"aホスホ-AMPKまたはこのリン酸化標的に特異的に結合する抗体を用いて血液試料の細胞を標識し、標識試料を作製するステップと、bフローサイトメトリーを用いて前記標識試料の血液細胞の集団による抗体結合を測定し、これにより細胞の前記集団におけるAMPK活性化の評価を得るステップとを含む、試料分析方法。前記評価が血液細胞の前記集団の幾何平均蛍光である、請求項1に記載の方法。血液細胞の前記集団が白血球またはこの亜集団である、請求項1または2に記載の方法。前記亜集団がリンパ球または顆粒球から構成される、請求項3に記載の方法。前記抗体がホスホ-AMPKに特異的に結合する、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。前記抗体がホスホ-ACCに特異的に結合する、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。前記方法が、前記標識ステップaの前に、血液をエクスビボまたはインビボで試験薬剤と接触させるステップと、前記評価を血液細胞の参照試料から得られた結果と比較し、これにより血液細胞の前記集団におけるAMPK活性化に対する前記化合物の影響を判定するステップとをさらに含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。前記影響が、血液細胞の前記集団の幾何平均蛍光および血液細胞の前記参照試料の幾何平均蛍光の差を計算して測定される、請求項7に記載の方法。前記接触させるステップが、前記試験薬剤を被験者に投与するステップと、次いで一定期間後に前記被験者から血液を採取するステップとを含む、請求項7または8に記載の方法。前記接触させるステップが、被験者から血液を採取するステップと、次いで採取された血液と前記試験薬剤を一定期間接触させるステップとを含む、請求項7または8に記載の方法。前記試験薬剤がAMPK活性化に影響を与えることが知られている、請求項7から10のいずれか一項に記載の方法。AMPK活性化に対する前記試験薬剤の影響が知られていない、請求項7から10のいずれか一項に記載の方法。前記参照試料が、前記血液試料と同じ個体から得られた血液細胞を含む、請求項7から12のいずれか一項に記載の方法。前記参照試料を前記試験薬剤と接触させていない、請求項7から13のいずれか一項に記載の方法。前記血液試料を前記試験薬剤の第1の量と接触させ、参照試料を前記試験薬剤の第2の量と接触させる、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。前記方法が、前記標識ステップaの前に、哺乳動物に生活様式の変化を経験させるステップと、前記哺乳動物から前記血液試料を得るステップと、前記評価を血液細胞の参照試料から得られた結果と比較し、これにより前記哺乳動物のAMPK活性化に対する前記生活様式の変化の影響を判定するステップとをさらに含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。前記生活様式の変化が食事である、請求項16に記載の方法。前記生活様式の変化が運動の増加である、請求項16に記載の方法。試料分析方法が提供される。ある実施形態において、方法は、a標識試料を作製するために、ホスホ-AMPKまたはこのリン酸化標的に特異的に結合する抗体を用いて血液試料の細胞を標識するステップと、bフローサイトメトリーを用いて、標識試料の血液細胞の集団による抗体結合を測定するステップとを含む。特定の実施形態において、方法は、標識ステップの前に、血液をエクスビボまたはインビボで試験薬剤と接触させるステップと、評価を血液細胞の参照試料から得られた結果と比較するステップとをさらに含んでもよい。いかなる科学的理論にも拘束されることを望むものではないが、aAMPKを調節するAMPK調節化合物または生活様式例えば、食事または運動の影響は、生物の血液を分析して判定することができ、bエネルギー産生または使用と通常関連しない組織である血液は、エネルギー産生または使用と関連した組織例えば、肝臓および筋肉等の代理の役割を果たすことができると考えられる。故に、生物のエネルギー状態は、ホスホ-AMPKまたはこのリン酸化標的に特異的に結合する抗体を用いたフローサイトメトリーにより、生物の血液を用いて評価することができる。これらの方法は、侵襲的手順例えば、組織生検を必要とせず、先行アプローチ例えば、ウェスタンブロッティングと比べてより迅速およびより経済的である。本発明の幾つかの実施形態のある態様は、添付図面と併せて読まれるとき、以下の詳細な記載から最も良く理解することができる。通常の習慣により、図面のさまざまな特徴は原寸に比例していないことが強調される。それどころか、さまざまな特徴の寸法は、明確さのため任意に拡大または縮小される。図面に含まれるのは、以下の図である。本発明がより詳細に記載される前に、本発明は記載された特定の実施形態に限定されず、そのため、当然ながら変わり得ることが理解されるべきである。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることから、本明細書に使用される用語法は、特定の実施形態のみを記載する目的のためであり、限定されるものではないことも理解されるべきである。値の範囲が示されている場合、文脈が別途明確に指示しない限り下限の単位の10分の1まで、この範囲の上限と下限との間の各介在値、およびこの規定範囲にある任意の他の規定値または介在値は、本発明の範囲内に包含されることが理解される。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法および材料もまた、本発明の実践または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料が、これより記載される。本明細書に引用された全ての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が、参照により組み込まれることを具体的および個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれ、ならびに刊行物が引用される関連での方法および/または材料を開示および記載するために、参照により本明細書に組み込まれる。いかなる刊行物の引用も、出願日前のこの開示のためであり、先行発明を理由として、本発明がこのような刊行物に先行する権利を有さないことの承認として解釈されるべきではない。さらに、示された刊行物の日付は、実際の刊行日とは異なる可能性があり、独自に確認される必要があり得る。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形a、an、およびtheは、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことが留意されなければならない。特許請求の範囲は、いかなる随意的な要素も排除するように起草され得ることがさらに留意される。そのため、この記載は、請求項要素の列挙に関連した、~だけsolely、~のみonly等のような排他的用語の使用、または否定的限定の使用のための先行詞としての役割を果たすことが意図される。本開示を読むと当業者に明らかになるように、本明細書に記載および図示された個々の実施形態はそれぞれ、本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく、いずれの他の幾つかの実施形態の特徴からも容易に区別され得る、または組み合わされ得る個別の構成要素および特徴を有する。いずれの列挙された方法も、列挙されたイベントの順、または論理的に可能ないずれか他の順に行うことができる。試料分析方法下記の方法は、血液の試料を使用する。しかし、血液は、該方法において使用することができる多くの生物学的試料の1つにすぎない。他の実施形態において、他の組織例えば、肝臓または脾臓等などの他の軟組織由来のインタクトな細胞、または組織培養で増殖された細胞が使用されてもよい。フローサイトメトリーに適した細胞懸濁液を提供するための、このような組織の処理方法が知られている。ひとたび作製されると、細胞懸濁液は、下記の方法と類似した方法で使用することができる。大まかに言えば、主題の方法は、aホスホ-AMPKまたはこのリン酸化標的に特異的に結合する抗体を用いて血液試料の細胞を標識して、標識試料を作製するステップ、およびbフローサイトメトリーを用いて標識試料の血液細胞の集団による抗体結合を測定し、これにより血液細胞の集団におけるAMPK活性化の評価を得るステップを伴う。血液から得られた結果がエネルギー消費と関連する組織例えば、筋肉または肝臓から得られた結果とよく相関したことから、血液中のAMPK活性化の評価は、血液が得られた被験者におけるAMPK活性化の評価を提供するまでに拡大することができる。方法は全血で行われてもよいが、特定の実施形態において、分析される血液細胞の集団は、白血球またはこの亜集団例えば、リンパ球集団または顆粒球集団であってもよい。特定の実施形態において、血液は、エクスビボですなわち、被験者から採取された血液を用いてまたはインビボで例えば、試験薬剤を哺乳動物に投与して試験薬剤と接触させてもよく、およびアッセイからの結果は、血液試料が得られた被験者におけるAMPK活性化に対する該化合物の影響を判定するために、血液細胞の参照試料例えば、試験薬剤または異なる量の試験薬剤と接触していない血液細胞から得られた結果と比較してもよい。影響は、ある場合には、血液細胞の集団の幾何平均蛍光および血液細胞の参照試料の幾何平均蛍光の差を計算して測定することができる。明らかとなるように、ある実施形態において、接触させるステップは、試験薬剤を被験者に投与するステップ、および次いで一定期間後に被験者から血液を採取するステップを伴い得る。他の実施形態において、接触させるステップは、被験者から血液を採取するステップ、および次いで採取された血液と薬剤を一定期間接触させるステップを伴い得る。試験薬剤は、AMPK経路の公知の調節因子であってもなくてもよい。特定の実施形態において、参照試料は、試験血液試料と同じ個体から得られた血液細胞を含有してもよい。参照試料は、試験薬剤と接触させていてもいなくてもよい。特定の場合において、該方法から得られたデータは、図2に図示の通り、試料の数の蛍光の幾何平均のグラフとして表されてもよい。このようなグラフは、例えば、時間的経過、または試験薬剤の異なる用量間の差を示すことができる。図1に図示の通り、AMPKは、グルコースの細胞取り込み、脂肪酸のβ酸化、ならびにグルコーストランスポーター4GLUT4およびミトコンドリアの生合成を含む幾つかの細胞内系intracellularsystemを制御する代謝のマスタースイッチの役割を果たす。AMPKのエネルギー感知能力は、安静時および運動筋肉刺激時に起こるAMP:ATP比の変動を検出および反応するAMPKの能力に起因し得る。筋肉刺激時に、AMPが増加する一方でATPは減少し、これがAMPKを上流のキナーゼ複合体、AMPKKを介した活性化の良好な基質に変化させ、あるいは、AMPの結合が、Thr-172でリン酸化された活性化AMPKをタンパク質ホスファターゼ2Cαにとってより悪い基質にする。AMPKKは、3つのタンパク質、STE関連アダプターSTRAD、マウスタンパク質25MO25、およびLKB1セリン/スレオニンキナーゼの複合体である。ひと運動中、筋肉細胞がATPに対する極端な細胞の需要によりもたらされる代謝ストレスを経験する間に、AMPK活性は増加する。活性化すると、AMPKは、同化エネルギー消費経路脂肪酸合成、タンパク質合成等の阻害、およびエネルギー産生異化経路脂肪酸酸化、グルコース輸送等の刺激により、細胞のエネルギーレベルを増加させる。AMPKの活性化の誘発は、2つの条件が満たされることを条件として行われ得る。第一に、AMPKのγサブユニットは、αサブユニット上の活性部位Thr-172を露出するようなコンフォメーション変化を受けなければならない。AMPKのγサブユニットのコンフォメーション変化は、AMPの増加した濃度下で達成され得る。AMPの増加した濃度は、2つのAMPがAMPKのγサブユニット上に位置する2つのBatemanドメインを結合させるとき、AMPKのγサブユニット上にコンフォメーション変化を引き起こす。αサブユニット上の活性部位Thr-172を露出するのは、AMPの増加した濃度によりもたらされるこのコンフォメーション変化である。AMPのこの役割は、よく知られた5-アミノ-4-イミダゾールカルボキサミドリボシドAICARに由来するAMP類似体5-アミノ-4-イミダゾールカルボキサミドリボチドZMPを介したAMPK活性化を実証する実験においてさらに立証される。満たされなければならない第二の条件は、上流のキナーゼAMPKKによりもたらされる、αサブユニットのThr-172での活性化ループにおけるAMPKのリン酸化、およびその結果としての活性化である。LKB1STK11、マウスタンパク質25MO25、および偽キナーゼSTE関連アダプタータンパク質STRAD間に形成される複合体は、Thr-172での活性化ループにおけるAMPKのリン酸化に関与する主要な上流のキナーゼとして最近同定された。AMPKは、LKB1/MO25/STRAD複合体によりリン酸化されなければならないが、アロステリック調節因子により制御することもできる。アロステリック調節因子は、全般的なAMPK活性を直接増加させ、およびAMPKを修飾してこれをAMPKKに対してはより良好な基質、ホスファターゼに対してはより悪い基質にする。3-ホスホグリセリン酸解糖中間体は、AMPKKを介したAMPK活性化をさらに顕著にするように作用することが最近見出された。CaMKKも、上流のAMPKKとして同定されている。CaMKKは、AMP非依存的にAMPKをリン酸化および活性化し、代わりにこれは、細胞内Ca2濃度の上昇により誘発される。CaMKKがAMPKKの役割を果たしているという発見は、AMP対ATP比の増加に加えて、AMPKが、栄養素、薬物、または生理学的刺激に応答した細胞内Ca2濃度の上昇によっても活性化され得ることを示すものである。AMPKの幾つかの下流の標的が図1に図示されている。図示の通り、AMPKの下流の標的には、炭水化物代謝例えば、GEF、MEF、グリコーゲン合成酵素、PFK2およびTORC2、脂質代謝例えば、HMGCoAR、ACC、HNF-4、SREBP-1およびHSL、細胞増殖およびアポトーシスeNOS、p53、HrRおよびeEF2Kおよびタンパク質代謝を制御するタンパク質が含まれる。AMPKの1つの例示的な下流の標的は、アセチルCoAカルボキシラーゼACCである。アセチルCoAカルボキシラーゼは、アセチルCoAの不可逆的カルボキシル化を触媒して、この2つの触媒活性、ビオチンカルボキシラーゼBCおよびカルボキシルトランスフェラーゼCTを通じてマロニルCoAを産生する、ビオチン依存性酵素である。ACCは、ほとんどの真核生物の小胞体におけるマルチサブユニット酵素である。ACCの最も重要な機能は、脂肪酸の生合成にマロニルCoA基質を提供することである。ACCの活性は、転写レベルでコントロールされ得るほか、小分子モジュレーターおよび共有結合修飾によりコントロールされ得る。ヒトゲノムは、2つの異なるACC、すなわち、ACACAおよびACACBに対する遺伝子を含有する。AMPKのリン酸化は、ホルモンのグルカゴンまたはエピネフリンが細胞表面受容体に結合するときに生じるが、リン酸化の主な原因は、AMP活性化タンパク質キナーゼAMPKの活性化をもたらす、細胞のエネルギー状態が低いときのAMPレベルの上昇による。AMPKは、ACCの両方のアイソフォーム上の幾つかのセリン残基をリン酸化することができる、ACCの主要なキナーゼ制御因子である。ACC1において、AMPKは、Ser79、Ser1200、およびSer1215をリン酸化する。ACC2において、AMPKは、Ser218をリン酸化する。タンパク質キナーゼAもACCをリン酸化する能力を有し、ACC1よりACC2をリン酸化する能力がはるかに大きい。しかし、ACCの制御におけるタンパク質キナーゼAの生理学的重要性は、現在知られていない。インスリンが細胞膜上の受容体に結合すると、ホスファターゼを活性化して該酵素を脱リン酸化し、これにより阻害効果を除去する。AMPKおよびこの標的は概して細胞内にある。そのため、方法は概して、血液細胞を透過処理するステップ、および次いで、ホスホ-AMPKまたはこのリン酸化標的に特異的に結合する抗体を用いて透過処理された細胞を標識するステップを伴う。このような細胞内標識方法の正確なステップは大きく異なり得るが、これらは概して、細胞を透過処理するステップ、標識抗体を用いて細胞を標識するステップ、および次いで、この後の操作の間に細胞の内容物がインタクトなままであるように、染色された細胞を固定するステップを伴う。細胞が、細胞内タンパク質に特異的な蛍光抗体を用いて標識され得る例示的な方法は、これらの方法の開示のため参照により組み込まれる、LazarusらCytometry.199832:206~13頁、SartorらCytometry.199418:119~22頁、GadolらCytometry199415:359~70頁およびFarらCytometry.199415:327~34頁を含むさまざまな刊行物に記載されている。FACS分析のために細胞を細胞内標識するキットには、OrionBioSolutions,Incヴィスタ、CAによるINTRACYTE商標細胞内FACSキット、BectonDickinsonフランクリンレイク、NJによるINTRASURE商標またはFASTIMMUNE商標キット、およびPharMingenサンディエゴ、CAによるCYTOFIX商標またはCYTOPERM商標Plusキットが含まれる。使用される方法に応じて、試料の赤血球は、白血球の透過処理および標識の前に溶解され得る。このような溶解技法は、一般に血液分析に使用されるものから適合されてもよい。血液細胞の集団の個々の細胞による抗体結合は、フローサイトメトリーを用いて測定される。このような方法は公知であり、これらの方法の開示のため全てが本明細書に参照により組み込まれる、BrownらClinChem.200046:1221~9頁、McCoyらHematol.Oncol.Clin.NorthAm.200216:229~43頁およびScheffoldJ.Clin.Immunol.200020:400~7頁を含むさまざまな刊行物、ならびにCareyらFlowCytometryinClinicalDiagnosis、第4版ASCPPress、2007、OrmerodFlowCytometry-Apracticalapproach第3版.OxfordUniversityPress、Oxford、UK2000、OrmerodFlowCytometry第2版.BIOSScientificPublishers、Oxford、UK1999およびOrmerodFlowCytometry-Abasicintroduction2009CytometryPartA75A、2009などの書籍においてレビューされている。特定の場合において、蛍光の測定ごとにイベント数を提供するために、単一試料のデータが処理されてもよい。図3に示されている通り、データは、ある場合には、蛍光単位をx軸に、細胞計数をy軸に示す単一パラメータヒストグラムとして表すことができる。蛍光は対数値であってもよく、ある場合には絶対値例えば、生の値または正規化された値の対数であってもよい。ヒストグラムのピークは、血液試料が得られた被験者におけるAMPK活性化の評価を提供する。ヒストグラムのピークは、蛍光値の幾何平均であってもよいが、類似の結果を得るために他の統計分析が使用されてもよい。血液細胞のさまざまな亜集団すなわち、赤血球、血小板、ならびに好中球、リンパ球、単球、好酸球、および好塩基球から構成される白血球は、フローサイトメトリーを用いて容易に識別できることから、血液細胞の任意の亜集団におけるAMPK活性化の評価を提供するためにデータを分析してもよい。1つの実施形態において、リンパ球におけるAMPK活性化の評価を提供するためにデータを分析してもよい。さらなる実施形態において、血液細胞は二次抗体、例えば細胞表面抗体で標識してもよく、二次抗体で標識した細胞におけるAMPK活性化を評価するためにデータを分析してもよい。本明細書に記載された方法は、概して、任意の適切なフローサイトメーターで使用することができる。この例は当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第5,378,633号、5,631,165号、6,524,858号、5,266,269号、5,017,497号および6,549,876号、PCT公開WO99/54494、ならびに米国特許出願公開US20080153170、20010006787、US20080158561、US20100151472、US20100099074、US20100009364、US20090269800、US20080241820、US20080182262、US20070196870およびUS20080268494に記載されており、この各々が参照により本明細書に組み込まれる。細胞を標識するのに使用される抗体は、天然のすなわち、折り畳まれたホスホ-AMPKまたはこのリン酸化標的に特異的に結合することができるべきである。特定の場合において、抗体は、はるかに減少したすなわち、少なくとも2、5、10、50または100倍親和性で線形すなわち、折り畳まれていない、変性した形態のタンパク質に結合することができる。このような抗体が結合する構造は、該タンパク質において隣接しないアミノ酸を含有し得る。換言すれば、ある場合にはポリペプチドへのこのような抗体の結合は、特定の三次元コンフォメーションに折り畳まれたポリペプチドに依存し得る。このような抗体は、免疫応答を生成するのに適した、当技術分野でよく知られた任意の技法を用いて、適切な動物、例えば温血動物、特にウサギ、マウス、ラット、ラクダ、ヒツジ、ウシもしくはブタなどの哺乳動物、またはニワトリもしくは七面鳥などの鳥を、折り畳まれたホスホ-AMPKまたはこの下流の標的で例えば免疫して作ることができる。動物を免疫する手順は、当技術分野でよく知られており、HarlowAntibodies:ALaboratoryManual、第1版1988ColdSpringHarbor、N.Y.およびWeirHandbookof実験的Immunology第4巻、BlackwellScientificPublishers、Oxford、英国、1986年に記載されている。当業者に理解されるように、免疫原は、免疫応答を増加させるために、アジュバントもしくはハプテン例えば、完全もしくは不完全フロインドアジュバントまたは脂質Aアジュバント、またはキーホールリンペットヘモシニアンKLHなどの担体と混合されてもよい。ひとたび適切な動物が免疫され、および抗原に対する免疫応答が動物により確立されると、所望の活性を有する抗体を産生する細胞を同定するために、該動物由来の抗体産生細胞がスクリーニングされる。幾つかの実施形態において、これらの方法は、免疫された動物の脾臓由来の細胞が、適切な不死細胞と融合されてハイブリドーマ細胞を産生するハイブリドーマ技術を使用することができる。これらのハイブリドーマ細胞由来の上清はスクリーニングすることができ、および陽性クローンが標準的手順HarlowらAntibodies:ALaboratoryManual、第1版1988ColdspringHarbor、N.Y.;およびSpieker-Poletら、上記参照により増殖される。抗体は、天然のコンフォメーションに折り畳まれたリン酸化AMPKまたはこのリン酸化標的への結合についてスクリーニングすることができる例えば、これらのタンパク質のリン酸化形態に特異的であるような抗体を同定するための細胞染色により。特定の実施形態において、適切な抗体を同定するために市販の抗体がスクリーニングされてもよい。代替の実施形態において、ファージディスプレイ抗体が使用されてもよく、この作製方法はよく知られている例えば、ScottらScience1990249:386;Devlinら、Science1990249:404;例えば、米国特許第5,223,409号、5,733,731号、5,498,530号、5,432,018号、5,338,665号、および5,922,545号を参照のこと。特定の場合において、AMPKまたはこの下流の標的に特異的な抗体ではなく、上記および下記の方法は、AMPKα1およびAMPKα2に密接に関連したリン酸化AMPK関連キナーゼ例えば、BRSK1、BRSK2、NUAK1、NUAK2、QIK、QSK、SIK、MARK1、MARK2、MARK3、MARK4、MELK、またはSNARK;Manningら、Science2002298:1912~1934頁に特異的な抗体を用いて行われてもよい。リン酸化AMPK関連キナーゼの幾つかは、エネルギー恒常性にも関与していたKohらPNAS2010107:15541~15546頁。代替の実施形態において、定量的ウェスタンブロッティング方法例えば、CellBioscencesCB1000machineなどのキャピラリーベースのシステムを用いるが使用されてもよい。あるいは、質量分析またはマスサイトメトリーが使用されてもよい。ある場合には、アッセイは、例えば、96または384ウェルプレートを用いてハイスループットフォーマットで行うことができる。有用性上記の方法は、例えば、AMPK活性化を調節する化合物の同定、投与された化合物が所望の効果を有しているかどうかの判定、または化合物の最適用量がAMPK活性化を調節することが知られていることの判定に使用することができる。これらの実施形態において、上述の方法を用いて得られた測定は、血液の参照試料から得られた結果と比較することができる。上述の通り、血液の試験試料は、試験薬剤とエクスビボまたはインビボで接触させることができる。血液の参照試料は、例えば、試験薬剤と接触させていなくてもよく、または異なる量の試験薬剤と接触させていてもよい。1つの実施形態において、試験試料および参照試料はいずれも、同じ量の試験化合物と、ただし、異なる回数または異なる期間接触させていることができる。試験試料および参照試料は、同じ被験者、または異なる被験者から得ることができる。被験者は、少なくとも8~12時間絶食していてもよく、または、ある場合には、方法は運動前、運動中または運動後に行うことができる。方法は、被験者の健康の評価を提供するために、コレステロール試験すなわち、脂質パネルまたは血糖試験などの他の医学的試験と併用することができる。試験薬剤の標的は、AMPKの上流であってもよく、AMPK自体またはAMPKの下流であってもよい。幾つかの場合において、試験薬剤の作用機序は未知である場合がある。1つの例示的な実施形態において、同じ個体由来の血液の個別のアリコートは、AMPK活性化を調節することが知られている試験薬剤の2つ以上の量と接触される。接触された血液は、上記の方法を用いてアッセイすることができ、試験薬剤の有効量が判定され得る。別の例示的な実施形態において、同じ個体由来の血液の個別のアリコートは、aAMPK活性化を調節することが知られていない試験薬剤、およびb試験薬剤を含有しない対照溶液と接触させる。接触させた血液は、上記の方法を用いてアッセイすることができ、AMPK活性化に対する化合物の影響が判定される。これらの実施形態において、試験試料および対照試料が異なる程度は、例えば、試験試料から得られた結果の幾何平均を、参照試料から得られた結果の幾何平均と比較して判定することができる。幾何平均間のより大きな差は、薬剤がAMPK活性化に対しより大きな影響を有することを示している。例えば、図3に図示の通り、化合物1は、顆粒球よりリンパ球においてAMPK活性化に対するより大きな影響を有する。化合物と接触させなかった試料の幾何平均蛍光に比べて、AMPK活性化を調節する化合物は、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも20、または少なくとも50、幾何平均蛍光を変える可能性がある。特定の実施形態において、化合物は、幾何平均蛍光における少なくとも10、少なくとも20、少なくとも50、少なくとも70、または少なくとも80の減少をもたらす可能性がある。他の実施形態において、化合物は、幾何平均蛍光における少なくとも10、少なくとも20、少なくとも50、少なくとも70、少なくとも100、または少なくとも200、または少なくとも500以上の増加をもたらす可能性がある。上述の通り、試験薬剤はインビボで投与することができ、この場合、接触させるステップは、試験薬剤を被験者に投与するステップと、次いで、フローサイトメトリーによる分析の前の一定期間例えば、5分から1時間、1時間から12時間、12時間から24時間、または24時間から1週間以上後に被験者から血液を採取するステップとを含み得る。エクスビボでの適用において、接触させるステップは、被験者から血液を採取するステップと、次いで、フローサイトメトリーによる分析の前の一定期間例えば、5分から1時間、1時間から12時間、12時間から24時間、または24時間から1週間以上、採取された血液と試験薬剤を接触させるステップとを含み得る。1つのインビボでの実施形態において、ある量のAMPK調節因子を被験者に投与し得、一定期間後に、血液を被験者から採取し得、上記の方法を用いてアッセイし得る。アッセイの結果に基づき、AMPK調節因子の第2の量を被験者に投与し得、一定期間後に、血液が被験者から採取し得、上記の方法を用いてアッセイし得る。これらのステップは、所望の効果例えば、AMPK活性化の所望の安定なレベルをもたらすAMPK調節因子の用量が得られるまで反復することができる。この方法は、特定の被験者に対するAMPK調節因子の投与量を最適化するのに使用することができる。大まかに言えばアッセイで使用される血液は、肉食目例えば、イヌおよびネコ、ネズミ目例えば、マウス、モルモット、およびラット、およびサル目例えば、ヒト、チンパンジー、およびサルを含む任意の哺乳動物被験者から得ることができる。幾つかの実施形態において、被験者はヒトであってもよい。被験者は、健康であってもよく、あるいは幾つかの場合において癌、炎症性疾患、または肥満もしくは糖尿病などの代謝疾患を有してもよい。特定の実施形態において、被験者は、ストレス、過体重、座りがちな生活様式、加齢、冠動脈心疾患、慢性心不全、リポジストロフィー、統合失調症、末梢動脈疾患、神経変性疾患、筋萎縮/筋力低下/筋疾患、腎臓疾患、慢性閉塞性肺疾患、加齢黄斑変性症、またはリウマチ疾患などの代謝症候群に対する1つまたは複数のリスク要因を有し得る。例えば、被験者は、空腹時高血糖例えば、2型糖尿病またはインスリン抵抗性に起因した、高血圧、中心性肥満、HDLコレステロールの低下および/またはトリグリセリドの上昇を有し得る。幾つかの実施形態において、試験薬剤は、AMPK活性化に影響を与えることが知られている場合がある。このような薬剤は公知であり、メトホルミン、シロスタゾール、5-アミノイミダゾール-4-カルボキサミドリボヌクレオシドAICAR、2-デオキシグルコース、トログリタゾンtroglitzone、ロシグリタゾン、レスベラトール、およびピオグリタゾンなどのチアゾリジンジオン、ならびにPCT公開WO08/083124、WO09/065131、WO09/076631、WO09/132136、およびWO10/088392、米国特許出願公開US20100009992、US20090253764、US20090105293、US20090094709、US20080221088、US20070244202、US20070054965、US20070015665、US20060287356、US20060134240、US20050038068および米国特許第7,119,205号に記載されているさまざまな他の化合物を含み、この開示は、これらの化合物の一般的開示および特定の開示のため参照により組み込まれる。他の実施形態において、AMPK活性化に対する試験薬剤の効果は未知である場合がある。このような薬剤は、任意の化学的クラスからであってもよく、ある場合には合成、半合成、または自然発生の無機または有機分子であってもよい。試験薬剤は、合成または天然化合物の大きなライブラリーにおいて見出されるものが含まれる。例えば、合成化合物ライブラリーは、MaybridgeChemicalCo.Trevillet、コーンウォール、UK、ComGenexサウスサンフランシスコ、CA、およびMicroSourceニューミルフォード、CTから市販されている。あるいは、細菌、真菌、植物および動物抽出物の形態での天然化合物のライブラリーは、PanLabsボセル、WAから利用可能であり、または容易に生成可能である。試験薬剤は、50を超え、約2,500Da未満である分子量を有する小さな有機または無機化合物であってもよい。試験薬剤は、タンパク質との構造的相互作用、特に水素結合に必要な官能基を含んでもよく、少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシル、またはカルボキシル基を含んでもよく、官能化学基の少なくとも2つを含有してもよい。候補薬剤は、上述の官能基の1つまたは複数と置換された環状炭素もしくは複素環構造および/または芳香族もしくは多環芳香族構造を含んでもよい。候補薬剤はまた、ペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造類似体またはこの組み合わせを含む生体分子の中にも見出される。試験薬剤は、合成または天然化合物のライブラリーを含む多様な源から得ることができる。例えば、多くの手段が、ランダム化オリゴペプチドの発現を含む、多様な有機化合物および生体分子のランダムおよび指向性合成に利用可能である。あるいは、細菌、真菌、植物および動物抽出物の形態での天然化合物のライブラリーが利用可能であり、または容易に生成される。さらに、天然のまたは合成的に生成されたライブラリーおよび化合物は、従来の化学的、物理的および生化学的手段を通じて容易に修飾され、およびコンビナトリアルライブラリーを生成するのに使用することができる。公知の薬理学的薬剤は、構造類似体を生成するために、アシル化、アルキル化、エステル化、アミド化等などの指向性化学的修飾またはランダム化学的修飾に供することができる。新たな潜在的治療剤も、合理的な薬物設計またはコンピュータモデリングなどの方法を用いて作製することができる。スクリーニングは、公知の薬理学的に活性な化合物およびこの化学的類似体、または合理的な薬物設計を通じて作製されるものなど未知の特性を有する新たな薬剤を対象にすることができる。被験者は、候補薬剤と接触させてもよく、例えば、薬剤を、経口例えば、強制経口投与、静脈内、筋肉内、鼻内、皮下、胃内等を含むがこれらに限定されない任意の許容可能な投与経路、例えば任意の腸内または非経口経路により、動物に投与する。単回投与を投与する、または一定期間にわたって複数回投与を投与する。本明細書に提示されたスクリーニング方法により同定された薬剤を含む、医薬製剤を含む製剤が提供される。製剤は、薬剤の有効量を含む。有効量は、所望の結果をもたらすのに十分な投与量を意味する。使用される投与量は、達成されるべき臨床目標に応じて変わるであろうが、適切な投与量範囲は、所望の結果をもたらし、単回投与で投与することができる、約1μg~約1,000μgまたは約1μg~約10,000μgまでの薬剤を提供するものである。あるいは、所望の結果をもたらす薬剤の標的投与量は、薬剤の投与後最初の24~48時間以内に採取された宿主血液の試料中、約0.1~1000μΜ、約0.5~500μΜ、約1~100μΜ、または約5~50μΜの範囲にあると見なされ得る。当業者は、用量レベルが、特定の化合物、症状の重症度および副作用に対する被験者の感受性に応じて変わり得ることを容易に理解するであろう。任意の化合物の好ましい投与量は、さまざまな手段により当業者により容易に判断することができる。特定の実施形態において、主題の方法は、グルコースまたはコレステロール試験と類似の方法で被験者の代謝的健康の読み取り情報を提供するのに使用することができる。主題の方法は単独で、または他の臨床的技法例えば、理学的検査または別の血液検査と併用して行われてもよい。例えば、被験者アッセイから得られた結果は、他の情報、例えば、血糖レベル、体重、または個体の代謝的健康を示す他のタンパク質性血液マーカーに関する情報と組み合わせることができる。1つの例示的な実施形態において、方法は、細胞の標識の前に、哺乳動物に生活様式の変化例えば、食事または運動量の変化を経験させるステップと、この後に分析される哺乳動物由来の血液試料を得るステップとを含んでもよい。評価は、血液細胞の参照試料から得られた結果と比較することができ、これにより哺乳動物のAMPK活性化に対する生活様式の変化の影響を判定する。1つの実施形態において、試料は、最初の場所、例えば、病院または診療所などの臨床現場で患者から回収されてもよく、試料は、第2の場所、例えば、試料が処理され、および報告書を作成するために上記方法が実施される試験所に送られてもよい。本明細書に記載された報告書は、試験結果試験から得られた幾何平均、および例えば、正常と見なされる幾何平均の範囲を含み得るを提供する報告要素を含む電子または有形文書である。作成されると、報告書は別の場所最初の場所と同じ場所であり得るに送られ得、医療専門家例えば、臨床医、検査技師、または腫瘍専門医、外科医、病理医などの医師により臨床診断の一環として解釈され得る。以下の例は、本発明をどのように行いおよび使用するかの完全な開示および記載を当業者に提供するために提示されるものであり、発明者らが自らの発明と見なすものの範囲を限定するものではない。使用される数例えば量、温度等に関して正確さを確保するための努力がなされたが、いくらかの実験誤差および偏差は考慮されるべきである。別途指示されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、および圧力は大気圧または大気圧近傍である。3つの異なるAMPK活性化因子が下記の例において使用された。化合物1はPCT公開WO10/088392に記載され、化合物2はPCT公開WO09/065131に記載されている。実施例1MEFまたはC2C12細胞をDMSOまたは化合物2で処理し、CellSignaling抗pAMPK抗体を用いたウェスタンブロッティングにより調べた。抗体はpAMPKのみを認識し、他のバンドは観察されない。同じ抗体をこの後の実験におけるFACSに使用した。HepG2ヒト肝臓癌細胞をトリプシン処理し、1ml当たり2×106細胞で完全培地に再懸濁し、ディープウェルの丸底96ウェルプレートに播種した1ウェル当たり100μl。化合物を1μlのDMSO中で細胞懸濁液に添加し、混合し、37°Cで1時間インキュベートした。インキュベーション後、900μlのlyse-fix溶液BDを添加し、プレートを37°Cでさらに10分間インキュベートし、5分間回転させ、上清を除去した。細胞ペレットを250μlの氷冷メタノールに再懸濁し、4°Cで30分間インキュベートした。標準の96ウェル丸底プレートに移した後、細胞を5分間スピンダウンさせ、2のFCSを含有する250μlのPBSPBS2中で洗浄し、1:100希釈のpACC抗体Milliporeを含有する100μlのPBS2に再懸濁した。懸濁液を、振とう機で一晩、室温でインキュベートした。翌朝、細胞をPBS2で1回洗浄し、室温で1時間、1:200希釈で、アレクサ488にコンジュゲートした二次ヤギ抗ウサギ抗体と共にインキュベートした。1回の洗浄後、細胞をBDFACS選別装置で選別した。定量はFlowjoソフトウェアを用いて行った。生細胞ゲートに対するアレクサ488シグナルの幾何平均を用いて結果をプロットし、matlabにおいてEC50を判定した。結果を図2に示す。FACSにより得られたEC50は、同じエピトープに対するin-cellウェスタンのEC50と強く相関し、FACSベースのアプローチの正当性を立証している。実施例2ヒト全血を、丸底プレートに1ウェル当たり100μlで等分し、1μlの1uM化合物1/DMSO溶液またはDMSO単独を添加し、混合し、37°Cで1時間インキュベートし、次いで900μlのlyse-fix溶液BDを添加した。手順の残りは、1:100希釈のpAMPKウサギ抗体CellSignalingを一次としてpACCの代わりに使用をした以外は、上述のHepG2細胞に関する記載の通りに行った。リンパ球および顆粒球を示されているようにゲートした。結果を図3に示す。4~7倍大きいシグナルウィンドウは、ロバストな血液ベースのアッセイの作製を可能にする。実施例3ヒト全血およびマウス全血を、丸底プレートに1ウェル当たり100μlで等分し、1μlの1uM化合物1DMSO溶液またはDMSO単独を添加し、混合し、37°Cで1時間インキュベートし、次いで900μlのlyse-fix溶液BDを添加した。手順の残りは、1:100希釈のpAMPKウサギ抗体CellSignalingを一次としてpACCの代わりに使用をした以外は、上述のHepG2細胞に関する記載の通りに行った。結果を図4に示す。抗体は、ヒトおよびげっ歯類血液を用いて両方とも機能する。実施例4pAMPKについて染色した、ゲートされたヒトまたはマウスリンパ球および顆粒球に関するFL-1チャネルヒストグラムを比較した。両方の種においてリンパ球は、顆粒球より良好なウィンドウを一貫して示した。IL-2の存在下で増殖された精製T細胞は、刺激の極めて狭いウィンドウのため、全血の代わりとしては不足であることを証明した。この結果、全ての追跡実験はWBリンパ球を用いてEC50を生成した。実施例5インビトロで増殖されたヒトT細胞ならびにヒトおよびマウス血液細胞における、化合物2によるAMPKリン酸化の刺激に関するEC50判定。結果を図5に示す。精製T細胞のウィンドウは、恐らく細胞ストレスにより誘導されたAMPKリン酸化の高いバックグラウンドレベルのため極めて狭い。マウス血液のEC50は、ヒトのEC50より著しく平均で約10倍高い。ヒトおよびマウスEC50は両方とも、HepG2の対応するEC50より著しく高い最大数百倍。実施例6マウス血液におけるAMPKリン酸化に対する飢餓の影響。C57B1/6Jオスマウスは、採血の前に14時間絶食させるか、または普通に給餌した。化合物2および化合物1によるAMPK刺激は、50μlで1時間、エクスビボで行った。染色手順は、一次および二次抗体の両方に1:500希釈を使用した以外は、HepG2に関してと同じであった。絶食させた動物におけるAMPKリン酸化の最大レベルは、給餌した動物と比べた場合、一貫してほぼ2倍高かったが、バックグラウンドレベルは元の状態のままであった。実施例7マウス血液におけるAMPKによるACCリン酸化に対する飢餓の影響。AMPKリン酸化に関する全ての観察は、同様にpACC染色に関連する。結果を図6に示す。両方のタンパク質のEC50は、同じ化合物を使用する場合、予想通り同一である。実施例8抗pAMPKウサギモノクローナルおよびポリクローナル抗体を用いた染色は、高度に特異的であり、ドナー依存性である。2名のヒトドナー由来の全血試料を用いて、AMPKリン酸化を誘導する化合物210μMの非存在下青いプロフィールおよび存在下赤いプロフィールでpAMPKを染色した。抗体は両方とも、化合物2処理をした際のAMPKリン酸化の類似の増加をロバストに検出し、染色選択性を裏付けた。実施例9リンパ球の染色に2つの異なる抗体を用いた場合、2名の異なるドナー由来のヒト全血における化合物2のEC50は同一であった。結果を図7に示す。モノクローナルウサギ抗体を用いた場合、ウィンドウは著しく良好であった。実施例10全血中の化合物をエクスビボで滴定した後、pAMPに関して血液細胞を染色して得られた曲線は、顆粒球ゲートよりリンパ球ゲートを用いた場合に再現性がより高いが、両方の方法により得られたEC50は、抗体、細胞型またはドナーにかかわりなく本質的に同じである。実施例11pAMPKアッセイの一貫性および安定性。同じドナーの血液を用いて異なる週に得られた化合物1および化合物2の滴定曲線およびEC50。最終EC50は互いに密接に一致する。図8A~8Cは、2つのAMPK活性化因子を用いたpAMPKおよびpACC刺激には、ドナーによって低い変動性があることを示している。実施例12WBアッセイでの得られたEC50に対する、化合物とのインキュベーション時間の影響。単一のドナー由来のヒト全血を、37°Cで一定期間、さまざまな量の化合物1により処理した。血液を標準的方法により処理して、FACSによりAMPKリン酸化を検出した。EC50はmatlabにより判定した。結果を図9に示す。リンパ球に対する影響はほとんど観察されなかった右の2つのパネル。EC50の著しい変化をもたらさないにもかかわらず左の2つのパネル、顆粒球は、検出されたpAMPKのベースラインレベルにおける著しいおよび着実な上昇のため、インキュベーション時間に極めて感受性である。故に、インキュベーション時間が長いほど、アッセイのウィンドウおよび全般的ロバスト性を予想外に減少させる。両方の細胞型において、化合物2は、AMPK活性化の極めて速い動態を示す-5分間隔で、化合物の飽和濃度で該キナーゼの完全な刺激を見ることができる。最大活性化レベルは同じままであり、非刺激レベルはわずかに上昇する。実施例13図10は、HepG2細胞においてpACCin-cell-westernICWにより得られたEC50X軸と、ヒト全血においてpAMPKFACSにより得られたEC50Y軸との間の強い線形相関を示す。両方の軸に対数目盛を用いた。恐らく試験化合物の、高いタンパク質結合および赤血球への高レベルの分布高VSSの組み合わせのため、化合物の大多数が、HepG2細胞と比べて血液における有効性の著しい喪失最大100倍を示す。実施例14図11は、試験化合物に関するヒト全血におけるpACCEC50とpAMPKFACSEC50Y軸との間の極めて良好な線形相関を示している。ACCは、AMPKの下流の標的であり、AMPKは、ACC上の阻害性リン酸化部位を標的にする唯一のキナーゼである。インビボでの血液バイオマーカーとしてのpAMPK。図12は、インビボ試験でのAMPK活性化に対する化合物2の影響の概略を示している。図13は、化合物2の単回経口投与後のマウス血液におけるpAMPK染色の1次元FACSプロットを示している。細胞のpAMPK陽性集団の明らかな増加は、化合物2のより高い用量で観察される。実施例15インビボでの血液バイオマーカーとしてのpAMPK。結果を図14に示す。上、5および20mg/kgで化合物2を単回投与により、または示されているようにビヒクル対照により処理したマウスの血液由来リンパ球におけるpAMPKシグナルの幾何平均。処理前に採取した血液試料からのpAMPKレベルの測定結果を青で示し、処理1時間後に採取した対応する測定結果を赤で示す。下、同じ動物群に関する、処理前1時間でのシグナル幾何平均対処理前0.5時間のシグナル幾何平均の比。シグナルの明らかな用量依存的増加が、化合物2で処理した動物由来の血液試料に関して観察される。実施例16図15は、FACSベースのpAMPKアッセイが、血液以外の組織に対する化合物の影響を検出するのに使用できることを示している。化合物2上またはR043下で処理した動物由来の脾臓を、単細胞懸濁液にホモジナイズし、得られた試料を血液と同じ方法で処理し、pAMPKについて染色した。上、ビヒクル処理右または化合物2処理左した動物由来の試料の幾何平均ビヒクル対照と比較した倍。非刺激、いずれの追加処理もせずに処理した試料。刺激、懸濁液中の細胞に関する最大AMPK刺激レベルを判定するための処理の前に、37°Cで5分間、3.2uM化合物1で処理した試料。下、経口投与後、示された用量および時点でビヒクルまたは化合物3で処理した動物由来の脾臓試料のpAMPK幾何平均0.5時間時点でのビヒクル対照と比較した倍結論:同じ方法は、脾臓および肝臓などの、単細胞懸濁液処理に修正可能な固体組織におけるpAMPKレベルを査定するのに使用することができる。実施例17図16Aおよび16Bは、pAMPKの最大刺激レベルは、給餌し肥満したマウスと比べて絶食させ痩せたマウスで著しく高いが、非刺激レベルは変わらないままであることを示している。図15Aは、いずれの試験化合物のEC50も、満腹度に依存しなかったことを示している。AMPKおよびACCリン酸化の両方のベースラインレベルは両群で変わらないままであったが、両方についての最大刺激レベルは絶食群で著しく高かった。図15Bの上のパネルは、化合物1によるエクスビボ刺激の前後の肥満したマウスおよび痩せたマウスの血液におけるpAMPKレベルを示している。図15Bの下のパネルは、R283によるエクスビボ刺激の前後の肥満したマウスおよび痩せたマウスの脾臓細胞におけるpAMPKレベルを示している。図17Aは実験計画を示し、図17Bは、OGTTとPK/PDとの結果の間に妥当な相関があることを示している。本明細書に引用された全ての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が、参照により組み込まれることを具体的および個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。いかなる刊行物の引用も、出願日前のこの開示のためであり、先行発明を理由として、本発明がこのような刊行物に先行する権利を有さないことの承認として解釈されるべきではない。本発明は、この特定の実施形態を参照して記載されてきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、さまざまな変更が行われ得ること、および同等物が代用され得ることが当業者により理解されるべきである。さらに、特定の状況、材料、物質の組成、工程、工程ステップまたはステップを本発明の目的、趣旨および範囲に適合させるために、多くの改変が行われ得る。全てのこのような改変は、本明細書に添付された特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。"