D-マンノースの高濃度溶液に酸を加えて縮合反応を行い、α結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。α-結合のマンノオリゴ糖がαDマンノピラノシルDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノースである1に記載のα結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。α-結合のマンノオリゴ糖がαDマンノピラノシルDマンノピラノシルαDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノシルαDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノシルαDマンノピラノースである1に記載のα結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。酸が塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、H型イオン交換樹脂、メタンスルホン酸、pトルエンスルホン酸である1に記載のα結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。Dマンノースの高濃度溶液が60ww~85wwである1に記載のα結合のマンノオリゴ糖混合物を効率的に得る方法。そこで本発明の目的は、Dマンノースを原料として、縮合用触媒として酵素を利用せずに、且つ水酸基の保護あるいは1位の活性化という多段階の化学合成反応を経ずして、マンノオリゴ糖を効率的に製造する方法を提供する点にある。オリゴ糖とは単糖がグリコシド結合により、いくつか結合したものである。グリコシド結合というのは、糖の1位のアルデヒド基が他の化合物の水酸基とアセタール結合を形成したものである。即ち2糖とは、一つの糖のアルデヒド基と別の糖の水酸基がアセタール結合した化合物のことである。このアセタール結合形成反応は、酸によって触媒される。糖をアルコール中に懸濁して酸を作用させると、グリコシド化合物が形成されるが、この反応はFischer合成法として古くから知られている。例えば酸触媒の存在下、メチルアルコール溶液に糖を懸濁して撹拌すると徐々にメチルグリコシドが形成され、それに伴いそのメチルグリコシドはメチルアルコールに溶解していく。完全に溶解した時点が反応の終点となる。しかしFischer合成法の延長として、酸を触媒として糖と糖を結合して2糖を合成するには重大な問題がある。即ち、液体状のアルコールを用いてグリコシドを形成する場合には、単糖をアルコールに懸濁させて酸を添加することにより反応行えばよい。しかし、2糖を合成する場合は、一つの糖のアルデヒドに対して、別の糖分子の水酸基をアセタール結合で結合させることになる。当然のことながら、糖は固体であるので、ある糖を別の糖に溶解あるいは懸濁させるわけにはいかない。もちろん、2つの単糖を水に溶解させて酸を加えれば、基本的には一定の平衡点まで反応は進行するが、一般には水分が大過剰であるので脱水反応の収率は極端に低くなる。例えばDマンノースの20溶液100mLを考えると、糖は約011モルであるのに対して、水は約44モルとなり、Dマンノースの周辺には40倍もの水分子が存在していることになるFischer合成法で2糖を合成するには脱水的環境でなくてはならない。即ち、水の量が少なければ少ないほど収率は向上するはずである。そこで、本発明者らはDマンノースをできるだけ少量の水に溶かすべく、80というDマンノースの超高濃度溶液の調製を達成した。80の溶液ということは、80gのDマンノースを20g約20mLの水に溶解するという、常識では考えられない溶液である。この場合、Dマンノースは約044モル、水は約11モルとなり、水分子の方が約25倍だけ多いということになる。この濃度ならば、マンノオリゴ糖を収率良く生成させるのに十分な濃度である。この溶液に少量の酸を加えて撹拌することにより、マンノオリゴ糖を高収率で合成できることを見出した。また上記の反応において、Dマンノースがα結合で結合した2糖の方が、β結合で結合した2糖よりも圧倒的に多いということが明らかになった。通常、Dグルコースをメタノールに懸濁させて酸触媒でFischer合成を行うと、βグルコシドが優勢に生成する。しかし、Dマンノースの2位水酸基はアキシアル配置であることから、α結合のマンノオリゴ糖が優勢に生成したものと理解される。ここで、生成したオリゴ糖はα結合で結合したものが圧倒的に多いものの、β結合のオリゴ糖も微量混在している。そこで、反応終了後に希釈して直ちに中和した後、βマンノシダーゼを加えることにより混在しているβ結合のマンノオリゴ糖を加水分解した。この操作により、α結合のみからなるマンノオリゴ糖混合物が得られることを確認し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、1Dマンノースの高濃度溶液に酸を加えて縮合反応を行い、その後副生しているβ結合のマンノオリゴ糖をβマンノシダーゼを用いて加水分解することにより、α結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。2α結合のマンノオリゴ糖がαDマンノピラノシルDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノース以下、それぞれManα12Man、Manα13Man、Manα16Manと記すである1に記載のα結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。3α結合のマンノオリゴ糖がαDマンノピラノシルαDマンノピラノシルDマンノピラノースである1に記載のα結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。4酸が塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、H型イオン交換樹脂、メタンスルホン酸、pトルエンスルホン酸である1に記載のα結合のマンノオリゴ糖を効率的に得る方法。5Dマンノースの高濃度溶液が60WW~82WWである1に記載のα結合のマンノオリゴ糖混合物を効率的に得る方法。に関する。以下、発明を詳細に説明する。本発明者らは、糖と液体のアルコールではなく、固体である糖と糖の脱水縮合反応を進行させるという問題を解決するために、糖を溶解させる水の量をできるだけ少なくする方法を検討した。通常、Dマンノースをできるだけ高濃度に溶解する場合、100mLの水にどれだけのDマンノースを溶解できるかという実験を行う。しかるに本発明者らは逆の発想で、100gのDマンノースはどれだけ少量の水に溶解させることができるかという観点から実験を行った。100gのDマンノースを沸騰湯浴中で加熱しつつ、できるだけ少量の水を加えて溶解させていったところ、22mLの水を加えた時点で水あめ状になることを見出した。これに微量の酸を混ぜて反応させることにより、脱水縮合反応が進行して、高収率でマンノオリゴ糖が得られることが明らかになった。本反応で用いた82WWという超高濃度のDマンノース溶液では、82gのマンノース046モルに対して18gの水1モルという割合になり、脱水縮合反応の反応収率は最高となった。ここで、Dマンノースの濃度は82WW限定されるわけではなく、これよりも低くても、それに相応して収率は低下するが、オリゴ糖は生成する。しかしながら、実用に適応する濃度範囲としては60WWが限度と考えられる。使用できる酸としては、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸などの鉱酸の他、メタンスルホン酸、pトルエンスルホン酸などの有機酸、さらにはH型のAmberliteIR120樹脂等のイオン交換樹脂でも触媒として使用することができる。加熱によって反応速度は促進されるが、酸を添加しているために、あまりに高温では副反応が進行してしまい、反応収率の面からも不適当である。4°C~60°Cが実用的な範囲である。本発明による方法で生成するオリゴ糖混合物に、βマンノシダーゼを作用させると少量副成しているβ結合のオリゴ糖は加水分解され、α結合のオリゴ糖混合物を得ることができる。この混合物を活性炭カラムで分離することにより、αDマンノピラノシルDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノース、αDマンノピラノシルDマンノピラノースが得られる。ここでβ結合のオリゴ糖を加水分解するのに用いられるβマンノシダーゼは、加水分解に用いるだけなので少量で構わない。これらのオリゴ糖は、高価なαマンノシダーゼを大量使うことなく、酸触媒で合成できることから、大量合成にも適しており、基礎科学研究のみならず産業的な利用を図る上でもその貢献度は大きい。本発明により、極めて安価に糖タンパク質糖鎖を構成するα結合のマンノオリゴ糖を高収率で製造可能となった。これにより、高マンノース型糖鎖の化学合成の原料を提供することができ、科学技術の進展に貢献できる。さらに、マンノオリゴ糖は大腸菌などある種の病原菌に結合する性質も有していることから、この手法で製造されたマンノオリゴ糖を利用した除菌用製品も普及させることが可能となった。以下、本発明を実施する形態を説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。5gのDマンノースを2mLの水に加熱して溶解して得られた水飴様の溶液に濃塩酸50μLを加え、37°Cにてよく撹拌しつつ反応を行った。HPLCで反応を追跡し、変化が少なくなった85時間反応で反応を停止した図1。100mLの水を加えて素早く溶解して直ちに01規程の水酸化ナトリウム溶液で中和した。そのうちの1mLを濃縮してC13NMRを測定した図2a。残りの溶液に02ユニットのβマンノシダーゼHelixpomatia由来、Sigma社を加えて37°Cにて12時間撹拌した。再度そのうちの1mLを濃縮してC13NMRを測定して、β結合のマンノオリゴ糖が消失していることを確認した図2b。実施例1で得られたα結合マンノオリゴ糖混合物の水溶液を、活性炭カラムWako02135220g77cmφx40cmに供した。1Lの水にて洗浄した後、03L→7VV3Lのエタノールのグラジエントにより溶出を行った。25mLずつのフラクションを集めて、各フラクションについてフェノール硫酸法により還元糖の検出を行った図3。得られたグラフより、4つのピークのフラクションを集めて濃縮し、NMRスペクトルを測定して標品と比較した結果、Manα12Man図3のフラクション93~125を74mg、Manα16Man図3のフラクション158~217を293mg、およびManα13Manを主成分として含む2糖図3のフラクション126~157を83mg得た。