"特異的内在性miRNAを発現している細胞中でのみ目的の外因性タンパク質の発現を指示するための1つまたは複数のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記1つまたは複数のポリヌクレオチドが外因性RNA分子をコードし、その外因性RNA分子が:a目的の外因性タンパク質をコードする配列;b目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる阻害配列;およびc前記特異的内在性miRNA用の結合部位、を含み、それにより、前記特異的内在性miRNAの存在下でのみ、外因性RNA分子が切断部位で切断され、その結果、目的の外因性タンパク質をコードする配列から阻害配列が放出され、目的の外因性タンパク質が発現可能となる組成物。前記切断部位が前記結合部位内に位置し、その切断部位が阻害配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列の間に位置する請求項1に記載の組成物。前記特異的内在性miRNAが切断部位での前記外因性RNA分子の切断を指示するために、特異的内在性miRNA用前記結合部位が前記特異的内在性miRNA内の配列に対し充分な相補性を有する請求項1に記載の組成物。前記特異的内在性miRNAが、細胞マイクロRNA、ウイルスマイクロRNA、または両方である請求項1に記載の組成物。前記内在性マイクロRNAが、腫瘍性細胞中でのみ発現する請求項1に記載の組成物。前記ウイルスマイクロRNAが、二本鎖DNAウイルス、単鎖DNAウイルス、二本鎖RNAウイルス、二本鎖RNAウイルス、単鎖プラス鎖ウイルス、単鎖マイナス鎖ウイルスおよびレトロウイルス、からなる群より選択されるウイルスにより発現する請求項4に記載の組成物。目的の外因性タンパク質が毒素である請求項1に記載の組成物。前記毒素が、リシン、リシンA鎖、アブリン、アブリンA鎖、ジフテリア毒素A鎖およびこれらの改変型、からなる群より選択される請求項7に記載の組成物。前記毒素が、アルファ毒素、サポリン、トウモロコシRIP、オオムギRIP、コムギRIP、comRIP、ライムギRIP、亜麻RIP、志賀毒素、志賀様RIP、モモルジン、チミジンキナーゼ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、シュードモナス外毒素、シュードモナス外毒素A、大腸菌シトシンデアミナーゼおよびこれらの改変型、からなる群より選択される請求項7に記載の組成物。前記阻害配列が切断部位の上流に配置され、前記阻害配列が、前記外因性RNA分子からの前記目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を低減させる請求項1に記載の組成物。前記阻害配列が複数の開始コドンを含む請求項10に記載の組成物。各前記開始コドンおよび前記目的の外因性タンパク質をコードする配列が同じ読み枠にはない請求項11に記載の組成物。各前記開始コドンが5’-AUG-3’を基本的に含む請求項11に記載の組成物。前記開始コドンがコザックコンセンサス配列内に配置される請求項11に記載の組成物。前記阻害配列がポリペプチドに結合でき、前記ポリペプチドが、前記外因性RNA分子からの前記目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を低減させる請求項1に記載の組成物。前記ポリペプチドが翻訳リプレッサータンパク質であり、前記翻訳リプレッサータンパク質が内在性翻訳リプレッサータンパク質、または組成物の1つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされる翻訳リプレッサータンパク質である請求項15に記載の組成物。前記阻害配列が細胞内局在のためのRNA局在化シグナル、内在性miRNA結合部位、または両方を含む請求項1に記載の組成物。前記組成物が、直接または間接的に内在性エキソヌクレアーゼの発現を阻害できる機能性RNAをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む請求項1に記載の組成物。充分な相補性が少なくとも30の相補性である請求項1に記載の組成物。充分な相補性が少なくとも90の相補性である請求項1に記載の組成物。特異的内在性miRNA用の前記結合部位が、同じまたは異なる内在性miRNA対し複数の結合部位であり、前記切断部位が複数の切断部位である請求項1に記載の組成物。前記ポリヌクレオチドが1つまたは複数のDNA分子、1つまたは複数のRNA分子またはこれらの組み合わせを含む請求項1に記載の組成物。前記特異的内在性miRNAが下記からなる群より選択される請求項1に記載の組成物:hsv1-miR-H1、hsv1-miR-H2、hsv1-miR-H3、hsv1-miR-H4、hsv1-miR-H5、hsv1-miR-H6、hsv2-miR-I、hcmv-miR-UL22A、hcmv-miR-UL36、hcmv-miR-UL70、hcmv-miR-ULl12、hcmv-miR-UL148D、hcmv-miR-US4、hcmv-miR-US5-I、hcmv-miR-US5-2、hcmv-miR-US25-1、hcmv-miR-US25-2、hcmv-miR-US33、kshv-miR-K12-1、kshv-miR-K12-2、kshv-miR-K12-3、kshv-miR-K12-4、kshv-miR-K12-5、kshv-miR-K12-6、kshv-miR-K12-7、kshv-miR-K12-8、kshv-miR-K12-9、kshv-miR-K12-10a、kshv-miR-K12-10b、kshv-miR-K12-11、kshv-miR-K12-12、ebv-miR-BART1、ebv-miR-BART2、ebv-miR-BART3、ebv-miR-BART4、ebv-miR-BART5、ebv-miR-BART6、ebv-miR-BART7、ebv-miR-BART8、ebv-miR-BART9、ebv-miR-BART10、ebv-miR-BART11、ebv-miR-BART12、ebv-miR-BART13、ebv-miR-BART14、ebv-miR-BART15、ebv-miR-BART16、ebv-miR-BART17、ebv-miR-BART18、ebv-miR-BART19、ebv-miR-BART20、ebv-miR-BHRF1-1、ebv-miR-BHRF1-2、ebv-miR-BHRF1-3、bkv-miR-B1、jcv-miR-J1、hiv1-miR-H1、hiv1-miR-N367、hiv1-miR-TAR、sv40-miR-S1、MCPyV-miR-M1、hsv1-miR-LAT、hsv1-miR-LAT-ICP34.5、hsv2-miR-II、hsv2-miR-III、hcmv-miR-UL23、hcmv-miR-UL36-1、hcmv-miR-UL54-1、hcmv-miR-UL70-1、hcmv-miR-UL22A-1、hcmv-miR-UL112-1、hcmv-miR-UL148D-1、hcmv-miR-US4-1、hcmv-miR-US24、hcmv-miR-US33-1、hcmv-RNAβ2.7、ebv-miR-BART1-1、ebv-miR-BART1-2、ebv-miR-BART1-3、ebv-miR-BHFR1、ebv-miR-BHFR2、ebv-miR-BHFR3、hiv1-miR-TAR-5p、hiv1-miR-TAR-p、hiv1-HAAmiRNA、hiv1-VmiRNAl、hiv1-VmiRNA2、hiv1-VmiRNA3、hiv1-VmiRNA4、mir-675、hiv1-VmiRNA5、hiv2-miR-TAR2-5p、hiv2-miR-TAR2-3p、mdv1-miR-M1、mdv1-miR-M2、mdv1-miR-M3、mdv1-miR-M4、mdv1-miR-M5、mdv1-miR-M6、mdv1-miR-M7、mdv1-miR-M8、mdv1-miR-M9、mdv1-miR-M10、mdv1-miR-M11、mdv1-miR-M12、mdv1-miR-M13、mdv2-miR-M14、mdv2-miR-M15、mdv2-miR-M16、mdv2-miR-M17、mdv2-miR-M18、mdv2-miR-M19、mdv2-miR-M20、mdv2-miR-M21、mdv2-miR-M22、mdv2-miR-M23、mdv2-miR-M24、mdv2-miR-M25、mdv2-miR-M26、mdv2-miR-M27、mdv2-miR-M28、mdv2-miR-M29、mdv2-miR-M30、mcmv-miR-M23-1、mcmv-miR-M23-2、mcmv-miR-M44-1、mcmv-miR-M55-l、mcmv-miR-M87-1、mcmv-miR-M95-1、mcmv-miR-m01-1、mcmv-miR-m01-2、mcmv-miR-m01-3、mcmv-miR-m01-4、mcmv-miR-m21-1、mcmv-miR-m22-1、mcmv-miR-m59-1、mcmv-miR-m59-2、mcmv-miR-m88-1、mcmv-miR-M107-1、mcmv-miR-M108-1、mcmv-miR-M108-2、rlcv-miR-rL1-1、rlcv-miR-rL1-2、rlcv-miR-rL1-3、rlcv-miR-rL1-4、rlcv-miR-rL1-5、rlcv-miR-rL1-6、rlcv-miR-rL1-7、rlcv-miR-rL1-8、rlcv-miR-rL1-9、rlcv-miR-rL1-10、rlcv-miR-rL1-11、rlcv-miR-rL1-12、rlcv-miR-rL1-13、rlcv-miR-rL1-14、rlcv-miR-rL1-15、rlcv-miR-rL1-16、rrv-miR-rR1-1、rrv-miR-rR1-2、rrv-miR-rR1-3、rrv-miR-rR1-4、rrv-miR-rR1-5、rrv-miR-rR1-6、rrv-miR-rR1-7、mghv-miR-M1-1、mghv-miR-M1-2、mghv-miR-M1-3、mghv-miR-M1-4、mghv-miR-M1-5、mghv-miR-M1-6、mghv-miR-M1-7、mghv-miR-M1-8、mghv-miR-M1-9およびsv40-miR-S1。前記外因性RNA分子が、開始コドンおよび前記目的のタンパク質をコードする配列の出発コドンの間に位置する停止コドンをさらに含み、前記停止コドンおよび前記開始コドンが同じ読み枠にあり、前記停止コドンが、5’-UAA-3’、5’-UAG-3’および5’-UGA-3’、からなる群より選択される請求項1に記載の組成物。前記阻害配列が目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に配置され、阻害配列が-30kcal/mol未満の折り畳み自由エネルギーを有する二次構造を形成でき、それにより、前記二次構造が、スキャニングリボソームが前記目的の外因性タンパク質の出発コドンに到達するのを阻止するのに充分である請求項1に記載の組成物。前記細胞が、ヒト細胞、動物細胞、培養細胞および植物細胞、からなる群より選択される請求項1に記載の組成物。前記組成物が細胞中に導入される請求項1に記載の組成物。前記細胞が生物体中に存在する請求項1に記載の組成物。請求項1の組成物を含む診断キット。請求項1の組成物および1つまたは複数の賦形剤を含む医薬組成物。標的細胞の死滅を標的にする方法であって、標的細胞中に請求項1の組成物の導入を含み、標的細胞が特異的内在性miRNAを含む方法。外因性RNA分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターであって、前記外因性RNA分子が、a目的の外因性タンパク質をコードする配列;b目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる阻害配列;およびc特異的内在性miRNA用の結合部位、を含むベクター。前記ベクターがウイルスベクターである請求項32に記載のベクター。前記ベクターが非ウイルスベクターである請求項32に記載のベクター。ベクターを前記特異的内在性miRNAを含む細胞中に導入するに場合に、特異的内在性miRNAが切断部位での前記外因性RNA分子の切断を指示するために、特異的内在性miRNA用の前記結合部位が特異的内在性miRNA内の配列に対し充分な相補性である請求項32に記載のベクター。前記切断部位が特異的内在性miRNA用の前記結合部位内に位置し、切断部位が阻害配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列の間に位置する請求項32に記載のベクター。特異的内在性miRNAが細胞マイクロRNA、ウイルスマイクロRNA、または両方である請求項36に記載のベクター。前記内在性マイクロRNAが腫瘍細胞中でのみ発現する請求項32に記載の組成物。前記ウイルスマイクロRNAが、二本鎖DNAウイルス、単鎖DNAウイルス、二本鎖RNAウイルス、二本鎖RNAウイルス、単鎖プラス鎖ウイルス、単鎖マイナス鎖ウイルスおよびレトロウイルス、からなる群より選択されるウイルスにより発現する請求項37に記載の組成物。目的の外因性タンパク質が、毒素である請求項32に記載の組成物。前記毒素が、リシン、リシンA鎖、アブリン、アブリンA鎖、ジフテリア毒素A鎖およびこれらの改変型、からなる群より選択される請求項40に記載の組成物。前記毒素が、アルファ毒素、サポリン、トウモロコシRIP、オオムギRIP、コムギRIP、comRIP、ライムギRIP、亜麻RIP、志賀毒素、志賀様RIP、モモルジン、チミジンキナーゼ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、シュードモナス外毒素、シュードモナス外毒素A、大腸菌シトシンデアミナーゼおよびこれらの改変型、からなる群より選択される請求項40に記載の組成物。発明の詳細な説明下記の詳細な説明では、参照用語、例えば:前記のsaid、the、最後のthelastおよび、前記のtheformerが使われる場合、それは、上述の明確な用語を参照する例えば、Thenucleicacidsequenceという場合、それは、上述の核酸配列nucleicacidsequenceを参照し、上述のヌクレオチド配列を参照しない.さらに、下記の発明の詳細な説明では、他の実施形態を参照する各実施形態は、別々のユニットとして、それらと一緒に定義される。下記は、説明全体を通して使用される用語であり、種々の実施形態においては下記を意味すると理解されるべきである:本明細書で言及される用語のポリヌクレオチド分子、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核酸およびヌクレオチド配列は、本明細書では同義に使用できる。この用語は、デオキシリボヌクレオチドDNA、リボヌクレオチドRNAポリマー、および別々の断片の形の、またはさらに大きな構築物、直鎖または分岐、単鎖、二本鎖、三本鎖、またはこれらの複合物の成分としてのそれらの改変型に関する。この用語は、また、RNA/DNA複合物も包含する。ポリヌクレオチドは、例えば、DNAもしくはRNAのセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列であってもよい。DNAまたはRNA分子は、限定されないが、例えば、相補的なDNAcDNA、ゲノムDNA、合成DNA、組換えDNA、もしくはそれらの複合物またはRNA分子、例えば、mRNA、shRNA、siRNA、miRNA、等であってもよい。従って、本明細書に使用される用語のポリヌクレオチド分子、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核酸およびヌクレオチド配列は、DNAおよびRNA分子の両方を指すことが意図されている。この用語は、天然塩基、糖、および共有結合ヌクレオシド間結合から構成されるオリゴヌクレオチド、ならびにそれぞれの天然の成分と類似的に機能する非天然部分を有するオリゴヌクレオチドをさらに含む。用語のポリペプチド、ペプチドおよびタンパク質は、本明細書では同義に使用され、アミノ酸残基のポリマーを意味する。この用語は、1つまたは複数のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工の化学的類似体であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマーに適用される。本明細書で言及される用語の相補性は、核酸の鎖間の塩基対形成を意味する。当技術分野で知られているように、核酸の各鎖は、鎖間の塩基対が2つまたは3つの水素結合を介して非共有結合で結合されるという点において別の鎖に対し相補的でありうる。水素結合により結合される相補的な核酸鎖上の向かい合っている2つのヌクレオチドは、塩基対と呼ばれる。ワトソン-クリックDNA塩基対形成に従って、アデニンAはチミンTと、グアニンGは、シトシンCと塩基対をつくる。RNAでは、チミンは、ウラシルUで置換される。2つの核酸の鎖間の相補性の程度は、鎖間で塩基対を形成するヌクレオチドの数またはパーセンテージに応じて変わってもよい。例えば、100相補性は、各鎖中の全てのヌクレオチドが相補鎖と塩基対を形成することを示す。例えば、95相補性は、各鎖中の95のヌクレオチドが相補鎖と塩基対を形成することを示す。用語の充分な相補性は、約30~約100の範囲の任意のパーセンテージの相補性を含むことができる。本明細書で使われる用語の構築物は、人工で構築されたまたは単離された核酸分子を指し、1つまたは複数の核酸配列を含んでもよく、核酸配列は、コード配列すなわち、最終産物をコードする配列、調節配列、非コード配列、またはこれらのいずれかの組み合わせであってもよい。用語の構築物は、例えば、ベクターを含むが、それに限定されると見なされるべきではない。発現ベクターは、異質細胞中で異種の核酸断片DNAのようなを組み込み、発現させる能力を有するベクターを指す。換言すれば、発現ベクターは、転写可能な核酸配列/断片DNA、mRNA、tRNA、rRNA、等を含む。多くのウイルス、原核生物および真核生物の発現ベクターが既知であり、および/または市販されている。適切な発現ベクターの選択は、当業者の知識の範囲内で可能である。本明細書で使われる用語の上流および下流は、ヌクレオチド配列、例えば、DNA配列またはRNA配列、中の相対的位置を意味する。よく知られているように、ヌクレオチド配列は、5’末端および3’末端ヌクレオチド骨格の糖デオキシリボースまたはリボース環上の炭素に対し、そのように呼ばれるを有する。従って、ヌクレオチド配列上の位置に対して、用語の下流は、配列の3’末端に向かう領域に関連する。用語の上流は、鎖の5’末端に向かう領域に関連する。本明細書で使われる用語のプロモーターエレメントpromoterelement、プロモーターまたはプロモーター配列promotersequenceは、通常、コード配列の5’末端に配置されるすなわち、先行する、上流に配置されるヌクレオチド配列を指し、スイッチとして機能し、コード配列の発現を活性化する。コード配列が活性化される場合は、転写されると言われる。転写は、通常、コード配列からのRNA分子例えば、mRNAの合成を伴う。従って、プロモーターは、転写調節配列として機能し、また、mRNAへのコード配列の転写の開始部位を与える。プロモーターは、天然ソースからそのまま得ても、または天然の異なるプロモーター由来の異なる配列から構成されても、またはさらに合成ヌクレオチドセグメントを含んでもよい。当業者には、異なるプロモーターは、異なる組織または細胞型で、または異なる成長の段階で、または異なる環境条件に応答して、または種々の発現レベルで、遺伝子の発現を指示してもよいことは理解されよう。ほとんどの細胞型中でほぼ必ず遺伝子を発現させるプロモーターは、通常、構成的プロモーターと呼ばれる。特異的組織中で遺伝子発現を誘導するプロモーターは、組織特異的プロモーターと呼ばれる。本明細書で言及される用語の外因性RNA分子は、標的細胞中に導入される、および/または標的細胞中で発現する組換え型RNA分子を意味する。外因性RNA分子は、インタクトすなわち、完全長分子であっても、または細胞内で、1つまたは複数の切断部位で切断されてもよい。本明細書で言及される用語の目的のタンパク質および目的の外因性タンパク質は、同義に使用できる。この用語は、細胞内で外因性RNA分子から翻訳されるペプチド配列を指す。一部の実施形態では、ペプチド配列は、1つまたは複数の別々のタンパク質または融合タンパク質であってもよい。本明細書で言及される用語の特異的内在性miRNAおよび特異的miRNAは、同義に使用できる。この用語は、細胞内マイクロRNAmiRNA分子/配列を指す。特異的内在性miRNAは、細胞のゲノムによりコードされてもよく細胞miRNA、および/または細胞内に存在する外来性ゲノム由来、例えば、細胞内に存在するウイルス由来ウイルスmiRNAであってもよい。特異的miRNAは、外因性RNA分子の標的細胞中への導入/発現の前に標的細胞内に存在する。本明細書で使用される用語の発現は、標的細胞での所望の最終産物分子の産生を意味する。最終産物分子は、例えば、RNA分子;ペプチドまたはタンパク質、等;またはこれらの組み合わせであってもよい。本明細書で言及される用語の読み枠ORFは、出発コドンおよび停止コドンを含むコーディング領域を意味する。本明細書で言及される用語のコザック配列は、当技術分野でよく知られており、翻訳開始部位としてリボソームにより認識されるmRNA分子上の配列を指す。用語のコザックコンセンサス配列、コザックコンセンサスまたはコザック配列は、真核生物のmRNA上で出現し、コンセンサスgccgccRccAUGG配列番号24を有する配列である。ここで、Rは、別のGがその後に続く出発コドンAUGの3つの塩基上流のプリンアデニンまたはグアニンである。一部の実施形態では、コザック配列は、配列RNNAUGG配列番号83を有する。本明細書で使われる用語の導入および形質移入は、同義に使用でき、例えば、核酸、ポリヌクレオチド分子、ベクター、等の分子を、標的細胞中に、さらに具体的には、標的細胞の膜に囲まれた空隙の内部に、移入することを意味する。分子は、例えば、Sambrooketal.分子クローニング:実験マニュアルMolecularCloning:ALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratoryPress、NewYork2001、で教示のように、当業者に既知のいずれかの手段によって、標的細胞中に導入できる。この文献の内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。分子を細胞中に導入する手段には、例えば、限定されないが、熱ショック、リン酸カルシウム形質移入、PEI形質移入、電気穿孔、リポフェクション、形質移入試薬、ウイルス媒介移入、等、またはこれらの組み合わせが含まれる。細胞の形質移入は、例えば、ヒト細胞、動物細胞、直物細胞、等のいずれの起原の細胞のいずれのタイプの細胞にも行うことができる。細胞は、単離細胞、組織培養細胞、細胞株、生物体内に存在する細胞、等であってよい。細胞/細胞集団に関する用語の死滅させるは、その細胞/細胞集団の死亡に繋がると思われるいずれかのタイプの操作を含むことを意味する。本明細書で言及される用語の疾患の治療または状態の治療は、組成物を投与することを意味し、この組成物は、疾患に関連する症状を回復させる、重症度を下げるもしくは疾患を治癒する、または疾患の発症を防ぐために有効な少なくとも1つの試薬例えば、1つまたは複数のポリヌクレオチド分子、1つまたは複数の発現ベクター、1つまたは複数の物質/成分、等であってよいを含む。投与には、いずれの投与経路を含めてもよい。用語の検出、診断は、疾患、症状、傷害、病理学的または正常な状態の検出の方法;疾患、症状、傷害、病理学的状態の分類方法;疾患、症状、傷害、病理学的状態の重症度の判定方法;疾患、症状、傷害、病理学的状態の進行のモニタリング方法;転帰、および/またはその回復の見通しの予測方法、を意味する。1.本発明の組成物の基本的構造一部の実施形態では、特異的内在性miRNAを含む細胞中でのみ、目的の外因性タンパク質を発現するための組成物が提供される。内在性miRNAは、細胞miRNA、ウイルスmiRNAおよび/または細胞中に存在するいずれのタイプのmiRNAであってもよい。目的の外因性タンパク質は、例えば、毒素、等のいずれのタイプのペプチドまたはタンパク質であってもよい。一部の実施形態では、本発明の組成物は、1つまたは複数のポリヌクレオチド分子、例えば、DNA分子、RNA分子、または両方、を含んでもよい。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも下記の配列を含むRNA分子である外因性RNA分子を含むか、またはコードする:a目的の外因性タンパク質をコードする配列;b目的の外因性タンパク質の発現を阻害することができる阻害配列;およびc特異的内在性miRNAが外因性RNA分子の切断部位での切断を指示するために、特異的内在性miRNAの成熟miRNA鎖に対し、充分な相補性であるように設計されている結合部位。切断部位は、阻害配列と目的の外因性タンパク質をコードする配列の間に配置されるように設計されている。従って、細胞中での特異的内在性miRNAの存在下でのみ、外因性RNA分子は特異的内在性miRNAにより切断部位で切断されて、阻害配列が目的の外因性タンパク質をコードする配列から切り離され、目的の外因性タンパク質が発現できる。これは、例えば、図2と3に示されている。一部の実施形態では、特異的内在性miRNAの選択は、標的細胞である特異的細胞タイプ内のその発現に応じて関連付けられる、および/または決定できる。従って、特定的細胞タイプ中で発現した特異的内在性miRNAの選択は、選択細胞型標的細胞中での、目的の外因性タンパク質の標的化された発現の機序を提供できる。特異的細胞は、例えば、限定されないが、ウイルスまたは他の感染性病原体に感染した細胞;良性または悪性細胞、免疫系の成分を発現している細胞、から選択できる。特異性は、特異的内在性miRNAが標的細胞中で外因性RNA分子の切断を指示するために、特異的内在性miRNAが成熟miRNA鎖に対し、充分に相補的であるように組成物の外因性RNA分子の結合部位の改変することにより実現できる。キャップまたはポリAテールが無いmRNAでも、タンパク質を翻訳できることは、当技術分野で知られている。哺乳動物細胞では、キャップの付加は、mRNAの翻訳を35~50倍増加させ、ポリAテールの付加は、mRNAの翻訳を114~155倍増加させる[6]。哺乳動物細胞のポリAテールは、機能的mRNA半減期を2.6倍しか増加させず、キャップは、機能的mRNA半減期を1.7倍しか増加させない。さらに、一部のタンパク質は、細胞当たり1つのタンパク質の濃度でさえも、細胞に対し生物学的効果を及ぼすことができることが当技術分野で知られている。例えば、細胞のサイトゾルに到達したリシンまたはアブリンのただ一個のタンパク質でも、細胞を死滅させることができることが報告された[3、4]。さらに、細胞に導入されたジフテリア毒素断片ADTAのただ1個のタンパク質で、細胞を死滅させることができる[5]。一部の実施形態では、目的の外因性タンパク質は、いずれのタンパク質またはペプチド、例えば、限定されないが、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、等またはそれらの組み合わせであってもよい。一部の実施形態では、目的の外因性タンパク質は、2つのタンパク質の融合体であるポリペプチドであってもよく、それらの間に切断部位を持つことができ、細胞内で2つのタンパク質の分離が可能となる。例えば、目的の外因性タンパク質は、リシンおよびDTAの融合タンパク質であってもよく、それにより、例えば、特異的プロテアーゼによる融合タンパク質の切断により、細胞中でDTAとリシンタンパク質を別々に作製することができる。一部の実施形態では、目的の外因性タンパク質は、組成物により発現されうる2つの別々のタンパク質であってもよい。例えば、目的の外因性RNAは、2つの別々の目的の外因性タンパク質、例えば、リシンとDTAをコードしてもよい。2.切断部位の上流に配置された阻害配列を有する外因性RNA分子の構造2.1.切断部位の上流に配置された阻害配列の構造一部の実施形態では、外因性RNA分子中の阻害配列は、切断部位の上流または下流に配置できる。このセクションでは、外因性RNA分子中の切断部位の上流に配置される阻害配列の構造について記載する。これは、例えば、図2に示されている。一部の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、例えば、開始コドンであってもよい。開始コドンおよび目的の外因性タンパク質をコードする配列は、同じ読み枠に無く、それにより、開始コドンは、コード配列が下流にある目的の外因性タンパク質のフレームシフト変異の原因となる可能性がある。これは、例えば、図4Aに示されている。一実施形態では、開始コドンは、コザックコンセンサス配列内に配置されてもよい。さらに、翻訳のイニシエータとして機能する能力を維持している改変コザックコンセンサス配列も使用可能である。例えば、図4Bを参照。一部の実施形態では、ヒトのコザックコンセンサス配列は、5’-ACCAUGG-3’配列番号25であり、開始コドンは、5’-AUG-3’である。一部の実施形態では、開始コドンは、TISUモチーフ内に配置されても、または1つまたは複数のTISUモチーフを持ってもよい。TISU短い5’UTRの翻訳イニシエータTranslationInitiatorofShort5’UTRモチーフは、非常に短い5’UTRを使った効率的で正確なmRNAからの翻訳開始を指示する固有の能力によりコザックコンセンサスとは区別される[38]。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、複数の開始コドンを持つことができ、それぞれの開始コドンおよび目的の外因性タンパク質をコードする配列は、同じ読み枠中には存在しない。開始コドンは、コード配列が下流にある目的の外因性タンパク質のフレームシフト変異の原因となる可能性がある。さらに、それぞれの開始コドンは、コザックコンセンサス配列または翻訳イニシエータとして機能する能力を維持している改変コザックコンセンサス配列内に配置されてもよい。例えば、図4Cを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、開始コドンを含んでもよい。外因性RNA分子は、開始コドンと目的の外因性タンパク質をコードする配列の出発コドンとの間に停止コドンを含んでもよく、この場合、停止コドンと開始コドンは、同じ読み枠にある。このような実施形態では、下流の目的の外因性タンパク質をコードする配列の翻訳の効率を低下させる可能性のある上流の読み枠uORFが作られる。例えば、図5Aを参照。一部の実施形態では、停止コドンは、例えば、5’-UAA-3’または5’-UAG-3’または5’-UGA-3’であってよい。一部の実施形態では、強力なステムおよびループは、miRNA用の標的配列切断部位の上流または下流の位置で、上流のORFに対して下流に配置できる。このようなステムおよびループの形成は、停止コドンに到達したにもかかわらず、リボソームの小さいサブユニットがmRNAから切り離されず、mRNAを走査し続ける状態を支援することができる。リボソームの小さいサブユニットは、強力なRNA二次構造を開くことができない。さらに、これらのステムとループが、標的配列の下流に配置される場合、それらは、例えば、XRN1エキソリボヌクレアーゼにより行うことができる切断mRNAの分解を阻止することができる。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、開始コドンおよび細胞内局在のための選別グシグナルをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。ヌクレオチド配列は、開始コドンの下流に配置でき、ヌクレオチド配列と開始コドンは、同じ読み枠にある。一部の実施形態では、選別グシグナルにより指示される目的の外因性タンパク質の細胞内局在は、目的のタンパク質の生物学的機能を阻害できる。細胞内局在のための選別グシグナルは、例えば、限定されないが、ミトコンドリア用選別グシグナル、核用選別グシグナル、エンドソーム用選別グシグナル、リソソーム用選別グシグナル、ペルオキシソーム用選別グシグナル、ER用選別グシグナル、等であってもよい。細胞内局在用選別グシグナルは、例えば、ペルオキシソームターゲティングシグナル2[R/KL/V/IX5Q/HL/A]配列番号26またはH2NRLRVLSGHL配列番号27ヒトアルキルジヒドロキシアセトンホスファートシンターゼのであってもよい[28]。これは、例えば、図5Bに示される。本発明の別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、開始コドンおよびタンパク質分解シグナルをコードするヌクレオチド配列を含んでもよい。ヌクレオチド配列は、開始コドンの下流に配置され、それにより、ヌクレオチド配列および開始コドンは、同じ読み枠に存在できる。ンパク質分解シグナルは、例えば、限定されないが、ユビキチン分解シグナルであってもよい。例えば、図5Bを参照されたい。本発明の別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、開始コドンならびに開始コドンおよび目的の外因性タンパク質をコードする配列と同じ読み枠にある開始コドンの下流のヌクレオチド配列を含むように設計でき、そのヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列が目的の外因性タンパク質に融合される場合、目的の外因性タンパク質の生物学的機能が阻害されうる。例えば、図5Cを参照されたい。本発明の別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、開始コドンを含んでもよく、また、外因性RNA分子が開始コドンの下流の停止コドンをさらに含むことができ、それにより、停止コドンおよび開始コドンが同じ読み枠に存在することができる。さらに、外因性RNA分子は、停止コドンの下流のイントロンを追加で含むことができ、それにより、外因性RNA分子が外因性RNA分子を分解できるナンセンス変異依存分解機構NMDのための標的となりうる[29]。例えば、図5Dを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、翻訳リプレッサータンパク質に結合できる配列を含んでもよい。一部の実施形態では、翻訳リプレッサータンパク質は、内在性翻訳リプレッサータンパク質である。一部の実施形態では、翻訳リプレッサータンパク質は、組成物によりコードされてもよい。翻訳リプレッサータンパク質は、目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を、直接、または間接的に低減させることができる[24]。例えば、翻訳リプレッサータンパク質に結合できる配列には、限定されないが、SMAUGリプレッサータンパク質5’-UGGAGCAGAGGCUCUGGCAGCUUUUGCAGCG-3’[25]配列番号28に結合する配列が含まれる。例えば、図6Aを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、細胞内局在のためのRNA局在化シグナル例えば、同時翻訳移入co-translationalimportを含むまたは内在性miRNA結合部位を含むことができ、その結果、外因性RNA分子の細胞内局在により、目的の外因性タンパク質の翻訳を阻害でき、また、外因性RNA分子半減期を短縮できる。RNA局在化シグナルは、例えば、限定されないが、RNA局在化シグナルは、ミエリン形成末梢、ミエリンコンパートメント、ミトコンドリア、ラメラの前縁、核周囲の細胞質[22]、等のためのものであってもよい。例えば、RNA局在化シグナルは、ミエリン形成末梢5’-GCCAAGGAGCCAGAGAGCAUG-3’配列番号29または5’-GCCAAGGAGCC-3’配列番号30[27]のためのRNA局在化シグナルであってもよい。例えば、図6Bを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、外因性RNA分子の分解を刺激できるRNA不安定化配列を含むことができる。RNA不安定化配列は、例えば、AUリッチ領域ARE、エンドヌクレアーゼ認識部位、等であってもよい。AUリッチ領域は、例えば、少なくとも約35ヌクレオチド長のAUリッチ領域であってもよい。例えば、AUリッチ領域は、5’-AUUUA-3’配列番号31、5’-UUAUUUAU/AU/A-3’配列番号32または5’-AUUU-3’配列番号33[26]であってもよい。例えば、図6Cを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、下流にある目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を低下させることができる二次構造を形成可能な配列を含んでもよい。一部の実施形態では、二次構造の折り畳み自由エネルギーは、-30kcal/mol未満例えば、-50kcal/mol、-80kcal/molであってもよく、従って、二次構造は、スキャニングリボソームが目的の外因性タンパク質をコードする領域の下流にある出発コドンに到達するのを阻止するのに充分である。例えば、図6Dを参照されたい。さらなる実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、切断部位のすぐ上流に配置されたヌクレオチド配列を含むことができ、この場合、ヌクレオチド配列は、二次構造の形成のために切断部位のすぐ下流に配置されたヌクレオチド配列に結合でき、それにより、二次構造が、下流にある目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を直接、または間接的に低減させることができる。二次構造の折り畳み自由エネルギーは、-30kcal/mol未満例えば、-50kcal/mol、-80kcal/molであってもよく、従って、この二次構造は、スキャニングリボソームが目的の外因性タンパク質の出発コドンに到達するのを阻止するのに充分でありうる。別の実施形態では、切断部位は、二次構造の単鎖領域内またはループ領域内に配置でき、それにより、単鎖領域またはループ領域は、例えば、限定されないが、少なくとも約15ヌクレオチド長の領域でありうる。別の実施形態では、外因性RNA分子は、切断部位の下流で、目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に配列内リボソーム進入部位IRES配列をさらに含むことができ、それにより、IRES配列が、インタクト外因性RNA分子の場合に比べ、切断された外因性RNA分子内でさらに機能的となる。別の実施形態では、少なくとも一部のIRES配列を、切断部位のすぐ下流にあるヌクレオチド配列内に配置できる。例えば、図7を参照されたい。IRES配列は、例えば、限定されないが、下記から選択できる:ピコルナウイルスIRES、口蹄疫ウイルスIRES、脳心筋炎ウイルスIRES、肝炎AウイルスIRES、肝炎CウイルスIRES、ヒトライノウイルスIRES、ポリオウイルスIRES、ブタ水疱病ウイルスIRES、カブモザイクポチウイルスIRES、ヒト繊維芽細胞増殖因子2mRNAIRES、ペスチウイルスIRES、リーシュマニアRNAウイルスIRES、モロニーマウス白血病ウイルスIRES、ヒトライノウイルス14IRES、アフトウイルスIRES、ヒト免疫グロブリン重鎖結合タンパク質mRNAIRES、ショウジョウバエアンテナペディアmRNAIRES、ヒト繊維芽細胞増殖因子2mRNAIRES、肝炎GウイルスIRES、トバモウイルスIRES、血管内皮細胞増殖因子mRNAIRES、コクサッキーBウイルスIRES、c-mycプロトオンコジーンmRNAIRES、ヒトMYT2mRNAIRES、ヒトパレコウイルス1型ウイルスIRES、ヒトパレコウイルス2型ウイルスIRES、真核生物開始因子4GImRNAIRES、チャバネアオカメムシ腸管ウイルスIRES、タイラーマウス脳脊髄炎ウイルスIRES、ウシエンテロウイルスIRES、コネキシン43mRNAIRES、ホメオドメインタンパク質GtxmRNAIRES、AML1転写因子mRNAIRES、NF-カッパBリプレッシング因子mRNAIRES、アポトーシスのX連鎖阻害剤mRNAIRES、コオロギ麻痺ウイルスRNAIRES、p58PITSLREプロテインキナーゼmRNAIRES、オルニチンデカルボキシラーゼmRNAIRES、コネキシン32mRNAIRES、ウシウイルス性下痢症ウイルスIRES、インスリン様増殖因子I受容体mRNAIRES、ヒト免疫不全ウイルス1型gag遺伝子IRES、ブタコレラウイルスウイルスIRES、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスIRES、ランダムオリゴヌクレオチドライブラリーから選択される短いIRES、Jembrana病ウイルスIRES、アポトーシスプロテアーゼ活性化因子1mRNAIRES、ムギクビレアブラムシウイルスIRES、カチオン性アミノ酸輸送体mRNAIRES、ヒトインスリン様増殖因子IIリーダー2mRNAIRES、ジアルジアウイルスIRES、Smad5mRNAIRES、ブタテスコウイルス‐1タルファンIRES、DrosophilaHairlessmRNAIRES、hSNM1mRNAIRES、Cbfal/Runx2mRNAIRES、エプスタインバーウイルスIRES、ハイビスカスクロロティックリングスポットウイルスIRES、ラット下垂体バソプレシンV1b受容体mRNAIRESまたはヒトhsp70mRNAIRES。2.2.5’末端で切断された外因性RNA分子の翻訳の効率を高めることが可能な追加の構造。このセクションでは、切断された外因性RNA分子の翻訳の効率を高めることができる追加の構造の実施形態について詳述する。ここでは、切断された外因性RNA分子の切断部位は、5’末端である。一部の実施形態では、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列のすぐ上流の固有の配列内リボソーム進入部位IRES配列を含む配列を含み、それにより、固有のIRES配列は、切断された外因性RNA分子からの目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を高めることができる。例えば、図8Aを参照されたい。別の実施形態では、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列のすぐ下流に固有のヌクレオチド配列を含むことができ、それにより、固有のヌクレオチド配列は、固有のステムループ構造を含み、その固有のステムループ構造は、直接または間接的に、切断された外因性RNA分子からの目的の外因性タンパク質の翻訳の効率および外因性RNA分子の半減期を増加させることができる。固有のステムループ構造は、例えば、限定されないが、ヒトヒストン遺伝子3’-UTRの保存ステムループ構造またはその機能性誘導体であってもよい。ヒトヒストン遺伝子3’-UTRの保存ステムループ構造は、例えば、5’-GGCUCUUUUCAGAGCC-3’配列番号34であってもよい。例えば、図8Bを参照されたい。さらなる実施形態では、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列のすぐ下流に固有のヌクレオチド配列を含むことができ、これにより、その固有のステムループ構造は、直接または間接的に、切断された外因性RNA分子からの目的の外因性タンパク質の翻訳の効率および外因性RNA分子の半減期を増加させることができる細胞質ポリアデニル化配列を含む。細胞質ポリアデニル化配列は、例えば、限定されないが、5’-UUUUAU-3’配列番号35、5’-UUUUUAU-3’配列番号36、5’-UUUUAAU-3’配列番号37、5’-UUUUUUAUU-3’配列番号38、5’-UUUUAUU-3’配列番号39または5’-UUUUUAUAAAG-3’配列番号40[23]であってもよい。一部の実施形態では、本発明の組成物は、いずれの細胞中でもhCPEBを発現するために、ヒト細胞質ポリアデニル化配列結合タンパク質hCPEB、またはその相同体をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含むことができる。例えば、図8Cを参照されたい。さらなる実施形態では、外因性RNA分子は、切断部位の下流で、目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に位置する固有のヌクレオチド配列含むことができ、それにより、固有のヌクレオチド配列は、目的の外因性タンパク質をコードする配列の下流に位置する配列に結合できる。この実施形態では、切断された外因性RNA分子は、環状構造を作ることができ、これは、切断された外因性RNA分子からの目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を高めることができる。例えば、図8Dを参照されたい。別の実施形態では、外因性RNA分子は、切断部位の下流で、目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に位置する固有のヌクレオチド配列を含むことができる。固有のヌクレオチド配列は、切断された外因性RNA分子中のポリAテールに直接または間接的に結合できる固有のポリペプチドに結合できる。固有のポリペプチドは、また、本発明の組成物によりコードされてもよい。この実施形態では、固有のポリペプチドおよび切断された外因性RNA分子は、環状構造を形成し、これは、切断された外因性RNA分子からの目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を高めることができる。例えば、図9Aを参照されたい。別の実施形態では、本発明の組成物は、追加のポリヌクレオチド配列をさらに含むことができ、これは、切断部位の下流で、目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に位置する配列に結合できる固有のヌクレオチド配列を5’末端に含む追加のRNA分子をコードする。追加のポリヌクレオチド配列の発現は、例えば、ポリメラーゼIIベースのプロモーターにより進行させることができる。一部の実施形態では、本発明の組成物は、直接または間接的に追加のRNA分子の固有のヌクレオチド配列の下流の位置での切断に影響を与えることができる切断成分をさらに含んでもよい。切断成分は、例えば、以下であってもよい:追加のRNA分子内に位置する固有の核酸配列であって、限定されないが、エンドヌクレアーゼ認識部位、内在性miRNA結合部位、シス作用性リボザイム、回文構造終止配列もしくはmiRNA配列であってもよい固有の核酸配列;または本発明の組成物によりコードされる固有の阻害性RNAであって、限定されないが、マイクロRNAmiRNA、ラリアート型RNA、ショートヘアピンRNAshRNA、siRNA発現ドメイン、アンチセンスRNA、二本鎖RNAdsRNA、低分子干渉RNAsiRNAまたはリボザイムであってもよい固有の阻害性RNA。この実施形態では、追加のRNA分子は、切断された外因性RNA分子に結合でき、切断された外因性RNA分子からの目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を高めることができるキャップ構造をそれに与える。例えば、図9Bを参照されたい。一部の実施形態では、vpg認識配列が導入でき、それにより、切断の際に、5’切断末端がvpg認識配列を含むことができる。vpg認識配列に対し、VPGタンパク質が結合でき、それにより、キャップを置換する。vpgタンパク質は、本発明の組成物または阻害配列の最初のORFによりコードされうる。理論または機序に拘泥する意図はないが、一部の実施形態では、シス作用性リボザイムの使用が好都合である。理由は、シス作用性リボザイムを含む追加のRNA分子は、それ自体で切断され得る[15]ためである。シス作用性リボザイムは、例えば、限定されないが、非常に効率的なシス作用性ハンマーヘッド型リボザイムのsnorbozyme[15]またはN117[16]であってもよい。図10A、10Bを参照されたい。別の実施形態では、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列のすぐ上流にヌクレオチド配列をさらに含むことができ、それにより、ヌクレオチド配列が切断された外因性RNA分子の分解を低減することができるステムループ構造を含む。一実施形態では、ステムループ構造は、ヒトヒストン遺伝子3’-UTRの保存ステムループ構造5’-GGCUCUUUUCAGAGCC-3’配列番号34またはその機能的誘導体である。2.3.インタクト外因性RNA分子の翻訳の効率を低減させることが可能な追加の構造このセクションでは、追加の構造に関する種々の実施形態が記載され、これらの追加の構造は、インタクトすなわち、外因性RNA分子が切断される前の外因性RNA分子の翻訳の効率を低下させることができる。一部の実施形態では、組成物は、切断部位の上流に位置する阻害配列の上流の位置での外因性RNA分子の切断に直接または間接的に影響を与えることができる特定の切断成分を含むことができる。特定の切断成分は、例えば、下記であってもよい:外因性RNA分子内に位置する特定の核酸配列であって、例えば、限定されないが、エンドヌクレアーゼ認識部位、内在性miRNA結合部位、シス作用性リボザイムもしくはmiRNA配列であってもよい特定の核酸配列;または本発明の組成物によりコードされる特定の阻害性RNAであって、例えば、限定されないが、マイクロRNAmiRNA、ラリアート型RNA、ショートヘアピンRNAshRNA、siRNA発現ドメイン、アンチセンスRNA、二本鎖RNAdsRNA、低分子干渉RNAsiRNAまたはリボザイムであってもよい特定の阻害性RNA。このような実施形態では、特定の切断成分は、インタクト外因性RNA分子から目的の外因性タンパク質への翻訳の効率を低減させるために、インタクト外因性RNA分子からキャップ構造を取り外すことができる。例えば、図9Cを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の上流に配置される阻害配列は、1つまたは複数の開始コドンをさらに含むことができ、それにより、各開始コドンおよび目的の外因性タンパク質をコードする配列は、同じ読み枠に存在せず、各開始コドンは、コザックコンセンサス配列内に配置される。3切断部位の下流に位置する阻害配列を有する外因性RNA分子の構造3.1.切断部位の下流に位置する阻害配列の構造一部の実施形態では、外因性RNA分子中の阻害配列は、切断部位の上流または下流に配置できる。このセクションでは、阻害配列が外因性RNA分子の切断部位の下流に配置される場合の実施形態に関し記載する。例えば、図3を参照されたい。一部の実施形態では、切断部位の下流に位置する阻害配列は、例えば、イントロンを含んでもよい。外因性RNA分子は、従って、外因性RNA分子を分解するナンセンス変異依存分解機構NMDの標的となりうる[29]。例えば、図11Aを参照されたい。一実施形態では、切断部位の下流に位置する阻害配列は、翻訳リプレッサータンパク質に結合できる配列を含むことができ、翻訳リプレッサータンパク質は、内在性翻訳リプレッサータンパク質であるか、または組成物によりコードされ、それにより、翻訳リプレッサータンパク質が、外因性RNA分子内から目的の外因性タンパク質への翻訳の効率を直接または間接的に低減させることができる[24]。翻訳リプレッサータンパク質に結合できる配列は、例えば、限定されないが、smaugリプレッサータンパク質5’-UGGAGCAGAGGCUCUGGCAGCUUUUGCAGCG-3’配列番号28[25]の結合配列であってもよい。例えば、図11Bを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の下流に位置する阻害配列は、細胞内局在のためのRNA局在化シグナル同時翻訳移入を含むまたは内在性miRNA結合部位を含むことができ、外因性RNA分子の細胞内局在により、目的の外因性タンパク質の翻訳を阻害でき、また、外因性RNA分子の半減期を短くできる。RNA局在化シグナルは、例えば、限定されないが、ミエリン形成末梢、ミエリンコンパートメント、ラメラの前縁、ミトコンドリアまたは核周囲細胞質のためのRNA局在化シグナルを含むことができる[22]。RNA局在化シグナルは、例えば、限定されないが、ミエリン形成末梢のためのRNA局在化シグナル5’-GCCAAGGAGCCAGAGAGCAUG-3’配列番号29または5’-GCCAAGGAGCC-3’配列番号30[27]であってもよい。例えば、図11Cを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の下流に位置する阻害配列は、外因性RNA分子の分解を刺激することができるRNA不安定化配列を含むことができ、RNA不安定化配列は、AUリッチ領域AREまたはエンドヌクレアーゼ認識部位であってもよい。AUリッチ領域は、例えば、限定されないが、少なくとも約35ヌクレオチド長のAUリッチ領域であってもよい。AUリッチ領域は、例えば、5’-AUUUA-3’配列番号31、5’-UUAUUUAU/AU/A-3’配列番号32または5’-AUUU-3’配列番号33[26]であってもよい。例えば、図11Dを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の下流に位置する阻害配列は、上流にある目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を低減できる二次構造を形成できる配列を含むことができる。例えば、図11Eを参照されたい。別の実施形態では、切断部位の下流に位置する阻害配列は、二次構造の形成のために、切断部位のすぐ上流に位置するヌクレオチド配列に結合できる切断部位のすぐ下流の配列を含むことができる。二次構造は、上流にある目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を直接または間接的に低減できる。一部の実施形態では、二次構造の折り畳み自由エネルギーは、-30kcal/mol未満例えば、-50kcal/mol、-80kcal/molである可能性があり、従って、この二次構造は、スキャニングリボソームが目的の外因性タンパク質の停止コドンに到達するのを阻止するのに充分である。別の実施形態では、切断部位は、二次構造の単鎖領域またはループ領域内に位置し、単鎖領域またはループ領域は、例えば、限定されないが、少なくとも約15ヌクレオチド長の領域であってもよい。例えば、図12Aを参照されたい。3.2.3’末端の切断部位で切断された外因性RNA分子の翻訳の効率を高めることが可能な追加の構造このセクションでは、追加の構造の実施形態に関して記載され、これらの追加の構造が切断された外因性RNA分子の翻訳の効率を高めることができ、この場合、切断された外因性RNA分子の切断部位は、3’末端である。一部の実施形態では、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列のすぐ上流にある固有の配列内リボソーム進入部位IRESを有する配列を含むことができ、それにより、固有のIRES配列は、切断された外因性RNA分子から目的の外因性タンパク質への翻訳の効率を高めることができる。例えば、図12Bを参照されたい。本発明の別の実施形態では、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列のすぐ下流に固有のヌクレオチド配列を含むことができ、固有のヌクレオチド配列が固有のステムループ構造を含み、固有のステムループ構造は、切断された外因性RNA分子の目的の外因性タンパク質への翻訳の効率および外因性RNA分子の半減期を直接または間接的に増加させることができる。固有のステムループ構造は、例えば、限定されないが、ヒトヒストン遺伝子3’-UTRの保存ステムループ構造またはその機能的誘導体であってもよい。ヒトヒストン遺伝子3-UTRの保存ステムループ構造は、5’-GGCUCUUUUCAGAGCC-3’配列番号34である。例えば、図12Cを参照されたい。本発明の一実施形態では、セクション3.1または1で記載されている外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列のすぐ下流に固有のヌクレオチド配列を含むことができ、それにより、固有のヌクレオチド配列が、細胞質ポリアデニル化配列を含み、切断された外因性RNA分子の目的の外因性タンパク質への翻訳の効率、および外因性RNA分子の半減期を直接または間接的に増加させる。細胞質ポリアデニル化配列は、例えば、限定されないが、5’-UUUUAU-3’配列番号35、5’-UUUUUAU-3’配列番号36、5’-UUUUAAU-3’配列番号37、5’-UUUUUUAUU-3’配列番号38、5’-UUUUAUU-3’配列番号39または5’-UUUUUAUAAAG-3’配列番号40[23]であってもよい。本発明の組成物は、また、ヒト細胞質ポリアデニル化配列結合タンパク質hCPEB、または任意の細胞中でhCPEBを発現させるためにその相同体をコードするポリヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、図12Dを参照されたい。一部の実施形態では、外因性RNA分子は、切断部位の上流で、目的の外因性タンパク質をコードする配列の下流に位置する固有のヌクレオチド配列を含むことができ、それにより、固有のヌクレオチド配列が目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に位置する配列に結合できる。この実施形態では、切断された外因性RNA分子は、切断された外因性RNA分子から目的の外因性タンパク質への翻訳の効率を高めることができる環状構造を作ることができる。例えば、図13Aを参照されたい。別の実施形態では、外因性RNA分子は、切断部位の上流で、目的の外因性タンパク質をコードする配列の下流に位置する固有のヌクレオチド配列を含むことができる。固有のヌクレオチド配列は、切断された外因性RNA分子中のキャップ構造に間接または直接的に結合できる固有のポリペプチドに結合できる。固有のポリペプチドは、また、本発明の組成物によりコードされてもよい。この実施形態では、固有のポリペプチドおよび切断された外因性RNA分子は、切断された外因性RNA分子から目的の外因性タンパク質への翻訳の効率を高めることができる環状構造を作ることができる。例えば、図13Bを参照されたい。さらなる実施形態では、本発明の組成物は、追加のポリヌクレオチド配列を含むことができ、これは、切断部位の上流で、目的の外因性タンパク質をコードする配列の下流に位置する配列に結合できるヌクレオチド配列を3’末端に有する追加のRNA分子をコードできる。追加のポリヌクレオチド配列の発現は、ポリメラーゼIIベースプロモーターにより進行させることができる。この実施形態では、追加のRNA分子は、切断された外因性RNA分子に結合でき、それに、切断された外因性RNA分子から目的の外因性タンパク質への翻訳の効率を高めることができるポリAテールを与える。例えば、図13Cを参照されたい。3.3.インタクト外因性RNA分子の翻訳の効率を低減させることが可能な追加の構造このセクションでは、切断される前のインタクト外因性RNA分子の翻訳の効率を低減させることができる追加の構造に関する実施形態について記載する。一部の実施形態では、組成物は、阻害配列の下流の位置の外因性RNA分子の切断に直接または間接的に影響を与えることができる特定の切断成分をさらに含むことができ、この場合、阻害配列は、切断部位の下流に配置される。この特定の切断成分は、例えば下記を含むことができる:外因性RNA分子内に位置する特定の核酸配列であって、限定されないが、エンドヌクレアーゼ認識部位、内在性miRNA結合部位、シス作用性リボザイムまたはmiRNA配列から選択してもよい特定の核酸配列;または本発明の組成物によりコードされる特定の阻害性RNAであって、限定されないが、:マイクロRNAmiRNA、ラリアート型RNA、ショートヘアピンRNAshRNA、siRNA発現ドメイン、アンチセンスRNA、二本鎖RNAdsRNA、低分子干渉RNAsiRNAまたはリボザイムから選択してもよい特定の阻害性RNA。この実施形態では、特定の切断成分は、インタクト外因性RNA分子から目的の外因性タンパク質への翻訳の効率を低減させるために、インタクト外因性RNA分子からポリAテールを取り除くことができる。例えば、図13Dを参照されたい。4.明確化および追加の実施形態用語の充分な相補性は、限定されないが、結合ができること、または少なくとも部分的に相補的であることを含むことができる。一部の実施形態では、用語の充分な相補性は、約30~100の範囲である。例えば、一部の実施形態では、用語の充分な相補性は、少なくとも30相補性である。例えば、一部の実施形態では、用語の充分な相補性は、少なくとも50相補性である。例えば、一部の実施形態では、用語の充分な相補性は、少なくとも70相補性である。例えば、一部の実施形態では、用語の充分な相補性は、少なくとも90相補性である。例えば、一部の実施形態では、用語の充分な相補性は、約100相補性である。一部の実施形態では、本発明の組成物が挿入/導入できる細胞は、例えば、限定されないが、ヒト細胞、動物細胞、培養細胞、植物細胞、一次細胞、生物体中に存在する細胞であってもよい。一部の実施形態では、外因性RNA分子を切断する特異的内在性miRNAは、例えば、限定されないが、特定細胞タイプ固有のマイクロRNA、腫瘍性細胞に固有のmiRNA、ウイルスマイクロRNA、等であってもよい。ウイルスmiRNAをコードするウイルスは、例えば、限定されないが、二本鎖DNAウイルス、単鎖DNAウイルス、二本鎖RNAウイルス、二本鎖RNAウイルス、単鎖プラス鎖ウイルス、単鎖マイナス鎖ウイルスまたはレトロウイルスから選択できる。一部の代表的実施形態では、外因性RNA分子を切断できる特異的内在性miRNAは、例えば、限定されないが、下記から選択できる:miR-17-92、miR-221、miR-222、miR-146、miR-221、miR-21、miR-155、mir-675、miR-10b、hsv1-miR-H1、hsv1-miR-H2、hsv1-miR-H3、hsv1-miR-H4、hsv1-miR-H5、hsv1-miR-H6、hsv2-miR-I、hcmv-miR-UL22A、hcmv-miR-UL36、hcmv-miR-UL70、hcmv-miR-UL112、hcmv-miR-UL148D、hcmv-miR-US4、hcmv-miR-US5-l、hcmv-miR-US5-2、hcmv-miR-US25-1、hcmv-miR-US25-2、hcmv-miR-US33、kshv-miR-K12-1、kshv-miR-K12-2、kshv-miR-K12-3、kshv-miR-K12-4、kshv-miR-K12-5、kshv-miR-K12-6、kshv-miR-K12-7、kshv-miR-K12-8、kshv-miR-K12-9、kshv-miR-K12-10a、kshv-miR-K12-10b、kshv-miR-K12-11、kshv-miR-K12-12、ebv-miR-BART1、ebv-miR-BART2、ebv-miR-BART3、ebv-miR-BART4、ebv-miR-BART5、ebv-miR-BART6、ebv-miR-BART7、ebv-miR-BART8、ebv-miR-BART9、ebv-miR-BART10、ebv-miR-BART11、ebv-miR-BART12、ebv-miR-BART13、ebv-miR-BART14、ebv-miR-BART15、ebv-miR-BART16、ebv-miR-BART17、ebv-miR-BART18、ebv-miR-BART19、ebv-miR-BART20、ebv-miR-BHRF1-1、ebv-miR-BHRF1-2、ebv-miR-BHRF1-3、bkv-miR-B1、jcv-miR-J1、hiv1-miR-H1、hiv1-miR-N367、hiv1-miR-TAR、sv40-miR-S1、MCPyV-miR-M1、hsv1-miR-LAT、hsv1-miR-LAT-ICP34.5、hsv2-miR-II、hsv2-miR-III、hcmv-miR-UL23、hcmv-miR-UL36-1、hcmv-miR-UL54-1、hcmv-miR-UL70-1、hcmv-miR-UL22A-1、hcmv-miR-UL112-1、hcmv-miR-UL148D-1、hcmv-miR-US4-1、hcmv-miR-US24、hcmv-miR-US33-1、hcmv-RNAβ2.7、ebv-miR-BART1-1、ebv-miR-BART1-2、ebv-miR-BART1-3、ebv-miR-BHFR1、ebv-miR-BHFR2、ebv-miR-BHFR3、hiv1-miR-TAR-5p、hiv1-miR-TAR-p、hiv1-HAAmiRNA、hiv1-VmiRNA1、hiv1-VmiRNA2、hiv1-VmiRNA3、hiv1-VmiRNA4、hiv1-VmiRNA5、hiv2-miR-TAR2-5p、hiv2-miR-TAR2-3p、mdv1-miR-M1、mdv1-miR-M2、mdv1-miR-M3、mdv1-miR-M4、mdv1-miR-M5、mdv1-miR-M6、mdv1-miR-M7、mdv1-miR-M8、mdv1-miR-M9、mdv1-miR-M10、mdv1-miR-M11、mdv1-miR-M12、mdv1-miR-M13、mdv2-miR-M14、mdv2-miR-M15、mdv2-miR-M16、mdv2-miR-M17、mdv2-miR-M18、mdv2-miR-M19、mdv2-miR-M20、mdv2-miR-M21、mdv2-miR-M22、mdv2-miR-M23、mdv2-miR-M24、mdv2-miR-M25、mdv2-miR-M26、mdv2-miR-M27、mdv2-miR-M28、mdv2-miR-M29、mdv2-miR-M30、mcmv-miR-M23-1、mcmv-miR-M23-2、mcmv-miR-M44-1、mcmv-miR-M55-1、mcmv-miR-M87-1、mcmv-miR-M95-1、mcmv-miR-m01-1、mcmv-miR-m01-2、mcmv-miR-m01-2、mcmv-miR-m01-4、mcmv-miR-m21-1、mcmv-miR-m22-1、mcmv-miR-m59-l、mcmv-miR-m59-2、mcmv-miR-m88-1、mcmv-miR-m107-1、mcmv-miR-m108-1、mcmv-miR-ml08-2、rlcv-miR-rL1-1、rlcv-miR-rL1-2、rlcv-miR-rL1-3、rlcv-miR-rL1-4、rlcv-miR-rL1-5、rlcv-miR-rL1-6、rlcv-miR-rL1-7、rlcv-miR-rL1-8、rlcv-miR-rL1-9、rlcv-miR-rL1-10、rlcv-miR-rL1-11、rlcv-miR-rL1-12、rlcv-miR-rL1-13、rlcv-miR-rL1-14、rlcv-miR-rL1-15、rlcv-miR-rL1-16、rrv-miR-rR1-1、rrv-miR-rR1-2、rrv-miR-rR1-3、rrv-miR-rR1-4、rrv-miR-rR1-5、rrv-miR-rR1-6、rrv-miR-rR1-7、mghv-miR-M1-1、mghv-miR-M1-2、mghv-miR-M1-3、mghv-miR-M1-4、mghv-miR-M1-5、mghv-miR-M1-6、mghv-miR-M1-7、mghv-miR-M1-8、mghv-miR-M1-9またはsv40-miR-Sl[34、35]。種々のmiRNA分子の命名法および配列は、データベースhttp://www.mirbase.org/で定義されている。一部の実施形態では、外因性RNA分子によりコードされる目的の外因性タンパク質は、任意のタイプのタンパク質であってよい。例えば、目的の外因性タンパク質は、限定されないが、下記から選択できる:アルファ毒素、サポリン、トウモロコシRIP、オオムギRIP、コムギRIP、comRIP、ライムギRIP、亜麻RIP、志賀毒素、志賀様RIP、モモルジン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、シュードモナス外毒素、シュードモナス外毒素Aまたはこれらの改変型、リシンA鎖、アブリンA鎖、ジフテリア毒素断片Aまたはこれらの改変型、蛍光タンパク質、酵素例えば、ルシフェラーゼ、構造タンパク質、等。一部の実施形態では、目的の外因性タンパク質は、隣接する細胞に影響を及ぼすことができる毒素であってもよい。例えば、毒素は、限定されないが、完全型のリシン、アブリン、ジフテリア毒素またはその改変型から選択してもよい。一部の実施形態では、目的の外因性タンパク質は、例えば、その生成物が隣接する細胞も死滅させることができる酵素であってもよい。このような酵素は、例えば、限定されないが、HSV1チミジンキナーゼであってもよい。一部の実施形態では、本発明の組成物は、HSV1チミジンキナーゼの基質であるプロドラッグのガンシクロビルをさらに含むことができる。一部の代表的実施形態では、酵素は、大腸菌シトシンデアミナーゼであってもよく、また、組成物は、プロドラッグの5-フルオロシトシン5-FCをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、目的の外因性タンパク質をコードする配列は、目的の外因性タンパク質のコーディング領域に加えて、目的のタンパク質の発現を増やせる1つまたは複数のイントロンを含むことができる。一部の実施形態では、イントロンは、目的のタンパク質コードする天然の遺伝子の一部であるイントロンであってもよい。一部の実施形態では、イントロンは、無関係遺伝子のイントロンであってもよい。一部の実施形態では、外因性RNA分子は、任意の発現ベクターにコードされてもよい。例えば、外因性RNA分子が、ウイルスベクターによりコードされ、目的の外因性タンパク質がウイルスベクターの繁殖に必要な遺伝子の産物であってもよく、それにより、細胞中の特異的内在性miRNAの存在に応答してウイルスベクターが繁殖し、繁殖のプロセスの間にその細胞を死滅させることができる。ウイルスベクターは、また、例えば、細胞中に特異的分子例えば、TetR-VP16/ドキシサイクリンが存在する場合に、ウイルスベクターの繁殖を停止できる遺伝子を含むことができる。ウイルスベクターが特異的内在性miRNAを含まない細胞中での繁殖のために充分な変異ができると推定できる場合は、特異的分子は、身体中での全てのウイルスベクターの繁殖を停止させるために投与でき、身体中で、ほとんどのウイルスベクターの分解後、新規ウイルスベクターを再度投与できる。また、特異的プロドラッグ例えば、チミジンキナーゼ/ガンシクロビルが存在する場合は、ウイルスベクターは、例えば、細胞を死滅させる遺伝子を含むことができ、それにより、ウイルスベクターが、特異的内在性miRNAを含まない細胞中での繁殖のために充分な変異が得られると想定される場合は、特異的プロドラッグは、身体中の全てのウイルスベクターを死滅させるために投与でき、その後、新規ウイルスベクターを再度投与できる。一部の代表的実施形態では、外因性RNA分子は、繁殖プロセスの間に細胞を死滅させる方法で繁殖させられるウイルスベクターによりコードできる。この実施形態では、特異的内在性miRNAは、患者の標的細胞例えば、癌細胞中には存在しないが、むしろ、特異的内在性miRNAは、患者の大抵の正常なまたは非転移性腫瘍化細胞中には存在する。この例では、目的の外因性タンパク質は、毒素、例えば、リシンA鎖、アブリンA鎖、ジフテリア毒素断片Aまたはこれらの改変型である。ウイルスベクターが正常なまたは非転移性腫瘍化細胞に入ると、細胞を死滅させ、また、ウイルスベクターが標的細胞癌細胞中に入ると、ウイルスベクター繁殖プロセスの間に癌細胞を死滅させ、従って、大部分のウイルスベクターは、腫瘍領域に存在する。また、特異的分子例えば、TetR-VP16/ドキシサイクリンが細胞中に存在する場合は、このウイルスベクターは、ウイルスベクターの繁殖を停止できる遺伝子を含むことができる。ウイルスベクターが特異的内在性miRNAを含む細胞中で繁殖のための充分な変異が得られる場合は、特異的分子を、身体中で全てのウイルスベクターの繁殖を停止するために投与でき、身体中の大部分のウイルスベクターを分解後、体細胞中で、新規ウイルスベクターを再度投与できる。また、特異的プロドラッグ例えば、チミジンキナーゼ/ガンシクロビルが存在する場合は、このウイルスベクターは、細胞を死滅させることができる遺伝子を含むことができ、それにより、ウイルスベクターが特異的内在性miRNAを含まない細胞中での繁殖のために充分な変異を得ることができると想定される場合に、特異的プロドラッグを身体中の全てのウイルスベクターを死滅させるために投与でき、その後、新規ウイルスベクターを再度投与できる。一部の実施形態では、阻害配列は、目的の外因性タンパク質をコードする配列から切り離されるときに、目的の外因性タンパク質が発現されうる配列または配列の一部であってもよい。阻害配列が目的の外因性タンパク質をコードする配列から切り離されない場合に、阻害配列が外因性RNA分子中の特異的構成内にある場合には、それは目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる。阻害配列は、また、上述のいずれかの阻害配列の特異的構成内の一部のみを含んでもよい。例えば、読み枠外5’-AUG-3’阻害配列の代わりに、阻害配列は、それぞれ、--UG-3’または--G-3’の構成中のAまたは5’-AU-3’部分のみであってもよいすなわち、外因性RNA分子は、5’末端に読み枠外5’-AUG-3’を含むが、切り離される予定の配列は、5’-AU-3’部分のみである。本発明の別の実施形態では、本発明の組成物は、内在性エキソヌクレアーゼの発現を直接または間接的に阻害できる特異的機能性RNAをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含むことができる。その特異的機能性RNAは、例えば、限定されないが、マイクロRNAmiRNA、ラリアート型RNA、ショートヘアピンRNAshRNA、siRNA発現ドメイン、アンチセンスRNA、二本鎖RNAdsRNA、低分子干渉RNAsiRNAまたはリボザイムであってもよい。本発明の別の実施形態では、上述の結合部位は、同じまたは異なるmiRNA用の複数の結合部位であってもよく、この場合、切断部位の上流という場合、また、全ての切断部位の上流を包含する。同様に、切断部位の下流という場合は、包含する全ての切断部位の下流をも包含する。一部の実施形態では、複数の結合部位が異なる内在性miRNA用である場合、miRNAの1つしか細胞内に存在しない場合でも、目的の外因性タンパク質は発現できる。例えば、図14A、14B、14C、14Dを参照されたい。本発明の一部の実施形態では、外因性RNA分子は、1つまたは複数の特異的内在性miRNA用の追加の結合部位をさらに含み、各追加の結合部位は、特異的内在性miRNAがRNA干渉によって固有の切断部位で外因性RNA分子の切断を指示するのに充分な相補性である。各固有の切断部位は、それぞれの追加の結合部位内に位置してもよく、また、各固有の切断部位は、目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に位置してもよい。外因性RNA分子は、全ての固有の切断部位の上流の1つまたは複数の開始コドンをさらに含むことができ、それにより、各開始コドンおよび目的の外因性タンパク質をコードする配列が読み枠に存在する。開始コドンは、例えば、基本的に5’-AUG-3’から構成でき、それにより、少なくとも1つの開始コドンが、コザックコンセンサス配列内、またはいずれかの他の翻訳開始配列内に配置される。開始コドンは、例えば、TISU配列[38]であってもよい。一部の実施形態では、組成物の特異的内在性miRNAを含む細胞への導入に続いて、外因性RNA分子が転写され、特異的内在性miRNAにより切断部位および各固有の切断部位で切断され、それにより、目的の外因性タンパク質をコードする配列が阻害配列および各開始コドンから切り離されて目的の外因性タンパク質が発現できる。例えば、図15Aを参照されたい。一部の実施形態では、本発明の組成物は、直接または間接的に各開始コドンの上流の位置の外因性RNA分子の切断に影響を与えることができる切断成分をさらに含むことができ、そのような切断成分は、例えば、下記に示すものである:外因性RNA分子内に位置する核酸配列であって、エンドヌクレアーゼ認識部位、内在性miRNA結合部位、シス作用性リボザイムまたはmiRNA配列である核酸配列;または組成物によりコードされる阻害性RNAであって、マイクロRNAmiRNA、ラリアート型RNA、ショートヘアピンRNAshRNA、siRNA発現ドメイン、アンチセンスRNA、二本鎖RNAdsRNA、低分子干渉RNAsiRNAまたはリボザイムである阻害性RNA。例えば、図15B参照。一部の実施形態では、本発明の組成物は、1つまたは複数のポリヌクレオチド分子、例えば、DNA分子、RNA分子、または両方を含んでもよい。一実施形態では、組成物は、細胞中の特異的内在性miRNAの存在下でのみ、細胞中で目的の外因性タンパク質を発現するためのDNA分子を含んでもよく、特異的内在性miRNAは、例えば、細胞miRNA、ウイルスmiRNA、等であってもよい。DNA分子は、外因性RNA分子をコードするポリヌクレオチド配列を含んでもよく、外因性RNA分子は、以下を含むRNA分子である:目的の外因性タンパク質をコードする配列、目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流の特異的内在性miRNA用の結合部位、目的の外因性タンパク質をコードする配列の下流の特異的内在性miRNA用の追加の結合部位、および1つは外因性RNA分子の5’末端に、残りは外因性RNA分子の3’末端に位置する少なくとも2つの阻害配列それぞれの阻害配列が、目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる。従って、特異的内在性miRNAが細胞中に存在する場合のみ、2つの阻害配列が、目的の外因性タンパク質をコードする配列から切り離されることができ、目的の外因性タンパク質が細胞中で発現できる。阻害配列は、上述のいずれの配列であってもよい。例えば、図15Cを参照されたい。さらなる実施形態では、組成物は、細胞中の2つの特異的内在性miRNAの存在下でのみ、目的の外因性タンパク質を細胞中で発現するためのDNA分子を含むことができる。DNA分子は、外因性RNA分子をコードするポリヌクレオチド配列を含んでもよく、外因性RNA分子は、以下を含むRNA分子である:目的の外因性タンパク質をコードする配列、目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流の第1の特異的内在性miRNA用の結合部位、目的の外因性タンパク質をコードする配列の下流の第2の特異的内在性miRNA用のもう一つの結合部位、および1つは外因性RNA分子の5’末端に、残りは外因性RNA分子の3’末端にある少なくとも2つの阻害配列。各阻害配列は、目的の外因性タンパク質の発現を阻害することができ、また、2つの特異的内在性miRNAが細胞中に存在する場合は、2つの阻害配列は、目的の外因性タンパク質をコードする配列から切り離され、目的の外因性タンパク質が細胞中で発現できる。阻害配列は、上述のいずれの配列であってもよい。例えば、図15Dを参照されたい。追加の実施形態では、目的の外因性タンパク質のみを発現する必要がある場合で、複数の異なるmiRNAが細胞中に同時に存在する場合には、本発明の組成物は、複数の外因性RNA分子を含むかまたはコードでき、この場合、各外因性RNA分子の構造は、上述のようであってよい。外因性RNA分子は、類似であっても、異なってもよい。それぞれのこれらの外因性RNA分子は、異なるmiRNA結合部位および異なる目的のタンパク質をコードする異なる配列を含むことができ、それにより、全ての異なる目的のタンパク質が、新規機能を細胞中で一緒に作り出すことができる。例えば、複数の異なるmiRNAが3つの異なるmiRNAを含む場合には、3つの異なる外因性RNA分子から発現した3つの異なる目的のタンパク質が、感染防御抗原PA、浮腫因子EFおよび致死因子LFから選択でき、それにより、3つの異なるmiRNAが同時に細胞中に存在する場合、3つのタンパク質:感染防御抗原PA、浮腫因子EFおよび致死因子LFが発現し、細胞死を誘導できる炭疽毒素を一緒に作り出すことができる。別の実施形態では、外因性RNA分子は、切断部位および目的の外因性タンパク質をコードする配列の間に細胞内局在同時翻訳移入を含むのためのRNA局在化シグナルをさらに持つことができ、それにより、阻害配列が、細胞内局在のためのRNA局在化シグナルの機能を阻害できるが、目的の外因性タンパク質の適切な発現のために外因性RNA分子の細胞内局在が必要である。例えば、図16A、16Bを参照されたい。さらなる実施形態では、阻害配列は、切断部位の上流の開始コドンを含んでもよく、この場合、開始コドンは、基本的に5’-AUG-3’から構成される。阻害配列は、開始コドンのすぐ下流にアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列をさらに含むことができ、それにより、ヌクレオチド配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列が同じ読み枠になる。アミノ酸配列は、目的の外因性タンパク質の細胞内局在のための選別グシグナルの機能を阻害でき、適切な発現のために目的の外因性タンパク質の細胞内局在が必要である。例えば、図16Cを参照されたい。本発明の別の実施形態では、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列の出発コドンの下流の停止コドンを含まない。阻害配列は、目的の外因性タンパク質をコードする配列の下流に配置でき、阻害配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列が同じ読み枠になり、阻害配列は、下記からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードする:目的の外因性タンパク質の機能を阻害できるアミノ酸配列;細胞内局在の選別グシグナルアミノ酸配列;タンパク質分解シグナルであるアミノ酸配列;目的の外因性タンパク質の細胞内局在のための選別グシグナルの機能を阻害できるアミノ酸配列;および切断部位および目的の外因性タンパク質をコードする配列の出発コドンの間に位置するヌクレオチド配列によりコードされるペプチド配列の切断を阻害できるアミノ酸配列であって、ヌクレオチド配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列が、同じ読み枠にあり、ペプチド配列が哺乳動物細胞中のプロテアーゼにより切断されうるアミノ酸配列。ヒト細胞では、停止コドンのない切断型mRNAの翻訳の間に、リボソームは、末端コドンで停止し、同族tRNA分子は、ポリペプチド鎖およびリボソームに結合したまま残るが、しかし、翻訳の最中に、小胞体シグナルペプチダーゼによって、ペプチジル-tRNA種の必要な処理がなされうることが報告されている[32]。例えば、図16Dを参照されたい。本発明の組成物の合成一部の実施形態では、上記で詳述したように、組成物は、外因性RNA分子を含むか、またはそれをコードする1つまたは複数のポリヌクレオチド分子を含んでもよい。ポリヌクレオチド分子は、1つまたは複数のDNA分子、1つまたは複数のRNA分子、またはこれらの組み合わせであってもよい。一部の代表的実施形態では、組成物は、外因性RNA分子をコードする1つまたは複数のDNA分子を含んでもよい。外因性RNA分子をコードするDNA分子は、組換え操作により種々の宿主ベクター系/構築物中に挿入でき、これは、また、大規模なDNAの複製を与え、外因性RNA分子の転写を指示するための必要な配列を含むことができる。このようなベクターの標的細胞への導入は、細胞内で充分な量の外因性RNA分子の転写をもたらす。例えば、ベクターは、インビボで導入でき、細胞に取り込まれ、外因性RNA分子の転写を指示する。このようなベクターは、所望の外因性RNA分子を産生するために転写されうる間は、エピソームとして残るか、または染色体に統合される。このようなベクターは、当技術分野でよく知られた組換えDNA技術で構築されるか、またはDNA分子合成用の当技術分野で既知のいずれかの方法により調製できる。一部の実施形態では、外因性RNA分子をコードする組換えDNA構築物は、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルスベクター、または、所望の標的細胞例えば、哺乳動物細胞例えば、ヒト細胞、マウス細胞、鳥類細胞、植物細胞、等中で複製および発現に使われる当技術分野で既知のいずれかの他のベクターを含むことができる。外因性RNA分子の発現は、当技術分野で既知の所望の標的細胞中で働くいずれかのプロモーターにより調節できる。このようなプロモーターは、誘導性でも、または構成的であってもよい。このようなプロモーターには、例えば、限定されないが、SV40初期プロモーター領域、ラウス肉腫ウイルスの3’末端反復配列に含まれるプロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター、メタロチオネイン遺伝子の調節配列、ウイルスCMVプロモーター、ヒト絨毛性ゴナドトロピンベータプロモーター、等が含まれる。一部の実施形態では、プロモーターは、RNAポリメラーゼIプロモーターすなわち、RNAPol.Iにより認識されるプロモーター、例えば、リボソームDNArDNA遺伝子のプロモーターであってもよい。このような実施形態では、目的の外因性RNA分子の終止シグナルは、RNAPol.I終止シグナルまたはRNAポリメラーゼII終止シグナル例えば、ポリAシグナルであってもよい。いずれのタイプのプラスミド、コスミド、YACまたはウイルスベクターも標的細胞/細胞集団または組織部位に直接的に導入可能な組換えDNA構築物の調製に使用できる。あるいは、選択的に所望の標的細胞に感染するウイルスベクターは、使用可能である。一部の実施形態では、ウイルス性感染症または癌に抵抗性の形質転換体の形成のために、外因性RNA分子をコードするベクターは、選択可能マーカーを持つのが望ましい。限定されないが、それぞれ、tk、hgprtまたはaprt欠損細胞中の単純疱疹ウイルスチミジンキナーゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼおよびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼタンパク質の発現のための選択を含む多数の選択系が使用可能である。また、抗代謝耐性は、メトトレキサートに対する耐性を付与するジヒドロ葉酸トランスフェラーゼdhfr;ミコフェノール酸に対する耐性を付与するキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼgpt;アミノグリコシドG-418に対する耐性を付与するネオマイシンneo;およびヒグロマイシンに対する耐性を付与するヒグロマイシンBホスホトランスフェラーゼhygroのための選択の基準として使用できる。一部の実施形態では、本発明の実施で使用するベクターは、いずれの発現ベクターであってもよい。一部の代表的実施形態では、外因性RNA分子は、ウイルス発現ベクターによりコードされる。ウイルス発現ベクターは、限定されないが、下記から選択できる:ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、アデノウイルス科、パピローマウイルス科、パルボウイルス科、ヘパドナウイルス科、レトロウイルス科、レオウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、ニューモウイルス亜科、ラブドウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、ハンタウイルス科、ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、トガウイルス科、フラビウイルス科、アレナウイルス科、コロナウイルス科、またはヘパシウイルス属。ウイルス発現ベクターには、また、限定されないが、その細胞屈性が繊維タンパク質のアデノウイルス末端ノブドメインHIループの置換により改変されて、これが繊維表面に露出されているアデノウイルスベクターも含まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物は、1つまたは複数のRNA分子を含んでもよく、これは、例えば、外因性RNA分子それ自体または誘導体またはそれらの改変体、単鎖または二本鎖であってもよい。外因性RNA分子は、限定されないが、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオシド、リン酸ジエステル結合、改変結合または5つの生物学的に発生する塩基以外の塩基アデニン、グアニン、チミン、シトシンおよびウラシル等のヌクレオチドを有してもよい。一部の実施形態では、外因性RNA分子は、RNA分子の合成用の当技術分野で既知の方法により合成できる。例えば、外因性RNA分子は、市販の試薬およびシンセサイザーを使って、当技術分野でよく知られた方法により化学的に合成できる。あるいは、外因性RNA分子は、外因性RNA分子をコードするDNA配列のインビトロおよびインビボ転写により作製できる。このようなDNA配列は、適切なRNAポリメラーゼプロモーター、例えば、T7またはSP6ポリメラーゼプロモーターを組み込んだ各種のベクター中に組み込むことができる。外因性RNA分子は、プラスミド、例えば、SPS65を使ってインビトロ転写を介して高収率で産生出来る。さらに、Qベータ増幅、等のRNA増幅方法を利用して、外因性RNA分子を産生出来る。一部の実施形態では、外因性RNA分子または外因性RNA分子をコードするDNA分子は、塩基部分、糖部分、またはリン酸塩骨格の位置で改変して、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーション、細胞中への輸送、等を改善できる。さらに、改変を行って、ヌクレアーゼ分解に対する感受性を減らすことができる。外因性RNA分子または外因性RNA分子をコードするDNA分子は、他の付加基、例えば、ペプチド例えば、宿主細胞受容体のインビボ標的化のための、または細胞膜または血液脳関門を通過して輸送を促進する薬剤、ハイブリダイゼーション誘発切断薬剤または挿入剤を有してもよい。種々の他のよく知られた改変が、細胞内の安定性および半減期の増加の手段として、導入できる。可能な改変には、限定されないが、リボまたはデオキシヌクレオチドの隣接配列の分子の5’および/または3’末端への付加が含まれる。安定性の増加が所望である一部の環境では、改変ヌクレオシド間結合、例えば、2’-O-メチル化を有する核酸が、好ましと思われる。改変ヌクレオシド間結合を含む核酸は、当技術分野でよく知られた試薬と方法を使って合成できる。さらなる実施形態では、外因性RNA分子または外因性RNA分子をコードするDNA分子は、当技術分野でよく知られたいずれかの適切な手段例えば、逆相クロマトグラフィーまたはゲル電気泳動法で精製できる。一部の実施形態では、外因性のRNAをコードするウイルスベクターを産生する細胞は、また、患者の身体での連続治療のための移植に使用できる。これらの細胞は、血液中の特異的分子例えば、HSV1チミジンキナーゼ/ガンシクロビルの存在下でそれらの脂肪を誘導できる特異的遺伝子を保有できる。一部の実施形態では、外因性RNA分子は、RNA分子または複製RNA分子であってもよい。複製RNA分子は、外因性RNA分子に相補的な配列を含むRNA分子であり、それにより、複製RNA分子は、外因性RNA分子の形成のために細胞中で複製されうる。6.本発明の組成物の使用と投与一部の実施形態では、本発明の組成物は、例えば、限定されないが、遺伝子発現の調節、標的細胞死、例えば、癌等の増殖性疾患の治療、HIV等の感染症の治療、形質転換体の形成、自殺遺伝子治療、等の種々の状態および傷害の治療、等の様々な異なる用途があり得る。組成物は、例えば、哺乳動物ヒト、マウス、等、鳥類、植物、等の種々の生物に使用できる。組成物は、種々の細胞培養および/またはインビボで、組織、器官、および/または生物体に対し使用できる。一部の実施形態では、本発明の組成物は、ウイルスmiRNAを発現する癌細胞の死滅のために、またはウイルス感染細胞を死滅させるために、このウイルスmiRNAである特異的内在性miRNAを発現する細胞中で、毒性遺伝子を発現、および/または活性化するために使用できる。本発明の別の実施形態では、本発明の組成物は、特異的内在性miRNAとして発癌性miRNA癌細胞中で強力に発現上昇しているmiRNAを含む細胞を死滅させるために、これらの細胞中で毒性遺伝子を発現、および/または活性化するために使用できる。一部の実施形態では、本発明の組成物は、ウイルス性感染症または癌のような疾患の診断のために、ウイルス性または発癌性miRNAの存在下、レポーター遺伝子を発現、および/または活性化するために使用できる。別の実施形態では、外因性RNA分子をコードするベクターを安定に形質移入された細胞が、ウイルス性感染症または癌に対し抵抗性の形質転換体の形成のために使用できる。別の実施形態では、ウイルス性感染疾患の診断のために、レポーター遺伝子を活性化できる形質転換体の形成を目的として、ウイルスmiRNAの存在下、本発明の組成物を使用して細胞に安定に形質移入できる。さらに別の実施形態では、本発明の組成物を使用して、細胞中のmiRNAの機能をリアルタイムでモニターでき、また、細胞中のmiRNAの形成または発現上昇を伴う疾患例えば、癌およびウイルス性感染症の診断を行うことができる。一部の実施形態では、種々のデリバリーシステムが既知であり、本発明の組成物を細胞中に移入するために使用できる。このデリバリーシステムには、例えば、リポソーム内封入、微粒子、マイクロカプセル、組成物を発現できる組換え細胞、受容体依存性エンドサイトーシス、ウイルスベクターまたは複製プロセスの間に細胞を死滅させることなく複製できる本発明の組成物を含む他のベクターやウイルスベクター、複製できず本発明の組成物を含むウイルスベクターの一部としての本発明の組成物の構築、本発明の組成物を含むウイルスベクターを産生する細胞の注入、DNAの注入、電気穿孔、リン酸カルシウム媒介形質移入、等、または当技術分野で既知もしくは将来開発される見込みのいずれかの他の方法、がある。一部の実施形態では、理論または機序に拘泥する意図はないが、本発明の組成物と方法は、特異的かつ標的にしている細胞の全か無かの応答を与えることができる。換言すれば、本発明の組成物と方法は、外因性RNA分子が特異的内在性miRNAを含む標的細胞中でのみ切断されそして、その結果、目的の外因性タンパク質が発現、活性化される、一方、その内在性miRNAを含まない細胞は、本発明の組成物により影響を受けない方法である。本発明の組成物と方法は、従って、内在性miRNAを含まない細胞中で目的の外因性タンパク質の発現の漏出性が観察されないため、強化された安全性および制御が提供できる。一部の実施形態では、特異的細胞集団を死滅させる方法が提供され、その細胞集団は、これらの細胞に対し固有で、特異的である特異的内在性miRNAを含む。この方法は、細胞に本発明の組成物を導入することを含み、その組成物は、特異的内在性miRNAを発現している細胞中でのみ、目的の外因性タンパク質の発現を指示するための1つまたは複数のポリヌクレオチドを含む。ここで、1つまたは複数のポリヌクレオチドは、外因性RNA分子を含むか、またはそれをコードし、また、外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列;目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる阻害配列;および前記特異的内在性miRNA用の結合部位を含む。一部の実施形態では、目的の外因性タンパク質は、細胞機能に損傷を与えることができ、結果として、細胞の死亡に繋がるいずれのタイプのタンパク質であってもよい。タンパク質は、限定されないが、次のようなタンパク質から選択できる:毒素、細胞阻害剤、細胞増殖モジュレーター、細胞シグナル伝達経路阻害剤、細胞シグナル伝達経路モジュレーター、細胞透過性モジュレーター、細胞プロセスモジュレーター、等。一部の実施形態では、例えば、発現ベクターウイルスベクターまたは非ウイルスベクター等のベクターが提供され、これは、外因性RNA分子をコードする1つまたは複数のポリヌクレオチド配列を含み、前記外因性RNA分子は、目的の外因性タンパク質をコードする配列;目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる阻害配列;および特異的内在性miRNA用結合部位を含む。特異的内在性miRNA用の結合部位は、ベクターが特異的内在性miRNAを含む細胞中に導入される場合に、特異的内在性miRNAが切断部位での外因性RNA分子の切断を指示するために、特異的内在性miRNA内の配列に対し充分な相補性である。切断部位は、特異的内在性miRNA用の結合部位内に位置してもよく、また、さらに、切断部位は、阻害配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列の間に位置してもよい。一部の実施形態では、1つまたは複数のポリヌクレオチド配列は、DNA配列である。一部の実施形態では、1つまたは複数のポリヌクレオチド配列は、RNA配列である。当技術分野で既知のように、ベクターは、その操作に必要な種々の他のポリヌクレオチド配列例えば、調節配列、非コード配列、構造配列、等をさらに含むことができる。さらなる実施形態では、本発明は、また、有効量の本発明の組成物および薬学的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物を提供する。用語の薬学的に許容可能なは、動物、さらに具体的にはヒトに使用するために、連邦または州政府の規制当局により承認されている、または米国薬局方または他の一般的に認められている薬局方に挙げられていることを意味する。用語のキャリアは、治療薬と一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビークル、を意味する。一部の実施形態では、医薬組成物は、例えば、限定されないが、腸内、非経口、注射、局所的、等の既知のいずれかの投与経路により、必要としている対象に投与できる。一部の実施形態では、治療の必要な標的領域に局所的に本発明の医薬組成物を投与するのが望ましい可能性がある。これは、例えば、限定されないが、手術の間の局所注入、局所的投与により、例えば、手術後の創傷被覆と併せて、注射により、カテーテルを使って、坐剤を使って、またはインプラント膜、例えば、サイラスティック膜、または繊維を含む多孔性、非多孔性、またはゼラチン状材料製を使って実現できる。局所投与は、また、制御放出薬剤デリバリーシステム、例えば、ナノ粒子、徐放型ポリマーまたはヒドロゲル等のマトリックスにより実現できる。一部の実施形態では、本発明の組成物は、標的細胞/組織中で所望の効果を得るのに有効な量を投与できる。本発明の組成物の有効用量は、生物学的半減期、バイオアベイラビリティおよび毒性としてこれらのパラメーターを処理するこれらの技術分野でよく知られた方法により決定できる。本発明の組成物の有効な量は、治療される疾患または傷害の性質に依存し、標準的臨床的技術により決定できる。さらに、任意選択で、インビトロアッセイを採用して、最適用量範囲の特定を支援することができる。投与手段には、また、限定されないが、患者の血流への本発明の組成物の常置または連続注入が含まれる。一部の実施形態では、組成物およびそれを含む医薬組成物は、例えば、哺乳動物、鳥類、植物、等の種々の生物体に投与できる。例えば、組成物およびそれを含む医薬組成物は、ヒト、および動物に投与できる。さらなる実施形態では、本発明は、また、1つまたは複数の本発明の医薬組成物成分を入れた1つまたは複数の容器を含む医薬品パックまたはキットを提供する。任意選択で、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売規制行政機関により指示された形式の、ヒトまたは動物への投与のためのその製造、使用または販売機関の承認を反映した通知をこのような容器に添付してもよい。実施例以下の実施例は、例示の目的で提示され、限定する意図はなく、また、本発明の最良の実施形態の例である。実施例1外因性のRNAによりコードされた目的の外因性タンパク質の特異的発現実施例1に記載の実験用の一般的プロトコル:形質移入の前日に、ウエル当たり約120,000のT293細胞を24ウエルプレートに播種し、形質移入の日に、各ウエルを下記を使って同時形質移入した:1ウミシイタケ/ルシフェラーゼプラスミド-ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子およびホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現している170ngのプラスミドプラスミドE11、Psv40-INTRON-MCS-RLuc-Phsvtk-Fluc配列番号22またはプラスミドE65、Psv40-INTRON-Tsp-TD1-TLacZ-RLuc-PTS-60ATG-Phsvtk-FLuc配列番号23。2試験済みプラスミド=30ngの試験済みプラスミド詳細は下記。3siRNAまたはsiRNA-=試験済みプラスミドによりコードされたmRNAの切断を誘導できるsiRNAまたは切断を誘導できないsiRNA-10pmoleのsiRNA二本鎖分子詳細は下記。形質移入を、リポフェクタミン2000形質移入試薬Invitrogenを使って、メーカーのプロトコルに従って行った。形質移入の48時間後、ジュアルルシフェラーゼレポーターアッセイキットPromegaおよびルミノメーターglomax20/20promegaを使ってウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子発現を測定し、相対発光量RLUを求めた。試験済みプラスミドは、下記のプラスミドの内のいずれのタイプでもよい:陰性対照=ジフテリア毒素DTAをコードしていないプラスミド;陽性対照=構成的にジフテリア毒素DTAをコードしているプラスミド;試験プラスミド=本発明の組成物のプラスミド、すなわち、阻害配列およびジフテリア毒素DTAをコードする下流の配列の間にsiRNA用の標的部位を含むプラスミド。試験プラスミドに対しては、同時形質移入されたsiRNAが、試験プラスミドの阻害配列を切断する場合、ジフテリア毒素を発現でき、発現している細胞を死滅させ、それにより、ウミシイタケの発現および全体のRLU測定値を低減させる。試験済みプラスミドは、2つの異なるsiRNAsおよび2つの異なるsiRNAs-で別々に、それぞれ、3回繰り返して試験された。結果は、以下のように計算される:活性化の倍数=試験プラスミド6ウエルを含むそれぞれ2つのsiRNA-の存在下の測定RLU相対発光量の平均を、試験プラスミド3ウエルを含むsiRNAの1つを使ったRLUの平均で割った値。漏出倍数=陰性対照プラスミドを含む全てのsiRNAs-/を使ったRLUの平均を、試験プラスミドを含む各2つのsiRNA-を使ったRLUの平均で割った値。siRNA/-RLU=1つの同時形質移入siRNAの存在下、または2つの同時形質移入siRNA-の存在下、独立に測定したRLUの平均。プラスミドは、分子生物学の技術分野で行われている通常の、既知の方法を使って構築した。以下に本明細書に記載の構築プラスミドのためのバックボーンベクターは:psiCHECK登録商標-2ベクターpromega、Cat.No.C8021またはpcmv6-A-GFPOriGene、Cat.No.PS100026である。各プラスミドの付加名は、プラスミド配列内に含まれる配列を示す。これについては、試験プラスミドに関して、下記でさらに詳述する。siRNA配列:1RLDuplexDharmacon、Cat.No.P-002070-01-20配列番号65センス鎖および配列番号66アンチセンス鎖。2GFPDuplexIIDharmacon、Cat.No.P-002048-02-20、配列番号67センス鎖および配列番号68アンチセンス鎖。3siRNA-対照Sigma、Cat.No.VC30002000010、配列番号69センス鎖および配列番号70、アンチセンス鎖。4抗βGalsiRNA-1標的部位:Tlacz配列番号71、Dharmacon、Cat.No.P-002070-01-20配列番号72センス鎖および配列番号73アンチセンス鎖。5ルシフェラーゼGL3Duplex標的部位:Tfluc配列番号74、Dharmacon、Cat.No.D-001400-01-20、配列番号75センス鎖および配列番号76アンチセンス鎖。6GFPDuplexI標的部位:TD1、配列番号77、Dharmacon、Cat.No.P-002048-01-20、配列番号78センス鎖および配列番号79アンチセンス鎖。7TCTL標的部位:TCTL配列番号80、配列番号81センス鎖および配列番号82アンチセンス鎖。各実験では、試験プラスミド中に標的部位を有するsiRNAは、siRNAとして使用され、試験済みプラスミド中に対応する標的部位を持たないその他のsiRNAは、siRNA-として使用された。陰性対照プラスミド:1E34配列番号10-Pcmv-4ORF^-TD1-TflucPsv40-TGFP。2E71配列番号17-Psv40-INTRON-4ORF^Phsvtk-Fluc。3E38-3CARz-4SL。E38配列番号19の挿入は、pacIおよびXhoI制限酵素部位でPMKシャトルベクターGeneArt中に連結される。陽性対照プラスミド:1E28配列番号11-Pcmv-Tfluc-TD1-cDTAWT-Psv40-TGFP.2E20配列番号12-Pcmv-nsDTAPsv40-TGFP3E70配列番号13-Psv40-INTRON-cDTAWTPhsvtk-Fluc4E3配列番号14-Pcmv-KDTAPsv40-TGFP5E89配列番号15-Pcmv---DT^APsv40-TGFP6E110配列番号16-Pcmv-D5^TAPsv40-TGFP7E4配列番号18-Pcmv-KDTAPsv40-Hygro8E10配列番号20-Pefl-DTA24ZEO::GFP-Pcmv9E143配列番号21-3PolyA-Prp119-cDTAWTPhsvtk-Fluc試験プラスミド1E80配列番号1-Pcmv-4ORF^-TD1-Tfluc-S-cDTAWTPsv40-TGFPpCMVプロモーター配列番号1のnt.420~938;4ORF^=4連続ORF配列番号1のnt.1027~3547中の隣接ATGコドン間の57、57、36、36、21、21、21、および21ntを有する9TISU配列および57コザック配列から構成される阻害配列。第1のORF配列番号1のnt.1031~1651は、621ntで、TISU配列番号1のnt.1027~1038から翻訳され、また、次の3ORF^配列番号1のnt.1662~2996、nt.2306~2941およびnt.2951~3547は、コザック配列から翻訳される。最後のORF配列番号1のnt.2951~3547は、野性型DTAcDTAwt=wtDTAコード配列、プロモーター/スプライシング/終端/ポリA部位がなく、コザック配列配列番号1のnt.3568~4155を含む;次に、SV40プロモーターの制御下のTGFPコード配列が続くのコード配列の前で停止する。プラスミドは、標的部位TD1配列番号77およびTfluc配列番号74をさらに含む。2E54配列番号2-Pcmv-4CARZ-PTS-60ATG^-3ORF^-TDl-Tfluc-incDTAWTPsv40-TGFPpCMVプロモーター配列番号2のヌクレオチドnt.420~938;4CAR=4シス作用性リボザイム配列番号2のnt.1013~1373;PTS=ペルオキシソームターゲティングシグナル配列番号2のnt.1420~1500;60ATG^=61ATG、46は、ほぼ2ATG毎の間の53nt配列番号2のnt.1534~4554およびDTAコード配列配列番号2のnt.6745~7332の内側の停止コドンを含むコザック配列中にある;psv40プロモーター配列番号2のnt.8092~8399の制御下のTGFPコード配列配列番号2のnt.8452~9143。プラスミドは、標的部位TD1配列番号77およびTfluc配列番号74をさらに含む。3E113配列番号3-Pcmv-4ORF^-TD1-Tfluc-PK-D5^TAPsv40-TGFPpCMVプロモーター配列番号3のnt.420~938;4ORF^配列番号3のnt.1027~3547;PK=シュードノットステムおよびループで、ループの6ntは、DTA配列番号3のnt3561~3611の出発コドンとハイブリッド形成する;5^=DTAのコード配列配列番号3のnt.3609~3806内に位置する5つのヒトイントロン配列番号3のnt.3712~3801、3856~3960、4066~4173、4380~4519および4617~4783で、RNAポリメラーゼ1および/または3転写の終止用のTリッチ領域を含み、イントロンは、cDTAwtコード配列中に埋め込まれている;psv40プロモーター配列番号3のnt.5546~5853の制御下のTGFPコード配列配列番号3のnt5906~6597。プラスミドは、標的部位TD1配列番号77およびTfluc配列番号74をさらに含む。4E91配列番号4-Pcmv-4ORF^-TD1-Tfluc-DT^APsv40-TGFPpCMVプロモーター配列番号4のnt.420~938、4ORF^配列番号4のnt.1027~3507;DT^A=ヒトコラーゲン16A1遺伝子由来のイントロンを含み、プロモーター/スプライシング/ポリAシグナルを含まないコザックDTA配列番号4のnt.3520~4444;pSV40プロモーターnt.5184~5491の制御下のTGFPコード配列配列番号4のnt.5544~6235。プラスミドは、標的部位TD1配列番号77およびTfluc配列番号74をさらに含む。5E112配列番号5-Pcmv-4ORF^-2xTLacZinINTRON-8X[TCTLTD1]-PK-D5^TAPsv40-TGFPpCMVプロモーター配列番号5のnt.420~938、4ORFA配列番号5のnt.1027~3436;2xTLacZinINTRON=市販プラスミドpSELECT-GFPzeo-LacZのイントロン中のTLacZの2つの標的配列番号5のnt.3438~3638;8X[TCTLTD1]配列番号5のnt.3647~4052;PK=シュードノットステムおよびループで、ループの6ntは、DTAの出発コドンとハイブリッド形成する配列番号5のnt.4059~4109;5^=DTAのコード配列配列番号5のnt.4107~5304内に位置し、RNAポリメラーゼ1および/または3転写を終止用のTリッチ領域を含む5ヒトイントロン配列番号5のnt.4210~4299、4354~4458、4564~4671、4878~5017および5115~5281で、イントロンは、cDTAwtコード配列中に埋め込まれている;psv40プロモーター配列番号5のnt.6044~6351制御下のTGFPコード配列配列番号5のnt.6404~7095。プラスミドは、標的部位TD1配列番号77の8つのコピー、TCTL配列番号80およびTLacZ配列番号71の2つのコピーをさらに含む。6E87配列番号6-Pcmv-4ORF^-TD1-3TLacZ-Tctl-BGlob-25G-XRN1SL-DT^APsv40-TGFPpCMVプロモーター配列番号6のnt.420~938;4ORF^配列番号6のnt.1027~3430;BGlob=キャッピングされたベータグロビン5’切断型末端配列番号6のnt.3577~3655、25G=XRNエキソリボヌクレアーゼ酵素で遮断/妨害できる一続きの25連続Gヌクレオチド配列番号6のnt.3660~3684;XRN1SL=XRN1エキソリボヌクレアーゼを遮断できる黄熱病ウイルス3’UTRのステムおよびループ構造配列番号6のnt.3687~3767、DT^A=ヒトコラーゲン16A1遺伝子由来のイントロンを含み、プロモーター/スプライシング/ポリAシグナルを持たないコザックDTA配列番号6のnt.3787~4711;psv40プロモーター配列番号6のnt.5811~6502の制御下のTGFPコード配列配列番号6のnt.6404~7095。プラスミドは、TD1配列番号77、TLacz配列番号71の3つのコピーおよびTCTL標的部位配列番号80をさらに含む。7E123配列番号7-Psv40-INTRON-4ORF^-3X[TD1-TLacZ]-4PTE-SV40intron-HBB-DTAPhsvtk-FlucpSV40プロモーター配列番号7のnt.7~419、4ORF^=9TISU配列および4連続ORF配列番号7のnt.722~2387中の隣接ATGコドンの間の57、57、36、36、21、21、21、および21ntを含む57コザック配列;4PTE=回文構造終止配列配列番号7のnt.3318~3473の4種のステムおよびループ構造、SV40intron=SV40小t抗原イントロン配列番号7のnt.3505~3596;HBB=ATGが無く、その最初のイントロンを含むヘモグロビンベータmRNA配列番号7のnt.3627~4406;cDTAwtコード配列配列番号7のnt.4431~5014;HSKVKプロモーター配列番号7のnt.5106~5858およびホタルルシフェラーゼコード配列配列番号7のnt.5894~7546。プラスミドは、TD1配列番号77の3つのコピーおよびTLacz標的部位配列番号71をさらに含む。8E30配列番号8-Pcmv-4ORF^-TD1-Tfluc-incDTAWTPsv40-TGFPpCMVプロモーター配列番号8のnt.420~938;4ORF^=9TISU配列および4つの連続ORF中の隣接ATGコドンの間に、57、57、36、36、21、21、21、および21ntを含む57コザック配列配列番号8のnt1027~3547;最初のORF配列番号8のnt.1031~1651は、TISU配列番号8のnt.1027~1038から翻訳され、次の3ORF^配列番号8のnt.1662~2996、nt.2306~2941およびnt.2951~3547は、コザック配列から翻訳される。最後のORF配列番号8のnt.2951~3516は、野性型DTAcDTAwt=wtDTAコーディング領域、プロモーター/スプライシング/終止/ポリA部位が無く、コザック配列配列番号8のnt3568~4155を含む;次に、SV40プロモーターの制御下TGFPコード配列が続くのコード配列の内側で停止する。プラスミドは、標的部位TD1配列番号77およびTfluc配列番号74をさらに含む。9E142配列番号9-3ポリA-Prp119-4ORF^D1-Tfluc-S-cDTAWTPhsvtk-Fluc.3ポリA=HSVポリA、SV40ポリA、合成ポリA配列番号9のnt.60~247;Prpll9=その最初のイントロンと共に取り込んだRPL19リボソームタンパク質L19のプロモーター配列番号9のnt.248~1941;4ORF^=9TISU配列および、4連続ORF中の隣接ATGコドンの間の57、57、36、36、21、21、21、および21ntを含む57コザック配列配列番号9のnt.1948~4366;野性型DTAのコード配列配列番号9のnt.4457~5044;HSKVKプロモーター配列番号9のnt.5136~5888およびホタルルシフェラーゼコード配列配列番号9のnt.5924~7576。プラスミドは、標的部位TD1配列番号77およびTfluc配列番号74をさらに含む。結果:結果を下表1~5および6A~Cに示す。結果は、表示されたプラスミドおよびsiRNA分子を形質移入された細胞を使って種々の実験条件下、測定されたRLUを示す。使用されたsiRNA分子は、試験済みプラスミド内の対応する標的配列に結合できるsiRNA分子である。上記表1~5および6A~6Cで示された結果は、目的の外因性のRNAの切断を誘導できるsiRNA分子下で、目的の外因性タンパク質DTAが発現し、これが、次に細胞死の増加をもたらすことを明確に示している。増加した細胞死により、ルシフェラーゼ遺伝子を発現/産生する細胞がより少なくなるために、ウエル中の全体RLU測定値が低減する。この結果は、これらの細胞中でのみ、目的の外因性RNAの切断部位での切断が誘導され、それにより、目的の外因性タンパク質の細胞中での発現が可能となるために、実際に、特異的siRNAを含む細胞中でのみ、目的の外因性タンパク質この例ではDTAが発現されることを示している。実施例2:EBV関連胃癌細胞、上咽頭癌細胞およびバーキットリンパ腫細胞を死滅させるための本発明の組成物の使用。世界中で、胃癌は肺癌の次に多い癌で、死亡率と罹患率に影響する主要原因である。5年生存率は、20未満である。世界中で、胃癌の症例の約6~16にエプスタインバーウイルスEBVが関係していおり、ほとんど全ての腫瘍細胞中に認められる[21]。バーキットリンパ腫は、顎骨に影響を与えることが多いタイプの非ホジキンリンパ腫で、巨大腫瘍塊を形成する。EBVで不死化したB細胞は、最終的にバーキットリンパ腫に繋がる第1ステップである。上咽頭癌は、上気道で見つかった癌で、上咽頭に最も多くみられ、EBVウイルスとの関係が強い。移植後リンパ増殖性障害PTLPDは、AIDSまたは関連免疫抑制を伴う臓器移植を受けている人、等の免疫無防備状態の患者に発生するもう一つのB細胞リンパ腫であり、従って、EBVに関連していると想定されている。悪性患者の平滑筋腫瘍、およびホジキンリンパ腫もEBVに関連している。米国では、35~40才の内の95もの多くの成人が、エプスタインバーウイルスEBVまたはHHV-4に感染している。エプスタインバーウイルスは、腫瘍調節およびアポトーシス抑制の作用をする23のmiRNAをコードする[13]。複数のmiRNAがエプスタインバーウイルスの2つのゲノム領域内で特定されており、形質転換されたB細胞株の潜伏感染の間に発現する[20]。EBVmiRNAのmiR-BART1配列番号41の発現がEBV感染B細胞バーキットリンパ腫、上咽頭癌細胞、およびEBV関連胃癌EBVaGC中で観察された[21]。従って、本発明の組成物を使ってmiR-BART1を発現する細胞を死滅させて、これらの癌を、死滅させることができる。EBV-mir-BART1の成熟内在性miRNA鎖は、5’-UCUUAGUGGAAGUGACGUGCUGUG-3’配列番号42であり、実施例の外因性RNA分子の結合部位は、EBV-mir-BART1の成熟内在性miRNA鎖に100相補的な配列:3’-AGAAUCACCUUCACUGCACGACAC-5’配列番号43を含むように設計される。例えば、図17を参照されたい。目的の外因性タンパク質をコードする配列は、ジフテリア毒素断片ADT-Aをコードするように設計され、また、外因性RNA分子のEBV-mir-BART1結合部位の下流に位置するように設計される。細胞に導入されたジフテリア毒素断片Aのただ1つの分子でも、その細胞を死滅させることができ[5]、また、哺乳動物細胞では、キャップの除去により、mRNAの翻訳を35~50倍低減し、機能的mRNAの半減期を1.7倍だけ短くする[6]。例えば、図17を参照されたい。阻害配列は、EBV-mir-BART1結合部位の上流に位置し、ヒトコザックコンセンサス配列:5’-ACCAUGG-3’配列番号25内の位置の出発コドンを含むように設計され、DT-Aの開始コドンと同じ読み枠にはない。例えば、図17を参照されたい。実施例の外因性RNA分子は、EBV-mir-BART1により切断される前に、外因性RNA分子の翻訳の効率を低減させるために、非常に効率的なシス作用性ハンマーヘッド型リボザイムのsnorbozyme[15]を5’末端にさらに含む。シス作用性ハンマーヘッド型リボザイムのsnorbozymeは、また、2つの開始コドンを含むが、それらの内のそれぞれは、DT-Aの出発コドンと同じ読み枠にはない。例えば、図17を参照されたい。実施例の外因性RNA分子は、また、DT-Aをコードする配列の下流の、ヒトHIST1H2ACH2ac遺伝子3’UTR5’-GGCUCUUUUCAGAGCC-3’配列番号34由来の回文構造終端配列PTEを含む。PTEは、mRNA処理および安定性に関し重要な役割を果たす[7]。HIST1H2AC遺伝子からの転写物は、ポリAテールを欠くが、それでも、PTEのおかげで安定である。例えば、図17を参照されたい。図17で図示されているこの実施例では、外因性RNA分子が、強力なウイルスCMVプロモーターの制御下でウイルスベクターにより転写される。この実施例の全体外因性RNA分子の配列は、配列番号44似設定される。この実施例の、外因性RNA分子をコードするベクターで導入される外因性RNA分子の標的細胞中での転写後、シス作用性リボザイムが、外因性RNA分子の全ての翻訳を減らすために、5’末端からキャップを取り除き、回文構造終端配列が外因性RNA分子を安定化させ、分解から保護する。読み枠外の開始コドンがDT-Aの翻訳を防ぐが、標的細胞中の内在性EBV-mir-BART1の存在下では、実施例の外因性RNA分子は切断され切断された配列は、配列番号45に設定される、読み枠外開始コドンが切り離され、それにより、DT-Aが翻訳されて、少なくとも1つのそのタンパク質のコピーが発現し、これで細胞死を起こさせるのに充分である。例えば、図17を参照されたい。実施例3:HIV-1感染細胞を死滅させるための本発明の組成物の使用世界保健機関によれば、2006年に世界中でHIV患者が約3950万人に達した。国連共同エイズ計画の推計によると、HIVは、アフリカの9000万人に感染し、少なく見積もっても、1800万人の孤児が発生することになる。HIVヒト免疫不全ウイルスは、後天性免疫不全症候群AIDSになる可能性がある。HIVの2つの種:HIV-1およびHIV-2がヒトに感染する。HIV-1がより毒性が強く、比較的容易に伝染し、世界中の大部分のHIV感染の原因である。HIV-2は、HIV-1より伝染力が低く、ほぼ西アフリカに限定される。HIVを含む多くのウイルスは、休止状態または潜伏期を示し、その間、タンパク質合成は、ほとんど、または全く行われない。ウイルス性感染症は、このような期間中、免疫系には基本的に不可視である。現在の大抵の抗ウイルス治療法は、潜在型ウイルス保有細胞の除去には効果がない[1]。計算機手法およびハイスループット検証により可能となった近年のゲノム全体での選別により、ウイルスによりコードされた109のマイクロRNA前駆物質が明らかになった[13]。近年の調査は、HIV-1をコードしたマイクロRNA例えば、miR-N367の潜伏感染に影響を与える役割、および/またはそれを維持する役割を示唆している[1、14および19]。HIV-1の転写は、ヒトT細胞中のnef-発現miRNA:miR-N367配列番号46、により抑制されている[19]。miR-N367は、5’-LTRのU3領域の負の応答配列を介してHIV-1LTRプロモーター活性を低減させる[19]。従って、HIV-1感染細胞中で産生されたnef-miRNAは、転写後経路および転写新経路の両方を介して、HIV-1転写を下方制御できる[19]。図18に図示されているこの実施例では、本発明の組成物は、内在性miR-N367hiv1-mir-N367を含み、従って、また、HIV-1を含む細胞を死滅させるように設計される。miR-N367の成熟内在性miRNA鎖は:5’-ACUGACCUUUGGAUGGUGCUUCAA-3’配列番号47であり、この実施例の外因性RNA分子の結合部位は、miR-N367の成熟miRNA鎖に100相補的な配列5’-UUGAAGCACCAUCCAAAGGUCAGU-3’配列番号48を含むように設計される図18に示すように。目的の外因性タンパク質をコードする配列は、ジフテリア毒素DTタンパク質をコードするように設計され、また、外因性RNA分子中のmiR-N367結合部位の下流に配置されるように設計される図18。阻害配列は、miR-N367結合部位の上流に位置し、2つの開始コドンを含み、その内の1つが、ヒトコザックコンセンサス配列:5’-ACCAUGG-3’配列番号25内に位置するように設計され、それらのそれぞれは、DTの出発コドンと同じ読み枠にはない図18。外因性RNA分子は、また、miR-N367結合部位の下流で、DTタンパク質をコードする配列の上流の22ヌクレオチドのヌクレオチド配列配列番号49を含み、それにより、ヌクレオチド配列は、DTをコードする配列の下流に位置する22ヌクレオチドの配列配列番号50に結合でき、特に、外因性RNA分子が切断された場合に、外因性RNA分子がDTの翻訳の効率を高める環状構造を形成する。外因性RNA分子は、また、外因性RNA分子の翻訳の効率を低減させるために、内在性miRNAにより切断される前に、5’末端に非常に効率的なシス作用性ハンマーヘッド型リボザイムのN117[16]を含む。シス作用性ハンマーヘッド型リボザイムのN117は、また、2つの開始コドンを含み、そのどちらもDTタンパク質の出発コドンと同じ読み枠にはない。例えば、図18を参照されたい。この実施例では、外因性RNA分子は、強力なウイルスCMVプロモーターの制御下でウイルスベクターにより転写される。この実施例の全体の外因性RNA分子の配列は、配列番号51に設定される。外因性RNA分子をコードするベクターで導入された、この実施例の外因性RNA分子を標的細胞中で転写後、シス作用性リボザイムは、外因性RNA分子による全ての翻訳を低減させるために5’末端からキャップを取り外す。読み枠外の開始コドンは、DTの翻訳を防ぐが、しかし、細胞中に内在性miR-N367またはHIV-1の存在下では、外因性RNA分子は、切断され切断された配列は、配列番号52に設定される、読み枠外の開始コドンがタンパク質をコードする配列から切り離され、それによりDTが発現できる。DTタンパク質をコードする配列を含むRNA部分は、HIV-1感染細胞を死滅させる目的で、環状構造を形成し、DTタンパク質の翻訳を増加させる。例えば、図18を参照されたい。実施例のウイルスベクターは、また、HIV-1感染細胞中のHiv1-miR-N367の転写を強化することができる転写因子例えば、NF-κBをコードしてもよい。ウイルスベクターは、また、新規HIV-1粒子の産生を防ぐことができる遺伝子例えば、Revで、これはHIV-1mRNAスプライシングを防ぐをコードしてもよい。実施例4:転移性の乳癌細胞を死滅させるための本発明の組成物の使用転移性の乳癌細胞では、miR-10b配列番号53の発現が、健康なまたは非転移性腫瘍化細胞に比べて、上方制御されている[8]。miR-10bの発現は、転写因子Twistにより上方制御されている[8]。miR-10bの標的は、HOXD10であり、さらに、HOXD10レベルの減少は、高レベルのRHOCを生じ、より高いレベルのRHOCが、癌細胞運動性を刺激する[8]。図19に示されているこの実施例では、本発明の組成物は、転移性の乳癌細胞に特有の内在性miR-10bを含む細胞を死滅させるように設計されている。miR-10bの成熟内在性miRNA鎖は:5’-UACCCUGUAGAACCGAAUUUGUG-3’配列番号54であり、実施例の外因性RNA分子は、miR-10b用の2つの結合部位含むように設計され、それらの内のそれぞれ1つが、配列:5’-CACAAAUUCGGUUCUACAGGGUA-3’配列番号55を含み、これはmiR-10bの成熟miRNA鎖に100相補的である[31]。図19。目的の外因性タンパク質をコードする配列は、ジフテリア毒素断片ADT-Aタンパク質をコードするように設計され、また、外因性RNA分子中のmiR-10b用の2つの結合部位の間に配置されるように設計される。哺乳動物細胞では、細胞に導入されたジフテリア毒素断片Aのただ1つの分子でも、その細胞を死滅させることができる[5]。この実施例の外因性RNA分子は、2つの阻害配列を、1つは5’末端に、もう一つは3’末端に、含む。外因性RNA分子の5’末端に位置する阻害配列は、3つの開始コドンを含むように設計され、その内の1つは、ヒトコザックコンセンサス配列:5’-ACCAUGG-3’配列番号25内に配置され、これらのいずれも、DT-Aをコードする配列の出発コドンと同じ読み枠にはなく、また、3つの全ての開始コドンは、同じ読み枠に存在する。外因性RNA分子の5’末端に位置する阻害配列は、また、3つの開始コドンの下流で、miR-10b用の2つの結合部位の上流のヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、3つの開始コドンと同じ読み枠にあり、また、ヌクレオチド配列は、細胞内局在のための選別グシグナルをコードする。このシグナルは、ヒトアルキルジヒドロキシアセトンホスファートシンターゼのペルオキシソームターゲティングシグナル2であるH2NRLRYLSGHL配列番号27[28]。哺乳動物細胞では、細胞内局在のための選別グシグナルを有するタンパク質は、それらのmRNAから翻訳される間に、細胞内定位に配置することができる。外因性RNA分子の3’末端に位置する阻害配列は、miR-10b用の2つの結合部位の下流のHSV1LATイントロンを含むように設計され、それにより、外因性RNA分子が、外因性RNA分子中のコード配列の下流のイントロンを含む外因性RNA分子を分解するナンセンス変異依存分解機構NMDの標的となる[29]。外因性RNA分子の3’末端に位置する阻害配列は、また、3’末端に外因性RNA分子の分解を刺激するAUリッチ領域を含む。AUリッチ領域は、47ヌクレオチド長で、配列:5’-AUUUA-3’配列番号31および5’-UUAUUUAU/AU/A-3’配列番号32[26]を含む。この実施例では、外因性RNA分子は、強力なウイルスCMVプロモーターの制御下のウイルスベクターにより転写される。この実施例の全体の外因性RNA分子の配列は、配列番号56に設定される。外因性RNA分子をコードするベクターで導入された、この実施例の外因性RNA分子を標的細胞中で転写後、読み枠外の開始コドンは、DT-Aの翻訳を防ぐが、ペルオキシソームターゲティングシグナル2が、誤ったタンパク質および外因性RNA分子をペルオキシソームに送出し、イントロンが外因性RNA分子を標的にしてナンセンス変異依存分解機構NMDによる分解を起こさせ、また、AUリッチ領域も外因性RNA分子の分解を刺激する。しかし、細胞中の内在性miR-10bの存在下では、外因性RNA分子は、切断され切断された配列は、配列番号57に設定される、全ての阻害配列は、切り離され、それにより、DT-Aタンパク質は、少なくともそのタンパク質の1つのコピーが翻訳され、発現する。これで細胞死を起こさせるには充分である。実施例5:HSV-1感染細胞を死滅させるための本発明の組成物の使用HSV-1単純疱疹ウイルス-1を含む多くのウイルスが休止状態または潜伏期を示し、その間、タンパク質合成は行われない。ウイルス性感染症は、このような期間中は、免疫系に対し基本的に不可視である。現在の抗ウイルス治療法は、潜在型ウイルス保有細胞の除去に関してはほとんど効果がない[1]。単純疱疹ウイルス-1HSV-1の潜伏関連転写物LATは、ニューロンへの潜伏感染の間に発現したウイルス遺伝子であるに過ぎない。LATは、アポトーシスを抑制し、感染したニューロンの生存を促進することにより潜在性を維持する。LAT遺伝子はいかなるタンパク質も産生しない。調査は、HSV-1LAT遺伝子によりコードされるmiRNAのmiR-LAT配列番号57が、アポトーシス耐性を与えることを示唆する[17]。miR-LATは、HSV-1LAT遺伝子のエキソン1領域から生成され、従って、miR-LATは、潜伏感染の間に発現する[17]。図2に示されているこの実施例では、本発明の組成物は、内在性miR-LATを含み、従って、HSV-1も含む細胞を死滅させるように設計されている。miR-LATの成熟内在性miRNA鎖は:5’-UGGCGGCCCGGCCCGGGGCC-3’配列番号59であり、この実施例の外因性RNA分子は、miR-LAT用の2つの結合部位を含むように設計され、結合部位のそれぞれ1つが、miR-LATの成熟miRNA鎖に100相補的な配列:5’-GGCCCCGGGCCGGGCCGCCA-3’配列番号60を含む[17]。目的の外因性タンパク質をコードする配列は、ジフテリア毒素DTタンパク質をコードするように設計され、また、外因性RNA分子中の2つのmiR-LAT用結合部位の間に位置するように設計される図20。外因性RNA分子は、また、2つの阻害配列を、1つは5’末端に、もうひとつは3’末端に含む。外因性RNA分子の5’末端に位置する阻害配列は、2つの開始コドンを含むように設計され、それらの内のそれぞれ1つがヒトコザックコンセンサス配列:5’-ACCAUGG-3’配列番号25中に配置され、それらのいずれもDTタンパク質の出発コドンと同じ読み枠にはない図20。外因性RNA分子の3’末端に位置する阻害配列は、2つのmiR-LAT結合部位の下流の翻訳リプレッサーsmaug認識配列SRE:5’-UGGAGCAGAGGCUCUGGCAGCUUUUGCAGCG-3’配列番号28を含むように設計される。Smaug1は、ヒト染色体14中でコードされ、SRE含有メッセンジャーの翻訳を阻止できる[24、25]。マウスSmaug1は、脳で発現し、シナプトノイロゾーム翻訳がシナプスの刺激により厳重に調節されている細胞内領域で豊富に存在する[24]。外因性RNA分子の3’末端に位置する阻害配列は、また、ミエリン形成末梢のためのRNA局在化シグナルA2RE-核リボ核タンパク質A2応答配列:5’-GCCAAGGAGCCAGAGAGCAUG-3’配列番号29を3’末端に含む[27]。A2REは、MBPミエリン塩基性タンパク質mRNAの3’-非翻訳領域に位置するシス作用性配列であり、オリゴデンドロサイトのミエリン形成末梢へのMBPmRNAの輸送のために充分であり、また、必要である[27]。hnRNP異種核リボ核タンパク質A2は、A2REに結合し、MBPの輸送を媒介する[27]。外因性RNA分子は、また、DTタンパク質をコードする配列のすぐ下流の細胞質ポリアデニル化配列CPEを含む。CPEは、DTタンパク質をコードする配列のすぐ下流の配列5’-UUUUUUAUU-3’配列番号38およびDTタンパク質をコードする配列の91ヌクレオチド下流の配列5’-UUUUAUU-3’配列番号39を含む[23]。哺乳動物では、CPEB細胞質ポリアデニル化配列結合タンパク質が海馬樹状層長期記憶に関与する脳の一部中に存在する[30]。哺乳類海馬ニューロンのシナプトデンドリックコンパートメント中で、CPEBは、ポリアデニル化誘導翻訳によりCPEを含むα-CaMKIImRNAの翻訳を刺激するように思われる[30]。この実施例では、外因性RNA分子は、強力なウイルスCMVプロモーターの制御下にあるウイルスベクターにより転写される。この例の全体の外因性RNA分子の配列は、配列番号61に設定される。外因性RNA分子をコードするベクターにより導入される、この実施例の外因性RNA分子の標的細胞中での転写後、読み枠外の開始コドンが、DTタンパク質の翻訳を防ぎ、Smaug1翻訳リプレッサーがsmaug認識配列SREに結合してDTタンパク質の翻訳を抑制し、hnRNPA2がA2REに結合して外因性RNA分子のミエリン形成末梢への輸送を媒介する。しかし、標的細胞の内在性miR-LATHSV-1のの存在下では、外因性RNA分子は、切断され切断された配列は、配列番号62に設定される、2つの阻害配列が切り離され、それにより、CPEB細胞質ポリアデニル化配列結合タンパク質がCPEに結合し、切断された外因性RNA分子中のポリアデニンテールの伸長を促進し、DTが発現できるようになり、従って、その細胞ならびに隣接細胞を死滅させる。参考文献のリスト1WeinbergM.SandMorrisK.V、2006.ウイルスがコードするマイクロRNAが潜在型HIV-1感染症を媒介しているかDNACellBiol25:223-231.2VelculescuVEetal、2006.ヒト乳癌および結腸直腸癌のコンセンサスコード配列、Science314、5797:268-274.3LordMJ、JolliffeNA、MarsdenCJ、etal、2003、リシン細胞障害性の機序、ToxicolRev22、1:53-64.4Jeen-KuanChen、Chih-HungHung、Yen-ChywanLiawandJung-YawLin、1997、アブリン-aA鎖のアミノ酸残基の特定は、触媒および部位特異的変異誘発によるアブリン-aB鎖との再会合のために必須である、ProteinEngineering10:827-833.5Yamaizumi、M、Mekada、E、Uchida、T.andOkadaY、1978、細胞に導入された1分子のジフテリア毒素断片Aで細胞を死滅させることができる、cell15、1:245-50.6GallieDR、1991、キャップおよびポリAテールは、相乗的に機能し、mRNA翻訳効率を調節する、GenesDev5、11:2108-16.7EntrezGene:HIST1H2ACヒストンクラスター1、H2ac.8T.Dalmay、2008、マイクロRNAと癌、JournalofInternalMedicine263、4:366-375.9YZeng、2006、マイクロRNA産生および成熟の原理、Oncogene25;6156-6162.10BMEngelsandGHutvagner、2006、マイクロRNA媒介転写後遺伝子調節の原理と効果、Oncogene25:6163-6169.11BenjaminHaleyPhillipDZamore、2004、RNAi酵素複合体の動態解析、NatureStructuralMolecularBiology11:599-606.12WilliamCSCho、2007、OncomiR:癌中のマイクロRNAの検知と進行、MolecularCancer6:60.13VinodScariaandVaibhavJadhav、2007、ウイルス性発癌におけるマイクロRNA、Retrovirology4:82.14VinodScaria、ManojHariharan、BeenaPillai、SouvikMaiti、SamirK.Brahmachari、2007、宿主-ウイルスゲノム相互作用:マイクロRNAの大きな役割、CellularMicrobiology9、12:2784-2794.15MaurilleJ.Fournieretal、1999.核小体低分子RNA:リボザイムハイブリッドは、ほぼ完全な効率で核小体RNA標的をインビボ切断する、PNAS96、12:6609-6614.16LaisingYen、JenniferSvendsen、Jeng-ShinLee、JohnT.Gray、MaximeMagnier、TakashiBaba、RobertJ.D 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