対応するアミドマロネートOOPt錯体またはアミドマロネートOOPtおよびNOPt錯体の混合物をpH60~100の水溶液に接触させる段階を含むプロセスによって本質的に純粋に得られる、以下の化学構造を有するアミドマロネートNOPt錯体:式中、XはCOまたはSO2であり;R1は、水素、脂肪族基、水溶性基、腫瘍ターゲティング基、および一つまたはそれ以上の腫瘍ターゲティング基をさらに含む水溶性基からなる群より選択され;qは0または1であり;rは1~500であり;リンカーは、アルキル基、アミノ酸、ポリアミノ酸、ポリエチレングリコールPEG、およびその任意の組み合わせからなる群より選択され;R2およびR3は、独立して、NH3、一級アミン、二級アミン、三級アミン、および窒素含有ヘテロ脂環式基からなる群より選択されるか;またはR2およびR3は、独立して、その双方が脂肪族、脂環式、芳香族、アラルキル、または複素環基の炭素原子に共有結合する一級、二級、三級アミノ基であって、アミノ基の窒素原子がPt原子とキレートを形成する場合、それによって5~7員環が得られ;R4は、水素、陽イオンおよびエステル形成基からなる群より選択される。対応するアミドマロネートNOPt錯体またはアミドマロネートNOPtおよびOOPt錯体の混合物をpH35またはそれ未満の水溶液に接触させる段階を含むプロセスによって本質的に純粋に得られる、以下の化学構造を有するアミドマロネートOOPt錯体:式中、XはCOまたはSO2であり;R1は、水素、脂肪族基、水溶性基、腫瘍ターゲティング基、および一つまたはそれ以上の腫瘍ターゲティング基をさらに含む水溶性基からなる群より選択され;qは0または1であり;rは1~500であり;リンカーは、アルキル基、アミノ酸、ポリアミノ酸、ポリエチレングリコールPEG、およびその任意の組み合わせからなる群より選択され;R2およびR3は、独立して、NH3、一級アミン、二級アミン、三級アミン、および窒素含有複素環からなる群より選択されるか;またはR2およびR3は、独立して、その双方が脂肪族、脂環式、芳香族、アルカリル、または複素環基の炭素原子に共有結合する一級、二級、三級アミノ基であって、アミノ基の窒素原子がPt原子とキレートを形成する場合、それによって5~7員環が得られる。pHが70~80である、請求項1記載の錯体。pHが20~35である、請求項2記載の錯体。水溶液の温度が20°C~50°Cである、請求項1または2に記載の錯体。水溶液の温度が35°C~40°Cである、請求項1または2に記載の錯体。水溶液が、緩衝液を用いて選択されたpHに維持される、請求項1または2に記載の錯体。緩衝液がリン酸緩衝液である、請求項7記載の錯体。pHがpHスタットによって選択された範囲に維持される、請求項1または2に記載の錯体。陽イオンが、Li、Na、K、Ca2、Mg2および四級アンモニウムからなる群より選択される、請求項1記載の錯体。陽イオンがNaである、請求項10記載の錯体。R2およびR3がNH3である、請求項1または2に記載の錯体。R2およびR3が共に、12ジアミノシクロヘキサン、を含む、請求項1または2に記載の錯体。12ジアミノシクロヘキサンが1R2Rジアミノシクロヘキサンである、請求項13記載の錯体。リンカーが、GlypGlyを含む、請求項1または2に記載の錯体:式中、pは0、1、2、3、4、または5であり;かつWは同じまたは異なってもよいアミノ酸またはアミノ酸の直鎖である。pが0である、請求項15記載の錯体。pが1であって、WがGlyである、請求項15記載の錯体。pが2であって、WがPheLeuである、請求項15記載の錯体。pが2であって、WがGlyGlyである、請求項15記載の錯体。R1が水溶性基である、請求項1または2に記載の錯体。水溶性基がNメタクリルアミドとアクロイルまたはメタクロイルCのコポリマーである、請求項20記載の錯体。R1がポリアミノ酸である、請求項20記載の錯体。ポリアミノ酸がポリグルタメート、ポリアスパルテート、およびポリリジンからなる群より選択される、請求項22記載の錯体。R1が多糖類である、請求項20記載の錯体。R1が、腫瘍ターゲティング基をさらに含む水溶性基である、請求項1または2に記載の錯体。腫瘍ターゲティング基が、葉酸、葉酸誘導体、葉酸類似体、ビタミンB12、ビタミンB12誘導体、ビタミンB12類似体、ビオチン、デスチオビオチンおよびビオチン類似体からなる群より選択される、請求項25記載の錯体。R1が腫瘍ターゲティング基である、請求項1または2に記載の錯体。腫瘍ターゲティング基が、葉酸、葉酸誘導体、葉酸類似体、ビタミンB12、ビタミンB12誘導体、ビタミンB12類似体、ビオチン、デスチオビオチンおよびビオチン類似体からなる群より選択される、請求項27記載の錯体。Ptが2酸化状態である、請求項1または2に記載の錯体。Ptが4酸化状態である、請求項1または2に記載の錯体。R1が以下の化学構造を有する水溶性のランダムコポリマーである、請求項1または2に記載の錯体:式中、tは075~099であり;vは001~025であり;tv=100であり;zはポリマーの分子量を表し、1~5000kDaであり;R5およびR5は独立して水素およびCH3からなる群より選択され;かつR6は2C-6Cヒドロキシアルキル基である。R6が、2ヒドロキシプロピルアミノCH2NHである、請求項31記載の錯体。本質的に純粋な錯体を得る段階が限外濾過をさらに含む、請求項1または2に記載の錯体。限外濾過がタンジェンシャルフロー濾過を含む、請求項33記載の錯体。限外濾過が遠心限外濾過を含む、請求項33記載の錯体。以下を含む、薬学的組成物:請求項1、2、または31のいずれか一項に記載の錯体;および一つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤。請求項1、2または31のいずれか一項に記載の白金錯体の薬学的有効量をそれを必要とする患者に投与する段階を含む、固形腫瘍を治療する方法。錯体が非経口投与される、請求項37記載の方法。アミドマロネートOOPtキレートまたはアミドマロネートNOPtおよびOOPtキレートの混合物を、pH60~100の水溶液に接触させる段階を含む、本質的に純粋なアミドマロネートOOPtキレートまたはアミドマロネートNOPtおよびOOPtキレートの混合物から本質的に純粋なアミドマロネートNOPtキレートを調製する方法。pHが70~80である、請求項39記載の方法。アミドマロネートNOPtキレートまたはアミドマロネートNOPtおよびOOPtキレートの混合物を、pH35およびそれ未満の水溶液に接触させる段階を含む、本質的に純粋なアミドマロネートNOPtキレートまたはアミドマロネートNOPtおよびOOPtキレートの混合物から本質的に純粋なアミドマロネートOOPtキレートを調製する方法。pHが2~35である、請求項41記載の方法。水溶液の温度が20°C~50°Cである、請求項39または41に記載の方法。水溶液の温度が35~40°Cである、請求項39または41に記載の方法。水溶液が、緩衝液を用いて選択されたpH範囲に維持される、請求項39または41に記載の方法。緩衝液がリン酸緩衝液である、請求項45記載の方法。水溶液が、pHスタットを用いて選択されたpH範囲に維持される、請求項39または41に記載の方法。[発明の詳細な説明]表の簡単な説明表138°Cで主にOOアミドマロネートPt錯体の組成に及ぼすpHの影響を示す。表238°Cで、100NOアミドマロネートPt錯体の組成に及ぼすpHの影響を示す。表3主にOOPtキレートおよび100NOアミドマロネートから開始してpH50~55でのアミドマロネートPt錯体の組成に及ぼす二つの陰イオン、塩素Clおよび過塩素酸ClO4の影響を示す。表4ポリGFLGAmaPt2、100NOキレートに関する経時的な放出されたPtの百分率対pHを示す。表5シスプラチンおよびカルボプラチンと比較した本発明の様々な化合物のIC50を示す。表6本発明のOOおよびNOアミドマロネートPt錯体に対するマウスの認容レベルの比較を示す。定義本質的に純粋なという句は、Ptの90より多く、好ましくは95より多く、および最も好ましくは99より多くが一つの異性体、すなわちOOPtまたはNOPtアミドマロネートキレートとしてキレートを形成しているアミドマロネートPtキレートAmaPtを指す。治療的有効量は、それによって患者における腫瘍または複数の腫瘍の増殖の停止、増殖速度の減少、大きさの退縮または完全な消失が起こる投与量である。本発明の目的に関して、本明細書に記述の化合物の治療的有効量は、約1mgPtkg~約1gmPtkg体重の範囲であろう。本明細書において用いられるように、患者は、哺乳類、特にヒトを指す。アクリルアミドポリマーは、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、および両者のコポリマーを指す。Pt錯体という用語は、Pt原子がPtIIの場合は配位子4個、PtIVの場合は6個と配位結合している種を示す。キレートは、Pt錯体のPt原子と環を形成する二座配位子を指す。アミンという用語はアンモニア、NH3を指す。一級アミンという用語は、Raが脂肪族、脂環式、芳香族、または複素環基からなる群より選択される化学式RaNH2を有する化合物を指す。二級アミンという用語は、RaおよびRbが脂肪族、脂環式、芳香族、または複素環基からなる群より独立して選択される化学式RaRbNHを有する化合物を指す。三級アミンという用語は、Ra、Rb、およびRcが脂肪族、脂環式、芳香族、または複素環基からなる群より独立して選択される化学式RaRbRcNを有する化合物を指す。四級アンモニウムという用語は、Ra、Rb、Rc、およびRdが脂肪族、脂環式、芳香族、または複素環基からなる群より独立して選択される、式RaRbRcRdNを有する化合物を指す。四級アンモニウム基は、対イオン、例えば塩素Cl、またはカルボキシルCOO、しかしこれらに限定されない対イオンを必要とし、後者は、四級アンモニウム基がその一部である分子に結合してもよく、またはそれに対して外部であってもよい、例えば物理的に離れたF3CCOO基であってもよいがこれらに限定されない。本明細書において用いられるように、脂肪族という用語は、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和すなわち、一つまたはそれ以上の二重結合および/または三重結合を含む炭化水素を指す。好ましくは、脂肪族は、炭素原子1~10個からなり本明細書において、1~10または1から10のような数字の範囲が提供される場合、基は、炭素原子1個、炭素原子2個、炭素原子3個等から表記の炭素原子の最大数までおよびこれを含む炭素原子からなる可能性があることを意味する。より好ましくは現在、これは炭素原子1~6個を有する低級脂肪族基である。本明細書において用いられるように、脂環式という用語は、炭素の少なくともいくつかが環を形成する脂肪族基を指す。ヒドロキシアルキル基は、如何なる二重または三重結合も含まず、一つまたはそれ以上のOH基によって置換されている脂肪族基を指す。本明細書において用いられるように、エステル形成部分は、カルボキシレート酸素に共有結合した場合に、すなわちカルボキシル基のCO酸素がエステル、すなわちCOR基を形成する、脂肪族、脂環式、アラルキル、またはヘテロアラルキルR基を指す。本明細書において用いられるように、芳香族基は、環において完全な非局在化π電子系を有する全て炭素の単環または縮合環多環式基すなわち、炭素原子の隣接する対を共有する環を指す。アリール基の例は、フェニル、ナフタレニル、およびアントラセニルであるが、それらに限定されない。本明細書において用いられるように、アラルキル基は、それに共有結合した脂肪族基を有するアリール基を指し、脂肪族基は基が結合している如何なる他の部分に対してもアラルキル基の結合点である。アラルキル基の例には、ベンジル、フェネチル等が含まれるがそれらに限定されるわけではない。本明細書において用いられるように、複素環基は、環の一つまたはそれ以上が窒素、酸素、および硫黄からなる群より選択される一つまたはそれ以上の原子を含む、単環または縮合環基を指す。この用語には、環が、ヒュッケル則によって芳香族である完全な非局在化π電子系を有するヘテロ芳香族基が含まれる。ヘテロ芳香族基の例は、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、イソキサゾール、イソチアゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、プリンおよびカルバゾールであるがそれらに限定されるわけではない。この用語にはまた、環が一つまたはそれ以上の二重結合を含んでもよいが、完全な非局在化π電子系を有しないヘテロ脂環式基が含まれる。本明細書において用いられるように、腫瘍ターゲティング基は、治療化合物、例えば本発明の治療化合物を他の組織と比較して腫瘍に選択的に送達する基を指す。ターゲティングはEPR作用を利用する場合には受動的であってもよく、または抗体、レクチン、葉酸、ビオチン、ビタミンB12、およびメソトレキセートおよびデスチオビオチンのようなその類似体に結合させる場合には、能動的であってもよい。本明細書において用いられるように、水溶性基は、それ自身、一般的に水溶性が不良であるOOPtおよびNOPtアミドマロネートキレートを含む分子の水溶性を提供するまたは増加させる基を指す。水溶性基の例には、ポリ、ポリおよびそのコポリマーのようなポリマー;ポリエチレングリコールPEG;ポリプロピレンオキシドPEO;ポリビニルアルコール;ポリ;水溶性のデンドリマー;マンノースおよびグルコースのような糖;アスコルビン酸;グリセロール;セリン、トレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、チロシン、アルギニン、シトルリン等のような水溶性基を含むアミノ酸およびポリアミノ酸;デキストロース、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースのような多糖類;ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリンのようなグリコサミノグリカン;スルホン酸、スルホネート、4級アンモニウム塩およびヒドロキシ、メトキシ、ポリオール、ポリエーテル、アミド等のような個々の水溶性官能基が含まれるがそれらに限定されるわけではない。ポリマー結合NOアミドマロネートジアミンプラチナII錯体は、PtIIがアミド窒素およびAmaのカルボキシレート酸素とキレートを形成して、そのようなAmaPt部分の一つまたはそれ以上が直接またはリンカーを通してポリマー骨格に共有結合している化合物を指す。リンカーは、ポリマー骨格からAmaPtキレートを空間的に分離する基を指す。リンカーは、その一つの末端がポリマー骨格と共有結合を形成することができ、そのもう一方の末端がAmaと共有結合することができる、ポリエチレングリコール、アミノ酸またはポリアミノ酸のような、しかしこれらに限定されない任意の種類の実体となりうる。本明細書において用いられるように、陽イオンは、アルカリおよびアルカリ土類金属陽イオン、ならびに四級アンモニウム基が含まれるがそれらに限定されるわけではない薬学的に許容される任意の陽性荷電種を指す。特に、本発明の陽イオンは、H、Na、K、Li、Ca2、Mg2、および四級アンモニウム基からなる群より選択される。本明細書において用いられるように、陰イオンは、塩素、臭素、ヨウ素、窒素、硝酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、重炭酸塩、炭酸塩、四フッ化ホウ素、テトラフェニルホウ素、六フッ化リン、過塩素酸塩等が含まれるがそれらに限定されるわけではない任意の薬学的に許容される陰性荷電種を指す。本明細書において用いられるように、アミノ酸は、非カルボニル炭素原子に共有結合した一つまたはそれ以上のNH2基を有する任意の有機酸、例えばβアラニン、4アミノ酪酸、6アミノカプロン酸、pアミノ安息香酸、ならびにPEGスペーサーによって離れているアミンおよびカルボキシル基のような、しかしこれに限定されない有機酸を指す。アミノ酸はまた、全ての天然および非天然のαアミノ酸およびそのNアルキル誘導体を指す。本明細書において用いられるように、ポリアミノ酸は、ペプチド結合によって結合した直鎖または分岐鎖アミノ酸を指す。ポリアミノ酸を構成するアミノ酸は、同じであってもよくまたは異なってもよい。本明細書において用いられるように、ポリAmadiEtは、カルボキシル側鎖のごく一部すなわち15がAmadiEt基によって置換されているポリマーを指す。本明細書において用いられるように、ポリは、全てのカルボキシル側鎖がAmadiEt基に置換されているポリマーを指す。本明細書において用いられるように、ポリAmaPt2は、二つのEt基が、Ptが同様に二つのカルボキシル基とキレートを形成しているOOPtキレート、またはAmaのカルボキシル基の一つおよびアミド基の窒素とキレートを形成しているNOPtキレートシスジアミンPt基によって置換されているポリAmadiEt基を指す。本明細書において用いられるように、ポリPt2は、Ama基のごく一部すなわち、10~15がシスジアミンプラチナII種と配位結合しているAmaPtキレートを指す。本明細書において用いられるように、AmaPtDACHは、PtがOOまたはNOコンフィギュレーションのいずれかでAmaとキレートを形成して、12ジアミノシクロヘキサンDACHのアミノ基ともキレートを形成している基を指す。本明細書において用いられるように、ポリGG、ポリGGG、ポリGGGG、ポリGFLG等は、HPMAと、GG、GGG、GGGG、GFLG等が共有結合しているアクリルアミドまたはメタアクリルアミドとのコポリマーを指す。すなわち、本発明の目的に関して、GGは、例えば実際にを指し、式中Rは水素またはメチルであって、GG部分のC末端はONp、AmadiEt等によってさらに置換され、最終的に本発明の請求の化合物において、アミドマロネートOOPtキレートまたはアミドマロネートNOPtによって置換されると理解される。pHスタットによってとは、溶液のpHを連続的または一定間隔で測定する段階、および選択された範囲にpHを戻す必要がある場合には酸または塩基によって滴定する段階によって、選択された範囲内に溶液のpHを維持することができる装置を用いることを意味する。下付文字rは、下付文字によって修飾された部分の実際の数を指す。rが100である場合、括弧内の部分の100個がR1に共有結合していることを意味する。本明細書において用いられるように、一つまたはそれ以上の腫瘍ターゲティング基をさらに含む水溶性基は、水溶性基がそれ自身同様に腫瘍ターゲティング基であってもよい状況、および一つまたはそれ以上の腫瘍ターゲティング基が水溶性基に付随している状況の双方を指す。この句はまた、先の組み合わせを指す;すなわち水溶性基は腫瘍ターゲティング基であってもよく、さらにそれに付随した一つまたはそれ以上の異なる腫瘍ターゲティング基を有してもよい。本明細書において用いられるように、アミドマロネートOOPtキレートまたはNOPt錯体を指す場合の対応するは、対応する錯体が同じ分子に由来するが、主な違いは、一つの場合においてPtが二つのカルボキシレート酸素原子を通してアミドマロネートとキレートを形成しており、他の場合において、Ptがカルボキシレート酸素とアミド窒素とを通してアミドマロネートとキレートを形成している点である。省略語Ama:アミドマロネートAmadiEt:ジエチルアミドマロネートDACH:12ジアミノシクロヘキサン1R2RDACH:1R2RジアミノシクロヘキサンDCC:ジシクロヘキシルカルボジイミドDMAP:NNジメチルアミノピリジンDMF:ジメチルホルムアミドEDC:13エチルカルボジイミド塩酸塩FID:自由誘導減衰EまたはGlu:グルタメートFまたはPhe:フェニルアラニンGまたはgly:グリシンLまたはleu:ロイシンHOBt:ヒドロキシベンゾトリアゾールHPA:2ヒドロキシプロピルアミンHPMA:NメタクリルアミドMA:メタクロイルMTD:最大認容量、薬物による毒性に起因する死亡が起こらない、評価された最高用量。NOPt:Ptがアミド基の窒素と、アミドマロネート部分のカルボキシレート酸素の一つとに結合しているAmaPtキレートOOPt:Ptがアミドマロネート部分の二つのカルボキシレート酸素に結合しているAmaPtキレートONpまたはONpエステル:pニトロフェノールエステルとしてのニトロフェノキシ基RCF:相対的遠心力TFF:タンジェンシャルフロー濾過考察本発明は、初回のAmaPtキレート形成反応から通常得られる二つの種の混合物から、本質的に純粋なOOPtキレート図3AまたはNOPtキレート図3Bを選択的および再現性よく調製する方法に関する。本出願の親出願である米国特許出願第09755229号において、最初に形成されたOOPtおよびNOPtアミドマロネートキレートの混合物を、塩化ナトリウム濃度が65mMまたはそれ以上であるpH約74のリン酸緩衝生理食塩水によって処置すると、NOPtキレートがほぼ独占的に生成されることが証明された。他の陰イオンも類似の結果を生じた。これらの結果に基づいて、OOPtキレートのNOPtキレートへの変換を行うためには特定の陰イオン濃度が必要であるという仮説が立てられた。陰イオンは、変換にとって有用である可能性があるが、どの異性体が得られるかの決定を支配するように思われるのは実際にはpHである。実際に、異性体の混合物を供するpHに応じて、得られたキレートの構造を完全に制御することが可能である。すなわち、低いpH、すなわち35またはそれより低いpHでは、NOPtキレートが完全に排除される点までOOPtキレートが優勢であるが、pH約60~約100では、同様にOOPtキレートが本質的に完全に排除される点までNOPtキレートが優勢である。中間のpHでは、様々な比の異性体が得られ、NOPtキレートはpHが6およびそれ以上でより優勢となる。これは以下の表において示される。表1において、pGFLGAmaPt2の主にOOPtキレートの水溶液を38°Cで様々なpH範囲に供した。表1認められるように、pH30~35では、混合物は本質的に完全にOOPtキレートとなるが、pH60~65では、OOPtキレートは、本質的に完全にNOPtキレートに変換する。中間のpH、すなわち40~45および50~55では、時間と共にNOPtキレートの量の増加が得られる。100NOPtキレートpGFLGAmaPt2を同じpH範囲および温度に供したところ、表2に示す結果が得られた。表2認められるように、NOPtキレートは、pH60~65では本質的に不変であり、pHが低下するとOOPtキレートへの何らかの変換がpH30~35まで起こり、pH30~35ではNOPtキレートのOOPtキレートへの変換は本質的に完全である。陰イオンの添加が一つの異性体から他の異性体への変換に影響を及ぼすために必要ではないことを決定的に証明するために、中間のpH範囲、50~55および38°Cで、添加した塩素または過塩素酸陰イオンの存在下で実験を行った。認められるように、添加した陰イオンの存在下での変換百分率は、陰イオンを全く添加しなかった場合に得られた百分率と有意差を示さなかった。表3上記の現象は一般的であるように思われ、PtDACH類似体についても類似の結果が得られたデータは示していない。NOPtアミドマロネートDACHキレートをpH60未満に供する場合は常に、これはOOPtアミドマロネートDACHキレートに再配列して、pHが低くなれば変換はより迅速かつより完全である。同様に、OOPtアミドマロネートDACHキレートを35より上のpHに供する場合、これはNOPtアミドマロネートDACHキレートに変換し始め、pH60およびそれ以上では、NOPtキレートへの変換は完全である。DACHキレートとシスジアミンキレートの変換のあいだに認められた差は、NOPtキレート型の場合、前者は後者ほど完全にはOOPtキレートに変換しないという点であるように思われる。一方、DACHキレートは、シスジアミンの場合よりOOPtからNOPtキレートにより急速および十分に変換し、前者は約8時間で本質的に完全に変換されるのに対し、後者は少なくとも20時間であるデータは示していない。当初、脱気した水およびアルゴン大気をキレートの変換実験において用いた。しかし、脱気および不活性大気は必要ではないように思われる。実際に、最初に得られたキレート混合物が変換前に単離されないOOPtキレートの代用合成が考案された。その代わりに、1時間の白金添加期間の後、キレート混合物のpHを非脱気水を用いて開放大気においてpH30~35に調節すると、本質的に純粋なOOPtキレートが得られたが、より純粋なOOPtキレートが望ましい場合、脱気水および不活性大気を用いてもよいがその影響は小さい。本発明の化合物のAmaPtキレートのどの異性体が得られるかを本質的に完全に制御することができるために、少なくとも二つの長所が存在する。第一に、本明細書において開示された方法は、化学療法剤として登録するために規制当局の要件を見たさなければならない本質的に純粋な化合物を提供する。第二に、化合物の治療指数は、特定の治療プロトコールの要件を満たすように制御することができる。すなわち、NOPtキレートが、対応するOOPtキレートより実質的に高いMTDsおよび伸長により良好な治療指数を示すことが、既に示された米国特許出願第09755229号。特定の理論に拘束されないが、これは現在のところ、OOPtキレートが活性な低分子Pt化合物をNOPtキレートより急速に放出するという事実によると考えられている。このことは、実施例31において行われた、ポリGFLGAmaPt2、100NOキレート、約20kDaを様々なpH範囲に供した実験によって証明される。結果を表4に示す。表4認められうるように、約60より高いpHでは、24時間後でも放出されるPtは非常に少量である。一方、pH34では8時間で12が放出され、24時間で30が放出される。表1~3において、NOPtキレートはより低いpHでOOPtキレートに変換するが、OOPtキレートはより高いpHでNOPtキレートに変換し、さらにNOPtキレートは60より高いpHで比較的安定であることが証明された。このように、100NOPtキレートを、実施例31においてpH64、74、および82に供すると、NOPtキレートと同様に不変であろうと予想される。一方、pH34では表1~3は、NOPtキレートのOOPtキレートへのかなり急激な変換が起こることを示している。中間のpH50~55では、表1~3は、NOPtキレートがその安定性の一部を喪失して、OOPtキレートに変換し始めることを示している。表4では、pH64、75、および82において、放出されるPtは非常に少なく、NOPtキレートがPtを容易に放出しないが、pH34では実質的な量のPtが放出され、OOPtキレートがPtをかなりより効率的に放出するという仮説を支持する。中間のpH54では表1~3は、NOPtキレートがOOPtキレートに変換することを示しているが、より低いpHではその速度は遅く、表4においてPtの中間量が放出される。生理的な状況において、上記は以下のことを示唆している:新生物および正常細胞はいずれも、様々な基質を溶解する酵素を含むオルガネラであるライソゾームを含む。これらの酵素は、酸性環境に曝露されることによる活性化を必要とする。ライソゾームは必須の環境を提供する;その内部pHは約50である。本明細書の開示は、ライソゾームに入るNOPtキレートの有意な量がOOPtキレートに変換して、後者は次に活性な低分子Pt種を放出するであろうと予測するであろう。本発明のポリマーまたは高分子結合NOキレートは、腫瘍において選択的に蓄積して、その細胞のライソゾームに遭遇すると予想されるであろう。酸性環境によって、化合物のOOPtキレートへの変換が起こり、次にこれは、活性な低分子Pt種を放出して、次にこれが細胞を殺して最終的に腫瘍を殺すであろう。一方、ポリマー/高分子結合NOキレートは、正常な臓器の細胞およびライソゾームに対するアクセスが限られており、したがって血管系を通して循環中に追放され、その生理的pH約74によって、比較的非毒性のNOPtキレート型で残る化合物が得られるであろう。化学物質シスプラチン、ピリジン、エタノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジエチルアミノマロネートHCl塩、ジエチルNアセトアミドマロネート、AgNO3、NaOH、1R2Rジアミノシクロヘキサン、ポリグルタメートNa塩、KIおよびPBSはSigmaAldrichUSAによって供給された。用いた溶媒は、HPLC等級であり、試薬はACS等級またはそれ以上であった。イオン交換樹脂AG501X8H、HO型、AG50WX8H、およびChelex100Biotech等級は、BioRadLaboratoriesによって供給された。MilliQ水システムを用いてクラス1の水を得た。K2PtCl4は、AllChemieLtdMtPleasantSCによって供給された。濾過助剤289パルプは、SchleicherandSchuellから得た。ポリGFLGONp、ポリGFLGAmadiEt45kDaおよびポリGFLGAmadiEt351kDaは、PolymerLaboratoriesShropshireUKによって合成された。アミノ酸分析およびMALDITOFMSは、PeptideTechnologiesCorpGaithersburgMDによって行われた。装置および機器スケールに応じて、25mmWhatmanGDXPVDFシリンジフィルター、Millipore社のGPExpressメンブレンを備えたSteritop培地ボトルフィルター、またはMillipore社のPVDFメンブレンを備えたMillipakインラインフィルターのいずれかによって、02μm滅菌濾過を行った。UV光を備えた層流フードを滅菌操作のために用いた。pHは、低いpH測定の場合にはpH4に較正し、高いpH測定ではpH10に較正したゲル電極を用いて、BeckmanPhi34pHメーターによって測定した。凍結乾燥固体における静電気は、ZerostatgunAldrichによって中和して、SIMCOHatfieldPAからの静電場計によって誘導した。白金は、JobinYvonJY24分光計を用いて、3HNO3において1~60ppmに希釈した試料および標準物質に関して、ICPOESによって分析した。水は、EMScience社のAquastarC2000を用いてKarlFisher滴定によって決定した。Na、Cl、およびPに関する元素分析は、DesertAnalyticsTucsonAZが行った。1HNMRスペクトルは、VarianIncの400MHzUnityInovaシステムによって得た。195PtNMRスペクトルは、Varianの300MHzMercuryシステム、または300MHzAvanceBrukerシステムによって得た。凍結乾燥は、Virtus社のFreezemobile12ELを用いて行った。OOPtおよびNOPtキレートの少量の精製反応混合物の一定時間での少量におけるOOおよびNOキレートの百分率を、195PtNMR分光計のみを行う場合にはPtキレート100mgより多く、またはPtおよびH2Oも同様に決定する場合には、約200mgを生じるために反応混合物の十分量濃度に応じて4~15mLを採取することによって決定した。少量を、Millipore社の5kDaBiomaxメンブレンを備えたCentriconPlus20遠心フィルターを用いて超遠心によって精製した。充填した装置を、推奨されるRCFで、1mL未満が残るまで遠心した。濾液を捨てて、残留物を水15~18mLによって希釈して、試料を遠心した。これをもう一度繰り返して、残留物を凍結乾燥して、分析のための試料を得た。PBSからの白金の放出経時的に放出された小さい白金種の百分率を、リン酸緩衝生理食塩水10mMリン酸塩、123mMCl15mLにおいてポリマー白金結合体の約30mgを溶解して、37°Cの水浴中で溶液をインキュベートすることによって測定した。表記の時間で、少量の20mLを、3kDaの公称排除限界分子量を有する遠心フィルターMillipore社のCentriconYM3に移して、濾液>15mLが蓄積するまで遠心した。一定時間の濾液および最初の溶液をICPOESによって白金に関して分析した。放出された小さいPt種の百分率を以下の式:濾液中のPtのppm/保存溶液におけるPtのppm×100を用いて決定した。サイズ排除クロマトグラフィーNOPtキレートを、35°Cのカラムオーブンにおいて二つのPLAquagelOH混合8μmカラムPolymerLabsおよびRI検出器を備えたHPLC機器からなるSECシステムにおいて分析した。100mMLiClO4を含むMeOHH2Oの3565混合物からなる移動相を、10mL分で押し出した。カラムをPEOPEG標準物質によって較正して、結果を保持時間の逆数の関数としてlogの4次元多項式に適合させた。MwおよびMnに関する報告された値は、移動相において溶解した2mgml試料100μLの3回測定の平均値を表す。タンジェンシャルフロー濾過約2gより多いスケールでは、ポリマーのOOPtおよびNOPtキレートを、5kD公称排除限界分子量のBiomaxポリエーテルスルホン製の面積005~01m2のメンブレンを用いてタンジェンシャルフロー濾過TFFによって精製した。濾過の前に、01NNaOHを推奨される流速で30~60分間ポンプで流すことによって、システムを洗浄および清浄した。苛性物質を除去して、残渣および透過液のpHが本質的に中性pH<8となるまで新鮮なMilliQ水を循環させた。透過液の流速を入り口圧力20barおよび出口圧力035barで測定した。MilliQ水はまた構成液としても用いた。NMR分光法195PtNMRスペクトルは、5mm試験管において937H2OD2O中で濾過した溶液070mLから得た。十分な試料80~120mgを用いて、白金が>50mMである溶液を得た。プローブを各試料に関して調節した。パルス幅90°、取得時間10m秒、スペクトルウィンドウ100kHzおよび減衰なしを用いた。送信器を、OOPtおよびNOPtキレートシフトのほぼ中間に調節したシスジアミンPtに関して1896ppmおよびDACHPtに関して2450。シスジアミンPtおよびDACHPt種に関してそれぞれ十分な>35:1sn比を得るためには、典型的に積算回数50000~100万回が必要であった。得られたFIDは、平坦な基準値が得られるまでますます左にシフトさせて、100Hz線広幅化を行って、フーリエフィル2048を処理前に適用した。積分領域を設定して、スペクトルの基準値をVNMRソフトウェアv61を用いてスプライン適合に供した。試料を1624ppmで955H2OD2Oおよび100mMHCl中でK2PtCl4の100mM試料に対して外部参照した。これはまた、90°パルス幅およびT1を決定するためにも用いた。195PtNMRに関して用いた同じ試料を用いて13CNMRスペクトルを得た。取得時間050秒、減衰30秒、約70°パルス幅および積算5000~10000回を回収して、35Hz線広幅化を行った。sn>100が典型的に得られた。水溶性試料を、6719ppmで937H2OD2Oにおいて14ジオキサンに対して外部参照した。1HNMRスペクトルをTMSまたはTMSPに対して参照して、標準的なパラメータを用いて得た。HODシグナルのプレ飽和をしばしば用いた。カップリング定数Jはヘルツである。以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、それらは、本発明の範囲を如何なるようにも制限すると意図されないし、また制限すると解釈されない。実施例1:ポリGFLGAmadiEt、約25kDの調製乾燥器で乾燥させた1Lの丸底フラスコに磁気攪拌子を入れて、隔壁を入れて、真空下で冷却した。冷却後、窒素を導入して、隔壁を除去し、ジエチルアミノマロネート塩酸塩2979g1408mmolを加えた。隔壁を元に戻して無水ピリジン800mLをカニューレによってフラスコに加えた。ポリGFLGONp化合物1、米国特許第5965118号の図1A50gの3分の1を加えた。ほぼ溶解した後、ONpポリマーの次の3分の1を加えた。第二の3分の1がほぼ溶解した後、ONpポリマーの最後の3分の1を加えた。C18カラム、pH45MeCN移動相および316nmでのUV検出を用いて遊離および総pニトロフェノールに関して反応をHPLCによってモニターした。少量を、塩基の加水分解pH12、5分後の遊離のpニトロフェノールおよび総pニトロフェノールに関して分析した。約23°Cで20~24時間攪拌した後、反応は本質的に終了した図6。反応混合物を40~45°Cの水浴中で3時間加熱した後室温まで冷却し、ピリジンを<40°Cの真空下で除去した。残渣を無水EtOHに溶解すると、25wtvol溶液が得られた。粗産物を無水EtOAc25Lおよびジエチルエーテル05Lによって沈殿させた。混合物を3~5時間攪拌した後、中等度の大きさのガラスフリットを通して濾過した。残渣をエーテル約100mLによって3回洗浄して、ラバーダム下で乾燥させると、暗黄色の固体57~59gが得られ、これをフィルターケーク1gあたりAG501X8IX樹脂HおよびOH型31gを加えた後、EtOH500mLに溶解した。混合物を25時間軽く攪拌した後、濾過して樹脂を除去した。EtOHの容積を減少させて、25wtvol溶液を得て、産物を沈殿させた。産物を回収して洗浄すると、暗黄色の固体45~46gが得られた。1HNMRは、AmadiEt基に特徴的なピークを示し、EtOHおよびEtOAcのそれぞれに関して<1を除き低分子の特徴を示さなかった。アミノ酸分析gly:HIPA:leu:pheのモル比31:71:10:12;実施例2:シスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩の調製シスプラチン8996g、2998mmol、AgNO39959g、5862mmol、5HNO33~5滴、および水190mLを、ホイルで覆った低化学線培地ボトルにおいて室温で一晩攪拌した後、60~65°Cで35時間加熱した。<30°Cに冷却後、混合物を022μmフィルターを通して濾過すると、pH2の透明な溶液を得た。PtおよびAg分析ICPOESは典型的に、15000~25000ppmPtおよび4~14ppmAgの範囲であった。各調製物をPtに関して分析し、使用直前に55°Cで5分間加熱した後室温まで冷却した。シスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩のジ15Nアイソトポマー調製物は、1582ppmで195PtNMRトリプレットを示し、これはAppletonetal1989によって報告された1580ppmの文献値と厳密にマッチした。実施例3:ポリGFLGAmaPt2OOPtキレートの調製A.ポリGFLGAmadiEtの加水分解攪拌子を備えた1L培地ボトルにおいて水200mlに、ポリGFLGAmadiEt1935mmolAmadiEt残基45gを加えた。激しく攪拌した後、水135mlを加えて、12~13wtv混合物を得た。溶解が得られた後1~2時間、2NNaOH27ml54mmolを加えてpHを125~127にした。pHをこの範囲で30分間維持した後、AG50iX8IX樹脂HおよびOH45gを加えた。pHが7未満に低下すれば、樹脂を濾過滅菌によって除去した。濾液のpHを2NNaOHによって76に上昇させると、ポリGFLGAma2の溶液が得られた。B.ポリGFLGAmaPt2OOPtキレートの調製上記のpH76の溶液に、5909mM22940ppmPt溶液のシスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩199mLを加えて反応混合物のpHを50±01にした。一晩攪拌した後、pHは約42に低下し、少量の沈殿物が形成された。16~18時間後、Chelex100樹脂17gを加えて、混合物を15時間攪拌した。濾過前、濾過助剤パルプ約05gを加えて分散させた。混合物を目の粗いガラスフリットによって濾過した。産物約125mgを含む濾液の少量を採取して、02μmメンブレンを通して濾過し、遠心限外濾過によって精製した。残留物を凍結乾燥すると産物約110mgが得られた。分析は、この材料が約9Pt、5~10水、および002Naを含むことを示している。実施例4:ポリGFLGAmaPt2NOPtキレートの調製A.OOPtからNOPtキレートへの変換実施例3からChelex100樹脂を濾過後、濾液約1Lが得られ、NaCl585g100mmol、Na2HPO47H2O1635g61mmolおよびNaH2PO4193g14mmolを加えることによって、溶液を100mMNaClおよび75mMリン酸塩pH74にした。pHを1NNaOHまたは5HNO3によって74に調節して、濾過滅菌し、同じ濃度の緩衝液によって滅菌培地ボトルに洗浄して溶液12Lを得て、ボトルを022μmメンブレンスクリューキャップによってキャップした。溶液を水浴中で37~38°Cに加温した後、37°Cの乾燥器で22時間乾燥させた。この時点で、限外濾過によって精製した少量の195PtNMR分光法により、白金キレートが≧95NOPtキレートおよび<5OOPtキレートであることが示された。B.NOPtキレートのTFF精製および凍結乾燥NOPtキレート12Lを本明細書において記述されるようにTFFによって精製した。透明な暗赤色の溶液である残留物を濾過滅菌して凍結乾燥すると、赤茶色の固体414gが得られた:Pt=79±015、56、107Na、<05P、007Cl;37°CでPBSにおけるPt放出、3時間で06、24時間で20。実施例5:ポリGFLGAmaPtDACHOOPtキレートの調製A.シスジアクア1R2RDACHPt二硝酸塩の調製K2PtCl4365g879mmolおよび水37mLを含む125mlアーレンマイヤーフラスコを加温して、茶赤色の溶液を得て、これにKI584g352mmolの水溶液6mLを加えて、暗赤色溶液を得た。室温まで冷却した後、1R2Rジアミノシクロヘキサン0962gを加えた。黄色い沈殿物が直ちに形成された。25°Cで3時間攪拌した後、混合物を4°Cに冷却して一晩維持した。沈殿物を回収して冷水、EtOHおよびエーテルによって洗浄すると、シスI2Pt1R2RDACH498gが得られた。次に、シスI2Pt1R2RDACH100g1776mmol、AgNO305898g3472mmolおよび水16mlを遮光した容器において混合して、室温で一晩攪拌し、その後60~65°Cで35時間攪拌した。室温まで冷却した後、AgClを濾過によって除去して少量の水で1回洗浄した。濾液のICPOESによる分析によって、これが13500ppmPt691mMシスPt1R2RDACHを含むことが示された。B.ポリGFLGAmaPtDACHOOPtキレートの調製ポリGFLGAmadiEt280g、1232mmolAmadiEt基を加水分解して中和すると、ポリGFLGAma2のpH76溶液が得られた。これに、シス2Pt1R2RDACH二硝酸塩148mmolの水溶液を加えて、混合物を室温で一晩攪拌した。濾過助剤パルプ01gを加えた後、形成された沈殿物を濾過滅菌によって除去した。次に、反応物の3分の1をChelex樹脂03gによって90分間処置して、濾過滅菌した後、遠心限外濾過によって精製した。試料を凍結乾燥すると、赤茶色の固体071gが得られた:87Pt、42H2O37°CでPBSにおけるPt放出:3時間で60、24時間で109。実施例6:ポリGFLGAmaPtDACHNOPtキレートの調製実施例5からの反応混合物の残りの3分の2を、Chelex樹脂06gと共に90分間攪拌した後、濾過滅菌した。透明な溶液を110mMNaClおよび85mMリン酸塩pH74にした。溶液を37~38°Cで22時間維持した後、遠心限外濾過によって精製して凍結乾燥すると、赤茶色の固体133gが得られた:81Pt、71H2O;1900ではピークを認めず、他のピークを認めなかった:37°CでPBSにおけるPt放出:3時間で20、24時間で21。実施例7:ポリAmadiEtの調製ポリグルタメート05g329mmolCO2基および攪拌子を含むボトルに、ジエチルアミノマロネートHCl塩104mg0493mmol、DMAP3mg、および無水DMFHPLC等級、4Aふるいで>48時間10mLをドライボックスにおいて加えて、内容物を攪拌すると曇った混合物が得られた。次に、DCC315mg136mmolを加えて、ボトルの口から隔壁を挿入して、10MHClのエーテル溶液2mLを加えて、混合物を室温で一晩攪拌した。CHCl315mlを加えた後、曇った混合物を3850RCFで15分間遠心した。上清を捨てて、残った白色ゲルを25NaHCO3と共に30分間攪拌した。混合物を遠心して凍結乾燥すると、白色固体191gが得られ、その1HNMRスペクトルは、DMF、EtOH、DCCDCUの存在を示し、ポリグルタメート、ジエチルアミドマロネート、およびジエチルアミノマロネートのピークを示した43ppmgluのαCHおよびOCH2CH3および24ppmgluのCH2でのピーク面積は約1:1であるが、ポリグルタメートでは比は1:2であった。材料を水に溶解して、遠心限外濾過によって精製すると、白色固体216mgが得られ、1HNMRスペクトルは、DCCDCUの存在を示した。同様に、NaODを材料のD2O溶液に加えると、ポリAmadiEt1gあたり067mmolのAmadiEt基に対応するEtOHを放出した。これを精製せずに実施例8において用いた。実施例8:ポリAmaPt2OOPtおよびNOPtキレートの調製A.ポリAmaPt2OOPtキレートの調製攪拌子を備えた20mLバイアル中の水4mLに、実施例7からのポリAmadiEt188mg0126mmolAmadiEt当量を加えた。溶解した後、pHを124~128に20分間上昇させた後、AG50WX8HIX樹脂02gを加えた。2分以内にpHは6に低下した。目の粗いガラスフリットによる濾過によって樹脂を除去して、濾液を濾過滅菌した。新鮮な2NNaOHによって濾液のpHを71に上昇させて、シスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩の19000ppmPt溶液0126mmol13mLを加えた。これを35分間攪拌した後、遠心限外濾過によって精製した。18mlに濃縮して水15mLによって3回洗浄した後、残留物を凍結乾燥すると白色固体182mgが得られ、その195PtNMRスペクトルは、二つのピークを示した:1595および1732ppmが約1:4の比。1732での主なピークは、シスジアミンプラチナIIのOOPtキレートである。B.ポリAmaPt2NOPtキレートの調製上記のポリAmaPt2OOPtキレートを、実施例4のOOPtからNOPtキレートへの変換条件:110mMNaCl、85mMリン酸塩、pH74に供した。38°Cで約22時間後、これを遠心限外濾過によって精製して、残留物を凍結乾燥すると、白色固体163mgが得られ、これは155Pt077mmolPtgポリマー0035Pを含んだ:実施例9:ポリの調製ポリグルタメート05gCO2Na基329mmolおよび攪拌子を含むボトルに、ジエチルアミノマロネートHCl塩139g658mmol、EDC189g9862mmol、HOBt0503g3287mmol、および無水DMFHPLC等級、4Aふるいで>48時間20~25mLをドライボックスにおいて加えて、攪拌すると曇った混合物が得られた。室温で一晩攪拌した後、混合物を水150mLに注ぐと白色沈殿物が得られた。材料を水に懸濁して濾過して水によって洗浄した。真空下で3日間乾燥させた後、固体079gが得られた:さらに精製を行わずに、この材料を実施例10において用いた。実施例10:ポリPt2OOPtおよびNOPtキレートの調製ポリ079gAmadiEt基275mmolのEtOHスラリー30mLを、40mMNaOHにした。pHを123~126に維持して混合物を加温して30分間超音波処理すると、わずかに曇った溶液が得られた。HIX樹脂18gによってpHを726に低下させて、濾過滅菌すると、かすかに黄色い溶液が得られた。真空下で容積を約30mLに減少させて、シスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩の18400ppmPt039mmol溶液42mLを加えると、pH597の溶液が得られた。pHを5HNO3によって50に低下させて、室温で1時間攪拌した。1時間攪拌後、上記の反応混合物の試料を凍結乾燥すると白色固体90mgが得られ、その1HNMRスペクトルは、エチルエステルの67のみが加水分解されたことを示した:103Pt;ポリPt2OOPtキレート溶液の残りの32mLを、NaCl207mg、NaH2PO4H2O76mgおよびNa2HPO47H2O588mgを加えることによって110mMNaClおよび85mMリン酸塩にした。pHを74に調節して、溶液を濾過滅菌した後、42°Cで16時間インキュベートした。溶液はこの時点でわずかに曇っていた。これを再度濾過した後、遠心限外濾過によって精製した。残留物を凍結乾燥すると、淡黄色の固体約600mgが得られた:114Pt;実施例11:AcAmaPt2OOPtおよびNOPtキレートの調製20mLバイアルにおいて、Nアセトアミドマロネート800mg368mmolを水8mlおよび2NNaOH20mlと共に攪拌した。3分以内に、pH126でかすかに黄色の溶液が得られた。30分後、HIX樹脂を加えて、pHを70に低下させた。樹脂を濾過によって除去して、pHを75に上昇させ、シスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩の28375ppmPt368mmol溶液253mLを加えた。pHは44に低下した。2NNaOH2滴を加えると、白色の固体が形成された。混合物を濾過して、試料を10D2Oにして、195PtNMRによって分析した。1734でのピークのみが認められた。濾液を100mMKIおよび50mMKHCO3pH77~79にして濾過滅菌した。これを40°Cに加温して、18時間維持した。形成されたオレンジ色の沈殿物を濾過によって除去して、濾液を真空下で除去した。残渣をアセトン20mLと共に1時間攪拌した。一部を濾過して、7D2Oにして、195PtNMR分光法によって分析した。2057ppmでの唯一のピークを認め、NOACAmaPt2が明らかであった。実施例12:ポリGFLGAmadiEt、45kDaおよび350kDaの調製A.MAGFLGAmadiEtの調製MAGFLGONp約25gをジエチルアミノマロネートHCl塩12当量、TEA3当量、およびHOBtのDMF溶液1当量によって50°Cで約16時間処置した。DMFを真空で除去して、残渣をジエチルエーテルにおいてスラリーにして4°Cで一晩冷却した。産物を濾過によって回収して、エーテルによって洗浄し、真空下で乾燥させるとMAGFLGAmadiEtが得られ、その同一性および純度を1HNMR分光法およびHPLCによって確認した:B.ポリGFLGAmadiEt、約45kDの調製濃縮器を備えたフラスコに、127wtHPMAおよびMAGFLGAmadiEt単量体を9010の比で、06wt純粋AIBN、pニトロフェノール総単量体10モルおよび86wtアセトンを加えた。混合物を窒素によって約30分間脱気した後、50°Cで65時間加熱した。ポリGFLGAmadiEtを濾過によって回収して、エーテルによって洗浄した。これを約25wtvolで無水EtOHに再溶解して、その後EtOAc8倍量によって沈殿させた。得られた固体を濾過によって回収して、エーテルによって洗浄し、真空下で乾燥させると乳白色の粉末約20gが得られた。その1HNMRスペクトルは、25kDa化合物のスペクトルと非常に類似していた:Mw=445kDa、PDI=176、二相性。アミノ酸分析:μmolmgポリマーgly:2ヒドロキシプロピルアミン:leu:pheが27:81:09:09;MALDITOFMSNBAmatrixmzM40~45kDa、M214~16kDa。C.ポリGFLGAmadiEt、約350kDの調製45kDポリGFLGAmadiEtのために用いた技法を、pニトロフェノールを省略したことを除き、繰り返した。白色粉末約25gが得られた。その1HNMRスペクトルは、ピークがより広幅化しているが25kDaのスペクトルと非常に類似であった:分子量=351kDa、PDI=395、三相性。実施例13:ポリGFLGAmaPt2NOPtキレート、45kDaの調製攪拌子を含む250培地ボトルに、水72mLおよびポリGFLGAmadiEt155g682mmolAmadiEt基を加えた。激しく攪拌した後、さらに水48mLを加えて、混合物を約1時間攪拌すると、淡い紫色の溶液が得られた。この溶液に、新鮮な2MNaOH12mLを加えて、pHを126に上昇させた。pHを124~128に30分間維持した後、混合床IX樹脂AG501X8H、OH型154gを加えた。pHは3分後に50に低下して、その後樹脂を滅菌Steritop150mlフィルターを通して濾過によって除去した。新しい2NNaOHによって濾液のpHを760に上昇させて、新たに調製したシスジアミンプラチナII溶液814mmol64ml、24200ppmPtを一度に加えた。添加後、pHは51であった。次に、混合物を一晩攪拌した。翌日、pHは442であり、Chelex100樹脂510gを加えた。pHは533に上昇し、混合物を90分間攪拌した。樹脂を目の粗いガラスフリットを通しての濾過によって除去して、溶液460mLを得た。濾液を、NaCl296g、NaH2PO4H2O108g、およびNa2HPO47H2O766gによって110mMNaClおよび80mMリン酸塩にした。pHを2NNaOHおよび5HNO3によって74に調節した後、Steritopフィルターによって滅菌した培地ボトルに濾過滅菌して、これを換気フード内でメンブレンキャップによってキャップした。これを39°Cの水浴中に20分間入れて、37~38°Cのインキュベータオーブンに22時間入れた。37~38°Cで22時間後、溶液をTFFによって精製した。溶液を5wtvolまで濃縮して、透過液の7倍量を回収して、残留物を8~10まで濃縮した。残留物をMillipak20フィルターによって滅菌凍結乾燥フラスコに濾過滅菌した。凍結乾燥後、乳白色の固体112gを得た:889Pt、54H2O、103Na、005Cl、<005P;および実施例4において報告された全てのピーク;195PtNMRH2OD2O937δ2055100。実施例14:ポリGFLGAmaPt2NOPtキレート、>351kDaの調製攪拌子を備えた500mL培地ボトルに、水120mLおよびポリGFLGAmadiEt351kDa20g880mmolAmadiEtを加えた。激しく攪拌した後、水100mlを加えて、混合物を2時間攪拌すると無色の溶液が得られた。pH電極を挿入して、新しい2NNaOH14mLを加えた。pHは1274に上昇して、124~128に30分間維持した。その後、混合床H、OH型IX樹脂AG501X8199gを加えると、3分以内にpHは6に低下した。混合物をSteritopボトルキャップフィルターによって濾過滅菌して、2NNaOHおよび5HNO3によってpHを763に調節した。新たに調製したシスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩の24200ppmPt溶液855mL106mmolを1度に加えると、pH502の溶液が得られた。粒子の大きさのためにわずかに曇った混合物を室温で一晩攪拌した。このあいだに、pHは425に低下して、Chelex100樹脂677gを加えた。pHは533に上昇して、90分間攪拌後、濾過助剤パルプ02gを加えた。混合物を、目の粗いガラスフリットによって濾過滅菌した。溶液725mlを、NaCl4661g798mmol、Na2HPO412H2O1224g457mmolおよびNaH2PO4H2O1703g101mmolによって110mMNaClおよび85mMリン酸塩にした。pHを74に調節して、混合物をSteritopフィルターによって1L培地ボトルに濾過滅菌した。ボトルをメンブレンキャップによって密封して40°Cの水浴中に20分間入れた後、37~38°Cのインキュベータに入れた。約22時間後、内容物をTFFによって精製した。より濃縮した溶液は粘性が高すぎるため、材料約50mgを用いてNMRスペクトルを得た。残留物の凍結乾燥によって白色固体199gが得られた:795Pt、70H2O、103Na、009Cl、<005P;および実施例4に関して報告された全ての他のピーク;195PtNMRH2OD2O937δ2055100、NO;SEC三相、Mp=468kDa、147kDa、Mn=663kDa、PDI=138;Pt放出、3時間で068、24時間で228。実施例15:ポリGGONp、23kDaの調製アルミホイルで覆って、Omnifitからの堅固な3弁キャップ、噴霧管、および攪拌子を備えた乾燥5L培地ボトルに、HPMA2455g、17146mol、11当量、MAGlyGlyONp500g、01556mol、1当量および無水HPLC等級のアセトン1970gを加えた。不均一な混合物を激しく攪拌して、アルゴンを90分間噴霧すると、曇った無色の混合物が得られた。AIBN142g、08647mol再結晶型CH2Cl2を250mL培地ボトルにおいてアセトン75mLに溶解した。アルゴンを90分間噴霧した後、アルゴンを激しく噴霧しながらこの溶液を培地ボトルに注いだ。250ml培地ボトルをアセトン30mLによってすすいで、すすいだ液を反応容器に移した。90分後、噴霧を停止して、反応容器を50°Cの水浴に48時間入れた。その後、底に白い沈殿物が形成された反応混合物を、室温まで冷却して、容器の気体を排出した。反応混合物を750mL遠心管4本に移した。各ボトルを2600RCF3800rpmで5°Cで10分間遠心した。上清をデカントして捨て、ポリマーが全て回収されるまでこのプロセスを繰り返した。粗ポリマー沈殿物を、床容積の1~2倍量約200mLのアセトンによって3回洗浄して、床容積の1~2倍量約150mLのジエチルエーテルによって3回洗浄した。各洗浄に関して、溶媒を導入して、ボトルを1分間振とうした後、先と同様に遠心した。最終の洗浄後、ポリマーを真空下で一定重量まで乾燥させると、ポリGlyGlyONp2288gが得られた:各<1のEtOHおよびEtOAcを除き、低分子を認めなかった。実施例16:ポリGGAmadiEtの調製攪拌子および隔壁キャップを備えた乾燥器で乾燥させた500mL培地ボトルに、ポリGGONp60gONpの3162mmolおよびジエチルアミノマロネートHCl塩AmadiEtHCl2673g126mmolを加えた。無水ピリジン87mlをフラスコにカニューレによって加えて、溶液が得られるまで混合物を40°Cで攪拌した。反応の程度は、遊離および総HONpを測定することによって決定し、それらが等しくなれば、無水酢酸エチル800mLを加えて1時間攪拌することによって産物を沈殿させた。混合物を3840RCFでの10分間の遠心によって回収した後、Et2O100mLによって3回洗浄した。沈殿物をEtOH70mLに溶解して、AG501X8IX樹脂HOH型18gと共に1時間軽く攪拌した。樹脂を濾過して、ポリマーを遠心沈降によって沈殿および精製した。真空下で乾燥させた後、ポリGGAmadiEtの白色粉末625gが得られた:および各<1EtOHおよびEtOAcを除き、低分子を認めなかった。実施例17:ポリGGAmaPtキレート、約22kDaの調製A.ポリGGAmadiEt、約25kDaの加水分解攪拌子を備えた50mL遠心管に、pGGAmadiEt05g02635mmolAma残基およびMilliQH2O42mLを加えた。溶解後、2MNaOH0347mL0694mmolNaOHを加えて、pHを126に90分間維持した。溶液をBioRexMSZ501D樹脂071gと共に攪拌した。pHが784に低下した後、樹脂を濾過によって除去した。濾液のpHを2MNaOHによって731に調節した。B.ポリGGAmaPt2OOキレートの調製上記のpH73溶液に、シスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩の30149ppm溶液240mL0316mmolPtを加えた。pHを2MNaOHによって直ちに56に調節した。一晩攪拌した後、pHは331に低下した。これを54に上昇させて、Chelex樹脂0192gを加えた。90分間軽く攪拌した後、樹脂を濾過滅菌によって除去すると、わずかに着色した表記の化合物9mLを生じた。C.ポリGGAmaPt2NOキレートの調製濾液の上記の9mLを、NaCl0069g089mmol、NaH2PO4H2O0019g0142mmol、およびNa2HPO47H2O0153g057mmolによって110mMNaClおよび80mMリン酸塩pH74にした。pHを74に調節して、溶液を水浴中で38°Cに加温した後、38°Cの乾燥器に24時間移した。溶液を遠心限外濾過によって精製して、凍結乾燥すると、表記の化合物0413gが乳白色の固体として得られた:105Pt、731H2O;3および24時間でのPt放出、14、46。実施例18:ポリGGAmaPtDACHキレート、約24kDaの調製A.ポリGGAmadiEt~24kDa53bの加水分解攪拌子を備えた250mL培地ボトルにpGGAmadiEt50g2635mmolAmadiEtおよびMilliQH2O42mLを加えた。溶解後、2MNaOH694mmolNaOH347mLを加えて、pHを126に90分間維持した。次に、BioRexMSZ501D樹脂5gを加えて、pHが741に低下するまで混合物を軽く攪拌して、その時点で樹脂を濾過によって除去した。濾液のpHを2MNaOHによって749に調節した。B.ポリGGAmaPtDACHOOキレートの調製上記のpH75の濾液に、シスジアクア1R2RDACHPt二硝酸塩の23808ppm溶液259mL316mmolPtを加えた。pHを523に調節した。一晩攪拌した後、pHは411に低下した。2MNaOHによってpHを再度54に調節して、Chelex樹脂192gを加えて、その後混合物を90分間軽く攪拌した後濾過滅菌すると、表記の化合物を含む濾液100mLが得られた。C.ポリGGAmaPtDACHNOキレートの調製上記の濾液を、NaCl0648g11mmol、NaH2PO4H2O0221g16mmol、およびNa2HPO47H2O171g64mmolを加えることによって、110mMNaClおよび80mMリン酸塩pH74にした。pHを74に調節して、溶液を水浴中で38°Cに加温した後、38°Cの乾燥器に24時間移した。溶液にTFF精製を行って凍結乾燥すると、乳白色の固体431gが得られた:97Pt、762H2O;3および24時間でのPt放出、13、55:実施例19:ポリGGGAmadiEtの調製A.GlyAmadiEt、TFA塩の調製NaHCO332498g、387molおよび水15Lの混合物を、4LアーレンマイヤーフラスコにおいてジエチルアミノマロネートHCl74078g、350molに徐々に加えて、得られた二相混合物を15分間激しく攪拌した。CH2Cl2層を回収して、CH2Cl205mlを水層に加えて、混合物を15分間攪拌して、CH2Cl2層を回収した。水層のpHは78であった。CH2Cl2層を合わせて、無水Na2SO4上で乾燥させて濾過した。容積が約06Lに減少するまでCH2Cl2を真空下で除去した。この溶液を2Lの三頚丸底フラスコに移して、tBOCGlyOH56934g、325molを加えた。混合物を攪拌して、10°Cに冷却した。CH2Cl2400mLに溶解したDCC67057g、325molを、激しく攪拌されているジエチルアミノマロネート/tBOCGlyAme混合物に25時間かけて加え、温度を25°C未満に維持した。DCCの添加が完了した後、混合物を氷浴中で45分間攪拌して、温度を約5°Cに低下させた。冷浴を外して、反応混合物を室温でさらに4時間攪拌した後、一晩放置した。形成された白色の沈殿物を濾過によって除去してCH2Cl2100mLによって洗浄した。濾液およびCH2Cl2洗浄液を合わせて、溶媒を真空下で除去すると、黄色の結晶材料が得られ、真空下で乾燥後tBOCGlyAmadiEt8818gが得られた:tBOCGlyAmadiEt9852g、296molのCH2Cl2溶液770mLに、トリフルオロ酢酸TFAを加えた。得られた混合物を攪拌して、6時間後沈殿物が形成され、これを8時間後に回収した。CHCl3からの再結晶によって、TFAGlyAmadiEt10251gが白色固体として得られた:B.ポリGGGAmadiEt、約23kDの調製乾燥器で乾燥させ、隔壁キャップ、攪拌子、およびアルゴン入り口を備えた5Lの培地ボトルにTFAGlyAme10428g、03012mol、ピリジン21516kgおよびTEA4501g、04448molを加えた。溶液が得られた後、ポリGlyGlyONp225g、010316molONpを30分間かけて4~5回に分けて加えた。25時間後、全てまたはほぼ全てのポリマーが溶解した後、遊離および総HONpの百分率を決定するために少量を採取した。分析のあいだ、反応物を攪拌し続けた。分析により、反応が100完全である室温で35~4時間ことが示された後、反応容器にキャップをして40°Cに加熱し、そのまま2時間維持した。透明な黄色の反応混合物の500~550mLずつ5個を、それぞれが磁気攪拌子を有する5L培地ボトル5本に移した。激しく攪拌した後、EtOAc/ジエチルエーテル500mL80mLの580mLを6回徐々に加えることによって粗産物を各5L培地ボトルから沈殿させた。曇った黄色の混合物を1時間攪拌して、沈殿物を遠心によって回収して床容積の1~2倍量のEtOAcによって1回洗浄して、床容積の1~2倍量のジエチルエーテルによって2回洗浄した。産物を真空下で乾燥した後、5L培地ボトルにおいて激しく攪拌したEtOH10~15wtvol約2Lに徐々に加えた。溶解後、BioRexMSZ501D指標IX樹脂EtOH洗浄1008gを加えた。混合物を25時間軽く攪拌した後、指標の青いビーズが残っているか否かを30分毎に調べた。青色のビーズが認められなければ、IX樹脂さらに150~200gを加えた。青色のビーズが30分後に残っていれば、WhatmanGFBガラスマイクロファイバーフィルターを通して濾過することによって樹脂を除去した。EtOH溶液からのポリマーを沈殿させて、回収して、上記のように洗浄した後、真空下で約72時間乾燥させると、ポリGlyGlyGlyAmeが黄色の細粉として得られる。SECMeOHH2OMp=24kDa、Mw=24kDa、Mn=15kDa、PDI=16;実施例20:ポリGGGGAmadiEt、22kDaの調製A.tBOCGlyGlyOHの調製隔壁および攪拌子を有する乾燥器で乾燥させた20mLバイアルに、ジオキサン6ml、GlyGly1325g、100mmol、BOCON2714g、110mmolおよびEt3N210mL、15mmolを加えた。混合物を2時間攪拌して、そのあいだに透明な黄色の溶液が形成された。混合物をEtOAc20mLおよびH2O15mLによって抽出した。水層を回収して、EtOAcによって洗浄し、5クエン酸50mLに加えた。tBOCGlyGlyOHをEtOAc200mlによって抽出して、無水Na2SO4上で乾燥させた。EtOAcを真空下で除去して、熱いEt2Oによって粉砕した。結晶を回収した後、Et2Oによって洗浄して乾燥させると、表記の化合物1309gが得られた:B.tBOCGlyGlyAmadiEtの調製100mL培地ボトルにtBOCGlyGlyOH1002g、4315mmol、ジエチルアミノマロネートHCl913g、4315mmol、EDC1266g、6604mmol、HOBt066g、4315mmolおよびピリジン200mLを加えた。室温で21時間攪拌した後、ピリジンを真空下で除去して残渣をCHCl33×300mLによって抽出した。CHCl3層を無水MgSO4上で乾燥させて、CH2Cl2を真空下で除去して、残渣を4°Cでヘキサン:エーテル7:3から再結晶した。tBOCGlyGLyAmadiEt1232gが白色結晶として回収された:C.TFAGlyGlyAmadiEt塩の調製隔壁キャップと攪拌子を備えた100mL培地ボトルに、tBOCGlyGlyAmadiEt512g、1314mmolおよびCH2Cl215mlを加えた。激しく攪拌しながら、TFACH2Cl225mL中に25mLを滴下して加えた。1時間後、反応が完了し、TFAを真空下で除去して、トリフルオロ酢酸塩をEt2Oによって沈殿させた。TFAGlyGlyAmadiEtを濾過によって回収して、Et2Oによって洗浄して、無水EtOH:エーテル7:3vvから再結晶させた。白色結晶を真空下で乾燥させると、産物521gが得られた:D.ポリGGGGAmadiEt、約22kDaの調製乾燥器で乾燥させて、攪拌子および隔壁を備えた250mL丸底フラスコに、TFAGGAmadiEt5724g1419mmolを加えて、混合物の空気をN2に入れ替えた。次に、無水ピリジン70mLを加えて溶解後、ポリGGONp7015gを3回に分けて加え、毎回前回の分が溶解した後に加えた。混合物を40°Cに加温して、反応の程度をHPLCによってモニターした。23時間後、反応は完了した。次に、無水EtOAc700mLおよび無水Et2O100mLを室温で加えて、混合物を1時間攪拌してポリマーを沈殿させた。沈殿物を遠心によって回収した。得られた沈降物を無水EtOH60mLに溶解して、AG501X8IX樹脂HOH型と共に25時間攪拌した。樹脂を濾過によって除去して、ポリマーをEtOAc800mLによって沈殿させた。1時間攪拌後、沈殿物を遠心によって単離して、EtOAcおよびエーテルによって連続的に洗浄し、真空下で乾燥させると、表記の化合物577gが乳白色の粉末として得られた:実施例21:ポリGGGGAmaPt1R2RDACH、約22kDaの調製A.ポリGGGGAmadiEtの加水分解攪拌子、ポリGGGGAmadiEt55g2895mmolAma残基およびMilliQ水46mLを含む250mLボトルを、溶解するまで攪拌した。2MNaOH381mL762mmolによってpHを126に上昇させて90分間そのまま維持した。混合物を、BioRexMSZ501D樹脂55gによってpH751に調節して、その後樹脂を濾過して除去した。濾液のpHを2MNaOHによって693にすると、ポリGGGGAma2の溶液が得られた。B.ポリGGGGAmaPt1R2RDACHOOキレートの調製ポリGGGGAma2の上記の溶液に、シスジアクア1R2RDACHPt二硝酸塩溶液275mL347mmolPtを加えた。441に低下したpHを、2MNaOHによって514に調節した。一晩攪拌するあいだに、pHは244に低下した。2NNaOHによってpHを54に調節して、Chelex100樹脂2114gを加えて、混合物を軽く攪拌した。90分後、樹脂を濾過滅菌によって除去して濾液100mLを得た。C.ポリGGGGAmaPt1R2RDACHNOキレートの調製上記の濾液100mLを、NaCl0648g11mmol、NaH2PO4H2O0221g16mmol、およびNa2HPO47H2O171g64mmolによって110mMNaClおよび80mMリン酸塩pH74にして、2MNaOHによってpHを74に調節した。溶液を水浴中で38°Cに加温した後、38°Cの乾燥器に24時間移した。溶液をTFFによって精製して凍結乾燥すると、乳白色固体431gが得られた:886Pt、935H2O;3および24時間でのPt放出、0972、3173:実施例22:3アミノプロピルスルホンアミドマロネート、ジエチルエステル、HCl塩の調製A.3クロロプロパンスルホンアミドマロネートジエチルエステルCl3SO2AmadiEtCHCl3400mLおよびEt3N50mLにおけるジエチルアミノマロネートHClAmadiEtHCl、2434g、0115molの溶液に、3クロロプロパンスルホニルクロリド2125g、012molをCHCl3100mLにおいてを不活性大気中で一定の蒸気として加えた。得られた混合物を3時間還流して、室温まで冷却し、1NHCl2×300mLおよび水2×300mLによって抽出した。有機相を回収して、無水Na2SO4において乾燥させ、CHCl3を真空下で除去すると、Cl3SO2AmadiEt2905gが得られた:B.3ヨードプロパンスルホンアミドマロネートジエチルエステルNaI3447g023molのアセトン溶液400mLに、Cl3SO2AmadiEt2905g、0092molを加えた。反応混合物を6時間還流した後室温まで冷却した。NaClを濾過によって除去して、濾液を真空下で除去して、残渣をCH2Cl2300mLに溶解した。この溶液をNa2S2O3水溶液3×250mLおよび水3×250mLによって洗浄した。有機相を無水Na2SO4上で乾燥させて、溶媒を真空下で除去すると、表記の化合物2907gが得られた:C.3アジドプロパンスルホンアミドマロネートジエチルエステルN33SO2AmadiEtの調製方法A:注意、NaN3は、ハロゲン化溶媒と反応してアルキルジアジドを形成する可能性があり、これは単離されると爆発する可能性がある。3ヨードプロパンスルホニルアミドマロネートジエチルエステル2900g、0071molのCCl4溶液300mLに、10molトリオクチルメチル塩化アンモニウムを含むNaN31138g、0175molの水溶液50mLを加えた。得られた混合物を80°Cで16時間攪拌した。反応混合物を室温まで冷却した。水層を分離して、ジクロロメタン100mLによって洗浄した。有機相を合わせて、水3×100mLによって洗浄した後、無水Na2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去すると、表記の化合物1894gが得られた。方法B:3クロロプロパンスルホニルアミノマロネートジエチルエステル4421g、014molのDMF溶液200mLに、NaN32925g、045molを加えた。反応混合物を90°Cで16時間攪拌した後、室温まで冷却した。混合物を氷水に注いで、ジクロロメタンによって抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄して、無水Na2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空下で除去すると、表記の化合物2802gが得られた:D.3アミノプロパンスルホンアミドマロネートジエチルエステルの調製3アジドプロパンスルホンアミドマロネートジエチルエステル2760g、0086molのエタノール溶液70mLおよびPdC1g10を、60psiH2のParr水素添加装置に8時間入れた。水素を2時間毎に補充した。混合物をセライトパッドによって濾過して、1NHClのエタノール溶液10mLを濾液に加えた。溶媒を真空下で除去して、残渣をAl2O3上でCH2Cl2MeOH41、vvを用いてカラムクロマトグラフィーによって精製すると、表記の化合物2684gが塩酸塩として得られた:実施例23:ポリGGNH3SO2AmadiEt、約22Daの調製100mL培地ボトルに、3アミノプロパンスルホニルアミノマロネートジエチルエステル281g、846mmolおよびピリジン80mLを攪拌しながら加えた。pGGONp800g、422mmolおよびHOBt00968g、06321mmolを加えて、混合物を21時間攪拌した後、40°Cの水浴中に入れた。全体で44時間後、反応は、HPLC分析によって遊離のHONpが総HONpと等しくなることから示されるように完了した。混合物を1L培地ボトルに移して、絶えず攪拌しながらEtOAc900mLを加えてポリマーを沈殿させた。固体を遠心によって単離した4800rpm、5分、5°C。上清の液体をデカントして、固体を無水EtOH10溶液に溶解した。BioRexMSZ501D樹脂300gを加えて、混合物を25時間攪拌した。樹脂を濾過によって除去して、濾液を約25溶液まで濃縮した。EtOAc900mLを加えて、混合物を1時間攪拌した。ポリマーを遠心によって単離して、EtOAcおよびEt2Oによって洗浄した後、真空下で乾燥させると、乳白色の粉末600g75が得られた:実施例24:ポリGGNH3SO2AmaPt2、約22kDaの調製A.ポリGGNH3SO2Ama2の調製ポリGGC3スルフAmadiEtの加水分解は、ポリGGNH3SO2AmadiEt050g、02635mmolAmadiEt残基、H2O42mL、2NNaOH035m、070mmolを用いて上記のカルボキサミド化合物に関して用いた条件と同じ条件下で行った。pH124~126で30分後、BioRexMSZ501樹脂050gによって溶液をpH<7に調節した。B.ポリGGNH3SO2AmaPt2OOキレート主にの調製段階Aにおいて得られた材料を、シスジアミンジアクアプラチナII二硝酸塩の30060ppmPt溶液205mlによって処置した。pHを50~54に90分間維持して、混合物をChelex樹脂01923gと共にさらに90分間軽く攪拌した後、樹脂を濾過によって除去した。C.ポリGGC3スルフAmaPt2NOキレートの調製BからのほとんどがOOであるキレートを、NaCl0077g13175mmol、NaH2PO4H2O00265g01920mmol、およびNa2HPO402059g07681mmolによって処置した。pHを74に調節して、溶液を38°Cの水浴中に入れた後、38°Cの乾燥器に20時間入れた。遠心限外濾過および凍結乾燥後、茶色の固体0134gを得た:実施例25:ポリGGNH3SO2AmaPtDACH、約22kDaの調製100mL培地ボトルに、ポリGGNH3SO2AmadiEt60g、3162mmolAmadiEt基およびH2O50mLを加えた。ポリマーをpH124~126で2NNaOH42mLによって2時間加水分解した後、IX樹脂によって中和した。pHを2NNaOHおよび5HNO3によって74に調節して、シスジアクオ1R2RDACHPt二硝酸塩24484ppmPt、12当量AmadiEt303mLを加えた。pHを54に増加して、混合物を一晩攪拌した。Chelex樹脂192gを加えて、混合物を90分間軽く攪拌した。樹脂を除去した後、溶液の容積を100mlに調節してNaCl06431g、NaH2PO4H2O0221gおよびNa2HPO47H2O171gを加えた。塩が溶解した後、溶液を濾過して38°Cで24時間維持した後、TFFによって精製して凍結乾燥後、茶色の固体513gが得られた:Pt625、H2O937;3および24時間でのPt放出はそれぞれ、10および193であった;ならびに195PtNMRH2O:D2O、93:7δ2257、approx2280and2432。実施例26:GGNH3SO2Ama、ジエチルエステルTFA塩の調製tBOCGlyGlyOH929g、00400molおよびHOBt61260g、00400molのDMF溶液18mLの攪拌溶液に、0°CでDCC825g、00400molを加えた。混合物を0°Cで45分間攪拌した後、TEA50595g、00500molを、異なるフラスコに入った3アミノプロパンスルホンアミドマロネートジエチルエステルHCl塩133136g、00400molとDMF10mLとの混合物に加えた。この混合物を室温で10分間攪拌して、濾過し、濾液を50mLフラスコにおいて高真空下で5分間放置した。3アミノプロパンスルホンアミドマロネートジエチルエステルのDMF溶液を攪拌中のtBOCGlyGlyOHHOBtDCC混合物に加えた。得られた混合物を0°Cで2時間攪拌した後、室温に戻して、さらに6時間攪拌した。混合物を濾過して濾液を水300mLに注いでCH2Cl23×400mLによって抽出した。合わせた有機相を塩水3×300mLおよび水3×300mLによって洗浄して、無水Na2SO4上で乾燥させて濾過した。溶媒を真空下で除去した。残渣をCH2Cl2アセトン、991~0100によってSiゲル上で精製すると、産物910gが白色固体として得られた:tBOCGlyGly3アミノプロピルスルホンアミドマロネートジエチルエステル77880g、00200molのTFADCM1140mLにおける溶液をアルゴン大気中で攪拌した。2時間後、TLC分析CH2Cl2MeOH、91、vvは、反応が完了したことを示し、溶媒を真空下で除去した。残渣をジエチルエーテル5mLによって粉砕して、濾過し、沈殿物を真空下で乾燥させると、表記の化合物766gが得られた:実施例27:ポリGFLGNH3SO2AmadiEt、約24kDaの調製乾燥器で乾燥させて、攪拌子および隔壁キャップを備えた100mL培地ボトルに、NH3SO2AmadiEtHCl224g674mmolおよび無水ピリジン80mLを加えて、混合物を攪拌した。ポリGFLGONp803gを加えて、混合物を溶解するまで攪拌した後、40~45°Cで445時間維持した。このあいだに、少量を遊離および総HONpに関して分析した。43時間後、反応は完了した。粗産物を無水EtOAc06Lおよびジエチルエーテル02Lによって沈殿させた。室温で15時間攪拌後、沈殿物を遠心によって単離した。上清を捨てて、沈殿物を洗浄し、遠心して、デカントしてジエチルエーテル30mLによって3回洗浄した。乾燥後、固体を無水EtOH80mLに溶解して250gのAG501X8IX樹脂HOH型と共に軽く攪拌した。25時間後、樹脂を濾過によって除去して、EtOAc09Lおよびジエチルエーテル02Lによって沈殿させた。1時間攪拌後、ポリマーを単離して、先と同様に洗浄した。産物を真空で乾燥させると、表記の化合物708gが乳白色の粉末として得られた:実施例28:ポリGFLGNH3SO2AmaPt2の調製A.ポリGFLGNH3SO2AmadiEtの加水分解ポリGFLGNH23SO2AmadiEt050g、02110mmolAmediEt残基、H2O42mL12溶液を生成する、および2NNaOH0295mL、0590mmolを用いて先と同様に加水分解を行った。pH124~126で30分後、BioRexMSZ501樹脂050gを加えて、pHを<7にした。B.ポリGFLGC3スルフAmaPt2OOキレートの調製白金添加は、シスジアミンアクアプラチナII二硝酸塩160mL0253mmolおよびChelex樹脂01540gを用いて先と同様に行った。C.ポリGFLGC3スルフAmaPt2NOキレートの調製このキレートの変換および精製は、NaCl00482g08248mol、NaH2PO4H2O00166g01203mmolおよびNa2HPO47H2O01287g04801mmolを用いて先と同様に行った。遠心限外濾過および凍結乾燥後、表記の化合物0219gが茶色の固体として得られた:37°CでのPBSにおけるPt放出、3時間で302、24時間で544。実施例29:ポリGFLGC3NH3SO2AmaPtDACHの調製A.ポリGFLGC3NH3SO2AmadiEtの加水分解ポリGFLGC3スルフAmadiEtの加水分解は、ポリGFLGNH3SO2AmadiEt550g、2321mmolAmediEt残基、H2O46mL12溶液を生成、2NNaOH3241mL、648mmolおよびBioRexMSZ501樹脂550gを用いて先に用いた条件と同じ条件下で行った。B.:ポリGFLGNH3SO2AmaPtDACHOOキレートの調製この化合物は、シスジアクア1R2RDACHプラチナII二硝酸塩の26487ppmPt溶液2050mLおよびChelex樹脂16943gを用いて、既に記述された条件と同じ条件で調製した。C.:ポリGFLGNH3SO2AmaPtDACHNOキレートの調製この調製は、類似の変換に関して先に記述した条件と同じ条件下で行った。用いた試薬の量は、PBS溶液に関してNaCl06428g11mmol、NaH2PO402208g160mmolおよびNa2HPO417156g640mmolであった。タンジェンシャルフロー濾過によって精製後、産物410gが茶色の固体として得られた:Pt=658:37°CのPBSにおけるPt放出、3時間で212、24時間で454。実施例30:OOPt対NOPtキレートの異性体比のpHに対する依存性50mL遠心管4本にそれぞれ、pGFLGAmaPt2100g100、NOキレート、または92OOキレート、8NOキレート混合物をそれぞれ加えた。これらの材料をMilliQ水27mLGFLGAmaPt2NOキレート、約20kDaの経時的な放出されたPtの百分率対pH10mMクエン酸、20mMリン酸塩、および100mMNaClのクエン酸PBSの保存溶液を調製して、これをボトルに分けて、これを所望のpHに調節した。ボトルを乾燥器において37°Cに加温して、ポリGFLGAmaPt2NOキレート、~20kDaを加えて、緩衝液1mLあたり濃度約2mgのポリマー白金結合体を得た。混合物を十分に混合して無色の溶液を得た。表記の時間において、約25mLの少量3本をそれぞれのpHで溶液から採取して、既に洗浄したYM3超遠心装置Amiconに移して5000RCF、37°Cで50分間遠心した。全ての時点で全ての試料を採取して調製した後、濾液および保存溶液を、白金輝線21442nmでICPOESによってPt標準物質0~10ppmに対して分析した。それぞれの時点およびそれぞれのpHで、試料3個を調製して分析した。実施例32:OOPtおよびNOPtキレートのインビトロ活性様々なOOPtキレート類似体の相対的細胞障害活性を、B16F10黒色腫細胞の組織培養を用いるクローン原性コロニー形成アッセイによってインビトロで評価した。この方法において、類似体の活性を、シスプラチンおよびカルボプラチンの活性と比較した。NOPtキレートへの変換の影響も同様に評価した。簡単に説明すると、細胞を培養皿に播種して接着させた。培養物を、所望の濃度の試験物質を含む培地において7日間インキュベートした。固定後、細胞>50個を含む細胞集団の数をコロニーとして採点した。試験物質のそれぞれの濃度を1試料あたり3個ずつアッセイした。1試料あたり3個ずつの皿におけるコロニー数の平均値を、対照値試験物質なしにおける平均コロニー数によって除して、それぞれの濃度の試験物質に関する生存値を得た。各物質のIC5050増殖阻害が起こる濃度を、50生存点に最も近い上下のデータ値を用いて、直線回帰分析によって決定した。結果を表8に示す。表5アミドマロネートのOOPtおよびNOPtキレートのクローン原性アッセイからの細胞障害性結果実施例33:認容および最大認容量試験分子量~20kDaのポリGFLGAmaPt2のOOPtとNOPtキレート型を比較する1回投与IV試験により、マウスにおける最大認容量MTDが、OOPtキレートおよびNOPtキレートに関してそれぞれ、80~100および400mgPtkgであることが示され、ポリマー結合NOPtキレートによってより大きい安全性域が得られることが証明された。これらの試験に関して、MTDは薬物による毒性のために如何なるマウスも死亡しない、評価した最高用量であると定義された。いずれかのキレートを5日間毎日投与したB16黒色腫瘍を有するマウス10匹の群の最高平均体重によって示されるように、双方のキレートの多数回投与の認容性を表9に示す。データはまた、OOPtキレートの用量と同等の用量でNOPtキレートの毒性がないこと、および同等の平均体重減少を生じるために必要なNOPtキレートの用量は実質的により高いことを示している。表6ポリGFLGAmaPt2OOPtおよびNOPtキレート、25kDaの毎日5回投与に関する体重減少の平均値として表記される認容性実施例34:皮下接種scB16黒色腫モデルにおける腫瘍増殖の阻害:NOPtキレートポリGFLGAmaPt2NOPtキレート、25kDa対シスプラチンおよび生理食塩水対照の腫瘍増殖阻害を雌性C57BL6マウスにおいて評価した。NOPtキレートおよびシスプラチンを175mgPtkgおよび3mgPtkgで毎日5回投与した。NOPtキレートの用量はそのMTDの十分下であるが、シスプラチンの用量はそのMTD付近である。処置群あたり動物10匹の右後部わき腹にB16F10マウス黒色腫細胞106個を皮下接種した。移植後6日目から、軽いメチウラン麻酔下で腫瘍の大きさをキャリパーを用いて毎日測定した。得られた腫瘍の体積mgを、式W2×L2を用いて推定し、式中Wは腫瘍の長径であり、Lは腫瘍の短径である。腫瘍の大きさが50mgまたはそれ以上に達した場合に、各動物において処置を開始した。各試験動物を個々に追跡して、各動物の処置1日目は、腫瘍の大きさが投与開始を示す日に対応した。試験化合物は全て、尾静脈を通してIV投与して、体重20gあたり容積02~03mLで投与した。投与容量を確立するために、投与前に動物を毎日観察して、体重を測定し、その後試験終了まで毎日測定した。結果を図9に示す。実施例35:皮下接種B16黒色腫モデルにおける腫瘍増殖阻害:OOPtキレートポリGFLGAmaPt2OOPtキレート、25kDaOOPt対シスプラチンおよび生理食塩水対照の腫瘍増殖阻害を、雌性C57BL6マウスにおいて評価した。OOPtキレートおよびシスプラチンを175mgPtkgおよび3mgkgで5日間毎日投与した。OOPtキレートの用量はシスプラチンの用量と同様にほぼそのMTDであった。結果を図10に示す。実施例36:皮下接種B16黒色腫モデルにおける腫瘍増殖阻害:NOPtキレートポリGFLGAmaPt2NOPtキレート、25kDaNOPt対カルボプラチンおよび生理食塩水対照の腫瘍増殖阻害を、雌性C57BL6マウスにおいて評価した。NOPtキレートおよびカルボプラチンを200mgPtkgおよび65mgkgで5日間毎日投与した。このNOPtキレートの用量はカルボプラチンの用量と同様にほぼそのMTDであった。結果を図11に示す。実施例47:皮下接種扁平上皮癌異種移植片モデルにおける腫瘍増殖阻害:NOPtキレートポリGFLGAmaPt2NOPtキレート、25kDa対カルボプラチンおよび溶媒対照等張グルコースの腫瘍増殖阻害を、処置群あたり1群7匹のBALBcnunuマウスにおいて評価した。ヒト扁平上皮腫瘍細胞UMSCC10bを4カ所の部位左右両肩および左右両わき腹に移植した部位あたり細胞106個。NOPtキレートおよびカルボプラチンは、1回IP注射として400mgPtkgおよび65mgkgで投与した。NOPtキレートの用量はカルボプラチンの用量と同様にほぼそのMTDである。腫瘍が群の平均値の50mgに達した場合、マウス全てに試験治療を投与した。結果を図12に示す。実施例38:多用量プロトトコールを用いたB16黒色腫モデルにおけるpGFLGAmaPtDACHの抗腫瘍活性B16黒色腫モデルにおいて、ポリGFLGAmaPtDACHの抗腫瘍活性をカルボプラチンの抗腫瘍活性と比較する試験を行い、各物質をIP注射として5日間毎日投与したqd×5。ポリGFLGAmaPtDACH材料も同様に15、16、および17日に投与した。このレジメでは、双方の化合物のそのそれぞれの最大認容等毒性量を投与した。体重18~20gの雌性C57BL6マウスに、組織培養から回収したB16F10腫瘍細胞106個を皮下に移植した。得られた腫瘍の大きさを試験期間を通して個々に追跡した。腫瘍塊mgはW2×L2として計算し、式中Wは腫瘍短径でありLは腫瘍長径である。腫瘍の大きさが75~100mgに達した場合に個々の処置を行った。注射容量は、004mLg体重であり、薬物は腹腔内投与した。腫瘍体積および体重を毎日測定した。データを腫瘍量の平均値±SEMとして表記して、各処置群における動物の50が死亡する、または過剰な腫瘍量、腫瘍潰瘍化、または罹患のために動物が屠殺されるまで、これをプロットした。異なる物質の活性を比較するために、各物質をそのそれぞれの最大認容量MTDで投与して、MTDは、腫瘍の負荷に帰因しない、再現よく誘導される初期毒性死が101群の動物10匹中1匹に過ぎず、10~15の平均最大体重減少すなわち、それが起こった日にかかわらず、個々のマウスの体重における最低値の群の平均値が起こるがその後体重減少が回復する用量であると定義される。このモデルにおいて、pGFLGAmaPtDACHの5日間毎日投与の最大認容量およびカルボプラチンの対応する最大認容量は60mgkg32mgPtkgに対応するである。各処置群における腫瘍増殖の平均値のプロットを、図Aに示す。これらの結果は、カルボプラチンが最も控えめな腫瘍増殖阻害を示したことを示している。対照的に、腫瘍の増殖は、pGFLGAmaPtDACH処置療法後では実質的に遅くなり延長した。実施例39:多用量プロトコールを用いたB16黒色腫モデルにおけるpGFLGC3スルフAmaPtDACHの抗腫瘍活性B16黒色腫モデルにおいて、pGFLGC3スルフAmaPtDACHの抗腫瘍活性をカルボプラチンの抗腫瘍活性と比較する試験を行い、各物質をIP注射として5日間毎日投与したqd×5。この療法では、双方の化合物をそのそれぞれの最大認容等毒性量で投与した。本試験において用いた方法は、実施例38のpGFLGC3スルフAmaPtDACH試験において用いた方法と同一であった。このモデルにおいて5日間毎日投与した場合のpGFLGC3スルフAmaPtDACHの最大認容量は75mgPtkgであり、カルボプラチンの対応する最大認容量は60mgkg32mgPtkgに相当である。各処置群における腫瘍増殖の平均値のプロットを図Bに示す。これらの結果は、カルボプラチンがこの試験において非常に弱い腫瘍増殖阻害を示したことを示している。対照的に、pGFLGC3スルフAmaPtDACH処置療法後では腫瘍増殖のより顕著な阻害を認めた。結論このように、本発明は、本質的に純粋なアミドマロネートOOPtおよびNOPtキレートを選択的に調製する手段を提供する。本発明はまた、方法を用いて調製された本質的に純粋なアミドマロネートOOPtおよびNOPtキレートを提供する。NOキレートは、pH約60およびそれ以上で比較的安定であり、そのpHより低いpHでは小さいPt種を放出することが示され、より低いpHが認められる腫瘍またはリポソームのような構造では活性な小さいPt種を選択的に放出するという結果が得られた。本明細書に開示の方法に変更および改変を行ってもよいことは当業者に明らかであろう。そのような変更および改変は本発明の範囲内である。例えば、これに限定されないが、カルボキシル、スルホネート、またはスルフェート基ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸等のようなグリコサミノグリカンが含まれるがそれらに限定されるわけではないを有するポリおよびポリ以外の他のポリマーを、通常の共役物質によって水性または非水性条件で直接、またはアミノ酸もしくはポリアミノ酸のようなスペーサーを通してAmadiEtに結合させることができることは、当業者によって認識されるであろう。次に、これらのポリマーアミドマロネート結合体を加水分解して、本明細書において記述されるように白金を添加してOOPtキレートを生成することができ、次に、これを対応するNOPtキレートを生成するように変換することができる。同様に、当業者は、本明細書の開示に基づいてNOPtキレートがハーフエステルまたはモノアルキルアミドマロネートで構成されうることを認識するであろう。例えば、ジアルキルエステルの1当量NaOHもしくはKOHによる部分的加水分解によってモノエステルを調製することができ、またはマロン酸もしくは加水分解されたNアシルアミドマロン酸による処置によって双方のハーフエステルを生成することができる。精製後、モノエステルをpH4~5で白金添加することができる。次に、pHを約6またはそれ以上に上昇させると、NOPt錯体が形成されるであろう。本明細書に記述の化合物のそのような変更は全て本発明の範囲に含まれる。