"関節リウマチを処置するための方法であって、該方法は、関節リウマチの処置を必要とする哺乳動物にCD24タンパク質を投与する工程を包含する、方法。前記CD24タンパク質が、成熟マウスCD24もしくは成熟ヒトCD24、またはそれらの改変体の配列を含む、請求項1に記載の方法。前記成熟ヒトCD24が、配列番号1および2からなる群より選択される配列からなり、そして前記成熟マウスCD24が、配列番号3の配列からなる、請求項2に記載の方法。前記CD24タンパク質がマウスCD24またはヒトCD24の細胞外ドメインを含み、該細胞外ドメインは前記成熟CD24のN末端に融合されている、請求項2に記載の方法。前記細胞外ドメインが配列番号4の配列からなる、請求項4に記載の方法。前記CD24タンパク質が可溶性である、請求項1に記載の方法。前記CD24タンパク質がグリコシル化されている、請求項1に記載の方法。前記CD24タンパク質が、前記成熟CD24のN末端またはC末端に融合されている、哺乳動物免疫グロブリンIgの一部をさらに含む、請求項2に記載の方法。前記Igの一部が、ヒトIgタンパク質のFc部分である、請求項8に記載の方法。前記Fc部分が、前記ヒトIgタンパク質のヒンジ領域およびCH2ドメインおよびCH3ドメインからなり、前記Igが、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4およびIgAからなる群より選択される、請求項9に記載の方法。前記Fc部分が、IgMのヒンジ領域およびCH3ドメインおよびCH4ドメインからなる、請求項9に記載の方法。前記CD24タンパク質が、真核生物のタンパク質発現系を使用して産生される、請求項1に記載の方法。前記発現系が、チャイニーズハムスター卵巣細胞系統に含まれるベクターまたは複製欠損レトロウイルスベクターを含む、請求項12に記載の方法。前記複製欠損レトロウイルスベクターが真核細胞のゲノムに安定に組込まれる、請求項13に記載の方法。CD24タンパク質を、関節リウマチの処置を必要とする哺乳動物に投与することによって、関節リウマチを処置するための方法が、本明細書中で提供される。そのCD24タンパク質は、成熟マウスCD24または成熟ヒトCD24、またはその改変体の配列を含み得る。成熟ヒトCD24は、配列番号1または2の配列から成り得る。成熟マウスCD24は、配列番号3の配列から成り得る。そのCD24タンパク質はまた、マウスまたはヒトCD24の細胞外ドメインを含み得、それは成熟CD24のN末端に融合し得る。CD24の細胞外ドメインは、配列番号4の配列から成り得る。CD24タンパク質はさらに、哺乳動物免疫グロブリンIgの一部を含み得、それは成熟CD24のN末端またはC末端に融合し得る。そのIgの一部は、ヒトIgタンパク質のFc部分であり得、それはIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、またはIgAであり得る。そのFc部分は、ヒトIgタンパク質のヒンジ領域およびCH2およびCH3ドメインから成り得る。そのFc部分はまた、ヒトIgMのヒンジ領域およびCH3およびCH4ドメインから成り得る。そのCD24タンパク質は、可溶性であり得、そしてグリコシル化され得る。そのCD24タンパク質を、真核生物のタンパク質発現系を用いて産生し得る。その発現系は、チャイニーズハムスター卵巣細胞系統に含まれるベクターまたは複製欠損レトロウイルスベクターを含み得る。その複製欠損レトロウイルスベクターは、真核細胞のゲノムに安定に組込まれ得る。本発明者らは、CD24の可溶性形態が、関節リウマチの処置のために非常に有効であることを発見した。1.定義本明細書中で使用される用語は、特定の実施態様のみを説明する目的のためであり、そして制限することを意図しない。明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形a、anおよびtheは、文脈が明らかに他を指示しなければ、複数の指示対象を含む。本明細書中における数値範囲の列挙に関して、その間にあるそれぞれの数字が、同じ程度の正確さで、明白に企図される。例えば、6-9の範囲に関して、数字7および8が、6および9に加えて企図され、そして6.0-7.0の範囲に関して、数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、および7.0が明白に企図される。ペプチドまたはポリペプチドは、アミノ酸の連結した配列であり、そして天然、合成、または天然および合成の修飾または組み合わせであり得る。実質的に同一は、1番目および2番目のアミノ酸配列が、1,2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、または300アミノ酸の領域にわたって、少なくとも60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、または99であることを意味し得る。動物を疾患から保護することに言及する場合処置または処置することは、その疾患を予防すること、抑制することsuppressing、抑圧することrepressing、または完全に除去することを意味する。疾患を予防することは、その疾患の発症前に本発明の組成物を動物に投与することを含む。疾患を抑制することは、疾患の誘発後であるが、その臨床的出現の前に、本発明の組成物を動物に投与することを含む。疾患を抑圧することは、疾患の臨床的出現後に、本発明の組成物を動物に投与することを含む。改変体は、アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によって、アミノ酸配列が異なるが、少なくとも1つの生物学的活性を保持するペプチドまたはポリペプチドを意味し得る。生物学的活性の代表的な例は、Toll様受容体に結合する、および特異的な抗体によって結合される能力を含む。改変体はまた、少なくとも1つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質を意味し得る。アミノ酸の保存的置換、すなわちアミノ酸を、同様の特性例えば親水性、荷電領域の程度および分布の異なるアミノ酸で置換することは、当該分野において典型的に小さい変化を含むと認識される。これらの小さい変化を、部分的には、当該分野において理解されるように、アミノ酸のハイドロパシー指標hydropathicindexを考慮することによって同定し得る。Kyteら、J.Mol.Biol.157:105-1321982。アミノ酸のハイドロパシー指標は、その疎水性および電荷の考慮に基づく。同様のハイドロパシー指標のアミノ酸を置換し、そして依然としてタンパク質機能を保持し得ることが、当該分野で公知である。1つの局面において、±2のハイドロパシー指標を有するアミノ酸を置換する。アミノ酸の親水性をまた、生物学的機能を保持するタンパク質を生じる置換を明らかにするために使用し得る。ペプチドの状況におけるアミノ酸の親水性の考慮は、そのペプチドの最も大きい局所平均親水性の計算を可能にし、それは抗原性および免疫原性とよく関連することが報告された有用な尺度である。米国特許第4,554,101号これは、本明細書中において完全に参考として援用される。同様の親水性の値を有するアミノ酸の置換は、当該分野で理解されるように、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するペプチドを生じ得る。お互いに±2以内の親水性の値を有するアミノ酸で置換を行い得る。アミノ酸の疎水性インデックスhydrophobicityindexおよび親水性の値はどちらも、そのアミノ酸の特定の側鎖によって影響される。その観察と一致して、生物学的機能と適合性であるアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、および他の性質によって明らかになるような、アミノ酸、および特にそれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することが理解される。2.CD24本明細書中でCD24タンパク質が提供され、それは、SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK配列番号1またはSETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTKV/A配列番号2であり得る成熟ヒトCD24、またはNQTSVAPFPGNQNISASPNPTNATTRG配列番号3であり得るマウスCD24、またはその改変体のアミノ酸配列を有し得る。CD24は可溶性であり得る。CD24はさらに、N末端シグナルペプチドを含み得、それはアミノ酸配列MGRAMVARLGLGLLLLALLLPTQIYS配列番号4を有し得る。CD24はまた、図1または3で記載されるアミノ酸配列を有し得る。CD24は、成熟ヒトCD24のC末端アミノ酸が、バリンまたはアラニンであり得るように、2つの対立遺伝子形態の1つで存在し得る。C末端バリンまたはC末端アラニンは免疫原性であり得、そしてその免疫原性を低減するためにCD24から削除され得る。2つの対立遺伝子間の差異は、多発性硬化症およびRAを含む自己免疫疾患のリスクに影響し得る。それにも関わらず、その2つの対立遺伝子形態は膜結合形態の発現レベルに影響するので、それらの変異はCD24の機能には影響しないはずである。マウスおよびヒトの成熟CD24タンパク質のアミノ酸配列におけるかなりの配列変異にも関わらず、それらは危険関連分子パターンDAMPとの相互作用において機能的に等価である。DAMPに対する宿主反応は、RAの病因に重要であると考えられるので、マウスおよびヒトCD24は、RAの処置において機能的に等価であり得る。主にC末端、およびグリコシル化部位の存在量abundanceにおけるマウスおよびヒトCD24の間の配列保存の結果として、特にそれらの変異がC末端の保存された残基に影響を与えない、またはマウスまたはヒトCD24由来のグリコシル化部位に影響を与えないなら、RAを処置するためのCD24の使用において、成熟CD24タンパク質のかなりの変異は許容され得る。a.融合CD24を、そのN末端またはC末端で、ヒトまたはマウスであり得る哺乳動物Igタンパク質の一部に融合し得る。その一部は、Igタンパク質のFc領域であり得る。そのFc領域は、Igタンパク質のヒンジ領域およびCH2およびCH3ドメインを含み得る。そのIgタンパク質は、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、またはIgAであり得る。そのFc部分は、配列番号6を含み得る。そのIgタンパク質はまた、IgMであり得、そしてそのFc部分はIgMのヒンジ領域およびCH3およびCH4ドメインを含み得る。CD24をまた、そのN末端またはC末端で、タンパク質タグに融合し得、それはGST、His、またはFLAGであり得る。融合タンパク質の作成および融合タンパク質の精製の方法は、当該分野において周知である。b.産生CD24は、高い程度でグリコシル化され得、そして危険関連分子パターンとの共起刺激および相互作用のような、CD24の機能に関与し得る。CD24を、真核細胞発現系を用いて調製し得る。その発現系は、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞のような、哺乳動物細胞におけるベクターからの発現を伴い得る。その系はまた、真核細胞に感染させるために使用し得る、複製欠損レトロウイルスベクターのような、ウイルスベクターであり得る。CD24をまた、細胞ゲノムに組込まれたベクターまたはベクターの一部からCD24を発現する安定な細胞系統から産生し得る。その安定な細胞系統は、組込まれた複製欠損レトロウイルスベクターからCD24を発現し得る。その発現系は、GPExTMであり得る。3.処置方法CD24を、関節リウマチを処置するために使用し得る。CD24を、その必要のある被験体に投与し得る。その被験体は、ヒトのような哺乳動物であり得る。a.組み合わせたCD24治療CD24を、疾患修飾性抗リウマチ薬DMARDのような、別の薬物と組み合わせ得る。その薬物は、非ステロイド性抗炎症薬NSAIDであり得、それはプロピオン酸誘導体、酢酸誘導体、エノール酸enolicacid誘導体、フェナム酸fenamicacid誘導体、または選択的Cox2阻害剤であり得る。その薬物はまた、コルチコステロイドまたはメトトレキサートであり得る。その薬物は、生物学的製剤であり得、それは抗TNF-α抗体またはTNF-αに結合する融合タンパク質EnbrelのようなTNF-αアンタゴニスト、抗CD20mAb、2つの分子に結合するモノクローナル抗体または融合タンパク質CTLA4Igのような共起刺激分子CD80およびCD86のアンタゴニスト、またはIL-1またはIL-6のいずれかの受容体のアンタゴニストであり得る。CD24および他の薬物を、一緒に、または逐次投与し得る。b.薬学的組成物CD24は、薬学的組成物に含まれ得、それはCD24を長期間安定に維持し得る溶媒を含み得る。その溶媒はPBSであり得、それは-20°C-15~-25°Cで、CD24を少なくとも36ヶ月間安定に維持し得る。その溶媒は、他の薬物と組み合わせてCD24を収容し得る。c.投与量ヒトのために使用する用量を、許容可能な毒性および臨床有効性を有する用量を決定するための臨床試験によって、最終的に決定し得る。ヒトのための最初の臨床用量を、げっ歯類および非ヒト霊長類における薬物動態学および毒性試験によって推定し得る。CD24の用量は、処置されている疾患の重症度および投与経路に依存して、0.01mg/kgから1000mg/kgであり得る、および1から500mg/kgであり得る。d.投与その薬学的組成物の投与経路は、非経口であり得る。非経口投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、関節内および罹患した関節への直接投与を含むがこれに限らない。獣医学的使用のために、その薬剤を、通常の獣医学上の実施によって適当に許容可能な処方物として投与し得る。獣医は、特定の動物に関して最も適当な投与レジメンおよび投与経路を容易に決定し得る。薬学的組成物を、ヒト患者、ネコ、イヌ、大型動物、または鳥類に投与し得る。CD24を、他の処置と同時に、または規則正しく投与し得る。本明細書中で使用される同時のまたは同時にという用語は、CD24および他の処置を48時間、好ましくは24時間、より好ましくは12時間、さらにより好ましくは6時間、および最も好ましくは3時間またはそれより短い時間以内に、お互いを投与することを意味する。本明細書中で使用される規則正しくという用語は、他の処置とは異なる時間で、かつ反復投与と比較してある頻度での、薬剤の投与を意味する。CD24を、約120時間、118時間、116時間、114時間、112時間、110時間、108時間、106時間、104時間、102時間、100時間、98時間、96時間、94時間、92時間、90時間、88時間、86時間、84時間、82時間、80時間、78時間、76時間、74時間、72時間、70時間、68時間、66時間、64時間、62時間、60時間、58時間、56時間、54時間、52時間、50時間、48時間、46時間、44時間、42時間、40時間、38時間、36時間、34時間、32時間、30時間、28時間、26時間、24時間、22時間、20時間、18時間、16時間、14時間、12時間、10時間、8時間、6時間、4時間、3時間、2時間、1時間、55分、50分、45分、40分、35分、30分、25分、20分、15分、10分、9分、8分、7分、6分、5分、4分、3分、2分、および1分を含む、別の処置の前のあらゆる時点で投与し得る。CD24を、約120時間、118時間、116時間、114時間、112時間、110時間、108時間、106時間、104時間、102時間、100時間、98時間、96時間、94時間、92時間、90時間、88時間、86時間、84時間、82時間、80時間、78時間、76時間、74時間、72時間、70時間、68時間、66時間、64時間、62時間、60時間、58時間、56時間、54時間、52時間、50時間、48時間、46時間、44時間、42時間、40時間、38時間、36時間、34時間、32時間、30時間、28時間、26時間、24時間、22時間、20時間、18時間、16時間、14時間、12時間、10時間、8時間、6時間、4時間、3時間、2時間、1時間、55分、50分、45分、40分、35分、30分、25分、20分、15分、10分、9分、8分、7分、6分、5分、4分、3分、2分、および1分を含む、CD24の2回目の処置前のあらゆる時点で投与し得る。CD24を、約1分、2分、3分、4分、5分、6分、7分、8分、9分、10分、15分、20分、25分、30分、35分、40分、45分、50分、55分、1時間、2時間、3時間、4時間、6時間、8時間、10時間、12時間、14時間、16時間、18時間、20時間、22時間、24時間、26時間、28時間、30時間、32時間、34時間、36時間、38時間、40時間、42時間、44時間、46時間、48時間、50時間、52時間、54時間、56時間、58時間、60時間、62時間、64時間、66時間、68時間、70時間、72時間、74時間、76時間、78時間、80時間、82時間、84時間、86時間、88時間、90時間、92時間、94時間、96時間、98時間、100時間、102時間、106時間、108時間、110時間、112時間、114時間、116時間、118時間、および120時間を含む、別の処置後のあらゆる時点で投与し得る。CD24を、約120時間、118時間、116時間、114時間、112時間、110時間、108時間、106時間、104時間、102時間、100時間、98時間、96時間、94時間、92時間、90時間、88時間、86時間、84時間、82時間、80時間、78時間、76時間、74時間、72時間、70時間、68時間、66時間、64時間、62時間、60時間、58時間、56時間、54時間、52時間、50時間、48時間、46時間、44時間、42時間、40時間、38時間、36時間、34時間、32時間、30時間、28時間、26時間、24時間、22時間、20時間、18時間、16時間、14時間、12時間、10時間、8時間、6時間、4時間、3時間、2時間、1時間、55分、50分、45分、40分、35分、30分、25分、20分、15分、10分、9分、8分、7分、6分、5分、4分、3分、2分、および1分を含む、以前のCD24処置後のあらゆる時点で投与し得る。以下の実施例を、本発明の方法を説明するために提供し、そして決してその方法の使用を制限しない。実施例1可溶性CD24タンパク質CD24の細胞外ドメインを、IgG1Fcに融合した。そのCD24融合タンパク質のアミノ酸組成を、図1で提供する。次いでCD24Ig融合タンパク質の発現を駆動する、複製欠損レトロウイルスベクターを作製した。GPExTM遺伝子産物発現geneproductexpressionのアクロニムシステムは、いくつかの重要な利点を提供し、その最も重要なものは、平均で、細胞あたり>1000個の挿入があるが、挿入あたり1コピーのみであることである。さらに、レトロウイルスは転写活性遺伝子座に優先的に挿入するので、GPExTMは、標的タンパク質の高レベルの発現を生じた。高収量のCD24Igを産生する安定な細胞系統を産生した。それに加えて、45グラムのGLPグレード産物および~100グラムのcGMPグレード産物を産生した。バイオリアクターから回収した培地の下流の処理に使用する方法を、下記のフローチャートにまとめる図2。回収物の清澄化バイオリアクター培養培地を、Cuno60M02Maximizerデプスフィルター、続いてMilliporeOpticap0.22μmフィルターを用いて、清澄化した。ろ液を、滅菌収集バッグへ集めた。ELISAによるCD24-Fc収量の定量のためにサンプルを得た。プロテインA捕捉清澄化した培地を、プロテインA樹脂GEHealthcareMabSelectのカラムに、16g/Lを超えない樹脂の濃度でELISAに基づいて、および4分の接触時間で通過させた。そのカラムを、平衡化緩衝液50mMのTris0.15MのNaCl、pH7.5、次いで10mMのクエン酸ナトリウム/クエン酸、pH6.0で、5cv洗浄した。結合したCD24Igを、10mMのクエン酸ナトリウム/クエン酸、pH3.5を用いてカラムから溶出した。ウイルス不活性化プロテインA溶出画分を、すぐに2Mの塩酸を加えることによってpHを3.0にし、そして周囲温度で30分間、このpHに維持した。次いで1MのTris塩基を加えることによってpH5.0にし、そして0.65μmのグラスファイバーフィルターSartoriusSartopureGF2および0.2μmSartoriusSartopore2を用いて滅菌収集バッグへろ過して、清澄化した。SP-セファロースクロマトグラフィーウイルス不活性化物質を、SP-セファロースGEHealthcareのカラムに、25g/Lを超えない樹脂の濃度で1.22のA280nm=1mg/mLに基づいて、そして250cm/hrの線形の流量で添加した。そのカラムを、平衡化緩衝液10mMのクエン酸ナトリウム/クエン酸、pH5.0で洗浄し、そして結合したCD24Igを、10mMのクエン酸ナトリウム/クエン酸0.2MのNaCl、pH5.0を用いてカラムから溶出した。流出液を、滅菌収集バッグに収集した。MustangQクロマトグラフィーSP-セファロース溶出液を、1MのTris塩基を加えることによってpH7.5に調整し、そして伝導率を低減するためにWFIで希釈した。希釈した物質を、MustangQフィルターPallに、0.5g/Lを超えない樹脂の濃度で1.22のA280=1mg/mLに基づく、そして5カラム容積/分の流量で添加した。そのフィルターを、平衡化緩衝液10mMのTris、pH7.5で洗浄し、そしてCD24-Fcは、フロースルーに含まれており、そして滅菌収集バッグに収集した。ウイルスろ過MustangQフロースルーを、次いで0.2mMのフィルターおよびMilliporeNFPウイルスフィルター名目上の孔径20nmを通して30psiの一定の圧力でろ過し、そして滅菌収集バッグに収集した。濃縮および最終的な処方その産物を、280nmでの吸光度によって決定した、約10mg/mLの最終濃度で、10mMのリン酸ナトリウム、150mMの塩化ナトリウム、pH7.2に、10kDa限外ろ過膜MilliporePrep/Scaleを用いて濃縮およびダイアフィルトレーションdiafiltrateした。バイオセーフティbiosafetyキャビネットにある間に、バルクから分析サンプルを抜き出した。ラベリングを行い、そしてサンプルを試験のためにQCに送達し、一方バルクアリコートを、放出を継続させる2°C~8°Cで保存した。ウイルスクリアランス試験ウイルスクリアランスの確認を、CHMで調製されたサンプルに対して、CardinalHealth、NCにおいて行った。GalaBiotechの資格のある科学者が、CardinalHealthViralValidation施設において、CardinalHealthの職員の助けをかりて、クロマトグラフィーおよびろ過工程を行った。スケールダウン手順を、200Lのスケールの過程から開発した。2つのウイルスを、この試験において使用するために選択した。最初のものは異種栄養性マウス白血病ウイルスXMuLvであり、それはレトロウイルス科の、80nm~130nmのサイズのエンベロープ型RNAウイルスである。2番目は、ブタパルボウイルスPPVであり、それは18nm~26nmのサイズの無エンベロープ型DNAウイルスである。これは頑強なウイルスであると考えられ、そしてXMuLvよりも、精製プロトコールを通して、はるかにより低いウイルスの低減を示すことが予期された。実施例2RAの治療のためのCD24Fcの使用この実施例は、CD24を、RAを処置するために使用し得ることを示す。抗コラーゲン抗体は、疾患が発症する前にRA患者に存在するので、および抗コラーゲン抗体は、マウスにおいてRA様病理を誘発し得るので、確立されたRAの受動伝達モデルを、可溶性CD24の有効性を試験するために使用した。その融合タンパク質を、PBSビヒクルに10mg/mlで溶解した。図4に示すように、4つの抗コラーゲン抗体の組み合わせは、全ての肢において重篤な臨床症状を引き起こし、ビヒクルおよびCD24Fc処置群の両方において、7日目にピークになった。その疾患は、全ての四肢の肢全体の発赤および腫脹によって特徴づけられた。指および複数の関節を含む、いくつかの四肢は、最大限の炎症を起こした。従って、可溶性タンパク質は、疾患の開始に影響を与えない。驚くべきことに、CD24Fc処置群は、はるかにより迅速な回復を示す。臨床スコアの減少は、9日目から高度に有意であり、かつ24日間の観察期間全体を通して続く。従って、CD24Fcは、RAのための有効な処置を提供する。興味深いことに、その効果は疾患のピークの後に観察されるので、おそらくCD24をブロックすることは、炎症の開始後の、慢性疾患過程に影響を与える。実施例3CD24薬物動態1mgのCD24IgG1を、未処置のC57BL/6マウスに注射し、そして異なる時点5分、1時間、4時間、24時間、48時間、7日、14日、および21日で、各時点において3匹のマウスから血液サンプルを収集した。その血清を1:100に希釈し、そしてCD24Igのレベルを、捕捉抗体として精製抗ヒトCD243.3μg/ml、および検出抗体としてペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗ヒトIgGFc5μg/mlを用いて、サンドイッチELISAを用いて検出した。図5aに示すように、CD24Igの減衰曲線は、タンパク質の典型的な二相性の減衰を明らかにした。最初の体内分布相は、12.4時間の半減期を有していた。2番目の相は、中心コンパートメントからの1次消失のモデルに従う。2番目の相の半減期は9.54日であり、それはインビボにおける抗体のものと同様である。これらのデータは、融合タンパク質が、血流中で非常に安定であることを示唆する。融合タンパク質を皮下に注射する別の研究において、ほとんど同一の9.52日の半減期が観察された図5b。より重要なことは、CD24Igが血液中でピークレベルに達するまでに約48時間かかるが、AUCによって測定される、血液中の融合タンパク質の総量は、いずれの注射経路によっても実質的に同じであった。従って、治療的観点から、異なる注射経路は、薬物の治療効果に影響を与えないはずである。この観察は、霊長類の毒性および臨床試験の実験デザインを非常に単純化した。実施例4RAを処置するためのCD24数十年の間、RAは主にT細胞媒介性自己免疫疾患であると推定されてきた。最近20年の間に、RAの病因における抗体およびBリンパ球の可能性のある役割が再注目されている。従って、リウマチ因子に加えて、自己反応性抗体の宿主がRA患者において見出されたが、それはヒトにおいて決定的に取り組まれてこなかった。しかし、いくつかの系統の証拠が、マウスモデルにおいて、遍在性または組織特異的抗原のいずれかに特異的な抗体が、RA症状を引き起こすのに十分であることを示した。例えば、K/BxNTCRトランスジェニックマウス由来の抗体は、新規宿主においてRA様疾患を完全に伝達し得ることが見出された。同様に、4つの抗コラーゲン抗体のカクテルが、マウスにおいてRAを誘発するために現在広く使用されている。このモデルは現在、CAIA、コラーゲン抗体誘発関節炎と呼ばれる。CAIAモデルの遺伝的分析は、補体の重要な役割を示す。他の可能性が存在するが、これらの要件は、RAの病因における抗体媒介性の組織損傷の潜在的な関与を示唆する。組織損傷および炎症の間の関連は、免疫学における長年の観察である。20年近く前、Matzingerは、一般に危険理論と呼ばれるものを提案した。本質的に、彼女は、免疫系は宿主において危険を感じた場合に活性化されると主張した。危険の性質は当時よく定義されなかったが、ネクローシスは、HMGB1および熱ショックタンパク質のような細胞内成分の放出に関連することが決定され、それらはDAMP、危険関連分子パターンと呼ばれた。DAMPは、炎症性サイトカインの産生および自己免疫疾患を促進することが見出された。動物モデルにおいて、HMGB1およびHSP90の阻害剤は、RAを寛解させることが見出された。DAMPの関与は、DAMPに対する宿主反応の負の調節を、RA治療のために探索し得るという展望を提起した。組織損傷に対する宿主反応におけるCD24-Siglec10の相互作用アセトアミノフェン誘発肝ネクローシスを使用し、そして炎症を確実にして、本発明者らは、SiglecGの相互作用によって、CD24が、組織損傷に対する宿主反応の強力な負の調節を提供することを観察した。CD24は、造血性細胞および他の組織幹細胞に広く発現する、GPIアンカー分子である。多発性硬化症、全身性エリテマトーデスerythromatosus、RA、および巨細胞性動脈炎arthritisを含む、ヒトにおける様々な自己免疫疾患の遺伝的分析は、CD24多型および自己免疫疾患のリスクの間に有意な関連を示した。SiglecGは、シアル酸を含む構造を認識する能力によって規定される、I-レクチンファミリーのメンバーである。SiglecGは、CD24のシアル酸を含む構造を認識し、そして樹状細胞による炎症性サイトカインの産生を負に調節する16。CD24と相互作用するその能力に関して、ヒトSiglec10およびマウスSiglecGは、機能的に等価である。しかし、マウスホモログおよびヒトホモログの間に、1対1の関連が存在するかどうかは不明である。そのメカニズムはまだ完全に明らかではないが、SiglecG関連SHP1が、その負の調節に関与し得ることがもっともらしい。最近Scienceにおいて報告されたこれらのデータは、CD24-SiglecG/10の相互作用が、DAMPからの病原体関連分子パターンPAMPの区別に重要な役割を果たし得る、新しいモデルを導く図6。少なくとも2つの重複するメカニズムが、CD24の機能を説明し得る。まず、様々なDAMPに結合することによって、CD24は炎症性刺激を捕捉して、そのTLRまたはRAGEとの相互作用を阻害し得る。この考えは、CD24が、HSP70、90、HMGB1およびヌクレオリンnucleolinを含むいくつかのDAMP分子と関連するという観察によって支持される。2番目に、おそらくDAMPと結合した後、CD24はSiglecGによるシグナル伝達を刺激し得る。いずれかの遺伝子の標的化変異を有するマウスは、はるかにより強力な炎症性反応を起こすので、両方のメカニズムが協同で作用し得る。実際、CD24-/-またはSiglecG-/-マウスいずれか由来の骨髄から培養したDCは、HMGB1、HSP70、またはHSP90のいずれかで刺激した場合、はるかに高い炎症性サイトカインを産生した。対照的に、LPSおよびPolyI:CのようなPAMPに対するその反応においては、影響は見られなかった。これらのデータは、先天免疫系が病原体を組織損傷から区別するメカニズムを提供するだけでなく、CD24およびSiglecGを、組織損傷に関連する疾患の潜在的な治療標的として示唆する。コラーゲン抗体誘発関節炎に対するCD24Fcの治療効果RAの病因における組織損傷に対する先天免疫の疑われる役割、およびそのような反応を負に調節するCD24-SiglecG/10経路の役割を考慮して、RAを処置するためにこの経路を刺激することの可能性を探索した。本質的に全ての自己免疫疾患の病因は、自己抗原に対する免疫反応および自己免疫性破壊の誘発を含む。CD24-SiglecG相互作用の新規機能に基づいて、その自己免疫性破壊期autoimmunedestructivephaseに焦点を当てた。従って、予備的分析のために、コラーゲン抗体誘発関節炎モデルを採用して潜在的な治療効果を評価した。図7aに示すように、4つの抗コラーゲンmAbのカクテルMDBiosciences、St.Paul、MNを、2mg/マウスで1日目にi.v.注射し、そして3日目に100μg/マウスのLPSMDBioscienceをi.p.注射することによって、8週齢のBALB/cマウスにCAIAを誘発した。そのマウスを、1日目に1mgのCD24Fcまたはネガティブコントロールとして等しい容積の1×PBSビヒクルのいずれかで処置した。図7bに示すように、ビヒクルコントロールと比較して、CD24Fcは高度に有意な治療効果を提供した。CD24Fcがこのモデルで関節炎を低減するメカニズムを理解するために、CD24Fc処置マウスまたはPBSコントロール群のホモジナイズした関節からサイトカインを測定し、そしてサイトカインビーズアレイによって200μgの組織ホモジネートの上清を測定した。典型的な例を図8aに示し、まとめのデータを図8bに示す。これらのデータは、全身性に投与したCD24が、TNF-α、IL-6、MCP-1CCL2、およびIL-1βを含む、複数の炎症性サイトカインのレベルを低減することを示した。CD24Fcの効果を、図9で示したように、CAIAマウスの滑膜関節synovialjointの組織学的分析によって実証する。関節炎の誘発後7日目に、HE染色は、PBS群の関節滑膜が、好中球、マクロファージ、およびリンパ球を含む炎症性細胞が重度に浸潤していることを示した図9a。これは、CD24Fc処置マウスにおいて大いに低減された図9b。それに加えて、PBS処置図9cマウスにおいて、サフラニンOレッド染色の喪失によって、重症severの軟骨損傷が明らかになったが、CD24Fc処置群図9dではなかった。マウスにおいてCD24Fcが進行中のRAに対して治療効果を有するかどうかを決定するために、RAの誘発後5または7日目のいずれかに処置を開始した。図10に示すように、RAスコアの有意な減少が、CD24Fc処置後2日目の早さで観察された。その治療効果は、さらなる処置無しでも、残りの観察期間中続いた。これらのデータはさらに、進行中の疾患に対するCD24Fcの治療可能性を増強する。ヒトにおけるCD24Fcの治療上の用量を推定するために、CD24Fcを、広い範囲の用量で滴定した。図11に示すように、2μg/マウスと少ない量が、統計学的に有意な治療効果を有するために十分である。CD24FcのSiglecG依存性治療効果CD24Fcが、SiglecGとの相互作用によってマウスを保護するかどうかを決定するために、本発明者らは、その治療効果がSiglecg遺伝子に依存するかどうかを決定した。Siglecg-欠損マウスは、C57BL/6マウス由来のES細胞で産生されたので、本発明者らは、コントロールとしてWTC57BL/6マウスを使用した。図12aに示すように、B6マウスはCAIAによりかかりにくいことが公知であるので、全体的な疾患スコアは、BALB/cマウスで観察されたものより低い。それにも関わらず、CD24Fcの単回注射は、実質的にWTマウスにおいて臨床徴候を一掃した。重要なことに、その疾患はSiglecg欠損マウスにおいてより軽症であるが、CD24Fcは、治療効果を有さなかった。従って、CD24Fcの治療効果は、厳密にSiglecg遺伝子に依存する。合わせると、本明細書中で述べたデータは、CAIAに関するCD24Fcの高い治療有効性を示す。安全性、安定性についての本発明者らの広範なデータ、および本発明者らの成功したCD24Fcの製造を考慮して、全てRAの治療薬としての融合タンパク質の高い可能性を示す。実施例5毒性げっ歯類および非ヒト霊長類の広範な毒性試験は、マウスおよび非ヒト霊長類における、12.5mg/kg~125mg/kgの用量における薬物関連毒性を示さなかった。引用された参考文献"