"一般式2式中、R1は炭素数1から3のアルキル基を表し、R2は炭素数1から8のアルキル基または炭素数1から8のハロアルキル基を表し、R3は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表し、R4は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表す。R3とR4は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。R5-1、R5-2、R5-3およびR5-4は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、R6-1、R6-2およびR6-3は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基または炭素数1から3のアルコキシ基を表し、Xはハロゲン原子、炭素数1から8のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。で表される、4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。R6-1、R6-2およびR6-3が各々独立に水素原子またはメトキシ基である、請求項1に記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。R5-1、R5-2、R5-3、R5-4、R6-1、R6-2およびR6-3が水素原子である、請求項1に記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。R1がメチル基である、請求項1から3のいずれかに記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。R3およびR4がメチル基である、請求項1から4のいずれかに記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。R2がエチル基、3-ヨードプロピル基、4-ヨードブチル基、5-ヨードペンチル基または6-ヨードヘキシル基である、請求項1から5のいずれかに記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。Xがヨウ素原子またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基である、請求項1から6のいずれかに記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。一般式2が、下記一般式2a式中、R2aは3-ヨードプロピル基、4-ヨードブチル基、5-ヨードペンチル基または6-ヨードヘキシル基を表す。である請求項1に記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。一般式2が、下記式2bである、請求項1に記載の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩。一般式4式中、R1は炭素数1から3のアルキル基を表し、R2は炭素数1から8のアルキル基または炭素数1から8のハロアルキル基を表し、R6-1、R6-2およびR6-3は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基または炭素数1から3のアルコキシ基を表し、Xはハロゲン原子、炭素数1から8のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。で表される4-アルコキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム塩を、縮合剤の存在下、一般式5式中、R3は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表し、R4は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表す。R3とR4は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。R5-1、R5-2、R5-3およびR5-4は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表す。で表されるベンズアルデヒド誘導体と反応させる、一般式2式中、R1、R2、R3、R4、R5-1、R5-2、R5-3、R5-4、R6-1、R6-2、R6-3およびXは前記と同じ意味を表す。で表される4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩の製造方法。一般式2式中、R1は炭素数1から3のアルキル基を表し、R2は炭素数1から8のアルキル基または炭素数1から8のハロアルキル基を表し、R3は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表し、R4は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表す。R3とR4は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。R5-1、R5-2、R5-3およびR5-4は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、R6-1、R6-2およびR6-3は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基または炭素数1から3のアルコキシ基を表し、Xはハロゲン原子、炭素数1から8のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。で表される4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、該4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩の蛍光増感を観測することにより、二本鎖核酸を検出する方法。エチジウムブロミドやオキサゾールイエロー等二本鎖核酸を検出するのに用いられる従来の蛍光色素は、ストークスシフトが小さい、蛍光強度が弱いといった問題があった。具体的には、エチジウムブロミドには、蛍光強度値が低く、当該色素と核酸との接触による蛍光強度値の増加の割合、いわゆる蛍光増感率が小さいという問題があった。オキサゾールイエローには、ストークスシフトが小さいという問題があった。また非特許文献2に開示の2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩は、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素として用いることができるが、ストークスシフトが小さく、蛍光強度値が低く、蛍光増感率も小さいため、実用には十分ではないという問題があった。本発明の課題は、ストークスシフトが大きく、蛍光強度値が大きく、さらに蛍光増感率も大きい、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素を提供することにある。本発明者らは、上記課題を鑑み鋭意検討を重ねた結果、本発明の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩が、ストークスシフトが大きく、蛍光強度値が大きく、さらに蛍光増感率も大きい、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素であることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明は、一般式2式中、R1は炭素数1から3のアルキル基を表し、R2は炭素数1から8のアルキル基または炭素数1から8のハロアルキル基を表し、R3は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表し、R4は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表す。R3とR4は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。R5-1、R5-2、R5-3およびR5-4は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、R6-1、R6-2およびR6-3は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基または炭素数1から3のアルコキシ基を表し、Xはハロゲン原子、炭素数1から8のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。で表される4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩に関し、その具体例として、下記一般式2a式中、R2aは3-ヨードプロピル基、4-ヨードブチル基、5-ヨードペンチル基または6-ヨードヘキシル基を表す。、および下記式2bがある。また本発明は、一般式4式中、R1は炭素数1から3のアルキル基を表し、R2は炭素数1から8のアルキル基または炭素数1から8のハロアルキル基を表し、R6-1、R6-2およびR6-3は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基または炭素数1から3のアルコキシ基を表し、Xはハロゲン原子、炭素数1から8のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。で表される4-アルコキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム塩を、縮合剤の存在下、一般式5式中、R3は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表し、R4は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表す。R3とR4は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。R5-1、R5-2、R5-3およびR5-4は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表す。で表されるベンズアルデヒド誘導体と反応させる、一般式2式中、R1、R2、R3、R4、R5-1、R5-2、R5-3、R5-4、R6-1、R6-2、R6-3およびXは前記と同じ意味を表す。で表される4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩の製造方法に関する。さらに本発明は、一般式2式中、R1は炭素数1から3のアルキル基を表し、R2は炭素数1から8のアルキル基または炭素数1から8のハロアルキル基を表し、R3は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表し、R4は水素原子または炭素数1から3のアルキル基を表す。R3とR4は結合している窒素原子と一体となって複素環を形成してもよい。R5-1、R5-2、R5-3およびR5-4は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基で置換していてもよいアミノ基、メトキシ基またはフッ素原子を表し、R6-1、R6-2およびR6-3は各々独立に水素原子、炭素数1から3のアルキル基または炭素数1から3のアルコキシ基を表し、Xはハロゲン原子、炭素数1から8のアルコキシスルホニルオキシ基、メチルスルホニルオキシ基またはトリフルオロメチルスルホニルオキシ基を表す。で表される4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、該4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩の蛍光増感を観測することにより、二本鎖核酸を検出する方法に関する。本発明の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩は、二本鎖核酸を検出するための蛍光色素として用いることができる。また本発明の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩は、非特許文献2で開示の2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩と比較し、大きなストークスシフト、強い蛍光強度、および高い蛍光増感を示すため、遺伝子検査、遺伝子診断、遺伝子研究の分野等で極めて有用である。以下に、本発明を詳細に説明する。本発明の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩以下、本発明の蛍光色素という中、R1で表される炭素数1から3のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、メチル基がR1として好ましい。本発明の蛍光色素中、R2で表される炭素数1から8のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基を例示することができる。また、R2で表される炭素数1から8のハロアルキル基としては、ブロモメチル基、2-ブロモエチル基、3-ブロモプロピル基、4-ブロモブチル基、5-ブロモペンチル基、6-ブロモヘキシル基、7-ブロモヘプチル基、8-ブロモオクチル基、ヨードメチル基、2-ヨードエチル基、3-ヨードプロピル基、4-ヨードブチル基、5-ヨードペンチル基、6-ヨードヘキシル基、7-ヨードヘプチル基、8-ヨードオクチル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、エチル基、3-ヨードプロピル基、4-ヨードブチル基、5-ヨードペンチル基または6-ヨードヘキシル基がR2として好ましい。本発明の蛍光色素中、R3およびR4で表される炭素数1から3のアルキル基としては、直鎖状、分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基を例示することができる。また、R3とR4が結合している窒素原子と一体となって形成される複素環としては、該窒素原子を含む複素環の名称で例示すると、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、メチル基がR3およびR4として好ましい。本発明の蛍光色素中、R5-1、R5-2、R5-3およびR5-4で表される炭素数1から3のアルキル基で置換していてもよいアミノ基としては、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、水素原子がR5-1、R5-2、R5-3およびR5-4として好ましい。本発明の蛍光色素中、R6-1、R6-2およびR6-3で表される炭素数1から3のアルキル基としては、直鎖状または分岐状のいずれであってもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基を例示することができる。また、R6-1、R6-2およびR6-3で表される炭素数1から3のアルコキシ基としては、直鎖状または分岐状のいずれであってもよく、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロピルオキシ基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、水素原子、メチル基またはメトキシ基がR6-1、R6-2およびR6-3として好ましい。本発明の蛍光色素中、Xで表されるハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を例示することができる。またXで表される炭素数1から8のアルコキシスルホニルオキシ基としては、メトキシスルホニルオキシ基、エトキシスルホニルオキシ基、プロポキシスルホニルオキシ基、ブトキシスルホニルオキシ基、ペントキシスルホニルオキシ基、ヘキサノキシスルホニルオキシ基、ヘプタノキシスルホニルオキシ基、オクタノキシスルホニルオキシ基を例示することができる。中でも蛍光強度が強い点で、ヨウ素原子またはトリフルオロメチルスルホニルオキシTfO基がXとして好ましい。次に、本発明の蛍光色素の製造方法以下、単に本発明の製造方法というについて詳細に説明する。本発明の蛍光色素2は、下記スキームにより製造することができる。式中、R1、R2、R3、R4、R5-1、R5-2、R5-3、R5-4、R6-1、R6-2、R6-3およびXは前記と同じ意味を表す。本発明の製造方法は、4-アルコキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム塩4とベンズアルデヒド誘導体5を縮合させ、本発明の蛍光色素2を製造する方法である。本発明の製造方法の原料である4-アルコキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム塩4は、例えば文献記載の方法DyesandPigments,11,21-351989:非特許文献3を参考に、対応する4-アルコキシ-2-メチルベンゾチアゾール誘導体から調製することができる。なお本発明の製造方法は、縮合剤の存在下に行なうことが必須であり、縮合剤としては塩基または脱水剤を用いることができる。本工程の縮合剤として用いることのできる塩基としては、ピペリジン、ピロリジン、モルフォリン等の有機塩基を例示することができる。また、本工程の縮合剤で用いることのできる脱水剤としては、無水酢酸、無水トリフルオロ酢酸等の酸無水物を例示することができる。中でも収率が良い点で、ピペリジンまたは無水酢酸が縮合剤として好ましい。本工程の反応は反応を阻害しない溶媒であれば、溶媒中で行なってもよい。本工程で用いることができる溶媒として、具体的には、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、1,4-ジオキサン、メチル-tert-ブチルエーテル、1,2-ジメトキシエタン、シクロペンチルメチルエーテル等のエーテル系溶媒、ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、シクロヘキサン等の炭化水素系溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、1,2-ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、N-メチル-2-ピロリドン、1,3-ジメチル-3,4,5,6-テトラヒドロ-21H-ピリミジノン等の非プロトン性極性溶媒、メタノール、エタノール、tert-ブチルアルコール等のアルコール系溶媒、水等を例示することができ、これらの溶媒の中から2種類以上を混合して用いてもよい。また前述した縮合剤である、ピペリジン、ピロリジン、モルフォリン等の有機塩基、無水酢酸、無水トリフルオロ酢酸等の酸無水物を溶媒として用いてもよい。4-アルコキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム塩4とベンズアルデヒド誘導体5とのモル比に特に制限はないが、1:1から1:10の範囲が好ましく、中でも収率が良い点で1:1から1:3がさらに好ましい。また、4-アルコキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム塩4と縮合剤とのモル比も特に制限はないが、縮合剤を溶媒として用いない場合には、1:1から1:10が好ましく、中でも収率が良い点で1:1から1:3がさらに好ましい。本工程の反応温度は、-78°Cから150°Cの範囲から適宜選ばれた温度で行なうことができる。中でも収率が良い点で室温から120°Cの範囲が好ましい。本工程で得られた、本発明の蛍光色素2は、必要に応じて反応終了後、反応溶液から精製することで得ることができる。精製する方法には特に限定はないが、溶媒抽出、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー、分取液体クロマトグラフィー、再結晶または昇華等の汎用的な方法で目的物を精製することができる。本発明の蛍光色素2は、二本鎖核酸と分子間相互作用することにより顕著な蛍光増感を示すので、二本鎖核酸の検出に用いることができる。分子間相互作用の方法に特に制限はないが、例えば、インターカレーション、マイナーグルーブバインディング、メジャーグルーブバインディング等があげられる。好ましくはインターカレーションまたはマイナーグルーブバインディングであり、さらに好ましくはインターカレーションである。検出対象の二本鎖核酸は、二本鎖DNA、二本鎖RNA、DNA-RNAハイブリッドのいずれであってもよく、PCR等に代表される核酸増幅反応により合成された二本鎖核酸、化学的に合成された二本鎖核酸、血液、組織、細胞等の生体由来試料から抽出された二本鎖核酸、食品、土壌、排水等から分離された微生物由来試料から抽出された二本鎖核酸等を用いることができる。本発明の蛍光色素2と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、該蛍光色素2の蛍光増感を観測する溶媒に特に制限はないが、緩衝液を用いると好ましい。該緩衝液としては、トリス-塩酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、HEPES-KOH緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液を例示することができる。また、検出対象の二本鎖核酸の熱的安定性の向上を目的に、前述の緩衝液に任意の濃度で無機塩を添加してもよい。用いることのできる無機塩としては、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、臭化マグネシウム、臭化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム等を例示することができ、これらの無機塩の中から2種類以上を混合して用いてもよい。なお、無機塩の添加濃度は0Mから5Mの範囲が好ましい。前述の緩衝液に、さらに0から80の割合で該緩衝液と混和可能な有機溶媒を添加してもよい。該有機溶媒としては、ジメチルスルホキシド、メタノール、エタノール、ヘキサメチルリン酸トリアミド、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、1,4-ジオキサン、テトラヒドロフランを例示することができ、これらの有機溶媒の中から2種類以上を混合して用いてもよい。有機溶媒の添加割合は、検出対象の二本鎖核酸が安定して存在する点で、0から20の範囲が好ましい。本発明の蛍光色素2と二本鎖核酸とを分子間相互作用させ、本発明の蛍光色素2の蛍光増感を観測する温度に特に制限はないが、検出対象の二本鎖核酸の融解温度Tm値以下である0°Cから80°Cが好ましく、0°Cから60°Cの範囲が特に好ましい。次に本発明を実施例および参考例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。実施例1アルゴン雰囲気下、3-エチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート931mg,2.60mmol、4-ジメチルアミノベンズアルデヒド420mg,2.82mmolと無水酢酸10mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン5.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-エチル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート1.17g,収率92を紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ8.02d,J=15.2Hz,1H,7.91d,J=9.0Hz,2H,7.83dd,J=8.1Hz,1H,7.62t,J=8.1Hz,1H,7.57d,J=15.2Hz,1H,7.40d,J=8.1Hz,1H,6.83d,J=9.0Hz,2H,4.98q,J=7.0Hz,2H,4.06s,3H,3.11s,6H,1.47t,J=7.0Hz,3H.実施例2アルゴン雰囲気下、3-3-ヨードプロピル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージド35.9mg,0.076mmol、4-ジメチルアミノベンズアルデヒド14.0mg,0.094mmolと無水酢酸1.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン5.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-3-ヨードプロピル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=ヨージド16.7mg,収率36を黒紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ8.04d,J=15.3Hz,1H,7.91d,J=9.6Hz,2H,7.84d,J=8.1Hz,1H,7.62t,J=8.1Hz,1H,7.52d,J=15.3Hz,1H,7.42d,J=8.1Hz,1H,6.89d,J=9.6Hz,2H,5.10-4.90m,2H,4.09s,3H,3.47t,J=7.4Hz,2H,3.12s,6H,2.41-2.37m,2H.実施例3アルゴン雰囲気下、3-4-ヨードブチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージド1.36g,2.78mmol、4-ジメチルアミノベンズアルデヒド416.6mg,2.79mmolと無水酢酸12.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン5.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-4-ヨードブチル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=ヨージド1.41g,収率82を紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ8.07d,J=15.2Hz,1H,7.91d,J=9.0Hz,2H,7.83d,J=8.1Hz,1H,7.62d,J=8.1Hz,1H,7.54d,J=15.2Hz,1H,7.39d,J=8.1Hz,1H,6.84d,J=9.0Hz,2H5.10-5.00m,2H,4.07s,3H,3.40-3.35m,2H,3.11s,6H,2.00-1.90m,4H.実施例4アルゴン雰囲気下、3-5-ヨードペンチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージド39.6mg,0.073mmol、4-ジメチルアミノベンズアルデヒド20.2mg,0.14mmolと無水酢酸1.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン2.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-5-ヨードペンチルベンゾチアゾリウム=ヨージド11.2mg,収率24を黒紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ8.06d,J=15.3Hz,1H,7.91d,J=9.2Hz,2H,7.83d,J=8.2Hz,1H,7.63t,J=8.2Hz,1H,7.56d,J=15.3Hz,1H,7.39d,J=8.2Hz,1H,6.83d,J=9.2Hz,2H,4.96-4.93m,2H,4.06s,3H,3.30-3.29m,2H,3.11s,6H,1.90-1.80m,4H,1.60-1.50m,2H.実施例5アルゴン雰囲気下、3-6-ヨードヘキシル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージド38.6mg,0.075mmol、4-ジメチルアミノベンズアルデヒド16.6mg,0.11mmolと無水酢酸1.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン2.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-6-ヨードヘキシルベンゾチアゾリウム=ヨージド12.9mg,収率27を黒紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ8.03d,J=15.3Hz,1H,7.91d,J=9.0Hz,2H,7.83d,J=8.1Hz,1H,7.62t,J=8.1Hz,1H,7.56d,J=15.3Hz,1H,7.40d,J=8.1Hz,1H,6.85d,J=9.0Hz,2H,4.94t,J=8.0Hz,2H,4.07s,3H,3.29t,J=6.8Hz,2H,3.12s,6H,1.90-1.70m,4H,1.52-1.40m,4H.実施例6アルゴン雰囲気下、3-エチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート238.6mg,0.67mmol、4-ジメチルアミノ-3-フルオロベンズアルデヒド122.8mg,0.73mmolと無水酢酸1.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン2.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジメチルアミノ-3-フルオロスチリル]-3-エチル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート356.6mg,収率90を紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ8.05d,J=15.5Hz,1H,8.00dd,J=2.0,16.1Hz,1H,7.87d,J=8.2Hz,1H,7.72d,J=15.5Hz,1H,7.68m,1H,7.66t,J=8.2Hz,1H,7.43d,J=8.2Hz,1H,6.96t,J=9.2Hz,1H,5.03q,J=7.0Hz,2H,4.07s,3H,3.04d,J=2.0Hz,6H,1.48t,J=7.0Hz,3H.19F-NMR376MHz,CDCl3:δ-77.7s,3F,-123.1s,1F.実施例7アルゴン雰囲気下、3-エチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート101.8mg,0.28mmol、4-ジメチルアミノ-2-フルオロベンズアルデヒド47.5mg,0.28mmolと無水酢酸1.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン2.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジメチルアミノ-2-フルオロスチリル]-3-エチル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート111.7mg,収率74を紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ8.06t,J=9.0Hz,1H,7.95d,J=15.4Hz,1H,7.84d,J=8.1Hz,1H,7.64t,J=8.1Hz,1H,d,J=15.4Hz,1H,7.42d,J=8.1Hz,1H,6.73dd,J=2.5,9.0Hz,1H,6.66dd,J=2.5,15.2Hz,1H,4.98q,J=7.1Hz,2H,4.07s,3H,3.11s,6H,1.48t,J=7.1Hz,3H.19F-NMR376MHz,CDCl3:δ-77.7s,3F,-122.2s,1F.実施例8アルゴン雰囲気下、3-エチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート104.3mg,0.29mmol、4-ジエチルアミノ-3-メトキシベンズアルデヒド60.5mg,0.29mmolと無水酢酸1.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン2.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-2-[4-ジエチルアミノ-3-メトキシスチリル]-3-エチル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート113.9mg,収率90を黒紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ8.07d,J=15.1Hz,1H,7.92d,J=9.0Hz,1H,7.75d,J=8.1Hz,1H,7.57t,J=8.1Hz,1H,7.45d,J=15.1Hz,1H,7.36d,J=8.1Hz,1H,6.51dd,J=2.0,9.0Hz,1H,6.24d,J=2.0Hz,1H,4.90q,J=7.1Hz,2H,4.04s,3H,3.97s,3H,3.53q,J=7.0Hz,4H,1.45t,J=7.1Hz,3H,1.18t,J=7.0Hz,6H.19F-NMR376MHz,CDCl3:δ-77.7s,3F.実施例9アルゴン雰囲気下、3-エチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート128.9mg,0.36mmol、4-1-ピロリジニルベンズアルデヒド69.4mg,0.40mmolと無水酢酸1.0mLの混合物を、110°Cで一晩撹拌した。反応混合物にトルエン2.0mLを加えて減圧濃縮を行ない、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、E-3-エチル-4-メトキシ-2-[4-1-ピロリジニルスチリル]ベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート184.4mg,収率99を紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ8.01d,J=15.2Hz,1H,7.91d,J=8.8Hz,2H,7.81d,J=8.1Hz,1H,7.61t,J=8.1Hz,1H,7.53d,J=15.2Hz,1H,7.38d,J=8.1Hz,1H,6.79d,J=8.8Hz,2H,4.97q,J=7.0Hz,2H,4.06s,3H,3.42t,J=6.4Hz,4H,2.02-1.98m,4H,1.46t,J=7.0Hz,3H.19F-NMR376MHz,CDCl3:δ-77.7s,3F.実施例10実施例1と同様な方法で、3-エチル-4,7-ジメトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナートと4-ジメチルアミノベンズアルデヒドを反応させ、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-エチル-4,7-ジメトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナートの緑色固体70を得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ8.13d,J=15.2Hz,1H,7.90d,J=9.0Hz,2H,7.55d,J=15.2Hz,1H,7.34d,J=9.0Hz,1H,7.22d,J=9.0Hz,1H,6.83d,J=9.0Hz,2H,4.95q,J=7.1Hz,2H,4.00s,3H,3.99s,3H,3.11s,6H,1.45t,J=7.1Hz,3H.19F-NMR376MHz,CDCl3:δ-77.7s,3F.実施例11実施例1と同様な方法で、3-エチル-4,6-ジメトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージドと4-ジメチルアミノベンズアルデヒドを反応させ、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-エチル-4,6-ジメトキシベンゾチアゾリウム=ヨージドの赤褐色固体85を得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ7.93d,J=15.2Hz,1H,7.78d,J=9.0Hz,2H,7.53d,J=15.2Hz,1H,7.48d,J=2.3Hz,1H,6.95d,J=2.3Hz,1H,6.82d,J=9.0Hz,2H,4.93q,J=7.1Hz,2H,4.03s,3H,3.88s,3H,3.09s,6H,1.44t,J=7.1Hz,3H.実施例12実施例1と同様な方法で、3-エチル-4,5,6,7-テトラメトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナートと4-ジメチルアミノベンズアルデヒドを反応させ、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-エチル-4,5,6,7-テトラメトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナートの緑色固体55を得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ8.34d,J=15.1Hz,1H,7.91d,J=9.0Hz,2H,7.56d,J=15.1Hz,1H,6.84d,J=9.0Hz,2H,4.87q,J=7.1Hz,2H,4.05s,3H,4.03s,3H,3.96s,3H,3.95s,3H,3.12s,6H,1.46t,J=7.1Hz,3H.19F-NMR376MHz,CDCl3:δ-77.7s,3F.実施例13アルゴン雰囲気下、3-エチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート107mg,0.30mmol、4-ジメチルアミノベンズアルデヒド51.8mg,0.35mmolとピペリジン9.0μL,0.090mmolのエタノール2.0mL溶液を、90°Cで一晩撹拌を行なった。反応混合物を室温に戻した後減圧濃縮を行ない、得られた粗成生物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]により精製することで、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-エチル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート50mg,収率34を紫色の固体として得た。実施例14アルゴン雰囲気下、3-4-ヨードブチル-4,7-ジメトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージド201mg,0.39mmolと4-ジメチルアミノベンズアルデヒド59.0mg,0.39mmolの無水酢酸1.0mL懸濁液を、110°Cで一晩撹拌を行なった。反応混合物を室温に戻した後減圧濃縮を行ない、得られた粗成生物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]により精製することで、E-2-[4-ジメチルアミノスチリル]-3-4-ヨードブチル-4,7-ジメトキシベンゾチアゾリウム=ヨージド225mg,収率89を暗赤色粉状として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6/1H-NMR400MHz,CDCl3:δ8.13d,J=15.2Hz,1H,7.90d,J=9.0Hz,2H,7.55d,J=15.2Hz,1H,7.34d,J=9.0Hz,1H,7.22d,J=9.0Hz,1H,6.84d,J=9.0Hz,2H,4.94m,2H,4.00s,3H,3.99s,3H,3.38-3.35m,2H,3.11s、6H,1.96-1.80m,4H.実施例15アルゴン雰囲気下、3-4-ヨードブチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージド133mg,0.27mmolと4-ジメチルアミノ-3-フルオロベンズアルデヒド45.4mg,0.27mmolの無水酢酸2.0mL溶液を、110°Cで一晩撹拌を行なった。反応混合物を室温に戻した後減圧濃縮を行ない、得られた粗成生物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]により精製することで、E-2-[4-ジメチルアミノ-3-フルオロスチリル]-3-4-ヨードブチル-4-メトキシベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート112.9mg,収率65を紫色の固体として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ8.07d,J=15.7Hz,1H,7.98d,J=15.7Hz,1H,7.90d,J=8.1Hz,1H,7.70d,J=9.3Hz,1H,7.69t,J=8.1Hz,1H,7.68t,J=8.1Hz,1H,7.44d,J=8.1Hz,1H,6.97t,J=9.3Hz,1H,5.04-5.01m,2H,4.08s,3H,3.38-3.35m,2H,3.06s,3H,3.05s,3H,1.96-1.94m,4H.19F-NMR376MHz,CDCl3:δ-123.1s,1F.参考例12-アミノ-4-メトキシベンゾチアゾール5.0g,27.7mmolと水酸化カリウム30g,15.3mmolの水-エチレングリコール5:1,36mL混合溶液を二日間加熱還流した。反応混合物にトルエン100mLと酢酸30mLを加え、トルエン30mL×3にて抽出した。あわせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮を行なうことで2-アミノ-3-メトキシチオフェノール3.79g,収率88を黄色液体として得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ6.85d,J=7.9Hz,1H,6.77d,J=7.9Hz,1H,6.54t,J=7.9Hz,1H,3.84s,3H.参考例2アルゴン雰囲気下、2-アミノ-3-メトキシチオフェノール3.79g,24.4mmolのピリジン30mL溶液にパラアセトアルデヒド16.2mL,122mmolと酢酸7.0mLを加えた後、70°Cで一晩撹拌した。反応混合溶液に飽和塩化ナトリウム水溶液10mLを加え、酢酸エチル30mL×3にて抽出した。あわせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮を行なった。得られた粗生成物のエタノール40mL溶液に塩化鉄III3.95g,24.4mmolを加え、室温で一晩撹拌した。反応混合溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液50mLを加え、酢酸エチル100mL×3にて抽出した。あわせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮を行なった。得られた粗生成物を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー[ヘキサン-酢酸エチル3:1]で精製することにより、4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾール2.36g,収率54を黄色固体として得た。1H-NMR400MHz,CDCl3:δ7.40d,J=8.0Hz,1H,7.29t,J=8.0Hz,1H,6.88d,J=8.0Hz,1H,4.03s,3H,2.85s,3H.13C-NMR100MHz,CDCl3:δ165.0,152.9,143.3,125.6,113.4,106.3,55.8,20.0.参考例3アルゴン雰囲気下、4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾール509mg,2.84mmolのジクロロメタン5.0mL溶液を0°Cに冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸エチル0.5mL,3.87mmolを加え、室温で一晩撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、得られた粗生成物を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー[クロロホルム-メタノール10:1]で精製することにより、3-エチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=トリフルオロメタンスルホナート949mg,収率94を白色固体として得た。1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ7.95d,J=8.2Hz,1H,7.72t,J=8.2Hz,1H,7.48d,J=8.2Hz,1H,4.85q.J=7.2Hz,2H,4.08s,3H,3.15s,3H,1.48t,J=7.2Hz,3H.13C-NMR100MHz,DMSO-d6:δ175.5,149.5,131.1,130.1,129.1,116.0,111.7,57.1,48.1,16.5,14.3.19F-NMR376MHz,DMSO-d6:δ-77.7.参考例4アルゴン雰囲気下、4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾール524mg,2.92mmolと1,4-ジヨードブタン1.90mL,14.6mmolの混合物を、105°Cにて一晩撹拌した。反応溶液に酢酸エチル加えた後、濾過を行なうことで3-4-ヨードブチル-4-メトキシ-2-メチルベンゾチアゾリウム=ヨージド1.36g,96を黄土色の固体として得た。mp:145から147°C.1H-NMR400MHz,DMSO-d6:δ7.96d,J=8.2Hz,1H,7.72t,J=8.2Hz,1H,7.47d,J=8.2Hz,1H,4.83-4.79m,2H,4.08s,3H,3.45-3.30m,2H,3.14s,3H,1.97-1.94m,4H.13C-NMR100MHz,DMSO-d6:δ175.8,149.4,131.1,130.2,129.1,116.0,111.7,57.2,51.3,30.0,29.8,16.8,7.60.以上、実施例1から15および参考例1から4に例示した方法により製造可能な、本発明の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩の例を表1から7に示す。ただし、本発明はこれらの例示に限定されるものではない。実施例164-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩2に二本鎖核酸二本鎖DNADNA-DNAまたはDNA-RNAハイブリッドを添加した時の蛍光特性を評価した。a方法以下の条件で、本発明の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩2化合物1、化合物10、化合物18に二本鎖DNAまたはDNA-RNAハイブリッドを添加して蛍光スペクトルを測定した。なお対照化合物として下記の対照色素Aを用いて、同様の測定を行なった。二本鎖DNA:5’-dCGACGCAGGGATGTTAAGTATAACATTTGC-3’配列番号1と5’-dGCAAATGTTATACTTAACATCCCTGCGTCG-3’配列番号2からなる二本鎖DNADNA-RNAハイブリッド:5’-dCGACGCAGGGATGTTAAGTATAACATTTGC-3’配列番号1と5’-rGCAAAUGUUAUACUUAACAUCCCUGCGUCG-3’配列番号3からなるDNA-RNAハイブリッド測定溶液:リン酸バッファー137mMNaCl,2.68mMKCl,8.1mMNa2HPO4,1.47mMKH2PO4、pH7.4,0.1DMSO色素濃度:1.0μM二本鎖核酸の濃度:0.5μM測定温度:43°Cb結果本発明の4-アルコキシ-2-4-アミノスチリルベンゾチアゾリウム塩本発明の蛍光色素2化合物1、化合物10、化合物18および対照色素A対照Aのみでの最大励起波長、最大蛍光波長および蛍光強度、ならびに二本鎖核酸二本鎖DNADNA-DNAまたはDNA-RNAハイブリッド添加時の各化合物の最大蛍光波長、蛍光強度、蛍光増感率二本鎖核酸添加時の蛍光強度値を色素のみでの蛍光強度値で割った値を表8に示す。本発明の蛍光色素2は、二本鎖核酸の添加により大きな蛍光増感を示すことがわかる。具体的には、二本鎖DNAを添加したときの、本発明の蛍光色素2化合物1、化合物10、化合物18における蛍光増感率は、それぞれ10.7倍、13.1倍、19.7倍を示す一方、対照色素Aの蛍光増感率は6.3倍であり、本発明の色素が二本鎖DNAに対し蛍光増感率の有意な増大が確認できた。また、本発明の蛍光色素2化合物1、化合物10、化合物18に二本鎖DNA添加した時の蛍光強度値は、対照色素Aに二本鎖DNA添加した時の値と比較し、1.2倍から1.6倍あり、蛍光強度絶対値の増大も確認できた。さらに、二本鎖DNAの添加による本発明の蛍光色素2化合物1、化合物10、化合物18のストークスシフトも、対照色素A50nmに対し3nmから17nm増大した。同様に、DNA-RNAハイブリッドを添加したときの、本発明の蛍光色素2化合物1、化合物10、化合物18における蛍光増感率は、それぞれ3.5倍、8.0倍、3.2倍を示す一方、対照色素Aの蛍光増感率は2.3倍であり、本発明の色素がDNA-RNAハイブリッドに対し蛍光増感率の有意な増大が確認できた。また、DNA-RNAハイブリッドによる本発明の蛍光色素2化合物1、化合物10、化合物18のストークスシフトも、対照色素A53nmに対し4nmから19nm増大した。以上の結果より、対照色素Aのベンゾチアゾール環4位をアルコキシ基に置換した、本発明の蛍光色素2は、対照色素Aと比較し、二本鎖核酸添加による、ストークスシフトの有意な増大、蛍光強度値の増大および蛍光増感率の有意な増加が確認できる。"