アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子が、宿主のコリネ型細菌に導入された、アニリン生産能を有する形質転換体。アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子が、バチラスサブチリスBacillussubtilis由来の遺伝子、ラクトバチルスラムノーサスLactobacillusrhamnosus由来の遺伝子、ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevis由来の遺伝子、シュードモナスプチダPseudomonasputida由来の遺伝子、エシェリキアコリEscherichiacoli由来の遺伝子、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae由来の遺伝子、又はエンテロバクタークロアカエEnterobactercloacae由来の遺伝子である請求項1に記載の形質転換体。アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子が下記の又はのDNAである請求項1に記載の形質転換体。配列番号16の塩基配列からなるDNA、配列番号19の塩基配列からなるDNA、配列番号22の塩基配列からなるDNA、配列番号25の塩基配列からなるDNA、配列番号28の塩基配列からなるDNA、配列番号31の塩基配列からなるDNA、又は配列番号34の塩基配列からなるDNAの何れかの塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつアミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNA宿主のコリネ型細菌がコリネバクテリウムグルタミカムである請求項1~3の何れかに記載の形質転換体。宿主のコリネバクテリウムグルタミカムが、コリネバクテリウムグルミカムRFERMP-18976、ATCC13032、又はATCC13869である請求項4に記載の形質転換体。コリネバクテリウムグルタミカムANI1受託番号:NITEBP1001形質転換体。請求項1~6の何れかに記載の形質転換体を、還元条件下、アミノ安息香酸、そのエステル、及び/又はその塩を含有する反応液中で反応させる工程と、反応培地中のアニリンを回収する工程とを含むアニリンの製造方法。反応工程において、形質転換体が実質的に増殖しない請求項7に記載のアニリンの製造方法。還元条件下の反応液の酸化還元電位が-200~-500ミリボルトである請求項7又は8に記載のアニリンの製造方法。本発明は、アミノ安息香酸を原料として効率よくアニリンを製造できる微生物、及びアミノ安息香酸を原料として効率よくアニリンを製造できる方法を提供することを課題とする。上記課題を解決するために本発明者らは研究を重ね、コリネ型細菌にアミノベンゾエートデカルボキシラーゼ遺伝子を導入した形質転換体は、効率よくアミノ安息香酸からアニリンを生産することを見出した。また、この形質転換体は、還元条件下の反応液中で実質的に増殖しない状態で反応させる場合、特に、アニリン生産効率が高いことを見出した。本発明は上記知見に基づき完成されたものであり、以下の形質転換体及びアニリンの製造方法を提供する。項1.アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子が、宿主のコリネ型細菌に導入された、アニリン生産能を有する形質転換体。項2.アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子が、バチラスサブチリスBacillussubtilis由来の遺伝子、ラクトバチルスラムノーサスLactobacillusrhamnosus由来の遺伝子、ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevis由来の遺伝子、シュードモナスプチダPseudomonasputida由来の遺伝子、エシェリキアコリEscherichiacoli由来の遺伝子、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae由来の遺伝子、又はエンテロバクタークロアカエEnterobactercloacae由来の遺伝子である項1に記載の形質転換体。項3.アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子が下記の又はのDNAである項1に記載の形質転換体。配列番号16の塩基配列からなるDNA、配列番号19の塩基配列からなるDNA、配列番号22の塩基配列からなるDNA、配列番号25の塩基配列からなるDNA、配列番号28の塩基配列からなるDNA、配列番号31の塩基配列からなるDNA、又は配列番号34の塩基配列からなるDNAの何れかの塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつアミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNA項4.宿主のコリネ型細菌がコリネバクテリウムグルタミカムである項1~3の何れかに記載の形質転換体。項5.宿主のコリネバクテリウムグルタミカムが、コリネバクテリウムグルミカムRFERMP-18976、ATCC13032、又はATCC13869である項4に記載の形質転換体。項6.コリネバクテリウムグルタミカムANI1受託番号:NITEBP1001形質転換体。項7.項1~6の何れかに記載の形質転換体を、還元条件下、アミノ安息香酸、そのエステル、及び/又はその塩を含有する反応液中で反応させる工程と、反応培地中のアニリンを回収する工程とを含むアニリンの製造方法。項8.反応工程において、形質転換体が実質的に増殖しない項7に記載のアニリンの製造方法。項9.還元条件下の反応液の酸化還元電位が-200~-500ミリボルトである項7又は8に記載のアニリンの製造方法。本発明の形質転換体を用いることにより、アミノ安息香酸、その塩、又はそのエステルからアニリンを高効率で製造することができる。一般に微生物はアニリンのような溶剤の細胞毒性により生育が阻害されるため、微生物を用いてアニリンを製造することは困難であったが、本発明方法によれば、微生物を用いて、実用上十分に効率良くアニリンを製造することができる。以下、本発明を詳細に説明する。Iアニリン生産能を有する形質転換体本発明のアニリン生産能を有する形質転換体は、アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子が、宿主のコリネ型細菌に導入された形質転換体である。宿主コリネ型細菌とは、バージーズマニュアルデターミネイティブバクテリオロジーBargeysManualofDeterminativeBacteriology、Vol8、5991974に定義されている一群の微生物であり、通常の好気的条件で増殖するものならば特に限定されるものではない。具体例を挙げれば、コリネバクテリウム属菌、ブレビバクテリウム属菌、アースロバクター属菌、マイコバクテリウム属菌、マイクロコッカス属菌等が挙げられる。コリネ型細菌の中ではコリネバクテリウム属菌が好ましい。コリネバクテリウム属菌としては、コリネバクテリウムグルタミカム、コリネバクテリウムエフィシェンスCorynebacteriumefficiens、コリネバクテリウムアンモニアゲネスCorynebacteriumammoniagenes、コリネバクテリウムハロトレランスCorynebacteriumhalotolerance、コリネバクテリウムアルカノリティカムCorynebacteriumalkanolyticum等が挙げられる。中でも、安全でかつアニリン生産性が高い点で、コリネバクテリウムグルタミカムが好ましい。好適な菌株として、コリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumR株FERMP18976、ATCC13032株、ATCC13869株、ATCC13058株、ATCC13059株、ATCC13060株、ATCC13232株、ATCC13286株、ATCC13287株、ATCC13655株、ATCC13745株、ATCC13746株、ATCC13761株、ATCC14020株、ATCC31831株、MJ233FERMBP1497、MJ233AB41FERMBP1498等が挙げられる。中でも、R株FERMP18976、ATCC13032株、ATCC13869株が好ましい。なお、分子生物学的分類により、ブレビバクテリウムフラバムBrevibacteriumflavum、ブレビバクテリウムラクトファーメンタムBrevibacteriumlactofermentum、ブレビバクテリウムディバリカタムBrevibacteriumdivaricatum、コリネバクテリウムリリウムCorynebacteriumlilium等のコリネ型細菌もコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumに菌名が統一されているLieblWetalTransferofBrevibacteriumdivaricatumDSM20297TBrevibacteriumflavumDSM20411BrevibacteriumlactofermentumDSM20412andDSM1412andCorynebacteriumglutamicumandtheirdistinctionbyrRNAgenerestrictionpatternsIntJSystBacteriol41255260、駒形和男らコリネフォルム細菌の分類発酵と工業45944963。旧分類のブレビバクテリウムラクトファーメンタムATCC13869株、ブレビバクテリウムフラバムのMJ233株FERMBP1497、MJ233AB41株FERMBP1498なども好適なコリネバクテリウムグルタミカムである。ブレビバクテリウム属菌としては、ブレビバクテリウムアンモニアゲネスBrevibacteriumammoniagenes例えばATCC6872株等が挙げられる。アースロバクター属菌としては、アースロバクターグロビフォルミスArthrobacterglobiformis例えばATCC8010株、ATCC4336株、ATCC21056株、ATCC31250株、ATCC31738株、ATCC35698株等が挙げられる。マイコバクテリウム属菌としては、マイコバクテリウムボビスMycobacteriumbovis例えばATCC19210株、ATCC27289株等が挙げられる。マイクロコッカス属菌としては、マイクロコッカスフロイデンライヒMicrococcusfreudenreichii例えばNo239株FERMP13221、マイクロコッカスルテウスMicrococcusleuteus、マイクロコッカスウレアエMicrococcusureae例えばIAM1010株、マイクロコッカスロゼウスMicrococcusroseus例えばIFO3764株等が挙げられる。また、コリネ型細菌は、野生株の他に、その変異株や人為的な遺伝子組換え体であってもよい。例えば、ラクテート乳酸デヒドロゲナーゼlactatedehydrogenase:LDH、フォスフォエノールピルベートカルボキシラーゼphosphoenolpyrvatecarboxylase、マレートデヒドロゲナーゼmalatedehydrogenaseなどの遺伝子の破壊株が挙げられる。このような遺伝子破壊株を宿主として用いることにより、アニリンの生産性を向上させたり、副生成物の生成を抑制したりすることができる。中でも、ラクテートデヒドロゲナーゼ遺伝子の破壊株が好ましい。この遺伝子破壊株は、乳酸デヒドロゲナーゼ遺伝子が破壊されていることにより、ピルビン酸から乳酸への代謝経路が遮断されている。中でも、コリネバクテリウムグルタミカムの、特にRFERMP18976株のラクテートデヒドロゲナーゼ遺伝子の破壊株が好ましい。このような遺伝子破壊株は、遺伝子工学的手法により常法に従い作製できる。例えば、WO2005/010182A1に、乳酸デヒドロゲナーゼ破壊株、及びその作製方法が記載されている。コリネ型細菌は、他細菌に比べて、アニリンのような溶剤に対する耐性が高い。また、コリネ型細菌は、他の好気性細菌に比べて、実質的に増殖しない還元条件下で効率よく物質生産を行える。これらの点で、コリネ型細菌は本発明方法によるアニリン製造に好適である。アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ酵素遺伝子アミノベンゾエートデカルボキシラーゼは、アミノ安息香酸から炭酸を脱離させてアニリンを生成する反応、及びその逆反応を触媒する酵素である。アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子の由来は特に限定されないが、バチラスサブチリスBacillussubtilis由来の遺伝子、ラクトバチルスラムノーサスLactobacillusrhamnosus由来の遺伝子、ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevis由来の遺伝子、シュードモナスプチダPseudomonasputida由来の遺伝子、エシェリキアコリEscherichiacoli由来の遺伝子、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae由来の遺伝子、又はエンテロバクタークロアカエEnterobactercloacae由来の遺伝子が好ましい。中でも、バチラスサブチリス由来の遺伝子、及びエンテロバクタークロアカエ由来の遺伝子が好ましい。特に、アントラニル酸2アミノ安息香酸を基質とした場合はバチラスサブチリス由来の遺伝子が好ましく、4アミノ安息香酸を基質とした場合はエンテロバクタークロアカエ由来の遺伝子が好ましい。バチラスサブチリス由来の遺伝子としては配列番号16の塩基配列からなるDNAが挙げられ、ラクトバチルスラムノーサス由来の遺伝子としては配列番号19の塩基配列からなるDNAが挙げられ、ラクトバチラスブレビス由来の遺伝子としては配列番号22の塩基配列からなるDNAが挙げられ、シュードモナスプチダ由来の遺伝子としては配列番号25の塩基配列からなるDNAが挙げられ、エシェリキアコリ由来の遺伝子としては配列番号28の塩基配列からなるDNAが挙げられ、サッカロマイセスセレビシエ由来の遺伝子としては配列番号31の塩基配列からなるDNAが挙げられ、エンテロバクタークロアカエ由来遺伝子としては配列番号34の塩基配列からなるDNAが挙げられる。また、本発明では、配列番号16、19、22、25、28、31、又は34の塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつアミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAも使用できる。本発明においてストリンジェントな条件は、一般的な条件、例えば、MolecularCloningALaboratoryManualSecondEdition1989Vol2p1145に記載された条件を指す。具体的には、完全ハイブリッドの融解温度より5~10°C低い温度でハイブリダイゼーションが起こる場合を指す。アミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性は、JAmChemSoc79628630に記載の方法を改変して測定できる。簡単に説明すると、コリネ型細菌を栄養培地で、18時間33°Cで培養したものを、最少培地で2回洗菌した後、最少培地に再懸濁、IntactCellとする。次に反応として、IntactCellにHEPESを緩衝液として25mM加え、基質としてアントラニル酸、又は4アミノベンゾエートを終濃度5mMになるように添加する。33°C、200rpmで6時間振とう後、反応液を菌と上清に遠心分離し、上清を022μmのフィルターで濾過したものをサンプルとする。生じたアニリン生成量をGCMS、又はHPLCで定量できる。また、本発明では、配列番号16、19、22、25、28、31、又は34の塩基配列と同一性が90以上、好ましくは95以上、より好ましくは98以上の塩基配列からなり、かつアミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAも使用できる。本発明において、塩基配列の同一性は、GENETYXver8GENETYX株式会社ゼネティックス製により算出した値である。配列番号16、19、22、25、28、31、又は34の塩基配列からなるDNAのホモログは、例えば、これらの塩基配列に基づき常法に従い設計したプライマー又はプローブを用いたPCR又はハイブリダイゼーションにより、他生物種のDNAライブラリーから選択することができ、これにより高確率でアミノベンゾエートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAが得られる。形質転換のためのベクターの構築PCRで増幅したアミノベンゾエートデカルボキシラーゼ酵素をコードするDNAは、それぞれ、宿主で増幅できる適切なベクターにクローニングすればよい。プラスミドベクターとしては、コリネ型細菌内で自律複製機能を司る遺伝子を含むものであれば良い。その具体例としては、ブレビバクテリウムラクトファーメンタムBrevibacteriumlactofermentum2256由来のpAM330特開昭5867699、MiwaKetalCrypticplasmidsinglutamicacidproducingbacteriaAgricBiolChem48290129031984及びYamaguchiRetalDeterminationofthecompletenucleotidesequenceoftheBrevibacteriumlactofermentumplasmidpAM330andtheanalysisofitsgeneticinformationNucleicAcidsSympSer162652671985、コリネバクテリウムグルタミカムATCC13058由来のpHM1519MiwaKetalCrypticplasmidsinglutamicacidproducingbacteriaAgricBiolChem48290129031984及びpCRY30KurusuYetalIdentificationofplasmidpartitionfunctionincoryneformbacteriaApplEnvironMicrobiol577597641991、コリネバクテリウムグルタミカムT250由来のpCG4特開昭57183799、KatsumataRetalProtoplasttransformationofglutamateproducingbacteriawithplasmidDNAJBacteriol、1593063111984、pAG1、pAG3、pAG14、pAG50特開昭62166890、pEK0、pEC5、pEKEx1EikmannsBJetalAfamilyofCorynebacteriumglutamicumEscherichiacolishuttlevectorsforcloningcontrolledgeneexpressionandpromoterprobingGene10293981991などが挙げられる。好ましいプロモーターとしては、コリネバクテリウムグルタミカムR由来のグリセルアルデヒド3フォスフェートデヒドロゲナーゼA遺伝子のプロモーターPgapA、マレートデヒドロゲナーゼ遺伝子mdhのプロモーターPmdh、ラクテートデヒドロゲナーゼA遺伝子ldhAのプロモーターPldhAなどが挙げられ、中でも、PgapAが好ましい。好ましいターミネーターとしては、大腸菌rRNAオペロンのrrnBT1T2ターミネーター、大腸菌のtrpAターミネーター、ブレビバクテリウムラクトファーメンタムBrevibacteriumlactofermentumのtrpターミネーターなどが挙げられ、中でも、rrnBT1T2ターミネーターが好ましい。形質転換形質転換方法は、公知の方法を制限無く使用できる。このような公知の方法として、例えば塩化カルシウム/塩化ルビジウム法、リン酸カルシウム法、DEAE-デキストラン介在トランスフェクション、電気穿孔法などが挙げられる。中でも、コリネ型細菌には、電気パルス法が好適であり、電気パルス法は、公知の方法KurusuYetalElectroporationtransformationsystemforCoryneformbacteriabyauxotrophiccomplementationAgricBiolChem544434471990及びVertesAAetalPresenceofmrrandmcrlikerestrictionsystemsinCoryneformbacteriaResMicrobiol1441811851993により行うことができる。形質転換体は、微生物の培養に通常使用される培地を用いて培養すればよい。この培地としては、通常、炭素源、窒素源、無機塩類及びその他の栄養物質等を含有する天然培地又は合成培地等を用いることができる。炭素源としては、グルコース、フルクトース、スクロース、マンノース、マルトース、マンニトール、キシロース、アラビノース、ガラクトース、澱粉、糖蜜、ソルビトール、グリセリン等の糖質又は糖アルコール;酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸又はグルコン酸等の有機酸;エタノール、プロパノール等のアルコール等が挙げられる。また、所望によりノルマルパラフィン等の炭化水素等も用いることができる。炭素源は、1種を単独で使用でき、又は2種以上を混合して使用してもよい。培地中のこれら炭素源の濃度は、通常、約01~10w/vとすればよい。窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等の無機又は有機アンモニウム化合物、尿素、アンモニア水、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等が挙げられる。また、コーンスティープリカー、肉エキス、ベプトン、NZ-アミン、蛋白質加水分解物、アミノ酸等の含窒素有機化合物等も使用できる。窒素源は、1種を単独で使用してもよく、また2種以上を混合して使用してもよい。培地中の窒素源濃度は、使用する窒素化合物によっても異なるが、通常、約01~10w/vとすればよい。無機塩類としては、例えばリン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、又は炭酸カルシウム等が挙げられる。これら無機塩は、1種を単独で使用してもよく、また2種以上を混合して使用してもよい。培地中の無機塩類濃度は、使用する無機塩によっても異なるが、通常、約001~1w/vとすればよい。栄養物質としては、例えば肉エキス、ペプトン、ポリペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスティープリカー、脱脂粉乳、脱脂大豆塩酸加水分解物、又は動植物若しくは微生物菌体のエキスやそれらの分解物等が挙げられる。栄養物質の培地濃度は、使用する栄養物質によっても異なるが、通常、約01~10w/vとすればよい。さらに、必要に応じて、ビタミン類を添加することもできる。ビタミン類としては、例えば、ビオチン、チアミンビタミンB1、ピリドキシンビタミンB6、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が挙げられる。培地のpHは約5~8が好ましい。好ましい微生物培養培地としては、A培地InuiMetalMetabolicanalysisofCorynebacteriumglutamicumduringlactateandsuccinateproductionsunderoxygendeprivationconditionsJMolMicrobiolBiotechnol7182196、BT培地OmumasabaCAetalCorynebacteriumglutamicumglyceraldehyde3phosphatedehydrogenaseisoformswithoppositeATPdependentregulationJMolMicrobiolBiotechnol891103等が挙げられる。培養温度は約15~45°Cとすればよく、培養時間は約1~7日間とすればよい。IIアニリンの製造方法上記説明した本発明の形質転換体を、アミノ安息香酸、その塩、及び/又はそのエステルを含有する反応液中で反応させる工程と、反応液中のアニリンを回収する工程とを含む方法によりアニリンを製造することができる。微生物の増殖反応に先立ち、形質転換体を好気条件下で、温度約25~35°Cで、約12~48時間培養して増殖させることが好ましい。培養用培地反応に先立つ形質転換体の好気的培養に用いる培地は、炭素源、窒素源、無機塩類およびその他の栄養物質等を含有する天然培地または合成培地を用いることができる。炭素源として、糖類グルコース、フルクトース、マンノース、キシロース、アラビノース、ガラクトースのような単糖;スクロース、マルトース、ラクトース、セロビオース、キシロビオース、トレハロースのような二糖;澱粉のような多糖;糖蜜等、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、グリセリンのような糖アルコール;酢酸、クエン酵、乳酸、フマル酸、マレイン酸、グルコン酸のような有機酸;エタノール、プロパノールのようなアルコール;ノルマルパラフィンのような炭化水素等も用いることができる。炭素源は、1種を単独で、又は2種以上を混合して使用できる。窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムのような無機又は有機アンモニウム化合物、尿素、アンモニア水、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等を使用できる。また、コーンスティープリカー、肉エキス、ペプトン、NZ-アミン、蛋白質加水分解物、アミノ酸等の含窒素有機化合物等も使用できる。窒素源は、1種を単独で、又は2種以上を混合して使用できる。窒素源の培地中の濃度は、使用する窒素化合物によっても異なるが、通常、約01~10w/vとすればよい。無機塩類としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等が挙げられる。無機塩は、1種を単独で、又は2種以上を混合して使用できる。無機塩類の培地中の濃度は、使用する無機塩によっても異なるが、通常、約001~1wvとすればよい。栄養物質としては、肉エキス、ペプトン、ポリペプトン、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスティープリカー、脱脂粉乳、脱脂大豆塩酸加水分解物、動植物又は微生物菌体のエキスやそれらの分解物等が挙げられる。栄養物質の培地中の濃度は、使用する栄養物質によっても異なるが、通常約01~10w/vとすればよい。さらに、必要に応じて、ビタミン類を添加することもできる。ビタミン類としては、ビオチン、チアミンビタミンB1、ピリドキシンビタミンB6、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が挙げられる。培地のpHは約6~8が好ましい。具体的な好ましいコリネ型細菌用培地としては、A培地InuiMetalMetabolicanalysisofCorynebacteriumglutamicumduringlactateandsuccinateproductionsunderoxygendeprivationconditionsJMolMicrobiolBiotechnol7182196、BT培地OmumasabaCAetalCorynebacteriumglutamicumglyceraldehyde3phosphatedehydrogenaseisoformswithoppositeATPdependentregulationJMolMicrobiolBiotechnol891103等が挙げられる。これらの培地において、糖類濃度を上記範囲にして用いればよい。反応液反応液は、アニリン前駆体アニリン原料を含有する水、緩衝液、無機塩培地などを用いることができる。前駆体としては、アミノ安息香酸、その塩、及び/又はそのエステルを用いることができる。アミノ安息香酸としては、2アミノ安息香酸、3アミノ安息香酸、4アミノ安息香酸の何れも使用できる。中でも、水溶性であるため反応に使用し易い点で、2アミノ安息香酸、4アミノ安息香酸が好ましい。塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、塩酸塩などが挙げられる。また、エステルとしては、炭素数1~4のアルコールとのエステルなどが挙げられる。反応液への溶解度が高くなる点で、塩が好ましい。前駆体は、1種を単独で、又は2種以上を混合して使用できる。反応液中のアミノ安息香酸、その塩、及び/又はそのエステルの濃度は、約01~10wvが好ましく、約05~7wvがより好ましく、約05~5wvがさらにより好ましい。上記範囲であれば、効率良く、アニリンを製造できる。緩衝液としては、リン酸バッファー、トリスバファー、炭酸バッファーなどが挙げられる。緩衝液の濃度は、約10~150mMが好ましい。無機塩培地としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硝酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、炭酸カルシウム等の無機塩の1種又は2種以上を含む培地が挙げられる。中でも、硫酸マグネシウムを含む培地が好ましい。無機塩培地として、具体的には、BT培地OmumasabaCAetalCorynebacteriumglutamicumglyceraldehyde3phosphatedehydrogenaseisoformswithoppositeATPdependentregulationJMolMicrobiolBiotechnol891103等が挙げられる。無機塩類の培地中の濃度は、使用する無機塩によっても異なるが、通常、約001~1w/vとすればよい。反応液のpHは約6~8が好ましい。反応中は、アンモニア水溶液、水酸化ナトリウム水溶液などを用いて、pHコントローラー微生物からの染色体DNAの抽出バチルスサブチリスBacillussubtilisNBRC14144からの染色体DNA抽出は、NBRCMediumNo802培地polypeptone10gyeastextract2gMgSO47H2O1gを蒸留水1Lに溶解に、白金耳を用いて植菌後、対数増殖期まで37°Cで振盪培養し、菌体を集菌後、DNAゲノム抽出キットを用いて、取扱説明書に従い、集めた菌体から染色体DNAを回収した。ラクトバチルスラムノーサスLactobacillusrhamnosusNBRC3425からの染色体DNA抽出は、NBRCMediumNo804培地polypeptone5gyeastextract5gglucose5gMgSO47H2O1gを蒸留水1Lに溶解に、白金耳を用いて植菌後、対数増殖期まで30°Cで振盪培養し、菌体を集菌後、DNAゲノム抽出キットを用いて、取扱説明書に従い、集めた菌体から染色体DNAを回収した。ラクトバチラスブレビスLactobacillusbrevisATCC367からの染色体DNA抽出は、LactobacilliMRSbrothベクトンディッキンソン社製BD288130に、白金耳を用いて植菌後、対数増殖期まで30°Cで振盪培養し、菌体を集菌後、DNAゲノム抽出キットを用いて、取扱説明書に従い、集めた菌体から染色体DNAを回収した。シュードモナスプチダPseudomonasputidaKT2440ATCC47054からの染色体DNA抽出は、LB培地tryptone10gyeastextract5gNaCl5gを蒸留水1Lに溶解に、白金耳を用いて植菌後、対数増殖期まで37°Cで振盪培養し、菌体を集菌後、DNAゲノム抽出キットを用いて、取扱説明書に従い、集めた菌体から染色体DNAを回収した。エシェリキアコリEscherichiacoliK12MG1655からの染色体DNA抽出は、LB培地tryptone10gyeastextract5gNaCl5gを蒸留水1Lに溶解に、白金耳を用いて植菌後、対数増殖期まで37°Cで振盪培養し、菌体を集菌後、DNAゲノム抽出キットを用いて、取扱説明書に従い、集めた菌体から染色体DNAを回収した。サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeNBRC10217からの染色体DNA抽出は、NBRCMediumNo108培地glucose10gpeptone5gyeastextract3gmaltextract3gを蒸留水1Lに溶解に、白金耳を用いて植菌後、対数増殖期まで24°Cで振盪培養し、菌体を集菌後、DNAゲノム抽出キットを用いて、取扱説明書に従い、集めた菌体から染色体DNAを回収した。エンテロバクタークロアカエEnterobactercloacaeNBRC13535からの染色体DNA抽出は、NBRCMediumNo802培地polypeptone10gyeastextract2gMgSO47H2O1gを蒸留水1Lに溶解に、白金耳を用いて植菌後、対数増殖期まで37°Cで振盪培養し、菌体を集菌後、DNAゲノム抽出キットを用いて、取扱説明書に従い、集めた菌体から染色体DNAを回収した。クローニングベクターの構築クローニングベクターpCRB22の構築コリネバクテリウムカゼイJCM12072由来のプラスミドpCASE1のDNA複製起点以降、pCASE1oriと記す配列、及びクローニングベクターpHSG298タカラバイオ株式会社製をそれぞれ含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、pCASE1ori配列、クローニングベクターpHSG298をそれぞれクローン化するべく、配列番号1pCASE1ori配列、配列番号2クローニングベクター-pHSG298を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを合成し、使用した。pCASE1ori配列増幅用プライマーa1;5’ATAGATCTAGAACGTCCGTAGGAGC3’配列番号3b1;5’ATAGATCTGACTTGGTTACGATGGAC3’配列番号4尚、プライマーa1及びb1には、BglII制限酵素部位が付加されている。クローニングベクターpHSG298増幅用プライマーa2;5’ATAGATCTAGGTTTCCCGACTGGAAAG3’配列番号5b2;5’ATAGATCTCGTGCCAGCTGCATTAATGA3’配列番号6尚、プライマーa2及びb2には、BglII制限酵素部位が付加されている。鋳型DNAは、JapanCollectionofMicroorganismsより入手したコリネバクテリウムカゼイJCM12072から抽出したトータルDNA及びクローニングベクターpHSG298タカラバイオ株式会社製を用いた。実際のPCRは、サーマルサイクラーGeneAmpPCRSystem9700を用い、反応試薬としてTaKaRaLATaqタカラバイオ株式会社製を用いて下記の条件で行った。上記で生成した反応液10μlを08アガロースゲルにより電気泳動を行い、pCASE1ori配列の場合約14kb、クローニングベクターpHSG298の場合、約27kbのDNA断片が検出できた。上記のPCRにより増幅したコリネバクテリウムカゼイ株由来のプラスミドpCASE1ori配列含む約14kbDNA断片10μl及びクローニングベクターpHSG298を含む約27kbDNA断片10μlを各々制限酵素BglIIで切断し、70°Cで10分処理させることにより制限酵素を失活させた後、両者を混合し、これにT4DNAリガーゼ10×緩衝液1μl、T4DNAリガーゼタカラバイオ株式会社製1unitの各成分を添加し、滅菌蒸留水で10μlにして、15°Cで3時間反応させ、結合させた。これをライゲーションA液とした。得られたライゲーションA液を、塩化カルシウム法JournalofMolecularBiology53159によりエシェリヒアコリJM109を形質転換し、カナマイシン50μgmlを含むLB寒天培地1ポリペプトン、05酵母エキス、05塩化ナトリウム、および15寒天に塗布した。培地上の生育株を常法により液体培養し、培養液よりプラスミドDNAを抽出、該プラスミドを制限酵素BglIIでそれぞれ切断し、挿入断片を確認した。この結果、クローニングベクターpHSG298約27kbのDNA断片に加え、pCASEori配列の約14kbDNA断片が認められた。pCASE1ori配列を含むクローニングベクターをpCRB22と命名した。クローニングベクターpCRB207の構築コリネバクテリウムグルタミカムR由来のグリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼglyceraldehyde3phosphatedehydrogenaseをコードするgapA遺伝子のプロモーター配列以降、PgapAと記すを含むDNA断片、及びクローニングベクターpKK2233ファルマシア社製由来rrnBT1T2双方向ターミネーター配列以降、ターミネーター配列と記すを含むDNA断片を以下の方法により増幅した。PCRに際して、PgapA配列及びターミネーター配列をそれぞれクローン化するべく、配列番号7PgapA配列、配列番号8ターミネーター配列を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを合成し、使用した。PgapA配列増幅用プライマー;5’CTCTGTCGACCCGAAGATCTGAAGATTCCTG3’配列番号9;5’CTCTGTCGACGGATCCCCATGGTGTGTCTCCTCTAAAGATTGTAGG3’配列番号10尚、プライマーa3には、SalI制限酵素部位が、プライマーb3には、SalI、BamHI及びNcoI制限酵素部位が付加されている。ターミネーター配列増幅用プライマーa4;5’CTCTGCATGCCCATGGCTGTTTTGGCGGATGAGAGA3’配列番号11b4;5’CTCTGCATGCTCATGAAAGAGTTTGTAGAAACGCAAAAAGG3配列番号12尚、プライマーa4には、SphI及びNcoI制限酵素部位が、プライマーb4には、SphI及びBspHI制限酵素部位が付加されている。鋳型DNAは、コリネバクテリウムグルタミカムRから抽出した染色体DNA及びpKK2233プラスミドファルマシア社製を用いた。実際のPCRは、サーマルサイクラーGeneAmpPCRSystem9700を用い、反応試薬としてTaKaRaLATaqタカラバイオ株式会社製を用いて下記の条件で行った。上記で生成した反応液10μlを08アガロースゲルにより電気泳動を行い、PgapA配列の場合約06kb、ターミネーター配列の場合、約04kbのDNA断片が検出できた。上記のPCRにより増幅したコリネバクテリウムグルタミカムR由来PgapA配列を含む約06kbDNA断片10μlとクローニングベクターpCRB22約41kbを各々制限酵素SalIで切断し、70°Cで10分処理させることにより制限酵素を失活させた後、両者を混合し、これにT4DNAリガーゼ10×緩衝液1μl、T4DNAリガーゼタカラバイオ株式会社製1unitの各成分を添加し、滅菌蒸留水で10μlにして、15°Cで3時間反応させ、結合させた。これをライゲーションB液とした。得られたライゲーションB液を、塩化カルシウム法JournalofMolecularBiology53159によりエシェリヒアコリJM109を形質転換し、カナマイシン50μgmlを含むLB寒天培地1ポリペプトン、05酵母エキス、05塩化ナトリウム、および15寒天に塗布した。培地上の生育株を常法により液体培養し、培養液よりプラスミドDNAを抽出、該プラスミドを制限酵素SalIでそれぞれ切断し、挿入断片を確認した。この結果、クローニングベクターpCRB22約41kbのDNA断片に加え、PgapA配列の約06kbDNA断片が認められた。PgapA配列を含むクローニングベクターをpCRB206と命名した。上記PCRにより増幅したpKK2233プラスミド由来ターミネーター配列を含む約04kbDNA断片10μlを制限酵素NcoI及びBspHIで、上述のクローニングベクターpCRB2062μlを制限酵素NcoIで切断し、70°Cで10分処理させることにより制限酵素を失活させた後、両者を混合し、これにT4DNAリガーゼ10×緩衝液1μl、T4DNAリガーゼタカラバイオ株式会社製1unitの各成分を添加し、滅菌蒸留水で10μlにして、15°Cで3時間反応させ、結合させた。これをライゲーションC液とした。得られたライゲーションC液を、塩化カルシウム法JournalofMolecularBiology53159によりエシェリヒアコリJM109を形質転換し、カナマイシン50μgmlを含むLB寒天培地1ポリペプトン、05酵母エキス、05塩化ナトリウム、および15寒天に塗布した。培地上の生育株を常法により液体培養し、培養液よりプラスミドDNAを抽出、該プラスミドを制限酵素で切断し、挿入断片を確認した。この結果、クローニングベクターpCRB206約47kbのDNA断片に加え、ターミネーター配列の約04kbDNA断片が認められた。rrnBT1T2ターミネーター配列を含むクローニングベクターをpCRB207と命名した。クローニングベクターpCRB209の構築コリネバクテリウムグルタミカムR由来のgapAglyceraldehyde3phosphatedehydrogenaseA遺伝子のプロモーター以降、PgapAと記す配列を含むDNA断片を以下の方法により増幅した。PCRに際して、pCRB207配列をクローン化するべく、配列番号13pCRB207を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを合成し、使用した。pCRB207配列増幅用プライマーa5;5’CTCTCATATGCTGTTTTGGCGGATGAGAG3’配列番号14b5;5’CTCTCATATGGTGTCTCCTCTAAAGATTGTAGG3’配列番号15尚、プライマーa5及びb5にはNdeI制限酵素部位が付加されている。鋳型DNAは、gapAプロモーター及びrrnBT1T2ターミネーター配列を含有するクローニングベクターpCRB207を用いた。実際のPCRは、サーマルサイクラーGeneAmpPCRSystem9700を用い、反応試薬としてTaKaRaLATaq宝酒造株式会社製を用いて下記の条件で行った。上記で生成した反応液10μlを08アガロースゲルにより電気泳動を行い、クローニングベクターpCRB207配列を含む約51kbのDNA断片が検出できた。上記のPCRにより増幅したpCRB207由来遺伝子を含む約51kbDNA断片10μlを制限酵素NdeIで切断し、70°Cで10分処理させることにより制限酵素を失活させた後、これにT4DNAリガーゼ10×緩衝液1μl、T4DNAリガーゼ宝酒造株式会社製1unitの各成分を添加し、滅菌蒸留水で10μlにして、15°Cで3時間反応させ、結合させた。これをライゲーションD液とした。得られたライゲーションD液を、塩化カルシウム法JournalofMolecularBiology53159によりエシェリヒアコリJM109を形質転換し、カナマイシン50μgmlを含むLB寒天培地1ポリペプトン、05酵母エキス、05塩化ナトリウム、および15寒天に塗布した。この培地上の生育株を常法により液体培養し、培養液よりプラスミドDNAを抽出、該プラスミドを制限酵素NdeIで切断し、制限酵素サイトの挿入を確認した。PgapA配列及びrrnBT1T2ターミネーター配列を含むクローニングベクタ-をpCRB209と命名した。アニリン生産遺伝子のクローニングバチラスサブチリス由来のアニリン生産遺伝子のクローニングバチラスサブチリス由来のアミノベンゾエートデカルボキシラーゼをコードするbsdBCD以降、decBSと記載遺伝子を含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、decBS遺伝子をクローン化するべく、配列番号16バチラスサブチリスdecBS遺伝子を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystems社製394DNARNAシンセサイザーsynthesizerを用いて合成し、使用した。decBS遺伝子増幅用プライマーa6;5’CTCTCATATGAAAGCAGAATTCAAGCGTAAAG3’配列番号17b6;5’CTCTCATATGGATCAAGCCTTTCGTTCCG3’配列番号18尚、プライマーa6及びb6には、NdeI制限酵素部位が付加されている。ラクトバチルスラムノーサス由来のアニリン生産遺伝子のクローニングラクトバチルスラムノーサス由来のアミノベンゾエートデカルボキシラーゼをコードするubiDX以降、decLRと記載遺伝子を含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、decLR遺伝子をクローン化するべく、配列番号19ラクトバチルスラムノーサスdecLR遺伝子を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystems社製394DNARNAシンセサイザーsynthesizerを用いて合成し、使用した。decLR遺伝子増幅用プライマーa7;5’CTCTCATATGACAGCATCACCTTGGG3’配列番号20b7;5’CTCTCATATGTCATCTTAACGACGCTCCATTC3’配列番号21尚、プライマーa7及びb7には、NdeI制限酵素部位が付加されている。ラクトバチルスブレビス由来のアニリン生産遺伝子のクローニングラクトバチルスブレビス由来のアミノベンゾエートデカルボキシラーゼをコードするLVIS1987LVIS1986以降、decLBと記載遺伝子を含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、decLB遺伝子をクローン化するべく、配列番号22ラクトバチルスブレビスdecLB遺伝子を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystems社製394DNARNAシンセサイザーsynthesizerを用いて合成し、使用した。decLB遺伝子増幅用プライマーa8;5’CTCTCATATGGTAAATGATCCTTATGATTTACGAAAAG3’配列番号23b8;5’CTCTCATATGCTAATCTCCCTCCCAACG3’配列番号24尚、プライマーa8及びb8には、NdeI制限酵素部位が付加されている。シュードモナスプチダ由来のアニリン生産遺伝子のクローニングシュードモナスプチダ由来のアミノベンゾエートデカルボキシラーゼをコードするubiD以降、decPPと記載遺伝子を含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、decPP遺伝子をクローン化するべく、配列番号25シュードモナスプチダdecPP遺伝子を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystems社製394DNARNAシンセサイザーsynthesizerを用いて合成し、使用した。decPP遺伝子増幅用プライマーa9;5’CTCTCATATGAACGGGCCGGAAC3’配列番号26b9;5’CTCTCATATGTCAATCATCCACCCCGAAG3’配列番号27尚、プライマーa9及びb9には、NdeI制限酵素部位が付加されている。エシェリキアコリ由来のアニリン生産遺伝子のクローニングエシェリキアコリ由来のアミノベンゾエートデカルボキシラーゼをコードするpurEK以降、decECと記載遺伝子を含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、decEC遺伝子をクローン化するべく、配列番号28エシェリキアコリdecEC遺伝子を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystems社製394DNARNAシンセサイザーsynthesizerを用いて合成し、使用した。decEC遺伝子増幅用プライマーa10;5’CTCTCATATGTCTTCCCGCAATAATCCG3’配列番号29b10;5’CTCTCATATGTTAACCGAACTTACTCTGCGC3’配列番号30尚、プライマーa10及びb10には、NdeI制限酵素部位が付加されている。サッカロマイセスセレビシエ由来のアニリン生産遺伝子のクローニングサッカロマイセスセレビシエ由来のアミノベンゾエートデカルボキシラーゼをコードするADE2以降、decSCと記載遺伝子を含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、decSC遺伝子をクローン化するべく、配列番号31サッカロマイセスセレビシエdecSC遺伝子を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystems社製394DNARNAシンセサイザーsynthesizerを用いて合成し、使用した。decSC遺伝子増幅用プライマー;5’CTCTCCATGGATTCTAGAACAGTTGGTATATTAG3’配列番号32;5’CTCTCCATGGTTACTTGTTTTCTAGATAAGCTTCGTAAC3’配列番号33尚、プライマーa11及びb11には、NcoI制限酵素部位が付加されている。エンテロバクタークロアカエ由来のアニリン生産遺伝子のクローニングエンテロバクタークロアカエ由来のアミノベンゾエートデカルボキシラーゼをコードするECL04083ECL04082ECL04081以降、decECLと記載遺伝子を含むDNA断片を以下のPCR法により増幅した。PCRに際して、decECL遺伝子をクローン化するべく、配列番号34エンテロバクタークロアカエdecECL遺伝子を基に、それぞれ下記の一対のプライマーを、アプライドバイオシステムズAppliedBiosystems社製394DNARNAシンセサイザーsynthesizerを用いて合成し、使用した。decECL遺伝子増幅用プライマーa12;5’CTCTCATATGAGATTGATCGTGGGAATGAC3’配列番号35b12;5’CTCTCATATGTTACAGCAATGGCGGAATGG3’配列番号36尚、プライマーa12及びb12には、NdeI制限酵素部位が付加されている。鋳型DNAは、バチラスサブチリスは、NITEBiologicalResourceCenterNBRCより入手したバチルスサブチリスNBRC14144から抽出した染色体DNAを用いた。ラクトバチルスラムノーサスは、NITEBiologicalResourceCenterNBRCより入手したラクトバチルスラムノーサスNBRC3425から抽出した染色体DNAを用いた。ラクトバチルスブレビスは、AmericanTypeCultureCollectionより入手したラクトバチラスブレビスATCC367から抽出した染色体DNAを用いた。シュードモナスプチダは、AmericanTypeCultureCollectionより入手したシュードモナスプチダATCC47054から抽出した染色体DNAを用いた。エシェリキアコリは、エシェリキアコリK12MG1655から抽出した染色体DNAを用いた。サッカロマイセスセレビシエは、NITEBiologicalResourceCenterNBRCより入手したサッカロマイセスセレビシエNBRC10217から抽出した染色体DNAを用いた。エンテロバクタークロアカエは、NITEBiologicalResourceCenterNBRCより入手したエンテロバクタークロアカエNBRC13535から抽出した染色体DNAを用いた。実際のPCRは、サーマルサイクラーGeneAmpPCRSystem9700を用い、反応試薬としてTaKaRaLATaqタカラバイオ株式会社製を用いて下記の条件で行った。バチラスサブチリスdecBS遺伝子を増幅する場合はプライマーとの組み合わせ、ラクトバチルスラムノーサスdecLR遺伝子を増幅する場合はプライマーと、ラクトバチルスブレビスdecLB遺伝子を増幅する場合はプライマーとの組み合わせ、シュードモナスプチダdecPP遺伝子を増幅する場合はプライマーとの組み合わせ、エシェリキアコリdecEC遺伝子を増幅する場合はプライマーとの組み合わせ、サッカロマイセスセレビシエdecSC遺伝子を増幅する場合はプライマーとの組み合わせ、エンテロバクタークロアカエdecECL遺伝子を増幅する場合はプライマーとの組み合わせで行った。上記で生成した反応液10μlを08アガロースゲルにより電気泳動を行い、バチラスサブチリスdecBS遺伝子の場合約23kb、ラクトバチルスラムノーサスdecLR遺伝子の場合約21kb、ラクトバチルスブレビスdecLB遺伝子の場合約20kb、シュードモナスプチダdecPP遺伝子の場合約06kb、エシェリキアコリdecEC遺伝子の場合約16kb、サッカロマイセスセレビシエdecSC遺伝子の場合約17kb、エンテロバクタークロアカエdecECL遺伝子の場合約23kbのDNA断片が検出できた。アニリン生産遺伝子発現プラスミドの構築アニリン生産遺伝子のpCRB207へのクローニング上記項に示したPCRにより増幅したサッカロマイセスセレビシエ株由来decSC遺伝子を含む約17kbのDNA断片10μl及びPgapAプロモーターを含有するクローニングベクターpCRB2072μlを制限酵素NcoIで切断し、70°Cで10分処理させることにより制限酵素を失活させた後、両者を混合し、これにT4DNAリガーゼ10×緩衝液1μl、T4DNAリガーゼタカラバイオ株式会社製1unitの各成分を添加し、滅菌蒸留水で10μlにして、15°Cで3時間反応させ、結合させた。これをライゲーションE液とした。得られたライゲーションE液を、塩化カルシウム法JournalofMolecularBiology53159によりエシェリヒアコリJM109を形質転換し、カナマイシン50μgmlを含むLB寒天培地1ポリペプトン、05酵母エキス、05塩化ナトリウム、および15寒天に塗布した。培地上の生育株を常法により液体培養し、培養液よりプラスミドDNAを抽出、該プラスミドを制限酵素でそれぞれ切断し、挿入断片を確認した。この結果、プラスミドpCRB207約51kbのDNA断片に加え、サッカロマイセスセレビシエ株由来decSC遺伝子ライゲーションE液の場合、長さ約17kbの挿入断片が認められた。サッカロマイセスセレビシエ株由来decSC遺伝子を含むプラスミドをpCRB207decSCと命名した図1。アニリン生産遺伝子のpCRB209へのクローニング上記項に示したPCRにより増幅したバチラスサブチリス株由来decBS遺伝子を含む約23kbのDNA断片、ラクトバチルスラムノーサス株由来decLR遺伝子を含む約21kbのDNA断片、ラクトバチルスブレビス株由来decLB遺伝子を含む約20kbのDNA断片、シュードモナスプチダ株由来decPP遺伝子を含む約06kbのDNA断片、エシェリキアコリ株由来decEC遺伝子を含む約16kbのDNA断片、エンテロバクタークロアカエ株由来decECL遺伝子を含む約23kbのDNA断片10μl及びPgapAプロモーターを含有するクローニングベクターpCRB2092μlを各々制限酵素NdeIで切断し、70°Cで10分処理させることにより制限酵素を失活させた後、両者を混合し、これにT4DNAリガーゼ10×緩衝液1μl、T4DNAリガーゼタカラバイオ株式会社製1unitの各成分を添加し、滅菌蒸留水で10μlにして、15°Cで3時間反応させ、結合させた。これをライゲーションF液、G液、H液、I液、J液及びK液とした。得られた6種のライゲーションF液、G液、H液、I液、J液及びK液それぞれを、塩化カルシウム法JournalofMolecularBiology53159によりエシェリヒアコリJM109を形質転換し、カナマイシン50μgmlを含むLB寒天培地1ポリペプトン、05酵母エキス、05塩化ナトリウム、および15寒天に塗布した。各々の培地上の生育株を常法により液体培養し、培養液よりプラスミドDNAを抽出、該プラスミドを制限酵素でそれぞれ切断し、挿入断片を確認した。この結果、プラスミドpCRB209約51kbのDNA断片に加え、バチラスサブチリス株由来decBS遺伝子ライゲーションF液の場合、長さ約23kbの挿入断片が、ラクトバチルスラムノーサス株由来decLR遺伝子ライゲーションG液の場合、長さ約21kbの挿入断片が、ラクトバチルスブレビス株由来decLB遺伝子ライゲーションH液の場合、長さ約20kbの挿入断片が、シュードモナスプチダ株由来decPP遺伝子ライゲーションI液の場合、長さ約06kbの挿入断片が、エシェリキアコリ株由来decEC遺伝子ライゲーションJ液の場合、長さ約16kbの挿入断片が、エンテロバクタークロアカエ株由来decECL遺伝子ライゲーションK液の場合、長さ約23kbの挿入断片が認められた。バチラスサブチリス株由来decBS遺伝子を含むプラスミドをpCRB209decBS、ラクトバチルスラムノーサス株由来decLR遺伝子を含むプラスミドをpCRB209decLR、ラクトバチルスブレビス株由来decLB遺伝子を含むプラスミドをpCRB209decLB、シュードモナスプチダ株由来decPP遺伝子を含むプラスミドをpCRB209decPP、エシェリキアコリ株由来decEC遺伝子を含むプラスミドをpCRB209decEC、エンテロバクタークロアカエ株由来decECL遺伝子を含むプラスミドをpCRB209decECLとそれぞれ命名した図1。アニリン生産遺伝子導入株の構築上述のプラスミド6種類pCRB209decBS、pCRB209decLR、pCRB209decLB、pCRB209decPP、pCRB209decEC、pCRB207decSC及びpCRB209decECLを用いて、電気パルス法AgricBiolChem、Vol54、443447及びResMicrobiol、Vol144、181185により、コリネバクテリウムグルタミカムR株を形質転換し、カナマイシン50μgmlを含むA寒天培地に塗布した。この培地上の生育株を常法により液体培養し、培養液よりプラスミドDNAを抽出、該プラスミドを制限酵素で切断し、挿入断片を確認した。この結果、上記で作製のプラスミドpCRB209decBS、pCRB209decLR、pCRB209decLB、pCRB209decPP、pCRB209decEC、pCRB207decSC及びpCRB209decECLの導入が認められた。pCRB209decBSプラスミドを導入した株をコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI1、pCRB209decLRプラスミドを導入した株をコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI2、pCRB209decLBプラスミドを導入した株をコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI3、pCRB209decPPプラスミドを導入した株をコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI4、pCRB209decECプラスミドを導入した株をコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI5、pCRB207decSCプラスミドを導入した株をコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI6、pCRB209decECLプラスミドを導入した株をコリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI7と命名した。コリネバクテリウムグルタミカムCorynebacteriumglutamicumANI1は、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足258郵便番号2920818の独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託した受託日:2010年11月16日、受託番号:NITEBP1001。実施例2コリネバクテリウムグルタミカムアニリン生産遺伝子導入株のアントラニル酸からのアニリン生成実験実施例1において作製したコリネバクテリウムグルタミカムANI1~ANI7株を、カナマイシン50μgmlを含むA寒天培地2CO2g、2SO47g、KH2PO405g、K2HPO405g、MgSO47H2O05g、006Fe2SO47H2O0042MnSO42H2O1ml、002biotinsolution1ml、001thiaminsolution2ml、yeastextract2g、vitaminassaycasaminoacid7g、glucose40g、寒天15gを蒸留水1Lに懸濁に塗布し、33°C、20時間暗所に静置した。上記のプレートで生育したコリネバクテリウムグルタミカムANI1~ANI7株を、カナマイシン50μgmlを含有したA液体培地10mlの入った試験管に一白金耳植菌し、33°Cにて20時間、好気的に振盪培養を行った。このようにして培養増殖されたそれぞれの菌体は、遠心分離により菌体を回収した。得られた菌体を、10mlのBT液体培地2CO2g、2SO47g、KH2PO405g、K2HPO405g、MgSO47H2O05g、006Fe2SO47H2O0042MnSO42H2O1ml、002biotinsolution1ml、001thiaminsolution2mlで2回洗浄した後、OD61010となるようにBT液体培地で懸濁した。この菌体懸濁液を容量15ml遠心管に入れ、還元条件下酸化還元電位;450mV、基質としてアントラニル酸を25mMとなるように添加し、33°Cに保った水浴中で攪拌しながら6時間反応させた。サンプリングした反応液を遠心分離し、得られた上清液を用いてアニリンをGCMSによって定量した。この結果、コリネバクテリウムグルタミカムANI1~ANI7株は、還元条件下における反応において、下記表1のようにアニリンを生成していた。なお、カナマイシンを培地に添加しないこと以外は上記と同様の実験をコリネバクテリウムグルタミカム野生株に対して行ったところ、アニリン生成は認められなかった。実施例3コリネバクテリウムグルタミカムアニリン生産遺伝子導入株の4アミノベンゾエートからのアニリン生成実験実施例1において作製したコリネバクテリウムグルタミカムANI1~ANI7株を、カナマイシン50μgmlを含むA寒天培地2CO2g、2SO47g、KH2PO405g、K2HPO405g、MgSO47H2O05g、006Fe2SO47H2O0042MnSO42H2O1ml、002biotinsolution1ml、001thiaminsolution2ml、yeastextract2g、vitaminassaycasaminoacid7g、glucose40g、寒天15gを蒸留水1Lに懸濁に塗布し、33°C、20時間暗所に静置した。上記のプレートで生育したコリネバクテリウムグルタミカムANI1~ANI7株を、カナマイシン50μgmlを含有したA液体培地10mlの入った試験管に一白金耳植菌し、33°Cにて20時間、好気的に振盪培養を行った。このようにして培養増殖されたそれぞれの菌体は、遠心分離により菌体を回収した。得られた菌体を、10mlのBT液体培地2CO2g、2SO47g、KH2PO405g、K2HPO405g、MgSO47H2O05g、006Fe2SO47H2O0042MnSO42H2O1ml、002biotinsolution1ml、001thiaminsolution2mlで2回洗浄した後、OD61010となるようにBT液体培地で懸濁した。この菌体懸濁液を容量15ml遠心管に入れ、還元条件下酸化還元電位;450mV、基質として4アミノベンゾエートを5mMとなるように添加し、33°Cに保った水浴中で攪拌しながら6時間反応させた。サンプリングした反応液を遠心分離し、得られた上清液を用いてアニリンをGCMSによって定量した。この結果、コリネバクテリウムグルタミカムANI1~ANI7株は、還元条件下における反応において、下記表2のようにアニリンを生成していた。なお、カナマイシンを培地に添加しないこと以外は上記と同様の実験をコリネバクテリウムグルタミカム野生株に対して行ったところ、アニリン生成は認められなかった。