"結晶性または結晶状形態の、式1によって表される化合物、その水和物または溶媒和物。1mH2O[式中、mは、整数または非整数値で約0から約5まで変動する。]によって表される、請求項1に記載の化合物の水和物。mが約1である、請求項2に記載の化合物。mが約1/2である、請求項2に記載の化合物。mが約1であり、かつある量の吸着水をさらに含む、請求項2に記載の化合物。1H2Oの重量に基づいて、吸着水の量が約0wtから約10wtまでの範囲である、請求項5に記載の化合物。結晶性1mH2O。XRPD2θ-反射°を約14.8に有する、請求項7に記載の結晶性1mH2O。XRPD2θ-反射°を約14.8および17.6に有する、請求項7に記載の結晶性1mH2O。XRPD2θ-反射°を約14.8、17.6、および20.4に有する、請求項7に記載の結晶性1mH2O。XRPD2θ-反射°を約8.7、14.8、17.6、および20.4に有する、請求項7に記載の結晶性1mH2O。XRPD2θ-反射°を約8.7、13.6、14.8、17.6、および20.4に有する、請求項7に記載の結晶性1mH2O。XRPD2θ-反射°を約8.7、11.1、13.6、14.8、17.6、および20.4に有する、請求項7に記載の結晶性1mH2O。図1に示されるもののようなXRPD回折パターンを実質的に有する、請求項7に記載の結晶性の1H2O。斜方晶結晶性1mH2O。以下の単位格子パラメーターa~10.99Å、b~13.09Å、およびc~20.36Åを有する、請求項15に記載の斜方晶結晶性1H2O。請求項1に記載の化合物を含む組成物。それを必要とする患者におけるHCVを治療する方法であって、治療有効量の請求項1に記載の化合物を患者に投与することを含む方法。それを必要とする患者におけるHCVを治療する方法であって、治療有効量の請求項1に記載の化合物を患者に投与することを含む方法。それを必要とする患者におけるHCVを治療する方法であって、治療有効量の請求項1に記載の化合物を治療有効量の別の抗ウイルス剤と組み合わせてまたは交替で患者に投与することを含む方法。他の抗ウイルス剤が、化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、テラプレビル、ボセプレビル、BM-790052、ITMN-191、ANA-598、TMC435、およびその組み合わせの中から選択される、請求項20に記載の方法。それを必要とする患者におけるHCVを治療する併用療法であって、治療有効量の請求項1に記載の化合物を治療有効量の別の抗ウイルス剤と組み合わせてまたは交替で患者に投与することを含む併用療法。他の抗ウイルス剤が、化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、テラプレビル、ボセプレビル、BM-790052、ITMN-191、ANA-598、TMC435、およびその組み合わせの中から選択される、請求項22に記載の併用療法。1を結晶化することを含む、請求項1に記載の化合物を調製する方法。溶媒または溶媒混合物に溶解するまたは懸濁することを含む、請求項24に記載の方法。溶媒または溶媒混合物が、アニソール、酢酸エチル、キシレン、トルエン、イソプロパノール、アセトン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、酢酸イソプロピル、t-ブチルメチルエーテル、およびその組み合わせの中から選択される、請求項25に記載の方法。溶媒混合物が、アニソール/酢酸エチル、ヘプタン/酢酸エチル、キシレン/酢酸エチル/水、アニソール/水、酢酸エチル/キシレン、イソプロパノール/キシレン、アセトン/キシレン、ジクロロメタン/キシレン、ジクロロメタン/ヘキサン、酢酸エチル/トルエン、ジエチルエーテル/キシレン、酢酸イソプロピル/キシレン、酢酸イソプロピル/ヘプタン、酢酸エチル/水、t-ブチルメチルエーテル/水、t-ブチルメチルエーテル/エチルエーテル、およびt-ブチルメチルエーテルの中から選択される、請求項25に記載の方法。請求項1に記載の化合物の結晶化度を求める方法であって、XRPDまたは単結晶X線結晶法によって化合物を解析することを含む方法。本明細書において、結晶性または結晶状形態の、式1によって表される化合物、その水和物または溶媒和物が開示される。第1の実施形態は、結晶性または結晶状形態の、式1によって表される化合物によって表される化合物、その水和物または溶媒和物を対象とする。結晶性または結晶状の形態の水和物として式1によって表される化合物は、1mH2O[式中、mは、整数または非整数値で約0から約5まで変動する。]として示される。結晶性または結晶状の形態の溶媒和物として式1によって表される化合物は、1nS[式中、nは、整数または非整数値で約0から約3まで変動する。]として示される。式1によって表される化合物、その水和物または溶媒和物は、特定の有利な量の吸着溶媒Sまたは水を有し得る。その場合には、結晶性または結晶状の形態の、式1によって表される化合物またはその水和物の重量に基づいて、Sまたは水の量が約0wtから約10wtまで変動し得る。第2の実施形態は、結晶性または結晶状の1を対象とする。第3の実施形態は、結晶性または結晶状の1mH2O[式中、mは、整数または非整数値で約0から約5まで変動する。]を対象とする。第3の実施形態の第1の態様は、結晶性または結晶状の1H2Oを対象とする。第3の実施形態の第2の態様は、結晶性または結晶状の11/2H2Oを対象とする。第4の実施形態は、結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第1の態様は、好ましくは以下の単位格子パラメーターa~10.99Å、b~13.09Å、およびc~20.36Åを有する斜方晶系結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第2の態様は、約14.8にXRPD2θ-反射°を有する結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第3の態様は、約14.8および17.6にXRPD2θ-反射°を有する結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第4の態様は、約14.8、17.6、および20.4にXRPD2θ-反射°を有する結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第5の態様は、約8.7、14.8、17.6、および20.4にXRPD2θ-反射°を有する結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第6の態様は、約8.7、13.6、14.8、17.6、および20.4にXRPD2θ-反射°を有する結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第7の態様は、約8.7、11.1、13.6、14.8、17.6、および20.4にXRPD2θ-反射°を有する結晶性の1H2Oを対象とする。第4の実施形態の第8の態様は、図1に示されるもののようなXRPD回折パターンを実質的に有する結晶性の1H2Oを対象とする。第5の実施形態は、実質的に純粋な結晶性の1H2Oを対象とする。第6の実施形態は、結晶状の1H2Oを対象とする。投薬量、投与、および使用第7の実施形態は、何らかのウイルス因子の治療および/または予防のための、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSを使用する組成物を対象とする。可能なウイルス因子は、C型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、A型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、牛ウイルス性下痢ウイルス、日本脳炎ウイルス、またはペスチウイルス、ヘパシウイルス、もしくはフラビウイルスの群に属するウイルスを含むが、これらに限定されない。この実施形態の態様は、本明細書に開示されるウイルス因子のいずれかの治療のための組成物であって、賦形剤、担体、希釈剤、および同等の媒体、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSのその水和物、溶媒和物、および任意の結晶形を含むように意図される結晶性もしくは結晶状の1mH2O、または1nSの中から選択される薬学的に許容される媒体を含む組成物を対象とする。結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSは、種々様々の経口投与剤形および担体において独立して製剤化されてもよい。経口投与は、錠剤、コーティング錠、硬質および軟質のゼラチンカプセル剤、溶液、乳剤、シロップ剤、または懸濁剤の形態であってもよい。他の投与経路の中でも、坐剤投与によって投与される場合、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSが効果的である。最も都合のよい投与の方式は、一般に、疾患の重症度および抗ウイルス薬に対する患者の反応に従って調節することができる、便利な日々の投薬レジメンを使用する経口法である。結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSは、1種もしくは複数の従来の賦形剤、担体、または希釈剤と一緒に、医薬品組成物および単位投与量の形態にすることができる。医薬組成物および単位剤形は、追加の活性化合物の有無にかかわらず、従来の比率の従来の成分で構成されていてもよい。また、単位剤形には、用いられる意図した日用投薬量範囲に相応した活性成分の適切な有効量を含んでいてもよい。医薬品組成物は、錠剤もしくは充填したカプセル剤、半固体、粉末、徐放性製剤などの固体、または懸濁剤、乳剤、もしくは充填した経口用カプセルなどの液体として;または直腸および膣内投与の形態で使用されてもよい。典型的な調製物には、約5~約95w/wの活性化合物複数可が含まれる。結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSは、単独で投与することができるが、一般に、意図する投与経路および標準的な医薬品の慣行に関連して選択される、1種もしくは複数の適切な医薬品賦形剤、希釈剤または担体を含む混合物で投与される。固体形態の調製物としては、例えば粉末、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、および分散性顆粒剤が含まれる。固体担体は、希釈剤、芳香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存料、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としても作用してよい1種または複数の物質であってよい。粉末中では、一般に担体は、微粉化された活性成分との混合物である微粉化された固体である。錠剤中では、活性成分は一般に、適切な比率で必要な結合能力を有する担体と混合され、所望の形状および寸法に圧密される。適切な担体としては、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂などが含まれるがこれらに限定されない。固体形態調製物は、活性成分に加えて、着色剤、芳香剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでいてよい。固体製剤の例は、欧州特許第0524579号、米国特許出願公開第2002/0142050号、米国特許出願公開第2004/0224917号、米国特許出願公開第2005/0048116号、米国特許出願公開第2005/0058710号、米国特許出願公開第2006/0034937号、米国特許出願公開第2006/0057196号、米国特許出願公開第2006/0188570号、米国特許出願公開第2007/0026073号、米国特許出願公開第2007/0059360号、米国特許出願公開第2007/0077295号、米国特許出願公開第2007/0099902号、米国特許出願公開第2008/0014228号、米国特許第6,267,985号、米国特許第6,294,192号、米国特許第6,383,471号、米国特許第6,395,300号、米国特許第6,569,463号、米国特許第6,635,278号、米国特許第6,645,528号、米国特許第6,923,988号、米国特許第6,932,983号、米国特許第7,060,294号ならびに米国特許第7,462,608号に例示され、そのそれぞれは参照によって組み込まれる。液体製剤も、経口投与に適切であり、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、および水性懸濁液を含む液体製剤を含む。これらには、使用直前に液体形態の調製物に変換されるように意図された固体形態調製物が含まれる。液体製剤の例は、米国特許第3,994,974号、第5,695,784号、および第6,977,257号に例示される。乳剤は、溶液中で、例えば、水性プロピレングリコール溶液中で調製されてもよく、またはレシチン、モノオレイン酸ソルビタン、またはアラビアゴムなどの乳化剤を含んでいてもよい。水性懸濁液は、天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースなどの粘稠材料、および他の周知の懸濁化剤を含む水中で微粉化された活性成分を分散させることにより調製することができる。結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSは、坐剤としての投与のために独立して製剤化されてもよい。脂肪酸グリセリドまたはカカオ脂の混合物などの低融点ワックスがまず溶融し、活性成分は、例えば、撹拌によって均一に分散する。次いで、溶融した均一混合物を、都合のよい寸法の型へ注ぎ、冷却し、固化させる。結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSは、膣投与のために独立して製剤化されてもよい。ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、パスタ剤、発泡体またはスプレー剤は、活性成分に加えて、当業界で適していると知られている担体を含有する。これらの製剤のいくつかはまた、殺精剤を含む、または含まないコンドームと組み合わせて使用されてもよい。適切な製剤は、医薬品担体、希釈剤および賦形剤とともに、参照によってこれによって組み込まれるRemington:TheScienceandPracticeofPharmacy1995,editedbyE.W.Martin,MackPublishingCompany,19thedition,Easton,Pennsylvaniaに記載されている。熟練した製剤学者であれば、明細書の教示の範囲内で調合物を修正して、本明細書において企図された化合物を含む組成物を不安定にしたりまたはその治療活性を損なったりすることなく、特定の投与経路向けの数多くの製剤を提供することができる。さらに、精製した結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSは、独立して、リポソームまたはミセルと組み合わせて製剤化されてもよい。リポソームに関して、精製した化合物は、そのそれぞれが参照によって組み込まれる、米国特許第4,797,285号、第5,013,556号、第5,077,056号、第5,077,057号、第5,154,930号、第5,192,549号、第5,213,804号、第5,225,212号、第5,277,914号、第5,316,771号、第5,376,380号、第5,549,910号、第5,567,434号、第5,736,155号、第5,827,533号、第5,882,679号、第5,891,468号、第6,060,080号、第6,132,763号、第6,143,321号、第6,180,134号、第6,200,598号、第6,214,375号、第6,224,903号、第6,296,870号、第6,653,455号、第6,680,068号、第6,726,925号、第7,060,689号、および第7,070,801号に開示されている方式で製剤化できることが企図される。ミセルに関して、精製した化合物は、その両方が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第5,145,684号および第5,091,188号に開示される方式で製剤化できることが企図される。第5の実施形態は、以下のウイルス因子のいずれか1つによる感染症の結果である、何らかの症状の治療用の医薬の製造における結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSの使用を対象とする:C型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デングdegueウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、A型肝炎ウイルス、牛ウイルス性下痢ウイルスおよび日本脳炎ウイルス。医薬という用語は、それを必要とする対象の治療および/または予防方法において使用され、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSを含む組成物、製剤、剤形などを含むが、これらに限定されない物質を意味する。本明細書において開示される抗ウイルス性症状のいずれかを治療するための医薬の製造における、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSは、単独、または本明細書において開示される別の化合物との組み合わせが企図される。医薬には、本明細書において開示される第4の実施形態により企図される組成物のいずれか1つを含むが、これらに限定されない。第8の実施形態は、それを必要とする対象の治療および/または予防の方法であって、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSの治療有効量を対象に投与することを含む方法を対象とする。それを必要とする対象とは、C型肝炎、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デングdegueウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、A型肝炎ウイルス、牛ウイルス性下痢ウイルス、または、日本脳炎ウイルス、フラビウイルス科もしくはペスチウイルスもしくはヘパシウイルスを含むがこれらに限定されない、本明細書において開示されるウイルス因子、または、上に列挙したウイルスのいずれかと同等のまたはそれに匹敵する症候をひき起こすウイルス因子のいずれかによる感染の結果である任意の症状を有する対象であることが意図されている。対象という用語は、畜牛、豚、羊、鶏、七面鳥、水牛、ラマ、ダチョウ、イヌ、ネコおよびヒトを含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味し、好ましくは対象はヒトである。第9の態様のその対象の治療方法は、単独または本明細書において開示される別の化合物と組み合わせた、本明細書において企図された化合物のいずれかであり得るということが企図される。本明細書において使用される治療有効量という用語は、個体の疾患の症候を軽減するのに必要とされる量を意味する。用量は、特定の各症例における個々の要件に合わせて調整される。その投薬量は、治療すべき疾患の重症度、患者の年令および全身的健康状態、患者が治療を受けている他の医薬、投与経路および形態ならびに関与する医師の選好および経験などの数多くの要因に応じて、広い限界内で変動し得る。経口投与については、1日あたり0.001、0.0025、0.005、0.0075、0.01、0.025、0.050、0.075、0.1、0.125、0.150、0.175、0.2、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9および9.5などの間の全ての値を含む、約0.001から約10gの間の1日投薬量が、単剤療法および/または組み合わせ療法において適しているはずである。特定の1日投薬量は、その間の0.01gすなわち10mgの全増分値を含む1日あたり約0.01~約1gの間にあり、好ましい1日投薬量は、それぞれその間の0.01gの全増分値を含む、1日あたり約0.01~約0.8g、より好ましくは1日あたり約0.01~約0.6g、最も好ましくは1日あたり約0.01~約0.25gである。一般に、治療は、ウイルスを素早く低減または除去するため大量の初期負荷用量loadingdoseから開始し、その後、感染の再発を防止するのに充分なレベルまで用量が削減される。当業者は、本明細書において記載される疾患の治療において、過度の実験をせずに知識、経験および本出願の開示に頼って、所与の疾患および患者について本明細書において記載される化合物の治療有効量を確定することができる。治療薬有効性は、血清タンパク質例えば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ例えば、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、5-ヌクレオシダーゼ、γ-グルタミニルペプチド転移酵素、など、ビリルビン合成、コレステロール合成、および胆汁酸合成;炭水化物代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝を含むがこれらに限定されない、肝臓代謝機能などのタンパク質レベルを含むがこれらに限定されない、肝機能の試験から確認することができる。代替として、治療有効性は、HCV-RNAの測定により監視されてもよい。これらの試験の結果により、用量を最適化することができる。第8の実施形態の第1の態様は、それを必要とする対象における治療および/または予防方法であって、1mH2Oまたは1nSによって表される治療有効量の化合物ならびに治療有効量の別の抗ウイルス剤を対象に投与することを含み、投与が同時または交替である方法を対象とする。交替投与の間の時間は、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、および23時間を含む間のあらゆる下位範囲を含む、1~24時間の範囲内であってよいと理解される。別の抗ウイルス剤の例は、HCVNS3プロテアーゼ阻害薬参照:欧州特許第1881001号、米国特許出願公開第2003187018号、米国特許出願公開第2005267018号、国際公開第2003006490号、国際公開第200364456号、国際公開第2004094452号、国際公開第2005028502号、国際公開第2005037214号、国際公開第2005095403号、国際公開第2007014920号、国際公開第2007014921号、国際公開第2007014922号、国際公開第2007014925号、国際公開第2007014926号、国際公開第2007015824号、国際公開第2008010921号、および国際公開第2008010921号;HCVNS5B阻害薬参照:米国特許出願公開第2004229840号、米国特許出願公開第2005154056号、米国特許出願公開第2005-98125号、米国特許出願公開第20060194749号、米国特許出願公開第20060241064号、米国特許出願公開第20060293306号、米国特許出願公開第2006040890号、米国特許出願公開第2006040927号、米国特許出願公開第2006166964号、米国特許出願公開第2007275947号、米国特許出願公開第6784166号、米国特許出願公開第20072759300号、国際公開第2002057287号、国際公開第2002057425号、国際公開第2003010141号、国際公開第2003037895号、国際公開第2003105770号、国際公開第2004000858号、国際公開第2004002940号、国際公開第2004002944号、国際公開第2004002977号、国際公開第2004003138号、国際公開第2004041201号、国際公開第2004065367号、国際公開第2004096210号、国際公開第2005021568号、国際公開第2005103045号、国際公開第2005123087号、国際公開第2006012078号、国際公開第2006020082号、国際公開第2006065335号、国際公開第2006065590号、国際公開第2006093801号、国際公開第200702602号、国際公開第2007039142号、国際公開第2007039145号、国際公開第2007076034号、国際公開第2007088148号、国際公開第2007092000号、および国際公開第2007095269号;HCVNS4阻害薬参照:国際公開第2005067900号および国際公開第2007070556号;HCVNS5a阻害薬参照:米国特許出願公開第2006276511号、国際公開第2006035061号、国際公開第2006100310号、国際公開第2006120251号、および国際公開第2006120252号;トール様受容体アゴニスト参照:国際公開第2007093901号;ならびに他の阻害薬参照:国際公開第2000006529号、国際公開第2003101993号、国際公開第2004009020号、国際公開第2004014313号、国際公開第2004014852号、および国際公開第2004035571号;化合物A以下に示され、米国特許出願公開第7,429,572号に開示されている;化合物B米国特許出願公開第2007/0197463号に開示されている;化合物C米国特許出願公開第2010/0081628号に開示されている。また、化合物Cのそれぞれのジアステレオマーである化合物19aおよび19bが同出願に開示されている;化合物D米国特許出願公開第2010/0016251号に開示されている;化合物E米国特許仮出願第12/783,680号に開示され、同出願にRp-4もまた開示されている;テラプレビルVX-950としても知られ、米国特許出願公開第2010/0015090号に開示されている;ボセプレビル米国特許出願公開第2006/0276405号に開示されている;BMS-790052国際公開第2008/021927号に開示されている;ITMN-191米国特許出願公開第2009/0269305号の実施例62-1に開示されている;ANA-598以下に示され、F.Ruebasametal.Biorg.Med.Chem.Lett.200818:3616-3621において化合物3iとして特定された;ならびにTMC435以前はTMC435350として知られるの他に、インターフェロン-α、インターフェロン-β、ペグインターフェロン-α、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、別のヌクレオシドHCVポリメラーゼ阻害薬、HCV非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害薬、HCVプロテアーゼ阻害薬、HCVヘリカーゼ阻害薬またはHCV融合阻害薬を含むが、これらに限定されない。結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSが別の抗ウイルス剤と組み合わせて投与される場合、親化合物に比べて活性が増大するかもしれない。治療が組み合わせ療法である場合には、このような投与はヌクレオシド誘導体の投与との関係において同時であっても逐次的であってもよい。したがって、本明細書において使用される同時投与は、同時のまたは異なる時点での薬剤の投与を含む。2種以上の薬剤の同時投与は、2種以上の活性成分を含む単一の調合物によってまたは単一の活性薬剤を伴う2種以上の剤形の実質的に同時の投与によって達成可能である。本明細書における治療への言及は、存在する症状の治療だけでなく予防にまで及ぶことが理解される。さらに、本明細書において使用されるHCV感染症の治療という用語はまた、HCV感染症と関連するまたは介在する疾患もしくは症状、またはその臨床症候の治療または予防を含む。調製第9の実施形態は、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSを調製する方法であって、1mH2Oまたは1nSを結晶化するステップを含み、ここで、mおよびnは上で定義された通りである方法を対象とする。第9の実施形態の第1の態様は、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSを調製する方法であって、溶媒または溶媒の混合物中で1を溶解するまたは懸濁するステップをさらに含む方法を対象とする。第9の実施形態の第2の態様は、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSを調製する方法であって、1mH2Oまたは1nSの種結晶を加えるステップをさらに含む方法を対象とする。第9の実施形態の第3の態様は、結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSを調製する方法であって、溶媒または溶媒混合物に反溶媒を加えるステップをさらに含む方法を対象とする。結晶性もしくは結晶状の1mH2Oまたは1nSを与える任意の適切な溶媒を使用することができる。企図される特定の溶媒は、アニソール、酢酸エチル、キシレン、トルエン、イソプロパノール、アセトン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、酢酸イソプロピル、t-ブチルメチルエーテル、またはその組み合わせを含むが、これらに限定されない。特定の組み合わせは、アニソール/酢酸エチル、ヘプタン/酢酸エチル、キシレン/酢酸エチル/水、アニソール/水、酢酸エチル/キシレン、イソプロパノール/キシレン、アセトン/キシレン、ジクロロメタン/キシレン、ジクロロメタン/ヘキサン、酢酸エチル/トルエン、ジエチルエーテル/キシレン、酢酸イソプロピル/キシレン、酢酸イソプロピル/ヘプタン、酢酸エチル/水、t-ブチルメチルエーテル/水、t-ブチルメチルエーテル/エチルエーテル、またはt-ブチルメチルエーテルを含むが、これらに限定されない。水も含む溶媒の組み合わせに関して、十分な量の水が1mH2Om≠0である場合を形成するために必要であり、これは、結晶化に使用される1の量、または1およびそのRp異性体を含有する混合物中に含まれる1の量の見積もりに基づくことが理解される。また、市販の溶媒は、単独で十分なある量の水を含み、結晶性または結晶状の1mH2Om≠0である場合の形成に十分な水を与える場合があることが理解される。第10の実施形態は、結晶性または結晶状の1mH2Oの結晶化度を求める方法であって、XRPDまたは単結晶X線結晶法によって1mH2Oを解析するステップを含む方法を対象とする。実施例以下の実施例は、開示された実施形態のよりよい理解を当業者に提供するように意図される。1の調製化合物1は、立体選択的または非立体選択的手段によって調製することができる。立体選択的方法は、以下の他に、米国特許仮出願第61/319,548号に記載され、これは参照によって組み込まれる。非立体選択的方法はまた、以下の他に、米国特許仮出願第12/645,765号に記載され、その主題は参照によって組み込まれる。1およびそのRp異性体を含むジアステレオマー混合物を製造する非立体選択的方法による1の製造は、以下に詳述されるように、1を得るためのジアステレオマー混合物の結晶化、またはSMBクロマトグラフィーによるジアステレオマー混合物のクロマトグラフ分離をさらに含む。実施例11の立体選択的調製実施例1-12R,3R,4R,5R-2-ビス4-メトキシフェニルフェニルメトキシメチル-5-2-ビス4-メトキシフェニルフェニルメチルアミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-4-フルオロ-4-メチルテトラヒドロフラン-3-オール3の合成:2R,3R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-4-フルオロ-2-ヒドロキシメチル-4-メチルテトラヒドロフラン-3-オール2,4g,12.8mmolの0°Cで冷却した無水ピリジン100mL中溶液に、DMT-Clを窒素下に分割して添加した。この褐色の溶液を常温で24時間撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、ほとんどの溶媒を除去し、飽和NaHCO320mLを添加した。混合物を水150mLおよびEtOAc120mLで希釈した。有機層を分離し、水5x120mL、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒の除去後、残渣をカラムクロマトグラフィーヘキサン中20のEAからヘキサン中80のEAによって精製し、白色発泡固体として11.6gの生成物3を得た定量的収率。1HNMR:DMSOd6δ7.94s,1H,7.39-7.37m,3H,7.26-7.14m,17H,6.84-6.80m,8H,5.58s,1H,4.04br,1H,3.71-3.70m,14H,3.68m,1H,3.48br,2H,3.20d,1H,0.88br,3H.実施例1-2ベンジル2R,3R,4R,5R-2-ビス4-メトキシフェニルフェニルメトキシメチル-5-2-ビス4-メトキシフェニルフェニルメチルアミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-4-フルオロ-4-メチルテトラヒドロフラン-3-イルカルボナート4の合成:ヌクレオシド32.52g、2.75mmolの無水DCM8mL中溶液に、DMAP1.01g、8.2mmolを添加し、この溶液を氷水浴で0°Cに冷却した。Cbz-Cl0.77g、4.2mmolを混合物に注射器によって添加し、濁った反応混合物が結果として生じた。この混合物を室温で24時間撹拌し、飽和NaHCO310mLを添加した。混合物をDCMおよび水中で分配した。有機層をNa2SO4で乾燥し、白色発泡固体に濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーヘキサン中10~60のEtOAcによって精製し、白色発泡固体として2.74g収率、95の生成物4を得た。1H-NMRCDCl3:δ7.87s,1H,7.41-7.16m,24H,6.79-6.75m,8H,6.28s,1H,5.65br,1H,5.15s,2H,4.28d,1H,3.79-3.71m,15H,3.55-3.52m,1H,3.39-3.36m,1H,0.93br,3H。実施例1-32R,3R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-4-フルオロ-2-ヒドロキシメチル-4-メチルテトラヒドロフラン-3-イルベンジルカルボナート5の合成:1volTFAのDCM50mL中溶液を、42.69g、2.56mmolを装填したフラスコに添加した。この混合物を室温で2時間撹拌し、完了した。飽和NaHCO320mLを添加し、混合物を水およびDCM中で分配した。有機層を濃縮し、固体残渣をカラムクロマトグラフィーシリカゲル、DCM中0~5の2-PrOHによって精製し、白色発泡固体として1.01g収率88の生成物5を得た。1H-NMRCDCl3:δ7.82s,1H,7.39-7.33m,5H,6.02d,1H,J=19.2Hz,5.77dd,1H,J=20.8,8.8Hz,5.32-5.30m,1H,5.20s,2H,5.04s,2H,4.34d,1H,J=8.8Hz,4.15m,1H,4.04s,3H,3.85-3.79m,1H,1.21d,3H,J=22.8Hz.実施例1-4S-2-[4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルジアステレオマーS、SP-6およびS、RP-6の混合物の調製。4-ニトロフェニルホスホロジクロリダートphoshorodichloridate12.8g、50mmolの撹拌したジクロロメタン100mL中溶液に、-78°Cで、フェノールおよびトリエチルアミン7.7mL、55mmolのジクロロメタン100mL中溶液を20分の間にわたって添加した。この混合物をこの温度で30分間撹拌し、次いで、0°Cでジクロロメタン100mL中のL-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩8.38g、50mmolを入れた別の丸底フラスコに移した。混合物に、15分の間にわたってトリエチルアミン14.6mL、105mmolの第2のロットを添加した。混合物を0°Cで1時間撹拌し、次いで、溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチル150mLで研和し、白色固形物を濾別した。濾液を減圧下で濃縮し、薄黄色の油状物を得た。粗の化合物を、0-20の酢酸エチル/ヘキサン勾配を使用してクロマトグラフィーで分離し、約1:1の比のジアステレオマーの混合物として生成物17g、83収率を得た。31PNMR162MHz,CDCl3:δ-2.05,-2.10;1HNMR400MHz,CDCl3:δ8.22d,J=9.2Hz,2H,7.41-7.33m,4H,7.26-7.18m,3H,5.05-4.96m,1H,4.14-4.05m,1H,3.93-3.88m,1H,1.38d,J=6.8Hz,3H,1.22dd,J=6.23.0Hz,6H;MSESIm/z407M-1.実施例1-5S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルS,SP-6の結晶化:S-2-[4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]-プロピオン酸イソプロピルエステル3.4gをIPE6mLに溶解した。溶液が濁るまで手撹拌しながら、上記溶液にヘキサン1mLを添加した。次いで、2、3滴のIPEを混合物に添加し、透明な溶液を得た。この混合物を室温で20時間穏やかに撹拌した。得られた白色で微細結晶性の固体を濾過し、IPE/ヘキサンの1:1混合物で洗浄し、乾燥し、白色のふかふかした固形物820mg、24の収率mp52収縮62~66溶融を得た。31PNMR162MHz,CDCl3:δ-2.05;1HNMR400MHz,CDCl3:δ8.22d,J=9.2Hz,2H,7.41-7.33m,4H,7.26-7.18m,3H,5.05-4.96m,1H,4.14-4.05m,1H,3.93-3.88m,1H,1.38d,J=6.8Hz,3H,1.22dd,J=6.23.0Hz,6H;MSESIm/z407M-1.S,SP-6の立体化学は、単結晶X線結晶法によってSのCIP配置を有すると確証された。2010年3月31日出願された米国特許仮出願61/319,548を参照のこと。実施例1-6SP-2S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-3-ベンジルオキシカルボニルオキシ-4-フルオロ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアート7の合成:ヌクレオシド5150mg、0.34mmolの無水THF1.5mL中溶液に、t-BuMgClのTHF中溶液1.0M、0.41mLを0°Cで添加した。濁った混合物を常温で1時間撹拌し、次いで、ホスホルアミダート試薬約95のキラル純度S-2-[S-4-ニトロフェノキシフェノキシホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル、S,SP-6、162mg、0.4mmolのTHF1.5mL中溶液を、注射器によって混合物に滴下添加した。化合物6は、米国特許出願第12/645,765号に略述された手順に従って調製する。混合物を常温で20時間撹拌し、出発物質の約29は残存した。この反応を飽和NH4Cl4mLの添加によりクエンチし、EtOAc20mLを添加した。分離後、有機層を水3x25mL、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒の除去後、油状残渣を1HNMRおよび31PNMRによって点検した。2つの異性体の比は約12.5:1であった。主要な異性体、1HNMRCDCl3:δ7.73s,1H完了していない;31PNMRCDCl3:δ4.02.実施例1-7SP-2S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアート1の合成:粗のホスホルアミダート7のMeOH2.5mL中溶液に、5Pdチャ-コール40mgを添加した。フラスコ内の雰囲気を、水素で2度交換した。この混合物を1気圧の水素下で常温で1時間撹拌した。混合物をセライトの短いパッドに通して濾過し、濾液を濃縮した。粗の残渣を1HNMRおよび31PNMRによって点検し、2つの異性体の比は約17:1SP異性体1であり、また薄層クロマトグラフィーによってSP異性体と一致した。31P-NMRDMSO-d6:δ4.91.代替として、1は、以下に説明されるように2から直接調製することができる。実施例2SP-2S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアート、1の合成乾燥した50mLフラスコに、ヌクレオシド2、100mg、0.32mmolおよび無水THF1.5mLを添加した。この懸濁液を氷浴で冷却し、t-BuMgClのTHF中溶液1.7M、0.35mL、2eqを、注射器によってゆっくり添加した。結果として得られた透明溶液を室温で1時間撹拌した。キラルに富むホスホルアミダート試薬98:2S,SP-6/S,RP-6、156mg、0.383mmolの無水THF1.5mL中溶液を、室温で注射器によって滴下添加した。48時間後、TLCは、出発ヌクレオシドのおよそ35が残存することを示した。この反応を飽和NH4Cl6mLの添加によりクエンチした。酢酸エチル20mLを添加し、有機層を分離した。水層を酢酸エチル10mLで抽出した。合わせた有機層を、水2x20mL、飽和NaHCO315mL、水3x25mL、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒の除去後、粗の残渣をNMRによって点検した。31PNMRは、ジアステレオマーの比が75:11の1/RP異性体であることを示した。混合物をカラムシリカゲル、DCM中0~8のMeOHによって精製し、白色発泡固形物35.8mg、19として生成物を得た。1の非立体選択的調製実施例32S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-9H-プリン-9-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアート1の合成乾燥した250mL丸底フラスコにフェニルジクロロホスファート2.66g、12.61mmolおよび無水ジクロロメタン40mLを装入した。アミノエステル塩2.60g、15.53mmolを溶液に添加し、混合物を-5°Cに冷却した。次いで、N-メチルイミダゾール7.7mL、97mmolを、-5°Cで乾燥した注射器によって速やかに添加し、溶液を-5°Cで1時間撹拌した。ヌクレオシド1,3.04g,9.7mmolを、-5°Cでバイアルから一度に添加し、固形物を20分でゆっくり溶解した。反応温度を2時間にわたり常温に上昇させた。17時間後、反応は完了していなかった。追加の試薬を製造し上記のようにホスファート2.66g、アミノエステル2.60g、およびNMI3.8mL、48mmolから、-5°Cで反応混合物に添加した。この反応物を室温でさらに2時間撹拌した。反応は、TLC結果によって示されたように、ほぼ完了し、ジクロロメタン70mLで希釈した。HCl溶液1N、70mLを添加した。水層を分離しジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和NaHCO3、水、塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した。減圧下での溶媒の除去後、粘着性の残渣を、自動カラムクロマトグラフィーに通して240gのカートリッジおよびジクロロメタン中0~8の2-PrOHの勾配を使用して精製し、発泡固形物4.16g、7.14mmol、73の収率として生成物を得た。HPLC純度97.4。生成物のNMRスペクトルは、それが1.2:1の比の2つのジアステレオマーの混合物であることを示した。1H-NMRDMSO-d6:δ=7.981H,s,一方の異性体の8-H,7.951H,s,別の異性体の8-H,7.37-7.322H,m,arom-H,7.22-7.153H,m,arom-H,6.62H,s,NH2,6.111H,d,一方の異性体のC1-H,6.091H,d,別の異性体のC1-H,6.09-5.981H,m,amideNH,5.881H,d,一方の異性体の3-OH,5.811H,d,別の異性体の3-H,4.85-4.751H,hepta,iso-プロピルのメチンH,4.46-4.272H,m,C4-H,アミノエステルのα-H,4.15-4.071H,m,C3-H,3.963H,s,OCH3,3.82-3.722H,m,C5-HaおよびC5-Hb,1.23-1.069H,m,アミノエステルのCH3,1.033H,d,C2-CH3.31PNMR:DMSOd6δ=4.91一方の異性体、4.72別の異性体。代替精製法は、化学的にクロマトグラフ分離を単純化するために、マイナーな3ホスホルアミダート副生成物を変えることである。粗のホスホルアミダート生成物を無水ピリジン5mL/gに溶解し、常温でt-ブチルジメチルシリルクロリドの0.5当量で処理し、3異性体不純物の遊離の第一級5ヒドロキシルと選択的に反応させた。反応の進行はLC/MSによって監視することができる。一旦、3異性体が5-tBDMS-3-ホスホルアミダート誘導体に変換されれば、反応をメタノール3eqでクエンチし、減圧下で濃縮し、酢酸エチルおよび5のクエン酸の間で分配し、次いで、有機層を濃縮する。次いで、残渣を、ここでは、より高い装填およびより高速の勾配で実施しかつ、高純度を達成することができるクロマトグラフィーにかける。非立体選択的方法による1の製造では、1およびRp異性体を含有するジアステレオマー混合物を提供し、それによって、以下に説明するように、混合物の結晶化によって、またはクロマトグラフ分離によって、1をさらに精製することができる。実施例41およびRp異性体を含む混合物からの1の分離1およびRp異性体を含むジアステレオマー混合物合計11.9kgを分離し、cGMPプロトコルの下で両異性体1およびRp異性体のおよそ85の収率を得る。ジアステレオマーの純度の必要条件は、両ジアステレオマーについて>98d.eである。分取クロマトグラフィー条件クロマトグラフィーの設備および分離法は以下のとおりである:100グラムのCHIRALPAK登録商標IA商標をそれぞれ保持する8カラムで構成される5cmのSMBシステムを、ジアステレオマー混合物の処理に使用した。移動相は100の酢酸エチルであった。分離および単離この物質の溶解度は、移動相中で75g/lであった。物質を撹拌しながら40°Cで移動相に溶解した。SMBからの抽出物流れを、最初は、1/2平方フィート水平薄膜蒸発器Prothermを使用して濃縮し、次いで、回転蒸留器で40°Cで乾燥した。抽残物流れの流速はあまりにも低いので、Prothermによって扱うことができなかった。抽残物は、回転蒸留器を使用して、直接乾燥した。次いで、生成物を真空オーブンで40°Cで恒量になるまで乾燥した。しかし、酢酸エチルの残留含量は、恒量到達後でも所望の水準<0.4wtを上回ることがわかった。真空下で50°Cでさらに乾燥した後も、含量はおよそ1wtに留まった。生成物をアセトンに再度溶解し、次いで、回転蒸留器で蒸発乾固させた。このステップは、効果的に0.1wt以下に残留酢酸エチル含量を除去した。次いで、生成物を真空オーブンでさらに乾燥して、残留アセトンを所望の含量<0.4wtに減少させた。結果抽出物-1.非晶質1の6,864gの量は、99.2d.eのジアステレオマー純度で回収された。抽残物-Rp異性体。3,707gの量のRp異性体を回収し、そのうち1,844gは98.1d.eのジアステレオマー純度を有していた。実施例5アニソール/酢酸エチル/水を用いる非晶質固形物1SMBクロマトグラフィーから得られたからの1H2Oのキロスケール結晶化。10Lのロータリーエバポレータフラスコに機械式撹拌機を装備した。常温で、1000gの非晶質固形物98.9のHPLC純度、水0.25当量存在続いて酢酸エチル1.00Lおよびアニソール99等級、4.00Lを添加した。この懸濁液を、すべての固形物が溶解する15分まで高速で撹拌した。撹拌を88rpmまで減速した。結晶種40mg、続いて水31mL、1.0eqを添加した。溶液は約30分後に濁り、3~4時間後、重い沈殿物が生じ、目に見える水は残存していなかった。この懸濁液を常温で合計20時間撹拌した。結晶性固体を25cmブフナー漏斗上で真空濾過によって収集した。ケーキをヘプタンおよびt-ブチルメチルエーテル3x1Lの50:50混合物で洗浄した。ケーキは容易に洗浄され、圧縮を必要としなかった。15分間の風乾後、固形物を8x14乾燥皿に移し、恒量4時間になるまで真空0.2mmHg、50°C下で乾燥し、次いで、17時間常温で真空下に保持し、840g水和の差として約82の微細な砕けた結晶性木舞lathsおよび、側面に150マイクロメートル未満の針状物を得た。HPLC純度99.7。88°Cで収縮が始まり93~100°Cで溶融する明白な融点を示した。水和物として、これは、脱水から非晶質固体、および次の相転移温度の組み合わせを意味する。結晶化を、比例した方式でさらに990gについて反復し、同じ純度でさらに840g約83を得た。濾液を合わせ、減圧下で粗の重量450gの黄色油状物にストリップしたが、なお概算で150gのアニソールを含んでいた。これに、酢酸エチル350mL、追加のアニソール850mL、水9gおよび種20mgを添加した。前と同様に、この溶液を撹拌した。これは4時間後に濁り、常温で24時間撹拌した。固形物を濾過によって収集し、機械的に塊を壊し黄色味がなくなるまで洗浄しながら、50:50ヘプタンおよびt-ブチルメチルエーテルですすいだ4x450mL。固形物を同様に乾燥し、追加の再結晶化に適切な98.9のHPLC純度の200gの生成物をさらに得た。母液を175gの明茶色油状物85のHPLC純度にストリップしたが、なおいくらかのアニソールを含有していた。実施例6ヘプタン/酢酸エチルを用いる非晶質1SMBクロマトグラフィーから得られたからの1H2Oの結晶化。1gの非晶質198.9のHPLC純度を、ボルテックスミキサーでの振盪によって酢酸エチル4mLおよびヘプタン2mLの混合物に溶解した。この溶液に結晶性物質の少数の種を添加した。この懸濁液を、6時間大気水分に曝したオープン容器内で常温で撹拌した。固形物を濾過によって収集し、エチルエーテルおよびヘキサン1:1、3×3mLの混合物で洗浄し、910mgの結晶性固体に乾燥した。HPLC純度99.5。実施例7キシレン/酢酸エチル/水を用いる非晶質1SMBクロマトグラフィーから得られたからの1H2Oの結晶化。1gの非晶質198.9のHPLC純度を酢酸エチル1.5mLに溶解し、次いでキシレンを濁るまで3.2mL添加した。混合物を45°Cに加熱し、透明な溶液を得、次いで常温に冷却した。水50μLを添加し、溶液は磁気撹拌機を用いて撹拌した。種は添加しなかった。72時間後、結果として得られた沈殿物を濾過によって収集し、キシレン2.5mL中35の酢酸エチルで洗浄し、乾燥し0.2mmHg、常温、微細な白色の破砕した結晶として950mgの生成物を得た。HPLC純度99.5。混合物からの精製に関する検討SMBクロマトグラフィー、および次いで、それを結晶化することによって、1およびその対応するRpジアステレオマー対応物を含む混合物から1を分離することに対する実践的な代替法は、混合物から1または1H2Oを直接結晶化することである。全体の回収は、SMB法の経費および時間消費を回避しつつ、ほとんど同じくらい高度である。非常に高いSP/RP比を含むキラル合成で生成する物質の直接結晶化は、はるかに効率的であると予想される。実施例8異性体SP/RP1.6:1の混合物の精製した非晶質固体からの1H2Oの結晶化1およびそのジアステレオマー対応物Rp異性体1.0gを含む混合物を酢酸エチル1mLに溶解した。アニソール4mLをゆっくり添加し、高速撹拌しながら透明な溶液を形成した。水22mg、1に基づいて1.0eq、続いて結晶性1の種~2mgを添加した。10分で固形物が形成し始めた。撹拌を36時間継続した。白色固形物を濾過によって収集し、エチルエーテル/ヘキサン1:1、3mlx3の低温混合物で洗浄した。収率=520mg961、P-NMRによる。この470mgの物質を、2分にわたって温酢酸エチル0.7mL、45°Cに溶解し、次いで、撹拌しながら、追加の水または種なしでアニソール2.8mLを添加することにより再結晶した。この溶液は5分後濁った。これを常温で48時間撹拌した。固形物を焼結ガラス漏斗での濾過によって集め、エチルエーテル/ヘキサン1:1、2mlx3の低温混合物で洗浄し、真空下で、白色固形物451mgに乾燥したP-NMRによると純度>99。理論上出発混合物中に存在する615mgの1に基づいた回収率は、73であった。混合物からSP異性体を結晶化する代替溶媒混合物に対する検討当量の水を含む酢酸エチル4mL/gに溶解し、続いて約1ml/gに蒸発させた、1およびRP異性体を含有する混合物1gから93の純粋な物質396mgを得た。この375mgの試料を、酢酸エチル2.5mLおよび当量の水から再結晶し、純度99.1の物質275mgを得た。別の1gのジアステレオマー混合物を1当量の水を含む酢酸エチル/ヘプタン2:16.5mL/gから結晶化し、95純度の433mgを得た。1H2Oは、1およびRP異性体の粗の混合物の結晶化によって得ることができることが企図される。代替として、SP異性体はまた、クロマトグラフィーなしで、クロロホスファート試薬から形成される粗の生成物からの一水和物の直接結晶化によって単離することができる上記の非立体選択的法を参照。アニソール-水は、結晶化を開始し、続いてエチルエーテルで希釈する、適切な溶媒の組み合わせである。精製した1に使用されるような他の溶媒の組み合わせを使用してもよい。実施例9粗生成物からの直接結晶化による1の単離乾燥した50mL丸底フラスコにフェニルジクロロホスファート2.68g、12.7mmolおよび無水ジクロロメタン40mLを装入した。アミノエステル塩2.58g、15.4mmolを溶液に添加し、混合物を-30°Cに冷却した。次いで、N-メチルイミダゾール6.3g、76mmolを、-30°Cで乾燥した注射器によって速やかに添加し、溶液を-5°Cで20分間撹拌した。ヌクレオシド7、2.00g、6.38mmolを、-5°Cでバイアルから一度に添加し、固形物を20分でゆっくり溶解した。反応温度を常温に上昇させ、1時間撹拌した。TLCは約95の完了を示した。反応物をジクロロメタン50mLで希釈し、1NHCl2x50mL、飽和重炭酸塩および塩水の1:1混合物で洗浄し、硫酸ナトリウム5gで乾燥し、濾過し、減圧下で、次いで高真空下で4.5gの粗生成物に濃縮した。P-NMRは、SP/RP異性体の1.5:1混合物を示した。粗の油状物の少量部分100mgをアニソール0.30mLに溶解し、この溶液を注射器フィルター22ミクロンに通して濾過した。水8mg、続いて種結晶約1mgを、常温で撹拌した溶液にゆっくり添加した。この溶液は5分で濁った。エチルエーテル1mLをゆっくり滴下し、懸濁液を2時間撹拌し、次いで、沈殿物は濾過によって集め、エチルエーテル-ヘキサン3x1mLの低温1:1混合物で洗浄し、次いで、真空下でSP異性体17mgに常温で乾燥した。NMR純度98。これは、出発ヌクレオシドから21の収率、および粗の混合物中に形成された1の量の35の理論収率を意味する。固体状態の特性評価の検討。塩化メチレン/ヘキサン/大気中の水からの単結晶X線は、1個の水分子が結晶構造に組み込まれていることを示した。3種の溶媒系アニソール/酢酸エチル、ヘプタン/酢酸エチル、キシレン/酢酸エチルからの試料は、XRPDによって同じ結晶形をすべて示した。アニソール試料をさらなる検討のために使用した。KarlFisher分析は、一水和物に対応する3.1の水を示した。TGA分析は、80~100°Cの間で半分の水和、および110~170°Cで第2の半分の水和の損失を示した。開放皿で10°C/分で加熱すると、DSCは、75°Cで吸熱が始まる、93.56°Cでの開始、および100.24°Cでのピークを有する脱水を示した。温度可変式XRPDは、90から100°Cの間の結晶化度の損失を示した。GVS分析は、90RHで可逆的な0.47w/wの増加を有する一水和物の非常に低い吸湿性、および0RHで一水和物の安定性を示した。実施例101H2O形態1のXRPD実験X線粉末回折パターンは、CuKa放射40kV、40mA、θ-2θゴニオメーター、V4の発散スリットおよび受光スリット、GeモノクロメーターおよびLynxeye検出器を使用するBrukerD8回折計で収集した。装置は、検証されたコランダム標準NIST1976を使用して性能点検した。データ収集用に使用したソフトウェアは、DiffracPlusXRDCommanderv2.5.0であり、データはDiffracPlusEVAv11.0.0.2orv13.0.0.2を使用して、分析し提示した。試料は、平板試験片として、入手したままの粉末を使用して周囲条件下で運転した。およそ20mgの試料を、研磨した、ゼロバックグラウンド510シリコンウエハーに切削した空洞に穏やかに充填した。試料を、分析の間、それ自体の平面内で回転させた。データ収集の詳細は次のとおりである:角度範囲:2~42°2θステップサイズ:0.05°2θ収集時間:0.5秒.ステップ-1以下の°2θ/強度データを与えるXRPDパターンが得られた:図1は、1H2OのXRPDスペクトルを含む。実施例111H2OのX線構造決定化合物1H2O、C24H34N6PO9Fは、斜方晶空間群P212121で結晶化する。組織の欠如h00:h=奇数、0k0:k=奇数、および00l:l=奇数a=10.99188Å、b=13.09259Å、c=20.357013Å,V=2929.63Å3,Z=4,およびdcalc=1.362g/cm3。X線強度データは、1431Kの温度でグラファイト単色化Mo-Kα放射λ=0.71073Åを使用するBrukerAPEXIICCD面検出器で収集した。予備的指標付けを一連の36の0.5°回転フレームから30秒の露光で行った。合計1790のフレームを、結晶から検出器までの37.522mmの距離、0.5°の回転幅および30秒の露光で収集した。SAINTBruker2009SAINT.BrukerAXSInc.,Madison,Wisconsin,USA.を使用して回転フレームを積分し、平均化されていないF2およびσF2値のリストを作り、次いで、デルペンティウム4コンピューターでのさらなる処理および構造解明のためにSHELXTLBruker2009SHELXTL.BrukerAXSInc.,Madison,Wisconsin,USA.プログラムパッケージに通した。合計47654の反射が範囲1.85≦θ≦25.06°,-13≦h≦13,-15≦k≦15,-24≦l≦22にわたって測定し、5187の固有の反射Rint=0.0261が得られた。強度データは、SADABSSheldrick,G.M.2007SADABS.UniversityofGottingen,Germany.を使用して、ローレンツおよび分極効果、および吸収について補正した。最小および最大の伝達0.6749、0.7452。構造を直接法SHELXS-97Sheldrick,G.M.2008ActaCryst.A64,112-122.によって解明した。SHELXL-97Sheldrick,G.M.2008ActaCryst.A64,112-122.を使用するF2に基づくフルマトリックス最小二乗法によっって精密化した。反射はすべて精密化中に使用した。使用した重み付けスキームは、w=1/[σ2Fo20.0413P20.4916P]式中、P=Fo22Fc2/3。非水素原子を異方性的に精密化し、水素原子はライディングモデルを使用して精密化した。精密化は、5000の観察された反射に対し、R1=0.0244およびwR2=0.0657に収斂し、5187すべての固有の非ゼロ反射および377の変数に対して、F>4σF、かつR1=0.0259、かつwR2=0.0669、かつGOF=1.059であるR1=Σ||Fo|-|Fc||/Σ|Fo|;wR2=[ΣwFo2-Fc22/ΣwFo22]12;GOF=[ΣwFo2-Fc22/n-p]12;式中、n=反射の数、p=精密化するパラメーターの数である。最小二乗の最終サイクルの最大Δ/σは0.001であり、最終の差フーリエの2つの最も顕著なピークは0.170および-0.248e/Å3であった。表2は、セル情報、データ収集パラメーターおよび精密化データを列挙する。最終の位置およびパラメーターは表3に示される。図2は、30の確率で温熱性楕円体が示される1H2OのORTEP表現である結晶構造説明のためのフォートラン温熱性楕円体プロットプログラムORTEP-II:AFortranThermalEllipsoidPlotProgramforCrystalStructureIllustrations.C.K.Johnson1976ORNL-5138.。以下の実施形態は、様々なホスホルアミダート試薬が、1、そのRP異性体、または1およびそのRP異性体のジアステレオマー混合物を調製するために使用される実施例を提供する。実施例12-1S-2-{S-[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステル一水和物1のS-イソプロピル2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートS,SP-8による合成ならびにクロマトグラフィーおよび結晶化による単離。aS-2-[2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルS,SP-8およびS,RP-8の調製およびS-2-[S-2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルS,SP-8の単一収穫での結晶化誘起動的光学分割による単離低温温度計および機械式撹拌機を取り付けた乾燥した1L3首フラスコに、フェニルホスホロジクロリダート25g、118.5mmolを装入した。無水ジクロロメタン125mLを添加し、溶液を0°Cに冷却した。揺動しながら、アラニンエステル塩オーブン乾燥した19.86g、1eqをN2下に速やかに添加した。溶液を、約-50°C内部温度に冷却したN2下でアセトン/ドライアイス浴中。トリエチルアミンのDCM125mL中溶液25.2g、2.1eqを、-50°Cで0.5時間にわたり添加漏斗経由で滴下添加し、結果として得られた白色スラリーを約-50°C0.5時間撹拌した。混合物を1.5時間にわたり0°Cまで暖め、次いでペンタフルオロフェノール21.82g、1eqおよびTEA13.2g、1.1eqの前もって混合しておいた冷却溶液DCM75mL中注意:ペンタフルオロフェノールおよびTEAの混合中に熱が放出されるを添加漏斗経由で0°Cで0.5時間にわたり添加した。この混合物を0°Cでさらに4時間撹拌した。この混合物をブフナー漏斗に通して濾過し、収集した固形物のトリエチルアミン塩酸塩をDCM3×40mLですすいだ。濾液を31PNMRによって点検し約1.14:1比で低磁場ピークのSPジアステレオマーが優勢であった。、同重量の2つの部分に分けた。その1つを減圧下で濃縮した。白色固形物残渣31gを、EtOAcおよびヘキサン150mL、20:80、v/vの混合物中で室温で17時間研和し、その間にそれほど可溶性でないSP異性体の動的分割を可能にした。白色スラリーを濾過し、固形物をヘキサン中20のEtOAc2x25mLですすいだ。固形分22.58gを1HNMRおよび31PNMRによって点検し、それはトリエチルアミン塩酸塩が混入した一方の異性体としての生成物を含んでいた。固形分を溶解し、EtOAc310mLおよび水100mLに分配した。有機層の分離後、水層をEtOAc50mLで逆抽出した。合わせた有機層を、水3x80mL、塩水50mLで洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶液を減圧下で濃縮し、次いで、室温で高真空下で恒量になるまで乾燥し、反応物の半分から白色固形物として17.36gの生成物が得られた。収率は64である。上記からの母液をゴム状残渣7.89gに濃縮し、これは31PNMRに基づいて1:1.2S,SP-8/S,RP-8の比を有する試薬を含んでいた。bS,SP-8および2からの1の調製乾燥した250mL3首丸底フラスコに、プリンヌクレオシド25.06g16.15mmolを添加した。固形物を無水THF40mLに懸濁し、氷水浴で冷却した。グリニャール試薬THF中1M溶液を注射器によって滴下添加し、透明な溶液が形成された。この混合物を0°Cで30分間撹拌し、S,SP-88.32g、18.35mmolのTHF40mL中溶液を、50分にわたり添加漏斗経由で添加した。添加終了後に、反応混合物を室温で3時間撹拌した。この反応を0°Cで飽和NH4Cl20mLを添加することによりクエンチした。この混合物を酢酸エチル100mLで希釈した。2層を分離し、水層を酢酸エチル50mLで抽出した。有機層を合わせ、水60mL、飽和重炭酸ナトリウム2×60mL、水60mL、塩水40mLで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、非晶質固形残渣を得た。粗の残渣に、酢酸エチル7mL、続いてアニソール26mLを添加した。溶液が形成されるまで、この混合物を撹拌した。水320mgを添加し、生成物1の結晶の種20mgを添加した。この混合物を-5°Cで終夜冷却した。白色固形物が形成され濾過によって収集した。固形分をヘプタンおよびTBME1:1、3×2mLの前もって冷却した混合物ですすぎ、乾燥後、3.3gと秤量された。母液を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーDCM中5~7の2-プロパノールによって精製した。生成物が白色非晶質固形物4.5gとして得られた。上記からの固形分を合わせて7.8g、酢酸エチル7.7mLと混合した。スラリーに、アニソール31mLを添加し、均一溶液が形成されるまで、混合物が撹拌した。溶液に、水160mg、続いて生成物1の結晶種20mgを添加した。この混合物を室温でゆっくり撹拌し、白色固形物が沈澱した。この混合物を-5°Cで2時間維持し、固形物を濾過によって集めた。固形分を、ヘプタンおよびTBME1:1、4×5mLの前もって冷却した混合物ですすぎ、真空内で乾燥した。生成物は6.69g69の収率と秤量された。実施例12-2S-2-{S-[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステル一水塩1のS-イソプロピル2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートS,SP-8による合成および結晶化のみによる単離。乾燥した250mL3首丸底フラスコに、ヌクレオシド5g15.96mmolおよび無水THF40mLを装入した。この懸濁液を氷水浴で冷却し、グリニャール試薬THF中の1M溶液、20mmol20mLを、10分にわたり注射器によって添加した。透明な反応混合物を0°Cで半時間撹拌し、次いで、THF40mL中リン試薬S,SP-8の溶液を、2時間で添加漏斗によって添加した。常温までこの反応物をゆっくり暖め、終夜撹拌した。この混合物を0°Cに冷却し、1N希HCl50mLを添加した。ほとんどのTHFを減圧下で除去し、混合物を酢酸エチル200mLで希釈した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル30mLで抽出した。合わせた有機層を、水60mL、飽和重炭酸ナトリウム2×50mL、5の炭酸ナトリウム70mL、水50mL、および塩水50mLで洗浄した。有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去し、非晶質固形物残渣を得た。粗の残渣を室温でアニソール41mLに溶解した。溶液に、キシレン24mL、続いて水410mgを添加した。この混合物を、室温でゆっくり撹拌し、1の結晶種10mgを添加した。白色固形物が沈澱し、混合物を-5°Cで2時間維持した。固形分を濾過によって収集し、ヘプタンおよびTBME1:1、3×2mLの前もって冷却した混合物ですすいだ。固形分は、乾燥後5.83gと秤量された。母液を減圧下で乾固するまで濃縮した。残渣をアニソール7.2mLに溶解し、キシレン10.7mLを添加した。溶液に水178mgを添加し、1の結晶種5mgを添加した。混合物を室温で終夜ゆっくり撹拌した。白色固形物が形成され濾過によって収集した。固形分を、ヘプタンおよびTBMEの前もって冷却した混合物1:1。3×1mLですすぎ、1.17gと秤量された。上で得られた固形分を合わせて7.0g、酢酸エチル7mLを添加した。アニソール27mLの添加後、透明な溶液が形成された。溶液に水200mgを添加し、次いで、1の結晶種5mgを添加した。この混合物を常温で撹拌し白色固形物が沈澱した。混合物を-5°Cで終夜維持した。結晶性固体を濾過によって収集し、ヘプタンおよびTBME1:1、3×5mLの前もって冷却した混合物ですすいだ。結果として生じた生成物1は5.66gと秤量され、HPLCによると98.3の純度であった。上記の固形分を、酢酸エチル5.6mLおよびアニソール22.6mLの組み合わせからの結晶化によって再び精製した。濾過および乾燥の後、生成物4.48g47が得られ、純度はHPLCによると99.18であった。スペクトル1Hおよび31PNMR、MSおよび物理的性質HPLC保持時間、融点および外観は、基準試料と一致した。実施例12-3S-2-{S-[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステル1のS-イソプロピル2-S-2,4-ジニトロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートS,SP-9による合成a2S-イソプロピル2-2,4-ジニトロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートジアステレオマー混合物S,SP-9およびS,RP-9の調製ならびに結晶化による単一の異性体2S-イソプロピル2-S-2,4-ジニトロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートS,SP-9の単離1結晶化フェニルホスホロジクロリダート10.0g、47.4mmolを乾燥DCM60mLに溶解し、続いて、-78°Cに冷却した。2,4-ジニトロフェノール8.72g、47.4mmolおよびトリエチルアミン7.27mL、52.1mmolの予備混合したDCM20mL中溶液を、30分の間にわたり-78°Cでゆっくり添加した。反応物を0°Cにし、この温度で2.5時間撹拌し、次にL-アラニンイソプロピルエステル7.95g,47.4mmolを1バッチの固形分として添加した。次いで、0°Cで40分間撹拌し、続いて追加のトリエチルアミン13.9mL、99.54mmolを添加し、0°Cで3時間、またはTLC酢酸エチル/ヘキサン=1/3によって完了と判断されるまで追加撹拌した。続いて反応混合物は減圧下で蒸発させ、残渣をMTBE100mLに再溶解し、固形分を濾別し、濾液を乾固するまで蒸発させ、黄色のシロップが得られた。粗の試料のNMRは、1:1の比の、2つの異性体、S,SP-9およびS,RP-9の混合物であることを示した。EtOAc:ヘキサン1:1の混合物50mlを添加し、15時間混合物を撹拌した。このようにして形成された白色固形物を濾別し、EtOAc:ヘキサン1:120mLですすぎ、真空下で乾燥して、S,SP-9の単一の異性体6.0g28が得られた。データ:1HNMRCDCl3,400MHzδ:8.82-8.81m,1H,8.43-8.40m,1H,7.89-7.86m,1H,7.36-7.32m,2H,7.23-7.19m,3H,4.96hepta,1H,4.19-4.08m,2H,1.42d,3H,1.20d,6H.31PNMRCDCl3,162MHzδ:-1.82.bS,SP-9および2からの1の調製乾燥した50mL丸底フラスコに、2の80mg0.255mmolおよび無水THF1mLを添加した。この懸濁液を氷水浴で冷却し、グリニャール試薬0.33mLを窒素下で注射器によって添加した。透明な溶液が形成され、0°Cで半時間撹拌した。S,SP-9133mg、0.294mmolのTHF1.5mL中溶液を、注射器経由で添加した。透明なオレンジ色の反応混合物を0°Cで20分でTLCによって点検し、この反応はほぼ完了していた。生成物が、3,5-ビスホスホルアミダート副生成物とともに形成された。この反応は、1時間半後、飽和NH4Clを添加することによりクエンチした。この混合物を酢酸エチル20mLで希釈した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル20mLで抽出した。合わせた有機層を、水50mL、飽和重炭酸ナトリウム2×40mL、飽和炭酸ナトリウム40mL、水40mL、および塩水30mLで洗浄した。明黄色の有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液を減圧下で濃縮し、結果として生じた非晶質固形分残渣を、カラムクロマトグラフィーによって精製した。ビスホスホルアミダート副生成物を、発泡固形分32.4mgとしてDCM中1のメタノールで溶出し、1は、DCM74mg、0.127mmol、49.6中3のメタノールで溶出された。実施例12-4S-2-{[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステルジアステレオマー混合物1およびRP異性体の2S-イソプロピル2-2-ニトロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートS,SP-10およびS,RP-10による合成aS,SP-10およびS,RP-10の調製窒素雰囲気下-70°Cのフェニルホスホロジクロリダート30g、142.2mmolのジクロロメタン150mL中溶液に、o-ニトロフェノール19.76g、142.2mmolおよびトリエチルアミン19.8mL、142.2mmolの前もって調製した混合物ジクロロメタン150mL中を、上記温度で1時間添加漏斗によって滴下添加した。撹拌をさらに2時間継続し、ゆっくり0°Cにした。L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩26.2g、156.3mmolを固体として加え、次いで続いてジクロロメタン150mL中のトリエチルアミン43.7mL、313.4mmolを0°Cで20分間滴下添加し、反応物は、さらに1時間同じ温度で撹拌を継続した。反応混合物を濾過し濃縮し、カラムクロマトグラフィー20のEtOAc/ヘキサンによってシリカゲルで最終的に精製し、ジアステレオマー混合物14.4g、25としてS、SP-10およびS、RP-10が得られた。1HNMRCDCl3,400MHzδ:7.94-7.90m,1H,7.67-7.63m,1H,7.57-7.54m,1H,7.33-7.26m,3H,7.23-7.14m,3H,5.04-4.89m,1H,4.21-4.04m,2H,1.38d,3H,異性体I,1.33d,3H,異性体II,1.23-1.17m,6H.31PNMRCDCl3,162MHzδ:-1.55異性体I,-1.76異性体II.b1およびそのRP異性体のジアステレオマー混合物のS,SP-10およびS,RP-10ならびに2からの調製乾燥した50mL丸底フラスコに、80mg0.255mmolの2および無水テトラヒドロフラン1mLを添加した。この懸濁液を氷水浴で冷却し、グリニャール試薬THF中の1M、0.32mmolの溶液を、注射器によって添加した。このようにして形成された透明な溶液を、0°Cで半時間撹拌し、次いで、リン試薬120mg、0.296mmol、異性体の混合物のTHF1mL中溶液を、0°Cで滴下添加した。この混合物を室温で44時間撹拌し、1N希HClの添加によってクエンチした。通常通りの水性処理の後、粗の残渣を、カラムクロマトグラフィーシリカゲル、DCM中3のメタノールによって精製し、2つの異性体の1:1混合物として1およびそのRP異性体33.9mg0.058mmol、22.8を得た。実施例12-5S-2-{[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステルジアステレオマー混合物1およびそのRP異性体の2S-イソプロピル2-2,4-ジクロロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートのジアステレオマー混合物S,SP-11およびS,RP-11による合成a2S-イソプロピル2-2,4-ジクロロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートジアステレオマー混合物S,SP-11およびS,RP-11の調製フェニルホスホロジクロリダート10.0g、47.4mmolを乾燥DCM60mLに溶解し、続いて、-78°Cに冷却した。2,4-ジクロロフェノール7.73g、47.4mmolおよびトリエチルアミン7.27mL、52.1mmolのDCM20mL中の、あらかじめ作っておいた混合物をゆっくり添加し、続いて上記温度で30分間撹拌した。この反応を0°Cにし、この温度で2.5時間撹拌し、次にL-アラニンイソプロピルエステル7.95g、47.4mmolを1バッチの固形分として添加した。0°Cで40分間撹拌し、続いて追加のトリエチルアミン13.9mL、99.54mmolを添加し、0°Cで3時間、またはTLC酢酸エチル/ヘキサン=1/3によって完了と判断されるまで追加撹拌した。続いて、反応混合物を減圧下で蒸発させ、最終的に、シリカゲルでカラムクロマトグラフィーヘキサン中酢酸エチルにかけ、粘性のある無色油状物として66の収率13.6gで生成物2つの異性体の混合物を得た。データ:1HNMRCDCl3,400MHzδ:7.47-7.44m,1H,7.42-7.39m,1H,7.35-7.30m,2H,7.24-7.15m,3H,5.05-4.94m,1H,4.19-4.08m,1H,3.96-3.89m,1H,1.41-1.35m,1H,1.24-1.19m,6H.31PNMRCDCl3、162MHzδ:-1.52一方の異性体、-1.54他方の異性体。b1およびそのRP異性体のジアステレオマー混合物のS,SP-11およびS,RP-11、ならびに2からの調製乾燥した50mL丸底フラスコに、181mg0.58mmolの2および無水THF1.5mLを添加した。この懸濁液を氷水浴で冷却した。グリニャール試薬THF中の1M溶液、0.72mmolを、0°Cで5分にわたり注射器によって滴下添加した。透明溶液を室温で半時間撹拌し、S,SP-11およびS,RP-11のTHF1.5mL中溶液276mg、0.66mmolを10分にわたって添加した。常温までこの反応物を暖め、22時間撹拌した。反応は完了せず、出発物質の半分未満が消費された。さらに3日後にこの反応を飽和NH4Cl5mLの添加によりクエンチした。この混合物を酢酸エチル20mLで希釈した。処理後、残渣をカラムクロマトグラフィーシリカゲル、DCM中4の2-プロパノールによって精製し、2つのジアステレオマーの混合物として63.1mgの10.108mmol、19およびそのRP異性体を得た。カラムから、出発ヌクレオシド29.6mg0.094mmolが回収された。実施例12-6S-2-{[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステルジアステレオマー混合物1およびRP異性体の2S-イソプロピル2-2-クロロ-4-ニトロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートS,SP-12およびS,RP-12による合成aS,SP-12およびS,RP-12の調製、ならびにS,SP-12およびS,RP-12の単離フェニルホスホロジクロリダート10.0g、47.3mmolを乾燥DCM50mLに溶解し、続いて、0°Cに冷却した。固体のL-アラニンイソプロピルエステルHCl塩7.94g、47.3mmolを添加した後、反応混合物を-70°Cに冷却し、次いで、乾燥DCM50mLに溶解したトリエチルアミン13.8mL、94.6mmolで処理した。結果として得られた混合物をこの温度で30分間撹拌し、次に0°Cに温めた。続いて、乾燥DCM20mLに溶解した2-クロロ-4-ニトロフェノール8.2g、47.3mmolおよびトリエチルアミン6.6mL、47.3mmolの前もって作った溶液を、5~10分にわたって添加し、さらに2時間継続して撹拌した。この溶液を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。結果として得られた残渣をTBME50mLに懸濁させ、室温で10分間撹拌した。続く濾過で追加のトリエチルアミン塩酸塩を取り除き、濾液が得られ、これを再び減圧下でこの溶媒をストリップした。カラムクロマトグラフィージクロロメタンによって、固形分として生成物12.2g、27.6mmolが得られた。生成物はEtOAc/ヘキサン2:3を使用して2回再結晶し、S,RP-125.2g、25の収率を単離し、-5°Cまで母液を冷却して、S,SP-12が得られた1.5g、7の収率。S,SP-12データ::1HNMRCDCl3、400MHzδ:8.33m,1H,8.13-8.10m,1H,7.73-7.71m,1H,7.36-7.33m,2H,7.25-7.18m,3H,5.00hepta,1H,4.19-4.10m,1H,4.02-3.97m,1H,1.43d,3H,1.23-1.21m,6H.31PNMRCDCl3,162MHzδ:-1.97.S,RP-12データ::1HNMRCDCl3、400MHzδ:8.32-8.31m,1H,8.13-8.10m,1H,7.73-7.71m,1H,7.38-7.34m,2H,7.28-7.19m,3H,5.02hepta,1H,4.21-4.11m,1H,4.01-3.95m,1H,1.40d,3H,1.25-1.22m,6H。31PNMRCDCl3,162MHzδ:-2.02.b1およびそのRP異性体のジアステレオマー混合物のS,SP-12およびS,RP-12ならびに2からの調製乾燥した50mL丸底フラスコに、181mg0.58mmolの2および無水THF1.5mLを添加した。この懸濁液を窒素下で氷水浴で冷却した。グリニャール試薬THF中の1M溶液、0.72mmolを、注射器によって添加し、透明な溶液が形成された。この混合物を常温で半時間撹拌し、次いで、再び0°Cに冷却した。S,SP-12およびS,RP-12292mg、0.66mmolのTHF1.5mL中溶液を、0°Cで10分にわたって注射器によって添加した。結果として得られたオレンジ色の反応溶液を室温で終夜19時間撹拌し、TLCによって点検すると、反応はほぼ完了していた。この反応を飽和NH4Cl5mLの添加によってクエンチし、酢酸エチル20mLおよび水10mLで希釈した。2層を分離し、水層をEtOAc20mLで抽出した。有機層を、水20mL、飽和重炭酸ナトリウム2×30mL、5炭酸ナトリウム30mL、水20mL、および塩水20mLで洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、黄色固形物残渣に濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーシリカゲル、DCM中3のメタノールによって精製し、279mgの10.48mmol、83およびそのRP異性体を得た。実施例12-7S-2-{R-[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステル1のRP異性体の2S-イソプロピル2-R-2-クロロ-4-ニトロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノアートS,RP-12による合成乾燥した50mL丸底フラスコに、70mg0.223mmolの2および無水THF1mLを装填した。フラスコを氷水浴で冷却し、グリニャール試薬THF中1M溶液、0.32mLを0°Cで滴下添加した。0°Cで半時間撹拌した後、S,RP-12129mg、0.29mmolのTHF1mL中溶液を、注射器によって添加した。透明な褐色溶液が形成され、常温まで徐々に暖めた。室温で終夜19時間の後、反応を0°Cで1N希HClを添加することによりクエンチした。この混合物を酢酸エチル20mLおよび水10mLで希釈した。2層の分離後、水層をEtOAc10mLで抽出した。有機層を、水10mL、飽和重炭酸ナトリウム3×15mL、水10mL、塩水10mLで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。濃縮後、固形物残渣を、カラムクロマトグラフィーシリカゲル、DCM中3のメタノールによって精製し、白色固形物および単一の異性体として100mgの生成物0.17mmol、77を得た。実施例12-8S-2-{[1R,4R,5R-5-2-アミノ-6-メトキシ-プリン-9-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステルジアステレオマー混合物1および1のRP異性体のジアステレオマー混合物2S-イソプロピル2-フェノキシ2-チオキソベンゾ[d]チアゾール-32H-イルホスホリルアミノプロパノアートS,SP-13およびS、RP-13による合成.aS,SP-13およびS,RP-13の調製フェニルホスホロジクロリダート6.37g、30.19mmolを乾燥DCM40mLに溶解し、続いて、0°Cに冷却した。固体L-アラニンイソプロピルエステル5.06g、30.19mmolの添加後、反応混合物を-78°Cに冷却し、次いで、乾燥DCM20mLに溶解したトリエチルアミン8.84mL、63.3mmolで処理した。結果として得られた混合物をこの温度で30分間撹拌し、次に0°Cに温めた。続いて、乾燥DCM20mLに溶解したベンゾ[d]チアゾール-23H-チオン5.05g、30.19mmolおよびトリエチルアミン4.63mL、33.21mmolの前もって作っておいた溶液を5~10分にわたって添加し、その後、室温にこの混合物を終夜暖めた。次いで、濁った混合物を、0°Cに冷却し戻し、濾過して固体をすべて取り除いた。濾液を減圧下ですべての溶媒をストリップした。結果として得られた残渣をTBME50mLに懸濁させ、室温で1時間撹拌した。続く濾過で追加のトリエチルアミン塩酸塩を取り除き、濾液が得られ、この溶媒を減圧下で再びストリップした。カラムクロマトグラフィーDCMによって、S,SP-13およびS,RP-133:1、異性体I/異性体IIが粘性のある油状物として151.97gの収率で得られた。データ:1HNMRCDCl3,300MHzδ:8.63-8.59m,1H,7.37-7.27m,7H,7.18-7.14m,1H,6.05-5.97m,1H,5.04hepta,1H,異性体II,4.91hepta,1H,異性体I,4.37-4.24m,1H,1.45-1.42d,3H,異性体I,1.41-1.39d,3H,異性体II,1.26-1.22m,6H,1.09-1.02m,6H.31PNMRCDCl3、121MHzδ:-0.43異性体I、-1.29異性体II。b1およびそのRP異性体のジアステレオマー混合物のS,SP-13およびS,RP-13、ならびに2からの調製乾燥した丸底フラスコに、120mg0.38mmolの2および無水THF1.5mLを添加した。この混合物を0°Cに冷却し、グリニャール試薬0.5mmol0.5mLを滴下添加した。透明な溶液を0°Cで半時間撹拌した。S,SP-13およびS,RP-13197mg、0.45mmolのTHF1.5mL中溶液を、注射器によって添加した。結果として得られた混合物を室温まで暖め、終夜19時間撹拌した。TLCは反応が完了していないことを示し、生成物がビスホスホルアミダート副生成物とともに見出された。反応を0°Cで1N希HClの添加によってクエンチし、混合物を酢酸エチル20mLで希釈した。上記のように処理した後、油性の残渣が得られた。それをカラムクロマトグラフィーシリカゲル、DCM中3のメタノールによって精製して、2つのジアステレオマーの混合物として78.6mg0.13mmol、35の1およびそのRP異性体を得た。カラムから、36.4mgのビスホスホルアミダート副生成物が単離された。実施例13。化合物1の生物学データHCVレプリコンアッセイHCVレプリコンRNA含有Huh7細胞クローンA細胞;Apath、LLC、St.Louis、Mo.を10のウシ胎仔血清、4mMのL-グルタミンおよび1mMのピルビン酸ナトリウム、1倍の可欠アミノ酸およびG4181000μg/mlを含むダルベッコ修正イーグル培地高グルコース中で指数関数的成長状態に保った。G418を含まない同じ培地中で、抗ウイルスアッセイを実施した。1ウエルあたり1500個の細胞の割合で96ウエル平板内に細胞を播種し、被験化合物を播種直後に添加した。インキュベーション時間は4日。インキュベーションステップの終了時に、全細胞RNAを単離したRNeasy96キット;Qiagen。製造業者が推奨する通りに、単一ステップのマルチプレックスRT-PCRプロトコルにおいて、レプリコンRNAと内部対照TaqManrRNA対照試薬;AppliedBiosystemsを増幅した。HCVプライマーおよびプローブは、PrimerExpressソフトウェアAppliedBiosystemsで設計され、高度に保存された5’-未翻訳領域UTR配列センス、5’-AGCCATGGCGTTAGTATGAGTGT-3’、およびアンチセンス、5’-TTCCGCAGACCACTATGG-3’;プローブ、5’-FAM-CCTCCAGGACCCCCCCTCCC-TAMRA-3’を網羅していた。化合物の抗ウイルス効果を表現するために、被験化合物の閾値RT-PCRサイクルを、無薬物対照の平均閾値RT-PCRサイクルΔCtHCVから減算した。3.3というΔCtは、レプリコンRNAレベルにおいて1-log10の減少90の有効濃度[EC90]に等しいに等しい。試験化合物の細胞毒性も、ΔCtrRNA値を計算することにより表現することができよう。次に、ΔΔCt特異性パラメーターを導入することができΔCtHCV-ΔCtrRNA、ここではHCVRNA準位は、rRNA準位について規格化され、無薬物対照に対し較正されている。化合物1は、先のアッセイに基づいたその生物学的な特性に関して試験した。これらの試験の結果は以下に開示される。レプリコンアッセイの結果は、化合物1が化合物Cと組み合わせてアッセイされる場合、活性を示す。米国特許公開第2010/0081628号で化合物19として示された、および同じ出願に開示された各ジアステレオマー19aおよび19b;化合物D米国2010/0016251に開示された;化合物ESP-4として米国12/783,680に開示された。;ITMN-191実施例62-1で米国特許公開第2009/0269305号に開示された;およびANA-598化合物3iとしてF.Ruebasametal.Biorg.Med.Chem.Lett.200818:3616-3621に開示.驚いたことに、レプリコンアッセイ結果は、化合物1が化合物C19aまたは19b;化合物ESP-4,ITMN-191;およびANA-598の任意の1種と組み合わせてアッセイされる場合、相乗作用を示す。本出願は、2010年3月31日に出願された米国仮出願第61/319,513号;2010年3月31日に出願された米国仮出願第61/319,548号;および2010年6月17日に出願された米国仮出願第61/355,940号に対する優先権を主張し、その主題全体が参照によって組み込まれる。米国特許仮出願第61/319,548号および米国特許仮出願第12/645,765号、第12/053,015号、第12/783,680号の内容は、全体として参照によって本明細書に組み込まれる。さらに本明細書中に開示される特許および非特許参考文献は、参照によって本明細書に組み込まれる。包含されている主題が本出願の本文中で開示されている用語と矛盾する用語を含む場合には、包含されている主題の全体的意味が失われないことを条件として、本出願の中に含まれる用語の意味が支配する。"