脂肪組織から単離した成熟脂肪細胞の均質集団を3次元培養基材上で培養する、脂肪細胞を培養する方法。3次元培養基材が、ヒドロゲルである請求項1に記載の脂肪細胞を培養する方法。3次元培養基材が、10~30残基を含むペプチドの非共有的相互作用から形成されるヒドロゲルである請求項1または2に記載の脂肪細胞を培養する方法。ペプチドが、配列RADARADARADARADAを含む請求項3に記載の脂肪細胞を培養する方法。脂肪組織が、1以上のヒト個体から採取された請求項1~4のいずれか1項に記載の脂肪細胞を培養する方法。請求項1~3のいずれか1項で定義される3次元培養基材と接触している脂肪組織から単離した成熟脂肪細胞の単培養物を含む脂肪細胞培養物。脂肪組織が、1以上のヒト個体から採取された請求項6に記載の脂肪細胞培養物。脂肪細胞代謝を調節する化合物をスクリーニングするための、請求項6または7で定義される脂肪細胞培養物の使用。脂肪分解を活性化する化合物をスクリーニングするための、請求項8に記載の脂肪細胞培養物の使用。PPARγ2転写因子を活性化する化合物をスクリーニングするための、請求項8に記載の脂肪細胞培養物の使用。本発明の目的は、よって、生理的状況に近い、特にヒトの生理に近いこのような培養系を提供することである。本発明は、脂肪組織から単離した成熟脂肪細胞を、他の細胞型の非存在下で、3次元培養基材を用いて培養でき、このようにして培養された脂肪細胞が、少なくとも48時間、新しく単離した成熟脂肪細胞のものと同様の表現型を保有することを本発明者らが驚くべきことに証明したことに基づく。本発明は、よって、脂肪組織から単離した成熟脂肪細胞の均質集団を、3次元培養基材上で培養する、脂肪細胞を培養する方法に関する。本発明は、3次元培養基材と接触している脂肪組織から単離した成熟脂肪細胞の単培養物を含む脂肪細胞培養物にも関する。本発明は、脂肪細胞代謝を調節する化合物をスクリーニングするための、本発明による脂肪細胞培養物の使用にも関する。本発明は、スクリーニングされる化合物を、本発明による脂肪細胞培養物と接触させ、前記脂肪細胞培養物の脂肪細胞代謝の少なくとも1つの代表的パラメータが、スクリーニングされる化合物と接触していない本発明による脂肪細胞培養物と比較して改変されているかを決定し、化合物が脂肪細胞代謝の少なくとも1つの代表的パラメータを改変させるならば、該化合物を選択する、脂肪細胞代謝を調節する化合物をスクリーニングする方法にも関する。本明細書において意図するように、成熟脂肪細胞との表現は、分化脂肪細胞を表す。成熟脂肪細胞は、当業者により容易に同定され得る。特に、本発明による成熟脂肪細胞は、通常、単一の脂質液胞と、特にエピネフリンおよびノルエピネフリンのようなβアドレナリン作用薬により誘導可能な脂肪分解活性と、細胞外媒体から細胞内媒体へのグルコースおよび脂肪酸のインスリン誘導性輸送により特に定義されるインスリンに対する感受性とを有する。本発明による成熟脂肪細胞は、顕著には、当業者に公知の前駆脂肪細胞特異的マーカーであるDelK1Pref1の発現が、本発明による成熟脂肪細胞において本質的に存在しないことにより、特に前駆脂肪細胞とは異なる。本発明による成熟脂肪細胞は、脂肪組織から単離される。つまり、本発明による成熟脂肪細胞は、特に、前駆脂肪細胞のような脂肪細胞前駆体または全能性、多分化能もしくは多能性の幹細胞のインビトロ分化に由来しない。本発明による脂肪組織に関して、これは、任意の種の動物に由来できる。しかし、本発明による脂肪組織について、1以上のヒト個体から採取されたものが好ましい。成熟脂肪細胞は、脂肪組織から、特に成熟脂肪細胞の低い密度を利用して、当業者に公知の多数の方法により単離できる。特に、脂肪組織は、コラゲナーゼを用いて処理し、消化の後に、綿織ガーゼを通してろ過できる。ろ過物を水性媒体中で放置して沈降させ、本発明による成熟脂肪細胞の均質集団を、浮遊細胞を採集することにより回収できる。本明細書において意図するように、成熟脂肪細胞の均質集団は、特に、それがその他の細胞型、特に内皮細胞または前駆脂肪細胞を本質的に含まないことである。特に、本発明による成熟脂肪細胞の均質集団は、10未満、より具体的には5未満の成熟脂肪細胞以外の細胞、特に前駆脂肪細胞を含む。成熟脂肪細胞の均質集団中の前駆脂肪細胞の量は、例えばDelK1Pref1のような前駆脂肪細胞特異的マーカーを発現する細胞の数を定量することにより決定できる。本明細書において意図するように、成熟脂肪細胞の単培養物は、成熟脂肪細胞の均質集団の培養物である。成熟脂肪細胞の均質集団は、それが、インキュベートされている、すなわち集団を構成する細胞の生存を可能にする条件下でインビトロにおいて保存されている場合に、培養されているまたは培養下にあるという。このような条件および適当な培養培地は、当業者に公知である。これらの培養培地は、集団を構成する細胞の生存を、少なくとも12時間、好ましくは少なくとも24時間、より好ましくは少なくとも48時間確実にできる全ての要素、特に栄養素を含有するようなものである。例えば、集団は、DMEMF12、1ペニシリンストレプトマイシン、50nMインスリン培地中で撹拌しながら、37°Cおよび5CO2雰囲気中で、培地を定期的に新しくしながらインキュベートできる。有利には、本発明による成熟脂肪細胞についての培養培地は、例えばフォルスコリンおよびデキサメタゾンのような成熟脂肪細胞の代謝活性を調節することを意図する化合物を含むことができる。さらに、成熟脂肪細胞の集団の培養は、少なくとも3時間、6時間、12時間、24時間または48時間行うことが好ましい。本発明によると、成熟脂肪細胞は、脂肪細胞が基材と接触している場合、すなわちこれらが、基材上にあるかまたは基材上に接着している場合に、3次元培養基材上で培養されている。ある具体的な実施形態において、本発明による脂肪細胞を培養する方法は、以下のステップを含む:脂肪細胞の均質集団を3次元培養基材と接触させるステップと、培養基材と接触している成熟脂肪細胞を、特に細胞の生存を特に少なくとも48時間可能にする条件下でインキュベートするステップ。本発明による3次元培養基材は、細胞の3次元培養物を得るために適切な材料、特に生体適合性材料からなる。言い換えると、3次元培養基材は、特に、いくつかの重畳細胞層を得るために適切である。よって、2次元細胞層、すなわち細胞の単層の培養を可能にするだけの培養基材は、本発明による3次元培養基材でない。好ましくは、本発明による3次元培養基材は、ヒドロゲルである。より好ましくは、本発明による3次元培養基材は、10~30残基を含むペプチド、例えば配列RADAの反復を含むペプチド、特に配列RADARADARADARADAの非共有的相互作用から形成されるヒドロゲルである。ヒドロゲルを形成するペプチドは、例えば、ペプチドのN末端の端へのアセチル基の付加およびペプチドのC末端の端へのNH2基の付加により改変できる。よって、ペプチドは、配列:AcRADARADARADARADACONH2により表すことができる。特に好ましくは、本発明による3次元培養基材は、PuraMatrixヒドロゲルである。本発明によりスクリーニングできる化合物は、任意の型のものであってよい。特に、これらは、化学ライブラリーに由来する化合物であり得る。さらに、本発明による脂肪細胞培養物は、脂質分解を活性化する化合物もしくはPPARγ2転写因子を活性化する化合物;またはインスリン感受性を調節する化合物をスクリーニングするために用いることができる。本明細書で意図するように、脂肪分解、インスリン感受性またはPPARγ2転写因子活性は、脂肪細胞代謝の代表的パラメータである。脂肪分解の決定は、当業者に公知の多数の方法により行うことができる。特に、脂肪分解活性は、本発明による脂肪細胞培養物により放出されるグリセロールおよび遊離脂肪酸の量を、特に分光光学法により、LacasaらEndocrinology128747~753に記載されるようにして測定することにより決定できる。脂肪細胞のインスリン感受性は、脂肪細胞におけるグルコース輸送の測定に従って、WoodらBiochemBiophysResCommun361468~473に記載されるようにして評価できる。PPARγ2転写因子活性は、細胞においてそれをコードするmRNAの量を、例えばRTPCRまたはその特異的DNA部位への結合活性の直接的測定により、特にKeophiphathらJNutr1392055~2060に記載されるようにして決定することにより測定できる。A材料および方法1材料BDPuraMatrixペプチドヒドロゲルは、BDBiosciencesから得る。用いた抗カベオリン1および抗CD361次抗体は、SantaCruzBiotechnologyから得る。Cy3と結合した対応する抗体は、GEHealthcareから得る。2単離成熟脂肪細胞の調製成熟脂肪細胞は、ヒト脂肪組織のコラゲナーゼ処理により単離する。肥満でない若年女性の皮下ヒト脂肪組織を、消化培地、1mgmlコラゲナーゼA中で、ポリプロピレンチューブ中で2mlの消化培地あたり1gの組織の割合で切り刻む。チューブを30分間撹拌しながら37°Cに置く。消化の後に、綿織ガーゼを通して培地をろ過する。成熟脂肪細胞を、5分間浮遊させてデカントのために放置し、次いで、5容量の10スクロースで3回洗浄する。最後の洗浄の終わりに、スクロースを除去し、成熟脂肪細胞をPuraMatrixヒドロゲルに組み込む準備ができている。3成熟脂肪細胞含有ヒドロゲルの調製製造業者により推奨されるように、ヒドロゲルを30分間音波処理して、その粘度を低減させる。次いで、ゲルを20スクロースでVV希釈し、次いで、気泡を除去するために1000gにて5分間遠心分離する。洗浄した成熟脂肪細胞をこの混合物に迅速に加え、ピペットを用いて穏やかに吸引することによりホモジナイズする。脂肪細胞ゲル混合物を次いで、ウェルあたり100μlの割合で96ウェル培養プレートに分配する。非常に迅速に、インキュベーション培地をウェルに加え、プレートを、37°Cにて5CO2雰囲気下のインキュベーターに入れる。30分後に、DMI培地を新しくする。培地の交換を2回反復する。次の日に、DMI培地を交換し、この操作を毎日反復する。いくつかの実験では、DMIは、100nMデキサメタゾンまたは100nMのロシグリタゾンを含有する。4脂肪分解活性の測定ヒドロゲル脂肪細胞の組み合わせを含有するウェルを最初に150μlのKrebsRinger培地、5mMグルコース、3本質的脂肪酸フリーアルブミンで洗浄して、ヒドロゲルを平衡化する。01DMSOまたは10μMフォルスコリンのいずれかを含有する100μlのKRBALBをウェルに分配する。プレートを、次いで、インキュベーターに4時間入れる。培地を試料として採取し、70°Cに10分間おいて、グリセロールアッセイに干渉し得る脂肪細胞酵素を不活性化する。放出されたグリセロールを、分光光度法により、LacasaらEndocrinology128747~753に記載されるようにしてアッセイする。5アディポカイン分泌の測定DMI培地を、培地の最後の交換の24時間後に試料として採取する。アディポカインのアッセイを、この培地に対して直接、ELISA法を製造業者により記載されるようにして用いて行う。6遺伝子発現の測定DMI培地を、ウェルから迅速に取り出し、ゲル脂肪細胞の組み合わせを、溶解バッファーを用いて、1mlの溶解バッファー1mlのゲル脂肪細胞の組み合わせの割合でホモジナイズする。次いで、クロロホルムを用いる予めの脱脂質処理とともにRNeasy抽出キットをLacasaらEndocrinology148868~877に記載されるようにして用いてRNAを抽出する。トータルRNAを、次いで、LacasaらEndocrinology148868~877に記載されるようにしてcDNAに転写する。用いたプライマーのリストを表1に示す。リアルタイムPCRアッセイを、25ngのcDNAならびにセンスおよびアンチセンスプライマーを用い、SybergreenユニバーサルPCRミックスを用いて行い、検出装置において測定する。全ての値は、RPLPOリボソームタンパク質の発現に対して標準化する。7免疫蛍光法DMI培地を除去してPBSで洗浄した後に、ゲル脂肪細胞の組み合わせを、96ウェルプレートのウェルに入れ、4パラホルムアルデヒドで1時間固定する。PBS01Mグリシンバッファーを用いる処理によりPAFを不活性化した後に、細胞を、PBS3アルブミン中の01TritonX100を用いて周囲温度にて5分間透過にする。非特異的部位をPBS3アルブミンバッファーを用いて4時間、周囲温度にてブロックし、次いで、1次抗体を加え、インキュベーションを4°Cにて14時間継続する。6回の洗浄の後に、ゲル脂肪細胞の組み合わせを2次抗体と4時間、周囲温度にて暗所でインキュベートする。ゲル脂肪細胞の組み合わせを、次いで、洗浄し、このゲルの断片を、スライドとカバーガラスとの間のマウンティング媒体上に置く。スライドを蛍光により24時間後に調べる。8免疫電気泳動法DMI培地を除去してPBSで洗浄した後に、ゲル脂肪細胞の組み合わせを、プロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤との混合物を含有する1容量の溶解バッファーに迅速に溶解する。ホモジネートを、次いで、4°Cに15分間保持し、次いで、5000gにて10分間遠心分離する。細胞溶解物を次いで回収し、Laemmliバッファー中で希釈し、LacasaらEndocrinology148868~877に記載されるようにして電気泳動に供する。タンパク質をセルロースメンブレン上に移した後に、Ponceauレッドを用いる染色により、装填量およびトランスファーの質を確認できる。次いで、メンブレンを、1次抗体と4°Cにて14時間インキュベートする。次いで、洗浄を行った後に、メンブレンを2次抗体とインキュベートする。シグナルを、化学発光により検出し、デンシトメトリーにより定量する。9インスリン感受性の測定前日にインスリンを枯渇させたヒドロゲル脂肪細胞を含有するウェルを、インキュベーション培地とともにインキュベートする。次いで、プレートをインキュベーター中に15~30分間入れる。ゲル脂肪細胞の組み合わせを、プロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤との混合物を含有する1容量の溶解バッファーに迅速に溶解する。ホモジネートを、次いで、4°Cに15分間保持し、次いで、5000gにて10分間遠心分離する。溶解物を次いで回収し、Laemmliバッファー中で希釈し、以前に記載したようにして電気泳動に供する。メンブレンを、次いで、それぞれAktのSer473のレベルにてリン酸化された形を指向する1次抗体またはアクチンを指向する1次抗体とともに4°Cにて14時間インキュベートする。次いで、洗浄を行った後に、メンブレンを2次抗体とインキュベートする。シグナルを、化学発光により検出し、デンシトメトリーにより定量する。B結果1成熟脂肪細胞集団の均質性培養に用いた脂肪組織から単離した成熟脂肪細胞の集団中に存在する混入前駆脂肪細胞の割合を、リアルタイムPCRにより、前駆脂肪細胞特異的マーカーDelK1Pref1の発現を測定することにより決定した。この測定は、用いた成熟脂肪細胞集団が、5未満の前駆脂肪細胞を含むので、本質的に均質であることを示す。2脂肪細胞タンパク質の検出ヒドロゲルで形成された3次元基材において培養した成熟脂肪細胞は、膜タンパク質CD36およびカベオリン1の免疫蛍光標識の後に単房性の外観を示すので、このことは、脂肪細胞膜タンパク質の検出の可能性を証明する。さらに、脂肪細胞溶解物は、細胞質の脂肪細胞タンパク質aP2FABP4およびアクチンの検出により示されるように、免疫電気泳動により分析できる。3脂肪分解活性脂肪分解活性を、基底条件下および10μMのフォルスコリンで刺激した条件下で、ヒドロゲル中に7日間維持した成熟脂肪細胞について測定する。この活性を、新しく単離した同じ細胞のものとも比較する。図5および6に示す結果は、基底脂肪分解活性およびフォルスコリン刺激脂肪分解活性が、新しく単離した脂肪細胞のものと同じ程度であり、5~7日間一定のままであることを示す。さらに、培養培地中のデキサメタゾンの存在は、基底および刺激された活性を改変しない。4アディポカインアディポネクチンおよびレプチンの分泌アディポネクチンおよびレプチンの分泌を、デキサメタゾンの存在下または非存在下でヒドロゲル中に7日ほど長く維持した成熟脂肪細胞について測定する。さらに、図7に示すように、レプチンの分泌は、デキサメタゾンの非存在下で培養している間に減少するが、この分泌は、グルココルチコイドの存在下で増加し、よって、これらのホルモンに対する応答が、培養下の脂肪細胞において機能的なままであることを証明する。その部分についてのアディポネクチンの分泌は、7日間一定のままである。5脂肪細胞遺伝子発現脂肪細胞遺伝子の発現を、新しく単離した成熟脂肪細胞とヒドロゲル中に2日間維持した同じ細胞との間で比較する。図9は、アディポカイン、主要脂肪細胞転写因子PPARγ2ならびにその標的遺伝子aP2FABP4およびLPLの発現が一定のままであることを示す。6インスリン感受性の測定脂肪細胞は、主要タンパク質同化ホルモンであるインスリンの好ましい標的である。ヒト脂肪細胞において、インスリンは、グルコース消費を刺激し、トリグリセリドの合成の増加を引き起こし、他方、これらの脂質の分解を阻害する。Akt酵素は、セリン473のリン酸化によりその活性化を引き起こすインスリンの代謝的効果を伝達する。よって、Aktリン酸化のレベルは、細胞のインスリン感受性の指標である。インスリンは、Aktリン酸化を、新しく単離した脂肪細胞およびヒドロゲル中に48時間維持したものにおいて同一の様式で刺激し、よって、このことは、これらの細胞のインスリンに対する応答の良好な維持を示す。結論グルココルチコイドおよびチアゾリニジンジオンを補充し得るインキュベーション培地を用いてヒドロゲルの3次元培養基材において維持した成熟脂肪細胞は、新しく単離した脂肪細胞のものに匹敵する脂肪分解活性およびアディポカイン分泌活性を示す。さらに、ヒドロゲル中に維持した成熟脂肪細胞は、少なくとも7日間、グルココルチコイドJEndocrinol197189~204に対して応答する能力を保持する。よって、この系は、脂肪分解活性または例えば脂肪細胞特異的転写因子PPARγ2を活性化する活性を有する薬理学的化合物をスクリーニングするために用いることができる。さらに、本発明者らは、本発明によるヒドロゲルの3次元培養基材中に維持した成熟脂肪細胞が、新しく単離した成熟脂肪細胞と比較して、少なくとも2日間、それらのインスリン感受性を保持することを示した。このことにより、本発明による脂肪細胞培養物が、インビボでの成熟脂肪細胞を代表するモデルであることが確認される。