"重力に応答する生物試料を、その光軸が重力方向に垂直になるように配置された顕微鏡対物レンズを介して観察する観察方法。前記生物試料に対して明視野照明をおこなって明視野像を取得する請求項1に記載の観察方法。重力の影響を受けて発現する遺伝子に対するレポーターである発光遺伝子の発光像を取得する請求項2に記載の観察方法。さらに前記明視野像と前記発光像の合成処理をおこなう請求項3に記載の観察方法。重力の影響を受けて発現する遺伝子に対するレポーターである発光遺伝子の発光像を取得する請求項1に記載の観察方法。これまでの顕微鏡観察では、試料が水平方向、対物レンズが鉛直方向に配置されている。そのため、正立型顕微鏡の場合は試料の上方向から、倒立型顕微鏡の場合は試料の下方向から観察することになる。また、試料の側面を観察したい場合は、試料を90度回転させて観察することになる。この場合、生物試料が生きたものではなく固定されたものであれば、試料を設置する際に重力の作用する方向を考慮する必要はない。しかし、重力の影響を受けて生長する植物を観察するような場合は、試料の配置が制限されてしまう。例えば、植物の芽と根はそれぞれ負および正の重力方向に伸長し、試料台上で水平方向には伸長しないので、重力方向に伸長した芽や根に対して、対物レンズを垂直方向からアプローチすることが困難である。そのため、重力に応答して生長する生物試料をその状態を変えることなく継続的に観察することはできない。本発明は、このような実状を考慮して成されたものであり、その目的は、重力に応答して生長する生物試料を継続的に観察し得る観察方法を提供することである。本発明による観察方法は、重力に応答する生物試料を、その光軸が重力方向に垂直になるように配置された顕微鏡対物レンズを介して観察する。本発明によれば、重力に応答して生長する生物試料を継続的に観察し得る観察方法が提供される。以下、図面を参照しながら本発明の実施形態について説明する。図1は、本実施形態の観察方法を実施するための観察装置を模式的に示している。観察装置は、生物試料40の光学像を取得するための撮像光学系10と、生物試料40を明視野照明するための照明光学系20と、撮像光学系10で取得された画像を処理するための画像処理装置30を有している。撮像光学系10は、その光軸が実質的に重力方向62に垂直になるように配置された顕微鏡対物レンズ12と、顕微鏡対物レンズ12を介して入射する光を結像させる結像レンズ14と、撮像装置たとえばCCDカメラ16を有している。撮像光学系10は、顕微鏡対物レンズ12のNAの2乗/総合倍率の2乗の値が0.01以上である。照明光学系20は、照明光を発する光源22と、照明光を導光する光ファイバー24を有している。生物試料40は、重力に応答する試料である。たとえば、生物試料40は、シロイヌナズナなどの植物やムラサキホコリカビなどの細胞性粘菌など、重力の影響を受けて応答生長する生物である。または、重力の影響を受ける発生進行中の動物の胚などであってもよい。これらの生物において、重力に応答して発現する遺伝子を発光遺伝子たとえばルシフェラーゼ遺伝子をレポーターとして発光でモニターできる系統を作製する。一例では、生物試料40は、芽生えたばかりのシロイヌナズナであり、図2に示されるように、子葉42と胚軸44と根46などの器官から構成されている。生物試料40は、たとえば、図1に示されるように、シャーレ52内に設けられた培地54の上に配置される。シャーレ52は、たとえば、重力方向62への生長を保持した状態で生物試料40を観察するために、生物試料40の生長方向が鉛直方向になるように保持される。シャーレ52はまた、重力の作用する方向を経時的に変えられるように、顕微鏡対物レンズ12の光軸に平行な軸の周りに回転可能に保持されてもよい。本実施形態の観察方法では、生物試料40の観察は、水平方向から顕微鏡対物レンズ12を介しておこなう。たとえば、生物試料40の明視野像の取得と、重力に応答して発現する遺伝子に対するレポーターである発光遺伝子の発光像の取得をおこなう。発光遺伝子の発光は微弱であるため、撮影は、暗黒下の状態でおこなわなければならない。このため、撮像光学系10と生物試料40は暗箱70で覆われる。明視野像を取得する際は、照明光学系20によって生物試料40に対して明視野照明をおこなう。光源22で生成された照明光は、光ファイバー24を伝搬し、生物試料40を側方から照明する。生物試料40で反射された光は、顕微鏡対物レンズ12によって集められ、結像レンズ14によってCCDカメラ16の受光面に結像される。CCDカメラ16は、受光面に結像された像明視野像に対応した画像データを生成して画像処理装置30に送る。発光像を取得する際は、照明光学系20による照明をおこなうことなく、暗黒下の状態で撮影をおこなう。生物試料40内の発光遺伝子で発せられた光は、顕微鏡対物レンズ12によって集められ、結像レンズ14によってCCDカメラ16の受光面に結像される。CCDカメラ16は、受光面に結像された像発光像に対応した画像データを生成して画像処理装置30に送る。画像処理装置30は、CCDカメラ16から受け取った画像データを記憶しておき、必要に応じて明視野像と発光像を表示する、または明視野像と発光像の画像データを出力する。また画像処理装置30は明視野像と発光像の合成処理をおこなう。たとえば画像処理装置30は明視野像と発光像を重ね合わせた画像を形成する。画像処理装置30は、合成処理した画像を記憶または表示または出力する。このような観察方法によって、重力に応答して生長する生物試料を経時的に観察し得る。また、生物試料に対する重力の影響を画像情報として取得し得る。これにより、また、さらに明視野像と発光像の合成処理をおこなうことにより、これまでと比較して、生物試料に対する重力の影響の評価を容易に精度良くおこなうことが可能になる。以下に本実施形態の観察方法を用いて発光遺伝子を持つ遺伝子組換えシロイヌナズナを観察した実施例を示す。重力刺激の方向に依存した生長の経時観察本実施例では、シロイヌナズナの芽生えにおいて胚軸が重力とは逆向きに生長している様子を側方から発光観察と明視野観察を組み合わせて経時観察した例を示す。材料と方法観察に用いた発光遺伝子を持つ遺伝子組換えシロイヌナズナN9808系統はノッティンガムシードストックセンターから購入した。N9808系統は、CCR2遺伝子の上流領域にルシフェラーゼ遺伝子を連結させたカセットを導入した系統であるDoyleら、2002NatureVol419、74-77頁。シロイヌナズナの種子を滅菌した後に寒天培地上で4日間栽培し、発光観察と明視野観察を組み合わせて経時観察をおこなった。種子の滅菌は0.1次亜塩素酸ナトリウム、0.02TritonX-100を含む蒸留水内で攪拌した後、5分室温で放置し、次いで種子を滅菌蒸留水で5回洗うことによりおこなった。観察用の寒天培地は、次のように作成した。蒸留水985mlに1MKNO35ml、1MMgSO42ml、1MCaNO322ml、20mMFe-EDTA2.5ml、微量要素液1ml、K-PO4緩衝液液pH5.52.5mlと寒天末SIGMA社を1.5の濃度になるように加え、オートクレーブ後にシャーレに注いで固化させた白石英秋ら、1991現代化学増刊20植物バイオテクノロジーII、38頁。滅菌した種子を寒天培地上に播種し、約3日間冷暗所に置いた後に、シャーレを垂直に立てた状態で約20°Cに設定したインキュベータに移して4日間栽培した。栽培時の光環境は、約50-65μmolm-2s-1の強度の光を12時間照射した後、光を12時間照射しないというサイクルに設定した。経時観察をおこなう1日前に基質溶液を植物個体全体に噴霧した。基質溶液は2.5mMD-ルシフェリンプロメガ社を含む0.05Tween20水溶液である。経時観察中は、約27°Cの環境で光を照射していない条件で約3日間生育させた。画像の取得はEM-CCDカメラImagEM、浜松ホトニクス社C9100-13を用いた。発光観察は、EM-CCD読み出しモードで、露出時間1分、binning1x1でおこなった。明視野観察は、NORMAL-CCD読み出しモードで露出時間122ms、binning1x1でおこなった。経時観察により各々撮像され保存された画像は、市販のソフトウェアAQUACOSMOS、浜松ホトニクス社もしくはアメリカ国立衛生研究所で開発されたImageJを用いて解析した。結果シロイヌナズナの芽生えは、図2に示すように、重力方向62に向かって根46が伸長し、重力方向とは逆向きには胚軸44が伸長する。観察する視野を胚軸44に合わせて、OLYMPUS社製対物レンズUPLFLN4xを通して、明視野画像と発光画像を取得した。また明視野画像と発光画像の重ね合わせ画像を形成した。明視野画像と発光画像と重ね合わせ画像を図3に示す。図3A,B,Cは、それぞれ、経時観察の開始から2時間後の胚軸の明視野画像、発光画像、重ね合わせ画像である。図3D,E,Fは、それぞれ、経時観察の開始から32時間後の胚軸の明視野画像、発光画像、重ね合わせ画像である。図3G,H,Iは、それぞれ、経時観察の開始から62時間後の胚軸の明視野画像、発光画像、重ね合わせ画像である。図3B,E,Hの四角枠内を関心領域に設定した。図3C,F,Iの重ね合わせ画像では、発光シグナルを黄色に着色した。経時観察の開始から2時間後の観察では、胚軸と子葉では、全体的に発光シグナルが検出でき、特に胚軸と片側の子葉の先端と基部から強いシグナルが検出された。その後、32時間後、62時間後の観察から、時間が経過するにつれて胚軸が重力方向62とは逆向きに屈曲して生長することが確認できる図3D,G。32時間後、62時間後には胚軸の頂端部に強い発光シグナルが観察されるが、それ以外の領域では発光シグナルが減衰しほとんど消失した図3B,C,E,F,H,I。経時観察の結果を元に発光シグナルの経時変化を解析した。発光画像から胚軸の中心部をROIに設定し、約3日間の発光シグナルの変化をプロットした図4。発光シグナルは小さく振幅していることが確認できた。このように本実施形態の観察方法を用いることによって、胚軸が重力とは逆向きに生長する過程において明視野観察と発光観察を同時におこなうことができ、器官ごとや器官内の特定の領域の発光シグナルの強弱を識別できることが分かった。また、発光画像を元に発光シグナルの変化を解析し、特徴付けることができることが分かった。根端の重力刺激の方向変化に応答した伸長方向の変化の経時観察本実施例では、シロイヌナズナの根端が重力刺激の方向変化に応答して伸長方向を変化させる様子を発光観察と明視野観察を組み合わせて経時観察した例を示す。材料と方法観察に用いたシロイヌナズナは実施例1と同じ系統である。滅菌したシロイヌナズナの種子を寒天培地上で6日間栽培した後、図5に示すように、シャーレ52を90度回転させることで生物試料40の伸長方向に垂直な向きから重力刺激を加わるようにして、回転直後から経時観察をおこなった。種子の滅菌方法、寒天培地の作成方法は実施例1と同じ方法である。滅菌した種子を寒天培地上に播種し、約3日間冷暗所に置いた後に、シャーレを垂直に立てた状態で約27°Cの実験室内で6日間栽培した。栽培時の光強度は約50-65μmolm-2s-1である。経時観察をおこなう1日前に基質溶液を植物個体全体に噴霧した。基質溶液の組成は実施例1と同じである。経時観察中は、約27°Cの環境で光を照射していない条件で約1日半生育させた。画像の取得に用いたカメラ及び解析に用いたソフトウェアは実施例1と同じである。発光観察時の露出時間のみを実施例1の1分から10秒に変更した。結果観察する視野を根端に合わせて、重力刺激の方向変化後の根端の伸長方向の変化を経時観察した。画像取得はOLYMPUS社製対物レンズLMPlanFL10xを通しておこなった。図6に示すように、重力の方向に向かって徐々に伸長方向が変化していった。30.5時間後には根端は変化後の重力の方向を向いており、伸長方向の変化が完了していた。観察した系統では、根端に分裂領域から伸長領域に存在する細胞で強い発光シグナルが確認できた。屈曲して伸長する根の内側の細胞層と外側の細胞層では、どちらも同程度の発光シグナルであった。このように本実施形態の観察方法を用いることによって、根の重力刺激に応答した伸長方向の変化の過程を発光観察と明視野観察を組み合わせて経時観察することができ、根端の分裂領域、伸長領域、屈曲の内側と外側の細胞を区別して特徴付けることができることが分かった。これまで、図面を参照しながら本発明の実施形態を述べたが、本発明は、これらの実施形態に限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において様々な変形や変更が施されてもよい。ここにいう様々な変形や変更は、上述した実施形態を適当に組み合わせた実施も含む。"