"RNAi分子を含む、標的遺伝子の優性アレル発現抑制剤であって、前記RNAi分子が優性点突然変異を少なくとも一つ含む連続する16~30塩基のいずれか一の前記優性アレルのセンス鎖塩基配列に一致する塩基配列からなるRNAiセンス鎖領域と、それに相補的な塩基配列からなるRNAiアンチセンス鎖領域を含み、RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の優性点突然変異から、上流側に向かって7~10番目のいずれか一の塩基がRNAi分子における5’末端塩基を構成し、かつ前記いずれか一の優性点突然変異から、下流側に向かって3~8番目のいずれか一の塩基が前記優性アレルのセンス鎖塩基配列上の塩基とは異なるミスマッチ塩基を有する前記優性アレル発現抑制剤。RNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含む、標的遺伝子の優性アレル発現抑制剤であって、前記RNAi分子が優性点突然変異を少なくとも一つ含む連続する16~30塩基のいずれか一の前記優性アレルのセンス鎖塩基配列に一致する塩基配列からなるRNAiセンス鎖領域と、それに相補的な塩基配列からなるRNAiアンチセンス鎖領域を含み、RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の優性点突然変異から、上流側に向かって7~10番目のいずれか一の塩基がRNAi分子における5’末端塩基を構成し、かつ前記いずれか一の優性点突然変異から、下流側に向かって3~8番目のいずれか一の塩基が前記優性アレルのセンス鎖塩基配列上の塩基とは異なるミスマッチ塩基を有する前記優性アレル発現抑制剤。5’末端塩基を構成する塩基が前記優性点突然変異から上流側に向かって7~9番目のいずれか一の塩基である、請求項1又は2に記載の抑制剤。ミスマッチ塩基が前記優性点突然変異から下流側に向かって3~5番目のいずれか一の塩基である、請求項1~3のいずれか一項に記載の抑制剤。RNAi分子がsiRNAである、請求項1~4のいずれか一項に記載の抑制剤。RNAi分子がshRNAである、請求項1~4のいずれか一項に記載の抑制剤。優性点突然変異が機能獲得型である、請求項1~6のいずれか一項に記載の抑制剤。前記優性点突然変異が疾患の発症に関与する、請求項1~7のいずれか一項に記載の抑制剤。疾患が悪性新生物である、請求項8に記載の抑制剤。悪性新生物が非小細胞肺癌であり、かつ標的遺伝子がEGFR上皮成長因子受容体遺伝子である、請求項9に記載の抑制剤。RNAi分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ配列番号81及び82、又は配列番号83及び84で示されるオリゴヌクレオチドペアからなる、請求項10に記載の抑制剤。疾患が進行性骨化性線維異形成症であり、かつ標的遺伝子がALK2アクチビン様キナーゼ2遺伝子である、請求項8に記載の抑制剤。RNAi分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ配列番号3及び4、配列番号5及び6、配列番号7及び8、配列番号9及び10、配列番号11及び12、配列番号13及び14、配列番号19及び20、配列番号21及び22、配列番号23及び24、配列番号25及び26、配列番号27及び28、配列番号29及び30、配列番号35及び36、配列番号37及び38、配列番号39及び40、配列番号41及び42、配列番号43及び44、及び配列番号91及び92で示されるオリゴヌクレオチドペアからなる群から選択される、請求項12に記載の抑制剤。疾患がハンチントン病であり、かつ標的遺伝子がハンチンチン遺伝子である、請求項8に記載の抑制剤。RNAi分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ配列番号55及び56、配列番号57及び58、配列番号59及び60、配列番号61及び62、配列番号63及び64、配列番号67及び68、及び配列番号69及び70で示されるオリゴヌクレオチドペアからなる群から選択される、請求項14に記載の抑制剤。請求項1~16のいずれか一項に記載の抑制剤を有効成分として含有する医薬組成物。製薬上許容可能な担体を含む、請求項16に記載の医薬組成物。標的遺伝子の優性アレルの発現を選択的に抑制するRNAi分子の設計方法であって、標的遺伝子の優性アレルの塩基配列上に存在する一の優性点突然変異部位を基準変異点として設定する工程、優性アレルの塩基配列上において前記基準変異点から上流側に向かって7~10番目のいずれか一の塩基を5’末端塩基として定める工程、設定した5’末端塩基を起点として下流側16~30塩基長をRNAiセンス鎖領域として、優性アレルのセンス鎖塩基配列から選択する工程、選択したRNAiセンス鎖領域内において、前記基準変異点から下流側に向かって3~8番目のいずれか一の塩基にミスマッチ塩基を導入する工程、及び設定されたRNAiセンス鎖領域の塩基配列に相補的な塩基配列をRNAiアンチセンス鎖領域として設定する工程を含む、前記設計方法。本発明は、野生型又は所望のアレルの発現を許容し、特定の優性アレルの発現のみを選択的かつ効果的に抑制することのできるRNAi分子を開発し、その設計ガイドライン及び当該RNAi分子を有効成分として含む優性アレル発現抑制剤の提供を目的とする。本発明は、優性アレルの発現により発症する遺伝性疾患を治療する治療剤の提供を目的とする。本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、特定のアレルの発現を選択的、かつ効果的に抑制することが可能なsiRNA等の構造的一般法則性を見出した。すなわち、標的とする優性アレルの優性点突然変異を基準点として、該基準点から5’末端までの塩基長を所定の長さとなるように設定し、かつ該基準点から下流側の所定の位置に標的遺伝子の配列とは異なるミスマッチ塩基を一つ導入した構造を有するRNAi分子は、優性アレルの発現を選択的、かつ効果的に抑制する一方で、野生型アレルをはじめとする他方のアレルの発現に対しては、抑制効果をほとんど示さないことが明らかとなった。このような構造を有するRNAi分子は、塩基配列によることなく、いかなるアレルに対してもその効果を発揮し得ることも明らかとなった。したがって、当該構造は、ASPRNAiの新規ガイドラインとなり得ると考えられた。本発明は、上記知見に基づいて完成されたものであり、以下を提供する。1RNAi分子を含む、標的遺伝子の優性アレル発現抑制剤であって、前記RNAi分子がRNAiセンス鎖領域と、それに相補的な塩基配列からなるRNAiアンチセンス鎖領域を含み、ここで前記RNAiセンス鎖領域は優性点突然変異を少なくとも一つ含む連続する16~30塩基のいずれか一の前記優性アレルのセンス鎖塩基配列に一致する塩基配列からなり、並びに前記RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の優性点突然変異から、上流側に向かって7~10番目のいずれか一の塩基がRNAi分子における5’末端塩基を構成し、かつ前記いずれか一の優性点突然変異から、下流側に向かって3~8番目のいずれか一の塩基が前記優性アレルのセンス鎖塩基配列上の塩基とは唯一異なるミスマッチ塩基を有する、前記優性アレル発現抑制剤。2RNAi分子をコードするDNAを動作可能なように連結した発現ベクターを含む、標的遺伝子の優性アレル発現抑制剤であって、RNAiセンス鎖領域と、それに相補的な塩基配列からなるRNAiアンチセンス鎖領域を含み、ここで前記RNAi分子が優性点突然変異を少なくとも一つ含む連続する16~30塩基のいずれか一の前記優性アレルのセンス鎖塩基配列に一致する塩基配列からなり、並びに前記RNAiセンス鎖領域上のいずれか一の優性点突然変異から、上流側に向かって7~10番目のいずれか一の塩基がRNAi分子における5’末端塩基を構成し、かつ前記いずれか一の優性点突然変異から、下流側に向かって3~8番目のいずれか一の塩基が前記優性アレルのセンス鎖塩基配列上の塩基とは異なるミスマッチ塩基を有する、前記優性アレル発現抑制剤。35’末端塩基を構成する塩基が前記優性点突然変異から上流側に向かって7~9番目のいずれか一の塩基である、1又は2に記載の抑制剤。4ミスマッチ塩基が前記優性点突然変異から下流側に向かって3~5番目のいずれか一の塩基である、1~3のいずれかに記載の抑制剤。5RNAi分子がsiRNAである、1~4のいずれかに記載の抑制剤。6RNAi分子がshRNAである、1~4のいずれかに記載の抑制剤。7優性点突然変異が機能獲得型である、1~6のいずれかに記載の抑制剤。8前記優性点突然変異が疾患の発症に関与する、1~7のいずれかに記載の抑制剤。9疾患が悪性新生物である、8に記載の抑制剤。10悪性新生物が非小細胞肺癌であり、かつ標的遺伝子がEGFR上皮成長因子受容体遺伝子である、9に記載の抑制剤。11RNAi分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ配列番号81及び82、又は配列番号83及び84で示されるオリゴヌクレオチドペアからなる、10に記載の抑制剤。12疾患が進行性骨化性線維異形成症であり、かつ標的遺伝子がALK2アクチビン様キナーゼ2遺伝子である、8に記載の抑制剤。13RNAi分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ配列番号3及び4、配列番号5及び6、配列番号7及び8、配列番号9及び10、配列番号11及び12、配列番号13及び14、配列番号19及び20、配列番号21及び22、配列番号23及び24、配列番号25及び26、配列番号27及び28、配列番号29及び30、配列番号35及び36、配列番号37及び38、配列番号39及び40、配列番号41及び42、配列番号43及び44、及び配列番号91及び92で示されるオリゴヌクレオチドペアからなる群から選択される、12に記載の抑制剤。14疾患がハンチントン病であり、かつ標的遺伝子がハンチンチン遺伝子である、8に記載の抑制剤。15RNAi分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ配列番号55及び56、配列番号57及び58、配列番号59及び60、配列番号61及び62、配列番号63及び64、配列番号67及び68、及び配列番号69及び70で示されるオリゴヌクレオチドペアからなる群から選択される、14に記載の抑制剤。161~15のいずれかに記載の抑制剤を有効成分として含有する医薬組成物。17製薬上許容可能な担体を含む、16に記載の医薬組成物。18標的遺伝子の優性アレルの発現を選択的に抑制するRNAi分子の設計方法であって、標的遺伝子の優性アレルの塩基配列上に存在する一の優性点突然変異部位を基準変異点として設定する工程、優性アレルの塩基配列上において前記基準変異点から上流側に向かって7~10番目のいずれか一の塩基を5’末端塩基として定める工程、設定した5’末端塩基を起点として下流側16~30塩基長をRNAiセンス鎖領域として、優性アレルのセンス鎖塩基配列から選択する工程、選択したRNAiセンス鎖領域内において、前記基準変異点から下流側に向かって3~8番目のいずれか一の塩基にミスマッチ塩基を導入する工程を含む、前記設計方法。本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2010139925号の明細書及び/又は図面に記載される内容を包含する。本発明の優性アレル発現抑制剤によれば、他のアレルの発現に大きな影響を及ぼすことなく、標的とする優性アレルの発現のみを選択的に、また効果的に抑制することが可能となる。本発明の優性アレル発現抑制剤の有効成分であるRNAi分子の設計方法によれば、疾患の原因となる優性点突然変異を基準点として設計が可能であり、かつ当該基準点の周辺の塩基配列に大きく影響されることがない、応用性の高い設計方法を提供できる。本発明の医薬組成物によれば、遺伝性疾患において、野生型アレルの発現を維持させながら疾患原因となる優性アレルの発現を選択的に抑制することにより、その疾患を治癒することが可能となる。1.優性アレル発現抑制剤1-1.概要本発明の第1の実施形態は、優性アレルの発現抑制剤である。本発明の抑制剤は、RNAi分子及び/又はそれをコードする発現ベクターを有効成分として含み、そのRNAi分子が、優性アレルを標的としてその発現を選択的に抑制することを特徴とする。1-2.RNAi分子の構成本明細書において、RNAi分子とは、生体内においてRNA干渉を誘導し、標的とする遺伝子の転写産物の分解を介してその遺伝子の発現を転写後翻訳前に抑制サイレンシングすることができる分子をいう。RNAi機構を介して遺伝子の発現を抑制できる分子であれば、一本鎖分子又は二本鎖分子のいずれであってもよい。例えば、siRNAのような二本鎖分子、shRNA又はmiRNAのような一本鎖分子が挙げられる。RNA干渉については、例えば、BassBL2000Cell101235238;SharpPA2001GenesDev15485490;ZamorePD2002Science29612651269;DernburgAFKarpenGH2002Cell111159162を参照されたい。なお、本明細書では、RNAi機構を介した転写後の遺伝子サイレンシングを、以下、遺伝子の発現抑制として表す。本明細書において、RNAi分子は、核酸からなる。ここでいう核酸とは、天然型核酸、非天然型核酸及び/又は核酸類似体をいう。本明細書において、天然型核酸とは、ヌクレオチドを構成単位とし、それらがホスホジエステル結合によって連結した自然界に存在する生体高分子をいう。通常は、アデニン、グアニン、シトシン及びウラシルのいずれかの塩基を有するリボヌクレオチドが連結したRNA及び/又はアデニン、グアニン、シトシン及びチミンのいずれかの塩基を有するデオキシリボヌクレオチドが連結したDNAが該当する。本発明のRNAi分子では、特に、RNAが主な構成成分であることが好ましい。本明細書において、非天然型核酸とは、非天然型ヌクレオチドを含む又はそれからなる核酸をいう。ここで非天然型ヌクレオチドとは、人工的に構築された又は人工的に化学修飾された自然界に存在しないヌクレオチドであって、前記天然に存在するヌクレオチドに類似の性質及び/又は構造を有するヌクレオチド、又は天然に存在するヌクレオシド若しくは塩基に類似の性質及び/又は構造を有するヌクレオシド若しくは塩基を含むヌクレオチドをいう。例えば、脱塩基ヌクレオシド、アラビノヌクレオシド、2デオキシウリジン、α-デオキシリボヌクレオシド、βLデオキシリボヌクレオシド、その他の糖修飾を有するヌクレオシドが挙げられる。さらに、置換五単糖2Oメチルリボース、2デオキシ2フルオロリボース、3Oメチルリボース、1,2デオキシリボース、アラビノース、置換アラビノース糖;置換六単糖及びアルファ-アノマーの糖修飾を有するヌクレオシドが含まれる。また、非天然型ヌクレオチドは、人工的に構築された塩基類似体又は人工的に化学修飾された塩基修飾塩基を包含するヌクレオチドも含む。塩基類似体には、例えば、2オキソ1Hピリジン3イル基、5位置換2オキソ1Hピリジン3イル基、2アミノ62チアゾリルプリン9イル基、2アミノ62チアゾリルプリン9イル基、2アミノ62オキサゾリルプリン9イル基等が挙げられる。修飾塩基には、例えば、修飾化ピリミジン例えば、5ヒドロキシシトシン、5フルオロウラシル、4チオウラシル、修飾化プリン例えば、6メチルアデニン、6チオグアノシン及び他の複素環塩基等が挙げられる。メチルホスホネート型DNARNA、ホスホロチオエート型DNARNA、ホスホルアミデート型DNARNA、2Oメチル型DNARNA等の化学修飾核酸や核酸類似体も含むこともできる。本明細書において核酸類似体とは、天然型核酸に類似の構造及び/又は性質を有する人工的に構築された化合物をいう。例えば、ペプチド核酸PNA:PeptideNucleicAcid、ホスフェート基を有するペプチド核酸PHONA、架橋化核酸BNALNA:BridgedNucleicAcidLockedNucleicAcid、モルホリノ核酸等が挙げられる。また、本発明のRNAi分子を構成する核酸は、必要に応じて、リン酸基、糖及び/又は塩基が核酸用標識物質で標識されていてもよい。核酸用標識物質は、当該分野で公知のあらゆる物質を利用することができる。例えば、放射性同位元素例えば、32P、3H、14C、DIG、ビオチン、蛍光色素例えば、FITC、Texas、cy3、cy5、cy7、FAM、HEX、VIC、JOE、Rox、TET、Bodipy493、NBD、TAMRA、又は発光物質例えば、アクリジニウムエスターが挙げられる。アレルアレル:alleleとは、対立遺伝子とも呼ばれ、原則としてゲノム上の相同の遺伝子座に存在する遺伝子多型を構成する個々の遺伝子をいう。ただし、同一遺伝子の多型であれば、必ずしも相同する遺伝子座に存在する必要はなく、転座や重複によって他の遺伝子座に存在していてもよい。本発明において、アレルは、ゲノム上に先天的に存在するものの他、変異により後天的に獲得されたものも含む。さらに、各アレルは、個体を構成する全ての細胞中に存在する必要はなく、個体における一部の細胞、組織又は器官にのみ存在してするものであってもよい。例えば、一の個体において、正常細胞中には存在せず、癌細胞中にのみ存在する変異型アレルが挙げられる。本明細書において優性アレルとは、個体においてそのアレルに基づく形質が表現型として顕在化するものをいう。例えば、二倍体の常染色体上における異なる2つのアレルの場合、その形質が個体に現れるいずれか一方のアレルが該当する。そのアレルが正常機能を有するタンパク質をコードしているか否かは問わない。例えば、一方が機能異常のタンパク質をコードし、他方が正常機能するタンパク質をコードするアレルであっても、機能異常のタンパク質による異常な機能が正常機能するタンパク質の機能を凌駕するか又は阻害することによって、結果的にその個体における当該タンパク質の機能がその異常な表現型として現れる場合には、機能異常のタンパク質をコードするアレルが優性アレルとなる。このような具体例としては、常染色体優性遺伝性疾患の原因となるアレルが挙げられる。本明細書で点突然変異とは、野生型アレルの塩基配列と比較したときに、対応する塩基配列上に見られる一塩基置換をいう。ここでいう野生型アレルとは、同種遺伝子のアレル集団内において自然界に最も多く存在し、かつそれがコードするタンパク質がそのタンパク質本来の機能を有するものをいう。点突然変異には、通常、プリン間又はピリミジン間の置換であるトランジション変異、又はプリンとピリミジン間の置換であるトランスバージョン変異があるが、本発明においてはいずれの変異であってもよい。また、本発明の点突然変異は、先天的に存在する変異及び後天的に獲得された変異のいずれであってもよい。さらに、点突然変異は、その変異によってアミノ酸の置換をもたらすミスセンス変異、縮重コドンへの置換であって、アミノ酸置換を生じないサイレント変異、終止コドンをもたらすナンセンス変異及びスプライス部位の変異が知られるが、本発明のRNAi分子の点突然変異に関しては、ミスセンス変異、ナンセンス変異又はスプライス部位の変異が好ましい。優性点突然変異とは、そのアレルに優性形質をもたらす点突然変異、又は優性突然変異と連鎖した同―転写産物内の点突然変異をいう。優性突然変異と連鎖した同―転写産物内の点突然変異には、例えば、優性形質をもたらすトリプレットリピート病に代表される異常伸長したトリプレットリピート繰り返し配列等の優性突然変異と連鎖した一塩基多型SNP部位が該当する。本発明では、優性点突然変異の特性に特に制限はない。例えば、優性形質をもたらす点突然変異であれば、機能獲得型変異gainoffunctionmutation又は機能喪失型変異lossoffunctionmutationが挙げられる。機能獲得型変異は、タンパク質に量的上昇過剰発現:overexpression又は活性上昇構成的活性化:constitutiveactive又は機能亢進型:hyperactiveを示す形質をもたらすハイパーモルフ変異hypermorphmutation、新規機能活性を示す形質をもたらすネオモルフ変異neomorphmutation、及び野生型アレル由来のタンパク質と拮抗又はそれを抑制し、野生型アレルの形質発現を抑制するアンチモルフ変異antimorphmutationdominantnegativeを含む。また、機能喪失型変異は、アレルが形質発現能を完全に失ったアモルフ変異amorphmutation及びアレルの形質発現能の低下をもたらすハイポモルフ変異hypomorphmutationが挙げられる。ただし、機能喪失型変異の場合、その効果が優性となるものに限る。好ましくは機能獲得型の優性点突然変異である。また、優性突然変異と連鎖した同―転写産物内の点突然変異であれば、特段の制限はなく、例えば、SNPにおける縮重変異のようなアミノ酸置換をもたらさない変異であってもよい。標的とする優性アレルの塩基配列上には、優性点突然変異は、一個又は複数個存在しても構わない。本実施形態において、標的となる遺伝子の種類、及びその遺伝子が由来する生物種は、特に限定はしない。優性点突然変異を含む優性アレルであれば、あらゆるタンパク質をコードする遺伝子が本実施形態の抑制剤の標的となり得る。また、生物種は、動物、植物のいずれであってもよく、それらのあらゆる種類を包含する。動物であれば、好ましくは脊椎動物、より好ましくは魚類、鳥類又は哺乳動物である。魚類の中でさらに好ましくは水産資源用魚種例えば、サケ科、スズキ科、タラ科、ニシン科、ヒラメ科、カレイ科、アジ科、イカナゴ科、タイ科及びメバル科の魚種である。鳥類の中でさらに好ましくは食用種例えば、ニワトリ、ガチョウ、アヒル、カモ、合鴨、七面鳥、ウズラ、ダチョウ等である。哺乳動物の中でさらに好ましくは家畜ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、実験用動物げっ歯類、ウサギ、イヌ、サル、競争馬、愛玩動物イヌ、ネコ、ウサギ、サル、げっ歯類又はヒトである。一層好ましい生物種は、ヒトである。一方、植物であれば、好ましくは種子植物、より好ましくは被子植物、さらに好ましくは食用植物種例えば、イネ科、マメ科、ナス科、ヒルガオ科、バラ科、アブラナ科、アカザ科、セリ科、タデ科、ウリ科、キク科、ユリ科、サトイモ科、ブドウ科、ミカン科、ブナ科、ヤシ科等に属する食用の植物種、繊維資源用植物種例えば、ワタ、アサ等、木材資源用植物種例えば、スギ、ヒノキ、モミ、ツガ、マツ、イチイ、サクラ、カエデ、カシ、ナラ、ブナ、ニレ、ケヤキ、クルミ、ホウ、カツラ、チーク、ラワン、黒檀、マホガニー、ポプラ、ユーカリ等である。前記優性点突然変異が関与する形質も、特に限定はしないが、好ましくはその発現を抑制したい形質である。例えば、疾患の発症に関与する変異、異常形態に関与する変異等が挙げられる。ここでいう疾患は、例えば、前述の常染色体優性変異疾患であって、その変異が点突然変異によるものや、後天的に特定の細胞内のゲノムDNA中に生じた点突然変異によるものを含む。より具体的には、ヒト常染色体優性変異疾患であれば、例えば、ハンチンチン遺伝子の変異を原因とするハンチントン病、ALK2アクチビン様キナーゼ2遺伝子の変異を原因とする進行性骨化性線維異形成症FOP、トランスサイレチン遺伝子の変異を原因とする家族性アミロイドポリニューロパチー、LDL受容体LDLR遺伝子の変異を原因とする家族性高コレステロール血症FH、HNF4α遺伝子MODY1、グルコキナーゼ遺伝子MODY2及びHNF1α遺伝子MODY3の各変異を原因とする若年発症成人型糖尿病MODY、フィブリン1遺伝子の変異を原因とするマルファンMarfan症候群、ミオトニンキナーゼ遺伝子の変異を原因とする優性進行性筋ジストロフィー症、コラーゲン1型遺伝子の変異を原因とする優性骨形成不全症、ロドプシン遺伝子又はペリフェン/RDS遺伝子の変異を原因とする優性網膜色素変性症、アクアポリンAQP0遺伝子の変異を原因とする優性先天性白内障、TSC1又はTSC2遺伝子の変異を原因とする結節性硬化症、PKD1遺伝子又はPKD2遺伝子の変異を原因とする優性多発性嚢胞腎ADPKD、ケラチン遺伝子、ロリクリン遺伝子、デスモグレイン1遺伝子又はデスモブラキン遺伝子の変異を原因とする遺伝性手掌角皮症、APC遺伝子の変異を原因とする家族性大腸ポリポーシス、Rb遺伝子の変異を原因とする網膜芽細胞腫、NF1遺伝子の変異を原因とする神経線維腫等が挙げられる。また、後天的に特定の細胞内のゲノムDNA中に生じた点突然変異による疾患には、新生物腫瘍、特に悪性新生物悪性腫瘍、いわゆる癌が挙げられる。より具体的な例としては、上皮成長因子受容体EGFR遺伝子の変異を原因とする非小細胞肺癌NSCLC、Kras遺伝子の変異を原因とする膵臓癌や大腸癌、RET遺伝子の変異を原因とする甲状腺髄様癌がある。1-3.RNAi分子の構造本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子の構造における概念図を図1に示す。この図で示すように、RNAi分子は、二本鎖分子図1A又は一本鎖分子図1Bを包含する。RNAi分子共通構成要素本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子は、一本鎖分子又は二本鎖分子のいずれの場合にもRNAiセンス鎖領域0101、RNAiアンチセンス鎖領域0102及びミスマッチ塩基0103を必須の構成要素として含む。以下、RNAi分子に共通する構成要素について説明をする。RNAiセンス鎖領域0101とは、後述するミスマッチ塩基を除いて優性アレルのセンス鎖塩基配列に一致する塩基配列であって、その塩基配列内に優性アレルの優性点突然変異0104を少なくとも一つ含む。ただし、本実施形態のRNAi分子は、前述のように、主としてRNAで構成されることから、優性アレルのセンス鎖塩基配列上のTチミンに相当する塩基は、原則としてUウラシルとなる。また、優性アレルのセンス鎖塩基配列に一致する塩基長は、連続する16~30塩基、18~25塩基又は19~23塩基である。RNAiセンス鎖領域は、少なくとも優性点突然変異部位0104において、前記優性アレルに対応する野生型アレルの塩基配列とは異なる。RNAiセンス鎖領域は、優性アレルのセンス鎖塩基配列に含まれる優性点突然変異を少なくとも一つ含んでいれば、前記塩基長の範囲内においてセンス鎖塩基配列上のいずれの配列と一致していてもよい。RNAi分子は、RNAiセンス鎖領域において、前記RNAiセンス鎖領域上のいずれかの一の優性点突然変異以降、この優性点突然変異を基準変異点と呼ぶ0104から、上流側に向かって7~10番目の塩基がRNAiセンス鎖領域の5’末端塩基に相当することを特徴とする。換言すれば、RNAiセンス鎖領域における基準変異点の位置は、5’末端から8~11番目となる。RNAiセンス鎖領域が優性点突然変異を二以上含む場合、基準変異点はそれらのうちのいずれであってもよい。本実施形態のRNAi分子が二本鎖分子図1Aの場合、RNAiセンス鎖領域の前記5’末端塩基は、RNAiセンス鎖領域を含む一方の鎖ポリヌクレオチド鎖の5’末端塩基と一致する図1A。また、本実施形態のRNAi分子が一本鎖分子図1Bの場合、RNAiセンス鎖領域の5’末端塩基は、その一本鎖分子の5’末端塩基と一致する図1B。このRNAiセンス鎖領域における基準変異点から5’末端塩基までの距離が、本実施形態のRNAi分子の構成上必須の構成要件となる。RNAiアンチセンス鎖領域0102とは、前記RNAiセンス鎖領域0101に完全に相補的な塩基配列である。したがって、その塩基配列中には、前記基準変異点に相補的な塩基及び後述するミスマッチ塩基に相補的な塩基を含む。また、RNAiセンス鎖領域のAアデニンに相補する塩基は、Uとなる。RNAiアンチセンス鎖領域は、本実施形態のRNAi分子が二本鎖分子図1Aの場合には、RNAiセンス鎖領域を含むポリヌクレオチド鎖とは異なる他方のポリヌクレオチド鎖に含まれるが、一本鎖分子図1Bの場合には、RNAiセンス鎖領域と同一のポリヌクレオチド鎖に含まれる。ミスマッチ塩基0103とは、前記優性アレルのセンス鎖塩基配列上の塩基とは唯一一致しない、すなわち、ミスマッチするRNAiセンス鎖領域上の塩基であって、かつ、優性アレルのアンチセンス鎖塩基配列上の対応する塩基とも塩基対合のできない塩基である。例えば、優性アレルのアンチセンス鎖塩基配列上の対応する塩基がAであればこの場合、優性アレルのセンス鎖塩基配列上の本来の塩基はTであるミスマッチ塩基は、Aと塩基対合できないA、Gグアニン又はCシトシンである。優性アレルのアンチセンス鎖塩基配列上の対応する塩基がTであればこの場合、優性アレルのセンス鎖塩基配列上の本来の塩基はAであるミスマッチ塩基は、Tと塩基対合できないU又はCである。また、優性アレルのアンチセンス鎖塩基配列上の対応する塩基がGであればこの場合、優性アレルのセンス鎖塩基配列上の本来の塩基はCであるミスマッチ塩基は、Gと塩基対合できないG又はAである。さらに、優性アレルのアンチセンス鎖塩基配列上の対応する塩基がCであればこの場合、優性アレルのセンス鎖塩基配列上の本来の塩基はGであるミスマッチ塩基は、Cと塩基対合できないC、A又はUである。ミスマッチ変異は、RNAiセンス鎖領域上の所定の位置に存在する。この所定の位置は、前記基準変異点を0番目とした時に下流側に向かって3~8番目、好ましくは3~5番目及び7~8番目、より好ましくは3~5番目のいずれか一の塩基である。ただし、RNAiセンス鎖領域の3’末端にミスマッチ塩基が位置することはない。二本鎖RNAi分子の構成要素本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子がsiRNAのような二本鎖分子の場合、前記図1Aに示すように、上記RNAi分子共通構成要素であるRNAiセンス鎖領域0101、RNAiアンチセンス鎖領域0102及びミスマッチ塩基0103に加えて、さらにそれぞれのポリペプチド鎖の3’末端に3’末端付加塩基0105を含むことができる。3’末端付加塩基0105は、TTチミン‐チミン又はUUウラシル‐ウラシルの2塩基で構成される。この塩基を付加したRNAi分子は、RNAi抑制効率を高めることができるTuschlTetal1999GenesDev1331917。一本鎖RNAi分子の構成要素本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子がshRNAのような一本鎖分子の場合、前記図1Bに示すように、上記RNAi分子共通構成要素であるRNAiセンス鎖領域0101、RNAiアンチセンス鎖領域0102及びミスマッチ塩基0103に加えて、さらにRNAiセンス鎖領域0101とRNAiアンチセンス鎖領域0102とを連結する短いスペーサ配列0106を含む。スペーサ配列は、通常3~24塩基、好ましくは、4~15塩基からなる自己塩基対合しない任意の塩基配列とすることができる。したがって、RNAi分子が一本鎖の場合、分子全体として、35塩基16×23~84塩基30×224からなる。RNAi分子内では、RNAiセンス鎖領域とRNAiアンチセンス鎖領域が互いに塩基対合し、その間に位置するスペーサ配列がループ構造を形成することによって、分子全体がヘアピン型のステム-ループ構造をなす。前記構造を有する一本鎖RNAi分子が細胞内に導入されると、細胞質内でDicerと呼ばれるエンドヌクレアーゼの働きによって二本鎖siRNAに加工され、そのうちRNAiアンチセンス鎖領域がRISCRNAinducedsilencingcomplex複合体に取り込まれた後、前述の二本鎖RNAi分子と同様のRNAi機構によって標的遺伝子の転写後翻訳前発現を抑制することができる。1-4.発現ベクターの構成本明細書において発現ベクターとは、本実施形態の阻害剤に含まれる有効成分であって、前記RNAi分子をコードするDNAを発現可能なように発現用ベクター内に挿入したベクターである。本実施形態の発現ベクターは、RNAi分子がsiRNAのような二本鎖分子の場合、RNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域のそれぞれをコードするDNA断片を、異なる二つの発現用ベクターに挿入していてもよく、また一つの発現用ベクター内に独立に発現制御されるDNA断片として挿入していてもよい。一方、RNAi分子がshRNAのような一本鎖分子の場合、当該一本鎖RNA分子をコードするDNA断片が発現用ベクター内の所定の位置に挿入されていればよい。本明細書において、発現用ベクターとは、本実施形態の発現ベクターにおける骨格部分、すなわち、本実施形態の発現ベクターにおいて実施形態1のRNAi分子をコードするDNA断片以外の部分をいう。発現用ベクターの種類は、特に限定はしないが、プラスミド又はウイルスが好ましい。これらは、導入する宿主に応じて適宜選択すればよい。例えば、導入する宿主がヒトの場合には、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノ随伴ウイルス等のウイルス、あるいは非ウイルスベクターを基礎とするベクターのような公知の発現ベクターを使用することができる。また、導入する宿主が植物の場合には、pBI系若しくはpRI系のバイナリーベクター等のプラスミドやカリフラワーモザイクウイルスCaMV、インゲンマメゴールデンモザイクウイルスBGMV、タバコモザイクウイルスTMV等のウイルスを利用することができる。さらに、導入する宿主が大腸菌の場合には、例えば、pBI系、pPZP系、pSMA系、pUC系、pBR系、pBluescript系stratagene社等のプラスミドを利用することができる。この他、各ライフサイエンスメーカーから市販されている様々な各種宿主用発現ベクターを利用してもよい。前記発現用ベクターは、プロモータ、エンハンサ、若しくはターミネータのような調節領域、又は選抜マーカー遺伝子のような標識領域を含むことができる。それぞれの種類は、特に限定されない。発現ベクターを導入する宿主に応じて当該分野で公知のものを適宜選択すればよい。大腸菌中で動作可能なプロモータとしては、例えば、lac、trp若しくはtacプロモータ又はファージ由来のT7、T3、SP6、PR若しくはPLプロモータ等が挙げられる。酵母で動作可能なプロモータとしては、例えば、酵母解糖系遺伝子由来のプロモータ、アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子プロモータ、TPI1、ADH24cプロモータ等が挙げられる。植物細胞で動作可能なプロモータとしては、例えば、カリフラワーモザイクウイルスCaMVの35Sプロモータ、ノパリン合成酵素遺伝子のプロモータPnos、トウモロコシ由来ユビキチンプロモータ、イネ由来のアクチンプロモータ、タバコ由来PRタンパク質プロモータ等が挙げられる。昆虫細胞で動作可能なプロモータとしては、例えば、ポリヘドリンプロモータ、P10プロモータ、オートグラファカリホルニカポリヘドロシス塩基性タンパクプロモータ、バキュロウイルス即時型初期遺伝子1プロモータ、バキュロウイルス39K遅延型初期遺伝子プロモータ等が挙げられる。そして、ヒトをはじめとする動物細胞内で動作可能なプロモータとしては、RNAポリメラーゼII系のプロモータやRNAポリメラーゼIII系のプロモータが好適に用いられる。好ましくは、PolIII系のプロモータ、特に好ましくはU6及びH1等のプロモータである。また、いずれの宿主の場合にも、生体内の特定の部位でのみ発現を誘導する部位特異的プロモータを使用することもできる。なお、異なる二つの発現用ベクターのそれぞれにRNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域をコードするDNA断片を挿入した場合、各RNA鎖が同程度の量で発現するように、プロモータは、同一のプロモータ又は同程度の発現活性を有する異なるプロモータを用いることが好ましい。1-5.RNAi分子の設計と製造本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子の設計方法について説明をする。本設計方法は、図2で示すように、基準変異点設定工程0201、5’末端塩基設定工程0202、RNAiセンス鎖領域選択工程0203、ミスマッチ塩基導入工程0204及びRNAiアンチセンス鎖領域設定工程0205を含む。基準変異点設定工程、5’末端塩基設定工程RNAi、センス鎖領域選択工程及びRNAiアンチセンス鎖領域設定工程は、この順序で進めるが、ミスマッチ塩基導入工程は、基準変異点設定工程、5’末端塩基設定工程又はRNAiセンス鎖領域選択工程のいずれの工程後に行なってもよい。以下、それぞれの工程について説明をする。基準変異点設定工程0201とは、標的遺伝子の優性アレルにおいて、その塩基配列中に存在する一の優性点突然変異部位を基準変異点として定める工程である。優性アレル中に優性点突然変異部位が1塩基のみの場合には、その塩基が基準変異点となる。また、優性アレルにおいて優性点突然変異部位が2塩基以上存在する場合には、いずれか一の塩基を基準変異点として選択すればよい。望ましくは、その選択によって必然的に定まるRNAiセンス鎖領域内のGC含有量が、20~80、好ましくは30~70、より好ましくは40~60となるような優性点突然変異部位である。5’末端塩基設定工程0202とは、優性アレルの塩基配列上の基準変異点から上流側に向かって7~10番目の塩基をRNAiセンス鎖領域の5’末端塩基として定める工程である。前述のように、本工程で定めた5’末端塩基が、二本鎖RNAi分子の場合にはRNAiセンス鎖領域を含むポリヌクレオチド鎖側の、また一本鎖RNAi分子の場合には当該分子の、5’末端塩基となる。したがって、本工程によりRNAi分子の一方の端部が決定される。RNAiセンス鎖領域選択工程0203とは、前記5’末端塩基設定工程で5’末端塩基として定めた優性アレルの塩基配列上の塩基を起点として下流16~30塩基の塩基配列をRNAiセンス鎖領域として優性アレルのセンス鎖塩基配列から選択する。本工程によってRNAi分子の優性アレルに対する標的領域が定まる。なお、DNA配列である優性アレルの塩基配列上のTに相当する塩基は、RNAiセンス鎖領域の塩基配列ではUに置換しておくことが望ましい。ミスマッチ塩基導入工程0204とは、設定したRNAiセンス鎖領域内にミスマッチ塩基を導入する工程である。ミスマッチ塩基は、基準変異点から下流側に向かって3~8番目の塩基を一つ選択し、優性アレルのセンス鎖塩基配列の相当する塩基とは異なる塩基に置換する。好ましくは3~5番目及び7~8番目、より好ましくは3~5番目の塩基である。このとき、置換後の塩基が優性アレルのアンチセンス鎖塩基配列の対応する塩基とは塩基対合できない塩基を選択するように留意する。例えば、優性アレルのアンチセンス鎖の対応する塩基がAであれば、A、G又はCに、アンチセンス鎖の対応する塩基がTであれば、U又はCに、アンチセンス鎖の対応する塩基がGであれば、G又はAに、アンチセンス鎖の対応する塩基がCであれば、C、U又はAにすればよい。RNAiアンチセンス鎖領域設定工程0205とは、設定されたRNAiセンス鎖領域の塩基配列に相補的な塩基配列をRNAiアンチセンス鎖領域として設定する工程である。これによって、二本鎖RNAi分子の基本構造が定まる。以上の工程は、本実施形態の抑制剤に含まれるRNAi分子が一本鎖RNAi分子及び二本鎖RNAi分子のいずれであっても共通する工程である。次に、二本鎖RNAi分子及び一本鎖RNAi分子のそれぞれに特有の工程として、3’末端付加工程及びスペーサ連結工程を以下で説明する。3’末端付加工程は、二本鎖RNAi分子に特有の任意の工程である。本工程は、前記で設計したRNAiセンス鎖領域及びRNAiアンチセンス鎖領域のそれぞれの3’末端にTTチミン‐チミン又はUUウラシル‐ウラシルを付加することを特徴とする。スペーサ連結工程は、一本鎖RNAi分子に特有の必須の工程である。本工程は、前記で設計したRNAiセンス鎖領域の3’末端とRNAiアンチセンス鎖領域の5’末端をそれぞれスペーサ配列の3’末端と5’末端に連結して一本鎖分子にする工程である。スペーサ配列は、3~24塩基、好ましくは4~15塩基からなる任意の塩基配列でよい。好ましくは、スペーサ配列内で塩基対合を形成しない塩基配列である。本実施形態のRNAi分子は、前述の方法によって設計された塩基配列に基づいて、化学的合成法によって合成することができる。RNAi分子の化学合成は、各ライフサイエンスメーカー例えば、シグマアルドリッチ社、ベックス社、タカラバイオ社、インビトロジェン社等が受託製造サービスを行っており、それらを利用することもできる。また、本実施形態のRNAi分子は、前述の方法によって設計された塩基配列を一旦DNA配列に変換し、その配列に基づいてDNAを化学合成したものをクローニングした後に、当該分野で公知のinvitroRNA転写法によってRNAとして調製することができる。invitroRNA転写法は、例えば、SambrookJetalMolecularCloningALaboratoryManualSecondEdColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYorkを参照すればよい。また、UiTeiらの方法NucleicAcidsRes329369482004、Reynoldsらの方法NatBiotechnol223263302004、Amarzguiouiらの方法BiochemBiophysResCommun316105010582004を参考にすることができる。1-6.発現ベクターの調製本実施形態の抑制剤に含まれる発現ベクターの調製方法は、基本的には、当該分野で公知の方法、例えば、SambrookJetalMolecularCloningaLaboratoryManualSecondEdColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYorkに記載の方法に従って調製することができる。具体的な例を挙げると、まず、前述の1-5.RNAi分子の設計と製造の項で説明した方法に従い、RNAi分子の塩基配列を決定する。続いて、それに対応するDNA配列に基づき、センス鎖DNA及びアンチセンス鎖DNAを化学合成法等によってそれぞれ合成する。このとき各鎖の両末端に適当な制限部位を付加するか、各鎖のアニーリング後に適当なコヘシブ末端が形成されるようにしておくことが好ましい。DNA合成は、ライフサイエンス関連メーカー各社が受託合成サービスを行っており、それを利用することもできる。合成後の両鎖を混合してアニーリングさせ、二本鎖DNA断片を調製した後、末端に制限部位を付加していた場合には、必要に応じてその制限酵素で切断する。さらに、各鎖の5’末端を必要に応じてT4ポリヌクレオチドキナーゼ等でリン酸化する。続いて、発現用ベクターのプロモータ下流の対応する制限部位に前記調製した二本鎖DNA断片を連結する。DNA断片は、一旦適当なクローニングベクターに連結してクローン化した後、それから切り出したものを発現用ベクターに連結してもよい。1-7.効果本実施形態の優性アレル発現抑制剤によれば、有効成分のRNAi分子が、アレル間の塩基配列の相違がわずか1塩基であっても、非標的アレルの発現にはほとんど又はあまり影響を及ぼすことなく、標的アレルの発現を選択的、かつ効率的に抑制することができる。本実施形態の抑制剤によれば、細胞内に導入した場合、RNAi分子を有効成分とする場合にはそのRNAi分子がそのままで、また発現ベクターを有効成分とする場合にはその発現ベクターに含まれるDNAにコードされたRNAi分子が発現した後に、標的とする優性アレルに作用してその発現をRNAiサイレンシング機構によって抑制することができる。したがって、抑制剤がRNAi分子を含む場合には、ASPRNAi効果を投与した細胞等に短時間で付与することができる。一方、抑制剤が発現ベクターを含む場合には、投与後の細胞内で発現ベクターが維持されている限りASPRNAi効果を継続的に付与し続けることができる。故に、これらを組合わせて用いることで、効果的に優性アレルの発現を抑制することができる。本実施形態の抑制剤を用いれば、後述する医薬組成物に加えることで、従来その治療が困難であった優性アレルによる様々な疾患を治療又は軽減することができる他、動植物の品種改良等にも利用することができる。2.医薬組成物本発明の第2の実施形態は、前記実施形態1の抑制剤を含む医薬組成物である。2-1.構成本発明の医薬組成物は、有効成分であるRNAi分子及び/又は発現ベクターの媒体を含む。媒体には、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアレルアルコール、ポリオキシ化イソステアレルアルコール及びポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類のような溶媒が挙げられる。このような媒体は、殺菌されていることが望ましく、必要に応じて血液と等張に調整されていることが好ましい。本発明の医薬組成物において、医薬組成物中の有効成分であるRNAi分子及び/又は発現ベクターの含有量は、治療対象となる疾患の原因遺伝子の種類、その遺伝子の発症作用機序、RNAi分子の作用効果及び安定性、発現ベクターの発現量、医薬組成物の剤形、使用する担体の種類、及び投与方法、投与する被検体の状態等の様々な条件によって異なる。これらは、当該分野の公知技術に基づいて適宜選択すればよい。本発明のRNAi分子又は発現ベクターの含有量の具体例は、他の医薬の併用を必要としないヒト成人男子体重60kgに対して注射液によって投与する場合、注射液一投与単位あたり約0.01~約20、好ましくは約01~約10で含まれていればよい。具体的には、例えば、1回1m1の注射剤中にはsiRNAが通常1μg~200μg含まれていればよい。また、本発明の医薬組成物の薬理効果を得る上で、本発明の核酸の大量投与が必要な場合、被検体に対する負担軽減のために数回に分割して投与することもできる。本発明の医薬組成物は、必要に応じてさらに製薬上許容可能な担体を含むことができる。製薬上許容可能な担体とは、製剤技術分野において通常使用する添加剤をいう。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、乳化剤、流動添加調節剤、滑沢剤等が挙げられる。賦形剤としては、単糖、二糖類、シクロデキストリン及び多糖類のような糖より具体的には、限定はしないが、グルコース、スクロース、ラクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン及びセルロースを含む、金属塩例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム若しくはリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、クエン酸、酒石酸、グリシン、低、中、高分子量のポリエチレングリコールPEG、プルロニック、カオリン、ケイ酸、あるいはそれらの組み合わせが例として挙げられる。結合剤としては、トウモロコシ、コムギ、コメ、若しくはジャガイモのデンプンを用いたデンプン糊、単シロップ、グルコース液、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック及び/又はポリビニルピロリドン等が例として挙げられる。崩壊剤としては、前記デンプンや、乳糖、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、アルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド又はそれらの塩が例として挙げられる。充填剤としては、前記糖及び/又はリン酸カルシウム例えば、リン酸三カルシウム、若しくはリン酸水素カルシウムが例として挙げられる。乳化剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルが例として挙げられる。流動添加調節剤及び滑沢剤としては、ケイ酸塩、タルク、ステアリン酸塩又はポリエチレングリコールが例として挙げられる。このような担体は、主として前記剤形形成を容易にし、また剤形及び薬剤効果を維持するために用いられるものであり、必要に応じて適宜使用すればよい。上記の添加剤の他、必要であれば矯味矯臭剤、可溶化剤、懸濁剤、希釈剤、界面活性剤、安定剤、吸収促進剤、増量剤、付湿剤、保湿剤、吸着剤、崩壊抑制剤、コーティング剤、着色剤、保存剤、抗酸化剤、香料、風味剤、甘味剤、緩衝剤等を含むこともできる。本発明の医薬組成物は、前記RNAi分子が有する薬理効果を失わない範囲において、他の薬剤を含有することもできる。例えば、注射剤の場合であれば、抗生物質を所定量含有していても良い。さらに、実施形態の医薬組成物は、製薬上許容可能な範囲内で、かつ実施形態1の抑制剤中のRNAi分子及び/又は発現ベクターを失活させない範囲において、他の有効成分を包含する、いわゆる複合製剤とすることができる。本実施形態の医薬組成物の剤形は、抑制剤中の有効成分であるRNAi分子又は発現ベクター、さらには他の付加的な有効成分を不活化させない形態であれば特に限定しない。例えば、液体、固体又は半固体のいずれであってもよい。具体的な剤形としては、例えば、注射剤、懸濁剤、乳剤、点眼剤、点鼻剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、シップ剤及び座剤等の非経口剤形又は液剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、舌下剤、トローチ剤等の経口剤形が挙げられる。RNAi分子又は発現ベクターを有効成分とする抑制剤を含む本実施形態の医薬組成物の場合、剤形は注射剤であることが好ましい。2-2.投与方法本実施形態の医薬組成物は、目的とする疾患の治療のために製薬上有効な量を生体に投与することができる。投与する対象となる生体は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。本明細書において製薬上有効な量とは、本発明の医薬組成物に含まれる抑制剤の有効成分であるRNAi分子及び/又は発現ベクターが、対象とする疾患を治療する又は症状を軽減する上で必要な用量具体的には疾患原因である優性アレルの形質発現を抑制することができる用量であって、かつ投与する生体に対して有害な副作用例えば、野生型アレルの発現抑制等がほとんどないか又は全くない用量をいう。その具体的な量は、標的とする遺伝子の種類、優性アレルにおける優性点突然変異の位置、優性アレルの形質発現効果、使用する剤形、被検体ヒトの場合には被験者の情報及び投与経路によって異なる。ヒトに投与する場合には、製薬上有効な量の範囲及び好適な投与経路は、一般に細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータに基づいて策定される。最終的な投与量は、個々の被験者に応じて医師の判断により決定され、調整される。その際に、勘案される被験者の情報には、病気の進行度若しくは重症度、全身の健康状態、年齢、体重、性別、食生活、薬剤感受性及び治療に対する耐性等が含まれる。本発明のRNAi分子は、全身投与又は局所的投与のいずれであってもよい。疾患の種類、発症箇所又は進行度等に応じて適宜選択することができる。発症箇所が局部的な疾患であれば、注射などにより発症箇所及びその周辺に直接投与する局所的投与が好ましい。治療すべき箇所組織又は器官に本発明のRNAi分子を十分量投与することができ、また他の組織に影響を及ぼしにくいからである。一方、転移性癌のように治療箇所を特定できない場合や発症が全身性の疾患の場合には、限定はしないが、静脈注射等による全身投与が好ましい。血流を介して本発明のRNAi分子を全身に行き渡らせることで、診断で発見できない病変部にも投与が可能となるからである。本発明のRNAi分子は、含有される有効成分が失活しないあらゆる適当な方法で投与することができる。例えば、非経口例えば、注射、エアロゾル、塗布、点眼、点鼻又は経口のいずれであってもよい。好ましくは、注射である。注射による投与の場合、注入部位は、特に限定しない。標的分子に対して本発明のRNAi分子又は発現ベクターから生産されるRNAi分子がその機能を発揮し、医薬組成物の目的を達し得ればいずれの部位であってもよい。例えば、静脈内、動脈内、肝臓内、筋肉内、関節内、骨髄内、髄腔内、心室内、経皮、皮下、皮内、腹腔内、鼻腔内、腸内又は舌下等が挙げられる。好ましくは、静脈内注射又は動脈内注射等の血管内への注射である。前述のように血流を介して本発明の医薬組成物を全身に行き渡らせることが可能であり、また侵襲性も比較的低いからである。2-3.用法本発明の医薬組成物は、疾患の治療用として使用される。例えば、常染色体優性遺伝疾患のような優性アレルの発現を原因とする疾患において適用することで、優性アレルの発現を選択的に抑制し、同時に他方のアレル例えば、正常な機能を有するタンパク質をコードする野生型アレルの形質を顕在化できることから、従来その治療が困難であった遺伝病や癌等の治療の他、動植物の品種改良等に利用することができる。したがって、本実施形態の医薬組成物の対象となる疾患は、抑制剤に含まれるRNAi分子又は発現ベクターから発現されるRNAi分子が、標的とする優性アレルの優性形質に基づく疾患である。このような疾患の具体例としては、例えば、ハンチントン病、進行性骨化性線維異形成症FOP、家族性アミロイドポリニューロパチー、家族性高コレステロール血症、若年発症成人型糖尿病MODY、マルファンMarfan症候群、優性進行性筋ジストロフィー症、優性骨形成不全症、優性網膜色素変性、優性先天性白内障、結節性硬化症、遺伝性手掌角皮症、家族性大腸ポリポーシス、優性多発性嚢胞腎、網膜芽細胞腫、神経線維腫のようなヒト常染色体優性変異疾患の他、非小細胞肺癌NSCLC、膵臓癌、大腸癌、甲状腺髄様癌のような悪性新生物が挙げられる。したがって、本実施形態の医薬組成物は、治療対象となる疾患に応じて、その原因遺伝子である優性アレルに対するRNAi分子又はそれをコードするDNAを含む発現ベクターを有効成分として用いることで、様々な疾患に対して適用できる。<実施例1:ALK2遺伝子に対するsiRNAのASP-RNAi効果の検証>ヒト常染色体優性変異疾患として知られる進行性骨化性線維異形成症FOPの原因遺伝子であるALK2遺伝子に対するsiRNAALK2siRNAを設計し、優性アレルと野生型アレルのそれぞれにおけるASPRNAi効果について検証した。1ALK2siRNAの設計と調製FOP患者では、ヒトALK2遺伝子アクセッションNoNM001105における617番目開始コドンのAを1番目とする。以下、同じの塩基GがAにR206Hアミノ酸変異、すなわち、開始メチオニンから206番目のリジンをヒスチジンに置換する変異をもたらす又は1067番目の塩基GがAにG356Dアミノ酸変異、すなわち、356番目のグリシンをアスパラギン酸に置換する変異をもたらす置換した点突然変異を有する。そこで、それぞれの点突然変異を基準変異点として定め、実施形態1に記載のRNAi分子の設計方法に従って様々なALK2siRNAを設計した。表1に617番目R206Hアミノ酸変異を基準変異点として設計したALK2siRNAセンス鎖及びアンチセンス鎖の塩基配列を、また表2に1067番目G356Dアミノ酸変異を基準変異点として設計したALK2siRNAセンス鎖及びアンチセンス鎖の塩基配列を示す。ただし、各表で示す塩基配列は、センス鎖及びアンチセンス鎖の3’末端におけるUUからなるオーバーハング配列を記載便宜上、除いている。それぞれの表において、siRNA名は、以下のように命名した。siR206H8s19ssを例に挙げれば、siR206HはR206Hのアミノ酸置換をもたらす617番目の基準変異点を含むsiRNAであることを示し、8sは基準変異点standardmutationpointの上流側に8塩基を有することを示し、A5Uのようなカッコは、ミスマッチ塩基で、かつ基準変異点の下流側5番目のAをUに置換したことを示し、続く数値19はsiRNAの全塩基数を意味し、最後のssはsiRNAのセンス鎖配列であることを示す。同様に最後のasはsiRNAのアンチセンス鎖配列であることを示す。また、カッコのないsiRNAは、ミスマッチ塩基を有さないことを意味する。各表中のセンス鎖塩基配列においては、基準変異点を太字で、ミスマッチ塩基を下線付文字で示した。表1及び2の塩基配列に基づき、siRNAの化学合成を行なった。合成は、シグマアルドリッチ社に委託した。合成siRNAは、対を成すべきセンス鎖及びアンチセンス鎖がアニーリング処理されており、それを実験に使用した。2レポーターアレル発現プラスミドの構築前記1で調製したALK2siRNAにおけるASPRNAi効果の評価及び好適なALK2siRNAの選定のために、ホタルルシフェラーゼPhotinusluciferase遺伝子を発現するpGL3TKOhnishietal2005と及びウミシイタケルシフェラーゼRenillaluciferase遺伝子を発現するphRLTKプラスミドPromega社を用いて、siRNAの標的となる優性変異型と非標的の正常型のレポーターアレル発現プラスミドの構築を行った。優性点突然変異部位を含む優性アレルに相当する合成オリゴDNAの設計、レポータープラスミドへの挿入、選定方法については、非特許文献6に従った。具体的には、FOPの病因となるALK2遺伝子の617番目又は1097番目の優性点突然変異部位をそれぞれ含む39塩基からなるオリゴDNAのセンス鎖及びアンチセンス鎖をそれぞれ合成したシグマアルドリッチ社。点突然変異を持たない正常型アレルについても同様に、オリゴDNA合成した。それぞれの具体的な塩基配列を表3に示す。これらのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、ALK2遺伝子断片のセンス鎖及びアンチセンス鎖の両端に制限酵素切断部位を構成するリンカー配列を含んでいる。表中、基準変異点を太字で、またリンカー配列を下線で示している。次に、合成した各鎖オリゴDNAのアニーリング処理を行った。具体的には、最終容量10μLとなるように、センス鎖及びアンチセンス鎖の一本鎖オリゴDNA最終濃度:それぞれ1μM、10×アニーリングバッファインビトロジェン社、最終濃度:1×及び滅菌水を混合し、80°Cで5分間熱処理をした後、室温に30分間放置し、二本鎖を形成させた。続いて、二本鎖オリゴDNAを制限酵素処理した前記2種のプラスミドに挿入した。具体的には、pGL3TKプラスミドとphRLTKプラスミドを制限酵素XbaI及びNotIで処理した後、正常型アレルはpGL3-TKプラスミドにおける、また優性変異型アレルはphRLTKプラスミドにおける、各レポーター遺伝子の3’非翻訳領域3’UTR内に挿入して、正常型ALK2レポーターアレル発現プラスミド及び優性変異型ALK2レポーターアレル発現プラスミドを構築した。また、正常型及び優性変異型アレルに対してレポーター遺伝子を入れ替えたレポーターアレル発現プラスミドも同様に構築した。3細胞培養ヒト由来株化細胞であるHeLa細胞を10ウシ胎仔血清FBS;Invitrogen社及び抗生物質100ユニットmLペニシリン、100μgmLストレプトマイシン;Wako社含有のDMEM培養液Wako社を用いて、5CO2下で37°Cにて培養した。4トランスフェクション及びレポーターアッセイ遺伝子導入の前日に、HeLa細胞をトリプシン消化により分散させた後、細胞密度1×105cellscm2となるように調整して96ウェル培養プレートに播種し、抗生物質不含のDMEM培養液で培養を行った。24時間後、3種類のプラスミド、すなわち、a正常型ALK2レポーターアレル発現プラスミドであるpGL3TKバックボーンプラスミド60ngウェル、b変異型ALK2優性レポーターアレルの各発現プラスミドであるphRLTKバックボーンプラスミド20ngウェル及びc内部コントロールとしてRNAiによる発現抑制を受けないβガラクトシダーゼ遺伝子発現プラスミドであるpSVβガラクトシダーゼ対照用プラスミドPromega社10ngウェルを前記HeLa細胞にALK2優性変異型アレルを標的として設計した表1又は2で示す様々なALK2siRNA終濃度20nMと共に導入した。ネガティブコントロールとして、終濃度20nMのRNAiを誘導しないsiRNAsiControlQIAGEN社を用いた。これらの核酸の導入には、リポフェクタミン2000Invitrogen社を用いた。トランスフェクション法は、添付されたプロトコールに従った。核酸を導入して24時間後、DualLuciferasereporterassaysystemPromega社のキットに添付されたDualLuciferasereporterassaysystem細胞溶解バッファPassivelysisbufferを用いて細胞抽出液を調製し、発現したそれぞれのレポーターアレル及び2種のルシフェラーゼとコントロールのβガラクトシダーゼの活性をDualLuciferasereporterassaysystemPromega社及びBetaGloassaysystemPromega社を用いてそれぞれ測定した。測定にはFusionUniversalMicroplateAnalyzerPerkinElmer社を用いた。さらに、レポーターに関して、使用した2種のルシフェラーゼ活性の違いによる測定差異の可能性を排除するため、各変異部位R206H、G356Dに対しレポーター遺伝子を入れ替えた実験も行った。5結果前記レポーターアレル発現プラスミドを用いたレポーターアッセイによってALK2の各変異部位R206H、G356Dに対して設計した様々なALK2siRNAのASPRNAi効果及びASPRNAi誘導に好適なRNAi分子の構造的一般法則性について検討した。各siRNAによる発現抑制効果は、野生型ALK2及び変異型ALK2のそれぞれのレポータールシフェラーゼ活性に基づいて算出される識別比及びASPスコアによって評価した。ここで、識別比DRDiscriminationRatioとは、DR正常型アレルの発現量変異型アレルの発現量の式から得られる正常型アレルの変異型アレルに対する相対的発現比である。識別比は、その値が大きいほどsiRNAが正常型アレルと変異型アレルを識別していることを意味する。また、ASPスコアAlleleSPecificityscoreとは、本発明者らが考案した評価法で、下記式によって得られる値である。ASPスコアは、変異型アレルに対する特異性と抑制効果の両者を反映する。ASPスコア=正常型アレルの発現量-変異型アレルの発現量×正常型アレルの発現量上記の式は、RNAi分子の変異型アレルに対する抑制効果の程度を正常型アレルの発現量との差で反映させ、そして正常型アレルの発現量を乗ずることにより正常型が受ける非特異的な影響を加味させたものである。前記識別比の評価方法は、有用な評価方法ではあるが、ASPRNAiにおいて重要な要素である正常型アレルに対する非特異的な抑制の影響、換言すれば、RNAiが正常型アレルに与える副作用を加味することができなかった。しかし、ASPスコアによれば、変異型アレルに対する特異性と抑制効果の両者を反映した評価が可能となる。例えば、識別比の値が高く、野生型と変異型アレルを特異的に識別可能なsiRNAであっても、野生型アレルの発現を少なからず抑制する場合には、ASPスコアは低い値となる。結果を図3及び4に示す。図3はALK2G356DsiRNAを、図4はALK2R206HsiRNAをそれぞれ用いたときのRNAiの結果である。図3及び4において、Aは、各siRNAを用いたときの識別比及びASPスコアを示す。また、Bは、野生型の非標的ALK2配列WT-ALK2と、変異型の標的ALK2配列のルシフェラーゼ活性に基づいて算出された発現量の相対値を示す。図3では、ALK2G356D変異を標的とし、基準変異点から上流側に向かって9個のヌクレオチドを有し、かつミスマッチ塩基を有さない全長19塩基からなるsiG356D9s19をコントロールに用い、これにミスマッチ塩基の位置を一つずつずらして導入し、ASPRNAiに最適の位置を検証した。siG356D9s19の識別比は164で、ASPスコアは002であった。この結果は、siG356D9s19は野生型と変異型アレルの識別能が低く、かつ変異型アレルと共に野生型アレルの発現をも強く抑制してしまうことを示している。一方、基準変異点から下流側に向かって2~9番目にそれぞれミスマッチ塩基を導入したsiG356D9s19~siG356D9s19に関しては、3~8番目にミスマッチ塩基を導入したsiG356D9s19~siG356D9s19において、コントロールであるsiG356D9s19と比較して、非常に高い識別比及びASPスコアが得られた。これらの結果は、基準変異点の下流に向かって3~8番目の位置にミスマッチを導入したsiRNAは、野生型と変異型アレルの識別能が高く、かつ変異型アレルを強く抑制する一方で野生型アレルの発現量の抑制能がほとんどないか又は非常に低いことを示している。すなわち、これは、ASPRNAi効果の高い非常に有用なsiRNAであることを意味する。この結果から、ミスマッチ塩基の位置は、基準変異点から3~8番目が好適であることが示唆された。上記結果の一般性を確認するために、上流側に向かって10個のヌクレオチドを有する全長19塩基のsiG356D10s19をコントロールとして、これにsiG356D9s19で効果のみられた位置基準変異点の下流に向かって3~7番目に、同様にミスマッチ塩基を導入したsiRNAsiG356D10s19~siG356D10s19についてそのASPRNAi効果を検証した。その結果、コントロールのsiG356D10s19では、識別比が10で、ASPスコアが000と、siG356D9s19とほぼ同程度であったのに対し、ミスマッチ塩基を導入したsiRNAでは、いずれもコントロールと比較して高い識別比とASPスコアが得られた。図4は、ALK2R206H変異を標的とし、siR206H8s19をコントロールに用いて、これに前述のsiG356D9s19でASPRNAi効果のみられた位置ここでは、基準変異点の下流に向かって4番目と5番目にミスマッチ塩基を導入したsiRNAについての結果を示す。ALK2のR206H変異でもG356D変異と同様に基準変異点から4又は5番目の位置にミスマッチを導入したsiRNAでは、コントロールと比較して高い識別比とASPスコアが得られた。また、ミスマッチ部位の塩基の違いによるASPRNAi効果を検証するため5番目のミスマッチ塩基をU、G及びCと変えてみた図中、siR206H8s19、siR206H8s19、siR206H8s19で示す。その結果、塩基間に大きな差異は認められず、ミスマッチを形成する塩基であれば、いずれの塩基であってもよいことが明らかとなった。さらに、ここで用いたsiRNAの多くは、基準変異点から上流側に向かって8個のヌクレオチドを有するが、8個であっても9個及び10個を用いたG356DのsiRNAと同様の効果がみられることも判明した。加えて、7塩基のヌクレオチドを有するsiR206H7sA5U18とsiR206H7sA5U19を検証したところ、同様の高い識別比とASPスコアが得られた。以上の結果から、ASPRNAi誘導に好適なRNAi分子の構造的特徴は、センス鎖の5’末端が基準変異点から5’側上流に向かって7~10番目に位置し、さらに基準変異点から下流側に向かって3~8番目にミスマッチ塩基が導入されたものが好適であることが明らかとなった。<実施例2:ALK2siRNAを用いた細胞内BMPシグナル伝達経路の活性>実施例1で変異型ALK2R206H及びG356Dに対して、効果的な発現抑制効果を示したALK2-siRNAを選択し、全長の変異型ALK2に対してタンパク質レベルで同様の効果が見られるか否かを検証した。1細胞培養マウスの筋芽細胞であるC2C12細胞を、15ウシ胎仔血清FBS;Invitrogen社及び抗生物質100ユニットmLペニシリン、100μgmLストレプトマイシン;Wako社含有のDMEM培養液Wako社を用いて、それぞれ培養を行なった。2トランスフェクション上記の細胞を遺伝子導入の前日にトリプシン消化によって分散させた後、細胞密度1×105cellscm2となるように調整して、24ウェル培養プレートに播種し、抗生物質を含まないDMEM培養液にて培養を行った。24時間後、各ウェルに2種類のプラスミド、すなわち、1V5タグを付加した完全長の正常型ALK2遺伝子と2疾患原因のR206H変異型ALK2遺伝子発現プラスミド又はG356D変異型ALK2遺伝子発現プラスミドを200ngウェル、そして3上記アッセイで評価したALK2RNAi誘導を惹起するsiR206H8s19又はsiG356D9s19を20nMウェル、共導入した。基本的方法は、前記実施例1の4トランスフェクション及びレポーターアッセイの方法に準じた。比較対照としてRNAiを誘導しないsiControlQIAGEN社終濃度20nMを用いて同様の実験も行った。核酸導入して48時間後、細胞溶解液50mMTrisHClpH7501TritonX100を用いて細胞抽出液を調製した。ウェスタンブロッティング前記各細胞から調製した細胞抽出液におけるタンパク質濃度をProteinQuantificationkitDOJINDO社を用いて、添付されたプロトコールに従って測定した。各サンプル10μgを4×サンプルバッファ025MTrisHCl40グリセロール8SDS004ブロモフェノールブルー8βメルカプトエタノールと混合し、100°Cで5分間加熱処理を行った。熱処理したタンパク質サンプルを10SDSポリアクリルアミドゲルを用いた電気泳動法CV50V、30分間;その後、CV75V、2時間によって展開し、その後PVDFメンブレンImmobilonPMillipor社にエレクトロブロットCC100mA、45分間した。メンブレンは、室温で1時間ブロッキング溶液5DifcoskimmilkBD社、1×PBSWako社、01Tween20に浸し、1×PBSWako社で洗浄した後、PBSで5000倍希釈した一次抗体マウスモノクローナル抗V5抗体Invitrogen社と反応4°C、16時間させた。次にメンブレンをPBST1×PBSWako社、01Tween20で室温にて数回洗浄し、二次抗体15000希釈である抗マウスIgGペルオキシダーゼ結合抗体SIGMA社と反応室温、1時間させた。PBSTで室温にて数回洗浄後、ImmobilonWesternChemilumHRPSubstrateMillipore社を用いて添付のプロトコールに従って抗体と反応したタンパク質を検出した。タンパク質バンドの検出後、メンブレン上の抗体をReBlotPlusStrongSolutionMillipore社を用いて除去し、PBSTで洗浄した。ブロッキング処理を上記と同様に施した後、一次抗体110000希釈マウスモノクローナル抗αチューブリン抗体SIGMA社と反応4°C、16時間させた。その後の操作は上記と同様に行った。露光フィルムにバンドとして検出されたタンパク質図5A及びCは、スキャナーにて画像を取り込んだ後、ScionImageScion社によって数値化することで定量化を行った図5B及びD。4結果図5に結果を示す。図A及びCで未処理のサンプルは、トランスフェクションを行なっていないC2C12細胞から抽出されたタンパク質である。この図で示すように、siR206H8sA5C19又はsiG356D9s19は、正常型ALK2WTの発現を抑制することなく、各変異型ALK2MTALK2-R206H、又はALK2G356Dに対してのみ顕著かつ特異的に発現抑制効果を示し、好適なASPRNAi誘導が可能であることがタンパク質レベルで実証された。<実施例3:ハンチンチン遺伝子に対するsiRNAのASP-RNAi効果の検証>ハンチントン病HD:Huntington’sdiseaseの原因遺伝子である変異型ハンチンチン遺伝子の対立遺伝子特異的発現抑制のため、該遺伝子転写配列内に存在する一塩基多型SNPSinglenucleotidepolymorphismを標的としたsiRNAHTTsiRNAを設計し、設計した様々なHTTsiRNAの2種類のアレルに対するASPRNAi効果について検証した。1HTTsiRNAの設計と調製HD患者では、ヒトHTT遺伝子アクセッションNoNM0021116のエキソン1内に存在するCAG繰り返し配列が異常伸長した変異を有する。そのCAG繰り返し配列は、正常型アレルにも存在するため、CAG繰り返し配列を直接RNAiの標的とする場合、標的アレルだけでなく正常型アレルの発現も抑制されてしまう。そこで、該疾患原因遺伝子の転写配列内に存在するアレル間でヘテロ接合を示すSNP部位を基準変異点として、本発明の設計方法を用いて様々なHTTsiRNAを設計し、それぞれのRNAi効果を評価した。表4に、2つのSNP部位に対して設計したHTTsiRNAそれぞれsiRs099及びsiRs331で表すのセンス鎖及びアンチセンス鎖の塩基配列を示す。ただし、各表で示す塩基配列は、センス鎖及びアンチセンス鎖の3’末端におけるUUからなるオーバーハング配列を記載便宜上、除いている。表3の塩基配列に基づき、実施例1と同様の方法でsiRNAの化学合成及びアニーリング処理を行なった。2レポーターアレル発現プラスミドの構築前記1で調製したHTTsiRNAのRNAi効果の評価及び好適なHTTsiRNAの選定のために、実施例12で記載した方法と同様に、アレル間においてヘテロ接合度の高いSNPとその周辺配列を各ルシフェラーゼ遺伝子の3‘UTRに挿入することでレポーターアレル発現プラスミドの構築を行った。具体的にはHTT遺伝子転写配列内に存在する2つのSNP部位アクセッションNors363099及びrs362331の両SNPアレル塩基をそれぞれ基準変異点部位として含む41塩基からなるオリゴDNAセンス鎖及びアンチセンス鎖をそれぞれ化学合成したシグマアルドリッチ社に委託。表5に各オリゴDNAの具体的な配列を示す。表中、各センス鎖上のSNP部位を太字で、また、リンカー配列を下線を付して示す。次に、前記実施例12と同様の方法で、合成した各鎖オリゴDNAのアニーリング処理、及びプラスミドへの挿入操作を行い、レポーターアレル発現プラスミドを構築した。3細胞培養前記実施例13と同様の方法を用いて、HeLa細胞ヒト由来株化細胞を培養した。4トランスフェクション及びレポーターアッセイ前記実施例14と同様の方法を用いて、細胞を播種後、前記のHTTsiRNA及びレポーターアレル発現プラスミドをトランススフェクションし、ルシフェラーゼ活性を測定した後、各SNPの両塩基に対して設計した様々なHTTsiRNAの評価を行った。5結果HTT遺伝子の転写配列内に存在する前記2箇所のSNP部位の対立する2つの塩基ここでは、それぞれのSNP部位が共にCとTのアレルを持つ;表5参照に対して好適なHTT-siRNAを選定すると同時に、各SNP部位の両塩基をそれぞれ基準変異点として定め、ミスマッチ部位等の構造的特徴を変化させたときの影響について評価を行い、ASPRNAi誘導に好適なRNAi分子の構造的一般法則性について検討を行った。各siRNAによる発現抑制効果は、実施例1と同様に、一方のHTTSNPアレルC塩基アレルとする及び他方のHTTSNPアレルT塩基アレルとするのそれぞれのレポータールシフェラーゼ活性に基づいて算出される識別比及びASPスコアによって評価した。本実施例では、前記2箇所のSNP部位に対してそれぞれC塩基アレルを、標的アレルすなわち、変異型アレルとみなすとする。図6に結果を示す。Aは、各siRNAを用いたときの識別比及びASPスコアを示す。また、Bは、C塩基アレルのHTTと、T塩基アレルのHTTのルシフェラーゼ発現量を示す。rs362331について、実施例1と同様に、基準変異点から上流側に向かって8個のヌクレオチドを有し、かつミスマッチ塩基を有さない全長19塩基からなるsiRs3318s19をコントロールとして設計し、これにミスマッチ塩基の位置を一つずつずらして導入したsiRNAのASPRNAi効果について検証した。コントロールの識別比は289で、ASPスコアは004であった。これに対して、基準変異点から下流に向かって4~8番目にミスマッチ塩基を導入したsiRNAそれぞれ、siRs3318s19~siRs3318s19は、いずれもコントロールと比較して高い識別比とASPスコアが得られた。この結果は、実施例1の結果と矛盾しない。さらに、別のSNP部位rs363099について、基準変異点から上流側に向かって8個のヌクレオチドを有し、かつミスマッチ塩基を有さない全長19塩基からなるsiRs0998s19をコントロールとして、基準変異点から下流に向かって4及び5番目にミスマッチ塩基を導入したsiRNAそれぞれ、siRs0998s19及びsiRs0998s19について検証した。この結果も、所定の位置にミスマッチを導入したsiRNAの方がコントロールと比較して識別比、ASPスコアともに高かった。以上の結果から、本発明の設計方法に基づいた構造的特徴を有するsiRNAは、遺伝子に特定されず、かつSNP変異であっても高いASPRNAi効果を有することが示された。<実施例4:HTTsiRNAを用いた内在性変異型ハンチンチン遺伝子のASPRNAi効果>1細胞培養HD患者由来株化細胞C0221;国立精神神経センター病院神経内科より分与を10ウシ胎仔血清FBS;株式会社ジャパンバイオシーラム、ピルビン酸ナトリウム110mgL;Wako社、D-グルコース4500mgL;Wako社、及び抗生物質100ユニットmLペニシリン、100μgmLストレプトマイシン;GIBCO社含有のRPMI1640培養液Wako社を用いて、5CO2、37°Cにて培養した。コントロールとして、HDに関して健常人由来の株化細胞を、上記と同様に培養した。2エレクトロポレーション法によるHTTsiRNAの導入前記1で培養した2種類の細胞、すなわち、HD患者由来株化細胞C0221リンパ芽球様細胞と健常人株化細胞をそれぞれ遠心120G、5分間によって回収し、約1×106個の細胞をHTTsiRNA終濃度5μMを含む100μLのエレクトロポレーションバッファAmaxaCellLineNucleofectorSolutionV、Amaxa社にて懸濁した。前記エレクトロポレーション用サンプルを2つ調製し、添付されたプロトコールに従ってエレクトロポレーションプログラム:U005遺伝子導入システムNucleofectorAmaxa社によって核酸の導入を行なった。導入した核酸は、RNAiを誘導しないコントロールsiRNAQIAGEN社、siRs0998s19である。核酸を導入した前記2つのC0221細胞、及び未処理のC0221細胞及び健常人株化細胞は、前記1の培養液を用いて、6ウェル培養プレートにて培養を行い、48時間後に回収した。3ウエスタンブロット法前記2で回収した各細胞を1×プロテアーゼ阻害剤Roche社を含む細胞溶解液で溶解し、タンパク質濃度をProteinQuantificationkitDOJINDO社を用いて、添付されたプロトコールに従って測定した。各サンプル20μgを4×サンプルバッファ025MTrisHCl、40グリセロール、8SDS004ブロモフェノールブルー、8β-メルカプトエタノールと混合し、100°Cで5分間加熱処理を行った。熱処理したタンパク質サンプルは、改変型SDSポリアクリルアミドゲル及びトリシン系泳動バッファTrisTricineSDSbuffer、BioRad社を用いた電気泳動法CV50V、2時間;その後、CV100V、約30時間によって展開し、その後PVDFメンブレンImmobilonPMillipor社にエレクトロブロットCC100mA、1時間した。具体的な改変型SDSポリアクリルアミドゲルの組成は以下の通りである。分離ゲル:5~20アクリルアミド濃度のステップグラジエントゲル、濃縮ゲル:4アクリルアミドゲル。エレクトロブロット後のメンブレンは、室温で1時間ブロッキング溶液5DifcoskimmilkBD社、1×PBSWako社、01Tween20に浸し、1×PBSWako社で洗浄した後、PBSで3000倍希釈した一次抗体マウスモノクローナル抗ハンチンチン抗体clone1HU4C8Millipore社と反応4°C、16時間させた。次にメンブレンは、PBST1×PBSWako社、01Tween20で室温にて数回洗浄し、二次抗体15000希釈である抗マウスIgGペルオキシダーゼ結合抗体SIGMA社と反応室温、1時間させ、PBSTで室温にて数回洗浄後、ImmobilonWesternChemilumHRPSubstrateMillipore社を用いて添付されたプロトコールに従って抗体と反応したタンパク質を検出した。タンパク質バンドの検出後、メンブレン上の抗体をReBlotPlusStrongSolutionMillipore社を用いて除去し、PBSTで洗浄、ブロッキング処理を上記と同様に施した後、一次抗体110000希釈マウスモノクローナル抗αチューブリン抗体SIGMA社と反応4°C、16時間させた。その後の操作は実施例2と同様に行った。4結果図7に結果を示す。健常人ではHTTタンパク質が正常型のバンドのみなのに対して、HD患者では正常型HTTタンパク質に加え、変異型HTTタンパク質のバンドC塩基アレル由来が認められる。このHD患者由来の細胞を本発明の設計方法で作製したsiRs0998s19で処理したサンプルでは、標的アレルであるC塩基アレル由来HTTタンパク質のバンドが消失している。この結果から、実施例3でASPRNAi効果が確認されたsiRs0998s19は、全長タンパク質レベルでもASPRNAi効果を有することが明らかとなった。また、内在性変異型HTT遺伝子のSNPタイプが異なっていても、そのSNP型に対応するHTTsiRNAを導入することで好適なASPRNAi誘導され、正常なHTTタンパク質を残して疾患原因の変異型HTTタンパク質だけを特異的に発現抑制できることも立証された。<実施例5:EGFR遺伝子に対するsiRNAのASP-RNAi効果の検証>後天的に発生する優性変異アレルとして知られる非小細胞肺癌nonsmallcelllungcancer;NSCLCの原因遺伝子である変異型EGFR上皮成長因子受容体遺伝子の発現を特異的に抑制するsiRNAEGFRsiRNAを設計し、優性アレルと野生型アレルのそれぞれにおけるASPRNAi効果について検証した。EGFRの細胞外ドメインに上皮成長因子EGF等のリガンドが結合すると、細胞内ドメインのチロシンキナーゼ活性化され、自己リン酸化作用によって下流の細胞内シグナル伝達経路が作動される。非小細胞肺癌は、EGFR遺伝子の特定の塩基に点突然変異や欠失が生じ、機能獲得型となることによって発生すると考えられているPaezGJetalScience2004304;14971500。それ故、本発明のEGFRsiRNAが変異したEGFR遺伝子の発現のみを特異的に抑制することができれば、非小細胞肺癌に対する効果的な治療剤となり得る。1EGFRsiRNAの設計と調製非小細胞肺癌患者では、ヒトEGFR遺伝子アクセッションNoNM005228における2369番目開始コドンのAを1番目とする。以下、同じの塩基CがTにT790M、すなわち、開始メチオニンから790番目のトリプトファンをメチオニンに置換する変異をもたらす置換した点突然変異を有する。そこで、この点突然変異を基準変異点として定め、実施形態1に記載のRNAi分子の設計方法に準じて、3つのEGFRsiRNAを設計した。表6に設計したセンス鎖及びアンチセンス鎖の塩基配列を示す。siT790M8s18は、実施例1と同様に、前記基準変異点から上流側に8個のヌクレオチドを有し、かつミスマッチ塩基を有さない全長18塩基からなる。siT790M8s18及びsiT790M8s18は、siT790M8s18における基準点の下流4番目及び6番目にミスマッチ塩基を導入したEGFRsiRNAである。ただし、各表で示す塩基配列は、センス鎖及びアンチセンス鎖の3’末端におけるUUからなるオーバーハング配列を記載便宜上、除いている。表6の塩基配列に基づき、実施例1と同様の方法でsiRNAの化学合成及びアニーリング処理を行なった。2レポーターアレル発現プラスミドの構築前記1で調製したEGFRsiRNAのRNAi効果の評価の選定のために、実施例12で記載した方法と同様に、優性変異型EGFR遺伝子と正常型EGFR遺伝子のレポーターアレル発現プラスミドの構築を行った。具体的には、非小細胞肺癌の病因となるEGFR遺伝子の2369番目の優性点突然変異部位をそれぞれ含む35塩基からなるオリゴDNAのセンス鎖及びアンチセンス鎖をそれぞれ合成したシグマアルドリッチ社。優性点突然変異部位を持たない正常型アレルについても同様に、オリゴDNA合成した。それぞれの具体的な塩基配列を表7に示す。次に、前記実施例12と同様の方法で、合成した各鎖オリゴDNAのアニーリング処理、及びプラスミドへの挿入操作を行い、レポーターアレル発現プラスミドを構築した。3細胞培養前記実施例13と同様の方法を用いて、HeLa細胞ヒト由来株化細胞を培養した。4トランスフェクション及びレポーターアッセイ前記実施例14と同様の方法を用いて、細胞を播種後、前記のEGFRsiRNA及びレポーターアレル発現プラスミドをトランススフェクションし、ルシフェラーゼ活性を測定した後、設計したEGFRsiRNAの評価を行った。5結果図8に結果を示す。Aは、各siRNAを用いたときの識別比及びASPスコアを示す。また、Bは、野生型のEGFR配列T790Tと、変異型の標的EGFR配列のルシフェラーゼ発現量を示す。基準変異点から下流に向かって4番目と6番目にミスマッチ塩基を導入したsiT790M8s18及びsiT790M8s18は、コントロールであるsiT790M8s18の識別比及びASPスコアと比較していずれも高い値が得られた。この結果は、実施例1及び3の結果と矛盾しない。以上の結果から、本発明の設計方法に基づいた構造的特徴を有するsiRNAは、様々な遺伝子に対して高いASPRNAi効果を有することが示された。本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。"