"a哺乳動物由来の、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を提供するステップと、b前記試料を、高温状態で、少なくとも1つの試験抗原と共にインキュベーションするステップと、c前記試料における試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を決定するステップと、を含み、前記高温状態でのインキュベーションが、摂氏37°Cの通常の熱条件下でのインキュベーションによって得られる参照レベルと比較した場合に、試験抗原に特異的な免疫応答の増大を生じさせる、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を生じさせる方法。前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答が、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することによって決定される、請求項1に記載の方法。前記免疫シグナル伝達分子がサイトカインまたはケモカインである、請求項2に記載の方法。前記免疫シグナル伝達分子のレベルが、mRNAおよび/またはタンパク質のレベルを測定することによって決定される、請求項2に記載の方法。前記免疫シグナル伝達分子のレベルの前記決定を、qPCR、RT-PCR、qRT-PCR、ELISA、ELISPOT、Luminex、Multiplex、免疫ブロッティング、免疫クロマトグラフィー側方流動アッセイ、酵素増幅免疫アッセイ技法、RAST試験、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光および様々な免疫学的ドライスティックアッセイからなる群から選択される方法を使用して行う、請求項4に記載の方法。前記免疫シグナル伝達分子が、IP-10、INF-γ、IL-2、MIG、TNF-α、MIP-1a、MCP-1、MCP-2、MCP-3、IL-1b、IL-RA、sIL-2R、およびIL-12からなる群から選択される、請求項2から5のいずれかに記載の方法。前記免疫シグナル伝達分子がIP-10である、請求項6に記載の方法。前記免疫シグナル伝達分子がIFN-γである、請求項6に記載の方法。サイトカインIL-7、IL-15、IL-21;IL-10、IL-4、IL-5と結合する中和抗体、抗CD25抗体でコーティングしたビーズ、抗CD39抗体でコーティングしたビーズ、IL-10、JAK1またはTYK2をコードしている遺伝物質に対するセンスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、CpG含有オリゴヌクレオチド、TLR変調剤として作用するオリゴヌクレオチド、およびTLR変調剤からなる群から選択される少なくとも1つの免疫変調剤を、ステップbで加える、請求項1に記載の方法。前記少なくとも1つの試験抗原が、ESAT-6、CFP-10、TB7.7、ならびに他のRD-1およびRD-11抗原を含む群から選択される、請求項1に記載の方法。前記試料が、全血、または血液、胸膜液、気管支液、組織生検、腹水、および/もしくは脳脊髄液に由来する細胞である、請求項1に記載の方法。前記試料が、末梢単核細胞、T細胞、CD4T細胞、CD8T細胞、ガンマデルタT細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞およびNK細胞からなる群から選択される細胞を含む、請求項1に記載の方法。前記高温状態が、摂氏38.5~41.0°Cの温度でのインキュベーションである、請求項1に記載の方法。前記高温状態が、摂氏39~40°Cの温度でのインキュベーションである、請求項1に記載の方法。炭化水素および/またはグリカンの形態の糖をステップbで加える、請求項1に記載の方法。前記方法が前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の改善されたシグナル対ノイズ比を生じる、請求項1に記載の方法。前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を使用して、前記試験抗原を発現することができる微生物によって引き起こされる感染症を診断する、請求項1から16のいずれかに記載の方法。前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を使用してワクチン接種の応答を検出する、請求項1から17のいずれかに記載の方法。前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を使用して、癌または新生物または悪性腫瘍を検出する、請求項1から18のいずれかに記載の方法。前記微生物が、マイコバクテリア属Mycobacteria、リーシュマニア属Leishmania、クラミジア属Chlamydiaおよびサイトメガロウイルスからなる群から選択される、請求項17に記載の方法。前記マイコバクテリア属が結核菌M.tuberculosis複合生物結核菌M.tuberculosis、ウシ結核菌M.bovisおよびエムアフリカヌムM.africanum、および相違領域regionofdifferenceRD1が欠失していないマイコバクテリア属カンサシ菌M.kansasii、エムツルガイM.szulgai、エムマリヌムM.marinum、エムフラベセンスM.flavescens、エムガストリイMgastriiまたはヒトに病原性のあるマイコバクテリア属トリ結核菌M.avium、らい菌M.lepraもしくは他の非結核性マイコバクテリアに属している、請求項20に記載の方法。前記マイコバクテリア属が結核菌M.tuberculosisである、請求項21に記載の方法。残念ながら、これらの試験の感度は、免疫不全の個体HIVに感染した個体または免疫抑制治療を受けている患者などでは損なわれる。したがって、そうしなければ抗原に対して不十分な免疫応答を有するこれらの患者診断を可能にする、より感度の高い試験を開発することが望ましい。このことは、偽陰性試験結果および不確定試験結果の数を低下させ、したがって免疫診断試験の感度および対費用効果を改善させるであろう。本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を増大させる方法を提供する。この方法は、より良好な、疾患に特異的な抗原認識を可能にする。本発明の一態様は、生体試料と少なくとも1つの抗原とのinvitroインキュベーション中における、上昇した温度の使用に関する。上昇した温度でのインキュベーションは、37°Cでのインキュベーションと比較して、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の増加をもたらす。したがって、本発明は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む生体試料を、少なくとも1つの試験抗原と共に、38~42°Cの温度などの高温状態でインキュベーションするステップを含む方法を提供する。高温状態でのインキュベーションは、37°Cの通常の熱条件下でのインキュベーションによって得られる参照レベルと比較した場合に、試験抗原に特異的な免疫応答を増大させる。また、本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を改善させるために、IL-7および/または抗IL-10などの少なくとも1つの免疫変調剤を加えるステップをさらに含む方法にも関する。本発明の一態様は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を開始させる対象の性能または能力を決定するための、最適化された方法に関する。この方法は、抗原性刺激に応答した免疫系の細胞からの1つまたは複数の免疫シグナル伝達分子の産生を測定することに基づく。免疫シグナル伝達分子は、免疫シグナル伝達分子に特異的な抗体などのリガンドを使用して、または免疫シグナル伝達分子をコードしている遺伝子の発現レベルを決定することによって検出し得る。本発明の別の態様は、免疫原性、すなわち細胞媒介性免疫応答を生じさせる抗原の潜在性または能力を決定するための、最適化された方法に関する。細胞性免疫応答を監視するためのこの方法は、ワクチンの合理的な開発のための1つの必須条件である。したがって、本発明は、対象における試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の応答性を決定する手段を提供し、ひいては、感染性疾患、病的状態、免疫応答性のレベルの推定、および内在性または外因性の抗原に対するT細胞応答性のレベルを診断する手段を提供する。本発明によって提供される方法は、偽陰性および不確定試験結果の数を低下させ、したがって、通常のインキュベーション温度、すなわち37°Cで行われた試験と比較して感度を増加させる。したがって、この方法は試験および診断を改善させる。本発明によれば、通常のインキュベーション条件下で低いまたは弱い免疫応答を有する患者/ドナーは、インキュベーション温度を上昇することによって、特にIL-7および/または抗IL-10などの少なくとも1つの免疫変調剤の存在下で、強く応答するようにさせることができる。これにより、本発明は、そうでなければ抗原に対して不十分な免疫応答を有する患者の免疫学的診断を可能にし、また、偽陰性試験結果の数も低下させる。したがって、本発明は、重要なことには免疫不全の個体においても、免疫診断試験の感度および対費用効果を改善させる。さらに、これはワクチン開発ならびにたとえば感染性因子および癌の監視において役割を果たし得る。本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を増大させるための新規方法に関する。サイトカインおよびケモカインの応答が、伝統的な摂氏37°Cでのインキュベーションと比較して高温インキュベーションで劇的に増加したことが、初めて示された。また、本発明は、高温インキュベーションでの増大した免疫認識が、疾患またはワクチンに特異的な抗原に対する免疫応答に適用される現象であることも、初めて示す。また、本発明は、高温インキュベーションでの増大した免疫認識を、どのように診断試験またはワクチン応答の評価に適用できるかも示す。さらに、生存サイトカインIL-7を、抗炎症性サイトカインIL-10を遮断する抗体と合わせて加える場合、高温および通常インキュベーション温度のどちらでも免疫応答が顕著に増大されることも、初めて実証されている。本発明の一態様は、生体試料と少なくとも1つの抗原とのinvitroインキュベーション中における、上昇した温度の使用に関する。上昇した温度でのインキュベーションは、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の増加をもたらす。また、本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を改善させるための、IL-7および/または抗IL-10などの免疫変調剤の使用にも関する。したがって、本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を増大させる手段を提供し、ひいては、試験抗原に特異的な細胞媒介性応答の存在および/またはレベルを決定することが所望される方法および試験を改善させる手段を提供する。本発明の別の態様は、試験抗原の細胞媒介性免疫応答を開始させる対象の潜在性または能力を測定する方法である。試験抗原に特異的な免疫応答は、抗原刺激に応答した、免疫系の細胞による免疫シグナル伝達分子の産生を測定することによって決定することができる。免疫シグナル伝達分子は、免疫シグナル伝達分子に特異的な抗体などのリガンドを使用して、および/または免疫シグナル伝達分子をコードしている遺伝子の発現レベルを測定することによって検出し得る。したがって、本発明は、感染性疾患を診断する、および/またはワクチン中で使用される抗原に対する免疫反応性の存在を診断してワクチンの有効性の監視を可能にする手段を提供する。したがって、本発明は、免疫アッセイおよび他の免疫学的ツールを改善することができる単純な方法を提供する。本発明の一態様は、試験抗原に特異的な細胞媒介性応答を増大させる方法に関する。この方法は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を、少なくとも1つの抗原と共に、高温状態でインキュベーションすることに基づく。本発明の別の態様は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を、少なくとも1つの抗原と共に、高温状態で、IL-7の存在下でインキュベーションすることに基づく、試験抗原に特異的な細胞媒介性応答を増大させる方法に関する。本発明の第3の態様は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を、少なくとも1つの抗原と共に、高温状態で、抗IL-10の存在下でインキュベーションすることに基づく、試験抗原に特異的な細胞媒介性応答を増大させる方法に関する。本発明のさらなる態様は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を、少なくとも1つの抗原と共に、高温状態で、IL-7および抗IL-10の存在下でインキュベーションすることに基づく、試験抗原に特異的な細胞媒介性応答を増大させる方法に関する。試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答は、抗原性刺激に応答したIP-10および/またはIFN-γなどの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することによって決定することができる。IP-10およびIFN-γのレベルは、IP-10およびIFN-γに特異的な抗体などのリガンドを使用して、またはIP-10およびIFN-γをコードしている遺伝子の発現レベルを測定することによって検出し得る。本発明者らは、結核菌に特異的およびBCGワクチンに特異的な刺激ならびに続くIP-10およびIFN-γのレベルの決定に基づく方法を使用して、試験抗原に特異的な細胞媒介性応答の増大の原理を実証した。この方法で結核菌に感染した人を同定することができる。また、この方法でワクチン接種が成功した人を同定することもできる。本発明者らは、高温状態でのインキュベーションが、抗原およびマイトジェンの刺激に対するT細胞および単球からの免疫シグナル伝達分子の応答IP-10およびIFN-γを増加させることができることを示している実施例2~4。この効果は、抗炎症性サイトカインIL-10に対する中和抗体抗IL-10を用いてまたは用いずに、T細胞生存サイトカインIL-7を添加することよって、さらに増大させることができる。本発明者らは、抗IL-10およびIL-7の存在下における高温インキュベーションが、バイオマーカーの産生を相乗的に増加させることができることを示している実施例3~4。したがって、記載した方法は、摂氏37°Cでのインキュベーションを用いた伝統的な方法と比較して、より高いレベルまたはより高い規模の免疫シグナル伝達分子IP-10およびIFN-γをもたらす。本発明者らは、高温状態でのインキュベーションが、理論的には応答するべきである2人のBCGワクチン接種した非応答者を、IP-10およびIFN-γの両方による応答者へと変換したことを示している。また、これは、2人のTB患者からの不確定結果をそれぞれ陽性および陰性の結果へと変換した。したがって、この方法は偽陰性および不確定試験結果の数を低下させる。高温状態でのインキュベーションは、バックグラウンドのIP-10産生をわずかに増加させたが、IFN-γのバックグラウンド産生を低下させた実施例3~4および6。したがって、本発明の方法は、摂氏37°Cのインキュベーションを使用した古典的な方法に基づく試験と同等に特異的かつより感度が高く、また、低応答者、たとえば免疫不全の個体の試験および診断を改善させる。IFN-γは主にTリンパ球によって産生され、IP-10は主に単球などの抗原提示細胞によって産生されるが、本発明者らは、バイオマーカーレベルでリンパ球または単球の計数に対していかなる影響も示すことができなかったデータ示さず。本発明に記載されている方法は、一連の問題を解決する。細胞媒介性免疫を監視する現在利用可能な方法は、効果パラメータIFN-γを測定する。IFN-γは、最も高感度な検出方法の限界にさえ近い、非常に低いレベルで発現される結核試験の場合、QuantiFERON試験は0.35国際単位/ml17.5pg/ml、T-SPOT.TB試験は5スポット形成単位/フィールドの陽性試験カットオフレベルを有する。感度を増強させるためにカットオフを減少させると、最終的には試験の特異性が損なわれる。低い範囲のIFN-γレベルを有する人の繰返しQuantiFERON試験に基づく出版物は、この領域のIFN-γレベルがカットオフ付近で揺れる傾向にあることを見い出している。すなわち、細胞媒介性免疫を監視する伝統的な方法は、アッセイの制限、すなわち免疫シグナル伝達分子またはバイオマーカーの低濃度での再現性の不良によって、損なわれている。このことは、偽陽性および偽陰性の結果の潜在的な危険性を強調している。記載した方法は、応答、たとえばIFN-γおよびIP-10のレベルを増加させ、これにより、細胞媒介性の免疫アッセイ、たとえば結核試験の感度が増加され、これは、摂氏37°Cで行われる伝統的な試験と比較して偽陽性および偽陰性の結果の危険性を低下させる。さらに、通常のインキュベーション条件下で低い免疫応答を有する患者/ドナーは、インキュベーション温度を上昇することによって、特にIL-7および抗IL-10の存在下で、応答するようにさせることができる。これにより、本発明は、そうでなければ抗原に対して不十分な免疫応答を有する患者の診断を可能にするため、偽陰性試験結果または不確定結果を有する患者の数を低下させる。したがって、本発明は、重要なことには免疫不全の個体においても、免疫診断試験の感度および対費用効果を改善させる。さらに、これは感染性因子および癌のどちらのワクチン開発においても役割を果たし得る。方法本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を増大させる方法を提供する。本発明の一態様は、生体試料と少なくとも1つの抗原とのinvitroインキュベーション中における、上昇した温度の使用に関する。上昇した温度でのインキュベーションは、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の増加をもたらす。したがって、本発明は、a哺乳動物由来の、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を提供するステップと、b前記試料を、高温状態で、少なくとも1つの試験抗原と共にインキュベーションするステップと、c前記試料における試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を決定するステップとを含み、前記高温状態でのインキュベーションが、37°Cの通常の熱条件下でのインキュベーションによって得られる参照レベルと比較した場合に、試験抗原に特異的な免疫応答の増大を生じさせる、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を生じさせる方法に関する。試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答とは、診断することを望む疾患または状態に特異的な抗原に対する応答として理解されたい。言い換えれば、細胞媒介性免疫応答の特異性は試験抗原の特異性から派生する。ワクチンの有効性の監視の場合、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答は、ワクチン中に含まれる抗原に対して生じさせる。試験抗原に特異的な細胞の免疫応答の例は、結核菌M.tuberculosisに感染した個体におけるESAT-6に対する応答である。好ましい実施形態では、試料は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む。特に好ましい実施形態では、試料は免疫適格細胞を含む。免疫適格細胞は、抗原に曝露された後に、細胞媒介性免疫応答などの免疫応答を生じることができる。免疫シグナル伝達分子試験抗原に特異的な免疫応答は、特異的な抗原刺激に応答した免疫系の細胞による免疫シグナル伝達分子の産生を測定することによって決定することができる。したがって、本発明の一態様は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することによって決定する方法である。したがって、本発明によれば、1、2、3、4、5、6、7または8つの免疫シグナル伝達分子のレベルを決定する。好ましくは、1つまたは2つまたは3つまたは4つの免疫シグナル伝達分子のレベルを決定する。最も好ましくは、1つまたは2つの免疫シグナル伝達分子のレベルを決定する。したがって、好ましい実施形態では、少なくとも1つ、少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つまたは少なくとも5つの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定する。最も好ましいのは、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することである。最も好ましいのは、1~2つの免疫シグナル伝達分子のレベルの測定、または1~3つの免疫シグナル伝達分子のレベルもしくは1~4つの免疫シグナル伝達分子のレベルである。最も好ましい実施形態では、1つまたは2つの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定する。本発明の一実施形態では、複数の免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することは、この方法を診断試験に適用した際に、偽陽性の数を低下させ、判別力を増加させ得るたとえば増加した感度および/または特異性。このことは、たとえば、この方法を、対象における試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を決定することができる試験として使用する場合に有用であり、ひいては、たとえば感染性疾患、癌を診断する、および/またはワクチンの有効性を監視するための手段を提供する。したがって、一実施形態では、この方法は、前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答が、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することによって決定されるステップをさらに含む。したがって、一実施形態では、この方法は、前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答が、サイトカインまたはケモカインの応答などの少なくとも1つのバイオマーカーのレベルを測定することによって決定されるステップをさらに含む。免疫シグナル伝達分子とは、特定の免疫系の細胞によって分泌される、および/または免疫系の細胞に対して効果を有する物質の大きなファミリーとして理解されたい。したがって、免疫シグナル伝達分子は免疫系の細胞などの細胞間の情報の伝達に関与している。好ましい本実施形態では、免疫シグナル伝達分子または少なくとも1つのシグナル伝達分子は、サイトカイン、ケモカイン、可溶性受容体および可溶性受容体拮抗剤の群から選択される。本発明の特に好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はサイトカインまたはケモカインである。本発明の最も好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はサイトカインである。サイトカインとは、細胞間でシグナルを局所的に運ぶ免疫系の特定の細胞によって分泌され、したがって他の細胞に対して効果を有する、いくつかの物質のうちの任意のものとして理解されたい。サイトカインはシグナル伝達分子として分類することができる。これらは、タンパク質、ペプチド、または糖タンパク質である。用語サイトカインには、身体全体にわたって多様な発生学的起源の細胞によって広く産生される、ポリペプチド調節因子の大きくかつ多様なファミリーが包含される。基本的に、用語サイトカインとは、それだけには限定されないが、インターロイキン、インターフェロンなどの免疫変調剤をいう。免疫シグナル伝達分子は、サイトカインINF-γ、IL-2、TNF-α、IL-1bおよびIL-12からなる群から選択される。本発明の別の最も好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はインターフェロンである。本発明の別の最も好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はIFN-γである。IFN-γインターフェロン-ガンマIFN-γとは、ウイルスおよび細菌の感染症に対する免疫応答に重要なサイトカインである。ヒトでは、IFN-γタンパク質はIFNG遺伝子によってコードされている。IFN-γは、免疫賦活性および免疫調節性の効果の両方を有する。IFN-γは、主にナチュラルキラーおよびナチュラルキラーT細胞によって自然免疫応答の一部として、ならびに、抗原に特異的な免疫が発生した後はCD4およびCD8細胞毒性Tリンパ球エフェクターT細胞によって、産生される。別の最も好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はケモカインである。ケモカインとは、小さなサイトカイン、または細胞によって分泌されるタンパク質のファミリーである。その名前は、付近の応答性細胞において定方向の走化性を誘導するその能力に由来しており、これらは走化性サイトカインである。これらのタンパク質は、その標的細胞の表面上に選択的に見つかる、ケモカイン受容体と呼ばれるGタンパク質結合膜貫通受容体と相互作用することによって、その生物学的効果を発揮する。ケモカインは、免疫系の発生、恒常性、および機能において基礎的な役割を果たし、中枢神経系の細胞および血管形成若しくは血管形成阻害angiostasisに関与する内皮細胞に対して効果を有する。ケモカインは、4個の保存的なシステイン残基のうちの最初の2個の配置に基づいて、2つの主要なサブファミリー、すなわちCXCおよびCCに分類される。2個のシステインは、CXCケモカイン中では単一のアミノ酸によって分離されており、CCケモカイン中では隣接している。CXCケモカインは、CXCモチーフに隣接し、かつN末端側にあるglu-leu-arg配列の存在または非存在に基づいて、ELRおよび非ELR型へとさらに亜分類される。ELR型は好中球で走化性である一方、非ELR型はリンパ球で走化性である。好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はCC-ケモカインからなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子は、CXC-ケモカインからなる群から選択される。さらに別の好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子は、IP-10、MIG、MCP-1、MCP-2、MCP-3からなる群から選択される。本発明に関連する他の免疫シグナル伝達分子は、IL-1受容体の拮抗剤であるIL-1RAおよび可溶性受容体であるsIL-2Rである。本発明の好ましい実施形態では、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子は、IP-10、INF-γ、MIG、IL-2、TNF-α、MIP-1a、MCP-1、MCP-2、MCP-3、IL-1b、IL-1RA、sIL-2R、CD40-リガンドおよびIL-12からなる群から選択される。本発明の別の好ましい実施形態では、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子は、IP-10、INF-γおよびIL-2からなる群から選択される。本発明の別の好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はIFN-γである。本発明の最も好ましい実施形態では、免疫シグナル伝達分子はIP-10である。また、免疫シグナル伝達分子のレベルの概念は、それだけには限定されないが、少なくとも2つのサイトカインの応答の乗算、除算および/または加算などの、濃度測定値の数学的な操作もカバーする。IP-10IFN-γ-誘導タンパク質10IP-10またはCXCL10は、ケモカインである。IP-10の遺伝子は、insituハイブリダイゼーションによって4q21にマッピングされている。IP-10の発現は、インターフェロンIFN、すなわちインターフェロンガンマIFN-γおよび炎症性刺激によって上方制御されており、これは多くのTh1型の炎症性疾患において様々な組織および細胞種中で発現されている。ヒト遺伝子配列は、GeneBank中で受託番号BC010954号gi15012099の下で見つけることができる。IP-10は、骨髄コロニー形成を阻害し、invivo抗腫瘍活性を有しており、ヒト単球およびT細胞の化学誘引物質であり、内皮細胞へのT細胞接着を促進する。IP-10は、invivo血管形成の強力な阻害剤である。IP-10は、炎症および腫瘍形成中の血管形成の調節に関与し得る。IP-10はRAS標的遺伝子でもあり、大多数の結腸直腸癌において過剰発現されている。IP-10が、IL8などの他のケモカインの相互作用表面に類似のIP-10のN-ループおよび40s-ループ領域によって形成される疎水性の裂け目を介して、CXCR3のN末端と相互作用することが、核磁気共鳴分光分析を使用して示されている。IP-10のN末端および30sループによって形成される疎水性の裂け目からなる追加の相互作用領域が同定されている。このことは、30sループに関与する機構およびベータ鎖2の立体配置がIP-10とCCR3との相互作用および拮抗機能を説明し得ることを示唆している。結核の場合、高レベルのIP-10は、TB患者および免疫再構築症候群を経験しているTB-HIV同時感染患者のリンパ節および肺結核性肉芽腫中、胸水中、および血清または血漿中に見つかっている。したがって、一実施形態では、この方法は、IP-10およびIFN-γの両方のレベルを測定することをさらに含む。したがって、本発明の一態様は、a哺乳動物由来の、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を提供するステップと、b前記試料を、高温状態で、少なくとも1つの試験抗原と共にインキュベーションするステップと、c前記試料中のIP10および/またはIFN-γのレベルを決定するステップとを含み、前記高温状態でのインキュベーションが、37°Cの通常の熱条件下でのインキュベーションによって得られる参照レベルと比較した場合に、試験抗原に特異的な免疫応答の増大を生じさせる、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を生じさせる方法に関する。さらに別の実施形態では、この方法は、IP-10および/またはIFN-γならびに少なくとも1つの他のシグナル伝達分子のレベルを測定することをさらに含む。シグナル伝達分子複数可のレベルの決定免疫シグナル伝達分子は、免疫シグナル伝達分子に特異的な抗体などのリガンドを使用して、または免疫シグナル伝達分子をコードしている遺伝子の発現レベルを測定することによって検出し得る。したがって、一実施形態では、この方法は、前記免疫シグナル伝達分子のレベルが、mRNAおよび/またはタンパク質のレベルを測定することによって決定されるステップをさらに含む。さらに別の実施形態では、免疫シグナル伝達分子の位置は、免疫蛍光および顕微鏡観察などの方法によってinsituで決定される。したがって、本発明の一態様は、a哺乳動物由来の、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を提供するステップと、b前記試料を、高温状態で、少なくとも1つの試験抗原と共にインキュベーションするステップと、c前記試料における試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を決定するステップとを含み、前記高温状態でのインキュベーションが、37°Cの通常の熱条件下でのインキュベーションによって得られる参照レベルと比較した場合に、試験抗原に特異的な免疫応答の増大を生じさせ、前記免疫シグナル伝達分子のレベルが、mRNAおよび/またはタンパク質のレベルを測定することによって決定される、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を生じさせる方法に関する。免疫シグナル伝達分子は、好ましくは、それだけには限定されないがIP-10および/またはIFN-γなどのサイトカインまたはケモカインである。免疫シグナル伝達分子の存在またはレベルは、分子自身のレベルで、または遺伝子が発現される程度によって決定し得る。IP-10および/またはIFN-γなどの免疫シグナル伝達分子のレベルは、当技術分野で知られている免疫学的方法などの慣用の分析方法によって測定する。免疫シグナル伝達分子の測定は、本明細書中の教示に従って、遺伝子、RNA、またはタンパク質のレベルでの他の免疫シグナル伝達分子の測定と組み合わせることができる。本発明中に記載の方法はどれもプラットフォーム非依存性であることを理解されたい。したがって、それだけには限定されないが、ELISA、ELISPOT、Luminex、Multiplex、免疫ブロッティング、免疫クロマトグラフィー側方流動アッセイ、酵素増幅免疫アッセイ技法、RAST試験、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光および様々な免疫学的ドライスティックアッセイimmunologicaldrystickassaysたとえば側方流動またはクロマトグラフィースティック試験などの任意の免疫学的方法を本発明に適用し得る。上述のように、免疫シグナル伝達分子の検出は、タンパク質または核酸のレベルで行い得る。その結果、前記免疫シグナル伝達分子の存在またはレベルへの言及には、直接的および間接的なデータが含まれる。たとえば、高レベルのIP-10mRNAは、IP-10のレベルの増加を示す間接的なデータである。さらに、DNA、RNAおよび/またはmRNAのレベルを測定するための任意の方法、たとえばPCR技法を、シグナル伝達分子のレベルの測定に使用し得ることを理解されたい。シグナル伝達分子のレベルをDNAまたはRNAのレベルで測定する方法は、それだけには限定されないが、定量的PCRq-PCR、リアルタイムPCRqRT-PCRおよび逆転写PCRRT-PCRなどである。したがって、本発明の一態様は、前記免疫シグナル伝達分子のレベルの前記決定を、qPCR、RT-PCR、qRT-PCR、ELISA、ELISPOT、Luminex、Multiplex、免疫ブロッティング、免疫クロマトグラフィー側方流動アッセイ、酵素増幅免疫アッセイ技法、RAST試験、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光および様々な免疫学的ドライスティックアッセイからなる群から選択される方法を使用して行う方法に関する。免疫シグナル伝達分子に対するリガンドは、これらの分子の検出および/または定量において特に有用である。免疫シグナル伝達分子に対する抗体が特に有用である。本明細書中で企図される方法のための技法は当技術分野で知られており、たとえば、サンドイッチアッセイ、xMAPMultiplex、Luminex、ELISAおよびELISpotが含まれる。抗体への言及には、抗体の部分、哺乳動物化たとえばヒト化抗体、組換えまたは合成抗体ならびにハイブリッドおよび単鎖抗体が含まれる。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体はどちらも、免疫シグナル伝達分子またはその抗原性断片を用いた免疫化によって入手可能であり、どちらの種類も免疫アッセイに利用可能である。どちらの種類の血清を入手する方法も当技術分野で周知である。ポリクローナル血清はより好ましくないが、適切な実験動物に有効量の免疫シグナル伝達分子またはその抗原性部分を注射し、動物から血清または血漿を採取し、既知の免疫吸着技法のうちの任意のものによって特異的な血清を単離することによって比較的容易に調製される。この方法によって産生される抗体は事実上任意の種類の免疫アッセイにおいて利用可能であるが、産物の潜在的な不均一性が理由で、一般により好まれない。大量に産生する能力および産物の均一性が理由で、免疫アッセイにおけるモノクローナル抗体の使用が特に好ましい。不死化細胞系と免疫原性調製物に対して感作させたリンパ球とを融合することによって誘導した、モノクローナル抗体を産生するためのハイブリドーマ細胞系の調製は、当業者に周知の技法によって行うことができる。また、検出は、シグナル伝達分子、たとえばIP-10に特異的な抗体を競合的蛍光偏光イムノアッセイCFIPAにおいて直接測定すること、またはインターフェロン-ガンマのホモ二量体化を二量体化誘導蛍光偏光DIFPによって検出することのどちらかによっても、得ることができる。どちらの場合でも、検出および定量は6pg/ml以下まで下がる。IP-10などの生物学的マーカーを決定するためのいくつかの技法が、当業者に知られている。免疫エフェクターの存在またはレベルは、ELISA、Luminex、ELISPOT、RT-PCRなどのmRNAに基づく技法、または細胞内フローサイトメトリーによって決定し得る。LuminexインターフェロンガンマIFN-γは、感染性疾患の免疫学、特にTBの免疫学においてTh1応答を測定するための判断基準である。Luminexによって決定されるIFN-γは、QuantiFERON試験のために開発された市販のELISAなどのより感度の高い方法と比較して感度が低いため、不良のマーカーである。xMAPまたはLuminexは、フローサイトメトリーを用いた溶液中の分析物の多重化multiplexingを可能にする。特許propriety技法を使用して、Luminexは、2つの蛍光色素の様々な比を組み合わせることによってxMAPミクロスフェアを内部で色分けする。それぞれのビーズ組は異なる捕捉抗体とコンジュゲートしている。R-フィコエリスリンで標識した検出抗体の使用により、相対蛍光強度を測定することによってミクロスフェア表面上で起こっている抗原-抗体反応の定量が可能となる。ELISA酵素結合免疫吸着アッセイとは、ELISA、酵素免疫アッセイまたはEIAとも呼ばれ、試料中の抗体または抗原の存在を検出するために、主に免疫学において使用される生化学的技法である。簡単に言えば、ELISAでは、未知の量の抗原を表面に固定し、その後、特異的抗体を、抗原と結合できるように表面上に洗い流す。この抗体を酵素と連結させ、最終ステップで、酵素が何らかの検出可能なシグナルへと変換することができる物質を加える。蛍光ELISAの場合、適切な波長の光を試料に照らした際、任意の抗原/抗体複合体が蛍光発光して、試料中の抗原の量を蛍光の規模によって推測できるようになる。少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルを決定するためにELISAを使用することは、実施例中にさらに記載されている。免疫クロマトグラフィー試験ICTICTたとえば側方流動スティックlateralflowstickの原理は、すべてIP-10などの免疫シグナル伝達分子に特異的な一次抗体Abおよび1~4つの二次Abを利用するinvitro免疫診断試験である。一次Abはコロイド金に付着しており、二次Abを固定した線で含有するレーンを有する試料パッド内に含浸されている。第1のステップでは、インキュベーションした試料を試料パッドの左側部分に加える。血清または血漿はレーン内で前方に流れ、存在するすべてのIP-10がコロイド金で標識した一次Abと結合することが可能となる。二次Abは、レーンの膜を横切る線に固定する。その後、試料および標識した一次Abは、膜レーンに沿って、固定された二次Abの線を横切って遊走する。試験の解釈:金で標識した一次Abと複合体形成したすべてのIP-10は膜上の二次Abによって捕捉され、線の色変化が起こる。その後、試験を、a.色強度に基づいて、またはb.応答試料たとえば全血などの抗原刺激した試験材料の血漿で行ったものとnil試料で行ったものとの2つの試験を比較し、nil試験の色変化の強度をAg試験の色変化の強度から減算し、これを参照と比較することによって、解釈する。また、試験の読み取りは、コンピュータインタフェースを使用した自動または半自動であってもよい。この設定は、自動インタフェースにより線の色変化の強度が決定されるように構築することができる。好ましい実施形態では、読み取りは、スキャナ、たとえば平面スキャナ、リーダまたは携帯用リーダを使用して行う。線の強度は、たとえば関連するソフトウェアを使用して参照と比較することによって、定量することができる。別の好ましい実施形態では、読み取りは、カメラ、たとえば携帯電話のデジタルカメラを使用して行う。線の強度は、たとえば裸眼または関連するソフトウェアを使用して参照と比較することによって、定量することができる。携帯電話のカメラを使用する場合、分析のために写真をたとえばマルチメディアメッセージサービスすなわちMMSで電話からセントラルサーバーに送信することができる。別の好ましい実施形態では、分析の読み取りは、携帯電話のデジタルカメラを使用して、搭載されたソフトウェアを使用して行う。免疫変調剤本発明は、試料と少なくとも1つの試験抗原とのinvitroインキュベーション温度を上昇することによって炎症誘発性の免疫応答を増加させる方法に関する。したがって、本発明は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を、バイオマーカーの応答を増強させる高温状態でインキュベーションする試験を提供する。高温は細胞ストレスを潜在的にもたらすため、本発明のさらなる態様は、これらの機構に対抗するために免疫変調剤を加えることである。したがって、本発明の特に好ましい実施形態は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を改善させるために、少なくとも1つの免疫変調剤を加えるステップさらに含む方法である。また、本発明は、少なくとも1つの免疫変調剤を加えることによって免疫診断試験を改善させることにも関する。用語、免疫変調剤とは、免疫応答を改変させる物質として理解されたい。免疫変調剤とは、免疫増強、免疫抑制、もしくは免疫寛容の誘導などのように、免疫応答の調整を所望のレベルまで誘導することができる物質、および/または、細胞は高温が原因でストレスを受けるため、潜在的な有害効果に対抗することができる物質である。また、免疫変調剤とは、免疫系の特定領域、たとえばTリンパ球細胞またはTリンパ球部分集団をブーストまたは阻害することができる物質としても理解される。本発明による好ましい免疫変調剤は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を改善させるサイトカインおよび中和抗体である。特定の好ましい免疫変調剤は、IL-7、IL-15およびIL-21などのサイトカインである。他の特定の好ましい免疫変調剤は、IL-10、IL-4、および/またはIL-5と結合する中和抗体である。本発明の一態様は、サイトカインIL-7、IL-15、IL-21;IL-10、IL-4、IL-5と結合する中和抗体、抗CD25抗体でコーティングしたビーズ、抗CD39抗体でコーティングしたビーズ、IL-10、JAK1またはTYK2をコードしている遺伝物質に対するセンスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、CpG含有オリゴヌクレオチド、TLR変調剤として作用するオリゴヌクレオチド、およびTLR変調剤からなる群から選択される少なくとも1つの免疫変調剤をステップbで加える、少なくとも1つの免疫変調剤の添加をさらに含む方法である。免疫変調剤を加える効果は、実施例中に、IL-10に対する抗体、およびIL-7の添加によって例示されている。好ましい実施形態では、少なくとも1つの免疫変調剤は、IL-7、IL-15およびIL-21からなる群から選択されるサイトカインである。別の好ましい実施形態では、少なくとも1つの免疫変調剤は、IL-10と結合する中和抗体、IL-4と結合する中和抗体、IL-5と結合する中和抗体およびCD25と結合する中和抗体からなる群から選択される中和抗体である。さらに別の好ましい実施形態では、少なくとも1つの免疫変調剤は、抗CD25抗体でコーティングしたビーズ、IL-10、JAK1またはTYK2をコードしている遺伝物質に対するセンスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、CpG含有オリゴヌクレオチド、TLR変調剤として作用するオリゴヌクレオチド、およびTLR変調剤からなる群から選択される。サイトカインであるインターロイキン-7IL-7がナイーブおよびメモリーのCD4およびCD8T細胞部分組の生存および恒常性に必須であることは、十分に確立されている。高温は細胞のストレスおよび損傷を引き起こす可能性があり、インキュベーション中に生存サイトカインIL-7を加えることでこれらの潜在的に有害な効果から保護し得る。本発明の特に好ましい実施形態は、細胞を高温状態でのインキュベーションの潜在的に有害な効果から保護するためにIL-7を加える方法に関する。本発明の別の態様は、炎症誘発反応をブーストするために、抗炎症性サイトカインIL-10に対する抗体を加えることである。高温状態でのインキュベーション、または抗IL-10を用いてもしくは用いずにIL-7を加えることで、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答が増加することが、本発明によって示されている。本発明の好ましい実施形態は、炎症誘発反応をさらにブーストするために抗炎症性サイトカインIL-10に対する抗体の添加を用いてまたは用いずに、細胞を高温インキュベーションのこれらの潜在的に有害な効果から保護するためにIL-7を加える方法に関する。したがって、本発明は、IL-10と結合する中和抗体を用いてまたは用いずにIL-7を加えることによって、免疫診断試験を改善させる方法にも関する。また、本発明は、IL7の存在下での、抗IL10を用いたまたは用いない、高温状態でのインキュベーションにも関する。IL-7および抗IL-10の両方の存在が、抗原依存性かつマイトジェン誘導性の両方の免疫シグナル伝達分子を産生するために最適なインキュベーション条件を提供すると考えられる。また、本発明は、免疫シグナル伝達分子、たとえばケモカインIP-10および/またはサイトカインIFN-γを、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を抗原性タンパク質/ペプチドで刺激した後に、高温状態で、ならびに/またはIL-7および/もしくは抗IL-10の存在下で測定することに基づく、たとえば結核菌の感染症を検出することができる試験システムにも関する。記載した試験システムは、通常のインキュベーション温度、すなわち37°Cで行われた試験よりも感度が高く、偽陰性および不確定試験結果の数を低下させる。これは試験および診断を改善させる。本発明によれば、通常のインキュベーション条件下で低い免疫応答を有する患者/ドナーは、インキュベーション温度を上昇することによって、特にIL-7および抗IL-10の存在下で、応答するようにさせることができる。これにより、本発明は、そうでなければ抗原に対して不十分な免疫応答を有する患者の診断を可能にする。さらに、本発明は、重要なことには免疫不全の個体においても、免疫診断試験の感度および対費用効果を改善させる。さらに、これは感染性因子および癌のワクチン開発において役割を果たし得る。Il-7インターロイキン7IL-7とは、ヒトではIL7遺伝子によってコードされているタンパク質である。IL-7は生存サイトカインである。IL-7はリンパ系前駆細胞の増殖を刺激することが知られており、BおよびT細胞の発生に重要である。サイトカインであるインターロイキン-7は、ナイーブおよびメモリーのCD4およびCD8T細胞の生存および恒常性に必須であることが示されており、IL-7シグナル伝達の欠損はヒトにおいて重篤な免疫不全をもたらす。IL-10インターロイキン-10IL-10とは、ヒトサイトカイン合成阻害因子CSIFとしても知られ、抗炎症性サイトカインである。ヒトでは、IL-10はIL10遺伝子によってコードされている。IL-10は重要な免疫調節分子であることが知られている。これは、マクロファージおよびTh1細胞などの細胞からのIFN-γ、IL-2、IL-3、TNFαおよびGM-CSFなどの炎症誘発性サイトカインの合成を阻害することができる。また、IL-10は、抗原提示細胞の抗原提示能力の強力な抑制因子でもある。しかし、これは特定のT細胞および肥満細胞に対して刺激性でもあり、B細胞の成熟および抗体産生を刺激する。IL-10を顕著に阻害する中和抗体が開発されており、これによりIL-10の生物学的効果が阻害または中和される。また、DNAおよび/またはRNAと結合するサイレンシングオリゴヌクレオチドも、IL-10に媒介されるシグナルの阻害に有効である。細胞集団の免疫変調別の実施形態では、抗炎症を阻害することによってアッセイをさらに増強させることができる。これは、調節性T細胞またはTh2細胞などの試験抗原の細胞媒介性免疫応答を阻害する細胞集団の阻害、枯渇または排除によって行うことができる。好ましい免疫変調剤は、T調節性細胞の機能または活性を阻害する。これらの免疫変調剤は、CD25リガンド、ヤヌスキナーゼ1JAK1またはチロシンキナーゼ2TYK2をコードしている遺伝物質に対するセンスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、CpG含有オリゴヌクレオチド、TLR変調剤として作用するオリゴヌクレオチド、およびTLR変調剤からなる群から選択される。より詳細には、T調節性細胞阻害性質を有する免疫変調剤は、抗CD25抗体および/またはホスホロチオエート化オリゴヌクレオチドである。より詳細には、免疫細胞媒介性アッセイの感度を増大または増強させるために、オリゴヌクレオチドは、JAK1またはTYK2分子をコードしている遺伝物質RNAまたはDNAに相補的または相同的であることができる。本明細書中で企図されるオリゴヌクレオチドは、修飾された主鎖を有し得る、またはホスホロチオエートで修飾されたオリゴヌクレオチドなどの化学修飾されたヌクレオチドもしくはヌクレオシドを有し得る。本発明の一態様は、ビーズの表面上にコーティングした抗CD25抗体である、少なくとも1つの免疫変調剤を加えることをさらに含む方法である。試験抗原本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を増大させる方法に関する。本発明に適した抗原の選択肢は、試験抗原とも呼ばれ、所望する場合に細胞媒介性免疫応答に対する前記抗原の効果を決定する、任意の抗原である。試験抗原とは、診断することを望む疾患または状態に特異的な抗原として理解されたい。試験抗原は、ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質、炭水化物、糖タンパク質、リン脂質、リンタンパク質もしくはホスホリポタンパク質または非タンパク質化学薬品の形態であり得る。試験抗原の一例は、結核菌中でほぼ排他的に発現され、結核菌に特異的であるとみなすことができる抗原である、ESAT-6である。ESAT-6ペプチドは抗原提示細胞上に提示され、ESAT-6抗原に特異的なT細胞受容体を保有するT細胞によって認識される。非特異的抗原の一例は、カルメットゲラン桿菌BCGの精製タンパク質誘導体PPDまたは結核菌、ウシ結核菌M.bovisもしくはトリ結核菌M.aviumのツベルクリンPPDである。PPDはいくつかの非特異的な抗原を含むタンパク質沈殿物である。PPDがほとんどのマイコバクテリア種らい病の疾患を引き起こすらい菌M.Lepraeが含まれると交差反応することは十分に確立されており、さらに、PPDはマイトジェン様効果を含めた非特異的な効果を有する。それ故、PPDは試験抗原としてみなすことができない、すなわちPPDは非特異的抗原である。非特異的抗原の他の例は、強力な自然免疫応答を誘発する抗原、たとえばT細胞および生得的受容体のどちらによっても認識されるリポ多糖LPSである。LPSは試験抗原として分類することができる特異的抗原を含むが、多くの場合は生得的応答の方が強力であり、これは試験抗原誘導性シグナルを不明瞭にする。生得的応答は免疫学的メモリーに非依存的であるため、これらは、哺乳動物が、以前にその特異的試験抗原に遭遇し、それにより特異的試験抗原複数可に対する免疫学的反応性を生じたかどうか、または以前に他の抗原に遭遇して特異的試験抗原複数可に対する免疫学的交差反応性を生じたかどうかを識別することができる特異的シグナルを生じることができない。言い換えれば、細胞媒介性免疫応答の特異性は試験抗原の特異性に由来する。疾患または状態を評価するために必要な特異性の度合に応じて、精通した技術者は様々な特異性の試験抗原を選択することができる。本発明の一態様では、本発明に適した試験抗原の選択肢は、精通した技術者が評価したい感染症の種類に依存する。したがって、選択された抗原は疾患に関連する。たとえば、結核菌の感染症を監視する場合、任意の利用可能な結核菌抗原が必要な応答を生じることができ、逆もそうである。いくつかの試験抗原が既存の市販アッセイにおいて既に使用されている。感染症が結核に関連していると考えられている場合、抗原または少なくとも1つの抗原はRD-1および/またはRD-11抗原である。好ましい実施形態では、抗原は、RD-1抗原、ESAT-6、CFP-10、TB7.7、融合タンパク質ESAT-6/CFP-10、TB10.4、および異なるが特異的ないくつかの抗原を組み合わせた融合タンパク質からなる群から選択される。試験抗原に特異的なバイオマーカーの応答の一例は、たとえば実施例6に例示されている、結核菌特異的抗原ESAT-6、CFP10およびTB7.7を用いた刺激である別の好ましい実施形態では、抗原または少なくとも1つの抗原は、以下のinvivo発現された遺伝子からの潜伏抗原からなる群から選択される:Rv0079、Rv0570、Rv0717、Rv1170、Rv1284、Rv1363、Rv1956、Rv2034、Rv2225、Rv2324、Rv2380、Rv2435、Rv2465、Rv2737c、Rv2838c、Rv2982c、Rv3353c、Rv3420cおよびRv3515。さらに別の好ましい実施形態では、抗原または少なくとも1つの抗原は、以下の耐久性低酸素応答EnduringHypoxicResponse遺伝子からの抗原からなる群から選択される:Rv0140、Rv0244c、Rv0251、Rv0384c、Rv0753c、Rv0767、Rv0846、Rv0847、Rv0967、Rv0990、Rv0991、Rv1284、Rv1403、Rv1471、Rv1733、Rv1806、Rv1874、Rv1875、Rv1909、Rv1955、Rv1956、Rv1957、Rv2034、Rv2035、Rv2324、Rv2389、Rv2465、Rv2466、Rv2558、Rv2626、Rv2627、Rv2628、Rv2642、Rv2643、Rv2658、Rv2660、Rv2662、Rv2745、Rv2913、Rv3223、Rv3406、Rv3515、Rv3536およびRv3862。本発明に関連する試験抗原は、特異性を損なわせずに免疫原性を改善させるために、たとえばMHCからの不変鎖とカップリングさせることによって改変することができる。また、トリ結核菌、エムゴルドナエM.gordonaeおよびエムゼノピM.xenopiからなるリストから選択されるNTMセンシチンsensitinも、好ましい抗原である。現在好ましい実施形態では、試験抗原または少なくとも1つの試験抗原は、ESAT-6、CFP-10、TB7.7、ならびに他のRD-1およびRD-11抗原からなる群から選択される。本発明のさらなる一実施形態では、試験抗原はESAT-6である。本発明の別の実施形態では、試験抗原はCFP-10である。本発明のさらなる実施形態では、試験抗原はTB7.7である。本発明の現在好ましい実施形態では、試験抗原はRD抗原である。本発明の現在好ましい実施形態では、試験抗原はRD-1抗原である。本発明のさらなる現在好ましい実施形態では、抗原はRD-11抗原である。いくつかの研究所が、個々の感染性因子、いわゆる微生物または疾患に特異的な抗原によって厳粛に発現される試験抗原の同定に取り組んでいる。結核菌の場合、特異的試験抗原は、それだけには限定されないが、休眠、潜伏、活動、近時recent、肺、肺外、局在または治癒段階などの、感染の様々な段階で発現される。本発明は、そのような試験抗原を使用して実装することができ、したがってその具体的な段階たとえば結核菌の潜伏感染を同定するためのツールを提供する。好ましい実施形態では、応答試料を作製する際に同じ微生物からのいくつかの抗原を加えることができる。様々な組織型の好みを有するいくつかの抗原を加えることによって、方法の強度が増す。結核の場合、ESAT-6、CFP-10およびTB7.7タンパク質の抗原ペプチドを組み合わせることで、この試験が幅広い範囲の組織型をカバーし、したがって様々な患者集団においてより強力かつ信頼性のある試験結果を与えることが確実となる。感染症がクラミジア属Chlamydiaに関連していると考えられている場合、抗原は、血清型D抽出物、主要外膜タンパク質MOMP、システインに富んだ外膜タンパク質OMP、OMP2、OMP3、多形OMPPOMP、肺炎クラミジアChlamydiapneumoniaのアデノシン二リン酸/アデノシン三リン酸転位酵素、ポリンBタンパク質PorB、およびCT521からなる群から選択される。本発明から明らかなように、感染源は変動し得る。本発明の一実施形態では、抗原は、固定上鞭毛型、固定錐鞭毛型、破壊上鞭毛型、破壊錐鞭毛型、上鞭毛型からの精製した抗原性画分、上鞭毛型からの半精製した抗原性画分、錐鞭毛型排出-分泌抗原TESA、優性可変抗原型VAT、可変表面糖タンパク質VSG、トランスシアリダーゼTS、たとえばTS13、無鞭毛型表面タンパク質-2ASP2、KMP-11m、CRA、Ag30、JL8、TCR27、Ag1、JL7、H49、TCR39、PEP-2、Ag36、JL9、MAP、SAPA、TCNA、Ag13、TcD、B12、TcE、JL5、A13、1F8、Tc-24、Tc-28、Tc-40、Cy-hsp70、MR-HSP70、Grp-hsp78、CEA、CRP、SA85-1.1、FCaBP鞭毛Ca2結合タンパク質、FL-160160kDaの鞭毛表面タンパク質およびFRA鞭毛反復抗原からなる群から選択され、前記抗原はトリパノソーマ属Trypanosomaに関連する。本発明の好ましい実施形態では、抗原は、固定上鞭毛型、固定錐鞭毛型、破壊上鞭毛型、破壊錐鞭毛型、上鞭毛型からの精製した抗原性画分、上鞭毛型からの半精製した抗原性画分、錐鞭毛型排出-分泌抗原TESA、優性可変抗原型VAT、可変表面糖タンパク質VSG、トランスシアリダーゼTS、たとえばTS13、無鞭毛型表面タンパク質-2ASP2、FCaBP鞭毛Ca2結合タンパク質、FL-160160kDaの鞭毛表面タンパク質およびFRA鞭毛反復抗原からなる群から選択される。感染症が住血吸虫属schitosomaに関連している場合、抗原は、破壊住血吸虫卵、排出/分泌性糖タンパク質ES、外皮TG糖タンパク質、可溶性卵抗原SEA、マンソン住血吸虫S.mansoniの可溶性抽出物SWAP、キーホールリンペットヘモシアニンKLH、RP26、Sj31、Sj32、パラミオシン、Sm62-IrV5、Sm37-SG3PDH、Sm28-GST、Sm14-FABP、PR52-フィラミンPL45-ホスホグリセリン酸キナーゼ、PN18-シクロフィリン、MAP3、Sm23、MAP4、Sm28-TPI、Sm97、CAA、CCA、およびマンソン住血吸虫熱ショックタンパク質70からなる群から選択される。本発明の好ましい実施形態では、抗原は、排出/分泌性糖タンパク質ES、外皮TG糖タンパク質、可溶性卵抗原SEA、マンソン住血吸虫の可溶性抽出物SWAP、キーホールリンペットヘモシアニンKLH、およびRP26からなる群から選択される。リーシュマニア属leishmaniaに関して、抗原または少なくとも1つの抗原は、破壊前鞭毛型、リーシュマニン、rGBP、rORFF、rgp63、rK9、rK26、rK39、PN18-シクロフィリン、MAP3、Sm23、MAP4、Sm28-TPI、Sm97、CAA、およびCCAからなる群から選択される。実際、分析する種に特異的な任意の試験抗原が、本発明において有用な場合がある。本発明の一態様は、前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を使用して、癌または新生物または悪性腫瘍を検出する方法に関する。癌に関しては、試験抗原は、WT1、MUC1、LMP2、HPVE6、HPVE7、EGFRvIII、Her2、neu、MAGEA3、p53突然変異体および非突然変異体、NY-EOS-1、PSMA、GD2、CEA、MelanA、MART1、Ras-突然変異体、gp100、PR1、Bcr-abl、チロシナーゼ、生存、PSA、hTERT、肉腫転位切断点sarcomatranslocationbreakpoint、EphA2、PAP、ML-IAP、AFP、EpCAM、ERG、NA17、PAX3、ALK、アンドロゲン受容体、サイクリンB1、ポリシアル酸、NYCN、TRP-2、RhoC、GD3、フコシルGM1、メソテリン、PSCA、MAGEA1、sLea、CYP181、PLAC1、GM3、BORIS、Tn、GloboH、ETV6-AML、NY-BR-1、RGS5、SART3、STn、炭酸脱水酵素IX、PAX5、OY-TES1、精子タンパク質17、LCK、HMWMAA、精子線維鞘タンパク質、AKAP-4、SSX2、XAGE1、B7H3、レグマイン、Tie2、Page4、VEGFR2、MAD-CT-2ならびにFAPからなる群から選択される。実際、癌、前癌または突然変異に特異的な任意の試験抗原が、本発明において癌を診断および監視するために有用な場合がある。別の好ましい実施形態では、様々な疾患からの様々な抗原を組み合わせて、個々の疾患について低い特異性であるが、感染症について高い感度であるスクリーニングツールを可能にすることができる。たとえば、兵士が任務中に曝露される微生物たとえば、マラリア、結核、リーシュマニア、住血吸虫および/またはトリパノソーマ症からの抗原のパレットを組み合わせるキットは、医者が様々な試験の代わりに1つの素早いスクリーニング試験を行うことを可能にする。別の好ましい実施形態では、様々な性行為感染症からの様々な抗原を組み合わせて、個々の疾患について低い特異性であるが、性行為感染症STDについて高い感度であるスクリーニングツールを可能にすることができる。たとえば、親密な粘膜接触で感染症を伝播する微生物たとえば、軟性下疳菌Haemophilusducreyi、トラコーマ病原体Chlamydiatrachomatis、クレブシエラグラヌロマティスKlebsiellagranulomatis、淋菌Neisseriagonorrhoeae、梅毒トレポネーマTreponemapallidum、紅色白癬菌Trichophytonrubrum、カンジダ症、ヘルペス、B型肝炎ウイルス、HSV、HIV、HPV、MCV、恥毛ジラミPhthiriuspubis、ヒゼンダニSarcoptesscabieiからの抗原のパレットを組み合わせるキットは、医者が様々な試験の代わりに1つのスクリーニング試験を行うことを可能にする。そのような試験は、それだけには限定されないが性労働者などの、危険性を負う個体における、STDの素早いスクリーニングツールとして役割を果たすであろう。別の好ましい実施形態では、組み合わせたキットは、臓器に感染する様々な微生物たとえば、骨盤炎症性疾患を引き起こすネセリア属Nesseriaおよびクラミジア属の種からの抗原を含み得る、または一般的な症状を引き起こす感染性因子たとえば、カンピロバクターcampylobacterおよび赤痢菌shigellaの感染症によって引き起こされる処置可能な下痢は、ウイルス、たとえばロタウイルスによって引き起こされる処置不能な下痢から区別することができるからの抗原を含み得る。試料本発明の一実施形態は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を生じさせる方法を企図し、前記方法は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む試料を哺乳動物から提供するステップと、前記試料を、高温状態で、少なくとも1つの試験抗原と共にインキュベーションするステップと、前記試料における試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を決定するステップとを含む。本発明の別の実施形態は、対象において試験抗原に特異的な媒介性免疫応答を生じさせる方法を企図し、前記方法は、前記対象から、少なくとも1つの試験抗原による刺激の後に免疫シグナル伝達分子を産生することができる免疫系の細胞を含む試料を採取するステップと、前記試料を高温温度で前記少なくとも1つの試験抗原と共にインキュベーションし、その後、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルの存在または上昇を測定するステップであって、前記免疫シグナル伝達分子の存在またはレベルが、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を開始させる前記対象の能力の指標であるステップとを含む。一実施形態では、試料は、全血、または血液、胸膜液、気管支液、組織生検、腹水、および/もしくは脳脊髄液に由来する細胞に由来する。好ましい実施形態では、試料は血液に由来する。特に好ましい実施形態では、試料は、末梢血単核球PBMC、T細胞、CD4T細胞、CD8T細胞、ガンマデルタT細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞およびNK細胞からなる群から選択される細胞を含む。好都合には、試料が全血である場合、採血チューブを、抗凝固剤たとえばヘパリンおよび任意選択で免疫変調剤および任意選択で栄養素を用いて処理する。全血が好ましく、最も好都合な試料であるにもかかわらず、本発明は、それだけには限定されないが、胸膜液、腹水、リンパ液、脊髄または大脳液、組織液、ならびに鼻汁および肺液を含めた呼吸器の液などの、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含有する他の試料にまで及ぶ。全血への言及には、組織培養物、培地、試薬、賦形剤などによって希釈されていない全血が含まれる。一実施形態では、用語全血には、少なくとも10体積の全血を含むアッセイ試料すなわち反応混合物が含まれる。用語少なくとも10体積には、反応混合物の全アッセイ体積の10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99および100体積の血液量が含まれる。全血を含む試料から逸脱せずに、培養培地、酵素、免疫変調剤、賦形剤、抗原などの追加の薬剤を加え得る。したがって、一実施形態では、本発明は、試料が、全血、または血液、胸膜液、気管支液、組織生検、腹水、および/もしくは脳脊髄液に由来する細胞である方法に関する。したがって、別の実施形態では、本発明は、試料が、末梢単核細胞、T細胞、CD4T細胞、CD8T細胞、ガンマデルタT細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞およびNK細胞からなる群から選択される細胞を含む方法に関する。一実施形態では、試料は、抗原、マイトジェンまたはnilがそれ中に存在する3つの適切な容器中に採取し得る全血である。別の実施形態では、抗原、マイトジェンまたはnilは、試料、たとえば全血を含有するアリコートに後で加えることができる。別の実施形態では、試料は、抗原、マイトジェンもしくはnilを含有する採取チューブ中で採取し得る全血であるか、または、抗原、マイトジェンもしくはnilを加える全血のアリコートであり得る。好ましい実施形態では、試料は、乾燥させた試験抗原および任意選択で細胞に栄養素を提供する物質たとえば炭水化物の形態および任意選択で免疫変調剤を用いてコーティングした、空にしたチューブ内に採取した全血である。別の好ましい実施形態では、試料は、直径約3~4mmの毛細管内に採取する。一般に、血液は、抗凝固剤好ましくはヘパリン、またはたとえばクエン酸塩もしくはEDTAの存在下で維持する。抗凝固剤は、血液を加える際に採血チューブ内に存在する。採血チューブの使用が好ましいが、標準の自動実験室システムに適合性がある必要はなく、これらは大スケールおよびランダムアクセスサンプリングにおける分析を受け入れ易い。また、採血チューブは、取扱いの費用を最小限にし、実験室での全血および血漿への曝露を低下させ、それにより、実験室の人員が、それだけには限定されないがヒト免疫不全ウイルスなどの病原性因子にかかる危険性を低下させる。全血のアリコートは、10μL~4000μlの範囲の体積、たとえば、それだけには限定されないが、10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL、90μL、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、501μL、525μl、550μL、600μl、700μl、800μl、900μl、1000μl、1100μl、1200μl、1300μl、1400μl、1500μl、1600μl、1700μl、1800μl、1900μl、2000μl、2100μl、2200μl、2300μl、2400μl、2500μl、2600μl、2700μl、2800μl、2900μlまたは3000μlであり得る。試料は、チューブ、組織培養ウェルまたは他の容器中でインキュベーションすることができ、抗原、マイトジェンおよびnilは関連する濃度で加えることができる。採血チューブにはvaccutainerチューブまたは別の同様の容器が含まれるが、血液は開口チューブまたは毛細管内に直接採血することもできる。高温状態でのインキュベーション細胞媒介性免疫系の細胞は、対象から採血してから長時間の後、全血中の細胞媒介性免疫応答を開始させる能力を失う。応答は、血液試料が、それだけには限定されないが摂氏10°C~39°Cの温度での保存などの細胞の生命を延長する様式で処理されていない場合、採血の24時間後にしばしば激しく低下しているか存在しない。一実施形態では、作業の軽減が、抗原を用いた試料の刺激を、医院、クリニック、外来患者施設、獣医クリニックまたは農場などの看護現場で行うことを可能にする。抗原刺激が完了した後は、新鮮かつ活性のある細胞の必要性は存在しなくなる。IP-10およびサイトカインまたは免疫シグナル伝達分子などの他のバイオマーカーは血漿中で安定しており、したがって、試料を特別な条件または迅速な時間要件なしに、他の感染性疾患または他の疾患の診断に使用される標準の血漿試料と同様の様式で、保管、凍結または輸送することができる。インキュベーションステップは、5~144時間、より好ましくは5~120時間、さらにより好ましくは12~24時間またはその間の期間であり得る。したがって、本発明の一実施形態では、インキュベーション時間は、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、26時間、30時間、36時間、42時間、48時間、72時間、96時間、120時間、または144時間である。本発明では、インキュベーションステップは高温状態で行う。高温状態には、摂氏38°C~42°Cの範囲の温度でのインキュベーションが含まれる。インキュベーションステップは、摂氏38°C~42°Cの範囲の温度で行うことができる。したがって、本発明の一実施形態では、インキュベーション温度は、摂氏38°C、摂氏38.1°C、摂氏38.2°C、摂氏38.3°C、摂氏38.4°C、摂氏38.5°C、摂氏38.6°C、摂氏38.7°C、摂氏38.8°C、摂氏38.9°C、摂氏39.0°C、摂氏39.1°C、摂氏39.2°C、摂氏39.3°C、摂氏39.4°C、摂氏39.5°C、摂氏39.6°C、摂氏39.7°C、摂氏39.8°C、摂氏39.9°C、摂氏40.0°C、摂氏40.1°C、摂氏40.2°C、摂氏40.3°C、摂氏40.4°C、摂氏40.5°C、摂氏40.6°C、摂氏40.7°C、摂氏40.8°C、摂氏40.9°C、摂氏41.0°C、摂氏41.2°C、摂氏41.3°C、摂氏41.4°C、摂氏41.5°C、摂氏41.6°C、摂氏41.7°C、摂氏41.8°C、摂氏41.9°Cまたは摂氏42.0°Cであり得る。より好ましい実施形態では、インキュベーション温度は摂氏38.5°C、摂氏39.0°C、摂氏39.5°C、摂氏40.0°C、または摂氏40.5°Cである。インキュベーションステップは、固定されていない温度、それだけには限定されないが、摂氏38°C~42.0°C、より好ましくは38.0°C~41°C、より好ましくは38.2°C~40.7°C、より好ましくは摂氏38.5°C~40.5°C、さらにより好ましくは摂氏39.0°C~摂氏40.0°Cで行うことができる。したがって、本発明の好ましい実施形態は、前記高温状態が摂氏38.5~41.0°Cの温度でのインキュベーションであるものである。より好ましい実施形態は、前記高温状態が摂氏39~40°Cの温度でのインキュベーションであるものである。試料を高温状態でインキュベーションするためのいくつかの方法が、精通した技術者に知られている。たとえば、インキュベーター、水浴および加熱ブロックを使用することが可能である。本発明の一実施形態は、細胞培養物に培養培地を加えた、希釈した試料の刺激を行うことを可能にする。本発明の別の実施形態は、不活性希釈液たとえば生理食塩水を細胞培養物に加えて試料を刺激することを可能にする。本発明では、試料を少なくとも1つの試験抗原とインキュベーションする際に、少なくとも1つの炭水化物が存在することが好ましいことを理解されたい。炭水化物の存在は、細胞培養物の成長を改善させる。したがって、本発明は、小さな炭水化物、たとえば単糖および二糖などの少なくとも1つの炭水化物が前記インキュベーションステップ中に存在することが好ましい方法にも関する。特に好ましい実施形態は、炭化水素および/またはグリカンの形態の糖をインキュベーションステップ中で加える方法である。最も好ましい実施形態では、加えた糖はデキストロースである。この炭水化物、たとえばデキストロースは、前記インキュベーションステップ中で加え得る。増大本発明の一態様は、高温温度でのインキュベーションによる試験抗原の細胞媒介性免疫応答の増大に関する。増大は、高温状態でのインキュベーション後の少なくとも1つのシグナル伝達分子のレベルから参照レベルを減算することによって決定することができる。精通した技術者によって理解されるように、参照レベルは、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を含む前記試料を、少なくとも1つの試験抗原と共に37°Cでインキュベーションすることによって決定することができる。好ましい実施形態では、試験抗原の細胞媒介性免疫応答の増大とは、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することによって決定することができる、試験抗原の細胞媒介性免疫応答の改善として理解されたい。好ましい実施形態では、この改善または増大とは、高温温度での前記試料のインキュベーション後の少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベルが、37°Cでのインキュベーション後よりも高いこととして理解されたい。好ましい実施形態では、この改善または増大とは、高温温度での前記試料のインキュベーション後の少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子の規模が、37°Cでのインキュベーション後よりも高いこととして理解されたい。好ましい実施形態では、この改善または増大とは、高温温度での前記試料のインキュベーション後の少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子の分子数たとえばpg/mlまたはモル/mlを使用して測定可能が、37°Cでのインキュベーション後よりも高いこととして理解されたい。好ましい実施形態では、この改善または増大とは、高温温度での前記試料のインキュベーション後の少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子の分子濃度が、37°Cでのインキュベーション後よりも高いこととして理解されたい。特に好ましい実施形態では、改善とは、高温温度での前記試料のインキュベーション後の少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子の絶対的レベルが、37°Cでのインキュベーション後よりも高いこととして理解されたい。絶対的レベルとは、試料中で決定される少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のレベル、すなわち少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のバックグラウンドレベルを減算していないものとして理解されたい。別の好ましい実施形態では、改善とは、高温温度での前記試料のインキュベーション後の少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子の、少なくとも1つの免疫シグナル伝達分子のバックグラウンドレベルを減算した後のレベルが、37°Cでのインキュベーション後よりも高いこととして理解されたい。特に好ましい実施形態では、改善とは、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の改善されたシグナル対ノイズ比SN比として理解されたい。したがって、特に好ましい実施形態では、本発明は、前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の改善されたシグナル対ノイズ比を生じる方法に関する。これは実施例7中に例示されている。一般に、用語シグナル対ノイズ比とは、所望のシグナルのレベルこの場合は免疫シグナル伝達分子のレベルによって測定した試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答/試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答から生じる免疫シグナル伝達分子のレベルをバックグラウンドノイズのレベル無刺激の試料中に存在する前記免疫シグナル伝達分子のレベルと比較する。比が高ければ高いほど、バックグラウンドノイズは突出しない。試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答の改善されたシグナル対ノイズ比は、免疫シグナル伝達分子のバックグラウンドレベルを下げることによって、および/または試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答のレベルを増加させることによって、達成することができる。バックグラウンドレベルは、無刺激の試料試験抗原と共にインキュベーションする試料と同一中の免疫シグナル伝達分子のレベルを測定することによって決定される。シグナル対ノイズ比は、刺激した試料中の免疫シグナル伝達分子のレベルを無刺激の試料中の前記免疫シグナル伝達分子のレベルで除算することによって決定することができる。高温温度のインキュベーションによる改善されたシグナル対ノイズ比は、試料および特異的試験抗原または少なくとも1つの特異的試験抗原のシグナル対ノイズ比を、摂氏37°Cおよび高温温度、たとえば摂氏39°Cの両方で決定することによって、決定することができる。改善されたシグナル対ノイズレベルとは、前記試験抗原について摂氏37°Cでおよび前記試験抗原について摂氏39°Cなどの高温温度で決定されたシグナル対ノイズ比を比較した際に、シグナル対ノイズ比が増加している場合として理解されたい。したがって、高温温度で達成されるシグナル対ノイズ比は、摂氏37°Cでのものよりも良好である。相乗効果相乗作用とは、最終結果のための、異なる実体の有利な企業として定義される。すなわち、2つ以上の実体及び/または修飾間の相互作用が、それぞれの実体単独での合計よりも全体的により良好な結果を生じる。本発明に従って、かつ実施例中に実証されているように、高温インキュベーションは、加えた免疫変調剤と、対でおよびすべて一緒のどちらにおいても、相乗作用で作用する。参照およびカットオフレベル当業者に一般に理解されるように、細胞媒介性免疫反応性のスクリーニング方法は、比較による意思決定方法である。どのような意思決定方法においても、目的の疾患もしくは状態に罹患している対象および/または目的の疾患、感染症、もしくは状態に罹患していない対象に基づく参照値が必要であり、本発明にはさらに、本明細書中に記載の高温領域の様々な温度レベルに対するそのような比較も必要である。カットオフレベルは、それだけには限定されないが、試験した特定の個体群などのいくつかの基準に基づいて調整することができる。たとえば、免疫不全を有する個体および活動性疾患へと進行する危険性が高い患者ではカットオフレベルを低く設定することができ、活動性疾患を発生する危険性が低い、それ以外は健康な個体群では、カットオフは高くてもよい。判別値とは、摂氏37°Cの対照群または試料および高温状態での群または試料の両方におけるパラメータまたは複数のパラメータを測定して、判別値複数可を決定することによって決定された値である。判別値は受信者動作特性曲線ROC曲線を使用して決定することができる。この様式で決定された判別値は、将来の個々の実験における同じ実験設定に有効である。たとえばバイオマーカー濃度の測定は国際単位IUへと翻訳することができる。IUはバイオマーカーの生物活性に関連し、様々な測定方法間のベンチマークへの参照である。本発明の他の実施形態では、決定されたカットオフ値は、たとえば抗原で刺激されたIP-10濃度を非刺激の血漿濃度によって除算したものとして定義される刺激指数と組み合わせることができる。これらの分析物のレベルを測定するための既知の分析方法のうちの任意のものが本発明において機能するが、当業者には明らかなように、それぞれのマーカーで使用する分析方法は、その特定のマーカーの参照データを生成するために使用した方法と同じでなければならない。特定のマーカーまたはマーカーの組合せに新しい分析方法を使用した場合は、その方法を用いて開発したデータに基づく新しい参照データの組を生成しなければならない。多変量の判別分析および他の危険性評価は、市販のコンピュータプログラム統計的パッケージ、StatisticalAnalysisSystemSASInstituteInc.により製造および販売上で、あるいは当業者に知られている他の多変量統計分析方法または他の統計的ソフトウェアパッケージもしくはスクリーニングソフトウェアによって行うことができる。当業者には明らかなように、上述の実施形態のうちの任意のものにおいて、陽性試験の危険性カットオフレベルを変化させること、または集団中の様々な部分群に適用され得る様々な演繹的危険性を使用することは、それぞれの患者の判別分析の結果を変化させる場合がある。本発明の文脈においては、用語参照とは、たとえば検量線などの、他の値または特徴をそれに対して比較することができる、量、品質または種類に関連する標準に関する。診断一実施形態では、かつ上述のように、この方法は、感染症などの様々な免疫学的状態が疑われる対象の診断に使用し得る。診断に使用する場合、本発明による方法は、通常は臨床症状およびさらなる臨床検査を評価することによって達成される、感染症などの免疫学的状態の存在の決定を援助し得る。試験は、感染症の様々な段階、すなわち、どのような症状もない個体における最近遭遇した感染症、その感染症の症状を有さない個体における何年も前に遭遇した感染症、または感染症が原因の症状を患者が有する活動性の感染症を診断し得る。したがって、本発明は、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を開始させる対象の潜在性または能力を決定する方法に関する。本発明は、細胞媒介性免疫応答を生じさせることができる免疫系の細胞を、抗原性タンパク質/ペプチドを用いて、高温状態でならびに/またはIL-7および/もしくは抗IL-10の存在下で刺激した後に、免疫シグナル伝達分子、たとえばケモカインIP-10および/またはサイトカインIFN-γを測定することに基づく、たとえば結核の感染症の検出を可能にする方法を提供する。したがって、本発明の特に好ましい実施形態は、前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を使用して、前記試験抗原を発現することができる微生物によって引き起こされた感染症を診断する方法に関する。記載した試験システムは、偽陰性試験結果および不確定試験結果の数を低下させ、摂氏37°Cでのインキュベーションステップを含む試験よりも感度が高い。したがって、本発明による方法は、試験および診断を改善させる。別の実施形態では、この方法は、結核が疑われる対象たとえば、活動性、潜伏性または最近のTB感染症、特に潜伏性から活動性の結核への進行の危険性が増加した患者、すなわち、免疫抑制医薬品すなわちモノクローナル抗体処置抗CD20抗体たとえばリツキシマブ著作権もしくはTNF-α遮断処置たとえば、Remicade著作権、Enbrel著作権、Humira著作権またはステロイドもしくは癌-化学療法を受けている患者、あるいは、免疫抑制状態たとえば、HIV感染症、癌、IDDMもしくは非インスリン依存性真性糖尿病NIDDM、自己免疫状態、栄養失調、高齢、静脈内薬物使用IVDUまたは遺伝性免疫障害を患っている患者、および最近感染した個体の診断に使用し得る。実際、標準の指針に従って、医療を開始する前に、これらの患者を活動性、潜伏性または最近のTBについてスクリーニングするべきである。現在では、TNF-α遮断剤処置の候補である、またはHIV陽性である患者を、TSTまたは結核菌抗原に特異的なIFN-γ試験のどちらかでスクリーニングすることが強く勧められている。しかし、研究により、これらの試験は上述した患者分類では信頼できないことが示されており、したがって、本方法は、偽陰性試験結果および不確定試験結果の数を低下させるため、より良好な選択肢である。別の実施形態では、本方法は、クラミジア属感染症たとえば、泌尿生殖器の感染症、骨盤の感染症および/または眼の感染症が疑われる個体をスクリーニングするために使用し得る。したがって、本発明の方法は、感染性疾患の危険性が高い人、たとえば疾患の流行地域に滞在または旅行していた人のスクリーニングに適用可能であり得る。したがって、本発明の一実施形態では、感染性疾患は、マラリア、結核、髄膜炎、日本脳炎、コレラ、リーシュマニナleishmanina、デングおよびポリオからなる群から選択される。本発明の別の実施形態では、感染性疾患は、軟性下疳、クラミジア属感染症、淋病、鼠径リンパ肉芽腫、ウレアプラズマウレアリチカムUreaplasmaurealyticum、マイコプラズマホミニスMycoplasmahominis、梅毒トレポネーマ、B型肝炎、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、軟属腫、恥毛ジラミ、ヒゼンダニおよび膣トリコモナスTrichomonasvaginalisからなる性行為感染症から選択される。本発明のさらなる一実施形態では、感染性疾患は、処置可能な胃腸管系感染性因子、たとえば、赤痢菌、大腸菌E.Coli、カンピロバクター、コレラ菌Vibriocholerae細菌、クリプトスポリジウムパルバムCryptosporidiumparvum、サルモネラSalmonella細菌およびマウスチフス菌Salmonellatyphi細菌からなる群から選択される。本発明のさらなる一実施形態では、感染性疾患は、抗生物質で処置可能でない胃腸管系感染性因子、たとえば、ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、サポウイルス、およびアストロウイルスからなる群から選択される。本発明のさらなる実施形態では、感染性疾患は、たとえば血液バンクにおいてスクリーニングの対象となる血液関連疾患、すなわち、A型肝炎、E型肝炎、マラリア、シャガス病、バベシア症、リーシュマニア症、サル泡沫状ウイルス、クロイツフェルト-ヤコブCreutzfelt-Jacob病vCJD、クロイツフェルト-ヤコブCreutzfeldt-Jakob病CJD、サイトメガロウイルスCMVおよびエプスタイン-バーウイルスからなる群から選択される。本発明の一実施形態では、感染性疾患は、細菌性髄膜炎を引き起こすことができる細菌、髄膜炎菌Neisseriameningitides、肺炎球菌Streptococcuspneumoniae、リステリア菌Listeriamonocytogenes、緑膿菌Pseudomonasaeruginosa、黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureus、ストレプトコッカスアガラクチアStreptococcusagalactiaeおよびインフルエンザ菌Haemophilusinfluenzaからなる群から選択される。したがって、特異的抗原の選択は、精通した技術者がたとえばマイコバクテリアの様々な種間を識別することを可能にするため、本発明の目的は、種に特異的な診断を作製することである。予後診断一実施形態では、この方法は、感染症などの様々な免疫学的状態が診断された個体の予後診断を予測するために使用し得る。患者の予後診断で使用する場合、本発明による方法は、感染症などの免疫学的状態の過程および可能性の高い結果の予測を援助し、したがって、当業者が適切な処置方法を選択し、状態のための特定の処置の可能性の高い効果を評価することを支援し得る。監視一実施形態では、この方法は、感染症を診断された個体を監視するために使用し得る。患者の監視で使用する場合、本発明による方法は、処置中およびその終了後に処置の有効性を評価すること、たとえば感染症の再発の可能性を監視および予測することを援助し得る。本発明によって治療の有効性を監視する可能性は、以下の理由で特に関連性がある結核菌の感染症を例として使用:a痰の顕微鏡観察、マイコバクテリア培養、X線または他の方法などの現在利用可能な方法の代わりに、単純な採血によって容易に行われる、b痰の顕微鏡観察、マイコバクテリア培養、X線または他の方法と比較して、より再現性がある、c痰の顕微鏡観察、マイコバクテリア培養、X線または他の方法、たとえば肺外の結核が疑われる場合の生検に関連する侵襲性の手術手順、もしくは患者が痰陰性の場合は気管支鏡検査と比較して安価である、dRD1重複ペプチドに基づく古典的な37°Cのアッセイと比較して、偽陰性試験結果および不確定試験結果の数を低下させ、より感度が高い、e他の免疫アッセイは感染症の有無のみを判別するが、これは活動性および潜伏性の結核を判別し得る。スクリーニング一実施形態では、本発明による方法はスクリーニング目的に使用する。すなわち、これは、IP-10のレベルを本発明に従って測定し、測定されたレベルを事前に指定されたレベルと相関させることによって、以前に関連する感染症複数可を診断されていない対象を評価するために使用し、それにより様々な感染症たとえば結核菌の感染症の存在または非存在が示される。別の実施形態では、本発明による方法はスクリーニング目的に使用する。すなわち、これは、IP-10のレベルを、本発明を示す事前に指定されたレベルに従って測定し、測定されたレベルを様々な感染症たとえば結核菌の感染症の存在または非存在と相関させることによって、以前に関連する感染症複数可を診断されていないが、潜伏性疾患の再活性化の危険性にある対象を評価するために使用する。以前に述べたように、本発明は、少なくとも2つの感染性疾患を同時にスクリーニングする方法を開示する。本発明の別の実施形態では、この方法は、血液ドナーからの血液を、それだけには限定されないがたとえば寄生生物またはウイルスによって引き起こされる感染症複数可などの様々な疾患についてスクリーニングするために使用することができる。接触者追跡好ましい実施形態では、本発明による方法は、結核菌などの様々な感染症に曝露された対象の診断に使用し得る。接触者追跡で使用する場合、本発明による方法は、結核菌の感染症などの感染症の存在の決定を援助し得る。他の実施形態では、本発明による方法は、それだけには限定されないが、結核、コロナウイルスたとえば重症獲得呼吸器症候群、インフルエンザ、エボラまたはマールブルグウイルスなどの伝染性の高い感染症の大流行において、伝染性の症例に曝露された対象の診断に使用し得る。結核の場合:接触者追跡で使用する場合、本発明による方法は、通常はTSTまたは現在利用可能なIFN-γ放出アッセイを評価することによって達成される、感染症の存在の決定を援助し得る。強化症例発見Enhancedcasefinding好ましい実施形態では、本発明による方法は、感染症などの様々な疾患の診断に使用し得る。強化症例発見で使用する場合、本発明による方法は、それだけには限定されないが、そうでなければ感染症の微生物学的証拠の欠如通常は臨床症状を評価することによって達成される、処置に対する応答の欠如、および代替診断の欠如または痰培養などの時間のかかるアッセイ数週間が原因で診断が困難である、顕微鏡観察陰性TBなどの感染症の存在の決定を援助し得る。有病率の研究好ましい実施形態では、本発明による方法は、それだけには限定されないが、子供、HIV陽性移民、難民、医療従事者、学童、囚人、検査技師などの目的の集団における感染症などの、様々な免疫学的状態の有病率の研究に使用し得る。有病率の研究で使用する場合、本発明による方法は、通常はTSTによって達成する、集団における潜伏性および活動性のTBなどの感染症の存在の決定を援助し得る。研究目的一実施形態では、本発明による方法は、マイコバクテリア属、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、リステリア属Listeria、腸球菌、ナイセリア属Neisseria、ビブリオ属vibrio、トレポネーマ属treponema梅毒、ボレリア属Borrelia、レプトスピラ属leptospirae、クラミジア属Clamydia、レトロウイルスSIV、HIV-1およびHIV-2、重症急性呼吸器症候群SARSおよびNL-63などのコロナウイルス、サイトメガロウイルス、ロタウイルス、メタニューモウイルス、呼吸器多核体ウイルスRSV、ポックスウイルス、エブスタインEbsteinバーウイルス、エンテロウイルス、モルビリウイルス、ラブドウイルス狂犬病、ルビウイルス風疹、フラビウイルスデング、黄熱、ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルスvaricellea-zosterウイルス、CおよびB型肝炎、リーシュマニア属、トキソプラズマ原虫Toxoplasmagondii、トリパノソーマ、マラリア原虫Plasmodium熱帯熱マラリア原虫falciparum、三日熱マラリア原虫vivax、卵形マラリア原虫ovale、四日熱マラリア原虫malaria、ニューモシスチスカリニpneumocystiscariiniPCPおよび様々な線虫、吸虫からなる群から選択される微生物に由来する潜在的な新しい抗原をスクリーニングする場合に、研究所によって使用され得る。これらの抗原は、たとえば、脂質、多糖分子、タンパク質およびペプチドであることができる。実験室の研究目的で使用する場合、本発明による方法は、ワクチンおよび診断試験の開発に応用可能な、調査した抗原、タンパク質またはペプチドに対する免疫反応性の決定を援助し得る。たとえばペプチドなどのいくつかの抗原分子が、種に特異的または疾患に特異的として同定されているが、invivoでT細胞反応性を誘導するその性能の決定は、感度の高いマーカーが欠如していることが原因で困難である。そのような候補抗原を用いた高温温度での刺激後に決定された免疫シグナル伝達分子複数可のレベルを使用して、潜在的に興味深い新しい抗原または分子についてスクリーニングし、それを同定することができる。より詳細には、結核菌、トラコーマ病原体C.trachomatis、HIV-1またはHCVに由来する抗原の場合、この方法は、これらの抗原の免疫原性を試験する場合に、すなわちたとえばワクチンを開発するためのT細胞の反応性の測度として、研究所によって使用され得る。本発明による決定に関連して本明細書中に記述した任意の特長および/または態様が、本発明による診断、予後診断、監視すること、スクリーニング、研究目的、接触者追跡、強化症例発見および有病率の研究にも同様に適用され、逆もそうであることを理解されたい。本発明は、試験および診断を改善させる方法を提供する。実施例中に見られるように、増加したインキュベーション温度は、最も低い応答者において増加した応答性をもたらす。これらの驚くべき発見は、高温インキュベーション方法は、そうでなければ偽陰性である低応答者からの応答をブーストさせ、より少ない偽陰性試験結果をもたらし、したがって伝統的な摂氏37°Cの方法と比較して感度を増加させることができることを示している。さらに、39°CIL7および抗IL-10では、非常に少ないドナーがマイトジェンに対して低い応答性を示す。これは、本発明者らが患者からの細胞を免疫抑制HIV、癌、様々な種類の医療応答性にすることができ、これが不確定試験結果の量を減少させ、したがって対費用効果を増加させることを示すため、重要な発見である。ワクチン接種本発明の一態様は、参照レベルを超える試験抗原依存性の免疫シグナル伝達分子の応答が、哺乳動物が、以前に抗原と遭遇している、または本明細書中で言及した任意の微生物に対するワクチン接種が原因で抗原と交差反応性を生じる他の抗原と以前に遭遇していることを示す方法に関する。生きていない物質に基づくワクチンに対する応答は、低いレベルの抗原に特異的な免疫シグナル伝達分子をもたらす場合があり、本方法は改善された免疫応答免疫シグナル伝達分子のより高い放出またはより低いバックグラウンドレベルなどをもたらすため、これを使用して、前臨床、臨床治験、および続いてルーチン的設定におけるワクチン応答を検出し得る。本発明の別の好ましい実施形態では、この方法は、ワクチンの効果の監視に有用である。本発明の教示に従って、ワクチン中に含まれる抗原を使用して、IP-10の応答を監視することによって、ワクチン接種の効果を決定することが可能である。そのような手段は、再ワクチン接種の必要性またはワクチンの潜在的な利点の可能性を評価する場合に重要である。したがって、本発明は、前記試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を使用してワクチン接種の応答を検出する方法にも関する。微生物本発明によれば、感染症は、それだけには限定されないが、細菌、寄生生物、真菌、ウイルス、プリオン、および/またはウイロイドなどの微生物によって引き起こされ得る。現在好ましい実施形態では、微生物は、マイコバクティエラ属Mycobactiera、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、リステリア属、腸球菌、ナイセリア属、ビブリオ属、トレポネーマ属梅毒、ボレリア属、レプトスピラ属、クラミジア属、レトロウイルスSIV、HIV-1、HIV-2、サイトメガロウイルス、ポックスウイルス、エブスタインEbsteinバーウイルス、エンテロウイルス、モルビリウイルス、ラブドウイルス狂犬病。ルビウイルス風疹、フラビウイルスデング、黄熱、ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、CおよびB型肝炎、リーシュマニア属、トキソプラズマ原虫、トリパノソーマ、マラリア原虫熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、ニューモシスチスカリニPCP、コロナウイルスたとえば重症獲得呼吸器症候群SARS、エボラまたはマーブルグおよび様々な線虫、吸虫からなる群から選択される。さらにより好ましい実施形態では、微生物は、マイコバクテリア属、リーシュマニア属、クラミジア属およびサイトメガロウイルスからなる群から選択される。感染症がマイコバクテリア属によって引き起こされているまたは引き起こされていた場合、前記マイコバクテリア属は、結核菌M.tuberculosis複合生物結核菌M.tuberculosis、ウシ結核菌およびエムアフリカヌムM.africanum、および相違領域RD1が欠失していないマイコバクテリア属カンサシ菌、エムツルガイ、エムマリヌム、エムフラベセンスM.flavescens、エムガストリイMgastriiまたはヒトに病原性のあるマイコバクテリア属トリ結核菌、らい菌M.lepraもしくは他の非結核性マイコバクテリアに属する。したがって、現在好ましい一実施形態では、マイコバクテリア属は結核菌M.tuberculosisである。結核結核一般的にTBと略記されるとは、最も一般的には肺肺TBを冒すが、身体中のすべての他の器官、たとえば、中枢神経系髄膜炎、リンパ系、循環系粟粒結核、泌尿生殖器系、骨および関節も冒すことができる、細菌である結核菌Mycobacteriumtuberculosis、M.tuberculosisによって引き起こされる感染性疾患である。また、結核菌の感染症は無症候性のまま保たれる場合もあり、これは一般的に潜伏性、休眠中または無症候性のTB感染症として知られる。この段階から、感染症は活動性疾患へと進行することができ、これは、多くの場合は免疫不全、たとえばHIVの同時感染症または免疫抑制性の処置によって引き起こされるものが原因である。現在好ましい実施形態では、本発明は、結核の様々な、たとえば明確な提示、すなわち、活動性結核性疾患、活動性の顕微鏡観察陽性または顕微鏡観察陰性のTB感染症、潜伏性結核感染症、および最近の結核感染症を診断および監視する方法に関する。この方法は、結核菌の分泌タンパク質の選択されたペプチド配列に応答する抗原提示細胞たとえば単球/マクロファージと相互作用する抗原に特異的なTリンパ球による、IP-10などの免疫シグナル伝達分子の産生の評価に基づく。これらのペプチド配列は、その免疫原性およびその特異性について選択されており、潜在的には他のペプチドも同様に使用することができる。この方法は、活動性結核性疾患を診断するため、痰陽性の肺結核を有する患者と接触した健常者における最近の感染症を診断するため、潜伏感染を有する健常者を診断するため、肺のおよび肺外の結核の場合は処置に対する応答を監視するため、および潜伏感染と活動性結核病状とを判別するために使用することができる。哺乳動物哺乳動物または対象への言及には、ヒト、または霊長類、それだけには限定されないが、ヒツジ、ウシ、ブタ、ウマ、ロバ、ヤギ、臨床検査動物およびコンパニオン動物などの家畜動物を含めた非ヒト種が含まれる。したがって、本発明は、ヒトの医学において応用を有しており、また、家畜および獣医学ならびに野生生物の応用も有する。以下の実施例では、試験抗原に特異的な細胞媒介性免疫応答を増大させるための、高温状態の使用ならびに/またはIL7および抗IL-10の存在を、結核菌からの抗原を用いた刺激を例として使用して実証する。全般的な方法ドナー予備研究実施例1には、血液試料を、研究現場で採用した健康なドナー、およびビィドゥビェ病院、感染性疾患科DepartmentofInfectiousDiseases、HvidovreHospitalの外来患者クリニックに通う、TBが疑われるまたはその処置を開始する患者から採取した。BCGワクチン研究実施例2~5および7には、血液試料を、研究現場であるデンマークのビィドゥビェ病院、感染性疾患科または臨床研究センターClinicalResearchCentreの外来患者クリニックで採用した35人の健康なドナーから採取した。35人のドナーをBCGワクチン接種またはBCGワクチン非接種に分類し、デンマーク人の子供のBCGワクチン接種は1975年に廃止されたため、ドナーが自身のBCGワクチン接種状態を知っていない限りは、分類は出生年に従って行った。TB診断研究実施例6~7には、血液を、デンマークのビィドゥビェ病院、感染性疾患科の外来患者クリニックに通う、TBが疑われるまたはその処置を開始する患者から採取した。試薬および器材BCGワクチン研究には、TB10.4ペプチドを抗原として使用しJPTPeptideTechnologiesGmbH、ドイツBerlin、インゲンマメPhaseolusvulgarisからのレクチンをマイトジェンとして使用したPHA、Sigma-AldrichCorp、米国ミズーリ州。追加の刺激剤免疫変調剤として、本発明者らは組換えヒトIL-7RDSystemsInc.、米国Minneapolisおよびヒトインターロイキン10に対するモノクローナル抗体抗IL-10、MBLIntl.、米国マサチューセッツ州を使用した。温度インキュベーションには、本発明者らはインキュベーター、水浴および加熱ブロックを使用した。TB診断研究には、QuantiFERONTBGoldIntube採血チューブを使用した。これらは、TB特異的抗原ESAT-6、CFP-10、TB7.7を含有する抗原チューブ、PHAを含有するマイトジェンチューブ、およびnilチューブからなる。BCGワクチン研究およびTB診断研究には、37°Cでのインキュベーションにはインキュベーターを使用した一方で、39°Cでのインキュベーションにはインキュベーター内に入れた水浴を使用した。温度はそれぞれのインキュベーションのラウンド中に少なくとも2時間間隔で少なくとも4回確認し、0.2°Cを超える変動はなかった。バイオマーカー測定のための採血およびインキュベーションTB診断研究のために、血液をヘパリン処理したチューブBDVacutainerSystems、英国PlymouthまたはQuantiFERON採血チューブ中に採取した。予備研究には、1mlの血液をnunccryotubeThermoFisherScientific、デンマークRoskildeに移し、ここで本発明者らはインキュベーションを最適化するための一連のステップに従った。ステップ1:PHAおよびTB10.4の、それぞれ0.16~20μg/mlおよび0.04~20μg/mlの滴定。ステップ2:3回の連続的な試行における、様々な温度での試料のインキュベーション:i20、30、37、39、41および43°C、ii37、38、39、40、41および42°Cならびにiii37.0、37.3、37.9、38.5、39.0、39.5および39.9°Cで、それぞれ18時間のインキュベーション。ステップ3:0、6、9、12、15、18、24および48時間、それぞれ37および39°Cでの試料のインキュベーション。ステップ4:IL-72.0ng/ml、抗IL-101.0μg/mlおよびIL-7と抗IL-10の両方と共に、18時間、それぞれ37および39°Cで、かつそれぞれのチューブに2mg/mlのデキストロースを加えた、試料のインキュベーション。IL-7および抗IL-10の濃度は文献から採用した[Feske、ClinVaccImmunol、2008、Denis、ClinVaccImmunol、2007]。BCGワクチン研究には、1mlの血液をnunccryotubeThermoFisherScientific、デンマークRoskildeに移し、関連する刺激剤を加えた。それぞれの試行について、3つの試料を異なる刺激剤と共に、すなわち、抗原チューブをTB10.4ペプチド懸濁液と共に、マイトジェンチューブをPHA懸濁液と共に、およびバックグラウンド測定用にnilチューブをPBSと共に、追加のサイトカインなしで、IL-72.0ng/mlと共に、抗IL-101.0μg/mlと共に、またはIL-7および抗IL-10の両方と共に、18時間、それぞれ37および39°Cでインキュベーションして、ドナーあたり合計24本チューブが得られた。デキストロースをすべてのチューブに2mg/mlの濃度まで加えた。QuantiFERON研究には、1mlの血液をそれぞれの採血チューブnil、抗原およびマイトジェンに移した。その後、これらを、追加の刺激剤なしで、またはIL-72.0ng/mlおよび抗IL-101.0μg/mlと共に、摂氏37または39°Cで18時間インキュベーションした。測定予備およびBCGワクチンの研究には、IP-10の測定を血漿収集の直後に行い、ここで試料を摂氏-80°Cで凍結した。6カ月後、BCGワクチン研究試料を解凍し、IFN-γの測定を行った。TB診断研究には、血漿をインキュベーションの直後に収集し、摂氏-80°Cで凍結した。IP-10およびIFN-γの測定は6~8カ月後に同時に行った。IP-10の測定には、試料をアッセイ希釈剤で1:9に希釈し、サンドイッチELISAを使用して二つ組で2000pg/mlから31.8pg/mlまでの直線性を有する検量線を用いて実行した。手短に述べると、NUNCMaxiSorbプレートを、ヒトIP-10に特異的なマウスモノクローナルmAbで終夜コーティングした。プレートを洗浄し、10のウシ血清アルブミンを含む緩衝液を使用して遮断した。その後、血漿試料を二つ組で加え、1時間、摂氏37°Cでインキュベーションした。その後、プレートを洗浄し、西洋ワサビ過酸化酵素とカップリングさせたマウス検出mAbを加え、摂氏37°Cで45分間インキュベーションさせた。その後、プレートを×7洗浄し、TMB基質を加えた。プレートを15分間展開させ、その後、1MのH2SO4を加えることによって反応を停止させた。市販のQuantiFERON-TBGoldQFT-ITELISAを使用してIFN-γレベルを測定した。IFN-γのレベルをより良好に定量するために、QFT-ITELISAの検量線を延ばして、800~12.5pg/mlの直線性を与えた。すべての他の側面は製造者の指示に従った。1IUは50pgのIFN-γに等しい。提示したデータでは、別段に指定しない限りはバイオマーカーのバックグラウンドレベルnilを減算した生の値。バイオマーカーの抗原依存性レベルをaと示す一方ですなわちaIFN-γおよびaIP-10、マイトジェン誘導性のバイオマーカーレベルをmと示すすなわちmIFN-γおよびmIP-10。白血球のレベルおよび分画はビィドゥビェ病院の臨床検査室ClinicalLaboratoryで測定した。統計分析。データはSAS9.2SASInstitute、米国ノースカロライナ州Caryを使用して分析した。どのパラメータも正規分布されていなかったため、すべての試験はノンパラメトリック試験を使用して行ったウィルコクソン符号順位検定およびスピアマン相関試験。相乗効果は、それぞれの刺激単独を加算した値よりも大きい、2つの刺激抗IL-10、IL-7および温度を合わせた効果として定義された。すべての試験は両側で行い、p値≦0.05を有する結果が有意とみなされた。倫理的配慮。研究を実施する許可は、コペンハーゲン自治体の倫理委員会から得た。すべての研究参加者は参加のインフォームドコンセントを書面で預け、いつでも研究から脱退することが自由であった。[実施例1]予備研究高温温度はIP-10およびIFN-γの応答を増大させる。本発明者らは、インキュベーション温度を上昇することによってIP-10およびIFN-γの応答を増大させることができるかどうかを調査した。結果図1は、予備研究からの2人の代表的な個体を示すスパゲッティ図であり、これらの実験の発見を11人の追加の個体でも再現することができた。本発明者らは、シグナルは摂氏39.5°Cまでの温度で一貫してかつ有意に増加したことを見い出したが、より高い温度では応答の急減を観察した。結論として、高温状態でのインキュベーションは、摂氏37°Cでのインキュベーションと比較して、BCGワクチン接種した個体からの全血をBCG特異的抗原で刺激した場合に、増加したIP-10およびIFN-γの応答をもたらす。高温でのインキュベーションは、偽陰性および不確定試験結果の数を低下させ、したがって、抗原に特異的な刺激の後に誘導されたIP-10および/またはIFN-γなどのバイオマーカーの存在/レベルの決定に依存する試験の感度および対費用効果を改善させるための容易な方法として、大きな潜在性を有している。[実施例2]BCGワクチン研究全血を結核菌特異的抗原TB10.4で刺激することによって誘導した血漿IP-10のレベルを測定することによる、ドナーの非応答者および応答者への区分。合計35人のドナー、すなわち、16人のBCGワクチン接種し、したがってTB10.4抗原に応答する可能性の高いドナー、および19人のワクチン接種していない、TB10.4抗原に応答する可能性の低いドナーを試験した。全血を採血し、18時間、それぞれ摂氏37°Cおよび摂氏39°Cで、抗原TB10.4からのペプチドのカクテルと共にインキュベーションした。予備調整に基づいて、本発明者らは、標準の摂氏37°Cのインキュベーションを新しい摂氏39°Cのインキュベーションと比較することを選択した。本発明者らは、安定なシステムに関する概念証明のデータを望んでいたため、明らかに劣性の摂氏39°C~摂氏39.5°Cを選択した。結果本発明者らは、全血を34人の健康なドナーから採取した静脈穿刺に失敗したため、1人のBCGワクチン接種したドナーを排除した。TB10.4と共にインキュベーションした全血試料の血漿中のIP-10のレベルをインハウスELISAによって測定した上述のように。IP-10を測定した後、本発明者らは参加者を2つの群、すなわち、誰がinvitro免疫応答を生じさせることができるかおよびできないかによって定義した、応答者および非応答者に分割した標準のインキュベーション温度37°Cでインキュベーションした場合に、タンパク質TB10.4からのペプチドに対するIP-10産生500pg/mlを用いて、自由裁量で定義図2および表1を参照非応答者および応答者の間に、年齢にも白血球数にも有意な差異は存在しなかった。[実施例3]IL-7および/または抗IL-10を用いたまたは用いない高温インキュベーションはIP-10の応答を改善させる。本発明者らは、上述の34人の応答者および非応答からの試料を試験することによって、IP-10の応答に対する高温インキュベーションの効果を妥当性確認した。次に、本発明者らは、インキュベーション中のサイトカインIL-7の存在が応答を改善させるかどうかを試験した。また、本発明者らは、系中の既知の主要なcardinal阻害剤を阻害することすなわち阻害剤を阻害することによって、阻害性サイトカインIL-10の遮断がIP-10の応答に影響を与えるかどうかも試験した。結果図3A~Dは、IP-10の応答を8列で示す。最初の4列は摂氏37°Cでのインキュベーションを表し、最後の4列は摂氏39°Cでのインキュベーションを表す。研究参加者からの血液をアリコートへと分割し、すべての様々な培養条件に供した、すなわち、列を直接比較することができる。バックグラウンドレベルnilを抗原およびマイトジェン応答から減算している。図3Aは、非応答者non-resp.における、バイオマーカーレベルに対する様々なインキュベーション条件の影響を示す。様々な培養条件間で応答性のわずかな有意な差異が見られたが、興味深いことに、非応答者のうちの2人が摂氏39°Cで応答するようになった。非応答者群の中でBCGワクチン接種した人は、現在使用されている方法では非応答者となるこの2人だけであり、また、この2人は、図2中の非応答者のうちで最も高いIP-10シグナルを有する者でもあった。これらの驚くべき発見は、高温インキュベーション方法は、そうでなければ偽陰性である低応答者からの応答をブーストさせ、したがって、伝統的な摂氏37°Cの方法と比較して感度を増加させることができることを示している。図3Bは応答者の結果を示す。摂氏37°Cと比較して摂氏39°CでIP-10の応答性の特筆すべき改善が見られる。IL-7の添加、IL-10の遮断、および特に両方の組合せが、IP-10シグナルをさらに改善させる。したがって、非常に少数が摂氏39°Cで低応答者のままである。図3Cでは、本発明者らは、インキュベーションの様々な改変に伴う増加したバックグラウンドIP-10レベルの潜在的な問題を調査する。特に高温が実際に、系中でより高い度合のノイズをもたらすことは明らかであるが、このレベルは、応答者からの応答で見られる特筆すべき改善と比較して無視できる軸スケールの差に注目されたい。図3Dでは、本発明者らは、非特異的PHAマイトジェン刺激に対するIP-10の応答を比較する。本発明者らは3Bからの発見を再現しており、したがって、この発見が、特異的ペプチドで刺激した場合のみだけでなく、非特異的刺激でも存在することを実証している。したがって、34人の応答者および非応答者を試験する際、本発明者らは、実施例1でも観察されたように、摂氏39°Cでの高温インキュベーションがIP-10の応答を改善させることを見い出した。グラフから、マイトジェンに対するIP-10の応答性の増加は抗原刺激に対する応答性よりも低かったように見えるが、アッセイの上限濃度がIP-10およびIFN-γでそれぞれ20000pg/mlおよび800pg/mlであるため、これは人為結果artefactであり、したがってこれらの限界を超える濃度は不正確である。結論として、この発見は、高温インキュベーション方法が、放出されたIP-10の規模を増加させ、偽陰性および不確定試験結果の数を低下させ、これにより伝統的な摂氏37°Cの方法と比較して感度を増加させることができることを示している。さらに、IL-7の添加、IL-10の遮断、および特に両方の組合せが、BCGワクチン接種した個体からの全血をBCG特異的抗原で刺激した場合に、IP-10の応答を増加させる。[実施例4]高温インキュベーションならびにIL-7および/または抗IL-10の存在がIFN-γの応答を改善させる。本発明者らは、34人の応答者および非応答者からの試料を試験し、IL-7の添加またはIL-10の遮断がIFN-γの応答を改善させるかどうかを分析することによって、IFN-γの応答に対する高温インキュベーションの効果を妥当性確認した。結果図4Aでは、IP-10非応答者はIFN-γ非応答者でもあったことが見られる。本発明者らは、図3Aからの発見を、同じ2人のBCGワクチン接種した非応答者が39°Cのインキュベーションによって急にTB-10.4抗原に応答したことで再現できたことに満足であった。図4Bは、TB10.4応答者のIFN-γレベルに対するインキュベーション条件の効果を示しており、本発明者らは、IP-10で見られた特筆すべき改善がこのワクチンリコール試験システムにおいてIFN-γについてそれほど明白でなかったという発見に驚いた。ノンパラメトリック分析によって分析した場合に、上昇した温度単独での顕著な改善は存在しなかったが、本発明者らは、増加したインキュベーション温度が、最も低い応答を有する応答者において増加した応答性をもたらしたことを見い出した。図4Cは、摂氏39°Cのインキュベーション温度が、顕著により低いIFN-γのバックグラウンドレベルをもたらすことを例示している。興味深いことに、これは、抗原に特異的なIFN-γの応答性の改善はIP-10ほど明白でないが、より低いバックグラウンドレベルが系中でより良好なシグナル対ノイズ比をもたらす可能性があることを示す、IP-10で見られるものとは逆の効果である図5中に詳しく示す。図4Dでは、本発明者らは非特異的PHAマイトジェン刺激に対するINF-γの応答を比較し、この発見は図3Dでの発見に類似している。しかし、摂氏39°Cでのインキュベーションが単独で応答を有意に増加させることは、注目すべきである。さらに、摂氏39°CIL7および抗IL-10では、マイトジェンに対する応答性が低いドナーが非常に少数であることが見られる。したがって、34人の応答者および非応答者を試験した際、本発明者らは、摂氏39°Cでのインキュベーションの、INF-γの応答に対する同様の有益効果を見い出した。グラフから、マイトジェンに対するINF-γの応答性の増加は抗原刺激に対する応答性よりも低かったように見えるが、アッセイの上限濃度がIP-10およびIFN-γでそれぞれ20000pg/mlおよび800pg/mlであるため、これは人為結果artefactであり、したがってこれらの限界を超える濃度は不正確である。結論として、高温状態でのインキュベーションは、全血をBCG特異的抗原で刺激した場合に、最も低い応答者において増加した応答性および減少したバックグラウンドレベルをもたらす。さらに、IL-7の添加およびIL-10の遮断はINF-γシグナルを増大させた。したがって、非常に少数が摂氏39°Cで低応答者のままである。したがって、本発明の一実施形態は、免疫抑制HIV、癌、様々な種類の医療を有する患者からの細胞を、摂氏39°Cでのインキュベーションによって応答性にさせる方法に関する。これにより、これらの困難な患者群において、免疫診断試験のより良好な性能すなわちより少ない不確定試験結果がもたらされる。[実施例5]IP-10およびINF-γの産生に対する、高温インキュベーションならびにIL-7および/または抗IL-10の存在の相乗効果。すべての刺激を組み合わせることで、抗原およびマイトジェンの両方の刺激後のすべての他の組合せと比較して、IP-10およびIFN-γの両方のより優れたレベルが与えられた。本発明者らは、高温インキュベーション温度と抗IL-10を添加する組合せを除いて、抗原およびマイトジェンの両方の刺激後に高温インキュベーションをIL-7および/または抗IL-10の添加と共に使用することの、IP-10産生に対する相乗効果を見い出したすべてp0.05、表2。バックグラウンドIP-10レベルで観察される相乗効果は、刺激を適用した際の増加したバックグラウンドIP-10レベルが原因であった。IFN-γでは、相乗効果は、抗原刺激後に高温インキュベーションをIL-7および抗IL-10と一緒に使用した際に観察された。また、抗IL-10の添加を用いてまたは用いずに、IL-7を加え、高温インキュベーションを使用することは、バックグラウンドIFN-γレベルを相乗的に下げた。本発明者らは、単球またはリンパ球数と、IP-10またはIFN-γの抗原依存性またはマイトジェン誘導性の産生レベルとの間に、相関を見い出さなかったデータ示さず。[実施例6]高温インキュベーションは、TBを診断するためのTB特異的試験抗原に対するIFN-γおよびIP-10の両方の応答性を増加させる。その後、本発明者らは、IL-7の添加およびIL-10の遮断を用いたまたは用いない、摂氏39°CでのQuantiFERONTBGoldIntube試験管のインキュベーション後のIFN-γおよびIP-10レベルを、それぞれ摂氏37°Cでの通常のインキュベーションと比較した。血液を、TBが疑われるまたはその処置を開始する、結核が疑われる9人の患者から採取した。血漿中のIP-10のレベルはインハウスELISAによって測定し上述のように、IFN-γのレベルはQuantiFERONTBGoldELISAを使用して測定した上述のように。結果図5A~Cおよび6A~Cは、IP-10およびIFN-γについてそれぞれIP-10の応答を4列で示す。最初の2列は摂氏37°Cでのインキュベーションを表し、後者はIL-7および抗IL-10を用いたまたは用いない、摂氏39°Cでのものをそれぞれ表す。バックグラウンドレベルnilを抗原およびマイトジェンの応答から減算している。図5Aおよび6Aでは、本発明者らは、インキュベーションの様々な改変に伴う増加したバックグラウンドレベルの潜在的な問題を調査する。様々なインキュベーション条件間でバックグラウンドIP-10レベルの有意な増加は見い出されなかった。興味深いことに、ワクチン特異的応答の発見と類似しているが、IFN-γのバックグラウンドレベルは、摂氏39°Cでインキュベーションした場合により低かった。図5Bおよび6Bは、抗原チューブ中のIP-10およびIFN-γのレベルをそれぞれ示す。特にIL-7を加え、IL-10を遮断した場合に、摂氏37°Cと比較して、摂氏39°CでIP-10およびIFN-γの両方におけるTB特異的抗原の応答性の特筆すべき改善が見られる。効果は、ワクチン特異的応答で見られる効果よりもさらに明白である図3および4中。したがって、非常に少数が摂氏39°Cで低または非応答者のままである。図5Cおよび6Cでは、本発明者らは、PHAマイトジェンチューブ中のIP-10およびIFN-γの応答をそれぞれ比較する。本発明者らは5Bおよび6Bからの発見を再現しており、したがって、この発見が、特異的ペプチドで刺激した場合のみだけでなく、非特異的刺激でも存在することを実証している。したがって、本発明者らは、疑わしいTB患者をQuantiFERONTBGoldIntube試験システムで試験した際、上記のワクチンリコールの実施例でも観察されたように、摂氏39°Cでの高温インキュベーションがIP-10およびIFN-γの応答をどちらも改善させたことを見い出した。試験結果へと解釈した際、摂氏37°Cでインキュベーションした場合に、IL-7および抗IL-10を加えた場合でも、1人の患者が陰性17.5pg/ml未満の抗原応答および25pg/mlを超えるマイトジェン応答、2人が不確定なQuantiFERON結果17.5pg/ml未満の抗原応答および25pg/ml未満のマイトジェン応答を有していた。quantiferon陰性結果を有する患者は、インキュベーション条件に関係なく陰性のままであった。最初はQuantiFERON不確定結果を有する1人の患者が、摂氏39°Cでインキュベーションした際に、どちらのIFN-γも非常に高レベルの陽性へと変換された。不確定のquantiferon結果を有する他方の患者は、抗原性刺激後に一貫して低いIFN-γの応答を有するが摂氏39°Cでのインキュベーション後にのみマイトジェン刺激に強く応答しており、摂氏39°Cでのインキュベーション後にquantiferon陰性であるとして明らかとなった。これらの患者において同じパターンがIP-10でも見い出された。結論として、高温状態でのインキュベーションは、最も低い応答者においてでも、結核菌特異的抗原に対する増加したIP-10およびIFN-γの応答性をもたらす。さらに、これは、全血を結核菌に特異的な抗原で刺激した場合にもバックグラウンドIFN-γレベルを減少させた。IL-7の添加およびIL-10の遮断は、IP-10およびIFN-γの両方のレベルを増大させた。したがって、非常に少数が摂氏39°Cで低応答者のままである。これらの発見は、高温インキュベーション方法が偽陰性および不確定試験結果の数を低下させ、それにより伝統的な摂氏37°Cの方法と比較して感度を増加させることができることを示している。この方法はワクチン応答および抗原に特異的な刺激に基づく診断試験について例示されており、抗原の特異性を変化させることによって、それだけには限定されないが癌の診断学および癌の監視などの他の指標にも拡張することができる。[実施例7]この方法は、nilと抗原との間の分離を改善させ、これにより抗原特異的応答のシグナル対ノイズ比を改善させる。なぜ本方法がIFN-γの診断的情報を改善させるかをより良好に例示するために、すべての様々な培養条件について、ワクチン特異的抗原刺激後に、抗原およびマイトジェンの生の値をnilと比較してプロットした図7。nilと抗原との間のより良好な分離は、より良好なシグナル対ノイズを意味する。摂氏39°CIL-7抗IL-10のカクテルが、より高い抗原応答およびより低いnil応答、したがってnilと抗原との間の完璧な分離をもたらすことは、明らかである。改善された分離を完全に理解するために、マイトジェンおよび結核菌に特異的なESAT6、CFP10、TB7.7抗原を用いた刺激の両方について、応答比を計算したすなわち刺激したレベルをnilレベルで除算した。図8AにIFN-γnil値を提示し、抗原およびマイトジェンを用いた応答比をそれぞれ8Bおよび8C中に提示する。図9AにIP-10nil値を提示し、抗原およびマイトジェンを用いた応答比をそれぞれ9Bおよび9C中に提示する。ここでも、摂氏39°C任意選択でIL-7および抗IL-10カクテルを用いるがより高い抗原応答およびより低いnil応答、したがってnilと抗原との間の完璧な分離をもたらすことは明らかである。参考文献WatersWR、NonneckeBJ、OlsenSC、PalmerMV。ウシ結核菌に感染した畜牛からの全血培養物におけるインターフェロン-ガンマの応答に対する、前培養の保持時間および温度の効果Effectsofpre-cultureholdingtimeandtemperatureoninterferon-gammaresponsesinwholebloodculturesfromMycobacteriumbovis-infectedcattle。VeterinaryMicrobiology、2007、1192~4:277~282。Robbe-AustermanS、KrullAC、StabelJR。パラ結核を検出するためのガンマインターフェロンELISAの、全血に対する時間遅延、温度効果および陽性対照の評価Timedelay,temperatureeffectsandassessmentofpositivecontrolsonwholebloodforthegammainterferonELISAtodetectparatuberculosis。JournalofVeterinaryMedicine.2006、535:213~7。BasuS、SrivastavaPK。発熱様温度がhsp90の誘導を介して樹状細胞の成熟を誘導するFever-liketemperatureinducesmaturationofdendriticcellsthroughinductionofhsp90。InternationalImmunology、2003、159:1053~61。HuangYH、HaegerstrandA、FrostegardJ。増殖性応答およびリンパ球活性に対するinvitro高温の効果Effectsofinvitrohyperthermiaonproliferativeresponsesandlymphocyteactivity。ClinicalExperimentalImmunology、1996、103:61~66。KappelM、DiamantM、HansenMB、KlokkerM、PedersenBK。血液単核細胞部分組の増殖性応答、ならびにインターロイキン1および6、腫瘍壊死因子-アルファおよびインターフェロン-ガンマの検出に対する、invitro高温の効果Effectsofinvitrohyperthermiaontheproliferativeresponseofbloodmononuclearcellsubsets,anddetectionofinterleukins1and6,tumournecrosisfactor-alphaandinterferon-gamma。Immunology.1991年7月、733:304~8。SchillerI、WatersWR、VordermeierHM、NonneckeB、WelshM、KeckN、WhelanA、SigafooseT、StammC、PalmerM、ThackerT、HardeggerR、Marg-HaufeB、RaeberA、OeschB。ウシ結核菌に感染した畜牛を検出するための全血ガンマインタ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