"式I:[式中、nは1または2であり;R1は、水素、C14アルキル、C13アルコキシC24アルキル、ヒドロキシC24アルキルおよびRXRYN-C24アルキルから選択され、ここでRXおよびRYはそれぞれ独立に水素またはC13アルキルを示し;R2は、水素、ヒドロキシメチルまたは2-ヒドロキシエチルである]で示される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。nが1である請求項1記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。R1が水素またはC14アルキルである請求項1または2記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。R1がメチルである請求項1~3のいずれか記載の化合物、またはその製薬的に許容し得る塩。以下からなる群から選択される請求項1記載の化合物:1-4-{[2-アミノ-4-ブチルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン;1-4-{[2-アミノ-4-メチル-6-ペンチルアミノピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン;S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン;S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシペンタン-2-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン;S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニルピペラジン-2-オン;またはその製薬的に許容し得る塩。製薬的に許容し得る希釈剤または担体と組み合わせて、請求項1~5のいずれか記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩を含有する医薬組成物。医薬として使用するための、請求項1~5のいずれか記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。癌の処置において使用するための、請求項1~5のいずれか記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。癌の処置において使用するための医薬の製造における、請求項1~5のいずれか記載の化合物またはその製薬的に許容し得る塩。ヒトなどの温血動物における癌を処置する方法であって、請求項1~5のいずれかにおいて定義される有効量の式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を、そのような処置を必要とする動物に投与することを含んでなる、方法。請求項1において定義される式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の製造方法であって、式XXIII:[式中、R1は、請求項1の式Iで定義したとおりであり、LG4は脱離基である]で示される化合物と、式XII:[式中、R2およびnは請求項1の式Iで定義したとおりである]で示される化合物を、塩基の存在下または非存在下で反応させる工程を含んでなる方法。優れた効果および/または有益な物性例えば、高い浸透性および/または低い血漿タンパク結合および/または好ましい毒性プロファイルおよび/または好ましい代謝プロファイルという理由によって、知られている他のTLR7アゴニスト例えば852Aと比較して疾患例えば癌の処置においてより効果の高い、さらなるTLR7アゴニストが必要とされている。本明細書において説明するように、本発明の環状アミド化合物は、invitroでTLR7を活性化することができる。この活性化の結果として、本発明の環状アミド化合物は、ヒトの疾患例えば癌の予防または処置単剤治療または他の化学療法剤もしくは放射線療法との併用において有用である。本発明のさらなる特徴として、本発明の化合物は、TLR8と比較してTLR7に対する顕著に優れた選択性を有する。TLR7とTLR8は、細胞内での発現に違いがあり、結果として選択的なアゴニストによる刺激は異なったサイトカインプロファイルを誘導する。TLR8刺激TLR8選択的アゴニストまたはTLR7/8デュアルアゴニストのいずれかでのの結果、TNFα、IL-1βおよびIL-6を含む炎症性サイトカインのレベルは増大するGordenetalJImmunol17412591268。反対に、TLR8刺激の結果IFNαは低レベルとなる。したがって、TLR7選択的なアゴニストは、アレルギー疾患で増加するTh2サイトカインの抑制に重要なIFNαHuberetalJImmunol185813817の誘導に有利に働く。また、化合物がTLR8と比べてTLR7に対し選択的であることで、炎症性サイトカインの誘導が減少し、ヒトでの炎症反応が回避される。本発明のさらなる特徴として、本発明の化合物の幾つかはまた、顕著に優れたPAMPAParallelArtificialMembranePermeabilityAssayプロファイルを有する。PAMPAで低い数値を示す化合物は、浸透性が低く化合物の経口での投与不足に関係するので望ましいといえない。本発明のさらなる特徴として、本発明の化合物はまた、顕著に優れたhERGプロファイルを有する。hERGイオンチャンネルに対する活性が顕著な化合物は、QT延長の誘発と関連し、そのような活性が多型性心室頻拍の発生や心臓死に関係するため、望ましいといえない。本発明の第一の態様によれば、式I:[式中、nは1または2であり;R1は、水素、C14アルキル、C13アルコキシC24アルキル、ヒドロキシC24アルキルおよびRXRYN-C24アルキルから選択され、ここでRXおよびRYはそれぞれ独立に水素またはC13アルキルを示し;R2は、水素、ヒドロキシメチルまたは2-ヒドロキシエチルである]で示される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。上で定義した式Iの化合物が、1またはそれ以上の不整炭素原子によって光学活性体としてまたはラセミ体として存在する場合、上述の活性を有する任意のそのような光学活性体またはラセミ体が本発明の定義に包含されることは理解されよう。光学活性体の合成は、当分野でよく知られた有機化学の標準的な技術例えば光学活性な出発物質からの合成またはラセミ体の分割によって行うことができる。同様に、上述の活性は、以下に記載する標準的な実験技術を用いて評価することができる。上記式Iで示される化合物が、溶媒和されていない形態でも溶媒和された形態例えば水和物でも存在し得ることは理解されよう。本発明が、TLR7を活性化するそのような溶媒和された形態のすべてを包含することは理解されよう。また、式Iで示される化合物が結晶形として存在し結晶多形を示し得ることは理解されよう。本発明はTLR7を活性化するそのような形態のすべてを包含する。用語C14アルキルは、直鎖または分岐鎖であってよい1~4炭素原子長の飽和の炭素鎖を意味する。但し、プロピルなど個別のアルキル基に言及する場合は、特に直鎖であるもののみを指し、tertブチルなど個別の分岐鎖アルキル基に言及する場合は、特に分岐鎖であるもののみを指す。例えば、C14アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルおよびtertブチルが挙げられるがこれに限定されない。用語C24アルキルおよびC13アルキルは、これに準じて解釈される。用語C13アルコキシC24アルキルは、酸素原子を介して、直鎖または分岐鎖であってよい2~4炭素原子長の他の飽和炭素鎖と連結した、直鎖または分岐鎖であってよい1~3炭素原子長の飽和の炭素鎖を意味する。例えば、C13アルコキシC24アルキルとしては、メトキシエチル、メトキシプロピル、エトキシプロピル、プロポキシエチルおよびメトキシプロピルが挙げられるがこれに限定されない。用語ヒドロキシC24アルキルは、水素原子の1つがヒドロキシ基で置換された、直鎖または分岐鎖であってよい2~4炭素原子長の飽和の炭素鎖を意味する。例えば、ヒドロキシC2-4アルキルとしては、ヒドロキシエチル、2-ヒドロキシプロピル、3-ヒドロキシプロピル、1-ヒドロキシイソプロピルおよび4-ヒドロキシブチルが挙げられるが、これに限定されない。用語RXRYN-C24アルキルは、水素原子の1つがRXRYN-ここで、RXおよびRYはそれぞれ独立に水素またはC13アルキルを示すで示される基で置換された、直鎖または分岐鎖であってよい2~4炭素原子長の飽和の炭素鎖を意味する。C13アルキルは、直鎖または分岐鎖であってよい1~3炭素原子長の飽和の炭素鎖を意味し、メチル、エチル、プロピルおよびイソプロピルが挙げられる。一実施形態では、式IA:[式中、R1、R2およびnはそれぞれ、R1、R2およびnについてそれぞれ本明細書に定義したとおりである]で示される、式Iの化合物またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。また、可変基n、R1およびR2は、以下に記載するいずれでもよい。そのような可変基を、定義、クレーム、本明細書において定義した態様または実施形態のいずれかと一緒に用い、本発明のさらなる実施形態またはクレームを提供することができ、文脈上許されない場合を除いて、任意の数の当該基の定義を互いに組み合わせて用い、さらなる実施形態、態様およびクレームを形成してもよい。例えば、当業者は、下記2、4および9を組み合わせれば、nが1であり、R1が水素、C14アルキル、C13アルコキシC24アルキル、ヒドロキシC24アルキルまたはRXRYN-C24アルキルであり、R2が水素または2-ヒドロキシエチルである、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩が提供されると理解するであろう。あるいは、例えば、当業者は、下記2、7および8を組み合わせれば、nが1であり、R1がメチルであり、R2が水素、ヒドロキシメチルまたは2-ヒドロキシエチルである、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩が提供されると理解するであろう。1n=1または22n=13n=24R1は、水素、C14アルキル、C13アルコキシC24アルキル、ヒドロキシC24アルキルまたはRXRYN-C24アルキル5R1は、水素またはC14アルキル6R1は、C14アルキル7R1は、メチル8R2は、水素、ヒドロキシメチルまたは2-ヒドロキシエチル9R2は、水素または2-ヒドロキシエチル10R2は、水素11R2は、2-ヒドロキシメチル式Iで示される具体的な新規化合物としては、以下の化合物が挙げられるがこれに限定されない:1-4-{[2-アミノ-4-ブチルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン:1-4-{[2-アミノ-4-メチル-6-ペンチルアミノピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン:S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン:S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシペンタン-2-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン:S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニルピペラジン-2-オン:およびその製薬的に許容し得る塩。本発明の一実施形態では、本明細書記載のいずれかの実施例またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。式Iで示される化合物の適当な製薬的に許容し得る塩は、例えば、式Iで示される化合物の酸付加塩、例えば無機または有機酸塩酸、臭化水素酸、硫酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸またはマレイン酸等との酸付加塩である。本発明の化合物は、ヒトまたは動物の体内で分解され本発明の化合物を生じるプロドラッグの形態として投与することができる。プロドラッグは、本発明の化合物の物性および/または薬物動態特性を変えるために用いることができる。本発明の化合物が、特性を修飾する基が結合可能な適当な基または置換基を含む場合、プロドラッグを形成することができる。プロドラッグの例としては、式Iで示される化合物のアミノ基にて形成し得る、invivoで開裂可能なアミド誘導体が挙げられる。したがって、本発明は、有機合成によって入手可能となるとき、そのプロドラッグの開裂を経てヒトまたは動物の体内で利用可能となるとき、上で定義した式Iで示される、そのような化合物を包含する。したがって、本発明は、有機合成の手段によって製造される、また、そのような化合物が前駆体化合物の代謝を経てヒトまたは動物の体内で生じる、式Iで示される化合物を包含する。即ち、式Iで示される化合物は、合成により製造された化合物であっても、代謝により生じた化合物であってもよい。式Iで示される化合物の好適な製薬的に許容し得るプロドラッグは、望ましくない薬理学的活性や過度の毒性なしに、ヒトまたは動物の身体への投与に適しているとの合理的な医学的判断に基づいたものである。様々な形態のプロドラッグが、例えば下記文献において記述されている:aMethodsinEnzymologyVol42p309396editedbyKWidderetal;bDesignofProdrugseditedbyHBundgaard;cATextbookofDrugDesignandDevelopmenteditedbyKrogsgaardLarsenandHBundgaardChapter5DesignandApplicationofProdrugsbyHBundgaardp113191;dHBundgaardAdvancedDrugDeliveryReviews8138;eHBundgaardetalJournalofPharmaceuticalSciences77285;fNKakeyaetalChemPharmBull32692;gTHiguchiandVStellaProdrugsasNovelDeliverySystemsACSSymposiumSeriesVolume14;およびhERocheBioreversibleCarriersinDrugDesignPergamonPress1987アミノ基を有する式Iで示される化合物の好適な製薬的に許容し得るプロドラッグは、例えば、invivoで開裂可能なそのアミド誘導体である。アミノ基を形成する好適な製薬的に許容し得るアミドとしては、例えば、C110アルカノイル基アセチル、ベンゾイル、フェニルアセチル、並びに置換されたベンゾイルおよびフェニルアセチル基、等と形成するアミドが挙げられる。フェニルアセチルおよびベンゾイル基における置換基の例としては、アミノメチル、N-アルキルアミノメチル、NN-ジアルキルアミノメチル、モルホリノメチル、ピペラジン-1-イルメチルおよび4-C14アルキルピペラジン-1-イルメチルが挙げられる。式Iで示される化合物は、式Iで示される化合物の投与後にヒトまたは動物の体内で形成する1またはそれ以上の代謝物質により部分的にinvivoで効果を奏し得る。上に記載したように、式Iで示される化合物のinvivoの効果は、前駆体化合物プロドラッグの代謝によっても発揮され得る。式Iで示される化合物の調製式Iで示される化合物は、以下の反応スキームに記載するとおり調製することができる。工程i式IVで示される化合物は、適当な溶媒THFまたはDMF等中、適当な温度例えば0°C~室温にて、式IIIで示される化合物と塩基NaH等を反応させた後、式IIで示される化合物[式中、LG1およびLG2はそれぞれ独立に適当な脱離基ブロモ、クロロまたは-OSO2R3等であり、ここでR3はC13アルキルまたは場合により置換されたアリールフェニル、4-メチルフェニルまたは246-トリメチルフェニル等であるを示す]を添加することにより調製することができる。次いで、好ましくは、反応混合物を、場合により添加剤KI等の存在下、加熱例えば50~100°Cする。あるいは、式IVで示される化合物を下記スキーム1-2により調製することができる:式VIIで示される化合物は、スキーム1-2に示すように、式Vで示される化合物と式VIで示される化合物との反応により調製することができる。反応は、酢酸とピペリジンの存在下、適当な溶媒トルエン等中、適当な温度例えば、50~150°Cにて行うことができる。式IVで示される化合物は、触媒Pd/C等の存在下、水素雰囲気下1~20bar、適当な溶媒MeOH等中、適当な温度例えば、20~100°Cにて、式VIIで示される化合物を還元することにより調製することができる。式IVで示される化合物はまた、下記スキーム1-3に示す方法によって合成することもできる。式IVで示される化合物は、スキーム1-3に示すように、式VIIIで示される化合物と式IXで示される化合物とのHeck反応により調製することができる式中、Halはブロモまたはヨードを示す。反応は、パラジウム触媒酢酸パラジウムII、ビストリ-o-トリルホスフィンパラジウムIIジクロリドまたは11-ビスジtertブチルホスフィノ-フェロセンパラジウムIIクロリドPd118等、塩基NaHCO3、トリエチルアミンまたはジシクロヘキシルメチルアミン等および塩化テトラブチルアンモニウムまたは臭化テトラブチルアンモニウムを用いて行うことができる。反応は、適当な溶媒THF、DMFまたはDMA等中、適当な温度例えば50~150°Cにて行う。工程ii式Xで示される化合物は、適当な溶媒MeOHまたはEtOH等中、適当な温度例えば50~150°Cにて、式IVで示される化合物とグアニジンまたは炭酸グアニジンとを反応させることによって調製することができる。工程iii式XIで示される化合物は、LG3がクロロを示す場合、適当な温度例えば50~150°Cにて、式Xで示される化合物とPOCl3とを反応させることにより調製することができる。あるいは、式XIで示される化合物は、式Xで示される化合物を、式R3SO2Cl[式中、R3はC13アルキルまたは場合により置換されたアリールフェニル、4-メチルフェニルまたは246-トリメチルフェニル等を示す]で示される化合物と反応させることにより調製することもできる。LG3が-OSO2R3を示すとき、反応は、適当な溶媒DCMまたはTHF等中、適当な塩基NNNN-テトラメチル-13-プロパンジアミンまたはトリエチルアミン等の存在下、適当な温度例えば0~50°Cにて行うことができる。工程iv式XIIIで示される化合物は、場合により添加剤トリフルオロ酢酸またはDIPEA等の存在下、適当な溶媒ブタノール、プロピオニトリル、酢酸ブチルまたは14-ジオキサン等中、適当な温度例えば50~150°Cにて、式XIで示される化合物と過剰量の式XIIのアミンとを反応させることにより調製することができる。あるいは、マイクロウェーブ中、適当な温度例えば50~200°Cにて、反応を行うことができる。式XIIおよび/またはXIIIにおいて、R2がヒドロキシメチルまたは2-ヒドロキシエチルを示す場合、R2におけるヒドロキシル基を保護基ベンジルまたはtertブチルジメチルシリル等で保護してもよい。ヒドロキシル基は工程ivの反応後に保護してもよい。工程v式Iで示される化合物は、適当な溶媒14-ジオキサン、トルエンまたはDMF等中、触媒CuI等、添加剤NN-ジメチルジアミノエタンまたはtrans-12-シクロヘキサンジアミンおよび適当な塩基Cs2CO3またはK2CO3等の存在下、適当な温度例えば50~150°Cにて、式XIIIで示される化合物とXIVとを反応させることにより調製することができる。式Iで示される化合物においてR1が水素である場合、式XIVで示される化合物のR1を保護基tertブトキシカルボニル基等で保護し、これを式XIIIで示される化合物と反応させた後、適当な溶媒14-ジオキサンまたはMeOH等中、酸塩酸またはTFA等で脱離してもよい。R2におけるヒドロキシル基を保護する場合、下記スキーム5-2またはスキーム6に示すように、ヒドロキシ基を保護し保護基を除去するさらなる工程により、式Iで示される化合物を調製することができる。スキーム5-2において、mは1または2を示し、PG1は保護基tertブチルジメチルシリルTBDMSまたはベンジル等を示す。式XIII-2で示される化合物は、式XIIIで示される化合物のヒドロキシル基を保護基:PG1ベンジルまたはTBDMS等で保護することによって調製することができる。式I-2で示される化合物は、スキーム5の工程v記載の方法により調製することができる。保護基がベンジルエーテルを示す場合、脱保護反応は、触媒Pd/C等を用い、水素雰囲気下1~20bar、適当な溶媒MeOH等中、適当な温度例えば20~100°Cにて、場合により添加剤塩酸または酢酸の存在下で、行うことができる。保護基がTBDMSを示す場合、保護基をフッ素化合物フッ化テトラ-n-ブチルアンモニウムTBAF等と反応させることにより脱離することができる。あるいは、スキーム4の反応プロセスにおいて、式XIIで示される化合物の代わりにスキーム6の式XVIIIで示される化合物を用いてもよい。R2におけるヒドロキシル基が保護された式XVIIIで示される化合物は、スキーム6により調製することができる。式XVIで示される化合物は、塩基NaOH等の存在下、適当な溶媒メタノールおよび水等中、適当な温度例えば0~50°Cにて、式XVで示される化合物と二炭酸ジ-t-ブチルとを反応させることにより、式XVで示される化合物[式中、mは1または2を示す]のアミノ基を保護基:PG3tertブトキシカルボニル等で保護することによって調製することができる。式XVIIで示される化合物は、塩基NaHまたはDIPEA等の存在下、適当な溶媒DMF等中、適当な温度例えば0~50°Cにて、式XVIで示される化合物と臭化ベンジルまたは塩化ベンジルとを反応させることにより、式XVIで示される化合物のヒドロキシル基を保護基:PG2ベンジル等で保護することにより調製することができる。式XIIで示される化合物のR2におけるヒドロキシル基がPG2で保護された式XVIIIで示される化合物は、PG3がtertブトキシカルボニルである場合、適当な溶媒1,4-ジオキサンまたはMeOH等中、適当な温度例えば0~50°Cにて、アミノ基を酸塩酸またはTFA等で脱保護することにより調製することができる。各反応工程に用いる条件は本明細書の実施例に記載する。あるいは、式Iで示される化合物は、スキーム7に示す方法により調製することができる:[式中、LG3およびLG4はそれぞれ独立に適当な脱離基クロロ、ブロモまたは-OSO2R3等を示し、ここでR3はC13アルキルまたは場合により置換されたアリールフェニル、4-メチルフェニルまたは246-トリメチルフェニル等である]式XXで示される化合物は、適当な溶媒14-ジオキサン、トルエンまたはDMF等中、触媒CuI等、添加剤NN-ジメチルジアミノエタンまたはtrans12-シクロヘキサンジアミン等および塩基Cs2CO3またはK2CO3等の存在下、適当な温度例えば50~150°Cにて、式IXXで示される化合物と式XIVで示される化合物とを反応させた後、酸塩酸水溶液等またはシリカゲルと反応させることにより調製することができる。式XXIで示される化合物は、酢酸およびピペリジンの存在下、適当な溶媒トルエン等中、適当な温度例えば50~150°Cにて、式XXで示される化合物と式IIIで示される化合物とを反応させることにより調製することができる。式XXIIで示される化合物は、触媒Pd/C等の存在下、水素雰囲気下1~20bar、適当な溶媒MeOH等中、適当な温度例えば20~100°Cにて、式XXIで示される化合物を還元した後、適当な溶媒MeOHまたはEtOH等中、適当な温度例えば50~100°Cにて、グアニジンまたは炭酸グアニジンと反応させることにより調製することができる。LG4がクロロを示す場合、式XXIIIで示される化合物は、適当な温度例えば50~150°Cにて、式XXIIで示される化合物をPOCl3と反応させることにより調製することができる。あるいは、式XXIIIで示される化合物は、式XXIIで示される化合物を、式R3SO2Cl[式中、R3はC13アルキルまたは場合により置換されたアリールフェニル、4-メチルフェニルまたは246-トリメチルフェニル等を示す]で示される化合物と反応させることにより調製することができる。LG4が-OSO2R3を示す場合、反応は、適当な溶媒DCMまたはTHF等中、適当な塩基NNNN-テトラメチル-13-プロパンジアミンまたはトリエチルアミン等の存在下、適当な温度例えば0~50°Cにて、行うことができる。式Iで示される化合物は、適当な溶媒ブタノール、プロピオニトリル、酢酸ブチルまたは14-ジオキサン等中、適当な温度例えば50~150°Cにて、場合により添加剤トリフルオロ酢酸またはDIPEA等の存在下、過剰量の式XIIのアミンと反応させることにより調製することができる。あるいは、反応は、マイクロウェーブにて、適当な温度例えば、50~200°Cにて行うことができる。反応式と付随する文章および後半の詳細な実験の項に詳細に記載した化合物は、式Iの化合物の調製のための有用な中間体であり、遊離の塩基または塩として単離することができる。したがって、本発明のさらなる態様および実施形態は、ここに記載した中間体またはその塩ここで、該中間体について記載した可変基はいずれも、その可変基に関して本明細書に記載した任意の基であってよいを提供する。R2基を有する中間体ここで、R2は、水素以外であるは、R2基が結合する炭素原子においてキラル中心を有する。さらなる実施形態では、S-立体化学配置を有する、そのような中間体の各々またはその塩を提供する。式II、III、V、VI、VIII、IX、XII、XIVおよびXVで示される化合物は知られている化合物であるか、または知られている化合物から、慣用の方法によってか、もしくは本明細書に記載したそれらの合成によって調製できる。当業者は、本発明のプロセスにおいて、反応試薬における特定の官能基ヒドロキシル基またはアミノ基等を保護基で保護する必要があり得ることを理解するであろう。したがって、式Iで示される化合物の調製では、適当な段階で、1またはそれ以上の保護基の脱離を行うこともある。官能基の保護と脱保護は、ProtectiveGroupsinOrganicChemistryeditedbyJWFMcOmiePlenumPressandProtectiveGroupsinOrganicSynthesis3rdeditionTWGreeneandPGMWutsWileyInterscienceに記載されている。本発明のさらなる態様によれば、製薬的に許容し得る希釈剤又は担体と組み合わせて、上に定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を含有する医薬組成物を提供する。医薬組成物は癌の処置に用いることができる。組成物は、経口投与のための、例えば錠剤またはカプセルとして;非経口注射静脈内、皮下、筋肉内、血管内または輸液を含むのための滅菌溶液、懸濁液またはエマルジョンとして;局所投与のための軟膏またはクリームとして;または直腸投与のための坐薬として適した形態であってよい。式Iで示される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩はまた、吸入用のエアスプレーとして投与することができる。エアスプレー例えば、スプレー、エアロゾル、ドライパウダー製剤等は、場合により、水性の溶液又は懸濁液として、あるいは、例えば液化したプロペラントを用いる加圧式定量吸入器などの加圧包装体から送達されるエアロゾルとして製剤化することができる。ドライパウダー製剤を用いてもよい。吸入に適したエアロゾルは、懸濁液または溶液のいずれであってもよく、一般的に式Iの化合物またはその製薬的に許容し得る塩、及び適当なプロペラントフッ化炭素、水素含有クロロフルオロカーボン又はそれらの混合物等を含有する。具体的には、ハイドロフルオロアルカン、具体的には1112-テトラフルオロエタン、ヘプタフルオロアルカンHFA1112333-ヘプタフルオロ-n-プロパン等またはそれらの混合物を含有し得る。エアロゾルは、必要に応じ、界面活性剤などの当業者によく知られているさらなる添加剤例えば、オレイン酸やレシチンおよび共溶媒例えば、エタノールなどを含有し得る。具体的には、エアロゾル調製物は、タービュヘイラーTMとして知られている吸入器を使用して送達することができる。経口投与のために、本発明の化合物をアジュバントまたは担体例えば、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール;デンプン、例えば、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプンまたはアミロペクチン、セルロース誘導体;結合剤例えば、ゼラチンまたはポリビニルピロリドン;および/または滑沢剤例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、ワックス、パラフィンなどと混合した後、錠剤に圧縮することができる。コーティング錠が必要な場合は、上記のように調製したコアを、例えば、アラビアゴム、ゼラチン、タルクおよび二酸化チタンを含有し得る濃縮糖溶液でコーティングすることができる。あるいは、揮発性の有機溶媒に溶解した適当なポリマーで錠剤を被覆してもよい。ソフトゼラチンカプセルの調製のために、本発明の化合物を、例えば、植物油又はポリエチレングリコールと混合することができる。ハードゼラチンカプセルは、錠剤について上に記載した賦形剤のいずれかを用いた化合物の顆粒を含有し得る。また、本発明の化合物の液体または半固体製剤をハードゼラチンカプセル内に充填してもよい。経口投与用の液体製剤は、シロップまたは懸濁液の形態であってもよく、例えば、糖、並びにエタノール、水、グリセロールおよびプロピレングリコールの混合物と本発明の化合物を含有する溶液であってよい。このような液体製剤は、場合により、着色料、香料、サッカリンおよび/または増粘剤としてカルボキシメチルセルロースまたは当業者に公知の他の添加剤を含有してもよい。式Iの化合物は、温血動物に対し、通常5~5000mg/m2体表面積、即ち、約0.1~100mg/kg、の範囲の単位用量にて投与し、これは通常、治療上有効な用量をもたらす。錠剤またはカプセルのような単位投与形態は、通常、例えば1~250mgの活性成分を含有する。好ましくは、1日あたり1~50mg/kgの範囲の投与量で用いられる。但し、この1日あたりの用量は、処置を受ける宿主、具体的な投与経路および処置される疾患の重症度によって変更する必要がある。したがって、至適用量は、個別の患者を処置する施術者が決定することができる。投与経路および投与レジメについてのさらなる情報については、ComprehensiveMedicinalChemistry第5巻253章PergamonPress1990を参照のこと。特段の記載がない限り、本明細書の文脈において、用語治療には予防も含まれる。用語治療のおよび治療上はこれに準じて解釈される。本明細書において用いられる、用語処置は、症状のいずれか、幾つかまたはすべてを全体的にまたは部分的に緩和するため、または背景にある病理の矯正もしくは穴埋めのために、疾患に対処するという、その通常の日常の意味である。本明細書において用いられる場合、用語予防は、その通常の日常の意味を有し、一次予防疾患の発症を防ぐおよび二次予防既に疾患が発症し、患者がその疾患の一時的または永続的な増悪もしくは悪化、またはその疾患に関連する新たな症状の発症が、それにより保護されるを包含する。本発明で定義される化合物は、invitroでのTLR7の効果的な活性化因子である。従って、本発明の化合物は、TLR7が単独でまたは部分的に介在する疾患または医学的状態の処置において潜在的に有用な薬剤であると期待される。例えば、本発明の化合物で、下記1~8に示す疾患や状態を処置することが可能である。1.呼吸器:以下を含む気道の閉塞性疾患:断続的および永続的のいずれの、あらゆる重症度の喘息気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、運動誘発性喘息、薬剤誘発性喘息アスピリンおよびNSAID誘発を含むおよび粉塵誘発性喘息を含む;および他の原因による気道過敏;慢性閉塞性肺疾患COPD;気管支炎感染性および好酸球性気管支炎を含む、肺気腫;気管支拡張症;嚢胞性線維症;サルコイドーシス;農夫肺および関連疾患;過敏性肺炎;肺線維症特発性線維化性肺胞炎、特発性間質性肺炎、抗新生物治療および慢性感染結核およびアスペルギルス症および他の真菌感染症を含むに伴う線維症を含む;肺移植の合併症;肺血管系の血管炎や血栓症、および肺高血圧症;気道の炎症や分泌状態に関連する慢性の咳および医原性の咳の処置を含む鎮咳作用;急性及び慢性鼻炎薬物性鼻炎および血管運動神経性鼻炎を含む;通年性および季節性アレルギー性鼻炎神経性鼻炎花粉症を含む;鼻ポリープ症;急性ウイルス感染一般的な風邪、および呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザウイルス、コロナウイルスSARSを含むおよびアデノウイルスに起因する感染を含む;2.皮膚:乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎や他の湿疹性皮膚疾患、および遅延型過敏反応;植物性皮膚炎および光線皮膚炎;感染性と非感染性の両方の、脂漏性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬、壊疽性膿皮症、皮膚サルコイド、円板状エリテマトーデス、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、じんましん、血管性浮腫、血管炎、中毒性紅斑、皮膚好酸球増加症、円形脱毛症、男性型脱毛症、スウィート症候群、ウェーバークリスチャン症候群、多形性紅斑、蜂巣炎;脂肪織炎、皮膚リンパ腫、非メラノーマ皮膚癌やその他の異形成病変;固定薬疹を含む薬剤誘発性疾患;3.目:眼瞼炎;通年性および春季アレルギー性結膜炎を含む結膜炎;虹彩炎;前部および後部ブドウ膜炎;脈絡膜炎;網膜を冒す、自己免疫性、変性または炎症性障害;交感神経眼炎を含む眼炎;サルコイドーシス;ウイルス、真菌、および細菌を含む感染症;4.泌尿生殖器:間質性腎炎や糸球体腎炎を含む腎炎;ネフローゼ症候群;急性および慢性間質性膀胱炎およびハナー潰瘍を含む膀胱炎;急性および慢性尿道炎;前立腺炎;精巣上体炎;卵巣炎や卵管炎;外陰腟炎;ペイロニー病;勃起障害男性および女性の両方;5.同種移植片拒絶反応:例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、骨髄、皮膚もしくは角膜の移植後の、または輸血後の急性および慢性の拒絶反応、または慢性の移植片対宿主病;6.関節リウマチ、過敏性腸症候群、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、橋本甲状腺炎、グレーブス病、アジソン病、糖尿病、特発性血小板減少性紫斑病、好酸球性筋膜炎、高IgE症候群、抗リン脂質症候群、およびセザリー症候群を含む、その他の自己免疫疾患およびアレルギー性疾患;7.癌:膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、膵臓臓、腸および大腸癌、胃癌、皮膚癌および脳腫瘍などの一般的な癌、骨髄白血病を含むおよびリンパ増殖系に影響を及ぼす悪性疾患ホジキンリンパ腫や非ホジキンリンパ腫等の処置転移性疾患および腫瘍再発、並びに腫瘍随伴症候群の予防および処置を含む;8.感染症:生殖器疣、尋常性疣贅、足底疣贅、B型肝炎、C型肝炎、単純ヘルペスウイルス、伝染性軟属腫、天然痘、ヒト免疫不全ウイルスHIV、ヒトパピローマウイルスHPV、サイトメガロウイルスCMV、水痘帯状疱疹ウイルスVZV、ライノウイルス、アデノウイルス、コロナウイルス、インフルエンザ、パラインフルエンザなどのウイルス疾患;結核、マイコバクテリウムアビウム、ハンセン病などの細菌性疾患;真菌症、クラミジア、カンジダ、アスペルギルス、クリプトコッカス髄膜炎、ニューモシスチスカリニ、クリプトスポリジウム症、ヒストプラズマ症、トキソプラズマ症、トリパノソーマ感染およびリーシュマニア症等の他の感染症。本明細書に記載する治療方法に関して、式Iの化合物は、哺乳動物、より具体的にはヒトに投与することが想定される。同様に、本明細書に記載する疾患または医学的状態の処置のための式Iの化合物の使用に関して、式Iの化合物は、哺乳動物、より具体的にはヒトに投与されることが想定される。したがって、本発明の別の態様によれば、医薬として使用するための、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。本発明のさらなる態様によれば、TLR7が介在する疾患の処置において使用するための、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。本発明の一実施形態では、該TLR7が介在する疾患は癌である。本発明のさらなる実施形態では、前記癌は、膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、子宮癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、卵巣癌、大腸癌、胃癌、皮膚癌、脳腫瘍、悪性骨髄腫およびリンパ増殖性腫瘍から選択される。本発明の一実施形態では、TLR7が介在する前記疾患は、喘息、COPD、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、B型肝炎、C型肝炎、HIV、HPV、細菌感染または皮膚病である。本発明のさらなる態様によれば、TLR7が介在する疾患の処置のための医薬の製造のための、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明の一実施形態では、該TLR7が介在する疾患は癌である。本発明のさらなる実施形態では、前記癌は、膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、子宮癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、卵巣癌、大腸癌、胃癌、皮膚癌、脳腫瘍、悪性骨髄腫およびリンパ増殖性腫瘍から選択される。本発明の一実施形態では、TLR7が介在する前記疾患は、喘息、COPD、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、B型肝炎、C型肝炎、HIV、HPV、細菌感染または皮膚病である。本発明のさらなる態様によれば、癌の処置のための医薬の製造のための、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明の一実施形態では、前記癌は、膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、子宮癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、卵巣癌、大腸癌、胃癌、皮膚癌、脳腫瘍、悪性骨髄腫およびリンパ増殖性腫瘍から選択される。本発明のさらなる態様によれば、喘息、COPD、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、B型肝炎、C型肝炎、HIV、HPV、細菌感染または皮膚病の処置のための医薬の製造のための、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明の一態様では、癌の処置において使用するための、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明のさらなる態様によれば、癌の処置のための、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用方法を提供する。したがって、ヒトなどの温血動物における癌を処置する方法であって、有効量の、本明細書において定義される式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を、そのような処置を必要とする温血動物に投与することを含んでなる、方法を提供する。本発明の一実施形態では、前記癌は、膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、子宮癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、卵巣癌、大腸癌、胃癌、皮膚癌、脳腫瘍、悪性骨髄腫およびリンパ増殖性腫瘍から選択される。本発明のさらなる態様によれば、喘息、COPD、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、B型肝炎、C型肝炎、HIV、HPV、細菌感染または皮膚病の処置のための、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用方法を提供する。本発明のさらなる態様によれば、TLR7の活性化が有益である疾患を患っているヒトを処置する方法であって、それを必要とする人に、治療上有効量の、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を投与する手段を含んでなる方法を提供する。本発明の一実施形態では、TLR7の活性化が有益である疾患は癌である。本発明のさらなる実施形態では、前記癌は、膀胱癌、頭頸部癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、子宮癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、卵巣癌、大腸癌、胃癌、皮膚癌、脳腫瘍、悪性骨髄腫およびリンパ増殖性腫瘍から選択される。本発明の一実施形態では、TLR7の活性化が有益である疾患は、喘息、COPD、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、B型肝炎、C型肝炎、HIV、HPV、細菌感染または皮膚病である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は膀胱癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は頭頸部癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は前立腺癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は乳癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は肺癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は子宮癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は膵臓癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は肝臓癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は腎臓癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は卵巣癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は大腸癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は胃癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は皮膚癌である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は脳腫瘍である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌は悪性骨髄腫である。本明細書に記載したいずれかの態様または実施形態では、癌はリンパ増殖性腫瘍である。上で定義した抗がん治療は、単独療法として適用するか、または本発明の化合物に加えて慣用の外科手術または放射線療法または化学療法を含んでいてよい。そのような化学療法には、下記カテゴリーの抗がん剤の1以上が含まれ得る:i内科的腫瘍学において用いられる、他の抗増殖/抗新生物薬およびそれらの組み合わせ、例えばアルキル化剤例えばシスプラチン、ミリプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、テモゾラミドおよびニトロソ尿素化合物;代謝拮抗薬例えば、ゲムシタビンや葉酸代謝拮抗剤、例えば5-フルオロウラシルおよびテガフールのようなフルオロピリミジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、およびヒドロキシ尿素;抗腫瘍抗生物質例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、アムルビシン、イダルビシン等のアントラサイクリン、マイトマイシンC、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン;有糸分裂阻害剤例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンなどのビンカアルカロイド、タキソールやタキソテールなどのタキソイド、およびポロキナーゼ阻害剤;およびトポイソメラーゼ阻害剤例えば、エトポシドおよびテニポシド等のエピポドフィロトキシン、アムサクリン、トポテカンおよびカンプトテシン;ii細胞増殖抑制剤、例えば抗エストロゲン例えばタモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン、抗アンドロゲン例えばビカルタミド、フルタミド、ニルタミドおよび酢酸シプロテロン、LHRHアンタゴニストまたはLHRHアゴニスト例えばゴセレリン、リュープロレリンおよびブセレリン、プロゲストーゲン例えば酢酸メゲストロール、アロマターゼ阻害剤例えばアナストロゾール、レトロゾール、ボラゾールおよびエキセメスタンおよび5α-レダクターゼの阻害剤例えばフィナステリド;iii抗侵襲剤[例えば、c-Srcキナーゼファミリー阻害剤、例えば4-6-クロロ-23-メチレンジオキシアニリノ-7-[2-4-メチルピペラジン-1-イルエトキシ]-5-テトラヒドロピラン-4-イルオキシキナゾリンAZD0530;国際特許出願WO01/94341、N-2-クロロ-6-メチルフェニル-2-{6-[4-2-ヒドロキシエチルピペラジン-1-イル]-2-メチルピリミジン-4-イルアミノ}チアゾール-5-カルボキサミドダサチニブ、BMS-354825;JMedChem20044766586661およびボスチニブSKI606、およびメタロプロテイナーゼ阻害剤、例えばマリマスタット、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクティベーター受容体機能の阻害剤またはヘパラナーゼに対する抗体];iv増殖因子機能の阻害剤:例えば、このような阻害剤としては、増殖因子抗体および増殖因子受容体抗体が挙げられる例えば抗erbB2抗体トラスツマブHerceptinTM、抗EGFR抗体パニツムマブ、抗erbB1抗体セツキシマブErbituxC225およびSternetalCriticalreviewsinoncologyhaematology2005Vol54pp1129に記載の増殖因子または増殖因子受容体抗体;また、このような阻害剤にはチロシンキナーゼ阻害剤が含まれる例えば、上皮細胞増殖因子ファミリーの阻害剤例えばEGFRファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、例えばN--7-メトキシ-6-キナゾリン-4-アミン、N--67-ビスキナゾリン-4-アミンおよび6-アクリルアミド-N--7--キナゾリン-4-アミン、erbB2チロシンキナーゼ阻害剤例えばラパチニブ、肝細胞増殖因子ファミリーの阻害剤、インスリン増殖因子ファミリーの阻害剤;血小板由来増殖因子ファミリーの阻害剤例えばイマチニブおよび/またはニロチニブAMN107、セリン/スレオニンキナーゼの阻害剤例えばRas/Rafシグナル伝達阻害剤、例えばファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばソラフェニブ、チピファルニブおよびロナファルニブ、MEKおよび/またはAKTキナーゼを介する細胞シグナル伝達の阻害剤、c-kit阻害剤、ablキナーゼ阻害剤、PI3キナーゼ阻害剤、Plt3キナーゼ阻害剤、CSF-1Rキナーゼ阻害剤、IGF受容体インシュリン様増殖因子キナーゼ阻害剤;オーロラキナーゼ阻害剤例えばAZD1152、PH739358、VX680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX528およびAX39459、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤例えばCDK2および/またはCDK4阻害剤およびBRAF阻害剤例えばベムラフェニブ;v抗血管新生剤、例えば血管内皮増殖因子の作用を阻害するもの[例えば抗血管内皮増殖因子抗体ベバシズマブAvastinTM、およびVEGF受容体チロシンキナーゼ阻害剤例えば、バンデタニブZD6474、バタラニブPTK787、スニチニブSU11248、アキシチニブAG013736、パゾパニブGW786034および4-4-フルオロ-2-メチルインドール-5-イルオキシ-6-メトキシ-7-3-ピロリジン-1-イルプロポキシキナゾリンAZD2171;WO00/47212の実施例240、例えば国際特許出願WO97/22596、WO97/30035、WO97/32856およびWO98/13354に記載の化合物および他のメカニズムにより作用する化合物例えばリノミド、インテグリンαvβ3機能およびアンジオスタチンの阻害剤];vi血管傷害剤、例えばコンブレタスタチンA4および国際特許出願WO99/02166、WO00/40529、WO00/41669、WO01/92224、WO02/04434およびWO02/08213に開示された化合物;viiエンドセリン受容体アンタゴニスト、例えばジボテンタンZD4054またはアトラセンタン;viiiアンチセンス治療、例えば上記の標的に対するもの、例えばISIS2503、抗rasアンチセンス;ix遺伝子治療アプローチ、例えば、異常遺伝子異常p53または異常BRCA1またはBRCA2等を置換するためのアプローチ、GDEPT遺伝子指向性酵素プロドラッグ治療アプローチ例えばシトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌ニトロレダクターゼ酵素を用いるもの、および化学療法または放射線療法に対する患者の耐容性を上げるためのアプローチ例えば多剤耐性遺伝子治療;およびx免疫治療アプローチ、例えば、患者の腫瘍細胞の免疫原性を増大させるためのexvivoおよびinvivoアプローチ例えばインターロイキン2、インターロイキン4または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子等のサイトカインでのトランスフェクション、T細胞アネルギーを低下させるためのアプローチ、トランスフェクト免疫細胞例えばサイトカイントランスフェクト樹状細胞を使用したアプローチ、サイトカイントランスフェクト腫瘍細胞株を使用したアプローチ、および抗イディオタイプ抗体を使用したアプローチ、免疫抑制細胞例えば、制御性T細胞、骨髄由来抑制細胞またはIDOインドールアミン23-デオキシゲナーゼ発現樹状細胞の機能を減少させるためのアプローチ、および腫瘍関連抗原由来のタンパク質またはペプチド例えばNYESO1、MAGE3、WT1またはHer2neuからなる癌ワクチンを用いたアプローチ。本発明のこの態様によれば、上で定義した式Iで示される化合物および癌の併用治療conjointtreatmentのための上で定義したさらなる抗腫瘍物質を含有する医薬品を提供する。本発明のこの態様によれば、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩および癌の併用治療のためのさらなる抗腫瘍物質を含有する医薬品を提供する。本発明のこの態様によれば、上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩と、上記i~ixに記載した任意の抗がん剤とを含んでなる、癌の処置における使用に適した組み合わせを提供する。したがって、本発明のさらなる態様では、上記i~ixに記載したものから選択される抗がん剤と組み合わせて、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。本明細書において、用語組み合わせを用いる場合、同時に、別個にまたは逐次的に投与することを意味すると理解される。本発明の一態様では、組み合わせは同時に投与することを意味する。本発明の別の態様では、組み合わせは別個に投与することを意味する。本発明のさらに別の態様では、組み合わせは逐次的に投与することを意味する。逐次的にまたは別個に投与する場合は、その組み合わせによる有益な効果が失われないうちに2番目の成分を投与する。本発明のさらなる態様によれば、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩と、上記i~ixに記載したものから選択される抗がん剤とを、製薬的に許容し得る希釈剤または担体とともに組み合わせて含んでなる医薬組成物を提供する。本発明のさらなる態様によれば、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩と、上記i~ixに記載したものから選択される抗がん剤とを、製薬的に許容し得る希釈剤または担体とともに組み合わせて含んでなる、癌の処置において使用するための医薬組成物を提供する。本発明の別の特徴によれば、温血動物ヒトなどにおける癌において使用するための医薬の製造における、上記i~ixに記載したものから選択される抗がん剤と組み合わせた、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明のさらに別の特徴によれば、温血動物ヒトなどにおける癌の処置において使用するための、上記i~ixに記載したものから選択される抗がん剤と組み合わせた、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。したがって、本発明のさらなる特徴では、有効量の式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を、上記i~ixに記載したものから選択される抗がん剤と組み合わせて、温血動物ヒトなどに投与することを含んでなる、そのような処置を必要とする該動物において癌を処置する方法を提供する。本発明のさらなる態様によれば、上記i~ixに記載したものから選択される抗がん剤と組み合わせて、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を含んでなるキットを提供する。本発明のさらなる態様によれば、以下を含んでなるキットを提供する:a式Iで示される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩の第一の単位投与形態;b上記i~ixに記載したものから選択される抗癌剤の第二の単位投与形態;およびc該第一および第二の単位投与形態を入れるための容器手段。本発明のさらなる態様によれば、さらなる抗癌剤と組み合わせて、式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を含んでなるキットを提供する。本発明のさらなる態様によれば、以下を含んでなるキットを提供する:a式Iで示される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩の第一の単位投与形態;b別の抗癌剤の第二の単位投与形態;およびc該第一および第二の単位投与形態を入れるための容器手段。本発明の一態様では、式Iの化合物はワクチンアジュバントとして有用であり得る。本発明のさらなる態様として、ワクチンアジュバントとして使用するための、上で定義した式Iで示される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩を提供する。本発明のさらなる態様として、疾患または状態の処置のためのワクチンの製造における、ワクチンアジュバントとしての、上で定義した式Iで示される化合物、またはその製薬的に許容し得る塩の使用を提供する。本発明はさらに、疾患または状態を処置またはそのリスクを減少させる方法であって、治療上有効量のワクチンおよび上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を、それを必要とする患者に投与することを含んでなる方法を提供する。本発明はさらに、患者におけるワクチンに対する応答を増大する方法であって、治療上有効量のワクチンおよび上で定義した式Iで示される化合物またはその製薬的に許容し得る塩を、それを必要とする患者に投与することを含んでなる方法を提供する。以下の実施例により本発明を説明するが、特に記載しない限り、記載した材料はいずれも商業的に入手可能である。rtは室温、即ち17~28°Cの範囲、通常は20°Cを意味する。エレクトロスプレーイオン化質量分析スペクトルは、WatersMicromassZQTM質量分析器、WatersWaters2790AllianceTMセパレーションモジュール、およびImtaktCadenzaCDC18TMカラム以下のグラジェントで溶出:ABおよびC、00~01分A95B2およびC3、01~31分直線グラジェントA95B2およびC3~A1B96およびC3、31~35分A1B96およびC3を用いて記録した。プロトン核磁気共鳴。ii2-アミノ-5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-6-メチルピリミジン-4-オール工程iで得た生成物13.0g,41.4mmolのMeOH100mL溶液に、炭酸グアニジン16.2g,90.0mmolを加えた。混合物を還流温度で12時間攪拌した。室温に冷却後、溶媒を留去して溶液の体積を半分にした。生じた沈殿を濾過により回収し、水とMeOHで洗浄して副題の化合物を白色の固形物として得た4.10g,12.8mmol,31;1HNMR710700678640383348192LCMSmz324MH]iii2-アミノ-5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-6-メチルピリミジン-4-イル246-トリメチルベンゼンスルホネート工程iiで得た生成物1.50g,4.64mmolのTHF20mL溶液を攪拌し、室温にてNNNN-テトラメチル-13-プロパンジアミン1.17mL,7.00mmolおよび2-メシチレンスルホニルクロリド1.53g,7.00mmolを加えた。12時間攪拌後、水を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をジエチルエーテル/ヘキサン1/4で洗浄して副題の化合物を白色の固形物として得た2.00g,3.94mmol,85;1HNMR695691669494381376256232229LCMSmz506MH]iv5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-N4-ブチル-6-メチルピリミジン-24-ジアミン工程iiiで得た生成物0.250g,0.494mmolのプロピオニトリル溶液に、ブチルアミン0.240mL,2.47mmolおよびトリフルオロ酢酸0.0740mL,1.00mmolを加えた。混合物を110°Cに加熱し、7時間攪拌した。室温に冷却後、飽和NaHCO3水溶液を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して副題の化合物を白色の固形物として得た0.144g,0.381mmol,77;LCMSmz393MH]v1-4-{[2-アミノ-4-ブチルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン工程ivで得た生成物0.144g,0.380mmolの14-ジオキサン2mL溶液に、CuI72.0mg,0.379mmol、NN-ジメチルジアミノエタン0.0820mL,0.763mmol、4-メチルピペラジン-2-オン87.0mg,0.760mmolおよびCs2CO3247mg,0.760mmolを加えた。混合物を100°Cに加熱し、10時間攪拌した。冷却後、水を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を淡黄色の固形物として得た120mg,0.291mmol,77;1HNMR690686672476387368365363332327326278275239227145137126119085LCMSmz413MH]。実施例2:1-4-{[2-アミノ-4-メチル-6-ペンチルアミノピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン標題の化合物は以下の工程により製造することができる:i5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-6-メチル-N4-ペンチルピリミジン-24-ジアミン実施例1工程iiiで得た生成物1.51g,3.00mmolを用い、実施例1工程ivの方法ブチルアミンの代わりにペンチルアミン1.05mL,9.04mmolを使用により製造し、副題の化合物を淡黄色の固体として得た1.00g,2.54mmol,85;LCMSmz393MH]ii1-4-{[2-アミノ-4-メチル-6-ペンチルアミノピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン工程iで得た生成物60.0mg,0.153mmolを用い、実施例1工程vの方法により製造して標題の化合物を無色の油状物質として得た23.7mg,0.0556mmol,36;1HNMR692688673499388367363364333327326279276239230148141129117085LCMSmz427MH]実施例3:S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン標題の化合物は以下の工程により製造することができるiS-3-[2-アミノ-5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-6-メチルピリミジン-4-イルアミノ]ヘキサン-1-オール実施例1工程iiiで得た生成物0.770g,1.52mmolを用い、実施例1工程ivの方法ブチルアミンの代わりにS-3-アミノヘキサン-1-オール0.890g,7.60mmolを使用により副題の化合物を白色のアモルファス状の固体として得た0.54g,1.28mmol,84;LCMSmz423MH]iiS-5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-N4-[1-tertブチルジメチルシリルオキシヘキサン-3-イル]-6-メチルピリミジン-24-ジアミン工程iで得た生成物0.430g,1.00mmolのDMF5mL溶液に、トリエチルアミン0.690mL,5.00mmolおよびtertブチルジメチルシリルクロリド0.375g,2.50mmolを加えた。室温で10時間攪拌した後、飽和NaHCO3水溶液を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して副題の化合物を無色の油状物質として得た0.380g,0.707mmol,71;LCMSmz537MH]iiiS-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン工程iiで得た生成物126mg,0.240mmolの14-ジオキサン1mL溶液に、CuI46.0mg,0.240mmol、NN-ジメチルジアミノエタン52.0μL,0.480mmol、4-メチルピペラジン-2-オン55.0mg,0.480mmolおよびCs2CO3234mg,0.720mmolを加えた。混合物を100°Cに加熱し、10時間攪拌した。冷却後、水を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をさらに精製することなく次の反応に用いた。粗製の残渣のTHF1.0mL溶液に、フッ化テトラ-n-ブチルアンモニウム1.0mL,THF中1M溶液を加え、混合物を室温で攪拌した。5時間後、水を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を白色のアモルファス状の固形物として得た19.6mg,0.0430mmol,18;1HNMR694686675507490451413388369365367331326325278276240235180176144111081LCMSmz457MH]実施例3:別の製造方法:S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン標題の化合物は以下の工程により製造することができる:i2-メトキシ-4-4-メチル-2-オキソピペラジン-1-イルベンズアルデヒド4-ブロモ-2-メトキシベンズアルデヒド10.0g,46.5mmolの14-ジオキサン140mL溶液に、CuI8.84g,46.5mmol、NN-ジメチルジアミノエタン10.0mL,93.0mmol、4-メチルピペラジン-2-オン7.95g,69.8mmolおよびCs2CO345.0g,139mmolを加えた。混合物を100°Cに加熱し5時間攪拌した。冷却後、混合物を濾過し、溶液を1規定塩酸でpH2~3に調整した。室温で3時間攪拌後、混合物を飽和NaHCO3水溶液で中和し、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、副題の化合物を白色の固形物として得た10.7g,43.1mmol,93;1HNMR104786711692392376330282242LCMSmz249MH]iiメチル2-2-メトキシ-4-4-メチル-2-オキソピペラジン-1-イルベンジリデン-3-オキソブタノエート工程iで得た生成物10.7g,43.1mmolのトルエン溶液に、アセト酢酸メチル5.90g,51.0mmol、酢酸0.980mL,17.2mmolおよびピペリジン0.430mL,4.31mmolを加えた。得られた混合物を20時間加熱還流した。冷却後、飽和NaHCO3水溶液を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して副題の化合物を淡黄色の油状物質として得た[E-およびZ-異性体の混合物]14.0g,40.5mmol,94;LCMSmz347MH]。iiiメチル2-2-メトキシ-4-4-メチル-2-オキソピペラジン-1-イルベンジル-3-オキソブタノエート工程iiで得た生成物14.0g,40.5mmolのメタノール300mL溶液に、10Pd-C4.0gを加え、H21atm雰囲気下、室温で攪拌した。12時間後、反応混合物を珪藻土CeliteTMで濾過し、溶媒を留去して副題の化合物を淡黄色の油状物質として得た14.0g,39.2mmol,99。LCMSmz349MH]。iv1-4-2-アミノ-4-ヒドロキシ-6-メチルピリミジン-5-イルメチル-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン工程iiiで得た生成物14.0g,39.2mmolのメタノール100mL溶液に、炭酸グアニジン9.90g,55.0mmolを加えた。混合物を還流温度にて6時間攪拌した。室温に冷却後、混合物を濾過し、溶媒を留去した。粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して副題の化合物を白色の固形物として得た6.16g,17.3mmol,43;1HNMR694671666379365325277240198LCMSmz358MH]v2-アミノ-5-2-メトキシ-4-4-メチル-2-オキソピペラジン-1-イルベンジル-6-メチルピリミジン-4-イル246-トリメチルベンゼンスルホネート工程ivで得た生成物2.50g,7.00mmolのTHF30mL攪拌溶液に、室温にてNNNN-テトラメチル-13-プロパンジアミン1.75mL,10.5mmolおよび2-メシチレンスルホニルクロリド2.30g,10.5mmolを加えた。12時間攪拌後、水を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して副題の化合物を白色のアモルファス状の固形物として得た3.60g,6.68mmol,95;1HNMR695685679668380370330282258243231229LCMSmz540MH]。viS-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン工程vで得た生成物1.90g,3.53mmolのプロピオニトリル溶液に、S-3-アミノヘキサン-1-オール1.23g,10.5mmolおよびトリフルオロ酢酸0.259mL,3.5mmolを加えた。混合物を110°Cに加熱し、9時間攪拌した。室温に冷却後、飽和NaHCO3水溶液を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を白色のアモルファス状の固形物として得た1.10g,2.41mmol,68;1HNMR694686675507490451413388369365367331326325278276240235180176144111081LCMSmz457MH]実施例4:S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシペンタン-2-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン標題の化合物は以下に記載する工程によって製造することができるiS-2-[2-アミノ-5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-6-メチルピリミジン-4-イルアミノ]ペンタン-1-オール実施例1工程iiiで得た生成物1.00g,1.98mmolを用い、実施例1工程ivの方法ブチルアミンの代わりにS-2-アミノペンタン-1-オール1.02g,9.90mmolを使用により製造して副題の化合物を無色の油状物質として得た0.790g,1.93mmol,98;LCMSmz410MH]iiS-5-4-ブロモ-2-メトキシベンジル-N4-[1-tertブチルジメチルシリルオキシペンタン-2-イル]-6-メチルピリミジン-24-ジアミン工程iで得た生成物131mg,0.320mmolを用い、実施例3工程iiの方法により副題の化合物を無色の油状物質として得た27mg,0.0517mmol,16;LCMSmz523MH]iiiS-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシペンタン-2-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニル-4-メチルピペラジン-2-オン工程iiで得た生成物27.0mg,0.0517mmolを用い、実施例3工程iiiの方法により製造して標題の化合物を無色の油状物質として得た5.70mg,0.0129mmol,25;1HNMR698682675584558412388374373365345340325281277246240147120086LCMSmz443MH]実施例5:S-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニルピペラジン-2-オン標題の化合物は以下に記載する工程によって製造することができる:iStertブチル4-4-2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イルメチル-3-メトキシフェニル-3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート実施例3工程iiで得た生成物80.0mg,0.149mmolを用い、実施例3工程iiiの方法4-メチルピペラジン-2-オンの代わりにtertブチル3-オキソピペラジン-1-カルボキシレート40.0mg,0.200mmolを使用により製造して副題の化合物を無色の油状物質として得た70mg,0.129mmol,86;1HNMR695686674491454424413390380367333234181111150081LCMSmz543MH]iiS-1-4-{[2-アミノ-4-1-ヒドロキシヘキサン-3-イルアミノ-6-メチルピリミジン-5-イル]メチル}-3-メトキシフェニルピペラジン-2-オンクロロホルム0.8mL中の工程iで得た生成物67mg,0.124mmolの溶液に、塩化水素0.8mL,4規定14-ジオキサン溶液を加え、混合物を室温で攪拌した。3時間後、10K2CO3水溶液を加え、得られた混合物をEtOAcで抽出した。集めた有機溶液を飽和食塩水で洗浄した後、乾燥Na2SO4した。溶媒を減圧留去した後、粗製の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を無色の油状物質として得た22.0mg,0.0498mmol,40;1HNMR694687675490467455411389368360340319230191177144109079LCMSmz443MH]生物学的アッセイinvitroでTLR7を活性化する化合物の能力を、以下に記載するヒトTLR7アッセイを用いて評価した。ヒトTLR7アッセイ組み換えヒトTLR7を、既にpNiFty2SEAPレポータープラスミドを安定に発現しているHEK293細胞株に安定に発現させた;レポーター遺伝子の組込みは、抗生物質ゼオシンでの選択により維持した。ヒトTLR7の最も一般的な変異配列を、哺乳動物細胞発現ベクターpUNOにクローン化し、このレポーター細胞株にトランスフェクトした。抗生物質ブラストサイジンを用いて、安定に発現するトランスフェクタントを選択した。このレポーター細胞株では、分泌アルカリホスファターゼの発現が、近位ELAM-1プロモーターと組み合わさった5個のNFκB部位を含んでなるNFκB/ELAM-1複合プロモーターにより制御される。TLRシグナル伝達はNFκBの転位およびプロモーターの活性化を引き起こし、SEAP遺伝子の発現をもたらす。TLR7特異的活性化は、01ジメチルスルホキシド存在下、37°Cにて標準化合物と一晩インキュベーション後、生成したSEAPのレベルの測定により評価した。化合物による濃度依存的なSEAP産生誘導を、その化合物についてSEAPの最大レベルの半分をもたらす化合物の濃度として示した。本発明の化合物のTLR7活性をヒトTLR7アッセイを用いて評価し、その結果を以下の表1に示す各化合物のTLR7活性化の程度をpEC50値として示す。ヒトTLR8アッセイTLR8NFκBSEAPorterTMHEK293細胞株は、NF-κB応答エレメントの転写制御下で全長ヒトTLR8と分泌型アルカリホスファターゼSEAPレポーター遺伝子を発現する安定なコトランスフェクト細胞株である。この細胞株でのTLR8発現はフローサイトメトリーにより試験済みである。抗生物質ブラストサイジンおよびジェネティシンを使用して、安定に発現するトランスフェクタントを選択した。TLRシグナル伝達はNFκBの転位およびプロモーターの活性化を引き起こし、SEAP遺伝子の発現をもたらす。TLR8特異的活性化は、0.1v/vジメチルスルホキシドDMSO存在下、37°Cにて標準化合物と一晩インキュベーション後、生成したSEAPのレベルの測定により評価した。化合物による濃度依存的なSEAP産生誘導を、その化合物についてSEAPの最大レベルの半分をもたらす化合物の濃度として示したpEC50。本発明の化合物のTLR8活性を、ヒトTLR8アッセイを用いて評価し、その結果を以下の表2に示す各化合物のTLR8活性化の程度をpEC50値として示す。hERGhumanetheragogorelatedgene解析-方法1hERGカリウム電流を、hERGを安定に発現するChinesehamsterovaryK1細胞で測定した。実験は、自動化されたプラナーパッチクランプシステムQPatchHTSophionBioscienceASを用いて行った。QPatchアッセイソフトウェアを用いて、ギガシール形成のための圧力を与えホールセルパッチクランプの構成を確立した。パッチクランプ実験を電圧クランプモードで行い、個々の細胞からホールセル電流を記録した。下記の刺激プロトコルを適用してhERGカリウムチャンネルに対する化合物の効果を調べた。膜電位を-80mVに保持し、-50mV20ミリ秒間のパルスでベースラインを定義後、繰り返し15秒毎5秒間20mVに脱分極させた後、5秒間-50mVの脱分極ステップで末尾電流の振幅を評価した。実験は室温22±2°Cで行った。化合物の効果は、累積的に濃度を増大させた4種類の濃度から決定し、ブロックされた電流の百分率として計算した。データポイントをHillの式に当てはめ、50阻害濃度を算出した。試験溶液は下記を含有する:細胞外溶液mM:CaCl22mM、MgCl21mM、HEPES10mM、KCl4mM、NaCl145mMおよびグルコース10mM;および細胞内溶液mM:CaCl25.4mM、MgCl21.8mM、HEPES10mM、KOH31mM、EGTA10mM、KCl120mMおよびATP4mM結果は、以下の表3に示す。hERG解析-方法2細胞培養PerssonCarlssonDuker及びJacobson2005に記載されるhERGを発現するチャイニーズハムスター卵巣K1CHO細胞を、L-グルタミン、10ウシ胎仔血清FCS及び06mg/mlハイグロマイシンすべてSigmaAldrichより入手可能を含むF-12Ham培地にて、加湿環境5CO2下37°Cでセミコンフルエンスまで増殖させた。使用前に、単層を、予め温めておいた37°CVersene1:5000Invitrogenのアリコート3mLを用いて洗浄した。この溶液を吸引した後、さらにVersene1:50002mlとともにインキュベーター中37°Cで6分間フラスコをインキュベートした。次いで、軽くタッピングすることによって、フラスコの底から細胞を脱離させ、カルシウム09mM及びマグネシウム05mMPBS;Invitrogenを含むダルベッコリン酸緩衝食塩水10mLをフラスコに添加し、15mLの遠心分離管に吸引後遠心分離50g、4分間した。上清を捨て、ペレットをPBS3mLへ静かに再懸濁した。細胞懸濁液のアリコート05mLを取り、トリパンブルー排除に基づく生細胞数を、自動化したリーダーCedexInnovatisで測定し、細胞再懸濁液の容量をPBSで調整して所望の最終細胞濃度が得られるようにした。アッセイのこの時点での細胞濃度が、このパラメータに言及するときに引用されるものである。IonWorksTMHTでの電圧オフセットの調整に使用されるCHOKv15細胞を、使用のために同様に維持及び調製した。電気生理学この装置の原理及び操作は、SchroederNeagleTreziseWorley2003に記載されている。簡単に言えば、384ウェルプレートPatchPlateTMをベースとし、吸引を用いて、2つの独立した液体チャンバを隔てる小さなホール上に細胞を配置および保持することにより、各ウェルにおいて記録を行うというものである。シーリングが起こったら、PatchPlateTM下側の溶液を、アムホテリシンBを含むものに変える。これにより、各ウェルのホールを覆う細胞膜のパッチを透過処理し、実際に、穿孔ホールセルパッチクランプ記録が可能になる。EssenInstrument製のβ-testIonWorksTMHTを用いた。この装置には溶液を温める機能がないので、次の通りに室温約21°Cで操作した。緩衝液のリザーバにPBS4mLをロードし、細胞のリザーバに、上記のCHO-hERG細胞懸濁液をロードした。試験化合物最終試験濃度の3倍の濃度を含む96ウェルプレートV底、GreinerBiooneを、プレート1に置き、PatchPlateTMを、PatchPlateTMステーションに固定した。各化合物プレートは、カラムを12列に並べ、10列を8点の濃度-効果曲線作成用とし、残りの2列に賦形剤最終濃度033のDMSOを加えて、アッセイベースラインを定義し、シサプリドの過最大遮断濃度最終濃度10μMを100阻害レベルと定義した。次いで、IonWorksTMHTのフルイディクスヘッドF-ヘッドが、PatchPlateTMの各ウェルにPBS35μLを添加し、そしてその下側を、次の組成単位はmMを有する内部溶液が灌流する:K-グルコネート100部、KCl40部、MgCl232部、EGTA3部及びHEPES5部;pH725~730、10MKOHを使用。プライミング及び脱泡後、エレクトロニクスヘッドE-ヘッドが、PatchPlateTMの周りを移動し、ホール試験を行ったすなわち、各ウェルのホールが開いたか否かを判定するために電圧パルスを加えた。次いでF-ヘッドが、上記の細胞懸濁液35μLをPatchPlateTMの各ウェルに分配し、200秒間で細胞を各ウェルのホールに到達させシールした。この後、E-ヘッドがPatchPlateTMの周りを移動し、各ウェルのシール抵抗を測定する。次に、PatchPlateTMの下側の溶液を、次の組成単位はmMを有するアクセス溶液に交換する:KCl140部、EGTA1部、MgCl21部及びHEPES20部;10MKOHを使用してpH725~730に調整並びに100μg/mLアムホテリシンBSigmaAldrich。9分間でパッチ穿孔を発生させた後、E-ヘッドがPatchPlateTMの48ウェルの周りを移動すると同時にプレ-化合物hERG電流測定値を得る。次いでF-ヘッドが、化合物プレートの各ウェルから溶液35μlをPatchPlateTM上の4つのウェルに添加する最終DMSO濃度は、どのウェルも033であった。これは、化合物のキャリーオーバーの影響を最小化するため、最も薄い化合物プレートのウェルから最も濃い化合物プレートのウェルへと移動するようにして行われる。約35分間のインキュベーション後、ポスト-化合物hERG電流測定値を得るため、E-ヘッドがPatchPlateTMのすべての384ウェルを移動する。このようにして、判定基準が十分な割合のウェルで達成される場合には以下を参照のこと、試験化合物の各濃度の効果は1~4の細胞からの記録に基づいた、非累積的な濃度効果曲線を作成することができる。20秒間-70mVに保持、-60mVの160ミリ秒間ステップリークの概算を得るため、-70mVに戻す100ミリ秒間ステップ、40mVの1秒間ステップ、-30mVの2秒間ステップ、最後に-70mVの500ミリ秒間ステップ、からなる単一の電圧パルスによって、プレ-及びポスト-化合物hERG電流を誘発する。プレ-化合物電圧パルスとポスト-化合物電圧パルスの間に、膜電位のクランピングはない。電圧パルスプロトコルの開始時の10mVのステップの間に誘発された電流の概算に基づいて、リーク電流を差し引く。IonWorksTMHTの電圧オフセットは、2つの方法のうちのいずれかで調整した。化合物の効力を測定する場合は、脱分極電圧ランプをCHO-Kv15細胞に適用し、電流トレースの屈曲点が存在する電圧すなわち、ランププロトコルを用いてチャネル活性化が見られる点に注目する。これが生じる電圧は、慣用の電気生理学において同じ電圧コマンドを用いて測定済みであり、-15mVであることが分かっているデータは示さずので、オフセット電位は、この値を基準点として用いてIonWorksTMHTソフトウェアに入力することができた。hERGの基本的な電気生理学的性質を決定するとき、IonWorksTMHTにおいてhERG末尾電流逆転電位を測定し、これを、慣用の電気生理学で分かっている値-82mVと比較し、次いでIonWorksTMHTソフトウェアにおいて必要なオフセット調整を行うことによって、すべてのオフセットを調整する。電流シグナルは、25kHzでサンプリングする。-70mVベースライン電流での最初の保持期間の間に電流の40ミリ秒平均をとり、末尾電流レスポンスのピークからこれを差し引くことによって、リークを差し引いたトレースからプレ-及びポスト-スキャンhERG電流量をIonWorksTMHTソフトウェアにより自動的に測定した。各ウェルで誘発された電流の判定基準は、次の通りである:プレ-スキャンシール抵抗>60MΩ、プレ-スキャンhERGテール電流振幅>150pA;ポスト-スキャンシール抵抗>60MΩ。ポスト-スキャンhERG電流を各ウェルのそれぞれのプレ-スキャンhERG電流で割ることによって、hERG電流の阻害程度を評価できる。参考文献:ReferencesPerssonFetalJCardiovascElectrophysiol16329341およびSchroederKetalJBiomolScreen85064結果を表3に示す。PAMPA解析試験溶液の調製ドナー:SystemSolutionConcentrate25mLおよびDMSO50mL最終濃度5をmilliQ水で1Lに希釈し、NaOHでpH5.0または7.4に調整した。化合物溶液5μL,DMSO中の10mM溶液を上記で調製したシステム溶液1mLに加え、濾過した。アクセプター:AcceptorSinkBuffer透過実験化合物溶液200μLをドナープレートに加えた。GITLipid04μLをアクセプタープレートに加えた。AcceptorSinkBuffer200μLをアクセプタープレートに加えた。ドナーおよびアクセプタープレートを重ね合わせた。加湿条件下で4時間インキュベーションした後、アクセプターおよびドナーの両プレートの溶液における試験化合物の濃度をUVプレートリーダー190~500nmで測定した。透過係数Pe10-6cm/secを以下に示す数式により計算した。結果を表4に示す。"