"図3配列番号3、図5配列番号5、図7配列番号7、図9配列番号9、図11配列番号11、図13配列番号13、図15配列番号15、図17配列番号17、図19配列番号19、図21配列番号21、図23配列番号23、図25配列番号25、図27配列番号27、図29配列番号29、図31配列番号31、図33配列番号33、図35配列番号35、図37配列番号37、図39配列番号39、図41配列番号41、図43配列番号43、図45配列番号45、図47配列番号47、図49配列番号49、図51配列番号51、図53配列番号53、図55配列番号55、図57配列番号57、図59配列番号59、図61配列番号61、図63配列番号63、図65配列番号65、図67配列番号67、図69配列番号69、図71配列番号71、図73配列番号73、図75配列番号75、図77配列番号77、図79配列番号79、図81配列番号81、図83配列番号83、図85配列番号85、図87配列番号87、図89配列番号89、図91配列番号91、図93配列番号93、図95配列番号95、図97配列番号97、図99配列番号99、図101配列番号101、図103配列番号103、図105配列番号105、図107配列番号107、図109配列番号109、図111配列番号111、図113配列番号113、図115配列番号115、図117配列番号117、図119配列番号119、図121配列番号121、図123配列番号123、図125配列番号125、図127配列番号127、図129配列番号129、図131配列番号131、図133配列番号133、図135配列番号135、図137配列番号137、図139配列番号139、図141配列番号141、図143配列番号143、図145配列番号145、図147配列番号147、図149配列番号149、図151配列番号151、図153配列番号153、図155配列番号155、図157配列番号157、図159配列番号159、図161配列番号161、図163配列番号163、図165配列番号165、図167配列番号167、図169配列番号169、図171配列番号171、図173配列番号173、図175配列番号175、図177配列番号177、図179配列番号179、図181配列番号181、図183配列番号183、図185配列番号185、図187配列番号187、図189配列番号189、図191配列番号191、図193配列番号193、図195配列番号195、図197配列番号197、図199配列番号199、図201配列番号201、図203配列番号203、図205配列番号205、図207配列番号207、図209配列番号209、図211配列番号211、図213配列番号213、図215配列番号215、図217配列番号217、図219配列番号219、図221配列番号221、図225配列番号225、図227配列番号227、図229配列番号229、図232配列番号232、図235配列番号235、図237配列番号237、図239配列番号239、図243配列番号243、図246配列番号246、図248配列番号248、図250配列番号250、図252配列番号252、図254配列番号254、図256配列番号256、図258配列番号258、図260配列番号260、図262配列番号262、図264配列番号264、図266配列番号266、図268配列番号268、図270配列番号270、図272配列番号272、図274配列番号274、図276配列番号276、図278配列番号278、図280配列番号280、図282配列番号282、図284配列番号284、図286配列番号286、図288配列番号288、図290配列番号290、図292配列番号292、図294配列番号294、図296配列番号296、図298配列番号298、図300配列番号300、図302配列番号302、図304配列番号304、図306配列番号306、図308配列番号308、図310配列番号310、図312A-B配列番号312、図314配列番号314、図316配列番号316、図318配列番号318、図320配列番号320、図324配列番号324、図326配列番号326、図329配列番号329、図332配列番号332、図334配列番号334、図336配列番号336、図338配列番号338、図340配列番号340、図342配列番号342、図344配列番号344、図346配列番号346、図348配列番号348、図350配列番号350、図352配列番号352、図354配列番号354、図356配列番号356、図358配列番号358、図360配列番号360、図362配列番号362、図364配列番号364、図366配列番号366、図368配列番号368、図370配列番号370、図372配列番号372、図375配列番号375、図377配列番号377、図379配列番号379、図381配列番号381、図383配列番号383、図385配列番号385、図387配列番号387、図389配列番号389、図392配列番号392、図394配列番号394、図396配列番号396、図399配列番号399、図403配列番号403、図405配列番号405、図411配列番号411、図413配列番号413、図415配列番号415、図417配列番号417、図419配列番号419、図421配列番号421、図423配列番号423、図425配列番号425、図427配列番号427、図429配列番号429、図431配列番号431、図433配列番号433、図435配列番号435、図437配列番号437、図439配列番号439、図441配列番号441、図443配列番号443、図445配列番号445、図447配列番号447、図449配列番号449、図451配列番号451、図453配列番号453、図455配列番号455、図457配列番号457、図460配列番号460、図462配列番号462、図464配列番号464、図466配列番号466、図468配列番号468、図472配列番号472、図474配列番号474、図476配列番号476、図478配列番号478、図480配列番号480、図482配列番号482、図484配列番号484、図486配列番号486、図488配列番号488、図490配列番号490、図492配列番号492、図494配列番号494、図496配列番号496、図498配列番号498、図500配列番号500、図502配列番号502、図504配列番号504又は図506配列番号506に示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に対して、少なくとも80の核酸配列同一性を有する単離された核酸。図1配列番号1、図2A-B配列番号2、図4配列番号4、図6配列番号6、図8配列番号8、図10配列番号10、図12配列番号12、図14配列番号14、図16配列番号16、図18配列番号18、図20配列番号20、図22配列番号22、図24配列番号24、図26配列番号26、図28配列番号28、図30配列番号30、図32配列番号32、図34配列番号34、図36A-B配列番号36、図38配列番号38、図40配列番号40、図42配列番号42、図44A-B配列番号44、図46A-B配列番号46、図48配列番号48、図50A-B配列番号50、図52配列番号52、図54配列番号54、図56配列番号56、図58配列番号58、図60配列番号60、図62配列番号62、図64配列番号64、図66配列番号66、図68配列番号68、図70配列番号70、図72A-B配列番号72、図74配列番号74、図76配列番号76、図78配列番号78、図80配列番号80、図82配列番号82、図84配列番号84、図86配列番号86、図88配列番号88、図90配列番号90、図92配列番号92、図94A-B配列番号94、図96配列番号96、図98配列番号98、図100配列番号100、図102配列番号102、図104配列番号104、図106配列番号106、図108配列番号108、図110A-B配列番号110、図112配列番号112、図114A-B配列番号114、図116配列番号116、図118配列番号118、図120配列番号120、図122A-B配列番号122、図124A-B配列番号124、図126配列番号126、図128A-B配列番号128、図130配列番号130、図132配列番号132、図134配列番号134、図136配列番号136、図138配列番号138、図140配列番号140、図142配列番号142、図144A-B配列番号144、図146配列番号146、図148配列番号148、図150配列番号150、図152配列番号152、図154配列番号154、図156A-B配列番号156、図158配列番号158、図160配列番号160、図162配列番号162、図164配列番号164、図166A-B配列番号166、図168A-B配列番号168、図170配列番号170、図172配列番号172、図174A-B配列番号174、図176配列番号176、図178A-B配列番号178、図180配列番号180、図182配列番号182、図184配列番号184、図186配列番号186、図188配列番号188、図190A-B配列番号190、図192A-B配列番号192、図194配列番号194、図196配列番号196、図198配列番号198、図200A-B配列番号200、図202配列番号202、図204配列番号204、図206配列番号206、図208配列番号208、図210配列番号210、図212配列番号212、図214配列番号214、図216A-B配列番号216、図218配列番号218、図220A-B配列番号220、図222配列番号222、図223配列番号223、図224配列番号224、図226配列番号226、図228配列番号228、図230配列番号230、図231配列番号231、図233配列番号233、図234配列番号234、図236A-B配列番号236、図238配列番号238、図240配列番号240、図241配列番号241、図242配列番号242、図244配列番号244、図245配列番号245、図247A-B配列番号247、図249配列番号249、図251配列番号251、図253配列番号253、図255配列番号255、図257配列番号257、図259配列番号259、図261配列番号261、図263配列番号263、図265配列番号265、図267配列番号267、図269配列番号269、図271配列番号271、図273配列番号273、図275配列番号275、図277配列番号277、図279配列番号279、図281配列番号281、図283配列番号283、図285配列番号285、図287配列番号287、図289A-B配列番号289、図291配列番号291、図293A-B配列番号293、図295配列番号295、図297配列番号297、図299A-B配列番号299、図301配列番号301、図303A-B配列番号303、図305A-B配列番号305、図307配列番号307、図309配列番号309、図311A-D配列番号311、図313配列番号313、図315A-B配列番号315、図317配列番号317、図319A-B配列番号319、図321配列番号321、図322配列番号322、図323配列番号323、図325配列番号325、図327配列番号327、図328配列番号328、図330配列番号330、図331配列番号331、図333配列番号333、図335A-B配列番号335、図337配列番号337、図339配列番号339、図341配列番号341、図343配列番号343、図345配列番号345、図347配列番号347、図349配列番号349、図351配列番号351、図353配列番号353、図355配列番号355、図357配列番号357、図359配列番号359、図361A-B配列番号361、図363配列番号363、図365配列番号365、図367A-C配列番号367、図369配列番号369、図371配列番号371、図373A-B配列番号373、図374配列番号374、図376配列番号376、図378配列番号378、図380配列番号380、図382配列番号382、図384A-B配列番号384、図386配列番号386、図388配列番号388、図390配列番号390、図391配列番号391、図393配列番号393、図395A-B配列番号395、図397配列番号397、図398A-B配列番号398、図400配列番号400、図401配列番号401、図402A-B配列番号402、図404配列番号404、図406配列番号406、図407配列番号407、図408配列番号408、図409配列番号409、図410配列番号410、図412配列番号412、図414配列番号414、図416配列番号416、図418配列番号418、図420A-B配列番号420、図422配列番号422、図424A-B配列番号424、図426配列番号426、図428配列番号428、図430配列番号430、図432配列番号432、図434配列番号434、図436A-B配列番号436、図438A-B配列番号438、図440A-B配列番号440、図442A-B配列番号442、図444A-B配列番号444、図446A-B配列番号446、図448配列番号448、図450A-B配列番号450、図452配列番号452、図454配列番号454、図456配列番号456、図458配列番号458、図459配列番号459、図461配列番号461、図463A-B配列番号463、図465配列番号465、図467配列番号467、図469A-B配列番号469、図470A-B配列番号470、図471A-C配列番号471、図473配列番号473、図475配列番号475、図477配列番号477、図479配列番号479、図481A-B配列番号481、図483配列番号483、図485配列番号485、図487配列番号487、図489配列番号489、図491A-B配列番号491、図493配列番号493、図495配列番号495、図497配列番号497、図499配列番号499、図501配列番号501、図503配列番号503及び図505配列番号505に示すヌクレオチド配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも80の核酸配列同一性を有する単離された核酸。図1配列番号1、図2A-B配列番号2、図4配列番号4、図6配列番号6、図8配列番号8、図10配列番号10、図12配列番号12、図14配列番号14、図16配列番号16、図18配列番号18、図20配列番号20、図22配列番号22、図24配列番号24、図26配列番号26、図28配列番号28、図30配列番号30、図32配列番号32、図34配列番号34、図36A-B配列番号36、図38配列番号38、図40配列番号40、図42配列番号42、図44A-B配列番号44、図46A-B配列番号46、図48配列番号48、図50A-B配列番号50、図52配列番号52、図54配列番号54、図56配列番号56、図58配列番号58、図60配列番号60、図62配列番号62、図64配列番号64、図66配列番号66、図68配列番号68、図70配列番号70、図72A-B配列番号72、図74配列番号74、図76配列番号76、図78配列番号78、図80配列番号80、図82配列番号82、図84配列番号84、図86配列番号86、図88配列番号88、図90配列番号90、図92配列番号92、図94A-B配列番号94、図96配列番号96、図98配列番号98、図100配列番号100、図102配列番号102、図104配列番号104、図106配列番号106、図108配列番号108、図110A-B配列番号110、図112配列番号112、図114A-B配列番号114、図116配列番号116、図118配列番号118、図120配列番号120、図122A-B配列番号122、図124A-B配列番号124、図126配列番号126、図128A-B配列番号128、図130配列番号130、図132配列番号132、図134配列番号134、図136配列番号136、図138配列番号138、図140配列番号140、図142配列番号142、図144A-B配列番号144、図146配列番号146、図148配列番号148、図150配列番号150、図152配列番号152、図154配列番号154、図156A-B配列番号156、図158配列番号158、図160配列番号160、図162配列番号162、図164配列番号164、図166A-B配列番号166、図168A-B配列番号168、図170配列番号170、図172配列番号172、図174A-B配列番号174、図176配列番号176、図178A-B配列番号178、図180配列番号180、図182配列番号182、図184配列番号184、図186配列番号186、図188配列番号188、図190A-B配列番号190、図192A-B配列番号192、図194配列番号194、図196配列番号196、図198配列番号198、図200A-B配列番号200、図202配列番号202、図204配列番号204、図206配列番号206、図208配列番号208、図210配列番号210、図212配列番号212、図214配列番号214、図216A-B配列番号216、図218配列番号218、図220A-B配列番号220、図222配列番号222、図223配列番号223、図224配列番号224、図226配列番号226、図228配列番号228、図230配列番号230、図231配列番号231、図233配列番号233、図234配列番号234、図236A-B配列番号236、図238配列番号238、図240配列番号240、図241配列番号241、図242配列番号242、図244配列番号244、図245配列番号245、図247A-B配列番号247、図249配列番号249、図251配列番号251、図253配列番号253、図255配列番号255、図257配列番号257、図259配列番号259、図261配列番号261、図263配列番号263、図265配列番号265、図267配列番号267、図269配列番号269、図271配列番号271、図273配列番号273、図275配列番号275、図277配列番号277、図279配列番号279、図281配列番号281、図283配列番号283、図285配列番号285、図287配列番号287、図289A-B配列番号289、図291配列番号291、図293A-B配列番号293、図295配列番号295、図297配列番号297、図299A-B配列番号299、図301配列番号301、図303A-B配列番号303、図305A-B配列番号305、図307配列番号307、図309配列番号309、図311A-D配列番号311、図313配列番号313、図315A-B配列番号315、図317配列番号317、図319A-B配列番号319、図321配列番号321、図322配列番号322、図323配列番号323、図325配列番号325、図327配列番号327、図328配列番号328、図330配列番号330、図331配列番号331、図333配列番号333、図335A-B配列番号335、図337配列番号337、図339配列番号339、図341配列番号341、図343配列番号343、図345配列番号345、図347配列番号347、図349配列番号349、図351配列番号351、図353配列番号353、図355配列番号355、図357配列番号357、図359配列番号359、図361A-B配列番号361、図363配列番号363、図365配列番号365、図367A-C配列番号367、図369配列番号369、図371配列番号371、図373A-B配列番号373、図374配列番号374、図376配列番号376、図378配列番号378、図380配列番号380、図382配列番号382、図384A-B配列番号384、図386配列番号386、図388配列番号388、図390配列番号390、図391配列番号391、図393配列番号393、図395A-B配列番号395、図397配列番号397、図398A-B配列番号398、図400配列番号400、図401配列番号401、図402A-B配列番号402、図404配列番号404、図406配列番号406、図407配列番号407、図408配列番号408、図409配列番号409、図410配列番号410、図412配列番号412、図414配列番号414、図416配列番号416、図418配列番号418、図420A-B配列番号420、図422配列番号422、図424A-B配列番号424、図426配列番号426、図428配列番号428、図430配列番号430、図432配列番号432、図434配列番号434、図436A-B配列番号436、図438A-B配列番号438、図440A-B配列番号440、図442A-B配列番号442、図444A-B配列番号444、図446A-B配列番号446、図448配列番号448、図450A-B配列番号450、図452配列番号452、図454配列番号454、図456配列番号456、図458配列番号458、図459配列番号459、図461配列番号461、図463A-B配列番号463、図465配列番号465、図467配列番号467、図469A-B配列番号469、図470A-B配列番号470、図471A-C配列番号471、図473配列番号473、図475配列番号475、図477配列番号477、図479配列番号479、図481A-B配列番号481、図483配列番号483、図485配列番号485、図487配列番号487、図489配列番号489、図491A-B配列番号491、図493配列番号493、図495配列番号495、図497配列番号497、図499配列番号499、図501配列番号501、図503配列番号503及び図505配列番号505に示すヌクレオチド配列の完全長コード化配列からなる群より選択されたヌクレオチド配列に対して、少なくとも80の核酸配列同一性を有する単離された核酸。請求項1に記載の核酸を含んでなるベクター。ベクターで形質転換された宿主細胞によって認識されるコントロール配列に作用可能に結合している請求項5に記載のベクター。請求項5に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。前記細胞がCHO細胞、大腸菌、又は酵母細胞である、請求項7に記載の宿主細胞。PROポリペプチドの製造方法において、前記PROポリペプチドの発現に適した条件下で請求項7に記載の宿主細胞を培養し、細胞培養物から前記PROポリペプチドを回収することを含んでなる方法。a図3配列番号3、図5配列番号5、図7配列番号7、図9配列番号9、図11配列番号11、図13配列番号13、図15配列番号15、図17配列番号17、図19配列番号19、図21配列番号21、図23配列番号23、図25配列番号25、図27配列番号27、図29配列番号29、図31配列番号31、図33配列番号33、図35配列番号35、図37配列番号37、図39配列番号39、図41配列番号41、図43配列番号43、図45配列番号45、図47配列番号47、図49配列番号49、図51配列番号51、図53配列番号53、図55配列番号55、図57配列番号57、図59配列番号59、図61配列番号61、図63配列番号63、図65配列番号65、図67配列番号67、図69配列番号69、図71配列番号71、図73配列番号73、図75配列番号75、図77配列番号77、図79配列番号79、図81配列番号81、図83配列番号83、図85配列番号85、図87配列番号87、図89配列番号89、図91配列番号91、図93配列番号93、図95配列番号95、図97配列番号97、図99配列番号99、図101配列番号101、図103配列番号103、図105配列番号105、図107配列番号107、図109配列番号109、図111配列番号111、図113配列番号113、図115配列番号115、図117配列番号117、図119配列番号119、図121配列番号121、図123配列番号123、図125配列番号125、図127配列番号127、図129配列番号129、図131配列番号131、図133配列番号133、図135配列番号135、図137配列番号137、図139配列番号139、図141配列番号141、図143配列番号143、図145配列番号145、図147配列番号147、図149配列番号149、図151配列番号151、図153配列番号153、図155配列番号155、図157配列番号157、図159配列番号159、図161配列番号161、図163配列番号163、図165配列番号165、図167配列番号167、図169配列番号169、図171配列番号171、図173配列番号173、図175配列番号175、図177配列番号177、図179配列番号179、図181配列番号181、図183配列番号183、図185配列番号185、図187配列番号187、図189配列番号189、図191配列番号191、図193配列番号193、図195配列番号195、図197配列番号197、図199配列番号199、図201配列番号201、図203配列番号203、図205配列番号205、図207配列番号207、図209配列番号209、図211配列番号211、図213配列番号213、図215配列番号215、図217配列番号217、図219配列番号219、図221配列番号221、図225配列番号225、図227配列番号227、図229配列番号229、図232配列番号232、図235配列番号235、図237配列番号237、図239配列番号239、図243配列番号243、図246配列番号246、図248配列番号248、図250配列番号250、図252配列番号252、図254配列番号254、図256配列番号256、図258配列番号258、図260配列番号260、図262配列番号262、図264配列番号264、図266配列番号266、図268配列番号268、図270配列番号270、図272配列番号272、図274配列番号274、図276配列番号276、図278配列番号278、図280配列番号280、図282配列番号282、図284配列番号284、図286配列番号286、図288配列番号288、図290配列番号290、図292配列番号292、図294配列番号294、図296配列番号296、図298配列番号298、図300配列番号300、図302配列番号302、図304配列番号304、図306配列番号306、図308配列番号308、図310配列番号310、図312A-B配列番号312、図314配列番号314、図316配列番号316、図318配列番号318、図320配列番号320、図324配列番号324、図326配列番号326、図329配列番号329、図332配列番号332、図334配列番号334、図336配列番号336、図338配列番号338、図340配列番号340、図342配列番号342、図344配列番号344、図346配列番号346、図348配列番号348、図350配列番号350、図352配列番号352、図354配列番号354、図356配列番号356、図358配列番号358、図360配列番号360、図362配列番号362、図364配列番号364、図366配列番号366、図368配列番号368、図370配列番号370、図372配列番号372、図375配列番号375、図377配列番号377、図379配列番号379、図381配列番号381、図383配列番号383、図385配列番号385、図387配列番号387、図389配列番号389、図392配列番号392、図394配列番号394、図396配列番号396、図399配列番号399、図403配列番号403、図405配列番号405、図411配列番号411、図413配列番号413、図415配列番号415、図417配列番号417、図419配列番号419、図421配列番号421、図423配列番号423、図425配列番号425、図427配列番号427、図429配列番号429、図431配列番号431、図433配列番号433、図435配列番号435、図437配列番号437、図439配列番号439、図441配列番号441、図443配列番号443、図445配列番号445、図447配列番号447、図449配列番号449、図451配列番号451、図453配列番号453、図455配列番号455、図457配列番号457、図460配列番号460、図462配列番号462、図464配列番号464、図466配列番号466、図468配列番号468、図472配列番号472、図474配列番号474、図476配列番号476、図478配列番号478、図480配列番号480、図482配列番号482、図484配列番号484、図486配列番号486、図488配列番号488、図490配列番号490、図492配列番号492、図494配列番号494、図496配列番号496、図498配列番号498、図500配列番号500、図502配列番号502、図504配列番号504又は図506配列番号506に示すポリペプチドのアミノ酸配列に対して、少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有する単離されたポリペプチド。異種アミノ酸配列と融合した請求項10に記載のポリペプチドを含んでなるキメラ分子。前記異種アミノ酸配列がエピトープタグ配列又はイムノグロブリンのFc領域である、請求項12に記載のキメラ分子。請求項10に記載のポリペプチドと特異的に結合する抗体。前記抗体がモノクローナル抗体、ヒト化抗体又は一本鎖抗体である、請求項14に記載の抗体。a請求項10に記載のポリペプチド、b前記ポリペプチドのアゴニスト、c前記ポリペプチドのアンタゴニスト、又はd前記ポリペプチドと結合する抗体を、担体と組み合わせて含有する組成物。前記担体が製薬的に許容可能な担体である、請求項16に記載の組成物。a、b、c又はdの治療的有効量を含む、請求項実施例1:刺激されたB細胞のマイクロアレイ分析しばしば何千もの遺伝子配列を含む核酸マイクロアレイは、正常な対応体と比較して疾患状態にある細胞において差次的に発現する遺伝子を同定するのに役立つ。核酸マイクロアレイを使用することによって、試験及びコントロール組織試料由来の試験及びコントロールmRNA試料を逆転写し、標識して、cDNAプローブを生成した。ついで、そのcDNAプローブを、固体支持体に固定された核酸アレイにハイブリダイズさせた。アレイはアレイの各部位の配列と位置が既知となるように構成している。例えば、所定の疾患状態において発現されることが知られている遺伝子の選択群を固体支持体上にアレイ化することができる。標識化プローブの特定のアレイメンバーとのハイブリダイゼーションは、そのプローブが由来する試料がその遺伝子を発現することを示している。試験この実施例では刺激B細胞試料由来のプローブのハイブリダイゼーションシグナルが、コントロール試料この例では非刺激B細胞由来のハイブリダイゼーションシグナルよりも大きければ、試験試料に過剰発現する遺伝子又は遺伝子群が同定される。この結果の意味するところは、試験試料に過剰発現するタンパク質は疾患状態の存在の診断マーカーとしてのみではなく、疾患状態の治療のための治療標的としても有用であるということである。核酸ハイブリダイゼーション法及びマイクロアレイ技術は当該分野で周知である。一例として、ハイブリダイゼーション及びプローブのための核酸の特定の調製、スライド、及びハイブリダイゼーション条件は全て2001年3月30日出願のPCT/US01/10482に詳述されており、それを出典明示によりここに取り込む。この実験では、3の正常な男性ドナーから提供された末梢血から一次B細胞を単離した。B細胞は、MACSTM磁気細胞ソーティングシステムMiltenyiBiotecAuburnCAを使用するB細胞単離キットを用いたネガティブ選択により単離した。細胞純度は、アイソタイプ抗体コントロールに対して抗CD19を用いて蛍光抗体染色を行った後、FACS分析を行って純度を決定した。B細胞集団の純度は各ドナーについて90を超えていた。単離された細胞を、10のFBS、2mMのL-グルタミン、55mMの2-ME、100単位/mLのペニシリン、100mg/mLのストレプトマイシンを補填したRPMI1640倍地に懸濁させた。6ウェルのFALCONTMポリスチレン組織培養プレート中で1ウェル当たり5mL、濃度3×105細胞/mLで細胞を培養した。抗CD4010mg/mL及びIL-4100ng/mLの存在下及び不存在下の何れかにおいて、細胞を37°Cで23時間培養した。抗CD40/IL-4による刺激に応答する単離B細胞の免疫能力を、細胞表面タンパク質CD69の発現の誘導によって決定した。抗CD69抗体での蛍光染色を使用して、CD69の発現の増大を、抗CD40/IL-4による培養後0時間目と23時間目にモニターした。QiagenRneasyMaxiKitTMを使用して、抗CD40/IL-4刺激の存在下及び不存在下で、0時間目と23時間目に培養B細胞から全RNAを抽出した。Qiagenプロトコルに従いデオキシリボヌクレアーゼIで処理したカラムからRNAを抽出し、DEPC処理水を用いて溶出させた。抽出したRNAをAffimaxAffymetrixIncSantaClaraCAマイクロアレイにかけた。0時間目に回収した非刺激細胞について同じ分析を行った。遺伝子は、刺激した細胞と非刺激細胞において23時間目に発現が上方制御されていたものを比較した。以下はこれら実験の結果であり、本発明の様々なPROポリペプチドが、単離された非刺激B細胞と比較して、抗CD40/IL-4によって刺激された単離B細胞において有意に過剰発現したことを実証するものである。上述のように、これらのデータは本発明のPROポリペプチドが一又は複数の免疫疾患の存在を示す診断マーカーとして有用であるだけでなく、その免疫疾患の治療のための治療標的としても役立つことを実証している。図1配列番号1、図2A-B配列番号2、図4配列番号4、図6配列番号6、図8配列番号8、図10配列番号10、図12配列番号12、図14配列番号14、図16配列番号16、図18配列番号18、図20配列番号20、図22配列番号22、図24配列番号24、図26配列番号26、図28配列番号28、図30配列番号30、図32配列番号32、図34配列番号34、図36A-B配列番号36、図38配列番号38、図40配列番号40、図42配列番号42、図44A-B配列番号44、図46A-B配列番号46、図48配列番号48、図50A-B配列番号50、図52配列番号52、図54配列番号54、図56配列番号56、図58配列番号58、図60配列番号60、図62配列番号62、図64配列番号64、図66配列番号66、図68配列番号68、図70配列番号70、図72A-B配列番号72、図74配列番号74、図76配列番号76、図78配列番号78、図80配列番号80、図82配列番号82、図84配列番号84、図86配列番号86、図88配列番号88、図90配列番号90、図92配列番号92、図94A-B配列番号94、図96配列番号96、図98配列番号98、図100配列番号100、図102配列番号102、図104配列番号104、図106配列番号106、図108配列番号108、図110A-B配列番号110、図112配列番号112、図114A-B配列番号114、図116配列番号116、図118配列番号118、図120配列番号120、図122A-B配列番号122、図124A-B配列番号124、図126配列番号126、図128A-B配列番号128、図130配列番号130、図132配列番号132、図134配列番号134、図136配列番号136、図138配列番号138、図140配列番号140、図142配列番号142、図144A-B配列番号144、図146配列番号146、図148配列番号148、図150配列番号150、図152配列番号152、図154配列番号154、図156A-B配列番号156、図158配列番号158、図160配列番号160、図162配列番号162、図164配列番号164、図166A-B配列番号166、図168A-B配列番号168、図170配列番号170、図172配列番号172、図174A-B配列番号174、図176配列番号176、図178A-B配列番号178、図180配列番号180、図182配列番号182、図184配列番号184、図186配列番号186、図188配列番号188、図190A-B配列番号190、図192A-B配列番号192、図194配列番号194、図196配列番号196、図198配列番号198、図200A-B配列番号200、図202配列番号202、図204配列番号204、図206配列番号206、図208配列番号208、図210配列番号210、図212配列番号212、図214配列番号214、図216A-B配列番号216、図218配列番号218、図220A-B配列番号220、図222配列番号222、図223配列番号223、図224配列番号224、図226配列番号226、図228配列番号228、図230配列番号230、図231配列番号231、図233配列番号233、図234配列番号234、図236A-B配列番号236、図238配列番号238、図240配列番号240、図241配列番号241、図242配列番号242、図244配列番号244、図245配列番号245、図247A-B配列番号247、図249配列番号249、図251配列番号251、図253配列番号253、図255配列番号255、図257配列番号257、図259配列番号259、図261配列番号261、図263配列番号263、図265配列番号265、図267配列番号267、図269配列番号269、図271配列番号271、図273配列番号273、図275配列番号275、図277配列番号277、図279配列番号279、図281配列番号281、図283配列番号283、図285配列番号285、図287配列番号287、図289A-B配列番号289、図291配列番号291、図293A-B配列番号293、図295配列番号295、図297配列番号297、図299A-B配列番号299、図301配列番号301、図303A-B配列番号303、図305A-B配列番号305、図307配列番号307、図309配列番号309、図311A-D配列番号311、図313配列番号313、図315A-B配列番号315、図317配列番号317、図319A-B配列番号319、図321配列番号321、図322配列番号322、図323配列番号323、図325配列番号325、図327配列番号327、図328配列番号328、図330配列番号330、図331配列番号331、図333配列番号333、図335A-B配列番号335、図337配列番号337、図339配列番号339、図341配列番号341、図343配列番号343、図345配列番号345、図347配列番号347、図349配列番号349、図351配列番号351、図353配列番号353、図355配列番号355、図357配列番号357、図359配列番号359、図361A-B配列番号361、図363配列番号363、図365配列番号365、図367A-C配列番号367、図369配列番号369、図371配列番号371、図373A-B配列番号373、図374配列番号374、図376配列番号376、図378配列番号378、図380配列番号380、図382配列番号382、図384A-B配列番号384、図386配列番号386、図388配列番号388、図390配列番号390、図391配列番号391、図393配列番号393、図395A-B配列番号395、図397配列番号397、図398A-B配列番号398、図400配列番号400、図401配列番号401、図402A-B配列番号402、図404配列番号404、図406配列番号406、図407配列番号407、図408配列番号408、図409配列番号409、図410配列番号410、図412配列番号412、図414配列番号414、図416配列番号416、図418配列番号418、図420A-B配列番号420、図422配列番号422、図424A-B配列番号424、図426配列番号426、図428配列番号428、図430配列番号430、図432配列番号432、図434配列番号434、図436A-B配列番号436、図438A-B配列番号438、図440A-B配列番号440、図442A-B配列番号442、図444A-B配列番号444、図446A-B配列番号446、図448配列番号448、図450A-B配列番号450、図452配列番号452、図454配列番号454、図456配列番号456、図458配列番号458、図459配列番号459、図461配列番号461、図463A-B配列番号463、図465配列番号465、図467配列番号467、図469A-B配列番号469、図470A-B配列番号470、図471A-C配列番号471、図473配列番号473、図475配列番号475、図477配列番号477、図479配列番号479、図481A-B配列番号481、図483配列番号483、図485配列番号485、図487配列番号487、図489配列番号489、図491A-B配列番号491、図493配列番号493、図495配列番号495、図497配列番号497、図499配列番号499、図501配列番号501、図503配列番号503及び図505配列番号505の核酸は抗CD40/IL-4での刺激時に上方制御された。実施例2:ハイブリダイゼーションプローブとしてのPROの使用以下の方法は、PROをコードするヌクレオチド配列のハイブリダイゼーションプローブとしての利用を示している。ここに開示されている完全長又は成熟PROのコード化配列を含むDNAは、ヒト組織cDNAライブラリー又はヒト組織ゲノムライブラリーの相同的DNAPROの天然に生じる変異体をコードするもの等をスクリーニングするためのプローブとして用いられる。何れかのライブラリーDNAを含むフィルターのハイブリダイゼーションと洗浄を、次の高ストリンジェント条件下で実施される。放射標識PRO誘導プローブのフィルターへのハイブリダイゼーションを、50ホルムアミド、5xSSC、0.1SDS、0.1ピロリン酸ナトリウム、50mMリン酸ナトリウム、pH6.8、2xデンハード液、及び10デキストラン硫酸の溶液中において42°Cで20時間にわたって実施される。フィルターの洗浄を、0.1xSSC及び0.1SDSの水溶液中において42°Cで実施される。ついで、完全長天然配列をコードするDNAと所望の配列同一性を有するDNAを、当該分野で知られている標準技術を用いて同定することができる。実施例3大腸菌中でのPROの発現この実施例は、大腸菌中での組換え発現によるPROの未グリコシル化型の調製を例証する。先ず、PROをコード化するDNA配列を選択されたPCRプライマーを使用して増幅した。このプライマーは、選択された発現ベクター上に制限酵素部位に対応する制限酵素部位を含んでいなければならない。様々な発現ベクターを使用することができる。適したベクターの例としては、アンピシリン及びテトラサイクリン耐性の遺伝子を含むpBR322を参照のことがある。ベクターを制限酵素によって消化し、脱リン酸化した。ついで、PCR増幅配列をベクターにライゲーションした。ベクターは好ましくは抗生物質耐性遺伝子、trpプロモーター、ポリHisリーダー最初の6つのSTIIコドン、ポリHis配列、及びエンテロキナーゼ切断部位を含む、PROコード領域、ラムダ転写終結因子及びargU遺伝子をコードする配列を含む。ついで、上掲のSambrookらに記載されている方法を用いて選択された大腸菌株を形質転換するために、このライゲーション混合物を使用した。形質転換体をLBプレート上でのその成長能力によって同定した後、抗生物質耐性コロニーを選択した。プラスミドDNAを単離し、制限分析及びDNA配列決定によって確認することができた。選択されたクローンを、抗生物質が補填されたLBブロスのような液体培地で一晩かけて成長させることができる。この一晩の培養物を、ついでより大きなスケールでの培養を播種するために使用してもよい。そして細胞を所望の光学密度になるまで成長させ、その間に発現プロモーターが作用し始める。更に数時間、細胞を培養した後に、遠心分離によって細胞を収集することが可能であった。遠心分離によって得られた細胞ペレットは、当該分野で公知の様々な薬剤を使用して可溶化でき、ついでこの溶解したPROタンパク質を、タンパク質の堅固な結合を可能にする条件下で金属キレート化カラムを用いて精製すること可能であった。以下の手法を用いて、ポリ-Hisタグ形態でPROを大腸菌で発現させてもよい。PROをコードするDNAを、選択したPCRプライマーを用いて最初に増幅した。このプライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位、及び効率的で信頼性のある翻訳開始、金属キレートカラムでの迅速な精製、及びエンテロキナーゼでのタンパク質分解的除去をもたらす他の有用な配列を含む。ついで、PCR増幅されたポリHisタグ配列を発現ベクターへ結合させ、これを株52W3110fuhAlongalErpoHtsclpPに基づく大腸菌宿主の形質転換に使用した。形質転換体を、最初に50mg/mlのカルベニシリンを含有するLB中で、30°Cで振盪しながら3-5のO.D.600に達するまで成長させた。ついで培養液をCRAP培地3.57gの2SO4、0.71gのクエン酸ナトリウム2H2O、1.07gのKCl、5.36gのDifco酵母抽出物、500mL水中の5.36gのSheffieldhycaseSF、並びに110mMのMPOS、pH7.3、0.55w/vのグルコース及び7mMのMgSO4の混合で調製中にて50-100倍希釈し、30°Cで振盪によって約20-30時間成長させた。SDSPAGEにより発現を確認するために試料を取り出し、細胞がペレットとなるようにバルク培地を遠心分離した。精製及びリフォールディング再折りたたみまで、細胞ペレットを凍結させた。0.5から1Lの発酵6-10gペレットからの大腸菌ペーストを、7Mのグアニジン、20mMのトリス、pH8バッファー中で10容量w/vで再懸濁させた。固体硫酸ナトリウム及びテトラチオン酸ナトリウムを添加して最終濃度を各々0.1M及び0.02Mとし、溶液を4°Cで終夜撹拌した。この工程により、すべてのシステイン残基が亜硫酸によりブロックされた変性タンパク質が生じる。溶液をBeckmanUltracentrifuge中で40,000rpmで30分間濃縮した。上清を金属キレートカラムバッファー6Mのグアニジン、20mMのトリス、pH7.4の3-5容量で希釈し、透明にするために0.22ミクロンフィルターを通して濾過する。透明抽出物を、金属キレートカラムバッファーで平衡化させた5mlのQiagenNiNTA金属キレートカラムに負荷した。カラムを50mMのイミダゾールCalbiochemUtrolgradeを含む添加バッファー、pH7.4で洗浄した。タンパク質を250mMのイミダゾールを含有するバッファーで溶離した。所望のタンパク質を含有する画分をプールし、4°Cで保存した。タンパク質濃度は、そのアミノ酸配列に基づいて計算した吸光係数を用いて280nmにおけるその吸光度により推定した。試料を20mMのトリス、pH8.6、0.3MのNaCl、2.5Mの尿素、5mMのシステイン、20mMのグリシン及び1mMのEDTAからなる新たに調製した再生バッファー中で徐々に希釈することによって、タンパク質を再生させた。リフォールディング容量は、最終的なタンパク質濃度が50~100マイクログラム/mlとなるように選択した。リフォールディング溶液を4°Cで12-36時間ゆっくりと撹拌した。リフォールディング反応はTFAを採取濃度0.4約3のpHで添加することにより停止させた。タンパク質をさらに精製する前に、溶液を0.22ミクロンフィルターを通して濾過し、アセトニトリルを最終濃度2-10で添加した。再生したタンパク質を、PorosR1/H逆相カラムで、0.1TFAの移動バッファーと10~80のアセトニトリル勾配での溶離を用いてクロマトグラフにかけた。A280吸収を持つ画分のアリコートをSDSポリアクリルアミドゲルで分析し、相同な再生タンパク質を含有する画分をプールした。一般的に、殆どの正しく再生したタンパク質種は、これらの種が最もコンパクトであり、その疎水性内面が逆相樹脂との相互作用から遮蔽されているので、アセトニトリルの最低濃度で溶離される。凝集した種は通常、より高いアセトニトリル濃度で溶離される。誤って再生したタンパク質を所望の形態から除くのに加えて、逆相工程は試料からエンドトキシンも除去する。所望の再生したPROポリペプチドを含有する画分をプールし、溶液に向けた窒素の弱い気流を用いてアセトニトリルを除去した。タンパク質を、透析又は調製バッファーで平衡化したG25SuperfinePharmacia樹脂でのゲル濾過及び滅菌濾過により、0.14Mの塩化ナトリウム及び4のマンニトールを含む20mMのHepes、pH6.8に調製した。ここで開示されたPROポリペプチドの多くのものを、上述の方法によって成功裏に発現させた。実施例4:哺乳動物細胞中でのPROの発現この実施例は、哺乳動物細胞における組み換え発現による潜在的にグリコシル化した形態のPROの調製を例証する。発現ベクターとしてベクターpRK51989年3月15日公開のEP307247参照を用いた。場合によっては、PRODNAを選択した制限酵素を持つpRK5に結合させ、上掲のSambrook等に記載されたようなライゲーション方法を用いてPRODNAを挿入させる。得られたベクターは、pRK5PROと呼ばれる。一実施態様では、選択された宿主細胞は293細胞とすることができる。ヒト293細胞ATCCCCL1573は、ウシ胎児血清及び場合によっては滋養成分及び/又は抗生物質を添加したDMEMなどの培地中で組織培養プレートにおいて成長させて集密化した。約10μgのpRK5PRODNAを約1μgのVARNA遺伝子コード化DNA[ThimmappayaらCell31543]と混合し、500μlの1mMトリスHCl、0.1mMEDTA、0.227MCaCl2に溶解させた。この混合物に、500μlの50mMHEPESpH7.35、280mMNaCl、1.5mMNaPO4を滴下して添加し、25°Cで10分間析出物を形成させた。析出物を懸濁し、293細胞に加えて37°Cで約4時間定着させた。培地を吸引し、2mlのPBS中20グリセロールを30秒間添加した。293細胞は、ついで無血清培地で洗浄し、新鮮な培地を添加し、細胞を約5日間インキュベートした。トランスフェクションの約24時間後、培地を除去し、培地単独又は200μCi/ml35S-システイン及び200μCi/ml35S-メチオニンを含む培地で置換した。12時間のインキュベーションの後、条件培地を回収し、スピンフィルターで濃縮し、15SDSゲルに添加した。処理したゲルを乾燥させ、PROポリペプチドの存在を現す選択された時間にわたってフィルムにさらした。形質転換した細胞を含む培地に、更なるインキュベーションを施し無血清培地で、培地を選択されたバイオアッセイで試験した。これに換わる技術において、PROは、SomparyacらProcNatlAcadSci127575に記載されたデキストラン硫酸法を用いて293細胞に一過的に導入される。293細胞は、スピナーフラスコ内で最大密度まで成長させ、700μgのpRK5PRODNAを添加する。細胞は、まずスピナーフラスコから遠心分離によって濃縮し、PBSで洗浄した。DNAデキストラン沈殿物を細胞ペレット上で4時間インキュベートした。細胞を20グリセロールで90秒間処理し、組織培地で洗浄し、組織培地、5μg/mlウシインシュリン及び0.1μg/mlウシトランスフェリンを含むスピナーフラスコに再度導入した。約4日後に、条件培地を遠心分離して濾過し、細胞及び細胞片を除去した。ついで発現PROを含む試料を、透析及び/又はカラムクロマトグラフィー等の選択した方法によって濃縮し精製することが可能である。他の実施態様では、PROをCHO細胞で発現させることができる。pRK5PROは、CaPO4又はDEAE-デキストランなどの公知の試薬を用いてCHO細胞にトランスフェクションすることができる。上記したように、細胞培地をインキュベートし、培地を培養培地のみ又は35Sメチオニン等の放射性標識を含む培地に置換することができる。PROポリペプチドの存在を同定した後、培地を無血清培地に置換してもよい。好ましくは、培地を約6日間インキュベートし、ついで条件培地を収集する。ついで、発現PROを含む培地を、任意の選択した方法によって濃縮し精製することができる。また、エピトープタグPROは、宿主CHO細胞において発現させてもよい。PROはpRK5ベクターからサブクローニングしてもよい。サブクローン挿入物は、PCRを施してバキュロウイルス発現ベクター中のポリhisタグ等の選択されたエピトープタグを持つ枠に融合できる。ついで、ポリhisタグPRO挿入物は、安定なクローンの選択のためのDHFR等の選択マーカーを含むSV40プロモーター/エンハンサー含有ベクターにサブクローニングできる。最後に、CHO細胞をSV40プロモーター/エンハンサー含有ベクターで上記のようにトランスフェクションした。発現を確認するために、上記のように標識化を行ってもよい。発現されたポリhisタグPROを含む培地は、ついで濃縮し、Ni2キレートアフィニティクロマトグラフィー等の選択された方法により精製できる。またPROは、一過性発現法によりCHO及び/又はCOS細胞で、他の安定な発現方法によりCHO細胞で発現させてもよい。CHO細胞における安定な発現は以下の方法を用いて実施された。タンパク質は、それぞれのタンパク質の可溶化形態のコード配列例えば、細胞外ドメインがIgG1のヒンジ、CH2及びCH2ドメインを含む定常領域配列に融合したIgG作成物イムノアドヘシン、又はポリHisタグ形態として発現された。PCR増幅に続いて、対応するDNAを、AusubelらCurrentProtocolsofMolecularBiologyUnit326JohnWileyandSonsに記載されたような標準的技術を用いてCHO発現ベクターにサブクローニングした。CHO発現ベクターは、対象とするDNAの5’及び3’に適合する制限部位を有し、cDNAの便利なシャトル化ができるように作成される。ベクターは、LucasらNuclAcidsRes24917741779に記載されたようにCHO細胞での発現を用い、対象とするcDNA及びジヒドロフォレートレダクターゼDHFRの発現の制御にSV40初期プロモーター/エンハンサーを用いる。DHFR発現は、トランスフェクションに続くプラスミドの安定な維持のための選択を可能にする。所望のプラスミドDNAの12マイクログラムを、市販のトランスフェクション試薬SuperfectDosper及びFugeneBoehringerMannheim約1千万のCHO細胞に導入する。細胞は、上記のLucas等に記載されているように成長させた。約3x107細胞を、下記のような更なる成長及び生産のためにアンプル中で凍結させた。プラスミドDNAを含むアンプルを水槽に配して解凍し、ボルテックスにより混合した。内容物を10mLの媒質を含む遠心管にピペットして、1000rpmで5分間遠心分離した。上清を吸引して細胞を10mLの選択培地0.2μm濾過PS20、5の0.2μm透析濾過ウシ胎児血清を添加中に懸濁させた。ついで細胞を90mLの選択培地を含む100mLスピナーに分ける。1-2日後、細胞を150mLの選択培地を満たした250mLスピナーに移し、37°Cでインキュベートする。さらに2-3日後、250mL、500mL及び2000mLのスピナーを3x105細胞/mLで播種した。細胞培地を遠心分離により新鮮培地に交換し、生産培地に再懸濁させた。任意の適切なCHO培地を用いてもよいが、実際には1992年6月16日に発行された米国特許第5,122,469号に記載された生産培地を使用した。3Lの生産スピナーを1.2x106細胞/mLで播種した。0日目に、pHを測定した。1日目に、スピナーをサンプルし、濾過空気での散布を実施した。2日目に、スピナーをサンプルし、温度を33°Cに変え、30mLの500g/Lのグルコース及び0.6mLの10消泡剤例えば35ポリジメチルシロキサンエマルション、DowCorning365MedicalGradeEmulsionをとった。生産を通して、pHは7.2近傍に調節し維持した。10日後、又は生存率が70を下回るまで、細胞培地を遠心分離で回収して0.22μmフィルターを通して濾過した。濾過物は、4°Cで貯蔵するか、即座に精製用カラムに充填した。ポリHisタグ作成物に関して、タンパク質をNiNTAカラムQiagenを用いて精製した。精製の前に、イミダゾールを条件培地に5mMの濃度まで添加した。条件培地を、0.3MのNaCl及び5mMイミダゾールを含む20mMのHepes,pH7.4バッファーで平衡化した6mlのNi-NTAカラムへ4-5ml/分の流速によって4°Cでポンプ供給した。充填後、カラムをさらに平衡バッファーで洗浄し、タンパク質を0.25Mイミダゾールを含む平衡バッファーで溶離した。高度に精製されたタンパク質は、続いて10mMのHepes、0.14MのNaCl及び4のマンニトール,pH6.8を含む貯蔵バッファー中で25mlのG25SuperfinePharmaciaを用いて脱塩し、-80°Cで貯蔵した。イムノアドヘシンFc含有作成物を、以下通りに条件培地から精製した。条件培地を、20mMのリン酸ナトリウムバッファー,pH6.8で平衡化した5mlのプロテインAカラムPharmaciaへポンプ注入した。充填後、カラムを平衡バッファーで強く洗浄した後、100mMのクエン酸,pH3.5で溶離した。溶離したタンパク質は、1mlの画分を275μLの1Mトリスバッファー,pH9を含む管に回収することにより即座に中性化した。高度に精製されたタンパク質は、続いてポリ-Hisタグタンパク質について上記した貯蔵バッファー中で脱塩した。均一性はSDSポリアクリルアミドゲルとエドマンEdman分解によるN-末端アミノ酸配列決定により評価した。ここに開示したPROポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。実施例5酵母菌でのPROの発現以下の方法は、酵母菌中でのPROの組換え発現を記載する。第1に、ADH2/GAPDHプロモーターからのPROの細胞内生産又は分泌のための酵母菌発現ベクターを作成する。PROをコードするDNA及びプロモーターを選択したプラスミドの適当な制限酵素部位に挿入してPROの細胞内発現を指示する。分泌のために、PROをコードするDNAを選択したプラスミドに、ADH2/GAPDHプロモーターをコードするDNA、天然PROシグナルペプチド又は他の哺乳動物シグナルペプチド、又は、例えば酵母菌α因子又はインベルターゼ分泌シグナル/リーダー配列、及び必要ならばPROの発現のためのリンカー配列とともにクローニングすることができる。酵母菌株AB110等の酵母菌は、ついで上記の発現プラスミドで形質転換し、選択された発酵培地中で培養できる。形質転換した酵母菌上清は、10トリクロロ酢酸での沈降及びSDS-PAGEによる分離で分析し、ついでクマシーブルー染色でゲルの染色をすることができる。続いて組換えPROは、発酵培地から遠心分離により酵母菌細胞を除去し、ついで選択されたカートリッジフィルターを用いて培地を濃縮することによって単離及び精製できる。PROを含む濃縮物は、選択されたカラムクロマトグラフィー樹脂を用いてさらに精製してもよい。ここに開示したPROポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。実施例6バキュロウイルス感染昆虫細胞でのPROの発現以下の方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞中におけるPROの組換え発現を記載する。PROコードする配列を、バキュロウイルス発現ベクターに含まれるエピトープタグの上流に融合させた。このようなエピトープタグは、ポリhisタグ及び免疫グロブリンタグIgGのFc領域などを含む。pVL1393Navagenなどの市販されているプラスミドから誘導されるプラスミドを含む種々のプラスミドを用いることができる。簡単には、PRO又はPROコード配列の所定部分、例えば膜貫通タンパク質の細胞外ドメインをコードする配列又はタンパク質が細胞外である場合の成熟タンパク質をコードする配列などが、5’及び3’領域に相補的なプライマーでのPCRにより増幅される。5’プライマーは、隣接する選択された制限酵素部位を包含していてもよい。生産物は、ついで、選択された制限酵素で消化され、発現ベクターにサブクローニングされる。組換えバキュロウイルスは、上記のプラスミド及びBaculoGoldウイルスDNAPharmingenを、SpodopterafrugiperdaSf9細胞ATCCCRL1711中にリポフェクチンGIBCOBRLから市販を用いて同時トランスフェクションすることにより作成される。28°Cで4-5日インキュベートした後、放出されたウイルスを回収し、更なる増幅に用いた。ウイルス感染及びタンパク質発現は、OReilleyらBaculovirusexpressionvectorsAlaboratoryManualOxfordOxfordUniversityPressに記載されているように実施した。次に、発現されたポリhisタグPROは、例えばNi2キレートアフィニティクロマトグラフィーにより次のように精製される。抽出は、RupertらNature362175179に記載されているように、ウイルス感染した組み換えSf9細胞から調製した。簡単には、Sf9細胞を洗浄し、超音波処理用バッファー25mLのHepes,pH7.9;12.5mMのMgCl2;0.1mMEDTA;10グリセロール;0.1のNP-40;0.4MのKCl中に再懸濁し、氷上で2回20秒間超音波処理した。超音波処理物を遠心分離で透明化し、上清を負荷バッファー50mMリン酸塩、300mMのNaCl、10グリセロール、pH7.8で50倍希釈し、0.45μmフィルターで濾過した。Ni2NTAアガロースカラムQiagenから市販を5mLの総容積で調製し、25mLの水で洗浄し、25mLの負荷バッファーで平衡させた。濾過した細胞抽出物は、毎分0.5mLでカラムに負荷した。カラムを、分画回収が始まる点であるA280のベースラインまで負荷バッファーで洗浄した。次に、カラムを、結合タンパク質を非特異的に溶離する二次洗浄バッファー50mMリン酸塩;300mMのNaCl、10グリセロール、pH6.0で洗浄した。A280のベースラインに再度到達した後、カラムを二次洗浄バッファー中で0から500mMイミダゾール勾配で展開した。1mLの分画を回収し、SDSPAGE及び銀染色又はアルカリホスファターゼQiagenに複合したNi2NTAでのウェスタンブロットで分析した。溶離したHis10タグPROを含む画分をプールして負荷バッファーで透析した。あるいは、IgGタグ又はFcタグPROの精製は、例えば、プロテインA又はプロテインGカラムクロマトグラフィーを含む公知のクロマトグラフィー技術を用いて実施できる。ここに開示したPROポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。実施例7PROに結合する抗体の調製この実施例は、PROに特異的に結合できるモノクローナル抗体の調製を例示する。モノクローナル抗体の生産のための技術は、この分野で知られており、例えば、上記のGodingに記載されている。用いられ得る免疫原は、精製PRO、PROを含む融合タンパク質、細胞表面に組換えPROを発現する細胞を含む。免疫原の選択は、当業者が過度の実験をすることなくなすことができる。Balb/c等のマウスを、完全フロイントアジュバントに乳化して皮下又は腹腔内に1-100マイクログラムで注入したPRO免疫原で免疫化する。あるいは、免疫原をMPL-TDMアジュバントRibiImmunochemicalResearhハミルトンモンタナに乳化し、動物の後足蹠に注入してもよい。免疫化したマウスは、ついで10から12日後に、選択したアジュバント中に乳化した付加的免疫源で追加免疫する。その後、数週間、マウスをさらなる免疫化注射で追加免疫する。抗PRO抗体の検出のためのELISAアッセイで試験するために、レトロオービタル出血からの血清試料をマウスから周期的に採取してもよい。適当な抗体力価が検出された後、抗体にポジティブ陽性な動物に、PRO静脈内注射の最後の注入をすることができる。3から4日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を取り出した。ついで脾臓細胞を35ポリエチレングリコールを用いて、ACTTから番号CRL1597で入手可能なP3X63AgU.1等の選択されたマウス骨髄腫株化細胞に融合させた。融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、ついで、HATヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン培地を含む96ウェル組織培養プレートに蒔き、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、及び脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害した。ハイブリドーマ細胞は、PROに対する反応性についてのELISAでスクリーニングされる。PROに対する所望のモノクローナル抗体を分泌するポジティブ陽性ハイブリドーマ細胞の決定は、技術常識の範囲内である。陽性ハイブリドーマ細胞を同系のBalb/cマウスに腹腔内注入し、抗PROモノクローナル抗体を含む腹水を生成させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコ又はローラーボトルで成長させることもできる。腹水中に生成されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈降、それに続くゲル排除クロマトグラフィ-を用いて行うことができる。あるいは、抗体のプロテインA又はプロテインGへの親和性に基づくアフィニティクロマトグラフィーを用いることもできる。実施例8特異的抗体を用いたPROポリペプチドの精製天然又は組換えPROポリペプチドは、この分野の種々の標準的なタンパク質精製方法によって精製できる。例えば、プロPROポリペプチド、成熟ポリペプチド、又はプレPROポリペプチドは、対象とするPROポリペプチドに特異的な抗体を用いた免疫親和性クロマトグラフィーによって精製される。一般に、免疫親和性カラムは抗PROポリペプチド抗体を活性化クロマトグラフィー樹脂に共有結合させて作成される。ポリクローナル免疫グロブリンは、硫酸アンモニウムでの沈殿又は固定化プロテインAPharmaciaLKBBiotechnologyPiscatawayNJでの精製のいずれかにより免疫血清から調製される。同様に、モノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム沈殿又は固定化プロテインAでのクロマトグラフィーによりマウス腹水液から調製される。部分的に精製された免疫グロブリンは、CnBr活性化セファロース商品名PharmaciaLKBBiotechnology等のクロマトグラフィー樹脂に共有結合される。抗体が樹脂に結合され、樹脂がブロックされ、誘導体樹脂は製造者の指示に従って洗浄される。このような免疫親和性カラムは、可溶化形態のPROポリペプチドを含有する細胞からの画分を調製することによるPROポリペプチドの精製において利用される。この調製物は、洗浄剤の添加又はこの分野で公知の方法により微分遠心分離を介して得られる全細胞又は細胞成分画分の可溶化により誘導される。あるいは、シグナル配列を含む可溶化PROポリペプチドは、細胞が成長する培地中に有用な量で分泌される。可溶化PROポリペプチド含有調製物は、免疫親和性カラムを通され、カラムはPROポリペプチドの好ましい吸着をさせる条件下例えば、洗浄剤存在下の高イオン強度バッファーで洗浄される。ついで、カラムは、抗体/PROポリペプチド結合を分解する条件下例えば、約2-3といった低pH、高濃度の尿素又はチオシアン酸イオン等のカオトロープで溶離され、PROポリペプチドが回収される。実施例9薬物スクリーニング本発明は、PROポリペプチド又はその結合断片を種々の薬物スクリーニング技術において使用することによる化合物のスクリーニングとって特に有用である。そのような試験に用いられるPROポリペプチド又は断片は、溶液中の自由状態でも、固体支持体に固定されても、細胞表面に担持されていても、あるいは細胞内に位置していてもよい。薬剤スクリーニングの1つの方法では、PROポリペプチド又は断片を発現する組換え核酸で安定にトランスフェクションされる真核生物又は原核生物宿主細胞を利用する。薬剤は、そのようなトランスフェクション細胞に対して、競合的結合アッセイによってスクリーニングされる。生存可能又は固定化形態のいずれかによって、このような細胞は標準的な結合アッセイで使用できる。例えば、PROポリペプチド又は断片と試験される試薬の間での複合体の形成を測定してよい。あるいは、試験する試薬によって生ずるPROポリペプチドとその標的細胞との間の複合体形成における減少を試験することもできる。従って、本発明は、PROポリペプチド関連疾患又は障害に影響を与えうる薬剤又は任意の他の試薬のスクリーニング方法を提供する。これらの方法は、その試薬をPROポリペプチド又は断片に接触させ、試薬とPROポリペプチド又は断片との間の複合体の存在について、又はPROポリペプチド又は断片と細胞との間の複合体の存在について、検定することを含む。これらの競合結合アッセイでは、PROポリペプチド又は断片が典型的には標識される。適切なインキュベーションの後、自由なPROポリペプチド又は断片を結合形態のものから分離し、自由又は未複合の標識の量が、特定の試薬がPROポリペプチドに結合する又はPROポリペプチド/細胞複合体を阻害する能力の尺度となる。薬剤スクリーニングのための他の技術は、ポリペプチドに対して適当な結合親和性を持つ化合物についての高スループットスクリーニングを提供し、1984年9月13日に公開されたWO84/03564に詳細に記載されている。簡単に述べれば、多数の異なる小型ペプチド試験化合物が、プラスチックピン等の固体支持体又は幾つかの他の表面上で合成される。PROポリペプチドに適用すると、ペプチド試験化合物はPROポリペプチドと反応して洗浄される。結合したPROポリペプチドはこの分野で良く知られた方法により検出される。精製したPROポリペプチドは、上記の薬剤スクリーニング技術に使用するためにプレート上に直接被覆することもできる。さらに、非中和抗体は、ペプチドを捕捉し、それを固体支持体上に固定化するのに使用できる。また、本発明は、PROポリペプチドに結合可能な中和抗体がPROポリペプチド又はその断片について試験化合物と特異的に競合する競合薬剤スクリーニングアッセイも考慮する。この方法において、抗体は、PROポリペプチドで、1つ又は複数の抗原決定基を持つ任意のペプチドの存在を検出するのに使用できる。実施例10合理的薬物設計合理的薬物設計の目的は、対象とする生物学的活性ポリペプチド例えば、PROポリペプチド又はそれらが相互作用する小分子、例えばアゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターの構造的類似物を製造することである。これらの例の任意のものが、PROポリペプチドのより活性で安定な形態又はインビボでPROポリペプチドに機能を促進又は阻害する薬物の創作に使用できる参考、HodgsonBioTechnology91921。一つのアプローチ法では、PROポリペプチド、又はPROポリペプチドインヒビター複合体の三次元構造が、x線結晶学により、コンピュータモデル化により、最も典型的には2つの方法の組み合わせにより決定される。分子の構造を解明し活性部位を決定するためには、PROポリペプチドの形状及び電荷の両方が確認されなければならない。数は少ないが、PROポリペプチドの構造に関する有用な情報が相同タンパク質の構造に基づいたモデル化によって得られることもある。両方の場合において、関連する構造情報は、類似PROポリペプチド様分子の設計又は効果的なインヒビターの同定に使用される。合理的な薬剤設計の有用な例は、Braxton及びWellsBiochemistry3177967801に示されているような向上した活性又は安定性を持つ分子、又はAthaudaらJBiochem113742746に示されているような天然ペプチドのインヒビター、アゴニスト、又はアンタゴニストとして作用する分子を含む。また、上記のような機能アッセイによって選択された標的特異的な抗体を単離しその結晶構造を解明することもできる。この方法は、原理的には、それに続く薬剤設計が基礎をおくことのできるファーマコアを生成する。機能的な薬理学的に活性な抗体に対する抗イディオタイプ抗体抗idsを生成することにより、タンパク質結晶学をバイパスすることができる。鏡像の鏡像として、抗idsの結合部位は最初のレセプターの類似物であると予測できる。抗idは、ついで、化学的又は生物学的に製造したペプチドのバンクからペプチドを同定及び単離するのに使用できる。単離されたペプチドは、ファーマコアとして機能するであろう。本発明によって、X線結晶学などの分析実験を実施するために十分な量のPROポリペプチドが入手可能である。さらに、ここに提供したPROポリペプチドアミノ酸配列の知識は、X線結晶学に代わる又はそれに加わるコンピュータモデル化技術で用いられるガイダンスを提供する。上記の文書による明細書は、当業者に本発明を実施できるようにするために十分であると考えられる。寄託した実施物は、本発明のある側面の一つの例示として意図されており、機能的に等価なあらゆるコンストラクトがこの発明の範囲内にあるため、寄託されたコンストラクトにより、本発明の範囲が限定されるものではない。ここでの物質の寄託は、ここに含まれる文書による説明が、そのベストモードを含む、本発明の任意の側面の実施を可能にするために不十分であることを認めるものではないし、それが表す特定の例証に対して請求の範囲を制限するものと解釈されるものでもない。実際、ここに示し記載したものに加えて、本発明を様々に改変することは、前記の記載から当業者にとっては明らかなものであり、添付の特許請求の範囲内に入るものである。"