"有効アミン基の過半数がアルキル化した滅菌された、非架橋の、細胞除去された、かつ精製された哺乳類の組織を含む再吸収可能かつ再造形可能な移植材料。組織が漿膜および繊維漿膜からなる群から選択される、請求項1に記載の材料。組織が心膜、腹膜、大腿筋膜、硬膜、真皮、および小腸粘膜下組織からなる群から選択される、請求項2に記載の材料。組織がウシの心膜を含む、請求項3に記載の材料。材料が1,2-エポキシ-RただしRは炭素原子6個までのアルキル基からなる群から選択されるアルキル化剤によってアルキル化されている、請求項1に記載の材料。アルキル化剤がプロピレンオキシドである、請求項5に記載の材料。アルキル化剤がメチルグリシジルエーテルである、請求項1に記載の材料。材料が平坦またはテキスチャー仕上げされたシートまたはストリップとして提供される、請求項1に記載の材料。材料を硬膜形成、胸部、腹部、泌尿器科、眼科、心臓、および血管の手術からなる群から選択される外科的用途に使用するようにした、請求項1に記載の材料。請求項1に記載の再吸収可能で再造形可能な移植材料の調製方法であって、前記方法が組織をアルキル化剤でその組織中の有効アミン基の過半数がアルキル化されるのに適した条件下で処理するステップと、処理された組織をインビボで使用するために滅菌するステップとを含む、方法。清浄化した組織を前記アルキル化のステップの前に塩基で処理する、請求項10に記載の方法。アルキル化剤をpH約9と約11の間で用いる、請求項10に記載の方法。アルキル化剤の濃度が約2v/vと約5v/vの間にある、請求項10に記載の方法。組織を少なくとも48時間アルキル化剤に曝す、請求項10に記載の方法。実施例1.ウシの心膜嚢を、最低年齢が生後12ヵ月のUSDAが検定した健康な雌牛から採取した。新鮮な心膜を取り、一連の洗浄液、その後最終的に氷で冷やした洗浄水を通した。組織から外生組織を一掃し、新鮮な状態または-20°Cに保管して使用した。下記の通常の手順を用いて本発明に従って処理済みの組織を調製した。すべての試験手順は20~25°Cで行なった。NaOHと中和1.ウシの心膜40~45gを計量する。2.心膜を10MNaOHDI水1lに溶かしたNaOH40g1l中に60~65分間置く。pH測定用の試料を浸液の端から採取する。3.NaOHをデカントし、組織を軽く搾り、濾過したDI水2l中に15~20分間置く。4.DI水をデカントし、組織をクエン酸塩緩衝液DI水2lに溶かしたクエン酸ナトリウム28gおよびクエン酸20g2l中に60~65分間置く。pH測定用の試料を浸液の端から採取する。5.クエン酸塩緩衝液をデカントし、組織を軽く搾り、組織を別のDI水2l中に30~35分間置く。組織のアルキル化1.5プロピレンオキシド溶液02M炭酸塩緩衝液pH105~106950mlに溶かしたプロピレンオキシド50mlを調製する。2.NaOH処理した組織をプロピレンオキシド溶液中に置く。3.プラットホーム式ふりまぜ機で72~96時間混合する。4.組織を溶液から取り出し、DI水15l中に24時間置く。組織をヒドロキシプロピル化した後、アミン指数および未反応アルキル化剤の定量検定を行なって十分アルキル化されたことおよびPOを検証する。組織をワイヤメッシュのラック上に移し、VirtisGenesis式真空乾燥機中で115mTorr約013Paで乾燥した。結果:表1コラゲナーゼ活性下記の表は、本明細書に記載の方法で調製した再吸収性組織をコラゲナーゼ001mgmlで24~96時間インキュベートしたときのコラゲナーゼ検定の結果を提供する。ODmgは、コラゲナーゼ酵素の作用によって分解したコラーゲンの量の相対値である。本発明のアルキル化した組織を含む各組織がコラゲナーゼの消化を受けやすいことが分かり、これはそれらが体内で再吸収される可能性の現れである。表2.pH依存性下記の表は、5PO溶液中で2種類の異なるpHでインキュベートした場合のNaOHPO処理した組織のアミン指数の結果を提供する。組織pH95でアミン指数pH105でのアミン指数NaOHPO84769629関与した実験環境下では、アルキル化の程度はpHが高いほど増加する可能性があることが分かる。表3.時間依存性下記の表は、5PO溶液中pH105で、ある時間インキュベートした場合のNaOHPO処理した組織のアミン指数の結果を提供する。組織POインキュベーション72時間POインキュベーション72時間NaOHPO9395962972時間から96時間までのインキュベーション期間中でさえ、わずかにアルキル化の増加があることが分かる。表4.未反応アルキル化剤の定量検定下記の表は、未反応アルキル化剤の検定から得られる標準曲線の例である。570でのOD未反応アルキル化剤07734上記データをプロットするとそれは標準曲線を提供し、一般的な調製においてこの実施例の実験条件下では04から05の間のプロピレンオキシドがアルキル化溶液中に未反応のまま残ると推定される。表5.含水率下記の表は、組織がアルキル化プロセスを通過する72~96時間の間にに従って含水率がいかに増加する傾向にあるかを示している。表6.変性温度下記の表は、組織がアルキル化プロセスを通過するに従って変性収縮する温度が低下する傾向にある様子を示している。実施例2.POでキャップしたウシの心膜のインビボにおける生体適合性および生体安定性の調査。この調査では炎症、物性の変化、および宿主細胞による移植組織の基質の再造形の観点から、皮下の動物モデルでプロピレンオキシドPOでキャップした非架橋のウシの心膜をグルタルアルデヒドGAで架橋したウシの心膜と比較した。PO処理した組織の調製新鮮なウシの心膜の貼布約4cm×6cmをまず1NNaOH中で1時間処理し、続いて50mMクエン酸塩緩衝液4l中に2~3回、1時間浸漬した。次いでNaOH処理した組織を、02MNaHCO3緩衝液pH105100mlおよび2プロピレンオキシドを含有する大型の試験管の中に入れた。管を自動ロッカー上で室温、48時間静かに振とうさせた。組織をpHレベル6575までの塩類液で十分に洗浄し、70エタノール中で貯蔵した。GAで架橋した組織の調製グルタルアルデヒドGAで架橋したウシの心膜の貼布は、SupplePeriGuardを含むPeriGuardの商標で市販されており、BioVascularIncStPaulMNから入手した。滅菌濡れた組織の貼布を試料サイズ1cm×2cmに切断した。試料をプラスチックの包装紙各4枚上に平らに置き、プラスチックの包装紙を巻きつけることによって密封した。包まれた試料をプラスチック/アルミニウム箔の袋の中に入れ、その後アルゴンガスでパージし、ヒートシールした。袋は電子ビーム照射25±25Kgyによる滅菌用に送られた。移植動物は生後3ヶ月のFisher344の雄のラットである。各動物は2種類の異なる材料の移植組織を与えられた。手術の手順では動物をペントバルビタール5mg100gで麻酔し、背の上部を剃毛し、ブタジエン溶液で洗浄した。動物の背の中線上に2cmの切開を行なった。皮下組織の平坦部を横に切り裂いて背の左右の側に袋を形成した。1枚の試料を挿入し、各袋の中に平らに広げた。傷を手術用縫合糸で塞ぎ、ブタジエンで洗浄した。麻酔から覚めた後、動物を檻に戻した。外殖移植して4および12週間後、動物を二酸化炭素の吸入によって屠殺した。試料を周囲の粘着組織と一緒に回収した。回収した試料を3片に切断した。1片は03アジ化ナトリウムを含む塩類液中で貯蔵して縫合保持試験に使用され、第2片はブーアン固定液中で固定して包埋し、薄片に切り、ヘマトキシリンおよびエオジンHE染色するために送られ、第3片は凍結して酵素消化検定に使用された。縫合保持の測定補綴材から縫合糸のループを引き抜くのに必要な力を決定する縫合保持試験をChemDyneMC1000式引張試験装置で行なった。50Prolene縫合糸を、組織の端から2mm食い込んだところで組織を貫いてループにした。縫合糸のループを抜取率20Hz、速度100mm/分で引き抜いた。酵素消化検定組織試料をそれぞれ40UmlコラゲナーゼWorthingtonBiochemCorp10mlおよび005トリプシン/EDTA溶液10mlに浸漬した。試料を37°Cで12時間インキュベートし、組織の完全性を目視で得点を与えた。結果:縫合の保持GAで架橋したウシの心膜は、移植期間Eビームによる滅菌後12週間までを通じてその縫合保持特性をほぼ維持したが、POでキャップした組織はEビームによる滅菌および移植終了後にかなりの変化があった表7。Eビーム照射は、POでキャップした組織の縫合保持率を約60まで低下させた。縫合保持率は、移植期間中にさらに低下した。しかしながら、POでキャップした組織の縫合保持率は移植後4週間で最も低いレベルに達したのち時間とともに増加するようにみえることは興味深い。表7ラットにおけるEビームによる滅菌および移植前および後の組織試料の縫合保持力g酵素消化GA架橋は、移植の前および後12週間までのウシの心膜をコラゲナーゼおよび/またはトリプシンに対して耐性にした。しかしながらPOでキャップしたウシの心膜は、移植前にコラゲナーゼおよびトリプシンによって容易に消化された。ウシの心膜は、その自然の状態すなわち非架橋ではコラゲナーゼによって消化できるが、トリプシンによって消化できないコラーゲンにより大部分が作られているので、その組織がPOキャップ後トリプシンに影響されやすくなったことは興味深い。移植の終了後、POでキャップした試料は4週間目ではトリプシンにより完全に消化可能であったが12週間目では部分的であった。移植の後期の段階では試料中に新しいコラーゲンが形成された可能性がある。組織学的評価組織学的試料のスライドガラスHE染色を光学顕微鏡を用いて評価し、1から4段階で得点を与えた表7。移植後4週間でGA架橋した試料は、主に移植組織の外面に見られるかなりの量の多形核白血球PMN、マクロファージ、および異物巨細胞、ならびにリンパ球を特徴とする軽微ないし中位レベルの炎症性の応答を引き起こした。これと比べてきれいに見え、きわめてわずかな炎症性の細胞が存在するPOでキャップした試料では、きわめて軽度な反応が見られるかまたは全く見られなかった。GA架橋した組織の移植組織の周囲には繊維質の被嚢が現れたが、POでキャップした試料ではほとんど検出されなかった。POでキャップした移植組織は層状剥離しぼろぼろになっているように見えたが、GA架橋した組織の基質中のコラーゲン繊維構造は変化しなかった。GA架橋した組織に対する炎症性の応答は移植後12週間では4週目と同様で物質的完全性にほとんど変化がなかったが、PO処理した試料には顕著な変化があった。PO処理した組織の周囲および内部には、より多くの細胞性浸潤特に繊維芽細胞があった。POでキャップした組織の基質は、普通のウシの心膜で観察されるように起伏のない繊維質の構造を有する均質かつ異方性になった。組織の基質は、薄い繊維質の被膜下の若干の領域では繊維芽細胞、ネオコラーゲン、およびマクロファージをもつ肉芽組織に発展する特徴と似ていた。表7.外殖片の4および12週目の顕微鏡による評価段階1から4パラメーターGA架橋GA架橋POキャップPOキャップ4週間12週間4週間12週間多形核白血球PMN2211リンパ球2211血漿細胞0000マクロファージ1201巨細胞2201壊死0000腺維増殖0000繊維形成2312脂肪浸潤物0000繊維芽細胞の増殖0012結論として、GA架橋したウシの心膜と比較してPOでキャップした非架橋のウシの心膜は、移植後4および12週目に現れる炎症細胞PMNおよびマクロファージがより少ないことによって示されるように、引き起こされる炎症がより少なかった。GA架橋した組織はその物質的および構造的完全性の大部分を移植期間を通じて維持したが、POでキャップした組織は移植期間中に顕著な変化を受けるように見えた。移植の後、POでキャップした組織は最初の数週間以内に一部分解して縫合保持率の低下をもたらした。しかしながら、興味深いことに完全に体内に吸着されるのではなく、材料は新しい宿主細胞と一緒に徐々に再造形されるように見え、より強くなって縫合保持率を増した。12週目の繊維芽細胞の増殖およびトリプシン消化に対する外殖片の耐性の増加によって示されるように、恐らく再造形プロセス中に新しいコラーゲンの形成が起こったと考えられる。組織学的実験は、移植の後期の段階例えば12週目にはPOでキャップしたウシの心膜の基質が、正常な治癒過程を示す組織の特殊な型である肉芽組織に似はじめることを明らかにした。"