"配列番号1の第11位に相当するディロフィラリア属種Dirofilariaspp.線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップを含む、前記線虫の大環状ラクトンに対する反応性を決定する方法。配列番号1の第11位に相当する前記部位における遺伝子型GGが、線虫が前記大環状ラクトンに耐性である可能性が高いことを示す、請求項1に記載の方法。配列番号1の第618位に相当する前記線虫の前記P糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップをさらに含む、請求項1または2に記載の方法。配列番号1の第618位に相当する前記部位における遺伝子型GGが、線虫が前記大環状ラクトンに耐性である可能性が高いことを示す、請求項3に記載の方法。前記ディロフィラリア属種線虫がディロフィラリアイミティスDirofilariaimmitisである、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。大環状ラクトンが、例えば、イベルメクチン、セラメクチン、ミルベマイシンオキシムまたはモキシデクチンである、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。線虫のP糖タンパク質の核酸配列が、この全長にわたり配列番号1に対して少なくとも80の同一性を有する、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。線虫のP糖タンパク質の核酸配列が、この全長にわたり配列番号1に対して少なくとも90の同一性を有する、請求項7に記載の方法。線虫のP糖タンパク質の核酸配列が、この全長にわたり配列番号1と同一である、請求項8に記載の方法。線虫から核酸を単離し、線虫の遺伝子型を決定する前に核酸を場合によって精製するステップをさらに含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。線虫の遺伝子型が、DNAシーケンシング、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション、一本鎖高次構造多型SSCP、マイクロアレイ解析またはPCR、RT-PCRもしくはqRT-PCRに基づいたアプローチによって決定される、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。線虫の遺伝子型が、オリゴヌクレオチド、プライマー、アプタマーまたは抗体などのプローブを使用して決定される、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。その全長にわたり配列番号1に対して少なくとも80の配列同一性を有し、配列番号1の第11位に相当する部位にヌクレオチドのグアニンGを含む単離された核酸分子、または少なくとも50ヌクレオチドの長さを有し、配列番号1の第11位に相当する部位に前記Gヌクレオチドを含有する前記核酸分子の断片。配列番号1の第618位に相当する部位にヌクレオチドのグアニンGをさらに含む、請求項13に記載の単離された核酸分子、または少なくとも50ヌクレオチドの長さを有し、配列番号1の第618位に相当する部位に前記Gヌクレオチドを含有する、前記核酸分子の断片。全長にわたり配列番号1に対して少なくとも90の同一性を有する、請求項13または14に記載の核酸分子。全長にわたり配列番号1と同一である、請求項15に記載の核酸分子。ディロフィラリア属種線虫の大環状ラクトンに対する反応性を決定するためのキットであって、配列番号1の第11位に相当するディロフィラリア属種線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定することができるプローブ、または配列番号1の第11位および第618位に相当するディロフィラリア属種線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定することができるプローブを含む、前記キット。配列番号1の第11位に相当する前記部位における遺伝子型GG、または配列番号1の第11位および第618位に相当する前記部位における遺伝子型GGが、線虫が前記大環状ラクトンに耐性である可能性が高いことを示す、請求項17に記載のキット。前記ディロフィラリア属種線虫がディロフィラリアイミティスである、請求項17または18に記載のキット。大環状ラクトンが、例えば、イベルメクチン、セラメクチン、ミルベマイシンオキシムまたはモキシデクチンである、請求項17から19のいずれか一項に記載のキット。プローブが、オリゴヌクレオチド、プライマー、アプタマーまたは抗体である、請求項17から20のいずれか一項に記載のキット。線虫の遺伝子型が、DNAシーケンシング、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション、一本鎖高次構造多型SSCP、マイクロアレイ解析またはPCR、RT-PCRもしくはqRT-PCRに基づいたアプローチによって決定される、請求項17から20のいずれか一項に記載のキット。配列番号1の第11位に相当するディロフィラリア属種線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップ、および前記線虫の前記遺伝子型に基づいて治療法を選択するステップを含む、前記線虫に感染した動物を治療するための治療法を選択する方法。配列番号1の第618位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップをさらに含む、請求項23に記載の方法。ディロフィラリア属種線虫がディロフィラリアイミティスである、請求項23または24に記載の方法。線虫から核酸を単離し、線虫の遺伝子型を決定する前に核酸を場合によって精製するステップをさらに含む、請求項23から25のいずれか一項に記載の方法。線虫の遺伝子型が、DNAシーケンシング、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション、一本鎖高次構造多型SSCP、マイクロアレイ解析またはPCR、RT-PCRもしくはqRT-PCRに基づいたアプローチによって決定される、請求項23から26のいずれか一項に記載の方法。請求項23から27のいずれか一項に記載の方法であって、選択された治療法で動物を治療するステップをさらに含み、線虫が、配列番号1の第11位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、または線虫が、配列番号1の第11位および第618位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、前記治療法が、ヒ素に基づく療法、ジエチルカルバマジン、抗生物質、またはこれらのうち1種または複数の組合せである、前記方法。配列番号1の第11位に相当するディロフィラリア属種線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップ、および前記線虫の前記遺伝子型に基づいて予防法を選択するステップを含む、動物が前記線虫によって感染するのを防ぐための予防法を選択する方法。配列番号1の第618位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップをさらに含む、請求項29に記載の方法。ディロフィラリア属種線虫がディロフィラリアイミティスである、請求項29または30に記載の方法。線虫から核酸を単離し、線虫の遺伝子型を決定する前に核酸を場合によって精製するステップをさらに含む、請求項29から31のいずれか一項に記載の方法。線虫の遺伝子型が、DNAシーケンシング、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション、一本鎖高次構造多型SSCP、マイクロアレイ解析またはPCR、RT-PCRもしくはqRT-PCRに基づいたアプローチによって決定される、請求項29から32のいずれか一項に記載の方法。選択された予防法を動物に提供するステップをさらに含み、線虫が、配列番号1の第11位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、または線虫が、配列番号1の第11位および第618位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、前記予防法がジエチルカルバマジンである、請求項29から33のいずれか一項に記載の方法。配列番号1に示されている配列を含む単離された核酸分子。しかし、大環状ラクトンに耐性であるディロフィラリアイミティスイヌ糸状虫を検出する方法は依然として必要とされている。発明の要旨一態様において、本発明は、ディロフィラリア属種線虫の大環状ラクトンに対する反応性を決定する方法に関し、前記方法は、配列番号1の第11位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップを含む。この方法は、配列番号1の第618位に相当する前記線虫の前記P糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップをさらに含み得る。該線虫が配列番号1の第11位に相当する部位において遺伝子型GGを有するまたは配列番号1の第11位および第618位に相当する部位において遺伝子型GGを有するという決定は、該線虫が前記大環状ラクトンに耐性である可能性が高いことを示す。他の一態様において、本発明は、その全長にわたり配列番号1に対して少なくとも80の配列同一性を有し、配列番号1の第11位に相当する部位にヌクレオチドのグアニンGを含む単離された核酸分子、または少なくとも50ヌクレオチドの長さを有し、配列番号1の第11位に相当する部位に前記Gヌクレオチドを含有する前記核酸分子の断片に関する。単離された核酸分子は、配列番号1の第618位に相当する部位にヌクレオチドのグアニンGをさらに含み得、または少なくとも50ヌクレオチドの長さを有し、配列番号1の第618位に相当する部位に前記Gヌクレオチドを含有する前記核酸分子の断片である。他の一態様において、本発明は、ディロフィラリア属種線虫の大環状ラクトンに対する反応性を決定するためのキットに関し、該キットは、配列番号1の第11位に相当するディロフィラリア属種線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における該線虫の遺伝子型を決定することができるプローブ、または配列番号1の第11位および第618位に相当するディロフィラリア属種線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における該線虫の遺伝子型を決定することができるプローブを含む。他の一態様において、本発明は、ディロフィラリア属種線虫に感染した動物を治療するための治療法を選択する方法に関し、この方法は、配列番号1の第11位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップ、および前記線虫の該遺伝子型に基づいて治療法を選択するステップを含む。この方法は、配列番号1の第618位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップおよび/または選択された治療法で動物を治療するステップをさらに含んでもよく、ここで、該線虫が、配列番号1の第11位に相当する該線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、または該線虫が、配列番号1の第11位および第618位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、該治療法は、ヒ素に基づく療法、ジエチルカルバマジン、抗生物質、またはこれらのうち1種または複数の組合せである。他の一態様において、本発明は、動物がディロフィラリア属種線虫によって感染するのを防ぐための予防法を選択する方法に関し、この方法は、配列番号1の第11位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップ、および前記線虫の該遺伝子型に基づいて予防法を選択するステップを含む。この方法は、配列番号1の第618位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップおよび/または選択された予防法を動物に提供するステップをさらに含んでもよく、ここで、該線虫が、配列番号1の第11位に相当する該線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、または該線虫が、配列番号1の第11位および第618位に相当する該線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位において遺伝子型GGを有する場合、該予防法は、ジエチルカルバマジンである。さらなる一態様において、本発明は、配列番号1に示されている配列を含有する単離された核酸分子に関する。本発明の方法は、線虫を含む試料を動物などの対象から得るステップ、試料から線虫を単離するステップ、線虫から核酸を単離するステップ、および線虫の遺伝子型を決定するステップの前に核酸を場合によって精製するステップをさらに含み得る。さらに、線虫の遺伝子型は、DNAシーケンシング、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション、一本鎖高次構造多型SSCP、マイクロアレイ解析またはPCR、RT-PCRもしくはqRT-PCRに基づいたアプローチなどの既知の技術を使用して決定され得る。本発明の他の態様、利点および特徴は、添付の図面と併せて本発明の特定の実施形態についての以下の説明に目を通すことによって当業者に明らかになる。アベルメクチンおよびミルベマイシンを含むがこれらに限定されない大環状ラクトンは、ストレプトミセスStreptomyces属に属する土壌微生物の産物、またはそれらの化学誘導体である。これらの分子は、何百もの種の内部寄生虫および外部寄生虫を広範囲にわたる宿主において治療するために広く使用される。商業的使用におけるアベルメクチンとしては、限定されるものではないが、イベルメクチン、アバメクチン、ドラメクチン、エプリノメクチンおよびセラメクチンなどが挙げられる。市販のミルベマイシンとしては、限定されるものではないが、ミルベマイシンオキシムおよびモキシデクチンなどが挙げられる。大環状ラクトンは、低用量レベルで強力な広い抗寄生虫性スペクトルを有する。これらは、多くの未成熟の体内寄生幼虫hypobioticlarvaeを含む線虫および節足動物に対して活性がある。単回治療用量は、差し迫った線虫感染に対して有効であるために十分な濃度で治療後長期間持続し得る。大環状ラクトンMLイヌ糸状虫予防薬は、成長中のL3/L4期を標的とすることによって成虫の感染の確立を防ぐために、まだ感染していないイヌおよびネコの処置用に開発された。大環状ラクトンは、ミクロフィラリア期L1においても効果を有するBowmanら、1992;Courtneyら、1998;McCallら、1998。イベルメクチンIVM、ミルベマイシンオキシムMBO、モキシデクチンMOXおよびセラメクチンSLMなどの大環状ラクトンエンドエクトシドは、伝染シーズンの間にイヌおよびネコにおけるイヌ糸状虫の化学的予防法のために使用される。しかし、近年、何名かの専門家は、大環状ラクトンが、成虫における生殖を抑制し、さらにミクロフィラリアmf期を除去するために月1回使用され、それによって伝染を減少させ、成虫の自然減少を徐々に引き起こし得たことを示唆している。感染を防ぎ、既存の感染を徐々に除去するために、成虫感染が確立していない動物をただ治療することは不必要であるだろう-safetynetstoryaboutmacrocycliclactoneheartwormpreventivesMcCall、2005。成長中のL3/L4期のD.イミティスは、大環状ラクトンに非常に感受性であるのに対して、大環状ラクトンは、成虫の生殖する能力に影響を及ぼす蓄積性の損傷を引き起こし、最終的には、成虫およびミクロフィラリアの双方にとって致死的となり得るようである。しかし、大環状ラクトンがこの寄生虫の異なる期に対してどのように作用するかは知られていない。古典的見解は、大環状ラクトンが、グルタメート作動性またはGABA作動性の塩素イオンチャネルを開くことによって作用し、これが咽頭および/または体筋の麻痺をもたらし、結果として線虫が飢餓しまたは動けなくなり、これが胃腸管内での寄生虫に致死的であるというものである。これらの効果は、カエノルハブディティスエレガンスCaenorhabditiselegansおよび毛様線虫科線虫寄生虫における知見に基づいており、比較的急性であって、かなり急速な麻痺および死をもたらす。D.イミティスなどのフィラリア線虫において、これらの急速な効果は生じず、少なくとも成虫およびミクロフィラリアにおいて生じず、致死性を引き起こすために反復の処置が必要とされる。IVMは、インビトロにおいて、成虫のフィラリアまたはミクロフィラリアを麻痺させずBennett、WilliamsDave、1988、フィラリア線虫では咽頭が退化しており、表皮を通して栄養素の取り込みが生じると考えられているStote、BonowAttah、1996。反芻動物の線虫寄生虫における大環状ラクトン耐性についての多くの証拠があり総説については、Kaplan、2004;Wolstenholmeら、2004;Geary、2005を参照されたい、近年、シアトストムムCyathostomum属種Trawford、BurdenHodgkinson、2005;Molento、pers.comm.を含むウマの線虫寄生虫Boersema、EyskerNas、2002;HearnPeregrine、2003およびヒトのフィラリア線虫オンコセルカボルブルスOnchocercavolvulusOsei-Atweneboanaら、2007におけるIVM耐性についての報告があった。残念ながら、近年、いくつかの場所において、D.イミティスに対して、大環状ラクトンイヌ糸状虫予防薬の効力の損失があるといういくつかの証拠が現在あるHampshire、2005。ヘモンクスコントルタスおよびクーペリアオンコフォラCooperiaoncophoraなどの大環状ラクトン耐性毛様線虫科寄生虫が大環状ラクトン感受性分離株と比較されたときに、グルタメート作動性塩素イオンチャネルGluClサブユニットBlackhallら、1998a;Njueら、2004、GABA作動性塩素イオンチャネルGABA-ClサブユニットFengら、2002;Blackhallら、2003、P糖タンパク質PgpABC輸送体Blackhallら、1998b;Xuら、1998;LeJambreら、1999;Sangsterら、1999およびβ-チューブリンEngら、2006;MottierPrichard、2008における遺伝的変化が報告されている。自由生育の線虫C.エレガンスC.elegansにおいて、3つのGluClサブユニットの欠失は、結果としてIVMに対する感受性の高レベルの損失になりDentら、2000、これは、これらのGluClsがこの線虫に対するIVMの作用に関与していることを示している。しかし、これは、寄生性線虫における大環状ラクトン耐性機構が必然的にGluClsにおける変化に関与することを暗示しているとは解釈され得ない。上記のように、IVM耐性Osei-Atweneboanaら、2007およびIVMに対する最適以下の反応Aliら、2002;Awadziら、2004a、2004bがヒトフィラリア寄生虫O.ボルブルスO.volvulusにおいて現在報告されている。O.ボルブルスは、系統学的に毛様線虫科の寄生虫またはC.エレガンスよりもD.イミティスにかなり近いことに留意すべきである。O.ボルブルスにおいて発達しているIVM耐性と関連し得る遺伝的変化についての広範囲な調査が行われてきた。EngPrichard2005は、O.ボルブルスにおけるIVM耐性との関連について多数の候補遺伝子および非候補遺伝子を調査した。GluClまたはGABA-Cl遺伝子における選択についての証拠は発見されていないが、β-チューブリンおよびP糖タンパク質遺伝子における有意な選択が認められた。さらなる調査は、β-チューブリンにおけるEngら、2006;Bourguinatら、2007、P糖タンパク質遺伝子における、およびO.ボルブルスにおける他のABC輸送体遺伝子ArdelliPrichard、2004;ArdelliPrichard、2007;Ardelliら、2005;2006a;2006b;Bourguinatら、2008における選択を確認した。IVM選択のための一塩基多型SNPは、O.ボルブルスについてβ-チューブリンEngら、2006および半分の大きさのABC輸送体、OvPLPBourguinatら、2008において同定されており、このフィラリア線虫における大環状ラクトン耐性についてのモニタリングのための有用なマーカーとなり得る。大環状ラクトンイヌ糸状虫予防薬の効力の損失は、遺伝的原因を有する可能性があり、ディロフィラリアイミティスにおいて発達中の薬剤耐性状況を示し得る。IVMは、P糖タンパク質の基質でありLespineら2009、P糖タンパク質は、アベルメクチン駆虫薬に対する耐性に関係していることが示されているXuら1998。本発明は、ディロフィラリア属種線虫の大環状ラクトンに対する反応性を決定するための方法およびキットならびに前記線虫の単離された核酸分子に関する。核酸分子一態様において、本発明は、その全長にわたり配列番号1に対して少なくとも80の配列同一性を有し、配列番号1の第11位に相当する部位にヌクレオチドのグアニンGを含む単離された核酸分子、または少なくとも50ヌクレオチドの長さを有し、配列番号1の第11位に相当する部位に前記Gヌクレオチドを含有する前記核酸分子の断片に関する。本発明の一実施形態において、単離された核酸分子は、配列番号1の第618位に相当する部位にヌクレオチドのグアニンGをさらに含み得る、または前記核酸分子の断片は、少なくとも50ヌクレオチドの長さを有し、配列番号1の第618位に相当する部位に前記Gヌクレオチドを含有する。他の一態様において、本発明は、配列番号1に示されている配列を含有する、該配列からなる、または該配列から本質的になる、単離された核酸分子に関する。本明細書において、核酸、ヌクレオチド配列または核酸分子とは、一本鎖または二本鎖であり得る、場合によってDNAまたはRNAのポリマー中への組み込みが可能な合成の、非天然のまたは改変されたヌクレオチド塩基を含有する、DNAおよび/またはRNAのポリマーを指し得る。核酸、核酸配列または核酸分子は、遺伝子、cDNA、DNA例えば、ゲノムDNAおよび遺伝子によってコードされるRNAを包含し得る。核酸または核酸配列は、少なくとも3、少なくとも10、少なくとも100、少なくとも1000、少なくとも5000、または少なくとも10000のヌクレオチドまたは塩基対を含有し得る。核酸、核酸配列または核酸分子は、アルキル化剤、褐変糖などのようなあらゆる既知の化学物質との反応;リンカー基に対するコンジュゲーション例えば、PEG;メチル化;酸化;電離放射線;または化学発癌物質の作用を含むがこれらに限定されない、当技術分野において知られているあらゆる化学的方法および/または生物学的方法によって改変され得る。こうした核酸改変は、合成中もしくは加工中にまたは当技術分野において知られている化学試薬での処理後に生じ得る。本明細書において、から本質的になるまたはから本質的になっているとは、核酸配列が、配列内または配列の一方もしくは双方の末端を含む、1個または複数のヌクレオチド塩基を含み得るが、さらなるヌクレオチド塩基が、核酸配列の機能に実質的に影響を及ぼさないことを意味する。本発明の核酸分子は、その長さにわたり配列番号1の配列に相当する配列を含み得る。本発明の実施形態において、核酸配列は、配列番号1と少なくとも約80、少なくとも約81、少なくとも約82、少なくとも約83、少なくとも約84、少なくとも約85、少なくとも約86、少なくとも約87、少なくとも約88、少なくとも約89、少なくとも約90、少なくとも約91、少なくとも約91、少なくとも約92、少なくとも約93、少なくとも約94、少なくとも約95、少なくとも約96、少なくとも約97、少なくとも約98、少なくとも約99または100同一であり得るが、配列番号1の第11位に相当する部位に遺伝子型GGを有するまたは配列番号1の第11位および第618位に相当する部位に遺伝子型GGを有する線虫から単離されたものである。単離された核酸分子とは、より大きなポリヌクレオチド配列の一部として自然界に存在しない核酸分子を指すこともあり、さらに/またはその自然環境において見出される他のいかなる核酸分子または他のいかなる夾雑物も実質的に含んでいないものであってもよい。本明細書において、単離された核酸分子は、組換えまたは合成によって作製された核酸分子も包含し得る。同一性または同一であるという用語は、2つのポリペプチド分子間またはポリヌクレオチド分子間の配列類似性を指す。同一性は、アライメントされた配列においてそれぞれの部位を比較することによって決定され得る。アミノ酸配列間または核酸配列間の同一性の程度は、例えば特定の領域にわたり、それらの配列によって共有されている部位における同一であるまたは整合しているアミノ酸または核酸の数の関数である。同一性を比較するための配列の最適なアライメントは、当技術分野において知られているように、http://clustalw.genome.ad.jpにおいて利用可能なClustalW商標プログラム、SmithおよびWaterman、1981、Adv.Appl.Math2:482の局所的相同性アルゴリズム、NeedlemanおよびWunsch、1970、J.Mol.Biol.48:443の相同性アライメントアルゴリズム、PearsonおよびLipman、1988、Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:2444の類似性探索法、ならびにWisconsinGeneticsSoftwarePackage、GeneticsComputerGroup、Madison、WI、U.S.A.中にあるGAP、BESTFIT、FASTAおよびTFASTAのようなこれらのアルゴリズムのコンピュータ化された実行などの、多様なアルゴリズムを使用して行われ得る。配列同一性は、Altschulら、1990、J.Mol.Biol.215:403-10に記載のBLASTアルゴリズム例えば、BLASTnおよびBLASTpを公表されている初期設定を用いて使用して決定され得る。BLAST解析を行うためのソフトウェアは、NationalCenterforBiotechnologyInformationを通してインターネットを通してhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/において利用可能である。一態様において、2つの配列は、NCBIウェブサイトにおいてBlast2Sequencesツールを初期設定で使用してアライメントされ得るTatusovaおよびMadden.FEMSMicrobiolLett、174:247-250、1999。他の一実施形態において、当業者は、任意の所定の配列をアラインメントして、単なる目視検査によって配列の同一性/相同性を導き出すことが容易におよび適切にできる。本発明の核酸分子は、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位または第11位および第618位に相当する部位において遺伝子型GGを有するディロフィラリアイミティス線虫に由来し得る。本明細書において、に由来するとは、天然の供給源、例えば、ディロフィラリアイミティス線虫から単離された核酸分子を指し得る。これは、人工の、例えば、ディロフィラリアイミティス線虫から単離された核酸分子に基づいて組換えによるまたは合成された核酸分子も指し得る。本明細書において、遺伝子型とは、考察中の特定の性質に通常関して、細胞、生物、または個体の遺伝的構成すなわち、個体の特定の対立遺伝子構造を指す。本発明に関して、例えば、GG遺伝子型は、2つの対立遺伝子を有する遺伝子の特定の部位において、それぞれの対立遺伝子における同一部位のヌクレオチドがGグアニンであることを意味し得る。対立遺伝子は、同一の物理的座位における代替のDNA配列であり、これは、結果として異なる表現型の形質になり得るまたはなり得ない。各染色体について2つのコピーを有する、いかなる特定の二倍体の生物においても、各遺伝子の遺伝子型はこの座位に存在する対の対立遺伝子を含み、これらは、ホモ接合体において同一であり、ヘテロ接合体において異なる。本明細書に記載の遺伝子解析は、大環状ラクトン耐性をP糖タンパク質の多型変異体と結びつけた。本明細書において、多型部位という用語は、個体群の多数の核酸試料において2つ以上の代替のヌクレオチド配列が認められる、核酸における領域を指す。長さが1ヌクレオチドである多型部位は、本明細書中で一塩基多型またはSNPと呼ばれ得る。配列番号1に示されている配列は、ディロフィラリアイミティスのP糖タンパク質の一部をコードしている。P糖タンパク質は、最初にチャイニーズハムスター卵巣細胞からクローニングされ、化学療法薬に対する耐性を発達させた癌細胞に多剤耐性表現型を与えるこの能力に基づいて特徴付けられた[JulianoらBiochim.Biophys.Acta4551:152-62、1976]。P糖タンパク質は、広範囲に分配され、例えば、腸上皮、肝細胞、腎近位尿細管細胞、副腎ならびに血液脳関門および血液精巣関門を含む毛細血管内皮細胞において発現され得る。P糖タンパク質は、ATP結合カセットABC輸送体のスーパーファミリーの一員である。特に、P糖タンパク質は、MDR/TAPサブファミリーの一員であり、これらは多剤耐性に関与する。P糖タンパク質は、広範な基質特異性を有する、生体異物化合物のATP依存性薬剤流出ポンプである。それは、多剤耐性細胞における薬剤蓄積の減少の原因となることもあり、薬剤に対する耐性の獲得を媒介することも多い。当業者は、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位において遺伝子型GGを有するディロフィラリアイミティス線虫に由来する核酸分子、または配列番号1の第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位において遺伝子型GGを有するディロフィラリアイミティス線虫に由来する核酸分子が、大環状ラクトン感受性線虫のものとは異なるP糖タンパク質をコードし得ることを理解するはずである。例えば、こうしたP糖タンパク質は、少なくとも1つのアミノ酸改変を有し得る。非限定的なアミノ酸改変は、アミノ酸置換を含み得る。一実施形態において、アミノ酸置換は、保存的置換であり得る。本明細書において、保存的置換という用語は、ペプチド中の所定の部位における1つのアミノ酸から別のものへの置換を指し、ここで、該置換は、関連する機能の実質的な損失なしに行われ得る。こうした変化の作製において、アミノ酸残基のようなものの置換は、側鎖置換基の相対類似性、例えば、それらの大きさ、電荷、疎水性、親水性などに基づいて行われることが可能であり、こうした置換は、常法に従う試験によってペプチドの機能に対するそれらの効果について試験され得る。保存的置換の特定の非限定的な例としては、以下のものが挙げられる:他の一実施形態において、少なくとも1つのアミノ酸改変は、P糖タンパク質の機能に影響を及ぼす置換改変であってもよい。例えば、改変されたP糖タンパク質を発現しているディロフィラリアイミティスは、例えば、大環状ラクトンに耐性または感受性であってもよい。さらなる実施形態において、改変されたP糖タンパク質は、大環状ラクトン耐性ディロフィラリアイミティス線虫のマーカーであってもよく、またはディロフィラリアイミティス線虫における大環状ラクトン耐性に寄与していてもよい。D.イミティスの大環状ラクトンに対する反応性を決定する方法他の一態様において、本発明は、ディロフィラリア属種線虫の大環状ラクトンに対する反応性を決定する方法に関し、前記方法は、配列番号1の第11位に相当する前記線虫のP糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップを含む。本発明の一実施形態において、該方法は、配列番号1の第618位に相当する前記線虫の前記P糖タンパク質遺伝子内の部位における前記線虫の遺伝子型を決定するステップをさらに含み得る。本発明に関して、線虫が、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位において遺伝子型GGを有する場合、該線虫は前記大環状ラクトンに耐性である可能性が高い。一態様において、線虫が、配列番号1の第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位において遺伝子型GGを有する場合、該線虫は前記大環状ラクトンに耐性である可能性が高い。本明細書において、反応性という用語は、該線虫が大環状ラクトンに対する曝露後に反応することを意味し得る。本発明の実施形態において、線虫は、大環状ラクトンに感受性または耐性であることによって反応し得る。大環状ラクトンに対する感受性とは、大環状ラクトンが、曝露されたディロフィラリアイミティス線虫に悪影響を与えることを意味する。例えば、大環状ラクトンは、ディロフィラリアイミティス線虫にとって致死的または亜致死的であり得る、またはこの寿命を短縮し得る。耐性とは、疾患の治癒または患者の症状の改善における薬剤の有効性の低下である。ディロフィラリアイミティス線虫は、それを死滅させるはずの薬剤が無効である場合、大環状ラクトン耐性であり得る。ディロフィラリアイミティス線虫は、薬剤が、それを死滅させるはずである特定の用量において、低減された作用を有する場合にも、大環状ラクトン耐性であり得る。本発明の実施形態において、線虫の大環状ラクトンに対する反応性は、インビボまたはインビトロで決定され得る。一実施形態において、LD9595のディロフィラリアイミティス線虫を死滅させたはずである薬剤の致死量または致死濃度の用量または濃度の大環状ラクトンに対する曝露後に、約93未満、約91未満、約89未満、約87未満、約85未満、約83未満、約81未満、約79未満、約77未満、約75未満、約73未満、約71未満、約69未満、約67未満、約65未満、約63未満、約61未満、約59未満、約57未満、約55未満、約53未満、約51未満、約49未満、約47未満、約45未満、約43未満、約41未満、約39未満、約37未満、約35未満、約33未満、約31未満、約29未満、約27未満、約25未満、約23未満、約21未満、約19未満、約17未満、約15未満、約13未満、約11未満、約9未満、約7未満、約5未満、約3未満、約1未満または0の線虫が死滅した場合、ディロフィラリアイミティス線虫は、大環状ラクトンに耐性であると言うことができる。他の一実施形態において、LD9595のディロフィラリアイミティス線虫を死滅させたはずである薬剤の致死量または致死濃度の用量または濃度の大環状ラクトンに対する曝露後に、多くとも約5、多くとも約4、多くとも約3、多くとも約2、多くとも約1または0の線虫が生存していた場合、ディロフィラリアイミティス線虫は、大環状ラクトンに感受性であると言うことができる。核酸試料のプローブとの接触ディロフィラリアイミティス線虫を含む生体試料は、対象から得られ得る。対象は、限定されるものではないが、イヌ、キツネ、オオカミ、コヨーテまたはネコであり得る。本発明に関して、生体試料は、対象のいかなる試料例えば、体液、排泄物、臓器、組織などであってもよい。生体試料は、ディロフィラリアイミティス線虫感染を有することが知られている、または有すると疑われる対象のものであってもよい。ディロフィラリアイミティス線虫は、標準的な分離法および技術で生体試料から単離され得る。核酸試料は、使用前にディロフィラリアイミティス線虫から単離され得るまたは得られ得る。生物および組織から核酸を単離する方法は知られている。こうした方法は、プロテイナーゼK消化に次ぐフェノールクロロホルム抽出での伝統的なDNA抽出、水酸化ナトリウム抽出、および物理的破壊、その後の精製、例えば塩化セシウム遠心分離または高速液体クロマトグラフィーHPLCによるもの;または市販のキット、例えば、QIAamp商標またはDNeasy商標の使用を含み得るが、これらに限定されない。当業者は、成虫のディロフィラリアイミティス線虫から核酸試料を単離するためにミクロフィラリアと比較して異なるアプローチが使用され得ることを理解するはずである。本発明の一実施形態において、核酸試料はゲノムDNAを含有する。核酸試料は、P糖タンパク質中の1つまたは複数の部位における線虫の遺伝子型を決定するためにプローブと接触され得る。好適なインキュベーション培地およびインキュベーション条件は、プローブおよび試料をインキュベートするために使用され得る。一実施形態において、プローブおよび核酸試料を、例えば接触によって、相互作用できるようにするために、プローブおよび核酸試料は、任意の培地中でインキュベートされ得る。例えば、インキュベーション培地は、PBSなどの緩衝液であってもよい。当業者は、インキュベーション培地の組成が、使用されるプローブおよび/または核酸試料の成分に依存し得ることを理解するはずである。プローブ本発明の方法およびキットは、P糖タンパク質中の部位における線虫の遺伝子型を検出するためのプローブを含有し得る。本発明のプローブは、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位における線虫の遺伝子型を決定するために使用され得る。本発明の一実施形態において、プローブは、配列番号1の第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位における線虫の遺伝子型を同時にまたは連続的に決定するために使用され得る。本発明のプローブは、P糖タンパク質中の1つまたは複数の特定の部位における線虫の遺伝子型を決定するために核酸試料に結合することができる、または核酸試料と関連した1種または複数の分子であり得る。これに関して、プローブは、例えば、オリゴヌクレオチド、プライマー、アプタマーまたは抗体であってもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位における、または配列番号1の第11位および第618位に相当する部位における線虫の遺伝子型を対立遺伝子特異的に決定することができる。オリゴヌクレオチドは、本発明に関する使用に好適ないかなる大きさ、形状および組成物を含んでもよい。好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドは、DNA、RNA、合成ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、改変されたヌクレオチド、またはこれらのうち1種または複数の組合せを含み得る。一実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドは、ロックド核酸および/またはペプチド核酸を含んでもよい。オリゴヌクレオチドは、本発明の方法における使用に好適な任意の長さであり得る。一般に、1つの部位における線虫の遺伝子型を検出することができるオリゴヌクレオチドは、他の部位における検出と干渉しない。しかし、本発明のオリゴヌクレオチドは、P糖タンパク質中の2つの部位における例えば、配列番号1の第11位および第618位に相当する部位における線虫の遺伝子型を同時に検出することができてもよい。本発明の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも35、少なくとも40、少なくとも45、少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも100、少なくとも125、少なくとも150、少なくとも175、少なくとも200、少なくとも250、またはそれよりも多い一連のヌクレオチドを含み得る。本発明の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、限定されるものではないが、1種のプライマーまたは2種以上のプライマー、例えば、プライマー対、例えば、フォワードプライマーおよびリバースプライマーを包含し得る。プライマーは、DNA複製を開始するために使用され得るオリゴヌクレオチドであってもよい。典型的には、プライマーは、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100またはそれよりも多いヌクレオチドであり得る短いオリゴヌクレオチドである。プライマーは、遺伝子の特定の部位における線虫の遺伝子型を検出するためのアプローチの一部として使用され得る。例えば、プライマーは、PCR、RT-PCRおよびqRT-PCRによるような、DNAの増幅に、サザンブロット、シーケンシングまたはSSCPによるなどの、その後の解析に、有用であり得る。本明細書において、アプタマーは、特定の分子標的に結合する核酸分子またはペプチド分子であり得る。例えば、溶液中で、ヌクレオチドの鎖は、アプタマーを折りたたんで複雑な三次元の形状にする分子内相互作用を形成し得る。このアプタマーの形状は、アプタマーが、この標的分子の表面に固く結合するのを可能にする。ヌクレオチドおよびアミノ酸の配列に対して存在する分子形状が多様なので、アプタマーは、核酸分子、酵素、膜タンパク質、ウイルスタンパク質、サイトカイン、成長因子、および免疫グロブリンなどが挙げられるが、これらに限定されない、広範囲にわたる一配列の分子標的に対して得られ得る。本発明のアプタマーは、核酸分子であってもよい。前記アプタマーは、DNA、RNA、合成ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、改変されたヌクレオチド、またはこれらのうち1種または複数の組合せを含んでいてもよい。核酸アプタマーは、一本鎖または二本鎖であり得る。核酸アプタマーは、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも35、少なくとも40、少なくとも45、少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも100、少なくとも125、少なくとも150、少なくとも175、少なくとも200、少なくとも250、少なくとも300、少なくとも350、少なくとも400、少なくとも500、またはそれよりも多い一連のヌクレオチドを含み得る。好ましい核酸のアプタマーは、一本鎖核酸分子であってもよく、約100未満の一連のヌクレオチドを含み得る。本発明のアプタマーは、ペプチド分子であってもよい。ペプチドアプタマーは、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも35、少なくとも40、少なくとも45、少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも100、少なくとも125、少なくとも150、少なくとも175、少なくとも200またはそれよりも多い一連のアミノ酸残基を含み得る。好ましいペプチドアプタマーは、約15から約75の間の一連のアミノ酸残基を含み得る。本明細書において、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質という用語は、互換可能に使用される場合もあり、長さ例えば、少なくとも5、6、8、10、12、14、16、18、20、25、30、40、50、100またはそれよりも多いアミノ酸もしくは翻訳後修飾例えば、グリコシル化またはリン酸化または該ペプチドに共有結合によって結合されている例えば1個または複数の非アミノアシル基例えば、糖、脂質などの存在にかかわらず、天然に存在するまたは天然に存在しないアミノ酸D-アミノ酸またはL-アミノ酸いずれものいかなる鎖を包含していてもよく、例えば、天然タンパク質、合成または組換えのポリペプチドおよびペプチド、ハイブリッド分子、ペプトイド、ペプチド模倣体などを含む。ペプチドは、単量体または多量体であってもよい。ペプチドフラグメントは、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも25、少なくとも50、少なくとも100、少なくとも250、少なくとも500、少なくとも1000、少なくとも1500、または少なくとも2500の隣接した一範囲の連続したアミノ酸を含んでいてもよく、全長ペプチドの望ましい活性を維持していてもよい。本明細書において、抗体は、モノクローナル抗体全長モノクローナル抗体を含む、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体例えば、二重特異性抗体、単一ドメイン抗体および抗体フラグメントを含み得る。抗体フラグメントは、全長抗体の一部、一般にこの抗原結合領域または可変領域を含有する。抗体フラグメントの例としては、Fab、Fab’、Fab’2、およびFvフラグメント;ダイアボディ;直鎖抗体;単鎖抗体分子;および抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体などが挙げられるが、これらに限定されない。抗体という用語は、キメラ抗体またはヒト化抗体も含み得る。本発明のプローブは、当業者に知られている標準技術に従って調製され得る。例えば、プローブは、合成、組換えによって作製され得るまたは天然の供給源から単離され得る。一実施形態において、該供給源は、生物の供給源、例えば、微生物例えば、細菌またはウイルス、動物例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、またはヒト、または植物由来であり得る。本発明に関して、プローブとは、1種のプローブまたは2種以上のプローブを意味し得る。一実施形態において、単一のプローブは、配列番号1の第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位における線虫の遺伝子型を検出するために使用され得る。当業者は、1種または複数のプローブが本発明に関して有用であり得ることおよび用いる遺伝子型同定アプローチに依存し得ることを理解するはずである。例えば、プライマーは、増幅反応において、対で、すなわちフォワードプライマーおよびリバースプライマーで使用されることが多い。増幅された産物は、次いで、特定の部位におけるヌクレオチドを同定するために解析され得る。1種または複数の型のプローブは、本発明の方法において同時に使用され得る。一実施形態において、異なる型の2種のプローブは、配列番号1の第11位および第618位に相当する線虫の部位の配列において同時に検出するために使用され得る。例えば、一方のプローブは、配列番号1の第11位に相当する部位においてヌクレオチドを検出するためのオリゴヌクレオチドであってもよく、もう一方のプローブは、配列番号1の第618位に相当する部位においてヌクレオチドを検出するための抗体であってもよい。他の一実施形態において、2種のプローブは、同一の型の分子を含有していてもよい。プローブの設計および作製は、当技術分野において知られている。一般に、プローブは、組換え、合成によって作製され得る、または天然の供給源、例えば、細胞、動物または植物から単離され得る。しかし、当業者は、プローブ作製は、問題になっているプローブの型に依存し得ることを理解するはずである。当業者は、本発明のプローブが、GG/GG遺伝子型すなわち、配列番号1の第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位においてGG遺伝子型を有する線虫を、他のあり得る遺伝子型、例えば、AA/AA、AG/AA......AG/AG....AA/AGなどから識別できることを必要とし得ることを理解するはずである。好ましいプローブは、フルオロフォアfluoroflorまたは色素を有するまたは有さない、核酸分子例えば、プライマーであり得る。プローブは、フルオロフォアを有し、クエンチャーまたは例えば、FRET解析用に別のフルオロフォアを有するまたは有さない、直線状またはヘアピンの形態であり得る。それは、DNAまたはタンパク質配列を特異的に認識する抗体であってもよい。もう一方のプローブは、RNA分子に基づいていてもよい。何が好ましいかは、安定性、費用、使用の容易性などの技術的な考慮点に依存し得る。遺伝子型の決定当業者は、P糖タンパク質中の1つまたは複数の部位における線虫の遺伝子型を決定するために常法に従うアプローチが使用され得ることを理解するはずである。本発明に関する使用に好適なアプローチは、限定されるものではないが、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位における線虫の遺伝子型を決定するための、または配列番号1の第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位における線虫の遺伝子型を決定するための、PCR、RT-PCR、qRT-PCR、SSCP、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション、および抗体の使用を含み得る。他のアプローチは、DNAマイクロアレイまたはビーズに対する核酸ハイブリダイゼーション、制限断片長多型RFLP、末端制限断片長多型t-RFLP、増幅断片長多型AFLP、および多重ライゲーション依存性プローブ増幅MLPAを含み得る。ポリメラーゼ連鎖反応PCRU.S.4,683,195;4,683,202;および4,965,188は、試料中の標的核酸配列の濃度を高めるために使用される方法である。この方法は、典型的には、標的配列を増幅するために、標的配列に相補的なフォワードプライマーおよびリバースプライマーの使用、ならびに変性、アニーリングおよび伸長を促進するための3つの温度のサイクルを必要とする。定量RT-PCRは、相対量および絶対量の双方でmRNAを定量するために使用される。リアルタイムPCRは、PCRの原理に基づいているが、核酸配列の信頼性の高い検出および定量を可能にする。PCR反応は、対数期、直線期および定常期の3つの区分に分けられ得る。理論的には、対数期の間に、初期の標的配列の量と任意の所定のサイクルにおけるPCR産物の量との間に量的な相関がある。対数期の範囲内で、リアルタイムPCR機器は2つの値を算出する。閾値線は、反応がバックグラウンドを超える蛍光強度に到達したときの検出のレベルである。試料がこのレベルに到達したときのPCRサイクルは、サイクル閾値、Ctと呼ばれる。Ct値は、定量または存在/非存在の検出解析において使用される。未知濃度の試料のCt値を一連の標準と比較することによって、未知の反応物中の鋳型DNAの量が正確に決定され得る。リアルタイムPCRは、ポリメラーゼのヌクレアーゼ活性および増幅産物に結合するレポーター分子の使用に依存する。一般的なレポーター分子は、限定されるものではないが、1二本鎖DNAとインターカレートする蛍光色素の使用、および2相補的なDNAとハイブリダイゼーションしたときに蛍光を発する改変されたDNAオリゴヌクレオチドプローブを含む。例えば、レポーター分子は、増幅される標的鋳型を結合する標識されたオリゴヌクレオチドを含有し得る。標識されたオリゴヌクレオチドは、一方の末端に蛍光分子を、他方に蛍光分子の蛍光をクエンチするクエンチング分子を含有し得る。ポリメラーゼは鋳型を移動して、蛍光分子に到達し、標識されたオリゴヌクレオチドから蛍光分子を切断する。切断された蛍光分子の蛍光は、検出され得る。蛍光の量は、生成されたpcr産物当たりの鋳型の量に直接比例する。増幅された核酸分子は、P糖タンパク質に関して線虫の遺伝子型を決定するためのアプローチと共に使用され得る。こうしたアプローチは、限定されるものではないが、DNAシーケンシング、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション、サザンブロット解析、およびSSCPを含み得る。一本鎖高次構造多型SSCP技術は、PCR増幅産物における小さな変化を検出するための簡単で効率的な方法である。これは、わずかな核酸の変化が一本鎖DNA断片の移動に影響を及ぼし、したがって、非変性ポリアクリルアミドゲルを通って認識可能な移動度のシフトが生じるという仮定に基づいているOrita,M.、Iwahana,H.、Kanazawa,H.、Hayashi,K.、およびSekiya,T.DetectionofpolymorphismofhumanDNAbygelelectrophoresisassingle-strandconformationpolymorphisms.Proc.Natl.Acad.Sci.USA86、2766-27701989。対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーション。対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドASOは、多様な標的DNAの配列に相補的な短い断片の合成DNAである。これは、サザンブロットアッセイにおけるまたはドットブロットアッセイにおける標的の存在を検出するためのプローブとして作用し得る。ASOは、典型的には、長さが15-21ヌクレオチド塩基のオリゴヌクレオチドである。これは、試験されるDNAの1つのみの型、または対立遺伝子に特異的になるように設計される。ASOの長さ、どちらの鎖が選択されるか、標的DNAに結合するさらにそこから洗浄される条件、すべてがこの特異性において役割を果たす。これらのプローブは、通常、一塩基多型SNPのアッセイにおける基本的な能力である、標的の遺伝子配列におけるわずか1塩基の相違を検出するように設計され得る。標的に結合した後に検出されるように、ASOは、放射能、酵素、または蛍光タグで標識されていてもよい。例えば、IlluminaMethylationAssay技術は、1塩基対の相違チミン対シトシンを検出するためにASOを利用して特定のCpG部位におけるメチル化を測定する。PCRが、ASO解析と組み合わされることもある[SaikiらNature3246093:163-166、1986]。直接DNAシーケンシングおよび制限断片長多型RFLPに基づいた技術は、広く知られている。RFLPは、制限エンドヌクレアーゼでDNA試料を消化し、その後サザンブロット解析を行い、結果として生じる多様な長さのDNA断片を解析する技術である。結果として生じたパターンは、多型の検出において使用され得る。DNAシーケンシングは、一般に、DNAの分子内のヌクレオチド塩基-アデニン、グアニン、シトシン、およびチミン-の順序を決定する方法を指す。他の好適な遺伝子型同定の方法としては、限定されるものではないが、マイクロアレイ解析、SmartAmp2増幅、ピロシーケンシング、質量分析法、分子ビーコン、およびELISA例えば、ディップスティックELISAなどが挙げられる。DNAマイクロアレイは、分子生物学および医学において使用される多重化技術である。これは、それぞれピコモル10-12モルの特定のDNA配列プローブを含む、数千の顕微鏡的な点のDNAオリゴヌクレオチドの配列されたシリーズからなる。DNAマイクロアレイは、発現レベルにおける変化を測定するために、一塩基多型SNPを検出するために、所定の試料の変異ゲノム使用および型の節を参照されたいを遺伝子型同定または再シーケンスするために、使用され得る。配列番号1の第11位はP糖タンパク質のエキソン中にあり、配列番号1の第618位は非コード領域に該当する。大環状ラクトン耐性D.イミティスは、配列番号1の第11位にまたは第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位において遺伝子型GGを有する。したがって、大環状ラクトン耐性D.イミティス線虫において発現されるP糖タンパク質は、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位において線虫のGG遺伝子型を間接的に検出するのに有用であり得る改変されたアミノ酸配列を有し得る。本発明の一実施形態において、配列番号1の第11位に相当する部位にグアニンを含有する核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を検出することができる抗体は、P糖タンパク質に関して線虫のGG遺伝子型を検出する際に有用であり得る。配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位において、または配列番号1の第11位および第618位に相当する部位において遺伝子型GGを有するディロフィラリアイミティス線虫が同定されると、それは、結果を確認するのに有用であり得る。一実施形態において、機能的アッセイは、該線虫が大環状ラクトン耐性であることを確認するために使用され得る。例えば、ディロフィラリアイミティス線虫は、ある用量の大環状ラクトン、例えば、LD95用量の大環状ラクトン、すなわち、ディロフィラリアイミティスの95に対して致死的である用量の化合物に曝露され得る。キットおよび市販用パッケージ本発明の実施形態において、本発明のプローブは、キットとして使用者に提供されてもよい。本発明のキットは、1種または複数の本発明のプローブを含み得る。例えば、キットは、配列番号1の第11位に相当する線虫のP糖タンパク質中の部位における該線虫の遺伝子型を決定することができるプローブ、または配列番号1の第11位および第618位に相当する線虫のP糖タンパク質中の部位における該線虫の遺伝子型を決定することができるプローブを含有し得る。キットは、1種または複数の試薬、緩衝液、パッケージング材、キットを使用するための説明書およびキットの構成要素を保持するための容器をさらに含み得る。方法およびキットの使用本発明の方法およびこの方法を行うためのキットは、研究、医学および産業上の用途を有し得る。本発明は、感染した動物におけるイヌ糸状虫の管理および地域における大環状ラクトン耐性ディロフィラリアイミティス線虫の検出における広範な用途を見出している。本発明の代表的な、非限定的な用途としては、予防または療法のための大環状ラクトンの通常の用量に対して感受性でないディロフィラリアイミティスの個体または個体群の存在の検出、定量および/または診断などが挙げられる。一実施形態において、核酸分子を検出および定量する本発明の能力は、配列番号1の第11位に相当するP糖タンパク質中の部位においてGG遺伝子型を有するディロフィラリアイミティス線虫に感染した動物用の、または配列番号1の第11位および第618位に相当するP糖タンパク質中の部位においてGG遺伝子型を有するディロフィラリアイミティス線虫に対する、化学療法レジメンを処方、および/または変更するように、開業獣医師に指示を与える限りにおいて有用である。こうした大環状ラクトン耐性ディロフィラリアイミティス線虫の同定は、治癒を達成するためおよび/または耐性株の広がりを最小限に抑えるために、代替の薬剤、例えば、成虫駆除剤例えば、ヒ素ベースの薬剤、ジエチルカルバマジン、テトラサイクリンなどの抗生物質、およびこれらのうち1種または複数の組合せなどを含み得る療法を処方するように、および/または大環状ラクトン療法単独からこれらに切り換えるように、獣医師に指示を与え得る。代替的に、獣医師は、大環状ラクトン耐性線虫に感染した動物の治療において、大環状ラクトンの、および/または大環状ラクトンを使用した治療レジメンの、例外的な用量例えば、通常よりも高い用量を処方するまたは現行の用量を調整することができる。大環状ラクトン予防薬のための典型的な推奨される用量の割合としては、例えば、イベルメクチンについて6μg/kg;ミルベマイシンオキシムについて500mg/kg;モキシデクチンについて3μg/kg月1回;およびセラメクチンについて6mg/kgなどが挙げられる。獣医師は、ディロフィラリア属種線虫、例えば、大環状ラクトン耐性ディロフィラリアイミティス線虫に感染した動物を治療するのに好適な任意の組合せで上記の治療法および療法のうちの1つまたは複数を組み合わせることもできる。例えば、獣医師は、こうした動物をヒ素ベースの薬剤などの成虫駆除剤で治療し、次いで、大環状ラクトンまたはジエチルカルバマジンなどのミクロフィラリア駆除剤を後続させることもできる。一例において、ヒ素ベースの薬剤は、大環状ラクトン耐性ディロフィラリアイミティス線虫に感染した動物を治療するために使用され得る。ヒ素ベースの薬剤は、メラルソミン二塩酸塩を含み得るが、これに限定されない。メラルソミン二塩酸塩は、例えば、2.5mg/kgの用量で、24時間間隔で、2回使用され得る。これは、第1の治療に対する反応性ならびに動物の状態、年齢、および用途に依存して、4カ月間繰り返され得る。しかし、当業者は、投与量が、感染の重症度に依存して変化し得ることを理解するはずである。例えば、重症クラス3の疾患を有するイヌなどの感染した動物に、1用量を投与して、2、3カ月間回復させた後に、2用量の完全なセットを投与することもできる。他の一例において、ジエチルカルバマジンは、大環状ラクトン耐性のディロフィラリアイミティス線虫に感染した動物を治療するために使用され得る。ジエチルカルバマジンは、例えば、動物の1ポンドにつき25から50mgの用量で使用され得る。投与の期間は、治療されている状態、投薬に対する反応性および何らかの有害作用の発生に依存し得る。他の一例において、抗生物質は、大環状ラクトン耐性のディロフィラリアイミティス線虫に感染した動物を治療するために使用され得る。前記抗生物質は、テトラサイクリンを含み得るが、これに限定されない。ディロフィラリアイミティス中のウォルバキアWolbachia内部共生体を標的とする、ドキシサイクリンなどのテトラサイクリンは、例えば、10mg/kg/日の用量で40日間使用され得る。さらなる例において、他の抗寄生虫剤が使用され得る。こうした他の抗寄生虫剤は、アカシアシドを含み得るが、これに限定されない。アカシアシドは、例えば、10mg/kg/日の用量で7日間使用され得る。他の一実施形態において、P糖タンパク質における上記の遺伝子型を用いたディロフィラリアイミティス線虫個体群の検出は、感染しやすい動物、例えば、イヌを保護するための予防法として、ジエチルカルバマジンなどの代替の薬剤の使用を処方するように、獣医師に指示を与え得る。一例において、ジエチルカルバマジンは、動物が、大環状ラクトン耐性のディロフィラリアイミティス線虫に感染するのを防ぐために使用され得る。これに関して、ジエチルカルバマジンは、例えば、動物の1ポンドにつき3mgの用量で1日1回使用され得る。他の一実施形態において、本発明のキットは、市販の製品として、大環状ラクトン耐性ディロフィラリアイミティス線虫の検出において有用となり得る。こうした製品は、限定されるものではないが、獣医師、医師、ペット所有者、農業家、動物園管理人、疫学者、またはそれを必要としている他の消費者による使用に好適であり得る。本発明は、以下の非限定的な実施例によってさらに例示される。[実施例1]材料および方法試料4つの群の試料を入手することができた。群Aは、大環状ラクトンにそれまで曝露されたことがなかった39匹の未処置の個々の虫に該当する。群Bは、フロリダ、ルイジアナおよびテキサスにおいて大環状ラクトンに曝露された、またはそれらの祖先が曝露されたようである、35匹の個々の虫に該当する。これらの試料について、イヌの治療歴は詳細ではないが、大環状ラクトンはこれらの地域において一般的に使用されている。群Cは、インビトロアッセイにおいてIVMに対して低い感受性を示した117匹の個々のミクロフィラリアに該当する。群Dは、日本において大環状ラクトンに曝露された、またはそれらの祖先が曝露されたようである、33匹の個々の虫に該当する。これらの試料について、イヌの治療歴は詳細ではないが、大環状ラクトンは日本において一般的に使用されている。試験Tip、KendallおよびTootieと名づけられた3匹のイヌからミクロフィラリアを採取した。これらのミクロフィラリアは、群Cの同一群のものである。個々の各イヌからのこれらのミクロフィラリアにおけるインビトロアッセイを、未処置のミクロフィラリアの95がその用量において死滅するはずであることを意味するIVM95致死量IVM-LD95である1用量を用いて行った。死滅したミクロフィラリアを計数した。次いで、ミクロフィラリアを、IVM-LD95の2倍に相当する第2の用量のIVM中でインキュベートした。死滅したミクロフィラリアを計数した。分子生物学個々の成虫のゲノムDNAを、QiagenQiagenInc、Mississauga、CanadaからのDNeasy商標キットで抽出した。個々のミクロフィラリアのゲノムDNA抽出は、QiagenからのQIAampDNAキットを使用して抽出し、その後、きわめて少量のDNAから全ゲノムを増幅することを可能にする、QiagenからのRepli-g登録商標スクリーニングキットを適用した。GenBankで入手可能なD.イミティスの配列はごくわずかなので、O.ボルブルス、B.マライB.malayi、C.エレガンスまたはH.コントルタスH.contortusの配列に基づいて生物情報学研究を行い、D.イミティスのP糖タンパク質遺伝子の620bpの領域を増幅できるようにした。この増幅は、以下のプライマーを使用してPCRによって行った:Pgp-1-sens5’ggacaattatccggtggtca3’[配列番号2]およびPgp-1-antisens5’tcgcaaatttccttccactt3’[配列番号3]。変性を94°Cで45秒間;アニーリングを56°Cで45秒間;伸長を68°Cで2分間、35サイクル行った。0.5μg/mlエチジウムブロマイドを含有した1アガロースゲルを用いた100Vで40分間のゲル電気泳動によってPCR増幅を確認した。3730XLDNAAnalyserシステムMcGillUniversity/GenomeQuebecInnovationCentreを使用して、PCR産物をシーケンスした。増幅中にエラーが入るのを避けるために、HighFidelityPlatinium登録商標TaqDNAポリメラーゼInvitrogenをPCR反応に使用した。個々のクロマトグラムを、Sequencher商標4.7ソフトウェアGeneCodesCorporation、AnnArbor、Ml48108、USAで解析した。このプログラムは、各ヌクレオチドにおける識別およびクロマトグラム上の主なヌクレオチドピークの90を超えていた第2のピークのみについての選択を可能にした。この高レベルの識別能は、多型部位におけるホモ接合性およびヘテロ接合性を決定するのに信頼性を与えた。統計解析χ2検定およびFisherの正確確率検定を用いて、群C大環状ラクトン低応答動物の一塩基多型SNPの遺伝子型頻度を、他の3群のSNPの遺伝子型頻度と比較した。群CのミクロフィラリアのP糖タンパク質の遺伝子型と、それらに対応するイベルメクチン-LD95表現型との間に相関があるかどうかを評価するために、GraphPadPrismversion5.00forWindows登録商標、GraphPadSoftware、SanDiegoCaliforniaUSA、www.graphpad.comを使用して線形回帰を行った。結果解析した断片において2個の共通のSNPが見出された[図1;配列番号1]。1つ目は、解析した断片の第11位A11Gに位置しており、2つ目は、第618位A618Gであった。A11GのSNPは、コード領域内の第2のATP結合ドメインの直前にあり、結果としてリシンからアルギニンへのアミノ変更が生じていた。A618GのSNPは、非コード領域内に位置していた。O.ボルブルス、B.マライおよびC.エレガンスからの入手可能な配列に基づき、解析した断片は、アミノ酸配列のおよそ第1200位から始まっていた。群Aに遺伝子型同定された37匹の成虫間で、第11位におけるホモ接合体AA、GGおよびヘテロ接合体AGの遺伝子型頻度は、それぞれ81.1、0および18.9であった。群Bに遺伝子型同定された34匹の成虫間で、第11位におけるホモ接合体AA、GGおよびヘテロ接合体AGの遺伝子型頻度は、それぞれ91.2、2.9および5.9であった。群Cに遺伝子型同定された92匹のミクロフィラリア間で、第11位におけるホモ接合体AA、GGおよびヘテロ接合体AGの遺伝子型頻度は、それぞれ57.6、35.9および6.5であった。群Dに遺伝子型同定された33匹の成虫間で、第11位におけるホモ接合体AA、GGおよびヘテロ接合体AGの遺伝子型頻度は、それぞれ100、0および0であった[図2]。ホモ接合体AA遺伝子型頻度は、群Ap=0.008、群Bp=0.0001および群Dp=0.000006と比較して、群Cにおいて有意に低かった。ホモ接合体GG遺伝子型頻度は、群Ap=0.000001、群Bp=0.00005および群Dp=0.000006と比較して、群Cにおいて有意に高かった[表1]。さらに、対立遺伝子Aおよび対立遺伝子Gの頻度は、群Ap=0.000002、群Bp=0.0000001および群Dp=0.00000000001と比較して、群Cにおいてそれぞれ有意に低かったおよび高かった[図示せず]。第11位および第618位におけるSNPの遺伝子型を組み合わせた[図3]。例えば、AA-GG遺伝子型は、第11位における遺伝子型AAおよび第618位における遺伝子型GGに相当した。考えられる9種の遺伝子型の組合せの中で、AA-AA、AA-GG、AA-AG、AG-GG、AG-AGおよびGG-GGの6種の異なる遺伝子型のみが全試料群において見出された。群Dにおいて、遺伝子型AA-GGのみが見出された。群AにおけるGG-GG、群BにおけるAG-AGおよびAA-AAのように、いくつかの遺伝子型は、いくつかの群において見出されなかった。群Cは、6種の異なる遺伝子型すべてが見出された唯一の群であった。興味深いことに、遺伝子型GG-GGは、群Ap=0.000001、群Bp=0.00005および群Dp=0.000006と比較して、群Cにおいて有意に高く[表2]、群AおよびDでは見出されなかった。群Cは、3匹のイヌ:Tip、KendallおよびTootieから単離された個々のミクロフィラリアの群である。TipおよびKendallのミクロフィラリアは、遺伝子型GG-GGおよびAA-GGのみを有していたのに対して、Tootieのミクロフィラリアでは、6種の異なる遺伝子型がすべて見出された[図4]。遺伝子型GG-GGの頻度は、Tip、KendallおよびTootieから採取されたミクロフィラリアにおいてそれぞれ51.3、30.7および20.7であった。インビトロ試験[表3]より、95のミクロフィラリアが死滅するはずの用量であるLD95での1用量のIVMに対する曝露後に、Tipのミクロフィラリアの8および39のみが死滅したことが示された。2倍のLD95でTipのミクロフィラリアを曝露することによって、24.1および50.4のみが死滅した。LD95での1用量のIVMの後にKendallおよびTootieのミクロフィラリアの56および79が死滅したが、2倍のLD95の曝露後にはこの2匹のイヌのミクロフィラリアの99.2および100が死滅した。Tip、KendallおよびTootieのミクロフィラリアのGG-GG遺伝子型と、それらのIVM-LD95表現型との間に、有意な相関適合度r2=0.93;p=0.008[図5]が認められた。考察獣医学的線虫における、およびより最近では、系統学的にD.イミティスとより密接に関連がある、O.ボルブルスにおける、様々な報告から、大環状ラクトン処置を繰り返すことによってABC輸送体遺伝子において遺伝的選択が生じることが現在知られている。大環状ラクトンに対して低い反応性を有するイヌが新たに出現しているので、大環状ラクトン耐性の潜在的な蔓延に伴う遺伝子の変化を検出する信頼性の高い遺伝子マーカーを備えることが重要である。この試験は、異なる治療歴を有する異なる地域のD.イミティスの試料を比較しているので独特なものである。この点に関して、IVMにそれまで曝露されたことがなかった虫を、大環状ラクトンに曝露された試料およびIVMに対する強い曝露の後にこの薬剤に対して低い反応性を示した試料と比較した。個々の試料を、GenBankにおいて入手不可能なP糖タンパク質遺伝子の特定の領域についてシーケンスした。このデータより、D.イミティスにおけるP糖タンパク質遺伝子についての大環状ラクトンの明らかな選択圧があることが示される。P糖タンパク質のGG-GG遺伝子型は、当分野において、イヌ糸状虫に感染したイヌにおけるIVM/大環状ラクトン最適以下応答動物の広がりを把握するための遺伝子マーカーツールとして使用され得る。[実施例2]実施例1において注目したように、P糖タンパク質アクセッション番号:HM596853-配列番号6におけるGG-GG遺伝子型と、インビトロアッセイでのD.イミティスmfにおけるIVM非感受性表現型との間に、強い相関が認められた;mfがIVMに対してより非感受性であるほど、GG-GG遺伝子型の頻度が高かった。この実施例では、NewOrleans出身の、イヌ糸状虫陽性のイヌにおける治療に対する反応性を報告し、大環状ラクトン感受性の欠如に伴うPgp遺伝子型の頻度を決定した。材料および方法症例:イヌは、2006年2月生まれの雄の去勢されたラブラドールミックスであり、体重が約31kgであった。イヌは、NewOrleans、Louisiana、U.S.A.の救助犬であり、BoudreauxRescueCrew、NewOrleansによって集められ、その後、Canadaに移され、そこで2008年1月に採用された。診断:このイヌは、2008年6月6日1日目に、Welland、OntarioにあるMainWestAnimalHospitalMWAHに検査のために連れてこられた。このイヌから採取された血液は、イヌ糸状虫抗原試験PetChek登録商標PFIDEXXLaboratories、Westbrook、MEで陽性反応を示し、D.イミティスのmfを含有していた。2008年6月11日6日目に、最初の検査血液検査、胸部ラジオグラフ、身体検査、尿検査を行った。聴診により、肺内の気管支肺胞音における軽度の増大およびグレードlll-IV/VI心雑音が認められた。残りの身体検査では、特に異常はなかった。胸部ラジオグラフィーにより、右側の心臓の中程度の拡大および背尾側肺野における侵入性の肺パターンが認められた。これらの検査により、クラス2心糸状虫症の診断が示された。治療歴:2008年6月11日6日目に、2.5mg/kgのIMメラルソミン二塩酸塩Immiticide登録商標、MerialInc.を用いた成虫駆除剤処置を開始した。7月9日および7月10日34日目、35日目に、2.5mg/kgのメラルソミン二塩酸塩を用いた2回のIM処置によって治療を続けた。その後90日にわたり、循環しているmfを排除するために、イヌにミルベマイシンオキシムMOで1回、IVMで2回の治療を行った表4を参照されたい。成虫駆除剤の最終投与の4カ月後、159日目および160日目に、イヌに、2.5mg/kgのメラルソミン二塩酸塩IMで再び治療を行った。その後の診断試験および殺マイクロフィラリア処置については、表4にまとめている。イヌ糸状虫抗原試験:イヌの治療期間中に、マイクロウェルELISA試験である、DiroChek登録商標SynbioticsCorporation、SanDiego、CAおよびPetChek登録商標PFIDEXXLaboratories、Westbrook、ME、ならびに、診療所内での迅速な使用のために設計された膜形態の試験である、SNAP登録商標PFIDEXXLaboratories、Westbrook、MEを含む、数種類のイヌ糸状虫抗原試験を行った表4を参照されたい。Knottの試験:9mlの2ホルマリンおよびEDTA中に採取された1mlの血液を遠心管内で混合した。LWScientificEZSwingSK遠心分離機内で3000rpm604m/s2で5分間遠心処理を行った。この上清液を捨てた。遠心管の底にあるペレットに0.1のメチレンブルー溶液を1滴添加して、混合し、染色された混合物のうちの1滴を顕微鏡下でD.イミティスのmfについて検査した。表4は、この試験がいつ行われ、ミクロフィラリア血症のレベルがいつ決定されたかを示している。遺伝子解析:mfの遺伝的調査のために、2010年5月12日706日目に、EDTA中に血液試料5mlを採取した。血液は、高度にミクロフィラリア血症であった。53匹の生存した個々のmfを血液試料から単離した。QIAampDNAキットQiagenInc、Mississauga、Canadaを使用して、個々のmfのゲノムDNAを抽出し、その後、Repli-g登録商標スクリーニングキットQiagenInc、Mississauga、ON、Canadaを用いて全ゲノムの増幅を行った。Pgp-1-sense5’ggacaattatccggtggtca3’プライマー[配列番号2]およびPgp-1-antisense5’tcgcaaatttccttccactt3’[配列番号3]を使用して、P糖タンパク質Pgp遺伝子のPCR増幅を行った。本明細書に記載のように、P糖タンパク質中の配列番号1の第11位および第618位に相当する部位におけるGGの遺伝子型がMLに対する非感受性と相関しているのが認められた。変性を94°Cで45秒間、アニーリングを56°Cで45秒間、および伸長を68°Cで2分間、35サイクル行った。増幅中にエラーが入るのを最小限に抑えるために、HighFidelityPlatinum登録商標TaqDNAポリメラーゼInvitrogen、Burlington、ON、CanadaをPCR反応に使用した。1アガロースゲルに通しての電気泳動によってPCR増幅を確認した。3730XLDNAAnalyserシステムGenomeQuebecInnovationCentre、McGillUniversityを使用して、PCR産物をシーケンスした。個々のクロマトグラムを、Sequencher商標4.7ソフトウェアGeneCodesCorporation、AnnArbor、Mlで解析した。Hardy-Weinberg平衡の偏差:3つの遺伝子の合計10個の異なる一塩基多型SNPについて、Wrightの階層的F-統計を計算した。上記で評価した、P糖タンパク質における2個のSNPに加えて、さらなる8個のSNPβ-チューブリン遺伝子アクセッション番号:HM596854-配列番号4内の2個、および熱ショックタンパク質遺伝子アクセッション番号:HM596851-配列番号5内の6個を、これらの部位で多型を示した、D.イミティスの遺伝子のベースライン情報を決定するために行われた以前の解析に基づいて調査した。統計解析:Fisherの正確確率検定を用いて遺伝子型頻度を比較した。結果治療:2008年7月におけるメラルソミン二塩酸塩の3用量の最終投与2日後すなわち、37日目、イヌは、成虫のイヌ糸状虫の死と一致する一時的徴候直腸温上昇、嗜眠、咳、肺音増大を示した。41日目に開始して、これらの徴候を、プレドニゾンApo-Prednisone;Apotex、Toronto、ON、Canada、1.3mg/kg、1日2回で6日間管理した。74日目に経口で0.74mg/kgのミルベマイシンオキシムMO、95日目に経口で50ug/kgのIVM、および125日目に経口で200ug/kg4×通常のミクロフィラリア用量のIVMの投与後、このイヌは、断続的にミクロフィラリア血症のままであった。メラルソミン二塩酸塩の第2の治療レジメン159日目および160日目の6週間後、207日目に、Knottの試験は依然として陽性であり、そのため、このイヌに、経口で200μg/kgのIVMで再び治療を行った。1カ月後、242日目に、D.イミティス抗原試験は陰性であり、これにより、このイヌに成虫はいないことが確認された。しかし、このイヌは、依然としてミクロフィラリア血症であった。したがって、243日目に開始して、このイヌに、0.74mg/kgのMOを経口で2週間に1回、計4回投与した表4を参照されたい。これにもかかわらず、298日目に、このイヌはミクロフィラリア血症のままであった。したがって、298、312、326、340および354日目に、1.1mg/kgのMOを経口で投与した。356日目に、このイヌから血液を採取して検査した:mfは依然として存在しており、D.イミティス抗原試験は依然として陰性であった。375日目に、血液試料を、AnimalHealthLaboratory、UniversityofGuelphAHLUGに送付した:ミクロフィラリア血症は、6530mf/mlであり、抗原試験は依然として陰性であった表4を参照されたい。そのため、384日目に開始して、このイヌに、2.0mg/kgのMOを経口で1回1日、7日間投与した。420日目に、このイヌは、355mf/mlのミクロフィラリア血症を有していた。420日目に、このイヌに、経口で2.0mg/kgのMOで再び治療を行い、これを1日1回、8日間継続した。この第2の高用量レジメンにもかかわらず、480日目に、依然としてイヌ糸状虫抗原試験で陰性反応を示したまま、このイヌは、1810mf/mlのミクロフィラリア血症を有していた。遺伝子解析:706日目に、このイヌから血液を採取し、血液中のミクロフィラリアを遺伝子解析のために単離した。428日目および706日目の間、このイヌに、大環状ラクトンでの治療を行っていない。Pgp遺伝子におけるGG-GG遺伝子型の頻度は、血液試料から単離された生存しているmfにおいて45.3であった。GG-GG遺伝子型とは、配列番号1の第11位および第618位に相当する部位におけるPgpの遺伝子型を指す]Hardy-Weinberg平衡の偏差:F係数は、異なるSNPについて0.23から1まで変化し、この個体群におけるホモ接合性の過剰性が示唆された図6。特に、ホモ接合性の過剰性は、PgpのSNPではきわめて高かった0.88および1のF係数。考察MLに感受性であることが知られている、イヌのmfまたは成虫のD.イミティスは、0から18.5までの範囲に及ぶ、Pgp遺伝子におけるGG-GG遺伝子型の頻度を有していたのに対して、インビトロアッセイにより最もIVM耐性のmfは、51.3のGG-GG頻度を有しており、この遺伝子型の頻度は、IVMに対する非感受性のレベルときわめて高く相関したことが見出された。ここに記載している症例のmfにおいて、GG-GG遺伝子型頻度は、45.3であった感受性のイヌの感染のmfと比較してp=0.002、実施例1において報告したように、種々の感受性の感染の成虫と比較して、p=0.000006。実施例1において見出された、Pgp遺伝子型とIVM反応性表現型との間の相関は、インビボでの感受性を反映しているようであり、記載した症例のmfにおけるIVMに対する高レベルの非感受性を示唆する。PgpのSNPのホモ接合性についての高い過剰性は、薬剤の圧力の結果としての特定のPgp遺伝子型の選択と一致している。MOおよびIVMは、それぞれ500μg/kgおよび50μg/kgでmfを死滅させることが以前に示されている。しかし、この症例において使用した薬剤レジメンのうち、用量を増加させても、または複数の治療プロトコルを使用しても例えば、2.0mg/kgで8日間のMO、mfを取り除けるものはなかった。ML非感受性と相関することが示された治療反応性表現型および遺伝子型により、このイヌにおけるD.イミティスのML耐性について結論づけることができる。2つの治療シナリオ、3.5カ月齢より上の成長期のD.イミティスを有するイヌに対するML予防薬の投与、およびミクロフィラリア血症のイヌに対するイヌ糸状虫予防薬の投与は、D.イミティスにおけるML耐性の発達をもたらす可能性があることが示唆されている。耐性は、伝染がより激しく、それ故に薬剤の圧力がより高い地域において生じるようである。予防は、薬剤が有効であるならば、イヌ糸状虫感染を制御するための確かに最良のツールのままである。というのは、MLイヌ糸状虫予防薬に対する反応性の欠如についての散発的な報告があり、ML耐性のD.イミティスに感染したのは、ここに記載の症例のイヌだけではないであろうと考える根拠があるからである。したがって、ML耐性の蔓延についての調査が至急に必要とされている。これに関して、ここに、およびBourguinatらに記載の遺伝子型アッセイは、有用となり得る。ML耐性のD.イミティスを制御するために、新しい戦略が開発される必要があり得る。調査は、この遺伝子型が特異的に集中しているのか、またはより一般的なものなのかどうかを示すものでなければならない;そうした知識は、可能性のある代替制御戦略の開発および使用を導くために重要となり得る。本明細書に引用されているすべての刊行物および特許出願は、各個の刊行物または特許出願が参照により本明細書に組み込むものとして具体的に個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込む。いずれの刊行物の引用もその開示について出願日より前であり、本発明が従来の発明の効力によってこうした刊行物に先行する権利がないことを容認するものとして解釈されるべきではない。本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形1つのa、anおよび該theは、文脈中にそうでないことが明確に示されていない限り、複数を含む。他で定義されていない限り、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。上記の発明は、明確な理解のために図および例を通していくらか詳細に記載されているが、本発明の教示に鑑み、添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲から逸脱することなく特定の変更および改変がこれになされ得ることは当業者に容易に明らかである。"