SEQIDNO1からSEQIDNO10、SEQIDNO20およびSEQIDNO24から成るグループから選択されたアミノ酸配列を含む、および/またはSEQIDNO1からSEQIDNO10、SEQIDNO20およびSEQIDNO24と少なくとも85同一の変異アミノ酸配列を含む少なくとも2つのペプチド、および/またはSEQIDNO1からSEQIDNO10、SEQIDNO20およびSEQIDNO24をコード化する核酸を含むポリヌクレオチドまたは変異アミノ酸配列、および薬剤的に認容される担体を有する薬剤組成物。請求項1記載の薬剤組成物であって、更に、SEQIDNO11からSEQIDNO22から成るグループから選択されるアミノ酸配列を含むか、またはSEQIDNO11からSEQIDNO22と85以上同一の変異アミノ酸配列を含む少なくとも1つの追加ペプチド、またはSEQIDNO11からSEQIDNO22をコード化する核酸を含むポリヌクレオチドまたは変異アミノ酸配列を有する薬剤組成物。請求項1または2記載の薬剤組成物において、前記ペプチドの全体は、8~100アミノ酸長、好ましくは8~30アミノ酸長、最も好ましくは8~17アミノ酸長である薬剤組成物。請求項1~3のいずれか一に記載の薬剤組成物において、前記少なくとも1つのペプチドは非ペプチド結合を含むものである薬剤組成物。請求項1~4のいずれか一に記載の薬剤組成物であって、SEQIDNO1からSEQIDNO22およびSEQIDNO24のアミノ酸配列から成る少なくとも2つのペプチドを有する薬剤組成物。請求項1~5のいずれか一に記載の薬剤組成物であって、SEQIDNO1のアミノ酸配列およびSEQIDNO11のアミノ酸配列を含む、またはSEQIDNO2のアミノ酸配列およびSEQIDNO11のアミノ酸配列を含む、、またはSEQIDNO3のアミノ酸配列およびSEQIDNO11のアミノ酸配列を含む、これら2つのMHCクラスIペプチドの少なくとも1つを有する薬剤組成物。請求項1~6のいずれか一に記載の薬剤組成物において、前記組成物に存在するペプチドの選択、数、および/または量が組織、がん、および/または患者特異的である薬剤組成物。請求項1~7のいずれか一に記載の薬剤組成物であって、更に、1018ISS、アルミニウム塩、Amplivax、AS15、BCG、CP870893、CpG7909、CyaA、dSLIM、GMCSF、IC30、IC31、イミキモド、ImuFactIMP321、ISPatch、ISCOMATRIX、JuvImmune、LipoVac、MF59、モノホスホリルリピドA、モンタニドIMS1312、モンタニドISA206、モンタニドISA50V、モンタニドISA51、OK432、OM174、OM197MPEC、ONTAK、PepTelベクター系、PLG微粒子、レシキモド、SRL172、ビロソームおよび他のウイルス様粒子、YF17DBCG、AquilasQS21stimulon、RibisDetoxQuil、Superfos、フロイントアジュバント、GMCSF、コレラ毒素、免疫学的アジュバント、MF59、およびサイトカインから成るグループから選択される、少なくとも1つの適切なアジュバントを有する薬剤組成物。請求項8記載の薬剤組成物において、前記アジュバントが顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GMCSFなどのコロニー刺激因子、またはイミキモドまたはレシミキモドから成るグループから選択されるものである薬剤組成物。請求項1~9のいずれか一に記載の薬剤組成物であって、更に少なくとも1つの抗原提示細胞を含む薬剤組成物。請求項10記載の薬剤組成物において、前記抗原提示細胞は樹状細胞である薬剤組成物。請求項10または11記載の薬剤組成物において、前記少なくとも1つの抗原提示細胞が以下である薬剤組成物;a前記ペプチドでパルスされている、または前記ペプチドを載せているb前記ペプチドをコード化する発現構成物を有するものである請求項1~12のいずれか一に記載の薬剤組成物において、そのワクチンが静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、経皮、腫瘍内、経口、経皮、経鼻、頬側、直腸、経膣、吸入、または局所投与されるものである薬剤組成物。患者のがんを治療または予防する方法であって、請求項1~13のいずれか一に記載の薬剤組成物の治療有効量を前記患者に投与する工程を有する方法。請求項14記載の方法において、前記薬剤組成物が抗がんワクチンである方法。請求項15の方法において、これらのがんは、前立腺癌、口腔癌、口腔扁平上皮癌OSCC、急性骨髄性白血病AML、ピロリ菌誘発性MALTリンパ腫、大腸癌結腸癌/結腸直腸癌、神経膠芽細胞種、非小細胞肺癌NSCLC、子宮頸癌、ヒト乳癌、前立腺癌、大腸癌、膵臓癌、膵管腺癌、卵巣癌、肝細胞癌、肝臓癌、様々な表現型の脳腫瘍、急性リンパ芽球性白血病ALLなどの白血病、肺癌、ユーイング肉腫、子宮内膜癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、咽頭上皮癌、食道癌、口腔癌、膀胱癌、卵巣癌、腎細胞癌、非定型髄膜腫、甲状腺乳頭癌、脳腫瘍、唾液管癌、節外性TNK細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および肺と乳房の悪性固形腫瘍があるが、好ましくは胃癌である方法。請求項16記載の方法において、前記癌は大腸癌である方法。本明細書で以下に説明する通り、本発明の基礎となるMET005を除くペプチドは、全てMHCクラスIまたはIIを有する細胞によって提示されることが同定された。従って、これらの特定ペプチドと前記配列つまり、誘導ペプチドを含む他のペプチドは、全て特異的T細胞応答を誘発するが、そのような反応が誘発される程度は個々のペプチドによって、また個々の患者によって異なるかもしれない。その違いは、例えば、ペプチドの変異による可能性がある。当業者は、特に、本明細書の例と個別の文献を参照し、反応がどの程度個々のペプチドによって誘導されるかの判定に応用することのできる方法を十分把握している。好ましくは、本発明の変異体は本発明の各ペプチドと交差反応するT細胞を誘導する。前記ペプチドは、腫瘍関連抗原、特に、例えば、タンパク質分解、血管形成、細胞増殖、細胞周期の制御、細胞分裂、転写の制御、翻訳の制御、組織浸潤などの機能を持つ腫瘍関連抗原に由来する。表4は、ペプチドと、ペプチドが由来するタンパク質の機能を示している。表4:本発明のペプチドと親タンパク質の機能表5本発明の組成物に有用な追加免疫原性ペプチド細胞分裂周期2タンパク質CDC2CDC2は、p34cdc2またはCdk1サイクリン依存性キナーゼ1とも知られ、セリンスレオニンタンパク質キナーゼファミリーであるCdkに属しており、細胞周期のコントロールに重要な役割を果たしている。G2M移行の主な調節因子として知られている。細胞分裂中間期の最後で、A型サイクリンと結合して活性化され、有糸分裂の開始を促す。核膜の破壊後、A型サイクリンは分解されサイクリンBに置き換わる。CDC2とサイクリンBの複合物から、有糸分裂中に細胞を誘導するのに不可欠な、有糸分裂促進因子MPFが形成される。活性なCDC2は70を超える基質をリン酸化する。例えば、リンカーヒストンH1のリン酸化により、クロマチン構造の緩和と特異遺伝子の転写が起こり、さらにRNAポリメラーゼIIのリン酸化により、転写が強化されるCisekandCorden1989。BRCA2のリン酸化により相同組み換え依存修復が刺激されEsashietal2005、FOXO1のリン酸化により転写活動が阻害され、その結果細胞増殖と生存が起こる。セパラーゼのリン酸化は、未熟な姉妹染色分体の分離を抑制するStemmannetal2001。後期促進複合体シクロソームAPCCがサイクリンBをユビキノン化するとき、CDC2活性は分裂後期中に再び断ち切られ、その分解が起こる。細胞分裂でCDC2の機能は重複せず、Cdk2、4および6など他のCdk活性によって補正することはできない。これに反して、CDC2がG1S移行のような細胞周期の他の相でも同様に働くことが報告され、つまり、中間期Cdkの代わりになり得る。それ故、CDC2は唯一の不可欠な細胞周期Cdkであると思われた。細胞周期でのその発現と機能とは別に、一部の例でCDC2はアポトーシス状態で発現され、亢進された活性により有糸分裂のカタストロフィーが起こり得る。CDC2の過剰発現が数種のがんで発見されたが、サイクリンのような他の細胞周期タンパク質の発現は、むしろ無調節になることが多くなる。がんの種類の中でCDC2を過剰発現させるのは、前立腺癌、口腔癌、口腔扁平上皮癌OSCC、急性骨髄性白血病AMLQianetal2009、ピロリ菌誘発性MALTリンパ腫Banerjeeetal2000、大腸癌Yasuietal1993である。いくつかの症例では、過剰発現は予後の悪化と相関していた。胃癌GCでは、過剰発現およびまたは活性の増大が報告されており1423症例、CDC2の過剰発現が原因となっている可能性が示唆された。さらにCDC2は有糸分裂中に活性な遺伝子群であり、過剰発現されると、腫瘍の染色体を不安定に導くことが認められた。CDC2および他のCdkの阻害物質は、がんの薬物治療法の候補として考慮されてきたShapiro2006。異常紡錘体様小頭症関連タンパク質ASPM異常紡錘体様小頭症関連ASPM遺伝子は、ショウジョウバエの異常紡錘体aspのヒト相同分子種であり、常染色体劣性原発性小頭症の最も一般的な変異遺伝子である。ヒトでは、ASPMの同型変異に起因する神経形成不全により、小頭症および精神遅滞が発生する。原発性常染色体劣性小頭症MCPHの最も一般的な原因は、神経形成調節に関与するASPM遺伝子の変異であるようにみえる。ASPMは有糸分裂中、紡錘体極に局在化している。siRNA介在ノックダウンによりASPMを阻害すると、腫瘍細胞の増殖と神経幹細胞の増殖が抑制されるため、神経膠芽細胞種中の考えられる分子標的としてASPMが支持される。ASPMは、正常脳と比較して神経膠芽細胞種で過剰発現された。ASPMの発現は、悪性神経膠腫のマーカーとして使用することもでき、治療標的となる可能性を示している。ASPMの過剰発現は、つまりp53の変異状態および腫瘍病期とは無関係に腫瘍の早期再発ETRのリスクが高く、そのため予後が悪い、浸潤転移の可能性が高い肝細胞癌HCCを予測する分子マーカーである。ASPMは、不死化細胞、がん細胞および非小細胞肺癌NSCLC組織でもアップレギュレートされていたJungetal2009。ユビキチンカルボキシル末端ヒドラーゼL5UCHL5ユビキチンカルボキシル末端ヒドラーゼL5UCHL5は、ユビキチンC末端ヒドラーゼUCH37またはINO80Rとしても知られる、プロテアソームに関連する脱ユビキチナーゼである。この酵素は、C末端Cys76とLys48間のイソペプチド結合を開裂させ、遠位端からタンパク質に結合したポリユビキチン鎖を分解する。UCHL5は、イソペプチターゼの作用を活性化するプロテアソームの19S調節粒子の成分であるhRpn13Adrm1としても知られると結合する。hRpn13は、ユビキチンの受容体としても機能し、その結果、脱ユビキチン化への基質認識と連結する。UCHL5はリッドとベース間に位置する19S粒子の別成分である、Rpn10S5aとも結合するが、この相互作用によりUCHL5は活性化されない。UCH37はユビキチン化が進んでいない基質または、他の分解が遅いユビキチン抱合体をタンパク質分解から救済する。その代わりUCH37はまた、タンパク質分解の中心である26Sプロテアソームの20S粒子内への転座を行う19S調節複合体内で、ポリユビキチン化した基質がそれらの開始結合部位から放出されるのを容易にし、分解を促進する可能性があるUCHL5は核内で、Ino80クロマチン再モデル化複合体にも関連している。プロテアソームと結合すると、活性化され、Ino80とプロテアソームが介在すると指摘されている転写とDNA修復の調節に寄与する可能性がある。UCHL5のRNAi介在ノックダウンは、細胞内タンパク質分解は促進したが、細胞成長、プロテアソーム構造またはタンパク質分解能力に対しては検出可能な作用を有していなかったので、UCHL5の機能の少なくとも一部は他のタンパク質によって発揮される可能性がある。UCHL5のようなユビキチン特異的プロテアーゼは、細胞周期進行のコントロール、分化、DNA複製と修復、転写、タンパク質品質制御、免疫応答およびアプトーシスなどいくつかのプロセスに関与している。UCHL5が悪性形質転換に寄与するという証拠は、少なくともいくつかある。その活性は、ヒト子宮頸癌組織では、隣接する正常組織に比べアップレギュレートされていることが示された。脱ユビキチン化が可能なため、TGFβ受容体と、その下流メディエーターであるSmadを安定化し、その結果TGFβシグナル伝達を高める。高められたTGFβシグナル伝達は、がん進行の末期で腫瘍プロモーターとして作用する可能性があるが、二重機能も有し、早期および発生前に腫瘍サプレッサーになる可能性もあるWicksetal2005Wicksetal2006Hortonetal2007BierieandMoses2006。cMet例として、EP080082928およびEP1507795B1を参照のこと。さらに、リン酸化による構成的cMet活性化は、ヒト明細胞腎細胞癌における腫瘍形成の重要なメカニズムとしても同定されたNakaigawaetal2006。cMetの過剰発現は腫瘍の低酸素状態により誘導されることが多く、受容体の構成的活性化につながり、予後が悪いことと関連している。内因性cMET遺伝子のサイレンシングによりinvitroで浸潤性増殖プログラムを完全に実行できなくなり、腫瘍が発育しなくなり、invivoでは実験的転移の生成が低下する。マクロファージ刺激タンパク質受容体MST1RMST1R別名RON受容体は、細胞表面受容体チロシンキナーゼのMetファミリーのメンバーで、上皮細胞とマクロファージで主に発現される。cMETのようにRONは、様々な上皮細胞由来腫瘍およびがん細胞株によって発現され、腫瘍形成で機能的役割を果たすと考えられている。臨床試験は、MST1Rの過剰発現が患者転帰の悪化と転移の両方に関連していることを示している。MST1R発現は、胃癌組織および対応する腫瘍随伴性組織で著しいが、正常の胃粘膜では発現されないZhouetal2008。MST1R受容体は、各リガンドに対応して、細胞移動、浸潤、増殖および生存を誘発する。さらに、MST1Rはinvitroで、動物モデルではinvivoで発がん活性を有し、ヒトのがんでは脱調節されることが多いDussaultandBellon2009。データによれば、前立腺癌細胞のMST1Rノックダウンは、invitroでMST1R発現細胞と比べて、内皮細胞走化性を有意に低下させ、腫瘍増殖の減少、およびinvivoで前立腺内への同所移植後の微小血管密度の低下を起こすことを示している。発がん性の高い大腸癌細胞株中でMST1RキナーゼをRNA干渉媒介性ノックダウンすると、対照細胞と比較して増殖が減少することが示された。染色体タンパク質4の構造維持SMC4構造維持された染色体SMCタンパク質は、細菌からヒトへ高く保存される染色体ATPアーゼであり、高次染色体組織およびダイナミクスの多数の側面で基本的役割を果たしている。SMC4タンパク質は、クロマチン縮合で役割を持つコンデンシン複合体の中心成分であり、核小体分離、DNA修復、およびクロマチン骨格の維持にも関連している。真核生物は個々の生物で6種以上のSMCタンパク質を有し、特別な機能を持つ3つの独特のヘテロダイマーを形成する。SMC2とSMC4が、染色体の集合と分離に不可欠なコンデンシン複合体の中心として機能する。25種の異なる正常組織のmRNAレベルをRTPCRで分析した結果、この遺伝子は正常な前立腺および唾液腺では高く発現し、大腸、膵臓、小腸では非常に弱く発現し、その他の組織では全く発現しないことが示された。ヒトのがんサンプルのRTPCRによる試験では、ヒト乳癌33例中26例、前立腺癌3例中3例、大腸癌3例中3例、膵臓癌3例中3例など、RNAは多数のがん細胞株およびがん標本で高く発現していることが示されたEglandetal2006。AVL9驚いたことに、AVL9タンパク質は、それ自体および対応する遺伝子の機能について不完全なデータしか得られていないため、ソースタンパク質として発見された。動原体タンパク質Nuf2NUF2遺伝子は、セントロメアと関連した保存タンパク質複合体の成分である、酵母Nuf2に非常に似たタンパク質をコード化する。酵母Nuf2は、セントロメアが紡錘体極体との接続を失う時、減数分裂前にセントロメアから消失し、染色体分離の調節の役割を果たす。サービビンおよびhNuf2csiRNAは、それらのmRNAを一時的にノックダウンし、それぞれ多核細胞化や有糸分裂停止による細胞死を起こすことが認められた。Nuf2およびHec1は、動原体で双直交に必須な極方向力の維持に必要とされる、外部プレート中の安定な微小管プラス端集積因子部位の組織化に必要である。肺癌組織のマイクロアレイによる免疫組織化学的解析から、色々な組織学的タイプの肺癌の大半で、CDCA1とKNTC2タンパク質レベルが高いことが確認された。これらの高い発現が、NSCLC患者の予後の悪化と関連していた。それらの結合を、KNTC2への結合ドメインに対応する、CDCA1由来の19個アミノ酸ペプチド11RCDCA1を有する細胞透過性ペプチドにより阻害すると、NSCLC細胞の成長を効果的に抑制したHayamaetal2006。CDCA1またはKNTC2のsiRNA媒介ノックダウンは、NSCLC、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、大腸癌、および神経膠腫における細胞増殖およびアポトーシス誘導を阻害することが見出されたKanekoetal2009。CDCA1遺伝子は、子宮頸癌では異なった形で発現するリアルタイムPCRRTPCRにより実証されたmRNAの発現と免疫組織化学によるタンパク質の発現Martinetal2009。切除術により摘出した胃癌組織びまん性6つ、腸型4つのRTPCRから、CDCA1の2つの変異体が癌組織でアップレギュレートされていることが確認された。別のスプライシング変異体が特にCDCA1において、この試験で検出され、抗がん治療の診断マーカーおよびまたは新しいターゲットとして有用である可能性があるOhnumaetal2009。脂質リン酸リン酸ヒドラーゼ2PPAP2Cこの遺伝子でコード化されたタンパク質は、ホスファチジン酸ホスファターゼPAPファミリーのメンバーである。PAPは、ホスファチジン酸をジアシルグリセロールに変換し、グリセロ脂質のデノボ合成、およびホスホリパーゼDにより媒介された受容体活性化シグナル変換で機能する。異なるイソフォームをコード化する、3つの別のスプライスされた転写変異体が報告されている。PPAP2Cは、形質変換された原発性ヒト成人間充織幹細胞MSCでアップレギュレートされる、新規な標的になる可能性がある。PPAP2Cのノックダウンは、細胞周期のS相への進行を遅延させることで細胞増殖を減少させ、p53により転写が調節される。一部のデータは、多数のヒトのがんで観察されるPPAP2Cの過剰発現が、細胞増殖促進の必要条件であることを示唆しているFlanaganetal2009。ある研究では、PPAP2Cが線維芽細胞での細胞周期進行の調節因子であることを示している。PPAP2Cであるが、触媒的に不活性な突然変異体ではない酵素が過剰発現し、早期にS相へ進行させ、これにサイクリンAの早期蓄積が伴った。これらが、有糸分裂誘発、移動、創傷治癒、発病、および腫瘍形成などのプロセスに関連している可能性のある、S相移行速度の大きな変化を説明している。ユビキノールチトクロームcレダクターゼ結合タンパク質UQCRBUQCRB遺伝子は、10個の核コード化サブユニットと1つのミトコンドリアコード化サブユニットを含む、ユビキノールチトクロームc酸化還元酵素複合体の一部であるタンパク質をコード化する。コード化タンパク質はユビキノンと結合し、ユビキノンが結合する時、電子の移動に加わる。この遺伝子の突然変異が、ミトコンドリア複合体III欠乏症に関連している。偽遺伝子がX染色体上に報告された。UQCRB遺伝子は、膵臓腺癌の潜在的癌遺伝子または腫瘍抑制遺伝子の可能性があるHaradaetal2009。UQCRB遺伝子は肝臓細胞癌で過剰発現するJiaetal2007。プロミニン1Prom1プロミニン1はCD133とも呼ばれ、元々CD34造血前駆細胞に特異な分子として同定され、その後様々な組織中の正常幹細胞とがん幹細胞CSCのマーカーであることが示されたMizraketal20081。しかし、その機能については殆ど知られていない。上皮細胞の微線毛のような細胞膜の突起部に主に存在するので、細胞膜局所構造のオーガナイザーとしての機能的役割は、プロミニン1に属するものとみなされた。コレステロールとの相互作用が認められたため、細胞膜内での適切な脂質組成を維持するのに重要であるかもしれない。プロミニン1は多数のヒト腫瘍においてCSCマーカーとして使用される。CSCマーカーに予想される通り、僅かなパーセントの腫瘍細胞のみが、通常プロミニン1に陽性である。腫瘍タイプによって、腫瘍質量当たりの陽性細胞数は1~15であり、大抵は約2である。細胞を発現するプロミニン1が機能テストでCSCであると示される腫瘍球体形成、免疫不全マウスで腫瘍成長の高い開始能力、および非対称分裂自己再生多分化能は以下の通りである。大腸癌腫瘍質量の2~25Todaroetal2007RicciVitianietal2007肝臓癌Maetal2007Suetsuguetal2006Yinetal2007膵臓癌Hermann2007Wang2009前立腺癌腫瘍質量の1Richardsonetal2004異なる表現型の脳腫瘍Singhetal2003Singhetal2004急性リンパ芽球細胞白血病ALLのような白血病Coxetal2009メラノーマMonzanietal2007Rappaetal2008肺癌ChenandOShea2008Eramoetal2008Tirinoetal2009ユーイング肉腫Suvaetal2009子宮内膜癌Rutellaetal2009口腔扁平上皮細胞癌Zhangetal2009頭頸部扁平上皮細胞癌Harperetal2007さらに、いくつかの研究では、正常組織に比べ癌組織ではプロミニン1の発現が増大することを示し、それらの研究の殆どがプロミニン1の発現が全生存率、腫瘍病期または転移などの臨床パラメータと相関することを認めている。その例は、非小細胞肺癌、悪性メラノーマ、網膜芽腫、神経芽細胞腫、および滑膜癌である。プロミニン1の発現は、神経膠腫、膵臓癌PROM1細胞は最大15、大腸癌、直腸および結腸癌、および乳管癌の予後悪化とも相関している。興味深いことに、転移癌患者のPBMCではPROM1mRNAがアップレギュレートされ、特に骨へ転移している患者では顕著であり、PBMCでのPROM1発現は全生存率に対する予後因子となる。予後との相関は卵巣癌では認められなかった。びまん性胃癌では、ケイ素分析に基づきPROM1の発現が示唆されKatohandKatoh2007、さらに正常胃組織に比べ、胃癌ではタンパク質レベルでの過剰発現が報告されているSmithetal2008。しかし、BoeglおよびPrinz2009は、プロミニン1の発現は胃癌、特に後期では減少すると報告し、プロミニン1の発現は腫瘍成長ではなくむしろ血管新生後期でも減少すると相関すると主張した。胃癌細胞株を使った研究ではTakaishietal2009、プロミニン1ではなくCD44が胃癌のCSCマーカーであると主張している。腫瘍形成でプロミニン1発現細胞が関与するという証拠が出されZhuetal2009、マウス腸癌モデルでは新生物細胞のすべてがProm1細胞から生じるが、Prom1表現型を維持したのはわずか7であったと報告された。それ以外に、プロミニン1細胞が腫瘍血管新生に寄与することが示された。CSCに予測したように、プロミニン1細胞には、Akt生存経路の活性化による化学療法耐性が示されたMa2008。シスプラチン治療に奏効しないことが報告されているBertolinietal2009。FLIPアップレギュレーションによるTRAILFas誘発アポトーシスに耐性である。プロミニン1細胞は、IL4の分泌により自らをアポトーシスから保護する。しかし、NK細胞Castriconietal2007Pietraetal2009や細胞傷害性T細胞Brownetal2009によって死滅するので、免疫系が近づきやすいのかもしれない。基質メタロプロテイナーゼ11MMP11基質メタロプロテイナーゼ11MMP11は、乳腺の発達と授乳後の退縮、創傷治癒と瘢痕形成、および生理サイクル中など、組織の改造を要するいくつかの生理的プロセスに関与することが提言された。含脂肪細胞の分化を低減させることで、脂肪ホメオスタシスを負に調節するとも提言されている。他のMMPとは対照的に、コラーゲンVIを除き典型的な細胞外基質分子を開裂することはできない。しかし、α1抗トリプシン、インスリン様成長因子結合タンパク質1およびラミニン受容体など、ある種のセリンプロテアーゼ阻害剤セルピン類であるα2マクログロブリンのような他の基質が同定されている。MMP11は浸潤性乳癌周囲の間質細胞で特異的に過剰発現する遺伝子として発見された。さらなる研究でも、乳癌および他の癌で間質周囲の腫瘍に発現されることが確実となったが、他の癌とは、皮膚癌、非小細胞肺癌と小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、結腸および大腸癌、咽頭上皮癌、食道癌、口腔癌、膵臓癌、膀胱癌、卵巣癌、腎細胞癌、非定型髄膜腫、甲状腺乳頭癌、脳腫瘍MMP11は星状細胞腫で発現されたが、乏突起膠腫と悪性神経膠腫では狭い範囲だけであった、唾液管癌、子宮頸癌、節外性TNK細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および前立腺癌である。MMP11は、殆どのヒト浸潤性癌の間質で過剰発現するが、肉腫や他の非上皮腫瘍ではまれであることが明言された。大抵、MMP11は腫瘍に直接隣接する間質細胞に発現する一方、腫瘍細胞自身、正常組織、および腫瘍から離れた間質細胞では発現しない。しかし、一部の症例では、MMP11は結腸の非癌性組織や、腫瘍細胞、例えば膵臓、乳房、くも膜、および胃のなどの腫瘍中にも発見されることから、上述の内容を一般化することはできない。高レベルのMMP11は、悪性表現型高い浸潤性および予後の悪化と相関している。しかし、甲状腺乳頭癌では、MMP11の発現は悪性な特徴とは逆な関係となった。MMP11の発現は微小血管密度とは相関しなかったので、血管新生での役割はないと思われる。むしろ、癌細胞生存の強化とアポトーシスの抑制を行うように見える。線維芽細胞からのMMP11が癌細胞のIGF1R経路を刺激し、その結果増殖能力を高めると提言された。含脂肪細胞の脱分化へ導く能力が、癌細胞生存と腫瘍の増殖に有利な腫瘍周辺の線維芽細胞様細胞の蓄積によって、癌をサポートする。MMP11は、腫瘍組織および胃癌患者の血清で発見され、発現は転移と相関しているYangetal2008。さらに、MMP11は腫瘍細胞株と胃癌の原発性腫瘍で高く発現しこれに対し他の癌では、間質のみに発現するのではない、腫瘍細胞の増殖を高めるらしいことが示されたDengetal2005。ABL1ABL1がん原遺伝子は、細胞分化、細胞分裂、細胞接着、およびストレス応答のプロセスに関与する、Srcファミリーの細胞質と核のタンパク質チロシンキナーゼをコード化するYoshida2007。CAblは核と細胞質コンパートメント間を往復する。核cAblは、細胞増殖の阻害とアポトーシス促進に関与している。これに対し、細胞質cAblの役割はよく分かっていない。形態形成とFアクチンの動態における役割、および成長因子やインテグリンリガンドのような細胞外刺激により誘発されたシグナル伝達における役割に対する手がかりがある。細胞質cAblは有糸分裂誘発を促進すると報告された。CAbl有糸分裂誘発基質は同定されていないが、その基質はRhoファミリー、特にVavとSosメンバーの低分子GTPアーゼの調節因子を含んでいる可能性がある。偏在的に発現したABL1シロシンキナーゼのDNA結合活性は、CDC2媒介リン酸化によって調節され、ABL1では細胞周期に機能していることが示唆される。cAblタンパク質の活性はそのSH3ドメインによって負に調節され、SH3ドメインを削除するとABL1はがん原遺伝子に変化する。cAbl非受容体チロシンキナーゼは、非造血細胞におけるアクチン応答を調節する。一部の研究では、cAblはシグナル伝達カスケードに関与する重要な因子であり、T細胞活性化中にアクチンの再組織化に導くと同定しているHuangetal2008。ABL1遺伝子の突然変異は、慢性骨髄性白血病CMLに関連している。CMLでは、遺伝子が22染色体のBCRbreakpointclusterregion:切断点クラスター領域遺伝子内で転座されることにより活性化される。この新たな融合遺伝子BCRABLは、サイトカインによる調節なしで細胞を増殖させる、無秩序な細胞質標的チロシンキナーゼをコード化する。これによって、細胞は次々にがん化するZhaoetal2009。活性化cAblチロシンキナーゼは、融合タンパク質としてはなく、肺や乳房の悪性固形腫瘍で重要な役割を果たしているLinandArlinghaus2008。最近の観察では、cAblは固形腫瘍でも脱調節されることを示している。細胞質キナーゼの高い活性は、乳癌とNSCLCで検出されている。しかし過剰発現は十分でなく、構成的なキナーゼ活性がタンパク質リン酸化には必要である。乳癌細胞では、cAblのリン酸化が、SFK、EGFRファミリーメンバーおよびIGF1受容体などの細胞膜チロシンキナーゼにより誘発される。ABL融合タンパク質は固形腫瘍では検出されていない。ABL1と胃癌-ABL1発現の免疫組織学研究では、広範囲にわたるヒトの胎児と成人の正常組織と様々な腫瘍タイプを試験した。殆どの腫瘍は限局性で弱いABL免疫反応性を示した。最も強い染色は軟骨肉腫、脂質肉腫、およびびまん性胃腺癌印環細胞腺癌で認められた。後者2例では、ABLも腫瘍微小血管で発現し、血管新生に関与している可能性を示した。最近の研究で、cagA陽性ピロリ菌への感染が、胃癌の発生に本質的な役割を果たすことが明らかにされた。胃上皮細胞の長期感染時に、ピロリ菌はEGFRのエンドサイトーシスと受容体分解を遮断する。その上、この阻害はCagAに依存するがCagAリン酸化には依存しない、非受容体キナーゼcAblの活性化を介して起こり、そのcAblは次々にEGFR標的部位のpY1173をリン酸化するBaueretal2009。STI571またはshRNAによるcAblキナーゼ活性の選択的阻害により、持続性細胞毒関連遺伝子ACagAのリン酸化と上皮細胞遊走を無効にし、ピロリ菌感染と病原性に極めて重要な役割を果たしていることを示しているPoppeetal2007。キナーゼ遮断薬の例が、BcrAbl癌タンパク阻害剤であるイマチニブ化学名メシル酸イマチニブ、商品名グリベック、STI571であり、慢性骨髄性白血病の第一選択薬となっているPyteletal2009。イマチニブは進行性消化管間質腫瘍GISTの患者の治療に認可されており、その腫瘍ではチロシンキナーゼ受容体であるKITが異常に発現するCroomandPerry2003。がん治療に最近使用されている別のキナーゼ阻害薬は、細胞質性非受容体のABLに特異的なダサチニブBMS354825であるPyteletal2009。ニロチニブは、成人でのイマチニブ耐性または不耐性PhCMLCPAPの治療に適応される二世代bcrablTKI経口薬であるDeremeretal2008。SEQIDNO13、SEQIDNO14、SEQIDNO15はWO2007028574で公表され、CDC42細胞分裂周期42は細胞周期の制御に関与するタンパク質である。このタンパク質はRhoサブファミリーの低分子GTPアーゼであり、細胞の形態、遊走、移動、エンドサイトーシス、細胞周期の進行など、様々な細胞機能を管理するシグナル伝達経路を制御している。CDC42は神経膠芽細胞腫で大きく過剰発現されることが分かった。WO2004067023では、腫瘍関連抗原サービビンに由来するMHCクラスI拘束性ペプチドについて報告しており、このペプチドは高い親和性でクラスIHLA分子に結合できる。骨シアロタンパク質IBSP1、早期Tリンパ球活性化タンパク質ETA1、また最も一般的にはオステオポンチンOPNとしても知られる分泌性リンタンパク質1SPP1はヒト遺伝子産物であり、他の種でも保存されている。オステオポンチンは骨再形成の重要な因子として関係があるとされてきた。特に、研究では、破骨細胞を骨の無機物基質に固定する役割を果たしていることが指摘されている。骨の有機物部分は乾燥重量の約20であり、オステオポンチン以外の部分として、I型コラーゲン、オステオカルシン、オステオネクチン、骨シアロタンパク質、アルカリホスファターゼが含まれる。I型コラーゲンがタンパク質質量の90に相当する。OPNは、白血球で発現されるα4β1、α9β1、α9β4など、数種類のインテグリン受容体に結合する。これらの受容体は、白血球細胞の接着、遊走、生存に働くことが十分確立されている。そのため、最近の研究努力は、このような反応に介在する上でのOPNの役割に焦点が当てられている。オステオポンチンは、マクロファージ、好中球、樹状細胞、TおよびB細胞など、一連の免疫細胞において、様々な動態で発現される。OPNは様々な方法で免疫調節因子として作用することが報告されている。まず、OPNには化学走性があり、細胞の炎症部位への補充を促す。接着タンパク質としても機能し、細胞接着および創傷治癒に関与する。更に、OPNは細胞の活性化とサイトカイン産生に介在し、アポトーシスを制御することで細胞の生存を促す。活性化されたT細胞はIL12の働きを受けてTh1タイプに分化し、IL12およびIFNγなどのサイトカインを産生する。OPNはTh2サイトカインIL10の産生を抑制し、Th1応答を亢進する。OPNは細胞性免疫に影響し、Th1サイトカインの機能を有する。また、B細胞の免疫グロブリン産生と増殖を増進する。2008年に実施された最近の研究では、OPNが肥満細胞の脱顆粒を誘導することが示唆されている。[NagasakaAMatsueHMatsushimaHetalOsteopontinisproducedbymastcellsandaffectsIgEmediateddegranulationandmigrationofmastcellsEurJImmunol3848999]この研究者らは、IgEが介在するアナフィラキシーは、野生型マウスと比較し、OPNノックアウトマウスで有意に減少することを観察した。マクロファージの活性化におけるOPNの役割はがん研究でも意味づけられ、この研究では、OPNを産生する腫瘍がOPNを産生しない腫瘍と比較し、マクロファージの活性化を誘導できることを発見した。OPNは多くの状況で重要な抗アポトーシス因子である。OPNは、マクロファージおよびT細胞、また有害刺激に曝露した線維芽細胞や内皮細胞の活性化誘導細胞死を阻害する。OPNは炎症性大腸炎の非プログラム細胞死も予防する。OPNが遍在的に発現された複数の細胞表面受容体と相互作用するという事実は、創傷治癒、骨代謝回転、腫瘍形成、炎症、虚血、免疫応答など、多くの生理的、病的プロセスにOPNが積極的に関与していることを示している。従って、血漿OPNレベルを操作することは、自己免疫疾患、がん転移、骨粗鬆症、一部のストレスの治療に有用と考えられる。OPNはIL17産生を促進することが示されたが、OPNは肺癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、卵巣癌、メラノーマ、中皮腫など、様々ながんで過剰発現されており、OPNは糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎のいずれにも関与し、OPNは動脈内の粥状斑に認められる。従って、血漿OPNレベルを操作することは、自己免疫疾患、がん転移、骨粗鬆症、一部のストレスの治療に有用と考えられる。ヒト上皮細胞増殖因子受容体3ERBB3は、受容体チロシンキナーゼの上皮細胞増殖因子受容体EGFRファミリーのメンバーをコード化する。ERBB3は、ニューレグリン、他のERBBと非ERBB受容体、さらに他のキナーゼ、および新規メカニズムによって活性化される。ERBB3は下流で、ホスホイノシトール3キナーゼAKT生存有糸分裂経路で顕著に相互作用するが、GRB、SHC、SRC、ABL、rasGAP、SYKおよび転写レギュレータのEBP1とも同様に相互作用するSithanandamandAnderson41348。原発性がんのERBB3発現および培養細胞中でのその機序の寄与に関する研究では、様々な割合の確実性で、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、ある種の脳細胞癌、網膜癌、メラニン細胞癌、大腸癌、膵臓癌、胃癌、口腔癌および肺癌の原因または支持とERBB3を関係付けているSithanandamandAnderson41348。ERBB3タンパク質は、中咽頭および食道の扁平上皮細胞、胃壁細胞および大小腸の表面腸細胞など、消化管全体の上皮細胞中で免疫組織学的方法により検出された。ERBB3は胃癌で発現の増大を示したPolleretal27580Sanidasetal93540。胃癌細胞株すべてがERBB3と切断型分泌物を発現した。胃悪性腫瘍でERBB3が重要な役割を果たしている強い証拠が、あまり分化されていない印環細胞胃癌の研究からもたらされた。Kobayashietal1294301Zhangらは、免疫組織化学的方法IHCにより、2つの病理タイプの胃癌腸型およびびまん性でERBB3の発現を研究した。びまん性胃癌は、腸型よりもERBB3発現速度が有意に高かった262vs50p001。2つの組織型の胃癌におけるERBB3の選択的過剰発現は、予後悪化と強く関連しているZhangetal211218。ERBB3の発現は、腫瘍浸潤の深さ、関与するリンパ節、遠隔転移、腫瘍病期、および再発など、腫瘍進行に関与するパラメータと有意に関連していた。Hayashietal784349胃癌21症例および慢性胃炎20症例において、臨床病理変数を考慮しながら、新鮮凍結組織の免疫組織化学的方法によりEGFR、cerbB2およびcerbB3の発現と共発現が試験された。全般的に、胃癌患者は慢性胃炎群よりもEGFR、cerbB2およびcerbB3の過剰発現発生率が高い各々81と43、38と45、35と20ことが示されたが、統計的有意差はEGFR発現のみで認められたp001Slesaketal272732。ERBB3の治療標的に対するいくつかのアプローチが実験的に試みられた。ERBB3の細胞外ドメインへのRNAアプタマーは、NRG誘発性ERBB3ERBB2ヘテロ二量化、ERBB2リン酸化、およびMCF7乳癌細胞の成長を阻害した。Chenetal922631A431扁平上皮細胞癌細胞のERBB3遺伝子発現を、合成デザイナージンクフィンガーを持つ転写因子により阻害すると、増殖と遊走が低減し、ERBB3発現の抑制はERBB2の変化よりも大きい効果を与えたLundetal908291。ビタミンEアイソマーγトコトリエノールは、ERBB3活性化およびPI3KAKT経路の下流刺激の特異的遮断により、乳腺細胞の増殖を阻害したSamantandSylvester56374。マイクロRNA125aは、ERBB3RNAとタンパク質、AKTの活性化、SKBR3乳癌細胞の成長と浸潤性を低減させたScottetal147986。乳癌細胞でのsiRNAによるERBB3のダウンレギュレーションにより、チロシンキナーゼ阻害薬への二次耐性を無効にし、アポトーシスを誘発させたSerginaetal43741。低分子干渉RNAsiRNAによるERBB3またはAKTの阻害作用は、肺腺癌の治療へのアプローチとして有望であることを示しているSithanandametal184759。サービビンBIRC5アポトーシス阻害タンパク質IAPファミリーの一員であるBIRC5サービビンの発現は、胎生組織および様々なヒトがんで上昇している。WO2004067023では、腫瘍関連抗原サービビンに由来するMHCクラスI拘束性ペプチドについて報告しており、このペプチドは高い親和性でクラスIHLA分子に結合できる。サービビンは、細胞増殖とアポトーシス細胞死の両方の調節が可能であると思われる。特に神経膠芽細胞腫では、非常に高レベルのサービビンの発現が検知できる。脳神経膠腫中のサービビン過剰発現が悪性増殖、抗アポトーシスおよび血管形成に重要な役割を果たしている可能性があることが指摘されている。特に神経膠芽細胞腫では、ただし他の腫瘍にも当てはまるが、サービビン陰性腫瘍患者と比較し、サービビンの発現が悪性度神経膠芽細胞腫においてサービビンの発現が最も高いおよび全体的な生存期間が短いことと有意に関連していた。B型肝炎コア抗原B型肝炎ウイルスHBVコアタンパク質HBcでは、免疫原性ペプチドがよく知られている。HBcの10アミノ酸ペプチドは、本発明に基づき、患者の免疫能およびがんワクチンへの免疫付与成功の陽性コントロールに含めることができる。表6:ソースタンパク質のがん関連機能順位:、は、現在未知状態であることを示す。表6からわかるように、近い将来、当業者は本出願組成を特異的な患者およびまたは腫瘍に容易に採用し、それに応じてTUMAPを選択できる。本発明の好ましい実施形態において、前記薬剤組成物は少なくとも2つのペプチドを有し、その1つはSEQIDNo1のアミノ酸配列を含み、さらSEQIDNo11のアミノ酸配列を含む。本発明の好ましい実施形態において、前記薬剤組成物はSEQIDNo1のアミノ酸配列とSEQIDNo2および/またはSEQIDNo11のアミノ酸配列を含む、少なくとも2つのペプチドを有する。本発明の好ましい実施形態において、前記薬剤組成物はSEQIDNoSEQIDNo3のアミノ酸配列とSEQIDNo2および/またはSEQIDNo11のアミノ酸配列を含む、少なくとも2つのペプチドを有する。本発明の好ましい実施形態において、前記薬剤組成物はSEQIDNoSEQIDNo1のアミノ酸配列とSEQIDNo7および任意選択としてSEQIDNo11のアミノ酸配列を含む、少なくとも2つのペプチドを有する。本発明の好ましい実施形態において、前記薬剤組成物はSEQIDNo2のアミノ酸配列とSEQIDNo7および任意選択としてSEQIDNo17のアミノ酸配列を含む、少なくとも2つのペプチドを有する。本発明の好ましい実施形態において、前記薬剤組成物はSEQIDNoSEQIDNo3のアミノ酸配列とSEQIDNo7および任意選択としてSEQIDNo11のアミノ酸配列を含む、少なくとも2つのペプチドを有する。更に好ましい実施形態において、前記薬剤組成物は、SEQIDNO2からSEQIDNO11およびSEQIDNo11からSEQIDNo22とSEQIDNo24から成るグループから選択されたアミノ酸配列、および/またはSEQIDNO2からSEQIDNO10またはSEQIDNo11からSEQIDNo22とSEQIDNo24の配列と少なくとも85同一のアミノ酸配列を含む少なくともう1つのペプチド、および/またはSEQIDNO2からSEQIDNO10またはSEQIDNo11からSEQIDNo22とSEQIDNo24をコード化する核酸を含むポリヌクレオチド、またはその変異型アミノ酸配列、および薬剤的に認容される担体を有する。本発明の更に好ましい実施形態は、SEQIDNO1からSEQIDNO12およびSEQIDNo14からSEQIDNo20から成るグループから選択されたアミノ酸配列および/またはSEQIDNO1からSEQIDNO12の配列と少なくとも80同一のアミノ酸配列を含む少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、または18個のペプチド、および/またはSEQIDNO1からSEQIDNO12およびSEQIDNo14からSEQIDNo20をコード化する核酸を含むポリヌクレオチド、またはその変異型アミノ酸配列、および薬剤的に認容される担体を有する。以下に更に説明される通り、前記薬剤組成物は、より効果的にするため、更に追加ペプチドおよび/または添加物を含むことができる。特定のアミノ酸配列の異型アミノ酸配列により、発明者は、例えば、1もしくは2アミノ酸残基の側鎖を例えば、これを別の自然に発生したアミノ酸残基の側鎖または一部の他の側鎖と置換することにより変更していることを意味し、特定のアミノ酸配列から成るペプチドと実質的に同様に、ペプチドがなおもHLA分子に結合することができるようにする。例えば、HLAAまたはDRなどの適切なMHC分子と相互作用し、結合する能力を改善しない場合も、少なくとも維持できるように、また、本発明の観点において定義したアミノ酸配列を含むポリペプチドを発現した細胞を認識し、死滅させることができる、活性化CTLを発生させる能力を改善しない場合も、少なくとも維持できるように、ペプチドを修飾してもよい。データベースから導出できる通り、HLAA結合ペプチドの特定の位置は典型的にはアンカー残基であり、HLA結合溝の結合モチーフに合うコア配列を形成している。T細胞受容体と相互作用することが不可欠ではないこれらのアミノ酸残基は、実質上T細胞の反応性に影響せず、また関連するMHCとの結合を阻害しない、他のアミノ酸との置換によって修飾できる。そのため、本発明のペプチドは、所定の条件とは別に、アミノ酸配列または、その一部分または変異体を含んだいずれかのペプチドこの用語により、発明者はオリゴペプチドまたはポリペプチドを含むである。更に、MHCクラスII提示ペプチドは、特定のHLA特異的アミノ酸モチーフを持つコア配列と、任意選択として、コア配列の機能を阻害しないN末端および/またはC末端伸長アミノ酸配列すなわちこのペプチドとT細胞との相互作用とは無関係とみなされるから構成されることが知られている。N末端および/またはC末端の伸長は、それぞれ例えば、1から10アミノ酸長である。これらのペプチドはMHCクラスII分子に直接載せるために使用するか、または以下に示す方法で、この配列をベクターに入れてクローン化できる。これらのペプチドは、細胞内で、より大きなペプチドがプロセシングされた最終産物であるため、より長いペプチドも、同様に利用できる。本発明のペプチドは、いずれのサイズでもよいが、一般的には分子量は100000未満、好ましくは50000未満、より好ましくは10000未満、より好ましくは5000未満、より好ましくは2500未満であり、また通常は約1000~2000である。アミノ酸残基数に関して、本発明のペプチドは1000残基未満、好ましくは500残基未満、より好ましくは100残基未満である。更に、本発明ではペプチド組成物およびその変異体も提供するが、前記ペプチドまたは変異体は、全体が8から100アミノ酸長、好ましくは8から30アミノ酸長であり、最も好ましくは8から17アミノ酸長、すなわち8、9、10、11、12、13、14、15または16アミノ酸長である。好ましくは、SEQIDNO11からSEQIDNo22とSEQIDNo24から成るグループから選択したコア配列を持ち、C末端および/またはN末端が1~10アミノ酸伸長したコア配列を持つペプチドであり、より好ましくは、これらの隣接アミノ酸の総数が1~12残基、より好ましくは1~8残基、より好ましくは1~6残基であり、SEQIDNO11からからSEQIDNo22とSEQIDNo24いずれかの前記ペプチドと同様に、前記ペプチドがHLA分子に結合できるならば、前記隣接アミノ酸は前記C末端および前記N末端にどのような比率でも分配することができる例えば、全ての隣接アミノ酸を片方の末端に加えるか、前記アミノ酸を両方の末端に等しく、又は他のいかなる比率でも加えることができる。従って、本発明のペプチドとのT細胞交差反応を誘発する変異体は、しばしは長さが異なる変異体である。約12アミノ酸残基より長いペプチドがMHCクラスII分子との結合に直接使用われる場合、コアHLA結合部位に隣接するアミノ酸残基は、MHCクラスII分子の結合溝に特異的に結合する、あるいは、CTLにペプチドを提示する、ペプチドの能力に実質上影響しない残基であることが好ましい。しかし、すでに上述した通り、より大きなペプチドは適当な抗体提示細胞によって断片化されるため、特に、ポリペプチドによってコード化される場合は、このようなより大きなペプチドが利用可能であることは理解される。更に、前記隣接アミノ酸はinvivoにおいてペプチド分解速度を減速させることができ、CTLが利用できる実際のペプチド量が、隣接アミノ酸がないペプチドと比較して多くなるようにする。また、通常8から10アミノ酸長のMHCクラスIエピトープは、実際のエピトープを含んだより長いペプチド、またはタンパク質からプロセシングされたペプチドから作成することも可能である。MHCクラスIIエピトープと同様、実際のエピトープのNおよびC末端上流および/または下流の伸長した前駆ペプチドの隣接する残基は、実質的にCTLへのペプチド提示に影響せず、また前記伸長したペプチドのプロセシングにより、実際のエピトープが生成するために必要なタンパク質分解的切断部位を隠さないことが好ましい。好ましくは、SEQIDNO1からSEQIDNO10およびSEQIDNo11から成るコア配列を持ち、C末端および/またはN末端が1~10アミノ酸伸長したペプチドであり、より好ましくは、これらの隣接アミノ酸の全数が1~12残基、より好ましくは1~10残基、より好ましくは1~8残基、より好ましくは1~6残基であり、前記ペプチドがSEQIDNO1からSEQIDNO10、およびSEQIDNo11いずれかの前記ペプチドと同様に、なおもHLA分子に結合できるならば、前記隣接アミノ酸はC末端およびN末端にどのような比率でも分配することができる例えば、全ての隣接アミノ酸を片方の末端に加えるか、前記アミノ酸を両方の末端に等しく、又は他のいかなる比率でも加えることができる。更に本発明では、MHCクラスIエピトープのペプチドおよび変異体も提供し、このペプチドまたは変異体の全体は、8~100アミノ酸長であり、好ましくは8~30アミノ酸長であり、最も好ましくは8~18アミノ酸長、すなわち8、9、10、11、12、13、14、15、16または17アミノ酸長である。当然のことながら、本発明のペプチドまたは変異体は、ヒトMHCクラスIあるいはII分子に結合する能力を持つ。MHC複合体へのペプチドまたは変異体の結合は、例えば、本発明の以下の例で説明される方法、または異なるMHCクラスII対立遺伝子に関する文献で報告された方法など、該分野で既知の方法により検討することができる例として、VogtABKropshoferHKalbacherHKalbusMRammenseeHGColiganJEMartinRLigandmotifsofHLADRB50101andDRB11501moleculesdelineatedfromselfpeptidesJImmunol199415316651673MalcherekGGnauVStevanovicSRammenseeHGJungGMelmsAAnalysisofallelespecificcontactsitesofnaturalHLADR17ligandsJImmunol199415311411149ManiciSSturnioloTImroMAHammerJSinigagliaFNoppenCSpagnoliGMazziBBelloneMDellabonaPProttiMPMelanomacellspresentaMAGE3epitopetoCD4cytotoxicTcellsinassociationwithhistocompatibilityleukocyteantigenDR11JExpMed1999189871876HammerJGallazziFBonoEKarrRWGuenotJValsasniniPNagyZASinigagliaFPeptidebindingspecificityofHLADR4moleculescorrelationwithrheumatoidarthritisassociationJExpMed199518118471855TompkinsSMRotaPAMooreJCJensenPEAeuropiumfluoroimmunoassayformeasuringbindingofantigentoclassIIMHCglycoproteinsJImmunolMethods1993163209216BoytonRJLohmannTLondeiMKalbacherHHalderTFraterAJDouekDCLeslieDGFlavellRAAltmannDMGlutamicaciddecarboxylaseTlymphocyteresponsesassociatedwithsusceptibilityorresistancetotypeIdiabetesanalysisindiseasediscordanthumantwinsnonobesediabeticmiceandHLADQtransgenicmiceIntImmunol199817651776。本発明のペプチドは更に、必ずしも、MHC分子の実際のエピトープとして機能するペプチドの一部を形成する必要のないNおよび/またはC末端に位置する追加のアミノ酸伸長を有しているが、それでも、本発明のペプチドを細胞に効率的に導入するために重要と考えられる上記参照。本発明の1つの実施形態において、本発明のペプチドが、例えば、NCBIのGenBank受入番号X00497由来のHLADR抗原関連不変鎖の80残基のN末端アミノ酸p33、以下Iiを有する融合タンパク質であるStrubinMMachBandLongEOThecompletesequenceofthemRNAfortheHLADRassociatedinvariantchainrevealsapolypeptidewithanunusualtransmembranepolarityEMBOJ3869872。本発明はまた、少なくとも1つの本発明のペプチドからなる薬剤組成物を提供し、該ペプチドの全体は8~100アミノ酸長、好ましくは8~30アミノ酸長、最も好ましくは8~17アミノ酸長、または9、10、11、12、13、14、15、または16アミノ酸長である。更に、前記ペプチドまたは変異体は、より強い免疫応答を引き起こすため、MHC分子に対する安定性および/または結合性を向上できるようにさらに修飾される。そのようなペプチド配列の最適化の方法は、該分野では良く知られており、逆方向ペプチド結合または非ペプチド結合の導入などがある。従って、本発明の別の観点では、少なくとも1つのペプチドまたは変異体が非ペプチド結合を含む薬剤組成物を提供する。逆方向ペプチド結合において、アミノ酸残基はペプチドCONH結合ではなく、逆向きに結合している。このようなレトロインバーソ型ペプチド模倣物は、例えば、参照文献として引用されるMeziereetalJImmunol15932303237に記載のように、該分野で知られている方法で作成される。この方法では、骨格の変化はあるが側鎖方向は変化させずに擬ペプチドを作成する。Meziereら1997は、これらの擬ペプチドが、MHCとヘルパーT細胞応答に有用であることを示している。CONHペプチド結合の代わりにNHCO結合を含むレトロインバーソ型ペプチドは、タンパク質分解にはるかに耐性がある。非ペプチド結合とは、例えば、CH2NH、CH2S、CH2CH2、CHCH、COCH2、CHCH2、およびCH2SOなどのことである。米国特許4897445では、標準的方法で合成したポリペプチドを含むポリペプチド鎖内の非ペプチド結合CH2NHと、NaCNBH3存在下アミノアルデヒドとアミノ酸を反応させ合成した非ペプチド結合の固相合成法が提供されている。上述の本発明の配列を持つペプチドは、アミノ末端および/またはカルボキシ末端にある別の化学基を用いて合成され、例えば、ペプチドの安定性、バイオアベイラビリティ、および/または親和性を向上させることもできる。例えば、カルボベンゾキシル基、ダンシル基、またはt-ブチルオキシカルボニル基などの疎水基は、ペプチドのアミノ末端に付加できる。同様に、アセチル基または9-フルオレニルメトキシ-カルボニル基をペプチドのアミノ末端に付加することもできる。更に、疎水基、t-ブチルオキシカルボニル基、またはアミノ基を、ペプチドのカルボキシ末端に付加することもできる。更に、本発明の全てのペプチドは、その立体配置が変化するように合成することもできる。例えば、通常のL異性体の代わりに、前記ペプチドの1個またはそれ以上のアミノ酸残基のD異性体を使用する。更に、本発明のペプチドの少なくとも1つのアミノ酸残基を、既知の合成アミノ酸残基の1つに置換してもよい。このような変化は、本発明のペプチドの安定性、バイオアベイラビリティ、および/または結合作用を向上させることもある。同様に、本発明のペプチドまたは変異体は、ペプチド合成の前後において、特定のアミノ酸と反応して化学的に修飾することもできる。このような修飾の例は、当該分野では良く知られており、本明細書で参考文献として引用した、RLundbladChemicalReagentsforProteinModification3rdedCRCPress2005などに要約されている。アミノ酸の化学的修飾としては、アシル化、アミジン化、リジンのピリドキシル化、還元的アルキル化、246-トリニトロベンゼンスルホン酸TNBSによるアミノ基のトリニトロベンジル化、カルボキシル基のアミド修飾、およびシステインからシステイン酸への過蟻酸酸化によるスルフィドリル修飾、水銀誘導体の形成、他のチオール化合物との混合ジスルフィドの形成、マレイミドとの反応、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドとのカルボキシメチル化、およびアルカリ性pH下でのシアン酸塩とのカルバモイル化が挙げられるが、これだけに限定されない。これに関して、当業者は、より広義なタンパク質の化学修飾に関する方法論について、EdsColiganらのCurrentProtocolsInProteinScienceJohnWileySonsNY19952000の15章を参照されたい。治療用のタンパク質およびペプチドをPEGによりうまく修飾できると、しばしば循環血液中の半減期の延長につながり、一方、グルタルアルデヒト、ポリエチレングリコールジアクリレート、およびホルムアルデヒドによるタンパク質の架橋は、ヒドロゲルの調製用として使われる。免疫療法のためのアレルゲンの化学的修飾は、しばしばシアン酸カリウムとのカルバミル化によって達成される。一般的に、少なくともアミノ酸残基間にペプチド結合を持つペプチドおよび変異体は、LuetalJOrgChem463433および参考文献で公表されているように、固相ペプチド合成のFmocポリアミド法によって合成される。精製は、再結晶、分子篩クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、および通常アセトニトリル/水の勾配分離などによる逆相高速液体クロマトグラフィーの1つあるいはその組み合わせにより達成される。ペプチド解析は、薄層クロマトグラフィー、電気泳動、特にキャピラリー電気泳動、固相抽出CSPE、逆相高速液体クロマトグラフィー、酸加水分解後のアミノ酸分析および、高速原子衝撃FAB質量分析法、そしてMALDIおよびESIQTOF質量分析法にて行われる。本発明のさらなる観点では、本発明のペプチドもしくは変異体をコード化する核酸例、ポリヌクレオチドを提供する。前記ポリヌクレオチドはDNA、cDNA、PNA、CAN、RNAなどであり、一本鎖および/または二本鎖、天然型または例えばホスホロチオエート結合骨格を有するポリヌクレオチドなどの安定型ヌクレオチド、またはその組み合わせであってもよく、また、ペプチドをコード化している限り、イントロン含有または不含どちらの場合であってもよい。当然のことながら、前記ペプチドは、ポリヌクレオチドでコード化可能な天然発生のペプチド結合によって連結される天然発生のアミノ酸残基を含むペプチドのみである。更に、本発明のさらなる観点では、本発明に従うポリペプチドを発現できる発現ベクターを提供する。異なる細胞タイプの発現ベクターは該分野で周知であり、必要以上に実験を重ねなくても選択可能である。一般的に、DNAは、発現の適切な配向と正しいリーディングフレームで、プラスミドなどの発現ベクターに挿入される。必要に応じて、DNAは、目的とする宿主に認識される適切な転写および翻訳の調節制御ヌクレオチド配列に連結されるが、そのような制御は一般に発現ベクターで行われる。続いてベクターは、標準的な技術で宿主に導入される。指針は、SambrooketalMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborNYなどに見ることができる。ただし、本発明の特に好ましい実施形態において、前記薬剤組成物は、SEQIDNO1からSEQIDNO12に示されたアミノ酸配列から構成される、少なくとも2つのペプチドを有する。ワクチンおよび最適な投与法に含めるべき各ペプチドの最適量は、必要以上に実験を重ねなくても当業者が決定することができる。例えば、ペプチドまたはその変異体を、静脈内注射iv、皮下注射sc、皮内注射id、腹腔内注射ipまたは筋肉内注射imとして調製してもよい。ペプチドの好ましい注射経路は、sc、id、ip、im、ivである。DNAの好ましい注射経路は、id、im、sc、ip、ivである。ペプチドまたはDNAの投与量は、例えば、1~500mg、50μg~15mgであり、好ましくは125μg~500μgであり、投与量は各ペプチドやDNAにより異なる。この範囲の投与量は、これまでの試験で成功裏に使用されたBrunsvigPFAamdalSGjertsenMKKvalheimGMarkowskiGrimsrudCJSveIDyrhaugMTrachselSMullerMEriksenJAGaudernackGTelomerasepeptidevaccinationaphaseIIIstudyinpatientswithnonsmallcelllungcancerCancerImmunolImmunother20065515531564MStaehlerAStenzlPYDietrichTEisenAHaferkampJBeckAMayerSWalterHSinghJFrischCGStiefAnopenlabelstudytoevaluatethesafetyandimmunogenicityofthepeptidebasedcancervaccineIMA901ASCOmeeting2007AbstractNo3017。本発明の薬剤組成物は、前記組成に存在するペプチドの選択、数、および/または量が組織、がん、および/または患者特異的となるように作ることができる。例えば、ペプチドは、特定組織の親タンパク質の発現パターンによって正確に選択し、副作用を避けることができる。この選択は、治療を行う患者が罹患している具体的ながんのタイプ、およびがんの状態、早期治療法、患者の免疫状態、また当然ながら、患者のHLAハプロタイプに左右される。更に、本発明のワクチンには、特定の患者の個人的必要性によって、個別の成分を含めることができる。例えば、特定患者の関連するTAAの発現によってペプチドの量が異なる、個人的なアレルギーまたは他の治療のため望ましくない副作用が生じる、初回の治療または治療計画後の二次的な治療を調節するなどである。例えば、GBMのワクチンとして使用される組成物については、親タンパク質が正常組織で大量に発現されるペプチドは、本発明の組成物中には避けるか、少量とする。他方、患者の腫瘍が特定のタンパク質を大量に発現していることが分かっている場合、このがんの治療に用いる個別の薬剤組成物は大量としてもよく、および/またはこの特定タンパク質またはこのタンパク質の経路に特異的なペプチドを2種類以上含めてもよい。当業者は、例えば、invitroにおけるT細胞の作成、およびその効率と全体的な存在、特定ペプチドに対する特定T細胞の増殖、親和性、増大、またT細胞の機能性を、例えばIFN産生を分析することにより検討することで、免疫原性ペプチドの好ましい組み合わせを選択することができる以下の例も参照。続いて、通常、最も効率的なペプチドは、上述の目的においてワクチンとして混合される。適切なワクチンは、好ましくは1~20個のペプチド、より好ましくは2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20種類の異なるペプチド、更に好ましくは6、7、8、9、10、11、12、13、または14種類の異なるペプチド、最も好ましくは10、11、12、13、または14種類のペプチドを含む。がんワクチンに使用するペプチドの長さについては、本明細書で開示したいかなる適切な長さでもよい。特に、適切な9merのペプチド、または適切な8merまたは9merまたは10merまたは11merのペプチド、または12mer、13mer、14mer、または15merとしてもよい。より長いペプチドも適当であり、添付の表4および5に説明されている9merまたは10merのペプチドがMHCクラスIペプチドに適しているが、12~15merがMHCクラスIIペプチドには適している。前記ペプチドは腫瘍またはがんワクチンの構成要素となる。本ワクチンは患者、患部の器官、または全身に直接投与するか、または、その後患者に投与される、患者またはヒト細胞株に由来の細胞にexvivoで適用するか、あるいはinvivoで使用して、その後患者に再投与される、患者由来の免疫細胞の亜集団を選択する。前記ペプチドは実質的に純粋であるか、免疫刺激アジュバントと併用されるか以下参照、または免疫刺激性サイトカインと併用される、あるいはリポソームなど適当な送達システムを用いて投与される。前記ペプチドは、また、キーホールリンペットヘモシアニンHLHまたはマンナンなど、適切な担体に接合させることもできるWO9518145およびLongeneckeretalAnnNYAcadSci690276291参照。前記ペプチドは、標識化するか、融合タンパク質とするか、ハイブリッド分子とすることもある。配列が本発明で与えられるペプチドは、CD4T細胞またはCD8CTLを刺激することが期待される。ただし、逆のCDに陽性のT細胞による助けがあると、刺激はより効率的となる。従って、CD4T細胞を刺激するMHCクラスIIエピトープに対し、融合パートナーまたはハイブリッド分子の一部は、CD8陽性T細胞を刺激するエピトープを適切に提供する。他方、CD8CTLを刺激するMHCクラスIエピトープに対し、融合パートナーまたはハイブリッド分子の一部は、CD4陽性T細胞を刺激するエピトープを適切に提供する。CD4およびCD8を刺激するエピトープは、該分野で良く知られており、本発明により同定されたエピトープを含む。薬剤的に認容される担体はよく知られており、通常は液体で、この担体中に有効な治療薬が調剤される。前記担体は製剤に薬理活性を与えないが、化学的および/または生物学的安定性、放出特性などを与えることができる。典型的製剤は、例えばAlfonsoRGennaroRemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy20thEditionBaltimoreMDLippincottWilliamsWilkins2000などに見ることができ、生理食塩水、水、緩衝用水、03グリシン、ヒアルロン酸、デキストロースなどを含むが、これに限定されない。最近、長年、ヒト患者の静脈栄養に利用されてきた若干の脂肪乳剤が、ペプチドの溶媒としての役割を果たすことができることが分かった。そのような乳剤の2つの例は、イントラリピッド、リポフンディンとして知られる市販の脂肪乳剤である。イントラリピッドは米国特許3169094に報告された、静脈栄養用脂肪乳剤に付けられた、スウェーデンKabiPharmacia社の登録商標である。リポフンディンは、ドイツBBraunMelsungen社の登録商標である。いずれも脂肪として大豆油を含む1000mlの蒸留水中、100gまたは200g:それぞれ10または20。イントラリピッドでは卵黄リン脂質が乳化剤として使用され12gl蒸留水、リポフンディンでは卵黄レシチンが使用されている12gl蒸留水。イントラリピッドおよびリポフンディンのいずれにおいても、グリセロール25glが添加され、等張性が保たれている。免疫応答を誘発するため、通常、前記組成物により高い免疫原性を与えるアジュバントを含めることが必要である。そのため、本発明の好ましい実施形態では、前記薬剤組成物が更に少なくとも1つの適切なアジュバントを有する。適切なアジュバントには、1018ISS、アルミニウム塩、Amplivax、AS15、BCG、CP870893、CpG7909、CyaA、dSLIM、フラジェリンまたはフラジェリン由来TLR5リガンド、FLT3リガンド、GMCSF、IC30、IC31、イミキモドALDARA登録商標、レシキモド、ImuFactIMP321、IL2IL13IL21などのインターロイキン、インターフェロン-または、ペグインターフェロン誘導体、ISPatch、ISS、ISCOMATRIX、ISCOM、JuvImmune、LipoVac、MALP2、MF59、モノホスホリルリピドA、モンタニドIMS1312、モンタニドISA206、モンタニドISA50V、モンタニドISA51、油中水型エマルジンおよび水中油型エマルジン、OK432、OM174、OM197MPEC、ONTAK、OspA、PepTel登録商標ベクター系、ポリPLGベース微粒子およびデキストラン微粒子、タラクトフェリン、SRL172、ビロソームおよび他のウイルス様粒子、YF17D、VEGFtrap、R848、-グルカン、Pam3Cys、サポニン、マイコバクテリア抽出物、合成細菌細胞壁模倣体由来のAquilasQS21stimulon、およびRibisDetoxQuilまたはSuperfosなど、他の所有権のあるアジュバントが含まれるが、これに限定されない。フロイントもしくはGMCSFなどのアジュバントなども好ましい。樹状細胞およびその調製物に特異的ないくつかの免疫学的アジュバントMF59などについては、これまでに報告があるAucouturieretal2001AllisonandKrummel1995。またサイトカインを使用してもよい。いくつかのサイトカインは、リンパ系組織への樹状細胞の遊走に対する影響例えば、TNF、Tリンパ球に効率的に抗原を提示する抗原提示細胞への樹状細胞の成熟加速例えば、GMCSF、IL1、IL4米国特許5849589、その全体を本明細書の参考文献として明確に引用している、更に免疫アジュバントとしての作用例えば、IL12IL15IL23IL7IFNαIFNβなどに、直接関連性があったGabrilovichetal1996。CpG免疫刺激性オリゴヌクレオチドも、ワクチン環境におけるアジュバントの作用を増強することが報告されている。理論に拘束されずに、CpGオリゴヌクレオチドは、Toll様受容体TLR、主としてTLR9によって生来の獲得免疫系を活性化することで作用する。CpGによって誘発されたTLR9活性化は、ペプチドもしくはタンパク抗原、生ウイルスもしくは死滅ウイルス、樹状細胞ワクチン、自家細胞ワクチン、および予防/治療用ワクチン両方の多糖類接合体を含む、種々様々の抗原に対する抗原特異的体液性および細胞性免疫応答を増強する。更に重要なことには、この活性化は、CD4T細胞の助けがない状態でさえ、樹状細胞の成熟および分化を増強し、TH1細胞の活性化の増強、および強力な細胞傷害性Tリンパ球CTLの生成をもたらす。TLR9刺激により誘発されたTH1バイアスは、通常、TH2バイアスを促進するミョウバンもしくは不完全フロイントアジュバントIFAのようなワクチンアジュバントが存在する状態でさえ維持される。CpGオリゴヌクレオチドは、他のアジュバントと処方された場合もしくは併用して投与された場合、または微粒子、ナノ粒子、脂肪乳剤などの製剤もしくは同様の製剤の場合、更に大きなアジュバント活性を呈するが、それは抗原が比較的弱い場合に、強い応答を誘発するために特に必要である。CpGオリゴヌクレオチドは免疫応答も加速し、抗原投与量を約2桁減少させることができ、一部の実験では、CpGを用いない全量ワクチンに対する抗体応答と同等であるKrieg2006。米国特許6406705B1は、抗原特異的免疫応答を誘発するためにCpGオリゴヌクレオチド、非核酸アジュバントおよび抗原を組み合わせた使用について記述している。CpGTLR9拮抗薬は、本発明の薬剤組成物の好ましい成分であるMologen社ドイツ、ベルリンによるdSLIMダブルステムループ免疫賦活剤である。RNA結合TLR7、TLR8および/またはTLR9など、他のTLR結合分子も使用される。他の有用なアジュバントの例には、化学的に修正されたCpGs例えば、CpR、Idera、polyのようなdsRNA類似化合物およびその誘導体polypoly例えば、polyIC12U、非CpG細菌DNAもしくはRNAの他にも、シクロホスファミド、スニチニブ、ベバシズマブ、セレブレックス、NCX4016、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ソラフェニブ、テモゾォミド、テムシロリムス、XL999、CP547632、パゾパニブ、VEGFTrap、ZD2171、AZD2171、抗CTLA4免疫系の主要構造を標的とする他の抗体例、抗CD40、抗TGFbeta、抗TNFα受容体およびSC58175などの免疫活性小分子および抗体が上げられ、これらは治療用としておよび/またはアジュバントとして作用しうるが、それらだけに限定されるものではない。本発明の状況において有用なアジュバントおよび添加物の量および濃度は、必要以上に実験を重ねなくても熟練した当業者により容易に決定されうる。好ましいアジュバントはイミキモド、レシミキモド、GMCSF、シクロホスファミド、スニチニブ、ベバシズマブ、インターフェロン-、CpGオリゴヌクレオチドおよび誘導体、polyおよび誘導体、RNA、シルデナフィル、およびPLGまたはビロソームの微粒子製剤である。本発明の薬剤組成物の好ましい実施形態において、アジュバントは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GMCSF、サルグラモスチム、イミキモド、レシミキモド、インターフェロン-などのコロニー刺激因子から成るグループから選択される。本発明の薬剤組成物の好ましい実施形態において、アジュバントはイミキモドまたはレシキモドである。本発明の薬剤組成物の好ましい実施形態において、アジュバントはGMCSFおよびレシミキモドまたはレシミキモドである。本発明の組成物は、皮下、皮内、筋肉内、腹腔内などの非経口投与、または経口投与に用いられる。このため、ペプチドおよび任意選択の他の分子は、薬剤的に認容可能な、好ましくは水性担体に溶解または懸濁される。更に、前記組成物は緩衝剤、結合剤、爆破剤、希釈剤、香料、潤滑剤などの賦形剤を含むこともできる。前記ペプチドは、サイトカインなどの免疫刺激物質と併用投与することもできる。そのような組成物に使用できる賦形剤の広範なリストは、例えばAKibbeHandbookofPharmaceuticalExcipients3rdEd2000AmericanPharmaceuticalAssociationandpharmaceuticalpressなどから引用することができる。前記組成物は、腺腫またはがん性疾患、好ましくはCRCの阻止、予防および/または治療に利用することができる。好ましい製剤は、例えば、EP2113253の中で見出される。細胞傷害性T細胞CTLは、完全な外来抗原自体ではなく、MHC分子に結合したペプチドの形で抗原を認識する。MHC分子自体は抗原提示細胞の細胞表面にある。そのため、ペプチド抗原、MHC分子、APCの三量体複合体が存在する場合しか、CTLの活性化を行うことができない。対応して、ペプチドがCTLの活性化に利用されるだけでなく、更にAPCと各MHC分子が追加される場合、免疫応答を増進させることができる。従って、好ましい実施形態では、本発明の薬剤組成物が更に少なくとも1つの抗原提示細胞を含む。抗原提示細胞または刺激細胞は通常は表面にMHCクラスIまたはII分子を有し、一実施形態では、抗原提示細胞自体が実質的に選択された抗原をMHCクラスIまたはII分子に載せることができない。以下に詳細に説明する通り、前記MHCクラスIまたはII分子はそれ自身、invitroにおいて選択された抗原を容易に載せることができる。好ましくは、哺乳動物細胞に、TAPペプチドトランスポーターがないか、そのレベルが低下しているか、機能が低下している。TAPペプチドトランスポーターがない適切な細胞は、AmericanTypeCultureCollection12301ParklawnDriveRockvilleMaryland20852USAからカタログ番号CRL1992として販売されている、ヒトペプチドを載せた欠損細胞株T2などである。T2などのTAP欠損細胞株はAPCとして利用でき、TAPがないため、MHCクラスIによって提示されるほぼ全てのペプチドが、これら細胞株の空のMHCクラスI分子を細胞外に載せるために使用される監視下のペプチドとなる。したがって全ての効果は使用したペプチドに明確に帰着することになる。好ましくは、前記抗原提示細胞が樹状細胞である。当然のことながら、前記樹状細胞は自己樹状細胞であり、抗原ペプチドでパルスされている。前記抗原ペプチドは、適切なT細胞応答を引き起こす、いかなる適切な抗原ペプチドであってもよい。腫瘍関連抗原のペプチドをパルスした自己樹状細胞を用いるT細胞療法については、MurphyetalTheProstate29371380andTjuaetalTheProstate32272278で公表されている。そのため、本発明の好ましい実施形態において、少なくとも1つの抗原提示細胞を含む薬剤組成物は、例えば例5で示す方法によりペプチドがパルスされているか、ペプチドが載せられている。別の可能性として、前記抗原提示細胞はペプチドをコード化する発現構成物を有する。ポリヌクレオチドはいかなる適切なポリヌクレオチドであってもよく、樹状細胞を形質導入でき、結果としてペプチドを提示し、免疫を誘導できることが好ましい。便宜上、本発明の核酸はウイルスのポリヌクレオチドまたはウイルスに含まれていてもよい。例えば、アデノウイルスを形質導入した樹状細胞は、MUC1と関連し、抗原特異的抗腫瘍免疫を誘導することが示されたGongetalGeneTher410231028を参照。同様に、アデノウイルスを基本とした系を利用することができ例えば、WanetalHumGeneTher813551363を参照、レトロウイルス系を利用することができるKochetal2006JExpMed18612131221およびSzabolcsetal。樹状細胞への血液粒子が介在した移動も利用することができTuting1997EurJImmunol2727022707、RNAも利用することができるAshleyetal2007JExpMed18611771182。一般に、本発明の核酸を含む本発明の薬剤組成物は、本発明のペプチドを含む薬剤組成物と同様、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、経皮、腫瘍内、経口、経皮、経鼻、頬側、直腸、経膣、吸入、または局所投与により、投与することができる。腫瘍は、回避メカニズムにより、治療に耐性を生じることが多い。薬物耐性は投与中に発生し、転移および腫瘍の再発として現れる。そのような薬物耐性を回避するため、腫瘍は薬物を併用して治療されることが多く、無病期間後の転移と腫瘍の再発には、しばしば異なる併用が必要となる。そのため、本発明の一観点では、前記薬剤組成物を第2の抗がん剤と併用投与する。第2の薬剤は、本発明の薬剤組成物の前後またはこれと同時に投与する。同時投与は、化学的性質から混合可能であれば、例えば、本発明の薬剤組成物を第2の抗がん剤と混合することにより達成可能である。同時投与の別の方法は、本発明の薬剤組成物を例えば注射し、第2の抗がん剤を例えば経口投与するなどの投与経路から、前記組成物と抗がん剤を同じ日に別々に投与するものである。前記薬剤組成物と第2の抗がん剤は同じ投与経路で投与することもできるが、異なる日および/または別の投与経路で投与することもできる。本発明の別の観点では、本発明の薬剤組成物のいずれか1つを治療有効量で患者に投与することを含め、患者のがんを治療または予防する方法を提供する。治療有効量は、特にCTL亜集団の活性化など、免疫応答を誘発するために十分な量である。当業者は、本明細書の例で提供される方法などの標準的免疫学的方法を利用することで、ある量が有効か否かを容易に決定することができる。薬剤組成物のある量の効果をモニターする別の方法は、治療している腫瘍の発育および/またはその再発を観察することである。本発明の特に好ましい実施形態においては、前記薬剤組成物を抗がんワクチンとして使用する。ペプチドまたはペプチドをコード化する核酸を含む組成物が腫瘍またはがんワクチンを構成することも可能である。本ワクチンは患者、患部の器官、または全身に直接投与するか、または、その後患者に投与される、患者またはヒト細胞株由来の細胞にexvivoで適用するか、あるいはinvivoで使用して、その後患者に再投与される、患者由来の免疫細胞の亜集団を選択する。本発明の組成物は、がんの治療法に利用するか、がんワクチンとして利用することができる。前記がんは、前立腺癌、口腔癌、口腔扁平上皮癌OSCC、急性骨髄性白血病AMLQianetal2009、ピロリ菌誘発性MALTリンパ腫Banerjeeetal2000、大腸癌結腸癌/結腸直腸癌、神経膠芽細胞腫、非小細胞肺癌NSCLC、子宮頸癌、ヒト乳癌、前立腺癌、大腸癌、膵臓癌、膵管腺癌、卵巣癌、肝細胞癌、肝臓癌、様々な表現型の脳腫瘍、急性リンパ芽球性白血病ALLなどの白血病、肺癌、ユーイング肉腫、子宮内膜癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、咽頭上皮癌、食道癌、口腔上皮癌、膀胱癌、卵巣癌、腎細胞癌、非定型髄膜腫、甲状腺乳頭癌、脳腫瘍、唾液管癌、節外性TNK細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、および肺と乳房の悪性固形腫瘍であってもよく、好ましくは胃癌である。本発明の治療法またはワクチンの最も好ましい実施形態において、前記ワクチンはGC治療用の複数ペプチドを含む腫瘍ワクチンである。好ましくは、前記ワクチンがSEQIDNo1からSEQIDNo11から選択される一連の腫瘍関連ペプチドを有し、このペプチドは原発性胃癌に認められ、この細胞で同定されている。この一連のペプチドには、HLAクラスIおよびクラスIIペプチドが含まれる。前記一連のペプチドは、HBVコア抗原SEQID23のペプチドなど、少なくとも1つのペプチドを含み、皮内投与の効率を検証する免疫マーカーとして機能する、陽性コントロールペプチドとして用いられる。特定の一実施形態では、前記ワクチンがSEQIDNo1からSEQIDNo11の個別のペプチド11個から成り、各ペプチドは約1500μg~約75μg、好ましくは約1000μg~約175μg、より好ましくは約500μg~約600μg、最も好ましくは約578μgであり、全てHPLCおよびイオン交換クロマトグラフィーにより精製され、白色から黄色がかった白色の粉末に見える。凍結乾燥品は好ましくは炭酸水素ナトリウムに溶解し、室温で再溶解後30分以内に皮内注射に用いる。本発明によれば、好ましいペプチドの量は、溶液500μlあたり約01~100mg、好ましくは約01~1mg、最も好ましくは約300μg~800μgで変化する可能性がある。本明細書において、約という用語は、別に記載のない限り、特定の値の平均10を意味する。当業者は、実際に使用するペプチドの量を、例えば個別患者の免疫状態、および/または特定のがんタイプに存在するTUMAPの量など、いくつかの要因に基づき、調節することができる。本発明のペプチドは、凍結乾燥品の代わりに他の適切な形態滅菌溶液などで提供されることもある。前記薬剤組成物は、遊離型のペプチドあるいは薬剤的に認容可能な塩型のペプチドのいずれかを含む。ここに使用されるような薬剤的に認容可能な塩は、公表されたペプチドの誘導体を言い、前記ペプチドは、作用薬の酸性または塩基性塩を調製することにより修飾される。例えば、酸性塩は、適切な酸との反応に関与する遊離塩基通常、中性型の薬物は中性NH2基を持つから調製される。酸性塩の調製に適当な酸は、無機酸例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などだけでなく、有機酸例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸なども含む。反対に、ペプチドに存在する酸部分の塩基性塩の調製は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンのような薬剤的に認容可能な塩基を使用して調製される。特に好ましい実施形態において、前記薬剤組成物は酢酸酢酸塩、アンモニウム、あるいは塩酸塩化物の塩としてペプチドを含む。別の実施形態において、本発明の薬剤組成物が、骨格形成物質として糖類、糖アルコール、グリシン、アルギニン、グルタミン酸などのアミノ酸などを含む。前記糖類は一、二、三糖であってもよい。これらの糖類は単独で用いるか、糖アルコールと併用して使用されることもある。糖類の例は、単糖としてグルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、またはソルボース、二糖としてサッカロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、三糖としてラフィノースなどである。糖アルコールは、例えば、マンニトースとしてもよい。好ましい成分は、サッカロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、マンニットおよび/またはソルビット、より好ましくはマンニトールである。更に、本発明の薬剤組成物は、アスコルビン酸またはグルタチオンのような抗酸化物質、フェノール、m-クレゾール、メチル-またはプロピルパラベン、クロロブタノール、チオマーサル、またはベンズアルコニウムクロライドなどの保存料、安定剤、サッカロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、マンニトース、マンニットおよび/またはソルビット、マンニットおよび/またはラクトースなどの骨格形成物質、およびポリエチレングリコールPEG、つまりPEG3000、3350、4000、または6000、またはシクロデキストリン、つまりヒドロキシプロピレン-β-シクロデキストリン、スルホブチルエチル-β-シクロデキストリンまたはγシクロデキストリン、またはデキストランまたはポロキサマー、つまりポロキサマー407、ポロキサマー188、またはTween20、Tween80などの可溶化剤など、生理学的に忍容性に優れた賦形剤HandbookofPharmaceuticalExcipients5thededitedbyRaymondRowePaulSheskeyandSianOwenPharmaceuticalPressを参照を含む。好ましい実施形態では、本発明の薬剤組成物が抗酸化物質、骨格形成物質、安定剤から成るグループから選択される、1つ以上の忍容性に優れた賦形剤を含む。許容可能なpH範囲は、静脈内および筋肉内投与でpH2~12であるが、invivoでは希釈率が減少し、注射部位で放散する可能性が高くなるため、皮下ではこの範囲は27~90に減少する。StrickleyRobertGPharmRes21NO2201230。本発明のペプチドおよび/または核酸を含む本発明の薬剤組成物は、それぞれのペプチドまたは抗原が関連した腺腫様またはがん性疾患に罹患した患者に投与される。これにより、T細胞性免疫応答が誘発される可能性がある。本発明の薬剤組成物が好ましいのは、前記組成物に存在する特に腫瘍関連ペプチド、本発明の核酸、または本発明の発現ベクターの量が組織、がん、および/または患者特異的である場合である。本発明の別の実施形態において、前記ワクチンは核酸ワクチンである。ポリペプチドをコード化したDNAワクチンなどの核酸ワクチンを接種すると、T細胞応答が誘発されることが知られている。本ワクチンは患者、患部の器官、または全身に直接投与するか、または、その後患者に投与される患者またはヒト細胞株に由来の細胞にexvivoで適用するか、あるいはinvivoで使用して、その後患者に再投与される患者由来の免疫細胞の亜集団を選択する。細胞にinvitroで核酸を投与する場合は、インターロイキン-2またはGMCSFなどの免疫刺激サイトカインを同時発現できるように細胞に核酸を形質移入することが有用である。前記核酸は実質的に純粋であるか、免疫刺激アジュバントと併用されるか、または免疫刺激性サイトカインと併用される、あるいはリポソームなど適当な送達システムを用いて投与される。前記核酸ワクチンは、ペプチドワクチンについて上述したように、アジュバントと併用投与されることもある。前記核酸ワクチンがアジュバントなしで投与される場合も好ましい。ポリヌクレオチドは実質的に純粋であり、適切なベクターまたは送達系に含まれる。適切なベクターと送達系は、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス、アデノ随伴ウイルスや、複数のウイルスの要素を含むハイブリッドウイルスを基にした系などの、ウイルス系である。ウイルスを用いない送達系は、陽イオン性脂質や陽イオン性ポリマーなどで、DNA送達に関する技術分野で周知である。遺伝子銃などの、物理的な送達法を使用してもよい。ペプチドまたは核酸でコード化されたペプチドは、例えば、CD4陽性T細胞を刺激する破傷風トキソイドのエピトープとの融合タンパク質である。当然のことながら、患者に投与される核酸は滅菌されており、発熱性物質を含まないものとする。裸DNAは、筋肉内または経皮または皮下投与することができる。便宜上、前記核酸ワクチンはいかなる適切な核酸送達手段を有してもよい。前記核酸、好ましくはDNAは、リポソームまたはウイルスベクター送達系の一部として送達されてもよい。DNAワクチンなどの核酸ワクチンは筋肉に投与される場合に好ましいが、ペプチドワクチンは好ましくはscまたはid投与される。前記ワクチンが皮膚に投与されることも好ましい。樹状細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞による核酸の取り込みとコード化されたポリペプチドの発現は、免疫応答のプライミングのメカニズムであると考えられるが、樹状細胞は組織中の形質移入された細胞から、発現されたペプチドを受け取ることができるため、樹状細胞は形質移入されないと考えられるが、まだ重要であるクロスプライミング、例えば、ThomasAMSantarsieroLMLutzERArmstrongTDChenYCHuangLQLaheruDAGogginsMHrubanRHJaffeeEMMesothelinspecificCD8TcellresponsesprovideevidenceofinvivocrossprimingbyantigenpresentingcellsinvaccinatedpancreaticcancerpatientsJExpMed2004Aug2200297306。ポリヌクレオチドによるがんの免疫療法については、ConryetalSeminarsinOncology23135147CondonetalNatureMedicine211221127GongetalNatureMedicine3558561ZhaietalJImmunol156700710GrahametalIntJCancer65664670およびBurchelletal309313InBreastCancerAdvancesinbiologyandtherapeuticsCalvoetalJohnLibbeyEurotextに報告されており、全ての参考文献が、その全体の参照として本明細書に組み込まれている。注射部位で、標的化ベクターおよび送達系を利用することにより、または患者のそのような細胞集団の選択的精製およびペプチドまたは核酸のexvivo投与により、前記ワクチンの標的を特定の細胞集団、例えば、抗原提示細胞とすることも有用である例えば、樹状細胞は、ZhouetalBlood8632953301RothetalScandJImmunology43646651に報告される通り分類することができる。例えば、標的化ベクターには、適切な場所で抗原を発現させる、組織または腫瘍特異的プロモーターが含まれる。最後に、本発明のワクチンは、治療を行う患者が罹患している具体的ながんのタイプ、およびがんの状態、早期治療法、患者の免疫状態、また当然ながら、患者のHLAハプロタイプに左右される可能性がある。更に、本発明のワクチンには、特定患者の個人的必要性によって、個別の成分を含めることができる。例えば、特定患者の関連するTAAの発現によってペプチドの量が異なる、個人的なアレルギーまたは他の治療のため望ましくない副作用が生じる、初回の治療または治療計画後の二次的な治療を調節するなどである。本発明のペプチドは、がんの治療に有効であるのに加えて、診断にも有効である。前記ペプチドは神経膠芽細胞腫から作成し、しかも正常組織には存在しないことが判明しているため、がんの有無を診断するために使用できる。本発明のペプチドが組織生検に存在することを、病理学者のがん診断に役立てることができる。病理学者は、抗体、マススペクトロメトリー、または該分野で既知の他の方法を用いて本発明の特定のペプチドを検出し、その組織が悪性または炎症性、あるいは病変組織であるかを判断できる。本発明のペプチドのグループが存在すれば、病変組織の分類または下位分類が可能である。特に、Tリンパ球が既知である、またはTリンパ球が作用機序に関わっていると予想される場合は、病変組織標本で本発明のペプチドを検出することにより、免疫学的療法の有効性を決定できる。MHCの発現欠失は、感染した悪性腫瘍細胞が免疫学的監視から逃れる、十分報告されたメカニズムである。従って、本発明のペプチドの存在は、このメカニズムが分析した細胞により利用されていないことを示している。本発明のペプチドは、T細胞応答など、本発明のペプチドに対するリンパ球応答、または本発明のペプチドまたはMHC分子と複合体を形成した本発明のペプチドに対する抗体応答を分析するために使用されることもある。これらのリンパ球応答は、それ以上の治療段階を決定する際、予後マーカーとして使用できる。これらの応答は、タンパク質ワクチン、核酸、自己物質、リンパ球養子免疫療法など異なる方法を使った、リンパ球応答の誘発を目的とした免疫療法的アプローチにおいて、代理マーカーとしても利用できる。遺伝子療法において、副作用を評価する際、本発明のペプチドに対するリンパ球応答を考慮できる。また、リンパ球応答を監視することで、移植片対宿主病および宿主対移植片病を検出するなど、移植治療の追跡検査に有効であるかもしれない。これに関するまた別の観点では、本発明がa上述の薬剤組成物溶液または凍結乾燥物を含む容器、b任意に、希釈剤もしくは、該凍結乾燥製剤用の再溶解用溶液を含む第二の容器、およびc任意に、i溶液の使用あるいはii再溶解および/または該凍結乾燥製剤の使用に関する説明書を有するキットに関する。前記キットは更に、i緩衝剤、ii希釈剤、iiiフィルタ、iv針もしくはv注射器を1つまたは複数を含むことがある。前記容器は、好ましくはボトル、バイアル、注射器もしくは試験管であり、容器は再利用してもよい。前記薬剤組成物は、好ましくは凍結乾燥される。本発明のキットには、好ましくは適切な容器中に本発明の凍結乾燥製剤および再溶解および/または使用に関する説明書が含まれる。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル例えば、ダブルチャンバーバイアル、注射器ダブルチャンバー注射器などおよび試験管を含む。前記容器はガラスもしくはプラスチックのような様々な材料から形成される。好ましくは、前記キットおよび/または容器は、再溶解および/または使用の方法を示す、容器あるいはその容器に関連する説明書を含む。例えば、ラベルに、前記凍結乾燥製剤が上述のペプチド濃縮物に再溶解されることを表示してもよい。ラベルは更に、製剤が皮下投与に有用であるか、あるいは皮下投与を意図するものであることを表示してもよい。製剤を入れる容器は再利用可能なバイアルとしてもよく、再溶解した製剤の反復投与例えば2~6回が許される。キットは更に、適切な希釈剤例えば重炭酸ナトリウム溶液を含む、第2容器を含んでもよい。希釈剤および凍結乾燥製剤の混合に際して、再溶解した製剤の最終ペプチド濃度は、好ましくは少なくとも015mgmLペプチド=75μgであり、好ましくは最高3mgmLペプチド=1500μgまでである。前記キットは更に、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、注射器および添付文書と使用説明書を含む、商業上および使用者の観点から見て望ましい他の資材を含む。本発明のキットは、他の成分例えば、他の化合物あるいはこれら他の化合物の薬剤組成物の有無に関わらず、本発明による薬剤組成物の製剤を含む単一容器を有してもよく、あるいは各成分を入れる別個の容器を有してもよい。好ましくは、本発明のキットは、第2化合物アジュバント例えば、GMCSF、化学療法剤、天然産物、ホルモンもしくは拮抗薬、抗血管形成薬もしくは阻害剤、アポトーシス誘導剤もしくはキレート剤など、またはその薬剤組成物の併用投与を組み合わせる使用目的で包装された本発明の製剤を含む。前記キットの成分は、あらかじめ複合体を形成するか、または各成分が患者に投与する前に個別の容器に入っていてもよい。前記キットの成分は、1つまたはそれ以上の溶液中、好ましくは水溶液、更に好ましくは無菌水溶液中に提供される。前記キットの成分はまた、固体として提供され、好ましくは他の別個の容器で提供される、適切な溶媒を添加することで液体に変換されてもよい。治療用キットの容器は、バイアル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器もしくは固体または液体を入れるその他の手段であってもよい。通常、2つ以上の成分がある時、前記キットは第2のバイアルあるいは他の容器を含み、それにより別々の投与が可能となる。前記キットはまた、薬剤的に認容可能な液体用の別の容器を含んでもよい。好ましくは、治療用キットは器具例えば、1つまたはそれ以上の針、注射器、点眼容器、ピペットなどを含み、現在のキットの成分である、本発明の薬剤の投与を可能にする。本発明の製剤は、経口腸内、経鼻、点眼、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、もしくは経皮など、任意の許容可能な経路によるペプチドの投与に適するものである。好ましくは、投与はscで、最も好ましくはidである。投与は輸液ポンプにより行ってもよい。本明細書で公表および報告された本発明の特徴は、明示された各々の組み合わせで使用されるだけでなく、本発明で意図する範囲から逸脱せずに、単一の方法で使用することもできる。本発明の目的のため、本明細書で引用されている全ての参考文献が、その全体の参照として組み込まれている。本発明は、以下の図、配列表、例を参照することで、これからより詳細に説明される。以下の例は説明の目的のみで提供され、本発明を限定する意図はない。実施例11合成ペプチドはFmoc法を利用し、標準的で十分確立された固相合成により合成した。分取用RPHPLCによる精製後、イオン交換法を行い、生理的に適合可能な対イオン例えば、酢酸、アンモニウム、または塩化物イオンを組み込んだ。最終的に、凍結乾燥後、白色から黄色がかった白色の固体が得られた。全てのTUMAPは好ましくは酢酸塩として投与され、他の塩の形態も可能である。重要なことに、個々の各ペプチドの同一性と純度は、質量分析、分析用HPLCを用い、容易に、高い精度で決定することができる。イオン交換操作後、表7で示す純度で白色からオフホワイトの凍結乾燥物として得られた。表7ではすべてのペプチドは、温度やpH値などが異なる物理化学的条件でその安定性を試験した。2典型的な薬剤組成IMA941の成分IMA941は、大部分が原発性大腸癌細胞で同定された合成腫瘍関連ペプチドTUMAPの混合物から成る。TUMAPには、細胞傷害性T細胞CD8T細胞活性化能を持つ10個のHLAクラスI結合ペプチド、ヘルパーT細胞CD4T細胞活性化能を持つ1個のHLAクラスII結合ペプチドが含まれる。ヘルパーT細胞は、CD8T細胞の殺傷機能を高めるサイトカインを放出することで、細胞傷害性T細胞の機能を助ける重要な役割を果たし、腫瘍細胞に直接作用することもある。上記11個のTUMAPに加え、IMA941はウイルスのコントロールペプチドも1つ含んでもよい。GBM患者の外科的に切除した悪性組織および正常組織のサンプルおよび健常ドナーの血液は、段階的アプローチで分析した。まず、マイクロアレイによるゲノム規模のmRNA発現分析を利用し、一連の正常な臓器および組織と比較し、悪性組織で過剰発現した遺伝子を同定した。第2段階では、悪性材料のHLAリガンドを質量分析により同定した。その後、同定したHLAリガンドを遺伝子発現データと比較した。第1段階で検出された、選択的に発現または過剰発現された遺伝子によりコード化されるペプチドは、マルチペプチドワクチンを開発するために適切な候補TUMAPとみなした。最後に、健常人の末梢CD8T細胞は、数種類の免疫測定法invitroT細胞測定法により、腫瘍関連HLAリガンドに対する反応性を検討した。3腫瘍サンプルのIMA941に含まれる腫瘍関連ペプチドTUMAPの提示組織サンプル患者の腫瘍組織は、京都府立大学KPUM、京都、日本、および大阪市立大学医学部大学院OCU、大阪、日本から提供された。手術前に全ての患者から書面でインフォームドコンセントを得た。組織は、術後直ちに液体窒素で衝撃冷凍し、TUMAPを単離するまで-80°Cで保存した。組織サンプルからのHLAペプチドの単離衝撃冷凍した組織サンプルのHLAペプチドプールは、わずかに変更したプロトコールFalketal1991が標準勾配分離媒体により最初に単離された。単離されたCD8リンパ球またはPBMCは、10熱不活性化ヒトAB血清PANBiotech、Aidenbach、ドイツが補充されたRPMI-グルタマックスInvitrogen、Karlsruhe、ドイツ、100Umlペニシリン/100μgmlストレプトマイシンCambrex、Cologne、ドイツ、1mMピルビン酸ナトリウムCCPro、Oberdorla、ドイツ、および20μgml/ゲンタマイシンCambrexで構成される、T細胞培地TCMで使用直前までインキュベートした。CD8リンパ球は、製造業者の指示に従い、CD8MACS陽性分離キットMiltenyi、BergischGladbach、ドイツを用いて単離した。25ngmlIL7PromoCell、Heidelberg、ドイツおよび10UmlIL2Chiron、Munich、ドイツがこの段階で、TCM中に補充された。CD8リンパ球の単離は、CD8MicroBeadsMiltenyiBiotecBergischGladbachGermanyを使って陽性選択により実施した。pMHC/抗CD28被覆ビーズの作成、T細胞刺激および読み出しなどは、わずかな変更を行い、すでに報告の通りWalteretal2003に実施した。簡単に言うと、膜貫通型ドメインを欠き重鎖のカルボキ末端でビオチン化された、ビオチン化組み換えペプチド負荷HLAA2402分子は、Altmanetal1996が報告した方法に従い生成した。精製した共刺激マウスIgG2a抗ヒトCD28Ab93Jungetal1987は、スルホ-N-ヒドロキシスクシンイミドビオチンで化学的にビオチン化した。使用したビーズは、56μmの大きいサイズのストレプタビジン被覆ポリスチレン粒子BangsLaboratories、米国イリノイ州である。コントロールとして使用したpMHCは、A0201DDX5001DDX5から得たYLLPAIVHIである。ビーズ800000個/200μlを、600ngのビオチン抗CD28200ngの関連ビオチン-pMHC高密度ビーズの存在下、96ウェルプレート中で被覆した。5ngmlIL12PromoCellが補充された200μlTCM中で2×105個の洗浄済み被覆ビーズおよび1×106個のCD8T細胞を37°Cで3~4日間共インキュベートし、96ウェルプレート中刺激を開始した。続いて、培地の半分を80UmlIL2が補充された新しいTCMと交換し、インキュベーションは37°Cで3~4日間続けた。この刺激サイクルを合計3回実施した。最後に、LivedeadAqua色素Invitrogen、ドイツ、カルルスルーエ、CD8FITC抗体クローンSK1BD、ドイツ、ハイデルベルク、およびPEまたはAPCカップリングA2402MHC多量体で細胞を染色して多量体解析を実施した。解析は、適切なレーザーとフィルターを装備したBDLSRIISORPサイトメータを使用した。ペプチド特異的細胞を総CD8T細胞のパーセンテージとして計算した。多量体解析の評価は、FlowJoソフトウェアによって行ったTreeStar、米国オレゴン州。特定の多量体CD8リンパ球のinvitroプライミングは、適切なゲート開閉と陰性コントロール刺激との比較によって、検出した。一例の健常ドナーについてinvitroで刺激された評価可能な少なくとも1つのウェルに、invitro刺激後、特異的なCD8T細胞株が含まれることが発見された場合すなわち、このウェルがCD8T細胞中に少なくとも1の特異的多量体を含んでおり、特異的多量体細胞のパーセンテージが陰性コントロール刺激の中央値の少なくとも10倍であった場合、特定抗原の免疫原性が検出された。IMA941ペプチドのInvitro免疫原性検討したHLAクラスIペプチドは14個すべてについて、invitro免疫原性をペプチド特異的T細胞株を生成させることにより証明できた。本発明の2つのペプチドに対する、TUMAP特異的多量体染色後の典型的なフローサイトメトリーの結果を、対応する負のコントロールと共に図3に示す。本発明のペプチドの結果を表8にまとめ、本発明のHLAクラスIのinvitro免疫原性を示している。invitro免疫原性の実験結果は、テストした陽性ドナーと評価可能なペプチド間のウェルのパーセンテージを示している。少なくとも2つのドナーと24個のウェルが各ペプチドについて評価可能であった。表8:本発明に含まれるHLAクラスIペプチドのinvitro免疫原性5IMA941クラスIITUMAPBIR002の免疫原性SEQIDNO11ペプチドの免疫原性を確認するために、臨床試験を実施した。試験の主な目的は、顕性転移病変が検出されず、根治的前立腺切除術の施行後、生化学的に再発した患者を対象とし、前立腺特異的ペプチドパネルの皮下注投与ワクチン接種療法に対するPSA前立腺特異抗原に基づく奏効PSARを検討することであった。試験の第2の目的は、T細胞応答の点から免疫現象を特別に検討した前立腺癌患者について、ワクチン接種療法施行の忍容性と実現性を検討することであった。試験は、顕性転移病変が検出されず、根治的前立腺切除術を施行後、生化学的に再発した徴候を検討する、プロスペクティブランダム化第I/II相試験としてデザインされた。試験集団この第I/II相試験の一部として、根治的前立腺切除術後に生化学的に再発したHLAA02患者において、前立腺特異的ペプチドパネルのワクチン接種による腫瘍発育停止の指標として、PSAレベルを軽減させる試みが行われた。前立腺特異的ペプチドの組み合わせが皮下投与され、抗原構造の様々な投与形態に照らし、各免疫応答の程度が評価された。以前のワクチン接種試験とは対照的に、この計画された試験では、画像診断ではまだ検出不可能な、少量の腫瘍組織量を持つ患者の治療を目標とした。患者は全員、既知の前立腺特異的抗原構造を使った同一の方法でワクチン接種を受け、悪性形質転換した細胞への免疫応答を強化した。19例の患者が治療を受けた。表9:試験集団の背景治療計画事前の根治的前立腺切除術後にPSA再発が検出された14日以上の間隔で2回測定し、PSAが50上昇した患者に、CTと骨シンチグラフィーにより顕性転移病変を除外した後、前立腺特異的ペプチドワクチンを異なる投与形態で皮下投与した。ワクチンは0、7、14、28、42、56日目に8倍投与した1ペプチド、注射1回につき約100mg。各ワクチン接種後と70日目に再度、PSAを測定し、治療の奏効を評価した。腫瘍の応答完全寛解[PSACR]、部分寛解[PSAPR]、または安定な臨床経過[変化なし、[PSANC]が検出される場合、患者は、選択した投与形態で維持療法として毎月1回ワクチンを接種した。ワクチン接種療法に対する患者の奏効は以下のように詳細に評価した。完全寛解PSACR:初期に上昇したPSAレベルが正常化し、これが少なくとも4週間後の測定で確認される。正常化はPSA最低値が<02ngmlと定義され、全腫瘍または全前立腺の根治的切除術後に期待される。部分寛解:aPSAPR≦80初期に上昇したPSAレベルの80減少が、少なくとも4週間後の測定で確認される、bPSAPR≦50初期に上昇したPSAレベルの50減少が、少なくとも4週間後の測定で確認される。病態安定PSASD:4週間以上にわたり有意な変化がない。これには、安定化および50未満の減少および10未満の上昇が、少なくとも4週間後の測定で確認されることが含まれる。病態進行PSAPD:PSAレベルが10を超えて上昇する。PSA進行の場合は、試験を中止する。患者の本試験への登録後、エピトープ特異的ワクチンを使用し、前立腺上皮細胞例えば、PSMA/PSCAに特異的に発現するタンパク質を検討した。PSAのモニタリングにより評価される残存腫瘍画分の増殖モニリングに関連した、投与ワクチンの全体的有効性を検討することに加え、本試験では免疫系の効果的な調節に関連した、様々なワクチン接種法の効果も検討した。ペプチドのみの単純な皮下投与に加え、様々なアジュバントの併用も利用した。特に、最近非常に好意的に報告された、モンタニドヒトでの使用に適した従来からの不完全フロイントアジュバント製剤ペプチドワクチンのデポーおよびアジュバント活性を利用した。この目的では、ペプチド溶液500μlをモンタニド500μlと混合して投与した。これにより、油中水滴型エマルジョンが形成され、水層に含まれる抗原が数週間かけてゆっくり放出される。このエマルジョンの物理的安定性は非常に高く、4°Cで、明らかな相分離を起こさずに3ヶ月を超えて保存できる。モンタニドのデポー製剤としての機能は、数件のワクチン接種試験で開発され、良好な結果を得ているOkaetal2004。1試験群では、増殖因子GMCSF製剤である注射用Leukine登録商標溶液により、免疫系の同時刺激中にワクチン接種の効能を検討した。GMCSFはペプチドワクチン接種試験で非常に一般的に使用されるアジュバントであり、この試験のうち数件で臨床的なT細胞応答が強化されることが報告されている。最初に、GMCSFはワクチン注入部位で樹状細胞数を増加させると考えられる、樹状細胞の補充/分化因子である。GMCSF自体は、樹状細胞およびマクロファージとしての抗原提示細胞を活性化しないが、invivoでの間接的活性化が報告されているMolenkampetal2005。別の試験群では、イミキモドの経皮投与による樹状細胞の同時活性化中のワクチン接種の有効性を検討した。イミキモドは5軟膏Aldaraとして投与した。イミキモドはTLR7陽性細胞例、形質細胞様DC、ランゲルハンス細胞、皮膚DCへの作用を通じて強い免疫刺激作用を有し、MyD88依存性経路を活性化する。活性化APCはT細胞刺激サイトカインと炎症性サイトカインを遊離し、共刺激をアップレギュレートし、流入領域リンパ節まで遊走する。抗原を軟膏中に混合するか、抗原のscまたはid注射部位にAldaraを塗布することによりペプチド誘発CTL応答が高まるという、イミキモドの可能性が動物モデルで証明された。別の試験群では、樹状細胞をムチン-1をコード化するプロタミン安定化mRNAと混合してTLR78を活性化することにより、樹状細胞を同時に活性化している間のワクチン接種の有効性を検討した。mRNAは、マウスおよびヒトの免疫細胞集団を広範囲に活性化することが示された。製剤中に多塩基タンパク質プロタミンが存在すると、mRNAの半減期が増大し、デポーを形成する可能性のある粒子の形成を誘発する。そのため、このアジュバントはデポー形成とAPC活性化の性質を兼ね備えている可能性がある。要約すると、ワクチンの投与形態には以下の方法が含まれる。モンタニド中で乳化されたペプチドワクチンの皮下投与増殖因子の同時投与によりより強力な免疫応答を得る目的で、GMCSF225μlの局所投与を併用した、モンタニド500μl中に乳化したペプチドワクチンの皮下投与熱で誘発されるより強力な免疫応答を得る目的で行われる局所温熱療法と併用した、モンタニド500μl中に乳化したペプチドワクチンの皮下投与TLR7を介して樹状細胞を活性化するためにイミキモド経皮投与を併用した、モンタニド500μl中に乳化したペプチドワクチンの皮下投与TLR78によって樹状細胞を活性化するため、ムチン-1のmRNA/プロタミン55μlと共に、モンタニド500μl中に乳化したペプチドワクチンの皮下投与スケジュール:全試験期間は3年であった。前立腺特異的ペプチドワクチンは0、7、14、28、42、56日目に患者に投与した。病態安定または目的とする腫瘍応答PSACRまたはPSAPRが見られる患者では、検出可能な進行が起こるまで毎月1回idでワクチン接種を行った。これまで得られた経験に基づき、ペプチド注射は忍容性があり、重大な有害反応はない。ワクチン接種療法への奏効は、PSA測定に基づき血清学的にのみに評価されたため、検査は試験の開始時に実施し、invitroのPSA測定を投与ワクチンが妨害するか否かを決定したが、これにより臨床奏効をシミュレートできる。0、7、14、28、42、56、70日目に、臨床検査、PSAレベル、白血球百分率数、FACS分析およびサイトカイン測定用に血液サンプルを採取した。70日目を過ぎて治療が継続される場合、時宜、治療失敗を検出するために、6週間のPSAのモニタリングが実施された。PSA上昇の持続という点からみて疾病の進行が確認されれば、治療は終了とした。免疫療法は84日目に開始し、病態進行が確認されるまで、または最長420日目まで15ヶ月間、4週間隔で継続した。本試験終了後に成功例について治療を継続するかの決定は、臨機応変に行った。予想外の有害反応は本試験では発生しなかった。臨床検査では、血液凝固、電解質、LDH、β2M、CK、肝酵素、ビリルビン、クレアチニン、尿酸、総タンパク質、血液凝固、CRP、塗抹による白血球百分率数、PSAレベル、サイトカイン、FACS、Elispotを測定した。確認された細菌および真菌抗原に対する皮膚反応の分析投与48~72時間後、T細胞による遅延型過敏症DTHは、試験開始前の患者の細胞性免疫系の分析として役立つ。試験に必要なペプチドノナペプチドは、ProfHGRammenseeの学部のPDDrStefanStevanovic研究室で製造された。これらのペプチドはHPLCで精製し、質量分析計で分析された。ペプチドの純度は、HPLC、質量分析計、Edman配列決定により確認することもできる。これらの方法により、最大98までの純度が確認できる現状の方法では、どうしても最高とみなされる値である。合成ペプチドはDMSOCryoSure、WAKChemieMedicalGmbH、10mgmlに溶解し、AmpuwaFreseniusKabiで110に希釈し、滅菌条件下で分取した。臨床的奏効患者2例に継続的なデジタル直腸検査によって局所腫瘍が検出された後、PETCTスキャンで局所再発を発見できた。残る17例の患者では、疾患活動部位を試験終了時に確認できなかった。白血球百分率数または広範な生化学試験の臨床評価を繰り返しても、試験期間中にいかなる異常あるいは変化も発見されなかった。19例の患者のうち16例がSEQIDNO12のサービビンIIペプチドIFNgELISPOT、ICSに反応した。このうち12例ではワクチン接種で抗サービビンT細胞応答が誘導され、2例では事前に抗サービビンT細胞が存在し、2例では事前に抗サービビンT細胞が十分存在したどうかは確認されなかった。生化学的奏効完全奏功とは、PSA値の初期上昇後、共同研究している検査室の検出可能最小値に従い、PSA値が検出不能の場合とみなした。測定は4週間以上の間隔後に確認する必要があった。従って、80超および50超のPRは、4週間後に再評価する必要があった。少なくとも4週間後にPSAが50未満の低下または10未満の上昇の範囲内と確認されれば、病態安定を示した。病態進行は、治療開始時にPSAの上昇が10を超えた場合と考えた。試験を中止した患者の生化学的奏効は、患者が局所放射線照射または抗内分泌療法の追加療法を受けるまで追跡した。19例が試験の参加に同意し、最長約3.75年継続した追跡調査によりデータを解析した。PSAの安定とDTの増加患者2例102のPSA値は上述した生化学的奏効基準に従う病態安定を示し、これは、治療開始時に10を超えていたPSA値は、試験終了時に上昇していなかったことを示している図6、表10、11、12。最後のワクチンを投与後、これらの2症例の追跡調査は14ヶ月間および16ヶ月間実施された。病態安定の平均期間は、データのカットオフ時点で24ヶ月28ヶ月および31ヶ月であり、平均ワクチン接種回数は18回14回および20回であった。これら2例の患者のうち1例は、9ヶ月間で50を超える部分的奏功を示し、その後ゆっくりとしたPSAの上昇期間が続き、倍加時間DTはワクチン接種前の98ヶ月に比べ205ヶ月となった。最初のPSA再発は、pT2pN0Gleasonスコア5の腫瘍の手術後18ヶ月で始まった。データ解析では、患者8は28ヶ月前のワクチン接種プログラム開始時から病態安定を示していた。この患者は10ヶ月後の14回目のワクチン接種後、アレルギー反応のため投与を中止した。この患者はpT3bGleasonスコア34という好ましくない状況であり、根治的前立腺切除術後もPSA最低値が06ngml未満とならず、PSA進行であり、この進行は術後最初に鈍化した後、適時遅くなることはなかった。倍加時間は66ヶ月から148ヶ月まで延びた。これら2例の患者では、ペプチドワクチン接種時に毎回、接種部位にイミキモドも経皮投与した。PSAの安定が認められないPSADTの延長患者11のPSADTは6ヶ月の試験期間中に15ヶ月から101ヶ月に延びた。この患者は、PSAが最初に108ngmlであり、178ngmlまで進行したため試験を中止し、PETCTでは視覚的に悪性病変はなく、抗アンドロゲン単剤療法を受けた。アジュバントとしてAldaraが投与された。患者16は、倍加時間が61ヶ月であり、ワクチン投与とムチン-1-mRNA/プロタミンの併用で開始した。PSAの速度は5ヶ月間で半減期27ヶ月まで低下し、続いてPSADT上昇の統計的計算値は144ヶ月となり、これは治療開始後16ヶ月間続いている。この患者の初期PSA値は029ngmlであり、試験治療を行った最初の5ヶ月間で019ngmlに低下し、次の8ヶ月で04ngmlまで上昇し、治療開始19ヶ月後041ngmlであったため、プロトコールにつき試験を中止した。PSA進行患者5は、ワクチン接種前の推定PSA倍加時間から判断して試験中に進行した。しかし、この患者はPSA低下を経験し、治療終了後半減期が202ヶ月であり、データカットオフ時点で10ヶ月間継続していた。この患者はワクチン接種終了後2回目の治療を受けなかった。この患者には、唯一のアジュバントとしてモンタニドをワクチン接種した。表10:PSA倍加時間月試験終了時または追跡調査終了時のPSADTは、患者5ではPSAが低下したため含めなかった。7本発明のHLAクラスI拘束性ペプチドのHLAA0201への結合目的および概要本分析の目的は、IMA941の作用機序の重要なパラメータであるため、HLAA0201対立遺伝子によってコード化されるMHC分子へのHLAクラスIペプチドの親和性を評価することであった。HLAA0201への親和性は、IMA941およびMET001では、10個のHLAクラスI拘束性ペプチド全てにおいて中等度から高度であり、解離定数KDは014MET001から205nMCSP001であった。全ての値が、強力な結合因子HBV001の01から中等度の結合因子MUC001の44までの範囲内にあった。これらの結果から、ワクチン候補のIMA941およびMET005由来MET001からHLAA02のHLAクラスIペプチド全てにおいて強い結合親和性が確認された。試験の原理安定なHLA/ペプチド複合体は、HLA重鎖、β2ミクログロブリンb2m、およびペプチド性リガンドの3つの分子から構成される。変性組み換えHLAA0201重鎖分子単独の活性は、その重鎖分子に空のHLAA0201分子と同等な機能を与えながら保存することができる。これらの分子は、b2mと適切なペプチドを含む水性緩衝剤に希釈すると、完全にペプチド依存的に迅速に効率よく折り畳まれる。これらの分子の有用性は、ペプチドとHLAクラスI分子間の相互作用の親和性を測定する、ELISAに基づくアッセイで利用されているSylvester2002。精製された組み換えHLAA0201分子は、b2mと共にインキュベートされ、関心のあるペプチドの用量を評価した。HLAクラスI結合能を持たない全長MET005に代わり、証明されたA0結合生成物のMET001を分析に含めたが、これは自然発生する抗原プロセシングによりMET005からinvivoで作成した。新規折り畳みHLA/ペプチド複合体の量は、定量的ELISA法で測定した。解離定数KD値は、較正物質であるHLA/ペプチド複合体を希釈して記録した標準曲線を用いて計算した。結果結果は、図2に示している。KD値が低いほどHLAA0201への親和性は高い。殆どのIMA941ペプチドは、01nMHBV001、強力な結合因子から444nMMUC001、中等度の結合因子の範囲でHLAA0201に対して同様の強い親和性を示した。従って、全てのIMA941クラスITUMAPはMHC分子A02に対して中等度から強度の結合親和性を持つ。8本発明のHLAクラスII拘束性ペプチドのHLADRへの結合目的および概要クラスIITUMAPは、クラスI拘束性TUMAPにより誘発されるCTLの機能を補助する上で重要な役割を果たすヘルパーT細胞を活性化する。IMA941クラスIIペプチドが数種類の異なるHLAクラスII分子に結合することは無差別な結合、ワクチン候補IMA941を投与した患者の大部分が補助的なヘルパーT細胞応答の利益を得ることができる、ということを確認するために重要である。例えば、最も優位に発現されるヒトHLAクラスII分子のHLADRは、非常に多様な形を持ち、数百種類の対立遺伝子が知られている。HLADRB1ハプロタイプの既知の対立遺伝子頻度および十分確立された結合アルゴリズムに基づき、IMA941のいずれのHLAクラスIIリガンド、IMABIR002およびIMAMET005とも、無差別なHLADR結合ペプチドであると予測できる。詳細には、HLAA02陽性白人が少なくとも1つ適切なHLADR対立遺伝子を発現している可能性は、いずれのIMA941クラスIITUMAPとも90を超える。頻度データあるいは結合予測アルゴリズムがないという理由から、残りのヒトクラスII対立遺伝子HLADQおよびDPはこの計算から除外したため、実際の無差別性は更に高くなる可能性が最も高い。2つのIMA941クラスIITUMAPについて計算された無差別性は、既知のpanDRエピトープPADRE、遺伝子型頻度Fprojected=931と同じ範囲である。更に、これらのペプチドの無差別な結合は、invitro結合アッセイにより実験的に確認された。また、IMABIR002では、高いinvivo免疫原性を証明することができた上記参照。要約すると、これらの結果から、MET005およびBIR002は無差別なHLADR結合ペプチドがあることが確認される。結合予測の原理UniversityofTubingenで開発されたSYFPEITHIアルゴリズムにより、IMA941クラスIITUMAPのいくつかの共通HLADR対立遺伝子への結合をランク付けした。このアルゴリズムは、例えばヒト腫瘍関連抗原TRP2クラスIおよびSSX2クラスIIなど、広範な抗原からクラスIおよびクラスIIエピトープを同定するため、すでに使用され、成功している。結合閾値は、公表された既知の無差別HLADRリガンドの結合スコア分析に基づき、スコア18に定義した。HLAA02陽性白人集団について公表されたHLADRハプロタイプの頻度および高分解能ハプロタイプ頻度を利用した表2参照。ハプロタイプ頻度とは、個々の染色体上で異なる対立遺伝子が発生する頻度である。哺乳類細胞では染色体が2倍体であるため、この対立遺伝子の遺伝子型が発生する頻度は高く、ハーディーワインベルクの法則を用いて計算することができるハプロタイプ頻度Gfから遺伝子型発生頻度Fが得られるF=2Gf-Gf2。既知のSYFPEITHIマトリックスを用いたDRB1ハプロタイプ頻度とA02白人集団における既知の個別頻度の合計は、478である。従って、クラスIITUMAPのこれらの対立遺伝子に対する予測結合分布は、DRB1対立遺伝子で残りの522になると予想されたが、このデータは利用できない。最後に、無差別な結合は1つのペプチドが数種類のHLADR対立遺伝子に結合することと定義され、この対立遺伝子のうち1つが白人集団で発現される確率は50以上である。invitro結合アッセイの原理ProImmuneREVEAL登録商標IMABIR002およびIMAMET005を広範なHLADR抗原HLADR1からDR7、分割された抗原HLADR11からDR15も含むと会合させ、REVEAL登録商標MHC:ペプチド結合アッセイProImmune、英国オックスフォードにより分析し、MHC分子に組み込まれたレベルを決定した。このアッセイでは、結合を合否判定用のコントロール結合因子、および各HLADR抗原の陽性コントロールペプチドと比較した。結果SYFPEITHIアルゴリズムの予測に基づき、IMABIR002は、それぞれ既知の結合モチーフを持つHLADR対立遺伝子78個と結合する可能性がある表11。HLAA02陽性白人がIMABIR002に対して少なくとも1つ適切なHLADRB1対立遺伝子を発現する確率は、それぞれ926である。従って、いずれのIMA941クラスIIペプチドも無差別なHLADR結合因子と予想される。結合HLADRB1対立遺伝子のハプロタイプ頻度がファクター2のため、このアプローチにより過大評価された場合でも、この遺伝子型の発生率は、IMA941における全てのクラスIITUMAPでまだ50を超える。更に、invitroの結合データから、IMABIR002のHLADR1、3、4、11への無差別な結合が実験的に確認された図3。異なるHLADR対立遺伝子を持つ前立腺癌患者を対象とした臨床試験において、IMABIR002は広範な免疫原性が証明されたため、このクラスIIペプチドの無差別性はinvivoで明らかに証明された。結論として、IMA941に含まれる2つのクラスIIペプチドのHLADR結合特性に関するコンピュータによる解析、および、更にBIR002に関するinvitroアッセイおよび臨床試験の実験的根拠は、これらのTUMAPがヒトクラスIIHLA分子の無差別な結合因子であることを強く示唆している。表11:既知の結合モチーフを持つHLADR対立遺伝子に対する、IMA941クラスIITUMAPの結合スコア白人集団で最も多いHLADRB1対立遺伝子について、SYFPEITHI結合スコアが示されている。pは、HLAA02陽性白人のハプロタイプ頻度を示している。スコアが18以上の場合、そのペプチドはHLA分子に結合するとみなした。DRB1対立遺伝子の結合についてp値を蓄積すると、最小ハプロタイプ頻度pminが得られる。これらの頻度を結合予測マトリックスまたは頻度データが不完全なものを含む全てのDRB1対立遺伝子に外挿すると、遺伝子型発生頻度Fprojectedに対応する予測ハプロタイプ頻度pprojectedが得られる。nd=データなし参考文献リストAllisonJPKrummelMFTheYinandYangofTcellcostimulationScience270932933AngileriFFAguennouzMContiALaTDCardaliSCrupiRTomaselloCGermanoAVitaGTomaselloFNuclearfactorkappaBactivationanddifferentialexpressionofsurvivinandBcl2inhumangrade24astrocytomasCancer11222582266AshleyACSargentDJAlbertsSRGrotheyACampbellMEMortonRFFuchsCSRamanathanRKWilliamsonSKFindlayBPPitotHCGoldbergRMUpdatedefficacyandtoxicityanalysisofirinotecanandoxaliplatinintergrouptrialN9741infirstlinetreatmentofmetastaticcolorectalcancerCancer110670677AucouturierJDupuisLGanneVAdjuvantsdesignedforveterinaryandhumanvaccinesVaccine1926662672BanchereauJPaluckaAKDhodapkarMBurkeholderSTaquetNRollandATaquetSCoquerySWittkowskiKMBhardwajNPineiroLSteinmanRFayJImmuneandclinicalresponsesinpatientswithmetastaticmelanomatoCD34progenitorderiveddendriticcellvaccineCancerRes6164516458BanerjeeSKWestonAPZoubineMNCampbellDRCherianRExpressionofcdc2andcyclinB1inHelicobacterpyloriassociatedgastricMALTandMALTlymphomarelationshiptocelldeathproliferationandtransformationAmJPathol156217225BauerBBartfeldSMeyerTFHpyloriselectivelyblocksEGFRendocytosisviathenonreceptorkinasecAblandCagACellMicrobiol11156169BertolettiAChisariFVPennaAGuilhotSGalatiLMissaleGFowlerPSchlichtHJVitielloAChesnutRCDefinitionofaminimaloptimalcytotoxicTcellepitopewithinthehepatitisBvirusnucleocapsidproteinJVirol6723762380BertoliniGRozLPeregoPTortoretoMFontanellaEGattiLPratesiGFabbriAAndrianiFTinelliSRozECaseriniRLoVSCameriniTMarianiLDeliaDCalabroEPastorinoUSozziGHighlytumorigeniclungcancerCD133cellsdisplaystemlikefeaturesandaresparedbycisplatintreatmentProcNatlAcadSciUSA1061628116286BierieBMosesHLTGFbetaandcancerCytokineGrowthFactorRev172940BrownCEStarrRMartinezCAguilarBDApuzzoMTodorovIShihCCBadieBHudecekMRiddellSRJensenMCRecognitionandkillingofbraintumorstemlikeinitiatingcellsbyCD8cytolyticTcellsCancerRes6988868893CastriconiRDonderoANegriFBelloraFNozzaPCarnemollaBRasoAMorettaLMorettaABottinoCBothCD133andCEurJImmunol3731903196ChakravartiANollEBlackPMFinkelsteinDFFinkelsteinDMDysonNJLoefflerJSQuantitativelydeterminedsurvivinexpressionlevelsareofprognosticvalueinhumangliomasJClinOncol2010631068ChanockSJFosterCBMillerFWOHanlonTPHLAABCwDQA1andDRB1AllelesinaCaucasianPopulationfromBethesdaUSAHumImmunol6512111223ChenZOSheaJJRegulationofIL17productioninhumanlymphocytesCytokine417178CisekLJCordenJLPhosphorylationofRNApolymerasebythemurinehomologueofthecellcyclecontrolproteincdc2Nature339679684CorsoSMiglioreCGhisoEDeRGComoglioPMGiordanoSSilencingtheMEToncogeneleadstoregressionofexperimentaltumorsandmetastasesOncogene27684693CoxCVDiamantiPEvelyRSKearnsPRBlairAExpressionofCD133onleukemiainitiatingcellsinchildhoodALLBlood11332873296DeLucaJGDongYHergertPStraussJHickeyJMSalmonEDMcEwenBFHec1andnuf2arecorecomponentsofthekinetochoreouterplateessentialfororganizingmicrotubuleattachmentsitesMolBiolCell16519531DengHGuoRFLiWMZhaoMLuYYMatrixmetalloproteinase11depletioninhibitscellproliferationingastriccancercellsBiochemBiophysResCommun326274281DeremerDLUstunCNatarajanKNilotinibasecondgenerationtyrosinekinaseinhibitorforthetreatmentofchronicmyelogenousleukemiaClinTher3019561975EglandKALiuXFSquiresSNagataSManYGBeraTKOndaMVincentJJStrausbergRLLeeBPastanIHighexpressionofacytokeratinassociatedproteininmanycancersProcNatlAcadSciUSA10359295934EramoALottiFSetteGPilozziEBiffoniMDiVAConticelloCRucoLPeschleCDeMRIdentificationandexpansionofthetumorigeniclungcancerstemcellpopulationCellDeathDiffer15504514EsashiFChristNGannonJLiuYHuntTJasinMWestSCCDKdependentphosphorylationofBRCA2asaregulatorymechanismforrecombinationalrepairNature434598604FalkKRotzschkeOStevanovicSJungGRammenseeHGAllelespecificmotifsrevealedbysequencingofselfpeptideselutedfromMHCmoleculesNature351290296FlanaganJMFunesJMHendersonSWildLCareyNBoshoffCGenomicsscreenintransformedstemcellsrevealsRNASEH2APPAP2CandADARB1asputativeanticancerdrugtargetsMolCancerTher8249260GabrilovichDIChenHLGirgisKRCunninghamHTMenyGMNadafSKavanaughDCarboneDPProductionofvascularendothelialgrowthfactorbyhumantumorsinhibitsthefunctionalmaturationofdendriticcellsNatMed210961103GrundaJMNaborsLBPalmerCAChhiengDCStegAMikkelsenTDiasioRBZhangKAllisonDGrizzleWEWangWGillespieGYJohnsonMRIncreasedexpressionofthymidylatesynthetaseubiquitinspecificprotease10andsurvivinisassociatedwithpoorsurvivalinglioblastomamultiformeJNeurooncol80261274HaradaTChelalaCCrnogoracJurcevicTLemoineNRGenomewideanalysisofpancreaticcancerusingmicroarraybasedtechniquesPancreatology91324HarperLJPiperKCommonJFortuneFMackenzieICStemcellpatternsincelllinesderivedfromheadandnecksquamouscellcarcinomaJOralPatholMed36594603HayamaSDaigoYKatoTIshikawaNYamabukiTMiyamotoMItoTTsuchiyaEKondoSNakamuraYActivationofCDCA1KNTC2membersofcentromereproteincomplexinvolvedinpulmonarycarcinogenesisCancerRes661033910348HortonRAStrachanEAVogelKWRiddleSMAsubstratefordeubiquitinatingenzymesbasedontimeresolvedfluorescenceresonanceenergytransferbetweenterbiumandyellowfluorescentproteinAnalBiochem360138143HuangYFanJYangJZhuGZCharacterizationofGPR56proteinanditssuppressedexpressioninhumanpancreaticcancercellsMolCellBiochem308133139JiaHLYeQHQinLXBudhuAForguesMChenYLiuYKSunHCWangLLuHZShenFTangZYWangXWGeneexpressionprofilingrevealspotentialbiomarkersofhumanhepatocellularcarcinomaClinCancerRes1311331139JungGLedbetterJAMullerEberhardHJInductionofcytotoxicityinrestinghumanTlymphocytesboundtotumorcellsbyantibodyheteroconjugatesProcNatlAcadSciUSA8446114615JungHMChoiSJKimJKExpressionprofilesofSV40immortalizationassociatedgenesupregulatedinvarioushumancancersJCellBiochem106703713KajiwaraYYamasakiFHamaSYaharaKYoshiokaHSugiyamaKAritaKKurisuKExpressionofsurvivininastrocytictumorscorrelationwithmalignantgradeandprognosisCancer9710771083KanekoNMiuraKGuZKarasawaHOhnumaSSasakiHTsukamotoNYokoyamaSYamamuraANagaseHShibataCSasakiIHoriiAsiRNAmediatedknockdownagainstCDCA1andKNTC2bothfrequentlyoverexpressedincolorectalandgastriccancerssuppressescellproliferationandinducesapoptosisBiochemBiophysResCommun39012351240KnutsonKLDisisMLAugmentingThelpercellimmunityincancerCurrDrugTargetsImmuneEndocrMetabolDisord5365371KochMBeckhovePOpdenWJAutenriethDWagnerPNummerDSpechtSAntolovicDGalindoLSchmitzWinnenthalFHSchirrmacherVBuchlerMWWeitzJTumorinfiltratingTlymphocytesincolorectalcancerTumorselectiveactivationandcytotoxicactivityinsituAnnSurg244986992KriegAMTherapeuticpotentialofTolllikereceptor9activationNatRevDrugDiscov5471484LiuXChenNWangXHeYChenXHuangYYinWZhouQApoptosisandproliferationmarkersindiffuselyinfiltratingastrocytomasprofilingof17moleculesJNeuropatholExpNeurol65905913LivingstonBDCrimiCGreyHIshiokaGChisariFVFikesJGreyHChesnutRWSetteAThehepatitisBvirusspecificCTLresponsesinducedinhumansbylipopeptidevaccinationarecomparabletothoseelicitedbyacuteviralinfectionJImmunol15913831392MaSChanKWHuLLeeTKWoJYNgIOZhengBJGuanXYIdentificationandcharacterizationoftumorigeniclivercancerstemprogenitorcellsGastroenterology13225422556MartinCMAstburyKMcEvoyLOTooleSSheilsOOLearyJJGeneexpressionprofilingincervicalcanceridentificationofnovelmarkersfordiseasediagnosisandtherapyMethodsMolBiol511333359MellaiMCalderaVPatruccoAAnnovazziLSchifferDSurvivinexpressioninglioblastomascorrelateswithproliferationbutnotwithapoptosisAnticancerRes28109118MizrakDBrittanMAlisonMCD133moleculeofthemomentJPathol21439MolenkampBGVuylstekeRJvanLeeuwenPAMeijerSVosWWijnandsPGScheperRJdeGruijlTDMatchedskinandsentinellymphnodesamplesofmelanomapatientsrevealexclusivemigrationofmaturedendriticcellsAmJPathol16713011307MonzaniEFacchettiFGalmozziECorsiniEBenettiACavazzinCGrittiAPiccininiAPorroDSantinamiMInverniciGParatiEAlessandriGLaPortaCAMelanomacontainsCD133andABCG2positivecellswithenhancedtumourigenicpotentialEurJCancer43935946MoriMBeattyPGGravesMBoucherKMMilfordELHLAgeneandhaplotypefrequenciesintheNorthAmericanpopulationtheNationalMarrowDonorProgramDonorRegistryTransplantation6410171027NakaigawaNYaoMBabaMKatoSKishidaTHattoriKNagashimaYKubotaYInactivationofvonHippelLindaugeneinducesconstitutivephosphorylationofMETproteininclearcellrenalcarcinomaCancerRes6636993705NeumannFWagnerCKubuschokBStevanovicSRammenseeHGPfreundschuhMIdentificationofanantigenicpeptidederivedfromthecancertestisantigenNYESO1bindingtoabroadrangeofHLADRsubtypesCancerImmunolImmunother53589599NguyenQNChavliRVMarquesJTConradPGJrWangDHeWBelisleBEZhangAPastorLMWitneyFRMorrisMHeitzFDivitaGWilliamsBRMcMasterGKLightcontrollablesiRNAsregulategenesuppressionandphenotypesincellsBiochimBiophysActa1758394403NishioKKimSWKawaiKMizushimaTYamaneTHamazakiJMurataSTanakaKMorimotoYCrystalstructureofthedeubiquitinatingenzymeUCH37catalyticdomainBiochemBiophysResCommun390855860OhnumaSMiuraKHoriiAFujibuchiWKanekoNGotohONagasakiHMizoiTTsukamotoNKobayashiTKinouchiMOkabeMSasakiHShiibaKMiyagawaKSasakiICancerassociatedsplicingvariantsoftheCDCA1andMSMBgenesexpressedincancercelllinesandsurgicallyresectedgastriccancertissuesSurgery1455768OkaYTsuboiATaguchiTOsakiTKyoTNakajimaHElisseevaOAOjiYKawakamiMIkegameKHosenNYoshiharaSWuFFujikiFMurakamiMMasudaTNishidaSShirakataTNakatsukaSSasakiAUdakaKDohyHAozasaKNoguchiSKawaseISugiyamaHInductionofWT1specificcytotoxicTlymphocytesbyWT1peptidevaccineandtheresultantcancerregressionProcNatlAcadSciUSA1011388513890PietraGManziniCVitaleMBalsamoMOgnioEBoitanoMQueiroloPMorettaLMingariMCNaturalkillercellskillhumanmelanomacellswithcharacteristicsofcancerstemcellsIntImmunol21793801PoppeMFellerSMRomerGWesslerSPhosphorylationofHelicobacterpyloriCagAbycAblleadstocellmotilityOncogene2634623472PytelDSliwinskiTPoplawskiTFerriolaDMajsterekITyrosinekinaseblockersnewhopeforsuccessfulcancertherapyAnticancerAgentsMedChem96676QianZJoslinJMTennantTRReshmiSCYoungDJStoddartALarsonRALeBeauMMCytogeneticandgeneticpathwaysintherapyrelatedacutemyeloidleukemiaChemBiolInteractRammenseeHGBachmannJEmmerichNPBachorOAStevanovicSSYFPEITHIdatabaseforMHCligandsandpeptidemotifsImmunogenetics50213219RammenseeHGBachmannJandStevanovicSMHCLigandsandPeptideMotifsSpringerVerlagHeidelbergGermanyRammenseeHGFalkKRotzschkeOPeptidesnaturallypresentedbyMHCclassImoleculesAnnuRevImmunol11213244RappaGFodstadOLoricoAThestemcellassociatedantigenCD133isamoleculartherapeutictargetformetastaticmelanomaStemCells2630083017RicciVitianiLLombardiDGSignoreMBiffoniMPalliniRParatiEPeschleCDeMariaRHumanneuralprogenitorcellsdisplaylimitedcytotoxicityandincreasedoligodendrogenesisduringinflammationCellDeathDiffer14876878RichardsonGDRobsonCNLangSHNealDEMaitlandNJCollinsATCD133anovelmarkerforhumanprostaticepithelialstemcellsJCellSci11735393545RutellaSBonannoGProcoliAMariottiACoralloMPriscoMGEramoANapoletanoCGalloDPerilloANutiMPierelliLTestaUScambiaGFerrandinaGCellswithcharacteristicsofcancerstemprogenitorcellsexpresstheCD133antigeninhumanendometrialtumorsClinCancerRes1542994311SaitoTArifinMTHamaSKajiwaraYSugiyamaKYamasakiFHidakaTAritaKKurisuKSurvivinsubcellularlocalizationinhighgradeastrocytomassimultaneousexpressioninbothnucleusandcytoplasmisnegativeprognosticmarkerJNeurooncol82193198SasakiTLopesMBHankinsGRHelmGAExpressionofsurvivinaninhibitorofapoptosisproteinintumorsofthenervoussystemActaNeuropathol104105109SeegerFHSchirleMGatfieldJArnoldDKeilholzWNickolausPRammenseeHGStevanovicSTheHLAA6601peptidemotifpredictionbypocketstructureandverificationbypeptideanalysisImmunogenetics49571576ShapiroGICyclindependentkinasepathwaysastargetsforcancertreatmentJClinOncol2417701783SinghSKClarkeIDTerasakiMBonnVEHawkinsCSquireJDirksPBIdentificationofacancerstemcellinhumanbraintumorsCancerRes6358215828SinghSKHawkinsCClarkeIDSquireJABayaniJHideTHenkelmanRMCusimanoMDDirksPBIdentificationofhumanbraintumourinitiatingcellsNature432396401SmithLMNesterovaARyanMCDunihoSJonasMAndersonMZabinskiRFSutherlandMKGerberHPVanOrdenKLMoorePARubenSMCarterPJCD133prominin1isapotentialtherapeutictargetforantibodydrugconjugatesinhepatocellularandgastriccancersBrJCancer99100109StemmannOZouHGerberSAGygiSPKirschnerMWDualinhibitionofsisterchromatidseparationatmetaphaseCell107715726SuetsuguANagakiMAokiHMotohashiTKunisadaTMoriwakiHCharacterizationofCD133hepatocellularcarcinomacellsascancerstemprogenitorcellsBiochemBiophysResCommun351820824SunYSongMStevanovicSJankowiakCPaschenARammenseeHGSchadendorfDIdentificationofanewHLAA0201restrictedTcellepitopefromthetyrosinaserelatedprotein2melanomaantigenIntJCancer87399404SuvaMLRiggiNStehleJCBaumerKTercierSJosephJMSuvaDClementVProveroPCironiLOsterheldMCGuillouLStamenkovicIIdentificationofCancerStemCellsinEwingsSarcomaCancerResSylvesterRKClinicalapplicationsofcolonystimulatingfactorsahistoricalperspectiveAmJHealthSystPharm59S612TakaishiSOkumuraTTuSWangSSShibataWVigneshwaranRGordonSAShimadaYWangTCIdentificationofgastriccancerstemcellsusingthecellsurfacemarkerCD44StemCells2710061020TirinoVCamerlingoRFrancoRMalangaDLaRAVigliettoGRoccoGPirozziGTheroleofCD133intheidentificationandcharacterisationoftumourinitiatingcellsinnonsmallcelllungcancerEurJCardiothoracSurg36446453TodaroMAleaMPDiStefanoABCammareriPVermeulenLIovinoFTripodoCRussoAGulottaGMedemaJPStassiGColoncancerstemcellsdictatetumorgrowthandresistcelldeathbyproductionofinterleukin4CellStemCell1389402UematsuMOhsawaIAokageTNishimakiKMatsumotoKTakahashiHAsohSTeramotoAOhtaSPrognosticsignificanceoftheimmunohistochemicalindexofsurviviningliomaacomparativestudywiththeMIB1indexJNeurooncol72231238WalterSHerrgenLSchoorOJungGWernetDBuhringHJRammenseeHGStevanovicSCuttingedgepredeterminedavidityofhumanCD8TcellsexpandedoncalibratedMHCantiCD28coatedmicrospheresJImmunol17149744978WicksSJGrocottTHarosKMaillardMtenDPChantryAReversibleubiquitinationregulatestheSmadTGFbetasignallingpathwayBiochemSocTrans34761763WicksSJHarosKMaillardMSongLCohenREDijkePTChantryAThedeubiquitinatingenzymeUCH37interactswithSmadsandregulatesTGFbetasignallingOncogene2480808084XieDZengYXWangHJWenJMTaoYShamJSGuanXYExpressionofcytoplasmicandnuclearSurvivininprimaryandsecondaryhumanglioblastomaBrJCancer94108114YangLAndersonDEBaecherAllanCHastingsWDBettelliEOukkaMKuchrooVKHaflerDAIL21andTGFbetaarerequiredfordifferentiationofhumanT17cellsNatureYasuiWAyhanAKitadaiYNishimuraKYokozakiHItoHTaharaEIncreasedexpressionofp34cdc2anditskinaseactivityinhumangastricandcoloniccarcinomasIntJCancer533641YinSLiJHuCChenXYaoMYanMJiangGGeCXieHWanDYangSZhengSGuJCD133positivehepatocellularcarcinomacellspossesshighcapacityfortumorigenicityIntJCancer12014441450ZhangXKedlRMXiangJCD40ligationconvertsTGFbetasecretingtolerogenicCD48dendriticcellsintoIL12secretingimmunogeniconesBiochemBiophysResCommun379954958ZhaoCChenAJamiesonCHFereshtehMAbrahamssonABlumJKwonHYKimJChuteJPRizzieriDMunchhofMVanarsdaleTBeachyPAReyaTHedgehogsignallingisessentialformaintenanceofcancerstemcellsinmyeloidleukaemiaNatureZhenHNZhangXHuPZYangTTFeiZZhangJNFuLAHeXSMaFCWangXLSurvivinexpressionanditsrelationwithproliferationapoptosisandangiogenesisinbraingliomasCancer10427752783ZhouLLopesJEChongMMIvanovIIMinRVictoraGDShenYDuJRubtsovYPRudenskyAYZieglerSFLittmanDRTGFbetainducedFoxp3inhibitsT17celldifferentiationbyantagonizingRORgammatfunctionNature453236240ZhuKJCenJPLouJXWangQZhangXXuYChenXZChengHImiquimodinhibitsthedifferentiationbutenhancesthematurationofhumanmonocytederiveddendriticcellsIntImmunopharmacol9412417