以下を含む乾燥ワクチン粉末製剤:a.1つまたは複数の抗原;b.1つまたは複数の糖類;およびc.微結晶性セルロース。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがウイルス抗原である、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがインフルエンザウイルス抗原である、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、弱毒化生ウイルス、不活化全ウイルス、スプリットウイルス、サブユニット抗原、ウィロゾーム、または低温馴化生インフルエンザウイルスである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが不活性全ウイルスである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが不活性スプリットウイルスである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがH1N1インフルエンザウイルスである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、H5N1インフルエンザウイルスである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原が、H1N1インフルエンザウイルス、H3N2インフルエンザウイルス、およびB型インフルエンザウイルスを含む、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが細菌抗原である、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、全菌体死菌、弱毒化細菌、トキソイド、精製表面タンパク質、または精製組み換え型表面タンパク質である、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、破傷風トキソイドである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、ジフテリアトキソイドである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、原生生物抗原である、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、タンパク質である、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つが、トレハロース、マンニトール、またはラクトースである、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つが、トレハロースである、請求項16記載の乾燥ワクチン粉末製剤。微結晶性セルロースが、10μmから100μmの平均粒子直径を有する、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。微結晶性セルロースが、13m2gから20m2gの比表面積を有する、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。微結晶性セルロースが、01gcm3から10gcm3のかさ密度を有する、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の緩衝剤をさらに含む、請求項1記載の乾燥ワクチン粉末製剤。1つまたは複数の緩衝剤の少なくとも1つが、リン酸緩衝剤である、請求項21記載の乾燥ワクチン粉末製剤。室温および相対湿度60で少なくとも12ヶ月間安定である、請求項1記載のワクチン粉末製剤。以下の段階を含む、乾燥ワクチン粉末製剤を生成する方法:a.1つまたは複数の抗原を含む液体製剤を調製する段階;b.液体製剤を急速凍結する段階であって、噴霧凍結することを含まない、段階;c.フリーズドライした試料を1つまたは複数の賦形剤と混和して、乾燥ワクチン粉末製剤を生成する段階。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがウイルス抗原である、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがインフルエンザウイルスである、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、H1N1インフルエンザウイルスである、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、H5N1インフルエンザウイルスである、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原が、H1N1インフルエンザウイルス、H3N2インフルエンザウイルス、およびB型インフルエンザウイルスを含む、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、弱毒化生ウイルス、不活化全ウイルス、スプリットウイルス、サブユニット抗原、ウィロゾーム、または低温馴化生インフルエンザウイルスである、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが細菌抗原である、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、全菌体死菌、弱毒化細菌、トキソイド、精製表面タンパク質、または精製組み換え型表面タンパク質である、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、破傷風トキソイドである、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、ジフテリアトキソイドである、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、原生生物抗原である、請求項24記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、タンパク質である、請求項24記載の方法。液体製剤を調製する段階が、1つまたは複数の糖類の添加をさらに含む、請求項24記載の方法。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つがラクトースである、請求項37記載の方法。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つがトレハロースである、請求項37記載の方法。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つがマンニトールである、請求項37記載の方法。液体製剤を調製する段階が、1つまたは複数の緩衝剤の添加をさらに含む、請求項24記載の方法。1つまたは複数の緩衝剤の少なくとも1つが、リン酸緩衝剤である、請求項41記載の方法。粉末が10μmから100μmの平均粒子直径を有する、請求項24記載の方法。粉末が室温および相対湿度60で少なくとも12ヶ月間安定である、請求項24記載の方法。1つまたは複数の賦形剤が1つまたは複数の経鼻担体を含む、請求項24記載の方法。1つまたは複数の経鼻担体が、微結晶性セルロースまたは第三リン酸カルシウムTCPを含む、請求項45記載の方法。経鼻担体が10μmから100μmの平均粒子直径を有する、請求項46記載の方法。経鼻担体が、13m2gから20m2gの比表面積を有する、請求項46記載の方法。経鼻担体が、01gcm3から10gcm3のかさ密度を有する、請求項46記載の方法。1つまたは複数の賦形剤が流動性を改善する、請求項24記載の方法。1つまたは複数の賦形剤が吸湿性を低減させる、請求項24記載の方法。ワクチン粉末製剤がアジュバントを含まない、請求項24記載の方法。急速凍結する段階が液体窒素を用いることを含む、請求項24記載の方法。乾燥ワクチン粉末製剤を対象に投与する段階を含む、対象において抗原に対するsIgA応答を刺激する方法であって、乾燥粉末製剤が1つまたは複数の抗原を含み、かつ乾燥粉末製剤が液体ワクチン製剤を急速凍結する段階によって生成され、急速凍結する段階が噴霧凍結することを含まない方法。IgG応答も同様に刺激される、請求項54記載の方法。ワクチン乾燥粉末製剤が、投与部位以外の粘膜部位でsIgA産生を誘導することができる、請求項54記載の方法。投与が鼻内投与である、請求項54記載の方法。ワクチン粉末製剤がアジュバントを含まない、請求項54記載の方法。急速凍結する段階が、液体窒素を用いることを含む、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがウイルス抗原である、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、弱毒化生ウイルス、不活化全ウイルス、スプリットウイルス、サブユニット抗原、ウィロゾーム、または低温馴化生インフルエンザウイルスである、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがインフルエンザウイルスである、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがH1N1インフルエンザウイルスである、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つがH5N1インフルエンザウイルスである、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原が、H1N1インフルエンザウイルス、H3N2インフルエンザウイルス、およびB型インフルエンザウイルスを含む、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが細菌抗原である、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、全菌体死菌、弱毒化細菌、トキソイド、精製表面タンパク質、または精製組み換え型表面タンパク質である、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、破傷風トキソイドである、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、ジフテリアトキソイドである、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、原生生物抗原である、請求項54記載の方法。1つまたは複数の抗原の少なくとも1つが、タンパク質である、請求項54記載の方法。液体製剤が、1つまたは複数の糖類を含む、請求項54記載の方法。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つがラクトースである、請求項72記載の方法。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つがトレハロースである、請求項72記載の方法。1つまたは複数の糖類の少なくとも1つがマンニトールである、請求項72記載の方法。液体製剤が1つまたは複数の緩衝剤を含む、請求項54記載の方法。1つまたは複数の緩衝剤の少なくとも1つがリン酸緩衝剤である、請求項76記載の方法。粉末が10μmから100μmの平均粒子直径を有する、請求項54記載の方法。粉末が室温および相対湿度60で少なくとも12ヶ月間安定である、請求項54記載の方法。乾燥ワクチン粉末製剤が1つまたは複数の賦形剤を含む、請求項54記載の方法。1つまたは複数の賦形剤が1つまたは複数の経鼻担体を含む、請求項80記載の方法。1つまたは複数の経鼻担体が、微結晶性セルロース、または第三リン酸カルシウムTCPを含む、請求項80記載の方法。経鼻担体が、10μmから100μmの平均粒子直径を有する、請求項82記載の方法。経鼻担体が、13m2gから20m2gの比表面積を有する、請求項82記載の方法。経鼻担体が、01gcm3から10gcm3のかさ密度を有する、請求項82記載の方法;1つまたは複数の賦形剤が流動性を改善する、請求項78記載の方法。1つまたは複数の賦形剤が吸湿性を低減させる、請求項80記載の方法。請求項24記載の方法によって生成されるワクチン粉末製剤を含む、ワクチン粉末製剤を投与するための装置。1回使用のために構成される、請求項87記載の装置。態様の説明発明の詳細な説明I.概要室温から40°Cまで24時間かけて冷却するような、液体インフルエンザワクチン製剤の従来のフリーズドライプロセスでは、粒子特性が最適下となるか、または抗原性たとえば、インフルエンザ赤血球凝集HA効力の喪失が起こりうる図1。たとえば、トレハロースを有する液体インフルエンザワクチン製剤を従来のフリーズドライプロセスに供すると、部分的にケーキ状の粉末を形成しうる図1。マンニトールを有する液体インフルエンザワクチン製剤を従来のフリーズドライプロセスに供すると、HA効力が低減されうる図1。ラクトースを有する液体インフルエンザワクチン製剤を従来のフリーズドライプロセスに供すると、部分的にケーキ状の粉末を形成して、HA効力が低減されうる図1。本開示は、これまでのフリーズドライ法の限界を克服して、それによって高い流動性を有する高い効力の粉末ワクチンが得られる乾燥ワクチン粉末製剤を生成するための急速凍結段階を含む方法たとえば、図2および3を参照されたいを提供する。方法は、1つまたは複数の物質たとえば、糖類および/または緩衝剤、たとえばリン酸緩衝液と共に、病原体またはその成分たとえば、不活化全インフルエンザウイルスなどの1つまたは複数の抗原を含有する液体製剤を生成するための段階を含みうる。液体ワクチン製剤をフリーズドライしてたとえば、液体窒素中での急速凍結を含む、粉末たとえば、ワクチン粉末を生成することができる。粉末は微粒子を含みえて、室温で安定でありうる。抗原がインフルエンザウイルスである場合、粉末は、高いHA効力を有しうるたとえば、少なくとも約90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、または100。フリーズドライ後、粉末を1つまたは複数の賦形剤たとえば、経鼻担体および/または流動性物質と混和してたとえば、ボルテックスミキサーで撹拌することによって、乾燥ワクチン粉末製剤を形成することができる。本明細書において記述される乾燥ワクチン粉末製剤は、室温で安定でありうる。これは、室温では不安定であり、冷蔵条件での費用のかかる貯蔵および流通たとえば、コールドチェーンでの流通を必要としうる液体インフルエンザワクチンに対して進歩である。いくつかのワクチン調製物において、二糖類、たとえばトレハロースまたはラクトースを含有する液体製剤を調製する。そのような添加剤は一般的に、乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤のHA効力を維持させる。そのような成分糖類を用いることは公知であるが、本明細書において記述される方法は、これらの糖類成分を用いてハードケーキを形成しない乾燥ワクチン剤形を提供することができる。ハードケーキングは、緩衝剤および本明細書において記述される急速凍結技術を用いて回避することができる。次に、急速凍結および乾燥抗原調製物から産生された粉末を、経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび/または流動性物質たとえば、第三リン酸カルシウムなどの1つまたは複数の賦形剤と共に混合することができる。本発明の製剤によって、室温および加速条件下で安定でありうる経鼻送達にとって適した乾燥粉末ワクチンを得ることができる。本明細書において提供される乾燥ワクチン粉末製剤は、経鼻送達装置からの完全で一貫した送達を与えることができ、それによってワクチンが向けられる抗原/病原体に対するレシピエントの免疫応答の刺激が起こりうる。本明細書において提供される方法は、本明細書において提供される乾燥ワクチン粉末製剤の吸湿性の低減、および流動性の改善を可能にしうる。方法は、乾燥ワクチン粉末製剤の吸湿性を低減させて流動性を改善するために、粉末製剤に生理的に許容される物質たとえば、微結晶性セルロースの添加を含むことができる。本明細書において提供される方法は、ワクチンの効能の改善を可能にしうる。方法は、局所免疫応答、たとえば粘膜免疫応答たとえば、粘膜sIgAを伴うを刺激することができる乾燥ワクチン粉末組成物を生成するための段階を含みうる。sIgAは、変異したインフルエンザウイルスたとえば、乾燥ワクチン粉末製剤をパンデミックインフルエンザワクチンとして用いることができるおよび/または遺伝的浮動を受けているウイルスに対する交叉防御を提供することができる。乾燥ワクチン粉末製剤、たとえば乾燥経鼻インフルエンザ粉末製剤は、遠位粘膜部位において防御を誘導することができる。たとえば、鼻粘膜に本開示のワクチンを導入すると、防御が起こりうるたとえば、上気道、下気道、消化管、および膣におけるsIgA産生。乾燥ワクチン粉末製剤は、全身性免疫応答を刺激することができるたとえば、血清中IgGの産生。乾燥ワクチン粉末組成物は、微結晶性セルロースを含みうる。いくつかの態様において、乾燥ワクチン粉末製剤は、アジュバントを含まない。II.粉末製剤を生成するために用いるための液体製剤乾燥ワクチン粉末製剤を生成するために、液体製剤を最初に生成することができる。液体製剤は、1つまたは複数の抗原たとえば、1つまたは複数の病原体または病原体の成分、1つまたは複数の糖類、1つまたは複数の緩衝剤、および1つまたは複数の他の成分を含みうる。典型的に、液体製剤を、急速凍結たとえば、液体窒素中に浸すことによっておよびフリーズドライに供した後、乾燥ワクチン粉末製剤を産生する。液体製剤の容積は、約01mL、10mL、10mL、25mL、50mL、100mL、250mL、500mL、1L、10L、50L、100L、250L、500L、または1000Lでありうる。液体製剤の容積は、約01mL、10mL、10mL、25mL、50mL、100mL、250mL、500mL、1L、10L、50L、100L、250L、500L、または1000Lより上でありうる。液体製剤の容積は、約001~1mL、約1~10mL、約10~50mL、約50~100mL、約1~1000mL、約100~1000mL、約1~10L、約10~50L、約50~100L、約100~500L、約100~1000L、または約1~1000Lでありうる。フリーズドライ後、産生された乾燥ワクチンの量は、約005mgから500mg、約0005mgから約1mg、約1mgから約100mg、または約100mgから約500mgのあいだでありうる。A.ウイルスワクチン成分本明細書において記述される乾燥ワクチン粉末製剤を生成する方法を用いて、弱毒化生ウイルス、不活化全ウイルス、スプリットウイルス、サブユニット抗原、ウィロゾーム、または低温馴化生インフルエンザウイルスを有するワクチンを産生することができる。本明細書において記述される乾燥ワクチン粉末製剤を生成する方法を用いて、弱毒化生ウイルスを有するワクチンを産生することができる。弱毒化生ワクチンは、たとえばヒト二倍体細胞たとえば、胎児肺組織、他の線維芽細胞、サル腎細胞、およびニワトリ胚を含む培養細胞での数回継代に由来しうる。培養細胞において生育するようウイルスを適応させることは、天然の宿主に対するビルレンスを徐々に喪失することを伴いうる。無ビルレンスは、たとえば点突然変異の蓄積によって付与されうる。遺伝子操作を用いて、たとえば温度感受性変異体を生成することによって、欠失変異体を生成することによって、部位特異的変異誘発によって、または組み換え型生ウイルスを生成することによって、ウイルスの弱毒化を達成することができる。本明細書において記述される乾燥ワクチン粉末製剤を生成する方法を用いて、不活化全ウイルスを有するワクチンを産生することができる。不活化ウイルスは、たとえば紫外光、低pHたとえば、酸、たとえばカプリル酸、低温殺菌、溶媒/洗浄剤、チオシアン酸ナトリウム、ホルマリン、βプロピオラクトン、またはエチレンイミンを用いることによって生成することができる。UV光線は、遺伝子材料の複製を防止することによりウイルスを不活化することができる核酸二量体の作製を通して、DNAに損傷を与えることができる。いくつかのウイルスは、低pH溶液に曝露されると変性する。この方法は、エンベロープを有するウイルスを使用する場合、特に有効でありうる。低温殺菌は、温度誘発変性によってウイルスを不活化することができる。溶媒/洗浄剤不活化は、脂質コートに包まれているウイルスに限って有効である。用いられる洗浄剤は典型的に、TritonX100である。チオシアン酸ナトリウムは、ウイルスのタンパク質コートを変性させることができ、それによってウイルスを不活化する。ホルマリンは、ウイルスコートの表面タンパク質を化学修飾することができ、感染症を予防することができる。エチレンイミンおよびβプロピオラクトンは、タンパク質コートをほとんど修飾することなく、ウイルスの核酸に作用することができる。不活化は、ウイルスの免疫原性を維持しながら、ウイルスの感染性を破壊することができる。不活化ウイルスの複数回の適用を対象に投与することができる。本明細書において記述される乾燥ワクチン粉末製剤を生成する方法を用いて、1つまたは複数の病原体からの1つまたは複数の抗原性タンパク質ワクチンタンパク質を有するワクチンを生成することができる。抗原性タンパク質は、それに対してワクチンが産生される任意の病原体に由来しうる。たとえば、ワクチンがインフルエンザウイルスを標的とする場合、抗原性タンパク質は、赤血球凝集素HAおよび/またはノイラミニダーゼNAでありうる。赤血球凝集素は、抗原性の糖タンパク質であり、A型インフルエンザウイルスの主要な表面タンパク質である。これは、細胞表面上のシアル酸含有受容体に結合することによって、インフルエンザウイルスと、感染される細胞とのあいだの結合を媒介する。細胞表面に結合したウイルス粒子は、エンドソームに取り込まれる。エンドソーム内部で、HAは、ウイルス膜とエンドソーム膜との融合を媒介して、ウイルスゲノムを細胞内に放出する。構造的に、HAは、らせん状のコイルに構築される3つの同一の単量体からなる。機能遮断抗体は、HAの細胞結合または膜融合機能のいずれかを阻害することができるであろう。ノイラミニダーゼは、インフルエンザウイルスの表面上に見いだされるもう1つの糖タンパク質である。NAは、糖タンパク質からシアル酸基を切断することによって機能する酵素である。この切断は、2つの機能、すなわちウイルスの凝集を防止すること、および細胞表面から子孫ウイルスを放出させること、を果たすように思われる。少なくとも16個の公知のHAサブタイプが存在する。ワクチン抗原は、HA1、HA2、HA3、HA4、HA5、HA6、HA7、HA8、HA9、HA10、HA11、HA12、HA13、HA14、HA15、またはHA16でありうる。公知のNAサブタイプは9個存在する。ワクチン抗原は、NA1、NA2、NA3、NA4、NA5、NA6、NA7、NA8、またはNA9でありうる。HAおよび/またはNAサブタイプから調製されたワクチンを、個々にまたは任意の組み合わせで用いることができる。たとえば、様々なHAおよびNA抗原の2つまたはそれより多くを、乾燥ワクチン粉末製剤の製造の際に混合することができ、または個々のHAおよびNA抗原の乾燥粉末製剤を混合することができる。抗原性タンパク質は、病原体からの表面タンパク質でありうる。抗原性タンパク質は、組み換えによって産生されうる。たとえば、関心対象抗原をコードする核酸を、原核細胞たとえば、細菌、真核細胞たとえば、酵母細胞および昆虫細胞に導入することができ、タンパク質を発現させて、細胞から精製することができる。病原体がウイルスである場合、ビリオンの非必須成分を除去することができるたとえば、エーテルおよび洗浄剤を用いて。本明細書において記述される乾燥ワクチン粉末製剤を生成する方法を用いて、ウィロゾームワクチンを産生することができる。ウィロゾームワクチンは、本来のウイルスの遺伝材料を有することなく、再構成されたウイルスエンベロープのウイルス様粒子を含む。インフルエンザウィロゾームは、HAおよびNAタンパク質がインターカレートしたユニラメラリン脂質二重層からなる小胞である。それらは遺伝材料を有しないことから、ウィロゾームは感染性ではない。液体ワクチン製剤中のワクチンタンパク質たとえば、抗原または抗原含有成分の濃度は、約005mgmLから10mgmL、約01mgmLから約10mgmL、約01mgmLから約5mgmL、約01mgmLから約25mgmL、約01mgmLから約1mgmL、約01mgmLから約05mgmL、約05mgmLから約1mgmL、約005mgmLから1mgmL、または約005mgmLから25mgmLでありうる。液体ワクチン製剤中のワクチンタンパク質たとえば、抗原または抗原含有成分の濃度は、約005mgmL、01mgmL、02mgmL、03mgmL、04mgmL、05mgmL、06mgmL、07mgmL、08mgmL、09mgmL、10mgmL、11mgmL、12mgmL、13mgmL、14mgmL、15mgmL、16mgmL、17mgmL、18mgmL、19mgmL、20mgmL、25mgmL、3mgmL、35mgmL、4mgmL、45mgmL、5mgmL、55mgmL、6mgmL、65mgmL、70mgmL、80mgmL、85mgmL、9mgmL、または10mgmLでありうる。液体ワクチン製剤中のワクチンタンパク質たとえば抗原または抗原含有成分の濃度は、約005mgmL、01mgmL、02mgmL、03mgmL、04mgmL、05mgmL、06mgmL、07mgmL、08mgmL、09mgmL、10mgmL、11mgmL、12mgmL、13mgmL、14mgmL、15mgmL、16mgmL、17mgmL、18mgmL、19mgmL、20mgmL、25mgmL、3mgmL、35mgmL、4mgmL、45mgmL、5mgmL、55mgmL、6mgmL、65mgmL、70mgmL、80mgmL、85mgmL、9mgmL、または10mgmLより上でありうる。乾燥ワクチン粉末製剤は、1つまたは複数のインフルエンザウイルスによる感染症を予防および/または処置するために用いられうる。インフルエンザウイルスは、オルトミクソウイルス科のウイルスに属し、これは5つの属を含む:A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、C型インフルエンザウイルス、イサウイルス、およびトゴトウイルス。ドーリウイルスは、トゴトウイルス属の種である。インフルエンザウイルスは、ヒトおよび他の種に感染することができる。A型インフルエンザウイルスは、ヒト、トリ、ブタ、ウマ、アザラシ、および他の動物に感染することができる。野生のトリは、これらのウイルスの天然の宿主でありうる。A型インフルエンザウイルスは、ウイルスの表面上の2つのタンパク質に基づいてサブタイプに分けられ、名前をつけられている。たとえば、H7N2ウイルスは、HA7タンパク質とNA2タンパク質とを有するA型インフルエンザサブタイプを示す。同様に、H5N1ウイルスは、HA5タンパク質とNA1タンパク質とを有する。16個の公知のHAサブタイプおよび9個の公知のNAサブタイプが存在する。HAとNAタンパク質の異なる多くの組み合わせが可能である。任意の数の公知のHAサブタイプHA1、HA2、HA3、HA4、HA5、HA6、HA7、HA8、HA9、HA10、HA11、HA12、HA13、HA14、HA15、およびHA16を、任意の数の公知のNAサブタイプNA1、NA2、NA3、NA4、NA5、NA6、NA7、NA8、およびNA9と組み合わせて、感染症を予防または処置するためのワクチンを産生することができる。HAおよびNAサブタイプはまた、感染症を予防または処置するためにワクチンにおいて個々に用いることができる。異なるサブタイプワクチンを、感染症を予防または処置するために、使用時に連続的または同時に混合することができる。いくつかのA型インフルエンザサブタイプたとえば、H1N1、H1N2、およびH3N2が現在、人々のあいだで一般的に広がっている。他のサブタイプは、他の動物種において見いだされうる。たとえば、H7N7およびH3N8ウイルスはウマにおいて病気を引き起こしうるが、最近、H3N8はまた、イヌにおいても病気を引き起こすことが示されているhttpwwwcdcgovfluaviangeninfofluviruses。抗ウイルス剤は、高リスク群たとえば、入院患者、高齢者介護施設の入所者、または免疫抑制患者を保護するために用いることができる。抗ウイルス剤の可能性がある使用は、たとえばトリH5N1またはもう1つの株のインフルエンザウイルスたとえば、H1N1によって引き起こされるか否かによらず、今後のパンデミックの広がりまたは重症度を制限することである。H5N1、H7N7、およびH7N3ウイルスを含むA型トリインフルエンザウイルスのサブタイプH5およびH7は、高い病原性に関連しており、これらのウイルスによるヒトの感染症は、軽度たとえば、H7N3、H7N7から重度および致死性疾患たとえば、H7N7、H5N1に及ぶ。非常に軽度の症状たとえば、結膜炎からインフルエンザ様の病気を含む、低病原性ウイルスの感染症によるヒトの病気が報告されている。ヒトに感染する低病原性ウイルスの例には、H7N7、H9N2、およびH7N2が挙げられるhttpwwwcdcgovfluaviangeninfofluviruses。B型インフルエンザウイルスはヒトにおいて見いだされうるが、アザラシにも感染しうる。A型インフルエンザウイルスとは異なり、これらのウイルスは、サブタイプに従って分類されない。B型インフルエンザウイルスは、ヒトにおいて病的状態および死亡を引き起こしうるが、一般的にA型インフルエンザウイルスほど重度の流行には関連しない。B型インフルエンザウイルスは、ヒトでの流行を引き起こしうるが、それらはパンデミックを引き起こしたことはないhttpwwwcdcgovfluaviangeninfofluviruses。C型インフルエンザウイルスは、ヒトにおいて軽度の病気を引き起こしうるが、流行またはパンデミックを引き起こさない。これらのウイルスもまた、イヌおよびブタに感染することができる。これらのウイルスはサブタイプに従って分類されないhttpwwwcdcgovfluaviangeninfofluviruses。本明細書において記述される方法および組成物は、たとえばアベルソン白血病ウイルス、アベルソンネズミ白血病ウイルス、アベルソンウイルス、急性喉頭気管気管支炎ウイルス、アデレード川ウイルス、アデノ随伴ウイルス群、アデノウイルス、アフリカウマ病ウイルス、アフリカブタ熱ウイルス、AIDSウイルス、アリューシャンミンク病パルボウイルス、アルファレトロウイルス、アルファウイルス、ALV関連ウイルス、アマパリウイルス、アフトウイルス、アクアレオウイルス、アルボウイルス、アルボウイルスC、A群アルボウイルス、B群アルボウイルス、アレナウイルス群、アルゼンチン出血熱ウイルス、アルゼンチン出血熱ウイルス、アーテリウイルス、アストロウイルス、アテリネヘルペスウイルス群、オジェッキー病ウイルス、オーラウイルス、オースダック病ウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、トリアデノウイルス、トリ赤芽球症ウイルス、トリ感染性気管支炎ウイルス、トリ白血病ウイルス、トリ白血病ウイルス、トリリンパ腫症ウイルス、トリ骨髄芽球症ウイルス、トリパラミクソウイルス、トリ気脳炎ウイルス、トリ細網内皮症ウイルス、トリ肉腫ウイルス、トリC型レトロウイルス群、トリヘパドナウイルス、トリ痘ウイルス、Bウイルス、B19ウイルス、ババンキウイルス、ヒヒヘルペスウイルス、バキュロウイルス、バーマー森林ウイルス、ベバルウイルス、ベリマーウイルス、ベータレトロウイルス、バーナウイルス、ビトナーウイルス、BKウイルス、ブラッククリーク運河ウイルス、ブルータングウイルス、ボリビア出血熱ウイルス、ボマ病ウイルス、ヒツジボーダー病ウイルス、ボルナウイルス、ウシアルファヘルペスウイルス1型、ウシアルファヘルペスウイルス2型、ウシコロナウイルス、ウシ流行熱ウイルス、ウシ免疫不全ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ウシ乳頭炎ウイルス、ウシパピローマウイルス、ウシ丘疹口内炎ウイルス、ウシパルボウイルス、ウシ合胞体ウイルス、ウシC型オンコウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、バギークリークウイルス、弾丸形ウイルス群、ブニヤムウェラウイルス超群、ブニヤウイルス、バーキットリンパ腫ウイルス、ブワンバ熱、CAウイルス、カリシウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、ラクダ痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、イヌヘルペスウイルス、イヌコロナウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌヘルペスウイルス、イヌ微小ウイルス、イヌパルボウイルス、カノデルガディトウイルス、ヤギ関節炎ウイルス、ヤギ脳炎ウイルス、ヤギヘルペスウイルス、ヤギ痘ウイルス、カルジオウイルス、カビドcaviidヘルペスウイルス1型、オナガザルヘルペスウイルス1型、オナガザルヘルペスウイルス1型、オナガザルヘルペスウイルス2型、チャンジプラウイルス、チャンギノラウイルス、ブチナマズウイルス、シャルルビルウイルス、鶏痘ウイルス、チクングンヤウイルス、チンパンジーヘルペスウイルス、チャブレオウイルス、シロザケウイルス、コカルウイルス、ギンザケレオウイルス、媾疹ウイルス、コロラドダニ熱ウイルス、コルチウイルス、コロンビアSKウイルス、風邪ウイルス、感染性膿瘡ウイルス、感染性膿疱性皮膚炎ウイルス、コロナウイルス、コリパルタウイルス、鼻風邪ウイルス、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、CPV細胞質多角体病ウイルス、コオロギ麻痺ウイルス、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、クループ関連ウイルス、クリプトウイルス、サイポウイルス、サイトメガロウイルス、サイトメガロウイルス群、細胞質多角体病ウイルス、シカパピローマウイルス、デルタレトロウイルス、デングウイルス、デンソウイルス、デペンドウイルス、ドーリウイルス、ディプロルナウイルス、ショウジョウバエCウイルス、カモB型肝炎ウイルス、カモ肝炎ウイルス1型、カモ肝炎ウイルス2型、デュオウイルス、デュベンヘージウイルス、羽変形病ウイルスDWV、東部ウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、EBウイルス、エボラウイルス、エボラ様ウイルス、エコーウイルス、エコーウイルス、エコーウイルス10、エコーウイルス28、エコーウイルス9、欠肢症ウイルス、EEEウイルス、EIAウイルス、EIAウイルス、脳炎ウイルス、脳心筋炎ウイルス群、脳心筋炎ウイルス、エンテロウイルス、酵素上昇ウイルス、酵素上昇ウイルスLDH、流行性出血熱ウイルス、流行性出血病ウイルス、エプスタインバーウイルス、ウマアルファヘルペスウイルス1型、ウマアルファヘルペスウイルス4型、ウマヘルペスウイルス2型、ウマ流産ウイルス、ウマ動脈炎ウイルス、ウマ脳症ウイルス、ウマ感染性貧血ウイルス、ウマ麻疹ウイルス、ウマ鼻肺炎ウイルス、ウマライノウイルス、ユーベナングウイルス、ヨーロッパエルクパピローマウイルス、ヨーロッパブタ熱ウイルス、エバーグレイズウイルス、ヤッチウイルス、ネコヘルペスウイルス1型、ネコカリシウイルス、ネコ線維肉腫ウイルス、ネコヘルペスウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、ネコ感染性腹膜炎ウイルス、ネコ白血病/肉腫ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコパルボウイルス、ネコ肉腫ウイルス、ネコ合胞体ウイルス、フィロウイルス、フランダーズウイルス、フラビウイルス、口蹄疫ウイルス、フォートモーガンウイルス、フォーコーナーズハンタウイルス、家禽アデノウイルス1型、家禽痘ウイルス、フレンドウイルス、ガンマレトロウイルス、GB肝炎ウイルス、GBウイルス、ドイツ麻疹ウイルス、ゲタウイルス、テナガザル白血病ウイルス、腺熱ウイルス、ヤギ痘ウイルス、ゴールデンシンナーウイルス、ゴノメタウイルス、ガチョウパルボウイルス、顆粒病ウイルス、グロスウイルス、ジリスB型肝炎ウイルス、A群アルボウイルス、グアナリトウイルス、モルモットサイトメガロウイルス、モルモットC型ウイルス、ハンターンウイルス、ハンタウイルス、ホンビノスガイレオウイルス、野ウサギ線維腫ウイルス、HCMVヒトサイトメガロウイルス、赤血球吸着ウイルス2型、日本の赤血球凝集ウイルス、出血熱ウイルス、ヘンドラウイルス、ヘニパウイルス、ヘパドナウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス群、C型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、F型肝炎ウイルス、G型肝炎ウイルス、非A非B肝炎ウイルス、肝炎ウイルス、肝炎ウイルス非ヒト、肝脳脊髄炎レオウイルス3型、ヘパトウイルス、ヘロンB型肝炎ウイルス、ヘルペスBウイルス、単純ヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス1型、単純ヘルペスウイルス2型、ヘルペスウイルス、ヘルペスウイルス7型、クモザルヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヘルペスウイルス感染、リスザルヘルペスウイルス、ブタヘルペスウイルス、水痘ヘルペスウイルス、ハイランドJウイルス、ヒラメラブドウイルス、ブタコレラウイルス、ヒトアデノウイルス2型、ヒトアルファヘルペスウイルス1型、ヒトアルファヘルペスウイルス2型、ヒトアルファヘルペスウイルス3型、ヒトBリンパ球向性ウイルス、ヒトベータヘルペスウイルス5型、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス群、ヒト泡沫状ウイルス、ヒトガンマヘルペスウイルス4型、ヒトガンマヘルペスウイルス6型、ヒトA型肝炎ウイルス、ヒトヘルペスウイルス1群、ヒトヘルペスウイルス2群、ヒトヘルペスウイルス3群、ヒトヘルペスウイルス4群、ヒトヘルペスウイルス6型、ヒトヘルペスウイルス8型、ヒト免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス1型、ヒト免疫不全ウイルス2型、ヒトパピローマウイルス、ヒトT細胞白血病ウイルス、ヒトT細胞白血病ウイルスI型、ヒトT細胞白血病ウイルスII型、ヒトT細胞白血病ウイルスIII型、ヒトT細胞リンパ腫ウイルスI型、ヒトT細胞リンパ腫ウイルスII型、1型ヒトT細胞リンパ球向性ウイルス、2型ヒトT細胞リンパ球向性ウイルス、ヒトTリンパ球向性ウイルスI型、ヒトTリンパ球向性ウイルスII型、ヒトTリンパ球向性ウイルスIII型、生痕ウイルス、新生児胃腸炎ウイルス、感染性ウシ鼻気管炎ウイルス、感染性造血壊死ウイルス、感染性膵臓壊死ウイルス、A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、C型インフルエンザウイルス、D型インフルエンザウイルス、インフルエンザウイルスpr8、昆虫虹色ウイルス、昆虫ウイルス、イリドウイルス、日本Bウイルス、日本脳炎ウイルス、JCウイルス、フニンウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ケメロボウイルス、キラムラットウイルス、クラマスウイルス、コロンゴウイルス、韓国出血熱ウイルス、クンバウイルス、キサヌール森林病ウイルス、クィズールアガッシュKyzylagachウイルス、ラクロスウイルス、乳酸デヒドロゲナーゼ上昇ウイルス、乳酸デヒドロゲナーゼウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ラングールウイルス、ウサギパルボウイルス、ラッサ熱ウイルス、ラッサウイルス、ラット潜伏性ウイルス、LCMウイルス、リーキーウイルス、レンチウイルス、ウサギ痘ウイルス、白血病ウイルス、白血病ウイルス、ランピースキン病ウイルス、リンパ節症関連ウイルス、リンフォクリプトウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、リンパ増殖ウイルス群、マシュポウイルス、マッドイッチウイルス、哺乳動物B型オンコウイルス群、哺乳動物B型レトロウイルス、哺乳動物C型レトロウイルス群、哺乳動物D型レトロウイルス、乳癌ウイルス、マプエラウイルス、マールブルグウイルス、マールブルグ様ウイルス、メイソンファイザーサルウイルス、マストアデノウイルス、マヤロウイルス、MEウイルス、麻疹ウイルス、メナングルウイルス、メンゴウイルス、メンゴウイルス、ミデルブルグウイルス、乳牛結節ウイルス、ミンク腸炎ウイルス、マウスの微小ウイルス、MLV関連ウイルス、MMウイルス、モコラウイルス、軟体動物痘ウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サルBウイルス、サル痘ウイルス、モノネガウイルス目、麻疹ウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス、マウスサイトメガロウイルス、マウス脳脊髄炎ウイルス、マウス肝炎ウイルス、マウスKウイルス、マウス白血病ウイルス、マウス乳癌ウイルス、マウス微小ウイルス、マウス肺炎ウイルス、マウス灰白髄炎ウイルス、マウスポリオーマウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス痘ウイルス、モザンビークウイルス、ムカンボウイルス、粘膜病ウイルス、ムンプスウイルス、ネズミベータヘルペスウイルス1型、ネズミサイトメガロウイルス2型、ネズミサイトメガロウイルス群、ネズミ脳脊髄炎ウイルス、ネズミ肝炎ウイルス、ネズミ白血病ウイルス、ネズミ結節誘発ウイルス、ネズミポリオーマウイルス、ネズミ肉腫ウイルス、ムーロメガロウイルス、マリーバレー脳炎ウイルス、粘液腫ウイルス、ミクソウイルス、多形性ミクソウイルス、ミクソウイルスパロチチディス、ナイロビヒツジ病ウイルス、ナイロウイルス、ナニルナウイルス、ナリバウイルス、デュモウイルス、ニースリングウイルス、ネルソン湾ウイルス、神経向性ウイルス、新世界アレナウイルス、新生児肺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、非細胞変性ウイルス、ノーウォークウイルス、核多角体病ウイルスNPV、ニップルネックウイルス、オニョンニョンウイルス、オッケルボウイルス、発癌性ウイルス、発癌性ウイルス様粒子、オンコルナウイルス、オルビウイルス、オルフウイルス、オロポーシェウイルス、オルトヘパドナウイルス、オルトミクソウイルス、オルトポックスウイルス、オルトレオウイルス、オルンゴ、ヒツジパピローマウイルス、ウシカタル熱ウイルス、ヨザルヘルペスウイルス、パリアムウイルス、パピローマウイルス、パピローマウイルスシルビラギsylvilagi、パポバウイルス、パラインフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス1型、パラインフルエンザウイルス2型、パラインフルエンザウイルス3型、パラインフルエンザウイルス4型、パラミクソウイルス、パラポックスウイルス、パラワクシニアウイルス、パルボウイルス、パルボウイルスB19、パルボウイルス群、ペスチウイルス、フレボウイルス、アザラシジステンパーウイルス、ピコドナウイルス、ピコルナウイルス、ブタサイトメガロウイルス、ハト痘ウイルス、ピリーウイルス、ピクスナウイルス、マウスの肺炎ウイルス、肺炎ウイルス、灰白髄炎ウイルス、ポリオウイルス、ポリドナウイルス、多角体病ウイルス、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルス、ウシポリオーマウイルス、オナガザルポリオーマウイルス、ヒトポリオーマウイルス2型、マカカエmaccacaeポリオーマウイルス1型、ネズミポリオーマウイルス1型、ネズミポリオーマウイルス2型、ヒヒポリオーマウイルス1型、ヒヒポリオーマウイルス2型、ポリオーマウイルスシルビラギ、ポンギンヘルペスウイルス1型、ブタ流行性下痢ウイルス、ブタ赤血球凝集性脳脊髄炎ウイルス、ブタパルボウイルス、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス、ブタC型ウイルス、ポックスウイルス、ポックスウイルス、天然痘ポックスウイルス、プロスペクトヒルウイルス、プロウイルス、偽牛痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、オウム痘ウイルス、ウズラ痘ウイルス、ウサギ線維腫ウイルス、ウサギ腎臓空胞化ウイルス、ウサギパピローマウイルス、狂犬病ウイルス、アライグマパルボウイルス、アライグマ痘ウイルス、ラニケートウイルス、ラットサイトメガロウイルス、ラットパルボウイルス、ラットウイルス、ラウシャーウイルス、組換え型ワクシニアウイルス、組換え型ウイルス、レオウイルス、レオウイルス1型、レオウイルス2型、レオウイルス3型、爬虫類C型ウイルス、呼吸器感染ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、呼吸器ウイルス、細網内皮症ウイルス、ラブドウイルス、ラブドウイルスカルピア、ラジノウイルス、ライノウイルス、リジディオウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ライリーウイルス、牛疫ウイルス、RNA腫瘍ウイルス、ロス川ウイルス、ロタウイルス、ルージョールウイルス、ラウス肉腫ウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、ルビウイルス、ロシア秋脳炎ウイルス、SA11シミアンウイルス、SA2ウイルス、サビアウイルス、サギヤマウイルス、サイミリンヘルペスウイルス1型、唾液腺ウイルス、サシチョウバエ熱ウイルス群、サンジンバウイルス、SARSウイルス、SDAV唾液腺涙腺炎ウイルス、アザラシ痘ウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、ソウルウイルス、ヒツジ痘ウイルス、ショープ線維腫ウイルス、ショープパピローマウイルス、サル泡沫状ウイルス、サルA型肝炎ウイルス、サルヒト免疫不全ウイルス、サル免疫不全ウイルス、サルパラインフルエンザウイルス、サルT細胞リンパ球向性ウイルス、シミアンウイルス、シミアンウイルス40、単純ウイルス、シンノンブレウイルス、シンドビスウイルス、天然痘ウイルス、南アメリカ出血熱ウイルス、スズメ痘ウイルス、スプマウイルス、リス線維腫ウイルス、リスザルレトロウイルス、SSV1ウイルス群、STLVサルTリンパ球向性ウイルスI型、STLVサルTリンパ球向性ウイルスII型、STLVサルTリンパ球向性ウイルスIII型、口内炎丘疹ウイルス、下顎ウイルス、ブタアルファヘルペスウイルス1型、ブタヘルペスウイルス2型、スイポックスウイルス、沼地熱ウイルス、ブタ痘ウイルス、スイスマウス白血病ウイルス、TACウイルス、タカリベウイルス群、タカリベウイルス、タナポックスウイルス、タテラポックスウイルス、テンチレオウイルス、タイラー脳脊髄炎ウイルス、タイラーウイルス、トゴトウイルス、トッタパラヤムThottapalayamウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、チオマンウイルス、トガウイルス、トロウイルス、腫瘍ウイルス、ツパイアウイルス、シチメンチョウ鼻気管炎ウイルス、シチメンチョウ痘ウイルス、C型レトロウイルス、D型オンコウイルス、D型レトロウイルス群、潰瘍性疾患ラブドウイルス、ウナウイルス、ウクニエミウイルス群、ワクシニアウイルス、空胞化ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、水痘ウイルス、バリコラVaricolaウイルス、大痘瘡ウイルス、天然痘ウイルス、ウアシンギシュー病ウイルス、VEEウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、ベネズエラ出血熱ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ベシクロウイルス、ビリュイスクウイルス、毒ヘビレトロウイルス、ウイルス出血性敗血症ウイルス、ビスナマエディウイルス、ビスナウイルス、ハタネズミ痘ウイルス、VSV水疱性口内炎ウイルス、ウォーラルウイルス、ウォリゴウイルス、いぼウイルス、WEEウイルス、西ナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、ワタロアウイルス、冬季嘔吐症ウイルス、ウッドチャックB型肝炎ウイルス、ウーリーモンキー肉腫ウイルス、創傷腫瘍ウイルス、WRSVウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバウイルス、ヤタポックスウイルス、黄熱ウイルス、およびヤグボダノバックウイルスを含む任意のウイルスによる感染症を予防および/または処置するために有用でありうる。B.非ウイルス病原体ワクチン成分本明細書において記述されるワクチンは、細菌、真菌、または原生生物細胞またはその成分を含みうる。たとえば、細菌病原体に対するワクチンは、死菌またはその精製抗原決定基を含みうる。弱毒化細菌もまた、抗原として用いることができる。いくつかの例において、不活化毒素トキソイドを、本明細書において記述されるワクチン成分の1つまたは複数と混合することによって、細胞病原体によって産生された毒素たとえば、コレラ毒素に対するワクチンを産生することができる。標的病原体からの抗原性ペプチドを、起源病原体から精製するか、および/または組み換えによって産生した後に、ワクチンの成分の1つまたは複数と混合することができる。コンジュゲート抗原も同様に用いることができる。コンジュゲート抗原の場合、細菌病原体の抗原性の低い多糖類外皮を、免疫応答を刺激することができる毒性タンパク質に付着させる。典型的に、非ウイルス病原体に対するワクチンは、粘膜表面に影響を及ぼすまたは粘膜表面を介して体へのアクセスを獲得する病原体に対して免疫応答たとえば、sIgA産生を産生するように計画されるであろう。そのような病原体の非制限的な例には、クリプトコッカスネオフォルマンスCryptococcusneoformans、赤痢菌種Shigella、腸チフス菌Salmonellatyphi、パラチフス菌Saparatyphi、腸毒素性大腸菌Escherischiacoli、ペスト菌Yersiniapestis、ヒト型結核菌Mycobacteriumtuberculosis、ウレアプラズマウレアリチクムUreaplasmaurealyticum、クリプトスポリジウムCryptosporidium種、破傷風菌Clostridiumtetani、ジフテリア菌Corynebacteriumdiphtheriae、髄膜炎菌Neisseriameningitidis、百日咳菌Bordetellapertussis、肺炎連鎖球菌Streptococcuspneumoniae、炭疽菌Bacillusanthracis、レプトスピラインテロガンスLeptospirainterrogans、レプトスピラキルシュネリLeptospirakirschneri、レプトスピラノグチLeptospiranoguchii、レプトスピラアレクサンデリLeptospiraalexanderi、レプトスピラウェイリイLeptospiraweilii、レプトスピラボルグペテルセニイLeptospiraborgpetersenii、レプトスピラサンタロサイLeptospirasantarosai、レプトスピラメチイLeptospirakmetyi、ボレリアブルグドルフェリBorreliaburgdorferi、ウシ流産菌Brucellaabortus、イヌ流産菌Brucellacanis、ブルセラメリテンシスBrucellamelitensis、ブタ流産菌Brucellasuis、カンピロバクタージェジュニCampylobacterjejuni、クラミジア肺炎病原体Chlamydiapneumoniae、トラコーマクラミジアChlamydiatrachomatis、クラミドフィラシタッシChlamydophilapsittaci、ボツリヌス菌Clostridiumbotulinum、クロストリジウムディフィシレClostridiumdifficile、ウェルシュ菌Clostridiumperfringens、エンテロコッカスフェカーリスEnterococcusfaecalis、エンテロコッカスファシウムEnterococcusfaecium、野兎病菌Francisellatularensis、インフルエンザ菌Haemophilusinfluenzae、ヘリコバクターピロリ菌Helicobacterpylori、レジオネラニューモフィラLegionellapneumophila、レプトスピラインテロガンス、リステリア菌Listeriamonocytogenes、らい菌Mycobacteriumleprae、マイコバクテリウムアルセランスMycobacteriumulcerans、肺炎マイコプラズマMycoplasmapneumoniae、淋菌Neisseriagonorrhoeae、髄膜炎菌、緑膿菌Pseudomonasaeruginosa、リケッチアRickettsiarickettsii、腸チフス菌、ネズミチフス菌Salmonellatyphimurium、ゾンネ赤痢菌Shigellasonnei、黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureus、表皮ブドウ球菌Staphylococcusepidermis、ストレプトコッカスサプロフィチクスStreptococcussaprophyticus、ストレプトコッカスアガラクチエStreptococcusagalactiae、肺炎連鎖球菌Streptococcuspneumoniae、化膿性連鎖球菌Streptococcuspyogenes、梅毒トレポネーマTreponemapallidum、コレラ菌Vibriocholerae、カンジダアルビカンスCandidaalbicans、アスペルギルスフミガーツスAspergillusfumigatus、アスペルギルスフラブスAspergillusflavus、クリプトコッカスガチイCryptococcusgattii、ヒストプラスマカプスラーツムHistoplasmacapsulatum、ニューモシスチスジロベシイPneumocystisjirovecii、スタキボトリスチャータルムStachybotryschartarum、熱帯熱マラリア原虫Plasmodiumfalciparum等が挙げられる。C.抗原性成分の調製病原体のタンパク質または他の細胞成分の抗原性機能を保存するために、本開示は、抗原性成分たとえば、ウイルス、タンパク質の三次元立体配置のいくつかまたは全てを保存することができるワクチンを調製する方法を提供する。このように、本明細書において提供される方法は、病原体またはその成分上の抗原性決定基が無傷の状態で保存されるワクチンの産生を可能にすることができる。たとえば、ワクチンにおけるタンパク質の三次元構造を保持すれば、それに対する免疫応答を誘発することができるコンフォメーショナルエピトープの保持を可能にすることができる。コンフォメーショナルエピトープは、タンパク質のフォールディングに依存して、一般的に直鎖状のアミノ酸たとえば、消化されたまたは直鎖状のタンパク質を全く含まないエピトープである。さらに、本明細書において提供されるワクチン産生法によって、所定の量のワクチンに対する反応における免疫応答のレベルが、病原体または他の天然に存在する抗原起源に対する曝露と比較して、少なくとも約100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、または50であるように、抗原性効力すなわち、免疫応答の誘導能の保持が起こりうる。加えて、本明細書において提供される方法によって、本明細書において記述される急速凍結法に供される総抗原性タンパク質の抗原能の高レベルたとえば、少なくとも約100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、または50を特定の抗原が保持するワクチンの産生を可能にすることができる。この方法論の1つの態様を図2に示す。本実施例において、抗原白丸として示すを安定化剤トレハロースおよび緩衝剤リン酸緩衝液と混合する。成分を混合してフリーズドライするたとえば、液体窒素中に浸すことによって。産生された乾燥ワクチン成分は、抗原または複数の抗原がなおも免疫応答を誘発することができ、および室温で安定である微粒子を含む。次に、ワクチン成分を経鼻投与にとって適した担体たとえば、微結晶性セルロースと混合することができる。本明細書において開示されるワクチンの成分の非制限的な例を以下に提供する。ある機能を行うために液体製剤の成分を選択することができる。たとえば、1つの成分を利用して、それに対してワクチンを開発する抗原の安定性を提供することができる。主に、そのような成分は、その後の凍結プロセスの際の抗原の分解を防止することができる。これらの成分は、任意の安定化分子または化合物、たとえば糖、アミノ酸、および/またはポリマーを含むことができる。1つまたは複数のそのような抗原安定化物質を製剤において用いることができる。典型的に、抗原安定化物質は、全体的または部分的に水溶性であろう。好ましい抗原安定化剤は、本明細書において記述されるプロセスにおいてハードケーキを生じないであろう。液体ワクチン製剤を産生するために用いることができる例示的な糖には、トレハロース、マンニトール、スクロース、ラクトース、イヌリン、ソルボース、メレジトース、ラフィノース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、スタキオース、ソルビトール、グリセロール、フルクトース、マンノース、マルトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、Lグルコネート、および/またはその他が挙げられるがこれらに限定されるわけではない。利用することができる例示的なアミノ酸には、イソロイシン、バリン、ロイシン、アルギニン、アスパラギン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、グルタメート、およびリジンが挙げられるがこれらに限定されるわけではない。例示的なポリマーは、ポリエチレングリコールPEGであるが、利用することができる他のポリマーには、デキストラン、ヒト血清アルブミンHSA、非加水分解ゼラチン、メチルセルロース、キサンタンゴム、カラゲニン、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、シアル化多糖類、アクチン、ミオシン、微小管、ダイニン、キネチン、ポリビニルピロリドン、加水分解ゼラチン、および/またはその他が挙げられる。界面活性剤は、たとえば、ポリエチレングリコール、モノラウリン酸ソルビタンTween20、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンTween80、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロックコポリマーPluronic、および/またはその他でありうる。そのような抗原安定化剤はワクチン調製物において利用されているが、本発明の方法においてこれらの安定化剤の1つまたは複数を用いることによって、乾燥時にハードケーキを形成しない凍結ワクチン製剤を得ることができる。たとえば、トレハロースを用いることは、凍結時にタンパク質に対する保護を提供することが知られているが、物質を噴霧凍結しなければケーキングを引き起こすたとえば、ChefsonetalJBiotechnol2007Jul1513043640を参照されたい。しかし、本明細書において提供される1つの態様は、タンパク質様抗原、リン酸緩衝液、および急速凍結法たとえば、液体窒素に対する曝露とトレハロースとの組み合わせである。そのような方法によって、ハードケーキを形成することなく、タンパク質が活性たとえば、抗原能を保持する微粉末を産生することができる。ハードケーキをすりつぶす段階は、ワクチン調製プロセスにおける余分の段階であり、熱および/または機械的力によりハードケーキ中の抗原性タンパク質の低い回収率および分解が起こりうることから、微粉末であることは進歩である。抗原対安定化剤の比率は、たとえば約1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29、1:30、1:31、1:32、1:33、1:34、1:35、1:36、1:37、1:38、1:39、1:40、1:41、1:42、1:43、1:44、1:45、1:46、1:47、1:48、1:49、1:50、1:51、1:52、1:53、1:54、1:55、1:56、1:57、1:58、1:59、1:60、1:61、1:62、1:63、1:64、1:65、1:66、1:67、1:68、1:69、1:70、1:71、1:72、1:73、1:74、1:75、1:76、1:77、1:78、1:79、1:80、1:81、1:82、1:83、1:84、1:85、1:86、1:87、1:88、1:89、1:90、1:91、1:92、1:93、1:94、1:95、1:96、1:97、1:98、1:99、または1:100でありうる。抗原対安定化剤の比率は、たとえば、約1:110、1:120、1:130、1:140、1:150、1:160、1:170、1:180、1:190、1:200、1:210、1:220、1:230、1:240、1:250、1:260、1:270、1:280、1:290、1:300、1:310、1:320、1:330、1:340、1:350、1:360、1:370、1:380、1:390、1:400、1:410、1:420、1:430、1:440、1:450、1:460、1:470、1:480、1:490、1:500、1:510、1:520、1:530、1:540、1:550、1:560、1:570、1:580、1:590、1:600、1:610、1:620、1:630、1:640、1:650、1:660、1:670、1:680、1:690、1:700、1:710、1:720、1:730、1:740、1:750、1:760、1:770、1:780、1:790、1:800、1:810、1:820、1:830、1:840、1:850、1:860、1:870、1:880、1:890、1:900、1:910、1:920、1:930、1:940、1:950、1:960、1:970、1:980、1:990、または1:1000でありうる。フリーズドライ段階で用いられるワクチン液体製剤は、1つまたは複数のpH緩衝剤を含みうる図2および3。pH緩衝剤は、たとえば、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、ヒスチジン、HEPES、ACES、ADA、ADA二ナトリウム塩、ADA一ナトリウム塩、AMPSO、2アミノエタノール、2アミノ2メチル13プロパンジオール、2アミノ2メチル1プロパノール、3アミノ1プロパンスルホン酸ナトリウム塩、BES、ビシン、ビストリス、ビストリスHCl、ビストリスプロパン、CAPS、CAPSO、CHES、DIPSO、DIPSOナトリウム塩、グリシンアミドHCl、グリシン、HEPPS、HEPPSO、MES、MOPS、MOPSO、PIPES、TAPS、TAPSO、TES、トリシン、トリエタノールアミン、イミダゾール、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、重炭酸アンモニウム、および/またはカーボネートでありうる。緩衝剤は、リン酸緩衝生理食塩液でありうる。pHは、約pH3から約pH8、約pH4から8、約pH5から8、約pH6から8、または約pH60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、または80で維持されうる。液体製剤は、1つまたは複数の抗原および1つまたは複数の緩衝剤を含みうる、本質的にそれらからなりうる、またはそれらからなりうる。液体製剤は、1つまたは複数の抗原、1つまたは複数の安定化剤、および1つまたは複数の緩衝液を含みうる、本質的にそれらからなりうる、またはそれらからなりうる。本明細書において記述される方法によって粉末製剤を生成するために用いられる液体製剤は、1つまたは複数の他の薬物、増量剤、および/または徐放性ポリマーを含有しうる。本発明の組成物において有用な他の薬物には、たとえば浸透補助剤、うっ血除去剤、気管支拡張剤、去痰剤、鎮痛剤およびその他が挙げられる。増量剤には、たとえば、ラクトース、マンニトール、および/またはヒドロキシエチルデンプンHESが含まれうる。組成物の徐放性半透過性ポリマーマトリクスには、たとえばポリ乳酸、Lグルタミン酸とγエチルLグルタメートのコポリマー、ポリ、またはリポソームを挙げることができる。本明細書において記述されるワクチンは、アジュバントを含めることなく作製されうる。このように、最終的なワクチンを、病原体/抗原、安定化剤、および緩衝剤のみを用いて産生することができ、その後これをフリーズドライする。フリーズドライ後、アジュバントを添加する必要なく、ワクチンを担体と混合して、最終的なワクチン製品を産生することができる。または、製剤は、アジュバント、すなわちワクチンの免疫応答を改善するためにワクチンに添加される物質を含むことができる。アジュバントは、フリーズドライの前または後に添加することができる。アジュバントの例には、無機塩、たとえば水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムまたはリン酸カルシウムゲル、オイルエマルション、および界面活性剤に基づく製剤、たとえばMF59微小流動化洗浄剤安定化水中油型エマルション、QS21精製サポニン、AS02SBAS2水中油型MPLWS21、MontanideISA51およびISA720安定化油中水型エマルション、微粒子アジュバントたとえば、ウィロゾームインフルエンザ赤血球凝集素を組み入れたユニラメラリポソーム媒体、AS04SBAS4MPLを伴うAl塩、ISCOMSサポニンと脂質の構造複合体、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマーPLG、微生物誘導体天然および合成、たとえばモノホスホリルリピッドAMPL、DetoxMPLMフレイMphlei細胞壁骨格、AGPRC529合成アシル化単糖類、DCCholリポソームへと自己構築することができるリポイド免疫抑制剤、OM174リピッドA誘導体、CpGモチーフ免疫刺激CpGモチーフを含有する合成オリゴヌクレオチド、改変LTおよびCT非毒性のアジュバント効果を提供するための遺伝子改変細菌毒素、内因性のヒト免疫調整剤、たとえばhGMCSFまたはhIL12タンパク質またはコードされるプラスミドのいずれかとして投与されうるサイトカイン、ImmudaptinC3dタンデムアレイ、金粒子などの不活性媒体、およびスクアレンが挙げられる。液体製剤および最終的な乾燥ワクチン粉末製剤は、アジュバントを有しないことがありうる。III.フリーズドライ液体製剤をフリーズドライによって粉末に変換することができる。フリーズドライは、材料を凍結した後昇華による水の除去によって乾燥させるプロセスである。急速凍結は、たとえば噴霧液滴噴霧フリーズドライを液体窒素中または低温気体の流れの中に直ちに浸すことによって達成されうる。急速凍結はまた、噴霧凍結段階を含まないプロセスによっても達成されうる。急速凍結は、液体ワクチン製剤を液体窒素196°Cに接触させることによって達成されうる。急速凍結は、液体ワクチン製剤を、もう1つの化学物質と混合した液体窒素、たとえばヘキサン/液体窒素94°C、メタノール/液体窒素98°C、およびペンタン/液体窒素131°Cに接触させることによって達成されうるGordonAJandFordRATheChemistsCompanionWileyNewYork1972。急速凍結は、液体ワクチン製剤を、ドライアイス/有機溶媒たとえば、エタノール、メタノール、エチレングリコール、四塩化炭素、アセトニトリル、イソプロピルアルコール、またはアセトン浴、たとえば四塩化炭素/ドライアイス23°C、アセトニトリル/ドライアイス42°C、またはアセトンもしくはイソプロピルアルコール/ドライアイス浴78°Cに接触させることによって達成されうるGordon、前記。急速凍結は、40°Cに到達しうる氷と無機塩たとえば、NaClまたはCaCl2とのスラリー中に液体ワクチン製剤を浸すことによって達成されうる。液体ワクチン製剤を凍結することができる温度は、約0°C、5°C、10°C、15°C、20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、50°C、55°C、60°C、65°C、70°C、75°C、80°C、85°C、90°C、95°C、100°C、105°C、110°C、115°C、120°C、125°C、130°C、135°C、140°C、145°C、150°C、155°C、160°C、165°C、170°C、175°C、180°C、185°C、90°C、195°C、200°C、205°C、または210°C未満でありうる。液体ワクチン製剤を凍結することができる温度は、約0°Cから210°C、50°Cから約210°C、100°Cから約210°C、または150°Cから約200°Cでありうる。液体ワクチン製剤を凍結することができる温度は、約0°C、5°C、10°C、15°C、20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、50°C、55°C、60°C、65°C、70°C、75°C、80°C、85°C、90°C、95°C、100°C、105°C、110°C、115°C、120°C、125°C、130°C、135°C、140°C、145°C、150°C、155°C、160°C、165°C、170°C、175°C、180°C、185°C、190°C、195°C、200°C、205°C、または210°Cでありうる。凍結方法により、液体ワクチン製剤中での抗原の三次元形状の喪失を防止することができる。本明細書において開示されるいくつかの抗原含有溶液は、炭水化物を含有することができる。たとえば、抗原含有溶液は、トレハロース、マンニトール、スクロース、ラクトース、またはイヌリンが挙げられるがこれらに限定されない糖を含有することができる。そのような糖は、様々な目的のために、たとえば溶液のタンパク質様成分が凍結の際に失われないようまたは抗原能が減少しないよう保護するために利用される。たとえば、トレハロースを溶液に添加すると、タンパク質を含有する液体製剤たとえば、液体ワクチン液体製剤中のインフルエンザの赤血球凝集素HAなどのタンパク質の抗原性の喪失を防止することができる。しかし、トレハロースおよび他の糖を添加する場合、噴霧凍結を利用しなければ、ワクチン調製物においてハードケーキの形成が起こりうる。本明細書において開示される新規方法は、噴霧凍結を必要とせず、しかもハードケーキの形成が起こらない急速凍結法においてそのような糖を用いることを可能にする。ハードケーキの粉砕によって、成分である生物学的分子の抗原性の喪失が起こるうることから、このことは、そのような処置を必要とするこれまでのアプローチに対して進歩である。抗原含有溶液中で本明細書において開示される緩衝剤と糖とを混合することにより、そのような結果が可能となる。本明細書において開示される糖含有溶液の急速凍結によって、粉末の生成が起こりうる。液体ワクチン製剤は、低温の液体、たとえば液体窒素中に約30秒間から5分間、1分間から60分間、1分間から50分間、1から40分間、1から30分間、1から20分間、1から10分間、または1から5分間曝露されうる。液体ワクチン製剤は、低温の液体、たとえば液体窒素中に約30秒間、1分間、2分間、3分間、4分間、5分間、6分間、7分間、8分間、9分間、10分間、11分間、12分間、13分間、14分間、15分間、16分間、17分間、18分間、19分間、20分間、25分間、30分間、35分間、40分間、45分間、50分間、55分間、または60分間曝露されうる。液体ワクチン製剤は、低温の液体、たとえば液体窒素中に、約30秒間、1分間、2分間、3分間、4分間、5分間、6分間、7分間、8分間、9分間、10分間、11分間、12分間、13分間、14分間、15分間、16分間、17分間、18分間、19分間、20分間、25分間、30分間、35分間、40分間、45分間、50分間、55分間、または60分間より長く曝露されうる。液体ワクチン製剤を容器に入れて、内容物を低温の液体たとえば、液体窒素中に浸すことによって、液体ワクチン製剤を低温の液体に曝露することができる。液体ワクチン製剤は、低温の液体たとえば、液体窒素中に液体ワクチン製剤を直接導入することによって、低温の液体に曝露されうる。液体ワクチン製剤は、液体ワクチン製剤の上に低温の液体たとえば、液体窒素を注ぐことによって低温の液体に曝露されうる。乾燥たとえば液体窒素中での急速凍結後、凍結した製剤をフリーズドライヤーにおいてフリーズドライすることができる。フリーズドライは、1つまたは複数の段階たとえば、同じ圧力で異なる温度で起こりうる。フリーズドライは、たとえば約210°C、205°C、200°C、195°C、190°C、185°C、180°C、175°C、170°C、165°C、160°C、155°C、150°C、145°C、140°C、135°C、130°C、125°C、120°C、115°C、110°C、105°C、100°C、95°C、90°C、85°C、80°C、75°C、70°C、65°C、60°C、55°C、50°C、45°C、40°C、35°C、30°C、25°C、20°C、15°C、10°C、5°C、0°C、5°C、10°C、15°C、20°C、25°C、または30°Cで起こりうる。フリーズドライは、たとえば約210°C、205°C、200°C、195°C、190°C、185°C、180°C、175°C、170°C、165°C、160°C、155°C、150°C、145°C、140°C、135°C、130°C、125°C、120°C、115°C、110°C、105°C、100°C、95°C、90°C、85°C、80°C、75°C、70°C、65°C、60°C、55°C、50°C、45°C、40°C、35°C、30°C、25°C、20°C、15°C、10°C、5°C、0°C、5°C、10°C、15°C、20°C、25°C、または30°Cより上で起こりうる。フリーズドライは、たとえば約80°Cから30°C、約50°Cから25°C、または約40°Cから20°Cで起こりうる。フリーズドライは、1つの温度、異なる2つの温度、異なる3つの温度、異なる4つの温度、異なる5つの温度、異なる6つの温度、異なる7つの温度、異なる8つの温度、異なる9つの温度、または異なる10の温度で起こりうる。フリーズドライは、1つまたは複数の異なる圧力で行われうる。圧力は、たとえば約10mtorrから300mtorr、約25mtorrから300mtorr、約50mtorrから250mtorr、または約50mtorrから200mtorrでありうる。フリーズドライは、約10mtorr、20mtorr、30mtorr、40mtorr、50mtorr、60mtorr、70mtorr、80mtorr、90mtorr、100mtorr、110mtorr、120mtorr、130mtorr、140mtorr、150mtorr、160mtorr、170mtorr、180mtorr、190mtorr、200mtorr、210mtorr、220mtorr、230mtorr、240mtorr、250mtorr、260mtorr、270mtorr、280mtorr、290mtorr、または300mtorrで行われうる。フリーズドライは、約10mtorr、20mtorr、30mtorr、40mtorr、50mtorr、60mtorr、70mtorr、80mtorr、90mtorr、100mtorr、110mtorr、120mtorr、130mtorr、140mtorr、150mtorr、160mtorr、170mtorr、180mtorr、190mtorr、200mtorr、210mtorr、220mtorr、230mtorr、240mtorr、250mtorr、260mtorr、270mtorr、280mtorr、290mtorr、または300mtorrより上で行われうる。各フリーズドライ段階の期間は、約1時間から48時間、約1時間から36時間、約1時間から24時間、約4時間から24時間、約6時間から24時間、または約8時間から24時間でありうる。各フリーズドライ段階の期間は、約1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、25時間、26時間、27時間、28時間、29時間、30時間、31時間、32時間、33時間、34時間、35時間、36時間、37時間、38時間、39時間、40時間、41時間、42時間、43時間、4時間、45時間、46時間、47時間、または48時間でありうる。各フリーズドライ段階の期間は、約1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、25時間、26時間、27時間、28時間、29時間、30時間、31時間、32時間、33時間、34時間、35時間、36時間、37時間、38時間、39時間、40時間、41時間、42時間、43時間、44時間、45時間、46時間、47時間、または48時間より長い時間でありうる。1つまたは複数の乾燥段階を、本明細書において開示される方法において利用することができる。凍結試料の一次乾燥は、任意の関連する方法論、たとえば凍結乾燥によって行われうる。二次乾燥は、たとえば真空チャンバー中で高温での持続的フリーズドライ、温度制御表面との接触曝露、または温度/湿度制御気体の撹拌もしくは流動床での粒子の浮遊によって行われうる。乾燥粉末粒子産物は、たとえば、プロセス容器から、またはプロセス気体流から粒子の分粒および沈降によって回収されうる。他の乾燥プロセスには、たとえば空気乾燥、窒素パージでの脱水すりつぶしおよび篩い分けを含む、フリーズドライ粉砕および篩い分けを含む、および超臨界流体乾燥SCFが挙げられる。乾燥プロセスは、抗原の三次元構造を保存することができる。たとえば、プロセスは、インフルエンザHA抗原の構造を保存して、高いHA効力を提供することができる。フリーズドライ後、粉末を約4から25°Cの温度で貯蔵保存することができる。保存条件の相対湿度は、約0から70、約0から60、約0から50、約0から40、約0から30、約0から20、約0から10、または約0から5でありうる。保存の相対湿度は、約80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、24、23、22、21、60、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1未満でありうる。フリーズドライ後の粉末の水分含有量は、約12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、05、または01でありうる。フリーズドライ後の粉末の水分含有量は、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、05、01、または001未満でありうる。フリーズドライ後に生成された粉末の平均粒子直径は、約5から100μm、約5から60μm、または約5から30μmでありうる。フリーズドライ後に生成された粉末の平均粒子直径は、約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、または95μm未満でありうる。IV.担体本明細書に記述されるフリーズドライ法によって産生された粉末を、1つまたは複数の追加の成分と混和して、乾燥ワクチン粉末製剤を生成することができる。そのような成分は、薬学的に許容される担体、たとえば粘膜投与にとって適切な担体を含む。粘膜投与にとって適した担体は、微結晶性セルロースなどの生理学的に許容される物質でありうる。微結晶性セルロースは、より大きい比表面積を有する特定の微結晶性セルロースでありうる。任意の微結晶性セルロースを利用することができるが、いくつかの態様において、本出願のワクチンを産生するために用いられる微結晶性セルロースは、Ceolus登録商標PHF20JPまたはAvicel登録商標PH105でありうる。担体または完全なワクチンの粉末化粒子を定義する1つの様式は、平均粒子径に基づく。微結晶性セルロースおよび/またはワクチン粒子の平均粒子径は、当技術分野において任意の公知の手段、たとえば選別、篩い分け、またはレーザー回折によって測定されうる。担体たとえば、微結晶性セルロースおよび/またはワクチンの平均粒子径は、たとえば約10μm、11μm、12μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、21μm、22μm、23μm、24μm、25μm、26μm、27μm、28μm、29μm、30μm、31μm、32μm、33μm、34μm、35μm、36μm、37μm、38μm、39μm、40μm、41μm、42μm、43μm、44μm、45μm、46μm、47μm、48μm、49μm、50μm、51μm、52μm、53μm、54μm、55μm、56μm、57μm、58μm、59μm、60μm、61μm、62μm、63μm、64μm、65μm、66μm、67μm、68μm、69μm、70μm、71μm、72μm、73μm、74μm、75μm、76μm、77μm、78μm、79μm、80μm、81μm、82μm、83μm、84μm、85μm、86μm、87μm、88μm、89μm、90μm、91μm、92μm、93μm、94μm、95μm、96μm、97μm、98μm、99μm、100μm、110μm、120μm、130μm、140μm、150μm、160μm、170μm、180μm、190μm、または200μmでありうる。いくつかの態様において、本明細書において記述されるワクチン組成物の担体として用いられる微結晶性セルロースは、たとえばレーザー回折、篩い分け、または選別によって測定した場合に、25μm、39μm、または57μmの平均粒子径を有しうる。担体たとえば、微結晶性セルロースおよび/またはワクチン粉末は、有用な粒子径分布を有するように調製されうる。担体および/またはワクチンの調製物は、たとえば10~200μm、20~200μm、30~200μm、40~200μm、50~200μm、60~200μm、70~200μm、80~200μm、90~200μm、100~200μm、110~200μm、120~200μm、130~200μm、140~200μm、150~200μm、160~200μm、170~200μm、180~200μm、190~200μm、または含まれる任意の小範囲の粒子径分布を有しうる。本明細書において記述される粉末は、追加の粒子径分布を有する粒子径、たとえば10~100μm、20~100μm、30~100μm、40~100μm、50~100μm、60~100μm、70~100μm、80~100μm、90~100μm、10~50μm、10~60μM、20~60μm、30~70μm、40~80μm、50~90μm、60~100μm、70~110μm、80~120μm、90~130μm、100~140μm、110~150μm、120~160μm、130~170μm、140~180μm、150~190μm、160~200μm、または含まれる任意の小範囲の粒子径を有しうる。担体および/またはワクチンは、たとえば10~50μm、11~50μm、12~50μm、13~50μm、14~50μm、15~50μm、16~50μm、17~50μm、18~50μm、19~50μm、20~50μm、21~50μm、22~50μm、23~50μm、24~50μm、25~50μm、26~50μm、27~50μm、28~50μm、29~50μm、30~50μm、または含まれる任意の小範囲の粒子径分布を有しうる。特定の態様において、担体および/またはワクチンは、19~60μmの粒子径分布、または19~50μmの粒子径分布を有しうる。本明細書において記述されるワクチンの調製にとって有用な微結晶性セルロース粉末または他の担体化合物は、特定の物理的局面に関して明記されうる、または明記されなくてもよい。たとえば、微結晶性セルロース粉末は、肺を保護することができる、より大きい粒子を有するように明記されうる。微結晶性セルロース粉末は、免疫応答を増強することができる、より小さい粒子を有するように明記されうる。粉末の物理的特徴は、篩い分けによって明記されうるか、またはそうでなければ、たとえば約10μm未満、約20μm未満、約30μm未満、約40μm未満、約50μm未満、約60μm未満、約70μm未満、約80μm未満、約90μm未満、約100μm未満である粒子の存在を最小限にするように、および/または約20μmより大きい、約30μmより大きい、約40μmより大きい、約50μmより大きい、約60μmより大きい、約70μmより大きい、約80μmより大きい、約90μmより大きい、約100μmより大きい、約110μmより大きい、約120μmより大きい、約130μmより大きい、約140μmより大きい、約150μmより大きい、約160μmより大きい、約170μmより大きい、約180μmより大きい、約190μmより大きい、または約200μmより大きい粒子を最小限にするように処理されうる。本明細書において記述される所望の結果たとえば、免疫原性の増強を達成するために変化させることができる粉末組成物の追加のパラメータは、粉末の比表面積である。たとえば、粉末組成物は、担体たとえば、微結晶性セルロースおよび/またはワクチンの比表面積が、10m2g、11m2g、12m2g、13m2g、14m2g、15m2g、16m2g、17m2g、18m2g、19m2g、20m2g、21m2g、22m2g、23m2g、24m2g、25m2g、26m2g、27m2g、28m2g、29m2g、30m2g、31m2g、32m2g、33m2g、34m2g、35m2g、36m2g、37m2g、38m2g、39m2g、40m2g、41m2g、42m2g、43m2g、44m2g、45m2g、46m2g、47m2g、48m2g、49m2g、50m2g、51m2g、52m2g、53m2g、54m2g、55m2g、56m2g、57m2g、58m2g、59m2g、60m2g、61m2g、62m2g、63m2g、64m2g、65m2g、66m2g、67m2g、68m2g、69m2g、70m2g、71m2g、72m2g、73m2g、74m2g、75m2g、76m2g、77m2g、78m2g、79m2g、80m2g、81m2g、82m2g、83m2g、84m2g、85m2g、86m2g、87m2g、88m2g、89m2g、90m2g、91m2g、92m2g、93m2g、94m2g、95m2g、96m2g、97m2g、98m2g、99m2g、100m2g、101m2g、102m2g、103m2g、104m2g、105m2g、106m2g、107m2g、108m2g、109m2g、110m2g、111m2g、112m2g、113m2g、114m2g、115m2g、116m2g、117m2g、118m2g、119m2g、120m2g、121m2g、122m2g、123m2g、124m2g、125m2g、126m2g、127m2g、128m2g、129m2g、130m2g、131m2g、132m2g、133m2g、134m2g、135m2g、136m2g、137m2g、138m2g、139m2g、140m2g、141m2g、142m2g、143m2g、144m2g、145m2g、146m2g、147m2g、148m2g、149m2g、150m2g、151m2g、152m2g、153m2g、154m2g、155m2g、156m2g、157m2g、158m2g、159m2g、160m2g、161m2g、162m2g、163m2g、164m2g、165m2g、166m2g、167m2g、168m2g、169m2g、170m2g、171m2g、172m2g、173m2g、174m2g、175m2g、176m2g、177m2g、178m2g、179m2g、180m2g、181m2g、182m2g、183m2g、184m2g、185m2g、186m2g、187m2g、188m2g、189m2g、190m2g、191m2g、192m2g、193m2g、194m2g、195m2g、196m2g、197m2g、198m2g、199m2g、または200m2gであるように調製されうる。粉末の比表面積は、たとえば約21m2g、22m2g、23m2g、24m2g、25m2g、26m2g、27m2g、28m2g、29m2g、30m2g、31m2g、32m2g、33m2g、34m2g、35m2g、36m2g、37m2g、38m2g、39m2g、40m2g、41m2g、42m2g、43m2g、44m2g、45m2g、46m2g、47m2g、48m2g、49m2g、または50m2gでありうる。特定の態様において、担体たとえば、微結晶性セルロースおよび/またはワクチン粉末の比表面積は、13m2gに等しいかもしくはそれ未満、13m2gに等しいかもしくはそれより上、または約23m2gでありうる。粉末組成物担体および/またはワクチンを記述することができるさらにもう1つのパラメータは、かさ密度である。いくつかの態様において、用いられる粉末は、かさ密度範囲を有しうる。本発明の粉末は、たとえば010~100gcm3、010~090gcm3、010~080gcm3、010~070gcm3、010~060gcm3、010~050gcm3、010~040gcm3、010~030gcm3、020~100gcm3、020~090gcm3、020~080gcm3、020~070gcm3、020~060gcm3、020~050gcm3、020~040gcm3、020~030gcm3、030~100gcm3、030~090gcm3、030~080gcm3、030~070gcm3、030~060gcm3、030~050gcm3、030~040gcm3、040~100gcm3、040~090gcm3、040~080gcm3、040~070gcm3、040~060gcm3、040~050gcm3、050~100gcm3、050~090gcm3、050~080gcm3、050~070gcm3、050~060gcm3、060~100gcm3、060~090gcm3、060~080gcm3、060~070gcm3、070~100gcm3、070~090gcm3、070~080gcm3、080~100gcm3、080~090gcm3、09~10gcm3、または含まれる任意の小範囲のかさ密度を有しうる。特定の態様において、013~29gcm3、または026~048gcm3のかさ密度を有する担体たとえば、微結晶性セルロースおよび/またはワクチン粉末を用いることができる。他の態様において、粉末は、たとえば010gcm3、011gcm3、012gcm3、013gcm3、014gcm3、015gcm3、016gcm3、017gcm3、018gcm3、019gcm3、020gcm3、021gcm3、022gcm3、023gcm3、024gcm3、025gcm3、026gcm3、027gcm3、028gcm3、029gcm3、030gcm3、031gcm3、032gcm3、033gcm3、034gcm3、035gcm3、036gcm3、037gcm3、038gcm3、039gcm3、040gcm3、041gcm3、042gcm3、043gcm3、044gcm3、045gcm3、046gcm3、047gcm3、048gcm3、049gcm3、050gcm3、051gcm3、052gcm3、053gcm3、054gcm3、055gcm3、056gcm3、057gcm3、058gcm3、059gcm3、060gcm3、061gcm3、062gcm3、063gcm3、064gcm3、065gcm3、066gcm3、067gcm3、068gcm3、069gcm3、070gcm3、071gcm3、072gcm3、073gcm3、074gcm3、075gcm3、076gcm3、077gcm3、078gcm3、079gcm3、080gcm3、081gcm3、082gcm3、083gcm3、084gcm3、085gcm3、086gcm3、087gcm3、088gcm3、089gcm3、090gcm3、091gcm3、092gcm3、093gcm3、094gcm3、095gcm3、096gcm3、097gcm3、098gcm3、099gcm3、または100gcm3の特定のかさ密度を有しうる。いくつかの態様において、担体たとえば、微結晶性セルロースおよび/またはワクチン粉末は、023gcm3または041gcm3のかさ密度を有しうる。微結晶性セルロースなどの担体は、乾燥ワクチン粉末製剤の質量の約25から約98を含みうる。いくつかの態様において、担体は、乾燥ワクチン粉末製剤のわずか約98、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、または25を含みうる。本発明のワクチンにおいて有用であるもう1つの担体は、第三リン酸カルシウムTCPでありうる。TCPは、乾燥ワクチン粉末製剤の約05から約5を含みうる。TCPは、乾燥ワクチン粉末製剤のわずか約05、08、09、1、12、14、16、18、2、22、24、26、28、3、4、または5を含みうる。担体は、混和することによって、たとえばボルテックスミキサーで混和することによって添加されうる。混和、たとえばボルテックスミキサーで混和する期間は、約30秒間から120分間、約30秒間から2分間、約30秒間から75分間、約20秒間から15分間、約30秒間から30分間、約30秒間から45分間、約30秒間から60分間、約30秒間から75分間、約30秒間から90分間、約30秒間から120分間でありうる。混和、たとえばボルテックスミキサーで混和する期間は、約30秒間、1分間、2分間、4分間、8分間、10分間、15分間、20分間、30分間、45分間、60分間、90分間、または120分間より長い時間でありうる。混和、たとえばボルテックスミキサーで混和する期間は、約30秒間、1分間、5分間、10分間、15分間、30分間、45分間、60分間、75分間、90分間、または120分間でありうる。混和する際に、フリーズドライした抗原含有粉末と担体とを含む乾燥ワクチン製剤の粒子径は、関心対象の解剖学的部位に乾燥粉末ワクチンを送達するために適切な任意の大きさでありうる。加えて、粒子の大きさは異なる送達装置に合うように調整されうる。このように、本明細書の方法によって生成されたフリーズドライ抗原たとえば、インフルエンザと担体たとえば微結晶性セルロースとを含有する乾燥粉末ワクチン製剤の平均粒子直径は、約10μm、11μm、12μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、21μm、22μm、23μm、24μm、25μm、26μm、27μm、28μm、29μm、30μm、31μm、32μm、33μm、34μm、35μm、36μm、37μm、38μm、39μm、40μm、41μm、42μm、43μm、44μm、45μm、46μm、47μm、48μm、49μm、50μm、51μm、52μm、53μm、54μm、55μm、56μm、57μm、58μm、59μm、60μm、61μm、62μm、63μm、64μm、65μm、66μm、67μm、68μm、69μm、70μm、71μm、72μm、73μm、74μm、75μm、76μm、77μm、78μm、79μm、80μm、81μm、82μm、83μm、84μm、85μm、86μm、87μm、88μm、89μm、90μm、91μm、92μm、93μm、94μm、95μm、96μm、97μm、98μm、99μm、100μm、110μm、120μm、130μm、140μm、150μm、160μm、170μm、180μm、190μm、または200μm未満でありうる。フリーズドライした抗原含有粉末と担体とを含む乾燥ワクチン製剤は、たとえば、10~200μm、20~200μm、30~200μm、40~200μm、50~200μm、60~200μm、70~200μm、80~200μm、90~200μm、100~200μm、110~200μm、120~200μm、130~200μm、140~200μm、150~200μm、160~200μm、170~200μm、180~200μm、190~200μmの範囲の粒子径、または含まれる任意の小範囲の粒子径を有しうる。フリーズドライした抗原含有粉末と担体とを含む乾燥ワクチン製剤は、たとえば、10~100μm、20~100μm、30~100μm、40~100μm、50~100μm、60~100μm、70~100μm、80~100μm、90~100μm、10~50μm、20~60μm、30~70μm、40~80μm、50~90μm、60~100μm、70~110μm、80~120μm、90~130μm、100~140μm、110~150μm、120~160μm、130~170μm、140~180μm、150~190μm、160~200μmの範囲の粒子径、または含まれる任意の小範囲の粒子径を有しうる。フリーズドライした抗原含有粉末と担体とを含む乾燥ワクチン製剤は、篩い分けによって明記されうるか、またはそうでなければ、たとえば約10μm未満、約20μm未満、約30μm未満、約40μm未満、約50μm未満、約60μm未満、約70μm未満、約80μm未満、約90μm未満、約100μm未満である粒子を最小限にするように、および/または約20μmより大きい、約30μmより大きい、約40μmより大きい、約50μmより大きい、約60μmより大きい、約70μmより大きい、約80μmより大きい、約90μmより大きい、約100μmより大きい、約110μmより大きい、約120μmより大きい、約130μmより大きい、約140μmより大きい、約150μmより大きい、約160μmより大きい、約170μmより大きい、約180μmより大きい、約190μmより大きい、もしくは約200μmより大きい粒子を最小限にするように処理されうる。V.安定性および吸湿性本明細書において記述されるように調製した乾燥ワクチン粉末製剤は、室温25°Cで相対湿度60で少なくとも約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、または36ヶ月間安定でありうる。乾燥ワクチン粉末製剤の安定性はまた、加速条件45°Cで相対湿度75でも長期間安定でありうる。加速条件では、乾燥ワクチン粉末製剤は、少なくとも約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、または36ヶ月間安定でありうる。本明細書において記述されるように調製した乾燥ワクチン粉末製剤は、他の温度たとえば、20°Cから55°Cおよび相対湿度0から100で安定でありうる。本明細書において用いられる安定性は、貯蔵条件での乾燥ワクチン粉末のいくつかの局面を指しうる。そのような1つの局面は、ワクチンの効力、すなわちワクチンの抗原性成分の抗原性の保持である。たとえば、HAを含む乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤の安定性のこの局面は、HA抗原性を測定することによって決定されうる。ワクチン粉末は、特定の条件下で特定の時間たとえば、加速条件で18ヶ月の後、50より大きい最初の効力と比較して抗原性を保持すれば安定であると見なされる。または、安定性は、貯蔵条件下で乾燥粉末が環境水の取り込みに耐える能力を指すことができる。そのような水の取り込みによって、凝集塊の増加が起こりえて、それによって流動性の減少および生物学的利用率の減少などの望ましくない特性が起こりうる。本明細書において記述される乾燥ワクチン粉末製剤は、低い吸湿性を有しうる。乾燥ワクチン粉末製剤の吸湿性は、乾燥ワクチン粉末製剤の重量を測定することによって経時的に測定することができる。重量の増加は、水の獲得を示している。吸湿性は、粉末を気密容器、非気密容器、または開放系で貯蔵した場合に、本発明の乾燥ワクチン粉末が吸収した水の量によって決定されうる。VI.投与経路および投与手段いくつかの態様において、装置は、対象の鼻孔に乾燥ワクチン粉末治療製剤の1回量の実質的な分画を送達するように構成されうる。いくつかの例において、装置を、装置内に存在する乾燥ワクチン粉末治療製剤のある量の実質的な分画を対象の鼻孔に送達するように構成してもよい。いくつかの例において、乾燥ワクチン粉末治療製剤またはその実質的な分画を、装置の1回作動後に送達してもよい。いくつかの例において、粉末治療製剤またはその実質的な分画は、たとえば1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10回作動などの装置の複数回の作動後に送達されうる。いくつかの例において、装置の複数回の作動が、装置の1回使用を構成してもよい。本明細書において記述される方法、装置、および組成物に従って、装置によって送達される乾燥ワクチン粉末治療製剤の実質的な分画は、1回量または装置に存在する量などの、乾燥粉末治療薬の量の少なくとも50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、975、98、985、99、995、999、9995または100を包含する。提供される本発明の方法によって生成される乾燥ワクチン粉末製剤と共に用いるために適切な経鼻アプリケータは、その全内容が参照により本明細書に組み入れられる、係属中の米国特許出願第61260367号に記述されている。VII.免疫に及ぼす乾燥粉末製剤の効果提供される本発明の方法および組成物は、局所免疫応答を刺激するために用いられうる。局所免疫応答は、末梢リンパ組織での応答でありうる。たとえば、ワクチン乾燥粉末製剤を、粘膜免疫において役割を果たしうる粘膜隣接リンパ組織MALTを刺激するために鼻内に投与することができる。粘膜の例には、頬粘膜、食道粘膜、胃粘膜、腸粘膜、鼻粘膜、嗅粘膜、口腔粘膜、気管支粘膜、子宮粘膜、内膜子宮の粘膜、および陰茎粘膜が挙げられる。特に、鼻咽頭隣接リンパ組織NALTを標的とすることができる。NALTはTヘルパー1およびTヘルパー2細胞、ならびにIgA前駆B細胞の生成において役割を果たすことができる。鼻内免疫によって、粘膜および全身の免疫区画の双方において抗原特異的防御免疫を誘導することができる。提供される本発明の方法および組成物を用いて、粘膜免疫系の主な抗体である分泌型IgAsIgAの産生を刺激することができる図6、7、9、11、12、および20。sIgAは、2つまたは4つの単量体、J鎖ポリペプチド、および分泌成分と呼ばれるポリペプチド鎖で構成される二量体または四量体である。J鎖ポリペプチドは、血清および分泌型IgAの双方の重合化を容易にすることができる。分泌成分は、粘膜の上皮細胞によって産生される70kDaポリペプチドであり、粘膜分泌物中のタンパク質分解酵素に対するsIgAの感受性をより低くすることによって、sIgAを保護することができる。sIgAは、抗原試料採取のために計画される構築された粘膜リンパ臓器において最初に刺激された前駆体に由来する粘膜プラスマ細胞によって局所的に産生されうる。初回誘発後、前駆体細胞は、局所リンパ節、リンパ、および血液の中を通過して、粘膜部位に広く播種して、それによって投与部位たとえば、経鼻投与以外の粘膜部位での防御が起こる。局所プラスマ細胞から分泌された後、sIgAは上皮細胞表面受容体に結合することができ、複合体は、上皮細胞の中を分泌物まで通過することができ、そこで抗原の取り込みを阻害するための非催炎性の免疫学的障壁として役立ちうる。粘膜すなわち、sIgA応答の刺激に加えて、本明細書において開示される乾燥粉末製剤はまた、IgG応答も刺激することができる図6、7、9、11、12、14、17、および19。そのような刺激によって、たとえば本明細書において開示されるワクチンによって誘導されるsIgAによって提供される防御を逃れるまたは回避する病原体に反応するように液性応答をプライミングすることによって、追加の防御層を得ることができる。このように、1つの態様において、本明細書において開示されるワクチンは、粘膜および液性抗体応答の双方を誘導することができる。実施例1:不活性全H1N1乾燥ワクチン粉末製剤の調製および試験本実施例において、季節性インフルエンザワクチンH1N1の様々な乾燥粉末製剤を生成して試験する。本発明の好ましい態様をまた、季節性インフルエンザワクチンの従来の液体経鼻製剤および注射製剤と比較して試験する。実施例1A:非急速凍結技術を用いたインフルエンザワクチンH1N1粉末の調製本実験において、様々な抗原安定化剤を、従来のフリーズドライプロセスにおいて用いてワクチン粉末を生成し、これをコンシステンシーおよび安定性に関して調べる。10mLボトルにおいて、不活性全インフルエンザH1N1、ABrisbane592007株、TheChemoSeroTherapeuticResearchInstituteの16mgmL溶液04mLを、pH74のリン酸緩衝生理食塩液PBS、またはリン酸緩衝液04mL中で安定化剤136mgと混合して、最終的な抗原対安定化剤比1:21を得る。混合物を40°Cで5時間かけて徐々に凍結する。凍結した組成物を4段階でフリーズドライする:40°C、140mtorr未満で24時間;30°C、130mtorr未満で24時間;10°C、100mtorr未満で4時間;および20C、50mtorr未満で4時間。得られた凍結乾燥粉末は、インフルエンザワクチン粉末1mgあたりインフルエンザワクチンタンパク質29μgを含有する。インフルエンザワクチン粉末を、比表面積が13m2gより大きい経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび第三リン酸カルシウムTCPCa32と混合混和する。インフルエンザワクチン粉末493mg、インフルエンザワクチンタンパク質144mgを含むを、Ceolus登録商標PHF20JP微結晶性セルロース平均粒子径:57μm;かさ密度:023gcm3;比表面積23m2g3091mg、Ceolus登録商標PH301微結晶性セルロース平均粒子径:39μm;かさ密度:041gcm3400mg、およびTCP16mgと10mLガラスボトル中で混和して、ボルテックスミキサーを用いて成分を1分間混和する。得られた乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤は、乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤25mgあたりインフルエンザワクチンタンパク質90μgを含有する。1つの例において、トレハロースを安定化剤として用いると、部分的にケーキを形成するが安定なHA効力を有するインフルエンザワクチン粉末が生成される。もう1つの例において、マンニトールを安定化剤として用いると、微粒子を含むが不安定なHA効力を有するインフルエンザワクチン粉末が生成される。なおもう1つの例において、ラクトースを安定化剤として用いると、部分的にケーキを形成するが安定なHA効力を有するインフルエンザワクチン粉末が生成される図1。本実施例において、安定性は、フリーズドライ後に50より大きいHA効力を保持するとして定義される;不安定とは、フリーズドライ後での50に等しいまたはそれ未満のHA効力であり;結果を表1に要約する。製剤は、完全なHA効力および良好な流動性の双方を欠如することから、そのようなアプローチは、有効で完全に送達可能な経鼻ワクチンを産生するためには改善を必要とする。表1非急速凍結技術によって生成されたインフルエンザH1N1ワクチン粉末実施例1B:急速凍結プロセスを用いる経鼻インフルエンザH1N1ワクチン粉末の調製本実験において、様々な安定化剤を急速凍結および乾燥プロセスにおいて用いてワクチン粉末を生成し、これをコンシステンシーおよび安定性に関して調べる。全般的製造プロセスを図2および3に概要する;H1N1経鼻ワクチン製剤の生成に関する具体的詳細を以下に提供する。10mLボトルにおいて、不活性全インフルエンザH1N1、ABrisbane592007株の16mgmL溶液04mLを、pH74のリン酸緩衝生理食塩液PBS、またはリン酸緩衝液04mL中で安定化剤136mgと混合して、最終的な抗原対安定化剤比1:21を得る。混合物を液体窒素中で10分間急速凍結して、インフルエンザ粉末を、4段階のフリーズドライプロセスによって生成する:40°C、140mtorr未満で24時間;30°C、130mtorr未満で24時間;10°C、100mtorr未満で4時間;および20C、50mtorr未満で4時間。インフルエンザワクチン粉末1mgあたりインフルエンザワクチンタンパク質29μgを含有する粉末は、微粒子を含み、室温で安定であるが、この場合、安定性は50より大きいHA効力を保持するとして定義される表2。インフルエンザワクチン粉末を、比表面積が13m2gより大きい経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび第三リン酸カルシウムTCPCa32と混合混和する。インフルエンザワクチン粉末493mg、インフルエンザワクチンタンパク質144mgおよびトレハロース3060mgを含むを、Ceolus登録商標PHF20JP微結晶性セルロース平均粒子径:57μm;かさ密度:023gcm3;比表面積23m2g3091mg、Ceolus登録商標PH301微結晶性セルロース平均粒子径:39μm;かさ密度:041gcm3400mg、およびTCP16mgと10mLガラスボトル中で混合して、ボルテックスミキサーを用いて成分を1分間混和する。得られた乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤は、乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤25mgあたりインフルエンザワクチンタンパク質90μgを含有する。1つの例において、トレハロースを抗原安定化剤として用いると、安定なHA効力および微粒子サイズを有する製剤が得られた。もう1つの例において、ラクトースを抗原安定化剤として用いると、同様に微粒子サイズからなる安定な製剤を生じた。マンニトールは、H1N1ワクチン粉末に関する抗原安定化剤として試験しなかった。表2急速凍結技術によって生成されたインフルエンザH1N1ワクチン粉末実施例1C:経鼻インフルエンザワクチン粉末製剤の試験計画および結果本実験において、乾燥粉末H1N1ワクチンが免疫応答を誘発できるか否かを試験して、従来の経鼻および注射液体製剤と比較する。急速凍結プロセスを用いてワクチンを調製して、前記で説明したように、微結晶性セルロース担体と混和する。各々の条件において、インフルエンザワクチンタンパク質H1N1、ABrisbane592007株、不活性全インフルエンザワクチン009mgを、カニクイザルの4つの群に投与した。カニクイザルは、ヒトと類似の鼻腔の解剖学的構造および類似の免疫応答を有する。1群に、前記で概要した急速凍結プロセスによって調製し、インフルエンザワクチンタンパク質009mg、トレハロース191mg、Ceolus登録商標PHF20JP1928mg、Ceolus登録商標PH301250mg、およびTCP010mgを含有する経鼻インフルエンザH1N1ワクチン粉末製剤25mgを投与した;2群には、インフルエンザワクチンタンパク質009mgを含有する経鼻インフルエンザワクチン溶液01mlを投与した;3群には、インフルエンザワクチンタンパク質009mg、Tween8005μLと共にアジュバントαガラクトシルセラミド002mgを含有する経鼻インフルエンザワクチン溶液01mlを投与した;ならびに4群には、インフルエンザワクチンタンパク質009mgを含有するSCインフルエンザワクチン溶液05mLを投与した。図4に記述されるように、ワクチンを投与して、試料を採取した。抗体レベルを赤血球凝集阻害HIおよび酵素結合免疫吸着測定法ELISAによって決定した。血清および鼻洗浄液試料中の赤血球凝集阻害HI抗体力価を、以下のように決定した。試料を受容体破壊酵素RDE、DenkaSeikenCoLtdTokyoJapanによって、37°Cで15~18時間処置した後、56°Cで1時間熱不活化した。試料の連続2倍希釈液を調製して、4赤血球凝集単位ウェルの濃度でH1N1ABrisbane592007株HA抗原DenkaSeikenと混合して、室温で1時間インキュベートした。各ウェルに、05ニワトリ赤血球細胞浮遊液50μLを添加して、赤血球凝集を1時間後に評価した。赤血球凝集を阻害する試料の最高希釈が試料のHIタイトルtitleである。この試験において採取した試料のHI試験の結果を図5AおよびBに示し、これらの表は、不活性全H1N1ウイルスABrisbane592007株ワクチンの異なる製剤に曝露されたサルによって産生されたHI力価の表を含む。血清試料中で測定したHI力価を5Aに示す:鼻洗浄液試料中で測定したHI力価を5Bに示す。皮下注射ワクチン4群は、血清試料において最高のHI力価を生じた;しかし、鼻洗浄液試料ではHI力価の増加は検出されなかった。経鼻調製物の中で、不活性全経鼻インフルエンザH1N1、ABrisbane592007株ワクチン粉末製剤は、血清および鼻洗浄液試料のいずれにおいても最高の力価を生じ、液体製剤に対して明確な改善を証明した。併せて考慮すると、これらの結果は、血清および鼻洗浄液HI力価の双方が試験群1において上昇したことを証明する。血清および鼻洗浄液試料中での酵素結合免疫吸着測定法ELISA抗体力価を、以下のように決定した。ELISAプレートに抗原を4°Cで17時間コーティングして、洗浄し、ブロッキング溶液リン酸緩衝液中での05ウシ血清アルブミン100μLによって室温で1時間ブロックした。洗浄後、試験試料の2倍連続希釈を05BSAおよびPBS中で行って、希釈液をELISAプレートのウェルに加えた。37°Cで1時間インキュベートした後、プレートを洗浄して、西洋ワサビペルオキシダーゼHRPコンジュゲートヤギ抗サルIgGまたはHRPコンジュゲートヒツジ抗サル分泌成分検出抗血清と共に37°Cで1時間インキュベートした。プレートを洗浄して、oフェニレンジアミンOPDと共に37°Cで15分間インキュベートして、1M硫酸H2SO4100μLの添加によって呈色反応を停止させた。試料を、ELISAリーダーにおいてOD492によって測定した。本試験において採取した試料中で測定したELISA抗体力価の結果を図6および7に示す。図6AおよびBは、異なるインフルエンザワクチン製剤に曝露されたサルによって産生されたsIgA5BおよびIgG5A抗体力価の表である。図7は、データのグラフ表示を提供し、試験した各動物異なる動物を異なる線で示すからの類似の結果を示している。SCインフルエンザワクチン溶液は、全ての試験物質の中で最も多くのIgGを産生した。経鼻インフルエンザH1N1、ABrisbane592007株ワクチン粉末製剤は、全ての経鼻調製物の中で最も多くのIgGを産生した。経鼻インフルエンザワクチン粉末製剤は、全ての試験物質の中で最も多くのsIgAを産生した。SC注射インフルエンザワクチンは、全ての試験物質の中で最も少ないsIgAを産生した。アジュバントを有する経鼻インフルエンザワクチン溶液は、アジュバントを添加したにもかかわらず、全ての経鼻調製物の中で最も少ないsIgAを産生した。実施例1D:回復期でのHI、IgG、およびsIgA力価実施例1Cから動物のサブセットを実験の終了後にモニターして、上昇した抗体力価が保持されるか否かを決定した。血清および鼻洗浄液試料を80日目最後のワクチン接種後31日目、101日目ワクチン接種52日目、および115日目ワクチン接種後66日目に得た。結果を図8および9に示す。図8は、HI力価の表を含む;図9は、IgGおよびsIgA力価の表を含む。抗体力価レベルは経鼻粉末製剤によって処置した動物において高レベルで保持された図8および9、1群。抗体力価レベルは、経鼻液体製剤によって処置した動物において、アジュバントを添加しなくとも2群またはアジュバントを添加しても3群、より低いレベルで保持された。液体製剤を注射した動物4群におけるIgGおよびHI力価レベルは、回復期間を通して顕著に減少した;sIgA抗体レベルは、ワクチン製剤の注射によって処置した動物では有意に上昇しなかった。実施例1E:生存能/チャレンジ試験本実施例において、インフルエンザワクチンがその後のチャレンジから動物を防御できるか否かを決定する。先の実験においてワクチン接種したサルの鼻へのチャレンジを、最後の免疫後3週間目に行う。動物に、胚含有鶏卵生育イヌインフルエンザABrisbane592007IVR148ウイルスをチャレンジする。各動物に、全体でウイルスおよそ107TCID50を容積2ml中で与える。偽チャレンジに関して、サルに、ウイルスを含まない尿膜液2mlをチャレンジする。さらなる対照として、非ワクチン接種サル3匹に、ウイルス107TCID50を曝露するか、またはウイルスを含まない尿膜液2mlをチャレンジする。各群からの動物を、体重、低体温、全身外観、および臨床症状に関して毎日モニターする。サルをインフルエンザ関連臨床徴候に関してチャレンジ後28日間観察する。サルには全て、標準飼料を与えて、水を自由に与える。調べた各群に関して、鼻スワブおよび血液試料を、初回チャレンジ後7日目、3日目、7日目、14日目、および28日目に採取する。抗体力価sIgAおよびIgGを各動物に関して決定する。実施例1F:乾燥ワクチン粉末製剤の安定性および吸湿性の決定本実施例において、乾燥ワクチン粉末製剤の安定性および吸湿性を調べる。乾燥不活性全H1N1インフルエンザワクチン粉末製剤を、提供される本発明の方法によって生成する。ワクチン粉末製剤の安定性を45°Cおよび20°Cから25°Cで試験する。試験される乾燥ワクチン粉末製剤を、密封ボトルおよび非密封容器の双方に貯蔵する。HA抗原性を決定することによって、安定性を測定する。乾燥ワクチン粉末製剤の吸湿性は、試料の質量を経時的に決定することによって測定される。乾燥ワクチン粉末の吸湿安定性に及ぼす異なる環境条件の効果を決定するために、ワクチン粉末50mgを様々な条件下で貯蔵する。乾燥ワクチン粉末の試料を気密条件下、密封容器中、および開放容器中で貯蔵する。試料の重量を月1回の間隔で6ヶ月間測定する。重量の増加は、水の獲得を示している。6ヶ月より長く貯蔵したワクチン粉末製剤を、経鼻送達装置において試験する。装置から送達されるワクチン粉末製剤の百分率を決定して、新たに作製したワクチン粉末製剤の百分率と比較する。実施例2:不活性全H5N1乾燥ワクチン粉末製剤の調製および試験本実施例において、トリインフルエンザワクチンH5N1の様々な乾燥粉末製剤を生成して試験する。本発明の好ましい態様をまた、トリインフルエンザワクチンの従来の液体経鼻製剤および注射製剤と比較して試験する。実施例2A:急速凍結プロセスを用いる経鼻インフルエンザH5N1ワクチン粉末の調製本実施例は、H5N1経鼻ワクチン粉末を生成するために急速凍結および乾燥プロセスにおいて用いるための最適な抗原安定化剤、および抗原対安定化剤の比率を決定するために行った。全般的製造プロセスを図2および3に概要する:H5N1経鼻ワクチン製剤の生成に関連する具体的詳細を以下に提供する。4つの抗原対安定化剤比を試験した1:11、1:21、1:49、および1:101;以下に引用した数値は、1:49比の製剤に対応する。10mLボトルにおいて、不活性全H5N1ウイルスAVietnam11942004株、SinovacBiotschLtdを含有する0526mgmL抗原溶液04mLを、pH72のリン酸緩衝液04mL中で安定化剤トレハロース、マンニトール、またはラクトース104mgと混合して、最終的な抗原対安定化剤比1:49を得た。混合物を液体窒素中で10分間急速に凍結して、インフルエンザ粉末を4段階のフリーズドライプロセスによって生成する:40°C、140mtorr未満で24時間;30°C、130mtorr未満で36時間;10°C、100mtorr未満で4時間;および20°C、50mtorr未満で4時間。得られた粉末は、粉末1mgあたり抗原112μgを含有する。インフルエンザワクチン粉末を、比表面積が13m2gより大きい経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび第三リン酸カルシウムTCPCa32と混合混和する。インフルエンザワクチン粉末104mg、インフルエンザワクチンタンパク質12mgを含むを、Ceolus登録商標PHF20JP微結晶性セルロース平均粒子径:57μm;かさ密度:023gcm3;比表面積23m2g2544mg、Ceolus登録商標PH301微結晶性セルロース平均粒子径:39μm;かさ密度:041gcm3400mg、およびTCP16mgと10mLガラスボトル中で混和して、ボルテックスミキサーを用いて成分を1分間混和する。得られた乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤は、乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤20mgあたりインフルエンザワクチンタンパク質589μgを含有する。トレハロース、マンニトール、およびラクトースを安定化剤として用いると、1:21および1:49の抗原対安定化剤比で微粒子からなる安定な粉末を生じる。抗原対安定化剤比が1:101である場合、トレハロースおよびラクトース含有製剤はいずれもケーキを生じたが、安定な粉末を産生した;マンニトールは、抗原対安定化剤比1:101で微粒子からなる安定な粉末を生じた。トレハロース、マンニトール、およびラクトースを用いると、抗原対安定化剤比1:11では不安定な製剤を生じた。結果を表3に要約する。表3急速凍結技術によって生成したインフルエンザH5N1ワクチン粉末実施例2B:経鼻インフルエンザワクチン粉末製剤の試験計画および結果本実験において、乾燥粉末ワクチンがカニクイザルにおいて免疫応答を誘発できるか否かを調べて、従来の経鼻および注射液体製剤と比較した。カニクイザルは、ヒトと類似の鼻腔の解剖学的構造および類似の免疫応答を有する。乾燥粉末ワクチンを、急速凍結後のフリーズドライプロセスを用いて、不活化全H5N1AVietnam11942004株抗原から調製し、前記の微結晶性セルロース担体と混和した。経鼻インフルエンザH5N1ワクチン粉末製剤20mg毎に、不活性全H5N1ウイルス589μgを、トレハロース29mg、Ceolus登録商標PHF20JP127mg、Ceolus登録商標PH30120mg、および第三リン酸カルシウム008mgと共に送達する。各条件において、H5N1抗原30μgを投与した。1群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末20mgを投与した総抗原30μg;2群には、各鼻孔に経鼻インフルエンザスプレー015mLを投与した総抗原30μg;および3群には、液体ワクチン03mLを筋肉内注射IMによって投与した。ワクチンを投与して、図10のスケジュールに従って試料を採取した。試料を、実施例1に概要した方法に従って、酵素結合免疫吸着測定法ELISAによって試験した。本試験において採取した試料中で測定したELISA抗体力価の結果を図11および12に示す。図11は、異なるインフルエンザワクチン製剤に曝露されたサルによって産生されたsIgA11BおよびIgG11Aの力価を提供する。図12は、異なる線によって示される異なる動物に関するデータのグラフ表示を提供する。液体製剤の注射にはよってワクチン接種した動物3群は、その試験における最高のIgG力価を生じた;しかし、この同じ群はほぼ検出不可能なsIgA抗体レベルを生じた。経鼻液体製剤を用いてワクチン接種した動物2群は、この実験において最低レベルのIgG抗体を産生した;この群はまた、低レベルのsIgA抗体を産生した。経鼻粉末製剤によってワクチン接種した動物1群は、経鼻ワクチンのIgG抗体の最高レベルを産生した;経鼻粉末製剤はまた、sIgA抗体レベルによって測定した場合に最高レベルの免疫応答を誘発した。これらの結果は、H5N1経鼻粉末ワクチン製剤によって処置した動物において、sIgAおよびIgG抗体力価の双方の上昇に成功したことを示している。実施例2C:ストレス条件下での安定性試験の試験方法および結果本実験において、実施例2Aに記述されるように調製した乾燥粉末H5N1ワクチン製剤の安定性を、ストレス条件に供して、H5N1経鼻インフルエンザスプレー製剤と比較する。カプセル化H5N1インフルエンザワクチン粉末を、60°Cおよび相対湿度0で貯蔵して、2および3週間の時点で調べた。2週間目では、粉末は微粒子からなった;しかし、3週間目では、粉末の部分的凝集が観察された。別の試験において、H5N1インフルエンザワクチン粉末を1回使用送達装置ShinNipponBiomedicalLaboratoryLTDに充填して、酸素および水分吸収乾燥剤PharmaKeepKC20MitsubishiGasChemicalCompanyIncと共にアルミニウムキャニスター中で60°Cおよび相対湿度75で2週間貯蔵したところ、その後でも粉末はなおも微粒子からなった。なおもう1つの試験において、H5N1インフルエンザワクチン粉末をボトルに入れて、60°Cおよび相対湿度0で貯蔵して、HA効力を2および3週目の時点で調べた。いずれの時点においても、H5N1経鼻ワクチン粉末のHA効力は安定であった。HA効力のもう1つの試験において、H5N1インフルエンザワクチン粉末をボトルに入れて、酸素および水分吸収乾燥剤PharmaKeepKC20MitsubishiGasChemicalCompanyIncと共に60°Cおよび相対湿度75で2週間貯蔵したところ、その後のHA効力は安定であると決定された。これらの結果を表4に要約する。H5N1経鼻粉末ワクチンとは対照的に、ポリプロピレンマイクロチューブに貯蔵したH5N1経鼻スプレーワクチンは、60°Cで2週間後全てのHA効力を失った。このことは、経鼻粉末製剤では、上昇した温度での安定性の増加が達成されることを証明している。表4H5N1インフルエンザワクチン粉末ストレス試験の結果実施例3:3つのHAスプリット不活化株乾燥ワクチン粉末製剤の混合物の調製および試験本実施例において、3つのスプリット不活化株の混合物H1N1ACalifornia72009、H3N2AVictoria2102009、およびBBrisbane602008-集合的に三価HAインフルエンザを含む経鼻粉末ワクチンの様々な乾燥粉末製剤を生成して試験する。実施例3A:急速凍結プロセスを用いる三価HAインフルエンザワクチン粉末の調製本実験は、三価のHAインフルエンザ経鼻ワクチン粉末を生成するために、急速凍結および乾燥プロセスにおいて用いるための最適な抗原安定化剤および抗原対安定化剤比を決定するために行った。全般的製造プロセスを図2および3に概要する;三価HAインフルエンザ経鼻ワクチン製剤の生成に関する具体的詳細を以下に提供する。4つの抗原対安定化剤比を試験した1:26、1:56、1:111、および1:222;以下に引用した数値は、1:111比の製剤に対応する。10mLボトルにおいて、三価HAインフルエンザH1N1ACalifornia72009、H3N2AVictoria2102009、およびBBrisbane602008、DenkaSeikenCoLtdを含有する009mgmLの抗原溶液06mLを、超純水02mL中で安定化剤トレハロース、マンニトール、またはラクトース6mgと混合して、最終的な抗原対安定化剤比1:111を生じる。混合物を液体窒素中で10分間急速凍結して、インフルエンザ粉末を4段階フリーズドライプロセスによって生成する:40°C、140mtorr未満で24時間;30°C、130mtorr未満で36時間;10°C、100mtorr未満で4時間;および20°C、50mtorr未満で4時間。得られた粉末は、粉末1mgあたり46μgより多くの抗原を含有する。インフルエンザワクチン粉末を、比表面積が13m2gより大きい経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび第三リン酸カルシウムTCPCa32と混合混和する。インフルエンザワクチン粉末9775mg、インフルエンザワクチンタンパク質045mgを含むを、Ceolus登録商標PHF20JP微結晶性セルロース平均粒子径:57μm;かさ密度:023gcm3;比表面積23m2g3502mg、Ceolus登録商標PH301微結晶性セルロース平均粒子径:39μm;かさ密度:041gcm3500mg、およびTCP20mgと10mLガラスボトル中で混和して、ボルテックスミキサーを用いて成分を1分間混和する。得られた乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤は、乾燥インフルエンザワクチン粉末製剤25mgあたり45μgより多くのインフルエンザワクチンタンパク質を含有する。トレハロース、マンニトール、およびラクトースを抗原対安定化剤比1:26で用いる調製物は、微粒子からなる不安定な粉末を生じた。トレハロースおよびラクトース含有製剤はいずれも、抗原対安定化剤比1:56および1:111で微粒子サイズの安定な粉末を生じた;これらの比率では、安定化剤としてマンニトールを用いると、微粒子サイズの不安定なHA効力を生じた。抗原対安定化剤比1:222では、トレハロースおよびラクトース含有製剤はいずれも、安定なHA効力を有するケーキ状粉末を生じた;同じ比率で、マンニトール含有製剤は、微粒子からなる安定な粉末を産生した。結果を表5に要約する。表5急速凍結技術によって生成された三価HAインフルエンザワクチン粉末実施例3B:ストレス条件下での安定性試験の試験法および結果本実験において、急速凍結プロセスを用いて調製して、微結晶性セルロース担体と混和した乾燥粉末三価HAインフルエンザワクチン製剤の安定性を、ストレス条件下で試験して、経鼻スプレー三価HAインフルエンザワクチン製剤と比較する。カプセル化三価HAインフルエンザワクチン粉末を60°Cおよび相対湿度0で貯蔵して、2および3週間の時点で調べた。2週間目では、粉末は微粒子からなった;しかし、3週間目では、粉末の部分的凝集が観察された。なおもう1つの試験において、三価HAインフルエンザワクチン粉末をボトルに入れて60°Cおよび相対湿度0で貯蔵して、2および3週間の時点でHA効力に関して調べた。いずれの時点においても、三価HA経鼻ワクチン粉末のHA効力は安定であった。これらの結果を表6に要約する。三価HA経鼻粉末ワクチンとは対照的に、ポリプロピレンマイクロチューブにおいて貯蔵した経鼻スプレー三価HA経鼻スプレーワクチンは、60°Cで2週間後に全てのHA効力を失った。このことは、経鼻粉末製剤では、上昇した温度での安定性の増加が達成されることを証明している。表6ボトル詰めした三価HAインフルエンザおよび粉末ワクチンのストレス試験の結果実施例4:破傷風トキソイドTTx乾燥ワクチン粉末製剤の調製および試験本実施例において、破傷風トキソイドTTxワクチンの様々な乾燥粉末製剤を生成して試験する。本発明の好ましい態様をまた、TTxワクチンの従来の液体注射製剤と比較して試験する。実施例4A:急速凍結プロセスを用いる破傷風トキソイドワクチン粉末の調製本実験は、破傷風トキソイド経鼻ワクチン粉末を生成するため、急速凍結および乾燥プロセスにおいて用いるための最適な抗原安定化剤および抗原対安定化剤比を決定するために行った。全般的製造プロセスを図2および3に概要する;破傷風トキソイド経鼻ワクチン製剤の作製に関する具体的詳細を以下に提供する。5つの抗原対安定化剤比1:26、1:53、1:111、1:231、および1:420より上を試験した;以下に引用する数値は1:53比の製剤に対応する。10mLボトルにおいて、008mgmL未満の吸着破傷風トキソイド抗原溶液DenkaSekenCoLTD05mLを、超純水03mL中で安定化剤トレハロース、マンニトール、またはラクトース21mgと混合して、最終的な抗原対安定化剤比1:53を生じた。混合物を液体窒素中で10分間急速に凍結して、抗原粉末を4段階フリーズドライプロセスによって生成する:40°C、140mtorr未満で24時間;30°C、130mtorr未満で36時間;10°C、100mtorr未満で4時間;および20°C、50mtorr未満で4時間。得られた粉末は、粉末1mgあたり抗原47μg未満を含有する。破傷風トキソイドワクチン粉末を、比表面積が13m2gより大きい経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび第三リン酸カルシウムTCPCa32と混合混和する。破傷風トキソイドワクチン粉末854mg未満、抗原タンパク質004mg未満を含むを、Ceolus登録商標PHF20JP微結晶性セルロース平均粒子径:57μm;かさ密度:023gcm3;比表面積23m2g3546mg、Ceolus登録商標PH301微結晶性セルロース平均粒子径:39μm;かさ密度:041gcm35mg、およびTCP02mgと10mLガラスボトル中で混和して、ボルテックスミキサーを用いて成分を1分間混和する。得られた乾燥破傷風トキソイドワクチン粉末製剤は、総粉末25mgあたり抗原タンパク質20μg未満を含有する。トレハロース、マンニトール、およびラクトースを用いると、抗原対安定化剤比1:26、1:53、1:105、および1:210で微粒子からなる抗原粉末を産生した。抗原対安定化剤比1:420では、3つ全ての安定化剤トレハロース、マンニトール、およびラクトースは、ケーキ状粉末を生じた。結果を表7に要約する。表7急速凍結技術によって生成された破傷風トキソイドワクチン粉末実施例4B:経鼻破傷風トキソイドワクチン粉末製剤の試験計画および結果本実験において、破傷風トキソイド経鼻粉末ワクチンがカニクイザルにおいて免疫応答を誘発できるか否かを試験して、従来の注射液体製剤と比較する。カニクイザルは、ヒトと類似の鼻腔の解剖学的構造および類似の免疫応答を有する。急速凍結後のフリーズドライプロセスを用いて、吸着破傷風トキソイド抗原から乾燥粉末ワクチンを調製して、これを実施例4Aに記述される微結晶性セルロース担体と混和する。経鼻破傷風トキソイドワクチン粉末製剤25mgあたり、吸着破傷風トキソイド抗原25Lfをトレハロース11mg、Ceolus登録商標PHF20JP179mg、Ceolus登録商標PH30126mg、および第三リン酸カルシウム01mgと共に送達する。複数の投与レベルを比較する。1群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末25mgを投与する5Lf用量;2群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末25mgを2回投与する10Lf用量;3群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末25mgを4回投与する20Lf用量;および4群には、液体ワクチン20mLを皮下注射によって投与する10Lf用量。ワクチンを投与して、試料を図13のスケジュールに従って採取する。試料を、実施例1に概要される方法に従って、酵素結合免疫吸着測定法ELISAおよび酵素結合免疫吸着スポットELISpotによって試験する。ELISpotアッセイを以下のように行った。非コンジュゲートマウス抗ヒト/サルインターフェロンγIFNγモノクローナル抗体、クローンGZ415μgmL、MabTechSwedenをマルチスクリーンプレートMilliporeUSAに加えて、4°Cで終夜インキュベートした。翌日、プレートをAIMVLifeTechnologiesUSA完全培地によってブロックした。サル全血から分離した末梢血単核球細胞PBMC4×105個および吸収破傷風トキソイド25mLを加えて、プレートを37°Cで24時間インキュベートした。ウェルをPBSによって洗浄して、1μgmLビオチニル化マウス抗ヒトIFNγモノクローナル抗体、クローン7B61MabTechを加えた。室温で2時間インキュベートした後、ウェルをPBSによって洗浄した。1:1000倍希釈したストレプトアビジンアルカリホスファターゼMabTechを加えた。室温で1時間インキュベートした後、ウェルをPBSによって洗浄した。染色は、5ブロモ4クロロ3インドリルホスフェート/ニトロブルーテトラゾリウムBCIPNBTplus基質MossUSAを用いて行った。プレートを乾燥させて、各ウェルにおけるスポット数をからの尺度で評価した。本試験において採取した試料中で測定した抗体力価を図14および15に示す。図14Aは、異なるインフルエンザワクチン製剤に曝露されたサルによって産生された血清中IgGの吸光度比を提供する;図14Bは、それらの同じ結果のグラフ表示である。図15は、採取した血清試料のELISpot試験の結果を表にしている。図15でのスコアは以下のとおりである:は、陰性対象レベルを示し、は低レベルを示し、は中等度のレベルを示し、およびは高レベルを示す。ELISAおよびELISpot試験の双方において、TTxワクチンの注射液体製剤は、最大の免疫応答を生じた。経鼻粉末の20Lf用量は、ELISAによって測定した場合に試験のあいだのIgG抗体力価の検出可能な増加を誘導した。ELISpot測定は、TTx経鼻粉末ワクチンの3つ全ての用量が、用量依存的な免疫応答を生じることができることを示した。実施例5:ジフテリアトキソイドDTx乾燥ワクチン粉末製剤の調製および試験本実施例において、ジフテリアトキソイドワクチンの様々な乾燥粉末製剤を生成して、試験する。本発明の好ましい態様をまた、ジフテリアトキソイドワクチンの従来の液体注射製剤と比較して試験する。処理の際のジフテリアトキソイド抗原の安定性を試験するために、前記で詳述した急速凍結およびフリーズドライプロセスによって産生された抗原粉末を、液体製剤中で再水和した。この製剤を、以下で再構成粉末と呼ぶ。実施例5A:急速凍結プロセスを用いるジフテリアトキソイドワクチン粉末の調製本実験は、ジフテリアトキソイド経鼻ワクチン粉末を作製するために、急速凍結および乾燥プロセスにおいて用いるための最適な抗原安定化剤、および抗原対安定化剤比を決定するために行った。全般的製造プロセスを図2および3に概要し;ジフテリアトキソイド経鼻ワクチン製剤の生成に関する具体的詳細を以下に提供する。5つの抗原対安定化剤比25Lf:11mg、25Lf:21mg、25Lf:42mg、25Lf:84mg;および25Lf:168mgを試験した;以下に引用される数値は25Lf:21mg比の製剤に対応する。10mLボトルにおいて、5LfmL吸着ジフテリアトキソイド抗原溶液DTxResearchInstituteforMicrobialDiseaseOsakaUniversityを、超純水03mL中で安定化剤トレハロース、マンニトール、またはラクトース21mgと混合して、最終的な抗原対安定化剤比25Lf:21mgを生じる。混合物を液体窒素中で10分間急速凍結して、抗原粉末を4段階のフリーズドライプロセスによって生成する:40°C、140mtorr未満で24時間;30°C、130mtorr未満で36時間;10°C、100mtorr未満で4時間;および20°C、50mtorr未満で4時間。得られた粉末は、粉末1mgあたり抗原028Lf未満を含有する。ジフテリアトキソイドワクチン粉末を、比表面積が13m2gより大きい経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび第三リン酸カルシウムTCPCa32と混合混和する。ジフテリアトキソイドワクチン粉末1mg、抗原タンパク質028Lf未満を含むを、Ceolus登録商標PHF20JP微結晶性セルロース平均粒子径:57μm;かさ密度:023gcm3;比表面積23m2g3596mg、Ceolus登録商標PH301微結晶性セルロース平均粒子径:39μm;かさ密度:041gcm35mg、およびTCP02mgと10mLガラスボトル中で混和して、ボルテックスミキサーを用いて成分を1分間混和する。得られた乾燥ジフテリアワクチン粉末製剤は、総粉末25mgあたり抗原タンパク質125Lf未満を含有する。結果を表8に要約する。トレハロース、マンニトール、またはラクトースを用いると、抗原対安定化剤比25Lf:11mg、25Lf:21mg、25Lf:42mg、および25Lf:84mgで微粒子からなる粉末を生成した。抗原対安定化剤比25Lf:168mgでは、用いた3つ全ての安定化剤が、このプロセスを用いてケーキ状粉末を生成した。表8急速凍結技術によって生成されたジフテリアトキソイドワクチン粉末実施例5B:経鼻ジフテリアトキソイドワクチン粉末製剤の試験計画および結果本実験において、ジフテリアトキソイド経鼻粉末ワクチンがカニクイザルにおいて免疫応答を誘発できるか否かを調べて、従来の注射液体製剤および再構成粉末製剤と比較する。カニクイザルは、ヒトと類似の鼻腔の解剖学的構造および類似の免疫応答を有する。急速凍結後のフリーズドライプロセスを用いて、吸着ジフテリアトキソイド抗原から乾燥粉末ワクチンを調製して、これを前記の微結晶性セルロース担体と混和した。経鼻ジフテリアトキソイドワクチン粉末製剤25mgあたり、ジフテリアトキソイド抗原125Lfを、トレハロース11mg、Ceolus登録商標PHF20JP213mg、Ceolus登録商標PH30130mg、および第三リン酸カルシウム012mgと共に送達する。1群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末25mg25Lf用量を投与した;2群には、液体ワクチン10mL5Lf用量を皮下注射によって投与した;および3群には、再構成した粉末ワクチン10mL5Lf用量を皮下注射によって投与した。ワクチンを投与して、試料を図16のスケジュールに従って採取する。試料を、実施例1に概要される方法に従って、酵素結合免疫吸着測定法ELISAによって試験した。本実験において測定した抗体力価を図17に示す。図17Aは、血清中IgGの吸光度比の表である;17Bは、17Aのデータの棒グラフ上段および折れ線グラフ下段である。再構成した粉末製剤および従来の注射液体製剤は、血清中IgGレベルの増加の誘導に成功した。経鼻粉末製剤もまた、注射製剤の用量の半分を投与したにもかかわらず、IgG抗体力価の増加に成功した。併せて考慮すると、これらの結果は、本明細書において開示される急速フリーズドライ方法論が、動物においてジフテリアトキソイドワクチンの効力を保存することを示している。実施例6:卵白アルブミン乾燥ワクチン粉末製剤の調製および試験本実施例において、卵白アルブミンOVA、SIGMAA5503IGの乾燥粉末製剤を生成して、カニクイザルにおいて免疫応答を誘発できるか否かを試験する。経鼻投与乾燥ワクチン粉末製剤を従来の経鼻製剤および注射液体製剤と比較する。結果は、本明細書において記述される製剤を用いる例示的なタンパク質抗原の経鼻投与が動物において免疫応答を誘発できることを証明している。実施例6A:卵白アルブミン乾燥ワクチン粉末の調製ホモジナイズした卵白アルブミンhOVA経鼻粉末の3つの製剤を、異なる量のhOVAを、比表面積が13m2gより大きい経鼻担体たとえば、微結晶性セルロースおよび第三リン酸カルシウムTCPCa32と混和することによって生成する。hOVAは粉末型で提供されることから、急速凍結後のフリーズドライ段階は必要でなかった。製剤1において、hOVA粉末133mgを、CeolusPHF20JP3541mg、CeolusPH30140mg、および第三リン酸カルシウムTCP16mgと10mLボトル中で混合して、ボルテックスミキサーを用いて1分間混和する。得られた混合物は、粉末製剤30mgあたり抗原1mgを含有する。製剤2において、hOVA粉末667mgを、CeolusPHF20JP2917mg、CeolusPH30140mg、および第三リン酸カルシウムTCP16mgと10mLボトル中で混合して、ボルテックスミキサーを用いて1分間混和する。得られた混合物は、粉末製剤30mgあたり抗原5mgを含有する。製剤3において、hOVA粉末200mgを、CeolusPHF20JP1584mg、CeolusPH30140mg、および第三リン酸カルシウムTCP16mgと10mLボトル中で混合して、ボルテックスミキサーを用いて1分間混和する。得られた混合物は、粉末製剤30mgあたり抗原15mgを含有する。実施例6B:経鼻卵白アルブミンワクチン粉末製剤の試験計画および結果本実験において、卵白アルブミン経鼻粉末ワクチンがカニクイザルにおいて免疫応答を誘発できるか否かを試験して、hOVAをリン酸緩衝液に溶解する従来の注射および経鼻液体製剤と比較する。カニクイザルは、ヒトと類似の鼻腔の解剖学的構造および類似の免疫応答を有する。乾燥粉末ワクチンを、ホモジナイズした卵白アルブミン粉末から調製して、これを前記の賦形剤と混和した。1群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末製剤1の30mg2mg用量を投与した;2群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末製剤2の30mg10mg用量を投与した;3群には、各鼻孔に経鼻ワクチン粉末製剤3の30mg30mg用量を投与した;4群には、各鼻孔に液体ワクチン01mL20mg用量を投与した;5群には、各鼻孔に液体ワクチン01mL30mg用量を投与した;6群には、液体ワクチン10mL20mg用量を皮下注射によって投与した;および7群には、液体ワクチン10mL30mg用量を皮下注射によって投与した。ワクチンを投与して、試料を図18のスケジュールに従って採取した。試料を、実施例1に概要した方法に従って、酵素結合免疫吸着測定法ELISAによって試験した。本実験の際に採取した血清試料中で測定したIgG抗体力価を図19に示す。図19Aは、IgG抗体力価の表である;19Bは、19Aのデータの棒グラフ上段および折れ線グラフ下段表示である。経鼻粉末製剤および注射液体製剤はいずれも、類似の高レベルまで免疫応答を誘発することが可能であった;しかし、最高力価は、経鼻粉末製剤によって処置した動物においてより初期の時点で検出された。経鼻液体製剤は、IgG抗体力価によって測定した場合に検出可能な免疫応答を誘発することができなかった。本実験の際に採取したこの血清試料中で測定したsIgA抗体力価を図20に示す。図20Aは、sIgA抗体力価の表であり;20Bは20Aのデータの棒グラフ上段および折れ線グラフ下段表示である。sIgA抗体力価によって測定した場合、経鼻粉末製剤のみが検出可能な免疫応答を誘発することができた。sIgA力価の増加は、経鼻液体または注射液体製剤のいずれをワクチン接種した動物においても検出されなかった。併せると、これらの結果は、本明細書において記述される経鼻粉末製剤が、例示的なタンパク質抗原を用いて動物において粘膜および全身免疫原性の双方を誘発できることを示唆している。本発明の好ましい態様を、本明細書において示して記述してきたが、そのような態様は、単なる例として提供されるに過ぎないことは当業者に明らかであろう。多数の変更、変化、および置換が当業者に想起されるが、それらも本発明に含まれるであろう。本明細書において記述される本発明の態様に対する様々な代替を、本発明の実践において使用してもよいと理解すべきである。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を定義して、これらの特許請求の範囲およびその同等物の範囲内の方法および構造がそれによって範囲に含まれると意図される。