骨吸収が認められる疾患の治療または予防のための医薬品として用いるための単離されたHLAGのアイソフォーム。前記疾患が、骨粗鬆症、オステオペニア、骨折、ページェット病よび溶骨性腫瘍からなる群より選択されることを特徴とする請求項1に記載のアイソフォーム。可溶性アイソフォームである請求項1または2に記載のアイソフォーム。HLAG1およびHLAG5からなる群より選択され、好ましくはHLAG5であることを特徴とする請求項1または2に記載のアイソフォーム。単量体型であることを特徴とする請求項1~4のいずれか1項に記載のアイソフォーム。多量体型であることを特徴とする請求項1~4のいずれか1項に記載のアイソフォーム。単離されたHLAGのアイソフォームと、少なくとも1種の医薬的に許容され得る媒体とを含む、骨吸収が認められる疾患の治療または予防のための医薬品として用いるための医薬組成物。上記に鑑みると、それゆえに、骨リモデリングの機能異常の治療または予防のための、特に骨粗鬆症の治療ための分子を得る必要がある。骨粗鬆症の治療のために用いられる主な分子は、破骨細胞の活性化を阻害するバイホスホネートのファミリーに属する化学合成分子であるか、または、RANKLの競合的阻害剤であるオステオプロテゲリンの作用を模倣したヒト化抗体のいずれかである。RANKLは、TNF関連活性化誘導サイトカイン、オステオプロテゲリンリガンドまたは破骨細胞分化因子とも呼ばれ、破骨細胞の形成の誘導およびそれらの活性化による骨代謝に関連するサイトカインである。オステオプロテゲリンは、TNF受容体のファミリーに属し、RANKLに結合する可溶性受容体である。OPGがRANKLに結合することにより、後者と、破骨細胞および単球により発現されるRANK受容体との相互作用が阻害される。それゆえ、RANKLおよびOPGは、破骨細胞の分化および活性化にとって重要な役割を果たしている。本発明者らは、予期せぬことに、種々の単離されたHLAGのアイソフォーム、特に可溶性アイソフォームが、インビトロで、骨マトリックスの吸収する生物学的機能を有する破骨細胞の形成を阻害できることのみならず、破骨細胞形成も阻害できることを示した。したがって、HLAGのアイソフォームは抗骨吸収剤として用い得る。よって、本発明の目的は、骨吸収が認められる疾患の治療または予防のための医薬品として用いるための、単離されたHLAGのアイソフォームである。骨吸収が認められる関連疾患のうち、骨粗鬆症、オステオペニア、骨折、ページェット病よび溶骨性腫瘍が挙げることができる。HLAGのアイソフォームという表現は、HLAGの膜アイソフォームおよび可溶性アイソフォームから選択されるHLAGのアイソフォームを意味するものと理解される。単離されたという表現は、それが本来会合していた混合物または媒介物から分離されたHLAGのアイソフォームを意味するものと理解される。よって、HLAGの膜アイソフォームを本発明の実施のために用いる場合、このアイソフォームは、細胞膜から、例えば、幹細胞、特に胎盤の幹細胞の細胞膜などから分離されたことを意味する。一例として、膜アイソフォームは、国際出願PCTWO9837098に記載の方法に従って、真核細胞に有利に発現させることができ、そして、膜の処理および精製によって可溶化することができる。本発明の好ましい実施形態によれば、上記のHLAGのアイソフォームは、HLAG1およびHLAG5からなる群から選択され、HLAG5が望ましい。本発明によれば、用いられるHLAGのアイソフォームは、以下のいずれかである:溶液中で二量体を任意に形成できる遊離型、または多量体型、特にビーズ上での凝集型、よってHLAG分子が、HLAG分子の機能的に最適な高次構造であると記載されている多量体の形態になる。実際に、HLAGの二量体は、単量体と比較して、HLAG受容体について大きく増強した親和性を示すと記載されている。骨吸収が認められる疾患の治療におけるHLAGのアイソフォームの使用は、代替療法、または通常行われる治療法と組み合わせた補完療法を構成することができる。本発明の主題は、上記の単離されたHLAGのアイソフォームと、少なくとも1種の医薬的に許容され得る媒体とを含む、上記の骨吸収が認められる疾患の治療または予防のための医薬組成物でもある。上記の医薬組成物の好ましい実施形態によれば、医薬組成物は、幹細胞、特に胎盤の幹細胞を含まない。上記の組成物の実施形態の一つによれば、上記の医薬的に許容され得る媒体は、非経口投与に適する。投与は、例えば、静脈内、筋肉内または皮下であり得る。上記の組成物の別の有利な実施形態によれば、上記の医薬的に許容され得る媒体は、経口投与に適する。上記の組成物の別の有利な実施形態によれば、上記の医薬的に許容され得る媒体は、吸入による投与に適する。皮下投与に用いられる液剤または懸濁剤は、典型的に、1種以上の以下の化合物を含む:滅菌希釈剤、例えば、注射用水、等張および緩衝生理食塩水、または油、ポリエチレングリコール、グリセリン、ポリプロピレングリコールもしくはその他の合成溶媒;抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン;抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム;キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸;緩衝剤、例えば、アセテート、シトレートまたはホスフェート;及び浸透圧調整剤、例えば、塩化ナトリウムまたはブドウ糖。pHは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基を用いて調整できる。そのような調製物は、アンプル、ディスポーザブルシリンジまたはガラスもしくはプラスチックで作製された複数回用量の瓶の形態で提供され得る。注射に適する医薬組成物は、滅菌注射用液剤または散剤を使用直前に調製するための滅菌水性液剤、滅菌分散剤もしくは散剤を含む。静脈内投与のために、好ましい媒体は、生理食塩水、静菌水、CremophorELTMまたはPBSバッファーを含む。全ての場合において、組成物は無菌で流体でなければならない。これは、調製および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌または真菌のような微生物の汚染作用に対する防腐剤を含まなければならない。例を挙げると、媒体は、例えば、水、エタノール、ポリオールおよびこれらの化合物の混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適当な流動性は、例えば、レシチンを用いるか、または界面活性剤を用いることにより維持できる。微生物の作用は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸およびチメロサールの使用により防ぐことができる。上記の組成物は、等張剤、例えば、糖類、またはマンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール類、または塩化ナトリウムも含み得る。注射用組成物の持続作用は、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを製剤に加えることにより得ることができる。本発明の主題は、上記の骨吸収が認められる疾患の治療または予防を意図する医薬品を製造するための、上記のHLAGのアイソフォームまたは医薬組成物の使用でもある。本発明の主題は、上記のHLAGのアイソフォームまたは医薬組成物の治療的有効量を、骨吸収の阻害が必要な対象に投与することを含む、該対象における骨吸収の阻害方法でもある。上記の特徴に加えて、本発明は、HLAGのアイソフォームによるインビトロでの破骨細胞の阻害を示す実施例および添付の図面を参照する以下の記載から明らかとなる他の特徴を含む。添付の図面では:実施例:HLAGのアイソフォームによる破骨細胞のインビトロでの阻害1材料および方法a間葉系幹細胞間葉系幹細胞は腸骨稜の骨髄の穿刺から得た。それらは、トルソー中央病院大学の整形災害外科部門に、股関節全置換移植のため入院している健常なボランティア患者から得た。患者の同意を書面で得た。b骨肉腫株5種の骨肉腫株MG63、Cal72、HOS、U2OSおよびSaOS2は当業者に公知である。それらは、Billiauら、Rochetら、Foghら、PontenおよびSaksela、およびRhimらに記載されている。c末梢血リンパ球血液を、EtablissementsFrancaisduSangにて健常なボランティアから集めた。フィコール勾配での分離後、全血単核細胞を取得して、細胞のリングを一晩培養して接着性単球を除いた。計数後、上清に含まれる非接着性PBLを共培養に用いた。dBEBV細胞BEBV細胞は、エプスタインバーウィルスで形質転換したB細胞である。それらはSauceらに記載されている。eCD14pos細胞CD14pos細胞は、精製キットMiltenyiCD14マイクロビーズキットを供給業者の推奨に従って用いて、PBMCから選択された。f細胞培養および選択輸送後、クエン酸デキストロース中に収め、骨髄細胞検体を培養フラスコに直接入れた。培養培地は48時間ごとに交換した。非接着性細胞を除いた。培養の7~15日後、コンフルエントに達した接着細胞を、05のトリプシンを用いて剥離して、新たな増殖のために200000細胞/cm2で特徴付けまたは再播種するために懸濁した。細胞を、5CO2の湿潤雰囲気かつ温度37°Cのインキュベーター内で維持した。g培養培地増殖培地用いた増殖培地は、アルファ最小必須培地、10ウシ胎仔血清、1ペニシリンストレプトマイシンおよびLグルタミンおよびファンギゾンで構成される。これと同じ培地で骨肉腫性株を培養した。骨細胞分化培地この培地は、αMEM、005×103Mアスコルビン酸、10×103Mβグリセロリン酸および50ngmlのBMP4で構成される。これは、14日の培養後に骨細胞分化を可能にする。破骨細胞誘導培地CD14pos細胞を、MCSF25ngmlおよびRANKL30ngmlを補った培地を含む96ウェルプレート中で15日間培養した。ウェルの底面に接着しているTRAP陽性の多核細胞の数の定量を20日目に行った。TRAP活性は、TRAPアッセイキットを用いて検出した。M8HLAG5株もしくはM8対照ベクター株によりパッケージされた培地または組換え型ヒトHLAG5を、破骨細胞誘導培地に添加することができた。樹状細胞分化培地PBMC由来CD14pos細胞を、50ngmlのrhGMCSFおよび20ngmlrhIL4を含む培地中で6日間培養した。これは、陽性対照培地を構成した。CD14pos細胞培地の画分に、対照抗体を含むかまたは抗HLAGブロッキング抗体を含むMSCの上清のいずれかを添加した。培養の6日後、細胞を回収してフローサイトメトリで解析した。hフローサイトメトリ膜の抗原を検出するために、200000個の生細胞を、蛍光色素が結合した特異的モノクローナル抗体で標識する。細胞内の抗原を検出するために、CytofixCytopermキットを供給業者の推奨に従って用いて、細胞を固定および透過処理する。標識は、暗闇での4°Cで30分のインキュベーションでなされた。次いで、細胞をリン酸緩衝生理食塩水ですすいで、CellFIXで固定した。そして、細胞を、488nmの波長を射出するアルゴンレーザを搭載したフローサイトメータ、BectonDickinsonにかけた。データを、CellQuest31ソフトウェアを用いて解析した。その結果を、バックグラウンドノイズの平均蛍光強度に対する検出シグナルの平均蛍光強度の比として示した。HLAGを検出するために用いた抗体は、87Gクローンにより産生され、Alexa488が結合した抗体、MEMG9クローンにより産生され、APCが結合した抗体、5A6G7クローンにより産生され、Alexa488が結合した抗体であった。RANKLを検出するために用いた抗体は、MIH24クローンにより産生される抗体であった。ILT2を検出するために用いた抗体は、VMP55クローンにより産生される抗体であった。ILT4を検出するために用いた抗体は、42D1クローンにより産生される抗体であった。CD14を検出するために用いた抗体は、134620クローンにより産生される抗体であった。CD1aを検出するために用いた抗体は、HI149クローンにより産生される抗体であった。i共焦点顕微鏡検査される細胞を、スライドに1cm2の表面積を有するウェルチャンバー、NuncInternational、ロチェスター、ニューヨーク、USAに10000細胞/ウェルで播種した。培養の48時間後、それらを4パラホルムアルデヒドで10分間固定した。PBS、05FCSおよび01tritonX100の溶液による室温で5分間の透過処理工程が、細胞内タンパク質の同定のために必要であった。次いで、細胞を4°Cで1時間、抗リン酸化チロシン一次抗体または抗SHP1一次抗体、およびAlexa488または594型の蛍光色素が結合した、対応する二次抗体と連続的にインキュベートした。すすぎの後、封入剤を添加した。対照抗体を含むウェルを陰性対照とした。スライドを共焦点顕微鏡の下で調べた。j混合リンパ球培養物:混合リンパ球培養物を96ウェルプレートに調製した。PBLを105個の割合で播種した。BEBVに放射線を照射し、5×104個で用いた。MSCを5×104個の割合で共培養した。BMP4を20ngmlの濃度でD0およびD3に用いた。共培養の6日後、Brduの取り込みを、ユーロピウムが結合した抗Brdu抗体でモニターした。ユーロピウムの量を、Delfiaプロリファレーションキットを用いて測定した。DELFIAにより観察されたユーロピウムの蛍光は、合成されたDNAに比例し、それゆえリンパ球増殖に比例する。いくつかの実験において、フィトヘマグルチニンを10μgmlで用いてPBLを活性化させた。k免疫沈降μMACSプロテインAGマイクロビーズキットを用いて免疫沈降を行った。供給業者の推奨に従って、細胞検体を処理した。保持されていない分画の溶出後、免疫沈降されたタンパク質検体をウェスタンブロット法により解析した。lウェスタンブロット法1ドデシル硫酸ナトリウム、1mMオルトバナジウム酸ナトリウム、10mMTrispH74に抗プロテアーゼ溶液を補った所定のバッファーに、細胞を溶解した。検体をミニキットBCAPierceにより解析した。濃度の値を562nmにて分光光度計により求めた。ウェスタンブロット法により解析される予定の検体を、00625MTRIS、2SDS、20グリセロール、001ブロモフェノールブルー、02βメルカプトエタノールで構成される1×サンプルバッファーに加えて、95°Cに3分間置いた。ゲルをマウンティングキットに調製した。分離バッファー15mMTrisHClpH88、10アクリルアミド、0012TEMEDおよび005APSからなる10アクリルアミドを含む分離ゲルを注ぎ、そして、濃縮バッファーからなる4アクリルアミドを含む別の濃縮ゲルを上に載せた。重合の後、分子量マーカーと検体をウェル当たり10~20μgの割合で載せた。泳動バッファー中で、泳動を、70mVで15分間、100mVで5分間および120mVで泳動終了まで行った。転写器具およびアクリルアミドゲルを、2の予め調製した泳動バッファーおよび5メタノールからなる転写バッファーで平衡化した。転写を、予め水和させた045μmニトロセルロース膜に転写バッファー中で250mAにて2時間行った。転写後、膜を、PBSTween01、5ミルクに室温で1時間浸した。膜を、PBSTween01、5ミルクで希釈した抗SHP1一次抗体とともに4°Cで一晩インキュベートした。HRPが結合したウサギ抗ヤギ抗体を二次抗体として用いた。インキュベーションを室温で2時間行った。染色されたバンドが得られるまで、膜をHRP基質とともにインキュベートした。mELISAによる解析調製した種々の細胞培養物の上清に分泌されたHLAGおよびRANKLの濃度を測定した。HLAG5およびRANKLの測定のためのELISAキットを供給業者の推奨に従って用いた。2結果末梢血単球または樹状細胞から破骨細胞を得ることができたことが文献に報告されている。単球細胞がその表面にHLAGILT2受容体およびILT4受容体を発現することも知られている。単球細胞が骨髄のMSCとともに共培養される場合、単球細胞によるHLAGのILT2受容体およびILT4受容体の発現が保持されているかについて、そして、MSCがそれらを発現できるかについて研究が行われた。培養の約6日後、フローサイトメトリのデータより、CD14pos単球細胞のみがILT2およびILT4を発現したこと、およびこれらの発現が長期にわたり実際に保持されたことが示された。そして、HLAGが、単球の樹状細胞への分化の間または単球からの破骨細胞形成の間に、破骨細胞分化を阻害できるかを検討した。CD14posCD1aneg末梢血単球をGMCSFおよびIL4で刺激して、CD14negCD1apos樹状細胞を得た。細胞の大多数が、CD1aを発現している分画を含むCD14negになった対照の条件とは異なり、MSC培養物上清の添加によって細胞の分化が阻害された。CD1aを発現する細胞が検出されたので、抗HLAGブロッキング抗体の添加により、MSCで観察される阻害が部分的に向上した。そして、MCSFおよびRANKLの添加の後、CD14pos単球を直接、破骨細胞へと分化誘導した。所定の条件下で、そこに、iHLAG5をコードするcDNAをトランスフェクトしたかまたはしていないM8株によりパッケージされた培地の上清、またはii組換え型ヒトHLAG5を添加した。陽性対照およびMCCtrlの条件の下では、破骨細胞は容易に観察されたが、G5MCの条件下では、ほとんど観察されなかった。組換え型HLAG5を用いた条件下では、破骨細胞はめったに検出されなかった。よって、HLAG5は、単球からの破骨細胞の形成を阻害することができる。ILT2受容体およびILT4受容体は、それらの細胞質内部分にITIMモチーフを有していることが知られている。これらの受容体にそれらのリガンドが結合したとき、これらのモチーフは、SHP1型ホスファターゼをチロシンのレベルで活性化させることができる。それゆえ、正常CD14pos単球細胞またはTHP1株におけるSHP1の活性化を評価した。これらの細胞を、HLAGでコートしたビーズまたは陰性対照としてビーズ単独とともにインキュベートした。ビーズは、Najiらにより記述された方法に従って得た。図4に表される結果より、細胞をHLAGposビーズと接触させたときのリン酸化SHP1の明瞭な増加が示され、これは単球細胞の種類にかかわらない。さらに、CD14pos単球をMSCと共培養したとき、リン酸化チロシンおよびSHP1の発現の共局在が観察された。これらのデータより、HLAGが、単球細胞の分化を阻害するタンパク質の活性化を誘導することが示される。破骨細胞形成はRANKL分子に依存する。後者は、主にリンパ球細胞および破骨細胞自身により分泌され得る。よって、HLAG発現とRANKL発現との間に関連があるかについて検討した。図5Aより、混合リンパ球培養物の条件下で、MSCはリンパ球の増殖を阻害できることが示される。この効果を増強するのにBMP4の添加は必要ではない。次いで、これらの共培養物の上清におけるRANKLの分泌を定量した。MSCを含む各条件の下では、RANKLの分泌の有意な減少があることが観察され、これはリンパ球がPHAにより活性化された場合でさえも見られた。これらの結果より、MSCによるリンパ球の活性化の阻害はRANKLの分泌も減少させることが示唆される。本発明者らの幾人かは、この阻害はある程度HLAGに起因すること、および異種リンパ球とMSCとの相互作用がHLAGの培養培地への放出を誘導することをこれまでに示している。したがって、HLAGとRANKLとの発現の間に逆の関係が存在するのかを確認した。骨芽細胞分化を誘導することにより、MSCを誘導してRANKLを産生させた。実際、骨芽細胞がRANKLを産生することが知られている。骨芽細胞分化は、MSCにおけるHLAG1およびHLAG5の発現を減少させると同時にRANKLの発現を増加させた。この結果はELISA技術により確かめられた。すなわち、誘導されていない培養物とは異なり、誘導された培養物の上清においてRANKLを検出できた。次いで、この関係を、骨肉腫株由来の骨芽細胞において評価した。注目すべきことに、逆の関係がHLAGとRANKLの発現の間でまた観察された。CAL72、HOS、SaOs2およびU2OS株では、骨芽細胞分化の誘導により、HLAG1およびHLAG5の発現が減少すると同時にRANKLの発現が増加した。MG63株では、分化により、HLAGの発現が増加し、RANKLの発現が減少した。これらの結果より、MSCにより発現されたHLAGまたは骨芽細胞は骨吸収を2つの方法で阻害することが明らかである:破骨細胞形成を抑制することにより直接的に阻害するか、またはRANKLを分泌する細胞の活性化を阻害することにより間接的に阻害する。さらに、骨芽細胞において、HLAGとRANKLの発現の間に逆の関係が存在する。