少なくとも約30のヒト促進細胞を含み、前記hFCが、CD8アルファベータTCRCD56dimnegの表現型を有する細胞とCD8アルファベータTCRCD56brightの表現型を有する細胞とを含む、細胞組成物。CD8アルファベータTCRCD56dimnegの表現型を有する前記細胞が、CD3イプシロンCD19優勢である、請求項1に記載の細胞組成物。CD8アルファベータTCRCD56brightの表現型を有する前記細胞が、CD3イプシロンCD19優勢である、請求項1に記載の細胞組成物。前記hFCが、CD8アルファベータTCRデルタガンマTCRCD3イプシロンCD19の表現型を有する細胞を含む、請求項1に記載の細胞組成物。前記hFCが、CD8アルファベータTCRB220CD11cCD11bの表現型を有する細胞を含む、請求項1に記載の細胞組成物。前記hFCの約48がCD8アルファベータTCRCD3イプシロンであり、前記hFCの約33がCD8アルファベータTCRCD19であり、前記hFCの約44がCD11cであり、前記hFCの約40がCD11bであり、前記hFCの約42がFoxp3であり、前記hFCの約30がHLADRである、請求項1に記載の細胞組成物。前記hFCの約25がCD8アルファベータTCRIFNガンマであり、前記hFCの約31がCD8アルファベータTCRCXCR4である、請求項6に記載の細胞組成物。少なくとも約40のhFCを含む、請求項1に記載の細胞組成物。少なくとも約50のhFCを含む、請求項1に記載の細胞組成物。少なくとも約60のhFCを含む、請求項1に記載の細胞組成物。CD34の表現型を有するヒト造血幹細胞と、CD8アルファベータTCRCD56dimnegの表現型を有する細胞およびCD8アルファベータTCRCD56brightの表現型を有する細胞を含むヒト促進細胞と、治療的であると考えられるよりも多い量で存在するヒトアルファベータTCRT細胞とを含む、治療用細胞組成物。レシピエントへの送達用である、請求項11に記載の治療用細胞組成物。前記アルファベータTCRT細胞が、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞約20×106から約50×106の間の量で存在する、請求項12に記載の治療用細胞組成物。レシピエントへの送達用の治療用細胞組成物を作製する方法であって、造血幹細胞のドナーソースを準備するステップと、前記ドナーソースからアルファベータTCRT細胞を枯渇させて枯渇ドナーソースを生成するステップと、前記枯渇ドナーソース中のアルファベータTCRT細胞の数を、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞1×105より多い数に調整し、それによりレシピエントへの送達用の治療用細胞組成物を生成するステップとを含む方法。前記HSCのソースが、骨髄、胸腺、末梢血、胎児肝または胚性卵黄嚢である、請求項14に記載の方法。前記HSCのソースが、骨髄である、請求項14に記載の方法。細胞が、1または複数の抗体を用いて枯渇される、請求項14に記載の方法。1または複数の抗体が、磁性ビーズとコンジュゲートしている、請求項17に記載の方法。アルファベータTCRT細胞の数が、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞約20×106から約50×106の間に調整される、請求項14に記載の方法。アルファベータTCRT細胞の数が、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞約30×106から約42×106の間に調整される、請求項14に記載の方法。hFCが、前記hFCの非存在下で生着したHSCと比較して、前記HSCの生着能力を改善する、請求項14に記載の方法。ドナーの免疫系とキメラであるレシピエントの免疫系を作製する方法であって、請求項14に記載の治療用細胞組成物を、前処置されているレシピエントに投与するステップを含む方法。レシピエントの前処置が、300cGyを超えない線量の全身放射線照射を含む、請求項22に記載の方法。治療用細胞組成物が、レシピエントに静脈内投与される、請求項22に記載の方法。レシピエントの免疫系が少なくとも約1ドナー起源である場合に、レシピエントの免疫系が、ドナーの免疫系とキメラであるとみなされる、請求項22に記載の方法。レシピエントが疾患を有する、請求項22に記載の方法。疾患が、自己免疫疾患、白血病、ヘモグロビン異常症、遺伝性代謝障害および臓器移植を必要とする疾患からなる群から選択される、請求項26に記載の方法。自己免疫疾患が、糖尿病、多発性硬化症または全身性エリテマトーデスである、請求項27に記載の方法。疾患が、免疫不全ウイルスによる感染または肝炎である、請求項26に記載の方法。疾患が、造血器悪性腫瘍、貧血、ヘモグロビン異常症および酵素欠損症から選ばれる、請求項26に記載の方法。臓器が、心臓、皮膚、肝臓、肺、心肺、腎臓、膵臓または内分泌臓器である、請求項27に記載の方法。内分泌臓器が、甲状腺、副甲状腺、胸腺、副腎皮質または副腎髄質である、請求項31に記載の方法。本発明は、ヒト促進細胞、hFCを単離する方法、ならびに幹細胞を用いる損傷を受けたかまたは破壊された造血系の再構築を促進するとともに、ドナー細胞、組織および実質臓器の移植のためにドナー特異的寛容を誘導するのにhFCを用いる方法に関する。一態様では、細胞組成物が提供される。このような細胞組成物は、少なくとも約30のヒト促進細胞を含むことができ、hFCは、CD8アルファベータTCRCD56dimnegの表現型を有する細胞とCD8アルファベータTCRCD56brightの表現型を有する細胞とを含む。いくつかの実施形態では、CD8アルファベータTCRCD56dimnegの表現型を有する細胞は、優勢にCD3イプシロンCD19である。いくつかの実施形態では、CD8アルファベータTCRCD56brightの表現型を有する細胞は、優勢にCD3イプシロンCD19である。いくつかの実施形態では、hFCは、CD8アルファベータTCRデルタガンマTCRCD3イプシロンCD19の表現型を有する細胞を含む。いくつかの実施形態では、hFCは、CD8アルファベータTCRB220CD11cCD11bの表現型を有する細胞を含む。いくつかの実施形態では、hFCの約48は、CD8アルファベータTCRCD3イプシロンであり、hFCの約33は、CD8アルファベータTCRCD19であり、hFCの約44は、CD11cであり、hFCの約40は、CD11bであり、hFCの約42は、Foxp3であり、hFCの約30は、HLADRである。いくつかの実施形態では、hFCの約25は、CD8アルファベータTCRIFNガンマであり、hFCの約31は、CD8アルファベータTCRCXCR4である。一態様では、治療用細胞組成物が提供される。このような治療用細胞組成物は、CD34の表現型を有するヒト造血幹細胞と、CD8アルファベータTCRCD56dimnegの表現型を有する細胞およびCD8アルファベータTCRCD56brightの表現型を有する細胞を含むヒト促進細胞と、治療的であると考えられるよりも多い量で存在するヒトアルファベータTCRT細胞とを含むことができる。いくつかの実施形態では、治療用細胞組成物は、レシピエントへの送達用である。また、いくつかの実施形態では、アルファベータTCRT細胞は、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞約20×106から約50×106の間の量で存在する。いくつかの実施形態では、アルファベータTCRT細胞の数は、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞約20×106から約50×106の間に調整される。いくつかの実施形態では、アルファベータTCRT細胞の数は、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞約30×106から約42×106の間に調整される。一態様では、レシピエントへの送達用の治療用細胞組成物を作製する方法が提供される。このような方法は、典型的に、造血幹細胞のドナーソースを準備するステップと、ドナーソースからアルファベータTCRT細胞を枯渇させて枯渇ドナーソースを生成するステップと、枯渇ドナーソース中のアルファベータTCRT細胞の数を、レシピエントの体重1kgあたりアルファベータTCRT細胞1×105より多い数に調整し、それによりレシピエントへの送達用の治療用細胞組成物を生成するステップとを含む。いくつかの実施形態では、HSCのソースは、骨髄、胸腺、末梢血、胎児肝または胚性卵黄嚢である。あるいくつかの実施形態では、T細胞は、1または複数の抗体を用いて枯渇させる。いくつかの実施形態では、1または複数の抗体は、磁性ビーズとコンジュゲートしている。本明細書に記載するhFCが、hFCの非存在下で生着したHSCと比較して、HSCの生着能力を改善することが、本開示の特徴である。一態様では、ドナーの免疫系とキメラであるレシピエントの免疫系を作製する方法が提供される。このような方法は、典型的に、上記の治療用細胞組成物を、前処置されているレシピエントに投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、レシピエントの前処置は、300cGyを超えない線量の全身放射線照射を含む。いくつかの実施形態では、治療用細胞組成物は、レシピエントに静脈内投与される。いくつかの実施形態では、レシピエントの免疫系は、レシピエントの免疫系が少なくとも約1ドナー起源である場合に、ドナーの免疫系とキメラであるとみなされる。いくつかの実施形態では、レシピエントは疾患を有する。例えば、疾患は、自己免疫疾患、白血病、ヘモグロビン異常症、遺伝性代謝障害または臓器移植を必要とする疾患であり得る。代表的な自己免疫疾患は、糖尿病、多発性硬化症および全身性エリテマトーデスを含む。いくつかの実施形態では、疾患は、免疫不全ウイルスによる感染または肝炎である。いくつかの実施形態では、疾患は、造血器悪性腫瘍、貧血、ヘモグロビン異常症または酵素欠損症であり得る。いくつかの実施形態では、移植臓器は、心臓、皮膚、肝臓、肺、心肺、腎臓、膵臓または内分泌臓器である。一態様では、CD8TCRCD56dimnegの表現型を有する少なくとも約30のヒト促進細胞を含む細胞組成物が提供される。このような細胞組成物は、造血幹細胞をさらに含むことができ、HSCは、CD34の表現型を有し、HSCは、hFCとMHCが一致している。別の態様では、CD34の表現型を有するヒト造血幹細胞と、CD8TCRCD56dimnegの表現型を有するヒト促進細胞とを含む細胞組成物が提供される。一実施形態では、hFCCD56dimneg表現型は、CD56dimである。本開示によると、hFCは、CD3CD16CD19CD52の表現型をさらに有することができる。さらに、hFCは、限定することなく、CXCR4、CD123、HLADR、NKp30、NKp44、NKp46、CD11cおよびCD162の表現型を有することができ、hFCは、限定することなく、CD11a、CD11b、CD62LおよびFoxP3のようなマーカーの存在によりさらに特徴付けることができる。典型的に、本明細書に記載するhFCは、hFCの非存在下で生着したHSCと比較して、HSCの生着能力を改善する。本明細書に記載する細胞組成物は、hFCを少なくとも約50含むことができる。典型的に、細胞の表現型は、抗体染色またはフローサイトメトリーにより決定される。一態様では、本明細書に記載する細胞組成物を含む医薬組成物が提供される。別の態様では、疾患に罹患しているヒトを処置する方法が提供される。このような方法は、本明細書に記載する細胞組成物を含む医薬組成物をヒトに投与するステップを一般的に含む。さらに別の態様では、ドナー細胞、組織または臓器をヒトレシピエントに移植する方法が提供される。このような方法は、本明細書に記載する細胞組成物を含む医薬組成物をヒトレシピエントに投与するステップを一般的に含む。このような方法は、医薬組成物の投与の前に全身放射線照射、免疫抑制薬、腫瘍縮小薬またはそれらの組み合わせに曝露することによりヒトを部分的に前処置するステップをさらに含み得る。一実施形態では、全身放射線照射は、200cGyである。本明細書に記載する医薬組成物は、静脈内投与できる。一実施形態では、疾患は、糖尿病、多発性硬化症または全身性エリテマトーデスのような自己免疫疾患である。別の実施形態では、疾患は、免疫不全ウイルスによる感染または肝炎である。また別の実施形態では、疾患は、造血器悪性腫瘍、貧血、ヘモグロビン異常症および酵素欠損症から選ばれる。代表的なドナー組織または臓器は、限定することなく、心臓、皮膚、肝臓、肺、心肺、腎臓、膵臓または甲状腺、副甲状腺、胸腺、副腎皮質もしくは副腎髄質のような内分泌臓器を含む。ドナー細胞は、膵島細胞、ニューロンまたは筋細胞であり得る。また別の態様では、少なくとも約05~80のhFCを含む細胞組成物を得る方法が提供される。このような方法は、造血細胞組成物を準備するステップと、アルファベータTCRおよびガンマデルタTCRの表現型を有する細胞を造血細胞組成物から除去するステップとを一般的に含む。このような方法は、CD8の表現型を有する細胞を選択するステップと、CD56dimnegの表現型を有する細胞を選択するステップと、CD3CD16CD19CD52の表現型を有する細胞を選択するステップとをさらに含むことができる。さらに、このような方法は、CXCR4、CD123、HLADR、NKp30、NKp44、NKp46、CD11cおよびCD162の表現型を有する細胞を選択するステップをさらに含むことができ、このような方法は、限定することなく、CD11a、CD11b、CD62LおよびFoxP3の表現型を有する細胞を選択するステップをまださらに含むことができる。このような方法により生成される細胞組成物は、CD34造血幹細胞も含むことができる。細胞は、抗体を用いて除去およびまたは選択できる。それに加えてまたはその代わりに、造血細胞組成物は、密度勾配遠心分離により分離して、単核細胞画分の細胞を得ることができる。一実施形態では、造血細胞組成物は、増殖因子と接触させる。造血細胞組成物は、骨髄、胸腺、末梢血、胎児肝または胚性卵黄嚢から得ることができる。一実施形態では、細胞組成物は、少なくとも約50のhFCを含む。別段定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術的および科学的用語は、本技術が属する分野の当業者により通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載するものと同様または等価な方法および材料を本方法および組成物の実施または試験において用いることができるが、適切な方法および材料は以下に記載される。さらに、材料、方法および例は、説明のためだけであり、限定することを意図しない。本明細書で言及する全ての出版物、特許出願、特許およびその他の参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれている。本発明の1または複数の実施形態の詳細を、付随する図面および以下の記載において示す。その他の特徴、目的および利点は、図面および詳細な説明ならびに特許請求の範囲から明らかである。初期の幹細胞生着を促進し、持続したHSC生着のために必要なヒトhFCが提供される。このようなhFCを骨髄または造血細胞のその他の生理的ソースから精製する方法も提供される。様々な分離手順が提供され、これらは、本明細書で開示する特異的マーカーの存在または非存在に全般的に基づく。ヒト促進細胞、hFCを含有する細胞組成物および作製方法ヒト促進細胞が同定され、本明細書に記載される。hFCは、一般的に、CD8およびアルファベータTCRとして特徴付けられる。hFCは、ガンマデルタTCRまたはガンマデルタTCRでもあり得る。CD8アルファベータTCRhFCは、以下のマーカーを発現する細胞の存在により特徴付けることができるCD3イプシロン、CD19、CD11c、CD11b、Foxp3、HLADRおよびCD123。hFCは、IFNガンマおよびCXCR4を発現する細胞の存在により特徴付けることもできる。さらに、hFCの約65は、免疫寛容誘発性形質細胞様樹状細胞に似ており、hFCは、抗原特異的Treg細胞を誘導できる。さらに、hFCは、限定することなく、CD16、CD52、NKp30、NKp44、NKp46、CD162、CD11aおよびCD62Lのようなマーカーのより低いレベルでの存在により特徴付けることができる。CD8アルファベータTCRhFC集団内に、2つの亜集団が存在するCD8アルファベータTCRCD56dimnegおよびCD8アルファベータTCRCD56bright。当業者により理解されるように、CD56dimneg細胞とは、比較的少量のCD56を発現する細胞と、CD56を発現しない細胞との集団のことをいい、CD56bright細胞とは、比較的多量のCD56を発現する細胞のことをいう。hFCのCD8アルファベータTCRCD56dimneg亜集団内で、大多数の細胞はCD3イプシロンを発現し、およそ3分の1の細胞はHLADRを発現し、より低いパーセンテージの細胞はCD11c、CD19、CD11bおよびCD123を発現する。よって、CD8アルファベータTCRCD56dimneghFC亜集団内の大多数の細胞は、CD3イプシロンCD19である。hFCのCD8アルファベータTCRCD56bright亜集団内で、およそ65の細胞はCD11cを発現し、約67の細胞はCD11bを発現し、約40の細胞はHLADRを発現するが、CD3イプシロン、CD19およびCD123は、この亜集団中でかなりより低いレベルで発現される。よって、CD8アルファベータTCRCD56brighthFC亜集団内の大多数の細胞は、CD3イプシロンCD19である。hFCは、骨髄、または限定することなく、脾臓、胸腺、血液、胚性卵黄嚢もしくは胎児肝のような造血細胞の任意のその他の生理的ソースから得ることができる。一実施形態では、hFCは、動員末梢血または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子の存在下でから得られる。別の実施形態では、hFCは、脊椎骨髄から得られる。造血細胞が一旦得られると、特定のマーカーを有する細胞を選択するためにこれらの特定のマーカーに特異的に結合する抗体を典型的に用いる様々な方法により、hFCを濃縮、精製できる。細胞分離技術は、例えば、蛍光活性化細胞ソーターおよび特異的蛍光色素を用いる細胞選別細胞表面マーカー特異的抗体にコンジュゲートしたビオチンと固体支持体に結合したアビジンまたはストレプトアビジンとを用いるビオチンアビジンまたはビオチンストレプトアビジン分離抗体被覆磁性ビーズを用いる磁性分離あるいは抗体および補体または細胞毒もしくは放射活性同位体に結合した抗体のような破壊的分離を含む。細胞分離において用いることができる抗体を作製する方法は、当該技術において公知である。例えば、米国特許第6013519号を参照されたい。特異的マーカーに対する抗体を用いる分離は、ネガティブまたはポジティブ選択に基づき得る。ネガティブ選択に基づく分離において、所望でない細胞上に存在するマーカーに特異的な抗体および所望の細胞上に存在しない抗体を用いる。抗体が結合したこれらの細胞を除去または溶解し、未結合の細胞を保持する。ポジティブ選択に基づく分離において、所望の細胞上に存在するマーカーに特異的な抗体を用いる。抗体が結合したこれらの細胞を保持する。ポジティブおよびネガティブ選択分離を同時または逐次的に用いてよいことが理解される。本開示は、本明細書に記載するhFCを濃縮または精製するために用いることができる任意の分離技術を包含することも理解される。抗体に基づく分離についてのある公知の技術は、例えばFACSを用いる細胞選別である。簡単に述べると、造血細胞の懸濁混合物を遠心分離し、培地に再懸濁する。蛍光色素にコンジュゲートした抗体を加えて、抗体が特異的細胞表面マーカーに結合することを可能にする。細胞混合物を次いで洗浄し、FACSに流し、FACSが細胞を、特異的抗体マーカーの結合により指図されるそれらの蛍光に基づいて分離する。細胞選別以外の他の分離技術をそれに加えてまたはその代わりに用いてhFCを得ることができる。あるそのような方法は、親和性クロマトグラフィーを用いるビオチンアビジンに基づく分離である。典型的に、このような技術は、造血細胞を、特異的マーカーに結合するビオチン結合抗体とインキュベートし、その後、アビジンカラムに細胞を通すことにより行われる。ビオチン抗体細胞複合体は、ビオチンアビジン相互作用によりカラムに結合するが、複合体を形成していない細胞は通過する。カラムに結合した細胞は、撹乱またはその他の既知の方法により遊離できる。ビオチンアビジン系の特異性は、迅速分離に適している。細胞選別およびビオチンアビジン技術は、細胞分離に高度に特異的な手段を提供する。所望であれば、特異性がより低い分離を用いて、造血細胞ソースから非hFCの部分を除去できる。例えば、磁性ビーズ分離を用いて、限定されないが、T細胞、B細胞、ナチュラルキラー細胞およびマクロファージを含む非促進分化造血細胞集団ならびに巨核球、肥満細胞、好酸球および好塩基球を含むマイナー細胞集団を初期に除去できる。さらに、細胞は、密度勾配分離を用いて分離できる。簡単に述べると、造血細胞を例えばFicollまたはPercollまたはEurocollins媒体を用いて調製した密度勾配中に入れることができる。分離を、次いで、遠心分離によりまたは例えばCobelCellSeparator2991を用いて自動的に行うことができる。造血細胞混合物のソースおよびその含量により、さらなる分離手順が望ましいことがある。例えば、血液を造血細胞のソースとして用いるならば、いずれの画分をも分離する前に赤血球を溶解することが望ましいことがある。特異的マーカーに基づく分離について開示するが、本開示は、hFCが濃縮された細胞組成物をもたらす任意の分離技術を包含することが理解される。造血細胞のほとんどのソースは、天然に、約05~約8のhFCを含有する。本明細書に開示するもののような分離は、hFCが濃縮された細胞組成物を産生できる。例えば、細胞の少なくとも約5が本明細書に記載するhFCである細胞組成物が提供される。これらの組成物は、hFCが濃縮されたという。別の例では、細胞の少なくとも約30が本明細書に記載するhFCである細胞組成物が提供される。この組成物は、hFCが精製されたという。ポジティブまたはネガティブ選択のいずれかまたは両方によるさらなる処理は、細胞の少なくとも約60が本明細書に記載するhFCである細胞組成物を産生できる。hFCを含む細胞組成物を得る例示的な方法を本明細書に記載する。当業者は、本明細書に記載する例をいくつかの様式で改変して、hFCをまだ得ることができるかまたは異なる量でhFCを得ることができることを理解している。以下の例では、骨髄が造血幹細胞のソースである。骨髄は、当業者に公知の様々な方法により採集できる。例えば、骨髄は、長骨から採集できるが、他の骨小腔または脊椎から得ることもできる。ある例示的な方法では、非hFCおよび非HSCは、骨髄から、本明細書に記載する1または複数のネガティブ選択を用いて除去できる。例えば、移植片対宿主病生成細胞としても知られるT細胞は、細胞組成物から、アルファベータTCRのようなT細胞特異的マーカーに対する抗体を用いて特異的に除去できる。あるいくつかの実施形態では、デルタガンマTCRに対する抗体を用いて、T細胞のさらなるサブセットを除去できる。得られる細胞組成物は、hFCおよびHSCが濃縮され、未熟リンパ球系および骨髄系前駆細胞のような他の未熟前駆細胞も含有する。別の例示的な方法では、hFCは、骨髄から、本明細書に記載する1または複数のポジティブ選択を用いて得ることができる。例えば、hFCは、本明細書に記載する1または複数のマーカーを用いる細胞選別により精製できる。あるいくつかの場合では、HSCを細胞組成物から除去することが望ましいことがある。HSCは、骨髄から、例えばCD34と場合によってCD45とに結合する抗体を用いて除去できる。例えば、米国特許第5061620号またはLC実験細胞分離システム、CD34キットを参照されたい。hFCを用いる方法およびhFCを含有する細胞組成物レシピエントにおけるドナー骨髄細胞の生着を増進するhFCの能力は、hFCが様々な治療プロトコールの促進において有用であることを示す。hFCが濃縮された細胞組成物は、耐久性のある生着を著しく改善し、移植片対宿主病を排除する。いずれの特定の機構にも結び付けられないが、一旦投与されると、hFCは、骨小腔、脾臓、胎児または成体の肝臓および胸腺を含むレシピエントの体内の様々な造血細胞部位に帰ると考えられる。hFCは、正しい部位に播種され、生着し、キメラ免疫系を確立し始める。幹細胞およびhFCの両方が複合体を形成して、生着のための適当な部位に播種される可能性がある。hFCを含む治療用細胞組成物をレシピエントに投与する方法も本明細書に記載する。治療用細胞組成物は、本明細書で用いる場合、hFCおよびHSCを含む組成物のことをいう。このような組成物は、本明細書に記載する任意の方法を用いて生成できる。レシピエントへの投与用の治療用細胞組成物は、レシピエントの投与体重1キログラムあたり合計で細胞数約1×108から細胞数3×108の間を含んでよい。治療用細胞組成物内で、HSCの数は、レシピエントの投与体重1kgあたり約1×105から18×106の間のHSCであることができ、同様の範囲のhFCを投与できる。しかし、用いられる細胞の厳密な数は、造血幹細胞の元々のソース中の細胞の数、処理後に存在する細胞の数、ならびにレシピエントの健康状態を含む多くの因子に依存する。本明細書に記載する場合、hFCを得ることは、典型的に、アルファベータTCRT細胞を枯渇させることを含むが、これは、これらがGVHD生成細胞と考えられるからである。しかし、治療的に、アルファベータTCRT細胞の存在が、HSCおよびhFCの細胞組成物において有益であることが見出されている。本明細書の実施例の項で示すように、治療的であると一般的に考えられるよりも大きいレベルでアルファベータTCRT細胞を含む細胞組成物は、キメリズムおよび生着を驚くべきことに助長した。レシピエントの体重1kgあたり約1×105のアルファベータTCRT細胞が、T細胞の致死量であると考えられることが一般的に受け入れられている。しかし、本明細書に記載する方法では、それより大きい量が、有害な影響なくレシピエントに定期的に投与された。具体的に、約20×106から50×106の間のアルファベータTCRT細胞の量を治療用細胞組成物に含めることができる。よって、HSCおよびhFC治療用細胞組成物を得るために用いる手順および方法に依存して、組成物中のアルファベータTCRT細胞の数を調整する必要があることがある。例えば、あるいくつかの実施形態では、アルファベータTCRT細胞を、T細胞枯渇HSCおよびhFC組成物に戻して加えて、所望の数を得ることができる。他の実施形態では、枯渇ステップを、所望量のT細胞だけが枯渇されるように改変することにより、組成物中に所望量のT細胞を残すことができる。治療用細胞組成物中に所望量のT細胞を達成するために、T細胞の数を、例えば枯渇前または枯渇ステップの後に決定できる。試料中の細胞の数を決定する方法は、当該技術において公知である。治療用細胞組成物は、一般的に、静脈内投与されるが、直接骨注射のような他の投与様式を用いることができる。本明細書に記載する治療用細胞組成物は、治療レベルより高いアルファベータTCRT細胞が存在していても、耐久性のあるキメリズムをもたらす。本明細書で用いる場合、耐久性のあるキメリズムとは、移植後6ヶ月を超えて少なくとも約1ドナー起源であるレシピエントの免疫系のことをいう。さらに、耐久性のあるキメリズムは、ドナーとHLAが一致していないかまたはドナーと部分的にだけ一致しているレシピエントにおいてさえ、本明細書に記載する治療用細胞組成物を用いて達成できる。よって、本明細書に記載する治療用細胞組成物は、互いに同系であるドナーとレシピエントとの間の移植を可能にし、互いに同種であるドナーとレシピエントとの間の移植を可能にするはずである。伝統的に、キメラ免疫系を確立する方法は、レシピエントの免疫系を破壊することを必要とし、このことは、レシピエントのHSCの消失をもたらす。このことは、当業者に公知の技術により遂行でき、限定することなく、選択されたレベルの全身放射線照射をレシピエントに照射すること、レシピエントに特定の毒素もしくは化学療法剤を投与すること、毒素もしくは放射活性同位体に結合した特異的モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体をレシピエントに投与すること、あるいはこれらの組み合わせを含む。顕著なことに、本明細書に記載するhFCをレシピエントに投与することにより、生着の成功のためにレシピエントに必要とされる前処置の量が著しく低減され、移植後に必要な免疫抑制薬の量も著しく低減される。例えば、レシピエントの免疫系を破壊することは、しばしば、レシピエントに950センチグレイの全身放射線照射を致死的に照射することを含むが、本明細書に記載する手順は、25cGy~200cGyほど低いTBIでの前処置計画を用いる。キメリズムをうまく確立する能力は、移植後の生存を著しく改善する。本開示は、例えば臓器、組織または細胞のようなドナー生理的構成要素を移植する方法を提供する。本明細書に開示する方法においてhFCを用いることは、キメラ免疫系を有するレシピエントをもたらし、該免疫系は、移植されたドナー臓器、組織または細胞に対して完全に免疫寛容であるが、第三者の移植片は完全に拒絶する。移植されたドナー臓器、組織または細胞は、レシピエントにおいてそれらのそれぞれの機能を果たすことができる。例えば、移植された島細胞は、糖尿病のための効果的な処置を提供できる。さらに、内分泌組織移植片ならびに腎臓、肝臓、心臓ならびに顔、手および他の四肢のような複合組織の永続的な受け入れが証明されている。混合キメラ免疫系は、レシピエントにおいて、臓器、組織もしくは細胞の移植前、移植中または移植後に生成できるが、典型的に、移植前または移植と同時に生成されることが理解される。キメラ免疫系の確立におけるhFCの使用は、骨髄移植を用いて処置できる疾患の範囲を著しく拡張できる。移植を超えて、レシピエントにおいてうまくキメラ造血系を確立する能力は、GVHDに伴う罹患率および死亡率のために骨髄移植により現在処置されていない他の疾患または障害を処置するために用いることができる。自己免疫疾患は、自己の免疫系による臓器または組織への攻撃に関わる。しかし、キメラ免疫系が確立された場合、体は、何が外来で何が自己であるかを再学習できる。本明細書に記載するhFCを用いてキメラ免疫系を確立することは、この状態を引き起こす自己免疫攻撃を低減または停止できる。本明細書に記載するhFCを用いて処置できる自己免疫疾患は、例えば、I型糖尿病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬または結腸クローン病を含む。本明細書に記載する細胞組成物を用いてアルツハイマー病を処置することも可能である。本明細書に開示する細胞組成物は、例えば鎌状赤血球貧血、球状赤血球症またはサラセミアのようなヘモグロビン異常症、ならびにハンター病、ハーラー病、慢性肉芽腫症、白質ジストロフィーおよび酵素欠損症のような代謝障害を処置するために用いることもできる。さらに、本明細書に記載する細胞組成物は、白血病もしくは他の希な小児期の障害を処置するために用いることができるか、または本明細書に記載する細胞組成物は、再生修復において用いることができる。本開示に従って、当該技術の熟練の範囲内の従来の分子生物学、細胞生物学、微生物学および生化学の技術を用いてよい。このような技術は文献に詳細に説明されている。方法および組成物を以下の実施例においてさらに記載するが、これらは、特許請求の範囲に記載する方法および組成物の範囲を限定しない。項Aコロニー形成細胞アッセイHSCおよびhFCの精製HSCおよびhFCを、ヒト脊椎骨髄または動員末梢血から、マルチパラメータ滅菌生細胞選別により単離した。簡単に述べると、VBMまたはMPBを、直接標識モノクローナル抗体で飽和濃度にて30分間染色した。HSCCD34CD45およびhFCCD8TCRCD56dimneg。両方の細胞集団を選別し、純度について分析した。85以上の純度レベルだけを許容した。HSCおよびhFC選別および計数HSCを、ISHAGEプロトコールに基づいて選別および計数した。Sutherlandら、1996、TheISHAGEguidelinesforCD34celldeterminationbyflowcytometry、JHematotherapy、5213~26頁を参照されたい。簡単に述べると、CD45FITCCD34PE組み合わせパラメータは、末梢血幹細胞前駆細胞区画を臨床的に適切に反映した。プロット1は、前方散乱対側方散乱を用いてフォーマットし、領域は、デブリを除くリンパ球、単球および顆粒球の集団の周囲に描いた。R1から、プロット2を、CD45FITC対側方散乱を用いてフォーマットし、CD45イベントを除くようにR1を描いた。R2から、プロット3を、CD34PE対側方散乱を用いてフォーマットし、R3を、CD34集団の周囲にだけ描いた。R3から、プロット4を、CD45FITC対CD34細胞のSSCを用いてフォーマットした。特徴的な低SSCおよび低~中間のCD45蛍光を有するクラスタを形成する細胞をゲーティングし、R4とした。非特異的染色イベントは、この領域から除いた。R4から、プロット5を、FSC対SSCを用いてフォーマットした。CD34幹細胞前駆細胞の全ての蛍光および光散乱基準を満たすイベントのクラスタがプロット5に出現した。図4は、ISHAGEプロトコールを用いるヒトHSCの選別および計数のためのゲーティング方策を示す。図5は、ヒトhFCの選別および計数のためのゲーティング方策を示す。hFCを用いるコロニー形成細胞アッセイ細胞選別の後に、HSC単独またはHSCとhFCまたは対照としてのHSCとT細胞を、メチルセルロースに直ちに播種したかまたは細胞培養培地中で18時間予備インキュベートした後にメチルセルロースに播種した。全ての細胞試料を、4重で培養した。37°Cおよび5CO2にて14日間培養した後に、50より多い細胞を含有するコロニーを得た。予備インキュベーションなしで、HSC単独対HSCとhFCとにより生じたコロニーに著しい差はなかった。著しいことに、HSCをhFCと18時間同時インキュベートした後にCFCアッセイを行った場合、hFCは、HSC単独およびCD8T細胞と同時インキュベートしたHSCと比較して、コロニー形成を有意に増進した。これらの結果は、マウスhFCと同様に、ヒトhFCが、HSCに対する保護効果を奏し、より多くの原始多能性前駆細胞のinvitroでの発生を助長することを示す。hFCの亜集団を用いるコロニー形成細胞アッセイコロニー形成培養アッセイ15000のHSCを、30000のCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCとともにまたはなしで、96ウェルプレート中の培養培地中で0時間または18時間培養し、37°Cにてインキュベートした。培養後、細胞をメチルセルロースに再懸濁し、CFCアッセイに用いた。コロニーは、14日目に数えた。まとめおよび結果CD8アルファベータTCRCD56dimneghFCのinvitroでの機能を評価するために、HSCをCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCと18時間インキュベートし、メチルセルロース中で14日間、コロニー形成細胞アッセイにおいて培養した。HSCとCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCは、HSC単独と比較して有意により多くのコロニーを生じ、このことは、CD8アルファベータTCRCD56dimneghFCが、HSCのコロニー形成能に対して直接的な効果を有することを証明した。項BヒトhFCのInVivoでの特徴付けマウスモデルにおけるキメリズムおよび生着CD8TCRhFCが同種および同系のマウスレシピエントにおける精製HSCの生着を増進することが以前に示されている373~383頁。さらに、マウスにおいて、hFCがコロニー形成能を増進し、より多くの原始多能性HSC前駆細胞のinvitroでの発生を助長することが示されている49~57頁。ある目的は、ヒトHSCキメリズムをマウスモデルにおいて達成することであった。簡単に述べると、CD34、CD45ヒトHSCを、GCSF動員末梢血から選別し、100000の選別ヒトHSCを、325cGyのTBIで前処置したNODSCIDIL2受容体γ鎖nullマウスに移植した。全血を、移植マウスから、移植の1ヶ月後に回収し、PBLタイピングを、ヒトT細胞、B細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞および単球に特異的な抗体を用いて行った。結果は、平均で32のヒトHSCキメリズムが、100000のhHSCを移植した後に達成されたことを示した。次いで、100000のhHSC単独または100000のhHSC300000のhFCを、325cGyのTBIで前処置したNODSCIDIL2Rγnullマウスに移植する実験を行った。多系列PBLタイピングを、上記のようにして移植の30日後に行った。これらの実験の結果は、HSChFC群が、HSC単独群と比較して、より高いパーセンテージのヒトT細胞を参照されたいおよびヒト単球を生成したことを証明した。リンパ球系ゲートおよび骨髄系ゲートにおけるドナーキメリズムのパーセンテージをTable3にまとめる。マウスモデルにおけるCD8アルファベータTCRCD56dimnegの生着動物5~6週齢の雄の非肥満糖尿病SCIDインターロイキン2受容体ガンマ鎖ノックアウトマウスを、JacksonLaboratoryから購入した。HSCおよびhFCの精製HSCおよびFCを、ヒトGCSF動員末梢血から、マルチパラメータ滅菌生細胞選別により選別した。ヒトCD8アルファベータTCRhFCの表現型GCSF動員PBMCを、抗ヒトCD8アルファ、アルファベータTCR、デルタガンマTCR、CD56、CD3イプシロン、CD19、CD11c、CD11b、HLADR、Foxp3、INFガンマ、TGFベータ、CXCR4およびSDF1モノクローナル抗体で染色し、CellQuestソフトウェアを用いるLSRにより分析した。HSCおよびFC移植ヒトHSCFC異種モデルにおいて、100000のヒトHSCを、300000の選別されたCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCとともにまたはなしで、325cGyTBIで前処置したNODSCIDIL2rガンマnullマウスレシピエントに移植した。キメリズムの評価ドナー細胞生着を、末梢血リンパ球、骨髄細胞および脾細胞において、7色フローサイトメトリーを用いて評価した。まとめヒトCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCがヒトHSCのinvivoでの生着を増進するかを評価するために、100000のHSC単独または300000のCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCとともに、325cGyの全身放射線照射で前処置したNODSCIDIL2rgnullレシピエントマウスに移植した。移植の30日後に、21匹のうち8匹のHSC単独レシピエントが生着した。これとは対照的に、HSCとCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCを受けたレシピエントの81が生着し、末梢血におけるドナーリンパ球およびドナー単球のキメリズムは、それぞれ053±016および393±128であった。移植の6ヶ月後に、HSC単独のNSGレシピエントは、末梢血におけるドナーキメリズムを喪失し、脾臓および骨髄においてほとんどまたは全くドナー細胞が検出されなかった。これとは対照的に、HSCとCD8アルファベータTCRCD56dimneghFCのNSGレシピエントは、末梢血において耐久性のあるドナーキメリズムを示し、HSC単独のレシピエントと比較して、有意により高いレベルの脾臓および骨髄におけるドナーキメリズムを示した。項Cヒトにおける鎌状赤血球症の処置鎌状赤血球症予備実験2名の鎌状赤血球症患者を、パイロット実験において予め処置して、混合キメリズムを確立することを試みた。これらのSCD患者はともに、彼らの疾患からの合併症について高い危険性があった。200cGyのTBIとフルダラビン、MMFおよびCyAとの組み合わせが、SCD患者における生着を確立できるかを評価した。しかし、一過性の生着だけが達成された。前処置は耐容性がよく、重度の有害事象は発生しなかった。しかし、内因性の造血が再出現した。輸血感作バリアを克服するために、プロトコールに改良を加えた。例えば、成熟T細胞、B細胞およびNK細胞について強力な溶解剤であるヒト化抗CD52モノクローナル抗体であるCampathを、臨床前処置計画に加えた。最初のサイクルで成熟B細胞が枯渇し、メモリーB細胞の恒常的な増殖が枯渇B細胞を置き換えるようにし、2回目のサイクルで増殖メモリーB細胞が枯渇するという基本原理により、2サイクルのCampathを投与した。Campathの広いリンパ球系特異性が、輸血療法により誘導されるアロ反応性を媒介するレシピエントにおけるTおよびB細胞を標的にするための強力なアプローチを提供すると仮定した。一例では、4回の用量の10mg日のCampath1Hを53日目~50日目に投与し、別の4回の用量の7mg日のCampath1Hを24日目~21日目に投与した。30mgm2のフルダラビンを5日目~3日目に投与し、200cGyの全身放射線照射を1日目に、ミコフェノール酸モフェチルおよびシクロスポリンとともに投与し、これを耐久性のある生着まで継続した。FCHSCは0日目に移植した。SCDの2名の対象は、改作プロトコールの下でうまく移植を受けた。これらの対象はともに、移植後27および24ヶ月で生着を維持し、無症状で輸血に依存していない。部分的レシピエント前処置と、その後のHSCおよびhFCの移植により、感作レシピエントにおいて最小限の毒性で混合キメリズムが確立でき、生着を保っている間のGVHDの危険性を低減できることが証明された。本明細書に記載する強さが低減された前処置アプローチは、安全で耐容性がよく、HSChFC移植片と組み合わせると、輸血患者において安定な混合キメリズムおよび優勢な正常RBC生成が十分に誘導される。PHA、カンジダおよび同種抗原に応答する免疫能は、移植後1ヶ月で回復したが陽性である。最下点は、両方の患者について9日目から24日目の間に発生した。SCD患者32005年11月に移植SCD3は、アフリカ系米国人女性であり、複数の疼痛発作および急性胸部症候群のエピソードを経験した。彼女は輸血療法を維持した。彼女の鎌状赤血球形質を有するHLA同一の姉妹が、彼女のドナーとなった。この患者は、4回の用量のCampath1Hでの前処置を53日目に開始し、4回の用量のCampath1Hで2回目を24日目に開始した。彼女は、3回の用量のフルダラビンを4日目に開始し、次いで200cGyのTBIを0日目に受けた。移植後に、彼女は、シクロスポリンおよびMMFでの処置を22ヶ月間受けた。免疫抑制は、その後漸減し、完全に中止した。患者は、141×106のCD34細胞kg体重、435×106のアルファベータTCR細胞kg体重および54×106のhFCkg体重を受けた。彼女は、5ドナー細胞キメリズムを17日目に、および78ドナー細胞キメリズムを32日目に示した。彼女は、移植後に無症状であり、輸血を必要としなかった。移植後727日目に、彼女は、21ドナー細胞キメラであり、GVHDの証拠を示さなかった。彼女の全ドナーキメリズムはおよそ30であったが、彼女は、ほぼ100のドナー由来形質のRBCを生成していた。移植後1259日目に、彼女は、100ドナーRBCを生成し、10~30の範囲のT、Bおよび骨髄系のキメリズムを有した。彼女は、まだ輸血に依存せず、彼女のSCDからのいずれの合併症も有さなかった。SCD3のための処理手順中に、SCD形質の骨髄細胞の密度のために細胞分離手順において正しい画分を回収することが困難になることがあった。ドナーレシピエントの対のHLAは一致していたので、このプロセスを打ち切り、生成物を枯渇させないことに決定した。よって、患者は、骨髄全体を受けた。しかし、この候補者において前処置の効力が確立された。SCD患者42006年3月に移植SCD4は、ナイジェリア人の男性であり、複数の疼痛発作と2回の急性胸部症候群に罹患した後に、1999年に赤血球交換を開始した。この患者の鎌状赤血球形質を有するHLA同一の同胞が、彼のドナーとなった。患者は、SCD3と同じ非骨髄破壊的前処置を受けた。彼のHSChFCの用量は、524×106kgのCD34細胞、055×106kgのαβTCR細胞および035×106kgのhFCであった。彼は、前処置に非常によく耐容性があり、FISHに基づいて1ヶ月で生着してキメラであった。彼のドナーキメリズムは、697日目に28であった。ドナーT細胞キメリズムは、501日目に34であった。患者は、移植の後無症状のままであり、優勢に正常RBCを生成している。患者SCD4についての網状赤血球数は、05から1の間であり、これは正常範囲である。まとめこの項では、同胞ドナーからのHLA同一骨髄を用いた2名の重度輸血SCD患者の移植の成功について記載した。これらの患者はともに、強さを低減した非骨髄破壊的前処置を用いてうまく移植を受け、2年を超えて疾患なしのままである。参加の時点で、彼らは輸血に依存しており、疼痛発作およびその他の合併症の危険性が非常に高かった。これらの患者はともに、免疫抑制から離脱することに成功した。項Dヒトにおける鎌状赤血球症の処置サラセミアからの罹患性および死亡についての危険性が高い5名の個体が、以下の参加および除外基準に従うプロトコールにより参加した。参加基準以下の基準を確立して、高い罹患性が予測され、早期の死亡の危険性にあるサラセミアの個体を同定したアルファまたはベータ重症型サラセミアの患者または他の複合型および輸血依存性ヘモグロビン異常症の患者。個体は、以下の包括的参加基準も全て満たさなければならない個体は、関連ドナーを有さなければならない個体は、心エコー図もしくは放射性核種スキャンにより文書化された適切な心肺機能を有さなければならない個体は、年齢について予測される≧50のFEV1およびもしくは10歳を超える年齢の患者について、年齢について予測される≧50のDLCOにより文書化された適切な肺機能を有さなければならない個体は、血清アルブミン30mgdL、およびSGPTもしくはSGOT2mgdLであるならば、クレアチニンクリアランス試験または核医学GFRが、≧50ml分173m2のGFRを文書化すべきである。このプロトコールについて、年齢制限はない。除外基準個体は、以下の基準のいずれかを満たすとこの試験から除外される個体は、関連ドナーを欠く個体は、管理不能な感染または重度の併発疾患を有し、低下した強さの移植に耐容性でない可能性がある個体は、05ドナー生着が最初の28日以内に観察されるならば、個体をさらに28日間追跡して、急性GVHDの発生を評価する。移植を受けたさらなる鎌状赤血球患者対象5は、移植の時点で9歳であった。彼は、複数の疼痛発作、2回の急性胸部症候群のエピソードを経験した後に移植を受け、交換輸血で7年間処置された。対象は、HLA一致形質の同胞ドナーの腸骨稜骨髄を受け、上記の項Cに記載したことと本質的に同じ計画で前処置された。移植片は、体重1kgあたり524×106のCD34細胞、体重1kgあたり055×106のアルファベータTCR細胞および体重1kgあたり035×106のFC細胞を含有した。対象は、幹細胞移植後に輸血に依存せず、移植後1525日を超えて100のドナーRBC生成およびFISHにより20~30のドナーキメリズムレベルであった。免疫抑制は、移植後23ヶ月で中止した。対象は、移植の後、移植片対宿主病、移植関連毒性または鎌状赤血球合併症を示していない。対象7は、16歳の男性であり、赤血球輸血療法を必要とする急性胸部症候群エピソードを繰り返し経験した。2009年9月に移植を受ける前に、彼は、右膝の骨髄炎および複数の血管閉塞性有痛性事象のために入院した。対象は、彼の親からハプロタイプ一致移植片を受けた。対象は、上の項Cに記載したことと本質的に同様にして前処置を受けた。対象は、前処置に対して耐容性がよく、移植の経過は良好であった。彼は、体重1kgあたり326×106のCD34細胞、体重1kgあたり38×106のアルファベータTCR細胞および体重1kgあたり05×106のFC細胞を受け、外来患者として管理された。残念なことに、この対象は、移植直後の期間に従順でなく、要求された通りにシクロスポリンおよびMMFを定期的に摂取しなかった。キメリズムは、移植後1ヶ月目および2ヶ月目に存在しなかった。移植後に、彼は再発疼痛発作を経験し、これはその後消散した。対象は、有害事象をモニタリングするために研究に残っているが、キメリズム試験は、移植後2ヶ月目に中止した。対象8は、12歳の女性であり、疼痛発作のために多数の入院を経験した。彼女は、隔離後の脾摘出術および胆嚢摘出術を受けた。彼女は、上の項Cに記載したことと本質的に同様にして前処置を受け、SCD形質を有する彼女の親からハプロタイプ一致移植片を受けた。彼女は、体重1kgあたり191×106のCD34細胞、体重1kgあたり38×106のアルファベータTCR細胞および体重1kgあたり079×106のFCを受け、移植後に、外来患者として管理された。彼女は前処置に対して耐容性が非常によく、移植後1ヶ月で71の堅固なドナー生着を示した。彼女の全血キメリズムは、84で耐久性のあるままであり、9ヶ月目でリンパ球系キメリズムは58、骨髄系キメリズムは95であった。彼女は、ヘモグロビン電気泳動により示される57のヘモグロビンA、41のヘモグロビンSおよび2のヘモグロビンA2により反映されるように、100ドナーRBCを生成した。対象は、移植の後、輸血療法を必要とせず、無症状である。彼女は、GVHDの証拠を示していない。対象9は、25歳の男性であり、繰り返しのPRBC輸血、鎌状赤血球症、高血圧症および腎血管疾患に伴う胆嚢摘出術を受けた後に移植を受けた。対象は、上の項Cに記載したことと本質的に同様にして前処置を受け、前処置に対して耐容性がよかった。この対象についてのアルファベータTCR細胞は、体重1kgあたり細胞数42×106まで増加し、対象は、体重1kgあたり146×106のCD34細胞および体重1kgあたり072×106のFCも受けた。彼は、移植後1ヶ月目で10のドナーキメリズムを示した。彼のキメリズムは2ヶ月目で4に、100日目で2未満に減少した。対象は、移植後2ヶ月目に、カルシニューリン阻害剤感受性によるクレアチニン上昇のために入院した。用量を調整し、SAEは消散した。約1ヶ月後に、彼は、発熱、グラム陽性球菌およびCMV感染のために入院した。彼は、CMV処置についての治験薬に参加するために、研究から離れた。項E実質臓器移植後の移植片対宿主病の防止患者の採用プロトコールのための候補者を、腎移植を待っている患者または移植について評価されている患者のリストから選択した。この選択プロセスは、UniversityofLouisvilleのInstituteofCellularTherapeuticsの移植外科医および移植看護師コーディネーターが行った。参加基準候補患者は、18歳から65歳の間であり、終末器官不全のための腎移植について施設の基準を満たさなければならない。候補患者は、1回目の腎移植を受けなければならない。候補患者は、腎移植だけを受けなければならない。交差適合は、ドナーとレシピエントとの間で陰性でなければならない。妊娠の可能性がある女性は、TBIの開始前48時間以内に妊娠試験が陰性でなければならず、移植後1年間、信頼できる避妊を用いることに同意しなければならない。候補患者は、現在または過去にドナー特異的抗体の証拠を示してはならない。除外基準患者が臨床的に活性な細菌、真菌、ウイルスもしくは寄生体感染であるか、または妊娠しているならば、その患者は候補者でない。患者が、レシピエントが腎移植片を受けることを妨げるウイルス感染の臨床的または血清学的証拠を示すならば、その患者は適格でない。患者が、TBIを妨げる用量の放射線療法を以前に受けているか、ドナーとレシピエントとの間に陽性の交差適合があるか、またはドナーに対向する免疫記憶についての証拠があるならば、その患者は候補者でない。患者の肥満度指数が18未満または35を超えても、その患者は除外される。ドナー選択基準このプロトコールについてのドナーは、腎臓および幹細胞移植についての施設の基準を全て満たさなければならない。プロトコール全ての操作についてのタイミングは、0日目のレシピエントのTBI前処置に関する。3日目に開始して4日間まで、10μgkgのGCSFをbid投与した。回収は、0日目に開始した。0日目に、CD34計数を行った後に、GCSFの最終用量を投与した。HSChFC移植は、腎臓採集の所望の日時の4~6週間前に予定した。腎臓の提供および移植は、ドナーの血小板数がベースラインおよび腎臓提供のための安全レベルに戻るまで予定しない。GCSF投与のための訪問、血液幹細胞提供および採血をTable7にまとめる。Xは、各訪問時に発生することを示す。移植前の前処置細胞用量、ならびにレシピエントの前処置の程度および型は、生着に影響する独立した変数であった。今回のプロトコールにおいて、細胞用量および前処置は、1ドナーキメリズムが確立されるまで最適化した。HSChFCについての初期の標的細胞用量は、≧1×108CD34kgであった。最初の患者は、200cGyのTBI、フルダラビン、ならびに6ヶ月間または臨床上の必要性に応じてのMMFおよびFK506を用いる移植後免疫抑制を受けた。患者によって薬物に対する耐容能力が異なるので、FK506またはシクロスポリンのいずれを用いるかの決定は、医師に任せた。骨髄は、1日目に注入した。予定をTable8に示す。レシピエントが透析を必要とするならば、フルダラビンの投与およびHSChFC注入は、特定した日の透析の後に行った。HSChFC注入の日の午前に、HSChFCの容量を受け入れるために、1リットルの容量を余分に透析から除去した。次いで、透析を、HSChFC注入の48時間以上後に予定して、細胞が骨髄区画に帰る最適な機会を与えた。転帰最小限でHSChFC注入後約2週間、またはレシピエントが幹細胞移植手順から完全に回復するために必要なだけ長く経過した後に、腎移植を同じドナーから行った。以下のアルゴリズムは、HSChFC移植の転帰に基づいて用いた。1レシピエントが≧1のキメリズムを示し、ドナーに対して耐容性があると決定されたならば、腎臓に対するドナー宿主寛容が確立される間に少なくとも6ヶ月のPrografおよびMMFを投与した。レシピエントは、移植時にCampath1Hまたはいずれのさらなる免疫抑制薬も受けなかった。2レシピエントが生着しないならば、患者を、移植前にフロー交差適合により試験して、ドナー特異的抗体が発生していないことを確実にした。ドナー特異的抗体が存在しないならば、患者は、Campath1Hでの従来のリンパ球枯渇導入を用いる生体腎移植と、その後、FK506およびMMFでの維持免疫抑制とを受けた。ALGのような導入療法についての他のリンパ球枯渇アプローチを、医療の標準に応じてCampathの代わりに用いることができる。3ドナー特異的抗体が発生しているならば、患者を評価し、臨床的に適当な抗体低減プロトコールを移植の前に実行した。患者の感作は予期されなかった。細胞投与アルゴリズム本研究の目的は、GVHDを回避しながら、同種生着のための適当なHSC、hFCおよび前駆細胞を有する移植片を工学的に作製することであった。最大限に可能なアルファベータT細胞用量と結びついた細胞投与アルゴリズムを確立した。例えば、毒性が生じないが生着に耐久性がないならば、最大限に可能なT細胞用量を1単位増加させた。多くのHSC、hFCおよび前駆細胞を含有する最大限に可能なT細胞用量を投与した。用いたアルゴリズムをTable9に示す。この細胞投与は、現在、最大でレシピエントの体重1kgあたり30×106~42×106のアルファベータT細胞を可能にする。レシピエントの体重1kgあたり38×106のアルファベータT細胞が開始用量であった。各患者を少なくとも28日間追跡した。生着の証拠が観察されないならば、最大限に可能なアルファベータTCR用量を1単位増加した。最大限に可能なアルファベータTCR用量は、著しいGVHDなしで安定な生着が達成されるまで対象において増加した。HLA一致移植片について、最大T細胞キャップはなく、細胞用量は、一致移植片の転帰に基づいて増加しなかった。ミスマッチである患者について、最大限に可能なアルファベータTCR用量を決定した。有意なドナー生着が最初の28日以内に観察されたならば、対象をさらに28日間追跡して、急性GVHDの発生を評価した後に、細胞用量を増加した。急性GVHDの大多数の症例は、移植後8週間までに明らかになると予想された。重度のGVHDの証拠が観察されたならば、最大限に可能なT細胞用量を、安全であると証明されているレベルまで低減した。現在までに、GVHDは観察されていない。HSChFCドナーPBMCを処理して、hFCおよびHSCを濃縮した。強磁性アプローチを用いて、GVHD生成T細胞およびB細胞を含む全骨髄組成物のおよそ85を除去した。得られた生成物は、hFC、HSCおよび前駆細胞が濃縮されていた。処理の妥当性をフローサイトメトリーにより確認した後に、HSChFC移植片を注入のために承認した。ドナー細胞採集の72時間後までの骨髄移植の遅延を許容して、骨髄処理および移植を可能にした。用量を調整したBactrimとValcyteまたはValtrexでの予防を開始した。患者は、例えば呼吸、血圧または過敏症を示し得る血管浮腫におけるいずれの変化についても検出するために、骨髄の注入中および注入後に注意深くモニタリングした。移植後免疫抑制このプロトコールに参加した対象は、担当医師の判断で、そして施設のプロトコールに従って、標準的な免疫抑制を受けた。1ヶ月目でドナーキメリズムの証拠がない死亡ドナーの腎臓HSChFCのレシピエントおよび生存ドナーのHSChFCのレシピエントについて、これは、全般的に、ALGまたはCampathでのリンパ球枯渇導入療法の後のPrografとMMFとを含んだ。Prografのレベルは、8~12ngmlの間に維持した。0日目に開始して、MMFを、全般的に、1~15gmbidで投与した。1回用量のCampathを30mgIVで、手術室において場合によって与えた。SoluMedrolは、Campath用量の1時間前に手術室において500mgIVの用量で、次いで手術後の1日目に250mgIVの用量で、手術後の2日目に125mgの用量で与えた。FK506およびMMFは、キメラである患者において少なくとも6ヶ月間継続して、生着および寛容誘導を助長した。予備的実質臓器移植プロトコール予備的実験は、腎移植レシピエントにおけるHSChFCおよび免疫に基づく骨髄非破壊的前処置の成功と安全性を証明した。HSChFCの投与を行って、安全性を最大限にし、HSCおよびhFC含量を最適化した。全体的な目的は、GVHDを完全に回避することであった。実質臓器寛容プロトコールを、レシピエントの体重1kgあたり最大で02×106のT細胞を用いて開始して、用量漸増を行った。GVHDについての他のエフェクター細胞が、全アルファベータT細胞に対して比例する量で全て存在するため、全アルファベータT細胞を用量漸増実験において用いた。CD34およびhFC用量を、最大限に可能なT細胞用量内で最適化した。著しい免疫学的事象は、いずれの患者においても観察されなかった。GVHDを発症した患者はいなかったが、一過性のキメリズムだけが観察された。2004年9月以降、9名の心臓患者および11名の腎臓患者に、Table10に示す用量漸増方策を用いて移植を行った。Table10において強調する患者5、6、12および13について、より詳細に記載する。3名の患者は、生存ドナーからの腎臓HSChFC同時移植を受け、残りの患者は、死亡ドナーから腎臓を受けた。4名の患者は全て、200cGyのTBIで前処置され、Campathでのリンパ球枯渇導入療法を受けた後に、MMFおよびカルシニューリン阻害剤での維持免疫抑制を受けた。彼らは、フルダラビンを受けなかった。これらの4名の患者について、以下に簡単に記載する。患者5は、55歳の男性であり、2005年9月に死亡ドナー腎臓同種移植HSChFC移植を受けた。患者は、レシピエントの体重1kgあたり37×106のCD34および08×106のhFCを受けた。前処置は耐容性がよく、アプローチに関連する有害事象は発生しなかった。ドナーとレシピエントとは、16のHLA抗原一致があった。患者は、予測される最下点を経験し、次いで、免疫機能および内因性の造血を回復した。彼は、最近の血清クレアチニンが21で、良好である。患者6は、58歳の男性であり、2005年11月に生体腎臓HSChFC移植を関連のない友人から受けた。患者は、レシピエントの体重1kgあたり133×106のCD34および018×106のhFCを受けた。前処置は耐容性がよく、アプローチに関連する有害事象は発生しなかった。ドナーとレシピエントとは、16のHLA抗原一致があった。患者は、予測される最下点を経験し、次いで、免疫機能および内因性の造血を回復した。彼は、最近の血清クレアチニンが20で、良好である。患者12は、37歳の女性であり、2007年10月に生体腎臓HSChFC移植を彼女のいとこから受けた。彼女は、レシピエントの体重1kgあたり224×106のCD34および041×106のhFCを受けた。前処置は耐容性がよく、アプローチに関連する有害事象は発生しなかった。ドナーとレシピエントとは、26のHLA抗原一致があった。患者は、予測される最下点を経験し、次いで、免疫機能および内因性の造血を回復した。彼女は、最近のクレアチニンが12で、良好である。患者13は、49歳の女性で、2007年11月に腎臓HSChFC移植を彼女の兄弟から受けた。患者は、レシピエントの体重1kgあたり385×106のCD34および078106のhFCを受けた。前処置は耐容性がよく、アプローチに関連する有害事象は発生しなかった。ドナーとレシピエントとは、46のHLA抗原一致があった。患者は、予測される最下点を経験し、次いで、免疫機能および内因性の造血を回復した。彼女は、最近のクレアチニンが12で、良好である。予備的プロトコールの結果初期において、観察されたキメリズムは低く、一過性だけであった。しかし、全細胞用量を増加すると、耐久性のある混合キメリズムが達成された。移植片に対する免疫応答は、混合リンパ球反応アッセイにおける一過性のドナー特異的寛容および臨床的または組織学的拒絶エピソードが存在しないことにより証明されるように、骨髄注入により調節された。生着しなかったこれらの患者において内因性の造血が回復したことにより、前処置の非骨髄破壊的性質が確認された。7日間から18日間の間にレシピエントにおいて発生した1000未満の好中球絶対数の予測される最下点があり、これは、患者12において外来患者として管理された。GCSFの投与は回復を加速しなかった。MMFおよびFK506を最下点の間に継続して、生着を助長した。B細胞、CD4細胞およびCD8細胞の回復は、3ヶ月目までにCampathリンパ球枯渇レシピエント12において発生した。血小板数を実質臓器移植の後に決定した。存在するならば、血小板最下点は、典型的に短く、通常、輸血療法を必要としなかった。実質移植患者において確立されたキメリズムを、図9Cおよび10Bに示す。実質臓器移植についての改変プロトコールフルダラビン前処置を加え、腎臓移植片を配置する1ヶ月前にHSChFCを投与して生体移植を逐次的に行うために、腎臓HSChFC移植プロトコールを改変した。1回目の移植を2008年3月に行ったの患者15。彼女は、31歳の女性であり、彼女の夫が彼女のドナーであった。患者は、現在、最下点期間にあり、外来患者として良好である。14日目に行ったフロー交差適合は、陰性であった。このアッセイにおいて、ドナーTおよびB細胞への抗体の結合を、MCDF単位でのフローサイトメトリー分析により測定した。これらの結果は、非骨髄破壊的前処置の安全性、ならびにHSChFC処理および生成物の実質臓器移植における実現性を証明した。いずれのレシピエントもドナーに対して感作されなかったことが注目される。項F腎臓移植ドナーおよびレシピエントの適格性全てのプロトコールは、NorthwesternInstitutionalReviewBoard、FDAIND13881により承認され、全てのドナーおよびレシピエントからインフォームドコンセントを得た。ドナーおよびレシピエントは、適切な生体移植ドナーおよびレシピエントとして施設の基準を満たさなければならなかった。参加者は、研究への参加を考慮されるために、移植前ドナーおよびレシピエント評価の全ての段階を完了しなければならなかった。移植レシピエントについての参加基準は、18歳から65歳の間の年齢、フローPRA分析により評価されるドナー特異的抗体の非存在、および生体腎臓移植片だけを受けることを含んだ。妊娠可能年齢の女性は、TBIを受ける前48時間以内に妊娠試験が陰性でなければならず、移植後1年間、信頼できる避妊を用いることに同意しなければならない。除外基準は、臨床的に活性な細菌、真菌、ウイルスまたは寄生体感染、妊娠、TBIを妨げる用量の以前の放射線療法、ドナーとレシピエントとの間の陽性のフローサイトメトリー交差適合、ドナー特異的抗体の存在、肥満度指数35または80kgであるならば125gmを1日2回を3日目に開始し、全体を通して継続した。HSChFCは、レシピエントに、0日目または1日目に投与できる。造血幹細胞回収腎移植の少なくとも2週間前に、ドナーを、10mcgkgbidの顆粒球コロニー刺激因子を用いて動員し、アフェレーシスを4日目に行った。生成物を配達業者によりInstituteforCellularTherapeuticsに輸送し、成熟移植片対宿主病生成細胞を除去しながら造血幹細胞、促進細胞および前駆細胞を保持するために処理した。生成物を、次いで、新鮮な生成物または低温保存されたもののいずれかとして、注入のためにNorthwesternUniversityに送り返した。免疫学的モニタリングPHA、カンジダ、破傷風トキソイド、ドナーおよび第三者同種抗原に対するレシピエントの応答を毎月試験した。ドナー抗体を検出するためのフロー交差適合アッセイを1および6ヶ月目に行った。キメリズム試験を、ショートタンデムリピートを用いる分子アッセイにより行った。調査監視生検を1年目に行った。選択された時点にて、末梢血の免疫表現型分析をT細胞、B細胞、NK細胞、単球、CD4CD25FoxP3制御性T細胞およびTエフェクター細胞の回復について行った。キメリズム試験キメリズムを、ショートタンデムリピートをコードする単純配列長多型の遺伝子型決定により決定した。系列キメリズム試験のために、CD19、CD3およびCD66B骨髄系細胞を全血から選別し、次いで、分子STRタイピングにより分析した。免疫抑制の離脱PrografおよびMMFを、医療の標準に応じて、移植後6ヶ月まで継続した。この時点で、キメリズムまたはドナー特異的寛容が存在するならば、MMFをまず中止し、次いで、Prografを、その後数ヶ月間で治療量未満に漸減させた。Prografは、キメリズムおよびまたはinvitroドナー特異的反応性低下の証拠が存在するならば、12ヶ月目に中止した。結果対象1~対象9のまとめを以下のTable12に示し、Table13は、細胞投与計画を示す。数人の対象について、以下により詳細に論じる。対象3は、43歳の白人男性であり、多発性嚢胞腎疾患によりESRDを発症した。6つのうち1つのHLAが一致した無関係の利他的ドナーが彼のドナーであった。レシピエントの体重1kgあたり合計で38×106のアルファベータTCRT細胞、253×106のCD34細胞および448×106のFCの低温保存生成物を注入した。レシピエントは、1ヶ月目で95のドナーキメリズムを示し、キメリズムは、移植後18ヶ月にわたって63から100の間で変動した。12ヶ月目に、多系列試験は、100のB細胞、T細胞および骨髄系の生成を明らかにした。フロー交差適合は、1ヶ月目および6ヶ月目に陰性であった。5ヶ月目に、レシピエントは、ドナー特異的寛容および第三者の同種抗原に応答する免疫能を示した。これは12ヶ月間持続した。彼の腎機能は、クレアチニン生成量に基づいて、安定したままである。対象は、6~15日目の間に一過性の最下点を示し、これは外来患者として管理された。対象5は、40歳の男性であり、彼の腎機能不全は、続発性から慢性の糸球体腎炎であった。彼は、FC腎臓の組み合わせ移植を、6つのうち1つのHLAが一致した無関係のドナーから受けた。彼の生成物は、レシピエントの体重1kgあたり38×106のアルファベータTCRT細胞、07×106のFCおよび394×106のCD34細胞を含んだ。最下点は、前の対象と同様のパターンをたどった。キメリズムは、1ヶ月目で100、3ヶ月目で92および5ヶ月目で94であった。ドナー特異的寛容プロフィールは、PHAおよび第三者同種抗原に対する応答とともに3ヶ月目に出現し始めた。対象6は、39歳の女性であり、逆流に続いてESRDを発症した。彼女は、2回目の腎移植を、6つのうち2つのHLAが一致した無関係のドナーから受けた。生成物は、レシピエントの体重1kgあたり38×106のアルファベータTCRT細胞、859×106のCD34および311×106のFC細胞からなった。レシピエントは、1ヶ月目に100のドナーキメリズムを示した。hFCおよび生体腎移植のまとめ移植された9名の対象のうち、非骨髄破壊的前処置は耐容性がよかった。さらに、全ての対象についての移植後最下点期間は、外来患者として管理が容易であった。9名の対象のうち8名が、1ヶ月目に6~100の範囲で移植後にマクロキメリズムを示した。耐久性のあるキメリズムが、対象の大多数で達成された。1名の対象は、免疫抑制から完全に離脱した。数名の対象は、ドナー特異的反応性低下の証拠を示し、免疫抑制から離脱しようとしている。対象は、マイトジェン、カンジダおよびMHCが異なる第三者の同種抗原に応答する免疫適格性があった。対象は、HLAミスマッチにもかかわらず、いずれもGVHDを発症しなかった。項G代謝障害遺伝性代謝障害の処置対象1は、異染性白質ジストロフィーの7歳の小児であった。彼は、6つのうち3つのHLAが一致した移植片を、異染性白質ジストロフィーの形質を有する父親から受けた。対象は、上の項C、実施例2に記載したことと本質的に同様にして前処置を受けた。彼は、外来患者として前処置および注入に対して耐容性が非常によかった。彼は、体重1kgあたり144×106のCD34細胞、体重1kgあたり38×106のアルファベータTCR細胞および体重1kgあたり41×106のFCを受けた。彼の最下点は短く、輸血療法を必要としなかった。分子STRによる彼のキメリズムは、80~98の間の範囲である。移植後14ヶ月目に、レシピエントはGVHDを示さなかった。この対象についてのMLRの結果は、ドナーに対する寛容を示し、耐久性のある長期の生着の可能性が確認された。移植前に、対象のアリールスルファターゼA酵素レベルは3であったが、これと比較してドナーのレベルは移植後に50であった。対象のレベルは移植後3および6ヶ月でおよそ50であり、移植後1年目で886であった。これは、表現型が正常な患者の酵素レベルを示す。その他の実施形態方法および組成物について、その詳細な説明とともに記載したが、上記の記載は、説明を意図し、本発明の範囲を限定せず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲により定義されることが理解される。他の態様、利点および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。