インターフェロンベータ及び免疫グロブリンFc領域が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール-プロピレングリコール共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択される非ペプチド性重合体により連結されたインターフェロンベータ結合体を含む、生体内持続性及び安定性が増加したインターフェロンベータの持続性製剤。前記インターフェロンベータのN末端に前記非ペプチド性重合体が連結されたものである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記インターフェロンベータが、インターフェロンベータ1b又はインターフェロンベータ1aである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記非ペプチド性重合体の両末端が、それぞれ前記免疫グロブリンFc領域と前記インターフェロンベータのアミノ基又はチオール基Thiolgroupに結合されたものである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域が、天然アミノ酸配列、又は天然アミノ酸が欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるいずれかの方法により変異した配列を有するものである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域が非グリコシル化されたものである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域が、CH1、CH2、CH3及びCH4ドメインからなる群から選択される1つ~4つのドメインからなるものである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域が、CH1、CH2、CH3及びCH4ドメインからなる群から選択される重鎖不変領域及び軽鎖不変領域の二量体からなるものである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域がヒンジ領域をさらに含むものである請求項7に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域が、IgG、IgA、IgD、IgE又はIgMに由来するFc領域である請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域のそれぞれのドメインが、IgG、IgA、IgD、IgE及びIgMからなる群から選択される免疫グロブリンに由来する異なる起源を有するドメインのハイブリッドである請求項10に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域が、同一起源の単鎖免疫グロブリンで構成された二量体又は多量体である請求項10に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域がIgG4Fc領域である請求項10に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記免疫グロブリンFc領域がヒト非グリコシル化IgG4Fc領域である請求項13に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記非ペプチド性重合体の分子量が1kDa以上100kDa以下の範囲である請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記非ペプチド性重合体の分子量が1kDa以上20kDa以下の範囲である請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記非ペプチド性重合体の反応基が、アルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、ブチルアルデヒド基、マレイミド基及びスクシンイミド誘導体からなる群から選択されるものである請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記スクシンイミド誘導体が、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルカルボキシメチル、ヒドロキシスクシンイミジル又はスクシンイミジルカーボネートである請求項17に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記非ペプチド性重合体が、両末端に反応アルデヒド基を有するものである請求項17に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。ウイルス感染、自己免疫疾患、癌及び神経退行性障害からなる群から選択される疾患の治療又は予防用である請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記癌は、卵巣癌、乳癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、結腸癌、膀胱癌、腎臓癌、胃癌、膵臓癌、頭頸部癌、皮膚癌、神経腫、癌腫、肉腫、腺腫及び骨髄腫からなる群から選択されるものである請求項20に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記神経退行性障害が多発性硬化症である請求項20に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。前記多発性硬化症が、再発緩和型、原發性進行型及び二次進行型多発性硬化症からなる群から選択されるものである請求項22に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。公知の抗ウイルス剤、抗癌剤、抗炎症剤、自己免疫疾患及び多発性硬化症の予防又は治療剤からなる群から選択される薬剤をさらに含むものである請求項20に記載のインターフェロンベータの持続性製剤。1両末端にアルデヒド、マレイミド又はスクシンイミド誘導体反応基を有する非ペプチド性重合体をインターフェロンベータのアミノ基又はチオール基に共有結合により連結する段階と、2前記1の反応混合物からN末端以外の位置に非ペプチド性重合体が共有結合したインターフェロンベータを含む連結体を分離する段階と、3分離した連結体の非ペプチド性重合体の他方の末端に免疫グロブリンFc領域を共有結合により連結し、非ペプチド性重合体の両末端がそれぞれ免疫グロブリンFc領域及びインターフェロンベータに結合された結合体を生成する段階とを含む、請求項1に記載のインターフェロンベータの持続性製剤の製造方法。ウイルス感染、自己免疫疾患、癌又は神経退行性障害を患う個体に有効量の請求項1に記載の持続性製剤を投与する段階を含む、ウイルス感染、自己免疫疾患、癌又は神経退行性障害を有する個体の治療方法。よって、本出願人はインターフェロンベータの血中半減期の増加と生体内活性の維持を同時に最大化する方法として、免疫グロブリンFc領域、非ペプチド性重合体及びインターフェロンベータを共有結合により部位選択的に互いに連結させる製造方法を用いた。その結果、インターフェロンベータ結合体の血中半減期が画期的に増加し、公知のペグ化インターフェロンベータより血中半減期の増加効果がはるかに改善された。さらに、結合体の低い溶解性と多量の投与量を欠点とするが、生産が容易で製造コストが低いという利点を有する、グリコシル化されていないインターフェロンベータ1bのFc結合体は、グリコシル化されたインターフェロンベータ1aのFc結合体と比較して、血中半減期及び力価が同等又はより高いことが確認された。本発明の目的は、インターフェロンベータの生体内活性を維持しながらも血中半減期を延長させて一層優れたインターフェロンベータ持続性製剤及びその製造方法を提供することにある。本発明のインターフェロンベータ薬物結合体は、ペプチドの生体内活性が比較的高く維持され、血中半減期が大幅に増加するという効果がある。上記目的を達成するための一態様として、本発明は、両末端に反応基を有する非ペプチド性重合体を介して、インターフェロンベータ及び免疫グロブリンFc領域が共有結合により連結されたインターフェロンベータ結合体を含む、生体内持続性及び安定性が増加したインターフェロンベータの持続性製剤を提供する。本発明のインターフェロンベータは、抗ウイルス活性を有して細胞増殖を抑制すると共に、抗増殖、リンパ球細胞毒性増大、自然免疫調節、マクロファージ活性化、細胞毒性T細胞効果増加、マクロファージ効果増加などの機能を有し、ウイルス感染、自己免疫疾患、癌及び多発性硬化症の治療に用いられるタンパク質である。インターフェロンベータは、インターフェロンベータ1b、インターフェロンベータ1a又はその類似型であることが好ましい。本発明のインターフェロンベータはN末端特異的結合体であることが好ましい。本発明者らは、N末端に結合させることにより活性が増加することを確認した。本発明において、活性という用語は、インターフェロンベータがインターフェロンベータ受容体に結合してインターフェロンベータとして機能することを意味する。このようなN末端特異的結合体の製造はpH調整により行われ、好ましいpH範囲は4.5~7.5である。本発明において、N末端という用語は、N末端領域という用語と混用される。持続型インターフェロンベータの製造に用いられる免疫グロブリンFc領域は、生体内で代謝される生分解性のポリペプチドであるので、薬物のキャリアとして安全に使用できる。また、免疫グロブリンFc領域は、全免疫グロブリン分子に比べて相対的に分子量が小さいので、結合体の製造、精製及び収率の面で有利である。アミノ酸配列が抗体毎に異なることから高い非均質性を示すFab部分を除去することにより、物質の同質性が大幅に増加し、血中抗原性の誘発可能性も低くなるという効果も期待することができる。本発明において、免疫グロブリンFc領域とは、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の可変領域、重鎖不変領域1CH1及び軽鎖不変領域CL1を除いたものであり、重鎖不変領域2CH2及び重鎖不変領域3CH3部分を含むタンパク質を意味する。重鎖不変領域にヒンジhinge部分をさらに含んでもよい。また、本発明の免疫グロブリンFc領域は、天然型と実質的に同等又は向上した効果を有するものであれば、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖の可変領域を除き、一部又は全部の重鎖不変領域1CH1及び/又は軽鎖不変領域1CL1を含む拡張されたFc領域であってもよい。さらに、CH2及び/又はCH3に該当する非常に長い一部のアミノ酸配列が除去された領域であってもよい。すなわち、本発明の免疫グロブリンFc領域は、1CH1ドメイン、CH2ドメイン、CH3ドメイン及びCH4ドメイン、2CH1ドメイン及びCH2ドメイン、3CH1ドメイン及びCH3ドメイン、4CH2ドメイン及びCH3ドメイン、51つ又は2つ以上のドメインと免疫グロブリンヒンジ領域又はヒンジ領域の一部との組み合わせ、6重鎖不変領域の各ドメインと軽鎖不変領域の二量体であってもよい。また、本発明の免疫グロブリンFc領域は、天然アミノ酸配列だけでなく、その配列誘導体mutantをも含む。アミノ酸配列誘導体とは、天然アミノ酸配列中の少なくとも1つのアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的もしくは保存的置換、又はそれらの組み合わせにより異なる配列を有するものを意味する。例えば、IgGFcの場合、結合に重要であることが知られている214~238、297~299、318~322又は327~331番アミノ酸残基が変形のために適当な部位として用いられる。また、ジスルフィド結合を形成する部位が除去されるか、天然型FcからN末端のいくつかのアミノ酸が除去されるか、又は天然型FcのN末端にメチオニン残基が付加されるなど、様々な種類の誘導体が可能である。また、エフェクター機能をなくすために、補体結合部位、例えばC1q結合部位が除去されてもよく、ADCC部位が除去されてもよい。このような免疫グロブリンFc領域の配列誘導体を製造する技術は、国際公開第97/34631号、国際公開第96/32478号などに開示されている。分子の活性を全体的に変更させないタンパク質及びペプチドにおけるアミノ酸交換は当該分野において公知であるHNeurathRLHillTheProteinsAcademicPressNewYork1979。最も一般的な交換はAla/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Thy/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、Asp/Gly間の双方向の交換である。場合によっては、Fc領域はリン酸化phosphorylation、硫酸化sulfation、アクリル化acrylation、グリコシル化glycosylation、メチル化methylation、ファネシル化farnesylation、アセチル化acetylation、アミド化amidationなどにより修飾modificationされてもよい。前述したFc誘導体は、本発明のFc領域と同じ生物学的活性を示すが、Fc領域の熱、pHなどに対する構造的安定性を増大させた誘導体である。また、このようなFc領域は、ヒト、及びウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモットなどの他の動物の生体内から分離した天然型から得てもよく、形質転換された動物細胞もしくは微生物から得られた組換え型又はその誘導体であってもよい。ここで、天然型から得る方法は、全免疫グロブリンをヒト又は動物の生体から分離し、その後タンパク質分解酵素を処理して得ることができる。パパインを処理するとFab及びFcに切断され、ペプシンを処理するとpF’c及びFab2に切断される。これらの断片は、サイズ排除クロマトグラフィーsizeexclusionchromatographyなどを用いてFc又はpF’cを分離することができる。ヒト由来のFc領域は、微生物から得られた組換え型免疫グロブリンFc領域であることが好ましい。また、本発明の免疫グロブリンFc領域は、天然型糖鎖、天然型に比べて増加した糖鎖、天然型に比べて減少した糖鎖、又は糖鎖が除去された形態であってもよい。このような免疫グロブリンFc糖鎖の増減又は除去には、化学的方法、酵素学的方法、微生物を用いた遺伝工学的方法などの通常の方法が用いられる。Fcから糖鎖が除去された免疫グロブリンFc領域は、補体c1qの結合力が著しく低下し、抗体依存性細胞毒性又は補体依存性細胞毒性が低下又は除去されるので、生体内で不要な免疫反応を誘発しない。このようなことから、糖鎖が除去されるか、非グリコシル化された免疫グロブリンFc領域は、薬物のキャリアとして本発明の目的に適する。本発明において、糖鎖の除去Deglycosylationとは、酵素で糖を除去したFc領域を意味し、非グリコシル化Aglycosylationとは、原核生物、好ましくは大腸菌から産生されてグリコシル化されていないFc領域を意味する。また、免疫グロブリンFc領域は、IgG、IgA、IgD、IgE、IgM由来、又はそれらの組み合わせcombinationもしくはそれらのハイブリッドhybridによるFc領域であってもよい。ヒト血液に最も豊富なIgG又はIgM由来であることが好ましく、リガンド結合タンパク質の半減期を向上させることが知られているIgG由来であることが最も好ましい。本発明において、組み合わせcombinationとは、同一起源の単鎖免疫グロブリンFc領域を暗号化するポリペプチドが異なる起源の単鎖ポリペプチドに結合して二量体又は多量体を形成することを意味する。すなわち、IgGFc、IgAFc、IgMFc、IgDFc及びIgEのFc断片からなる群から選択される2つ以上の断片から二量体又は多量体を製造することができる。本発明において、ハイブリッドhybridとは、2つ以上の異なる起源の免疫グロブリンFc断片に該当する配列が単鎖免疫グロブリンFc領域内に存在することを意味する用語である。本発明においては、様々な形態のハイブリッドが可能である。すなわち、IgGFc、IgMFc、IgAFc、IgEFc及びIgDFcのCH1、CH2、CH3及びCH4からなる群から選択される1つ~4つのドメインのハイブリッドが可能であり、ヒンジを含んでもよい。一方、IgGもIgG1、IgG2、IgG3及びIgG4のサブクラスに分けられ、本発明においては、それらの組み合わせ又はそれらのハイブリッド化も可能である。IgG2及びIgG4サブクラスであることが好ましく、補体依存性細胞毒性CDCComplementdependentcytotoxicityなどのエフェクター機能effectorfunctionのほとんどないIgG4のFc領域であることが最も好ましい。本発明の薬物のキャリアとして最も好ましい免疫グロブリンFc領域は、ヒトIgG4由来の非グリコシル化されたFc領域である。ヒト由来のFc領域は、ヒト生体において抗原として作用し、それに対する新規な抗体を生成するなどの好ましくない免疫反応を起こす非ヒト由来のFc領域に比べて好ましい。本発明において、非ペプチド性重合体とは、繰り返し単位が2つ以上結合された生体適合性重合体を意味し、前記繰り返し単位はペプチド結合を除く任意の共有結合により互いに連結される。本発明に使用可能な非ペプチド性重合体は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコールとプロピレングリコールの共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド、デキストラン、ポリビニルエチルエーテル、PLAポリ乳酸polylacticacid及びPLGAポリ乳酸-グリコール酸polylacticglycolicacidなどの生分解性高分子、脂質重合体、キチン類、ヒアルロン酸及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくはポリエチレングリコールである。当該分野に知られたこれらの誘導体や当該分野の技術水準で容易に製造できる誘導体も本発明に含まれる。従来のインフレームフュージョンinframefusion方法で製造された融合タンパク質に用いられていたペプチド性リンカーの欠点は、生体内でタンパク質分解酵素により容易に切断され、キャリアによる活性薬物の血中半減期の増加効果を期待したほど得られないということである。しかし、本発明においては、タンパク質分解酵素に抵抗性のある重合体を用いるので、キャリアと同様にペプチドの血中半減期を維持することができる。よって、本発明において用いられる非ペプチド性重合体は、このような役割を果たすもの、すなわち生体内のタンパク質分解酵素に抵抗性のある重合体であれば限定されることなく用いられる。非ペプチド性重合体の分子量は、1~100kDaの範囲、好ましくは1~90kDaの範囲、より好ましくは1~80kDaの範囲、より好ましくは1~70kDaの範囲、より好ましくは1~60kDaの範囲、より好ましくは1~50kDaの範囲、より好ましくは1~40kDaの範囲、より好ましくは1~30kDaの範囲、最も好ましくは1~20kDaの範囲である。また、前記免疫グロブリンFc領域に結合される本発明の非ペプチド性重合体は、1種類の重合体だけでなく、異なる種類の重合体の組み合わせが用いられてもよい。本発明に用いられる非ペプチド性重合体は、免疫グロブリンFc領域及びタンパク質薬物に結合される反応基を有する。前記非ペプチド性重合体の両末端反応基は、反応アルデヒド基、プロピオンアルデヒド基、ブチルアルデヒド基、マレイミドmaleimide基及びスクシンイミドsuccinimide誘導体からなる群から選択されることが好ましい。前記スクシンイミド誘導体としては、スクシンイミジルプロピオネート、ヒドロキシスクシンイミジル、スクシンイミジルカルボキシメチル又はスクシンイミジルカーボネートが用いられる。特に、前記非ペプチド性重合体が両末端又は三末端に反応アルデヒド基の反応基を有する場合、非特異的反応を最小限に抑え、非ペプチド性重合体の両末端で生理活性ポリペプチド及び免疫グロブリンとそれぞれ結合するのに効果的である。アルデヒド結合による還元性アルキル化で生成された最終産物は、アミド結合により連結されたものよりはるかに安定的である。アルデヒド反応基は、低いpHではN末端に選択的に反応し、高いpH、例えばpH9.0の条件ではリシン残基と共有結合を形成することができる。前記非ペプチド性重合体の両末端反応基は、同じものであってもよく、異なるものであってもよい。例えば、一末端にはマレイミド基、他の末端にはアルデヒド基、プロピオンアルデヒド基又はブチルアルデヒド基を有してもよい。両末端にヒドロキシ反応基を有するポリエチレングリコールを非ペプチド性重合体として用いる場合、公知の化学反応により前記ヒドロキシ基を前述した様々な反応基として活性化してもよく、商業的に入手可能な変形した反応基を有するポリエチレングリコールを用いて本発明のタンパク質結合体を製造してもよい。本発明の持続性製剤は、生体内持続性及び安定性を維持する上で優れた効果がある。本発明の具体的な実施例によれば、本発明のインターフェロンベータ持続性製剤は、天然型インターフェロンベータに比べて半減期が約10倍増加した表1。本発明の持続性製剤は、インターフェロンベータが標的組織に送達されるものであれば、いかなる一般的な経路を介して投与してもよい。投与方法は、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻腔内投与、肺内投与、直腸内投与などであるが、これらに限定されるものではない。しかし、経口投与の場合はペプチドが消化されるので、経口用組成物は、活性薬剤をコーティングしたり、胃での分解から保護されるように剤形化することが好ましい。持続性製剤は、注射剤の形態で投与されることが好ましい。また、本発明の持続性製剤は、活性物質を標的細胞に送達することのできる任意の装置により投与することができる。本発明の結合体を含む持続性製剤は、薬学的に許容される担体を含んでもよい。薬学的に許容される担体としては、経口投与の場合は結合剤、潤滑剤、崩壊剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素、香料などを用いてもよい。薬学的に許容される担体としては、注射剤の場合は緩衝剤、保存剤、無痛化剤、可溶化剤、等張化剤、安定化剤などを混合して用いてもよい。薬学的に許容される担体としては、局所投与用の場合は基剤、賦形剤、潤滑剤、保存剤などを用いてもよい。本発明の持続性製剤は、前述した薬学的に許容される担体と混合して様々な形態に製造してもよい。例えば、持続性製剤は、経口投与の場合は錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハー剤などの形態に製造してもよい。持続性製剤は、注射剤の場合は使い捨てアンプル又は複数回投薬形態に製造してもよい。また、持続性製剤は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、徐放型製剤などに剤形化してもよい。製剤化に適する担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、澱粉、アカシア、アルギネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム又は鉱物油が挙げられる。また、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料及び防腐剤をさらに含んでもよい。本発明の持続性製剤は、治療する疾患、投与経路、患者の年齢、性別及び体重、並びに疾患の重篤度などの様々な関連因子と共に、活性成分である薬物の種類により決定される。本発明の持続性製剤は、生体内持続性及び力価に優れるので、本発明の持続性製剤の投与回数及び頻度を著しく減少させることができる。本発明の持続性製剤は、インターフェロンベータの生体内持続性及び安定性を非常に高く維持するので、ウイルス感染、自己免疫疾患、癌及び神経退行性障害からなる群から選択される疾患の治療又は予防に効果的である。前記癌は、卵巣癌、乳癌、子宮癌、前立腺癌、精巣癌、肺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、結腸癌、膀胱癌、腎臓癌、胃癌、膵臓癌、頭頸部癌、皮膚癌、神経腫、癌腫、肉腫、腺腫及び骨髄腫を含む。前記神経退行性障害は、多発性硬化症、より具体的には再発緩和型、原發性進行型及び二次進行型多発性硬化症を含む。本発明の他の態様として、本発明は、1両末端にアルデヒド、マレイミド又はスクシンイミド誘導体反応基を有する非ペプチド性重合体を用いてインターフェロンベータのアミノ基又はチオール基に共有結合により連結する段階と、2前記1の反応混合物からN末端以外の位置に非ペプチド性重合体が共有結合したインターフェロンベータを含む連結体を分離する段階と、3分離した連結体の非ペプチド性重合体の他方の末端に免疫グロブリンFc領域を共有結合により連結し、非ペプチド性重合体の両末端がそれぞれ免疫グロブリンFc領域及びインターフェロンベータに結合された結合体を生成する段階とを含むインターフェロンベータ持続性製剤の製造方法を提供する。本発明のさらに他の態様として、本発明は、ウイルス感染、自己免疫疾患、癌又は神経退行性障害を患う個体に有効量の前記持続性製剤を投与する段階を含む、ウイルス感染、自己免疫疾患、癌又は神経退行性障害を有する固体の治療方法を提供する。ここで、個体はヒト、ヒト以外の霊長類、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタなどの哺乳類であってもよい。以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。ただし、下記実施例は本発明を例示するものにすぎず、本発明がこれらに限定されるものではない。[実施例1]ペグ化されたインターフェロンベータ1bの精製本出願人が自家生産したインターフェロンベータ1bハンミ-インターフェロンベータ1bを1mg/mLの濃度にし、3.4kDaPropionylALD2PEGをインターフェロンベータのN末端にペグ化させるために、インターフェロンとPEGのモル比が1:15となるようにPEGを添加して完全に溶解させた。その後、還元剤であるNaCNBH3を20mMとなるように加え、常温で90分間反応させた。その後、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる50mMpotassiumphosphatepH60で10倍に希釈し、SPHPカラムHitrap5mLGEHealthcare社に注入した。SPHPカラムは、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60で平衡が保たれたカラムであり、流速は5mL/minとした。モノペグ化されたインターフェロンを精製するために、zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60と1MNaClを0~40となるように40カラム体積流してモノペグ化されたインターフェロンベータ1bを精製した。[実施例2]インターフェロンベータ1b-免疫グロブリンFc結合体の製造実施例1の方法を用いて得たペグ化されたインターフェロンベータ1bを免疫グロブリンFcとカップリングさせた。インターフェロンベータと免疫グロブリンFcのモル比を1:10とし、全タンパク質濃度を50mg/mLとして4°Cで16時間反応させた。ここで、還元剤として20mMとなるようにNaCNBH3を加えた。その後、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる50mMpotassiumphosphatepH60で15倍に希釈し、SPHPカラムHitrap5mLGEHealthcare社に注入した。SPHPカラムは、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60で平衡が保たれたカラムであり、流速は5mL/minとした。カップリングタンパク質を溶出するために、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60と1MNaClを0~40の線形勾配で40カラム体積流して溶出した。SPHPカラムで未反応の免疫グロブリンFcを除去した。前記SPHPで溶出したカップリングタンパク質溶液を0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMTris-HClpH80で20倍に希釈し、QHPカラムHitrap5mLGEHealthcare社に注入した。QHPカラムは、0.05zwittergent3-14が含まれる20mMTris-HClpH80で平衡が保たれたカラムであり、流速は5mL/minとした。インターフェロンベータ-PEG-免疫グロブリンFcを精製するために、0.05zwittergent3-14が含まれる20mMTris-HClpH80と1MNaClを0~40の線形勾配で40カラム体積流した。前記QHPカラムで精製されたインターフェロンベータ1b-免疫グロブリンFc結合体をRP-HPLCで分析して図1に示す。[実施例3]ペグ化されたインターフェロンベータ1aの精製インターフェロンベータ1aGEMABiotech社をペグ化するために、バッファ組成を0.05zwitergent3-14detergentが含まれる50mMpotassiumphosphatepH60と100mMNaClに変更した。インターフェロンベータ1aを1mg/mLの濃度にし、インターフェロンベータのN末端にペグ化させるために、インターフェロンとPEGのモル比が1:20となるように3.4kDabutyrALD2PEGを添加して完全に溶解させた。その後、ペグ化反応のための還元剤として20mMNaCNBH3を用い、常温で90分間反応させた。その後、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60で10倍に希釈し、SPHPカラムHitrap5mLGEHealthcare社に注入した。SPHPカラムは、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60で平衡が保たれたカラムであり、流速は5mL/minとした。モノペグ化されたインターフェロンを精製するために、zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60と1MNaClを0~40となるように40カラム体積流して精製した。3.4kDaPropionylALD2PEGをインターフェロンベータ1aと反応させ、モノペグ化されたインターフェロンベータを精製した。[実施例4]インターフェロンベータ1a-免疫グロブリンFc結合体の製造実施例3で精製したモノペグ化monopeylationされたインターフェロンベータを免疫グロブリンFcとカップリングさせた。インターフェロンベータと免疫グロブリンFcのモル比を1:50とし、全タンパク質濃度を50mg/mLとして常温で2時間反応させた。ここで、還元剤として20mMNaCNBH3を加えた。その後、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60で15倍に希釈し、SPHPカラムHitrap5mLGEHealthcare社に注入した。SPHPカラムは、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60で平衡が保たれたカラムであり、流速は5mL/minとした。カップリングタンパク質を溶出するために、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60と1MNaClを0~40の線形勾配で40カラム体積流して溶出した。SPHPカラムで未反応の免疫グロブリンFcを除去した。前記SPHPで溶出したカップリングタンパク質溶液に2Mammoniumsulfateを1.5Mammoniumsulfateとなるように徐々に攪拌しながら加え、SOURCEISO1mlGEHealthcare社カラムに注入した。SOURCEISOカラムは、50mMpotassiumphosphatepH60、1.5Mammoniumsulfateバッファで平衡が保たれたカラムであり、流速は3mL/minとした。カップリングタンパク質を溶出するために、50mMpotassiumphosphateバッファを0~100の線形勾配で90カラム体積流して精製した。[実施例5]インターフェロンベータ1b-20kDaPEGの製造ハンミインターフェロンベータ1bを1mg/mLの濃度にし、20kDaPropionylALDPEGをインターフェロンベータのN末端にペグ化させるために、インターフェロンとPEGのモル比が1:15となるようにPEGを添加して完全に溶解させた。ペグ化バッファとしては、0.05wittergent3-14が含まれる100mMpotassiumphosphatepH60と5mMNaClを用いた。ペグ化反応のための還元剤として20mMNaCNBH3を用い、常温で90分間反応させた。その後、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる50mMpotassiumphosphatepH60で10倍に希釈し、SPHPカラムHitrap5mLGEHealthcare社に注入した。SPHPカラムは、0.05zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60で平衡が保たれたカラムであり、流速は5mL/minとした。モノペグ化されたインターフェロンを精製するために、zwitergent3-14detergentが含まれる20mMpotassiumphosphatepH60と1MNaClを0~40となるように40カラム体積流してモノペグ化されたインターフェロンベータ1bを精製した。[実施例6]インターフェロンベータ1a-20kDaの製造インターフェロンベータ1aGEMABiotech社を1mg/mLの濃度にし、インターフェロンベータのN末端にペグ化させるために、インターフェロンとPEGのモル比が1:5となるように20kDaPropionylALDPEGを添加し、150mMNaClを含む50mMSodiumphosphateバッファpH65に完全に溶解した。還元剤であるNaCNBH3を20mMとなるように加え、常温で18時間反応させた。その後、濃縮してSuperdex75カラム120mLGEHealthcare社に注入した。カラムは、150mMNaClが含まれる30mMSodiumphosphateバッファpH65で平衡が保たれたカラムであり、流速を1mL/minとしてモノペグ化インターフェロンベータ1aを精製した。[実施例7]持続型インターフェロンのinvitro活性及びPKの測定インターフェロンベータ持続性製剤の効力及び薬物動態学的因子を測定する方法としてinvitro細胞活性を測定する方法を用いた。通常は、インターフェロンベータのinvitro活性の測定方法としてWISHcellATCCが用いられ、Cytopathiceffectを確認する試験が行われる。WISHcellにインターフェロンベータと持続型インターフェロンベータ試験物質を濃度別に処理し、VesicularStomatitisVirusからのprotection能力をEC50値で測定してinvitro活性を測定した。また、インターフェロンベータ及び持続性製剤を投与した動物NormalSDratの血漿を分離し、invitro活性測定と同じ方法であるCPEassay法で薬物動態学的因子を算出した。表1に各物質のinvitro細胞活性と血中半減期を示す。ここで、invitro細胞活性は、全体的にインターフェロンベータ1aAvonexの値で比較し、ハンミ-インターフェロンベータ1b-Fc結合体は、結合体製造前のハンミ-インターフェロンベータ1bに比べて同等以上の力価を有することが確認された。天然型インターフェロンベータ1bの場合、T1/2が4.28時間と血中で短い持続力を有することが確認された。インターフェロンベータ1b-Fc結合体は、インターフェロンベータ1a-Fc結合体より、血中半減期は短いが、invitro力価は高いことが確認された。また、インターフェロンベータ-Fc結合体は、インターフェロンベータ-20kDaPEG結合体より長い血中半減期を示す。