1つ以上の液体試料中に存在し得る少なくとも第1および第2の標的核酸を単離および同時増幅するための方法であって、前記方法は、a前記液体試料のそれぞれに内部対照核酸を添加する工程b固体支持体物質と、前記1つ以上の液体試料を、標的核酸を含む核酸および内部対照核酸が固体支持体物質に固定化されるのに充分な時間および条件下で、1つ以上の容器中で一緒に合わせる工程c分離ステーションにおいて、液体試料中に存在する他の物質から固体支持体物質を単離する工程d前記分離ステーションにおいて核酸を精製し、固体支持体物質を洗浄バッファで1回以上洗浄する工程e精製された標的核酸および精製された内部対照核酸と、前記標的核酸のそれぞれおよび前記内部対照核酸についての少なくとも1つの異なる組のプライマーを含む1つ以上の増幅試薬を、少なくとも2つの反応容器中で接触させる工程、ここで少なくとも第1の反応容器は少なくとも前記第1の標的核酸を含み、少なくとも第2の反応容器は少なくとも前記第2の標的核酸を含み、第2の標的核酸は第1の反応容器には存在しないf前記反応容器中で、前記精製された標的核酸および前記精製された内部対照核酸と、前記1つ以上の増幅試薬を、前記標的核酸の存在または非存在を示す増幅反応が起こるのに充分な時間および条件下で、インキュベートする工程g前記標的核酸の増幅産物により生成され、前記標的核酸の濃度に比例するシグナルを検出および測定する工程、ならびに前記内部対照核酸により生成されるシグナルを検出および測定する工程の自動化工程を含み、工程d~gにおける増幅および検出のための条件が、前記少なくとも第1および第2の精製された標的核酸ならびに内部対照核酸について同じであり、前記内部対照核酸の配列が、前記少なくとも第1および第2の精製された標的核酸について同じである、方法。前記内部対照核酸の増幅産物の存在が、前記標的核酸の1つ以上についての増幅産物の非存在下であっても、反応混合物中で増幅が起こることを示す、請求項1記載の方法。以下:h前記標的核酸の1つ以上の量を決定する工程をさらに含む、前記請求項いずれか記載の方法。前記増幅試薬が、逆転写酵素活性を有するポリメラーゼを含み、前記方法が、工程eおよびfの間に、前記反応容器中で、前記精製された核酸と、前記1つ以上の増幅試薬を、前記逆転写酵素活性を有するポリメラーゼによるRNAの転写が起こるのに適した時間および条件下でインキュベートする工程をさらに含む、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸がDNAである、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸がRNAである、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸が外装された核酸である、前記請求項いずれか記載の方法。内部対照核酸の配列が、液体試料中に存在する他の核酸の配列とは異なる、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸の配列が天然に存在するゲノム由来である、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸の配列が混ぜ合わさっている、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸の融解温度が50°C~90°Cである、前記請求項いずれか記載の方法。内部対照核酸が500塩基までの長さを有する、前記請求項いずれか記載の方法。内部対照核酸の配列が30~70のGC含量を有する、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸がLOD~20xLODの濃度を有する、前記請求項いずれか記載の方法。前記内部対照核酸が20xLOD~5000xLODの濃度を有する、前記請求項いずれか記載の方法。工程aにおいて1つより多くの内部対照核酸が添加されるが、前記内部対照核酸の1つだけが工程fにおいて増幅される、前記請求項いずれか記載の方法。実施例以下の実施例には、本発明が作用され得る態様を記載する。これらの実施例は限定されるものではなく、本発明の精神を逸脱することなく改変され得ることが当業者には明らかである。実施例1:この実施例には、単一の一般的な内部対照核酸を使用した、少なくとも第1および第2の標的核酸を単離および同時増幅するための方法が記載される。簡潔に、示される態様において、リアルタイムPCRは、細菌、ならびにDNAウイルスおよびRNAウイルスを含む数種の異なる標的のパネルに対して同時にかつ同一の条件下で行われる。全ての試料は、同じ実験、すなわち同一のディープウェルプレートまたはマルチウェルプレートのそれぞれにおいて処理され、分析された。以下の試料を調製して、続いて分析した:適切な標準または他の種類の標的が当業者には利用可能である。以下の表に列挙する装置は、それぞれの製造業者の指示書に従って使用した:試料調製のために、希釈液として以下の試薬を使用した:以下の希釈物は、予め調製して一晩保存した:各それぞれの試料および各それぞれの検体希釈物を、手動でディープウェルプレートにピペットで移し、それぞれの試料は、三重の分析のために3つの異なるウェルに添加した。HIVまたはHBV試料を含むそれぞれのウェルに、50ulの内部対照核酸を手動で添加した。定性的HIVアッセイのために、定性対照として働くRNAを添加した。定量的HIVアッセイのために、定量標準として働くRNAを添加した。定量的HBVアッセイのために、定量標準として働くDNAを添加した。前記対照核酸の配列は、全ての場合で同一であり、配列番号45~48の群から選択した。それぞれの対照核酸は以下のバッファ中に保存した:試料調製は、図1に示す模式図によるワークフローに従い、以下の試薬を使用して、HamiltonStar上で行なった:最終工程後、HamiltonStar装置のプロセスヘッドにより増幅試薬を含むそれぞれのマスターミックスを、それぞれのウェルに添加し、単離された核酸を含む液体とMmxを混合し、それぞれの得られた混合物を、増幅を実施したマイクロウェルプレートの対応するウェルに移した。以下のマスターミックスを使用した:増幅および検出のために、マイクロウェルプレートを自動プレートシーラーで密封して、プレートをLightCycler480に移した。以下のPCRプロフィールを使用した:プレPCRプログラムは、RNA鋳型の逆転写のための55、60および65°Cでの最初の変性およびインキュベーションを含む。3種類の温度でインキュベートすることは、より低い温度で、わずかにミスマッチした標的配列も転写され、一方、より高い温度で、RNA二次構造の形成が抑制され、より効果的な転写がもたらされるという有利な効果を合わせる。PCRサイクルを2つの測定に分け、両方の測定は、ワンステップ設定が適用される。55°Cでの最初の5サイクルにより、わずかにミスマッチした標的配列を予め増幅することにより包括性の増加が可能になり、第2の測定の45サイクルで、58°Cのアニーリング伸長温度を使用することにより特異性の増加がもたらされる。上述のマイクロウェルプレートに含まれる全ての試料に対してこのプロフィールを使用して、図2に示されるように全ての試料で増幅および検出を達成した。これは、増幅前の試料調製も成功裡に行われたことを示す。定性的および定量的HIV内部対照および定量的HBV内部対照についての結果は、明確さの目的で図2において別々に示される。対照も全ての場合で成功裡に増幅されたことが見られ得る。定量的設定におけるHIV標的およびHBVの量は、定量標準として働く内部対照核酸との比較により計算した。実施例2:上述の一般的な増幅プロセスは、同一条件下であるが、別々の実験において種々の異なる標的核酸に対して行われた。それぞれの核酸の単離は、実施例1に記載されるように行なった。それぞれの一般的な内部対照核酸は、配列番号45~49から選択され、RNA標的について外装RNAであり、DNA標的についてλパッケージ化DNAであった。定性的RNAアッセイのために1試料あたり300粒子を添加し、定量的RNAアッセイのために3000および全DNAアッセイについて500を添加した。全ての標的に対して以下のPCRプロフィールを使用した:詳細に、以下の実験を行った:1HBV、HCVおよびHIVの定性的多重分析aマスターミックス分析感度LODそれぞれの検出されたウイルスについて、EDTA血漿について予想されるLODおよびその周囲で、いくつかの濃度レベル。1つのウイルスおよび1つの濃度あたり1つのパネルを、1つの濃度あたり少なくとも20回の妥当な反復実験で試験した。プロビット解析によりLODを決定した。HIVHIV1グループMについてのWHO標準の力価をIUmLに変換した。従って、IUmLのHIV1グループMLODは、プロビット解析によるLOD:677IUmLプロビット解析によるLODについての95信頼区間:475~154IUmLHIV1グループOについての一次標準の力価を、CBERHIV1グループOパネルに対して再整列した;計算因子は0586である。従って、HIV1グループOLODは、プロビット解析によるLOD:88cpmLプロビット解析によるLODについての95信頼区間:64~185cpmLHIV2についての一次標準の力価をCBERHIV2パネルに対して再整列した;計算因子は267である。そのため、HIV2LODは、プロビット解析によるLOD:3444cpmLプロビット解析によるLODについての95信頼区間:2189~8304cpmLHBVHCV2WNVの定性的分析マスターミックス分析感度LODウイルスについて、予想されるLODおよびその周辺でいくつかの濃度レベルを含むそれぞれの標準の連続希釈として独立パネルを調製した。1つのウイルスおよび1つの濃度あたり1つのパネルを、1つの濃度あたり少なくとも20回の妥当な反復実験により試験した。プロビット解析によりLODを決定した。3HBVの定量的分析マスターミックス分析感度LODHBV二次標準を有する4つの希釈パネル、すなわち2つは200μLおよび500μLの試料インプット容積についてHBV陰性血清中のもの、ならびに2つは200μLおよび500μLの試料インプット容積についてHBV陰性EDTA血漿中のものを調製した。それぞれのパネルは、予想されるLODおよびその周辺で7個の濃度レベルを含んだ。1マトリックス当たりの1つのパネルは、1つの濃度レベルあたり≧21回の反復実験で試験した。少なくとも20回の反復実験が妥当である必要があった。95ヒット率でのプロビット解析および≧95ヒット率分析によりLODを決定した。LOD概要:EDTA血漿:95ヒット率でのプロビット解析により、EDTA血漿に関して200μL試料インプット容積について82IUmLのLODおよび500μL試料インプット容積について23IUmLのLODが生じた。これらの濃度についての95信頼区間範囲は、200μL試料インプット容積について48~260IUmLおよび500μL試料インプット容積について16~42IUmLであった。血清:95ヒット率でのプロビット解析により、血清に関して、200μL試料インプット容積について902IUmLおよび500μL試料インプット容積について41IUmLのLODが生じた。これらの濃度についての95信頼区間範囲は、200μL試料インプット容積について62~190IUmLおよび500μL試料インプット容積について24~100IUmLであった。直線性1つのEDTA血漿パネルおよび1つの血清パネルをHBV遺伝子型Aを使用して調製した。アッセイの予想されるダイナミックレンジの決定のために、12個の濃度レベルでそれぞれのパネルを分析した。全ての濃度レベルパネルメンバーを21回の反復実験で試験した。この試験は、500μLの試料インプット容積で行なった。濃度レベルは以下のように選択した:予想される定量の下限未満で1つのレベル、予想されるLLOQで1つ、予想されるLLOQより上で1つ、中間レベルでいくつかの濃度、予想される定量の上限でいくつかの濃度、および予想されるULOQより上で1つ。PM1220E09IUmL予想されるULOQより上PM1110E09IUmL予想されるULOQPM1010E08IUmL予想されるULOQ未満PM910E07IUmL中間濃度レベルPM810E06IUmL中間濃度レベルPM710E05IUmL中間濃度レベルPM610E04IUmL中間濃度レベルPM510E03IUmL中間濃度レベルPM6a20E02IUmL中間濃度レベルPM410E02IUmL中間濃度レベルPM350E01IUmL予想されるLLOQより上PM210E01IUmL予想されるLLOQPM140E00IUmL予想されるLLOQ未満直線性パネルの全ての妥当な試料について、観測されたHBVDNA力価をlog10力価に変換し、濃度レベル当たりの平均log10力価を計算した。この結果のグラフ表示を図13に示す。この結果のグラフ表示を図14に示す。直線性概要:平均log10観測力価のlog10偏差がlog10名目力価の±03内にある濃度範囲として画定される直線範囲はEDTA血漿について35E00IUmL~17E09IUmLおよび血清について33E00IUmL~17E09IUmLと決定された。定量の下限はEDTA血漿および血清について40E00IUmLであることが見出された。4HCVの定量的分析マスターミックス分析感度LOD200μLおよび500μLの試料インプット容積を使用して、HCV陰性EDTA血漿および血清中にRocheHCV二次標準を有する希釈パネルを調製した。それぞれの濃度レベルは21回の反復実験で試験した。少なくとも≧20回の反復実験がだとうである必要がある。95ヒット率でのプロビット解析および≧95ヒット率解析によりLODを決定した。LOD概要:195ヒット率でのプロビット解析により、EDTA血漿に関して、200μLの試料処理インプット容積について174IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について90IUmLのLODが生じた。これらの濃度についての95信頼区間は、200μL試料処理インプット容積について121~343IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について55~254IUmLである。295ヒット率でのプロビット解析の値は、血清に対して、200μL試料処理インプット容積について202IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について82IUmLである。これらの濃度についての95信頼区間は、200μL試料処理インプット容積について140~393IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について58~150IUmLである。直線性HCVWHO標準に対して追跡可能なHCVaRNAのEDTA血漿パネルの1つの調製物および血清パネルの1つの調製物を分析した。連続希釈により直線性パネルを調製し、10個の異なる濃度で分析した。500μL試料処理インプット容積で試験を行った。濃度は以下のように選択した:予想される定量の下限未満で1つのレベル、LLoQで1つ、LLOQより上で1つ、中間レベルでいくつかの濃度、予想される定量の上限でいくつかの濃度およびULoQまたはそれより上で1つ。全ての濃度について、21回の反復実験を試験した。PM120E08IUmL予想されるULoQより上PM210E08IUmL予想されるULoQPM310E07IUmL予想されるULoQ未満PM410E06IUmL中間濃度レベルPM510E05IUmL中間濃度レベルPM610E04IUmL力価指定のための中間濃度レベルPM710E03IUmL中間濃度レベルPM810E02IUmL予想されるLLoQより上PM910E01IUmL予想されるLLoQPM1080E00IUmL予想されるLLoQ未満この結果のグラフ表示を図15に示す。この結果のグラフ表示を図16に示す。直線性概要:平均log10観測力価のlog10偏差がlog10名目力価の±03以内である濃度範囲として画定した直線範囲はEDTA血漿について487E00IUmL~122E08IUmLおよび血清について390E00IUmL~992E07IUmLと決定された。5HIVの定量的分析マスターミックス分析感度LOD200μLおよび500μLの試料インプット容積について、HIV1陰性EDTA血漿中にHIV1M二次標準を有する希釈パネルを調製した。それぞれの濃度レベルは21回の反復実験で試験した。少なくとも≧20回の反復実験が妥当である必要がある。95ヒット率でプロビット解析および≧95ヒット率解析によりLODを決定した。LOD概要195ヒット率でのプロビット解析により、200μLインプット容積について418cpmLおよび500μLインプット容積について189cpmLのLODが生じた。2これらの濃度についての95信頼区間範囲は、200μLインプット容積について309~749cpmLおよび500μLインプット容積について149~294cpmLであった。直線性直線性ダイナミックレンジ正確性試験に使用された試料は、HIV1細胞培養上清物質、HIV1グループMサブタイプBの希釈パネルからなった。連続希釈により直線性パネルを調製した。このパネルを10個の濃度レベルで分析した。濃度は以下のように選択した:予想される定量の下限未満で1つのレベル、LLoQで1つ、LLoQより上で1つ、中間レベルでいくつかの濃度、予想される定量の上限でいくつかの濃度およびULoQより上で1つ。全ての濃度について、21回の反復実験を試験した。この直線性試験は、500μLインプット容積で行った:PM120E07cpmL予想されるULoQより上PM210E07cpmL予想されるULoQPM310E06cpmL予想されるULoQ未満PM410E05cpmL中間濃度レベルPM530E04cpmL力価指定のための中間濃度レベルPM610E04cpmL中間濃度レベルPM710E03cpmL中間濃度レベルPM810E02cpmL中間濃度レベルPM950E01cpmL予想されるLLoQより上PM1020E01cpmL予想されるLLoQPM1115E01cpmL予想されるLLoQ未満この結果のグラフ表示を図17に示す。直線性概要平均log10観測力価のlog10偏差がlog10名目力価の±03以内にある濃度範囲として画定した直線範囲は、15E01cpmL~20E07cpmLと決定された。