"標的部位を有する核酸と、標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブとを共存させ、光照射することによって該標的部位を有する核酸と該クランププローブを光連結させ、核酸増幅法による標的部位を含む検出領域の増幅を抑制する方法。a野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する野生型核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bの反応産物を核酸増幅反応に供する工程、d前記増幅産物を解析する工程を含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出方法。a野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する野生型核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bを核酸増幅反応中に行う工程、d前記増幅産物を解析する工程を含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出方法。前記核酸増幅法がPCR法である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記核酸増幅法がリアルタイムPCR法である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記クランププローブが、標的核酸分子のセンス鎖及び/又はアンチセンス鎖に相補的な配列を有する、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記クランププローブの鎖長が7~30である、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。前記光照射が、350~380nmの範囲の波長によって行われる、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。前記光照射が、通常の相補鎖同士が結合および解離する温度サイクルにおいて相補鎖同士が結合できる温度において1回以上行われる、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。前記光照射が、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を付与した核酸増幅装置によって行われる、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、標的部位を含む検出領域を増幅するプライマーとを含む、遺伝子増幅法による標的部位を含む検出領域の増幅を抑制するキット。野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、標的部位を含む検出領域を増幅するプライマーとを含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出キット。350~380nmの範囲の波長の光照射機能を有する核酸増幅装置。a標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bの反応産物を核酸増幅反応に供する工程、を含む、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を有する核酸増幅装置。a標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bを核酸増幅反応中に行う工程、を含む、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を有する核酸増幅装置。本発明の目的は、核酸サンプルにおいて、野生型核酸群に微量に混在する変異型核酸を検出するにあたり、迅速且つ簡便に、高い特異性と感度を両立させた方法を提供することにある。本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブを、標的部位の配列を有する野生型核酸に対して光連結させることによって、選択的に野生型核酸の増幅を阻止できることを見出した。すなわち、光連結性クランププローブを用いることで、完全なハイブリッド形成を行った場合にのみ特異的に光連結させ、核酸増幅反応における温度サイクルのどの工程においても連結を維持する、すなわち、非平衡状態にすることで、標的分子の核酸増幅反応における鋳型としての役割を阻止することができる。このことにより、野生型核酸の高いクランピング抑制効果と変異型核酸の選択的特異的核酸増幅の両立を可能にした。本発明は、[1]標的部位を有する核酸と、標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブとを共存させ、光照射することによって該標的部位を有する核酸と該クランププローブを光連結させ、核酸増幅法による標的部位を含む検出領域の増幅を抑制する方法、[2]a野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する野生型核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bの反応産物を核酸増幅反応に供する工程、d前記増幅産物を解析する工程を含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出方法、[3]a野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する野生型核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bを核酸増幅反応中に行う工程、d前記増幅産物を解析する工程を含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出方法、[4]前記核酸増幅法がPCR法である、[1]~[3]のいずれかの方法、[5]前記核酸増幅法がリアルタイムPCR法である、[1]~[3]のいずれかの方法、[6]前記クランププローブが、標的核酸分子のセンス鎖及び/又はアンチセンス鎖に相補的な配列を有する、[1]~[3]のいずれかの方法、[7]前記クランププローブの鎖長が7~30である、[1]~[6]のいずれかの方法、[8]前記光照射が、350~380nmの範囲の波長によって行われる、[1]~[7]のいずれかの方法、[9]前記光照射が、通常の相補鎖同士が結合および解離する温度サイクルにおいて相補鎖同士が結合できる温度において1回以上行われる、[1]~[8]のいずれかの方法、[10]前記光照射が、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を付与した核酸増幅装置によって行われる、[1]~[9]のいずれかの方法、[11]標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、標的部位を含む検出領域を増幅するプライマーとを含む、遺伝子増幅法による標的部位を含む検出領域の増幅を抑制するキット、[12]野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、標的部位を含む検出領域を増幅するプライマーとを含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出キット、[13]350~380nmの範囲の波長の光照射機能を有する核酸増幅装置、[14]a標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bの反応産物を核酸増幅反応に供する工程、を含む、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を有する核酸増幅装置、[15]a標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bを核酸増幅反応中に行う工程、を含む、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を有する核酸増幅装置に関する。本発明によれば、高い感度と特異性を両立させて、核酸サンプルに混在する変異型核酸の有無を迅速に、また簡便に検出することができる。本発明において、DNA、RNA、核酸、遺伝子、遺伝子発現、コード、相補、鋳型、プロモーター、プローブ、プライマー、ハイブリダイゼーション、PCR等の用語の定義に関しては、現在、分子生物学、遺伝学、遺伝子工学等で広く一般的に使用されている用語と同じ意味である。本発明において、核酸とは、DNA又はRNA、あるいは、後述のヌクレオチドアナログであれば特に限定されるものではなく、天然のものであってもよく、合成されたものであってもよい。天然の核酸として、例えば、生物から回収されたゲノムDNA、mRNA、tRNA、rRNA、hnRNA等がある。また、合成された核酸として、β-シアノエチルホスフォロアミダイト法、DNA固相合成法等の公知の化学的合成法により合成されたDNAや、PCR等の公知の核酸増幅法により合成された核酸、逆転写反応により合成されたcDNA等がある。本発明において野生型核酸とは、変異を生じる前の核酸を意味するものとし、その典型的な例は、変異を生じておらず、本来の正常な機能を有する遺伝情報を含む核酸である。ここで言う遺伝情報とは、mRNA、tRNA、rRNA、snRNA等の情報をコードする転写領域だけでなく、プロモーター等の遺伝子発現上必要な調節領域を含むものとする。本発明において変異型核酸とは、変異を生じた核酸である。変異とはDNAやRNA等の核酸配列の変化であり、遺伝学等で使用される塩基置換、挿入、欠失、逆位、重複、転座等が該当する。当該変異型核酸において、変異の存在する領域は転写領域だけでなく、プロモーター等の遺伝子発現上必要な調節領域を含むものとする。なお、変異により変異型核酸が機能上の変化を有する必要はない。また、変異には、先天的なものも後天的なものも含まれる。本発明において標的部位とは、核酸配列において光連結性核酸類からなるクランププローブの標的となる部位であって、当該クランププローブの全部または一部とハイブリダイゼーションするヌクレオチド配列を有する部位のことである。通常の実施様態において標的部位とは変異型核酸において変異が見られる塩基が存在する部位であり、野生型核酸を含め、本発明において検出の標的とする部位である。例えば、塩基置換があった場合には野生型核酸、変異型核酸共に当該塩基置換した塩基が該当する。また挿入があった場合には変異型核酸においては挿入された塩基が該当し、野生型遺伝子においては変異型核酸で塩基が挿入された部位が該当する。また欠失があった場合には変異型核酸においては欠失によって塩基が失われた部位が該当し、野生型核酸においては変異型核酸で失われた塩基が該当する。当該標的部位の配列は、遺伝情報をコードする配列を有する鎖以下センス鎖とするを示すものであってもよいし、センス鎖に対して相補的な配列を有する鎖以下アンチセンス鎖とするを示すものであってもよい。本発明において核酸増幅反応とは、公知のポリメラーゼ反応を利用した鋳型核酸の増幅反応を言う。また、核酸増幅装置とは、核酸増幅反応が行える装置である。本発明の増幅抑制方法は、標的部位を含む検出領域を増幅可能なプライマーを用いて、通常の核酸増幅法を実施する中で、前記標的部位の変異に基づいて、1種類の核酸例えば、野生型核酸の増幅を抑制する一方、それ以外の核酸例えば、変異型核酸のみを選択的に増幅させる方法である。本発明では、野生型核酸または変異型核酸のいずれを増幅抑制の対象とするかは、その目的に応じて適宜選択することができ、特に限定されるものではないが、例えば、核酸サンプル中の存在比に大きな偏りがある場合、大量に存在する核酸例えば、野生型核酸の増幅を抑制し、微量に存在する核酸例えば、変異型核酸のみを選択的に増幅することにより、微量に存在する核酸の有無を検出することができる。以下、本発明方法について、本発明の一態様である、変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出方法に基づいて主に説明するが、本発明方法の本質は、前述のとおり、標的部位を含む検出領域を増幅可能なプライマーを用いて、通常の核酸増幅法を実施する中で、前記標的部位の変異に基づいて、1種類の核酸に関してのみ、その増幅を抑制できる点にある。本発明方法の第1の実施形態としては、a野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する野生型核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bの反応産物を核酸増幅反応に供する工程、d前記増幅産物を解析する工程を含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出方法にある。本発明方法の第2の実施形態としては、a野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する野生型核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bを核酸増幅反応中に行う工程、d前記増幅産物を解析する工程を含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出する変異型核酸検出方法にある。このような工程によって、野生型核酸の増幅を抑制し、選択的に変異型核酸を増幅することで高感度に変異型核酸を検出することができるものとなっている。以下、工程ごとに説明する。なお、工程c以外は、第1の実施形態と第2の実施形態は同様であるので、以下、主に第1の実施形態に沿って説明を行った後、第2の実施形態について、第1の実施形態との異なる点を挙げて説明する。工程aにおいて、野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと野生型核酸配列を有する標的核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる。この反応はハイブリッド形成に適した通常の条件温度、pH、塩濃度、緩衝液等で行うことができるが、反応液中にジメチルスルホキシドDMSOやホルムアミド等を加えることでクランププローブと野生型核酸との特異的なハイブリッド形成を促すこともできる。但し、その後または同時に行われる核酸増幅反応を阻害するような物質の混入を避けることが好ましい。特に核酸増幅反応と同時に行う場合は核酸増幅反応に適した反応組成であることが好ましい。工程aに用いる核酸サンプルとは、核酸を含有するサンプルであって、標的部位を含む核酸を含有する可能性のあるサンプルであれば、特に限定されるものではないが、好ましくは、標的部位を有する野生型核酸またはその変異型核酸の少なくとも一方を含有する可能性のあるサンプル、更に好ましくは、その両方を含有する可能性のあるサンプルである。例えば、血液や組織等を試料として試料中の全細胞から得られるゲノムDNAやRNAが該当する。この核酸の抽出は、フェノール/クロロホルム法等の公知の手法により行うことができる。このとき、検出の対象である標的核酸における変異型の存在率は問わない。例えば、100が野生型であってもよいし、50が野生型で残り50が変異型であってもよい。また、当該核酸サンプルは、細胞から得られるゲノムDNAであってもよいし、細胞から調製されたmRNAであってもよいし、mRNAを鋳型にして逆転写反応を行って得られるcDNAであってもよい。さらにはクローン化された多数の遺伝子を人工的に混合したものであってもよいし、核酸増幅反応によって人工的に増幅させた核酸、またはそれらの混合物であってもよい。本発明に使用できる光連結性核酸類としては、標的部位の核酸あるいは標的部位の近傍の核酸に光連結によりクロスリンク可能であれば良い。例えば、ソラレン誘導体ChangEetalBiochemistry1991308283やアミノプリン誘導体特開2001206896や4-チオウラシル等が使用できる。前記ソラレン誘導体は5’-AT-3’である塩基配列のチミン特異的に反応する性質があり、また、アミノプリン誘導体は配列依存性はないもののシチジン特異的であることから、適用範囲に一定の制約があるため、そのような制限のない下記の光連結性核酸類がより好ましい。使用が好ましい第1の光連結性核酸類として、塩基部分として、式I:式中、Raは、シアノ基、アミド基、カルボキシル基、C2~C7のアルコキシカルボニル基、又は水素であり、R1及びR2は、それぞれ独立して、シアノ基、アミド基、カルボキシル基、C2~C7のアルコキシカルボニル基、又は水素であるで表される基を有する核酸類OrgLettVol10No152008、特開2009254279を挙げることができる。結合される核酸がDNAの場合、この式Iで表される置換カルバゾリル基は、式I:で示すように、2-デオキシリボースの1位の炭素原子Cに、β位で結合している。具体的な例としては、3-シアノビニルカルバゾール-1’-β-デオキシリボシド3cyanovinylcarbazole1’βdeoxyribosideが挙げられる。また、使用が好ましい第2の光連結性核酸類として、式II:式中、Rは、-CN、-CONR1R2、または-COOR3であって、かかるR1~R3は、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基CnH2n1n≧1である。ここでnの上限は特に限定されるものではないが、例えば、nは1~7、好ましくは1~5であることができるで表される基を有する核酸類OrganicBiomolecularChemistry200752583、BioorganicMedicinalChemistryLetters1512991301、特開2005348645を挙げることができる。結合される核酸がDNAの場合、この式IIで表される置換フェノキシ基は、式II:で示すように、2-デオキシリボースの1位の炭素原子Cに、α位で結合している。Rが-CN、-COOH、-COOMeであるものが好ましく、特には、-COOHあるいは-COOMeであるものが好ましい。これらの式Iや式IIで表される基を有することで光連結性を備えた核酸類となる。この光連結性の付与はDNAであってもRNAであっても、さらにはヌクレオチドアナログであっても可能である。これらの光連結性核酸類は通常の核酸の製造方法に準じて製造することができる。工程aに用いられるクランププローブとは、標的部位に対して相補的な配列を有し、かつ、前記光連結性核酸類を含む核酸類プローブをいう。当該クランププローブは前記の式IおよびIIで表される基を有した光連結性核酸類を含んでいればよいが、式Iで表される基を有した光連結性核酸類を含んでいることが好ましい。また、当該クランププローブは、DNAであってもRNAであってもさらにはヌクレオチドアナログであってもよい。本発明の変異型核酸検出方法においては、当該クランププローブが有する光連結性核酸類が野生型核酸の標的部位に対して相補的な配列であることを特徴とする。当該クランププローブの塩基配列及び光連結性核酸類の位置や数は標的部位の一部、または全部と特異的にハイブリダイゼーションするものであれば、特に限定はされない。クランププローブの長さは、特異的なハイブリダイゼーションが可能であれば特に限定されるものではないが、例えば、7塩基から30塩基であることが好ましい。前記ヌクレオチドアナログとは、非天然のヌクレオチドであり、天然のヌクレオチドであるデオキシリボヌクレオチドDNAやリボヌクレオチドRNAと同様の機能を有するものをいう。すなわち、ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドと同様にリン酸ジエステル結合により鎖を形成することができ、かつ、ヌクレオチドアナログを用いて形成されたプライマーやプローブは、ヌクレオチドのみを用いて形成されたプライマーやプローブと同様に、PCRやハイブリダイゼーションに用いることができる。このようなヌクレオチドアナログとして、例えば、PNAポリアミドヌクレオチド誘導体、LNABNA、ENA2’-O,4’-C-Ethylene-bridgednucleicacids、及びこれらの複合体等がある。ここで、PNAは、DNAやRNAのリン酸と5炭糖からなる主鎖をポリアミド鎖に置換したものである。また、LNABNAは、リボヌクレオシドの2’部位の酸素原子と4’部位の炭素原子がメチレンを介して結合している2つの環状構造を持つ化合物である。工程aに用いられるクランププローブは、センス鎖に対するもののみならず、アンチセンス鎖に対しても調製して用いることができる。特に工程aの核酸サンプル中の核酸が二本鎖DNAである場合、両鎖に対して調製したクランププローブを同時に使用し、両鎖の標的部位に光連結させることによって、後の工程cにおいて野生型核酸の核酸増幅抑制効果を増大することができる。センス鎖およびアンチセンス鎖に対するクランププローブは、お互いのクランププローブ同士が光連結を起こさない位置に光連結性核酸類を導入することが好ましい。工程bにおいて、ハイブリッド形成したクランププローブと相補鎖の野生型核酸分子に対して光照射を行うことで光連結させる。この光連結は人工塩基部分の光反応によって光連結性核酸類分子と標的核酸分子との間に、分子間の共有結合が形成されて生じることから、分子間の架橋クロスリンクにあたるものである。このようにクロスリンクが形成された分子と分子は単なる熱的な安定性のみで会合しているのではないので、相補的二重鎖が解離する条件におかれた場合でも解離することなく結合している。工程bにおける光連結させる反応は、緩衝作用のある塩を含む反応溶液中で行うことができる。緩衝作用のある塩としてはカコジル酸塩、リン酸塩、トリス塩をあげることができる。緩衝作用のある塩の濃度は、5~250mmol/Lの範囲にあることが好ましい。また、アルカリ金属及び/またはアルカリ土類金属の塩を含むことが好ましい。アルカリ金属及び/またはアルカリ土類金属として塩化ナトリウム、及び塩化マグネシウムをあげることができる。さらに反応液中にDMSOやホルムアミド等の有機溶剤を加えることでクランププローブと野生型核酸との特異的な光結合反応を促すこともできる。但し、その後または同時に行われる核酸増幅反応を阻害するような物質の混入を避けることが好ましい。特に核酸増幅反応と同時に行う場合は核酸増幅反応に適した反応組成であることが好ましい。工程bにおける光照射は、一般に350~380nmの範囲、好ましくは366nmの波長を含む光が好ましく、特に好ましくは366nmの単波長のレーザー光である。好適な実施の様態において光照射による光反応は1秒~数秒以内が好ましい。但し、容器および溶液の光透過性を考慮してさらに時間をかけて行うこともできる。工程bにおける光連結は、前記のごとく通常のハイブリッド形成において相補的二重鎖が解離する条件においても結合を維持できることから、通常の相補鎖同士が結合および解離する温度サイクルを設け、相補鎖同士が結合できる温度において光照射を繰り返すことによってクランププローブとクロスリンク連結した相補鎖の野生型核酸分子を蓄積することができる。工程a、bに用いられる核酸サンプルがmRNA等のRNAの場合、クランププローブと光連結反応を行った後に、cDNA合成をしてPCR等の増幅反応に供することもできるし、1ステップPCR等で遺伝子増幅することもできる。また、cDNA合成した後、インビトロトランスクリプション法によりRNA増幅することもできる。工程a、bに用いられる核酸サンプルがcDNA等の一本鎖DNAの場合、クランププローブと光連結反応を行った後に、PCR等の増幅反応に供することができるしインビトロトランスクリプション法によりRNA増幅することもできる。工程a、bに用いられる核酸サンプルが染色体DNA等の二本鎖DNAの場合、該二本鎖DNAのハイブリダイズを熱変性や酸性条件などの変性条件で処理し、一本鎖DNAとしてから工程aを上記の一本鎖DNAの場合と同様に実施することができる。工程cにおいて、光結合反応を施した核酸サンプルを鋳型とし、増幅プライマーを用いて核酸増幅法例えば、PCRを行うことにより標的部位を含む検出領域を増幅する。工程cで用いる増幅プライマーは、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を増幅することのできるプライマーであり、それは同時に、クランクプローブが光連結される前の野生型核酸において、野生型核酸の標的部位を含む検出領域も増幅できるプライマーである。野生型配列を有する分子は光照射によってクランププローブとクロスリンク連結している為、架橋された塩基より3’末側への伸長反応が進まず増幅されない。一方、変異型配列を有する分子の大部分はクランププローブとクロスリンク連結していない為、伸長反応が起こり、その結果、選択的な核酸増幅が成される。核酸増幅法がPCRである場合、工程cにおいて用いられる増幅プライマーは、1又は2以上の標的ヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列増幅用ヌクレオチド配列をPCRにより増幅し得るプライマーであり、増幅用ヌクレオチド配列を挟む2種類のプライマーである。例えば、増幅用ヌクレオチド配列の上流端領域と相同的なヌクレオチド配列を有するフォワードプライマーと、増幅用ヌクレオチド配列の下流端領域と相補的なヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとからなる2種類のプライマーであってもよい。なお、PCRにおいて用いられる該2種類のプライマーの各濃度は、PCR産物として二本鎖核酸を得ることができる濃度比であれば特に限定されるものではないが、等濃度で用いることが好ましい。PCRに用いられるこれらのプライマーは標的ヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列の配列情報から常法により設計、合成することができる。PCRに用いられるこれらのプライマーは、ヌクレオチド及びヌクレオチドアナログからなる群より選択される1以上がリン酸ジエステル結合により連結したものである。プライマーの長さは、プライマーのTm値、増幅ヌクレオチド配列の種類等を考慮して適宜決定することができるが、10~100分子連結したものであることが好ましい。PCRは、通常用いられる試薬を通常用いられる量で用いて、通常使用されるプロトコールに基づき、常法により行うことができる。なお、PCRに用いられるDNAポリメラーゼは、通常PCRにおいて用いられるDNAポリメラーゼであれば特に限定されるものではないが、耐熱性ポリメラーゼであることが好ましい。光照射による標的分子とのクロスリンクによってポリメラーゼの伸長反応を阻害することから、クランププローブ自体にヌクレアーゼ活性に対する抵抗性は必要としない。従って、ヌクレアーゼ活性を有するポリメラーゼの使用も可能である。但し、プライマーとして機能しポリメラーゼの伸長反応が生じ得る核酸類をクランププローブに用いる場合は、ポリメラーゼによる伸長反応が起こる温度で標的分子から解離するようにTm値を考慮するか、クランププローブの3’末端に伸長反応を阻害する物質を修飾することによって増幅プライマーとして機能しないようにすることが好ましい。工程dにおいて、工程cの増幅産物を解析する方法として、以下の公知の方法が挙げられる。例えば、工程cで得られた増幅産物を使用する方法としては、該増幅産物に含まれる変異型核酸が既知の変異の場合は、マイクロアレイのような基板アッセイを利用して変異型核酸の有無を判定することができる。また、RFLP法を用いれば制限酵素による消化の有無によって変異型核酸の有無を判定することができる場合がある。あるいは、標的部位に未知の変異型核酸があると思われる場合は、検出領域の増幅産物について塩基配列を決定することで変異型核酸の有無を判定することができる。一方、例えば、判定したい変異型核酸が既知変異である場合には、工程cにおいて公知のリアルタイムPCRを行うことにより、変異型核酸の有無の判定もしくは定量も行うことができる。このように、工程cと工程dを同時に行うことにより、迅速且つ簡便に変異型核酸の有無を判定することができるので好ましい。リアルタイムPCRにより、変異型核酸の増幅と判定を同時に実施する方法としては、特許文献1を参考にすることができる。次に、第2の実施形態について、第1の実施形態との異なる点を挙げて説明する。第1の実施形態と異なる点は、工程a及び工程bを工程cの核酸増幅反応中に行うことである。具体的には、例えばPCRの際に、標的分子とクランププローブがハイブリッドを形成しうる温度条件時いわゆる工程aに光を照射することで、標的核酸とクランププローブが有する光連結核酸類を結合させいわゆる工程b、直接、選択的に変異型核酸の増幅を実施する。光の照射は1回以上行なえばよいが、増幅サイクル毎に光照射を繰り返すことによって、より確実に野生型核酸の増幅を抑制することができるため、PCRのサイクル毎に繰り返し実施することが好ましい。全増幅サイクルで光を照射してもよいし、任意の増幅サイクルから照射を開始または終了してもよい。工程cにおけるPCR反応の際にも、通常のPCR増幅反応に適した反応組成で実施できる。さらに変異型核酸の選択的増幅反応を促すために反応液中にDMSOやホルムアミド等、ハイブリダイズ条件に影響を与える物質を加えることも可能である。本発明のキットとしては、野生型核酸の配列を有する標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、標的部位を含む検出領域を増幅するプライマーとを含む、変異型核酸の標的部位を含む検出領域を選択的に増幅させることで、該変異型核酸の有無を検出するものである。更に、緩衝液や遺伝子増幅用のポリメラーゼ等を含むこともできる。本発明の装置としては、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を有する核酸増幅装置である。前記核酸増幅装置としては、本発明の反応を実施できるものであって、公知の核酸増幅機能を備えているものであれば良く、好ましくは、増幅した核酸を定量することができるリアルタイムPCR装置などを使用することができる。このような装置に、350~380nmの範囲の波長の光照射機能を備えれば良い。本発明の装置は、好ましくは、本発明の第1の実施形態の工程a~c:a標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bの反応産物を核酸増幅反応に供する工程、を実施させることのできるプログラム、及び/又は、本発明の第2の実施形態の工程a~c:a標的部位に対して相補的な配列を有する光連結性核酸類を含むクランププローブと、核酸サンプルとを共存させ、クランププローブと標的部位を有する核酸分子とを、特異的にハイブリッド形成させる工程、bハイブリッド形成したクランププローブと標的核酸分子に、光照射を行って、光連結させる工程、c前記工程a、bを核酸増幅反応中に行う工程、を実施させることのできるプログラムを含むことができる。以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。《実施例1》野生型遺伝子に対するPCR増幅抑制の検証材料と方法1.光連結性クランププローブの調製KRAS遺伝子上の変異点Gly12およびGly13を標的部位として、野生型配列を有する標的部位にハイブリダイゼーションするセンス鎖と相補的なクランププローブを設計した。同時にアンチセンス鎖に対するクランププローブも設計し、お互いのクランププローブ同士が光連結を起こさない位置に光応答性核酸である3-シアノビニルカルバゾール-1’-β-デオキシリボシドCNVK特開2009254279に記載の方法にて調製。北陸先端大科学技術大学院大学、マテリアルサイエンス研究科、藤本研究室より入手。を導入して調製した。クランププローブの合成はファスマック社に委託した。これらクランププローブの配列を表1に示す。また、CNVKの構造式を図1に示す。2.野生型KRAS遺伝子断片の調製健常者の末梢血より通常の方法によりヒトゲノムDNAを調製し、これを鋳型としてプライマーF1及びR1により変異点Gly12およびGly13を包含するKRASエクソン2の領域を通常のPCR反応条件により増幅した。PCR反応に用いたプライマー配列は以下の通りである。F1:5’-AAAGGTACTGGTGGAGTATTTG-3’配列番号1R1:5’-TGAAAATGGTCAGAGAAACC-3’配列番号2得られたPCR増幅産物をpGEMTeasyVectorプロメガ内に、添付のプロトコルに従って挿入しクローニングした。これを野生型プラスミドとした。次に、このプラスミドを鋳型として、前記プライマーセットF1及びR1を用いて通常のPCR反応条件によって増幅を行い、直鎖状のKRAS野生型遺伝子断片を得た。PCRPurificationKitキアゲンを用いて精製した後、これを以降の実験の鋳型として用いた。3.野生型KRAS遺伝子断片に対するクランププローブの光連結反応1.5mLチューブに、1nmol/Lの野生型KRAS遺伝子断片を2μLと、10μmol/Lの野生型センス鎖用クランププローブODN09および野生型アンチセンス鎖用クランププローブODN10を各2μLずつ加え、1×PCRバッファー10mmolLTrisHCl50mmolLKCl15mmolLMgCl20001gelatinの終濃度で総量を20μLとした。また、両ODNを添加せず、その分量を滅菌水に置き換えたものを用意した。95°Cに加温したヒートブロック中で3分間、加熱処理した後、55°Cに加温したヒートブロックで3分間静置し、UV-LEDにより、366nm光を5秒間照射した。尚、対照として366nm光の照射を行わないサンプルを同時に用意した。4.ライトサイクラーを用いたPCR増幅反応の確認上記の各調製液20μLに80μLの滅菌水をそれぞれ加えよく混合した後、その内5μLずつを鋳型としてプライマーNF1およびNR1によりライトサイクラーLightCycler;ロッシュを使用してPCR反応を行った。PCR反応試薬にはLightCyclerFastStartDNAMasterSYBERGreenIロッシュを使用した。尚、プライマーの配列は以下の通りである。NF1:5’-AACCTTATGTGTGACATGTTCTAA-3’配列番号3NR1:5’-GTCCTGCACCAGTAATATGC-3’配列番号4結果、考察図2にその結果を示す。グラフの縦軸は蛍光強度であり、横軸はPCRのサイクル数を示す。ODNを添加して光照射を行った鋳型サンプル4とODNを添加し光照射を行わなかった鋳型サンプル3の増幅曲線を比較すると、光照射を行った鋳型サンプルのCPクロッシング値が増加した。また、ODN未添加の鋳型サンプルの増幅曲線を、光照射の有2あるいは無1で比較すると、両者のCP値は同程度であり、さらに、光照射を行わなかった鋳型サンプルの増幅曲線をODN添加の有3あるいは無1で比較すると、両者のCP値は同程度であった。このことから、ODNの添加や366nmの光照射を単独で実施しただけではPCRによる遺伝子増幅反応は抑制されず、ODNの存在下で366nmの光照射を行うことによってのみクランプが形成され、その結果、KRAS遺伝子断片の増幅抑制が起きることが明らかとなった。また、PCR反応の前に、鋳型分子に対してクランプを形成することで遺伝子増幅を抑制できたことから、通常のハイブリッド形成では解離する温度条件であっても、一度結合したODNと鋳型分子は解離しない、即ち、非平衡状態にあることが確認された。尚、CP値の相対比較から光連結反応によって当初の鋳型量の約97がODNと光連結を起こしているものと推量できた。《実施例2》変異型遺伝子に対するPCR増幅抑制の検証材料と方法1.変異型KRAS遺伝子断片の調製実施例1で調製した野生型プラスミドに、PrimeSTAR登録商標MutagenesisBasalKitタカラバイオを用いてGly12Serの変異を導入した。すなわち、当該方法により、Kras遺伝子の34番塩基GをAに変異させた。これを変異型プラスミドとした。次に、このプラスミドを鋳型として、実施例1の2に記載のプライマーセットF1及びR1を用いて通常のPCR反応条件によって増幅を行い、直鎖状のKras変異型遺伝子断片を得た。PCRPurificationKitキアゲンを用いて精製した後、これを以降の実験の鋳型として用いた。2.変異型KRAS遺伝子断片に対するクランププローブの光連結反応1.5mLチューブに、1nmol/Lの変異型KRAS遺伝子断片を2μLと、10μmol/LのODN09及びODN10を各2μLずつ加え、1×PCRバッファーの終濃度で総量を20μLとした。クランププローブの配列は実施例1に記載のものと同一である。また、光連結反応は実施例1の3と同様の条件で行った。尚、対照として366nm光の照射を行わないサンプルを用意した。3.ライトサイクラーを用いたPCR増幅反応の確認実施例1の4と同様に実施した。結果、考察図3にその結果を示す。グラフの縦軸は蛍光強度であり、横軸はPCRのサイクル数を示す。ODN共存下で光照射を行ったサンプルと行わなかったサンプルのCP値が同程度であることから、PCR増幅抑制は殆ど認められなかった。即ち、野生型配列のODNが変異型遺伝子断片に対して殆ど光連結していないことから、変異型遺伝子断片を選択的に増幅できることが示唆された。《実施例3》変異型選択的核酸増幅の確認材料と方法1.KRAS野生型および変異型混合サンプルの調製実施例1および2で調製したKRAS野生型遺伝子断片と変異型遺伝子断片を99:1の割合で混合し、107コピー/μLのKRAS遺伝子混合サンプルを調製した。2.クランププローブとの光連結反応調製した混合サンプルを1.5mLチューブに2μL分注し、クランププローブとして10μmol/LのODN09及びODN10を各2μLずつ加え、1×PCRバッファーの終濃度で総量を20μLとした。尚、クランププローブの配列は実施例1に記載のものと同一である。また、光連結反応は実施例1の3と同様の条件で行った。3.光連結反応後のPCRおよび、PCR産物のクローニング上記で得られた光連結反応液20μLに80μLの滅菌水を加え、その内5μLを鋳型として実施例1の4に記載したプライマーNF1及びNR1により通常の条件で35サイクルのPCR反応を行った。このPCR産物をpGEMTeasyVectorプロメガ内に、添付のプロトコルに従って挿入しクローニングした。HB101コンピテントセルタカラバイオに形質転換しLBアンピシリンプレートで一晩、培養して大腸菌コロニーを形成させた。4.塩基配列決定による野生型/変異型の混在比の確認100個のコロニーを鋳型として、ベクター配列を利用したプライマーM13F及びM13Rにより通常の条件でPCR反応を行った。このPCR産物を鋳型にして、ダイレクトシークエンス法により各クローンの塩基配列を決定した。尚、シークエンス反応に供したプライマーはSP6及びT7であり、シーケンス反応試薬はBigDyeTerminatorV11cyclesequenceKitアプライドバイオシステムを使用した。各プライマーの塩基配列を以下に示す:M13F:5’-CAGGGTTTTCCCAGTCACGA-3’配列番号5M13R:5’-TCACACAGGAAACAGCTATG-3’配列番号6SP6:5’-ATTTAGGTGACACTATAGAA-3’配列番号7T7:5’-AATACGACTCACTATAGGG-3’配列番号8結果、考察光照射前の混在比が野生型99/変異型1であったサンプルが、光照射後に野生型87/変異型13に上昇していることが確認された。《実施例4》PCR増幅反応時に光連結を行った場合の変異型遺伝子の選択的増幅の確認材料と方法1.PCR反応溶液の調製遺伝子増幅用反応液として以下のPCR用反応液を調製し使用した:PCRバッファー10mmolLTrisHCl50mmolLKCl15mmolLMgCl20001gelatin;200μmol/L各dNTPdATPdTTPdCTPdGTP;0.75U/μLAmpliTaqGoldAppliedBiosystems社。上記遺伝子増幅用反応液に増幅プライマーとしてNF1及びNR1をそれぞれ0.2μmol/L添加した。さらにクランププローブとしてODN09及びODN10をそれぞれ0.4μmol/L添加した。尚、増幅プライマー及びクランププローブの配列は実施例1に記載のものと同一である。この遺伝子増幅用反応液に100pmol/Lの野生型KRAS遺伝子断片および変異型KRAS遺伝子断片を鋳型として1μLずつ、個別のチューブに加えてPCR反応に使用した。本反応の鋳型として用いた遺伝子断片は107コピーに相当する。2.光連結反応を伴うPCR反応の実施PCR用0.2mLチューブに前記反応溶液及び鋳型遺伝子断片を入れ、PCRを実施した。PCR反応は94°C,10分94°C,30秒/55°C,30秒/72°C,30秒×35サイクル72°C,3分の条件で実施した。全35サイクルにおいて、55°C,30秒のアニーリング毎に366nm光をUV-LEDにより5秒間、照射し、クランプを形成させた。PCR後の反応液は、3アガロースゲルを用いて電気泳動を行い、エチジウムブロマイドによる染色後、トランスイルミネーターによって増幅産物の確認を行った。結果、考察図4にその結果を示す。野生型遺伝子断片由来のPCR増幅産物は電気泳動後のエチジウムブロマイド染色によってその存在が確認できなかったが、変異型遺伝子断片由来のPCR増幅産物はその存在が確認できた。このことから、野生型用クランププローブによる光連結反応は一塩基置換という僅かな変異の存在を識別し、野生型および変異型配列に対するPCRによる核酸増幅量に差異を生じさせていることがわかった。この高い特異性を備えたクランププローブを利用することによって、変異型を選択的かつ高感度に検出する方法の確立が可能であると考えられる。《実施例5》PCR増幅反応時に光連結を行った場合の変異型遺伝子の検出感度の確認材料と方法1.光連結性クランププローブの調製EGFR遺伝子上の変異点Leu858を標的部位として、野生型配列を有する標的部位にハイブリダイゼーションするセンス鎖と相補的なクランププローブを設計した。同時にアンチセンス鎖に対するクランププローブも設計し、お互いのクランププローブ同士が光連結を起こさない位置に実施例1で記載した光応答性核酸であるCNVKを導入して調製した。クランププローブの合成はファスマック社に委託した。これらクランププローブの配列を表2に示す。2.EGFRエクソン21領域における野生型および変異型遺伝子断片の調製健常者の末梢血より通常の方法によりヒトゲノムDNAを調製し、これを鋳型としてプライマーセットEGFRエクソン21F及びEGFRエクソン21Rにより変異点Leu858を包含するEGFRエクソン21の領域を通常のPCR反応条件により増幅した。PCR反応に用いたプライマー配列は以下の通りである。EGFRエクソン21F:5’-GCATGAACTACTTGGAGGAC-3’配列番号9EGFRエクソン21R:5’-ACCTAAAGCCACCTCCTTAC-3’配列番号10得られたPCR増幅産物をpGEMTeasyVectorプロメガ内に、添付のプロトコルに従って挿入しクローニングした。これを野生型プラスミドとした。次に、この野生型プラスミドに、PrimeSTAR登録商標MutagenesisBasalKitタカラバイオを用いてLeu858Argの変異を導入した。すなわち、当該方法により、EGFR遺伝子の2573番塩基TをGに変異させた。これを変異型プラスミドとした。これらのプラスミドを鋳型として、前記プライマーセットEGFRエクソン21F及びEGFRエクソン21Rを用いて通常のPCR反応条件によって増幅を行い、直鎖状のEGFRエクソン21の野生型および変異型遺伝子断片を得た。PCRPurificationKitキアゲンを用いて精製した。精製したEGFRエクソン21の野生型および変異型遺伝子断片の重量濃度をNanoDropspectrophtometerThermoScientificを用いて測定し、増幅断片長を考慮して各遺伝子断片のコピー数を算出した。野生型と変異型の遺伝子断片を表3のように混合し、これを以降の実験の鋳型として用いた。3.光連結反応を伴うPCRによる増幅反応実施例4と同様の組成で遺伝子増幅用反応液を調製し、これに増幅プライマーとしてEGFRエクソン21NF及びEGFRエクソン21NRをそれぞれ0.2μmol/L添加した。このプライマー配列は以下の通りである。EGFRエクソン21NF:5’-CTTGGAGGACCGTCGCTTG-3’配列番号11EGFRエクソン21NR:5’-CCACCTCCTTACTTTGCCTC-3’配列番号12さらにクランププローブとして前記ODN11及びODN12をそれぞれ0.4μmol/Lずつ、遺伝子増幅用反応液に添加した。PCR用0.2mLチューブに各混合比の鋳型遺伝子断片を4μLずつ、個別のチューブに分注し、前記遺伝子増幅用反応液を加えてPCRを実施した。PCR反応は94°C,10分94°C,30秒/55°C,30秒/72°C,30秒×35サイクル72°C,3分の条件で実施した。全35サイクルにおいて、55°C,30秒のアニーリング毎に366nm光をUV-LEDにより5秒間、照射した。尚、対照として366nm光の照射を行わないサンプルを同時に用意した。4.ライトサイクラーを用いたPCR反応によるコピー数の確認3.項で得られた各PCR増幅産物の一部を分取し、ここに滅菌水を加えて100~100000倍希釈したサンプルを調製した。これらのサンプル5μLずつを鋳型として、プライマーEGFRエクソン21NF及びEGFRエクソン21NRにより、ライトサイクラーLightCycler;ロッシュを使用してPCR反応を行った。その際、野生型遺伝子断片の希釈系列コピー数=103~108を用意し、これをスタンダードとして同時にPCR反応に供した。PCR反応試薬にはLightCyclerFastStartDNAMasterSYBERGreenIロッシュを使用した。PCR反応後、スタンダードの増幅曲線から検量線を作成し、各サンプルのCP値からサンプル原液のコピー数を算出した。その値をもとに、3.項で得られた各PCR増幅産物をそれぞれ106コピー/4μLとなるように滅菌水で希釈調製した。5.リアルタイム定量PCR用反応液の調製リアルタイム定量PCR用反応液として以下の試薬を混合して調製した。12.5μLの2×PremixExTaq登録商標タカラバイオに、増幅プライマーとしてEGFRエクソン21NF及びEGFRエクソン21NRをそれぞれ5pmolずつ添加した。さらに末端蛍光標識した変異検出プローブを2.5pmol添加した。この変異検出プローブの配列は以下の通りである。L858R検出プローブ:5-6-FAMtttggccCgcccaaBHQ1-3ここで、配列の小文字はDNAを、大文字CはLNAを、6-FAMは蛍光色素を、BHQ1は蛍光抑制物質を、それぞれ示す。当該変異検出プローブの合成はIDT社に委託した。尚、ここに記載した本反応液の容量は1サンプルあたりのものであり、これを必要量分調製した。6.PNALNAclampPCR用反応液の調製5.項で調製したリアルタイム定量PCR用反応液に、L858R用のクランププローブとしてPNAL858cを12.5pmol添加し、PNALNAclampPCR用反応液とした。PNAL858cの配列は以下の通りである。PNAL858c:NH2-TTTGGCCAGCCCAA-CONH2PNAL858cの合成はパナジーン社に委託した。尚、ここに記載した本反応液の容量は1サンプルあたりのものであり、これを必要量分調製した。7.リアルタイム定量PCRによる変異型遺伝子検出感度の確認5.項で調製したリアルタイム定量PCR反応液に、3.項で366nm光の照射を行ったPCR増幅産物を4.項記載の方法で106コピー/4μLに希釈調製し、鋳型として4μLずつ個別のウェルに添加した。最終液量が25μLとなるように滅菌蒸留水で調製した後、ライトサイクラーLC480ロッシュを使用してリアルタイム定量PCRを行った。対照として、3.項で366nm光の照射を行なわなかったPCR増幅産物を4.項記載の方法で106コピー/4μLに希釈調製したものについても、リアルタイム定量PCRを行なった。また、比較例として、6.項で調製したPNALNAclampPCR用反応液に、3.項で366nm光の照射を行わなかったPCR増幅産物を4.項記載の方法で106コピー/4μLに希釈調製し、鋳型として4μLずつ個別のウェルに添加した。最終液量が25μLとなるように滅菌蒸留水で調製した後、同時にリアルタイム定量PCRを行った。尚、本反応は95°C,10秒95°C,3秒/56°C,30秒×45サイクルの条件で実施した。結果、考察図5~図7にその結果を示す。各グラフの縦軸は蛍光強度であり、また横軸はPCRのサイクル数を示す。図5はPCR増幅反応時に光連結反応を実施しなかったサンプル対照であり、図6はPCR増幅反応時に光連結反応を実施しなかったものについて、PNALNAclampPCR反応を実施したサンプル比較例であり、図7は光連結反応を実施したサンプル本発明である。aからcは、各PCR反応の鋳型に用いた野生型遺伝子と変異型遺伝子の混合比を示す。すなわち、aは100:1、bは1000:1、cは野生型遺伝子のみ、である。図5に示すように、光連結反応もPNALNAclampPCR反応も実施しなかったサンプルでは、変異型遺伝子の混在量が1/100量aであっても野生型遺伝子のみcのシグナルバックグランドとの区別が殆どつかず、変異型遺伝子の検出は出来なかった。図6のPNALNAclampPCR反応を行ったサンプルでは、変異型遺伝子の混在量が1/100量aでは検出可能であったが、1/1000量bでは野生型遺伝子のみcのシグナルと区別がつかなかった。すなわち、変異遺伝子の検出感度は1であった。一方、図7の366nm光の照射で光連結反応を行ったサンプルでは、変異型遺伝子の混在量が1/1000量dであっても、十分な検出が可能であり、0.1の検出感度が確認できた。以上の結果から、光連結反応を用いた本発明によれば、EGFRの遺伝子プールに混在する点突然変異遺伝子の検出は、その混在比率が0.1であっても可能であることが判明した。サザンブロットやダイレクトシークエンス法のような従来の方法では、信用性の高い検出感度の限界が約10であったこと、比較例として同時に行ったPNALNAclampPCR法による本変異点の検出感度は1であったことを考えると、本発明の変異遺伝子検出方法は非常に高い検出感度を有するといえる。PNALNAclampPCR法は、PNAクランププローブとLNA変異検出プローブの競合効果を利用して変異検出感度を向上している。すなわちクランプ形成と検出反応が同時に進行するのに対し、光連結反応を利用した場合、本実施例のようにクランプ形成と検出反応を独立して行え、競合反応を利用しない通常のリアルタイム定量PCRなどでも高感度な変異検出が可能である。この事は、先の実施例で示したように光連結性クランププローブと鋳型分子の結合を非平衡状態にできることによって初めて可能になる事象といえ、本発明の優位性を示している。"