"下記の一般式Iに示される2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物。I上記式において、R1とR2は、それぞれ独立にH若しくはC1~C4のアルキル基であり;R3は、少なくとも一つのヒドロキシ基で置換されたC1~C6のアルキル基、少なくとも一つのC1~C6のアルコキシ基で置換されたC1~C6のアルキル基、少なくとも一つのハロゲン原子で置換されたC1~C6のアルキル基、C2~C6のアルケニル基、少なくとも一つのヒドロキシ基で置換されたC2~C6のアルケニル基、若しくは少なくとも一つのハロゲン原子で置換されたC2~C6のアルケニル基であり;Xは、ハロゲン原子である。前記R1は、H、メチル基若しくはエチル基であり、R2はHであることを特徴とする請求項1に記載の2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物。前記R3は、1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC1~C5のアルキル基、1つまたは2つのC1~C4のアルコキシ基で置換されたC1~C5のアルキル基、1つのフッ素原子、塩素原子若しくは臭素原子で置換されたC1~C5のアルキル基、メチルプロペニル基、メトキシプロペニル基、若しくはフッ化メチルプロペニル基であることを特徴とする請求項1または2に記載の2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物。前記R3は、1つまたは2つのヒドロキシ基で置換された4つの炭素原子を含むアルキル基、1つまたは2つのC1~C4のアルコキシ基で置換された4つの炭素原子を含むアルキル基、4つの炭素原子を含むフッ化アルキル基、2-メチルプロペニル基、2-メトキシプロペニル基、若しくは2-フッ化メチルプロペニル基であることを特徴とする請求項1~3の何れか1項に記載の2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物。前記XはFであり、または4位F置換基であることを特徴とする請求項1~4の何れか1項に記載の2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物。前記2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物は、以下の化合物からなる群より選択されるものであることを特徴とする請求項1~5の何れか1項に記載の2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物。及び以下のルート3、ルート4、若しくはルート5により調製することを特徴とする請求項1~6の何れか1項に記載の2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物の調製方法。ルート3ここで、2’,2-ビスチアゾール蟻酸メチルが、溶媒であるエチレングリコールと高い温度で、親核試薬であるハロゲン化ベンジルアミンと反応して、2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を得る。;若しくは、ルート4ここで、2’,2-ビスチアゾール蟻酸メチルが加水分解されて対応する酸に転化され、当該酸が塩化オキサリルと反応して酸クロリドに転化された後、当該酸クロリドがハロゲン化ベンジルアミンと反応して2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を得る。;若しくは、ルート5ここで、2’,2-ビスチアゾール蟻酸メチルが加水分解されて対応する酸に転化され、当該酸が凝縮剤であるEDCI1-エチル-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩の存在下で、ハロゲン化ベンジルアミンと反応して、2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を得る。;なお、前記反応式におけるR1、R2、R3及びXの定義は、引用された請求項におけるR1、R2、R3及びXの定義と同じである。活性成分として請求項1~6のいずれか1項に記載された2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物中の一種若しくは多種を含み,さらに一般の医薬用添加剤を含む、抗B型及び/またはC型ウイルス肝炎の医薬組成物。B型及び/またはC型ウイルス肝炎の治療薬物の調製における、請求項1~6のいずれか1項に記載された前記2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物の使用。B型肝炎またはC型肝炎の患者に、治療有効量の請求項1~6のいずれか1項に記載された前記2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を投与することを含む、B型肝炎またはC型肝炎の治療方法。そのため、本発明は、新規な2,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を提供することを目的としている。また、本発明は、本発明に係る2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物の調製方法を提供することを目的としている。また、本発明は、活性成分として本発明に係る2,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を含む、抗B型及び/またはC型肝炎ウイルス阻害剤である医薬組成物を提供することを目的としている。また、本発明は、B型及び/またはC型ウイルス性肝炎の治療用薬物の調製における、本発明に係る2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物の用途を提供することを目的としている。また、本発明は、B型若しくはC型ウイルス肝炎の治療方法を提供することを目的としている。本発明の一形態によれば,本発明は、下記の一般式Iに示される2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を提供する。I上記式において、R1とR2は、それぞれ独立にH若しくはC1~C4のアルキル基であり、より好ましくは、前記R1はH、メチル基またはエチル基であり、R2はHであり;R3は、少なくとも一つのヒドロキシ基で置換されたC1~C6のアルキル基、少なくとも一つのC1~C6のアルコキシ基で置換されたC1~C6のアルキル基、少なくとも一つのハロゲン原子で置換されたC1~C6のアルキル基、C2~C6のアルケニル基、少なくとも一つのヒドロキシ基で置換されたC2~C6のアルケニル基、若しくは少なくとも一つのハロゲン原子で置換されたC2~C6のアルケニル基であり、好ましくは、前記R3は、1つまたは2つのヒドロキシ基で置換されたC1~C5のアルキル基、1つまたは2つのC1~C4のアルコキシ基で置換されたC1~C5のアルキル基、1つのフッ素原子、塩素原子または臭素原子で置換されたC1~C5のアルキル基、メチルプロペニル基、メトキシプロペニルmethylolpropenyl基、若しくはフッ化メチルプロペニルfluomethylolpropenyl基であり、最も好ましくは、前記R3は、1つまたは2つのヒドロキシ基で置換された4つの炭素原子を含むアルキル基、1つまたは2つのC1~C4のアルコキシ基で置換された4つの炭素原子を含むアルキル基、4つの炭素原子を含むフッ化アルキル基、2-メチルプロペニル基、2-メトキシプロペニル2methylolpropenyl基、若しくは2-フッ化メチルプロペニル2fluomethylolpropenyl基であり;Xはハロゲン原子であり、Fであることが好ましく、4位F置換基であることが最も好ましい。本発明において、以下のように定義する。即ち、前記アルキル基は直鎖または分岐鎖アルキル基を含み、前記アルケニル基は直鎖または分岐鎖のアルケニル基を含み、前記ハロゲンはF、Cl、Br及びIを含む。本発明に係る2,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物は、以下の化合物からなる群より選択されるものであることが最も好ましい。及び本発明に係る2,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物は、中間体4を原料として合成を行って得られることができる。中間体4の合成は、国際出願PCT/CN2007/001861国際公開番号WO2007/147336の方法を参照することができ、若しくは以下のルートにより実現することができるルート1。ルート1反応式において、R1とR2の定義は、上記のとおりであり、R4はC1~C6のアルキル基である。具体的に、中間体2-ブロムチアゾール1と活性化亜鉛粉によって亜鉛試薬が得られた後、得られた亜鉛試薬と他の中間体2-ブロムチアゾール中間体3が、酢酸パラジウムの触媒作用下で、Negishiカップリング反応を介して、中間体2,2-ビスチアゾール蟻酸メチル4が得られた。中間体2,2-ビスチアゾール蟻酸メチル4を原料として、側鎖に対して一連の官能基の転化を行うことにより、側鎖がヒドロキシ基、アルコキシ基またはハロゲン原子例えば、フッ素原子で置換された複数種の中間体、即ち2,2-ビスチアゾール蟻酸メチル4a~4iを調製することができるR4がイソブチル基であることを例として説明したが、この限りではないルート2。例えば、溶媒である四塩化炭素で、5-イソブチル-2,2-ビスチアゾール蟻酸メチル4とNBSN-ブロムスクシンイミドと反応させて臭化物が得られ、該臭化物を硝酸銀で処理した後、ヒドロキシ置換中間体4aが得られ;得られた中間体4aをDAST三フッ化ジエチルアミノ硫黄で処理した後、フッ化中間体4bを得る。トルエン中で、上記臭化物をアルカリDBU1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エンで処理した後、中間体アルケニル4cが得られ;中間体アルケニル4cがm-CPBAと作用した後、更にエポキシ化合物に転化し、該エポキシ化合物がPd-Cの水素化により、選択的にエポキシ環を開環し、ヒドロキシ置換中間体4dが得られ;中間体4dをDASTで処理した後、フッ化中間体4eを得る。中間体アルケニル4cが、混合溶媒であるイソプロパノール水中で、オスミン酸カリウムの触媒作用を介して、ジヒドロキシル化反応を起こし、中間体ジヒドロキシ化合物4fを得る。中間体アルケニル4cが、溶媒であるジオキサンで二酸化セレンと反応した後、中間体アルデヒドを得ることもでき、該中間体アルデヒドが、水素化硼素ナトリウムにより還元された後、中間体ヒドロキシ化合物4gが得られ;化合物4gをさらにDASTで処理した後、フッ化中間体4hを得る。ヒドロキシ置換中間体4aが、NaHの作用下で、ハロゲン化炭化水素R5XR5は、C1~C6のアルキル基であるとアルキル化し、アルコキシ置換中間体4iを得ることもできる。ルート2中間体4から、以下のルートを通じて本発明に係る2,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物の合成を実現することができる。ルート3,ルート4とルート5:ルート3ルート4ルート5その中、上記反応式におけるR1、R2及びR3の定義は上記の通りである。具体的に、中間体2,2-ビスチアゾール蟻酸メチル4は、加水分解を通じなく、直接に溶媒であるエチレングリコールと高い温度で、親核試薬であるハロゲン化ベンジルアミンと反応して、本発明に係る2,2-ビスチアゾール複素環化合物を得ることもできる。若しくは、中間体2,2-ビスチアゾール蟻酸メチル4が加水分解されて対応する酸に転化され、当該酸が塩化オキサリルと反応して酸クロリドに転化された後、当該酸クロリドがハロゲン化ベンジルアミンと反応して本発明に係る2,2-ビスチアゾール系複素環化合物を得ることもできる。若しくは、中間体2,2-ビスチアゾール蟻酸メチル4が加水分解を介して対応する酸に転化され、当該酸が凝縮剤である、例えばEDCI1-エチル基-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩の存在下で、ハロゲン化ベンジルアミンと反応して、本発明に係る2,2-ビスチアゾール系複素環化合物を得ることもできる。本発明に係る新規な2,2-ビスチアゾール系複素環非ヌクレオシド系化合物は、B型肝炎ウイルスとC型肝炎ウイルスに対抗する活性を同時に有し、B型肝炎とC型肝炎の治療に用いられ、且つ、薬物動力学試験により該化合物が良い生体利用効率を有することを示しており、B型肝炎とC型肝炎の治療薬物の調製に用いられる。本発明は、B型肝炎またはC型肝炎の患者に治療有効量の本発明の2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を投与することを含む、B型肝炎またはC型肝炎の治療方法を提供する。本発明は、抗B型ウイルス性肝炎及び/またはC型ウイルス性肝炎の医薬組成物を提供し、該医薬組成物は、活性成分として本発明に係る2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物中の一種若しくは多種を治療有効量で含み,さらに一般の医薬用添加剤、例えば分散剤、賦形剤、崩壊剤、酸化防止剤、甘味剤、コーティング剤などを含む。当該組成物は、薬学分野の慣用の調製方法により調製することができ、且つ各種の慣用の剤形、例えば錠剤、コーティング錠、カプセル及び粉末製剤などに製造されることができる。本発明は、新規な2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物を設計及び合成した。当該化合物は、B型とC型肝炎ウイルスの複製を有効的に抑制でき、B型とC型ウイルス性肝炎の治療に用いることが可能である。発明者による過去の国際出願PCT/CN2007/001861国際公開番号のWO2007/147336に開示された類似的な化合物と比べて、本発明に係る新規な2’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物は、その抗B型肝炎ウイルス活性を保持するとともに、当該の化合物は抗C型肝炎ウイルス活性も更に有し、且つ、側鎖に二重結合、ヒドロキシ基、アルコキシ基及びハロゲン原子などの極性基を導入するので、原化合物の生体利用効率低下の欠点を克服し、より良い開発見通しが表れる。以下、本発明に対して、具体的な実施例を挙げて詳しい説明を行う。しかし、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。<化合物の調製実施例>以下の調製実施例において、NMRは、Varian製造Mercury-Vx300M型機器により測定した。NMR校正:δH7.26ppmCDCl3;質量分析器として、Agilent1200QuadrupoleLC/MSを使用し;試薬は、主に上海化学試剤公司から提供され、TLC薄層クロマトグラフィシリカゲル平板は、山東烟台会友硅膠開発有限公司HuiyousilicadevelopmentcompanyYantaiShandongから提供され、タイプはHSGF254であり;化合物の精製に使用される順相カラムクロマトグラフィシリカゲルは、山東青島海洋化工工場の子工場から提供され、タイプはzcx-11、200~300目である。[調製実施例1中間体2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチルの合成]15-イソブチル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル活性化Zn粉末84gを2Lの三口フラスコに添加して、新鮮なTHF600mLを添加した。内部温度を60°C程度まで加熱し、2-ブロムチアゾール200gの乾燥THF60mL溶液を滴下し始め、約3~4時間にわたって滴下を完成させ、その後還流反応を1.5時間続けた。得られた亜鉛試薬を、2-ブロム-5-イソブチルチアゾール-4-蟻酸メチル233g、酢酸パラジウム9.4g及びトリフェニルホスフィン22gが溶解されている乾操トルエン1.2L溶液に移し、80°C~85°Cまで加熱して、1~1.5時間保温反応を行う。室温まで冷却した後、この反応混合物中に5HCl2Lを添加し、有機相を抽出し、水相を酢酸エチルで抽出する。有機相を合併して、5HClで洗浄し、濃縮してオフブラックの油状物を得て、メタノールにおいて再結晶して浅黄色固体162gである5-イソブチル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチルを得た。そのモル収率は69である。1HNMRCDCl3:δ1.00s,3H、1.02s,3H、2.03m,1H、3.17-3.19d,J=7.2Hz,2H、3.96s,3H,7.46-7.47d,J=3.3Hz,1H、7.87-7.88d,J=3.3Hz,1H。ESI-MSm/z:305.1MNaC12H14N2NaO2S2理論値:305.04。25-1-ブロム-2-メチルプロピル-2,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-イソブチル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル2.2gを四塩化炭素60mLとジクロロメタン20mLに溶解し、NBSN-ブロムスクシンイミド、1.8gとAIBNアゾビスイソブチロニトリル、O.2gを添加した後、加熱しながら3時間還流し、TLCで反応終了を確認し、濃縮した後、得られた残余物を酢酸エチルで希釈し、水で有機相を洗浄し、乾操して濃縮し、得られた残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して浅黄色固体である5-1-ブロム-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル8gを得た。その収率は定量に近づいた。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.03d,J=6.6Hz,3H、1.23d,J=6.6Hz,3H、2.24m,1H、3.98s,3H、6.11d,J=7.2Hz,1H、7.51d,J=3.3Hz,1H、7.90d,J=3.3Hz,1H。35-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-1-ブロム-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル235mgをメタノール7mLに溶解し、水3mLとAgNO3435mgを添加して、室温下で48時間反応させ、TLCで検査して大部分の原料が消滅していることを確認した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して得た残余物を水で希釈し、酢酸エチルで十分に抽出し、有機相を合併し、乾操して濃縮した後、得られた粗い製品をカラムクロマトグラフィで分離して白色に近い固体である5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル81mgを得た。そのモル収率は42である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.00d,J=6.6Hz,3H、1.20d,J=6.6Hz,3H、2.21m,1H、3.96s,3H、5.32t,J=5.4Hz,1H、7.50d,J=3.3Hz,1H、7.90d,J=3.3Hz,1H。45-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-1-ブロム-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル1.2gをトルエン50mLに溶解し、DBU1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、1.5gを添加し、加熱しながら3時間還流反応させ、TLCで反応終了を確認した。反応混合物を酢酸エチルで希釈した後、水、5塩酸及び飽和食塩水のそれぞれで洗浄し、乾操して濃縮し、残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製した後、浅黄色固体である5-[1-2-メチルプロペニル]-2,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル0.73g得た。そのモル収率は79である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ2.06s,6H、3.98s,3H、7.31t,J=1.2Hz,1H、7.47d,J=3.0Hz,1H、7.89d,J=3.3Hz,1H。55-[2-3,3-ジメチルエポキシエチル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル426mgをクロロホルム25mLに溶解し、m-CPBA3-メタクロロ過安息香酸,600mgを添加し、室温で3時間反応させ、TLCで反応終了を確認した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液と飽和重亜硫酸ナトリウム水溶液のそれぞれで洗浄し、有機層を抽出し、乾操して濃縮し、得られた粗い製品をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、白色結晶性粉末である5-[2-3,3-ジメチルエポキシエチル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル300mgを得た。そのモル収率は67である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.23s,3H、1.56s,3H、3.99s,3H、4.42s,1H、7.48d,J=3.0Hz,1H、7.89d,J=3.3Hz,1H。65-2-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-[2-3,3-ジメチルエポキシエチル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル200mgをメタノール150mLに溶解し、触媒であるPd-C10,10mgを添加し、水素で十分に置換した後、室温で5時間反応し、TLCで反応終了を確認した。N2で置換した後、反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して、残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで処理して、白色に近い固体である5-2-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル200mgを得た。その収率は定量に近づいた。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.34s,6H、3.51s,2H、3.97s,3H、7.47d,J=3.0Hz,1H、7.89d,J=3.0Hz,1H。75-1,2-ジヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル500mgをイソプロパノール20mLと水15mLの混合溶媒中に溶解し、上記反応混合物にオスミン酸カリウム25mg、N-メチル-N-酸化モルホリンNMO、50550mgを添加し、室温で一晩反応させ、翌日にTLCで反応終了を確認した。混合物を飽和重亜硫酸ナトリウム水溶液で急冷し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、飽和食塩水で洗浄した後、乾燥、濾過及び濃縮を行って、ベージュ油状物である5-1,2-ジヒドロキシ-2-メチルプロピル-2,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル494mgを得た。そのモル収率は87である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.21s,3H、1.53s,3H、3.89s,3H、4.32s,1H、7.49d,J=3.0Hz,1H、7.89d,J=3.3Hz,1H。85-[1-2-ホルミルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル50mgをジオキサン5mLに溶解し、二酸化セレン30mgを添加して、3時間還流反応させ、TLCで検査して原料が実質的に消滅していることを確認した。反応混合物を濃縮して、残余物をジクロロメタンで溶解した後、シリカゲルカラム石油エーテル/酢酸エチル=5/1体積比で溶出するに移して精製し、黄色固体である5-[1-2-ホルミルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル3lmgを得た。そのモル収率は60である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ2.10s,3H、3.97s,3H、7.57d,J=3.0Hz,1H、7.96d,J=3.0Hz,1H、8.49d,J=1.5Hz,1H、9.69s,1H。95-3-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-[1-2-ホルミルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル122mgをメタノール80mLとDMF10mLの混合溶媒に添加し、触媒であるPd-C10、10mgを添加し、水素で十分に置換した後、室温で一晩反応した。翌日にTLCで反応終了を確認し、N2で置換した後、反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して、残余物を酢酸エチルで希釈した後、水で三回洗浄し、飽和食塩水で洗浄し、乾燥、濾過及び濃縮を行って無色に近い油状物である5-2-ホルミルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル123mgを得た。その収率は定量に近づいた。上記ステップの産物123mgをメタノール25mLに溶解し、氷浴冷却下で水素化硼素ナトリウム300mgを添加し、15分間保温反応させた後、氷浴を除き、室温で3時間反応させ、TLCで反応終了を確認した。反応混合物を濃縮した後、残余物を水で希釈し、酢酸エチルで十分に抽出し、有機相を合併して、飽和食塩水で洗浄後に、乾燥、濾過及び濃縮を行って、無色に近い油状物である5-3-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル32mgを得た。そのモル収率は26であり、精製せずに、後の反応に直接使用する。105-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-[1-2-ホルミルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル300mgをメタノール300mLに溶解し、氷浴冷却下で、水素化硼素ナトリウム200mgを添加して、15分間保温反応させた後、氷浴を除き、室温で1.5時間反応させて、TLCで反応終了を確認した。反応混合物を濃縮した後、残余物を水で希釈し、酢酸エチルで十分に抽出し、有機相を合併して、飽和食塩水で洗浄した後、乾燥、濾過及び濃縮を行って、浅黄色の油状物である5-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル198mgを得た。そのモル収率は66であり、精製せずに、後の反応に直接使用する。115-2-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-2-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル63mgをジクロロメタン5mLに溶解し、氷浴冷却下で上記溶液に三フッ化ジエチルアミノ硫黄DAST、O.1mLを滴下して添加し、1時間保温反応をさせ、TLCで反応が大体終了したことを確認した。反応を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で急冷し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併して,乾燥、濾過及び濃縮を行って、残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、浅黄色の固体である5-2-フルオロ-2-メチルプロピル-2,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル20mgを得た。そのモル収率は33である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.39s,3H、1.46s,3H、3.69~3.77d,J=23.1Hz,1H、3.97s,3H、7.47d,J=3.0Hz,1H、7.90d,J=3.0Hz,1H。125-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル調製実施例111の方法により、5-1-ヒドロキシ基-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチルを原料として、5-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチルを得た。そのモル収率は42である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.07d,J=6.9Hz,6H、2.24m,1H、3.99s,3H、6.21~6.392d,J=5.4,17.lHz,1H、7.51d,J=3.0Hz,1H、7.92d,J=3.3Hz,1H。ESI-MSm/z:323.1MNaC12H13FN2NaO2S2,理論値:323.03。135-[1-3-フルオロ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル調製実施例111の方法により、5-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチルを原料として、5-[1-3-フルオロ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチルを得た。そのモル収率は83である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ2.07s,3H、2.24m,1H、3.97s,3H、4.89~5.05d,J=46.8Hz,1H、7.51d,J=3.0Hz,1H、7.61s,1H、7.92d,J=3.3Hz,1H。ESI-MSm/z:321.0MNaC12H11FN2NaO2S2,理論値:321.01。145-1-メトキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル55mgとヨードメタン0.3mLとをDMF10mLに溶解し、氷浴冷却下で上記溶液中にNaH60、50mgを添加し、自然に6時間昇温反応をさせて、TLCで反応終了を確認した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で急冷し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併して、水、飽和食塩水のそれぞれで洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して濃縮し、粗い製品をシリカゲルカラムクロマトグラフィ石油エーテル/酢酸エチル=5/1で処理した後、無色の油状物である5-1-メトキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル52mgを得た。そのモル収率は86である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ0.95d,J=6.6Hz,3H、1.02d,J=6.6Hz,3H、2.05m,1H、3.40s,3H、3.98s,3H、5.07d,J=6.0Hz,1H、7.49d,J=3.0Hz,1H、7.91d,J=3.0Hz,1H。155-メチル-5-イソブチル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピル調製実施例11の方法により、2-ブロム-5-メチルチアゾールと2-ブロム-5-イソブチルチアゾール4-蟻酸イソプロピルを原料として、浅黄色の固体である5-メチル基-5-イソブチル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを得た。そのモル収率は66である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ0.99d,J=6.6Hz,6H、1.41d,J=6.3Hz,6H、1.98m,1H、2.53s,3H、3.10d,J=7.2Hz,2H、5.28m,1H、7.51s,1H。165-メチル基-5-1-ブロム-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピル調製実施例12の方法により、5-メチル-5-イソブチル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを原料として、浅黄色の油状物である5-メチル-5-1-ブロム-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを得た。その収率は定量に近づいた。次のステップの反応に直接使用する。1HNMR300MHz,CDCl3:δ0.92d,J=6.6Hz,3H、1.20d,J=6.6Hz,3H、1.44m,6H、2.24m,1H、2.54s,3H、5.28m,1H、6.04d,J=6.6Hz,3H、7.54s,1H。175-メチル-5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピル調製実施例13の方法により、5-メチル-5-1-ブロム-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを原料として、浅黄色の固体である5-メチル-5-1ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを得た。そのモル収率は13である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ0.97d,J=6.6Hz,3H、1.05d,J=6.6Hz,3H、1.44d,J=6.3Hz,6H、2.10m,1H、2.54s,3H、3.28d,J=5.7Hz,1H、5.26m,1H、7.53s,1H。185-メチル基-5-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピル調製実施例111の方法により、浅黄色の固体である5-メチル-5-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを得た。その収率は定量的であった。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.04d,J=6.6Hz,6H、1.25m,6H、2.20m,1H、2.55s,3H、5.28m,1H、6.15~6.332d,J=5.4,17.1Hz,1H、7.55s,1H。195-メチル-5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピル調製実施例14の方法により、5’-メチル-5-1-ブロム-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを原料として、黄色の固体である5-メチル-5-[1-2-メチルプロペニル]-2,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを得た。そのモル収率は40である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.55s,6H、2.03s,6H、2.54s,3H、5.27m,1H、7.20s,1H、7.54s,1H。<調製実施例22’,2-ビスチアゾール非ヌクレオシド系化合物の合成>1N-p-フルオロベンジル-5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド391-15-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル30mgをエチレングリコール3mLに溶解し、p-フルオロベンジルアミン125mgを添加し、N2の保護下、150°Cで一晩反応させ、TLCで反応終了を確認した。反応混合物を水で希釈した後に、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併して、水、5塩酸及び飽和食塩水のそれぞれで洗浄した後、乾燥して濃縮し、粗い製品をさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、浅黄色の油状物であるN-p-フルオロベンジル-5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド17mgを得た。そのモル収率は50である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ0.93d,J=6.6Hz,3H、1.18d,J=6.6Hz,3H、2.20m,1H、4.63d,J=6.0Hz,2H、4.89t,J=7.8Hz,1H、5.65d,J=8.4Hz,1H、7.05m,2H、7.34m,2H、7.46d,J=3.0Hz,1H、7.89d,J=3.0Hz,1H、7.94m,1H。2N-p-フルオロベンジル-5-2-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド391-2上記調製実施例21と同じ方法により、浅黄色の油状物であるN-p-フルオロベンジル-5-2-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。そのモル収率は55である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.28s,6H、3.52s,2H、3.97s,1H、4.61d,J=6.0Hz,2H、7.04m,2H、7.34m,2H、7.45d,J=3.0Hz,1H、7.88d,J=3.0Hz,1H、7.89s,1H。3N-p-フルオロベンジル-5-3-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド391-3上記調製実施例21と同じ方法により、浅黄色の油状物であるN-p-フルオロベンジル-5-3-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。そのモル収率は16である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.10d,J=6.9Hz,3H、2.04brs,1H、3.24dd,J=5.4,14.4Hz,2H、3.34m,1H、3.54m,1H、3.71dd,J=6.0,14.1Hz,2H、3.67m,2H、7.05m,2H、7.35m,2H、7.46d,J=3.3Hz,1H、7.87s,1H、7.88d,J=3.3Hz,1H。4N-p-フルオロベンジル-5-1,2-ジヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド407上記調製実施例21と同じ方法により、浅黄色の油状物であるN-p-フルオロベンジル-5-1,2-ジヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。そのモル収率は26である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.32s,6H、4.61d,J=6.OHz,1H、5.69s,1H、7.07m,2H、7.37m,2H、7.45d,J=3.0Hz,1H、7.89d,J=3.0Hz,1H、7.90s,1H。5N-p-フルオロベンジル-5-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド3895-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル120mgをメタノール20mLと水10mL中に溶解し、水酸化リチウム一水和物50mgを添加し、室温で一晩反応させた。反応終了後、混合物を減圧濃縮して、大部分のメタノールを除き、得られた水相を5塩酸で酸性に調整すると、濁りが現れた。水相をジクロロメタンで十分に抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して濃縮し、浅黄色の固体である5-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸110mgを得た。その収率は定量的であり、次のステップの反応に直接使用する。上記ステップで得られた5-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2,2-ビスチアゾール-4-蟻酸62mgをDMFN,N-ジメチルホルムアミド20mLに溶解し、この溶液にフルオロベンジルアミン140mg、EDCI300mgとp-ジメチルアミノピリジンDMAP、30mgを添加し、室温で一晩反応させた。反応終了後、混合物を水で希釈し、酢酸エチルで十分に抽出して、得られた有機相を水、5塩酸及び飽和食塩水のそれぞれで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して濃縮し,シリカゲルカラムクロマトグラフィ石油エーテル/アセトン=4/1溶出で浅黄色の固体であるN-p-フルオロベンジル-5-[1-3-ヒドロキシ-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。そのモル収率は32である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ2.05s,3H、4.28s,2H、4.62d,J=6.OHz,2H、7.04m,2H、7.38m,2H、7.48d,J=3.0Hz,1H、7.83m,1H、7.89d,J=3.6Hz,1H、7.93s,1H。ESI-MSm/z:412.0MNaC18H16FN3NaO2S2,理論値:412.06。6N-p-フルオロベンジル-5-メチル-5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドMe-391-1上記調製実施例25と同じ方法により、5-メチル-5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸イソプロピルを原料として、加水分解、縮合を介して、カラムクロマトグラフィ石油エーテル/アセトン=5/1で無色に近い油状物であるN-p-フルオロベンジル-5-メチル-5-1-ヒドロキシ-2-メチルプロピル-2,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。そのモル収率は43である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ0.92d,J=6.6Hz,3H、1.01d,J=6.6Hz,3H、2.17m,1H、2.53s,3H、4.62d,J=6.0Hz,2H、4.83t,J=7.8Hz,1H、5.76d,J=8.4Hz,1H、7.05m,2H、7.35m,2H、7.54s,1H、7.89d,J=3.6Hz,1H、7.93m,1H。7N-p-フルオロベンジル-5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド3735-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸メチル276mgをメタノール10mLに溶解し、水10mLと水酸化リチウム一水和物100mgを添加して、混合物を室温で一晩反応させた。翌日にTLCで反応終了を確認し、減圧下で濃縮して大部分のメタノールを除き、得られた水相を5塩酸で酸性に調整し、ジクロロメタンで十分に抽出し、有機相を合併して、水で洗浄した後、乾燥、濾過及び濃縮を行って、浅黄色の固体である5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸257mgを得た。その収率は定量的であり、直接次のステップの反応を行う。得られた5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-蟻酸257mgをジクロロメタン15mL中に溶解し、1滴のDMF、塩化オキサリル0.15mLを添加して、室温で3時間反応させて、濃縮後浅黄色の固体を得た。得られた固体を酢酸エチル15mLに溶解し、且つ氷浴冷却下でp-フルオロベンジルアミン180mgの酢酸エチル15mL溶液と重炭酸ナトリウム200mg、水10mLとの混合混合物に滴下して添加し、自然に室温まで昇温しながら一晩反応させた。翌日にTLCで反応終了を確認し、有機層を抽出して、水相を酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、且つ5塩酸と飽和食塩水で洗浄した後、乾燥、濾過及び濃縮を行って、残余物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、黄色の固体であるN-p-フルオロベンジル-5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド284mgを得た。2段階反応のモル収率は77である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ2.06s,6H、4.62d,J=6.OHz,2H、7.04m,2H、7.37m,2H、7.45d,J=3.0Hz,1H、7.68s,1H、7.85m,1H、7.89d,J=3.0Hz,1H。8N-p-フルオロベンジル-5-2-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド393-2上記調製実施例27の方法により、黄色の油状物であるN-p-フルオロベンジル-5-2-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。2段階反応の収率は定量に近づいた。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.40s,3H、l.47s,3H、3.90d,J=24.OHz,2H、4.60d,J=6.6Hz,2H、7.07m,2H、7.34m,2H、7.44d,J=3.0Hz,1H、7.87m,1H、7.89d,J=3.0Hz,1H。ESI-MSm/z:416.1MNaC18H17F2N3NaOS2、理論値:416.07。9N-p-フルオロベンジル-5-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド393-1上記調製実施例27の方法により、無色に近い油状物であるN-p-フルオロベンジル-5-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。その収率は定量的であった。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.06t,J=6.6Hz,6H、2.26m,1H、4.63m,2H、6.47~6.652d,J=5.4,46.5Hz,1H、7.05m,2H、7.35m,2H、7.48d,J=3.0Hz,1H、7.77m,1H、7.91d,J=3.0Hz,1H。ESI-MSm/z:416.1MNaC18H17F2N3NaOS2,理論値:416.07。10N-p-フルオロベンジル-5-メチル-5-[1-2-メチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドMe-373上記調製実施例27の方法により、浅黄色の固体であるN-p-フルオロベンジル-5-メチル-5-[1-2-メチルプロペニル]-2,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。2段階反応の収率は93である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ2.04s,6H、2.53s,3H、4.62d,J=6.3Hz,2H、7.04m,2H、7.35m,2H、7.53s,1H、7.66s,1H、7.84m,1H。11N-p-フルオロベンジル-5-メチル-5-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドMe-393-1上記調製実施例27の方法により、無色に近い油状物であるN-p-フルオロベンジル-5’-メチル基-5-1-フルオロ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。2段階反応の収率は83である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.05m,6H、2.25m,1H、2.54s,3H、4.61m,2H、6.46~6.642d,J=5.4,46.8Hz,1H、7.05m,2H、7.33m,2H、7.55s,1H、7.76m,1H。12N-p-フルオロベンジル-5-[1-2-フルオロメチルプロペニル]-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド391-F上記調製実施例27の方法により、白色に近い固体であるN-p-フルオロベンジル-5-[1-2-フルオロメチルプロペニル]-2,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。2段階反応の収率は68である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ2.09s,3H、4.63d,J=6.OHz,2H、4.89s,1H、5.05s,1H、7.05m,2H、7.36m,2H、7.50d,J=3.0Hz,1H、7.88m,1H、7.92d,J=3.0Hz,1H、8.00s,1H。ESI-MSm/z:414.0MNaC18H15F2N3NaOS2,理論値:414.05。13N-p-フルオロベンジル-5-1-メトキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミド405-1上記調製実施例27の方法により、浅黄色の固体であるN-p-フルオロベンジル-5-1-メトキシ-2-メチルプロピル-2’,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドを得た。2段階反応の収率は73である。1HNMR300MHz,CDCl3:δ0.97d,J=6.6Hz,3H、1.02d,J=6.6Hz,3H、2.07m,1H、3.42s,3H、4.62d,J=6.3Hz,2H、5.36d,J=6.0Hz,1H、7.05m,2H、7.34m,2H、7.47d,J=3.0Hz,1H、7.79m,1H、7.90d,J=3.3Hz,1H。<抗肝炎ウイルス試験実施例>[抗ウイルス試験実施例1抗B型肝炎ウイルスHBV活性テスト試験]1.実験目的:HBV全ゲノムが安定的に導入されたHepG2.2.15の細胞において、サンプル化合物の抗HBV活性の測定を行う。測定は、サンプル化合物の細胞毒性CC50、及びHBV-DNAの複製レベルに対する影響IC50を含む。2.実験原理:HBV全ゲノムが安定的に導入されたヒト肝癌細胞であるHepG2.2.15細胞株は、培養の際に、B型肝炎ウイルス粒子DNAを含むを培養上清へ分泌する。抗ウイルス薬物の介入で、細胞が培養上清中へ分泌したウイルスDNAの含有量を検出し、薬物添加なしの対照グループにおける含有量と参照することによってサンプル薬物の抗ウイルス活性を検出できる共に、サンプル薬物の細胞毒性作用を検出できる。リアルタイム蛍光定量PCR法を用いてHBV-DNA複製量の50を阻害した場合の所要濃度IC50を測定し、MTT法を用いて50の細胞毒性になるまでのサンプル薬物の所要濃度CC50を測定した。3.実験サンプル:一時的に実験に必要なサンプル薬物濃度400μMに調整して、サンプル薬物毎に対して6種類の希釈濃度の試験を行い、且つ、臨床的な抗B型肝炎ウイルス薬物であるラミブジンlamivudineを試験の陽性対照薬とし、毎回の試験反応が正常かどうかを検査した。4.実験方法:a実験方法及び培養上清の収集:HepG2.2.15細胞5×105/穴を96穴プレート中に接種し、翌日にサンプル薬物を添加し、定期的に培養液及び同濃度のサンプル薬物を取り換えた。八日目に培養上清を収集して測定に準備した。96穴プレート中の細胞へMTT5mg/mlを添加し、4時間後にMTT溶解液100μl/穴を添加して、翌日にマイクロプレートリーダーでOD570を測定した。OD値を基づいて、サンプル薬物のHepG2.2.15細胞に対する毒性作用と細胞成長に対する影響の状况、および半数細胞死亡に必要な濃度CC50を計算した。b蛍光定量PCR法による培養上清中のHBV-DNA含有量の測定適量の培養上清を取って同体積のウイルス分離液に添加し、均一に混合した後に沸騰させ、室温で10,000rpm、5分間遠心分離し、適量の上清を取ってPCR増幅に用い、同時にHBV-DNA標準サンプルを4つ設置して標準曲線を作った。そして、測定により得られたウイルスDNA複製値により、サンプル薬物毎の各濃度に対応するHBV-DNA複製の阻害率を算出し、その後サンプル薬物の半数阻害率を計算して、そのIC50を得た。実験用PCRプライマーは:P1:5ATCCTGCTGCTATGCCTCATCTT3P2:5ACAGTGGGGAAAGCCCTACGAA3実験用PCRプローブは:5TGGCTAGTTTACTAGTGCCATTTTG34.実験結果:注:CC50は、HepG2.2.15細胞の成長に対するサンプル薬物の影響であり、50死亡濃度を示す。IC50は、サンプルがHBV-DNA複製の半数50を阻害する時の濃度である。SIは、サンプルの生物活性選択係数である。SI値>2の場合有効であり、且つ大きいほど良い。5.結果と討論:陽性対照であるラミブジンlamivudineの結果により、本テスト方法と試験結果は信頼性があると分かっている。上記細胞レベルのテスト結果によると、本発明に係る化合物は、当該化合物のHBV-DNA複製阻害である生物活性をよく保持し、W28FのN-p-フルオロベンジル-5-イソブチル-2,2-ビスチアゾール-4-ホルムアミドの抗HBV複製活性とほぼ相当し、半数有効阻害係数IC50が0.2~33.3μΜである。[抗ウイルス試験実施例2抗C型肝炎ウイルスHCV複製活性の測定]1.実験方法高感度緑色蛍光タンパク質EGFPを導入したHCVウイルスJ399Eで感染されたHuh7.5.1細胞武漢ウイルス所提供により、抗HCV活性の測定を行う。マイクロプレートリーダーで緑色蛍光の変化状況を検査すると共に、細胞毒性を測定して、HCV複製活性に対する化合物の影響を判断した。実験の前に、被験化合物をDMSOに溶解させて母液を調製し、得られた母液を使用する場合に、FBS牛胎児血清fetalbovineserum、FBSHyclone会社Logan,Utah,USAから購入を10含むDMEMDulbeccosModifiedEagleMedia,GibcoBRL会社LifeTechnologies,GrandIsland,NY,USAから購入培養液を所要の濃度に希釈して使用する。細胞培養を行う時、DMSOの最終濃度を0.25V/V,VolumetoVolume以下とし、当該濃度のDMSOは細胞成長に対して影響がない。陽性対照薬物:DMSOでリバビリンビラゾール、ribavirin、sigma/Aldrichから購入から母液を調製した後,-20°Cで保存して予備とし、使用する前に所要の濃度まで希釈する。穴毎に100μlの条件で、Huh7.5.l細胞10FBS、DMEMを105個/mlの濃度で96穴プレート中Costar3904に添加し;24時間後、培養上清を吸出し、MOI=0.1のウイルス上清50μlを添加し;8時間後、50μlの被験薬を添加し、100μlの培養液を補充添加して、72時間培養し;上清を吸出して、蛍光マイクロプレートリーダーの値を読みEx=488nm,Em=516nm;各穴に20μlのMTT5mg/mlを添加し、50μlの培養液を補充添加して、4時間後に100μlのMTT溶解液を添加し、6時間後に570nmの周波数で数値を読取る。2.実験結果:注:CC50は、Huh7.5.1細胞の成長に対するサンプル薬物の影響であり、50死亡濃度を示す。IC50は、サンプルがHCV複製の半数50を阻害する時の濃度である。SIは、サンプルの生物活性選択係数である。SI値>2の場合有効であり、且つ大きいほど良い。3.結果と討論結果によれば、上記選択された部分の代表的な化合物は、体外投与を行う場合に、HCVに感染されたHuh7.5.1細胞におけるHCVウイルス複製活性に対して、全部顕著な阻害作用を有し、IC50が1.5~21.3μMであり、全てのテスト化合物の抗HCV活性が、陽性対照薬物であるリバビリンより良かった。[薬物動力学実験実施例3ラット体内の薬物動力学実験研究]研究案胃内投与:健康なSDラット3匹、雄性、体重200~250g、投与量が20mg/kg、投与容積が10ml/kgである。投与する前に、12時間絶食させ、水を自由に飲ませて、投与後の0.25h、0.5h、1.0h、2.0h、3.0h、4.0h、5.0h、7.0h、9.0h、及び24h後、ラット眼球後の静脈叢から静脈血0.3mlを取って、ヘパリン化試験管に置いて、3500rpm、10分間遠心分離して、血漿を分離し、-20°Cで保存し予備とする。静脈注射:健康なSDラット3匹、雄性、体重が200~250gである。投与量は10mg/kgであり、投与容積が5.0ml/kgである。投与する前に、12時間絶食させ、水を自由に飲ませて、投与後の5分間、15分間、0.5h、1.0h、2.0h、3.0h、4.0h、5.0h、7.0h、9.0h、及び24h後、ラット眼球後静脈叢から静脈血を0.3t取って、ヘパリン化試験管に置いて、3500rpm、10分間遠心分離して、血漿を分離し、-20°Cで保存し予備とする。研究結果分量を標準化させた後、AUC0-tでW28F10mg/kgの経口投与の生体利用効率の平均値は2.80であり;同じ条件下で、化合物37320mg/kgの経口投与の生体利用効率の平均値は6.9であり、化合物391-220mg/kgの経口投与の生体利用効率平均値は76.5であり、いずれも側鎖未置換化合物であるW28Fより良かった。"