以下の工程を含む、イムノアッセイのための基質を調製するための方法:a試薬および中性物質を含む組成物を得る工程;ならびにb該試薬および該中性物質を基質にカップリングさせるのに適した条件下で該組成物を該基質に適用する工程。前記試薬が抗体または抗原である、請求項1記載の方法。前記中性物質が関連性のない種の抗体または血清アルブミンである、請求項1記載の方法。前記基質が粒子またはウェル表面である、請求項1記載の方法。前記粒子がミクロスフェアである、請求項4記載の方法。前記組成物中の試薬対中性物質の比率が約1:120から6:1である、請求項1記載の方法。前記試薬および前記中性物質が共有結合により前記基質にカップリングする、請求項1記載の方法。共有結合により表面にカップリングした試薬および中性物質を有する、ミクロスフェア。前記試薬が抗体または抗原である、請求項8記載のミクロスフェア。前記中性物質が関連性のない種の抗体または血清アルブミンである、請求項8記載のミクロスフェア。前記試薬対中性物質の比率が約1:120から6:1である、請求項8記載のミクロスフェア。磁気的に反応性である、請求項8記載のミクロスフェア。一つまたは複数の蛍光色素を含む、請求項8記載のミクロスフェア。共有結合によりウェルの表面にカップリングした試薬および中性物質を有するウェルを含む、プレート。前記試薬が抗体または抗原である、請求項14記載のウェル。前記中性物質が関連性のない種の抗体または血清アルブミンである、請求項14記載のウェル。前記試薬対中性物質の比率が約1120から6:1である、請求項14記載のウェル。以下の工程を含む、多重イムノアッセイにおいて試薬の反応性を制御する方法:a多重イムノアッセイにおいて高反応性を有し、該多重イムノアッセイのための最大使用可能シグナルを上回るアッセイシグナルをもたらす試薬を同定する、工程;b該高反応性試薬を組成物中で中性物質と組み合わせる工程;c該高反応性試薬および該中性物質を基質にカップリングさせるのに適した条件下で該組成物を該基質に適用する工程;ならびにd該中性物質と共に該基質にコカップリングした該高反応性試薬のアッセイシグナルが該多重イムノアッセイのための使用可能なシグナル範囲内であることを確認する工程。前記多重イムノアッセイにおいて高反応性を有する二つまたはそれよりも多い試薬の前記反応性を制御する工程を含む、請求項18記載の方法。前記アッセイシグナルが化学発光シグナルまたは蛍光シグナルである、請求項18記載の方法。前記高反応性試薬が抗体または抗原である、請求項18記載の方法。前記中性物質が関連性のない種の抗体または血清アルブミンである、請求項18記載の方法。前記基質が粒子またはウェル表面である、請求項18記載の方法。前記粒子がミクロスフェアである、請求項23記載の方法。前記組成物中の高反応性試薬対中性物質の比率が約1:120から6:1である、請求項18記載の方法。前記高反応性試薬および前記中性物質が共有結合により前記基質にカップリングする、請求項18記載の方法。例証的態様の説明本発明の態様は、アッセイの開始時にイムノアッセイの反応性を制御する方法および組成物を提供し、従って、分析物のもっとも高濃度での反応性を制御しつつ、測定のすべてのレベルについてバランスのとれた制御を提供する。上述のように、アッセイの後期段階で用いられる試薬の制御に着目した、イムノアッセイの反応性を制御するための従来の方法は、分析物の濃度が高い場合には、信頼できない情報をもたらしやすい。さらに、少量の試薬を固相物質に単純にカップリングさせることは可能ではあるが、以下に説明する試験により、このアプローチでは、不均一にカップリング/コーティングされた表面がもたらされ、これらは、本明細書に開示するコカップリングまたはココーティングのアプローチによって調製されたものよりも反応性の制御の点で効果が低いことが示される。なぜなら該アプローチは、反応性の制御およびカップリング/コーティングした表面の均一性の双方を提供するからである。I.イムノアッセイ本明細書に記載する方法および組成物は、イムノアッセイにおいて試薬の反応性を制御するために用いることができる。当業者は、以下に記載するものを含むがこれらに限定されない、イムノアッセイを実施するための様々な方法が存在することを理解する。いくつかの免疫検出法は、いくつかを挙げると、酵素結合免疫測定法ELISA、放射イムノアッセイRIA、免疫放射線測定法、蛍光免疫測定法、化学発光アッセイ、生物発光アッセイ、およびウエスタンブロットを含む。様々な有用な免疫検出法の工程が、例えば、それぞれが参照により本明細書に組み入れられる、DoolittleandBenZeev1999;GulbisandGaland1993;DeJageretal1993;およびNakamuraetal1987などの科学文献に記載されている。選択した生物学的試料を、免疫複合体一次免疫複合体の形成を可能にするのに十分な期間、有効な条件下で抗体と接触させるとは一般に、単に抗体組成物を試料に添加して、該抗体が、存在する任意の抗原と免疫複合体を形成するのに、即ち結合するのに十分な期間、該混合物をインキュベーションすることである。この時間の後、組織切片、ELISAプレート、ドットブロットまたはウェスタンブロットのような試料-抗体組成物を一般に、任意の非特異的に結合した抗体種を除去するために洗浄し、これによって一次免疫複合体内で特異的に結合した抗体のみを検出することが可能となる。一般に、免疫複合体形成の検出は当技術分野において周知であり、多くのアプローチの適用によって達成することができる。これらの方法は一般に、放射性タグ、蛍光タグ、生物学的タグ、および酵素的タグのいずれかのように、標識またはマーカーの検出に基づく。このような標識の使用に関する特許には、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第3817837号、同第3850752号、同第3939350号、同第3996345号、同第4277437号、同第4275149号、および同第4366241号が含まれる。勿論、当技術分野において公知の通り、二次抗体および/またはビオチン/アビジンリガンド結合配置のような二次的な結合リガンドの使用を介して、さらなる利点が見出され得る。高濃度の分析物の存在下では、免疫複合体によって産生される検出可能シグナルの量は検出装置のための最大使用可能範囲を超える可能性がある。従って、本発明の態様は、イムノアッセイの反応性を制御し、かつ従って、分析物の最高濃度における反応性を制御できて、それによって、免疫複合体によって産生される検出可能シグナルが、検出装置について使用可能なシグナル範囲内および規制当局によって定められた許容範囲内に収まる、方法および組成物を提供する。検出において用いられる選択的な抗体は、検出可能な標識にそれ自体が連結し得、当業者は次に、この標識を検出するだけでよく、それによって、組成物中の一次免疫複合体の量が測定可能となる。または、一次免疫複合体内で結合型となる最初の抗体を、該抗体に対して結合親和性を有する第二の結合リガンドによって検出することができる。これらの場合、第二の結合リガンドは検出可能な標識に連結してもよい。第二の結合リガンドはそれ自体が抗体であることが多く、従って二次抗体と呼ばれ得る。一次免疫複合体は、二次免疫複合体の形成を可能にするのに十分な時間、有効な条件下で、標識された第二の結合リガンドまたは抗体と接触させる。続いて、二次免疫複合体は一般に、非特異的に結合した標識二次抗体またはリガンドを除去するために洗浄され、その後、二次免疫複合体において残った標識が検出される。さらなる方法には、二段階アプローチによる一次免疫複合体の検出が含まれる。上記のように、二次免疫複合体を形成するために、抗体に対して結合親和性を有する第二の結合リガンド、例えば抗体が用いられる。洗浄後、二次免疫複合体を、同じく免疫複合体三次免疫複合体の形成を可能にするのに十分な期間、有効な条件下で、第二の抗体に対して結合親和性を有する第三の結合リガンドまたは抗体と接触させてもよい。第三のリガンドまたは抗体は典型的には、検出可能な標識に連結し、従って、このように形成される三次免疫複合体の検出を可能にする。望ましい場合、このシステムは、シグナルの増幅を提供し得る。上記に詳述するイムノアッセイとは、そのもっとも単純かつ/または直接的な意味において、抗体結合アッセイである。ある好ましいイムノアッセイとは、当技術分野において公知の様々なタイプの酵素結合免疫測定法ELISAおよび/または放射イムノアッセイRIAである。一つの例示的なELISAにおいて、選択的抗体を、タンパク質親和性を示す選択された表面、例えばポリスチレンマイクロタイタープレートのウェルに固定化する。続いて、臨床試料のような、抗原を含むことが疑われる試験組成物をウェルに加える。結合および/または、非特異的に結合した免疫複合体を除去するための洗浄の後、結合した抗原が検出され得る。検出は一般に、検出可能な標識に連結した別の抗体の添加によって達成される。このタイプのELISAは単純なサンドウィッチELISAである。検出は、第二の選択的抗体の添加によって、および続いて第二の抗体に対して結合親和性を有する第三の抗体の添加によって達成することも可能であり、第三の抗体は検出可能な標識に連結する。抗原が固定化される別のELISAは、検出における抗体競合の使用を伴う。このELISAでは、抗原に対する標識抗体をウェルに加えて結合させ、かつ/またはその標識によって検出する。次に、未知の試料中の抗原の量を、コーティングしたウェルを用いるインキュベーション期間中に試料と抗原に対する標識抗体とを混合することにより測定する。試料中の抗原の存在は、ウェルへの結合に利用可能な抗原に対する抗体の量を減少させるように作用し、従って、最終的なシグナルの量を減少させる。これはまた、未知の試料中の抗原に対する抗体の検出にも適しており、ここで、未標識の抗体は抗原でコーティングされたウェルに結合し、同じく、標識された抗体を結合させるのに利用可能な抗原の量を減少させる。用いられる様式に関わらず、ELISAは、コーティング、インキュベーションおよび結合、非特異的に結合した化学種を除去するための洗浄、ならびに結合した免疫複合体の検出などの、共通の一定の特徴を有する。これらを以下に説明する。抗原または抗体のいずれかを用いたプレートのコーティングにおいては、一般に、プレートのウェルに抗原または抗体の溶液を入れて、一晩または特定の期間、インキュベーションする。抗原または抗体が中性物質とコカップリングしている場合、プレートをコーティングするために抗原または抗体および中性物質を一緒にインキュベーションする。続いて、吸着が不完全な物質を除去するためにプレートのウェルを洗浄する。次に、ウェルの残った全ての有効な表面を、試験抗血清に関して抗原的に中性である非特異的なタンパク質でコーティングしてもよい。これらには、ウシ血清アルブミンBSA、カゼインまたは粉乳溶液が含まれる。このコーティングによって、固定化する表面上の非特異的な吸着部位の遮断が可能になり、従って、表面に対する抗血清の非特異的な結合によって惹起されるバックグラウンドが低下する。コカップリング処理が実施された場合、遮断工程で同一の中性物質を使用してもよく、あるいは異なる中性物質を使用してもよい。ELISAでは、直接的な手法よりも二次的または三次的な検出手段を用いることがより慣例的と思われる。従って、タンパク質または抗体のウェルへの結合、バックグランドを低下させるための非反応性物質によるコーティング、および未結合の物質を除去するための洗浄の後、免疫複合体抗原/抗体の形成を可能にするのに有効な条件下で固定化表面を試験対象である生物学的試料と接触させる。その後の免疫複合体の検出には、標識された二次的な結合リガンドまたは抗体、および、標識された三次抗体または第三の結合リガンドと組み合わせた二次的な結合リガンドまたは抗体が必要である。免疫複合体抗原/抗体の形成を可能にするのに有効な条件下とは、該条件が、好ましくはBSA、ウシγグロブリンBGGまたはリン酸緩衝生理食塩液PBS/Tweenなどの溶液で反応物を希釈する工程を含むことを意味する。これらの添加される物質は、非特異的なバックグラウンドの低下に役立つ傾向もある。適切な条件とは、インキュベーションが効果的な結合を可能にするのに十分な温度または期間で行われることも意味する。インキュベーション工程は典型的には約1時間から2~4時間などであり、温度は好ましくは25°C~27°C程度であり、または約4°Cで一晩などであってもよい。ELISAにおけるすべてのインキュベーション工程の後、複合体を形成していない物質を除去するために、接触させた表面を洗浄する。好ましい洗浄手順は、PBSTweenのような溶液またはホウ酸緩衝液で洗浄する工程を含む。試験試料と元々の結合物質の間の特異的な免疫複合体の形成、および引き続く洗浄の後に、ごく少量の免疫複合体の存在を測定することができる。検出手段を提供するために、第二または第三の抗体に、検出を可能にするための標識を結合させる。好ましくは、これは適切な色素産生性物質とのインキュベーションにより発色する酵素である。従って望ましい場合、例えば、第一および第二の免疫複合体を、ウレアーゼと、グルコースオキシダーゼと、アルカリホスファターゼと、または水素ペルオキシダーゼと結合した抗体と、さらなる免疫複合体の形成に有利な時間および条件下で例えば、PBSTweenのようなPBS含有溶液中で室温にて2時間のインキュベーション接触またはインキュベーションさせる。標識抗体とのインキュベーションおよび、未結合の物質を除去するための引き続く洗浄の後、例えば、酵素標識がペルオキシダーゼの場合は、尿素、またはブロモクレゾールパープル、または22アジノジおよびMacBeathandSchreiberで詳細に述べられている。これらのアレイは典型的に、スライドガラス上に滴下されたか小さなウェルに固定化された何千もの異なるタンパク質または抗体を含み、多数のタンパク質の生化学活性および結合プロフィールを一度に調べることを可能にする。このようなアレイを用いてタンパク質の相互作用を調べるために、標識したタンパク質を、アレイ上に固定化した各標的タンパク質とインキュベーションすることができる。続いて、標識分子が多くのタンパク質のうちどれに結合するのか、タンパク質の量もしくは濃度、またはタンパク質のその他の特性を調べるために、アレイを分析する。当業者は、アレイを分析するために利用可能な様々な方法を認識している。1タンパク質バイオチップアッセイ一般にバイオチップは、選択される検出方法によって位置特定可能であるような基質表面のそれぞれ別個の特定可能な位置に、捕捉分子試薬のアレイが付着している基質を含む。中性物質は、基質上の特定の位置における反応性を低下させるために、基質上の一つまたは複数の捕捉分子とコカップリングさせてよい。捕捉分子が分析試料に曝露されると、試料中の分析物は、それが親和性を有する表面上の捕捉分子に結合することができる。分析物分子と捕捉分子の間の捕捉または相互作用は、様々な任意の方法で検出または特徴決定される。このような検出または特徴決定の方法は当業者に公知であり、蛍光、発光、吸光度、反射率、透過光、または屈折率例えば、表面プラズモン共鳴、偏光解析、共鳴ミラー法、回折格子カプラー導波管gratingcouplerwaveguide法または干渉法、イムノアッセイ例えば、ELISA、気相イオン分光測光法、原子間力顕微鏡法または質量スペクトル、および、特に、SELDIを含むが、これらに限定されるものではない。試料中の分析物の定量は、適切な検出方法を選択することによって達成できる。2ビーズアレイミクロスフェアに基づくアッセイは、フローシステムにおいて、またはビーズアレイプラットフォーム上で分析することもできる。一般に、ビーズアレイプラットフォームはアレイ上に分布したビーズおよび分析物を画像化する。この方法では、ビーズアレイの画像化は上記のチップと同様である。しかしながら、分析物がアレイ上の空間的な位置によって同定されるチップとは対照的に、ビーズアレイは典型的に、分析物が結合するコード化されたミクロスフェアによって、分析物を特定する。例えば、参照によりいずれも本明細書に組み入れられるFultonetal1997ClinChem4317491756および米国特許第5736330号に開示されるように、LuminexAustinTXは、それらの蛍光に従ってミクロスフェアをコード化するための方法を説明している。この方法論は、固有の蛍光プロフィールを有する蛍光ミクロスフェアビーズを異なる分析物特異的な結合剤に固定化でき、かつ、それぞれのビーズタイプが個別の分析物に対して特異的である分析物特異的なビーズの蛍光に基づくアレイを作出するために用いることができるという原理に基づく。この技術は、それぞれのビーズを独立に同定することを可能にする蛍光色素の組み合わせを採用する。分析物特異的なミクロスフェアを、異なる蛍光色で標識したプローブと一緒に混合して接触させる。プローブは、標識されたミクロスフェア上のそれらのリガンドまたはレセプターに結合し、各ビーズ表面における特異的な分子相互作用を測定するために用いられる。各ミクロスフェアの個別の同定、および対応するプローブ結合シグナルの読み取りを可能にするフローサイトメーターにおいて、試料を読み取ることができる。ミクロスフェアは、共有結合により、表面のカルボキシル基を介して、実質的に任意のアミン含有分子にカップリングすることができる。または、アビジンがカップリングしたミクロスフェアを、ビオチン標識した分子を固定化するために利用できるFultonetal1997ClinChem4317491756。市販のビーズアレイのその他の例にはIlluminaのBeadXpress商標ReaderおよびBeadStation500商標が含まれる。3抗体マイクロアレイ抗体マイクロアレイはタンパク質マイクロアレイの特別な型である。抗体マイクロアレイは細胞溶解物からのタンパク質の発現を検出するための一般研究で用いられることが多く、診断用途、例えば、血清または尿からの特別なバイオマーカーの検出のために用いられ得る。III.実施例以下の実施例は本発明の好ましい態様を示すために含まれる。当業者は、下記の実施例に開示される技術は、本発明者らによって発見された技術が本発明の実践において十分に機能すると示すものであり、かつ従って、その実践のための好ましい形態を構成すると考えられ得ることを認識すべきである。しかし、当業者は本開示に照らして、開示される具体的態様において多くの変更を行うことが可能であり、かつさらに、本発明の精神および範囲から逸脱することなく類似または同様の結果が得られることを認識すべきである。実施例1-コカップリング手順Luminexミクロスフェアの濃縮:Luminexミクロスフェアとカップリングさせるために活性試薬を中性物質と混合することの利点の評価は、5000万個のLuminexMagPlex登録商標ミクロスフェアを用いて実施された。MagPlex登録商標ミクロスフェアを、磁気分離装置を用いて15mL微小遠心管内で05mLに濃縮した。この洗浄手順において、MagPlex登録商標ミクロスフェアは磁気表面によって微小遠心管の側面に引き寄せられ、これにより、微小遠心管からの上清の効率的な除去が可能になった。微小遠心管内のMagPlex登録商標ミクロスフェアを、活性化緩衝液01M2エタンスルホン酸ヘミナトリウム塩、緩衝液、pH62で2回洗浄した。Luminexミクロスフェアの活性化:活性化緩衝液04mLを活性化のために各微小遠心管に加えた。スルホNHSNヒドロキシスルホスクシンイミドおよびEDC1エチル33ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩を50mgmLの濃度で調製した。ミクロスフェアを超音波処理および強振盪で懸濁した直後に、活性化のために、5000万個のMagPlex登録商標ミクロスフェアを含む各微小遠心管に005mLのスルホNHSおよびEDCそれぞれ25mgを加えた。ミクロスフェアを再度懸濁して、微小遠心管を、活性化反応中にミクロスフェアを撹拌するために回転器に載せた。20分後、微小遠心管を回収した。活性化後、余剰なスルホNHSおよびEDCを除去するために、活性化ミクロスフェアをカップリング緩衝液01M2エタンスルホン酸ヘミナトリウム塩MES緩衝液、pH50で2回洗浄した。カップリング緩衝液10mLを5000万個のミクロスフェアを含む各微小遠心管に加えた。Luminexミクロスフェアへのタンパク質のカップリング:カップリング緩衝液中の洗浄したMagPlex登録商標ミクロスフェアにタンパク質を加えた。以下の実施例においてより詳細に述べる通り、活性化MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせるために、活性試薬タンパク質家禽血清学的アッセイ用のウサギポリクローナル抗ニワトリIgY抗体または精製ニワトリIgY;あるいは、新規アッセイ用のマウスモノクローナル抗甲状腺刺激ホルモン抗体の異なる量を、中性物質精製ウサギIgGまたは精製ウシIgGと混合した。実施例2-ニワトリIgYまたはウサギ抗ニワトリIgYとウサギIgGとのコカップリングは家禽血清学的アッセイにおける内部対照の機能を向上させる材料:様々な領域のためのLuminexMagPlex登録商標ミクロスフェアウサギ抗ニワトリIgY24mgmL-MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングした試薬ニワトリIgY57mgmL-MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングした試薬精製ウサギIgG50mgmL-MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングした中性物質ビオチン化ウサギ抗ニワトリIgYアッセイ試薬ストレプトアビジンRフィコエリトリンアッセイ試薬PBSBSA緩衝液PBSTween、BSA緩衝液手順および観察:家禽血清学的アッセイの内部対照のための最初の試薬カップリング要件:家禽血清学的アッセイにおける内部対照とするために、ウサギ抗ニワトリIgYタンパク質およびニワトリIgYタンパク質をMagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。ウサギ抗ニワトリIgYとカップリングしたミクロスフェアは、IgYを含むニワトリ血清試料がアッセイに添加されていたことを示すために使用した。ニワトリIgYとカップリングしたミクロスフェアは、検出抗体であるビオチン化ウサギ抗ニワトリIgYがアッセイに添加されていたことを示すために使用した。ウサギ抗ニワトリIgY10μgおよびニワトリIgY5μgを5000万個のMagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。試料希釈液防腐剤としてProClin登録商標2メチル4イソチアゾリン3オン、5クロロ2メチル4イソチアゾリン3オン、および12ベンズイソチアゾリン3オンを含むウシおよびブタタンパク質で1:500に希釈したニワトリ血清の試料を、捕捉試薬上記のようにミクロスフェアにカップリングさせた、ウサギ抗ニワトリIgYまたはニワトリIgYのタンパク質を含むマイクロタイタープレートのウェルに加えた。試料と捕捉試薬をインキュベーションした後、捕捉試薬をウェル内に保持しながら、未反応の試料を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。続いて、検出試薬ビオチン化ウサギ抗ニワトリIgYを加えた。この検出試薬と共にインキュベーションした後、未反応の検出試薬を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。その後、レポーター試薬を加えた。このレポーター試薬ストレプトアビジンRフィコエリトリンと共にインキュベーションした後、未反応のレポーター試薬を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。緩衝液をウェルに加えて、内容物をLuminexLX200商標装置で測定した。発生したシグナルはLuminexLX200商標装置における23000~44000MFI当量の範囲内であると判定された。これは、最大使用可能シグナルが約20000MFIであるLX200商標装置のための使用可能な範囲を大きく上回る値であった。アッセイにおける総MFI反応を減少させる試みのために、少量の2種類の試薬を5000万個のMagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。カップリングしたニワトリIgYの量は、168、124および084μgニワトリIgYであり、24、12、06μgウサギ抗ニワトリIgYであった。MFI反応は大半のカップリングにおいて25000MFIを上回る値のままであった。低下したシグナルある場合には15000MFIが得られた場合もあったが、この最低シグナルは最少量の試薬にカップリングしたミクロスフェアに対応するものではなかった。別の場合には低下が観察されたが、結果は16000から23000MFIまで大きく変動していた。反復実験では、8回の反復において様々な結果が得られて、変動係数は最大36であった。従って、カップリング反応における試薬の量を単に減らすだけでは信頼性のあるデータは得られず、試薬の高反応性の抑制には有効ではないことが結論付けられた。反応範囲が縮小された家禽血清学的アッセイの内部対照を調製するためのコカップリング:試薬および中性物質を以下の1~4群において記載する通りに混合して、上記の実施例1で記載した通りに5000万個のミクロスフェアにカップリングさせた。1群-ウサギ抗ニワトリIgY抗体25μgおよび精製ウサギIgG1475μgの混合物を、活性化MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。2群-ウサギ抗ニワトリIgY抗体125μgおよび精製ウサギIgG14875μgの混合物を、活性化MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。3群-ニワトリIgY25μgおよび精製ウサギIgG1475μgの混合物を、活性化MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。4群-ニワトリIgY125μgおよび精製ウサギIgG14875μgの混合物を、活性化MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。試料希釈液で1:500希釈したニワトリ血清の試料を、1~4群について記載した通りに捕捉試薬を含むマイクロタイタープレートのウェルに加えた。試料および捕捉試薬をインキュベーションした後、捕捉試薬をウェル内に保持しながら、未反応の試料を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。続いて、検出試薬ビオチン化ウサギ抗ニワトリIgYを加えた。この検出試薬と共にインキュベーションした後、未反応の検出試薬を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。次に、レポーター試薬ストレプトアビジンRフィコエリトリンを加えた。このレポーター試薬と共にインキュベーションした後、未反応のレポーター試薬を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。緩衝液をウェルに加えて、内容物をLuminexLX200商標装置で測定した。上記の混合物を使用する目的は、LuminexLX200商標装置を用いたイムノアッセイ反応を20000MFI未満の値まで低下させることであった。これは4群のすべてで達成された。1群-アッセイ反応は17000MFIであった。2群-アッセイ反応は12000MFIであった。3群-アッセイ反応は19400MFIであった。4群-アッセイ反応は13900MFIであった。従って、該アッセイにおいて、基質に対する中性物質例えば、ウサギIgGおよび活性試薬ウサギポリクローナル抗ニワトリIgYまたは精製ニワトリIgYのコカップリング実施例3-新規四重アッセイにおける試薬のコカップリングマウスモノクローナル抗甲状腺刺激ホルモン抗体300μgおよび精製ウシIgG50μgの混合物を、上記の実施例1に記載する通り活性化MagPlex登録商標ミクロスフェアにカップリングさせた。ある容量の抽出した血液試料を、捕捉試薬上記の通り、精製ウシIgGと共にMagPlex登録商標ミクロスフェアにコカップリングさせたマウスモノクローナル抗甲状腺刺激ホルモン抗体を含むマイクロタイタープレートのウェルに加えた。検出試薬ビオチン化マウスモノクローナル抗甲状腺刺激ホルモン抗体もウェルに加えた。試料、捕捉試薬および検出試薬をインキュベーションした後、捕捉試薬がウェル内に保持しながら、未反応の試料および検出試薬を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。次に、レポーター試薬ストレプトアビジンRフィコエリトリンを加えた。このレポーター試薬と共にインキュベーションした後、未反応のレポーター試薬を除去するためにマイクロタイタープレートを洗浄した。緩衝液をウェルに加えて、内容物をLuminexLX200商標装置で測定した。これによりアッセイ反応は14000MFIとなり、これはTSHアッセイについての標準曲線の作製における使用に関して許容可能な範囲内である。本明細書に開示されて特許請求されるすべての組成物および方法は、本開示に照らして必要以上の実験を行うことなく、作製および実施することができる。本発明の組成物および方法は好ましい態様の観点から説明されているが、当業者には、本発明の概念、精神および範囲から逸脱することなく、説明される方法の工程または一連の工程における組成物および方法に対して変更を加えることができることが明らかである。より具体的には、同一または同等の結果が得られつつ、化学的および生理学的な両面で関連する一部の物質を本明細書に述べられる物質に置き換えられることが明らかである。当業者に明白なこのような同等の置き換えおよび修正はすべて、添付の特許請求の範囲に規定される本発明の精神、範囲および概念の範囲内であると考えられる。参考文献以下の参考文献は、本明細書に記載されるものの追加となる例示的な手順またはその他の詳細を示すという範囲で、参照により本明細書に具体的に組み入れられる。