i少なくとも1つのエプスタインバールウイルスEBV構造ポリペプチドと、ii少なくとも1つのEBV溶菌性ポリペプチドと、iii膜脂質とを含有し、EBVDNAの無い粒子を含有するワクチンであって、a前記粒子に含有される、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドのB細胞形質転換能は無能化されているが、それらの免疫原性は維持され、および/またはb前記粒子は、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドが無い、ワクチン。前記粒子は、BZLF1およびgp350から選択される前記少なくとも1つのEBVポリペプチドを含有し、および/または、少なくとも1つのEBV潜在性ポリペプチドをさらに含有する、請求項1に記載のワクチン。粒子を生成するための方法であって、a細胞に修飾EBVゲノムをトランスフェクトするステップを含み、前記修飾EBVゲノムは、野生型EBVゲノムと比較して、少なくとも、aa前記野生型EBVゲノムのパッケージングに必要な1以上の配列が欠如し、前記パッケージングに必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、パッケージング能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有し、abB細胞形質転換に必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、B細胞形質転換能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有し、さらに、acEBVの複製を誘導するのに必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、EBV複製の誘導能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有し、前記方法はさらに、b前記ステップaで得られた細胞を、前記修飾EBVゲノムの発現を可能にする条件下で培養するステップと、cEBVの複製相を誘導するステップと、d前記粒子を単離するステップとを含む、方法。請求項1の前記aまたは請求項3の前記abにおいて、形質転換能が無能化されているポリペプチドは、LMP-1ポリペプチドである、請求項1もしくは2に記載のワクチン、または請求項3に記載の方法。請求項1の前記bまたは請求項3の前記abに記載の、欠如している、B細胞形質転換に必要な前記1以上のEBVポリペプチドは、EBNA-2、EBNA-3a、EBNA-3bおよびEBNA-3cからなる群から選択される、請求項1、2もしくは4のいずれかに記載のワクチン、または請求項3もしくは4に記載の方法。請求項3の前記acに記載の、欠如している、EBVの複製を誘導するのに必要な前記1以上のEBVポリペプチド、または、EBV複製誘導能が無能化されている前記1以上のEBVポリペプチドは、BZLF1、BRLF1、BMLF1および、これらの任意の組合せからなる群から選択され、請求項3の前記ステップcにおいて、前記複製相は、選択された前記ポリペプチドを前記細胞に付与することによって誘導される、請求項3から5のいずれかに記載の方法。選択された前記ポリペプチドは、BZLF1である、請求項6に記載の方法。前記細胞への前記1以上のEBVポリペプチドまたは前記BZLF1の付与は、前記細胞に安定的にトランスフェクトされたベクターからの前記1以上のEBVポリペプチドまたは前記BZLF1の発現により行なわれる、請求項6または7に記載の方法。前記1以上のEBVポリペプチドまたは前記BZLF1の発現は、誘導可能に調節される、請求項8に記載の方法。前記ステップbの後かつ前記ステップcの前に、1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列、および/または、1以上のワクチンアジュバントを前記細胞に付与する更なるステップb′を含み、前記1以上のウイルスポリペプチドまたは前記1以上のウイルス核酸配列は、それぞれEBVポリペプチドまたはEBV核酸配列でない、請求項3から9のいずれかに記載の方法。1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列、および/または、ワクチンアジュバントを追加的に含有し、前記1以上のウイルスポリペプチドまたは前記1以上のウイルス核酸配列は、それぞれEBVポリペプチドまたはEBV核酸配列でない、請求項1、2、4、および5のいずれかに記載のワクチン。請求項8から10のいずれかに記載の方法の前記ステップaに従ってトランスフェクトすることにより得られる細胞。請求項1、2、4、5および11のいずれかに記載のワクチンまたは、請求項3から10のいずれかに記載の方法に従って生成される粒子を含むキット。EBV抗原に特異的なCD8T細胞を生成するための、請求項1、2、4、5および11のいずれかに記載のワクチンまたは、請求項3から10のいずれかに記載の方法により得られる粒子の使用。本発明の基となる技術的問題は、EBV感染およびEBV関連疾患に対する治療的および予防的ワクチン接種を可能にする、代替的および/または改善された手段および方法を特定することにあった。このような技術的問題の解決策は、請求項に特徴が記載される実施形態を提供することによって達成される。したがって、本発明は、第1の実施形態において、i少なくとも1つのエプスタインバールウイルスEBV構造ポリペプチドと、ii少なくとも1つのEBV溶菌性ポリペプチドと、iii膜脂質とを含有し、EBVDNAが無い粒子を含有するワクチンであって、a上記粒子に含有される、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドのB細胞形質転換能は無能化されているが、それらの免疫原性は維持され、および/またはb上記粒子は、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドが無い、ワクチンに関する。本発明で使用されるワクチンという用語は、個人をEBVに対して予防上または治療上免疫化することを意味する。本発明に従うワクチンは、個人をEBV感染およびEBV関連疾患に対して免疫化する。免疫化は、免疫系をワクチン内の抗原へと刺激し、感作させるプロセスに関する。本発明に従うと、予防免疫化とは、個人の免疫系、すなわち無感作の免疫系のEBV抗原への1度目の曝露を指す。上記1度目の曝露の結果、曝露された個人の体から上記抗原が排除され、かつ、EBV抗原特異的CD4-およびCD8-細胞ならびに、抗体を産生する記憶B細胞が発生する。2度目の曝露後、免疫系は、EBV感染を予防し、および/または、上記感染をより効果的に排除することにより、EBV関連疾患の発症を予防または緩和することが可能である。具体的には、上記予防免疫化の効果は、EBVを患う免疫化された個人の感染を予防すること、感染を変更modifyingまたは制限すること、上記個人の感染からの回復を援助し、向上させ、強化し、または刺激すること、および、後のEBV感染を予防または制限する免疫記憶を生成することのうち、少なくとも一つにおいて現れる。上記効果のいずれの存在も、当業者に既知である慣例の方法によって試験、検出できる。好ましくは、患者は、用いられたワクチンの一部であった1以上のEBV抗原に曝され、上記1以上の抗原に対する抗体力価およびT細胞の数が求められる。また、インビトロでヒトB細胞の感染を阻害する中和抗体の誘導も求められる。本発明に従う治療免疫化は、EBV抗原に対する免疫応答を同様に誘発する一方で、上記免疫化の前にEBVに曝露されている個人、すなわち、既にEBVに感染している個人に対して行われる。この場合、免疫化は、MHCクラスI分子および/またはMHCクラスII分子に結合されるプロフェッショナルな抗原提示細胞によって提示される形態である同族の抗原と直面する、休止Tエフェクター細胞の再活性化につながる。EBVに対する治療免疫化は、たとえば、移植レシピエントもしくはその他の免疫無防備な患者HIV陽性の個人、癌患者、重症な炎症性疾患もしくは自己免疫疾患の患者においてウイルスの再活性化が望ましくない場合、または、EBV再活性化が、移植後リンパ増殖性疾患PTLDおよび非ホジキンリンパ腫、慢性活動性EBV感染CAEBV、口腔毛状白板症のような疾患の発症につながり得るか、つながっている場合、または、EBVのB細胞形質転換能が、たとえば癌などの疾患の発症につながっている場合に、特に関連することが判明するであろう。本発明に従うワクチンは、以下に詳述されるように、本発明に従って粒子に含有されるEBV抗原を含有する上に、医薬上許容されるキャリアをさらに含有してもよく、医薬上許容されるキャリアは、ワクチンを受ける個人に有害な免疫応答またはいかなる他の悪反応もそれ自体は惹起しない任意のキャリアを含む。好適なキャリアは、典型的には、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマーなどの徐徐に代謝される大きな巨大分子、および、たとえば油滴またはリポソームなどの脂質凝集物である。更に好適な医薬上許容されるキャリアは、当該技術分野において周知である。さらに、上記キャリアは、以下により詳しく記載される、更なる免疫刺激剤として機能してもよい。さらに、ワクチンは、たとえば、水、生理食塩水、グリセロール、エタノールなどの希釈剤を含有してもよい。さらに、乳化剤および/またはpH緩衝物質など、製剤化目的で必要な物質がワクチンに含有されてもよい。前述の物質のいかなる組合せも、必要に応じて、本発明に従うワクチンの一部であってよい。効果的な免疫化に必要な量および治療投与計画treatmentregimenは異り得、個人のサイズ、体表面積、年齢、性別、投与時間および投与経路、一般的な健康状態、ならびに併用投与されている他の薬などの要因に依存し得る。上記有効な量は、広範囲であることが予想され、任意のある状況について、慣例の実験により容易に求められ、通常の臨床医または医師の技能および判断の範囲内である。投与方式は、免疫化用ワクチンに曝露される個人の免疫化が得られれば、いかなる方式でも可能であり、たとえば、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、胸骨内intrasternal投与、皮下投与、関節内注射または注入および吸入、ならびに腸投与などの非経口投与が含まれる。好ましくは、ワクチンは、免疫化の効果を最大限にするために、少なくとも2回投与される。本明細書で用いられる粒子という用語は、EBVポリペプチドおよび膜脂質からなるとともに、EBVDNAのない粒子状集合体に関する。ポリペプチドという用語は、30個を超える連続アミノ酸からなる分子を指す。さらに、ポリペプチドの代わりに、ペプチド、すなわち、30個以下のアミノ酸を含有する分子を用いることが、本発明に従って意図される。上記ペプチドが粒子の免疫効果に寄与する範囲で、ペプチドはEBV抗原性エピトープを含有することが理解される。ポリペプチドという用語によって包含されるものには、ポリペプチドのフラグメントもある。ポリペプチドのフラグメントという用語は、全長ポリペプチドの生物学的活性に関連付けられてもいなくてもよいポリペプチドの部分を指す。好ましくは、活性はフラグメントに起因し得る。ポリペプチドはさらに、1個を超えるポリペプチド分子からなるダイマー、トリマーおよびより高次のオリゴマーをさらに形成してもよい。該ダイマー、トリマーなどを形成するポリペプチド分子は、同一であっても非同一であってもよい。結果的に、対応する高次構造は、ホモまたはヘテロダイマー、ホモまたはヘテロトリマーなどと呼ばれる。ホモまたはヘテロダイマーなどは、ポリペプチドという用語の定義に該当する。ポリペプチドおよびタンパク質という用語は、ここで交換可能に用いられ、修飾が、たとえば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などによって行なわれる天然修飾ポリペプチドも指す。このような修飾は当該技術分野で周知である。本発明に従うEBVポリペプチドと呼ばれるポリペプチドは、EBVのポリペプチドとアミノ酸配列が同一であるポリペプチドである。ここで用いられるEBVという用語は、任意の野生型、すなわち、天然起源のEBV株に関し、1つの特定の株に制限されない。具体的には、EBV1型株およびEBV2型株が当該技術分野で周知であり、広範囲で特徴付けされている。これらの2種類のEBV型は、EBNA-LP、EBNA-2、EBNA-3A、EBNA-3BおよびEBNA-3Cをコードする核内ポリペプチド遺伝子が大きく異なる。EBNAファミリーのポリペプチドをコードする遺伝子に関連する差異を超えて、1型および2型のゲノムはほとんど変わらない。1型は、先進国の世界人口において優勢に蔓延しており、2型は、赤道付近アフリカおよびニューギニアでも蔓延している概要については、KieffおよびRickinson、2007年。さらに、EBVポリペプチドという用語は、配列に関して野生型EBV株と同一でないが、野生型EBVポリペプチドと各値について少なくとも99、98、97、96、95、90、85、80および少なくとも75の配列同一性を共有するタンパク質を含有するポリペプチドも含む。ポリペプチド配列の同一性の度合は、当業者に周知の方法によって計算することができ、配列データのアライメントおよび配列相同性の計算を実施するアルゴリズムの自動的実行を含んでもよい。粒子のEBVポリペプチドは種々のEBV株を起源としてよく、好ましくは1つの株を起源とする。前述のように、粒子に含有される必要のあるEBVポリペプチドは、EBV構造ポリペプチドおよびEBV溶菌性ポリペプチドの群に属する。当業者には理解されるように、EBVの特定のポリペプチドは、前述のポリペプチドの群の複数に属してもよい。言い換えると、以下の段落に記述される特定のEBVポリペプチドから明らかであるように、EBVポリペプチドは、構造ポリペプチドおよび溶菌性ポリペプチドを表わしてもよい。後者の場合、粒子は構造ポリペプチドまたは溶菌性ポリペプチドのいずれかである更なるEBVポリペプチドを含有する必要はない。典型的に、ワクチンの抗原性ポテンシャルを増加させるため、好ましくは、粒子は、前述のEBVポリペプチドの群の各々について少なくとも1つの別々のEBVポリペプチドを含有する。より好ましくは、各値について少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または少なくとも12個の別々のポリペプチドが、独立して、ワクチンの粒子によって含有される上記ポリペプチド群の各々の一部である。本発明に従うと、EBVの構造ポリペプチドという用語は、EBVの構造設定setupに関与するポリペプチドに関する。上記ポリペプチドは、好ましくは、膜ポリペプチド、外被ポリペプチドおよびキャプシドポリペプチドからなる群から選択される。EBV膜ポリペプチドは、BALF4、BLLF1gp350とも呼ばれる、BDLF2、BDLF3、BKRF2、BLRF1、BNLF1LMP-1とも呼ばれる、TPLMP-2aとも呼ばれる、BXLF2、BZLF2およびこれらの任意の組合せからなる群から選択されるポリペプチドを含有する。EBV外被ポリペプチドは、BBRF2、BGLF2、BMLF1、BNRF1、BOLF1、BPLF1、BTRF1、BVRF1およびこれらの任意の組合せからなる群から選択されるポリペプチドを含有する。EBVキャプシドポリペプチドは、BBRF1、BcLF1、BDLF1、BFRF3およびこれらの任意の組合せからなる群から選択されるポリペプチドを含有する。好ましくは、少なくとも1つの構造ポリペプチドは、BLLF1、BMLF1、BNRF1、または、たとえばBLLF1およびBMLF1、BLLF1およびBNRF1、もしくはBMLF1およびBNRF1などの、これらの任意の組合せからなる群から選択される。溶菌性ポリペプチドという用語は、EBV溶菌サイクルここでは複製相とも呼ぶの誘導および維持に関与し、および/または、溶菌サイクルの誘導の結果として発現されるEBVポリペプチドに関する。上記溶菌性ポリペプチドは、好ましくは、最初期遺伝子、初期遺伝子および後期溶菌性遺伝子KieffおよびRickinson、2007年を含む群から選択される。溶菌サイクルは、ともに最初期タンパク質であるBZLF1およびBRLF1の発現により開始され、続いて、初期および後期タンパク質の発現が行なわれる。誘導に続いて、ウイルス複製が許容となった細胞は、ヘルペスウイルスに特徴的な細胞変性変化を受けるKieffおよびRickinson、2007年。本発明に従って用いられるべき例示的な溶菌性ポリペプチドは、BZLF1、BRLF1、BMRF1、BMLF1、BALF2、BALF5、BGL2、BHRF1、BALF4、BDLF3およびこれらの任意の組合せを含む群から選択される。好ましくは、少なくとも1つの溶菌性ポリペプチドはBLLF1gp350とも呼ぶまたはその任意の組合せである。本発明に従って用いられる膜脂質という用語は、脂質二重層を形成するように自発的に配列することの可能な脂質に関する。該膜脂質は、疎水性領域および親水性領域を含有する脂質であり、自己組織化の後、膜脂質の疎水性領域は二重層の内側部を形成し、親水性領域は膜の外側面を形成する。好ましくは、膜脂質は、両親媒性リン脂質などの細胞膜を自然に形成する脂質である。また、上記膜脂質は、野生型EBVが複製可能な宿主細胞を起源とすることが好ましい。より好ましくは、上記膜脂質は、本発明に従う細胞を起源とする。本発明に従うと、粒子中に含有される膜は、粒子の外殻を構成する膜を形成するのに十分な量で存在する。粒子は、上記膜外殻を有しなければならず、膜外殻は、少なくとも1つのEBV構造ポリペプチドを含有することが好ましい。以下に概説するように、膜結合EBV構造ポリペプチドの好ましい例は、gp350ポリペプチドおよびLMP-1ポリペプチドである。以下にさらに詳述するように、LMP-1のB細胞形質転換能は無能化されてもよい。さらに、粒子の膜は、たとえば、膜の内側、外側、または膜に貫通して存在し得る更なる膜ポリペプチドなど、EBV膜中に自然に存在する更なる膜構成成分を含有する。粒子がEBVDNAが無いとは、粒子がEBVDNAを含有しない、すなわち、EBVDNAが一切検出できないことを意味する。具体的には、本発明に従って、DNAという用語は、cDNAまたはゲノムDNAなどのいかなるDNAも含む。この文脈で用いられるDNAという用語によりさらに含まれるのは、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方である、DNAの合成または半合成誘導体および混合ポリマーなど、当該技術分野で既知のDNA模倣分子である。本発明に従うこのようなDNA模倣分子またはDNA誘導体は、ホスホロチエート核酸、ホスホロアミデート核酸、2′-O-メトキシエチルリボ核酸、モルホリノ核酸、ヘキシトール核酸HNAおよびロックド核酸LNAを含むBraaschおよびCorey、2001年。LNAは、リボース環が2′-酸素と4′-炭素との間のメチレン結合によって拘束されているRNA誘導体である。当業者には容易に認識されるように、それらは追加的な非天然または誘導化ヌクレオチド塩基を含有してもよい。したがって、粒子は、EBVDNA配列と同一のDNA配列を含有してはならず、上記配列は、EBV遺伝子配列に関することが好ましい。さらに、粒子は、野生型EBV核酸配列と各値について少なくとも99、98、97、96、95、90、85、80および少なくとも75の配列同一性を共有する核酸配列を含有してはならない。核酸配列の配列同一性の度合は、当業者によって周知の方法により計算することができ、配列データのアライメントおよび配列相同性の計算を実施するアルゴリズムの自動実行を含んでもよい。さらに、粒子は、発現の際にEBVポリペプチドと機能的に類似するポリペプチドを生成するDNA配列を含有しなくてもよく、機能的類似点は、B細胞形質転換能に関することが好ましい。ポリペプチドの機能的に似通った点を試験するための方法は、当業者に周知であるインシリコinsilicoならびにインビトロ、エクスビボおよびインビボの試験を含む。たとえば、機能的類似点を求めるために、EBVの欠損変異体を生成し、相補性分析を行なうことができる。具体的には、EBVの欠損変異体は、たとえば、B細胞形質転換に不可欠なポリペプチドをコードする遺伝子の配列が欠損されたことを特徴とする。結果的に、上記欠損変異体はB細胞を形質転換することが不可能である。DNA配列の欠損EBV配列との機能的類似点を試験するには、たとえば、試験すべき上記DNAを上記欠損変異体のゲノムDNA内に取込むことにより、試験すべき上記DNAを欠損変異体に供給する。次に、斯くして修飾された欠損変異体がB細胞を形質転換することが可能であるか、すなわち、欠損を補完して、野生型EBVと機能的に類似するEBVを生じるかどうかが判断される。上記相補性分析のバリエーションは当該技術分野において既知であり、該分野における当業者の技術的知識に基づいて、当業者の特定のニーズに応じてさらに適合することができる。更なる実施形態では、ワクチンまたはワクチンに含有される粒子には、いかなる種類のDNAも一切含有されないことが意図される。しかしながら、粒子はEBVRNAを含有してもよい。ここで用いられるRNAという用語は、mRNA、ncRNA非コードRNA、tRNAおよびrRNAを含むすべての形態のRNAを含むことが理解される。非コードRNAという用語は、天然起源のsiRNA低分子干渉RNA、miRNAマイクロRNA、rasiRNA反復関連RNA、snoRNA核小体低分子RNA、およびsnRNA核内低分子RNAを含む。ウイルスmRNAは、種々の実施形態でここに記載されるように、粒子に含有されると、感染細胞で翻訳されることができ、翻訳されたポリペプチドに由来するペプチドは、CD8T細胞を予備刺激または再活性化するように、MHCクラスI抗原に結合して提示されることができた。対応するEBVウイルスmRNAは、転写がEBV構造ポリペプチドおよび溶菌性ポリペプチドに属すると上述されたmRNA分子である。たとえば、粒子は、BALF4、BLLF1gp350とも呼ばれる、BDLF2、BDLF3、BKRF2、BLRF1、BNLF1LMP-1とも呼ばれる、TPLMP-2aとも呼ばれる、BXLF2、BZLF2、BBRF2、BGLF2、BMLF1、BNRF1、BOLF1、BPLF1、BTRF1、BVRF1、BBRF1、BcLF1、BDLF1、BFRF3構造ポリペプチドとして、および/もしくはBZLF1、BRLF1、BMRF1、BMLF1、BALF2、BALF5、BGL2、BHRF1、BALF4、BDLF3溶菌性ポリペプチドとしてをコードするウイルスEBVmRNA、ならびに/または、B細胞形質転換能は無能化されているが、それらの免疫原性は維持される、対応するポリペプチドを含有してもよい。好ましくは、本発明に従う粒子に含有されるEBVウイルスmRNA分子は、好ましい構造ポリペプチドおよび/または溶菌性ポリペプチドおよび/または、形質転換能が無能化されているが、それらの免疫原性は維持される、対応するポリペプチド、または、粒子に含有されるか、もしくは構成するとして上記に記載されるこれらの好ましい組合せをコードする。言い換えると、粒子に含有されるmRNA分子の転写は、本発明に従う粒子のEBVポリペプチド組成を反映する。粒子は、代替的または追加的に、その転写が粒子に含有されないEBVmRNAを含有してもよいことが同様に意図される。たとえば、BZLF1および/またはBRFL1をコードするmRNAは、本発明に従う粒子に含有され得るが、BZLF1および/またはBRFL1ポリペプチドは、上記粒子に含有されない。さらに、粒子は、本発明に従う粒子に含有されるすべてのポリペプチドをコードするmRNA分子、すなわち、上記粒子のEBVポリペプチド組成を反映するmRNA分子を含有しないことも意図される。好ましくは、EBVmRNAをコードする少なくともBRLF1および/またはBZLF1は、本発明に従う粒子に含有される。上記粒子内へのmRNAの取込は、たとえば、修飾EBVゲノムを発現する細胞に存在するEBVmRNA分子が粒子内に取込まれる、以下に記載される方法によって達成され得る。本発明に従う粒子内にEBVmRNAを取込むための更なる方法は、たとえば、電気穿孔法、リポフェクションまたは、脂質膜を通して核酸の移入を行うための当該技術分野で既知の他の方法を含む。本発明の粒子に存在するいかなるmRNA分子も、感染細胞の増殖性状態への形質転換を誘導することは不可能であることが、本発明に従って理解される。粒子に含有される上記EBVmRNAからの潜在的な形質転換EBVポリペプチドの発現は、mRNA分子の不安定性および、その結果としてのEBVポリペプチドの低発現率のため、感染細胞の形質転換を誘導するには十分でないことが当業者には理解される。しかしながら、当業者は、単独でまたは更なるEBVポリペプチドと組合されて形質転換活性を有するEBVポリペプチドの発現を排除するために、どのmRNAを用いることができるか、および/または、対応するEBVmRNAに対してどのような修飾を行なうべきかを、このことが医薬の活性剤としての認可のプロセスにおいて規制目的で必要である場合には、判断する立場にある。別の実施形態では、ワクチンまたはワクチンに含有される粒子には、いかなる種類のRNAも一切含有されないことが意図される。さらに、ワクチンまたはワクチンに含有される粒子には、いかなる種類の核酸も一切含有されないことが意図される。このように、少なくともEBVDNAが粒子に存在しないのは、野生型EBVの、B細胞を不確定な成長が可能な細胞へと形質転換する能力のためである。これは、野生型EBVゲノム中の潜在的な発癌遺伝子、すなわち、癌の発症に関与する遺伝子の存在のためである。したがって、被免疫化個人への投与の際の本発明のワクチンの安全性に関して、ワクチンから、より具体的には粒子から、EBVDNAが排除されると、ワクチン接種の直接的な結果として、上記被免疫化個人がB細胞形質転換に晒されるリスク、または、癌を発症するリスクが最小限となる。このことは特に、過去にEBVに曝露されておらず、かつ感染していない個人の場合に特に重要である。上記の導入部も参照。免疫原性に寄与しつつ投与の際のワクチンの安全性を強化させる更なる特徴として、粒子は、B細胞形質転換能は無能化されているが、それらの免疫原性は維持される、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドを含有してもよい。インビトロでは、EBVによるB細胞形質転換は、感染B細胞のより長い寿命での増殖につながる。B細胞形質転換に必要なという用語は、本発明に従うと、野生型EBVによる感染の際、上記1以上のEBVポリペプチドがB細胞を形質転換する際に不可欠であることを意味する。言い換えると、上記1以上の不可欠なEBVポリペプチドの非存在下では、B細胞は感染の際に形質転換されない。したがって、粒子は、B細胞との融合の際、B細胞を形質転換することが不可能である。B細胞形質転換の可能性を排除するためには、1つの不可欠なEBVポリペプチドのB細胞形質転換能を無能化すれば足りるであろうが、代替的に、EBVポリペプチドの不可欠な組合せのB細胞形質転換能を無能化して、1つの不可欠なポリペプチドのみを無能化したときに得られるのと同じ結果を達成する、すなわち、B細胞形質転換の可能性の排除を達成することもできる。好ましくは、複数の上述の不可欠なEBVポリペプチドまたはEBVポリペプチドの不可欠な組合せのB細胞形質転換能が無能化される。B細胞形質転換に不可欠な対応するEBVポリペプチドは、EBNA2、LMP1、EBNA-LPである。これらのEBVポリペプチドの1つのB細胞形質転換能を無能化すれば、B細胞形質転換の可能性を排除するのに十分である。B細胞形質転換に必要なEBVポリペプチドの不可欠な組合せは、EBNA3AおよびEBNA3C、LMP-2AおよびEBNA3A、または、LMP-2AおよびEBNA3Cである。当業者には容易に理解されるように、対応する不可欠な組合せの1つのメンバーのみが粒子に存在する場合、それ単独であってもB細胞を形質転換することが可能であるため、B細胞形質転換能は無能化されなくてはならない。このことは、組合せが完全でない限り、すなわち、B細胞形質転換の可能性を排除するのに必要なすべてのメンバーが粒子に存在していない限り、組合せのより多くのメンバーが存在する場合にも同様に当てはまる。言い換えると、不可欠な組合せのすべてのメンバーが無能化されているときのみ、B細胞形質転換の可能性が排除される。ワクチンの安全性を確保するために、B細胞形質転換が無能化されているB細胞形質転換に必要な上記1以上のEBVポリペプチドを含有する粒子は、同時に、対応する機能性EBVポリペプチド相当物を含有しないことが理解される。上記は、以下の実施形態に準用して適用される。B細胞を形質転換する能力の無能化は、B細胞形質転換のプロセスに機能的に関与するポリペプチドのドメインを修飾するなどの方法によって達成することができる。上記修飾は、たとえば、上記機能ドメインもしくはその一部の欠損、上記機能ドメインもしくはポリペプチド全体の立体阻害、または、機能が不全化される旨での上記機能ドメインの1以上のアミノ酸の置換などの方法によって達成することができる。ポリペプチドのB細胞形質転換能を無能化するとき、その免疫原性は維持されるべきである。当業者は、インシリコならびにインビボ、インビトロまたはエクスビボの慣例の実験方法を使用することによって、タンパク質の免疫原性領域および上記領域内の特異的な免疫原性エピトープを難なく判断する立場である。上記免疫原性領域の判断後、当業者は、ポリペプチドのB細胞形質転換能を無能化しつつ、その免疫原性を維持するために好適な戦略を選ぶ立場である。このようにして、機能的に無能化されているが、免疫原性のEBVポリペプチドを得ることができる。たとえば、LMP-1BNLF1とも呼ばれるなどのB細胞形質転換能を有する膜貫通ポリペプチドの場合、上記ポリペプチドの膜貫通部分のみを欠損させるが、ウイルス粒子の外側の上記ポリペプチドの膜外部分を保存することによって、上記ポリペプチドをトランケートすることができる。代替的に、または追加的には、粒子は、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドが無くてもよい。B細胞形質転換に必要な上述のEBVポリペプチドまたはB細胞形質転換に必要なEBVポリペプチドの組合せのいずれかは、粒子から欠如していてもよい。しかし、本発明に従うと、少なくとも1つのEBV構造ポリペプチドおよび少なくとも1つのEBV溶菌性ポリペプチドなどの他のEBV粒子の存在のため、粒子はそれでも免疫原性である。1以上の形質転換ポリペプチドが欠如しており、かつ少なくとも1つのEBVポリペプチドが無能化されている場合、欠如している1以上のEBVポリペプチドは同時に無能化することができないと理解される。言い換えると、上記1以上のEBVポリペプチドが無能化されていると、同時に欠如することはできない。EBVポリペプチドの組合せがB細胞形質転換の際に不可欠であれば、組合せの第1のメンバーを無能化し、第2のメンバーが欠如していてもよい。本実施形態に設けられた定義および説明は、特に明記しない限り、以下のすべての実施形態に準用して適用される。一般的に、さらに本発明に従うと、ワクチンの抗原性ポテンシャルを最大限にするためには、ワクチンは出来る限り多くの異なるEBVポリペプチドを含有することが望ましい。したがって、代替的な実施例では、本発明は、修飾EBVを含有する粒子を含有し、上記修飾EBVは、野生型EBVと比較して、EBVDNAが無く、a上記粒子に含有される、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドのB細胞形質転換能は無能化されているが、それらの免疫原性は維持され、および/またはb上記粒子は、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドが無い、ワクチンに関する。上記代替的な実施形態の好ましい実施形態では、上記修飾EBVは、上に特定された特徴についてのみ野生型EBVと異なる。この代替的な実施形態は、野生型EBVの全抗原能を実現するが、被免疫化個人におけるB細胞形質転換、または、たとえば伝染性単核症IM、腫瘍などの他のEBV関連疾患を誘導するワクチンのポテンシャルを排除する。結果として、免疫化された個人の免疫系は、野生型EBVによく類似するワクチン中の広範囲のEBV抗原に応答して予備刺激されているため、医学的観点から、EBV感染と闘う際に非常に有効とみなされる免疫系の調節が得られている。上記代替的な実施形態のより好ましい実施形態では、上記修飾EBVは、EBVポリペプチドEBNA-2、EBNA-3a、EBNA-3b、EBNA-3cが欠如しているという点において、さらに野生型EBVと異なる。さらにより好ましくは、LMP-1は無能化されており、および/または、BZLF1は修飾EBVの一部である。本発明のワクチンに含有される粒子は、標準的クローニングおよび細胞培養技術に関与し、たとえば、サムブルックSambrook著、分子クローニング実験室マニュアルMolecularCloningALaboratoryManual、コールドスプリングハーバー研究所ColdSpringHarborLaboratory1989年、N.Y.;実践的細胞培養技術PracticalCellCultureTechniques、ボルトンBoulton、ベーカーBakerら編、ヒューマナプレスHumanaPress1992年、ISBN0896032140;ヒト細胞培養プロトコルHumanCellCultureProtocols、ガレスEジョーンズGarethEJones著、ヒューマナプレス1996年、ISBN089603335Xに記載される、当該技術分野で周知の方法によって調製できる。たとえば、EBVポリペプチドは、粒子の凝集および放出を可能にする宿主細胞内のDNA配列からの発現によって、組換えにより生成することができる。上記粒子は、合成ベースで一部または全体的に産生することもできる。好ましくは、粒子は以下に詳述される方法のいずれかによって調製される。上に概説したように、EBVは、種々の重症な病状に原因として関わっており、さまざまなウイルス株との闘いに関する精力的な研究および成功にも関わらず、EBVワクチンの発生はこれまで成功していない。とはいえ、近年、たとえばヒト乳頭腫ウイルスおよびB型肝炎に対するウイルスワクチンの認可も見られている。本発明者らは、EBV無感作の個人にEBV特異的免疫応答を予備刺激し、かつ、EBV陽性個人にEBV特異的免疫応答を再活性化するのに有効であるワクチンを生成することが初めて可能となったため、長年感じられてきたEBVワクチンに対する必要性に応えている。最も驚くべきことは、本発明のワクチンは、動物モデルにおいて、強力な体液性免疫応答に加えてEBV特異的CD8免疫応答、すなわち、細胞性免疫応答を惹起することが可能であり、さらに、EBNA3ポリペプチドがそのB細胞転換能のため欠損されたにも関わらず、EBV血清陽性のヒトドナーからEBV特異的CD8T細胞を再活性化することが可能なことであった。EBV感染の際に生成されるCD8細胞は、優勢的にEBNA3ポリペプチドに対して向けられることが周知であり、上記EBNA3ポリペプチドの無いワクチンは、有力なEBV特異的CD8細胞応答を生じないと予想されたであろうため、このことは驚くべきことである。さらに、本発明のEBVワクチンの標的であるヒトB細胞は、ウイルス粒子由来のMHCクラスI制限エピトープを交差提示するポテンシャルを有しないと推測されているKelleretal、2009年。発明者らは、本発明のワクチンの一部である粒子内にパッケージングできないように修飾されたEBVヘルパーゲノムを持つ細胞株を用いた。ワクチンの安全性をさらに保証するために、ワクチンは、宿主細胞株中の好ましくは上記のように修飾されたEBVヘルパーゲノムの結果として、B細胞を形質転換できるEBVポリペプチドが無いことが好ましい。したがって、EBVヘルパゲノムが粒子内に非正統的にパッケージングされてしまう稀な場合においても、B細胞の形質転換およびウイルスの再活性化を完全に排除することができる。要約すると、発明者らは、ウイルスDNAが無く、かつ、無感作宿主において多価の強い体液性および細胞性免疫中和反応を確実に誘導する粒子を提供する。したがって、粒子は、いかなる血清状態を有する個人、特に、たとえば移植を控えたEBV無感作患者に対しても有効かつ安全であり、免疫無防備な患者におけるEBV関連疾患のリスクを低減するワクチンを構成する。本発明のワクチンの好ましい実施形態では、上記粒子は、BZLF1およびgp350から選択される少なくとも1つのEBVポリペプチドを含有し、および/または、少なくとも1つのEBV潜在性ポリペプチドをさらに含有する。EBVポリペプチドgp350糖タンパク質350は、膜結合型糖タンパク質である。上記gp350は、B細胞の細胞表面上のCD21に結合することにより、B細胞に対する特異性指向性の原因となる。追加的な補助的ウイルスポリペプチドは、完全に効率的な感染に寄与してもよいChesnokovaetal、2009年;Omerovicetal、2005年、Silvaetal、2004年、SoremおよびLongnecker、2009年。さらに、低効率での感染もgp350の無い組換えEBV粒子により証明されているJanzetal、2000年。近年の研究によっては、内部移行internalizationステップ後であり、かつ、おそらくエンドソーム区画からのウイルスキャプシドの放出の間に、gp350が関わっていることも仮定されているBusseetal、2010年。本発明に従うワクチンには決定的ではないが、gp350が粒子の膜に含有されることが好ましい。なぜなら、ワクチンの投与の際に生成される免疫応答が、野生型EBVによる感染の際に惹起される免疫応答によりよく類似するためである。EBV最初期ポリペプチドBZLF1は、潜伏EBV感染の破壊を媒介し、一般的に、EBVの溶菌相の誘導において鍵となる制御因子であるとみなされる。野生型EBVでは、BZLF1は定常的に発現されない。宿主の体に入る際にはBZLF1は発現されず、B細胞感染の後にのみBZLF1は発現されて、溶菌サイクルの誘導が生じる。溶菌サイクルは、宿主の免疫応答がEBVに適合するまで維持され、EBVが感染の潜伏相に入るときの感染を含むことができる。上記相ではBZLF1は発現されない。EBVによる持続的な感染は、溶菌相および潜伏相が交互にあることを特徴とし、溶菌相の誘導は、これらの時に免疫細胞に提示されるBZLF1の発現による。したがって、BZLF1を含有するワクチンは、免疫化された個人の免疫系を、溶菌相の誘導の結果として新しいウイルス粒子が実際に放出される前に動態化されるように予備刺激する。潜在性ポリペプチドという用語は、EBV潜伏サイクルの誘導および維持に関与し、および/または、潜伏サイクルの誘導の結果として発現されるEBVポリペプチドに関する。好ましくは、少なくとも1つの潜在性ポリペプチドは、LMP-1BNLF1とも呼ばれるおよび/またはLMP-2である。本発明はさらに、粒子を生成するための方法であって、a細胞に修飾EBVゲノムをトランスフェクトするステップを含み、上記修飾EBVゲノムは、野生型EBVゲノムと比較して、少なくとも、aa上記野生型EBVゲノムのパッケージングに必要な1以上の配列が欠如し、上記パッケージングに必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、パッケージング能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有し、abB細胞形質転換に必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、B細胞形質転換能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有し、さらに、acEBVの複製を誘導するのに必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、EBV複製の誘導能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有し、方法はさらに、bステップaで得られた細胞を、上記修飾EBVゲノムの発現を可能にする条件下で培養するステップと、cEBVの複製相を誘導するステップと、d粒子を単離するステップとを含む、方法にも関する。トランスフェクションという用語は、当該技術分野で受入れられている意味に従って、すなわち、核酸を細胞内に導入するプロセスに従って、本発明に関連して用いられる。トランスフェクションは、たとえば、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションまたはリポソーム媒介トランスフェクションのような化学系の方法などの種々の方法によって達成され得る。さらに、電気穿孔法または超音波穿孔法、または、遺伝子銃媒介トランスフェクションもしくはマグネトフェクションなどの粒子系方法、およびウイルス媒介方法のような非化学方法も当該技術分野で既知である。修飾EBVゲノムは、野生型EBVゲノムと比較して修飾される。上記の章に概説したように、その遺伝子構成が当該技術分野で周知であるいくつかの野生型EBV株が存在するRickinsonおよびKieff、2007年。上記から明らかであるように、修飾EBVゲノムは、すべてのEBV株に共通の配列に関してのみ修飾される。パッケージングという用語は、ウイルス組織について当該技術分野で周知であり、ウイルス粒子組織化の間に直鎖EBVウイルスDNAをウイルス粒子内に導入するプロセスに関する。EBVゲノムDNAのパッケージングは、上記ゲノムDNAの両端で直接反復される配列TRで開始する。具体的には、上記修飾EBVゲノムは、野生型EBVゲノムのパッケージングに必要な1以上の配列が欠如する。パッケージングに必要なという用語は、本発明に従うと、上記1以上の配列が野生型EBV粒子内にEBVDNAをパッケージングする際に不可欠であることを意味する。言い換えると、上記1以上の配列の非存在下では、EBVDNAは、野生型EBV粒子および、本発明のワクチンに含有されてもよい本発明の方法によって生成された粒子内にパッケージングされない。したがって、パッキングに必要な上記1以上の配列が欠如しているとき、修飾EBVゲノムはここに記載されるような粒子内にパッケージングされない。たとえば、EBVの末端反復の配列が欠損され得る。上記末端反復はターミナーゼと呼ばれる酵素によって認識される。代替的に、または追加的に、上記パッケージングに必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を欠損させることもできる。このようなEBVポリペプチドは、たとえば、ターミナーゼ酵素である。さらに、上記パッケージングに必要な上記EBVポリペプチドは、そのパッケージング能を失うように無能化されてもよい。上記無能化は、パッケージングのプロセスに機能的に関与するポリペプチドのドメインを修飾するなどの方法によって達成され得る。上記修飾は、たとえば、上記機能ドメインもしくはその一部の欠損、上記機能ドメインもしくはポリペプチド全体の立体阻害、または、上記機能ドメインの1以上のアミノ酸の置換などの方法によって達成することができる。パッケージングの可能性を排除するためには、パッケージングに必要な1つの配列もしくは上記パッケージングに必要なEBVポリペプチドをコードする1つの配列を欠損させる、および/または、1つの不可欠なEBVポリペプチドのパッケージング能を無能化すれば足りるであろうが、代替的に、EBVポリペプチドの組合せのパッケージング能を無能化することによっても、EBVDNAパッケージングの可能性を排除することができる。さらに、修飾EBVゲノムは、B細胞形質転換に必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、B細胞形質転換能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有する。具体的なEBVポリペプチドおよびその組合せは、上に記載されている。当業者は、上記1以上のポリペプチドをコードするゲノム配列を直接かつ明確に同定する立場である。さらに、当業者は、EBVゲノムから上記1以上の配列を欠損させるステップを実施し、および/または、上記1以上の配列を修飾して、発現の際の形質転換能が無能化されている1以上のEBVポリペプチドを得る立場である。さらに、修飾EBVゲノムは、EBVの複製を誘導するのに必要なEBVポリペプチドをコードする1以上の配列が欠如し、および/または、そのEBV複製誘導能が無能化されているEBVポリペプチドをコードする1以上の配列を含有する。EBVの複製に関与するEBVポリペプチドは、大部分が、ウイルスゲノムの複製およびEBVゲノムの発現に関与し、最終的に感染宿主細胞からウイルス粒子が放出される、溶菌性ポリペプチドと呼ばれるポリペプチドである。必要なという用語は、他のポリペプチドについてここで上に説明したのと同じ意味、すなわち、1以上のポリペプチドが特定の局面に関して絶対に必要であるという意味を有する。発明のこの局面では、EBVポリペプチドをコードする上記1以上の配列の存在は、EBVの複製の誘導には絶対に必要である。対応するポリペプチドは、BZLF1、BRLF1、BMLF1およびこれらの組合せからなる群から選択され得る。この点においても、当業者は、上記1以上のポリペプチドをコードするゲノム配列を直接かつ明確に同定し、さらに、EBVゲノムからの上記1以上の配列を欠損させるステップを実施し、および/または、上記1以上の配列を修飾して、発現の際のEBV複製誘導能が無能化されている1以上のEBVポリペプチドを得る立場である。培養という用語は、当該技術分野で認められるその意味に従って用いられる。一般的に、たとえば、培地構成成分、マーカ選択および選定、細胞定量化および単離などの細胞培養方法が、当該技術分野で周知の方法であり、たとえば、実践的細胞培養技術PracticalCellCultureTechniques、ボルトンBoulton、ベーカーBakerら編、ヒューマナプレスHumanaPress1992年、ISBN0896032140;ヒト細胞培養プロトコルHumanCellCultureProtocols、ガレスEジョーンズGarethEJones著、ヒューマナプレス1996年、ISBN089603335X、および実施例の欄に例示的に記載されている。培養条件は、細胞型ごとに異なる上に、特定の細胞型について異なる表現型が発現され得る。一般的に、細胞は、典型的には摂氏37°C、5CO2の適切な温度および気体混合物で、a細胞内および細胞外浸透圧バランスを維持しつつ洗浄、輸送および希釈する液体としての成長培地、b正常な細胞代謝に不可欠な水および一定量の無機イオンを細胞に与える成長培地、cブドウ糖などの炭水化物と組合されて、細胞代謝の基本的なエネルギ源を与える成長培地、およびd培地を生理的pH範囲内に維持する、すなわち、細胞が生存可能に保たれるように、緩衝系を与える成長培地、の成長培地中で成長、維持される。成長培地の配合は細胞型に依存して大きく異なり、たとえば、限定されないが、成長因子、栄養成分、ブドウ糖、pHを維持する緩衝液、ならびに殺菌剤および抗生物質などを含有する。細胞を培養し、培養細胞を維持するための方法は、当該技術分野で周知であり、成長培地および他の細胞培養に関連する材料、ならびに、細胞の培養を成功させるための説明書および方法は、たとえば、シグマアルドリッチSigmaAldrichまたはインビトロジェンInvitrogenで得ることができる。修飾EBVゲノムの発現を可能にする条件は、ここで上記の一般的な条件に本質的には対応する。宿主細胞中のEBVゲノムからのポリペプチド発現を向上させる修飾は、当業者には既知である。本発明の方法で用いられるべき細胞は、好ましくは、ヒト由来の細胞である。微生物および細胞培養の独国コレクションGermanCollectionofMicroorganismsandCellCulturesDSMZ、ブラウンシュヴァイクBraunschweigまたは米国組織培養コレクションAmericantissueculturecollectionATCCなどから入手可能である、HEK293細胞株の使用が好ましい。EBVの複製相を誘導という用語は、本発明に従うと、最終的に、ウイルス様粒子VLPsが細胞内で組織化され、かつ、上記VLPがここに定義される粒子として放出されるプロセスの開始を意味する。誘導は、たとえば、複製を誘導するのに必要なEBVポリペプチドをコードする上記1以上の配列の欠損のため、および/または、EBVポリペプチドをコードする上記1以上の配列の修飾のため、宿主細胞に存在しない上記1以上のEBVポリペプチドで細胞を補完する結果、EBV複製を誘導することが不可能になることにより達成され得る。上記補完は、たとえば、欠損しているEBVポリペプチドが発現され得る、安定的にまたは一過的にトランスフェクトされたプラスミド上などで、上記欠損された1以上の配列を細胞に付与するか、または、複製相を誘導することが可能な機能性EBVポリペプチドをコードする1以上の修飾されていない配列を細胞に付与することによって、達成され得る。上記1以上のDNA配列の付与は、ここで上記し、実施例の章に記載するような方法によって行うことができる。代替的に、上記補完は、EBVの複製を誘導するのに必要な上記1以上のEBVポリペプチドを細胞に付与することによって達成され得る。細胞への上記1以上のポリペプチドの付与は、当該技術分野で周知であり、たとえば、ProteoJuice登録商標メルクMerck、TurboFect登録商標フェルメンタスFermentasまたはLipodinPro登録商標アビオテックAbbiotecなどの試薬を用いてもよい、タンパク質送達方法によって達成され得る。斯くして生成された粒子は、宿主細胞からの放出の際、細胞培養上澄みから回収することも、その一部として回収することもできる。たとえば、上記生成された粒子を含有する上澄みをB細胞の感染に直接用いたり、上記粒子を超遠心分離法もしくは限外ろ過法によってさらに濃縮することもできる。本発明の方法に従って生成される粒子は、本発明のワクチンに好適に用いられる。好ましくは、本発明のワクチンに含有される粒子は、野生型EBVゲノムと比較してEBVゲノムをさらに修飾してもよい、本発明の方法に従って生成される。上記修飾は、当業者であれば、バイオテクノロジーの分野の一般的な常識に基づき、さらに、ここに記載および/または引用される方法に基づいて、難なく行うことができる。好ましい実施形態では、本発明のワクチンのaまたは本発明の方法のabにおいて、形質転換能が無能化されているポリペプチドは、LMP-1ポリペプチドである。LMP-1EBVポリペプチドは、B細胞形質転換に必要な膜貫通ポリペプチドである。LMP-1は、恒常的活性型CD40受容体を模倣するGiresetal、1997年。B細胞形質転換能は、たとえば、上記ポリペプチドの膜貫通部分またはその一部のみを欠損させて、ウイルス粒子の外側の上記ポリペプチドの膜外部分を保存することによる上記ポリペプチドのトランケーションによって無能化することができる。対応する方法は、実施例の章に開示されている。簡潔には、LMP-1を、その疎水性領域のみ、すなわち、膜貫通ドメインを含有する配列番号:4のアミノ酸26~210のみを欠損させることによって失活したとともに、その免疫原性を維持する試みで、膜外部分を保存した。したがって、好ましい実施形態では、トランケートされたLMP-1は、配列番号:1のDNA配列によってコードされ、配列番号:2のポリペプチド配列からなる。本発明のワクチンまたは方法の別の好ましい実施形態では、本発明のワクチンのbまたは本発明の方法のabに記載の、欠如している、B細胞形質転換に必要な1以上のEBVポリペプチドは、EBNA-2、EBNA-3a、EBNA-3bおよびEBNA-3cからなる群から選択される。本発明の方法のさらに好ましい実施形態では、ステップacにおいて本発明の方法に記載の、欠如している、EBVの複製を誘導するのに必要な1以上のEBVポリペプチド、または、EBV複製誘導能が無能化されている1以上のEBVポリペプチドは、BZLF1、BRLF1、BMLF1および、これらの任意の組合せからなる群から選択され、上記本発明の方法のステップcにおいて、複製相は、選択されたポリペプチドを上記細胞に付与することによって誘導される。本発明の方法のより好ましい実施形態では、選択されたポリペプチドは、BZLF1である。本発明の方法のさらにより好ましい実施形態では、上記細胞への上記1以上のEBVポリペプチドまたは上記BZLF1の付与は、上記細胞に安定的にトランスフェクトされたベクターからの上記1以上のEBVポリペプチドまたは上記BZLF1の発現により行なわれる。上に概説したように、細胞に上記1以上のEBVポリペプチドまたは上記BZLF1を付与する方法はいくつか存在するが、安定的に組込まれたプラスミドからの発現は、いくつかの理由で有利である。発現されるポリペプチドの発現レベルが一定である、宿主細胞の調節が最低限に低下される、さらに、上記粒子を産生する技術的な複雑性が同様に著しく最小限化され、大規模産生系の場合に有利である。本発明の方法の最も好ましい実施形態では、上記1以上のEBVポリペプチドまたは上記BZLF1の発現は、誘導可能に調節される。プラスミドからのポリペプチドの発現を制御する技術は、当該技術分野で周知である。ある技術では、熱、化学物質、または光感受性プロモーターなどの誘導性プロモーターが使用される。たとえば、テトラサイクリン誘導性プロモーター、Dox-誘導性プロモーター、エクジソン誘導性プロモーターまたは重金属誘導性プロモーターなどが当該技術分野で既知であり、本発明に従って用いられ得るたとえば図7を参照。さらに好適なプロモーターは、当業者に周知である。代替的に、BZLF1は、エストロゲン受容体に融合すると調節可能でもあるため、エストロゲンの追加の際に活性化される。本発明の方法の別の好ましい実施形態では、上記方法は、上記ステップbの後かつ上記ステップcの前に、1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列、および/または、1以上のワクチンアジュバントを上記細胞に付与する更なるステップb′を含み、上記1以上のウイルスポリペプチドまたは上記1以上のウイルス核酸配列は、それぞれEBVポリペプチドまたはEBV核酸配列でない。1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列は、上記に述べた定義に従うEBVポリペプチドまたはEBV核酸配列でない限り、いかなる起源または配列でもあり得る。好ましくは、上記1以上のポリペプチドまたは上記1以上の核酸配列は、免疫原性であり、特定の免疫応答を惹起し、さらに、より好ましくは、免疫化剤として安全かつ有効であることが示されているポリペプチドまたは配列である。アジュバントという用語は、ワクチンに関連して周知の意味に従って用いられる。具体的には、アジュバントは、それ自体が与えられるとき、免疫系に対し、あるとしても少しの直接的な作用しか有さず、ワクチンの効果を変更modifiesし、好ましくは強化する免疫剤である。本発明に従うと、アジュバントは、特定の抗原と併用して用いられると、抗原特異的免疫応答を促進し、延長させ、または強化することが可能な任意の物質として定義される。好適なアジュバントは、たとえば、アルミニウム塩たとえば、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウムなどなどの無機アジュバント、スクワランまたは油系アジュバントなどの有機アジュバント、およびビロソームとすることができる。本実施形態は、本発明に従って生成される粒子が、核酸配列と同様にEBVポリペプチド以外の他のポリペプチドを有効に包含し得るため、ワクチンである上に、被免疫化個人にさらなる化合物を送達させる送達手段として作用することに起因する。上記1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列、および/または、1以上のウイルスアジュバントの取込は、上記取込に好適な量で、タンパク質トランスフェクションまたは核酸トランスフェクションなどの上述の技術に従って細胞にこれらを付与することによって簡便に達成され得る。特定の必要量および、上記細胞内レベルを達成するための特定の技術は、当業者によって過度の重荷なしに実験により求められ得る。本発明のワクチンの好ましい実施形態では、ワクチンは、1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列、および/または、ワクチンアジュバントを追加的に含有し、上記1以上のウイルスポリペプチドまたは上記1以上のウイルス核酸配列は、それぞれEBVポリペプチドまたはEBV核酸配列でない。上に述べた定義は本実施形態にも適用され、上記粒子を生成するための方法は、上に同様に記載されている。好ましくは、ワクチンに含有される上記粒子は、粒子の一部として、1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列および/またはワクチンアジュバントを含有する。しかしながら、上記ワクチンは、上記粒子内に取込まれずに、ここに定義される粒子に混合される1以上のウイルスもしくは非ウイルスポリペプチド、1以上のウイルスもしくは非ウイルス核酸配列および/またはウイルスアジュバントを含有することも意図される。本発明の別の実施形態は、本発明に従う方法のステップaに従ってトランスフェクトすることにより得られる細胞に関する。当業者には上に概説したように理解されるように、上記1以上のEBVポリペプチドまたは上記BZLF1の、好ましくは誘導可能に調節された発現を可能にするベクターの安定的なトランスフェクションは、大規模な設定、および/または、標準化され、質に関して一定な製品が必要な設定において特に有用である。これは、好ましくは本発明のワクチンの一部である、本発明の方法に従って生成される粒子のように、医療用途を目的とし、具体的には、患者への投与を目的とするものには重要であると考えられる。好ましくは、細胞は、培養細胞、細胞株またはインビトロでの細胞である。別の実施形態では、本発明は、本発明に従うワクチンまたは本発明の方法に従って生成される粒子を含むキットに関する。キットは、本発明のワクチンまたは方法に従って生成される粒子などの1種類の項目のみを含有してもよい。キットは、発明に従うワクチンを構成するさまざまな成分も含んでよい。好ましい実施形態では、ワクチンを構成する粒子および医薬上許容されるキャリアが、別々の成分として本発明に従うキットに含有される。別の好ましい実施形態では、本発明の方法に従って得られる細胞および複製相を誘導するのに必要な化合物が、別々の成分として本発明に従うキットに含有される。したがって、キットのさまざまな成分は、1以上のバイアルなどの1以上の容器中にパッケージ化されてもよい。バイアルは、成分に加えて、保存剤または保存用緩衝液、維持および保存用培地、たとえば、とりわけ、細胞培地、DMEM、MEM、HBSS、PBS、HEPES、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、ペニシリン-ストレプトマイシン溶液、ゲンタマイシンを含有してもよい。有利には、キットはさらに、当業者が、たとえば、本発明のさまざまな実施形態を簡便に作業できるように、成分の使用の説明書を含む。いずれの成分も実験的な場で使用されてよい。たとえば、粒子自体またはワクチンを動物および人の研究の免疫応答を研究するのに用いてもよい。さらに、本発明は、EBV抗原に特異的なCD8T細胞を生成するための、本発明に従うワクチンまたは、本発明の方法により得られる粒子の使用に関する。本発明に従う使用は、たとえば、以下に記載する方法に従って実施されてもよい。追加的に、本発明は、EBV抗原に特異的なCD8T細胞を含有する製剤を生成するための方法であって、a本発明に従うワクチンまたは本発明の方法により得られる粒子とともに、B細胞を、EBV抗原を提示するB細胞を含有する製剤を生成するのに十分な時間インキュベートするステップと、bステップaで得られた上記B細胞をT細胞を含有する製剤と混合するステップと、cステップbで得られた上記混合物をインキュベートして、EBV抗原に特異的なCD8T細胞を含む製剤を生成するステップとを含む、方法に関する。CD8T細胞という用語は、当該技術分野で周知である細胞毒性T細胞という用語と交換可能に用いられる。インキュベートという用語は、本実施形態に従うと、異なるものと接触させるプロセスを指す。本発明のワクチンまたは本発明の方法により得られる粒子とB細胞をインキュベートすることに関して、該インキュベートは、B細胞を生存可能に保ち、かつ上記ワクチンまたは粒子などの抗体に対して反応性に保つ条件下で、特定の時間行なわれる。B細胞による抗原提示に必要な時間は、実験により求めることができ、選ばれる実験設定に依存して異なり得る。好ましくは、インキュベーションは、各値について少なくとも2、4、6、8、16または少なくとも24時間維持される。さらに、少なくとも2日、少なくとも3日または少なくとも4日間のインキュベーション時間も意図される。ステップbにおいてB細胞と混合されるT細胞の調製は、無感作T細胞および/またはEBV特異的記憶T細胞および/またはEBV特異的エフェクターT細胞を含む。本発明の方法のインキュベーションステップcは、EBV特異的CD8T細胞の生成を可能にする時間でなければならない。CD8T細胞の発育に必要な上記の時間は実験により求めることができ、選ばれる実験設定に依存して異なり得る。好ましくは、インキュベーションは、各値について少なくとも2、4、6、8、16または少なくとも24時間維持される。さらに、少なくとも2日、少なくとも3日または少なくとも4日間のインキュベーション時間が意図される。方法または使用は、インビボ、エクスビボまたはインビトロな方法または使用であり得る。発明の本実施形態は、当該技術分野の定説に反してたとえば、Kelleretal、2009年、WO2009/068615号、B細胞が交差提示およびクロスプライミング可能であるという驚くべき知見による。具体的には、クロスプライミングは、免疫細胞による取込後の抗原をプロセシングして、MHCクラスIおよびMHCクラスII結合提示するプロセスを表わす。上記プロセスは、たとえば、樹状細胞およびマクロファージに制限されると今まで考えられてきた。MHCクラスII結合抗原提示がCD4T細胞の生成を生じる一方で、MHCクラスI結合抗原提示は、CD8T細胞、すなわち、抗原特異的Tキラー細胞の生成を生じる。B細胞は、その主な機能が抗体の生成であり、クロスプライミングは不可能であると考えられている。本発明の発明者らは、驚くべきことに、ここに記載されるような粒子をマウスに投与すると、EBV特異的T細胞の存在が脾臓細胞中に示され得ることを示すことができたたとえば、実施例4、図5、実施例8、図11Cを参照。実施例により本発明を説明する。293-Vll細胞は、誘導の際、ウイルスDNAは欠如するが、さまざまなEBVタンパク質を含有するVLPを放出する。本発明者らは最近、EBV由来ベクターを組換えウイルス粒子内にキャプシド形成するための2つのヘルパー細胞株の構築を記載したDelecluseetal、1999年、Hettichetal、2006年。これらの細胞株は、ウイルスのパッケージングシグナルである末端反復TRが欠如するが、代わりに、gfpの遺伝子を含有するEBVヘルパーゲノムを持つ。結果的に、これらのヘルパーゲノムは、ウイルス粒子内にキャプシド形成はできないが、好適なウイルスベクターのパッケージングならびに、組換えおよび感染性EBV粒子の組織化および放出に必要なタンパク質をすべてイントランスintransで送達する。第一世代細胞株であるTR-2は、一次ヒトB細胞の完全な形質転換能を保持する、それ以外ではインタクトなEBVゲノムを持っていたDelecluseetal、1999年。ヘルパーゲノムの稀な非正統的キャプシド形成および、ウイルスベクターとヘルパーゲノムとの間の偶発的な組換えの結果、形質転換能を有する組換えウイルス粒子が放出されてしまうことに対処するために、本発明者らは、B細胞形質転換に不可欠なウイルス遺伝子のほとんどが欠如しているEVBヘルパーゲノムにより、第二世代パッケージング細胞株である293-Vllを後に設計した図1Hettichetal、2006年。驚くべきことに、これらのヘルパー細胞株から放出される組換えウイルス粒子は、野生型EBVの特性を維持しており、正常および悪性Bリンパ球の両方についてB細胞指向性および伝達能を提示する。おそらくヘルパーゲノムからのその過剰発現により、これらの粒子はGFPタンパク質も含有しており、標的細胞とのそれらの相互作用が容易にモニターできる。興味深いことに、本発明者らは、BZLF1発現プラスミドであるp509による溶菌サイクルの誘導の際HammerschmidtおよびSugden、1988年、パッキング可能なウイルスベクターが同時トランスフェクトされていないときでさえ、293-VII細胞は大量のGFP陽性粒子を上澄み内に放出することを観察した。多くの細胞型および永久細胞株が、エキソソームと呼ばれる微小胞を恒常的に放出し、多くのウイルスが、それ自体の組織化および放出のためにエキソソーム生合成を活用することからCalistrietal、2009年、Morietal、2008年、PelchenMatthewsetal、2004年、産生サイクルの誘導の際に293-VII細胞から放出される粒子は、ウイルスタンパク質を含有するエキソソーム様粒子ではないかが問われた。したがって、本発明者らは、これらの粒子の組成および特性をより詳細に分析した。まず、本発明者らは、VII細胞からのVLPがウイルスDNAを含有していないかどうかをPCRによって調べた。このために、本発明者らは、p509を有するVII細胞にEBVの溶菌相を導入し、陽性コントロールとして、TREBVゲノムを持ち、感染性ウイルス粒子を放出する2089細胞にも導入したDelecluseetal、1998年。3日後、これらの細胞株から上澄みを採取し、超遠心分離法により放出された粒子を沈殿させた。これらの粒子のPCR分析により、EBV-DNAは2089粒子では容易に検出され得るが、VII細胞からのVLPではそうでないことが明らかになった図2。293-VII-VLPは、EBV様B細胞指向性を有するVLP内に取込まれていることが分かったタンパク質の1つは、CD21との相互作用によってビリオンのヒトBリンパ球への結合を媒介する主要なウイルス外膜タンパク質である、gp350/220であった。したがって、本発明者らは、VLPが野生型EBVと同様のB細胞指向性を有しているかを解明したかった。そのために、本発明者らは、新たに単離したPBMCを、濃縮したVIIVLPと一晩インキュベートし、VLPの結合をFACSによって分析した。これらの実験のために、本発明者らは、VIIヘルパーゲノムから発現された高感度GFPもVLP内に取込まれていることを利用した。図3aで証明されるように、VLPの結合は、CD21細胞のみがGFP陽性になることから判断されるように、CD21細胞、最も確実にはB細胞に制限されている。対照的に、VLPのCD21陰性細胞への結合は観察できなかった。VLPのB細胞との相互作用をより詳細に調べるために、本発明者らは、VLPとインキュベートされたPBMCで共焦点顕微鏡法を行ったところ、VLPに存在するgp350およびCD21の細胞表面上での共存が明らかになり、これらの2つの分子の率直な相互作用が示された図3b。最近、293/TR-に由来するVLPが、ヒトPBMCによる貪食の際に、EBV特異性CD4T細胞を効率的に再活性化reactiveできることが記載されAdhikaryetal、2008年、このことがVll-VLPについてもあてはまるかどうかを求める試みがなされた。この問題に対処するために、本発明者らは、健常なドナーからの照射した一次PBMCにVlI-VLPを添加し、次に、EBV構造タンパク質BLLF1およびBNRF1に特異的な自己CD4T細胞クローンまたは自己PBMCのいずれかと共培養した。これらの実験により、VlI-VLP添加PBMCは、IFN-γELISAアッセイで測定すると、特異的CD4T細胞クローンおよび自己バルクT細胞を効率的に再活性化させることが証明された。VlI-VLPは、無感作宿主にEBV特異的中和抗体を誘導する前の章からの結果により、VLPのEBV特異的復活recall免疫応答を刺激するポテンシャルが証明された。したがって、次の一連の実験では、本発明者らは、VLPが、インビボで無感作宿主にEBV特異的免疫応答も誘導できるかどうかについて評価した。これは、予防ワクチンにとっても当然前提条件である。その目的で、本発明者らは、BALB/cマウスに10μgのVLPn=4を14日の期間内に2回腹腔内ワクチン接種し、コントロールマウスn=2を293の上澄みから単離した同量のエキソソームで免疫化した。2度目の免疫化後4週間目に、血清を採取し、EBV特異的抗体が存在するかどうかを分析し、脾細胞をEBV特異性があるか試験した。このために、本発明者らは、さまざまなEBVタンパク質の発現プラスミドを一過的にトランスフェクトしたHEK293細胞からの一連のライセートで、96ウェルクラスタープレートをコーティングした。図4に示されるように、293エキソソームで免疫化されたマウスでなく、VII-VLPで免疫化されたマウスからの血清により、強い免疫反応性が明らかになったため、EBV粒子の成分として最近同定されたさまざまなEBVタンパク質に対して特異的な抗体の誘導が明らかになったJohannsenetal、2004年。全ての抗体は、1:200の希釈度図4および1:1.000の希釈度図示せずで、VLP免疫化マウスからの血清中で明確に検出可能であった。興味深いことに、本発明者らは、前述のように、VLPを放出するVII細胞中に高レベルで存在し、かつ、VIIVLP内に取込まれている転写因子BZLF-1に対する抗体も検出した。対照的に、293エキソソームで免疫化されたマウスでは、検出可能なレベルのEBV特異的抗体は一切明らかにならなかった。コントロールとして、本発明者らは、CMVの主要な外皮タンパク質pp65およびEBVトランスアクチベータEBNA2をコードする発現プラスミドをトランスフェクトした293細胞からのライセートに対する血清の反応性を測定した。このタンパク質は、VIIヘルパーゲノムから欠損されたオープンリーディングフレームBYRF1から翻訳されている図1を参照。本発明者らは、これらの2つのタンパク質に対する反応性を一切検出することができず、これらのアッセイの特異性が示された。興味深いことに、初めての免疫化後7日目に、VLP注入マウスで大きな抗体力価が既に検出可能であり、VII-VLPの高い免疫原性が示されたデータは図示せず。EBV特異的抗体が中和抗体であるかどうかを試験するために、本発明者らは、それらがどの程度EBVによる一次B細胞の感染を阻害するかを定量化した。このために、本発明者らは、感染細胞で発現されたgfp遺伝子を持つ組換えEBV2089を利用したDelecluseetal、1998年。新たなアデノイドから単離した一次B細胞をEBV-2089に感染させ、0.1MOIでマウス血清と30分間プレインキュベートし、感染細胞の数をFACS分析によって48時間後に定量化した。図4に示すように、VLPに感染したマウスからの血清は、EBVによる一次ヒトB細胞の感染を阻害した。見られるように、293で免疫化したマウスからの血清も、おそらく293由来EBV-2089を認識する293特異的抗体のために、弱い阻害効果を有する。VII-VLPは、EBV特異的細胞性免疫応答を誘導する次に、本発明者らは、無感作マウスのVLPによる免疫化が、ウイルスおよびEBV感染細胞の免疫監視に不可欠であることが知られているHislopetal、2007年、EBV特異的細胞性免疫応答も誘導するかどうかを問うた。したがって、本発明者らは、VLP免疫化マウスの脾臓を単離し、単一細胞浮遊液を生成した。EBV特異的抗体の検出にも用いられたEBVタンパク質のいずれかの発現プラスミドを一過的にトランスフェクトした293細胞からのライセートと、2×105脾細胞を一晩インキュベートして、貪食、タンパク質分解およびVLP由来タンパク質の提示を可能にした。T細胞の活性化は、インターフェロンγElispotによって24時間後に測定した。第3世代パッケージング細胞株の導入TR-2および293-Vllは、潜伏サイクルから溶菌サイクルへの切換えを開始するのに十分である、BZLF1をコードする発現プラスミドの一過性トランスフェクションによってEBVの産生ライフサイクルが誘導される、2つのパッケージング細胞株である。しかしながら、臨床グレードのVLPの大規模産生は、永続的に放出する細胞株に依存する。これらの制限を克服し、VLPの、標準化されたより一定の産生への最初のステップに近づくために、本発明者らは、VIIヘルパーゲノムに加えて、誘導可能なBZLF1および、追加的に、BZLF1と協働して上皮細胞に溶菌サイクルを誘導する別のウイルス最初期タンパク質であるBRLF1Zalanietal、1996年をコードする第2のプラスミドを安定して持つ、iVllと呼ばれる新しいパッケージング細胞株を設計した。ドキシサイクリンの存在下で培養すると、iVll細胞は、溶菌サイクルを維持し、細胞表現型における検出可能な変化は一切なしに、VLPを恒常的に放出する。EBV特異的T細胞の再活性化293-Vll細胞から得られたVLPは、ヒトB細胞によって貪食され、EBV特異的T細胞を再活性化させるポテンシャルを有するかどうかを定義するために、ミニEBVで形質転換されたリンパ芽球様B細胞株LCLKempkesetal、1995年を293-Vll細胞からのVLPとインキュベートした。次に、添加されたLCLを、ミニEBVKempkesetal、1995年ではコードされないEBV外皮タンパク質であるBNRF1に特異的な自己CD4T細胞クローンと共培養した。実験により、VLP添加B細胞は、GM-CSFELISAアッセイによって測定すると、CD4T細胞クローンを効率的に再活性化することが証明された図8A。この実験のセットにより、293-VII細胞は、ヒトB細胞と特異的に相互作用し、かつヒトB細胞によって貪食され、さらに、ヒトB細胞は、強力な抗原提示細胞であり、かつEBV特異的CD4T細胞の刺激剤であることが分かり、このことは、Adhtkaryetal、2008年の知見を裏付けた。VLPSは、血清陽性宿主からのCD8T細胞を再活性化するワクチンの効能は、CD4およびCD8T細胞の両方に頼っている、持続性の免疫記憶の生成に依存する。293-VII細胞のVLPが、インビボでEBV感染細胞の監視に必須の細胞集団である、EBV特異的CD8T細胞を活性化できるかどうか求める試みがなされた。VLPのCD8記憶T細胞を再活性化させるreactive能力を試験するために、PBMCをまず、293-Vll細胞からのVLPまたは293細胞からのエキソソームと一晩インキュベートして、次に、EBV特異的CD8T細胞クローンの標的として用いた。IFN-γELISAにより、VLPとプレインキュベートされたPBMCとインキュベートされたT細胞の、弱いが明確な活性化が明らかになった図8B。次の一連の実験で、EBV血清陽性ドナーからのPBMCを、293-Vll細胞からのVLPとプレインキュベートされた、照射した自己PBMCにより刺激した。28日後、かつ3回の刺激の後、詳細なフローサイトメトリ分析により、293-Vll細胞からのVLPを添加したPBMCは、親HEK293細胞または未処理PBMCからのエキソソームを添加したPBMCとは対照的に、自己CD4T細胞の増殖を誘導することが明らかになった図10A。VLPもEBV特異的CD8T細胞を再活性化させたかどうかを求めるために、ドナーPBMCでのそれらの初めの頻度を測定し、感染宿主において強いCD8T細胞免疫応答を惹起する既知のHLAクラスl制限EBVエピトープの特異的な認識のための、インビトロのVLP拡大CD8T細胞集団と比較した。HLAB03/B08またはA02制限性である、潜在性タンパク質LMP2のペプチドエプトープCLGならびに、初期溶菌性タンパク質BZLF1、BMLF1およびBRLF1それぞれのペプチドエピトープEPL/RAK、GLCおよびYVLが選ばれた。HLA/ペプチド五量体での染色により、主に初期溶菌性エピトープを認識する初めのドナーPBMCでの少ないが検出可能なCD8T細胞のフラクションが明らかになった図10B。エピトープ特異的CD8T細胞のフラクションは、3回のVLP刺激で約0.15から0.25、1.1、2.4へと拡大し図10B、エピトープ特異的CD8T細胞の絶対数は、およそ10倍まで増加した図10C。この知見は、最近の発表と矛盾している。なぜなら、B細胞は、樹状細胞またはマクロファージなどのプロフェッショナルな抗原提示細胞と対照的にKelleretal、2009年、ウイルス粒子またはVLPを効率的にプロセシングして、HLAクラスl結合交差提示しなかったためである。したがって、PBMC中の単球またはマクロファージは、VLP由来ペプチドをCD8T細胞に提示して活性化させることが予想された。このような論議に対応するために、CD19およびCD19-細胞をPBMCから精製して、分画した単核細胞を293-VII細胞からのVLPまたはHEK293細胞からのエキソソームとインキュベートした。VLP添加PBMCでの3回目の刺激直後のT細胞の活性化をCD19およびCD19-PBMCによるIFN-γElispotアッセイで定量化した。結果により、CD19B細胞のみがVLP由来ウイルス抗原の強力なプレゼンターであることが明示された図9。CD19-PBMCを抗原提示細胞として用いた場合、ほとんど全くT細胞は同定されず図9、B細胞のみが、HLAクラスI制限CD8T細胞を含むウイルスエピトープ特異的T細胞を活性化させたことが示唆された。VLPは、無感作Balb/cマウスにEBV特異的な高力価中和抗体および細胞性免疫応答を惹起するこれは、更なるデータ図11を参照を含む、実施例3図4も参照の繰返しである。方法論はバリエーションを含むため、完全性のために再説明する。本発明者らは、BALB/cマウス4匹の動物を10μgのVLPで14日の期間内に2回免疫化し、コントロールマウス2匹の動物を同量のHEK293細胞からのエキソソームで免疫化した。2度目の免疫化後4週目に、血清を、ELISAおよび、図11Aに示すように、単一のEBVタンパク質の発現プラスミドを一過的にトランスフェクトした抗原としてのHEK293細胞からのタンパク質ライセートにより、EBV特異的抗体の存在があるかどうか分析した。HEK293由来タンパク質に対して産生された抗体により引起こされるバックグラウンド信号を回避するために、血清を、細胞培養プレートにコーティングしたHEK293ライセートと2時間プレインキュベートした。図示するように、HEK293細胞からのエキソソームで免疫化されたマウスではなく、VLP免疫化マウスからの血清により、EBVのビリオンの成分である、選択されたウイルスタンパク質に対する強い免疫反応性が明らかになった。全ての抗体は、1~200の希釈度でVLP免疫化マウスからの血清中で明確に検出可能であった図11A。VLP免疫化マウスでは、BZLF1遺伝子によりコードされる転写因子Ztaに対する抗体も高レベルで発生した。コントロールとして、CMV外皮タンパク質pp65およびEBVトランスアクチベータEBNA2をコードする発現プラスミドをトランスフェクトしたHEK293細胞からのライセートに対する血清の反応性を測定した。EBNA2は、293-VII細胞中のEBVヘルパーゲノムにおいて欠損されたBYRF1遺伝子から翻訳される図1。予期されたように、VLP免疫化マウスでのこれらの2つのタンパク質に対する体液性応答は一切検出されず、これらのアッセイの特異性が示された。VLP免疫化動物からの血清が、EBVによる細胞感染を阻害できるEBV特異的中和抗体を含有するかどうかを知るために、感染の定量的測度としてB細胞にGFP蛍光を与える、2089EBVをコードする組換えgfpDelecluseetal、1998年を用いた。2089EBVのウイルス保存液をマウス血清と30分間プレインキュベートし、次に、0.1と計算された感染多重度で、一次ヒトB細胞を感染させるのに用いた。48時間後、GFP陽性感染細胞をフローサイトメトリによって定量化した。図11Bに図示するように、VLP免疫化マウスからの血清はEBVによる感染を障害したが、HEK293細胞からのエキソソームで免疫化したマウスからの血清も、おそらく293由来タンパク質に対する抗体の誘導のため、より弱いが阻害効果を有していた。2089EBVのウイルス保存液は、HEK293産生細胞から得られDelecluseetal、1998年、このことは、HEK293細胞からのエキソソームで免疫化したマウスからの血清も、2089EBV粒子を認識し、その感染力を損なうことができたことを示唆している。次に、マウスの免疫化が、EBVの免疫監視に不可欠なEBV特異的細胞免疫応答の誘導につながるかどうかが問われた。上記VLP免疫化マウスおよびコントロールマウスの脾臓から単一細胞を調製した。個々のマウスからの致死的に照射した脾細胞を、図11Cで図示するウイルス遺伝子をコードし、ビリオンに存在する単一の発現プラスミドを一過的にトランスフェクトしたHEK293細胞から得られたライセートとインキュベートした。外因的に加えたライセートの吸着、タンパク質分解および提示を可能にするために、脾細胞を5時間インキュベートし、続いて洗浄して遊離ライセートを除去した。細胞の抗原提示能を、指標として加えた5×105非放射脾細胞で評価した。指標細胞の活性化を24時間後にIFN-γElispotアッセイで求めた。図11Cに図示するように、VLPで免疫化したマウスからの脾細胞は、明らかに再活性化されたが、HEK293細胞からのエキソソームで免疫化したコントロールマウスからの脾細胞ではそうでなかった。まとめると、この実験により、293-Vll細胞からのVLPは、無感作マウスにEBV特異的細胞性免疫応答を誘導できることが示された。[文献]