"ヒトActRIIAへのアクチビンAの結合を阻害する、単離された抗体もしくはそのフラグメント。ヒトActRIIAに結合しかつヒトActRIIAへのAb-14E1の結合を交叉ブロックする、請求項1に記載の単離された抗体もしくはそのフラグメント。ヒトActRIIAへのアクチビンAおよびアクチビンBの結合を阻害する、単離された抗体もしくはそのフラグメント。前記抗ActRIIA抗体もしくはフラグメントは、a卵胞刺激ホルモンレベルをインビボで低下させる活性、およびb細胞株においてインビトロでアクチビンAシグナル伝達を阻害する活性からなる群より選択される活性を有する、請求項1~3のいずれかに記載の抗体もしくはそのフラグメント。前記抗ActRIIA抗体もしくはフラグメントは、a卵巣切除した雌性C57BL/6マウスにおいて卵胞刺激ホルモンレベルを低下させる活性、およびbアクチビンAに曝されたA204細胞株においてCAGA12によって調節されるレポーター遺伝子の発現を阻害する活性からなる群より選択される活性を有する、請求項1~4のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメント。前記抗体もしくはそのフラグメントは、以下からなる群:a.配列番号16の13位にあるフェニルアラニン、b.配列番号16の14位にあるフェニルアラニン、c.配列番号16の15位にあるアスパラギン、d.配列番号16の17位にあるアスパラギン、e.配列番号16の21位にあるアスパラギン酸、f.配列番号16の22位にあるアルギニン、g.配列番号16の23位にあるスレオニン、h.配列番号16の29位にあるグルタミン酸、i.配列番号16の30位にあるプロリン、j.配列番号16の31位にあるシステイン、k.配列番号16の32位にあるチロシン、l.配列番号16の33位にあるグリシン、m.配列番号16の34位にあるアスパラギン酸、n.配列番号16の36位にあるアスパラギン酸、o.配列番号16の37位にあるリジン、p.配列番号16の39位にあるアルギニン、q.配列番号16の40位にあるヒスチジン、r.配列番号16の42位にあるフェニルアラニン、s.配列番号16の44位にあるスレオニン、t.配列番号16の46位にあるリジン、u.配列番号16の55位にあるバリン、v.配列番号16の56位にあるリジン、w.配列番号16の57位にあるグルタミン、x.配列番号16の58位にあるグリシン、y.配列番号16の59位にあるシステイン、z.配列番号16の60位にあるトリプトファン、aa.配列番号16の61位にあるロイシン、bb.配列番号16の62位にあるアスパラギン酸、cc.配列番号16の63位にあるアスパラギン酸、dd.配列番号16の64位にあるイソロイシン、ee.配列番号16の65位にあるアスパラギン、ff.配列番号16の66位にあるシステイン、gg.配列番号16の76位にあるリジン、hh.配列番号16の80位にあるグルタミン酸、ii.配列番号16の81位にあるバリン、jj.配列番号16の83位にあるフェニルアラニン、およびkk.配列番号16の85位にあるシステイン、より選択される、ヒトActRIIAの細胞外ドメインにおける1個以上のアミノ酸と接触する、請求項1~5のいずれか1項に記載の単離された抗体もしくはそのフラグメント。前記抗体もしくはそのフラグメントは、以下:a.配列番号12のシステイン1から-20位にあるバリン、b.配列番号12のシステイン1から4位にあるグリシン、c.配列番号12のシステイン1から5位にあるチロシン、d.配列番号12のシステイン1から9位にあるセリン、e.配列番号12のシステイン1から10位にあるグリシン、f.配列番号12のシステイン1から11位にあるチロシン、g.配列番号12のシステイン1から12位にあるチロシン、h.配列番号12のシステイン1から32位にあるチロシン、i.配列番号12のシステイン1から37位にあるアスパラギン、j.配列番号12のシステイン2から4位にあるアラニン、k.配列番号12のシステイン2から5位にあるチロシン、l.配列番号12のシステイン2から6位にあるアルギニンm.配列番号12のシステイン2から7位にあるアスパラギン、n.配列番号12のシステイン2から8位にあるアスパラギン酸、o.配列番号12のシステイン2から10位にあるアルギニン、p.配列番号12のシステイン2から12位にあるアラニン、q.配列番号12のシステイン2から13位にあるチロシン;およびr.前述のうちのいずれかの保存的置換、からなるVH残基の群より選択される1個以上のアミノ酸を含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の単離された抗体もしくはそのフラグメント。前記抗体もしくはそのフラグメントは、以下:a.配列番号13のシステイン1から5位にあるアスパラギン酸、b.配列番号13のシステイン1から7位にあるセリン、c.配列番号13のシステイン1から9にあるアスパラギン、d.配列番号13のシステイン1から10位にあるフェニルアラニン、e.配列番号13のシステイン1から27位にあるチロシン、f.配列番号13のシステイン1から28位にあるフェニルアラニン、g.配列番号13のシステイン1から30位にあるセリン、h.配列番号13のシステイン1から31位にあるアルギニン、i.配列番号13のシステイン1から32位にあるロイシン、j.配列番号13のシステイン1から34位にあるセリン、k.配列番号13のシステイン2から-21位にあるセリン、l.配列番号13のシステイン2から3位にあるグリシン、m.配列番号13のシステイン2から4位にあるアスパラギン、n.配列番号13のシステイン2から5位にあるスレオニン、o.配列番号13のシステイン2から6位にあるロイシン、p.配列番号13のシステイン2から8位にあるトリプトファン、およびq.前述のうちのいずれかの保存的置換からなるVL残基の群より選択される1個以上のアミノ酸を含む、請求項1~7のいずれか1項に記載の単離された抗体もしくはそのフラグメント。配列番号4、5、6、7、8、および9からなる群より選択されるCDRに対して少なくとも80の同一性を有する少なくとも1個のCDR配列を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメント。配列番号4、5、6、7、8、および9からなる群より選択されるCDRに対して少なくとも80の同一性を有する少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個もしくは少なくとも6個のCDR配列を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメント。3個のCDR、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメントであって、ここでCDR-H1は、配列番号4に対して少なくとも80同一である配列を含み、CDR-H2は、配列番号5に対して少なくとも80同一である配列を含み、CDR-H3は、配列番号6に対して少なくとも80同一である配列を含む、抗体もしくはそのフラグメント。重鎖を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメントであって、ここで該重鎖は、配列番号12に示される配列に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドを含む、抗体もしくはそのフラグメント。軽鎖を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメントであって、ここで該軽鎖は、配列番号13に示される配列に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドを含む、抗体もしくはそのフラグメント。重鎖および軽鎖の両方を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメントであって、ここで該重鎖は、配列番号12に示される配列に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドを含み、該軽鎖は、配列番号13に示される配列に対して少なくとも80の同一性を有するポリペプチドを含む、抗体もしくはそのフラグメント。ActRIIA結合剤を生成する方法であって、該方法は、生存可能なホモ接合性ActRIIA欠損マウスを、ActRIIAに由来する抗原ペプチドで免疫化する工程を包含する、方法。望ましくないActRIIA依存性シグナル伝達を有する患者において状態を処置する方法であって、該方法は、状態の処置を必要とする患者に、有効量の、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。前記状態は、不十分な除脂肪体重によって特徴付けられる、請求項16に記載の方法。前記状態は、筋肉量もしくは筋機能の低下によって特徴付けられる、請求項16に記載の方法。前記状態は、がん悪液質もしくは筋肉減少症である、請求項16に記載の方法。前記患者は、望ましくない高レベルの卵胞刺激ホルモンを有する、請求項16に記載の方法。請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメントを含む、薬学的組成物。薬学的に受容可能な賦形剤、希釈剤、もしくはキャリアのうちの1種以上と組み合わせた、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメント。Fc、ポリエチレングリコール、アルブミン、およびトランスフェリンのうちの少なくとも1つに結合体化されている、請求項1~14のいずれか1項に記載の抗体もしくはそのフラグメント。発明の要旨本開示は、他の局面の中でも、ActRIIAに結合し、かつActRIIA媒介性もしくはアクチビン媒介性のシグナル伝達を阻害する抗体およびそのフラグメントを提供する。このようなタンパク質についての種々の使用は、本明細書に記載される。例えば、上記抗体は、筋肉減少musclelossもしくは筋損傷によって特徴付けられる疾患もしくは状態を有する患者において、筋肉量もしくは除脂肪体重leanbodymassを増大させて、必要な患者においてFSHを低下させ、悪液質特に、がん悪液質を処置し、肥満症を低減し、それによって、肥満症のような障害を処置するため、ならびに公知かつ新規なActRIIA結合剤を同定するためのアッセイの一部として使用され得る。本開示は、ActRIIAに特異的に結合し、必要に応じて、1種以上のActRIIAリガンド例えば、アクチビンA、アクチビンB、GDF11、ミオスタチン、BMP7および/もしくは他の公知のActRIIAリガンドの結合を阻害する結合剤例えば、抗体に関する。上記結合剤は、これらが、ActRIIAへの本明細書で開示される少なくとも1種の抗体の結合を交叉ブロックし、そして/または上記抗体のうちの少なくとも1種によってActRIIAの結合から交叉ブロックされる能力によって特徴付けられ得る。特定の実施形態において、抗ActRIIA抗体もしくはそのフラグメントは、細胞株におけるActRIIA媒介性シグナル伝達をインビトロで阻害し得る。ActRIIA媒介性シグナル伝達は、例えば、ActRIIAを発現する細胞と、ActRIIAリガンド例えば、アクチビンA、アクチビンB、ミオスタチンもしくはGDF-11とを、抗ActRIIA抗体の存在下で接触させることによって、測定され得る。特定の実施形態において、中和抗体もしくはそのフラグメントのような結合剤は、リガンド結合に重要な複数の残基において、ActRIIAの細胞外ドメインを同時に接触させることによって、1種以上のActRIIAリガンドへのActRIIAの結合を阻害し得る。部分的に、本開示は、以下:a配列番号16の13位にあるフェニルアラニン、b配列番号16の14位にあるフェニルアラニン、c配列番号16の15位にあるアスパラギン、d配列番号16の17位にあるアスパラギン、e配列番号16の21位にあるアスパラギン酸、f配列番号16の22位にあるアルギニン、g配列番号16の23位にあるスレオニン、h配列番号16の29位にあるグルタミン酸、i配列番号16の30位にあるプロリン、j配列番号16の31位にあるシステイン、k配列番号16の32位にあるチロシン、l配列番号16の33位にあるグリシン、m配列番号16の34位にあるアスパラギン酸、n配列番号16の36位にあるアスパラギン酸、o配列番号16の37位にあるリジン、p配列番号16の39位にあるアルギニン、q配列番号16の40位にあるヒスチジン、r配列番号16の42位にあるフェニルアラニン、s配列番号16の44位にあるスレオニン、t配列番号16の46位にあるリジン、u配列番号16の55位にあるバリン、v配列番号16の56位にあるリジン、w配列番号16の57位にあるグルタミン、x配列番号16の58位にあるグリシン、y配列番号16の59位にあるシステイン、z配列番号16の60位にあるトリプトファン、aa配列番号16の61位にあるロイシン、bb配列番号16の62位にあるアスパラギン酸、cc配列番号16の63位にあるアスパラギン酸、dd配列番号16の64位にあるイソロイシン、ee配列番号16の65位にあるアスパラギン、ff配列番号16の66位にあるシステイン、gg配列番号16の76位にあるリジン、hh配列番号16の80位にあるグルタミン酸、ii配列番号16の81位にあるバリン、jj配列番号16の83位にあるフェニルアラニン、およびkk配列番号16の85位にあるシステインからなる群より選択されるヒトActRIIAの細胞外ドメインにおける1個以上のアミノ酸と接触する抗体およびそのフラグメントのような結合剤に関する。ActRIIA結合抗体もしくはそのフラグメントにおける複数の残基は、ActRIIAシグナル伝達を中和する目的で、ActRIIAの細胞外ドメインにおける領域と接触させるために使用され得る。本明細書で例示されるように、VHにおいて高度に保存された残基は、可変性残基を示すために参照点として働き得る2個のシステインを含む。特定の局面において、本開示は、以下:a配列番号12のシステイン1から-20位にあるバリン、b配列番号12のシステイン1から4位にあるグリシン、c配列番号12のシステイン1から5位にあるチロシン、d配列番号12のシステイン1から9位にあるセリン、e配列番号12のシステイン1から10位にあるグリシン、f配列番号12のシステイン1から11位にあるチロシン、g配列番号12のシステイン1から12位にあるチロシン、h配列番号12のシステイン1から32位にあるチロシン、i配列番号12のシステイン1から37位にあるアスパラギン、j配列番号12のシステイン2から4位にあるアラニン、k配列番号12のシステイン2から5位にあるチロシン、l配列番号12のシステイン2から6位にあるアルギニン、m配列番号12のシステイン2から7位にあるアスパラギン、n配列番号12のシステイン2から8位にあるアスパラギン酸、o配列番号12のシステイン2から10位にあるアルギニン、p配列番号12のシステイン2から12位にあるアラニン、q配列番号12のシステイン2から13位にあるチロシン;およびr前述のうちのいずれかの保存的置換からなるVH残基の群より選択される1個以上のアミノ酸を含む結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントに関する。VLにおける高度に保存された残基はまた、可変性残基を示すために参照点として働き得る2個のシステインを含む。特定の局面において、本開示は、以下:a配列番号13のシステイン1から5位にあるアスパラギン酸、b配列番号13のシステイン1から7位にあるセリン、c配列番号13のシステイン1から9位にあるアスパラギン、d配列番号13のシステイン1から10位にあるフェニルアラニン、e配列番号13のシステイン1から27位にあるチロシン、f配列番号13のシステイン1から28位にあるフェニルアラニン、g配列番号13のシステイン1から30位にあるセリン、h配列番号13のシステイン1から31位にあるアルギニン、i配列番号13のシステイン1から32位にあるロイシン、j配列番号13のシステイン1から34位にあるセリン、k配列番号13のシステイン2から-21位にあるセリン、l配列番号13のシステイン2から3位にあるグリシン、m配列番号13のシステイン2から4位にあるアスパラギン、n配列番号13のシステイン2から5位にあるスレオニン、o配列番号13のシステイン2から6位にあるロイシン、p配列番号13のシステイン2から8位にあるトリプトファン、およびq前述のうちのいずれかの保存的置換からなるVL残基の群より選択される1個以上のアミノ酸を含む結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントに関する。ActRIIAに特異的に結合し、配列番号4、5、6、7、8、および9から選択される少なくとも1個のCDR配列、ならびに前述のうちのいずれか1つに対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一なポリペプチドを含むか、これらからなるか、もしくはこれらから本質的になる結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントが、本明細書で提供される。ActRIIAに特異的に結合し、そして配列番号4、5、6、7、8、および9から選択される少なくとも2個のCDR配列、ならびに前述のうちのいずれかに対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一なポリペプチドを含むか、これらからなるか、もしくはこれらから本質的になる結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントもまた、本明細書で提供される。別の実施形態においては、ActRIIAに特異的に結合し、そして配列番号4、5、6、7、8、および9から選択される少なくとも3個のCDR配列、ならびに前述のうちのいずれかに対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一なポリペプチドを含むか、これらからなるか、もしくはこれらから本質的になる結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントが提供される。別の実施形態は、ActRIIAに特異的に結合し、そして配列番号4、5、6、7、8、および9に由来する少なくとも4個のCDR配列、ならびに前述のうちのいずれかに対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一なポリペプチドを含むか、これらからなるか、もしくはこれらから本質的になる結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントを提供する。さらに別の実施形態は、ActRIIAに特異的に結合し、配列番号4、5、6、7、8、および9に由来する少なくとも5個のCDR配列、ならびに前述のうちのいずれかに対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一なポリペプチドを含むか、これらからなるか、もしくはこれらから本質的になる結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントを提供する。なお別の実施形態において、ActRIIAに特異的に結合し、配列番号4、5、6、7、8、および9に由来する少なくとも6個のCDR配列、ならびに前述のうちのいずれかに対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一なポリペプチドを含むか、これらからなるか、もしくはこれらから本質的になる結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントが提供される。本開示はさらに、3個のCDRCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含む結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントに関し、ここでCDR-H1は、配列番号4に対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一な配列を含み、CDR-H2は、配列番号5に対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一な配列を含み、CDR-H3は、配列番号6に対して少なくとも80、85、90、95もしくは100同一な配列を含む。特定の実施形態において、本開示は、配列番号12に対して少なくとも80、85、90、95もしくは100の同一性を有するポリペプチドを含む重鎖を含む結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントに関する。別の実施形態において、本発明は、配列番号13に対して少なくとも80、85、90、95もしくは100の同一性を有するポリペプチドを含む軽鎖を含む結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントに関する。なお別の実施形態において、本発明は、重鎖および軽鎖の両方を含む結合剤例えば、抗体およびそのフラグメントに関し、ここで上記重鎖は、配列番号12に対して少なくとも80、85、90、95もしくは100の同一性を有するポリペプチドを含み、上記軽鎖は、配列番号13に対して少なくとも80、85、90、95もしくは100の同一性を有するポリペプチドを含む。別の実施形態において、本開示は、ActRIIAに特異的に結合し得る抗体を生成するための方法に関し、上記方法は、生存可能なホモ接合性ActRIIA欠損マウスを、ActRIIAに由来する抗原ポリペプチドで免疫化する工程を包含する。本発明は、望ましくないActRIIA媒介性もしくはアクチビン媒介性のシグナル伝達を有する患者における状態がん、上昇したFSH、および不十分な除脂肪体重、もしくは肥満症が挙げられるが、これらに限定されないを処置するための方法に関し、上記方法は、有効量のActRIIA結合剤例えば、抗体もしくはそのフラグメントを投与する工程を包含する。特定の局面において、本開示は、ActRIIA関連状態例えば、神経筋障害例えば、筋ジストロフィーおよび筋萎縮、鬱血性閉塞性肺疾患congestiveobstructivepulmonarydiseaseもしくは肺気腫および関連する筋消耗、筋消耗症候群musclewastingsyndrome、筋肉減少症sarcopenia、悪液質、脂肪組織障害例えば、肥満症、2型糖尿病、ならびに骨変性疾患例えば、骨粗鬆症を処置し得る抗体に関する。本発明のActRIIA結合剤は、本明細書で記載されるように、従来のがん治療との組み合わせにおいて、前立腺がんにおけるFSHを低下させるか、またはがん悪液質において筋肉を増大させるために使用され得る。よって、ActRIIAに結合する抗体およびそのフラグメントは、必要な患者において前立腺がんもしくはがん悪液質の処置、予防、もしくは管理のための組み合わせ治療において使用され得る。実施例において示されるように、ActRIIAに結合するアクチビンAおよび/もしくはアクチビンBを阻害する抗体は、FSHレベルを低下させ、筋肉を増大させ、脂肪を低下させ、そして悪液質を改善するために、インビボで使用され得る。本発明はまた、上記ActRIIA結合剤例えば、抗体もしくはそのフラグメントを含む薬学的組成物を提供し、上記組成物中には、薬学的に受容可能な賦形剤、希釈剤、もしくはキャリアのうちの1種以上が存在し得る。本明細書で開示される場合、上記抗体もしくはそのフラグメントは、Fc、ポリエチレングリコール、アルブミン、もしくはトランスフェリンのうちの少なくとも1種に結合体化され得る。本発明のこれらおよび他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照して明らかになる。本明細書で開示される全ての参考文献は、各々が個々に援用されるかのように、それらの全体において本明細書に参考として援用される。発明の詳細な説明1.概説トランスフォーミング増殖因子-βTGF-βスーパーファミリーは、共通配列エレメントおよび構造モチーフを共有する種々の増殖因子を含む。これらタンパク質は、脊椎動物および無脊椎動物の両方において、非常に多くの細胞タイプに対して生物学的効果を発揮することが公知である。上記スーパーファミリーのメンバーは、パターン形成および組織明確化tissuespecificationにおける胚発生の間に重要な機能を発揮し、種々の分化プロセス脂肪生成、筋発生、軟骨形成、心臓発生、造血、神経発生、および上皮細胞分化が挙げられるに影響を及ぼし得る。上記TGF-βファミリーのメンバーの活性を操作することによって、生物において重大な生理学的変化を引き起こすことは、しばしば可能である。例えば、PiedmonteseおよびBelgianBlueというウシ品種は、筋肉量において顕著な増大を引き起こす、GDF8ミオスタチンともいわれる遺伝子における機能喪失変異を有する。Grobetら、NatGenet.1997,171:71-4。さらに、ヒトにおいては、GDF8の不活性対立遺伝子は、増大した筋肉量、および報告によれば、例外的な強さと関連している。Schuelkeら、NEnglJMed2004,350:2682-8。アクチビンは、上記TGF-βスーパーファミリーに属するダイマーポリペプチド増殖因子である。2種の密接に関連したβサブユニットのホモ/ヘテロダイマーβAβA、βBβB、およびβAβBである3種の重要なアクチビン形態A、B、およびABがある。ヒトゲノムはまた、肝臓において主に発現されるアクチビンCおよびアクチビンEをコードする。上記TGF-βスーパーファミリーにおいて、アクチビンは、特有のかつ多機能の因子であり、これは、卵巣および胎盤の細胞におけるホルモン生成を刺激し得、神経細胞neuronalcellの生存を支援し得、細胞タイプに依存して陽性にもしくは陰性に細胞周期進行に影響を与え得、少なくとも両生類の胚において中胚葉分化を誘導し得るDePaoloら、1991,ProcSocEpBiolMed.198:500~512;Dysonら、1997,CurrBiol.7:81~84;Woodruff,1998,BiochemPharmacol.55:953~963。さらに、刺激されたヒト単球性白血病細胞から単離した赤血球分化誘導因子EDFは、アクチビンAと同一であることが見いだされたMurataら、1988,PNAS,85:2434。アクチビンAは、骨髄において造血の天然の陽性レギュレーターとして作用することが示唆された。いくつかの組織において、アクチビンシグナル伝達は、その関連ヘテロダイマーであるインヒビンによって拮抗される。例えば、下垂体からの卵胞刺激ホルモンFSHの放出の間に、アクチビンは、FSH分泌および合成を促進する一方で、インヒビンは、FSH分泌および合成を妨げる。アクチビンの生物活性を調節し、そして/またはアクチビンに結合し得る他のタンパク質としては、フォリスタチンFS、フォリスタチン関連タンパク質FSRP、α2-マクログロブリン、Cerberus、およびエンドグリンが挙げられる。アクチビンシグナルは、タイプIおよびタイプIIセリン/スレオニンキナーゼレセプターこれは、リガンド刺激の際に、下流のSmadタンパク質をリン酸化および活性化するのヘテロマー複合体によって媒介されるMassague,2000,Nat.Rev.Mol.CellBiol.1:169~178。これらタイプIおよびタイプIIレセプターは、膜貫通タンパク質であり、システインリッチ領域を有するリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および推定セリン/スレオニン特異性を有する細胞質ドメインから構成される。タイプIレセプターは、シグナル伝達に必須であり;タイプIIレセプターは、リガンドを結合するため、およびタイプIレセプターの発現のために必要とされる。タイプIおよびタイプIIのアクチビンレセプターは、リガンド結合の後に安定な複合体を形成し、タイプIIレセプターによるタイプIレセプターのリン酸化を生じる。2種の関連するタイプIIレセプターである、ActRIIAおよびActRIIBは、アクチビンA、アクチビンB、アクチビンAB、アクチビンCおよびアクチビンEのタイプIIレセプターとして同定されたMathewsおよびVale,1991,Cell65:973~982;Attisanoら、1992,Cell68:97~108。アクチビンの他に、ActRIIAおよびActRIIBは、いくつかの他のTGF-βファミリータンパク質BMP7、Nodal、BMP9、BMP10、GDF8、およびGDF11が挙げられると生化学的に相互作用し得るYamashitaら、1995,J.CellBiol.130:217~226;LeeおよびMcPherron,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:9306~9311;YeoおよびWhitman,2001,Mol.Cell7:949~957;Ohら、2002,GenesDev.16:2749~54。ALK4は、アクチビンの特に、アクチビンAの主なタイプIレセプターであり、ALK-7は、同様にアクチビンの特に、アクチビンBのレセプターとして働き得る。アクチンシグナル伝達経路のインヒビターは、種々の障害筋肉減少、過剰なFSH、肥満症、骨喪失、種々の腫瘍多発性骨髄腫および乳がんが挙げられるおよび貧血が挙げられるの処置について提唱されてきた。本発明者らの知識では、ActRIIAに結合し、上記TGF-βスーパーファミリーのメンバーによるシグナル伝達を阻害する抗体は、何ら生成されていない。ActRIIAは、ほぼ20年間にわたって知られているものの、ヒト、マウスおよび他の脊椎動物のActRIIA配列の間での高度の保存が、ActRIIAノックアウト動物の報告された致死性と組み合わせて、中和抗ActRIIA抗体の生成を妨げた可能性がある。本明細書で実証されるように、ActRIIAシグナル伝達を中和する抗ActRIIA抗体が生成され得、本開示は、広範囲の構造的および機能的特徴付けを提供して、広い範囲の中和抗ActRIIA抗体およびそのフラグメントを利用しやすいようにする。本明細書で示されるように、中和抗ActRIIA抗体は、種々の適応症においてがんおよび悪液質の処置が挙げられる、および必要な患者においてFSHレベルを低下させるために、使用され得る。本明細書において使用される用語は、一般に、当該分野において、本発明の状況内で、および各用語が使用される具体的文脈において、それらの通常の意味を有する。特定の用語は、本発明の組成物および方法、ならびにそれらの作製法および使用法を記載するにあたって、実務家にさらなるガイドラインを提供するために、以下でもしくは本明細書中の他の箇所で考察される。用語の何らかの使用の範囲および意味は、上記用語が使用される具体的文脈から明らかである。約aboutおよび約、およそapproximatelyとは、一般に、測定の性質および精度を考慮して、測定される量についての誤差の許容される程度を意味するものとする。代表的には、例示的な誤差の程度は、所定の値もしくは値の範囲の20パーセント以内、好ましくは、10以内、およびより好ましくは、5以内である。代わりに、および特に、生物学的システムにおいて、用語約および約、およそは、所定の値の一桁以内、好ましくは5倍以内、およびより好ましくは2倍以内である値を意味し得る。本明細書で与えられる数値的な量は、別段示されなければ近似値であり、用語約もしくは約、およそが、明らかに示されない場合には暗示され得ることを意味する。本発明の方法は、互いに配列を比較する工程1種以上の変異体配列改変体に対して野生型配列が挙げられるを包含し得る。このような比較は、代表的には、ポリマー配列のアラインメント例えば、当該分野で周知の配列アラインメントプログラムおよび/もしくはアルゴリズム例えば、いくつか挙げると、BLAST、FASTAおよびMEGALIGNを使用するを含む。当業者は、このようなアラインメントにおいて、変異が、残基挿入もしくは欠失を含む場合に、上記配列アラインメントが、ギャップ代表的には、ダッシュもしくはAによって表されるを挿入もしくは欠失した残基を含まないポリマー配列の中に導入することを容易に理解し得る。別段示されなければ、BLASTは、比較のためのデフォルトアルゴリズムであるものとする。相同なとは、その全ての文法的形態および綴りのバリエーションにおいて、同じ生物種におけるスーパーファミリーに由来するタンパク質、および異なる生物種に由来する相同なタンパク質を含む、共通する進化起源を有する2種のタンパク質の間の関係をいう。このようなタンパク質およびそれらのコードする核酸は、配列同一性、または特定の残基もしくはモチーフおよび保存された位置の存在に関わらず、それらの配列類似性によって示されるように配列相同性を有する。用語配列類似性は、その全ての文法的形態において、共通する進化起源を共有してもよいし、しなくてもよい核酸もしくはアミノ酸配列の間の同一性もしくは対応の程度に言及する。しかし、一般的使用法において、および本願において、用語相同なとは、高度にのような副詞で修飾される場合、配列類似性に言及し得、共通の進化起源に関連してもよいし、関連しなくてもよい。本明細書で使用される場合、用語ActRIIAとは、任意の種に由来するアクチビンレセプタータイプIIAActRIIAタンパク質のファミリーおよびこのようなActRIIAタンパク質に由来する改変体に言及する。本明細書でのActRIIAへの言及は、現在同定された形態のうちのいずれか1つへの言及であることが理解される。上記ActRIIAファミリーのメンバーは、一般に、膜貫通タンパク質であり、システインリッチ領域を有するリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および推定セリン/スレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインから構成される。上記ヒトActRIIA前駆タンパク質配列は、以下のとおりであり、下線が付された配列は、文献で報告された成熟細胞外ドメインに対応し、この中には、中和抗ActRIIA抗体および他のActRIIA結合剤によって標的とされるエピトープがある。ヒトActRIIA前駆タンパク質をコードする核酸配列は、以下のとおりであるGenbankエントリーNM_001616のヌクレオチド164~1705:2.ActRIIA結合剤本発明は、一部は、全長ActRIIAにまた結合する抗体によって認識されるエピトープを含む上記ActRIIAタンパク質の領域、およびこれらエピトープを作製および使用するための方法に関する。本発明はまた、ActRIIAもしくはActRIIAの一部に特異的に結合する結合剤例えば、抗体、およびこのような結合剤を使用するための方法を提供する。上記結合剤は、1種以上のリガンドへのヒトActRIIAの結合をブロックするかもしくは損ない、そしてその生物学的活性に干渉するために有用である。ActRIIAのオルソログの間に高度の配列同一性が存在するということは、当業者によって理解されている。ヒトActRIIAのマウスオルソログは、既に記載されておりNCBIRef.Seq.:NP_031422、これは、成熟した494アミノ酸タンパク質において2個の置換によってのみ異なり、一方ラットオルソログは、既に記載されておりNCBIRef.Seq.:NP_113759、これは、3個の置換によってのみ異なる。よって、ヒトActRIIAに結合する薬剤は、上記結合剤の認識部位例えば、エピトープのような抗体結合部位が、高度に保存されており、特に、ヒト配列に対してほぼもしくは完全に同一である場合に、マウスActRIIAもしくはラットActRIIAに結合すると予期される。従って、用語ActRIIAに特異的に結合するが使用される場合、複数の種の間の配列が保存されている場合、複数の種のActRIIAに結合することを含むことが理解される。本発明に従う結合剤の例としては、抗体14E1Ab-14E1が挙げられる。本明細書で使用される場合、Ab-14E1は、配列番号14および配列番号15において示されるヌクレオチドによって発現されるポリペプチドを含む。本発明の結合剤は、代表的には、本明細書で定義されるように、抗体もしくはそのフラグメントである。用語抗体とは、インタクトな抗体もしくはその結合フラグメントに言及する。抗体は、完全な抗体分子全長の重鎖および/もしくは軽鎖を有するポリクローナルバージョン、モノクローナルバージョン、キメラバージョン、ヒト化バージョンもしくはヒトバージョンを含むを含み得るか、またはそれらの抗原結合フラグメントを含む。抗体フラグメントは、Fab’2、Fab、Fab’、Fv、Fc、およびFdフラグメントを含み、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、マキシボディーmaxibodies、ミニボディーminibodies、イントラボディーintrabodies、ダイアボディーdiabodies、トリボディーtriabodies、テトラボディーtetrabodies、v-NARおよびビス-scFv例えば、HollingerandHudson,2005,NatureBiotechnology,23,9,1126-1136を参照のことへと組み込まれ得る。抗体様ポリペプチドはまた、米国特許第6,703,199号[ArtificialAntibodyPolypeptides,ResearchCorpTechnologiesに譲渡]において開示されており、これは、フィブロネクチンポリペプチドモノボディーmonobodiesを含む。他の抗体様ポリペプチドは、米国特許公開第2005/0238646号において開示されており、これは、一本鎖ポリペプチドである。本明細書で使用される場合、上記単離された抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体などであり得る。結合剤のこれらタイプの各々において、一般に、本明細書で開示される抗体に由来する1個以上のCDRを挿入して、代替的なActRIIA結合剤を生成することが期待される。本発明に従う抗体は、あらゆる免疫グロブリンクラス例えば、IgGIgG1、IgG2、IgG3、IgG4およびIgG2/4ハイブリッドを含む、IgE、IgM、IgD、もしくはIgAに属し得る。上記抗体は、動物例えば、トリ例えば、ニワトリおよび哺乳動物これらとしては、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ヒト、もしくは他の霊長類が挙げられるが、これらに限定されないから得られるか、もしくはこれらに由来し得る。上記抗体は、内在化抗体internalizingantibodyであり得る。抗体に由来する抗原結合フラグメントは、例えば、上記抗体のタンパク質分解的加水分解例えば、従来法に従う完全抗体のペプシン消化もしくはパパイン消化によって得られ得る。例示によれば、抗体フラグメントは、抗体をペプシンで酵素的に切断して、Fab’2といわれる5Sフラグメントを提供することによって生成され得る。このフラグメントは、チオール還元剤を使用してさらに切断されて、3.5SFab1価フラグメントを生成し得る。必要に応じて、上記切断反応は、ジスルフィド結合の切断に起因するスルフヒドリル基のためのブロッキング基を使用して行われ得る。代わりに、パパインを使用する酵素的切断は、2種の1価FabフラグメントおよびFcフラグメントを直接生成する。これら方法は、例えば、Goldenbergによって、米国特許第4,331,647号、Nisonoffら、Arch.Biochem.Biophys.89:230,1960;Porter,Biochem.J.73:119,1959;Edelmanら、MethodsinEnzymology1:422AcademicPress1967において;およびAndrews,S.M.およびTitus,J.A.によって、CurrentProtocolsinImmunologyColiganJ.E.,ら、eds,JohnWileySons,NewYork2003,pages2.8.1~2.8.10および2.10A.1~2.10A.5において記載されている。抗体を切断するための例えば、重鎖を分離して、1価軽鎖-重鎖フラグメントFdを形成するための他の方法、フラグメントのさらなる切断、または他の酵素的、化学的、もしくは遺伝的技術もまた、上記フラグメントが、上記インタクトな抗体によって認識される上記抗原に結合する限りにおいて使用され得る。抗体フラグメントはまた、任意の合成タンパク質もしくは遺伝子操作されたタンパク質であり得る。例えば、抗体フラグメントは、軽鎖可変領域からなる単離されたフラグメント、上記重鎖および軽鎖の可変領域からなるFvフラグメント、軽鎖および重鎖の可変領域がペプチドリンカーによって接続された組換え一本鎖ポリペプチド分子scFvタンパク質を含む。抗体フラグメントの別の形態は、抗体の1個以上の相補性決定領域CDRを含むペプチドである。CDR最小認識単位もしくは超可変領域ともいわれるは、上記目的のCDRをコードするポリヌクレオチドを構築することによって得られ得る。このようなポリヌクレオチドは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して、テンプレートとして抗体生成細胞のmRNAを使用して可変領域を合成することによって調製される例えば、Larrickら、Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology2:106,1991;Courtenay-Luck,GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies,inMonoclonalAntibodies.Production,EngineeringandClinicalApplication,Ritterら、eds.,page166CambridgeUniversityPress1995;およびWardら、GeneticManipulationandExpressionofAntibodies,inMonoclonalAntibodies:PrinciplesandApplications,Birchら、eds.,page137Wiley-Liss,Inc.1995を参照のこと。従って、一実施形態において、上記結合剤は、本明細書に記載される少なくとも1個のCDRを含む。上記結合剤は、本明細書に記載されるように、少なくとも2個、3個、4個、5個もしくは6個のCDRを含む。上記結合剤は、本明細書に記載される抗体の少なくとも1個の可変領域ドメインをさらに含み得る。上記可変領域ドメインは、任意のサイズもしくはアミノ酸組成のものであり得、一般に、ヒトActRIIAに対する結合を担う少なくとも1個のCDR配列例えば、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3を含み、そして/または上記軽鎖CDRは、本明細書に具体的に記載され、1種以上のフレームワーク配列に隣接しているか、または上記フレームワークとインフレームにある。一般的用語において、上記可変V領域ドメインは、免疫グロブリン重鎖VHおよび/もしくは軽鎖VL可変ドメインの任意の適切な配置であり得る。従って、例えば、上記V領域ドメインは、モノマーであってもよいし、VHドメインもしくはVLドメインであってもよく、これは、以下に記載されるように1×10-7M以下と少なくとも等しい親和性でヒトActRIIAに独立して結合し得る。あるいは、上記V領域ドメインは、ダイマーであってもよいし、VH-VHダイマー、VH-VLダイマー、もしくはVL-VLダイマーを含んでいてもよい。上記V領域ダイマーは、非共有結合的に会合している可能性のある少なくとも1個のVHおよび少なくとも1個のVL鎖本明細書中以降、FVといわれるを含む。所望であれば、上記鎖は、直接的に例えば、2個の可変ドメインの間のジスルフィド結合を介して、もしくはリンカー例えば、ペプチドリンカーを介してかのいずれかで、共有結合的に結合されて、単鎖FvscFvを形成し得る。上記可変領域ドメインは、任意の天然に存在する可変ドメインもしくはその操作されたバージョンであり得る。操作されたバージョンとは、組換えDNA操作技術を使用して作製された可変領域ドメインを意味する。このような操作されたバージョンは、例えば、上記特異的抗体のアミノ酸配列における挿入、欠失、もしくは変更によって特異的抗体可変領域から作製されたものを含む。特定の例としては、第1の抗体に由来する少なくとも1個のCDR、および必要に応じて、1個以上のフレームワークアミノ酸、ならびに第2の抗体に由来する上記可変領域ドメインの残りを含む操作された可変領域ドメインを含む。上記可変領域ドメインは、C末端アミノ酸において、少なくとも1個の他の抗体ドメインもしくはそのフラグメントに共有結合され得る。従って、例えば、上記可変領域ドメインに存在するVHドメインは、免疫グロブリンCH1ドメインもしくはそのフラグメントに連結され得る。同様に、VLドメインは、CKドメインもしくはそのフラグメントに連結され得る。このように、例えば、上記抗体は、Fabフラグメントであり得、ここで上記抗原結合ドメインは、それらのC末端において、それぞれ、CH1ドメインおよびCKドメインに共有結合的に連結される、会合したVHドメインおよびVLドメインを含む。上記CH1ドメインは、さらなるアミノ酸で伸長されて、Fabフラグメントにおいて見いだされるようにヒンジ領域もしくはヒンジ領域の一部を提供し得るか、またはさらなるドメイン例えば、抗体CH2ドメインおよびCH3ドメインを提供し得る。本明細書で記載されるように、結合剤は、これらCDRのうちの少なくとも1個を含み得る。例えば、1個以上のCDRは、公知の抗体フレームワーク領域IgGl、IgG2などへと組み込まれ得るか、または適切なビヒクルに結合体化されて、それらの半減期を増強し得る。適切なビヒクルとしては、Fc、ポリエチレングリコールPEG、アルブミン、トランスフェリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。これらおよび他の適切なビヒクルは、当該分野で公知である。このような結合体化されたCDRペプチドは、モノマー、ダイマー、テトラマー、もしくは他の形態にあり得る。一実施形態において、1種以上の水溶性ポリマーが、結合剤の1個以上の特定の位置において、例えば、アミノ末端において結合される。特定の実施形態において、結合剤は、1種以上の水溶性ポリマー結合物attachmentを含み、これらとしては、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、もしくはポリプロピレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、米国特許第4,640,835号、同第4,496,689号、同第4,301,144号、同第4,670,417号、同第4,791,192号および同第4,179,337号を参照のこと。特定の実施形態において、誘導体の結合剤は、モノメトキシ-ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、もしくは他の炭水化物ベースのポリマー、ポリ-N-ビニルピロリドン-ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド/エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール例えば、グリセロールおよびポリビニルアルコール、ならびにこのようなポリマーの混合物のうちの1種以上を含む。特定の実施形態において、1種以上の水溶性ポリマーは、1個以上の側鎖に無作為に結合される。特定の実施形態において、PEGは、結合剤例えば、抗体の治療能力を改善するために作用し得る。特定のこのような方法は、例えば、米国特許第6,133,426号これは、あらゆる目的のために本明細書に参考として援用されるにおいて考察されている。本発明に従う抗体は、本明細書で記載され、そして当該分野で公知であるとおりの従来の免疫化および細胞融合手順によって得られ得る。本発明のモノクローナル抗体は、種々の公知の技術を使用して、生成され得る。一般に、特定の抗原に結合するモノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって得られ得る例えば、Kohlerら、Nature256:495,1975;Coliganら、eds.,CurrentProtocolsinImmunology,1:2.5.12.6.7JohnWileySons1991;米国再発行特許第RE32,011号、米国特許第4,902,614号、同第4,543,439号、および同第4,411,993号;MonoclonalAntibodies,Hybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses,PlenumPress,Kennett,McKearn,andBechtoleds.1980;ならびにAntibodies:ALaboratoryManual,HarlowandLaneeds.,ColdSpringHarborLaboratoryPress1988;Picksleyら、ProductionofmonoclonalantibodiesagainstproteinsexpressedinE.coli,inDNACloning2:ExpressionSystems,2ndEdition,Gloverらeds.,page93OxfordUniversityPress1995を参照のこと。抗体フラグメントは、任意の適切な標準的技術例えば、タンパク質分解的消化を使用して、もしくは必要に応じて、タンパク質分解的消化例えば、パパインもしくはペプシンを使用して、続いて、ジスルフィド結合の穏和な還元およびアルキル化によって、上記モノクローナル抗体から得られ得る。あるいは、このようなフラグメントはまた、本明細書で記載される組換え遺伝子操作技術によって生成され得る。モノクローナル抗体は、動物例えば、ラット、ハムスター、ウサギ、もしくは、好ましくは、マウス、好ましくは、ActRIIA欠損性マウスに、配列番号1のヒトActRIIA、もしくはそのフラグメントを含む免疫原を、当該分野で公知でありかつ本明細書で記載される方法に従って注射することによって、得られ得る。ActRIIA欠損性マウスすなわち、Acvr2-/-ノックアウトマウスは、実質的に低下した生存能および他の欠損を有するので、十分に健康かつ適切に繁殖されたマウスを得るためには、注意が必要である。特異的抗体生成の存在は、血清サンプルを得、ヒトActRIIAもしくはペプチドに結合する抗体の存在を、当該分野で公知でありかつ本明細書に記載されるいくつかの免疫検出法のうちのいずれか1つを使用して検出することによって、最初の注射後および/もしくはブースター注射の後に、モニターされ得る。所望の抗体を生成する動物から、リンパ系細胞最も一般には、脾臓もしくはリンパ節に由来する細胞は、Bリンパ球を得るために取り出される。次いで、上記Bリンパ球は、薬物感作した骨髄腫細胞融合パートナー好ましくは、免疫化した動物と同系でありかつ必要に応じて、他の所望の特性例えば、内因性Ig遺伝子生成物を発現できない能力を有するもの例えば、P3X63-Ag8.653ATCCNo.CRL1580;NSO、SP20と融合されて、ハイブリドーマこれは、不死の真核生物細胞株であるを生成する。上記リンパ系例えば、脾臓細胞および上記骨髄腫細胞は、数分間にわたって膜融合促進剤例えば、ポリエチレングリコールもしくは非イオン性洗剤と合わせられ得、次いで、低密度において、ハイブリドーマ細胞の増殖を支持するが、非融合骨髄腫細胞は支持しない選択培地上にプレートされ得る。好ましい選択培地は、HATヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジンである。十分な時間通常は、約1~2週間の後に、細胞のコロニーが観察される。単一のコロニーが単離され、上記細胞によって生成される抗体は、ヒトActRIIAに対する結合活性について、当該分野で公知でありかつ本明細書に記載される種々のイムノアッセイのうちのいずれか1つを使用して試験され得る。上記ハイブリドーマはクローニングされ例えば、限界希釈クローニングによって、もしくは軟寒天プラーク単離によって、ActRIIAに特異的な抗体を生成する陽性クローンが選択されかつ培養される。上記ハイブリドーマ培養物に由来するモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養物の上清から単離され得る。マウスモノクローナル抗体を生成するための代替法は、同系マウス例えば、上記モノクローナル抗体を含む腹水の形成を促進するように処置された例えば、プリスタンで初回刺激されたprimedマウスの腹腔へと上記ハイブリドーマ細胞を注射することである。モノクローナル抗体は単離され得、種々の十分に確立された技術によって精製され得る。このような単離技術としては、プロテイン-ASepharoseでのアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる例えば、Coliganatpages2.7.1~2.7.12andpages2.9.1-2.9.3;Bainesら、PurificationofImmunoglobulinGIgG,inMethodsinMolecularBiology,Vol.10,pages79-104TheHumanaPress,Inc.1992を参照のこと。モノクローナル抗体は、適切なリガンドその選択は、上記抗体の特定の特性例えば、重鎖もしくは軽鎖のアイソタイプ、結合特異性などに基づくを使用して、アフィニティークロマトグラフィーによって精製され得る。固体支持体に固定化された適切なリガンドの例としては、プロテインA、プロテインG、抗定常領域軽鎖もしくは重鎖抗体、抗イディオタイプ抗体、およびActRIIaタンパク質、またはこれらのフラグメントもしくは改変体が挙げられる。本発明の結合剤が、上記結合剤が結合特異性を保持するという条件で少なくとも1個のアミノ酸置換を有し得ることは、当業者によって理解される。従って、上記結合剤の構造への改変は、本発明の範囲内に包含される。これらは、アミノ酸置換を含み得、上記アミノ酸置換は、保存的であってもよいし、非保存的であってもよく、結合剤のActRIIA結合能を破壊しない。保存的アミノ酸置換は、天然に存在しないアミノ酸残基これらは、代表的には、生物学的システムにおける合成よりむしろ、化学ペプチド合成によって組み込まれるを包含し得る。これらは、アミノ酸部分のペプチド摸倣物および他の逆転した形態reversedformまたは反転した形態invertedformを含む。保存的アミノ酸置換はまた、その位置でのアミノ酸残基の極性もしくは電荷に対してほとんどもしくは全く影響がないように、標準の残基での天然のアミノ酸残基の置換を包含し得る。保存的置換は、好ましい置換の見出しの下で、表1に示される。このような置換が、生物学的活性における変化を生じれば、より実質的な変化表1中の例示的置換、もしくはアミノ酸クラスに言及して以下でさらに記載されるように称されるが導入され得、その生成物がスクリーニングされ得る。上記抗体の生物学的特性における実質的改変は、a上記置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造例えば、シートもしくはヘリックスコンホメーションとして、b標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、またはc側鎖のかさ高さ、を維持することに対してそれらの効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、一般的な側鎖特性に基づいて、以下の群に分けられる:1疎水性:Met、Ala、Val、Leu、Ile、ノルロイシン;2中性かつ親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;3酸性:Asp、Glu;4塩基性:His、Lys、Arg;5鎖の配向に影響を及ぼす残基:Gly、Pro;および6芳香族:Trp、Tyr、Phe。非保存的置換は、アミノ酸もしくはアミノ酸摸倣物のあるクラスのメンバーを、異なる物理的特性例えば、サイズ、極性、疎水性、電荷を有する別のクラスのメンバーと交換することを包含し得る。このような置換された残基は、非ヒト抗体と相同なヒト抗体の領域へ、もしくは上記分子の非相同性領域へと導入され得る。さらに、当業者は、各所望のアミノ酸残基において単一のアミノ酸置換を含む試験改変体を生成し得る。次いで、上記改変体は、本明細書で記載されるとおりの活性アッセイを使用してスクリーニングされ得る。このような改変体は、適切な改変体についての情報を集めるために使用され得る。例えば、特定のアミノ酸残基への変更が、破壊された活性、望ましくなく低下された活性、もしくは不適切な活性を生じたことが発見されれば、このような変更を有する改変体は、回避され得る。言い換えれば、このような慣用的実験から集めた情報に基づいて、当業者は、単独で、もしくは他の変異と組み合わせてのいずれかで、さらなる置換を回避すべきアミノ酸を容易に決定し得る。当業者は、周知の技術を使用して、本明細書で示されるポリペプチドの適切な改変体を決定し得る。特定の実施形態において、当業者は、活性にとって重要であるとは考えられない領域を標的とすることによって、活性を破壊することなく変化させられ得る上記分子の適切な領域areaを同定し得る。特定の実施形態において、類似のポリペプチドの中で保存されている、上記分子の残基および部分が同定され得る。特定の実施形態においては、生物学的活性にとって、もしくは構造にとって重要であり得る領域すら、上記生物学的活性を破壊することなく、もしくは上記ポリペプチド構造に有害に影響を及ぼすことなく、保存的アミノ酸置換に供され得る。さらに、当業者は、活性もしくは構造にとって重要である類似のポリペプチド中の残基を同定する構造-機能研究を検討し得る。このような比較に鑑みて、類似のタンパク質における活性もしくは構造にとって重要なアミノ酸残基に対応する、タンパク質中のアミノ酸残基の重要性が、予測され得る。当業者は、このような予測される重要なアミノ酸残基のための化学的に類似のアミノ酸置換を決定し得る。本開示は、ヒトActRIIAの細胞外ドメインECDと複合体化したモノクローナルAb-14E1Fabフラグメントのx線結晶解析の結果を包含する。実施例において詳述されるように、分析は、Ab-14E1VH配列番号12において17アミノ酸残基、およびAb-14E1VL配列番号13において16残基を同定した。これら残基は、ヒトActRIIAECDにおけるアミノ酸と接触しているので、特異性決定残基SDRと考えられ得るPadlanら、FASEBJ9:133-1391995。これらSDRの大部分は、上記CDR内に集中している。2個以上のSDRは、CDRに直ぐ隣接して位置し、第1は、CDR-H1の次に、かつ上記第1の保存的されたシステインC1からの4残基に優先的に位置したグリシン。配列番号12においてC1から3残基もしくは5残基に位置したグリシンを含む改変体が企画される。上記第2のこのようなSDRは、CDR-L2の次に、かつC1から26残基に優先的に位置したチロシンであり、配列番号13におけるC1から24残基、25残基、27残基、もしくは28残基に位置したチロシンを有する改変体が企画される。最後に、2種のさらなるサテライトSDRは、CDRの十分外側に位置し、第1は、配列番号12におけるC1から-20残基に優先的に位置するバリンであり、第2は、配列番号13における第2の保存されたシステインC2から-21残基に優先的に位置するセリンである。改変体は、配列番号12におけるC1から-18残基、-19残基、-21残基、もしくは-22残基に位置するバリンを含むか、または配列番号13におけるC2から-19残基、-20残基、-22残基、もしくは-23残基に位置するセリンを含むと想定される。上記33個のSDR位置において、および上記CDR内の非SDR位置において存在するとしても、保存的変異のみが許容されることは、予測される。改変体、特に、配列番号4、5、6、7、8、および9の対応する一部に対して少なくとも80、85、90、95、もしくは99の同一性を有するものが企図される。上記SDRおよびCDRの外側にあるフレームワーク領域では、非保存的変異が許容されることが予測され、改変体は、配列番号12および配列番号13の対応する一部に対して少なくとも75、80、85、90、95、もしくは99の同一性を有すると企図される。多くの科学刊行物が、二次構造の予測に捧げられてきた。MoultJ.,Curr.Op.inBiotech.,74:422-4271996,Chouら、Biochemistry,132:222-2451974;Chouら、Biochemistry,1132:211-2221974;Chouら、Adv.Enzymol.Relat.AreasMoI.Biol.,47:45-1481978;Chouら、Ann.Rev.Biochem.,47:251-276およびChouら、Biophys.J.,26:367-3841979を参照のこと。さらに、コンピュータープログラムは、二次構造の予測を補助するために現在利用可能である。二次構造を予測する一方法は、相同性モデル化に基づく。例えば、30より大きい配列同一性、もしくは40より大きい配列類似性を有する2種のポリペプチドもしくはタンパク質は、しばしば、類似の構造トポロジーを有する。上記タンパク質構造データベースPDBの最近の発展は、ポリペプチドもしくはタンパク質の構造内の潜在的折りたたみ回数を含む、二次構造の増強された予測可能性を提供した。Holmら、Nucl.Acid.Res.,27l:244~2471999を参照のこと。所定のポリペプチドもしくはタンパク質において、折りたたみ回数が制限されていること、およびいったん構造の限界の個数criticalnumberが解明されると、構造予測は、劇的により正確になることは、示唆されるBrennerら、Curr.Op.Struct.Biol.,73:369~3761997。二次構造を予測するさらなる方法としては、スレッディングthreadingJones,D.,Curr.Opin.Struct.Biol.,73:377~871997;Sipplら、Structure,41:15~191996、プロフィール分析Bowieら、Science,253:164~1701991;Gribskovら、Meth.Enzym.,183:146~1591990;Gribskovら、Proc.Nat.Acad.Sci.,8413:4355~43581987、および進化的連関evolutionarylinkageHolm,前出1999、およびBrenner,前出1997を参照のことが挙げられる。いくつかのタンパク質例えば、抗体が、宿主細胞からの発現および分泌の間に、種々の翻訳後修飾を受け得ることは、当業者によって理解される。これら修飾のタイプおよび程度は、しばしば、上記タンパク質を発現するために使用される宿主細胞株、および培養条件に依存する。このような修飾としては、グリコシル化、メチオニンもしくはトリプトファンの酸化、ジケトピペラジン形成、アスパラギン酸異性化およびアスパラギン脱アミドにおける変動が挙げられ得る。頻繁な修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用に起因するHarris,RJ.JournalofChromatography705:129~134、1995に記載されるように、カルボキシ末端塩基性残基例えば、リジンもしくはアルギニンの喪失である。上記タンパク質がいったん発現されかつプロセシングされたら、それらタンパク質は、成熟形態にある。従って、本発明は、本発明のDNAの発現から生じる成熟抗体を包含することは理解される。特定の実施形態において、結合剤の改変体としては、グリコシル化改変体が挙げられ、ここでグリコシル化部位の数および/もしくはタイプは、親ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して、変化されている。特定の実施形態において、改変体は、上記天然タンパク質より多くのもしくはより少ない数のN結合型グリコシル化部位を含む。N結合型グリコシル化部位は、配列:Asn-X-SerもしくはAsn-X-Thrによって特徴付けられ、ここでXとして示される上記アミノ酸残基は、プロリンを除く任意のアミノ酸残基であり得る。この配列を作るためのアミノ酸残基の置換は、N結合型炭水化物鎖の付加のための潜在的な新たな部位を提供する。あるいは、この配列を除去する置換は、既存のN結合型炭水化物鎖を除去する。N結合型炭水化物鎖の再配列rearrangementもまた提供され、ここで1個以上のN結合型グリコシル化部位代表的には、天然に存在するものは除去され、1個以上の新たなN結合型部位が作られる。さらなる好ましい抗体改変体としては、1個以上のシステイン残基が、上記親アミノ酸配列と比較して、欠失されるかもしくは別のアミノ酸例えば、セリンで置換されているシステイン改変体が挙げられる。システイン改変体は、抗体が生物学的に活性なコンホメーションへと例えば、不溶性封入体の単離の後に再折りたたみされなければならない場合に有用であり得る。システイン改変体は、一般に、上記天然タンパク質より少ないシステイン残基を有し、代表的には、不対システインから生じる相互作用を最小限にするために偶数を有し得る。アミノ酸置換保存的であろうと非保存的であろうとは、このような置換が所望される場合に、当業者によって決定され得る。特定の実施形態において、アミノ酸置換は、ActRIIAに対する抗体の重要な残基を同定するために、または本明細書に記載されるActRIIAに対する抗体の親和性を増大もしくは低下させるために、使用され得る。特定の実施形態によれば、好ましいアミノ酸置換は、以下のものである:1タンパク質分解への感受性を低下させる、2酸化への感受性を低下させる、3タンパク質複合体を形成させるために結合親和性を変化させる、4結合親和性を変化させる、そして/または4このようなポリペプチドに対して他の物理化学的特性もしくは機能的特性を付与するかもしくは改変する。特定の実施形態によれば、単一もしくは複数のアミノ酸置換特定の実施形態において、保存的アミノ酸置換は、天然に存在する配列において作製され得る特定の実施形態において、上記ドメインの外側にあるポリペプチドの一部において、分子間接触を形成する。特定の実施形態において、保存的アミノ酸置換は、代表的には、上記親配列の構造的特徴を実質的に変更しなくてもよい例えば、置換アミノ酸は、上記親配列に存在するヘリックスを壊す傾向にも、上記親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を破壊する傾向にもないはずである。当該分野で認識されているポリペプチド二次構造および三次構造の例は、Proteins,StructuresandMolecularPrinciplesCreighton,Ed.,W.H.FreemanandCompany,NewYork1984;IntroductiontoProteinStructureC.BrandenandJ.Tooze,eds.,GarlandPublishing,NewYork,N.Y.1991;およびThorntonら、Nature354:1051991これらは、各々本明細書に参考として援用されるに記載されている。特定の実施形態において、本発明の結合剤は、ポリマー、脂質もしくは他の部分と化学的に結合され得る。上記結合剤は、生体適合性のフレームワーク構造に組み込まれる、本明細書に記載されるCDRのうちの少なくとも1個を含み得る。一例において、上記生体適合性フレームワーク構造は、コンホメーション的に安定な構造支持体、もしくはフレームワーク、もしくは足場を形成するために十分なポリペプチドもしくはその一部を含む。これは、局在化した表面領域における抗原に結合する1つ以上のアミノ酸配列例えば、CDR、可変領域などを提示し得る。このような構造は、天然に存在するポリペプチドもしくはポリペプチド折りたたみ構造モチーフであり得るか、または1種以上の改変例えば、天然に存在するポリペプチドもしくは折りたたみに対するアミノ酸の付加、欠失もしくは置換を有し得る。これら足場は、任意の種例えば、ヒト、他の哺乳動物、他の脊椎動物、無脊椎動物、植物、細菌、もしくはウイルスのもしくは1より多くの種のポリペプチドに由来し得る。代表的には、上記生体適合性のフレームワーク構造は、免疫グロブリンドメイン以外のタンパク質足場もしくは骨格に基づく。例えば、フィブロネクチン、アンキリン、リポカリン、ネオカルチノスタチンneocarzinostain、シトクロームb、CPlジンクフィンガー、PSTl、コイルドコイル、LACl-Dl、Zドメインおよびテンダミスタットtendramisatドメインに基づくものが、使用され得る例えば、NygrenandUhlen,1997,CurrentOpinioninStructuralBiology,7,463~469を参照のこと。好ましい実施形態において、本発明の結合剤が、ヒト化抗体これは、当業者に公知の技術を使用して生成され得るを含むことは、理解されるZhang,W.,ら、MolecularImmunology.4212:1445~1451、2005;HwangW.ら、Methods.36l:35~42、2005;Dall’AcquaWF,ら、Methods36l:43~60、2005;およびClark,M.,ImmunologyToday.218:397~402、2000。本発明の抗体はまた、ヒトモノクローナル抗体であり得る。ヒトモノクローナル抗体は、当業者が精通している多くの技術によって生成され得る。このような方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:ヒト末梢血細胞例えば、Bリンパ球を含むのエプスタインバーウイルスEBV形質転換、ヒトB細胞のインビトロ免疫化、挿入されたヒト免疫グロブリン遺伝子を有する免疫化したトランスジェニックマウスに由来する脾細胞の融合、ヒト免疫グロブリンV領域ファージライブラリーからの単離、もしくは当該分野で公知のかつ本明細書中の開示に基づく他の手順。例えば、ヒトモノクローナル抗体は、抗原チャレンジに応じて、特異的ヒト抗体を生成するように操作されたトランスジェニックマウスから得られ得る。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、例えば、Greenら、NatureGenet.7:13,1994;Lonbergら、Nature368:856,1994;Taylorら、Int.Immun.6:579,1994;米国特許第5,877,397号;Bruggemannら、1997Curr.Opin.Biotechnol.8:455~58;Jakobovitsら、1995Ann.N.YAcad.Sci.764:525~35によって記載されている。この技術において、上記ヒト重鎖および軽鎖遺伝子座のエレメントは、上記内因性重鎖および軽鎖の遺伝子座の標的化した破壊を含む胚性幹細胞株から得られたマウス系統に導入されるBruggemannら、Curr.Opin.Biotechnol.8:455~581997もまた参照のこと。例えば、ヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、ミニ遺伝子構築物、もしくは酵母人工染色体上のトランス遺伝子座translociであり得、これらは、B細胞特異的DNA再配列およびマウスリンパ組織における超変異を受ける。ヒトモノクローナル抗体は、上記トランスジェニックマウスを免疫化することによって得られ得る。次いで、上記マウスは、ActRIIAに特異的なヒト抗体を生成し得る。上記免疫化トランスジェニックマウスのリンパ系細胞は、本明細書に記載される方法に従って、ヒト抗体分泌ハイブリドーマを生成するために使用され得る。ヒト抗体を含むポリクローナル血清はまた、上記免疫化動物の血液から得られ得る。本発明のヒト抗体を生成するための別の方法は、EBV形質転換によってヒト末梢血細胞を不死化する工程を包含する。例えば、米国特許第4,464,456号を参照のこと。このような、ActRIIAに特異的に結合するモノクローナル抗体を生成する不死化B細胞株もしくはリンパ芽球様細胞株は、本明細書に提供される免疫検出法例えば、ELISAによって同定され得、次いで、標準的なクローニング技術によって単離され得る。抗ActRIIA抗体を生成する上記リンパ芽球様細胞株の安定性は、上記形質転換された細胞株と、マウス骨髄腫とを融合して、当該分野で公知の方法に従って、マウス-ヒトハイブリッド細胞株を生成することによって改善され得る例えば、Glaskyら、Hybridoma8:377~891989を参照のこと。ヒトモノクローナル抗体を生成するためのなお別の方法は、インビトロ免疫化であり、これは、ヒトActRIIAでヒト脾臓B細胞を初回刺激し、続いて、初回刺激したB細胞とヘテロハイブリッド融合パートナーとを融合する工程を包含する。例えば、Boernerら、1991,J.Immunol.147:86~95を参照のこと。特定の実施形態において、抗ヒトActRIIA抗体を生成しているB細胞が選択され、上記軽鎖および重鎖の可変領域が、当該分野で公知でありWO92/02551;米国特許第5,627,052号;Babcookら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-481996かつ本明細書で記載される分子生物学技術に従って上記B細胞からクローニングされる。免疫化した動物に由来するB細胞は、脾臓、リンパ節、もしくは末梢血サンプルから、ActRIIAに特異的に結合する抗体を生成している細胞を選択することによって単離され得る。B細胞はまた、ヒトから、例えば、末梢血サンプルから単離され得る。所望の特異性を有する抗体を生成している単一のB細胞を検出するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、プラーク形成、蛍光標識細胞分取、インビトロ刺激、続いて、特異的抗体の検出などによる。特異的抗体生成B細胞の選択法は、例えば、ヒトActRIIAを含む軟寒天中でB細胞の単一細胞懸濁物を調製する工程を包含する。上記抗原への、B細胞によって生成された上記特異的抗体の結合は、複合体の形成を生じ、これは、免疫沈降物として目に見え得る。上記所望の抗体を生成するB細胞が選択された後、上記特異的抗体の遺伝子は、当該分野で公知かつ本明細書に記載される方法に従って、DNAもしくはmRNAを単離および増幅することによってクローニングされ得る。さらに、当業者は、適切な結合剤が、本明細書で具体的に開示されるように、これら抗体の一部例えば、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3のうちの1個以上を含むことを認識する。CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3の領域のうちの少なくとも1個は、上記結合剤が、上記置換されていないCDRの結合特異性を保持するという条件で、少なくとも1個のアミノ酸置換を有し得る。CDRは、長さも増大もしくは減少するように変化させられ得るので、置換、挿入および欠失として特徴付けられる変化は、全て企図される。上記結合剤の非CDR部分は、非タンパク質分子であり得、ここで上記結合剤は、ActRIIAへの本明細書で開示される抗体の結合を交叉ブロックし、そして/またはActRIIAを中和する。上記結合剤の上記非CDR部分は、アミノ酸から構成され得、ここで上記結合剤は、組換え結合タンパク質もしくは合成ペプチドであり、上記組換え結合タンパク質は、ActRIIAへの本明細書で開示される抗体の結合を交叉ブロックし、そして/またはActRIIAを中和する。上記結合剤の上記非CDR部分は、アミノ酸から構成され得、ここで上記結合剤は、組換え結合タンパク質であり、上記組換え結合タンパク質は、上記ヒトActRIIAペプチドエピトープ競合結合アッセイ本明細書以降に記載されるにおいて、ヒトActRIIAペプチドへの、抗体Ab-14E1によって示されるものと類似する結合パターンを示し、そして/またはActRIIAを中和する。一実施形態において、ライブラリースクリーンにおいて上記抗体重鎖をベイトbaitとして使用し得ることが企図され、ここで上記ライブラリーは、上記再構成された抗体がActRIIAに結合する補完ヒト軽鎖を同定するために、ヒト抗体軽鎖から構成される。この実施形態において、上記重鎖は、ActRIIAに特異的な抗体に由来し、マウス、キメラ、もしくはヒト化されている。抗体が、上記のように、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3のうちの1個以上を含む場合、上記抗体は、これら配列をコードするDNAを含む宿主細胞からの発現によって得られ得る。各CDR配列をコードするDNAは、上記CDRのアミノ酸配列に基づいて決定され得、適切な場合、オリゴヌクレオチド合成技術、部位指向性変異誘発およびポリメラーゼ連鎖反応PCR技術を使用して、任意の所望の抗体可変領域フレームワークおよび定常領域のDNA配列と一緒に合成され得る。可変領域フレームワークおよび定常領域をコードするDNAは、遺伝子配列データベース例えば、GenBank.RTM.から当業者に広く利用可能である。いったん合成されると、本発明の抗体もしくはそのフラグメントをコードするDNAは、核酸切り出し、連結、形質転換、および多くの公知な発現ベクターを使用するトランスフェクションに関する周知の技術のうちのいずれかに従って、増殖および発現させられ得る。従って、特定の実施形態において、抗体フラグメントの発現は、原核生物宿主例えば、Escherichiacoli例えば、Pluckthunら、1989MethodsEnzymol.178:497~515を参照のことにおいて好ましいものであり得る。特定の他の実施形態において、上記抗体もしくはそのフラグメントの発現は、真核生物宿主細胞酵母例えば、Saccharomycescerevisiae、Schizosaccharomycespombe、およびPichiapastoris、動物細胞哺乳動物細胞を含むもしくは植物細胞が挙げられるにおいて好ましいものであり得る。適切な動物細胞の例としては、骨髄腫例えば、マウスNSO株、COS、CHO、もしくはハイブリドーマ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。植物細胞の例としては、タバコ、トウモロコシ、大豆、およびイネの細胞が挙げられる。抗体可変領域および/もしくは定常領域をコードするDNAを含む1種以上の複製可能な発現ベクターが調製され得、適切な細胞株例えば、非生成骨髄腫細胞株例えば、マウスNSO株もしくは細菌例えば、E.coliを形質転換するために使用され得、ここで上記抗体の生成が起こる。効率的な転写および翻訳を得るために、各ベクター中のDNA配列は、適切な調節配列特に、上記可変ドメイン配列に作動可能に連結されたプロモーターおよびリーダー配列を含むはずである。このようにして抗体を生成するための特定の方法は、一般に、周知でありかつ慣用的に使用される。例えば、基本的な分子生物学手順は、ManiatisらMolecularCloning,ALaboratoryManual,2nded.,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork,1989;Maniatisら、3rded.,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork,2001もまた参照のことによって記載されている。DNA配列決定は、SangerらPNAS74:5463,1977およびAmershamInternationalpicsequencinghandbookにおいて記載されるとおりに行われ得、部位指向性変異誘発は、当該分野で公知の方法に従って行われ得るKramerら、NucleicAcidsRes.12:9441,1984;KunkelProc.Natl.Acad.Sci.USA82:488~921985;Kunkelら、MethodsinEnzymol.154:367~821987;AnglianBiotechnologyLtdhandbook。さらに、多くの刊行物が、DNAの操作、発現ベクターの作製、および適切な細胞の形質転換および培養による、抗体の生成に適切な技術を記載しているMountainAandAdair,JRinBiotechnologyandGeneticEngineeringReviewsed.Tombs,MP,10,Chapter1,1992,Intercept,Andover,UK;CurrentProtocolsinMolecularBiology,1999,F.M.Ausubeled.,WileyInterscience,NewYork。上記のCDRのうちの1個以上を含む本発明に従う抗体の親和性を改善することが所望される場合、改善された抗体は、多くのアフィニティー成熟プロトコル上記CDRを維持することYangら、J.MoI.Biol.,254,392~403,1995、鎖シャッフリングchainshufflingMarksら、Bio/Technology,10,779~783,1992、E.coliの変異株の使用Lowら、J.MoI.Biol.,250,350~368,1996、DNAシャッフリングDNAshufflingPattenら、Curr.Opin.Biotechnol.,8,724~733,1997、ファージディスプレイThompsonら、J.MoI.Biol.,256,7~88,1996およびセクシャルPCRsexualPCRCrameri,ら、Nature,391,288~291,1998が挙げられるによって、得られ得る。アフィニティー成熟のこれら方法の全ては、VaughanらNatureBiotechnology,16,535~539、1998によって考察されている。本発明の抗体を得るためのさらなる方法は、ファージディスプレイによる。例えば、Winterら、1994Annu.Rev.Immunol.12:433~55;Burtonら、1994Adv.Immunol.57:191~280を参照のこと。ヒトもしくはマウスの免疫グロブリン可変領域遺伝子のコンビナトリアルライブラリーは、ファージベクターにおいて作製され得、上記ライブラリーは、ActRIIAまたはこれらの改変体もしくはフラグメントに特異的に結合するIgフラグメントFab、Fv、sFv、もしくはこれらのマルチマーを選択するためにスクリーニングされ得る。例えば、米国特許第5,223,409号;Huseら、1989Science246:1275~81;Sastryら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:5728~321989;Alting-Meesら、StrategiesinMolecularBiology3:1-91990;Kangら、1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:4363-66;Hoogenboomら、1992J.Molec.Biol.227:381-388;Schlebuschら、1997Hybridoma16:47-52およびそこで引用される参考文献を参照のこと。例えば、Ig可変領域フラグメントをコードする複数のポリヌクレオチド配列を含むライブラリーは、糸状バクテリオファージ例えば、M13もしくはその改変体のゲノムの中に、ファージコートタンパク質をコードする配列とインフレームで挿入され得る。融合タンパク質は、上記コートタンパク質と上記軽鎖可変領域ドメインおよび/もしくは上記重鎖重鎖可変領域ドメインとの融合物であり得る。特定の実施形態によれば、免疫グロブリンFabフラグメントはまた、ファージ粒子上でディスプレイされ得る例えば、米国特許第5,698,426号を参照のこと。重鎖および軽鎖の免疫グロブリンcDNA発現ライブラリーはまた、λファージにおいて、例えば、λImmunoZapTMHおよびλImmunoZapTMLベクターStratagene,LaJolla,Calif.を使用して、調製され得る。簡潔には、mRNAは、B細胞集団から単離され、重鎖および軽鎖の免疫グロブリンcDNA発現ライブラリーを、λImmunoZapHおよびλImmunoZapLベクターにおいて作るために使用される。これらベクターは、個々にスクリーニングされ得るか、またはFabフラグメントもしくは抗体を形成するように、共発現され得るHuseら、前出を参照のこと;Sastryら、前出もまた参照のこと。陽性プラークを、その後非溶解性プラスミドに変換し得、E.coliからモノクローナル抗体フラグメントの高レベル発現を可能にし得る。ハイブリドーマにおける一実施形態において、目的のモノクローナル抗体を発現する遺伝子の可変領域は、ヌクレオチドプライマーを使用して増幅される。これらプライマーは、当業者によって合成され得るか、または商業的に利用可能な供給元から購入され得る例えば、とりわけ、VHa、VHb、VHc、VHd、CHI、VLおよびCL領域のためのプライマーを含む、マウスおよびヒト可変領域のプライマーを販売するStratageneLaJolla,Calif.を参照のこと。これらプライマーは、重鎖もしくは軽鎖の可変領域を増幅するために使用され得、これらは、次いで、ベクター例えば、それぞれ、ImmunoZAPTMHもしくはImmunoZAPTMStratageneの中に挿入され得る。これらベクターは、次いで、発現のために、E.coli、酵母、もしくは哺乳動物ベースのシステムの中に導入され得る。上記VHおよびVLドメインの融合物を含む大量の単鎖タンパク質は、これら方法を使用して生成され得るBirdら、Science242:423-426,1988を参照のこと。本発明に従う抗体を生成する細胞が、上記の免疫化および他の技術のうちのいずれかを使用していったん得られたら、上記特異的抗体の遺伝子は、本明細書に記載されるとおりの標準的手順に従って、そこからDNAもしくはmRNAを単離および増幅することによってクローニングされ得る。そこから生成される抗体は、配列決定され得、かつ上記CDRを同定し得、上記CDRをコードするDNAは、他の本発明に従う抗体を生成するために以前に記載されるように操作され得る。好ましくは、上記結合剤は、ActRIIAに特異的に結合する。全ての結合剤および結合アッセイのように、当業者は、結合剤が、治療上有効でかつ適切であるために、検出可能に結合しないはずである種々の部分が、網羅的でありかつ列挙するのは実行可能でないことを認識する。従って、本明細書で開示される結合剤に関して、用語特異的に結合するとは、結合剤が、非関連コントロールタンパク質に結合するより大きな親和性でActRIIA好ましくは、ヒトActRIIAに結合する能力に言及する。好ましくは、上記コントロールタンパク質は、鶏卵の卵白リゾチームである。好ましくは、上記結合剤は、ActRIIAに、コントロールタンパク質の親和性より少なくとも50倍、100倍、250倍、500倍、1000倍、もしくは10,000倍大きい親和性で結合する。結合剤は、1×10-7M以下、1×10-8M以下、1×l0-9M以下、1×10-10M以下、1×10-11M以下、もしくは1×10-12M以下というヒトActRIIAに対する結合親和性を有し得る。親和性は、アフィニティーELISAアッセイによって決定され得る。特定の実施形態において、親和性は、BIACORETMアッセイによって決定され得る。特定の実施形態において、親和性は、動的方法によって決定され得る。特定の実施形態において、親和性は、平衡/溶液法によって決定され得る。このような方法は、本明細書でさらに詳細に記載されるかもしくは当該分野で公知である。結合剤例えば、抗体もしくは結合パートナーの親和性、ならびに結合剤例えば、抗体が結合を阻害する程度は、従来技術を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴SPR;BIACORETM,Biosensor,Piscataway,N.J.によって、またはScatchardらによって記載される方法Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660~6721949に従って、当業者によって決定され得る。表面プラズモン共鳴に関しては、標的分子は、固相に固定化され、フローセルにそって流れる移動相中でリガンドに曝される。上記固定化された標的へのリガンド結合が起こる場合、局所的な屈折率が変化し、SPR角度における変化がもたらされ、このことは、反射光の強度における変化を検出することによって、リアルタイムでモニターされ得る。上記SPRシグナルの変化の速度は、上記結合反応の会合相および解離相の見かけの速度定数を得るために分析され得る。これら値の比は、見かけ上の平衡定数親和性を与える例えば、Wolffら、CancerRes.53:2560~651993を参照のこと。オリゴペプチドもしくはポリペプチドは、それが、実施例に示されるCDR配列番号4、5、6、7、8、および9のうちの少なくとも1個に対して;ならびに/またはActRIIAへのAb-14E1の結合を交叉ブロックしかつ/もしくはAb-14E1によるActRIIAへの結合から交叉ブロックされるActRIIA結合剤のCDRに対して;ならびに/またはActRIIA結合剤が細胞ベースのアッセイにおいてActRIIAの効果をブロックし得る上記ActRIIA結合剤すなわち、ActRIIA中和結合剤のCDRに対して、少なくとも75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98もしくは99同一なアミノ酸配列を有する場合、本発明の範囲内にある。本発明の範囲内にあるActRIIA結合剤ポリペプチドおよび抗体の例は、Ab-14E1の可変領域配列番号12および配列番号13に対して少なくとも85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98もしくは99同一でありかつActRIIAへのAb-14E1の結合を交叉ブロックし、そして/またはAb-14E1によるActRIIAへの結合から交叉ブロックされ;そして/または細胞ベースのアッセイにおいてActRIIAの阻害効果をブロックし得るすなわち、ActRIIA中和結合剤;そして/または以下の実施例に記載される接触残基のうちの1個以上に結合するアミノ酸配列を有するものである。本発明の範囲内にあるActRIIA結合剤をコードするポリヌクレオチドの例は、Ab-14E1の可変領域をコードするポリヌクレオチド配列番号15および16に対して少なくとも85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98もしくは99同一であるポリヌクレオチド配列を有するものであり、ここで上記コードされるActRIIA結合剤は、ActRIIAへのAb-14E1の結合を交叉ブロックし、そして/またはAb-14E1によるActRIIAへの結合から交叉ブロックされ;そして/または細胞ベースのアッセイにおいてActRIIAの阻害効果をブロックし得るすなわち、ActRIIA中和結合剤;または以下の実施例に記載される接触残基のうちの1個以上に結合する。本発明のActRIIA結合剤は、好ましくは、本明細書で記載される細胞ベースのアッセイおよび/もしくは本明細書で記載されるインビボアッセイにおいて、ActRIIA機能を調節し、そして/または以下の実施例に記載されるActRIIAの接触残基のうちの1個以上に結合し、そして/または本願に記載される抗体Ab-14E1の結合を交叉ブロックし、そして/または本願において記載される抗体Ab-14E1によるActRIIAの結合から交叉ブロックされる。よって、このような結合剤は、本明細書で記載されるアッセイを使用して同定され得る。特定の実施形態において、結合剤は、実施例に記載されるActRIIAの接触残基のうちの1個以上に結合し、そして/または本明細書で記載される細胞ベースのおよび/もしくはインビボアッセイにおいて中和し、そして/または本願において記載される抗体Ab-14E1を交叉ブロックし、そして/または本願において記載される抗体Ab-14E1によるActRIIAの結合から交叉ブロックされる抗体を最初に同定することによって、作製される。これら抗体に由来するCDR領域は、次いで、適切な生体適合性フレームワークの中に挿入して、ActRIIA結合剤を生成するために使用される。上記結合剤の非CDR部分は、アミノ酸から構成されてもよいし、非タンパク質分子であってもよい。本明細書に記載されるアッセイは、結合剤の特徴づけを可能にする。好ましくは、本発明の結合剤は、本明細書で定義される抗体である。本発明に従う抗体を生成するための本明細書で記載される方法新たなフレームワークおよび/もしくは定常領域への上記特異的Ab-14E1CDRの操作を含むにおいて、適切なアッセイが、所望の抗体もしくは結合剤を選択するために利用可能であるすなわち、ActRIIAへの結合親和性を決定するためのアッセイ;交叉ブロッキングアッセイ例えば、以下の実施例4に記載されるBIACORETMベースのヒトActRIIAペプチドエピトープ競合結合アッセイ;A204細胞ベースのアッセイ;インビボアッセイ。用語交叉ブロックする、交叉ブロックされる、および交叉ブロッキングとは、抗体もしくは他の結合剤が、ActRIIAへの他の抗体もしくは結合剤の結合に干渉する能力を意味するために本明細書において交換可能に使用される。抗体もしくは他の結合剤が、ActRIIAへの別のものの結合に干渉し得る程度、従って、上記抗体もしくは他の結合剤が、本発明に従って交叉ブロックするといわれるか否かは、競合結合アッセイを使用して決定され得る。1つの特に適した定量的アッセイは、表面プラズモン共鳴技術を使用して相互作用の程度を測定し得るBIACORETM機器を使用する。実施例4は、BIACORETMベースの交叉ブロッキングアッセイを行うための方法を提供する。別の適切な定量的交叉ブロッキングアッセイは、ActRIIAへのそれらの結合に関して、抗体もしくは他の結合剤の間での競合を測定するために、ELISAベースのアプローチを使用する。以下は、一般に、抗体もしくは他の結合剤が、本発明に従って交叉ブロックするかもしくは交叉ブロックし得るかを決定するために適切なBIACORETMアッセイを記載する。便宜上、2種の抗体に対して言及されるが、上記アッセイが、本明細書で記載されるActRIIA結合剤のうちのいずれかとともに使用され得ることは、認識される。上記BIACORETM機器例えば、BIACORETM3000は、製造業者の推奨に従って操作される。従って、1つの交叉ブロッキングアッセイにおいて、ActRIIA-mFc融合タンパク質は、予め結合された抗mFcIgGによってCM5BIACORETMチップ上で捕捉されて、ActRIIA被覆表面を生成する。代表的には、ActRIIA-mFcダイマーの200~800の共鳴ユニットが、上記チップに結合される容易に測定可能な結合のレベルを与えるが、使用される試験試薬の濃度によって容易に飽和可能である量。互いに交叉ブロックする能力についてアッセイされるべき上記2種の抗体AおよびBと示されるは、上記試験混合物を作るために適した緩衝液中で結合部位の1:1モル比において混合される。結合部位ベースで濃度を計算する場合、抗体の分子量は、上記抗体の総分子量を、その抗体上のActRIIA結合部位の数で除算したものであると仮定される。試験混合物中の各抗体の濃度は、上記BIACORETMチップ上で捕捉されたActRIIA-mFc分子に対するその抗体の結合部位を容易に飽和させるために十分高くなければならない。上記混合物中の抗体は、結合ベースで同じモル濃度において存在し、その濃度は、代表的には、結合部位ベースで1.00~1.5マイクロモル濃度の間である。抗体Aのみ、および抗体Bのみを含む別個の溶液もまた、調製される。これら溶液中の抗体Aおよび抗体Bは、上記試験混合物と、同じ緩衝液中および同じ濃度で存在しなければならない。上記試験混合物は、上記ActRIIA-mFc被覆BIACORETMチップ上を通過させ、結合の総量が記録される。上記チップは、次いで、上記チップ結合ActRIIA-mFcに損傷を与えずに結合した抗体を除去するような方法において処理される。代表的には、これは、30mMHClで60秒間上記チップを処理することによって行われる。次いで、抗体A単独の溶液を、上記ActRIIA-mFc被覆表面の上に通過させ、結合量を記録する。上記チップを再び処理して、上記チップに結合したActRIIA-mFcに損傷を与えることなく、上記結合した抗体の全てを除去する。次いで、抗体B単独の溶液を、上記ActRIIA-mFc被覆表面の上に通過させ、結合量を記録する。抗体Aおよび抗体Bの混合物の最大の理論的結合を、次に計算する。これは、上記ActRIIA表面の上に単独で通過させた場合には、各抗体の結合の合計である。上記混合物の実際に記録された結合が、この理論的最大値より低い場合、上記2種の抗体は、互いに交叉ブロックしている。従って、一般に、本発明に従う交叉ブロッキング抗体もしくは他の結合剤は、上記アッセイの間に、および本発明の第2の抗体もしくは他の結合剤の存在下で、上記記録された結合が、組み合わせにおける上記2種の抗体もしくは結合剤の上記理論的最大結合のうちの80~0.1の間例えば、80~4、具体的には、上記理論的最大結合のうちの75~0.1の間例えば、75~4、およびより具体的には、上記理論的最大結合のうちの70~0.1の間例えば、70~4直前で定義されるとおりであるように、上記BIACORETM交叉ブロッキングアッセイにおいてActRIIAへ結合するものである。上記BIACORETMアッセイは、抗体もしくは他の結合剤が、本発明に従って互いに交叉ブロックするか否かを決定するために使用されるアッセイである。稀な場合には、特定の抗体もしくは他の結合剤は、抗mFcIgGを介してCM5BIACORETMチップへと結合されたActRIIA-mFcに結合しなくてもよいこれは、ActRIIA上の関連する結合部位が、mFcへのActRIIA連結によってマスクされるかもしくは破壊される場合に起こり得る。このような場合、交叉ブロッキングは、ActRIIAのタグ付きバージョン例えば、C末端Hisタグ付きActRIIAを使用して決定され得る。この特定の形式において、抗His抗体は、上記BIACORETMチップに結合され、次いで、上記Hisタグ付きActRIIAは、上記チップの表面の上に通過させられ、抗His抗体によって捕捉される。上記交叉ブロッキング分析は、本質的に、各チップ再生サイクル後に、新たなHisタグ付きActRIIAが、抗His抗体で被覆された表面に戻って負荷されることを除いて、上記に記載されるとおりに行われる。さらに、当該分野で公知である、種々の他のタグおよびタグ結合タンパク質の組み合わせが、このような交叉ブロッキング分析のために使用され得る例えば、HAタグと抗HA抗体;FLAGタグと抗FLAG抗体;ビオチンタグとストレプトアビジン。以下は、一般に、抗ActRIIA抗体もしくは他のActRIIA結合剤が、本発明に従って交叉ブロックするかもしくは交叉ブロックし得るかを決定するためのELISAアッセイを記載する。便宜上、2種の抗体が言及されるが、上記アッセイが、本明細書に記載されるActRIIA結合剤のうちのいずれかとともに使用され得ることは、理解される。上記アッセイの一般原理は、抗ActRIIA抗体が、ELISAプレートのウェルに被覆されることである。過剰量の第2の、潜在的に交叉ブロックする抗ActRIIA抗体は、溶液中に添加されるすなわち、上記ELISAプレートに結合されない。次いで、制限された量のActRIIAもしくは代わりにActRIIA-mFcが、上記ウェルに添加される。上記被覆された抗体および上記溶液中の抗体は、上記制限された数のActRIIAもしくはActRIIA-mFc分子の結合について競合する。上記プレートは、上記被覆された抗体によって結合されなかったActRIIAを除去するため、また、上記第2の溶液相の抗体および上記第2の溶液相の抗体とActRIIAとの間で形成されたいかなる複合体をも除去するために洗浄される。次いで、結合したActRIIAの量は、適切なActRIIA検出試薬を使用して測定される。上記被覆された抗体を交叉ブロックし得る溶液中の抗体は、ActRIIA分子の数の低下を引き起こし得る。というのは、上記被覆された抗体は、上記被覆された抗体が上記第2の溶液相の抗体の非存在下で結合し得るActRIIA分子の数に比例して結合し得るからである。このアッセイは、Ab-14E1および理論的抗体Ab-XXのためにより詳細に本明細書で記載される。Ab-14E1が、上記固定化抗体であるように選択される場合において、Ab-14E1を、上記ELISAプレートのウェルに被覆し、その後、上記プレートを、適切なブロッキング溶液でブロックして、その後に添加される試薬の非特異的結合を最小限にする。次いで、過剰量のAb-XXを、上記ELISAプレートに添加し、Ab-XXActRIIA結合部位/ウェルのモルが、上記ELISAプレートの被覆の間に、1ウェルあたりに使用されたAb-14E1ActRIIA結合部位のモルより少なくとも10倍高いようにされる。次いで、ActRIIAを添加し、1ウェルあたりに添加されるActRIIAのモルが、各ウェルを被覆するために使用したAb-14E1ActRIIA結合部位のモルの多くとも25/1になるようにされる。適切なインキュベーション期間の後、上記ELISAプレートを洗浄し、ActRIIA検出試薬を添加して、上記被覆された抗ActRIIA抗体この場合は、Ab-14E1によって特異的に結合されたActRIIAの量を測定する。上記アッセイについてのバックグラウンドシグナルは、上記被覆された抗体この場合は、Ab-14E1、溶液相の抗体この場合は、Ab-XX、ActRIIA緩衝液のみすなわち、ActRIIAなしおよびActRIIA検出試薬とともにウェル中で得られたシグナルとして定義される。上記アッセイについての陽性コントロールシグナルは、上記被覆された抗体この場合は、Ab-14E1、溶液相の抗体緩衝液のみすなわち、溶液相の抗体なし、ActRIIAおよびActRIIA検出試薬とともにウェル中で得られたシグナルとして定義される。上記ELISAアッセイは、上記バックグラウンドシグナルの少なくとも3倍の上記陽性コントロールシグナルを有するような様式において行われる必要がある。方法論的アーティファクトについてのコントロールとして、上記交叉ブロッキングアッセイは、直前で記載される形式において行われ得るか、また、逆にされ得るAb-XXが上記被覆された抗体として、およびAb-14E1が上記溶液相の抗体として。A204横紋筋肉腫細胞でのレポーター遺伝子アッセイを、所定の抗ActRIIA抗体が、組換えActRIIAリガンド例えば、アクチビンAおよびアクチビンBによって内因性のActRIIAの活性化を中和し得るか否かを決定するために使用し得る。抗体の非存在下で、これらActRIIAリガンドは、A204細胞におけるActRIIAシグナル伝達を用量依存的に刺激し得る。上記アッセイを始めるために、A204細胞ATCCHTB-82を、48ウェルプレート中で、105細胞/ウェルにおいて分配する。翌日、細胞を、一次レポータープラスミドpGL3CAGA12Dennlerら、1998,EMBO17:3091-3100およびRenillaレポータープラスミドpRLCMVこれは、トランスフェクション効率を照合するために使用されるでトランスフェクトする。上記CAGA12モチーフは、TGF-β応答性遺伝子に存在するので、このベクターは、Smad2およびSmad3を介してシグナル伝達する因子に一般に有用である。10μgpGL3CAGA12、1μgpRLCMV、30μlFugene6RocheDiagnostics、および970μlOptiMEMInvitrogenを含む溶液を、30分間にわたって予備インキュベートし、次いで、McCoyの増殖培地に添加し、これを、室温において一晩のインキュベーションにわたって上記プレートした細胞500μl/ウェルに適用する。3日目に、培地を除去し、細胞を、6時間にわたって37°Cにおいて、0.1BSAを含むリン酸緩衝化食塩水で希釈した試験物質とともに、インキュベート250μl/ウェルする。すすいだ後、細胞を、受動溶解緩衝液PromegaE1941で溶解し、-70°Cにおいて一晩貯蔵する。4日目に、プレートを、室温へと穏やかに撹拌しながら加温する。細胞溶解物を、二連において、化学発光プレート96ウェルに移し、Dual-LuciferaseReporterAssayシステムPromegaE1980の試薬でルミノメーターにおいて分析して、正規化したルシフェラーゼ活性を決定する。本明細書で開示される抗体は、上記タンパク質のインビボ活性にとって重要であるヒトActRIIAの領域に結合し、それによって、ActRIIAの活性を阻害する。ActRIIAへの抗体の結合は、ActRIIA媒介性シグナル伝達と関連したバイオマーカー例えば、循環FSH濃度、体重、またはアクチビン依存性腫瘍形成を有する動物においては、悪液質のマーカーの変化と相関させることができる。ActRIIAシグナル伝達に依存する薬物動態パラメーターは、ActRIIAを中和しかつ治療上の利益を提供し得るActRIIA結合剤を同定するために、それら結合剤のインビボ試験のためのエンドポイントとして測定され得る.このようなパラメーターとしては、実施例に示されるように、卵巣切除したOVX雌性における血清FSH濃度、除脂肪体重および脂肪含有量が挙げられる。ActRIIA中和結合剤は、ビヒクル処置動物と比較して、このような薬物動態パラメーターにおいて統計的に有意な変化を引き起こし得るものとして定義される。このようなインビボ試験は、任意の適切な哺乳動物例えば、マウス、ラット、サルにおいて行われ得る。3.スクリーニングアッセイおよび他の生化学的使用特定の局面において、本発明は、ActRIIAのアゴニストもしくはアンタゴニストである化合物薬剤を同定するための、本発明のActRIIA結合剤の使用に関する。このスクリーニングを介して同定される化合物は、これらがActRIIA媒介性シグナル伝達をインビボもしくはインビトロで調節する能力を評価するために試験され得る。これら化合物は、例えば、動物モデルにおいて試験され得る。種々のアッセイ形式が十分であり、本開示に鑑みて、本明細書に明示的に記載されないものも、それにも関わらず、当業者によって理解される。本明細書に記載されるように、本発明の試験化合物薬剤は、任意のコンビナトリアル化学的方法によって作られ得る。あるいは、本発明の化合物は、インビボもしくはインビトロで合成される天然に存在する生体分子であり得る。組織増殖の調節因子として作用するそれらの能力について試験されるべき化合物薬剤は、例えば、細菌、酵母、植物もしくは他の生物によって生成され得る例えば、天然生成物か、化学的に生成され得る例えば、低分子ペプチド摸倣物が挙げられるか、または組換え生成され得る。本発明によって企図される試験化合物としては、非ペプチジル有機分子、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド摸倣物、糖、ホルモン、および核酸分子が挙げられる。具体的実施形態において、上記試験薬剤は、分子量約2,000ダルトン未満を有する有機低分子である。本発明の試験化合物は、単一の別個の実体として提供され得るか、またはより高い複雑性を有するライブラリー例えば、コンビナトリアルケミストリーによって作製されるの中で提供され得る。これらライブラリーは、例えば、アルコール、アルキルハライド、アミン、アミド、エステル、アルデヒド、エーテルおよび他のクラスの有機化合物を含み得る。試験システムへの試験化合物の提示は、単離された形態において、もしくは化合物の混合物としてのいずれかで、特に、初期スクリーニング工程において行われ得る。必要に応じて、上記化合物は、他の化合物で必要に応じて誘導体化され得、上記化合物の単離を促進する誘導体化する基derivatizinggroupを有し得る。誘導体化する基の非限定的な例としては、ビオチン、フルオレセイン、ジゴキシゲニン、緑色蛍光タンパク質、同位体、ポリヒスチジン、磁性ビーズ、グルタチオンSトランスフェラーゼGST、光活性化可能な架橋剤またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。化合物および天然抽出物のライブラリーを試験する多くの薬物スクリーニングプログラムにおいて、ハイスループットアッセイは、所定の期間において調査される化合物の数を最大にするために望ましい。無細胞系例えば、精製タンパク質もしくは半精製タンパク質で得られ得るものにおいて行われるアッセイは、しばしば、迅速な開発および試験化合物によって媒介される分子標的における変化の比較的容易な検出を可能にするために行われ得る点において一次スクリーニングとして好ましい。さらに、上記試験化合物の細胞毒性もしくはバイオアベイラビリティーの効果は、一般に、インビトロシステムにおいて無視され得、代わりに、上記アッセイは、上記分子標的に対する上記薬物の効果に主に焦点を当てる。なぜなら、それは、ActRIIA結合剤とActRIIAポリペプチドとの間の結合親和性の変化において明らかになり得るからである。単に例示するために、本発明の例示的スクリーニングアッセイにおいて、上記目的の化合物は、上記アッセイの目的に適切な場合、ActRIIAポリペプチドに通常結合し得る単離されかつ精製されたActRIIA結合剤と接触させられる。次いで、上記化合物およびActRIIA結合剤の混合物に、ActRIIAポリペプチドを含む組成物が添加される。ActRIIAポリペプチドとActRIIA結合剤との間の複合体の検出および定量は、上記ActRIIAポリペプチドとActRIIA結合剤との間の複合体形成を阻害するもしくは増強することにおいて、上記化合物の効力を決定するための手段を提供する。上記化合物の効力は、上記試験化合物の種々の濃度を使用して得られたデータから、用量応答曲線を作成することによって評価され得る。さらに、コントロールアッセイもまた、比較のためのベースラインを提供するために行われ得る。例えば、コントロールアッセイにおいて、単離されかつ精製されたActRIIA結合剤は、ActRIIAポリペプチドを含む組成物に添加され、ActRIIAポリペプチドとActRIIA結合剤との間の複合体の形成は、上記試験化合物の非存在下で定量される。一般に、上記反応物が混合され得る順序は、変動し得、同時に混合され得ることは、理解される。さらに、精製タンパク質の代わりに、細胞抽出物および溶解物が、適切な無細胞アッセイ系を与えるために使用され得る。ActRIIAポリペプチドとActRIIA結合剤との間の複合体形成は、種々の技術によって検出され得る。例えば、複合体の形成の調節は、例えば、検出可能に標識されたタンパク質例えば、放射性標識された例えば、32P、35S、14Cもしくは3Hか、蛍光標識された例えば、FITCか、または酵素標識されたActRIIAポリペプチドもしくはActRIIA結合剤を使用して、イムノアッセイによって、もしくはクロマトグラフィー検出によって、定量され得る。4.治療剤の処方および送達上記の結合剤例えば、抗体Ab-14E1もしくはそのヒト化バージョンのうちの1種とともに、薬学的にもしくは生理学的に受容可能なキャリア、賦形剤もしくは希釈剤を含む薬学的組成物が提供される。種々の処置レジメン例えば、皮下、経口、非経口、静脈内、鼻内、および筋肉内の投与および処方を含むにおいて、本明細書で記載される特定の組成物を使用するのに適切な投与および処置レジメンの開発は、当該分野で周知である。そのうちのいくつかは、一般的な例示目的で以下に簡潔に考察される。特定の適用において、本明細書で開示される薬学的組成物は、動物への経口投与を介して送達され得る。このようにして、これら組成物は不活性希釈剤とともに、もしくは同化できる食用のキャリアとともに、処方されてもよいし、それを硬質シェルもしくは軟質シェルのゼラチンカプセル剤の中に封入されてもよいし、錠剤へと圧縮されてもよいし、食事の食品と一緒に直接組み込まれてもよい。特定の状況において、本明細書で開示される薬学的組成物を皮下に、非経口的に、静脈内に、筋肉内に、もしくはさらに腹腔内に送達することは、望ましい。このようなアプローチは、当業者に周知であり、そのうちのいくつかは、例えば、米国特許第5,543,158号;米国特許第5,641,515号および米国特許第5,399,363号においてさらに記載されている。特定の実施形態において、遊離塩基もしくは薬理学的に受容可能な塩としての活性化合物の溶液は、水の中で界面活性剤例えば、ヒドロキシプロピルセルロースと適切に混合されて、調製され得る。分散物はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの混合物中で、ならびに油中で調製され得る。貯蔵および使用の通常の条件下では、これら調製物は、一般に、微生物の増殖を防止するように、保存剤を含む。注射可能医薬品の使用に適した例示的薬学的形態は、滅菌水性溶液もしくは分散物および滅菌注射用溶液もしくは分散物の即時の調製のための滅菌散剤を含む例えば、米国特許第5,466,468号を参照のこと。全ての場合において、上記形態は、無菌でなければならず、かつシリンジでの取り扱いsyringabilityが容易になる程度に流動性でなければならない。それは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、微生物例えば、細菌および真菌の汚染作用に対して保護されなければならない。上記キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど、これらの適切な混合物、および/もしくは植物性油を含む溶媒もしくは分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティング例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には必要とされる粒度の維持によって、および/もしくは界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物活動の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって促進され得る。多くの場合において、等張剤isotonicagent例えば、糖もしくは塩化ナトリウムを含むことは、好ましい。注射用組成物の長期間の吸収は、吸収を遅延させる薬剤例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中で使用することによってもたらされ得る。一実施形態において、水性溶液中での非経口投与のために、上記溶液は、必要であれば、適切に緩衝化されるべきであり、液体希釈剤は、十分な食塩水もしくはグルコースで最初に等張性にされるべきである。これら特定の水性溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内の投与に特に適している。この関連において、使用され得る滅菌水性媒体は、本開示に鑑みて、当業者に公知である。例えば、1投与量は、1mlの等張性NaCl溶液に溶解され得、1000mlの皮下注入流体に添加され得るか、または提唱される注入部位において注射され得るかのいずれかである例えば、Remington’sPharmaceuticalSciences,15thed.,pp.1035~1038および1570~1580を参照のこと。投与量におけるある程度の変動は、処置されている被験体の状態に依存して、必然的に生じる。さらに、ヒト投与のためには、調製物は、当然のことながら、好ましくは、FDAOfficeofBiologiesの基準によって要求されるとおりの滅菌性、発熱性、ならびに一般的な安全性および純度標準を満たす。本発明の別の実施形態において、本明細書で開示される組成物は、中性形態もしくは塩形態において処方され得る。例示的な薬学的に受容可能な塩としては、酸付加塩上記タンパク質の遊離アミノ基と形成されるが挙げられ、これは、無機酸例えば、塩酸もしくはリン酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などのような有機酸などと形成される。上記遊離カルボキシル基と形成される塩はまた、無機塩基例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、もしくは水酸化鉄III、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基から得られ得る。処方に際して、溶液は、投与処方物と適合性の様式において、および治療上有効であるような量において、投与される。上記キャリアは、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝液、キャリア溶液、懸濁物、コロイドなどをさらに含み得る。薬学的活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体もしくは薬剤が、上記活性成分と不適合性である場合を除いて、治療用組成物におけるその使用が企図される。補助的活性成分はまた、上記組成物に組み込まれ得る。語句薬学的に受容可能なとは、ヒトに投与された場合に、アレルギー反応もしくは類似の都合の悪い反応を生成しない分子実体および組成物に言及する。特定の実施形態において、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、脂質粒子、ビヒクルなどは、本発明の組成物を適切な宿主細胞/生物に導入するために使用される。特に、本発明の組成物は、脂質粒子、リポソーム、ビヒクル、ナノスフェア、もしくはナノ粒子などのいずれかに被包されて送達するために処方される。あるいは、本発明の組成物は、このようなキャリアビヒクルの表面に、共有結合もしくは非共有結合のいずれかで結合され得る。潜在的薬物キャリアとしてのリポソームおよびリポソーム様調製物の処方および使用は、一般に、当業者に公知である例えば、Lasic,TrendsBiotechnol.167:307-21,1998;Takakura,NipponRinsho563:691~95,1998;Chandranら、IndianJ.Exp.Biol.358:801~09,1997;Margalit,Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.122-3:233~61,1995;米国特許第5,567,434号;米国特許第5,552,157号;米国特許第5,565,213号;米国特許第5,738,868号および米国特許第5,795,587各々は、それらの全体において本明細書に具体的に援用されるを参照のこと。リポソームの使用は、全身送達後の自己免疫応答もしくは受容不能な毒性と関連しないようである。特定の実施形態において、リポソームは、水性媒体中に分散されるリン脂質から形成され、多層状の同心円2層ビヒクル多層ビヒクルMLVともいわれるを自発的に形成する。あるいは、他の実施形態において、本発明は、本発明の組成物の薬学的に受容可能なナノカプセル処方物を提供する。ナノカプセルは、一般に、安定かつ再現可能な方法で化合物を捕捉し得る例えば、Quintanar-Guerreroら、DrugDev.Ind.Pharm.2412:1113-28,1998を参照のこと。細胞内ポリマー過負荷に起因する副作用を回避するために、このような超微細粒子約0.1μmの大きさが、インビボで分解され得るポリマーを使用して設計され得る。このような粒子は、例えば、Couvreurら、Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.5l:l-20,1988;zurMuhlenら、Eur.J.Pharm.Biopharm.452:149-55,1998;Zambauxら、JControlledRelease50l-3:31-40,1998;および米国特許第5,145,684号によって記載されるとおりに作製され得る。さらに、本発明の薬学的組成物は、このような薬学的組成物の使用に関する説明書を提供するパッケージング材料とともに、容器内に配置され得る。一般に、このような説明書は、上記試薬濃度、ならびに特定の実施形態の範囲内において、上記薬学的組成物を再構成するために必要であり得る賦形剤成分もしくは希釈剤例えば、水、食塩水もしくはPBSの相対的な量を記載する明確な表現を含む。上記投与される用量は、0.01mg/kg体重~200mg/kg体重の範囲に及び得る。しかし、当業者に明らかなように、投与の量および頻度は、当然のことながら、処置されている適応症の性質および重篤度、所望の応答、患者の状態などのような要因に依存する。代表的には、上記組成物は、上記のように、種々の技術によって投与され得る。5.ActRIIA結合剤の治療的使用特定の実施形態において、本発明のActRIIA結合剤は、ActRIIAおよび/もしくはActRIIAリガンド例えば、アクチビンA、GDF8、もしくはGDF11の異常な活性と関連する疾患もしくは状態を処置もしくは予防するために使用され得る。これら疾患、障害もしくは状態は、一般に、本明細書においてActRIIA関連状態といわれる。特定の実施形態において、本発明は、必要な個体において、治療上有効な量の上記のActRIIA結合剤を上記個体に投与することを通して、疾患、障害もしくは状態を処置もしくは予防するための方法を提供する。これら方法は、動物、およびより具体的には、ヒトの治療的および予防的な処置を特に目標とする。本開示は、必要な個体における状態もしくは障害を、治療上有効な量のActRIIA結合剤例えば、ActRIIAに対して指向される中和抗体を上記個体に投与することによって処置するための方法および組成物を提供する。インヒビンαサブユニットが遺伝的に欠損しているマウスは、インヒビンAおよびインヒビンBを欠損しており、アクチビンAおよびアクチビンBを過剰発現する性腺腫瘍をもたらすMatzukら、1992,Nature360:313~319;Matzukら、1994,ProcNatlAcadSciUSA91:8817~8821。全てのこのようなマウスは、これら腫瘍を発症させ、最終的には、ActRIIAを介して作用する高レベルの腫瘍由来アクチビンによって媒介されるがん悪液質様の症候群で死ぬCoerverら、1996,MolEndocrinol10:534~543。本発明を限定することは意図しないが、ActRIIAに対して指向される中和抗体は、インヒビン欠損マウスについて本明細書で示されるように、アクチビン生成腫瘍の影響を処置し、アクチビン媒介性悪液質を緩和し、そして患者の生存を延長するために有用である実施例を参照のこと。ActRIIAおよびActRIIAリガンドの複合体は、組織増殖および初期発生プロセス例えば、種々の構造の正確な形成において、または1種以上の発生後の能力post-developmentalcapacities性的発生、下垂体ホルモン生成、ならびに骨および軟骨の生成が挙げられるにおいて、本質的な役割を果たす。従って、ActRIIA関連状態は、異常な組織増殖および発生の欠陥を含む。さらに、ActRIIA関連状態としては、細胞増殖および分化の障害例えば、炎症、アレルギー、自己免疫疾患、感染性疾患、および腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。例示的ActRIIA関連状態としては、神経筋障害例えば、筋ジストロフィーおよび筋萎縮、鬱血性閉塞性肺疾患もしくは肺気腫および関連する筋消耗、筋消耗症候群、筋肉減少症、悪液質、脂肪組織障害例えば、肥満症、2型糖尿病、および骨変性疾患例えば、骨粗鬆症が挙げられる。他の例示的ActRIIA関連状態としては、筋変性musculodegenerative障害および神経筋障害、組織修復例えば、創傷治癒、神経変性疾患例えば、筋萎縮性側索硬化症、免疫学的障害例えば、リンパ球の異常な増殖もしくは機能に関連した障害、ならびに肥満もしくは脂肪細胞の異常な増殖に関連した障害が挙げられる。特定の実施形態において、本発明のActRIIA結合剤は、筋ジストロフィーのための処置の一部として使用される。用語筋ジストロフィーとは、骨格筋ならびにときおり、心臓および呼吸筋が徐々に弱って、劣化することによって特徴付けられる変性性の筋疾患の群に言及する。筋ジストロフィーは、筋肉における微視的変化とともに始まる進行性の筋消耗および虚弱によって特徴付けられる遺伝的障害である。経時的に筋肉が変性するにつれて。上記個体の筋肉の強度は、衰える。本発明のActRIIA結合剤を含むレジメンで処置され得る例示的な筋ジストロフィーとしては、以下が挙げられる:デュシェンヌ型筋ジストロフィーDMD、ベッカー型筋ジストロフィーBMD、エメリードレフュス型筋ジストロフィーEDMD、肢帯型筋ジストロフィーLGMD、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーfacioscapulohumeralmusculardystrophyFSHもしくはFSHDLandouzy-Dejerine型としても公知、筋強直性筋ジストロフィーMMDシュタイネルト病としても公知、眼球咽頭型筋ジストロフィーOPMD、遠位型筋ジストロフィーDD、先天性筋ジストロフィーCMD、および肩甲上腕型筋ジストロフィーSMD。デュシェンヌ型筋ジストロフィーDMDは、フランス人神経学者GuillaumeBenjaminAmandDuchenneによって1860年代に最初に記載された。ベッカー型筋ジストロフィーBMDは、ドイツ人医師PeterEmilBeckerにならって命名され、彼は、DMDのこの異型を1950年代に最初に記載した。DMDは、男性において最も頻繁な遺伝性疾患のうちの1つであり、3,500名の男子のうち1名が罹患している。DMDは、ジストロフィン遺伝子X染色体の短腕に位置するが破壊されているときに生じる。男性は、1コピーのX染色体しか有しないので、彼らは、上記ジストロフィン遺伝子を1コピーしか有しない。ジストロフィンタンパク質がなければ、筋肉は、収縮および弛緩のサイクルの間に容易に損傷を受ける。上記疾患において初期の間には、筋肉が再生によって補償され、後には、筋前駆細胞は、進行している損傷に追いついていくことができず、健康な筋肉は、非機能的線維脂肪組織に置き換わる。BMDは、ジストロフィン遺伝子における異なる変異から生じる。BMD患者は、ある程度のジストロフィンを有するが、それは、量が不十分であるかまたは質が乏しいのいずれかである。ある程度のジストロフィンがあれば、BMDを有するものの筋肉を、DMDを有する人々のものと同程度に悪くもしくは素早く変性することから防御される。例えば、研究から、GDF8ActRIIAリガンドの機能をインビボでブロッキングもしくは除去すると、DMD患者およびBMD患者において少なくとも特定の症状を効果的に処置し得ることが実証されている。従って、本発明のActRIIA結合剤は、GDF8インヒビターアンタゴニストとして作用し得、DMDおよびBMDの患者において、GDF8および/もしくはActRIIAの機能をインビボでブロックする代替手段を構成し得る。他の実施形態において、ActRIIA結合剤はまた、ミオパチーに起因する筋萎縮を処置もしくは予防するために使用され得る。ミオパチーの例としては、炎症性ミオパチー、代謝性ミオパチー、およびミオトニーが挙げられる。本発明のActRIIA結合剤は、先天性ミオパチー例えば、筋細管ミオパチー、ネマリンミオパチー、およびミトコンドリアミオパチーを処置するにおいて適用を有する。本発明のActRIIA結合剤は、封入体筋炎、ミオグロビン尿症、横紋筋融解症、骨化性筋炎、多発性筋炎、もしくは皮膚筋炎を処置するために使用され得る。さらに、ActRIIA結合剤は、グルココルチコイド処置、筋肉減少症、長期床上安静、骨格固定skeletalimmobilization、敗血症、もしくは鬱血性心不全から生じる筋萎縮を処置もしくは予防し得る。本発明のActRIIA結合剤は、筋肉の成長を必要とする他の神経筋疾患もしくは状態において筋肉量を増大する有効な手段を提供する。例えば、筋萎縮性側索硬化症ALSルーゲーリック病もしくは運動ニューロン疾患としても公知は、運動ニューロン脳を骨格筋に接続するCNSの成分を攻撃する慢性の、不治のかつ制止できないCNS障害である。ALSにおいて、運動ニューロンは劣化し、最終的には死に至るが、個人の脳は、正常に、完全に機能して、機敏な状態のままであり、動かそうとする命令が、筋肉に達し得ない。ALSを発症する大部分の人々は、40~70歳の間である。最初に衰える運動ニューロンは、腕もしくは脚にいたるものである。ALSを有するものは、歩行困難を有し得、彼らは、ものを落とし、ころび、発話が不明瞭になり、制御できずに笑うもしくは泣くことがある。最終的に、四肢の筋肉は、不使用から萎縮し始める。この筋肉の虚弱は悪化していき、個人は、車いすが必要になるか、またはベッドを降りて活動できなくなる。大部分のALS患者は、呼吸不全からもしくは肺炎のように人工呼吸器による補助の合併症から死亡する疾患が始まって3~5年。ActRIIA結合剤が有用であり得る他の神経筋疾患としては、脊髄損傷もしくは脳卒中に起因する麻痺;外傷、または変性性、代謝性、もしくは炎症性のニューロパチーに起因する脱神経;成人運動ニューロン疾患;多病巣性の神経ブロックmultifocalconductorblockを伴う自己免疫運動ニューロパチー;ならびに乳児もしくは若年性脊髄性筋萎縮が挙げられる。ActRIIA結合剤によって誘導される増大した筋肉量はまた、筋消耗疾患に罹患しているものに利益を与え得る。Gonzalez-Cadavidら1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:14938~43は、GDF8発現がヒトにおける除脂肪体重と逆相関し、上記GDF8遺伝子の増大した発現が、AIDS消耗症候群を有する男性において、体重減少と関連することを報告した。AIDS患者におけるGDF8の機能を阻害することによって、AIDSの少なくとも特定の症状が、完全に除去されないとしても緩和され得、従って、AIDS患者におけるクオリティーオブライフを有意に改善し得る。最も消耗性であり、生命を脅かすがんの局面の中には、がん食欲不振-悪液質症候群がある。がん食欲不振-悪液質症候群における進行性の体重減少は、がんの多くのタイプのうちの一般的な特徴であり、乏しいクオリティーオブライフおよび化学療法に対する乏しい応答の原因であるのみならず、体重減少がない匹敵する腫瘍を有する患者において見いだされるより生存期間もより短い。食欲不振、脂肪および筋組織消耗、心的困難、および低いクオリティーオブライフと関連して、悪液質は、がんと宿主との間の複雑な相互作用から生じる。悪液質は、がん患者の中で最も一般的な死亡原因のうちの1つであり、死亡時に80に存在する。悪液質は、タンパク質、炭水化物、および脂肪の代謝に影響を及ぼす代謝的カオスの複雑な例である。腫瘍は、直接的および間接的両方の異常を生じ、食欲不振および体重減少を生じる。現在では、この過程を制御もしくは逆転するための処置は存在しない。がん食欲不振-悪液質症候群は、サイトカイン生成、脂質動員lipid-mobilizing因子およびタンパク質分解誘導因子の放出、ならびに中間代謝における変化に影響を及ぼす。食欲不振は一般的であるが、食品摂取の低下単独では、がん患者において認められる体組成における変化を説明できず、栄養摂取の増大は、消耗症候群を逆転することはできない。悪液質は、一般に、病前の体重の5より多くの意図しない体重減少が、6ヶ月以内に起これば、がんを有する患者において疑われる。成体マウスにおけるGDF8の全身の過剰発現は、ヒト悪液質症候群において認められるものに類似する顕著な筋肉および脂肪の減少を誘導することが見いだされたZimmersら、2002,Science296:1486~1488ので、薬学的組成物としての本発明のActRIIA結合剤は、上記悪液質症候群の症状ここで筋肉の成長が所望されるを予防、処置もしくは改善するために有益に使用され得る。これは、がんと関連した悪液質、および関節リウマチと関連した悪液質を含む。特定の実施形態において、本発明は、必要な個体におけるFSH分泌を、治療上有効な量のActRIIA結合剤例えば、ActRIIAに対して指向される中和抗体を上記個体に投与することによって、低下もしくは阻害するための方法を提供する。男性におけるFSHの正常値は、2~18mIU/ml血液の範囲に及ぶ。女性についての正常値は、5~25mIU/mLの範囲に及ぶ。健康な女性において50mIU/mLより高いレベルは、閉経と関連する。FSHの組織濃度は、唾液を試験することによって決定され得るeMHPTM。特定の実施形態において、本発明は、必要な個体において前立腺がんを、治療上有効な量のActRIIA結合剤例えば、ActRIIAに対する中和抗体を、FSH分泌を低下もしくは阻害するために上記個体に投与することによって、処置もしくは予防するための方法を提供する。これら方法は、ヒト特に、前立腺がんを発症するリスクが高い男性の治療的および予防的な処置のために使用され得る、あらゆる男性は、前立腺がんを発症させるリスクがあるので、前立腺がんを発症させるリスクが高い男性は、リスク因子が、一般的集団もしくは特定の年齢群内の男性の集団と比較して、上記疾患を発症させるより高い確率を与えるものである。例示的リスク因子としては、年齢、家族歴もしくは遺伝的構成、生活習慣lifestylehabit例えば、運動および食事、ならびに放射線もしくは他のがんを引き起こす因子への曝露が挙げられる。用語前立腺がんを処置するとは、処置されていないコントロールと比べて、または処置する前に疾患の重篤度と比べて、上記疾患の1つ以上の症状もしくは特徴の改善に言及する。上記用語は、上記処置を受けている患者が治癒すること、または上記疾患が上記患者から完全に根絶されることは必ずしも必要としない。前立腺がんを処置する薬剤が、上記疾患の1つ以上の症状の重篤度もしくは特徴を低下させる薬剤であり得る。腫瘍増殖および進行は、種々の要因細胞周期進行および細胞分裂のメディエーター、ならびに細胞死の調節因子、またはアポトーシスが挙げられるによって影響を受け得ることに注意すべきである。よって、前立腺がんを処置することは、がん細胞増殖における低下もしくは細胞分裂の速度における低下を包含し得る。代わりにもしくはさらに、前立腺がんを処置することは、がん細胞生存の低下もしくはアポトーシスの増大を包含し得る。よって、特定の実施形態において、前立腺がんを処置することは、細胞分裂の低下および細胞死の増大の両方を包含し得る。機構に拘わらず、前立腺がんを処置することにおける薬剤の有効性は、観察可能な測定基準例えば、コントロールと比較した、がん細胞の数の低下増殖の低下、アポトーシスの増大、もしくはその両方のいずれかに起因する、またはコントロールと比較した腫瘍サイズの低下によって決定され得る。従って、前立腺がんを処置すること、または腫瘍もしくばがん細胞の増殖を阻害することは、このような変化が起こる機構に関して中立であることが意図される。予防および処置の両方が、医師もしくは他のヘルスケア提供者によって提供される診断および上記治療剤の投与の意図された結果の分析において認識され得る。ヒトにおける前立腺がん進行に対する本発明のアンタゴニストの効果を観察する場合、効果は、測定可能な疾患の低下もしくは消失、および/または新たな病変の非存在もしくは転移の予防によって評価され得る。例えば、ActRIIA結合剤は、非侵襲性および侵襲性の前立腺がんの両方を有する患者において前立腺がん進行を有意に低下もしくは遅延させ得る。さらに、上記薬剤は、上記疾患のリスク因子を有する健康な男性において、前立腺がんを発症させるリスクを防止もしくは低下させ得る。これら薬剤はまた、上記疾患の病歴を有する患者における前立腺がん再発のリスクを低下させ得る。よって、ActRIIA結合剤は、上記疾患を発症させるリスクがあると考えられる個体において前立腺がんの開始を予防もしくは遅延させるために使用され得、そしてこのようなアンタゴニストは、選択された患者集団において使用され得る。適切な患者集団の例としては、前立腺がんの家族歴を有する患者例えば、父親もしくは兄弟が上記疾患を有すると診断された男性患者が挙げられる。一実施形態において、前立腺がんを発症させるリスクが高いと考えられるが、上記疾患を有すると診断されなかった患者は、ActRIIA結合剤で処置される。このような処置は、上記患者が、30歳、40歳、50歳、60歳、もしくは70歳に達したときに始まり得る。本明細書で開示されるActRIIA結合剤、および特に、抗ActRIIA抗体は、患者固形腫瘍を有する患者および転移性がんを有する患者が挙げられるにおける前立腺がんを処置もしくは予防するために使用され得る。ActRIIA結合剤はまた、前立腺の前癌病変もしくは良性病変、または任意の異常な増殖病変典型的な過形成、異型過形成、および非侵襲性癌腫もしくは上皮内がんinsitucarcinomaが挙げられるを有するヒト被験体に投与され得る。本開示のアンタゴニストはまた、ホルモン依存性もしくはホルモン応答性のがん、およびホルモン非依存性がん例えば、ホルモン無反応性前立腺がんの両方の処置もしくは予防において有用である。ActRIIA結合剤は、上昇した正常前立腺組織由来細胞に比較してレベルのアクチビン例えば、A、ABもしくはBまたは上昇したレベルのActRIIAを発現する腫瘍において特に有用であると判明し得る。特定の実施形態において、本発明は、FSH分泌下垂体腫瘍に罹患した個体におけるFSH分泌を、治療上有効な量のActRIIA結合剤例えば、抗ActRIIA抗体を上記個体に投与することによって、低下もしくは阻害するための方法を提供する。これら下垂体腫瘍におけるFSHの過剰分泌を阻害することは、腫瘍症状例えば、増大したエストロゲンレベルおよび卵巣嚢腫の発生を低下させるための処置として有用である。本発明の方法は、好ましくは、従来のがん治療例えば、外科手術と関連して使用されるが、FSH分泌の阻害単独が、特に、外科手術もしくは照射が禁忌である場合において、有効な処置であり得る。抗ActRIIA抗体はまた、卵巣過剰刺激症候群を有する患者を処置するために使用され得る。本発明は、従来のがん治療例えば、化学療法、放射線療法、光線療法、免疫療法および外科手術、特に、前立腺切除術の有効性が、本発明の結合剤の使用を介して増強され得ることを認識する。よって、ActRIIA結合剤は、前立腺がんの処置、予防、もしくは管理のための組み合わせ治療において使用され得る。上記結合剤は、放射線および/もしくは外科的処置と、ならびに細胞傷害性化学療法および/もしくは内分泌療法と組み合わせて、患者に投与され得る。このような組み合わせ処置は、相乗的に作用し得、上記個々の処置の各々の投与量の低下を可能にし得る。それによって、より高い投与量での各処置によって発揮される有害な副作用が低下する。他の場合において、処置に抗療性である悪性疾患は、2種以上の異なる処置の組み合わせ治療に応答し得る。よって、本開示は、別の従来の抗新生物薬剤と組み合わせて、同時にもしくは逐次的のいずれかで、上記抗新生物薬剤の治療効果を増強するか、またはこのような抗新生物薬剤への細胞耐性を克服するために、ActRIIA結合剤を投与することに関する。本開示はまた、ホルモン療法と組み合わせた、ActRIIA結合剤の投与に関する。ActRIIA結合剤はまた、FSH分泌下垂体腫瘍から生じる症状を低下させるために、組み合わせ治療において使用され得る。組み合わせ抗腫瘍療法のために使用され得る薬学的化合物としては、以下が挙げられるが、例示するに過ぎない:アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、bcg、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コルヒチン、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエネストロール、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、ゲニステイン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、イリノテカンironotecan、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトータン、ミトキサントロン、ニルタミド、ノコダゾール、オクトレオチド、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、スラミン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストステロン、チオグアニン、チオテパ、二塩化チタノセンtitanocenedichloride、トポテカン、トラスツズマブ、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビン。これら化学療法抗腫瘍化合物は、例えば、以下の群へのそれらの作用機構によって分類され得る:代謝拮抗物質/抗がん剤例えば、ピリミジンアナログ5-フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビンおよびプリンアナログ、葉酸アンタゴニストおよび関連インヒビターメルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび2-シクロデオキシアデノシンクラドリビン;抗増殖/抗有糸分裂剤ビンカアルカロイドビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン、微小管破壊因子microtubuledisruptor例えば、タキサンパクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンのような天然生成物、エピポドフィロトキシンepidipodophyllotoxinエトポシド、テニポシドが挙げられる、DNA損傷薬剤アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびエトポシドVP16;抗生物質例えば、ダクチノマイシンアクチノマイシンD、ダウノルビシン、ドキソルビシンアドリアマイシン、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシンミトラマイシンおよびマイトマイシン;酵素L-アスパラギンを体系的に代謝し、それら自身のアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を欠乏させるL-アスパラギナーゼ;抗血小板薬剤;抗増殖/抗有糸分裂アルキル化剤例えば、ナイトロジェンマスタードメクロレタミン、シクロホスファミドおよびアナログ、メルファラン、クロラムブシル、エチレンイミンおよびメチルメラミンヘキサメチルメラミンおよびチオテパ、アルキルスルホネート-ブスルファン、ニトロソウレアカルムスチンBCNUおよびアナログ、ストレプトゾシン、トラゼンtrazene-ダカルバジンDTIC;抗増殖/抗有糸分裂代謝拮抗物質例えば、葉酸アナログメトトレキサート;白金配位錯体シスプラチン、カルボプラチン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトータン、アミノグルテチミド;ホルモン、ホルモンアナログエストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミドおよびアロマターゼインヒビターレトロゾール、アナストロゾール;抗凝固剤ヘパリン、合成ヘパリン塩およびトロンビンの他のインヒビター;線維素溶解剤fibrinolyticagent例えば、組織プラスミノゲンアクチベーター、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼ、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ;抗遊走剤antimigratoryagent;抗分泌剤ブレフェルジンbreveldin;免疫抑制剤シクロスポリン、タクロリムスFK-506、シロリムスラパマイシン、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル;抗脈管形成化合物TNP-470、ゲニステインおよび増殖因子インヒビター血管内皮細胞増殖因子VEGFインヒビター、線維芽細胞増殖因子FGFインヒビター;アンギオテンシンレセプターブロッカー;酸化窒素ドナー;アンチセンスオリゴヌクレオチド;抗体トラスツズマブ;細胞周期インヒビターおよび分化誘導因子トレチノイン;mTORインヒビター、トポイソメラーゼインヒビタードキソルビシンアドリアマイシン、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、テニポシドeniposide、エピルビシン、エトポシド、イダルビシンおよびミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン、コルチコステロイドコルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロンmethylpednisolone、プレドニゾン、およびプレドニゾロン;増殖因子シグナル伝達キナーゼインヒビター;ミトコンドリア機能不全誘導因子およびカスパーゼ活性化因子;ならびにクロマチン破壊因子。特定の実施形態において、組み合わせ治療のために使用され得る薬学的化合物としては、以下が挙げられる:抗脈管形成薬剤例えば、1脈管形成分子例えば、VEGFもしくはbFGF塩基性線維芽細胞増殖因子の放出のインヒビター;2脈管形成分子の中和剤例えば、抗βbFGF抗体;および3脈管形成刺激に対する内皮細胞応答のインヒビターコラゲナーゼインヒビター、基底膜ターンオーバーインヒビター、抗血管新生ステロイド、真菌由来脈管形成インヒビター、血小板因子4、トロンボスポンジン、関節炎の薬物例えば、D-ペニシラミンおよびチオリンゴ酸金goldthiomalate、ビタミンD3アナログ、α-インターフェロンなどが挙げられる。脈管形成のさらに提唱されるインヒビターについては、Bloodら、Bioch.Biophys.Acta.,1032:89-1181990,Mosesら、Science,248:1408-14101990,Ingberら、Lab.Invest.,59:44-511988、ならびに米国特許第5,092,885号、同第5,112,946号、同第5,192,744号、同第5,202,352号および同第6573256号を参照のこと。さらに、脈管形成を阻害するために使用され得る広く種々の化合物がある例えば、VEGF媒介性脈管形成経路をブロックするペプチドもしくは薬剤、エンドスタチンタンパク質もしくは誘導体、アンジオスタチンのリジン結合フラグメント、メラニンもしくはメラニン促進化合物、プラスミノゲンフラグメント例えば、プラスミノゲンのKringles1~3、トロポニンtropoinサブユニット、ビトロネクチンαvβ3のアンタゴニスト、サポシンBに由来するペプチド、抗生物質もしくはアナログ例えば、テトラサイクリン、もしくはネオマイシン、ジエノゲスト含有組成物、ペプチドに結合したMetAP-2阻害コアを含む化合物、化合物EM-138、カルコンおよびそのアナログ、ならびにnaaladaseインヒビター。例えば、米国特許第6,395,718号、同第6,462,075号、同第6,465,431号、同第6,475,784号、同第6,482,802号、同第6,482,810号、同第6,500,431号、同第6,500,924号、同第6,518,298号、同第6,521,439号、同第6,525,019号、同第6,538,103号、同第6,544,758号、同第6,544,947号、同第6,548,477号、同第6,559,126号、および同第6,569,845号を参照のこと。上記組み合わせ治療の性質に依存して、本発明の治療用ActRIIA結合剤の投与は継続され得る一方で、他の治療が、施されているか、そして/またはその後施される。本明細書に記載の結合剤の投与は、単一用量において、もしくは複数用量において行われ得る。いくつかの場合において、上記結合剤の投与は、従来の治療の少なくとも数日前に始められる一方で、他の場合には、投与は、従来の治療の投与の直前もしくは投与時のいずれかに始められる。上記適用の一局面は、繁殖可能性において有用な方法および組成物を提供する。ActRIIA結合剤の投与を介するFSH分泌の低下もしくは阻害は、精子成熟を阻害するための有用な方法である。女性において、FSHの低下は、卵巣における卵胞顆粒膜細胞の増殖を制限するように作用する。ActRIIA結合剤の投与を介するFSH分泌の低下もしくは阻害は、有用な避妊方法である。低下したFSHはまた、卵巣内の卵胞の成熟を遅らせ得、それによって、女性における制限された数の卵胞の成熟を遅らせる。このような処置は、生活における自然受精および後の妊娠の可能性を増大する潜在能力を有する。FSH分泌を低下させることによって卵巣内の卵胞の成熟を遅らせることはまた、急激に分裂する細胞を処置するように設計された化学療法もしくは類似の処置の一般的な副作用である卵母細胞の枯渇を防止することにおいて有用である。本願はまた、1種以上の避妊薬と組み合わせて、1種以上のActRIIA結合剤を含む新規な組成物を提供する。例示的な避妊薬としては、エストロゲン、プロゲステロン、プロゲスチン例えば、ノルエチノドレル、ノルエチンドロン、ノルゲスチメートnorgestimate、ノルゲストレル、レボノルゲストレルlevonorgestrel、メドロキシプロゲステロンおよびデソゲストレルdesogestrel、オルメロキシフェンOrmeloxifeneセントクロマンCentchromanが挙げられる。特定の実施形態において、本発明は、必要な個体におけるエストロゲン関連障害を、上記個体に、治療上有効な量のActRIIA結合剤例えば、ActRIIAに対して指向される中和抗体を、FSH分泌を低下もしくは阻害するために投与することによって、処置もしくは予防するための方法を提供する。エストロゲン合成に対してFSHの機能を制御するので、FSH分泌の低下はまた、エストロゲン関連障害例えば、子宮筋腫、子宮内膜症、多嚢胞性卵巣疾患polycysticovariandisease、機能不全性子宮出血、および卵巣がんの処置において有効であり得る。例示本発明は、ここで一般的に記載されているが、以下の実施例を参照することによってより容易に理解される。実施例は、本発明の特定の実施形態を例示する目的で含められるに過ぎず、本発明を限定するとは解釈されない。実施例1.モノクローナル抗体の生成ActRIIAACVR2Aに対する抗体は、種間でのこのレセプターの高い配列保存に起因して、生成するのは困難であった。出願人は、マウスのA/J、BALB/c、およびSwissWebster系統を異なるActRIIAベースの免疫原での徹底的な免疫化プロトコルに供したが、これらの試みは全て失敗に終わり、抗体を生成できなかった。この難題を克服するために、出願人は、ヒトActRIIA抗原構築物を使用して、ActRIIA遺伝子のヌル変異を有するマウスを免疫化した。Acvr2a-/-マウスC57BL/6Acvr2atm1Zukは、低下した生存能を有し、20~30のマウスは、脳顔面頭蓋異常に起因して周産期に死亡してしまうMatzukら、1995,Nature374:356~360。ホモ接合性雄性は繁殖可能性がある一方で、ホモ接合性雌性は、繁殖可能性がない。重要なことには、Acvr2a-/-マウスは、それらが上記ヒトActRIIAレセプターに対するモノクローナル抗体の生成のために使用されることを可能にするように成体になるまで十分生存する。従って、8匹の雄性および8匹の雌性Acvr2a-/-マウスに、キーホールリンペットヘモシアニンKLHまたはオボアルブミンOVAのいずれかに結合体化させ、かつ完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、もしくはリン酸緩衝化食塩水の存在下で以下のヒトActRIIA-His配列を皮下に免疫化した25μg/マウス。免疫化の約10日後に血液を採取して、抗原としてActRIIA-Fcを使用する間接的ELISAによって、抗ActRIIA抗体の力価を決定した。そのスクリーニングに基づいて、1匹の免疫化したAcvr2a-/-マウスに、ActRIIA-His-KLH50μg/マウスの2回目の投与i.p.と抗CD40モノクローナル抗体10μg/マウス、CD40アゴニストとを与えて、B細胞活性化を促進した。3日後、脾臓を取り出し、B細胞を、SP2/0マウス骨髄腫細胞と標準的な方法によって融合して、ハイブリドーマを得た。見込みのあるハイブリドーマクローンを、全体的な結合特性ELISA、解離速度off-rateBIACORETMアッセイ、および中和能細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイについてのスクリーニングに基づいて同定した。2回のハイブリドーマサブクローニングの後、上記抗体候補14E1.H8.H1Ab-14E1を、配列決定、精製、およびさらなる特徴付けのために選択した。実施例2.Ab-14E1配列本発明に従って生成された抗体の構造を分析するために、抗ActRIIAモノクローナル抗体を生成しているハイブリドーマから重鎖および軽鎖の可変領域をコードする核酸をクローニングした。メッセンジャーRNAを、約4×106細胞/ハイブリドーマから、QIAshredderQiagenホモジナイゼーションシステムおよびRNeasyPlusMiniKitQiagenで調製した。AdvantageRTPCRKitClontechを使用して、第1鎖cDNAを合成し、次いで、これをAdvantage-HF2PCRKitClontechおよび縮重プライマーセットとの組み合わせにおいて使用してZhouら、1994,NuclAcidsRes22:888を参照のこと、PCR増幅を行った。PCR反応生成物を、アガロースゲルおよびQIAquickGelExtractionKitQiagenによって精製した。次いで、上記定常領域に相補的な3’PCRプライマーを使用する標準的方法によって、配列を決定した。上記Ab-14E1のVHおよびVLアミノ酸配列を、それぞれ、図1および図2に示し、対応するヌクレオチド配列を図3および図4に示す。4個のヌクレオチド置換が、縮重PCRプライマーによるクローニングの間に、VHのN末端付近に導入されたにもかかわらず、これらの置換は、活性な抗体を生じたことに留意すること。これらヌクレオチドを、最終配列において調節して配列番号14、3位、6位、7位、および12位;図3、上記ハイブリドーマに由来する精製タンパク質のN末端配列決定によって確認されるように、公知の免疫グロブリンフレームワーク配列に合わせた。また、サイレントヌクレオチド置換を、VHのC末端付近配列番号14、351位および357位;図3およびVLのC末端付近配列番号15;312位および315位;図4に導入して、クローニングのための制限部位を作ったことに留意すること。以下に列挙されるのは、Kabatら1987,SequencesofproteinsofImmunologicalInterest,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIH,USAおよびChothiaおよび共同研究者Al-Lazikaniら、1997,JMolBiol273:927-948に従って定義される、Ab-14E1のCDR配列である。ハイブリドーマ馴化培地からの抗体タンパク質の精製は、プロテインAクロマトグラフィー、透析、ウイルス濾過、および緩衝液交換によって達成した。精製されたVHタンパク質およびVLタンパク質のN末端は、N末端配列決定によって、それぞれ、DVQLQESSGPG配列番号10およびDIQMTQTTS配列番号11であると確認された。実施例3.Ab-14E1とActRIIAとの間の接触部位Ab-14E1における特異性決定残基SDRを同定するために、Ab-14E1とヒトActRIIAとの間の接触部位を、a14E1Fab単独およびbActRIIA細胞外ドメインECDと複合体化した14E1Fabのx線結晶解析によって位置を特定した。タンパク質生成。14E1Fabを、4mMEDTAおよび10mMシステインを含むリン酸緩衝化食塩水中、100:1w/wAb-14E1:パパインの比において、4時間にわたって37°CにおいてAb-14E1を活性化パパインで消化することによって結晶化のために調製した。上記消化したサンプルを2倍希釈し、pH9.5に調節し、HiTrapQSepharoseTMGEHealthcareでのクロマトグラフィーに供して、Fab成分フロースルーを分離した。次いで、これを、サイズ排除クロマトグラフィーでさらに精製した。精製14E1Fabを、5mMTrispH8.0、25mMNaCl、および2mMEDTAを含む溶液中、12mg/mlにおいて貯蔵した。ActRIIAECDを、エンテロキナーゼ切断部位を含むリンカーによって、Fcドメインに結合したヒトActRIIAECDからなる融合タンパク質からの結晶化のために調製した。ActRIIAECDを、この融合タンパク質をエンテロキナーゼで一晩37°Cにおいて消化し、上記Fc成分をMABSELECTTMGEHealthcareクロマトグラフィーで取り出すことによって得た。次いで、ActRIIAECDを、エンドグリコシダーゼHfNewEnglandBiolabsで脱グリコシル化し、サイズ排除クロマトグラフィーで精製し、カルボキシペプチダーゼBおよびカルボキシペプチダーゼYで消化しリン酸緩衝化食塩水中20:1ActRIIAECD:CPB/CPYの比、37°Cにおいて一晩インキュベート、そしてサイズ排除クロマトグラフィーで再び精製した。上記タンパク質複合体を生成するために、精製14E1Fabを、精製ActRIIAECDと比1:1.2で混合し、最後にサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。14E1FabとActRIIAECDとの精製した複合体を、10mMTrispH8.0および25mM塩化ナトリウムを含む溶液中、20.5mg/mlにおいて貯蔵した。結晶化方法。14E1Fabを、15~25においてポリエチレングリコール、塩例えば、チオシアン酸カリウム、硫酸ナトリウム、マロネート、もしくは酒石酸カリウムナトリウムを含む条件において、および5.5~8.5の範囲のpH値において結晶化した。データを、20ポリエチレングリコール3350、200mM硫酸ナトリウム、および100mMビス-トリスプロパン中、pH7.75において成長させた結晶から集めた。これら結晶を、3:1v/vの比率において結晶化緩衝液およびグリセロールからなる緩衝液の中に移し、液体窒素中で急速冷凍し、その後、x線システムに移した。14E1FabとActRIIAECDとの複合体を、7~15においてポリエチレングリコール、1~15mMにおいて塩化亜鉛を含む条件において、および5.5~7.5の間のpH値において結晶化させた。8ポリエチレングリコール8000、8mM塩化亜鉛、および100mMHEPES中、pH7.00において成長した結晶から、データを集めた。これら結晶を、25エチレングリコールを含む結晶化緩衝液中に移し、液体窒素中で急速冷凍し、その後、x線システムへと移した。結晶データ以下の結晶データを、14E1Fab、および14E1FabとActRIIAECDとの複合体について得た。構造精密化プロセス。14E1Fabの結晶構造を決定するために、出願人は、分子置換モデル化のためのモデルとしてPDB構造1FIGを使用し、予測通り、1種のFab分子からなる単一の溶液を得た。それぞれ、PDB構造2A6Dおよび1KENからの相同なVLおよびVHドメインを、対応する1FIGドメインに重ね合わせた。位置づけしたVLおよびVHドメインを置換して、新たな14E1Fabモデルを作成し、これを、矛盾するシーケンス領域の調節を介して精密化した。上記14E1Fabモデルを再構築し、これら調節したシーケンスでさらに精密化して、最終の統計値statistics上記表を参照のことによって評価されるように、優れたモデルを得た。14E1FabとActRIIAECDとの間の複合体の結晶構造を決定するために、出願人は、分子置換のためのモデルとしてActRIIAの14E1構造およびPDG2GOO構造を使用した。予測通り、1種のActRIIA分子および1種の14E1Fab分子からなる単一溶液を得た。上記14E1FabおよびActRIIAECDモデルを、次いで、再構築し、精密にして、最終統計値上記表を参照のことによって評価されるように、良好な品質のモデルを得た。構造結果。結晶解析から、14E1FabとActRIIAECDとの間の大きな接触表面が明らかになった。これは、ActRIIAの以前決定されたリガンド結合領域と大部分が重なるGreenwaldら、1999,NatStructBiol6:18-22;Grayら、2000,JBiolChem275:3206-3212;Allendorphら、2006,ProcNatlAcadSciUSA103:7643-7648。ActRIIAと接触する14E1FabVHにおける特定のアミノ酸残基は、ソフトウェア分析ActaCrystD50:760-763,1994によって決定される場合、図5に示され、以下の表にもまた、各VH残基が個々のActRIIA残基と作る原子接触の数とともに、列挙される。以下の表において、VHにおけるアミノ酸位置は、3個の代わりの参照点に関して定義される:aN末端アスパラギン酸残基;b0位として再定義される第1のシステイン残基C1,22位;もしくはc0位として再定義される第2のシステイン残基C2,96位。以下の表中のActRIIAECD残基の番号付けは、上記ActRIIAECD配列配列番号16内のVH接触ActRIIA残基の分布を示す図6と同じである。ActRIIAと接触する14E1FabVLにおける特定のアミノ酸残基は、図7に示され、以下の表において、個々のActRIIA残基と作る各VL残基との原子接触の数とともに列挙する。以下の表において、VLにおけるアミノ酸位置は、3個の代わりの参照点に関して定義される:aN末端アスパラギン酸残基;b0位として再定義される第1のシステイン残基C1,23位;もしくはc0位として再定義される第2のシステイン残基C2,88位。以下の表におけるActRIIAECD残基の番号付けは、上記ActRIIAECD配列配列番号16内でのVL接触ActRIIA残基の分布を示す図8と同じである。上記14E1-ActRIIA複合体をモデル化するために使用した上記ActRIIA構造PDB構造2GOOは、ヒト配列配列番号16と比較して、ECD20位にある保存的置換Lys→Argを有するマウス配列に基づく;しかし、いずれの残基の側鎖も乱れ、上記複合体の構造全体に認識可能な影響を及ぼさなかった。実施例4.Ab-14E1によるActRIIA結合および中和出願人は、表面プラズモン共鳴BIACORETMベースの分析を使用して、精製Ab-14E1によるヒトActRIIA結合の動態および親和性を決定した。この抗体は、ActRIIA-mFcダイマータンパク質をKD約12pMで結合し図9、ヒスチジンでタグを付けたモノマーActRIIAActRIIA-Hisを10分の1の親和性で結合すると見いだされた。さらに、BIACORETMベースの分析を使用して、Ab-14E1がその同族リガンドへのActRIIAの結合をブロックし得るか否かを決定した。重大なことには、ActRIIA-Fcへの複数のリガンドの結合が、2種の異なる試験構成図10~11において、ActRIIA-FcとAb-14E1との予備インキュベーションによって妨げられた。従って、このことは、Ab-14E1の中和能力を示す。類似の結果が、ダイマーActRIIA-Fcを、ヒスチジンでタグを付けたActRIIAのモノマー細胞外ドメインで置換した場合に得られた。さらに、ActRIIAリガンド、最も顕著には、アクチビンAは、濃度依存性様式においてActRIIA-FcへのAb-14E1の結合を競合的に阻害した図12。従って、このことは、共有されたエピトープに起因するActRIIA中和のさらなる証拠を提供する。実施例5.細胞ベースのアッセイにおけるAb-14E1によるActRIIAシグナル伝達の中和A204細胞におけるレポーター遺伝子アッセイを使用して、ActRIIAリガンドであるアクチビンAおよびアクチビンBによるシグナル伝達に対する精製抗ActRIIA抗体の効果を評価した。このアッセイは、pGL3CAGA12レポータープラスミドDennlerら、1998,EMBO17:3091-3100およびトランスフェクション効率を照合するためのRenillaレポータープラスミドpRLCMVでトランスフェクトしたヒト横紋筋肉腫細胞株に基づく。上記CAGA12モチーフは、TGF-β応答性遺伝子PAI-1遺伝子に存在するので、このベクターは、Smad2およびSmad3を介してシグナル伝達する因子について一般的に有用である。上記A204細胞株は、主にActRIIAを発現するので、これは、潜在的ActRIIA中和能に対して抗体を試験するために適している。このようなインヒビターの非存在下において、ActRIIAリガンドは、A204細胞におけるActRIIAシグナル伝達を用量依存的に刺激し得る。上記アッセイの1日目に、A204細胞ATCCHTB-82を、48ウェルプレート中に、105細胞/ウェルにて分配した。翌日、10μgpGL3CAGA12、1μgpRLCMV、30μlFugene6RocheDiagnostics、および970μlOptiMEMInvitrogenを含む溶液を、30分間にわたって予備インキュベートし、次いで、マッコイの増殖培地に添加し、これを、室温において一晩のインキュベーションにわたり上記プレートした細胞に適用した500μl/ウェル。3日目に、培地を除去し、細胞を、6時間にわたって37°Cにおいて、0.1BSAを含むリン酸緩衝化食塩水中に希釈した試験物質250μl/ウェルとともにインキュベートした。すすいだ後、細胞を、受動的溶解緩衝液PromegaE1941で溶解し、一晩-70°Cにおいて貯蔵した。4日目の最終日に、プレートを、穏やかに振盪しながら室温へと加温した。細胞溶解物を、二連において化学発光プレート96ウェルへと移し、Dual-LuciferaseReporterAssayシステムPromegaE1980の試薬でルミノメーターにおいて分析して、正規化したルシフェラーゼ活性を決定した。Ab-14E1は、このアッセイにおいてアクチビンAシグナル伝達の強力なインヒビターであった図13。類似の結果を、Ab-14E1とアクチビンBとについても得た。従って、このことは、Ab-14E1が、細胞ベースのシステムにおいて、ActRIIA媒介性シグナル伝達を中和し得ることを示す。実施例6.マウスにおけるFSHレベルに対するAb-14E1の阻害効果アクチビンを、もともと、下垂体生殖腺刺激ホルモン産生細胞からFSH分泌を増大させるその能力によって同定された。アクチビン媒介性シグナル伝達一部は、ActRIIAを介するは、いまや、複数の調節レベルにおける作用を介してFSH分泌を促進すると考えられているGregoryら、2004,SeminReprodMed22:253-267。従って、出願人は、Ab-14E1が、上記抗体の中和能のインビボ試験として、マウスにおける循環FSH濃度を阻害する能力を調査した。雌性C57BL/6マウス6週齢に、偽手術shamoperationn=16もしくは両側の卵巣切除術OVX;n=18のいずれかを受けさせて、FSH分泌を脱抑制し、それによって、外因性阻害因子への感受性を増大させた。マウスに6週間の回復期間を与え、次いで、Ab-14E150mg/kg,s.c.もしくはビヒクルTris緩衝化食塩水で1週間に2回処置した。上記OVXマウスにおいて4週間の処置後に、および生殖腺が無傷の偽手術マウスにおいて処置の8週間後に血液サンプルを集め、マウスFSHの血清レベルを、ラジオイムノアッセイによって決定した。図14において示されるように、Ab-14E1での処置は、OVXマウスにおいて50超p<0.01、および偽マウスにおいては30超、血清FSH濃度を低下させたが、後者の差異は、統計学的有意性に達しなかった。この研究の結果は、Ab-14E1がインビボでActRIIAシグナル伝達を中和する能力と一致する。実施例7.インヒビン欠損マウスにおけるがん悪液質に対するAb-14E1の効果インヒビン-αサブユニットが遺伝的に欠損したマウスは、アクチビンAおよびアクチビンBを過剰発現する性腺腫瘍を発症させるMatzukら、1992,Nature360:313~319;Matzukら、1994,ProcNatlAcadSciUSA91:8817~8821。全てのこのようなマウスは、これら腫瘍を発症させ、最終的には、ActRIIAを介して作用する高レベルの腫瘍由来アクチビンによって媒介されるがん悪液質様症候群で死ぬCoerverら、1996,MolEndocrinol10:534~543。従って、出願人は、Ab-14E1がこれらマウスにおいて悪液質を阻害する能力を調査した。6週齢で始めて、上記インヒビン-αヌル対立遺伝子についてホモ接合性の雄性および雌性マウスを、Ab-14E110mg/kgもしくはビヒクルリン酸緩衝化食塩水のいずれかで、1週間に2回、皮下に処置した。マウスを毎日モニターし、重篤な病的状態の事象脱水、嗜眠、身体を丸めた姿勢、毛並みが乱れた外見unkemptappearance、呼吸困難、もしくは元の体重の20超を喪失において安楽死させ、体重を、処置の有効性の指数として、1週間に2回測定した。図15に示されるように、Ab-14E1で処置した雄性マウスn=9は、ビヒクル処置した雄性n=11より研究の過程にわたってより良好な体重増加を示し、雄性におけるAb-14E1処置で生存が改善される傾向があったデータは示さず。それらの雄性の対応するものとは異なり、ビヒクル処置した雌性マウスは、予測外にも、実質的な悪液質を発症せず、Ab-14E1での雌性の処置は、ビヒクルと比較して、体重の改善に向かう、有意ではない傾向しかもたらさなかった。この研究の結果から、Ab-14E1は、過剰なアクチビンActRIIAシグナル伝達によって引き起こされる腫瘍依存性悪液質をインビボで緩和し得ることが示される。まとめると、前述の知見は、ActRIIA抗原でのActRIIA欠損マウスの免疫化が、高親和性でActRIIAに結合し得、種々の複雑性の複数のアッセイシステムにおいてActRIIA媒介性シグナル伝達を中和し得、そしてアクチビン依存性がん悪液質をインビボで緩和し得るモノクローナル抗体Ab-14E1を生じたことを実証する。実施例8.正常マウスにおける筋肉に対するAb-14E1の刺激効果出願人は、正常マウスにおいて体重および除脂肪量に対するAb-14E1の効果を調査した。6週齢で始めて、雄性C57BL/6マウスを、Ab-14E110mg/kg,i.p.,n=10もしくはビヒクルリン酸緩衝化食塩水,n=5で1週間に2回、4週間にわたって処置した。1週間に2回、体重を決定し、除脂肪量を、ベースラインおよび処置の4週間後に、全身核磁気共鳴NMRによって決定した。図16に示されるように、Ab-14E1で処置したマウスは、上記研究の過程全体を通じて、コントロールより有意に大きな体重増加を示した。研究の最後に、Ab-14E1で処置したマウスは、コントロールの2倍程度より大きく全身除脂肪量が増加した図17。研究の最後に、Ab-14E1で処置したマウスにおける胸筋重量両側は、ビヒクル処置マウスより15大きく、差異は有意な傾向があったp=0.137。さらに、ビヒクルと比較して、Ab-14E1処置での全身の脂肪重量の蓄積は実質的に低かったp=0.058。このことは、ActRIIAに対して指向される抗体が、脂肪蓄積を低下させるために使用され得ることを示す。前述の結果は、抗ActRIIA抗体での処置が、正常マウスにおいて、体重増加、具体的には、除脂肪量筋肉量の指標の増加を増大させ得ることを実証する。援用の表示本明細書で言及される全ての刊行物および特許は、各個々の刊行物もしくは特許が、具体的にかつ個々に援用されるために示されるかのように、それらの全体において本明細書に参考として援用される。主題の具体的実施形態が考察されてきたが、本明細書は、例示であって限定ではない。多くのバリエーションは、本明細書および以下の特許請求の範囲を検討すれば、当業者に明らかになる。本発明の全範囲は、特許請求の範囲と、それらの等価物の全範囲、および本明細書と、このようなバリエーションを参照することによって決定されるべきである。"