"被検物質で処理されたBhas42細胞における下記1~199の遺伝子の少なくとも1つの発現量の変化を指標として、前記被検物質の発がんプロモーション活性を検出する方法であって、1~126の遺伝子は、発現増大した場合に発がんプロモーション活性が検出される遺伝子であり、127~199の遺伝子は、発現減少した場合に発がんプロモーション活性が検出される遺伝子である、方法。11100001G20Rik配列番号122310002L13Rik配列番号232410066E13Rik配列番号345430417L22Rik配列番号456430527G18Rik配列番号56Aen配列番号67Aldh1a7配列番号78Apcdd1配列番号89Aspm配列番号910Atp2a2配列番号1011AW112010配列番号1112Bcat1配列番号1213C3配列番号1314Car5b配列番号1415Cbs配列番号1516Ccl11配列番号1617Ccl9配列番号1718Ccne2配列番号1819Ccrn4l///LOC100047134配列番号1920Cdc6配列番号2021Cebpd配列番号2122Ces1配列番号2223Cib2配列番号2324Cp配列番号2425Ctps配列番号2526Cyr61配列番号2627Dkc1配列番号2728Dtl配列番号2829Emilin1配列番号2930Enpp3配列番号3031Ephb2配列番号3132Eps8///LOC632638配列番号3233Errfi1配列番号3334Exo1配列番号3435Fam171a2配列番号3536Fam43a配列番号3637Fbn1配列番号3738Fkbp5配列番号3839Fosl1配列番号3940Foxf1a配列番号4041Foxm1配列番号4142Galntl2配列番号4243Gdpd2配列番号4344Gdpd5配列番号4445Gfod1配列番号4546Gla配列番号4647Glb1配列番号4748Gm10638配列番号4849Gm11428配列番号4950Gm14446配列番号5051Gm22配列番号5152Gpr133配列番号5253Grk5配列番号5354Gsta1///Gsta2配列番号5455Herc5配列番号5556Hirip3配列番号5657Hmga2配列番号5758Ifi205///Mnda配列番号5859Ifrd2配列番号5960Il13ra1配列番号6061Il1rl1配列番号6162Ivns1abp配列番号6263Kif20b配列番号6364Lgals2配列番号6465LOC100045677///Mcm3配列番号6566Ltbp1配列番号6667Lum配列番号6768Ly6e配列番号6869Masp1配列番号6970Matr3配列番号7071Mmp13配列番号7172Mpeg1配列番号7273Mthfd1配列番号7374Mtm1配列番号7475Myc配列番号7576Nolc1配列番号7677Nop16配列番号7778Nop56配列番号7879Nr2f2配列番号7980Nsl1配列番号8081Orm1配列番号8182Pdss1配列番号8283Peg3配列番号8384Per1配列番号8485Plekhg4配列番号8586Pnn配列番号8687Polr1b配列番号8788Prelp配列番号8889Prkg2配列番号8990Prl2c2///Prl2c3///Prl2c4配列番号9091Ptgfr配列番号9192Ptprf配列番号9293Rrm2配列番号9394Rrp12配列番号9495Rsad2配列番号9596S100b配列番号9697S1pr3配列番号9798Sema3g配列番号9899Shmt2配列番号99100Slc7a3配列番号100101Slfn2配列番号101102Slfn4配列番号102103Smc2配列番号103104Spon2配列番号104105Srm配列番号105106St3gal5配列番号106107Steap1配列番号107108Tbc1d4配列番号108109Timp4配列番号109110Tjp2配列番号110111Tk1配列番号111112Tmem41a配列番号112113Tmem97配列番号113114Tnfrsf12a配列番号114115Tnfsf10配列番号115116Trim25配列番号116117Trp53配列番号117118Tsc22d3配列番号118119Tspan2配列番号119120Ttc7b配列番号120121Ttll1配列番号121122Ttyh2配列番号122123Ung配列番号123124Vdr配列番号124125Wwp2配列番号125126Zc3h8配列番号126127Adamts4配列番号127128Agt配列番号128129Ankrd1配列番号129130Apod配列番号130131Aspn配列番号131132Atrx配列番号132133AU015680配列番号133134Bdh2配列番号134135Boc配列番号135136Btg2配列番号136137Calml4配列番号137138Cbr2配列番号138139Cd1d1配列番号139140Clu///LOC100046120配列番号140141Col27a1配列番号141142Col3a1配列番号142143Crlf1配列番号143144Cxcl5配列番号144145Cyr61配列番号145146D0H4S114配列番号146147D530037H12Rik配列番号147148Dbp配列番号148149Dcn配列番号149150Dhrs3配列番号150151Dleu2配列番号151152Dusp1配列番号152153Dusp5配列番号153154Ebf1配列番号154155Egr1配列番号155156Egr2配列番号156157Egr3配列番号157158Enpp2配列番号158159Fbxo32配列番号159160Fmod配列番号160161Fos配列番号161162Gpc6配列番号162163Hist1h1c配列番号163164Ier2配列番号164165Jhdm1d配列番号165166Kdm6b配列番号166167Lgals7配列番号167168Lipa配列番号168169LOC100047324///Sesn1配列番号169170LOC640441///Thbs1配列番号170171Matn2配列番号171172Mmp14配列番号172173Nr4a1配列番号173174Per3配列番号174175Pik3ip1配列番号175176Plac8配列番号176177Postn配列番号177178Ppargc1a配列番号178179Prelp配列番号179180Prokr1配列番号180181Ptgfr配列番号181182Ptn配列番号182183Ptplb配列番号183184Rbms3配列番号184185Rhobtb3配列番号185186Scn2a1配列番号186187Sesn3配列番号187188Slc9a3r2配列番号188189Sned1配列番号189190Sorbs2配列番号190191Sox4配列番号191192Tpm1配列番号192193Trp53inp2配列番号193194Tsc22d2配列番号194195Wbscr27配列番号195196Ypel1配列番号196197Ypel2配列番号197198Zbed6配列番号198199Zfp36配列番号199下記遺伝子群Aから選択される少なくとも1つの遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項1記載の方法。遺伝子群A:26912181920222527283234394156575960616263656670737475767778808286878990939499103105107111113114117123127128130131133134135136137138139140141142143146147149150151152154155156157158159160161164165166167168169171172173175176177178179180181182183184186187188189191193195196197199下記遺伝子群Bから選択される少なくとも1つの遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項1記載の方法。遺伝子群B:11162937464750545558646768697172818385919596101102104109110115116122125129132145151162163170184185192194198下記遺伝子群Cから選択される少なくとも1つの遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項1記載の方法。遺伝子群C:134581013141517212326303133353640424445484951525364717981889297100106107108112119120121124126190192下記遺伝子群Dから選択される少なくとも1つの遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項1記載の方法。遺伝子群D:72124333843818498118133144145148153156157174192前記遺伝子群A~Dから少なくとも1つずつ選択される遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項2ないし5のいずれか1項に記載の方法。前記1~199から選択される10種以上の遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項6記載の方法。前記1~199から選択される50種以上の遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項7記載の方法。前記1~199から選択される100種以上の遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項8記載の方法。前記1~199の遺伝子の発現量の変化を指標とする請求項9記載の方法。指標とする発現量の変化は、被検物質と接触させたBhas42細胞における遺伝子の発現量と、被検物質と接触させないコントロールのBhas42細胞における遺伝子の発現量とを対比した相対変化である、請求項1ないし10のいずれか1項に記載の方法。被検物質処理により発現量が変化した遺伝子の種類を下記A~Dの基準と対比し、一致の度合いに基づいて被検物質がTPA型、オカダ酸型、リトコール酸型及びプロゲステロン型のいずれに分類されるかを判定することをさらに含む、請求項1ないし11のいずれか1項に記載の方法。ATPA型A-1TPA型で増大する遺伝子26912181920222527283234394156575960616263656670737475767778808286878990939499103105107111113114117123A-2TPA型で減少する遺伝子127128130131133134135136137138139140141142143146147149150151152154155156157158159160161164165166167168169171172173175176177178179180181182183184186187188189191193195196197199Bオカダ酸型B-1オカダ酸型で増大する遺伝子11162937464750545558646768697172818385919596101102104109110115116122125B-2オカダ酸型で減少する遺伝子129132145151162163170184185192194198Cリトコール酸型C-1リトコール酸型で増大する遺伝子134581013141517212326303133353640424445484951525364717981889297100106107108112119120121124126C-2リトコール酸型で減少する遺伝子190192Dプロゲステロン型D-1プロゲステロン型で増大する遺伝子72124333843818498118D-2プロゲステロン型で減少する遺伝子133144145148153156157174192従って、本発明の目的は、任意の化学物質の発がんプロモーション活性を迅速に調べることができる新規な手段を提供することにある。本願発明者らは、Bhas42細胞を5種類の既知発がんプロモーターで24時間処理した時点での遺伝子発現をマイクロアレイ分析し、コントロールの溶媒処理群における遺伝子発現と対比して発現量の相対変化を調べた。その結果、Bhas42形質転換試験が陽性であるプロモーターの場合には、各プロモーターごとにそれぞれ有意な発現変化を示す遺伝子群が存在することを見出し、これら遺伝子を特定した。これら遺伝子を発がんプロモーションマーカー遺伝子とし、被検物質で処理したBhas42細胞におけるマーカー遺伝子の発現量の相対変化を指標とすれば、従来よりも短時間の被検物質処理で発がんプロモーション活性を検出できること、さらに、既知発がんプロモーターによって発現変化する遺伝子群との一致性を調べることで、被検物質がいずれの発がんプロモーターに似ているか、すなわちプロモーターの系統分類ができることを見出し、本願発明を完成した。すなわち、本発明は、被検物質で処理されたBhas42細胞における下記1~199の遺伝子の少なくとも1つの発現量の変化を指標として、前記被検物質の発がんプロモーション活性を検出する方法であって、1~126の遺伝子は、発現増大した場合に発がんプロモーション活性が検出される遺伝子であり、127~199の遺伝子は、発現減少した場合に発がんプロモーション活性が検出される遺伝子である方法を提供する。11100001G20Rik配列番号1、22310002L13Rik配列番号2、32410066E13Rik配列番号3、45430417L22Rik配列番号4、56430527G18Rik配列番号5、6Aen配列番号6、7Aldh1a7配列番号7、8Apcdd1配列番号8、9Aspm配列番号9、10Atp2a2配列番号10、11AW112010配列番号11、12Bcat1配列番号12、13C3配列番号13、14Car5b配列番号14、15Cbs配列番号15、16Ccl11配列番号16、17Ccl9配列番号17、18Ccne2配列番号18、19Ccrn4l///LOC100047134配列番号19、20Cdc6配列番号20、21Cebpd配列番号21、22Ces1配列番号22、23Cib2配列番号23、24Cp配列番号24、25Ctps配列番号25、26Cyr61配列番号26、27Dkc1配列番号27、28Dtl配列番号28、29Emilin1配列番号29、30Enpp3配列番号30、31Ephb2配列番号31、32Eps8///LOC632638配列番号32、33Errfi1配列番号33、34Exo1配列番号34、35Fam171a2配列番号35、36Fam43a配列番号36、37Fbn1配列番号37、38Fkbp5配列番号38、39Fosl1配列番号39、40Foxf1a配列番号40、41Foxm1配列番号41、42Galntl2配列番号42、43Gdpd2配列番号43、44Gdpd5配列番号44、45Gfod1配列番号45、46Gla配列番号46、47Glb1配列番号47、48Gm10638配列番号48、49Gm11428配列番号49、50Gm14446配列番号50、51Gm22配列番号51、52Gpr133配列番号52、53Grk5配列番号53、54Gsta1///Gsta2配列番号54、55Herc5配列番号55、56Hirip3配列番号56、57Hmga2配列番号57、58Ifi205///Mnda配列番号58、59Ifrd2配列番号59、60Il13ra1配列番号60、61Il1rl1配列番号61、62Ivns1abp配列番号62、63Kif20b配列番号63、64Lgals2配列番号64、65LOC100045677///Mcm3配列番号65、66Ltbp1配列番号66、67Lum配列番号67、68Ly6e配列番号68、69Masp1配列番号69、70Matr3配列番号70、71Mmp13配列番号71、72Mpeg1配列番号72、73Mthfd1配列番号73、74Mtm1配列番号74、75Myc配列番号75、76Nolc1配列番号76、77Nop16配列番号77、78Nop56配列番号78、79Nr2f2配列番号79、80Nsl1配列番号80、81Orm1配列番号81、82Pdss1配列番号82、83Peg3配列番号83、84Per1配列番号84、85Plekhg4配列番号85、86Pnn配列番号86、87Polr1b配列番号87、88Prelp配列番号88、89Prkg2配列番号89、90Prl2c2///Prl2c3///Prl2c4配列番号90、91Ptgfr配列番号91、92Ptprf配列番号92、93Rrm2配列番号93、94Rrp12配列番号94、95Rsad2配列番号95、96S100b配列番号96、97S1pr3配列番号97、98Sema3g配列番号98、99Shmt2配列番号99、100Slc7a3配列番号100、101Slfn2配列番号101、102Slfn4配列番号102、103Smc2配列番号103、104Spon2配列番号104、105Srm配列番号105、106St3gal5配列番号106、107Steap1配列番号107、108Tbc1d4配列番号108、109Timp4配列番号109、110Tjp2配列番号110、111Tk1配列番号111、112Tmem41a配列番号112、113Tmem97配列番号113、114Tnfrsf12a配列番号114、115Tnfsf10配列番号115、116Trim25配列番号116、117Trp53配列番号117、118Tsc22d3配列番号118、119Tspan2配列番号119、120Ttc7b配列番号120、121Ttll1配列番号121、122Ttyh2配列番号122、123Ung配列番号123、124Vdr配列番号124、125Wwp2配列番号125、126Zc3h8配列番号126、127Adamts4配列番号127、128Agt配列番号128、129Ankrd1配列番号129、130Apod配列番号130、131Aspn配列番号131、132Atrx配列番号132、133AU015680配列番号133、134Bdh2配列番号134、135Boc配列番号135、136Btg2配列番号136、137Calml4配列番号137、138Cbr2配列番号138、139Cd1d1配列番号139、140Clu///LOC100046120配列番号140、141Col27a1配列番号141、142Col3a1配列番号142、143Crlf1配列番号143、144Cxc15配列番号144、145Cyr61配列番号145、146D0H4S114配列番号146、147D530037H12Rik配列番号147、148Dbp配列番号148、149Dcn配列番号149、150Dhrs3配列番号150、151Dleu2配列番号151、152Dusp1配列番号152、153Dusp5配列番号153、154Ebf1配列番号154、155Egr1配列番号155、156Egr2配列番号156、157Egr3配列番号157、158Enpp2配列番号158、159Fbxo32配列番号159、160Fmod配列番号160、161Fos配列番号161、162Gpc6配列番号162、163Hist1h1c配列番号163、164Ier2配列番号164、165Jhdm1d配列番号165、166Kdm6b配列番号166、167Lgals7配列番号167、168Lipa配列番号168、169LOC100047324///Sesn1配列番号169、170LOC640441///Thbs1配列番号170、171Matn2配列番号171、172Mmp14配列番号172、173Nr4a1配列番号173、174Per3配列番号174、175Pik3ip1配列番号175、176Plac8配列番号176、177Postn配列番号177、178Ppargc1a配列番号178、179Prelp配列番号179、180Prokr1配列番号180、181Ptgfr配列番号181、182Ptn配列番号182、183Ptplb配列番号183、184Rbms3配列番号184、185Rhobtb3配列番号185、186Scn2a1配列番号186、187Sesn3配列番号187、188Slc9a3r2配列番号188、189Sned1配列番号189、190Sorbs2配列番号190、191Sox4配列番号191、192Tpm1配列番号192、193Trp53inp2配列番号193、194Tsc22d2配列番号194、195Wbscr27配列番号195、196Ypel1配列番号196、197Ypel2配列番号197、198Zbed6配列番号198、199Zfp36配列番号199本発明により、従来よりも短時間で遺伝子発現の変化を指標に発がんプロモーション活性を検出できる新規な方法が提供された。Bhas42細胞を用いれば、被検物質処理は24時間と短時間でよく、また発がんイニシエーション処理は不要なため、イニシエーターの影響を排除できる。199の遺伝子の一部又は全てを含むマイクロアレイチップを設計すれば、簡便な発がんプロモーター検出用のチップを提供できる。また、新規DNAマイクロアレイ以外にも、発がんプロモーター検出に特化したトランスクリプトミクスリアルタイムPCR測定用遺伝子リストおよびプライマーセットなど、プロテオミクスプロテインチップなど、メタボロミクス代謝産物リストなどへと展開し、発がんプロモーターの検出に広く応用することも可能である。本発明の方法で使用する細胞は、マウス胎児由来のBalb/c3T3細胞にv-Ha-ras遺伝子を導入したBhas42細胞である。Bhas42細胞は、非特許文献1及び2に記載されるように公知であり、当業者であれば容易に入手ないしは調製できる。培養条件も公知であり、通常、37°C、5CO2インキュベーター内で培養する。本発明の方法では、Bhas42細胞は、例えば5牛胎児血清FBSを添加したDMEM/F12培地DF5Fで前培養を行なった後、同培地で7x103cells/mL程度の細胞密度の細胞浮遊液を調製して培養を開始する。6wellプレートを用いる場合には細胞浮遊液を2mL/well程度ずつ播種すればよい。播種から4日程度後に被検物質処理又はコントロールの溶媒処理を行なう。通常、被検物質を含む新鮮な培地に交換することで、被検物質処理が行なわれる。プロモーター活性未知の被検物質を調べる場合、ng/ml~mg/mlのオーダーで数段階の濃度で処理を行ない、サンプルを得てよい。被検物質処理から24時間後、細胞をサンプリングし、常法によりトータルRNAを抽出、このRNA試料について発現解析を行なえばよい。マイクロアレイを用いて発現解析を行なう場合、使用するマイクロアレイで推奨される品質のRNA試料を調製する必要があるが、当業者であれば適宜調製できる。特に限定されないが、通常、Agilent社のBioAnalyzerにてRIN9.0以上を保証される程度の品質であれば、マイクロアレイ解析に好ましく供することができる。例えば、Affymetrix社の3’IVTExpresskitにてaRNAを調製した場合、Agilent社のBioAnalyzerにてSmearAnalysisを実行し、1000ntにピーク中心があること、1000-4000ntのAUCが全体の35以上を占めることがRNA試料の条件となり得るが、他社製品使用の場合はこの限りではない。本発明でマーカー遺伝子として使用され得る遺伝子を表1及び表2に示す。配列表に記載されるこれら遺伝子の塩基配列は、GenBankに登録されている塩基配列であり、各RefSeqTranscriptIDなどで検索可能な配列である。これらの遺伝子は、下記実施例において、5種類の既知発がんプロモーターのうちの少なくともいずれか1つで有意にFalseDiscoveryRateFDR<0.01発現量が変化した遺伝子である。表1の126遺伝子1~126の遺伝子が、溶媒処理の対照群に対し2倍以上に発現量が増大した遺伝子であり、表2の73遺伝子127~199の遺伝子が、溶媒処理の対照群に対し0.5倍以下に発現量が減少した遺伝子である。表中、mRNAを増大減少させるプロモーターの欄には、Bhas42細胞を24時間処理した場合に発現増大減少が確認された発がんプロモーターを示す12-O-テトラデカノイルホルボール13-アセテートTPA、オカダ酸OA、リトコール酸LCA、プロゲステロンPROG及び17β-エストラジオールED。1~199の遺伝子について、発がんプロモーターごとにグループ分けすると以下の通りである。なお、ED処理で発現量の変化が認められた遺伝子は161のみであり、該遺伝子は遺伝子群Aの減少遺伝子にも属する。遺伝子群A:TPA処理で発現量が変化する遺伝子106遺伝子A-1発現増大する遺伝子48遺伝子26912181920222527283234394156575960616263656670737475767778808286878990939499103105107111113114117123A-2発現減少する遺伝子58遺伝子127128130131133134135136137138139140141142143146147149150151152154155156157158159160161164165166167168169171172173175176177178179180181182183184186187188189191193195196197199遺伝子群B:オカダ酸処理で発現量が変化する遺伝子43遺伝子B-1発現増大する遺伝子31遺伝子11162937464750545558646768697172818385919596101102104109110115116122125B-2発現減少する遺伝子12遺伝子129132145151162163170184185192194198遺伝子群C:リトコール酸処理で発現量が変化する遺伝子46遺伝子C-1発現増大する遺伝子44遺伝子134581013141517212326303133353640424445484951525364717981889297100106107108112119120121124126C-2発現減少する遺伝子2遺伝子190192遺伝子群D:プロゲステロン処理で発現量が変化する遺伝子19遺伝子D-1発現増大する遺伝子10遺伝子72124333843818498118D-2発現減少する遺伝子9遺伝子133144145148153156157174192遺伝子群E:17β-エストラジオール処理で発現量が変化する遺伝子1遺伝子発現減少する遺伝子1遺伝子161本発明の方法では、1~199のマーカー遺伝子のうちの少なくともいずれか1つの遺伝子の発現量を測定し、コントロール処理群に対する相対変化を調べる。測定する遺伝子数は特に限定されず、例えば199遺伝子中の10種以上、30種以上、50種以上、70種以上、100種以上、又は150種以上としても良く、199遺伝子の全てを測定しても良い。複数の遺伝子を測定対象とする場合、遺伝子群A~Dのいずれか1つから測定対象の遺伝子を選択しても良いが、遺伝子群A~Dの各群から少なくとも1つずつを選択しても良い。例えば、遺伝子群A~Dから5以上又は10以上の遺伝子を測定対象としても良いし、あるいは、各群から1割以上具体的には、遺伝子群Dであれば19遺伝子なので1遺伝子以上、3割以上遺伝子群Dであれば5遺伝子以上、5割以上、又は7割以上の遺伝子を測定対象としても良い。網羅的に解析する観点では、できる限り多数のマーカー遺伝子の発現量を調べることが望ましく、また、対象とするマーカー遺伝子には、遺伝子群A~Dの少なくとも1遺伝子ずつが含まれることが望ましい。なお、上記の遺伝子に加えて、発がんプロモーションマーカー遺伝子として有用であり得る他の遺伝子例えば後掲の表4、表5に記載される遺伝子などの発現量をさらに調べることは差し支えない。多数の遺伝子について発現量を調べる場合にはマイクロアレイを好ましく用いることができる。1~199の遺伝子の全てが搭載されたマイクロアレイとしては、例えば下記実施例でも用いた市販のMouseGenome4302.0アレイアフィメトリクス株が挙げられるが、これに限定されず、他の市販品を用いることができる。あるいは、上記の199遺伝子を含むアレイを適宜設計して用いても良い。なお、MouseGenome4302.0アレイに固定化されている上記1~199の遺伝子に対するプローブの配列情報は、アフィメトリクス社のホームページから入手可能であり、当業者であれば下記表3に示すID番号Probesetnameで容易に特定し入手できる。配列表の配列番号200~440には、各ID番号で識別されているプローブ配列の具体例を示すが、これら具体例以外の各プローブ配列も当業者であれば容易に入手可能である。アレイ測定データの正規化summerization,normalizationの手法は、用いるアレイに応じて適宜検討し、解析に最適な手法を選択して用いることができる。群間比較解析には、採用した正規化手法に適した手法を選択して用いることができる。例えば、MouseGenome4302.0アレイを用いて被検物質処理したBhas42細胞の遺伝子発現量を調べる場合には、下記実施例で用いた正規化手法等をそのまま用いることができる。被検物質処理群におけるマーカー遺伝子の発現量の相対変化を調べ、コントロール処理群に対し有意な変化FDR<0.01で、増大遺伝子の場合は2倍以上、減少遺伝子の場合は0.5倍以下が確認できれば、発がんプロモーション活性が検出されたと判断される。複数のマーカー遺伝子を調べた場合、そのうちの1遺伝子だけでも有意な変化が確認できれば、その被検物質は発がんプロモーション活性を有すると判断でき、2以上の遺伝子で有意な変化が確認できればより確実性が増す。199遺伝子について発現量の相対変化を調べた場合であれば、199遺伝子全体との発現変化の一致率又は遺伝子群A~Dのうちのいずれか1群との一致率が例えば10程度以上、20程度以上、又は30程度以上であれば、検出結果の確実性がより高まる。例えば、下記実施例に記載されるTBHQの例では、増大126遺伝子のうちの21遺伝子、減少73遺伝子のうちの19遺伝子で有意な変化が確認されており後掲の表6及び表7参照、199遺伝子全体との一致率が2040/199、遺伝子群Aとの一致率が3739/106である。もっとも、本発明の範囲はこの具体例に限定されるものではない。本発明の方法で発がんプロモーション活性が検出された場合、該物質は発がんプロモーション活性を有すると判断できる。ただし、本発明の方法で該活性が検出されない場合には、該物質は発がんプロモーション活性を有しないとは判断されず、該活性は不明と判断される。本発明の方法で発がんプロモーション活性が検出されなかった被検物質は、発がんプロモーション活性を有しない物質と、発がんプロモーション活性を有するがBhas42細胞形質転換試験が陰性である物質とのいずれかであり得る。本発明の方法で活性が検出されなかった被検物質については、別途異なる方法で発がんプロモーション活性を調べても良い。被検物質の発がんプロモーション活性が検出された場合には、さらに、該被検物質が発がんプロモーターとしてTPA、オカダ酸、リトコール酸、プロゲステロンのいずれに近いかを調べることもできる。被検物質で発現量が増大又は減少した遺伝子を、上記の遺伝子群A~Dと対比し、遺伝子の一致性を調べる。その一致性の度合いに基づいて、被検物質をTPA型A群、オカダ酸型B群、リトコール酸型C群、プロゲステロン型D群のいずれかに分類することが可能である。A~Dの各群で遺伝子数は異なるので、一致性は、例えば各群の遺伝子の何と一致したかによって評価することができる。特に限定されないが、いずれかの群との一致率が10程度以上、例えば20程度以上、又は30程度以上であれば、その群が表す型に分類できる。複数の群との一致率が高い場合には、その被検物質は複数の型に分類され得る。例えば、A群及びB群との一致率が高い場合、その被検物質をTPA/オカダ酸型と分類してよい。下記実施例のTBHQの例では、A群との一致率が37と非常に高く、TBHQをTPA型に分類することができる。以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。1.DNAマイクロアレイによるmRNA発現量測定1細胞試料液の調製Bhas42細胞は、実験ごとに新たに保存細胞株を解凍し、5牛胎児血清FBSを添加したDMEM/F12培地DF5Fで前培養を行ったものを用いた。同培地を用いてBhas42細胞の7x103cells/mL細胞浮遊液を調製し、6wellプレートに2mL/wellずつ播種した。細胞播種4日後に発がんプロモーター処理又はコントロールの溶媒処理を行なった。発がんプロモーターとして、既知の発がんプロモーターである12-O-テトラデカノイルホルボール13-アセテートTPA、オカダ酸OA、リトコール酸LCA、プロゲステロンPROG及び17β-エストラジオールEDを用いた。各プロモーターについてDMSO溶液を調製しTPAは5μg/mL、OAは6μg/mL、LCAは10mg/mL、PROG及びEDは3μmol/mL、各DMSO溶液をDF5Fに0.1添加した培地で培地交換を行ない、発がんプロモーター処理群とした培地中の終濃度は、TPA;5ng/mL、OA;6ng/mL、LCA;10μg/mL、PROG及びED;3nmol/mL。溶媒対照群については、DMSO0.1を添加したDF5Fで培地交換を行った。24時間後に細胞観察とRNA抽出用細胞試料液の調製を行ない、試料液を-80°Cで保存した。各群の細胞試料液は、細胞解凍から完全繰り返し実験3回分n=3で調製した。また、各プロモーター物質について、公知のBhas42細胞形質転換試験非特許文献2:MutationResearch20045572:191-202および結果判定AlternativestoLaboratoryAnimals200533:619-639を行なった。上記の通りにBhas42細胞を準備し、各プロモーター処理は播種後4日から14日まで10日間行なった。播種後7日、11日に培地交換を行なった。播種後14日でプロモーター物質を含まない新鮮な培地に交換し、播種後21日まで培養後、細胞をメタノールで固定、ギムザ染色して形質転換細胞フォーカスをカウントした。その結果、TPA、OA、LCA、PROGはフォーカス形成頻度foci/wellが溶媒対照群に対して有意Dunnett検定を行い、片側p<0.05かつ2倍以上に増大する濃度群が存在し、Bhas42形質転換活性が陽性であった。EDはフォーカス形成頻度foci/wellが溶媒対照群に対して有意に増大する濃度群も、2倍以上に増大する濃度群も存在しないため、Bhas42形質転換活性は陰性であった。2RNA試料の抽出精製凍結保存した細胞試料液を解凍し、クロロホルム分配およびイソプロパノール沈殿によりトータルRNAを抽出し、RNeasy登録商標MinikitQIAGEN社を用いて、キアゲン社のプロトコールに従いトータルRNAを精製した。得られたトータルRNA試料について、RNA濃度測定およびAgilent2100バイオアナライザによりクオリティー評価を行った。3DNAマイクロアレイ分析用RNA試料の調製および分析精製後のトータルRNAについて、3’IVTExpressKitアフィメトリクス株を用いて、cDNAに逆転写後、ラベル化aRNAを調製し、精製した後、フラグメンテーションを行った。GeneChipHybridization,Wash,andstainKitアフィメトリクス株の試薬と混合し、MouseGenome4302.0アレイアフィメトリクス株に注入後、45°Cで16時間、ハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダイゼーションの終了後、アレイの中の溶液を除去し、同キットを用いてFluidicsStation450アフィメトリクス株で洗浄および染色後、GeneChipScanner3000アフィメトリクス株を用いてマイクロアレイ分析を行った。2.マイクロアレイ測定結果の解析およびマーカー遺伝の選出DNAマイクロアレイ分析により得られたデータCELデータに対し、はじめに採用する正規化summarization,normalization手法の検討を行った。DFW、MAS5、RMAおよびqFARMSによる正規化を、Rhttp://www.r-project.org/により実行し、階層的クラスター解析を行った。その結果、既知発がんプロモーター処理群と溶媒対照群との間で異なるクラスターを形成する正規化手法としてqFARMSを選択した。続いて、qFARMSにより正規化したデータに対し、統計法としてRankproductsを実行し、解析結果をExcelファイルに変換した。5種の各既知発がんプロモーター処理により有意に発現変動したGene遺伝子を抽出するために、Rankproducts実行により得られたデータのFalseDiscoveryRateFDRをオートフィルターにより昇順に並べなおし、0.05未満のprobesetsプローブセットを抽出した。一部の遺伝子については一つの遺伝子が複数のプローブセットによりコードされる場合があることから、抽出されたプローブセットについて、GeneTitle遺伝子名または、GeneSymbol遺伝子略名の重複を削除し、溶媒対照群に対して既知発がんプロモーター処理群で有意にmRNA量が増大または減少した遺伝子名を抽出した増大:1668遺伝子、減少:1238遺伝子。これらの遺伝子を下記表4及び表5に示す。それらの有意に増大または減少した遺伝子から、さらに、有意性の高い遺伝子を選出する目的で、増大または減少のそれぞれについて、FDR0.01未満のプローブセットを抽出した。それらのプローブセットについて、MAS5の正規化データにおいて、発がんプロモーター処理群でシグナル強度比が2倍以上に増大し、シグナル強度が300以上のプローブセットを抽出した。続いて、遺伝子名または遺伝子略名の重複を削除することにより、増大遺伝子126遺伝子を選出した上掲の表1。同様に有意FDR0.01未満に減少したプローブセットについて、シグナル強度比が発がんプロモーター処理群において0.5倍以下に減少し、溶媒対照群のシグナル強度が300以上のプローブセットを抽出した。遺伝子名または遺伝子略名の重複を削除することにより、減少遺伝子73遺伝子を選出した上掲の表2。3.選出したマーカー遺伝子による被検物質の発がんプロモーション活性の判定と分類tert-ブチルヒドロキノンTBHQは、上記したBhas42細胞形質転換試験により強い陽性反応が得られた化学物質である。上記と同様の手順で、TBHQ処理後24時間のBhas42細胞からmRNA試料を調製し、マイクロアレイ解析を行ない、FDR0.01未満で且つシグナル強度が2倍以上又は0.5倍以下に変化した遺伝子を調べた。変化が認められた遺伝子について、上記で選出した199遺伝子増大126遺伝子、減少73遺伝子との一致性を調べた。その結果を下記表6及び表7に示す。TBHQ処理したBhas42細胞で発現量が変化した遺伝子の一致性は、TPAとの間で非常に高かった。Bhas42形質転換活性陰性であるEDとの間では、一致する遺伝子は見出されなかった。TBHQは発がんプロモーション活性を有し、その活性はTPA型と判定することができた。"