"ヒト腫瘍壊死因子αTNF-αに結合することが可能な抗原結合ドメインを含むヒト化結合タンパク質であって、抗原結合ドメインが配列番号22の残基31-35;配列番号22の残基50-65;配列番号22の残基98-106;配列番号23の残基24-34;配列番号23の50-56または配列番号23の残基89-97のアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含み、ヒトアクセプターフレームワークを含む、結合タンパク質。少なくとも3つのCDRを含む、請求項1の結合タンパク質。少なくとも3つのCDRが、a配列番号22の残基31-35;配列番号22の残基50-65;および配列番号22の残基98-106ならびにb配列番号23の残基24-34;配列番号23の残基50-56;または配列番号23の残基89-97である可変ドメインCDRの組を含む、請求項2の結合タンパク質。抗原結合ドメインが、配列番号22の残基31-35;配列番号22の残基50-65;配列番号22の残基98-106;配列番号23の残基24-34;配列番号23の50-56;および配列番号23の残基89-97を含むアミノ酸配列を含む、請求項3の結合タンパク質。抗原結合ドメインがVH領域を含む、請求項1の結合タンパク質。VH領域が配列番号24、25、28、29、30、31、32または33のアミノ酸配列を含む、請求項5の結合タンパク質。抗原結合ドメインがVL領域を含む、請求項1の結合タンパク質。VL領域アミノ酸配列が配列番号26、27、34、35および36である、請求項7の結合タンパク質。抗原結合ドメインがVH領域およびVL領域を含む、請求項7の結合タンパク質。VH領域が配列番号24、25、28、29、30、31、32または33のアミノ酸配列を含み、ならびにVL領域が配列番号26、27、34、35および36のアミノ酸配列を含む、請求項9の結合タンパク質。ヒトアクセプターフレームワークが、配列番号6-21のうちの少なくとも1つのアミノ酸配列を含む、請求項1の結合タンパク質。ヒトアクセプターフレームワークが、配列番号9、10、11、12、15、16、17または21のアミノ酸配列を含む、請求項11の結合タンパク質。ヒトアクセプターフレームワークが少なくとも1つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記フレームワークのアミノ酸配列が前記ヒトアクセプターフレームワークの配列に対して少なくとも65同一であり、ならびに前記ヒトアクセプターフレームワークに対して同一である少なくとも70アミノ酸残基を含む、請求項11または12の結合タンパク質。ヒトアクセプターフレームワークが、CDRに隣接している残基;グリコシル化部位残基;希少残基;ヒトTNF-αと相互作用することができる残基;CDRと相互作用することができる残基;カノニカル残基;重鎖可変領域と軽鎖可変領域間の接触残基;バーニアゾーン内の残基;Chothia定義の可変重鎖CDR1またはKabat定義の第一の重鎖フレームワーク間にまたがる領域中の残基であるキー残基に少なくとも1つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含む、請求項13の結合タンパク質。キー残基が、H1、H12、H24、H27、H29、H37、H48、H49、H67、H71、H73、H76、H78、L13、L43、L58、L70またはL80である、請求項14の結合タンパク質。VH突然変異が、Q1E、I12V、A24V、G27F、I29L、V29F、F29L、I37V、I48L、V48L、S49G、V67L、F67L、V71K、R71K、T73N、N76S、L78IまたはF78Iである、請求項15の結合タンパク質。VL突然変異が、V13L、A43S、I58V、E70DまたはS80Pである、請求項15の結合タンパク質。配列番号24および配列番号26;配列番号24および配列番号27;配列番号25および配列番号26;配列番号25または配列番号27のアミノ酸配列を有する2つの可変ドメインを含む、請求項1の結合タンパク質。TNF-αの生物学的機能を調節する、請求項1の結合タンパク質。TNF-αを中和する、請求項1の結合タンパク質。TNF-αのその受容体に結合する能力を減少させる、請求項1の結合タンパク質。プロヒトTNF-α、成熟ヒトTNF-αまたは切断型ヒトTNF-αのその受容体に結合する能力を減少させる、請求項21の結合タンパク質。TNF依存性サイトカイン産生;TNF依存性細胞死滅;TNF依存性炎症;TNF依存性骨浸食およびTNF依存性軟骨損傷のうちの1つ以上を減少させる、請求項1の結合タンパク質。表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約102M-1s-1;少なくとも約103M-1s-1;少なくとも約104M-1s-1;少なくとも約105M-1s-1;または少なくとも約106M-1s-1の結合速度定数Konを有する、請求項1の結合タンパク質。表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約10-3s-1;最大約10-4s-1;最大約10-5s-1;または最大約10-6s-1の解離速度定数Koffを有する、請求項1の結合タンパク質。最大約10-7M;最大約10-8M;最大約10-9M;最大約10-10M;最大約10-11M;最大約10-12M;または最大10-13Mの解離定数KDを有する、請求項1の結合タンパク質。ヒトIgM定常ドメイン、ヒトIgG1定常ドメイン、ヒトIgG2定常ドメイン、ヒトIgG3定常ドメイン、ヒトIgG4定常ドメイン、ヒトIgA定常ドメインまたはヒトIgE定常ドメインの重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項1の結合タンパク質。重鎖免疫グロブリン定常領域ドメインがヒトIgG1定常ドメインである、請求項27の結合タンパク質。ヒトIgκ定常ドメインまたはヒトIgλ定常ドメインをさらに含む、請求項1または27の結合タンパク質。ヒトIgG1定常ドメインが、配列番号2または配列番号3のアミノ酸配列を含む、請求項28の結合タンパク質。軽鎖免疫グロブリン定常領域ドメインが、配列番号4のアミノ酸配列を含むヒトIgκ定常ドメインである、または配列番号5のアミノ酸配列を含むヒトIgλ定常ドメインである、請求項29の結合タンパク質。ヒトTNF-αに結合することが可能な結合タンパク質であって、配列番号2または配列番号3のアミノ酸配列を有するIg定常重領域;配列番号4または配列番号5のアミノ酸配列を有するIg定常軽領域;配列番号24、25、28、29、30、31、32または33のアミノ酸配列を有するIg可変重領域;および配列番号26、27、34、35または36のアミノ酸配列を有するIg可変軽領域を含む、結合タンパク質。免疫グロブリン分子、Fv、ジスルフィド連結されたFv、モノクローナル抗体、scFv、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、CDR移植された抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異的抗体、Fab、二重特異的抗体、Fab’断片、二特異的抗体、Fab’2断片、DVD-Ig商標、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された2つのFab断片を含む二価断片、VHおよびCH1ドメインからなるFd断片、抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、dAb断片、単離された相補性決定領域CDRまたは単一鎖抗体である、請求項1の結合タンパク質。結晶の形態である、請求項1の結合タンパク質を含む結晶化された結合タンパク質。結晶が担体を含まない医薬徐放結晶である、請求項34の結晶化された結合タンパク質。結合タンパク質が、インビボにおいて、前記結合タンパク質の可溶性対応物より長い半減期を有する、請求項34の結晶化された結合タンパク質。a請求項1または34の結合タンパク質および成分を含む製剤ならびにb少なくとも1つのポリマー担体を含む、TNF-α結合タンパク質の放出のための組成物。成分が、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項37の組成物。ポリマー担体が、ポリアクリル酸、ポリシアノアクリラート、ポリアミノ酸、ポリ無水物、ポリデプシペプチド、ポリエステル、ポリ乳酸、ポリ乳酸グリコール酸共重合体、ポリb-ヒドロキシブチラート、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン;ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリオルガノホスファゼン、ポリオルトエステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸-アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化された多糖ならびにこれらの混合物および共重合体からなる群の1つ以上から選択されるポリマーである、請求項37の組成物。請求項1の結合タンパク質およびリンカーまたは免疫グロブリン定常ドメインを含むTNF-α結合タンパク質構築物。結合タンパク質がヒトグリコシル化パターンを有する、請求項40のTNF-α結合タンパク質構築物。結晶化されたTNF-α結合タンパク質構築物である、請求項40のTNF-α結合タンパク質構築物。結晶化されたTNF-α結合タンパク質構築物が、無担体医薬徐放結晶化TNF-α結合タンパク質構築物である、請求項42のTNF-α結合タンパク質構築物。前記結合タンパク質構築物の可溶性相当物より大きなインビボ半減期を有する、請求項40のTNF-α結合タンパク質構築物。請求項40のTNF-α結合タンパク質構築物を含み、免疫接着分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤をさらに含む、TNF-α結合タンパク質連結体。作用物質が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである造影剤である、請求項45の結合タンパク質連結体。放射性標識が、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Hoおよび153Smである、請求項46のTNF-α結合タンパク質連結体。作用物質が、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である治療剤または細胞毒性剤である、請求項47のTNF-α結合タンパク質連結体。請求項1のアミノ酸配列を含む結合タンパク質をコードする単離された核酸。請求項40のアミノ酸配列を含むTNF-α結合タンパク質構築物をコードする単離された核酸。請求項49または50の単離された核酸を含むベクター。pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJVおよびpBJからなる群から選択される、請求項51のベクター。請求項51のベクターを含む宿主細胞。原核細胞である、請求項53の宿主細胞。真核細胞である、請求項53の宿主細胞。真核細胞が、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、トリ細胞または昆虫細胞である、請求項55の宿主細胞。CHO細胞、COS細胞またはサッカロミセスセレビシアエSaccharomycescerevisiae細胞である、請求項55の宿主細胞。TNF-αに結合する結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で培養培地において請求項53の宿主細胞を培養する段階を含む、TNF-αに結合するタンパク質を産生する方法。請求項58の方法に従って生産されたTNF-α結合タンパク質。請求項1の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。医薬として許容される担体が、アジュバンドとして機能する、請求項60の医薬組成物。アジュバンドがヒアルロニダーゼである、請求項601の医薬組成物。TNF-α活性が有害である疾患を治療するための少なくとも1つの追加の治療剤をさらに含む、請求項60の医薬組成物。追加の作用物質が、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、共刺激分子遮断剤、接着分子遮断剤、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、FK506、検出可能な標識、検出可能なレポーター、TNF-αアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬NSAID、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸入用ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたはその類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである、請求項63の医薬組成物。請求項60の有効量の医薬組成物を哺乳動物に投与する段階を含む、哺乳動物を治療するための方法。ヒトTNF-α活性を減少させるための方法であって、ヒトTNF-α活性が減少するように、ヒトTNF-αを請求項1の結合タンパク質と接触させる段階を含む、方法。TNF-α活性が有害である疾患に罹患しているヒト対象におけるヒトTNF-α活性を減少させるための方法であって、ヒト対象におけるヒトTNF-α活性が減少するように、および/または治療が達成されるように、請求項1の結合タンパク質をヒト対象に投与する段階を含む、方法。請求項1の結合タンパク質を第二の作用物質の投与前に、それと同時にまたはその後で投与する段階を含む、TNF-αが有害である疾患に罹っている患者を治療する方法であって、前記第二の作用物質がヒトIL-12に結合することが可能な抗体もしくはその断片;PGE2;LPA;NGF;CGRP;SubP;RAGE;ヒスタミン;ヒスタミン受容体遮断剤;ブラジキニン;IL-1α;IL-1β;VEGF;PLGF;メトトレキサート;コルチコステロイド、グルココルチコイド受容体修飾薬;シクロスポリン、ラパマイシン、FK506または非ステロイド系抗炎症薬である、方法。疾患が、呼吸器疾患;喘息;アレルギー性および非アレルギー性喘息;感染による喘息;呼吸器合胞体ウイルスRSVの感染による喘息;慢性閉塞性肺疾患COPD;気道炎症を伴う状態;好酸球増加症;線維症および過剰粘液産生;嚢胞性線維症;肺線維症;アトピー性疾患;アトピー性皮膚炎;蕁麻疹;湿疹;アレルギー性鼻炎;アレルギー性胃腸炎;皮膚の炎症および/または自己免疫状態;胃腸器の炎症および/または自己免疫状態;炎症性腸疾患IBD;潰瘍性大腸炎;クローン病;肝臓の炎症および/または自己免疫状態;肝硬変;肝線維症;B型および/またはC型肝炎ウイルスにより引き起こされる肝線維症;強皮症;腫瘍または癌;肝細胞癌;神経膠芽腫;リンパ腫;ホジキンリンパ腫;ウイルス感染;細菌感染;寄生虫感染;HTLV-1感染;保護的1型免疫応答の発現の抑制ならびに予防接種中の保護的1型免疫応答の発現の抑制である、請求項68の方法。疾患が、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホシェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群I型および多内分泌腺機能低下症候群II型、シュミット症候群、成人急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患/アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状IgA病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎/ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、B型肝炎、C型肝炎、分類不能型免疫不全症分類不能型原発性低γグロブリン血症、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎/多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、1型自己免疫性肝炎古典的自己免疫性またはルポイド肝炎、2型自己免疫性肝炎抗LKM抗体肝炎、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うB型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、1型乾癬、2型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病NOS、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはNOS、精子自己免疫、多発性硬化症すべてのサブタイプ、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病/動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症橋本病、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞choleostatis、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、B群連鎖球菌GBS感染、精神障害例えば、うつ病および統合失調症、Th2型およびTh1型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛疼痛の様々な形態、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および腎臓癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病ALL、急性骨髄性白血病AML、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房aerial異所性拍動、AIDS認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α-1-アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗cd3治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応、大動脈aordicおよび動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動持続的または発作性、心房粗動、房室ブロック、B細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植BMT拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群cardiacstunsyndrome、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病CML、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病CLL、慢性閉塞性肺疾患COPD、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト-ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン-バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデンスパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群/血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎A型、ヒス束不整脈、HIV感染/HIV神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部-下垂体-副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、A型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎/ブドウ膜炎/視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチJRA、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、口唇浮腫lipedema、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫lymphederma、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性/特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患mitochondrialmulti.systemdisorder、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性メンセルデジェリーヌ-トーマスシャイ-ドレーガーおよびマシャド-ジョセフ、重症筋無力症、マイコバクテリウムアビウムイントラセルラーレ、マイコバクテリウムチュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性I筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、OKT3登録商標療法、精巣炎/精巣上体炎、精巣炎/精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群/悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチスカリニ肺炎、肺炎、POEMS症候群多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群、灌流後症候群、ポンプ後症候群、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なQRS幅の狭い頻脈症regularnarrowQRStachycardia、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、特異性不整脈specificarrythmias、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、T細胞またはFABALL、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷/出血、III型過敏症反応、IV型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎vitalencephalitis/無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ-コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アテローム性動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群ALPS、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群cis、結膜炎、小児発症精神障害、慢性閉塞性肺疾患COPD、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群GBS、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、IgE媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、IPF/UIP、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎keratojuntivitissicca、クスマウル病またはクスマウル-マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブスベヒテレフmorbusbechterev、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非A非B型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性JRA、末梢動脈閉塞疾患PAOD、末梢血管疾患PVD、末梢動脈疾患PAD、静脈炎、結節性多発性動脈炎または結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性JRA、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛PMR、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、sapho滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン-ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンスジョンソン症候群SJS、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、TRAPS腫瘍壊死因子受容体関連周期的症候群、1型アレルギー反応、II型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎UIP、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト小柳原田症候群VKH症候群、滲出型黄斑変性、創傷治癒、エルシニアまたはサルモネラ関連間接症からなる群から選択される、請求項68の方法。TNF-αが有害である疾患に罹っている患者を治療する方法であって、請求項1の結合タンパク質を第二の作用物質の投与前に、それと同時にまたはその後で投与する段階を含み、前記第二の作用物質が吸入ステロイド;βアゴニスト;短時間作用性または長時間作用性βアゴニスト;ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体のアンタゴニスト;ADVAIR;IgE阻害剤;抗IgE抗体;XOLAIR;ホスホジエステラーゼ阻害剤;PDE4阻害剤;キサンチン;抗コリン薬;マスト細胞安定化剤;クロモリン;IL-4阻害剤;IL-5阻害剤;エオタキシン/CCR3阻害剤;H1、H2、H3およびH4を含むヒスタミンまたはその受容体のアンタゴニスト;プロスタグランジンDまたはその受容体DP1およびCRTH2のアンタゴニスト;TNFアンタゴニスト;TNF受容体の可溶性断片;ENBREL;TNF酵素アンタゴニスト;TNF変換酵素TACE阻害剤;ムスカリン受容体アンタゴニスト;TGF-βアンタゴニスト;インターフェロンγ;ペルフェニドン;化学療法薬、メトトレキサート;レフルノミド;シロリムスラパマイシンまたはその類似体、CCI-779;COX2またはcPLA2阻害剤;NSAID;免疫調節剤;p38阻害剤;TPL-2、MK-2およびNFkB阻害剤;ブデノシド;上皮増殖因子;コルチコステロイド;シクロスポリン;スルファサラジン;アミノサリチラート;6-メルカプトプリン;アザチオプリン;メトロニダゾール;リポキシゲナーゼ阻害剤;メサラミン;オルサラジン;バルサラジド;抗酸化剤;トロンボキサン阻害剤;IL-1受容体アンタゴニスト;抗IL-1β抗体;抗IL-6抗体;増殖因子;エラスターゼ阻害剤;ピリジニル-イミダゾール化合物;LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGFもしくはPDGFの抗体またはアゴニスト;CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90またはこれらのリガンドの抗体;FK506;ラパマイシン;ミコフェノラートモフェチル;イブプロフェン;プレドニゾロン;ホスホジエステラーゼ阻害剤;アデノシンアゴニスト;抗血栓剤、補体阻害剤;アドレナリン作動薬;IRAK、NIK、IKK、p38またはMAPキナーゼ阻害剤;IL-1β変換酵素阻害剤;TNF-α□変換酵素阻害剤;T細胞シグナル伝達阻害剤;メタロプロテイナーゼ阻害剤;6-メルカプトプリン;アンギオテンシン変換酵素阻害剤;可溶性サイトカイン受容体;可溶性p55TNF受容体;可溶性p75TNF受容体;sIL-1RI;sIL-1RII;sIL-6R;抗炎症性サイトカイン;IL-4;IL-10;IL-11またはTGF-βである、方法。対象への投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内intracavity、腔内intracelial、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内および経皮からなる群から選択される少なくとも1つの様式による、請求項67の方法。イムノアッセイにより試験試料中のTNF-αまたはその断片の存在を決定する方法であって、前記イムノアッセイが、試験試料を請求項1に記載の少なくとも1つの結合タンパク質またはその断片および少なくとも1つの検出可能な標識と接触させることを含む、方法。i試験試料を少なくとも1つの結合タンパク質またはその断片と接触させ、前記結合タンパク質が、TNF-αまたはその断片上のエピトープに結合して、第一の複合体を形成する段階;ii前記複合体を少なくとも1つの検出可能な標識と接触させ、前記検出可能な標識が、前記結合タンパク質またはその断片が結合していない、前記第一の複合体上または前記TNF-αもしくはその断片上のエピトープに結合して、第二の複合体を形成する段階;およびiii前記第二の複合体中の前記検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、前記試験試料において前記TNF-αまたはその断片の存在を検出し、前記TNF-αまたはその断片の存在が前記検出可能な標識によって発生した前記シグナルと直接相関している段階をさらに含む、請求項73の方法。i試験試料を少なくとも1つの結合タンパク質またはその断片と接触させ、前記結合タンパク質またはその断片が、TNF-αまたはその断片上のエピトープに結合して、第一の複合体を形成する段階;ii前記複合体を少なくとも1つの検出可能な標識と接触させ、前記検出可能な標識が、前記結合タンパク質またはその断片への結合について、TNF-αもしくはその断片と競合して、第二の複合体を形成する段階;およびiii前記第二の複合体中の前記検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、前記試験試料において前記TNF-αまたはその断片の存在を検出し、前記TNF-αまたはその断片の存在が前記検出可能な標識によって発生した前記シグナルと間接的に相関している段階をさらに含む、請求項73の方法。患者の治療的/予防的処置の効力を診断、予後診断または評価することを場合によってさらに含む、請求項73の方法。本発明は、TNF-α結合タンパク質、特に、TNF-αに結合する抗TNF-α抗体またはその抗原結合部分に関する。一実施形態において、TNF-αに結合することが可能な抗体またはその抗原結合部分は、配列番号22-36からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一態様において、本発明は、配列番号22の残基31-35;配列番号22の残基50-65;配列番号22の残基98-106;配列番号23の残基24-34;配列番号23の残基50-56および配列番号23の残基89-97からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも1つのCDRを含む、ヒトTNF-αに結合することが可能な抗原結合ドメインを含み、ヒトアクセプターフレームワークを含むヒト化結合タンパク質を提供する。一実施形態では、結合タンパク質は、少なくとも3つのCDRを含む、例えば、a配列番号22の残基31-35;配列番号22の残基50-65および配列番号22の残基98-106ならびにb配列番号23の残基24-34;配列番号23の50-56および配列番号23の残基89-97からなる群から選択される可変ドメインCDRの組を含む。特定の実施形態では、抗原結合ドメインは、配列番号22の残基31-35;配列番号22の残基50-65;配列番号22の残基98-106;配列番号23の残基24-34;配列番号23の50-56および配列番号23の残基89-97を含むアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、例えば、配列番号24、25、28、29,30、31、32および33からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むVH領域を含む。別の実施形態において、抗原結合ドメインは、例えば、配列番号26、27、34、35および36からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むVL領域を含む。特定の実施形態において、抗原結合ドメインは、例えば、VH領域が配列番号24、25、28、29,30、31、32および33からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、VL領域が配列番号26、27、34、35および36からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、VH領域およびVL領域を含む。一実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、配列番号6-21からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、配列番号9、10、11、12、15、16、17および21からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは少なくとも1つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、フレームワークのアミノ酸配列はヒトアクセプターフレームワークの配列に対して少なくとも65同一であり、ヒトアクセプターフレームワークに対して同一である少なくとも70アミノ酸残基を含む。別の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、CDRに隣接する残基;グリコシル化部位残基;希少残基;ヒトTNF-αと相互作用することができる残基;CDRと相互作用することができる残基;カノニカル残基;重鎖可変領域と軽鎖可変領域間の接触残基;バーニアゾーン内の残基;およびChothia定義の可変重鎖CDR1とKabat定義の第一の重鎖フレームワーク間にまたがる領域中の残基からなる群から選択されるキー残基に少なくとも1つのフレームワーク領域アミノ酸置換を含む。一実施形態において、キー残基は、H1、H12、H24、H27、H29、H37、H48、H49、H67、H71、H73、H76、H78、L13、L43、L58、L70およびL80からなる群から選択される。一実施形態において、VH突然変異は、Q1E、I12V、A24V、G27F、I29L、V29F、F29L、I37V、I48L、V48L、S49G、V67L、F67L、V71K、R71K、T73N、N76S、L78IおよびF78Iからなる群から選択される。別の実施形態において、VL突然変異は、V13I、A43S、I58V、E70DおよびS80Pからなる群から選択される。一実施形態において、結合タンパク質は2つの可変ドメインを含み、2つの可変ドメインは、配列番号24と配列番号26;配列番号24と配列番号27;配列番号25と配列番号26;配列番号25と配列番号27からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。一実施形態において、結合タンパク質はTNF-αに結合する。別の実施形態において、結合タンパク質は、TNF-αの生物学的機能を調節する。別の実施形態において、結合タンパク質はTNF-αを中和する。さらに別の実施形態において、結合タンパク質は、TNF-αのその受容体に結合する能力を減少させる、例えば、結合タンパク質は、プロヒトTNF-α、成熟ヒトTNF-αまたは切断型ヒトTNF-αのこれらの受容体に結合する能力を減少させる。さらに別の実施形態において、結合タンパク質は、TNF依存性サイトカイン産生;TNF依存性細胞死滅;TNF依存性炎症;TNF依存性骨浸食およびTNF依存性軟骨損傷からなる群から選択される1つ以上のTNF-α生物学的活性を減少させる。一実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合、少なくとも約102M-1s-1;少なくとも約103M-1s-1;少なくとも約104M-1s-1;少なくとも約105M-1s-1および少なくとも約106M-1s-1からなる群から選択される結合速度定数Konを有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合、最大約10-3s-1;最大約10-4s-1;最大約10-5s-1;および最大約10-6s-1からなる群から選択される解離速度定数Koffを有する。さらに別の実施形態において、結合タンパク質は、最大約10-7M;最大約10-8M;最大約10-9M;最大約10-10M;最大約10-11M;最大約10-12Mおよび最大10-13Mからなる群から選択される解離定数KDを有する。一実施形態において、結合タンパク質は、ヒトIgM定常ドメイン、ヒトIgG1定常ドメイン、ヒトIgG2定常ドメイン、ヒトIgG3定常ドメイン、ヒトIgG4定常ドメイン、ヒトIgA定常ドメインおよびヒトIgE定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。特定の実施形態において、重鎖免疫グロブリン定常領域ドメインは、ヒトIgG1定常ドメインである。別の実施形態において、結合タンパク質は、ヒトIgκ定常ドメインおよびヒトIgλ定常ドメインからなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む。例えば、一実施形態において、結合ドメインは、配列番号2、配列番号3、配列番号4および配列番号5からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン定常ドメインを含む。特定の実施形態において、ヒトIgG1定常ドメインは、配列番号2および配列番号3からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、軽鎖免疫グロブリン定常領域ドメインは、配列番号4のアミノ酸配列を含むヒトIgκ定常ドメインである。さらに別の実施形態において、軽鎖免疫グロブリン定常領域ドメインは、配列番号5のアミノ酸配列を含むヒトIgλ定常ドメインである。特定の実施形態において、本発明は、配列番号2および配列番号3からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するIg定常重領域;配列番号4および配列番号5からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するIg定常軽領域;配列番号24、25、28、29、30、31、32および33からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するIg可変重領域ならびに配列番号26、27、34、35および36からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するIg可変軽領域を含む、ヒトTNF-αに結合することが可能な結合タンパク質を提供する。特定の実施形態では、本発明の結合タンパク質は、免疫グロブリン分子、Fv、ジスルフィド連結されたFv、モノクローナル抗体、scFv、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、CDR移植された抗体、ダイアボディ、ヒト化抗体、多重特異的抗体、Fab、二重特異的抗体、Fab’断片、二特異的抗体、Fab’2断片、DVD-Ig商標、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された2つのFab断片を含む二価断片;VHおよびCH1ドメインからなるFd断片;抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、dAb断片、単離された相補性決定領域CDRならびに単一鎖抗体からなる群から選択される。別の態様において、本発明は、結晶の形態である、本発明の結合タンパク質を含む結晶化された結合タンパク質を提供する。一実施形態において、結晶は無担体医薬徐放結晶である。別の実施形態では、結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性相当物より大きなインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は生物学的活性を保持している。別の態様において、本発明は、a本発明の結晶化された結合タンパク質および成分を含む製剤ならびにb少なくとも1つのポリマー担体を含む、TNF-α結合タンパク質の放出のための組成物を提供する。一実施形態において、ポリマー担体は、:ポリアクリル酸、ポリシアノアクリラート、ポリアミノ酸、ポリ無水物、ポリデプシペプチド、ポリエステル、ポリ乳酸、ポリ乳酸グリコール酸共重合体またはPLGA、ポリb-ヒドロキシブチラート、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン;ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリオルガノホスファゼン、ポリオルトエステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸-アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化された多糖、ならびにこれらの混合物および共重合体からなる群の1つ以上から選択されるポリマーである。別の実施形態において、成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の態様において、本発明は、本発明のTNF-α結合タンパク質ならびにリンカーおよび免疫グロブリン定常ドメインからなる群から選択されるポリペプチドを含むTNF-α結合タンパク質構築物を提供する。一実施形態において、結合タンパク質はヒトグリコシル化パターンを有する。別の実施形態において、結合タンパク質構築物は、結晶化されたTNF-α結合タンパク質構築物である。さらに別の実施形態において、結晶化されたTNF-α結合タンパク質構築物は、無担体医薬徐放結晶化TNF-α結合タンパク質構築物である。特定の実施形態において、TNF-α結合タンパク質構築物は、結合タンパク質構築物の可溶性相当物より大きなインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質構築物は生物学的活性を保持している。別の態様において、本発明は、本発明のTNF-α結合タンパク質構築物を含み、免疫接着分子、造影剤、治療剤および細胞毒性剤からなる群から選択される作用物質をさらに含むTNF-α結合タンパク質連結体を提供する。一実施形態において、作用物質は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識およびビオチンからなる群から選択される造影剤である。一実施形態において、造影剤は、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Hoおよび153Smからなる群から選択される放射性標識である。別の実施形態において、作用物質は、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンおよびアポトーシス剤からなる群から選択される治療剤または細胞毒性剤である。別の態様において、本発明は、本発明の結合タンパク質をコードする単離された核酸を提供する。別の態様において、本発明は、本発明の単離された核酸を含むベクターを提供する。一実施形態において、ベクターは、pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJVおよびpBJからなる群から選択される。一実施形態において、本発明は、本発明のベクターを含む宿主細胞を提供する。別の実施形態において、宿主細胞は原核細胞、例えば、E.コリE.coliである。別の実施形態において、宿主細胞は真核細胞、例えば、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞または真菌細胞である。別の実施形態において、真核細胞は、哺乳動物細胞、トリ細胞および昆虫細胞からなる群から選択される動物細胞である。例えば、宿主細胞は、CHO細胞、COS細胞、酵母細胞、例えば、サッカロミセスセレビシアエSaccharomycescerevisiaeまたは昆虫Sf9細胞である。別の態様において、本発明は、TNF-αに結合する結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で培養培地において本発明の宿主細胞を培養する段階を含む、TNF-αに結合するタンパク質を産生する方法、ならびにこの方法により産生されるTNF-α結合タンパク質も提供する。別の態様において、本発明は、本発明の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、医薬として許容される担体は、結合タンパク質の吸収または分散を増加させるのに有用なアジュバンドとして機能する。別の実施形態において、アジュバンドはヒアルロニダーゼである。別の実施形態において、医薬組成物は、TNF-α活性が有害である疾患を治療するための少なくとも1つの追加の治療剤、例えば、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤、キナーゼ阻害剤、共刺激分子遮断剤、接着分子遮断剤、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、FK506、検出可能な標識、検出可能なレポーター、TNF-αアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬NSAID、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性薬剤、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸引用ステロイド、経口ステロイド、エピネフリンまたはその類似体、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストをさらに含む。別の態様において、本発明は、本発明の有効量の医薬組成物を哺乳動物に投与する段階を含む、哺乳動物を治療するための方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ヒトTNF-α活性が減少するように、ヒトTNF-αを本発明の結合タンパク質と接触させる段階を含む、ヒトTNF-α活性を減少させるための方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ヒト対象におけるヒトTNF-α活性が減少するように、本発明の結合タンパク質をヒト対象に投与する段階を含む、TNF-α活性が有害である疾患に罹っているヒト対象においてヒトTNF-α活性を減少させるための方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、治療が達成されるように、本発明の結合タンパク質を対象に投与する段階を含む、TNF-α活性が有害である疾病または疾患について対象を治療するための方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ヒトIL-12に結合することが可能な抗体またはその断片;PGE2;LPA;NGF;CGRP;SubP;RAGE;ヒスタミン;ヒスタミン受容体遮断剤;ブラジキニン;IL-1α;IL-1β;VEGF;PLGF;メトトレキサート;コルチコステロイド、グルココルチコイド受容体修飾薬;シクロスポリン、ラパマイシン、FK506、非ステロイド系抗炎症薬およびスクレロスチンからなる群から選択される第二の作用物質の投与前に、それと同時にまたはその後で本発明の結合タンパク質を投与する段階を含む、TNF-αが有害である疾患に罹っている患者を治療する方法を提供する。一実施形態において、疾患は、呼吸器疾患;喘息;アレルギー性および非アレルギー性喘息;感染による喘息;呼吸器合胞体ウイルスRSVの感染による喘息;慢性閉塞性肺疾患COPD;気道炎症を伴う状態;好酸球増加症;線維症および過剰粘液産生;嚢胞性線維症;肺線維症;アトピー性疾患;アトピー性皮膚炎;蕁麻疹;湿疹;アレルギー性鼻炎;アレルギー性胃腸炎;皮膚の炎症および/または自己免疫状態;胃腸器の炎症および/または自己免疫状態;炎症性腸疾患IBD;潰瘍性大腸炎;クローン病;肝臓の炎症および/または自己免疫状態;肝硬変;肝線維症;B型肝炎および/またはC型肝炎ウイルスにより引き起こされる肝線維症;強皮症;腫瘍または癌;肝細胞癌;神経膠芽腫;リンパ腫;ホジキンリンパ腫;ウイルス感染;細菌感染;寄生虫感染;HTLV-1感染;保護的1型免疫応答の発現の抑制ならびに予防接種中の保護的1型免疫応答の発現の抑制からなる群から選択される。一実施形態において、疾患は、関節炎リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホシェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群I型および多内分泌腺機能低下症候群II型、シュミット症候群、成人急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患/アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状IgA病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎/ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、B型肝炎、C型肝炎、分類不能型免疫不全症分類不能型原発性低γグロブリン血症、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎/多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患vasculiticdiffuselungdisease、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、1型自己免疫性肝炎古典的自己免疫性またはルポイド肝炎、2型自己免疫性肝炎抗LKM抗体肝炎、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うB型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、1型乾癬、2型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病NOS、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはNOS、精子自己免疫、多発性硬化症すべてのサブタイプ、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病/動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症橋本病、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫primarymyxoedema、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞choleostatis、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、B群連鎖球菌GBS感染、精神障害例えば、うつ病および統合失調症、Th2型およびTh1型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛疼痛の様々な形態、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および腎臓癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病ALL、急性骨髄性白血病AML、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房aerial異所性拍動、AIDS認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α-1-アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗CD3治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応anti-receptorhypersensitivityreactions、大動脈aordicおよび動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動持続的または発作性、心房粗動、房室ブロック、B細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植BMT拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群cardiacstunsyndrome、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病CML、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病CLL、慢性閉塞性肺疾患COPD、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト-ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン-バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデンスパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群/血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎A型、ヒス束不整脈、HIV感染/HIV神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部-下垂体-副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、A型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎/ブドウ膜炎/視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症lipedema、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症meningococcemia、代謝性/特発性疾患、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患mitochondrialmulti.systemdisorder、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性メンセルデジェリーヌ-トーマスシャイ-ドレーガーおよびマシャド-ジョセフ、重症筋無力症、マイコバクテリウムアビウムイントラセルラーレ、マイコバクテリウムチュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性I筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、OKT3登録商標療法、精巣炎/精巣上体炎、精巣炎/精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群/悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチスカリニ肺炎、肺炎、POEMS症候群多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群skinchangessyndrome、灌流後症候群postperfusionsyndrome、ポンプ後症候群postpumpsyndrome、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なQRS幅の狭い頻脈症regularnarrowQRStachycardia、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、特異性不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、T細胞またはFABALL、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷/出血、III型過敏症反応、IV型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎vitalencephalitis/無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ-コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アテローム性動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群ALPS、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群CIS、結膜炎、小児発症精神障害、慢性閉塞性肺疾患COPD、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群GBS、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、IgE媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、IPF/UIP、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎keratojuntivitissicca、クスマウル病またはクスマウル-マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブスベヒテレフmorbusbechterev、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非A非B型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性JRA、末梢動脈閉塞疾患PAOD、末梢血管疾患PVD、末梢動脈疾患PAD、静脈炎、結節性多発性動脈炎または結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性JRA、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛PMR、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、sapho滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、坐骨神経痛、シリコーン関連結合組織病、スネドン-ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンスジョンソン症候群SJS、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、TRAPS腫瘍壊死因子受容体関連周期的症候群、1型アレルギー反応、II型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎UIP、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト小柳原田症候群VKH症候群、滲出型黄斑変性、創傷治癒、エルシニアおよびサルモネラ関連関節症からなる群から選択される。別の実施形態において、本発明は、吸入ステロイド;βアゴニスト;短時間作用性または長時間作用性βアゴニスト;ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体のアンタゴニスト;ADVAIR;IgE阻害剤;抗IgE抗体;XOLAIR;ホスホジエステラーゼ阻害剤;PDE4阻害剤;キサンチン;抗コリン薬;マスト細胞安定化剤;クロモリン;IL-4阻害剤;IL-5阻害剤;エオタキシン/CCR3阻害剤;H1、H2、H3およびH4を含むヒスタミンまたはその受容体のアンタゴニスト;プロスタグランジンDまたはその受容体DP1およびCRTH2のアンタゴニスト;TNFアンタゴニスト;TNF受容体の可溶性断片;ENBREL;TNF酵素アンタゴニスト;TNF変換酵素TACE阻害剤;ムスカリン受容体アンタゴニスト;TGF-βアンタゴニスト;インターフェロンγ;ペルフェニドンperfenidone;化学療法薬、メトトレキサート;レフルノミド;シロリムスラパマイシンまたはその類似体、CCI-779;COX2またはcPLA2阻害剤;NSAID;免疫調節剤;p38阻害剤;TPL-2、MK-2およびNFkB阻害剤、ブデノシド;上皮増殖因子;コルチコステロイド;シクロスポリン;スルファサラジン;アミノサリチラート;6-メルカプトプリン;アザチオプリン;メトロニダゾール;リポキシゲナーゼ阻害剤;メサラミン;オルサラジン;バルサラジド;抗酸化剤;トロンボキサン阻害剤;IL-1受容体アンタゴニスト;抗IL-1βmAb抗体;抗IL-6抗体;増殖因子;エラスターゼ阻害剤;ピリジニル-イミダゾール化合物;LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGFまたはPDGFの抗体またはアゴニスト;CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90またはこれらのリガンドの抗体;FK506;ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル;イブプロフェン;プレドニゾロン;ホスホジエステラーゼ阻害剤;アデノシンアゴニスト;抗血栓剤;補体阻害剤;アドレナリン作動薬;IRAK、NIK、IKK、p38またはMAPキナーゼ阻害剤;IL-1β変換酵素阻害剤;TNF-α変換酵素阻害剤;T細胞シグナル伝達阻害剤;メタロプロテイナーゼ阻害剤;6-メルカプトプリン;アンギオテンシン変換酵素阻害剤;可溶性サイトカイン受容体;可溶性p55TNF受容体;可溶性p75TNF受容体;sIL-1RI;sIL-1RII;sIL-6R;抗炎症性サイトカイン;IL-4;IL-10;IL-11;およびTGF-βからなる群から選択される第二の作用物質の投与前に、それと同時にまたはその後で本発明の結合タンパク質を投与する段階を含む、TNF-αが有害である疾患に罹っている患者を治療する方法を提供する。一実施形態において、本発明の結合タンパク質は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内intracavity、腔内intracelial、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内および経皮からなる群から選択される少なくとも1つの様式によって、対象に投与される。本発明は、TNF-α結合タンパク質、特に、TNF-αすなわち、腫瘍壊死因子、腫瘍壊死因子アルファ、腫瘍壊死因子-α、TNFおよびカケクチンに結合する抗TNF-α抗体またはその抗原結合部分に関する。本発明の様々な態様は、抗体および抗体断片ならびにその医薬組成物、ならびにそのような抗体および断片を作製するための核酸、組み換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する。ヒトTNF-αを検出するための、ヒトTNF-αをインビトロでまたはインビボで阻害するためのおよび遺伝子発現またはTNF-α関連機能を調節するための本発明の抗体を使用する方法も本発明により包含されている。本発明の抗体を含む組成物、ならびにそのような抗体を使用する方法も記載されている。本明細書に別段の定義がなければ、本発明に関連して使用される科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。しかしながら、何らかの曖昧さが伏在している場合には、用語の意味および範囲は明確であるべきであり、本明細書中に付与されている定義は、すべての辞書または本明細書外の定義に優越する。さらに、文脈上別段の必要がなければ、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。本願において、またはの使用は、別段の記載がなければ、および/またはを意味する。さらに、含んでいるという用語ならびに含むおよび含まれたなどの用語のその他の形式の使用は、限定的なものではない。また、要素または成分などの用語は、別段の記載がなければ、1つのユニットを含む要素および成分ならびに1より多いサブユニットを含む要素および成分をともに包含する。一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、病理学、腫瘍学、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリッド形成に関連して使用される命名法およびこれらの技術は、周知のものであり、本分野において一般的に使用されている。一般に、本発明の方法および技術は、別段の記載がなければ、本分野において周知の慣用方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学に関して使用される命名法、ならびに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学の実験室操作および技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、調合、および送達、および患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。本発明をさらに容易に理解し得るように、いくつかの用語を以下に定義する。ポリペプチドという用語は、アミノ酸のあらゆるポリマー鎖を表す。ペプチドおよびタンパク質という用語は、ポリペプチドという用語と互換的に使用され、同じく、アミノ酸のポリマー鎖を表す。ポリペプチドという用語は、固有または人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは、単量体または多量体であり得る。単離されたタンパク質または単離されたポリペプチドという用語は、その由来起源または由来源のために、その固有の状態において当該タンパク質またはポリペプチドとともに存在する天然に随伴される成分を伴わないタンパク質またはポリペプチドであり、同じ種に由来する他のタンパク質を実質的に含まず、異なる種から得られた細胞によって発現され、または天然には存在しない。したがって、化学的に合成されたポリペプチド、またはポリペプチドが本来由来する細胞とは異なる細胞系の中で合成されたポリペプチドは、それに本来付随している成分から単離されている。タンパク質は、本分野で周知のタンパク質精製技術を使用し、単離によって、本来付随している成分が実質的に存在しないようにすることもできる。回収するという用語は、例えば、本分野で周知のタンパク質精製技術を使用して、単離によって、ポリペプチドなどの化学種を、本来付随する成分を実質的に含まないようにする方法を表す。ヒトTNF-α本明細書ではhTNF-αと略記されるという用語は、三量体サイトカインタンパク質を含む。前記用語は、3つの17.5kDTNF-αタンパク質を含むホモ三量体タンパク質を含む。ホモ三量体タンパク質はTNF-αタンパク質と呼ばれる。ヒトTNF-αという用語は、標準組み換え発現法により調製することができる組み換えヒトTNF-αrhTNF-αを含むものとする。ヒトTNF-αの配列は、表1に示される。生物学的活性とは、サイトカインのすべての固有の生物学的特性を表す。TNF-αの生物学的特性には、TNF受容体に結合することが含まれるが、これらに限定されない。第二の化学種との抗体、タンパク質またはペプチドの相互作用に関して、特異的結合または特異的に結合するという用語は、相互作用が、化学種、例えば、抗体上の特定の構造例えば、抗原決定基またはエピトープの存在に依存し、例えば、抗体がタンパク質一般ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、結合することを意味する。抗体がエピトープAに対して特異的であれば、標識されたAおよび抗体を含有する反応中での、エピトープAを含有する分子すなわち、標識されていない遊離のAの存在は、抗体に結合した、標識されたAの量を減少させる。抗体という用語は、4つのポリペプチド鎖2つの重H鎖および2つの軽L鎖から構成されるあらゆる免疫グロブリンIg分子もしくはその抗原結合部分、またはIg分子の本質的なエピトープ結合特性を保持したすべての機能的断片、変異体、バリアントまたはこれらの誘導体を広く表す。このような変異体、バリアントまたは誘導体抗体のフォーマットは、本分野において公知である。これらの非限定的な実施形態は、以下に論述されている。完全長の抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域本明細書において、HCVRまたはVHと略称される。および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、3つのドメインCH1、CH2およびCH3から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域本明細書において、LCVRまたはVLと略称される。および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、1つのドメインCLから構成される。VHおよびVL領域は、より保存された領域フレームワーク領域FRと称される。が散在された超可変領域相補性決定領域CDRと称される。へ、さらに細分割することが可能である。各VHおよびVLは、FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された3つのCDRおよび4つのFRから構成される。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY、クラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2またはサブクラスであり得る。抗体の抗原結合部分または抗原結合領域または単に抗体部分という用語は、抗原例えば、hTNF-αに特異的に結合する能力を保持する、抗体の1つ以上の断片を表す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実行可能であることは示されている。このような抗体の実施形態は、二特異的、二重特異的または多重特異的フォーマットを有することができ、2つまたはそれ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の抗原結合部分という用語に包含される結合断片の例には、iFab断片VL、VH、CLおよびCH1ドメインからなる一価断片、iiFab’2断片ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された2つのFab断片を含む二価断片、iiiVHおよびCH1ドメインからなるFd断片、iv抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、v単一の可変ドメインを含むdAb断片Wardetal.1989Nature341:544-546、Winteretal.,PCT公開WO90/05144A1およびvi単離された相補性決定領域CDRが含まれる。さらに、Fv断片の2つのドメインであるVLおよびVHは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、VLおよびVH領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として、これらの作製を可能とする合成リンカーによって、組み換え法を用いて連結することが可能である一本鎖FvscFvとして知られている。例えば、Birdetal.1988Science242:423-426;およびHustonetal.1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883を参照。このような一本鎖抗体も、抗体の抗原結合部分という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。ダイアボディは、VHおよびVLドメインが一本鎖ポリペプチド鎖上に発現されているが、同一鎖上にある2つのドメイン間での対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、両ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合するように強制し、2つの抗原結合部位を作出する二価の二特異的抗体である例えば、Holliger,etal.1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak,etal.1994Structure2:1121-1123を参照。このような抗体結合部分は、本分野において公知であるKontermannandDubeleds.,AntibodyEngineering2001Springer-Verlag.NewYork.790pp.ISBN3-540-41354-5。抗体構築物という用語は、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに連結された本発明の1つ以上の抗原結合部分を含むポリペプチドを表す。リンカーポリペプチドはペプチド結合により結合された2つまたはそれ以上のアミノ酸残基を含み、1つ以上の抗原結合部分を連結するのに使用される。そのようなリンカーポリペプチドは当技術分野では周知である例えば、Holliger,etal.1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak,etal.1994Structure2:1121-1123参照。免疫グロブリン定常ドメインは、重または軽鎖定常ドメインを表す。ヒトIgG重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は当技術分野では公知であり、表2に示されている。抗体またはその抗原結合部分は、抗体または抗体部分と1つ以上の他のタンパク質またはペプチドとの共有または非共有結合により形成される、さらに大きな免疫接着分子の一部であってもよい。そのような免疫接着分子の例には、ストレプトアビジンコア領域を使用しての四量体scFv分子の作製Kipriyanov,etal.1995Hum.Antibod.Hybridomas6:93-101ならびにシステイン残基、マーカーペプチドおよびC末端ポリヒスチジンタグを使用しての二価およびビオチン化scFv分子の作製Kipriyanov,etal.1994Mol.Immunol.31:1047-1058が含まれる。FabおよびFab’2断片などの抗体部分は、全抗体の、それぞれパパインまたはペプシン消化などの従来の技法を使用して全抗体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分および免疫接着分子は、本明細書に記載されるように、標準組み換えDNA技法を使用して得ることができる。単離された抗体とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体が実質的にない抗体またはその抗原結合部分例えば、hTNF-αに特異的に結合する単離された抗体は、hTNF-α以外の抗原に特異的に結合する抗体が実質的にない。を表す。しかし、hTNF-αに特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のTNF-α分子などの他の抗原に交差反応性を有していてもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および/または化学物質が実質的になくてもよい。ヒト抗体という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体またはその抗原結合部分を含む。本発明のヒト抗体は、例えば、CDR、特にCDE3中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基例えば、インビトロでのランダムな突然変異導入もしくは部位特異的突然変異導入によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入された変異を含み得る。しかしながら、ヒト抗体という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するCDR配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含まないものとする。組み換えヒト抗体という用語は、宿主細胞中に形質移入された組み換え発現ベクターを用いて発現された抗体、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体Hoogenboom1997TrendsBiotechnol.15:62-70;AzzazyandHighsmith2002Clin.Biochem.35:425-445;GavilondoandLarrick2000BioTechniques29:128-145;HoogenboomandChames2000Immunol.Today21:371-378、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して遺伝子導入されている動物例えば、マウスから単離された抗体例えば、Tayloretal.1992Nucl.AcidsRes.20:6287-6295;KellermannandGreen2002CurrentOpin.Biotechnol.13:593-597;Littleetal2000Immunol.Today21:364-370参照またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の、他のDNA配列へのスプライシングを含む他のいずれかの手段によって調製され、発現され、作製され、もしくは単離された抗体など、組み換え手段によって調製され、発現され、作製され、もしくは単離されたすべてのヒト抗体またはその抗原結合部分を含むものとする。このような組み換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、ある種の実施形態において、このような組み換えヒト抗体は、インビトロ突然変異導入または、ヒトIg配列に対して遺伝子導入された動物が使用される場合には、インビボ体細胞突然変異導入に供され、したがって、組み換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列VHおよびVL配列に由来し、これらの配列に関連しつつも、インビボで、ヒト抗体生殖系列レパートリー内には、天然に存在しない場合があり得る配列である。キメラ抗体という用語は、ヒト定常領域に連結されたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列ならびに別の種に由来する定常領域配列を含む抗体またはその抗原結合部分を表す。CDR移植された抗体という用語は、ヒトCDRの1つ以上例えば、CDR3がマウスCDR配列で置換されているヒト重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、VHおよび/またはVLのCDR領域の1つ以上の配列が、別の種のCDR配列と置換されている抗体またはその抗原結合部分を表す。ヒト化抗体という用語は、ヒト以外の種例えば、マウス由来の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、VHおよび/またはVL配列の少なくとも一部が、よりヒト類似に、すなわち、ヒト生殖系列可変配列により類似するように改変された抗体またはその抗原結合部分を表す。ヒト化抗体の1つの種類は、ヒト以外のCDR配列がヒトVHおよびVLフレームワークに導入されたCDR移植された抗体である。Kabat番号、Kabat定義およびKabat標識という用語は、本明細書において、互換的に使用される。本分野において認められているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基に比べて、より可変的なすなわち、超可変的なアミノ酸残基に付番するシステムを表すKabatetal.1971Ann.NYAcad,Sci.190:382-391およびKabat,etal.1991SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNO.91-3242。Martin、ProteinSequenceandStructureAnalysisofAntibodyVariableDomains、InKontermannandDubel、eds.、AntibodyEngineeringSpringer-Verlag、Berlin、2001、Chapter31、especiallypages432-433.も参照されたい。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、CDR1に対するアミノ酸位置31から35、CDR2に対するアミノ酸位置50から65およびCDR3に対するアミノ酸位置95から106にわたる。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、CDR1に対するアミノ酸位置24から34、CDR2に対するアミノ酸位置50から56およびCDR3に対するアミノ酸位置89から97にわたる。アクセプターおよびアクセプター抗体という用語は、フレームワーク領域のうちの1つ以上のアミノ酸配列の少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも98または100を与えるまたはコードする抗体または核酸配列を表す。いくつかの実施形態において、アクセプターという用語は、定常領域複数可を与えるまたはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を表す。さらに別の実施形態において、アクセプターという用語は、フレームワーク領域のうちの1つ以上および定常領域複数可を与えるまたはコードする抗体アミノ酸または核酸配列を表す。特定の実施形態において、アクセプターという用語は、フレームワーク領域のうちの1つ以上のアミノ酸配列の少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも98または100を与えるまたはコードするヒト抗体アミノ酸または核酸配列を表す。この実施形態と一致して、アクセプターは、ヒト抗体の1つ以上の特定の位置には存在しない少なくとも1、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5または少なくとも10のアミノ酸残基を含有し得る。アクセプターフレームワーク領域および/またはアクセプター定常領域複数可は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体例えば、当技術分野で周知の抗体、開発中の抗体または市販されている抗体に由来するまたはから得られる。CDRという用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を表す。重鎖および軽鎖の各可変領域中には3つのCDRが存在し、これらは、各可変領域に対して、CDR1、CDR2およびCDR3と表記される。CDRセットという用語は、抗原に結合することが可能な単一の可変領域中に存在する3つのCDRの群を表す。これらのCDRの正確な境界は、異なる系に従って、異なって定義されてきた。Kabatによって記載された系Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterestNationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.1987and1991は、抗体のいずれの可変領域に対しても適用可能な明瞭な残基付番系を提供するのみならず、3つのCDRを定義する正確な残基境界を提供する。これらのCDRは、KabatCDRと称され得る。Chothiaおよび共同研究者ChothiaandLesk1987J.Mol.Biol.196:901-917およびChothiaetal1989Nature342:877-883は、KabatCDR内のある種の亜部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらの亜部分は、L1、L2およびL3またはH1、H2およびH3LおよびHは、それぞれ、軽鎖および重鎖領域を表記する。と表記される。これらの領域は、ChothiaCDRと称される場合があり、これは、KabatCDRと重複する境界を有する。KabatCDRと重複するCDRを定義する他の境界が、Padlan1995FASEBJ.9:133-139およびMacCallum1996J.Mol.Biol.2625:732-45によって記載されている。さらに別のCDR境界定義が、上記系の1つに厳格に従わない場合があり得るが、それにも関わらず、KabatCDRと重複するが、これらは、特定の残基または残基の群またはさらにはCDR全体が、抗原結合に著しい影響を与えないという予測または実験的な発見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書に使用されている方法は、これらの系のいずれかに従って定義されたCDRを使用し得るが、特定の実施形態は、KabatまたはChothiaによって定義されたCDRを使用する。カノニカル残基という用語は、Chothiaetal.1987J.Mol.Biol.196:901-917;Chothiaetal.1992J.Mol.Biol.227:799-817により定義される特定のカノニカルCDR構造を定義するCDRまたはフレームワーク中の残基を表す。Chothiaetal.に従えば、多くの抗体のCDRの決定的な部分は、アミノ酸配列のレベルには大きな多様性があるがほぼ同じペプチド骨格立体構造を有する。各カノニカル構造は、ループを形成するアミノ酸残基の隣接するセグメントに対する1組のペプチド骨格捻れ角を主に特定する。ドナーおよびドナー抗体という用語は、1つ以上のCDRを提供する抗体を表す。特定の実施形態において、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られるまたは由来する抗体とは異なる種由来の抗体である。ヒト化抗体に関して、ドナー抗体という用語は、1つ以上のCDRを提供する非ヒト抗体を表す。フレームワークまたはフレームワーク配列という用語は、CDRを差し引いた可変領域の残りの配列を表す。CDR配列の正確な定義は、異なる系によって決定され得るので、フレームワーク配列の意義は、これに対応して、異なる解釈に供せられる。6つのCDR軽鎖のCDR-L1、-L2および-L3ならびに重鎖のCDR-H1、-H2および-H3は、軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域も、各鎖上の4つの亜領域FR1、FR2、FR3およびFR4に分割し、CDR1はFR1とFR2の間に位置し、CDR2はFR2とFR3の間に、CDR3はFR3とFR4の間に位置する。他者によって表記されるように、FR1、FR2、FR3またはFR4として特定の亜領域を特定せずに、フレームワーク領域は、天然に存在する単一の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされたFRを表す。1つのFRは、4つの亜領域の1つを表し、複数のFRは、フレームワーク領域を構成する4つの亜領域の2つまたはそれ以上を表す。ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は当技術分野では公知である。本発明の一実施形態において、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、V-basehttp://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/からまたはIMGT登録商標、すなわちtheInternationalImMunoGeneTicsinformationsystem登録商標http://imgt.cines.fr/textes/IMGTrepertoire/LocusGenes/から収載される配列から選択される。本発明の別の実施形態において、ヒト重鎖および軽鎖アクセプター配列は、表3および表4に記載される配列から選択される。生殖系列抗体遺伝子または遺伝子断片という用語は、特定の免疫グロブリンの発現のために遺伝的再編成および変異をもたらす成熟プロセスを経ていない非リンパ系細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を表す。例えば、Shapiroetal2002Crit.Rev.Immunol.223:183-200;Marchalonisetal2001Adv.Exp.Med.Biol.484:13-30参照。本発明の様々な実施形態によって提供される利点の1つは、生殖系列抗体遺伝子は、成熟した抗体遺伝子より、種内の個体に特徴的な必須のアミノ酸配列構造を保存する傾向がより大きく、このため、その種において治療的に使用された場合に、外来源に由来するものと認識される可能性がより低いという認識から生じる。キー残基という用語は、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性および/または親和性に対してより多くの影響を及ぼす可変領域内のある種の残基を表す。キー残基には、CDRに隣接している残基、潜在的グリコシル化部位例えば、N-またはO-グリコシル化部位、希少残基、抗原と相互作用することができる残基、CDRと相互作用することができる残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域間の接触残基、バーニアゾーン内の残基およびChothia定義の可変重鎖CDR1とKabat定義の第一の重鎖フレームワーク間にまたがる領域中の残基のうちの1つ以上が含まれるが、これらに限定されない。ヒト化抗体という用語は、対象の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワークFR領域および非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補的決定領域CDRを含む抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくは断片である。CDRに関して、実質的にという用語は、CDRが、非ヒト抗体CDRのアミノ酸配列に対して、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも98または少なくとも99同一のアミノ酸配列を有することを表す。ヒト化抗体は、少なくとも1つの、典型的には2つの可変ドメインFab、Fab’、Fab’2、FabC、Fvの実質的にすべてを含み、CDR領域のすべてまたは実質的にすべては非ヒト免疫グロブリンすなわち、ドナー抗体のCDR領域に一致し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域Fcの少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖、ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体は、重鎖のCH1、ヒンジ、CH2、CH3およびCH4領域も含み得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび/またはヒト化重鎖のみを含有する。ヒト化抗体は、例えば、IgM、IgG、IgD、IgAおよびIgEを含む任意のクラスの免疫グロブリンならびに、例えば、IgG1、IgG2、IgG3およびIgG4を制限なしに含む任意のアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、1つを超えるクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含み得、特定の定常ドメインは、当技術分野では周知の技法を使用して望ましいエフェクター機能を最適化するように選択され得る。ヒト化抗体のフレームワークおよびCDR領域は、親配列と正確に一致する必要はなく、例えば、ドナー抗体CDRまたはコンセンサスフレームワークは、その部位のCDRまたはフレームワーク残基が、ドナー抗体ともまたはコンセンサスフレームワークとも一致しないように、少なくとも1つのアミノ酸残基の置換、挿入および/または欠失により変異誘発され得る。特定の実施形態において、そのような変異は広範囲ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90および少なくとも95は、親FRおよびCDR配列の残基に一致することになる。コンセンサスフレームワークという用語は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を表す。コンセンサス免疫グロブリン配列という用語は、関連する免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も頻繁に存在するアミノ酸またはヌクレオチドから形成される配列を表す例えば、Winnaker、FromGenestoClonesVerlagsgesellschaft、Weinheim、Germany1987参照。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列中の各位置は、そのファミリーのその位置に最も頻繁に存在するアミノ酸により占められている。2つのアミノ酸が等しく頻繁に存在する場合、コンセンサス配列にはどちらでも含むことができる。バーニアゾーンという用語は、FooteandWinter1992J.Mol.Biol.224:487-499により記載されている、CDR構造を調整し、そのフィットを抗原に合わせて微調整することができるフレームワーク残基のサブセットを表す。バーニアゾーン残基は、CDRの根底にある層を形成し、CDRの構造および抗体の親和性に影響を及ぼし得る。多価結合タンパク質という用語は、本明細書においては、2つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を表すために使用される。多価結合タンパク質は、3つまたはそれ以上の抗原結合部位を有するように工学的に作製され、一般に、天然に存在する抗体ではない。多重特異的結合タンパク質という用語は、2つまたはそれより多い関連する標的または無関係な標的に結合することが可能な結合タンパク質を表す。本明細書において使用される二重可変ドメインDVD結合タンパク質または二重可変ドメイン免疫グロブリンDVD-Igは、2つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質であり、四価または多価結合タンパク質である。そのようなDVD-Igは、単一特異的であり得、すなわち、1つの抗原に結合することが可能である、または多重特異的であり得、すなわち、2つまたはそれ以上の抗原に結合することが可能である。2つの重鎖DVD-Igポリペプチドおよび2つの軽鎖DVD-Igポリペプチドを含むDVD-Ig結合タンパク質は、DVD-Igと表される。DVD-Igの各半分は、重鎖DVD-Igポリペプチドおよび軽鎖DVD-Igポリペプチドおよび2つの抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、計6CDRが抗原結合部位当たりの抗原結合に関与する。DVD結合タンパク質およびDVD結合タンパク質を作製する方法は、米国特許第7,612,181号に開示されている。本発明の一態様は、TNF-αに結合することが可能な結合タンパク質を含むDVD結合タンパク質に関する。特定の実施形態において、DVD結合タンパク質は、TNF-αおよび第二の標的に結合することが可能である。中和という用語は、結合タンパク質がサイトカインに特異的に結合すると、サイトカインの生物学的活性を中和することを表す。特定の実施形態において、中和結合タンパク質は、hTNF-αへのその結合がhTNF-αの生物学的活性を抑制する中和抗体であり、例えば、中和結合タンパク質はhTNF-αに結合して、hTNF-αの生物学的活性を少なくとも約20、40、60、80、85またはそれよりも多く低下させる。中和結合タンパク質によるhTNF-αの生物学的活性の抑制は、当技術分野で周知のhTNF-α生物学的活性の1つ以上の指標を測定することにより評価することが可能である。例えば、L929細胞に対するTNF-αの細胞毒性の中和である。別の実施形態において、アゴニスト作用を及ぼすagonizingという用語は、結合タンパク質がTNF-α、例えば、hTNF-αに特異的に結合すると、TNF-αの生物学的活性が増加することを表す。特定の実施形態において、アゴナイジング結合タンパク質は、TNF-αへのその結合によりTNF-αの生物学的活性が増加するアゴニスト抗体である。特定の実施形態において、アゴニスト結合タンパク質は、TNF-αに結合してTNF-αの生物学的活性を少なくとも約20、40、60、80、85、90、95、96、97、98、99および100増加させる。アゴニスト結合タンパク質によるTNF-αの生物学的活性の抑制は、当技術分野で周知のTNF-α生物学的活性の1つ以上の指標を測定することにより評価することが可能である。活性という用語は、抗原に対する抗体、例えば、TNF-α抗原に結合する抗hTNF-α抗体の結合特異性/親和性および/または抗体、例えば、hTNF-αへのその結合がhTNF-αの生物学的活性を抑制する抗hTNF-α抗体の中和能力もしくは、アゴナイジング能力、例えば、L929細胞に対するTNF-αの細胞毒性の中和などの活性を含む。エピトープまたは抗原決定基という用語は、免疫グロブリン、例えば、抗体またはT細胞受容体が結合する抗原上の部位を表す。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホリルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある種の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴および/または特異的な電荷特徴を有し得る。エピトープとは、抗体によって結合される抗原の領域である。ある種の実施形態において、抗体が、タンパク質および/または高分子の複雑な混合物中で、その標的抗原を優先的に認識する場合に、抗体は抗原を特異的に結合すると言われている。エピトープは、近接するアミノ酸またはタンパク質の三次フォールディングにより並置された非近接アミノ酸の両方から形成することが可能である。近接するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶剤に曝露されると保持され、三次フォールディングにより形成されるエピトープは、典型的には、変性溶剤を用いて処理すると失われる。エピトープは、典型的には、独自の空間的構造に少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14または15アミノ酸を含む。所与の抗体によりどのエピトープが結合されているかを決定するための方法すなわち、エピトープマッピングは、当技術分野では周知であり、例えば、免疫ブロッティングおよび免疫沈降アッセイが含まれ、TNF-α由来の重複しているまたは近接しているペプチドは、所与の抗TNF-α抗体との反応性について試験される。エピトープの空間的構造を決定する方法には、当技術分野の技法および本明細書に記載される技法、例えば、X線結晶解析および二次元核磁気共鳴が含まれる例えば、EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology、Vol.66、G.E.Morris、Ed.1996参照。本明細書に記載される特定の抗体により認識されるエピトープのすべてまたは一部例えば、同じもしくは重複している領域または前記領域間のもしくは前記領域にまたがる領域を含むTNF-α上のエピトープに結合する抗体も本発明により包含される。同じエピトープに結合する抗体および/またはTNF-α、例えば、ヒトTNF-αへの結合について本明細書に記載される抗体と競合する抗体も本発明により包含される。同じエピトープを認識するまたは結合について競合する抗体は、通常の技法を使用して同定することが可能である。そのような技法には、例えば、標的抗原に別の抗体が結合するのを遮断する1つの抗体の能力を示すイムノアッセイ、すなわち、競合的結合アッセイが含まれる。競合的結合は、試験中の免疫グロブリンが、hTNF-αなどの共通の抗原への基準抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定される。数多くの種類の競合的結合アッセイ、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイRIA、固相直接または間接酵素免疫アッセイEIA、サンドイッチ競合アッセイStahlietal.1983MethodsinEnzymol.9:242参照;固相直接ビオチン-アビジンEIAKirklandetal.1986J.Immunol.137:3614参照;固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイHarlowandLane、Antibodies:ALaboratoryManual、ColdSpringHarborPress1988参照;I-125標識を使用する固相直接標識RIAMoreletal.1988Mol.Immunol.251:7参照;固相直接ビオチン-アビジンEIACheungetal.1990Virol.176:546参照;および直接標識化RIAMoldenhaueretal.1990Scand,J.Immunol.32:77が知られている。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合している精製された抗原またはこれら非標識試験免疫グロブリンおよび標識された基準免疫グロブリンのどちらかを坦持する細胞の使用を含む。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合している標識の量を決定することにより測定される。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在している。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、競合する抗体は共通の抗原への基準抗原の特異的結合を、少なくとも50-55、55-60、60-65、65-70、70-75またはさらにそれよりも多く抑制する。他の技法には、例えば、エピトープの原子分解を与える抗原-抗体複合体の結晶のX線解析などのエピトープマッピング法が含まれる。他の方法は、抗原断片または抗原の変異した変種への抗体の結合をモニターし、そこでは、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾のせいによる結合の喪失が、エピトープ成分の指標と見なされることが多い。さらに、エピトープマッピングのための計算コンビナトリアル法も使用することが可能である。これらの方法は、コンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリー由来の特定の短いペプチドを親和性単離する対象の抗体の能力に依拠している。次に、ペプチドは、ペプチドライブラリーをスクリーニングするのに使用される抗体と一致するエピトープの定義のためのリードと見なされる。エピトープマッピングでは、立体構造的不連続エピトープを位置付けることが明らかにされている計算アルゴリズムも開発されている。表面プラズモン共鳴という用語は、例えば、BIAcore登録商標システムPharmaciaBiosensorAB、Uppsala、SwedenおよびPiscataway、NJを用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を表す。さらなる記載については、Jonsson,etal.1993Ann.Biol.Clin.51:19-26;Jonsson,etal.1991Biotechniques11:620-627;Johnsson,etal.1995J.Mol.Recognit.8:125-131;およびJohnnson,etal.1991Anal.Biochem.198:268-277を参照されたい。Konという用語は、例えば、本分野で知られている抗体/抗原複合体を形成する、結合タンパク質例えば、抗体と抗原の結合についての結合速度onrate定数を表す。Konは、結合速度associationrate定数またはkaという用語によっても知られ、これらは本明細書において互換的に使用される。抗体とその標的抗原の結合速度または抗体と抗原間での複合体形成の速度を示しているこの値は、以下の方程式によっても示される:抗体Ab抗原Ag→Ab-AgKoffという用語は、結合タンパク質例えば、抗体の、例えば、本分野で知られている抗体/抗原複合体からの解離についての解離速度offrate定数または解離速度dissociationrate定数を表す。この値は、抗体のその標的抗原からの解離速度またはAb-Ag複合体の遊離抗体および抗原への経時的な分離を示し、以下の方程式によって示される:AbAg←Ab-AgKDという用語は、平衡解離定数を表すものとし、平衡状態での滴定測定においてまたは解離速度定数koffを結合速度定数konで割ることによって得られた値を表す。結合速度定数、解離速度定数および平衡解離定数は、抗体と抗原の結合親和性を表すために使用される。結合および解離速度定数を決定する方法は本分野において周知である。蛍光を基礎とする技術の使用は、高い感度を提供し、平衡状態で生理的緩衝液中の試料を調べることができる。BIAcore登録商標生体分子相互作用分析アッセイなどの他の実験的アプローチおよび機器を使用することが可能である例えば、BIAcoreInternationalAB,GEHealthcare社,Uppsala,Swedenから入手可能な機器。さらに、SapidyneInstrumentsBoise,Idahoから入手可能なKinExA登録商標動態排除アッセイアッセイも使用することが可能である。標識された結合タンパク質という用語は、結合タンパク質の同定を与える標識が取り込まれたタンパク質を表す。特定の実施形態において、標識は、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込み、または印を付けたアビジン例えば、光学的方法または比色分析法によって検出することができる、蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジンによって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチド用の標識の例には、以下の放射性同位体または放射性核種例えば、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Hoまたは153Sm;蛍光標識例えば、FITC、ローダミン、ランタニドリン光体;酵素的標識例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ;化学発光マーカー;ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ;およびガドリニウムキレートなどの磁気作用物質が含まれるが、これらに限定されない。抗体連結体という用語は、第二の化学部分治療剤または細胞毒性剤などに化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を表す。作用物質という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子または生物由来物質から作製された抽出物を表記するために使用される。一実施形態において、治療剤または細胞毒性剤には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1-デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体または相同体が含まれるが、これらに限定されるものではない。結晶および結晶化されたという用語は、結晶の形態で存在する抗体またはその抗原結合部分を表す。結晶は、物質の固体状態の一形態であり、これは、非晶質の固体状態または液体の結晶状態などの他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子例えば、抗体などのタンパク質または分子集合体例えば、抗原/抗体複合体の規則的な反復する三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、本分野においてよく理解されている特異的な数学的関係に従って整列されている。結晶中で反復されている基礎的単位または構築ブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に整えられた結晶的対称性に合致する配置での非対称単位の反復は、結晶の単位格子を与える。すべての三次元中での規則的な転換による単位格子の反復は、結晶を与える。Giegeetal.、Chapter1、InCrystallizationofNucleicAcidsandProteins、APracticalApproach、2nded.、DucruixandGiege、eds.OxfordUniversityPress、NewYork、1999、pp.1-16を参照されたい。ポリヌクレオチドという用語は、2つまたはそれ以上のヌクレオチドの重合体形態、すなわち、リボヌクレオチドRNAもしくはデオキシリボヌクレオチドDNAのいずれかまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾された形態を意味する。前記用語は、DNAの一本鎖および二本鎖形態を含むが、特定の実施形態において、二本鎖DNAである。単離されたポリペプチドという用語は、例えば、ゲノム、cDNAもしくは合成起源またはこれらのいくつかの組合せのポリヌクレオチドを意味し、その起源のために、単離されたポリヌクレオチドは、単離されたポリヌクレオチドが本来その中でともに見出されるポリヌクレオチドの全部または一部と会合していない、本来連結されていないポリヌクレオチドに作用可能に連結されている、またはより大きな配列の一部として本来存在しない、ことを意味する。ベクターという用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することができる該核酸分子を表す。ベクターの1つの種類はプラスミドであり、これは、その中にさらなるDNAセグメントを連結し得る環状二本鎖DNAループを表す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ここで、追加のDNAセグメントはウイルスゲノム中に連結され得る。ある種のベクターは、当該ベクターがその中に導入された宿主細胞中で自律的複製を行うことができる例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター。他のベクター例えば、非エピソーム哺乳動物ベクターは、宿主細胞中へ導入されて、宿主細胞のゲノム中に組み込まれることが可能であり、これにより、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが作用可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、組み換え発現ベクターまたは単に、発現ベクターと称される。一般に、組み換えDNA技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書において、プラスミドおよびベクターは互換的に使用され得る。しかしながら、本発明は、均等な機能を果たす、ウイルスベクターなどの例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス発現ベクターのような他の形態を含むものとする。作用可能に連結されたという用語は、記載された成分をそれらを所期の様式で機能させることができる関係にある併置状態を表す。コード配列に対して作用可能に連結された制御配列は、制御配列と適合的な条件下で、コード配列の発現が達成されるように連結されている。作用可能に連結された配列は、目的の遺伝子と連続する発現調節配列および目的の遺伝子を調節するように、トランスにてまたは離れて作用する発現調節配列の両方を含む。発現調節配列という用語は、連結されているコード配列の発現およびプロセッシングに影響を与えるために必要であるポリヌクレオチド配列を表す。発現調節配列には、適切な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列;スプライシングおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なRNAプロセッシングシグナル;細胞質mRNAを安定化させる配列;翻訳効率を増強する配列すなわち、Kozakコンセンサス配列;タンパク質の安定性を増強する配列;および所望であれば、タンパク質分泌を増強させる配列が含まれる。このような調節配列の性質は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、このような調節配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含む。真核生物では、一般に、このような調節配列には、プロモーターおよび転写終結配列が含まれ得る。調節配列という用語は、その存在が発現およびプロセッシングに不可欠である成分を含むものとし、その存在が有利である追加の成分、例えば、リーダー配列および融合対配列も含むことが可能である。形質転換とは、外来DNAが宿主細胞に入るすべてのプロセスを表す。形質転換は、本分野で周知の様々な方法を用いて、自然の条件または人工の条件下で起こり得る。形質転換は、原核または真核宿主細胞中へ外来核酸配列を挿入するためのいずれかの公知の方法に依拠し得る。本方法は、形質転換されている宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、電気穿孔、リポフェションおよび粒子照射を含み得るが、これらに限定されない。このような形質転換された細胞には、挿入されたDNAが、自律的に複製するプラスミドとして、または宿主染色体の一部として、その中で複製することできる安定に形質転換された細胞が含まれる。これらには、挿入されたDNAまたはRNAを、限られた時間にわたって一過性に発現する細胞も含まれる。組み換え宿主細胞または単に、宿主細胞という用語は、外来DNAがその中に導入されている細胞を表す。このような用語は、当該細胞を表すのみならず、このような細胞の子孫も表すことを理解すべきである。突然変異または環境的な影響のために、後続の世代中にある種の修飾が生じ得るので、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、宿主細胞という用語の範囲になお含まれる。特定の実施形態において、宿主細胞には、生物のいずれかの界から選択される原核および真核細胞が含まれる。真核細胞には、原生生物、真菌、植物および動物細胞が含まれる。特定の実施形態において、宿主細胞には、原核細胞株E.コリ;哺乳動物細胞株CHO、HEK293およびCOS;昆虫細胞株Sf9および真菌細胞サッカロミセスセレビシアエが含まれるが、これらに限定されるものではない。組み換えDNA、オリゴヌクレオチド合成および組織培養および形質転換例えば、電気穿孔、リポフェクションに対しては標準的な技術が使用され得る。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、または本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施され得る。一般に、先述の技術および手順は、本分野で周知の慣用的な方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施し得る。例えば、Sambrooketal.MolecularCloning:ALaboratoryManual2ded.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.1989を参照されたい。トランスジェニック生物とは、導入遺伝子を含有する細胞を有する生物を表し、生物中に導入された導入遺伝子または生物の子孫は、生物中に自然に発現されていないポリペプチドを発現する。導入遺伝子とは、細胞のゲノム中に安定におよび作用可能に組み込まれているDNA構築物であり、この細胞からトランスジェニック生物が発達し、トランスジェニック生物の1つ以上の細胞種または組織中で、コードされた遺伝子産物の発現を誘導する。制御するまたは調節するという用語は互換的に使用され、目的の分子の活性例えば、hTNF-αの生物学的活性の変化または変更を表す。調節は、目的の分子の一定の活性または機能の規模の増加または減少であり得る。分子の典型的な活性および機能には、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化およびシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されない。これに対応して、調節物質という用語は、目的の分子の活性または機能例えば、hTNF-αの生物学的活性を変化または変更させることが可能な化合物である。例えば、調節物質は、調節物質の不存在下で観察される活性または機能の規模と比べて、分子のある種の活性または機能の規模の増加または減少を引き起こし得る。ある種の実施形態において、調節物質は、分子の少なくとも1つの活性または機能の規模を減少させる阻害剤である。典型的な阻害剤には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチバディ、炭水化物または小有機分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。ペプチバディは、例えば、国際PCT公開WO01/83525に記載されている。アゴニストという用語は、目的分子と接触したときに、アゴニストの不存在下で観察される活性または機能の規模と比べて、分子のある種の活性または機能の規模の増加を引き起こす調節物質を表す。興味深い特定のアゴニストには、TNF-αポリペプチドまたはポリペプチド、核酸、炭水化物またはhTNF-αに結合する他のすべての分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。アンタゴニストまたは阻害剤という用語は、目的分子と接触したときに、アンタゴニストの不存在下で観察される活性または機能の規模と比べて、分子のある種の活性または機能の規模の減少を引き起こす調節物質を表す。興味深い具体的なアンタゴニストには、TNF-α、例えばhTNF-αの生物学的または免疫学的活性を遮断または調節するアンタゴニストが含まれる。hTNF-αのアンタゴニストおよび阻害剤には、タンパク質、核酸、炭水化物またはhTNF-αに結合する他のすべての分子が含まれ得るが、これらに限定されるものではない。有効量という用語は、疾患もしくはその1つもしくはそれ以上の症候の重度および/または持続時間を低下もしくは軽減し、疾患の進行を抑制し、疾患の退行を引き起こし、疾患に伴う1つもしくはそれ以上の症候の再発、発達、発症もしくは進行を予防し、疾患を検出し、または別の療法例えば、予防的または治療的剤の予防的または治療的効果を増強もしくは改善するのに十分である療法の量を表す。試料という用語は、本明細書において最も広義で使用される。生物学的試料は、生物または生物であったものから得られた物質のいずれかの量を含むが、これらに限定されない。このような生物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよびその他の動物が含まれるが、これらに限定されない。このような物質には、血液、血清、尿、滑液、細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されない。I.ヒトTNF-αに結合する抗体本発明の一態様は、TNF-αに高い親和性で、低い解離速度でおよび高い中和能力で結合する単離されたマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明の第二の態様は、TNF-αに結合するキメラ抗体を提供する。本発明の第三の態様は、TNF-αに結合するCDR移植された抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明の第四の態様は、TNF-αに結合するヒト化抗体またはその抗原結合部分を提供する。特定の実施形態において、抗体またはその部分は、単離された抗体である。一実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗TNF-αを中和するまたはTNF-α機能を調節する。A.抗TNF-α抗体を作製する方法本発明の抗体は、当技術分野で公知のいくつかの技法のうちのいずれによっても作製し得る。1.ハイブリドーマ技術を使用する抗TNF-αモノクローナル抗体モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組み換えおよびファージディスプレイ技術またはこれらの組合せの使用を含む、当技術分野において公知の多種多様な技法を使用して調製することが可能である。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の、例えば、Harlowetal.、Antibodies:ALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratoryPress、2nded.1988;Hammerlingetal.、eds.、MonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas、InResearchMonographsinImmunology、vol.3J.L.Turk、GeneralEditorElsevier、NewYork、1981.pp.563-587において教唆される技法を含む、ハイブリドーマ技法を使用して作製することが可能である。モノクローナル抗体という用語は、ハイブリドーマ技術を通じて作製される抗体に限定されない。モノクローナル抗体という用語は、任意の真核生物クローン、原核生物クローンまたはファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体を表し、その抗体を作製する方法ではない。ハイブリドーマ技術を使用して抗体を作製し特定の抗体についてスクリーニングするための方法は、常用であり当技術分野では周知である。一実施形態において、本発明は、ハイブリドーマが本発明の抗原を用いて免疫されたマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合させることにより作製される、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養し、次に、本発明のポリペプチドに結合することが可能な抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて融合により生じるハイブリドーマをスクリーニングすることを含む、モノクローナル抗体を作製する方法および前記方法により産生される抗体を提供する。手短に言えば、マウスはTNF-α抗原を用いて免疫することが可能である。特定の実施形態において、TNF-α抗原はアジュバンドと一緒に投与されて、免疫応答を刺激する。そのようなアジュバンドには、完全もしくは不完全フロイントアジュバンド、RIBIムラミルジペプチドまたはISCOM免疫賦活性複合体が含まれる。そのようなアジュバンドは、ポリペプチドを局所的沈着物に隔離することにより急速な分散から保護し得るまたはそのようなアジュバンドは、宿主を刺激してマクロファージおよび免疫系の他の成分に対して走化性である因子を分泌させる物質を含有し得る。特定の実施形態において、ポリペプチドが投与されている場合、免疫スケジュールは数週間にわたり広がる、ポリペプチドの2回またはそれ以上の投与を含む。TNF-α抗原を用いる動物の免疫化後、抗体および/または抗体産生細胞を動物から得ることができる。抗TNF-α抗体含有血清は、動物を出血させるまたは屠殺することにより動物から得られる。血清は動物から得られると同時に使用してよく、免疫グロブリン画分は血清から得られるまたは抗TNF-α抗体は血清から精製し得る。このようにして得られる血清または免疫グロブリンは、ポリクローナルであり、したがって異種な一連の特性を有する。免疫応答が検出される、例えば、抗原TNF-αに特異的な抗体がマウス血清において検出されると、マウス脾臓は収穫され脾細胞は単離される。次に、脾細胞は周知の技法により任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、ATCCから入手可能な細胞系SP20由来の細胞に融合される。ハイブリドーマが選択され、限界希釈によりクローン化される。次に、ハイブリドーマクローンは、TNF-αに結合することが可能な抗体を分泌する細胞について当技術分野において公知の方法によりアッセイされる。腹水液は、一般に高レベルの抗体を含有しているが、陽性ハイブリドーマクローンを用いてマウスを免疫することにより作製することが可能である。別の実施形態において、抗体産生不死化ハイブリドーマは免疫された動物から調製し得る。免疫後、動物は屠殺され、脾臓B細胞は、当技術分野では周知である不死化された骨髄腫細胞に融合される。例えば、HarlowandLane、上記を参照されたい。特定の実施形態において、骨髄腫細胞は免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない非分泌性細胞系。融合および抗生物質選択後、ハイブリドーマは、TNF-αもしくはその一部またはTNF-αを発現している細胞を使用してスクリーニングされる。特定の実施形態において、最初のスクリーニングは、酵素結合イムノアッセイELISAもしくは放射イムノアッセイRIAまたはELISAを使用して実施される。ELISAスクリーニングの例は、国際PCT出願WO00/37504において提供されている。抗TNF-α抗体産生ハイブリドーマは、選択され、クローン化され、強いハイブリドーマ増殖、高抗体産生および下でさらに考察されるような望ましい抗体特徴を含む望ましい特徴についてさらにスクリーニングされる。ハイブリドーマは、同系動物において、免疫系を欠く動物、例えば、ヌードマウスにおいてインビボで、または細胞培養においてインビトロで培養され拡大され得る。ハイブリドーマを選択し、クローン化し、拡大する方法は当業者には周知である。特定の実施形態において、ハイブリドーマは、上記のようなマウスハイブリドーマである。別の特定の実施形態において、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマなどの非ヒト、非マウス種において産生される。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫が抗TNF-α抗体を発現しているヒト細胞に融合されているヒトハイブリドーマである。特定のエピトープを認識する抗体断片は、公知の技法により作製され得る。例えば、本発明のFabおよびFab’2断片は、パパインFab断片を産生するためまたはペプシンFab’2断片を産生するためなどの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質切断により産生され得る。Fab’2断片は、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のCH1ドメインを含有する。2.SLAMを使用する抗TNF-αモノクローナル抗体本発明の別の態様において、組み換え抗体は、米国特許第5,627,052号、PCT公開WO92/02551およびBabcock,etal.1996Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-7848に記載されているように、選択リンパ球抗体法SLAM;selectedlymphocyteantibodymethodとして本分野で呼ばれている手法を用いて、単一の単離されたリンパ球から作製される。この方法において、対象の抗体を分泌する単一細胞、例えば、セクション1に記載される免疫された動物のいずれか1つに由来するリンパ球は、抗原特異的溶血プラークアッセイを使用してスクリーニングされ、抗原TNF-α、TNF-αのサブユニットまたはこれらの断片は、ビオチンなどのリンカーを使用してヒツジ赤血球に連結され、TNF-αに対する特異性を有する抗体を分泌する単一細胞を同定するのに使用される。対象の抗体分泌細胞の同定に続いて、重および軽鎖可変領域cDNAは、逆転写酵素PCRにより細胞から救済され、その後、これらの可変領域は、COSまたはCHO細胞などの哺乳動物宿主細胞において、適切な免疫グロブリン定常領域例えば、ヒト定常領域との関連で、発現させることが可能である。増幅された免疫グロブリン配列で形質移入され、インビボで選択されたリンパ球に由来する宿主細胞は、次いで、例えば、TNF-αに対する抗体を発現する細胞を単離するために、形質移入された細胞をパニングすることによって、インビトロで、さらに分析および選択を行うことが可能である。増幅された免疫グロブリン配列は、さらに、PCT公開WO97/29131およびPCT公開WO00/56772に記載されているものなど、インビトロでのアフィニティー成熟方法によるなど、インビトロで操作することが可能である。3.トランスジェニック動物を使用する抗TNF-αモノクローナル抗体本発明の別の実施形態において、抗体は、TNF-α抗原を有するヒト免疫グロブリン遺伝子座のいくつかまたはすべてを含む非ヒト動物を免疫することによって産生される。特定の実施形態において、非ヒト動物は、XENOMOUSEトランスジェニックマウスヒト免疫グロブリン遺伝子座の巨大断片を含み、マウス抗体産生を欠失している改変されたマウス系統である。例えば、Greenetal.1994NatureGenet.7:13-21ならびに米国特許第5,916,771号、第5,939,598号、第5,985,615号、第5,998,209号、第6,075,181号、第6,091,001号、第6,114,598号および第6,130,364号を参照されたい。1991年7月25日に公開されたPCT公開WO91/10741、1994年2月3日に公開されたWO94/02602、ともに1996年10月31日に公開されたWO96/34096およびWO96/33735、1998年4月23日に公開されたWO98/16654、1998年6月11日に公開されたWO98/24893、1998年11月12日に公開されたWO98/50433、1999年9月10日に公開されたWO99/45031、1999年10月21日に公開されたWO99/53049、2000年2月24日に公開されたWO0009560および2000年6月29日に公開されたWO00/037504も参照されたい。XENOMOUSEトランスジェニックマウスは、完全なヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトMabsを生成する。XENOMOUSEトランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびx軽鎖遺伝子座のメガ塩基サイズの生殖系列配置YAC断片の導入を通じて、ヒト抗体レパートリーの約80を含有する。Mendezetal.1997NatureGenet.15:146-156;GreenandJakobovits1998J.Exp.Med.188:483-495を参照されたい。4.組み変え抗体ライブラリーを使用する抗TNF-αモノクローナル抗体本発明の抗体を作製するために、インビトロ法も使用することが可能であり、抗体ライブラリーは、所望の結合特異性を有する抗体を同定するためにスクリーニングされる。組み換え抗体ライブラリーのこのようなスクリーニングの方法は、本分野において周知であり、例えば、米国特許第5,223,409号;PCT公開WO92/18619;PCT公開WO91/17271;WO92/20791;WO92/15679;WO93/01288;WO92/01047;WO92/09690;およびWO97/29131;Fuchsetal.1991Bio/Technology9:1369-1372;Hayetal.1992Hum.Antibod.Hybridomas3:81-85;Huseetal.1989Science246:1275-1281;McCaffertyetal1990Nature348:552-554;Griffithsetal.1993EMBOJ.12:725-734;Hawkinsetal.1992J.Mol.Biol.226:889-896;Clacksonetal.1991Nature352:624-628;Grametal.1992Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:3576-3580;Garradetal.1991Bio/Technology9:1373-1377;Hoogenboometal.1991Nucl.AcidRes.19:4133-4137;およびBarbasetal.1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:7978-7982、および米国特許公開第20030186374号に記載されている方法が含まれる。組み換え抗体ライブラリーは、TNF-αまたはTNF-αの一部を用いて免疫された対象由来であり得る。あるいは、組み換え抗体ライブラリーは、未処置の対象、すなわち、ヒトTNF-αを用いて免疫されたことがないヒト対象由来のヒト抗体ライブラリーなどの、TNF-αを用いて免疫されたことのないヒト由来であってよい。本発明の抗体は、ヒトTNF-αを含むペプチドを用いて組み換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、それによってTNF-αを認識する抗体を選択することにより選択される。そのようなスクリーニングおよび選択を行うための方法は当技術分野では周知であり、例えば、前の段落の参考文献に記載されている。ヒトTNF-αから特定のkoff速度定数で解離する抗体などの、hTNF-αに対して特定の結合親和性を有する本発明の抗体を選択するために、表面プラズモン共鳴という当技術分野で公知の方法を使用して、所望のkoff速度定数を有する抗体を選択することができる。特定のIC50を有する抗体などの、hTNF-αに対して特定の中和活性を有する本発明の抗体を選択するために、hTNF-α活性の抑制を評価するための当技術分野において公知の標準法を使用し得る。一態様において、本発明は、TNF-α、例えばヒトTNF-αに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分に関する。特定の実施形態において、抗体は中和抗体である。様々な実施形態において、抗体は組み換え抗体またはモノクローナル抗体である。例えば、本発明の抗体は、本分野で公知の様々なファージディスプレイ法を用いて作製することも可能である。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、これらをコードしているポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上にディスプレイされる。特に、このようなファージは、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー例えば、ヒトまたはマウスから発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために使用することが可能である。目的の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を用いて、選択または同定することが可能である。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ファージ遺伝子IIIまたは遺伝子VIIIタンパク質のいずれかに組み換え的に融合されたFab、Fvまたはジスルフィドで安定化されたFv抗体ドメインとともにファージから発現されたfdおよびM13結合ドメインを含む糸状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用することが可能なファージディスプレイ法の例には、Brinkmanetal.1995J.Immunol.Methods182:41-50;Amesetal.1995J.Immunol.Methods184:177-186;Kettleboroughetal.1994Eur.J.Immunol.24:952-958;Persicetal.1997Gene1879-18;Burtonetal.1994Adv.Immunol.57:191-280;PCT公開WO90/02809;WO91/10737;WO92/01047PCT出願PCT/GB91/01134;WO92/18619;WO93/11236;WO95/15982;およびWO95/20401;ならびに米国特許第5,698,426号;第5,223,409号;第5,403,484号;第5,580,717号;第5,427,908号;第5,821,047号;第5,571,698号;第5,427,908号;第5,516,637号;第5,780,225号;第5,658,727号;第5,733,743号および第5,969,108号に開示されているものが含まれる。上記参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ヒト抗体または他の所望されるすべての抗原結合断片を含む完全な抗体を作製するために、ファージから得た抗体コード領域を単離および使用し、例えば、以下に詳述されているように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌など、あらゆる所望の宿主中で発現させることが可能である。例えば、PCT公開WO92/22324;Mullinaxetal.1992BioTechniques126:864-869;およびSawaietal.1995Am.J.Reprod.Immunol.34:26-34;およびBetteretal.1998Science240:1041-1043に開示されている方法などの本分野で公知の方法を用いて、Fab、Fab’およびFab’2断片を組み換え的に産生するための技術も使用することが可能である。一本鎖Fvおよび抗体を作製するために使用することが可能な技術の例には、米国特許第4,946,778号および第5,258,498号;Hustonetal.1991MethodsEnzymol.203:46-88;Shuetal.1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:7995-7999;ならびにSkerraetal.1998Science240:1038-1041に記載されているものが含まれる。ファージディスプレイによる組み換え抗体ライブラリーのスクリーニングに代えて、巨大なコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための本分野で公知の他の方法を、本発明の二重特異性抗体の同定のために適用することが可能である。代替的発現系の1つの種類は、PCT公開WO98/31700およびRobertsandSzostak1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA94,12297-12302に記載されているような、組み換え抗体ライブラリーがRNA-タンパク質融合物として発現されるものである。この系において、ピューロマイシン、ペプチジルアクセプター抗生物質をそれらの3’末端に担持する合成mRNAのインビトロ翻訳によって、mRNAおよびこれがコードするペプチドまたはタンパク質の間に共有結合的融合物が作製される。したがって、特異的なmRNAは、コードされているペプチドまたはタンパク質、例えば抗体またはその一部の特性抗体またはその一部の、二重特異性抗原への結合などに基づいて、mRNAの複雑な混合物例えば、コンビナトリアルライブラリーから濃縮することが可能である。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された、抗体またはその一部をコードする核酸配列は、上記されているような組み換え手段によって例えば、哺乳動物宿主細胞中で発現されることが可能であり、さらに、最初に選択された配列中に変異が導入されているmRNA-ペプチド融合物のスクリーニングのさらなるラウンドによって、または上記されているように、組み換え抗体のインビトロでの親和性成熟のためのその他の方法によって、さらなる親和性成熟に供することが可能である。別のアプローチにおいて、本発明の抗体は、本分野で公知の酵母ディスプレイ法を用いて作製することも可能である。酵母ディスプレイ法では、抗体ドメインを酵母細胞壁に繋留し、これらを酵母の表面上にディスプレイするために、遺伝学的な方法が使用される。特に、このような酵母は、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー例えば、ヒトまたはマウスから発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために使用することが可能である。本発明の抗体を作製するために使用することが可能な酵母ディスプレイ法の例には、Wittrup,etal.米国特許第6,699,658号およびFrenkenetal米国特許第6,114,147号に開示されているものが含まれる。B.組み換えTNF-α抗体の作製本発明の抗体は、当技術分野で公知のいくつかの技法のいずれによっても産生し得る。例えば、重鎖と軽鎖をコードする発現ベクター複数可は、標準技法により宿主細胞にトランスフェクトされる、宿主細胞からの発現である。トランスフェクションという用語の様々な形態は、異種DNAを原核または真核宿主細胞に導入するために一般に使用されている多種多様な技法、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、DEAEデキストラントランスフェクション等を包含するものとする。原核宿主細胞でも真核宿主細胞でも本発明の抗体を発現することは可能であるが、真核細胞、例えば、哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が企図されている。なぜならば、そのような真核細胞特に、哺乳動物細胞は正しくフォールディングされ免疫学的に活性な抗体を組立て分泌する可能性が原核細胞よりも高いからである。本発明の組み換え抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞例えば、KaufmanandSharp1982J.Mol.Biol.159:601-621に記載されるDHFR選択可能マーカーと一緒に使用される、UrlaubandChasin1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-4220に記載されるdhfr-CHO細胞を含む、NS0骨髄腫細胞、COS細胞およびSP2細胞が含まれる。抗体遺伝子をコードする組み換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入されると、宿主細胞における抗体の発現、特に、宿主細胞が増殖されている培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間宿主細胞を培養することにより抗体は産生される。抗体は、標準タンパク質精製法を使用して培養培地から回収することが可能である。宿主細胞を使用して、Fab断片またはscFv分子などの機能的抗体断片を産生することも可能である。上記手順の変動は本発明の範囲内であることは理解される。例えば、本発明の抗体の軽鎖および/または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするDNAを宿主細胞にトランスフェクトすることが望ましい場合がある。組み換えDNA技術を使用して、対象の抗原に結合するのに必要ではない軽鎖と重鎖のどちらかまたは両方をコードするDNAの一部またはすべてを取り除いてもよい。そのような切断されたDNA分子から発現される分子も、本発明の抗体に包含されている。さらに、標準化学的架橋法により本発明の抗体を第二の抗体に架橋させることにより、1つの重鎖と1つの軽鎖は本発明の抗体であり、残りの重鎖と軽鎖は対象の抗原以外の抗原に特異的である二機能性抗体を産生し得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分の組み換え発現のための例となるシステムにおいて、抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターは、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによりdhfr-CHO細胞に導入される。組み換え発現ベクター内では、抗体重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、この遺伝子の高レベルの転写を推進するCMVエンハンサー/AdMLPプロモーター調節エレメントに作用可能に連結されている。組み換え発現ベクターは、メトトレキサート選択/増幅を使用して前記ベクターがトランスフェクトされているCHO細胞の選択を可能にするDHFR遺伝子も坦持している。選択された形質転換体宿主細胞は培養されて、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にし、培養培地から無傷の抗体が回収される。標準分子生物学技法を使用して、組み換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養して、培養培地から抗体を回収する。さらに、本発明は、本発明の組み換え抗体が合成されるまで、本発明の宿主細胞を適切な培養培地において培養することにより本発明の組み換え抗体を合成する方法を提供する。前記方法は、組み換え抗体を培養培地から単離することもさらに含むことが可能である。1.抗hTNF-α抗体表5は、本発明の抗hTNF-α抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列の一覧表であるCDR配列は太字で示されている。2.抗hTNF-αキメラ抗体キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体などの、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を産生するための方法は当技術分野では公知であり、実施例2.1において詳細に考察されている。例えば、Morrison1985Science229:1202;Oietal.1986BioTechniques4:214-221;Gilliesetal.1989J.Immunol.Methods125:191-202;米国特許第5,807,715号;米国特許第4,816,567号;および米国特許第4,816,397号を参照されたい。さらに、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と一緒にスプライスすることにより、キメラ抗体の産生のために開発された技法Morrisonetal.1984Proc.Natl.Sci.USA81:6851-6855;Neubergeretal.1984、Nature312:604-608;Takedaetal.1985Nature314:452-454を使用することが可能である。一実施形態において、本発明のキメラ抗体は、セクション1に記載されるマウスモノクローナル抗ヒトTNF-α抗体の重鎖定常領域をヒトIgG1定常領域で置き換えることにより産生される。3.抗TNF-αCDR移植された抗体本発明のCDR移植された抗体は、ヒト抗体由来の重鎖および軽鎖可変領域配列を含み、VHおよび/またはVLのCDR領域の1つ以上が、本発明のマウス抗体のCDR配列と置換される。あらゆるヒト抗体から得られるフレームワーク配列が、CDR移植のためのテンプレートとしての役割を果たし得る。しかしながら、このようなフレームワーク上への直鎖の置換は、しばしば、抗原への結合親和性を若干喪失させる。元のマウス抗体に対して、ヒト抗体がより相同であるほど、ヒトフレームワークとマウスCDRの組合せは、親和性を低下させ得るCDR中の歪みを導入する可能性がより低くなる。したがって、一実施形態において、CDR以外のマウス可変フレームワークを置換するために選択されたヒト可変フレームワークは、マウス抗体可変領域フレームワークと少なくとも65の配列同一性を有する。特定の実施形態において、CDRを除くヒトおよびマウス可変領域は、少なくとも70の配列同一性を有する。特定の実施形態において、CDRを除くヒトおよびマウス可変領域は、少なくとも75の配列同一性を有する。特定の実施形態において、CDRを除くヒトおよびマウス可変領域は、少なくとも80の配列同一性を有する。キメラ抗体を作製する方法は、本分野において公知であり、実施例2.2において詳細に考察されているEP特許第0239400号;PCT公開WO91/09967;米国特許第5,225,539号;米国特許第5,530,101号;および第5,585,089号も参照、ベニアリングveneeringまたはリサーフェシングresurfacingEP0592106;EP0519596;Padlan1991Mol.Immunol.284/5:489-498;Studnickaetal.1994ProteinEng.76:805-814;Roguskaetal.1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:969-973,およびチェーンシャッフリング米国特許第5,565,352号。特定の実施形態において、本発明は、表6に記載されるVHおよび/またはVL鎖を有するCDR移植された抗体を提供する。4.抗hTNF-αヒト化抗体ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する1つ以上の相補性決定領域CDRと、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する所望の抗原に結合する非ヒト種抗体から得られる抗体分子である。公知のヒトIg配列は、開示されている。例えば、www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi;www.atcc.org/phage/hdb.html;www.sciquest.com/;www.abcam.com/;www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html;www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html;www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm;www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html;www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html;www.antibodyresource.com/;mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html.www.immunologylink.com/;pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.-html;www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/;www.pebio.com/pa/340913/340913.html-;www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/;www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html;www.biodesign.com/table.asp;www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html;www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html;www.isac-net.org/sites_geo.html;aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html;baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html;www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/;www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu-blic/INTRO.html;www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html;imgt.cnusc.fr:8104/;www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html;antibody.bath.ac.uk/;abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html;www.unizh.ch/.about.honegger/AHOseminar/Slide01.html;www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/;www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/humanisation/TAHHP.html;www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html;www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html;www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html;www.jerini.de/frroducts.htm;www.patents.ibm.com/ibna.html。Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.Dept.Health1983。このような導入された配列は、免疫原性を低下させるために、または結合、親和性、結合速度、解離速度、結合力、特異性、半減期もしくは本分野で公知の他のいずれかの適切な特性を減少、増強もしくは修飾するために使用することが可能である。ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させるために、抗原結合を改善させるために、CDRドナー抗体由来の対応する残基で置換され得る。これらのフレームワーク置換は、本分野で周知の方法によって、例えば、抗原結合にとって重要なフレームワーク残基を同定するために、CDRとフレームワーク残基の相互作用をモデリングすることによって、および特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される。例えば、米国特許第5,585,089号;Riechmannetal.1988Nature332:323-327を参照されたい。。三次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列が採り得る三次元立体構造を図式および表示するコンピュータプログラムを利用可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の推定される役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を可能とする。このようにして、FR残基は、所望される抗体特性標的抗原に対して増加された親和性などが達成されるように、コンセンサスおよび輸入配列から選択され、組み合わせることが可能である。一般に、CDR残基は、抗原結合に影響を与えることに直接、および最も実質的に関与する。抗体は、Jonesetal.1986Nature321:522-525;Verhoeyenetal.1988Science239:1534-1536、Simsetal.1993J.Immunol.151:2296-2308;ChothiaandLesk1987J.Mol.Biol.196:901-917;Carteretal.1992Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285-4289;Prestaetal.1993J.Immunol.151:2623-2632;Padlan1991Mol.Immunol.284/5:489-498;Studnickaetal.1994ProteinEngineering76:805-814;Roguska.etal.1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:969-973;PCT公開WO91/09967,WO98/06834国際出願第PCT/US98/16280、WO97/20032国際出願第PCT/US96/18978、WO92/11272国際出願第PCT/US91/09630、WO92/03461国際出願第PCT/US91/05939、WO94/18219国際出願第PCT/US94/01234、WO92/01047国際出願第PCT/GB91/01134、WO93/06213国際出願第PCT/GB92/01755;WO90/14443、WO90/14424およびWO90/14430、欧州公開第EP0592106;EP0519596およびEP0239400、米国特許第5,565,332号、第5,723,323号、第5,976,862号、第5,824,514号、第5,817,483号、第5,814,476号、第5,763,192号、第5,723,323号、第5,766,886号、第5,714,352号、第6,204,023号、第6,180,370号、第5,693,762号、第5,530,101号、第5,585,089号、第5,225,539号および第4,816,567号に記載されているものなどの但し、これらに限定されない。、本分野で公知の様々な技術を用いてヒト化することが可能である。C.抗体および抗体産生細胞系の作製一実施形態において、本発明の抗TNF-α抗体は、当技術分野において公知のいくつかのインビトロおよびインビボアッセイのうちのいずれか1つにより評価された場合、TNF-α活性を減少させるまたは中和する高い能力を示す。あるいは、本発明の抗TNF-α抗体は、TNF-α活性を増加させるまたは刺激する高い能力も示す。特定の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ヒトTNF-αに結合し、表面プラズモン共鳴により決定される場合、抗体またはその抗原結合部分は、約0.1s-1もしくはそれより少ないkoff速度定数でヒトTNF-αから解離し、または約1×10-6Mもしくはそれよりも少ないIC50でヒトTNF-α活性を抑制する。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定される場合、約1×10-2s-1もしくはそれより少ないkoff速度定数でヒトTNF-αから解離し得る、または約1×10-7Mもしくはそれよりも少ないIC50でヒトTNF-α活性を抑制し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定される場合、約1×10-3s-1もしくはそれより少ないkoff速度定数でヒトTNF-αから解離し得る、または約1×10-8Mもしくはそれよりも少ないIC50でヒトTNF-α活性を抑制し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定される場合、約1×10-4s-1もしくはそれより少ないkoff速度定数でヒトTNF-αから解離し得る、または約1×10-9Mもしくはそれよりも少ないIC50でヒトTNF-α活性を抑制し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定される場合、約1×10-5s-1もしくはそれより少ないkoff速度定数でヒトTNF-αから解離し得る、または約1×10-10Mもしくはそれよりも少ないIC50でヒトTNF-α活性を抑制し得る。あるいは、抗体またはその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴により決定される場合、約1×10-5s-1もしくはそれより少ないkoff速度定数でヒトTNF-αから解離し得る、または約1×10-11Mもしくはそれよりも少ないIC50でヒトTNF-α活性を抑制し得る。ある種の実施形態において、抗体は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgMまたはIgD定常領域などの、重鎖定常領域を含む。一実施形態において、重鎖定常領域はIgG1重鎖定常領域またはIgG4重鎖定常領域である。さらに、抗体は、軽鎖定常領域、すなわち、κ軽鎖定常領域またはλ軽鎖定常領域のいずれかを含むことができる。別の実施形態において、抗体はκ軽鎖定常領域を含む。あるいは、抗体部分は、例えば、Fab断片または単一鎖Fv断片であることが可能である。抗体エフェクター機能を変化させるために、Fc部分中のアミノ酸残基を置換することが、本分野において周知である米国特許第5,648,260号および第5,624,821号参照。抗体のFc部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ADCC、食作用、補体依存性細胞傷害CDCおよび抗体の半減期/排除速度および抗原-抗体複合体を媒介する。いくつかの事例において、これらのエフェクター機能は、治療用抗体のために望ましいが、別の事例では、治療目的に応じて、必要でない場合があり得、または有害である場合さえあり得る。ある種のヒトIgGアイソタイプ、特に、IgG1およびIgG3は、それぞれ、FcγRおよび補体C1qへの結合を介して、ADCCおよびCDCを媒介する。新生児Fc受容体FcRnは、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の実施形態において、少なくとも1つのアミノ酸残基は、抗体のエフェクター機能が変化されるように、抗体の定常領域、例えば、抗体のFc領域において置換されている。一実施形態は、標識された結合タンパク質を提供し、ここで、本発明の抗体または抗体部分は、別の機能的分子例えば、別のペプチドまたはタンパク質へ誘導体化され、または連結される。例えば、本発明の標識された結合タンパク質は、別の抗体例えば、二特異的抗体またはダイアボティ、検出可能作用物質、細胞毒性剤、薬剤および/または別の分子ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなどとの、抗体または抗体部分の会合を媒介可能なタンパク質もしくはペプチドなどの1つ以上の他の分子実体へ、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有会合またはその他によって本発明の抗体または抗体部分を機能的に連結することによって誘導することが可能である。本発明の抗体または抗体部分を誘導体化し得る有用な検出可能作用物質には、蛍光化合物が含まれる。典型的な蛍光検出可能作用物質には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、5-ジメチルアミン-1-ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリンなどが含まれる。抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素でも誘導体化され得る。抗体が検出可能な酵素で誘導体化される場合には、検出可能な反応産物を生成させるために、本酵素が使用するさらなる試薬を添加することによって抗体が検出される。例えば、検出可能作用物質西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合には、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加は、検出可能な発色した反応産物をもたらす。抗体は、ビオチンを用いて誘導体化し、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的な測定を通じても検出され得る。本発明の別の実施形態は、結晶化された結合タンパク質を提供する。一実施形態において、本発明は、本明細書において開示されるホール抗TNF-α抗体およびその断片の結晶、ならびにそのような結晶を含む製剤および組成物に関する。一実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、結晶化後の生物活性を保持する。本発明の結晶化された結合タンパク質は、本分野で公知の方法に従って、およびPCT公開WO02/72636に開示されているように産生され得る。本発明の別の実施形態は、抗体またはその抗原結合部分が1つ以上の炭水化物残基を含む、グリコシル化された結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質産生は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセッシングを経ることがあり得る。特に、糖グリコシル残基は、酵素的に付加され得るグリコシル化として知られる方法。共有結合されたオリゴ糖側鎖を有する得られたタンパク質は、グリコシル化されたタンパク質または糖タンパク質として知られる。タンパク質グリコシル化は、対象のタンパク質のアミノ酸配列およびその中でタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素例えば、グリコシル転移酵素およびグリコシダーゼを産生し得、利用可能な異なる基質ヌクレオチド糖を有し得る。このような要因のために、タンパク質グリコシル化パターンおよびグリコシル残基の組成は、タンパク質がその中で発現されている宿主系に応じて異なり得る。本発明において有用なグリコシル残基には、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、n-アセチルグルコサミンおよびシアル酸が含まれ得るが、これらに限定されない。一実施形態において、グリコシル化された結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるように、グリコシル残基を含む。異なるタンパク質グリコシル化は異なるタンパク質特性をもたらし得ることが、当業者に公知である。例えば、酵母などの微生物宿主中で産生され、酵母内在経路を用いてグリコシル化された治療用タンパク質の効力は、CHO細胞株などの哺乳動物細胞中で発現された同じタンパク質の効力と比べて低下され得る。また、このような糖タンパク質は、ヒトにおいて免疫原性であり得、投与後に、減少したインビボ半減期を示し得る。ヒトおよび他の動物中の特異的な受容体は、特異的なグリコシル残基を認識し得、血流からのタンパク質の迅速な除去を促進し得る。他の有害な効果は、タンパク質の折り畳み、溶解度、プロテアーゼに対する感受性、運搬、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性の変化が含まれ得る。したがって、当業者は、グリコシル化の特異的な組成およびパターン、例えば、ヒト細胞中または意図される対象動物の種特異的細胞中で産生されるものと同一または少なくとも類似のグリコシル化組成およびパターンを有する治療タンパク質を好み得る。宿主細胞のものとは異なるグリコシル化されたタンパク質を発現することは、異種グリコシル化酵素を発現するために宿主細胞を遺伝的に修飾することによって達成され得る。本分野で公知の技術を使用して、当業者は、ヒトタンパク質グリコシル化を呈する抗体またはその抗原結合部分を作製し得る。例えば、酵母株中で産生されたグリコシル化されたタンパク質糖タンパク質が、動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を呈するように米国特許第7,449,308号および第7,029,872号、酵母株は、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するように遺伝的に修飾されている。さらに、ライブラリーのメンバー宿主細胞がバリアントグリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を産生するように、様々なグリコシル化酵素を発現するように遺伝学的に改変された宿主細胞のライブラリーを用いて、目的のタンパク質を発現させ得ることが、当業者によって理解されている。次いで、当業者は、特定の新規グリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を選択および単離し得る。一実施形態において、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善または改変された生物学的特性を示す。D.抗TNF-α抗体の使用ヒトTNF-αに結合するその能力を考慮すると、例えば、本発明の抗ヒトTNF-α抗体またはその部分を使用して、酵素結合免疫吸着アッセイELISA、放射イムノアッセイRIAまたは組織免疫組織化学などの従来のイムノアッセイを使用して、TNF-α例えば、血清または血漿などの生体試料においてを検出することが可能である。本発明は、生体試料を本発明の抗体または抗体部分と接触させて、TNF-αに結合している抗体もしくは抗体部分または非結合抗体もしくは抗体部分のいずれかを検出し、それによって生体試料中のTNF-αを検出することを含む、生体試料中のTNF-αを検出するための方法を提供する。抗体は、結合したまたは結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン/ビオチンおよびアビジン/ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例には、ルミノールが含まれる;および適切な放射性材料の例には、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Hoまたは153Smが含まれる。抗体を標識する代わりに、ヒトTNF-αは、検出可能物質で標識されたrhTNF-α標準物質および非標識抗ヒトTNF-α抗体を利用する競合イムノアッセイにより生体液中においてアッセイすることが可能である。このアッセイでは、生体試料、標識されたrhTNF-α標準物質および抗ヒトTNF-α抗体を組み合わせて、非標識抗体に結合している標識されたrhTNF-α標準物質の量が決定される。生体試料中のヒトTNF-αの量は、抗ヒトTNF-α抗体に結合している標識されたrhTNF-α標準物質の量に反比例している。同様に、ヒトTNF-αは、検出可能物質で標識されたrhTNF-α標準物質および非標識抗ヒトTNF-α抗体を利用する競合イムノアッセイにより生体液中においてもアッセイすることが可能である。一実施形態において、本発明の抗体および抗体部分は、TNF-α活性、例えば、ヒトTNF-α活性をインビトロでもインビボでも中和することができる。別の実施形態において、本発明の抗体および抗体部分は、ヒトTNF-α活性、例えば、ヒトTNF-α活性を増加させるまたは刺激することができる。したがって、本発明のそのような抗体および抗体部分を使用して、例えば、hTNF-αを含有する細胞培養物中で、ヒト対象においてまたは本発明の抗体が交差反応するTNF-αを有する他の哺乳動物対象において、hTNF-α活性を抑制するまたは増加させることができる。一実施形態において、本発明は、hTNF-α活性が抑制されるまたは増加されるように、hTNF-αを本発明の抗体または抗体部分と接触させることを含む、hTNF-α活性を抑制するまたは増加させるための方法を提供する。例えば、hTNF-αを含有するまたは含有すると疑われる細胞培養物において、本発明の抗体または抗体部分を培養培地に添加して、培養物中でhTNF-α活性を抑制するまたは増加させることができる。別の実施形態において、本発明は、対象において、有利には、TNF-α活性が有害であるまたは、代わりに有益である疾病または疾患に罹っている対象から、hTNF-α活性を減少させるまたは増加させるための方法を提供する。本発明は、対象中のTNF-α活性が減少するまたは増加するように、本発明の抗体または抗体部分を対象に投与することを含む、そのような疾病または疾患に罹っている対象においてTNF-α活性を減少させるまたは増加させるための方法を提供する。特定の実施形態では、TNF-αはヒトTNF-αであり、対象はヒト対象である。あるいは、対象は、本発明の抗体が結合することができるTNF-αを発現している哺乳動物であることが可能である。さらに、対象は、TNF-αが導入されている例えば、TNF-αの投与によってまたはTNF-αトランス遺伝子の発現によって哺乳動物であることが可能である。本発明の抗体は、治療目的でヒト対象に投与することが可能である。さらに、本発明の抗体は、獣医学目的でまたはヒト疾病の動物モデルとして、その抗体が結合することができるTNF-αを発現している非ヒト哺乳動物に投与することが可能である。後者に関しては、そのような動物モデルは本発明の抗体の治療効果を評価する例えば、投与の投与量および時間経過を試験するために有用であり得る。TNF-α活性が有害である疾患という用語は、本疾患に罹患している対象中でのTNF-α活性の存在が、疾患の病態生理の原因であることがまたは疾患の悪化に寄与している因子であることが示されており、または疑われている疾病およびその他の疾患を含む。したがって、TNF-α活性が有害である疾患は、TNF-α活性の低下が疾患の症候および/または進行を緩和することが予測される疾患である。そのような疾患は、例えば、疾患に罹っている対象の生体液中のTNF-αの濃度の増加例えば、対象の血清、血漿、滑液、等中のTNF-αの濃度の増加により証明し得、この濃度の増加は、例えば、上記の抗TNF-α抗体を使用して検出することができる。本発明の抗体を用いて治療することが可能な疾患の非限定的例には、本発明の抗体の医薬組成物に関する下のセクションにおいて考察される疾患が含まれる。あるいは、TNF-α活性が有益である疾患という用語には、疾患に罹っている対象中のTNF-α活性の存在が、疾患の病態生理を治療するのに有益であるまたは疾患の治療に寄与する要因であるのいずれかであることが明らかにされているまたはそうであると疑われている疾病または他の疾患が含まれる。したがって、TNF-α活性が有益である疾患は、TNF-α活性の増加が疾患の症状および/または進行を軽減すると予想される疾患である。本発明の抗体を用いて治療することが可能な疾患の非限定的例には、本発明の抗体の医薬組成物に関する下のセクションにおいて考察される疾患が含まれる。E.医薬組成物本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合部分および医薬として許容される担体を含む医薬組成物も提供する。本発明の抗体を含む医薬組成物は、疾患を診断し、検出し、もしくはモニタリングし、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、もしくは軽減する上で、および/または研究において使用されるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、1つ以上の本発明の抗体を含む。別の実施形態において、医薬組成物は、1つ以上の本発明の抗体、およびTNF-α活性が有害である疾患を治療するための、本発明の抗体以外の1つ以上の予防または治療剤を含む。特定の実施形態において、予防剤または治療剤は、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候の予防、治療、管理または軽減に有用であることが知られており、または疾患または1つもしくはそれ以上のその症候の予防、治療、管理または軽減においてこれまで使用されており、もしくは現在使用されている。これらの実施形態に従えば、組成物は、担体、希釈剤または賦形剤をさらに含み得る。本発明の抗体および抗体部分は、対象に投与するのに適した医薬組成物中に取り込ませることが可能である。典型的には、医薬組成物は、本発明の抗体および抗体部分ならびに医薬として許容される担体を含む。医薬として許容される担体という用語は、生理的に適合性がある、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。医薬として許容される担体の例には、水、生理的食塩水、リン酸緩衝化された生理的食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの1つ以上およびこれらの組合せが含まれる。多くの場合において、等張剤、例えば、組成物中の糖、マニトール、ソルビトールなどの多価アルコールまたは塩化ナトリウムが含まれる。医薬として許容される担体は、抗体または抗体部分の保存期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、防腐剤または緩衝剤などの補助物質の微量をさらに含み得る。様々な送達系が公知であり、例えば、リポソーム、微粒子、ミクロカプセル、抗体または抗体断片を発現することができる組み換え細胞、受容体によって媒介されるエンドサイトーシス例えば、WuandWu1987J.Biol.Chem.262:4429-4432参照、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築物などに封入して、本発明の1つもしくはそれ以上の抗体または本発明の1つもしくはそれ以上の抗体および疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を予防し、管理し、治療し、もしくは軽減するのに有用な予防剤または治療剤の組合せを投与するために使用することが可能である。本発明の予防剤または治療剤を投与する方法には、非経口投与例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与例えば、鼻内および経口経路が含まれるが、これらに限定されない。さらに、例えば、吸入装置または噴霧器およびエアロゾル化剤を加えた製剤の使用によって、経肺投与を使用することが可能である。例えば、米国特許第6,019,968号;第5,985,320号;第5,985,309号;第5,934,272号;第5,874,064号;第5,855,913号;および第5,290,540号;ならびにPCT公開WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346およびWO99/66903を参照されたい。一実施形態において、本発明の抗体、組合せ療法または本発明の組成物は、AlkermesAIR登録商標経肺薬物送達技術Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass.を用いて投与される。特定の実施形態において、本発明の予防剤または治療剤は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻内、経肺または皮下投与される。予防剤または治療剤は、あらゆる都合のよい経路によって、例えば、注入もしくはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮下の裏打ち例えば、口粘膜、直腸および腸粘膜などを通じた吸収によって投与され得、生物学的に活性な他の作用物質と一緒に投与され得る。投与は、全身または局所であり得る。特定の実施形態において、治療を必要としている部位へ局所的に、本発明の予防剤または治療剤を投与することが望ましい場合があり得る。これは、例えば、局所的注入によって、注射によって、またはインプラントの手段によって達成され得るが、これらに限定されるものではなく、前記インプラントは、シアラスチックsialastic膜、ポリマー、繊維性マトリックス例えば、Tissuel登録商標またはコラーゲンマトリックスなどの、膜およびマトリックスを含む多孔性または非多孔性材料である。一実施形態において、本発明の1つ以上の抗体アンタゴニストの有効量は、疾患またはその症候を予防し、治療し、管理し、および/または軽減するために、対象の罹患した部位へ局所的に投与される。別の実施形態において、本発明の1つ以上の抗体の有効量は、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、および/または軽減するために、本発明の抗体以外の1つ以上の治療薬例えば、1つ以上の予防剤または治療剤の有効量と組み合わせて、対象の罹患した部位へ局所的に投与される。別の実施形態において、予防剤または治療剤は、調節された放出系または徐放系に入れて送達することが可能である。一実施形態において、調節された放出または徐放を達成するためにポンプを使用し得るLanger,上記;Sefton1987CRCCrit.Rev.Biomed.Eng.14:201-240;Buchwaldetal1980Surgery88:507-516;Saudeketal.1989N.Engl.J.Med.321:574-579参照。別の実施形態において、本発明の治療薬の調節された放出または徐放を達成するために、ポリマー材料を使用することが可能である。例えば、Goodson,J.M.,Chapter6,InMedicalApplicationsofControlledRelease,VolII,ApplicationsandEvaluation,LangerandWise,eds.CRCPress,Inc.,BocaRaton,1984,pp.115-138;ControlledDrugBioavailability,DrugProductDesignandPerformance,SmolenandBall,eds.,Wiley,NewYork,1984;LangerandPeppas1983J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.Phys.C231:61-126を参照されたい。Levyetal.1985Science228:190-192;Duringetal.1989Ann.Neurol.25:351-356;Howardetal.1989J.Neurosurg.71:105-112;米国特許第5,679,377号;第5,916,597号;第5,912,015号;第5,989,463号;および米国特許第5,128,326号;およびPCT公開WO99/15154;およびWO99/20253も参照されたい。徐放製剤中で使用されるポリマーの例には、ポリ2-ヒドロキシエチルメタクリラート、ポリメチルメタクリラート、ポリアクリル酸、ポリエチレン-コビニルアセタート、ポリメタクリル酸、ポリグリコリドPLG、ポリ無水物、ポリN-ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、ポリラクチドPLA、ポリラクチド-コ-グリコリドPLGAおよびポリオルトエステルが含まれるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態において、徐放製剤中で使用されるポリマーは、不活性であり、溶脱可能な不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、生物分解性である。さらに別の実施形態において、調節された放出系または徐放系は、予防剤または治療剤の近くに配置されて、全身投薬量の一部のみを必要とするようにすることができる例えば、Goodson,InMedicalApplicationsofControlledRelease,vol.II,supra,pp.115-1381984参照。徐放系は、Langer1990,Science249:1527-1533による概説中に論述されている。本発明の1つ以上の治療剤を含む徐放製剤を作製するために、当業者に公知のあらゆる技術を使用することが可能である。例えば、米国特許第4,526,938号、PCT公開WO91/05548、PCT公開WO96/20698、Ningetal.1996RadiotherapyOncol.39:179-189,Songetal.1996PDAJ.Pharm.Sci.Technol.50:372-377,Cleeketal.1997Proceed.Int’l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854およびLametal.1997Proceed.Int’l.Symp.ControlRel.Bioact.Matter.24:759-760を参照されたい。本発明の組成物が予防剤または治療剤をコードする核酸である特定の実施形態において、適切な核酸発現ベクターの一部として、核酸を構築し、例えば、レトロウイルスベクター米国特許第4,980,286号の使用によって、または直接の注射によって、または微粒子照射例えば、遺伝子銃;Biolistic,Duponの使用によって、核酸が細胞内となるように核酸を投与し、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくは形質移入剤でコーティングし、または核内に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに連結して核酸を投与することによって例えば、Joliotetal.1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:1864-1868参照、核酸がコードしている予防剤または治療剤の発現を促進するために、核酸をインビボで投与することが可能である。あるいは、相同的組み換えによる発現のために、核酸を細胞内に導入し、宿主細胞DNA内に取り込むことが可能である。本発明の医薬組成物は、その予定された投与経路と適合的であるように製剤化される。投与の経路の例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻内例えば、吸入、経皮例えば、局所、経粘膜および直腸投与が含まれるが、これらに限定されない。特異的な実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻内または局所投与に適合された医薬組成物として、定型的な手法に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合には、組成物は、可溶化剤および注射の部位における痛みを和らげるための局所麻酔剤リグノカムンlignocamneなども含み得る。本発明の組成物が局所的に投与されるべき場合には、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、エマルジョンの形態でまたは当業者に周知の他の形態で製剤化することが可能である。例えば、Remington’sPharmaceuticalSciencesandIntroductiontoPharmaceuticalDosageForms,19thed.,MackPub.Co.,Easton,Pa.1995を参照されたい。噴霧不能な局所剤形の場合には、局所適用に適合性のある担体または1つもしくはそれ以上の賦形剤を含み、水より大きな動粘性係数を有する粘性ないし半固体または固体の形態が典型的には使用される。適切な製剤は、所望であれば、滅菌され、または、例えば、浸透圧などの様々な特性に影響を及ぼすための補助剤例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、緩衝剤または塩と混合された、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏ointment、粉末、リニメント剤、軟膏salveなどこれらに限定されないを含む。他の適切な局所剤形には、場合によって固体または液体不活性担体と組み合わされた活性成分が、加圧された揮発性物質例えば、FREON登録商標などの気体状噴射剤との混合物中または搾り出し瓶中に梱包されている噴霧可能なエアロゾル調製物が含まれる。所望であれば、医薬組成物および剤形に、加湿剤または湿潤剤も添加することが可能である。このような追加の成分の例は、本分野において周知である。本発明の方法が組成物の鼻内投与を含む場合には、組成物は、エアロゾル形態、スプレー、ミスト中に、または点鼻薬の形態で製剤化することが可能である。特に、本発明に従って使用するための予防剤または治療剤は、適切な噴射剤例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適切な気体を用いて、加圧されたパックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー提示の形態で都合よく送達することが可能である。加圧されたエアロゾルの場合には、投薬単位は、定量された量を送達するためのバルブを付与することによって決定され得る。化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物を含有する、吸入装置またはガス注入装置で使用するためのカプセルおよびカートリッジ例えば、ゼラチンから構成される。を製剤化し得る。本発明の方法が経口投与を含む場合、錠剤、カプセル、カシェ剤、ゲルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で、組成物を経口的に製剤化することが可能である。錠剤またはカプセルは、従来の手段によって、結合剤例えば、予めゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース;充填剤例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム;潤滑剤例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ;崩壊剤例えば、イモデンプンまたはグリコール酸デンプンナトリウム;または湿潤剤例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなどの、医薬として許容される賦形剤とともに調製することが可能である。錠剤は、本分野において周知な方法によって被覆され得る。経口投与用の液体調製物は、溶液、シロップもしくは懸濁液の形態これらに限定されない。を採り得、または、使用前に、水もしくは他の適切なビヒクルを用いて構成するための乾燥製品として与えられ得る。このような液体調製物は、慣用の手段によって、懸濁剤例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用脂肪;乳化剤例えば、レシチンまたはアカシア;非水性ビヒクル例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコールまたは分画された植物油;および防腐剤例えば、p-ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピルまたはソルビン酸などの医薬として許容される添加物とともに調製され得る。調製物は、適宜、緩衝液塩、着香剤、着色剤および甘味剤も含有し得る。経口投与用調製物は、予防剤または治療剤の遅い放出、調節された放出または徐放のために、適切に製剤化され得る。本発明の方法は、例えば、吸入装置または噴霧器の使用、エアロゾル化剤とともに製剤化された組成物の使用によって、経肺投与を含み得る。例えば、米国特許第6,019,968号;第5,985,320号;第5,985,309号;第5,934,272号;第5,874,064号;第5,855,913号;および第5,290,540号;ならびにPCT公開WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346およびWO99/66903を参照されたい。特定の実施形態において、本発明の抗体、組合せ療法および/または本発明の組成物は、AlkermesAIR登録商標経肺薬物送達技術Alkermes,Inc.Cambridge,Mass.USを用いて投与される。本発明の方法は、注射による例えば、ボーラス注射または連続的注入による非経口投与のために製剤化された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、添加された防腐剤とともに、単位剤形で例えば、アンプル以上投薬容器に入れて与え得る。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態を採り得、懸濁剤、安定化剤および/または分散剤などの処方剤を含有し得る。あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル例えば、発熱物質を含まない無菌水で構成するための粉末形態であり得る。本発明の方法は、さらに、デポ調製物として製剤化された組成物の投与を含み得る。このような長期作用製剤は、例えば、皮下または筋肉内への植え込みによって、または筋肉内注射によって投与され得る。したがって、例えば、組成物は、適切なポリマー材料もしくは疎水性材料例えば、許容される油中のエマルジョンとしてまたはイオン交換樹脂とともに、または難溶性誘導体として例えば、難溶性塩として調合され得る。本発明の方法は、中性または塩形態として製剤化された組成物の投与を包含する。医薬として許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどの陰イオンとともに形成された塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなど、陽イオンとともに形成された塩が含まれる。一般的には、組成物の成分は、別個に、または単位剤形中に例えば、活性剤の量を示した注射器またはにおい袋など、密閉された容器中の凍結乾燥された乾燥粉末または無水濃縮物として一緒に混合されて供給される。投与の様式が注入である場合には、組成物は、医薬等級の無菌水または生理的食塩水を含有する注入瓶を用いて分配することが可能である。投与の様式が注射による場合には、注射用の無菌水または生理的食塩水の注射器は、投与前に成分が混合され得るように提供することが可能である。特に、本発明は、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または本発明の医薬組成物が、薬剤の量を示した注射器またはにおい袋など、密閉された容器中に梱包されることも提供する。一実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または医薬組成物は、密閉された容器中の凍結乾燥された乾燥無菌粉末または無水濃縮物として供給され、対象に投与するための適切な濃度になるように例えば、水または生理的食塩水で再構成することができる。一実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または医薬組成物は、少なくとも5mg、少なくとも10mg、少なくとも15mg、少なくとも25mg、少なくとも35mg、少なくとも45mg、少なくとも50mg、少なくとも75mgまたは少なくとも100mgの単位投薬量で、密封された容器中の凍結乾燥された乾燥無菌粉末として供給される。本発明の凍結乾燥された予防もしくは治療剤または医薬組成物は、その元の容器中で、2°Cと8°Cの間で保存されるべきであり、本発明の予防剤もしくは治療剤または医薬組成物は、再構成後、1週以内、5日以内、72時間以内、48時間以内に、24時間以内に、12時間以内に、6時間以内に、5時間以内に、3時間以内に、または1時間以内に投与されるべきである。別の実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または本発明の医薬組成物は、薬剤の量および濃度を示す密閉された容器中に、液体形態で供給される。一実施形態において、投与された組成物の液体形態は、少なくとも0.25mg/ml、少なくとも0.5mg/ml、少なくとも1mg/ml、少なくとも2.5mg/ml、少なくとも5mg/ml、少なくとも8mg/ml、少なくとも10mg/ml、少なくとも15mg/kg、少なくとも25mg/ml、少なくとも50mg/ml、少なくとも75mg/mlまたは少なくとも100mg/mlで、密封された容器中に供給される。液体形態は、その元の容器中で、2°Cと8°Cの間で保存されるべきである。本発明の抗体および抗体部分は、非経口投与に適した医薬組成物中に取り込ませることが可能である。一実施形態において、抗体または抗体部分は、0.1-250mg/mLの抗体を含有する注射可能溶液として調製される。注射可能溶液は、フリント容器または琥珀色の容器、注射器または予め充填されたシリンジ中の液体または凍結乾燥された剤形から構成され得る。緩衝液は、pH5.0から7.0最適にはpH6.0のL-ヒスチジン1-50mM、最適には5-10mMであり得る。他の適切な緩衝液には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。0-300mMの濃度に最適には、液体剤形に対して150mMの溶液の毒性を修飾するために、塩化ナトリウムを使用することが可能である。凍結乾燥された剤形に対して、凍結保護剤、主に、0-10のスクロース最適には、0.5-1.0を含めることが可能である。他の適切な凍結保護剤には、トレハロースおよびラクトースが含まれる。凍結乾燥された剤形に対して、充填剤、主に、1-10のマニトール最適には、2-4を含めることが可能である。液体および凍結乾燥された両剤形において、安定化剤、主に1-50mMのL-メチオニン最適には、5-10mMを使用することが可能である。他の適切な充填剤には、グリシン、アルギニンが含まれ、0-0.05のポリソルベート-80最適には、0.005-0.01として含めることが可能である。さらなる界面活性剤には、ポリソルベート20およびBRIJ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。本発明の組成物は、様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体溶液例えば、注射可能な溶液および注入可能な溶液など、分散液または懸濁液、錠剤、丸薬、粉末、リポソームおよび坐薬などの、液体、半固体および固体剤形が含まれる。特定の形態は、予定される投与の様式および治療用途に依存する。典型的な組成物は、他の抗体を用いたヒトの受動免疫に対して使用される組成物と同様の組成物など、注射可能溶液または注入可能溶液の形態である。投与の様式は、非経口例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内を含む。特定の実施形態において、抗体は、静脈内注入または注射によって投与される。別の特定の実施形態において、抗体は、筋肉内注入または皮下注射によって投与される。治療組成物は、典型的には、製造および保存の条件下で、無菌および安定でなければならない。組成物は、溶液、ミクロエマルジョン、分散液、リポソームまたは高薬物濃度に適したその他の秩序化された構造として製剤化することが可能である。無菌注射可能溶液は、上で列記されている成分の1つまたは組合せを加えた適切な溶媒中に、必要な量で活性な化合物すなわち、抗体、抗体部分を取り込ませた後、必要に応じて、濾過滅菌を行うことによって調製することが可能である。一般的に、分散液は、塩基性分散溶媒および上で列記されたものから得られる必要なその他の成分を含有する無菌ビヒクル中に活性化合物を取り込ませることによって調製される。無菌注射可能溶液の調製のための凍結乾燥された無菌粉末の場合には、調製の方法は、予め滅菌濾過されたその溶液から、あらゆる追加の所望される成分を加えた活性成分の粉末を与える真空乾燥および粉末乾燥を含む。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、分散液の場合に必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射可能組成物の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによって実現することができる。本発明の抗体および抗体部分は、本分野で公知の様々な方法によって投与することが可能であるが、多くの治療用途において、例えば、投与経路/様式は皮下注射、静脈内注射または注入である。当業者によって理解されるように、投与の経路および/または様式は、所望される結果に応じて変動する。ある種の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよび微小封入された送達系を含む徐放製剤など、迅速な放出に対して化合物を保護する担体とともに調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸など、生物分解可能な生物適合性ポリマーを使用することが可能である。このような製剤の多くの調製方法は、特許が付与されているまたは一般的に当業者に公知である。例えば、SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.Robinson,ed.,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1978を参照されたい。ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗体部分は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用担体とともに経口投与され得る。また、化合物および、所望であれば、その他の成分は、硬いもしくは軟い殻のゼラチンカプセル中に封入され、錠剤へと圧縮され、または患者の食事中に直接取り込ませ得る。経口治療投与の場合、化合物は、賦形剤とともに取り込まれ、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハースなどの形態で使用され得る。非経口投与以外によって本発明の化合物を投与するために、その不活化を妨げるための物質で化合物を被覆し、またはその不活化を妨げるための物質とともに化合物を同時投与することが必要であり得る。補助的活性化合物も、組成物中に取り込ませることが可能である。ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗体部分は、TNF-α活性が有害である疾患を治療するのに有用である、1つ以上のさらなる治療剤とともに共製剤化され、および/または同時投与される。例えば、本発明の抗hTNF-α抗体または抗体部分は、他の錠剤に結合する1つ以上のさらなる抗体例えば、他のサイトカインに結合する抗体または細胞表面分子に結合する抗体とともに共製剤化され、および/または同時投与され得る。さらに、本発明の1つ以上の抗体は、先述の治療剤の2つまたはそれ以上と組み合わせて使用され得る。このような組合せ療法は、投与される治療剤のより低い投薬量を有利に使用し得るので、様々な単独療法に伴って生じ得る毒性または合併症が回避される。ある種の実施形態において、TNF-αの抗体またはその断片は、本分野で公知の半減期延長ビヒクルに連結される。このようなビヒクルには、Fcドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランが含まれるが、これらに限定されない。このようなビヒクルは、例えば、米国出願第6,660,843号に記載されている。特定の実施形態において、本発明の抗体または本発明の別の予防剤もしくは治療剤をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列は、遺伝子治療によって、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を治療し、予防し、管理し、または軽減するために投与される。遺伝子治療は、発現された核酸または発現可能な核酸の、対象への投与によって実行される治療を表す。本発明の本実施形態において、核酸は、予防的効果または治療的効果を媒介する、本発明のコードされたそれらの抗体または予防剤もしくは治療剤を産生する。本発明に従って、本分野で利用可能な遺伝子治療のためのあらゆる方法を使用することが可能である。遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Goldspieletal.1993Clin.Pharm.12:488-505;WuandWu1991Biotherapy3:87-95;Tolstoshev1993Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596;Mulligan1993Science260:926-932;およびMorganandAnderson1993Ann.Rev.Biochem.62:191-217;Robinson1993TrendsBiotechnol115:155を参照されたい。使用可能な組み換えDNA技術の分野で一般的に知られた方法は、Ausubeletal.eds.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons,NY1993;およびKriegler,GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY1990に記載されている。遺伝子治療の様々な方法の詳細な記述は、米国特許公開第2009/0297514号に開示されている。TNF-αは、免疫および炎症要素を含む種々の疾病に付随する病態において決定的に重要な役割を果たしている。これらの疾病には、後天性免疫不全症症候群;後天性免疫不全関連疾患;後天性悪性貧血;急性冠症候群;急性および慢性疼痛異なる形態の疼痛;急性特発性多発神経炎;臓器移植に付随する急性免疫疾患;臓器移植に付随する急性または慢性免疫疾患;急性炎症性脱髄性多発性神経根筋障害;急性虚血;急性肝疾患;急性リウマチ熱;急性横断性脊髄炎;アジソン病;成人急性呼吸促迫症候群;成人スティル病;アルコール性肝硬変;アルコール誘発肝損傷;アレルギー性疾患;アレルギー;脱毛症;円形脱毛症;アルツハイマー病;アナフィラキシー;強直性脊髄炎;強直性脊髄炎関連肺疾患;抗リン脂質抗体症候群;再生不良性貧血;動脈硬化症;関節症;喘息;アテローム性疾患/動脈硬化症;アテローム性動脈硬化;アトピー性アレルギー;アトピー性湿疹;アトピー性皮膚炎;萎縮性自己免疫甲状腺機能低下症;自己免疫水疱症;自己免疫皮膚炎;自己免疫性糖尿病;連鎖球菌感染に付随する自己免疫障害;自己免疫性腸症;自己免疫性溶血性貧血;自己免疫性肝炎;自己免疫聴力損失;自己免疫リンパ球増殖性症候群ALPS;自己免疫媒介低血糖症;自己免疫性心筋炎;自己免疫性好中球減少症;自己免疫早発卵巣不全;自己免疫性血小板減少症AITP;自己免疫性甲状腺疾患;自己免疫ブドウ膜炎;閉塞性細気管支炎;ベーチェット病;癌瞼炎;気管支拡張症;水疱性類天疱瘡;悪液質;心血管疾患;劇症型抗リン脂質症候群;セリアック病;頸椎症;クラミジア;胆汁うっ滞;慢性活動性肝炎;慢性好酸球性肺炎;慢性疲労症候群;臓器移植に付随する慢性免疫疾患;慢性虚血;慢性肝疾患;慢性粘膜皮膚カンジダ症;瘢痕性類天疱瘡;多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群CIS;分類不能型免疫不全症分類不能型低γグロブリン血症;結合組織疾患関連間質性肺疾患;結膜炎;クームス陽性溶血性貧血;小児期発症精神障害;慢性閉塞性肺疾患COPD;クローン病;原因不明自己免疫肝炎;原因不明線維性肺胞炎;涙嚢炎;鬱病;皮膚炎強皮症;皮膚筋炎;皮膚筋炎/多発性筋炎関連肺疾患;糖尿病性網膜症;真性糖尿病;拡張型心筋症;円板状エリテマトーデス;椎間板ヘルニア;椎間板脱出症;播種性血管内凝固;薬物性肝炎;薬物性間質性肺疾患;薬物性免疫性溶血性貧血;心内膜炎;子宮内膜症;眼内炎;腸疾患滑膜炎;上強膜炎;多形性紅斑;重症型多形性紅斑;女性不妊症;線維症;線維症肺疾患;妊娠性類天疱瘡;巨細胞性動脈炎GCA;糸球体腎炎glomerulonephritides;甲状腺腫性自己免疫甲状腺機能低下症橋本病;グッドパスチャー症候群;痛風関節炎;移植片対宿主病GVHD;グレーブス病;B群連鎖球菌GBS感染;ギランバレー症候群GBS;ヘモジデリン沈着症関連肺疾患;枯草熱;心不全;溶血性貧血;ヘノッホシェーライン紫斑症;B型肝炎;C型肝炎;ヒューズ症候群;ハンチントン舞踏病;甲状腺機能亢進症;副甲状腺機能低下症;特発性白血球減少症;特発性血小板減少症;特発性パーキンソン病;特発性間質性肺炎;特異体質肝疾患;IgE媒介アレルギー;免疫性溶血性貧血;封入体筋炎;感染症;伝染性眼性炎症性疾患;炎症性腸疾患;炎症性脱髄性疾患;炎症性心疾患;炎症性腎疾患;インシュリン依存性糖尿病;間質性肺炎;IPF/UIP;虹彩炎;若年性慢性関節炎;若年性悪性貧血;若年性関節リウマチ;川崎病;角膜炎;乾性角結膜炎keratojunctivitissicca;クスマウル病またはクスマウル-マイヤー病;ランドリー麻痺;ランゲルハンス細胞組織球症;線状IgA病;網状皮斑;ライム関節炎;リンパ性浸潤性肺疾患;黄斑変性症;特発性男性不妊症またはNOS;悪性腫瘍;腎臓の微細脈管炎;顕微鏡的多発血管症;混合結合組織疾患関連肺疾患;ベヒテレフ病;運動ニューロン障害;粘膜類天疱瘡;多発性硬化症すべてのサブタイプ:原発性進行性、二次性進行型、再発寛解型、等;多臓器不全;筋痛性脳炎/ロイヤルフリー病;重症筋無力症;骨髄異形成症候群;心筋梗塞;心筋炎;ネフローゼ症候群;神経根障害;神経障害;非アルコール性脂肪性肝炎;非A非B型肝炎;視神経炎;臓器移植拒絶;変形性関節炎;骨溶解症;卵巣癌;卵巣機能不全;膵炎;寄生虫症;パーキンソン病;小関節JRA;類天疱瘡;落葉状天疱瘡;尋常性天疱瘡;末梢血管閉塞性疾患PAOD;末梢血管疾患PVD;末梢動脈疾患PAD;水晶体起因性ブドウ膜炎;静脈炎;結節性多発動脈症または結節性動脈周囲炎;多発性軟骨炎;リウマチ性多発筋痛症;白髪症;多関節型JRA;多内分泌腺症候群polyendocrinedeficiencysyndrome;多発性筋炎;多内分泌腺機能低下症候群I型および多内分泌腺機能低下症候群II型;リウマチ性多発筋痛症PMR;感染後間質性肺疾患;炎症後間質性肺疾患;ポストポンプ症候群;早期卵巣機能不全;原発性胆汁性肝硬変;原発性粘液水腫;原発性パーキンソン症;原発性硬化性胆管炎;原発性硬化性肝炎;原発性脈管炎;前立腺直腸癌および造血器悪性腫瘍白血病およびリンパ腫;前立腺炎;乾癬;乾癬1型;乾癬2型;乾癬性関節炎;乾癬性関節症;結合組織疾患に続発する肺高血圧症;結節性多発動脈炎の肺症状;赤芽球癆;原発性副腎不全;放射線線維症;反応性関節炎;ライター病;再発性視神経脊髄炎;腎疾患NOS;再狭窄;関節リウマチ;関節リウマチ関連間質性肺疾患;リウマチ性心疾患;SAPHO滑膜炎、挫瘡、膿疱症、骨増殖症および骨炎;サルコイドーシス;統合失調症;シュミット症候群;強皮症;続発性アミロイドーシス;ショック肺;強膜炎;坐骨神経痛;続発性副腎機能不全;敗血症症候群;化膿性関節炎;敗血症性ショック;血清陰性関節症;シリコーン関連結合組織疾患;シェーグレン病関連肺疾患;シェーグレン症候群;スネドン-ウィルキンソン皮膚症;精子自己免疫;脊椎関節炎;脊椎炎アンキロサンspondylitisankylosans;スティーブンスジョンソン症候群SJS;スチル病;脳卒中;交感性眼炎;全身性炎症反応症候群;全身性エリテマトーデス;全身性エリテマトーデス関連肺疾患;全身性硬化症;全身性硬化症関連間質性肺疾患;高安病/動脈炎;側頭動脈炎;Th2型およびTh1型によって媒介される疾病;甲状腺炎;毒素性ショック症候群;トキソプラスマ性網膜炎;中毒性表皮壊死症;横断性脊髄炎;TRAPS腫瘍壊死因子受容体1型TNFR-関連周期的症候群;黒色表皮腫を伴うB型インシュリン抵抗性;1型アレルギー反応;1型自己免疫肝炎古典的自己免疫またはルポイド肝炎;2型自己免疫肝炎抗LKM抗体肝炎e;II型糖尿病;潰瘍性大腸炎性関節症;潰瘍性大腸炎;蕁麻疹;通常型間質性肺炎UIP;ブドウ膜炎;血管炎性瀰漫性肺疾患;脈管炎;春季カタル;ウイルス性網膜炎;白斑;フォークト小柳原田症候群VKH症候群;ウェゲナー肉芽腫症;滲出型横斑変性;創傷治癒;エルシニアおよびサルモネラ関連関節症が含まれるがこれらに限定されない。本発明の抗体および抗体部分を使用して、自己免疫疾患、特に、炎症、関節リウマチ、変形性関節炎;乾癬;多発性硬化症に付随する自己免疫疾患および他の自己免疫疾患に罹っているヒトを治療することが可能である。本発明の抗体または抗体部分は、自己免疫疾患および炎症性疾患の治療において有用な1つ以上の追加の治療剤とともに投与することも可能である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、このような疾病を治療するために、単独で、または組み合わせて使用することが可能である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独で、または追加の作用物質、例えば治療剤と組み合わせて使用することが可能であり、前記追加の作用物質は、その意図される目的に対して、当業者によって選択されることを理解すべきである。例えば、追加の作用物質は、本発明の抗体によって治療されている疾病または症状を治療するのに有用であると本分野で認識されている治療剤とすることが可能である。追加の作用物質は、治療組成物に有益な属性を付与する作用物質、例えば、組成物の粘性に影響を与える作用物質とすることも可能である。本発明に含まれるべき組合せは、それらの意図される目的に対して有用な組合せであることをさらに理解すべきである。以下に記されている作用物質は、例示を目的とするものであって、限定を意図するものではない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体および以下のリストから選択される少なくとも1つの追加の作用物質であり得る。当該組合せにおいて、形成された組成物がその意図される機能を実行することが可能であれば、組合せは、2以上の追加の作用物質、例えば、2または3個の追加の作用物質を含むこともできる。特定の組合せは、NSAIDとも称される非ステロイド性抗炎症薬イブプロフェンのような薬物が含まれる。である。他の組合せは、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドである。ステロイド使用の周知の副作用は、本発明の抗TNF-α抗体と組み合わせて患者を治療するときに必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能であり、または除去することさえ可能である。本発明の抗体または抗体部分とともに組み合わせることが可能な関節リウマチに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの:サイトカイン抑制性抗炎症薬CSAID;その他のヒトサイトカインまたは成長因子例えば、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、インターフェロン、EMAP-II、GM-CSF、FGFおよびPDGFに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80B7.1、CD86B7.2、CD90、CTLAまたはCD154を含むこれらのリガンドgp39またはCD40Lなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。治療剤の特定の組合せは、異なる点で、自己免疫およびこれに続く炎症カスケードを干渉し得る。特定の例には、キメラ、ヒト化またはヒトTNF抗体、D2E7PCT公開WO97/29131、CA2Remicade商標、CDP571、および可溶性p55またはp75TNF受容体、これらの誘導体、p75TNFRIgGEnbrel商標またはp55TNFR1gGLenerceptおよびTNF-α変換酵素TACE阻害剤などのようなTNFアンタゴニストが含まれる。同様にIL-1阻害剤インターロイキン-1変換酵素阻害剤、IL-1RAなどは、同じ理由のために有効であり得る。他の組合せは、インターロイキン11との組合せである。さらに別の組合せは、TNF-α機能と平行して、IL-12機能に依存して、またはIL-12と協調して作用し得る自己免疫応答の他の中心的プレーヤとの組合せである。さらに別の組合せは、非枯渇性抗CD4阻害剤との組合せである。さらに別の組合せには、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路CD80B7.1またはCD86B7.2のアンタゴニストとの組合せである。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、6-MP、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン/ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、金チオリンゴ酸塩筋肉内および経口、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド経口、吸入および局所注射、β-2アドレナリン作動性受容体アゴニストサルブタモール、テルブタリン、サルメテラール、キサンチンテオフィリン、アミノフィリン、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、NSAID、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、TNFαまたはIL-1などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質例えば、IRAK、NIK、IKK、p38またはMAPキナーゼ阻害剤、IL-1β変換酵素阻害剤、TNFα変換酵素TACE阻害剤、キナーゼ阻害剤などのT細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体例えば、可溶性p55またはp75TNF受容体および誘導体p75TNFRIgGEnbrel商標およびp55TNFRIgGLenercept、sIL-IR1、sIL-1RII、sIL-6R、炎症抑制性サイトカイン例えば、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13およびTGFβ、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリムシノロンアセトニド、プロポキシフェンナプシラート/apap、フォラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩/apap、ジクロフェナクナトリウム/ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組み換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン/fa/ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン/コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン/アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、IL-1TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18BP、抗IL-18、抗IL15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX740、ロフルミラスト、IC-485、CDC-801およびメソプラムなどの作用物質とも組み合わされ得る。特定の組合せには、メトトレキサートまたはレフルノミドが含まれ、中度または重度の関節リウマチの症例では、シクロスポリンが含まれる。本発明の医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分の治療的有効量または予防的有効量を含み得る。治療的有効量は、所望の治療的結果を達成するための投薬量で、および所望の治療的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。抗体または抗体部分の治療的有効量は、当業者によって決定され得、病状、年齢、性別および個体の体重ならびに抗体または抗体部分が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体または抗体部分のあらゆる毒性効果または有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。予防的有効量は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量で、および所望の予防的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。典型的には、疾病のより初期段階の前にまたは疾病のより初期段階において、予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量より少ない。投薬計画は、最適な所望の応答例えば、治療的応答または予防的応答を与えるように調整され得る。例えば、単一のボーラスを投与することができ、複数の分割された用量を経時的に投与することができ、または、治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例的に減少もしくは増加させ得る。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。投薬単位形態は、治療されるべき哺乳動物患者に対する統一された投薬として適した、物理的に分離された単位を表し、各単位は、必要とされる医薬担体とともに、所望される治療効果を生じるように計算された活性化合物の所定量を含有する。本発明の投薬単位形態に対する規格は、a活性化合物の特有の特徴および達成されるべき具体的な治療効果または予防効果ならびにb個体における過敏症の治療用のこのような活性化合物を配合する分野に固有の制約によって規定され、これらに直接依存する。緩和されるべき症状の種類および重度に応じて、投薬量の値が変化し得ることに注意すべきである。いずれかの具体的な患者に対して、個体の要求に従って、組成物の投与を行いまたは監督している者の専門的判断に従って、特異的投薬計画を経時的に調整すべきこと、および、本明細書に記載されている投薬量の範囲は典型的なものに過ぎず、特許請求の範囲に記載されている組成物の範囲または実施に限定することを意図したものではないことをさらに理解すべきである。本発明の方法の他の適切な改変および適合は、本発明の範囲または本明細書に開示されている実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いてこれらを行い得ることが当業者に自明である。ここに、本発明を詳しく記載してきたが、例示のみを目的とし、本発明を限定することを意図したものではない以下の実施例を参照することによって、本発明がより明確に理解される。実施例1組み換え抗ヒトTNF-α抗体実施例1.1:組み換えキメラ抗ヒトTNF-α抗体の構築および発現マウス抗ヒトTNF-αモノクローナル抗体MAK195重鎖定常領域をコードするDNAは、細菌における相同組み換えによる2つのヒンジ領域のアミノ酸変異を含むヒトIgG1定常領域をコードするcDNA断片によって置換された。これらの変異は、234位EU番号付けのロイシンからアラニンの変更であり、235位のロイシンからアラニンの変更であるLundetal.1991J.Immunol.147:2657-2662。これらの抗体の各々の軽鎖定常領域は、ヒトκ定常領域によって置換された。全長のキメラ抗体は、PHybE発現プラスミドに連結されたキメラ重鎖および軽鎖のcDNAの同時の形質移入によってHEK293細胞において一時的に発現された。組み換えキメラ抗体を含む細胞上清は、プロテインAセファロースクロマトグラフィーによって精製され、結合した抗体は酸性緩衝液の添加によって溶出された。抗体は中和され、PBS中で透析された。次に、精製されたキメラ抗ヒトTNF-αモノクローナル抗体は、抗原結合を確認するためのELISAによりhTNF-αタンパク質に結合するその能力について試験された。実施例1.2:CDR移植された抗ヒトTNF-α抗体の構築当技術分野では周知の標準法を適用することにより、モノクローナル抗体MAK195上の表5参照のVHおよびVL鎖のCDR配列が、異なるヒト重および軽鎖アクセプター配列に移植された。本発明のモノクローナル抗体MAK195のVHおよびVL配列との配列VHおよびVLアラインメントに基づいて、以下の:a重鎖アクセプター配列を構築するためのVH4-59IGHV4-59およびVH3-53IGHV3-53、ならびに連結配列hJH4b軽鎖アクセプター配列を構築するための1-39/O12および3-15/L2、ならびにhJK2である既知のヒト配列が選択された。MAK195の対応するVHおよびVLCDRを前記アクセプター配列に移植することにより、CDR移植されたヒト化、改変VHおよびVL配列が調製された上の表6も参照。実施例1.3:CDR移植された抗体におけるフレームワーク逆突然変異の構築ヒト化抗体フレームワーク逆突然変異を作製するために、可変ドメインの新規合成によりならびに/または変異原性プライマーとPCRおよび当技術分野で周知の方法例えば、WO2007/042261;WO99/54440;Trauneckeretal.1987EMBOJ.、1012:3655-9andLanzavecchiaandScheidegger1987Eur.J.Immunol.、171:105-11参照を使用して、実施例1.2に従って調製された通りに、突然変異はCDR移植された抗体配列に導入される。逆突然変異と他の突然変異の異なる組合せは、以下のCDR移植片ごとに構築される。各ヒト化抗体の提唱される設計の概要は下に示されている。これらの突然変異の残基番号はKabat付番方式に基づいている。重鎖hMAK195VH.1zでは、以下のバーニアおよびVH/VLインターフェイシング残基のうちの1つ以上は以下の通り:G27→F、I29→L、I37→V、I48→L、V67→L、V71→K、T73→N、N76→SおよびF78→Iに逆突然変異された。追加の突然変異には、以下の:Q1→Eが含まれる。重鎖hMAK195VH.2zでは、以下のバーニアおよびVH/VLインターフェイシング残基のうちの1つ以上は以下の通り:A24→V、F29→L、V48→L、F67→L、R71→K、S49→G、N76→SおよびL78→Iに逆突然変異される。追加の突然変異には、以下の:Q1→E、I12→VおよびV29→Fが含まれる。軽鎖hMAK195Vk.1では、以下のバーニアおよびVH/VLインターフェイシング残基のうちの1つ以上は以下の通り:A43→Sに逆突然変異される。軽鎖hMAK195Vk.2zでは、以下のバーニアおよびVH/VLインターフェイシング残基のうちの1つ以上は以下の通り:A43→S、I58→Vに逆突然変異される。追加の突然変異には、以下の:V13→L、E70→DおよびS80→Pが含まれる。実施例1.4:フレームワーク逆突然変異を含有するヒト化抗hTNF-α重および軽鎖実施例1.5:ヒト化抗hTNF-αhMAK195抗体VH/VL対合実施例1.6:BIACORE技術を使用する親和性決定BIACORE法:BIACOREアッセイBiacore,Inc,Piscataway,NJは、結合定数および解離定数の反応速度測定を用いて抗体の親和性を決定する。標的抗原例えば、精製された組み換え標的抗原に対する抗体の結合は、泳動HBS-EP10mMHEPES[pH7.4]、150mMのNaCl、3mMのEDTA、および0.005サーファクタントP20を用いて25°Cにて、Biacore登録商標1000または3000装置Biacore登録商標AB,Uppsala,Swedenにより表面プラズモン共鳴に基づく測定により決定された。すべての化学物質は、Biacore登録商標ABUppsala,Swedenから入手し、または他には本明細書に記載される別の供給元から入手される。例えば、10mM酢酸ナトリウムpH4.5中に希釈された、約5000RUのヤギ抗マウスIgG、Fcγ、断片特異的なポリクローナル抗体PierceBiotechnologyInc,Rockford,Ill.,USは、製造業者の使用説明書に従って標準的なアミンカップリングキットおよび25μg/mlでの操作を用いてCM5研究等級のバイオセンサーチップ全体に直接固定化される。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンを用いてブロックする。フローセル2および4における修飾カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用する。フローセル1および3におけるヤギ抗マウスIgGなしの未修飾のカルボキシメチルデキストランを基準表面として使用する。反応速度分析のために、Biaevaluation4.0.1ソフトウェアを用いて、8個すべての注入物の結合および解離相に対して、1:1ラングミュアLangmuir結合モデルから誘導された速度方程式を同時にフィッティングさせるグローバルフィット分析を使用。ヤギ抗マウスIgG特異的反応表面の全体で捕捉するために、HEPES緩衝生理食塩水中に、精製された抗体を希釈する。リガンドとして捕捉されるべき抗体25μg/mlを5μl/分の流速で反応マトリックス全体に注入する。結合速度定数および解離結合定数のkonM-1s-1およびkoffs-1は、25μl/分の連続的流速下で決定される。10-200nMの範囲の異なる抗原濃度にて速度論結合測定を行うことによって速度定数を導く。次に、以下の式:KD=koff/konによって、速度論的速度定数から抗体および標的抗原間の反応の平衡解離定数Mを計算する。結合を時間の関数として記録し、速度論的反応定数を計算する。このアッセイでは、106M-1s-1程度に速い速度定数、および10-6s-1程度に遅い解離定数を測定することができる。Biacore技術により特徴付けられるすべてのヒト化構築物の結合は維持され、マウス親抗体の結合に匹敵していた。実施例1.7:ヒトTNF-αの中和L929細胞は半コンフルエント密度まで増殖され、0.25トリプシンGibco25300を使用して収穫された。細胞はPBSを用いて洗浄され、計測され、4μg/mLアクチノマイシンDを含有するアッセイ培地において1E6細胞/mLで再懸濁された。細胞は、容積100μLおよび5E4細胞/ウェルで96ウェルプレートCostar3599に播種された。抗体および対照IgGはアッセイ培地中4×濃度まで希釈され、連続1対4希釈が実施された。huTNF-αはアッセイ培地中400pg/mLまで希釈された。抗体試料200μLは1対2希釈配合でhuTNF-α200μlに添加され、室温で0.5時間インキュベートさせた。抗体/ヒトTNF-α溶液を、最終濃度100pg/mLhuTNF-αおよび150nM-0.0001nM抗体になるよう蒔かれた細胞に100μLで添加された。プレートは、5CO2、37°Cで20時間インキュベートされた。生存率を定量化するため、100μLがウェルから取り出され、10μLのWST-1試薬Rocheカタログ番号11644807001が添加された。プレートはアッセイ条件下で3.5時間インキュベートされた。プレートは、Spectromax190ELISAプレートリーダー上OD420-600nmで読み取られた。いくつかのアッセイからの平均EC50は、表9に含まれている。抗hTNF-α抗体はすべて、TNF-α中和アッセイにおいて中和を示した。実施例1.8:ヒト化モノクローナル抗体の物理化学的およびインビトロでの安定性分析サイズ排除クロマトグラフィー水を用いて抗体を2.5mg/mLに希釈し、20mLをTSKゲルG3000SWXLカラムTosohBioscience、カタログk5539-05kを用いてShimadzuHPLCシステム上で分析した。211mM硫酸ナトリウム、92mMリン酸ナトリウム、pH7.0を用いて、流速0.3mL/分にて試料をカラムから溶出した。HPLCシステムの操作条件は以下の通りであった:移動相:211mMのNa2SO4、92mMのNa2HPO47H20、pH7.0勾配:アイソクラチック流速:0.3mL/分検出波長:280nmオートサンプラー冷却装置温度:4°Cカラムオーブン温度:周囲実行時間:50分表10は、上のプロトコールにより決定されるパーセントモノマー予想される分子量の非凝集性タンパク質として発現される抗体構築物の純度データを含有している。抗hTNF-α抗体は優れたSECプロファイルを示しており、大半が>95モノマーを示した。ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGE還元条件下および非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGEによって抗体を分析する。AdalimumabロットAFP04Cを対照として用いる。還元条件について、100mMのDTTを含む2×トリスグリシンSDS-PAGE試料緩衝液Invitrogen、カタログLC2676、ロット1323208と1:1で試料を混合し、60°Cで30分間加熱する。非還元条件について、試料緩衝液と1:1で試料を混合し、100°Cで5分間加熱する。還元試料10mg/レーンを12プレキャストのトリス-グリシンゲルInvitrogen、カタログEC6005box、ロット6111021上に装填し、非還元試料10mg/レーンを8-16プレキャストのトリス-グリシンゲルInvitrogen、カタログEC6045box、ロット6111021上に装填する。SeeBluePlus2Invitrogen、カタログLC5925、ロット1351542を分子量マーカーとして用いる。ゲルをXCellSureLockミニセルゲルボックスInvitrogen、カタログEI0001に入れ、最初に、ゲル内の試料を積層するために電圧75を加え、次にダイフロントdyefrontがゲルの底に到達するまで定電圧125にしてタンパク質を分離する。使用される泳動緩衝液は1×トリスグリシンSDS緩衝液であり、10×トリスグリシンSDS緩衝液ABC、MPS-79-080106から調製される。コロイド状青色染色Invitrogen、カタログ46-7015、46-7016を用いてゲルを一晩染色し、バックグラウンドを除くためにMilli-Q水で脱染する。次に、EpsonExpressionスキャナーモデル1680、S/NDASX003641を用いて、染色されたゲルをスキャンする。沈降速度分析3つの標準的な2セクターのカーボンエポンセンターピースの各々の試料チャンバー内に抗体を装填する。これらのセンターピースは1.2cmの光路長を有し、サファイアウィンドウで構築される。基準緩衝液に関してはPBSを使用し、各チャンバーは140μLを含む。BeckmanProteomeLabXL-I分析用超遠心分離機シリアルPL106C01の4ホールAN-60Tiローターを用いて、すべての試料を同時に試験する。実行条件をプログラムし、ProteomeLabv5.6を用いて遠心分離制御を行う。試料およびローターは、分析前の1時間20.0±0.1°C熱平衡化させる。適切なセル装填の確認を3000rpmで行い、1回のスキャンを各ウェルについて記録する。沈降速度条件は以下の通りである:試料細胞体積:420mL基準細胞体積:420mL温度:20°Cローター速度:35,000rpm時間:8:00時間UV波長:280nm半径刻み幅:0.003cmデータ回収:信号加算平均なしの1段階あたり1データポイントスキャン総数:100完全な抗体のLC-MS分子量測定完全な抗体の分子量をLC-MSによって分析する。水を用いて各抗体を約1mg/mLに希釈する。タンパク質マイクロトラップMichromBioresources,Inc、カタログ004/25109/03を備えた1100HPLCAgilentシステムを用いて、脱塩し、試料の5mgをAPIQSTARパルサーi質量分析計AppliedBiosystemsに導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相AHPLC水中の0.08TFA、0.02TFAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.08FAおよび0.02TFAを用いて、50mL/分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は2000から3500の質量対電荷比である。抗体軽鎖および重鎖のLC-MS分子量測定抗体軽鎖LC、重鎖HCおよび脱グリコシル化されたHCの分子量測定をLC-MSによって分析する。水を用いて抗体を1mg/mLに希釈し、試料は、最終濃度が10mMのDTTを用いて、30分間、37°CでLCおよびHCに還元される。抗体を脱グリコシル化するために、100mgの抗体は、100mLの全体積中の2mLのPNGaseF、5mLの10N-オクチルグルコシドとともに、一晩37°Cにてインキュベートされる。脱グリコシル化後、最終濃度が10mMのDTTを用いて、試料を30分間、37°Cにて還元する。C4カラムVydac、カタログ214TP5115、S/N060206537204069を備えたAgilent1100HPLCシステムを用いて脱塩し、試料5mgをAPIQSTARパルサーi質量分析計AppliedBiosystemsに導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相AHPLC水中の0.08FA、0.02TFAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.08FAおよび0.02TFAを用いて、50mL/分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は800から3500の質量対電荷比である。ペプチドマッピング75mM重炭酸アンモニウム中の最終濃度が6Mの塩酸グアニジンを用いて抗体を15分間、室温にて変性させる。変性試料は、最終濃度が10mMのDTTを用いて、37°C、60分間還元させ、次に、暗所にて37°C、30分間、50mMヨード酢酸IAAを用いてアルキル化される。アルキル化後、4リットルの10mM重炭酸アンモニウムに対して、一晩4°Cで試料を透析する。透析された試料は、10mM重炭酸アンモニウム、pH7.8を用いて1mg/mLに希釈され、100mgの抗体は、1:20w/wトリプシン/Lys-C:抗体の比でトリプシンPromega、カタログV5111またはLys-CRoche、カタログ11047825001を用いて37°Cで4時間消化される。消化物は、1NのHClを1mL用いてクエンチされる。質量分析計検出を用いたペプチドマッピングについて、40mLの消化物は、Agilent1100HPLCシステムを備えた、C18カラムVydac、カタログ218TP51、S/NNE960610.3.5上で逆相高速液体クロマトグラフィーRPHPLCによって分離される。ペプチドの分離は、移動相AHPLC等級の水中の0.02TFAおよび0.08FAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.02TFAおよび0.08FAを使用する勾配を用いて、50mL/分の流速にて実行する。APIQSTARPulsari質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は800から2500の質量対電荷比である。ジスルフィド結合マッピング抗体を変性するために、100mLの抗体は、100mM重炭酸アンモニウム中の8MグアニジンHClの300mLと混合される。pHをチェックして、pHが7から8の間であることを確認し、最終濃度が6MのグアニジンHCl中で15分間、室温にて試料を変性させる。一部の変性試料100mLをMilli-Q水で600mLに希釈し、最終のグアニジン-HCl濃度を1Mとする。試料220mgは、1:50のトリプシン:抗体または1:50のLys-C:抗体w/wの比4.4mg酵素:220mg試料でトリプシンPromega、カタログV5111、ロット22265901またはLys-CRoche、カタログ11047825001、ロット12808000を用いて37°Cで約16時間消化される。さらに5mgのトリプシンまたはLys-Cを試料に添加し、消化をさらに2時間、37°Cで進行させる。各試料に1mLのTFAを添加することによって消化を停止させる。消化された試料は、AgilentHPLCシステム上のC18カラムVydac、カタログ218TP51、S/NNE020630-4-1Aを用いてRPHPLCによって分離される。分離は、移動相AHPLC等級の水中の0.02TFAおよび0.08FAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.02TFAおよび0.08FAを用いて、ペプチドマッピングについて使用されたものと同じ勾配で50mL/分の流速にて実行する。HPLCの操作条件は、ペプチドマッピングについて使用された条件と同じである。APIQSTARPulsari質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は800から2500の質量対電荷比である。ジスルフィド結合は、ペプチドの実測されたMWと、ジスルフィド結合によって連結されたトリプシンまたはLys-Cペプチドの予測されたMWとを合致させることによって割り当てられる。遊離スルフヒドリル決定抗体中の遊離システインを定量するために使用される方法は、特徴的な発色生成物である5-チオ-2-ニトロ安息香酸TNBを生じさせる、エルマン試薬である5,5’-ジチオ-ビス2-ニトロ安息香酸DTNBとスルフヒドリル基SHの反応に基づいている。反応は、式:DTNBRSH→RS-TNBTNB-Hにおいて説明される。TNB-の吸光度は、Cary50分光光度計を用いて、412nmで測定される。吸光度曲線は、遊離SH標準として2-メルカプトエタノールβ-MEの希釈を用いてプロットし、タンパク質中の遊離スルフヒドリル基の濃度は、試料の412nmでの吸光度から決定される。β-ME標準ストックは、最終濃度が0.142mMになるように、HPLC等級の水を用いて14.2Mのβ-MEを連続希釈することによって調製される。次に、各濃度について3点測定の標準を調製する。アミコンウルトラ10,000MWCO遠心フィルターMillipore、カタログUFC801096、ロットL3KN5251を用いて抗体を10mg/mLに濃縮し、緩衝液をアダリムマブについて使用した処方緩衝液5.57mMリン酸一水素ナトリウム、8.69mMリン酸二水素ナトリウム、106.69mMのNaCl、1.07mMクエン酸ナトリウム、6.45mMクエン酸、66.68mMマンニトール、pH5.2、0.1w/vTween登録商標に交換する。試料をシェーカー上で室温にて20分間混合する。次に、180mLの100mMのTris緩衝液、pH8.1を各試料に添加し、標準は、10mMリン酸緩衝液、pH8.1中の2mMのDTNBを300mL添加する。完全に混合した後、Cary50分光光度計上で412nmの吸光度について試料および標準を測定する。遊離SHの量とβ-ME標準のOD412nmをプロットすることによって、標準曲線を得る。試料の遊離SH含有量は、ブランクを差し引いた後、この曲線に基づいて計算される。弱い陽イオン交換クロマトグラフィー10mMリン酸ナトリウム、pH6.0を用いて抗体を1mg/mLに希釈する。電荷異質性は、WCX-10ProPac分析用カラムDionex、カタログ054993、S/N02722を備えたShimadzuHPLCシステムを用いて分析される。試料を80移動相A10mMリン酸ナトリウム、pH6.0および20移動相B10mMリン酸ナトリウム、500mMのNaCl、pH6.0においてカラムに充填し、1.0mL/分の流速で溶出する。オリゴ糖プロファイリング抗体のPNGaseF処理後に放出されるオリゴ糖は、2-アミノベンズアミド2-AB標識試薬を用いて誘導される。蛍光標識されたオリゴ糖は、順相の高速液体クロマトグラフィーNPHPLCによって分離され、異なる形態のオリゴ糖は、保持時間に基づいて、既知の標準と比較して特徴付けられる。抗体を最初にPNGaseFを用いて消化し、重鎖のFc部分からN結合のオリゴ糖を切断する。2mLのPNGaseFおよび3mLの10N-オクチルグルコシドとともに500mLエッペンドルフチューブに抗体200mgを入れる。リン酸緩衝生理食塩水を添加し、最終体積を60mLにする。700RPMに設定したエッペンドルフのサーモミキサー中で一晩37°Cにて試料をインキュベートする。また、AdalimumabロットAFP04Cを対照としてPNGaseFを用いて消化する。PNGaseF処理後、750RPMに設定されたエッペンドルフのサーモミキサー中で95°C、5分間、試料をインキュベートしてタンパク質を沈殿させ、次に、2分間、10,000RPMでエッペンドルフの遠心分離機に試料を置き、沈殿したタンパク質を沈降させる。オリゴ糖を含む上清を500mLのエッペンドルフチューブに移し、スピード-vac中、65°Cで乾燥させる。Prozymeから購入される2AB標識キットカタログGKK-404、ロット132026を用いて、オリゴ糖を2ABで標識する。製造業者の使用説明書に従って標識試薬を調製する。酢酸150mL、キットにおいて提供されるをDMSOバイアルキットにおいて提供されるに添加し、溶液を数回、上下にピペッティングすることによって混合する。酢酸/DMSO混合物100mLを2-AB色素のバイアル使用直前に移し、色素が完全に溶解するまで混合する。次に、色素溶液を還元剤キットにおいて提供されるのバイアルに添加し、十分に混合に混合する標識試薬。標識試薬5mLを各々乾燥させたオリゴ糖試料バイアルに添加し、完全に混合する。65°Cで700-800RPMに設定されたエッペンドルフのサーモミキサーに反応バイアルを置き、2時間反応させる。標識反応後、Prozymeから入手されるGlycoCleansカートリッジカタログGKI-4726を用いて過剰の蛍光色素を取り除く。試料を添加前、カートリッジを1mLのMilli-Q水で洗浄し、その後、1mLの30酢酸溶液で5回洗浄する。試料を添加直前に、1mLのアセトニトリルBurdickandJackson、カタログAH015-4をカートリッジに添加する。すべてのアセトニトリルがカートリッジを通過した後、新たに洗浄したディスクの中心に試料をスポット状に置き、ディスク上に10分間吸着させる。1mLのアセトニトリルを用いてディスクを洗浄し、続いて、1mLの96アセトニトリルで5回洗浄する。カートリッジを1.5mLのエッペンドルフチューブ上に置き、2-AB標識されたオリゴ糖をMilli-Q水の3回の洗浄各洗浄あたり400mLにより溶出させる。ShimadzuHPLCシステムに連結させたGlycosepNHPLCカタログGKI-4728カラムを用いてオリゴ糖を分離する。ShimadzuHPLCシステムは、システムコントローラー、脱気装置、二重ポンプ、試料冷却器を備えたオートサンプラーおよび蛍光検出器からなっていた。高温での安定性適切な緩衝液、界面活性剤、安定化剤および/または糖を用いて、抗体の最終濃度を2mg/mLに調整する。次に、抗体溶液を濾過滅菌し、0.25mLのアリコートを無菌条件下で調製する。アリコートを-80°C、5°C、25°Cまたは40°Cで1、2または3週間放置する。インキュベーション期間の終わりに、サイズ排除クロマトグラフィーおよびSDS-PAGEによって試料を分析する。安定性試料は、還元条件下および非還元条件下でSDS-PAGEによって分析される。使用される手法は、本明細書に記載されたものと同じである。コロイド状青色染色Invitrogen、カタログ46-7015、46-7016を用いてゲルを一晩染色させ、バックグラウンドが透明になるまでMilli-Q水で脱染される。次に、EpsonExpressionスキャナーモデル1680、S/NDASX003641を用いて、染色されたゲルをスキャンする。高い感度を得るために、銀染色キットOwlScientific,GelCompany,SanFrancisco,Calif.USを用いて同じゲルを銀染色し、製造業者によって提供される推奨の手順を用いる。実施例1.9:HEK293-6E細胞における形質移入および発現タンパク質を生成するために、抗hTNF-α抗体ベクター構築物を293細胞に形質移入する。使用された293の一時的な形質移入の手法は、Durocheretal.2002Nucl.AcidsRes.302e9:1-9およびPhamら2005Biotech.Bioeng.903:332-44において公開された方法の変法である。形質移入において使用された試薬には以下のものが含まれる:130rpm、37°Cおよび5CO2に設定された加湿インキュベーター内で使い捨ての三角フラスコにおいて培養されるHEK293-6E細胞NationalResearchCouncilCanadaから入手されるEBNA1を安定に発現するヒト胎児腎臓細胞株。培養液:FreeStyle293発現培地Invitrogen12338-01825μg/mLジェネティシンGeneticinG418Invitrogen10131-027および0.1PluronicF-68Invitrogen24040-032。形質移入培地:FreeStyle293発現培地10mMのHEPESInvitrogen15630-080。ポリエチレンイミンPEI保存液:25kDaの直鎖状PEIPolyscienceを用いて調製され、-15°C未満で保存される1mg/mL無菌保存溶液、pH7.0。トリプトン供給培地:FreeStyle293発現培地中のトリプトンN1Organotechnie、19554の5w/v無菌保存液。形質移入のための細胞調製:形質移入の約2-4時間前に、遠心分離によってHEK293-6E細胞を回収し、約100万個の生細胞/mLの細胞密度で培養液中に再懸濁させた。各形質移入について、40mLの細胞懸濁液を使い捨ての250mL三角フラスコに移し、2-4時間インキュベートした。形質移入:形質移入培地およびPEI保存液を予め室温RTに温めた。各形質移入について、25μgのプラスミドDNAおよび50μgのポリエチレンイミンPEIを5mLの形質移入培地と合わせて、15-20分間RTにてインキュベートし、DNA:PEI複合体を形成させるようにした。BR3-Ig形質移入について、25μgのBR3-Igプラスミドを形質移入ごとに用いた。各5mLのDNA:PEI複合混合物は、予め調製した40mLの培養物に添加し、130rpm、37°Cおよび5CO2に設定した加湿インキュベーターに戻された。20-28時間後、5mLのトリプトン供給培地を各形質移入に添加され、培養を6日間継続した。表11は、HEK293-6E細胞中リットルあたりミリグラムとして発現される親抗体の産生量データを含有する。すべての抗体がHEK293-6E細胞ではよく発現した。大半の場合、HEK293-6E細胞の上清から、>50mg/Lの精製された抗体を容易に得ることができた。参照による組み込み本発明は、分子生物学および薬物送達の分野において周知の技法を、参照によりその全体に組み込む。これらの技法には、以下の出版物に記載される技法を含むが、これらに限定されない。本出願を通して引用される、すべての引用される参考資料参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含むの内容は、これによって、これらの参考資料がそこに記載されているかのように、参考資料の全体を参照することにより明確に組み込まれる。本発明の実施は、別段の記載がない限り、当該技術分野において周知である免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来技術を使用する。均等本発明は、その精神または本質的な特徴から逸脱せずに他の具体的な形態において体現されもよい。したがって、前述の実施形態は、本明細書に記載されている本発明を限定するというよりはむしろ、すべての点において例示していると考えるべきである。よって、本発明の範囲は、前述の記載によるというよりはむしろ、添付される特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内にあるすべての変更は本明細書に包含されることが意図される。"