"オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ及びグルタメート排出に関与するタンパク質NCgl1221の活性が内在的活性より低下するように改変され、オルニチン脱炭酸酵素ODCの活性が導入された、プトレシンを生産する微生物。前記オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼが、配列番号28のアミノ酸配列、又はそれと70以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するものである、請求項1に記載のプトレシンを生産する微生物。前記グルタメート排出に関与するタンパク質が、配列番号30のアミノ酸配列、又はそれと70以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するものである、請求項1に記載のプトレシンを生産する微生物。タンパク質の活性低下が、1前記タンパク質をコードする遺伝子の一部又は全ての欠失、2前記遺伝子の発現が減少するように発現調節配列を改変、3前記タンパク質の活性が低下するように染色体上の前記遺伝子配列を改変、及び4それらの組み合わせからなる群から選択される方法により行われるものである、請求項1に記載のプトレシンを生産する微生物。前記オルニチン脱炭酸酵素が、配列番号40のアミノ酸配列、又はそれと70以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するものである、請求項1に記載のプトレシンを生産する微生物。ODCの活性導入が、ODCをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを染色体に挿入する方法、前記ポリヌクレオチドをベクターシステムに導入して微生物に導入する方法、ODCをコードする塩基配列の上流に改良された活性を示すプロモーターを導入するか、プロモーターに変異を入れたODCを導入する方法、及びODCをコードする塩基配列の変異体を導入する方法からなる群から選択されるものである、請求項1に記載のプトレシンを生産する微生物。さらに、オルニチンの生合成に関与するアセチルガンマグルタミルホスフェートレダクターゼArgC、アセチルグルタメートシンターゼ又はオルニチンアセチルトランスフェラーゼArgJ、アセチルグルタメートキナーゼArgB、及びアセチルオルニチンアミノトランスフェラーゼArgDの活性が内在的活性よりも増加したものである、請求項1に記載のプトレシンを生産する微生物。前記ArgC、ArgJ、ArgB及びArgDが、それぞれ配列番号33、35、37及び39のアミノ酸配列、又はそれと70以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するものである、請求項7に記載のプトレシンを生産する微生物。タンパク質の活性増加が、1前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのコピー数の増加、2前記ポリヌクレオチドの発現が増加するように発現調節配列を改変、3前記酵素の活性が増加するように染色体上の前記ポリヌクレオチド配列を改変、及び4それらの組み合わせからなる群から選択される方法により行われるものである、請求項7に記載のプトレシンを生産する微生物。コリネバクテリウム属微生物である、請求項1に記載のプトレシンを生産する微生物。前記コリネバクテリウム属微生物がコリネバクテリウムグルタミカムである、請求項10に記載のプトレシンを生産する微生物。前記コリネバクテリウム属微生物がコリネバクテリウムグルタミカムKCCM11138Pである、請求項10に記載のプトレシンを生産する微生物。iオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ及びグルタメート排出に関与するタンパク質NCgl1221の活性が低下するように改変され、オルニチン脱炭酸酵素ODCの活性が導入された、プトレシン生産能が付与された微生物を培養して培養物を得る段階と、ii前記培養された微生物又は培養物からプトレシンを回収する段階とを含む、プトレシンの生産方法。このような背景から、本発明者らはプトレシンをより高収率で生産できる菌株を開発するために鋭意研究を重ねた結果、オルニチンからアルギニンへの生合成経路を遮断し、細胞内のグルタメートの量を増加させ、グルタメートからオルニチンを生産する生合成経路の活性を増加させ、オルニチンからプトレシンを合成できる酵素であるオルニチン脱炭酸酵素ornithinedecarboxylaseを外部から導入することにより、プトレシン過剰生産菌株を開発し、本発明を完成するに至った。本発明は、プトレシン生産能が付与された微生物を提供することを目的とする。また、本発明は、前記微生物を用いてプトレシンを生産する方法を提供することを目的とする。本発明のプトレシン生産能が付与された微生物は、より効果的なプトレシン製造に広く活用することができる。上記本発明の目的を達成するための一実施形態として、本発明は、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ及びグルタメート排出に関与するタンパク質NCgl1221の活性が内在的活性より低下し、オルニチン脱炭酸酵素の活性が導入された、プトレシンを生産する微生物を提供する。本発明におけるオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼornithinecarbamoyltransferaseOCTという用語は、カルバモイルリン酸とオルニチンの反応を介してシトルリンとリン酸を生成する触媒活性を示す酵素を意味し、尿素排出動物の肝臓だけでなく、植物や微生物にも存在し、微生物においてはアルギニンの合成過程に関与する。前記酵素は触媒機能部位と調節機能部位を含むが、前記調節機能部位にオルニチンが結合すると酵素の活性が阻害される。大腸菌K12株の場合は2種類argF,argIのOCTを有し、大腸菌B及びW株を含む腸内微生物の場合はargIに類似した1種類のOCTを有する。argF及びargIによりコードされるOCTは、アミノ酸配列は異なるが、同じ機能を有するアイソザイムisoenzymeであるといえる非特許文献3。コリネバクテリウム属微生物には、argF遺伝子によりコードされるOCTのみ存在する。OCTはオルニチンからアルギニンを合成する経路で作用するので、OCTの活性を低下させると、細胞内のオルニチンの生成量を増加させることができる。本発明においては、プトレシンの前駆体であるオルニチンがアルギニンに変換されることを防ぐために、オルニチンからアルギニンに変換される経路が遮断されたコリネバクテリウム属微生物を提供するが、このために前記オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を欠失させた形質転換菌株を製造した。ここで、前記オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼは、特にこれに限定されるものではないが、配列番号28のアミノ酸配列、又はそれと70以上、好ましくは80以上、より好ましくは90以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質である。本発明における相同性という用語は、タンパク質をコードする遺伝子の塩基配列やアミノ酸配列の類似程度を意味し、相同性が十分に高いと、該当遺伝子の発現産物は同一又は類似の活性を有する。本発明におけるグルタメート排出に関与するタンパク質glutamateexporterという用語は、細胞内で生成されたグルタメートを細胞外に排出する役割を果たすタンパク質であり、機械受容チャネルmechanosensitivechannelsの一種を意味する。本発明においては、プトレシンの生産能が付与されたコリネバクテリウム属微生物を提供するが、このために前記プトレシンの前駆体であるオルニチンの合成の原料となるグルタメートを細胞外に放出するタンパク質をコードする遺伝子を欠失させ、細胞内のグルタメートの濃度を高いレベルに維持できる形質転換菌株を製造した。オルニチンの前駆体であるグルタメートの細胞内含有量を増加させると、オルニチン生合成経路を促進することができるが、本発明においては、NCgl1221タンパク質の活性を低下させることにより、グルタメートの排出を減少又は除去することができる。ここで、欠失したグルタメート排出に関与するタンパク質は、特にこれらに限定されるものではないが、配列番号30のアミノ酸配列、又はそれと70以上、好ましくは80以上、より好ましくは90以上の相同性を有するタンパク質である。前記タンパク質の活性低下は、1前記タンパク質をコードする遺伝子の一部又は全ての欠失、2前記遺伝子の発現が減少するように発現調節配列を改変、3前記タンパク質の活性が低下するように染色体上の前記遺伝子配列を改変、又は4それらの組み合わせなどを用いて行うことができるが、特にこれらに限定されるものではない。前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドの一部又は全てを欠失させる方法は、細菌内の染色体挿入ベクターにより染色体内の内在性標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドを一部の核酸配列が欠失したポリヌクレオチド又はマーカー遺伝子に置換することにより行うことができる。前記一部とは、ポリヌクレオチドの種類により異なるが、具体的には1~300個、好ましくは1~100個、より好ましくは1~50個である。また、前記ポリヌクレオチドの発現が減少するように発現調節配列を改変する方法は、前記発現調節配列の活性がより低下するように、核酸配列の欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換、又はそれらの組み合わせにより発現調節配列上の変異を誘導して行うこともでき、より低い活性を有する核酸配列に置換することにより行うこともできる。前記発現調節配列には、プロモーター、オペレーター配列、リボソーム結合部位をコードする配列、及び転写と翻訳の終結を調節する配列が含まれる。また、本発明の酵素をコードする、染色体上のポリヌクレオチド配列を改変する方法は、前記酵素の活性がより低下するように、ポリヌクレオチド配列の欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換、又はそれらの組み合わせにより配列上の変異を誘導して行うこともでき、より低い活性を有するように改良されたポリヌクレオチド配列に置換することにより行うこともできる。前記プトレシンの前駆体であるオルニチンが細胞内に蓄積するように改変された微生物は、従来のオルニチン生産菌株の開発、すなわちアルギニン生合成経路の転写抑制因子であるargRの機能をなくすか、低下させてオルニチンの生産を増加させ、さらにオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼornithinecarbamoyltransferase遺伝子を欠失させ、調節が解除されたN-アセチルグルタメートシンターゼNacetylglutamatesynthaseを導入してオルニチン生産を増加させる方法特許文献3とは異なるアプローチで製造された微生物である。本発明における内在的活性という用語は、微生物が天然状態で有する酵素の活性状態を意味し、本発明においては微生物が天然に有するオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ及びグルタメート排出に関与するタンパク質NCgl1221の活性状態を意味し、本発明において内在的活性よりも低下するように改変されたとは、遺伝子の欠損又は突然変異により、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ及びグルタメート排出に関与するタンパク質NCgl1221が正常に作用せず、微生物が天然状態で有するオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ及びグルタメート排出に関与するタンパク質NCgl1221の活性が低下した状態を意味する。本発明におけるオルニチン脱炭酸酵素ornithinedecarboxylaseODCとは、オルニチンを用いてプトレシンを生成する酵素を意味するが、前記ODCは補酵素としてピリドキサールホスフェートPyridoxal5phosphatePLPを必要とし、ほとんどのグラム陰性菌に存在し、グラム陽性菌のうちラクトバシラスLactobacillusのような腸内細菌の一部に存在する。大腸菌の場合、ODCをコードする遺伝子は2つあるが、そのうちの一方であるspeCは持続的に一定濃度で発現し、他方のspeFは特定条件一定濃度以上のオルニチンの存在及び低いpH条件下で発現が誘導される遺伝子である。種によっては、大腸菌のように2種類のODCを有する種もあり、1種類しかない種もある。エシェリキア属Escherichiasp、シゲラ属Shigellasp、シトロバクター属Citrobactersp、サルモネラ属Salmonellasp、エンテロバクター属Enterobacterspなどの種は2種類のODCspeC,speFを有し、エルシニア属Yersiniasp、クレブシエラ属Klebsiellasp、エルウィニア属Erwiniaspなどの菌株は1種類のODCspeCを有する。乳酸菌の場合、ODCが1種類の遺伝子speFから発現され、低いpHやオルニチンornithineとヒスチジンhistidineが豊富な条件で発現が誘導されることが知られている。前記ODCは、特にこれらに限定されるものではないが、配列番号41のアミノ酸配列、又はそれと70以上、好ましくは80以上、より好ましくは90以上の相同性を有するアミノ酸配列によりコードされるタンパク質である。前述したように、微生物にオルニチン脱炭酸酵素ODCの活性を導入することは当該分野で周知の様々な方法で行うことができるが、例えばODCをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを染色体に挿入する方法、前記ポリヌクレオチドをベクターシステムに導入して微生物に導入する方法、ODCをコードする塩基配列の上流に改良された活性を示すプロモーターを導入するか、プロモーターに変異を入れたODCを導入する方法、ODCをコードする塩基配列の変異体を導入する方法などを用いることができ、前記ODCをコードする塩基配列を導入する場合は、この発現を調節するためのプロモーターとして配列番号42のCJ7プロモーターを用いることが好ましい。本発明の具体的な実施例においては、プトレシン生産能が付与されたコリネバクテリウム属微生物を提供し、このためにオルニチンからプトレシンを合成できるオルニチン脱炭酸酵素をコードする塩基配列を染色体内に導入し、プトレシンを生産できる形質転換菌株を製造した。微生物により製造されたプトレシンは、大腸菌において、細胞内の分解経路により、スペルミジンspermidine、アセチルプトレシンacetylputrescine、ガンマアミノ酪酸gaminobutyricacidGABAなどに分解される。ODCは、ほとんどのグラム陰性菌に存在するが、コリネバクテリウム属微生物には存在しないことが知られている。よって、コリネバクテリウム属微生物を用いてプトレシン生産菌株を開発する場合、外来種のODC導入は必要不可欠である。本発明におけるプトレシンの生産能が付与された微生物又はプトレシンを生産する微生物という用語は、プトレシンの生産能がない母菌株にプトレシンの生産能が付与された微生物を意味するが、前記プトレシン生産能が付与されるか、又はプトレシンを生産する微生物は、特にこれらに限定されるものではないが、グルタメートからオルニチン合成までの生合成経路の強化のために、グルタメートをアセチルグルタメートNacetylglutamateに変換するアセチルグルタメートシンターゼ、又はアセチルオルニチンをオルニチンに変換するオルニチンアセチルトランスフェラーゼArgJ、アセチルグルタメートをアセチルグルタミルホスフェートNacetylglutamylphosphateに変換するアセチルグルタメートキナーゼArgB、アセチルグルタミルホスフェートをアセチルグルタメートセミアルデヒドNacetylglutamatesemialdehydeに変換するアセチルガンマグルタミルホスフェートレダクターゼArgC、アセチルグルタメートセミアルデヒドをアセチルオルニチンNacetylornithineに変換するアセチルオルニチンアミノトランスフェラーゼArgDの活性が内在的活性よりも増加するようにさらに形質転換されてプトレシンの原料として用いられるオルニチンの生産性が向上し、オルニチン脱炭酸酵素speCをコードする遺伝子が導入されるように形質転換されて前記オルニチンを用いてプトレシンを生産できる微生物であることができる。ここで、前記アセチルガンマグルタミルホスフェートレダクターゼArgC、アセチルグルタメートシンターゼ又はオルニチンアセチルトランスフェラーゼArgJ、アセチルグルタメートキナーゼArgB、及びアセチルオルニチンアミノトランスフェラーゼArgDは、特にこれらに限定されるものではないが、好ましくはそれぞれ配列番号33、35、37及び39のアミノ酸配列、又はそれと70以上、好ましくは80以上、より好ましくは90以上の相同性を有するアミノ酸配列を有することができ、これらの活性増加は、1前記タンパク質をコードするポリヌクレオチドのコピー数の増加、2前記ポリヌクレオチドの発現が増加するように発現調節配列を改変、3前記酵素の活性が増加するように染色体上の前記ポリヌクレオチド配列を改変、及び4それらの組み合わせにより増加するように改変する方法からなる群から選択される少なくとも1つの方法により行うことができる。具体的には、微生物におけるタンパク質の活性を増加させるために、一般的に様々な方法を用いることができる。例えば、プラスミド導入、相同性組換え、接合、転位などを用いた形質転換によりポリヌクレオチドのコピー数を増加させたり、ポリヌクレオチドの発現調節配列を改変したり、ポリヌクレオチドの発現を増加させる調節因子をコードする遺伝子を増幅したり、ポリヌクレオチドの発現を減少させる調節因子をコードするポリヌクレオチドを破壊又は低減することにより、ポリヌクレオチドの発現量を増加させることができる。より具体的には、ポリヌクレオチドを含む遺伝子断片をコリネバクテリウム属微生物内で複製できる多重コピーベクターに作動可能に連結したり、染色体内に一つ又は複数のポリヌクレオチドのコピーを導入したり、ポリヌクレオチドのプロモーターを含む発現調節配列を活性が改良されたものに代替することができる。例えば、ベクターpHC139Tを用いてargCJBD遺伝子群を微生物に形質転換し、野生型よりオルニチン生産能が非常に向上した微生物を製造するか、又は微生物の染色体内に存在するargCJBD遺伝子の発現を調節するプロモーター領域を改良して強化するか、もしくは改良された活性を示すプロモーターに置換してオルニチンまでの生合成経路を強化した微生物を用いることができる。特に、プロモーター領域を改良する方法は、特にこれらに限定されるものではないが、染色体内のプロモーター置換は置換する領域の両末端の塩基配列と導入するプロモーターを染色体内の本来の位置と同じ形態に作製し、その後公知のpDZベクターを用いた遺伝子欠失方法特許文献5と同様に行う方法を用いることができる。ここで、前記改良されたプロモーターは、特にこれらに限定されるものではないが、配列番号42の塩基配列を有するpcj7又はPCJ7プロモーター特許文献6を用いることが好ましく、前記pDZベクターは、特にこれらに限定されるものではないが、図3の切断地図で表されるベクターを用いることが好ましい。本発明におけるベクターという用語は、好適な宿主内で目的遺伝子を発現させることができるように、好適な調節配列に作動可能に連結された遺伝子の塩基配列を含有するDNA製造物を意味する。前記調節配列は、転写を開始するプロモーター、その転写を調節するための任意のオペレーター配列、好適なmRNAリボソーム結合部位をコードする配列、及び転写及び翻訳の終結を調節する配列を含む。通常用いられるベクターの例としては、天然状態又は組換え状態のプラスミド、コスミド、ウイルス及びバクテリオファージが挙げられる。例えば、ファージベクター又はコスミドベクターとしては、pWE15、M13、λEMBL3、λEMBL4、λFIXII、λDASHII、λZAPII、λgt10、λgt11、Charon4A、及びCharon21Aなどを用いることができ、プラスミドベクターとしては、pDZベクター、pBR系、pUC系、pBluescriptII系、pGEM系、pTZ系、pCL系、pET系などを用いることができる。使用可能なベクターが特に限定されるわけではなく、公知の発現ベクターを用いることができる。pDZベクターなどを用いることが好ましい。一方、前記微生物は、特にこれらに限定されるものではないが、本発明の微生物は、プトレシン代謝経路を持たず、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ及びグルタメート排出に関与するタンパク質NCgl1221の活性を示すエシェリキア属Escherichiasp、シゲラ属Shigellasp、シトロバクター属Citrobactersp、サルモネラ属Salmonellasp、エンテロバクター属Enterobacterspエルシニア属Yersiniasp、クレブシエラ属Klebsiellasp、エルウィニア属Erwiniasp、コリネバクテリウム属Corynebacteriumsp、ブレビバクテリウム属Brevibacteriumsp、ラクトバシラス属Lactobacillussp、セレノモナス属Selenomonassp又はビブリオ属Vibriospに属する微生物を形質転換させた微生物であってもよい。好ましくは、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼの活性を減少させるか、又は不活性にすることによりオルニチンが蓄積され、グルタメートエクスポーターexporterの活性を減少させるか、又は不活性にすることにより細胞内のグルタメート量が増加し、アルギニン生合成に関与するargCJBD遺伝子群の発現量を増加させてオルニチンを大量に生産し、オルニチンをプトレシンに変換するオルニチン脱炭酸酵素ornithinedecarboxylaseODCの活性が外部から導入されてプトレシン生産能を有するように形質転換された微生物であってもよい。コリネバクテリウム属微生物であることがが好ましく、コリネバクテリウムグルタミカムであることがより好ましい。具体的には、野生型菌株であるコリネバクテリウムグルタミカムATCC13032又はグルタメート過剰生産菌株KCCM-10785P特許文献7であってもよいが、これらに制限されるものではない。前記KCCM-10785P菌株は、NTGなどの変異誘発物質により選別したグルタメート生産菌株KFCC-11074に基づいてcg2624NCBILOCUSIDYP_226636、cg2115NCBILOCUSIDYP_226173を欠失させたグルタメート過剰生産菌株である。cg2624とcg2115の欠損に伴うグルタメート過剰生産のメカニズムは前記文献以前に明らかにされていないが、cg2624はpcaRによりIclRファミリーの調節タンパク質IclRfamilyregulatoryproteinと命名されており、cg2115はsugRにより糖代謝メカニズムの発現因子調節タンパク質transcriptionalregulatorsofsugarmetabolismと命名されている。図2に示すオルニチンの合成経路から分かるように、オルニチンの生成量を増加させるためには、出発物質であるグルタメートの量を増加させ、合成されたオルニチンをアルギニンに変換させる経路を遮断し、オルニチンの生合成に関与する酵素の量や活性を増加させることが求められる。このように、オルニチンの生産性を向上させ、プトレシン代謝経路を持たない微生物に、オルニチンからプトレシンを生合成し得る酵素であるオルニチン脱炭酸酵素ornithinedecarboxylaseODCをコードする遺伝子を導入し、過剰に生成されたオルニチンを用いて、プトレシンの生産性が付与された形質転換微生物を製造することができる。本発明の一実施例によれば、argF遺伝子が欠失したコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargF及びKCCM-10785PΔargF実施例1、argF遺伝子及びNCgl1221遺伝子が欠失したコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221実施例2、argF遺伝子及びNCgl1221遺伝子が欠失し、argCJBD遺伝子が導入されたコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221/pHC139T-argCJBDCgl及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221/pHC139T-argCJBDCgl実施例3-1、argF遺伝子及びNCgl1221遺伝子が欠失し、染色体内のargCJBD遺伝子群のプロモーターを置換させたコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBD及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBD実施例3-2、argF遺伝子及びNCgl1221遺伝子が欠失し、オルニチン脱炭酸酵素ODCをコードするspeC遺伝子が染色体に導入されたコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc、前記菌株にargCJBD遺伝子が導入されたコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc/pHC139T-argCJBDCgl及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc/pHC139T-argCJBDCgl、並びにargF遺伝子及びNCgl1221遺伝子が欠失し、染色体内のargCJBD遺伝子群のプロモーターが置換され、speC遺伝子が染色体に導入されたコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEc及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEcをそれぞれ製造した。これらのプトレシン生産性を比較した結果、argF遺伝子及びNCgl1221遺伝子が欠失し、染色体内のargCJBD遺伝子群のプロモーターが置換され、speC遺伝子が染色体に導入されたコリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEc及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEcが優れたプトレシン生産性を示すことが確認された表7及び表8。よって、本発明者らは、プトレシン生産能に優れることが確認されたプトレシン生産菌株をCC01-0064ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEcと命名し、ブダペスト条約に基づいてソウル市西大門区弘済1洞所在の韓国微生物保存センターKoreanCultureCenterofMicroorganismsKCCMに2010年11月24日付けで受託番号KCCM11138Pとして寄託した。前記目的を達成するための本発明の他の態様によれば、本発明は、i前記プトレシン生産能が付与された微生物を培養して培養物を得る段階と、ii前記培養された微生物又は培養物からプトレシンを回収する段階とを含むプトレシンの生産方法を提供する。前記方法において、前記微生物を培養する段階は、特にこれらに限定されるものではないが、公知の回分培養方法、連続培養方法、半回分培養方法などで行われることが好ましく、培養条件は、特にこれらに限定されるものではないが、塩基性化合物例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又はアンモニア又は酸性化合物例えば、リン酸又は硫酸を用いて適正pHpH5~9、好ましくはpH6~8、最も好ましくはpH6.8に調整し、酸素又は酸素含有ガス混合物を培養物に導入して好気性条件を維持し、培養温度を20~45°C、好ましくは25~40°Cに維持し、約10~160時間培養することが好ましい。前記培養により生産されたプトレシンは、培地中に分泌されるか、又は細胞内に残留し得る。また、用いられる培養用培地は、炭素供給源として糖及び炭水化物例えば、グルコース、スクロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、モラセス、デンプン及びセルロース、油脂及び脂肪例えば、大豆油、ひまわり油、落花生油及びココナッツ油、脂肪酸例えば、パルミチン酸、ステアリン酸及びリノール酸、アルコール例えば、グリセリン及びエタノール、及び有機酸例えば、酢酸などを個別に又は混合して用いることができ、窒素供給源として窒素含有有機化合物例えば、ペプトン、酵母抽出液、肉汁、麦芽抽出液、トウモロコシ浸漬液、大豆粕粉及びウレア、無機化合物例えば、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、炭酸アンモニウム及び硝酸アンモニウムなどを個別に又は混合して用いることができ、リン供給源としてリン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、これに相当するナトリウム含有塩などを個別に又は混合して用いることができ、その他金属塩例えば、硫酸マグネシウム又は硫酸鉄、アミノ酸、及びビタミンなどの必須成長促進物質を含んでもよい。以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。しかし、これらの実施例は本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。実施例1:argF遺伝子が欠失したコリネバクテリウムグルタミカム菌株の作製野生型コリネバクテリウムグルタミカム菌株ATCC13032と、NTGなどの変異体により選別したグルタメート生産菌株KFCC-11074に基づいてcg2624、cg2115を欠失させたグルタメート過剰生産菌株KCCM-10785P特許文献7から、オルニチンからアルギニンを合成する経路を防止するために、argF欠失菌株を作製した。コリネバクテリウムグルタミカムATCC13032のアルギニン生合成遺伝子はargCJBDFRGH形態のオペロン構造で構成され、欠失の標的であるargF遺伝子配列番号27が染色体上でオルニチン合成経路に関与する酵素をコードする遺伝子と並んで存在するので、外側の部分に位置するargDとargRの塩基配列に基づいてargF部分を欠失させるためのプラスミドを作製することを試みた。具体的には、前記ATCC13032菌株のargD及びargRの塩基配列に基づいて、argFのN末端外部の相同組換えhomologousrecombination断片、及びargFのC末端外部の相同組換え断片を得た。ここで、argFのN末端外部の断片は、ATCC13032菌株から得られたゲノムDNAを鋳型とし、プライマー配列番号1及び2を用いたPCRを行うことにより得られ94°C、30秒の変性、55°C、30秒のアニーリング、及び72°C、30秒の伸長を28サイクル、argFのC末端外部の断片は、ATCC13032菌株から得られたゲノムDNAを鋳型とし、プライマー配列番号3及び4を用いた同一条件のPCRを行うことにより得られた表1。前記得られたargFのN末端外部の相同組換え断片をBamHI及びSalIで処理して切断し、前記argFのC末端外部の相同組換え断片をSalI及びXbaIで処理して切断することにより、それぞれの断片を得た。また、これら切断された各断片をBamHI及びXbaIで処理して切断されたpDZベクターに導入し、プラスミドpDZ-argFK/Oを得た。前記得られたプラスミドpDZ-argFK/OをATCC13032菌株とKCCM-10785P菌株に導入し、導入された菌株をカナマイシン25μg/mlとX-gal5ブロモ4クロロ3インドリンβDガラクトシドを含むBHIS平板培地Braineheartinfusion37g/l,ソルビトール91g/l,アガー2に塗抹して培養することによりコロニーを形成し、前記形成したコロニーから青色のコロニーを選択することにより、前記プラスミドpDZ-argFK/Oが導入された菌株を選抜した。前記選抜された菌株をCM培地グルコース10g/l,ポリペプトン10g/l,酵母エキス5g/l,牛肉エキス5g/l,NaCl2.5g/l,尿素2g/l,pH6.8で振盪培養30°C,8時間し、それぞれ10-4から10-10まで順次希釈し、X-galを含む固体培地に塗抹して培養することによりコロニーを形成した。形成したコロニーから比較的低い割合の白色のコロニーを選択し、argFが欠失した菌株を選抜した。前記選抜された菌株から得られた染色体DNAを鋳型とし、配列番号1及び4のプライマーを用いたPCRを行うことにより、前記選抜された菌株に前記プラスミドpDZargFK/Oが導入されたことが確認され、前記選抜された菌株はargFが欠失した菌株ATCC13032ΔargF,KCCM-10785PΔargFであることが確認された。実施例2:argF遺伝子及びNCgl1221遺伝子が欠失したコリネバクテリウムグルタミカム菌株の作製実施例1で得られたATCC13032ΔargF菌株とKCCM-10785PΔargF菌株からグルタメートエクスポーター遺伝子であるNCgl1221遺伝子をさらに欠失させることにより、オルニチンの前駆体であるグルタメートの細胞内含有量を増加させた。具体的には、前記ATCC13032菌株のNCgl1221の塩基配列配列番号29に基づいて、NCgl1221のN末端外部の相同組換え断片、及びNCgl1221のC末端外部の相同組換え断片を得た。ここで、NCgl1221のN末端外部の断片は、ATCC13032菌株から得られたゲノムDNAを鋳型とし、プライマー配列番号5及び6を用いたPCRを行うことにより得られ、NCgl1221のC末端外部の断片は、ATCC13032菌株から得られたゲノムDNAを鋳型とし、プライマー配列番号7及び8を用いた実施例1と同一条件でPCRを行うことにより得られた表2。前記得られたNCgl1221のN末端外部の相同組換え断片をBamHI及びSalIで処理して切断し、前記NCgl1221のC末端外部の相同組換え断片をSalI及びXbaIで処理して切断することにより、それぞれの断片を得た。また、これら切断された各断片をBamHI及びXbaIで処理して切断されたpDZベクターに導入し、プラスミドpDZ-NCgl1221K/Oを得た。前記得られたプラスミドpDZ-NCgl1221K/OをATCC13032ΔargF菌株とKCCM-10785PΔargF菌株に導入し、導入された菌株をカナマイシン25μg/mlとX-galを含むBHIS平板培地に塗抹して培養することによりコロニーを形成し、前記形成したコロニーから青色のコロニーを選択することにより、前記プラスミドpDZ-NCgl1221K/Oが導入された菌株を選抜した。前記選抜された菌株をCM培地で振盪培養30°C,8時間し、それぞれ10-4から10-10まで順次希釈し、X-galを含む固体培地に塗抹して培養することによりコロニーを形成した。形成したコロニーから比較的低い割合の白色のコロニーを選択し、NCgl1221が欠失した菌株を選抜した。前記選抜された菌株から得られた染色体DNAを鋳型とし、配列番号5及び8のプライマーを用いたPCRを行うことにより、前記選抜された菌株に前記プラスミドpDZ-NCgl1221K/Oが導入されたことが確認され、前記選抜されたNCgl1221が欠失した菌株をそれぞれATCC13032ΔargFΔNCgl1221及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221と命名した。実施例3:argCJBD遺伝子が導入されたコリネバクテリウムグルタミカム菌株の作製実施例3-1:argCJBD遺伝子のクローニング及び形質転換体の製造グルタメートからオルニチンを合成する経路に関与する酵素をコードするargCJBDオペロンプロモーター領域を含む,配列番号31のコピー数を増加させてオルニチン生成経路を強化するために、argC、argJ、argB、argD遺伝子それぞれ配列番号32、34、36、38が導入されたベクターを製造し、これを導入した形質転換体を製造した。まず、argCJBD遺伝子を得るために、ATCC13032菌株の染色体を鋳型とし、プライマー配列番号9及び10を用いたPCRを行うことにより95°C、40秒の変性、55°C、40秒のアニーリング、及び72°C、150秒の伸長を30サイクル、4,900bpの大きさの遺伝子断片を得た。前記得られた遺伝子断片を0.8アガロースゲルで電気泳動し、その後所望の大きさのバンドを溶出し、溶出したバンドに制限酵素であるKpnI及びXbaIを処理して断片を得た。前記得られた断片をpHC139T-gfpベクター特許文献8にクローニングし、発現ベクターpHC139T-argCJBDCglを製造した。次に、菌株内のオルニチン生成量を増加させるために、前記製造した発現ベクターpHC139T-argCJBDCglをATCC13032ΔargFΔNCgl1221菌株とKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221菌株に電気穿孔法で導入し、25μg/mlのカナマイシンを含むBHIS平板培地に塗抹して形質転換体を選抜し、前記選抜された各形質転換体をATCC13032ΔargFΔNCgl1221/pHC139T-argCJBDCgl及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221/pHC139T-argCJBDCglと命名した。実施例3-2:染色体内のargCJBD遺伝子群のプロモーター置換グルタメートからオルニチンを合成する経路に関与する酵素をコードするargCJBD遺伝子の調節解除により発現量を増加させるために、染色体内のargCJBD自体のプロモーターを本出願人が新規開発したCJ7プロモーターに置換することを試みた。まず、CJ7プロモーターを含み、前記プロモーターの両末端部位は染色体上の本来の配列を有する相同組換え断片を得た。具体的には、CJ7プロモーターの5末端部位はATCC13032菌株のゲノムDNAを鋳型とし、プライマー配列番号11及び12を用いたPCRを行うことにより得られ94°C、30秒の変性、55°C、30秒のアニーリング、及び72°C、30秒の伸長を28サイクル、CJ7プロモーターの部位はプライマー配列番号13及び14を用いた同一条件でPCRを行うことにより得られ、CJ7プロモーターの3末端部位はプライマー配列番号15及び16を用いた同一条件でPCRを行うことにより得られた。前記得られたプロモーターの5末端部位argC-Lを制限酵素BamHIとEcoRIで処理し、CJ7プロモーター領域を制限酵素EcoRIとXbaIで処理し、プロモーターの3末端部位argC-Rを制限酵素XbaIとSalIで処理し、これら制限酵素で処理された各PCR産物をBamHI及びSalIで処理されたpDZベクターにクローニングし、プロモーターが置換された発現ベクターpDZ-CJ7argを製造した。前記製造された発現ベクターpDZ-CJ7argをATCC13032ΔargFΔNCgl1221及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221菌株に電気穿孔法で導入し、形質転換体を製造した。前記製造された形質転換体をCM培地で振盪培養30°C,8時間し、前記培養物を10-4から10-10まで順次希釈し、25μg/mlのカナマイシンとX-galを含むBHIS平板培地に塗抹して培養することによりコロニーを形成させた。ほとんどのコロニーが青色であるのに対して低い割合で出現する白色のコロニーを選別することにより、2次交差により最終的にargプロモーターがCJ7に置換された菌株を選抜し、前記菌株から得られたゲノムDNAを鋳型とし、プライマー配列番号13及び16を用いたPCRを行うことにより94°C、30秒の変性、55°C、30秒のアニーリング、及び72°C、60秒の伸長を28サイクル、前記導入された発現ベクターpDZ-CJ7argにより染色体内のargCJBDプロモーターが置換されていることが確認され、前記確認された菌株をATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBD及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDと命名した。実施例4:speC遺伝子が導入されたコリネバクテリウムグルタミカム菌株オルニチンからプトレシンを合成するのに用いられる大腸菌のオルニチン脱炭酸酵素ODCをコードするspeC遺伝子をコリネバクテリウムグルタミカム菌株の染色体内の不活性化されたビオチン合成関連遺伝子内に導入した。実施例4-1:ODCの遺伝子断片を含む発現ベクターの製造大腸菌由来のspeC遺伝子配列番号40をコリネバクテリウムグルタミカム菌株に導入するために、配列番号42のCJ7プロモーターを用いて発現するようにクローニングした。まず、CJ7プロモーター領域は、p117-CJ7-gfp特許文献6を鋳型とし、プライマー配列番号17及び18を用いたPCRを行うことにより得られ94°C、40秒の変性、55°C、40秒のアニーリング、及び72°C、60秒の伸長を30サイクル、speC遺伝子のコード部位は、野生型大腸菌W3110菌株の染色体を鋳型とし、プライマー配列番号19及び20を用いたPCRを同一条件で行うことにより得られた。前記得られたCJ7プロモーター領域とspeC遺伝子のコード部位を制限酵素であるKpnI及びXbaIで処理し、KpnI及びXbaIで処理されたpHC139T-gfpベクターにクローニングし、前記CJ7プロモーターに続いてODCコード部位が連結された遺伝子を含む発現ベクターpHC139T-PCJ7-speCEcを製造した。実施例4-2:形質転換体の製造コリネバクテリウム属微生物はビオチン合成関連遺伝子の一部が欠失しているので、大腸菌由来のspeC遺伝子をビオチン合成遺伝子のbioAとbioD間に導入することを試みた。具体的には、実施例4-1で製造した発現ベクターpHC139T-PCJ7-speCEcに含まれるPCJ7-speCEc遺伝子断片の両末端部位をコリネバクテリウム属微生物の染色体の相同組換え部位として用いることができるように、前記両末端がそれぞれbioA及びbioD塩基配列を有するようにクローニングした。このために、ATCC13032菌株のゲノムを鋳型とし、プライマー配列番号21及び22を用いたPCRを行うことにより94°C、40秒の変性、55°C、30秒のアニーリング、及び72°C、60秒の伸長を28サイクルbioA遺伝子断片が得られ、同一鋳型とプライマー配列番号25及び26を用いたPCRを同一条件で行うことによりbioD遺伝子断片が得られ、前記発現ベクターpHC139T-PCJ7-speCEcを鋳型とし、プライマー配列番号23及び24を用いたPCRを同一条件で行うことによりPCJ7-speCEc遺伝子断片が得られた。前記得られたbioA遺伝子断片を制限酵素BamHIとScaIで処理し、PCJ7-speCEc遺伝子断片を制限酵素ScaIとEcoRIで処理し、bioD遺伝子断片を制限酵素EcoRIとXbaIで処理し、これら制限酵素で処理された各PCR産物をBamHI及びXbaIで処理されたpDZベクターにクローニングし、speC遺伝子を染色体内に導入するための発現ベクターpDZ-bioAD-PCJ7-speCEcを製造した。前記製造された発現ベクターpDZ-bioAD-PCJ7-speCEcをATCC13032ΔargFΔNCgl1221菌株、ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBD、KCCM-10785PΔargFΔNCgl1221、及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBD菌株にそれぞれ電気穿孔法で導入することにより、それぞれの形質転換体を製造した。前記製造されたそれぞれの形質転換体をCM培地で振盪培養30°C,8時間し、前記培養物を10-4から10-10まで順次希釈し、25μg/mlのカナマイシンとX-galを含むBHIS平板培地に塗抹して培養することによりコロニーを形成させた。ほとんどのコロニーが青色であるのに対して低い割合で出現する白色のコロニーを選別することにより、2次交差によりPCJ7-speCが染色体内に導入された菌株をそれぞれ選抜した。前記選抜された各菌株から得られたゲノムDNAを鋳型とし、プライマー配列番号21及び26を用いたPCRを行うことにより94°C、30秒の変性、55°C、30秒のアニーリング、及び72°C、120秒の伸長を28サイクル、前記導入された発現ベクターpDZ-bioAD-PCJ7-speCEcにより染色体内のbioAとbioD間にPCJ7-speC遺伝子断片が挿入されたことが確認され、前記確認された菌株をそれぞれATCC13032ΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc、ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEc、KCCM-10785PΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc、及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEcと命名した。また、実施例3-1で製造したpHC139T-argCJBDCglベクターをATCC13032ΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc菌株及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc菌株に導入して製造した形質転換体をそれぞれATCC13032ΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc/pHC139T-argCJBDCgl及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc/pHC139T-argCJBDCglと命名した。実施例5:argF及びNCgl1221遺伝子欠失、argCJBD発現量増加、並びにspeC遺伝子導入によるプトレシン生産性の向上効果実施例5-1:ATCC13032コリネバクテリウムグルタミカムベースのプトレシン生産能の確認ATCC13032コリネバクテリウムグルタミカムベースの菌株において、argF欠失、NCgl1221遺伝子欠失、argCJBD発現量増加及びspeC導入がプトレシンの生産に及ぼす効果を確認するために、実施例2~4で製造した各菌株を対象にプトレシン生産能を比較した。具体的には、実施例2~4で製造された各菌株ATCC13032ΔargFΔNCgl1221実験群1、ATCC13032ΔargFΔNCgl1221/pHC139T-argCJBDCgl実験群2、ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBD実験群3、ATCC13032ΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc実験群4、ATCC13032ΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc/HC139T-argCJBDCgl実験群5、及びATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEc実験群6を1.8w/vの寒天を含むCMA平板培地に塗抹して37°Cで24時間培養し、前記培養した各菌株を1mMのアルギニンを含む25mlの力価培地2w/vのグルコース、1w/vのポリペプトン、0.5w/vの酵母エキス、0.5w/vのNH42SO4、0.15w/vの尿素、0.4w/vのKH2PO4、0.8w/vのK2HPO4、0.05w/vのMgSO4、100μg/lのビオチン、及び1mg/lのチアミンに接種し、その後30°C、200rpmで72時間振盪培養し、各培養物から生産されたオルニチンとプトレシンの濃度を測定して比較した表7。ここで、対照群としては遺伝的に改変されていない菌株ATCC13032を用いた。表7から分かるように、argF及びNCgl1221遺伝子が欠失するか、又はargF及びNCgl1221遺伝子が欠失し、argCJBD遺伝子の発現量が増加した場合、オルニチンは生産されたが、プトレシンは生産されなかった。これは、コリネバクテリウムグルタミカム菌株内に、オルニチンからプトレシンを合成する酵素であるオルニチン脱炭酸酵素ODCをコードするspeC遺伝子が存在しないことによるものと分析される。一方、大腸菌に由来するspeC遺伝子が導入された実施例4-2で製造された3種の菌株では、オルニチンはほぼ存在せず、プトレシンは生産されることが確認されたが、これは大腸菌に由来するspeC遺伝子が導入され、そこから発現したODCがオルニチンからプトレシンを合成したことによるものと分析される。また、実験群1~3の菌株から生産されるオルニチンの生産量と、実験群1~3の菌株にspeC遺伝子が導入された実験群4~6の菌株から生産されるプトレシンの生産量を比較すると、プトレシンの生産量はオルニチンの生産量に比例することが確認された。また、外部のargCJBD遺伝子をさらに導入した場合より、内在的なargCJBD遺伝子の発現レベルを増加させた場合のほうが、オルニチンとプトレシンの生産量が向上することが確認された。実施例5-2:グルタメート生産コリネバクテリウムグルタミカムKCCM-10785P菌株ベースのプトレシン生産能の確認グルタメートを過剰生産するコリネバクテリウムグルタミカム菌株KCCM-10785Pに基づいて、argF欠失、NCgl1221遺伝子欠失、argCJBD発現量増加及びspeC導入がプトレシンの生産に及ぼす効果を確認するために、実施例2~4で製造した各菌株を対象にプトレシン生産能を比較した。具体的には、実施例2~4で製造された各菌株KCCM-10785PΔargFΔNCgl1221実験群1、KCCM-10785PΔargFΔNCgl1221/pHC139T-argCJBDCgl実験群2、KCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBD実験群3、KCCM-10785PΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc実験群4、KCCM-10785PΔargFΔNCgl1221bioAD::PCJ7-speCEc/HC139T-argCJBDCgl実験群5、及びKCCM-10785PΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEc実験群6を実施例5-1と同一条件で接種し、その後30°C、200rpmで48時間振盪培養し、各培養物から生産されたオルニチンの濃度を測定して比較した表6。ここで、対照群としては遺伝的に改変されていない菌株KCCM-10785Pを用いた。表8から分かるように、グルタメート過剰生産菌株ベースでも、argF及びNCgl1221遺伝子が欠失するか、又はargF及びNCgl1221遺伝子が欠失し、argCJBD遺伝子の発現量が増加した場合、オルニチンは生産されたが、プトレシンは生産されなかった。大腸菌に由来するspeC遺伝子が導入された実施例4-2で製造された3種の菌株でのみプトレシンが生産されることが確認されたが、これは大腸菌に由来するspeC遺伝子が導入され、そこから発現したODCがオルニチンからプトレシンを合成したことによるものと分析される。実験群1~3の菌株から生産されるグルタメートとオルニチンを比較すると、菌株内で生成されるグルタメート量が減少する量に比例して、生成されるオルニチン量が増加する現象を示した。また、実験群1~3の菌株から生産されるオルニチンの生産量と、実験群1~3の菌株にspeC遺伝子が導入された実験群4~6の菌株から生産されるプトレシンの生産量を比較すると、プトレシンの生産量はオルニチンの生産量に比例することが確認された。また、外部のargCJBD遺伝子をさらに導入した場合より、内在的なargCJBD遺伝子の発現レベルを増加させた場合のほうが、オルニチンとプトレシンの生産量が向上することが確認された。結論として、細胞内で生成されるグルタメート量が増加するに伴ってオルニチン量も増加し、最終的にプトレシン生成量も増加することが確認された。よって、本発明者らはプトレシン生産能に優れることが確認された実施例4-2で製造された菌株をCC01-0064ATCC13032ΔargFΔNCgl1221PCJ7-argCJBDbioAD::PCJ7-speCEcと命名し、ブダペスト条約に基づいてソウル市西大門区弘済1洞所在の韓国微生物保存センターKoreanCultureCenterofMicroorganismsKCCMに2010年11月24日付けで受託番号KCCM11138Pとして寄託した。以上の説明から、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施できることを理解するであろう。これに関して、前記実施例は全ての面においてあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明の範囲は、請求の範囲の意味及び範囲とその等価概念から導かれるあらゆる変更や変形された形態を含むものであると解釈すべきである。"