"LP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドの効力が経時的に安定であるように製剤化された、LP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドを含む免疫原性組成物。界面活性剤およびLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドを10:1未満の界面活性剤対タンパク質のモル比で含む免疫原性組成物。LP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドの効力の少なくとも50が、少なくとも1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間、9カ月間、12カ月間、18カ月間、24カ月間、30カ月間、36カ月間、42カ月間、48カ月間、54カ月間または60カ月間維持される、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。LP2086fHBPサブファミリーAポリペプチドをさらに含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。界面活性剤をさらに含む、請求項1に記載の免疫原性組成物。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約0.5:1~約10:1の間である、請求項1から5のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約1:1~約5:1の間である、請求項6に記載の免疫原性組成物。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約1.4:1~約4.2:1の間である、請求項7に記載の免疫原性組成物。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約2.8:1である、請求項8に記載の免疫原性組成物。界面活性剤の量が、容器中でのケイ素とポリペプチドの結合を低下させるのに十分である、請求項1から9のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。容器が、シリンジまたはバイアルである、請求項10に記載の免疫原性組成物。界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、請求項1から11のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。界面活性剤が、ポリソルベート界面活性剤である、請求項12に記載の免疫原性組成物。界面活性剤が、ポリソルベート80である、請求項13に記載の免疫原性組成物。多価カチオンをさらに含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。多価カチオンが、カルシウムまたはアルミニウムである、請求項15に記載の免疫原性組成物。Ca3PO42を含む、請求項16に記載の免疫原性組成物。アルミニウムの濃度が、約0.1mg/ml~約1mg/mlの間である、請求項16に記載の免疫原性組成物。アルミニウムの濃度が、約0.5mg/mlである、請求項18に記載の免疫原性組成物。AlPO4、AlOH3、Al2SO43およびミョウバンのうちの1つまたは複数を含む、請求項16から19のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。ヒスチジンをさらに含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。ヒスチジンの濃度が、約2mM~約20mMの間である、請求項21に記載の免疫原性組成物。ヒスチジンの濃度が、約5mM~約15mMの間である、請求項22に記載の免疫原性組成物。コハク酸塩をさらに含む、請求項1から20のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。コハク酸塩の濃度が、約2mM~約10mMの間である、請求項24に記載の免疫原性組成物。コハク酸塩の濃度が、約3mM~約7mMの間である、請求項25に記載の免疫原性組成物。コハク酸塩の濃度が、約5mMである、請求項25に記載の免疫原性組成物。pHが、約5.0~約8.0の間である、請求項1から27のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。pHが、約5.8~6.0の間である、請求項28に記載の免疫原性組成物。ヒスチジンの濃度が、約10mM、pH6.0である、請求項29に記載の免疫原性組成物。凍結乾燥されている、請求項1から30のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。凍結乾燥された組成物が、アルミニウムを含む緩衝液中に再懸濁されている、請求項31に記載の免疫原性組成物。緩衝液が、AlPO4、AlOH3、Al2SO43またはミョウバンを含む、請求項32に記載の免疫原性組成物。タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClを含む、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。200ug/mLのrLP2086fHBPサブファミリーAポリペプチド、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClを含む、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。200ug/mLのrLP2086fHBPサブファミリーAポリペプチド、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる、請求項1または2に記載の免疫原性組成物。免疫原性組成物中のLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドの効力を安定化させるための方法であって、a約0.5:1~約10:1の間の界面活性剤対タンパク質のモル比を有する組成物中にLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドを製剤化するステップを含む方法。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約1:1~約5:1の間である、請求項40に記載の方法。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約1.4:1~約4.2:1の間である、請求項41に記載の方法。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約2.8:1である、請求項42に記載の方法。界面活性剤の量が、容器中でのケイ素とポリペプチドの結合を低下させるのに十分である、請求項40から43のいずれか一項に記載の方法。容器が、シリンジまたはバイアルである、請求項44に記載の方法。界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、請求項40から45のいずれか一項に記載の方法。界面活性剤が、ポリソルベート界面活性剤である、請求項46に記載の方法。界面活性剤が、ポリソルベート80である、請求項47に記載の方法。組成物が、多価カチオンをさらに含む、請求項40から48のいずれか一項に記載の方法。多価カチオンが、カルシウムまたはアルミニウムである、請求項49に記載の方法。組成物が、Ca3PO42を含む、請求項50に記載の方法。アルミニウムの濃度が、約0.1mg/ml~約1mg/mlの間である、請求項50に記載の方法。アルミニウムの濃度が、約0.5mg/mlである、請求項52に記載の方法。組成物が、AlPO4、AlOH3、Al2SO43またはミョウバンを含む、請求項49から53のいずれか一項に記載の方法。ヒスチジンをさらに含む、請求項40から54のいずれか一項に記載の方法。ヒスチジンの濃度が、約2mM~約20mMの間である、請求項55に記載の方法。ヒスチジンの濃度が、約5mM~約15mMの間である、請求項56に記載の方法。コハク酸塩をさらに含む、請求項40から54のいずれか一項に記載の方法。コハク酸塩の濃度が、約2mM~約10mMの間である、請求項58に記載の方法。コハク酸塩の濃度が、約3mM~約7mMの間である、請求項59に記載の方法。pHが、約5.0~約8.0の間である、請求項40から60のいずれか一項に記載の方法。pHが、約5.8~6.0の間である、請求項61に記載の方法。ヒスチジンの濃度が、約10mM、pH6.0である、請求項62に記載の方法。コハク酸塩の濃度が、約5mM、pH6.0である、請求項62に記載の方法。b免疫原性組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む、請求項40から64のいずれか一項に記載の方法。c凍結乾燥された組成物を、アルミニウムを含む緩衝液中に再懸濁するステップをさらに含む、請求項65に記載の方法。緩衝液が、AlPO4、AlOH3、Al2SO43またはミョウバンを含む、請求項66に記載の方法。サブファミリーBタンパク質を、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる組成物中に製剤化する、請求項40に記載の方法。サブファミリーBタンパク質を、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる組成物中に製剤化する、請求項40に記載の方法。免疫原性組成物中のLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドの効力を安定化させるための方法であって、aLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチドを、約0.1mg/ml~約1mg/mlの間のアルミニウムを有し、約0.5:1および約10:1の間の界面活性剤対タンパク質のモル比を有する組成物中に製剤化するステップを含む方法。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約1:1~約5:1の間である、請求項70に記載の方法。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約1.4:1~約4.2:1の間である、請求項71に記載の方法。界面活性剤対タンパク質のモル比が、約2.8:1である、請求項72に記載の方法。界面活性剤の量が、容器中でのケイ素とポリペプチドの結合を低下させるのに十分である、請求項70から73のいずれか一項に記載の方法。容器が、シリンジまたはバイアルである、請求項74に記載の方法。界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、請求項70から75のいずれか一項に記載の方法。界面活性剤が、ポリソルベート界面活性剤である、請求項76に記載の方法。界面活性剤が、ポリソルベート80である、請求項77に記載の方法。アルミニウムの濃度が、約0.5mg/mlである、請求項70から78のいずれか一項に記載の方法。組成物が、AlPO4、AlOH3、Al2SO43またはミョウバンを含む、請求項70から79のいずれか一項に記載の方法。ヒスチジンをさらに含む、請求項70から80のいずれか一項に記載の方法。ヒスチジンの濃度が、約2mM~約20mMの間である、請求項81に記載の方法。ヒスチジンの濃度が、約5mM~約15mMの間である、請求項82に記載の方法。コハク酸塩をさらに含む、請求項70から80のいずれか一項に記載の方法。コハク酸塩の濃度が、約2mM~約10mMの間である、請求項84に記載の方法。コハク酸塩の濃度が、約3mM~約7mMの間である、請求項85に記載の方法。pHが、約5.0~約8.0の間である、請求項70から86のいずれか一項に記載の方法。pHが、約5.8~6.0の間である、請求項87に記載の方法。ヒスチジンの濃度が、約10mM、pH6.0である、請求項88に記載の方法。b免疫原性組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む、請求項70から89のいずれか一項に記載の方法。c凍結乾燥された組成物を、アルミニウムを含む緩衝液中に再懸濁するステップをさらに含む、請求項90に記載の方法。緩衝液が、AlPO4、AlOH3、Al2SO43またはミョウバンを含む、請求項91に記載の方法。サブファミリーBタンパク質を、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる組成物中に製剤化する、請求項70に記載の方法。サブファミリーBタンパク質を、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる組成物中に製剤化する、請求項70に記載の方法。免疫原性組成物中の2086fHBPポリペプチドの効力を決定するための方法であって、1第1のモノクローナルAbおよび第2のmAbを、2086タンパク質を含む免疫原性組成物と共にインキュベートするステップであって、第1のmAbがmAbを捕捉するために使用する第1のタグにコンジュゲートしており、第2のmAbが検出可能である第2のタグにコンジュゲートしており、第1および第2のmAbは、2086基準タンパク質上の異なる立体構造エピトープを標的とするステップと、2第1のmAbに結合している2086タンパク質を、第1のタグを使用して捕捉するステップと、3第2のタグを使用して捕捉した第2のmAbに結合している2086タンパク質を検出し、その量を定量化するステップとを含む方法。第1のタグが、ビオチン、GST、6×Hisタグまたはビーズである、請求項95に記載の方法。ビーズが、カルボキシル化ポリスチレンビーズまたは常磁性ビーズである、請求項96に記載の方法。第1のタグを、ストレプトアビジンビーズ、ストレプトアビジンカラム、グルタチオンビーズ、グルタチオンカラム、ニッケルビーズ、ニッケルカラム、遠心分離、または磁場を用いて捕捉する、請求項96に記載の方法。第2のタグが、ビオチン、HRP、蛍光体または放射標識である、請求項95から98のいずれか一項に記載の方法。第2のタグを、蛍光体またはHRPにコンジュゲートさせたストレプトアビジンを用いて、電気化学発光、蛍光検出または放射活性検出によって検出する、請求項99に記載の方法。2086ポリペプチドが、サブファミリーAポリペプチドである、請求項95から100のいずれか一項に記載の方法。2086ポリペプチドが、サブファミリーBポリペプチドである、請求項95から100のいずれか一項に記載の方法。2086ポリペプチドに、脂質が付加されている、請求項95から102のいずれか一項に記載の方法。2086ポリペプチドに、脂質が付加されていない、請求項95から102のいずれか一項に記載の方法。2086ポリペプチドが組換えである、請求項95から104のいずれか一項に記載の方法。両方の抗体により認識されるエピトープを示しているポリペプチドを定量化することができる、請求項95から105のいずれか一項に記載の方法。試料の効力を基準物質の効力と比較する、請求項95から106のいずれか一項に記載の方法。いくつかの実施形態では、本発明は、安定な免疫原性組成物を提供し、組成物中のLP2086サブファミリーBポリペプチドの効力が、少なくとも約1~12カ月間、約6~18カ月間、約12~24カ月間、約24~36カ月間または約36~48カ月間維持される。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、LP2086サブファミリーAポリペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、界面活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質のモル比が、約0.5:1~約10:1の間、約1:1~約5:1の間、または約1.4:1~4.2:1の間である。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質のモル比が、約2.8:1である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の量が、容器、例として、シリンジまたはバイアル中でのケイ素とポリペプチドの結合を低下させるのに十分である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、例として、ポリソルベート界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート-80である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、多価カチオンをさらに含む。いくつかの実施形態では、多価カチオンは、カルシウムまたはアルミニウムである。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、リン酸カルシウムを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、アルミニウムを、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムまたはミョウバンとして含む。いくつかの実施形態では、アルミニウムの濃度は、約0.1mg/mL~1.0mg/mLの間である。いくつかの実施形態では、アルミニウムの濃度は、約0.5mg/mLである。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、ヒスチジンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM~約20mMの間または約5mM~約15mMの間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約10mMである。いくつかの実施形態では、ヒスチジンのpHは、約5.0~約8.0の間または約5.8~約6.0の間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、10mM、pH6.0である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、コハク酸塩をさらに含む。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM~約10mMの間または約3mM~約7mMの間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約5mMである。いくつかの実施形態では、コハク酸塩のpHは、約5.0~約8.0の間または約5.8~約6.0の間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、5mM、pH6.0である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、凍結乾燥されている。いくつかの実施形態では、凍結乾燥された組成物は、アルミニウムを含む緩衝液中に再懸濁されている。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムまたはミョウバンとして存在する。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのrLP2086fHBPサブファミリーAポリペプチド、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのrLP2086fHBPサブファミリーAポリペプチド、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。別の態様では、本発明は、約0.5:1~10:1の間、約1:1~約5:1の間、または約1.4:1~約4.2:1の間の界面活性剤対タンパク質のモル比を有する緩衝液中にLP2086サブファミリーBポリペプチドを保存することによって、免疫原性組成物中のLP2086サブファミリーBポリペプチドの効力を安定化させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質のモル比は、約2.8:1である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の量が、容器、例として、シリンジまたはバイアル中でのケイ素とポリペプチドの結合を低下させるのに十分である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、例として、ポリソルベート界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート-80である。いくつかの実施形態では、緩衝液が、多価カチオンをさらに含む。いくつかの実施形態では、多価カチオンが、カルシウムまたはアルミニウムである。いくつかの実施形態では、緩衝液が、リン酸カルシウムを含む。いくつかの実施形態では、緩衝液が、アルミニウムを、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムまたはミョウバンとして含む。いくつかの実施形態では、アルミニウムの濃度が、約0.1mg/mL~1.0mg/mLの間である。いくつかの実施形態では、アルミニウムの濃度は、約0.5mg/mLである。いくつかの実施形態では、緩衝液が、ヒスチジンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度が、約2mM~約20mMの間または約5mM~約15mMの間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約10mMである。いくつかの実施形態では、ヒスチジンのpHが、約5.0~約8.0の間または約5.8~約6.0の間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、10mM、pH6.0である。いくつかの実施形態では、緩衝液が、コハク酸塩をさらに含む。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度が、約2mM~約10mMの間または約3mM~約7mMの間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約5mMである。いくつかの実施形態では、コハク酸塩のpHが、約5.0~約8.0の間または約5.8~約6.0の間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、10mM、pH6.0である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、凍結乾燥されている。いくつかの実施形態では、凍結乾燥された組成物は、アルミニウムを含む緩衝液中に再懸濁されている。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムまたはミョウバンとして存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液が、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、緩衝液が、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。別の態様では、本発明は、約0.1mg/mL~約10mg/mLの間のアルミニウムを有し、約0.5:1~10:1の間の界面活性剤対タンパク質のモル比を有する緩衝液中に、LP2086サブファミリーAポリペプチドおよびLP2086サブファミリーBポリペプチドを保存することによって、免疫原性組成物中のLP2086サブファミリーAポリペプチドおよびLP2086サブファミリーBポリペプチドの効力を安定化させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1:1~約5:1の間、または約1.4:1~約4.2:1の間である。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質のモル比は、約2.8:1である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の量が、容器、例として、シリンジまたはバイアル中でのケイ素とポリペプチドの結合を低下させるのに十分である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、例として、ポリソルベート界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート-80である。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムまたはミョウバンとして存在する。いくつかの実施形態では、アルミニウムの濃度は、約0.5mg/mLである。いくつかの実施形態では、緩衝液が、ヒスチジンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度が、約2mM~約20mMの間または約5mM~約15mMの間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約10mMである。いくつかの実施形態では、ヒスチジンのpHが、約5.0~約8.0の間または約5.8~約6.0の間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、10mM、pH6.0である。いくつかの実施形態では、緩衝液が、コハク酸塩をさらに含む。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度が、約2mM~約10mMの間または約3mM~約7mMの間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約5mMである。いくつかの実施形態では、コハク酸塩のpHが、約5.0~約8.0の間または約5.8~約6.0の間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、10mM、pH6.0である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、凍結乾燥されている。いくつかの実施形態では、凍結乾燥された組成物は、アルミニウムを含む緩衝液中に再懸濁されている。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムまたはミョウバンとして存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液が、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーAポリペプチド、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、10mMヒスチジン、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、緩衝液が、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーAポリペプチド、200ug/mLのLP2086fHBPサブファミリーBポリペプチド、タンパク質に対して約2.8:1のモル比のポリソルベート80、AlPO4としての0.5mg/mLアルミニウム、5mMコハク酸塩、pH6.0、および150mMNaClから本質的になる。別の態様では、本発明は、rLP2086サブファミリーAポリペプチドおよび/またはrLP2086サブファミリーBポリペプチドの効力を決定するための方法を提供し、この方法は、a各サブファミリータンパク質上の立体構造エピトープを認識する第1および第2の機能性モノクローナル抗体を、免疫原性組成物に結合させるステップと、b当該ポリペプチドに結合している抗体を定量化するステップとを含む。いくつかの実施形態では、定量化を、電気化学発光により実施する。いくつかの実施形態では、両方の抗体により認識されるエピトープを示しているポリペプチドを定量化する。いくつかの実施形態では、第1の抗体を、標識、例として、ビオチンにコンジュゲートさせる。いくつかの実施形態では、第1の抗体を、コンジュゲートした標識に結合する化合物、例として、ストレプトアビジンビーズまたはストレプトアビジンカラムにより単離する。いくつかの実施形態では、第2の抗体は、定量的な標識により結合される。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物の効力を、基準物質の効力と比較する。別段の定義がない限り、本明細書において使用する全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。本明細書に記載するものに類似するかまたはそれらと同等である方法および材料を、本発明の実行または試験において使用することができるが、適切な方法および材料を、下記に記載する。材料、方法および例は、例示のためのものに過ぎず、それらに本発明を限定する意図はない。本明細書において言及する刊行物、特許およびその他の文献は全て、それらの全体が参照により組み込まれている。本明細書全体を通して、単語含むcomprise、または変化形、例として、含むcomprisesもしくは含むcomprisingは、記述する整数または整数の群を包含するが、任意のその他の整数および整数の群を排除しないことを示していることが理解されよう。定義本明細書で使用する場合、単数形あるa、あるanおよびこのtheは、文脈からそうでないことが明らかでない限り、複数形への言及を含む。したがって、例えば、この方法という言及は、本明細書に記載し、かつ/または当業者であれば、本開示を読み取れば明らかになるであろう等のタイプの1つまたは複数の方法および/またはステップを含む。本明細書で使用する場合、複数形は、文脈からそうでないことが明らかでない限り、単数形への言及を含む。したがって、例えば、これらの方法という言及は、本明細書に記載し、かつ/または当業者であれば、本開示を読み取れば明らかになるであろう等のタイプの1つまたは複数の方法および/またはステップを含む。本明細書で使用する場合、約は、値、例として、記述する濃度範囲、時間枠、分子量、温度またはpHの統計学的に意味のある範囲内を意味する。そのような範囲は、指標内、典型的には所与の値または範囲の20の範囲内、さらにより典型的には10の範囲内、さらにより典型的には5の範囲内であり得る。用語約が包含する、許される変動は、研究下の特定の系によって異なることになり、当業者であれば容易に理解することができる。また、本出願内で範囲を記載する場合は常に、範囲内の全ての整数も、本発明の実施形態として企図される。用語アジュバントは、本明細書においてさらに記載および例示するように、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。本発明のワクチン中で使用することができるアジュバントの非限定的な例として、RIBIアジュバント系RiBiInc.、Hamilton、Mont.、ミョウバン、水酸化アルミニウムゲル等の鉱物ゲル、水中油型乳剤、例えば、フロイントの完全および不完全アジュバント等の油中水型乳剤、ブロックコポリマーCytRx、AtlantaGa.、QS-21CambridgeBiotechInc.、CambridgeMass.、SAF-MChiron、EmeryvilleCalif.、AMPHIGEN登録商標アジュバント、サポニン、QuilAまたはその他のサポニン画分、モノホスホリルリピドA、ならびにアブリジン脂質-アミンアジュバントが挙げられる。用語アルミニウムとタンパク質の結合は、アルミニウムに結合しているタンパク質分子の組成物中のパーセントを指す。アルミニウムとタンパク質の結合は、本明細書に開示するかまたは当技術分野で公知である方法を使用して決定することができる。用語有効免疫原性量は、本明細書で使用する場合、脊椎動物宿主中で免疫応答を惹起するのに有効であるポリペプチドまたはポリペプチドを含む組成物の量を指す。例えば、本発明のrLP2086タンパク質の有効免疫原性量は、脊椎動物宿主中で免疫応答を惹起するのに有効な量である。具体的な有効免疫原性投与量または量は、宿主の年齢、体重および医学的状態、ならびに投与方法によって異なることになる。当業者であれば、適切な用量を容易に決定する。用語モル比は、本明細書で使用する場合、組成物中の2つの異なる要素のモル数の比を指す。いくつかの実施形態では、モル比は、界面活性剤のモル対タンパク質のモルの比である。いくつかの実施形態では、モル比は、ポリソルベート80のモル対タンパク質のモルの比である。タンパク質およびポリソルベート80の濃度に基づいて、以下の式を使用して、モル比を計算する。例えば、0.01ポリソルベート80および200μgを含む組成物は、10.8:1[0.01/0.2×216]の界面活性剤対タンパク質のモル比を有する。3モルのポリソルベート80対2モルのタンパク質の比は、3:2のPS80対タンパク質のモル比と表わされるであろう。さらに、モル比を単一の数として記載する場合、モル比は、その単一の数対1の比を指す。例えば、0.5、2および10のポリソルベート80対タンパク質の比はそれぞれ、0.5:1、2:1および10:1の比を指す。本明細書で使用する場合、用語界面活性剤対タンパク質のモル比およびポリソルベート80対タンパク質のモル比は一般に、界面活性剤またはポリソルベート80対タンパク質抗原、特に、P2086抗原のモル比を指す。本明細書に開示する教示に基づいて、当業者であれば、その他の界面活性剤についてのモル比およびその他の界面活性剤を有する製剤に最適なモル比を計算するための方法を決定することができるであろう。本明細書で使用する場合、低いモル比は一般に、高いモル比よりも少ない、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質抗原のモル比を指す。高いモル比は一般に、低いモル比よりも多い、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質抗原のモル比を指す。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質の高いモル比は、10:1よりも多いモル比を指す。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質の低いモル比は、0.5:1~10:1の間のモル比を指す。用語ORF2086は、本明細書で使用する場合、ナイセリア種の細菌に由来するオープンリーディングフレーム2086を指す。ナイセリアORF2086、そこからコードされるタンパク質、それらのタンパク質の断片、およびそれらのタンパク質を含む免疫原性組成物は、当技術分野で公知であり、例えば、それらのそれぞれの全体が、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第US20060257413号および第US20090202593号に記載されている。用語P2086は一般に、ORF2086がコードするタンパク質を指す。本発明のP2086タンパク質は、脂質が付加されていてもよく、または脂質が付加されていなくてもよい。LP2086およびP2086は典型的にはそれぞれ、2086タンパク質の脂質が付加されている形態および脂質が付加されていない形態を指す。本発明のP2086タンパク質は、組換えであり得る。rLP2086およびrP2086は典型的にはそれぞれ、組換え2086タンパク質の脂質が付加されている形態および脂質が付加されていない形態を指す。用語薬学的に許容できる担体は、本明細書で使用する場合、ヒトまたはその他の脊椎動物宿主への投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤等を含むことを意図する。典型的には、薬学的に許容できる担体は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物を含めた、動物において使用するために連邦、州政府の規制当局もしくはその他の規制当局による承認を得ているかまたは米国薬局方もしくはその他の一般に認識されている薬局方に収載されている担体である。用語担体は、それと共に医薬組成物が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。そのような薬学的担体は、無菌の液体、例として、水、および石油、動物、植物または合成の起源のものを含めた、油であり得る。水、生理食塩水、ならびにデキストロースおよびグリセロールの水溶液を、液体の担体として、特に、注射用液剤のために用いることができる。適切な薬学的賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等を含む。また、組成物は所望により、少量の湿潤剤、増量剤、乳化剤またはpH緩衝剤を含有してもよい。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、持続放出性製剤等の剤型をとることができる。適切な薬学的担体の例が、E.W.MartinによるRemington’sPharmaceuticalSciencesに記載されている。製剤は、投与様式に適すべきである。適切な担体は、当業者に明らかであり、投与経路に大いに依存することになる。用語効力は、免疫原性応答を起こす抗原の能力を指す。いくつかの実施形態では、効力を、抗体に結合するエピトープの能力により測定する。効力は、抗原もしくはエピトープの完全性の喪失または抗原もしくはエピトープの立体構造の変化に起因して経時的に喪失または低下し得る。効力は、これらに限定されないが、光、温度、凍結/解凍のサイクル、撹拌およびpHを含めた要因に起因して、喪失または低下し得る。効力は、本明細書において開示する方法および当技術分野で公知のアッセイにより測定することができる。そのような効力決定アッセイは、これらに限定されないが、動物ワクチン接種モデル、血清殺菌力アッセイSBA、フローサイトメトリー、およびinvitroにおける効力アッセイを含む。効力を決定するための好ましい方法は、SBAおよびinvitroにおける効力アッセイである。効力を決定するためのより好ましい方法は、SBAである。いくつかの実施形態では、効力を、免疫応答に関与する少なくとも1つのエピトープを標的とする少なくとも1つのモノクローナル抗体を使用して決定することができる。いくつかの実施形態では、試験試料の効力を、基準標準物質の効力と比較する。いくつかの実施形態では、基準標準物質は、T0時の試験試料である。いくつかの実施形態では、基準標準物質は、界面活性剤を有さない免疫原性組成物である。いくつかの実施形態では、基準標準物質は、10:1よりも高い界面活性剤対タンパク質のモル比を有する免疫原性組成物である。防御免疫応答は、対象を感染から防御するように働く、液性または細胞媒介性のいずれかの免疫応答を惹起する免疫原性組成物の能力を指す。もたらされる防御は、絶対的である必要はなく、すなわち、対照の対象集団、例えば、ワクチンまたは免疫原性組成物を投与されない感染動物と比較して統計学的に有意な改善があるならば、感染を完全に予防または根絶する必要はない。防御は、感染症状の重症度または発症速度の緩和に限定され得る。一般に、防御免疫応答は、各抗原に対する測定可能な機能性抗体の応答の何らかのレベルを含めた、少なくとも50の対象における特定の抗原に特異的な抗体のレベルの増加の誘発を含むであろう。特定の状況では、防御免疫応答は、各抗原に対する測定可能な機能性抗体の応答の何らかのレベルを含めた、少なくとも50の対象における、特定の抗原に特異的な抗体のレベルの2倍の増加または4倍の増加の誘発を含むことができるであろう。特定の実施形態では、オプソニン化抗体が、防御免疫応答と相関する。したがって、オプソニン化貪食作用アッセイ、例えば、下記に記載するアッセイにおいて細菌数のパーセント減少を測定することによって、防御免疫応答をアッセイすることができる。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物の非存在下の細菌数と比較して、少なくとも10、25、50、65、75、80、85、90、95以上の細菌数の減少がある。用語タンパク質、ポリペプチドおよびペプチドは、アミノ酸残基のポリマーを指し、産物の最小の長さに制限されない。したがって、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体等が、この定義の内に含まれる。完全長タンパク質およびそれらの断片の両方が、この定義により包含される。また、これらの用語は、好ましくは、タンパク質を投与する動物内で免疫学的応答を惹起する能力をタンパク質が維持するような、未変性配列に対する一般に、保存的な性質であるが、非保存的であってもよい改変、例として、欠失、付加および置換も含む。また、発現後の改変、例えば、グリコシル化、アセチル化、脂質付加、リン酸化等も含まれる。用語組換えは、本明細書で使用する場合、遺伝子工学的方法により産生される任意のタンパク質、ポリペプチド、または目的の遺伝子を発現する細胞を指す。用語組換えは、タンパク質またはポリペプチドに関して使用する場合、組換えポリヌクレオチドの発現により産生されるポリペプチドを意味する。本発明のタンパク質は、天然の供給源から単離するかまたは遺伝子工学的方法により産生することができる。組換えは、本明細書で使用する場合、その起源または操作に起因して、それが本来結び付いているポリヌクレオチドの全部または一部と結び付いていない核酸分子をさらに表す。用語組換えは、宿主細胞に関して使用する場合、組換えポリヌクレオチドを含む宿主細胞を意味する。用語安定なおよび安定性は、免疫原性を一定期間にわたり維持する抗原の能力を指す。安定性を、経時的な効力として測定することができる。用語安定なおよび安定性は、免疫原性組成物の物理的、化学的および立体構造的な安定性をさらに指す。タンパク質組成の不安定性は、化学的分解、またはタンパク質分子が凝集して、より高次のポリマーを形成することによってか、ヘテロ二量体がモノマーに解離すること、脱グリコシル化、グリコシル化の改変、または本発明中に含むタンパク質組成の少なくとも1つの生物学的活性を低下させる任意のその他の構造的改変によって引き起こされ得る。安定性は、試料の光散乱、光吸光度もしくは光学密度の見かけの減弱、例えば、分子ふるいクロマトグラフィーによるサイズ、invitroもしくはinvivoにおける生物学的活性、および/または示差走査熱量測定DSCによる特性の測定を含めた、当技術分野で周知の方法によって評価することができる。安定性を評価するためのその他の方法は、当技術分野で公知であり、また、本発明に従って使用することもできる。いくつかの実施形態では、本発明の安定な製剤中の抗原は、基準標準物質と比較して、少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99または100の効力を、少なくとも1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間、9カ月間、12カ月間、18カ月間、24カ月間、30カ月間、36カ月間、42カ月間、48カ月間、54カ月間または60カ月間維持することができる。いくつかの実施形態では、本発明の安定な製剤中の抗原は、基準標準物質と比較して、少なくとも50の効力を、少なくとも1年間、2年間、3年間、4年間または5年間維持することができる。また、用語安定なおよび安定性は、エピトープまたは免疫反応性を一定期間にわたり維持する抗原の能力も指す。例えば、本発明の安定な製剤中の抗原は、基準標準物質と比較して、そのエピトープまたは免疫反応性の少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99または100を、少なくとも1カ月間、2カ月間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、6カ月間、9カ月間、12カ月間、18カ月間、24カ月間、30カ月間、36カ月間、42カ月間、48カ月間、54カ月間または60カ月間維持することができる。いくつかの実施形態では、安定性を、環境条件に関して測定する。環境条件の非限定的な例として、光、温度、凍結/解凍のサイクル、撹拌およびpHが挙げられる。当業者であれば、抗原性エピトープの存在または免疫反応性を、本明細書において開示する方法または当技術分野で公知のその他の方法を使用して決定することができるであろう。例えば、McNeilら、Vaccine、27:3417~34212009を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗原の安定性を、その製剤化の日から測定する。いくつかの実施形態では、抗原の安定性を、その保存条件を変化させた日から測定する。保存条件の変化の非限定的な例として、凍結から冷蔵への変化、凍結から室温への変化、冷蔵から室温への変化、冷蔵から凍結への変化、室温から凍結への変化、室温から冷蔵への変化、明所から暗所への変化、または撹拌の導入が挙げられる。用語安定化剤は、抗原に結合し、抗原のエピトープまたは免疫反応性を一定期間にわたり維持する化合物を指す。安定化剤は、当技術分野で公知である。安定化剤の例として、多価カチオン、例えば、カルシウムまたはアルミニウムが挙げられる。用語対象は、哺乳動物、鳥、魚、爬虫類、または任意のその他の動物を指す。また、用語対象は、ヒトも含む。また、用語対象は、家庭用ペットも含む。家庭用ペットの非限定的な例として、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、モルモット、ケナガイタチ、鳥、ヘビ、トカゲ、魚、カメおよびカエルが挙げられる。また、用語対象は、家畜動物も含む。家畜動物の非限定的な例として、アルパカ、バイソン、ラクダ、ウシ、シカ、ブタ、ウマ、ラマ、ラバ、ロバ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、トナカイ、ヤク、ニワトリ、ガチョウおよびシチメンチョウが挙げられる。用語ワクチンまたはワクチン組成物は、互換的に使用し、対象内において免疫応答を誘発する少なくとも1つの免疫原性組成物を含む医薬組成物を指す。一般的な説明本発明は、rLP2086サブファミリーA抗原ではなく、rLP2086サブファミリーB抗原が、二価のワクチン製剤中で効力を経時的に喪失し、したがって、不安定であるという新規の発見から生み出されている。二価の製剤中の構成成分を変化させることによって、二価のワクチン製剤中の界面活性剤対タンパク質の高いモル比により、rLP2086サブファミリーB抗原に特異的な不安定性が生じることを決定した。二価および一価の製剤中の界面活性剤対タンパク質のモル比を低下させると、効力の経時的な維持により決定した場合、rLP2086サブファミリーB抗原の安定性の増加が生じ、rLP2086サブファミリーA抗原の安定性には影響が及ばなかった。この結果は驚くべきものであるが、これは、リポタンパク質は典型的には、それらの疎水性脂質部分の凝集を阻止するために高い界面活性剤濃度を使用して精製および保存されるからである。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、rLP2086サブファミリーB抗原を含み、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を備える免疫原性組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫原性組成物中のrLP2086サブファミリーB抗原の安定性を維持する方法を提供し、この方法は、rLP2086サブファミリーB抗原を、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を備える緩衝液中に保存するステップを含む。さらなる研究から、低いモル比の免疫原性組成物を撹拌すると、低いモル比の製剤からは、rLP2086サブファミリーA抗原およびB抗原の凝集が生じることが明らかになった。しかし、低いモル比の組成物中のアルミニウム濃度を増加させると、撹拌しても、rLP2086サブファミリーA抗原およびB抗原の凝集が阻止された。さらに、rLP0286サブファミリーA抗原は、アルミニウムの非存在下では、低い界面活性剤のモル比の作用に対して感受性が高まる。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、rLP2086サブファミリーA抗原、rLP2086サブファミリーB抗原、高い濃度のアルミニウムを含み、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を備える免疫原性組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫原性組成物中のrLP2086サブファミリーA抗原およびrLP2086サブファミリーB抗原の安定性を維持する方法を提供し、この方法は、rLP2086サブファミリーA抗原およびrLP2086サブファミリーB抗原を、高い濃度のアルミニウムを含み、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を備える緩衝液中に保存するステップを含む。免疫原性組成物ナイセリアメニンギティディスNeisseriameningitidisのORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードするタンパク質を含む免疫原性組成物は、当技術分野で公知である。例示的な免疫原性組成物として、米国特許出願公開第US20060257413号および第US20090202593号に記載されているものが挙げられ、それらの出願公開は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。そこに記載されているそのような免疫原性組成物は、ORF2086タンパク質と同定されている、殺菌活性を示すタンパク質、その免疫原性部分、および/またはそれらの生物学的同等物を含む。ORF2086タンパク質は、ナイセリア種のオープンリーディングフレーム2086がコードするタンパク質を指す。タンパク質は、組換えタンパク質であっても、または自然のナイセリア種から単離したタンパク質であってもよい。例えば、ナイセリアORF2086タンパク質は、細菌株、例として、ナイセリアメニンギティディスNeisseriameningitidis血清群A、B、C、D、W-135、X、Y、Zおよび29E、ナイセリアゴノレアNeisseriagonorrhoeaeならびにナイセリアラクタミカNeisserialactamicaの株を含めた、ナイセリア種の細菌株から単離することができ、前記タンパク質の免疫原性部分および/または生物学的同等物であってもよい。ORF2086タンパク質は、2086のサブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質、それらの免疫原性部分、および/またはそれらの生物学的同等物を含む。ORF2086タンパク質またはそれらの同等物等は、脂質が付加されていてもよく、または脂質が付加されていなくてもよい。好ましくは、ナイセリアORF2086タンパク質は、脂質が付加されている。ある1つの実施形態では、免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードするタンパク質に対して少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する単離タンパク質を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードするサブファミリーAタンパク質に対して少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する単離タンパク質を含む。好ましくは、免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードする単離サブファミリーAタンパク質を含む。別の実施形態では、免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードするサブファミリーBタンパク質に対して少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する単離タンパク質を含む。好ましくは、免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードする単離サブファミリーBタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ORF2086サブファミリーBタンパク質は、B01変異体である。さらに別の実施形態では、免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードするサブファミリーAタンパク質に対して少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する単離タンパク質、およびナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードするサブファミリーBタンパク質に対して少なくとも95のアミノ酸配列同一性を有する単離タンパク質を含む。好ましくは、免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードする単離サブファミリーAタンパク質、およびナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードする単離サブファミリーBタンパク質を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、1:1のサブファミリーAタンパク質対サブファミリーBタンパク質の比を含む。免疫原性組成物は、ナイセリアORF2086に由来するヌクレオチド配列がコードするタンパク質、ポリヌクレオチドまたはそれらの同等物を、免疫原性組成物中の唯一の活性免疫原として含むことができる。あるいは、免疫原性組成物は、その他のナイセリア種の免疫原性ポリペプチド、あるいは1つまたは複数のその他の微生物病原体例えば、非限定的に、ウイルス、プリオン、細菌もしくは真菌の免疫学的に活性なタンパク質、または莢膜多糖体を含めて、活性免疫原をさらに含んでもよい。組成物は、1つまたは複数の所望のタンパク質、断片、または選ばれた適応に望まれる医薬化合物を含むことができる。本発明は、いずれの多抗原型または多価の免疫原性組成物も企図する。例えば、免疫原性組成物は、2つ以上のORF2086タンパク質の組合せ、ORF2086タンパク質と1つまたは複数のPorAタンパク質との組合せ、ORF2086タンパク質と髄膜炎菌血清群A、C、YおよびW135の多糖体および/もしくは多糖体コンジュゲートとの組合せ、ORF2086タンパク質を、髄膜炎菌および肺炎球菌の組合せと組み合わせたもの、または前述のうちのいずれかの組合せを、所望の投与、例えば、粘膜送達に適した剤型をとって含むことができる。当業者であれば、そのような多抗原型または多価の免疫学的組成物を容易に製剤化することができるであろう。また、本発明は、複合免疫化投与計画も企図し、ある病原体に対して有用な任意の組成物を、本発明の組成物の中にかまたは本発明の組成物と組み合わせることができる。例えば、非限定的に、患者は、本発明の免疫原性組成物、および複合免疫化投与計画の一部としての、ヒトパピローマウイルスウイルスHPVに対して免疫化するための別の免疫学的組成物、例として、HPVワクチンGARDASIL登録商標の投与を受けることができる。当業者であれば、複合免疫化投与計画を開発および実行する目的で、本発明の免疫原性組成物と併せて使用するための免疫原性組成物を容易に選択することができるであろう。ORF2086ポリペプチド、断片および同等物を、コンジュゲート免疫原性組成物の一部として使用することができ、いくつかの血清型および/またはいくつかの疾患に対して免疫原性の特性を有する組成物を生成するために、1つまたは複数のタンパク質またはポリペプチドを担体にコンジュゲートさせる。あるいは、ORF2086ポリペプチドのうちの1つを、その他の免疫原性ポリペプチドのための担体タンパク質として使用することができる。そのような免疫原性組成物の製剤化は、当業者に周知である。本発明の免疫原性組成物は、好ましくは、薬学的に許容できる担体を含む。適切な薬学的に許容できる担体および/または希釈剤は、あらゆる従来の溶媒、分散媒体、充填剤、固体の担体、水溶液、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤等を含む。適切な薬学的に許容できる担体は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝溶液、デキストロース、グリセロール、エタノール等のうちの1つまたは複数、およびそれらの組合せを含む。薬学的に許容できる担体は、少量の補助物質、例として、湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤、または緩衝剤をさらに含むこともでき、これらは、抗体の有効期間または有効性を増強する。薬学的に許容できる担体の調製および使用は、当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または作用物質が活性成分と不和合性でない限り、本発明の免疫原性組成物中でのそれらの使用が企図される。免疫原性組成物は、例えば、皮下注射または筋肉内注射のいずれかにより非経口投与してもよく、経口によりまたは鼻腔内に投与してもよい。筋肉内免疫化ための方法は、Wolffら、Biotechniques;114:474~851991およびSedegahら、PNAS91巻、pp.9866~98701994により記載されている。その他の投与様式は、例えば、非限定的に、経口製剤、肺用製剤、坐剤および経皮適用を用いる。経口製剤は、例えば、非限定的に、例えば、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等のような通常用いられる賦形剤を含む。好ましくは、免疫原性組成物は、筋肉内投与する。本発明の免疫原性組成物は、1つまたは複数のアジュバントを含むことができる。例示的なアジュバントとして、これらに限定されないが、水酸化アルミニウム;リン酸アルミニウム;STIMULON商標QS-21AquilaBiopharmaceuticals,Inc.、Framingham、Mass.;MPL商標3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドA;Corixa、Hamilton、Mont.、529アミノアルキルグルコサミンホスフェート化合物、Corixa、Hamilton、Mont.、IL-12GeneticsInstitute、Cambridge、Mass.;GM-CSFImmunexCorp.、Seattle、Wash.;N-アセチル-ムラミル-L-スレオニル-D-イソグルタミンthr-MDP;N-アセチル-ノル-ムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミンCGP11637、nor-MDPと呼ばれる;N-アセチルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミニル-L-アラニン-2-1’-2’-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリルオキシ-エチルアミンCGP19835A、MTP-PEと呼ばれる;およびコレラ毒素が挙げられる。特定の好ましい実施形態では、アジュバントはQS-21である。さらなる例示的なアジュバントとして、Aサブユニットを含めた、コレラ毒素の無毒性の誘導体、および/あるいはナイセリアメニンギティディスN.meningitidisポリペプチドと、コレラ毒素もしくはそのBサブユニットCTBとのコンジュゲートもしくは遺伝子工学的に作製した融合体、プロコレラゲノイドprocholeragenoid、シゾフィランを含めた、真菌の多糖体、ムラミルジペプチド、ムラミルジペプチドMDP誘導体、ホルボールエステル、大腸菌E.coliの熱不安定毒素、ブロックポリマー、またはサポニンが挙げられる。リン酸アルミニウムは、アジュバントとして、第一相臨床治験において、0.125mg/用量の濃度まで使用されており、この濃度は、米国連邦規制基準[610.15a]が特定する限度の0.85mg/用量よりもはるかに低い。アルミニウム含有アジュバントは、筋肉内または皮下投与の場合、抗原の免疫応答を強化するために、ヒトにおいて広く使用されている。特定の好ましい実施形態では、本発明のタンパク質を、粘膜アジュバントを含む経口投与のための免疫原性組成物中で使用し、ヒト宿主においてナイセリアメニンギティディスN.meningitidis感染を治療または予防するために使用する。粘膜アジュバントは、コレラ毒素であってよい;しかし、好ましくは、本発明に従って使用することができるコレラ毒素以外の粘膜アジュバントとして、Aサブユニットを突然変異させたコレラホロ毒素の無毒性の誘導体、化学的に改変したコレラ毒素、またはコレラ毒素のアミノ酸配列の改変により産生させた関連のタンパク質が挙げられる。本発明の免疫原性組成物を調製するのに特に有用であり得る特定のコレラ毒素については、その全体が参照により本明細書に組み込まれている国際出願公開WO00/18434に開示されている突然変異体のコレラホロ毒素E29Hを参照されたい。これらを、本発明のポリペプチドに添加するかまたは本発明のポリペプチドとコンジュゲートさせることができる。同じ技法を、粘膜アジュバント特性または送達特性を有するその他の分子、例として、大腸菌Escherichiacoliの熱不安定毒素LTに適用することができる。粘膜アジュバント活性または送達活性を有するその他の化合物、例として、胆汁;ポリカチオン、例として、DEAE-デキストランおよびポリオルニチン;界面活性剤、例として、ドデシルベンゼン硫酸ナトリウム;脂質コンジュゲート物質;抗生物質、例として、ストレプトマイシン;ビタミンA;ならびに粘膜表面の構造的または機能的な完全性を変化させるその他の化合物を使用することができる。その他の粘膜活性を示す化合物は、微生物構造の誘導体、例として、MDP;アクリジンおよびシメチジンを含む。また、上記したSTIMULON商標QS-21、MPLおよびIL-12も使用することができる。本発明の免疫原性組成物は、ISCOM免疫賦活複合体、CTBを含有するISCOM、リポソームの形態で送達するか、または吸着に適したサイズのマイクロスフェアを形成するために、アクリレートまたはポリDL-ラクチド-co-グリコシド等の化合物中に被包することができる。また、本発明のタンパク質は、油性乳剤中に組み込むこともできる。患者に投与する免疫原性組成物の量すなわち、用量を、特定の抗原、存在する場合にはアジュバント、特定の患者の年齢、性別、体重、種、状態、および投与経路等の要因を考慮に入れて、当業者に公知の標準的な技法に従って決定することができる。例えば、思春期のヒト患者のための投与量は、少なくとも0.1μg、1μg、10μgまたは50μgのナイセリアORF2086タンパク質を含み、最大80μg、100μg、150μgまたは200μgのナイセリアORF2086タンパク質を含むことができる。任意の最小値と任意の最大値とを組み合わせて、適切な範囲を定義することができる。invitroにおける効力アッセイ免疫原性組成物中のサブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質中の機能性エピトープを、立体構造に特異的なモノクローナル抗体を使用して、rLP2086基準物質と比べて定量化することによって、効力を決定する。invivoにおいて免疫応答を惹起して、殺菌性抗体を生成させることになるサブファミリーAまたはサブファミリーBのrLP2086タンパク質中の機能性エピトープを定量的に測定することによって、効力を決定する。選択したモノクローナル抗体mAbを用いる効力アッセイに定量化技術を使用する。立体構造性であり、オーバーラップしない2つの機能性モノクローナル抗体を、免疫原性組成物中の各サブファミリーのrLP2086タンパク質について選択する。2つの精製モノクローナル抗体のうち、第1の抗体を、第1のタグにコンジュゲートさせ、第1のタグを使用して、rLP2086タンパク質分子を捕捉する。いくつかの実施形態では、第1のタグは、ビオチン、グルタチオン-SトランスフェラーゼGST、6×Hisタグ、またはビーズ例えば、カルボキシル化ポリスチレンビーズもしくは常磁性ビーズである。いくつかの実施形態では、第1のタグを、ストレプトアビジンビーズ、ストレプトアビジンカラム、ニッケルビーズ、ニッケルカラム、遠心分離を用いて、または磁場を用いて捕捉する。第2の抗体を、第2のタグにコンジュゲートさせ、第2のタグは定量化可能である。いくつかの実施形態では、第2のタグは、ビオチン、西洋ワサビペルオキシダーゼHRP、蛍光体または放射標識である。いくつかの実施形態では、第2のタグを、蛍光体またはHRPにコンジュゲートさせたストレプトアビジンを用いて、電気化学発光、蛍光検出または放射活性検出によって検出する。各免疫原性組成物中の2つのmAbにより認識される両方のエピトープを示すタンパク質のみが測定されることになる。タンパク質のいずれか一方または両方のエピトープの変化が反映されることになる。試料の効力を、基準物質の効力と比べて報告する。いくつかの実施形態では、本発明は、2086タンパク質の効力を決定するための方法を包含する。いくつかの実施形態では、この方法は、1第1のモノクローナルAbおよび第2のmAbを、2086タンパク質を含む免疫原性組成物と共にインキュベートするステップであって、第1のmAbがmAbを捕捉するために使用する第1のタグにコンジュゲートしており、第2のmAbが検出可能である第2のタグにコンジュゲートしており、第1および第2のmAbは、2086基準タンパク質上の異なる立体構造エピトープを標的とするステップと、2第1のmAbに結合している2086タンパク質を、第1のタグを使用して捕捉するステップと、3第2のタグを使用して捕捉した第2のmAbに結合している2086タンパク質を検出し、その量を定量化するステップとを含む。いくつかの実施形態では、2086タンパク質は、サブファミリーAタンパク質である。いくつかの実施形態では、2086タンパク質は、サブファミリーBタンパク質である。いくつかの実施形態では、2086タンパク質は、脂質が付加されている。いくつかの実施形態では、2086タンパク質は、脂質が付加されていない。いくつかの実施形態では、2086タンパク質は組換えである。いくつかの実施形態では、第1のタグは、ビオチン、6×Hisタグ、またはビーズ例えば、カルボキシル化ポリスチレンビーズもしくは常磁性ビーズである。いくつかの実施形態では、第1のタグを、ストレプトアビジンビーズ、ストレプトアビジンカラム、グルタチオンビーズ、グルタチオンカラム、ニッケルビーズ、ニッケルカラム、遠心分離を用いて、または磁場を用いて捕捉する。いくつかの実施形態では、第2のタグは、ビオチン、HRP、蛍光体または放射標識である。いくつかの実施形態では、第2のタグを、蛍光体またはHRPにコンジュゲートさせたストレプトアビジンを用いて、電気化学発光、蛍光検出または放射活性検出によって検出する。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、複数の2086タンパク質変異体を含む。rLP2086サブファミリーB抗原の効力の安定性いくつかの実施形態では、本発明は、rLP2086サブファミリーB抗原を経時的に安定化させる免疫原性組成物を提供し、この免疫原性組成物は、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を有する緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5~約10の間である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1~約5の間である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1.4~約4.2の間である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9、約4.0、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4、約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5、約7.0、約7.5、約8.0、約8.5、約9.0、約9.5または約10である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート80である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、多価カチオンをさらに含む。いくつかの実施形態では、多価カチオンは、カルシウムまたはアルミニウムである。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、AlPO4、AlOH3、Al2SO43およびミョウバンのうちの1つまたは複数として存在する。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、約0.1mg/mL~約1mg/mLの間、約0.25mg/mL~約0.75mg/mLの間、または約0.4mg/mL~約0.6mg/mLの間のアルミニウムを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、約0.1mg/mL、約0.15mg/mL;約0.2mg/mL、約0.25mg/mL、約0.3mg/mL、約0.35mg/mL、約0.4mg/mL、約0.45mg/mL、約0.5mg/mL、約0.55mg/mL、約0.6mg/mL、約0.65mg/mL、約0.7mg/mL、約0.75mg/mL、約0.8mg/mL、約0.85mg/mL、0.9mg/mL、約0.95mg/mLまたは約1mg/mLのアルミニウムを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99または100のアルミニウムとタンパク質の結合がある。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、ヒスチジンを含む緩衝液をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM~約20mMの間、約5mM~約15mMの間、または約8mM~12mMの間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、コハク酸塩を含む緩衝液をさらに含む。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM~約20mMの間、約2mM~約10mMの間、または約3mM~7mMの間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物のpHは、約5.0~約8.0の間、約5.5~約7.0の間、または約5.8~約6.0の間のpHを有する。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物のpHは、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4または約6.5のpHを有する。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーBタンパク質抗原の免疫原性組成物の製剤は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ10mMヒスチジン緩衝溶液、pH6.0である。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーBタンパク質抗原の免疫原性組成物の製剤は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ5mMコハク酸緩衝溶液、pH6.0である。いくつかの実施形態では、本発明は、rLP2086サブファミリーB抗原を経時的に安定化させる方法を提供し、この方法は、抗原を、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を有する緩衝液中に保存するステップを含む。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5~約10の間である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1~約5の間である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1.4~約4.2の間である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9、約4.0、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4、約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5、約7.0、約7.5、約8.0、約8.5、約9.0、約9.5または約10である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート-80である。いくつかの実施形態では、緩衝液は、多価カチオンをさらに含む。いくつかの実施形態では、多価カチオンは、カルシウムまたはアルミニウムである。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、AlPO4、AlOH3、Al2SO43およびミョウバンのうちの1つまたは複数として存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液中の安定化剤は、約0.1mg/mL~約1mg/mLの間、約0.25mg/mL~約0.75mg/mLの間、または約0.4mg/mL~約0.6mg/mLの間のアルミニウムである。いくつかの実施形態では、緩衝液中の安定化剤は、約0.1mg/mL、約0.15mg/mL;約0.2mg/mL、約0.25mg/mL、約0.3mg/mL、約0.35mg/mL、約0.4mg/mL、約0.45mg/mL、約0.5mg/mL、約0.55mg/mL、約0.6mg/mL、約0.65mg/mL、約0.7mg/mL、約0.75mg/mL、約0.8mg/mL、約0.85mg/mL、0.9mg/mL、約0.95mg/mLまたは約1mg/mLのアルミニウムである。いくつかの実施形態では、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99または100のアルミニウムとタンパク質の結合がある。いくつかの実施形態では、緩衝液は、ヒスチジンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM~約20mMの間、約5mM~約15mMの間、または約8mM~12mMの間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、コハク酸塩をさらに含む。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM~約20mMの間、約2mM~約10mMの間、または約3mM~7mMの間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約5.0~約8.0の間、約5.5~約7.0の間、または約5.8~約6.0の間のpHを有する。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4または約6.5のpHを有する。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーBタンパク質抗原を保存する緩衝液は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ10mMヒスチジン緩衝溶液、pH6.0である。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーBタンパク質抗原を保存する緩衝液は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ5mMコハク酸緩衝溶液、pH6.0である。rLP2086サブファミリーA抗原およびB抗原の効力の安定性いくつかの実施形態では、本発明は、rLP2086サブファミリーA抗原および/またはrLP2086サブファミリーB抗原を経時的に安定化させる免疫原性組成物を提供し、この免疫原性組成物は、安定化剤の高い濃度を有し、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を有する緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5~約10の間である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1~約5の間である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1.4~約4.2の間である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9、約4.0、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4、約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5、約7.0、約7.5、約8.0、約8.5、約9.0、約9.5または約10である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート80である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、多価カチオンをさらに含む。いくつかの実施形態では、多価カチオンは、カルシウムまたはアルミニウムである。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、AlPO4、AlOH3、Al2SO43およびミョウバンのうちの1つまたは複数として存在する。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、約0.1mg/mL~約1mg/mLの間、約0.25mg/mL~約0.75mg/mLの間、または約0.4mg/mL~約0.6mg/mLの間のアルミニウムを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、約0.1mg/mL、約0.15mg/mL;約0.2mg/mL、約0.25mg/mL、約0.3mg/mL、約0.35mg/mL、約0.4mg/mL、約0.45mg/mL、約0.5mg/mL、約0.55mg/mL、約0.6mg/mL、約0.65mg/mL、約0.7mg/mL、約0.75mg/mL、約0.8mg/mL、約0.85mg/mL、0.9mg/mL、約0.95mg/mLまたは約1mg/mLのアルミニウムを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99または100のアルミニウムとタンパク質の結合がある。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、ヒスチジンを含む緩衝液をさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM~約20mMの間、約5mM~約15mMの間、または約8mM~12mMの間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、コハク酸塩を含む緩衝液をさらに含む。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM~約20mMの間、約2mM~約10mMの間、または約3mM~7mMの間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、約5.0~約8.0の間、約5.5~約7.0の間、または約5.8~約6.0の間のpHを有する。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4または約6.5のpHを有する。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーAおよびBのタンパク質抗原の製剤は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ10mMヒスチジン緩衝溶液、pH6.0である。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーBタンパク質抗原の免疫原性組成物の製剤は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ5mMコハク酸緩衝溶液、pH6.0である。いくつかの実施形態では、本発明は、rLP2086サブファミリーA抗原および/またはrLP2086サブファミリーB抗原を経時的に安定化させる方法を提供し、この方法は、抗原を、安定化剤の高い濃度を有し、界面活性剤対タンパク質の低いモル比を有する緩衝液中に保存するステップを含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤対タンパク質のモル比は、10:1未満である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5~約10の間である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1~約5の間である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約1.4~約4.2の間である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の界面活性剤対タンパク質のモル比は、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、約3.0、約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9、約4.0、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4、約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.9、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5、約7.0、約7.5、約8.0、約8.5、約9.0、約9.5または約10である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート界面活性剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート80である。いくつかの実施形態では、緩衝液中の安定化剤は、多価カチオンである。いくつかの実施形態では、多価カチオンは、カルシウムまたはアルミニウムである。いくつかの実施形態では、アルミニウムは、AlPO4、AlOH3、Al2SO43およびミョウバンのうちの1つまたは複数として存在する。いくつかの実施形態では、緩衝液中の安定化剤は、約0.1mg/mL~約1mg/mLの間、約0.25mg/mL~約0.75mg/mLの間、または約0.4mg/mL~約0.6mg/mLの間のアルミニウムである。いくつかの実施形態では、緩衝液中の安定化剤は、約0.1mg/mL、約0.15mg/mL;約0.2mg/mL、約0.25mg/mL、約0.3mg/mL、約0.35mg/mL、約0.4mg/mL、約0.45mg/mL、約0.5mg/mL、約0.55mg/mL、約0.6mg/mL、約0.65mg/mL、約0.7mg/mL、約0.75mg/mL、約0.8mg/mL、約0.85mg/mL、0.9mg/mL、約0.95mg/mLまたは約1mg/mLのアルミニウムである。いくつかの実施形態では、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99または100のアルミニウムとタンパク質の結合がある。いくつかの実施形態では、緩衝液は、ヒスチジンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM~約20mMの間、約5mM~約15mMの間、または約8mM~12mMの間である。いくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、コハク酸塩をさらに含む。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM~約20mMの間、約2mM~約10mMの間、または約3mM~7mMの間である。いくつかの実施形態では、コハク酸塩の濃度は、約2mM、約3mM、約4mM、約5mM、約6mM、約7mM、約8mM、約9mM、約10mM、約11mM、約12mM、約13mM、約14mM、約15mM、約16mM、約17mM、約18mM、約19mMまたは約20mMである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約5.0~約8.0の間、約5.5~約7.0の間、または約5.8~約6.0の間のpHを有する。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4または約6.5のpHを有する。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーAおよびBのタンパク質抗原を保存する緩衝液は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ10mMヒスチジン緩衝溶液、pH6.0である。いくつかの実施形態では、MnBrLP2086サブファミリーAおよびBのタンパク質抗原を保存する緩衝液は、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウムを含有し、2.8のポリソルベート80:タンパク質のモル比をもつ5mMコハク酸緩衝溶液、pH6.0である。本発明がより良好に理解され得るために、以下の実施例を記載する。実施例は例示のためのものに過ぎず、実施例により本発明の範囲が限定されると解釈してはならない。本明細書に引用する参考文献は全て、参照により本明細書に組み込まれている。実施例1実験手順アルミニウムの結合の決定アルミニウムおよび少なくとも1つのタンパク質抗原を含む組成物を遠心分離し、その結果、アルミニウムがペレット化された。アルミニウム吸収タンパク質の遠心分離は、当技術分野で公知である。例えば、Eganら、Vaccine、27巻24:3175~31802009を参照されたい。また、アルミニウム結合型のタンパク質もペレット化され、一方、アルミニウム非結合型のタンパク質は、上清中に残留した。上清およびペレット中の総タンパク質を、ローリーアッセイにより決定した。上清中の総タンパク質を、組成物に添加した総タンパク質で割り、100を乗じることによって、パーセント結合型タンパク質を計算した。同様に、パーセント非結合型タンパク質を、上清中の総タンパク質を、組成物に添加した総タンパク質で割り、100を乗じることによって計算した。サブファミリーA抗原およびサブファミリーB抗原の両方を含む組成物については、上清中のサブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質の個々の濃度を、イオン交換クロマトグラフィーにより決定した。サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質の分離および溶出を、強力なアニオンカラムおよび高い塩濃度の溶出液を使用して実施した。サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質の両方を、励起=280runおよび放射=310runに設定した蛍光検出器を使用して検出および定量化した。サブファミリーAタンパク質とサブファミリーBタンパク質とは、明確に異なる保持時間で溶出し、rLP2086タンパク質基準物質に対して得た検量線を使用して定量化した。パーセント非結合型タンパク質は、上清中の総タンパク質を、組成物に添加した総タンパク質で割り、100を乗じることによって計算した。パーセント結合型タンパク質は、100からパーセント非結合型タンパク質を減じることによって計算した。invitroにおける効力アッセイrLP2086の効力アッセイは、rLP2086薬物物質の単一のタンパク質分子上の、立体構造性であり、オーバーラップしないエピトープを認識する2つの機能性モノクローナル抗体に依存する均一な捕捉アッセイまたはサンドイッチアッセイである。一方の精製モノクローナル抗体は、捕捉抗体mAbとして働き、特有の色でコードされた識別子を有するカルボキシル化ポリスチレンビーズに化学的にコンジュゲートしている。第2の抗体は、ビオチン化されており、検出抗体として働き、続いて、この抗体に、蛍光体R-フィコエリトリンにコンジュゲートしているストレプトアビジンSA-PEが結合する。Bio-Plex検出装置の流体素子が、個々のマイクロスフェアおよびそれらに伴うSA-PEシグナルを定量化する。マイクロスフェアを伴うR-フィコエリトリンからの蛍光シグナルは、ビーズコンジュゲート抗体、抗原および検出抗体の間で三成分複合体が形成されることによってのみ検出されることになり、rLP2086試料中の機能性エピトープの数に比例することになる。一方または両方のエピトープが変化すると、基準標準物質に比して蛍光の喪失が生じ、このことは、効力の喪失を示すことになる。試薬モノクローナル抗体コンジュゲートマイクロスフェアLuminexMicroPlexMicrosphereのビーズ領域12番またはビーズ領域66番にコンジュゲートしている。ビオチン化モノクローナル抗体。rLP2086基準物質、サブファミリーAおよびB、2mg/ml。-70°Cで保存。rLP2086サブファミリーAおよびBの二価の対照ストレプトアビジン、R-フィコエリトリンにコンジュゲート、凍結乾燥緩衝液10mMヒスチジン、150mMNaCl、pH6.00.85w/v生理食塩水中の5w/vポリソルベート80PS-80。マトリックス緩衝液10mMヒスチジン、0.02ポリソルベート80、150mMNaCl、pH6.0。アッセイ用緩衝液0.1BSA、0.02ポリソルベート80、0.1アジドを有するPBS、pH7.4。100×ストレプトアビジン、R-フィコエリトリンコンジュゲートSA-PE-凍結乾燥ストレプトアビジン、R-フィコエリトリンのバイアルを開け、1mLの蒸留水を添加する。完全に溶解するまでボルテックスした。手順200μLのサブファミリーAタンパク質および200μLのサブファミリーBタンパク質を、600μLのマトリックス緩衝液に添加して、各サブファミリーの400μg/mlの濃度を得た。8つの濃度3333~1.5ng/mLの検量線を、ストック溶液をアッセイ用緩衝液中に希釈することによって得た。200μLの二価の対照を、800μLのマトリックス緩衝液に添加して、各サブファミリーの400μg/mLの濃度を得た。100、50および12.5ng/mLの作業濃度を作製するために、400μg/mLのストックをアッセイ用緩衝液中で希釈した。100および12.5ng/mLはそれぞれ、高い対照および低い対照、すなわち、CHおよびCLを表した。試験試料を、マトリックス緩衝液中で400μg/mLの濃度に希釈した。100、50および12.5ng/mLの作業溶液を、400μg/mLのストックから調製した。アッセイ用緩衝液中の2×105ビーズ/mLのコンジュゲートビーズ濃度および30μg/mLの検出抗体濃度を使用した均質アッセイ用混合物を調製した。0.4mLの標準物質、対照、試料またはブランクを、2mLの96ウェルの深いウェルプレートに添加することによって、試料プレートを調製した。96ウェルのMultiScreenHTS-BVフィルタープレートのフィルターを、100μLのアッセイ用緩衝液を添加することによってあらかじめ湿潤させ、次いで、この緩衝液を、真空吸引vacuumsuctionにより、フィルターを通して吸引した。25μLの調製した均質アッセイ用混合物を、96ウェルのプレートに添加した。標準物質、対照、試料またはブランク溶液それぞれの25μLを、96ウェルのフィルタープレートの各ウェルに添加した。プレートを、室温で振とうしながら1時間インキュベートした。抗原と抗体とのインキュベーションの後に、緩衝液を、真空吸引vacuumaspirationにより、フィルターを通して除去した。各ウェルのフィルターを、100μLのアッセイ用緩衝液を用いて3回洗浄し、続いて、真空吸引vacuumaspirationした。最終の洗浄の後、50μLの1×SA-PEを各ウェルに添加した。暗所において、タイター上で、室温で振とうしながら10分間プレートをインキュベートした。SA-PEとのインキュベーションの後に、75μLのアッセイ用緩衝液をプレートの各ウェルに添加して、125μLの総体積を得た。プレートを、Bio-Plex200System上で直ちに読み取った。血清殺菌力アッセイCharlesRiverCanadaSt.Constant、QC、カナダから得たNewZealandWhiteウサギ、雌、2.5~3.0kgを全細胞ELISAによりあらかじめスクリーニングして、2つの異なる髄膜炎菌株それぞれのP2086サブファミリーから1つに対して低い反応性を示すウサギを同定した。これらのウサギは一般に、非常に低いバックグラウンドを有し、最も低い値を示すウサギを選択して、使用した。ウサギに、一価のrLP2086-A05ワクチン、一価のrLP2086-B01ワクチンまたは二価のrLP2086-A05B01ワクチンのいずれかを用いて、0、4および9週目に筋肉内にワクチン接種した。それぞれの用量は、一価のワクチンについては100μgのタンパク質および二価のワクチンについては100μgの各タンパク質を含有し、10mMヒスチジン緩衝液、pH6.0、150mMNaCl、0.02ポリソルベート80および250μgのAlPO4中に製剤化した。ワクチンを、右後ろ足中に筋肉内注射した0.5ml/投与。対照として、ウサギの1つの群に、製剤用緩衝液単独を用いてワクチン接種した。免疫前0週目の血清試料および免疫された10週目血清試料を得て、解析した。動物プロトコールは全て、確立されたInstitutionalAnimalCareandUseCommitteeの指針に忠実に従った。rLP2086ワクチンを用いて免疫化したウサギ中の血清殺菌性抗体を、ヒト補体を用いるSBAを使用して決定した。ウサギ免疫血清を、内因性の補体活性を除去するために熱不活性化し、続いて、96ウェルのマイクロタイタープレート中のCa2およびMg2を有するダルベッコPBSD-PBS中で1:2に段階希釈して、ナイセリアメニンギティディスN.meningitidis株に対する血清殺菌活性について試験した。アッセイに使用する細菌は、ケロッグの補充物質を補充したGC培地GCK中で増殖させ、650nmにおける光学密度によりモニターした。細菌は、アッセイにおいて使用するために、0.50~0.55の最終的なOD650で採取し、D-PBS中に希釈し、1000~3000CFUを、20ヒト補体と共にアッセイ混合物に添加した。検出可能な殺菌活性を示さないヒト血清を、外来の補体供給源として使用した。補体供給源を、それぞれの個々の試験株に対する適切性について試験した。補体供給源は、免疫血清が添加されていない対照中で生存する細菌の数が>75である場合のみに使用した。この研究に記載するSBAを実施するには、10種の特有の補体供給源が必要であった。5CO2下、37°Cにおける30分間のインキュベーションの後、D-PBSを、反応混合物に添加し、一定分量を、50GCK培地を充填したマイクロフィルタープレートに移した。マイクロフィルタープレートをろ過し、5CO2下、37°Cで一晩インキュベートし、マイクロコロニーを染色し、定量化した。血清殺菌力価を、免疫血清を有さない対照ウェル中のCFUと比較して、CFUの50の低下をもたらす補間した血清希釈度の逆数と定義した。SBA力価を、37°Cにおける30分間のインキュベーションの後に細菌数の50の低下を引き起こす補間した試験血清の希釈度の逆数と定義する。P2086免疫血清について、対応する免疫前血清と比較してSBA力価の4倍以上の上昇がある場合に、P2086免疫血清による死滅に対する感受性が確立された。検出限度は、ウサギ血清については、8の力価であった。アッセイ株に対して開始希釈度では陰性である血清には、アッセイについての検出限度の2分の1の力価すなわち、ウサギについては4を割り当てた。フローサイトメトリーMnB細胞を、0.45~0.55のOD650まで増殖させ、続いて、1×PBS中の1v/vパラホルムアルデヒド中に10分間固定した。100マイクロリットル/ウェルの細菌を、96ウェルのU底ポリスチレン製プレート中に蒔き、遠心沈殿させ、1×PBS中の1w/vBSA中で1回洗浄した。抗LP2086モノクローナル抗体を、細菌ペレットに添加し、再懸濁し、氷上で30分間インキュベートした。1BSA/PBS中での2回の洗浄の後、ビオチン化ヤギ抗マウスIgGサブクラス12a2b3JacksonImmunoresearchを、細胞ペレットに添加し、再懸濁し、氷上で30分間インキュベートした。細胞を、2回洗浄し、ストレプトアビジン-PEBDBiosciences中に再懸濁し、氷上で30分間インキュベートした。1BSA/PBS中での2回の洗浄の後、細胞ペレットを、1パラホルムアルデヒド中に再懸濁した。マウスIgGを、陰性対照として含めた。1ウェル当たり2万20,000個の事象を、BDLSRIIフローサイトメーター上で獲得し、FlowJov7ソフトウエアTreestar、Ashland、Oregonを使用して解析した。対数のFSC対SSCのドットプロット中で、細菌細胞に関するゲーティング後の各試料について、PEチャネルの平均蛍光強度MFIを決定した。MFIが、対照のマウスIgGのMFIの3倍である場合に、MFIを陽性とみなした。実施例2rLP2086タンパク質とポリソルベート80の結合rLP2086タンパク質AおよびBのそれぞれに結合しているポリソルベート80の安定性を理解するために、200μg/mLサブファミリーAをアルミニウムAlと共に用いて製剤化したrLP2086試料および200μg/mLサブファミリーBを用いて製剤化した別のrLP2086試料の両方を、2~8°Cおよび25°Cで保存し、それらのタンパク質およびポリソルベート80の含有量について5カ月後に試験した。また、プラセボタンパク質を有さない緩衝液Alについても解析した。プラセボ中のポリソルベート80の分布を、図14に示し、一方、サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質についてのポリソルベート80の分布をそれぞれ、図15および図16に示す。図17に示すように、サブファミリーBについての相対効力を、結合型モル比と比較した。結果図14に示すように、総ポリソルベート80と上清中のポリソルベート80とが同じであり0.017、このことは、ポリソルベート80は、アルミニウムに結合することも、ペレット中に捕捉されることもなかったことを示している。さらに、ポリソルベート80は、2~8°Cおよび25°Cの両方で5カ月後も安定であった。rLP2086サブファミリーA試料およびサブファミリーB試料の、結合型ペレット、非結合型上清および全体のポリソルベート80の分布をそれぞれ、図15および図16に示す。サブファミリーAについては、上清およびペレット中のポリソルベート80は、2~8°Cおよび25°C、5カ月目の時点においては変化がなかった。しかし、サブファミリーB試料については、25°C、5カ月目の時点において、ペレット中により多くのポリソルベート80が観察された。上清およびペレット中のポリソルベート80の2~8°Cと25°Cとにおける異なる濃度にもかかわらず、両方のサブファミリーについて、正確な質量バランスが達成された。このマトリックスでは、rLP2086タンパク質はリン酸アルミニウムに100結合するので、ペレットにおいて結び付いているポリソルベート80は、タンパク質分子に結合している可能性が最も高かった。タンパク質AおよびBの両方がポリソルベート80に結合したが、タンパク質Aの結合は、2~8°Cで保存した試料と25°Cで保存した試料とで同じであり、タンパク質Bの結合は、2~8°Cで保存した試料と比較して、25°Cで保存した試料ではほとんど2倍であった。サブファミリーBについての相対効力を、Toおよび5カ月目の時点において、2~8°Cおよび25°Cの両方で決定し、図17に記載するように、サブファミリーBの相対効力は、結合型モル比に反比例する挙動を示すことが見出された。効力は、T0時の120から、5M/25°Cにおいては16に低下し、一方、結合型モル比は、同じ期間中に、5.3から13.9に増加した。実施例3臨界モル比の研究rLP2086の安定性に必要なポリソルベート80の臨界濃度を決定するために、表1に記載するように、200μg/mLおよび400μg/mLのサブファミリーAのみ、サブファミリーBのみ、ならびにサブファミリーAおよびBの両方を、異なるポリソルベート80の濃度と共に含有する40個のrLP2086製剤を調製した。各試料について、総タンパク質および結合型タンパク質、ならびに全体、上清およびペレットのポリソルベート80を、時間ゼロT0、14日目および1カ月目において、2~8°Cおよび25°Cの両方で決定した。この研究から得られた結果を図18~図24に示す。結果上清、ペレットおよび全体のポリソルベート80の濃度を、リン酸アルミニウムを有するrLP2086製剤試料40個全てについて決定した。全体および結合型のモル比を、サブファミリーAおよびBの両方について決定したが、200μg/mLにおける0.005ポリソルベート805.4のモル比以下を含有する両方のサブファミリーについては、それぞれ図18および図19に示すように、全体のモル比と結合型モル比とが類似するように見える。しかし、0.0065ポリソルベート807.0のモル比以上を含有する試料については、サブファミリーBについての全体のモル比が、結合型モル比よりもはるかに高かった。また、図20に記載するように、各400μg/mLにおけるサブファミリーA、サブファミリーBおよびサブファミリーABについての全体のモル比と結合型モル比とについてのデータは、0.008ポリソルベート808.6のモル比以下を含有する製剤については同様に近かったが、0.017ポリソルベート8018.4のモル比を含有する製剤については、全体のモル比が結合型モル比よりもはるかに高かった。実施例4経時的なポリソルベート80の結合上清およびペレット中のパーセントポリソルベート80を、AlPO4を有するサブファミリーAおよびBの製剤試料について、T0、14日目/25°C、1カ月目/4°C、および1カ月目/25°Cにおいて決定した。サブファミリーAおよびBの製剤試料の両方について、上清中のポリソルベート80は、2~8°Cで保存した試料については比較的同じであった。しかし、上清中のポリソルベート80は、25°Cで保存した試料については、わずか14日後でさえ劇的に減少した。サブファミリーAおよびBの両方について、ペレット中のポリソルベート80は、T0/5°Cおよび1カ月目/5°Cにおいては比較的類似していた。しかし、上清中のポリソルベートは、25°Cで保存した試料、とりわけ、0.008ポリソルベート808.6のモル比以上を含有するサブファミリーBについては顕著に増加した。また、ポリソルベート80を、上清およびペレット中で、AlPO4を有するrLP2086サブファミリーAおよびBの製剤について、T0、14日目/25°C、1カ月目/4°C、および1カ月目/25°Cにおいて決定した。図21に示すように、ポリソルベート80の濃度は、0.008を含有する試料については、4つの時点全てについておよそ同じであった。しかし、ポリソルベート80の濃度は、25°Cで保存した、0.017ポリソルベート80を含有する試料については増加した。ポリソルベート80は、0.008以下のポリソルベート80を含有する試料の上清中には見出されなかった。図22に示すように、結合型モル比は、0.008以下のポリソルベート80を含有する試料については、4つの時点全てにおいて安定であった。しかし、結合型モル比は、25°Cで保存した、0.017ポリソルベート80を含有する試料については増加した。効力を、AlPO4を有するサブファミリーAおよびBの製剤試料について、T0および14日目/25°Cにおいて決定したそれぞれ、図23および図25。図23に記載するように、異なる全体のモル比におけるサブファミリーAについての効力は、5°Cおよび25°Cの両方において91~102の範囲に及んだ。また、結合型モル比の結果も、いずれの温度においても比較的同じであったが、全体のモル比/結合型モル比が増加するにつれて、効力の軽微な増加が見られた。5°Cの試料については、サブファミリーBについての効力は、9.0までの全体のモル比については約95であった。しかし、全体のモル比が18.1に増加すると、サブファミリーBの効力は79に減少した。さらに、18.1の全体のモル比を有する試料は、その他の試料と比較して、より高い結合型モル比を有した。25°Cにおいては、全体のモル比が、5.3から18.1まで増加するにつれて、サブファミリーBの効力は83から5への顕著な低下を示した。結合型モル比の値は、25°Cの試料については、全体のモル比が増加するにつれて、5.3から13.8まで増加した。したがって、サブファミリーBについての効力は、結合型モル比に反比例する。サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質の両方が、ポリソルベート80に結合した。サブファミリーAの結合は、2~8°Cで保存した試料と25°Cで保存した試料とで同じであったが、サブファミリーBの結合は、25°Cで保存した試料では、ほとんど2倍であった。さらに、臨界モル比の研究から、200μg/mLの製剤試料は、0.008以下のポリソルベート80を含有する場合に安定であることも示され、この濃度は、4.2以下の全体のモル比と同等である。実施例5界面活性剤濃度とrLP2086サブファミリーB抗原の効力ポリソルベート80の種々の濃度を伴う、さらなる安定性の研究により、効力を維持するためのポリソルベート80対タンパク質のモル比の臨界が裏付けられた。1つの実験では、免疫原性組成物を、200μgの投与量400μg/mLの総タンパク質濃度で、0.5mg/mLアルミニウムリン酸アルミニウムとしてを有し、0.01、0.02、0.05または0.1のポリソルベート805.3、10.7、26.7および53.4のポリソルベート80対rLP2086タンパク質の対応するモル比でスパイクした10mMヒスチジン緩衝溶液HBS中、pH6.3において製剤化した。製剤化した試料は、25°Cでインキュベートし、対照試料は、2~8°Cで保存した。時間0においては、0.1までのポリソルベート80の濃度では、効力の顕著な変化はなかった。しかし、より長い期間については、2~8°Cおよび25°Cにおいて、効力の低下が、温度およびポリソルベート80の濃度の関数として観察された。免疫原性組成物中のポリソルベート80の濃度を、0.01から0.1まで増加させると、安定性の3カ月目の時点で、25°Cおよび2~8°Cにおいてそれぞれ、サブファミリーBタンパク質の効力が10未満および25に低下することが示された図1。さらなる安定性の研究図2を実施し、サブファミリーBタンパク質を、HBS中の4mg/mLの濃度で評価し、0.06、0.5および1の最終濃度3.3、26.7および53.4の対応するモル比までポリソルベート80でスパイクした。対照は、0.09ポリソルベート80を含有した。0.06ポリソルベート803.3のモル比中のサブファミリーBタンパク質は安定であった。ポリソルベート80を、濃度を0.5および1それぞれ、26.7および53.4のモル比に増加させて含有させた同じ試料は不安定であった。400μg/mLの免疫原性組成物製剤については、サブファミリーBタンパク質の不安定性が、0.015.3のモル比以上の濃度のポリソルベート80を含有する製剤全てにおいて認められた。しかし、4mg/mLタンパク質と0.06ポリソルベート80との濃度においては、効力の低下はなかったが、これは、ポリソルベート80対タンパク質の比3.3が、400μg/mLタンパク質と0.01ポリソルベート80との濃度における比5.3のモル比よりも低いことによる。したがって、ポリソルベート80によるサブファミリーBタンパク質の効力の低下は、ポリソルベート80界面活性剤対タンパク質のモル比に相関し、マトリックス中のポリソルベート80の絶対濃度には相関しなかった。したがって、ワクチン中の、および続いて2~8°Cで保存する間のサブファミリーBタンパク質の安定性を維持するためには、ポリソルベート80の濃度を、免疫原性組成物中では低下させなければならない。20および200μgの投与量において、ポリソルベート80の種々のモル比0、1.1、2.7および5.3を伴う免疫原性組成物について28日間の加速安定性の研究を設計した図3および図4。二価のサブファミリーAとサブファミリーBとの製剤を、10mMヒスチジン緩衝溶液、pH6.0、リン酸アルミニウムとしての0.5mg/mLアルミニウム中に、ポリソルベート80の種々の濃度を伴って調製した。2~8°Cの対照群と併せて、試料を25°Cでインキュベートした。試料を効力について0、7、14および28日目に解析した。サブファミリーAタンパク質データは図示せずおよびサブファミリーBタンパク質の両方が、5.3未満のポリソルベート80対タンパク質のモル比をもつ群全てについて安定であった。80超の効力の値を、アッセイの変動性の範囲内にあるとみなす。5.3のモル比においては、サブファミリーBタンパク質の効力についての減少傾向を、25°Cの試料について観察した。包括的な研究により、ポリソルベート80対タンパク質の種々のモル比を伴って製剤化した全ての予測される臨床投与量20、60、120および200μgの投与量を、加速保存安定性条件下で評価して、ポリソルベート80対タンパク質のモル比の、MnBrLP2086タンパク質の安定性に対する作用を調査した。およそ1.4~10.7の範囲に及ぶポリソルベート80対タンパク質のモル比で製剤化した二価のMnBrLP2086免疫原性組成物を使用した。ポリソルベート80対タンパク質のモル比を1.4、2.4、3.4、3.9、4.3、4.7および10.7に増加させて製剤化した免疫原性組成物を生成するために、免疫原性組成物を製剤化する間に、さらなるポリソルベート80を必要としないように、ポリソルベート80を添加することによって、抗原を変動するモル比に対して調節した。この研究では、2セットの抗原のロットを使用した。一方のセットのサブファミリーAおよびBのロットは、1.4のポリソルベート80対タンパク質のモル比で生成し、他方は2.4に設定した。2.4のモル比を有するセットのタンパク質を使用して、さらなるポリソルベート80でスパイクすることによって、3.4、3.9、4.3および10.7のモル比を調節した。免疫原性組成物の最終的なマトリックスは、10mMヒスチジン、150mMNaCl、pH6.0、0.5mg/mLリン酸アルミニウムであり、上記で言及したポリソルベート80対タンパク質のモル比を有した。2~8°Cまたは25°Cにおける特定の期間にわたる保存の後、試験の24時間前に、ロッカーを用いて穏やかな混合を適用した。IEX-HPLCによる総タンパク質、効力、外観、上清画分の320nmにおける光学密度、およびpHを試験した。200および20μgの用量の効力の結果をそれぞれ、図5および図6に示す。効力アッセイは、研究で使用したその他の試験よりも感度がよかった。全体的に、サブファミリーA抗原またはサブファミリーB抗原のいずれについても、4.3以下のモル比を有する全ての投与量については、最初の時点と比較して、効力の顕著な低下は観察されなかった。25°Cで保存したサブファミリーBタンパク質については、4.7のモル比を有する製剤を、効力の軽微な低下に起因して限界であるとみなした。10.7のモル比の製剤については、サブファミリーB抗原についての効力の結果は、25°Cで保存した試料の場合、2~8°Cで保存した試料よりも顕著に低かった。実施例6アルミニウム濃度とrLP2086サブファミリーA抗原およびB抗原の効力いくつかの実験を実施して、サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質の両方の95超の結合を確保するのに最適なリン酸アルミニウムのレベルを決定した。最初の研究は、pH6.5における製剤化の最適化に焦点を合わせた。製剤を、サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質に由来するそれぞれのタンパク質の200μg/mLを標的投与量として、0.02ポリソルベート80および0.25mg/mLまたは0.5mg/mLのいずれかのアルミニウムリン酸アルミニウムとしてを有するpH6.5の10mMヒスチジン緩衝液中に調製した。サブファミリーBタンパク質は、サブファミリーAタンパク質よりも低い程度でリン酸アルミニウムに結合した図7。アルミニウム含有量を0.25mg/mLから0.5mg/mLに増加させると、サブファミリーBタンパク質の結合が、>80に増加した。タンパク質とアルミニウム懸濁液との間の結合機構が大部分はイオン性の相互作用であることから、懸濁液のpHが、結合に影響を及ぼす要因である。製剤のpHを、サブファミリーBタンパク質の90~95超の結合を確保するように最適化した。異なるロットの免疫原性組成物を用いた、Aタンパク質およびBタンパク質のそれぞれが200μg/mLであり、5.6~6.5の範囲に及ぶpHを有する複数の製剤について調べた図8。両方のタンパク質の90~95超の結合が、5.6~6.4の範囲に及ぶpHを有する製剤において生じた。製剤のpHを6.5以上に増加させると、サブファミリーBタンパク質の結合が顕著に低下した。サブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質の両方の90超の結合を確保するために推奨される標的pHは6.0である。また、pH、緩衝液、タンパク質およびポリソルベート80の濃度を変化させることによる製剤化の変数および/または限界下での製剤のロバスト性も評価した図9。サブファミリーAタンパク質の結合は、総タンパク質濃度が500μg/mL各タンパク質250μg/mLまでは、一貫して高かった≧95が、サブファミリーBタンパク質の結合は、タンパク質濃度およびpHに対してより感受性を示した。市販の製剤は、200μgの投与量で使用されるので、この実験から得られた結果により、0.5mg/mLリン酸アルミニウムを用いた6.0のpHにおける製剤化の推奨がさらに支持される。リン酸アルミニウムを有する製剤とリン酸アルミニウムを有さない製剤とを評価して、サブファミリーBタンパク質の安定性のために十分低いポリソルベート80の濃度で、リン酸アルミニウムを有さない安定な製剤を提供することの実現可能性を調査した。免疫原性組成物を、20および200μgの投与量で、0~5.3のモル比の範囲に及ぶポリソルベート80の濃度を有するヒスチジン緩衝溶液の緩衝液中に製剤化した。試料の半分を、パルスモード2秒間のオンおよび1秒間のオフ下で500rpmに設定したデジタル複数チューブ型ボルテックスミキサーを用いて、試験の前に24時間撹拌した。この条件を採用して、輸送条件の間の極度の振動を模倣するために、最終的な免疫原性組成物の出荷包装段階において典型的に実施されるISTA試験国際安全輸送協会をシミュレートした。撹拌すると、リン酸アルミニウムを有さない製剤は沈殿し、沈殿により最終的には、サブファミリーA抗原およびB抗原の両方の効力の喪失に至った。外観試験図10およびλ=320nmにおける吸光度の測定図11から、リン酸アルミニウムを有さない製剤を撹拌すると、凝集体および/または沈殿物が形成されることが示された。これらの試料の効力試験図12および図13から、試験した時点全てにおいて、サブファミリーAタンパク質およびBタンパク質の両方について、効力の顕著な喪失が示された。低い量のポリソルベート80を含有する製剤において、効力の喪失が最も著しかった。低い量のポリソルベート80は、サブファミリーBタンパク質の安定化を維持するのに必要であることから、安定性を保つには、製剤中にリン酸アルミニウムを含めることが必要である。rLP2086免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムと共に製剤化することができ、リン酸アルミニウムは、invitroにおける効力アッセイにより測定されるように効力の安定性を増強するように働くであろう。実施例7緩衝剤としてのコハク酸塩およびヒスチジン一連の製剤を調製して、コハク酸塩中とヒスチジン中とで、rLP2086サブファミリーAタンパク質およびBタンパク質の結合、ならびにpH、ポリソルベート80およびMgCl2の結合に対する作用を比較した表2。pH、緩衝液、タンパク質およびポリソルベートの濃度を変化させることによる製剤化の変数および/または限界下での製剤のロバスト性を評価した図25および26。アルミニウムとサブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質の結合は、使用した緩衝液ヒスチジンまたはコハク酸にかかわらず類似していた。緩衝塩および混合時間の、アルミニウムの結合に対する作用を、3つの一般に使用されている緩衝塩を用いて評価し、これらの緩衝塩は、それらのpKaが生理的な範囲内にあり、これらの塩が一般に安全であるとみなされていることから選ばれた。rLP2086サブファミリーAタンパク質およびBタンパク質を、3つの緩衝塩、すなわち、5mMコハク酸塩、10mMヒスチジンまたは10mMリン酸塩のうちの1つと共に、それぞれの塩のpKaに適しているpHで製剤化して、それぞれの条件における結合の程度を決定した。結合が完了に達するのに必要な時間を、試料を5分または120分のいずれかの間混合させてから、結合したタンパク質の量を測定することによって評価した。図27に示すように、サブファミリーBタンパク質は、リン酸緩衝液中、pH6.8において結合の低下を示し、一方、サブファミリーAタンパク質は、同じ条件において顕著な影響は受けなかった。アルミニウムに結合したタンパク質の量は、ヒスチジンと共に製剤化した試料またはコハク酸塩と共に製剤化した試料で類似していた。したがって、これら2つの緩衝塩を選んで、さらに評価した。理論に縛られる意図はないが、リン酸緩衝液中の結合の低下は、AlPO4上の結合部位についての、添加されたリン酸イオンとの競合から生じる可能性がある。これらの条件、ならびにタンパク質およびAlPO4の濃度では、結合は、室温での5分間の混合の後に完了し、類似の結果が、2時間の混合の後にも得られた。リン酸緩衝液中、pH6.8におけるサブファミリーBタンパク質の結合の低下がpHまたは緩衝塩間の差に起因するかどうかをさらに調べるために、ヒスチジン緩衝製剤またはコハク酸緩衝製剤のいずれかの中で、5.3~7.0のpH範囲にわたり、結合を測定した。0.2mg/mLの各サブファミリータンパク質0.4mg/mLの総タンパク質、0.02PS80、0.5mgのAl/mLおよび150mMNaClを含有する二価の製剤を調製した。試料を10mMヒスチジンまたは5mMコハク酸塩のいずれかの中に製剤化して、緩衝塩の作用を比較した。製剤化の後、各試料のpHを個々に検証した。pH5.3~7.0の結合プロファイルを、サブファミリーAタンパク質については図28に、サブファミリーBタンパク質については図29に示す。サブファミリーAタンパク質は、結合したタンパク質の量の変化をほとんど示さず、試験したpH範囲にわたり、95超の結合を維持した。標的pHが7.0である、ヒスチジンを含有する製剤からは、6.8のpHが生じた。タンパク質またはAlPO4に対して起こり得る作用を回避するために、pHの7.0への例えば、塩基の添加による調節は行なわず、したがって、このデータポイントについての結果は利用できない。サブファミリーBタンパク質の結合プロファイル図29に示すは、pH依存性の傾向を示した。しかし、結合を、ヒスチジン緩衝製剤中で実施した場合であっても、コハク酸緩衝製剤中で実施した場合であっても、アルミニウムに結合したタンパク質の量は類似していた。結合は、緩衝塩ではなく、製剤のpHに依存した。結合は、pH6.5までは95ヒスチジン中では94、コハク酸塩中では95で維持されたが、pHが6.5超になると減少した。pH7.0では、結合が約82まで減少し、緩衝塩間で小さな差が生じた。これらの濃度におけるサブファミリーBタンパク質のAlPO4とのロバストな結合を得るためには、6.5以下のpHが好ましい。実施例8安全性、耐容性および免疫原性の研究0および2カ月目の投与;0、2および6カ月目の投与;0および2カ月目の投与、続いて、12カ月目の追加免疫の投与のいずれかの投与計画に従って、研究を実施して、健常な思春期の集団において、投与したrLP2086ワクチンの安全性、耐容性および免疫原性を評価した。免疫原性組成物は、rLP2086ワクチン脂質が付加されている組換え体である。免疫原性組成物は、大腸菌Escherichiacoli中に発現させたナイセリアメニンギティディスN.meningitidis血清群B組換えORF2086タンパク質を含み、rLP2086の1つのサブファミリーA株および1つのサブファミリーB株から構成される二価のワクチンとして製剤化されている。特に、免疫原性組成物は、それぞれ60μg、120μgまたは200μgの精製サブファミリーArLP2086タンパク質および精製サブファミリーBrLP2086タンパク質、2.8のモル比のポリソルベート80ならびにAlPO4として、0.25mgのAl3、pH6.0の10mMヒスチジン緩衝溶液を含有するように製剤化した0.5mL用量である。対照の組成物は、0.5mL用量中に、生理食塩水0.9塩化ナトリウムを含む。対象を、5群に無作為に帰属させる。表3を参照されたい。対象を、2つの年齢群、すなわち、≧11歳~<14歳、および≧14歳~<19歳に階層化する。生理食塩水を、プラセボとして使用するが、これは、活性な対照として働くことができる、安全で、免疫原性を示し、かつ有効な、実績のあるMnBに対するワクチンがないことによる。表3に従って、ワクチン接種の各来診例えば、来診1、2、4および6時に、対象は、1回用量のrLP2086ワクチンまたは生理食塩水の投与を受ける。標準的なワクチン接種の慣行を順守し、ワクチンは血管内には注射しない。rLP2086ワクチンを、上部三角筋内に0.5mLを注射することによって筋肉内投与する。生理食塩水を、上部三角筋内に筋肉内投与する。A.来診1来診1、1日目、ワクチン接種1の際に、対象は、最初に採血され、次いで、ワクチン接種を受ける。来診1の採血およびワクチン接種1は、同日に行う。ワクチン接種の前に、血液試料およそ20mLを、対象から収集する。群1、2、3および4に無作為化した対象については、rLP2086ワクチンの単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。群5の対象については、生理食塩水の単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。B.来診2来診1の42~70日後、ワクチン接種2群1、2および3については、rLP2086ワクチンの単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。群4および5については、生理食塩水の単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。C.来診3来診2の28~42日後、ワクチン接種2後の採血血液試料およそ20mLを、対象から収集する。D.来診4来診2の105~126日後、ワクチン接種3群2、4および5については、rLP2086ワクチンの単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。群1および3については、生理食塩水の単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。E.来診5来診4の28~42日後、ワクチン接種3後の採血血液試料およそ20mLを、対象から収集する。F.来診6来診4の161~175日後、ワクチン接種4来診6時に、対象は、最初に採血され、次いで、ワクチン接種を受ける。来診6の採血およびワクチン接種4は、同日に行う。ワクチン接種の前に、血液試料およそ20mLを、対象から収集する。群3および5については、rLP2086ワクチンの単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。群1、2および4の対象については、生理食塩水の単回の0.5mLの筋肉内注射を、上部三角筋内に投与する。G.来診7来診6の28~42日後、ワクチン接種4後の採血血液試料およそ20mLを、対象から収集する。免疫原性の結果この研究の主要な目標は、LP2086サブファミリーAタンパク質およびLP2086サブファミリーBタンパク質を発現するMnB株を用いて実施するSBAにより測定する場合の60μg、120μgおよび200μgのrLP2086ワクチンの免疫原性を評価することであった。この研究の副次的な目標は、rLP2086ワクチンのサブファミリーAタンパク質およびサブファミリーBタンパク質とIgの結合の定量化により決定する場合の60μg、120μgおよび200μgのrLP2086ワクチンの免疫原性を評価することであった。表4に示すように、SBA活性を、3つのサブファミリーA株および3つのサブファミリーB株を使用して評価した。規定したレベルに達する力価を示した対象の比率を、表5に示す。両方のサブファミリーについて、規定したSBA力価のレベルを達成した対象の比率は、投与2の後においてよりも、投与3の後においての方が多かった。免疫原性データから、ワクチンは、MnBのサブファミリーA株およびサブファミリーB株に対して顕著なSBA活性を有する抗体を生成することができることが示されている。サブファミリーA株2については、投与2の後、SBA応答率は、88.9~90.9の範囲に及び、投与3の後、SBA応答率は、90.0~97.4の範囲に及んだ。サブファミリーA株1の変異体については、投与2および投与3の両方の後、100.0の対象が、60μgおよび120μgの両方の用量レベルにおいて、この変異体に対するSBA応答を示した。200μgの用量レベルにおいては、投与2および投与3の後にそれぞれ、対象の96.5および99.0がSBA応答を示した。サブファミリーA株1の変異体については、SBA応答率は、投与2の後には85.0~96.3および投与3の後には95.2~97.4の範囲に及んだ。サブファミリーB株1の変異体については、投与2の後、SBA応答率は、76.2~81.0の範囲に及び、投与3の後、SBA応答率は、89.5~92.0の範囲に及んだ。サブファミリーB株2の変異体については、投与2の後、SBA応答率を有する対象のパーセントは、21.1~33.3の範囲に及んだ。しかし、第3の投与の後、60μg、120μgおよび200μgの用量レベルにおいてそれぞれ、対象の53.3、75.6および67.9がSBA応答を示した。サブファミリーB株3の変異体については、SBA応答率は、投与2の後には61.9~70.8および投与3の後には76.2~88.7の範囲に及んだ。全体的に、試験したのがサブファミリーA株であるかまたはサブファミリーB株であるかにかかわりなく、高い比率の対象が、≧LLOQのSBA力価で応答した。hSBAデータは、60μg~200μgの用量において、ロバストな免疫応答を示したが、明確な用量応答関係はなかった。応答の頻度は、調べた解析方法にかかわりなく、120μgの群の数値が最も高かった。200μgの群は、120μgの用量レベルを上回る免疫応答の改善を示さなかった。"