i配列番号:89のヒトIL12Rベータ1ポリペプチドのエピトープに結合する単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該エピトープは、aヒトIL12Rベータ1ポリペプチドのアミノ酸残基416から429内に含まれるか、またはb上記aに定義されているアミノ酸残基の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8または9個またはそれ以上を含むか、またはc上記aに定義されているアミノ酸残基を含み、該抗体またはタンパク質は、1nM以下のKDで配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドに結合し、そしてインビトロ競合結合アッセイで測定したとき、配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドへのIL12および/またはIL23の結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質。a配列番号:1のHCDR1、配列番号:2のHCDR2、配列番号:3のHCDR3を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:4のLCDR1、配列番号:5のLCDR2および配列番号:6のLCDR3を含む可変軽鎖アミノ酸配列;b配列番号:7のHCDR1、配列番号:8のHCDR2、配列番号:9のHCDR3を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:10のLCDR1、配列番号:11のLCDR2および配列番号:12のLCDR3を含む可変軽鎖アミノ酸配列;c配列番号:13のHCDR1、配列番号:14のHCDR2、配列番号:15のHCDR3を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:16のLCDR1、配列番号:17のLCDR2および配列番号:18のLCDR3を含む可変軽鎖アミノ酸配列;d配列番号:19のHCDR1、配列番号:20のHCDR2、配列番号:21のHCDR3を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:22のLCDR1、配列番号:23のLCDR2および配列番号:24のLCDR3を含む可変軽鎖アミノ酸配列;e配列番号:25のHCDR1’、配列番号:26のHCDR2’、配列番号:27のHCDR3’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:28のLCDR1’、配列番号:29のLCDR2’および配列番号:30のLCDR3’を含む可変軽鎖アミノ酸配列;f配列番号:31のHCDR1’、配列番号:32のHCDR2’、配列番号:33のHCDR3’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:34のLCDR1’、配列番号:35のLCDR2’および配列番号:36のLCDR3’を含む可変軽鎖アミノ酸配列;g配列番号:37のHCDR1’、配列番号:38のHCDR2’、配列番号:39のHCDR3’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:40のLCDR1’、配列番号:41のLCDR2’および配列番号:42のLCDR3’を含む可変軽鎖アミノ酸配列;h配列番号:43のHCDR1’、配列番号:44のHCDR2’、配列番号:45のHCDR3’を含む可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号:46のLCDR1’、配列番号:47のLCDR2’および配列番号:48のLCDR3’を含む可変軽鎖アミノ酸配列;またはiCDRが、上記a-hに記載されている少なくとも1つの抗体またはタンパク質の対応するCDR配列と少なくとも60パーセント配列同一性を共有する、可変重鎖VHおよび可変軽鎖VLアミノ酸配列のいずれかを含む単離された抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質であって、該抗体またはタンパク質は、1nM以下のKDにて配列番号:89のIL12Rβ1ポリペプチドに結合し、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号:89のIL12Rβ1ポリペプチドへのIL12および/またはIL23結合を阻害する、単離された抗体またはタンパク質。配列番号:98のカニクイザルIL12Rβ1ポリペプチドと交差反応する、請求項1または2に記載の単離された抗体またはタンパク質。1nM以下のIC50にてヒト血球におけるIL12依存性IFN-γ生産を阻害する、請求項1、2または3に記載の単離された抗体またはタンパク質。完全にヒトである、請求項1から4のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。変異された、または化学的に修飾されたアミノ酸Fc領域を含む請求項1から5のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質であって、野生型Fc領域を有する対応する抗体と比較したとき、該変異された、または化学的に修飾されたFc領域は、該抗体に対してADCC活性を付与しないか、または減少したADCC活性を付与する、単離された抗体またはタンパク質。変異された、または化学的に修飾されたアミノ酸Fc領域が変異サイレントIgG1Fc領域である、請求項6に記載の単離された抗体またはタンパク質。配列番号:49、配列番号:51、配列番号:53および配列番号:55の少なくとも1つと少なくとも95パーセント配列同一性を有する、VHポリペプチド配列を含む、請求項1から7のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。配列番号:50、配列番号:52、配列番号:54および配列番号:56の少なくとも1つと少なくとも95パーセント配列同一性を有する、VLポリペプチド配列を含む、請求項1から8のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。a配列番号:57の重鎖アミノ酸配列および配列番号:69の軽鎖アミノ酸配列;b配列番号:61の重鎖アミノ酸配列および配列番号:69の軽鎖アミノ酸配列;c配列番号:65の重鎖アミノ酸配列および配列番号:69の軽鎖アミノ酸配列;d配列番号:58の重鎖アミノ酸配列および配列番号:70の軽鎖アミノ酸配列;e配列番号:62の重鎖アミノ酸配列および配列番号:70の軽鎖アミノ酸配列;f配列番号:66の重鎖アミノ酸配列および配列番号:70の軽鎖アミノ酸配列;g配列番号:59の重鎖アミノ酸配列および配列番号:71の軽鎖アミノ酸配列;h配列番号:63の重鎖アミノ酸配列および配列番号:71の軽鎖アミノ酸配列;i配列番号:67の重鎖アミノ酸配列および配列番号:71の軽鎖アミノ酸配列;j配列番号:60の重鎖アミノ酸配列および配列番号:72の軽鎖アミノ酸配列;k配列番号:64の重鎖アミノ酸配列および配列番号:72の軽鎖アミノ酸配列;または、l配列番号:68の重鎖アミノ酸配列および配列番号:72の軽鎖アミノ酸配列のいずれかを含む、請求項1から9のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。IL12Rβ1への結合から、請求項1から10のいずれかに記載の少なくとも1つの抗体を交差ブロックするか、もしくは該抗体により交差ブロックされるか、または、請求項1から10のいずれかに記載の抗体と同じエピトープへの結合に対して競合する、抗体または抗体の抗原結合部分を有するタンパク質。i1nM以下のKDにて配列番号:89のIL12Rβ1ポリペプチドに結合する、iiインビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号:89のIL12Rβ1ポリペプチドへのIL12および/またはIL23結合を阻害する、およびiii配列番号:98のカニクイザルIL12Rβ1ポリペプチドと交差反応する、請求項11に記載の単離された抗体またはタンパク質。医薬としての使用のための、請求項1から12のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。IL12Rβ1により媒介されるか、またはIFNγ生産を阻害することにより処置することができる病理学的疾患の処置における使用のための、請求項1から13のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。自己免疫性および炎症性疾患、例えば、リウマチ性関節炎、乾癬または炎症性腸疾患の処置における使用のための、請求項1から14のいずれかに記載の単離された抗体またはタンパク質。1つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に、請求項1から15のいずれかに記載の抗体またはタンパク質を含む、医薬組成物。他の活性成分をさらに含む、請求項16に記載の医薬組成物。請求項1から15のいずれかに記載の抗体またはタンパク質の凍結乾燥製剤。治療的に許容される量の請求項1から15のいずれかに記載の抗体またはタンパク質を含む充填済シリンジ。請求項1から15のいずれかに記載の抗体またはタンパク質の少なくとも重鎖および/または軽鎖可変領域をコードする単離された核酸。請求項20に記載の1つ以上の核酸を含むクローニングまたは発現ベクター。配列番号:73-88からなる群から選択される少なくとも1つの核酸を含む、宿主細胞における請求項1から15のいずれかに記載の抗体の組換え生産のために適当なクローニングまたは発現ベクター。適当なプロモーター配列に作動可能に連結した少なくとも以下のいずれかのコード配列:a配列番号:73および配列番号:85;b配列番号:77および配列番号:85;c配列番号:81および配列番号:85;d配列番号:74および配列番号:86;e配列番号:78および配列番号:86;f配列番号:82および配列番号:86;g配列番号:75および配列番号:87;h配列番号:79および配列番号:87;i配列番号:83および配列番号:87;j配列番号:76および配列番号:88;k配列番号:80および配列番号:88;またはl配列番号:84および配列番号:88を含む、請求項22に記載のクローニングまたは発現ベクター。請求項21から23のいずれかに記載の1つ以上のクローニングまたは発現ベクターを含む宿主細胞。請求項1から15のいずれかに記載の抗体またはタンパク質の生産のための方法であって、請求項24に記載の宿主細胞を培養すること、および、該抗体またはタンパク質を精製および回収することを含む方法。方法1.表面プラズモン共鳴Biacoresystemを使用するアフィニティー決定KD値の決定のために、表面プラズモン共鳴技術を、BiacoreTM技術を使用して適用した。IL12Rβ1-Fc-融合物を捕獲するために、抗-ヒト-Fc-捕獲CM5チップBiacoreSwedenを使用し、次に、異なる濃度でリガンドFab注射を行った。2.IL12Rβ1-IL12/IL23インビトロ競合的結合阻害アッセイBioverisIC50は、受容体/リガンド相互作用の50阻害のために必要であったFabまたはIgGの濃度を示す。アッセイ処理中、ほぼ最大のシグナルをもたらすようにあらかじめ決定された固定された量の受容体を、溶液中で、精製されたFab/IgGの濃度を増加と共に1:100から100:1モル比インキュベートした。次に、サンプルを、リガンド被覆され、ブロックされたMSDマルチタイタープレートに移した。遊離受容体はリガンドに結合し、適当なルテニウム錯体標識抗体を介して検出され、定量された。インキュベーションのために使用されるFab/IgG濃度の逆関数として結合受容体の濃度を、それぞれのモデルを使用して合わせた。近似曲線の変曲点は、IC50値を示す。3.ヒト血球のIL12-依存性IFNγ生産の阻害ドナー血液由来の末梢血単核細胞PBMCを、一般的に使用されるFicoll/Histopaque勾配NobleandCutts1967CanVetJ8110111を介して単離した。細胞をX-Vivo15培地中で2E6細胞/mlに調節した。50μlの細胞1E5を96ウェルU底プレートに移し、所望の濃度で、阻害抗体、例えば、抗ヒトIL12Rβ1FabまたはサイレントIgG1またはコントロールmAbまたはコントロールと共にインキュベートし、シェーカー上で30分間RTでプレインキュベートした。2μg/mlの抗-CD3および抗-CD28mAbならびに2ng/mlの組換えヒトサイトカインIL12での刺激を、5CO2インキュベーター中で、37°C20時間o/nで行った。次の日、上清を250gでRTで5分間細胞の遠心分離により回収し、新しい96ウェルプレートに移し、ELISA測定のために使用されたか、またはアッセイが行われるまで-20°Cで貯蔵した。IFNγELISAのために、上記回収した上清をX-Vivo15培地で希釈し、ELISAをBenderMedSystemsBMS228HSまたはBiozol/BiolegendBLD-430105の製造業者のプロトコールにしたがって行った。IFNγ生産をIFNγ標準滴定曲線にしたがって決定した。4.ヒト血球のIL23-依存性IFNγ生産の阻害PHA刺激PBMCを使用して、別のアッセイ系を試験した。該細胞集団において、レクチン暴露時にT細胞が増殖し、したがって、該集団におけるT細胞の割合が増加する。予備実験において、IL-12、IL-23、IL-18およびLPS単独または組合せに対するこれらの細胞の応答性を評価し、最適な刺激条件を確立した。IFN-γ分泌に対するIL-12IL-18およびIL-23IL-18の効果は、それぞれ約7ng/mlおよび800pg/mlの誘導であった。あるいは、ヒトドナー血液由来のPBMCを密度勾配で遠心分離により単離し、30分間RTでIgGの連続希釈物とインキュベートした。IL-18およびIL-23を加え、細胞を48時間37°C/5CO2でインキュベートした。5倍希釈上清標準曲線10ng/ml-20pg/mlの範囲内の濃度をなし遂げるためにPBS/2mMEDTAにおいてを取り、標準サンドウィッチELISAによりIFN-γを定量した。5.全血におけるIL12-依存性IFNγ生産の阻害ヒトまたはカニクイザル起源の抗凝固血液のアリコートを、U-底96ウェルプレートCostar3799の個々のウェルに分配し、X-Vivo15培地中のmAbの連続希釈物を加え、30分間RTでインキュベートした。ヒトサイトカインIL-12およびIL-18を加えた後、細胞を20-24時間37°Cで、5CO2でインキュベートし、上清をサンプリングし、ELISAによりIFN-γを定量した。6.ADCCアッセイカルセインと対照的に、そのアセトキシ-メチルエステルカルセイン-AMは、細胞膜を通過することができる化合物である。細胞内で、エステル結合は細胞性エステラーゼにより加水分解される。したがって、蛍光カルセインは、細胞内部に捕捉される。それは、膜完全性が妨げられるとき、すなわち細胞が殺されるときのみ、漏出する。カルセイン標識標的細胞は、NKエフェクター細胞に対する標的として働き、上清において測定されるカルセインの量は、抗体調製物がADCCを媒介する能力に比例する。NK3.3アッセイのために、2日間、飢餓培地IL-2およびIL-10なしにおいてNK3.3細胞を培養することにより飢餓にする必要がある。ヒトIL-12Rβ1トランスフェクトマウスプレB細胞をカルセインで標識し、試験される抗体とインキュベートした。CD20を発現するヒトB細胞系Rajiおよび抗-CD20mAbを、NK3.3細胞の殺活性に対するコントロールとして使用する。標識細胞のみからの自発的放出およびmAbなしでNK3.3細胞の添加によるバックグラウンド死もまた、決定する。Triton-X100での細胞溶解により誘導される全放出との相関関係において、特異的溶解を決定する。7.カニクイザル薬物動力学PDアッセイヘパリン化血液サンプルを96-Uウェルプレート1090μl/ウェルに分配した。組換えヒトIL-12RDSystems;最終100ng/mlおよびIL-18MBL;最終50ng/mlをそれぞれのウェルに加え、プレートを穏やかに3分間撹拌した。6CO2で37°Cで24時間のインキュベーション後、プレートを2000rpmで10分間遠心した。血漿を回収し、さらなる処理まで-80°Cで維持した。IL-2、TNFαおよびIFN-γ決定を、製造業者UcyTechBiosciencesUtrechtにより説明されているとおりに、NHP特異的ELISA-キットCT711、CT148およびCT141で行った。PD読み出しのため、INFγ/mlのpgにおける結果をそれぞれのサンプル中に見出されるリンパ球数により補正し、最後にpg/106リンパ球として表した。8.ラットインビボ適合性アッセイラットに所定量のmAbを注入し、血液サンプルを様々な間隔で取り、ピーク血漿濃度および放出速度をモニターし、血漿半減時間を決定した。ラット標的への交差反応性が予測されないため、標的関連効果内在化、ターンオーバーもまた、結果に影響することが予測することができない。9.CD45RBhi移植炎症性腸疾患マウスモデル体重減少により特徴付けられる疾患を誘発するため、CD4CD45RBHiTリンパ球をFACS-ソートによりBALB/cマウス脾臓から単離し、10週齢のメスSCIDマウスに注射した2×105細胞/マウス、i.p.0日目。ネガティブコントロールマウスにPBSをi.p.で与える。マウスグループに、1、7、14および21日目にmAb抗-IL12p40クローンC17.8または抗-IL12Rβ1抗体またはアイソタイプコントロールまたはPBSの皮下または腹腔内注射による処置を与える。試験中および試験終了時点で、それぞれのマウスの体重をモニタリングする。末端大腸の組織学的実験および血清ハプトグロビンの決定を、28日目に検視で決定する。10.Biacore交差ブロッキングアッセイ以下は、一般的に、抗体または他の結合剤が、本発明の抗体と交差ブロックするか、または交差ブロッキングすることができたか否かを決定するための適当なBiacoreアッセイを記載する。アッセイは、本明細書に記載されているIL12Rβ1結合剤のいずれかで使用することができることが理解される。Biacore機械例えば、BIAcore3000は、製造業者の推奨ししたがって操作される。IL12Rβ1細胞外ドメインは、日常的に使用されるアミンカップリング化学、例えば、EDC-NHSアミンカップリングの方法により、例えばCM5Biacoreチップと結合させ、IL12Rβ1被覆表面が作製され得る。測定可能な結合レベルを得るために、一般的に、IL12Rβ1の200-800共鳴ユニットをチップに結合させ得るこの量は、測定可能な結合レベルを与え、同時に、使用されている試験試薬の濃度により容易に飽和化できる。BIAcoreチップにIL12Rβ1を結合する代替方法は、IL12Rβ1のタグ付けのバージョン、例えば、N-末端またはC-末端His-タグ化IL12Rβ1を使用することによる。この形式において、抗-His抗体は、Biacoreチップと結合し、次に、His-タグ化IL12Rβ1は、チップの表面を通過し、抗-His抗体により捕捉される。互いに交差ブロックする能力について評価される2つの抗体は、テスト混合物を作製するために適当なバッファーにおいて結合部位の化学量論量で、例えば、1対1のモル比で混合される。使用されるバッファーは、一般的に、タンパク質化学で通常使用されるバッファー、例えば、PBS136mMのNaCl、2.7mMのKCl、10mMのNa2HPO4、1.76mMのKH2PO4、pH7.4である。結合部位に基づいて濃度を計算するとき、抗体の分子量は、抗体上の標的すなわちIL12Rβ1結合部位の数で割られた抗体の全分子量であると仮定される。試験混合物中のそれぞれの抗体の濃度は、BIAcoreチップ上に結合されているIL12Rβ1分子上の抗体に対する結合部位の飽和を保証するために十分に高いはずである。混合物中の抗体は同じモル濃度にあり結合に基づいて、濃度は、一般的に、1.0mMから1.5mM結合部位に基づいてである。別々の抗体を単独で含む別々の溶液も調製する。これらの別々の溶液に対して使用されるバッファーは、試験混合物に対して使用されるものと同じバッファーで同じ濃度であるべきである。試験混合物をIL12Rβ1-被覆BIAcoreチップ上を通過させ、結合を記録する。その後、約1分間、例えば酸、例えば30mMのHClでチップを処理することにより、結合した抗体を除去した。チップに結合しているIL12Rβ1分子が損傷していないことが重要である。次に、一次抗体の溶液単独を、IL12Rβ1-被覆表面上を通過させ、結合を記録した。その後、例えば、上記酸処理の方法により、チップ結合IL12Rβ1を損傷することなく、すべての結合抗体を除去するために、チップを処理する。次に、二次抗体の溶液単独を、IL12Rβ1-被覆表面上を通過させ、結合量を記録する。最大理論的結合は、それぞれの抗体の別々のIL12Rβ1への結合の合計として定義することができる。次に、これは、測定される抗体の混合物の実際の結合と比較する。実際の結合が理論的結合よりも低いとき、2つの抗体は、互いに交差ブロッキングしている。11.Elisaベースの交差ブロッキングアッセイ抗-IL12Rβ1抗体または別のIL12Rβ1結合剤の交差ブロッキングはまた、ELISAアッセイを使用することにより検出され得る。ELISA-アッセイの一般原理は、ELISAプレートのウェル上に抗-IL12Rβ1抗体を被覆することを含む。次に、過剰量の第2の潜在的に交差ブロッキングする抗-IL12Rβ1抗体を溶液に加えるすなわち、ELISAプレートに結合しない。次に、限られた量のIL12Rβ1-Fcをウェルに加える。ウェル上に被覆した抗体および溶液中の抗体は、限られた数のIL12Rβ1分子の結合に対して競合する。次に、プレートを洗浄し、被覆された抗体に結合しなかったIL12Rβ1-Fcを除去し、第2の溶液相の抗体ならびに第2の溶液相の抗体とIL12Rβ1-Fc間で形成されたあらゆる複合体も除去する。次に、結合したIL12Rβ1の量を、適当なIL12Rβ1検出試薬を使用して測定する。被覆した抗体と交差ブロックすることができる溶液中の抗体は、第2の溶液相の抗体の非存在下で被覆した抗体が結合することができるIL12Rβ1分子の数と比較して、被覆した抗体が結合することができるIL12Rβ1分子の数の減少を引き起こすことができる。このアッセイは、Ab-XおよびAb-Yと称される2つの抗体について以下でさらに詳細に記載されている。Ab-Xが固定化された抗体に選択される場合、それはELISAプレートのウェル上に被覆され、その後、プレートを適当なブロッキング溶液でブロックし、次に加えられる試薬の非特異的結合を最小限にする。過剰量のAb-Yを、ウェルあたりのAb-YIL12Rβ1結合部位のモルが、ELISAプレートの被覆の間、ウェルあたりに使用されるAb-XIL12Rβ1結合部位のモルよりも少なくとも10倍高くなるようにELISAプレートに加えた。次に、IL12Rβ1-Fcを、ウェルあたりに加えられるIL12Rβ1-Fcのモルが、それぞれのウェルを被覆するために使用されるAb-XIL12Rβ1結合部位のモルよりも少なくとも25倍低くなるように加えた。適当なインキュベーション期間後、ELISAプレートを洗浄し、IL12Rβ1検出試薬を加え、被覆抗-IL12Rβ1抗体この場合、Ab-Xにより特異的に結合されるIL12Rβ1の量を測定する。アッセイに対する背景シグナルは、被覆抗体この場合、Ab-X、第2の溶液相抗体この場合、Ab-Y、バッファーのみすなわち、IL12Rβ1なしおよびIL12Rβ1検出試薬でウェルにおいて得られるシグナルとして定義される。アッセイに対する陽性対照シグナルは、被覆抗体この場合、Ab-X、第2の溶液相抗体バッファーのみすなわち、第2の溶液相抗体なし、IL12Rβ1およびIL12Rβ1検出試薬でウェルにおいて得られるシグナルとして定義される。ELISAアッセイは、陽性対照シグナルが背景シグナルの少なくとも6倍となるような様式で行う必要がある。被覆抗体として使用する抗体、および第2競合抗体として使用する抗体の選択から引き起こされるあらゆるアーティファクト例えば、Ab-XとAb-Y間のIL12Rβ1に対する有意に異なる親和性を避けるために、交差ブロッキングアッセイは、1Ab-XがELISAプレート上に被覆されている抗体であり、Ab-Yが溶液中にある競合抗体である形式1、および2Ab-YがELISAプレート上に被覆されている抗体であり、Ab-Xが溶液中にある競合抗体である形式2、の2つの形式で実行する必要がある。12.細胞結合アッセイ選択される抗体の細胞結合を、種々のIL-12Rβ1を発現する細胞系、例えばキット225またはHSC-F、またはヒトおよびカニクイザルT細胞芽細胞を使用して、フローサイトメトリーを使用して試験する。抗体連続希釈物とのインキュベーション後、細胞の染色を、フローサイトメトリー分析により定量する。13.エピトープ結合エピトープ結合実験を、フローサイトメトリーを使用して行った。キット225細胞を、100倍過剰のFab-フラグメントおよびEC50濃度のIgGとインキュベートした。細胞へのIgG結合を、フローサイトメトリーによりPE-標識Fc-特異的二次抗体で定量した。同じエピトープまたは同じ提示表面への結合に対するFabとIgG間の競合は、すぐ近くの領域において同じビン、IgG検出減少をもたらした。14.重角光散乱検出器と連結したサイズ排除クロマトグラフィーSEC-MALSSEC-MALS測定を、三角形光散乱検出器miniDAWNTreosWyattTechnologySantaBarbaraCAUSAに連結したAgilent1200HPLCシステムAgilentTechnologiesにて行った。サンプルの濃度は、0.186ml/gの特定の屈折率増加dn/dc値を使用して示差屈折計OptilabrEXWyattTechnologyでオンラインで追跡されたWenら1996。50μlのサンプル容量をSuperdex20010/300GLカラムGEHealthcareに注入した。データを記録し、ASTRAVソフトウェアWyattTechnologyを使用して処理した。MALS検出器に対する検出器遅延容量および正規化係数を決定するために、BSAサンプルSigmaA8531を参照として使用した。デスパイキングもバンド拡大補正も適用しなかった。WenJArakawaTPhiloJS1996AnalBiochem240155166も参照。15.細胞上清における抗体濃度のインプロセスコントロール力価抗体含有上清の濃度決定を、プロテインAカラムを使用するHP1100HPLCシステムAgilentTechnologiesで行った。62.5μlのプロテインAセファロース4ファーストフローAmershamBiosciencesをHPLCカートリッジに充填した。ランニングバッファーは50mMのH3BO3、200mMのNa2SO4であり、バッファーAはNaOHを使用してpH7.5に調整されており、バッファーBはH2SO4を使用してpH2.5に調整されていた。流速は0.75ml/分であった。一般的に、0.2mlの上清をプロテインAカラムに注入した。5.5分間バッファーAでリンスした後、結合抗体を2.5分間、バッファーBで溶離した。次のサンプル注射の前に、カラムをバッファーAで平衡にした。215nmUV線をモニタリングし、溶離ピーク領域または高さを定量のために使用した。培養培地に加えられた異なる量の精製された抗体を有するサンプルから得られた標準曲線を、校正のために使用した。16.ヒト抗体の等電点pIのコンピューター内予測コンピューター内予測pIを、MarkusHeitzmann、TinaBuch、SalvatoreLeonardi、NoraEiflerおよびMichaelVetschによりNBx-PSP-CPDで開発されたNovartisBiologicspICalculatorversion1.1で完全抗体の一次アミノ酸配列を分析することにより計算した。pK値は、GrimsleyGRScholtzJMandPaceCNProteinSci20091824751からである。17.プロテインA回収多重波長ナノドロップ分光光度計ND1000Peqlabを使用して、280nmの波長でプロテインA精製後のサンプル抗体の濃度を決定した。プロテインA回収は、プロテインAHPLC上記により測定される細胞上清中の精製された抗体の全量および抗体の量の比率である。18.pH7.4でのIgGの融点決定使用されるシステムは、Thermofluor登録商標iQTM5OpticalSystemBioRadLaboratoriesであり、使用されるソフトウェアは、iQTM5OpticalSystemv2.0であった。96-ウェル白色マイクロプレートmultiplate登録商標PCRPlateTMはBioradMPL9561であった。プレートは、Microseal登録商標‘B’Filmで密封した。SYPRO登録商標OrangeProteinGelStainはSigmaS5692であった。使用前に、濃縮された色素をdH2Oで希釈した1mlのdH2O中1.4μl。10μlの抗体サンプルを、10μlの250mMのナトリウムリン酸バッファーpH7.4、23μlのdH2Oに加え、7μlの希釈された色素を含ませた。最終容量はウェルあたり50μlであった。プレートを、ハンドヘルドシーラー指紋を回避するを使用してMicroseal登録商標‘B’Filmで密封し、プレートを2分間1000gで遠心した。Tm測定は、温度を90分間20°Cから95°Cへ0.5°Cずつの増加でThermofluor装置において行った。19.pH7.4、pH6.0、pH3.5でFabの融点決定使用されるシステムは、Thermofluor登録商標iQTM5OpticalSystemBioRadLaboratoriesであり、使用されるソフトウェアは、iQTM5OpticalSystemv2.0であった。96-ウェル白色マイクロプレートmultiplate登録商標PCRPlateTMはBioradMPL9561であった。プレートは、Microseal登録商標‘B’Filmで密封した。SYPRO登録商標OrangeProteinGelStainはSigmaS5692であった。使用前に、濃縮された色素をdH2Oで希釈した1mlのdH2O中1.4μl。25μlの大腸菌発現Fabサンプルを、18μlの50mMのクエン酸塩pH3.5または100mMのMESpH6.0またはPBSに加え、最後に7μlの希釈された色素を含ませた。最終容量はウェルあたり50μlであった。プレートを、密封ツールを使用してMicroseal’B’AdhesiveSealsBioRad、MSB1001で密封し、混合し、遠沈した。融解温度を、20から100°Cへ0.5°Cずつの増加でiQTM5MulticolorRealTimePCRDetectionSystemにおいてサンプルを加熱することにより測定した。結果は、iQ5を使用して分析した。20.エピトープのアミド水素/ジュウテリウム交換質量分析マッピングアミド水素/ジュウテリウム交換質量分析H/DxMSを使用して、以下の抗体のグループ:imAb1、mAb2、mAb3、mAb13MOR11873、iimAb4、mAb5、mAb6、mAb14MOR11878、およびiiimAb10、mAb11、mAb12、mAb16MOR11880に対するエピトープに関する情報のためにIL12Rベータ1をプローブした。H/DxMSマッピングは、1Hと2Hジュウテリウムとも称され、原子記号Dで省略されるまたはジュウテリウムの同位体質量間の質量の違いによる。水H2Oから重水D2Oへの変化時、タンパク質の水素原子が重陽子すなわち、水素のより重いアイソトープで徐々に置き換えられるため、タンパク質は質量における増加を生じる。水素/ジュウテリウム交換事象の可能性は、生理学的条件下で主にタンパク質構造により決定される。該構造は、所定の位置でのタンパク質の熱力学的安定性および部位特異的溶媒接近性をコントロールする。H/DxMS技術は、生理学的条件下でタンパク質へのジュウテリウム取り込みに起因するタンパク質のタンパク質分解性フラグメントの質量シフトを測定するために使用される。これらの質量シフトは、間接的に、局所的タンパク質構造的特徴幾何学的およびエネルギー的に折り返し伝えられる。標識分析後に残るように十分に他の部位でジュウテリウム化を安定化することができないため、タンパク質における交換可能な水素のアミド水素のみがH/DxMS分析において観察される。結合パートナーが抗体標的に結合するとき例えば抗原/抗体相互作用、水素/ジュウテリウム交換率における実験的変化は、局所環境の溶媒排除およびエネルギー的安定化の結果として観察され得る。溶媒から排除される表面領域は、はるかにゆっくり、複合体形成交換時に接近する。したがって、交換の減少は、結合部位に対する指標として直接的に使用することができる。具体的には、抗原-抗体相互作用において、これらの変化は、エピトープの位置を強調し得る。該解釈は、タンパク質が共同的様式においてリガンド結合に対して応答するため、幾何学的およびエネルギー的変化がタンパク質の他の場所に起こることができるアロステリックな変化という事実により複雑化される。水素-ジュウテリウム交換におけるアロステリックな効果は、幾何学的/構造的情報が回収されないとき、質量分析ベースのアッセイにおいて区別することができない。それにもかかわらず、実際には、溶媒排除が、遊離抗原に関するようなタンパク質-抗原複合体形成において観察される保護パターンを主に説明し、交換の減少を示すタンパク質上の位置が結合接合面を高度に示すということが観察される。抗体結合後の重陽子取り込みの減少の位置は、標的タンパク質の消化、次に、水素/ジュウテリウム交換例えば適当な酵素、例えば、ペプシンでの、次に、関連フラグメントの質量シフトを決定するための質量分析により推測され得る。実験的記述:標識実験において、抗原IL12Rベータ1および抗原免疫複合体を、自動液体処理システムを使用してあらかじめ決定された時間、0°Cで溶液中で交換した。10分の交換期間後、サンプルを、低pH約2.5、これは、pH7.5と比較して、アミド-水素の交換プロセスを5桁ゆっくりにするにクエンチし、過剰の酸性クエンチバッファーの添加により交換を停止し、標識状態を保存する。低pHへのクエンチは、タンパク質分解ペプシンに対する、および液体クロマトグラフィー質量分析による分析のための標識状態半減期~30分の十分な安定化を提供する。抗体-抗原複合体と遊離抗原からのフラグメントに対するジュウテリウム化における違いを検査する。マイナスの値は、抗体-抗原複合体において溶媒保護を示し、相互作用の最も可能性の高い部位として解釈する。この分析の結果は、表13に挙げられているMOR可変領域MOR11873、MOR11878、MOR11880を有する抗体の3つのグループからの典型的な抗体で行ったとき、以下の表15に提供される。実施例mAb1からmAb16表6は、実施例mAb1からmAb16の全長重鎖および軽鎖のアミノ酸配列配列番号を記載している。表6:実施例mAb1-mAb16実施例mAb1からmAb16は、慣用の抗体組換え生産および精製方法を使用して、生産することができる。例えば、表7において定義されるコード配列を、哺乳動物生産細胞系における組換え発現のための生産ベクターにクローニングする。表7:mAb1-mAb16のコードDNA配列IL12Rβ1と同じ結合特性を実質的に保持する他の抗体は、mAb1からmAb16のいずれか1つの同じVHおよびVL領域ならびに異なる定常領域例えば、異なるアイソタイプ、例えばIgG4またはIgG2から選択される異なるFc領域を保持するmAb1からmAb16のいずれか1つのキメラ抗体を含む。表8は、mAb1からmAb16由来のキメラ抗体を作製するために使用することができるmAb1からmAb16の可変重鎖VHおよび軽鎖VLアミノ酸配列を要約する。表8:可変重鎖VHおよび軽鎖VLアミノ酸配列mAb1-mAb16と同様のIL12Rβ1に対する結合特性を実質的に保持する他の抗体の例は、異なるフレームワークおよび/または定常領域を有するmAb1からmAb16のいずれか1つのCDR領域を保持する、CDR移植によるmAb1からmAb16のいずれか1つのCDR移植抗体を含む。表9は、mAb1からmAb16のCDR領域がKabat定義にしたがって定義される代替CDR移植抗体を作製するためのmAb1からmAb16の有用なCDR配列を要約する。表10は、mAb1からmAb16のCDR領域がChothia定義にしたがって定義される代替CDR移植抗体を作製するためのmAb1からmAb16の有用なCDR配列を要約する。表9:mAb1からmAb16のCDR領域は、Kabat定義にしたがって定義される表10:mAb1からmAb16のCDR領域は、Chothia定義にしたがって定義される抗-IL12Rベータ1mAbの作製一旦、本明細書に記載されている所望の特性を有する単一の典型的な抗-ヒト-IL12Rベータ1抗体、例えばmAb1から16のいずれか1つが単離されれば、当分野で既知の方法を使用することにより、同様の特性を有する他の抗体を作製することは容易である。例えば、マウスをIL12Rベータ1で免疫化し、ハイブリドーマを生産し、得られた抗体を配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドへの結合についてスクリーニングし得る。あるいは、ファージディスプレイ方法論を使用して、配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドに対する特異性を有する他の抗体を作製し得る。次に、配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドに対する特異性を有するこのような他の抗体を、以下の1つ以上の特性:表面プラズモン共鳴Biacoresystemを使用して1nM以下のKD、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドへのIL12および/またはIL23の結合の阻害、表面プラズモン共鳴BiacoresystemまたはElisaベースの交差ブロッキングアッセイを使用して測定されるとき、IL12Rベータ1への結合について典型的なmAbと競合する能力、アミド水素/ジュウテリウム交換質量分析を使用して測定されるとき、同じエピトープ内への、または該エピトープへの結合についてスクリーニングすることができる。あるいは、出典明示により本明細書に包含させるJespersらBiotechnology128991994の方法は、典型的なmAb、例えば、mAb1から16のいずれか1つのものと同じエピトープ、したがって同様の特性を有するmAbの選択を導くために使用され得る。ファージディスプレイを使用して、典型的な抗体の第1の重鎖を好ましくはヒト軽鎖のレパートリーと対にし、IL12Rベータ1に結合するmAbを選択し、次に、新規軽鎖を好ましくはヒト重鎖のレパートリーと対にし、典型的なmAbと同じエピトープを有する好ましくはヒトIL12Rベータ1に結合するmAbを選択する。例えば、本明細書に記載されているエピトープ内または該エピトープへ結合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、次に、アミド水素/ジュウテリウム交換質量分析を使用してエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合についてスクリーニングすることができる。あるいは、IL12Rベータ1への結合に対して典型的なmAbと競合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、次に、表面プラズモン共鳴BiacoresystemまたはElisaベースの交差ブロッキングアッセイを使用して競合についてスクリーニングすることができる。本明細書に記載されている機能特性を有する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、次に、表面プラズモン共鳴Biacoresystemを使用して1nM以下のKD、および、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドへのIL12および/またはIL23の結合の阻害についてスクリーニングすることができる。本明細書に記載されている機能特性を有し、本明細書に記載されているエピトープ内または該エピトープへ結合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、表面プラズモン共鳴Biacoresystemを使用して1nM以下のKD、および、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドへのIL12および/またはIL23の結合の阻害についてスクリーニングし、アミド水素/ジュウテリウム交換質量分析を使用してエピトープへの結合、または該エピトープ内の結合についてスクリーニングすることができる。本明細書に記載されている機能特性を有し、IL12Rベータ1への結合について典型的なmAbと競合する他の抗体を同定するために、抗体を上記のとおりに作製し、表面プラズモン共鳴Biacoresystemを使用して1nM以下のKDについてスクリーニングし、インビトロ競合的結合アッセイにおいて測定されたとき、配列番号:89のIL12Rベータ1ポリペプチドへのIL12および/またはIL23の結合の阻害についてスクリーニングし、表面プラズモン共鳴BiacoresystemまたはElisaベースの交差ブロッキングアッセイを使用して競合についてスクリーニングすることができる。表11:本発明を実施するために有用なアミノ酸およびヌクレオチド配列の簡単な説明表12:本発明を実施するために有用なアミノ酸およびヌクレオチド配列結果実施例mAb1からmAb16は、以下に記載されるとおりに得られ、生産された:IL12Rb1に対して高親和性を有するFab抗体のスクリーニングおよび同定迅速な成熟と共にライブラリースクリーニングを記載されているとおりに行ったKnappikら2000JMolBiol2965786Prasslerら2009Immunotherapy157183。古典的なスクリーニングに加えて、確認された結合物Fabを、IL-12Rを天然に発現するヒトKit-225およびカニクイザルHSC-F細胞への結合について即座に試験した。これは、最初に観察された5520個から119個のユニークなクローンの選択を可能にした。次に、それらを、有効な候補物のために、ヒト全血アッセイ、次にカニクイザルバージョンにおける機能性阻害について試験した46から20ファミリー、4エピトープビンに分類された。したがって、6つの有効な機能性阻害剤4つのファミリーからを、最初に、カニクイザルおよびヒトIL-12機能を阻害するIC50によって最終候補にリストした。トップ4つそれぞれMOR11873、MOR11878、MOR11879およびMOR11880と命名された;後者2つは同一のCDRを含む2つの異なるフレームワークであるを、それらの発展性を改善するように最適化操作のために選択し、最適なサイレントバージョンの評価のために4つの異なるIgG1Fcバージョンにおいて調製したADCC/CDCまで。大腸菌におけるHuCAL登録商標-Fab抗体の発現および精製可溶性Fabの迅速な発現を促進するために、選択されたHuCALPLATINUM登録商標ファージのFabコード挿入物を、哺乳動物細胞系におけるIPTG誘導Fab発現のための発現ベクターにサブクローニングし、Ni-NTAクロマトグラフィーによりFabの精製を行った。TG-1細胞におけるFabフラグメントの発現を、IPTGの添加により誘導した。リゾチームおよびNi-NTAクロマトグラフィーBioRadGermanyにより単離されたFabフラグメントを使用して細胞を、破壊した。タンパク質濃度を、UV-分光光度法により測定した。HP-SECにより自然条件で、およびSDS-PAGEを使用して変性し、還元した状態で、Fabフラグメントの純度を分析した。IgGへの変換ヒトIgG1f野生型、ヒトIgG1fD265A、ヒトIgG1fN297Aおよび以下LALAと称されるヒトIgG1fL234AL235Aについて、全長IgGを発現させるために、4つの有力な候補物であるMOR11873、MOR11878、MOR11879およびMOR11880の重鎖VHおよび軽鎖VLの可変ドメインフラグメントを、Fab発現ベクターから適当な発現ベクターにサブクローニングし、本発明の16個の抗体である、以下の表13に記載されているmAb1-mAb16の生産のための発現ベクターを得た:表13:mAb1-mAb16の可変領域およびIgG1Fc領域の記載ヒトIgGの一過性発現および精製IgGmAb1、mAb4、mAb7およびmAb10の重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターDNAで真核HKB11細胞をトランスフェクトした。滅菌濾過後、溶液を、標準プロテインAアフィニティークロマトグラフィーMabSelectSUREGEHealthcareに付した。タンパク質濃度を、UV-分光光度法により測定した。SDS-PAGEにおいて、変性、還元、および非還元条件下で、またはHP-SECにより自然条件で、かつ、CaliperLabChip登録商標SystemまたはAgilentBioAnalyzerを使用することにより、IgGの純度を、分析した。上記パラグラフの方法に記載されている方法にしたがって、全ての候補抗体を、ヒトおよびカニクイザルにおいてそれらのIL12Rβ1結合親和性SPR、KDnM、IL12/IL23インビトロ競合的結合阻害、IL12/IL18依存性IFNγ生産について試験した。該結果は、表14に示される。表14:mAb1、mAb4、mAb7およびmAb10のプロファイリングデータ驚くべきことに、本発明の抗体は、KDアフィニティー、および、機能性ヒトアッセイにより測定されるとき、IL12競合的結合に対して100pM以下、さらに10pM以下のIC50を有し、したがって薬物としての使用のために特に適当である。さらに、それらは、有利な発展性特性を有する。それらはまた、カニクイザルIL12Rβ1配列番号:98と交差反応し、可変領域をコードするコード配列は、サイレントIgG1抗体、例えばL234AL235A変異を含むIgG1Fc変異体、またはD265A変異を含むIgG1Fc変異体、またはN297A変異を含むIgG1Fc変異体を作製するために容易に移動することができる。エピトープ結合実験抗体を交差競合エピトープ結合実験で試験し、4つの別個のグループは、全ての最初に同定された機能的に阻害するmAb中で区別することができた。選択されたトップ4つの候補物MOR11873、MOR11878、MOR11879およびMOR11880は全て、偶然、エピトープビンBと称される第2のグループに分類され、したがって互いに競合する。全mAb1-mAb16が4つのトップ候補物の1つに由来する結合領域を有するため、したがって、全mAb1-mAb16抗体は互いに競合することが予期される。アミド水素/ジュウテリウム交換質量分析エピトープマッピングの要約本発明の抗体間の結合関連性の明確な状況を発達させるために、エピトープマッピング試験を行った。目的は、標的ヒトIL12Rベータ1分子上への候補モノクローナル抗体の結合部位を決定することであった。特に、目的は、抗体と標的間の結合相互作用に関与するヒトIL12Rベータ1の特異的アミノ酸残基を同定することであった。エピトープマッピングは一般的に、当業者が利用できる当分野の技術の様式を使用して行った。特に、水素/ジュウテリウム交換質量分析は、抗体結合に影響する、すなわち関連エピトープに関与するアミノ酸残基に対するヒトIL12Rベータ1の構造をプローブするために使用した。表15における結果は、Δデルタ値、すなわちIL12Rベータ1/抗体複合体と遊離IL12Rベータ1タンパク質間のジュウテリウム化における差を示す。マイナスの値は、抗体-抗原複合体において溶媒保護を示し、相互作用の最も可能性の高い部位として解釈する。表15:H/DxMSエピトープマッピングデータH/DxMSエピトープマッピング結果は、ヒトIL12Rベータ1配列のアミノ酸残基416-429ITIFASAHPEKLTLに対応する1つのペプチドが全てのグループの抗体に対して保護を示したことを示す。このデータは、これらのグループの抗体が互いに競合を示すという事実と一致し、416-ITIFASAHPEKLTL-429のペプチドが、全3つのグループの抗体に対するエピトープに対応することを示す。さらに、これらのデータは、抗体がカニクイザルIL12Rベータ1と交差反応性であるが、同等の齧歯動物配列マウスおよびラットと交差反応性ではないという事実と一致する。ヒト、カニクイザル、ラットおよびマウスにおける該エピトープ配列の比較は、表16に示され、アラインされたエピトープ配列は下線が引かれている。表16:ヒト、カニクイザル、ラットおよびマウスにおけるIL12Rベータ1抗体エピトープ配列の比較カニクイザルおよびヒト配列は、ヒトおよびカニクイザル配列の両方と抗体の交差反応性を有する該エピトープ配列において1つのアミノ酸残基のみ異なる。対照的に、該エピトープにおける齧歯動物配列は、ヒトおよびカニクイザル配列と比較して大きな違いを示し、これは、齧歯動物IL12Rベータ1タンパク質と抗体の特異性の欠如と一致する。