化合物22ジメチルN6オキソ67ジヒドロ5Hジベンゾbdアゼピン7イルNマロンアミドを用いた治療に対する被験者の耐性を判定する方法であって、前記被験者から得られる生体試料中に存在するバイオマーカーのレベルを測定することを含み、該バイオマーカーがIL6又はIL8である方法。前記被験者が哺乳動物である請求項1に記載の方法。前記被験者がヒトである請求項1に記載の方法。前記バイオマーカーがIL6である請求項1に記載の方法。前記バイオマーカーがIL8である請求項1に記載の方法。IL6及びIL8の双方のレベルが測定される請求項1に記載の方法。前記生体試料が血液である請求項1に記載の方法。前記生体試料が血清である請求項1に記載の方法。前記生体試料が尿である請求項1に記載の方法。前記バイオマーカーが、前記試料中に存在するタンパク質の量を測定することにより測定される請求項1に記載の方法。前記バイオマーカーが、該バイオマーカーをコードするmRNAのレベルを測定することにより測定される請求項1に記載の方法。前記試料中に存在するバイオマーカーのレベルを、該バイオマーカーの閾値レベルと比較し、大きいならば、前記被験者は、22ジメチルN6オキソ67ジヒドロ5Hジベンゾbdアゼピン7イルNマロンアミドを用いた治療に対してインビボ耐性を有していると考えられる請求項1に記載の方法。前記バイオマーカーがIL6であり、IL6に対する前記閾値レベルが約500pg/mlである請求項12に記載の方法。前記バイオマーカーがIL8であり、IL8に対する前記閾値レベルが約50pg/mlである請求項12に記載の方法。化合物22ジメチルN6オキソ67ジヒドロ5Hジベンゾbdアゼピン7イルNマロンアミドを用いた治療に対する被験者の耐性の判定の補助に使用されるキットであって、被験者から得られる生体試料中における、IL6又はIL8であるバイオマーカーを検出するための薬剤を含むキット。医薬、特に癌等の増殖性疾患の治療に使用される医薬として使用される、A化合物I;及びB抗IL6及び/又は抗IL8剤の逐次の又は同時の組合せ。前記組合せが抗IL6剤及び抗IL8剤の双方を含む請求項16に記載の組合せ。前記抗IL6剤が抗IL6抗体である請求項16又は17に記載の組合せ。前記抗IL8剤が抗IL8抗体である請求項16又は17に記載の組合せ。前記抗IL6剤が、IL6をコードする核酸の発現に干渉する核酸である請求項16から18のいずれか一項に記載の組合せ。IL6をコードする核酸の発現に干渉する前記核酸がアンチセンスRNAである請求項20に記載の組合せ。IL6をコードする核酸の発現に干渉する前記核酸がshRNA又はsiRNAである請求項20に記載の組合せ。前記抗IL8剤が、IL8をコードする核酸の発現に干渉する核酸である請求項16、17又は19のいずれか一項に記載の組合せ。IL8をコードする核酸の発現に干渉する前記核酸がアンチセンスRNAである請求項23に記載の組合せ。IL8をコードする核酸の発現に干渉する前記核酸がshRNA又はsiRNAである請求項23に記載の組合せ。A化合物I;及びB抗IL6及び/又は抗IL8剤を含むキット。増殖性疾患、特に癌の治療のための医薬の製造のための、A化合物I;及びB抗IL6及び/又は抗IL8剤の組合せの使用。実質的にここに記載された新規方法、組合せ、使用及びキット。定義特に他の定義を述べない限り、明細書及び特許請求の範囲を含むこの出願で使用される次の用語は、以下に付与する定義を有する。明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形a、an及びtheは、文脈が明らかに他の意味を示すものでなければ、複数の指示対象を含むことに留意されなければならない。ここで使用される場合、化合物Iは、ガンマセクレターゼ阻害剤として有用な22ジメチルN6オキソ67ジヒドロ5Hジベンゾbdアゼピン7イルNマロンアミドを意味する。化合物Iは次の構造を有している。バイオマーカーなる用語は、生物学的状態の指標となる客観的に測定可能な実体を意味する。生体試料なる用語は、バイオマーカーが測定され得る被験者から得られた部分例えば、血液、血清、組織、痰、尿、唾液を意味する。バイオマーカーに関連したレベルなる用語は、存在しているバイオマーカーの濃度、活性、発現レベル、又は量の測定値を意味する。レベルは、例えば、試料中に存在するバイオマーカーの濃度又は質量を測定することにより、又は例えば、関連する細胞集団又は組織において発現されるバイオマーカーをコードするmRNAの量を測定することにより、定量的に測定することができる。あるいは、レベルは、例えば、設定された閾値レベルより多い又は少ないとして、より定性的に測定することもできる。閾値レベルは、健常な被験者のバイオマーカーの平均又は中央値レベルに対応し得、又は疾患の診断がなされるレベルに対応しうる。バイオマーカーは、測定されるレベルが設定された閾値レベルを越える場合に上昇したレベルで存在していると言われる。被験者は哺乳動物及び鳥を含む。哺乳動物は、限定されるものではないが、ヒト;非ヒト霊長類、例えばチンパンジー及び他の類人猿及びサル種;家畜、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、及びブタ;飼育動物、例えばウサギ、イヌ、及びネコ;齧歯類を含む実験動物、例えばラット、マウス、及びモルモット等々を含む哺乳類クラスの任意のメンバーを意味する。被験者なる用語は、特定の年齢又は性別を示すものではない。ここで使用される場合、薬学的に許容可能な担体なる用語は、示された担体が、合理的に賢明な医療従事者が、治療されるべき疾患又は症状、及びそれぞれの投与経路を考慮し、患者へのその投与を避ける原因となり得る特性を有していないことを示す。ここで使用される場合、治療的有効量なる用語は、患者への投与の際に、所望される治療効果を生じせしめ、例えば癌性腫瘍の増殖をくい止め、癌性腫瘍の収縮を生じせしめ、又は患者の寿命を延ばすのに効果的な化合物又はその組合せ又は組成物の量を意味する。細胞増殖性疾患及び増殖性疾患なる用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連した疾患を意味する。一実施態様では、増殖性疾患は癌である。癌及び癌性なる用語は、典型的には調節されない細胞成長/増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態を意味するか記述する。癌の例は、限定されるものではないが、結腸直腸癌、メラノーマ、及び甲状腺癌を含む。細胞成長又は増殖を阻害とは、少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95又は100、細胞成長又は増殖を低減させることを意味し、細胞死の誘導を含む。ここで使用される実質的に低減又は実質的に異なるなる語句は、当業者が、2つの値の間の差が、該値によって測定される生物学的特徴の内容において統計的に有意であると考える程の、2つの数値一般的には、一方は分子に関連し、他方は参照/比較分子に関連の間の十分に高度な差異を意味する。腫瘍なる用語は、悪性か良性かにかかわらず、全ての新生物細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を意味する。癌、癌性、細胞増殖性疾患、増殖性疾患及び腫瘍なる用語は、ここで言及される場合は相互に排他的ではない。耐性の測定方法本発明は、部分的には、22ジメチルN6オキソ67ジヒドロ5Hジベンゾbdアゼピン7イルNマロンアミドここでは、化合物Iとも称されるを用いた治療に対する被験者の耐性を判定する方法であって、前記被験者から得られる生体試料中に存在するバイオマーカーのレベルを測定することを含む方法に関し、前記バイオマーカーはIL6又はIL8である。本発明の一実施態様では、前記試料中に存在するバイオマーカーのレベルは、該バイオマーカーの閾値レベルと比較され、大きいならば、前記被験者は、化合物Iを用いた治療に対してインビボ耐性を有していると考えられる。特許請求の範囲を含むここでの目的に対して、インビボ耐性とは、化合物Iを用いた治療の低減したインビボ有効性を意味する。本発明の実施態様では、バイオマーカーはIL6であり、IL6に対する前記閾値レベルは約500pg/mlである。本発明の実施態様では、バイオマーカーはIL8であり、IL8に対する前記閾値レベルは約500pg/mlである。バイオマーカーのレベルは、タンパク質自体、又はそのそれぞれのmRNAの量に基づいて測定することができる。タンパク質は、物理的/化学的技術、例えばゲル電気泳動、HPLC、質量分析、及びプロテオミクス技術;イムノアッセイ技術、例えばELISA、競合アッセイ、サンドイッチアッセイ等;及び生物活性例えば、リガンド及び/又は酵素としてのアッセイにより、ツーハイブリッドアッセイ系を介し、当該技術分野で知られている方法で生体試料中の活性を測定することにより、直接測定することができる。商業的アッセイは上述したバイオマーカーの多く又は殆どで利用可能であるか、又は当該技術に記載されている。適切な生体試料には、血液、血清、尿等が含まれる。また、上述したタンパク質バイオマーカーに相当する、mRNAのレベルを測定することも可能である。mRNA転写レベルの測定は、限定されるものではないが、ノーザンブロット;マイクロアレイ技術;RTPCR、qRTPCR及び他の定量的及び半定量的DNA及びmRNA増幅方法等を含む、任意の適切な定量的又は半定量的方法を使用して実施することができる。例えば、RTPCRを実施するためには、生体試料から全RNAを抽出し、デオキシリボヌクレアーゼ1で処理し、逆転写酵素、例えばマルチスクライブ逆転写酵素を使用し、cDNAに転換させることができる。ついで、テンプレートとして、cDNAを使用し、cDNASYBRグリーンのリアルタイム定量PCRアッセイを実施し、ABIPRISM7900配列検出器を使用して分析することができる。本発明の一実施態様では、被験者は哺乳動物、例えばヒトである。本発明の一実施態様では、測定されるバイオマーカーはIL6である。本発明の一実施態様では、測定されるバイオマーカーはIL8である。本発明の一実施態様では、IL6及びIL8の双方が測定される。本発明の一実施態様では、生体試料は血液である。本発明の一実施態様では、生体試料は血清である。本発明の一実施態様では、生体試料は尿である。本発明の一実施態様では、バイオマーカーは、前記試料に存在するタンパク質の量を測定することにより測定される。本発明の一実施態様では、バイオマーカーは、バイオマーカーをコードするmRNAのレベルを測定することにより測定される。耐性を測定するためのキットまた本発明は、22ジメチルN6オキソ67ジヒドロ5Hジベンゾbdアゼピン7イルNマロンアミドを用いた治療に対する、被験者の耐性の測定の補助に使用されるキットであって、被験者から得られた生体試料中のIL6又はIL8であるバイオマーカーを検出するための薬剤を含むキットに関する。併用療法一実施態様では、本発明は、患者に:化合物I;及び抗IL6又は抗IL8剤を投与することを含む、増殖性疾患を患っている患者を処置する方法に関する。本発明の一実施態様では、抗IL6及び抗IL8の双方が投与される。さらなる実施態様では、本発明は、医薬として、特に癌等の増殖性疾患、中でも固形腫瘍、さらには乳腺腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、及び前立腺腫瘍の処置に使用される医薬としての、化合物I;及び抗IL6及び/又は抗IL8剤の逐次又は同時組合せに関する。増殖性疾患の処置は、腫瘍サイズの維持又は低減、腫瘍退縮、腫瘍増殖の阻害、及び/又は疾患を被った患者の寿命の延長を含むと理解されるべきである。また本発明は、化合物I;及び抗IL6又は抗IL8剤を含有するキットに関する。本発明の一実施態様では、キットは抗IL6剤及び抗IL8剤の双方を含有する。本発明の一実施態様では、増殖性疾患は固形腫瘍である。本発明の他の実施態様では、固形腫瘍は、脳、肝臓、前立腺、卵巣、膵臓、皮膚乳腺、結腸直腸、肺、及び前立腺の腫瘍からなる群から選択される。本発明の他の実施態様では、固形腫瘍は、乳腺、結腸直腸、肺、及び前立腺の腫瘍からなる群から選択される。本発明の一実施態様では、抗IL6剤は、患者におけるIL6のレベルを低減するのに有効な量で投与される。本発明の一実施態様では、抗IL8剤は、患者におけるIL8のレベルを低減するのに有効な量で投与される。本発明の一実施態様では、抗IL6剤は抗IL6抗体である。本発明の一実施態様では、抗IL8剤は抗IL8抗体である。本発明の一実施態様では、抗IL6剤は、IL6をコードする核酸の発現に干渉する核酸である。IL6をコードする核酸の発現に干渉する核酸は、例えばアンチセンスRNAであってよい。また核酸は、例えばshRNA又はsiRNAであってもよい。本発明の一実施態様では、抗IL8剤は、IL8をコードする核酸の発現に干渉する核酸である。IL8をコードする核酸の発現に干渉する核酸は、例えばアンチセンスRNAであってよい。また核酸は、例えばshRNA又はsiRNAであってもよい。本発明の方法の一実施態様では、化合物Iは、増殖性疾患を治療するために治療的に有効な量で投与される。その量は、例えば約400nghr/mlから約9000nghr/ml、約1100nghr/mlから約4100nghr/ml、又は約1380nghr/mlから約2330nghr/mlでありうる。本発明の実施態様では、化合物Iは、約21日までの期間にわたって約400nghr/mlから約9000nghr/ml、約21日までの期間にわたって約1100nghr/mlから約4100nghr/ml、約21日までの期間にわたって約1380nghr/mlから約2330nghr/mlの量で投与されうる。本発明の方法の一実施態様では、化合物Iは21日サイクルの1、2、3、8、9、及び10日目に1日1回投与される。他の実施態様では、投与は、21日サイクルの1から7日目に1日1回なされうる。さらなる実施態様では、投与は、毎日基準で1日1回なされうる。本発明の方法及びキットの実施態様では、化合物Iは薬学的経口単位投与形態である。本発明の方法の一実施態様では、患者は放射線治療もさらに受ける。本発明の方法の一実施態様では、化合物Iは、約400nghr/mlから約9000nghr/mlの量で、21日サイクルの1、2、3、8、9、及び10日目に1日1回投与される。本発明の方法の一実施態様では、化合物Iは、約400nghr/mlから約9000nghr/mlの量で、21日サイクルの1から7日目に1日1回投与される。本発明の一実施態様では、抗IL6抗体は、患者におけるIL6のレベルを低減するのに有効な量で投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL6抗体は、約1から約100mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL6抗体は、約1から約50mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL6抗体は、約10から約30mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL6抗体は、約20mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の一実施態様では、抗IL8抗体は、患者におけるIL8のレベルを低減するのに有効な量で投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL8抗体は、約1から約100mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL8抗体は、約1から約50mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL8抗体は、約10から約30mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の方法の一実施態様では、抗IL8抗体は、約20mg/kgの量で、週2回投与される。本発明の一実施態様では、抗IL6shRNAは、患者におけるIL6のレベルを低減するのに有効な量で投与される。本発明の一実施態様では、抗IL8shRNAは、患者におけるIL8のレベルを低減するのに有効な量で投与される。本発明の一実施態様では、抗IL6siRNAは、患者におけるIL6のレベルを低減するのに有効な量で投与される。本発明の一実施態様では、抗IL8siRNAは、患者におけるIL8のレベルを低減するのに有効な量で投与される。化合物I、抗IL6剤、及び/又は抗IL8剤の投薬量レベルは、患者の必要性、及び治療に対する患者の反応に応じて、ここに記載したものより低く又は高くなるように医師により修正されうる。以下の調製物及び実施例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することができるようにするために与えられる。それらは、発明の範囲を限定すると見なされるべきではなく、単にその例証で代表例である。実施例1この実施例は、化合物Iでの治療に対する様々な異なった異種移植モデルの応答を示す。CharlesRiverLaboratoriesWilmingtonMAから得た雌のnu/nuヌードマウス、又は雌のSCIDベージュマウスTaconicGermantownNYを、約8~14週齢で、約23~25グラムの体重のときに使用した10マウス/群。全ての動物実験は、RocheAnimalCareandUseCommitteeRACUCで承認されたプロトコルに従って実施した。ヒト癌細胞株LOVO、BxPC3、HCT116、A549、AsPC1、MiaPaCa2、及びCalu6を、AmericanTypeCultureCollectionから購入した。H460a細胞株は、JackRoth博士MDAndersonMedicalCenterから贈られた。異種移植片の移植のために、細胞を0.05トリプシンを使用して収集し、培養培地で洗浄し、遠心分離し、リン酸緩衝食塩水及びマトリゲルの1:1混合物、又はPBS単独を、右側腹部に皮下的に移植した。全ての異種移植モデルを、BxPC3を除いてヌードマウスに移植し、BxPC3はSCIDベージュマウスに移植した。腫瘍を、平均体積が~100-150mm3に達するまで、移植後8から26日間成長させ、その後、動物を治療群に無作為化した。国際特許第2005/023772号に記載の手順に従い合成した化合物Iを、経口po投与用に、0.2のTween80を用い、水中1.0Klucelの懸濁液として処方した。処方した化合物及びビヒクルを毎週調製し、4°Cで保存した。Calu6異種移植モデルにおいて、化合物Iを4週間の間、隔週で毎日60mg/kg投与した7/7-×2サイクル。全ての他の異種移植モデルに、毎日10mg/kgで化合物Iを投与した。腫瘍の測定及びマウスの体重を週2回実施した。統計的解析を、マンホイットニーの順位和検定、1方向分散分析、及び事後ボンフェローニt検定により決定したSigmaStatversion20JandelScientificSanFranciscoCA。群間の差異は、確率値pが≦0.05であった場合に有意であると考えた。腫瘍増殖阻害TGIを治療開始から21日で測定した。結果を以下の表1に示した。分かるように、H460a異種移植片では、化合物Iでの治療後の腫瘍増殖阻害は最小量が示された8。実施例2実施例1において、H460a異種移植モデルが化合物Idでの治療後の最小量の腫瘍増殖阻害を示すことを同定した後、H460a細胞株を分離させるバイオマーカーがあったかどうかを決定するためにH460a及びA549NSCLC細胞株の双方についてサイトカインアレイアッセイを実施した。サイトカインアレイは、RayBiotech社NorcrossGAから購入し、製造者のプロトコルに従って使用した。細胞を5日間増殖させ、細胞培地を収集し、剥離させ、遠心分離により細胞を取り除いた。4ミリリットルの培地を一晩インキュベートし、アレイを複数のPBS/Tweenで洗浄した後、シグナルを発現させた。H460a細胞株が、A549又は血清コントロールよりも、IL6及びIL8の双方を高レベル発現していたことが測定された。図1を参照。実施例3ついで、IL6及びIL8の発現を、ELISAを使用し、分泌されたIL6及びIL8タンパク質のレベルを測定することにより、BxPC3、HCT116、A549、AsPC1、MiaPaCa2、及びCalu6細胞株において定量した。IL6ELISAキットは、BenderMedSystemsBMS213/2又はBMS213INSTから購入した。IL8ELISAキットは、BenderMedSystemsBMS204/3INST又はRDSystemsD8000Cから購入した。組織培養培地に分泌されたIL6及びIL8を測定するために、35mmプレートに100万の半分の密度で細胞を播種した。次の日、細胞を2mlのPBSで洗浄した後、1mlの新鮮培地を補充した。24時間後、培地及び収集し、直ぐにELISA分析に使用した。結果から分かるように図2を参照、H460a細胞は、A549細胞と比較した場合、4倍高いIL6タンパク質、及び10倍高いIL8タンパク質を含み、試験された他の細胞株よりも多くの量のIL6及びIL8タンパク質を分泌している。実施例4ついで、IL6及びIL8の発現を、qRTPCRを使用し、mRNAのレベルを測定することにより、BxPC3、HCT116、A549、AsPC1、MiaPaCa2、及びCalu6細胞株において定量した。標準的な実験法を使用し、RNA単離及び逆転写PCRRTPCRを実施した。各プローブセットに対するカタログ番号は、Hes1Hs00172878_m1、ACTB4333762F、IL6Hs00174131_m1、IL8Hs00174103_m1及び18S4319413Eであった。結果から分かるように図3を参照、H460a細胞は、A549細胞と比較した場合、12倍高いIL6mRNA、及び8倍高いIL8mRNAを含み、試験された他の細胞株よりも多くの量のIL6及びIL8mRNAを発現している。実施例5IL6又はIL8の発現が、化合物Iの処置の効能を変化させるかどうかを試験するために、IL6又はIL8を過剰発現するA549細胞株を操作し、このような過剰発現が化合物Iの処置に対する細胞の感度を変えるかどうかを決定するために研究する異種移植モデルを作製するために使用した。IL6及びIL8レンチウイルスは、それぞれIL6及びIL8プラスミドGenecopoeiaRockvilleMarylandUSAから入手可能を使用して作製した。A549細胞を3群に分け、一つの群はベクターコントロールを受容し、一つの群はIL6レンチウイルスに感染させられており、第3の群はIL8レンチウイルスに感染させられている。後の2つの群は、それぞれ外来性IL6及びIL8の安定した発現を伴う細胞プールを形成した。IL6及びIL8タンパク質の過剰発現はELISAにより定量した。図4を参照。H460aと比較して、IL6を過剰発現するA549細胞は、7倍高いIL6を分泌した。IL8を過剰発現するA549細胞は、H460aより、わずかに少ないIL8タンパク質を分泌した。IL6及びIL8を過剰発現するA549細胞は、A549ベクターコントロール細胞と同様の形態を有している。ついで、IL6過剰発現A549細胞と、IL8過剰発現A549細胞の一部を組合せ、このような細胞の1:1混合物を含む第4群を形成した。ベクターコントロールを受容するA549細胞、IL6を過剰発現するA549細胞、IL8を過剰発現するA549細胞、及びIL6を過剰発現するA549細胞とIL8を過剰発現するA549細胞の1:1混合物を、6つのウェルプレートに播種し、各群は、0日目にウェル当たり約1×105で播種した。4、6、10及び12日目に、全ての細胞をトリプシン処理し、計数し、ついで同じ希釈度で、さらなる増殖のために再播種した。コントロール細胞は100増殖として任意にセットした。全ての他の細胞型の増殖は、コントロール細胞の増殖に対する比として表した。試験した全ての細胞株、同様の増殖率を示した。表2を参照。化合物Iの効能に対するIL6及びIL8過剰発現のインビボ効果をこれらの細胞群のそれぞれついて評価した。上述の4群の細胞と親A549及びH460a細胞を使用し、実施例1に記載の手順を使用して異種移植モデルを作製した。異なった治療群10マウス/群:1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容する親A549マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容する親A549マウス、1日4回30mg/kgのタキソールを受容する親A549マウス、1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容するベクターコントロールA549マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するベクターコントロールA549マウス、1日4回30mg/kgのタキソールを受容するベクターコントロールA549マウス、1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容するIL6過剰発現A549マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するIL6過剰発現A549マウス、1日4回30mg/kgのタキソールを受容するIL6過剰発現A549マウス、1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容するIL8過剰発現A549マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するIL8過剰発現A549マウス、1日4回30mg/kgのタキソールを受容するIL6過剰発現A549マウス、1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容するIL6及びIL8過剰発現A549細胞の1:1異種移植混合物を含有するA549マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するIL6及びIL8過剰発現A549細胞の1:1異種移植混合物を含むA549マウス、1日4回30mg/kgのタキソールを受容するIL6及びIL8過剰発現A549細胞の1:1異種移植混合物を含むA549マウス、1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容するH460aマウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するH460aマウス、及び1日4回30mg/kgのタキソールを受容するH460aマウスにおいて、マウスを無作為化した。1日1回10mg/kgの化合物Iで処置されたH460aIL6及びIL8の双方が高レベルからの異種移植腫瘍では、21日後に、9のTGIが生じた。この耐性は、A549腫瘍について観察された71TGI、A549ベクターコントロール腫瘍についての61TGIIL6及びIL8も低レベルに対して、明らかに対照的であり、過去の実験とも一致する。A549におけるIL6又はIL8の過剰発現は、それぞれ32及び45まで、TGIを低減させた。IL6又はIL8が過剰発現したA549の1:1混合物で開始された腫瘍は、親H460a異種移植の耐性と一致して、化合物Iに対して十分な耐性8TGIを示した。タキソールは、様々なモデルにわたって一致したTGIを示すポジティブ薬剤コントロールとして含めた。化合物Iに対するIL6又はIL8過剰発現A549の耐性は、インビトロでの化合物Iの処置後のHes1mRNAのダウンレギュレーション、Notchシグナル伝達ブロックの特徴が、これらの細胞において適切に保持されているため、Notch阻害の損失により生じたわけではない。実施例6この実施例は、IL8の発現が、H460a細胞の耐性の維持に必要であるかどうかを調査するために実施された研究を記述する。レンチウイルスは、pLKO.1ベースの抗IL8shRNAOpenBiosystemsから購入を使用して作製し、H460a細胞におけるIL8発現を安定にノックダウンするために使用した。図6に示されるように、shRNAは、H460a親細胞と比較して、IL8発現mRNA及びタンパク質の双方の75ノックダウンを与えた。しかしながら、IL8ノックダウンH460a細胞は、A549細胞と比較して2倍高いIL8レベルをなおも有していた。ついで、親H460a細胞とIL8ノックダウンH460a細胞を、実施例1に記載された手順を使用し、マウスに異種移植片として移植した。ついで、マウスを、異なった治療群10マウス/群:1日1回ビヒクルを受容するH460a異種移植マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するH460a異種移植マウス、1日1回ビヒクルを受容するH460a異種移植マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するIL8ノックダウンH460a異種移植マウス、及び1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するIL8ノックダウンH460a異種移植マウスに無作為化した。図7に示されるように、21日の間、1日1回10mg/kgの化合物Iで治療された場合、IL8ノックダウンH460a細胞から誘導された腫瘍は、親H460a細胞からの腫瘍と比較して、改善された応答性を示した5TGI対24TGI。実施例7この実施例は、IL8の発現がH460a細胞の耐性の維持に必要であるかどうかを調査するために実施されたさらなる研究を記述する。中和抗IL8抗体を、RDsystemsカタログ番号:MAB208から購入した。まず、この抗体をインビトロで試験し、この抗体で処置されたH460a細胞からは何の増殖阻害も観察されなかった。H460a異種移植モデルは実施例1に記載した手順を使用して作製した。ついで、マウスを、異なった治療群10マウス/群:週2回ビヒクルを受容するH460a異種移植マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するH460a異種移植マウス、週2回20mg/kgの抗IL8抗体を受容するH460a異種移植マウス、及び1日1回10mg/kgの化合物Iと週2回20mg/kgの抗IL8抗体を受容するH460a異種移植マウスに無作為化した。化合物Iと抗体との組合せにより、化合物Iに対するH460a腫瘍の感受性が改善した10TGI対43TGI。これは、IL8shRNAを利用する過去のデータと一致している。図8を参照。実施例8この実施例は、IL6の発現が、H460a細胞の耐性の維持に必要であるかどうかを調査するために実施された研究を記述する。中和抗IL6抗体を、RDsystemsカタログ番号:MAB2061から購入した。まず、この抗体をインビトロで試験し、この抗体で処置されたH460a細胞からは何の増殖阻害も観察されなかった。H460a異種移植モデルは実施例1に記載した手順を使用して作製した。ついで、マウスを、異なった治療群10マウス/群:週2回ビヒクルを受容するH460a異種移植マウス、1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するH460a異種移植マウス、週2回20mg/kgの抗IL6抗体を受容するH460a異種移植マウス、及び1日1回10mg/kgの化合物Iと週2回20mg/kgの抗IL6抗体を受容するH460a異種移植マウスに無作為化した。化合物Iと抗体との組合せにより、化合物Iに対するH460a腫瘍の感受性が改善した43TGI対47TGI。図9を参照。実施例9任意の応答マーカーの重要な側面は、レスポンダー及び非レスポンダー腫瘍型を成功裏に予め同定する能力である。この実施例では、異なった細胞株を、それらが高発現レベルのIL6及び/又はIL8を有しているかどうかを決定するために分析した。ついで、高レベルのIL6及びIL8を発現する細胞を使用し、異種移植を作製したよって、化合物Iの治療に対する非レスポンダーであると予測された。ついで、異種移植モデルを化合物Iで処置し、治療の効能に対して高レベルのIL6及びIL8が何らかの効果を有しているかどうかを調べた。複数の腫瘍型にわたっておよそ100の細胞株を、qRTPCRにより、IL6及びIL8の発現についてスクリーニングした。約13の細胞株が、A549よりも少なくとも10倍高いIL6又はIL8の発現を有していた。2つの細胞株、つまり高レベルのIL6A549よりも35倍高いIL6mRNA及びIL8A549よりも85倍高いIL8mRNAを発現するU87MGと、高レベルのIL8A549より50倍高いIL8mRNA及びIL6A549よりも2倍高いIL6mRNAを発現するLOXメラノーマ図10を、さらなる研究のために選択した。これらの2つの細胞株からのIL6及び/又はIL8のより高い発現レベルが、ELISAによりさらに確認された図11。ヒト癌細胞株U87MG及びLOXは、AmericanTypeCultureCollectionから購入した。ついで、U87MG及びLOX細胞株を使用し、異種移植モデルを作製した。CharlesRiverLaboratoriesWilmingtonMAから得た雌nu/nuヌードマウスに、約8から14週齢で、およそ23から25グラムの重量のときに、異種移植片を移植した10マウス/群。全ての動物実験は、RocheAnimalCareandUseCommitteeRACUCで承認されているプロトコルに従い実施した。異種移植片の移植のために、細胞を0.05のトリプシンを使用して収集し、培養培地で洗浄し、遠心分離し、リン酸緩衝食塩水PBS及びマトリゲルU87MGの1:1混合物、又はPBS単独のいずれかに、mL当たり1.5-5×107細胞の濃度で再懸濁させた。マウス当たり0.2mL体積の細胞懸濁液U87MGについては5×106細胞、LOXについては2×106細胞を、右側腹部に皮下的に移植した。腫瘍を、平均体積が~100-150mm3に達するまで、移植後8~26日間成長させ、その後、動物を治療群:1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容するU87MG異種移植マウス、21日間1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するU87MG異種移植マウス、1日1回ビヒクルKlucel及びTweenを受容するLOX異種移植マウス、及び11日間1日1回10mg/kgの化合物Iを受容するLOX異種移植マウスに無作為化した。U87MG及びLOXモデルの双方とも、予測したように、化合物Iを用いた治療耐性が証明され、U87MG腫瘍については-17TGI、LOX腫瘍については15であった。図12を参照。化合物Iに対するU87MG及びLOX細胞の耐性は、インビトロでの化合物Iの処置後のHes1mRNAのダウンレギュレーション、Notchシグナル伝達ブロックの特徴が、これらの細胞において適切に保持されているため、Notch阻害の損失により生じたわけではない。図13を参照。実施例10異種移植モデルにおけるIL6及びIL8の血清レベルを測定し、それらが、細胞培地からインビトロで観察される発現差を反映しているかどうかを決定した。得られたデータは、血清収集物が、IL6及びIL8の患者の腫瘍レベルをモニターするための、臨床的に実施可能なアプローチでありうることを示唆している。次の異種移植モデル:A549、H460a、IL8ノックダウンH460a、U87MG及びLOXモデルは、上述の方法を使用して作製を使用し、腫瘍を有するマウスからマウス血清を収集した。これは、BDMicrotainer血清分別チューブカタログ365956、BectonDickinsonFranklinLakesNJでの後眼窩出血又は心臓パンクチャーにより達成した。血液を放置し、最小10分間で凝集させ、微小遠心分離器で10分間、9000rpmでスピンさせた。血清を収集し、1.5mlの微小遠心分離用チューブに配し、-80°Cで保存した。A549腫瘍からのマウス血清に分泌されたヒトIL6及びIL8は、あまりに少なくて、ELISAでは検出することができなかった。しかしながら、H460a、LOX及びU87MG異種移植モデル由来のヒトIL6及びIL8は、ELISAを使用し、血清において容易に検出された図14。さらに、分泌されたIL8血清レベルにおける予期される変化が、IL8ノックダウンH460aモデル及びH460aモデルの間に観察された。一般的に、血清中、インビボで観察されたIL6及びIL8のレベルは、細胞培養からインビトロで観察される量を反映していた。しかしながら、マウス血清対細胞培地から測定されたIL6及びIL8の間には、ある程度の矛盾も観察された。例えば、U87MGは、プラスチック上の同数の細胞に播種した場合、H460aよりも5-6倍高いレベルでIL6及びIL8を分泌した;これはマウス血清では反映されなかった。