"骨髄由来の自己複製コロニー形成体細胞CF-SCの単離集団または前記細胞由来の馴化細胞培養物を含む生体適合性もしくは生分解性のマトリックスであって、前記CF-SCが多能性分化能をもたず、前記CF-SCが正常核型を有し、前記CF-SCが不死化されず、前記CF-SCが、CD13、CD44、CD49c、CD90、HLAクラス-1およびβベータ2-ミクログロブリンを発現し、前記CF-SCが、CD10、CD34、CD45、CD62LまたはCD106を発現しない、マトリックス。請求項1に記載のマトリックスを含む組織またはネオ組織。さらに、薬学的に許容される化合物を含む、請求項1に記載のマトリックス。前記化合物が、脂質、タンパク質、核酸、抗炎症薬、抗生物質、ビタミン、およびミネラルからなる群から選択される、請求項3に記載のマトリックス。天然のまたは組換え型のヒト血漿タンパク質、ウシ血漿タンパク質、および/またはブタ血漿タンパク質からなる群から選択されるタンパク質を含む、請求項1に記載のマトリックス。前記タンパク質がトロンビンまたはフィブリノゲンである、請求項5に記載のマトリックス。前記マトリックスが、コラーゲンまたはポリグリコール酸を含む、請求項1に記載のマトリックス。前記マトリックスが、4mg/ml~6mg/mlの濃度でコラーゲンを含む、請求項1に記載のマトリックス。病状の治療を必要としている患者において病状を治療する方法であって、請求項1に記載のマトリックスと前記患者とを接触させる工程を包含する、方法。前記病状が皮膚科的dermatologicである、請求項9に記載の方法。前記創傷が、糖尿病患者の足の創傷、静脈性の足の潰瘍の創傷、または手術後の創傷である、請求項10に記載の方法。前記病状が整形外科的orthopedicである、請求項9に記載の方法。前記CF-SCが非ヒト供給源に由来する、請求項1に記載のマトリックス。前記非ヒト供給源が、ウマ供給源、ブタ供給源、イヌ供給源、ネコ供給源、ウシ供給源、ヒツジ供給源、ヤギ供給源、ラクダ供給源、マウス供給源からなる群から選択される、請求項13に記載のマトリックス。前記患者が非ヒト動物である、請求項9に記載の方法。医薬組成物を調製する方法であって、前記方法は:a可溶性コラーゲンを含む溶液を調製する工程;b骨髄由来の自己複製コロニー形成体細胞CF-SCの単離集団を懸濁する工程であって、ここで、前記CF-SCは多能性分化能をもたず、前記CF-SCは正常核型を有し、前記CF-SCは不死化されず、前記CF-SCは、CD13、CD44、CD49c、CD90、HLAクラス-1およびβベータ2-ミクログロブリンを発現し、前記CF-SCは、aの溶液中で、CD10、CD34、CD45、CD62LまたはCD106を発現しない、工程;ならびにcbの細胞懸濁液を組織の型に移す工程を包含する、方法。請求項1に記載のマトリックスを含む粉末。前記マトリックスが、コラーゲンまたはポリグリコール酸を含む、請求項17に記載の粉末。病状の治療を必要としている患者において病状を治療する方法であって、請求項17に記載の粉末と前記患者とを接触させる工程を包含する、方法。前記病状が、開放創、皮膚の変形、声帯瘢痕、第3度熱傷および歯周傷害からなる群から選択される、請求項19に記載の方法。本発明は、安定な細胞集団およびそれによって生成される組成物の生成および使用に関する。本発明は、主に、同種細胞の使用を含む治療に関する。しかし、自己細胞を用いて、これらの同じ治療を行うことも同様に可能であろう。本発明は、部分的に、皮膚創傷および免疫障害ならびに皮膚に関わる疾患などの皮膚科の病状の治療にも関する。本明細書で使用する安定な細胞集団という用語は、マウス、ラット、ヒト、イヌ、ウシなどの生存している哺乳類生物に導入した時に、軟骨細胞、脂肪細胞、骨細胞などの特殊化した1つまたは複数の細胞型に分化した細胞の検出可能な生成をもたらさない、単離され、インビトロ培養された細胞集団を意味し、この細胞集団の細胞は、膜結合型もしくは可溶性のTNF-α受容体、IL-1Rアンタゴニスト、IL-18アンタゴニスト、表1A、表1B、表1Cなどに示される組成物などの検出可能なレベルの少なくとも1つの治療上有用な組成物を発現するか、または発現する能力もしくは発現するように誘導される能力を維持する。本発明の安定な細胞集団の別の特徴は、これらの細胞が異所性分化を示さないということである。異所性という用語は、間違った場所または場違いという意味である。異所性という用語は、ギリシャ語の置換を意味するektopisに由来するekは外outoftoposは場所place=場違いoutofplace。例えば、異所性腎臓は、通常の場所にないものであり、または、子宮外妊娠は、異所性妊娠である。この文脈において、異所性分化の例は、心臓組織に導入された時に、骨組織に似た石灰化および/または骨化をもたらす細胞であろう。この現象は、例えば、間葉系幹細胞が心臓組織に注入された時に生じることが証明されている。BreitbachetalPotentialRisksofBoneMarrowCellTransplantationIntoInfarctedHeartsBloodVol110No4Aug2007を参照されたい。本発明は、様々な疾患および障害の治療のために、インビトロ培養し、増殖させた自己複製コロニー形成体細胞以下、CF-SCと称す、ならびにかかる細胞によって産生される生成物の生成および使用に関する。さらに、本発明は、様々な疾患および障害の治療のために、インビトロ培養し、大規模に増殖させた自己複製コロニー形成体細胞以下、exCF-SCと称す、ならびにかかる細胞によって産生される生成物の生成および使用にも関する。exCF-SCは、インビトロ培養中に、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加を経た自己複製コロニー形成体細胞CF-SCである。したがって、インビトロで増殖させた自己複製コロニー形成体細胞は、以下、CF-SCと称すその結果、特に明記しない限り、この用語は、インビトロで約30回未満の集団倍加例えば、約5回未満、約10回未満、約15回未満、約20回未満、約25回未満の集団倍加を経た細胞集団および約30回を超える、約40回を超える、または約50回を超える集団倍加を経た細胞集団の両方を包含する。CF-SCの一特定例は、ヒト成人骨髄由来体細胞以下、ABM-SCと称すである。さらに、exCF-SCの一特定例は、インビトロ培養中に、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加を経たヒト成人骨髄由来体細胞以下、exABM-SCと称すである。したがって、ABM-SCという用語は、特に明記しない限り、インビトロで約30回未満の集団倍加例えば、約5回未満、約10回未満、約15回未満、約20回未満、約25回未満の集団倍加を経たABM-SC細胞集団および約30回を超える、約40回を超える、または約50回を超える集団倍加を経たABM-SC細胞集団の両方を包含する。本明細書で使用する大規模増殖という用語は、少なくとも約30回以上の細胞集団倍加を経た細胞集団を指し、これらの細胞は、老化せず、不死化せず、かつ起源の細胞種で見出される正常核型を維持し続ける。本明細書で使用する実質的な自己複製能という用語は、複数世代の細胞子孫の生成をもたらす多数のサイクルの細胞分裂を経る能力を有することを意味するしたがって、各細胞分裂で、1つの細胞が2つの娘細胞を生み出し、その際、少なくとも1つの娘細胞はさらに細胞分裂できる。実質的な自己複製能の1つの尺度は、少なくとも約10回、15回、20回、25回、30回、35回、40回、45回、50回またはそれより多くの細胞倍加を受ける細胞集団の能力によって示される。実質的な自己複製能の別の尺度は、同じかまたは同様の培養条件が維持される時に細胞培養継代後の組織培養容器中で、再増殖するか、またはコンフルエンスに近づく細胞集団の能力の維持によって示される。したがって、実質的な自己複製能の例は、細胞集団が約10回を超える集団倍加を受ける前などの初期の細胞培養倍加中に、このような再増殖のために必要とされる時間の少なくとも約25、50、60、70、80、90、95または100の期間で、細胞集団が組織培養容器内で再増殖し続ける時に示される。実質的な自己複製能の別の尺度は、集団倍加時間の一貫した速度、または集団倍加の一貫したかつ比較的速い速度の維持である。本明細書で使用する多能性分化能が実質的にないという用語は、インビトロまたはインビボのいずれかで、細胞の複数の異なる型に分化することができない細胞集団を意味する。実質的な多能性分化能を有する細胞の例として造血幹細胞が挙げられ、これは、インビトロまたはインビボのいずれかで、赤血球、T細胞、B細胞、血小板などに分化することができる。実質的な多能性分化能を有する細胞の別の例として間葉系幹細胞が挙げられ、これは、例えば、骨細胞骨、脂肪細胞脂肪、または軟骨細胞軟骨に分化することができる。逆に、多能性分化能が実質的にない細胞集団の細胞は、インビトロまたは生物もしくは標的組織複数可にインビボ導入された時に、複数の細胞型に分化することができない。本発明の好ましい実施形態において、多能性分化能が実質的にない細胞集団は、この細胞集団中の細胞の少なくとも約80、90、95、98、99または100が、インビトロまたはインビボで検出可能な程度に、2種類以上の細胞型に分化するように誘導され得ない細胞集団である。単能性細胞または単能性前駆細胞は、多能性分化能が実質的にない細胞の一例である。本明細書で使用する幹細胞とは、以下の2つの性質を保有する1つまたは複数の細胞を意味する:1未分化状態を維持しながら、多数の細胞分裂周期を経る能力である自己複製能;および21種類または複数の種類の成熟細胞型に変化し、そのような変化の際には、もはや細胞分裂周期を経ない能力例えば、骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞などに変化する能力である分化能。本明細書で使用する分化能は、これらの細胞が、全能性、多能性pluripotent、多分化能、または単能性の前駆細胞のいずれかであることを意味する。間葉系幹細胞は、この同じ定義の幹細胞であるが、前記細胞は、例えば、骨髄、脂肪または軟骨などの間葉組織に由来するかまたはそれから得られた。HorwitzetalClarificationofthenomenclatureforMSC:TheInternationalSocietyforCellularTherapypositionstatementCytotherapyvol7no5pp393-3952005およびその中に引用されている参考文献を参照されたい。本明細書で使用する全能性とは、細胞が由来する生物において任意の発生段階中に見出され得るような、任意の細胞型になることができる細胞を意味する。全能性細胞は、一般的に、受精卵すなわち、卵細胞および精細胞の融合後の最初の数回の分割によって生成される。したがって、全能性細胞は、胚の細胞型および胚外の細胞型に分化することができる。本明細書で使用する多能性とは、細胞が由来する生物において見られる3つの胚葉内胚葉、中胚葉、外胚葉のいずれかに由来する細胞に分化することができる細胞を意味する。本明細書で使用する多分化能とは、複数の型すなわち、2種類以上の型の分化細胞を生成することができる細胞を意味する。間葉系幹細胞は、多分化能細胞の一例である。本明細書で使用する単能性とは、1つの細胞型のみを生産することができる細胞を意味する。単能性細胞は自己複製の性質を有するが、1種類のみの成熟細胞型に変化することができる。本明細書で使用する正常核型とは、一般的に細胞が由来する種で見出され、正常とみなされる数および構造の染色体を含む遺伝子組成物を有することを意味する。本明細書で使用する結合組織は、従来の分類で通常参照される4種類の組織のうちの1つである他は、上皮組織、筋肉組織、および神経組織である。結合組織は、生物および臓器構造ならびに支持体に含まれ、通常、中胚葉に由来する。本明細書で使用する結合組織には、固有結合組織、特殊化した結合組織、および胚性結合組織とも呼ばれることがある組織が含まれる。固有結合組織は、輪のまたは緩い結合組織を含み、所定の位置に臓器および上皮を保持し、コラーゲンおよびエラスチンを含む様々なタンパク質性線維を有する。固有結合組織には、靭帯および腱を形成する緻密な結合組織または線維性結合組織も含まれる。特殊化した結合組織には、血液、骨、軟骨、脂肪および細網結合組織が含まれる。細網結合組織は、リンパ器官リンパ節、骨髄、および脾臓を支持する軟骨格を形成する細網線維微細コラーゲン、III型のネットワークである。胚性結合組織には、間葉系結合組織および膠様結合組織が含まれる。胚性結合組織とも知られる間葉は、主に胚の中胚葉三層構造の胚盤の中間層から発達する組織の塊である。一貫性のある粘性の間葉は、コラーゲン束および線維芽細胞を含む。間葉は、後に、血管、血液に関連する臓器、および結合組織に分化する。膠様結合組織または粘液組織は、胎児の発育中に見られる結合組織の一種であり、これは、ウォートンゼリーWharton’sjelly臍帯中で細胞を保護し、隔離する役目を果たす臍帯内のゼラチン状物質の成分として最も容易に見出される。本明細書で使用する不死化とは、インビトロで不定数の細胞倍加を受けることができる細胞または細胞株を指す。不死化細胞は、絶えず分裂する細胞の能力の自然の制限を排除するか、または回避する遺伝子変化を介して、かかる能力を獲得する。対照的に、非不死化細胞は、生物から直接採取し、初代細胞培養物を生じさせるためにインビトロ培養した時に、老化して分裂する能力を失い、死ぬ前に、限られた数の細胞倍加を受けることができる真核細胞である。例えば、哺乳類のほとんどの種類の非不死化細胞の初代培養物は、一般に、分化、老化、または死滅する前に、初代細胞型に応じて比較的明確であるが再現性よく限られた範囲の細胞倍加を受けることができる。本明細書で使用する長期移植とは、ドナー細胞が投与時から約4週間を超えた後に、それに向けてもしくはその中に送達される標的組織内にまたはその一部として存在するドナー細胞の検出可能な存在を意味する。約4週間を超えるには、約5週間、6週間、7週間、8週間、10週間、12週間、14週間、16週間、18週間、20週間および24週間を超える期間が含まれる。約4週間を超えるには、約6カ月、8カ月、10カ月、12カ月、18カ月、24カ月、30カ月、36カ月、42カ月および48カ月を超える期間も含まれる。本発明は、インビトロで培養し、増殖させた自己複製コロニー形成細胞によって生成される様々な可溶性組成物もしくは分泌組成物の生成を調節するすなわち、上方制御するかまたは下方制御するための、培養中のCF-SC細胞集団およびexCF-SC細胞集団の操作にも関する。本発明は、骨細胞bonecell骨細胞osteocytesに分化する能力の喪失によって特徴付けられる大規模に増殖させた細胞集団にも関する。例えば、本発明は、補助的骨モルフォゲンであるノギンの存在下での培養の有無に関わらず、骨誘導条件下で培養した時に、カルシウム沈着を生じさせる能力の喪失によって特徴付けられる、大規模に増殖させた細胞集団に関する実施例16参照。マウスおよびヒトのノギン:例えば、米国国立バイオテクノロジーセンターPubMedタンパク質データベース受託番号NP_032737およびNP_005441それぞれ参照。例えば、ValenzuelaetalIdentificationofmammaliannogginanditsexpressionintheadultnervoussystemJNeurosci1596077-60841995も参照されたい。本発明は、上記に記載のとおり骨細胞に分化する能力の喪失および/またはカルシウム沈着を生じさせる能力の喪失によって特徴付けられる、大規模に増殖させた細胞集団にも関するが、前記細胞集団は、少なくとも1つの治療上有用な組成物を分泌し続けるか、または分泌する能力を維持するか、分泌するように誘発される能力を維持する。本発明は、細胞ベースの療法および組織工学的療法にも関し、特に、薬学的に許容される溶液または一時的な、永久的もしくは生分解性のマトリックスなどの薬学的に許容される担体へ組み込むか、またはそれとの混合を介した投与を含む、CF-SCおよびexCF-SC、もしくはかかる細胞によって生成される組成物の使用法および/もしくは投与法にも関する。本発明は、増殖させたすなわち、インビトロで培養し、継代した細胞集団および大規模に増殖させた細胞集団にも関し、これらは、好ましくは、STRO-1細胞表面マーカーの発現に関して陰性である。例えば、StewartetalSTRO-1HOP-26CD63CD49aandSB-10CD166asmarkersofprimitivehumanmarrowstromalcellsandtheirmoredifferentiatedprogeny:acomparativeinvestigationinvitroCellTissueRes2003Sep:3133:281-90;およびDennisetalTheSTRO-1marrowcellpopulationismultipotentialCellsTissuesOrgans2002:1702-3:73-82;ならびにOyajobietalIsolationandcharacterizationofhumanclonogenicosteoblastprogenitorsimmunoselectedfromfetalbonemarrowstromausingSTRO-1monoclonalantibodyJBoneMinerRes1999Mar;143:351-61を参照されたい。本発明は、追加の構造成分および/または治療成分と共に、CF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCを含む、薬学的に許容される組成物の製造ならびに使用にも関する。一例として、例えば、皮膚障害例えば、熱傷、擦り傷、裂傷、潰瘍、感染症などの皮膚創傷の治療、修復、および再生において使用するために、CF-SCまたはexCF-SC例えば、ABM-SCまたはexABM-SCおよびコラーゲンを薬学的に許容される溶液中で組み合わせ、液体、半固体、もしくは固体様形態マトリックスの組成物を生成してもよい。本発明は、概して、大規模に継代したコロニー形成体細胞exCF-SCを含む、コロニー形成体細胞CF-SCと本明細書で呼ぶ自己複製細胞の使用に関する。かかる細胞の例として、様々な疾患および障害、特に、例えば、急性心筋梗塞AMIによる心不全および脳卒中などの虚血、外傷、および/または炎症を含む疾患および障害の治療において使用するための、大規模に継代したヒト成人骨髄由来体細胞exABM-SCを含むヒト成人骨髄由来体細胞ABM-SCが挙げられる。本発明で使用するヒト成人骨髄由来体細胞ABM-SCなどの自己複製コロニー形成体細胞CF-SCを、米国特許公開第20030059414号2001年9月21日に出願された米国特許出願第09/960,244号および米国特許公開第20040058412号2002年9月20日に出願された米国特許出願第10/251,685号に記載されるとおりに調製する。これらの特許出願のそれぞれは、これにより、その全体が参照により組み込まれる。特に、例えば、骨髄、脂肪、皮膚、胎盤、筋肉、臍帯血、または結合組織などに由来する細胞集団の供給源から単離されたCF-SCを、このCF-SCが、多数の集団倍加を通して基本的に一定の集団倍加速度を維持するように低酸素例えば、大気に満たない条件下で培養し、低細胞密度で継代する。このCF-SCを適切な細胞数に増殖させた後、このCF-SCを用いて、本発明の組成物を生成してもよい。例えば、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加のために、このCF-SCをインビトロで増殖させた後に、exCF-SCを用いて、本発明の組成物を生成してもよい。一実施形態において、本発明で使用するCF-SCおよびexCF-SCは骨髄に由来するそれぞれ本明細書でABM-SCおよびexABM-SCと称す。本発明で使用する例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの一実施形態は、単離細胞集団であり、この細胞集団の細胞は、CD49cおよびCD90を共発現し、この細胞集団は、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加後に、約30時間未満の倍加速度を維持する。本発明で使用する例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの別の実施形態は、単離細胞集団であり、この細胞集団の細胞は、CD49c、CD90、ならびにCD44、HLAクラス1抗原、およびβベータ2-ミクログロブリンからなる群から選択される1つまたは複数の細胞表面タンパク質を共発現し、この細胞集団は、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加後に、約30時間未満の倍加速度を維持する。本発明で使用する例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの別の実施形態は、単離細胞集団であり、この細胞集団の細胞は、CD49cおよびCD90を共発現するが、細胞表面タンパク質CD10の発現に関しては陰性であり、この細胞集団は、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加後に、約30時間未満の倍加速度を維持する。本発明で使用する例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの別の実施形態は、単離細胞集団であり、この細胞集団の細胞は、CD49c、CD90、ならびにCD44、HLAクラス1抗原、およびβベータ2-ミクログロブリンからなる群から選択される1つまたは複数の細胞表面タンパク質を共発現するが、細胞表面タンパク質CD10の発現に関しては陰性であり、この細胞集団は、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加後に、約30時間未満の倍加速度を維持する。本発明で使用する例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの別の実施形態は、単離細胞集団であり、この細胞集団の細胞は、表1A、表1Bおよび表1Cに示す可溶性タンパク質からなる群から選択される1つまたは複数のタンパク質を発現し、この細胞集団は、少なくとも約30回、少なくとも約40回、または少なくとも約50回の細胞集団倍加後に、約30時間未満の倍加速度を維持する。損傷を受けた組織や臓器は、例えば、疾患例えば、遺伝性遺伝的疾患または細菌感染症、ウイルス感染症、および真菌感染症などの感染症、熱傷、裂傷、擦り傷、圧迫または侵襲的組織および臓器損傷などの身体的外傷、虚血、加齢、有害化学物質への曝露、電離放射線、ならびに免疫系の調節不全例えば、自己免疫疾患に起因し得る。本発明は、例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SC、CF-SCおよびexCF-SCの精製タンパク質画分、CF-SCおよびexCF-SCの馴化培地の上清、ならびにCF-SCおよびexCF-SCの馴化培地に由来する細胞上清画分の使用を包含する。本発明の一実施形態において、上記の成分は、コラーゲンおよび/もしくはフィブリン例えば、精製した天然または組換えのヒト、ウシ、またはブタのコラーゲンもしくはフィブリン、および/もしくはポリグリコール酸PGAなどの追加の成分、ならびに/または追加の構造化合物もしくは治療用化合物を含む生理的に適合性のある生分解性マトリックスと組み合わせるか、またはそれらに導入してもよい。このような組み合わせのマトリックスを組織または臓器の損傷の部位に投与し、損傷を受けた組織または臓器の修復および/または再生を促進し、それらを高めるか/または誘起してもよい。本発明の実施形態には、液体、半固体、または固体様の状態で投与することができる薬学的に許容される組成物に組み込まれた例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの使用が含まれる。本発明の実施形態は、関連技術の技術者によって日常的に使用されている方法によって、例えば、スプレー式の組成物またはエアロゾル化した組成物として局所適用によって、注射および移入などによって投与してもよい。組織再生療法のための本発明に記載の例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SC、細胞およびこれらの細胞によって生成される組成物の使用は、前述した組織再生療法および製品と比較して多くの利点を提供することができる。例えば、例えば、それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SC、exABM-SC細胞、ならびにこれらによって生成される組成物の使用は、炎症およびT細胞活性化の低下などの有害な免疫反応の低下を示すことができる組織再生療法の手段を提供する。例えば、実施例3A、実施例3B、実施例5、実施例18、および実施例19を参照されたい。さらに、ABM-SCおよびexABM-SCは、免疫学的に無症状であるので、対象に対して、治療前に、HLAを一致させることも、事前調整することも必要ではない。実施例10、パートIIを参照されたい。図17も参照されたい。本発明は、造血を誘導し、増強し、かつ/または維持するために特に、赤血球生成と呼ばれる過程において造血前駆細胞から赤血球redbloodcell赤血球erythrocyteのインビトロでの生成generationおよび生成productionのために、増殖させ、大規模増殖させたヒト成人骨髄由来体細胞それぞれ、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SC、ならびにこれらの細胞によって生成される細胞生成物を使用することにも関する。したがって、本発明の別の実施形態は、赤血球redbloodcell赤血球erythrocyteの生成generationおよび生成productionを誘導し、増強し、かつ/または維持するための、かかる細胞および/もしくはかかる細胞によって生成される組成物の使用を包含する。本発明の分野の別の実施例は、かかる細胞、細胞集団、それらによって生成される組成物の使用によって、免疫、自己免疫、および炎症性疾患を予防し、治療することに関する。別の実施例において、本発明は、皮膚すなわち、表皮、真皮、皮下組織の創傷の修復および再生のための組成物および方法を提供し、それには、CF-SCおよびexCF-SC例えば、ヒトABM-SCおよびexABM-SC、またはかかる細胞によって生成される生成物、ならびに追加の構造化合物もしくは治療用化合物が組み込まれた液体、半固体、および固体様マトリックスの製造および使用が含まれる。前臨床研究の代表的な結果インビボの前臨床薬理学的研究は、心筋梗塞および脳卒中の治療におけるABM-SCの有益な効果を示した。例えば、心筋梗塞のラットモデルにおけるhABM-SCの心臓内注射の効果を調べる特に、AMI急性心筋梗塞後の心機能回復におけるhABM-SCの有効性を判定し、hABM-SCの分布および配置を評価するための研究において、hABM-SCが心機能を著しく改善し、線維症を著しく低下させることを示した。さらに、このhABM-SCは、心臓注射から4週間後の心臓内にも、注射から8週間後の調べた末梢臓器のいずれにも残らないことが観察された。さらに、ブタのAMIモデルにおけるブタおよびヒトのABM-SCの安全性ならびに有効性を調べるための特に、MYOSTAR商標カテーテルを介した、細胞の経皮的なNOGA商標誘導性心内膜心筋投与の実行可能性、安全性および有効性を評価する研究において、この特定の送達法は十分に許容され、心臓パラメータに著しい改善をもたらすことが証明された。同様に、特に、虚血性脳卒中からの神経運動回復の促進におけるhABM-SCの有効性を判定するためにhABM-SCの送達法および脳卒中の回復の比較において、I.V.治療または大脳内治療が神経運動活性に著しい改善をもたらすことが観察された。本発明は、長期的な細胞移植に頼ることのない細胞ベースの療法の使用に関する。特に、本発明は、様々な疾患および障害、特に、例えば、神経の組織および臓器ならびに心臓の組織および臓器などの限定された自己複製能を有する組織および臓器を含む疾患および障害の治療における、細胞ならびに細胞によって生成される組成物の使用に関する。本発明の実施形態において、本発明の細胞を、治療を必要とする患者と接触させる。患者という用語は、ヒトおよび非ヒト動物の両方を包含する。一般的に、幹細胞またはその他の初期段階の前駆細胞は、これらの細胞が特定の分化経路に関係づけられているので、可塑性を失う。生体分子レベルでは、このプロセスが起こり始めると、別の方法で、この細胞が、分裂するように、または別の細胞型になるように促す特定のシグナル伝達分子例えば、マイトジェンおよびモルフォゲンに応答する能力を失う。したがって、細胞が分化し始めると、細胞は細胞周期を離れすなわち、もはや有糸分裂を経ることができず、G0と呼ばれる不可逆的な状態に移行し、この細胞はもはや分裂することができない。G0への移行は、複製老化とも関連するその特徴は、分子内タンパク質p21およびp53の発現増加を含む。したがって、可塑性の喪失種々な細胞型に分化する能力は、一般的に、細胞分化または細胞老化への前兆とみなされる。さらに、可塑性の損失は、一般的に細胞の連続的自己複製能の喪失とも関連づけられている。対照的に、一般的で、従来から受け入れられているこのシナリオに対して、予想外の、驚くべき本発明の結果は、本発明のexCF-SC例えば、exABM-SCが、可塑性の損失にもかかわらず比較的一定の速度での自己複製を含む自己複製を継続することである。したがって、本発明の一実施形態は、連続的自己複製能を有する治療上有用な末期の細胞例えば、連続的自己複製および栄養支持因子または栄養支持細胞を生成することができる細胞である。別の実施形態において、本発明のexCF-SCおよびexABM-SCは、有意量のp21および/またはp53を発現せず、前記分子の有意量は、細胞の老化を示す量である老化は、p21、p53、および/または他の細胞周期調節因子の十分な発現レベルを必要とし得る。さらに、本発明の分野の多くの専門家は、臓器および組織を生成するか、または臓器および組織の再生を促進する、限られた有用性または能力を有するために可塑性を失った非造血性間質型細胞を予想する。したがって、本発明の別の驚くべき、予想外の結果は、可塑性は失ったが、インビトロで新しい組織を生成し、インビボで組織の再生を促進する能力を保持している、大規模に継代したCF-SC例えば、ABM-SCを生成する能力である。本発明は、とりわけ、コロニー形成体細胞CF-SCそのうちの一例として、ヒト成人骨髄由来体細胞ABM-SCが挙げられると本明細書で呼ぶ自己複製細胞を用いた組織の修復、再生、および/または若返りの方法に関する。本発明で使用するヒト成人骨髄由来体細胞ABM-SCなどの自己複製コロニー形成体細胞CF-SCを、米国特許公開第20030059414号2001年9月21日に出願された米国出願第09/260,244号および米国特許公開第20040058412号2002年9月20日に出願された米国出願第10/251,685号に記載されるとおりに調製する。これにより、これらの特許出願のそれぞれは、参照によりその全体が組み込まれる。それぞれ、2007年6月15日に出願された米国仮特許出願第60/929,151号および同第60/929,152号、2007年8月10日に出願された米国仮特許出願第60/955,204号および、2007年11月1日に出願された米国仮特許出願第60/996,093号も、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、CF-SC細胞由来の馴化細胞培養物を含む組成物およびマトリックスにも関する。本発明は、さらに、CF-SC細胞由来の馴化細胞培養物を用いて、患者の病状を治療する方法を提供する。CF-SC細胞由来の馴化細胞培養物という用語は、CF-SC細胞を増殖させ、その後、これらの細胞をこの培地から取り除いた培地を指す。実施形態において、CF-SC細胞に由来するかかる馴化細胞培養物は、実質的にCF-SC細胞を含まない。実質的に含まないとは、これらの細胞の全てを取り除くか、またはこれらの細胞の大部分を取り除くことを意味する。必要に応じて、CF-SC細胞由来の馴化細胞培養物を、医薬品、例えば、いくつか例を挙げると、インターロイキン-1βIL-lb、インターロイキン-1αIL-La、腫瘍壊死因子αTNF-α、インターフェロンガンマIFN-g、インターロイキン-2IL-2、形質転換増殖因子βTGF-b、神経成長因子NGF、上皮増殖因子EGF、コンカナバリンACon-A、および/または植物性血球凝集素PHAなどの刺激因子で処理し、馴化細胞培地の生成を誘導する。特に、例えば、骨髄ABM-SCおよびexABM-SC、脂肪、皮膚、胎盤、筋肉、臍帯血、または結合組織などに由来する細胞の供給集団から単離されたCF-SCを、これらのCF-SCが、例えば、限定されないが、10回、15回、20回、25回、30回、35回、40回、45回および/または50回の集団倍加を経験するなどの多数の集団倍加を通して例えば、限定されないが、約30時間未満の倍加速度などの基本的に一定の集団倍加速度を維持するように、例えば、限定されないが、4mMグルタミンおよび10ウシ胎仔血清が補充された最小必須培地-アルファ例えば、HYCLONE商標から入手可能などの適切な培地の存在下で培養細胞表面に接着させ、例えば、限定されないが、窒素で平衡化した約2~5のO2、約5のCO2などの低酸素条件下で培養し、続いて、約30~1000細胞/cm2などの低細胞密度で継代する。本発明の実施形態は、低酸素条件下で培養したCF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCで生成してもよく、その際、前記O2濃度は、約1~20の範囲であり例えば、前記O2濃度が、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、または約20であり、それにCO2を加え、窒素で平衡化する。例えば、ABM-SCを低酸素条件下で培養してもよく、その際、前記O2濃度は、約20、約20未満、約15、約15未満、約10、約10未満、約7、約7未満、約6、約6未満、約5、約5未満、約4、約4未満、約3、約3未満、約2、約2未満、約1であるか、または前記低酸素条件は、約1~約20、約1~約15、約1~約10、約1~約5、約5~約20、約5~約15、約5~約10、約10~約15、約10~約20、約2~約8、約2~約7、約2~約6、約2~約5、約2~約4、約2~約3、約3~約8、約3~約7、約3~約6、約3~約5、約3~約4、約4~約8、約4~約7、約4~約6、約4~約5、約5~約8、約5~約7、約5~約6の範囲、もしくは約5である。本発明の実施形態は、低酸素条件下で培養したCF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCで生成してもよく、その際、CO2濃度は、約1~15の範囲であり例えば、前記CO2濃度が、約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、または約15であり、それに低濃度のO2を加え、窒素で平衡化する。本発明の実施形態を、低細胞密度で細胞を播種することによって継代したCF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCで生成してもよく、前記細胞密度は、約1~2500細胞/cm2の範囲である例えば、細胞密度が、約1、約2、約5、約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90、約100、約200、約300、約400、約500、約600、約700、約800、約900、約1000、約1500、約2000または約2500細胞/cm2である。例えば、ABM-SCは、約2500細胞/cm2未満、約1000細胞/cm2未満、約500細胞/cm2未満、約100細胞/cm2未満、約50細胞/cm2未満、約30細胞/cm2未満、または約10細胞/cm2未満の播種密度で継代してもよい。本発明の実施形態は、CF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCで生成してもよく、その際、細胞集団倍加速度は、約24~96時間未満の範囲で維持される例えば、細胞集団倍加速度は、約24、約30、約36、約42、約48、約54、約60、約66、約72、約78、約84、約90、または約96時間未満で維持される。本発明の実施形態は、CF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCで生成してもよく、その際、細胞集団は、約5~50回の集団倍加の範囲などの様々な範囲の集団倍加を通して、基本的に一定の倍加速度を維持する例えば、集団倍加速度は、約5~10、約5~15、約5~20、約5~25、約5~30、約5~35、約5~40、約5~45、または約5~50回の集団倍加の間維持される。本発明の実施形態は、液体、半固体、または固体様状態にあってもよい薬学的に許容される組成物に組み込まれたCF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCの使用を含む。液体、半固体、または固体様状態という用語の使用は、これらの細胞が含まれる薬学的に許容される組成物が、1通常の生理食塩水中などの一般的な液体状態から;2ゼリー状、ゼラチン状、または粘弾性状態を含む広範囲の低粘性~高粘性状態までその際、この医薬組成物は、例えば、この組成物が、油もしくは蜂蜜のようにゆっくり漏出する状態から、ゼリー状、柔軟性、半弾性、および/または展性があり得るゼラチン質もしくは粘弾性が増した状態の粘性の範囲にあるように非常に高レベル~非常に低レベルの細胞外液を含む;3マトリックス内の生存細胞が、例えば、哺乳類の皮膚と同じくらい柔軟な半弾性特性のいくつかを有する耐久性があり、非ゼラチン質であるが、なお柔軟な、半弾力性の、展性のあるマトリックスに当初懸濁された環境を再構築した非常に低レベルの細胞外液を有する固体様状態までの、様々な範囲の物理的状態に及び得ることを示すことを目的としている。図10Aおよび図10Bを参照されたい。非弾性としても知られている粘弾性は、塑性変形を受ける時に粘性および弾力性の両方の特徴を示す物質を説明する。蜂蜜のような粘性物質は、ストレスが加えられると、時間と共に直線的に剪断流および歪みに抵抗する。弾性物質は、引き伸ばされると即座に歪み、ストレスが取り除かれると、それらの元の状態に素早く戻る。粘弾性物質は、これらの性質の両方の要素を有し、それ自体、時間依存的な歪みを示す。液体、半固体、および固体様のビヒクル中の細胞の臨床投与は、創傷中に不要な滲出液を閉じ込めることなく、創傷床の輪郭を成形する治療の適用を可能にする。コラーゲンまたはフィブリンなどの可溶性マトリックス成分を、CF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCと組み合わせることは、サイトカインおよびマトリックスメタロプロテアーゼなどの重要な分泌タンパク質の発現を上方制御するようにこの細胞集団を誘導する。さらに、外科的に誘発した創傷へのABM-SCの適用は、創傷閉鎖を促進し、瘢痕化を防ぎ、それによって最低限の瘢痕化をもたらすと思われる例えば、実施例7参照。本発明の実施形態において、CF-SCおよび/またはexCF-SC細胞を含むマトリックスを、治療を必要としている患者、例えば、創傷を有する患者と接触させる。さらに、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの見かけの免疫調節特性例えば、実施例5参照は、これらの細胞が組み込まれる組成物および治療法を、例えば、限定されないが、慢性炎症性皮膚疾患、乾癬、扁平苔癬、エリテマトーデスLE、移植片対宿主病GVHD、および薬疹すなわち、皮膚の有害な薬物反応などの皮膚に関係する皮膚科学的な免疫障害および免疫疾患の治療に対して魅力的にする。ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの馴化培地の分泌タンパク質および細胞上清画分は、インビボ使用に適するようにする方法で、無血清状態から製造し、濃縮し、調製することができる。この方法で調製した時に、ABM-SCの無血清馴化培地は、治療有効濃度の多数の再生促進サイトカイン、成長因子、およびマトリックスプロテアーゼを含むことが示された例えば、表1A、表1Bおよび1C参照。ABM-SCによって生成される何百もの可溶性因子の複合混合物は、2次元SDSPAGEによって区別することができる図1参照。個々のタンパク質および他の巨大分子を、これらのゲルから切り出し、例えば、MALDI-TOF質量分析マトリックス支援レーザー脱離イオン化-飛行時間型質量分析などの当技術分野で日常的に行われている技術を用いて同定することができる。開示する方法ならびにクロマトグラフィーまたは中空糸細胞培養系などの他の分離技術を利用して、所望のタンパク質または細胞上清画分を単離し、透析し、凍結乾燥し、固体として保存するか、または治療的投与のために適切なビヒクルで再構成することができる。一実施形態において、タンパク質または細胞上清画分を、半固体コラーゲンまたはフィブリンベースのビヒクルで再構成し、創傷床へ局所的に適用する。ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCによって生成される生成物に加えて、脂質、タンパク質、および核酸などの生物製剤を含む小分子化合物から大きな高分子化合物などの、任意の数および種類の薬学的に許容される化合物を、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SC、またはかかる細胞によって生成される生成物を含む生分解性マトリックスなどの薬学的に許容される担体と共に投与するために組み込んでもよい。非常に少しの標本として、かかる追加分子は、ほんの少しのカテゴリーの例をあげると、抗炎症薬、抗生物質、ビタミン、およびカルシウムなどのミネラルなどの小分子医薬品を含んでもよい。同様に、生物製剤の非常に少しの標本は、治療上有益な変異体、ならびに様々なアイソフォーム、断片、サブユニット、ならびに置換、挿入、および欠失変異体などのかかる分子の誘導体を含む細胞外マトリックスタンパク質、血漿凝固タンパク質、抗体、増殖因子、ケモカイン、サイトカイン、カルジオリピンおよびスフィンゴミエリンなどの脂質、ならびにリボザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはcDNA発現コンストラクトなどの核酸を含んでもよい。本明細書に提供する教示と組み合わせて、任意の数の追加の構造的または治療上有益な化合物が、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SC、またはかかる細胞によって生成される生成物を含む生分解性マトリックスなどの薬学的に許容される担体と共に投与するために含まれ得ることを当業者なら理解できるので、これらは単なる一例として言及される。本発明の一実施形態は、糖尿病足もしくは静脈性下肢潰瘍などの糖尿病患者、または手術後の創傷における創傷閉鎖を刺激する方法を包含する。創傷閉鎖の刺激は、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SC、またはかかる細胞によって生成される生成物を、天然に存在する細胞外マトリックスならびに/または、例えば、精製した天然もしくは組換え型のヒト、ウシ、ブタ、または組換え型のコラーゲン、ラミニン、フィブリノゲン、および/もしくはトロンビンなどの血漿タンパク質成分と組み合わせた医薬組成物で治療することによって促進することができる。この医薬組成物は、組織の損傷部位で、ヒトを含む哺乳類に投与することができる。別の実施形態では、局所的に投与される生分解性マトリックスを、精製した天然または組換え型のコラーゲン、フィブリノゲン、および/またはトロンビンなどの成分を同種のABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCと組み合わせた混合物から形成する。本発明の別の実施形態において、同種細胞およびマトリックスの医薬組成物を、例えば、限定されないが、1日~1カ月以上などの長期間、インビトロで培養し、結合組織の新たな形成をもたらす。本発明の別の実施形態において、この生分解性マトリックスは、ウシコラーゲンまたはポリグリコール酸PGAである。別の実施形態において、この医薬組成物は、酸素圧を低下させた条件下、例えば、限定されないが、約4~5O2に相当する酸素圧、5CO2、および窒素で平衡化した条件下で、無血清細胞培地で培養する。一実施形態において、本発明は、以下のステップを含む医薬組成物を調製する方法を包含する:a可溶性コラーゲンと、グルタミン、炭酸水素ナトリウム、およびHEPESを補充した必要に応じて、インスリン、トランスフェリン、および/またはセレンの補充を含む無血清細胞培地とを含む溶液を調製するステップ;bこの溶液にCF-SCまたはexCF-SC例えば、ABM-SCまたはexABM-SCを再懸濁するステップ;ならびにcこの細胞懸濁液を組織の型またはその同等物に移し、37°C、例えば、細胞培養インキュベーター内に入れた時に凝固させるステップ。医薬組成物を調製する上記の方法は、さらに、例えば、限定されないが、1~3日以上などの長期間、約4~5O2、5CO2に等しく、窒素で平衡化した低酸素圧条件下で、この培養物をインキュベートするステップを含んでもよい。別の実施形態において、本発明は、以下のステップを含む医薬組成物を調製する方法を包含する:aフィブリノゲンおよびトロンビンを含む溶液を調製するステップ;bこの溶液にCF-SCまたはexCF-SC例えば、ABM-SCまたはexABM-SCを再懸濁するステップ;ならびにcこの再懸濁液を開放創へ投与するステップ。別の実施形態において、本発明は、以下のステップを含む医薬組成物を調製する方法を包含する:a可溶性コラーゲンと、グルタミン、炭酸水素ナトリウム、およびHEPESを補充した必要に応じて、インスリン、トランスフェリン、および/またはセレンの補充を含む無血清細胞培地を含む溶液とを調製するステップ;bCF-SCまたはexCF-SC例えば、ABM-SCまたはexABM-SCに由来する細胞上清の1つまたは複数の画分を、この溶液に混合するステップ;ならびに、cこの溶液を組織の型またはその同等物に移し、37°C、例えば、細胞培養インキュベーター内に入れた時に凝固させるステップ。医薬組成物を調製する上記の方法は、さらに、約18~21O2および5CO2に等しい大気の酸素圧条件下で、組織の型またはその同等物をインキュベートするステップを含んでもよい。別の実施形態において、本発明は、以下のステップを含む医薬組成物を調製する方法を包含する:aフィブリノゲンおよびトロンビンを含む溶液を調製するステップ;bCF-SCまたはexCF-SC例えば、ABM-SCまたはexABM-SCに由来する細胞上清の1つまたは複数の画分を、この溶液に混合するステップ;ならびに、cこの溶液を開放創へ投与するステップ。別の実施形態において、本発明は、特に、自己免疫障害などの免疫に関連する障害、急性および慢性両方の炎症性障害を含む炎症、心筋梗塞などの虚血、熱傷、裂傷、および擦り傷などの外傷、細菌、ウイルス、真菌による感染症などの感染症、ならびに慢性皮膚創傷によって引き起こされる組織損傷の治療における組織再生を包含する。本発明は、損傷および障害、例えば、限定されないが、例えば、神経外傷および神経変性疾患などによって引き起こされ得る中枢神経系脳および末梢神経系例えば、脊髄の多様な神経損傷および神経障害の治療を包含する。本発明の別の実施形態では、骨、結合組織、および軟骨の再生を必要とする疾患および障害、慢性および急性の炎症性肝疾患、血管不全、ならびに角膜変性および黄斑変性の治療を包含する。本発明の別の実施形態は、例えば、心筋虚血ならびに血管の修復および再生などの心血管および肺の損傷および障害の治療を包含する。本発明の別の実施形態は、膵臓および肝臓の組織ならびに他の内分泌腺および外分泌腺の損傷および障害の治療を包含する。本発明の別の実施形態は、胸腺ならびに他の免疫細胞を生成し、収容する器官の損傷および障害の治療を包含する。本発明の別の実施形態は、例えば、尿管および膀胱などの泌尿生殖器系の損傷および障害の治療を包含する。本発明の別の実施形態は、ヘルニアおよびヘルニア組織の治療を包含する。本発明の別の実施形態は、心臓弁の治療、修復、再生、および再構築を包含する。ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCまたはABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCに由来するタンパク質および細胞上清画分も、固体様コラーゲンベースのデバイスで再構成され得る。これらの細胞をこのような方法で再構成する時、この固体様コラーゲンマトリックスを数日かけて再造形し、それ自体特有なマトリックスを作るネオ組織を生じさせる。ABM-SCおよびexABM-SCなどのかかるCF-SCおよびexCF-SCに由来するネオ組織は、柔軟で、縫合可能であり、生理活性がある例えば、図38参照。これらの構造物は、滅菌し、化学的に架橋し、凍結乾燥するか、またはさらに処理することで、これらの細胞を生き残れないように、かつさらに増殖できないようにさせることもできる。かかるデバイスは、全層熱傷創傷を含む熱傷の治療に特に有益であり得る。血管新生化された創傷床を再構築するために、重度の熱傷患者は、死んだ組織の外科的切除後の人工皮膚代替物で治療される場合が多い。創傷床が癒された後に、これらの患者は、その後、宿主表皮を再成長させる目的で、上皮細胞の人工皮膚の製品またはアプリケーションで治療される。本明細書に記載されるものなどの組成物は、従来の人工皮膚製品例えば、DERMAGRAFT商標の代わりに使用される時に、望ましくないT細胞媒介性免疫反応を阻害するか、または低下させることによって、その後に移植された同種の皮膚の寿命を延ばすことができる例えば、実施例5参照。T細胞媒介性免疫反応を調節することによって、本発明の組成物は、患者自身の皮膚の再成長を刺激するのに十分な期間、人工皮膚のその後の再適用を可能にすることができる。上記のABM-SCは、以下の特性を示すことが明らかになっている:インビトロ血管新生および組織修復に重要なサイトカインの分泌。瘢痕化およびマトリックス代謝回転の阻止および阻害のための因子の放出。血管新生促進活性を示す内皮細胞の遊走の促進。インビボ急性心筋梗塞AMIおよび脳卒中の複数の動物モデルにおける予後の大幅な改善。効果的で、良好な耐容性を示す細胞の心臓内送達または大脳内送達。注射後8週間、組織において細胞が検出できないこと。細胞に対する測定可能な免疫反応がないこと。本発明の一実施形態において、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCによって分泌される多数の再生促進性細胞因子は、例えば、急性心筋梗塞AMIまたは脳卒中による心不全によって損傷した心臓および神経の臓器および組織などの損傷した組織および臓器の治療、修復、再生、および/または若返りに用いることができる。これらには、図11に示すABM-SCなどのCF-SCによって分泌され得る因子が含まれる。例えば、これらの因子には、SDF-1α、VEGF、ENA-78、アンギオゲニン、BDNF、IL-6、IL-8、ALCAM、MMP-2、アクチビン、MMP-1、MMP-13、MCP-1が含まれるが、これらに限定されない。図11を参照されたい。表1A、1Bおよび1Cにまとめたものなどの追加の因子も、ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCによって分泌され得る。ABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCによる再生促進因子の分泌は、馴化細胞培地の生成を誘導するか、または患者への細胞投与の前にこれらの細胞をプライミングするための例えば、腫瘍壊死因子αTNF-αなどの刺激因子で前処理することによって、増強または誘導することができる。急性虚血、外傷または炎症は、影響を受けた臓器および組織において、様々な細胞および化学的な事象をもたらす。例えば、図12を参照されたい。炎症段階では、損傷部位への因子の放出および細胞の流入が起こる。再生段階では、機能的な組織の適切な修復のために循環細胞の動員が起こる。線維症の段階では、臓器の機能を損なう可能性のある線維性の瘢痕の沈着が起こる。さらに、様々なサイトカインおよび他の生体分子は、これらのプロセスのそれぞれにおいて様々な役割を担っている。例えば、図12を参照されたい。本発明におけるABM-SCおよびexABM-SCなどのCF-SCおよびexCF-SCの使用には、炎症を治療および予防する方法、線維症すなわち、組織の瘢痕化を低下させる一方で、臓器または組織の再生を刺激する方法、ならびにABM-SCおよびexABM-SCなどの刺激されるかまたは刺激されないCF-SCおよびexCF-SCによって生成される組成物例えば、サイトカイン、プロテアーゼ、細胞外マトリックスタンパク質などにより血管新生を刺激する方法が含まれる。別の実施形態において、CF-SCおよびexCF-SCは、線維症の生物学的プロセスを阻害することができる。線維症は、多くのヒト組織における創傷治癒、瘢痕化、および炎症の天然副生成物である。瘢痕組織が、最適な臓器の機能に必要である細胞を置換するので、線維性の瘢痕としても知られる線維症は、特に、心臓および中枢神経系CNSにおける最適な機能を有する組織の再生に対して重大な障害である。本明細書に開示する細胞を用いた治療は、線維症を予防または軽減するのに役立ち、それによって、損傷を受けた組織の治癒を促進する。線維症は、膜結合細胞表面分子を含む2種類以上の分泌タンパク質または細胞生成組成物の追加的効果または相乗効果によって予防することができる。さらに、ABM-SCおよびexABM-SCなどの投与されたCF-SCおよびexCF-SCによって誘導されるかまたは生成されるマトリックスプロテアーゼは、線維症を防ぐのに重要な役割を果たすことができる。本発明の別の代表的な使用において、新血管新生としても知られる血管新生が、所望の組織で増大する。新たに形成された組織は、血液供給が行われなければならないので、血管新生、すなわち新しい血管の形成は再生医療の重要な要素であり、内皮細胞が、本発明によって治療される変性過程、疾患の進行、または急性傷害の間に失われた場合には、血管新生が重要である。したがって、CF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCまたはかかる細胞によって生成される組成物の使用は、標的組織および臓器特に、例えば、損傷を受けた心臓組織における血管新生を刺激するのに有用である。血管新生は、組織修復の重要な要素であり、損傷した組織の治癒を最適化するために、線維症抑制と合わせて機能することができる。本発明の別の代表的な使用は、投与細胞が生着しないで、再生または若返りのプロセスを刺激することを伴う。インビボ試験で、ヒトABM-SCまたはexABM-SCの長期的細胞生着または組織特異的分化が一般的に見られないことが示され、これらの細胞が組織再生を刺激するメカニズムは、細胞置換を介するのではなく、代わりに、これらの細胞自体および/またはそれらの細胞が生成する因子に対する宿主反応を介することを示唆する。しかし、これは、骨髄におけるABM-SCの役割が、構造的および栄養的な支持を提供することであることを考えれば驚くべきことではない。したがって、本発明には、損傷した組織および臓器の治療が含まれ、その際、投与されるCF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCは、永久的そして長期的な組織もしくは臓器の生着を示さない。その代わり、治療用のCF-SCおよびexCF-SC例えば、ABM-SCおよびexABM-SCは、顕著なレベルまたは現在検出可能なレベルで修復組織の一部になることなく、栄養支持因子を提供し、細胞死を抑制し、線維症を阻害し、炎症例えば、免疫細胞の炎症反応を阻害し、細胞外マトリックスの再構築を促進し、かつ/または血管新生を刺激する。本発明の更なる例は、一定の期間後に、これらの投与細胞が実験動物のどこにも検出されないことを教示し、このことは、投与細胞が完全に身体から取り除かれることを示唆する。これは、分泌因子が、損傷組織の修復に重要な役割を果たしていることを示唆する。その有用性を示す本発明のさらに別の例において、本明細書で開示するhABM-SCは、一人のドナーソースに由来する。このように、これらの細胞は患者における同種細胞移植物であり、これらの移植された細胞が、有害な免疫反応を刺激する可能性を示唆しているのかもしれない。しかし、驚くべきことに、本明細書で開示する移植された同種細胞は、実際に、インビトロでマイトジェン誘発性T細胞増殖を抑制し、インビボでT細胞依存性免疫反応の誘導を避けることができる。T細胞媒介性免疫反応は、治癒、再生、および若返りのプロセスに害を及ぼす免疫プロセスの重要な要素である。本明細書で使用する有効量は、組織、臓器、または生物システム例えば、免疫系の性能、機能、完全性、構造または組成において検出可能な改善をもたらすのに十分な量であり、前記改善は、損傷した組織、臓器または生物システムの完全なもしくは部分的な寛解、修復、補修、再生、または治癒を示す。表1A、表1Bおよび表1Cは、無血清細胞培地で継代培養した時に、ヒトABM-SCによって分泌されるサイトカイン、成長因子、可溶性受容体、およびマトリックスプロテアーゼの多数のリストを示す。培地上清濃縮物1=4mMのL-グルタミンを補充したAdvancedDMEMGibco商標。培地上清濃縮物2=インスリン-トランスフェリン-セレン-AGibco商標を補充した、4mMのL-グルタミンおよびHEPESHyClone社を含むRPMI-1640。これらの結果は、これらの条件下で培養した時に、組織再生および免疫系の調節に重要な多数の栄養因子および可溶性受容体が、治療的に適するレベルでABM-SCによって生成されることを証明する。特に、以前の実験は、表1A、表1Bおよび表1Cに示されるものなどの分泌タンパク質レベルを達成するために、インスリン、トランスフェリン、セレンを含む基本培地の補充が必要であることを証明した。生存しているおよび生存していない生理活性デバイス本発明の実施形態には、創傷治癒を高めるための構築物内に可溶性因子およびマトリックス沈着をもたらすことができる組織様構築物を作るCF-SCおよび/またはexCF-SCを播種した足場の生成が含まれる。足場の特性、細胞播種、および培養条件を評価し、皮膚、骨、神経、および筋肉などの組織の修復ならびに再生を支援するのに有用な組織工学構築物を生成するように最適化する。これらの組織工学構築物は、インビボで負傷した/損傷した組織へ、治療に適する因子を送達するための製品として使用することができる。具体的には、ヒトまたは非ヒトのCF-SCおよび/またはexCF-SCを、組織工学構築物の作製のために、コラーゲンハイドロゲルの足場内に埋め込むことができる。細胞を播種したコラーゲンゲル構築物を、インビトロ培養で維持し、細胞を調節するかまたは刺激して、これらの構築物内に関連因子を分泌し、生成することができる。培養条件/パラメータは、場合により、化学的、機械的、または電気的な刺激例えば、低酸素圧、成長因子の添加、または培養容器の攪拌で変化させることができる。ヒト、ブタ、またはウシ由来のコラーゲンは、例えば、限定されないが、これらの生成物を生成するのに有用であり得る。これらの構築物は、フィブリン、ヒアルロン酸、ヘパリン、アルギン酸塩、ゼラチン、キトサン、ラミニン、もしくはフィブロネクチンを含む他の天然由来のマトリックスとコラーゲンを組み合わせるか、またはコラーゲンをそれらと置換することにより、さらに発展させることができる。組織工学構築物は、ヒトまたは非ヒトのCF-SCおよび/またはexCF-SCを播種した合成高分子の足場から生成することもできる。具体的には、ポリ乳酸-co-グリコール酸共重合体などのFDAに承認された物質は、それらの優れた生体適合性および生分解性により使用されるだろう。これらの共重合体は、特定の性質を有する複数の足場構造中で生成され得る。分解速度は、グリコール酸に対する乳酸の共重合体比を変えることによって調整することができる。組織工学構築物として有用なこれらの重合体の特定の配置には、多孔質不織メッシュが含まれるが、これに限定されない。CF-SCおよび/またはexCF-SCを播種した重合体の足場を、これらのコラーゲン構築物と同様に培養で維持し、上記と同様の操作を使用して最適化することができる。また、これらの構築物は、重合体の足場に天然由来のマトリックスを添加するかまたは組み込むことで生成することができる。ヒトまたは非ヒトのCF-SCおよび/またはexCF-SCを含む組織工学構築物の足場として有用な他の合成重合体には、非分解性のシリコーン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリジメチルシロキサン、ポリスルホン、ならびに分解性のポリエチレングリコール、ポリカプロラクトン、および他のポリエステルもしくはポリウレタンが含まれる。ヒトまたは非ヒトのCF-SCおよび/またはexCF-SCを播種した足場を培養し、インビトロでネオ組織を形成することができる。これらの構築物を直接適用するか、または凍結保存し、後で、ヒトもしくは非ヒトの対象へ送達するために、生存している構築物として用いることができるか、または、さらに、貯蔵および患者への後の適用のために操作し、生存していない構築物に変換することができる。生存している構築物には、注射用の液体中の細胞懸濁液または注射用の半固体マトリックス、細胞を播種した注射用のマトリックス微粒子、および細胞を播種した移植用の固体構築物が含まれ得る。これらの構築物は、生存細胞および無傷のタンパク質を有する構築物を維持するために、製造時から対象に適用されるまで凍結保存することができる。これらの同じ製剤をさらに処理して、生存していない細胞を含む生存していない構築物にするが、なおその構築物内の細胞によって生成された、治療に適する因子およびマトリックスを維持している構築物を生成することもできる。構築物を生存していないようにさせる方法には、照射、タンパク質架橋結合、タンパク質安定化のための添加剤、脱細胞化などの化学修飾、または、凍結、脱水熱乾燥dehydrothermaldrying、および凍結乾燥などの温度操作が含まれる。特定の化学的架橋結合処理には、グルタルアルデヒド、カルボジイミドEDC、ポリエポキシド化合物、ジイソシアネート、ジビニルスルホン、および天然由来のゲニピンまたはリボースが含まれる。滅菌法は、生存していないようにさせるかまたは最終滅菌用の組織工学構築物に使用されるさらなる操作であってもよく、方法には、照射、電子ビーム、またはガスプラズマ処理が含まれる。生存していない構築物を、室温で維持し、保存してもよい。本発明の実施形態には、生理活性デバイスすなわち、組成物、物品、物体、製品、アンサンブル、コレクション、生成物などが含まれ、これらのデバイスは、生存しているCF-SCおよびexCF-SC、生存していないCF-SCおよびexCF-SC、または任意の組み合わせの生存しているCF-SCおよびexCF-SCと生存していないCF-SCおよびexCF-SCとの両方の混合物で構成されている生存しているliving生存しているlive製品、生存していない製品、または生存している製品および生存していない製品の両方の組み合わせである。本発明の実施形態には、さらに、このような生存しているデバイスおよび生存していないデバイスが含まれ、これらのデバイスは、追加の精製、単離、および/または分離のステップの有無にかかわらず生存しているCF-SCおよびexCF-SCならびに/または生存していないCF-SCおよびexCF-SCに由来する成分で部分的にまたは完全に構成される。本明細書で定義される生存していないデバイスは、a生存していないCF-SCおよび/またはexCF-SCを含むデバイス;bCF-SCおよび/またはexCF-SCを含み、これらの細胞を死滅させることを目的とした処理条件例えば、照射、凍結、凍結融解、空気乾燥/乾燥、化学的架橋結合、加熱、凍結乾燥にさらされているデバイスであって、前記処理が、100効果的であっても、そうでなくてもよいすなわち、ある程度、生存しているCF-SCおよび/またはexCF-SCの画分が残っていてもよいデバイス;ならびにc生存しているCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたは生存していないCF-SCおよび/もしくはexCF-SCに由来する例えば、分離されるか、単離されるか、または精製される1つもしくは複数の成分を含むデバイスである。本明細書で定義する生存しているデバイスは、生存しているCF-SCおよび/またはexCF-SCを含むデバイスであり、その際、前記デバイスは、その中でCF-SCおよび/またはexCF-SCの生存率を維持することを目的とした処理条件にさらされている。本明細書で定義する生存しているデバイスは、ある程度、一部の生存していないCF-SCおよび/またはexCF-SCすなわち、死んだCF-SCおよび/またはexCF-SCを含んでいてもよい。本発明の一実施形態において、生存しているデバイスは、ほぼ100生存しているCF-SCおよび/またはexCF-SCを含む。本発明の他の実施形態において、生存しているデバイスは、約25以上、約50以上、約60以上、約70以上、約75以上、約80以上、約85以上、約90以上、約95以上、約98以上、および約99以上生存しているCF-SCおよび/またはexCF-SCを含む。本発明の一実施形態において、生存していないデバイスは、100またはほぼ100生存していないすなわち、死んだCF-SCおよび/またはexCF-SCを含んでいてもよい。本発明の他の実施形態において、生存していないデバイスは、約25未満、約20未満、約15未満、約10未満、約5未満、約2未満、および約1未満の生存していないCF-SCおよび/またはexCF-SCを含んでいてもよい。本発明の実施形態は、さらに、必要な構成成分componentpartsの取得時に、費用効率が高く、当業者が組み立てるのが容易である生理活性デバイスを含む。本発明の実施形態には、1生分解性の足場例えば、足場は、ポリグリコール酸PGAで構成される、ならびに2生存しているCF-SCおよび/もしくはexCF-SC、生存していないCF-SCおよび/もしくはexCF-SC、または、生存しているCF-SCおよび/もしくはexCF-SCと生存していないCF-SCおよび/もしくはexCF-SCとの混合物で構成される、あるいは生存しているまたは生存していないCF-SCおよび/もしくはexCF-SCに由来する1つもしくは複数の成分で構成される皮膚様組織構築物の生理活性デバイスの生成および使用が含まれる。本発明の実施形態には、所望の生分解率を達成するために選択されるか、工学処理されるか、または改変された生理活性デバイスが含まれる。本発明の実施形態には、これらの足場または生物工学処理構築物の元の体積もしくは元の質量の約100、98、95、90、85、80または50が、6ヶ月以内、3ヶ月以内、1ヶ月以内、3週間以内、2週間以内、1週間以内、5日以内、3日以内、48時間以内、24時間以内、12時間以内に除去されるか、吸収されるか、劣化するか、またはそうでなければ、破壊された足場または生物工学処理構築物の生分解が含まれる。本発明のさらなる実施形態には、CF-SCおよび/またはexCF-SCを、CF-SCおよび/またはexCF-SCに由来する成分と併用する時に、生体適合性および生理活性について異なる物質を試験し、評価する方法が含まれる。生体適合性の試験法には、例えば、細胞生存率、細胞増殖growthおよび/または増殖proliferation、代謝、生存、ならびにアポトーシス活性の試験が含まれるが、これらに限定されない。かかる評価に用いられ得る方法および技術の例として、カルセイン/EthD-1アッセイ、CELLTITERGLO商標アッセイ、グルコース/ラクテートアッセイ、組織学的評価が挙げられるが、これらに限定されない。生理活性の試験法には、例えば、栄養因子の分泌およびマトリックス代謝回転の試験が含まれるが、これらに限定されない。かかる評価に用いられ得る方法および技術の例として、ELISA、マトリックス含有量の測定、免疫染色、および組織学的評価が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の実施形態は、所望の治療レベルの分泌因子および内在性因子を含むデバイスを生成するための細胞播種密度ならびに細胞培養条件の変化を包含する。かかるデバイスを評価するために用いられるアッセイには、例えば、目視による検査/操作、細胞の数および生存率、組織学的評価、例えば、ELISAまたはマトリックスキットを用いる栄養因子およびマトリックス生成の測定、ならびに機能的挙動例えば、ゲル収縮、細胞共培養アッセイが含まれるが、これらに限定されない。本発明は、さらに、コラーゲンベースの生理活性デバイスの作製法を提供する。図40は、コラーゲンベースの生理活性デバイスを作製するためのプロセスの実施形態を示すフローチャートである。ステップ1で、細胞を、本発明の方法によって調製する。ステップ2で、本明細書に開示するとおりに、これらの細胞をコラーゲンと混合する。ステップ3で、本明細書に記載するとおりに、これらの細胞をコラーゲンと培養する。ステップ4で、これらの構築物を処理する。例えば、実施形態において、本発明の細胞を、バイオマトリックス、例えば、コラーゲン、ゲル溶液に被包する。ゲル溶液を固化した後に、実施形態において、この構築物を低酸素条件下で培養する。培養期間の終わりに、実施形態において、これらの構築物を、例えば、グルタルアルデヒドで架橋結合し、続いて、例えば、グリシンで洗浄することによって処理する。実施形態において、これらの構築物を脱水し、これらの細胞が分泌する生理活性因子を保存したままこれらの細胞を不活性にさせる。これらの構築物を、脱水状態中または再水分補給rehydration後のいずれかでネオ組織および/または手術用移植片として用いることができる。脱水は完全脱水を包含する、すなわち、周囲条件下で、全ての液体がこれらの構築物から蒸発するが、必ずしも周囲湿度を下回る特定の湿度レベルまでの脱水を包含するわけではない。本発明の実施形態の一例には、約2×106細胞/mL、約5×106細胞/mLまたは約6×106細胞/mLの最終濃度で、CF-SCおよび/またはexCF-SCを約3mg/mL、約4mg/mLのコラーゲン例えば、ラットまたはブタのコラーゲンと組み合わせることが含まれるが、これに限定されない。図27を参照されたい。図27は、3mg/mLまたは4mg/mLのいずれかの濃度で、医療グレードのブタコラーゲンゲル例えば、THERACOL商標;SEWONCELLONTECH、ソウル、韓国内にヒトexCF-SCを様々な密度で播種し、培地中で懸濁培養した結果を示す各時点での各条件についてn=3。ゲル構築物の直径を、24、48および72時間の時点で測定した。x方向およびy方向の初期の直径を各時点の収縮した直径と比較することにより、表面積の収縮の割合を算出した。熱不活性化した細胞を含む対照ゲルは、ほとんど収縮しなかった。対照的に、細胞密度の増加に伴う、またコラーゲンゲル濃度の増加に伴うコラーゲンゲル収縮の用量反応があった。本発明の実施形態は、さらに、約1×103細胞/mL~約1×107細胞/mLの範囲の最終濃度で、CF-SCおよび/またはexCF-SCをコラーゲンまたは別の生体適合性マトリックスと組み合わせることを含む。例えば、本発明の実施形態は、約1×103細胞/mL以上、約1×104細胞/mL以上、約1×105細胞/mL以上、約1×106細胞/mL以上、約1×107細胞/mL以上、約2×103細胞/mL以上、約2×104細胞/mL以上、約2×105細胞/mL以上、約2×106細胞/mL以上、約3×103細胞/mL以上、約3×104細胞/mL以上、約3×105細胞/mL以上、約3×106細胞/mL以上、約4×103細胞/mL以上、約4×104細胞/mL以上、約4×105細胞/mL以上、約4×106細胞/mL以上、約5×103細胞/mL以上、約5×104細胞/mL以上、約5×105細胞/mL以上、約5×106細胞/mL以上、約6×103細胞/mL以上、約6×104細胞/mL以上、約6×105細胞/mL以上、約6×106細胞/mL以上、約7×103細胞/mL以上、約7×104細胞/mL以上、約7×105細胞/mL以上、約7×106細胞/mL以上、約8×103細胞/mL以上、約8×104細胞/mL以上、約8×105細胞/mL以上、約8×106細胞/mL以上、約9×103細胞/mL以上、約9×104細胞/mL以上、約9×105細胞/mL以上、約9×106細胞/mL以上、の最終濃度で細胞を有するコラーゲンまたは別の生体適合性マトリックスを含んでもよい。本発明の実施形態は、約0.1mg/mL~約50mg/mLの範囲の濃度でコラーゲンまたは別の生体適合性マトリックスと組み合わせて、任意の最終濃度でCF-SCおよび/またはexCF-SCまたはそれに由来する成分を含んでもよい。例えば、本発明の実施形態は、約0.1mg/mL以上、0.5mg/mL以上、1mg/mL以上、2mg/mL以上、3mg/mL以上、4mg/mL以上、5mg/mL以上、6mg/mL以上、7mg/mL以上、8mg/mL以上、9mg/mL以上、10mg/mL以上、12mg/mL以上、15mg/mL以上、20mg/mL以上、25mg/mL以上、30mg/mL以上、40mg/mL以上、50mg/mL以上の濃度でコラーゲンまたは別の生体適合性マトリックスを有するCF-SCおよび/またはexCF-SCまたはそれに由来する成分を含んでもよい。本発明の実施形態は、所望のレベルの栄養因子例えば、限定されないが、VEGFの生成/濃度を提供するように最適化した、組み合わせる最終コラーゲン濃度、細胞濃度、および期間で、生体適合性マトリックス例えば、限定されないが、コラーゲンとCF-SCおよび/またはexCF-SCとを組みあわせることを含む。図28を参照されたい。図28は、4mg/mlの医療グレードのブタコラーゲンゲルネオ組織の中に、2e6、5e6、または6e6細胞/mLの様々な密度でヒトexCF-SCを播種し、1日、3日、または6日のいずれかの間、培地中で懸濁培養して得られた結果を示す各時点での各条件についてn=3。構築物に、一日おきに新鮮な培地を補充するか、または示したところには、6日の培養期間中、補充しなかった。各時点で、ゲルを、平衡塩類溶液で3回洗浄し、急速凍結した。タンパク質抽出緩衝液中で機械的に解離させることにより、溶解物を各ゲルで作製した。ゲル溶解物にELISAを用いて、hABM-SCコラーゲンゲル構築物内に含まれるVEGFの量ngを定量化したエラーバーは、3つの別々のゲルの標準偏差を表す。対照には、培養しないゲルのみ、2e6細胞/mlを播種して培養しないゲル、および熱不活性化した5e6細胞/mlを播種して6日間培養したゲルが含まれる。結果は、細胞密度が増加するにつれ、ゲル内に含まれるVEGFが増加することを示す。3日の培養時間が、hABM-SCを播種したコラーゲンゲル内に最高量のVEGFを有することを示す。本発明の代表的な実施形態として、限定されないが、CF-SCおよび/またはexCF-SCを、約1~約30日の範囲の期間中、本明細書に記載の任意の細胞濃度で、本明細書に記載の任意濃度のコラーゲンと組み合わせてもよい。例えば、上記の期間は、限定されないが、約:1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、14日、15日、20日、25日、および30日であってもよい。本発明の実施形態において、ゲルネオ組織、またはゲル構築物は、1ml~20ml、2ml~10ml、3ml~8mlまたは5ml~約7mlのゲルの総容積を含む。実施形態において、このゲルの総容積は、少なくとも1ml、少なくとも2ml、少なくとも3ml、少なくとも4ml、少なくとも5ml、少なくとも6ml、少なくとも7ml、少なくとも8ml、少なくとも9ml、少なくとも10ml、少なくとも11ml、少なくとも12ml、少なくとも13ml、少なくとも14ml、少なくとも15ml、少なくとも16ml、少なくとも17ml、少なくとも18ml、少なくとも19ml、および少なくとも20mlである。本発明の実施形態には、SCAFTEX商標PLGA足場BMS、BioMedicalStructures、LLC、ロードアイランド州、米国などの生体適合性のマトリックスおよび足場が含まれるが、これに限定されない。本発明の実施形態には、血清を含む培地、追加の成長因子および/もしくは生存因子を含む培地、タンパク質を含まない培地すなわち、化学的に定義された培地、または血清を含まない培地例えば、タンパク質は補充するが、血清を補充しない培地を用いて、生体適合性のマトリックスおよび足場の中で培養したCF-SCおよび/またはexCF-SCが含まれるが、これらに限定されない。市販の足場製品の限定されない数例として、以下のものが挙げられる:BIOBRANE商標BertekPharmaceuticalsInc、PERMACOL商標TissueScienceLaboratoriesInc、STRATTICE商標LifeCellCorp、E-Z-DERM商標BrennenMedicalInc、MATRISTEM商標MedlineIndustriesInc、INTEGRA商標およびINTEGRA商標FlowableWoundMatrixIntegraLifeSciencesCorp、PRIMATRIX商標TEIBiosciences社、TISSUEMEND商標TEIBiosciences社、ALLODERM商標LifeCellCorp、CYMETRA商標LifeCellCorp、NEOFORM商標MentorCorp、DermaMatrixMusculoskeletalTransplantFoundation商標MTF商標、GRAFTJACKET商標およびGRAFTJACKETXPRESS商標LifeCellCorporationandWrightMedicalGroup、GAMMAGRAFT商標PrometheanLifeSciencesInc、ORTHADAPT商標BioimplantPegasusBiologicsInc。生存しているまたは生存していない細胞を含む市販の足場製品の限定されない数例として、以下のものが挙げられる:CELADERM商標AdvancedBioHealingInc、LASERSKIN商標FidiaAdvancedBiopolymersSRLイタリア、PERMADERM商標CambrexCorp、APLIGRAF商標OrganogenesisInc、ORCEL商標OrtecInternationalIncイスラエル、DERMAGRAFT商標AdvancedBiohealingInc、およびTRANSCYTE商標AdvancedBiohealingInc。生存していない生理活性デバイスを生成するのに使用してもよい方法の限定されない数例として、例えば、グルタルアルデヒド、カルボジイミド、ポリエポキシド化合物、およびジビニルスルホンなどの薬剤を用いる架橋結合処理、室温でのデバイスの保存を可能にし、タンパク質含有量を維持する働きもする凍結乾燥などの処理を細胞またはデバイスに施すこと;例えば、DERMAGRAFT商標に対して現在使用されている1回または複数回の凍結/融解サイクルを細胞および/またはデバイスに施すこと;ならびに細胞および/またはデバイスが凍結にさらされた時に生成される免疫原性ペプチドによって引き起こされ得る免疫原性の可能性を減少させるのを助けることもできる脱細胞化が挙げられる。本発明の実施形態において、グルタルアルデヒドなどの少なくとも1種類の架橋剤が、0.0009~0.09、0.001~0.08、0.005~0.05および0.008~0.08の濃度でこの架橋結合反応に存在する。実施形態において、この架橋剤が、0.01、0.05または0.005でこの架橋結合反応に存在する。本発明は、所望のレベルの栄養因子例えば、限定されないが、VEGFの生成/濃度を提供するように最適化した、組み合わせる最終コラーゲン濃度、細胞濃度、および期間で、CF-SCおよび/またはexCF-SCならびに生体適合性マトリックスおよび/または生分解性マトリックス例えば、限定されないが、コラーゲンを含む、動物に移植するためのデバイスを提供する。かかるデバイスを、例えば、手術時に移植することができる。実施形態において、このデバイスは、脱水状態および再び水分が補給されたrehydrated状態の両方において可撓性があり、耐久性があるなどの適切な物理的性質を有する。代表的な実施形態において、これらのデバイスは、円形またはほぼ円形であり、少なくとも23mm、少なくとも24mm、少なくとも26mm、少なくとも27mm、少なくとも28mm、少なくとも29mm、少なくとも30mmおよび少なくとも35mmの直径を有する。実施形態において、これらのデバイスは、少なくとも60mg、少なくとも65mg、少なくとも70mg、少なくとも80mg、少なくとも90mg、少なくとも100mg、少なくとも110mg、少なくとも115mg、少なくとも120mgおよび少なくとも130mgの重さがある。実施形態において、本発明のデバイスを、ヒトを含む動物の整形外科的な傷害を予防するかまたは修復するのに用いる。実施形態において、整形外科的な傷害には、首、腕、背中、肘、手、足、膝、手首、腰、および足首への傷害が含まれるが、これらに限定されない。例えば、ヒトを含む動物の腱傷害は、修復を必要とする領域にこのデバイスを接着することによって支援することができる。実施形態において、本発明のデバイスは、ほぼ長方形である。例えば、円形の断片を、身体の一部に接着させるために条片に切断することができる。実施形態において、修復の対象となる腱は、ヒトの手の中にある。実施形態において、このデバイスを、負傷した動物、例えば、ヒトの体に外科的に移植する。例えば、本発明のデバイスは、腱の周りを効果的に包み、滑らかな滑走面を提供することは明らかであるという点で、腱上epi-tendinousの修復の代替物として用いることができる。腱上の修復は、歴史的に、その修復に20強度を加えるので、本発明の生理活性デバイスが、これの縫合thisstitchの使用を排除することができる。追加の因子がこのデバイス内に埋め込まれると、屈筋腱の強度の改善および癒着形成の減少の両方が実現できる。実施形態において、例えば、軟骨細胞が埋め込まれた本発明のデバイスを、親指の関節炎の手術CMC関節形成におけるスペーサーとして用いる。FDAに承認され、軟骨形成細胞からなる生理活性成分を含まない2つの主要な移植片が、現在、CMC関節手術に用いられている。バイオアッセイの例さらに生理活性を最適化し、本発明の細胞、細胞成分、および生理活性デバイスが実行する作用機序を検討し、さらに特定するために用いることができる様々なバイオアッセイが利用できる。限定されないが、かかるアッセイの数例として、スクラッチアッセイ、AmJPathol1561:193-2002000およびその中で引用されている参考文献に記載されるものなどのインビトロモデル系として3次元皮膚構築物を用いる生理活性の評価、マクロファージ活性化の評価、および本発明の細胞および生理活性デバイスによって生成される因子の定性的および定量的な分泌プロファイルに対する追加因子の効果の評価が挙げられ得る。このスクラッチアッセイは、インビトロでの細胞移動を測定するための、簡単で低コストの、よく知られている方法である。このアッセイは、細胞培養単層を掻いて、接着細胞のないを空隙を作製することによって行われる。空隙すなわち、擦り傷は、この空隙を超えて移動する、かつ/または成長する細胞によって閉鎖されるので、細胞移動の開始時、ならびに細胞移動の間に、一定間隔で、空隙の画像を取得してもよい。次に、画像の比較を行い、対照治療と比較して、少なくとも1つの実験的な治療法を用いて、これらの細胞の移動速度を定量化する。図29を参照されたい。図29は、hABM-SCが、インビトロの創傷閉鎖アッセイにおいて閉鎖の割合および大きさを高める因子を生成することを証明する結果を示す。特に、単層を横切って擦り傷を作るためにピペットチップで傷をつける前に、正常なヒトケラチノサイトNHEKをコンフルエントな単層になるまで増殖させた。4時間および6時間の間隔で、擦り傷を作ったすぐ後に写真を撮り、対照培地または馴化培地でインキュベートした。創傷閉鎖の程度を、画像解析ソフトウェアCMA、MuscaleLLCを用いて、初期の写真と4時間および6時間の写真を比較し、擦り傷の領域を計算することにより決定した。閉鎖の程度を、この図で最初の傷の割合として示す。ヒトexCF-SC細胞が分泌する因子を有する馴化培地完全馴化培地は、hABM-SC細胞に曝露されていない対照培地完全培地と比較して、閉鎖の割合が増加した。4時間および6時間の時点の両方で、hABM-SC細胞のヒトexCF-SCによって馴化された培地で処理したウェルに残っている擦り傷の領域は、対照培地で処理したものと比較して有意に減少しそれぞれ、p<0.001、p<0.01、このことは、閉鎖率および閉鎖の大きさの両方が増加したことを示す。AmJPathol1561:193-2002000およびその中で引用されている参考文献に記載されるものなどの3次元皮膚構築物を用いて、例えば、皮膚の成長、発達、モデリング、リモデリング、および創傷修復に対する本発明の生理活性デバイスの効果を分析し、最適化することができる。本発明の細胞および生理活性デバイスによって生成されるタンパク質および他の化合物の定性的および定量的な分泌プロファイルに対する追加因子の効果の評価を、様々な追加因子を用いて行ってもよい。限定されないが、かかる評価の3例として、図30、図31、および図32は、IL-1αIL-1a、TNF-αTNFa、およびインターフェロン-γIFNgの分子による外因的な処理にさらされた場合、またはさらされない場合の、骨髄由来細胞によって生成される因子の分泌プロファイルに対するこれらの分子の効果を示す。図30は、ヒトexCF-SCを、24時間、IL-1αIL-1a10ng/mLに暴露した後に、RayBiotech社ノークロス、ジョージア州、米国のQUANTIBODY商標グラス抗体アレイを用いて、馴化培地中の分泌因子を定量的に測定した結果を示す。各抗体によって検出されたタンパク質量の計算を、RayBiotech社のQアナライザーソフトウェアを用いた5点の標準曲線を用いて行った。各抗体を、陽性の対照および陰性の対照と共に、4つ組でアレイを行った。異常値を、Qアナライザーソフトウェアを用いて生データから自動的に排除し、平均値を決定して、タンパク質量を計算した。各バーは、3回の生物学的反復の平均値±標準偏差を表す。8つの因子すなわち、GM-CSF、GDNF、CXCL-16、MMP-3、ENA-78、GCP-2、RANTES、MIP-3aは、IL-1a刺激時にのみ検出されたが、追加因子例えば、GDF-15、IL-8、GRO、MCP-1は、IL-1a処理により、基礎レベルを越えて少なくとも2倍誘導された。IL-1αは炎症状態で存在しているので、ヒトexCF-SCによるこれらの因子の上方制御は、炎症の抑制、血管新生、組織再生および免疫エフェクターの動員に重要である。図31は、ヒトexCF-SCを、24時間、腫瘍壊死因子αTNFa10ng/mLに暴露した後に、RayBiotech社ノークロス、ジョージア州、米国のQUANTIBODY商標グラス抗体アレイを用いて馴化培地中の分泌因子を定量的に測定した結果を示す。各抗体によって検出されたタンパク質量の計算を、RayBiotech社のQアナライザーソフトウェアによる5点の標準曲線を用いて行った。各抗体を、陽性の対照および陰性の対照と共に、4つ組でアレイを行った。異常値を、Qアナライザーソフトウェアを用いて生データから自動的に排除し、平均値を決定して、タンパク質量を計算した。各バーは、3回の生物学的反復の平均値±標準偏差を表す。5つの因子すなわち、CXCL-16、ENA-78、ICAM-1、MIP-3a、RANTESは、TNFa刺激時にのみ検出されたが、追加の5つの因子すなわち、GDF-15、PIGF、IL-8、GRO、MCP-1は、TNFa処理により、基礎レベルを越えて少なくとも2倍誘導された。TNFaは炎症状態で存在しているので、hABMSCによるこれらの因子の上方制御は、炎症の抑制、血管新生、組織再生および免疫エフェクターの動員に重要である。図32は、ヒトexCF-SCを、24時間、インターフェロンγIFNg10ng/mLに暴露した後に、RayBiotech社ノークロス、ジョージア州、米国のQUANTIBODY商標グラス抗体アレイを用いて、馴化培地中の分泌因子を定量的に測定した結果を示す。各抗体によって検出されたタンパク質量の計算を、RayBiotech社のQアナライザーソフトウェアによる5点の標準曲線を用いて行った。各抗体を、陽性の対照および陰性の対照と共に、4つ組でアレイを行った。異常値を、Qアナライザーソフトウェアを用いて生データから自動的に排除し、平均値を決定して、タンパク質量を計算した。各バーは、3回の生物学的反復の平均値±標準偏差を表す。2つの因子すなわち、GDNFおよびCXCL16は、IFNg刺激時にのみ検出されるが、追加の2つの因子すなわち、PIGFおよびMCP-1は、IFNg処理により、基礎レベルを越えて少なくとも2倍誘導される。IFNgは炎症状態で存在しているので、hABMSCによるこれらの因子の上方制御は、炎症の抑制、血管新生、組織再生および免疫エフェクターの動員に重要である。図33は、お互いに比較したhABM-SCに対する腫瘍壊死因子αTNFa、インターフェロンγIFNg、およびインターロイキン-1αIL-1aの相対効果のサイドバイサイド比較を提供する。完全培地AMEM10血清グルタミン中で2日間、その後、培地ビヒクル基礎または培地10ng/mlの腫瘍壊死因子αTNFa、インターフェロンγIFNgもしくはインターロイキン-1αIL-1a中で、1日維持したヒトexCE-SCの培養液から上清spntsを収集した。この上清に存在する150以上の因子の定量分析を、RayBiotech社のQuantibodyアレイを用いて完了した。この表は、基礎および処理上清を比較したときの変化の大きさと方向を示す。数値コードを用いて、効果の大きさおよび方向に基づいて、これらの効果を5つのカテゴリーに分けた:-2=2を越える減少、-1=0~-2の減少、0=変化なし、1=10未満の誘導、10=10~1000の誘導、1000=1000を越える誘導。これらの結果は、ヒトABM-SCが異なる炎症マーカーに反応してそれらの分泌プロファイルを変更し、その結果、ヒトABMSCが、インビボ環境に応じて異なる効果を持つと期待できる可能性を示す。図34は、限定されないが、示される因子の誘導が、治療効果を与えるのに有用であり得る様々な生物システムの例例えば、血管、免疫、再生、炎症、および創傷修復のシステムならびに血管、免疫、再生、炎症、および創傷修復のメカニズムを示す。転写物発現のゲノムプロファイルの評価を用いて、本発明の細胞および生理活性デバイスに対する細胞培養条件の効果を最適化し、分析することができる。例えば、図35は、4酸素で増殖させ、30細胞/cm2で播種した線維芽細胞対20酸素で増殖させ、3000細胞/cm2で播種した線維芽細胞において、約200の転写物が、少なくとも2倍異なって発現するp≦0.01という事実を示すグラフである。これらの結果を、さらに、以下の表2に記載する。具体的には、異なって発現した遺伝子を、4酸素条件下で培養し、30細胞/cm2の細胞播種密度で継代した新生児のヒト皮膚線維芽細胞NHDFを用いて、20酸素条件下で培養し、3000細胞/cm2の細胞播種密度で継代したNHDFにおける遺伝子発現と比較して同定した。約37回の集団倍加後、低酸素4で低細胞播種密度30細胞/cm2または高酸素20で高細胞播種密度3000細胞/cm2のいずれかの条件下で、それぞれ3つのフラスコ中で増殖させたNHDF細胞からRNAを単離した。このRNAをCy5で標識し、30,968個のヒトプローブを含むPhalanxBiotechGroup社パロアルト、カリフォルニア州、米国のヒト全ゲノムONEARRAY商標とハイブリダイズさせた。各増殖条件下での遺伝子発現の倍数変化を、全部で3種類の3つ組の試料について決定した。少なくとも2倍異なって発現した196個のプローブを同定したP≦0.01。このデータは、低酸素で低細胞播種密度の条件下で増殖させたnhDFが、標準的な組織培養条件と比較して、著しく異なる遺伝子発現プロファイルをもたらすことを示す。再生および治療用の粉末本発明の実施形態には、ヒトまたは非ヒト供給源に由来するCF-SCおよび/またはexCF-SCと生分解性マトリックス例えば、コラーゲン、PGAなどの組み合わせを用いた、インビトロでの組織例えば、骨格筋、平滑筋、皮膚、軟骨などの再生が含まれる。本発明の実施形態には、CF-SCおよび/またはexCF-SCから生成される乾燥もしくは凍結乾燥した再生用ならびに治療用の粉末の生成が含まれる。本発明の実施形態には、CF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはCF-SCおよび/またはexCF-SCの成分が組み込まれた人工組織および生物学的に適合したマトリックス例えば、コラーゲンマトリックスから生成される再生用ならびに治療用の粉末も含まれる。例えば、CF-SCおよびexCF-SC、生物学的に適合したマトリックスに組み込まれたCF-SCおよびexCF-SC、ならびに人工組織に組み込まれたCF-SCおよびexCF-SCは、米国特許第7,358,284号Griffeyetal;これにより、参照により本明細書に組み込まれるに記載され、さらに引用される方法にしたがって処理され、利用され得る。本発明の実施形態は、無細胞の組織マトリックスの一部として基底膜を含まないし構成もしないCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれに由来する成分を含む乾燥もしくは凍結乾燥した再生用ならびに治療用の粉末を包含する。本発明の実施形態は、本発明の粉末を患者と接触させることによって、治療を必要としている患者の病状を治療することを含む。実施形態において、真皮の変形例えば、挫瘡瘢痕、法令線の治療のために、声帯瘢痕、例えば、死んだ皮膚の壊死組織切除後ではあるが、皮膚弁移植前に適用される第3度熱傷の治療のために、および/または所望の予後が、瘢痕化が殆どない、より早い治癒である全ての臨床的シナリオにおいて、本発明の再生用ならびに治療用の粉末を用いて、開放創を治療し、歯周の修復を助けるかまたは歯周の修復をもたらす。本発明の実施形態は、本明細書に記載の新しい組織を作製すること、その後、これらの組織を、治療薬として用いることができる、生存していない微粒子粉末に覆うことを含む。本発明の実施形態は、他の所望の組織を構築するために、ECM細胞外マトリックスの供給源として粉末を使用することも含む。本発明の実施形態には、さらに、ヒト、または非ヒト動物において、注射、噴霧、層にすること、充填、およびケーシングによるin-casingインビボ適用のために、液体形態、半液体形態、または乾燥形態で粉末を調製すること、ならびに使用することが含まれる。獣医学への適用本発明の実施形態には、少なくとも一部が非ヒト細胞に由来する細胞、細胞組成物、および生理活性デバイス、ならびに獣医学すなわち、非ヒトへの適用に有用な方法も含まれる。例えば、組成物および生理活性デバイスは、限定されないが、ウマ科の動物例えば、ウマ/ロバ、ブタporcine例えば、ブタpig、イヌ科の動物例えば、イヌ、ネコ科の動物例えば、ネコ、ウシ科の動物例えば、雌ウシ、ヒツジovine例えば、ヒツジsheep、ヤギcaprine例えば、ヤギgoat、ラクダ科の動物例えば、ラクダ/ラマ、およびネズミ科の動物例えば、ラット/マウスのカテゴリーの動物に由来するか、またはそれらの動物を治療するために用いられ得る。例として、限定されないが、ウマ科の動物ウマ供給源からの成体骨髄由来細胞は、低酸素4および低細胞播種60細胞/cm2下でインビトロ培養した時に、急速増殖ならびに高回数の細胞倍加を可能にすることが証明されている。図36を参照されたい。特に、図36は、ウマ科の動物ウマ骨髄由来体細胞の増殖の動態プロットを示す。1ヶ月齢の子ウマの上腕骨および大腿骨からの骨髄由来細胞を60,000細胞/cm2で播種し、4酸素で増殖させ、マスターセルバンクMCBを作製した。MCBおよびその後に続く全てのワーキングセルバンクWCB1-WCB3を60細胞/cm2で播種し、4酸素および低細胞播種密度でウマのABMSCの増殖動態を決定した。MCBの合計39回の細胞集団倍加を、増殖あたり平均8回の細胞集団倍加で4回を越える増殖を達成した。これらの結果は、ヒトABMSCが低酸素および低細胞播種密度の条件下で増殖するのと同様の倍加ならびに増殖動態で、ウマABMSCは増殖することができることを示す。さらに、上記の条件下で培養したウマ科の動物ウマの成体骨髄由来の細胞集団は、表3に示す特有のタンパク質発現プロファイルを示すことが明らかになった。特に、ウマABM-SCを、マスターセルバンクおよびワーキングセルバンク中の表面マーカーの発現についてフローサイトメトリーによって特徴づけた。ウマの末梢血単核球PBMCを、ウマABMSCにおいて陰性であるいくつかのマーカーに対する陽性対照として用いた。これらの結果は、ウマABMSCが、表面マーカーのCD44、CD49d、CD49e、CD49f、CD90、およびCD147によって同定され得ることを示す。これらのマーカーは、全ての増殖にわたって一貫した発現を示す。さらに、ウマABMSCは、全ての増殖にわたってGM-CSFおよびビメンチンを発現する。より低い割合で発現する他の表面マーカーは、CD13およびMHCIである。PBMC上では発現するが、ウマのABMSC上では発現せず、混入物の可能性を検出するのに用いることができるマーカーは、CD31、CD33、CD34およびCD11bである。ウマ科の動物ウマの成体骨髄由来の細胞集団が、コラーゲンマトリックスで培養した時に、ヒトおよびブタの成体骨髄由来細胞について以前に証明されたのと同じタイプの生理活性ゲル収縮を示すことも証明された。例えば、図37を参照されたい。例えば、図37は、ウマABM-SCを1.6mg/mlのラットの尾のコラーゲンゲル内に5e6細胞/mlで播種し、3日間、培地中で懸濁培養した時に得られた結果を示す。ゲル構築物の直径を、24時間、48時間、および72時間の時点で測定した。x方向およびy方向の最初の直径を各時点の収縮した直径と比較することによって、表面積収縮の割合を計算した。熱不活化細胞を含む対照ゲルは収縮をほとんど示さなかったが、培養3日後に、活性細胞が、これらのゲルを最初のサイズから5.8まで著しく収縮させた。本発明の別の実施形態において、hABM-SCは、生体適合性の細胞マトリックス中にかなりの量のVEGFを生成することもできる。例えば、図38は、exCF-SCを播種し、培養したポリ乳酸-co-グリコール酸PLGAの足場内のVEGF量を示す。細胞を、直径2cmの不織PLGA重合体の足場上に、3e6細胞または7e6細胞の様々な密度で播種し、1日間、3日間、または6日間培養した。培養2日目および4日目に、構築物に新鮮な培地を補充した。各時点で、構築物を、平衡塩類溶液で3回洗浄し、急速凍結させた。タンパク質抽出緩衝液中で機械的に解離させることによって、溶解物を各構築物から作製した。構築物の溶解物にELISAを用いて、hABM-SC播種したPLGA構築物内に含まれるVEGFの量ngを定量化した。結果は、細胞密度の増加につれて、PLGA構築物内に含まれるVEGFが増加することを示す。本発明の実施形態は、PLGA足場などの生体適合性マトリックス内に、約100細胞/mm3~約100000細胞/mm3の範囲の密度で播種したABM-SC例えば、ヒトまたは非ヒトCF-SCまたはexCF-SCを含む。例えば、本発明の実施形態は、約100、500、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、10000、15000、20000、25000、30000、35000、40000、45000、50000、60000、70000、80000、90000および100000細胞/mm3以上で、生体適合性マトリックス内に播種した細胞を含む。追加の再生用および治療用の組成物ならびに適用本発明の実施形態は、例えば、戦争中の兵士に起こるか、または熱傷もしくは高速発射体によって受けた熱傷もしくは傷害を患う他の個人において起こるものなどの急性および慢性の外傷に関連する傷害の治療および管理のために、本発明の生理活性組成物を使用することを含む。したがって、本発明の実施形態は、熱傷の傷害、皮膚創傷、外傷性脳損傷の治療および修復に有用な方法および組成物を含む。本発明の実施形態は、例えば、パーキンソン病およびアルツハイマー病などの神経病理学的病状の治療を含むが、これらに限定されない神経細胞および神経シグナル伝達の治療ならびにそれらの機能の維持のために、本発明の組成物を使用することを含む。本発明の実施形態は、例えば、乳腺切除/乳房再建術を行う患者において、切開部位の瘢痕の治癒および縮小を促進するために、外科的に誘導した傷害の治療および修復のために本発明の組成物を使用することも含む。本発明の追加の実施形態は、直接か、または乾燥粉末、液体、半液体、ペースト、固体、もしくは半固体などの任意の最終形態で適用することができる生体適合性マトリックスに組み込むか、生理活性組成物およびデバイスに組み込むか、再生用および治療用の粉末に組み込むかのいずれかにより、CF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分を使用することを含み、前記使用は、特に、限定されないが以下のものを包含してもよい:生体適合性シートすなわち、シート様マトリックス;これは、現場での熱傷または他の創傷に対して可動性があり、かつ迅速に適用するためにパケットに詰めることができるに組み込まれたCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;懸濁液中の例えば、開放創にスプレーするか、注入するか、または塗ることによる適用のためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用外傷性脳損傷などの傷害の軽減のためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;敗血症を防ぐか、または軽減するためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;亜急性の傷害例えば、手足救済の改善および切断防止のためにの治癒を促進するかまたは治癒をもたらすためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;自己の皮膚移植の予後を改善する例えば、拒絶リスクまたは取得の失敗を低下させるためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;外観を損なった瘢痕の縮小または修正のためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;パーキンソン病、アルツハイマー病または他の神経学的病変の過程を遅くするためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;慢性のおよび不十分な治癒の創傷の治癒を助けるためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用;限定的な瘢痕を縮小、改善、または除去する例えば、可動性および生活の質を向上させるためのCF-SCおよび/もしくはexCF-SCまたはそれら由来の成分の使用。本発明の特定の実施形態において、ABM-SCは、様々な形および形態の組織工学処理構築物において有用である。例えば、図39は、以下の写真を示す:AおよびB生存していない機械的に安定な生理活性構築物を生成するために培養し、架橋結合した後のhABM-SCを播種したブタコラーゲンゲル;C生存していない薄膜生理活性構築物を生成するために培養し、脱水した後のhABM-SCを播種したブタコラーゲンゲル;ならびにD不織のPLGA足場左およびhABM-SCを播種した不織のPLGA足場の培養構築物。本発明の追加の実施形態には、以下のものも含まれる:CF-SCおよび/またはexCF-SCを播種した足場を、他の細胞型と共培養し、例えば、神経、血管、骨、軟骨、心臓の疾患conditionの治療上有用な因子の生成のためにCF-SCおよび/またはexCF-SCに由来する組織特異的因子の刺激を可能にする生理活性組成物およびデバイス;CF-SCおよび/またはexCF-SCを播種した足場を、様々なO2、N2およびCO2のガス比で培養し、さらに所望の生理活性に最適化する組成物およびデバイスこれは、低酸素状態、大気状態、または過酸素状態をもたらすために、培養構築物と接触する空気中に存在する様々な割合の酸素を含み得る;CF-SCおよび/またはexCF-SCを播種した足場を、様々な培地条件下で培養し、さらに所望の生理活性に最適化する組成物およびデバイスこれは、増殖因子タンパク質、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、糖、脂肪酸、および緩衝剤などの化学因子の追加の変動を含み得る;特定の形態の天然マトリックスまたは合成高分子にCF-SCおよび/またはexCF-SCを播種するか、または患者への細胞またはそれらに由来する成分のマイクロキャリア送達ビヒクル用に、CF-SCおよび/またはexCF-SCを特定の形態に被包する組成物およびデバイス。さらに、CF-SCおよび/またはexCF-SCを用いて、インビトロで生成した特定の形態の組織工学処理構築物および足場を、患者への担体送達ビヒクル用に、生存可能なCF-SCおよび/またはexCF-SCと組み合わせて使用する;CF-SCおよび/またはexCF-SCから生成した組織工学処理構築物および足場を用いて、生理活性フィルム、包帯、パッチ、縫合糸、メッシュ、またはラップを生産することができる。これらの構築物の多数の形状、サイズ、および厚さを、特定の適用のために設計することができる。包帯またはパッチは、損傷した皮膚組織を覆うために適用することができる。可撓性のある構築物を、生理活性ラップとして使用し、骨、靭帯、腱、神経、および筋肉などのより不規則な形状の組織を囲むことができる;培養中のCF-SCおよび/またはexCF-SCならびにマトリックス足場の配置を、細胞のカプセル化、足場の外側の周囲に播種する細胞、細胞から足場に因子を分泌するための細胞-足場の並置を含む異なる構築物の調製のために特異的に設計することができる。免疫障害本発明の細胞および組成物を用いて、とりわけ、免疫疾患、自己免疫疾患、および炎症性疾患ならびに免疫障害、自己免疫障害、および炎症性障害を予防し、治療し、かつ/または改善することができる。かかる障害の数例を以下に示す:これらのリストは、単なる例示であり、全ての免疫疾患、自己免疫疾患、および炎症性疾患ならびに免疫障害、自己免疫障害、および炎症性障害に関して包括的であることを意図せず、以下のものは、本発明の細胞および組成物で治療することができる病状に関して制限するものとして解釈されるべきではない。完全なまたは部分的な自己免疫原因を有するいくつかの疾患の例:急性散在性脳脊髄炎ADEM、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群APS、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、クローン病、1型真性糖尿病、妊娠性類天疱瘡Gestationalpemphigoid、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群GBS、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、川崎病、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、オプソクローヌスミオクローヌス症候群OMS、視神経炎、オード甲状腺炎Ord’sthyroiditis、天疱瘡、悪性貧血、多発性関節炎、原発性胆汁性肝硬変、関節リウマチ、ライター症候群、シェーグレン症候群、高安動脈炎、巨細胞性動脈炎としても知られる側頭動脈炎、温式自己免疫性溶血性貧血、およびヴェーゲナー肉芽腫症。自己免疫に関連すると疑われているいくつかの疾患の例:全身性脱毛症、ベーチェット病、シャーガス病、慢性疲労症候群、自立神経障害、子宮内膜症、化膿性汗腺炎、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、神経性筋強直症、ナルコレプシー、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎、白斑、および外陰部痛。いくつかの免疫過敏性の疾患および障害の例:アレルギー性喘息、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎枯草熱、アナフィラキシー、重症筋無力症、血管浮腫、アルサス反応、アトピー性皮膚炎湿疹、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性悪性貧血、セリアック病、接触性皮膚炎例えば、ツタウルシ毒発疹poisonivyrash、好酸球増加症、胎児赤芽球症、農夫肺アルサス型反応、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、新生児溶血性疾患、免疫複合体糸球体腎炎、免疫性血小板減少症、重症筋無力症、天疱瘡、リウマチ熱、関節リウマチ、血清病、亜急性細菌性心内膜炎、ハンセン病の諸症状、マラリアの諸症状、結核の諸症状、全身性エリテマトーデス、側頭動脈炎、輸血反応、移植片拒絶、および蕁麻疹Urticaria蕁麻疹hives。いくつかの炎症性障害の例:アレルギー、強直性脊椎炎、関節炎、ぜんそく、自閉症腸炎、自己免疫疾患、ベーチェット病、慢性炎症、糸球体腎炎、炎症性腸疾患IBD、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、乾癬、乾癬性関節炎、再灌流傷害、関節リウマチ、移植片拒絶反応、および血管炎。いくつかの免疫不全障害の例:X連鎖無ガンマグロブリン血症および選択的免疫グロブリン欠損症などのB細胞欠損症、ディジョージ症候群胸腺形成不全、慢性粘膜皮膚カンジダ症、高IgM症候群、インターロイキン12受容体欠損症などのT細胞欠損症、重症複合型免疫不全症SCID、ウィスコットアルドリッチ症候群、および毛細血管拡張性運動失調などのT細胞とB細胞の複合異常、遺伝性血管浮腫または遺伝性血管神経性浮腫および発作性夜間ヘモグロビン尿症などの補体欠損症、白血球接着不全症、慢性肉芽腫症CGD、チェディアック東症候群、ヨブ症候群高IgE症候群、周期性好中球減少症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、ブドウ糖-6-リン酸脱水素酵素欠損症、およびインターフェロンγ欠損症などの食細胞欠乏症Phagocytedeficiencies、ならびに一般変異型免疫不全症CVID、Vici症候群、後天性免疫不全症候群AIDS。本発明の実施形態本発明の特定の実施形態には、以下のものが含まれる。A1.治療有効量の1つまたは複数の生物学的組成物を対象へ投与する方法であって、自己複製コロニー形成細胞の単離集団を前記対象へ投与することを含み、前記細胞集団中の細胞は、実質的に多分化能をもたず、前記細胞が正常核型を有し、前記細胞が不死化されない方法。A2.治療有効量の1つまたは複数の生物学的組成物を対象へ投与する方法であって、i自己複製コロニー形成細胞の単離集団によって生成される1つまたは複数の生物学的組成物を単離すること;およびii前記1つまたは複数の生物学的組成物を前記対象へ投与することを含み、前記細胞集団の細胞は、実質的に多分化能をもたず、前記細胞が正常核型を有し、前記細胞が不死化されない方法。A3.対象の損傷組織を修復するか、治療するか、または損傷組織の再生を促進する方法であって、有効量の自己複製コロニー形成細胞の単離集団を前記対象に投与することを含み、前記細胞集団の細胞は、実質的に多分化能をもたず、前記細胞が正常核型を有し、前記細胞が不死化されない方法。A4.対象の損傷組織を修復するか、治療するか、または損傷組織の再生を促進する方法であって、i自己複製コロニー形成細胞の単離集団によって生成される1つまたは複数の生物学的組成物を単離すること;およびii前記1つまたは複数の生物学的組成物を前記対象へ投与することを含み、前記細胞集団の細胞は、実質的に多分化能をもたず、前記細胞が正常核型を有し、前記細胞が不死化されない方法。A5.対象の炎症性活性、免疫活性、または自己免疫活性を治療するかまたは低下させる方法であって、有効量の自己複製コロニー形成細胞の単離集団を前記対象に投与することを含み、前記細胞集団の細胞は、実質的に多分化能をもたず、前記細胞が正常核型を有し、前記細胞が不死化されない方法。A6.対象の炎症性活性、免疫活性、または自己免疫活性を治療するかまたは低下させる方法であって、i自己複製コロニー形成細胞の単離集団によって生成される1つまたは複数の生物学的組成物を単離すること;およびii前記1つまたは複数の生物学的組成物を前記対象へ投与することを含み、前記細胞集団の細胞は、実質的に多分化能をもたず、前記細胞が正常核型を有し、前記細胞が不死化されない方法。A7.投与前に、前記細胞集団の細胞に多分化能を失わせるのに十分な多数の集団倍加の間、前記細胞集団をインビトロで継代する、実施形態A1~A6のいずれかに記載の方法。A8.前記細胞集団が単能性の分化能unipotentdifferentiationcapacityを有する、実施形態A1~A7のいずれか1つに記載の方法。A9.前記細胞が実質的な自己複製能を有する、実施形態A1~A8のいずれかに記載の方法。A10.投与前に、多数の集団倍加の間、実質的な自己複製能を保持しながら、前記細胞集団をインビトロで継代する、実施形態A1~A9のいずれかに記載の方法。A11.前記単離細胞集団の細胞が胚性幹細胞ではない、実施形態A1~A10のいずれか1つに記載の方法。A12.前記単離細胞集団の細胞が、幹細胞、間葉系幹細胞、造血幹細胞、多能性成体前駆細胞MAPC、多能性成体幹細胞MASC、や線維芽細胞ではない、実施形態A1~A11のいずれか1つに記載の方法。A13.前記細胞が、a骨細胞;b脂肪細胞;およびc軟骨細胞からなる群から選択される1つまたは複数の細胞型に分化しない、実施形態A1~A12のいずれか1つに記載の方法。A14.前記細胞が、骨誘導性条件下での治療後に、検出可能なレベルのカルシウムを沈着させない、実施形態A1~A13のいずれか1つに記載の方法。A15.前記骨誘導性条件が、外から供給されるノギンへの暴露を含む、実施形態A14に記載の方法。A16.前記単離細胞集団の細胞が結合組織に由来する、実施形態A1~A15のいずれか1つに記載の方法。A17.前記単離細胞集団の細胞が間質細胞である、実施形態A1~A16のいずれか1つに記載の方法。A18.前記単離細胞集団の細胞がCD49cおよびCD90を共発現する、実施形態A1~A17のいずれか1つに記載の方法。A19.前記細胞集団が、複数のインビトロ細胞倍加を通して、ほぼ一定の倍加速度を維持する、実施形態A1~A18のいずれか1つに記載の方法。A20.前記細胞が、aCD10;bSTRO-1;およびcCD106/VCAM-1からなる群から選択される1つまたは複数の抗原の検出可能な発現に関して陰性である、実施形態A1~A19のいずれか1つに記載の方法。A21.前記細胞が、aCD44;bHLAクラス-1抗原およびcβベータ2-ミクログロブリンからなる群から選択される1つまたは複数の抗原の検出可能な発現に関して陽性である、実施形態A1~A20のいずれか1つに記載の方法。A22.前記細胞が、aTNF-RI;b可溶性TNF-RI;cTNF-RII;d可溶性TNF-RII;eIL-1Rアンタゴニスト;およびfIL-18結合タンパク質からなる群から選択される検出可能な量の組成物を発現するかまたは分泌する、実施形態A1~A21のいずれか1つに記載の方法。A23.前記細胞が、表1A、表1Bおよび表1Cに示す組成物からなる群から選択される検出可能な量の組成物を発現するかまたは分泌する、実施形態A1~A21のいずれか1つに記載の方法。A24.前記単離細胞集団の細胞が、最初に、a骨髄;b脂肪組織/脂肪;c皮膚;d胎盤;e臍帯;f腱;g靭帯;h筋膜;およびi他の結合組織からなる群から選択される組織源から単離される、実施形態A1~A23のいずれか1つに記載の方法。A25.前記組織源がヒトである、実施形態24に記載の方法。A26.前記細胞集団が、以下のものからなる群から選択される多数のインビトロ細胞倍加を通して、ほぼ一定の倍加速度を維持する、実施形態A1~A25のいずれか1つに記載の方法:a1~5回の細胞倍加;b5~10回の細胞倍加;c10~20回の細胞倍加;d20~30回の細胞倍加;e30~40回の細胞倍加;f40~50回の細胞倍加;g1~50回の細胞倍加;h5~50回の細胞倍加;i10~50回の細胞倍加;j20~50回の細胞倍加;k30~50回の細胞倍加;l1~10回の細胞倍加;m1~20回の細胞倍加;n1~30回の細胞倍加;o1~40回の細胞倍加;p5~20回の細胞倍加;q5~30回の細胞倍加;r5~40回の細胞倍加;s10~30回の細胞倍加;t10~40回の細胞倍加;およびu20~40回の細胞倍加。A27.前記細胞集団が、以下ものからなる群から選択される多数の集団倍加を受ける、実施形態A1~A26のいずれか1つに記載の方法:a少なくとも約10回の集団倍加;b少なくとも約15回の集団倍加;c少なくとも約20回の集団倍加;d少なくとも約25回の集団倍加;e少なくとも約30回の集団倍加;f少なくとも約35回の集団倍加;g少なくとも約40回の集団倍加;h少なくとも約45回の集団倍加;i少なくとも約50回の集団倍加。A28.前記1つまたは複数の生物学的組成物が、前記細胞集団の細胞表面において、またはその細胞表面に結合している、実施形態A1~A27のいずれか1つに記載の方法。A29.前記1つまたは複数の生物学的組成物が、前記細胞集団の細胞外環境へ分泌される、実施形態A1~A28のいずれか1つに記載の方法。A30.前記1つまたは複数の生物学的組成物が、aタンパク質;b炭水化物;c脂質;d脂肪酸;e脂肪酸誘導体;d気体、およびe核酸からなる群から選択される1つまたは複数の分子である、実施形態A1~A29のいずれか1つに記載の方法。A31.前記タンパク質が、a糖化タンパク質;bサイトカイン;cケモカイン;dリンホカイン;e増殖因子;f栄養因子;g形態形成タンパク質;およびhホルモンからなる群から選択される、実施形態A30に記載の方法。A32.前記1つまたは複数の生物学的組成物が、以下のものからなる群から選択される分子に結合し、かつそれらの分子の生理活性を不活性化するかまたは低下させる、実施形態A31に記載の方法:a脂肪酸;b脂肪酸誘導体;c受容体分子;dサイトカイン;eケモカイン;fリンホカイン;g増殖因子;h栄養因子;i形態形成タンパク質;およびjホルモン。A33.前記1つまたは複数の生物学的組成物が、以下のものからなる群から選択される同族リガンドに結合する可溶性受容体である、実施形態A32に記載の方法:a脂肪酸;b脂肪酸誘導体;c受容体分子;dサイトカイン;eケモカイン;fリンホカイン;g増殖因子;h栄養因子;i形態形成タンパク質;およびjホルモン。A34.前記細胞が、1つまたは複数の生物学的組成物の発現を増加させるように誘導される、実施形態A1~A33のいずれか1つに記載の方法。A35.前記細胞が、1つまたは複数の生物学的組成物を発現するように誘導される、実施形態A1~A33のいずれか1つに記載の方法。A36.前記1つまたは複数の生物学的組成物が、表1A、表1Bおよび表1Cから選択される、実施形態A1~A29のいずれか1つに記載の方法。A37.前記1つまたは複数の生物学的組成物が以下のものからなる群から選択される、実施形態A1~A29のいずれか1つに記載の方法:aTNF-RI;b可溶性TNF-RI;cTNF-RII;D可溶性TNF-RII;eIL-1Rアンタゴニスト;およびfIL-18結合タンパク質。A38.前記細胞集団の細胞が、生存している哺乳類生物に投与される時、組織もしくは臓器において、または組織もしくは臓器と長期の生着を示さない、実施形態A1~A37のいずれか1つに記載の方法。A39.前記細胞集団の細胞が、1つまたは複数の治療上有用な組成物のほぼ一定のレベルのインビボ生産を維持する、実施形態A1~A38のいずれか1つに記載の方法。A40.前記生産レベルが、以下のものからなる群から選択される一定時間中維持される、実施形態A39に記載の方法:a少なくとも約24時間;b少なくとも約48時間;c少なくとも約72時間;d少なくとも約4日間;e少なくとも約5日間;f少なくとも約6日間;g少なくとも約7日間;h少なくとも約2週間;i少なくとも約3週間;j少なくとも約4週間;k少なくとも約1カ月;l少なくとも約2カ月;m少なくとも約3カ月:n少なくとも約6カ月;およびo少なくとも約1年。A41.前記患者がヒトである、実施形態A1~A40のいずれか1つに記載の方法。A42.前記方法が、以下のものからなる群から選択される疾患または障害を治療するために用いられる、実施形態A1~A41のいずれか1つに記載の方法。a神経の疾患または障害;b心臓の疾患または障害;c皮膚の疾患または障害;d骨格筋の疾患または障害;e呼吸器の疾患または障害;f肝臓の疾患または障害;g腎臓の疾患または障害;h尿生殖器系の疾患または障害;i膀胱の疾患または障害;j内分泌の疾患または障害;k造血の疾患または障害;l膵臓の疾患または障害;m糖尿病:n眼の疾患または障害;o網膜の疾患または障害;p胃腸の疾患または障害;q脾臓の疾患または障害;r免疫疾患または免疫障害;s自己免疫疾患または自己免疫障害;t炎症性疾患または炎症性障害;u過剰増殖性疾患または過剰増殖性障害、およびv癌。A43.前期細胞が、遺伝子改変された、実施形態A1~A42のいずれか1つに記載の方法。A44.前期細胞が、組換え核酸分子の導入によって遺伝子改変された、実施形態A43に記載の方法。A45.実施形態A1~A47のいずれか1つに記載の単離細胞集団を作製するプロセスであって、i生物から細胞供給源集団を得ること;およびii前記細胞供給源集団をインビトロで培養することを含むプロセス。B1.自己複製コロニー形成体細胞CF-SC、かかる細胞由来の馴化細胞培地、および精製された天然の細胞外マトリックスもしくは血漿タンパク質、または単離された組換え型の細胞外マトリックスもしくは血漿タンパク質の薬学的に許容される混合物を含む組成物。B2.前記CF-SCが骨髄由来である、実施形態B1に記載の組成物。B3.前記CF-SCがヒト由来である、実施形態B1またはB2に記載の組成物。B4.前記CF-SCがヒトを含む成体哺乳類に由来する、実施形態B1~B3のいずれか1つに記載の組成物。B5.前記CF-SCが、表1A、表1Bおよび表1Cに示す1つまたは複数の分泌タンパク質を発現する、実施形態B1~B4のいずれか1つに記載の組成物。B6.前記細胞外マトリックスまたは血漿タンパク質が、以下のものからなる群から選択される分子の1つまたは複数の全長もしくはオールターナティブプロセシングされたアイソフォーム、タンパク質分解断片、またはサブユニットを含む、実施形態B1~B5のいずれか1つに記載の組成物:aコラーゲン;bエラスチン;cフィブロネクチン;dラミニン;eエンタクチンニドジェン;fヒアルロン酸;gポリグリコール酸PGA;hフィブリノゲン第I因子;iフィブリン;jプロトロンビン第II因子;kトロンビン;l抗トロンビン;m組織因子VIIaのコファクター第III因子:nプロテインC;oプロテインS;pプロテインZ;qプロテインZ関連プロテアーゼインヒビター;rヘパリンコファクターII;s第V因子プロアクセレリン、不安定因子;t第VII因子;u第VIII因子;v第IX因子;w第X因子;x第XI因子;y第XII因子;z第XIII因子;aaフォンヴィルブランド因子;abプレカリクレイン;ac高分子量キニノーゲン;adプラスミノーゲン;aeプラスミン;af組織プラスミノーゲン活性化因子;agウロキナーゼ;ahプラスミノーゲン活性化因子インヒビター-1;およびaiプラスミノーゲン活性化因子インヒビター-2。B7.さらに、精製した天然のサイトカインもしくはケモカインまたは単離した組換え型のサイトカインもしくはケモカインを含む、実施形態B1~B6のいずれか1つに記載の組成物。B8.前記細胞外マトリックス、血漿タンパク質、サイトカイン、および/またはケモカインがヒトに由来する、実施形態B1~B7のいずれか1つに記載の組成物。B9.前記薬学的に許容される混合物が、半固体マトリックスまたは固体マトリックスを形成する、実施形態B1~B8のいずれか1つに記載の組成物。B10.損傷組織を、実施形態B1~B8のいずれか1つに記載の組成物で治療する方法であって、前記組成物が液体である方法。B11.前記液体が注射によって適用される、実施形態B10に記載の方法。B12.損傷組織を、実施形態1~9のいずれか1つに記載の組成物で治療する方法であって、前記組成物が液体として適用されるが、その後、半固体マトリックスまたは固体マトリックスを形成する方法。B13.前記組織が、以下のものからなる群から選択される病状の結果として損傷を受ける、実施形態B10~B12に記載の方法:a疾患;b物理的外傷;c虚血;d加齢;e熱傷;f細菌感染;gウイルス感染;h真菌感染;およびi免疫系の調節不全。B14.前記損傷組織が皮膚である、実施形態B13に記載の方法。B15.顔面皮膚の若返りのための、実施形態B1~B9のいずれか1つに記載の組成物の使用法。B16.前記組成物が急性炎症を阻害する、実施形態B1~B9のいずれか1つに記載の組成物の使用法。C1.損傷を受けた臓器または組織を治療するか、修復するか、再生するか、または治癒する方法であって、前記損傷を受けた臓器または組織の前記治療、修復、再生、または治癒を達成するために、前記損傷を受けた臓器または組織を、有効量の自己複製コロニー形成体細胞またはかかる細胞から生成される組成物と接触させることを含む方法。C2.前記損傷を受けた臓器または組織を、以下のものからなる群から選択される手段によって、有効量の自己複製コロニー形成体細胞またはかかる細胞から生成される組成物と接触させる、実施形態C1に記載の方法:a損傷を受けた臓器または組織への注射;b損傷を受けた臓器または組織上への適用;c損傷を受けた臓器または組織の近位の部位への注射;d損傷を受けた臓器または組織の近位の部位への適用;e静脈内投与。C3.前記細胞が骨髄に由来する、実施形態C1またはC2に記載の方法。C4.前記細胞がヒトである、実施形態C1~C3のいずれか1つに記載の方法。C5.前記細胞または前記細胞によって生成される組成物が、細胞性自己免疫などの有害な免疫反応、線維症瘢痕化および/または有害な組織リモデリング例えば、心室リモデリングを阻害するかまたは低下させる、実施形態C1~C4のいずれか1つに記載の方法。C6.前記細胞または前記細胞によって生成される組成物が、炎症を制御し、かつ/または急性炎症を阻害する、実施形態C1~C5のいずれか1つに記載の方法。C7.前記細胞または前記細胞によって生成される組成物が、血管新生を刺激するかまたは増強する、実施形態C1~C5のいずれか1つに記載の方法。C8.前記細胞が、前記損傷を受けた臓器または組織内へと、顕著なレベルまたは検出可能なレベルの永久的な生着や長期の生着を示さない、実施形態C1~C5のいずれか1つに記載の方法。C9.前記損傷を受けた臓器が、心臓、脳、および脊髄からなる群から選択される、実施形態C1~C8のいずれか1つに記載の方法。C10.前記損傷を受けた組織が、心臓組織、中枢神経系組織および末梢神経系組織を含む神経組織、主要な動脈、静脈、および毛細血管ならびにマイナーな動脈、静脈、および毛細血管を含む血管組織からなる群から選択される、実施形態C1~C8のいずれか1つに記載の方法。D1.インビトロで新しい赤血球の生成を誘発する、増強する、かつ/または維持する方法。D2.前記誘発、増強、または維持が、自己複製コロニー形成細胞と造血前駆細胞との共培養によって達成される、実施形態D1に記載の方法。D3.前記自己複製コロニー形成細胞がヒト骨髄由来体細胞hABM-SCである、実施形態D2に記載の方法。D4.前記hABM-SCが成人由来である、実施形態D3に記載の方法。D5.前記共培養が、前記自己複製コロニー形成細胞からの造血前駆細胞の分離を維持するために半透過性のバリアーを利用する一方で、前記バリアーを越えて前記自己複製コロニー形成細胞によって生成される組成物の交換を可能する、実施形態D1~D3のいずれか1つに記載の方法。D6.前記誘発、増強、または維持が、自己複製コロニー形成細胞によって生成される単離した組成物と造血前駆細胞との共培養によって達成される、実施形態D1に記載の方法。D7.前記自己複製コロニー形成細胞がヒト骨髄由来体細胞hABM-SCである、実施形態D5に記載の方法。D8.前記hABM-SCが成人由来である、実施形態D6に記載の方法。D9.前記単離した組成物が凍結乾燥される、実施形態D5~D7のいずれか1つに記載の方法。D10.前記単離した組成物が凍結保存される、実施形態D5~D7のいずれか1つに記載の方法。D11.前記単離した組成物が、1つまたは複数の薬学的に許容される担体と混合される、実施形態D5~D7のいずれか1つに記載の方法。D12.細胞由来の組成物および/または栄養因子を生成し、単離し、精製し、かつ/または包装をする方法。D13.馴化培地を生成する方法であって、前記培地が血清を含むか、または無血清培地である方法。D14.馴化培地から画分および/または細胞由来の組成物を単離し、精製する方法であって、前記培地が血清を含むか、または無血清培地である方法。D15.CD34臍帯血細胞CBCを単離し、凍結保存し、かつ/または増殖させる方法。D16.前記CBCを懸濁培養で増殖させる、実施形態D15に記載の方法。D17.前記CBCを、自己複製コロニー形成細胞の支持細胞層と共培養することによって増殖させる、実施形態D15に記載の方法。D18.前記自己複製コロニー形成細胞がヒト骨髄由来体細胞hABM-SCである、実施形態D17に記載の方法。D19.デキストロースを含む平衡塩類溶液BSSDを含む洗浄液。D20.前記デキストロースが約4.5デキストロースの濃度である、実施形態D19に記載の洗浄液。D21.さらに、ヒト血清アルブミンを含む、実施形態D19またはD20に記載の洗浄液。D22.前記ヒト血清アルブミンが約5ヒト血清アルブミンの濃度である、実施形態D21に記載の洗浄液。D23.平衡塩類溶液中にジメチルスルホキシドDMSOおよびヒト血清アルブミンを含む凍結保存培地。D24.前記DMSO濃度が約5であり、前記HSA濃度が約5である、実施形態D23に記載の凍結保存培地。E1.骨髄由来の単離細胞集団であって、前記細胞集団の細胞の約91超がCD49cおよびCD90を共発現し、約30時間未満の倍加速度を有する細胞集団。E2.前記細胞集団がヒト骨髄由来である、実施形態E1に記載の単離細胞集団。E3.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、CD34および/またはCD45を発現しない、実施形態E1またはE2に記載の単離細胞集団。E4.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、GATA-4、Irx4、およびNkx2.5からなる群から選択される少なくとも1つの心臓関連転写因子をさらに発現する、実施形態E1、E2、またはE3のいずれか1つに記載の単離細胞集団。E5.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、以下のものからなる群から選択される少なくとも1つの栄養因子をさらに発現する、実施形態E1、E2、またはE3のいずれか1つに記載の単離細胞集団:a脳由来神経栄養因子BDNF;bシスタチン-C;cインターロイキン-6IL-6;dインターロイキン-7IL-7;eインターロイキン-11IL-11;f神経成長因子NGF;gニュートロフィン-3NTー3;hマクロファージ化学誘因物質タンパク質-1MCP-1;iマトリックスメタロプロテアーゼ-9MMP-9;j幹細胞因子SCF;およびk血管内皮増殖因子VEGF。E6.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、p21またはp53をさらに発現し、その際、p53の発現が、18srRNAの106個の転写物あたりp53の最高で約3000個の転写物の相対的発現であり、p21の発現が、18srRNAの106個の転写物あたりp21の最高で約20,000個の転写物の相対的発現である、実施形態E1、E2、またはE3のいずれか1つに記載の単離細胞集団。E7.前記単離細胞集団を、以下のものからなる群から選択される多数の集団倍加を通してインビトロ培養する、実施形態E1、E2、またはE3のいずれか1つに記載の単離細胞集団:a少なくとも約15回の集団倍加;b少なくとも約20回の集団倍加;c少なくとも約25回の集団倍加;d少なくとも約30回の集団倍加;e少なくとも約35回の集団倍加;およびf少なくとも約40回の集団倍加。E8.骨髄由来の単離細胞集団を作製する方法であって、前記細胞集団の細胞の約91超がCD49cおよびCD90を共発現し、前記細胞集団が約30時間未満の倍加速度を有し、以下のステップを含む方法:a低酸素条件または低酸化ストレス条件下で前記細胞集団の供給源を培養し、接着細胞集団を生成するステップ;およびb約2500細胞/cm2未満の播種密度で前記接着細胞集団を培養するステップ。E9.前記細胞集団がヒト骨髄に由来する、実施形態E8に記載の方法。E10.実施形態8のパートaに記載の細胞集団の供給源を、以下のものからなる群から選択される初期播種密度で培養する、実施形態E8またはE9に記載の方法:a約75000細胞/cm2未満;およびb約50000細胞/cm2未満。E11.実施形態8のパートbに記載の接着細胞集団を、以下のものからなる群から選択される播種密度で培養する、実施形態E8~E10のいずれか1つに記載の方法:a約2500細胞/cm2未満;b約1000細胞/cm2未満;c約100細胞/cm2未満;d約50細胞/cm2未満;およびe約30細胞/cm2未満。E12.前記低酸素条件が以下のものからなる群から選択される、実施形態E8~E11のいずれか1つに記載の方法:a約1~10の酸素;b約2~7の酸素;d約20未満の酸素;c約15未満の酸素;d約10未満の酸素;e約5未満の酸素;およびf約5の酸素。E13.前記細胞集団の供給源を培養する前に、前記細胞集団の供給源中の赤血球を溶解することをさらに含む、実施形態E8~E12のいずれか1つに記載の方法。E14.前記細胞集団の供給源を培養する前に、密度勾配を通過させることによって分画した供給源の前記細胞集団を、選択することをさらに含む、実施形態E8~E12のいずれか1つに記載の方法。E15.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、CD34および/またはCD45を発現しない、実施形態E8~E14のいずれか1つに記載の方法。E16.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、GATA-4、Irx4、およびNkx2.5からなる群から選択される少なくとも1つの心臓関連転写因子をさらに発現する、実施形態E8~E15のいずれか1つに記載の方法。E17.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、以下のものからなる群から選択される少なくとも1つの栄養因子をさらに発現する、実施形態E8~E15のいずれか1つに記載の方法:a脳由来神経栄養因子BDNF;bシスタチン-C;cインターロイキン-6IL-6;dインターロイキン-7IL-7;eインターロイキン-11IL-11;f神経成長因子NGF;gニュートロフィン-3NT-3;hマクロファージ化学誘因物質タンパク質-1MCP-1;iマトリックスメタロプロテアーゼ-9MMP-9;j幹細胞因子SCF;およびk血管内皮増殖因子VEGF。E18.CD49cおよびCD90を共発現する前記細胞集団の細胞が、p21またはp53をさらに発現し、その際、p53の発現が、18srRNAの106個の転写物あたりp53の最高で約3000個の転写物の相対的発現であり、p21の発現が、18srRNAの106個の転写物あたりp21の最高で約20,000個の転写物の相対的発現である、実施形態E8~E15のいずれか1つに記載の方法。E19.前記単離細胞集団を、以下のものからなる群から選択される多数の集団倍加を通してインビトロ培養する、実施形態E8~E15のいずれか1つに記載の方法:a少なくとも約15回の集団倍加;b少なくとも約20回の集団倍加;c少なくとも約25回の集団倍加;d少なくとも約30回の集団倍加;e少なくとも約35回の集団倍加;f少なくとも約40回の集団倍加。E20.以下のものからなる群から選択される疾患を患うヒトを治療するための薬剤の製造における、実施形態E1~E7のいずれか1つに記載の単離細胞集団の使用:a変性疾患;b急性損傷疾患;c神経学的疾患;d心臓疾患。E21.変性疾患または急性損傷疾患を患うヒトを治療するための薬剤の製造における、実施形態E1~E7のいずれか1つに記載の単離細胞集団の使用。E22.骨髄由来の単離細胞集団であって、前記細胞集団の細胞の約91超がCD49cおよびCD90を共発現する、低酸素条件下で約30時間未満の倍加速度を有する細胞集団。E23.前記細胞集団がヒト骨髄由来である、実施形態E22に記載の単離細胞集団。E24.前記低酸素条件が約1~10の酸素である、実施形態E22またはE23に記載の単離細胞集団。E25.前記低酸素条件が約5の酸素である、実施形態E24に記載の単離細胞集団。E26.前記細胞集団を、約2500細胞/cm2未満の播種密度で接着細胞集団として培養する、実施形態E22~E25のいずれか1つに記載の単離細胞集団。E27.前記播種密度が約1000細胞/cm2未満である、実施形態E22~E25のいずれか1つに記載の単離細胞集団。E28.前記播種密度が約100細胞/cm2未満である、実施形態E22~E25のいずれか1つに記載の単離細胞集団。E29.前記播種密度が約50細胞/cm2未満である、実施形態E22~E25のいずれか1つに記載の単離細胞集団。E30.前記播種密度が約30細胞/cm2未満である、実施形態E22~E25のいずれか1つに記載の単離細胞集団。E31.単離細胞集団を作製する方法であって、前記細胞集団の細胞の約91超がCD49cおよびCD90を共発現する、約30時間未満の倍加速度を有し、以下のステップを含む方法:aヒトから骨髄細胞を吸引するステップ;b骨髄吸引物の赤血球成分を溶解するステップ;c組織培養デバイス中に非溶解性骨髄細胞を播種するステップ;d非溶解性骨髄細胞を表面に接着させるステップ;e5酸素条件下で接着細胞を培養するステップ;f30細胞/cm2の播種密度で前記接着細胞を継代するステップ。E32.実施形態E31に記載の方法によって取得できる単離細胞集団。E33.実施形態E31に記載の方法によって取得した単離細胞集団。E34.単離細胞集団を作製する方法であって、前記細胞集団の細胞の約91超がCD49cおよびCD90を共発現し、前記細胞集団が30回の細胞倍加後に約30時間未満の倍加速度を有し、以下のステップを含む方法:aヒトから骨髄細胞を吸引するステップ;b密度勾配を通過させることによって分画した供給源の前記細胞集団を、選択するステップ;c組織培養デバイス中に分画細胞を播種するステップ;d前記分画細胞を表面に接着させるステップ;e5酸素条件下で接着細胞を培養するステップ;f30細胞/cm2の播種密度で前記接着細胞を継代するステップ。E35.実施形態E34に記載の方法によって取得できる単離細胞集団。E36.実施形態E34に記載の方法によって取得した単離細胞集団。実施例実施例1成人骨髄由来体細胞の生理活性:無血清の馴化培地の生成無血清の馴化培地を、以下に記載の分泌タンパク質の固相抗体捕捉などのアッセイにおいて使用するために、以下に記載のとおりに生成した。ヒトexABM-SCロット番号RECB-819;約43回の集団倍加の時点のを解凍し、4mMのL-グルタミンカタログ番号SH30034.01、ロット番号134-7944HYCLONE商標LaboratoriesInc、ローガン、ユタ州、米国を補充したAdvancedDMEMGIBCO商標カタログ番号12491-015、ロット番号1216032InvitrogenCorp、カールスバッド、カリフォルニア州、米国、または4mMのL-グルタミンを含み、インスリン-トランスフェリン-セレン-AITSGIBCO商標カタログ番号51300-044、ロット番号1349264を補充したHyQ登録商標RPMI-1640HYCLONE商標カタログ番号SH30255.01、ロット番号ARC25868のいずれかに再懸濁した。次に、細胞懸濁液を、T-225cm2CELLBIND商標CorningInc、ニューヨーク州、米国培養フラスコ培養表面を、特許権を有するマイクロ波プラズマプロセスで処理した;米国特許第6,617,152号参照n=3に、培地36mL中20,000細胞/cm2で播種した条件あたりn=3。培養物を、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内に約24時間置いた。次に、接着していないデブリを除去するのと同じ日に、培養物に新鮮な培地を再供給し、インキュベーターに戻した。3日目に、細胞培地を、製造業者の取扱説明書に従って、20mLCENTRICON商標PLUS-20遠心濾過ユニットMilliporeCorp、ビレリカ、マサチューセッツ州、米国を用いて濃縮した。簡単に説明すると、濃縮器を、45分間、1140×Gで遠心分離した。濃縮上清を、きれいな2mLのクライオバイアルに移し、-80°Cで保存した。新鮮な培地も、陰性の対照として使用するために、記載のとおりに濃縮した。次に、これらの細胞を、0.25ブタトリプシンEDTACELLGRO商標;カタログ番号30-004-C1MediatechInc、ハーダン、バージニア州、米国を用いて、これらのフラスコから取り除いた。次に、トリプシンを、等容積の10ウシ胎仔血清を含む細胞培地を加えることによって中和した。細胞の数および生存率の分析を、それぞれ、COULTER商標AcT10シリーズアナライザーBeckmanCoulter、フラートン、カリフォルニア州およびトリパンブルー排除アッセイを用いて行った。2DSDS-PAGEを行うために、ロット番号PCH627;約27回の集団倍加時のヒトABM-SCを解凍し、4mMのL-グルタミンHYCLONE商標;カタログ番号SH30034.01、ロット番号134-7944を補充したHyQ登録番号最小必須培地MEM、アルファ改良AlphaModificationHYCLONE商標;カタログ番号SH30265.01、ロット番号ASA28110、または4mMのL-グルタミンHYCLONE商標;カタログ番号SH30034.01、ロット番号134-7944を補充したRPMI1640HYCLONE商標;カタログ番号SH30255.01のいずれかに再懸濁した。次に、細胞懸濁液を、T-225cm2CELLBIND商標培養フラスコn=3中、培地36mLに24,000~40,000細胞/cm2で播種した条件あたりn=3。培養物を、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内に約24時間置いた。接着していないデブリを除去するのと同じ日に、培養物に新鮮な培地を再供給し、次に、インキュベーターに戻した。次の日に、馴化培地を収集し、プールし、15分間、1140×Gで遠心分離し、細胞デブリを除去し、次に、-80°Cでの短期保存のために無菌の遠心管に移した。実施例2分泌因子の2次元2-DSDSPAGE分離図1馴化培地および対照培地の凍結した一定分量試料を、分析のためにKendrickLabs社KendrickLabsIncマジソン、ウィスコンシン州に送った。使用前に、試料を解凍し、室温まで温めた。各試料約50mLを凍結乾燥し、次に、SDS煮沸緩衝液5ドデシル硫酸ナトリウム、5β-メルカプトエタノール、10グリセロールおよび60mMTris、pH6.8200μLおよび超純水2mLに再溶解した。次に、これらの試料を、6,000~8,000MWCO膜を用いて、2日間、4°Cで、5mMTris、pH7.0に対して透析した。最後の透析は、水のみを用いて行った。これらの試料を再び凍結乾燥し、SDS煮沸緩衝液200μLに再溶解し、ゲルにロードする前に、5分間、煮沸水浴中で加熱した。2次元ゲル電気泳動を、O’FarrellO’FarrellPHJBiolChem250:4007-40211975の方法に従って、以下のとおりに行った。等電点電気泳動を、最初、2.0アンフォライン、pH3.5~10AmershamBiosciences社PiscatawayNJを用いて、20,000ボルト-時間で、内径2.0mmのガラス管の中で行った。次に、IEF内部標準トロポミオシン50ngを各試料に加えた。このトロポミオシン標準をゲル上の基準点として用い、これは、MW33,000およびpI5.2のより低いポリペプチドスポットを有する二重線として移動する。アンフォラインのこのセットのためのチューブゲルのpH勾配を、表面pH電極を用いて決定した。緩衝液010グリセロール、50mmジチオスレイトール、2.3SDS、0.0625Mtris、pH6.8の中で10分間平衡化した後、各チューブゲルを、12アクリルアミドスラブゲル厚さ1.0mmの上部に置かれた濃縮用ゲルの上部に封着した。SDSスラブゲル電気泳動を、25mAで約5時間行った。以下のタンパク質SigmaChemicalCoを、分子量標準物質として、このゲルのアガロース部分このアガロースは、チューブゲルとスラブゲルの間に位置付けられるの単一ウェルに加えた:ミオシン220,000ダルトン、ホスホリラーゼA94,000ダルトン、カタラーゼ60,000ダルトン、アクチン43,000ダルトン、炭酸脱水酵素29,000ダルトン、およびリゾチーム14,000ダルトン。銀染色後に、これらの標準物質は、アクリルアミドスラブゲルの塩基性縁部上のバンドとして現れるOakleyetalAnalBiochem105:361-3631980。次に、このゲルを、2枚のセロファン紙の間で、酸性末端を左側にして乾燥させた図1。ゲルを質量分析で使用する場合、ゲルを、O’ConnellおよびStultsO’ConnellandStultsElectrophoresis18:349-3591997の銀染色法を用いて染色する。これらの結果は、提供した方法を用いて、ヒトABM-SCを動物血清が無い状態で培養すると、分泌タンパク質に富む馴化培地を生成することができ、かかるタンパク質を、それぞれ同定し、単離することができることを示す。もう1つの方法として、このように生成された馴化培地を、様々な分子量に基づいて発現タンパク質を分画することによって処理することもできる。タンパク質濃縮および分画の技術は、当業者に周知であり、日常的に用いられている。これらの技術には、親和性クロマトグラフィー、中空糸濾過、2DPAGE、および低吸収限外濾過low-absorptionultrafiltrationなどの技術が含まれる。実施例3AヒトABM-SCによる再生促進性サイトカインの分泌ヒトABM-SCを、AFG104培地を含む細胞培養Tフラスコに、6,000生存細胞/cm2で、3つ組で播種した。24時間、細胞を接着させ、平衡化した後に、培地を完全に交換し、フラスコを72時間インキュベートした。培地を収集し、遠心分離し、市販の比色分析ELISAアッセイキットを用いてサイトカインについて分析するまで、-80°Cで保存した。分泌サイトカイン放出の分析については、72時間のインキュベーションの最後の24時間に、10mg/mLのTNF-αを加えることによって、姉妹フラスコを処理した。それぞれのロットについて、基本条件および刺激条件に対して、3ロットのフラスコの細胞および上清を、独立して調製し、処理し、貯蔵し、それぞれ、基本フラスコA、基本フラスコBおよび基本フラスコCまたは刺激フラスコA、刺激フラスコBおよび刺激フラスコCと名付けた。結果は、継代培養した時に、血管新生、炎症および創傷治癒を増強することが知られている、潜在的に治療濃度のいくつかの増殖因子およびサイトカインを、ABM-SCが分泌することを示す。図11を参照されたい。したがって、ABM-SCは、血管新生促進因子proangiogenicfactor例えば、SDF-1α、VEGF、ENA-78およびアンジオゲニン、免疫調節物質例えば、IL-6およびIL-8ならびに瘢痕阻害因子/創傷治癒調節因子例えば、MMP-1、MMP-2、MMP-13およびアクチビン-Aを含むいくつかのサイトカインおよび増殖因子をインビトロで一貫して分泌することが示された。さらに、これらの因子のいくつかの放出は、急性組織傷害の過程中に放出される既知の炎症性サイトカインである腫瘍壊死因子αTNF-αによって調節される。実施例3B分泌因子の固相捕捉および同定表1A、表1Bおよび表1C馴化培地を、サイトカイン、プロテアーゼ、および可溶性受容体などの様々なタンパク質の存在について、RAYBIO商標ヒトサイトカイン抗体アレイRayBiotechInc、ノークロス、ジョージア州、米国を用いる固相抗体捕捉タンパク質アレイによってスクリーニングした。簡単に説明すると、馴化培地の凍結した一定分量を、使用前に解凍し、室温まで温めた。アレイ膜を、8ウェルトレイCシリーズ1000のウェルに入れた。各ウェルに、1×ブロッキング緩衝液RayBiotechInc2mLを加え、次に、室温で30分間インキュベートし、これらの膜をブロッキングした。次に、ブロッキング緩衝液を各容器から静かに取り除き、次に、これらの膜を、室温で1時間、ブロッキング緩衝液で1:10に希釈した馴化培地と共にインキュベートした。新しい細胞培地を、PBSの代わりに陰性の対照として用いた。次に、試料を各容器から静かに取り除き、1×洗浄緩衝液IRayBiotechInc2mLを用いて、5分間振盪しながら、室温で3回洗浄した。次に、アレイ膜を、1×ブロッキング緩衝液で調製したビオチン結合2次抗体1mLと共に1ウェルに入れ、室温で1時間インキュベートした。次に、アレイを洗浄緩衝液で数回洗浄した。1×ブロッキング緩衝液で1:1000に希釈したHRP結合ストレプトアビジン2mLを各膜に加え、次に、室温で2時間インキュベートした。次に、膜を1×洗浄緩衝液で数回洗浄した。化学発光用検出試薬を、製造業者RayBiotechIncの取扱説明書に従って調製し、各膜に適用し、室温で2分間インキュベートした。次に、膜をプラスチックシート上に、タンパク質側を上にして置いた。次に、膜の反対側を、別の1枚のプラスチックシートで覆った。プラスチックのしわを伸ばすことによって、空気の泡をこれらの膜から除いた。次に、これらの膜をx線フィルムKodakX-OMATAR商標フィルムに暴露し、次に、フィルム現像液を用いて処理した。表1A、表1Bおよび表1Cは、無血清細胞培地中で継代培養した時に、ヒトABM-SCによって分泌されるサイトカイン、増殖因子、可溶性受容体、およびマトリックスプロテアーゼの広範囲に及ぶリストである。培地上清濃縮物1=4mMのL-グルタミンを補充したAdvancedDMEMGibco商標。培地上清濃縮物2=4mMのL-グルタミンおよびHEPESHyClone社を含み、インスリン-トランスフェリン-セレン-AGibco商標を補充したRPMI-1640。これらの結果は、これらの条件下で培養した時に、組織再生および免疫系の調節に重要な多数の栄養因子および可溶性受容体が、ABM-SCによって生成されることを示す。特に、前の実験は、基本培地にインスリン、トランスフェリンおよびセレンを補充することが、表1A、表1Bおよび表1Cに示したものなどの分泌タンパク質レベルを達成するのに必要であることを示した。表1A、表1Bおよび表1Cに示したタンパク質レベルを、RAYBIO商標ヒトサイトカイン抗体アレイRayBiotech社を用いて評価した。値を、平均光学密度ODとして表す。試験試料についてN=2、対照についてN=4。と報告される値は、それぞれの陰性の対照の平均O.D値を超える2標準偏差より大きい特定の検体の平均O.D値を示す。-と報告される値は、それぞれの陰性の対照の平均O.D値を超える2標準偏差以下の特定の検体の平均O.D値を表す。実施例4成人骨髄由来体細胞の生理活性分泌因子によって増強したインビトロでの神経発生最初に、最終濃度3.0mg/mLで、0.1Nの酢酸にラット尾部コラーゲンSigmaChemical社を再懸濁することによって、コラーゲンのストック溶液を調製した。次に、このコラーゲンベースの培地を、本明細書に記載したとおり、BelletalProcNatlAcadSciUSAvol76no3pp1274-1278March1979に記載されるものに少し変更を加えて、調製した。簡単に説明すると、このラット尾部コラーゲン溶液と、5mMのL-グルタミンCELLGRO商標、抗生剤-抗真菌剤溶液CELLGRO商標を補充した5×DMEMJRHBiosciences社と、緩衝液0.05NNaOHSigmaChemical社、2.2NaHCO3SigmaChemical社、および60mMHEPESJRHBiosciences社とを4.72.03.3の比で混合することによってコラーゲン培地を調製した。このコラーゲン細胞懸濁液約500μLを、24ウェル培養プレートの各ウェルに加えた。次に、この24ウェルプレートを、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内に1時間入れ、このコラーゲン溶液を凝結させた。凍結したラットPC-12を解凍し、4mMのL-グルタミンおよびHEPESHyClone商標を補充し、インスリン-トランスフェリン-セレン-AGibco商標を補充したRPMI-1640の中で洗浄し、25°Cで5分間、350×gで遠心分離した。136ng/mLのラットβ-NGFβ-NGFSigmaChemical社、陰性の対照として用いる馴化していない濃縮RPMI-1640/ITS培地の1:50希釈液、および馴化した濃縮RPMI-1640/インスリン-トランスフェリン-セレン-AITS培地の1:50希釈液を含む場合と含まない場合で、細胞ペレットを75,000生存細胞/mLの濃度で同じ溶液に再懸濁した培地を、実施例1に記載のとおりに馴化した;馴化した陰性の対照培地および馴化していない陰性の対照培地を、実施例1に記載のとおりに濃縮した。次に、細胞懸濁液1mLを、各コホートに対して2つのゲル1mLゲルのそれぞれの表面の全域に均一に分注し、次に、位相差顕微鏡法によって確認した。次に、これらのプレートを、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内に入れた。使用済みの培地を、3日ごとに新鮮な培地と交換した。画像を10日目に撮った。図2を参照されたい。これらの結果は、ヒトABM-SCによって生成される馴化培地を補充した時に、PC12の、NGFによる神経細胞への分化が著しく増強されることを示す。興味深いことに、培養物中の軸索および神経突起の数によって評価した場合、神経分化の程度は、馴化培地を単独で加えた時には、顕著ではなかった。多少の神経突起伸長が、NGF単独の存在下で観察されたが、馴化培地を培養物に補充すると、神経突起の数および長さの両方が著しく増大した。発明者らの研究所の以前の研究から、試験した全ての標準的な、公開された実験条件下で、インスリン、トランスフェリン、およびセレンをRPMI培地に補充することが、PC12の神経分化に重大な意味をもつことが示された。これらのデータは、ヒトABM-SCによって馴化した培地が、RPMI/ITS培地を単独で用いて、またはNGFを含むRPMI/ITS培地を用いて得られるレベルを超えて、神経突起伸長を補うかまたは誘導する成分を含むことを示す。図2を参照されたい。実施例5成人骨髄由来体細胞の生理活性インビトロでのマイトジェン誘発性T細胞増殖の阻害ヒトABM-SCロット番号RECB801、約18回の集団倍加時およびexABM-SCRECB906、約43回の集団倍加時を、4mMのグルタミンおよび血清ロット選択し、γ線照射した10ウシ胎仔血清HYCLONE商標を補充した完全培地最小必須培地-αHYCLONE商標中6000生存細胞/cm2の濃度で75cm2フラスコに入れ、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内でインキュベートした。24時間後、使用済み培地を吸引し、新鮮な培地15mLと交換した。ヒト間葉系幹細胞hMSC、カタログ番号PT2501、ロット番号6F3837、現在、LonzaGroupLtd.、バーゼル、スイスが所有しているCambrexResearchBioproducts社から入手を、間葉系幹細胞増殖培地MSCGM商標;LonzaGroupLtd.、バーゼル、スイス15mL中6000生存細胞/cm2の濃度で75cm2フラスコに入れ、大気O2および5CO2の加湿インキュベーター内で、37°Cでインキュベートした。24時間後、使用済み培地を吸引し、新しいMSCGM商標15mLと交換した。培養96時間後に、ヒトABM-SChABM-SCおよびhMSCの両方を収集した。収集したhABM-SCおよびhMSCを、96ウェル丸底プレートに、RPMI完全培地HYCLONE商標中25,000生存細胞/mLの濃度でプレーティングした。ヒト末梢血単核球PMBCを、1.25μMのカルボキシフルオレセインサクシンイミジルエステルCFSE中で標識し、hMSCロット番号RECB801、ロット番号RECB906のhABM-SCと共に、または単独で、RPMI完全培地中250,000細胞/ウェルで培養した。T細胞増殖を刺激するために、培養物に2.5μg/mLまたは10μg/mLのフィトヘマグルチニンSigmaChemical社を接種した。次に、72時間後に細胞を収集し、製造業者の取扱説明書にしたがって、CD3-PC7抗体BeckmanCoulterで染色し、FlowJo8.0ソフトウェアTreeStarInc、アシュランド、オレゴン州を用いて、BeckmanFC500血球計算器で解析した。CD3細胞のみを、分裂指数について分析した。図3を参照されたい。これらの研究結果は、exABM-SCが、T細胞活性化およびT細胞増殖を阻害する能力を有し、それによって、T細胞によって媒介される移植片拒絶、T細胞の調節不全が関与する自己免疫障害を抑制するか、または他の免疫原性の皮膚製品に対して免疫寛容の状態を誘導するための治療薬として有用であり得ることを示す。したがって、同種皮膚製品の手術の適用を待っている熱傷患者を治療するために、同種ヒトexABM-SCまたはかかる細胞によって生成される組成物を使用することを想定することができる。このような実施形態において、最初に、exABM-SCまたはかかる細胞によって生成される組成物で開放創を治療することは、宿主細胞を傷害部位に移動させるように刺激することによって、創傷床を再構築するのに役立つように作用するだけでなく、同種皮膚または皮膚置換物の長期の生着を可能にする環境を提供するように作用し得る。実施例6インビボ投与用の水性ビヒクル中におけるブタABM-SCの再構成ブタABM-SCを、60細胞/cm2で播種し、4日目に再供給し、全部で6日間増殖させた。細胞を収集し、次の使用まで凍結させた。ブタABM-SCの凍結した一定分量を解凍し、DPBSG4.5グルコースを補充したダルベッコリン酸緩衝食塩水CELLGRO商標で洗浄し、25°Cで5分間、350×gで遠心分離した。細胞ペレットを、約50,000/μLの濃度でDPBSGに再懸濁した。細胞数および細胞生存率のアッセイを、それぞれ、COULTER商標AcT10シリーズアナライザーBeckmanCoulter社、フラートン、カリフォルニア州およびトリパンブルー排除によって行った。次に、この細胞懸濁液を、1ccのツベルクリン注射器に充填した。実施例7成人骨髄由来体細胞の生理活性同種ブタABM-SCを用いた切開創傷の治療体重57kg~78kgの2匹のユカタンブタに麻酔をし、無菌手術の準備をした。約50mmの長さの4つの切開創傷を、2匹の動物番号3および番号4の両側に、脊椎傍および胸部領域の皮膚に沿って、1匹の動物につき全部で8つの傷を手術用メスで作った。エピネフリンを染み込ませた無菌ガーゼを損傷部位に挿入することによって出血を止めた。次に、約10~20分後にガーゼを取り除き、12回の別々の注射剤に分けたブタABM-SCを、この切開部の周りに均等間隔で単回投与し、さらに10~300μLを創傷床自体に適用して、それぞれの創傷を治療した。同様に、対照の創傷にビヒクルDPBSGのみを注射した。次に、創傷を、Steri-Strips商標3Mで閉鎖し、これらの動物を、保護用アルミニウム製ジャケットで覆った。これらのジャケットを毎日数回チェックし、安定で、適切な位置を確実に保った。創傷包帯を毎日監視し、0日目、1日目、3日目、5日目、および7日目に変化を写真に撮った。組織病理検査のために、動物を7日目に安楽死させた。ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片を調製し、HEで染色した。専門の獣医病理学者が、治療群に関して盲検で、組織形態学的スコア化を行った。創傷の治療後7日目に、同種ブタABM-SCで治療した病変は、ほとんど目に見える瘢痕化の徴候を示さなかったが図4、ビヒクルで治療した病変は、目に見える瘢痕化の徴候を示した。これらの創傷の組織形態計測分析は、ABM-SCで治療した創傷において、組織マクロファージ組織球の著しい低下を示したが、評価した他の組織学的スコアのいずれにおいても顕著な差は見られなかった。類似の組織切片を、再上皮形成の程度創傷治癒率のおおよその指標についてスコア化すると、ABM-SCで治療した組織切片は、切開部で再増殖する上皮細胞の量の著しい増加を示した図5。実施例8液体、半固体、または固体様の治療薬としてインビボ投与するための、コラーゲンビヒクル中のヒトABM-SCの生理活性図6~9コラーゲンベースの生分解性ビヒクルで再構成し、4°Cで保存した時、ヒトABM-SCロット番号PCH610;約27回の集団倍加は、少なくとも24時間、ゲル収縮アッセイにおける細胞の生理活性によって示されるとおり高い細胞生存率を保持する。このように保存すると、このコラーゲン溶液は液体のままであり、著しく生存率が低下することなく、懸濁状態でこれらの細胞を保存する図6。次に、これらの細胞の生理活性を、創傷修復のインビボアッセイを用いて評価することができる。このアッセイを行うために、最初に、3.0mg/mLの最終濃度で、0.1Nの酢酸にラット尾部コラーゲンSigmaChemical社を再懸濁することによって、コラーゲンのストック溶液を調製した。このコラーゲン培地を、本明細書に記載されるように少し変更を加えたBellらProcNatlAcadSciUSAvol76no3pp1274-12781979年3月に記載のとおりに調製した。簡単に説明すると、このラット尾部コラーゲン溶液と、5mMのL-グルタミンCELLGRO商標、抗生剤-抗真菌剤溶液CELLGRO商標;カタログ番号30-004-C1を補充した5×DMEMJRHBiosciences社と、緩衝液0.05NNaOHSigmaChemical社、2.2NaHCO3SigmaChemical社、および60mMHEPESJRHBiosciences社とを4.72.03.3の比で混合することによってコラーゲン培地を調製した。凍結したヒト成体骨髄由来体細胞hABM-SCを解凍し、1×DMEMで洗浄し、25°Cで5分間、350×gで遠心した。これらの細胞ペレットを、約72,000の全細胞/μLの濃度で1×DMEMに再懸濁した。次に、細胞懸濁液50μLをコラーゲン培地2mLに加え、穏やかに粉砕しすなわち、穏やかにピペッティングして、コラーゲン培地中均質な細胞懸濁液を得、約1,800細胞/μLの最終細胞濃度を得た。次に、この細胞懸濁液を約4~8°Cで一晩保存した。次の日、液体の細胞懸濁液を15mLのコニカルチューブから移し、24ウェル細胞培養プレートに約500μL/ウェルで分注した。次に、これらのプレートを、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内に1時間置き、コラーゲンを半固体ゲルに凝固させた。次に、これらのゲルを、使い捨ての、滅菌した薬さじVWRを用いて24ウェルプレートから取り除き、12ウェルの培養プレートに移した。次に、これらのゲルを、1ウェルあたり1×DMEM1.0mLに浮かべた。陰性対照については、記載されたとおりではあるが、細胞を含めないでゲルを調製した。各条件について、3つのウェルに播種したn=3。ゲル収縮が用量依存的である程度を評価するために、同様のアッセイを行い、その際、ヒトexABM-SCロット番号RECB819;約43回の集団倍加時を、冷凍貯蔵庫から取り出した直後に、異なる細胞濃度で、コラーゲン溶液中で再構成した図7。最初に、3.0mg/mLの最終濃度で、0.1Nの酢酸にラット尾部コラーゲンSigmaChemical社を再懸濁することによって、コラーゲンのストック溶液を調製した。次に、このコラーゲン培地を、本明細書に記載されるように少し変更を加えたBellら1979に記載のとおりに調製した。簡単に説明すると、このラット尾部コラーゲン溶液と、5mMのL-グルタミンCELLGRO商標、抗生剤-抗真菌剤溶液Cellegro商標を補充した5×DMEMJRHBiosciences社と、緩衝液0.05NNaOHSigmaChemical社、2.2NaHCO3SigmaChemical社、および60mMHEPESJRHBiosciences社とを4.72.03.3の比で混合することによってコラーゲン培地を調製した。凍結したヒト成人骨髄由来体細胞hABM-SCを解凍し、1×DMEMで洗浄し、25°Cで5分間、350×gで遠心した。これらの細胞ペレットを、約40,000個、約80,000個および200,000個の生存細胞/μLの濃度で1×DMEMに再懸濁した。各細胞懸濁液50μLをコラーゲン培地2mLに加え、穏やかに粉砕した。このコラーゲン細胞懸濁液約500μLを、24ウェル細胞培養プレートの各ウェルに加えた。次に、これらのプレートを、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内に1時間置き、コラーゲン溶液を凝固させた。次に、これらのゲルを、使い捨ての、滅菌した薬さじVWRを用いてこれらのプレートから取り除き、12ウェルの培養プレートに移した。これらのゲルを、1ウェルあたり1×DMEM1.0mLに浮かべた。陰性対照として、これらの細胞を、生理活性を除去するために熱不活性化したことを除いて、最高濃度のhABM-SC5×106/mLを用いて、上記のとおりにゲルを調製した。最初に、1×DMEM培地中最初の細胞懸濁液を、水を含むヒートブロックで、40分間70°Cまで加熱すること熱伝達によって、熱不活性化細胞を調製した。各条件について、3つのウェルに播種したn=3。これらのゲルが時間とともに収縮する程度を決定するために、最初または出発時の表面積の割合を、平台のスキャナーを用いて、0時間、24時間、48時間および72時間の時点で取得したデジタル画像から計算した。各画像から、水平方向および垂直方向の両方でゲルの直径を測定し、平均値を求めた。結果は、ゲル収縮の速度および程度の両方が用量依存的に影響を受けたことを証明する図7。これらの半固体ゲル中のヒトABM-SCから生成される特定の分泌タンパク質のレベルを決定するために、これらのゲルの周囲の液体培地から収集した馴化細胞培養上清で酵素結合免疫吸着測定法ELISAを培養3日目に行った図8。上清を無菌の15mLコニカルチューブに移し、15分間、1140×gで遠心し、細胞デブリを除去した。次に、上清を2mLのクライオバイアルに移し、短期貯蔵のために-80°Cに移した。アッセイの日に、上清を解凍し、使用前に室温まで平衡化させた。ELISA分析を行い、IL-6、VEGF、アクチビン-A、pro-MMP-1、およびMMP-2を検出したELISAは、製造業者の取扱説明書に従って行った。;全てのキットをRDSystemsIncミネアポリス、ミネソタ州、米国から購入した。結果は、治療関連レベルの栄養因子をこれらの半固体ネオ組織によって生成させることができること、かつこれらのレベルは、細胞濃度を調整することによって調節することができることを示す。熱不活性化細胞のみを含む培養物中では、測定した栄養因子の検出できるレベルは認められなかった。アッセイ条件間の統計比較を、一元配置ANOVAによって決定したp<0.001。ヒトABM-SCをコラーゲン溶液で再構成し、局所治療薬として用いることができる大型のフォーマットの半固体構造を構築することもできる図9。かかる構造を構築するために、最初に、3.0mg/mLの最終濃度で0.1Nの酢酸にラット尾部コラーゲンSigmaChemical社を再懸濁することによって、コラーゲンのストック溶液を調製した。このラット尾部コラーゲン溶液と、5mMのL-グルタミンCELLGRO商標、抗生剤-抗真菌剤溶液CELLGRO商標を補充した5×DMEMJRHBiosciences社と、緩衝液0.286NNaOHSigmaChemical社、1.1NaHCO3SigmaChemical社、および100mMHEPESJRHBiosciences社とを622の比で混合することによって、水性コラーゲン培地を調製した。凍結したhABM-SCを解凍し、1×DMEMで洗浄し、次に、25°Cで5分間、350×gで遠心した。これらの細胞ペレットを、約90,000細胞/μLの濃度で1×DMEMに再懸濁した。次に、およそ1.1mLの細胞懸濁液をコラーゲン培地20mLに加え、穏やかに粉砕して、5×106細胞/mLの最終細胞濃度を得た。最終コラーゲン濃度は、1.8mg/mLであった。次に、この細胞懸濁液を、10cmのペトリ皿形成皿に分注した。分注したコラーゲン溶液中の有効量の細胞は、約100×106生存細胞であった。次に、この細胞懸濁液を含む10cmの形成皿を、37°Cの、加湿した5CO2インキュベーター内に1時間置き、このコラーゲン溶液を凝固させた。次に、この半固体ゲルを、10cmの形成皿から注意深く取り出し、15cmペトリ皿培養皿に移し、写真を撮った。ヒトABM-SCおよびコラーゲンに由来する固体様ネオ組織を構築するために、上記の半固体構造を、さらに2日間、37°Cの、加湿した5CO2細胞培養インキュベーター内に戻すことができる図10。固体様ネオ組織を形成するために、最終コラーゲン溶液が1.8mg/mLのかわりに1.4mg/mLであることを除いて、上記のとおりに調製した半固体ゲルを、10cmの形成皿の端から注意深く取り除き、15cm培養皿の中の、抗生剤-抗真菌剤溶液CELLGRO商標を含む1×DMEM約82mLに浮かべた。次に、この半固体ゲルを、さらに48時間、37°Cの、加湿した5CO2インキュベーターに移し、出発コラーゲン基質を含まない固体様組織構造へのマトリックスのリモデリングを促進した。次に、この固体様ネオ組織を15cm培養皿から取り出して、写真を撮った図10Aおよび図10B。マッソントリクローム染色によるこのネオ組織の組織学的分析は、このマトリックスが、新たに合成されたヒトのコラーゲンおよびプロテオグリカンに富むことを証明する図10C。対照コラーゲンゲルは、この方法で染色されない。コラーゲンおよびプロテオグリカンは青色に染色される。これらの研究の結果は、ABM-SCの凍結ストックを、解凍時に分注し、コラーゲンベースの液体培地で再構成することができ、液体懸濁液、半固体構築物、または固体様ネオ組織として治療に使用できることを示す。このような方法で調製し、約4~10°Cで保存すると、この細胞懸濁液は、24時間を超えて、十分な細胞生存率を維持しながら液体として留まる。次に、このような方法を用いて、臨床適用のためのABM-SCを製剤化すると、これらの細胞を投与する臨床医に十分な自由度を提供する。この懸濁液を、液体注射剤として投与するか、またはもう1つの方法として、創傷床に局所的に適用することができる。後者の場合、この液体細胞懸濁液を、創傷の輪郭に成形し、次に、例えば、約37°Cまで温めた時に、半固体構造に凝結させることが想定される。あるいは、この懸濁液をこのような方法で用いて、半固体構築物または固体様ネオ組織を製造することができる。これらのデータは、これらの方法によって調製した時に、生じた組成物もそれぞれ、様々な種類の創傷、特に、皮膚に関わる創傷の修復を媒介するのに重要な生理活性を有することも示す。したがって、液体コラーゲンベースの培地で調製したexCF-SC例えば、exABM-SC、もしくはかかる細胞によって生成される組成物を、開放創を治療するために局所的に用いるか、または顔の若返りのための皮膚充填剤に代わる注射剤として用いることができる。半固体形態では、exCF-SC例えば、exABM-SCまたはかかる細胞によって生成される組成物は、損傷した全層皮膚を外科的に除去した重度の熱傷患者を治療するために局所的に用いられ、それによって、皮膚代替物として作用することができる。exCF-SC例えば、exABM-SCによって生成された固体のネオ組織を、ヒトの死体の皮膚ALLODERM商標、ブタの皮膚PERMACOL商標および他の動物由来の構築物INTEGRA商標の代替物として外科的に用いることができるであろう。さらに、これらのデータは、これらの様々な構築物のそれぞれの効力を、細胞またはこれらの細胞によって生成された組成物の用量を変えることによって調節することができることも示す。実施例9hABM-SCで治療したラットの心臓機能の改善心筋梗塞後のヒトABM-SCの動物への投与は、ABM-SCなどのCF-SCが、血管新生を刺激し、線維症を低下させることによって、心臓機能を改善し、心臓組織損傷の修復を増強することを証明する。図15を参照されたい。冠動脈を閉鎖し、それによって、心臓病変すなわち、心臓の損傷領域を作ることによって、急性心筋梗塞のラットモデルを利用した。損傷を受けたラットに、hABM-SCまたはビヒクルのいずれかを心臓内注射した。心機能についての方法:両方の性のスプラーグドーリーラット約3カ月齢に、正中線胸骨切開による左前下行枝LADの周りの絹結紮糸の永久的な留置により、心筋梗塞を実験的に誘発した。この手順後5日目に、これらのラットに、シクロスポリンA治療の標準的な投与計画を開始し、この研究期間中続けた。梗塞後7~8日目に、ラットに麻酔し、挿管し、心臓の尖部をさらすために、肋間切開を行った。次に、超音波ミラーカテーテルを、心室壁を貫いて挿入し、約30~60秒の期間で、経時的に圧力測定を記録した。この梗塞生成および心機能の圧力/時間測定のモデルは、標準的で、十分に特徴づけられたモデルであり、それによって、心機能に対する細胞療法の効果を評価することができる例えば、Mueller-EhmsenetalCirculation10514:1720-62002参照。30ゲージの低デッドスペース針を取り付けた100μLハミルトンシリンジを用いて、試験組成物を送達した。5回の別々の20μLの注射を、2~3分の間に行った。4回の注射を、可視化した梗塞の周りに等距離で行い、5回目を、変色域によって決定した梗塞領域の中央に直接入れた。注射後、この切開部を縫合し、気胸を低下させ、これらの動物から人工呼吸器を取り外し、抜管した。注射後4週間目梗塞後5週間目に、動物に再び麻酔し、正中線胸骨切開により心臓を露出させ、ミラーカテーテルを挿入した。上記のとおりにdp/dt測定を行った後、これらのラットを、大量失血によって安楽死させた。心機能についての結果図13:治療後4週間目に、ABM-SCを受け取ったラットは、著しく高いdp/dt圧力の正の最大変化率値を示したA。4週目の値dp/dt値から0週目のdp/dt値を引くことによってΔdp/dt、試験期間中の心機能の変化を示すと、ビヒクル治療ラットでは、試験期間中、心機能は低下し負のΔ、いずれかの細胞調製物で治療した動物では、心機能に著しい改善が示されるBことが証明された。ビヒクル治療ラットと比較して、ABM-SCを受け取ったラットは、著しく低いタウ値を示しC、左室コンプライアンスの増加が示唆された。タウは、等容性左室圧減衰の時定数である。圧力の負の最大変化率-dp/dtについては、4週目の値-dp/dt値から0週目の-dp/dt値を引くことによってΔ-dp/dt、試験期間中の心機能の変化を示すと、ビヒクル治療ラットでは、試験期間中、心機能は低下し負のΔ、細胞調製物で治療した動物では、心機能に著しい改善が示されるDことが証明されたANOVAによると、p<0.05、p<0.01。心臓構造についての方法:左前下行枝LADの周りの絹結紮糸の永久的な留置により、スプラーグドーリーラットに心筋梗塞を実験的に誘発した。動物に、シクロスポリンA治療10mgkg、皮下、毎日の標準的な投与計画を開始し、この研究期間中続けた。梗塞後7~8日目に、ラットに麻酔し、挿管し、心臓の尖部をさらすために、肋間切開を行った。心機能を評価し、その後、30ゲージの低デッドスペース針を取り付けた100μLハミルトンシリンジを用いて、試験物質を送達した。5回の別々の20μLの注射を、2~3分の間に行った。4回の注射を、可視化した梗塞の周りに等距離で行い、5回目を、変色域によって決定した梗塞領域の中央に直接入れた。注射後、この切開部を縫合し、気胸を低下させ、これらの動物から人工呼吸器を取り外し、抜管した。注射後4週間目梗塞後5週間目に、動物に再び麻酔し、正中線胸骨切開により心臓を露出させ、心機能を評価した。機能測定を完了した後、ラットを大量失血によって安楽死させた。最初に、ケタミン75mg/kgおよびメデトミジン0.5mg/kgの混合物を用いて、ラットに深く麻酔した。次に、胸腔を外科的に露出させ、心臓を解剖し、10中性緩衝化ホルマリン中で浸漬固定した。次に、心臓を大まかに3片に区分し、包埋用の型に正しい位置で置き、パラフィン包埋処理した。次に、心臓組織を6μmの薄片にし、ヘマトキシリンエオシンHEまたはマッソントリクロームで染色した。全ての心臓からの少なくとも6つの切片も、それぞれ、ヘマトキシリン/エオシンHEおよびトリクロームで染色した。特に、トリクローム染色は、コラーゲン青対筋肉組織赤の可視化を可能にさせる。コラーゲンが再生のない瘢痕組織の存在を示すので、正常な心筋に対するコラーゲンの比を決定した。検出不能のコラーゲンを0とし、最高/重篤を5とすることで、半定量的スコア化のスケールを考案した。次に、組織形態学的なスコア化のために、有資格の病理学者に染色切片を送った。各スライドは、心臓の3つの横断面を含み、1は中央の心室領域から両方の心室の断面図を示し、2は心室の遠位の1/3を示し、3は心室の尖部を示す。組織形態計測分析については、以下の段階付けスキームを用いた。組織損傷の位置:左の心室LV、右の心室LV、両方の心室BV。影響を受けた心室の損傷の割合傷害のサイズ:パーセンテージ0~100で示す。心室の実験的に損傷を与えた領域の厚さのスコア:推定の厚さmmに基づき1~4の段階で示す。組織切片中の既知の目印と比較する例えば、赤血球の直径の平均は7ミクロンである;心筋の筋束の直径の平均は30ミクロンである。段階1.5mm未満;段階2.5mm~1mm、段階31mm~1.5mm;段階41.5mm以上。組織傷害の領域の新血管新生:0~4の段階、正常0~初期の組織損傷の全域にわたる新血管新生4。初期の血管損傷:前から存在する血管の変性/壊死を含み、残りの血管デブリの除去に起因する血栓症および/または炎症を0~4の段階で表し、0は血管損傷が存在せず、4は影響を受けた領域全体の血管損傷を表す。組織損傷領域内の線維症の程度:梗塞手順によって引き起こされた初期損傷領域の線維症および瘢痕化のレベルを0~4の段階で表し、20ずつ変化させ、線維症なし0~4で表す。例えば、心室の20の線維症には1の段階を、心室の40の線維症には2の段階を、心室の60の線維症には3の段階を、心室の60超の線維症には4の段階を割当てる。心臓構造についての結果:その後、ラットを屠殺し、心臓組織を切片にして、染色した。有資格の獣医病理学者が半定量的スコア化を行い図15、ビヒクルまたはABMSCを受けとった、心筋梗塞後7日後のラットの心臓の梗塞サイズの変化を評価した。組織病理学的分析から、ビヒクルと比較して、hABM-SCを受け取ったラットの梗塞サイズの著しい減少が示された。あらかじめ設定したスケールによると、hABM-SCを受け取ったラットの組織学的スコアは、ビヒクル対照よりも約2ポイント低かった。図14は、代表的な梗塞サイズの減少の例を示す。組織病理学的分析から、hABM-SCが、梗塞域において、線維症を低下させ、血管新生を増強させることが決定され図15、再生促進性活性と一致した。したがって、hABM-SCで治療したラットは、心臓組織構造の劇的な改善を示すことが観察された。図14および図15を参照されたい。実施例10成人骨髄由来体細胞は免疫介在性反応を抑制するパートI:1方向MLR混合リンパ球反応アッセイにおけるマイトジェン誘導性T細胞増殖の抑制方法:ヒトABM-SCおよびexABM-SCそれぞれ、ロット番号RECB801およびRECB906を、4mML-グルタミンカタログ番号SH30034.01、ロット番号134-7944、HYCLONE商標LaboratoriesInc、ローガン、ユタ州、米国を補充したAdvancedDMEMGIBCO商標;カタログ番号12491-015、ロット番号1216032InvitrogenCorp、カールスバッド、カリフォルニア州、米国、または4mMのL-グルタミンを含み、インスリン-トランスフェリン-セレン-AITSGIBCO商標カタログ番号51300-044、ロット番号1349264を補充したHyQ登録商標RPMI-1640HYCLONE商標カタログ番号SH30255.01、ロット番号ARC25868などの完全培地15mL中6000生存細胞/cm2の濃度で75cm2のフラスコに入れ、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内で培養した。24時間後、使用済み培地を吸引し、新鮮な培地15mLと交換した。ヒト間葉系幹細胞hMSCLonzaBioScience社、以前はCambrexBioscience社、カタログ番号PT2501、ロット番号6F3837を、MSCGM商標LonzaBioScience社15mL中6000生存細胞/cm2の濃度で75cm2のフラスコに入れ、37°Cの、加湿したインキュベーター内で、大気O2、5CO2で培養した。24時間後、使用済み培地を吸引し、新しいMSCGM商標15mLと交換した。培養96時間後に、hABM-SCおよびhMSCの両方を収集した。収集したhABM-SCおよびhMSCを、96ウェル丸底プレートに、RPMI完全培地HYCLONE商標中25,000生存細胞/mLの濃度でプレーティングした。ヒト末梢血単核球PMBCを、カルボキシフルオレセインサクシニミジルエステルCFSE1.25μMで標識し、hMSC、RECB801、RECB906と共に、または単独で、RPMI完全培地中250,000細胞/ウェルで培養した。T細胞増殖を刺激するために、培養物に2.5μg/mLまたは10μg/mLのフィトヘマグルチニンSigmaChemical社を接種した。次に、72時間後に細胞を収集し、製造業者の取扱説明書にしたがって、CD3-PC7抗体BeckmanCoulterで染色し、FlowJoソフトウェアを用いて、BeckmanFC500血球計算器で分析した。CD3細胞のみをゲーティングして、分裂指数について解析した。結果:同種ヒトABM-SCおよびexABM-SCは、1方向MLRアッセイにおいてマイトジェン誘導性T細胞増殖を抑制する。図16を参照されたい。パートII:同種ブタABM-SCは、2方向MLR負荷アッセイにおけるT細胞媒介性免疫反応を誘発しない。方法:免疫測定については0日目治療前に、および細胞性免疫反応の分析については倍検時治療後3日目または30日目に、ブタ全血を収集した。各動物のPBMCを、pABM-SC、マイトジェンConAと共に、または培地単独で培養した。試料をフローサイトメトリーにより分析し、増殖量を、FlowJoソフトウェアを用いて計算した。全血試料をDPBSダルベッコPBS-2ブタ血清で1:1に希釈した。希釈した血液をフィコール希釈した血液:フィコールの比は2:1で覆い、30分間、350×Gで遠心し、遠心分離サイクルを制動0で終了した。得られた上層を吸引した。所望の単核球を含む中間層を各試料についてプールし、DPBS-2ブタ血清で3回洗浄した。洗浄後、ペレットをACK溶解緩衝液20mLに再懸濁し、3分間インキュベートし、残留赤血球を除去し、次に、5分間、250×Gで遠心した。ペレットをDPBS-2ブタ血清20mLで洗浄し、RPMI完全培地RPMI-1640、10ブタ血清、2mML-glut、20mMHEPES、0.1mMNEAA、1×Penn-Strep5mLに再懸濁した。遠心分離により、20×106細胞/mLの濃度で細胞を凍結させ、氷冷凍結培地ブタ血清中10DMSOに再懸濁し、すぐに2mLのクライオバイアルに加え、クライオレートフリーザーcryoratefreezerに入れた凍結速度=-40°Cまで-25°C/分、-12.0°Cまで15°C/分、-40°Cまで-1°C/分、-120°Cまで-10°C/分。細胞を1バイアルにつき2mLの一定分量で、使用するまで液体窒素の気相中で保存した。0日目に、各試験条件について研究テンプレートに従って、pABM-SCを、AFG-104培地中10,000細胞/ウェルの濃度で、96ウェル培養皿にプレーティングした。プレートを、37°Cの、窒素で平衡化した低O24~5、5CO2の加湿インキュベーター内で一晩インキュベートした。次の日、PBMCをCFSEカルボキシフルオレセインジアセテート、サクシニミジルエステルで標識した。簡単に説明すると、PBMCのバイアルを37°Cの水浴中で解凍し、RPMI完全培地10mLで洗浄し、300×Gで細胞を遠心し、DPBSに再懸濁した。細胞濃度を10×106細胞/mLに調節し、0.625mMの最終濃度で、5分間、CFSEとインキュベートした。すぐに、細胞を氷冷DPBS/5ブタ血清40mLで洗浄し、300×Gで10分間遠心した。細胞を再びDPBS/5ブタ血清25mLで洗浄し、前回と同様に遠心した。3回目でかつ最終回として、細胞をRPMI完全培地10mLで洗浄した。細胞濃度を調節し、5×106細胞/mLの最終濃度にした。以下の研究テンプレートに従って、標識PBMCをアッセイプレートに加えた。AFG-104培地を吸引し、RPMI完全培地100μLと交換した。RPMI完全培地100μLを非刺激ウェルに添加し、RPMI完全培地中に20μg/mLのConAを含む培地100μLを刺激ウェルに添加し、4.5グルコース-RPMI完全培地を、ビヒクル細胞に添加した。研究テンプレートに従って、96ウェルプレートに、1ウェル当たり500,000標識PBMCをプレーティングした。プレートを、37°Cの、大気O2高いO2、加湿有り、5CO2、窒素なしで、5日間インキュベートした。与えられた各血液試料について、全ての条件を、3つ組みで完了した。サブセットの血液試料について、ビヒクル刺激を完了したが、培地単独と有意に異なることはなかった。共培養5日後に、フローサイトメトリーのために、細胞を96ウェルプレートからフローチューブへ移すことによって細胞を採集した。標準的なプロトコールに従って、間接染色を行った。使用した一次抗体は、ビオチン結合マウス抗-ブタCD3モノクローナル抗体であり;その後、ストレプトアビジン-PE-Cy7二次試薬に暴露した。細胞を、フロー洗浄flowwash緩衝液200μLに再懸濁し、CoulterFC500デバイス上で分析した。結果:ベースライン時、および治療後3日目または30日目に収集した試料について分裂指数を計算し、次に、培地、ビヒクル、pABM-SCまたはConAを用いてインビトロで誘発した。ConAを用いて刺激したCD3細胞については、3日目または30日目における全ての動物の平均分裂指数は、治療前および剖検時において、ビヒクル処理動物およびpABM-SC治療動物のCD3細胞の分裂指数よりも有意に高かったp<0.05。図17を参照されたい。実施例11臨床開発最初の急性心筋梗塞後30~60日目の成人コホートに、心内膜心筋注射により投与した、単回漸増用量のhABM-SCの安全性を評価するために、第1相、非盲検、用量漸増試験を行った。この研究の第1の目的は、NOGA商標またはNOGAXP商標電気機械的心臓マッピングシステムelectromechanicalcardiacmappingsystemによって導かれるMYOSTAR商標カテーテルを用いて、複数の心内膜心筋注射によって送達された単回漸増用量のhABM-SCの安全性および可能性を調査することであった。第2の目的は、左心容積、寸法、心筋梗塞のサイズおよび電圧によって測定される、単回漸増用量のhABM-SCの予備的な有効性を調査することであった。研究プロトコールにより、試験対象を、安全性について頻繁に監視して12カ月間追跡する。90日目および6ヵ月目の追跡調査来院時に、有効性の評価を行う。目的の研究集団は、登録前30日以内に急性心筋梗塞AMIを発症し、経皮的血管再生による治療が成功し、TIMIIIまたはより高い血流を回復し、心筋灌流イメージングSPECTによって測定した場合に、30以上の左室駆出率を示す、30~75歳齢の同意した成人である。試験対象患者基準および排除基準この研究の試験対象患者基準には、以下のものが含まれる:130~75歳齢であること包括的;2心筋灌流イメージング[SPECT]によって確認されたMIと一致するECG変化に加えて、正常レベルと比較して、心特異的トロポニンIcTnI酵素濃度の倍加を引き起こした、つい最近のMIとして定義されるAMIから30~60日目であること;3経皮的血管再生が成功し、梗塞領域へのTIMIIIまたはより高い血流を回復したこと;4出産可能な女性の場合において投与前24時間以内に妊娠検査血清_hCGが陰性であること;5心筋灌流イメージングSPECTによって測定した時に、左室駆出率LVEFが、30を超えること;6ベースラインにおいて、心臓酵素試験CPK、CPKMB、cTnIが正常範囲内であること;7歩行可能でなければならないこと。この研究の除外基準には、以下のものが含まれる:1登録6カ月以内に、経皮的または外科的な血管再生を必要とする場合がある顕著な冠状動脈の狭窄;2左心室LVの血栓移動性または壁在性;3高いグレードの房室ブロックAVB;4AMI後48時間を超えて、頻繁な、再発性、30秒を超える持続性または非持続性の心室頻拍;5心臓内のマッピングおよび注射の手順の間に対象の安全を妨げる恐れがある臨床的に有意な心電図上の異常;6制御されていない心拍数を伴う心房細動;7重度の弁膜疾患例えば、大動脈弁狭窄症、僧帽弁狭窄症、弁の交換を必要とする重度の弁膜機能不全;8心臓弁交換の病歴;9突発性心筋症;10重度の末梢血管疾患;11正常上限ULNの3倍を超える肝酵素アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ[AST]/アラニンアミノトランスフェラーゼ[ALT];122.0mg/dLを超える血清クレアチニン;13登録前3年以内の活性な癌の病歴基底細胞癌を除く;14以前に骨髄移植を行ったことがあること;15既知のヒト免疫不全ウイルスHIV感染;16胸部X線CXRまたは血液培養による、同時感染または敗血症の証拠があること;17登録前30日以内の実験的臨床治験への参加;18登録前6カ月以内のアルコールまたは娯楽的薬物乱用;19登録前14日以内の大規模な外科手術または大外傷;20既知の自己免疫疾患例えば、全身性エリテマトーデス[SLE]、多発性硬化症;21プロトロンビンPTまたは部分トロンボプラスチン時間PTTの、検査正常値と比較した臨床的に有意な上昇;22血小板減少血小板数50,000/mm3未満;23登録前3カ月以内の、抗糖尿病薬投与計画の変更、または7.0を超えるHbAlcとして定義される、不適切に制御されているI型またはII型糖尿病;24180mmHgを超える収縮期血圧SBPおよび/または100mmHgを超える拡張期血圧DBPとして定義される、制御されていない高血圧;25AMI後24時間を越える向イオン性薬物の使用;26治験責任者の意見で、対象を過度の危険に曝すまたはこの研究の目的を妨げる恐れがある血行動態不安定、不安定な不整脈および挿管などの他の併発状態;27治験責任者の意見で、対象の、プロトコールに従う能力を妨げる、対象の安全を損なうまたは研究結果の解釈を妨げる恐れがある全ての他の主要な病気;ならびに28適切なCTスキャン評価のための造影剤注射に対するアレルギーまたは正常に機能しない腎機能のいずれかの禁忌症。研究薬物の投与量および投与:同一コホートの対象には、3日より短い間隔では投与せず、以前のコホートの全ての対象における少なくとも3週間の安全性データの審査を受けて、次のコホートの投与は、約4週間の間隔をあける。投与当日には、ベースライン評価が完了した後、およびNOGA商標またはNOGAXP商標電気機械的マッピングシステムBiosenseWebster、DiamondBar、CAを用いた経皮的心室マッピングの直後に、hABM-SCの複数回の逐次的注射を、MYOSTAR商標カテーテルを用いて、経皮的にLVから接近して心筋層中に直接送達する。研究手順:計画されたhABM-SC投与前21日以内に、見込みがある対象から同意を得、スクリーニングを行い、その投与は、AMI後30~60日以内に行わなければならない。適格性を決定するためのスクリーニング手順も、病院のSOPが追加の試験をすなわち、カテーテル法の直前に必要としない限り、ベースライン値として用いる。治療の有効性についてのベースライン試験は、6分間歩行試験、NYHA分類、B型ナトリウム利尿ペプチドBNP濃度についての血液分析、心エコー検査、左右の心臓カテーテル法、心筋灌流イメージングSPECT、およびNOGA商標またはNOGAXP商標電気機械的マッピングからなる。入院当日には、出産可能な女性対象の場合には、妊娠検査[血清_hCG]を含む追加のベースライン血液試験を行い、適格性を確認する。投与の当日研究0日目には、対象に、NOGA商標またはNOGAXP商標電気機械的心臓マッピングを行い、MYOSTAR商標カテーテルを左心室中に留置する。hABM-SCの用量を、心内膜心筋への複数回の逐次的注射により、NOGA商標またはNOGAXP商標によって画定された損傷した心筋組織中に投与する。hABM-SCの投与後、起こり得る貫壁性穿孔を検出するために心エコーを行い、連続心臓遠隔測定モニタリングを用いて最低24時間観察するために、対象を集中治療室ICUに直接入れる。合併症のない安定な対象は、ICUからレベルを下げた病室に移し心臓モニターを行い、次いで、投与手順から72時間以降、退院帰宅させる。合併症を有する対象は、レベルを下げた病室に移すのに安定し、適するまで、最適な医療管理下でICUに留める。安全性評価を、hABM-SCの投与後7日目、14日目、21日目、60日目および90日目、ならびに6カ月目および12カ月目に行う。有効性評価を、手順後90日目および6カ月目に行い、これには、それぞれ、コントラストを高めた心エコー検査、心筋の再灌流および生存率の解析SPECT、左右の心臓カテーテル法90日目のみ、6分間歩行試験、NYHA分類、ならびにNOGA商標またはNOGAXP商標電気機械的マッピング90日目のみによって測定される、左心容積、寸法、心筋梗塞のサイズおよび電圧が含まれる。この研究の安全性エンドポイントには、以下のものが含まれる:1研究プロトコール中に詳述する有害事象;2CBC、CMP、CPK/CPKMB、cTnl、PT/PTTおよびHLA抗体解析を含む血液または血液成分の、ベースラインからの臨床的に有意な変化;3心電図ECGまたは心臓の遠隔測定によって評価される心臓の電気的な活動の、ベースラインからの臨床的に有意な変化;424時間ホルター監視によって評価される心臓の電気的な活動の、ベースラインからの臨床的に有意な変化;5手順後の心エコー図によって評価される周術期心筋穿孔;ならびに6集中的な神経学的検査を含む身体検査によって評価される身体的および精神的な状態の、ベースラインからの臨床的に有意な変化。脳血管障害脳卒中と一致する徴候および症状が観察される場合には、さらなる評価についての神経学上の助言を得る。有効性のエンドポイント:監視すべき有効性のエンドポイントには、以下のものが含まれる:1心筋灌流イメージングSPECTによって測定される、ベースラインと比較した収縮末期容量および/または拡張末期容量;2心筋灌流イメージングSPECTによって測定される、ベースラインと比較した心筋梗塞のサイズ;3コントラスト増強2-D心エコー検査によって測定される、ベースラインと比較した収縮末期寸法および/または拡張末期寸法;4NOGA商標またはNOGAXP商標電気機械的マッピングによって測定される、ベースラインおよびコア実験室から提供されたヒストリカルコントロールと比較した、hABM-SCを注射した心筋層領域における活動電位電圧の振幅;5左右の心臓カテーテル法によって決定される、ベースラインと比較した心拍出量および圧力勾配;66分間歩行試験によって評価される、ベースラインと比較した生活の質;ならびに7定期身体検査を実施する医師が評価する、ベースラインと比較した機能性心血管疾患クラスNYHA機能分類スキーム。hABM-SCの心内膜心筋への送達:hABM-SCは、心室チャンバー内から、カテーテルに案内される直接注射によって心筋層へ送達される。hABM-SCの心内膜心筋への送達は、NOGA商標CardiacNavigationSystemBiosense-Webster社ダイヤモンドバー、カリフォルニア州のインタクトな心筋層の物理的、機械的および電気的な特性のインビボでの三次元視覚化のための最先端のシステムの1つの援助によって達成される。実際の注射は、CordisMYOSTAR商標/カテーテルを用いて行う。NOGA商標システムによって、左心室の心機能のリアルタイムの観測、心臓組織損傷の検出、カテーテル先端の観察および留置が可能になる。AMI後の患者の衰弱した心臓の状態を考慮して、開心openheartによる送達または直接的な心臓内への送達と比較して比較的非侵襲性の送達システム、すなわち、NOGA商標マッピングシステムと併用するMYOSTAR商標注射用カテーテルを、hABM-SCの投与のために選択した。予備的な結果:5人の患者についての予備的な結果が得られている。最初の3人の患者は、初期用量群30×106細胞に含まれ、残りの2人の患者に、第2の漸増用量100×106細胞を投与した。全体的に、hABM-SCは、全ての患者において良好に耐容され、心機能が改善する傾向が数人の患者において認められた。より詳細な結果を以下で考察する。安全性に関する知見:いずれの患者においても、治療前後の抗体プロファイリングによって測定した場合同種免疫応答の証拠は見出されなかった。心機能の評価:NOGA電気機械的マッピング:機能のマッピングを、治療時および細胞治療後90日目に行った。代表的な単極性電圧マップを、第1用量コホートの第2患者から得た。明確な電圧の不足を、梗塞領域において認めることができたデータ示さず。15回の細胞注射を、梗塞の辺縁部において、参考のために単極性電圧を用いて行った。追跡調査90日目に、単極性電圧の明確な改善を認めることができ、正常に近い電圧が梗塞域に広がっていた。同様の程度の電圧の改善が、患者1、患者3および患者4において認められたデータ示さず。心筋灌流イメージングSPECT:灌流イメージングを、以前に公開された方法に従って、ベースライン時、細胞治療後90日目および6カ月目に行った。全ての画像を、デジタルで取得し、解析した。この解析から、24時間の洗い流し再スキャンと併せて、基礎条件およびアデノシンストレス条件下における駆出率、灌流欠損サイズおよび心室容積を導いた。各時点における各患者についての結果を以下で考察する。灌流欠損:一般に、全体的な梗塞サイズを示すと考えられている灌流欠損サイズは、治療患者では、追跡調査の6カ月間にわたって減少するか、または不変のままであった。欠損が、全心室壁の4~5未満まで回復したことを意味する臨床的に有意であるとみなされる欠損の減少を、2人の患者が示した。これらの症例の両方において、改善領域は、NOGAマッピングによって測定した場合、電圧改善領域と一致した。NOGAマッピングは研究用とみなされているが、このデータは、単極性電圧が、梗塞サイズの測定に代わることができるという仮説の妥当性を支持する。駆出率EF:一般に、研究患者の駆出率は、改善するか、または比較的不変のままであった。1人の患者は、全体的なEFの6カ月間にわたって63から50への顕著な減少を経験したが、この患者は、細胞治療の過程の間に、完全用量の細胞が実際に心内膜心筋に投与されたか否かが疑われる重大な有害事象を経験した。2人の患者は、この患者群について予想された増加をはるかに上回るEFの増加を示した。プラセボ対照を欠くことにより、この改善の機構についてのいかなる結論も排除することができない。拡張末期容量EDV:EDVを、ベースライン時ならびに治療後90日目および6ヶ月目に測定した。一般に、EDVは、すべての患者において、6カ月の追跡期間にわたり不変のままであり、これらの患者において、顕著なリモデリングは生じなかったことが示唆された。図18は、3人の患者において、ベースラインBL測定値を、hABM-SCによる治療後90日目に得た測定値と比較することによる、心臓の修復された灌流欠損サイズの変化を示す。図19は、ベースラインBL測定値を、hABM-SCによる治療後90日目に得た測定値と比較することによる、3人の患者において測定した心臓の駆出率の変化を示す。実施例12インビトロで赤血球を生成するためのヒトABM-SCおよびそれに由来する組成物骨髄の微小環境が、造血を支持し、調節するのに必要なマトリックス分子、増殖因子およびサイトカインの必須の組合せをもたらすことはよく知られているDexteratal1981。造血細胞の自己複製および系列によって制限される分化を推進することが知られている、栄養因子の全部ではないにしても大部分が、間葉系支持細胞に由来するQuesenberryetal1985。RoeckleinとTorok-Storb1995は、これらの細胞の比較的純粋な集団の中でさえ、造血を示差的に支持する亜集団を単離することができることを示した。これらの以前の刊行物に記載されている不死化クローンとは異なり、本明細書に記載のとおりに利用されるhABM-SCは、IL-6Ullrichetal1989、LIFCoryetal1991、SDF-1Hodoharaetal2000、SCFDaietal1991、アクチビン-AShaoetal1992、VEGFおよびIGF-IIMiharadaetal2006を含むが、これらに限定されない赤血球生成を誘導し、維持するのに重要な多くの因子を分泌する、CD45陰性で、CD90/CD49c同時陽性の非造血性支持細胞の純粋な集団である図20。造血前駆体例えば、胚性幹細胞ES、造血幹細胞HSC、臍帯血細胞CBCまたは方向付けされた赤芽球前駆体BFU-Eの出発集団から赤血球細胞を生成するために、ヒトABM-SCおよび/またはかかる細胞によって生成される組成物を利用して、造血前駆体の赤芽球への増殖および分化のために必要な、またはその増殖および分化を補うために必要な赤血球生成因子のカクテルを送達することによって、赤血球生成を誘導し、増強し、かつ/または維持することができる。図20を参照されたい。実施例13細胞由来組成物および栄養因子の生成、単離、精製および包装二段階の下流のバイオプロセスが、ヒトABM-SCおよびexABM-SCによって生成される分泌増殖因子、サイトカイン、可溶性受容体および他の巨大分子などの組成物を製造し、収集し、かつ精製するために開発されている。細胞によって作られた化学量論比などで生成された、分泌細胞組成物のこのカクテルは、再生促進性の治療用細胞培養試薬ならびに/またはインビトロでの細胞および組織の再生を研究するための研究ツールとして途方もない可能性を有する。かかる組成物は、懸濁培養での出発赤血球前駆細胞集団の増殖および系列に適した分化を支持するための、細胞自体の代替物として使用することもできる。無血清馴化培地の生成凍結保存したヒトABM-SCロット番号P25-T2S1F1-5を解凍し、4mML-グルタミンHYCLONELaboratoriesInc.、ローガン、ユタ州、米国、カタログ番号SH30255.01を補充したAdvancedDMEMGIBCO、カタログ番号12491-015、ロット番号284174InvitrogenCorp.、カールスバッド、カリフォルニア州、米国1Lに再懸濁する。細胞を、Corning登録商標CellBind登録商標polystyreneCellSTACK登録商標10チャンバーカタログ番号3312、CorningInc.、ニューヨーク州、米国中に、1cm2当たり20,000~25,000細胞の密度で播種する。CellSTACK登録商標10チャンバーユニットの一方のポートに、CellSTACK登録商標培養チャンバー充填アクセサリーCulturechamberfillingaccessoryCorning登録商標カタログ番号3333、CorningInc.、ニューヨーク州、米国を付け、他方のポートには、CellSTACK登録商標培養チャンバー充填アクセサリー37mm、0.1μMフィルターCorning登録商標カタログ番号:3284、CorningInc.、ニューヨーク州、米国を付ける。培養物を、37°C±1°Cのインキュベーター内に入れ、血液ガス混合物5±0.25CO2、4±0.25O2、残りは窒素GTS、アレンタウン、ペンシルベニア州を用いて、5±0.5時間通気する。播種後24±2時間後に、培地を除去し、新鮮な培地1Lと交換し、前記のとおりに通気する。約72±2時間後に、無血清馴化培地を、生物学的安全キャビネット内のCellSTACK登録商標10チャンバーユニットから無菌的に取り出し、1LのPETG瓶に移す。その後、この無血清馴化培地を、接線フローろ過tangentialflowfiltrationによって処理する。無血清馴化培地の単離および精製接線フローろ過TFFを、上記のとおりにCellSTACK登録商標10チャンバーユニットから回収した無血清馴化培地のリザーバで行った。100キロダルトンkDの分子量カットオフを有するポリスルホン中空糸カタログ番号M1ABS-360-01PSpectrumLaboratories,Inc.、ランチョドミンゲス、カリフォルニア州、米国を利用した。馴化した無血清リザーバ貯留物retentateを、中空糸の管腔を通過して管腔の面に対して接線方向に再循環させる。100kD以下の分子量を有する分子は、管腔を通過して、2LのPETG瓶中に入る。この画分は、透過物またはろ液と呼ばれる。この貯留物を、容積が約50mL未満に減少するまで連続して再循環させる。その後、この貯留物を廃棄し、さらなる処理のために、透過物を保持する。得られた透過物約1Lは、細胞デブリおよび大型の巨大分子は含まない、低分子量の分子を含む清澄な無血清溶液であり、本明細書で、画分1と呼ぶ。その後、画分1に対して、10キロダルトンkDの分子量カットオフを有するポリスルホン中空糸カタログ番号M11S-360-01PSpectrumLaboratories,Inc.、ランチョドミンゲス、カリフォルニア州、米国を用いて、追加のTFFを行う。その後、画分1を貯留物として用い、中空糸の管腔を通過して管腔の面に対して接線方向に再循環させる。10kD以下のより小さい分子すなわち、アンモニア、乳酸などは、この管腔を通過することが可能である。貯留物の容積が100mLまで減少した後に、溶液のダイアフィルトレーションを開始する。フェノールレッドを含まないアルファ-MEMHYCLONE、カタログ番号RRl1236.01HYCLONELaboratoriesInc.、ローガン、ユタ州、米国1Lを、透過物がポンプで汲みだされるのと同じ速度で貯留物のリザーバに添加し、それにより、リザーバの容積を一定に維持する。得られた貯留物は、分子量が10kDから100kDまでの範囲の小型分子のみを含み、本明細書で、画分2と呼ぶ。50キロダルトンkDの分子量カットオフを有するポリスルホン中空糸カタログ番号M15S-360-01PSpectrumLaboratories,Inc.、ランチョドミンゲス、カリフォルニア州、米国を用いて、画分2に追加のTFFを行うことによって、画分2をさらに処理することができる。したがって、画分2を、中空糸の管腔を通過して管腔の面に対して接線方向に再循環させる。50kD以下のより小さい分子は、この管腔を通過する。両方の処理ストリームを、生成物として保持する。得られた透過物/ろ液は、主として、10kD~50kDの分子で構成されるが画分3、貯留物は、50kD~100kDの範囲の巨大分子を含む画分4。それぞれの得られた画分を、60mLのPETG瓶カタログ番号2019-0060、NalgeneNuncInternationalRochesterNYの中で凍結させる。その後、そのような単離タンパク質画分に対して、さらなる無菌的な下流の処理および包装を行うことができ、その際、かかる組成物を、透析し、凍結乾燥し、BIOLYPH商標、ホプキンス、ミネソタ州、米国によって製造されるLYOSPHERES商標などの乾燥した生体適合性マトリックス中で再構成することができる。実施例14CD34臍帯血細胞CBCの単離、凍結保存および増殖系列が方向付けされた赤血球系細胞CFU-Eまたは網状赤血球の大規模生産を、以下に記載する方法を利用して、幹細胞または赤芽球前駆体例えば、臍帯血細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞およびBFU-Eの出発集団から行うことができる。健常な臨月の新生児の臍帯血を、ヘパリン処置血液収集袋に収集する。塩化アンモニウム溶解溶液を臍帯血に添加し、次いで、この混合物を、室温で15分間、300×gで遠心することによって、清浄な有核細胞調製物を作製する。上清を細胞ペレットから吸引し、この細胞ペレットを、5ヒト血清アルブミンを有するBSSD洗浄溶液で洗浄する。これらの細胞を、室温で15分間、300×gで再び遠心し、洗浄液を、細胞ペレットから吸引によって除去する。CD34細胞を、MASCLSカラムMACS登録商標;MiltenyiBiotech、グラッドバッハ、ドイツを用いる磁気細胞分離によって、確立されたプロトコールを使用して分離する。その後、CD34CBCを、約2×106細胞/mLで、CSM-55に再懸濁し、速度制御フリーザーを用いて凍結保存する。BSSD4.5デキストロースを有する平衡塩類溶液を、以下のように調製する。平衡塩類溶液である無菌の洗浄液SterileIrrigatingSolutionBSS;Baxter社、ディアフィールド、イリノイ州、米国に、450±0.5gのデキストロースEMDLifeSciences社、ギブスタウン、ニュージャージー州、米国を添加し、BSSを用いて最終容積を10.0Lにする。CSM-55凍結保存用培地5DMSO、5HSAを、以下のように調製する2Lの瓶の中で、BSSD1.4Lを、25HSA25ヒト血清アルブミン溶液、ZLBBehring社、イリノイ州、米国400mLおよび50DMSO50ジメチルスルホキシド、EdwardsLifesciences社、アーバイン、カリフォルニア州、米国200mLと組み合わせる。洗浄溶液を、BSSD400mLおよび25HSA100mLを用いて調製する。懸濁培養におけるCD34CBCの増殖その後、これらの細胞を、1.0U/mLの組換えヒトEPORDSystems社、カタログ番号287-TC、10LYOSPHERES商標/Lを補充したStemSpan登録商標H300StemCellTechnology社に再懸濁し、1.0×106/mLの細胞濃度で、使い捨てのHYCLONE商標、灌流BIOPROCESSCONTAINER商標バイオリアクターまたは等価物の中に接種する。培養物を、新鮮培地の連続的な流れを用いて、37°C、窒素で平衡化した5CO2、4O2で、3週間維持する。14日目に、Miharadaら、2006に記載のとおりに、培養物に、糖質コルチコイドアンタゴニストのミフェプリストンを補充し、除核を加速させる。新鮮培地の連続的な流れを、21日目の採集まで、これらの条件下で、一定速度で維持する。ヒトABM-SC支持細胞層上でのCBCの増殖凍結保存したヒトABM-SCを解凍し、1.0U/mLの組換えヒトEPORDSystems社、カタログ番号287-TC、4mML-グルタミン、およびロット選択し、ガンマ線照射した10ウシ胎仔血清Hyclone社を補充したAdvancedRPMI培地1640INVITROGEN商標に再懸濁し、40層の細胞培養ファクトリーcellculturefactoryCorning社の中に、10,000細胞/cm2の密度で播種し、37°Cで、窒素で平衡化した5CO2、4O2下で維持する。5日目に、2分の1の容積の使用済み培地をこの培養物から除去し、1.0×106CBC/mLと共に、2分の1の容積の新鮮培地を添加することによって補充する。その後、新鮮培地の不連続な流れオン-オフ-オンを与えて、培地条件が、新鮮オンから馴化オフへ、再び新鮮培地オンに戻るように循環するのを可能にする。14日目に、上記の記載のとおりに、培養物に、糖質コルチコイドアンタゴニストのミフェプリストンを補充し、除核を加速させる。共培養を、21日目の採集まで、これらの条件下で維持する。実施例15ABM-SCは、スカベンジャー受容体およびアンタゴニストを分泌し、腫瘍壊死因子-αのレベルを用量依存的に減少させる背景:本発明の実施形態は、治療有効量のexABM-SCまたはexABM-SCによって生成される組成物を送達することによって、対象の炎症または自己免疫活性などの有害な免疫活性を治療するか、低下させるか、または予防するための方法および組成物を含む。本発明の実施形態は、インビトロでの天然に存在する分泌組成物または基礎レベルの分泌組成物の生成による、exABM-SCまたはそれによって生成された組成物の利用を含む。あるいは、本発明の実施形態は、exABM-SCを操作して、例えば、TNF-αなどの炎症促進性因子の投与によって生成される組成物の量および種類を調節上方制御または下方制御することによる、exABM-SCまたはそれによって生成される組成物の利用も含む。例えば、現在までに、exABM-SCが、サイトカインの腫瘍壊死因子-αTNF-αの少なくとも1つのスカベンジャー受容体、およびインターロイキン-1受容体IL-1Rの少なくとも1つのアンタゴニスト、およびサイトカインのインターロイキン-18IL-18の少なくとも1つの結合タンパク質アンタゴニストを生成することが見出されている。したがって、本発明の実施形態は、治療上有用なタンパク質を未変性の形態で一貫して分泌するexABM-SCなどの安定な細胞集団の使用および投与のための方法および組成物を含む。本明細書で使用する場合、安定な細胞集団という用語は、単離し、インビトロ培養した細胞集団を意味し、この細胞集団は、マウス、ラット、ヒト、イヌ、ウシなどの生存哺乳類生物に導入した時に、ニューロン複数可、心筋細胞複数可、骨細胞複数可、肝細胞複数可などの1つまたは複数の新しい細胞型に分化した細胞の検出可能な生成を生じることはなく、この細胞集団中の細胞は、可溶性TNF-α受容体、IL-1Rアンタゴニスト、IL-18アンタゴニスト、表1A、表1Bおよび表1Cなどに示す組成物などの検出可能なレベルの少なくとも1つの治療上有用な組成物を分泌し続けるか、またはそのような組成物を分泌する能力もしくはそのような組成物の分泌を誘導する能力を維持し続ける。本発明の目的では、スカベンジャー受容体は、膜結合型であろうと、または細胞外環境中に遊離していようと、その同族リガンドに結合し、中和することができる任意の可溶性受容体または分泌された受容体を意味すると意図される。上記に列挙した炎症促進性因子に加えて、本開示を考慮すると、本発明の細胞集団によって生成される組成物の濃度および種類を操作するために、本発明の細胞集団を、現在知られているまたは今後発見もしくは同定される因子の任意の数、種類、組合せおよび/または異なる濃度で、処理することができることも理解される。例えば、本発明の細胞集団は、好ましくは、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-23、TNF-α、TNF-βおよびレプチンなどの因子で処理することができる。しかし、好ましい因子のこの簡潔なリストは、本発明の細胞集団を処理するために用いることができる異なる組成物の数に関して制限するものとして意図されず、また制限するものとして解釈されるべきではなく、簡潔な例として、核酸、脂質、炭水化物などの他の生物学的巨大分子、ならびにジメチルスルホキシドDMSOおよび亜酸化窒素NOなどの小分子および化学物質などを含む多くの他の種類の化合物も、本発明の細胞集団を操作するために用いることができると理解されるので、これらの組成物がタンパク質に制限されることもない。方法:酵素結合免疫吸着測定法ELISAこれについても以下に記載するで使用するために、無血清馴化培地を、以下に記載するとおりに生成した。凍結保存したヒトexABM-SCロット番号MFG-05-15;約43回の集団倍加時を解凍し、10ng/mLのTNF-αを含む場合と含まない場合とで、4mML-グルタミンカタログ番号SH30034.01.ロット番号134-7944、HYCLONECLaboratoriesInc.、ローガン、ユタ州、米国を補充したAdvancedDMEMGIBCO商標;カタログ番号12491-015、ロット番号1216032InvitrogenCorp.、カールスバッド、カリフォルニア州、米国に再懸濁した。次いで、細胞懸濁液を、T-225cm2CELLBIND商標CorningInc.、ニューヨーク州、米国培養フラスコ培養表面が、特許権を有するマイクロ波プラズマ加工で処理されている;米国特許第6,617,152号参照n=3に、培地36mL中10,000、20,000、40,000細胞/cm2で播種した条件につきn=3。40,000細胞/cm2で播種した熱不活性化細胞を、陰性対照として用いた。一定分量を無菌チューブへ移し、それを、効率的な熱伝達のために水を含む70°Cの加熱ブロック中で、約40分間インキュベートすることによって、細胞を熱不活性化した。培養物を、37°Cの加湿した、3種類のガスを有するインキュベーター窒素で平衡化した4O2、5CO2内に約24時間置いた。次いで、接着していないデブリを除去するのと同じ日に、培養物に新鮮培地を再供給して、インキュベーターに戻した。3日目に、細胞培地を、20mLのCENTRICON商標PLUS-20遠心濾過ユニットCentrifugalFilterUnitMilliporeCorp.、ビレリカ、マサチューセッツ州、米国を用いて、製造業者の取扱説明書に従って濃縮した。簡単に説明すると、濃縮器を、1140×Gで45分間遠心した。濃縮した上清100×最終濃度を、清浄な2mLのクライオバイアルに移し、後の使用まで、-80°Cで保存した。これらの接着培養物中の、ヒトABM-SCから生成された特定の分泌タンパク質のレベルを測定するために、3日目に、上記のとおりに収集し、100×濃縮し、馴化した細胞培養上清で、酵素結合免疫吸着測定法ELISAを行った。アッセイ当日、使用前に、上清を解凍し、室温まで平衡化させた。ELISA解析を行い、TNF-α、可溶性TNF-RIsTNF-RI、可溶性TNF-RIIsTNF-RII、IL-1受容体アンタゴニストIL-IRAおよびIL-2受容体αを検出した製造業者の取扱説明書に従って行った;全てのキットは、RDSystems,Inc.ミネアポリス、ミネソタ州、米国から購入した。これらの結果は、治療的に適するレベルの分泌スカベンジャー受容体例えば、sTNF-RIおよび受容体アンタゴニスト例えば、IL-IRAが、これらの接着培養物によって生成され、これらのレベルを、細胞の濃度または用量を調節することによって制御することができることを証明する図21~23。重要なことには、これらのデータは、これらの細胞が、それらが置かれた炎症性環境に応答することも証明する。例えば、強力な炎症性サイトカインのTNF-αで処理した後に、これらの細胞は、sTNF-RII図22BおよびIL-IRA図23の分泌を上方制御する。興味深いことに、これらの試料培養物において、TNF-αのレベルが、細胞播種密度を増加させる毎に著しく減少し図21、このことは、TNF-α自体が、ABM-SCまたはABM-SCが分泌する因子のいずれかによって、何らかの方法で捕捉されたことを示唆する。sTNF-RIおよびsTNF-RIIの両方が、TNF-αに結合し、TNF-αの生理活性を中和することができることは確立されている。測定可能なレベルのTNF受容体の両方の形態およびTNF-α自体が、細胞播種密度が増加する毎にそれぞれ著しく減少するので、このアッセイ系では、ABM-SC由来のsTNF-RIおよびsTNF-RIIが、TNF-αに結合し、TNF-αをマスキングしている可能性がある。熱不活性化細胞のみを含む培養物中では、測定した可溶性受容体および受容体アンタゴニストの検出可能なレベルは認められなかった。アッセイ条件間の統計学的比較を、一元配置ANOVAによって決定した。実施例16骨形成誘導アッセイ:ヒトABM-SC細胞は、約25回の集団倍加を超えて増殖させた細胞集団を標準的な骨誘導条件に曝した時、または約30回の集団倍加を超えて増殖させた細胞集団を増強した骨誘導条件に曝した時に、インビトロで骨分化の特徴を示さない方法:以降、間葉系幹細胞増殖培地MesenchymalStemCellGrowthMediumMSCGM商標と呼ぶ、MSCGM商標SingleQuotKitLonza社、カタログ番号PT-4105を補充した間葉系幹細胞基礎培地MesenchymalStemCellBasalMediumMSCBM商標;Lonza社、カタログ番号PT-3238を1ウェル当たり2.4mL含む6ウェル培養皿Corning、カタログ番号3516に、ヒトABM-SCおよびexABM-SCを3100細胞/cm2で播種した。約4時間後、MSCGM商標を、適切な試験条件に変えた。陰性対照ウェルは、MSCGM商標単独、または5ng/mLの組換えマウスノギン/FcChimerRDSystems社、カタログ番号719-NGを補充したMSCGM商標のいずれかを再供給したウェルであった。試験ウェルは、骨形成誘導培地OsteogenesisInductionMediumOIM;Lonza社、カタログ番号PT-3924およびPT-4120単独標準的な骨誘導条件、または5ng/mLの組換えマウスノギン/FcChimerを補充したOIM増強した骨誘導条件のいずれかで処理したウェルであった。次いで、培養物を、37°Cの加湿したCO2インキュベーター内で維持し、新鮮培地を、3~4日毎に2週間再供給した。14日後、製造業者の取扱説明書に従って、CalciumLiquicolorキットStanbio社、カタログ番号0150-250を用いるカルシウム測定のために培養物を処理した。SpectraMaxPlus384マイクロプレートリーダーを用いて、550nmで、プレートを読み取った。結果:研究ロット番号MCB109由来のヒトABM-SCおよびexABM-SCを、標準的な骨誘導条件下OIMのみまたは増強した骨誘導条件下OIMおよびモルフォゲンであるノギン;OIMノギンで培養した。陰性対照の培養物を、増殖培地単独MSCGM商標またはノギンを補充したMSCGM商標MSCGM商標ノギンのいずれかの中で維持した。約16回の集団倍加時のABM-SCは、OIM培地にノギンを補充した時に、カルシウム沈着の約6倍の増加を示したすなわち、約16回の集団倍加時のABM-SCは、OIM条件下では、カルシウムを約5μg/ウェル沈着し、OIMノギンの条件下では、約30μg/ウェルを沈着した。ABM-SCは、標準的なOIM条件下では、約16回の集団倍加を超えると、検出可能なレベルのカルシウムを沈着する能力を喪失したが、これは、ノギンを補うことによって逆転させることができたすなわち、約25回の集団倍加時のexABM-SCは、OIM条件下では、検出可能なカルシウムを沈着しなかったが、これらの同じ細胞は、OIMノギンの条件下では、カルシウムを約5μg/ウェル沈着した。対照的に、約30回を超える集団倍加時では例えば、約35および43回の集団倍加時では、exABM-SCは、試験した条件標準的なOIMまたは増強したOIMのいずれにおいても、検出可能なレベルのカルシウムを沈着しなかった。実施例17ABM-SCによる、IL-1受容体アンタゴニストIL-1RAおよびIL-18結合タンパク質IL-18BPの発現方法:約43回の細胞集団倍加を経たヒトABM-SCロット番号:P17-T2S1F1-5を解凍し、ブレフェルジンAを3μg/mL1×で補充したAFG増殖培地中に播種し、加湿した、5CO2インキュベーター内に、37°Cで24時間置いた。次いで、ブタトリプシンを使用して、培養細胞を培養フラスコから除去し、洗浄し、フローサイトメトリーのために、CALTAGFIXPERM登録商標染色プロトコールCALTAGLABORATORIES社;現在、InvitrogenCorp.カールスバッド、カリフォルニア州、米国の一部であるに従って調製した。細胞を、1:10に希釈したニートのFITC結合マウス抗-ヒトIL-1受容体アンタゴニストIL-1RA;eBioscience社、カタログ番号11-7015、クローンCRM17抗体または非標識ウサギ抗-IL-18結合タンパク質IL-18BP;Epitomics社、カタログ番号1893-1、クローンEP1088Yのいずれかを用いて、ともに室温で45分間染色した。次いで、FITC-ウサギFITC-標識ヤギ抗-ウサギ抗体を用いて、IL-18BPを検出した。アイソタイプ対応対照を、陰性対照として含めたBeckmanCoulter社。結果:ヒトexABM-SCは、TNF-αなどの炎症性シグナルの非存在下であっても、基礎レベルのIL-1受容体アンタゴニストIL-1RA;図24AおよびIL-18結合タンパク質IL-18BP;図24Bを発現させる。実施例18ヒトABM-SCは、TNF-αおよびIL-13の発現を減少させるが、同時に、IL-2の発現を増加させる方法:ヒト末梢血単核球PBMCを、1同一ドナーレスポンダー自己由来のマイトマイシンC処理したPBMC、または2異なるドナーレスポンダー刺激因子由来のマイトマイシンC処理したPBMCのいずれかを含む24ウェルプレート中、5ヒト血清アルブミン、10mMHEPES、2mMグルタミン、0.05mM2-メルカプトエタノール、100U/mLペニシリンおよび100μg/mLストレプトマイシンを含むRPMI-1640中で共培養した。各供給源からのPBMCを、それぞれ、4×105細胞/ウェルで播種した。各条件について、培養物に、ヒトABM-SCを40,000細胞/ウェルの播種密度で補う場合と、補わない場合とを設けた。培養物を、加湿した、5CO2インキュベーター内で、37°Cで7日間維持し、培地を馴化した。馴化した細胞培養上清を収集し、種々のサイトカインの存在について、SEARCHLIGHT商標9-PlexアッセイPierceProteinResearchProducts、ThermoFisherScientificInc.、ロックフォード、イリノイ州を用いて分析した。統計解析を、一元配置ANOVA分散の解析によって行った。結果:混合PBMC反応について予想されるとおり、同種PBMCレスポンダー刺激因子の共培養により、TNF-αおよびIL-13のレベルの著しい増加がもたらされた。しかし、ヒトABM-SCを用いて誘発した場合、IL-13およびTNF-αの両方が有意に減少したP<0.001ことから、ABM-SCを治療に活用して、炎症性メディエーターの病巣レベルまたは血清レベルを低下させることによって、慢性炎症障害または移植片拒絶を治療できることが示唆された。図25A、図25Bおよび図25Cを参照されたい。特に、ABM-SCは、自己レスポンダー自己および同種レスポンダー刺激因子の両方の混合PBMC培養物において、IL-2の発現上昇を誘導するがP<0.001、同時にPBMC増殖を抑制する。この結果は、T細胞増殖の促進におけるIL-2の重要性を考慮すると、幾分か矛盾するように思えるが、最近、マウスにおいて、IL-2経路を破壊すると、免疫不全よりむしろ、リンパ過形成および自己免疫が生じることが示され、これは、IL-2の主要な生理学的役割が、T細胞応答を増強するのではなく、制限するかまたは調整することができることを示唆するNelsonIL-2RegulatoryT-CellsandToleranceJourImmunol172:3983-39882004。さらに、現在、IL-2も、インビボにおいてT細胞反応を抑制することにより自己寛容を促進するのに重大な意味をもち、これが生じる機構は、CD4/CD25調節性T細胞の増殖および成熟を介することが知られている。したがって、ABM-SCを治療に利用して、調節性T細胞の成熟を、IL-2の上方制御の誘導を介して間接的に支持することによって、T細胞寛容を誘導できることが企図される。実施例19ヒトABM-SCは、マイトジェン誘導性末梢血単核球の増殖を阻害する方法:ヒト成人骨髄由来体細胞ABM-SCを、5CO2下、加湿インキュベーター内で96時間インビトロ培養し、次いで、96ウェル丸底プレートにて、RPMI完全培地HYCLONE商標中25,000生存細胞/mLの濃度で継代した。ヒト末梢血単核球PBMCを、別々に、RPMI完全培地中250,000細胞/mLで、またはABM-SCの約19回の集団倍加まで継代培養したロット番号RECB801もしくは約43回の集団倍加まで継代培養したRECB906と共に培養した。PBMC増殖を刺激するために、培養物に、2.5μg/mLのフィトヘマグルチニンSigmaChemicalCo.を接種した。培養56時間後に、チミジン-[メチル-3H]PerkingElmer社、1μCi/ウェルで細胞をパルスした。細胞を、72時間目に、フィルターマスターハーベスターFiltermasterharvesterを用いて、ガラスフィルター上に収集した。フィルターを、Omnifilterplater中で、NXTTopCountシンチレーションカウンターを用いて読み取った。ヒト間葉系幹細胞を、陽性対照として含めたヒト間葉系幹細胞は、現在、LonzaGroupLtd、バーゼル、スイスが所有しているCambrexResearchBioproducts社から入手した。統計学的解析を、一元配置ANOVA分散の解析によって行った。結果:PBMC誘導性増殖は、ABM-SCのいずれかのロットを用いて誘発した時に、有意に減少したP<0.001。図26を参照されたい。間葉系幹細胞MSCを、陽性対照として含めた。これらのデータは、ABM-SCが、全PBMC調製物のマイトジェン誘導性増殖を阻害するだけでなく、このアッセイ系にABM-SCが存在すると、調製物中の様々な細胞亜集団例えば、単核球、顆粒球、リンパ球の増殖を誘導しないことを示唆する。実施例20コラーゲンベースの生理活性デバイスこの実施例において、以下の略語を用いる:ADG;L-グルタミンおよびHEPESを含むAdvancedDMEMに基づく培地製剤BSC;バイオセーフティーキャビネット層流フードBSS;平衡塩類溶液CFM-G;MEM、グリセロール、ウシ血清およびFBSを含む凍結保存培地DMEM;ダルベッコ改変イーグル培地DPBS;ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水ELISA;酵素結合免疫吸着測定法EthD-1;エチジウムブロマイド死細胞を赤色に染めるGlut;グルタルアルデヒドhABMSCs;ヒト成人骨髄由来間質細胞複数可HEPES;PBS;リン酸緩衝生理食塩水RPM;1分間あたりの回転数VEGF;血管内皮増殖因子序論ヒト成人骨髄由来間質細胞hABM-SCは、組織の修復および再生に関与する多種多様な因子を分泌する。ラット尾部コラーゲンと組み合わせると、これらの細胞は数日間生存し、用量依存的に構築物を収縮させ、培地に因子を放出する研究RND-04-032-3を参照する。hABM-SCおよびラット尾部コラーゲンを組み合わせ、培養することから生成される構築物は、医療デバイスとして販売される可能性を有する治療因子を含む柔軟な実体である。この実施例は、臨床グレードの、GMPコラーゲンベースの生理活性医療デバイスを調製する方法を提供する。以下の4つの主要なステップが、コラーゲンベースの生理活性デバイスの生成に関与した:1細胞の調製、2コラーゲンゲルの形成、3コラーゲン細胞構築物の培養、および4コラーゲン構築物の加工。各ステップは、調整のための一連の変数および機会を含んでいた。様々な程度の生理活性、耐久性、柔軟性、およびサイズを有する200を超える異なるデバイスを作製した。細胞密度、コラーゲン濃度、および/またはコラーゲンゲル容積を増加させると、より高い生理活性がもたらされた。実施形態において、4mg/mlまたは6mg/mlいずれかのコラーゲン濃度が、この研究において最適な生理活性をもたらした。最高で9mlのコラーゲンゲル容積から生成されたデバイスが適しており、より高レベルのVEGFをもたらした。しかし、より高容積のゲルは、他のデバイス反復物と比較して、耐久性が低下した。これらの構築物を加工するために用いたグルタルアルデヒド架橋結合濃度は、0.005~0.05の間が最適であった。層流フード内でのポリエチレンプラスチックの脱水により、薄く、可撓性であり、室温にて保存することができるデバイスが得られた。hABM-SCおよび臨床グレードのブタコラーゲンを用いて、コラーゲンベースの生理活性デバイスの製作に成功した。以下のプロトコールは、比較的低いCOG、耐久性、および安定性を有する、生存していない生理活性医療デバイスの生成法を提供する。本発明の実施形態において、最適と認められたパラメータには、以下のものが含まれる:6e6hABM-SC3日間または4日間の培養4mg/mlまたは6mg/mlのコラーゲン6~9mlのゲル容積0.005、0.01および0.005のグルタルアルデヒド。目的この研究の目的は、1生存細胞を欠くが、生理活性因子を保持する、2長期保存が可能で、かつ輸送が容易である、3GMP製造に拡大することができる医療デバイスを開発することであった。研究設計この実施例において、hABM-SCを用いるコラーゲンベースの生理活性デバイスの生成には、図40で概要を述べた4つの主要なステップが含まれる。各ステップは、異なる特徴を有するデバイスを生成するために変更することができる複数の要素を必要とする。この実施例は、生存しておらず、生理活性を有し、拡張可能な医療デバイスの生成のための最良の組み合わせを特定するために、成分を段階的な方法で変更した多数のより小さい実験のまとめである。変更したパラメータのまとめを表4に示す。200を超える異なる組み合わせ/デバイスを作製した。これらのデバイスを、最初に、サイズ、テクスチャ、色、表面プロフィールについて物理的な観測および測定により評価した。それらの物理的特徴により容認できると思われるデバイスを、ELISAによる因子の定量化、機械的検査、コラゲナーゼ消化について、さらに試験を続けた。材料および方法細胞細胞型:製品レベルのhABMSCこの研究を通して、複数のロットを用いた培養容器:なし、凍結バイアルから解凍し、再懸濁した直後に用いられる細胞播種密度:これらの研究を通して、コラーゲンゲル構築物内の播種密度を変更したが、6e6、7e6、8e6、10e6、15e6個の生存細胞の全細胞数を各デバイスに含めた。材料および機器デバイス材料および機器L-グルタミンを含むAdvancedDMEMADG:AdvancedDMEM、4mMグルタミン、20mMHEPESコラーゲン:ブタ皮膚由来の、10mg/mlのTheraColコラーゲン1;SewonCellontech、韓国4mg/mlコラーゲンゲルに対するコラーゲン緩衝液:7.5炭酸水素ナトリウム16ml、1MHEPES4ml、1N水酸化ナトリウム2ml、滅菌水78ml6mg/mlコラーゲンゲルに対するコラーゲン緩衝液:7.5炭酸水素ナトリウム20ml、1MHEPES6.66ml、1N水酸化ナトリウム5.3ml、滅菌水68mlL-グルタミンを含む10×DMEM:10×DMEM、10mML-グルタミングルタルアルデヒドのワーキング溶液:最終濃度まで1×DPBSで希釈した8グルタルアルデヒドストック溶液5Mグリシン溶液:グリシン粉末Sigma社、1×DPBS1×DPBS懸濁培養用6ウェルプレート直径35mmのウェル、GrenierBioOne社平型薬さじVMueller滅菌パウチ12×15ポリエチレンプラスチックトリパンブルーGibco社カタログ番号15250-061バイオセーフティーキャビネットBSCインキュベーター:Forma3150遠心分離機:BeckmanCoulterAllegra6R血球計数器:Brightline倒立顕微鏡:NikonModelTS100デバイス試験の材料および機器カルセインAMおよびEthD-1染色生存細胞/死細胞の生存率/細胞毒性キット、MolecularProbes社コラゲナーゼ/ヒアルロニダーゼStemCellTechnologiesInc平衡塩類溶液BSSVEGFELISAVEGFELISAQuantikineキット、RnDSystems社はさみ37°Cの水浴ボルテックス実験手順デバイスの生成以下の4つの主要なステップにより、コラーゲンベースの生理活性デバイスの生成を完了した:上記の図40で概説した1細胞の調製、2コラーゲンゲルの形成、3コラーゲン細胞構築物の培養、および4コラーゲン構築物の加工。簡単に説明すると、コラーゲンゲル溶液にhABM-SCを封入することによって構築物を形成した。ウェルの直径が35mmの6ウェル懸濁プレートを、細胞含有ゲル溶液で満たし、ゲル化のために37°Cでインキュベートした。このゲル溶液を固化させた時点で、これをウェルからはがし、培地を用いて懸濁培養した。このコラーゲンゲル構築物を低O2条件下で培養し、その間、細胞はコラーゲンゲルを積極的に収縮させた。培養期間の終わりに、これらの構築物を、グルタルアルデヒド架橋結合により加工し、その後、グリシン洗浄した。最終的に、この構築物を脱水すると、これらの細胞は不活性化するが、これら細胞によって分泌された生理活性因子は保存された。各ステップにおいて、変更する機会はあった。その際、プロセスが変更されたか、または複数回の反復が行われ、詳細を以下に提供する。細胞の調製ほとんどのデバイスは、液体窒素下で保存したバイアルから直接解凍したhABM-SCを用いて作製した。これらの構築物のために、以下のステップを行って、これらの細胞を調製した:1.凍結バイアルを液体窒素タンクから取り出し、6~10分間、37°Cの水浴中で解凍した。2.細胞を、50mlのコニカルチューブ中のADG培地で再懸濁した。3.コニカルチューブ内の細胞を5分間、1,240rpmで遠心し、細胞をペレットにした。4.上清を除去し、細胞数を数えるために、細胞をADG培地に再懸濁した。5.細胞懸濁液試料100μlを取り、ADG培地に1:10で希釈した。トリパンブルーで1:1希釈したこの試料を用いて、細胞の数および生存率を、血球計数器で評価した。トリパンブルーを排除した生存細胞を数え、色素を保持し、青色に染まった死細胞を数えた。6.最終細胞濃度を用いて、単一の50mlコニカルチューブに、適切な数の生存細胞を一定分量入れた。7.細胞懸濁液を含むコニカルチューブを、5分間、1,240rpmで再び遠心し、細胞をペレットにした。8.全上清を細胞ペレットから除去した。これらのペレットは、構築物形成のために、コラーゲンゲル溶液と混合する準備ができた。コラーゲンゲル形成コラーゲンゲル構築物を、これらの細胞ペレットと共に、ゲル成分を混合することによって形成した。これらの成分は、常に、以下の順番で混合した:L-グルタミンを含む10×DMEM、コラーゲン緩衝液、TheraColストックコラーゲン、次いで、混合物を加えて、細胞ペレットを再懸濁する。表4に、これらのデバイスを生成するのに用いた異なるパラメータをまとめる。3つの異なるコラーゲン緩衝液を、4mg/mlゲル、6mg/mlゲル、または8mg/mlゲルのために用いた。全てのゲル溶液成分を、細胞と組み合わせて、ゲル形成を開始するまで4°Cで保った。1.L-グルタミンを含む10×DMEMを、50mlコニカルチューブ6個のゲルを作製する場合または250ml瓶12個のゲルを作製する場合のいずれかに加えた。各構築物の10×DMEMの容積は、最終ゲル構築物容積の1/10であり、この構築物内でDMEMを1×溶液にした。2.コラーゲンゲルの最終濃度を適切な4mg/ml、6mg/ml、または8mg/mlにするために、コラーゲン緩衝液を、10×DMEMに加え、回転混合した。3.10mg/mlのTheraColストック溶液を、片方の手で回転させながら、瓶の中にコラーゲンをピペッティングによって加え、溶液中にコラーゲンを均等に分散させた。4.これらの成分を、同じピペットを用いて、素早くピペットで溶液を吸引および排出することによって、均質溶液になるまで迅速に混合したコラーゲンは、ピペットの内側をコーティングするが、混合中にピペットでの吸引および排出により流出し続けるだろう。同様にピペッティング中、この溶液を含む瓶を回転させて、混合を助ける。5.この溶液を完全に混合すると、さらに粘性の一貫性と相まって、ピンク色の外観を呈した。6.このゲル溶液を細胞ペレットにピペットで入れ、素早くピペッティング操作して、これらの細胞をゲル溶液に完全に再懸濁させた。再懸濁した細胞で、この溶液が均一に濁り、細胞凝集体が見えなくなるまで、ピペッティング操作を続けた。7.次いで、この細胞懸濁液を、ピペッティング操作を繰り返して、残りのコラーゲンゲル溶液に均一に分注し、このゲル溶液中にこれらの細胞を均一に分布させた。8.規定量の細胞コラーゲン溶液を、懸濁培養6ウェルプレートの各ウェルにピペットで入れた。異なるデバイスを作製し、試験したので、この最終容積は3ml~9mlの範囲であった。9.ゲル溶液を含む培養プレートを、すぐに、5CO2および18O2を含む37°Cの加湿インキュベーターに入れた。これらのプレートを1時間そのままにしておき、コラーゲンのゲル化を完了させた。コラーゲンおよび細胞構築物の培養1.1時間インキュベーションした後、これらのプレートをインキュベーターから取り出し、BSC内に置いた。2.完全なゲル化後のコラーゲンゲル構築物を、滅菌した平型薬さじを用いて、これらのプレートのウェルから取り除いた。この薬さじをゲルの端とウェルの壁の間に挿入し、周囲を切り取り、ウェルの壁からこのゲルを完全に引き離した。3.薬さじを用いて、これらのゲルを、周囲に沿って中心に向かって端を穏やかに押すことによって、ウェルの底から持ち上げた。4.4ml、5ml、6ml、および7mlのゲル容積の構築物については、ADG培地6mlを、コラーゲンゲル構築物を含む各ウェルに加えた。8mlおよび9mlのゲル容積の構築物については、ADG培地4mlを加えた。5.各構築物が培地中を自由に浮いている状態を確実にするか、あるいは、薬さじを用いて、構築物を完全にさらに持ち上げた。6.次いで、これらの培養プレートを、培養のために、37°Cの、低酸素4O2、5CO2の加湿インキュベーター内に入れた。7.構築物を1~9日間培養した。ほとんどの構築物を64~72時間培養した。コラーゲン構築物の加工コラーゲンゲル中の細胞の培養後、これらの構築物を加工して、生存していない最終デバイスにした。この加工には、グルタルアルデヒド架橋結合、グルタルアルデヒド反応停止および脱水が含まれる。過剰なアミン基の条件下で、グルタルアルデヒド架橋結合反応を終了した。高濃度のグリシン溶液を加えることにより、未反応のグルタルアルデヒドの遊離端をグリシンと反応させた。この反応停止ステップは、架橋剤としてグルタルアルデヒドを用いる潜在毒性を防ぎ、制限することができる。1.培養構築物を、グルタルアルデヒド溶液6mlの添加により架橋結合した。このゲル構築物を、グルタルアルデヒド架橋結合および洗浄ステップの間中、元の培養プレート中で保持した。2.グルタルアルデヒドを用いる架橋結合を、プレート振盪機をわずかに動かしながら、室温で30分間または1時間行った。3.次いで、グルタルアルデヒド溶液をこれらのウェルから取り除き、1×DPBS6mlを加えて、残留グルタルアルデヒドの洗浄を始めた。4.1×DPBS6mlによる少なくとも全部で4回の洗浄を10分間行い、各ウェルから取り除いた。この洗浄の少なくとも2回については、これらのプレートをプレート振盪機上に置き、穏やかに撹拌した。5.各ウェルに0.5Mのグリシン溶液6mlを添加することにより、グルタルアルデヒド架橋結合反応を停止した。室温で2時間、3時間または4時間のグリシン反応停止中、プレートをプレート振盪機上に置き、穏やかに撹拌した。6.グリシン反応停止の終わりに、この溶液を除去し、これらの構築物を、ステップ4で明記したとおり、再び、少なくとも全部で4回の洗浄にDPBSを用いて完全に、洗浄した。7.最後の洗浄後、架橋結合した構築物の周りのウェルから可能な限り多くの液体を取り除き、BSC内で構築物の脱水を始めた。8.組織培養プレートの底で、以下の様々な脱水表面を直接試験した;スズ箔、ポリエチレンプラスチック具体的には、12×15ポリエチレン滅菌パウチ。これらの表面をBSC内においた。9.平型薬さじを用いて、各単一架橋結合構築物を、ウェルプレートから脱水表面に移した。10.これらの構築物に対して、互いに少なくとも10cmの間隔をあけた。フードの明かりを消し、送風機を付けたまま、適切に機能する高さまでフードのドアを開けた状態で、構築物をBSC内に一晩放置した。11.これらの構築物を、BSC内で一晩脱水した後、紙のように非常に薄いディスクにまで脱水することにより、デバイス構造を生成し、これをさらなる試験に用いた。デバイス試験デバイス試験を、本明細書に記載の方法に従って行った。以下の試験を行った:物理的パラメータ、コラゲナーゼ消化およびVEGFELISAを用いた生理活性の評価。結果生存している構築物パラメータの変動これらの実験について、生存しているコラーゲンゲル構築物内のhABM-SCから分泌される因子の量および捕捉が増加するように培養条件を最適化することに焦点を置いた。最初の方法には、密度、コラーゲンゲルの濃度およびコラーゲンゲル内の細胞の培養時間を変動させることを含んだ。前の実験に基づき、COGを考慮すると、2e6細胞/mlおよび5e6細胞/mlの細胞密度をこれらの研究で探求した。最初の実験のために作製した構築物は、容積が3mlのコラーゲンゲルを利用し、したがって、最終的な全細胞数は、各ゲル中6e6または15e6細胞のいずれかであった。このコラーゲンゲル濃度は、3mg/mlまたは4mg/ml各ゲル3ml容積のいずれかであった。この最初の研究における第3の変数は、37°Cで、N2で平衡化した4O2、5CO2の低酸素圧下、1日間、3日間、6日間、または9日間、hABM-SCを播種したコラーゲンゲルを培養することであった。図41および図42は、細胞生存率、細胞形態、細胞活性および構築物の生理活性の分析を有するこの最初の研究の結果を示す。図41は、完了した第1の研究の生存している構築物を染色する、細胞生存率緑色のカルセインAM=生存、赤色のEthD-1=死の画像を示す。図41の画像の上段は、培養3日後の4個のデバイス間の細胞形態における細胞播種密度およびコラーゲン濃度の違いを強調する。より高濃度のコラーゲンを播種した構築物は、より多くの生存している細胞を有するように見える。より多くのEthD-1赤色染色によって観察すると、3mg/mlの構築物内の細胞死もわずかに上昇していた。これらのコラーゲンゲルは、コラーゲンゲル1mlあたり最高で5百万個のABM-SCを許容し、保持することができるようにも見える。より高濃度のコラーゲンを有する構築物は、より収縮し、したがって、より密度が高くなるので証拠として図42を参照されたい、4mg/ml、5e6/mlのデバイスにおいて、より多くの生存細胞が現れることは、実際、ゲルサイズの低下および全体的な密度の増加にまさに起因する可能性がある。図41の下段は、同じ数の細胞を播種したが、1~9日間培養したデバイスについて、培養時間の影響を強調している。細胞を播種したコラーゲン構築物の培養の最初の3日間で、これらの細胞がゲルを操り、ゲルをより少ない容積まで収縮する。3日目の形態図2fは、ゲルを収縮させる細胞の一部の整列化を示す。3日目~6日目の形態は似ているが、培養9日目までに、より多くの死細胞がこれらの構築物内に現れる赤色染色。より多くの細胞数およびコラーゲン濃度の増加が、より生存能力があり、収縮させる細胞を保持するのに好ましいように思われる。理論的には、より生存能力のある細胞が、より生理活性のある因子をもたらすべきである。図42に示すとおり、細胞密度およびコラーゲン含有量の両方の増加が、構築物をより収縮させた。5e6個のABM-SCを有するデバイスは、2e6個のABM-SCを有するデバイスよりも速く、高い割合で収縮した。コラーゲン含有量が4mg/mlまで増加した時、構築物はより速く、大きな程度で収縮した。組み合わせると、効果は相加的であった。これらの予備構築物の生理活性を評価するために、これらのデバイス内および培地中に分泌されたVEGFを、ELISAを用いて定量化し、それを図43にまとめる。このデバイスを消化し、この溶液の一部を分析し、次いで、全含有量緑色のバーを計算することによって、これらの構築物内に含まれるVEGFを測定した。これらのデバイスの全タンパク質含量を、BCAキットを用いて測定した赤色のバー。デバイスあたりのVEGF量を、全タンパク質含量に対して正規化した紫色のバー。分泌因子の分析については、培地を実験の最後に収集し、分析し、培地1mlあたりの因子の量として表した青色のバー。いくつかの構築物については、上清を分析しなかったので、青色バーはデータセットから失われている。図43にまとめたELISAデータは、1より多くの細胞を加えると15e6対6e6、構築物あたりのVEGFが多くなる、2構築物内のコラーゲン含有量を増加させると3mg/mlから4mg/ml、構築物あたりのVEGFが多くなる、3デバイスを、6日を超えて培養すると、VEGF含有量が減少し、代わりに培地中により多くのVEGFが分泌されることを示す。また、図43の結果は、毎日、構築物の培地交換を行った時、VEGF含有量が減少したので、3日間培養した構築物の供給プロトコールが最良で、この期間の培地に変化を起こさないことを示した。6日を越えて培養した構築物については、毎日培地交換する供給プロトコールも、または全く培地交換しない供給プロトコールも、結果として得られるVEGF含有量は似ていたが、構築物を3日目に一回培地交換した時に、VEGF含有量が減少した。したがって、6日以内の任意の培養時間にわたり、全く培地を交換しないことによって、構築物内の最適なVEGF含有量が達成され得る。これは、培地交換に付随する物品のコストならびに製造時間および人件費を著しく低下させる。全培養期間中、同じ培地中で培養した構築物は、デバイス内に最大のVEGFを含んでいた。しかし、供給せずに構築物を6日間培養することは、高いVEGF含有量を維持するのに有益であるが、この期間中、培地はわずかに酸性になる。培養条件を改善するために、培地にHEPESを加える試験を行い、結果を図44に示した。図44に示したとおり、培地に20mMHEPESを添加すると、培養期間中、コラーゲンゲル構築物内の細胞の生存が改善された。図44の右のパネルを左のパネルと比較すると、培地に20mMHEPESを添加して培養した構築物は、より多くの生存細胞緑色の細胞およびより少ない死細胞赤を有していた。したがって、全てのその後の実験には、これらの構築物の培養のために、20mMHEPESをL-グルタミンを含むAdvancedDMEM培地に添加することを含めた。これらの最初の研究の間に、以下の観察を行った。1.播種する細胞が増加すると、ゲル収縮、VEGF分泌およびVEGF含有量の増加をもたらした。2.より高濃度のコラーゲンは、ゲル収縮、VEGF分泌およびこの構築物内のVEGF捕捉の増加をもたらした。3.培養時間が1日および3日の構築物は、より長い培養時間よりも、これらの構築物内に含まれるVEGFの捕捉を最大化した。これらの結果に基づいて、4mg/ml以上のコラーゲン濃度を有し、6日間未満培養した構築物を、次の研究に進めた。この次の段階中の焦点は、より厳密な分析および比較のために、N=3の数個のリードデバイスを準備することであった。細胞密度、培養時間および供給プロトコールに焦点を置いた。全ての構築物を、4mg/mlのより高濃度のコラーゲンで作製した。1日、3日、または6日の培養時間を考慮し、6日の培養では、3日目に1回供給したかまたは全く供給しなかった。VEGF含有量の定量化の結果を図45に示す。供給した6日間の培養物と、供給しなかった培養物を比較すると、明らかな傾向が現れた。供給せずに6日間培養したデバイスでは、これらの構築物内のVEGFレベルが増強した。しかし、最大のVEGFを有する構築物は、3日間培養した構築物であった。以前に見られたとおり、播種する細胞数の増加6対15対18は、VEGFレベルの増加と相関した。上記のデータの全てに基づいて、培養時間を4日以下に保ち、コラーゲン含有量を4mg/mlに固定することを決めた。ABM-SCの限られた供給源および費用に対する影響のために、細胞数を、構築物あたり6e6個のABM-SCに固定することも決めた。a生存していない構築物の加工に伴うパラメータの変動次の段階の目的は、生存構築物を加工して、室温での貯蔵に耐え、適用中に外科医が取り扱うことができる、耐久性があり、柔軟な、最終生成物である、生存していないデバイスを作製することであった。重要なことには、加工中に用いる技術は、これらの構築物の培養中にhABM-SCによって分泌される生理活性因子を保存しなければいけないか、または著しく減少させてはいけないことである。これらの構築物のグルタルアルデヒド架橋結合を、最も容認できる方法として選択し、必要とされる単純な架橋結合プロトコールのおかげでより耐久性のある生成物を、かつこの架橋剤を利用して、FDAに認可される前の他のコラーゲン生成物すなわち、ザイダームZydermおよびザイプラストZyplastを生成した。架橋結合後の脱水を方法として選択し、このデバイスを、室温で保存することができる、薄く、可撓性のある乾燥材料に縮小させた。この節の中で示した結果が、最終加工のために試験した変更を要約する。この実施例のここから、デバイスという用語は、グルタルアルデヒド架橋結合および脱水の加工を受け、最終生成物をもたらす、生存していない構築物を指す。構築物という用語は、加工前の、生存細胞を播種したコラーゲンゲル構築物を指す。最初の実験で、構築物消化および細胞生存率に対するグルタルアルデヒドglut濃度および架橋結合時間の影響を調べた。これらの最初の加工した生存していない反復物の結果を図46に示す。図46に示すとおり、glut濃度または架橋結合時間が増加すると、コラゲナーゼによる消化に対する構築物の耐性が増加し、細胞生存率が減少した。glut濃度を増加させるが、架橋結合時間を増加させないと、これらの構築物の架橋結合の改善により効果的な方法であることが判明した。架橋結合プロトコールの全ては、取り扱いに対して非常に耐久性のあるコラーゲン構築物をもたらした。最初の取り扱い時に、容易に崩壊し、バラバラに壊れ得る未加工の構築物とは異なり、glut固定デバイスはそれらの完全性を維持した。固定プロトコールを最適化し続ける一方で、脱水法を組み入れた。真空乾燥機を利用する機会のない場合およびGMP製造中にそれを利用できないと予想される場合に、バイオセーフティーキャビネット内における空気乾燥を利用した。試験した乾燥表面には、ホイル、薄く可撓性のあるポリエチレンプラスチックまた、プラスチックとも呼ばれる、およびこれらの構築物を培養するのに用いられる組織培養プレートを含めた。図47は、異なる表面を試験する最初の研究結果、ならびに架橋結合条件のさらなる変化およびそれらの条件の、デバイスVEGFレベルに対する効果を示す。プラスチック表面での脱水は、他の表面と比較して、脱水期間中に最高のVEGFを保存するのに役立った。不運にも、組織培養プレート中で直接脱水すると、脱水させたデバイスを取り除くのが困難になり、将来の製造工程に対して実用的でない表面にさせた。セロファンおよびホイルの表面上でのデバイスの脱水は、脱水期間の終わりに、これらのデバイスが容易にはがれる、固着しない表面を可能にした。したがって、これらのデバイスの全ての継続した開発には、ポリエチレンプラスチック表面上での構築物の脱水を含めた。図47の結果は、glutの増加が、VEGF含有量または回復の低下をもたらすという最初の観察を再確認する左から右に傾向が観察される。同様に、より長い固定時間は30分と1時間を比較すると、VEGF含有量または回復の減少をもたらした。0.001のglut濃度で30分間架橋結合し、プラスチック上で脱水した構築物は、架橋結合していない未加工の構築物よりわずか2ng下回るVEGFの減少をもたらした。収集した全てのデータを考慮すると、グリシン洗浄を伴うglutおよび脱水のこの加工法が、架橋結合し、脱水しても、十分なVEGFを保存するデバイスを生成するのに最も適すると決定した。結果として得られたデバイスは、未加工の構築物と比較して、柔軟で、取り扱いに対して顕著により耐久性があり、紙のように非常に薄い材料であった。加工した構築物も、脱水状態でより安定であり、これらのデバイスの室温での長期保存を可能にした。glut架橋結合および脱水を含む完全な加工後の細胞生存率を評価するために、6e6細胞、3mlゲル容積、4mg/mlのコラーゲン、3日間培養、0.001glutで30分間加工し、脱水したデバイスを、はさみを用いて1mm3未満の小片に細かく切り、AFG10FBSを含むhABM-SC増殖培地中で6日間平板培養した。この培養物を毎日監視し、加工デバイスからのhABM-SCの全てのプレーティングおよび/または増殖を観察した。この培養物の明視野画像および蛍光画像を図48に示す。デブリおよび細胞レムナントが培養物中に存在していたが、培養期間にわたって、デバイス由来の生存細胞の増殖を示す変化は観察されなかった。培養6日後、生きている生存細胞のみが活発に取り込み、それらの細胞を緑色に染色するカルセインAM色素で、デブリを染色した。図48の明視野画像は、培養6日後に存在するデバイス/細胞デブリクラスターを強調する。このクラスターは、カルセイン色素で陽性に染まらないので、クラスター内には生存細胞が存在しないことが判明した。全ての生存細胞を示す陽性の緑色染色は、培養物全体および全てのデブリ中で観察されなかった。これらの結果は、生存している構築物を30分間、0.001のグルタルアルデヒドで加工し、脱水すると、このデバイスを非生存状態にさせる、すなわち生存細胞がない状態にさせると思われることを示す。脱水した構築物の安定性を評価するために、数日間、室温で維持したいくつかのデバイスのVEGF含有量を分析した。この研究には、エタノールを用いて固定したデバイス、異なる緩衝液で洗浄した事前加工した構築物および3ml超のコラーゲンを用いて生成したデバイスも含まれた。コラーゲン含有量を増加させる2つの方法を試験した;6mg/mlまでコラーゲン濃度を増加させること、または3mlのコラーゲン溶液から6mlのコラーゲン溶液に構築物の容積を増加させること。この実験でコラーゲン濃度を増加させても、デバイス内に含まれるVEGFは増加しなかったが、ゲル容積を倍加させると、VEGF量が倍加した。このコラーゲンゲル容積の倍加は、デバイス内に含まれるVEGF量を最大にする、最も顕著な改善をもたらした。ゲル容積の増加は、6e6から15e6へ播種する細胞数を増加させることに匹敵する影響をVEGF含有量に与えた。これは、これらのデバイスを生成するのに用いたブタコラーゲン量の増加における物品の費用が、各デバイスに必要とされるhABM-SC数の増加における物品の費用よりも著しく安価であるので、注目すべき発見であった。コラーゲンゲル構築物を6ml容積にすることで、より高レベルのVEGFを達成することを当てにして実験を続けた。図49の中の、52ngの最高レベルのVEGFを有する反復物は、6ml容積での4mg/mlのコラーゲンに6e6細胞を有し、3日間培養し、0.0001glutで30分間架橋結合して、脱水したデバイスであった。この反復物は、VEGFレベルを最高にしたが、このデバイスの耐久性は容認できるものではなかった。0.0001のグルタルアルデヒドでのこの非常に低レベルの架橋結合は、その完全性を維持しながら、適度な取り扱いに耐えることができなかった。取り扱い後、このデバイス自体は、容易に崩壊し、変形した。したがって、0.001以上のglut架橋結合濃度が、患者への適用中に必要な取り扱いに耐えられるほど十分に耐久性があるデバイスを生成するのに必要であると結論づけた。しかし、これは、デバイスの生理活性を損なうことになる。4mg/mlのコラーゲンを用いて2日間培養した構築物は、3日間の培養に匹敵するVEGFレベルをもたらした。図50の反復物の中の最も重要な結果は、架橋結合濃度が0.001glutで、6mg/mlまでコラーゲン濃度を増加させると、他の反復物と比較してVEGFレベルが最大化したということであった。8mg/mlまでコラーゲンを増加させても、さらにVEGFは増加しなかった。6mg/mlのコラーゲン濃度で生成した最初の構築物の図48の結果は、コラーゲンゲル溶液製剤が6mg/mlのコラーゲンに最適化されなかったので、その対応する4mg/mlのコラーゲンを用いたデバイスと比較して、VEGFの増加をもたらさなかった。図50は、6mg/mlのコラーゲンのゲル製剤を、培養期間中にこのゲルを固化し、収縮する能力を最適化するように変更した後に作製したデバイスの結果であった。したがって、正しいゲル製剤の6mg/mlのコラーゲン構築物が、4mg/mlおよび8mg/mlの反復物と比較して、デバイス内のVEGF捕捉を増強した。0.05のglut濃度は、このデバイスの取り扱いに際し、柔軟性が減少し、堅さが増加したために除外した。今後のデバイスのために選択したglut濃度には、0.001、0.005、および0.01を含めた。4mg/mlの構築物と比較するために、別のセットのデバイスを調製し、その結果を図51に示した。このデータは、さらに開発され、この時点までに間に合った競争相手である全ての可能性のある反復物を示す。10を下回るデバイス反復物まで変更を最終的に絞るために、複数回の反復を実行した。これらの結果に含まれる1つの変更は、6e6から15e6個の細胞の前回の急激な上昇のかわりにわずかに6e6を超える細胞数の増加の効果を観察することであった。考察コラーゲンベースの生理活性デバイスは、hABM-SCおよび臨床グレードのブタコラーゲンを用いてうまく作ることができる。細胞密度、コラーゲン濃度、コラーゲンゲル容積、培養時間、グルタルアルデヒド架橋結合の濃度および時間、グリシン反応停止時間、洗浄緩衝液、ならびに脱水表面を変えた複数のデバイスを作製し、試験した。これらの研究は、細胞密度の増加が、デバイス内に含まれるVEGF量を著しく増加させることができることを示した。しかし、より多くの細胞を添加すると、著しく費用が跳ね上がるので、デバイスには、6e6個以下の細胞/デバイスを含め、VEGF含有量を高める他の方法を追求することに決めた。これらの研究における最も重要な発見は、濃度または容積のいずれかによる構築物のコラーゲン含有量の上昇が、生理活性を増大させることができることであった。構築物内のコラーゲンの増加は、おそらく、より多くの因子を分泌させる細胞の活性およびこの構築物内のこれらの因子をより良好に保持するゲルの能力の両方を増大するのに寄与した。広範なコラーゲンの濃度および容積を試験した後に、留意すべきことは、6mg/mlより高めても、VEGF含有量の実質的な増加をもたらさなかったことである。結果として、6mg/mlのコラーゲンを、さらなるデバイス開発に用いる最適濃度として選択した。6mlを超えてコラーゲンゲル容積を増加させると、デバイスの強度を低下させるように見えるが、これらの反復物を、より高いVEGF含有量などの他の利点を提供するように、さらなる試験および開発について考慮した。培養した細胞播種コラーゲン構築物をグルタルアルデヒド架橋結合および脱水によって加工することにより、検出可能な生存細胞または培養によりさらに増殖できる細胞を含まないデバイスが得られた。グルタルアルデヒド濃度の増加は、より耐久性のある構築物をもたらしたが、0.05を超える濃度は、結果として得られるデバイスの可撓性を減少させた。0.005、0.01、および0.05のglut濃度をさらに考慮した。より長時間の加工は生理活性に負の影響を及ぼすので、全体的な加工時間をより短く保つために、今後のデバイス反復物については、30分の架橋結合時間を選択した。ポリエチレンプラスチックの脱水表面は、スズ箔および培養皿を上回って優れていることが判明した。ポリエチレンは滅菌することができ、固着しない表面を可能にし、脱水後に、これらのデバイスは容易に取り外し可能であった。できるだけ高いVEGF含有量を保つ目的で、最終加工プロトコールには、グルタルアルデヒド架橋結合前の培養構築物の洗浄を含めず、唯一、架橋結合後にDPBSによる洗浄を含めた。実施例21コラーゲンベースの生理活性デバイス:手の腱の修復に対するデバイスの評価実施例20の略語をこの実施例でも用いる。要約手の腱の修復には、このデバイスは、1それ自体またはレシピエントの組織への縫合に耐えられるほど十分に強いこと、2関連する生理活性因子を含むこと、3外科医の操作に耐えられること、かつ4薄くて、可撓性があることを必要とした。スケールアップしたGMP製造および製品流通に対する強度、生理活性、外観、実施可能性の予備基準を満たすコラーゲンベースの生理活性デバイスを、本明細書に記載のhABM-SCを用いてうまく、再現性よく生成した。必須の特徴を有すると判定した6個のデバイスのさらなる試験が、手の外科医handsurgeonによって続けられた。これらのデバイスは、寸法、強度および生理活性の点で異なっているが、製造および治療への適用に対するコアとなる必要条件を維持している。デバイスに示される要素は、1GMPグレードの材料の使用、2製造のためにスケールアップすることができる生成法、および3エンドユーザーである手の外科医を満足させる物理的および機能的な特性である。6個の最終デバイスは、薄くて、可撓性があった。これらは、再水分補給により、容易に操作でき、繰り返し取り扱えた。生理活性の代替マーカーとして用いられるVEGFを、全てのデバイスにおいてナノグラムレベルで測定した。同様に、全てのデバイスは、荷重破壊に達する前に、数グラムの重さを保持する縫合保持試験sutureretentiontestingに耐えることができる。目的この研究の目的は、1手の腱の修復に、コラーゲンベースの生理活性デバイスを作製するためのGMP材料および方法を使用すること、ならびに2これらのデバイスの物理的および機能的な特性を評価することであった。研究計画この研究において、要素を様々な組み合わせで変えて、製造基準および臨床基準の両方を満たす一連のデバイスを作製した。製造のための必要条件には、以下のものが含まれた;1GMPグレードの材料から作られるデバイス、2スケールアップに適用できるプロセス、および3室温で保存することができ、長期間安定であり得るデバイス。好ましいデバイスは、以下の特色を有する;1非常に薄いこと、2可撓性があること、3操作が容易であること、4縫合を保持するのに十分強いこと、および5所望のサイズおよび形状に切断するのに十分大きいこと。デバイスの性質、大規模製造の実施可能性に基づいて、デバイスのサブセットをさらなる試験へと進めた。この報告は、さらに検討するために選択したサブセットの作製法および分析をまとめる。材料および方法細胞細胞型:hABMSCロット番号P15-T2S1F1-5、バイアルあたり約50e6個の細胞培養容器;なし、凍結バイアルから解凍し、再懸濁した直後に用いられる細胞播種密度:各コラーゲンゲル構築物に播種した6e6個の生存細胞材料および機器デバイス材料および機器L-グルタミンを含むAdvancedDMEMADG:AdvancedDMEM、4mMグルタミン、20mMHEPESコラーゲン:ブタの皮膚由来の10mg/mlのTheraCol1コラーゲンSewonCellontech、韓国4mg/mlのコラーゲンゲルに対するコラーゲン緩衝液:7.5炭酸水素ナトリウム16ml、1MHEPES4ml、1N水酸化ナトリウム2ml、滅菌水78ml6mg/mlのコラーゲンゲルに対するコラーゲン緩衝液:7.5炭酸水素ナトリウム20ml、1MHEPES6.66ml、1N水酸化ナトリウム5.3ml、滅菌水68mlL-グルタミンを含む10×DMEM:10×DMEM、10mML-グルタミン0.005または0.01グルタルアルデヒドのワーキング溶液:8グルタルアルデヒドストック溶液、1×DPBS5Mグリシン溶液:グリシン粉末Sigma社、1×DPBS1×DPBS懸濁培養用6ウェルプレート直径35mmのウェル、GrenierBioOne社平型薬さじVMueller滅菌パウチ12×15ポリエチレンプラスチックトリパンブルーGibco社カタログ番号15250-061バイオセーフティーキャビネットBSCインキュベーター:Forma3150遠心分離機:BeckmanCoulterAllegra6R血球計数器:Brightline倒立位相差顕微鏡:NikonModelTS100デバイス試験の材料および機器カルセインAMおよびEthD-1染色生存細胞/死細胞の生存率/細胞毒性キット、MolecularProbes社コラゲナーゼ/ヒアルロニダーゼStemCellTechnologiesInc平衡塩類溶液BSSVEGFELISAVEGFELISAQuantikineキット、RnDSystems社天秤機械的試験器具デバイスを固定するための小さなクランプと、棒を保持するクランプを有する2つの研究室用リングスタンド3-0Ethibond縫合糸Ethicon重りのバスケットペーパークリップおよびステップル付きのガーゼ重り5g、10g、20gはさみ37°Cの水浴ボルテックス実験手順デバイスの生成本発明の実施形態において、以下の4つの主要なステップが、コラーゲンベースの生理活性デバイスの生成に含まれる:1細胞の調製、2コラーゲンゲルの形成、3コラーゲン細胞構築物の培養、および4コラーゲン構築物の加工。簡単に説明すると、コラーゲンゲル溶液中でhABM-SCを封入することによって構築物を形成する。ウェルの直径が35mmの6ウェルプレートを、細胞含有ゲル溶液で満たし、インキュベートする。このゲル溶液が固化した時点で、これをウェルからはがし、培地を用いて懸濁培養する。このコラーゲンゲル構築物を、約3日間、低O2条件下で培養し、その間、これらの細胞はコラーゲンゲルを積極的に収縮させる。培養期間の終わりに、これらの構築物を、グルタルアルデヒド架橋結合、グルタルアルデヒド反応を止めるためのグリシンによる反応停止、および脱水によって加工し、これらの細胞によって分泌される分子を維持しながらも、これらの細胞を不活性にさせる。各ステップにおいて、変更する機会はある。その際、プロセスが変更されたか、または複数の反復物が処理され、詳細を以下に提供する。細胞の調製ほとんどのデバイスは、液体窒素下で保存したバイアルから取ったhABM-SCを用いて作製した。これらの構築物のために、以下のステップを行って、これらの細胞を調製した:1.50e6個のhABMSC/バイアルの凍結バイアルを液体窒素タンクから取り出し、6~10分間、37°Cの水浴中で解凍した。2.細胞を、50mlのコニカルチューブ中のADG培地で再懸濁した。3.コニカルチューブ内の細胞を5分間、1,240rpmで遠心分離し、細胞をペレットにした。4.上清を除去し、細胞数を数えるために、細胞をADG培地に再懸濁した。5.細胞懸濁液試料100μlを、ADG培地で1:10希釈した。トリパンブルーで1:1希釈したこの試料を用いて、細胞の数および生存率を、血球計数器で評価した。トリパンブルーを排除した生存細胞を数え、色素を保持して青色に染った死細胞を数えた。6.最終細胞濃度を用いて、単一の50mlコニカルチューブに、合計36e6個または72e6個のいずれかの生存細胞を一定分量入れた。6個のゲル構築物のバッチを作製する場合には、36e6個の細胞を用い、12個のゲルのバッチを作製する場合には72e6個の細胞を用いた。7.細胞懸濁液を含むコニカルチューブを、5分間、1,240rpmで再び遠心分離し、細胞をペレットにした。8.全ての上清の液体を細胞ペレットから除去した。これらのペレットを、さらに再懸濁しなかった。培養細胞で作製した1個のデバイスについては、バイアルを解凍し、hABM-SCを2.2e4個の細胞/cm2でTフラスコに入れ、一晩インキュベートした。次の日、細胞を収集し、洗浄して、ADG培地に再懸濁した。次いで、これらの収集した細胞を、上記のステップ5から続けて、同じ方法で処理した。コラーゲンゲル形成コラーゲンゲル構築物を、これらの細胞ペレットと共に、ゲル成分を混合することによって作製した。これらの成分は、常に、以下の順番で混合した:L-glutを含む10×DMEM、コラーゲン緩衝液、TheraColストックコラーゲン、次いで、細胞ペレット。表5に、この研究で考察する異なる構築物を生成するのに用いた成分および割合をまとめる。2つの異なるコラーゲン緩衝液を、4mg/mlゲルまたは6mg/mlのゲルに用いた。全てのゲル溶液成分を、細胞と組み合わせて、ゲル形成を開始するまで4°Cで保った。1.L-グルタミンを含む10×DMEMを、50mlコニカルチューブ6個のゲルを作製する場合または250ml瓶12個のゲルを作製する場合のいずれかに加えた。2.適切な4mg/mlまたは6mg/mlの最終コラーゲン濃度ゲル用のコラーゲン緩衝液を、10×DMEMに加え、回転混合した。3.10mg/mlのTheraColストック溶液を、反対側の手で回転させながら、瓶の中にコラーゲンをピペッティングによって加え、溶液全体にコラーゲンを均等に分散させた。4.これらの成分を、同じピペットを用いて、溶液を素早くピペッティング操作で上下させることによって、迅速に均質溶液になるまで混合したコラーゲンは、ピペットの内側をコーティングするが、混合中にピペッティング操作で上下させることにより流出し続けるだろう。ピペッティング中、この溶液を含む瓶も回転させると、混合を助ける。溶液への泡の導入を防ぐために、全ての溶液を完全に分注しないで、この溶液の少なくとも2mlを、常にピペットチップに保たせた。5.この溶液を、粘性の均一な一貫性を兼ね備えて、全体が均一なピンク色の外観を呈するまで完全に混合した。6.このゲル溶液10mlを細胞ペレットにピペットで入れ、素早くピペッティング操作で上下させて、これらの細胞をゲル溶液に完全に再懸濁させた。再懸濁した細胞で、この溶液が均一に濁り、細胞凝集体が見えなくなるまで、ピペッティング操作を続けた。7.次いで、この細胞懸濁液を、残りのコラーゲンゲル溶液に均一に、完全に分注し、ピペッティング操作で上下させることを繰り返して、このゲル溶液全体にこれらの細胞を均一に分布させた。泡の導入を避けるために、ピペットチップの中には、少なくとも2mlを、いつも保持した。8.細胞コラーゲン溶液4~9mlを、懸濁培養6ウェルプレートの各ウェルにピペットで入れた。ゲル溶液を含む培養プレートを、すぐに、5CO2および18O2を含む37°Cの加湿インキュベーターに入れた。これらのプレートを1時間そのままにしておき、コラーゲンのゲル化を完了させた。4mg/mlまたは6mg/mlのいずれかのゲルのために、2つの別々のコラーゲンゲル緩衝液調製物formulationがある。コラーゲンゲル構築物の最終的なパラメータ6e6個の細胞/構築物コラーゲン濃度:4mg/mlまたは6mg/ml様々なゲル容積:4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、または9ml1mMのL-グルタミン1×DMEM0.45の炭酸水素ナトリウム15.9mMの水酸化ナトリウム20MのHEPESコラーゲンおよび細胞構築物の培養1.1時間インキュベーションした後、これらのプレートをインキュベーターから取り出し、BSCに入れた。2.完全なゲル化後のコラーゲンゲル構築物を、滅菌した平型flatend薬さじを用いて、これらのプレートのウェルから持ち上げた。この薬さじをゲルの端とウェルの壁の間に挿入し、周囲を切り取り、ウェルの壁からこのゲルを完全に引き離した。3.この薬さじを用いて、これらのゲルを、周囲に沿って中心に向かって端を穏やかに押すことによって、ウェルの底から持ち上げた。4.4ml、5ml、6ml、および7mlのゲル容積の構築物については、ADG培地6mlを、コラーゲンゲル構築物を含む各ウェルに加えた。8mlおよび9mlのゲル容積の構築物については、ADG培地4mlを加えた。5.各構築物を試験し、各構築物が培地中を自由に浮いている状態を確実にするか、あるいは、薬さじを用いて、構築物を完全にさらに持ち上げた。6.次いで、これらの培養プレートを、培養のために、37°Cの、低酸素4O2、5CO2の加湿インキュベーター内に入れた。7.ほとんどの構築物を3日間64~72時間培養した。1つの反復物を2日間40~48時間培養した。コラーゲン構築物の加工コラーゲンゲル中の細胞の培養後、これらの構築物を加工して、生存していない最終デバイスを得た。この加工には、グルタルアルデヒド架橋結合、グルタルアルデヒド反応停止および脱水が含まれる。過剰なアミン基の条件下で、グルタルアルデヒド架橋結合反応を終了する。高濃度のグリシン溶液を加えることにより、未反応のグルタルアルデヒドの遊離端がグリシンと反応することが可能になる。この反応停止ステップは、架橋剤としてグルタルアルデヒドを用いる潜在毒性を防ぎ、制限することができる。1.2~3日間培養した構築物を、0.005、0.01、または0.05のグルタルアルデヒドの適切なワーキング溶液6mlの添加により架橋結合した。このゲル構築物を、グルタルアルデヒド架橋結合および洗浄ステップの間中、元の培養プレート中で保持した。2.プレート振盪機上でわずかに動かしながら、グルタルアルデヒドを用いる架橋結合を、室温で30分間行った。3.30分後、グルタルアルデヒド溶液をこれらのウェルから取り除き、1×DPBS6mlを加えて、残留グルタルアルデヒドの洗浄除去を始めた。4.1×DPBS6mlの少なくとも全部で4回の洗浄を10分間行い、各ウェルから取り除いた。この洗浄の少なくとも2回については、これらのプレートをプレート振盪機上に置き、穏やかに撹拌した。5.各ウェルに0.5Mのグリシン溶液6mlを添加することにより、グルタルアルデヒド架橋結合反応を停止した。室温で2時間、3時間または4時間のグリシン反応停止中、プレートをプレート振盪機上に置き、穏やかに撹拌した。これらのデバイス上で培養した細胞の生存率に対する、2時間および4時間の反応停止時間の効果を試験した結果を図52に示す。6.グリシン反応停止の終わりに、溶液を除去し、これらの構築物を、ステップ4で明記したとおり、少なくとも全部で4回の洗浄にDPBSを用いて再び、完全に、洗浄した。7.最後の洗浄後、架橋結合した構築物の周りのウェルから可能な限り多くの液体を取り除き、BSC内で構築物の脱水を始めた。8.12×15ポリエチレン滅菌パウチをBSC内に入れ、ポリエチレンプラスチック側を仰向けにした9.平型薬さじを用いて、それぞれの単一架橋結合構築物を、ウェルプレートからプラスチック面に移した。10.これらの構築物に対して、互いに少なくとも10cmの間隔をあけた。フードの明かりを消し、送風機を付けたまま、適切に機能する高さまでフードのドアを開けた状態で、構築物をBSC内に一晩放置した。11.これらの構築物を、BSC内で一晩脱水した後、紙のように非常に薄いディスクにまで脱水することにより、デバイス構造が作られ、これをさらなる試験に用いた。デバイスの命名各デバイスに4~5ケタの数を与えた。最初のケタは、ゲル内のコラーゲン濃度、4mg/mlまたは6mg/mlのいずれかに対応し、その結果、最初のケタは4または6のいずれかである。第2のケタは、コラーゲンゲル容積が4mlに対しては4、5mlに対しては5などを表す。最後の2~3つのケタは、コラーゲン構築物を架橋結合するのに用いたグルタルアルデヒド濃度のパーセンテージを特定する。例えば、0.005のグルタルアルデヒド濃度を用いた場合、デバイス名の最後の2~3つのケタは、005になる。最後の例として、6601と表示されたデバイスは、6mg/mlのコラーゲン濃度、容積が6mlで、0.01のグルタルアルデヒドで架橋結合して作製した構築物を意味する。デバイスの全ての最終反復物には、6ウェル懸濁培養プレート中のTheraColコラーゲンハイドロゲルの中で、3日間培養した6e6個のhABMSCが含まれる最初の直径35mm。デバイス試験この実施例のコラーゲンベースの生理活性デバイスにて、デバイス試験を行った。以下のデバイス試験を行った:物理的パラメータ、コラゲナーゼ消化およびVEGFELISAによる生理活性および縫合保持試験による機械的性質。結果デバイス生成コラーゲン濃度、コラーゲンゲル容積、およびグルタルアルデヒド架橋剤濃度を変えて、異なる性質を有するデバイスを生成した。これらの変化の多くを、表5および表6にまとめる。このデバイスの予備評価は、製造の実施可能性ならびに視覚検査および触覚検査に基づいていた。以下の観察を行い、次世代のデバイスの戦略および方法を変えた;1.4mg/mlのコラーゲンゲル構築物は、6mg/mlのコラーゲンゲル構築物より小さかった。2.6ウェルプレートに許容される最大ゲル容積は、培養のための培地4mlを含む9mlであった。3.ゲル容積が3ml容積を下回ると、完全にゲル化せず、固体構築物も形成しなかった。4.グルタルアルデヒド架橋結合は、構築物の取り扱いにおける耐久性の増加を可能にした。5.任意の濃度での架橋結合は、再水分補給のときに、架橋結合していないデバイスよりもはるかに耐久性のあるデバイスを生成した。脱水前のグルタルアルデヒド架橋結合構築物の例を図52に示す。このデバイス反復物の強度の実際の測定を以下で考察する。デバイス生成の最終加工ステップは脱水ステップである。架橋結合し、洗浄した構築物を、BSC内で層流空気流の下、ポリエチレン表面上で脱水することによって、これを行った。図53は、脱水中のいくつかのデバイス反復物を示す6種類の異なる反復物のn=6のデバイス。乾燥工程中にいくつかの観察を行った:1.ゲル容積がより大きい構築物は、ゲル容積がより小さい構築物よりも厚く、かつ直径が大きい。2.より大きく、より厚い構築物は、完全脱水までに12時間を超える時間を要する。注釈:本明細書で、完全脱水とは、BSC内で周囲層流空気流の条件下、構築物から全ての液体を蒸発させることを指す。しかし、これは、これらの構築物が、周囲の空気の湿度を下回る特定の定量化された湿度レベルまで脱水されたことを特定しない。3.4mg/mlのコラーゲン構築物は、12時間未満で完全に脱水することができた。4.これらの構築物の脱水は、任意の目に見える液滴を完全に蒸発させ、その後、ゲルの高さを減少させた。5.完全脱水の際、脱水中に、表面の外観は、澄んだ、つやのある状態から白色の、不透明な状態になった。0.5mm未満の厚さを有する完全脱水した最終デバイス言及したとおり、未反応の残基が周囲の細胞に対して毒性があると証明できるので、任意の残りのグルタルアルデヒドを反応停止することが重要である。固定したデバイスの潜在毒性を評価する1つの方法は、デバイスの上部で細胞を培養する試みである。hABM-SCまたはヒト軟骨細胞のいずれかをデバイスの上部に加え、それらの生存率を培養時間の経過と共に観察した。図54は、デバイス生成の加工ステップ中、2時間または4時間いずれかのグリシンによる反応停止時間を有するデバイスの表面上での培養4日後の軟骨細胞およびhABM-SCの両方の細胞毒性の結果を示す。これらの結果は、より長い4時間のグリシン洗浄ステップが、グルタルアルデヒド架橋結合デバイスの毒性を低下させたことを示す。2時間のグリシン洗浄時間を有するデバイスは、培養後に、このデバイスの表面上における死細胞赤色染色の増加を示した。4時間のグリシン洗浄時間を有するデバイスは、この表面の全域に、高密度の接着細胞および生存細胞緑色の染色を有していた。脱水した最終デバイスの物理的性質多くのデバイスが、効能、外科医またはスケールアップの実施可能性に必要な基準に満たなかったので、最終試験に進まなかった。表6に記載の6個のデバイスは、受け入れられ、追加分析をする価値があると判断した。コラーゲンベースの生理活性デバイスの6個の最終反復物のうちの5個の写真を図55に示す。これらの全反復物の構築物内の出発コラーゲン濃度は、6mg/mlであった。6mg/mlのコラーゲン濃度の構築物のコラーゲンゲル容積およびグルタルアルデヒド濃度などのパラメータを変化させると、このデバイス構造の物理的性質を著しく変化させることができた。コラーゲン構築物を生成するのに用いる初期容積を増加させると、デバイス構造の直径および重量の両方を増加させる。これらの違いの視覚的な図、ならびに定量的な証拠を、それぞれ図55および表6に提供する。この節で考察するコラーゲンベースの生理活性デバイスの全6個のバージョンは、脱水状態で同様に薄く、可撓性があった。これらのデバイスの再水分補給により、耐久性の違いが明らかになり、特に、異なるグルタルアルデヒド架橋結合濃度によって異なった。0.05で架橋結合したデバイスは、実質的により強固であったが、なお、可撓性があった。0.005のグルタルアルデヒドで架橋結合した66005デバイスは、操作後にバラバラになることなく、非常に可撓性があり、柔軟であった。概して、これらの6個のデバイスは、柔軟性に変動があったが、扱いやすさおよび取り扱いは容認できるものであった。7mlのコラーゲンゲル容積から生成したデバイスは、5mlおよび6mlのバージョンと比較して、再水分補給後に、顕著により厚かった。デバイスの機能的性質これらのデバイスの生理活性および強度を評価し、比較した。血管内皮増殖因子であるVEGFは、組織の治癒および再生に治療上有用であり得る関連タンパク質であり、培養物中のhABM-SCによって高量発現する。コラーゲンゲルに含まれるVEGFの量を、これらのデバイスの生理活性の代替マーカーとして用いた。このデイバス構造の強度は、有望な製品としてのこれらのデバイスの処理の実施可能性、耐久性、および使用において重要である。組織の治癒または再生に役立つ製品としてのこのデバイスの適用は、組織へこのデバイスを縫合することを含み、したがって、このデバイス反復物を比較するために、縫合保持試験によって強度を評価した。これらのデバイスに含まれるVEGF量を、コラゲナーゼ消化したこれらのコラゲナーゼ消化物にてELISA測定を行うことによって測定した。縫合保持試験を、標準的な実験装置を用いて行った。このデバイスの上端をクランプで固定し、さし縫い縫合により下端を貫いて縫い合わせた。縫合糸を、重りのバスケットに結合させた。これらのデバイスの強度を、このデバイスが破損して、縫合糸が抜けるまで重りを増加させることによって評価した。20gの重りを保持している縫合保持試験中の強度試験装置内に含まれる6601デバイスの写真を図56に示す。図57および図58は、デバイス内に含まれるVEGF量ngおよび縫合保持試験中の、これらのデバイスが破損する前に耐えることができた最大重量負荷gの結果を示す。図51は、15個の異なるデバイス反復物についてのこれらの結果を示し、図58は、6個の最終反復物だけについての同じデータを示す。観察結果1.VEGFレベルは、迅速に解凍し、コラーゲンに加えた凍結保存hABM-SCと比較して、培養細胞から作製したデバイスにおいてより低かった。2.VEGFレベルは、4mg/mlコラーゲンと比較して、6mg/mlコラーゲンで作製した全てのデバイスにおいてより高かった。3.6mg/mlコラーゲン濃度を有し、0.005または0.01のいずれかのグルタルアルデヒドで架橋結合したデバイスは、平均20ng以上のVEGF量を含む。4.4mg/mlコラーゲン濃度のデバイスのうちの最強のものである46005および4601は、20ng未満のVEGFを含む。5.より多くの細胞を添加しないか、またはコラーゲン濃度を増加させない状態のゲル容積の増加は、より高いVEGF含有量と相関した。6.強度グルタルアルデヒド濃度と生理活性の間には反比例関係があるように思われる;より高い強度またはグルタルアルデヒド濃度は、より低い生理活性と相関する。7.0.05のグルタルアルデヒドで架橋結合した6mg/mlコラーゲンは、0.01のグルタルアルデヒドで架橋結合したデバイスよりもより重い重量に耐えることができる。8.コラーゲンゲル容積を5mlを超えて増加させると、強度が減少する傾向がみられる。最大強度と最高の生理活性を最適化することの間に、妥協点trade-offが観察された。非常に高いVEGFレベルを有するほとんどのデバイスは、強度に乏しく、より高い強度を有するデバイスは、VEGFレベルが低かった10ngを下回った。図58は、図57のデータと同じであるが、さらに、将来的な製品候補として見なされる6個のデバイスのうちの5個のみについてのデータを示す。6701デバイスのデータは、この反復物から作製したデバイスがあまりにも少なく、代わりに他の研究に用いたため、完全ではなかった。これらのデバイス反復物は、製造に適し、以下の最初の目標基準に達することに関して容認できるデバイスを示す;1非常に薄いこと、2可撓性があること、3耐久性があること、4縫合を保持するのに十分強いこと、および5所望のサイズおよび形状に切断するのに十分大きいこと。これらのデバイス反復物のデータおよび画像を、図55、表7、および図58に示す。これらのデバイスの注目すべき違いおよび特色は、以下のとおりである:-デバイス反復物66005は、0.005のより低いグルタルアルデヒド濃度を有し、他の最終反復物よりも、インビボでより迅速にこのデバイスが分解することを可能にする。-デバイス6501、6601および6701は、強度と生理活性の間に良好なバランスを維持し、共に中程度のレベルを有する。-デバイス6501、6601および6701は、再水分補給後のデバイスの直径および潜在的な厚さが異なる。6501は、最小の直径を有し、最も薄いが、6701は、最大の直径を有し、より厚い。デバイス6505および6705は、0.05のより高いグルタルアルデヒド架橋結合を有するので、約10ngのVEGFを有する、はるかに強い生理活性のあるデバイスをもたらす。実施例22手の腱を修復する、コラーゲンベースの生理活性デバイスの試験序論この実施例の第1の目的は、手の屈筋腱修復のヒトの死体モデルにおいて、本発明のコラーゲンベースの生理活性デバイスの柔軟性、使いやすさおよび取り扱いを含む機械的性質を試験することであった。第2の目的は、屈筋腱手術に利点を提供することができるデバイスの、関連する生化学的および物理的な性質を広く考察することであった。最後に、本研究は、PLGAベースのデバイスをCMC関節のスペーサーとして使用する可能性を評価した。これも、同じ死体の肢を用いて模擬試験した。方法1体の新しい凍結死体を利用して、屈筋腱裂傷を模擬実験し、その後、本発明のデバイスを用いて修復を高めた。標準的な方法で、伸張暴露を行い、屈筋腱鞘、屈筋腱および滑車システムを露出させた。標準的な番号15の刃を用いて、複数の屈筋腱を、ベルダンゾーンVerdanZone1~3ゾーン1は、FDS刺入insertionに対して遠位にあり、ゾーン2は、中手指節関節MCPのレベルまでのFDS刺入の近位にあり、ゾーン3は、手根横靭帯の遠位程度までのMCP関節の近位にあるを含む様々な解剖学的ゾーンで傷をつけた。これらの屈筋腱を、改良したバネル縫合Bunnellstitchで、4-0Fiberwireからなる標準的な技術を用いて修復した。次いで、これらのデバイスを修復する周りに置いた。これらを、6-0Proleneを用いて定位置で縫合するか、または腱の周りでやさしく包み、完全に周囲を覆った。次いで、これらの腱の可動化を行い、このデバイスが、傷をつけた腱の部位から押しのけられないことを確実にした。使いやすさ、柔軟性、縫合を受け入れる能力、および腱の可動化の際に定位置に留まる能力に応じて、いくつかのデバイスを利用して、分析した。結果3個の別々のコラーゲンベースの生理活性デバイス46000、46001、および46000-001;図59の試験に基づいて、第1のデバイス架橋結合した46001は、評価した後者のデバイス架橋結合しなかった46000、および風乾し、架橋結合し、風乾した46000-001よりも取り扱いが容易であった。全3個のデバイスは、一般的に、腱の上epi-tendinousの修復に用いられる縫合Prolene、6-0口径を受け入れることができた。このデバイスを、標準的な顕微手術法を用いて、容易に、腱自体にうまく縫った図60。より困難であったが、このデバイス自体に縫うことができた。滅菌水にこれらのデバイスを浸した後、全てのデバイスは柔軟性があり、周囲のパターンで腱に適合することができた。しかし、架橋結合していないデバイス46000が、さらなる操作でネバネバになり、固体でなくなったことは、少なくとも架橋結合していないデバイスについては、適用前に、事前に湿らすことは望ましくない可能性を示唆する。術後数日以内に利用される場合が多い初期のリハビリテーションプロトコールを模擬実験するとすなわち、初期の活動的な動きをセットし、そのままの状態でいると、腱の活発な可動化によって含水したhydratedデバイスもよじれた。結果として、初期の動きによるよじれおよび集積bunchingを最小限にする選択肢として、これらのデバイスを乾燥形態で適用するという考え、および/またはこれらのデバイスを条片に切断するという考えが考察された図61。次いで、これらのデバイスを、乾燥形態で試験した。事前に湿らせたデバイスとは異なり、これらのデバイスは、集積しないで、基礎をなす腱とうまく統合するように思われた。実施形態において、腱の活発な可動化がない手術後の早期に、因子を即時放出する製品が、より遅い持続放出型の製品よりも効果的であり得る。このデバイスは、修復領域から移動すべきであるが、局所因子は、局部組織で作用することができない。一実施形態において、このデバイスを腱の背面に備え付けると、手掌面上で基材が動くことを防ぐ可能性がある。親指の関節炎手術のための現在の外科治療の選択肢CMC関節形成は、親指の関節炎手術中に、大菱形骨の一部または全体を切除する手順からなる。この普通型の関節炎を治療するための様々な技術および変更について記載されている。本発明のデバイス図62を、所定の死体解剖後に、親指のCMC関節に取り付けた。スペーサーは、この関節に対して適切なサイズであり、この空間にうまく適合するように思われた図63。実施例23手の腱を修復する、コラーゲンベースの生理活性デバイスの試験序論本研究の第1の目的は、手の屈筋腱修復のヒトの死体モデルにおいて、本発明に係るコラーゲンベースの生理活性デバイスのサイズ、形状、柔軟性、および取り扱いを含む物理的および機械的な性質を試験することであった。これらの試験の主要目的は、屈筋腱手術に利点を提供することができる単一の好ましいデバイスを同定するために、複数のデバイスを評価することであった。研究設計最初に、デバイスを、それらの全体的な物理的外観;サイズ、形状、柔軟性、耐久性、操作の容易さについて評価した。予備的な物理的評価に基づいて適切と判断したデバイスを、条片に切断し、腱に適用した。腱にまたは腱の周囲にうまく適用することができたデバイスを、動きに耐える能力について評価した。方法1体の新しい凍結死体を利用して、屈筋腱裂傷を模擬実験し、その後、本発明の移植可能な軟組織医療デバイスを用いて修復を高めた。標準的な方法で、伸張暴露を行い、屈筋腱鞘、屈筋腱および滑車システムを露出させた。標準的な番号15の刃を用いて、屈筋腱を、ベルダンゾーン1~3ゾーン1は、FDS刺入に対して遠位であり、ゾーン2は、中手指節関節MCPのレベルまでのFDS刺入の近位にあり、ゾーン3は、手根横靭帯の遠位程度までのMCP関節の近位にあるを含む様々な解剖学的ゾーンで傷をつけた。これらの屈筋腱を、改良したバネル縫合で、4-0Fiberwireからなる標準的な技術を用いて修復した図64。これらのデバイスを、遭遇することが多い解剖学的制約を再現する目的で、屈筋腱滑車システム内の様々なレベルゾーン1~3にある位置で縫合した。特に、中指の屈筋腱を、本発明のデバイスでの増強に加えて、主要な屈筋腱の修復の両方必要とするゾーン3の領域で切除した。人さし指を、特に、その滑車システムの重要な性質ならびに追加した容積bulkを理論的に受け入れるための限られた空間により、伝統的に、修復が困難である領域であるゾーン2でデバイスを受け入れるように調製した。適用前に、円形のデバイスを3~4つの条片に切断した。真ん中の条片を最初に用いた。このデバイスの条片を、真っすぐに重ねる形状か、または重ねないチョウネクタイの形状のいずれかで周囲を包むことによって、修復した腱または正常な腱のいずれかに適用した。真っすぐに重ねる適用において、このデバイスを、腱の上に重ねて、真っすぐにかつ完全に腱の周りを包み、重ねたデバイスの端を通って、デバイス自体の下まで一針縫うことでwithonestitch固定した。場合によって、チョウネクタイでの適用を行い、これには、重ねないで、腱の周囲をこのデバイスで包み、代わりに両端を互いに平行に置くことが含まれた。この形状では、各デバイス端から腱に至るまで一針縫い、このデバイスの隣接する小片をまとめるために中央で一針縫うことにより、このデバイスを3つの場所で腱に固定した。このデバイスを腱に固定する際、6-0Prolene縫合糸を用いた。次いで、このデバイスが、傷をつけた腱の部位から離れて動かないことを確実にするために、これらの腱の可動化を行った。物理的な寸法、使いやすさ、柔軟性、縫合を受け入れる能力、および腱の可動化の際に、定位置に留まる能力に応じて、いくつかのデバイス反復物を利用して、乾燥状態および水中で10分間含水させた含水状態の両方で評価した。結果、6個の異なるコラーゲンベースの生理活性デバイスの概説を以下に示す5個の反復物を図65に示す。表8は、寸法、縫合保持、屈筋腱修復への適切な使用および適用についての判定後の各デバイスの総合評価を示す。表8は、屈筋腱修復への適用後の寸法および縫合保持の許容性についての、乾燥状態および含水状態の両方における全ての原型のデバイス反復物の試験結果をまとめたものであるNP=試験せず;NC=コメントなし。以下の節で、この研究で試験した6個のデバイス反復物のそれぞれの試験中に行った具体的なコメントを考察する。6501デバイス:乾燥状態の6501デバイスの直径は、ゾーン3の中の、中指の切除した屈筋腱の周りを完全に包むことができたが、追加操作用の過剰な材料が残っていなかった図66。湿った状態の6501デバイスの直径は非常に小さいが、厚さは許容できるものであった。このデバイスの柔軟性および縫合強度は良好であった。6601デバイス:6601デバイスの条片を、小指のゾーン3の腱に適用した。直径は非常に許容できるものであり、過剰な材料により、長さは、チョウネクタイ形状を可能にした図67に示した。このデバイスの腱への適用中、乾燥状態および含水状態の両方におけるこのデバイスの取り扱いおよび柔軟性は、許容できるものであった。6601デバイスの条片は、腱およびデバイス自体の両方の下まで十分に縫合を受け入れた。特に、小指のゾーン3のこの位置は、腱の周りに限定された空間を有するが、このデバイスを、容易にこの腱に適用し、この空間内を滑らかな動きで縫合した。腱の可動化中に、このデバイスは、周囲に沿って定位置にとどまり、腱と共に滑らかに動いた。6701デバイス:6701デバイスを、複数の条片に切断することができた。1つの乾燥させた条片を、A2滑車修復下に置き、人さし指の屈筋腱を囲い、その後、鞘を閉じると、このデバイスがゾーン2の滑走する腱に付着したまま、指の可動化に十分耐えた図68a。人さし指の屈筋腱に沿ってこの位置の中で利用できる空間は、特に狭く、限定されているが、このデバイスを、腱に適切に適用し、縫合することができ、その後、これは、滑車の滑走中に付着したままであった。しかし、再び水分を補給させ、中指のゾーン3に適用した6701デバイスの条片は、厚くなりすぎ、腱への適用中に、十分に縫合を保持しなかった図68b。6701デバイスの直径は、腱の周りを包んだ後、追加の操作を可能にするために余分な長さを有することが好ましかった。6505デバイス:このデバイスは、6501の直径と似た直径を有することが観察され、非常に小さかったので、この6505デバイスをさらに試験しなかった。腱への適用を行わなかった。6705デバイス:乾燥時も、含水後も、6705デバイスの柔軟性は良好で、厚さは満足のいくものであった。このデバイスの適用は、腱の周囲への適用中、柔軟性において非常に許容できるものであった。各デバイス条片の端を腱へ縫合し、隣接するデバイスの小片を貫いて縫合した、人さし指のゾーン3の腱へのチョウネクタイ適用は、十分な縫合ができた3針の縫合を図69に示した。人さし指の屈筋腱に沿って利用できる空間は、特に狭く、限定されていたが、このデバイスを適切に腱に適用し、縫合することができた。66005デバイス:66005デバイスの直径および厚さは、乾燥状態および再水分補給状態の両方において、非常に許容できるものであった。乾燥状態における66005デバイスの条片を、真っすぐに重ねる形状を用いて、薬指のゾーン3の腱に適用した。腱の可動化の際に、このデバイスは、集積に耐え、腱からこのデバイスをずらすと、縫合部位で裂けた。第2の条片を、チョウネクタイ形状で適用し、腱に縫合した。滑車システムを使用した時、可動化は許容できるものであった。結論6個の別々のコラーゲンベースの生理活性デバイス6501、6601、6701、6505、6705、および66005;図65-66005は写真に含まれていないことに留意されたいの試験に基づいて、全てのデバイスは、実施例22で評価したデバイスと比較して、改良されたバージョンであった。全ての第2世代のデバイスは、改善された取り扱いにより、特に、含水状態でより耐久性があった。6個のデバイスのうちの4個は、一般的に、腱上の修復で用いられる縫合糸Prolene、6-0口径を十分に許容することができた1個は許容できず、もう1個は試験をしなかった。これらの4個のデバイスは、容易に腱に固定され腱およびデバイス自体の両方への縫合、このデバイスが腱から離れて動くことなく、腱の可動化に耐えた。人さし指のゾーン2および小指のゾーン3の限定された空間を含むゾーン2およびゾーン3の腱に適用した全てのデバイスは、腱の可動化の適用中および適用後に、腱の周りの空間内で容易に適合することができた。これらのデバイスの取り扱いおよび縫合によるこれらのデバイスの腱への適用は、乾燥状態が好ましかった。概して、6601デバイス反復物が、試験状況、デバイスの寸法、柔軟性、取り扱い、縫合による腱への適用および固定に基づいて、好ましいデバイスであった。参考文献CoryetalMurineerythroidcelllinesderivedwithc-mycretrovirusesrespondtoleukemia-inhibitoryfactorerythropoietinandinterleukin3CellGrowthDiffer23:165-721991DexteretalMolecularandcellbiologicalaspectsoferythropoiesisinlong-termbonemarrowculturesBlood584:699-7071981DiaetalHumanburst-formingunits-erythroidneeddirectinteractionwithstemcellfactorforfurtherdevelopmentBlood7810:2493-71991HodoharaetalStromalcell-derivedfactor-1SDF-1actstogetherwiththrombopoietintoenhancethedevelopmentofmegakaryocyticprogenitorcellsCFU-MKBlood953:769-752000MiharadaetalEfficientenucleationoferythroblastsdifferentiatedinvitrofromhematopoieticstemandprogenitorcellsNatureBiotech10:1255-562006Muller-EhmsenetalRebuildingadamagedheart:long-termsurvivaloftransplantedneonatalratcardiomyocytesaftermyocardialinfarctionandeffectoncardiacfunctionCirculation10514:1720-62002NelsonIL-2RegulatoryT-CellsandToleranceJourImmunol172:3983-39882004QuesenberryetalStudiesontheregulationofhemopoiesisExpHematol13:Suppl16:43-81985RoeckleinandTorok-StorbFunctionallydistincthumanmarrowstromalcelllinesimmortalizedbytransductionwiththehumanpapillomavirusE6/E7genesBlood854:997-10051995ShaoetalEffectofactivin-AonglobinexpressioninpurifiedhumanerythroidprogenitorsBloodFeb;793:773-811992UllrichetalInvivohematologiceffectsofrecombinantinterleukin-6onhematopoiesisandcirculatingnumbersofRBCsandWBCsBlood731:108-101989"