"ナチュラルキラーT細胞のリガンドを積載したB細胞、前記リガンドと抗原を積載したB細胞または前記リガンドを積載して抗原を発現するB細胞を含む、免疫治療及び予防用ワクチン。ナチュラルキラーT細胞のリガンドが、アルファガラクトロノシルセラミド、アルファグルクロノシルセラマイド、ホスファチジリノシトルテトラマンノサイド、イソグロボトリヘキソシルセラミド、ガングリオサイドGD3、ホスファチジルコリン、ベータガラクトシルセラミド、リポホスホグリカン、グリコイノシトールホスホリピド、アルファガラクトシルセラミドの類似体のベータアノマガラクトシルセラミド及びアルファアノマガラクトシルセラミド、バクテリア脂質抗原及びアルファガラクトシルセラミドの変異体からなる群から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。前記抗原が、病原菌、ウイルス及び寄生虫を含む病原体由来の抗原または癌抗原であることを特徴とする、請求項1に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。病原菌由来の抗原が、百日咳菌抗原、破傷風菌抗原、ジフテリア菌抗原、ヘリコバクテリアピロリ抗原、肺炎菌抗原、結核菌抗原、コレラ抗原、葡萄状球菌抗原、赤痢菌抗原、ボレリア抗原、カンジダ抗原及びプラスモジウム抗原からなる群から選択されることを特徴とする、請求項3に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。ウイルス由来の抗原が、インフルエンザウイルス抗原、ヒトパピロマウイルス抗原、小水疱性口内炎ウイルス抗原、サイトメガロウイルス抗原、肝炎ウイルス抗原,B,C,D及びG抗原、呼吸器多核体ウイルス抗原、ヘルペスシンプレックスウイルス抗原、ヒト免疫欠乏ウイルス抗原及びその組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする、請求項3に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。癌抗原が、HPVE6E7、gp100、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質1、チロシナーゼ関連タンパク質2、MAGE、MUC1、CEA、p53、アルファフェトプロテイン及びHer2neuからなる群から選択されることを特徴とする、請求項3に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。抗原が、ペプチド、脂質多糖類、多糖類、糖蛋白質またはポリヌクレオチドの形態を有することを特徴とする、請求項1に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。前記抗原の発現が、組換えウイルスによって導入されて発現することを特徴とする、請求項1に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。前記組換えウイルスが、抗原を発現する遺伝子が導入されたアデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、シンドビスウイルスであることを特徴とする、請求項8に記載の免疫治療及び予防用ワクチン。アルファガラクトシルセラミドが積載されたB細胞を媒介にするナチュラルキラーT細胞活性化剤。アルファガラクトシルセラミドを積載して癌抗原を発現するB細胞を含む細胞毒性反応誘導剤。本発明の目的は、ナチュラルキラーT細胞リガンド、特にアルファガラクトシルセラミドと抗原を積載したB細胞によって活性化したナチュラルキラーT細胞を通じて、B細胞の免疫寛容性を免疫原性に変化させることにより、抗原を提示するB細胞を通じて抗原特異的な免疫反応を誘導することができる免疫予防及び治療用ワクチンを提供するものである。本発明は、ナチュラルキラーT細胞のリガンドと抗原を積載したB細胞を含む免疫予防治療用ワクチン及び抗癌用ワクチンを提供する。また、本発明は、ナチュラルキラーT細胞のリガンドを積載して癌抗原を発現するB細胞を媒介にする抗癌用ワクチンを提供する。また、本発明は、アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞を媒介にするナチュラルキラーT細胞活性化剤を提供する。同時に、本発明は、癌抗原を発現するB細胞を含む細胞毒性反応誘導剤を提供する。以下、本発明を詳しく説明する。本発明は、ナチュラルキラーT細胞のリガンドを積載したB細胞または、ナチュラルキラーT細胞のリガンドと抗原を積載したB細胞を含む、免疫予防治療用ワクチン及び抗癌用ワクチンを提供する。前記のナチュラルキラーT細胞のリガンドは、スピンゴモナス属由来のアルファガラクトロノシルセラミドとアルファグルクロノシルセラマイド。Mツバクロシス由来のホスファチジリノシトルテトラマンノサイド。自家抗原であるイソグロボトリヘキソシルセラミドとガングリオサイドGD3、ホスファチジルコリン、ベータガラクトシルセラミド、Leishmania表面糖結合リポホスホグリカンとグリコイノシトールホスホリピド、アルファガラクトシルセラミドの類似体のベータアノマガラクトシルセラミド等とアルファアノマガラクトシルセラミド等、アルファガラクトシルセラミドの変異体及びバクテリア脂質抗原、例えばノカルデアファルシニカ由来のグルコースモノマイコレートを含む。すでに、アルファガラクトシルセラミドが積載された樹状細胞が、不変性ナチュラルキラーT細胞を活性化させるということは公知の事実なので巻,6172頁、本発明者等は、アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞が前記の樹状細胞と類似の効果を示すかどうかを確認した。マウスからCD19を発現するB細胞と樹状細胞を分離して、アルファガラクトシルセラミド及びナチュラルキラーT細胞ハイブリドーマとともに培養した後、培養液内のIL2濃度を測定した結果、アルファガラクトシルセラミドを積載した樹状細胞とB細胞の両方が、ナチュラルキラーT細胞ハイブリドーマを刺激してIL2を生成した。したがって、BαGalCer及びDCαGalCerの両方が、体外で不変性ナチュラルキラーT細胞を活性化させることができることを確認した。BαGalCer及びDCαGalCer投与が体内で免疫細胞を活性化させることができるかどうかを確認するために、C57BL6マウスから取得したB細胞とDCを使用して製造したBαGalCerまたはDCαGalCerを同種のマウスに静脈注射して、エリスポットを通じてIL4及びIFNγレベルを測定した。詳細には、野生型C57BL6またはJα281マウスにビヒクル、αGalCer、αGalCerを積載したB細胞または、αGalCerを積載した樹状細胞を静脈注射した。一週間後、脾臓細胞を摘出して単一細胞を作製した後にエリスポット用プレートに入れて、ビヒクルまたはαGalCerを入れて刺激した。以後は、製造社のマニュアルによってIL4とIFNγを生成する細胞を測定するためのエリスポット試験を実施した。その結果、BαGalCer及びDCαGalCerグループ全てで、IL4及びIFNγを生成する細胞を顕著に多く誘導した。しかし、不変性ナチュラルキラーT細胞が欠如したJα281マウスの場合には、正常マウスと異なり前記のようなサイトカインを生成する細胞が誘導されない。これは、IFNγとIL4を生成する細胞が、不変性ナチュラルキラーT細胞に依存的に誘導されるということを示唆する。本発明者等は、BαGalCerを体内で投与した時に誘導されるナチュラルキラーT細胞の活性化によってB細胞がどんな影響を受けるのかを調べるために、アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞をCFSEで標識して静脈で免疫化されないマウスに移入して、24時間または48時間後に脾臓細胞の免疫細胞中でCFSE細胞上の補助刺激分子をフローサイトメーターで分析した。その結果、CD80はどんな変化もなかったが、CD86は高いレベルで発現が誘導されCD40及びMHCclassII分子も弱く増加した。すなわち、BαGalCerを体内に投与すると、24時間または48時間後にB細胞が活性化することを確認した。本発明者等は、アルファガラクトシルセラミドとMHCI分子に結合する抗原のエピトープペプチドをB細胞に一緒に積載することで、ペプチド特異的なCD8T細胞を刺激して抗原特異的な細胞分解を起こすことができるかどうか調べた。そのために、CFSEで標識されたOVA特異的なCD8T細胞をマウスに移植した後、B細胞単独、BαGalCer、ビヒクルペプチドを添加したB細胞またはαGalCerペプチドを添加したB細胞を静脈注射して、脾臓とリンパ節から取得したリンパ球からCD8T細胞反応を測定した。その結果、B細胞単独またはBαGalCerを投与した群では、OVA特異的なCD8T細胞の分裂がほとんど誘導されず、Bpepを投与した群では相当に多いCD8T細胞の分裂を誘導し、BαGalCerpepを投与した群では細胞の顕著な分裂が現れ、分裂した細胞の40以上がIL2を生成し、90以上がIFNγを生成し、そのレベルがBpep群に比べて非常に高かった。前記結果は、B細胞にアルファガラクトシルセラミドとペプチドを一緒に積載することで、CD8T細胞をずっと高いレベルで活性化させることができることを示す。本発明者等は、マウスにB細胞単独、BαGalCer、BpepまたはBαGalCerpepを各々静脈投与した後、細胞毒性免疫反応を誘導することができるかどうかを調べるために、細胞毒性Tリンパ球活性を測定した。その結果、BαGalCerpepを投与した群でのみ、ペプチドが積載された標的を完全に破壊し、ペプチドに対するIFNγを生成するCD8T細胞が顕著に増加することを観察した。また、同一抗原で体外で再刺激した場合、B細胞単独またはBαGalCerを投与したマウスの場合には、正常に免疫反応が誘導されてペプチド特異的なIFNγを生産するCD8T細胞を誘導した一方、Bpepを投与したマウスはIFNγを生産するCD8T細胞の増加が見られず、BαGalCerpepを投与したマウスはB細胞単独またはBαGalCerを投与した群に比べて非常に多いペプチドに反応するCD8T細胞を形成した。本発明者等は、B細胞を媒介にするワクチンの細胞毒性効果を樹状細胞ワクチンの細胞毒性効果と比べるために、細胞毒性Tリンパ球分析を使用して、完全に標的を溶解するのに必要な最小限の細胞数を測定した。その結果、樹状細胞の広い表面積を考慮する時、BαGalCerpep投与群は、DCαGalCerpep投与群と類似の効率で体内で細胞毒性を起こすことを確認した。これと共に、体内細胞毒性の効果がDCpepとDCαGalCerpep投与群が類似していたが、これはαGalCerを樹状細胞に積載することが、ペプチドを積載した樹状細胞のワクチン効率を増加させないということを意味する。本発明者等は、細胞毒性Tリンパ球反応を誘導するのに関与する免疫細胞の種類を確認するために、各々の免疫細胞を除去する抗体を投与した後、BαGalCerpepで免疫化した。その結果、CD4T細胞またはNK11細胞除去が、細胞毒性Tリンパ球反応誘導を阻害しない一方、CD8T細胞を除去すると標的細胞の破壊が起きなかった。本発明者等は、ペプチドを積載したB細胞が抗原提示細胞として機能するのか、そうでなければB細胞が運んだペプチドを樹状細胞が回収して細胞毒性Tリンパ球反応を誘導するのかを調べた。そのために、OVAのCTLエピトープペプチドをMHCIに積載することができるが、H2K領域の突然変異によってCD8T細胞がMHCIペプチド複合体を認識することができないbm1マウスから取得したB細胞を使用した結果、前記細胞は、αGalCerと反応してナチュラルキラーT細胞の活性化を刺激することを確認した。また、野生型のB細胞から準備したBαGalCerpepを野生型マウスに注射すると、体内でOVA特異的な細胞毒性が完璧に生成されるが、bm1マウスのB細胞から準備したBαGalCerpepを野生型マウスに注射すると、OVA特異的な細胞毒性活性を生成することができないので、B細胞が抗原提示細胞として機能することを確認した。続いて、本発明者等は、αGalCerとペプチドを個別に投与した場合、そして一緒に投与した場合に、細胞毒性Tリンパ球を形成することができるかどうかを調査した。その結果、BαGalCerとBpepを一緒に投与したマウスでは、体内細胞毒性が全く誘導されないことを確認した。これは、ペプチドとαGalCerが同一なB細胞によって提示されることが、OVA特異的な細胞毒性を生成するのに必須であることを示す。本発明者等は、BαGalCerpepのワクチン投与が、抗癌免疫を誘導するかどうか調査した。まず、予防的抗癌免疫活性を試験するために、B細胞単独、BαGalCer、Bpep、BαGalCerpep、DCpep、またはDCαGalCerpepワクチンを投与してOVAを形質導入した黒色腫を皮下に移植した。その結果、BαGalCerを投与したマウスでは癌を形成した一方、BαGalCerpep、DCpep、またはDCαGalCerpepを投与したマウスでは癌が成長しなかった。続いて、最初に癌を移植してから70日になる時点で、生存したマウスに癌細胞を再び移植した結果、癌の成長が現れなかったが、これは、BαGalCerpepワクチン投与によって前記癌に対する記憶免疫反応を確立したことを示唆する。次に、BαGalCerpepワクチンを投与することで、すでに存在している癌を除去することができるかどうか調べたが、DCpep、DCαGalCerpepまたはBαGalCerpepワクチンを投与したマウスは、完璧に癌の成長を減少させることを観察した。本発明者等は、B細胞を媒介にするワクチン投与が、実際に癌抗原に適用され得るかどうかを調べるために、Her2neuモデルを使用した結果、αGalCer及びHer2neu6371を提示するB細胞を投与したマウス群で、体内Her2neuに対する細胞毒性が有意な水準で示されることを確認した。また、Her2neuを発現する癌細胞をマウスに注入した後、B細胞ワクチンを投与した結果、BαGalCerまたはBpepワクチン投与した場合には、B細胞単独投与群と比べて生存期間が若干延長されることが確認され、αGalCerとHer2neu6371を積載したB細胞を投与したマウスは、全体の実験期間の間生存することを観察した。また、癌を有したマウスをB細胞ワクチンまたは樹状細胞ワクチンで免疫化すると、αGalCerとHer2neu6371を積載したB細胞投与群は、樹状細胞ワクチンと類似の水準でHer2neuを発現する癌細胞の成長を抑制することを確認することができた。したがって、本発明のB細胞を媒介にするワクチン投与は、抗癌免疫の予防効果及び治療効果において樹状細胞を基盤にするワクチン程度に効率的であることを立証した。また、本発明は、ナチュラルキラーT細胞のリガンドを積載して抗原を発現するB細胞を含む免疫予防及び治療用ワクチン及び抗癌用ワクチンを提供する。ペプチドを積載した細胞ワクチンに比べてウイルスを媒介として全体抗原を導入した細胞ワクチンは、主組織適合性複合体の一倍体型に限らず、すべての人に適用可能であり、多くの抗原決定基に特異的な免疫反応を誘導することができる。特に、体液性免疫反応と細胞性免疫反応を同時に誘導することができるという長所がある。腫瘍関連抗原であるHer2neuを標的にしてHer2neuの細胞外領域及び細胞膜領域を発現する遺伝子を有したアデノウイルスでB細胞を感染させた結果、B細胞がアルファガラクトシルセラミドを提示するにおいても、特別な影響を及ぼさないことを確認した。また、免疫化して1週間過ぎた時点で、BとBαGalCerで免疫化されたマウス群では、標的細胞の分解を観察することができなかった一方、BAdHMとBAdHMαGalCerで免疫化されたマウス群では、細胞毒性T細胞反応を確認することができた。アルファガラクトシルセラミドが積載されたアデノウイルスで形質導入されたB細胞は、アデノウイルスで導入したB細胞に比べて、細胞毒性T細胞反応が多少高く長期間持続する傾向性を見せるが、有意な水準の差が現れないことから、細胞毒性T細胞反応を誘導するのにおいてペプチドを積載したB細胞ワクチンとは異なり、アルファガラクトシルセラミドの積載が決定的な役割を担当しないことを示している。しかし、アルファガラクトシルセラミドが積載されたB細胞ワクチンをマウスに投与すると、形質導入だけされたB細胞ワクチン投与群とは異なり、体内でNKT細胞を刺激して結果的にナチュラルキラー細胞を活性化させることを確認した。本発明者等は、B細胞ワクチンが細胞毒性T細胞を誘導する効率性を測定するために、完全な細胞毒性T細胞を誘導する水準以下で細胞ワクチンを投与した時に誘導される標的細胞の溶解程度を比較した。その結果、アデノウイルスで形質導入されたB細胞の場合、全体細胞数の約20程度だけが抗原提示細胞で機能することを勘案すると、抗原をアデノウイルスで導入したB細胞ワクチンは、ペプチドが積載されたB細胞ワクチンに比べて多数のB細胞投与が必要であるにもかかわらず、効率的に抗原特異的な細胞毒性T細胞反応を誘導することができると判断される。また、少数のB細胞が投与された時、アルファガラクトシルセラミドの積載でNKTの助けを受ける場合、標的細胞を溶解するのに多少有利であることを確認した。前記で癌抗原発現のためにB細胞に導入するウイルスは、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、シンドビスウイルス等が可能だが、これに限定されない。ウイルスを使用した方法以外にも、抗原遺伝子伝達で適用可能なものは、1DNAをリポソームに結合させて形質導入して酵素分解からDNAを保護したりエンドソームで吸収するようにする方法、2DNAにタンパク質で構成された分子コンジュゲートや合成リガンドを結合して細胞でDNAの伝達効率を高める方法[例:アシアログリコプロテイン、トランスフェリン、ポリマーIgA]、3PTDを使用した新しいDNA伝達システムで、細胞でDNAの伝達効率を高めることで、抗原遺伝子を伝達する方法[例:Mph1]、4前記方法以外にも、ペプチドを使用したり抗原タンパク質をB細胞に適用することで、B細胞が抗原を提示するようにできる。また、本発明は、アルファガラクトシルセラミドが積載されたB細胞を媒介にするナチュラルキラーT細胞活性化剤を提供する。前記と同様に、本発明のアルファガラクトシルセラミドが積載されたB細胞は、樹状細胞と同じく生体外でナチュラルキラーT細胞ハイブリドーマを刺激してIL2を生成し、生体内でも不変性ナチュラルキラーT細胞を活性化して結果的に免疫細胞の活性を誘導した。したがって、本発明のアルファガラクトシルセラミドが積載されたB細胞は、既存の樹状細胞と同じくナチュラルキラーT細胞活性化剤として使用することができる。併せて、本発明は、癌抗原を発現するB細胞を含む細胞毒性反応誘導剤を提供する。アデノウイルスで形質導入されたB細胞ワクチンは、細胞性免疫反応を誘導するためにペプチドを積載したB細胞ワクチンとは異なり、細胞性免疫反応及び体液性免疫反応を同時に誘導することができるという長所がある。AdHMで形質導入されたB細胞ワクチンが、Her2neu特異的な抗体を誘導することができるかどうかを調べるために、マウスをBAdHM及びBAdHMαGalCerで各々免疫化させた後、血清中の抗Her2neu抗体の力価を測定した結果、BAdHM及びBAdHMαGalCerの二つの集団全てで、長い間抗Her2neu抗体が高い力価で維持されることが観察され、B細胞及びBαGalCerと異なりBAdHM及びBAdHMαGalCerワクチン投与集団では、全て体液性免疫反応が生成されることを確認した。本発明者等は、マウスをB細胞ワクチンで免疫化した後、7日目にHer2neuを発現するマウス癌細胞を静脈注射して生存率を測定した結果、B細胞だけ投与を受けたマウス群に比べて、アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞の投与を受けたマウス群で、生存期間が多少延長され、癌抗原を発現するアデノウイルスで形質導入されたB細胞ワクチンで免疫化されたマウスで、すぐれた抗癌予防効果を確認することができた。したがって、アルファガラクトシルセラミドを積載してアデノウイルスで形質導入されたB細胞ワクチンに誘導された免疫反応が、効果的に癌を予防するということが分かった。次に、B細胞ワクチンの治療効果を確認するために、BALBcマウスを、B、BαGalCer、BAdHM、BAdHMαGalCerに各々免疫化した後、癌細胞を尾静脈に注射して肺癌を誘導した結果、B細胞だけ単独で投与を受けたマウス群が一番短い生存期間を示し、BαGalCerワクチン投与群もこれに似た傾向が観察された。BAdHMワクチンで免疫化されたマウス群は、B、BαGalCer投与群に比べて生存期間が延長されたが、完璧に癌の生成を抑制することはできなかった。一方、BAdHMαGalCer投与群は、他の投与群に比べて生存期間が有意的に増加した。したがって、B、BαGalCerまたはBAdHMの免疫化で誘導される抗癌効果に比べて優れた効果を示すことを確認した。本発明のワクチンは、ナチュラルキラーT細胞のリガンドとB細胞に追加で同一または類似の機能を示す有効成分を1種以上含むことができる。前記ワクチンは、投与のために前記記載した有効成分以外に追加で薬剤学的で許容可能な担体を1種以上含んで製造することができる。薬剤学的に許容可能な担体は、食塩水、リンゲル液、緩衝食塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エチルアルコール及びこれら成分中の1成分以上を混合して使用することができ、必要によって抗酸化剤、緩衝液、整菌剤等、他の通常の添加剤成分を添加することができる。また希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤及び潤滑剤を付加的に添加して、水溶液、懸濁液、乳濁液等のような注射用剤形等に製剤化することができる。一歩進んで、当分野の適正な方法でまたはレミントン、MackPublishingCompany、EastonPAに開示されている方法を使用して、各疾患によってまたは成分によって好ましく製剤化できる。本発明のワクチンは、非経口で投与することができ、非経口投与は、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射または胸部内注射注入方式による。非経口投与用剤形に製剤化するためには、本発明のナチュラルキラーT細胞のリガンドを積載したB細胞、ナチュラルキラーT細胞のリガンドとペプチドを積載したB細胞または癌抗原を発現するウイルスで感染されたB細胞は、安定剤または緩衝剤とともに混合して、溶液または懸濁液に製造して、それをアンプルまたはバイアルの単位投与型に製剤化する。ワクチンは、患者において免疫反応を刺激するのに効果的な量で投与することができる。例えば、ワクチンは、ヒトに一回ないし数回で投与することができ、投与量は細胞数が1×103個kg~1×109kg個、好ましくは1×104個kg~1×108個kgである。アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞ワクチンを製作する場合、B細胞1×106~1×107個ml当たりアルファガラクトシルセラミド1~2μgmlが入った培地を使用して培養する。アルファガラクトシルセラミドとペプチドを積載したB細胞ワクチンを製作する場合、B細胞1×106~1×107個ml当たりアルファガラクトシルセラミド1~2μgmlが入った培地を使用して、ペプチドはB細胞1×106~1×107個mlを1~10μgmlペプチドが含まれた培地で培養して細胞に積載させる。アルファガラクトシルセラミドは、げっ歯類及び猿で毒性を誘導しないものとみられている。2200μgKgのαGalCerが注入されたマウスでも、副作用は報告されていない。進行中の臨床試験でも、αGalCerの全身投与によって軽微な頭痛のような副作用が一部報告されたが、パラセタモールの投与によって予防することができ、これら対象においても微弱な全身的副作用が必ず現れるのではない。本発明でも、αGalCerは、用量制限毒性を惹起しないで、用量増加実験でも耐性を示し、αGalCerは安全な物質であると判断される。前記でペプチドは、ウイルス、バクテリア、菌類、寄生虫及び癌由来の抗原ペプチドが含まれ、ウイルスを媒介にして発現が誘導された抗原は、ウイルス、バクテリア、菌類、寄生虫及び癌由来の抗原が含まれる。抗原は、宿主の体内に入って来た時、宿主の免疫系によって認識されて免疫反応を起こすことができるすべての物質を意味する。抗原はまた、精製されたまたは精製されない形態で提供することができ、精製された形態で提供されることが好ましい。本発明は、病原体のタンパク質、組換えタンパク質、ペプチド、多糖類、糖蛋白質、脂質多糖類及びDNA分子、癌細胞、生ウイルス、死ウイルスを含む抗原にも適用することができる。下記の抗原リストは、実施例の癌抗原の代わりをして免疫反応を誘導する手段として提供でき、これに制限されるものではない:インフルエンザウイルス抗原、百日咳菌抗原、ヒトパピロマウイルス抗原、ヘリコバクテリアピロリ抗原、破傷風菌抗原、ジフテリア菌抗原、肺炎菌抗原、結核菌抗原、ヒト免疫欠乏ウイルス抗原、コレラ抗原、葡萄状球菌抗原、赤痢菌抗原、小水疱性口内炎ウイルス抗原、サイトメガロウイルス抗原、肝炎ウイルス抗原,B,C,D及びG抗原、呼吸器多核体ウイルス抗原、ヘルペスシンプレックス抗原またはその組み合わせ、ボレリア抗原、カンジダ抗原、プラスモジウム抗原。癌抗原は、正常な遺伝子の体細胞変異の結果生成されて、癌細胞の遺伝的不安定性に起因する産物である癌特異抗原と癌抗原の大部分を占めて癌細胞で発現が増加する抗原で、発生段階で一時的に発現されたり特定組職にだけ発現されるタンパク質で、正常に体内に存在する自家抗原である癌共有抗原が含まれる。癌特異抗原の例としては、HPVE6E7等の癌ウイルスによる癌抗原があり、癌共有抗原の例としては、gp100、チロシナーゼ、TRP1、TRP2、MAGE、MUC1、CEA、p53、アルファフェトプロテイン及びHer2neu等がある巻,3804頁。以下、本発明を実施例によって詳しく説明する。但し、下記の実施例は本発明を例示するだけのものであって、本発明の内容が下記の実施例に限定されるものではない。<実施例1>アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞及びナチュラルキラーT細胞間での両方向活性化<11>B細胞と樹状細胞のナチュラルキラーT細胞活性化効果の比較アルファガラクトシルセラミドが積載された樹状細胞が、不変性ナチュラルキラーT細胞を活性化させるということは公知の事実なので、本発明ではまず、このようなアルファガラクトシルセラミドが積載されたB細胞が前記の樹状細胞と類似の効果を示すかどうか確認して見た。本発明では、610週齢のメスのC57BL6とBALBcを使用した。OTI及びC57BL6bm1マウスは、ジャクソン研究所から購入し、Jα281マウス及びMHCIIマウスは、各々ソウル大学校ジョンドヒョン教授巻,123141頁と高麗大学校パクセホ教授から提供を受けた。すべてのマウスは、ソウル大学校薬学研究所動物センターの特定病原体がない条件下で保存した。また、抗体等は、GK15、243及びPK136ハイブリドーマから取得し、生体内で各々に対するリンパ球を除去するためにマウス当り150μgずつを腹腔に投与した。詳細には、各々のマウスからB細胞を純粋分離するために、マウスから脾臓を摘出した後、均質化して、脾臓細胞から抗CD11cマイクロビーズでCD11c細胞を除去した後、抗B220マイクロビーズを使用してB220細胞を分離した。前記細胞等は、99以上がCD19を発現する純粋に分離されたB細胞である。脾臓から樹状細胞を分離するために、マウスから摘出された脾臓をコラゲナーゼD及びDNaseIを含んだ7mlの培地を使用して37°Cで30分間反応させた後、EDTAを添加して5分間さらに反応させた。155Accudenz密度勾配を使用して脾臓から分離した細胞から樹状細胞を分離した。前記のように分離した細胞は、準備したアルファガラクトシルセラミドまたは溶媒とともに二酸化炭素培養器で14時間培養した後、ナチュラルキラーT細胞ハイブリドーマとともに24時間培養した。以後、培養液からナチュラルキラーT細胞ハイブリドーマの活性化指標であるIL2濃度をサンドイッチエライザ法で測定した。その結果、アルファガラクトシルセラミドを積載した樹状細胞は、DN32D3を刺激してIL2を生成した。これと類似に、アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞も、効率的にDN32D3を刺激してIL2を生成した。ハイブリドーマと抗原提示細胞を高い割合で混合したB細胞群で生成されるIL2レベルは、樹状細胞群で生成されるIL2の量と等しかったが、低い割合で混合した時は樹状細胞群のIL2量より少なく現れた。<12>ナチュラルキラーT細胞依存的免疫反応活性化確認本発明では、C57BL6マウスから取得したB細胞と、DCを使用して製造したBαGalCerまたはDCαGalCerを同種のマウスに静脈注射して、エリスポットを通じてIL4及びIFNγレベルを測定した。詳細には、野生型C57BL6またはJα281マウスにビヒクル、αGalCer、αGalCerを積載したB細胞またはαGalCerを積載した樹状細胞を静脈注射した。一週間後、脾臓細胞を摘出して単一細胞に作った後にエリスポット用プレートに入れて、ビヒクルまたはαGalCerを入れて6時間培養して刺激した。以後は、製造社のマニュアルによって、IL4とIFNγを生成する細胞を測定するためのエリスポット試験を実施した。その結果、BαGalCer及びDCαGalCerグループ全てで、IL4及びIFNγを生成する細胞を顕著に多く誘導した。しかし、不変性ナチュラルキラーT細胞が欠如したJα281マウスの場合には、正常マウスとは異なり前記のようなサイトカインを生成する細胞が誘導されない。これは、IFNγとIL4を生成する細胞が、不変性ナチュラルキラーT細胞依存的に誘導されるということを示唆する。<13>ナチュラルキラーT細胞活性化によるB細胞活性化確認本発明者等は、B細胞を注射すると生体内でどんな変化が起きるのかを調べるために、CFSEが標識されたBαGalCerを静脈投与した後、CFSE細胞で共刺激分子を分析した。詳細には、C57BL6の脾臓及びリンパ節から単一細胞を取得した後、抗CD11cマイクロビードを使用して脾臓及びリンパ器官から分離したリンパ球の中でCD11c細胞を除去して、抗B220マイクロビードを使用してB細胞を分離した後、その細胞を10μMのCFSEで標識して同種マウスの尾静脈にした。CFSE標識は、RPMI培地に適切な濃度でCFSEを希釈して、37°Cで15分間培養して標識した後、RPMI培地で3回洗浄して残余のCFSEを除去する方法で実施した。標識してから24時間後と48時間後、前記マウスのリンパ節や脾臓から分離したCFSE細胞の共刺激分子をフローサイトメーターで分析した。その結果、24時間以内にCD80はなんの変化もなかったが、CD86は高いレベルで発現が誘導され、CD40及びMHCIIの発現も弱く増加することを観察することができた。注射後48時間が経過した後にもCD80の増加は観察されなかったが、その他は24時間のレベルと大部分類似だった。すなわち、24時間以内にBαGalCerによって活性化したナチュラルキラーT細胞によって投与されたB細胞も活性化になる現象を確認することができた。前記実施例<11>、<12>と<13>の結果によって、BαGalCer及びDCαGalCerの全てでナチュラルキラーT細胞を活性化させることができ、B細胞はアルファガラクトシルセラミドを提示受けたナチュラルキラーT細胞によって活性化されるので、前記活性化は両方向で成り立つという事実を確認した。<実施例2>ペプチド及びαGalCerがともに積載されたB細胞によるペプチドに特異的なCD8T細胞の活性化促進本発明者等は、アルファガラクトシルセラミドとMHCIペプチドをB細胞に一緒に積載することで、ペプチドに特異的なCD8T細胞を刺激してOVA特異的な細胞毒性を起こすことができるかどうかを調べた。そのために、まずCFSEで標識されたOVA特異的なCD8T細胞を、C57BL6マウスの尾静脈に移植して、一日後にビヒクルを含んだ培地で培養したB細胞、αGalCerを積載したB細胞、OVA257264ペプチドを積載したB細胞そして、αGalCerとOVA257264ペプチドを積載したB細胞を静脈注射した。48時間後に脾臓から単一細胞を得た後にOTI細胞の分裂を観察した。別に、1μMのOVA257264ペプチドと1μLmLのGolgiPlμgで4時間培養した後、IL2とIFNγを生成するOTI細胞をCytopermCytofixキットを使用して細胞内サイトカイン染色法で試験した。その結果、B細胞単独またはBαGalCerを投与した群では、OVA特異的なCD8T細胞すなわち、OTI細胞の分裂がほとんど誘導されなかった。特に、BαGalCerを投与した群では、弱いながらもOTI細胞の分裂を示したが、これは抗原非特異的な変化であると思われる。一方、Bpepを投与した群では、相当に多いOTI細胞の分裂を誘導した。しかし、生体外で同一ペプチドで再刺激すると、このような細胞の極少数だけがIL2を生成し相対的に少ないIFNγを生成した。これとは対照的に、BαGalCerpepを投与した群では、OTI細胞の顕著な分裂が現れ、分裂した細胞の40以上がIL2を生成して、90以上がIFNγを生成し、そのレベルはBpep群に比べて顕著に高かった。前記結果は、Bpepとアルファガラクトシルセラミドを一緒に積載することで、CD8T細胞をずっと高いレベルで活性化させることができることを示している。<実施例3>BαGalCerpepによる持続性を有した細胞毒性T細胞反応の誘導及び免疫寛容の克服<11>BαGalCerpeptideによる持続的細胞毒性T細胞反応の誘導本発明者等は、C57BL6マウスにB細胞単独、BαGalCer、BpepまたはBαGalCerpepを各々静脈投与した後、生体内の細胞毒性Tリンパ球活性を測定して、B細胞ワクチンが細胞毒性免疫反応を誘導することができるかどうかを調べた。また、B細胞ワクチンによって誘導された細胞毒性免疫反応が、持続的に維持されるかどうかを調べた。詳細には、C57BL6マウスを各々、B単独、BαGalCer、Bpep及びBαGalCerpepで免疫化した後に、1週間、3週間、5週間後に生体内細胞毒性試験を実施した。まず、同種の免疫化されていないマウスの脾臓単一細胞を二つのグループに分けた後、一グループはOVA257264ペプチドを積載した後、20μMのCFSEで標識し、他のグループはペプチド積載なしに2μMのCFSEで標識して対照細胞にした。前記二つのグループの細胞を同量ずつ混合して免疫化したマウスに注射した後、一日後に脾臓単一細胞を摘出してCFSEhighとCFSElow細胞集団をフローサイトメーターを通じて測定した。ここで、CFSEhighの割合が低いほど細胞毒性免疫反応が大きいことを意味する。その結果、BαGalCerpepを投与した群でのみ、ペプチドが積載された標的を完全に破壊し、特異的に一回のワクチン接種以後、5週まで完璧に細胞毒性を示した。一方、BαGalCerまたはBpepを投与したマウス群の全てが、ペプチド特異的な細胞毒性T細胞反応が全く誘導されなかった。ただ、BαGalCerpepを投与した群でのみ、ペプチドに対するIFNγを生成するCD8T細胞が顕著に増加することを観察した。<12>BαGalCerpepによる免疫寛容の克服確認一般的に抗原のみを投与した場合には、免疫寛容が誘導されるので本発明者等は、αGalCerをペプチッドと一緒にB細胞に積載した時、抗原のみを投与して誘導される免疫寛容を乗り越えることができるかどうかを調べた。詳細には、前記実施例3の<11>と同様にC57BL6マウスを免疫化して一週間後に脾臓単一細胞を摘出した後、OVAが積載された脾臓単一細胞で一週間刺激した。刺激された脾臓単一細胞に対して、IFNγを生成するCD8T細胞を前記の細胞内サイトカイン染色法で試験した。その結果、B細胞単独またはBαGalCerを投与したマウスの場合には、正常に免疫反応が誘導されてペプチド特異的なIFNγを生産するCD8T細胞を誘導した一方、Bpepを投与したマウスはIFNγを生産するCD8T細胞の増加が現れなかった。これはマウスがペプチドに対して免疫寛容を示したものとみられる。これとは対照的に、BαGalCerpepを投与したマウスは、B細胞単独またはBαGalCerを投与した群に比べてペプチドに反応するCD8T細胞を顕著に多く形成した。ここで、B単独またはBαGalCerを投与したマウスの場合には、抗原が投与されたことがないから抗原特異的な免疫反応が誘導されないマウスで、OVAが積載された脾臓単一細胞の試験管内再刺激が最初の免疫反応である。一方、BαGalCerpepを投与したマウスの場合には、マウスにすでに抗原が投与されたのでOVAが積載された脾臓単一細胞の試験管内再刺激は再反応になる。結論的に、BαGalCerpepは、免疫寛容を克服して免疫原性を示して、力強い再反応を示すことを確認した。<実施例4>樹状細胞ワクチンと類似の効能のB細胞ワクチンの細胞毒性Tリンパ球の生成を誘導確認本発明者等は、B細胞を媒介にするワクチンの細胞毒性効果を樹状細胞ワクチンの細胞毒性効果と比較した。そのために、生体内細胞毒性Tリンパ球分析を使用して、完全に標的を溶解するのに必要な最小限の細胞数を測定してみた。詳細には、B細胞または樹状細胞を各々αGalCerまたはビヒクルとともに16時間乃至18時間培養した後、OVA257264ペプチド1μgmlで1時間培養した。その次に、細胞を順次に希釈して同種のマウスに静脈注射してから一週間後に、生体内細胞毒性Tリンパ球分析を実施した。すなわち前記実施例と同様に、ペプチドが適用された標的細胞はCFSEhighで標識して、ペプチドが適用されない対照細胞はCFSElowで標識してマウスに同量注入した後、一程時間が経ってマウスの脾臓細胞をフローサイトメーターで分析してCFSElow:CFSEhigh割合を算出して抗原特異的な標的細胞の溶解を測定した。その結果、DCαGalCerpep投与群は16000個の細胞だけでも完全に標的細胞の溶解を起こし、BαGalCerpep投与群では80000個の細胞で完全にペプチド特異的な溶解が起きた。前記のDCαGalCerpepと同数のBαGalCerpepを投与すると体内で中間程度の細胞毒性を起こすことを観察した。しかし、樹状細胞の表面積がB細胞に比べてずっと大きいという点を考慮すると、BαGalCerpepはDCαGalCerpep程度効果的に体内で細胞毒性を起こすと言える。また、DCpepは、OVA特異的に効率的な細胞毒性を起こした一方、Bpepを投与すると細胞の数字とは無関係に細胞毒性を誘導しなかった。特に、重要なことは、体内細胞毒性の傾向性がDCpepとDCαGalCerpep投与群が相当に類似しているということであるが、これは、αGalCerを樹状細胞に積載することが、ペプチドを積載した樹状細胞のワクチン効率を増加させないということを意味する。<実施例5>BαGalCerpepの細胞毒性Tリンパ球形成時の必要条件確認本発明者等は、細胞毒性Tリンパ球反応を誘導するのに関与する免疫細胞の種類を確認するために、C57BL6マウスにBαGalCerpepを投与する4日前または4日後に各々の免疫細胞を除去するための抗体を注射した後、体内細胞毒性Tリンパ球分析を実施した。その結果、免疫細胞除去の時期とは無関係にCD4T細胞またはNK11細胞除去が、細胞毒性Tリンパ球反応誘導を阻害しなかった。一方、CD8T細胞を除去すると標的細胞の破壊が起きなかった。前記結果と類似にMHCIIマウスは、正常に細胞毒性Tリンパ球反応が誘導された一方、Jα281マウスは誘導されないことを確認した。<実施例6>B細胞の抗原提示及び細胞毒性Tリンパ球の誘導確認本発明者等は、ペプチドを積載したB細胞が抗原提示細胞として機能するのか、あるいはペプチドの運搬体としてのみ作用するのか、すなわち、B細胞が運んだペプチドを樹状細胞が回収して細胞毒性Tリンパ球反応を誘導するのかを調べた。そのために、OVAペプチドをMHCIに積載することができるが、H2K領域の突然変異によってCD8T細胞がMHCIペプチド複合体を認識することができないbm1マウスを使用した。このようなbm1から取得したB細胞は、正常にCD1dを発現していて、αGalCerと反応してナチュラルキラーT細胞の活性化を刺激するという点で、bm1のB細胞とナチュラルキラーT細胞との相互作用においては何らの問題がないことが分かる。もう一度、野生型のB細胞から準備したBαGalCerpepを野生型マウスに注射すると、体内でOVA特異的な細胞毒性が完璧に生成されることを確認することができた。これとは異なり、bm1マウスのB細胞から準備したBαGalCerpepを野生型マウスに注射すると、野生型のマウスは、OVA特異的な細胞毒性活性を生成することができないことが分かった。このような結果は、受容マウスの樹状細胞または他の専門的な抗原提示細胞が細胞毒性Tリンパ球を形成するのに寄与しないことを示す。続いて、本発明者等は、αGalCerとペプチドを個別的に投与した場合と、ともに投与した場合に、細胞毒性Tリンパ球を形成することができるのかを調査した。C57BL6マウスにBαGalCerBpepまたはBαGalCerpep単独で静脈注射した後、体内細胞毒性Tリンパ球分析を実施した。その結果、BαGalCerBpepを投与したマウスでは、体内細胞毒性が全く誘導されないことを確認した。このような結果は、ペプチドとαGalCerが同一B細胞に積載されることがOVA特異的な細胞毒性を生成するのにおいて必須であることを示唆している。<実施例7>BαGalCerpepの抗癌効果確認<71>OVAモデルを使用した生体内実験本発明者等は、BαGalCerpepのワクチン投与が抗癌免疫を誘導するのかどうかを調査した。まず、予防的抗癌免疫活性を試験するためにB細胞単独、BαGalCer、Bpep、BαGalCerpep、DCpep、またはDCαGalCerpepワクチンを1回投与した後、OVAを形質導入したB16黒色腫を皮下に移植した。その結果、BαGalCerを投与したマウスでは、癌の成長が多少遅延する傾向性を見せたが、最終的には癌を形成した一方、BαGalCerpep、DCpep、またはDCαGalCerpepを投与したマウスでは、癌が成長しなかった。続いて、このようなマウスが長期間抗癌活性を維持することができるかどうかを確認するために、最初に癌を移植してから70日になる時点で生存したマウスにMO5癌細胞を再び皮下に移植した。その結果、このようなマウスでは癌の成長が現れなかった。これは、BαGalCerpepワクチン投与で前記癌に対する記憶免疫反応を確立したことを示唆する。OVAを形質導入すた胸腺種を使用して遂行した場合にも、前記と一致する結果を得ることができた。次には、BαGalCerpepワクチンを投与することですでに存在している癌を除去することができるかどうかを調べた。そのために本発明者等は、下記のような二つの治療モデルを提示した。すなわち、マウスに癌を皮下移植してからi1日後または、ii9日後に癌が促進される時期にワクチンを投与した。その結果、1日モデルでは、DCpepまたはDCαGalCerpepワクチンを投与した場合にほとんど完璧に癌の成長を抑制した。特に、BαGalCerpepワクチンを投与したマウスも完璧に癌の成長を減少させることを観察した。9日モデルでは、いかなるワクチン投与群でも成長する癌を完璧に減少させることができなかった。このような結果は、おそらくB16黒色腫が非常に活発な成長特性を有しているためであると判断される。これとは異なり、BαGalCerpepワクチンを投与したマウスの場合には、B細胞単独投与群及びBαGalCer、Bpep投与群に比べて癌の成長が減少することが示され、DCpepまたはDCαGalCerpepワクチン投与群と類似に現れることを確認した。<72>Her2neuモデルを使用した生体内実験本発明者等は、B細胞を媒介にするワクチン投与が実際に癌抗原に適用することができるかどうかを調べるために、特性がよく解明されていて細胞毒性Tリンパ球抗原決定基が知られているHer2neuを発現する癌細胞であるTAUFで、前記実施例<71>と同じ実験を実施した。その結果、本発明者等は、もう一度、αGalCer及びHer2neu6371ペプチドを提示するB細胞を投与したマウス群で体内Her2neuに対する細胞毒性が意味ある水準で現れることを確認した。また、前記モデルでの抗癌活性を分析するために、Her2neuを発現する癌細胞をBALBcマウスの静脈または皮下に注射した後、αGalCerとHer2neu6371を積載したB細胞ワクチンを投与した結果、静脈に癌を注入してBαGalCerまたはBpepワクチン投与した場合には、B細胞単独投与群と比べて生存期間が若干延長されることを確認した。これとは対照的に、BαGalCerpepを投与したすべてのマウスは、全体実験期間の間生存することを観察し、そのように生存したマウスにHer2neuを発現する癌細胞を再び注入しても抑制効果が現れることを確認することができた。また、皮下癌成長モデルでも、類似な結果を観察することができた。したがって、本発明のB細胞を媒介にするワクチン投与は、抗癌免疫の予防効果及び治療効果において、樹状細胞を基盤にするワクチン程度に効率的であることを立証した。<実施例8>抗原を発現するウイルスベクターを使用したタンパク質導入ペプチドを積載した細胞ワクチンは、臨床的に使用する場合、個人の主組織適合性複合体の一倍体型に制限的にペプチドが使用されるので普遍的に使用することができず、単一抗原決定基のみを提示する短所を有している。一方、ウイルスを媒介にして全体抗原を導入するようになれば、主組織適合性複合体の一倍体型に限らないですべての人に適用可能であり、多くの抗原決定基に特異的な免疫反応すなわち、特に体液性免疫反応と細胞性免疫反応を同時に誘導することができる。これを根拠にして、B細胞にウイルスで全体抗原を形質導入した後、免疫反応を効果的に誘導することができるかどうかを確認してみた。まず、腫瘍関連抗原であるHer2neuの細胞外領域及び細胞膜領域を発現する遺伝子を有したアデノウイルスを製作してマウス癌モデルに適用した。詳細には、BALBcマウスの脾臓細胞から分離したB細胞をHer2neuの細胞外領域及び細胞膜領域を発現するアデノウイルス100MOIで血清を添加しない培地で90分間37°Cの培養器で感染させた後、血清を補充して総8時間、24時間、及び48時間各々培養した後、PEで標識された抗Her2neu抗体で染色してフローサイトメトリーを実施した後、Her2neuが表面に発現される程度を測定した。その結果、8時間、24時間及び48時間、B細胞をアデノウイルスとともに培養した時、すべての培養条件で約20以上の効率を示すことを確認した。すなわち、B細胞をAdHMと8時間以上培養すると、十分にAdHMによって形質導入されたB細胞表面にHer2neuを発現することができるということが分かる。また、B細胞でのHer2neu発現は、ウイルスで形質導入した後、アルファガラクトシルセラミドとともに培養しても変わらなかったし、B細胞がアルファガラクトシルセラミドを提示するにおいても何の影響も及ぼさないことを確認した。このような結果は、前記で言及したように、B細胞のCD1d分子によってDN32D3細胞にアルファガラクトシルセラミドが提示されると、活性化したDN32D3細胞はIL2を分泌するようになって、培養液に含まれたこのようなIL2濃度を測定することで、B細胞がアルファガラクトシルセラミドを提示することができることを間接的に確認した。<実施例9>アデノウイルスで形質導入されたB細胞によって誘導される細胞毒性T細胞反応確認BALBcマウスの脾臓細胞から分離したB細胞を、Her2neuの細胞外領域と細胞膜領域を発現するアデノウイルス100MOIで血清を添加しない培地で60分間37 ゚Cの培養器で感染させた。以後、血清が補充された培地を添加して総24時間培養して、BAdHM細胞を製作した。また、AdHMで形質転換されたB細胞を1~2μgmlのαGalCerを添加した血清が補充された培地で23時間培養して、αGalCerを積載したB細胞を製作した。製作が完了したB細胞は、RPMI培地で3回以上洗浄して自由型のアデノウイルス及びαGalCerを除去して実験に使用した。本発明者等は、前記Her2neuの細胞外領域と細胞膜領域を発現するアデノウイルスで形質導入されたB細胞が、マウスで細胞毒性免疫反応を誘導することができるかどうか調査するために、マウスに静脈注射でB細胞ワクチンを投与した。B細胞単独及びアルファガラクトシルセラミドだけ積載したB細胞を投与したマウスを陰性対照群に使用し、AdHMで形質導入されたB細胞及び、AdHMで形質導入されたアルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞が誘導するHer2neu特異的な細胞毒性T細胞反応を測定した。免疫化した後、細胞毒性T細胞の抗原決定基ペプチドを積載した標的細胞を注入して体内で起きる標的細胞の分解を確認した。その結果、免疫化して1週間が過ぎた時点で、BとBαGalCerで免疫化されたマウス群では標的細胞の分解を観察することができなかった。一方、BAdHMとBAdHMαGalCerで免疫化されたマウス群では細胞毒性T細胞反応を確認することができた。アデノウイルスで形質導入されたB細胞は、活性化するのでナチュラルキラーT細胞の助けもなしに体内で細胞毒性T細胞を効果的に誘導することができる抗原提示細胞として機能すると考えられる。BAdHMとBAdHMαGalCerで誘導された細胞毒性T細胞反応は、時間に依存的に漸次減少する傾向を示したが、免疫化以後7週目まで細胞毒性T細胞反応が相当な水準で維持された。また、免疫化以後1週目に細胞毒性T細胞とともにCD8T細胞でIFNγの生成を確認した結果、B細胞のみ投与を受けたマウス群に比べて、BAdHMとBAdHMαGalCerで免疫化されたマウス群で活性化したCD8T細胞の数が増加していた。特に、このような現象は、BAdHMに比べてBAdHMαGalCer群で多少高く現れた。<実施例10>αGalCerの積載を通じたナチュラルキラー細胞の活性化誘導及びアデノウイルスで形質導入されたB細胞ワクチンの効果増進確認<101>αGalCerを積載したB細胞を通じたナチュラルキラー細胞の活性化誘導確認活性化したナチュラルキラー細胞集団は、IFNγを生産するナチュラルキラー細胞に基づいて計算した。簡略に説明すると、マウスの脾臓から分離したB細胞を1μgmlのゴルジプラグ下で5時間培養して、その細胞を固定及び透過させた後に抗マウスIFNγ:APC、CD3:PE、及びCD49b:FITC抗体で各々染色した。ナチュラルキラー細胞は、CD3を発現しないで、ナチュラルキラー細胞の標式であるCD49bを発現する細胞集団にした。アルファガラクトシルセラミドが積載されてアデノウイルスで形質導入されたB細胞は、アデノウイルスで形質導入したB細胞に比べて細胞毒性T細胞反応が多少高く長期間持続する傾向性を見せるが、留意するに値する水準の差が現れないことからして、細胞毒性T細胞反応を誘導するにおいてペプチドを積載したB細胞ワクチンとは異なり、アルファガラクトシルセラミドの積載が決定的な役目を担当しないものとみられる。しかし、アルファガラクトシルセラミドが積載されたB細胞ワクチンをマウスに投与すると、形質導入だけされたB細胞ワクチン投与群とは異なり、体内でナチュラルキラーT細胞を刺激して結果的にナチュラルキラー細胞を活性化させることを確認した。このようなナチュラルキラー細胞の活性化は、細胞毒性T細胞反応の誘導とともに抗癌効果に寄与することができると考えられる。<102>αGalCerの積載を通じたアデノウイルスで形質導入されたB細胞ワクチンの効果増進確認本発明者等は、B細胞ワクチンが細胞毒性T細胞を誘導する効率性を測定するために、完全な細胞毒性T細胞を誘導する水準以下で細胞ワクチンを投与した時、誘導される標的細胞の溶解程度を比較した。そのために、陽性対照群にはアルファガラクトシルセラミドを積載して細胞毒性T細胞抗原決定基ペプチドを積載したB細胞を使用し、各々のB細胞ワクチンを免疫化した後、1週間後にBAdHMとBAdHMαGalCer投与で誘導される細胞毒性T細胞誘導効率性を測定した。BαGalCerpepの場合、大部分のB細胞が抗原を提示できるようにペプチドが適用されたものと推定されるが、前記で言及したようにアデノウイルスで形質導入されたB細胞の場合、全体の約20程度だけが抗原提示細胞に機能すると考えられる。これを勘案すると、抗原をアデノウイルスで導入されたB細胞ワクチンは、ペプチドが積載されたB細胞ワクチンに比べて多数のB細胞投与が必要であるにもかかわらず、効率的に抗原特異的な細胞毒性T細胞反応を誘導することができると判断される。また、少数のB細胞が投与された時、アルファガラクトシルセラミドの積載でナチュラルキラーT細胞の助けを借りる場合、標的細胞を溶解するのに多少有利であることを確認した。<実施例11>抗原特異的な抗体反応を誘導するアデノウイルスで形質導入されたB細胞ワクチンアデノウイルスで形質導入されたB細胞ワクチンは、細胞性免疫反応を誘導するためにペプチドを積載したB細胞ワクチンとは異なり、細胞性免疫反応及び体液性免疫反応を同時に誘導することができるという長所がある。AdHMで形質導入されたB細胞ワクチンが、Her2neu特異的な抗体を誘導することができるかどうかを調べるために、BALBcマウスにBAdHM及びBAdHMαGalCerで各々免疫化させた後、血清中の抗Her2neu抗体の力価を測定するために、Her2neuを細胞表面に発現するマウス癌細胞であるTAUF細胞に結合する程度をフローサイトメトリーを通じて確認した。抗体反応を測定するためにB細胞ワクチンで免疫化した後、1、3、5、及び7週目に各々眼窩採血で血液を抽出した。マウスの血液を常温で2時間放置した後、8000rpmで10分間遠心分離して血清を分離した。血清中の抗Her2neu抗体の力価を測定するために、1:50から2倍ずつ緩衝剤で希釈した後、Her2neuを発現する癌細胞であるTAUF細胞と4 ゚Cで60分間培養した。緩衝剤でマウス血清と培養されたTAUF細胞を洗浄した後、FITCで標識されたマウス抗体に結合するヤギ抗体を2次抗体に使用して、TAUF細胞に結合されたマウス抗体を染色した。続いて、フローサイトメーターを使用して、TAUF細胞に結合したマウス抗体の量を測定し、免疫化されないマウスの血液を基準にして、平均蛍光強度が18倍以上増加する場合を陽性反応と見なして抗体の力価を算出した。その結果、細胞毒性T細胞を誘導したのと類似に、BAdHM及びBAdHMαGalCerの二集団全てで免疫化した後、7週間以上抗Her2neu抗体が高い力価で維持されることが観察され、B細胞及びBαGalCerとは異なり、BAdHMとBAdHMaGarCerワクチン投与集団では全て、体液性免疫反応が生成されることを確認した。<実施例12>アルファガラクトシルセラミドを積載してアデノウイルスで形質導入したB細胞ワクチンの免疫化を利用した癌の予防及び治療効果確認Her2neu腫瘍モデルでBALBcマウスの尾静脈に2×105個のTAUF細胞を投与してマウスに腫瘍ができるようにした。以後、腫瘍を有したマウスにB細胞ワクチンで各々免疫化した後、生存率を測定した。本発明では、アデノウイルスで形質転換されたB細胞ワクチンを使用して誘導された細胞性免疫反応及び体液性免疫反応が、窮極的に効果的な抗癌活性を示すかどうかを調査した。Her2neuを発現するマウス癌細胞を静脈注射した後、肺癌が誘導されたマウスでB細胞ワクチンの予防及び治療効果を確認した。2×106個のB細胞ワクチンで免疫化して7日後、癌細胞2×105個を静脈注射したマウスの生存率を測定した結果、B細胞だけ投与を受けたマウス群に比べて、アルファガラクトシルセラミドを積載したB細胞の投与を受けたマウス群と癌抗原を発現するアデノウイルスで形質転換されたB細胞で免疫化されたマウス群で、生存期間が多少延長されることを観察することができた。アルファガラクトシルセラミドが積載され癌抗原を発現するB細胞ワクチンを静脈投与すると、全実験期間の間マウスが生存することが観察され、BaGarCerやBAdHMワクチンに比べてBAdHMaGarCerワクチンが抗癌効果が高いことが示された。したがって、B細胞ワクチンで誘導された免疫反応が効果的に癌を予防するということが分かった。次では、B細胞ワクチンの治療効果を確認するために、BALBcマウスを1×106個のB、BaGarCer、BAdHM、BAdHMaGarCerで各々免疫化した後、3日後に5×104個の癌細胞を尾静脈に注射して肺癌を誘導した。B細胞だけ単独で投与を受けたマウス群が一番短い生存期間を示し、BaGarCerワクチン投与群もこれに似た傾向が観察された。BAdHMワクチンで免疫化されたマウス群は、B、BaGarCer投与群に比べて生存期間が若干延長される効果があった。一方、BAdHMaGarCer投与群は、予防モデルで観察したのと類似に他の実験群に比べて生存期間が顕著に増加することからして、B、BaGarCerまたはBAdHMの免疫化で誘導される抗癌効果に比べて優れた効果を示すことが分かる。<製剤例>注射液剤の製造方法本発明の抗癌用ワクチンの注射液剤は、次のような方法で製造した。アルファガラクトシルセラミド1~2μgml、B細胞5×106個ml、ペプチド1~2μgml、5クロロ3,2ジヒドロキシカルコンまたは5クロロ2,3ジヒドロキシカルコン塩酸塩1g、塩化ナトリウム06g及びアスコルビン酸01gを蒸溜水に溶解させて100mlを作った。前記溶液を瓶に入れて20°Cで30分間加熱して滅菌させた。"