ヒプシンを含有するタンパク質を過剰発現し、対応する天然の藻類細胞によって産生される油の量と比べて増大した量の油を産生する遺伝子導入藻類細胞。真核生物翻訳開始因子5AeIF-5Aを過剰発現する、請求項1に記載の遺伝子導入藻類細胞。eIF-5Aは、配列番号3と少なくとも85の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項2に記載の遺伝子導入藻類細胞。プロモーターに作動可能に連結したeIF-5Aをコードする核酸を含む構築体を含む、請求項2に記載の遺伝子導入藻類細胞。プロモーターはサッカロミセスセレビシエ解糖系酵素プロモーターである、請求項4に記載の遺伝子導入藻類細胞。構築体は、配列番号1に記載の配列を有する核酸を含む、請求項4に記載の遺伝子導入藻類細胞。デオキシヒプシンシンターゼDHSを過剰発現する、請求項1に記載の遺伝子導入藻類細胞。DHSは、配列番号4と少なくとも85の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項7に記載の遺伝子導入藻類細胞。プロモーターに作動可能に連結したトマトDHSをコードする核酸を含む構築体を含む、請求項7に記載の遺伝子導入藻類細胞。プロモーターはサッカロミセスセレビシエ解糖系酵素プロモーターである、請求項9に記載の遺伝子導入藻類細胞。構築体は、配列番号2に記載の配列を有する核酸を含む、請求項9に記載の遺伝子導入藻類細胞。DHSをさらに過剰発現する、請求項2に記載の遺伝子導入藻類細胞。サッカロミセスセレビシエ解糖系酵素プロモーターに作動可能に連結したトマトDHSをコードする核酸を含む構築体をさらに含む、請求項4に記載の遺伝子導入藻類細胞。配列番号2に記載の配列を有する核酸を含む構築体をさらに含む、請求項6に記載の遺伝子導入藻類細胞。油を製造する方法であって、バイオリアクター中、油を産生する条件下で、かつ油を産生するのに十分な時間、請求項1に記載の遺伝子導入藻類細胞を増殖させるステップと、遺伝子導入藻類細胞から油を回収するステップと、を含む方法。バイオディーゼル燃料を製造する方法であって、バイオリアクター中、油を産生する条件下で、かつ油を産生するのに十分な時間、請求項1に記載の遺伝子導入藻類細胞を増殖させるステップと、遺伝子導入藻類細胞から油を回収するステップと、回収した油をバイオディーゼル燃料に加工するステップと、を含む方法。対応する天然の藻類細胞によって産生される油の量と比べて増大した量の油を産生する遺伝子導入藻類細胞を作製する方法であって、プロモーターに作動可能に連結したeIF-5Aをコードする核酸を含むeIF-5A構築体を得るステップと、構築体を用いて藻類細胞を形質転換するステップと、藻類細胞の増殖が可能な条件下で、かつ藻類細胞が増殖するのに十分な時間、形質転換された藻類細胞を培養するステップと、藻類細胞を回収するステップと、を含む方法。藻類細胞を形質転換するステップの前に、プロモーターに作動可能に連結したDHSをコードする核酸を含むDHS構築体を得るステップと、DHS構築体及びeIF-5A構築体の両方を用いて藻類細胞を形質転換するステップと、をさらに含む、請求項17に記載の方法。実施例1遺伝子導入藻類:藻類培養:0032セネデスムスアクタスS.a.及びクロレラブルガリスC.v.細胞を、植物増殖用インキュベーター内、100×10mmペトリ皿中、凝固BBM培地Stein1973編HandbookofPhycologicalmethods.Culturemethodsandgrowthmeasurements.CambridgeUniversityPress上で、16h明100μmolm-2s-1光合成有効放射/8時間暗期を用いて21°Cで増殖させ、かつ維持した。遺伝子導入株を、植物増殖チャンバー内で、液体BBM培地を含む25mmガラス製試験管中、16h100μmolm-2s-1光合成有効放射/8hの明暗サイクルを用いて、120rpmでの振盪機上、21°Cの温度で増殖させた。OD600が0.01になるように細胞を希釈し、振盪機上に戻して、遺伝子導入株の増殖速度の促進が示されたかどうかを判定した。増殖速度は、振盪機上で10日を経た後にOD600として測定した。0033増殖チャンバー内、蓋付きの25mmガラス製試験管中で、100μmolm-2s-1光合成有効放射を用いて24h、21°Cの温度で増殖させた培養物について、CO2濃縮実験を最初に行なった。CO2100は、先端が各試験管の底に配置された25ゲージ針に接続された1cc注射器の切断端にはめられたTygonチューブを通して、それぞれ個々の試験管にバブリングされた。00343ゴム栓がそれぞれの首部にはめられた200mlガラス製四角瓶Kimaxからなる小規模バイオリアクターを開発した。栓には穴が2つあり、一方には切断された1cc注射器を取り付け、その注射器にCO2を供給するTygonチューブを挿入し、他方の穴には、綿栓を含む1mlプラスチック製ピペットFisherScientificCanadaの3cmの後端部pluggedendを取り付けた。これは、リアクター内の圧力上昇を防ぐために通気孔として使用された。バイオリアクターは、4.0のOD600での藻類細胞20mlで開始された。瓶は、70rpmでの回転振盪機上の植物増殖チャンバー内に24時間明下で、130μMol及び21°Cで置かれた。3L/分で流れる空気と2L/分で流れる100CO2とを混合して、約60CO2濃縮をもたらすことによって、炭素濃縮を達成した。プラスミド構築体及び菌株:1.pBI-PGKF5A構築体PF0035ポプラeIF-5A3cDNAヌクレオチド配列は配列番号3に示されており、アミノ酸配列は配列番号4に示されている。翻訳開始コドンは、ヌクレオチド48から始まり、停止コドンは、ヌクレオチド525から始まる。サッカロミセスセレビシエ解糖系酵素プロモーター、PGK1は、SalI制限部位を含む上流プライマー:5’-GTCTACAGGCATTTGCAAGAATTACTCG-3’配列番号9及びBamHI制限部位を含む下流プライマー:5’-GGATCCTGTTTTATATTTGTTGTAAAAAGTAG-3’配列番号10を用いてPCRによって増幅されたKong2006Biotechnol.Lett28:2033~2038。PGK1プロモーターのPCR産物を、SalI及びBamHI部位を含むpBI101ベクターに連結したpBI-PGKと命名した。0036PdeIF-5A1、PdeIF-5A2、PdeIF-5A3及びPdeIF-5A4と命名された4つの異なる完全長PdeIF-5AcDNAは、AteIF-5A1cDNAを使用してヒロハハコヤナギPopulusdeltoidesの葉のcDNAライブラリをスクリーニングすることによって単離された。製造業者の取扱説明書に従ってQiagenキットを使用して、葉mRNAを単離した。製造業者の取扱説明書に従ってStratageneZAPExpresscDNASynthesisKit及びZAPExpresscDNAGigapackIIIGoldCloningKitを使用して、cDNAライブラリを調製した。PdeIF-5A1、PdeIF-5A2、PdeIF-5A3及びPdeIF-5A4のGenBankアクセッション番号は、それぞれFJ032302、FJ032303、FJ032304及びFJ032305である。pBK-CMVベクター中に5’-及び3’-UTRを含むPdeIF-5A3完全長cDNAは、BamHI及びSacI制限酵素で消化した。pBI-PGK中のGUS遺伝子もBamHI及びSacI制限酵素消化によって取り出した。次いで、前消化したPdeIF-5A3cDNAを前消化したpBI-PGKベクターと連結して、pBI-PGKF5APFを形成した。PFの最終構築体は、PGK1-プロモーター:PdF5A3-cDNA:Nos-ターミネーター配列番号1を含む。PFベクターをアグロバクテリウムツメファシエンスAgrobacteriumtumefaciensGV3101に電気穿孔法によって導入した。0037pPGK:PdF5A3cDNA-tNos構築体のヌクレオチド配列は、配列番号1に示されている。PGK1プロモーター領域は、ヌクレオチド1~737に存在する。中間領域は、ポプラeIF-5A3完全長cDNA5’-及び3’-UTRを含む配列ヌクレオチド738~1832である。残りの領域は、Nosターミネーターヌクレオチド1562~1832である。2.pBI-PGKFD構築体FD0038トマトDHSヌクレオチドコード配列は、配列番号5に示されており、アミノ酸配列は、配列番号6に示されている。ソラナムリコペルシカムSolanumlycopersicumTEF1-ターミネーター由来のPGK1-プロモーターTDHSトマトデオキシヒプシンシンターゼcDNAコード配列を、pBluescriptpBS-KSベクター中にサブクローニングした。PGK1プロモーターは、HindIII制限部位を含む上流プライマー:5’-AAGCTTAGGCATTTGCAAGAATTACTCG-3’配列番号11及びXhoI制限部位を含む下流プライマー:5’-ATCGATTGTTTTATATTTGTTGTAAAAAGTAG-3’配列番号12を用いてPCRによって増幅された。TDHSは、Wang2001J.Biol.Chem.276:17541~17549に記載されているようにクローニングし、XhoI制限部位を含む上流プライマー:5’-CTCGAGATGGGAGAAGCTCTGAAGTACAG-3’配列番号13及びBamHI制限部位を含む下流プライマー:5’-GGATCCTCAAACTTGGCACCTTATCTGGG配列番号14を用いてPCRによって増幅された。TEF1ターミネーターは、BamHI制限部位を含む上流プライマー:5’-GGATCCTCAGTACTGACAATAAAAAGATTCTTG配列番号15及びClaI制限部位を含む下流プライマー:5’-ATCGATATCGATACTGGATGGCGGCGTTAGTATCG-3’配列番号16を用いて、酵母菌pFA6a-kanMX6Longtine1998Yeast14:953~961ベクターからPCRによって増幅された。PGK1プロモーター、TDHScDNA及びTEF1ターミネーターは制限酵素で消化し、pBS-KSベクター中にサブクローニングした。0039PGK1:TDHS:TEF1構築体は、pBS-KSベクターからHindIII及びClaIで消化した。PGK1:PdF5Aは、ClaI制限部位を含む上流プライマー:5’-ATCGATAAGAATTACTCGTGAGTAAGG-3’配列番号17及びSacI制限部位を含む下流プライマー:5’-GAGCTCTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’配列番号18、並びにテンプレートとしてpBI-PGKF5Aを用いてPCRによって増幅された。次いでPCR断片はClaI及びSacIで消化した。pBI101を、HindIII及びSacIベクターで消化して、GUS遺伝子を取り出した。次いでPGK1:TDHS:TEF1配列番号2及びPGK1:PdF5A3の両方を前消化したpBI101に連結して、pBI-PGKFDを形成した。pBI-PGKFDは、PGK1:TDHS:TEF1及びPGK1:PdF5A3:Nosを含む。pBI-PGKFDは、アグロバクテリウムツメファシエンスGV3101に電気穿孔法によって導入した。0040pPGK:TDHS-tTEF1構築体のヌクレオチド配列は、配列番号2に示されている。PGK1プロモーター領域は、ヌクレオチド1~733に存在する。中間領域は、ポプラDHSコード配列ヌクレオチド734~1879である。強調された領域は、TEF1ターミネーターヌクレオチド1880~2126である。藻類の形質転換:0041S.a.及びC.v.は、Kumar2004PlantScience166:731~738に従って以下の変更を加えて形質転換させた。BBMを増殖培地として使用した。アグロバクテリウム細胞を、2×YT培地中28°Cで終夜増殖させた。抗生物質カナマイシンの代わりにG418を選択剤として使用した。遺伝子導入藻類コロニーは、形質転換から7~10日後に選択培地上に現れた。50コロニーを選択し、G418への耐性を確認するために新鮮な選択プレート上に2回線条接種した。0042遺伝子操作したS.a.及びC.v.株を生成し、これらの株は単独で又はTDHSと併せてPdeIF-5AeIF-5Aの過剰発現を示した。遺伝子導入藻類コロニーは、アグロバクテリウム感染から7~10日後に選択プレート上に現れた。一例として、20株の遺伝子導入株を選択し、液体培養で4日増殖させた後分析して、eIF-5A発現が増加せず、WT株と比べて増殖が増加した株を特定した。試験した20株のうち、eIF-5AをPGK1プロモーターの制御下で過剰発現した12株は、対照株に対して4~55の範囲の増殖の増加を示した図1。F5A及びDHSの両方を含み、両方ともPGKプロモーターによって駆動される第2の構築体を用いて形質転換した株も試験し、WT株よりも良好に機能して増殖が3~20の範囲で増加した株が4株だけもたらされた。これらの実験は、異なる時間に実施されたので、パーセント増加の差は、出発原料の異なる条件又は実験中の増殖条件に起因し得た。したがって、構築体ごとに最も良好な4株を特定し、その後の実験に使用した。実施例2遺伝子導入藻類細胞の油含有量:0043藻類細胞の総脂質含有量は、バニリンリン酸反応sulpho-phospho-vanilinreactionIzaard2003JofMicrobialMethods55:411~418を使用して測定した。遺伝子導入藻類株を作製することの目標は、バイオディーゼルのための油を産生するためにバイオリアクター中でそれらを使用することである。したがって、バイオリアクターの条件を模倣する実験を設計した。一般に、バイオリアクターは、連続光及び藻類細胞の一定の流動にさらされる藻類増殖チャンバー内に100CO2をバブリングする。これらの条件をシミュレートするために、個々の藻類株を含む試験管内にCO2をバブリングするためのCO2バブラーを開発し、それによって複数の株を同時に同じ増殖条件下で試験することが可能になった。培養を低細胞密度で開始したときに観察されたように、CO2の添加は必要ではなく、藻類の増殖に有害であることが証明された。連続光及び100CO2濃縮で24時間培養された藻類細胞は、増殖しなかったが、定常期のままであった。CO2濃縮を中断し、空気を培養物内にバブリングした場合、増殖は再開され、PF株5で試験された4遺伝子導入株のうち2株においてより高い増殖速度が観察され、これによりWTの増殖速度に対して151の増加が示された図2。この実験は、eIF-5A及び/又はDHSを過剰発現している藻類が、ストレス事象に耐える又はストレス事象からより速く回復することを実証するものであり、ここで、ストレス事象はCO2濃縮が過度であり、増殖培地における毒性条件をもたらしたことであった。0044小規模バイオリアクターを開発した。遺伝子導入株を、バイオリアクター中、CO2濃縮条件下かつ増大した多量栄養素[リンP、カリウムK、カルシウムCa、マグネシウムMg及び硫黄S]レベルでスクリーニングした。従来の藻類増殖は、BBMなどの培地中で起こる。対照及び遺伝子導入藻類培養物の両方は、多量栄養素レベル4×及び微量栄養素レベル2×、データ示さずを増大させた培地中で増殖させた場合、より速く増殖し、より多く油を産生する。したがって、遺伝子導入株をこれらの条件下でスクリーニングした。PGK:F5A株の1株及びPGK:F5A-PGK:TDHS株の4株すべては増殖速度の増加を示したこと、並びにこれらの各株は対照株から産生されたものに比して油産生が増大したこと244~407増大が判明した図3。油産生をさらに試験するために、2つの遺伝子導入株を選択した。PGK:F5A株8PF8及びPGK:F5A-PGK:TDHS株16FD16の株を使用してバイオリアクターに播種した。4×多量栄養素と一緒に2×微量栄養素及び2×窒素で24時間増殖させた場合、両方の遺伝子導入株は、同条件下で増殖した対照株よりも著しく多くそれぞれ対照に対して226及び206増大油を産生した図4。0045栄養素レベルを10×多量栄養素、4×窒素及び2×微量栄養素までさらに増大させ、構築体ごとに2つの株をより長期間72時間増殖させて、最大量の油を産生するのに最適な栄養素レベルを決定した。これらの条件下で増殖させた場合、遺伝子導入株と対照との間で細胞増殖に差はなかったが、油産生がFD16において著しく増大した対照の560増大、図5。これらのデータは、藻類細胞におけるeIF-5A及び/又はDHSの過剰発現が、細胞増殖の増加及び油産生の増大をもたらすことを裏付ける。0046本発明は上記の実施例を参照して詳細に説明されているが、種々の変更形態が本発明の精神から逸脱することなく実施できることは理解されたい。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。本出願で参照されたすべての引用特許及び刊行物は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。