a癌に対する治療的な免疫応答を促進する有効量の組成物を癌部位又はその近くに投与するステップ、及びb癌を除去するステップ、を含む、患者における癌を治療するための方法。組成物の投与の前に又は後に、抗腫瘍免疫の抑制を緩和する有効量の薬剤を患者に投与することをさらに含む、請求項1に記載の方法。薬剤が、アルキル化剤、ステロイド、ヌクレオチド阻害剤、化学療法剤、モノクローナル抗体、毒素、及び炎症抑制剤からなる群より選択される、請求項2に記載の方法。薬剤が、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、デニロイキンディフティトックス、ベバシズマブ、及びドセタキセルからなる群より選択される、請求項2に記載の方法。組成物が、aポリマー粒子、及びb任意に、前記ポリマー粒子中にカプセル化され、又は前記ポリマー粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上の治療薬を含む、請求項1に記載の方法。ポリマー粒子が、ポリラクチドPLA、ポリグリコリドPGA、ポリPLGA又はそれらのコポリマーを含む、請求項5に記載の方法。ポリマー粒子がPLGAである請求項5に記載の方法。組成物が、ポリマー粒子中にカプセル化され、又はポリマー粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上の免疫学的アジュバントをさらに含む、請求項5に記載の方法。免疫学的アジュバントがToll様受容体TLRリガンドである請求項8に記載の方法。免疫学的アジュバントがC型レクチン受容体リガンドである請求項8に記載の方法。免疫学的アジュバントがヌクレオチド多量体化領域NucleotideOligomerizationDomain様受容体リガンドである請求項8に記載の方法。免疫学的アジュバントがレチノイン酸誘導遺伝子IRIG様受容体RLRリガンドである請求項8に記載の方法。免疫学的アジュバントが終末糖化産物受容体RAGEリガンドである請求項8に記載の方法。免疫学的アジュバントがモノホスホリルリピドAMPLである請求項9に記載の方法。免疫学的アジュバントがリポポリサッカライドLPSである請求項9に記載の方法。免疫学的アジュバントが、LPS又はその誘導体、CpGオリゴ、TLR3リガンド、TLR7リガンド、TLR9リガンド、MPLリガンド、及びRC529からなる群より選択される、請求項8に記載の方法。一以上の治療薬が癌抗原である請求項5に記載の方法。一以上の治療薬が、腫瘍抗原、CD4T細胞エピトープ、サイトカイン、化学治療薬、放射性核種、小分子シグナル伝達阻害剤、光熱アンテナphotothermalantenna、低分子干渉RNA、モノクローナル抗体、及び免疫学的デンジャーシグナリング分子dangersignalingmoleculesからなる群より選択される、請求項5に記載の方法。治療薬がシプロイセルTである請求項5に記載の方法。治療薬が炭酸脱水酵素IXである請求項5に記載の方法。治療薬が癌胎児性抗原である請求項5に記載の方法。癌の除去のステップが、冷凍アブレーション、熱アブレーション、放射線療法、化学療法、高周波アブレーション、エレクトロポレーション、アルコールアブレーション、高密度焦点式超音波、光線力学療法、モノクローナル抗体、及び免疫毒素からなる群より選択される方法によりなされる、請求項1に記載の方法。癌の除去のステップが冷凍アブレーションによりなされる請求項1に記載の方法。aiポリマー粒子、及びii任意に、ポリマー粒子中にカプセル化され、又はポリマー粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上の治療薬を含む、異常な細胞増殖に対する治療的な免疫応答を促進する有効量の組成物を、異常な細胞増殖の部位又はその近くに投与するステップ、及びb異常な細胞増殖を除去するステップ、を含む、患者における異常な細胞増殖を治療するための方法。組成物の投与の前に又は後に、抗腫瘍免疫の抑制を緩和する有効量の薬剤を患者に投与することをさらに含む、請求項24に記載の方法。薬剤がアルキル化剤、ステロイド、ヌクレオチド阻害剤、化学療法剤、モノクローナル抗体、毒素、及び炎症抑制剤からなる群より選択される、請求項25に記載の方法。薬剤が、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、デニロイキンディフティトックス、ベバシズマブ、及びドセタキセルからなる群より選択される、請求項25に記載の方法。ポリマー粒子が、PLA、PGA、PLGA、又はそれらのコポリマーを含む、請求項24に記載の方法。ポリマー粒子がPLGAである請求項24に記載の方法。組成物が、ポリマー粒子中にカプセル化され、又はポリマー粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上の免疫学的アジュバントをさらに含む、請求項24に記載の方法。免疫学的アジュバントがTLRリガンドである請求項30に記載の方法。免疫学的アジュバントがC型レクチン受容体リガンドである請求項30に記載の方法。免疫学的アジュバントがNOD様受容体リガンドである請求項30に記載の方法。免疫学的アジュバントがRLRリガンドである請求項30に記載の方法。免疫学的アジュバントがRAGEリガンドである請求項30に記載の方法。免疫学的アジュバントがモノホスホリルリピドAMPLである請求項31に記載の方法。免疫学的アジュバントがリポポリサッカライドLPSである請求項31に記載の方法。免疫学的アジュバントが、LPS又はその誘導体、CpGオリゴ、TLR3リガンド、TLR7リガンド、TLR9リガンド、MPLリガンド、及びRC529からなる群より選択される、請求項30に記載の方法。一以上の治療薬が、異常な増殖細胞によって優先的に発現される抗原である請求項24に記載の方法。一以上の治療薬が癌抗原である請求項24に記載の方法。一以上の治療薬が、腫瘍抗原、CD4T細胞エピトープ、サイトカイン、化学治療薬、放射性核種、小分子シグナル伝達阻害剤、光熱アンテナ、低分子干渉RNA、モノクローナル抗体、及び免疫学的デンジャーシグナリング分子からなる群より選択される、請求項24に記載の方法。治療薬がシプロイセルTである請求項24に記載の方法。異常な細胞増殖が前立腺癌である請求項42に記載の方法。治療薬が炭酸脱水酵素IXである請求項24に記載の方法。異常な細胞増殖が、腎臓癌、結腸癌、又は子宮頸部癌である請求項44に記載の方法。治療薬が癌胎児性抗原である請求項24に記載の方法。異常な細胞増殖が、乳癌、肺癌又は結腸癌である請求項46に記載の方法。癌の除去のステップが、冷凍アブレーション、熱アブレーション、放射線療法、化学療法、高周波アブレーション、エレクトロポレーション、アルコールアブレーション、高密度焦点式超音波、光線力学療法、モノクローナル抗体、及び免疫毒素からなる群より選択される方法によりなされる、請求項24に記載の方法。癌の除去のステップが冷凍アブレーションによりなされる請求項24に記載の方法。a抗腫瘍免疫の抑制を緩和する有効量の薬剤を患者に投与するステップ、biポリマーナノ粒子、ii前記ナノ粒子中にカプセル化され、又は前記ナノ粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上のTLRリガンド、C型レクチン受容体リガンド、NOD様受容体リガンド、RLRリガンド、及び/又はRAGEリガンド、並びにiii前記ナノ粒子中にカプセル化された一以上の腫瘍抗原を含む、有効量の組成物を腫瘍部位又はその近くに投与するステップ、並びにc固形腫瘍に冷凍アブレーションを行うステップ、を含む、患者における固形腫瘍を治療するための方法。aiポリマーナノ粒子、ii前記ナノ粒子中にカプセル化され、又は前記ナノ粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上のTLRリガンド、C型レクチン受容体リガンド、NOD様受容体リガンド、RLRリガンド、及び/又はRAGEリガンド、並びにiii前記ナノ粒子中にカプセル化された一以上の腫瘍抗原を含む、有効量の組成物を腫瘍部位又はその近くに投与するステップ、並びに、b固形腫瘍を除去するステップ、を含む、患者における固形腫瘍を治療するための方法。a有効量のシクロホスファミドを患者に投与するステップ、biPLGAを含むナノ粒子、ii前記ナノ粒子上に組み込まれたMPL、及びiii前記ナノ粒子中にカプセル化された一以上の腫瘍抗原を含む、有効量の組成物を腫瘍部位又はその近くに投与するステップ、並びに、c癌を除去するステップ、を含む、患者における癌を治療するための方法。本発明は明細書に記載された特定の方法及び組成物等に限定されるものではなく、これらは変更しうるものであると理解されたい。本明細書で用いられる用語は、特定の実施形態を記載する目的のためだけに使用され、本発明の範囲を限定することを意図していないということも、理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられる単数形の用語は、文脈が他に明確に示さない限り、複数への言及を含むことに注意されたい。したがって、例えば粒子への言及は一以上の粒子への言及であり、当業者に知られるそれらに同等な物を含む、等である。他で定義しない限り、本明細書で用いられる全ての科学的及び技術的用語は当業者に一般に理解されるのと同じ意味を有する。特定の方法、装置及び材料が記載されているが、本明細書で記載されるものと類似する又は同等ないずれの方法及び材料であっても、本発明を実施又は試験するのにあたって用いられ得る。全ての学術誌の論文、本、マニュアル、特許出願公開公報、及び特許公報をはじめとする、本明細書で引用する全ての引用文献を参照により本明細書に組み込む。さらに、明細書、実施例、及び添付の特許請求の範囲で用いられる幾つかの用語及び語句の意味が提供される。定義は、本来限定するための意味はなく、本発明の幾つかの側面の明確な理解を提供するのに役立つ。I.定義以下の定義は本明細書を通して用いられる。他の定義は参照しやすくするために明細書中に組み込まれる。用語アジュバントは、限定されるものではないが、抗原に対する免疫応答を増加させ及び/又は変化させる免疫学的アジュバントをはじめとする、医薬の作用を補助し又は変更するあらゆる物質を意味する。したがって、免疫学的アジュバントは抗原に対する免疫応答を増強し得る化合物である。免疫学的アジュバントは体液性及び/又は細胞性免疫を増強し得る。幾つかの実施形態では、免疫学的アジュバントは自然免疫応答を刺激する。免疫学的アジュバントは本明細書において免疫増強剤と呼ぶこともある。本明細書で用いられる抗原は、免疫学的応答を誘導する、一以上のエピトープ例えば、直線状、立体構造、又はその両方を含む分子を意味する。用語抗原は用語免疫原と交換可能に用いられ得る。用語抗原はサブユニット抗原、すなわち、抗原が本来関連している生物体から分離した別個の抗原だけでなく、殺し、弱毒化し、若しくは不活性化した細菌、ウイルス、寄生生物若しくは他の病原体又は腫瘍細胞も意味し得る。抗イディオタイプ抗体等の抗体又はその断片、及び抗原又は抗原決定基を模倣し得る合成ペプチドミモトープもまた、抗原の定義に含まれる。同様に、例えば核酸免疫nucleicacidimmunization法において、免疫原性のタンパク質又は抗原決定基をinvivoで発現するオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドもまた、本明細書の抗原の定義に含まれる。本明細書で用いられる用語癌は、脱調節された、又は制御不能の細胞増殖によって特徴づけられる悪性腫瘍を含む、過剰増殖性の病気を意味する。ほとんど全ての組織の癌が知られている。癌の例として、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性腫瘍が挙げられる。前記癌のより具体的な例は以下に記載され、扁平上皮癌例えば、上皮系の扁平上皮癌、肺癌小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌を含む消化器癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸部癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、へパトーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、肝癌だけでなく頭部癌及び頸部癌が挙げられる。用語癌には、原発性悪性細胞又は腫瘍例えば、細胞が、元の悪性腫瘍又は腫瘍部位以外の対象の体の部位に転移していない腫瘍及び二次性悪性細胞又は腫瘍例えば、転移、すなわち元の腫瘍の部位とは異なる第二の部位への悪性細胞又は腫瘍細胞の移動、により生じた腫瘍が挙げられる。用語癌は、過剰な細胞増殖又は細胞増殖性疾患とも呼ばれ得る、より広範な用語異常な細胞増殖の範囲に含まれる。異常な細胞増殖を伴う病気の例として、転移性腫瘍、悪性腫瘍、良性腫瘍、癌、前癌、過形成、疣及びポリープだけでなく、非癌性の状態、例えば良性黒色腫、良性軟骨腫、良性前立腺肥大症、奇胎mole、異形成母斑、異形成、過形成、及び上皮層で生じる他の細胞増殖が挙げられる。前癌の種類として、後天性の小さな又は微視的な前癌、核異型を伴う後天性の大きな病変、癌に進行する遺伝性の過形成症候群とともに生じる前駆病変、及び後天性のびまん性過形成及びびまん性異形成が挙げられる。小さな又は微視的な前癌の例として、HGSIL子宮頸部の高度扁平上皮内病変、AIN肛門上皮内腫瘍、声帯の異形成、結腸の異常陰窩、PIN前立腺上皮内腫瘍が挙げられる。核異型を伴う後天性の大きな病変の例として、管状腺腫、AILDタンパク異常血症をともなう血管免疫芽球性リンパ節症、非定型髄膜腫、胃ポリープ、大斑型の類乾癬、骨髄異形成、乳頭状移行上皮癌、過剰な芽細胞をともなう難治性貧血、及びシュナイダー乳頭腫が挙げられる。本明細書で用いられるエピトープは、ある対象例えば、抗原性分子又は抗原性複合体の、免疫学的特異性を決定する部分である。エピトープは本明細書の抗原の定義の範囲に含まれる。一般に、エピトープは天然の抗原中のポリペプチド又は多糖である。人工的な抗原では、エピトープはアルサニル酸誘導体等の低分子量の物質であり得る。通常、B細胞エピトープは少なくとも約5個のアミノ酸を含むが、3~4個のアミノ酸ほどの小ささであり得る。CTLエピトープ等のT細胞エピトープは、典型的に少なくとも7~9個のアミノ酸を含み、ヘルパーT細胞エピトープは典型的に少なくとも12~20個のアミノ酸を含む。抗原又はある対象例えば、抗原性分子、癌細胞、異常な細胞増殖に対する免疫学的応答又は免疫応答は、目的の組成物中に存在する分子に対する体液性及び/又は細胞性免疫応答の対象における発生である。防御免疫応答又は治療的免疫応答は病原性の抗原に由来する抗原例えば、癌細胞由来の腫瘍抗原に対する免疫応答を意味し、該免疫応答は何らかの方法で病気の症状、副次的影響、又は進行を、予防し、改善し、治療し本明細書で定義される、又は少なくとも部分的に停止させる。本明細書で用いられる用語粒子は一般に約01nm以下~約1000nmの直径を有し、約10nm~約500nmの直径を有し、又はより具体的には、約20nm~約500nmの直径を有するナノ粒子を意味する。用語粒子はまた、一般に約05ミクロン~約1000ミクロンの直径を有し、約1ミクロン~約500ミクロンの直径を有し、又はより具体的には約10ミクロン~約100ミクロンの直径を有するミクロ粒子も意味する。本明細書で用いられる対象又は患者は個体を意味し、飼いならされた動物例えばネコ、イヌ等;家畜例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ等、実験動物例えばマウス、ウサギ、ラット、ギニアピッグ等及び鳥類を含み得る。一側面において、対象は霊長類又はヒト等の哺乳類である。特に、対象又は患者は癌と診断されたヒトを意味する。本明細書で用いる用語治療、処置等は、所望の薬理学的及び/又は生理的な効果を得ることを意味する。その効果は、完全に若しくは部分的に病気若しくはその症状を予防するという点で予防的であり得、並びに/又は、部分的に若しくは完全に病気及び/又は病気に起因する有害な効果を治癒するという点で治療的であり得る。本明細書で用いる治療は、対象、特にヒトの病気のあらゆる治療を包含し、a病気に罹患しやすくなっている可能性があるが、まだ病気になっていると診断されていない対象における病気の発生の予防、b病気の抑制、すなわち病気の進行の停止、及びc病気の緩和、例えば病気の退行を引き起こすこと、例えば完全に又は部分的に病気の症状を除去すること、を含む。II.ポリマー粒子本発明の方法は免疫応答を促進する組成物を利用する。特定の実施形態では、組成物は粒子を含む。特定の実施形態では、粒子はポリマー粒子である。一実施形態では、ポリマー粒子はミクロ粒子である。別の実施形態では、ポリマー粒子はナノ粒子である。粒子を形成する方法、粒子を修飾する方法例えば、カプセル化、付着、あるいはその他粒子上又は中への組み込みは当業者に知られている。例えば、米国特許出願公開第20110038900号、第20100104503号、第20090269397号、及び第20110239789号を参照されたい。生分解性又は非生分解性のポリマーを用いて粒子を形成し得る。特定の実施形態では、ミクロ粒子は生分解性のポリマーで形成される。非生分解性のポリマーは経口投与に用いられ得る。幾つかの実施形態では合成のポリマーが用いられるが、天然のポリマーも用いられ得、特にポリヒドロキシアルカノエートのうちの幾つか等、加水分解によって分解される天然の生体高分子の幾つかは、合成のポリマーと同等又はより良い特性を有し得る。合成ポリマーの代表例として、限定されるものではないが、ポリヒドロキシ酸、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸、及び乳酸とグリコール酸のコポリマー、ポリラクチド、ポリグリコリド、ラクチドとグリコリドのコポリマー、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えばポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、ポリアルキレンオキシド、例えばポリエチレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート、例えばポリエチレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハロゲン化物、例えばポリ塩化ビニル、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポリスチレン、ポリウレタン及びそれらのコポリマー、セルロース誘導体、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシエチルセルロース、三酢酸セルロース、及びセルロース硫酸ナトリウム塩本明細書では合わせて合成セルロースと呼ぶ、アクリル酸若しくはメタクリル酸ポリマー、又はそれらのコポリマー若しくは誘導体、例えばエステル、ポリメタクリル酸メチル、ポリメタクリル酸エチル、ポリメタクリル酸ブチル、ポリメタクリル酸イソブチル、ポリメタクリル酸ヘキシル、ポリメタクリル酸イソデシル、ポリメタクリル酸ラウリル、ポリメタクリル酸フェニル、ポリアクリル酸メチル、ポリアクリル酸イソプロピル、ポリアクリル酸イソブチル、及びポリアクリル酸オクタデシル本明細書では、合わせてポリアクリル酸と呼ぶ、ポリ酪酸、ポリ吉草酸、及びラクチドとカプロラクトンのコポリマー、シクロデキストリン並びにそれらのコポリマー及び混合物が挙げられる。本明細書で用いられる用語誘導体は化学基の置換、付加、及び当業者により通常なされるその他の修飾を有するポリマーを含む。特定の実施形態では、PLGAが生分解性のポリマーとして用いられる。本発明に有用な生分解性ポリマーの例として、乳酸及びグリコール酸等のヒドロキシ酸のポリマー、PEGとのコポリマー、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリウレタン、ポリ酪酸、ポリ吉草酸、ラクチドとカプロラクトンのコポリマー、並びにそれらの混合物及びコポリマーが挙げられる。天然のポリマーとして、限定されるものではないが、タンパク質、例えばアルブミン、コラーゲン、ゼラチン、及びプロラミン、例えばゼイン、並びに多糖、例えばアルギン酸、セルロース誘導体、及びポリヒドロキシアルカン酸、例えばポリヒドロキシ酪酸が挙げられる。粒子のinvivoでの安定性は生産において、ポリマー、例えばポリエチレングリコールPEGとコポリマー化したラクチドとグリコリドのコポリマーを用いることにより調節され得る。もしPEGが外表面に露出すれば、PEGはその親水性によりこれらの物質の循環時間を増加させ得る。非生分解性のポリマーの例として、エチレンビニル酢酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸、ポリアミド、並びにそれらのコポリマー及び混合物が挙げられる。A.粒子の修飾粒子の外表面は、カップリング剤又はリガンドを粒子の表面に結合させることにより修飾され得る。幾つかの実施形態では、リガンドは粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれた免疫学的アジュバントである。免疫学的アジュバントとして、限定されるものではないが、Toll様受容体TLRリガンド、C型レクチン受容体リガンド、ヌクレオチド多量体化領域NOD様受容体NLRリガンド、レチノイン酸誘導遺伝子IRIG様受容体RLRリガンド、及び終末糖化産物受容体RAGEリガンドが挙げられる。特定の実施形態では、カップリング剤又はリガンドは粒子の表面に高密度で存在する。本明細書で用いられる用語高密度は、高密度のカップリング剤又はリガンド、具体的には約1000~約10000000、より具体的には約10000~約1000000のカップリング剤又はリガンドを、粒子表面積の1平方ミクロンあたりに有する粒子を意味する。粒子の密度は溶解した粒子を蛍光染色し、この蛍光を溶液中の既知量の遊離蛍光分子により較正することにより測定され得る。粒子は、リガンド又はカップリング剤に一以上の異なる分子、例えば標的分子、付着分子及び/又は治療剤、栄養剤、診断剤、若しくは予防剤を付着させることにより、さらに修飾され得る。標的分子は、粒子を選択された細胞若しくは組織タイプ上のレセプター部位に導き、付着分子として役立ち得るか、又は他の分子への結合若しくは付着に役立ち得る物質である。本明細書で用いる導くは、分子を選択された細胞又は組織タイプへ優先的に結合させることを意味する。これは以下で述べるように、細胞の物質、分子、又は薬を導くために用いられ得る。粒子は、カプセル化され、又は付着した分子を数日から数週間にわたって放出するように設計される。放出持続時間に影響する要因として、周囲の媒質のpHpH5以下では、PLGAの酸触媒加水分解のためにより速い速度で放出される及びポリマー組成が挙げられる。粒子のポリマー組成及び形態を変更することによって、長期の期間、中程度かつ一定の投与量を可能とするように、様々な制御された放出特性を効果的に調整することができる。表面の機能性を有し、又は有さない固形粒子を設計するために用いられる物質には様々なものがある。Briggeretal54ADVDRUGDELIVREV631-51を参照されたい。おそらく最も広く用いられている物質は脂肪族のポリエステル、特に疎水性のポリ乳酸PLA、より親水性のポリグリコール酸PGA及びそれらのコポリマーであるポリPLGAである。これらのポリマーの分解速度、及びしばしばそれに対応する薬剤の放出速度は、数日PGAから数ヶ月PLAまで変更することができ、PGAに対するPLAの割合の変更により簡単に操作される。PLGA並びにそのホモポリマーであるPGA及びPLAの生理的な適合性はヒトにおける安全な使用のために確立されている。これらの物質は、薬剤送達システムを含むヒトの臨床応用において30年以上の歴史を有する。さらにPLGA粒子は、受動的又は能動的なターゲティングによって組織を標的にするために、薬剤の薬物動態及び体内分布を改善する様々な方法によって製剤化され得る。特定の実施形態では、ポリマーは約1~約30日間続く分解動態を示す。B.粒子の形成粒子は、様々な方法を用いて様々なポリマーから作られ得る。溶媒蒸発法では、ポリマーは塩化メチレン等の揮発性の溶媒に溶解される。治療薬可溶性であるか、又は微細粒子として分散させるは溶液に添加され、混合物はポリビニルアルコール等の界面活性剤を含む水溶液に懸濁される。生じるエマルションは、固形粒子を残して、ほとんどの有機溶媒が蒸発するまで攪拌する。生じる粒子は水により洗浄し、凍結乾燥機で一晩乾燥させる。様々なサイズ約05~約1000ミクロン及び形態の粒子がこの方法で得られ得る。この方法はポリエステル及びポリスチレンのような比較的安定なポリマーにとって有用である。ホットメルトカプセル化hotmeltencapsulation法及び溶媒除去法は、水の存在により製造プロセスの間に分解し得る、ポリ酸無水物等の不安定なポリマーのために用いられ得る。ホットメルトカプセル化法では、ポリマーは最初融解され、その後固形粒子と混合される。混合物はシリコン油のような非混和性の溶媒中に懸濁され、連続的に攪拌しながら、ポリマーの融点の5°C上まで熱される。エマルションが安定化されたら、ポリマー粒子が凝固するまで冷却される。生じる粒子は、石油エーテルを用いてデカンテーションにより洗浄され、流動性粉末を得る。この方法により、約05~約1000ミクロンのサイズの粒子が得られ得る。この技術により調製される球の外表面は通常滑らか、かつ密である。この手順はポリエステル及びポリ酸無水物でできている粒子を調製するのに用いられる。しかしながら、この方法は一般に分子量が約1000~約50000であるポリマーに限定される。溶媒除去法は主としてポリ酸無水物の為に設計される。この方法では、治療薬は塩化メチレンのような揮発性有機溶媒中の選択されたポリマーの溶液中に分散され、又は溶解される。この混合物はシリコン油等の有機油中で撹拌することにより懸濁され、エマルションを形成する。溶媒蒸発法とは違い、この方法は高い融点と様々な分子量を有するポリマーから粒子を作るのに用いられ得る。約1~約300ミクロンの範囲の粒子が、この手順により得られ得る。この技術により製造される球の外的形態は用いられるポリマーのタイプに大きく依存する。噴霧乾燥は本発明の粒子を形成するのに有用なもう一つの方法である。この方法では、ポリマーは有機溶媒中に溶解される。既知量の治療薬がポリマー溶液中に不溶性の薬剤の場合は懸濁され、又は可溶性の薬剤の場合は共に溶解される。溶液又は分散液はその後噴霧乾燥される。ミニスプレードライヤーBuchiの場合の典型的なプロセスパラメーターは以下の通りである:ポリマー濃度=004g/mL、入り口温度=-24°C、出口温度=13~15°C、アスピレーターの設定=15、ポンプの設定=10mL/分、スプレー流量=600Nl/時、及びノズル直径=05mm。用いられるポリマーのタイプに依存する形態を有する、約1~約10ミクロンの範囲の粒子が得られ得る。アルギン酸塩等のゲルタイプポリマーで作られる粒子は、伝統的なイオンゲル化技術により製造される。ポリマーは最初水溶液に溶解され、硫酸バリウム又はある種の生理活性剤と混合され、その後、場合によって液滴を細かくするのに窒素ガスの流れを用いる微小滴形成装置から押し出される。ゆっくり攪拌したおよそ100~170RPMイオン硬化浴を、形成される微小滴を捕らえるために、押し出し装置の下に配置する。粒子は、ゲル化を起こすために十分な時間を与えるために、20~30分浴中でインキュベートするため放置する。粒子サイズは様々なサイズの押し出し機を用いることにより、又は窒素ガス若しくはポリマー溶液の流量のどちらかを変更することにより、制御される。キトサン粒子はポリマーを酸性溶液に溶解し、トリポリリン酸塩で架橋することにより調製され得る。カルボキシメチルセルロースCMC粒子は酸溶液にポリマーを溶解し、鉛イオンにより粒子を沈降させることにより調製され得る。負に荷電したポリマー例えば、アルギン酸塩、CMCの場合では、様々な分子量の正に荷電したリガンド例えば、ポリリジン、ポリエチレンイミンがイオン的に付着され得る。II.粒子に結合した分子本発明では、免疫応答を促進する組成物が患者に投与される。組成物は本明細書に記載の粒子を含み得る。幾つかの実施形態では、粒子の外表面はカップリング剤及び/又はリガンドにより被覆される。リガンドは免疫学的アジュバントであり得る。アジュバントは、例えば、粒子中に補足され得、粒子の表面に結合され得例えば、粒子の表面に直接的に、若しくは間接的に吸着され又はコンジュゲートされ得、及び/又はその他様々な程度に粒子に付随され得る例えば、液体懸濁液中で粒子と混合され、固体組成物中に粒子と共に混合され、例えば、粒子と共に凍結乾燥され得る等。粒子に結合することができる免疫学的アジュバントの例として、限定されるものではないが、TLRリガンド、C型レクチン受容体リガンド、NLRリガンド、RLRリガンド、及びRAGEリガンドが挙げられる。TLRリガンドとして、リポポリサッカライドLPS、及びその誘導体だけでなく、リピドA及びその誘導体、例えば、限定されるものではないが、モノホスホリルリピドAMPL、グリコピラノシルリピドA、PET-リピドA、及び3-O-脱アシル化-4’-モノホスホリルリピドAが挙げられる。特定の実施形態では、免疫学的アジュバントはMPLである。別の実施形態では、免疫学的アジュバントはLPSである。TLRリガンドとして、限定されるものではないが、TLR3リガンド例えば、ポリイノシン-ポリシチジル酸ポリIC、TLR7リガンド例えば、イミキモド及びレシキモド、及びTLR9リガンドも挙げられる。一以上の被覆剤及び/又はリガンドが粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれた粒子を利用することは、本発明の範囲内である。例えば、ポリマー粒子を含む組成物は、さらに粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上の免疫学的アジュバントを含み得る。組成物はさらに、粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれた一以上の治療薬を含み得る。特定の実施形態では、TLR4リガンド及びTLR7リガンドが粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれ得る。より具体的な実施形態では、MPLTLR4リガンド及びR837TLR7リガンドが粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれ得る。このような粒子は抗原等の治療薬も含み得る。Kasturietal470NATURE543-50を参照されたい。さらなる実施形態では、他の分子が粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれ得る。幾つかの実施形態では、治療薬が粒子中にカプセル化され又は粒子上に若しくは中に組み込まれる。治療薬として、限定されるものではないが、腫瘍抗原、CD4T細胞エピトープ、サイトカイン、化学療法薬、放射性核種、小分子シグナル伝達阻害剤、光熱アンテナ、低分子干渉RNA、モノクローナル抗体、及び免疫学的デンジャーシグナリング分子が挙げられる。特定の実施形態では、場合により、一以上の抗原が、本発明の組成物中に含まれ得る。抗原は、例えば、ナノ粒子中に補足され得、ナノ粒子の表面に結合され得例えば、ナノ粒子の表面に吸着され又はコンジュゲートされ得、及び/又はその他様々な程度にナノ粒子と結合され得る例えば、液体懸濁液中でナノ粒子と混合され、固体組成物中にナノ粒子と共に混合され、例えば、ナノ粒子と共に凍結乾燥され得る、等。各抗原は有効量例えば、本発明に係る治療法、予防法、又は診断法における使用のために有効な量で提供され得る。本発明に有用な抗原として、限定されるものではないが、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、及び腫瘍又は癌抗原が挙げられる。本発明の組成物は、一以上の腫瘍又は癌抗原を含み得る。腫瘍抗原は例えば、ペプチドを含む腫瘍抗原、例えば、ポリペプチド腫瘍抗原又は糖タンパク質腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はまた、例えば糖を含む腫瘍抗原、例えば糖脂質腫瘍抗原又はガングリオシド腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はさらに、例えばポリペプチドを含む腫瘍抗原を発現する、ポリヌクレオチドを含む腫瘍抗原、例えばRNAベクター構築物又はDNAベクター構築物、例えばプラスミドDNAであり得る。腫瘍抗原として、限定されるものではないが、aポリペプチドを含む腫瘍抗原、例えばポリペプチド例えば、約8~約20アミノ酸の長さであり得るが、この範囲外のものもまた一般的である、リポポリペプチド、及び糖タンパク質、b糖を含む腫瘍抗原、例えば多糖、ムチン、ガングリオシド、糖脂質、及び糖タンパク質、並びにc抗原性のポリペプチドを発現するポリヌクレオチド、が挙げられる。さらに腫瘍抗原は、a癌細胞に関連する完全長分子、b同分子の相同体及び、欠失、付加、及び/又は置換部分を含む修飾形、c同分子の断片、並びにd腫瘍細胞の抽出物又は溶解物であり得る。腫瘍抗原はまた、組み換え体として提供され得る。腫瘍抗原として、例えば、CD8リンパ球によって認識されるクラスI拘束性抗原又はCD4リンパ球によって認識されるクラスII拘束性抗原が挙げられる。多数の腫瘍抗原が本技術分野において知られており、腫瘍抗原として、a精巣癌の抗原、例えば、NY-ESO-1、SSX2、SCP1だけでなくRAGE、BAGE、GAGE及びMAGEファミリーのポリペプチド、例えばGAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、及びMAGE-12例えば、黒色腫、肺、頭部及び頸部、NSCLC、乳、消化管、並びに膀胱の腫瘍に対処するために用いられ得る、b変異抗原、例えば、p53様々な固形腫瘍、例えば結腸直腸、肺、頭部及び頸部癌に関連する、p21/Ras例えば、黒色腫、膵臓癌、及び結腸直腸癌に関連する、CDK4例えば黒色腫に関連する、MUM1例えば黒色腫に関連する、caspase-8例えば頭部及び頸部癌に関連する、CIA0205例えば膀胱癌に関連する、HLA-A2-R1701、βカテニン例えば黒色腫に関連する、TCR例えばT細胞非ホジキンリンパ腫に関連する、BCR-abl例えば慢性骨髄性白血病に関連する、トリオースリン酸イソメラーゼ、KIA0205、CDC-27、及びLDLR-FUT、c過剰に発現される抗原、例えばガレクチン4例えば結腸直腸癌に関連する、ガレクチン9例えばホジキン病に関連する、プロテイナーゼ3例えば慢性骨髄性白血病に関連する、WT1例えば様々な白血病に関連する、炭酸脱水酵素例えば腎臓癌に関連する、アルドラーゼA例えば肺がんに関連する、PRAME例えば黒色腫に関連する、HER-2/neu例えば、乳、結腸、肺及び卵巣癌に関連する、αフェトプロテイン例えばヘパトーマに関連する、KSA例えば結腸直腸癌に関連する、ガストリン例えば、膵臓及び胃癌に関連する、テロメラーゼの触媒タンパク質、MUC-1例えば乳及び卵巣癌に関連する、G-250例えば腎細胞癌に関連する、及び癌胎児性抗原例えば、乳癌、肺癌、及び結腸直腸癌等の消化管癌に関連する、d共通抗原、例えば黒色腫-メラニン細胞分化抗原、例えば、MART-1/MelanA、gp100、MC1R、メラニン細胞刺激ホルモン受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質-1/TRP1及びチロシナーゼ関連タンパク質-2/TRP2例えば黒色腫に関連する、e例えば前立腺癌と関連する、前立腺関連抗原、例えばPAP、PSA、PSMA、PSH-P1、PSM-P1、PSM-P2、f免疫グロブリンイディオタイプ例えば骨髄腫及びB細胞リンパ腫に関連する、並びにg他の腫瘍抗原、例えば、ポリペプチド及び糖を含む抗原、例えば、i糖タンパク質、例えばシアリルTn及びシアリルルイスX例えば、乳及び結腸直腸癌に関連するだけでなく、様々なムチン;糖タンパク質はキャリアタンパク質に結合され得る例えばMUC-1はKLHに結合され得る;iiリポポリペプチド例えば脂質部分に結合されたMUC-1;iiiキャリアタンパク質例えば、KLHに結合され得る多糖例えばグロボHGloboH合成六糖、ivキャリアタンパク質例えば、KLHに結合され得るガングリオシド、例えばGM2、GM12、GD2、GD3例えば、脳癌、肺癌、及び黒色腫に関連するが挙げられる。他の腫瘍抗原として、p15、Hom/Mel-40、H-Ras、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、エプスタインバーウイルスEpsteinBarrvirus抗原、EBNA、ヒトパピローマウイルスHPV抗原、例えばE6及びE7、B型及びC型肝炎ウイルス抗原、ヒトT細胞リンパ好性ウイルス抗原、TSP-180、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、TAG-72-4、CA19-9、CA72-4、CAM171、NuMa、K-ras、p16、TAGE、PSCA、CT7、43-9F、5T4、791Tgp72、beta-HCG、BCA225、BTAA、CA125、CA15-3CA2729\BCAA、CA195、CA242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、Ga733、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90Mac-2結合タンパク質\シクロフィリンC関連タンパク質、TAAL6、TAG72、TLP、TPS等が挙げられる。本発明に係るポリヌクレオチドを含む抗原は、先に述べたような癌抗原ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを典型的に含む。特定のポリヌクレオチドを含む抗原として、invivoで癌抗原ポリペプチドを発現可能な、DNA又はRNAベクター構築物、例えばプラスミドベクター例えばpCMVが挙げられる。腫瘍抗原は、例えば、変異した又は変更された細胞成分に由来し得る。変更後、細胞成分はもはやその調節機能を示さず、それゆえに細胞は制御不能な増殖を行い得る。変更される細胞成分の代表例として、ras、p53、Rb、変更されたウィルムス腫瘍遺伝子によってコードされるタンパク質、ユビキチン、ムチン、並びにDCC、APC、及びMCC遺伝子によってコードされるタンパク質だけでなく、受容体又は受容体様構造、例えばneu、甲状腺ホルモン受容体、血小板由来増殖因子PDGF受容体、インスリン受容体、上皮増殖因子EGF受容体、並びにコロニー刺激因子CSF受容体が挙げられる。これらだけでなく他の細胞成分も、例えば米国特許第5693522号及びそこにおいて引用されている引用文献に記載されている。細菌性の及びウイルス性の抗原は、癌の治療のために、本発明の組成物と共に用いられ得る。特に、キャリアタンパク質、例えばCRM197、破傷風トキソイド、又はネズミチフス菌Salmonellatyphimurium抗原が癌の治療のために、本発明の組成物と共に用いられ得る。癌抗原の併用療法は既存の療法と比較して、より高い有効性及び生物学的利用能を示し得る。III.抗腫瘍免疫の抑制を緩和する薬剤本発明の方法はまた、抗腫瘍免疫の抑制を緩和する薬剤の投与を含む。幾つかの実施形態では、薬剤は調節性T細胞を破壊するか、そうでなくても阻害する。他の実施形態では、薬剤は腫瘍微小環境において抗原提示細胞の組成を変更し、例えば骨髄由来のサプレッサー細胞を死滅させる。抗腫瘍免疫の抑制を緩和する薬剤の例として、限定されるものではないが、アルキル化剤、ステロイド、ヌクレオチド阻害剤、化学療法剤、モノクローナル抗体、毒素、及び炎症抑制剤が挙げられる。より具体的な例として、限定されるものではないが、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、デニロイキンディフティトックス、ベバシズマブ、及びドセタキセルが挙げられる。特定の実施形態では、薬剤はシクロホスファミドであるCy又はシトキサンとも呼ばれる。前記薬剤は、粒子組成物の前に、又は後に投与され得る。IV.組織のアブレーション本発明に従って、癌細胞を物理的に破壊するための様々な方法が、抗腫瘍免疫の抑制を緩和する薬剤及び/又は免疫応答を促進し若しくは誘導する組成物の投与と共に用いられ得る。本明細書で用いる用語除去、アブレーション及びそのバリエーション等は、組織、特に、癌の組織若しくは細胞又は腫瘍の実質的な変更を意味する。この用語はまた、あらゆる過形成の増殖又は前癌病変、例えば異形成母斑、結腸ポリープ、線維腺種、子宮筋腫、伝染性軟属種、子宮頸部パピローマ、又は皮膚疣の変更にも適用される。幾つかの実施形態では、用語アブレーションは、標的細胞、例えば癌細胞の物理的な破壊を意味する。より具体的には、この用語は組織の直接的な壊死を意味し得る。特定の実施形態では、細胞/組織からの、腫瘍抗原及び/又は免疫学的デンジャーシグナル、例えば、高移動度グループボックス1タンパク質HMGB1、アデノシン三リン酸ATP、熱ショックタンパク質HSP、S100タンパク質、SAP130、RNA、二本鎖ゲノムDNA、ヒアルロン酸、バイグリカン、バーシカン、ヘパラン硫酸、ミトコンドリアのホルミルペプチド、ミトコンドリアDNA、無水ピロリン酸カルシウム結晶、βアミロイド、コレステロール結晶、インターロイキンIL-1α、IL-33、又は尿酸若しくは尿酸一ナトリウムの結晶、の放出を導くいずれのアブレーション法も、抗腫瘍免疫を促進する。例えば、冷凍アブレーションすなわち細胞の凍結は、細胞膜を破壊し、腫瘍排出リンパ節tumor-draininglymphnodeにおける抗腫瘍リンパ球への提示のために抗原提示細胞に捕捉されるインタクトな腫瘍抗原を放出させる。denBroketal95BRJCANCER896-905を参照されたい。免疫学的アジュバントで被覆された粒子例えばMPLで被覆された粒子を含む幾つかの実施形態では、後の腫瘍冷凍アブレーションの毒性の減少を生じさせ得る。というのも、MPLが内因性のデンジャーシグナルの放出によって誘導される炎症性シグナリングを遮断するからである。したがって、組織を除去するための方法として、限定されるものではないが、冷凍アブレーション、熱アブレーション、光音響アブレーション、放射線療法、化学療法、高周波アブレーション、エレクトロポレーション、アルコールアブレーション、高密度焦点式超音波、光線力学療法、モノクローナル抗体、免疫毒素等が挙げられる。医療のための腫瘍アブレーション技術は本技術分野において知られており、該治療様式として、高周波、焦点式超音波、例えば高密度超音波ビーム、マイクロ波、レーザー、熱電気加温、直流DC又は交流AC電流を用いた伝統的な加温方法、並びに加温液体及び寒冷療法例えば、冷凍療法又は冷凍アブレーションとしても知られる冷凍手術が挙げられる。冷凍アブレーションの情報については、CSAMedicalInc米国特許第7255693号、第6027499号、及び第6383181号、EndocareIncHealthTronicsInc米国特許第7921657号、第7621889号、第6972014号、第6936045号、第6544176号、及び第6251105号、米国特許出願公開第20110040297号、第20110009854号、第20100180607号及び第20020087152号、並びにGalilMedicalは、アブレーション部位の温度上昇を伴わずに細胞の壊死を誘導する、熱によらないアブレーション技術である。より具体的には、IREは、細胞の壊死及び不可逆的な細胞膜透過を生じさせるために、ナノ秒からミリ秒の範囲の電気パルスを組織に対して使用する技術である。より正確には、IRE治療は、ナノスケールサイズであり、かつ結合及び骨格の構造及び組織を作る間の恒常性の破壊につながる、細胞膜の欠損を作り出すことによって作用する。国際公開番号WO200506284A2だけでなく、米国特許出願公開第20070043345号及び第20060293731号を参照されたい。V.組成物の製剤化及び投与したがって、本発明の方法の特定の実施形態は、抗腫瘍免疫の抑制を緩和する薬剤例えば、シクロホスファミド、デニロイキン等、及び本明細書に記載の粒子例えば、免疫学的アジュバントで被覆され、及び/又は治療薬をカプセル化しているナノ粒子を含む有効量の組成物の投与に関する。本明細書で用いる用語有効は、所望の、予期した、又は意図した結果を達成するのに適切であることを意味する。より具体的には、有効量又は治療有効量は互換的に用いられ、単独で若しくは他の治療薬と組み合わせてのどちらかにおいて、所望の治療効果を提供するのに必要な本発明の組成物例えば、シクロホスファミド及び/若しくは粒子の量、例えば、病気の症状を予防し、緩和し、治療し、若しくは改善させ、又は治療されている対象の生存を延長するのに有効な量を意味する。当業者に理解されるように、必要とされる正確な量は、年齢、対象の全体的状態、治療されている症状の重症度、投与される特定の化合物及び/又は組成物等に依存して対象ごとに異なる。個々のケースにおける適切な治療有効量も、関連する教科書及び文献を参照する事により、並びに/又は通常の実験を用いる事により、当業者によって決定され得る。医薬組成物、その製剤化、投与等への言及は、文脈によって、一以上の抗腫瘍免疫の抑制を緩和する薬剤例えば、シクロホスファミド、デニロイキン等、及び本明細書に記載の粒子例えば、免疫学的アジュバントで被覆され、及び/又は治療薬をカプセル化しているナノ粒子を意味し得ることを理解されたい。本発明の組成物は、対象へのinvivoでの投与のために適した生物学的に適合性のある形態である。医薬組成物は、医薬的に許容可能なキャリアをさらに含む。用語医薬的に許容可能は、動物、及びより具体的にはヒトにおける使用のために、連邦若しくは州政府の監督官庁に認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の一般に認められている薬局方にリストされていることを意味する。用語キャリアは、cit-PAD4ポリペプチドと共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを意味する。前記医薬キャリアは無菌の液体、例えば水及び油、例えば石油、動物油、植物油、又は合成油、例えば限定されるものではないが、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油等であり得る。医薬組成物が経口投与される際には、水がキャリアであり得る。医薬組成物が静脈内投与される際には、生理食塩水及び水性ブドウ糖がキャリアであり得る。生理食塩水並びに水性ブドウ糖及びグリセロール溶液は、注射用の溶液のための液体キャリアとして用いられ得る。好適な医薬賦形剤として、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等が挙げられる。医薬組成物は、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はpH緩衝剤もまた含み得る。本発明の医薬組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、徐放性製剤等の形態をとり得る。特定の実施形態では、患者への適切な投与用の形態を提供するために、医薬組成物は有効量の本発明の粒子と共に、好適な量の医薬的に許容可能なキャリアを含む。製剤化は投与の方法に適していなければならない。本発明の医薬組成物は、限定されるものではないが、経口、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、舌下、又は経鼻投与をはじめとする、いずれの特定の経路によっても投与され得る。最も好適な経路は静脈内、筋肉内、又は皮下注射による。特定の実施形態では、組成物は標的領域に、又はその近くに、例えば腫瘍内注射で投与される。一般に、医薬組成物は、いずれの潜在的な毒性も最小化しながら、最適な有効性を得るために、通常の試験によって規定される適切な用量で、単独で又は他の治療薬と共に用いられ得る。本発明の医薬組成物を利用する投与計画は、様々な要因、例えば患者のタイプ、種、年齢、体重、性別、医学的状態;治療される症状の重症度;投与経路;患者の腎臓及び肝臓の機能;並びに使用される特定の医薬組成物にしたがって選択され得る。通常の知識を有する医師は、症状の進行を予防し、対抗し、又は停止させるのに必要な、医薬組成物及び治療薬を含む他に可能性のある薬剤の有効量を容易に決定し、処方することができる。最大の有効性と最小の毒性を得る範囲の治療計画の濃度を最適かつ正確に達成するには、一以上の標的部位に対する医薬組成物の利用動態に基づいた計画が必要とされ得る。治療計画のための最適な濃度を決定する際には、医薬組成物の分布、平衡状態、及び排出が考慮され得る。所望の効果を達成するために組み合わされる際には、本明細書で開示する医薬組成物の用量は調整され得る。一方で、医薬組成物及び様々な治療薬の用量は、独立して最適化され、かつ、どちらかが単独で用いられた場合よりも病状がより抑制される相乗的な結果を達成するために組み合わされ得る。特に、医薬組成物の毒性及び治療の有効性は、細胞培養又は実験動物において標準的な医薬手順、例えばLD50個体群の50にとって致死的な用量及びED50個体群の50において治療的に有効な用量を決定すること、により決定され得る。毒性及び治療効果の用量の比は治療指数であり、LD50/ED50の比として表され得る。組成物の細胞毒性が所望の活性又は治療結果である場合を除いて、高い治療指数を示す医薬組成物が好適である。有毒な副作用を示す医薬組成物が用いられ得るが、非患部細胞への損傷の可能性を最小化し、それにより副作用を減少させるために、送達システムは前記組成物の冒された組織部位へのターゲット化を可能にする。一般に、本発明の医薬組成物は有効性を最大化し、毒性を最小化するように投与され得る。細胞培養アッセイ及び動物実験で得られるデータは、ヒトにおける使用のための用量範囲を決定するのに用いられ得る。前記組成物の用量は、好適には毒性が小さいか、又は全くないED50を含む循環濃度の範囲内である。用量は、用いられる投与形態及び利用される投与経路に依存して、この範囲内で変更し得る。本発明の方法において用いられるいずれの組成物も、治療有効用量は最初、細胞培養アッセイから見積もられ得る。用量は、細胞培養において決定されるIC50症状の阻害の最大半量を達成する試験組成物の濃度を含む範囲の循環血漿濃度になるように、動物モデルにおいて決定され得る。そのような情報は、ヒトにおける有益な投与量を正確に決定するのに用いられ得る。血漿中の濃度は例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。さらに、本発明の組成物の投与用量は薬物動態/薬力学モデリングシステムを用いて最適化され得る。例えば、一以上の投与計画が選ばれ得、薬物動態/薬力学モデルが一以上の投与計画の薬物動態/薬力学プロフィールを決定するために用いられ得る。次に、特定の薬物動態/薬力学プロフィールに基づく所望の薬物動態/薬力学反応を達成する、一投与計画が選択され得る。WO0067776を参照し、その全体を明白に、参照により本明細書に組み込む。より具体的には、医薬組成物は1日1回の用量で投与され得るか、又は合計の1日用量が、日に2、3、もしくは4回の用量にわけて、投与され得る。経口投与の場合には、組成物の一日投与量は、1患者1日あたり、約01ng~約1000mgの広い範囲にわたって変更され得る。範囲はより具体的には、1日あたり、約0001ng/体重kg~10mg/体重kg、成人においては約60kg1日あたり約01~100μg、約10~50μg、又は約10~20mgであり得る。医薬組成物の1日投与量は、ヒト成人1日あたり、約01ng~約1000mgの広い範囲にわたって、変更され得る。経口投与のために、組成物は治療される患者の症状の調節のために約01ng~約1000mgの組成物を含むか、又は01、02、05、10、20、50、100、150、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、800、900、若しくは1000ミリグラムの組成物を含む、錠剤の形態で提供され得る。医薬組成物の有効量は、1日あたり約01ng/体重kg~約20mg/体重kgの用量で通常提供される。一実施形態では、範囲は1日あたり約02ng/体重kg~約10mg/体重kgである。別の実施形態では、範囲は1日あたり約05ng/体重kg~約10mg/体重kgである。医薬組成物は、計画に基づいて1日あたり約1~約10回投与され得る。注射の場合では、約60kgの成人に対して1日あたり、約00001μg~30mg、約001μg~20mg、又は約001~10mgの量で静脈内経路により投与することが通常便利である。他の動物の場合でも同様に、60kgで計算した用量が投与され得る。本発明の医薬組成物の用量は、任意に00001μg~1000mg/kg/投与、0001μg~1000mg/kg/投与、001μg~10mg/kg/投与、01μg~10mg/kg/投与、例えば、限定されるものではないが、01、02、03、04、05、06、07、08、09、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、1314、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、5354、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99及び/若しくは100~500mg/kg/投与、又は全てのそれらの範囲、値、若しくは一部であるか、又は1投与若しくは複数回投与あたり血清濃度が01、05、09、10、11、12、15、19、20、25、29、30、35、39、40、45、49、50、55、59、60、65、69、70、75、79、80、85、89、90、95、99、10、105、109、11、115、119、20、125、129、130、135、139、140、145、49、50、55、59、60、65、69、70、75、79、80、85、89、90、95、99、10、105、109、11、115、119、12、125、129、130、135、139、14、145、15、155、159、16、165、169、17、175、179、18、185、189、19、195、199、20、205、209、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、及び/若しくは5000μg/mlとなる投与量、又は全てのそれらの範囲、値、若しくは一部を含み得る。特定の実施形態では、本発明の粒子は約1μg~約1gの用量で投与され得る。他の実施形態では、シクロホスファミドが経口的に約50mg/日~静脈内に約50mg/kg/日の用量で投与され得る。一実施形態では、約50mgのシクロホスファミドが、少なくともアブレーションの約2週間前に、1日2回経口的に投与される。別の実施形態では、約50mg/kgのシクロホスファミドが、アブレーションの前日に静脈内に投与される。限定するものではない例として、対象の治療は本発明の組成物の一回又は周期的投与として、1日あたり01ng~100mg/kg、例えば00001、0001、001、01、05、09、10、11、15、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90又は100mg/kgを、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、若しくは40日に少なくとも1回、又は代わりに若しくはさらに、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、若しくは52週に少なくとも1回、又は代わりに若しくはさらに1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、若しくは20年に少なくとも1回、又はそれらのいずれかの組み合わせにより、単独の用量、注射量若しくは反復用量を用いて、提供され得る。特に、本発明の医薬組成物は、数週間にわたって少なくとも一週間に一回投与され得る。一実施形態では、医薬組成物は、数週間から数ヶ月にわたって少なくとも一週間に一回投与される。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、4週間から8週間にわたって一週に一回投与される。さらに別の実施形態では、医薬組成物は、4週間にわたって一週に一回投与される。より具体的には、医薬組成物は約2日間の間少なくとも1日1回、約3日間の間少なくとも1日1回、約4日間の間少なくとも1日1回、約5日間の間少なくとも1日1回、約6日間の間少なくとも1日1回、約7日間の間少なくとも1日1回、約8日間の間少なくとも1日1回、約9日間の間少なくとも1日1回、約10日間の間少なくとも1日1回、約11日間の間少なくとも1日1回、約12日間の間少なくとも1日1回、約13日間の間少なくとも1日1回、約14日間の間少なくとも1日1回、約15日間の間少なくとも1日1回、約16日間の間少なくとも1日1回、約17日間の間少なくとも1日1回、約18日間の間少なくとも1日1回、約19日間の間少なくとも1日1回、約20日間の間少なくとも1日1回、約21日間の間少なくとも1日1回、約22日間の間少なくとも1日1回、約23日間の間少なくとも1日1回、約24日間の間少なくとも1日1回、約25日間の間少なくとも1日1回、約26日間の間少なくとも1日1回、約27日間の間少なくとも1日1回、約28日間の間少なくとも1日1回、約29日間の間少なくとも1日1回、約30日間の間少なくとも1日1回、又は約31日間の間少なくとも1日1回投与され得る。あるいは、医薬組成物は1日に約1回、2日に約1回、3日に約1回、4日に約1回、5日に約1回、6日に約1回、7日に約1回、8日に約1回、9日に約1回、10日に約1回、11日に約1回、12日に約1回、13日に約1回、14日に約1回、15日に約1回、16日に約1回、17日に約1回、18日に約1回、19日に約1回、20日に約1回、21日に約1回、22日に約1回、23日に約1回、24日に約1回、25日に約1回、26日に約1回、27日に約1回、28日に約1回、29日に約1回、30日に約1回、又は31日に約1回、投与され得る。あるいは、本発明の医薬組成物は1週間に約1回、2週間に約1回、3週間に約1回、4週間に約1回、5週間に約1回、6週間に約1回、7週間に約1回、8週間に約1回、9週間に約1回、10週間に約1回、11週間に約1回、12週間に約1回、13週間に約1回、14週間に約1回、15週間に約1回、16週間に約1回、17週間に約1回、18週間に約1回、19週間に約1回、又は20週間に約1回投与され得る。あるいは、本発明の医薬組成物は、1か月に約1回、2か月に約1回、3か月に約1回、4か月に約1回、5か月に約1回、6か月に約1回、7か月に約1回、8か月に約1回、9か月に約1回、10か月に約1回、11か月に約1回、又は12か月に約1回投与され得る。あるいは、医薬組成物は約2週間の間少なくとも週1回、約3週間の間少なくとも週1回、約4週間の間少なくとも週1回、約5週間の間少なくとも週1回、約6週間の間少なくとも週1回、約7週間の間少なくとも週1回、約8週間の間少なくとも週1回、約9週間の間少なくとも週1回、約10週間の間少なくとも週1回、約11週間の間少なくとも週1回、約12週間の間少なくとも週1回、約13週間の間少なくとも週1回、約14週間の間少なくとも週1回、約15週間の間少なくとも週1回、約16週間の間少なくとも週1回、約17週間の間少なくとも週1回、約18週間の間少なくとも週1回、約19週間の間少なくとも週1回、又は約20週間の間少なくとも週1回、投与され得る。あるいは、医薬組成物は、約1ヶ月の間少なくとも週1回、約2ヶ月の間少なくとも週1回、約3ヶ月の間少なくとも週1回、約4ヶ月の間少なくとも週1回、約5ヶ月の間少なくとも週1回、約6ヶ月の間少なくとも週1回、約7ヶ月の間少なくとも週1回、約8ヶ月の間少なくとも週1回、約9ヶ月の間少なくとも週1回、約10ヶ月の間少なくとも週1回、約11ヶ月の間少なくとも週1回、又は約12ヶ月の間少なくとも週1回、投与され得る。本発明の医薬組成物が一以上の治療薬と組み合わされ得ることは、当業者にとって明白であろう。特に、本発明の組成物及び他の治療薬は、同じか又は異なる投与経路によって、同時に又は連続的に投与され得る。本発明の方法における使用のための治療薬の種類及び量の決定は、本技術分野において知られる標準的な方法を用いて、通常の知識を有する熟練者によって、容易になされ得る。特定の実施形態では、本発明の粒子は癌を治療する有効量の第二の治療薬と合わせて投与され得る。別の側面において、本発明の粒子は他の治療薬、例えば、限定されるものではないが、免疫調節剤、抗炎症剤例えば、アドレノコルチコイド、コルチコステロイド例えば、ベクロメタゾン、ブデソニド、フルニソリド、フルチカゾン、トリアムシノロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ヒドロコルチゾン、グルココルチコイド、ステロイド、非ステロイド系抗炎症薬例えば、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、及びCOX-2阻害剤及びロイコトリエンアンタゴニスト例えば、モンテルカスト、メチルキサンチン、ザフィルルカスト及びジレウトン;β2アゴニスト例えば、アルブテロール、ビテロール、フェノテロール、イソエタリン、メタプロテレノール、ピルブテロール、サルブタモール、テルブタリン、フォルモテロール、サルメテロール及びサルブタモールテルブタリン;抗コリン剤例えば、臭化イプラトロピウム及び臭化オキシトロピウム、スルファサラジン、ペニシラミン、ダプソン、抗ヒスタミン剤、抗マラリア剤例えばヒドロキシクロロキン;抗ウイルス剤;及び抗生物質例えば、ダクチノマイシン以前のアクチノマイシン、ブレオマイシン、エリスロマイシン、ペニシリン、ミトラマイシン、及びアントラマイシンAMCと組み合わされ得る。様々な実施形態では、第二の治療薬剤と合わせた本発明の組成物は、5分以下の間隔で、30分以下の間隔で、1時間の間隔で、約1時間の間隔で、約1時間~約2時間の間隔で、約2時間~約3時間の間隔で、約3時間~約4時間の間隔で、約4時間~約5時間の間隔で、約5時間~約6時間の間隔で、約6時間~約7時間の間隔で、約7時間~約8時間の間隔で、約8時間~約9時間の間隔で、約9時間~約10時間の間隔で、約10時間~約11時間の間隔で、約11時間~約12時間の間隔で、約12時間~18時間の間隔で、18時間~24時間の間隔で、24時間~36時間の間隔で、36時間~48時間の間隔で、48時間~52時間の間隔で、52時間~60時間の間隔で、60時間~72時間の間隔で、72時間~84時間の間隔で、84時間~96時間の間隔で、又は96時間~120時間の間隔で投与され得る。特定の実施形態では、二以上の療法が同じ来診において施される。幾つかの実施形態では、本発明の粒子及び一以上の他の療法が周期的に施される。周期的な療法は、ある期間最初の療法例えば本発明の粒子の処置、続いてある期間第二の療法例えば他の治療薬の処置、任意に、続いてある期間第三の療法の処置等、及びこの連続的処置の繰り返し例えば、一つの療法に対する耐性の発生を減少させるため、一つの療法の副作用を回避し若しくは減少させるため、及び/又は療法の有効性を改善するためのサイクルを含む。幾つかの実施形態では、本発明の併用療法の処置は繰り返され得、少なくとも1日、2日、3日、5日、10日、15日、30日、45日、2ヶ月、75日、3ヶ月又は少なくとも6ヶ月離し得る。さらに詳細な情報がなくとも、当業者であれば上述の記載を用いて、本発明を最大の範囲で利用し得るだろう。以下の実施例は説明のためのみであって、残りの開示を何一つ限定するものではない。以下の実施例は、本明細書に記載された、及び特許請求の範囲に係る化合物、組成物、物品、装置、並びに/又は方法の実施法及び評価法について、当業者に完全な開示及び説明を提供するために記載され、純粋に例証することを意図しており、発明者が発明と考えらるものの範囲を制限することを意図しない。数字例えば、量、温度等に関して正確性を確実にするために努力がなされているが、いくらかの誤差及び偏差が、本明細書において考慮されるべきである。他で指示しない限り、割合は重量割合であり、温度はセ氏温度であるか又は周囲温度であり、圧力は大気圧であるか又はそれに近い。反応条件、例えば成分濃度、所望の溶媒、溶媒混合物、温度、圧力、並びに記載したプロセスによって得られる産物の純度及び収率を最適化するために利用され得る他の反応範囲及び条件には、多数のバリエーション及び組み合わせがある。前記プロセス条件の最適化には、合理的及び通常なされる実験のみが必要とされる。材料及び方法ナノ粒子の構築059dL/gの固有粘度を有する5050PLGAは、LactelPolymersInc中の超濃縮抗原20~100mg/mlを、塩化メチレンに溶解したボルテックスしているPLGA溶液2mlに、液滴で添加する。その後、ポリマー及びカプセル化物質を二つ目のエマルションW/O/W中の5PVAに液滴で添加する。各乳化の後にサンプルを振幅を38に設定したCV26型超音波処理機を備えたTekmarSonicDistributorを用いて、30秒間氷上で超音波処理する。二つ目のエマルションを速やかに03PVAに添加する。この外相は、塩化メチレンを蒸発させるために、一定の室温で勢い良く3時間攪拌する。LPS修飾粒子は、5PVAを含む二つ目のエマルションにLPS脱イオン水中に20mg/mlを添加することにより調製する。粒子を15分間12000rpmで回収し、三回DI水で洗浄する。粒子を後の使用のために凍結乾燥し、-20°Cで保管する。ナノ粒子は-20°Cで数年間安定である。LPS修飾、抗原カプセル化ナノ粒子の模式図を図1Aに示す。図1Bは上述のとおり調製されたナノ粒子の走査型電子顕微鏡写真を示す。ナノ粒子の腫瘍内投与ナノ粒子を冷凍庫から取り出し、秤量し、その後1×PBSに1mg/mlの濃度で懸濁する。粒子を約1分間ピペットで懸濁する。PBSで混合したら、4°Cで保管したナノ粒子は、12時間まで使用され得る。PBS中の粒子は、12時間以上保管した場合は用いるべきではない。粒子は、均一な懸濁液を作るために、バスソニケーターにより軽く超音波処理するか、又はボルテックスする。粒子はシリンジ中で何もしないで放置するべきではない、というのも粒子は沈降し、その結果シリンジを目詰まりさせるからである。理想的には、よく混合されたナノ粒子懸濁液をシリンジに引き入れた後、10~30秒以内に注射がなされるべきである。5~8mmの直径の腫瘍を有するマウスには、100mgの粒子を、01mlの容量で直接腫瘍内に注射する。実施例1マウスにおける転移癌の免疫療法腫瘍の冷凍アブレーションは、抗腫瘍免疫を促進する、腫瘍抗原並びにHMGB1及びATP等の免疫学的デンジャーシグナルを放出させるとの仮説が立てられた。さらに、本発明の粒子は、腫瘍抗原提示の際に冷凍免疫療法の免疫原性を高め得るとの仮説が立てられた。10頭のBALB/cマウスの群にそれぞれ、高転移性の同系の乳癌株化細胞を104個、脇腹の皮下に接種した。14日目の初めに、3~5mmの腫瘍の小塊が注射部位に生じる。マウスは、14日目にシクロホスファミド200mg/kgを腹腔内に、15日目にLPS修飾ナノ粒子100μg/マウスを腫瘍内に、及び16日目に腫瘍の切除又は冷凍アブレーションのいずれか、を順番に処置する。図2を参照されたい。図3Aは、シクロホスファミドCy又はシトキサンが冷凍アブレーションの全身性の抗腫瘍効果を示さない事を示す、つまりCyに加えて冷凍アブレーションを処置した動物は、Cyに加えて皮下の小塊の外科手術を処置した動物より有意に長く生存しない。対照的に、Cy、ナノ粒子、及び冷凍アブレーションを処置した腫瘍を有するマウスは、Cy、ナノ粒子、及び外科手術を処置した腫瘍を有するマウスより有意に長く生存したパネルB;p=002。この結果は、4T1腫瘍の冷凍アブレーションは腫瘍抗原を遊離させるが、抗腫瘍免疫を刺激するのに十分なデンジャーシグナルを遊離させず、しかしながらこの欠損は冷凍アブレーションの前にナノ粒子を注射することにより克服され得るという可能性を示している。要約すると、これらの結果は、ナノ粒子が局所的腫瘍の冷凍アブレーションによって遊離する腫瘍抗原に対する免疫を刺激するアジュバント効果を提供し、それにより転移性癌の動物の生存期間の延長につながるという事を示唆している。実施例2予言的患者における前立腺癌の免疫療法独占所有権のある腫瘍抗原、例えばDendreonの前立腺酸性ホスファターゼとGM-CSFの融合タンパク質を、LPS修飾ナノ粒子中にカプセル化する。腫瘍抗原を含むナノ粒子を、前立腺腫瘍に局所的腫瘍の冷凍アブレーションの直前に注射する。この処置は新しく診断された前立腺癌、最終的な放射線療法の後に局所的に再発した前立腺癌、又は転移性前立腺癌の患者に、適用され得る。冷凍免疫療法に対する免疫応答は、シプロイセルTプロベンジ登録商標DendreonCorpSeattleWAの断続的な皮下注射によりブーストされ得る。患者は冷凍アブレーションの前に調節性T細胞を枯渇させるために、二週間の間毎日経口的にシクロホスファミド50mgを処置され得る。実施例3予言的患者における乳癌の免疫療法実施例2に記載のアプローチは、Her2/neuエピトープをLPS修飾ナノ粒子中にカプセル化し、冷凍アブレーションの前に乳癌中に該ナノ粒子を注射し、及びラプロイセルTDendreonCorpSeattleWAでブーストすることにより、乳癌患者に適用され得る。実施例4予言的患者における腎臓癌の免疫療法実施例2に記載のアプローチは、腎臓細胞癌の冷凍免疫療法のためにLPS修飾ナノ粒子中に炭酸脱水酵素-9を組み込むことにより、腎臓癌患者に適用され得る。実施例5患者における癌の免疫療法ヒトサイトメガロウイルスの免疫優勢なpp65タンパク質からのオーバーラップするペンタデカペプチドのプールをLPS修飾ナノ粒子中にカプセル化し、冷凍アブレーションの直前にCMV血清陽性の個体の腫瘍に注射する。この戦略はCMV特異的CD4T細胞を、該細胞が腫瘍特異的CD8T細胞の活性化の持続を補助することができる場所である腫瘍除去部位、又は腫瘍排出リンパ節に引き付けるだろう。あるいは、癌患者はCD4T細胞エピトープを含む抗原によりワクチン接種され得る。二週間以上後抗原特異的メモリーCD4T細胞を発生させるため、及び冷凍アブレーションの直前に、患者に抗原又は抗原中のCD4T細胞エピトープを含むLPS修飾ナノ粒子を腫瘍内に注射する。この戦略もまた、CD4メモリーT細胞を、CD8T細胞が腫瘍抗原と遭遇する部位に引き付けるだろう。参考文献1Dementoetal27VACCINE3013212Levyetal330JPHARMACOLEXPTHER5966013Glasgow293AMJPHYSIOLLUNGCELLMOLPHYSIOLL491496