Lグルタミン又はLグルタミン酸を生産する能力を有し、かつ二本鎖DNAの超らせん形成能が親株に比べて低下した微生物を培地に培養し、該培地中にL-グルタミン又はLグルタミン酸を生成、蓄積せしめ、該培地中からL-グルタミン又はL-グルタミン酸を採取することを特徴とする、L-グルタミン又はLグルタミン酸の製造法。微生物が、親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物である、請求項1のLグルタミン又はLグルタミン酸の製造法。親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物が、親株に比べてDNAジャイレース阻害蛋白質の活性が向上した微生物である、請求項2のLグルタミン又はLグルタミン酸の製造法。微生物が、親株に比べてトポイソメラーゼ活性が向上した微生物である、請求項1のLグルタミン又はLグルタミン酸の製造法。微生物を用いた効率的なL-グルタミン又はL-グルタミン酸の製造法を提供する。本発明は以下の1~4に関する。1Lグルタミン又はLグルタミン酸を生産する能力を有し、かつ二本鎖DNAの超らせんの形成能が親株に比べて低下した微生物を培地に培養し、該培地中にL-グルタミン又はLグルタミン酸を生成、蓄積せしめ、該培地中からL-グルタミン又はL-グルタミン酸を採取することを特徴とする、L-グルタミン又はLグルタミン酸の製造法。2微生物が、親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物である、1のLグルタミン又はLグルタミン酸の製造法。3親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物が、親株に比べてDNAジャイレース阻害蛋白質の活性が向上した微生物である、2のLグルタミン又はLグルタミン酸の製造法。4微生物が、親株に比べてトポイソメラーゼ活性が向上した微生物である、1のLグルタミン又はLグルタミン酸の製造法。本発明により、微生物を用いた効率的なL-グルタミンまたはL-グルタミン酸の製造法を提供することができる。1.本発明の製造法で用いる微生物本発明の製造法で用いる、L-グルタミン又はL-グルタミン酸を生産する能力を有し、かつ二本鎖DNAの超らせんの形成能が親株に比べて低下した微生物とは、当該微生物の細胞内に存在するDNAのうち、超らせん構造をとるDNAの割合が親株に比べて低下している微生物をいう。具体的には1親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物または2親株に比べてDNAトポイソメラーゼ活性が向上した微生物をあげることができる。本発明においてDNAジャイレース活性とは、II型DNAトポイソメラーゼとして知られるDNAジャイレースの有する活性をいい、ATPの存在下で正の超らせんDNAまたは弛緩型のDNAに負の超らせんを導入する活性をいう。本発明においてDNAトポイソメラーゼ活性とは、I型またはIV型のDNAトポイソメラーゼが有する活性をいい、DNAの超らせんを解消する活性をいう。微生物の有するDNAジャイレース活性はAshiuchiらの方法TheJournalofBiologicalChemistry27739070390732002により測定することができる。また、DNAジャイレース活性又はDNAトポイソメラーゼ活性は、微生物細胞中のプラスミドDNAにおける超らせんDNAの割合を、Mizushimaらの方法で解析することにより測定することができる。ここで、本明細書中における親株とは、二本鎖DNAの超らせん形成能を低下させる元となる株であり、野生株であってもよいし、該野生株から人工的に育種された株でもよく、また親株はL-グルタミン又はL-グルタミン酸を生成する能力を有していてもよいし、有していなくてもよい。親株が有するL-グルタミン又はL-グルタミン酸を生成する能力は、該親株が元来有するものであっても良いし、後述する方法によって人工的に付与されるものであっても良い。親株がL-グルタミン又はL-グルタミン酸を生成する能力を有していない場合、該親株のDNAの超らせん形成能を低下させた後、後述する方法によってL-グルタミン又はL-グルタミン酸を生成する能力を人工的に付与することにより、本発明の方法で用いられる微生物を取得することができる。親株としては、例えば、NeidhardtFCらにより記載されている細菌EscherichiacoliandSalmonellaEditorinChiefFCNeidhardtASMPressWachingtonDC1996をあげることができる。好ましくは、例えば、エシェリヒア属、セラチア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム属、シュードモナス属又はストレプトマイセス属等に属する細菌を挙げることができ、より好ましい細菌としてはエシェリヒアコリ、コリネバクテリウムグルタミクム、コリネバクテリウムアンモニアゲネス、コリネバクテリウムラクトファーメンタム、コリネバクテリウムフラバム、コリネバクテリウムエフィシェンス、バチルスサチルス、バチルスメガテリウム、セラチアマルセッセンス、シュードモナスプチダ、シュードモナスエルギノーサ、ストレプトマイセスセリカラー又はストレプトミセスリビダンスを挙げることができ、特に好ましくはエシェリヒアコリおよびコリネバクテリウムグルタミカムを挙げることができる。微生物にL-グルタミン又はL-グルタミン酸を生成する能力を人工的に付与する方法としては、aLグルタミン又はLグルタミン酸の生合成を制御する機構の少なくとも1つを緩和又は解除する方法、bLグルタミン又はLグルタミン酸の生合成に関与する酵素の少なくとも1つを発現強化する方法、cLグルタミン又はLグルタミン酸の生合成に関与する酵素遺伝子の少なくとも1つのコピー数を増加させる方法、dLグルタミン又はLグルタミン酸の生合成経路から該アミノ酸以外の代謝産物へ分岐する代謝経路の少なくとも1つを弱化又は遮断する方法、及びe野生型株に比べ、Lグルタミン又はLグルタミン酸のアナログに対する耐性度が高い細胞株を選択する方法、などをあげることができ、上記公知の方法は単独又は組み合わせて用いることができる。上記a~eのいずれか、又は組み合わせた方法によるLグルタミン又はL-グルタミン酸を生産する能力を有する微生物の調製方法については、Biotechnology2ndedVol6ProductsofPrimaryMetabolismsection14a14bやAdvancesinBiochemicalEngineeringBiotechnology79135、AgricBiolChem5120892094、アミノ酸発酵、学会出版センター、相田浩ら1986に多くの例が記載されており、また上記以外にも具体的なアミノ酸を生産する能力を有する微生物の調製方法は、特開2003164297、AgricBiolChem39153160、AgricBiolChem3911491153、特開昭5813599、JGenApplMicrobiol4272283、特開昭6394985、AgricBiolChem3720132023、WO9715673、特開昭5618596、特開昭56144092、特表2003511086およびWO2006001380など数多くの報告があり、上記文献等を参照することによりLグルタミン又はL-グルタミン酸を生産する能力を有する微生物を調製することができる。上記方法によって調製することができるLグルタミン又はL-グルタミン酸を生産する能力を有する微生物としては、例えばLグルタミン生産菌としてエシェリヒアコリJGLE1およびエシェリヒアコリJGLBE1WO2006001379、コリネバクテリウムグルタミカムATCC13032株、GLA2株、GS2株、ATCC13032pGlnA2WO2006001380、FERMP4806およびATCC14751株など、Lグルタミン酸生産菌としてFERMBP5807およびATCC13032をあげることができる。上記したLグルタミン又はLグルタミン酸を生産する能力を有する微生物の調製に用いることができる微生物としては、上記a~eの方法を適用することができる微生物又は上記遺伝的形質を有する微生物であればいずれの微生物であってもよく、好ましくは上記の本発明の製造法で用いる微生物の親株として用いることができる微生物をあげることができる。1親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物とは、A染色体DNA上のDNAジャイレースをコードする遺伝子の内部またはその発現調節領域の変異により、親株に比べて細胞内のDNAジャイレース活性が低下した微生物、又はB染色体DNA上のDNAジャイレースを阻害する活性を有するタンパク質以下、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードする遺伝子の内部若しくはその調節領域の変異により、又はDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAで形質転換されることによりDNAジャイレース阻害タンパク質の発現量が増加し、親株に比べて細胞内のDNAジャイレース活性が低下した微生物をいう。また、本発明において親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物とは、親株に比べてDNAジャイレースの活性が低くなった微生物であればいかなる微生物でもよいが、好ましくはDNAジャイレースの活性が親株に比べて20、好ましくは30、より好ましくは50低下した微生物をいう。本発明においてDNAジャイレースとは、配列番号44で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質以下、GyrAタンパク質ともいうおよび配列番号46で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質以下、GyrBタンパク質ともいうからなる複合体タンパク質、又はGyrAタンパク質およびGyrBタンパク質の、それぞれの相同タンパク質からなる複合体タンパク質をいう。配列番号44若しくは46で表されるアミノ酸配列の相同タンパク質としては、それらアミノ酸配列のいずれかと80以上の相同性を有するアミノ酸配列とは、例えば、配列番号44若しくは46に示されるアミノ酸配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97、特に98又は最も好ましくは99以上の相同性を有するアミノ酸配列をあげることができる。アミノ酸配列の相同性は、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLASTProNatlAcadSciUSA905873やFASTAMethodsEnzymol18363を用いて決定することができる。このアルゴリズムBLASTに基づいて、BLASTNやBLASTXとよばれるプログラムが開発されている[JMolBiol215403]。BLASTに基づいてBLASTXによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメータは例えばscore=50、wordlength=3とすることができる。BLASTとGappedBLASTプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いることができる。A染色体DNA上のDNAジャイレースをコードする遺伝子の内部またはその調節領域の変異により、親株に比べて細胞内のDNAジャイレース活性が低下した微生物本発明における染色体DNA上のDNAジャイレースをコードする遺伝子の内部またはその発現調節領域の変異には、DNAジャイレースの発現量を低下させる変異およびDNAジャイレース1分子あたりの活性を低下させる変異を含む。DNAジャイレースをコードするDNAとしては例えば、EntrezGeneIDNO946614で特定される塩基配列を有する、EscherichiacoliのgyrA遺伝子の塩基配列を有するDNA又はEntrezGeneIDNO948211で特定される塩基配列を有する、EscherichiacoliのgyrB遺伝子の塩基配列を有するDNA、およびそれらの遺伝子のホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNAをあげることができる。ホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNAとしては、配列番号43若しくは45で表される塩基配列と少なくとも80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上、最も好ましくは99以上の相同性を有するDNAをあげることができる。塩基配列の相同性は、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLASTProNatlAcadSciUSA905873やFASTAMethodsEnzymol18363を用いて決定することができる。BLASTに基づいてBLASTNによって塩基配列を解析する場合には、パラメータは例えばScore=100、wordlength=12とし得る。DNAジャイレースをコードするDNAは、公知のDNAジャイレースをコードするDNAの塩基配列情報に基づいて、親株よりPCR法等により取得することができる。親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物は、例えば、DNAジャイレース阻害剤に耐性を有する微生物として取得することができる。DNAジャイレース阻害剤に耐性を有する微生物とは、自発的な変異導入、もしくは紫外線照射やN-メチル-N′-ニトロ-N-ニトロソグアニジンNTGなどの突然変異誘発剤による通常の変異処理を施し、該変異株を親株が生育できないか、または生育が不良となる濃度のDNAジャイレース阻害剤を含む寒天平板培地上で通常の条件下で培養し、生じたコロニーのうちで親株よりも生育が速いか大きなコロニーを生ずる株を選択することにより、DNAジャイレース阻害剤に対する耐性の付与された株として取得することができる。このようなDNAジャイレース活性が低下した微生物の調製に用いることができるDNAジャイレース阻害剤は、DNAジャイレースを阻害する物質であればいずれでも用いることができ、例えば、ナリジクス酸、オキソリン酸、クーママイシン、ノボビオシンまたはこれらのアルカリ金属塩などが用いられる。DNAジャイレース阻害剤としては、好ましくはナリジクス酸を用いることができる。また、DNAジャイレース阻害剤耐性株としては、好ましくは5mgLのナリジクス酸を含む培地上で生育可能な微生物を用いることができ、該微生物としてはエシェリヒアコリをあげることができる。DNAジャイレース阻害剤耐性株として取得することができる、本発明の製造法で用いることができる微生物としては、例えば、ナリジクス酸耐性株であるエシェリヒアコリNAR01株、NAR02およびNAR03株ならびにコリネバクテリウムグルタミカムGNA1株およびGNA2株があげられる。また、親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物は、該親株のDNAジャイレースをコードする遺伝子の内部またはその発現調節領域に人為的かつ部位特異的に、DNAジャイレースの活性を低下させるような変異を導入することにより取得することもできる。そのようなDNAジャイレースをコードする遺伝子の発現調節領域に導入する変異としては、該遺伝子のプロモーターをより効率の低いものに置換することなどがあげられる。DNAジャイレースをコードする遺伝子の内部またはその発現調節領域への部位得意的な変異の導入は、公知の方法によりDNAジャイレースをコードする遺伝子の内部またはその発現調節領域に目的とする変異を導入したDNA断片を作製し、親株の染色体DNA上の目的の領域と置換することにより行うことができる。部位特異的な変異を導入する方法としては、MolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPress以下、モレキュラークローニング第2版と略す、CurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySons以下、カレントプロトコールズインモレキュラーバイオロジーと略す、NucleicAcidsResearch106487、ProcNatlAcadSciUSA796409、Gene34315、NucleicAcidsResearch134431、ProcNatlAcadSciUSA82488等に記載の方法をあげることができる。変異を有するDNA断片を親株へ導入する方法としては、例えば、ファージ由来のλRedリコンビナーゼを用いる方法ProcNatlAcadSciUSA976640MolMicrobiol55137BiosciBiotechnolBiochem712905をあげることができる。さらに、変異体DNAと共に染色体上に組み込まれた枯草菌レバンシュークラーゼによって大腸菌がシュークロース感受性となることを利用した選択法や、ストレプトマイシン耐性の変異rpsL遺伝子を有する大腸菌に野生型rpsL遺伝子を組み込むことによって大腸菌がストレプトマイシン感受性となることを利用した選択法MolMicrobiol55137BiosciBiotechnolBiochem712905等を用いて、親株の染色体上のDNAが変異体DNAに置換された株を取得することができる。また上記の方法に限らず、微生物の染色体上の遺伝子を置換できる方法であれば他の遺伝子置換法も用いることができる。親株のDNAジャイレースをコードする遺伝子の内部に部位特異的に変異を導入することによって取得することができる、本発明の製造法で用いることができる微生物としては、例えば、gyrA遺伝子の変異株であるエシェリヒアコリGYR1株およびGYR2株、gyrB遺伝子の変異株であるエシェリヒアコリGYR3株をあげることができる。B染色体DNA上のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードする遺伝子の内部若しくはその調節領域の変異により、又はDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAで形質転換されることにより親株よりDNAジャイレース阻害タンパク質の活性が向上し、親株に比べて細胞内のDNAジャイレース活性が低下した微生物本発明で用いる親株に比べて細胞内のDNAジャイレース活性が低下した微生物としては、I親株の染色体DNA上のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードする遺伝子の内部若しくはその調節領域に変異を導入することにより、又はII親株をDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAで形質転換することにより、親株に比べてDNAジャイレース活性が低下した微生物も用いることができる。DNAジャイレース阻害タンパク質としては、配列番号20で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質およびそのホモログタンパク質をあげることができる。ホモログタンパク質としては、DNAジャイレース阻害活性を有し、かつ配列番号20で表されるアミノ酸配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは98以上、最も好ましくは99以上の相同性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質をあげることができる。アミノ酸配列や塩基配列の相同性は、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLASTProNatlAcadSciUSA905873やFASTAMethodsEnzymol18363を用いて決定することができる。このアルゴリズムBLASTに基づいて、BLASTNやBLASTXとよばれるプログラムが開発されている[JMolBiol215403]。BLASTに基づいてBLASTNによって塩基配列を解析する場合には、パラメータは例えばScore=100、wordlength=12とする。また、BLASTに基づいてBLASTXによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメータは例えばscore=50、wordlength=3とする。BLASTとGappedBLASTプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法はよく知られている。DNAジャイレース阻害活性は、例えばDNAジャイレース阻害タンパク質を強発現する微生物の有するDNAジャイレース活性をMizushimaらの方法により測定することができる。I親株の染色体DNA上にあるDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを改変することにより得られる、親株に比べDNAジャイレース活性が低下した微生物DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAとしては例えば、EntrezGeneIDNO948467で特定される塩基配列を有する、murI遺伝子の塩基配列を有するDNAおよびそのホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNAをあげることができる。murI遺伝子の塩基配列を有するDNAとしては、配列番号19で表される塩基配列を有するDNAをあげることができる。ホモログ遺伝子をコードするDNAとしては、配列番号19で表される塩基配列からなるDNAと少なくとも90以上、好ましくは95以上、より好ましくは97以上、さらに好ましくは98以上、特に好ましくは99以上の相同性を有するDNAをあげることができる。塩基配列の相同性は、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLASTProNatlAcadSciUSA905873やFASTAMethodsEnzymol18363を用いて決定することができる。BLASTに基づいてBLASTNによって塩基配列を解析する場合には、パラメータは例えばScore=100、wordlength=12とし得る。DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAは、公知のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAの塩基配列情報に基づいて、親株よりPCR法等により取得することができる。親株の染色体DNA上の、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAの改変により得られる、親株より該タンパク質の比活性が向上した微生物としては、親株が有する該タンパク質のアミノ酸配列において1アミノ酸以上、好ましくは1~10アミノ酸、より好ましくは1~5アミノ酸、さらに好ましくは1~3アミノ酸が置換しているアミノ酸配列を有するタンパク質を有しているため、親株のDNAジャイレース阻害タンパク質と比較して、その活性が向上した変異型タンパク質を有する微生物をあげることができる。親株の染色体DNA上の、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAの改変により得られる、親株よりDNAジャイレース阻害タンパク質の生産量が向上した微生物としては、親株の染色体DNA上に存在する該タンパク質をコードする遺伝子の転写調節領域又はプロモーター領域の塩基配列において1塩基以上、好ましくは1~10塩基、より好ましくは1~5塩基、さらに好ましくは1~3塩基の塩基が置換しているプロモーター領域を有しているため、親株のDNAジャイレース阻害タンパク質の生産量と比較して、該タンパク質の生産量が向上している微生物をあげることができる。DNAジャイレース阻害タンパク質の活性が親株より高い微生物のうち、比活性が親株のDNAジャイレース阻害タンパク質より高い微生物は、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAをinvitroにおける変異剤を用いた変異処理、又はエラープローンPCRなどに供することにより該DNAに変異を導入した後、該変異DNAを親株の染色体DNA上に存在する変異導入前のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAと公知の方法[ProcNatlAcadSciUSA976640]を用いて置換することにより該変異DNAを発現する改変体を作成し、上記した方法により親株と改変体のDNAジャイレース活性を比較することにより取得することができる。また、DNAジャイレース阻害タンパク質の活性が親株より高い微生物のうち、該タンパク質の生産量が親株の生産量より向上している微生物は、親株が有するDNAジャイレース阻害タンパク質をコードする遺伝子の転写調節領域及びプロモーター領域、例えば該遺伝子の開始コドンの上流側200bp、好ましくは100bpの塩基配列を有するDNAをinvitroにおける変異処理、又はエラープローンPCRなどに供することにより該DNAに変異を導入した後、該変異DNAを親株の染色体DNA上に存在する変異導入前のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードする遺伝子の転写調節領域及びプロモーター領域と公知の方法[ProcNatlAcadSciUSA976640]を用いて置換することにより変異型の転写調節領域又はプロモーター領域を有する改変体を作成し、RT-PCR又はノーザンハイブリダイゼーションなどにより、親株と改変体のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードする遺伝子の転写量を比較する方法、又はSDS-PAGEなどにより親株と改変体のDNAジャイレース阻害タンパク質の生産量を比較する方法により確認することができる。また、親株のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードする遺伝子のプロモーター領域を公知の強力なプロモーター配列と置換することによっても、親株よりDNAジャイレース阻害タンパク質の生産量が向上した微生物を取得することもできる。そのようなプロモーターとしては、Ecoliで機能するtrpプロモーターPtrp、lacプロモーターPlac、PLプロモーター、PRプロモーター、PSEプロモーター等の、エシェリヒアコリやファージ等に由来するプロモーター、SPO1プロモーター、SPO2プロモーター、penPプロモーター等をあげることができる。またPtrpを2つ直列させたプロモーター、tacプロモーター、lacT7プロモーター、letIプロモーターなどの人為的に造成したプロモーターもあげることができる。さらにBacillus属に属する微生物中で発現させるためのxylAプロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol35594599]やCorynebacterium属に属する微生物中で発現させるためのP546プロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol53674679]なども用いることができる。DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAは、例えば配列番号20で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNAの塩基配列に基づき設計することができるプローブDNAを用いた、Ecoliなどの微生物の染色体DNAライブラリーに対するサザンハイブリダイゼーション、又は該塩基配列に基づき設計することができるプライマーDNAを用いた、微生物、好ましくはEcoliの染色体DNAを鋳型としたPCRPCRProtocolsAcademicPressにより取得することができる。また、各種の遺伝子配列データベースに対して配列番号20で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNAの塩基配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上、最も好ましくは99以上の相同性を有する配列を検索し、該検索によって得られた塩基配列に基づき、該塩基配列を有する微生物の染色体DNA、cDNAライブラリー等から上記した方法によりDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを取得することもできる。取得したDNAをそのまま、あるいは適当な制限酵素などで切断し、常法によりベクターに組み込み、得られた組換え体DNAを宿主細胞に導入した後、通常用いられる塩基配列解析方法、例えばジデオキシ法ProcNatlAcadSciUSA745463又は3700DNAアナライザーアプライドバイオシステムズ社製等の塩基配列分析装置を用いて分析することにより、該DNAの塩基配列を決定することができる。上記のベクターとしては、pBluescriptIIKSストラタジーン社製、pDIRECTNucleicAcidsRes186069、pCRScriptAmpSKストラタジーン社製、pT7Blueノバジェン社製、pCRIIインビトロジェン社製及びpCRTRAPジーンハンター社製などをあげることができる。宿主細胞としては、Escherichia属に属する微生物などをあげることができる。Escherichia属に属する微生物としては、例えば、EcoliXL1Blue、EcoliXL2Blue、EcoliDH1、EcoliMC1000、EcoliATCC12435、EcoliW1485、EcoliJM109、EcoliHB101、EcoliNo49、EcoliW3110、EcoliNY49、EcoliMP347、EcoliNM522、EcoliBL21、EcoliME8415等をあげることができる。組換え体DNAの導入方法としては、上記宿主細胞へDNAを導入する方法であればいずれも用いることができ、例えば、カルシウムイオンを用いる方法ProcNatlAcadSciUSA692110、プロトプラスト法特開昭63248394、エレクトロポレーション法NucleicAcidsRes166127等をあげることができる。塩基配列を決定した結果、取得されたDNAが部分長であった場合は、該部分長DNAをプローブに用いた、染色体DNAライブラリーに対するサザンハイブリダイゼーション法等により、全長DNAを取得することができる。更に、決定されたDNAの塩基配列に基づいて、パーセプティブバイオシステムズ社製8905型DNA合成装置等を用いて化学合成することにより目的とするDNAを調製することもできる。上記のようにして取得されるDNAとして、例えば、配列番号20で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNA、及び配列番号19で表される塩基配列を有するDNAをあげることができる。IIDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAで形質転換して得られる微生物親株をDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAで形質転換して得られる微生物としては:[1]配列番号20で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質またはそのホモログタンパク質、並びに[2]配列番号19で表される塩基配列を有するDNAまたはmurI遺伝子のホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNA;を用いて親株を形質転換して得られる微生物をあげることができる。該微生物としては、外来のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを染色体DNA上に有する微生物、及び染色体外に有する微生物をあげることができる。すなわち、の微生物は、親株がDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを保有していない場合は、新たに導入された該DNAを1つ又は2つ以上、染色体DNA上に有する微生物であり、親株がDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを元来保有する場合には、新たに導入された該DNAを含む2つ以上のDNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを染色体DNA上に有する微生物である。の微生物は、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAをプラスミドDNA上に有する微生物である。該微生物は以下のようにして調製することができる。DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAをもとにして、必要に応じて、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードする部分を含む適当な長さのDNA断片を調製する。また、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードする部分の塩基配列を、宿主細胞での発現に最適なコドンとなるように塩基を置換することにより、転写効率が良いDNA断片を調製することができる。該DNA断片を適当な発現ベクターのプロモーターの下流に挿入することにより、組換え体DNAを作製する。該組換え体DNAを、該発現ベクターに適合した宿主細胞に導入することにより、DNAジャイレース阻害タンパク質の活性が宿主細胞、すなわち親株より向上した形質転換体を得ることができる。発現ベクターとしては、上記宿主細胞において自律複製可能又は染色体中への組込みが可能で、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを転写できる位置にプロモーターを含有しているものが用いられる。原核生物を宿主細胞として用いる場合は、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを有する組換え体DNAは、原核生物中で自律複製可能であると同時に、プロモーター、リボソーム結合配列、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNA、転写終結配列より構成された組換え体DNAであることが好ましい。プロモーターを制御する遺伝子が含まれていてもよい。発現ベクターとしては、pColdI、pCDF1b、pRSF1bいずれもノバジェン社製、pMALc2xニューイングランドバイオラブス社製、pGEX4T1ジーイーヘルスケアバイオサイエンス社製、pTrcHisインビトロジェン社製、pSE280インビトロジェン社製、pGEMEX1プロメガ社製、pQE30キアゲン社製、pET3ノバジェン社製、pKYP10特開昭58110600、pKYP200AgricBiolChem48669、pLSA1AgricBiolChem53277、pGEL1ProcNatlAcadSciUSA824306、pBluescriptIISK、pBluescriptIIKSストラタジーン社製、pTrS30エシェリヒアコリJM109pTrS30より調製、pTrS32エシェリヒアコリJM109pTrS32より調製、pPAC31、pUC19Gene33103、pSTV28、pUC118タカラバイオ社製、pPA1特開昭63233798等を例示することができる。プロモーターとしては、Ecoli等の宿主細胞中で機能するものであればいかなるものでもよい。例えば、trpプロモーターPtrp、lacプロモーターPlac、PLプロモーター、PRプロモーター、PSEプロモーター等の、Ecoliやファージ等に由来するプロモーター、SPO1プロモーター、SPO2プロモーター、penPプロモーター等をあげることができる。またPtrpを2つ直列させたプロモーター、tacプロモーター、lacT7プロモーター、letIプロモーターのように人為的に設計改変されたプロモーター等も用いることができる。さらにBacillus属に属する微生物中で発現させるためのxylAプロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol35594599]やCorynebacterium属に属する微生物中で発現させるためのP546プロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol53674679]なども用いることができる。リボソーム結合配列であるシャイン-ダルガノShineDalgarno配列と開始コドンとの間を適当な距離例えば6~18塩基に調節したプラスミドを用いることが好ましい。DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAを発現ベクターに結合させた組換え体DNAにおいては、転写終結配列は必ずしも必要ではないが、構造遺伝子の直下に転写終結配列を配置することが好ましい。このような組換え体DNAとしては、例えばプラスミドpSMurIをあげることができる。該組換え体DNAの宿主としては、本発明で用いる微生物の親株を用いることができる。本発明の製造法で用いることができる、DNAジャイレース阻害タンパク質をコードするDNAで形質転換して得られる微生物としては、エシェリヒアコリJPpTyeiGpSMurIをあげることができる。2親株に比べてDNAトポイソメラーゼ活性が向上した微生物本発明における親株に比べDNAトポイソメラーゼ活性が向上した微生物としては、A親株の染色体DNA上にあるI型又はIV型のDNAトポイソメラーゼをコードするDNAを改変することにより得られる、I親株より該酵素の比活性が向上した微生物、およびII親株よりI型又はIV型のDNAトポイソメラーゼの生産量が向上した微生物、ならびにB親株をI型又はIV型のDNAトポイソメラーゼをコードするDNAで形質転換して得られる微生物をあげることができる。I型又はIV型のDNAトポイソメラーゼとしては、以下の[3]または[4]記載のタンパク質、[3]配列番号24、36および40のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するタンパク質またはそれらのホモログタンパク質、並びに[4]配列番号28で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質および配列番号32で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる複合体タンパク質またはそれらのホモログタンパク質からなる複合体タンパク質;をあげることができる。また、ホモログタンパク質としては、配列番号24、28、32、36および40のいずれかで表されるアミノ酸配列との相同性が80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上、最も好ましくは99以上の相同性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質であり、かつDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をあげることができる。アミノ酸配列や塩基配列の相同性は、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLASTProNatlAcadSciUSA905873やFASTAMethodsEnzymol18363を用いて決定することができる。このアルゴリズムBLASTに基づいて、BLASTNやBLASTXとよばれるプログラムが開発されている[JMolBiol215403]。BLASTに基づいてBLASTNによって塩基配列を解析する場合には、パラメータは例えばScore=100、wordlength=12とする。また、BLASTに基づいてBLASTXによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメータは例えばscore=50、wordlength=3とする。BLASTとGappedBLASTプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法はよく知られている。DNAトポイソメラーゼ活性は、例えば該タンパク質をコードするDNAで微生物を形質転換し、該形質転換体の有するDNAトポイソメラーゼ活性をMizushimaらの方法により測定することができる。A親株の染色体DNA上にあるI型又はIV型のDNAトポイソメラーゼをコードするDNAを改変することにより得られる、親株に比べDNAトポイソメラーゼ活性が向上した微生物DNAトポイソメラーゼをコードするDNAとしては例えば、EntrezGeneIDNO945862で特定される塩基配列を有する、EscherichiacoliのtopA遺伝子の塩基配列を有するDNA、EntrezGeneIDNO947499および947501で特定される塩基配列を有する、EscherichiacoliのparCE遺伝子の塩基配列を有するDNA、EntrezGeneIDNO1021373で特定される塩基配列を有する、CorynebacteriumglutamicumのNCBIAccessionNoNCgl0304で特定される塩基配列を有するDNA又はEntrezGeneIDNO1019801で特定される塩基配列を有する、NCBIAccessionNoNCgl1769で特定される塩基配列を有するDNAおよびそれらのホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNAをあげることができる。上記遺伝子の塩基配列を有するDNAとしては、配列番号23、27、31、35および39のいずれかで表される塩基配列を有するDNAをあげることができる。ホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNAとしては、例えば上記したBLASTやFASTA等を用いて上記したパラメータ等に基づいて計算したときに、配列番号23、27、31、35及び39のいずれかで表される塩基配列からなるDNAと少なくとも90以上、好ましくは95以上、より好ましくは97以上、さらに好ましくは98以上、特に好ましくは99以上の相同性を有するDNAをあげることができる。塩基配列の相同性は、KarlinandAltschulによるアルゴリズムBLASTProNatlAcadSciUSA905873やFASTAMethodsEnzymol18363を用いて決定することができる。BLASTに基づいてBLASTNによって塩基配列を解析する場合には、パラメータは例えばScore=100、wordlength=12とし得る。DNAトポイソメラーゼをコードするDNAは、公知のDNAトポイソメラーゼをコードするDNAの塩基配列情報に基づいて、親株よりPCR法等により取得することができる。DNAトポイソメラーゼをコードするDNAに1以上の塩基の置換、欠失、又は付加を導入する方法としては、例えば、モレキュラークローニング第3版、カレントプロトコールズインモレキュラーバイオロジー、等に記載されている部位特異的変異導入法に準ずる方法をあげることができる。親株の染色体DNA上の、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAの改変により得られる、親株より該タンパク質の比活性が向上した微生物としては、親株が有する該タンパク質のアミノ酸配列において1アミノ酸以上、好ましくは1~10アミノ酸、より好ましくは1~5アミノ酸、さらに好ましくは1~3アミノ酸が置換しているアミノ酸配列を有するタンパク質を有しているため、親株のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質と比較して、その活性が向上した変異型タンパク質を有する微生物をあげることができる。DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質の比活性が親株のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質より高い微生物は、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAをinvitroにおける変異剤を用いた変異処理、又はエラープローンPCRなどに供することにより該DNAに変異を導入した後、該変異DNAを親株の染色体DNA上に存在する変異導入前のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAと公知の方法[ProcNatlAcadSciUSA976640]を用いて置換することにより該変異DNAを発現する改変体を作成し、上記した方法により親株と改変体のDNAトポイソメラーゼ活性を比較することにより取得することができる。上記AのIIの、親株の染色体DNA上の、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAの改変により得られる、親株よりDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質の生産量が向上した微生物としては、親株の染色体DNA上に存在する該タンパク質をコードする遺伝子の転写調節領域又はプロモーター領域の塩基配列において1塩基以上、好ましくは1~10塩基、より好ましくは1~5塩基、さらに好ましくは1~3塩基の塩基が置換しているプロモーター領域を有しているため、親株のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質の生産量と比較して、該タンパク質の生産量が向上している微生物をあげることができる。また、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質の生産量が親株の生産量より向上している微生物は、親株が有するDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の転写調節領域及びプロモーター領域、例えば該タンパク質の開始コドンの上流側200bp、好ましくは100bpの塩基配列を有するDNAをinvitroにおける変異処理、又はエラープローンPCRなどに供することにより該DNAに変異を導入した後、該変異DNAを親株の染色体DNA上に存在する変異導入前のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の転写調節領域及びプロモーター領域と公知の方法[ProcNatlAcadSciUSA976640]を用いて置換することにより変異型の転写調節領域又はプロモーター領域を有する改変体を作成し、RT-PCR又はノーザンハイブリダイゼーションなどにより、親株と改変体のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子の転写量を比較する方法、又はSDS-PAGEなどにより親株と改変体のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質の生産量を比較する方法により確認することができる。また、親株のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子のプロモーター領域を公知の強力なプロモーター配列と置換することによっても、親株よりDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質の生産量が向上した微生物を取得することもできる。そのようなプロモーターとしては、Ecoliで機能するtrpプロモーターPtrp、lacプロモーターPlac、PLプロモーター、PRプロモーター、PSEプロモーター等の、エシェリヒアコリやファージ等に由来するプロモーター、SPO1プロモーター、SPO2プロモーター、penPプロモーター等をあげることができる。またPtrpを2つ直列させたプロモーター、tacプロモーター、lacT7プロモーター、letIプロモーターなどの人為的に造成したプロモーターもあげることができる。さらにBacillus属に属する微生物中で発現させるためのxylAプロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol35594599]やCorynebacterium属に属する微生物中で発現させるためのP546プロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol53674679]なども用いることができる。DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAは、例えば配列番号24、28、32、36及び40のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNAの塩基配列に基づき設計することができるプローブDNAを用いた、Ecoliなどの微生物の染色体DNAライブラリーに対するサザンハイブリダイゼーション、又は該塩基配列に基づき設計することができるプライマーDNAを用いた、微生物、好ましくはEcoliの染色体DNAを鋳型としたPCRPCRProtocolsAcademicPressにより取得することができる。また、各種の遺伝子配列データベースに対して配列番号24、28、32、36及び40のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNAの塩基配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、さらに好ましくは97以上、特に好ましくは98以上、最も好ましくは99以上の相同性を有する配列を検索し、該検索によって得られた塩基配列に基づき、該塩基配列を有する微生物の染色体DNA、cDNAライブラリー等から上記した方法によりDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを取得することもできる。取得したDNAをそのまま、あるいは適当な制限酵素などで切断し、常法によりベクターに組み込み、得られた組換え体DNAを宿主細胞に導入した後、通常用いられる塩基配列解析方法、例えばジデオキシ法ProcNatlAcadSciUSA745463又は3700DNAアナライザーアプライドバイオシステムズ社製等の塩基配列分析装置を用いて分析することにより、該DNAの塩基配列を決定することができる。上記のベクターとしては、pBluescriptIIKSストラタジーン社製、pDIRECTNucleicAcidsRes186069、pCRScriptAmpSKストラタジーン社製、pT7Blueノバジェン社製、pCRIIインビトロジェン社製及びpCRTRAPジーンハンター社製などをあげることができる。宿主細胞としては、Escherichia属に属する微生物などをあげることができる。Escherichia属に属する微生物としては、例えば、EcoliXL1Blue、EcoliXL2Blue、EcoliDH1、EcoliMC1000、EcoliATCC12435、EcoliW1485、EcoliJM109、EcoliHB101、EcoliNo49、EcoliW3110、EcoliNY49、EcoliMP347、EcoliNM522、EcoliBL21、EcoliME8415等をあげることができる。組換え体DNAの導入方法としては、上記宿主細胞へDNAを導入する方法であればいずれも用いることができ、例えば、カルシウムイオンを用いる方法ProcNatlAcadSciUSA692110、プロトプラスト法特開昭63248394、エレクトロポレーション法NucleicAcidsRes166127等をあげることができる。塩基配列を決定した結果、取得されたDNAが部分長であった場合は、該部分長DNAをプローブに用いた、染色体DNAライブラリーに対するサザンハイブリダイゼーション法等により、全長DNAを取得することができる。更に、決定されたDNAの塩基配列に基づいて、パーセプティブバイオシステムズ社製8905型DNA合成装置等を用いて化学合成することにより目的とするDNAを調製することもできる。上記のようにして取得されるDNAとして、例えば、配列番号24、28、32、36及び40のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNA、及び配列番号23、27、31、35及び39のいずかで表される塩基配列を有するDNAをあげることができる。BI型又はIV型のDNAトポイソメラーゼをコードするDNAで形質転換して得られる微生物親株をDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAで形質転換して得られる微生物としては:[5]上記[3]または[4]のいずれかに記載のタンパク質をコードするDNA;[6]配列番号23、35及び39のいずれかで表される塩基配列を有するDNAまたは、topA遺伝子、NCgl0304若しくはNCgl1769のホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNA;[7]配列番号27で表される塩基配列を有するDNA、配列番号31で表される塩基配列を有するDNAまたはparCE遺伝子のホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNA;を用いて親株を形質転換して得られる微生物をあげることができる。該微生物としては、外来のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAをi染色体DNA上に有する微生物、及びii染色体外に有する微生物をあげることができる。すなわち、iの微生物は、親株がDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを保有していない場合は、新たに導入された該DNAを1つ又は2つ以上、染色体DNA上に有する微生物であり、親株がDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを元来保有する場合には、新たに導入された該DNAを含む2つ以上のDNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを染色体DNA上に有する微生物である。iiの微生物は、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAをプラスミドDNA上に有する微生物である。ホモログ遺伝子の塩基配列を有するDNAとしては、例えば上記したBLASTやFASTA等を用いて上記したパラメータ等に基づいて計算したときに、配列番号23、27、31、35及び39のいずれかで表される塩基配列からなるDNAと少なくとも90以上、好ましくは95以上、より好ましくは97以上、さらに好ましくは98以上、特に好ましくは99以上の相同性を有するDNAをあげることができる。DNAトポイソメラーゼをコードするDNAで形質転換された微生物は、以下のようにして調製することができる。DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAをもとにして、必要に応じて、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードする部分を含む適当な長さのDNA断片を調製する。また、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードする部分の塩基配列を、宿主細胞での発現に最適なコドンとなるように塩基を置換することにより、転写効率が良いDNA断片を調製することができる。該DNA断片を適当な発現ベクターのプロモーターの下流に挿入することにより、組換え体DNAを作製する。該組換え体DNAを、該発現ベクターに適合した宿主細胞に導入することにより、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質の活性が宿主細胞、すなわち親株より向上した形質転換体を得ることができる。発現ベクターとしては、上記宿主細胞において自律複製可能又は染色体中への組込みが可能で、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを転写できる位置にプロモーターを含有しているものが用いられる。原核生物を宿主細胞として用いる場合は、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを有する組換え体DNAは、原核生物中で自律複製可能であると同時に、プロモーター、リボソーム結合配列、DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNA、転写終結配列より構成された組換え体DNAであることが好ましい。プロモーターを制御する遺伝子が含まれていてもよい。発現ベクターとしては、pColdI、pCDF1b、pRSF1bいずれもノバジェン社製、pMALc2xニューイングランドバイオラブス社製、pGEX4T1ジーイーヘルスケアバイオサイエンス社製、pTrcHisインビトロジェン社製、pSE280インビトロジェン社製、pGEMEX1プロメガ社製、pQE30キアゲン社製、pET3ノバジェン社製、pKYP10特開昭58110600、pKYP200AgricBiolChem48669、pLSA1AgricBiolChem53277、pGEL1ProcNatlAcadSciUSA824306、pBluescriptIISK、pBluescriptIIKSストラタジーン社製、pTrS30エシェリヒアコリJM109pTrS30より調製、pTrS32エシェリヒアコリJM109pTrS32より調製、pPAC31、pUC19Gene33103、pSTV28、pUC118タカラバイオ社製、pPA1特開昭63233798等を例示することができる。プロモーターとしては、Ecoli等の宿主細胞中で機能するものであればいかなるものでもよい。例えば、trpプロモーターPtrp、lacプロモーターPlac、PLプロモーター、PRプロモーター、PSEプロモーター等の、Ecoliやファージ等に由来するプロモーター、SPO1プロモーター、SPO2プロモーター、penPプロモーター等をあげることができる。またPtrpを2つ直列させたプロモーター、tacプロモーター、lacT7プロモーター、letIプロモーターのように人為的に設計改変されたプロモーター等も用いることができる。さらにBacillus属に属する微生物中で発現させるためのxylAプロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol35594599]やCorynebacterium属に属する微生物中で発現させるためのP546プロモーター[ApplMicrobiolBiotechnol53674679]なども用いることができる。リボソーム結合配列であるシャイン-ダルガノShineDalgarno配列と開始コドンとの間を適当な距離例えば6~18塩基に調節したプラスミドを用いることが好ましい。DNAトポイソメラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを発現ベクターに結合させた組換え体DNAにおいては、転写終結配列は必ずしも必要ではないが、構造遺伝子の直下に転写終結配列を配置することが好ましい。このような組換え体DNAとしては、例えば後述するpStopA、pSparCE、pCG0304及びpCG1769をあげることができる。該組換え体DNAの宿主としては、本発明で用いる微生物の親株を用いることができる。2.本発明のL‐グルタミン又はLグルタミン酸の製造法上記1の方法で調製することができる微生物を培地に培養し、培養物中にL-グルタミン又はLグルタミン酸を生成、蓄積させ、該培養物からL-グルタミン又はLグルタミン酸を採取することにより、L-グルタミン又はLグルタミン酸を製造することができる。本発明の製造法で用いられる培地は、炭素源、窒素源、無機塩など本発明の微生物の増殖、およびL-グルタミン又はLグルタミン酸の生合成に必要な栄養素を含む限り、合成培地、天然培地のいずれでもよい。炭素源としては、使用する微生物の資化できる炭素源であればいずれでもよく、例えばグルコース、糖蜜、フラクトース、シュークロース、マルトース、でんぷん加水分解物等の糖類、エタノール、グリセロールのようなアルコール類、酢酸、乳酸、コハク酸等の有機酸類などをあげることができる。窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アンモニウムなどの各種無機および有機アンモニウム塩類、尿素、アミン等の窒素化合物、ならびに肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー、ペプトン、大豆加水分解物等の窒素含有有機物を用いることができる。無機塩としては、リン酸第一水素カリウム、リン酸第二水素カリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、炭酸カルシウム等を用いることができる。その他、必要に応じて、ビオチン、チアミン、ニコチンアミド、ニコチン酸等の微量栄養源を加えることができる。これら微量栄養源は、肉エキス、コーンスティープリカー、カザミノ酸等の培地添加物で代用することもできる。さらに必要に応じて本発明の微生物が生育に要求する物質例えばアミノ酸要求性の微生物であれば要求アミノ酸を添加することができる。培養は、振とう培養や深部通気攪拌培養のような好気的条件で行う。培養温度は20~50°C、好ましくは20~42°C、より好ましくは28~38°Cである。培地のpHは5~11の範囲で、好ましくは6~9の中性付近の範囲に維持して培養を行う。培地のpHの調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシウム、アンモニア、pH緩衝液などを用いて行う。培養時間は、5時間~6日間、好ましくは16時間~3日間である。培養物中に蓄積したL-グルタミン又はLグルタミン酸は、通常の精製方法によって採取することができる。例えばL-グルタミン又はLグルタミン酸は、培養後、遠心分離などで菌体や固形物を除いたあと、活性炭処理、イオン交換樹脂処理、濃縮、結晶分別等の公知の方法を併用することによって採取することができる。以下に本願発明の実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。L-グルタミン、L-グルタミン酸生産能を有するエシェリヒアコリの作製1yeiG遺伝子発現プラスミドの造成以下の方法でyeiG遺伝子発現プラスミドを造成した。エシェリヒアコリJM101株をLB培地10glバクトトリプトンディフコ社製、5glイーストエキスディフコ社製、5gl塩化ナトリウムに植菌し30°Cで一晩培養した。培養後、カレントプロトコールズインモレキュラーバイオロジーに記載の飽和フェノールを用いる方法により、該微生物の染色体DNAを単離精製した。配列番号1で表される塩基配列に基づき、yeiG遺伝子増幅用のプライマーDNAとして配列番号3および4で表される塩基配列からなるDNAを合成し、該合成DNAをプライマーセットとして用いてPCRを行った。PCRは、鋳型として01μgの染色体DNA、05μmolLの各プライマー、25unitsのPyrobestDNAポリメラーゼ、5μLのPyrobestDNAポリメラーゼ用×10緩衝液、各200μmolLのdNTPdATP、dGTP、dCTPおよびdTTPを含む反応液50μLを調製し、96°Cで15秒間、55°Cで30秒間、72°Cで1分間の工程を30回繰り返すことにより行った。約08kbのDNA断片が増幅したことを確認し、該DNA断片を常法に従って精製した。該DNA断片およびtrpプロモーターを含む発現ベクターpTrS30[エシェリヒアコリJM109pTrS30より調製]をそれぞれHindIII、SacIで切断し、アガロースゲル電気泳動によりDNA断片を分離した後、ジーンクリーンIIキットGENECLEANIIkit、BIO101社製を用いて、制限酵素消化DNA断片をそれぞれ回収した。上記で得られたyeiG遺伝子を含む08kb断片、pTrs30の制限酵素消化断片をDNAligationKitVer2タカラバイオ社製を用いて連結した。得られた連結体DNAを用いてエシェリヒアコリDH5α株タカラバイオ製を形質転換し、アンピシリン耐性を指標に形質転換体を選択した。選択した形質転換体のコロニーより公知の方法に従ってプラスミドを抽出し、制限酵素を用いてその構造を解析することにより、trpプロモーター下流にyeiG遺伝子が連結された発現ベクターであるpTyeiGが取得されていることを確認した。2proBA遺伝子欠損エシェリヒアコリJM101の作製遺伝子欠損用マーカー遺伝子の構築相同組換えを用いたエシェリヒアコリの遺伝子欠損および遺伝子置換のためのマーカー遺伝子として用いるcat遺伝子およびsacB遺伝子を以下の方法で単離した。クローニングベクターpHSG396タカラバイオ社製上のcat遺伝子の上流約200bpから下流約60bpまでを増幅するプライマーとして配列番号5および6で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを、バチルスズブチリス168株のsacB遺伝子の上流約300bpから下流約20bpまでを増幅するプライマーとして配列番号7および8で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドを合成した。なお、配列番号5および7で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドにはSalI認識サイトを付与した。配列番号5および6で表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットとして用い、pHSG396を鋳型としてPCRを行い、cat遺伝子を含むDNA断片を得た。PCRはPyrobestDNApolymeraseタカラバイオ社製を用いて、添付説明書にしたがって行なった。また配列番号7および8で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットとして用い、常法により調製したバチルスズブチリス168株の野生株のゲノムDNAを鋳型としてPCRを行い、sacB遺伝子を含むDNA断片を得た。cat遺伝子を含むDNA断片、sacB遺伝子を含むDNA断片をそれぞれ精製した後、SalIで切断した。フェノール/クロロホルム処理、およびエタノール沈殿を行い、両者を等モルの比率で混合してDNAligationKitVer2タカラバイオ社製を用いて連結した。該連結反応液をフェノール/クロロホルム処理、およびエタノール沈殿にて精製したものを鋳型とし、配列番号6および8で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットとして用いてPCRを行い、得られた増幅DNAをQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製し、cat遺伝子およびsacB遺伝子を含むDNA断片を取得した。proBA遺伝子欠損株の作成配列番号9および10で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチド、並びに配列番号12および14で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをそれぞれプライマーセットとして用い、常法により調製したエシェリヒアコリJM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を取得した。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物と、catsacB断片を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してcatBsacB断片が挿入されたproBA周辺領域を含む約46kbのDNA断片が増幅されことを確認した。また配列番号9および11で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチド、ならびに配列番号13および14で表わされるオリゴヌクレオチドをそれぞれプライマーセットとして用い、JM101株のゲノムDNAを鋳型として1回目のPCRを行い、増幅産物を得た。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。精製したDNA断片をアガロース電気泳動に供してproBA遺伝子が欠失したproBA周辺領域を含む約2kbのDNA断片が増幅されたことを確認した。次にエシェリヒアコリJM101株をpKD46で形質転換した後、100mgLのアンピシリンを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpKD46を保持するエシェリヒアコリJM101株以下、エシェリヒアコリJM101pKD46と称すを選択した。10mmolLのL-アラビノースと50μgmlのアンピシリンの存在下で培養して得られたエシェリヒアコリJM101pKD46に、電気パルス法により上記で取得したcatsacB断片の挿入されたproBA遺伝子周辺領域を含むDNA断片を導入した。得られた形質転換体を、25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地LBクロラムフェニコールアンピシリンに塗布して培養し、クロラムフェニコール耐性コロニーを選択した。相同組換えが生じた株はクロラムフェニコール耐性かつシュクロース感受性を示すので、選択したコロニーを10シュクロース、25μgmlのクロラムフェニコールおよび50μgmlのアンピシリンを含むLB寒天培地およびLBクロラムフェニコールアンピシリンにレプリカし、クロラムフェニコール耐性、かつシュクロース感受性を示した株を選択した。選択した株について配列番号7および9で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、proBA遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入されていることを確認した。proBA遺伝子の位置にcatsacB断片が挿入された株を上記と同様に培養してコンピテントセルを調製し、上記で得られたproBA遺伝子が欠失したproBA周辺領域を含むDNA断片を電気パルス法により導入した。得られた形質転換体をLBシュクロース寒天培地で培養し、シュクロース耐性コロニーを選択した。相同組換えを起こした株はcatsacB断片は含まず、よってクロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示すため、選択したコロニーをLBクロラムフェニコール寒天培地およびLBシュクロース寒天培地にレプリカし、クロラムフェニコール感受性かつシュクロース耐性を示した株を選択した。選択した株の中からアンピシリン感受性を示す株、すなわちpKD46が脱落した株を選択し、その株について配列番号9および14で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、proBA遺伝子が欠損していることを確認した。上記のようにしてproBA遺伝子が欠損した株を取得し、エシェリヒアコリJP株と命名した。得られたJP株に1で得られたpTyeiGを形質転換してpTyeiGを保有する形質転換体を取得し、JPpTyeiGと命名した。DNAジャイレース阻害剤に対する耐性を有するエシェリヒアコリL-グルタミン生産変異株の取得1ナリジクス酸耐性変異株の取得実施例1で得られたJPpTyeiGをLBアンピシリン培地が入った太型試験管に接種し、対数増殖期まで培養した後、ナリジクス酸を5mgL含むM9寒天平板培地06リン酸二ナトリウム、03リン酸一カリウム、005塩化ナトリウム、01、02グルコース、000147塩化カルシウム二水和物、005硫酸マグネシウム七水和物、0001ビタミンB1、16バクトアガーに塗布した。該寒天平板培地を30°Cで3~5日間培養し、生育してきたコロニーを釣菌分離し、ナリジクス酸に対する耐性を有する変異株を得た。上記で得られた変異株85株をそれぞれ50μgmlのアンピシリンを含む8mlのLB培地が入った太型試験管に接種し、30°Cで17時間培養した。該培養液を100μgmlのアンピシリンを含む培地[16gLリン酸水素二カリウム、14gLリン酸二水素カリウム、5gL硫酸アンモニウム、1gLクエン酸無水、5gLカザミノ酸ディフコ社製、10gLグルコース、10mgLビタミンB1、25mgL硫酸マグネシウム7水和物、50mgL硫酸鉄7水和物、100mgLL-プロリン、pH72に10molLの水酸化ナトリウムで調整、グルコース、ビタミンB1、硫酸マグネシウム7水和物、硫酸鉄7水和物は別個に加圧滅菌後添加した]が8ml入っている試験管に1接種し、30°Cで24時間培養した後、該培養液を遠心分離して培養上清を取得した。該培養上清中のLグルタミンおよびLグルタミン酸の蓄積量を高速液体クロマトグラフィーHPLCにより定量し、LグルタミンおよびLグルタミン酸生産性を評価した。その結果、85株の変異株中、50株がJPpTyeiG株よりも高いLグルタミンおよびLグルタミン酸生産性を示した。また、特に高いLグルタミンまたはLグルタミン酸生産性を示した株を3株選択し、それぞれNAR01、NAR02、NAR03株と命名した。表1にNAR01株、NAR02株及びNAR03株の培養上清中のLグルタミンおよびLグルタミン酸の蓄積量を測定した結果を示した。表1に示した通り、ナリジクス酸耐性を有するNAR01、NAR02、NAR02株はナリジクス酸耐性を有さないJPpTyeiG株に比べLグルタミンおよびLグルタミン酸の蓄積量が顕著に向上していた。2DNAジャイレースをコードする遺伝子に導入された変異の同定NAR01、NAR02、NAR03株から染色体DNAを調製し、配列番号15および16で表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチド、および配列番号17および18で表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットとしてPCRを行い、各々の変異株のgyrAを含む28kbのDNA断片、gyrBを含む26kbのDNA断片を得た。これらのDNA断片の塩基配列を常法に従い決定したところ、NAR01株のgyrA遺伝子のコードするポリペプチドには821番目のGly残基がSer残基agcに置換される変異および830番目のAsp残基がAsn残基に置換される変異以下、G821SD830Nと称すが見出された。同様にNAR02株のgyrB遺伝子のコードするポリペプチドの466番目にGlu残基が挿入される変異以下、466Eと称すが、NAR03株のgyrA遺伝子のコードするポリペプチドには84番目のAla残基がGlu残基に置換される変異以下、A84Eと称すが見出された。1DNAジャイレース阻害剤耐性変異を導入したエシェリヒアコリの作製実施例2にて見出されたDNAジャイレースをコードする遺伝子上の変異を実施例1において取得したJP株に以下の方法で導入した。NAR01、NAR03株の染色体DNAを鋳型として配列番号15および16で表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットとしてPCRを行い、gyrAにG821SD830N変異を含む28kbのDNA断片、およびgyrAにA84E変異を含む28kbのDNA断片を増幅し、QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。同様にNAR02株の染色体DNAを鋳型として配列番号17および18で表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットとしてPCRを行い、gyrBに466E変異を含む26kbのDNA断片を増幅し、QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。JP株をpKD46で形質転換した後、100mgLのアンピシリンを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpKD46を保持するエシェリヒアコリJP株以下、JPpKD46と称すを選択した。10mmolLのL-アラビノースと50μgmlのアンピシリンの存在下で培養して得られたJPpKD46に、電気パルス法により上記で取得した変異型gyrA、gyrBを含むDNA断片を導入した。得られた形質転換体をナリジクス酸5mgLを含むM9寒天平板培地に塗布して培養し、ナリジクス酸耐性株を選択した。選択したコロニーからgyrAG821SD830N変異については配列番号15および16で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、gyrAを含む断片を増幅した。このDNA断片の塩基配列を常法に従い決定し、gyrA遺伝子の821番目のGly残基がSer残基agcに置換されていること、第830番目のAsp残基がAsn残基に置換されていることを確認した。同様にgyrAA84E変異について配列番号15および16で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットに用いてコロニーPCRによりgyrAを含む断片を増幅して塩基配列を決定し、gyrA遺伝子の第84番目のAla残基がGlu残基に置換された株を選択した。さらにgyrB466E変異については配列番号17および18で表わされる塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをプライマーセットに用いてコロニーPCRを行い、gyrB遺伝子の第466番目にGlu残基が挿入された株を選択した。上記のようにしてgyrA遺伝子のコードするポリペプチドの第821番目のGly残基がSer残基に置換され、なおかつ第830番目のAsp残基がAsn残基に置換された株を取得し、エシェリヒアコリGYR1株と命名した。gyrA遺伝子のコードするポリペプチドの84番目のAla残基がGlu残基に置換された株はエシェリヒアコリGYR2株と命名した。gyrB遺伝子のコードするポリペプチドの466番目にGlu残基が挿入された株を取得し、エシェリヒアコリGYR3株と命名した。2DNAジャイレース変異導入株のDNAジャイレース活性の確認1で得たGYR1株、GYR2株、GYR3株、およびJP株をpBR322で形質転換した後、100mgLのアンピシリンを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpBR322を保持するエシェリヒアコリGYR1株以下、GYR1pBR322と称す、pBR322を保持するエシェリヒアコリGYR2株以下、GYR2pBR322と称す、pBR322を保持するエシェリヒアコリGYR3株以下、GYR3pBR322と称す、およびpBR322を保持するエシェリヒアコリJP株以下、JPpBR322と称すを選択した。これらの形質転換体を実施例21に記載の条件で2本ずつ培養し、一方には培養を停止する10分前に200mgLの濃度になるようにナリジクス酸を添加した。培養停止後、各培養物からQIAspinminiprepkitキアゲン社製でpBR322を抽出した。文献で報告されている方法に基づき、それぞれの菌体から抽出したpBR322をクロロキン25mgL、もしくは25mgL添加条件で電気泳動を行うことで超らせん構造を比較した。JP株ではナリジクス酸処理でDNAジャイレースの活性を阻害しpBR322の超らせんが減少した場合、クロロキン25mgLの電気泳動ではDNAのバンドが上側にシフトし、クロロキン25mgLの電気泳動ではDNAのバンドが下側にシフトしていた。一方、DNAジャイレースの変異株であるGYR1、GYR2、GYR3から抽出したpBR322はナリジクス酸未処理の条件でもJP株をナリジクス酸処理した場合と類似した電気泳動のパターンを示した。以上の結果からGYR1、GYR2、GYR3ではDNAジャイレースに導入された変異によって細胞内のDNAのうち、超らせん構造をとるDNAの割合が親株より低下していることが明らかになった。また、このことからGYR1、GYR2、およびGYR3のDNAジャイレース活性が親株より低下していることも明らかとなった。エシェリヒアコリDNAジャイレース変異株のL-グルタミン生産試験実施例31で得られたGYR1、GYR2、GYR3株にpTyeiGおよび、pTrs30を形質転換した後、100mgLのアンピシリンを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpTyeiGもしくはpTrs30を保持するエシェリヒアコリGYR1株以下、GYR1pTyeiG、GYR1pTrs30と称す、pTyeiGもしくはpTrs30を保持するエシェリヒアコリGYR2株以下、GYR2pTyeiG、GYR2pTrs30と称す、およびpTyeiGもしくはpTrs30を保持するエシェリヒアコリGYR3株以下、GYR3pTyeiG、GYR3pTrs30と称すを選択した。これらの菌株を実施例3と同様の条件で培養し、培養上清中の培養生成物の蓄積量をHPLCにより定量した。結果を表2に示す。表2に示した通り、DNAジャイレースの活性を低下させる変異を導入することで、L-グルタミン、L-グルタミン酸の蓄積量は顕著に向上した。1エシェリヒアコリDNAジャイレース阻害タンパク質発現株の造成エシェリヒアコリにおいてグルタミン酸ラセマーゼ遺伝子名murIを強制的に発現させると、プラスミドの複製効率の低下やDNAジャイレース活性の低下が認められることが報告されているTheJournalofBiologicalchemistry27739070390732002。配列番号21および22で表される塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットとして用いてPCRを行った。PCRはプライマーDNAとして上記プライマーセットを用いる以外、実施例11と同様の条件で行った。PCRで得られた増幅DNA断片、およびpSTV28をそれぞれEcoRIおよびSalIで消化した後、実施例11と同様に両DNAを連結し、連結体DNAを用いてエシェリヒアコリDH5α株を形質転換した。以上の方法でlacプロモーター下流にmurI遺伝子が連結された発現ベクターを造成し、pSmurIと命名した。実施例21で取得したJPpTyeiG株にpSTV28および、pSmurIを形質転換した後、100mgLのアンピシリンおよび25mgLのクロラムフェニコールを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpSTV28もしくはpSmurIを保持するエシェリヒアコリJPpTyeiG株以下、JPpTyeiGpSTV28、JPpTyeiGpSmurIと称すを選択した。2エシェリヒアコリDNAジャイレース阻害タンパク質発現株のL-グルタミン生産試験上記1で得たJPpTyeiGpSTV28、JPpTyeiGpSmurIを実施例21に記載の条件で培養し、培養上清中の培養生成物の蓄積量をHPLCにより定量した。結果を表3に示す。表3に示した通り、DNAジャイレースの活性を低下させる活性を有するタンパク質を発現させることで、L-グルタミンの蓄積量は顕著に向上した。1エシェリヒアコリDNAトポイソメラーゼ発現株の造成エシェリヒアコリのI型DNAトポイソメラーゼ遺伝子名topAを発現するプラスミド、およびIV型DNAトポイソメラーゼ遺伝子名parC、parEを発現するプラスミドを以下の方法で造成した。配列番号25および26で表される塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットとして用いてPCRを行った。PCRはプライマーDNAとして上記プライマーセットを用いる以外、実施例11と同様の条件で行った。PCRで得られた28kbpのDNA断片、およびpSTV28をそれぞれSacIおよびSalIで消化した後、実施例11と同様に両DNAを連結し、連結体DNAを用いてエシェリヒアコリDH5α株を形質転換した。以上の方法でlacプロモーター下流にtopA遺伝子が連結された発現ベクターを造成し、pStopAと命名した。次に、配列番号29および30で表される塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットとして用いてPCRを行い、23kbpのDNA断片を増幅した。同様に配列番号33および34で表される塩基配列からなる合成DNAをプライマーセットとして用いてPCRを行い、19kbpのDNA断片を得た。PCRはプライマーDNAとして上記プライマーセットを用いる以外、実施例11と同様の条件で行った。QiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した増幅産物を等モルの比率で混合したものを鋳型として2回目のPCRを行い、増幅産物を取得し、再びQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した。PCRで得られた増幅DNA断片、およびpSTV28をそれぞれEcoRIおよびSalIで消化した後、実施例11と同様に両DNAを連結し、連結体DNAを用いてエシェリヒアコリDH5α株を形質転換した。以上の方法でlacプロモーター下流にparC、parE遺伝子が連結された発現ベクターを造成し、pSparCEと命名した。実施例21で取得したJPpTyeiG株にpSTV28、pStopA、およびpSparCEを形質転換した後、100mgLのアンピシリンおよび25mgLのクロラムフェニコールを含むLB寒天培地に塗布して、30°Cで培養することでpSTV28もしくはpStopAもしくはpSparCEを保持するエシェリヒアコリJPpTyeiG株以下、JPpTyeiGpSTV28、JPpTyeiGpStopA、JPpTyeiGpSparCEと称すを選択した。2エシェリヒアコリDNAトポイソメラーゼ発現株のL-グルタミン生産試験上記1で得たJPpTyeiGpSTV28、JPpTyeiGpStopA、JPpTyeiGpSparCEを実施例3に記載の条件で培養し、培養上清中の培養生成物の蓄積量をHPLCにより定量した。結果を表4に示す。表4に示した通り、I型、IV型DNAトポイソメラーゼを過剰発現させることで、L-グルタミンの蓄積量は顕著に向上した。1コリネバクテリウムグルタミカムDNAトポイソメラーゼ過剰発現株の造成コリネバクテリウムグルタミカムの野生株ATCC13032株の染色体DNAを、斉藤らの方法BiochimBiophysActa72619により調製した。配列番号37および38で表される塩基配列からなる合成DNA、または配列番号41および42で表される塩基配列からなる合成DNAをそれぞれプライマーセットとして用い、PCRを行った。PCRは鋳型としてコリネバクテリウムグルタミカムの野生型ATCC13032株の染色体DNAを用いること、プライマーとして上記プライマーセットを用いること以外、実施例11と同様の条件で行い、NCgl0304とその上流を含む約32kbpの断片とNCgl1769とその上流を含む約25kbpの断片を増幅した。これらの断片をQiaquickPCRpurificationkitキアゲン社製を用いて精製した後、BamHIタカラバイオ社製で切断した。pCS299P国際公開第200063388号パンフレットをBamHIタカラバイオ社製で切断後、アルカリフォスファターゼタカラバイオ社製処理を行ない、アガロースゲル電気泳動し、GENECLEANKit]に従って電気穿孔法にてGLA2株国際公開第2007074857号パンフレットを形質転換した後、25mgLのカナマイシンを含むBY寒天培地ブイヨン20g、酵母エキスディフコ社製5g、バクトアガーディフコ社製18gを水1Lに含みpH70に調整した培地]に塗布して、30°Cで培養することでpCG0304もしくはpCG1769を保持するコリネバクテリウムグルタミカムGLA2株以下、GLA2pCG0304、GLA2pCG1769と称すを選択した。2コリネバクテリウムグルタミカムDNAトポイソメラーゼ過剰発現株のL-グルタミン生産試験上記1で取得したGLA2pCG0304、GLA2pCG1769株およびコントロールとしてpCS299PをGLA2株に導入した株以下GLA2pCS299Pと称すを、カナマイシンを25mgLになるように添加したBYG寒天培地グルコース10g、肉エキス7g、ペプトン10g、塩化ナトリウム3g、酵母エキスディフコ社製5g、バクトアガーディフコ社製18gを水1Lに含みpH72に調整した培地を用い30°Cで24時間培養し、各菌株をそれぞれカナマイシンを200mgLになるように添加した種培地グルコース50g、ブイヨン20g、硫酸アンモニウム5g、尿素5g、リン酸二水素カリウム2g、硫酸マグネシウム7水和物05g、硫酸鉄7水和物1mg、硫酸銅5水和物04mg、硫酸亜鉛7水和物09mg、塩化マンガン4水和物007mg、4ホウ酸2ナトリウム10水和物001mg、7モリブデン酸6アンモニウム4水和物004mg、チアミン塩酸塩05mg、ビオチン01mgを水1Lに含みpH72に調整後、炭酸カルシウムを10g加えた培地6mlを含む試験管に植菌し、30°Cで12時間~16時間培養した。得られた種培養液を、それぞれカナマイシンを200mgLになるように添加した本培養培地グルコース50g、尿素2g、硫酸アンモニウム20g、リン酸二水素カリウム05g、リン酸水素二カリウム05g、硫酸マグネシウム7水和物05g、硫酸鉄7水和物2mg、硫酸マンガン5水和物25mg、チアミン塩酸塩05mg、ビオチン01mgまたは0001mgを水1Lに含みpH70に調整後、炭酸カルシウムを20g加えた培地30mlを含むバッフルつき300ml三角フラスコに10植菌し、30°C、220rpm条件下で、糖を完全に消費しきらないように16~18時間培養した。培養終了後、遠心分離により培養物から菌体を除去し、上清中のL-グルタミンおよびL-グルタミン酸の蓄積量をそれぞれHPLCにより定量した。結果を表5に示す。表5に示したとおり、コリネバクテリウムグルタミカムにおいてもI型DNAトポイソメラーゼを過剰発現することでL-グルタミン、L-グルタミン酸の蓄積量は顕著に向上した。1DNAジャイレース阻害剤に対する耐性を有するコリネバクテリウムグルタミカムL-グルタミンおよびL-グルタミン酸生産変異株の取得GS2株国際公開第2007074857号パンフレットをBY培地肉エキス7g、ペプトン10g、塩化ナトリウム3g、酵母エキスディフコ社製5g、を水1Lに含みpH72に調整した培地6mlを含む太型試験管に植菌し、終夜培養した種培養液をBY培地6mlを含む太型試験管に1植菌し、30°Cで対数増殖期まで培養した。この菌体を生理食塩水で洗浄した後、ナリジクス酸を75mgLになるように添加したMMYE培地グルコース10g、酵母エキス1g、硫酸アンモニウム1g、リン酸二水素カリウム1g、リン酸水素二カリウム1g、硫酸マグネシウム7水和物03g、硫酸鉄7水和物10mg、硫酸マンガン5水和物36mg、塩化カルシウム2水和物10mg、パントテン酸カルシウム10mg、チアミン塩酸塩5mg、ビオチン003mgを水1Lに含みpH72に調整した培地に塗布し、30°Cで3~5日間培養した。生育してきたコロニーを釣菌分離し、DNAジャイレース阻害剤に対する耐性を有する変異株GNA1株、GNA2株を得た。2DNAジャイレース阻害剤に対する耐性を有するコリネバクテリウムグルタミカムL-グルタミンおよびL-グルタミン酸生産変異株のL-グルタミンおよびL-グルタミン酸生産試験上記1において取得したGNA1株、GNA2株およびGS2株を培地からカナマイシンを除いた実施例72に記載の条件でL-グルタミンおよびL-グルタミン酸生産試験を行った。結果を表6に示す。表6に示したとおり、コリネバクテリウムグルタミカムにおいてもDNAジャイレース阻害剤耐性を付与することでL-グルタミンおよびL-グルタミン酸の蓄積量は顕著に向上した。