"心臓血管疾患を発症または進行するヒト患者の危険性を評価するための方法であって、ここで該方法は、a患者から採取された生体外サンプルにおいて、ホスホリルコリン複合体と反応性の、患者の抗体のレベルを評価する工程、およびb患者から採取された生体外サンプルにおいてのホスホリルコリン複合体と反応性の抗体の評価されたレベルに基づいて、心臓血管疾患を発症または進行する患者の危険性を決定する工程、を含み、ここで患者から採取された生体外サンプルにおいての前記ホスホリルコリン複合体と反応性の抗体のレベルは、健常なヒト患者において心臓血管疾患を発症または進行する危険性とは逆相関するものである、ことを特徴とする心臓血管疾患を発症または進行するヒト患者の危険性を評価するための方法。心血管疾患を発症または進行するヒト患者の危険性を評価するための方法におけるホスホリルコリン複合体の使用であって、ここで前記方法は、a患者から採取された生体外サンプルにおいて、ホスホリルコリン複合体と反応性の、患者の抗体のレベルを評価する工程、およびbホスホリルコリン複合体と反応性の抗体の評価されたレベルに基づいて、心臓血管疾患を発症または進行する患者の危険性を決定する工程、を含み、ここで患者から採取された生体外サンプルにおいての前記ホスホリルコリン複合体と反応性の抗体のレベルは、健常なヒト患者において心臓血管疾患を発症または進行する危険性とは逆相関するものである、ことを特徴とする心血管疾患を発症または進行するヒト患者の危険性を評価するための方法におけるホスホリルコリン複合体の使用。心臓血管疾患が、虚血性心臓血管疾患である、請求項1に記載の方法または請求項2に記載の使用。心臓血管疾患が、アテローム性動脈硬化症である、請求項1に記載の方法または請求項2に記載の使用。ホスホリルコリン複合体と反応性の、患者のIgM抗体のレベルが評価される、請求項1または請求項3または請求項4に記載の方法、または請求項2乃至請求項4のいずれか1つに記載の使用。ホスホリルコリン複合体と反応性の、患者のIgG抗体のレベルが評価される、請求項1または請求項3または請求項4に記載の方法、または請求項2乃至請求項4のいずれか1つに記載の使用。ホスホリルコリンがスペーサーを介して担体に結合されている、請求項1または請求項3乃至請求項6のいずれか1つに記載の方法、または請求項2乃至請求項6のいずれか1つに記載の使用。ホスホリルコリン複合体が、選択的にスペーサーを介して、タンパク質担体に結合されているホスホリルコリンを含む、請求項1または請求項3乃至請求項7のいずれか1つに記載の方法、または請求項2乃至請求項7のいずれか1つに記載の使用。タンパク質がKLHキーホールリンペットヘモシアニンまたはヒト血清アルブミンHSAである、請求項8に記載の方法または使用。評価が免疫評価である、請求項1または請求項3乃至請求項9のいずれか1つに記載の方法、または請求項2乃至請求項9のいずれか1つに記載の使用。以下に開示する実施例は、単に本発明を例示する目的で提供されるものであって、添付の特許請求の範囲に概説される範囲の何らかの制限と考えてはならない。本明細書において記載された文書は、参照により本明細書に組込まれる。虚血性心臓血管疾患を発症する危険の増減と関連している、ホスホリルコリンに対するIgM抗体の有無またはレベルを調べる方法の一例を記載する。当技術分野で公知の他の方法も使用できる。同様の方法を用いてホスホリルコリンに対するIgG抗体の有無またはレベルを調べることができる。ホスホリルコリンに対するIgM抗体の有無を調べる方法PC-BSAに対するIgM抗体を、酵素結合免疫測定法によって調べた。マイクロタイタープレートをリン酸緩衝生理食塩水PBSに入れたPC-BSA10μg/ml;例えばバイオサーチテクノロジー社BiosearchTechnologiesINC米国、カリフォルニア州製でコーティングした。PBSで洗浄した後、2BSA溶液でプレートをブロッキングした。血清サンプルは0.2BSA-PBSで希釈した1:30。プレートを40°Cで一晩インキュベートし、洗浄した。アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ヒトIgMサンプルバッファーで1:7000希釈したものを100μl/ウェルwellで加え、40°Cで一晩インキュベートした。洗浄後、アルカリホスファターゼ基質を加え、プレートを室温、暗所で60分間インキュベートすることによって色を発現させた。吸光度は分光光度計において405nmで読み取った。ホスホリルコリンに対して種々の担体およびスペーサーを試験した。例示した担体はこれらに制限するものではない。その他のタンパク質、脂質またはポリマー、例えば当技術分野で公知であるラテックスビーズなどのその他の担体も使用できる。担体は、上述のようにUS5,455,032に開示されている。本発明の方法によって検出されるIgMまたはIgG抗体はまた、PCが露出しているPC含有化合物中、例えばリゾホスファチジルコリンリゾPC;例えば、キムKimら、ジャーナルオブエクスペリメンタルメディシンJournalofExperimentalMedicine、2002年9月2日、1965、655~65頁参照中に存在するホスホリルコリンPCと結合できる。したがって、本発明の方法は、リゾホスファチジルコリンと結合するIgMまたはIgG抗体を検出できる。ホスホリルコリン複合体の合成および薬剤組成物の調製ラテックスビーズ0.20μmまたは0.81μmをPBSに懸濁し、ホスホリルコリン-BSAの10μg/ml溶液と一晩混合した。次いで、このビーズを遠心分離し、バッファーで数回洗浄し、BSAの10μg/ml溶液でブロッキングした。さらに洗浄を反復した後、ビーズを適したバッファーで適した濃度に再懸濁し、使用まで冷蔵保存した。リンカーアームを有するホスホリルコリンはまた、ジアゾフェニル基を介してKLHキーホールリンペットヘモシアニンに結合できる。チーズボロChesebro,BおよびメッツガーMetzgerH、1972バイオケミストリーBiochemistry11:776頁にしたがい、PCのp-ニトロフェニル-6-O-ホスホコリンヒドロキシヘキサノエート誘導体を合成できることがより好ましい。p-ニトロフェニル-6-O-ホスホコリンヒドロキシヘキサノエートは、これをKLHに添加する直前に乾燥アセトニトリルに溶解した100mg/ml。誘導体およびKLHを4°Cで一晩混合し、次いで、結合していないスペーサーと脱離基であるp-ニトロフェニレートを透析して除去した。適したバッファーに懸濁した、調製したホスホリルコリン複合体の注射溶液は、免疫化に直接使用できる。ホスホリルコリン複合体での免疫化200μg[p-ニトロフェニル-6-O-ホスホコリンヒドロキシヘキサノエート-KLH]腹腔内で免疫化した後にBALB/cマウスから得た血漿において、提案された免疫分析評価法を用い、ホスホリルコリンを認識する高力価のIgM抗体を調べた。ホスホリルコリン複合体に対するモノクローナル抗体モノクローナル抗体は、当技術分野で公知のいずれかの標準的な方法を用いて作製できる。例えば、ブリルスBrilesDE、フォアマンFormanC、ヒュダックHudakS、クラフリンClaflinJL.T15インディオタイプの抗ホスホリルコリン抗体はストレプットコッカス肺炎に対し最適に保護するAntiphosphorylcholineantibodiesoftheT15idiotypeareoptimallyprotectiveagainstStreptococcuspneumoniae。ジャーナルオブエクスペリメンタルメディシンJournalofExperimentalMedicine、1982、156、1177~85頁またはモノクロナル抗体に結合しているT15PCは、IgMからIgGに変換されたときに特異性を維持するT15PCbindingmonoclonalantibodiesretainspecificitywhentheyswitchfromIgMtoIgG。スピラ,ギャドSpiraGad、アギラ,ヘクターAguilaHectorL、シャーフ,マシューScharffMatthewD.テクニオン-イスラエル工科大学、医学部FacMedTechnitonIsraelInstTechnol、イスラエル、ハイファ、ジャーナルオブイムノロジーJournalofImmunology1988、1408、2675~80頁。ホスホリルコリン複合体に対するその他の抗体は当業者に周知の方法を用いて調製できる。例えば、以下に記載のように、例えば、ホスホリルコリン複合体を用いるアフィニティー精製によって、ヒト免疫グロブリン製剤のaPC活性を有するサブフラクションを調製できる。静脈内免疫グロブリン投与製剤例えば、IGIV;バクスターBaxter他は、市販されているIgGの高度に精製された製剤であり、抗体産生がないか、抗体産生レベルが極めて低い患者の治療に用いられている。免疫グロブリン製剤としては、以下の製造業者から入手できるものが挙げられる;バクスターBaxter米国例えばガンマガードGammagard登録商標、イシベンIsivenイタリア、アンティモナプレスAntimoNaples、オムリックスOmrixイスラエル、テルアショメルTelHashomer、マイルスMiles生化学製品部門BiologicalProductsDivision、コネチカット州、ウェストヘブン、スクラボSclavoイタリア、ルッカ、サンドSandozスイス、バーゼル、ノバウティスNovautis、例えばサンドグロブリンSandoglobulin登録商標、ビオテストダイアグノスティック社BiotestDiagnosticCorporationニュージャージー州、ダビールDeville。免疫グロブリン製剤の例としては、ガンマガードGammagardS/D登録商標、ガンマーGammarIV登録商標、ガンマーGammarPIV登録商標、ガムイミュンGammimuneN登録商標、イベガムIveegam登録商標、パングロブリンPanglobulin登録商標、ポリガムPolygamS/D登録商標、サンドグロブリンSandoglobulin登録商標、ベノグロブリンVenoglobulin登録商標がある。免疫グロブリン製剤は、通常、数種のIgMならびにIgGを含む。ガンマーガードGammagard登録商標中には微量のIgMが存在する。ペンタグロビンビオテストBiotestは、SARSの治療に用いられている濃縮IgM製剤である。aPC活性を有するサブフラクションはIgGとIgMの双方を含む場合もあり、または主にIgGを含むよう選択することもでき例えば、ガンマーガードGammagard登録商標などのIgGが豊富な製剤で出発することによって、および/またはIgGについて選択することによって、もしくは主にIgMを含むように選択することもできる例えば、ペンタグロビンなどのIgMが豊富な製剤で出発することによって、および/またはIgMについて選択することによって。ホスホリルコリン複合体に対して特異性を有する抗体調製物は、結合していないホスホリルコリンと結合し、また、PCが露出しているPC含有化合物中に、例えば、リゾホスファチジルコリンリゾPC;例えば、キムKimら、ジャーナルオブエクスペリメンタルメディシンJournalofExperimentalMedicine、2002年9月2日、1965、655~65頁参照中に存在するホスホリルコリンPCとも結合し得る。したがって、ホスホリルコリン複合体に対して特異性を有する抗体調製物は、また、リゾホスファチジルコリンと結合し得る。アテローム性動脈硬化症の被験体におけるIgM免疫グロブリンレベル高血圧症の被験体拡張期血圧>95mmHgにおいて、ホスホリルコリンに対するIgM自己抗体レベルを、ベースラインおよび4年後にアテローム性動脈硬化症の危険因子の相関研究において調べた。結果を以下に要約する。登録時に77人の被験体35で、4年後の追跡調査では84人の被験体38で頸動脈プラークが検出された。この研究には全部で218人のヒト被験体がいた。追跡調査時の内膜-中膜肥厚IMTの増加は、登録の時点でPCに対するIgMの高血清レベルを有する被験体75または90パーセンタイルではあまり広まっていなかった。IMTが増加した個体とIMTが低下した個体間のIgM抗ホスホリルコリン抗体レベルの平均値間には有意な相違がある638.8±219.6対734.8±266.9、p=.004。PCに対するIgM自己抗体とIMTの変化の間の関係は、年齢、喫煙習慣、アテノロールまたはラシジピンlacidipineでの治療および血中脂質とは無関係であった。IgM自己抗体はまたIgG値とも無関係であった。したがって、本発明の一実施形態は、アテローム性動脈硬化症の治療または予防に用いられる薬剤組成物の調製のために、ホスホリルコリン複合体を使用することである。複合体は、タンパク質またはポリマーに結合したホスホリルコリンであり得る。薬剤組成物は注射によって与えられることが好ましい。能動免疫化という提案される方法は、自己抗体力価を調節し、これが順にアテローム性動脈硬化症の発症に対して正の作用を有することとなる。本発明のもう1つの実施形態は、アテローム性動脈硬化症の治療または予防に用いられる薬剤組成物の調製のために、ホスホリルコリン複合体を認識する抗体調製物、例えば、モノクローナル抗体を使用することである。モノクローナル抗体は当技術分野で公知の方法を用いて作製できる。本発明のさらなる実施形態は、ホスホリルコリン複合体を用いて、ホスホリルコリンに対する抗体、例えばIgMまたはIgG抗体の有無を診断する方法を提供することであり、この因子は虚血性心臓血管疾患を発症する危険の増減と関連している。好ましい方法は免疫分析評価である。この方法は、患者の、虚血性心臓血管疾患を発症するか、虚血性心臓血管疾患が進行する危険の評価に使用できる。被験体血清サンプルは、226人の確立した高血圧症の被験体拡張期血圧>95mmHgから得、その後、それらをアテローム性動脈硬化症に対する欧州のラシジピン研究theEuropeanLacidipineStudyonAtherosclerosisELSA25、26のスウェーデン成分に登録した。サンプルは、測定されるパラメーターに対する治療の作用を最小にするために、投薬を全くしない4週間の休薬期間の後に集めた。血圧、コレステロールおよびトリグリセリドレベルを先に記載された通りに調べた25、26。その後、115人の被験体をβ遮断薬アテノロールでの処置に割り当て、111人の被験体をカルシウムアンタゴニストラシジピンでの処置に割り当てた。この研究はカロリンスカ病院KarolinskaHospitalの倫理委員会によって承認され、ヘルシンキ宣言にしたがって実施した。すべての被験体にはインフォームドコンセントを与えた。頸動脈超音波頸動脈超音波測定を実施し、他で詳細に記載された通りに分析した25、26。ベースラインおよび4年後追跡調査で全部で218人の患者が有効な超音波測定値を有していた。簡単に言えば、8.0MHz環状アレイトランスデューサを用いるBiosound2000IIAデュプレクスduplexスキャナーで、左右の頸動脈を調べた。奥の壁において、内膜-中膜I-M肥厚を、内腔-内膜エコーの前縁と中膜-外膜エコーの前縁間の距離として測定した。アテローム性動脈硬化症の代用指標としての結果判定は、4年後追跡調査での末梢側総頸動脈と頸動脈両側分岐部中の4箇所の奥の壁の平均最大内膜-中膜肥厚IMTの変化CBMmaxとした。研究に登録した時点でのPCに対する抗体レベルと、4年後追跡調査時のIMTの増減の間の関連を評価した。試薬ポリソープPolysorpF96マイクロタイターイムノ-プレートはヌンクNuncデンマーク、ロスキレから購入し、PC-BSAホスホリルコリンウシ血清アルブミンはバイオサーチテクノロジーズ社BiosearchTechnologiesINC米国から購入した。ウシ血清アルブミンBSA、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ヒトIgGr鎖特異的、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ヒトIgMu鎖特異的、PNPPアルカリホスファターゼ基質はシグマSigma米国、ミズーリ州、セントルイスから入手した。カルジオリピンCLはAVANTT米国から購入し、β2糖タンパク質β2GP1はカルバイオケムCalbiochem米国から入手した。総IgGおよびIgMレベルは、先に記載されているような慣例の技術によって求めた6。CRPは、血清において、粒子増感された免疫比濁分析ベイリングネフェロメーターアナライザーBehringNephelometerAnalyzer、BNIIデイドベイリング社DadeBehringGmBH、ドイツ、マールブルクを用いる高感度法によって分析し、アンティアantir分析評価変動<4であった。PC、oxLDLおよびMDA-LDLに対する自己抗体の測定PC-BSAに対するIgGおよびigM抗体を、酵素結合免疫測定法ELISAによって調べた。17人の抗リン脂質症候群の患者から得たプールした血清を、内部標準として用い、プレート毎に試験した。抗体結合のプラトーは10μg/mlという抗原濃度で到達した。したがって、F96マイクロタイターポリソープpolysorpプレートを、PBS中PC-BSA10μg/ml50μgウェルでコーティングした。コーティングしたプレートを4°Cで一晩インキューベートした。PBSで5回洗浄した後、2BSA-PBSを用い、室温で2時間プレートをブロッキングし、上記のように洗浄した。血清サンプルは0.2BSA-PBSで希釈1:30し、50μl/ウェルで加えた。LDLは、記載されたように6、健常なドナーの血漿から連続分離超遠心によって単離し、銅イオンの使用によって酸化させるかOxLDL、MDAを用いて誘導体化したMDA-LDL。OxLDLおよびMDA-LDLは、本質的には記載されたように6ELISAによって測定した。OxLDLまたはMDA-LDLはコーティングバッファー炭酸-重炭酸バッファー50mMpH9.7で2μg/mlに希釈し、100μl/ウェルを用いてELISAプレートコスターCostar2581をコーティングした。このプレートを4°Cで一晩維持し、PBSで4回洗浄し、次いで、PBS中20成体ウシ血清20ABS-PBSを用い、室温で2時間ブロッキングした。次いで、それらを、20ABS-PBSで1:30希釈した100μlの血清とともに4°Cで一晩インキュベートした。プレートを4°Cで一晩インキュベートし、上記のように洗浄した。アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ヒトIgGサンプルバッファーで1:9000希釈したものおよびアルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ヒトIgMサンプルバッファーで1:7000希釈したものを、100μl/ウェルで加え、4°Cで一晩インキュベートした。5回洗浄した後、アルカリホスファターゼ基質PNPPを100μl/ウェルで加え、プレートを室温、暗所で60分間インキュベートすることによって色を発現させた。プレートは、ELISAマルチスキャンプラススペクトロフォトメーターMultiskanPlusspectrophotometerにおいて405nmで読み取った。すべてのサンプルを単一の分析評価したところ、変動係数は10~15より小さかった。抗ホスホリルコリン-BSA抗体の特異性抗ホスホリルコリン-BSAの特異性を調べるために、プールした高力価血清を使用することによって吸収分析評価を実施した。PC-BSAとの最大結合の50を生じる希釈で、高力価血清を、種々の濃度のPC-BSAとともにプレインキュベートした。ボルテックス処理した後、試験管を40°Cで一晩インキュベートし、13000r.p.m.で30分間40°C遠心分離した。上清を、記載したようにPC-BSAとの抗体結合について調べた。阻害のパーセンテージは以下のように算出した:阻害パーセント=競合物のないOD-競合物のあるOD×100/競合物のないOD統計分析抗ホスホリルコリンレベルを75パーセンタイルと90パーセンタイルで二分した。示したように、ロジスティック回帰分析およびオッズ比ORの算出および95信頼区間CI、またはスピアマン相関を用いる比較を用いて、IMTの増加はいまたはいいえを評価することによって、抗ホスホリルコリンまたはその他の抗体と4年間にわたるアテローム性動脈硬化症の進行の間の関連を調べた。年齢、喫煙習慣、血清コレステロール、血清トリグリセリドおよび抗高血圧治療の様式ラシジピン、アテノロールをはじめ、可能性ある交絡因子について調製を行った。両側p値<0.05を有意と考えた。結果研究に登録した時点での被験体の基本特性は他で詳細に記載されておりポックレーPockleyら2003ハイパーテンションHypertension42、235~238頁、表1に示す。競合研究は、IgMおよびIgGサブクラスのaPCは、PC-BSAとともにプレインキュベーションすることによって競合されたが、カルジオリピンは弱い競合能しか有しておらず、ホスファチジルセリンは競合能を有していなかったということを示す図1a、1b。β2-糖タンパク質IはPC-BSAとのIgG結合について、ある程度まで競合したが、IgMについてはそれほどではなかった図1a、1b。PC-BSAは、調べた他の抗原とは競合して結合する低い能力しか有していなかったデータは示していない。OxLDLおよびMDA-LDLはPC-BSAとのIgMaPCの結合に競合し得、また、IGGaPCの結合にも同程度までではないが競合し得た図2a、2b。追跡調査時のIMTの増加は、登録の時点でPC75または90パーセンタイル、oxLDLおよびMDA-LDL90パーセンタイルに対するIgMの血清レベルが高い被験体ではあまり広まっていなかったが、CRPはIMT変化と関連がなかった表2。ロジスティック回帰分析により、PC、oxLDLおよびMDA-LDLに対するIgM自己抗体とIMTの変化の間の関係は、年齢、喫煙習慣、アテノロールまたはラシジピンでの治療および血中脂質とは無関係であったということが示された。aPCIgMはまた、75パーセンタイルと90パーセンタイルの双方でIMTの変化と有意に関連していたが、IgMサブクラスのaOxLDLおよびaMDA-LDLは、90パーセンタイルでしか有意性を示さなかった表3a~d。IgM自己抗体はIgG値とも無関係であるデータは示していない。さらに、全IgGおよびIgMレベルはIMT測定値または変化と関連していなかったデータは示していない。IMTが増加した被験体ではPCに対するIgG自己抗体は傾向的に低かったが、この相違は統計的な有意性には達しなかった。表2。男性と女性のaPC、aMDA-LDLおよびaOxLDLのIgMサブクラス間には著しい相違があり、男性においてよりも女性において有意に高かったp’s<0.05。対照的に、これらの自己抗体のIgGレベルには男性と女性の間で相違はなかった。さらに、女性はベースラインおよび追跡調査時のプラークの発生が有意に低かったp<0.05。aPCIgMレベルはIMTの増加と負に相関しておりRho0.18、p=0.006、対照的に2種の他の保護因子、HDLおよびHSP70は、連続測定時のIMT変化と相関していなかったデータは示していない。aPCIgMとは異なり、これらの測定ではaOXLDLおよびaMDA-LDLはこれらの有意性に到達しなかったデータは示していない。aPCIgMレベルとaOCLDLIgMRho0.74、p<0.001およびaMDA-LDLIgMrho0.51、p<0.001との間には有意な関連があった。同様にaPCは、HSP60Rho0.28、p<0.001、HSP70Rho0.35、p<0.001と相関があり、これらは本発明者らがこのコホートにおけるヒトアテローム性動脈硬化症の新規保護因子として最近記載しポックレーPockleyら2003前掲、またHDLとも相関があったRho0.23、p<0.01。aPCIgM、aOxLDLIgMまたはaOxLDL、MDA-LDLおよびLDL、CRPまたはトリグリセリド間には関連はなかったデータは示していない。年齢、総コレステロール、トリグリセリド、喫煙および治療について制御しつつ、男性および女性について別個のロジスティック回帰分析を行った場合、IgMaPCはそれぞれ、女性においては90パーセンタイルを調べた場合にのみ有意な保護作用を示しEXPB=.17、95CI=0.05~.68;p=0.01、男性では75パーセンタイルを調べた場合にのみ有意な保護効果を示したそれぞれ、EXPB=.18、95CI=0.04~.74;p=0.01。MDA-LDLおよびoxLDLに対するIgMは、女性の値のみが独立に統計的有意性に達したのでこの点において異なっている。したがって、年齢、総コレステロール、トリグリセリド、喫煙および治療について制御しつつ、男性および女性について別個のロジスティック回帰分析を行った場合に、MDA-LDLに対するIgMおよびoxLDLに対するIgMは女性では有意な保護作用を示したがそれぞれ、EXPB=17、95CI=.05~.68、p=0.01およびEXPB=.18、95CI=.04~.74、p=0.01、男性の間では作用は有意性に達せずそれぞれ、EXPB=.60、95CI=.15~2.2、p=0.44およびEXPB=.39、95CI=.10~1.5、p=0.17、このことはOxLDLに対する、およびMDA-LDLに対する高いIgM力価は女性の間で特異的に保護的であり得るということを示す。参照文献1.フロストガードFrostegardJ、ウルフグレンUlfgrenAK、ニーベリNybergP、ヘディンHedinU、スウェーデンボリSwedenborgJ、アンダーソンAnderssonU、ハンソンHanssonGK。Cytokineexpressioninadvancedhumanatheroscleroticplaquesdominanceofproinflammatoryandmacrophagestimulatingcytokines.アテロスクレロシスAtherosclerosis1999、145、33~43頁。2.バインダーBinderCJ、チャンChangMK、ショーShawPX、ミラーMillerYI、ハートビグセンHartvigsenK、デワンDewanA、ウィツタムWitztumJL。Innateandacquiredimmunityinatherogenesis.ネイチャーメディシンNatureMedicine2002、8、1218~26頁。3.フロストガードFrostegardJ。AutoimmunityoxidizedLDLandcardiovasculardisease.オートイミュニティーレビューズAutoimmunityReviews2002、1、233~7頁。4.パリンスキPalinskiW、ミラーMillerE、ウィツタムWitztumJL。ImmunizationoflowdensitylipoproteinreceptordeficientrabbitswithhomologousmalondialdehydemodifiedLDLreducesatherogenesis.プロシーディングスオブナショナルアカデミックサイエンスオブユーエスエーProceedingsofNationalAcademicScienceofUSA1995、92、821~5頁。5.スーXuQ、ディートリッヒDietrichH、ステイナーSteinerHJ、ゴーンGownAM、シェルSchoelB、ミクツMikuzG,カウフィナンKaufinannSH、ウィックWickG。Inductionofarteriosclerosisinnormocholesterolemicrabbitsbyimmunizationwithheatshockprotein65アルテリオスクレロシスアンドトロンボシスArteriosclerosisandThrombosis、1992、12、789~99頁。6.ウーWuR、デフェアdeFaireU、レムンLemneC、ウィツタムWitztumJL、フロストガードFrostegardJ。AutoantibodiestoOxLDLaredecreasedinindividualswithborderlinehypertensionハイパーテンションHypertension、1999、33、53~9頁。7.ヒュルテHultheJ、ウィクランドWiklundO、ハート-カメジョHurtCamejoE、ボンジャーズBondjersG。AntibodiestooxidizedLDLinrelationtocarotidatherosclerosiscelladhesionmoleculesandphospholipaseAアルテリオスクレロシストロンボシスバスキュラーバイオロジーArteriosclerosisThrombosisVascularBiology、2001、21、269~74頁。8.カルボネンKarvonenJ、パイバンサロPaivansaloM、ケサニエミKesaniemiYA、ホルコHorkkoS。ImmunoglobulinMtypeofautoantibodiestooxidizedlowdensitylipoproteinhasaninverserelationtocarotidarteryatherosclerosisサーキュレーションCirculation2003、108、2107~12頁。9.ベルグマークBergmarkC、ウーWuR、デフェアdeFaireU、レフバートLefvertAK、スウェーデンボリSwedenborgJ。PatientswithearlyonsetperipheralvasculardiseasehaveincreasedlevelsofautoantibodiesagainstoxidizedLDLアルテリオスクレロシストロンボシスバスキュラーバイオロジーArteriosclerosisThrombosisVascularBiology、1995、15、441~5頁。11.スベナングソンSvenungssonE、ジェンセン-ウルスタドJensenUrstadK、ヘイルンバーガーHeilnburgerM、シルベイラSilveiraA、ハムステンHamstenA、デフェアdeFaireU、ウィツタムWitztumJL、フロストガードFrostegardJ。RiskfactorsforcardiovasculardiseaseinsystemiclupuserythematosusサーキュレーションCirculation、2001、104、1887~93頁。12.フロストガードFrostegardJ、ウーWuR、ギスコンベGiscombeR、ホルムHolmG、レフバートLefvertAK、ニルソンNilssonJ。InductionofTcellactivationbyoxidizedlowdensitylipoproteinアルテリオスクレロシスアンドトロンボシスArteriosclerosisandThrombosis1992、12、461~7頁。13.シュテメStemmeS、ファーバーFaberB、ホルムHolmJ、ウィクランドWiklundO、ウィツタムWitztumJL、ハンソンHanssonGK。TlymphocytesfromhumanatheroscleroticplaquesrecognizeoxidizedlowdensitylipoproteinプロシーディングスオブナショナルアカデミックサイエンスオブユーエスエーProceedingsofNationalAcademicScienceofUSA1995、92、3893~7頁。14.ベルリナーBerlinerJA、テリトTerritoMC、セバニアンSevanianA、ラミンRaminS、キムKimJA、バムシャドBamshadB、エスターソンEstersonM、フォーゲルマンFogelmanAMMinimallymodifiedlowdensitylipoproteinstimulatesmonocyteendothelialinteractionsジャーナルオブクリニカルインベスティゲーションJournalofClinicalInvestigation1990、85、1260~6頁。15.フロストガードFrostegardJ、ニルソンNilssonJ、ヘゲルストランドHaegerstrandA、ハムステンHamstenA、ウィグゼルWigzellH、ギドランドGidlundM。OxidizedlowdensitylipoproteininducesdifferentiationandadhesionofhumanmonocytesandthemonocyticcelllineU937プロシーディングスオブナショナルアカデミックサイエンスオブユーエスエーProceedingsofNationalAcademicScienceofUSA1990、87、904~8頁。16.フロストガードFrostegardJ、ヘゲルストランドHaegerstrandA、ギドランドGidlundM、ニルソンNilssonJ。BiologicallymodifiedLDLincreasestheadhesivepropertiesofendothelialcellsアテロクスレロシスAtherosclerosis1991、90、119~26頁。17.フェイFeiGZ、ファンHuangYH、スウェーデンボリSwedenborgJ、フロストガードFrostegardJ。OxidisedLDLmodulatesimmuneactivationbyanIL12dependentmechanismアテロスクレロシスAtherosclerosis2003、169、77~85頁。18.ボチコフBochkovVN、カドルKadlA、ヒューバーHuberJ、グルバーGruberF、バインダーBinderBR、レイティンガーLeitingerN。Protectiveroleofphospholipidoxidationproductsinendotoxininducedtissuedamageネイチャー2002、419、77~81頁。19.フロストガードFrostegardJ、ファンHuangYH、ロネリッドRonnelidJ、シェーファー-エリンダーSchaferElinderL。PlateletactivatingfactorandoxidizedLDLinduceimmuneactivationbyacommonmechanismアルテリオスクレロシストロンボシスバスキュラーバイオロジーArteriosclerosisThrombosisVascularBiology1997、17、963~8頁。20.ヒーリーHeeryJM、コザックKozakM、スタフォリニStafforiniDM、ジョーンズJonesD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アネキシンV結合を阻害する高い能力を有する、ヘパリン保存した血漿を、SFM中10という濃度でHUVEC単層に加えた。24時間後、細胞を細胞解離溶液CellDissociationSolutionCDS;シグマ-アルドリッチSigmaAldrich、米国、ミズーリ州、セントルイスで回収し、上清を用い、はがれた浮遊細胞の選択的減少をなくすよう注意深くプールし、1200rpmで7分の遠心分離を続けた。100μlのアネキシンV結合バッファーモレキュラープローブス社MolecularProbesInc、米国、オレゴン州、ユージーンに再懸濁した後、サンプルを2μlの5mg/mlアネキシンV-FITCモレキュラープローブスMolecularProbesで染色し、氷上で15分間インキュベートした。獲得の直前に、1mg/mlのヨウ化プロピジウムPI;生体染色色素;RDシステムスヨーロッパ社RDSystemsEuropeLtd、英国、アビンドンを加えた。分析は上記の通り実施した。統計分析統計はスタットビューStatViewソフトウェア、SASインスティチュートABSASInstituteAB、スウェーデン、エーテボリを用いてコンピュータで計算した。非対称の連続型変数を対数的に変形した。連続型変数についてANOVAおよびカテゴリ変数についてカイ二乗を用いて研究群を比較した。フィッシャーのPLSDを、ポストホックテストとして用いた。相関係数は単純回帰または正規分布変数についてではないスピアマンの順位相関を用いて算出した。有意レベルはp<0.05で設定した。結果内皮細胞とのアネキシンV結合の測定アネキシンV染色のHUVEC陽性の頻度を、二変数ドットプロットでのアネキシンV/PI-細胞のパーセンテージとしてか、ヒストグラムに基づくアネキシンV細胞のパーセンテージのいずれかとして求めた。結合を低下させると知られている血清の存在下でのHUVECとの、およびIVIGとプレインキュベートしたHUVECとのアネキシンV結合を調べた。IVIGとのプレインキュベーションはアネキシンの結合を回復させることができ、このことはIVIG中に存在する抗体が結合を中和できたということを示す図4。ECとのアネキシンV結合を有するCVDの病歴のあるSLE患者では、APC-BSAおよびaPC-KHLは双方とも有意に関連していたそれぞれ、r=0.45;p=0.02ならびにr=0.42およびp=0.03。aPCは上記のように測定した。PCによる、マクロファージにおけるoxLDL取り込み対する作用指摘したようにIVIGから抽出した、IgMおよびIgGサブクラスのaPCを必要性を示すoxLDLとともにプレインキュベートした図3。本発明者らは総IgMをaPCIgMおよびマクロファージ取り込みに対する効果の対照として用いたマクロファージDil-oxLDLIgM。陽性染色細胞の全パーセンテージは46.62であり、これはIgM自体はaPCが有する阻害作用を有していないということを示す。IgMはシグマSIGMAから購入し、精製ヒトIgMは、通常のヒト血清を出発物質として用いて沈殿およびゲル濾過技術によって製造されている。免疫グロブリンは少なくとも95純粋であると測定されている。内皮細胞におけるICAM誘導に対するaPCの作用PAFを、必要性を示す濃度のECとともにインキュベートした。図5に示されるように、この脂質はICAM発現の有意な増加を誘導できた。指摘したようにIVIGから抽出したIgMサブクラスのaPCを、必要性を示されるようにこれらの脂質とともにプレインキュベートした図5。先に記載したような高血圧症の226個体のELSA研究におけるaPCとその他の危険マーカー間の相関表4に示されるように、aPCIgMは2つのその他の保護因子、HSP70およびHDLと関連していた。また、TNF、つまり、炎症のマーカーでありアテローム生成性サイトカインとも、弱くはあるが有意な関連があった。TNFは重要な炎症性サイトカインであり、TNFレベルはaPCigMレベルと負に関連していた。この関連は弱いが有意である。HSP70は、本発明者等によって最近記載された新規保護因子である。明確な正の関連がある。また、HSP60は、弱い保護因子であるが、これも関連している。HDLはよく知られている良性コレステロールであり、抗炎症特性を有する。HDLは、aPCIgMと有意に関連している。"