"RNAと、少なくともDNAを含む生物試料からRNAを抽出するための溶液であって、a溶液の総量に対して50容量超過のフェノール、b溶液の総量に対して3~10容量の多価アルコール、c溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩、d溶液の総量に対して0.1~0.5M濃度のチオシアン酸塩、及びe溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤、を含む溶液。フェノール濃度が、溶液の総量に対して55~65容量である、請求項1に記載の溶液。水層を分離するための有機溶媒をさらに含む、請求項1又は2に記載の溶液。生物試料が培養細胞の培養液である、請求項1~3のいずれか1項に記載の溶液。生物試料が生物の体液成分である、請求項1~3のいずれか1項に記載の溶液。生物試料が生物の血液成分である、請求項1~3のいずれか1項に記載の溶液。RNAと少なくともDNAを含む生物試料を、a溶液の総量に対して50容量超過のフェノール、b溶液の総量に対して3~10容量の多価アルコール、c溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩、d溶液の総量に対して0.1~0.5M濃度のチオシアン酸塩、及びe溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤、を含む溶液と共にホモジェナイズする工程と、得られたホモジェネートを、水層を分離するための有機溶媒と混合する工程と、得られた混合物を遠心分離する工程と、遠心分離により生成した、RNA含有水層を回収する工程と、を含む、前記生物試料からRNAを抽出する方法。RNAと少なくともDNAを含む生物試料を、a溶液の総量に対して50容量超過のフェノール、b溶液の総量に対して3~10容量の多価アルコール、c溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩、d溶液の総量に対して0.1~0.5M濃度のチオシアン酸塩、及びe溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤、f水層を分離するための有機溶媒、を含む溶液と共にホモジェナイズする工程と、得られたホモジェネートを遠心分離する工程と、遠心分離により生成した、RNA含有水層を回収する工程と、を含む、前記生物試料からRNAを抽出する方法。フェノール濃度が、a~eの溶液の総量に対して55~65容量である、請求項7又は8に記載の方法。以上のように、生物試料からRNAを抽出するための従来の溶液では、定量性が求められるような場合に、DNAが混入していない実質的に純粋なRNAを抽出することができなかったという課題があった。そして、混入したDNAを除くために、DNase処理などの付加工程が必要であった。本発明は、これらの課題を解決しようとするものであって、生物試料から実質的に純粋なRNAを抽出するための溶液を提供する。本発明者らは、今回、従来のRNA抽出用溶液の組成について検討し、特にフェノール濃度がDNAの混入を防ぐ効果に関係することを見出して本発明を完成させた。すなわち、本発明は以下のものを提供する。[1]RNAと、少なくともDNAを含む生物試料からRNAを抽出するための溶液であって、a溶液の総量に対して50容量超過のフェノール、b溶液の総量に対して3~10容量の多価アルコール、c溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩、d溶液の総量に対して0.1~0.5M濃度のチオシアン酸塩、及びe溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤、を含む溶液。[2]フェノール濃度が、溶液の総量に対して55~65容量である、[1]に記載の溶液。[3]水層を分離するための有機溶媒をさらに含む、[1]又は[2]に記載の溶液。[4]生物試料が培養細胞の培養液である、[1]~[3]のいずれか1項に記載の溶液。[5]生物試料が生物の体液成分である、[1]~[3]のいずれか1項に記載の溶液。[6]生物試料が生物の血液成分である、[1]~[3]のいずれか1項に記載の溶液。[7]RNAと少なくともDNAを含む生物試料を、a溶液の総量に対して50容量超過のフェノール、b溶液の総量に対して3~10容量の多価アルコール、c溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩、d溶液の総量に対して0.1~0.5M濃度のチオシアン酸塩、及びe溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤、を含む溶液と共にホモジェナイズする工程と、得られたホモジェネートを、水層を分離するための有機溶媒と混合する工程と、得られた混合物を遠心分離する工程と、遠心分離により生成した、RNA含有水層を回収する工程と、を含む、前記生物試料からRNAを抽出する方法。[8]RNAと少なくともDNAを含む生物試料を、a溶液の総量に対して50容量超過のフェノール、b溶液の総量に対して3~10容量の多価アルコール、c溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩、d溶液の総量に対して0.1~0.5M濃度のチオシアン酸塩、及びe溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤、f水層を分離するための有機溶媒、を含む溶液と共にホモジェナイズする工程と、得られたホモジェネートを遠心分離する工程と、遠心分離により生成した、RNA含有水層を回収する工程と、を含む、前記生物試料からRNAを抽出する方法。[9]フェノール濃度が、a~eの溶液の総量に対して55~65容量である、請求項7又は8に記載の方法。本発明の溶液を用いることにより、生物試料から、DNAの混入がない実質的に純粋なRNAを簡便に抽出することができるようになる。また、本発明によれば、回収ロスの原因となりうるDNase処理などの付加処理を必要とせずに、定量性が求められる用途においてもそのまま用いることができるような純度のRNAを得ることが可能となる。特に、生物試料のうち、RNA分解酵素やその他の夾雑物が非常に多く含まれている血液等の体液においても、目的とするRNAを高純度で抽出することが可能である。本発明は、生物試料からRNAを抽出するための溶液であって、次のa~eをその成分として含む。a溶液の総量に対して50容量超過のフェノール、b溶液の総量に対して3~10容量3容量以上10容量以下の多価アルコール、c溶液の総量に対して0.5~2.0M0.5M以上2.0M以下濃度のグアニジニウム塩、d溶液の総量に対して0.1~0.5M0.1M以上0.5M以下濃度のチオシアン酸塩、及びe溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤。本発明で用いる生物試料は、RNAと、少なくともDNAを含むものである。また、本発明の溶液を用いることにより、上記生物試料から実質的に純粋なRNAを抽出することができる。ここで、実質的に純粋なRNAとは、生物試料に当初含まれていたDNAが分離されて、実質的にその混入のないRNAを意味する。RNAが実質的に純粋かどうかは、電気泳動によりDNAが検出されるか否かにより判断することができる。例えば、アジレントテクノロジー株式会社製AgilentRNA6000ピコキット型番5067-1513は推奨50pg/μL~5000pg/μLの核酸を検出することができるので、これを用いてDNAの混入の有無を評価することができる。具体的には、抽出した核酸をRNase処理してからAgilentRNA6000ピコキットを用いて電気泳動した場合に、ピークが検出されないときは十分にDNAの混入が抑制されており、実質的に純粋なRNAが得られていると判断することができる。また、混入したDNA量を定量PCRにより分析することで、RNAの純度を評価することができる。例えば、リアルタイムPCR装置とSYBRGreen蛍光色素を用いると、60pgの2本鎖DNAを検出することができるので、これを用いて評価することができる。具体的には、プライマーとDNA合成酵素とSYBRGreenを含むPCR反応溶液に、抽出した核酸を加えてPCR増幅を行い、予め作成した検量線と比較することにより、混入したDNA量を定量的に分析することができる。本発明において、溶液の総量とは、上記a~eの全てを含む溶液の全容量を意味する。例えば、溶液の総量に対して50容量超過のフェノールとは、全成分を混合させた後の溶液1L中に、500mLを超過するフェノールを含んでいることを意味する。また、例えば、溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩とは、溶液の終濃度が0.5M以上2.0M以下であること、すなわち各成分を全て混合させた後の溶液1L中に、0.5mol以上2mol以下のグアニジニウム塩が含まれていることを意味する。本発明の溶液は、a溶液の総量に対して50容量超過のフェノールを含む。フェノール濃度を従来技術と異なる50容量超過にすると、RNAが抽出される水層に、不純物としてのDNAの混入が減少する効果のあることが明らかになった。本発明の溶液は、例えば、51容量以上、52容量以上、53容量以上、54容量以上又は55容量以上のフェノールを含む。好ましくは、53容量以上、より好ましくは55容量以上のフェノールを含む。また、フェノールの濃度は、本発明の溶液の他の成分であるbの多価アルコール、cの0.5~2.0Mグアニジニウム塩、dの0.1~0.5Mチオシアン酸塩を各所定濃度において均一に混和した状態で本発明の溶液を調製する都合から、75容量以下であることが好ましく、またフェノールが酸化されることによる影響を減らすため、フェノールの濃度は65容量以下であることがより好ましい。好ましいフェノール濃度の範囲は、これらの上限と下限を任意に組み合わせた範囲であるが、より好ましくは52容量以上65容量以下、53容量以上65容量以下、特に好ましくは55容量以上65容量以下である。本発明の溶液は、b溶液の総量に対して3~10容量の多価アルコールを含む。本発明における多価アルコールは、複数の水酸基を有する脂肪族アルコールであって、本発明の溶液中のaのフェノール成分及びcやdの水溶液を混和して均一な溶液として維持することができるものを用いることができる。多価アルコールとしては、2~4個の水酸基を有する炭素数2~6個の脂肪族アルコールが好ましい。例えば、グリセロール、エチレングリコール、プロピレングリコール、エリスリトールなどが挙げられ、グリセロールがより好ましい。多価アルコールは、本発明の溶液を均一な溶液として維持し、フェノール成分が過度に水層に分配されないように、本発明の溶液の総量に対して3~10容量を用いることができる。本発明の溶液は、c溶液の総量に対して0.5~2.0M濃度のグアニジニウム塩を含む。グアニジニウム塩としては、具体的にはチオシアン酸グアニジニウムや塩酸グアニジニウムが好ましい。グアニジニウム塩は、RNAを分解から保護し、水性の溶液中でフェノールを溶液状態に維持する効果がある。本発明の溶液は、d溶液の総量に対して0.1~0.5M濃度のチオシアン酸塩を含む。チオシアン酸塩としては、チオシアン酸の無機塩が好ましく用いることができ、より好ましくはチオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸ナトリウムを用いることができる。また、複数の異なるチオシアン酸の無機塩の混合物であってもよく、例えばチオシアン酸アンモニウムとチオシアン酸ナトリウムとの混合物を好ましく用いることができる。チオシアン酸塩は、生物試料からのRNAの抽出を増強すると考えられている。なお、本発明の溶液がチオシアン酸グアニジニウムを含む場合、該チオシアン酸グアニジニウムの濃度は、上記したグアニジニウム塩の濃度に含め、チオシアン酸塩の濃度には含めない。本発明の溶液は、e溶液のpHを4~6に維持するための緩衝剤を含む。緩衝剤としては、pHを所望の範囲に維持するために通常用いられる緩衝性を示す有機塩や無機塩を使用することができる。具体的には、ナトリウム、カリウム、リチウム又はアンモニウムの、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フタル酸塩、酒石酸塩又は乳酸塩などの有機塩及び無機塩が含まれる。これらの組合せの中でも、酢酸ナトリウムやクエン酸ナトリウムがより好ましく用いられる。また、これらの複数の有機塩や無機塩を組み合わせて用いてもよい。この緩衝剤の濃度は、本発明の溶液を目的とするpH4~6に維持するために十分であれば特に限定されないが、本発明の溶液の総量に対して0.02~0.2Mの濃度となることが好ましい。本発明の溶液のpHを調整するために、緩衝剤に加えて、適当な酸又はアルカリ水溶液、例えば塩酸や水酸化ナトリウム溶液を適宜添加してもよい。本発明の溶液には、生物試料中のタンパク質を変性させて目的とするRNAの精製を補助するために、ポリオキシエチレンソルビタン、ドデシル硫酸ナトリウム、サルコシンなどの界面活性剤が含まれてもよい。また、本発明の溶液には、フェノールの酸化を防止するために、ヒンダードアミンフェノール、キノリンなどの酸化防止剤が含まれてもよい。本発明の溶液は、例えば、生物試料が液体状態の場合、目的のRNAを抽出するときには、その1倍容量以上、好ましくは3倍容量以上を用いることができる。本発明の溶液を用いて目的のRNAを抽出する手順の例を以下に示す。まず、生物試料を本発明の溶液中でホモジナイズしてホモジェネートを形成させる。ホモジナイズの方法は特に限定はないが、ボルテックスなどによる攪拌、注射針による破砕のほか、一般的なホモジナイザーを使用することができる。次に、水層を分離するための有機溶媒をこのホモジェネートに加えたのち、これを遠心分離する。ここで加える有機溶媒は、好ましくは、ホモジェネートの2容量~40容量程度を用いる。また遠心分離は、通常、6,000xG~20,000xGで3分間~30分間、例えば、速度12,000xGの条件で室温10分間行うことができるが、液層が分離すればよく、速度、温度、時間に特に制限はない。遠心分離すると、目的とする実質的に純粋なRNAは水層に抽出される。一方、DNAやタンパク質等は有機層に、又は中間層が生じた場合は有機層及び中間層に分離される。水層を分離するための有機溶媒とは、本発明の溶液を用いて抽出された目的のRNAが含まれる水層と、DNA等が含まれる有機層及び/又は中間層生じた場合とに分離するために用いる液体の有機化合物である。この有機溶媒としては、親水性の度合いがフェノールと同じか、より疎水性であるものを用いることができる。例えば、親水性を示す指標して一般に用いられる水/オクタノール分配係数CLogPの値が1.4フェノールのCLogP値以上の有機化合物であれば使用することができ、CLogPの値が1.4~5の範囲のものを好ましく用いることができる。ここで、CLogP値は、例えばChemDraw登録商標等のプログラムを用いて推算値を求めることができる。本発明において用いる有機溶媒としては、例えば、クロロホルム1.952、p-ブロモアニソール3.064、1-ブロモ-3-クロロプロパン1.847、4-ブロモベラトロール2.7345、6-ブロモ-1,4-ベンゾジオキサン3.0005、1-ブロモ-4-トリフルオロメトキシベンゼン4.173、1-ブロモ-2,4-ジメトキシベンゼン2.8545、4-フルオロアニソール2.344、4-ブロモトルエン3.504、4-ブロモ酪酸エチル1.772などが挙げられるが、これに限らない。ここで、上記の各有機溶媒の中の数値はChemDrawで求められたCLogPの値である。上記の水層を分離するための有機溶媒は、上記のようにa~eを含む本発明の溶液を用いて形成させてホモジェネートに添加して用いることができるが、上記a~eを含む本発明の溶液に予め含まれていてもよい。従来のフェノール濃度が50以下の溶液の場合は、この有機溶媒を予め含めようとすると生物試料と混和するまえに溶液が水層と有機層の2層に分離してしまうため抽出溶液として使用困難であったが、本発明の溶液のフェノール濃度においては有機溶媒が本発明の溶液に均一に混和し、単一の溶液として保存可能である。この有機溶媒を予め含有する本発明の溶液は、生物試料を加えてホモジナイズしてホモジェネートとしたあと、直ちに遠心分離することでRNAを含む水層を分離させることができる。従って、有機溶媒をホモジェネートに後から加える場合に比べ、手順を非常に単純化することができるので、好ましい。水層を分離するための有機溶媒が上記a~eを含む本発明の溶液に予め含まれる場合の当該有機溶媒の含有量は、加える有機溶媒の種類と溶液のフェノール濃度にあわせて、有機溶媒が本発明の溶液中で均一に混和する範囲で選定することができる。例えば、本発明の溶液のフェノール濃度が65であるときに有機溶媒としてクロロホルムを選択する場合には、上記a~eを含む溶液の総量100に対し27容量までの任意の容量を含むことが好ましい。具体的には、上記a~eを含む溶液100mLにクロロホルムを27mLまでの任意の容量を加えることが好ましい。上記a~eを含む溶液の総量100に対し、より好ましくは5~25容量、さらに好ましくは10~20容量のクロロホルムを含む。また、フェノール濃度が58であるときには、クロロホルムは上記a~eを含む溶液の総量100に対し14までの任意の容量を含むことが好ましく、より好ましくは6~13容量、さらに好ましくは8~12容量を含む。また、溶液のフェノール濃度が65であるときに有機溶媒としてp-ブロモアニソールを選択する場合には、上記a~eを含む溶液の総量100に対し22容量までの任意の容量を含むことが好ましく、より好ましくは5~20容量、さらに好ましくは10~18容量を含む。また、同様にフェノール濃度が58であるときには、p-ブロモアニソールは上記a~eを含む溶液の総量100に対し13容量までの任意の容量を含むことが好ましく、より好ましくは3~11容量、より好ましくは5~9容量を含む。本発明の溶液を用いて水層に抽出されたRNAをさらに精製、濃縮するために、RNAが含まれる水層に低級アルコールを加えてRNAを沈澱させ、沈澱したRNAを回収することができる。あるいは、RNAが含まれる水層に低級アルコールを加えて沈澱させたRNAを、RNAを吸着しうる担体、例えばシリカメンブレンカラムに吸着させたあと、担体カラムから溶出して回収しても良い。ここで用いる低級アルコールとしては、エタノール、イソプロパノールなどが挙げられる。その濃度は、一般的な核酸のエタノール沈殿、イソプロパノール沈殿の手法又はシリカメンブレンカラム等の担体のメーカー推奨濃度に準じて決めることができる。本発明の溶液は、上記のa~eを各濃度となるように混和することで製造することができる。その混和の手順としては特に制限はない。溶液の組成によっては、予め高濃度の各溶液を調製してからそれらを混和することもできる。例えば、6Mのチオシアン酸グアニジン水溶液、6Mのチオシアン酸アンモニウム水溶液、1Mの酢酸ナトリウムを予め準備し、目的の濃度に混和してから、さらにグリセロール、フェノールと不足分の水を加えて調製することができる。水層を分離するための有機溶媒が上記a~eを含む溶液に予め含まれる本発明の溶液も、同様にして、a~e及び当該有機溶媒が所望の濃度となるように混和することで製造することができる。本発明において用いる生物試料は、RNAと、少なくともDNAを含むものであれば、特に制限はない。例えば、目的とするRNAから分離したい不純物成分として、DNAのほかにタンパク質を含むものであってもよい。具体的には、培養細胞、培養細胞の培養液、手術切片や生検サンプル等の生体組織、生体細胞、血液、血液成分血清、血漿、尿、唾液、涙等の体液などが挙げられるが、これらに限られず、RNAの含まれる任意の試料を使用し得る。これらの生物試料に本発明の溶液を適用する場合には、生物試料が体液等の液体試料である場合には、採取後そのまま本発明の溶液と混和してもよいし、PBSや水で希釈してから本発明の溶液と混和してもよい。生物試料が細胞ペレットや組織片である場合には、採取後そのまま本発明の溶液と混和してもよいし、PBSや水で希釈してから本発明の溶液と混和してもよいが、RNAの分解を避けるため、希釈する場合にはより好ましくは生物試料のホモジェネートを作成してから水やPBSで希釈することが好ましい。生物試料のうち体液、特に血液には、RNAの分解酵素やその他の夾雑物が非常に多く含まれていることがあり、その場合に従来の方法では実質的に純粋なRNAを抽出することが非常に困難であった。本発明の溶液は、フェノールを50容量超過にすることにより、タンパク質などの夾雑物を効果的に有機層に抽出することができるため、目的とするRNAを純度高く得ることが可能である。また、遠心分離後に出現する中間層が減少し、明確な層分離が可能となるので、目的とするRNAの含まれる水層の分離が容易である。本発明の溶液を用いて抽出するRNAは、複数のリボヌクレオチドがホスホジエステル結合したリボ核酸であって、その分子量、塩基数や由来によって限定されない。一般に、RNAは、機能分類上、mRNAメッセンジャーRNA、tRNAトランスファーRNA、rRNAリボソームRNA、ncRNAノンコーディングRNA、snRNA核内低分子RNA、snoRNA核小体低分子RNA、等多くの種類に分類されているが、化学構造的には分子量塩基数以外に差は知られておらず、いずれも本発明におけるRNAに含まれる。一般にsmallRNAと呼ばれる塩基数が15~500塩基程度のRNAや、一般に塩基数が18~25塩基程度のmiRNAマイクロRNAも本発明におけるRNAに含まれる。一般に、RNAとDNAとの一次化学構造の主な差異は、構成糖であるリボース2’-位の水酸基-OHの有無であり、それぞれ塩基数が小さくなるほどRNAとDNAとの構造的な差異が小さくなるため、両者を抽出により分離することが難しくなる。しかし、本発明の溶液を用いれば、smallRNAといった塩基数の比較的小さいRNAについても、純度高く抽出することが可能である。通常、DNAとRNAとが混在している状態では吸光光度計又は発光光度計を用いてそれぞれを区別して定量することは困難であるが、本発明の溶液を用いることで実質的に純粋なRNAを得ることができるので、これらを用いたRNAの定量が可能となる。また、本発明の溶液を用いることで、qRT-PCRやマイクロアレイを使用したRNAの解析において、DNaseによる処理を必要とせず、DNAの混在するによるノイズがない状態で簡便に解析することができる。本発明は、以下の実施例によってさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されないものとする。<実施例1>1RNA抽出用溶液の調製溶液の各成分の終濃度が以下になるように、それぞれを混合してRNA抽出用の溶液を調製した。58容量フェノール5容量グリセロール0.8Mチオシアン酸グアニジニウム水溶液にて混合0.4Mチオシアン酸アンモニウム水溶液にて混合0.1M酢酸ナトリウム緩衝液水溶液にて混合、pHが5になるように調整。2生物試料からのRNA抽出RNAと、DNA及びタンパク質を含む生物試料として血清を用いてRNA抽出を行った。上記1で調製した溶液900μLと血清300μLをボルテックスで混和し、ホモジナイズした。ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加えて混和し、室温で12,000xGで10分間遠心した。遠心により、RNAを含有する水層と、DNA及びタンパク質を含有する有機層と中間層が形成された。このうち、水層400μLを別のチューブに分離した。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-2で分離したRNAを含む水層に1.5倍容量の100エタノールを加え、核酸の精製カラムであるmiRNeasyminikit株式会社キアゲン製のRNeasyMiniSpinColumnに700μL加え、8000xGで15秒遠心してカラムに核酸を吸着させ、カラムを通過した液は廃棄した。エタノール混和RNAサンプルがなくなるまで同作業を繰り返し、水層に含まれていた核酸をすべてカラムに吸着させた。その後miRNeasyminikitのプロトコルに従い、BufferRWT700μL、BufferRPE500μLで2回カラムを洗浄し、カラムを乾燥させた後、30μLのRNase-free水で溶出し、精製、濃縮したRNAサンプルを得た。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-抽出された核酸がRNAであることを確認するために、2で分離したサンプルに対してRNase処理を行った。2で分離したRNAを含む水層に1.5倍容量の100エタノールを加え、3aと同様に核酸をカラムに吸着させた。BufferRWT350μLで洗浄した後、希釈したRNaseを加えてカラムに吸着した核酸をRNase処理し、BufferRWT350μL、BufferRPE500μLで2回カラムを洗浄して、カラムを乾燥させた後、30μLのRNase-free水で溶出し、精製、濃縮したRNAサンプルを得た。4電気泳動による純度評価3a、3bで得た各RNAサンプル1μLを70°Cで2分熱変性したあと、急冷した。アジレントテクノロジー株式会社製AgilentRNA6000ピコキット型番5067-1513を用いて、電気泳動を行った。その結果を図1に示した。また、Bioanalyzer2100のSmearAnalysis機能により、25-500ntのピークエリアの面積を算出してピークのサイズと検出された核酸量濃度を確認した。3aの酵素処理なしサンプルでは、200baseより小さいサイズのピークが1本のみ確認されたレーン1。また、このときに算出された核酸量は816pg/μLであった。一方、3bのRNase処理したサンプルの電気泳動パターンを確認すると、ピークは全く検出されなかったレーン2。また、このときの核酸量は61pg/μLと算出された。血清の代わりに核酸を含まないPBSを用いて実施例1と同様に操作して検出系のノイズを確認するレーン3:BLANKと、このときの核酸量は63pg/μLであったことから、レーン2で算出された核酸量はノイズであると考えられた。以上のことから、抽出された核酸はDNAを含まないRNAのみであったことが確認された。なお、別途合成した22~25塩基のRNAを電気泳動して得られた泳動距離と本実施例で得られたピークの泳動距離は同等であったことから、レーン1で確認されたRNAは22~25塩基であると考えられた。以上の結果を表1にまとめた。<比較例1>1RNA抽出用溶液の調製溶液の終濃度は、フェノール濃度を50容量とし、これ以外は実施例1と同じ組成になるように調製して、特許文献2に記載の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-実施例1と同様に行った。3c水層からのRNAの精製、濃縮-DNase処理有り-実施例1の3bにおいて、RNAを含む水層を3bのRNaseに代えてDNaseで処理して精製、濃縮したサンプルを得た。以上のほかは、実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図2に示した。酵素処理していないサンプルからは2本の強いピーク塩基数が200塩基と500塩基付近と1本の弱いピーク実施例1と同塩基数が検出されたレーン1。RNase処理有りサンプルでは、200塩基と500塩基のピークにはほとんど変化がなかったことから、2本のピークはRNAではないことが明らかとなったレーン2。一方、レーン1で見られた、1本の弱いピークは消失したことから、実施例1と同様にこのピークはRNAであったことが確認された。DNase処理したサンプルでは、2本の強いピークが消失し、非常に短く分解された断片が検出されたレーン3ことから、この2本の強いピークは、混入したDNA断片であったことがわかった。以上のように、フェノール濃度が50容量の溶液を用いた場合は、DNAの混入が確認され、純粋なRNAが抽出されなかった。以上の結果を表3にまとめた。<比較例2>1RNA抽出用溶液の調製フェノール濃度が60容量である以外は、特許文献1に記載の抽出用溶液と同様の溶液を調製した。即ち、終濃度が60容量フェノール、2Mチオシアン酸グアニジニウム、0.1M酢酸ナトリウム、0.2容量2-メルカプトエタノールとし、pHは4とした。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図3に示した。比較例1と同様の3本のピークが確認された。このことから、DNA断片が混入していることが確認された。以上の結果を表3にまとめた。<実施例2>1RNA抽出用溶液の調製溶液の終濃度は、フェノール濃度を55容量とし、これ以外は実施例1と同じ組成になるように溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図4に示した。実施例1と同様のピークが検出されレーン1、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。RNase処理を行ったサンプルレーン5;RNaseではBLANKと同レベルまで減少していることから、抽出された核酸がRNAのみであることが確認できた。以上の結果を表1にまとめた。<実施例3>1RNA抽出用溶液の調製溶液の終濃度は、フェノール濃度を65容量とし、これ以外は実施例1と同じ組成になるように溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図4のレーン2に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表1にまとめた。<実施例4>1RNA抽出用溶液の調製溶液の終濃度は、フェノール濃度を53容量とし、これ以外は実施例1と同じ組成になるように溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図4のレーン3に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表1にまとめた。<実施例5>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、240μLのクロロホルムを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を、図4のレーン4に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表1にまとめた。<実施例6>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、100μLの4-ブロモベラトロールを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図5のレーン1に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表1にまとめた。<実施例7>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、100μLの6-ブロモ-1,4-ベンゾジオキサンを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図5のレーン2に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表1にまとめた。<実施例8>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、100μLの1-ブロモ-4-トリフルオロメトキシベンゼンを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図5のレーン3に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表1にまとめた。<実施例9>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、100μLの1-ブロモ-2,4,-ジメトキシベンゼンを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図5のレーン4に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表1にまとめた。<実施例10>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、100μLの4-フルオロアニソールを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図5のレーン5に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表2にまとめた。<実施例11>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、100μLの4-ブロモトルエンを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図5のレーン6に示した実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表2にまとめた。<実施例12>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出ホモジェネートに60μLのp-ブロモアニソールを加える代わりに、100μLの4-ブロモ酪酸エチルを加え、これ以外は実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図5のレーン7に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認された。以上の結果を表2にまとめた。<実施例13>1RNA抽出用溶液の調製実施例1で調製した溶液に塩酸を加えて、溶液のpHを4.2に調整した溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図6のレーン1に示した。溶液のpHが4.2においても実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことがわかった。以上の結果を表2にまとめた。<比較例3>1RNA抽出用溶液の調製比較例1で調製した溶液に塩酸を加えて、溶液のpHを3.6に調整した溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図6のレーン2に示した比較例1と同様の3本のピークが確認された。このことから、フェノール濃度が50容量の溶液を用いた場合は、pHを3.6としてもDNA断片が混入していることが確認された。以上の結果を表3にまとめた。<実施例14>1RNA抽出用溶液の調製実施例1と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1の300μLの血清の代わりに、生物試料としてPBS300μLに懸濁した培養細胞HEK293細胞を使用した以外は、実施例1と同様に行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-水層に加えるエタノール量を1.5倍容量ではなく、1.25倍容量にした以外は、実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-水層に加えるエタノール量を1.5倍容量ではなく、1.25倍容量にした以外は、実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価使用するキットをAgilentRNA6000ピコキットの代わりに、AgilentRNA6000ナノキット型番5067-1511アジレントテクノロジー社製を用いた以外は実施例1と同様に行った。その結果を図7に示した。3aの酵素処理なしサンプルでは、18S、28SリボソームRNAがほとんど分解されることなくRIN値:2.3抽出されていることが確認されたレーン1。このときの核酸量は、79ng/μLと算出された。また、3bのRNaseで処理したサンプルでの結果、実施例1と同様ピークは全く検出されなかったレーン2。このときの核酸量は、4ng/μLと算出された。また、サンプルを何も流さないときの検出系のノイズを確認するレーン3と、このときの核酸量は2ng/μLであったことから、レーン2の核酸量はノイズであると考えられた。以上のことから、抽出された核酸はすべてRNAであったことが確認された。以上の結果を表2にまとめた。<実施例15>1RNA抽出用溶液の調製溶液の各成分の終濃度が以下になるように、それぞれを混合してRNA抽出用の溶液を調製した。すなわち、実施例1と同じ組成の溶液900μLに対しさらに60μLのp-ブロモアニソールを加えて溶液を調製した。58容量フェノール5容量グリセロール0.8Mチオシアン酸グアニジニウム水溶液にて混合0.4Mチオシアン酸アンモニウム水溶液にて混合0.1M酢酸ナトリウム緩衝液水溶液にて混合、pHが5になるように調整上記の全量100に対し6.6容量のp-ブロモアニソール2生物試料からのRNA抽出上記1で調製した溶液900μLと血清300μLをボルテックスで混和し、ホモジナイズした。室温で12,000xGで10分間遠心した。遠心により、RNAを含有する水層と、DNA及びタンパク質を含有する有機層と中間層が形成された。このうち、水層350μLを別のチューブに分離した。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図8のレーン1、3、5に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことがわかったレーン1。RNase処理有りレーン3;RNaseではBLANKレーン5と同レベルまで減少していることから、抽出された核酸がRNAのみであることが確認できた。以上の結果を表2にまとめた。<実施例16>1RNA抽出用溶液の調製溶液の各成分の終濃度が以下になるように、それぞれを混合してRNA抽出用の溶液を調製した。すなわち、実施例1と同じ組成の溶液900μLに対しさらに90μLのクロロホルムを加えて溶液を調製した。58容量フェノール5容量グリセロール0.8Mチオシアン酸グアニジニウム水溶液にて混合0.4Mチオシアン酸アンモニウム水溶液にて混合0.1M酢酸ナトリウム緩衝液水溶液にて混合、pHが5になるように調整上記の全量100に対し10容量クロロホルム2生物試料からのRNA抽出上記1で調製した溶液900μLと血清300μLをボルテックスで混和し、ホモジナイズした。室温で12,000xGで10分間遠心した。遠心により、RNAを含有する水層と、DNA及びタンパク質を含有する有機層と中間層が形成された。このうち、水層350μLを別のチューブに分離した。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図8のレーン2、4、5に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことがわかったレーン2。RNase処理有りレーン4;RNaseではBLANKレーン5と同レベルまで減少していることから、抽出された核酸がRNAのみであることが確認できた。以上の結果を表2にまとめた。<比較例4>1RNA抽出用溶液の調製フェノール濃度が55容量である以外は比較例3と同じ組成の溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図9に示した。3aの酵素処理なしサンプルでは、実施例1と比較してややブロードなピークが検出されレーン1、また3bのRNase処理したサンプルにおいてもピークが検出されたレーン2。RNase処理有りRNaseにおいてもBLANKレーン2より大きなピークが得られていることから、RNA以外の核酸DNAの混入が確認できた。以上の結果を表3にまとめた。<実施例17>1RNA抽出用溶液の調製溶液の終濃度は、pH4とし、これ以外は実施例1と同じ組成になるように溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図10レーン1、2、5に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認されたレーン1。RNase処理有りレーン2;RNaseではBLANKレーン5と同レベルまで減少していることから、抽出された核酸がRNAのみであることが確認できた。以上の結果を表2にまとめた。<実施例18>1RNA抽出用溶液の調製溶液の終濃度は、pH6とし、これ以外は実施例1と同じ組成になるように溶液を調製した。2生物試料からのRNA抽出実施例1と同様に生物試料として血清を用いて行った。3a水層のRNAの精製、濃縮-酵素処理なし-実施例1と同様に行った。3b水層からのRNAの精製、濃縮-RNase処理有り-実施例1と同様に行った。4電気泳動による純度評価実施例1と同様に行った。その結果を図10レーン3、4、5に示した。実施例1と同様のピークが検出され、RNAのみが純度高く抽出されたことが確認されたレーン3。RNase処理有りレーン4;RNaseではBLANKレーン5と同レベルまで減少していることから、抽出された核酸がRNAのみであることが確認できた。以上の結果を表2にまとめた。"