"明細書に記載の発明。したがって、癌を制御するための新規且つより有効な治療薬が早急に必要である。以下の開示の概説から明らかなように、本発明は、これらおよび他の必要性について取り組んでいる。発明の要旨本発明は、アンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4のインヒビターならびに疾患および病的状態を治療する例えば、腫瘍成長または癌細胞増殖を遮断するかまたは減少させるか、腫瘍成長の再発を遮断するかまたは減少させるなどためのこのようなインヒビターの使用方法に関する。本発明は、ANGPTL4のインヒビターと抗癌薬との組み合わせおよび腫瘍成長を阻害するためのこのような組み合わせの使用方法を提供する。本発明はまた、ANGPTL4のインヒビターと血管形成のインヒビターとの組み合わせならびに癌成長および/または血管形成に関与する障害例えば、新生物障害例えば、腫瘍成長および非新生物障害を阻害するためのこのような組み合わせの使用方法を提供する。ANGPTL4のモジュレーター例えば、ANGPTL4のアンタゴニストまたはアゴニストを提供する。本発明のANGPTL4アンタゴニストは、ANGPTL4の活性を阻害または減少させる分子である。ANGPTL4インヒビターには、小分子量の物質、ポリヌクレオチド、アンチセンス分子、RNAアプタマー、ANGPTL4に対するリボザイムまたはその受容体ポリペプチド、ANGPTL4のポリペプチド、アンタゴニスト改変体、ANGPTL4活性を直接または間接的に阻害する単離タンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはその複合体もしくは融合タンパク質が含まれ得る。特定の実施形態では、ANGPTL4のアンタゴニストには、ANGPTL4に結合する抗体が含まれる。本発明の特定の実施形態では、アンタゴニストANGPTL4抗体は、ANGPTL4タンパク質の特定の物質または領域例えば、N末端、N末端コイルドコイル領域、C末端、C末端フィブリノーゲン様領域、またはヒトANGPTL4のANGPTL41~183、ANGPTL423~183、ANGPTL41~約162、ANGPTL4約162~406、ANGPTL423~406、またはANGPTL4184~406アミノ酸サブシーケンス、および/またはマウスANGPTL4のmANGPTL41~183、mANGPTL423~183、mANGPTL41~約165、mANGPTL423~約165、mANGPTL423~410、もしくはmANGPTL4184~410アミノ酸サブシーケンスへの結合によってANGPTL4の活性を阻害または減少させる抗体である。他のサブシーケンスには、例えば、hANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~406、60~406、80~406、100~406、120~406、140~406、および160~406、ならびに、例えば、mANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~410、60~410、80~410、100~410、120~410、140~410、および160~410も含まれるが、これらに限定されない。本発明の特定の実施形態では、ANGPTL4のアンタゴニストには、抗αVβ5抗体例えば、アンタゴニスト抗αVβ5抗体が含まれる。特定の実施形態では、本発明の抗体はヒト化抗体である。本発明の特定の実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストは、SiRNA分子である。一実施形態では、SiRNA分子は、ANGPTL4-SiRNA分子であり、この分子は、ANGPTL4をコードする核酸のDNA配列例えば、GTGGCCAAGCCTGCCCGAAGA配列番号3をターゲティングする。腫瘍成長または癌細胞の増殖を遮断するかまたは減少させる方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、有効量のアンジオポエチン様4ANGPTL4アンタゴニストを腫瘍または癌細胞に投与する工程を含む。別の実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストは、アンタゴニスト抗αVβ5抗体である。有効量で腫瘍成長または癌細胞の増殖が遮断または減少する。腫瘍細胞の移動の阻害方法も提供する。例えば、本方法は、有効量のANGPTL4アンタゴニストを腫瘍細胞に投与し、それにより、その移動が阻害される工程を含む。本発明の一実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストの投与により、転移が阻害される。さらなる治療薬例えば、1つまたは複数の抗癌薬、同一または異なる抗原に対する抗体、1つまたは複数の抗血管形成薬またはインヒビター、鎮痛薬などを、ANGPTL4アンタゴニストと組み合わせ、そして/または同時に投与することができる。さらなる治療手順例えば、外科的手順、照射などを行うか、本発明の方法において、または本発明の組成物と共に腫瘍および/または癌細胞に施すこともできる。本発明はまた、組み合わせ組成物例えば、抗癌薬例えば、抗血管形成薬など、ANGPTL4アンタゴニスト、およびキャリア例えば、薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を提供する。抗癌薬には、例えば、当該分野で公知の抗癌薬および本明細書中に記載の抗癌薬が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、抗癌薬は、1つまたは複数の抗血管形成薬例えば、VEGFアンタゴニストまたはインヒビターなどを含む。一実施形態では、VEGFアンタゴニストは、抗VEGF抗体またはその活性フラグメント例えば、ヒト化A4.6.1、Avastin登録商標などを含む。特定の実施形態では、抗癌薬は、1つまたは複数の化学療法薬を含む。腫瘍成長または癌細胞の増殖が遮断されるかまたは減少する組み合わせ方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、腫瘍または癌細胞に有効量の抗癌薬を投与する工程と、腫瘍または癌細胞に有効量のANGPTL4アンタゴニストを投与する工程とを含む。あるいはまたはさらに、有効量の抗癌薬例えば、抗血管形成薬などおよび有効量のANGPTL4アンタゴニストを含む組み合わせ組成物を投与することができる。有効量の組み合わせにより、腫瘍成長または癌細胞の増殖が遮断されるかまたは減少する。腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を遮断するかまたは減少させる方法も提供する。本発明の特定の実施形態では、被験体は、少なくとも1つの抗癌薬での癌療法を受けていたか同時に受けており、被験体は、有効量のANGPTL4アンタゴニストを投与される。有効量のANGPTL4アンタゴニストの投与により、腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発が遮断されるかまたは減少する。特定の実施形態では、被験体は、ANGPTL4アンタゴニストでの治療を受けていたか同時に受けており、被験体は、有効量の抗癌薬例えば、抗血管形成薬を投与され、有効量の抗癌薬の投与により、腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発が遮断されるかまたは減少する。典型的には、腫瘍および癌細胞は、被験体中に存在する。特定の実施形態では、被験体は、少なくとも1つの抗癌薬での癌療法を同時に受けているか、受ける予定である。典型的には、被験体は、哺乳動物例えば、ヒトである。特定の実施形態では、本発明の薬剤を、被験体に投与する。投与または手順工程を、任意の順序で行うことができる。一実施形態では、これらを連続的に行う。別の実施形態では、これらを同時に行う。あるいはまたはさらに、この工程を、連続的および同時の組み合わせとして任意の順序で行うことができる。ANGPTL4モジュレーターのキットも提供する。特定の実施形態では、キットは、ANGPTL4アンタゴニスト、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤、および容器を含む。一実施形態では、キットは、第1の量の抗癌薬例えば、抗血管形成薬など、第2の量のANGPTL4アンタゴニスト、ならびに薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤、および容器を含む。別の実施形態では、キットは、第1の投薬形態の一定量の抗癌薬例えば、抗血管形成薬など、および薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤、ならびに第2の投薬形態のANGPTL4アンタゴニスト、および薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤、ならびに容器を含む。その使用説明書も含めることができる。例えば、本発明は以下の項目を提供する。項目1腫瘍成長または癌細胞の増殖を遮断するかまたは減少させる方法であって、a有効量の抗癌薬を該腫瘍または該癌細胞に投与する工程と、b有効量のアンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4アンタゴニストを該腫瘍または該癌細胞に投与する工程と、を包含し、有効量の組み合わせによって該腫瘍成長または該癌細胞の増殖が遮断されるかまたは減少する、方法。項目2前記抗癌薬が抗血管形成薬を含む、項目1に記載の方法。項目3前記抗血管形成薬がVEGFアンタゴニストである、項目2に記載の方法。項目4前記VEGFアンタゴニストが抗VEGF抗体である、項目3に記載の方法。項目5前記抗VEGF抗体がヒト化A4.6.1である、項目4に記載の方法。項目6前記ANGPTL4アンタゴニストが抗ANGPTL4抗体である、項目1に記載の方法。項目7前記抗ANGPTL4抗体がANGPTL4184~406に結合する、項目6に記載の方法。項目8前記ANGPTL4アンタゴニストが抗αVβ5抗体である、項目1に記載の方法。項目9前記抗体がヒト化抗体である、項目4、項目6、または項目8に記載の方法。項目10前記ANGPTL4アンタゴニストがSiRNA分子を含む、項目1に記載の方法。項目11前記SiRNA分子がANGPTL4-SiRNA分子である、項目10に記載の方法。項目12前記ANGPTL4-SiRNA分子が、ANGPTL4をコードする核酸のDNA配列をターゲティングし、前記DNA配列が、少なくともGTGGCCAAGCCTGCCCGAAGA配列番号3を含む、項目11に記載の方法。項目13前記腫瘍または前記癌細胞に第3の抗癌薬を投与する工程をさらに包含する、項目1に記載の方法。項目14前記第3の抗癌薬が化学療法薬である、項目13に記載の方法。項目15前記第3の抗癌薬が別の血管形成インヒビターである、項目13に記載の方法。項目16前記投与工程aおよびbを連続的に行う、項目1に記載の方法。項目17前記投与工程aおよびbを同時に行う、項目1に記載の方法。項目18前記投与工程aおよびbを連続的にも同時にも行う、項目1に記載の方法。項目19前記投与工程を任意の順序で行う、項目1に記載の方法。項目20前記腫瘍または前記癌細胞が被験体中に存在する、項目1に記載の方法。項目21前記被験体がヒトである、項目20に記載の方法。項目22前記被験体が腫瘍成長または癌細胞の増殖を再発している、項目20に記載の方法。項目23被験体における腫瘍成長または癌細胞の増殖を遮断するかまたは減少させる方法であって、有効量の抗血管形成薬および有効量のアンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4アンタゴニストを含む組み合わせ組成物を該被験体に投与する工程をさらに含み、有効量の組み合わせによって該腫瘍成長または該癌細胞の増殖が遮断されるかまたは減少する、方法。項目24さらなる薬剤を投与する工程をさらに含み、該さらなる薬剤が抗癌薬である、項目23に記載の方法。項目25被験体における腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を遮断するかまたは減少させる方法であって、有効量のアンジオポエチン様4ANGPTL4アンタゴニストを被験体に投与する工程を含み、該被験体が抗癌薬での癌治療を受けていたかまたは同時に受けており、有効量の前記ANGPTL4アンタゴニストの投与により、前記腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発が遮断されるかまたは減少する、方法。項目26前記抗癌薬が1つまたは複数の化学療法薬である、項目25に記載の方法。項目27前記抗癌薬が抗血管形成薬を含む、項目25に記載の方法。項目28前記抗血管形成薬が抗VEGFインヒビターを含む、項目27に記載の方法。項目29前記抗VEGFインヒビターが抗VEGF抗体である、項目28に記載の方法。項目30前記抗VEGF抗体がヒト化A4.6.1である、項目29に記載の方法。項目31前記ANGPTL4アンタゴニストが抗ANGPTL4抗体である、項目25に記載の方法。項目32前記ANGPTL4アンタゴニストが抗αVβ5抗体である、項目25に記載の方法。項目33前記抗体がヒト化抗体である、項目29、項目31、または項目32に記載の方法。項目34前記ANGPTL4アンタゴニストがSiRNA分子を含む、項目25に記載の方法。項目35前記SiRNA分子がANGPTL4-SiRNA分子である、項目34に記載の方法。項目36前記ANGPTL4-SiRNA分子が、ANGPTL4をコードする核酸のDNA配列をターゲティングし、前記DNA配列が、少なくともGTGGCCAAGCCTGCCCGAAGA配列番号3を含む、項目35に記載の方法。項目37さらなる薬剤を投与する工程をさらに含み、該さらなる薬剤が抗癌薬である、項目25に記載の方法。項目38腫瘍成長または癌細胞の増殖を遮断するかまたは減少させる方法であって、有効量のアンジオポエチン様4ANGPTL4アンタゴニストを該腫瘍または該癌細胞に投与する工程を含み、該抗ANGPTL4アンタゴニストがANGPTL4184~406に結合する抗体であり、該有効量によって該腫瘍成長または該癌細胞の増殖が遮断されるかまたは減少する、方法。項目39ANGPTL4184~406に結合する抗体およびVEGFアンタゴニストを含む組成物。項目40ANGPTL4-SiRNA分子を含む組成物であって、該ANGPTL4-SiRNA分子が、ANGPTL4をコードする核酸のDNA配列をターゲティングし、該DNA配列が、少なくともGTGGCCAAGCCTGCCCGAAGA配列番号3を含む、組成物。項目41第1の量の抗血管形成薬、第2の量のアンジオポエチン様4ANGPTL4薬、および薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤、ならびに容器を含むキット。項目42第1の単位投薬形態の一定量の抗血管形成薬および薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤;第2の単位投薬形態の一定量のアンジオポエチン様4ANGPTL4アンタゴニストおよび薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤;ならびに容器を含むキット。詳細な説明定義本発明を詳細に説明する前に、本発明は特定の組成物または生物系に制限されず、勿論、変化し得ると理解すべきである。本明細書中で使用した専門用語は特定の実施形態を説明することのみを目的とし、本発明を制限することを意図しないことも理解すべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形a、an、およびtheには、明らかに別の内容を示さない限り、複数形が含まれる。したがって、例えば、分子には、任意選択的に、2つまたはそれを超えるこのような分子の組み合わせなどが含まれる。他で定義しない限り、全ての科学用語および技術用語は、関連分野で一般的に使用されているものと同一の意味を有すると理解される。本発明の目的のために、以下の用語を以下のように定義する。用語ANGPTL4またはAngptl4は、アンジオポエチン様4ポリペプチドまたはタンパク質、その天然に存在する対立遺伝子形態、分泌形態、およびプロセシング形態をいう。例えば、ヒト由来のANGPTL4は406アミノ酸タンパク質である一方で、マウスANGPTL4は410アミノ酸タンパク質である。用語ANGPTL4は、例えば、ポリペプチドのフラグメント例えば、サブシーケンス、短縮形態など例えば、N末端フラグメント、コイルドコイルドメイン、C末端フラグメント、フィブリノーゲン様ドメイン、ヒトアンジオポエチン様4タンパク質のアミノ酸1~183、23~183、1~約162、23~約162、23~406、184~406、約162~406、または23~184およびマウスアンジオポエチン様4タンパク質のアミノ酸1~183、23~183、1~約165、23~約165、23~410、または184~410が含まれるをいうためにも使用される。他のフラグメントには、例えば、hANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~406、60~406、80~406、100~406、120~406、140~406、および160~406ならびに、例えば、mANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~410、60~410、80~410、100~410、120~410、140~410、および160~410が含まれるが、これらに限定されない。ANGPTL4の任意のこのような形態を、本出願中で識別して言及することができる例えば、ANGPTL423~406、ANGPTL4184~406、ANGPTL423~183、mANGPTL423~410、mANGPTL4184~410mはマウス配列を示すなど。未変性nativeANGPTL4のフラグメントのアミノ酸の位置を、未変性ANGPTL4配列中に示すように番号をつけた。例えば、未変性ANGPTL4フラグメント中のアミノ酸22位Serはまた、未変性ヒトANGPTL4中の22位Serでもある例えば、図2を参照のこと。一般に、未変性ANGPTL4のフラグメントは、生物活性を有する。用語ANGPTL4モジュレーターは、ANGPTL4もしくはその発現を活性化することができる分子例えば、アゴニストまたはANGPTL4の活性もしくはその発現を阻害することができる分子例えば、アンタゴニストまたはインヒビターをいう。ANGPTL4アゴニストには、抗体および活性フラグメントが含まれる。ANGPTL4アンタゴニストは、ANGPTL4活性例えば、細胞増殖もしくは成長、移動、接着、または代謝産物例えば、脂質の調整、またはその発現ANGPTL4受容体例えば、αVβ5へのその結合が含まれるを中和、遮断、阻害、排除、減少、または妨害することができる分子をいう。ANGPTL4アンタゴニストには、例えば、抗ANGPTL4抗体およびその抗原結合フラグメント、ANGPTL4に特異的に結合し、それにより、1つまたは複数の受容体への結合が順序付けられる受容体分子および誘導体、抗ANGPTL4受容体抗体、ならびにANGPTL4受容体アンタゴニスト受容体の小分子インヒビターなどが含まれる。他のANGPTL4アンタゴニストには、ANGPTL4のアンタゴニスト改変体、アンチセンス分子例えば、ANGPTL4-SiRNA、RNAアプタマー、およびANGPTL4またはその受容体に対するリボザイムも含まれる。特定の実施形態では、アンタゴニストANGPTL4抗体は、ANGPTL4の特定の配列または領域例えば、N末端フラグメント、コイルドコイルドメイン、C末端フラグメント、フィブリノーゲン様ドメイン、ヒトアンジオポエチン様4タンパク質のアミノ酸1~183、23~183、1~約162、23~約162、23~406、184~406、または23~184およびマウスアンジオポエチン様4タンパク質のアミノ酸1~183、23~183、1~約165、23~約165、23~410、または184~410への結合によってANGPTL4活性を阻害または減少させる抗体である。他のフラグメントには、例えば、hANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~406、60~406、80~406、100~406、120~406、140~406、および160~406ならびに、例えば、mANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~410、60~410、80~410、100~410、120~410、140~410、および160~410が含まれるが、これらに限定されない。用語抗ANGPTL4抗体は、十分な親和性および特異性でANGPTL4に結合する抗体である。本発明の抗ANGPTL4抗体を、ANGPTL4活性が関与する疾患または容態のターゲティングおよび妨害における治療薬として使用することができる。一般に、抗ANGPTL4抗体は、通常、他のANGPTL4ホモログ例えば、ANGPTL3に結合しない。用語VEGFおよびVEGF-Aを、165アミノ酸の血管内皮細胞増殖因子およびLeungetal.,Science,246:13061989,Houcketal.,Mol.Endocrin.,5:18061991およびRobinsonStringer,JournalofCellScience,1445:853-8652001に記載の関連する121、145、183、189、および206アミノ酸の血管内皮細胞増殖因子、その天然に存在する対立遺伝子形態、およびプロセシング形態をいうために交換可能に使用する。用語VEGFを、例えば、165アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子のうちのアミノ酸8~109または1~109を含むポリペプチドのフラグメントをいうためにも使用する。VEGFの任意のこのような形態を、本出願中で識別して言及することができる例えば、VEGF8~109、VEGF1~109、またはVEGF165。未変性VEGFのフラグメントのアミノ酸の位置を、未変性VEGF配列中に示すように番号をつける。例えば、未変性VEGFフラグメント中のアミノ酸17位メチオニンはまた、未変性VEGF中の17位メチオニンでもある。未変性VEGFのフラグメントは、未変性VEGFに匹敵するKDRおよび/またはFlt-1受容体に対する結合親和性を有し得る。抗VEGF抗体は、十分な親和性および特異性でVEGFに結合する抗体である。本発明の抗VEGF抗体を、VEGF活性が関与する疾患または容態のターゲティングおよび妨害における治療薬として使用することができる。抗VEGF抗体は、通常、他のVEGFホモログVEGF-BまたはVEGF-Cなどに結合せず、PlGF、PDGF、またはbFGFなどの他の増殖因子にも結合しない。例えば、米国特許第6,582,959号、同第6,703,020号;WO98/45332;WO96/30046;WO94/10202;欧州特許第0666868B1号;米国特許出願番号20030206899号、20030190317号、20030203409号、および20050112126号;Popkovetal.,JournalofImmunologicalMethods288:149-1642004;ならびに代理人整理番号P2072R1を参照のこと。rhuMAbVEGFまたはAvastin商標としても公知の抗VEGF抗体ベバシズマブBVは、Prestaetal.,CancerRes.57:4593-45991997にしたがって生成された組換えヒト化抗VEGFモノクローナル抗体である。これは、変異ヒトIgG1フレームワーク領域およびヒトVEGFのその受容体への結合を遮断するマウス抗hVEGFモノクローナル抗体A.4.6.1由来の抗原結合相補性決定領域を含む。ベバシズマブの約93のアミノ酸配列ほとんどのフレームワーク領域を含むは、ヒトIgG1に由来し、この配列の約7はマウス抗体A4.6.1に由来する。ベバシズマブの分子量は約149,000ダルトンであり、グリコシル化されている。ベバシズマブおよび他のヒト化抗VEGF抗体は、2005年2月26日発行の米国特許第6,884,879号にさらに記載されている。VEGFアンタゴニストは、VEGF活性例えば、1つまたは複数のVEGF受容体へのその結合が含まれるを中和、遮断、阻害、排除、減少、または妨害することができる分子をいう。VEGFアンタゴニストには、抗VEGF抗体およびその抗原結合フラグメント、VEGFに特異的に結合し、それにより、1つまたは複数の受容体への結合が順序付けられる受容体分子および誘導体、抗VEGF受容体抗体、VEGF受容体アンタゴニストVEGFRチロシンキナーゼの小分子インヒビターなど、ならびに融合タンパク質例えば、VEGF-TrapRegeneron、VEGF121-ゲロニンPeregineが含まれる。VEGFアンタゴニストには、VEGFのアンタゴニスト改変体、VEGFに指向するアンチセンス分子、RNAアプタマー、およびVEGFに対するリボザイム、またはVEGF受容体も含まれる。ポリペプチドの未変性配列は、天然に由来するポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。したがって、ポリペプチドの未変性配列は、任意の哺乳動物由来の天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列を有する。このようなポリペプチドの未変性配列を、天然から単離し、あるいは組換え手段または合成手段によって産生することができる。用語ポリペプチドの未変性配列は、特に、天然に存在するポリペプチドの短縮形態または分泌形態例えば、細胞外ドメイン配列、天然に存在する改変体形態例えば、選択的スプライシング形態、および天然に存在するポリペプチドの対立遺伝子改変体を含む。ポリペプチド鎖は、非共有結合性相互作用またはジスルフィド結合とは対照的に、ペプチド結合によってその各ドメインが他のドメインに連結したポリペプチドである。ポリペプチド改変体は、少なくとも約80のアミノ酸配列が対応するポリペプチドの未変性配列と同一な生物活性ポリペプチドを意味する。このような改変体には、例えば、ポリペプチドのN末端および/またはC末端の1つまたは複数のアミノ酸天然に存在するアミノ酸および/または天然に存在しないアミノ酸残基が負荷または欠失しているポリペプチドが含まれる。通常、改変体は、未変性のポリペプチド配列と少なくとも約80のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも約90のアミノ酸配列が同一であるか、少なくとも95またはそれを超えるアミノ酸配列が同一である。改変体には、未変性配列の典型的には、生物活性ポリペプチドフラグメント例えば、サブシーケンス、短縮などが含まれる。アミノ酸配列の同一率を、本明細書中で、同一配列の一部としていかなる保存的置換を考慮せず、必要に応じて、最大配列同一率を達成するための配列のアラインメントおよびギャップの導入後に選択した配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の比率と定義する。アミノ酸配列同一率の決定のためのアラインメントを、当業者の範囲内の種々の方法例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2、またはMegalignDNASTARソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアの使用で達成することができる。当業者は、アラインメント計測のための適切なパラメータ比較配列の全長にわたって最大アラインメントを達成することが必要な任意のアルゴリズムが含まれるを決定することができる。しかし、本明細書中の目的のために、以下に記載のように配列比較コンピュータプログラムALIGN-2の使用によってアミノ酸配列同一率の値を得る。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムは、Genentech,Inc.が著作権を有し、エンドユーザ用付属文書と共にU.S.CopyrightOffice,WashingtonD.C.,20559に提出されており、米国著作権登録番号TXU510087にて登録されており、Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,Californiaを通して公的に利用可能である。ALIGN-2プログラムを、UNIX登録商標オペレーティングシステム例えば、デジタルUNIX登録商標V4.0D用にコンパイルすべきである。全ての配列比較パラメータを、ALIGN-2プログラムで設定し、変更しない。本明細書中の目的のために、所与のアミノ酸配列Aの所与のアミノ酸配列Bとのアミノ酸配列同一率所与のアミノ酸配列Bと一定のアミノ酸配列同一率を有するか含む所与のアミノ酸配列Aと表現することもできるを、以下のように計算した:100×分数X/Y式中、Xは、配列アラインメントプログラムALIGN-2によって、このプログラムのAおよびBのアラインメントにおいて完全な一致とスコアリングされたアミノ酸残基数であり、Yは、B中の総アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Aの長さはアミノ酸配列Bの長さと等しくなく、Bに対するAのアミノ酸同一率はAに対するBのアミノ酸同一率と等しくないと認識される。本明細書中で使用される、用語ANGPTL4改変体は、上記の改変体および/または未変性のANGPTL4配列中の1つまたは複数のアミノ酸変異を含むANGPTL4をいう。任意選択的に、1つまたは複数のアミノ酸変異には、アミノ酸置換が含まれる。本発明で使用されるANGPTL4およびその改変体を、当該分野で周知の種々の方法によって調製することができる。ANGPTL4のアミノ酸配列改変体を、ANGPTL4DNAの変異によって調製することができる。このような改変体には、例えば、ANGPTL4のアミノ酸配列内の残基の欠失、挿入、または置換例えば、ATCC寄託番号209284で寄託されているか図2に示す核酸によってコードされるヒトアミノ酸配列が含まれる。欠失、挿入、および置換を任意に組み合わせて、所望の活性を有する最終構築物に到達することができる。改変体をコードするDNA中の変異を、読み取り枠外に配列を配置してはならず、好ましくは、変異により、二次mRNA構造を得ることができる相補領域が作製されない。欧州特許第75,444A号。ANGPTL4変異体を、任意選択的に、未変性ANGPTL4をコードするDNA中のヌクレオチドの部位特異的変異誘発またはファージディスプレイ技術、それによる改変体をコードするDNAの産生、およびその後の組換え細胞培養物中でのDNAの発現によって調製する。アミノ酸配列改変の導入部位を予め決定する一方で、変異自体を予め決定する必要はない。例えば、所与の部位での変異能力を最適にするために、標的コドンまたは標的領域を無作為に変異誘発させ、発現されたANGPTL4改変体を所望の活性の最適な組み合わせについてスクリーニングすることができる。公知の配列を有するDNA中の予め決定した部位に置換変異を作製する技術例えば、部位特異的変異誘発などは周知である。本明細書中に記載のANGPTL4改変体を、PCT公開WO00/63380号などに記載のファージディスプレイ技術によって調製することができる。このようなクローンを選択した後、変異タンパク質領域を除去し、タンパク質産生のための適切なベクター一般に、適切な宿主の形質転換のために使用することができる発現ベクター型に入れることができる。アミノ酸配列の欠失は、一般に、約1~30残基、任意選択的に1~10残基、任意選択的に1~5残基またはそれ未満の範囲であり、典型的には連続している。アミノ酸配列挿入には、1残基から本質的に無制限の長さのポリペプチドまでのアミノ末端および/またはカルボキシ末端の融合および1つまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。配列内挿入すなわち、未変性のANGPTL4配列内の挿入は、一般に、約1~10残基、任意選択的に1~5残基、または任意選択的に1~3残基の範囲であり得る。末端挿入の例には、組換え宿主からの分泌を容易にするためのN末端へのシグナル配列宿主細胞と異種でも相同でもよいの融合が含まれる。さらなるANGPTL4改変体は、未変性のANGPTL4中の少なくとも1つのアミノ酸残基が除去され、その位置に異なる残基が挿入されているANGPTL4改変体である。本発明の一実施形態では、ANGPTL4改変体には、ANGPTL4の162位および/もしくは164位での置換またはmANGPTL4の169位での置換が含まれる。このような置換を、表1に示す置換にしたがって行うことができる。ANGPTL4改変体はまた、本明細書中に記載の非天然アミノ酸でありうる。アミノ酸を、以下のようにその側鎖の性質の類似性にしたがって分類することができるA.L.Lehninger,inBiochemistry,seconded.,pp.73-75,WorthPublishers,NewYork1975。1非極性:AlaA、ValV、LeuL、IleI、ProP、PheF、TrpW、MetM2非電荷極性:GlyG、SerS、ThrT、CysC、TyrY、AsnN、GlnQ3酸性:AspD、GluE4塩基性:LysK、ArgR、HisHあるいは、天然に存在する残基を、以下のように共通の側鎖の性質に基づいて分類することができる。1疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;2中性疎水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;3酸性:Asp、Glu;4塩基性:His、Lys、Arg;5鎖の配向に影響を与える残基:Gly、Pro;6芳香族:Trp、Tyr、Phe。天然に存在するアミノ酸残基すなわち、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸残基を、以下からなる群から選択することができる:アラニンAla;アルギニンArg;アスパラギンAsn;アスパラギン酸Asp;システインCys;グルタミンGln;グルタミン酸Glu;グリシンGly;ヒスチジンHis;イソロイシンIle:ロイシンLeu;リジンLys;メチオニンMet;フェニルアラニンPhe;プロリンPro;セリンSer;スレオニンThr;トリプトファンTrp;チロシンTyr;およびバリンVal。天然に存在しないアミノ酸残基は、ポリペプチド鎖中の隣接アミノ酸残基と共有結合することができる上記に列挙した天然に存在するアミノ酸残基以外の残基をいう。天然に存在しないアミノ酸残基の例には、例えば、ノルロイシン、オルニチン、ノルバリン、ホモセリン、および他のアミノ酸残基アナログEllmanetal.,Meth.Enzym.202:301-3361991ならびに米国特許出願公開第20030108885号および同第20030082575号に記載のアミノ酸残基などが含まれる。簡単に述べれば、これらの手順は、サプレッサーtRNAを天然に存在しないアミノ酸残基で活性化し、その後にRNAをインビトロまたはインビボで転写および翻訳する工程を含む。例えば、米国特許出願公開第20030108885号および同第20030082575号;ならびにNorenetal.,Science244:1821989;およびEllmanetal.,supraを参照のこと。単離ポリペプチドは、その自然環境の成分から同定、分離、および/または回収されたポリペプチドである。その自然環境の汚染成分は、ポリペプチドの診断または治療での使用を妨害する材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性溶質または非タンパク質性溶質が含まれ得る。特定の実施形態では、ポリペプチドを、1Lowry法で決定したところ、95重量を超えるポリペプチドまたは99重量を超えるポリペプチドに精製するか、2スピンカップシークエネーターを用いて少なくとも15残基のN末端アミノ酸配列または内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度に精製するか、3クーマシーブルーまたは銀染色を使用した還元条件下または非還元条件下でのSDS-PAGEによる均一性まで精製する。単離ポリペプチドには、組換え細胞内のinsituのポリペプチドが含まれ、これは、ポリペプチドの自然環境の少なくとも1つの成分が存在しないからである。しかし、通常、単離ポリペプチドを、少なくとも1つの精製工程によって調製する。用語抗体を最も広い意味で使用し、モノクローナル抗体全長またはインタクトなモノクローナル抗体が含まれる、ポリクローナル抗体、多価抗体、多重特異性multispecific抗体例えば、二重特異性抗体、および、所望の生物活性を示す限り、抗体フラグメント以下を参照のことが含まれる。他で示さない限り、表現多価抗体を、本明細書を通して、3つまたはそれを超える抗原結合部位を含む抗体を示すために使用する。多価抗体を、典型的には、3つまたはそれを超える抗原結合部位を有するように操作し、一般に、IgM抗体またはIgA抗体の未変性配列ではない。抗体フラグメントは、一般に、インタクトな抗体の抗原結合部位を含み、それにより、抗原結合能力を保持するインタクトな抗体の一部のみを含む。本発明の定義に含まれる抗体フラグメントの例には、以下が含まれる:iVL、CL、VH、およびCH1ドメインを有するFabフラグメント;iiCH1ドメインのC末端に1つまたは複数のシステイン残基を有するFabフラグメントであるFab’フラグメント;iiiVHおよびCH1ドメインを有するFdフラグメント;ivVHおよびCH1ドメインならびにCH1ドメインのC末端に1つまたは複数のシステイン残基を有するFd’フラグメント;v抗体の1つのアームにVLおよびVHドメインを有するFvフラグメント;viVHドメインからなるdAbフラグメントWardetal.,Nature341,544-5461989;vii単離CDR領域;viiiFab’2フラグメントヒンジ領域でのジスルフィド結合によって連結した2つのFab’フラグメントを含む2価フラグメント;ix一本鎖抗体分子例えば、一本鎖Fv;scFvBirdetal.,Science242:423-4261988;およびHustonetal.,PNASUSA85:5879-58831988;x同一のポリペプチド鎖中に軽鎖可変領域VLに連結した重鎖可変領域VHを含む2つの抗原結合部位を有するダイアボディdiabody例えば、欧州特許第404,097号;WO93/11161号;およびHollingeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-64481993を参照のこと;xi相補性軽鎖ポリペプチドと共に抗原結合領域対を形成するタンデムFdセグメント対VH-CH1-VH-CH1を含む線状抗体linearantibodiesZapataetal.,ProteinEng.810:105710621995;および米国特許第5,641,870号。本明細書中で使用される、用語モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体すなわち、考えられる天然に存在する変異少量であり得る以外は集団を含む各抗体が同一であるをいう。モノクローナル抗体は特異性が高く、1つの抗原に対して指向する。さらに、典型的に異なる決定基エピトープに対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の1つの決定基に対して指向する。修飾語モノクローナルは、任意の特定の方法による抗体の産生が必要であると解釈されない。例えば、本発明によって使用されるモノクローナル抗体を、Kohleretal.,Nature256:4951975によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができるか、組換えDNA法例えば、米国特許第4,816,567号を参照のことによって作製することができる。モノクローナル抗体を、例えば、Clacksonetal.,Nature352:624-6281991またはMarksetal.,J.Mol.Biol.222:581-5971991に記載の技術を使用したファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。本明細書中のモノクローナル抗体には、特に、重鎖および/または軽鎖の一部が特定の種に由来するか特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか相同である一方で、残りの鎖が別の種に由来するか別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか相同するキメラ抗体、所望の生物活性を示す限り、このような抗体のフラグメントが含まれる米国特許第4,816,567号およびMorrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-68551984。非ヒト例えば、マウス抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分については、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種ドナー抗体の超可変領域由来の残基に置換されているヒト免疫グロブリンレシピエント抗体である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域FR残基が、対応する非ヒト残基に置換されている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体中で見出されない残基を含み得る。これらの修飾を、抗体の能力をさらに洗練させるために行う。一般に、ヒト化抗体は、実質的に全ての少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインを含み、全てまたは実質的に全ての超可変ループが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、全てまたは実質的に全てのFRがヒト免疫グロブリン配列のFRに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、免疫グロブリン定常領域Fc典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。さらなる詳細については、Jonesetal.,Nature321:522-5251986;Riechmannetal.,Nature332:323-3291988;およびPresta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-5961992を参照のこと。ヒト抗体は、ヒトによって産生され、そして/または本明細書中に開示の任意のヒト抗体の作製技術を使用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、特に、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を排除する。ヒト抗体を、当該分野で公知の種々の技術を使用して産生することができる。一実施形態では、ヒト抗体を、ファージライブラリーがヒト抗体を発現する場合、ファージライブラリーから選択するVaughanetal.,NatureBiotechnology14:309-3141996:Sheetsetal.,PNASUSA95:6157-61621998;HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:5811991。ヒト抗体を、トランスジェニック動物例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活化されているマウスへのヒト免疫グロブリン遺伝子座の移入によって作製することもできる。攻撃誘発の際、ヒト抗体産生が認められ、これはあらゆる点でヒトで認められる産生と酷似している遺伝子の再編成、アセンブリ、および抗体レパートリーが含まれる。このアプローチは、例えば、米国特許第5,545,807号;同第5,545,806号;同第5,569,825号;同第5,625,126号;同第5,633,425号;同第5,661,016号、ならびに以下の科学論文に記載さている:Marksetal.,Bio/Technology10:779-7831992;Lonbergetal.,Nature368:856-8591994;Morrison,Nature368:812-131994;Fishwildetal.,NatureBiotechnology14:845-511996;Neuberger,NatureBiotechnology14:8261996;LonbergandHuszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-931995に記載されている。あるいは、ヒト抗体を、標的抗原に対して指向する抗体を産生するヒトBリンパ球このようなBリンパ球を、個体から回収するか、インビトロで免疫化することができるの不死化によって調製することができる。例えば、Coleetal.,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,p.771985;Boerneretal.,J.Immunol.,1471:86-951991;および米国特許第5,750,373号を参照のこと。用語可変は、可変ドメインの一定の部分が抗体間の配列中で広範に異なるという事実をいい、それぞれの特定の抗体のその特定の抗原に対する結合および特異性において使用される。しかし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一に分布していない。可変性は、軽鎖および重鎖の可変ドメイン中の超可変領域と呼ばれる3つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存されている部分は、フレームワーク領域FRと呼ばれる。未変性の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、4つのFRを含み、これらは大部分がβシート立体配置を取り、3つの超可変領域によって連結されて、βシート構造いくつかの場合、その一部に連結しているループを形成する。各鎖中の超可変領域は、FRと極めて接近して保持され、他の鎖由来の超可変領域と共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与するKabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.1991を参照のこと。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、種々のエフェクター効果抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCへの関与などを示す。本明細書中で使用される、用語超可変領域は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、一般に、相補性決定領域またはCDR由来のアミノ酸残基例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基24~34L1、50~56L2、および89~97L3ならびに重鎖可変ドメイン中の31~35H1、50~65H2、および95~102H3Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.1991および/または超可変ループ由来の残基例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基26~32L1、50~52L2、および91~96L3、ならびに重鎖可変ドメイン中の26~32H1、53~55H2、および96~101H3ChothiaandLesk,J.Mol.Biol.196:901-9171987を含む。フレームワーク領域またはFR残基は、本明細書中で定義された超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、インタクトな抗体を異なるクラスに割り当てることができる。インタクトな抗体には5つの主なクラスIgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMが存在し、これらのうちのいくつかを、サブクラスイソ型例えば、IgG1非AおよびAアロタイプが含まれる、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、およびIgA2にさらに分類することができる。異なる抗体クラスに対応する重鎖定常ドメインを、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ぶ。異なる免疫グロブリンクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖を、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ6およびλ8と呼ばれる2つの明確に異なる型の1つに割り当てることができる。用語Fc領域を、インタクトな抗体のパパイン消化によって生成することができる免疫グロブリン重鎖のC末端領域を定義するために使用する。Fc領域は、未変性配列のFc領域または改変Fc領域であり得る。免疫グロブリン重鎖のFc領域の境界が変化し得るにもかかわらず、ヒトIgG重鎖Fc領域は、一般に、約Cys226位または約Pro230位のアミノ酸残基からFc領域のカルボキシル末端までのひと続きstretchと定義する。免疫グロブリンのFc領域は、一般に、2つの定常ドメインCH2ドメインおよびCH3ドメインおよび任意選択的にCH4ドメインを含む。本明細書中のFc領域鎖は、Fc領域の2つのポリペプチド鎖のうちの1つを意味する。ヒトIgGFc領域のCH2ドメインCg2ドメインとも呼ばれるは、通常、約231位のアミノ酸残基から約340位のアミノ酸残基までにわたる。CH2ドメインは、別のドメインと密接に対合しないという点で固有である。むしろ、2つのN結合分岐炭水化物鎖が、インタクトな未変性IgG分子の2つのCH2ドメインの間に入っている。炭水化物がドメイン-ドメイン対合の代わりとなってCH2ドメインの安定化に役立つと推測されている。Burton,Molec.Immunol.22:161-2061985。本明細書中のCH2ドメインは、未変性配列のCH2ドメインまたは変性CH2ドメインであり得る。CH3ドメインは、Fc領域中のC末端からCH2ドメインまですなわち、IgGの約341位のアミノ酸残基から約447位のアミノ酸残基までのひと続きの残基を含む。本明細書中のCH3領域は、未変性配列のCH3ドメインまたは変性CH3ドメイン例えば、一方の鎖中に移入された突出部protroberanceおよび他方の鎖中に対応する移入された溝cavityを有するCH3ドメインであり得る米国特許第5,821,333号特に本明細書中で参考として援用されるを参照のこと。このような変異CH3ドメインを使用して、本明細書中に記載の多重特異性例えば、二重特異性抗体を作製することができる。ヒンジ領域は、一般に、ヒトIgG1の約Glu216または約Cys226から約Pro230までのひと続きと定義されるBurton,Molec.Immunol.22:161-2061985。他のIgGイソ型のヒンジ領域を、第1および最後のシステイン残基を配置して同一の位置に重鎖内S-S結合を形成することによってIgG1配列と整列させることができる。本明細書中のヒンジ領域は、未変性配列のヒンジ領域または変異ヒンジ領域であり得る。変異ヒンジ領域の2つのポリペプチド鎖は、一般に、ポリペプチド鎖あたり少なくとも1つのシステイン残基を保持し、その結果、変異ヒンジ領域の2つのポリペプチド鎖は2つの鎖の間にジスルフィド結合を形成することができる。本明細書中の好ましいヒンジ領域は、未変性配列のヒトヒンジ領域例えば、未変性配列のヒトIgG1ヒンジ領域である。機能的Fc領域は、未変性配列のFc領域の少なくとも1つのエフェクター機能を有する。例示的エフェクター機能には、C1q結合;補体依存性細胞傷害性CDC;Fc受容体結合;抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCC;食作用;細胞表面受容体例えば、B細胞受容体;BCRの下方制御などが含まれる。このようなエフェクター機能は、一般に、結合ドメイン例えば、抗体可変ドメインと組み合わされるべきFc領域が必要であり、このような抗体エフェクター機能の評価のために当該分野で公知の種々のアッセイを使用して評価することができる。未変性配列のFc領域は、天然で見出されるFc領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。改変Fc領域は、少なくとも1つのアミノ酸修飾によって未変性配列のFc領域と異なるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、改変Fc領域は、未変性配列のFc領域または親ポリペプチドのFc領域と比較して少なくとも1つのアミノ酸が置換されている例えば、未変性配列のFc領域中または親ポリペプチドのFc領域中に約1個~約10個のアミノ酸の置換、好ましくは、約1個~約5個のアミノ酸置換を有する。本明細書中の改変Fc領域は、典型的に、例えば、未変性配列のFc領域および/または親ポリペプチドのFc領域と少なくとも約80の配列が同一であるか、少なくとも約90の配列が同一であるか、少なくとも約95またはそれを超える配列が同一である。抗体依存性細胞媒介性細胞傷害およびADCCは、Fc受容体FcRを発現する非特異的細胞傷害性細胞例えば、ナチュラルキラーNK細胞、好中球、およびマクロファージが標的細胞上の結合抗体を認識し、その後に標的細胞を溶解させる細胞媒介性反応をいう。ADCCの媒介のための主な細胞NK細胞はFcγRIIIのみを発現するのに対して、単球は、FcγRI、FcγRII、およびFcγRIIIを発現する。造血細胞上でのFcR発現は、RavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol9:457-921991の464頁の表3にまとめられている。目的の分子のADCC活性を評価するために、インビトロADCCアッセイ米国特許第5,500,362号または同第5,821,337号に記載のアッセイなどを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞PBMCおよびナチュラルキラーNK細胞が含まれる。あるいはまたはさらに、目的の分子のADCC活性を、例えば、Clynesetal.,PNASUSA95:652-6561998に開示の動物モデルなどの動物モデルにおいてインビボで評価することができる。ヒトエフェクター細胞は、1つまたは複数のFcRを発現し、エフェクター機能を発揮する白血球である。典型的には、細胞は、少なくともFcγRIIIを発現し、ADCCエフェクター機能を発揮する。ADCCを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞PBMC、ナチュラルキラーNK細胞、単球、細胞傷害性T細胞、および好中球が含まれ、一般に、PBMCおよびNK細胞が好ましい。エフェクター細胞を、天然供給源例えば、本明細書中に記載の血液またはPBMCから単離することができる。用語Fc受容体およびFcRを、抗体のFc領域に結合する受容体を説明するために使用する。好ましいFcRは、未変性配列のヒトFcRである。さらに、好ましいFcRは、IgG抗体に結合するγ受容体FcRであり、FcγRI、FcγRII、およびFcγRIIIサブクラスの受容体これらの受容体の対立遺伝子改変体および選択的スプライシング形態が含まれるが含まれる。FcγRII受容体には、主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有するFcγRIIA活性化受容体およびFcγRIIB阻害受容体が含まれる。活性化受容体FcγRIIAは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシン活性化モチーフITAMを含む。阻害受容体FcγRIIIBは、その細胞質ドメイン中に、免疫受容体チロシン阻害モチーフITIMを含むDaeron,Annu.Rev.Immunol.15:203-2341997に概説。FcRは、RavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol9:457-921991;Capeletal.,Immunomethods4:25-341994;およびdeHaasetal.,J.Lab.Clin.Med.126:330-411995に概説されている。他のFcR将来的に同定されるFcRが含まれるは、本明細書中の用語FcRに含まれる。この用語には、母方のIgGの胎児への輸送を担う新生児受容体neonatalreceptorFcRnも含まれるGuyeretal.,J.Immunol.117:5871976;およびKimetal.,J.Immunol.24:2491994。補体依存性細胞傷害性およびCDCは、補体存在下での標的の溶解をいう。補体活性化経路は、同族抗原と複合体化した分子例えば、抗体への補体系C1qの第1の成分の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、CDCアッセイ例えば、Gazzano-Santoroetal.,J.Immunol.Methods202:1631996を行うことができる。親和性成熟抗体は、1つまたは複数のそのCDR中に1つまたは複数の変化を有し、これらの変化を持たない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性が改良された抗体である。好ましい親和性成熟抗体は、ナノモルまたはさらにピコモルの標的抗原に対して親和性を有する。親和性成熟抗体を、当該分野で公知の手順によって産生する。Marksetal.,Bio/Technology10:779-7831992は、VHおよびVLドメインのシャフリングによる親和性成熟を記載している。CDRおよび/またはフレームワーク残基の無作為な変異誘発は、Barbasetal.,ProcNat.Acad.Sci,USA91:3809-38131994;Schieretal.,Gene169:147-1551995;Yeltonetal.,J.Immunol.155:1994-20041995;Jacksonetal.,J.Immunol.1547:3310-91995;およびHawkinsetal.,J.Mol.Biol.226:889-8961992に記載されている。本明細書中の可動性リンカーは、ペプチド結合によって連結された2つまたはそれを超えるアミノ酸残基を含むペプチドをいい、これによって連結された2つのポリペプチド2つのFd領域などの回転自由度が増加する。このような回転自由度により、可動性リンカーによって連結された2つまたはそれを超える抗原結合部位をより効率的に各標的抗原に近づけることが可能である。適切な可動性リンカーペプチド配列の例には、gly-ser、gly-ser-gly-ser、ala-ser、およびgly-gly-gly-serが含まれる。二量体化ドメインは、少なくとも2つのアミノ酸残基一般に、システイン残基または少なくとも2つのペプチドまたはポリペプチド同一または異なるアミノ酸配列を有するの会合によって形成される。ペプチドまたはポリペプチドは、共有結合および/または非共有結合によって互いに相互作用し得る。二量体化ドメインの例には、Fc領域;ヒンジ領域;CH3領域;CH4領域;CH1-CL対;米国特許第5,821,333号特に本明細書中で参考として援用されるの記載のように操作されたノブknobおよび/または突出部protruberanceとの接合部分;ロイシンジッパー例えば、jun/fosロイシンジッパー、Kostelneyetal.,J.Immunol.,148:1547-15531992を参照のこと;または酵母GCN4ロイシンジッパー;イソロイシンジッパー;受容体二量体対例えば、インターロイキン8受容体IL-8R;およびインテグリンヘテロ二量体LFA-1およびGPIIIb/IIIaなどまたはその二量体形成領域;二量体リガンドポリペプチド例えば、神経成長因子NGF、ニューロトロフィン-3NT-3、インターロイキン8IL-8、血管内皮増殖因子VEGF、VEGF-C、VEGF-D、PDGFメンバー、および脳由来神経栄養因子BDNFArakawaetal.,J.Biol.Chem.26945:27833-278391994およびRadziejewskietal.,Biochem.3248:13501993を参照のことまたはその二量体形成領域;ジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基対;ペプチドとポリペプチドとの間にジスルフィド結合を形成することができるように少なくとも1つのシステイン残基例えば、約1個、2個、または3個~約10個のシステイン残基以後、合成ヒンジをそれぞれ含むペプチド対またはポリペプチド対;ならびに抗体可変領域が含まれる。本明細書中で最も好ましい二量体化ドメインは、Fc領域またはヒンジ領域である。抗体の機能的抗原結合部位は、標的抗原に結合することができる抗原結合部位である。抗原結合部位の抗原結合親和性は、抗原結合部位が由来する親抗体と必ずしも同等の強さではないが、抗原への抗体の結合を評価するための公知の種々の方法のいずれか1つを使用して抗原結合能力を測定可能でなければならない。さらに、本明細書中の多価抗体の各抗原結合部位の抗原結合親和性は、量的に同一である必要はない。本明細書中の多量体抗体について、機能的抗原結合部位数を、超遠心分離分析を使用して評価することができる。この分析方法にしたがって、異なる比率で標的抗原と多量体抗体とを組み合わせ、複合体の平均分子量を計算し、異なる機能的結合部位数を計算する。これらの理論値を得られた実際の実験値と比較し、機能的結合部位数を評価する。指定された抗体の生物学的特徴を有する抗体は、同一の抗原に結合する他の抗体が区別される1つまたは複数の生物学的特徴を有する抗体である。目的の抗体によって結合された抗原上のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlowandDavidLane1988などに記載の日常的な交差遮断cross-blockingアッセイを行うことができる。1つまたは複数のさらなる治療薬と組み合わせた投与には、同時併用投与および/または任意の順序での連続的投与が含まれる。治療される哺乳動物は、哺乳動物として分類される任意の動物ヒト、家畜domesticanimalおよび家畜farmanimal、ならびに動物園の動物、競技動物sports、またはペット用動物が含まれるイヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタなどをいう。典型的には、哺乳動物はヒトである。障害は、本発明の分子を使用した治療から恩恵を受けるであろう任意の容態である。これには、慢性および急性の障害または疾患哺乳動物が問題の障害にかかりやすい病的状態が含まれるが含まれる。本明細書中の治療すべき障害の制限されない例には、任意の形態の腫瘍、良性および悪性腫瘍血管新生化腫瘍肥大白血病およびリンパ性悪性疾患ニューロン、神経膠細胞、星状細胞、視床下部、および他の腺、マクロファージ、上皮、間質、および胞胚腔の障害ならびに不適当な、異常な、過剰のおよび/または病理学的な血管新生および/または血管透過性を生じる炎症性障害、血管形成障害、および免疫障害、血管障害が含まれる。用語有効量または治療有効量は、哺乳動物の疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量をいう。癌の場合、有効量の薬物により、癌細胞数を減少させることができ、腫瘍サイズを減少させることができ、周辺器官への癌細胞浸潤を阻害するすなわち、ある程度遅延させ、典型的には停止させることができ、腫瘍の転移を阻害すなわち、ある程度遅延させ、典型的には停止させるすることができ、腫瘍成長をある程度阻害することができ、そして/または障害に関連する1つまたは複数の症状をある程度緩和することができる。薬物によって既存の癌細胞の増殖を防止し、そして/または死滅させることができる程度まで、静菌性および/または細胞傷害性を示し得る。癌療法のために、インビボでの有効性を、例えば、生存期間、疾患進行時間TTP、反応速度RR、応答の持続時間、および/または生活の質の評価によって測定することができる。治療は、処置上の治療および予防的または防止的手段をいう。治療が必要な者には、既に障害を罹患している者および障害を予防すべき者が含まれる。本明細書中のANGPTL4分子に関する用語生物活性および生物学的に活性なは、特異的に結合して細胞応答例えば、増殖、接着、移動、脂質調整などを調節する分子の能力をいう。細胞応答には、ANGPTL4受容体例えば、αVβ5インテグリン受容体によって媒介される細胞応答接着、移動、および/または増殖が含まれるが、これらに限定されないも含まれる。この文脈では、用語調整するには、促進および阻害の両方が含まれる。本発明の分子には、ANGPTL4受容体例えば、αVβ5インテグリン受容体のアゴニストおよびアンタゴニストも含まれる。本明細書中で使用される、肥大を、腫瘍形成に関与しない天然の成長と無関係な器官または構造の質量の増大と定義する。器官または組織の肥大は、各細胞の質量の増大真性肥大、組織を作製する細胞数の増加過形成、またはその両方のいずれかに起因する。用語癌および癌性は、典型的には、無秩序の細胞増殖によって特徴づけられる哺乳動物の生理学的容態をいうか説明する。癌の例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性疾患が含まれるが、これらに限定されない。このような癌のより詳細な例には、腎臓癌もしくは腎癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、直腸結腸癌、肺癌小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌が含まれる、扁平上皮癌例えば、上皮扁平上皮癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌gastriccancerまたは胃の癌stomachcancer消化器癌が含まれる、膵癌、頭頸部癌、グリア芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星細胞腫、テコーマ、男性化腫瘍、肝細胞腫、血液悪性腫瘍非ホジキンリンパ腫NHL、多発性骨髄腫、および急性血液悪性腫瘍が含まれる、子宮内膜癌もしくは子宮癌、子宮内膜症、線維肉腫、絨毛癌、唾液腺癌、外陰癌、甲状腺癌、食道癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、上咽頭癌、鼻咽頭癌、咽頭癌、カポジ肉腫、黒色腫、皮膚癌、シュワン腫、乏突起細胞腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、骨原性肉腫、平滑筋肉腫、尿路癌、甲状腺癌、ウィルムス腫瘍、ならびにB細胞リンパ腫低悪性度/濾胞性非ホジキンリンパ腫NHL;小リンパ球性SLNHL;中等度の悪性度の濾胞性NHL;中等度の悪性度のびまん性NHL;高悪性度の免疫芽細胞NHL;高悪性度のリンパ芽球性NHL;高悪性度の小さな非切れ込み細胞NHL;巨大病変NHL;マントル細胞リンパ腫;エイズ関連リンパ腫;およびワンデンシュトレームマクログロブリン血症が含まれる;慢性リンパ球性白血病CLL;急性リンパ性白血病ALL;有毛細胞白血病;慢性骨髄芽球性白血病;および移植後リンパ球増殖性疾患PTLD、ならびに母斑症phakomatosesに関連する異常な血管増殖、浮腫脳腫瘍に関連する浮腫など、およびメージ症候群が含まれる。用語抗新生物組成物は、少なくとも1つの活性な治療薬例えば、抗癌薬を含む癌治療で有用な組成物をいう。治療薬抗癌薬の例には、以下が含まれるが、これらに限定されない:例えば、化学療法薬、増殖抑制薬、細胞傷害薬、放射線治療で使用される薬剤、抗血管形成薬、アポトーシス薬、抗チューブリン薬、毒素、癌を治療するための他の薬剤例えば、抗-VEGF中和抗体、VEGFアンタゴニスト、抗HER-2、抗CD20、上皮成長因子受容体EGFRアンタゴニスト例えば、チロシンキナーゼインヒビター、HER1/EGFRインヒビター、エルロチニブ、COX-2インヒビター例えば、セレコキシブ、インターフェロン、サイトカイン、1つまたは複数のErbB2、ErbB3、ErbB4に結合するアンタゴニスト例えば、中和抗体、またはVEGF受容体、血小板由来の成長因子PDGFおよび/または幹細胞因子SCFの受容体チロシンキナーゼのインヒビター例えば、イマチニブメシレートGleevec登録商標Novartis、TRAIL/Apo2、および他の生物活性薬および有機化学薬など。その組み合わせも本発明に含まれる。本明細書中で使用される、用語細胞傷害薬は、細胞機能を阻害または防止し、そして/または細胞破壊を起こす物質をいう。この用語は、放射性同位体211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、およびLuの放射性同位体、化学療法薬、小分子毒素または細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素そのフラグメントおよび/または改変体が含まれるなどの毒素が含まれることが意図される。本明細書中で使用される場合、増殖抑制薬は、細胞増殖をインビトロおよび/またはインビボで阻害する化合物または組成物をいう。したがって、成長抑制薬は、S期の細胞の比率を有意に減少させるものであり得る。成長抑制薬の例には、細胞周期S期以外の進行を遮断する薬剤G1の停止およびM期の停止を誘導する薬剤などが含まれる。古典的なM期遮断薬には、ビンカビンクリスチンおよびビンブラスチン、TAXOL登録商標、およびトポII阻害薬ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンなどが含まれる。G1期を停止させる薬剤例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、5-フルオロウラシル、およびara-CなどのDNAアルキル化剤は、S期の停止にも波及する。さらなる情報を、TheMolecularBasisofCancer,MendelsohnandIsrael,eds.,Chapter1,entitledCellcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugsbyMurakamietal.WBSaunders:Philadelphia,1995特に、p.13に見出すことができる。化学療法薬は、癌治療に有用な化合物である。化学療法薬の例には、アルキル化剤チオテパおよびCYTOXAN登録商標シクロホスファミドなど;アルキルスルホン酸塩ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなど;アジリジンベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパなど;エチレンイミンおよびメチラメルアミンアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロールメラミンが含まれる;アセトゲニン特にブラタシンおよびブラタシノンbullatacinone;δ-9-テトラヒドロカンナビノールドロナビノール、MARINOL登録商標;β-ラパコン;ラパコール;コルヒチン;ベツリン酸;カンプトテシン合成アナログトポテカンHYCAMTIN登録商標が含まれる、CPT-11イリノテカン、CAMPTOSAR登録商標、アセチルカンプトセシン、スコポレクチンscopolectin、および9-アミノカンプトテシンが含まれる;ブリオスタチン;カリスタチン;CC-1065そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビセレシン合成アナログが含まれる;ポドフィロトキシン;ポドフィリン酸podophyllinicacid;テニポシド;クリプトフィシンcryptophycin特に、クリプトフィシン1およびクリプトフィシン8;ドラスタチン;ズオカルマイシンduocarmycin合成アナログKW-2189およびCB1-TM1が含まれる;エレウセロビンeleutherobin;パンクラチスタチンpancratistatin;サルコジクチインsarcodictyin;スポンジスタチン;ナイトロジェンマスタードクロランブシル、クロラムブシル、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシンnovembichin、フェネステリンphenesterine、プレドニムスチンprednimustine、トロホスファミドtrofosfamide、ウラシルマスタードなど;ニトロソ尿素nitrosureaカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロリムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなど;抗生物質エンジイン抗生物質例えば、カリケアマイシン特に、カリケアマイシンγ1IおよびカリケアマイシンωI1例えば、Agnew、ChemIntl.Ed.Engl.,33:183-1861994を参照のことなど;ダイネミシンdynemicinダイネミシンAが含まれる;エスペラミシンesperamicin;ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質であるエンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシンauthramycin、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシンcactinomycin、カラビシンcarabicin、カルミノマイシンcarminomycin、カルジノフィリンcarzinophilin、クロモマイシンchromomycinis、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシンdetorubicin、6-ジアゾ-5-オキソ-L-ノルロイシン、ドキソルビシンADRIAMYCIN登録商標、モルフォリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、2-ピロリノ-ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシンリポソーム注射DOXIL登録商標、およびデオキシドキソルビシンが含まれる、エピルビシン、エソルビシンesorubicin、イダルビシン、マルセロマイシンmarcellomycin、マイトマイシンマイトマイシンCなど、ミコフェノール酸、ノガルマイシンnogalamycin、オリボマイシンolivomycin、ペプロマイシン、ポトフィロマイシンpotfiromycin、ピューロマイシン、ケラマイシンquelamycin、ロドルビシンrodorubicin、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジンtubercidin、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンzorubicin;代謝拮抗物質メトトレキセート、ゲムシタビンGEMZAR登録商標、テガフールUFTORAL登録商標、カペシタビンXELODA登録商標、エポシロン、および5-フルオロウラシル5-FUなど;葉酸アナログデノプテリンdenopterin、メトトレキセート、プテロプテリンpteropterin、トリメトレキセートなど;プリンアナログフルダラビン、6-メルカプトプリン、チアミプリンthiamiprine、チオグアニンなど;ピリミジンアナログアンシタビン、アザシチジン、6-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど;アンドロゲンカルウステロンcalusterone、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど;抗アドレナルanti-adrenalアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど;葉酸補給薬フォリン酸frolinicacidなど;アセグラトン;アルドホスファミドグリコシド;アミノレブリン酸;エニルウラシル;アムサクリン;ベストラブシルbestrabucil;ビサントレンbisantrene;エダトラキセートedatraxate;デフォファミンdefofamine;デメコルシン;ジアジコンdiaziquone;エルフォルニシンelfornithine;酢酸エリプチニウムelliptiniumacetate;エトグルシドetoglucid;硝酸ガリウム;ヒドロキシ尿素;レンチナン;ロニダイニンlonidainine;マイタンシノイドmaytansinoidマイタンシンおよびアンサミトシンansamitocinなど;ミトグアゾンmitoguazone;ミトキサントロン;モピダンモルmopidanmol;ニトラエリンnitraerine;ペントスタチン;フェナメトphenamet;ピラルビシン;ロソキサントリンlosoxantrone;2-エチルヒドラジン;プロカルバジン;PSK登録商標ポリサッカリド複合体JHSNaturalProducts,Eugene,OR;ラゾキサンrazoxane;リゾキシン;シゾフィラン;スピロゲルマニウム;テヌアゾン酸;トリアジクオンtriaziquone;2,2’,2-トリクロロトリエチルアミン;トリコテシン特に、T-2毒素、ベラクリンAverracurinA、ロリジンAおよびアングイジンanguidine;ウレタン;ビンデシンELDISINE登録商標、FILDESIN登録商標;ダカルバジン;マンノムスチンmannomustine;ミトブロニトール;ミトラクトールmitolactol;ピポブロマン;ガシトシンgacytosine;アラビノシドAra-C;チオテパ;タイソイド例えば、パクリタキセルTAXOL登録商標、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子処方物ABRAXANETM、およびドキセタキセルdoxetaxelTAXOTERE登録商標;クロラムブシルchloranbucil;6-チオグアニン;メルカプトプリン;メトトレキセート;白金アナログシスプラチンおよびカルボプラチンなど;ビンブラスチンVELBAN登録商標;白金;エトポシドVP-16;イホスファミド;ミトキサントロン;ビンクリスチンONCOVIN登録商標;オキサリプラチン;ロイコボビンleucovovin;ビノレルビンNAVELBINE登録商標;ノバントロン;エダトレキセートedatrexate;ダウノマイシン;アミノプテリン;イバンドロネート;トポイソメラーゼインヒビターであるRFS2000;ジフルオロメチルオルニチンdifluorometlhylornithineDMFO;レチノイドレチノイン酸など;上記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸、または誘導体;ならびに上記の2つまたはそれを超える組み合わせCHOPシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語などおよびFOLFOX5-FUおよびロイコボビンと組み合わせたオキサリプラチンELOXATINTMを使用した治療計画の略語が含まれる。癌の成長を促進することができるホルモンの作用を調節、減少、遮断、または阻害するように作用する抗ホルモン薬しばしば、全身systemicまたは全身whole-body治療の形態であるもこの定義に含まれる。これら自体がホルモンであり得る。例には、抗女性ホルモン薬および選択的エストロゲン受容体調節物質SERM例えば、タモキシフェンNOLVADEX登録商標タモキシフェンが含まれる、ラロキシフェンEVISTA登録商標、ドロロキシフェン、4-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェンkeoxifene、LY117018、オナプリストンonapristone、およびトレミフェンFARESTON登録商標が含まれる;抗プロゲステロン;エストロゲン受容体下方調節因子ERD;卵巣を抑制するか遮断するように機能する薬剤例えば、黄体形成leutinizingホルモン放出ホルモンLHRHアゴニスト酢酸ロイプロリドLUPRON登録商標およびELIGARD登録商標など、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン、およびトリプテレリンtripterelin;他の抗アンドロゲンフルタミド、ニルタミド、およびビカルタミドなど;ならびに副腎中でのエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター例えば、45-イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロールMEGASE登録商標、エキセメスタンAROMASIN登録商標、ホルメスタチンformestanie、ファドロゾール、ボロゾールvorozoleRIVISOR登録商標、レトロゾールFEMARA登録商標、およびアナストロゾールARIMIDEX登録商標などが含まれる。さらに、化学療法薬のこのような定義には、ビスフォスフォネートクロドロネート例えば、BONEFOS登録商標またはOSTAC登録商標など、エチドロン酸DIDROCAL登録商標、NE-58095、ゾレドロン酸/ゾレドロン酸塩ZOMETA登録商標、アレンドロネートFOSAMAX登録商標、パミドロン酸AREDIA登録商標、チルドロン酸SKELID登録商標、またはリセドロン酸ACTONEL登録商標など;ならびにトロキサシタビンtroxacitabine1,3-ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ;アンチセンスオリゴヌクレオチド特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路において遺伝子発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド例えば、PKC-α、Raf、H-Ras、および上皮成長因子受容体EGF-Rなど;ワクチンTHERATOPE登録商標ワクチンおよび遺伝子治療ワクチン例えば、ALLOVECTIN登録商標ワクチン、LEUVECTIN登録商標ワクチン、およびVAXID登録商標ワクチンなど;トポイソメラーゼ1インヒビター例えば、LURTOTECAN登録商標;rmRH例えば、ABARELIX登録商標;ラパチニブジトシレートErbB-2およびGW572016としても公知のEGFR二重チロシンキナーゼ小分子インヒビター;COX-2インヒビターセレコキシブCELEBREX登録商標など;4-5-4-メチルフェニル-3-トリフルオロメチル-1H-ピラゾール-1-イルベンゼンスルホンアミド;ならびに上記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸、または誘導体が含まれる。用語サイトカインは、一方の細胞集団によって放出され、細胞内メディエーターとして他方の細胞に対して作用するタンパク質の一般名である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインのうちで、成長ホルモンヒト成長ホルモン、N-メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなど;副甲状腺ホルモン;チロキシン;インスリン;プロインシュリン;リラキシン;プロレラキシンprorelaxin;糖タンパク質ホルモン濾胞刺激ホルモンFSH、甲状腺刺激ホルモンTSH、および黄体形成ホルモンLHなど;肝臓成長因子;線維芽細胞成長因子;プロラクチン;胎盤ラクトゲン;腫瘍壊死因子αおよびβ;ミューラー管阻害物質;マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド;インヒビン;アクチビン;血管内皮増殖因子例えば、VEGF、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E;胎盤由来成長因子PlGF;血小板由来成長因子PDGF例えば、PDGFA、PDGFB、PDGFC、PDGFD;インテグリン;トロンボポエチンTPO;神経成長因子NGF-αなど;血小板成長因子;トランスフォーミング成長因子TGFTGFαおよびTGFβなど;インスリン様成長因子IおよびII;エリスロポエチンEPO;骨誘導因子;インターフェロンインターフェロンα、β、およびγなど、コロニー刺激因子CSFマクロファージ-CSFM-CSFなど;顆粒球-マクロファージ-CSFGM-CSF;顆粒球-CSFG-CSF;インターロイキンILIL-1、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-30など;セクレトグロビン/ウテログロビンsecretoglobin/uteroglobin;オンコスタチンMOSM;腫瘍壊死因子TNFαまたはTNF-βなど;ならびに他のポリペプチド因子LIFおよびキットリガンドKLが含まれるが含まれる。本明細書中で使用される、用語サイトカインには、天然供給源または組換え細胞培養物由来のタンパク質および未変性配列のサイトカインの生物活性等価物が含まれる。本明細書中で使用される、用語プロドラッグは、親薬物と比較して腫瘍細胞に対する細胞傷害性が低く、酵素的に活性化するかより活性な親形態に変換することができる薬学的に活性な物質の前駆体または誘導体形態をいう。例えば、Wilman,ProdrugsinCancerChemotherapyBiochemicalSocietyTransactions,14,pp.375-382,615thMeetingBelfast1986およびStellaetal.,Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery,DirectedDrugDelivery,Borchardtetal.,ed.,pp.247-267,HumanaPress1985を参照のこと。本発明のプロドラッグには、より活性な細胞傷害性遊離薬に変換することができるリン酸塩含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、硫酸塩含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、D-アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、βラクタム含有プロドラッグ、任意選択的に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは任意選択的に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、5-フルオロシトシンプロドラッグおよび他の5-フルオロウリジンプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。本発明で使用するためにプロドラッグ形態に誘導体化することができる細胞傷害薬の例には、上記の化学療法薬が含まれるが、これらに限定されない。血管形成因子または血管形成薬は、血管の発達を刺激する例えば、血管形成、内皮細胞増殖、血管の安定性、および/または脈管形成などを促進する成長因子である。例えば、血管形成因子には、例えば、VEGFおよびVEGFファミリーのメンバー、PlGF、PDGFファミリー、線維芽細胞成長因子ファミリーFGF、TIEリガンドアンジオポエチン、エフリン、ANGPTL3、ANGPTL4などが含まれるが、これらに限定されない。創傷治癒を促進する因子成長ホルモン、インスリン様成長因子-IIGF-I、VIGF、上皮細胞成長因子EGF、CTGFおよびそのファミリーのメンバー、ならびにTGF-αおよびTGF-βも含まれるであろう。例えば、KlagsbrunandD’Amore,Annu.Rev.Physiol.,53:217-391991;StreitandDetmar,Oncogene,22:3172-31792003;FerraraAlitalo,NatureMedicine512:1359-13641999;Toninietal.,Oncogene,22:6549-65562003例えば、血管形成因子を列挙した表1;およびSato,Int.J.Clin.Oncol.,8:200-2062003を参照のこと。抗血管形成薬または血管形成インヒビターは、血管形成、脈管形成、または望ましくない血管透過性を直接または間接的に阻害する低分子量の物質、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、単離タンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはその複合体もしくは融合タンパク質をいう。例えば、抗血管形成薬は、上記で定義した血管形成薬に対する抗体または他のアンタゴニス例えば、VEGFに対する抗体、VEGF受容体に対する抗体、VEGF受容体シグナル伝達を遮断する小分子例えば、PTK787/ZK2284、SU6668である。抗血管形成薬には、未変性の血管形成インヒビター例えば、アンジオスタチン、エンドスタチンなども含まれる。例えば、KlagsbrunandD’Amore,Annu.Rev.Physiol.,53:217-391991;StreitandDetmar,Oncogene,22:3172-31792003例えば、悪性黒色腫の抗血管形成薬療法を列挙した表3;FerraraAlitalo,NatureMedicine512:1359-13641999;Toninietal.,Oncogene,22:6549-65562003例えば、抗血管形成因子を列挙した表2;およびSato,Int.J.Clin.Oncol.,8:200-2062003例えば、表1は、臨床試験で使用した抗血管形成薬を列挙しているを参照のこと。用語標識は、本明細書中で使用される場合、ポリペプチドと直接または間接的に抱合する検出可能な化合物または組成物をいう。標識自体が検出可能であり得るか例えば、放射性同位体標識または蛍光標識、酵素標識の場合、検出可能な基質化合物または組成物の化学的変化を触媒することができる。単離核酸分子は、通常はポリペプチド核酸の天然供給源中で会合した少なくとも1つの汚染核酸分子から同定および分離された核酸分子である。単離核酸分子は、自然界で見出される形態または配置とは異なる。したがって、単離核酸分子は、天然の細胞中に存在する核酸分子と区別される。しかし、単離核酸分子には、通常はポリペプチドを発現する細胞中に含まれ、例えば、天然の細胞と異なる染色体位置に存在する核酸分子が含まれる。表現調節配列は、特定の宿主生物中の作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なDNA配列をいう。原核生物に適切な調節配列には、例えば、プロモーター、任意選択的に、オペレーター配列、およびリボゾーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することが公知である。核酸は、別の核酸配列と機能的関係におかれた場合、作動可能に連結されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーのDNAは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現された場合、ポリペプチドのDNAと作動可能に連結されているか、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を与える場合、コード配列と作動可能に連結されているか、リボゾーム結合部位は、翻訳を容易にするように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、作動可能に連結されたは、連結されるDNA配列が連続していること、分泌リーダーの場合には、連続し且つ読み枠内に存在することを意味する。しかし、エンハンサーは、必ずしも連続している必要はない。従来の制限部位でのライゲーションによって連結される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを、従来の慣習にしたがって使用する。本明細書中で使用される、表現細胞、細胞株、細胞培養物を交換可能に使用し、全てのこのような表示には子孫が含まれる。したがって、用語形質転換体および形質転換細胞には、初代対象細胞および継代数と無関係のこれに由来する培養物が含まれる。全子孫は、意図的および不注意な変異によってDNAの内容が正確に同一でないかもしれないことも理解される。スクリーニングした最初に形質転換した細胞と同一の機能または生物活性を有する変異子孫が含まれる。異なる表示が意図される場合、文脈から明らかである。ANGPTL4アンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4は、分泌タンパク質であり、アンジオポエチンファミリーのメンバーである。これは、肝臓フィブリノーゲン/アンジオポエチン関連タンパク質HFARPKimetal.,Biochem.J.346:603-6102000、PGARPPARγアンジオポエチン関連タンパク質Yoon,etal.,Mol.CellBiol.,20:5343-53492000、絶食誘発性脂肪因子FIAFKertenetal.,J.Biol.Chem.,275:28488-284932000;アンジオポエチン関連タンパク質ARP-4;NL2米国特許第6,348,350号;同第6,372,491号;および同第6,455,496を参照のこと;およびAng6としても公知である。ヒト由来のANGPTL4は406アミノ酸タンパク質である一方で例えば、米国特許第6,348,350号、同第6,372,491号、および同第6,455,496号、マウスANGPTL4は410アミノ酸タンパク質であるKimetal.,Biochem.J.346:603-6102000。マウスおよびヒトは、アミノ酸レベルで約75同一である。Kimetal.,Biochem.J.346:603-6102000。ANGPTL4は、シグナルペプチド、3つの潜在的なN-グリコシル化部位、および分子内ジスルフィド結合に関与し得る4つのシステインを有する。例えば、図3のパネルAに示すように、ANGPTL4はより高次の分子構造を形成する。例えば、Geetal.,J.Biol.Chem.,2793:2038-20452004;Geetal.,J.LipidRes.45:2071-20792004;およびMandardetal.,J.ofBiol.Chem.,27933:34411-344202004も参照のこと。ANGPTL4を、タンパク質分解的にプロセシングすることもできる。例えば、Geetal.,J.Biol.Chem.,2793:2038-20452004;およびMandardetal.,J.ofBiol.Chem.,27933:34411-344202004も参照のこと。本明細書中に記載するように、ANGPTL4のR162GおよびR164E置換により、SDSゲル上で野生型または未変性タンパク質よりも高い分子量に泳動する変異ANGPTL4が得られる図3、パネルBを参照のこと。アンジオポエチンファミリーの保存領域には、コイルドコイルドメインおよびC末端フィブリノーゲンFBN様ドメインが含まれる。例えば、Kimetal.,Biochem.J.346:603-6102000を参照のこと。C末端フィブリノーゲン様ドメインを放出する調節された方法で、ANGPTL4がタンパク質分解的にプロセシングされることが示唆される。例えば、Geetal.,J.Biol.Chem.,2793:2038-20452004を参照のこと。アンジオポエチンファミリーの他のメンバーには、Tie2受容体に結合するアンジオポエチン1、アンジオポエチン2、およびアンジオポエチン3/アンジオポエチン4が含まれる。例えば、Davisetal.,Cell87,1161-11691996;Maisonpierreetal.,Science277,55-601997;Valenzuelaetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA96,1904-19091999;ならびに米国特許第5,521,073号;同第5,650,490号;および同第5,814,464号を参照のこと。アンジオポエチン1および4は、Tie2受容体のアゴニストであるようである一方で、アンジオポエチン2および3は、Tie2受容体のアンタゴニスト場合により、アゴニストであるようである。例えば、FolkmanD’Amore,Cell,87:1153-11551996;Surietal.,Cell,87:1171-11801996;Masionpierreetal.,Science277:55-601997;およびWardDumont,SeminarsinCellDevelopmentalBiology,13:19-272002を参照のこと。別のファミリーメンバー、アンジオポエチン様3タンパク質ANGPTL3は、インテグリンαVβ5に結合する血管形成因子である。例えば、2003年11月20日に公開された米国特許出願20030215451号およびCamenischetal.,J.Biol.Chem.,27719:17281-172902002を参照のこと。ANGPTL3は、受容体Tie2に結合しないようである。Camenishetal.,JournalofBiol.Chem.27719:17281-172902002。ANGPTL3はまた、血漿脂質レベルの調節因子である。例えば、Koishietal.,Nat.Genetics30:151-1572002を参照のこと。ANGPTL4は、インテグリンαVβ5に結合する。例えば、図11、12、および13を参照のこと。インテグリンαVβ5は、細胞外基質タンパク質ビトロネクチンおよびDel-1が含まれるの受容体である例えば、StupackandCheresh,JournalofCellScience115:3729-37382002を参照のこと。αvインテグリンは、腫瘍の進行および転移に関与している。例えば、Marshall,JFandHart,IRSemin.CancerBiol.73:129-381996を参照のこと。さらに、血管形成におけるαvインテグリンの役割も示されている。例えば、Eliceiri,BPandCheresh,DAMolecularMedicine4:741-7501998を参照のこと。例えば、αVβ5のモノクローナル抗体は、ウサギ角膜モデルおよびニワトリ絨毛尿膜モデルにおいてVEGF誘導性血管形成を阻害することが示されている。例えば、M.C.Friedlander,etal.,Science270:1500-15021995を参照のこと。αVβ3およびαVβ5のアンタゴニストは、成長因子および腫瘍誘導性血管形成を阻害することも示されている。例えば、EliceiriandCheresh,CurrentOpinioninCellBiology,13:563-5682001を参照のこと。本発明は、アンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4のモジュレーター例えば、アゴニストまたはアンタゴニストの組成物およびこれらのモジュレーターの他の治療薬との組み合わせを提供する。例えば、ANGPTL4のアンタゴニストの抗癌薬との組み合わせおよび腫瘍成長または癌細胞増殖の遮断または減少におけるその使用方法を提供する。本発明はまた、ANGPTL4のアンタゴニストおよび/または他の抗癌薬を使用した腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を遮断するかまたは減少させる方法を提供する。ANGPTL4のアンタゴニストの組成物、抗血管形成薬の組み合わせ、および新生物障害または非新生物障害の新血管形成の遮断または減少におけるその使用方法も提供する。ANGPTL4モジュレーターおよびその使用ANGPTL4のモジュレーターは、ANGPTL4活性を調整する分子例えば、アゴニストおよびアンタゴニストである。用語アゴニストを、未変性のANGPTL4受容体例えば、αVβ5インテグリンを介してシグナルを伝達する能力を有する場合、ANGPTL4のペプチドアナログおよび非ペプチドアナログならびにこのようなANGPTL4分子に特異的に結合する抗体をいうために使用する。ANGPTL4受容体例えば、αVβ5の生物学的役割の文脈で、用語アゴニストを定義する。特定の実施形態では、アゴニストは、上記に定義するように、未変性のANGPTL4の生物活性細胞の増殖、移動、および/もしくは接着、ならびに/または脂質ホメオスタシスhomestasisの調整などを有する。用語アンタゴニストを、ANGPTL4またはその受容体例えば、αVβ5に結合する能力と無関係に、ANGPTL4の生物活性を阻害する能力を有する分子をいうために使用する。したがって、ANGPTL4またはその受容体に結合する能力を有するアンタゴニストには、抗ANGPTL4抗体および抗αVβ5抗体が含まれる。アンタゴニストANGPTL4を、例えば、ANGPTL4活性ANGPTL4の接着、移動、増殖、および/または脂質ホメオスタシス活性の調整の阻害によって評価することができる。αVβ5インテグリン受容体活性に関して、αVβ5インテグリン受容体のモジュレーターを、当該分野で公知の方法によって決定することができる。例えば、J.W.Smithetal.inJ.Biol.Chem.265:12267-122711990に記載の方法を使用することができる。治療上の使用ANGPTL4は、癌標的に関与する。ANGPTL4は、いくつかの腫瘍細胞で発現される場合、インビトロおよびインビボでの腫瘍細胞増殖を引き起こす例えば、図4、図5、図7、ならびに図8のパネルAおよびパネルBを参照のこと。ANGPTL4が抗血管形成因子例えば、抗VEGF抗体で治療された腫瘍で発現した場合、腫瘍は成長能力を維持することができる例えば、図8のパネルCを参照のこと。ANGPTL4はまた、腫瘍細胞を移動させる例えば、図9を参照のこと。これは、腎癌で上方制御されることも示されている。例えば、代理人整理番号P5032R1;WO02/07941;およびLeJanetal.,AmericanJournalofPathology,1625:1521-15282003を参照のこと。さらに、ANGPTL4は血管形成促進因子proangiogenicfactorであり例えば、S.LeJanetal.,Am.J.Pathol.,1625:1521-15282003を参照のこと、癌療法の標的である。VEGFのようにShweikietal.,Proc.Natl.Acad.Sci,USA92:768-7721995、ANGPTL4発現は、低酸素状態に応答して増加する。例えば、LeJanetal.,AmericanJournalofPathology,1625:1521-15282003を参照のこと。ANGPTL4は、種々の条件下で、腫瘍細胞例えば、A673細胞に結合する例えば、図6のパネルAおよびB。例えば、図4のパネルAおよびパネルBに示すように、ANGPTL4は、細胞がANGPTL4を発現する発現構築物で形質導入された場合にインビトロでいくつかの腫瘍細胞増殖を刺激する。図4のパネルCはまた、ANGPTL4で形質導入したCOS7細胞由来の馴化培地の添加によってA673細胞の増殖が誘導されることを示す。図7のパネルAおよびBも参照のこと。ANGPTL4は、ANGPTL4が培養皿上にコーティングされた場合にA673細胞の増殖が誘導されるが図5を参照のこと、腎臓上皮細胞、腎臓メサンギウム細胞、またはHUVECの細胞増殖は誘導しない。ANGPTL4はまた、腫瘍細胞の細胞移動を誘導する。例えば、図9を参照のこと。ANGPTL4は、主に、脂肪組織、胎盤、肝臓、および腎臓で発現し、ob/obレプチンノックアウトマウスおよびdb/dbレプチン受容体ノックアウトマウスでも上方制御される。例えば、Yoonetal.,Mol.Cell.Biol.20:5343-53492000;Kimetal.,Biochem.J.,346:603-6102000;Kerstenetal.,J.Biol.Chem.,275:28488-284932000;およびLeJanetal.,AmericanJournalofPathology1625:1521-15282003を参照のこと。ANGPTL4はまた、脂質モジュレーターおよびリポタンパク質リパーゼのインヒビターであると報告されている。例えば、Yuetal.,PNASUSA1025:1767-17722005;Yoshidaetal.,J.LipidRes.43:1770-17722002;およびWiesneretal.,J.Endocrinology180:R1-R62004を参照のこと。ANGPTL4発現はまた、脂肪組織中のPPARγおよびαによって誘導され、飢餓によって誘導される。これは、脂肪前駆細胞および肝細胞の増殖ならびに/または脂肪前駆細胞の移動も調整し、それに伴って血清中のトリグリセリドレベルおよびコレステロールレベルが調整される。米国特許仮出願番号60/589,875号および同時に提出された代理人整理番号P2156R1全ての目的のために参考として援用されるを参照のこと。研究者は、血管形成と脂質生成との間の関係を報告している。例えば、Sierra-Honigmannetal.,BiologicalActionofLeptinasanAngiogenicFactorScience281:1683-1686;1998;Rupnicketal.,AdiposetissuemasscanberegulatedthroughthevasculatureProc.Nat.Acad.Sci.USA,9916:10730-107352002;およびFukumuraetal.,ParacrineRegulationofAngiogenesisandAdipocyteDifferentiationDuringInVivoAdipogenesis.Circ.Res.93:e88-e972003を参照のこと。本発明によれば、ANGPTL4モジュレーターおよび/またはANGPTL4モジレーターと他の治療薬との組み合わせを使用して、種々の新生物または非新生物容態を治療することができることが意図される。一実施形態では、ANGPTL4モジュレーター例えば、ANGPTL4のアンタゴニストを、癌細胞または腫瘍成長の阻害で使用する。例えば、図10のパネルAおよびBに示すように、抗ANGPTL4ポリクローナル抗体は、用量依存性様式で腫瘍細胞増殖を阻害した。ANGPTL4により、腫瘍細胞を移動させることができる例えば、図9を参照のこと。本発明によれば、ANGPTL4アンタゴニストを使用して腫瘍の転移を阻害することもできることが意図される。ANGPTL4はまた、脂肪前駆細胞の移動を誘導する。米国特許仮出願番号60/589,875号および同時に提出された代理人整理番号P2156R1を参照のこと。特定の実施形態では、1つまたは複数の抗癌薬をANGPTL4アンタゴニストと共に投与して、癌細胞または腫瘍成長を阻害することができる。本明細書中の併用療法の項を参照のこと。治療すべき新生物障害の例には、用語癌および癌性が付いた本明細書中に記載の新生物障害が含まれるが、これらに限定されない。本発明のアンタゴニストでの治療が可能な非新生物容態には、例えば、望ましくないか異常な肥大、関節炎、関節リウマチRA、乾癬、乾癬性プラーク、サルコイドーシス、粥状動脈硬化、動脈硬化プラーク、心筋梗塞由来の浮腫、糖尿病性網膜症および他の増殖性網膜症未熟児網膜症が含まれる、水晶体後線維増殖症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜新血管形成、角膜移植片新血管形成、角膜移植片拒絶、網膜/脈絡膜新血管形成、隅角の新血管形成ルベオーシス、眼新生血管疾患、血管再狭窄、動静脈奇形AVM、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺過形成グレーブス病が含まれる、角膜および他の組織の移植、慢性炎症、肺炎、急性肺損傷/ARDS、敗血症、原発性肺高血圧症、悪性肺浸出、脳浮腫例えば、急性脳卒中/閉鎖性頭部外傷/外傷に関連する、滑膜炎、RAにおけるパンヌス形成、骨化性筋炎、肥大性骨形成、骨関節炎OA、難治性腹水、多嚢胞性卵巣疾患、子宮内膜症、細胞外液疾患3rdspacingoffluiddisease膵炎、区画症候群、熱傷、腸疾患、子宮筋腫、早産、慢性炎症IBDクローン病および潰瘍性大腸炎など、腎臓の同種移植片拒絶、炎症性腸疾患、ネフローゼ症候群、望ましくないか異常な組織塊の成長非癌性、肥満、脂肪組織塊の成長、血友病性関節、肥厚性瘢痕、発毛の抑制、オスラー-ウェーバー症候群、化膿性肉芽腫水晶体後線維増殖症、強皮症、トラコーマ、血管接着、滑膜炎、皮膚炎、子癇前症、腹水、心膜滲出液心膜炎に関連する、および胸膜滲出液が含まれるが、これらに限定されない。ANGPTL4のモジュレーター例えば、ANGPTL4のアゴニストまたはアクチベーターを、病理学的障害の治療のために使用することができる。ANGPTL4のモジュレーター例えば、ANGPTL4のアゴニストを、血管形成もしくは新血管形成および/または肥大の傾向のある病理学的障害例えば、血管性外傷、創傷、断裂、切開、熱傷、潰瘍、組織増殖、重量増加、末梢動脈疾患、分娩誘導、発毛、表皮水疱症、網膜萎縮症、骨折、骨と脊髄の融合、半月板裂傷などが含まれるが、これらに限定されないの治療で使用することができる。米国特許仮出願番号60/589,875号および同時に提出された代理人整理番号P2156R1も参照のこと。併用療法上に示すように、本発明は、ANGPTL4アンタゴニストを別の治療薬と共に投与する併用療法を提供する。例えば、ANGPTL4アンタゴニストを、抗癌治療薬または抗新血管形成治療薬と組み合わせて使用して、種々の新生物容態または非新生物容態を治療する。一実施形態では、新生物容態または非新生物容態を、異常または望ましくない血管形成に関連する病理学的障害を特徴とする。ANGPTL4アンタゴニストを、同一組成物中または個別の組成物としてこれらの目的に有効な別の薬剤と連続的または組み合わせて投与することができる。あるいはまたはさらに、ANGPTL4の複数のインヒビターを投与することができる。本発明のアンタゴニストおよび/または薬剤を、同一または異なる投与経路を使用して、同時に例えば、1つの組成物としてまたは2つまたはそれを超える個別の組成物として投与することができる。あるいはまたはさらに、任意の順序で連続的に投与することができる。特定の実施形態では、2つまたはそれを超える組成物の投与の間隔は、分から日、週から月までの範囲であり得る。例えば、抗癌薬を、最初に投与し、その後にANGPTL4インヒビターを投与することができる。しかし、同時投与またはANGPTL4アンタゴニストの最初の投与も意図される。ANGPTL4アンタゴニストと組み合わせて投与される治療薬の有効量は、医師または獣医の判断による。治療すべき容態が最大に管理されるように投与および投薬量の調整を行う。用量は、さらに、使用される治療薬の型および治療される特定の患者などの要因に依存する。抗癌薬の適切な投薬量は、現在使用されている量であり、抗癌薬とANGPTL4アンタゴニストとの組み合わせ作用相乗効果によって軽減することができる。特定の実施形態では、インヒビターの組み合わせにより、1つのインヒビターの有効性が強化される。用語強化するは、その一般的または承認された用量での治療薬の有効性の改善をいう。本明細書中の薬学的組成物も参照のこと。典型的には、腫瘍成長または癌細胞の増殖などの病理学的障害を遮断するかまたは減少させるためのANGPTL4アンタゴニストおよび抗癌薬は、同一または類似の疾患に適切である。一実施形態では、抗癌薬は、抗血管形成薬である。癌に関連する抗血管形成療法は、腫瘍成長を支持するための栄養素の供給に必要な腫瘍血管の発達を阻害することを目的とする癌治療ストラテジーである。血管形成が原発性腫瘍成長および転移の両方に関与するので、本発明によって提供された抗血管形成治療は、原発部位の腫瘍の新生物成長を阻害し、続発性部位への腫瘍の転移を防止することができ、それにより、他の治療薬によって腫瘍を攻撃可能である。多数の抗血管形成薬が同定されており、これらは当該分野で公知であり、本明細書中例えば、定義に列挙および、例えば、CarmelietandJain,Nature407:249-2572000;Ferraraetal.,NatureReviews:DrugDiscovery,3:391-4002004;およびSato,Int.J.Clin.Oncol.,8:200-2062003に列挙した抗血管形成薬が含まれる。米国特許出願番号US20030055006号も参照のこと。一実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストを、抗VEGF中和抗体またはフラグメントおよび/または他のVEGFアンタゴニストもしくはVEGF受容体アンタゴニスト例えば、可溶性VEGF受容体例えば、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、ニューロピリン例えば、NRP1、NRP2フラグメント、VEGFまたはVEGFRを遮断することができるアプタマー、中和抗VEGFR抗体、VEGFRチロシンキナーゼRTKの低分子量インヒビター、VEGFのアンチセンスストラテジー、VEGFまたはVEGF受容体に対するリボザイム、VEGFのアンタゴニスト改変体;およびこれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されないと組み合わせて使用する。あるいはまたはさらに、2つまたはそれを超える血管形成インヒビターを患者に同時投与することができる。特定の実施形態では、1つまたは複数のさらなる治療薬例えば、抗癌薬を、ANGPTL4アンタゴニストおよび抗血管形成薬と組み合わせて投与することができる。本発明の特定の態様では、本発明のアンタゴニストとの腫瘍併用療法に有用な他の治療薬には、他の癌療法例えば、手術、放射線治療例えば、照射または放射性物質の投与が含まれる、化学療法、本明細書中に列挙され、且つ当該分野で公知の抗癌薬での治療、またはこれらの組み合わせが含まれる。あるいはまたはさらに、本明細書中に記載の同一または2つまたはそれを超える異なる抗原に結合する2つまたはそれを超える抗体を、患者に同時投与することができる。時折、1つまたは複数のサイトカインを患者に投与することも有益であり得る。化学療法薬特定の態様では、本発明は、有効量のANGPTL4のアンタゴニストおよび/または血管形成インヒビターおよび1つまたは複数の化学療法薬を癌に感受性を示すか癌と診断された患者に投与することによる、腫瘍成長または癌細胞の増殖を遮断するかまたは減少させる方法を提供する。種々の化学療法薬を、本発明の併用治療方法で使用することができる。意図される化学療法薬の例示的且つ非限定的なリストを、本明細書中の定義に示す。当業者に理解されているように、治療薬の適切な用量は、およそ、一般に、化学療法薬を単独または他の化学療法薬と組み合わせて投与する臨床療法で既に使用されている用量である。治療される容態によって投薬量が変化する可能性が高い。治療を行う医師は、各被験体に適切な用量を決定することができる。腫瘍成長の再発本発明はまた、腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を阻害または防止する方法および組成物を提供する。例えば、図8のパネルCは、腫瘍がANGPTL4も発現する場合に抗VEGF抗体AVASTINで治療される腫瘍が治療を回避する能力例えば、1つの再発型を概略的に示す。腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を使用して、1つまたは複数の現在利用可能な療法例えば、癌療法化学療法、放射線療法、手術、ホルモン療法、および/または生物学的療法/免疫療法、特に、特定の癌のための標準的な治療計画などを受けたか治療された患者が臨床的に適切に治療されないか、患者がもはや治療からいかなる有益な効果も得られず、これらの患者がさらなる有効な療法を必要とする容態を説明する。本明細書中で使用される場合、この句は、非応答/難治性患者例えば、依然として療法に応答する患者、副作用を生じる患者、耐性を示す患者、療法に応答しない患者、療法に満足に応答しない患者などを説明するの容態もいうことができる。種々の実施形態では、癌は、癌細胞数が有意に減少しないか増加し、腫瘍サイズが有意に減少しないか増加し、あるいは、癌細胞のサイズまたは数がさらに減少しない腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発である。癌細胞が腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発であるかどうかを、このような状況にて当該分野で承認されている再発、難治性、または非応答性手段を使用した当該分野で公知の任意の癌細胞に対する治療有効性のアッセイ方法によってインビボまたはインビトロで決定することができる。本発明は、被験体の腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を遮断するかまたは減少させるための1つまたは複数の本発明のANGPTL4アンタゴニストの投与による、被験体の腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を遮断するかまたは減少させる方法を提供する。特定の実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストを、癌療法の後に投与することができる。特定の実施形態では、ANGPTL4を、癌療法と同時に投与する。あるいはまたはさらに、ANGPTL4アンタゴニスト療法を別の癌療法と交互に実施し、これを任意の順序で実施することができる。本発明はまた、癌を罹患しやすい患者の癌の発症または再発を防止するための1つまたは複数のANGPTL4阻害抗体の投与方法を含む。一般に、被験体は、癌療法を受けていたか同時に受ける。一実施形態では、癌療法は、抗血管形成薬での治療である。抗血管形成薬には、当該分野で公知の抗血管形成薬および本明細書中の定義で見出される抗血管形成薬が含まれる。一実施形態では、抗血管形成薬は、抗VEGF中和抗体またはフラグメント例えば、ヒト化A4.6.1、AVASTIN登録商標Genentech,SouthSanFrancisco,CA、Y0317、M4、G6、B20、2C3などである。例えば、米国特許第6,582,959号、同第6,884,879号、同第6,703,020号;WO98/45332;WO96/30046;WO94/10202;欧州特許第0666868B1号;米国特許出願番号20030206899号、同第20030190317号、同第20030203409号、および同第20050112126号;Popkovetal.,JournalofImmunologicalMethods288:149-1642004;および代理人整理番号PR2072-4を参照のこと。腫瘍成長の再発または癌細胞増殖の再発を遮断するかまたは減少させるために、さらなる薬剤を、ANGPTL4アンタゴニストと組み合わせて投与することができる。例えば、本明細書中の併用療法の項を参照のこと。一実施形態では、本発明のANGPTL4アンタゴニストまたはANGPTL4発現を減少させる他の治療薬を投与して、一定の生物薬、ホルモン薬、放射線、および化学療法薬に対する癌細胞の耐性または感受性の減少を逆転させ、それにより、1つまたは複数のこれらの薬剤に対して癌細胞が再感作され、その後に癌を治療または管理する転移の防止が含まれるために投与するまたは投与し続けることができる。抗体本発明の抗体には、抗ANGPTL4抗体および抗ANGPTL4フラグメント抗体、抗血管形成薬または血管形成インヒビターである抗体、抗癌薬である抗体、ANGPTL4受容体に対する抗体例えば、抗αVβ5抗体、または本明細書中に記載の他の抗体が含まれる。例示的な抗体には、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、フラグメント抗体、多重特異性抗体、ヘテロ抱合抗体、多価抗体、エフェクター機能抗体などが含まれる。ポリクローナル抗体本発明の抗体は、ポリクローナル抗体を含み得る。ポリクローナル抗体の調製方法は、当業者に公知である。例えば、本発明の抗体に対するポリクローナル抗体を、関連抗原およびアジュバントの1回または複数回の皮下sc注射または腹腔内ip注射によって動物内に惹起する。二官能性剤または誘導体化剤derivatizingagent例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステルシステイン残基を介して抱合、N-ヒドロキシスクシンイミドリジン残基を介する、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、SOCl2、またはR1N=C=NR式中、RおよびR1は異なるアルキル基であるを使用して、免疫化すべき種で免疫原性を示すタンパク質例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビターに関連抗原を抱合するのに有用であり得る。例えば、100μgまたは5μgのタンパク質または複合体それぞれウサギまたはマウス用を3体積のフロイント完全アジュバントと組み合わせ、溶液を複数の部位に皮内注射することによって本発明の分子、免疫原性複合体、または誘導体に対して動物を免疫化する。1ヶ月後、動物を、元の量の1/5~1/10のペプチドまたは複合体を含むフロイント完全アジュバントの複数の部位への皮下注射によって動物を追加免疫する。7~14日後、動物を採血し、抗体力価について血清をアッセイする。力価がプラトーに達するまで動物を追加免疫する。典型的には、動物を同一抗原の複合体で追加免疫するが、異なるタンパク質に抱合し、そして/または異なる架橋試薬を使用している。複合体を、タンパク質融合物として組換え細胞培養物中で作製することもできる。また、ミョウバンなどの凝集剤を適切に使用して、免疫応答を増強する。モノクローナル抗体本明細書中に記載の抗原に対するモノクローナル抗体を、Kohleretal.,Nature,256:4951975に最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製することができるか、組換えDNA法米国特許第4,816,567号によって作製することができる。ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物ハムスターまたはマカクザルなどを上記のように免疫化して、免疫化のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化することができる。次いで、リンパ球を、適切な融合剤ポリエチレングリコールなどを使用して骨髄腫細胞と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成するGoding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103AcademicPress,1986。このようにして調製したハイブリドーマ細胞を、典型的には、非融合親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する1つまたは複数の物質を含む適切な培養培地中に播種して成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼHGPRTまたはHPRTを欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンHAT培地これらの物質はHGPRT欠損細胞の成長を阻害するを含む。典型的な骨髄腫細胞は、効率よく融合し、選択された抗体産生細胞によって抗体の安定な高レベル産生を支持し、HAT培地などの培地に感受性を示す骨髄腫細胞である。これらのうち、好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,CaliforniaUSAから利用可能なMOPC-21およびMPC-11マウス腫瘍由来の株およびAmericanTypeCultureCollection,Rockville,MarylandUSAから利用可能なSP-2またはX63-Ag8-653細胞などである。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株およびマウス-ヒトヘテロミエローマheteromyeloma細胞株も記載されているKozbor,J.Immunol.,133:30011984;Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987。ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地を、例えば、ANGPTL4、αVβ5、または血管形成分子に指向するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ放射免疫アッセイRIAまたは酵素結合免疫吸着アッセイELISAなどによって決定することができる。このような技術およびアッセイは、当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性を、例えば、MunsonandPollard,Anal.Biochem.,107:2201980のScatchard分析によって決定することができる。所望の特異性、親和性、および/または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを、限界希釈手順によってサブクローン化し、標準的な方法Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103AcademicPress,1986によって増殖させることができる。この目的に適切な培養培地には、例えば、D-MEM培地またはRPMI-1640培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞を、動物内で腹水腫瘍としてインビボで増殖させることができる。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体を、従来の免疫グロブリン精製手順例えば、プロテインA-Sepharose、ハイドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティクロマトグラフィなどによって、培養培地、腹水、または血清から適切に分離する。組換えDNA法米国特許第4,816,567号に記載の方法などによってモノクローナル抗体を作製することもできる。モノクローナル抗体をコードするDNAを、従来の手順例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用によるを使用して、容易に単離および配列決定する。ハイブリドーマ細胞は、このようなDNAの供給源として役立つ。一旦単離されると、DNAを発現ベクターに入れ、次いで、別の方法で免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞大腸菌細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、または骨髄腫細胞などにトランスフェクトして組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体を合成することができる。抗体の組換え産生を、以下により詳細に記載する。別の実施形態では、抗体または抗体フラグメントを、McCaffertyetal.,Nature,348:552-5541990に記載の技術を使用して生成した抗体ファージライブラリーから単離することができる。Clacksonetal.,Nature,352:624-6281991およびMarksetal.,J.Mol.Biol.,222:581-5971991はそれぞれ、ファージライブラリーを使用したマウス抗体およびヒト抗体の単離を記載している。その後の精製は、鎖シャフリングMarksetal.,Bio/Technology,10:779-7831992ならびに非常に巨大なファージライブラリーの構築のためのストラテジーとしての組み合わせ感染およびインビボ組換えWaterhouseetal.,Nuc.Acids.Res.,21:2265-22661993による高親和性nM範囲ヒト抗体の産生を記載している。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替法である。DNAを、例えば、ヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列相同なマウス配列への置換米国特許第4,816,567号;Morrison,etal.,Proc.NatlAcad.Sci.USA,81:68511984または免疫グロブリンコード配列への非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部もしくは一部の共有結合によって修飾することができる。典型的には、このような非免疫グロブリンポリペプチドに、抗体の定常領域を置換するか、抗体の1つの抗原組み合わせ部位の可変ドメインを置換して、一方の抗原に対する特異性を有する1つの抗原組み合わせ部位および異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原組み合わせ部位を含む2価のキメラ抗体を作製する。ヒト化抗体およびヒト抗体本発明の抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体を含み得る。ヒト化抗体は、これに移入された非ヒト供給源由来の1つまたは複数のアミノ酸残基を有する。しばしば、これらの非ヒトアミノ酸残基を、導入import残基といい、典型的には、導入可変領域から取り出される。本質的にWinterandco-workersJonesetal.,Nature,321:522-5251986;Riechmannetal.,Nature,332:323-3271988;Verhoeyenetal.,Science,239:1534-15361988の方法にしたがって、げっ歯類CDRまたはCDR配列へのヒト抗体の対応する配列の置換によってヒト化することができる。したがって、このようなヒト化抗体は、実質的にインタクト未満のヒト可変ドメインが非ヒト種由来の対応する配列に置換されたキメラ抗体米国特許第4,816,567号である。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのCDR残基およびおそらくいくつかのFR残基がげっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基に置換されているヒト抗体である。ヒト化抗体の作製において使用すべきヒト可変ドメイン軽鎖および重鎖の両方の選択は、抗原性の減少のために非常に重要である。いわゆる最良適合best-fit法にしたがって、げっ歯類抗体の可変ドメイン配列を、公知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングする。次いで、げっ歯類の配列に最も近いヒト配列を、ヒト化抗体のヒトフレームワークFRとして許容するSimsetal.,J.Immunol.,151:22961993;Chothiaetal.,J.Mol.Biol.,196:9011987。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の下位集団の全ヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。いくつかの異なるヒト化抗体に同一のフレームワークを使用することができるCarteretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:42851992;Prestaetal.,J.Immnol.,151:26231993。抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的性質を保持しながら抗体をヒト化することがさらに重要である。この目的を達成するために、典型的な方法にしたがって、ヒト化抗体を、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用した親配列および種々の概念ヒト化産物の分析過程によって調製する。三次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者に良く知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元高次構造を例示および表示するコンピュータプログラムは利用可能である。これらのディスプレイの検討により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性の高い役割が分析されるすなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基が分析される。この方法では、所望の抗体特性標的抗原に対する親和性の増加などが達成されるように、FR残基を、レシピエントから選択して組み合わせ、配列に導入する。一般に、CDR残基は、直接且つほとんど実質的に抗原結合への影響に関与する。あるいは、免疫化の際に、内因性免疫グロブリン非産生条件下でヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物例えば、マウスを産生することが現在可能である。例えば、キメラマウスおよび生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖結合領域JH遺伝子のホモ接合性欠失によって内因性抗体産生が完全に阻害されることが記載されている。このような生殖系列変異マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入により、抗原攻撃誘発の際にヒト抗体が産生される。例えば、Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:25511993;Jakobovitsetal.,Nature,362:255-2581993;Bruggermannetal.,YearinImmuno.,7:331993;およびDuchosaletal.,Nature355:2581992を参照のこと。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーに由来し得るHoogenboometal.,J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:581-5971991;Vaughanetal.,NatureBiotech14:3091996。ヒト抗体を、当該分野で公知の種々の技術ファージディスプレイライブラリーHoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksetal.,J.Mol.Biol.,222:5811991が含まれるを使用して産生することもできる。この技術によれば、抗体Vドメイン遺伝子を、繊維状バクテリオファージの大または小コートタンパク質M13またはfdのいずれかにインフレームでクローン化し、ファージ粒子表面上に機能的抗体フラグメントとしてディスプレイする。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖DNAコピーを含むので、抗体の機能的性質に基づいた選択により、これらの性質を示す抗体をコードする遺伝子も選択される。したがって、ファージはB細胞のいくつかの性質を模倣する。種々の形式でファージディスプレイを行うことができる例えば、Johnson,KS.andChiswell,DJ.,CurOpininStructBiol3:564-5711993に概説されている。V遺伝子セグメントのいくつかの供給源を、ファージディスプレイに使用することができる。例えば、Clacksonetal.,Nature,352:624-6281991では、免疫化マウスの脾臓由来のV遺伝子の小さな無作為の組み合わせライブラリーから種々の多数の抗オキサゾロン抗体が単離された。非免疫化ヒトドナー由来のV遺伝子のレパートリーを構築し、種々の多数の抗原自己抗原が含まれるに対する抗体を、例えば、本質的にMarksetal.,J.Mol.Biol.222:581-5971991またはGriffithetal.,EMBOJ.12:725-7341993に記載の技術にしたがって単離することができる。米国特許第5,565,332号および同第5,573,905号も参照のこと。Coleetal.andBoerneretal.の技術もヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能であるColeetal.,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,p.771985およびBoerneretal.,J.Immunol.,1471:86-951991。ヒト抗体を、インビトロ活性化B細胞によって生成することもできる米国特許第5,567,610号および同第5,229,275号を参照のこと。抗体フラグメント抗体フラグメントも本発明に含まれる。抗体フラグメント産生のための種々の技術が開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化に由来していたMorimotoetal.,JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-1171992およびBrennanetal.,Science,229:811985を参照のこと。しかし、現在、これらのフラグメントを、組換え宿主細胞によって直接産生することができる。例えば、抗体フラグメントを、上記で考察の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Fab’-SHフラグメントを、大腸菌から直接回収し、化学的にカップリングしてFab’2フラグメントを形成することができるCarteretal.,Bio/Technology10:163-1671992。別のアプローチにしたがって、Fab’2フラグメントを、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体フラグメントの他の産生技術は、当業者に明らかである。他の実施形態では、最適な抗体は、一本鎖FvフラグメントscFvである。WO93/16185;米国特許第5,571,894号および米国特許第5,587,458号を参照のこと。FvおよびsFvは、定常領域を欠くインタクトな組み合わせ部位を有する唯一の種である。したがって、これらは、インビボでの非特異的結合の減少に適切である。sFv融合タンパク質を構築して、sFvのアミノ末端およびカルボキシ末端のいずれかにエフェクタータンパク質の融合物を得ることができる。AntibodyEngineering,ed.Borrebaeck,supraを参照のこと。抗体フラグメントは、例えば、米国特許第5,641,870号に記載の線状抗体でもあり得る。このような線状抗体フラグメントは、単一特異性または二重特異性であり得る。多重特異性抗体例えば、二重特異性本発明の抗体には、例えば、少なくとも2つの異なる抗原に対する結合特異性を有する多重特異性抗体も含まれる。このような分子は、通常、2つの抗原のみに結合する一方ですなわち、二重特異性抗体、BsAb、本明細書中で使用される場合、三重特異性抗体などのさらなる特異性を有する抗体がこの表現に含まれる。BsAbの例には、腫瘍細胞抗原に指向する1つのアームおよび細胞傷害性誘発分子に指向する他のアームを有するBsAb抗FcγRI/抗CD15、抗p185HER2/FcγRIIICD16、抗CD3/抗悪性B細胞1D10、抗CD3/抗p185HER2、抗CD3/抗p97、抗CD3/抗腎細胞癌、抗CD3/抗OVCAR-3、抗CD3/L-D1抗結腸癌、抗CD3/抗メラニン細胞刺激ホルモンアナログ、抗EGF受容体/抗CD3、抗CD3/抗CAMA1、抗CD3/抗CD19、抗CD3/MoV18、抗神経細胞接着分子NCAM/抗CD3、抗葉酸結合タンパク質FBP/抗CD3、抗膵臓癌pancarcinoma関連抗原AMOC-31/抗CD3など;腫瘍抗原に特異的に結合する1つのアームおよび毒素に結合する1つのアームを有するBsAb抗サポリン/抗Id-1、抗CD22/抗サポリン、抗CD7/抗サポリン、抗CD38/抗サポリン、抗CEA/抗リシンA鎖、抗インターフェロン-αIFN-α/抗ハイブリドーマイディオタイプ、抗CEA/抗ビンカアルカロイドなど;変換酵素活性化プロドラッグのBsAb抗CD30/抗アルカリホスファターゼリン酸マイトマイシンプロドラッグのマイトマイシンアルコールへの変換を触媒するなど;繊維素溶解薬として使用することができるBsAb抗フィブリン/抗組織プラスミノゲンアクチベーターtPA、抗フィブリン/抗ウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベーターuPAなど;免疫複合体を細胞表面受容体にターゲティングするためのBsAb抗低密度リポタンパク質LDL/抗Fc受容体例えば、FcγRI、FcγRII、またはFcγRIIIなど;感染症の治療で使用されるBsAb抗CD3/抗単純ヘルペスウイルスHSV、抗T細胞受容体:CD3複合体/抗インフルエンザ、抗FcγR/抗HIVなど;インビトロまたはインビボでの腫瘍検出のためのBsAb抗CEA/抗EOTUBE、抗CEA/抗DPTA、抗p185HER2/抗ハプテンなど;ワクチンアジュバンとしてのBsAb;ならびに診断ツールとしてのBsAb抗ウサギIgG/抗フェリチン、抗西洋ワサビペルオキシダーゼHRP/抗ホルモン、抗ソマトスタチン/抗物質P、抗HRP/抗FITC、抗CEA/抗β-ガラクトシダーゼなどが含まれる。三重特異性抗体の例には、抗CD3/抗CD4/抗CD37、抗CD3/抗CD5/抗CD37、および抗CD3/抗CD8/抗CD37が含まれる。全長抗体または抗体フラグメント例えば、Fab’2二重特異性抗体として二重特異性抗体を調製することができる。二重特異性抗体の作製方法は当該分野で公知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、2つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対この2つの鎖は異なる特異性を有するの同時発現に基づくMillsteinetal.,Nature,305:537-5391983。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の無作為な分類のために、これらのハイブリドーマクアドローマは、10種の異なる抗体分子の混合物を産生する可能性があり、そのうちの1つのみが正確な二重特異性構造を有する。通常はアフィニティクロマトグラフィ工程によって行われる正確な分子の精製はむしろ煩雑であり、収率が低い。類似の手順が、WO93/08829およびTrauneckeretal.,EMBOJ.,10:3655-36591991に開示されている。異なるアプローチにしたがって、所望の結合特異性抗体-抗原組み合わせ部位を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリンの定常ドメイン配列に融合する。ヒンジ領域の少なくとも一部、CH2領域、およびCH3領域を含む免疫グロブリンの重鎖定常ドメインと融合することが好ましい。少なくとも1つの融合物中に存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第1の重鎖定常領域CH1を有することが好ましい。免疫グロブリンの重鎖融合物および、所望ならば、免疫グロブリン軽鎖をコードするDNAを、個別の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物に同時トランスフェクトする。構築に使用された比率が等しくない3つのポリペプチド鎖によって最適な収率が得られる実施形態では、これにより、3つのポリペプチドフラグメントの相互の比率の調整が非常に柔軟に行える。しかし、等しい比率の少なくとも2つのポリペプチド鎖の発現によって収率が高くなるか、比率が特に重要でない場合、2つまたは3つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を1つの発現ベクターに挿入することが可能である。このアプローチの一実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアーム中の第1の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖および他方のアーム中のハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対第2の結合特異性が得られるから構成される。たった半分の二重特異性分子中の免疫グロブリン軽鎖によって容易な分離方法が得られるので、この非対称構造によって望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの所望の二重特異性化合物の分離が容易になることが見出された。このアプローチは、WO94/04690に開示されている。二重特異性抗体の生成についてのさらなる詳細については、例えば、Sureshetal.,MethodsinEnzymology,121:2101986を参照のこと。WO096/27011に記載の別のアプローチにしたがって、抗体分子対間の接合部分を、ヘテロ二量体の比率を最大にするように操作し、組換え細胞培養物から回収することができる。好ましい接合部分は、抗体定常ドメインのCH3ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第1の抗体分子の接合部分由来の1つまたは複数の小アミノ酸鎖を、より大きな側鎖例えば、チロシンまたはトリプトファンに置換する。巨大側鎖と同一または類似のサイズの代償的空洞を、巨大アミノ酸側鎖のより小さな側鎖例えば、アラニンまたはトレオニンへの置換によって第2の抗体分子の接合部分に作製する。これにより、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物を超えたヘテロ二量体収率を増加させる機構が得られる。抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成する技術も文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennanetal.,Science,229:811985は、インタクトな抗体をタンパク質分解によって切断してFab’2フラグメントを生成する手順を記載している。隣接ジチオールを安定化して分子間ジスルフィド結合を防止するためのジチオール錯化剤である砒酸ナトリウムの存在下で、これらのフラグメントは減少する。次いで、Fab’フラグメントを、チオニトロベンゾエートTNB誘導体に変換する。次いで、メルカプトエチルアミンでの還元によってFab’-TNB誘導体の1つをFab’-チオールに変換し、等モル量の他のFab’-TNB誘導体と混合して二重特異性抗体を形成させる。産生された二重特異性抗体を、抗体の選択的固定化のための薬剤として使用することができる。最近の進歩によって大腸菌からFab’-SHフラグメントを直接回収することが容易になり、これを化学的にカップリングして二重特異性抗体を形成することができる。Shalabyetal.,J.Exp.Med.,175:217-2251992は、完全にヒト化された二重特異性抗体Fab’2分子の産生を記載している。各Fab’フラグメントを大腸菌から個別に分離し、インビトロでの有向directed化学的カップリングに供して二重特異性抗体を形成した。このようにして形成された二重特異性抗体は、VEGF受容体および正常なヒトT細胞を過剰発現する細胞に結合し、ヒト乳癌標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。二重特異性抗体フラグメントの作製および組換え細胞培養物からの直接的単離のための種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されている。Kostelnyetal.,J.Immunol.,1485:1547-15531992。FosおよびJunタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって2つの異なる抗体のFab’部分に連結した。ヒンジ領域の抗体ホモ二量体を還元して単量体を形成させ、次いで、再度酸化させて抗体ヘテロ二量体を形成させた。抗体ホモ二量体産生にもこの方法を利用することができる。Hollingeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-64481993に記載のダイアボディテクノロジーにより、二重特異性抗体フラグメントの別の作製機構が得られる。フラグメントは、リンカーによって軽鎖可変ドメインVLに連結した重鎖可変ドメインVHを含み、このリンカーは、短すぎて同一鎖上の2つのドメインを対合させることが不可能である。したがって、1つのフラグメントのVHおよびVLドメインは、別のフラグメントの相補的VLおよびVHドメインとの対合を強いられ、それにより、2つの抗原結合部位が形成される。一本鎖FvsFv二量体の使用による二重特異性抗体フラグメントの別の作製ストラテジーも報告されている。Gruberetal.,J.Immunol.,152:53681994を参照のこと。2価を超える抗体が意図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tuttetal.,J.Immunol.147:601991。ヘテロ複合体抗体二重特異性抗体には、架橋またはヘテロ複合体heteroconjugate抗体が含まれ、本発明の抗体である。例えば、ヘテロ複合体中の抗体の一方をアビジンにカップリングし、他方をビオチンにカップリングすることができる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞の望ましくない細胞へのターゲティング米国特許第4,676,980号およびHIV感染症の治療WO91/00360、WO92/200373、欧州特許第03089号が提案されている。ヘテロ複合体抗体を、任意の従来の架橋法を使用して作製することができる。適切な架橋剤は当該分野で周知であり、多数の架橋技術と共に米国特許第4,676,980号に開示されている。多価抗体本発明の抗体には、多価抗体が含まれる。多価抗体を、抗体が結合する抗原を発現する細胞によって2価抗体よりも迅速に内在化および/または異化することができる。本発明の抗体は、3つまたはそれを超える抗原結合部位を有し、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生することができるIgMクラス以外の多価抗体例えば、4価抗体であり得る。多価抗体は、二量体化ドメインおよび3つまたはそれを超える抗原結合部位を含み得る。好ましい二量体化ドメインは、Fc領域またはヒンジ領域を含むまたはこれらからなる。このシナリオでは、抗体は、Fc領域およびFc領域のアミノ末端側に3つまたはそれを超える抗原結合部位を含む。本明細書中の好ましい多価抗体は、3~約8個の抗原結合部位を含むがまたはこれらからなる、4つが好ましい。多価抗体は、少なくとも1つのポリペプチド鎖および好ましくは2つのポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖は2つまたはそれを超える可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖は、VD1-X1n-VD2-X2n-Fc式中、VD1は第1の可変ドメインであり、VD2は第2の可変ドメインであり、FcはFc領域の1つのポリペプチド鎖であり、X1およびX2はアミノ酸またはポリペプチドを示し、nは0または1であるを含み得る。例えば、ポリペプチド鎖は、VH-CH1-可動性リンカー-VH-CH1-Fc領域鎖またはVH-CH1-VH-CH1-Fc領域鎖を含み得る。本明細書中の多価抗体は、好ましくは、少なくとも2つ好ましくは4つの軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書中の多価抗体は、例えば、約2~約8個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書中で意図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意選択的に、CLドメインをさらに含む。エフェクター機能の操作例えば、癌治療における抗体の有効性を増強するために、エフェクター機能に関して本発明の抗体を修飾することが望ましいかもしれない。例えば、システイン残基をFc領域に移入し、それにより、この領域中の鎖間ジスルフィド結合を形成することができる。このようにして生成されたホモ二量体抗体は、内在化能力が改良され、そして/または補体媒介性細胞死滅および抗体依存性細胞傷害性ADCCを増加させることができる。Caronetal.,J.ExpMed.176:1191-11951992およびShopes,B.J.Immunol.148:2918-29221992を参照のこと。抗腫瘍活性が増強されたホモ二量体を、Wolffetal.,CancerResearch53:2560-25651993に記載のように、ヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製することもできる。あるいは、二重Fc領域を有し、それにより、補体溶解およびADCC能力を増強することができるように抗体を操作することができる。Stevensonetal.,Anti-CancerDrugDesign3:219-2301989を参照のこと。抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第5,739,277号に記載されているように、抗体特に、抗体フラグメントにサルベージsalvage受容体結合エピトープを組み込むことができる。本明細書中で使用される、用語サルベージ受容体結合エピトープは、IgG分子のインビボ血清半減期の増加を担うIgG分子例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のFc領域のエピトープをいう。免疫複合体本発明はまた、治療薬、毒素例えば、細菌、真菌、植物、または動物を起源とする酵素活性毒素またはそのフラグメント、または放射性同位体すなわち、放射性複合体radioconjugateなどの細胞傷害薬に抱合した本明細書中に記載の抗体を含む免疫複合体に関する。放射性複合体抗体の産生のために、種々の放射性核種を利用可能である。例には、212Bi、131I、131In、90Y、および186Reが含まれるが、これらに限定されない。このような免疫複合体の生成に有用な化学療法薬を上に記載している。例えば、BCNU、ストレプトゾイシンstreptozoicin、ビンクリスチン、5-フルオロウラシル、米国特許第5,053,394号、同第5,770,710号に記載の集合的にLL-E33288複合体として公知の薬剤のファミリー、エスペラミシン米国特許第5,877,296号など本明細書中の化学療法薬の定義も参照のことを、抗ANGPTL4、抗αVβ5、抗血管形成抗体、またはそのフラグメントに抱合することができる。腫瘍の選択的破壊のために、抗体は、高放射性原子を含み得る。種々の放射性同位体を、放射性抱合された抗ANGPTL4または抗血管形成抗体またはそのフラグメントの産生に利用可能である。例には、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、212Pb、111In、およびLuの放射性同位体などが含まれるが、これらに限定されない。複合体を診断のために使用する場合、複合体は、シンチグラフィ研究のための放射性原子例えば、99mtcまたは123Iまたは核磁気共鳴NMR映像法磁気共鳴映像法MRIとしても公知のためのスピン標識ヨウ素-123、ヨウ素-131、インジウム-111、フッ素-19、炭素-13、窒素-15、酸素-17、ガドリニウム、マンガン、または鉄などを含み得る。放射性標識または他の標識を、公知の方法で複合体中に組み込むことができる。例えば、ペプチドを生合成するか、適切なアミノ酸前駆体例えば、水素の代わりにフッ素-19を含むを使用したアミノ酸の化学合成によって合成することができる。99mtcまたは123I、186Re、188Re、および111Inなどの標識を、ペプチド中のシステイン残基を介して結合させることができる。イットリウム-99を、リジン残基を介して結合させることができる。IODOGEN法Frakeretal.1978Biochem.Biophys.Res.Commun.80:4957を使用して、ヨウ素-123を組み込むことができる。例えば、他の方法を詳述したMonoclonalAntibodiesinImmunoscintigraphyChatal,CRCPress1989を参照のこと。使用することができる酵素活性毒素およびそのフラグメントには、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素A鎖緑膿菌由来、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデクシンmodeccinA鎖、α-サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシンdianthinタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質PAPI、PAPII、およびPAP-S、ニガウリインヒビター、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリスsapaonariaofficinalisインヒビター、ゲロニン、ミトゲリンmitogellin、レストリクトシンrestrictocin、フェノマイシンphenomycin、ネオマイシン、およびトリコテセンが含まれる。例えば、1993年10月28日公開のWO93/21232を参照のこと。抗体と細胞傷害薬との複合体を、種々の二官能性タンパク質カップリング剤N-スクシニミジル-3-2-ピリジルジチオールプロピオネートSPDP、スクシニミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート、イミノチオランIT、イミドエステルの二官能性誘導体塩酸ジメチルアジポイミデードなど、活性エステルジスクリニミジルスベレートなど、アルデヒドグルタルアルデヒドなど、ビス-アジド化合物ビスp-アジドベンゾイルヘキサンジアミンなど、ビス-ジアゾニウム誘導体ビスp-ジアゾニウムベンゾイル-エチレンジアミンなど、ジイソシアネートトリエン2,6-ジイソシアネートなど、およびビス活性フッ素化合物1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼンなどなどを使用して作製する。例えば、リシン免疫毒素を、Vitettaetal.,Science238:10981987に記載のように調製することができる。炭素-14標識1-イソチオシアナトベンジル-3-メチルジエチレントリアミン五酢酸MX-DTPAは、抗体への放射性ヌクレオチドの抱合のための例示的キレート剤である。WO94/11026を参照のこと。リンカーは、細胞中の細胞傷害薬の放出を容易にする切断リンカーであり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカーCharietal.,CancerResearch52:127-1311992;米国特許第5,208,020号を使用することができる。あるいは、抗ANGPTL4、抗αVβ5、または抗血管形成抗体および細胞傷害薬を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製することができる。DNAの長さは、互いに隣接するか複合体の所望の性質を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離されている2つの複合体部分をコードする各領域を含み得る。特定の実施形態では、腫瘍プレターゲティングで使用するために、抗体を、受容体ストレプトアビジンなどに抱合し、抗体-受容体複合体を患者に投与し、その後に清澄化薬clearingagentを使用して循環から非結合複合体を除去し、細胞傷害薬例えば、放射性核種に抱合したリガンド例えば、アビジンを投与する。特定の実施形態では、抗体と核溶解nucleolytic活性を有する化合物例えば、リボヌクレアーゼまたはDNAエンドヌクレアーゼデオキシリボヌクレアーゼDnアーゼなどとの間に免疫複合体を形成する。マイタンシンmaytansineおよびマイタンシノイドmaytansinoid本発明は、1つまたは複数のマイタンシノイド分子に抱合した本発明の抗体を提供する。マイタンシノイドは、チューブリン重合の阻害によって作用する有糸分裂mitototicインヒビターである。マイタンシンは、東アフリカの低木マイテナスセラタMaytenusserrataから最初に単離された米国特許第3,896,111号。その後、一定の微生物がマイタンシノイドマイタンシノールmaytansinolおよびC-3マイタンシノールエステルなども産生することが発見された米国特許第4,151,042号。合成マイタンシノールならびにその誘導体およびアナログは、例えば、米国特許第4,137,230号;同第4,248,870号;同第4,256,746号;同第4,260,608号;同第4,265,814号;同第4,294,757号;同第4,307,016号;同第4,308,268号;同第4,308,269号;同第4,309,428号;同第4,313,946号;同第4,315,929号;同第4,317,821号;同第4,322,348号;同第4,331,598号;同第4,361,650号;同第4,364,866号;同第4,424,219号;同第4,450,254号;同第4,362,663号;および同第4,371,533号に開示されている。抗ANGPTL4、抗αVβ5、または抗血管形成抗体を、抗体またはマイタンシノイド分子の生物活性を有意に減少させることなくマイタンシノイド分子に抱合する。1抗体分子あたり平均3~4個のマイタンシノイド分子が抱合し、抗体の機能または溶解性に負の影響を与えることなく標的細胞の細胞傷害性の増強に有効性を示しているが、1分子の毒素/抗体でさえも裸の抗体を使用するよりも細胞傷害性を増強すると予想される。マイタンシノイドは当該分野で周知であり、公知の技術によって合成するか、天然供給源から単離することができる。適切なマイタンシノイドは、例えば、米国特許第5,208,020号および他の特許ならびに上記に言及したおよび非特許刊行物に開示されている。一実施形態では、マイタンシノイドは、マイタンシノールおよびマイタンシノール分子の芳香環または他の位置が修飾されたマイタンシノールアナログ種々のマイタンシノールエステルなどである。抗体-マイタンシノイド複合体を作製するための当該分野で公知の結合基が多数存在し、米国特許第5,208,020号または欧州特許第0425235B1号、およびCharietal.,CancerResearch52:127-1311992に開示の結合基が含まれる。結合基には、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、感光基、ペプチダーゼ不安定性基、またはエステラーゼ不安定性基が含まれ、上記で定義された特許に開示のように、ジスルフィド基およびチオエーテル基が好ましい。抗体とマイタンシノイドとの複合体を、種々の二官能性タンパク質カップリング剤N-スクシニミジル-3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDP、スクシニミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート、イミオンチオランITなど、イミドエステルの二官能性誘導体ジメチルアジポイミデート塩酸塩など、活性エステルスベリン酸ジスクシニミジルなど、アルデヒドグルタルアルデヒドなど、ビス-アジド化合物ビス-p-アジドベンゾイルヘキサンジアミンなど、ビス-ジアゾニウム誘導体ビスp-ジアゾニウムベンゾイル-エチレンジアミンなど、ジイソシアネートトルエン2,6-ジイソシアネートなど、およびビス活性フッ素化合物1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼンなどを使用して作製することができる。典型的なカップリング剤には、ジスルフィド結合を得るためのN-スクシニミジル-3-2-ピリジルジチオ-プロピオネート-SPDPCarlssonetal.,Biochem.J.173:723-737[1978]およびN-スクシニミジル-4-2-ピリジルチオペンタノエートSPPが含まれる。結合型に依存して、マイタンシノイド分子の種々の位置にリンカーを結合することができる。例えば、従来のカップリング技術を使用した水酸基との反応によってエステル結合を形成することができる。水酸基を有するC-3位、ヒドロキシメチル基で修飾されたC-14位、水酸基で修飾されたC-15位、および水酸基を有するC-20位で反応が起こり得る。マイタンシノールまたはマイタンシノールアナログのC-3位にリンカーを形成する。カリケアマイシン別の目的の免疫複合体は、1つまたは複数のカリケアマイシン分子と抱合した本発明の抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ピコモル以下の濃度で二本鎖DNAを破壊することができる。カリケアマイシンファミリーの複合体の調製については、米国特許第5,712,374号、同第5,714,586号、同第5,739,116号、同第5,767,285号、同第5,770,701号、同第5,770,710号、同第5,773,001号、同第5,877,296号全てAmericanCyanamidCompanyを参照のこと。使用することができるカリケアマイシンの構造アナログには、γ1I、α2I、α3I、N-アセチル-γ1I、PSAG、およびθI1Hinmanetal.,CancerResearch53:3336-33421993,Lodeetal.,CancerResearch58:2925-29281998および上記のAmericanCyanamidの米国特許が含まれるが、これらに限定されない。抗体を抱合することができる別の抗腫瘍薬は、葉酸拮抗薬であるQFAである。カリケアマイシンおよびQFAは共に細胞内作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。したがって、抗体媒介性内在化によるこれらの薬剤の細胞取り込みにより、その細胞傷害作用が非常に増強される。他の抗体修飾他の抗体修飾が本明細書中で意図される。例えば、抗体を、種々の非タンパク質性ポリマー例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーのうちの1つと結合することができる。抗体を、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル、およびポリ-メチルメタクリレートマイクロカプセル、コロイド状薬物送達系例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル、またはマクロエマルジョン中に捕捉することができる。このような技術は、Remington’sPharmaceuticalSciences,16thedition,Oslo,A.,Ed.,1980に開示されている。リポソームおよびナノ粒子本発明のポリペプチドを、リポソーム中に処方することができる。例えば、本発明の抗体を、免疫リポソームとして処方することができる。抗体を含むリポソームを、Epsteinetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:36881985;Hwangetal.,Proc.NatlAcad.Sci.USA,77:40301980;および米国特許第4,485,045号および同第4,544,545号などに記載の当該分野で公知の方法によって調製する。循環時間が造抗されたリポソームは、米国特許第5,013,556号に開示されている。一般に、リポソームの処方および使用は、当業者に公知である。特に有用なリポソームを、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミンPEG-PEを含む液体組成物を使用した逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームを所定の孔サイズのフィルターから押し出して所望の直径のリポソームを得る。Martinetal.,J.Biol.Chem.257:286-2881982に記載のように、ジスルフィド鎖間反応を介して、本発明の抗体のFab’フラグメントをリポソームに抱合することができる。化学療法薬ドキソルビシンなどを、任意選択的にリポソーム内に含める。Gabizonetal.,J.NationalCancerInst.811914841989を参照のこと。他の用途本発明の抗体には種々の用途がある。例えば、抗ANGPTL4抗体を、ANGPTL4の診断アッセイ例えば、癌検出例えば、腎癌検出のための特定の細胞、組織、または血清におけるその発現の検出などで使用することができる。一実施形態では、ANGPTL4抗体を、本明細書中に提供した方法を使用した治療のための患者集団例えば、ANGPTL4を発現する患者、ANGPTL4が上昇した患者、ANGPTL4レベルに感受性を示す癌患者の選択のために使用する。当該分野で公知の種々の診断アッセイ技術競合結合アッセイ、直接または間接的サンドイッチアッセイ、および均一相または不均一相において行った免疫沈降アッセイなどを使用することができるZola,MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,CRCPress,Inc.1987pp.147-158。診断アッセイで使用する抗体を、検出可能な部分で標識することができる。検出可能な部分は、直接または間接的に検出可能なシグナルを生じることができるはずである。例えば、検出可能な部分は、放射性同位体3H、14C、32P、35S、または125Iなど、蛍光化合物、化学発光化合物フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、またはルシフェリンなど、または酵素アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、または西洋ワサビペルオキシダーゼなどであり得る。当該分野で公知の検出可能部分に抗体を抱合する任意の方法Hunteretal.,Nature,144:9451962;Davidetal.,Biochemistry,13:10141974;Painetal.,J.Immunol.Meth.,40:2191981;およびNygren,J.Histochem.AndCytochem.,30:4071982に記載の方法が含まれるを使用することができる。抗ANGPTL4抗体はまた、組換え細胞培養物または天然供給源からのANGPTL4またはANGPTL4フラグメントのアフィニティ生成に有用である。この過程では、当該分野で周知の方法を使用して、ANGPTL4に対する抗体を、Sephadex樹脂または濾紙のような適切な支持体に固定する。次いで、固定された抗体を、精製すべきANGPTL4を含むサンプルと接触させ、その後、支持体を適切な溶媒で洗浄し、サンプル中のANGPTL4以外の固定化抗体に結合した実質的に全ての材料を除去する。最後に、支持体を別の適切な溶媒で洗浄し、抗体からANGPTL4を放出させる。本発明のポリペプチドに対する共有結合修飾本発明のポリペプチド例えば、ポリペプチドアンタゴニストフラグメント、融合分子例えば、免疫融合分子、本発明の抗体の共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれる。適切な場合、ポリペプチドの化学合成または酵素切断もしくは化学的切断によってこれを行うことができる。ターゲティングされたポリペプチドのアミノ酸残基と選択された側鎖、N末端残基、もしくはC末端残基と反応することができる有機誘導体化剤との反応または修飾アミノ酸もしくは非天然アミノ酸の成長中のポリペプチド鎖への組み込みによって、他のポリペプチドの共有結合修飾型を分子に移入する例えば、Ellmanetal.,Meth.Enzym.202:301-3361991;Norenetal.,Science244:1821989;ならびに米国特許出願公開番号20030108885号および同第20030082575号。システイニル残基を、α-ハロアセテートおよび対応するアミンクロロ酢酸またはクロロアセトアミドなどと反応させてカルボキシメチル誘導体またはカルボキシアミドメチル誘導体を得ることが最も一般的である。システイニル残基は、ブロモトリフルオロアセトン、α-ブロモ-β-5-イミドゾイルプロピオン酸、クロロアセチルリン酸、N-アルキルマレイミド、3-ニトロ-2-ピリジルジスルフィド、メチル2-ピリジルジスルフィド、p-クロロメルクリベンゾエート、2-クロロメルクリ-4-ニトロフェノール、またはクロロ-7-ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾールとの反応によっても誘導される。pH5.5~7.0でのジエチルピロカーボネートこの薬剤はヒスチジル側鎖に非確定特異的であるためとの反応によってヒスチジル残基を誘導体化する。パラ-ブロモフェナシルブロミドも有用である。反応を、典型的には、pH6.0にて0.1Mカルコジル酸ナトリウム中で行う。リジニル残基およびアミノ末端残基を、コハク酸または他のカルボン酸無水物と反応させる。これらの薬剤での誘導体化は、リジニル残基の電荷を逆にする効果がある。α-アミノ含有残基を誘導体化するのに適切な他の薬剤には、イミドエステルメチルピコリニミデート、など、ピリドキサルリン酸、ピリドキサル、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、O-メチルイソ尿素、2,4-ペンタンジオン、およびグリオキシレートとのトランスアミナーゼ触媒反応が含まれる。1つまたはいくつかの従来の試薬、特に、フェニルグリオキサール、2,3-ブタンジオン、1,2-シクロヘキサンジオン、およびニンヒドリンと反応によってアルギニル残基を修飾する。アルギニン残基の誘導体化には、グアニジン官能基のpKaが高いので、アルカリ条件下で反応を行うことが必要である。さらに、これらの試薬は、リジン基およびアルギニンε-アミノ基と反応することができる。チロシル残基の特異的修飾を行うことができ、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によるチロシル残基へのスペクトル標識の移入が特に興味深い。最も一般的には、N-アセチルイミジゾールN-acetylimidizoleおよびテトラニトロメタンを使用して、O-アセチルチロシル種および3-ニトロ誘導体をそれぞれ形成する。125Iまたは131Iを使用してチロシル残基をヨード化して、放射免疫アッセイで使用される標識タンパク質を調製する。カルボジイミドR-N=C=N-R’式中、RおよびR’は異なるアルキル基である1-シクロヘキシル-3-2-モルホリニル-4-エチルカルボジイミドまたは1-エチル-3-4-アゾニア-4,4-ジメチルフェニルカルボジイミドなどとの反応によって、カルボキシル側鎖基アスパルチルまたはグルタミルを選択的に修飾する。さらに、アンモニウムイオンとの反応によって、アスパルチル残基およびグルタミル残基を、アスパラギニル残基およびグルタミニル残基に変換する。グルタミニル残基およびアスパラギニル残基を、しばしば、対応するグルタミル残基およびアスパルチル残基にそれぞれ脱アミド化する。これらの残基を、中性または塩基性条件下で脱アミド化する。これらの残基の脱アミド化形態は、本発明の範囲内に含まれる。他の修飾には、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリル残基またはトレオニル残基の水酸基のリン酸化、リジン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のαアミノ基のメチル化T.E.Creighton,Proteins:StructureandMolecularProperties,W.H.FreemanCo.,SanFrancisco,pp.79-861983、N-末端アミンのアセチル化、および任意のC末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。別の共有結合修飾型は、本発明のポリペプチドへのグリコシドの化学的または酵素的カップリングを含む。これらの手順は、NまたはO結合グリコシル化のためのグリコシル化能力を有する宿主細胞中でのポリペプチド産生を必要としないという点で有利である。使用したカップリング様式に依存して、糖を、aアルギニンおよびヒスチジン、b遊離カルボキシル基、c遊離スルフヒドリル基システインの遊離スルフヒドリル基など、d遊離ヒドロキシル基セリン、スレオニン、またはヒドロキシプロリンの遊離ヒドロキシル基など、e芳香族残基フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンの芳香族残基などまたはfグルタミンのアミド基に結合することができる。これらの方法は、1987年9月11日公開のWO87/05330およびAplinandWriston,CRCCrit.Rev.Biochem.,pp.259-3061981に記載されている。本発明のポリペプチド上に存在する任意の炭水化物部分を、化学的または酵素的に除去することができる。化学的脱グリコシル化には、化合物トリフルオロメタンスルホン酸またはその等価な化合物へのポリペプチドの曝露が必要である。この処理により、結合している糖N-アセチルグルコサミンまたはN-アセチルガラクトサミン以外の全てまたはほとんどの糖が切断される一方で、ポリペプチドはインタクトなままである。化学的脱グリコシル化は、Hakimuddin,etal.,Arch.Biochem.Biophys.259:521987およびEdgeetal.,Anal.Biochem.,118:1311981に記載されている。例えば、抗体上の炭水化物部分の酵素的切断を、Thotakuraetal.,Meth.Enzymol.138:3501987に記載の種々のエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼの使用によって行うことができる。本発明のポリペプチドの別の共有結合修飾型は、米国特許第4,640,835号;同第4,496,689号;同第4,301,144号;同第4,670,417号;同第4,791,192号、または同第4,179,337号に記載の様式での種々の非タンパク質性ポリマー例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンのうちの1つへのポリペプチドの結合を含む。ベクター、宿主細胞、および組換え法本発明のポリペプチドを、容易に入手可能な技術および材料を使用した組換えによって産生することができる。本発明のポリペプチド例えば、ANGPTL4または抗ANGPTL4抗体、抗αVβ5抗体または抗血管形成抗体例えば、抗VEGF抗体の組換え産生のために、ポリペプチドをコードする核酸を単離し、さらなるクローニングDNAの増幅または発現のための複製ベクターに挿入する。従来の手順を使用して、本発明のポリペプチドをコードするDNAを容易に単離し、配列決定する。例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用などによって、モノクローナル抗体をコードするDNAを単離し、配列決定する。多くのベクターが利用可能である。ベクター成分には、一般に、1つまたは複数の以下が含まれるが、これらに限定されない:シグナル配列、複製起点、1つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。シグナル配列成分本発明のポリペプチドを、組換えによって直接産生することができるだけでなく、異種ポリペプチド典型的には、成熟タンパク質またはポリペプチドのN末端に特異的切断部位を有するシグナル配列または他の配列であるとの融合ポリペプチドとして産生することもできる。選択された異種シグナル配列は、典型的には、宿主細胞によって認識およびプロセシングされたすなわち、シグナルペプチドによって切断された配列である。未変性のポリペプチドシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核宿主細胞については、シグナル配列を、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、lpp、または熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列に置換する。酵母分泌のために、未変性シグナル配列を、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダーサッカロミセス属およびクリベロミセス属のα因子リーダーが含まれる、酸ホスファターゼリーダー、カンジタアルビカンスのグルコアミラーゼリーダー、またはWO90/13646に記載のシグナルに置換することができる。哺乳動物細胞発現では、哺乳動物シグナル配列およびウイルス分泌リーダー例えば、単純ヘルペスgDシグナルが利用可能である。このような前駆領域のDNAを、本発明のポリペプチドをコードするDNAに読み枠内でライゲーションする。複製起点成分発現ベクターおよびクローニングベクターは共に、1つまたは複数の選択された宿主細胞中でベクターが複製することができる核酸配列を含む。一般に、クローニングベクターでは、この配列は、宿主染色体DNAと無関係にベクターが複製することができる配列であり、複製起点または自己複製配列が含まれる。このような配列は、種々の細菌、酵母、およびウイルスで周知である。プラスミドpBR322由来の複製起点は、ほとんどのグラム陰性細菌に適切であり、2μプラスミドの複製起点は酵母に適切であり、種々のウイルスの複製起点SV40、ポリオーマ、アデノウイルス、VSV、またはBPVは哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般に、複製起点成分は、哺乳動物発現ベクターに必要ない初期プロモーターを含むので、典型的にはSV40の複製起点のみを使用することができる。選択遺伝子成分発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含み得る。典型的な選択遺伝子は、抗生物質または他の毒素例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセート、またはテトラサイクリンに対する耐性を付与するか、b栄養要求性欠損を補足するか、c天然培地から利用できない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする例えば、バチルス属のD-アラニンラセマーゼをコードする遺伝子。選択スキームの1つの例は、宿主細胞の成長を停止させる薬物を使用する。異種遺伝子で首尾よく形質転換された細胞は、薬物耐性が付与されたタンパク質を産生し、それにより、選択レジメregimenで生存する。このような優性選択dominantselectionの例は、薬物ネオマイシン、ミコフェノール酸、およびハイグロマイシンを使用する。哺乳動物細胞に適切な選択マーカーの別の例は、細胞が抗体核酸を取り込む能力を同定することができる選択マーカーDHFR、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン-IおよびII典型的には、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。例えば、DHFR選択遺伝子で形質転換された細胞を、メトトレキセートMtxDHFRの競合的アンタゴニストを含む培養培地中の全ての形質転換体の培養によって最初に同定する。野生型DHFRを使用する場合の適切な宿主細胞は、DHFR活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣CHO細胞株である。あるいは、本発明のポリペプチド野生型DHFRタンパク質をコードするDNA配列およびアミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼAPHなどの別の選択マーカーで形質転換または同時形質転換された宿主細胞特に、内因性DHFRを含む野生型宿主を、アミノグリコシド抗生物質例えば、カナマイシン、ネオマイシン、またはG418などの選択マーカーのための選択剤を含む培地での細胞増殖によって選択することができる。米国特許第4,965,199号を参照のこと。酵母での使用に適切な選択遺伝子は、酵母プラスミドYrp7中に存在するtrp1遺伝子であるStinchcombetal.,Nature,282:391979。trp1遺伝子により、トリプトファン中で成長能力を欠く酵母変異株例えば、ATCC番号44076またはPEP4-1の選択マーカーが得られる。Jones,Genetics,85:121977。次いで、酵母宿主細胞ゲノム中のtrp1損傷の存在により、トリプトファンの非存在下での成長による形質転換の検出に有効な環境が得られる。同様に、Leu2欠損酵母株ATCC20,622または38,626にLeu2遺伝子を有する公知のプラスミドを補足する。さらに、1.6μm環状プラスミドpKD1由来のベクターを、クリベロミセス属酵母の形質転換に使用することができる。あるいは、K.ラクチスについての組換えウシキモシンの大量生産のための発現系が報告されている。VandenBerg,Bio/Technology,8:1351990。クリベロミセス属の産業株industrialstrainによる成熟組換えヒト血清アルブミン分泌のための安定な多コピー発現ベクターも開示されている。Fleeretal.,Bio/Technology,9:968-9751991。プロモーター成分発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識され、本発明のポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む。原核生物宿主と共に使用するのに適切なプロモーターには、phoAプロモーター、β-ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファンtrpプロモーター系、ならびにtacプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが含まれる。しかし、他の公知の細菌プロモーターも適切である。細菌系で使用されるプロモーターは、本発明のポリペプチドをコードするDNAに作動可能に連結されたシャイン-ダルカルノS.D.配列も含む。真核生物のためのプロモーター配列が公知である。事実上全ての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位から約25~30塩基上流に位置するATリッチ領域を有する。多数の遺伝子の転写開始から70~80塩基上流に見出される別の配列は、CNCAAT領域Nは任意のヌクレオチドであってよいである。ほとんどの真核生物遺伝子の3’末端は、AATAAA配列であり、この配列は、コード配列の3’末端にポリAテールを付加するためのシグナルであり得る。これらの全配列を、真核生物発現ベクターに適切に挿入する。酵母宿主と共に使用される適切なプロモーター配列の例には、3-ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の糖分解酵素エノラーゼなど、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース-6-リン酸イソメラーゼ、3-ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、およびグルコキナーゼのプロモーターが含まれる。成長条件によって調節される転写のさらなる利点を有する誘導性プロモーターである他の酵母プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ2、イソシトクロムC、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連する分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ、およびマルトースおよびガラクトース利用を担う酵素のプロモーター領域である。酵母発現で使用される適切なベクターおよびプロモーターは、欧州特許第73,657号にさらに記載されている。酵母プロモーターと共に酵母エンハンサーを使用することも有利である。哺乳動物宿主細胞中のベクターからの本発明のポリペプチドの転写を、例えば、ポリオーマウイルス、伝染性上皮腫ウイルス、アデノウイルスアデノウイルス2など、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、B型肝炎ウイルス、典型的には、サルウイルス40SV40などのウイルスのゲノムから得たプロモーター、異種哺乳動物プロモーター例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーター、熱ショックプロモータープロモーターが宿主細胞系と適合する場合によって調節する。SV40ウイルスの初期プロモーターおよび後期プロモーターを、SV40ウイルス複製起点も含むSV40制限フラグメントとして得ることが都合が良い。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターを、HindIIIE制限フラグメントとして得ることが都合がよい。ベクターとしてウシ乳頭腫ウイルスを使用した哺乳動物宿主中のDNA発現系は、米国特許第4,419,446号に開示されている。この系の改変は、米国特許第4,601,978号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの調節下でのマウス細胞におけるヒトβ-インターフェロンcDNAの発現については、Reyesetal.,Nature297:598-6011982も参照のこと。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの長末端反復を、プロモーターとして使用することができる。エンハンサーエレメント成分高等真核生物による本発明のポリペプチドをコードするDNAの転写を、しばしば、ベクターへのエンハンサー配列の挿入によって増加させる。現在、哺乳動物遺伝子由来の多数のエンハンサー配列が公知であるグロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン、およびインスリン。典型的には、真核生物細胞ウイルス由来のエンハンサーを使用する。例には、複製起点の後期側bp100~270のSV40エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが含まれる。真核生物プロモーターの活性化エレメントの増強については、Yaniv,Nature297:17-181982も参照のこと。エンハンサーを、ベクター中のポリペプチドコード配列の5’位または3’位にスプライシングすることができるが、典型的には、プロモーターから5’位に配置する。転写終結成分真核生物宿主細胞酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物由来の有核細胞で使用される発現ベクターは、転写終結およびmRNAの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物またはウイルスのDNAまたはcDNAの一般に5’、時折3’の非翻訳領域から利用可能である。これらの領域は、本発明のポリペプチドをコードするmRNAの非翻訳部分にポリアデニル化部位として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。1つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。WO94/11026およびこれに開示されている発現ベクターを参照のこと。宿主細胞の選択および形質転換本明細書中のベクターにおける本発明のポリペプチドをコードするDNAをクローニングまたは発現する適切な宿主細胞は、上記の原核細胞、酵母細胞、または高等真核細胞である。この目的に適切な原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性生物などの真正細菌例えば、腸内細菌科大腸菌属例えば、大腸菌、エンテロバクター、エルウィニア、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ例えば、ネズミチフス菌、セラチア例えば、セラチアマルセスカンス、および赤痢菌など、ならびに桿菌枯草菌、バチルスリケニホルミス例えば、1989年4月12日公開のDD266,710に開示のバチルスリケニホルミス41Pなど、シュードモナス緑膿菌などおよび放線菌類が含まれる。典型的には、大腸菌クローニング宿主は、大腸菌294ATCC31,446であるにもかかわらず、大腸菌B株、大腸菌X1776株ATCC31,537、および大腸菌W3110株ATCC27,325などの他の株も適切である。これらの例は、制限ではなく、むしろ例示である。原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、本発明のポリペプチドをコードするベクターの適切なクローニング宿主または発現宿主である。出芽酵母すなわち、一般的なパン酵母は、下等真核生物宿主微生物で最も一般的に使用されている。しかし、多数の他の属、種、および株分裂酵母;クリベロミセス宿主例えば、クリベロミセスラクチス、K.フラジリスATCC12,424、K.ブルガリクスATCC16,045、K.ウィケラミイATCC24,178、K.ワルチイATCC56,500、K.ドロソフィラルムATCC36,906、K.サーモトレランス、およびK.マルキサヌスなど;ヤロウィア属欧州特許第402,226号;ピキアパストリス欧州特許第183,070号;カンジダ;トリコデルマレエシア欧州特許第244,234号;アカパンカビ;シュワニオマイセスSchwanniomycesシュワニオマイセスオシデンタリスなど;および糸状菌類例えば、パンカビ、アオカビ類、トリポクラジウム、およびアスペルギルス宿主A.ニジュランスおよびクロカビなどなどを本明細書中で一般に利用可能であり、且つ有用である。本発明のグリコシル化ポリペプチドの発現のための適切な宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞および昆虫細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株ならびに改変体および対応する許容状態の昆虫宿主細胞ヨウトガ、ネッタイシマカ、ヒトスジシマカ、キイロショウジョウバエ、およびカイコなどが同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株が公的に利用可能であり例えば、オートグラファカリフォルニカNPVのL-1改変体およびカイコNPVのBm-5株、このようなウイルスを、特にヨウトガ細胞のトランスフェクションのための本発明のウイルスとして使用することができる。ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、およびタバコの植物細胞培養物を、宿主として使用することもできる。しかし、脊椎動物細胞に最も高い関心が寄せられており、培養組織培養での脊椎動物細胞の増殖は日常的手段となりつつある。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、SV40によって形質転換されたサル腎臓CV1株COS-7、ATCCCRL1651;ヒト胚腎臓株293細胞または懸濁培養での増殖についてサブクローン化された293細胞、Grahametal.,J.GenVirol.36:591977;ベビーハムスター腎臓細胞BHK,ATCCCCL10;チャイニーズハムスター卵巣細胞/-DHFRCHO,Urlaubetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:42161980;マウスセルトリ細胞TM4,Mather,Biol.Reprod.23:243-2511980;サル腎臓細胞CV1ATCCCCL70;アフリカミドリサル腎臓細胞VERO-76,ATCCCRL-1587;ヒト子宮頸癌細胞HELA,ATCCCCL2;イヌ腎臓細胞MDCK,ATCCCCL34;バッファローラット肝細胞BRL3A,ATCCCRL1442;ヒト肺細胞W138,ATCCCCL75;ヒト肝細胞HepG2,HB8065;マウス乳癌MMT060562,ATCCCCL51;TRI細胞Matheretal.,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-681982;MRC5細胞;FS4細胞;およびヒト肝細胞腫株HepG2である。宿主細胞を、本発明で産生するポリペプチドのための上記発現ベクターまたはクローニングベクターで形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅に適切なように改変した従来の栄養培地中で培養する。宿主細胞の培養本発明のポリペプチドを産生するのに使用される宿主細胞を、種々の培地中で培養することができる。Ham’sF10Sigma、最少必須培地MEMSigma、RPMI-1640Sigma、およびダルベッコ改変イーグル培地DMEMSigmaなどの市販されている培地が宿主細胞の培養に適切である。さらに、Hametal.,Meth.Enz.58:441979,Barnesetal.,Anal.Biochem.102:2551980、米国特許第4,767,704号;同第4,657,866号;同第4,927,762号;同第4,560,655号;または同第5,122,469号;WO90/03430;WO87/00195;または米国特許再発行30,985号に記載の任意の培地を、宿主細胞の培養培地として使用することができる。これらの培地のいずれかに、必要に応じて、ホルモンおよび/または他の成長因子インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子など、塩塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩など、緩衝液HEPESなど、ヌクレオチドアデノシンおよびチミジンなど、抗生物質ゲンタマイシン商標薬など、微量元素通常、μモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物と定義する、およびグルコースまたは等価なエネルギー源を補足することができる。任意の他の必要な栄養補助剤を、当業者に公知の適切な濃度で含めることもできる。培養条件温度およびpHなどは、発現のために選択した宿主細胞で以前に使用した条件であり、当業者に明らかである。ポリペプチドの精製組換え技術を使用する場合、本発明のポリペプチド例えば、ANGPTL4、本発明の抗体例えば、抗ANGPTL4抗体、抗αVβ5抗体、または抗血管形成分子抗体を、細胞内に産生するか、細胞膜周辺腔中に産生するか、培地に直接分泌させることができる。本発明のポリペプチドを、培養培地または宿主細胞溶解物から回収することができる。膜に結合している場合、適切な界面活性剤溶液例えば、Triton-X100を使用するか、酵素切断によって膜から放出させることができる。本発明のポリペプチド発現で使用される細胞を、種々の物理的手段または化学的手段凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤などによって破壊することができる。組換え細胞のタンパク質またはポリペプチドから本発明のポリペプチドを精製することが望ましいかもしれない。以下の手順は適切な精製手順の例である:イオン交換カラムでの分画;エタノール沈殿;逆相HPLC;シリカでのクロマトグラフィ;陰イオンまたは陽イオン交換樹脂ポリアスパラギン酸カラム、DEAEなどによるヘパリンHAROSE商標クロマトグラフィでのクロマトグラフィ;等電点電気泳動;SDS-PAGE;硫酸アンモニウム沈殿;例えば、SephadexG-75を使用したゲル濾過;IgGなどの夾雑物を除去するためのプロテインASepharoseカラム;および本発明のポリペプチドのエピトープタグ化形態に結合させるための金属キレートカラム。種々のタンパク質精製方法を使用することができ、このような方法は当該分野で公知であり、例えば、Deutscher,MethodsinEnzymology,1821990;Scopes,ProteinPurification:PrinciplesandPractice,Springer-Verlag,NewYork1982に記載されている。選択される精製工程は、例えば、使用される産生過程および産生された本発明の特定のポリペプチドの性質に依存する。例えば、細胞から調製された抗体組成物を、例えば、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、およびアフィニティクロマトグラフィを使用して精製することができ、アフィニティクロマトグラフィが典型的な精製技術である。アフィニティリガンドとしてのプロテインAが適切性であるかどうかは、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンFcドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインAを使用して、ヒトγ1、γ2、またはγ4重鎖に基づいて抗体を精製することができるLindmarketal.,J.Immunol.Meth.62:1-131983。全マウスアイソタイプおよびヒトγ3にはプロテインGが推奨されるGussetal.,EMBOJ.5:156715751986。アフィニティリガンドが結合したマトリクスはほとんどの場合アガロースであるが、他のマトリクスを利用可能である。細孔性ガラスcontrolledporeglassまたはポリスチレンジビニルベンゼンなどの機械的に安定なマトリクスにより、アガロースよりも流速が速くなり、処理時間が短くなる。抗体がCH3ドメインを含む場合、BakerbondABX商標樹脂J.T.Baker,Phillipsburg,NJが精製に有用である。回収される抗体に依存して、他のタンパク質精製技術例えば、上記の技術の利用可能である。大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌された抗体の単離手順を記載しているCarteretal.,Bio/Technology10:163-1671992も参照のこと。薬学的組成物保存のための凍結乾燥処方物または水溶液の形態の本発明のポリペプチド、本発明の分子、およびその組み合わせの治療処方物ならびに本発明にしたがって使用される本明細書中に記載の治療処方物を、所望の精製度のポリペプチドと任意選択的な薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤Remington’sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol,A.Ed.[1980]との混合によって調製する。受容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに無毒であり、緩衝液リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、および他の有機酸の緩衝液など;抗酸化剤アスコルビン酸およびメチオニンが含まれる;防腐剤オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール;アルキルパラベンメチルパラベンまたはプロピルパラベンなど;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;およびm-クレゾールなど;低分子量約10残基未満ポリペプチド;タンパク質血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど;親水性ポリマーポリビニルピロリドンなど;アミノ酸グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなど;モノサッカリド、ジサッカリド、および他の炭水化物グルコース、マンノース、またはデキストリンが含まれる;キレート剤EDTAなど;糖スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなど;塩形成対イオンナトリウムなど;金属複合体例えば、Zn-タンパク質複合体;および/または非イオン性界面活性剤TWEEN商標、PLURONICS商標、またはポリエチレングリコールPEGなどが含まれる。また、有効成分を、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル、およびポリ-メチルメタクリレートマイクロカプセル、コロイド状薬物送達系例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル、またはマクロエマルジョン中に捕捉することができる。このような技術は、Remington’sPharmaceuticalSciences,16thedition,Oslo,A.,Ed.,1980に開示されている。インビボ投与で使用すべき処方物は無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜での濾過によって容易に行われる。徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の適切な例には、本発明のポリペプチドを含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、マトリクスが造形品例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル例えば、ポリ2-ヒドロキシエチル-メタクリレートまたはポリビニルアルコール、ポリラクチド米国特許第3,773,919号、L-グルタミン酸とγエチルL-グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン-ビニルアセテート、分解性乳酸-グリコール酸コポリマーLUPRONDEPOT商標乳酸-グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェアなど、およびポリ-D---3-ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン-ビニルアセテートおよび乳酸-グリコール酸などのポリマーが100日間超にわたって分子を放出することができる一方で、一定のヒドロゲルはより短い期間タンパク質を放出する。カプセル化抗体が体内に長期間保持される場合、抗体は37ECで水分に曝露された結果として変性または凝集し、それにより、生物活性を喪失し、免疫原性が変化する可能性がある。関連する機構に依存した安定化のための合理的ストラテジーを考案することができる。例えば、凝集機構がチオ-ジスルフィド交換による分子内S-S結合形成であることが発見された場合、スルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、含水率の調節、適切な添加物の使用、および特定のポリマーマトリクス組成物の開発によって安定化することができる。多価電解質被膜を有するカプセルを記載している米国特許第6,699,501号も参照のこと。遺伝子療法によって本発明の薬剤ANGPTL4、ANGPTL4アゴニスト、またはANGPTL4アンタゴニストを被験体に移入することができることがさらに意図される。遺伝子療法は、被験体への核酸の投与によって行われる療法をいう。遺伝子療法の適用では、遺伝子を細胞に移入し、例えば、欠失遺伝子の置換のための治療有効遺伝子産物のインビボ合成を行う。遺伝子療法には、1回の治療で持続的効果が得られる従来の遺伝子療法および治療有効DNAまたはmRNAの1回または反復投与を含む遺伝子療法薬の投与が含まれる。アンチセンスRNAおよびDNAを、インビボでの一定の遺伝子の発現の遮断のための治療薬として使用することができる。例えば、本明細書中に記載のAd-ANGPTL4-SiRNAを参照のこと。短鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドをこれらがインヒビターとして作用する細胞に導入することができるが、細胞膜による取り込みの制限によって細胞内濃度が低くなることが既に示されている。Zamecniketal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA83:4143-41461986。例えば、負電荷のホスホジエステル基の非荷電性基への置換によって、オリゴヌクレオチドを修飾して、その取り込みを増強することができる。遺伝子療法の方法の一般的概説については、例えば、Goldspieletal.,ClinicalPharmacy12:488-5051993;WuandWuBiotherapy3:87-951991;TolstoshevAnn.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-5961993;MulliganScience260:926-9321993;MorganandAndersonAnn.Rev.Biochem.62:191-2171993;およびMayTIBTECH11:155-2151993を参照のこと。使用することができる組換えDNAテクノロジー分野で一般的に公知の方法は、Ausubeletal.eds.1993CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons,NY;およびKriegler1990GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NYに記載されている。生存細胞への核酸の移入に利用可能な種々の技術が存在する。核酸が、培養細胞にインビトロで導入されるのか、意図する宿主の細胞にインビボで導入されるのかどうかによって技術は変化する。インビトロでの哺乳動物細胞への核酸の導入に適切な技術には、リポソーム、エレクトロポレーション、微量注入、細胞融合、DEAE-デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法の使用が含まれる。現在好ましいインビボ遺伝子導入技術には、ウイルス典型的には、レトロウイルスベクターでのトランスフェクションおよびコートタンパク質-リポソーム媒介トランスフェクションが含まれるDzauetal.,TrendsinBiotechnology11,205-2101993。例えば、インビボ核酸導入技術には、ウイルスベクターアデノウイルス、単純ヘルペスIウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、またはアデノ随伴ウイルスなどでのトランスフェクションおよび脂質ベースの系脂質媒介性遺伝子導入に有用な脂質は、例えば、DOTMA、DOPE、およびDC-Cholであるが含まれる。遺伝子療法でのウイルスベクターの使用例を、Clowesetal.,J.Clin.Invest.93:644-6511994;Kiemetal.,Blood83:1467-14731994;SalmonsandGunzbergHumanGeneTherapy4:129-1411993;GrossmanandWilsonCurr.Opin.inGeneticsandDevel.3:110-1141993;Boutetal.,HumanGeneTherapy5:3-101994;Rosenfeldetal.,Science252:431-4341991;Rosenfeldetal.,Cell68:143-1551992;Mastrangelietal.,J.Clin.Invest.91:225-2341993;およびWalshetal.,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204:289-3001993に見出すことができる。いくつかの状況では、標的細胞をターゲティングする薬剤細胞表面膜タンパク質または標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上の受容体のリガンドなどを核酸供給源に提供することが望ましい。リポソームを使用する場合、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質を、例えば、特定の細胞型に向かうキャプシドタンパク質またはそのフラグメント、循環時に内在化を受けるタンパク質の抗体、細胞内局在化をターゲティングして細胞内半減期を増強するタンパク質のターゲティングおよび/または取り込みの促進のために使用することができる。受容体媒介性エンドサイトーシス技術は、例えば、Wuetal.,J.Biol.Chem.262,4429-44321987;およびWagneretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA87,3410-34141990に記載されている。遺伝子の作製および遺伝子治療プロトコールの概説については、Andersonetal.,Science256,808-8131992を参照のこと。投薬量および投与公知の方法ボーラスとしての静脈内投与、長期間にわたる連続的注入、筋肉内投与、腹腔内投与、脳脊髄内intracerobrospinal投与、皮下投与、関節内投与、髄液嚢内投与、鞘内、経口投与、局所投与、または吸入経路、および/または皮下投与などにしたがって、本発明の分子を、ヒト患者に投与する。特定の実施形態では、本発明の治療は、ANGPTL4アンタゴニストと1つまたは複数の抗癌薬例えば、抗血管形成薬との組み合わせ投与を含む。一実施形態では、さらなる抗癌薬例えば、1つまたは複数の異なる抗血管形成薬、1つまたは複数の化学療法薬などが存在する。本発明はまた、複数のインヒビター例えば、同一抗原に対する複数の抗体または異なる癌活性分子に対する複数の抗体の投与を意図する。一実施形態では、異なる化学療法薬のカクテルを、ANGPTL4アンタゴニストおよび/または1つまたは複数の抗血管形成薬と共に投与する。組み合わせ投与には、個別の処方物または単一の薬学的処方物を使用した同時投与および/またはいずれかの順序での連続投与が含まれる。例えば、ANGPTL4アンタゴニストは、抗癌薬の前、後、交互に投与することができるか、同時に投与することができる。一実施形態では、両方のまたは全ての活性成分activeagentがその生物活性を同時に発揮する期間が存在する。疾患の防止または治療のために、ANGPTL4アンタゴニストの適切な投薬量は、上記定義の治療すべき疾患の型、疾患の重篤度および経過、防止または治療目的でインヒビターを投与しているかどうか、以前の治療、患者の病歴およびインヒビターに対する応答性、ならびに主治医の判断に依存する。インヒビターを、1回または治療を通して患者に適切に投与する。併用療法の投与計画では、本発明の組成物を、治療有効量または治療的に相乗効果のある量で投与する。本明細書中で使用される、治療有効量は、本発明の組成物の投与および/またはANGPTL4アンタゴニストおよび1つまたは複数の治療薬の同時投与によってターゲティングされる疾患または容態が軽減または阻害される量である。薬剤の組み合わせの投与効果は付加的であり得る。一実施形態では、投与の結果は、相乗効果である。治療的に相乗効果のある量は、特定の疾患に関連する容態または症状を相乗的または有意に軽減または排除するのに必要なANGPTL4アンタゴニストおよび1つまたは複数の他の治療薬例えば、血管形成インヒビターの量である。疾患の型および重篤度に依存して、約1μg/kg~50mg/kg例えば、0.1~20mg/kgのANGPTL4アンタゴニストまたは血管形成インヒビターは、例えば、1つまたは複数の個別の投与または連続注入による患者の投与のための第1の候補投薬量である。典型的な1日量は、上記要因に依存して、約1μg/kg~約100mg/kgまたはそれ以上の範囲であり得る。数日間またはそれを超える繰り返し投与のために、容態に依存して、疾患の症状が望ましく抑制されるまで治療を継続する。しかし、他の投薬計画が有用であり得る。典型的には、臨床医は、本発明の分子を、必要な生物学的効果が得られる投薬量に到達するまで投与する。本発明の治療過程を、従来の技術およびアッセイによって容易にモニタリングする。例えば、血管形成インヒビター例えば、AVASTIN登録商標Genentechなどの抗VEGF抗体の調製および投与計画を、製造者の説明者にしたがって使用するか、当業者によって経験的に決定することができる。別の例では、このような化学療法薬の調製および投与計画を、製造者の説明者にしたがって使用するか、当業者によって経験的に決定することができる。化学療法薬の調製および投与計画は、ChemotherapyServiceEd.,M.C.Perry,WilliamsWilkins,Baltimore,MD1992にも記載されている。治療有効性本発明の治療有効性を、新生物障害または非新生物障害の評価で一般的に使用されている種々の終点によって測定することができる。例えば、癌治療を、例えば、腫瘍の緩解、腫瘍重量、またはサイズの縮小、無増悪期間、生存期間、無増悪生存率、全奏功率、奏功期間、および生活の質によって評価することができる。本明細書中に記載の抗血管形成薬が腫瘍血管系をターゲティングし、必ずしも新生物細胞自体ではないので、抗血管形成薬は固有の抗癌薬クラスを示し、それにより、薬物に対する臨床反応を固有に測定および定義する必要があり得る。例えば、二次元分析における50を超える腫瘍の縮小は、応答を宣言するための標準的なカットオフである。しかし、本発明のインヒビターは、原発性腫瘍を縮小させることなく転移の拡大を阻害することができるか、単純に腫瘍静止効果tumouristaticeffectを発揮することができる。したがって、治療法の有効性を決定するアプローチ例えば、血管形成の血漿マーカーまたは尿マーカーの測定および放射線画像化による応答の測定が含まれるを使用することができる。一実施形態では、本発明を、非新生物障害または新生物障害例えば、癌に感受性を示すか診断されたヒト患者の生存期間を増加させるために使用することができる。生存期間を、最初の薬物の投与から死亡までの時間と定義する。1つの態様では、本発明のANGPTL4アンタゴニストを、1つまたは複数の抗癌薬と組み合わせてヒト患者に投与し、それにより、1つの治療型のみと比較して患者の生存期間が有効に増加する例えば、1つの治療型と比較して、約5の増加、約10の増加、約20の増加、約30の増加、約40の増加、あるいは約50またはそれを超える増加。別の実施形態では、本発明は、非新生物障害または新生物障害例えば、癌に感受性を示すか診断されたヒト患者の無増悪生存率を増加させる方法を提供する。疾患の進行期間を、薬物の投与から疾患が進行するまでの時間と定義する。一実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストおよび1つまたは複数の抗癌薬の本発明の併用療法により、抗癌薬のみと比較して、少なくとも約2ヶ月、少なくとも約4ヶ月、少なくとも約6ヶ月、少なくとも約8ヶ月、1年またはそれを超えて無増悪生存率が有意に増加する。さらに別の実施形態では、本発明の治療により、種々の治療法で治療した癌に感受性を示すか癌と診断されたヒト患者群で応答率が有意に増加する。応答率を、治療に応答した治療患者の比率と定義する。本発明の一実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストおよび1つまたは複数の抗癌薬を使用した本発明の併用療法により、単一の癌療法例えば化学療法のみでの治療群と比較して、この治療患者群の応答率が有意に増加し、この増加のカイ2乗p値は、例えば、0.010未満、0.005未満、または0.001未満である。1つの態様では、本発明は、癌に感受性を示すか癌と診断されたヒト患者またはヒト患者群の応答期間を増加させる方法を提供する。応答期間を、最初の応答から疾患の進行までの時間と定義する。本発明の特定の実施形態では、ANGPTL4アンタゴニストおよび1つまたは複数の抗癌薬を使用した本発明の併用療法により、例えば、応答期間を、例えば、少なくとも2ヶ月、少なくとも4ヶ月、少なくとも6ヶ月統計的に有意に増加させることができる。製品本発明の別の実施形態では、上記の障害の治療に有用な材料を含む製品を提供する。製品は、容器、ラベル、および添付文書を含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが含まれる。容器を、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成することができる。容器は、容態治療に有効な組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る例えば、容器は、皮下注射針で突き刺すことができるストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであり得る。組成物中の少なくとも1つの活性成分は、ANGPTL4モジュレーターである。容器上または容器に封入したラベルは、最適な容態の治療のために組成物を使用することを示す。製品は、さらに、薬学的に受容可能な緩衝液リン酸緩衝化生理食塩水など、リンゲル液、およびデキストロース溶液を含む第2の容器を含み得る。製品は、さらに、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料さらなる活性成分、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、ニードル、およびシリンジが含まれるを含む。材料の寄託以下の材料を、AmericanTypeCultureCollection,10801UniversityBoulevard,Manassas,VA.20110-2209,USAATCCに寄託した。特許手続き上の微生物寄託の国際的承認に関するブダペスト条約ブダペスト条約の下に寄託を行った。これにより、寄託日から30年間寄託物が生きたまま確実に維持される。寄託物を、ブダペスト条約の条項に従い、且つGenentech,Inc.とATCCとの間の合意を条件としてATCCから利用可能であり、適切な米国特許の発行時または任意の米国または外国特許出願の公開時にいずれが最初であっても寄託物の培養物の子孫の公的な恒久的且つ無制限の利用が保証され、合衆国法典第35巻第122条およびこれに準拠する米国特許商標局の規則連邦規則集第37巻第1.14条886OG638を特に参照するが含まれるに従って米国特許商標局長によって権利を与えると決定された者の子孫の利用が保証される。出願の譲受人は、寄託した材料の培養物が適切な条件下での培養時に死滅、紛失、または破壊された場合、通知の際に材料を別の寄託物と迅速に取り替えることに同意している。特許法にしたがって任意の政府当局で付与された権利に違反して、寄託材料の利用が発明の実施を許可すると解釈されない。本明細書中に記載の寄託物、実施例、および実施形態は例示のみを目的とし、これらを考慮して種々の修正形態または変更形態が当業者に示唆され、これらが本出願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれると理解される。実施例で言及した市販の試薬を、他で示さない限り、製造者の説明書に従って使用した。実施例1:ANGPTL4は、腫瘍細胞の増殖および細胞移動を刺激するアデノウイルスベクターの生成および形質導入。アデノウイルス構築物を、本質的に製造者が説明するように、StratageneLaJolla,CAのAd-easyベクター構築キットのポリリンカー部位へのNot1-Not1cDNAインサートのクローン化によって構築した。例えば、Hesseretal.,Blood,1041:149-1582004を参照のこと。hAngptl423-406PUR9384、mAngptl4184-410-IgGPUR9388、およびmAngptl423-410PUR9452シングルフラッグタグ化タンパク質の生成。採取した細胞培養液を、抗flagM2樹脂SigmaA-2220に一晩通過させた。カラムを、PBSでベースラインまで洗浄し、50mMクエン酸ナトリウムpH3.0で溶離した。この体積を、Amicon-1510,000MWCOMilliporeUFC901024で濃縮した。最終工程は、1mMHCl/SuperQ水への透析および0.2μmの濾過であった。4~20のトリス/グリシンInvitrogenEC6028boxSDSpageゲル/-10mMDTTを使用して、純度を決定した。正確なタンパク質を、質量分析またはエドマンN末端配列決定によって同定した。hAngptl4184-406-IgGPUR9441N末端フラッグタグおよびその後の連続したN末端huFcタグの生成。採取した細胞培養液を、ProSepAAmersham113111835に一晩通過させた。次いで、カラムを、PBSでベースラインまで洗浄した。次いで、4カラム体積の0.5MTMAC/PBSpH7.5洗浄工程を行い、その後、ベースラインまでPBS洗浄を行った。溶離工程は、50mMクエン酸ナトリウムpH3.0バンプbumpであった。この体積を、Amicon-1510,000MWCOMilliporeUFC901024で濃縮した。最終工程は、1mMHCl/SuperQ水への透析および0.2μmの濾過であった。4~20のトリス/グリシンInvitrogenEC6028boxSDSpageゲル/-10mMDTTを使用して、純度を決定する。正確なタンパク質を、質量分析またはエドマンN末端配列決定によって同定した。当該分野で公知の標準的技術を使用して、組換えタンパク質を作製することもできる。Ad-ANGPTL4-SiRNAの生成。4つの潜在的なANGPTL4-SiRNA分子Qiagenを、全長hANGPTL4配列に基づいて生成した。1つのANGPTL4-SiRNAを、SiRNAがhANGPTL4発現を阻害する能力に基づいて選択した。これは、以下のANGPTL4のDNA標的配列GTGGCCAAGCCTGCCCGAAGA配列番号3をターゲティングした例えば、rGGCCAAGCCUGCCCGAAGAUU配列番号4および/またはrUCUUCGGGCAGGCUUGGCCAC配列番号5。SiRNAを、RNAプロモーター例えば、H1プロモーターGenScriptを含むCMVpShuttle-H1.1導入ベクターにクローン化した。次いで、SiRNA発現カセットをクローン化して、アデノウイルスAdhANGPTL4-SiRNA構築物を生成した。例えば、アデノウイルス構築物を、本質的に製造者が説明するように、StratageneLaJolla,CAのAd-easyベクター構築キットのポリリンカー部位へのNot1-Not1cDNAインサートのクローン化によって構築した。例えば、Hesseretal.,Blood,1041:149-1582004を参照のこと。ANGPTL4の発現を、抗FLAG抗体を使用したウェスタンブロッティング分析によって検証した。製造者の説明書にしたがって、1つの強く発現するクローンを選択し、力価を増幅した。ウイルス調製物を、CsCl遠心分離によって精製し、PCRによって復帰変異体について試験した。製造者の説明書にしたがって、ウイルス力価を、96ウェル細胞溶解実験によって決定した。これらのベクターを、提供されたpShuttleCMV-lacZと共に、E1およびE3領域が欠失したAd5ゲノムを含むAdEasyベクターを含むBJ5183エレクトロコンピテント細菌中で組み換えた。初代ウイルスストックを、宿主HEK293細胞への組換えAdEasyプラスミドの一過性トランスフェクションによって調製した。アデノウイルスストックを、HEK293細胞中でさらに増幅し、製造者が記載のように、CsCl勾配精製法を使用して精製した。アデノウイルス作用力価workingtiterを、Elisaアッセイによって得た。mANGPTL4の生成。293細胞を、全長mANGPTL41~410をコードする核酸を含む構築物で一過性にトランスフェクトした。mANGPTL4を上清から精製し、実験に使用した。インビトロでの腫瘍細胞増殖。ANGPTL4は、インビトロで、ヒトA673横紋筋肉腫腫瘍細胞HTB1598の増殖を刺激した。図4のパネルAを参照のこと。以前に記載のように、Ad-Angptl4、Ad-LacZ、Ad-Angptl13のアデノウイルス構築物を生成したHesseretal.,Blood,1041:149-1582004。A673細胞を、感染多重度MOI100にて、アデノウイルス-ANGPTL4構築物Ad-Angptl4、コントロールとしてのアデノウイルス-LacZ構築物Ad-LacZ、またはアデノウイルス-ANGPTL3構築物Ad-Angptl3を含むいずれかの構築物で形質導入した。5FCS高グルコースDMEM中でのA673細胞の3日間の増殖後、細胞を計数した。図4のパネルAに示すように、Ad-Angptl4は腫瘍細胞増殖を刺激した。Ad-LacZコントロールと比較して、Ad-Angptl4で処置した細胞において、約2倍を超える細胞数の増加が認められた。Ad-Angptl4はまた、コントロールと比較して、MCF7細胞ヒト乳腺腫の増殖を約3倍、TK10細胞腎細胞癌株の増殖を約2倍、A549細胞ヒト肺癌の増殖を約1.5倍に刺激した。Ad-Angptl4はまた、U87MG細胞の増殖を刺激した。細胞A673、U87MG、4T-1、またはCakiを、感染多重度MOI500にて、アデノウイルス-ANGPTL4構築物Ad-Angptl42、コントロールとしてのアデノウイルス-LacZ構築物Ad-LacZ1、またはアデノウイルスANGPTL4-SiRNA構築物3を含むいずれかの構築物で形質導入した図4のパネルBを参照のこと。5FCS高グルコースDMEM中での細胞の2~3日間の増殖後、細胞を計数した。ANGPTL4で形質導入したCOS細胞由来の馴化培地もA673細胞の増殖を誘導した。図4のパネルCを参照のこと。アデノウイルス構築物Ad-Angptl42、Ad-LacZ1、またはAd-Angptl33で形質導入した肝細胞HepaA、ヒト微小血管内皮細胞HMEC細胞B、またはCOS7C由来の馴化培地を、A673細胞に添加した。5FCS高グルコースDMEM中でのA673細胞の4日間の増殖後、細胞を計数した。図4のパネルCに示すように、COS細胞Ad-Angptl4由来の上清は、コントロールおよび使用した他の細胞型肝細胞およびHMVEC細胞由来の上清と比較して、腫瘍細胞増殖を刺激した。培養皿にコーティングした場合のAngptl4活性。Angptl4によるA673細胞の増殖も、培養皿へのタンパク質のコーティングによって試験した。プレートを、種々の濃度で例えば、コーティングなし、0.3μg/ml、3.0μg/ml、または30μg/ml、マウスAngptl4、LZ-hANgptl4、フィブロネクチン、NL4コントロールタンパク質、IgG-hAngptl4184~406、mAngptl3、hAngptl3、mAngptl423~410、Lz-hAngptl4184~406、Fc-hAngptl4184~406、またはBSAでコーティングした。96ウェル平底プレートMaxiSorp,Nunc,Denmarkを、4°Cで一晩コーティングした。ヒトA673腫瘍細胞を採取し、5FCSを含むHG-DMEM培地中で105細胞/mlに希釈した。200μlの細胞懸濁液104細胞/ウェルを、コーティングしたウェルに添加し、プレートを、37°Cで選択された期間インキュベートした。非接着細胞をPBS洗浄によって除去し、クリスタルバイオレットまたはLandegrenのPNAS法を使用して細胞付着を測定した。Landegren,U.1984J.Immunol.Methods67:379-388を参照のこと。結果を、3連のウェルの平均OD550値またはOD405値で示す。同様に、ヒト臍帯またはヒト腎臓Cambrexのいずれかから単離したヒト初代臍静脈内皮細胞HUVECの上皮細胞epiおよびメサンギウム細胞mesaを採取し、同一条件の使用によって試験した。増殖アッセイのために、製造者Cambrexによって各細胞型のために供給された培地を使用した。ANGPTL4は、腎臓上皮細胞、腎臓メサンギウム細胞、またはヒト臍静脈内皮細胞HUVECの増殖を誘導しないようであるが、A673の増殖を誘導しなかった図5。A673細胞へのANGPTL4結合のFACS分析。ヒトA673細胞へのANGPTL4の結合を、FACS分析によって試験した。A673細胞を、10cm培養皿に500,000~1×106細胞/サンプルウェルでプレートした。FACSの前日に、細胞を分割した。細胞を、PBSで1回洗浄し、10mlの20mMEDTAを含むPBSを添加し、10~20分間インキュベートした。20分後、プレートから細胞を擦り取った。10mlの5FCSを含むPBSを添加し、細胞を、50mlFalconチューブに移した。細胞を、1.8Krpmにて4°Cで5分間スピンした。上清を除去し、細胞を、1mlの5FCSを含むPBSに再懸濁した。100μlの細胞懸濁液を、1μgのタンパク質を含む5mlFACSチューブに分布させ、氷上で30分以上インキュベートした。以下のタンパク質を使用した:mAngptl423~410、PUR9452、0.428mg/ml2μl/サンプル;hAngptl423~406、PUR9384、/-90μg/ml10μl/サンプル;hAngptl4184~406-IgG、PUR9441、1.5mg/ml1μl/サンプル;およびコントロールFLAG-BAPSigma0.1mg/ml2μl/サンプル。インキュベーション後、チューブを、氷上5mlの5FCSを含むPBSで満たした。細胞を、2Krpmで5分間スピンした。上清を除去した。抗FLAG-FITC抗体Sigmaを添加し2μlの抗体100μg/mlストック、氷上で5分以上インキュベートした。最終抗体濃度は、1μg/mlであった。5mlの5FCSを含むPBSを添加し、細胞を1.8Krpmにて4°Cで5分間スピンした。上清を除去し、細胞を、氷上で5FCSを含む0.25mlPBS中に再懸濁した。受容体内在化を防止するための0.05アジ化ナトリウムも存在させることができる。サンプルあたり1μlの50倍希釈したヨウ化プロピジウムPIのストックを添加することができる。次いで、細胞を、FACSに供した。種々の条件下で図6のパネルB酸素正常状態、低酸素状態0O2で24時間、またはPMA200nMで24時間種々のANGPTL4形態ヒトおよびマウスANGPTL4がA673細胞図6のパネルAに結合した。低酸素状態試験のために、細胞を、5CO2にて37°Cで24時間インキュベートし、95N2で24時間インキュベートした。あるいは、細胞を、37°Cのインキュベーター中にて200nMホルボールエステルPMAの存在下、5CO2、および酸素正常状態で活性化した。ANGPTL4を発現する細胞由来の馴化培地。Angptl4を発現する細胞由来の馴化培地を使用するか組換えAngptl4を添加した場合のA673細胞の増殖を試験した。アデノウイルス構築物Ad-Angptl42、Ad-LacZ1、またはAd-LacZrmAngptl423~41035μg/mlで形質導入したCOS7由来の500μlの馴化培地上清を、A673細胞に添加した。5FCS高グルコースDMEMを含む培地中で7日間細胞を増殖させた後図7のパネルA、細胞を計数した。5FCSを含む培地への組換えAngptl4の添加および4日間の細胞の増殖によってもA673増殖を試験した。添加せず1、緩衝液コントロール2、mAngptl423~4102.5μg/ml3、hAngptl423~4062.5μg/ml4、hIgG-hAngptl4184~4062.5μg/ml5、またはhIgG-mAngptl4184~4102.5μg/ml6のいずれかを、示した濃度で培地に添加した。5FCS高グルコースDMEMを含む培地中で4日間細胞を増殖させた後図7のパネルB、細胞を計数した。培地に添加したANGPTL4または組換えタンパク質を発現する細胞由来の馴化培地によるA673細胞の増殖は、細胞密度に依存し得る。図7のパネルA示した条件下で7日間増殖させた場合の細胞増殖およびパネルB示した条件下で4日間増殖させた場合の細胞増殖を参照のこと。Angptl4は細胞移動を誘導する。本発明者らは、Angptl4がマウス4T-1腫瘍細胞の細胞移動を誘導する能力を試験した。細胞運動性を、孔サイズ3μmのHTSマルチウェル組織培養インサートBectonDickinson,NJを使用して、記載のように測定した例えば、Camenisch,etal.,J.Biol.Chem.,27719:17281-172902002を参照のこと。hANGPTL41~406を、50/50/0.1BSAで5、1、および0.2μg/mlに希釈した。正のコントロールとして、膜を、培地または0.1μg/mlの組換えヒトPDGF-BBRDSystemsを含む10ウシ胎児血清FCSとインキュベートした。50/50/0.1BSAを、負のコントロールとして使用した。マウス4T1腫瘍を、PBSで3回洗浄し、採取し、約105細胞/mlを含む50/50/0.1BSA中に再懸濁した。mANGPTL4をNL2と示す以下の細胞調製物を試験した。調製物を下の室に添加し、調製物を37°Cで19時間インキュベートした。細胞懸濁液250μlを下の室に添加し、細胞を、37°Cで一晩5CO2加湿インキュベーター中に移動させた。インキュベーション後、上および下の室から培地を吸引し、より下の膜表面に移動した細胞を、メタノールで固定し400μlのMeOHにて4°Cで30分間固定し、MeOHを除去し、40分間風乾する、ヨウ化YO-PRO-1MolecularProbes,OR400μlのヨウ化YO-PRO-110μm1mMストックの100倍希釈物で染色した。移動の結果を、OpenlabソフトウェアImprovision,MAを使用した20倍での顕微鏡視野あたりの平均細胞数として定量する。別の実験では、Angptl4は、4T-1腫瘍細胞の移動に伴ってA673細胞の移動を誘導することが見出された。mANGPTL4を、50/50/0.1BSAで6、1.5、および0.375μg/mlに希釈した。正のコントロールとして、膜を、培地または0.1μg/mlの組換えヒトPDGF-BBRDSystemsを含む10ウシ胎児血清FCSとインキュベートした。50/50/0.1BSAを、負のコントロールとして使用した。4T-1およびA673細胞を採取し、50/50/0.1BSAに再懸濁した2×105細胞/ml。mANGPTL4をNL2と示す以下の細胞調製物を試験した。調製物を750μlの下の室に添加し、調製物を37°Cで19時間インキュベートした。細胞懸濁液250μl5×104を下の室に添加し、細胞を、37°Cで7時間5CO2加湿インキュベーター中に移動させた。インキュベーション後、上および下の室から培地を吸引し、より下の膜表面に移動した細胞を、メタノールで固定し400μlのMeOHにて4°Cで30分間固定し、MeOHを除去し、40分間風乾する、ヨウ化YO-PRO-1MolecularProbes,OR400μlのヨウ化YO-PRO-110μm1mMストックの100倍希釈物で染色した。移動の結果を、OpenlabソフトウェアImprovision,MAを使用した20倍での顕微鏡視野あたりの平均細胞数として定量する。1血清を添加せず、210ウシ胎児血清FCSを添加し、3PDGF-BBを添加し、4ANGPTL4を添加した図9を参照のこと。ANGPTL4および10FCSの両方を使用して、A673細胞および4T-1細胞が移動した。したがって、Angptl4に対するアンタゴニストを使用して、例えば、1つの理論に拘束されないが、腫瘍細胞の移動の防止によって転移を阻害することができる。ANGPTL4はインビボで腫瘍サイズを増加させる。ヒトA673横紋筋肉腫細胞HTB1598を、以前に記載のように培養したKimetal.,Nature362:841-8441993;およびGerberetal.,CancerResearch,60:6253-62582000。5×106個のA673細胞を含む0.1mlのMatrigelを、ベージュヌードマウスHarlanSpragueDawleyの背側の側腹部に皮下注射して異種移植片を確立させた。アデノウイルス構築物を、7日毎に1、7、および14日目に1×108プラーク形成単位PFUで腫瘍内にIT注射した。28ゲージの針および0.5mlのツベルクリンシリンジを使用して、腫瘍塊の側面および底面に直接注射した。アデノウイルス構築物は、アデノウイルス-ANGPTL4構築物Ad-Angptl4、コントロールとしてのアデノウイルス-LacZ構築物Ad-LacZ、またはアデノウイルス-ANGPTL3構築物Ad-Angptl3であった。腫瘍移植から種々の日数で腫瘍サイズを決定した。2日毎に腫瘍サイズを測定し、楕円体積の式π/6×L×W×H式中、L=長さ、W=幅、H=高さ;TomaykoReynolds,CancerChemother.Pharmacol.,24:148-1541989を使用して腫瘍体積を計算した。図8に示すように、腫瘍サイズパネルAおよび重量パネルBは、Ad-LacZまたはAd-Angptl3構築物と比較して、A673細胞およびアデノウイルス-ANGPTL4構築物Ad-Angptl4を注射したマウスで統計的に増加したP<0.0001。実施例2:ANGPTL4で処置した腫瘍の抗VEGF治療から回避する傾向ANGPTL4は、抗血管形成薬例えば、抗VEGFAVASTIN登録商標Genentech,SouthSanFranciscoなどで処置した腫瘍における腫瘍細胞増殖を刺激した。図8のパネルCを参照のこと。ヒトA673横紋筋肉腫細胞HTB1598を、以前に記載のように培養したKimetal.,Nature362:841-8441993;およびGerberetal.,CancerResearch,60:6253-62582000。5×106個のA673細胞を含む0.1mlのMatrigelを、ベージュヌードマウスHarlanSpragueDawleyの背側の側腹部に皮下注射して異種移植片を確立させた。アデノウイルス構築物を、7日毎に1、7、14、21、28日目に1×108プラーク形成単位PFUで腫瘍内にIT注射した。アデノウイルス構築物は、アデノウイルス-ANGPTL4構築物Ad-Angptl4、コントロールとしてのアデノウイルス-LacZ構築物Ad-LacZ、またはアデノウイルス-ANGPTL3構築物Ad-Angptl3であった。マウスにAvastin登録商標Genentechを、5mg/kgの用量で1週間に2回腹腔内を処置した。28ゲージの針および0.5mlのツベルクリンシリンジを使用して、腫瘍塊の側面および底面に直接注射した。2日毎に腫瘍サイズを測定し、楕円体積の式π/6×L×W×H式中、L=長さ、W=幅、H=高さ;TomaykoReynolds,CancerChemother.Pharmacol.,24:148-1541989を使用して腫瘍体積を計算した。図8のパネルCに示すように、腫瘍サイズは、AVASTIN登録商標治療と組み合わせたAd-LacZまたはAd-Angptl3構築物を含む細胞を注射したマウスと比較して、AVASTIN登録商標で処置したにもかかわらず、A673細胞およびアデノウイルス-ANGPTL4構築物Ad-Angptl4を注射したマウスで増加した。実施例3:ANGPTL4に結合する抗体は、腫瘍細胞増殖を阻害する抗ANGPTL4抗体がANGPTL4の生物活性例えば、腫瘍細胞の増殖を阻害する能力を試験した。1×104腫瘍細胞例えば、HeLa-S3、Caki、U87MG、293、A673、HM7、およびCalu6/ウェルを、10FCSを含む培地中の12ウェルプレートにプレートした。細胞を、5CO2加湿インキュベーター中にて37°Cで一晩インキュベートした。培地を、5FCSと交換し10FCSを含むCalu6細胞以外、1、2.5、5、または10μg/mlの抗hANGPTL4抗体または抗Dscrをウェルに添加するか、抗体を添加しなかった。プレートを、37°Cの5CO2加湿インキュベーター中に入れた。抗hANGPTL4抗体の添加から2または3日後に細胞を計数した。抗ANGPTL4抗体は、HeLa-S3、CakiU87MG、293、A673、およびCalu6の細胞成長を阻害したが、HM7細胞は阻害されなかった。図10のパネルAおよびBを参照のこと。実施例4:ANGPTL4に結合する抗体の調製ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の産生技術は、当該分野で公知であり、本明細書中に記載されている。使用することができる抗原または免疫原には、本発明の精製タンパク質、タンパク質フラグメント、このようなタンパク質を含む融合タンパク質、ならびに細胞表面上に組換えタンパク質および/またはタンパク質フラグメントを発現する細胞が含まれる。当業者は、過度に実験することなく、抗原を選択することができる。Balb/cなどのマウスを、フロイント完全アジュバント中に乳化した抗原で免疫化し、約1~100マイクログラムの量で皮下または腹腔内に注射した。あるいは、抗原をMPL-TDMアジュバントRibiImmunochemicalResearch,Hamilton,Mont.中に乳化し、動物の後足の足蹠に注射した。次いで、免疫化マウスを、10~12日後に、選択したアジュバント中で乳化したさらなる抗原で追加免疫する。その後、数週間、マウスを、さらなる免疫化注射で追加免疫することもできる。抗体を検出するためのELISAアッセイ試験のための血清サンプルを、眼窩後出血によってマウスから定期的に得ることができる。適切な抗体力価を検出した後、抗体に対して陽性の動物に、所与のリガンドの最終静脈内注射を用いて注射することができる。3~4日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を採取する。次いで、脾臓細胞を、ATCC番号CRL1597から利用可能なP3X63AgU.1などの選択されたマウス骨髄腫細胞株に融合する35ポリエチレングリコールを使用する。融合物はハイブリドーマ細胞を生成し、その後に、非融合細胞、骨髄腫細胞、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害するためのHATヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン培地を含む96ウェル組織培養プレートにプレートすることができる。ハイブリドーマ細胞を、抗原に対する反応性についてELISAでスクリーニングする。ANGPTL4に対して所望のモノクローナル抗体を分泌する陽性ハイブリドーマ細胞の決定は、当業者の範囲内である。陽性ハイブリドーマを同系Balb/cマウスに腹腔内注射して、抗ANGPTL4モノクローナル抗体を含む腹水を産生することができる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコまたはローラーボトル中で増殖させることができる。腹水中に産生されたモノクローナル抗体を、硫酸アンモニウム沈殿、その後のゲル排除クロマトグラフィによって精製することができる。あるいは、プロテインAまたはプロテインGへの抗体の結合に基づいたアフィニティクロマトグラフィを使用することができる。例えば、ウサギポリクローナル抗体を、1、40、および70日目に大腸菌で生成された500μgの組換えヒトANGPTL4タンパク質23~406でのウサギの免疫化によって生成した。免疫化から80日後および120日後に血清を採取し、プロテインAsephadexカラムによって抗体を精製した。実施例5:遮断抗体または中和抗体本明細書中に記載の抗体を、当該分野で公知の種々の技術例えば、ELISAによって同定することができる。例えば、プレートを、目的のポリペプチド例えば、ANGPTL4またはそのフラグメントでコーティングし、このポリペプチド例えば、ANGPTL4に対して生成された抗体とインキュベートした例えば、米国特許第6,348,350号、同第6,372,491号、および同第6,455,496号の説明を参照のこと。結合した抗体を、種々の方法によって検出することができる。アンタゴニスト例えば、遮断または中和抗体を、競合アッセイおよび/または活性アッセイによって同定することができる。例えば、ANGPTL4の発現は、腫瘍細胞の増殖、移動、接着、またはαVβ5への結合を刺激する。ANGPTL4に対する遮断抗体または中和抗体の決定を、抗体が腫瘍細胞の増殖例えば、図10のパネルAおよびBを参照のこと、移動、接着例えば、図12を参照のこと、またはαVβ5への結合USBiological,37K,Swampscott,Massachusetts例えば、図13のパネルBおよびCを参照のことを遮断する能力によって示すことができる。例えば、A673横紋筋肉腫細胞をプレートし、抗ANGPTL4抗体、コントロール抗体、またはPBSと共にAd-hAngptl4で形質導入されたCOS7細胞由来の上清とインキュベートした。7日後細胞を、トリプシン処理し、計数することができる。細胞数を減少させる抗体を、遮断抗体または中和抗体と定義する。ANGPTL4はまた、腫瘍細胞の細胞移動を誘導し、血管形成促進因子であることが示されていた。例えば、LeJanetal.,AmericanJournalofPathology,1645:1521-15282003を参照のこと。したがって、ANGPTL4に対する中和抗体を、腫瘍細胞移動アッセイおよび/または血管形成アッセイ例えば、CAMアッセイにおいてANGPTL4と組み合わせて抗体を使用することによって同定することができる。腫瘍成長の遮断もしくは減少または癌細胞増殖の遮断または減少で使用することができるANGPTL4に対する遮断抗体および中和抗体を、上記の培養および/またはベージュ/ヌードマウス研究における腫瘍細胞の使用によって同定することができる。例えば、ヌードマウスに腫瘍細胞を注射することができる。腫瘍細胞が確立された種々の期間に、マウスに、種々の用量の遮断または中和ANGPTL4抗体、抗体コントロール、またはPBSを1週間に1回または2回腹腔内に注射することができる。腫瘍サイズを毎週測定することができ、研究終了時に、腫瘍を切り出して秤量することができる。マウス内の腫瘍成長を遮断するかまたは減少させる遮断または中和ANGPTL4抗体を同定する。腫瘍成長を遮断するかまたは減少させるか、癌細胞増殖を遮断するかまたは減少させるANGPTL4抗体と抗血管形成薬との組み合わせを、上記の培養および/またはベージュ/ヌードマウス研究における腫瘍細胞の使用によって同定することができる。上記のように、ヌードマウスに腫瘍細胞を注射することができる。腫瘍細胞が確立された種々の期間に、マウスに、種々の用量のANGPTL4アンタゴニストと抗癌薬例えば、抗VEGF抗体などの抗血管形成薬との組み合わせ、またはANGPTL4アンタゴニスト、抗癌薬、抗体コントロール、もしくはPBSを1週間に1回または2回腹腔内に注射することができる。腫瘍サイズを毎週測定することができ、研究終了時に、腫瘍を切り出して秤量することができる。コントロールまたは単剤のみと比較して、マウス内の腫瘍成長を遮断するかまたは減少させるか、腫瘍成長の遮断または減少を増強するANGPTL4抗体と抗癌薬との併用療法を同定する。実施例6:ANGPTL4改変体製造者のプロトコールにしたがって標準的な変異誘発キット例えば、QuikChangeXL部位特異的変異誘発キットInvitrogen,Carlsbad,Californiaを使用して、変異ANGPTL4を作製した。2つのアミノ酸配列ヒトANGPTL4配列中の2つのアミノ酸を置換した例えば、図2を参照のこと。162位および164位を置換しR162GおよびR164E、RKRがGKEに変化した。ANGPTL4タンパク質L280プラスミド、aa1~406または変異ANGPTL4を、一過性にトランスフェクトしたCOS-7細胞の上清から単離した。精製するために、上清をニッケルカラムにロードした。抗FLAG-HRP抗体を使用したウェスタンブロットによってタンパク質を検出した。図3のパネルBを参照のこと。置換して変異ANGPTL4を未変性または野生型ANGPTL4タンパク質と比較した場合、変異ANGPTL4は、ウェスタンブロッティングによって未変性のANGPTL4よりも分子量が高いことが見出された。未変性タンパク質の162位および164位でのRKRからGKEへの置換により、ANGPTL4のタンパク質分解が防止された。実施例7:ANGPTL4はαVβ5インテグリンに結合するアンジオポエチンは、そのフィブリノーゲンFBN様ドメインを介した内皮細胞特異性チロシンキナーゼ受容体Tie2への結合によって血管形成を調節する分泌性因子である。分泌性リガンドファミリー中に存在するコイルドコイルドメインは、リガンドオリゴマー形成に必要であることが見出された例えば、Procopioetal.,J.Biol.Chem.,274:30196-2011999を参照のこと。アンジオポエチンと同様に、ANGPTL3およびANGPTL4は分泌性糖タンパク質であり、それぞれ、N末端シグナルペプチド、その後のコイルドコイルドメイン、およびC末端FBN様ドメインからなる。ANGPTL3はFBN様ドメインを介してαVβ3に結合すると確定した。本発明者らは、ANGPTL4はαVβ5に結合すると確定した。αVβ5インテグリンで安定にトランスフェクトされた293~1953細胞株を、ANGPTL4コーティングプレートへの結合能力または接着能力について試験した。細胞を採取し、PBS、1BSA、1mMCaCl2、および1mMMgCl2を含む無血清培地にて105細胞/mlに希釈した。細胞を、抗インテグリンαVβ5抗体MAB1961Chemicon,Temecula,CAまたはペプチドを含めるか含めずに37°Cで15分間プレインキュベートした。組換えmANGPTL4、BSA、またはビトロネクチン1μg/ml、3μg/ml、10μg/ml、または30μg/mlを、NuncMaxisorp96ウェル平底マイクロタイタープレート上に4°Cで一晩コーティングし、200μlの3BSAを含むリン酸緩衝化生理食塩水PBSpH7.4にて37°Cで1.5時間ブロッキングした。細胞懸濁液5×104細胞/100μl/ウェル5×105/mlを、コーティングしたウェルに添加し、プレートを37°Cで5.5時間インキュベートした。非接着細胞を、PBS洗浄によって除去し、細胞付着を、200μlのCyQuantGDDyeMolecularProbesInvitrogendetectionTechnologiesCarlsbad,California1:400/細胞溶解緩衝液の添加によって測定し、2~5分間インキュベートした。480nmの励起および520nmの放射極大を使用してサンプルの蛍光を測定した。LandegrenのPNAG法を使用することもできる例えば、Landegren,J.Immunol.Methods,67:379-3881984を参照のこと。αVβ5を発現する細胞は、BSA負のコントロールと比較して、ANGPTL4およびビトロネクチンUSBiological,Swampscott,Massachusetts正のコントロールへの接着を示した。図11を参照のこと。αVβ5インテグリンがANGPTL4細胞接着を媒介するのに十分であるかどうかを決定するために、遮断抗体を、細胞接着アッセイにおけるその接着阻害能力について試験した。機能的遮断抗体抗αVβ5抗体MAB1961Chemicon,Temecula,CAまたは抗hANGPTL4抗体を、293~1953細胞に添加し、その後にタンパク質コーティングしたウェルBSA1、ビトロネクチン2、またはANGPTL43とインキュベートした。図12を参照のこと。抗αVβ5および抗ANGPTL4抗体により、ANGPTL4の細胞接着活性が破壊された。さらなる実験を行ってANGPTL4がαVβ5に結合することを確認した。ELISA実験を行ってmANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端1~183、および/またはIgG-hANGPTL4-C末端184~406がαVβ5USBiological,37K,Swampscott,Massachusettsコーティングプレートに結合するかどうかを検出した。100μl/ウェルのコーティング緩衝液を含むインテグリンαVβ5希釈剤1μg/mlコーティング緩衝液50mM炭酸塩/重炭酸塩、pH9.6を、4°Cで一晩インキュベートした。プレートを、洗浄緩衝液PBSpH7.4、0.05Tween-20で3回洗浄し、100μl/ウェルの遮断緩衝液PBSpH7.4、0.5BSAを、穏やかに震盪しながら室温で1時間添加した。種々の量0、0.070μg、0.22μg、0.66μg、2μg、または6μgのサンプル、mANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端1~183、および/またはIgG-hANGPTL4-C末端184~406を、サンプル緩衝液0.5BSA、50mMTrispH7.4、0.05Tween20、1mMMnCl2、50μMCaCl2、50μMMgCl2、100mMNaCl中で調製し、30分間インキュベートした。サンプルをプレートに添加し100μl/ウェル、上記でインキュベートした量、穏やかに震盪しながら室温で2時間インキュベートした。プレートを緩衝液で洗浄し、100μl/ウェル抗Flag-西洋ワサビペルオキシダーゼHRP100ng/mlJackson,109-036-098を含むアッセイ緩衝液PBSpH7.4、0.5BSA、0.05Tween20を添加し、穏やかに震盪しながら室温で1時間インキュベートした。プレートを洗浄した。100μl/ウェルのテトラメチルベンジジンTMBMoss,Inc.を添加し、室温で良好に発色するまでプレート中でインキュベートした。100μl/ウェルの停止液1MH3PO4を添加して、反応を停止させた。プレートを、630nmで読み取った。mANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端、およびIgG-hANGPTL4-C末端はαVβ5コーティングプレートに結合したが、IgG-hANGPTL4-C末端がプレートにわずかにより結合した。図13のパネルAを参照のこと。抗ANGPTL4抗体は、αVβ5コーティングプレートへのANGPTL4の結合を阻害する。ELISA実験を行った。100μl/ウェルのコーティング緩衝液を含むインテグリンαVβ5希釈剤1μg/mlコーティング緩衝液50mM炭酸塩/重炭酸塩、pH9.6を、4°Cで一晩インキュベートした。プレートを、洗浄緩衝液PBSpH7.4、0.05Tween-20で3回洗浄し、100μl/ウェルの遮断緩衝液PBSpH7.4、0.5BSAを、穏やかに震盪しながら室温で1時間添加した。0.6μg~6.0μgのサンプル、mANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端1~183、および/またはIgG-hANGPTL4-C末端184~406を、サンプル緩衝液0.5BSA、50mMTrispH7.4、0.05Tween20、1mMMnCl2、50μMCaCl2、50μMMgCl2、100mMNaCl中で抗ANGPTL4抗体1.5μgまたは抗Dscr1.5μgと30分間インキュベートした。インキュベーション後、100μl/ウェルのサンプル/-抗体をプレートと穏やかに震盪しながら室温で2時間インキュベートした。プレートを緩衝液で洗浄し、100μl/ウェル抗Flag-HRP100ng/mlを含むアッセイ緩衝液PBSpH7.4、0.5BSA、0.05Tween20を添加し、穏やかに震盪しながら室温で1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、100μl/ウェルのTMBを添加し、室温で良好に発色するまでプレート中でインキュベートした。100μl/ウェルの停止液1MH3PO4を添加して、反応を停止させた。プレートを、630nmで読み取った。抗ANGPTL4抗体は、抗Dscr抗体、5G7モノクローナル抗体、または培地と比較して、αVβ5コーティングプレートに結合するmANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端、およびIgG-hANGPTL4-C末端の量を減少させた。図13のパネルBを参照のこと。別の実験では、ANGPTL4およびインテグリンαVβ5の結合を、ELISAによって示した。この実験では、80μl/ウェルのhANGPTL4-C末端、ビトロネクチン、またはBSA5μg/mlを、コーティング緩衝液50mM炭酸塩/重炭酸塩、pH9.6中のプレートに添加し、4°Cで一晩インキュベートした。プレートを洗浄し洗浄緩衝液:PBSpH7.4、0.05Tween-20、100μl/ウェルのいずれかの培地を有する遮断緩衝液PBSpH7.4、0.5BSA、抗hANGPTL4抗体15μg/100μl、または抗Dscr抗体15μg/100μgを添加し、穏やかに震盪しながら室温で1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、αVβ5100μl3~9μg/mlを添加し、穏やかに震盪しながら室温で2時間インキュベートした。プレートを洗浄し、1μg/ml1000倍の抗αVβ5抗体Chemicon5μg/100μlを、アッセイ緩衝液PBSpH7.4、0.5BSA、0.05Tween20中に添加し、穏やかに震盪しながら室温で1時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄し、100μl/ウェルの西洋ワサビペルオキシダーゼHRP抗マウス5000倍をアッセイ緩衝液に添加した。プレートを洗浄し、100μl/ウェルのテトラメチルベンジジンTMBを添加し、室温で良好に発色するまでプレート中でインキュベートした。100μl/ウェルの1MH3PO4で反応を停止させ、プレートを、630nmで読み取った。αVβ5はANGPTL4レーン1およびビトロネクチンレーン4コーティングプレートに結合する。結合は、抗ANGPTL4抗体レーン2で遮断されるが、コントロール抗体である抗Dscrを使用する場合レーン3またはコントロールタンパク質をプレート上にコーティングする場合レーン5、遮断されない。図13のパネルCを参照のこと。したがって、これらの所見は、組換えANGPTL4がαVβ5インテグリンに特異的に結合することを証明する。明細書は、当業者が本発明を実施可能にするのに十分であると見なされる。本明細書中に記載の実施例および実施形態は例示のみを目的とすると理解される。寄託物が本発明の特定の態様の一例であることが意図され、機能的に等価な任意の構築物が本発明の範囲内に含まれるので、本発明は、寄託した構築物によってその範囲が制限されない。本明細書中の材料の寄託は、明細書が本発明の任意の態様最良の形態が含まれるを実施するのに不適切であることを認めず、示される特定の例に特許請求の範囲が制限されるとも解釈されない。実際、本明細書中に示し、且つ説明した事項に加えて、上記説明から本発明の種々の修正形態が当業者に明らかであり、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。本明細書中に引用された全ての刊行物、特許、および特許出願は、全ての目的のためにその全体が本明細書中で参考として援用される。"