"認知の迅速な改善が達成されるような、有効用量の12A11免疫学的試薬を被験体に投与することを含んでなる、被験体における認知の迅速な改善を遂げる方法。被験体がAβ関連疾患若しくは障害を有するか若しくはその危険性がある、請求項1に記載の方法。被験体がアミロイド形成疾患若しくは障害を有するか若しくはその危険性がある、請求項1に記載の方法。被験体がアルツハイマー病を有するか若しくはその危険性がある、請求項3に記載の方法。患者がヒトである、請求項1~4のいずれか1つに記載の方法。有効用量が患者体重1kg当り約100μgから100mgまでである、請求項1~5のいずれか1つに記載の方法。有効用量が患者体重1kg当り約300μgから30mgまでである、請求項1~5のいずれか1つに記載の方法。有効用量が患者体重1kg当り約1mgから10mgまでである、請求項1~5のいずれか1つに記載の方法。認知の迅速な改善が、12A11免疫学的試薬の投与後12時間以内に達成される、先行する請求項のいずれか1つに記載の方法。認知の迅速な改善が、免疫学的試薬の投与後24時間以内に達成される、先行する請求項のいずれか1つに記載の方法。認知の迅速な改善が、免疫学的試薬の投与後36時間以内に達成される、先行する請求項のいずれか1つに記載の方法。認知の迅速な改善が、免疫学的試薬の投与後48時間以内に達成される、先行する請求項のいずれか1つに記載の方法。12A11抗体剤が、12A11抗体若しくはその抗原結合フラグメントである、先行する請求項のいずれかに記載の方法。12A11免疫学的試薬が、キメラ12A11抗体若しくはその抗原結合フラグメントである、請求項1~12のいずれか1つに記載の方法。キメラ12A11抗体が、実質的に配列番号2若しくは配列番号4に示されるところの可変領域配列、およびヒト免疫グロブリンからの定常領域配列を含んでなる、請求項14に記載の方法。12A11免疫学的試薬が、ヒト化12A11抗体若しくはその抗原結合フラグメントである、請求項1~12のいずれか1つに記載の方法。ヒト化抗体が、ai配列番号2に示されるマウス12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖;若しくはb配列番号2に示されるところのマウス12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基はi抗原を直接非共有結合する残基;iiCDRに隣接する残基;iiiCDRと相互作用する残基;およびivVL-VH界面に参画する残基よりなる群から選択され;ならびにci配列番号4に示されるマウス12A11免疫グロブリンH鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンH鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるH鎖;若しくはdi配列番号4に示されるところのマウス12A11免疫グロブリンH鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンH鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるH鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11免疫グロブリンH鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基はi抗原を直接非共有結合する残基;iiCDRに隣接する残基;iiiCDRと相互作用する残基;およびivVL-VH界面に参画する残基よりなる群から選択される、を含んでなる、請求項16に記載の方法。ヒト化抗体が、ai配列番号2として示されるマウス12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11L鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基は該12A11免疫グロブリンL鎖可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのL鎖可変領域のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基であり;ならびにbi配列番号4として示されるマウス12A11免疫グロブリンH鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンH鎖からの可変フレームワーク領域を含んでなるH鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11H鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基は該12A11免疫グロブリンH鎖可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのH鎖可変領域のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基である、を含んでなる、請求項16に記載の方法。ヒト化抗体が、ai配列番号2として示されるマウス12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11L鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基は、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接の残基、CDRと相互作用することが可能な残基、CDRに隣接した残基、CDR残基の6Å以内の残基、正準残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、まれな残基、および構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択され;ならびにbi配列番号4として示されるマウス12A11免疫グロブリンH鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンH鎖からの可変フレームワーク領域を含んでなるH鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11H鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基は、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接の残基、CDRと相互作用することが可能な残基、CDRに隣接した残基、CDR残基の6Å以内の残基、正準残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、まれな残基、および構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択される、を含んでなる、請求項16に記載の方法。ヒト化抗体が、ai配列番号2として示されるマウス12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であって、該領域は、Kabatにより番号付けられるところのL鎖の位置2、4、36、38、40、44、46、47、48、49、64、68、69、71、87および98よりなる群から選択される最低1位置で置換され;ならびにbi配列番号4として示されるマウス12A11免疫グロブリンH鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンH鎖からの可変フレームワーク領域を含んでなるH鎖であって、該フレームワーク領域は、Kabatにより番号付けられるところのH鎖の位置2、24、26、27、28、29、37、39、45、47、48、67、71、73、78、91、93、94および103よりなる群から選択される最低1位置で置換される、を含んでなる、請求項16に記載の方法。ヒト化抗体が、a配列番号2と呼称されるマウス12A11免疫グロブリンL鎖可変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する3個の相補性決定領域CDR1、CDR2およびCDR3、ならびにヒトL鎖可変領域フレームワーク配列からの可変領域フレームワークを含んでなるヒト化L鎖であるが、但し、正準残基、バーニア残基、充填残基およびまれな残基よりなる群から選択される最低1個のフレームワーク残基は、12A11免疫グロブリンL鎖可変領域フレームワークの同等な位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有され;ならびにb配列番号4と呼称される12A11免疫グロブリンH鎖可変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する3個の相補性決定領域CDR1、CDR2およびCDR3、ならびにヒトH鎖可変領域フレームワーク配列からの可変領域フレームワークを含んでなるヒト化H鎖であるが、但し、正準残基、バーニア残基、充填残基およびまれな残基よりなる第二の群から選択される最低1個のフレームワーク残基は、12A11免疫グロブリンH鎖可変領域フレームワークの同等な位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有される、を含んでなり;該ヒト化12A11抗体は最低10-7Mの結合親和性でβアミロイドペプチドAβに特異的に結合し、該ヒト化12A11抗体は、配列番号2と呼称される可変ドメインをもつL鎖および配列番号4と呼称される可変ドメインをもつH鎖を有する、請求項16に記載の方法。ヒトL鎖可変領域フレームワークがκL鎖可変領域からである、請求項21に記載の方法。ヒトH鎖可変領域フレームワークがIgG1H鎖可変領域からである、請求項21に記載の方法。L鎖可変領域フレームワークが、12A11抗体のL鎖配列との最低70の配列同一性を有するヒト免疫グロブリンL鎖からである、請求項21に記載の方法。H鎖可変領域フレームワークが、12A11免疫グロブリンのH鎖配列との最低70の配列同一性を有するヒト免疫グロブリンH鎖からである、請求項21に記載の方法。ヒト化L鎖が、12A11H鎖の対応する相補性決定領域に同一である相補性決定領域を含んでなり、かつ、ヒト化H鎖が、12A11H鎖の対応する相補性決定領域に同一である相補性決定領域を含んでなる、請求項21に記載の方法。ヒト化抗体が、配列番号2として示される12A11可変L鎖配列の相補性決定領域CDR1、CDR2およびCDR3を含んでなる、請求項16に記載の方法。ヒト化抗体が、配列番号4として示される12A11可変H鎖配列の相補性決定領域CDR1、CDR2およびCDR3を含んでなる、請求項16に記載の方法。ヒト化抗体が、12A11抗体からの相補性決定領域CDRに対応するCDRを含んでなる可変領域を含んでなり、かつ、前記ヒト化12A11抗体がβアミロイドペプチドAβに特異的に結合する、請求項16に記載の方法。ヒト化抗体が、配列番号7として示される可変L鎖アミノ酸配列を含み、ならびに配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号13、配列番号14、配列番号15および配列番号36よりなる群から選択される可変H鎖アミノ酸配列を有する、請求項16に記載の方法。認知の長期改善が達成されるような、有効用量の12A11免疫学的試薬を被験体に投与することを含んでなる、被験体における認知の長期改善を遂げる方法。被験体における認知の迅速な改善を遂げるための医薬品の製造のための12A11免疫学的試薬の使用。被験体における認知の長期改善を遂げるための医薬品の製造のための12A11抗体剤の使用。i配列番号4として示されるマウス12A11免疫グロブリンH鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンH鎖からの可変フレームワーク領域を含んでなるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11H鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基は、Kabatにより番号付けられるところのH鎖の位置24、29、37および48よりなる群から選択される位置で置換される、ヒト化免疫グロブリンH鎖。請求項34に記載のH鎖を含んでなるヒト化抗体、若しくは前記抗体の抗原結合フラグメント。ai配列番号2に示される12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖;ならびにbi配列番号2に示されるところの2A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基は12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基はi抗原を直接非共有結合する残基;iiCDRに隣接する残基;iiiCDRと相互作用する残基;およびivVL-VH界面に参画する残基よりなる群から選択され;ならびにci配列番号2として示される12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基はマウス12A11L可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基は12A11免疫グロブリンL鎖可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのL鎖可変領域のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基であり;di配列番号2として示される12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖配列からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であるが、但し、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11L鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で置換され、該フレームワーク残基は、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接の残基、CDRと相互作用することが可能な残基、CDRに隣接する残基、CDR残基の6Å以内の残基、正準残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、まれな残基、および構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基よりなる群から選択され;ならびにei配列番号2として示される12A11免疫グロブリンL鎖可変領域配列からの可変領域相補性決定領域CDR、およびiiヒトアクセプター免疫グロブリンL鎖からの可変フレームワーク領域を含んでなるL鎖であって、該領域はKabatにより番号付けられるところのL鎖の位置2、4、36、38、40、44、46、47、48、49、64、68、69、71、87および98よりなる群から選択される最低1位置で置換され;ならびにf配列番号2と呼称される12A11免疫グロブリンL鎖可変ドメインの対応する相補性決定領域からのアミノ酸配列を有する3個の相補性決定領域CD1、CDR2およびCDR3、ならびにヒトL鎖可変領域フレームワーク配列からの可変領域フレームワークを含んでなるL鎖であるが、但し、正準残基、バーニア残基、充填残基およびまれな残基よりなる群から選択される最低1個のフレームワーク残基が12A11免疫グロブリンL鎖可変領域フレームワークの同等な位置に存在する同一のアミノ酸残基により占有される、よりなる群から選択されるL鎖ならびに請求項34に記載のH鎖を含んでなるヒト化抗体、若しくは前記抗体の抗原結合フラグメント。配列番号7として示される可変L鎖アミノ酸配列、および配列番号36として示される可変H鎖アミノ酸配列を含んでなるヒト化抗体、若しくは前記抗体の抗原結合フラグメント。ヒトL鎖可変領域フレームワークがκL鎖可変領域からである、請求項35~37のいずれか1つに記載のヒト化抗体若しくは抗原結合フラグメント。ヒトH鎖可変領域フレームワークがIgG1H鎖可変領域からである、請求項35~37のいずれか1つに記載のヒト化抗体若しくは抗原結合フラグメント。最低10-7Mの結合親和性でβアミロイドペプチドAβに特異的に結合する、請求項35~37のいずれか1つに記載のヒト化抗体若しくは抗原結合フラグメント。最低10-8Mの結合親和性でβアミロイドペプチドAβに特異的に結合する、請求項35~37のいずれか1つに記載のヒト化抗体若しくは抗原結合フラグメント。最低10-9Mの結合親和性でβアミロイドペプチドAβに特異的に結合する、請求項35~37のいずれか1つに記載のヒト化抗体若しくは抗原結合フラグメント。ヒトIgG1免疫グロブリンからの定常領域配列を含んでなる、請求項35~37のいずれか1つに記載のヒト化抗体。ヒトIgG4免疫グロブリンからの定常領域配列を含んでなる、請求項35~37のいずれかに記載のヒト化抗体。配列番号36のアミノ酸1-120を含んでなる単離されたポリペプチド。請求項42に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸分子。配列番号37の残基1-417を含んでなる単離された核酸分子。請求項46若しくは47に記載の核酸分子を含んでなるベクター。請求項46若しくは47の核酸分子を含んでなる宿主細胞。請求項45に記載のポリペプチドを発現するトランスジェニック動物。ポリペプチドが前記動物の乳中で発現される、請求項50に記載のトランスジェニック動物。抗体若しくはフラグメントが産生されるような条件下で請求項49に記載の宿主細胞を培養すること、および該宿主細胞若しくは培養物から前記抗体を単離することを含んでなる、抗体若しくはそのフラグメントの製造方法。[発明の要約]本発明は、Aβ関連疾患若しくは障害および/またはアミロイド形成疾患若しくは障害例えばADの予防および処置のための免疫学的試薬、とりわけ治療的抗体試薬を特徴とする。本発明は、少なくとも部分的に、Aβペプチドに特異的に結合しかつアミロイド形成障害例えばADと関連する斑負荷量の減少で有効であるモノクローナル抗体12A11の同定および特徴付けに基づく。12A11は、可溶性オリゴマーAβに対する優先的結合もまた表し、かつ、ADの動物モデルで認知の改善に有効である。本抗体の構造および機能分析は、予防的および/若しくは治療的使用のための多様なヒト化抗体の設計に至る。とりわけ、本発明はこの抗体の可変領域のヒト化を特徴とし、そして、従って、特徴とする抗体のヒト化免疫グロブリンすなわち抗体鎖、無傷のヒト化免疫グロブリンすなわち抗体、および機能的免疫グロブリンすなわち抗体フラグメント、とりわけ抗原結合フラグメントを提供する。本発明は、AD若しくは他のアミロイド形成疾患を予防若しくは処置するための免疫学的試薬および改良された方法を特徴とする。本発明は、少なくとも部分的に、βアミロイドタンパク質Aβの結合例えば可溶性および/若しくは凝集型Aβの結合、例えば凝集型Aβの食作用の媒介、斑負荷量の低減、例えば被験体における神経炎性ジストロフィーの低下および/若しくは認知の改善で有効なモノクローナル免疫グロブリン12A11の特徴付けに基づく。本発明は、12A11免疫グロブリンの可変LおよびH鎖の一次および二次構造の決定および構造の特徴付け、ならびに活性および免疫原性に重要な残基の同定にさらに基づく。本明細書に記述される12A11モノクローナル免疫グロブリンの可変Lおよび/若しくは可変H鎖を包含する免疫グロブリンが特徴とされる。ヒト化可変Lおよび/若しくはヒト化可変H鎖を包含する好ましい免疫グロブリン、例えば治療的免疫グロブリンが特徴とされる。好ましい可変Lおよび/若しくは可変H鎖は、12A11免疫グロブリン例えばドナー免疫グロブリンからの相補性決定領域CDRおよびヒトアクセプター免疫グロブリンから若しくは実質的にそれからの可変フレームワーク領域を包含する。実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンからという句は、大多数の若しくは重要なフレームワーク残基がヒトアクセプター配列からであるがしかしながら該ヒト化免疫グロブリンの活性を改善する例えばドナー免疫グロブリンの活性をそれがより緊密に模倣するような活性を変えるよう選択されたか若しくは該ヒト化免疫グロブリンの免疫原性を低下させるよう選択された残基でのある位置の残基の置換を見込むことを意味している。一態様において、本発明は、12A11可変領域相補性決定領域CDRを包含しすなわち、配列番号2として示されるL鎖可変領域配列からの1、2若しくは3個のCDRを包含するか、または配列番号4として示されるH鎖可変領域配列からの1、2若しくは3個のCDRを包含し、かつ、フレームワーク残基の最低1残基が対応するマウス残基に場合によっては戻し突然変異されているヒトアクセプター免疫グロブリンL若しくはH鎖配列からの可変フレームワーク領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンL若しくはH鎖を特徴とし、前記戻し突然変異はAβ結合を指図する該鎖の能力に実質的に影響を及ぼさない。一態様において、本発明は、12A11可変領域相補性決定領域CDRを包含しすなわち、配列番号2として示されるL鎖可変領域配列からの1、2若しくは3個のCDRを包含するか、または配列番号4として示されるH鎖可変領域配列からの1、2若しくは3個のCDRを包含し、かつ、フレームワーク残基の最低1残基が対応するマウス残基に場合によっては戻し突然変異されている実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンL若しくはH鎖配列からの可変フレームワーク領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンL若しくはH鎖を特徴とし、前記戻し突然変異はAβ結合を指図する該鎖の能力に実質的に影響を及ぼさない。別の態様において、本発明は、12A11可変領域相補性決定領域CDRを包含し例えば、配列番号2として示されるL鎖可変領域配列からの1、2若しくは3個のCDRを包含しかつ/または配列番号4として示されるH鎖可変領域配列からの1、2若しくは3個のCDRを包含し、かつ、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11L若しくはH鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で場合によっては置換されている実質的にヒトアクセプター免疫グロブリンL若しくはH鎖配列からの可変フレームワーク領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンL若しくはH鎖を特徴とし、該フレームワーク残基はa抗原を直接非共有結合する残基;bCDRに隣接する残基;cCDRと相互作用する残基例えば相同な既知の免疫グロブリン鎖の解明された構造で該L若しくはH鎖をモデル化することにより同定される;およびdVL-VH界面に参画する残基よりなる群から選択される。別の態様において、本発明は、最低1個のフレームワーク残基がマウス12A11L若しくはH鎖可変領域配列からの対応するアミノ酸残基で場合によっては置換されている、12A11可変領域CDRおよびヒトアクセプター免疫グロブリンL若しくはH鎖配列からの可変フレームワーク領域を包含する、ヒト化免疫グロブリンL若しくはH鎖を特徴とし、該フレームワーク残基は、可変領域の三次元モデルの解析により同定されるところのL鎖可変領域のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基、例えば、抗原と相互作用することが可能な残基、抗原結合部位に近接の残基、CDRと相互作用することが可能な残基、CDRに隣接する残基、CDR残基の6Å以内の残基、正準残基、バーニア領域残基、鎖間充填残基、まれな残基、若しくは該構造モデルの表面上のグリコシル化部位残基である。別の態様において、本発明は、上述された置換に加えて、最低1個のまれなヒトフレームワーク残基の置換を特徴とする。例えば、まれな残基はその位置でヒト可変鎖配列に普遍的であるアミノ酸残基で置換し得る。あるいは、まれな残基は相同な生殖系列可変鎖配列からの対応するアミノ酸残基で置換し得る。別の態様において、本発明は、上述されるところのL鎖およびH鎖若しくは前記免疫グロブリンの抗原結合フラグメントを包含するヒト化免疫グロブリンを特徴とする。例示的一態様において、ヒト化免疫グロブリンは、βアミロイドペプチドAβに最低107M-1、108M-1若しくは109M-1の結合親和性で結合する例えば特異的に結合する。別の態様において、該免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントはアイソタイプγ1を有するH鎖を包含する。別の態様において、該免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントは可溶性βアミロイドペプチドAβおよび凝集型Aβのいずれか若しくは双方に結合する例えば特異的に結合する。別の態様において、該免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントは可溶性Aβ例えば可溶性Aβ1-42を捕捉する。別の態様において、該免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントはβアミロイドペプチドAβの食作用を媒介する例えば食作用を誘導する。なお別の態様において、該免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントは被験体の血液脳関門を横断する。なお別の態様において、該免疫グロブリン若しくは抗原結合フラグメントは、被験体中のβアミロイドペプチドAβ負荷量および神経炎性ジストロフィーのいずれか若しくは双方を低下させる。別の態様において、本発明は12A11可変領域例えば配列番号2若しくは配列番号4として示される可変領域配列を包含するキメラ免疫グロブリンを特徴とする。なお別の態様において、該免疫グロブリン若しくはその抗原結合フラグメントはIgG1からの定常領域をさらに包含する。本明細書に記述される免疫グロブリンは、Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害の予防若しくは処置を目的とした治療方法での使用にとりわけ適する。一態様において、本発明は、本明細書に記述されるところのヒト化免疫グロブリンの有効投薬量を患者に投与することを必要とする、アミロイド形成疾患若しくは障害例えばADの予防若しくは処置方法を特徴とする。ある態様において、本発明は、神経変性疾患若しくは障害例えばAβ関連疾患若しくは障害を伴う患者で観察される痴呆および/若しくは認知障害の予防若しくは軽減において有効な治療および/若しくは予防方法を特徴とする。とりわけ、本発明は、疾患若しくは障害の発病の初期段階を妨害しかつ不可逆的な神経損傷および/若しくは痴呆を予防する治療薬の投与を含んでなる、改良された治療および/若しくは予防方法を提供する。本発明の特徴とする局面は、12A11免疫学的試薬若しくは前記試薬を含んでなる製薬学的組成物の投与を伴う、被験体における認知の迅速な改善方法を提供する。好ましい12A11免疫学的試薬は、限定されるものでないが12A11抗体、ヒト化12A11抗体、キメラ12A11抗体、一本鎖12A11抗体、二特異性12A11抗体、12A11抗体フラグメント、12A11抗体鎖、それらのバリアント例えば12A11Fc抗体バリアント若しくはそれらの組合せを挙げることができる。本発明の別の局面は、12A11免疫学的試薬若しくは前記試薬を含んでなる製薬学的組成物の投与を伴う、被験体における認知の長期改善を遂げる方法を特徴とする。例示的態様において、本発明の方法は、痴呆疾患若しくは障害、例えばAβ関連疾患若しくは障害に罹患している被験体におけるAβ、とりわけAβオリゴマーの結合、アミロイド負荷量の低減、および/若しくは認知の迅速な改善で有効である12A11免疫学的試薬の投与を伴う。他の態様において、本発明の方法は、12A11モノクローナル抗体の相補性決定領域CDRを含んでなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド試薬、ベクターおよび適する宿主細胞を包含する、前記ポリペプチドを特徴とする。他の態様において、本発明は、本明細書に記述されるところのヒト化免疫グロブリンおよび製薬学的担体を包含する製薬学的組成物を特徴とする。本明細書に記述される免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメント若しくは鎖を製造するための単離された核酸分子、ベクターおよび宿主細胞、ならびに前記免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメント若しくは免疫グロブリン鎖の製造方法もまた特徴とする。本発明は、それぞれヒト化12A11免疫グロブリンを製造する場合に置換の影響を受けやすい12A11残基の同定方法をさらに特徴とする。例えば、置換の影響を受けやすい可変フレームワーク領域残基の同定方法は、解明された相同な免疫グロブリン構造で12A11可変領域の三次元構造をモデル化すること、および12A11免疫グロブリン可変領域のコンホメーション若しくは機能に影響を及ぼすことが可能な残基について前記モデルを解析することを伴い、その結果置換の影響を受けやすい残基が同定される。本発明は、12A11免疫グロブリン、12A11免疫グロブリン鎖若しくはそれらのドメインの三次元像の作製における、配列番号2若しくは配列番号4として示される可変領域配列またはそれらのいずれかの部分の使用をさらに特徴とする。本発明は、エフェクター分子、例えば補体若しくはエフェクター細胞上の受容体を結合する能力のような変えられたエフェクター機能を有する免疫グロブリンをさらに特徴とする。とりわけ、本発明の免疫グロブリンは、Fc領域の最低1アミノ酸残基が異なる残基若しくは側鎖で置換されている変えられた定常領域例えばFc領域を有する。一態様において、改変された免疫グロブリンはIgGクラスのものであり、免疫グロブリンが例えば未改変の免疫グロブリンに比較して変えられたエフェクター機能を有するようなFc領域中の最低1アミノ酸残基置換を含んでなる。特定の態様において、本発明の免疫グロブリンは、それがより少なく免疫原性であり例えば望ましくないエフェクター細胞活性、溶解若しくは補体結合を惹起しない、向上されたアミロイド消失特性を有し、かつ/または所望の半減期を有するような変えられたエフェクター機能を有する。いくつかの態様において、本発明の免疫グロブリンは、ヒンジ領域の1個若しくはそれ以上のアミノ酸変化例えばEU位置234、235、236および237でを含んでなる。特定の一態様において、本発明の免疫グロブリンは、ヒンジ結合領域の位置234および237すなわちL234AおよびG237Aのアミノ酸変化を包含するヒト化12A11抗体である。さらなる態様において、本発明の免疫グロブリンはペグ化抗体フラグメント、例えばFabおよびFab’を含んでなる。なお他の態様において、本発明の免疫グロブリンはアグリコシル化された定常領域を含んでなる。例示的一態様において、免疫グロブリンは位置297のアスパラギンのアラニンへのアミノ酸置換を包含し、それにより該免疫グロブリンのグリコシル化を予防する。免疫グロブリンのH鎖をコードする遺伝子中の1個若しくはそれ以上のイントロンを欠失することによる免疫グロブリンの発現の増大方法もまた本明細書で特徴とする。加えて、本発明は、本発明の1種若しくはそれ以上の免疫グロブリンを使用する、本明細書に記述されるところの処置方法に関する。[発明の詳細な記述]1定義本発明を記述する前に、下で使用されるべきある用語の定義を示すことがその理解に有用でありうる。本明細書で使用されるところのAβ関連疾患若しくは障害という用語は、Aβペプチドの発生若しくは存在と関連するか若しくはそれらを特徴とする疾患若しくは障害を指す。一態様において、Aβ関連疾患若しくは障害は可溶性Aβの存在と関連するか若しくはそれを特徴とする。別の態様において、Aβ関連疾患若しくは障害は、不溶性Aβの存在と関連するか若しくはそれを特徴とする。別の態様において、Aβ関連疾患若しくは障害は、向神経活性Aβ種NAβの存在と関連するか若しくはそれを特徴とする。別の態様において、Aβ関連疾患若しくは障害はまたアミロイド形成障害でもある。別の態様において、Aβ関連疾患若しくは障害は、Aβ関連の認知障害deficit若しくは障害disorder、例えばAβ関連痴呆障害を特徴とする。例示的Aβ関連疾患若しくは障害は、アルツハイマー病AD、ダウン症候群、脳アミロイド血管症、ある種の血管性痴呆および軽度認知障害MCIを包含する。βアミロイドタンパク質、βアミロイドペプチド、βアミロイド、AβおよびAβペプチドという用語は本明細書で互換性に使用される。Aβペプチド例えばAβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42およびAβ43は、アミロイド前駆体タンパク質APPと命名されたより大きな膜貫通糖タンパク質の39~43アミノ酸の約4kDaの内的フラグメントである。APPの複数のアイソフォーム、例えばAPP695、APP751およびAPP770が存在する。APP内のアミノ酸はAPP770アイソフォームの配列例えばGenBank受託番号P05067を参照されたいに従って割り当てられた番号である。ヒトで存在することが現在既知であるAPPの特定のアイソタイプの例は、正常APPと呼称されるKangら1987Nature325:733-736により記述される695アミノ酸のポリペプチド;Ponteら1988Nature331:525-5271988およびTanziら1988Nature331:528-530により記述される751アミノ酸のポリペプチド;ならびにKitaguchiら1988Nature331:530-532により記述される770アミノ酸のポリペプチドである。invivo若しくはinsituでの多様な分泌酵素によるAPPのタンパク質分解性プロセシングの結果として、Aβは短い形態長さ40アミノ酸および長い形態長さ42~43アミノ酸からの範囲にわたる双方で見出される。短い形態Aβ40はAPPの残基672-711よりなる。長い形態、例えばAβ42若しくはAβ43はそれぞれ残基672-713若しくは672-714よりなる。APPの疎水性ドメインの一部はAβのカルボキシ端で見出され、そしてとりわけ長い形態の場合にAβの凝集する能力の原因でありうる。Aβペプチドは、例えば正常個体およびアミロイド形成障害に罹患している個体双方を包含する、ヒトおよび他の哺乳動物の体液、例えば脳脊髄液中に見出し得るか、若しくはそれから精製し得る。βアミロイドタンパク質、βアミロイドペプチド、βアミロイド、AβおよびAβペプチドという用語は、APPの分泌酵素切断から生じるペプチド、および切断生成物と同一若しくは本質的に同一の配列を有する合成ペプチドを包含する。本発明のAβペプチドは多様な供給源、例えば組織、細胞株または体液例えば血清若しくは脳脊髄液に由来し得る。例えば、Aβは、例えばWalshら、2002、Nature、416、pp535-539に記述されるところのAPP717V→Fで安定にトランスフェクトしたチャイニーズハムスター卵巣CHO細胞のようなAPP発現細胞に由来し得る。Aβ調製物は前述された方法例えばJohnson-Woodら、1997、Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:1550を参照されたいを使用して組織供給源に由来し得る。あるいは、Aβペプチドは当業者に公知である方法を使用して合成し得る。例えば、Fieldsら、SyntheticPeptides:AUser’sGuide、Grant編、W.H.FreemanCo.、ニューヨーク州ニューヨーク、1992、p77を参照されたい。これ故に、ペプチドは、例えばAppliedBiosystemsペプチド合成機型式430A若しくは431で側鎖を保護したアミノ酸を使用するt-Boc若しくはF-mocいずれかの化学により保護したαアミノ基を用いる固相合成の自動化Merrifield技術を使用して合成し得る。より長いペプチド抗原は公知の組換えDNA技術を使用して合成し得る。例えば、ペプチド若しくは融合ペプチドをコードするポリヌクレオチドを合成し得るか若しくは分子的にクローン化し得、そしてトランスフェクションおよび適する宿主細胞による異種発現のため適する発現ベクターに挿入し得る。Aβペプチドはまた、正常遺伝子のAβ領域の突然変異から生じる関連Aβ配列も指す。可溶性Aβ若しくは解離型Aβという用語は、単量体の可溶性ならびにオリゴマーの可溶性のAβポリペプチド例えば可溶性Aβ二量体、三量体などを包含する凝集していないすなわちばらばらのAβポリペプチドを指す。可溶性Aβはinvivoで脳脊髄液および/若しくは血清のような生物学的液体中で見出し得る。可溶性Aβは、例えばAβペプチドを適切な溶媒および/若しくは溶液中で可溶化することによりinvitroでもまた調製し得る。例えば、可溶性Aβは、凍結乾燥したペプチドをアルコール、例えばHFIPに溶解すること、次いで冷水性溶液での希釈により調製し得る。あるいは、可溶性Aβは、凍結乾燥したペプチドを希釈していないDMSOに超音波処理を用いて溶解することにより調製し得る。生じる溶液を遠心分離例えば14,000×g、4°Cで10分していかなる不溶性の微粒子も除去し得る。不溶性Aβ若しくは凝集型Aβという用語は、凝集したAβペプチド、例えば非共有結合により一緒に保持され、かつ、ADを伴う患者の老人斑および脳血管中で見出される線維状の毒性のβ-シートの形態のAβペプチド中に存在し得るAβを指す。Aβ例えばAβ42は、少なくとも部分的に、該ペプチドのC末端の疎水性残基APPの膜貫通ドメインの一部の存在により凝集すると考えられる。本明細書で使用されるところの向神経活性Aβ種という句は、神経細胞の最低1種の活性若しくは物理的特徴を遂げるAβ種例えばAβペプチド若しくはAβペプチドの1形態を指す。向神経活性Aβ種は、例えば、神経細胞の機能、生物学的活性、生存能力、形態学および/若しくは構造を遂げる。神経細胞に対する影響は細胞性であり得る例えば神経細胞の長期の強化LPT若しくは神経細胞の生存能力神経毒性を遂げること。あるいは、該影響はinvivoの神経系に対してであり得る例えば適切な動物試験例えば認知試験で行動の結果を遂げること。本明細書で使用されるところの中和するという用語は、活性若しくは効果を中立にするか、打ち消すか若しくは無効にすることを意味している。本明細書で使用されるところの神経変性疾患という用語は、ニューロンおよび/若しくは神経組織の変性を伴うか若しくはそれを特徴とする障害若しくは疾患、例えばアミロイド形成疾患を広範に指す。アミロイド形成疾患若しくはアミロイド形成障害という用語は、不溶性アミロイド原線維の形成若しくは沈着と関連する若しくはそれにより引き起こされるいかなる疾患も包含する。例示的アミロイド形成疾患は、限定されるものでないが全身性アミロイドーシス、アルツハイマー病AD、脳アミロイド血管症CAA、成人発症型糖尿病、パーキンソン病、ハンチントン病、前頭側頭型痴呆、ならびにプリオン関連の伝染性海綿状脳症ヒトにおけるクールーおよびクロイツフェルトヤコブ病、ならびに、ヒツジおよび畜牛におけるそれぞれスクレイピーおよびBSEを挙げることができる。多様なアミロイド形成疾患が、沈着される原線維のポリペプチド成分の性質により定義若しくは特徴付けられる。例えば、アルツハイマー病を有する被験体若しくは患者において、βアミロイドタンパク質例えば野性型、バリアント若しくは切断型βアミロイドタンパク質がアミロイド沈着物の主ポリペプチド成分である。従って、アルツハイマー病は、例えば被験体若しくは患者の脳中のAβの沈着物を特徴とする疾患若しくはAβの沈着物を伴う疾患の一例である。Aβの沈着物を特徴とする他の疾患は、アミロイド形成性沈着物が、学習および/若しくは記憶と関連する脳の1個若しくはそれ以上の領域、例えば海馬、扁桃体、鉤状回、帯状皮質、前頭葉前皮質、鼻周囲皮質、感覚皮質および側頭葉内側部に見出される、特徴づけられていない疾患を包含し得る。認知という用語は、限定されるものでないが、学習若しくは記憶例えば短期若しくは長期の学習若しくは記憶、知識、覚醒、注意および集中、判断、視覚的認知、抽象的思考、実行機能、言語、視覚-空間visual-spatialすなわち視覚空間visuo-spatial見当識技能、視覚的認知、平衡/敏捷性ならびに感覚運動活動を挙げることができる、被験体により実施される認知に関する精神過程を指す。例示的認知過程は学習および記憶を包含する。認知障害disorder、認知障害deficit若しくは認知障害impairmentという用語は本明細書で互換性に使用され、そして被験体の1種若しくはそれ以上の認知に関する精神過程の欠陥若しくは障害を指す。認知障害は多数の起源、すなわち機能的機序不安、抑うつ、生理学的加齢加齢による記憶障害、脳損傷、精神障害例えば統合失調症、薬物、感染症、毒物若しくは解剖学的病変を有しうる。例示的認知障害は、学習若しくは記憶の欠陥若しくは障害例えば、知的能力、判断、言語、運動技能および/若しくは抽象的思考の短期若しくは長期の学習および/若しくは記憶の喪失におけるを包含する。本明細書で使用されるところのAβ関連認知障害disorderまたは障害deficit若しくは障害impairmentという用語は、Aβペプチドの発生若しくは存在と関連するか若しくはそれを特徴とする認知障害を指す。一態様において、Aβ関連疾患若しくは障害は可溶性Aβの存在を伴うか若しくはそれを特徴とする。別の態様において、Aβ関連疾患若しくは障害は不溶性Aβの存在を伴うか若しくはそれを特徴とする。別の態様において、Aβ関連疾患若しくは障害は向神経活性Aβ種NAβの存在を伴うか若しくはそれを特徴とする。本明細書で使用されるところの痴呆障害という用語は、痴呆すなわち認知能力の全般的劣化若しくは進行性減退または痴呆様症状を特徴とする障害を指す。痴呆障害は、しばしば、脳若しくは中枢神経系の1種若しくはそれ以上の異常な過程例えば神経変性を伴うか若しくはそれにより引き起こされる。痴呆障害は、一般に、軽度から重篤な段階まで進行し、そして日常生活で独立して機能する被験体の能力を妨害する。痴呆は、冒された脳の領域に依存して皮質若しくは皮質下に分類されうる。痴呆障害は、意識の喪失錯乱におけるような若しくは抑うつ、または他の機能的精神障害偽痴呆を特徴とする障害を包含しない。痴呆障害は、アルツハイマー病、血管性痴呆、レヴィー小体痴呆、ヤコブクロイツフェルト病、ピック病、進行性核上性麻痺、前頭葉痴呆、特発性大脳基底核石灰化、ハンチントン病、多発性硬化症、およびパーキンソン病のような不可逆性痴呆、ならびに外傷外傷後脳症、頭蓋内腫瘍原発性若しくは転移性、硬膜下血腫、代謝および内分泌学的状態甲状腺機能低下症および甲状腺機能亢進症、ウィルソン病、尿毒症性脳症、透析脳症症候群、低酸素性および低酸素後痴呆、ならびに慢性の電解質異常、欠乏状態ビタミンB12欠乏症およびペラグラビタミンB6、感染症AIDS、梅毒性髄膜脳炎、辺縁系脳炎、進行性多病巣性白質脳症、真菌感染症、結核、ならびにアルコール、アルミニウム、重金属ヒ素、鉛、水銀、マンガン若しくは処方薬抗コリン作動薬、鎮静剤、バルビツレートなどへの慢性曝露による可逆性痴呆を包含する。本明細書で使用されるところのAβ関連痴呆障害という用語は、Aβペプチドの発生若しくは存在を伴うか若しくはそれを特徴とする痴呆障害を指す。本明細書で使用されるところの認知の改善という句は、認知技能若しくは機能の増強若しくは増大を指す。同様に、認知を改善することという句は、認知技能若しくは機能の増強若しくは増大を指す。認知の改善は、例えば本発明の処置前の被験体での認知に関する。好ましくは、認知の改善は、正常被験体のもの、または標準的若しくは期待されるレベルに向く。例えば認知の迅速な改善若しくは認知を迅速に改善することという句で使用されるところの迅速なという用語は、相対的若しくは比較的短い時間がかかること、または比較的短い時間間隔内に発生すること;すなわちある効果例えば改善がすなわち熟練した臨床家により理解されるところの臨床での適切さに関して比較的急速に遂行、観察若しくは達成されることを意味している。例示的一認知の迅速な改善は1日以内すなわち24時間以内に遂行、観察若しくは達成される。認知の迅速な改善は、1日未満すなわち24時間未満で、例えば23、22、21、20、29、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2若しくは1時間以内に遂行、観察若しくは達成されうる。認知の迅速な改善は、あるいは、1日以上、しかし好ましくは1か月以内、例えば31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3若しくは2日以内に遂行、観察若しくは達成されうる。認知の迅速な改善を遂行、観察若しくは達成するための例示的時間間隔は、数週以内、例えば3週以内、2週以内若しくは1週以内、または例えば120時間、96時間、72時間、48時間、24時間、18時間、12時間および/若しくは6時間以内である。例えば認知の長期改善という句で使用されるところの長期という用語は、適する対照より比較的若しくは相対的により長い時間間隔にわたって発生すること;すなわち、所望の効果例えば改善が、すなわち熟練した臨床家により理解されるところの臨床での適切さに関して延長された若しくは長期化された時間、中断を伴わず持続されることが発生するか若しくは観察されることを意味している。例示的一認知の長期改善は最低1週間遂行、観察若しくは達成される。認知の長期改善は、1日以上すなわち24時間以上、例えば36時間、48時間すなわち2日、72時間すなわち3日、96時間すなわち4日108時間すなわち5日若しくは132時間すなわち6日以上、遂行、観察若しくは達成されうる。認知の長期改善は、あるいは、1週間以上、例えば8、9、10、11、12、13若しくは14日すなわち2週間、3週間、4週間、5週間、6週間若しくはそれ以上、遂行、観察若しくは達成されうる。認知の長期改善が遂行、観察若しくは達成される例示的時間間隔は、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19若しくは20日を包含する。本明細書で使用されるところの調節という用語は、応答の上方制御すなわち刺激および下方制御すなわち抑制双方を指す。本明細書で使用されるところの処置という用語は、疾患、疾患の症状若しくは疾患に対する素因を治癒、回復、軽減、解放、変化、治療、緩和、改善若しくは影響する目的を伴い、疾患、疾患の症状若しくは疾患に対する素因を有する患者への治療薬の適用若しくは投与、または患者からの単離した組織若しくは細胞株への治療薬の適用若しくは投与と定義する。有効用量若しくは有効投薬量という用語は、所望の効果を達成若しくは少なくとも部分的に達成するのに十分な量と定義する。治療上有効な用量という用語は、該疾患に既に罹患している患者で該疾患およびその合併症を治癒若しくは少なくとも部分的に抑止するのに十分な量と定義する。この使用に有効な量は、疾患の重症度、患者の全般的な生理機能、例えば患者の体重、齢、性、投与経路、ならびに医師および/若しくは薬理学者に公知の他の因子に依存することができる。有効用量は、例えば、抗体の総量例えばグラム、ミリグラム若しくはマイクログラムでとして、または体重に対する抗体の量の比として例えば、キログラムあたりグラムg/kg、キログラムあたりミリグラムmg/kg若しくはキログラムあたりマイクログラムμg/kgとして表しうる。本方法で使用される抗体の有効用量は、例えば1μg/kgと500mg/kgの間の範囲にわたることができる。本発明の方法で使用される抗体の有効用量の例示的一範囲は0.1mg/kgと100mg/kgの間である。例示的有効用量は、限定されるものでないが10μg/kg、30μg/kg、100μg/kg、300μg/kg、1mg/kg、30mg/kgおよび100mg/kgを挙げることができる。本明細書で使用されるところの投与することという用語は、製薬学的剤を被験体の身体に導入する行動を指す。非経口経路での投与、例えば皮下、静脈内若しくは腹腔内投与の例示的一経路。患者という用語は、本発明の1種若しくはそれ以上の剤例えば免疫治療薬での予防的若しくは治療的いずれかの処置を受領するヒトおよび他の哺乳動物被験体を包含する。例示的患者は、本発明の免疫治療薬での予防的若しくは治療的いずれかの処置を受領する。本明細書で使用されるところの動物モデル若しくはモデル動物という用語は、疾患若しくは障害のある系、例えばヒトの系、疾患若しくは障害の特徴feature若しくは特徴characteristicを表す、げっ歯類、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌおよびウシのような哺乳動物種の1メンバーを包含する。げっ歯類の族から選択される例示的なヒト以外の動物は、ウサギ、モルモット、ラットおよびマウス、最も好ましくはマウスを包含する。痴呆障害の動物モデル若しくはそれを有するモデル動物は、例えば痴呆関連障害例えばADと関連する顕著な認知障害を表す。好ましくは、モデル動物は、増大する齢とともに認知障害の進行的悪化を表し、その結果、モデル動物における該疾患の進行は、痴呆障害に罹患している被験体における疾患の進行と同等である。免疫学的試薬という用語は、本明細書で定義されるところの1種若しくはそれ以上の免疫グロブリン、抗体、抗体フラグメント若しくは抗体鎖、またはそれらの組合せを含んでなるか若しくはそれらよりなる剤を指す。免疫学的剤という用語は、免疫グロブリン、抗体、抗体フラグメント若しくは抗体鎖をコードする核酸もまた包含する。こうした核酸はDNA若しくはRNAであり得る。免疫グロブリンをコードする核酸は、典型的には、適切な細胞若しくは組織中での該核酸の発現を可能にするプロモーターおよびエンハンサーのような調節エレメントに連結される。12A11免疫学的試薬という用語は、本明細書で記述されるところのモノクローナル抗体12A11の1種若しくはそれ以上の特徴を有する免疫学的試薬を指す。12A11モノクローナル抗体の特徴は、限定されるものでないが、Aβペプチドへの特異的結合、可溶性オリゴマーAβに対する優先的結合、被験体におけるアミロイド形成障害と関連する斑負荷量を減少させるおよびADの動物モデルで認知を改善する能力を挙げることができる。ある局面において、12A11免疫学的試薬は、12A11モノクローナル抗体と保存された構造上の特徴、例えば本明細書に記述されるところの保存された抗原結合ドメイン若しくは領域例えば1個若しくはそれ以上の12A11CDRを有する。例示的12A11免疫学的試薬は、12A11抗体、ヒト化12A11抗体、キメラ12A11抗体、一本鎖12A11抗体、二特異性12A11抗体、12A11抗体フラグメント、12A11抗体鎖、それらのバリアント例えば親和性成熟させた12A11抗体バリアントおよび12A11Fc抗体バリアント、またはそれらの組合せを包含する。12A11免疫学的試薬という用語は、いかなる抗体例えばヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、二特異性抗体、抗体フラグメント、または12A11抗体、12A11抗体フラグメント、若しくは12A11抗体鎖由来の最低1ドメイン、領域若しくはフラグメントを含んでなる抗体鎖もまた包含する。免疫治療試薬という用語は、治療的使用に適する免疫学的試薬を指す。免疫グロブリン若しくは抗体本明細書で互換性に使用されるという用語は、抗原を特異的に結合する能力を有する、2本のHおよび2本のL鎖よりなる基本的4ポリペプチド鎖構造を有するタンパク質を指し、前記鎖は例えば鎖間ジスルフィド結合により安定化される。抗体という用語はいかなる供給源例えば、例示的態様において、ヒトおよびヒト以外の霊長類、ならびに付加的な態様においてげっ歯類、ウサギ目、ヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどから得られるいかなるIgクラス若しくはいかなるIgサブクラス例えばIgGのIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4サブクラスも包含することを意図している。本明細書で使用されるところのIgクラス若しくは免疫グロブリンクラスという用語は、ヒトおよび高等哺乳動物で同定された免疫グロブリンの5クラス、すなわちIgG、IgM、IgA、IgDおよびIgEを指す。Igサブクラスという用語は、ヒトおよび高等哺乳動物で同定されたIgMの2サブクラスHおよびL、IgAの3サブクラスIgA1、IgA2および分泌型IgA、ならびにIgGの4サブクラスIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4を指す。IgGサブクラスという用語は、免疫グロブリンのγH鎖それぞれγ1~γ4によりヒトおよび高等哺乳動物で同定された、免疫グロブリンクラスIgGの4サブクラスすなわちIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4を指す。一本鎖免疫グロブリン若しくは一本鎖抗体本明細書で互換性に使用されるという用語は、抗原を特異的に結合する能力を有する、1本のHおよび1本のL鎖よりなる2ポリペプチド鎖構造を有するタンパク質を指し、前記鎖は例えば鎖間ペプチドリンカーにより安定化される。ドメインという用語は、例えばβ-プリーツシートおよび/若しくは鎖内ジスルフィド結合により安定化されたペプチドループを含んでなる例えば3ないし4個のペプチドループを含んでなるH若しくはL鎖ポリペプチドの球状領域を指す。ドメインは、定常ドメインの場合には多様なクラスのメンバーのドメイン内の配列変動の相対的欠如、若しくは可変ドメインの場合は多様なクラスのメンバーのドメイン内の有意の変動に基づき定常若しくは可変と本明細書でさらに称される。抗体若しくはポリペプチドドメインは、しばしば、抗体若しくはポリペプチドの領域と当該技術分野で互換性に称される。抗体L鎖の定常ドメインは、L鎖定常領域、L鎖定常ドメイン、CL領域若しくはCLドメインと互換性に称される。抗体H鎖の定常ドメインは、H鎖定常領域、H鎖定常ドメイン、CH領域若しくはCHドメインと互換性に称される。抗体L鎖の可変ドメインは、L鎖可変領域、L鎖可変ドメイン、VL領域若しくはVLドメインと互換性に称される。抗体H鎖の可変ドメインは、H鎖定常領域、H鎖定常ドメイン、VH領域若しくはVHドメインと互換性に称される。領域という用語は、抗体鎖若しくは抗体鎖ドメインの一部若しくは一部分例えば本明細書で定義されるところのH若しくはL鎖の一部若しくは一部分、または定常若しくは可変ドメインの一部若しくは一部分、ならびに前記鎖若しくはドメインのより離れた一部若しくは一部分もまた指すことができる。例えば、LおよびH鎖若しくはLおよびH鎖可変ドメインは、本明細書で定義されるところのフレームワーク領域すなわちFRの間に散在された相補性決定領域すなわちCDRを包含する。本明細書で使用されるところの抗原結合部位という用語は、抗原例えば細胞表面若しくは可溶性抗原を特異的に結合するそれと免疫反応する部位を指す。本発明の抗体は、好ましくは最低2個の抗原結合部位を含んでなる。抗原結合部位は、一般に、免疫グロブリンH鎖およびL鎖CDRを包含し、そしてこれらのCDRにより形成される結合部位が該抗体の特異性を決定する。抗原結合領域若しくは抗原結合ドメインは、上で定義されたところの抗体結合部位を包含する領域若しくはドメイン例えば抗体領域若しくはドメインである。免疫グロブリンすなわち抗体は単量体若しくは多量体の形態で存在し得る例えば、五量体の形態で存在するIgM抗体および/または単量体、二量体若しくは多量体の形態で存在するIgA抗体。フラグメントという用語は、無傷のすなわち完全な抗体若しくは抗体鎖より少ないアミノ酸残基を含んでなる抗体若しくは抗体鎖の一部若しくは一部分を指す。フラグメントは、無傷のすなわち完全な抗体若しくは抗体鎖の化学的若しくは酵素的処理を介して得ることができる。フラグメントは組換え手段によってもまた得ることができる。例示的フラグメントはFab、Fab’、Fab’2、Fabcおよび/若しくはFvフラグメントを包含する。抗原結合フラグメントという用語は、抗原を結合するすなわち抗原結合すなわち特異的結合について無傷の抗体とすなわちそれらが由来した無傷の抗体と競合する免疫グロブリンすなわち抗体のポリペプチドフラグメントを指す。結合フラグメントは、組換えDNA技術により、または無傷の免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的切断により製造される。結合フラグメントは、Fab、Fab’、Fab’2、Fabc、Fv、一本鎖および一本鎖抗体を包含する。二特異性若しくは二官能性免疫グロブリンすなわち抗体以外の免疫グロブリンすなわち抗体は、同一のその抗原結合部位のそれぞれを有すると理解される。二特異性若しくは二官能性抗体は、2種の異なるH/L鎖対および2個の異なる抗原結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である。二特異性抗体は、ハイブリドーマの融合若しくはFab’フラグメントの連結を包含する多様な方法により製造し得る。例えば、SongsivilaiとLachmann、Clin.Exp.Immunol.79:315-3211990;Kostelnyら、J.Immunol.148、1547-15531992を参照されたい。本明細書で使用されるところのモノクローナル抗体という用語は、構造および抗原特異性が均一である、抗体産生細胞例えばBリンパ球すなわちB細胞の1クローン集団由来の抗体を指す。ポリクローナル抗体という用語は、それらの構造およびエピトープ特異性が不均一であるがしかし共通抗原を認識する、抗体産生細胞の多様なクローン集団に由来する複数の抗体を指す。モノクローナルおよびポリクローナル抗体は、体液内に、粗調製物として存在しうるか、若しくは本明細書に記述されるとおり精製しうる。ヒト化免疫グロブリン若しくはヒト化抗体という用語は、最低1本のヒト化免疫グロブリンすなわち抗体鎖すなわち、最低1本のヒト化L若しくはH鎖を包含する免疫グロブリンすなわち抗体を指す。ヒト化免疫グロブリン鎖若しくはヒト化抗体鎖すなわち、ヒト化免疫グロブリンL鎖若しくはヒト化免疫グロブリンH鎖という用語は、実質的にヒト免疫グロブリンすなわち抗体からの可変フレームワーク領域および実質的にヒト以外の免疫グロブリンすなわち抗体からの相補性決定領域CDR例えば最低1個のCDR、好ましくは2個のCDR、より好ましくは3個のCDRを包含する可変領域を有し、かつ、定常領域例えばL鎖の場合は最低1個の定常領域若しくはその一部分、およびH鎖の場合は好ましくは3個の定常領域をさらに包含する免疫グロブリンすなわち抗体鎖すなわちそれぞれ1本のL若しくはH鎖を指す。ヒト化可変領域例えばヒト化L鎖可変領域若しくはヒト化H鎖可変領域という用語は、実質的にヒト免疫グロブリンすなわち抗体からの可変フレームワーク領域および実質的にヒト以外の免疫グロブリンすなわち抗体からの相補性決定領域CDRを包含する可変領域を指す。例えば、Queenら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:10029-100331989、米国特許第5,530,101号、同第5,585,089号、同第5,693,761号、同第5,693,762号明細書、Selickら、第WO90/07861号、およびWinter、米国特許第5,225,539号明細書全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるを参照されたい。本開示により包含されるヒト化免疫グロブリン若しくはヒト化抗体は、本明細書に記述される方法若しくは当該技術分野で公知であるもののいずれを使用しても作成し得る。実質的にヒト免疫グロブリンすなわち抗体から若しくは実質的にヒトという句は、ヒト免疫グロブリンすなわち抗体のアミノ配列と比較の目的上整列する場合に、該領域が例えば保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖系列置換、戻し突然変異などを見込んで、ヒトフレームワーク若しくは定常領域配列と最低80~90、90~95、若しくは95~99の同一性すなわち局所配列同一性を共有することを意味している。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖系列置換、戻し突然変異などの導入はしばしばヒト化抗体若しくは鎖の至適化と称される。実質的にヒト以外の免疫グロブリンすなわち抗体から若しくは実質的にヒト以外という句は、ヒト以外の生物体、例えばヒト以外の哺乳動物のものに最低80~95、好ましくは最低90~95、より好ましくは96、97、98若しくは99同一の免疫グロブリンすなわち抗体配列を有することを意味している。従って、ヒト化免疫グロブリンすなわち抗体、若しくはヒト化免疫グロブリンすなわち抗体鎖の全領域若しくは残基は、おそらくCDRを除き、1種若しくはそれ以上の天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する領域若しくは残基に実質的に同一である。対応する領域若しくは対応する残基という用語は、第一および第二の配列を比較の目的上至適に整列する場合に、第一のアミノ酸若しくはヌクレオチド配列上の1領域若しくは残基と同一のすなわち同等の位置を占有する第二のアミノ酸若しくはヌクレオチド配列上の領域若しくは残基を指す。アミノ酸の各ドメインへの割り当ては、Kabat、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest国立保健研究所NationalInstitutesofHealth、メリーランド州ベセスダ、1987および1991の定義に従う。代替の構造の定義は、Chothiaら、J.Mol.Biol.196:9011987;Nature342:8781989;およびJ.Mol.Biol.186:6511989下でChothiaらと集合的に称され、かつ、全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるにより提案された。有意の同一性という用語は、2ポリペプチド配列を、デフォルトのギャップ重みgapweightを使用するプログラムGAP若しくはBESTFITによるように至適に整列する場合に、最低50~60の配列同一性、好ましくは最低60~70の配列同一性、より好ましくは最低70~80の配列同一性、より好ましくは最低80~90の同一性、なおより好ましくは最低90~95の同一性、およびなおより好ましくは最低95の配列同一性若しくはそれ以上例えば99の配列同一性若しくはそれ以上を共有することを意味している。実質的同一性という用語は、2ポリペプチド配列を、デフォルトのギャップ重みを使用するプログラムGAP若しくはBESTFITによるように至適に整列する場合に、最低80~90の配列同一性、好ましくは最低90~95の配列同一性、およびより好ましくは最低95の配列同一性若しくはそれ以上例えば99の配列同一性若しくはそれ以上を共有することを意味している。配列の比較のため、典型的には1配列がそれと試験配列を比較する参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験および参照配列をコンピュータに入力し、必要な場合は下位配列座標を指定し、そして配列アルゴリズムプログラムのパラメータを指定する。配列比較アルゴリズムがその後、指定されたプログラムパラメータに基づき、参照配列に関しての試験配列1種若しくは複数の配列同一性パーセントを計算する。比較のための配列の至適のアライメントは、例えば、SmithとWaterman、Adv.Appl.Math.2:4821981の局所相同性アルゴリズムにより、NeedlemanとWunsch、J.Mol.Biol.48:4431970の相同性アライメントアルゴリズムにより、PearsonとLipman、Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA85:24441988の類似性検索方法により、これらのアルゴリズムのコンピュータ化実装WisconsinGeneticsソフトウェアパッケージ、GeneticsComputerGroup、575ScienceDr.、ウィスコンシン州マディソン中のGAP、BESTFIT、FASTAおよびTFASTAにより、若しくは目視により実施し得る全般として、Ausubelら、CurrentProtocolsinMolecularBiologyを参照されたい。配列同一性および配列類似性パーセントを決定するのに適するアルゴリズムの一例は、Altschulら、J.Mol.Biol.215:4031990に記述されているBLASTアルゴリズムである。BLAST解析を実行するためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センターNationalCenterforBiotechnologyInformation国立保健研究所NationalInstitutesofHealthのNCBIインターネットサーバを通じて公的にアクセス可能を通じて公的に入手可能である。典型的には、デフォルトのプログラムパラメータを使用して配列比較を実施し得るとは言え、カスタマイズしたパラメータもまた使用し得る。アミノ酸配列については、BLASTPプログラムは、デフォルトとして3の語長wordlengthW、10の期待値expectationEおよびBLOSUM62スコアリングマトリックスを使用するHenikoffとHenikoff、Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:109151989を参照されたい。好ましくは、同一でない残基位置は保存的アミノ酸置換により異なる。アミノ酸置換を保存的若しくは非保存的と分類する目的上、アミノ酸を後に続くとおりグループ分けする。すなわち、グループI疎水性側鎖:leu、met、ala、val、leu、ile;グループII中性親水性側鎖:cys、ser、thr;グループIII酸性側鎖:asp、glu;グループIV塩基性側鎖:asn、gln、his、lys、arg;グループV鎖の向きに影響する残基:gly、pro;およびグループVI芳香族側鎖:trp、tyr、phe。保存的置換は同一分類中のアミノ鎖間の置換を伴う。非保存的置換は、これらの分類の1つの1メンバーについて別のもののメンバーと交換することを構成する。好ましくは、ヒト化免疫グロブリンすなわち抗体は、対応するヒト化されていない抗体の親和性の3、4若しくは5の係数内である親和性で抗原を結合する。例えば、ヒト化されていない抗体が109M-1の結合親和性を有する場合、ヒト化抗体は最低3×109M-1、4×109M-1若しくは5×109M-1の結合親和性を有することができる。免疫グロブリンすなわち抗体鎖の結合特性を記述する場合、該鎖は抗原例えばAβ結合を指図するその能力に基づき記述し得る。鎖は、それが特異的結合特性若しくは結合親和性を無傷の免疫グロブリンすなわち抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントに賦与する場合に抗原結合を指図すると言われる。突然変異例えば戻し突然変異は、それが、前記鎖を含んでなる無傷の免疫グロブリンすなわち抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントの結合親和性に、前記突然変異を欠く同等の鎖を含んでなる抗体若しくはその抗原結合フラグメントのものに比較して最低1桁だけ影響を及ぼす例えば低下させる場合に、抗原結合を指図するH若しくはL鎖の能力に実質的に影響を及ぼすと言われる。突然変異は、それが前記鎖を含んでなる無傷の免疫グロブリンすなわち抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントの結合親和性に、前記突然変異を欠く同等の鎖を含んでなる該抗体若しくはその抗原結合フラグメントのものの2、3若しくは4の係数のみ影響を及ぼす例えば低下させる場合に、抗原結合を指図する鎖の能力に実質的に影響を及ぼさ例えば低下させない。キメラ免疫グロブリンすなわち抗体という用語は、可変領域が第一の種に由来しかつ定常領域が第二の種に由来する免疫グロブリンすなわち抗体を指す。キメラ免疫グロブリンすなわち抗体は、例えば、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから遺伝子工学により構築し得る。ヒト化免疫グロブリン若しくはヒト化抗体という用語は、下で定義されるところのキメラ免疫グロブリンすなわち抗体を包含することを意図していない。ヒト化免疫グロブリンすなわち抗体はそれらの構築がキメラであるすなわちタンパク質の1以上の種からの領域を含んでなるとは言え、それらは、本明細書で定義されるところのキメラ免疫グロブリンすなわち抗体中で見出されない付加的な特徴すなわちドナーCDR残基およびアクセプターフレームワーク残基を含んでなる可変領域を包含する。コンホメーションという用語は、タンパク質若しくはポリペプチド例えば抗体、抗体鎖、それらのドメイン若しくは領域の三次構造を指す。例えば、L若しくはH鎖のコンホメーションという句はL若しくはH鎖可変領域の三次構造を指し、また、抗体のコンホメーション若しくは抗体フラグメントのコンホメーションという句は抗体若しくはそのフラグメントの三次構造を指す。抗体の特異的結合は、抗体が特定の1抗原若しくはエピトープに対する認識可能な親和性を表し、かつ、一般的には有意の交差反応性を表さないことを意味している。例示的態様において、抗体は交差反応性を表さない例えば、Aβ以外のペプチド若しくはAβ上の離れたエピトープと交差反応しない。認識可能なすなわち好ましい結合は、最低106、107、108、109M-1若しくは1010M-1の親和性もつ結合を包含する。107M-1以上、好ましくは108M-1以上の親和性がより好ましい。本明細書に示されるものの中間の値もまた本発明の範囲内にあることを意図しており、そして、好ましい結合親和性は、親和性のある範囲、例えば106ないし1010M-1、好ましくは107ないし1010M-1、より好ましくは108ないし1010M-1として示し得る。有意の交差反応性を表さない抗体は、望ましくない実体例えば望ましくないタンパク質性の実体に認識可能に結合することができないものである。例えば、Aβに特異的に結合する抗体はAβを認識可能に結合することができるが、しかし、Aβ以外のタンパク質若しくはペプチド例えば斑中に包含されるAβ以外のタンパク質若しくはペプチドと有意に反応することができない。特定の1エピトープに特異的な抗体は、例えば同一タンパク質若しくはペプチド上の離れたエピトープと有意に交差反応することができない。特異的結合は、こうした結合を測定するためのいずれかの技術に認識された手段に従って測定し得る。好ましくは、特異的結合はスキャッチャード分析および/若しくは競合結合アッセイに従って測定する。本明細書で使用されるところの親和性という用語は、単一の抗原を結合する部位の抗原決定基との結合の強さを指す。親和性は、抗体結合部位と抗原決定基の間の立体化学的適合の近接度、それらの間の接触の面積の大きさ、荷電したおよび疎水性の基の分布などに依存する。抗体親和性は平衡透析若しくは速度論的BIACORETM法により測定し得る。BIACORETM法は、表面プラスモン波が金属/液体界面で励起される場合に発生する表面プラスモン共鳴SPRの現象に頼る。サンプルと接触していない表面の側面に光を向け、そして光はそれから反射され、そしてSPRは角度および波長の特定の組合せで反射光強度の低下を引き起こす。生体分子結合事象は表面層で屈折率の変化を引き起こし、それがSPRシグナルの変化として検出される。解離定数KDおよび会合定数KAは親和性の量的尺度である。平衡では、遊離抗原Agおよび遊離抗体Abは抗原-抗体複合体Ag-Abと平衡状態にあり、そして速度定数kaおよびkdは個々の反応の速度を定量する。平衡では、ka[Ab][Ag]=kd[Ag-Ab]。解離定数KDは:KD=kd/ka=[Ag][Ab]/[Ag-Ab]により与えられる。KDは濃度の単位、最も典型的にはM、mM、μM、nM、pMなどを有する。KDとして表される抗体親和性を比較する場合、Aβに対するより大きい親和性を有することはより小さい値により示される。会合定数KAは:KA=KA/KD=[Ag-Ab]/[Ag][Ab]により与えられる。KAは濃度の逆数の単位、最も典型的にはM-1、mM-1、μM-1、nM-1、pM-1などを有する。本明細書で使用されるところの親和性avidityという用語は、可逆性複合体の形成後の抗原-抗体結合の強さを指す。Fc免疫グロブリンバリアント若しくはFc抗体バリアントという用語は、変えられたFc領域を有する免疫グロブリンすなわち抗体例えばヒト化免疫グロブリン、キメラ免疫グロブリン、一本鎖抗体、抗体フラグメントなどを包含する。例えば、免疫グロブリンが変えられたエフェクター機能を有するようなFc領域が変えられることができる。アミノ酸変化は、免疫グロブリンの、例えば免疫グロブリンのFc領域の1個若しくはそれ以上のアミノ酸のアミノ酸置換、付加、欠失および/若しくは修飾を包含する。いくつかの態様において、本発明の免疫グロブリンはFc領域に1個若しくはそれ以上の突然変異を包含する。いくつかの態様において、Fc領域は、ヒンジ領域、例えばEU位置234、235、236および/若しくは237に1個若しくはそれ以上のアミノ酸変化を包含する。アミノ酸位置234、235、236および/若しくは237の1個若しくはそれ以上にヒンジ領域突然変異を包含する抗体は、例えば米国特許第5,624,821号および米国特許第5,648,260号明細書引用することにより本明細書に組み込まれるに記述されるとおり作成し得る。エフェクター機能という用語は、抗体例えばIgG抗体のFc領域に存する活性を指し、そして、例えば、エフェクター細胞活性、溶解、補体媒介性の活性、抗体消失および抗体半減期のような抗体の数種の免疫機能を制御し得る、補体および/若しくはFc受容体のようなエフェクター分子を結合する該抗体の能力を包含する。エフェクター分子という用語は、限定されるものでないが補体タンパク質若しくはFc受容体を挙げることができる、抗体例えばIgG抗体のFc領域に結合することが可能である分子を指す。エフェクター細胞という用語は、限定されるものでないがリンパ球、例えば抗原提示細胞およびT細胞を挙げることができるエフェクター細胞の表面上で発現されるFc受容体を典型的に介して抗体例えばIgG抗体のFc部分に結合することが可能な細胞を指す。Fc領域という用語は、IgG抗体のC末端領域、とりわけ前記IgG抗体のH鎖1本若しくは複数のC末端領域を指す。IgGH鎖のFc領域の境界はわずかに変動し得るとは言え、Fc領域は、典型的にはヒトIgGH鎖1本若しくは複数のほぼアミノ酸残基Cys226からカルボキシル末端までにわたると定義される。アグリコシル化抗体という用語は、化学的若しくは酵素的過程、1個若しくはそれ以上のグリコシル化部位の突然変異、細菌中での発現などによって1個若しくはそれ以上の炭水化物を欠く抗体を指す。アグリコシル化抗体は、Fcの炭水化物が例えば化学的若しくは酵素的に除去された抗体である脱グリコシル化抗体でありうる。あるいは、アグリコシル化抗体は、例えば、グリコシル化パターンをコードする1個若しくはそれ以上の残基の突然変異、またはタンパク質に炭水化物を結合しない生物体、例えば細菌中での発現によりFc炭水化物を伴わず発現された抗体である、非グリコシル化若しくは未グリコシル化抗体でありうる。別の方法で述べられない限り、Kabatの番号付けは、KabatらSequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版国立保健研究所公衆衛生局PublickHealthService、NationalInstitutesofHealth、メリーランド州ベセスダ1991引用することによりに本明細書に明らかに組み込まれるに教示されるとおりである。別の方法で述べられない限り、EU番号付けもまた、KabatらSequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版国立保健研究所公衆衛生局PublickHealthService、NationalInstitutesofHealth、メリーランド州ベセスダ1991に教示され、そして、例えば、本明細書に記述されるところのEUインデックスEUindexを使用するH鎖抗体配列中の残基の番号付けを指す。この番号付け体系はEdelmanら、631:78-851969に記述されるEu抗体の配列に基づく。Fc受容体若しくはFcRという用語は、抗体のFc領域に結合する受容体を指す。抗体例えばIgG抗体のFc領域に結合する典型的なFc受容体は、限定されるものでないが、これらの受容体のアレルバリアントおよび選択的にスプライスされた形態を包含する、FcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIサブクラスの受容体を挙げることができる。他のFc受容体は、抗体の半減期を調節する新生児Fc受容体FcRnを包含する。Fc受容体は、RavetchとKinet、Annu.Rev.Immunol9:457-921991;Capelら、Immunomethods4:25-341994;およびdeHaasら、J.Lab.Clin.Med.126:330-411995に総説されている。抗原は、免疫グロブリンすなわち抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントが特異的に結合する実体例えばタンパク質性の実体若しくはペプチドである。エピトープ若しくは抗原決定基という用語は、免疫グロブリンすなわち抗体若しくはそれらの抗原結合フラグメントが特異的に結合する抗原上の1部位を指す。エピトープは、連続するアミノ酸、若しくはタンパク質の三次フォールディングにより並置される連続しないアミノ酸双方から形成され得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは典型的に変性溶媒への曝露に際して保持される一方、三次フォールディングにより形成されるエピトープは変性溶媒での処理に際して典型的に喪失される。エピトープは、典型的には独特な空間的コンホメーションに最低3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14若しくは15アミノ酸を包含する。エピトープの空間的コンホメーションの決定方法は、例えばx線結晶学および二次元核磁気共鳴を包含する。例えば、EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology、Vol.66、G.E.Morris編1996を参照されたい。同一エピトープを認識する抗体は、標的抗原への別の抗体の結合を阻害する一抗体の能力を示す単純なイムノアッセイ、すなわち競合結合アッセイで同定し得る。競合結合は、Aβのような共通の抗原への参照抗体の特異的結合を試験中の免疫グロブリンが阻害するアッセイで測定する。多数の型の競合結合アッセイ、例えば固相直接若しくは間接ラジオイムノアッセイRIA、固相直接若しくは間接エンザイムイムノアッセイEIA、サンドイッチ競合アッセイStahliら、MethodsinEnzymology9:2421983を参照されたい;固相直接ビオチン-アビジンEIAKirklandら、J.Immunol.137:36141986を参照されたい:固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイHarlowとLane、Antibodies:ALaboratoryManual、ColdSpringHarborPress1988を参照されたい;I-125標識を使用する固相直接標識RIAMorelら、Mol.Immunol.251:71988を参照されたい;固相直接ビオチン-アビジンEIACheungら、Virology176:5461990;および直接標識RIAMoldenhauerら、Scand.J.Immunol.32:771990が既知である。典型的には、こうしたアッセイはこれらすなわち未標識の試験免疫グロブリンおよび標識した参照免疫グロブリンのいずれかを担持する固体表面若しくは細胞に結合した精製抗原の使用を必要とする。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面若しくは細胞に結合した標識の量を測定することにより測定する。通常、試験免疫グロブリンは過剰で存在する。通常は、競合する抗体が過剰に存在する場合、それは共通の抗原への参照抗体の特異的結合を最低50~55、55~60、60~65、65~70、70~75若しくはそれ以上阻害することができる。エピトープは免疫学的細胞、例えばB細胞および/若しくはT細胞によってもまた認識される。エピトープの細胞認識は、3H-チミジン取り込み、サイトカイン分泌、抗体分泌若しくは抗原依存性の死滅細胞傷害性Tリンパ球アッセイにより測定されるような抗原依存性の増殖を測定するinvitroアッセイにより測定し得る。本発明の抗体が結合する例示的エピトープすなわち抗原決定基は、ヒトアミロイド前駆体タンパク質APP内に見出し得るが、しかし好ましくはAPPのAβペプチド内に見出される。本明細書に記述されるところのAβ内の例示的エピトープすなわち抗原決定基は、AβのN末端、中央領域若しくはC末端内に位置する。N末端エピトープは、AβペプチドのN末端内に位置する残基を含んでなるエピトープすなわち抗原決定基である。例示的N末端エピトープは、Aβのアミノ酸1-10若しくは1-12内、好ましくはAβ42の残基1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、2-6、3-6若しくは3-7からの残基を包含する。他の例示的N末端エピトープはAβの残基1-3で開始しかつ残基7-11で終了する。付加的な例示的N末端エピトープは、Aβの残基2-4、5、6、7若しくは8、Aβの残基3-5、6、7、8若しくは9、またはAβ42の残基4-7、8、9若しくは10を包含する。中央エピトープは、Aβペプチドの中央centralすなわち中央mid部分内に位置する残基を含んでなるエピトープすなわち抗原決定基である。例示的中央エピトープは、Aβペプチドのアミノ酸13-38内、好ましくは16-21、16-22、16-23、16-24、18-21、19-21、19-22、19-23若しくは19-24内の残基を包含する。C末端エピトープは、AβペプチドのC末端内例えばAβのほぼアミノ酸30-40若しくは30-42内に位置する残基を含んでなるエピトープすなわち抗原決定基である。付加的な例示的エピトープすなわち抗原決定基はAβの残基33-40若しくは33-42を包含する。こうしたエピトープをC末端エピトープと称し得る。抗体が、Aβ3-7のような指定された残基内の1エピトープに結合すると言われる場合、意味しているものは、該抗体が指定された残基すなわちこの一例ではAβ3-7を含有するポリペプチドに特異的に結合することである。こうした抗体はAβ3-7内のすべての残基と必ずしも接触しない。また、Aβ3-7内のすべての単一アミノ酸置換若しくは欠失は、結合親和性に必ずしも有意に影響を及ぼさない。Aβ抗体および抗Aβという用語は、Aβタンパク質内の1個若しくはそれ以上のエピトープすなわち抗原決定基に結合する抗体を指すのに本明細書で互換性に使用する。例示的Aβ抗体は、N末端Aβ抗体、中央Aβ抗体およびC末端Aβ抗体を包含する。本明細書で使用されるところのN末端Aβ抗体という用語は、最低1個のN末端エピトープすなわち抗原決定基を認識するAβ抗体を指す。本明細書で使用されるところの中央Aβ抗体という用語は、最低1個の中央のエピトープすなわち抗原決定基を認識するAβ抗体を指す。本明細書で使用されるところのC末端Aβ抗体という用語は、最低1個のC末端エピトープすなわち抗原決定基を認識するAβ抗体を指す。免疫学的若しくは免疫応答という用語は、被験体において抗原に向けられた体液性抗体媒介性および/または細胞性抗原特異的T細胞若しくはそれらの分泌生成物により媒介される応答の発生である。こうした応答は免疫原の投与により誘導される能動的応答、または抗体若しくは予め刺激されたT細胞の投与により誘導される受動的応答であり得る。細胞性免疫応答は、クラスI若しくはクラスIIMHC分子とともにのポリペプチドエピトープの提示により導き出されて抗原特異的CD4Tヘルパー細胞および/若しくはCD8細胞傷害性T細胞を活性化する。該応答は、単球、マクロファージ、ナチュラルキラーNK細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、小膠細胞、抗酸球若しくは自然免疫の他の成分の活性化もまた伴いうる。細胞媒介性の免疫学的応答の存在は、増殖アッセイCD4T細胞若しくはCTL細胞傷害性Tリンパ球アッセイにより測定し得るBurke、REF;Tigges、REFを参照されたい。免疫原の保護すなわち治療効果への体液性および細胞性応答の相対的寄与は、免疫した動物若しくは個体から抗体およびT細胞を別個に単離すること、ならびに保護若しくは治療効果を第二の被験体で測定することにより識別し得る。本明細書で使用されるところの免疫療法という用語は、免疫応答例えば能動若しくは受動免疫応答を意図しておりかつ/若しくはそれを生じる、疾患若しくは障害の処置、例えば治療的若しくは予防的処置を指す。免疫原剤若しくは免疫原は、場合によってはアジュバントとともにの患者への投与に際してそれ自身に対する免疫学的応答を誘導することが可能である。免疫原組成物は免疫原剤を含んでなるものである。アジュバントという用語は、抗原とともに投与される場合に該抗原に対する免疫応答を増強するがしかし単独で投与される場合に該抗原に対する免疫応答を生成しない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球動員、Bおよび/若しくはT細胞の刺激ならびにマクロファージの刺激を包含するいくつかの機構により免疫応答を増強し得る。本明細書で使用されるところのキットという用語は、サンプルの分析を容易にする試薬および他の物質の組合せに関して使用する。いくつかの態様において、本発明のイムノアッセイキットは、適する抗原、検出可能な部分を含んでなる結合剤および検出試薬を包含する。検出可能な部分により生じられるシグナルを増幅するための系もまたキットに包含しても若しくはしなくてもよい。さらに、他の態様において、キットは、限定されるものでないがサンプル収集のための装置、サンプル管、ホルダ、トレイ、ラック、皿、プレート、キット使用者への説明書、溶液若しくは他の化学的試薬、ならびに標準化、正規化に使用すべきサンプル、および/または対照サンプルを包含する。本発明の多様な方法論は、値、レベル、特徴feature、特徴chracteristic、特性などを、適切な対照と本明細書で互換性に称される適する対照と比較することを伴う段階を包含する。適する対照若しくは適切な対照は、比較の目的上有用な当業者になじみのあるいかなる対照若しくは標準でもある。一態様において、適する対照若しくは適切な対照は、本明細書に記述されるところの本発明の方法論を実施する前に測定される値、レベル、特徴feature、特徴characteristic、特性などである。別の態様において、適する対照若しくは適切な対照は、被験体、例えば、対照若すなわち例えば正常な特質を表す正常被験体で測定される値、レベル、特徴feature、特徴chracteristic、特性などである。なお別の態様において、適する対照若しくは適切な対照は、予め定義された値、レベル、特徴feature、特徴characteristic、特性などである。II.免疫学的および治療的試薬本発明の免疫学的および治療的試薬は、本明細書で定義されるところの免疫原若しくは抗体、またはそれらの機能的若しくは抗原結合フラグメントを含んでなるか若しくはそれらよりなる。基本的な抗体構造単位はサブユニットの四量体を含んでなることが既知である。各四量体はポリペプチド鎖の2個の同一の対から構成され、各対は1本のL約25kDaおよび1本のH鎖約50~70kDaを有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主として司る約100ないし110若しくはそれ以上のアミノ酸の可変領域を包含する。各鎖のカルボキシ末端部分はエフェクター機能を主として司る定常領域を定義する。L鎖はκ若しくはλいずれかに分類され、そして長さ約230残基である。H鎖はγ、μ、α、δ若しくはεに分類され、長さ約450~600残基であり、そして抗体のアイソタイプをそれぞれIgG、IgM、IgA、IgDおよびIgEと規定する。HおよびL鎖双方はドメインにフォールディングされている。ドメインという用語は、タンパク質、例えば免疫グロブリンすなわち抗体の球状領域を指す。免疫グロブリンすなわち抗体のドメインは、例えばβ-プリーツシートおよび1個の鎖間ジスルフィド結合により安定化された3若しくは4個のペプチドループを包含する。無傷のL鎖は例えば2ドメインVLおよびCLを有し、また、無傷のH鎖は例えば4若しくは5ドメインVH、CH1、CH2およびCH3を有する。LおよびH鎖内で、可変および定常領域は約12若しくはそれ以上のアミノ酸のJ領域により結合され、H鎖は約10より多いアミノ酸のD領域もまた包含する全般として、FundamentalImmunologyPaul,W.編、第2版RavenPress、ニューヨーク1989、第7章全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるを参照されたい。各L/H鎖対の可変領域は抗体結合部位を形成する。従って無傷の抗体は2個の結合部位を有する。二官能性若しくは二特異性抗体でを除き、該2結合部位は同一である。該鎖は全部、相補性決定領域すなわちCDRともまた呼ばれる3個の超可変領域により結合された、比較的保存されたフレームワーク領域FRの同一の一般構造を表す。天然に存在する鎖、若しくは組換えで製造される鎖はリーダー配列とともに発現され得、リーダー配列は細胞のプロセシングの間に除去されて成熟鎖を生じる。成熟鎖はまた、例えば目的の特定の鎖の分泌を高めるか若しくはプロセシングを変えるために、天然に存在しないリーダー配列を有して組換えで産生もし得る。各対の2本の成熟鎖のCDRはフレームワーク領域により整列されて、特定の1エピトープに結合することを可能にする。N末端からC末端まで、LおよびH鎖双方はドメインFR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3およびFR4を含んでなる。FR4は可変H鎖のD/J領域および可変L鎖のJ領域ともまた当該技術分野で称される。各ドメインへのアミノ酸の割り当てはKabatの定義に従う。A.Aβ抗体本発明の治療薬はAβ若しくはアミロイド斑の他成分に特異的に結合する抗体を包含する。好ましい抗体はモノクローナル抗体である。数種のこうした抗体は可溶性の形態に結合することなく凝集型の形態のAβに特異的に結合する。数種は凝集型の形態に結合することなく可溶性の形態に特異的に結合する。数種は凝集型および可溶性双方の形態に結合する。数種の抗体は斑中のAβを結合する。数種の抗体は血液脳関門を横断し得る。数種の抗体は被験体中のアミロイド負荷量を低減させ得る。数種の抗体は被験体での神経炎性ジストロフィーを低下させ得る。数種の抗体はシナプス構造を維持し得る例えばシナプトフィジン。数種の抗体は1種若しくはそれ以上の向神経活性の形態のAβを中和し得る。好ましい一態様において、受動免疫療法での使用のための本発明の抗体は、単量体の可溶性および/若しくはオリゴマーの可溶性Aβポリペプチド例えば可溶性Aβ二量体、三量体などを包含する可溶性Aβペプチドを結合する。本発明の一態様において、該抗体は斑に沈着した凝集型すなわち不溶性Aβを結合してアミロイド斑の大きさ若しくは密度を低下させることが可能である。別の態様において、該抗体は、単量体の可溶性ならびにオリゴマーの可溶性Aβポリペプチド例えば可溶性Aβ二量体、三量体などを包含する可溶性Aβを捕捉し、かつ、Aβの蓄積を予防しかつ/若しくはCNSからのAβの除去を促進することが可能である。とりわけ好ましい一態様において、本発明の抗体は可溶性および不溶性双方のAβペプチド若しくはそれらのフラグメントに結合することが可能であり、ならびに、既存のアミロイド斑の大きさおよび密度もまた減少させつつ付加的なアミロイド斑の形成を予防することが可能である。治療方法で使用される抗体は、好ましくは、無傷の定常領域、若しくはFc受容体と相互作用するのに少なくとも十分な定常領域を有する。好ましい抗体は斑中のAβのFc媒介性の食作用の刺激で有効なものである。ヒトアイソタイプIgG1は、食細胞上例えば脳常在性マクロファージ若しくは小膠細胞上のFcRI受容体に対するヒトアイソタイプの最高の親和性を有するそれのため好ましい。ヒトIgG1はマウスIgG2aの同等物であり、後者は従ってアルツハイマー病の動物例えばマウスモデルでinvivo有効性を試験するのに適する。抗体の一方のアームがAβおよび他方がFc受容体に対する特異性を有する二特異性Fabフラグメントもまた使用し得る。好ましい抗体は、約106、107、108、109若しくは1010M-1これらの値の中間の親和性を包含する以上若しくはそれらに等しい結合親和性でAβに結合する。本発明の抗体は、被験体のCNS若しくは脳中の可溶性Aβを結合かつ/若しくは消失することが可能である抗体もまた包含する。例示的抗体は、例えば被験体の血流中の可溶性Aβを捕捉することが可能である抗体もまた包含する。好ましい抗体は、例えば可溶性Aβの消失および/若しくは捕捉を介して被験体における認知を迅速に改善することが可能である。モノクローナル抗体は、コンホメーション若しくは非コンホメーションエピトープであり得るAβ内の特定の1エピトープに結合する。抗体の予防的および治療的有効性は、実施例に記述されるトランスジェニック動物モデル手順を使用して試験し得る。好ましいモノクローナル抗体は、Aβの残基1-10天然のAβの最初のN末端残基を1と呼称する内の1エピトープ、より好ましくはAβの残基3-7内の1エピトープに結合する。いくつかの方法において、多様なエピトープに対する結合特異性を有する複数のモノクローナル抗体を使用し、例えば、Aβの残基3-7内の1エピトープに特異的な抗体を、Aβの残基3-7の外側の1エピトープに特異的な抗体と共投与し得る。こうした抗体は連続して若しくは同時に投与し得る。Aβ以外のアミロイド成分に対する抗体もまた使用例えば投与若しくは共投与し得る。抗体のエピトープ特異性は、例えば、多様なメンバーがAβの異なる配列を表すファージディスプレイライブラリーを形成することにより決定し得る。該ファージディスプレイライブラリーをその後、試験中の抗体に特異的に結合するメンバーについて選択する。一群の配列を単離する。典型的には、こうした一群は、共通の中核配列および多様なメンバーでの隣接配列の変動する長さを含有する。抗体に対する特異的結合を示す最短の中核配列が該抗体により結合されるエピトープを規定する。抗体は、エピトープ特異性が既に決定された抗体との競合アッセイでもまたエピトープ特異性について試験し得る。例えば、Aβへの結合について12A11抗体と競合する抗体は、12A11と同一若しくは類似のすなわち残基Aβ3-7内のエピトープに結合する。エピトープ特異性について抗体をスクリーニングすることは治療的有効性の有用な予測因子である。例えば、Aβの残基1-7内の1エピトープに結合することが決定された抗体は、本発明の方法論に従ってアルツハイマー病の予防および処置において有効であることがありそうである。Aβの他領域に結合することなくAβの好ましい1セグメントに特異的に結合する抗体は、他領域に結合するモノクローナル抗体若しくは無傷のAβに対するポリクローナル血清に関して多数の利点を有する。第一に、等質量の投薬量について、好ましいセグメントに特異的に結合する抗体の投薬量は、アミロイド斑の消失において有効な抗体のより高いモル投薬量を含有する。第二に、好ましいセグメントに特異的に結合する抗体は、無傷のAPPポリペプチドに対する消失応答を誘導することなくアミロイド沈着物に対する消失応答を誘導して、それにより潜在的副作用を低下させ得る。1.ヒト以外の抗体の製造本発明はヒト以外の抗体、例えば本発明の好ましいAβエピトープに対する特異性を有する抗体を特徴とする。こうした抗体は、本発明の多様な治療的組成物の処方において使用し得るか、または、好ましくはヒト化若しくはキメラ抗体詳細に下述されるの製造のための相補性決定領域を提供し得る。ヒト以外のモノクローナル抗体、例えばマウス、モルモット、霊長類、ウサギ若しくはラットの製造は、例えばAβで動物を免疫することにより達成し得る。Aβ若しくはAβの免疫原性フラグメントを含んでなるより長いポリペプチド、またはAβに対する抗体に対する抗イディオタイプ抗体もまた使用し得る。HarlowとLane、上記全部の目的上引用することにより組み込まれるを参照されたい。こうした免疫原は天然の供給源から、ペプチド合成若しくは組換え発現により得ることができる。場合によっては、免疫原は下述されるとおり担体タンパク質に融合若しくは別の方法で複合体形成して投与し得る。場合によっては、免疫原はアジュバントともに投与し得る。アジュバントという用語は、抗原とともに投与される場合に該抗原に対する免疫応答を増強するが、しかし単独で投与される場合に該抗原に対する免疫応答を生成しない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球動員、Bおよび/若しくはT細胞の刺激、ならびにマクロファージの刺激を包含する数種の機構により免疫応答を増強し得る。数種の型のアジュバントを下述されるとおり使用し得る。フロイントの完全アジュバント、次いで不完全アジュバントが実験動物の免疫化に好ましい。ポリクローナル抗体を作成するためにウサギ若しくはモルモットを典型的に使用する。例えば受動的保護のためのポリクローナル抗体の例示的調製は後に続くとおり実施し得る。125匹の非トランスジェニックマウスを100μgのAβ1-42およびフロイントの完全/不完全アジュバントCFA/IFAアジュバントで免疫し、そして4~5か月で安楽死させる。免疫したマウスから血液を収集する。IgGを他の血液成分から分離する。免疫原に特異的な抗体をアフィニティークロマトグラフィーにより部分的に精製してもよい。平均約0.5~1mgの免疫原特異的抗体がマウスあたりで得られ、合計60~120mgを生じる。モノクローナル抗体を作成するのに典型的にマウスを使用する。モノクローナル抗体は、Aβのフラグメント若しくはより長い形態をマウスに注入すること、ハイブリドーマを調製すること、およびAβに特異的に結合する抗体についてハイブリドーマをスクリーニングすることにより、あるフラグメントに対し製造し得る。場合によっては、抗体はAβの他の重ならないフラグメントへの結合を伴わないAβの特定の1領域若しくは所望のフラグメントへの結合についてスクリーニングする。後者のスクリーニングは、Aβペプチドの欠失変異体の集合物への抗体の結合を測定すること、およびどの欠失変異体が該抗体に結合するかを決定することにより達成し得る。結合は例えばウエスタンブロット若しくはELISAにより評価し得る。抗体への特異的結合を示す最小フラグメントが該抗体のエピトープを規定する。あるいは、エピトープ特異性は、試験および参照抗体がAβへの結合について競合する競合アッセイにより決定し得る。試験および参照抗体が競合する場合には、それらは、同一のエピトープ、若しくは一方の抗体の結合が他方の結合を妨害するような十分に近位のエピトープに結合する。こうした抗体の好ましいアイソタイプはマウスアイソタイプIgG2a若しくは他の種の同等のアイソタイプである。マウスアイソタイプIgG2aはヒトアイソタイプIgG1例えばヒトIgG1の同等物である。2.キメラおよびヒト化抗体本発明は、βアミロイドペプチドに特異的なキメラおよび/若しくはヒト化抗体例えばキメラおよび/若しくはヒト化免疫グロブリンもまた特徴とする。キメラおよび/若しくはヒト化抗体は、キメラ若しくはヒト化抗体の構築のための出発原料を提供するマウス若しくは他のヒト以外の抗体と同一若しくは類似の結合特異性および親和性を有する。a.キメラ抗体の製造キメラ抗体という用語は、そのLおよびH鎖遺伝子が典型的には遺伝子工学により、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから構築された抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変Vセグメントを、IgG1およびIgG4のようなヒト定常Cセグメントに結合しうる。ヒトアイソタイプIgG1およびIgG4が例示的である。典型的なキメラ抗体は、従って、マウス抗体からのVすなわち抗原結合ドメインおよびヒト抗体からのCすなわちエフェクタードメインよりなるハイブリッドタンパク質である。b.ヒト化抗体の製造ヒト化抗体という用語は、実質的にヒト抗体鎖アクセプター免疫グロブリンすなわち抗体と称されるからの可変領域フレームワーク残基、および実質的にマウス抗体ドナー免疫グロブリンすなわち抗体と称されるからの最低1個の相補性決定領域を含んでなる最低1本の鎖を含んでなる抗体を指す。Queenら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:10029-100331989、米国特許第5,530,101号、同第5,585,089号、同第5,693,761号、同第5,693,762号、Selickら、第WO90/07861号、およびWinter、米国特許第5,225,539号明細書全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるを参照されたい。定常領域1個若しくは複数もまた、存在する場合、実質的に若しくは完全にヒト免疫グロブリンからである。マウスCDRのヒト可変ドメインフレームワークへの置換は、該CDRが発したマウス可変フレームワークに同一若しくは類似のコンホメーションを該ヒト可変ドメインフレームワークが採用する場合に、それらの正しい空間的向きの保持をもたらすことが最もありそうである。これは、CDRが由来したマウス可変フレームワークドメインと高程度の配列同一性をそのフレームワーク配列が表すヒト抗体からのヒト可変ドメインを得ることにより達成される。HおよびL鎖可変フレームワーク領域は同一若しくは異なるヒト抗体配列由来であり得る。ヒト抗体配列は天然に存在するヒト抗体の配列であり得るか、若しくは数種のヒト抗体のコンセンサス配列であり得る。Kettleboroughら、ProteinEngineering4:7731991;Kolbingerら、ProteinEngineering6:9711993およびCarterら、第WO92/22653号明細書を参照されたい。マウスドナー免疫グロブリンの相補性決定領域および適切なヒトアクセプター免疫グロブリンを同定したら、次の段階は、生じるヒト化抗体の特性を至適化するのにこれらの成分からのどの残基あればを置換すべきであるかを決定することである。一般に、マウスでのヒトアミノ酸残基の置換は最低限にすべきである。マウス残基の導入は、ヒトにおいてヒト抗マウス抗体HAMA応答を導き出す抗体の危険を増大させるためである。技術に認識された免疫応答測定方法を実施して、特定の患者での若しくは臨床試験の間のHAMA応答をモニターし得る。ヒト化抗体を投与した患者に、前記治療の投与の開始時およびその間、免疫原性評価を与え得る。HAMA応答は、例えば、表面プラスモン共鳴技術BIACOREおよび/若しくは固相ELISA分析を包含する当業者に既知の方法を使用して、患者からの血清サンプル中の該ヒト化治療試薬に対する抗体を検出することにより測定する。ヒト可変領域フレームワーク残基からのある種のアミノ酸を、CDRのコンホメーションおよび/若しくは抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づき、置換のため選択する。マウスCDR領域のヒト可変領域フレームワーク領域との非天然の並置は非天然のコンホメーションの拘束をもたらし得、それはあるアミノ酸残基の置換により補正されない限り、結合親和性の喪失につながる。置換のためのアミノ酸残基の選択は部分的にコンピュータモデル化により決定する。免疫グロブリン分子の三次元像を生じるためのコンピュータのハードウェアおよびソフトウェアが本明細書に記述される。一般に、分子モデルは、免疫グロブリン鎖若しくはそれらのドメインの解明された構造から出発して製造する。モデル化されるべき鎖を、解明された三次元構造の鎖若しくはドメインとアミノ酸配列の類似性について比較し、そして最大の配列類似性を示す鎖若しくはドメインを該分子モデルの構築のための出発点として選択する。最低50の配列同一性を共有する鎖若しくはドメインをモデル化に選択し、そして、好ましくは最低60、70、80、90の配列同一性若しくはそれ以上を共有するものをモデル化に選択する。モデル化されている免疫グロブリン鎖若しくはドメイン中の実際のアミノ酸と出発構造中のものの間の差違を見込むように、解明された出発構造を改変する。改変した構造をその後混成免疫グロブリンに集成する。最後に、エネルギー最小化、ならびに相互からの適切な距離内に全原子があることならびに結合長さおよび角が化学的に許容できる限界内にあることを確認することにより、該モデルを改良する。置換のためのアミノ酸残基の選択は、部分的に、特定の位置のアミノ酸の特徴の検査、または特定のアミノ酸の置換若しくは突然変異誘発の影響の経験的観察によってもまた決定し得る。例えば、アミノ酸がマウス可変領域フレームワーク残基と選択したヒト可変領域フレームワーク残基の間で異なる場合、該ヒトフレームワークアミノ酸は、該アミノ酸が:1抗原を直接非共有結合するか、2CDR領域に隣接するか、3CDR領域と別の方法で相互作用する例えばコンピュータモデル化により決定されるところのCDR領域の約3~6Å以内であるか、若しくは4VL-VH界面に参画することが合理的に期待される場合に、マウス抗体からの同等のフレームワークアミノ酸により、通常は置換すべきである。抗原を直接非共有結合する残基は、確立された化学力により、例えば水素結合、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などにより抗原上のアミノ酸と直接相互作用する十分な確率を有するフレームワーク領域中の位置のアミノ酸を包含する。CDRおよびフレームワーク領域はKabatら若しくはChothiaら、上記により定義されるとおりである。Kabatら、上記により定義されるところのフレームワーク領域がChothiaら、上記により定義されるところの構造ループ残基を構成する場合、マウス抗体に存在するアミノ酸をヒト化抗体中での置換に選択しうる。CDR領域に隣接する残基は、例えば、Kabatにより定義されるところのCDR若しくはChothia例えばChothiaとLeskJMB196:9011987を参照されたいにより定義されるところのCDRにすぐ隣接する位置のヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列中のCDRの1個若しくはそれ以上にすぐ隣接する位置のアミノ酸残基を包含する。これらのアミノ酸は、とりわけ、CDR中のアミノ酸と相互作用し、かつ、アクセプターから選ばれる場合はドナーCDRを歪ませかつ親和性を低下させることがありそうである。さらに、該隣接アミノ酸は抗原と直接相互作用することができAmitら、Science、233:7471986引用することにより本明細書に組み込まれる、そして、ドナーからこれらのアミノ酸を選択することは、元の抗体中で親和性を提供する全部の抗原接触を保つのに望ましいことができる。CDR領域と別の方法で相互作用する残基は、CDR領域に影響を及ぼすのに十分な空間的向きにあることが二次構造分析により決定されるものを包含する。一態様において、CDR領域と別の方法で相互作用する残基は、ドナー免疫グロブリンの三次元モデル例えばコンピュータ生成モデルを解析することにより同定する。典型的には元のドナー抗体の三次元モデルは、CDRの外側のあるアミノ酸がCDRに近接し、そして水素結合、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などによりCDR中のアミノ酸と相互作用する十分な確率を有することを示す。それらのアミノ酸位置ではアクセプター免疫グロブリンアミノ酸よりむしろドナー免疫グロブリンアミノ酸を選択しうる。この基準によるアミノ酸は、一般に、CDR中の何らかの原子の約3オングストローム単位Å以内に側鎖原子を有することができ、そして、上に列挙されたもののような確立した化学力によりCDR原子と相互作用し得る原子を含有しなければならない。水素結合を形成しうる原子の場合には、3Åがそれらの核間で測定されるが、しかし、結合を形成しない原子については、3Åはそれらのファンデルワールス表面間で測定される。これ故に、後者の場合、核は相互作用することが可能と考えられる原子について約6Å3Åファンデルワールス半径の総和以内になければならない。多くの場合、核は4若しくは5から6Åまで離れていることができる。あるアミノ酸がCDRと相互作用し得るかどうかの決定において、H鎖CDR2の最後の8アミノ酸をCDRの一部とみなさないことが好ましい。構造の見地からはこれら8アミノ酸はフレームワークの一部としてより多く挙動するためである。CDR中のアミノ酸と相互作用することが可能であるアミノ酸をなお別の方法で同定しうる。各フレームワークアミノ酸の溶媒到達可能な表面積は2方法、すなわち1無傷の抗体、および2そのCDRを除去した抗体よりなる仮想分子で計算する。約10平方オングストローム若しくはそれ以上のこれらの数の間の差違は、フレームワークアミノ酸の溶媒への到達がCDRにより少なくとも部分的に阻害されること、および従って該アミノ酸はCDRと接触していることを示す。アミノ酸の溶媒到達可能な表面積は、当該技術分野で既知のアルゴリズム例えばConnolly、J.Apply.Cryst.16:5481983およびLeeとRichards、J.Mol.Biol.55:3791971それらの双方は引用することにより本明細書に組み込まれるを使用して、抗体の三次元モデルに基づき計算しうる。フレームワークアミノ酸は、ときに、別のフレームワークアミノ酸CDRに順に接触するのコンホメ―ションに影響を及ぼすことにより、CDRと間接的にもまた相互作用しうる。フレームワーク中の数個の位置のアミノ酸は、多くの抗体でCDR確認を決定するのに重要例えばCDRと相互作用することが可能であることが既知であるChothiaとLesk、上記、Chothiaら、上記およびTramontanoら、J.Mol.Biol.215:1751990それらの全部は引用することにより本明細書に組み込まれる。これらの著者らは、数種の既知の抗体の構造の分析によりCDRコンホメーションに重要な保存されたフレームワーク残基を同定した。分析した抗体は、CDRのコンホメーションに基づき、制限された数の構造若しくは正準分類に属した。正準分類のメンバー内の保存されたフレームワーク残基は正準残基と称される。正準残基は、L鎖の残基2、25、29、30、33、48、64、71、90、94および95、ならびにH鎖の残基24、26、29、34、54、55、71および94を包含する。付加的な残基例えばCDR構造決定残基は、MartinとThorton1996J.Mol.Biol.263:800の方法論に従って同定し得る。注目すべきことに、L鎖の位置2、48、64および71ならびにH鎖の26-30、71および94のアミノ酸Kabatによる番号付けは、多くの抗体中でCDRと相互作用することが可能であることが既知である。L鎖の位置35ならびにH鎖の93および103のアミノ酸もまたCDRと相互作用することがありそうである。CDRのコンホメーションを遂げうる付加的な残基は、FooteとWinter1992J.Mol.Biol.224:487の方法論に従って同定し得る。こうした残基はバーニア残基と命名され、そしてCDRのすぐ下のすなわちその下の基盤を形成するフレームワーク領域中の残基である。全部のこれらの番号付けられた位置で、ヒト化免疫グロブリン中にあるべきアクセプターアミノ酸よりむしろドナーアミノ酸それらが異なる場合の選択が好ましい。他方、L鎖の最初の5アミノ酸のようなCDR領域と相互作用することが可能なある残基を、ときに、ヒト化免疫グロブリンでの親和性の喪失を伴わずにアクセプター免疫グロブリンから選ぶことができる。VL-VH界面に参画する残基若しくは充填残基は、例えばNovotnyとHaber、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、82:4592-661985若しくはChothiaら、上記により定義されるところのVLとVHの間の界面の残基を包含する。一般に、まれな充填残基は、それらがヒトフレームワーク中のものと異なる場合はヒト化抗体中で保持されなければならない。一般に、上の基準を満足するアミノ酸の1個若しくはそれ以上を置換し得る。いくつかの態様において、上の基準を満足するアミノ酸の全部若しくは大部分を置換する。ときに、特定の1アミノ酸が上の基準を満足するかどうかについて若干のあいまいさが存在し、そして、代替のバリアント免疫グロブリンが製造され、その一方はその特定の置換を有し、その他方は有しない。そのように製造された代替のバリアント免疫グロブリンを、本明細書に記述されるアッセイのいずれかで所望の活性について試験し得、そして好ましい免疫グロブリンを選択し得る。通常、ヒト化抗体中のCDR領域は、ドナー抗体の対応するCDR領域に実質的に同一、そしてより通常は同一である。しかしながら、ある態様において、抗体の抗原結合特異性を改変しかつ/若しくは該抗体の免疫原性を低下させるように、1個若しくはそれ以上のCDR領域を改変することが望ましいことができる。典型的には、理想化された結合定数が達成されるような、より好都合な結合オン速度on-rateofbinding、より好都合な結合オフ速度off-rateofbinding、若しくは双方を達成するように結合を改変するようにCDRの1個若しくはそれ以上の残基を変える。この戦略を使用して、例えば1010M-1若しくはそれ以上の超高結合親和性を有する抗体を達成し得る。簡潔には、ドナーCDR配列は基礎配列と称され、それから1個若しくはそれ以上の残基をその後変える。本明細書に記述されるところの親和性成熟技術を使用してCDR領域1個若しくは複数を変えることができ、次いで生じる結合分子を結合の所望の変化についてスクリーニングし得る。該方法は、潜在的なヒト抗マウス抗体HAMA応答が最小化若しくは回避されるようなより少なく免疫原性であるようにドナーCDR、典型的にはマウスCDRを変えるのにもまた使用しうる。従って、CDR1個若しくは複数が変えられる際に、最良の組合せられた結合および低免疫原性について至適化された抗体が達成されるような、結合親和性ならびに免疫原性の変化をモニターかつ評価し得る例えば、米国特許第6,656,467号および米国特許公開第US20020164326A1号明細書を参照されたい。別のアプローチにおいて、抗体のCDR領域を分析して、ドナーCDRのそれぞれをヒト対照物で系統的に置換することにより、各個々のCDRの抗体結合および/若しくは免疫原性への寄与を決定する。ヒト化抗体の得られた一団をその後、各CDRの抗原親和性および潜在的免疫原性について評価する。こうして、候補の結合分子の2種の臨床上重要な特性すなわち抗原結合および低免疫原性を測定する。対応するマウス若しくはCDRグラフトヒト化形態の抗体に対する患者血清が入手可能である場合には、系統的ヒトCDR交換を表す抗体の一団全体をスクリーニングして、各ドナーCDRに対する患者の抗イディオタイプ応答を決定し得る技術的詳細については、例えばIwashiら、Mol.Immunol.36:1079-911999を参照されたい。こうしたアプローチは、必須でないドナーCDRから必須のドナーCDR領域を同定することを見込む。必須でないドナーCDR領域をその後ヒト対照物CDRと交換しうる。機能の許容できない喪失を伴わずに必須のCDR領域を交換し得ない場合は、CDRの特異性決定残基SDRの同定を、例えば部位特異的突然変異誘発により実施する。こうして、CDRをその後、SDRのみ保持しかつCDR全体の残存するアミノ酸位置でヒトおよび/若しくは最小限に免疫原性であるように再工作し得る。ドナーCDRの一部分のみがグラフトされるこうしたアプローチはまた簡略化CDRグラフトとも称される前述の技術に関する技術的詳細については、例えばTamuraら、J.ofImmunology1643:1432-41.2000;Gonzalesら、Mol.Immunol40:337-3492003;Kashmiriら、Crit.Rev.Oncol.Hematol.38:3-162001;およびDePascalisら、J.ofImmunology1696:3076-84.2002を参照されたい。さらに、生じるヒト化免疫グロブリンの結合親和性に認識可能に影響を及ぼすことなくCDR残基の1個若しくはそれ以上の保存的アミノ酸置換を行うことがときに可能である。保存的置換により、gly、ala;val、ile、leu;asp、glu;asn、gln;ser、thr;lys、arg;およびphe、tyrのような組合せを意図している。置換の付加的な候補は、その位置でヒト免疫グロブリンにまれであるアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の同等の位置、若しくはより典型的なヒト免疫グロブリンの同等の位置からのアミノ酸で置換し得る。例えば、アクセプター免疫グロブリンのヒトフレームワーク領域中のアミノ酸がその位置にまれでありかつドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸がヒト免疫グロブリン配列中のその位置に普遍的である場合;または、アクセプター免疫グロブリン中のアミノ酸がその位置にまれでありかつドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸もまた他のヒト配列に関してまれである場合は、置換が望ましいことがある。残基がアクセプターヒトフレームワーク配列にまれであるかどうかは、戻し突然変異のための残基をCDRコンホメーションへの寄与に基づき選択する場合にもまた考慮すべきである。例えば、戻し突然変異がアクセプターヒトフレームワーク配列にまれである残基の置換をもたらす場合、ヒト化抗体を活性についてを伴いおよび伴わず試験しうる。戻し突然変異が活性に必要でない場合は、免疫原性の懸念を低下させるためにそれを除外しうる。例えば、以下の残基での戻し突然変異は、アクセプターヒトフレームワーク配列中でまれである残基を導入しうる;vl=V22.0、L30.4、T71.8、Q180.2、L831.2、I852.9、A1000.3およびL1061.1;ならびにvh=T32.0、K51.8、I110.2、S231.5、F241.5、S412.3、K712.4、R751.4、I821.4、D832.2およびL1090.8。これらの基準は、ヒトフレームワーク中の異常なアミノ酸が抗体構造を破壊しないことを確実にするのに役立つ。さらに、まれなヒトアクセプターアミノ酸をヒト抗体にたまたま典型的であるドナー抗体からのアミノ酸で置換することにより、ヒト化抗体をより少なく免疫原性にしうる。本明細書で使用されるところのまれなという用語は、配列の代表的なサンプル中の配列の約20未満、好ましくは約10未満、より好ましくは約5未満、なおより好ましくは約3未満、なおより好ましくは約2未満、およびなおより好ましくは約1未満でその位置に存在するアミノ酸を示し、また、本明細書で使用されるところの普遍的なという用語は、代表的サンプル中の配列の約25以上、しかし通常は約50以上に存在するアミノ酸を示す。例えば、ヒトアクセプター配列中のあるアミノ酸がまれであるか若しくは普遍的であるかを決定する場合、ヒト可変領域配列のみを、また、あるマウスアミノ酸がまれであるか若しくは普遍的であるかを決定する場合はマウス可変領域配列のみを考えることがしばしば好ましいことができる。さらに、全部のヒトLおよびH鎖可変領域配列はそれぞれ、相互にとりわけ相同でありかつある決定的な位置で同一アミノ酸を有する、配列のサブグループにグループ分けされるKabatら、上記。ヒトアクセプター配列中のあるアミノ酸がヒト配列のなかでまれであるか若しくは普遍的であるかを決定する場合、同一サブグループ中のそれらのヒト配列のみをアクセプター配列とみなすことがしばしば好ましいことができる。置換の付加的な候補は、Chothiaら、上記により提案された代替の定義のもとでCDR領域の一部と同定されるとみられるアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。置換の付加的な候補は、AbMおよび/若しくは接触の定義のもとでCDR領域の一部と同定されるとみられるアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。置換の付加的な候補は、まれなドナーフレームワーク残基に対応するアクセプターフレームワーク残基である。まれなドナーフレームワーク残基は、その位置でマウス抗体に本明細書で定義されるところのまれであるものである。マウス抗体について、サブグループをKabatに従って決定し得、そしてコンセンサスと異なる残基位置を同定し得る。これらのドナー特異的な差違は、活性を高めるマウス配列中の体細胞突然変異を指摘しうる。結合に影響を及ぼすことが予測されるまれな残基例えば充填正準および/若しくはバーニア残基は保持される一方、結合に重要でないことが予測される残基は置換し得る。12A11v1配列内のまれな残基はI853.6を包含する。12A11vh配列内のまれな残基は、T31.0、I111.7、L121.7、S412.8、D831.8およびA851.8を包含する。置換の付加的な候補は、アクセプターフレームワーク領域に存在する非生殖系列残基である。例えば、アクセプター抗体鎖すなわちドナー抗体鎖と有意の配列同一性を共有するヒト抗体鎖を生殖系列抗体鎖同様にドナー鎖と有意の配列同一性を共有すると整列する場合、アクセプター鎖のフレームワークと生殖系列鎖のフレームワークの間で一致しない残基を、生殖系列配列からの対応する残基で置換し得る。上で論考された特定のアミノ酸置換以外に、ヒト化免疫グロブリンのフレームワーク領域は、それらが由来したヒト抗体のフレームワーク領域に通常は実質的に同一、およびより通常は同一である。もちろん、フレームワーク領域中のアミノ酸の多くは、抗体の特異性若しくは親和性に対する直接の寄与をほとんど若しくはまったくなさない。従って、フレームワーク残基の多くの個別の保存的置換は、生じるヒト化免疫グロブリンの特異性若しくは親和性の認識可能な変化を伴わずに耐えら得る。従って、一態様において、ヒト化免疫グロブリンの可変フレームワーク領域は、ヒト可変フレームワーク領域配列若しくはこうした配列のコンセンサスに対する最低85の配列同一性を共有する。別の態様において、ヒト化免疫グロブリンの可変フレームワーク領域は、ヒト可変フレームワーク領域配列若しくはこうした配列のコンセンサスに対する最低90、好ましくは95、より好ましくは96、97、98若しくは99の配列同一性を共有する。しかしながら一般にこうした置換は望ましくない。例示的態様において、本発明のヒト化抗体は最低107、108、109若しくは1010M-1の抗原に対する特異的結合親和性を表す。他の態様において、本発明の抗体は最低1010、1011若しくは1012M-1の結合親和性を有し得る。通常、抗原に対するヒト化抗体の結合親和性の上限は、ドナー免疫グロブリンのものの3、4若しくは5の係数内である。しばしば、結合親和性の下限もまたドナー免疫グロブリンのものの3、4若しくは5の係数内にある。あるいは、結合親和性は、置換を有しないヒト化抗体例えばドナーCDRおよびアクセプターFRを有するがしかしFR置換を有しない抗体のものと比較し得る。こうした場合は、置換で至適化された抗体の結合は、好ましくは未置換の抗体のものより最低2ないし3倍より大きいか、若しくは3ないし4倍より大きい。比較を行うため、多様な抗体の活性を例えばBIACOREすなわち未標識試薬を使用する表面プラスモン共鳴若しくは競合結合アッセイにより測定し得る。一態様において、本発明の開示のヒト化抗体は、ヒト化される対応するヒト以外の抗体例えばマウスの正準CDR構造型に同一若しくは類似である1種若しくはそれ以上のCDR構造型を包含する、ヒト抗体遺伝子例えば生殖系列抗体遺伝子セグメントから選択された可変領域フレームワーク配列を包含する。米国特許第6,881,557号明細書およびTanら、JournalofImmunol169:1119-11252002全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるを参照されたい。例えば米国特許第6,300,064号明細書全部の目的上そっくりそのまま引用することにより本明細書に組み込まれるに記述されるところのコンセンサスアミノ酸配列を有するフレームワーク領域を含んでなるヒト化抗体もまた特徴とする。以下の表は、本明細書に記述されるヒト化抗体でフレームワーク領域として使用し得る多様なコンセンサス配列を列挙する。従って、下に示されるコンセンサス配列のいずれか1つを、本明細書に記述される1個若しくはそれ以上のCDRと組合せでのように使用して、それにより本発明のヒト化免疫グロブリンすなわちヒト化抗体をもたらし得る。本発明のヒト化抗体を製造するのに使用し得るなお別の戦略は、ヒト化されるべきマウス抗体からのCDRを受領するフレームワークとして最も近いヒト生殖配列を選択することである。Merckenら、第US2005/0129695号明細書全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるを参照されたい。生殖系列配列は、再配列されない免疫グロブリン遺伝子から発し、そして従って潜在的に免疫原性である体細胞高頻度変異を提示しない。このアプローチは最も近いヒト生殖系列配列の検索に基づく。とりわけ、マウスVLおよびVHフレームワーク領域との高程度の配列同一性を表す生殖系列配列からの可変ドメインを、V-Baseおよび/若しくはIMGTデータベースそれぞれ、医学研究協議会タンパク質工学センターMedicalResearchCouncilCenterforProteinEngineeringのインターネットサーバおよび欧州生物情報学研究所EuropeanBioinformaticsInstituteのインターネットサーバを通じ公的にアクセス可能を使用して同定し得る。マウスCDRをその後、選ばれたヒト生殖系列可変領域アクセプター配列にグラフトする。本発明の免疫グロブリンをヒト化するのに使用し得る付加的な例示的ヒト化技術は、例えば、Prestaら、J.Immunol.、151:2623-26321993;Carterら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA.、89:4285-42891992;Coutoら、CancerRes.、55:5973s-77s1995;O’Connerら、ProteinEng.、11:321-3281998;およびLoによるAntibodyEngineering-MethodsandProtocols、Vol.2482004に記述されている。加えて、上述されたところの技術のいずれかを使用してフレームワーク残基を分析して、生じるヒト化抗体の特性を至適化するためにどの残基あればを置換すべきかを決定し得る。例えば、コンピュータモデル化を使用して、抗原結合に直接若しくは間接的に影響する十分な確率を有する残基を同定し得る。c.ヒト化12A11抗体の製造本発明の好ましい一態様は、とりわけ本明細書に記述される治療および/若しくは診断の方法論での使用のためのAβのN末端に対するヒト化抗体を特徴とする。ヒト化抗体の製造のためのとりわけ好ましい出発原料はモノクローナル抗体12A11である。12A11はAβのN末端に特異的であり、そして1凝集型Aβ1-42に対する高親和性を有し、2可溶性Aβを捕捉する能力を有し、および3アミロイド斑の食作用を媒介すなわち食作用を誘導することが示されている実施例1を参照されたい。12A11抗体のinvivo有効性を実施例2に記述する。12A11抗体HおよびL鎖可変領域をコードするcDNAのクローニングおよび配列決定を実施例3に記述する。適するヒトアクセプター抗体配列は、マウス可変領域のアミノ酸配列の既知のヒト抗体の配列とのコンピュータ比較により同定する。該比較はHおよびL鎖について別個に実施するが、しかし原理はそれぞれについて同様である。とりわけ、フレームワーク配列がマウスVLおよびVHフレームワーク領域との高程度の配列同一性を表すヒト抗体からの可変ドメインを、例えばそれぞれのマウスフレームワーク配列でのNCBIIgGBLAST国立保健研究所NatioanlInstituteofHealthのNCBIインターネットサーバを通じ公的にアクセス可能を使用するKabatデータベース若しくはIgGタンパク質配列データベースのクエリにより同定する。一態様において、マウスドナー配列、例えばドナーフレームワークFR配列と50以上の配列同一性を共有するアクセプター配列を選択する。好ましくは、60、65、70、75、80、85、90、95の配列同一性若しくはそれ以上を共有するアクセプター抗体配列を選択する。12A11のコンピュータ比較は、12A11L鎖マウスサブグループIIが、Kabatら、上記により定義されるところのサブタイプκIIのヒトL鎖に対する最大の配列同一性を示すこと、および12A11H鎖マウスサブグループIbが、サブタイプIIのヒトH鎖に対する最大の配列同一性を示すことを示した。LおよびHヒトフレームワーク領域は、これらのサブタイプのヒト抗体若しくはこうしたサブタイプのコンセンサス配列に由来し得る。第一のヒト化の試みにおいて、L鎖可変フレームワーク領域はヒトサブグループII抗体に由来した。ヒトサブグループII抗体由来のH鎖可変フレームワーク領域を有するヒト化抗体の高レベルの発現を達成するよう設計された以前の実験に基づき、こうした抗体の発現レベルがときに低かったことが発見された。従って、Saldanhaら1999MolImmunol.36:709-19に記述される論法に基づき、ヒトサブグループIIよりむしろヒトサブグループIII抗体由来のフレームワーク領域を選んだ。ヒトサブグループII抗体K64AIMS4受託番号BAC01733は、12A11のL鎖可変領域内で有意の配列同一性を有するNCBIの非重複性データベースから同定した。ヒトサブグループIII抗体M72受託番号AAA69734は、12A11のH鎖可変領域内で有意の配列同一性を有するNCBIの非重複性データベースから同定したSchroederとWang1990Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.872:6146-6150もまた参照されたい。代替のL鎖アクセプター配列は、例えば、PDB受託番号1KFAgi24158782、PDB受託番号1KFAgi24158784、EMBL受託番号CAE75574.1gi38522587、EMBL受託番号CAE75575.1gi38522590、EMBL受託番号CAE84952.1gi39838891、DJB受託番号BAC01734.1gi21669419、DJB受託番号BAC01730.1gi21669411、PIR受託番号S40312gi481978、EMBL受託番号CAA51090.1gi3980118、GenBank受託番号AAH63599.1gi39794308、PIR受託番号S22902gi106540、PIR受託番号S42611gi631215、EMBL受託番号CAA38072.1gi433890、GenBank受託番号AAD00856.1gi4100384、EMBL受託番号CAA39072.1gi34000、PIR受託番号S23230gi284256、DBJ受託番号BAC01599.1gi21669149、DBJ受託番号BAC01729.1gi21669409、DBJ受託番号BAC01562.1gi21669075、EMBL受託番号CAA85590.1gi587338、GenBank受託番号AAQ99243.1gi37694665、GenBank受託番号AAK94811.1gi18025604、EMBL受託番号CAB51297.1gi5578794、DBJ受託番号BAC01740.1gi21669431およびDBJ受託番号BAC01733.1gi21669417を包含する。代替のH鎖アクセプター配列は、例えば、GenBank受託番号AAB35009.1gi1041885、DBJ受託番号BAC01904.1gi21669789、GenBank受託番号AAD53816.1gi5834100、GenBank受託番号AAS86081.1gi46254223、DBJ受託番号BAC01462.1gi21668870、GenBank受託番号AAC18191.1gi3170773、DBJ受託番号BAC02266.1gi21670513、GenBank受託番号AAD56254.1gi5921589、GenBank受託番号AAD53807.1gi5834082、DBJ受託番号BAC02260.1gi21670501、GenBank受託番号AAC18166.1gi3170723、EMBL受託番号CAA49495.1gi33085、PIR受託番号S31513gi345903、GenBank受託番号AAS86079.1gi46254219、DBJ受託番号BAC01917.1gi21669815、DBJ受託番号BAC01912.1gi21669805、GenBank受託番号AAC18283.1gi3170961、DBJ受託番号BAC01903gi21669787、DBJ受託番号BAC01887.1gi21669755、DBJ受託番号BAC02259.1gi21370499、DBJ受託番号BAC01913.1gi21669807、DBJ受託番号BAC01910.1gi21669801、DJB受託番号BAC02267.1gi21670515、GenBank受託番号AAC18306.1gi3171011、GenBank受託番号AAD53817.1gi5834102、PIR受託番号E36005gi106423、EMBLCAB37129.1gi4456494およびGenBankAAA68892.1gi186190を包含する。例示的態様において、本発明のヒト化抗体は12A11CDRおよび上に列挙されるアクセプター配列からのFRを包含する。本明細書に記述されるところのCDRのコンホメーションおよび/若しくは活性に重要なフレームワーク領域内の残基を戻し突然変異に選択するドナー配列とアクセプター配列の間で異なる場合。次に、後に続くとおり残基を置換のため選択する。アミノ酸が12A11可変フレームワーク領域と同等のヒト可変フレームワーク領域の間で異なる場合、ヒトフレームワークアミノ酸は、通常、該アミノ酸が:1抗原を直接非共有結合するか、2CDR領域に隣接するか、Chothiaら、上記により提案された代替の定義のもとでCDR領域の一部であるか、若しくはCDR領域と別の方法で相互作用する例えばCDR領域の約3A以内であるか、または3VL-VH界面に参画することが合理的に期待される場合は、同等のマウスアミノ酸により置換すべきである。12A11抗体HおよびL鎖可変領域の構造解析、ならびに12A11抗体のヒト化を実施例6に記述する。簡潔には、L鎖について解明されたマウス抗体構造1KTRならびにH鎖について1JRHおよび1ETZの三次元モデルを研究した。CDRコンホメーションに重要な残基例えばバーニア残基の同定のため研究し得る代替の三次元モデルは、L鎖について、PDB受託番号2JELgi3212688、PDB受託番号1TETgi494639、PDB受託番号IJP5gi16975307、PDB受託番号1CBVgi493917、PDB受託番号2PCPgi4388943、PDB受託番号1I9Igi2050118、PDB受託番号1CLZgi1827926、PDB受託番号1FL6gi17942615およびPDB受託番号1KELgi1942968、ならびにH鎖についてPDB1GGIgi442938、PDB受託番号1GGBgi442934、PDB受託番号1N5Ygi28373913、PDB受託番号2HMIgi3891821、PDB受託番号1FDLgi229915、PDB受託番号1KIPgi1942788、PDB受託番号1KIQgi1942791およびPDB受託番号1VFAgi576325を包含する。本明細書に記述される抗体の三次元構造情報は、例えば構造バイオインフォマティクス共同機構ResearchCollaboratoryforStructuralBioinformaticsのタンパク質データバンクPDBから公的に入手可能である。該PDBはワールドワイドウェブのインターネットを介して無料でアクセス可能であり、そしてBermanら2000NucleicAcidsResearch、28:235に記述されている。解明された三次元構造の研究は12A11内のCDRと相互作用する残基の同定を見込む。あるいは、コンピュータモデル化ソフトウェアを使用して、12A11のVHおよびVL鎖の三次元モデルを生成し得る。簡潔には、HおよびL鎖について最も近い解明されたマウス抗体構造に基づき三次元モデルを生成する。この目的上、1KTRを12A11L鎖をモデル化するための鋳型として使用し得、また、1ETZおよび1JRHをH鎖をモデル化するための鋳型として使用し得る。モデルは、不都合な原子接触を軽減しかつ静電およびファンデルワールス相互作用を至適化するための一連のエネルギー最小化段階によりさらに改良し得る。付加的な三次元分析および/若しくはモデル化を、これらの解明されたマウス構造とそれぞれの12A11鎖の間の類似性に基づき、L鎖について2JEL2.5Åおよび/若しくは1TET2.3ÅならびにH鎖について1GGI2.8Åまたは上で示された他の抗体を使用して実施し得る。12A11の構造のコンピュータモデルは、さらに、ヒトフレームワーク構造で置換した12A11相補性決定領域を含有する抗体の三次元構造を予測するための出発点としてはたらき得る。さらなるアミノ酸置換が導入される際に該構造を表す付加的なモデルを構築し得る。一般に、上の基準を満たすアミノ酸の1個、大部分若しくは全部の置換が望ましい。従って、本発明のヒト化抗体は、通常、選ばれた位置の最低1、2、3個若しくはそれ以上に、対応する12A11残基でのヒトL鎖フレームワーク残基の置換を含有することができる。ヒト化抗体は、通常、選ばれた位置の最低1、2、3個若しくはそれ以上に、対応する12A11残基でのヒトH鎖フレームワーク残基の置換もまた含有する。しかしながら、ときに、特定のアミノ酸が上の基準に合致するかどうかについて若干のあいまいさが存在し、そして代替のバリアント免疫グロブリンが製造され、その一方はその特定の置換を有し、その他方は有しない。マウス残基での置換が、特定の一位置にヒト免疫グロブリンでまれである残基を導入するとみられる場合は、該抗体を該特定の置換を伴い若しくは伴わず活性について試験することが望ましいことができる。活性例えば結合親和性および/若しくは結合特異性が置換を伴い若しくは伴わずほぼ同一である場合は、置換を伴わない抗体が好ましいことができる。本明細書に記述されるとおりより少ないHAHA応答を導き出すことが期待されるとみられるためである。置換の他の候補は、その位置でヒト免疫グロブリンにまれであるアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、より典型的なヒト免疫グロブリンの同等の位置からのアミノ酸で置換し得る。あるいは、マウス12A11中の同等の位置からのアミノ酸を、こうしたアミノ酸が該同等の位置でヒト免疫グロブリンに典型的である場合にヒトフレームワーク領域に導入し得る。置換の他の候補はフレームワーク領域に存在する非生殖系列残基である。既知の生殖系列配列との12A11のコンピュータ比較を実施することにより、H若しくはL鎖に対する最大の程度の配列同一性をもつ生殖系列配列を同定し得る。フレームワーク領域および生殖系列配列のアライメントは、対応する生殖系列残基での置換にどの残基を選択しうるかを示すことができる。選択したL鎖アクセプターフレームワークとこれらの生殖系列配列の1種の間で一致しない残基を、対応する生殖系列残基での置換に選択し得る。まれなマウス残基は、ドナーVLおよび/若しくはVH配列が属するKabatによるサブグループの他メンバーの配列と該ドナーVLおよび/若しくはVH配列を比較すること、ならびにコンセンサスと異なる残基位置を同定することにより同定する。これらのドナー特異的差違が、活性を増強する体細胞突然変異を指摘しうる。結合部位に近接のまれな残基はおそらく抗原を接触することができ、該マウス残基を保持することを望ましくする。しかしながら、該まれなマウス残基が結合に重要でない場合、対応するアクセプター残基の使用が好ましい。該マウス残基がヒト化抗体中に免疫原性の新エピトープを創製しうるためである。ドナー配列中のまれな残基が対応するアクセプター配列中で実際には普遍的な残基である状況では、好ましい残基は明らかにアクセプター残基である。表1は12A11のVHおよびVL領域の配列分析を要約する。アミノ酸置換の選択において使用し得る生殖系列配列を示す。本明細書に記述される抗体の三次元構造情報は、例えば構造バイオインフォマティクス共同機構ResearchCollaboratoryforStructuralBioinformaticsのタンパク質データバンクPDBから公的に入手可能である。該PDBはワールドワイドウェブのインターネットを介して無料でアクセス可能であり、そしてBermanら2000NucleicAcidsResearch、p235-242に記述されている。本明細書で参照される生殖系列遺伝子配列は、例えば、国立バイオテクノロジー情報センターNationalCenterforBiotechnologyInformationNCBIのIgh、IgκおよびIgλ生殖系列V遺伝子の集合物中の配列のデータベース国立保健研究所NIHの国立医学図書館NationalLibraryofMedicineNLMの一部門としてから公的に入手可能である。NCBIのIg生殖系列遺伝子データベースの相同性検索はIgGBLASTTMにより提供される。例示的一態様において、本発明のヒト化抗体は、iマウス12A11VLCDRおよびヒトアクセプターフレームワーク該フレームワークは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9若しくはそれ以上の残基が対応する12A11残基で置換されているを含んでなる可変ドメインを含んでなるL鎖、ならびにii12A11VHCDRおよびヒトアクセプターフレームワーク該フレームワークは、最低1、2、3、4、5、6、7、8、9若しくはそれ以上の残基が対応する12A11残基で置換され、また、場合によっては最低1、好ましくは2若しくは3残基が対応するヒト生殖系列残基で置換されているを含んでなるH鎖を含有する。別の例示的一態様において、本発明のヒト化抗体は、iマウス12A11VLCDRおよびヒトアクセプターフレームワークを含んでなるL鎖該フレームワークは最低1、2、3、4、5、6、7、8、9若しくはそれ以上の残基が戻し突然変異されておりすなわち対応する12A11残基で置換されている、該戻し突然変異1個若しくは複数は正準、充填および/若しくはバーニア残基でである、ならびにii12A11VHCDRおよびヒトアクセプターフレームワークを含んでなるH鎖該フレームワークは最低1、2、3、4、5、6、7、8、9若しくはそれ以上の残基が戻し突然変異されており、該戻し突然変異は正準、充填および/若しくはバーニア残基でであるを含有する。ある態様において、戻し突然変異は、充填および/若しくは正準残基でのみであるか、または主として正準および/若しくは充填残基でである例えば、ドナーとアクセプター配列の間で異なるバーニア残基の1若しくは2個のバーニア残基のみが戻し突然変異されている。他の態様において、ヒト化抗体は、ドナー抗体若しくはそのキメラバージョンの結合親和性に匹敵する結合親和性を保持しつつ可能な最少数の戻し突然変異を包含する。こうしたバージョンに到着するため、戻し突然変異の多様な組合せを除外し得、そして生じる抗体を有効性例えば結合親和性について試験し得る。例えば、バーニア残基での戻し突然変異例えば1、2、3若しくは4個の戻し突然変異を除外し得るか、または、バーニアおよび充填、バーニアおよび正準、若しくは充填および正準残基の組合せでの戻し突然変異を除外し得る。別の態様において、本発明のヒト化抗体は、本明細書に記述されるところの構造の特徴を有し、かつ、以下の活性、すなわち1可溶性Aβを結合する;2凝集型Aβ1-42を結合する例えばELISAにより測定されるとおり;3可溶性Aβを捕捉する;4斑中のAβを結合する例えばADおよび/若しくはPDAPP斑の染色;5キメラ12A11例えばマウス可変領域配列およびヒト定常領域配列を有する12A11よりせいぜい2ないし3倍より低い親和性でAβを結合する;6Aβの食作用を媒介する例えば、本明細書に記述されるところのexvivo食作用アッセイにおける;ならびに7血液脳関門を横断する例えば、例えば本明細書に記述されるところのPDAPP動物モデルにおいて短期の脳局在化を示すの最低1つ好ましくは2、3、4若しくは全部をさらに有する。別の態様において、本発明のヒト化抗体は、本明細書に記述されるところの構造の特徴を有し、その結果、それは以下のinvivo効果、すなわち1Aβ斑負荷量を低下させる;2斑形成を予防する;3可溶性Aβのレベルを低下させる;4アミロイド形成障害と関連する神経炎性の病理を低下させる;5アミロイド形成障害と関連する最低1種の生理学的症状を減じるか若しくは改善する;および/または6認知機能を改善するの最低1種を導き出すのに十分な様式若しくは親和性でAβを結合する。別の態様において、本発明のヒト化抗体は、本明細書に記述されるところの構造の特徴を有し、そしてAβの残基3-7を含んでなる1エピトープに特異的に結合する。なお別の態様において、本発明のヒト化抗体は、本明細書に記述されるところの構造の特徴を有し、その結果、それはAβ内のN末端エピトープに結合し例えばAβのアミノ酸3-7内の1エピトープに結合し、かつ、1Aβペプチドレベル;2Aβ斑負荷量;および3アミロイド形成障害と関連する神経炎性負荷若しくは神経炎性ジストロフィーを低下させることが可能である。上述された活性は、本明細書若しくは当該技術分野で記述される多様なアッセイのいずれか1種例えば結合アッセイ、食作用アッセイなどを利用して測定し得る。活性は、invivo例えば標識したアッセイ成分および/若しくは画像化技術を使用してまたはinvitro例えば被験体由来のサンプル若しくは試料を使用してのいずれでもアッセイし得る。活性は直接若しくは間接のいずれでもアッセイし得る。ある好ましい態様において、神経学的エンドポイント例えばアミロイド負荷量、神経炎性負荷などをアッセイする。こうしたエンドポイントは、非侵襲的検出の方法論を使用して生存被験体で例えばアルツハイマー病の動物モデル若しくは例えば免疫療法を受けているヒト被験体でアッセイし得る。あるいは、こうしたエンドポイントは死後の被験体でアッセイし得る。動物モデルおよび/若しくは死後のヒト被験体でこうしたエンドポイントをアッセイすることは、類似の免疫療法の応用で利用されるべき多様な剤例えばヒト化抗体の有効性の評価において有用である。他の好ましい態様において、行動若しくは神経学的パラメータを、上の神経病理学的活性若しくはエンドポイントの指標として評価し得る。3.可変領域の製造ヒト化免疫グロブリンのCDRおよびフレームワーク成分を概念的に選択したら、多様な方法がこうした免疫グロブリンを製造するのに利用可能である。一般に、抗体のHおよび/若しくはL鎖のマウスの相補性決定領域CDRの1個若しくはそれ以上をヒト化、例えばプライマーに基づくポリメラーゼ連鎖反応PCRを使用して1種若しくはそれ以上のヒトフレームワーク領域の情況に置くことができる。簡潔には、ヒトフレームワーク領域に重なりかつそれとアニーリングし得る配列もまた含有する標的マウスCDR領域1個若しくは複数にアニーリングすることが可能であるプライマーを設計する。従って、適切な条件下で、プライマーはマウスCDRをマウス抗体鋳型核酸から増幅しかつ増幅した鋳型にヒトフレームワーク配列の一部分を付加し得る。同様に、これらのプライマーを使用するPCR反応が増幅されたヒトフレームワーク領域1種若しくは複数をもたらす標的ヒトフレームワーク領域1種若しくは複数にアニーリングすることが可能であるプライマーを設計し得る。各増幅産物をその後変性し、組合せかつ他の産物にアニーリングさせる場合、増幅されたヒトフレームワーク配列と重なるヒトフレームワーク配列を有するマウスCDR領域を遺伝子的に連結し得る。従って、1種若しくはそれ以上のこうした反応で、1個若しくはそれ以上のマウスCDR領域を介在するヒトフレームワーク領域に遺伝子的に連結し得る。いくつかの態様において、プライマーは、結果として生じたPCR増幅配列の、より大きな遺伝子セグメント、例えば可変L若しくはH鎖セグメント、H鎖またはベクターへの遺伝子工作を容易にするための所望の制限酵素認識配列もまた含みうる。加えて、マウスCDR領域若しくはヒトフレームワーク領域いずれかを増幅するのに使用されるプライマーは、異なるコドンがマウスCDR若しくはヒトフレームワーク領域に導入されているような、所望の不適正を有しうる。典型的な不適正は、本明細書に記述されるとおり、マウスCDRの構造の向きおよび従ってその結合親和性を保存若しくは改良する変化をヒトフレームワーク領域に導入する。前述のアプローチを使用して、1、2若しくは全3個のマウスCDR領域を介在するヒトフレームワーク領域の情況に導入し得ることが理解されるべきである。プライマーに基づくPCRを使用する多様な配列の増幅および連結方法は、例えば、Sambrook、FritschとManiatis、MolecularCloning:ColdSpringHarborLaboratoryPress1989;DNACloning、Vol.1および2、D.N.Glover編1985;PCRHandbookCurrentProtocolsinNucleicAcidChemistry、Beaucage編、JohnWileySons1999編者;CurrentProtocolsinMolecularBiology、Ausubelら編、JohnWileySons1992に記述されている。暗号の縮重により、多様な核酸配列が各免疫グロブリンアミノ酸配列をコードすることができる。所望の核酸配列は、新規固相DNA合成若しくは所望のポリヌクレオチドの以前に調製されたバリアントのPCR突然変異誘発により製造し得る。オリゴヌクレオチド媒介性の突然変異誘発は、標的ポリペプチドDNAの置換、欠失および挿入バリアントの好ましい製造方法である。Adelmanら、DNA2:1831983を参照されたい。簡潔には、標的ポリペプチドDNAを、所望の突然変異をコードするオリゴヌクレオチドを一本鎖DNA鋳型にハイブリダイズさせることにより変える。ハイブリダイゼーション後に、DNAポリメラーゼを使用して、該オリゴヌクレオチドプライマーを組み込みかつ標的ポリペプチドDNA中で選択された変化をコードする鋳型の完全な第二の相補鎖を合成する。4.定常領域の選択上述されたとおり製造した抗体の可変セグメント例えばキメラ若しくはヒト化抗体のHおよびL鎖可変領域は、典型的には免疫グロブリン定常領域Fc領域典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部分に連結する。ヒト定常領域のDNA配列は多様なヒト細胞、しかし好ましくは不死化B細胞から公知の手順に従って単離し得るKabatら、上記、およびLiuら、第W087/02671号明細書それらのそれぞれは全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるを参照されたい。通常、抗体はL鎖およびH鎖双方の定常領域を含有することができる。H鎖定常領域は通常CH1、ヒンジ、CH2、CH3およびCH4領域を包含する。本明細書に記述される抗体は、IgM、IgG、IgD、IgAおよびIgEを包含する全部の型の定常領域、ならびにIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4を包含するいかなるアイソタイプも有する抗体を包含する。抗体例えばヒト化抗体が細胞傷害活性を表すことが望ましい場合、定常ドメインは通常補体固定定常ドメインであり、かつ、クラスは典型的にIgG1である。ヒトアイソタイプIgG1およびIgG4が例示的である。L鎖定常領域はλ若しくはκであり得る。ヒト化抗体は、1種以上のクラス若しくはアイソタイプからの配列を含みうる。抗体は、2本のLおよび2本のH鎖を含有する四量体として、別個のH鎖、L鎖として、Fab、Fab’、Fab’2およびFvとして、若しくはHおよびL鎖可変ドメインがスペーサーにより連結されている一本鎖抗体として発現し得る。一態様において、本発明のヒト化抗体は、下に配列番号52に示されるところの、IgG1定常領域に連結された12A11v.1VH領域を包含する。QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAFSGFSLSTSGMSVGWIRQAPGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPSLKSRLTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARRTTTADYFAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG別の態様において、本発明のヒト化抗体は、下に配列番号53に示されるところの、IgG4定常領域に連結された12A11v.1VH領域を包含する。QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAFSGFSLSTSGMSVGWIRQAPGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPSLKSRLTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARRTTTADYFAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGなお別の態様において、本発明のヒト化抗体は、下にそれぞれ配列番号54および55で示されるところの、IgG1若しくはIgG4定常領域に連結された12A11v3.1VH領域を包含する。QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAFSGFTLSTSGMSVGWIRQAPGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPSLKSRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRTTTADYFAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAFSGFTLSTSGMSVGWIRQAPGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPSLKSRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRTTTADYFAYWGQGTTVTVSSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAFSGFSLSTSGMSVGWIRQAPGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPSLKSRLTISKDTSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARRTTTADYFAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGいくつかの態様において、カッコ内に示されるところの末端のリシンは場合によっては発現される。いくつかの態様において、本明細書に記述されるヒト化抗体は、例えば米国特許第6,946,292号明細書その内容全体は本明細書に引用することにより組み込まれるに記述されるもののような技術を使用して、それらの抗原依存性細胞傷害ADCC活性を高めるよう改変する。抗体のADCC活性は、一般に、例えばキラー細胞、ナチュラルキラー細胞および活性化型マクロファージのようなエフェクター細胞の表面上に存在する抗体受容体への抗体のFc領域の結合を必要とすると考えられる。ヒト化抗体すなわちFc領域中の炭水化物構造のフコシル化を変える例えば減少若しくは除外することにより、抗体のADCC活性は、invitroで、未修飾のヒト化抗体に関して例えば10倍若しくは20倍若しくは30倍若しくは40倍若しくは50倍若しくは100倍高め得る。増大されたADCC活性のため、こうした修飾された抗体は、それらの未修飾の対照物より低投薬量で使用し得、そして一般に患者でより少ない若しくは低下された副作用を有し得る。いくつかの態様において、こうした抗体がアグリコシル化された定常領域を包含する、ヒト化抗体のアグリコシルバージョンを特徴とする。Asn-297のオリゴ糖が正常なヒトIgG抗体の特徴的特徴であるKabatら、1987、SequenceofProteinsofImmunologicalInterest、米国保健福祉省刊行物U.S.DepartmentofHealthHumanServicesPublicationを参照されたい。IgG分子中の2本のH鎖のそれぞれは、例えば位置297のアスパラギン残基のアミド基に連結されている単一の分枝状鎖炭水化物基を有する。例えばアスパラギンのアラニンでの置換は、例えば米国特許第6,706,265号明細書引用することにより本明細書に組み込まれるに記述されるとおり抗体のグリコシル化を予防する。特定の一態様において、位置297のアミノ酸残基Asnをアラニンに突然変異する。5.組換え抗体の発現キメラおよびヒト化抗体は典型的に組換え発現により製造する。場合によっては定常領域に連結されたLおよびH鎖可変領域をコードする核酸を発現ベクターに挿入する。LおよびH鎖は同一若しくは異なる発現ベクターにクローン化し得る。免疫グロブリン鎖をコードするDNAセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする、発現ベクター1種若しくは複数中の制御配列に作動可能に連結される。発現制御配列は、限定されるものでないが、プロモーター例えば天然に関連する若しくは異種のプロモーター、シグナル配列、エンハンサー要素および転写終止配列を挙げることができる。好ましくは、発現制御配列は、真核生物宿主細胞例えばCOS若しくはCHO細胞を形質転換若しくはトランスフェクトすることが可能なベクター中の真核生物プロモーター系である。ベクターが適切な宿主に一旦組み込まれれば、該宿主を、ヌクレオチド配列の高レベル発現、ならびに交差反応性抗体の収集および精製に適する条件下で維持する。これらの発現ベクターは、典型的に、エピソーム若しくは宿主染色体DNAの一体部分のいずれかとして宿主生物体中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のDNA配列で形質転換した細胞の検出を可能にするための選択マーカー例えば、アンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性若しくはネオマイシン耐性を含有する例えば、Itakuraら、米国特許第4,704,362号明細書を参照されたい。大腸菌E.coliは本発明のポリヌクレオチド例えばDNA配列をクローン化するのにとりわけ有用な1種の原核生物宿主である。使用に適する他の微生物宿主は、枯草菌Bacillussubtilisのような桿菌、ならびにサルモネラ属Salmonella、セラチア属Serratiaおよび多様なシュードモナス属Pseudomonasスピーシーズのような他の腸内細菌科を包含する。これらの原核生物宿主中で、該宿主細胞と適合性の発現制御配列例えば複製起点を典型的に含有することができる発現ベクターもまた作成し得る。加えて、乳糖プロモーター系、トリプトファンtrpプロモーター系、β-ラクタマーゼプロモーター系、若しくはファージλからのプロモーター系のようないずれかの数の多様な公知のプロモーターが存在することができる。プロモーターは、典型的には、場合によってはオペレーター配列を伴い発現を制御することができ、また、転写および翻訳を開始および終了させるためのリボソーム結合部位配列などを有することができる。酵母のような他の微生物もまた発現に有用である。サッカロミセス属Saccharomycesは好ましい酵母宿主であり、適するベクターは発現制御配列例えばプロモーター、複製起点、終止配列などを所望のとおり有する。典型的なプロモーターは3-ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の解糖酵素を包含する。誘導可能な酵母プロモーターは、とりわけ、アルコール脱水素酵素、イソチトクロームC、ならびに麦芽糖およびガラクトース利用を司る酵素からのプロモーターを包含する。微生物に加え、哺乳動物組織細胞培養物もまた本発明のポリペプチドを発現かつ製造するのに使用しうる例えば免疫グロブリン若しくはそれらのフラグメントをコードするポリヌクレオチド。Winnacker、FromGenestoClones、VCHPublishers、ニューヨーク州ニューヨーク1987を参照されたい。真核生物細胞は、異種タンパク質例えば無傷の免疫グロブリンを分泌することが可能な多数の適する宿主細胞株が当該技術分野で開発されているため実際に好ましく、そしてCHO細胞株、多様なCos細胞株、HeLa細胞、好ましくは骨髄腫細胞株、若しくは形質転換B細胞またはハイブリドーマを包含する。好ましくは細胞はヒト以外である。これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーターおよびエンハンサーQueenら、Immunol.Rev.89:491986のような発現制御配列、ならびにリボソーム結合部位、RNAスプライス部位、ポリアデニル化部位および転写終止配列のような必要なプロセシング情報部位を包含し得る。好ましい発現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、SV40、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルスなど由来のプロモーターである。Coら、J.Immunol.148:11491992を参照されたい。あるいは、抗体をコードする配列は、トランスジェニック動物のゲノムへの導入および該トランスジェニック動物の乳中でのその後の発現のため、導入遺伝子に組み込み得る例えば、Deboerら、米国特許第5,741,957号、Rosen、米国特許第5,304,489号、およびMeadeら、米国特許第5,849,992号明細書を参照されたい。適する導入遺伝子は、カゼイン若しくはβ-ラクトグロブリンのような乳腺特異的遺伝子からのプロモーターおよびエンハンサーとの操作可能な連結にあるLおよび/若しくはH鎖のコーディング配列を包含する。あるいは、本発明の抗体例えばヒト化抗体はトランスジェニック植物例えばタバコ、トウモロコシ、ダイズおよびアルファルファ中で製造し得る。改良されたプランティボディplantibodyベクターHendyら1999J.Immunol.Methods231:137-146、および形質転換可能な作物種の増大と結合された精製戦略が、こうした方法を、ヒトおよび動物の治療のみならずしかし同様に工業的応用例えば触媒的抗体のためにも組換え免疫グロブリンの実際的かつ効率的な製造手段にする。さらに、植物で産生される抗体は安全かつ有効であることが示されており、また、動物由来材料の使用、および従って伝染性海綿状脳症TSEの病原体での汚染の危険を回避する。さらに、植物および哺乳動物細胞で産生される抗体のグリコシル化パターンの差違は抗原結合若しくは特異性にほとんど若しくは全く影響を有しない。加えて、毒性すなわちHAMAの証拠は、植物由来の分泌型二量体IgA抗体の局所経口適用を受領する患者で観察されていないLarrickら1998Res.Immunol.149:603-608を参照されたい。トランスジェニック植物で組換え抗体を発現するのに多様な方法を使用しうる。例えば、抗体HおよびL鎖を発現ベクター例えばアグロバクテリウムツメファシエンスAgrobacteriumtumefaciensベクターに独立にクローン化し得、次いで該組換え細菌で植物組織をinvitroで形質転換するか、若しくは例えば該ベクターで被覆した粒子その後例えば遺伝子銃を使用して植物組織に物理的に導入するを使用して直接形質転換する。その後、個々の鎖を発現する全植物を再構成し、次いでそれらを性的交雑し、最終的に完全に集成されかつ機能的な抗体の産生をもたらす。類似のプロトコルが、タバコ植物で機能的抗体を発現するのに使用されているHiattら1989Nature342:76-87を参照されたい。多様な態様において、シグナル配列を利用して、未集成の抗体鎖を適切な植物環境例えばアポプラズマまたは根茎、果実若しくは種子を包含する他の特定の植物組織の水性環境に向けることにより該鎖の発現、結合およびフォールディングを促進しうるFiedlerら1995Bio/Technology13:1090-1093を参照されたい。植物バイオリアクターもまた、抗体収量を増大させかつ費用を大きく低減させるのに使用し得る。目的のポリヌクレオチド配列例えばHおよびL鎖をコードする配列および発現制御配列を含有するベクターは、細胞宿主の型に依存して変動する公知の方法により宿主細胞に移入し得る。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは原核生物細胞に一般に利用される一方、リン酸カルシウム処理、電気穿孔法、リポフェクション、遺伝子銃若しくはウイルスに基づくトランスフェクションを他の細胞宿主に使用しうる全般として、Sambrookら、MolecularCloning:ALaboratoryManualColdSpringHarborPress、第2版、1989全部の目的上そっくりそのまま引用することにより組み込まれるを参照されたい。哺乳動物細胞を形質転換するのに使用される他の方法は、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、電気穿孔法および微小注入法の使用を包含する全般として、Sambrookら、上記を参照されたい。トランスジェニック動物の製造のためには、導入遺伝子を受精卵母細胞に微小注入し得るか、若しくは胚性幹細胞のゲノムに組み込み得、そしてこうした細胞の核を除核卵母細胞に移入し得る。HおよびL鎖を別個の発現ベクターにクローン化する場合、該ベクターをコトランスフェクトして無傷の免疫グロブリンの発現および集成を得る。一旦発現されれば、全抗体、それらの二量体、個々のLおよびH鎖、若しくは本発明の他の免疫グロブリンの形態を、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、HPLC精製、ゲル電気泳動などを包含する当該技術分野の標準的手順に従って精製し得る全般として、Scopes、ProteinPurificationSpringer-Verlag、ニューヨーク1982を参照されたい。製薬学的使用には、最低約90ないし95均一な実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、そして98ないし99若しくはそれ以上の均一性が最も好ましい。6.抗体フラグメント抗体フラグメントもまた本発明の範囲内で企図している。一態様において、ヒト以外のおよび/若しくはキメラの抗体のフラグメントが提供される。別の態様において、ヒト化抗体のフラグメントが提供される。典型的には、これらのフラグメントは最低107、およびより典型的には108若しくは109M-1の親和性での抗原への特異的結合を表す。ヒト化抗体フラグメントは、別個のH鎖、L鎖、Fab、Fab’、Fab’2、FabcおよびFvを包含する。フラグメントは組換えDNA技術、または無傷の免疫グロブリンの酵素的若しくは化学的分離により製造する。いくつかの態様において、抗体フラグメント例えばFab若しくはFab’の一般に短い半減期がペグ化により延長される。これは一般に、例えばLeongらCytokine16、106-1192001により記述されるとおりポリエチレングリコールPEGへの融合により達成される。ペグ化は、所望の場合はFc受容体に媒介される機能を排除しかつ/若しくは免疫原性を低下させるという付加された利点を有する。例示的態様において、2~20kDaのPEG分子を、例えば、K-リンカー-Cを介して抗体H鎖ヒンジ領域に共有結合する例えば、Choyら、Rheumatol.41:1133-11372002を参照されたい。7.エピトープマッピングエピトープマッピングを実施して、Aβのどの抗原決定基すなわちエピトープが該抗体により認識されるかを決定し得る。一態様において、エピトープマッピングは置換NETrNET分析に従って実施する。rNETエピトープ地図アッセイは、該抗体の全体的結合活性への該エピトープ内の個々の残基の寄与についての情報を提供する。rNET分析は合成された体系的単一置換ペプチドアナログを使用する。試験されている抗体の結合を、天然のペプチド天然の抗原および19種の代替の単一置換ペプチド各ペプチドは第一の位置でその位置の19種の非天然のアミノ酸の1種で置換されているに対し測定する。多様な非天然の残基でのその位置の置換の影響を反映したプロファイルが生成される。プロファイルは同様に、抗原ペプチドに沿った連続する位置でも生成される。組み合わせたプロファイル、すなわちエピトープ地図全19種の非天然のアミノ酸での各位置の置換を反映するをその後、第二の抗体について同様に生成した地図と比較し得る。実質的に類似若しくは同一の地図は、比較されている抗体が同一若しくは類似のエピトープ特異性を有することを示す。8.動物モデルでの治療的有効性例えば斑消失活性についての抗体の試験7~9月齢のPDAPPマウスの群それぞれに、PBS中0.5mgのポリクローナル抗Aβ若しくは特異的抗Aβモノクローナル、ヒト化またはキメラ抗体を注入する。全抗体調製物は低エンドトキシンレベルを有するように精製する。モノクローナル抗体は、Aβのフラグメント若しくはより長い形態をマウスに注入すること、ハイブリドーマを調製すること、およびAβの他の重ならないフラグメントに結合することなくAβの所望の1フラグメントに特異的に結合する抗体について該ハイブリドーマをスクリーニングすることにより、1フラグメントに対し製造し得る。ヒト化および/若しくはキメラ抗体は本明細書に記述されるとおり製造する。Aβ42若しくは他の免疫原に対するELISAにより定義される1/1000以上のELISA力価により測定される循環抗体濃度を維持するため、マウスに4か月間にわたり必要とされるように腹腔内注入する。力価をモニターし、そしてマウスを6か月の注入の終了時に安楽死させる。組織化学、Aβレベルおよび毒物学を死後に実施する。10匹のマウスを1群あたりに使用する。9.可溶性オリゴマーAβへの結合についての抗体の試験本発明はまた、生化学的アッセイでの可溶性のオリゴマーAβに結合する抗体の能力の試験方法も提供する。該生化学的アッセイは、少なくとも部分的に、単量体Aβへの抗体の結合に比較した1種若しくはそれ以上の形態の可溶性オリゴマーAβ例えばAβ二量体、Aβ三量体、Aβ四量体、Aβ五量体などへの該抗体の結合の比較に基づく。この比較を使用して、単量体Aβに比較しての可溶性オリゴマーAβへの抗体の相対的結合を決定し得る。多様な態様において、この相対的結合を、単量体Aβに対する1種若しくはそれ以上の可溶性オリゴマーAβへの対照試薬の対応する相対的結合と比較する。他の局面において、1種若しくはそれ以上のオリゴマーAβ種に対する抗体の親和性を、Aβ調製物中の単量体Aβに対する該抗体の親和性と比較する。可溶性オリゴマーAβ種を優先的に結合するAβ抗体の能力と、詳細に下述されるところの適切なモデル動物でのCFCアッセイにより評価されるところの認知を迅速に改善する該抗体の能力の間に、強い相関が存在することが発見された。CFCアッセイでの認知を改善する抗体の能力は、該抗体の最終的なヒト治療の有効性とりわけ患者での認知の迅速な改善における有効性の強力な指標若しくは予測因子であるとさらに考えられる。従って、Aβ抗体結合の優先性および/若しくは親和性の比較は、本発明の治療法での使用、とりわけ患者で認知の迅速な改善を遂げる方法での使用のための候補としてのある種の抗体の同定に至る。候補抗体は、単量体Aβに比較して1種若しくはそれ以上の可溶性オリゴマーAβ種への優先的なすなわちより大きい結合を表す。単量体Aβに比較して例えばAβ二量体、三量体および四量体に優先的に結合する抗体は、患者で認知の迅速な改善を遂げる方法での使用のための好ましい候補である。例えば、単量体Aβに比較して可溶性オリゴマーAβ種への2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍若しくはそれ以上大きい結合を表す候補抗体を、治療方法での使用に選択する。1種若しくはそれ以上の可溶性オリゴマーAβ種または単量体Aβへの抗体の結合は、定性的、定量的、若しくは双方の組合せで測定し得る。一般に、該種を含んでなるAβ調製物中の単量体AβとオリゴマーAβ種を識別することが可能ないかなる技術も使用し得る。例示的態様において、免疫沈降法、電気泳動分離およびクロマトグラフィー分離例えば液体クロマトグラフィーの1種若しくはそれ以上を使用して、該種を含んでなるAβ調製物中の単量体AβとオリゴマーAβ種を識別し得る。好ましい態様において、1種若しくはそれ以上の可溶性のオリゴマーAβ種または単量体Aβへの抗体の結合は、Aβ種を調製物から免疫沈降させることにより測定する。免疫沈降物をその後電気泳動分離例えばSDS-PAGEにかけて、オリゴマー種を沈殿物中の単量体Aβと識別する。電気泳動バンド中に存在するオリゴマーAβ種および単量体Aβの量は、例えば電気泳動ゲルのイムノブロッティング、若しくは電気泳動ゲルのバンド中のそれぞれの種の直接定量により可視化し得る。1Aβ種の沈殿物の量は、例えば対応する電気泳動バンド、イムノブロットのバンド若しくは双方の組合せの強度から測定し得る。強度の測定は定性的、定量的若しくは双方の組み合わせであり得る。バンド強度の評価は、例えば、走査し得る適切なフィルム露光、およびソフトウェア、例えばAlphaEaseTMソフトウェアAlphaInnotechTMで測定されるバンドの密度を使用して実施し得る。バンド強度の評価は、例えば抗体、画像化試薬例えばイムノブロットで使用される抗体若しくは双方に取り込まれる多数の標識のいずれを使用しても実施し得る。適する標識は、限定されるものでないが、蛍光標識、放射活性標識、常磁性標識、若しくはそれらの組合せを挙げることができる。多様な態様において、抗体に結合する1種若しくはそれ以上のオリゴマーAβ種および/若しくは単量体Aβの量は、例えばそれを抗体と接触させた適する時間後のAβ調製物それ自身、あるいは、Aβ調製物から抽出された抗体に結合した単量体Aβおよび/または1種若しくはそれ以上の可溶性オリゴマーAβ種での質量分析を使用して評価し得る。ある局面において、1種若しくはそれ以上のオリゴマーAβ種に対する抗体の親和性を単量体Aβに対する該抗体の親和性と比較して、本発明の治療方法での使用、とりわけ患者での認知の迅速な改善を遂げる方法での使用の候補として該抗体を同定する。単量体Aβに比較してのオリゴマーAβに対する試験抗体例えばAβ抗体の親和性を、対照試薬の結合親和性と比較し得る。標識を使用して単量体Aβ、オリゴマーAβ若しくは双方に対する抗体の親和性を評価し得る。多様な態様において、Aβに対する親和性をもつ一次試薬は未標識であり、そして二次標識剤を使用して一次試薬に結合する。適する標識は、限定されるものでないが蛍光標識、常磁性標識、放射活性標識およびそれらの組合せを挙げることができる。ある局面において、本発明の方法は、被験体での免疫治療の有効性を適して予測するアッセイの使用において抗Aβ抗体が同定される、被験体での認知を迅速に改善することが可能である抗Aβ抗体の投与を特徴とする。例示的態様において、該アッセイは、試験免疫治療薬へのAβ調製物中の1種若しくはそれ以上のAβオリゴマーの結合の、試験免疫治療薬へのAβ調製物中のAβ単量体の結合との比較に少なくとも部分的に基づく生化学的アッセイである。1種若しくはそれ以上のAβオリゴマーは、例えばAβ二量体、Aβ三量体、Aβ四量体およびAβ五量体の1種若しくはそれ以上を包含し得る。多様な態様において、試験免疫治療薬は、試験免疫治療薬へのAβ調製物中の1種若しくはそれ以上のAβオリゴマーの結合が試験免疫治療薬へのAβ調製物中Aβ単量体の結合より大きい場合に同定される。試験免疫学的試薬に結合するAβ調製物中のAβ単量体および1種若しくはそれ以上のAβオリゴマー種の量は、生化学的方法を使用して、例えば試験免疫学的試薬に結合されたAβ単量体および1種若しくはそれ以上のAβオリゴマー種をAβ調製物から沈殿させるための免疫沈降法、次いで免疫沈降物の電気泳動分離を使用して評価し得る。こうした生化学的アッセイは、本明細書、ならびに2004年12月15日出願の米国仮出願第60/636,687号および2005年11月10日出願の同第60/736,045号明細書それらのそれぞれの内容全体は本明細書に引用することにより組み込まれるにさらに論考されている。10.消失活性についての抗体のスクリーニング本発明は、消失活性が望ましいアミロイド沈着物若しくはいずれかの他の抗原、または関連する生物学的実体の消失における活性についての抗体のスクリーニング方法もまた提供する。アミロイド沈着物に対する活性についてスクリーニングするため、アルツハイマー病を伴う患者、若しくは特徴的なアルツハイマーの病理学を有する動物モデルの脳からの組織サンプルを、小膠細胞のようなFc受容体を担持する食細胞および試験中の抗体と媒体中でinvitroで接触させる。食細胞は初代培養物若しくは細胞株であり得、そしてマウス例えばBV-2若しくはC8-B4細胞またはヒト起源例えばTHP-1細胞のものであり得る。いくつかの方法において、顕微鏡モニタリングを容易にするために成分を顕微鏡用スライドガラス上で組合せる。いくつかの方法において、複数の反応をマイクロタイター皿のウェル中で同時に実施する。こうした形式では、別個の小型顕微鏡用スライドガラスを別個のウェルにマウントし得るか、若しくはAβのELISA検出のような非顕微鏡的検出形式を使用し得る。好ましくは、一連の測定は、反応が進行する前の基礎値から出発するinvitro反応混合物中のアミロイド沈着物の量、および反応中の1個若しくはそれ以上の試験値から構成される。抗原は、例えばAβ若しくはアミロイド斑の他成分に対する蛍光標識抗体での染色により検出し得る。染色に使用する抗体は、消失活性について試験されている抗体と同一であってももしくはなくてもよい。アミロイド沈着物の反応中の基礎に関しての低下は、試験中の抗体が消失活性を有することを示す。こうした抗体はアルツハイマー病および他のアミロイド形成疾患の予防若しくは処置において有用であることがありそうである。アルツハイマー病および他のアミロイド形成疾患を予防若しくは処置するためのとりわけ有用な抗体は、稠密および拡散双方のアミロイド斑を消失させることが可能なもの、例えば本発明の12A11抗体、またはそのキメラ若しくはヒト化バージョンを包含する。類似の方法を使用して、他の型の生物学的実体の消失における活性について抗体をスクリーニングし得る。該アッセイを使用して、事実上いかなる種類の生物学的実体に対しても消失活性を検出し得る。典型的には、生物学的実体はヒト若しくは動物の疾患において何らかの役割を有する。生物学的実体は組織サンプルとして若しくは単離された形態で提供し得る。組織サンプルとして提供される場合、該組織サンプルは、好ましくは、該組織サンプルの成分への容易な到達を可能にしかつ固定に偶発する成分のコンホメーションの破壊を回避するために固定しない。本アッセイで試験し得る組織サンプルの例は、癌組織、前癌組織、疣贅若しくは母斑のような良性増殖を含有する組織、病原性微生物に感染した組織、炎症細胞に浸潤された組織、細胞間に病理学的マトリックスを担持する組織例えば線維素性心外膜炎、異常な抗原を担持する組織、および瘢痕組織を包含する。使用し得る単離された生物学的実体の例は、Aβ、ウイルス抗原若しくはウイルス、プロテオグリカン、他の病原性微生物の抗原、腫瘍抗原および接着分子を包含する。こうした抗原は、とりわけ天然の供給源、組換え発現若しくは化学合成から得ることができる。組織サンプル若しくは単離された生物学的実体を、単球若しくは小膠細胞のようなFc受容体を担持する食細胞、および試験されるべき抗体と媒体中で接触させる。抗体は、試験中の生物学的実体若しくは該実体と関連する抗原に向けることができる。後者の状況での目的は生物学的実体が抗原とともに貪食されるかどうかを試験することである。通常、とは言え必ずではなく、抗体および生物学的実体ときに関連抗原を伴うは食細胞を添加する前に相互と接触させる。媒体中に残存する生物学的実体および/若しくは関連抗原存在する場合の濃度をその後モニターする。媒体中の抗原若しくは関連する生物学的実体の量若しくは濃度の低下は、該抗体が食細胞とともに抗原および/若しくは関連する生物学的実体に対する消失応答を有することを示す。11.CFCアッセイにおけるに認知の迅速な若しくは長期の改善についての抗体の試験多様な局面において、本発明の抗体は、認知を改善する能力について適切な動物モデルで試験し得る。例えば、コンテクチュアルフィアーコンディショニングCFCアッセイを介して評価されるところのADの動物モデルで認知を改善する抗体の能力を使用して、本発明の治療方法、とりわけ患者での認知の迅速な改善を遂げる方法での使用のための候補として該抗体を選択し得る。コンテクチュアルフィアーコンディショニングは、大部分の動物、例えば哺乳動物で例外的に信頼できかつ迅速に取得される学習の普遍的な一形態である。試験動物は、有害経験および/若しくは環境刺激1種若しくは複数とのその関連により以前は中立の刺激を恐れることを学習する例えばFanselow、Anim.Learn.Behav.18:264-2701990;Wehnerら、NatureGenet.17:331-334.1997;Caldaroneら、NatureGenet.17:335-3371997を参照されたい。コンテクチュアルフィアーコンディショニングは、例えば神経変性疾患若しくは障害、Aβ関連疾患若しくは障害、アミロイド形成疾患若しくは障害のような疾患若しくは障害の結果としての認知機能若しくは機能低下、不都合な遺伝子変化情動的認知機能の存在例えば遺伝子突然変異、遺伝子破壊若しくは望ましくない遺伝子型、および/または認知能力に対する剤、例えば抗体剤の有効性を決定するのにとりわけ有用である。従って、CFCアッセイは、認知疾患若しくは障害、およびとりわけ脳の1種若しくはそれ以上の領域、例えば海馬、鉤状回、帯状皮質、前頭葉前皮質、鼻周囲皮質、感覚皮質および側頭葉内側部を冒す疾患若しくは障害を予防若しくは処置するための剤の治療効果の独立の試験および/若しくは検証方法を提供する。典型的には、CFCアッセイは、標準的動物室、ならびに聴覚例えばある期間の85dbホワイトノイズ、嗅覚例えばアーモンド若しくはレモン抽出物、触覚例えば床ケージの質感および/または視覚刺激光点滅と対にした軽度ショック例えば0.35mの足ショックを含んでなる条件付け訓練の使用を使用して実施する。あるいは、条件付け訓練は対にした刺激すなわち文脈を伴うショックのないショックの投与を含んでなる。嫌悪経験ショックに対する応答は、典型的にはフリージング呼吸を除く動きの非存在の1種であるが、しかし、選択した試験動物に依存して瞬き若しくは瞬膜反射の変化もまた包含しうる。嫌悪応答は通常、訓練の第一日に特徴付け、文脈的に条件付けられた恐怖として特徴づけられるその後の試験日の嫌悪応答結果例えば、同一情況しかし嫌悪刺激の非存在下でのフリージング、および/若しくは刺激の存在下しかし嫌悪経験の非存在下でのフリージングを伴う未条件付け恐怖の基礎を決定する。向上された信頼性のため、試験動物は、典型的には独立の技術者により長期にわたり個別に試験しかつ記録する。付加的な実験デザインの詳細は、当該技術分野、例えばCrawley,JN、What’sWrongwithmyMouse;BehavioralPhenotypingofTransgenicandKnockoutMice、Wiley-Liss、ニューヨーク2000に見出し得る。例示的試験動物例えばモデル動物は、アルツハイマー病のようなアミロイド形成障害に特徴的である顕著な症状若しくは病理学を表す哺乳動物例えばげっ歯類若しくはヒト以外の霊長類を包含する。モデル動物は、所望のについて選択的に同系交配することにより創製しうるか、または、それらは、痴呆障害と関連付けらている遺伝子中の標的とされた遺伝子変化例えば遺伝子突然変異、遺伝子破壊が、標的とされた遺伝子の異常な発現若しくは機能につながるような、当該技術分野で公知であるトランスジェニック技術を使用して遺伝子工作しうる。例えば、アルツハイマー病に特徴的であるAPPを過剰発現しかつアミロイド斑の病理学を発生しかつ/若しくは認知障害を発症する数種のトランスジェニックマウス系統が入手可能である例えば、Gamesら、上記、Johnson-Woodら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:15501997;MasliahEとRockensteinE.2000JNeuralTransmSuppl.;59:175-83を参照されたい。あるいは、モデル動物は、アミロイド形成障害の特徴的な症状若しくは病理学と関連する解剖学的脳領域例えば海馬、扁桃体、鼻周囲皮質、内側中隔核、青斑核、乳頭体mammalarybodiesまたは特定のニューロン例えばセロトニン作動性、コリン作動性若しくはドーパミン作動性ニューロンの正常機能を除去若しくは別の方法で妨害する化合物例えば神経毒、麻酔薬若しくは外科的手技例えば定位切除、軸索切断、切離、吸引を使用して創製し得る。ある好ましい態様において、動物モデルは、アミロイド形成障害と関連する神経変性の病理に加え、学習若しくは記憶と関連する顕著な認知障害を表す。より好ましくは、認知障害は、モデル動物での疾患の進行がアミロイド形成障害に罹患している被験体での疾患の進行と平行するような、齢とともに進行的に悪化する。本明細書に記述される抗体の機能性を試験するための馴化Conditional恐怖条件付けおよび他のinvivoアッセイは、野性型マウス、または損なわれた記憶につながるある種の遺伝子変化を有するマウス、あるいは脳脊髄液CSF若しくは血漿中の可溶性Aβの上昇したレベルを表すマウスモデルを包含する神経変性疾患例えばアルツハイマー病のマウスモデルを使用して実施しうる。例えば、アルツハイマー病の動物モデルは、年齢依存性の記憶障害および斑を示すヒトアミロイド前駆体タンパク質のスウェーデン型突然変異hAPPswe:Tg2576を過剰発現するトランスジェニックマウスHsiaoら1996Science274:99-102を包含する。本明細書に記述される抗体のinvivo機能性は、若齢で変異体の形態のヒトAPPAPPV71Fを発現しかつアルツハイマー病を発症するPDAPPトランスジェニックマウスBardら2000NatureMedicine6:916-919;MasliahEら1996JNeurosci.15;1618:5795-811を使用してもまた試験し得る。アルツハイマー病の他のマウスモデルは、Holcombら1998NatureMedicine4:97-110に記述されるPSAPPマウス、すなわち変異体APPおよびPS1導入遺伝子を過剰発現する二重トランスジェニックマウスPSAPP、ならびにDuffら1996Nature383、710-713に記述されるPS-1変異体マウスを包含する。アルツハイマー病の他の遺伝子的に変えられたトランスジェニックモデルがMasliahEとRockensteinE.2000JNeuralTransmSuppl.59:175-83に記述されている。多様な局面において、本発明の方法は、被験体で認知を迅速に改善することが可能である抗Aβ抗体の投与を含んでなり、抗Aβ抗体は被験体での免疫療法の有効性を適して予測するアッセイを使用して同定されている。例示的態様において、該アッセイは、適する対照と比較して、動物への試験免疫学的試薬の投与後の動物のコンテクチュアルフィアーコンディショニング研究から決定されるところの認知を比較することに少なくとも部分的に基づくモデル動物アッセイである。CFCアッセイは、潜在的治療的化合物での処置に際しての動物典型的にはマウス若しくはラットの認知の変化を評価する。ある態様において、評価される認知の変化は記憶障害状態の改善若しくは記憶障害の逆転である。従って、CFCアッセイは、認知疾患、およびとりわけ脳の1種若しくはそれ以上の領域、例えば海馬、鉤状回、帯状皮質、前頭葉前皮質、鼻周囲皮質、感覚皮質および側頭葉内側部を冒す疾患若しくは障害を予防若しくは処置するための剤の治療効果の直接測定方法を提供する。こうしたCFCアッセイは、本明細書、ならびに2004年12月15日出願の米国仮出願第60/636,842号、2004年12月16日出願の同第60/637,253号、および2005年11月10日出願の同第60/736,119号明細書それらのそれぞれの内容全体は本明細書に引用することにより組み込まれるでさらに論考されている。12.変えられたエフェクター機能を有するキメラ/ヒト化抗体定常領域Fc領域を含んでなる本発明の上述された抗体について、該分子のエフェクター機能を変えることもまた望ましいことがある。一般に、抗体のエフェクター機能は、多様なエフェクター分子、例えば補体タンパク質若しくはFc受容体への結合を媒介し得る該分子の定常すなわちFc領域に存する。Fc領域への補体の結合は、例えば細胞病原体の捕食および溶解ならびに炎症応答の活性化で重要である。例えばエフェクター細胞の表面上のFc受容体への抗体の結合は、例えば抗体で被覆された病原体若しくは粒子の貪食および破壊、免疫複合体の消失、キラー細胞による抗体で被覆された標的細胞の溶解すなわち抗体依存性の細胞媒介性細胞傷害すなわちADCC、炎症メディエーターの放出、抗体の胎盤通過、ならびに免疫グロブリン産生の制御を包含する多数の重要かつ多彩な生物学的応答を誘発し得る。従って、特定の治療若しくは診断の応用に依存して、上で挙げられた免疫機能、若しくは選択された免疫機能のみが望ましいことがある。抗体のFc領域を変えることにより、診断および治療における有益な効果を伴う免疫系の多様な反応を高める若しくは抑制することを包含する該分子のエフェクター機能の多様な局面が達成される。ある型のFc受容体とのみ反応する本発明の抗体を製造し得、例えば、本発明の抗体は、該抗体のFc領域に位置するFc受容体結合部位の欠失若しくは変化により、あるFc受容体のみに結合するか、若しくは所望の場合はFc受容体結合を全く欠くように改変し得る。本発明の抗体のFc領域の他の所望の変化を下に列記する。典型的には、EU番号付け体系すなわちKabatら、上記のEUインデックスを使用して、エフェクター機能の所望の変化を達成するためにFc領域例えばIgG抗体ののどのアミノ酸残基1個若しくは複数が例えばアミノ酸置換により変えられるかを示す。該番号付け体系は、例えばマウス抗体中で観察される所望のエフェクター機能がその後本発明のヒト、ヒト化若しくはキメラ抗体に系統的に工作され得るような、種を横断して抗体を比較するのにもまた使用される。例えば、抗体例えばIgG抗体を、Fc受容体例えばヒト単球上のFc受容体FcγRIへの強固の、中間の若しくは弱い結合を表すことが見出されるものにグループ分けし得ることが観察された。これらの異なる親和性群のアミノ酸配列の比較により、ヒンジ結合領域の単球結合部位EU番号付け体系によりLeu234-Ser239が同定された。さらに、ヒトFcγRI受容体は単量体としてのヒトIgG1およびマウスIgG2aを結合するが、しかしマウスIgG2bの結合は100倍より弱い。ヒンジ結合領域のこれらのタンパク質の配列の比較は、強結合体のEU番号付けの位置234ないし238、すなわちLeu-Leu-Gly-Gly-Pro配列番号32からの配列がマウスγ2bすなわち弱結合体でLeu-Glu-Gly-Gly-Pro配列番号33になることを示す。従って、低下されたFcγI受容体結合が望ましい場合は、ヒト抗体ヒンジ配列中の対応する変化を作成し得る。同一若しくは類似の結果を達成するために他の変化を作成し得ることが理解される。例えば、FcγRI結合の親和性は、その側鎖に不適切な官能基を有する残基で指定された残基を置換することにより、あるいは荷電した官能基例えばGlu若しくはAspまたは例えば芳香族非極性残基例えばPhe、Tyr若しくはTrpを導入することにより、変えることができる。これらの変化は、多様な免疫グロブリン間の配列相同性を考えれば、マウス、ヒトおよびラットの系に等しく適用し得る。ヒトFcγRI受容体に結合するヒトIgG3について、EU位置235のLeuをGluに変えることは該受容体に対する変異体の相互作用を破壊することが示された。この受容体の結合部位は、従って、適切な突然変異を作成することによりスイッチを入れ若しくは切ることができる。ヒンジ結合領域の隣接若しくは近接部位の突然変異例えば、EU位置234、236若しくは237の残基をAlaにより置換することは、少なくとも残基234、235、236および237の変化がFcγRI受容体に対する親和性に影響を及ぼすことを示す。従って、本発明の抗体はまた、改変されない抗体と比較してFcγRIに対する変えられた結合親和性をもつ変えられたFc領域も有し得る。こうした抗体は、便宜的に、EUアミノ酸位置234、235、236若しくは237に改変を有する。いくつかの態様において、本発明の抗体は、1個若しくはそれ以上のEU位置234、235、236および237にアミノ酸変化を包含するヒト化抗体である。本発明の特定の一態様において、ヒト化抗体は、IgG1由来のヒンジ結合領域のEU位置234および237にアミノ酸変化すなわちL234AおよびG237Aを包含する。他のFc受容体に対する親和性は、多様な方法で免疫応答を制御するための類似のアプローチにより変えることができる。さらなる一例として、補体のC1成分の結合後のIgG抗体の溶解特性を変えることができる。補体系の第一の成分C1は、一緒に強固に結合するC1q、C1rおよびC1sとして既知の3種のタンパク質を含んでなる。C1qが該3タンパク質複合体の抗体への結合の原因であることが示されている。従って、抗体のC1q結合活性は、H鎖のEUアミノ酸位置318、320および322のアミノ酸残基の最低1個が異なる側鎖を有する残基に変えられている、変えられたCH2ドメインをもつ抗体を提供することにより変えることができる。抗体への特異的C1q結合を変える、例えば低下若しくは廃止するための他の適する変化は、EU位置318Glu、320Lysおよび322Lysの残基のいずれか1個をAlaに変えることを包含する。さらに、これらの残基で突然変異を行うことにより、残基318が水素結合する側鎖を有しかつ残基320および322双方が正に荷電した側鎖を有する限りはC1q結合が保持されることが示された。C1q結合活性は、該3個の指定された残基のいずれか1個をその側鎖に不適切な官能性を有する残基で置換することにより廃止し得る。C1q結合を廃止するためにイオン性残基のみをAlaで置換することは必要でない。C1q結合を廃止するために、該3残基のいずれか1個の代わりにGly、Ile、Leu若しくはValのような他のアルキル置換非イオン性残基、またはPhe、Tyr、TypおよびProのような芳香族非極性残基を使用することもまた可能である。加えて、C1q結合活性を廃止するために、残基320および322しかし318でなくの代わりにSer、Thr、CysおよびMetのような極性の非イオン性残基を使用することもまた可能である。イオン性若しくは非イオン性極性残基上の側鎖は、Glu残基により形成される結合に類似の様式で水素結合を形成することが可能であろうこともまた注目される。従って、極性残基による318Glu残基の置換はC1q結合活性を改変しうるがしかし廃止しないことができる。残基297AsnをAlaで置換することが、C1qに対する親和性をわずかにのみ低下させる約3倍より弱い一方で溶解活性の除去をもたらすこともまた既知である。この変化は、グリコシル化部位および補体活性化に必要とされる炭水化物の存在を破壊する。この部位のいかなる他の置換もまたグリコシル化部位を破壊することができる。本発明は、抗体が改変されたヒンジ領域を有する、変えられたエフェクター機能を有する抗体もまた提供する。改変されたヒンジ領域は、CH1ドメインのものと異なる抗体クラス若しくはサブクラスの抗体由来の完全なヒンジ領域を含みうる。例えば、クラスIgG1抗体の定常ドメインCH1をクラスIgG4抗体のヒンジ領域に結合し得る。あるいは、新たなヒンジ領域は、天然のヒンジの一部、若しくは反復の各単位が天然のヒンジ領域由来である反復単位を含みうる。一例において、天然のヒンジ領域は、1個若しくはそれ以上のシステイン残基をアラニンのような中性残基に変換すること、若しくは適して配置された残基をシステイン残基に変換することにより変えられる。こうした変化は、技術に認識されたタンパク質化学、および好ましくは本明細書に記述されるところの遺伝子工学技術を使用して実施する。本発明の一態様において、抗体のヒンジ領域のシステイン残基の数は、例えば1システイン残基まで減少させる。この改変は、抗体、例えば二特異性抗体分子、およびFc部分がエフェクター若しくはレポーター分子により置換された抗体分子の集成を容易にするという利点を有する。単一のジスルフィド結合を形成することのみが必要であるためである。この改変は、例えば化学的手段により直接若しくは間接的のいずれかで別のヒンジ領域またはエフェクター若しくはレポーター分子いずれかにヒンジ領域を結合するための特定の標的もまた提供する。逆に、抗体のヒンジ領域のシステイン残基の数を、例えば、天然に存在するシステイン残基の数より最低1個、増加させる。システイン残基の数を増大することを使用して、隣接するヒンジ間の相互作用を安定化し得る。この改変の別の利点は、それが変えられた抗体にエフェクター若しくはレポーター分子、例えば放射標識を結合するためのシステインのチオール基の使用を容易にすることである。従って、本発明は、変えられたエフェクター機能を達成するための、抗体クラス、とりわけIgGクラス間のヒンジ領域の交換、および/またはヒンジ領域のシステイン残基の数の増大若しくは減少を提供する例えば米国特許第5,677,425号明細書明らかに本明細書に組み込まれるを参照されたい。変えられた抗体のエフェクター機能の決定は、本明細書に記述されるアッセイ若しくは他の技術に認識される技術を使用して行う。重要なことには、結果として生じる抗体は、出発抗体に比較しての生物学的活性のいかなる変化も評価するため1種若しくはそれ以上のアッセイにかけることができる。例えば、補体若しくはFc受容体を結合する変えられたFc領域をもつ抗体の能力は、本明細書に開示されるアッセイならびにいずれかの技術に認識されるアッセイを使用して評価し得る。本発明の抗体の製造は、本明細書に記述される技術ならびに当業者に既知の技術を包含するいずれかの適する技術により実施する。例えば、例えば抗体の関連する定常ドメイン、例えばFc領域の一部若しくは全部、すなわちCH2および/若しくはCH3ドメイン1個若しくは複数を形成しかつ適切に変えられた残基1個若しくは複数を包含する適切なタンパク質配列を合成し得、そしてその後抗体分子中の適切な場所に化学結合し得る。好ましくは、変えられた抗体を製造するために遺伝子工学技術を使用する。好ましい技術は、例えば、IgGH鎖の少なくとも一部分、例えばFcまたは定常領域例えばCH2および/若しくはCH3をコードするDNA配列が1個若しくはそれ以上の残基で変えられているような、ポリメラーゼ連鎖反応PCRでの使用のための適するプライマーを調製することを包含する。該セグメントはその後、抗体の残存部分、例えば抗体の可変領域、および細胞中での発現のための必要とされる調節エレメントに作動可能に連結し得る。本発明は、細胞株を形質転換するのに使用されるベクター、形質転換ベクターの製造で使用されるベクター、形質転換ベクターで形質転換した細胞株、調製ベクターで形質転換した細胞株、およびそれらの製造方法もまた包含する。好ましくは、変えられたFc領域をもつすなわち変えられたエフェクター機能の抗体を製造するため形質転換される細胞株は不死化哺乳動物細胞株例えばCHO細胞である。変えられたFc領域をもつ抗体を製造するのに使用される細胞株は好ましくは哺乳動物細胞株であるとは言え、細菌細胞株若しくは酵母細胞株のようないずれかの他の適する細胞株をあるいは使用しうる。13.親和性成熟本発明の抗体例えばヒト化抗体は、多数の親和性成熟技術のいずれかを使用して、改良された機能のため改変し得る。典型的には、所定の標的分子に対する結合親和性をもつ候補分子を同定し、そしてその後、標的分子とのより望ましい結合相互作用を有する1種若しくはそれ以上の関係する候補をもたらす突然変異誘発技術を使用してさらに改良すなわち成熟させる。典型的には、それは改変される抗体の親和性affinity若しくは親和性avidity、すなわち標的抗原に対する抗体の結合した親和性であるが、しかしながら、安定性、エフェクター機能、消失、分泌若しくは輸送機能のような該分子の他の特性もまた、親和性成熟技術を使用して別個に若しくは親和性と同時にのいずれかで改変しうる。例示的態様において、抗体例えば本発明のヒト化抗体の親和性が増大される。例えば、最低107M-1、108M-1若しくは109M-1の結合親和性を有する抗体を、それらの親和性が最低109M-1、1010M-1若しくは1012M-1となるように成熟させ得る。結合分子を親和性成熟するための1アプローチは、所望の変化1種若しくは複数をコードする、結合分子若しくはその部分をコードする核酸を合成することである。オリゴヌクレオチド合成は当該技術分野で公知であり、そしていかなる所望のコドン変化1個若しくは複数を有する1種若しくはそれ以上の核酸も製造するように容易に自動化される。制限部位、サイレント突然変異および好都合なコドン使用頻度もまたこうして導入しうる。あるいは、1種若しくはそれ以上のコドンを、特定のアミノ酸の1サブセット、例えばジスルフィド結合を形成し得るシステインを除外しかつ規定された領域、例えばCDR領域若しくはその一部分に制限されるサブセットを表すように変えることができる。あるいは、該領域は部分的に若しくは完全に無作為な一組のアミノ酸により表しうる付加的な詳細については、例えば、米国特許第5,830,650号;同第5,798,208号;同第5,824,514号;同第5,817,483号;同第5,814,476号;同第5,723,323号;同第4,528,266号;同第4,359,53号;同第5,840,479号;および同第5,869,644号明細書を参照されたい。上のアプローチは、当該技術分野で公知であり、かつ、例えば所望の変化1個若しくは複数を有するオリゴヌクレオチド、例えばプライマー若しくは一本鎖核酸を二本鎖核酸にかつ適切な発現若しくはクローニングベクターへの遺伝子工作のような他の操作に適する増幅された量で組み込むという利点を有するポリメラーゼ連鎖反応PCRを使用して部分的若しくは完全に実施し得ることが理解される。こうしたPCRは、ヌクレオチドの誤取り込みを見込んでそれにより増幅されている核酸に付加的な変動性を導入する条件下でもまた実施し得る。PCRを実施するための実験の詳細ならびに関連するキット、試薬およびプライマー設計は、例えば米国特許第4,683,202号;同第4,683,195号;同第6,040,166号;および同第6,096,551号明細書に見出し得る。プライマーに基づくPCRを使用する抗体フレームワーク領域へのCDR領域の導入方法は、例えば米国特許第5,858,725号明細書に記述されている。抗体分子のより大きくかつ多彩な組を効率的に増幅し得るような、抗体分子のより大きな組との配列相同性を見出すことが可能な最小のプライマー組を使用する抗体ライブラリーおよび方法に従って作成したライブラリーのプライマーに基づくPCR増幅方法は、例えば米国特許第5,780,225号;同第6,303,313号;および同第6,479,243号明細書に記述されている。部位特異的突然変異誘発のPCRに基づかない実施方法もまた使用し得、そして、一本鎖のウラシル含有鋳型、および、ハイブリダイズしかつ特定株の大腸菌E.coli株を通過する場合に突然変異を導入するプライマーを使用するKunkel突然変異誘発を包含する例えば米国特許第4,873,192号明細書を参照されたい。抗体配列若しくはその一部分の付加的な変動方法は、至適でないすなわち変異性条件下での核酸合成若しくは核酸のPCR、こうした核酸の変性および再生アニーリング、エキソヌクレオアーゼおよび/若しくはエンドヌクレアーゼ消化、次いでライゲーション若しくはPCRによる再集成核酸シャッフリング、または例えば米国特許第6,440,668号;同第6,238,884号;同第6,171,820号;同第5,965,408号;同第6,361,974号;同第6,358,709号;同第6,352,842号;同第4,888,286号;同第6,337,186号;同第6,165,793号;同第6,132,970号;同第6,117,679号;同第5,830,721号;および同第5,605,793号明細書に記述されるところの前述の技術の1種若しくはそれ以上の組合せを包含する。ある態様において、候補抗体分子のある部分、例えば1個若しくはそれ以上のCDR領域若しくはその一部分、1個若しくはそれ以上のフレームワーク領域、および/または1個若しくはそれ以上の定常領域例えばエフェクター機能を有する定常領域の多様性を有する候補抗体分子の一群を含んでなる抗体ライブラリー若しくは親和性成熟ライブラリーを、技術に認識された技術を使用して発現させ得かつ所望の特性についてスクリーニングし得る例えば米国特許第6,291,161号;同第6,291,160号;同第6,291,159号;および同第6,291,158号明細書を参照されたい。例えば、多様なCDR3配列を有する抗体可変ドメインの発現ライブラリー、ならびに、突然変異誘発により多様なCDR3配列を導入すること、および該ライブラリーを回収することによる多様なCDR3配列を有するヒト抗体ライブラリーの製造方法を構築し得る例えば米国特許第6,248,516号明細書を参照されたい。最後に、親和性成熟させた抗体を発現するために、候補抗体分子をコードする核酸を、標準的ベクターおよび細胞トランスフェクション/形質転換技術を使用して、適切な発現形式で、例えば完全長の抗体HおよびL鎖例えばIgG、抗体Fabフラグメント例えばFab、Fab’2若しくは一本鎖抗体scFvとして細胞に導入し得る例えば米国特許第6,331,415号;同第6,103,889号;同第5,260,203号;同第5,258,498号;および同第4,946,778号明細書を参照されたい。B.免疫学的剤および治療薬をコードする核酸アミロイド沈着物に対する免疫応答は、受動免疫に使用される抗体およびそれらの成分鎖をコードする核酸の投与によってもまた誘導し得る。こうした核酸はDNA若しくはRNAであり得る。免疫原をコードする核酸セグメントは、典型的には、患者の意図される標的細胞中での該DNAセグメントの発現を可能にするプロモーターおよびエンハンサーのような調節エレメントに連結する。免疫応答の誘導のため望ましいところの血液細胞中での発現のためには、例示的プロモーターおよびエンハンサー要素は、L若しくはH鎖免疫グロブリン遺伝子ならびに/またはCMV主要前初期プロモーターおよびエンハンサーStinski、米国特許第5,168,062号および同第5,385,839号明細書からのものを包含する。連結した調節エレメントおよびコーディング配列はしばしばベクターにクローン化される。二本鎖抗体の投与のためには、2本の鎖を同一若しくは別個のベクターにクローン化し得る。レトロウイルス系例えばLawrieとTumin、Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-1091993を参照されたい;アデノウイルスベクター例えばBettら、J.Virol.67:59111993を参照されたい;アデノ随伴ウイルスベクター例えばZhouら、J.Exp.Med.179:18671994を参照されたい、ワクシニアウイルスおよび鶏痘ウイルスを包含するポックス族poxfamilyからのウイルスベクター、シンドビスウイルスおよびセムリキ森林ウイルス由来のもののようなアルファウイルス属からのウイルスベクター例えばDubenskyら、J.Virol.70:5081996を参照されたい、ベネズエラウマ脳炎ウイルスJohnstonら、米国特許第5,643,576号明細書を参照されたいならびに水疱性口内炎ウイルスRose、第6,168,943号明細書を参照されたいのようなラブドウイルス、ならびにパピローマウイルスOheら、HumanGeneTherapy6:3251995;Wooら、第WO94/12629号明細書およびXiaoとBrandsma、NucleicAcids.Res.24、2630-26221996を包含する多数のウイルスベクター系が利用可能である。免疫原をコードするDNA若しくはそれを含有するベクターはリポソームに充填し得る。適する脂質および関連類似物は、Eppsteinら、米国特許第5,208,036号、Felgnerら、米国特許第5,264,618号、Rose、米国特許第5,279,833号およびEpandら、米国特許第5,283,185号明細書により記述されている。免疫原をコードするベクターおよびDNAは、微粒子担体に吸着若しくはそれらと会合もまたし得、それらの例はポリメチルメタクリレートポリマーならびにポリラクチドおよびポリラクチドコグリコリドを包含する。例えばMacGeeら、J.MicroEncap.1996を参照されたい。遺伝子治療ベクター若しくは裸のポリペプチド例えばDNAは、個々の患者への投与、典型的には全身投与例えば静脈内、腹腔内、鼻、胃、皮内、筋肉内、皮下若しくは頭蓋内注入または局所適用例えばAndersonら、米国特許第5,399,346号明細書を参照されたいによりinvivo送達し得る。裸のポリヌクレオチドという用語は、トランスフェクション促進剤とともに送達されないポリヌクレオチドを指す。裸のポリヌクレオチドはときにプラスミドベクターにクローン化される。こうしたベクターは、ブピバカインWeinerら、米国特許第5,593,972号明細書のような促進剤をさらに包含し得る。DNAは遺伝子銃を使用してもまた投与し得る。XiaoとBrandsma、上記を参照されたい。免疫原をコードするDNAを微細な金属ビーズの表面上に沈殿させる。微小発射体をショック波若しくは膨張ヘリウムガスで加速し、そして数細胞層の深さまで組織に浸透する。例えば、Agricetus,Inc.、ウィスコンシン州ミドルトンにより製造されるAccelTM遺伝子送達装置が適する。あるいは、裸のDNAは、単純に該DNAを化学的若しくは機械的刺激を伴い皮膚上にスポットすることにより血流中まで皮膚を通過させ得るHowellら、第WO95/05853号明細書を参照されたい。さらなる一変形において、免疫原をコードするベクターは、個々の患者から外植した細胞例えばリンパ球、骨髄吸引液、組織生検若しくは普遍的ドナー造血幹細胞のような細胞にexvivoで送達し得、次いで、通常はベクターを取り込んだ細胞について選択後に患者に該細胞を再移植し得る。II.予防および治療方法本発明は、とりわけ、可溶性Aβを特徴とするアミロイド形成障害および疾患例えばアルツハイマー病を包含するAβ関連疾患若しくは障害の処置に向けられる。本発明は、Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害の処置若しくは予防のための医薬品の製造における開示される免疫学的試薬例えばヒト化免疫グロブリンの使用にもまた向けられる。本発明の処置方法は、例えば、Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害の予防若しくは処置のための患者における、患者で有益な治療応答例えば認知の迅速な改善、Aβの食作用の誘導、斑負荷量の減少、斑形成の阻害、神経炎性ジストロフィーの低減、および/または認知低下の逆転、処置若しくは予防を生成させる条件下での患者への開示される免疫学的試薬例えばAβ内の特定のエピトープに対するヒト化免疫グロブリンの投与を含んでなる。こうした疾患は、アルツハイマー病、ダウン症候群および軽度認知障害を包含する。後者はアミロイド形成疾患の他の特徴を伴い若しくは伴わずに発生し得る。本発明の免疫学的試薬を使用して、前記免疫学的試薬での処置が該障害に罹患している患者に治療上の利益を提供することが示されているいかなる障害も処置しうることが、当業者により認識されるであろう。例えば、障害はいかなる認知障害、例えば痴呆障害でもありうる。こうした認知障害は、多数の起源、すなわち、機能的機序不安、うつ、生理学的加齢加齢による記憶障害、薬物若しくは解剖学的病変を有しうる。本発明の免疫治療薬が有用であり得る適応症は、毒物曝露による学習障害若しくは記憶障害、健忘に至る脳傷害、加齢、統合失調症、癲癇、精神遅滞、アルコール性ブラックアウト、コルサコフ症候群、薬物誘発性健忘例えばハルシオン、脳底動脈偏頭痛、若しくは単純ヘルペス脳炎と関連する記憶喪失を包含する。本発明のいくつかの方法は、アミロイド沈着物の成分に特異的に結合する抗体の有効投薬量を患者に投与することを含んでなる。こうした方法はヒト患者におけるアルツハイマー病を予防若しくは処置するのにとりわけ有用である。例示的方法は、Aβに結合する抗体の有効投薬量を投与することを含んでなる。好ましい方法は、Aβの残基1-10内の1エピトープに特異的に結合する抗体、例えばAβの残基1-3内の1エピトープに特異的に結合する抗体、Aβの残基1-4内の1エピトープに特異的に結合する抗体、Aβの残基1-5内の1エピトープに特異的に結合する抗体、Aβの残基1-6内の1エピトープに特異的に結合する抗体、Aβの残基1-7内の1エピトープに特異的に結合する抗体、若しくはAβの残基3-7内の1エピトープに特異的に結合する抗体の有効投薬量を投与することを含んでなる。なお別の局面において、本発明は、Aβの遊離N末端残基を含んでなる1エピトープに結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、本発明は、Aβの残基1および/若しくは残基7がアスパラギン酸であるAβの1-10の残基内の1エピトープに結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、本発明は、完全長のアミロイド前駆体タンパク質APPに結合することなくAβペプチドに特異的に結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、該抗体のアイソタイプはヒトIgG1である。なお別の局面において、該抗体のアイソタイプはヒトIgG4である。別の局面において、本発明のヒト抗体は低下されたエフェクター機能例えば、低下されたFc媒介性の食作用、斑をオプソニン化する低下された能力などを有するアイソタイプを有するよう工作される。特定の一態様において、本発明の抗体はIgG4アイソタイプを有するヒト化12A11抗体例えばヒト化12A11v.1である。なお別の局面において、本発明はAβの遊離N末端残基を含んでなる1エピトープに結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、本発明は完全長のアミロイド前駆体タンパク質APPに結合することなくAβペプチドに特異的に結合する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、該抗体のアイソタイプはヒトIgG1である。なお別の態様において、本発明は可溶性Aβに結合かつ/若しくはそれを捕捉する抗体を投与することを特徴とする。なお別の局面において、本発明は、患者中のアミロイド沈着物に結合しかつアミロイド沈着物に対する消失応答を誘導する抗体を投与することを特徴とする。例えば、こうした消失応答はFc受容体媒介性の食作用により遂げられ得る。こうした消失応答は、例えばFc受容体結合ドメイン例えばIgG2a定常領域を包含することにより抗体に工作し得る。該方法は、無症状の患者および疾患の症状を現在示している者双方で使用し得る。Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害を伴うヒト被験体の受動免疫若しくは免疫療法にで使用される抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ若しくはヒト以外の抗体またはそれらのフラグメント例えば抗原結合フラグメントであり得、かつ、本明細書に記述されるところのモノクローナル若しくはポリクローナルであり得る。別の局面において、本発明は、製薬学的担体を伴う抗体を製薬学的組成物として投与することを特徴とする。あるいは、抗体は最低1本の抗体鎖をコードするポリヌクレオチドを投与することにより患者に投与し得る。該ポリヌクレオチドが患者中で発現されて抗体鎖を産生する。場合によっては、該ポリヌクレオチドは抗体のHおよびL鎖をコードする。該ポリヌクレオチドが患者中で発現されてHおよびL鎖を産生する。例示的態様において、患者の血中の投与された抗体のレベルについて該患者をモニターする。別の局面において、本発明は製薬学的担体を伴う抗体を製薬学的組成物として投与することを特徴とする。あるいは、該抗体は最低1本の抗体鎖をコードするポリヌクレオチドを投与することにより患者に投与し得る。該ポリヌクレオチドが患者中で発現されて抗体鎖を産生する。場合によっては、該ポリヌクレオチドは抗体のHおよびL鎖をコードする。該ポリヌクレオチドが患者中で発現されてHおよびL鎖を産生する。例示的態様において、患者の血中の投与された抗体のレベルについて該患者をモニターする。本発明は、かように、Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害例えばADと関連する神経病理学、および若干の患者では認知障害を予防若しくは改善するための治療レジメンに対する長年の必要性を満足する。A.認知の迅速な改善本発明は、Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害例えばADを有するか若しくはそれに罹患する危険性がある患者での認知の迅速な改善を遂げる方法を提供する。好ましい局面において、該方法は、認知の迅速な改善が達成されるような有効用量の12A11免疫学的試薬を投与することを特徴とする。本発明の例示的局面において、患者での1種若しくはそれ以上の認知障害例えば手続き学習および/若しくは記憶障害の改善が達成される。認知障害は、意識に利用可能でありかつ従って言語により表現され得る特定の情報を保存かつ想起する能力例えば特定の事実若しくは事象を思い出す能力と定義される顕在記憶陳述若しくは作業記憶としてもまた知られるの障害であり得る。あるいは、認知障害は、意識に利用可能でなくかつ表現されるために技術、連合、習慣若しくは複雑な反射の学習を必要とする、一般情報若しくは知識を取得、保持および想起する能力、例えば特殊な課題をどのように実行するかを思い出す能力と定義される手続記憶潜在若しくは文脈記憶としてもまた知られるの障害であり得る。手続記憶障害に罹患している個体は正常に機能する彼らの能力がはるかにより損なわれている。であるから、手続記憶の障害の改善において有効である処置が高度に望ましくかつ有利である。ある態様において、本発明は、抗体の投与後1か月以内に迅速な改善が達成されるような被験体への抗体剤の投与を含んでなる、被験体での認知の迅速な改善を遂げる方法を提供する。他の態様において、認知の迅速な改善は抗体の投与後1週以内に達成される。他の態様において、認知の迅速な改善は抗体の投与後1日以内に達成される。なお他の態様において、認知の迅速な改善は抗体の投与後12時間以内に達成される。B.処置に従いやすい患者処置に従いやすい患者は、Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害の危険性があるがしかし症状を示していない個体、ならびに現在症状を示している患者を包含する。アルツハイマー病の場合、事実上誰でも彼若しくは彼女が十分に長く生きる場合にアルツハイマー病に罹患する危険性がある。従って、本方法は、主題の患者の危険性のいかなる評価に対する必要性も伴わずに一般集団に予防的に投与し得る。本方法は、ADの危険性がある個体、例えばADの危険因子を表す者にとりわけ有用である。ADの主な危険因子は増大した年齢である。集団が加齢する際に、ADの頻度は増大し続ける。現在の推定は、65歳以上の集団の10まで、および85歳以上の集団の50までがADを有することを示す。まれとは言え、ある種の個体はADを発症する遺伝的傾向があると若齢で同定され得る。家族性AD若しくは早発型ADとして知られる遺伝可能な形態のADを保有する個体は、変異される場合にADを賦与することが既知である遺伝子、例えばAPP若しくはプレセニリン遺伝子の分析の、ADの十分に報告された家族歴から同定され得る。十分に特徴づけられたAPP突然変異は、APP770のコドン716および717のハーディ型突然変異例えば、バリン717からイソロイシンGoateら、1991、Nature349:704;バリン717からグリシンChartierら1991Nature353:844;Murrellら1991、Science254:97;バリン717からフェニルアラニンMullanら1992、NatureGenet.1:345-7、APP770のコドン670および671のスウェーデン型突然変異、ならびにAPP770のコドン692のフランダース型突然変異を包含する。こうした突然変異は、APPのAβへの増大された若しくは変えられたプロセシング、とりわけ増大された量の長い形態のAβすなわちAβ1-42およびAβ1-43へのAPPのプロセシングによりアルツハイマー病を引き起こすと考えられる。プレセニリン遺伝子PS1およびPS2のような他の遺伝子中の突然変異は、増大された量の長い形態のAβを生成させるAPPのプロセシングに影響を及ぼすと間接的に考えられるHardy、TINS20:1541997;Kowalskaら、2004、PolishJ.Pharmacol.、56:171-8を参照されたい。ADに加えて、APPの770アミノ酸のアイソフォームのアミノ酸692若しくは683の突然変異は、オランダ型のアミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血HCHWA-Dと呼ばれる脳のアミロイド形成障害に関与している。より一般的には、ADは患者により遺伝されないが、しかし多様な遺伝因子の複雑な相互作用により発症する。これらの個体は、診断することがはるかにより困難である一形態散発性AD晩発型ADとしてもまた知られるを有すると言われる。にもかかわらず、患者集団は、ADを引き起こさないがしかし一般集団より高頻度でADで分離することが既知である感受性アレル若しくは形質、例えばアポリポタンパク質Eのε2、ε3およびε4アレルCorderら1993、Science、261:921-923の存在についてスクリーニングし得る。とりわけ、好ましくはADの何らかの他のマーカーに加えてε4アレルを欠く患者はADの危険性があると同定しうる。例えば、ADを有するまたは高コレステロール血症若しくはアテローム硬化症に罹患している親族を有する、ε4アレルを欠く患者は、ADの危険性があると同定しうる。別の潜在的生体マーカーは、脳脊髄液CSFのAβ42およびτのレベルの複合評価である。低いAβ42および高いτレベルはADの危険性がある患者の同定において予測的価値を有する。ADの危険性がある患者の他の指標は、invivoの動的神経病理学的データ、例えば脳βアミロイドのinvivo検出、脳活性化のパターンなどを包含する。こうしたデータは、例えば三次元磁気共鳴画像化MRI、陽電子断層撮影法PET走査およびシングルフォトンエミッションCTSPECTを使用して得ることができる。可能なADを有する患者の指標は、限定されるものでないが1痴呆を有する、240~90歳の、3例えば2個若しくはそれ以上の認知領域での認知障害、46か月以上の障害の進行、5意識平静、および/若しくは6他の合理的診断の非存在の患者を挙げることができる。散発性若しくは家族性いずれの形態のADに罹患している個体も、しかしながら、通常はADの1種若しくはそれ以上の特徴的症状の提示後に診断される。ADの一般的症状は、慣例の技能若しくは課題の実施に影響を及ぼす認知障害、言語での問題、時間若しくは場所に対する失見当、不十分若しくは低下した判断、抽象的思考の障害、運動調節の喪失、気分若しくは行動の変化、人格変化または自発性の喪失を包含する。患者により表される数障害若しくは認知障害の程度は通常、疾患が進行した程度を反映する。例えば、患者は、該患者が記憶例えば文脈記憶で問題を表すがしかしそれ以外は十分に機能することが可能であるような軽度認知障害のみを表しうる。本方法はAβ関連認知障害、例えばAβ関連痴呆を有する個体にもまた有用である。とりわけ、本方法は、中枢神経系CNS、例えば脳若しくはCSF中の可溶性オリゴマーAβの存在により引き起こされるか若しくはそれに起因する認知障害若しくは異常を有する個体にとりわけ有用である。Aβにより引き起こされるか若しくはそれに関連する認知障害は、1脳中でのβアミロイド斑の発生;2Aβの合成、プロセシング、分解若しくは消失の異常な速度;3例えば脳中の可溶性オリゴマーAβ種の形成若しくは活性;および/または4異常な形態のAβの形成により引き起こされるか若しくはそれらに関連するものもまた包含する。実際の因果関係が特定の患者でAβ異常と認知障害の間で確立されることは必要でないが、しかしながら、若干の関連が、例えば、Aβ免疫治療薬での処置が有効であると期待されないとみられる非Aβ関連認知障害に罹患している患者を識別するための、ADの上述されたマーカーの1つにより示されるはずである。ヒト被験体、例えば痴呆障害例えばADの症状若しくは病理学の危険性があるか若しくはそれらを有する被験体での認知技能若しくは能力を評価するための数種の検査が開発された。認知障害はこれらの検査の損なわれた成績により同定され得、そして、多くの処置がこれらの検査での成績を改善させるそれらの能力に基づいて提案されている。いくつかの課題が被験体の行動若しくは運動機能を評価したとは言え、大部分の課題は学習若しくは記憶を検査するために設計された。ヒトでの認知は限定されるものでないが以下の検査を挙げることができる多様な検査を使用して評価しうる。ADAS-Cogアルツハイマー病認知評価尺度AlzheimerDiseaseAssessmentScale-Cognitiveは終了するのに30分かかる11部分の検査である。ADAS-Cogは言語および記憶技能の研究のための好ましい簡易検査である。Rosenら1984AmJPsychiatry.14111:1356-64;Ihlら2000Neuropsychobiol.412:102-7;およびWeyerら1997IntPsychogeriatr.92:123-38を参照されたい。Blessed検査は、日常生活動作および記憶、集中ならびに見当識を評価する認知の別の短時間約10分の検査である。Blessedら1968BrJPsychiatry114512:797-811を参照されたい。ケンブリッジ神経心理学自動検査CambridgeNeuropsychologicalTestAutomatedBatteryCANTABは神経変性疾患若しくは脳損傷を伴うヒトの認知障害の評価に使用される。それは、記憶、注意および実行機能の13の相互に関連づけられたコンピュータ化検査よりなり、そしてパーソナルコンピュータからタッチスクリーンを介して実施する。この検査は言語およびほとんど文化によらず、そしてアルツハイマー病の早期検出および慣例のスクリーニングで高度に感受性であることが示された。Swainsonら2001DementGeriatrCognDisord.;12:265-280;およびFrayとRobbins1996NeurotoxicolTeratol.184:499-504.Robbinsら1994Dementia55:266-81を参照されたい。アルツハイマー病レジストリ確立協会TheConsortiumtoEstablishaRegistryforAlzheimer’sDiseaseCERADの臨床および神経心理学検査は、言語の流暢さの検査、ボストン命名検査BostonNamingTest、ミニメンタルステート検査MMSE、10項目語想起、構造練習constructionalpraxis、および練習項目の遅延想起を包含する。該検査は典型的に20~30分かかり、そして認知低下の評価および追跡で便宜的かつ有効である。Morrisら1988PsychopharmacolBull.244:641-52;Morrisら1989Neurology399:1159-65;およびWelshら1991ArchNeurol.483:278-81を参照されたい。1975年にFolesteinらにより開発されたミニメンタルステート検査MMSEは精神状態および認知機能の簡易検査である。それは他の精神現象を評価せず、そして従って完全な精神状態検査の代用でない。それは痴呆のスクリーニングにおいて有用であり、また、その評価体系は進行の長期にわたる追跡において有用である。ミニメンタルステート検査MMSEは、年齢および教育について基準を補正して広範に使用されている。それは認知障害をスクリーニングするため、所定の時点の認知障害の重症度を推測するため、1個体の認知変化の経過を長期にわたり追跡するため、および処置に対する1個体の応答を報告するために使用し得る。被験体の認知評価は、9か月若しくはそれ以上ヒトにおいて分離された経過観察検査を伴う、公式の神経心理学検査を必要としうる。Folsteinら1975JPsychiatrRes.12:196-198;CockrellとFolstein1988PsychopharmBull.244:689-692;およびCrumら1993J.Am.Med.Association18:2386-2391を参照されたい。Seven-MinuteScreenは、アルツハイマー病について評価すべきである患者を同定するのを助けるスクリーニングツールである。該スクリーニングツールは、多様な型の知的機能性を評価するための一連の質問を使用し、ADの早期徴候に高度に感受性である。該検査は、見当識、記憶、視覚空間技能および表現言語を焦点とする4組の質問よりなる。それは正常な加齢過程による認知変化と痴呆による認知障害を識別し得る。SolomonとPendlebury1998FamMed.304:265-71、Solomonら1998ArchNeurol.553:349-55を参照されたい。アルツハイマー病に現在罹患している個体は、特徴的な痴呆ならびに上述された危険因子の存在から認識され得る。加えて、多数の診断検査が、ADを有する個体を同定するために利用可能である。これらはCSFのτおよびAβ42レベルの測定を包含する。上昇したτおよび低下したAβ42レベルはADの存在を意味する。アルツハイマー病に罹患している個体は、実施例の節で論考されるところのADRDA基準によってもまた診断し得る。C.処置レジメンおよび投薬量予防的応用において、製薬学的組成物若しくは医薬品を、アルツハイマー病に感受性の、若しくは別の方法でその危険性がある患者に、該危険を排除もしくは低下、重症度を低下、または、該疾患の生化学的、組織学的および/若しくは行動的症状、その合併症、ならびに該疾患の発症の間に現れる中間の病理学的表現型を包含する該疾患の発症を遅らせるのに十分な量で投与する。治療的応用においては、組成物若しくは医薬品を、こうした疾患に感受性の、若しくはすでに罹患している患者に、その合併症および該疾患の発症での中間の病理学的表現型を包含する該疾患の症状生化学的、組織学的および/若しくは行動的を治癒若しくは少なくとも部分的に抑止するのに十分な量で投与する。いくつかの方法において、試薬の投与は、特徴的なアルツハイマー病の病理を未だ発生していない患者において筋認識myocognitive障害を低下若しくは排除する。治療的若しくは予防的処置を達成するのに十分な量は、治療的若しくは予防的有効用量と定義する。予防的および治療的双方のレジメンで、試薬は通常、十分な免疫応答が達成されるまで数投薬量で投与する。免疫応答若しくは免疫学的応答という用語は、レシピエント被験体中の抗原に向けられた体液性抗体媒介性および/または細胞性抗原特異的T細胞若しくはそれらの分泌産物により媒介される応答の発生を包含する。こうした応答は、能動的応答すなわち免疫原の投与により誘導されるまたは受動的応答すなわち免疫グロブリン若しくは抗体または予め刺激されたT細胞の投与により誘導されるであり得る。典型的には、免疫応答をモニターし、そして免疫応答が弱まり始める場合に反復投薬量を与える。上述された状態の処置のための本発明の組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか若しくは動物であるか、投与される他の医薬品、および処置が予防的であるか若しくは治療的であるかを包含する多くの多様な因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、しかしトランスジェニック哺乳動物を包含するヒト以外の哺乳動物もまた処置し得る。処置投薬量は安全性および有効性を至適化するように滴定される必要がある。抗体での受動免疫については、投薬量は約0.0001から10mg/kgまで、およびより通常は0.01ないし5mg/kg例えば0.02mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、2mg/kgなど宿主体重の範囲にわたる。例えば、投薬量は1mg/kg体重若しくは10mg/kg体重、または1~10mg/kgの範囲内、好ましくは最低1mg/kgであり得る。別の例において、投薬量は0.5mg/kg体重若しくは15mg/kg体重、または0.5~15mg/kgの範囲内、好ましくは最低1mg/kgであり得る。別の例において、投薬量は0.5mg/kg体重若しくは20mg/kg体重、または0.5~20mg/kgの範囲内、好ましくは最低1mg/kgであり得る。別の例において、投薬量は0.5mg/kg体重若しくは30mg/kg体重、または0.5~30mg/kgの範囲内、好ましくは最低1mg/kgであり得る。好ましい一例において、投薬量は約30mg/kgであり得る。とりわけ好ましい一例において、12A11抗体はおよそ0.3mg/kgからおよそ30mg/kgまでの用量範囲で腹腔内投与される。ある態様において、本発明の方法は、単一用量としての被験体への抗体剤例えばAβ抗体の投与を含んでなる。他の態様において、本発明の方法は、複数用量での被験体への抗体剤例えばAβ抗体の投与を含んでなる。一態様において、Aβ抗体の用量は約100μg/kgから100mg/kg患者体重までである。別の態様において、Aβ抗体の用量は約300μg/kgから30mg/kg患者体重までである。なお別の態様において、Aβ抗体の用量は約1mg/kgから10mg/kg患者体重までである。上の範囲の中間の用量もまた本発明の範囲内にあることを意図している。被験体は、こうした用量を毎日、隔日、週1回、若しくは経験的分析により決定されるいずれかの他の計画に従って投与され得る。例示的一処置は、例えば最低6か月の長期にわたる複数の投薬量での投与を必要とする。付加的な例示的処置レジメンは、2週ごとあたり1回若しくは月1回若しくは3ないし6か月ごとに1回の投与を必要とする。例示的投薬スケジュールは、連日1~10mg/kg若しくは15mg/kg、隔日30mg/kg、または週1回60mg/kgを包含する。いくつかの方法において、異なる結合特異性をもつ2種若しくはそれ以上のモノクローナル抗体を同時に投与し、この場合、投与される各抗体の投薬量は示される範囲内にある。抗体は通常、複数の機会に投与する。単一投薬量の間の間隔は週、月若しくは年であり得る。間隔は患者のAβに対する抗体の血液濃度を測定することにより示されるとおり不規則でもまたあり得る。いくつかの方法においては、投薬量を1~1000μg/mlの血漿抗体濃度、およびいくつかの方法では25~300μg/mlを達成するように調節する。あるいは、抗体は除放製剤として投与し得、この場合より少なく頻繁な投与が必要とされる。投薬量および頻度は患者での抗体の半減期に依存して変動する。一般に、ヒト化抗体は最長の半減期を示し、次いでキメラ抗体およびヒト以外の抗体である。投薬量および投与頻度は、処置が予防的であるか若しくは治療的であるかに依存して変動し得る。予防的応用において、本抗体若しくはそれらのカクテルを含有する組成物を未だ疾患状態にない患者に投与して該患者の抵抗性を高める。こうした量は予防的有効用量であると定義する。この使用において、正確な量は、再度、患者の健康状態および全般的な免疫に依存するが、しかし一般に投与あたり0.1から25mgまで、とりわけ投与あたり0.5ないし2.5mgの範囲にわたる。比較的低投薬量を長期にわたり比較的頻繁でない間隔で投与する。若干の患者は彼らの生涯の残りの間処置を受領し続ける。無症状の患者においては、処置はいずれの齢例えば10、20、30でも開始し得る。通常は、しかしながら、患者が40、50、60若しくは70歳に達するまで処置を開始することは必要でない。処置は、典型的には長期にわたる複数投薬量を必要とする。処置は長期にわたり抗体濃度をアッセイすることによりモニターし得る。応答が下落する場合は追加刺激投薬量が指示される。潜在的ダウン症候群患者の場合、処置は治療試薬を母親に投与することにより出生前に、若しくは出生直後に開始し得る。治療的応用においては、疾患の進行を低下若しくは終了させるまで、および好ましくは患者が疾患の症状の部分的若しくは完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高投薬量例えば投与あたり約1から200mgまでの抗体、5から25mgのまで投薬量をより一般的に使用するがときに必要とされる。その後、本特許は予防的レジメンを投与し得る。抗体をコードする核酸の用量は、患者あたり約10ngから1gまで、100ngないし100mg、1μgないし10mg、若しくは30~300μgのDNAの範囲にわたる。感染性ウイルスベクターの用量は、投与あたり10~100個若しくはそれ以上のビリオンまで変動する。治療的試薬は、予防的および/若しくは治療的処置のため非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻内若しくは筋肉内手段により投与し得る。免疫原剤の最も典型的な投与経路は皮下であるとは言え、他の経路が等しく有効であり得る。次の最も一般的な経路は筋肉内注入である。この型の注入は、最も典型的には腕若しくは脚の筋肉で実施する。いくつかの方法においては、沈着物が蓄積した特定の組織に試薬を直接注入する例えば頭蓋内注入。筋肉内注入若しくは静脈内注入が抗体の投与に好ましい。いくつかの方法において、特定の治療的抗体を頭蓋中に直接注入する。いくつかの方法においては、抗体を徐放性組成物若しくはMedipadTM装置のような装置として投与する。本発明の免疫学的試薬は、場合によっては、アミロイド形成疾患の処置で少なくとも部分的に有効である他の剤とともに投与し得る。ある態様において、本発明のヒト化抗体例えばヒト化12A11を、第二の免疫原性若しくは免疫学的試薬とともに投与する。例えば、本発明のヒト化12A11抗体をAβに対する別のヒト化抗体とともに投与し得る。他の態様において、ヒト化12A11抗体を、Aβワクチンを受領した若しくは受領している患者に投与する。アミロイド沈着物が脳に存在するアルツハイマー病およびダウン症候群の場合には、本発明の剤は、血液脳関門を横断する本発明の剤の通過を増大させる他の剤とともにもまた投与し得る。本発明の免疫学的試薬は、標的細胞若しくは組織への該治療薬の到達を高める他の剤、例えばリポソームなどとともにもまた投与し得る。こうした剤を共投与することは、所望の効果を達成するのに必要とされる治療薬例えば治療的抗体若しくは抗体鎖の投薬量を減少させ得る。D.製薬学的組成物本発明の免疫学的試薬はしばしば有効成分、すなわち、および多様な他の製薬学的に許容できる成分を含んでなる製薬学的組成物として投与される。Remington’sPharmaceuticalScience第15版、MackPublishingCompany、ペンシルバニア州イーストン1980を参照されたい。好ましい剤形は意図される投与様式および治療的応用に依存する。組成物は、所望の製剤に依存して、製薬学的に許容できる非毒性の担体若しくは希釈剤動物若しくはヒト投与のために製薬学的組成物を処方するのに一般に使用されるベヒクルと定義されるもまた包含し得る。希釈剤は該組合せの生物学的活性に影響を及ぼさないように選択する。こうした希釈剤の例は、蒸留水、生理学的リン酸緩衝生理的食塩水、リンゲル液、D-ブドウ糖溶液およびハンクス液である。加えて、製薬学的組成物若しくは製剤は他の担体、補助物質、若しくは非毒性の非治療的非免疫原性安定剤などもまた包含しうる。製薬学的組成物は、タンパク質、キトサンのような多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマーラテックス官能性化セファロースTM、アガロ―ス、セルロースなどのような、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、ならびに脂質凝集物油滴若しくはリポソームのようなのような大型のゆっくりと代謝される巨大分子もまた包含し得る。加えて、これらの担体は免疫刺激剤すなわちアジュバントとしても機能し得る。非経口投与のためには、本発明の剤は、水、油、生理的食塩水、グリセロール若しくはエタノールのような無菌の液体であり得る製薬学的担体を含む生理学的に許容できる希釈在中の該物質の溶液若しくは懸濁液の注入可能な投薬量として投与し得る。加えて、湿潤剤若しくは乳化剤、界面活性剤、pH緩衝物質などのような補助物質が組成物中に存在し得る。製薬学的組成物の他の成分は、石油、動物、植物若しくは合成起源のもの、例えばラッカセイ油、ダイズ油および鉱物油である。一般に、プロピレングリコール若しくはポリエチレングリコールのようなグリコールは、とりわけ注入可能な溶液の好ましい液体担体である。抗体は、有効成分の持続放出を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若しくは植込物製剤の形態で投与し得る。例示的組成物は、HClでpH6.0に調節した50mML-ヒスチジン、150mMNaClよりなる水性緩衝液中で処方した5mg/mLのモノクローナル抗体を含んでなる。典型的には、組成物は液体の溶液若しくは懸濁液いずれかとしての注入可能物として製造され;注入前の液体ベヒクル中の溶液若しくは懸濁液に適する固体の形態もまた製造し得る。該製剤は、上で論考されたところの高められたアジュバント効果のためのリポソーム、またはポリラクチド、ポリグリコリド若しくはコポリマーのような微粒子中に乳化若しくは被包化もまたされ得るLanger、Science249:15271990およびHanes、AdvancedDrugDeliveryReviews28:971997を参照されたい。本発明の剤は、有効成分の持続性若しくはパルス放出を可能にするような様式で処方し得るデポー注射剤若しくは植込物製剤の形態で投与し得る。他の投与様式に適する付加的な製剤は、経口、鼻内および肺製剤、坐剤、ならびに経皮適用を包含する。坐剤については、結合剤および担体は、例えばポリアルキレングリコール若しくはトリグリセリドを包含し;こうした坐剤は0.5ないし10、好ましくは1~2の範囲の有効成分を含有する混合物から成形し得る。経口製剤は、製薬学的等級のマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロースおよび炭酸マグネシウムのような賦形剤を包含する。これらの組成物は、溶液、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、除放製剤若しくは散剤の形態を取り、そして10~95、好ましくは25~70の有効成分を含有する。局所適用は経皮若しくは皮内送達をもたらし得る。局所投与は、コレラ毒素またはその無毒化誘導体若しくはサブユニット、あるいは他の類似の細菌毒素との該剤の共投与により助長し得るGlennら、Nature391、8511998を参照されたい。共投与は成分を混合物として、または化学的架橋若しくは融合タンパク質としての発現により得られる結合された分子として使用することにより達成し得る。あるいは、経皮送達は皮膚貼付剤を使用して、若しくはトランスフェロソームPaulら、Eur.J.Immunol.25:35211995;Cevcら、Biochem.Biophys.Acta1368:201-151998を使用して達成し得る。E.処置の経過のモニタリング本発明は、アルツハイマー病に罹患しているか若しくはそれに感受性の患者における処置のモニター方法、すなわち患者に投与されている処置の経過のモニター方法を提供する。該方法を使用して、症候性患者での治療的処置および無症候性患者での予防的処置の双方をモニターし得る。とりわけ、該方法は受動免疫をモニターする例えば投与された抗体のレベルを測定するのに有用である。いくつかの方法は、例えば、1投薬量の剤を投与する前の患者での抗体レベル若しくはプロファイルの基礎値を測定すること、およびこれを処置後の該プロファイル若しくはレベルの値と比較することを必要とする。レベル若しくはプロファイルの値の有意の増大すなわち、こうした測定値の平均からの1標準偏差として表される、同一サンプルの反復測定での実験誤差の典型的範囲より大きいは正の処置の結果すなわち、該剤の投与が所望の応答を達成したことを知らせる。免疫応答の値が有意に変化しないか若しくは減少する場合は、負の処置結果を示す。他の方法において、レベル若しくはプロファイルの対照値すなわち平均および標準偏差を対照集団について測定する。典型的には、対照集団の個体は以前の治療を受領していない。治療薬を投与した後の患者でのレベル若しくはプロファイルの測定値をその後該対照値と比較する。対照値に関しての有意の増大例えば平均から1標準偏差より大きいは正のすなわち十分な処置結果を知らせる。有意の増大の欠如若しくは減少は負のすなわち不十分な処置結果を知らせる。剤の投与は、一般に該レベルが対照値に関して増大している間継続する。前のとおり、対照値に関してのプラトーの到達は、処置の投与が中断または投薬量および/若しくは頻度を低下され得ることの指標である。他の方法において、レベル若しくはプロファイルの対照値例えば平均および標準偏差を、治療薬での処置を受けかつそのレベル若しくはプロファイルが処置に応答してプラトーに達した個体の対照集団から決定する。患者でのレベル若しくはプロファイルの測定値を該対照値と比較する。患者での測定レベルが対照値と有意に異ならない例えば1標準偏差より大きくない場合は、処置を中断し得る。患者でのレベルが対照値より有意に下である場合は、剤の継続投与が保証される。患者でのレベルが対照値より下に存続する場合には、処置の変更を示しうる。他の方法において、現在処置を受領していないがしかし以前の1クールの処置を受けた患者を、抗体レベル若しくはプロファイルについてモニターして、処置の再開が必要とされるかどうかを決定する。該患者での測定されたレベル若しくはプロファイルを、以前の1クールの処置後に該患者で以前に達成された値と比較し得る。以前の測定値に関しての有意の減少すなわち同一サンプルの反復測定での誤差の典型的範囲より大きいは、処置を再開し得ることの指示である。あるいは、患者で測定された値を、1クールの処置を受けた後の患者の集団で測定された対照値平均および標準偏差と比較し得る。あるいは、患者での測定値を、疾患の症状がないままである予防的に処置した患者の集団、若しくは疾患の特徴の改善を示す治療的に処置した患者の集団での対照値と比較し得る。これらの場合の全部において、対照値に関しての有意の減少すなわち1標準偏差より大きいは、処置を患者で再開すべきであることの指標である。分析のための組織サンプルは、典型的には患者からの血液、血漿、血清、粘液若しくは脳脊髄液である。サンプルを、例えばAβペプチドに対する抗体のレベル若しくはプロファイル、例えばヒト化抗体のレベル若しくはプロファイルについて分析する。Aβに特異的な抗体のELISA検出方法を実施例の節に記述する。いくつかの方法において、投与された抗体のレベル若しくはプロファイルを、消失アッセイを使用して、例えば本明細書に記述されるところのinvitro食作用アッセイで測定する。こうした方法において、試験されている患者からの組織サンプルを例えばPDAPPマウスからのアミロイド沈着物およびFc受容体をもつ食細胞と接触させる。アミロイド沈着物のその後の消失をその後、モニターする。消失応答の存在および程度は、試験中の患者の組織サンプル中のAβを消失させるのに有効な抗体の存在およびレベルの指示を提供する。受動免疫後の抗体プロファイルは、典型的には抗体濃度の即座のピーク、次いで指数的減衰を示す。さらなる投薬量がなければ、該減衰は、投与された抗体の半減期に依存して数日ないし数ヶ月の期間内に治療前のレベルに近づく。いくつかの方法においては、患者中のAβに対する抗体の基礎測定を投与前に行い、第二の測定をその後まもなく行ってピーク抗体レベルを決定し、そして1回若しくはそれ以上のさらなる測定をときどき行って抗体レベルの減衰をモニターする。抗体のレベルが基礎若しくは基礎より低いピークの予め決められたパーセント例えば50、25若しくは10まで減少した場合は、さらなる1投薬量の抗体の投与を投与する。いくつかの方法においては、ピーク若しくはバックグラウンドより低いその後の測定レベルを、他の患者での有益な予防的若しくは治療的処置レジメンを構成するために、以前に測定した参照レベルと比較する。測定した抗体レベルが参照レベルより有意により低い例えば、処置の利益を得る患者の集団での参照値の平均-1標準偏差より低い場合は、付加的な1投薬量の抗体の投与が指示される。付加的な方法は、アミロイド形成疾患例えばアルツハイマー病を診断若しくはモニターするために研究者若しくは医師により慣例に頼られているいずれかの技術に認識された生理学的症状例えば身体若しくは精神症状を処置の経過にわたりモニターすることを包含する。例えば認知障害をモニターし得る。後者はアルツハイマー病およびダウン症候群の症状であるが、しかしこれらの疾患のいずれの他の特徴を伴わずにもまた発生し得る。例えば、認知障害は、処置の経過を通じ、規約に従ってミニメンタルステート検査で患者のスコアを決定することによりモニターし得る。F.キット本発明は上述されたモニタリング方法を実施するためのキットをさらに提供する。典型的には、こうしたキットはAβに対する抗体に特異的に結合する剤を含有する。該キットは標識もまた包含し得る。Aβに対する抗体の検出のため、標識は典型的には標識された抗イディオタイプ抗体の形態にある。抗体の検出のため、該剤は、マイクロタイター皿のウェルへのような固相に予め結合して供給し得る。キットは、典型的には該キットの使用のための指示を提供するラベルもまた含有する。該ラベルは、測定された標識のレベルをAβに対する抗体のレベルと相関させる図若しくは他の対応する型regimeもまた包含しうる。ラベルという用語は、その製造、輸送、販売若しくは使用の間のいずれかの時点でキットに貼付されるか若しくは別の方法で付随するいかなる文書若しくは記録資料も指す。例えば、ラベルという用語は、広告用パンフレットおよび小冊子、包装資材、説明書、音声若しくはビデオカセット、コンピュータディスク、ならびにキットに直接刻印された文言を包含する。本発明は、診断キット、例えば研究、検出および/若しくは診断キット例えばinvivo画像化を実施するためのもまた提供する。こうしたキットは、典型的に、好ましくは残基1-10内のAβの1エピトープに結合するための抗体を含有する。好ましくは、該抗体は標識されているか、若しくは二次標識試薬がキットに包含される。好ましくは、キットは意図している応用を実施するため、例えばinvivo画像化アッセイを実施するための説明書で区別される。例示的抗体は本明細書に記述されるものである。G.invivo画像化本発明は患者中のアミロイド沈着物のinvivo画像化方法を提供する。こうした方法はアルツハイマー病若しくはそれに対する感受性を診断若しくはその診断を確認するのに有用である。例えば、該方法を痴呆の症状で診察を受ける患者で使用し得る。患者が異常なアミロイド沈着物を有する場合には、該患者はアルツハイマー病に罹患していることがありそうである。該方法は無症状の患者でもまた使用し得る。アミロイドの異常な沈着物の存在は将来の症候性疾患に対する感受性を示す。該方法は、以前にアルツハイマー病と診断された患者での疾患の進行および/若しくは処置に対する応答をモニターするのにもまた有用である。該方法は、Aβに結合する抗体のような試薬を患者に投与すること、およびその後該剤が結合した後にそれを検出することにより作用する。好ましい抗体は、完全長のAPPポリペプチドに結合することなく患者中のAβ沈着物に結合する。アミノ酸1-10内のAβの1エピトープに結合する抗体がとりわけ好ましい。いくつかの方法において、抗体はAβのアミノ酸7-10内の1エピトープに結合する。こうした抗体は、典型的には実質的な消失応答を誘導することなく結合する。他の方法において、抗体はAβのアミノ酸1-7内の1エピトープに結合する。こうした抗体は、典型的にAβに結合しかつそれに対する消失応答を誘導する。しかしながら、消失応答はFabのような完全長の定常領域を欠く抗体フラグメントを使用することにより回避し得る。いくつかの方法においては、同一の抗体が処置および診断双方の試薬としてはたらき得る。一般に、Aβの残基10に対しC末端のエピトープに結合する抗体は、おそらく該C末端エピトープがアミロイド沈着物中で到達不可能であるため、残基1-10内のエピトープに結合する抗体ほど強いシグナルを示さない。従ってこうした抗体はより少なく好ましい。診断試薬は、患者の体内への静脈内注入により、または頭蓋内注入により若しくは頭蓋を通る孔を開けることにより脳中に直接投与し得る。試薬の投薬量は処置方法についてと同一範囲内にあるべきである。典型的には試薬は標識されるとは言え、いくつかの方法においては、Aβに対する親和性をもつ一次試薬は未標識であり、そして一次試薬に結合するために二次標識剤を使用する。標識の選択は検出手段に依存する。例えば、蛍光標識は光学的検出に適する。常磁性標識の使用は外科的介入を伴わない断層撮影検出に適する。放射活性標識はPET若しくはSPECTを使用してもまた検出し得る。診断は、標識された場所の数、大きさおよび/若しくは強度を対応する基礎値と比較することにより実施する。基礎値は疾患に罹っていない個体の集団での平均レベルを表し得る。基礎値は同一患者で測定された以前のレベルもまた表し得る。例えば、基礎値をある患者で処置を開始する前に測定し得、そしてその後測定した値を該基礎値と比較し得る。基礎に関しての値の減少は処置に対する正の応答を知らせる。H.臨床試験単回投与第I相試験をヒトでの安全性を決定するため実施し得る。治療薬例えば本発明の抗体を、想定される有効性のレベルの約0.01から開始しかつ有効なマウス投薬量の約10倍のレベルに達するまで3の係数により増大させる、増大する投薬量で多様な患者に投与する。第II相試験は治療上の有効性を決定するためにさらに実施し得る。可能なADについてアルツハイマー病関連障害協会Alzheimer’sdiseaseandRelatedDisordersAssociationADRDAの基準を使用して定義される早期ないし中期アルツハイマー病を伴う患者を選択する。適する患者は、ミニメンタルステート検査MMSEで12~26の範囲で得点する。他の選択基準は、患者が試験の期間中生存しかつ妨害しうる付随する医薬品の使用のような複雑にする問題を欠くことがありそうであることである。患者機能の基礎評価は、MMSE、およびADASアルツハイマー病の状態および機能を伴う患者を評価するための包括的尺度であるのような古典的精神測定尺度を使用して行う。これらの精神測定尺度はアルツハイマー病の状態の進行の尺度を提供する。適する質的生活尺度もまた処置をモニターするのに使用し得る。疾患の進行はMRIによってもまたモニターし得る。免疫原特異的抗体およびT細胞応答のアッセイを包含する患者の血液プロファイルもまたモニターし得る。基礎測定後に、患者は処置を受領し始める。彼らを無作為化し、そして盲検化様式で治療薬若しくはプラセボいずれかで処置する。患者は最低6か月ごとにモニターする。有効性は、プラセボ群に関する処置群の進行の有意の減少により測定する。第二の第II相試験は、ときに加齢による記憶障害AAMI若しくは軽度認知障害MCIと称されるアルツハイマー病以外の早期記憶障害から、ADRDA基準によるように定義されるところの可能なアルツハイマー病への患者の転換を評価するために実施し得る。アルツハイマー病への転換の高危険度を伴う患者は、記憶障害、若しくは前アルツハイマー病の症候学に関連した他の困難の早期徴候、アルツハイマー病の家族歴、遺伝的危険因子、齢、性別、およびアルツハイマー病に対し高危険度と予測することが見出された他の特徴について参照集団をスクリーニングすることにより、非臨床集団から選択する。より正常な集団を評価するよう設計された他の数的指標と一緒の、MMSEおよびADASを包含する適する数的指標の基礎スコアを収集する。これらの患者集団を、該剤を含む投薬代替に対するプラセボ比較を伴う適する群に分割する。これらの患者集団を約6か月の間隔で追跡し、そして、各患者のエンドポイントは、彼若しくは彼女が観察の終了時にADRDA基準により定義されるところの可能なアルツハイマー病に転換するかどうかである。本発明は以下の制限しない実施例によりより完全に記述されるであろう。免疫グロブリン鎖可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を指すために、実施例の節を通じて以下の配列識別子を使用する。本明細書で使用されるところの、配列番号1~4、7、10、13~31および34~37のいずれか1つで示されるようなVLおよび/もしくはVH配列を含んでなる抗体すなわち免疫グロブリン配列は、完全な配列を含み得るか、または成熟配列すなわちシグナル若しくはリーダーペプチドを含まない成熟ペプチドを含み若しくはコードし得るかのいずれかである。マウス12A11抗体のexvivo有効性以前の研究は、exvivoで斑を結合する例えばPDAPP若しくはAD脳切片中でおよび/またはexvivo食作用アッセイBardら2000Nat.Med.6:916-919で斑消失を誘発する抗体の能力により、AD関連の神経病理学例えば斑負荷量の低下における多様なAβ抗体のinvivo有効性を予測することが可能であることを示した。該相関は、小膠細胞および/若しくはマクロファージによるFc依存性の食作用がinvivoでの斑消失の過程に重要であるという概念を裏付ける。しかしながら、抗体の有効性はFc相互作用に依存しない機構によりinvivoでもまた得ることができることもまた報告されたBacskaiら2002J.Neurosci.22:7873-7878。研究は、アミロイド斑を認識し得ない、Aβの中央部分に向けられた抗体が、可溶性Aβに結合しかつ斑沈着を低下させるようであることを示したDeMattosら2001Proc.Natl.Acad.Sci.USA98:8850-8855。マウスモノクローナル抗体12A11アイソタイプIgG1の潜在的invivo有効性を特徴づけるため、多様なexvivoアッセイを最初に実施した。Aβ1-42に対するmAb12A11の親和性。凝集させた合成Aβ1-42へのモノクローナル抗体12A11の結合を、SchenkらNature400:1731999に記述されるとおりELISAにより実施した。比較の目的上、mAb12B4および10D5もまたアッセイした。可溶性Aβ1-42はジメチルスルホキシドDMSO中で超音波処理した合成Aβ1-42ペプチドを指す。20μg/mlの抗体の連続希釈を50,000cpmの[125I]Aβ1-42190μCi/μmol;Iodogen試薬、Pierceで標識とともに室温で一夜インキュベートした。75mg/mlプロテインAセファロースAmershamPharmaciaおよび200μgのウサギ抗マウスIgGHLJacksonImmunoResearchを含有する50マイクロリットルのスラリーを、希釈した抗体とともに室温で1時間インキュベートし、2回洗浄し、そしてWallaceガンマカウンターPerkin-Elmerでカウントした。全段階は、10mMトリス、0.5MNaCl、1mg/mlゼラチンおよび0.5NonidetP-40、pH8.0よりなるRIA緩衝液中で実施した。親和性試験からの結果を下の表2に示す。試験した抗体の全部が、凝集型Aβ1-42に対する高親和性を表した。さらに、抗体12B4および12A11は20μg/mlの抗体濃度で可溶性Aβ1-42を認識可能に捕捉した。表2に示されるとおり、IgG1抗体12A11はIgG2a抗体12B4若しくはIgG1抗体10D5より効率的にAβ1-42を捕捉した。可溶性Aβを捕捉する多様な抗体12A11を包含するの能力を後に続くとおりさらにアッセイした。多様な濃度の抗体10μg/mlまでを50,000CPMの125I-Aβ1-42若しくは125I-Aβ1-40とともにインキュベートした。放射活性カウントの25を結合するのに十分な抗体の濃度を捕捉ラジオイムノアッセイで測定した。10μg/mlでカウントの25を結合することが可能でなかった抗体については、10μg/mlで結合されるカウントの比率を決定した。12A11は10μg/mlで放射活性カウントすなわち125I-Aβの20を結合した。これは試験した2種の他のAβ3-7抗体すなわち12B4および10D5それぞれ10μg/mlで7および2を結合するにより結合される量より大きかった。従って、試験したN末端エピトープAβ3-7抗体のうち、12A11はAβを捕捉する最も認識可能な能力を表した。Fc媒介性の斑消失を誘発するそれらの能力の尺度として、抗体を、初代マウス小膠細胞およびPDAPPマウスからの脳組織の切片を用いるexvivo食作用アッセイでもまた比較した。Aβ若しくは該アッセイの他の成分に対する反応性を有しない無関係のIgG1およびIgG2a抗体を、アイソタイプを一致させた陰性対照として使用した。簡潔には、マウス初代小膠細胞を、抗体の存在下でPDAPPマウス脳の未固定クライオスタット切片とともに培養した。24時間のインキュベーション後に、培養物中に残存するAβの総レベルをELISAにより測定した。斑消失/Aβ分解の程度を定量化するために、AβをELISA分析のため8M尿素を用いて小膠細胞および脳切片の培養物n=3から抽出した。データはANOVA、次いでposthocDunnett検定で解析した。図1に示されるとおり、12B4抗体はAβレベルを効率的に12B4について73;P<0.001低下させ、12A11はいくぶんより小さいがにもかかわらず統計学的に有意の効率12A11について48、P<0.05を示した。10D5抗体はAβレベルを有意に低下させなかった。exvivo食作用アッセイでの12A11の成績は、小膠細胞の食作用に好ましい1アイソタイプであるIgG2aアイソタイプへの転換に際して改善されうる。マウス12A11抗体のinvivo有効性:ADの神経病理学の低減マウス抗体12A11はアルツハイマー様の神経病理学をinvivoで低減させる12A11のinvivo有効性を決定するために、抗体12A11、12B4若しくは10D5を包含するを、Bardら2000Nat.Med.6:916に記述されたとおり、マウスに10mg/kgで週1回腹腔内注入により6か月間投与した。試験の終了時に皮質のAβの総レベルをELISAにより測定した。図2Aに示されるとおり、抗体のそれぞれは総AβレベルをPBS対照と比較して有意に低下させたP<0.001。すなわち、12B4は69の低下を示し、10D5は52の低下を示し、そして12A11は31の低下を示した。神経炎性ジストロフィーのレベルをその後、上述のマウスからの脳組織の切片で検査して、斑消失と神経保護の間の関連を決定した。神経炎性ジストロフィーにより占有される前頭皮質の比率を検査する脳画像解析からのデータを図2Bに示す。これらのデータは、本明細書に記述されるアッセイにより測定されるとおり、抗体10D5および12A11が神経炎性ジストロフィーの低減で有効でなかった一方、12B4は神経炎性ジストロフィーを有意に低下させた12B4、P<0.05;ANOVA、次いでposthocDunnett検定ことを示す。再度、12A11のこの活性は12A11をIgG2aアイソタイプに転換することにより改善しうるマウスの有効性。ヒト化バージョンの12A11に関して、IgG1アイソタイプが神経炎性ジストロフィーを低下させるために好ましい。抗体12A11の結合特性およびinvivo有効性を示す実験はBardらPNAS100:20232003引用することにより本明細書に組み込まれるにもまた記述されている。要約すれば、全抗体は凝集型Aβに対する有意の親和性を有し、かつ、exvivoアッセイで斑消失を誘発した。IgG2aアイソタイプFc受容体、とりわけFcγRIに対する親和性が、Aβの消失および神経炎性ジストロフィーに対する保護の双方のための重要な属性であるようである。抗体12A11IgG1は可溶性単量体Aβ1-42を12B4IgG2a若しくは10D5IgG1より効率的に捕捉したが、しかし神経炎性ジストロフィーの低減で同じくらい有効でというわけではなかった。斑負荷量の減少および神経炎性ジストロフィーの低減における高められた有効性は、食作用を最大限に支援するアイソタイプを有するように抗体を工作することにより達成しうる。とりわけ有効な抗体はAβのN末端内のエピトープに結合する。さらなる一研究において、12A11IgG2aアイソタイプ抗体を、PDAPPマウスでAD様神経病理学を低下させる能力について試験した。12~13月齢のPDAPPマウスに3mg/kgの12A11抗体を週1回6か月間注入した。6か月の終了時に動物を殺し、そして、Aβ負荷量、神経炎性負荷およびシナプトフィジンレベルを包含する多様なエンドポイントについて脳サンプルを分析した。12A11抗体の投与はPDAPPの脳サンプル中のアミロイド負荷量のレベルを有意に低下させた。12A11抗体の投与は神経炎性ジストロフィー斑を囲む異常な神経突起の程度もまた有意に低下させた。加えて、12A11投与はシナプトフィジンシナプスの完全性の尺度の喪失に対し有意に保護した。Aβオリゴマー結合の生化学的アッセイにおけるマウス12A11抗体のinvitro有効性本実施例は、可溶性オリゴマーAβに優先的に結合する多様なAβ抗体の能力を示す。該データを、Aβ抗体の治療的有効性を予測するのに使用する。本実施例にて、Aβ調製物は、実質的に後に続くとおり合成Aβから調製した。1凍結乾燥したAβ1-42ペプチドを氷冷100ヘキサフルオロイソプロパノールHFIPで1mMまで溶解しボルテックス攪拌し、その後室温で1時間インキュベートし、そして微小遠心管中でアリコートに分離し各チューブは0.5mgのAβ1-42ペプチドを含有した;2HFIPを蒸発により除去し、次いで凍結乾燥して残余のHFIPを除去し;3生じるAβペプチド薄膜/残渣を-20°Cで乾燥保存し;4Aβペプチド残渣を5mMのペプチドの最終濃度までDMSOに再懸濁し、その後氷冷ハムF12フェノールレッド不含培地に添加して、ペプチドを100μMの最終濃度にし;5ペプチドを4°Cで24時間インキュベートして、およそ100μM濃度の合成Aβオリゴマーを生じ;ならびに6合成Aβオリゴマーをペルオキシ亜硝酸で処理した。Aβ調製物のアリコートをその後、それぞれ試験免疫学的試薬この場合は抗体およびAβ単量体と接触させ、そして、試験免疫学的試薬に結合した1種若しくはそれ以上のAβオリゴマーを免疫沈降によりAβ調製物から抽出した。多様な免疫沈降物をゲル電気泳動により分離し、そして実質的に後に続くとおり3D6抗体でイムノブロット画像化した。図3~4の免疫沈降物サンプルをサンプル緩衝液で希釈し、そして16トリシンゲル上でのSDS-PAGEにより分離した。タンパク質をニトロセルロースメンブレンに移し、該メンブレンをPBS中で沸騰させ、そしてその後TBS/Tween/5カーネーション粉乳の溶液中4°Cで一夜ブロッキングした。メンブレンをその後3D6残基1-5に対するマウスモノクローナルAβ抗体とともにインキュベートした。検出のため、メンブレンを抗マウスIg-HRPとともにインキュベートし、ECLPlusTMを使用して発色させ、そしてフィルムを使用して可視化した。分子量はSeeBluePlus2TM分子量マーカーにより推定した。図3~4は、Aβ調製物中の例えばAβ単量体、二量体、三量体、四量体、五量体などの試験免疫学的試薬への結合を測定するための多様な試験免疫学的試薬図3~4でAβ抗体と上のAβ1-42調製物を接触した結果を描く。図3~4は、多様なAβ抗体と接触させたペルオキシ亜硝酸処理したオリゴマーAβ調製物の免疫沈降物のウエスタンブロット3D6を用いて画像化したを描く。Aβ1-42単量体、二量体、三量体および四量体のバンドのおよその位置を各図の左側に示す。該抗体により認識されるAβエピトープおよび該抗体についてのCFCアッセイの結果上の実施例5を参照されたいを各Aβ抗体の下に示し、表記は該抗体での処置に際しての増大した認知の観察結果を示し、-表記は該抗体での処置に際しての認知の変化なしという観察結果を示し、/-表記は、該抗体での処置に際しての増大した認知の傾向、しかし増大した認知という観察結果として示されるのに十分に統計学的に有意でない観察結果を示し、そしてND表記はCFCアッセイデータが入手可能でないか若しくはこの抗体と比較してないことを示す。図3~4で、Aβ調製物中のAβ単量体に対するAβ抗体の結合に関してAβ調製物中のAβ二量体もしくはより高次のオリゴマーに対するAβ抗体の増大された結合は、該Aβ抗体がアルツハイマー病の処置について治療的有効性を有することを予測する。注目すべきは、Aβ抗体3D6、15C11、10D5、12A11および266は、単量体Aβに比較してオリゴマーAβ種に対する優先的結合を表し、12A11がオリゴマーAβへの最も有意な優先的結合を表した。従って、これらの抗体は、処置認知障害、例えばADに関連するものにおいて治療的有効性を有すると予測される。それぞれATCC受託番号PTA-5129およびPTA-5130を有する抗体10D5および3D6を産生する細胞株は、ブダペスト条約の規約のもとで2003年4月8日に寄託され、また、それぞれATCC受託番号_______および______を有する抗体6C6および9G8を産生する細胞株は、ブダペスト条約の規約のもとで2005年10月31日に寄託された。また、ATCC受託番号______、______、______および______を有する抗体2H3、12A11、15C11および3A3を産生する細胞株は、ブダペスト条約の規約のもとで2005年12月12日に寄託された。マウス12A11抗体のinvivo有効性:Tg2576マウスにおける認知の迅速な改善野性型およびTg2576マウスに、腹腔内注入により単一用量のリン酸緩衝生理的食塩水PBS若しくは処置抗体を投与した。認知すなわち文脈的および手掛かり依存的記憶のいかなる迅速な改善も評価するため、各マウスにCFC訓練活動を処置直後に、およびCFC試験活動を処置24時間以内すなわち処置後第1日に実施した。治療的有効性は、記憶障害の逆転および記憶障害状態双方に関して表した。記憶障害の逆転は、mAb対PBS対照処置Tg2576動物のフリージング行動を比較することにより決定した。記憶障害状態は野性型対Tg2576mAb処置動物のフリージング行動を比較することにより決定した。AβのN末端に対し生じさせた数種のmAbの治療的有効性を表3に表にする。処置後第1日に実施したCFC試験活動の結果は、mAb3D6、10D5および12A11が対照処置に関してTg2576マウスの文脈的記憶の迅速かつ有意の改善を引き起こしたp値<0.05ことを示す。さらに、3D6、10D5および12A11で処置したTg2576マウスは、野性型マウスに関して有意の記憶障害を表さなかったp値>0.1。加えて、抗体6C6、10D5および12B4は、記憶障害の逆転若しくは記憶障害なしいずれかを遂げる傾向を表した0.1>p値>0.05。Tg2576マウスは、12A11と呼称されるN末端のマウスIgG2amAbを投与した場合に、文脈的記憶のとりわけ顕著な、有意のかつ迅速な改善を表した。例えば、12A11は試験したすべての用量0.3、1、10若しくは30mg/kgで記憶障害の逆転をもたらした[図5Aおよび5Bを参照されたい]。対照的に、未処置のPBSTg2576マウスは、野性型マウスと比較して文脈依存的記憶の有意の障害を表した[図5A]。しかしながら、Tg2576マウスは、1、10若しくは30mg/kgi.p.の12A11を投与した場合に完全なかつ有意の記憶障害の逆転を表した。認知能力の改善は、より低用量0.1および1mg/kgi.p.の12A11をマウスに投与した場合に持続した[図5B]。観察された応答がアミロイド結合によったことを確認するため、Tg2576マウスに、鶏コクシジウムE.tennelaからの無関係の抗原に対し生じさせたIgG2aアイソタイプの対照mAb30mg/kgを投与した。期待されたとおり、該対照抗体で処置したTg2576マウスは、野性型マウスに関して文脈的記憶の顕著な障害を表した。マウス12A11抗体のinvivo有効性:Tg2576マウスの認知の長期改善N末端のマウス12A11抗体mu12A11での処置後24時間以内に観察された認知改善の持続期間を、第二の長時間CFC試験で評価した。Tg2575および野性型マウスに、再度、PBS対照若しくは低用量の12A11抗体1mg/kgipを投与し、そしてそれらの認知状態を、処置後第0~1、9~10および16~17日のCFCアッセイにより評価したすなわち、CFC訓練活動を第0、9、16日に実施しかつCFC試験活動を第1、10および17日に実施した。実施例4に記述されたとおり、Tg2576マウスは再度、mu12A11での処置後第1日に文脈的記憶の顕著な有意のかつ迅速な改善を表した[図6を参照されたい]。例えば、mu12A11で処置したTg2576は、野性型マウスのものと同等に近づいた有意の記憶障害の逆転PBS処置したTg2576マウスと比較した場合および記憶障害状態を表した。文脈的記憶のこれらの改善は持続し、かつ、処置後第10日に評価した場合になおより顕著であった。さらに、処置後第17日に評価した場合、mu12A11は記憶障害なしへの傾向を表し続けた。これらの結果は、単一の低用量のmu12A11N末端抗体が、ADのマウスモデルの認知能力の永続的かつ長期の改善をもたらし得ることを示した。マウス12A11可変領域のクローニングおよび配列決定mu12A11VHのクローニングおよび配列分析。ハイブリドーマ細胞からの12A11のVHおよびVL領域を、ハイブリドーマ細胞からのmRNAを使用するRT-PCRおよび5’RACEならびに標準的なクローニングの方法論によりクローン化した。推定されるmu12A11VHドメインをコードする独立のcDNAクローン由来のヌクレオチド配列コーディング、配列番号3および推定されるアミノ酸配列配列番号4をそれぞれ表6および表7に示す図7Aもまた参照されたい。表6:マウス12A11VHのDNA配列。ATGGACAGGCTTACTACTTCATTCCTGCTGCTGATTGTCCCTGCATATGTCTTGTCCCAAGTTACTCTAAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGAAGCCCTCACAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGAGTGTAGGCTGGATTCGTCAGCCTTCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTGGTGGGATGATGATAAGTACTATAACCCATCCCTGAAGAGCCGGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCCAGAAACCAGGTATTCCTCAAGATCACCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACTTACTACTGTGCTCGAAGAACTACTACGGCTGACTACTTTGCCTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA配列番号3表7:マウス12A11VHのアミノ酸配列mdrlttsflllivpayvlsQVTLKESGPGILKPSQTLSLTCSFSGFSLStsgmsvgWIRQPSGKGLEWLAhiwwdddkyynpslksRLTISKDTSRNQVFLKITSVDTADTATYYCARrtttadyfayWGQGTTLTVSS配列番号4リーダーペプチドおよびCDRは小文字。12A11VLのクローニングおよび配列分析。12A11のL鎖可変VL領域をVH領域と類似の様式でクローン化した。推定される12A11VLドメインをコードする2個の独立したcDNAクローン由来のヌクレオチド配列コーディング、配列番号1および推定されるアミノ酸配列配列番号2をそれぞれ表8および表9に示す図7Bもまた参照されたい。表8:マウス12A11VLのDNA配列ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGCAGTGATGTTTTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTACATAGTAATGGAAACACCTACTTAGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAATTTATTACTGCTTTCAAAGTTCACATGTTCCTCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA配列番号1表9:マウス12A11VLアミノ酸配列mklpvrllvlmfwipasssDVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCrssqsivhsngntyleWYLQKPGQSPKLLIYkvsnrfsGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYYCfqsshvpltFGAGTKLELK配列番号2リーダーペプチドおよびCDRは小文字。12A11のVLおよびVH配列は、それらが開始メチオニンからC領域までの1個の連続するORFを含有しかつ免疫グロブリンV領域遺伝子の保存された残基の特徴を共有する限りは、機能的V領域の基準に合致する。N末端からC末端へ、LおよびH鎖双方はドメインFR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3およびFR4を含んでなる。キメラ12A11抗体の発現キメラ12A11抗体の発現:可変HおよびL鎖領域をそれぞれのVDJ若しくはVJ結合部の下流のスプライスドナー配列をコードするように再工作し、そしてH鎖について哺乳動物発現ベクターpCMV-hγ1配列番号57および58、ならびにL鎖についてpCMV-hκ1配列番号59および60にクローン化した例えばMaedaら1991Hum.Antibod.Hybridomas.2:124-134を参照されたい。これらのベクターは、ヒトγ1およびCk定常領域を、挿入された可変領域カセットの下流のエキソンフラグメントとしてコードする。配列確認後に、H鎖およびL鎖発現ベクターをCOS細胞にコトランスフェクトした。多様なH鎖クローンを、多様なキメラL鎖クローンとともに独立にコトランスフェクトして結果の再現性を確認した。抗体はプロテインAセファロースを使用してCOS細胞馴化培地から免疫沈降させた。抗体鎖をSDS-PAGEゲルのイムノブロット上で検出した。検出は5000倍希釈のヤギ抗ヒトIgGHL抗体を使用して室温で1時間達成した。有意の量の12A11HL鎖が馴化培地中で検出された。Aβへのキメラ12A11抗体の直接結合をELISAアッセイにより試験した。図8は、キメラ12A11が、キメラおよびヒト化3D6により示されるものと類似の高親和性でAβに結合することが見出されたことを示す。3D6のクローニング、特徴付けおよびヒト化は米国特許出願第10/010,942号明細書その内容全体はこの引用することにより本明細書に組み込まれるに記述されている。結合親和性はキメラおよびヒト化12B4により示されるものにもまた類似であった。12B4のクローニング、特徴付けおよびヒト化は、米国特許出願第10/388,214号明細書その内容全体はこの引用することにより本明細書に組み込まれるに記述されている。12A11ヒト化A.12A11ヒト化抗体、バージョン1相同性/分子モデル解析。マウス12A11抗体中の重要な構造フレームワーク残基を同定するため、12A11HおよびL鎖に対する相同性を有する解明されたマウス抗体の三次元モデルを研究した。12A11L鎖に対する緊密な相同性を有する1KTRと呼称される抗体を選び、また、12A11H鎖に対する緊密な相同性を有する1ETZおよび1JRHと呼称される2種の抗体を選んだ。これらのマウス抗体は12A11との強い配列保存を示すVkについて112アミノ酸で94の同一性、ならびにVhについてそれぞれ126アミノ酸で83の同一性および121アミノ酸で86の同一性。1ETZのH鎖構造を1KTRのものに重ねた。加えて、Vkについて、選択した抗体のCDRループは、12A11VLのCDRループが属すると同一の正準Chothia構造分類に属する。これらの抗体の結晶構造を、抗体の機能に重要であると予測される残基例えばCDRのコンホメーションに重要なFR残基などについて、および比較して類似の12A11抗体の機能を検査した。ヒトアクセプター抗体配列の選択。適するヒトアクセプター抗体配列は、マウス可変領域のアミノ酸配列の既知のヒト抗体の配列とのコンピュータ比較により同定した。該比較は12A11HおよびL鎖について別個に実施した。とりわけ、そのフレームワーク配列がマウスVLおよびVHフレームワーク領域と高程度の配列同一性を表したヒト抗体からの可変ドメインを、それぞれのマウスフレームワーク配列でのNCBIBLAST国立保健研究所のNCBIインターネットサーバを通じて公的にアクセス可能を使用するNCBIIgデータベースのクエリにより同定した。以下の基準、すなわち1主題の配列との相同性;2ドナー配列と正準CDR構造を共有すること;および/若しくは3フレームワーク領域中にいかなるまれなアミノ酸残基も含有しないことに基づき、2種の候補配列をアクセプター配列として選んだ。VLについて選択したアクセプター配列はNCBIIg非重複性データベースのBAC01733である。VHについて選択したアクセプター配列はNCBIIg非重複性データベースのAAA69734である。AAA69734はサブグループIIよりむしろヒトサブグループIII抗体であるが、しかしSaldanhaら1999Mol.Immunol.36:709の論法に少なくとも部分的に基づいて最初のアクセプター抗体として選択した。ヒト化12A11抗体の第一のバージョンはこれらの選択されたアクセプター抗体配列を利用する。該抗体はSchroederとWang1990Proc.Natl.Acad.Sci.USA872:6146に記述されている。アミノ酸残基の置換。上に示されたとおり、本発明のヒト化抗体は、実質的にヒト免疫グロブリンアクセプター免疫グロブリンからの可変フレームワーク領域および実質的に12A11と命名されたマウス免疫グロブリンドナー免疫グロブリンからの相補性決定領域を含んでなる。12A11の相補性決定領域および適切なヒトアクセプター免疫グロブリンを同定したら、次の段階は、生じるヒト化抗体の特性を至適化するためにこれらの成分からのどの残基あればを置換するかを決定することであった。再形成したL鎖V領域:再形成したL鎖V領域のアミノ酸アライメントを図9Aに示す。アクセプターフレームワークBAC01733の選択は同一のヒトサブグループからである。マウスV領域に対応するものはまれなフレームワーク残基を有さず、また、該CDRは同一のChothia正準構造グループに属するからである。戻し突然変異はヒト化12A11のバージョン1で行わなかった。再形成したH鎖V領域:再形成したH鎖V領域のアミノ鎖アライメントを図9Bに示す。アクセプターフレームワークAAA69734の選択は以前に記述されたところのヒトサブグループIIIからであり、そしてまれなフレームワーク残基を有しない。マウス配列へのAAA69734のアミノ酸アライメントとともにのマウスVH鎖1ETZおよび1JRHの構造解析は、再形成されたH鎖のバージョン1v1中の9個の戻し突然変異、すなわちA24FT28SF29LV37IV48LF67LR71KN73TL78VKabatの番号付けを指図する。該戻し突然変異は図9Bに示されるアミノ酸アライメント中で印により強調されている。該9種の戻し突然変異のうち3種が該モデルにより指図される。該残基は正準残基A24F、F29LおよびR71K、黒地白抜き、すなわちCDR領域への近接によって抗原結合に寄与しうるフレームワーク残基であるためである。残基の次の最も重要な分類、すなわちVH-VL充填相互作用に関与する界面残基下線に1個の戻し突然変異すなわちV37Iが存在する。N73T突然変異は結合部位の縁のバーニア残基点線で囲まれるでであり、おそらくCDR1に隣接するS30と相互作用する。戻し突然変異の標的とされる残存する4残基T28S、V48L、F67L、L78V、Kabatの番号付けもまたバーニア分類CDRコンホメーションへの間接的寄与、図9Bの点線囲みに属する。ヒト化12A11のバージョン1に組み込まれた変化の要約を表10に提示する。表11および12はそれぞれ多様なLおよびH鎖のKabatの番号付けの記号表を示す。該ヒト化抗体は、好ましくは最低107、108、109若しくは1010M-1のAβに対する特異的結合親和性を表す。通常、Aβのヒト化抗体の結合親和性の上限は12A11のものの3、4若しくは5の係数以内すなわち約109M-1である。しばしば、結合親和性の下限もまた12A11のものの3、4若しくは5の係数以内にある。ヒト化12A11VHおよびVL、バージョン1の集成および発現適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用するPCR媒介性の集成を使用してh12A11v1を生成した。ヒト化12A11VLバージョン1配列番号34および12A11VHバージョン1配列番号35のヌクレオチド配列を下にそれぞれ表13および表14に列挙する。表13.ヒト化12A11VLv1のヌクレオチド配列atgaggctccctgctcagctcctggggctgctgatgctctgggtctctggctccagtgggGATGTTGTGATGACCCAATCTCCACTCTCCCTGCCTGTCACTCCTGGAGAGCCAGCCTCCATCTCTTGCAGATCTAGTCAGAGCATTGTGCATAGTAATGGAAACACCTACCTGGAATGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAAGTTCACATGTTCCTCTCACCTTCGGTCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA配列番号34大文字はVLセグメントのみA19生殖系列配列によりコードされるリーダーペプチドはx63397リーダーペプチド由来表14.ヒト化12A11VHv1のヌクレオチド配列atggagtttgggctgagctgggttttcctcgttgctcttctgagaggtgtccagtgtCAAGTTCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGGGTGGTGCAGCCCGGACGGTCCCTCAGGCTGTCTTGTGCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGAGTGTGGGCTGGATTCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTGGTGGGATGATGATAAGTACTATAACCCATCCCTGAAGAGCCGGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCCAAAAACACCGTGTACCTCCAGATGAACAGTCTGCGGGCTGAAGATACTGCCGTGTACTACTGTGCTCGAAGAACTACTACCGCTGACTACTTTGCCTACTGGGGCCAAGGCACCACTGTCACAGTCTCCTCA配列番号35リーダーペプチド小文字はVHドナー配列受託M34030.1/aaa69734/M72由来ヒト化12A11VLバージョン1配列番号7および12A11VHバージョン1配列番号10のアミノ酸配列はそれぞれ図9Aおよび9Bに描く。B.ヒト化12A11抗体-バージョン2、2.1および3バーニア残基例えばS28T、V48L、F67L、L78VはCDRのコンホメーションに間接的に寄与し、そしてコンホメーションの混乱に最小に重要であると仮定した。標的とした残基は、Stratageneによるキットを使用する部位特異的突然変異誘発、および突然変異誘発鋳型としてのpCRSプラスミド中のh12A11VHv1により変異させて、バージョン2に対応するクローンで生じさせた。バージョン2の配列決定した確認したV領域挿入物を、H鎖発現ベクターpCMV-Cγ1配列番号57および58のBamHI/HindIII部位にサブクローニングして、組換えh12A11v2抗体を生じさせた。位置T73Nの突然変異に加えて上のバーニア残基突然変異すなわち戻し突然変異の除外のそれぞれを有するバージョン2.1抗体を同様に創製した。バージョン3の抗体は、同様に、位置K71Rの突然変異に加えて上の突然変異すなわちT28S、L48V、L67F、V87Lのそれぞれを有した。ヒト化12A11VHバージョン2配列番号13、12A11VHバージョン2.1配列番号14および12A11VHバージョン3配列番号15のアミノ酸配列を図10A~Cに描く。C.ヒト化12A11抗体-バージョン4ないし6正準および充填残基に戻し突然変異を保持したがしかし1バージョン4.1ないし4.4、2バージョン5.1ないし5.6若しくは3バージョン6.1ないし6.4個のバーニア残基の戻し突然変異を除外した付加的なヒト化12A11バージョンを設計した。部位特異的突然変異誘発およびクローン構築を上の下位区分Cで記述されたとおり実施した。組換え抗体をCOS細胞中で発現させ、そしてCOS細胞上清から精製した。付加的なバージョンは上の組合せ、例えば、最低1個の充填および/若しくは正準残基例えば位置28、37、48、67、71および78のヒト残基、若しくは位置28、37、48、67、71、73および78のヒト残基と組合せで1、2、3、4若しくは5個のバーニア残基にヒト残基を包含しうる。例えば、1個の充填残基および2個の正準残基すなわち位置28、48、67、71、73および78のヒト残基と組合せで1個のバーニア残基にヒト残基を有するバージョン3.1抗体を創製した。21のマウス可変領域残基VLVHを有するバージョン1に比較して、バージョン3.1はわずか17のマウス可変領域残基を有するすなわちより低いマウス含量を有する。ヒト化12A11VHバージョン3.1配列番号36およびヒト化12A11VHバージョン4~6配列番号16~29のアミノ酸配列を図10A~Cに描く。D.ヒト化12A11抗体-バージョン7および8残基28バーニアのT→S戻し突然変異、および残基37充填のV→I戻し突然変異を除きバージョン1について示された戻し突然変異のそれぞれを有するヒト化12A11の第七のバージョンを創製する。残基73バーニアのN→T戻し突然変異を除きバージョン1について示された戻し突然変異のそれぞれを有するヒト化12A11の第八のバージョンを創製する。ヒト化12A11VHバージョン7配列番号30およびヒト化12A11VHバージョン8配列番号16~31のアミノ酸配列を図10A~Cに描く。バージョン1に比較して、バージョン7は7個の戻し突然変異のみ含有する。T28S戻し突然変異は保存的でありかつH鎖のバージョン7で排除されている。充填残基V37Iの戻し突然変異もまたバージョン7で排除されている。バージョン1に比較して、バージョン7は8個の戻し突然変異のみ含有する。バージョン8ではN73Tバーニア戻し突然変異が排除されている。付加的なバージョンは、上の組合せ、例えば、場合によっては最低1個の充填残基例えば位置37および/若しくは最低1個の正準残基での戻し突然変異の排除と組合せの、位置28、48、78および73から選択される1、2、3、4若しくは5残基でのヒト残基例えば戻し突然変異の排除を包含しうる。ヒト化12A11抗体の機能試験全部のヒト化12A11バージョンをpSMED2/pSMEN2発現系にクローン化した。各抗体のコーディング配列を生殖系列リーダー配列に作動可能に連結して細胞外分泌を助長した。ヒト化12A11を、下述される機能試験で使用される抗体の分析的量の製造のためCOS細胞中で一過性に発現させた。CHOおよびHEK293細胞株をその後トランスフェクトしかつ懸濁培養物に移してinvivo使用のための抗体の産生レベルの安定な発現を提供した。注目すべきことに、最高レベルの一過性発現は、ヒト化12A11抗体hu12A11.v1および12A11.v3.1をコードする発現構築物で得られた。一過性にトランスフェクトしたCOS細胞でのh12A11v3.1の発現をH鎖イントロンの操作により増大させた。いくつかの実験では、安定にトランスフェクトしたプールでのh12A11v3.1の発現を、H鎖イントロン含量すなわちCH1とヒンジ領域の間のイントロン、ヒンジ領域とCH2との間のイントロン、およびCH2とCH3の間のイントロンの欠失の操作ならびにシグナル配列すなわち包括的シグナル配列MGWSCIILFLVATGAHS配列番号56の使用により増大させた。全部のヒト化抗体は技術に認識された方法論に従って精製した。ヒト化抗体の結合活性を定量的ELISAアッセイにより最初に示したデータは示されない。ヒト化12A11のバージョン1を、2種の特性すなわち抗原結合定量的AβELISAおよび相対親和性について、そのマウスおよびキメラの対照物とさらに比較した。h12A11v1の結合活性は定量的AβELISAで示され、そしてマウスおよびキメラの形態の12A11と同一であることが見出された図11を参照されたい。h12A11v1抗体の親和性もまた、競合的AβELISAによりマウスおよびキメラ12A11抗体と比較した。競合結合アッセイのため、ビオチン結合組換えマウス12A11Cγ2aアイソタイプスイッチ12A11を使用した。凝集物Aβ1-42に対するビオチニル化m12A11Cγ2aの結合活性を、レポーターとしてストレプトアビジン-HRPを使用するELISAアッセイにより確認した。レポーターとしてHRP結合ヤギ抗マウスHRPを使用する12A11の2種のアイソフォームCγ1、Cγ2aによるAβ結合の直接比較は、ビオチン結合組換え12A11Cγ2aが元のCγ1マウス抗体に匹敵することを確認した。競合結合研究は、固定された濃度のビオチン結合m12A11Cγ2a、および図12に示されるところの濃度の範囲の試験抗体と競合させることを使用した。図12は、h12A11v1をキメラおよびマウスの形態と比較するh12A11v1競合アッセイの結果を示す。ヒト化12A11v1はそのマウスおよびキメラの対照物と2×IC50値以内で競合した。このデータは、マウスCγ2aおよびh12A11v1についてそれぞれ38nMおよび23nMというKD値を示したBiacore技術を使用する親和性測定と矛盾しないデータは示されない。要約すれば、該知見は、h12A11v1がその元のマウス対照物の抗原結合特性および親和性を保持することを示唆する。COS細胞を、ヒト化12A11VHおよびh12A11VLv1の多様な組合で一過性にトランスフェクトした。馴化培地をトランスフェクション72時間後に収集した。トランスフェクトしたCOS細胞からの馴化培地中の抗体濃度を定量的ヒトIgGELISAにより測定した。定量的Aβ1-42凝集物結合アッセイは、h12A11v2、v2.1およびv3は抗原結合についてh12A11v1およびキメラ12A11に匹敵することを確認した。さらに、バージョン5.1~5.6および6.1~6.3は、この結合アッセイで試験される場合に類似の結合活性を表す。バージョン6.4は該アッセイで活性の若干の喪失を示したが、しかし活性はv2で顕著に復帰された。マウス12A11およびh12A11v1の結合特性もまたBIAcore技術を使用して比較した。マウス12A11およびh12A11v1は、低若しくは高いずれの密度で固定したAβペプチドbio-DAEペプチドに曝露した場合も類似の結合プロファイルを表した。h12A11v1に対するマウス12A11の速度論的分析法もまた実施した。これらの研究で、BIAcore技術を使用して、固相結合したビオチニル化DAEペプチドへの可溶性抗体の結合を測定した。ペプチドをストレプトアビジンバイオセンサーチップ上に固定し、その後変動する濃度の各抗体を三重で適用し、そして結合を時間の関数として測定した。速度論データは二価モデルに適用したBIAevaluationソフトウェアを使用して解析した。見かけの解離kdおよび会合ka速度定数を、大域解析globalanalysisを使用して、センサー図の適切な領域から計算した。Bio-DAE10と抗体の間の相互作用の親和性定数を動力学定数から計算した。これらの測定値から見かけの解離kdおよび会合ka速度定数を得、そして相互作用のKDを計算するのに使用した。表15は、BIAcore分析により測定されたところの12A11抗体のAβ結合の速度論的分析法の要約を包含する。該データは、ヒト化12A11v1が親マウス12A11と比較する場合にAβペプチドに対する類似の親和性を有することを示す。別の実験で、ヒト化12A11v1、v2、v2.1、v3およびv3.1の速度論的特性を比較した。表16は、BIAcore分析により測定されるところの多様なヒト化12A11抗体のAβ結合の速度論的分析法の要約を包含する。該データは、ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3.1が、親マウス12A11と比較した場合にAβペプチドに対する類似の親和性を有することを示すh12A11v1>m12A11>chi12A11>h12A11v3.1>h12A11v2.1>h12A11v2>h12A11v3.1。注目すべきことに、ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3.1の親和性は、競合結合および/若しくはBIAcore分析により測定されるとおり、キメラ12A11抗体のものの2~3倍以内である。類似の結果が、上述されたとおり実施した競合結合研究で見られた図13を参照されたい。注目すべきことに、VH中のバーニア残基48の戻し突然変異V48Lの復帰は、h12A11v3.1の親和性をh12A11v1のもの近くまで増大させる。ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3を、斑を結合しかつ斑を消失させる能力についてexvivoアッセイでさらに試験した。免疫組織化学をPDAPPおよびヒトAD脳からのクライオスタット切片で実施した。ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3をキメラ12A11と比較し、そして試験した全濃度すなわち0.3μg/ml、1μg/mlおよび3μg/mlでPDAPPおよびヒトクライオスタット切片双方で斑を染色することが見出された。Fc媒介性の斑消失を誘発するそれらの能力の尺度として、ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3を、斑を消失させるそれらの能力について、初代マウス小膠細胞およびPDAPPマウスからの脳組織の切片でのexvivo食作用アッセイでもまた試験した。Aβ若しくはアッセイの他の成分に対する反応性を有しない無関係のIgG1抗体を陰性対照として使用した。ヒト化12A11v1、ヒト化12A11v3およびキメラ12A11抗体のそれぞれが、0.3μg/mlの濃度で試験した場合にAβレベルを効率的に低下させたデータは示されない。キメラ12A11、ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3の結合特異性を、後に続くところの置換NETrNET分析により比較した。簡潔には、rNETエピトープ地図アッセイを実施して、試験した抗体の全体的結合活性へのAβのN末端エピトープ内の個々の残基の寄与についての情報を提供した。rNET分析は合成した体系的単一置換ペプチドアナログを使用する。AβのN末端の10アミノ酸に対応するペプチド天然の抗原および19種の代替の単一置換ペプチド各ペプチドは第一の位置で、その位置の19種の非天然のアミノ酸の1種で置換されているに対するマウス12A11の結合を測定した。結合活性に対する多様な非天然の残基でのその位置の置換の影響を反映するプロファイルが生成された捕捉ELISAにより測定される。プロファイルは同様に、抗原ペプチドに沿った連続する位置合計8残基でも生成された。組合せたプロファイル、すなわちエピトープ地図全19種の非天然のアミノ酸での各位置の置換を反映するをその後、同様に生成したキメラ12A11、ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3.1の地図と比較した。注目すべきことに、ヒト化12A11v1およびヒト化12A11v3.1の特異性は親マウス12A11抗体と同一若しくは同様であった。ヒト化12A11抗体のinvivo有効性:Tg2576マウスの認知の迅速な改善マウス12A11mu12A11、キメラ12A11chi12A11およびヒト化形態の12A11v3.1hu12A11抗体の治療的有効性をCFCアッセイで比較した。実施例4でのとおり、野性型およびTg2576双方のマウスに、単一用量のリン酸緩衝生理的食塩水PBS若しくは処置抗体を腹腔内注入により投与した。認知すなわち文脈的および手掛かり依存的記憶のいかなる迅速な改善も評価するため、各マウスに、処置直後にCFC訓練活動、および処置の24時間以内すなわち処置後第1日にCFC試験活動を実施した。CFCアッセイの結果を図14に描く。該データは、mu12A11、chi12A11およびv3.1hu12A11が認知の迅速な改善において類似の効力を有することを明瞭に示す。例えば、3mg/kg用量若しくはそれ以上のchi12A11若しくはv3.1hu12A11いずれも、1mg/kg用量のmu12A11で得られた結果に大きさが類似であった記憶障害の逆転をもたらした。ヒト化12A11抗体v1.0からv3.1、とりわけv1.0、v3.0およびv3.1もまたCFCアッセイで有効と判明し、v1.0およびv3.1はマウス12A11のものに類似の有効性を有し、また、v3.0は有意の有効性をさらに表した。さらに、h12A11v1.0は、二重トランスジェニックADマウスを試験したMED=3mg/kgCFCアッセイで有効であり、受動的に投与した抗体の有効性がこれらのマウスでの斑結合により滴定されなかったことを示した。マウス抗体266斑結合しないを陽性対照MED=3mg/kgとして包含した。IgGアイソタイプh12A11v1.0抗体の能力もまたCFCで試験し、そしてMED0.1mg/kgで有効であることが判明した。アイソタイプスイッチはFc媒介性の活性を大きく低下させたしかし排除しなかったことを示し、有効性がFc機能にのみ依存しないことを示す。前述の発明は理解の明確さの目的上詳細に記述されたとは言え、付随する請求の範囲の範囲内である種の改変を実施しうることが明らかであろう。本明細書で引用される全部の刊行物および特許文書、ならびに図面および配列表中に現れる文章は、これにより、それぞれがそのように個々に示される場合と同一の程度まで、全部の目的上、そっくりそのまま引用することにより組み込まれる。前述から、本発明は多数の用途を提供することが明らかであろう。例えば、本発明は、Aβ関連疾患若しくは障害またはアミロイド形成疾患若しくは障害の処置、予防若しくは診断、あるいはそれらでの使用のための医薬品若しくは診断組成物の製造における上述されたAβに対する抗体のいずれの使用も提供する。"