技術分野において周知であると考えられ、読者の便宜のため本明細書に示す。これらの文献に記載されているすべての情報は、参照により本明細書に組み入れられる。一般的な材料および方法妊婦からの血液採取:合併症がなく単生児を有しているすなわち単一の胎児を妊娠している健常な妊婦、および合併症を有する妊婦から、15mlの血液を採取した。本実験は、シバ医療センターShebaMedicalCenterの研究倫理委員会から承認を受けた。被験者へのインフォームドコンセントの後、産婦人科においてすべての血液サンプルを取得した。血液の調製:以前にNgが説明した通りに血液を調製した[Ngetal.,ProcNatlAcadSci20031008:4360-2]。詳細に述べると、EDTAの入ったチューブに血液サンプルを採取し、4°C、1,600×gで10分間、遠心分離したこれにより血液サンプルから有核細胞を除去する。次に、血漿と血清を慎重に1.5mlのエッペンドルフチューブに移した。血漿サンプルを4°C、16,000×gで10分間、再度遠心分離し、上清を新しいポリプロピレンチューブに回収した。血清サンプルは、その後の参考のために-20°Cで保管した。RNAの抽出:遠心分離の後1.6mlの血漿を、以前にNgが説明した通りに、2mlのTRIzolLS試薬インビトロジェン、カリフォルニア州カールズバッドおよび0.4mlのクロロホルムと混合した[Ngetal.,ClinChem2002488:1212-7]。混合物を4°C、11,900×gで15分間、遠心分離し、水層を新しいチューブに移した。1容量の70エタノールを、1容量の水層に加えた。次に、製造者の推奨事項に従って、混合物をRNeasyミニカラムRNeasyミニキット、キアゲン、カリフォルニア州バレンシアに移した。混入したDNAを完全に除去するため、オンカラムDNase処理を行ったRNase-FreeDNaseSet、キアゲン、カリフォルニア州バレンシア。トータルRNAを30μlのRNaseフリー水で溶出し、-80°Cで保管した。リアルタイム定量RT-PCR:ワンステップのリアルタイム定量RT-PCR、および各関心遺伝子を対象とする特定のプライマーを使用して、特定の無細胞mRNAの増幅を行った。DNAの混入を低減するため、RT-PCRプライマーはイントロンを挟む設計であった。また、NCBI-Blastチェックを行って、非特異的増幅を排除した。製造者の指示に従って、20μlの反応容量でRT-PCRを準備したEZrTthRNAPCR試薬セット、アプライドバイオシステムズ、カリフォルニア州フォスターシティー。詳細に述べると、抽出した5μlの血漿RNAを、100~500nMのPCRプライマーを用いて増幅した。各サンプルを2回分析し、分析ごとに、対応する検量線を同時に三重に処理した。テンプレートを含まない対照NTC:notemplatecontrolも各分析に含めた。本発明に従って使用したRT-PCR熱プロファイルは次の通りである:50°Cで反応を開始し逆転写を20分、95°Cで変性を5分。次に、以下のようにPCRを50サイクル行った:95°C、15秒の変性の後、60°C、30秒のアニーリング/伸長。心筋梗塞に罹患している患者からの血液採取:心筋梗塞MIに罹患している患者の無細胞RNAレベルの分析には、アプライドバイオシステムのアッセイキットを使用したAssays-on-Demand商標、表3。本アッセイでは、定量リアルタイムPCR遺伝子発現用にあらかじめ設計されたプライマーおよびプローブのセット一式を使用する。磁気ビーズMagmaxキット、アプライドバイオシステム;AM1836でRNAを抽出し、このRNAをワンステップRT-PCRキットキアゲンの提供するQuantiFastProbeRT-PCRPlusキット;204482で使用した。以下に説明する相対定量法に従って、RNAの定量化を行った。実施例実施例1正常な妊娠状態と比べて、低酸素症を併発した妊娠状態は血清中のp21のmRNAが上昇する結果結果は、低酸素症を併発した妊娠状態において、p21遺伝子発現が大きく上昇していることを示した図1。低酸素症を併発した妊娠状態の対象から取得した5つのRNAサンプルのうち、4サンプルに陽性のp21遺伝子発現が観察された。これに対して、正常な妊娠状態の対象から取得した5つのサンプルでは、p21遺伝子発現は全く見られなかった。さらなる実験において、正常な妊娠状態の20個のRNAサンプルのp21遺伝子発現を試験し、低酸素症を併発した妊娠状態に見られるp21遺伝子発現の上昇図1に示すと比較した。図2に示す通り、試験した正常妊娠20例中、p21遺伝子発現が大きく上昇したのは1例のみでありケース番号19、4例で微小な上昇が検出されたケース番号1、7、13、17。総括すると、本実験の結果は、胎児ストレスを予測するための非侵襲的マーカーとしての、分泌型p21mRNAの利用を実証している。実施例2広範な臨床試験により、低酸素症を併発した妊娠状態の女性から取得した血漿サンプルにおいてp21、MDM2、およびHIF1αのRNA発現のアップレギュレーションが特定された結果最初の結果実施例1に示すを得た後、試験対象をより大型のグループ計54人に拡大した。このうち31人は正常な妊娠状態の対象であり、23人は併発症を有する妊娠状態の対象である。母胎血漿RNAサンプルに対して、低酸素症およびストレスと関連する遺伝子、具体的にはp21GeneBank受託番号U09579、VEGFGeneBank受託番号NM_001025366、MDM2GeneBank受託番号M92424、HIF1αGeneBank受託番号NM_001530.2、およびTP53I3GeneBank受託番号NM_147184.1の遺伝子発現を、表2に示すプライマーおよびプローブを用いて試験した。下の表4Aに示す通り、低酸素症の妊娠状態の被験者23人中、13人がp21遺伝子発現の試験で陽性であり、10人がp21遺伝子発現の陰性と記録された。さらに、正常な妊娠状態の被験者31人中、p21遺伝子発現の試験で陽性となったのは2人だけであり、29人はp21遺伝子発現の陰性と記録された。低酸素症の妊娠状態と正常な妊娠状態のp21遺伝子発現をカイ二乗検定で検定した結果、pは0.001より小さいことが示された表4B。下の表5Aに示す通り、低酸素症の妊娠状態の被験者23人中、10人がVEGF遺伝子発現の試験で陽性であり、13人がVEGF遺伝子発現の陰性と記録された。さらに、正常な妊娠状態の被験者31人中、VEGF遺伝子発現の試験で陽性となったのは6人であり、25人はVEGF遺伝子発現の陰性と記録された。低酸素症の妊娠状態と正常な妊娠状態のVEGFの遺伝子発現をカイ二乗検定で検定した結果、p=0.053であることが示された表5B。下の表6Aに示す通り、低酸素症の妊娠状態の被験者22人中、12人がMDM2遺伝子発現の試験で陽性であり、10人がMDM2遺伝子発現の陰性と記録された。さらに、正常な妊娠状態の被験者31人中、MDM2遺伝子発現の試験で陽性となったのは5人だけであり、26人はMDM2遺伝子発現の陰性と記録された。低酸素症の妊娠状態と正常な妊娠状態のMDM2の遺伝子発現をカイ二乗検定で検定した結果、p=0.004であることが示された表6B。下の表7Aに示す通り、低酸素症の妊娠状態の被験者22人中、10人がHIF1α遺伝子発現の試験で陽性であり、12人がHIF1αに変更遺伝子発現の陰性と記録された。さらに、正常な妊娠状態の被験者31人中、HIF1α遺伝子発現の試験で陽性となったのは0人であり、31人はHIF1α遺伝子発現の陰性と記録された。低酸素症の妊娠状態と正常な妊娠状態のHIF1αの遺伝子発現をカイ二乗検定で検定した結果、pは0.001より小さいことが示された表7B。下の表8Aに示す通り、低酸素症の妊娠状態の被験者22人中、6人がTP53I3遺伝子発現の試験で陽性であり、16人がTP53I3遺伝子発現の陰性と記録された。さらに、正常な妊娠状態の被験者23人中、TP53I3遺伝子発現の試験で陽性となったのは5人であり、18人はTP53I3遺伝子発現の陰性と記録された。低酸素症の妊娠状態と正常な妊娠状態のTP53I3の遺伝子発現をカイ二乗検定で検定した結果、p=0.466であることが示された表8B。下の表9に示すように、低酸素症の妊娠状態と正常な妊娠状態でp21、MDM2、およびHIF1αの遺伝子発現を相関させ、比較した結果、これら3つの遺伝子の発現に対して陰性である被験者数が、低酸素症の妊娠状態でわずか4人であるのに対し、正常な妊娠状態では24人であることが明らかになった。さらに、p21、MDM2、およびHIF1αに対して陽性である被験者数が、低酸素症の妊娠状態で5人であるのに対し、正常な妊娠状態ではゼロであった。同様に、下の表10に示すように、低酸素症の妊娠状態と正常な妊娠状態でp21、VEGF、およびHIF1αの遺伝子発現を相関させ、比較した結果、これら3つの遺伝子の発現に対して陰性である被験者数が、低酸素症の妊娠状態でわずか5人であるのに対し、正常な妊娠状態では23人であることが明らかになった。さらに、p21、VEGF、およびHIF1αに対して陽性である被験者数が、低酸素症の妊娠状態で3人であるのに対し、正常な妊娠状態ではゼロであった。低酸素症の妊娠状態における低酸症関連の各種遺伝子の遺伝子発現をまとめた結果下の表11、表12、低酸素症の妊娠状態において、p21遺伝子発現および/またはHIF1α遺伝子発現が最も顕著にアップレギュレートされていることが明らかになった。したがって、低酸素症に関連する状態において過剰発現または抑制されるp53誘導性遺伝子の中で、特にこの2つの遺伝子は、一緒または個別に、妊娠中の低酸素ストレスを標識する。実施例3急性心筋梗塞に罹患している患者におけるp53誘導性遺伝子の活性化被験者100人の被験者グループが本実験に参加した。50人の被験者は、急性心筋梗塞MIでメイア病院MeirHospitalクファールサバの心臓集中治療室に入院している患者であった。患者全員が30歳超の男性であった。50人の被験者は、非侵襲的な虚血診断を受け、急性虚血を示していない患者であった対照群。MI患者MI患者は、ST部分上昇を伴う急性MIに罹患していた。これらの患者は継続する胸痛が理由で入院し、その胸痛は、少なくとも1時間は発生するが6時間より長くは発生しないと報告された。すべてのMI患者で緊急カテーテル留置が予定され、以下の少なくとも1つを示していた。1.前壁のST上昇2.新たな左脚ブロックLBBB3.側壁または後壁の病変を示す心電図の証拠を伴う後壁のST上昇対照群対照群は、心エコー検査または心エコー負荷試験を用いた非侵襲的な虚血診断を受け、急性虚血を示さない50人の患者で構成された。血液サンプルを分析して、遺伝子BNIP3L、P21、MDM2、HIF1α、NOTCH1、BTG2、TGFβ3、ZMAT3、およびERCC5の発現を調べた。患者からRNAを単離し、増幅した。複数のサンプルに渡って遺伝子の定常状態のmRNAレベルの変化を測定し、内部標準RNAのレベルに対して相対的に測定値を表す方法である、相対定量法LivakKJandSchmittgenTD.Methods2001;254:402-8;MarisaLWandJuanFM,BioTechniques2005;39:75-85に従って、患者の血液サンプル中の無細胞RNAを定量化した。相対定量のための外部標準キャリブレーターとして、A2780ヒト卵巣癌細胞株から抽出したトータルRNAを使用した。キャリブレーターすなわち細胞株A2780から得たRNAとの比較における試験サンプルの増加倍率を定量化した。内部標準であるGAPDHに対して正規化した後の患者全員のRNAサンプルを、A2780細胞株の発現レベルと比較した。MI群の場合:-2つの血液サンプルを以下の時点に採取した。1.病院到着時病院到着から救命センターを経てカテーテル留置されるまでの間、t=0;2.カテーテル留置から4時間後、t=4。対照群の場合:-アッセイ心エコー検査または心エコー負荷試験実施前に1つの血液サンプルを採取した。統計的分析:1.対照に対するt=0MI患者、対照に対するt=4MI患者、およびt=4に対するt=0の無細胞RNAレベルについて、パラメトリックt-検定を実施した表13、検定結果はp値を表す。p<0.05、p<0.01。2.一部の血液サンプルでt=0および/またはt=4および/または対照中で無細胞RNAが検出されない場合については、非パラメトリックのマンホイットニー統計検定ウィルコクソン順位和検定を行った表14、検定結果はp値を表す。p<0.05、p<0.01、p<0.001。この結果から、遺伝子p21、MDM2、HIF-1α、NOTCH1、BTG2の発現が急性MIを示すことが明らかになった表13、14の左の列。遺伝子p21、HIF-1α、NOTCH1、TGF-β3、およびBTG2は、MIの治療の成功を表す予測マーカーとなることが示された表13、14の右の列。遺伝子p21、MDM2、HIF-1α、NOTCH1、およびBTG2は、対照に対するt=4で表される通り、遺伝子発現から正常値への復帰を表す予測マーカーとなることが示された表13、14の中央の列。本発明のいくつかの特徴は、明確にするため個別の実施形態の文脈で記述されているが、これらを組み合わせて単一の実施形態として提供することもできることが理解される。逆に、本発明の種々の特徴は、簡潔にするため単一の実施形態の文脈で記述されているが、個別に提供することも、部分的に組み合わせた適切な小集合として提供することもできる。本発明は、その特定の実施形態と併せて記述されているが、当業者にとって多くの代替、修正、および変形が明白であることは明らかである。よって、添付の請求項の精神および広範な範囲に含まれるこうした代替、修正、および変形のすべてが包含されることが意図されている。本明細書で言及しているすべての出版物、特許および特許出願、ならびにGenBank受託番号は、個々の出版物、特許もしくは特許出願、またはGenBank受託番号が参照により本明細書に組み入れられることを特定的かつ個別に表示されるのと同程度に、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。加えて、本願において何らかの参考文献を引用または特定していても、当該参考文献が本発明の先行技術として利用可能であると認めたものとは解釈されない。"