"以下の及びGLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、を体細胞に接触させることを含む、iPS細胞の樹立効率改善方法。前記の物質が、GLISfamilyzincfinger1または該GLIS1をコードする核酸を含む、請求項1記載の方法。前記の物質が、Klf4または該Klf4をコードする核酸を含む、請求項1または2記載の方法。以下の及びGLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、を含有してなる、iPS細胞の樹立効率改善剤。前記の物質が、GLIS1または該GLIS1をコードする核酸を含む、請求項4記載の改善剤。前記の物質が、Klf4または該Klf4をコードする核酸を含む、請求項4または5記載の改善剤。以下の、及び3GLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、前記1及び2の物質と組み合わせることにより体細胞からiPS細胞を誘導しうる核初期化物質、を体細胞に接触させることを含む、iPS細胞の製造方法。前記の物質が、GLIS1または該GLIS1をコードする核酸を含む、請求項7記載の方法。前記の物質が、Klf4または該Klf4をコードする核酸を含む、請求項7または8記載の方法。前記の核初期化物質が、Octファミリーのメンバー、Soxファミリーのメンバー、Mycファミリーのメンバー、Lin28ファミリーのメンバーおよびNanog、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される、請求項7~9のいずれか1項に記載の方法。前記の核初期化物質が、Oct34またはそれをコードする核酸を含む、請求項7~9のいずれか1項に記載の方法。前記の核初期化物質が、Oct34およびSox2、またはそれらをコードする核酸を含む、請求項11記載の方法。前記の核初期化物質が、Oct34、Sox2およびcMyc、またはそれらをコードする核酸を含む、請求項11記載の方法。以下の、及び3GLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、前記1及び2の物質と組み合わせることにより体細胞からiPS細胞を誘導しうる核初期化物質、を含有してなる、体細胞からのiPS細胞の誘導剤。前記の物質が、GLIS1または該GLIS1をコードする核酸を含む、請求項14記載の剤。前記の物質が、Klf4または該Klf4をコードする核酸を含む、請求項14または15記載の剤。前記の核初期化物質が、Octファミリーのメンバー、Soxファミリーのメンバー、Mycファミリーのメンバー、Lin28ファミリーのメンバーおよびNanog、並びにそれらをコードする核酸からなる群より選択される、請求項14~16のいずれか1項に記載の剤。前記の核初期化物質が、Oct34またはそれをコードする核酸を含む、請求項14~16のいずれか1項に記載の剤。前記の核初期化物質が、Oct34およびSox2、またはそれらをコードする核酸を含む、請求項18記載の剤。前記の核初期化物質が、Oct34、Sox2およびcMyc、またはそれらをコードする核酸を含む、請求項18記載の剤。以下の及びGLISファミリーのメンバーをコードする外来性核酸からなる群より選択される1種以上の核酸、Klfファミリーのメンバーをコードする外来性核酸からなる群より選択される1種以上の核酸、を含む、iPS細胞。前記外来性核酸がゲノムに組み込まれている、請求項21記載のiPS細胞。請求項21または22記載のiPS細胞に分化誘導処理を行い、体細胞に分化させることを含む、体細胞の製造方法。下記のおよび:請求項7~13のいずれか1項に記載の方法によりiPS細胞を製造する工程、および上記工程で得られたiPS細胞に分化誘導処理を行い、体細胞に分化させる工程、を含む、体細胞の製造方法。iPS細胞の樹立効率改善のための、以下の及びGLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、の使用。iPS細胞の樹立効率改善のための、GLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質の使用であって、該物質を、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質とともに体細胞に接触させることを特徴とする、使用。iPS細胞の製造のための、以下の、及び3GLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、前記1及び2の物質と組み合わせることにより体細胞からiPS細胞を誘導しうる核初期化物質、の使用。iPS細胞の製造のための、以下の及びGLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、の使用であって、該因子を、前記1及び2の物質と組み合わせることにより体細胞からiPS細胞を誘導しうる核初期化物質とともに体細胞に接触させることを特徴とする、使用。iPS細胞の製造のための、GLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質の使用であって、該物質を、Klfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、および、前記1及び2の物質と組み合わせることにより体細胞からiPS細胞を誘導しうる核初期化物質とともに体細胞に接触させることを特徴とする、使用。体細胞の製造における、請求項21または22記載のiPS細胞の使用。体細胞の製造における細胞ソースとしての、請求項21または22記載のiPS細胞。発明の詳細な説明本発明は、体細胞の核初期化工程において、GLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、およびKlfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質以下、本発明の樹立効率改善因子ともいうを該体細胞に接触させることを含む、iPS細胞の樹立効率の改善方法を提供する。ここで体細胞の核初期化は、核初期化物質を体細胞に接触させることにより行われるので、本発明はまた、前記およびの物質と共に、前記およびの物質と組み合わせることにより体細胞からiPS細胞を誘導しうる核初期化物質以下単に、核初期化物質ともいうを体細胞に接触させることを含む、iPS細胞の製造方法を提供する。尚、本明細書では、前記の物質体細胞ソース本発明においてiPS細胞作製のための出発材料として用いることのできる体細胞は、哺乳動物例えば、ヒト、マウス、サル、ウシ、ブタ、ラット、イヌ等由来の生殖細胞以外のいかなる細胞であってもよく、例えば、角質化する上皮細胞例、角質化表皮細胞、粘膜上皮細胞例、舌表層の上皮細胞、外分泌腺上皮細胞例、乳腺細胞、ホルモン分泌細胞例、副腎髄質細胞、代謝貯蔵用の細胞例、肝細胞、境界面を構成する内腔上皮細胞例、I型肺胞細胞、内鎖管の内腔上皮細胞例、血管内皮細胞、運搬能をもつ繊毛のある細胞例、気道上皮細胞、細胞外マトリックス分泌用細胞例、線維芽細胞、収縮性細胞例、平滑筋細胞、血液と免疫系の細胞例、Tリンパ球、感覚に関する細胞例、桿細胞、自律神経系ニューロン例、コリン作動性ニューロン、感覚器と末梢ニューロンの支持細胞例、随伴細胞、中枢神経系の神経細胞とグリア細胞例、星状グリア細胞、色素細胞例、網膜色素上皮細胞、およびそれらの前駆細胞等が挙げられる。細胞の分化の程度や細胞を採取する動物の齢などに特に制限はなく、未分化な前駆細胞であっても、最終分化した成熟細胞であっても、同様に本発明における体細胞の起源として使用することができる。ここで未分化な前駆細胞としては、たとえば神経幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、歯髄幹細胞等の組織幹細胞体性幹細胞が挙げられる。体細胞を採取するソースとなる哺乳動物個体は特に制限されないが、得られるiPS細胞がヒトの再生医療用途に使用される場合には、拒絶反応が起こらないという観点から、患者本人またはHLAの型が同一もしくは実質的に同一である他人から体細胞を採取することが特に好ましい。ここでHLAの型が実質的に同一とは、免疫抑制剤などの使用により、該体細胞由来のiPS細胞から分化誘導することにより得られた細胞を患者に移植した場合に移植細胞が生着可能な程度にHLAの型が一致していることをいう。たとえば主たるHLA本発明のiPS細胞樹立効率改善因子本発明におけるGLISファミリーは、5つのC2H2型Zincフィンガー領域を有するKruppellikezincfingerfamilyであり、Glitranscriptionfactorへの類似性からこのように命名されたGlisGlisimilar、KimYSetalJBiolChem2773090130913。GLISファミリーは胚発生の過程における種々の遺伝子発現を正もしくは負に制御する転写因子で構成される。この遺伝子ファミリーのメンバーとしては、例えば、GLISfamilyzincfinger1GLIS1、GLIS2、GLIS3などが挙げられ、GLIS1が好ましく例示されるが、これに限定されない。尚、GLIS1はマウスES細胞では発現していない遺伝子である。GLISファミリーのメンバーとしては、任意の哺乳動物例えば、ヒト、マウス、ラット、サル、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ等の細胞組織[例えば、胸腺、骨髄、脾臓、脳、脊髄、心臓、骨格筋、腎臓、肺、肝臓、膵臓もしくは前立腺の細胞組織、これら細胞の前駆細胞、幹細胞または癌細胞など]由来のタンパク質またはそれをコードする核酸を用いることができるが、ヒト又はマウスの細胞組織由来のものが好ましい。ヒト及びマウス由来のGLISファミリーメンバーのアミノ酸配列およびcDNA配列情報は、表1に記載されるNCBIaccessionnumbersを参照することにより取得することができ、当業者は、該cDNA配列情報に基づいて容易に各タンパク質をコードする核酸を単離し、また必要に応じて、組換えタンパク質を製造することができる。また、上記の各アミノ酸配列と90以上、好ましくは95以上、より好ましくは98以上、特に好ましくは99以上の同一性を有し、且つ野生型タンパク質と同等のiPS細胞樹立効率改善効果を有する天然もしくは人工の変異タンパク質及びそれをコードする核酸も、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子として利用することができる。ここでiPS細胞の樹立効率改善効果は、所定の初期化因子例えば、Oct34およびSox2の2因子、さらにcMycを加えた3因子などのみを体細胞に導入した場合と、該初期化因子の導入に加えて本発明のiPS細胞樹立効率改善因子を体細胞に接触させた場合とで、出現するiPS細胞のコロニー数を比較することにより検証することができる。本発明のGLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸は、ファミリーに属する因子のいずれか1種のみを用いてもよいし、2種以上を組み合わせて用いてもよい。KlfKruppellikefactorファミリーは増殖、分化、発生、アポトーシス等の種々の生物学的プロセスを制御する転写因子であるが、詳しい働きはよくわかっていない。この遺伝子ファミリーのメンバーとして、Klf1、Klf2、Klf4およびKlf5などが挙げられ、好ましくはKlf4であるが、これに限定されない。なお前述したようにGLISファミリーは5つのC2H2型Zincフィンガー領域を有しているが、Klfファミリーは3つのC2H2型Zincフィンガー領域を有している。Yamanakaらは、4遺伝子Oct34、Sox2、Klf4およびcMycはそれぞれ同一ファミリーに属する他の遺伝子によって代替できると考え、Klf4をKlf1、Klf2もしくはKlf5に代えてもiPS細胞を樹立できることを示しているWO2007069666A1、NakagawaMetalNatBiotethnol26101106。また最近、Jiangらのグループは、ES細胞にレチノイン酸による分化誘導処理を施すと、Klf4だけでなくKlf2やKlf5の発現も低下することに着目し、Klf2、Klf4及びKlf5を同時にノックダウンしたところ、ES細胞の分化が誘導されることを見出し、Klf2やKlf5等のKlfファミリーの少なくとも一部は、ES細胞におけるKlf4の機能を代替し得る可能性を示しているJiangJetalNatCellBiol10353360。彼らはさらに、Oct34Sox2及びcMycの3遺伝子とともに、Klf2もしくはKlf5遺伝子、あるいは他の転写因子やエピジェネティック調節因子をMEFに導入し、Klf2やKlf5がKlf4を代替し得ることを確認するとともに、エストロゲン受容体に類似するオーファン核内受容体であるEsrrbもまた、Klf4を代替し得ることを見出しているFengBetalNatCellBiol11197203。以上により、Klf1、Klf2、Klf5、さらにはEsrrbもまた、本明細書の実施例で確認されたKlf4の効果GLISファミリーとの併用によるiPS細胞樹立効率改善効果を有していると考えられる。Klfファミリーのメンバーとしては、任意の哺乳動物例えば、ヒト、マウス、ラット、サル、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ等の細胞組織[例えば、胸腺、骨髄、脾臓、脳、脊髄、心臓、骨格筋、腎臓、肺、肝臓、膵臓もしくは前立腺の細胞組織、これら細胞の前駆細胞、幹細胞または癌細胞など]由来のタンパク質またはそれをコードする核酸を用いることができるが、ヒト又はマウスの細胞組織由来のものが好ましい。ヒト及びマウス由来のKlfファミリーメンバーのアミノ酸配列およびcDNA配列情報は、表2に記載されるNCBIaccessionnumbersを参照することにより取得することができ、当業者は、該cDNA配列情報に基づいて容易に各タンパク質をコードする核酸を単離し、また必要に応じて、組換えタンパク質を製造することができる。また、上記の各アミノ酸配列と90以上、好ましくは95以上、より好ましくは98以上、特に好ましくは99以上の同一性を有し、且つ野生型タンパク質と同等のiPS細胞樹立効率改善効果を有する天然もしくは人工の変異タンパク質及びそれをコードする核酸も、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子として利用することができる。本発明のKlfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸は、ファミリーに属する因子のいずれか1種のみを用いてもよいし、2種以上を組み合わせて用いてもよい。なお、核初期化の対象となる体細胞が、前記本発明のiPS細胞樹立効率改善因子であるGLISファミリーのメンバー、またはKlfファミリーのメンバーのいずれかにおける構成要素の一部を、樹立効率改善のために十分なレベルで内在的に発現している条件下にあっては、当該内在的に発現している構成要素を除いた残りの構成要素のみの組合わせもまた、本発明におけるiPS細胞樹立効率改善因子の範疇に含まれ得る。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をタンパク質として体細胞へ導入するには、自体公知の細胞へのタンパク質導入方法を用いて実施することができる。そのような方法としては、例えば、タンパク質導入試薬を用いる方法、タンパク質導入ドメインPTDもしくは細胞透過性ペプチドCPP融合タンパク質を用いる方法、マイクロインジェクション法などが挙げられる。タンパク質導入試薬としては、カチオン性脂質をベースとしたBioPOTERProteinDeliveryReagentGeneTherapySystmes、ProJectTMProteinTransfectionReagentPIERCEおよびProVectinIMGENEX、脂質をベースとしたProfect1TargetingSystems、膜透過性ペプチドをベースとしたPenetrainPeptideQbiogeneおよびChariotKitActiveMotif、HVJエンベロープ不活化センダイウイルスを利用したGenomONE石原産業等が市販されている。導入はこれらの試薬に添付のプロトコルに従って行うことができるが、一般的な手順は以下の通りである。本発明のタンパク性iPS細胞樹立効率改善因子を適当な溶媒例えば、PBS、HEPES等の緩衝液に希釈し、導入試薬を加えて室温で515分程度インキュベートして複合体を形成させ、これを無血清培地に交換した細胞に添加して37°Cで1ないし数時間インキュベートする。その後培地を除去して血清含有培地に交換する。PTDとしては、ショウジョウバエ由来のAntP、HIV由来のTATGreenMLoewensteinPMCell55117988、Penetratin、BuforinII、Transportan、MAP、KFGF、Ku70、Prion、pVEC、Pep1、Pep7、SynB1、HNI、HSV由来のVP22等のタンパク質の細胞通過ドメインを用いたものが開発されている。PTD由来のCPPとしては、11Rや9R等のポリアルギニンが挙げられる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子のcDNAとPTD配列もしくはCPP配列とを組み込んだ融合タンパク質発現ベクターを作製して組換え発現させ、融合タンパク質を回収して導入に用いる。導入は、タンパク質導入試薬を添加しない以外は上記と同様にして行うことができる。マイクロインジェクションは、先端径1μm程度のガラス針にタンパク質溶液を入れ、細胞に穿刺導入する方法であり、確実に細胞内にタンパク質を導入することができる。その他、エレクトロポレーション法、セミインタクトセル法KanoFetalMethodsinMolecularBiologyVol322357365、Wrtペプチドによる導入法KondoEetalMolCancerTher316231630などのタンパク質導入法も用いることができる。タンパク質導入操作は1回以上の任意の回数例えば、1回以上10回以下、または1回以上5回以下等行うことができ、好ましくは導入操作を2回以上たとえば3回または4回繰り返して行うことができる。導入操作を繰り返し行う場合の間隔としては、例えば6~48時間、好ましくは12~24時間が挙げられる。iPS細胞の樹立効率を重視するのであれば、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子を、タンパク質としてではなくそれをコードする核酸の形態で用いることがむしろ好ましい。該核酸はDNAであってもRNAであってもよく、あるいはDNARNAキメラであってもよい。好ましくはDNAが挙げられる。また、該核酸は二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖DNA、二本鎖RNAまたはDNARNAのハイブリッドでもよい。好ましくは該核酸は二本鎖DNA、特にcDNAである。本発明の核酸性iPS細胞樹立効率改善因子は、例えば、ヒトもしくは他の哺乳動物の細胞組織[例えば、胸腺、骨髄、脾臓、脳、脊髄、心臓、骨格筋、腎臓、肺、肝臓、膵臓もしくは前立腺の細胞組織、これら細胞の前駆細胞、幹細胞または癌細胞など]由来のcDNAから、常法に従ってクローニングすることができる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子の体細胞への導入は、自体公知の細胞への遺伝子導入方法を用いて実施することができる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸は、宿主となる体細胞で機能し得るプロモーターを含む適当な発現ベクターに挿入される。発現ベクターとしては、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、センダイウイルスなどのウイルスベクター、動物細胞発現プラスミド例、pA111,pXT1,pRcCMV,pRcRSV,pcDNAINeoなどが用いられ得る。用いるベクターの種類は、得られるiPS細胞の用途に応じて適宜選択することができる。例えば、アデノウイルスベクター、プラスミドベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクターなどが使用され得る。発現ベクターにおいて使用されるプロモーターとしては、例えばEF1αプロモーター、CAGプロモーター、SRαプロモーター、SV40プロモーター、LTRプロモーター、CMVサイトメガロウイルスプロモーター、RSVラウス肉腫ウイルスプロモーター、MoMuLVモロニーマウス白血病ウイルスLTR、HSVTK単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーターなどが用いられる。なかでも、EF1αプロモーター、CAGプロモーター、MoMuLVLTR、CMVプロモーター、SRαプロモーターなどが好ましい。発現ベクターは、プロモーターの他に、所望によりエンハンサー、ポリA付加シグナル、選択マーカー遺伝子、SV40複製起点などを含有していてもよい。選択マーカー遺伝子としては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子等が挙げられる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸は、単独で発現ベクター上に組み込んでもよいし、幾つかを組み合わせて1つの発現ベクター上に組み込んでもよい。さらに、1以上の初期化遺伝子とともに1つの発現ベクターに組み込んでもよい。上記において、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子や初期化因子の遺伝子を組み合わせて1つの発現ベクターに組み込む場合、これら複数の遺伝子は、好ましくはポリシストロニック発現を可能にする配列を介して発現ベクターに組み込むことができる。ポリシストロニック発現を可能にする配列を用いることにより、1種類の発現ベクターに組み込まれている複数の遺伝子をより効率的に発現させることが可能になる。ポリシストロニック発現を可能にする配列としては、例えば、口蹄疫ウイルスの2A配列配列番号:9PLoSONE3e25322008、StemCells2517072007、IRES配列USPatentNo4937190など、好ましくは2A配列を用いることができる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸を含む発現ベクターは、ベクターの種類に応じて、自体公知の手法により細胞に導入することができる。例えば、ウイルスベクターの場合、該核酸を含むプラスミドを適当なパッケージング細胞例、PlatE細胞や相補細胞株例、293細胞に導入して、培養上清中に産生されるウイルスベクターを回収し、各ウイルスベクターに応じた適切な方法により、該ベクターを細胞に感染させる。例えば、レトロウイルスベクターを用いる具体的手段がWO200769666、Cell126663676およびCell131861872に開示されており、レンチウイルスベクターを用いる場合については、Science31819171920に開示がある。iPS細胞を再生医療のための細胞ソースとして利用する場合、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子の発現再活性化またはそれらの外来性核酸が組み込まれた近傍に存在する内因性遺伝子の活性化は、iPS細胞由来の分化細胞から再生された組織における発癌リスクを高める可能性があるので、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸は細胞の染色体に組み込まれず、一過的に発現することが好ましい。かかる観点からは、染色体への組込みが稀なアデノウイルスベクターの使用が好ましい。アデノウイルスベクターを用いる具体的手段は、Science322945949に記載されている。また、アデノ随伴ウイルスも染色体への組込み頻度が低く、アデノウイルスベクターと比べて細胞毒性や炎症惹起作用が低いので、別の好ましいベクターとして挙げられる。センダイウイルスベクターは染色体外で安定に存在することができ、必要に応じてsiRNAにより分解除去することができるので、同様に好ましく利用され得る。センダイウイルスベクターについては、JBiolChem2822738327391、ProcJpnAcadSerB85348362、または特許第3602058号に記載のものを用いることができる。レトロウイルスベクターやレンチウイルスベクターを用いる場合は、いったん導入遺伝子のサイレンシングが起こったとしても、後に再活性化される可能性があるので、例えば、CreloxPシステムを用いて、不要となった時点で本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸を切り出す方法が好ましく用いられ得る。即ち、該核酸の両端にloxP配列を配置しておき、iPS細胞が誘導された後で、プラスミドベクターもしくはアデノウイルスベクターを用いて細胞にCreリコンビナーゼを作用させ、loxP配列に挟まれた領域を切り出すことができる。また、LTRU3領域のエンハンサー-プロモーター配列は、挿入突然変異によって近傍の宿主遺伝子を上方制御する可能性があるので、当該配列を欠失、もしくはSV40などのポリアデニル化配列で置換した3’自己不活性化SINLTRを使用して、切り出されずゲノム中に残存するloxP配列より外側のLTRによる内因性遺伝子の発現制御を回避することがより好ましい。CreloxPシステムおよびSINLTRを用いる具体的手段は、SoldneretalCell136964977、ChangetalStemCells2710421049などに開示されている。一方、非ウイルスベクターであるプラスミドベクターの場合には、リポフェクション法、リポソーム法、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム共沈殿法、DEAEデキストラン法、マイクロインジェクション法、遺伝子銃法などを用いて該ベクターを細胞に導入することができる。ベクターとしてプラスミドを用いる具体的手段は、例えばScience322949953等に記載されている。プラスミドベクターやアデノウイルスベクター等を用いる場合、遺伝子導入は1回以上の任意の回数例えば、1回以上10回以下、または1回以上5回以下など行うことができる。2種以上の発現ベクターを体細胞に導入する場合には、これらの全ての種類の発現ベクターを同時に体細胞に導入することが好ましいが、この場合においても、導入操作は1回以上の任意の回数例えば、1回以上10回以下、または1回以上5回以下など行うことができ、好ましくは導入操作を2回以上繰り返して行うことができる。尚、アデノウイルスやプラスミドを用いる場合でも、導入遺伝子が染色体に組み込まれることがあるので、結局はサザンブロットやPCRにより染色体への遺伝子挿入がないことを確認する必要がある。そのため、上記CreloxPシステムのように、いったん染色体に導入遺伝子を組み込んだ後に、該遺伝子を除去する手段を用いることは好都合であり得る。別の好ましい一実施態様においては、トランスポゾンを用いて染色体に導入遺伝子を組み込んだ後に、プラスミドベクターもしくはアデノウイルスベクターを用いて細胞に転移酵素を作用させ、導入遺伝子を完全に染色体から除去する方法が用いられ得る。好ましいトランスポゾンとしては、例えば、鱗翅目昆虫由来のトランスポゾンであるpiggyBac等が挙げられる。piggyBacトランスポゾンを用いる具体的手段は、KajiKetalNature458771775、WoltjenetalNature458766770に開示されている。別の好ましい非組込み型ベクターとして、染色体外で自律複製可能なエピゾーマルベクターが挙げられる。エピゾーマルベクターを用いる具体的手段は、YuetalScience324797801に開示されている。必要に応じて、エピゾーマルベクターの複製に必要なベクター要素の5’側および3’側にloxP配列を同方向に配置したエピゾーマルベクターに、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸を挿入した発現ベクターを構築し、これを体細胞に導入することもできる。該エピゾーマルベクターとしては、例えば、EBV、SV40等に由来する自律複製に必要な配列をベクター要素として含むベクターが挙げられる。自律複製に必要なベクター要素としては、具体的には、複製開始点と、複製開始点に結合して複製を制御するタンパク質をコードする遺伝子であり、例えば、EBVにあっては複製開始点oriPとEBNA1遺伝子、SV40にあっては複製開始点oriとSV40largeTantigen遺伝子が挙げられる。また、エピゾーマル発現ベクターは、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸の転写を制御するプロモーターを含む。該プロモーターとしては、前記と同様のプロモーターが用いられ得る。また、エピゾーマル発現ベクターは、前記と同様に、所望によりエンハンサー、ポリA付加シグナル、選択マーカー遺伝子などをさらに含有していてもよい。選択マーカー遺伝子としては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子等が挙げられる。本発明で使用されるloxP配列としては、バクテリオファージP1由来の野生型loxP配列配列番号:10の他、導入遺伝子の複製に必要なベクター要素を挟む位置に同方向で配置された場合に、組換えを起こしてloxP配列間の配列を欠失させ得る任意の変異loxP配列が挙げられる。変異loxP配列としては、例えば、5’側反復配列に変異のあるlox71配列番号:11、3’側反復配列に変異のあるlox66配列番号:12、スペーサー部分に変異のあるlox2272やlox511などが挙げられる。該ベクター要素の5’側および3’側に配置される2つのloxP配列は、同一であっても異なっていてもよいが、スペーサー部分に変異のある変異loxP配列の場合は同一のもの例、lox2272同士、lox511同士が用いられる。好ましくは、5’側反復配列に変異のある変異loxP配列例、lox71と3’側反復配列に変異のある変異loxP配列例、lox66との組合せが挙げられる。この場合、組換えの結果染色体上に残るloxP配列は5’側および3’側の反復配列に二重変異を有するため、Creリコンビナーゼに認識されにくく、不必要な組換えにより染色体の欠失変異を起こすリスクが低減される。変異loxP配列であるlox71とlox66との組合せを用いる場合、前記ベクター要素の5’側および3’側にいずれの変異loxP配列を配置してもよいが、変異部位がloxP配列の外端に配置されるような向きで変異loxP配列を挿入する必要がある。2つのloxP配列は、導入遺伝子の複製に必要なベクター要素即ち、複製開始点、または複製開始点に結合して複製を制御するタンパク質をコードする遺伝子配列の5’側および3’側に、同方向に配置される。loxP配列が挟むベクター要素は、複製開始点、または複製開始点に結合して複製を制御するタンパク質をコードする遺伝子配列のいずれか一方だけであってもよいし、両方であってもよい。エピゾーマルベクターは、例えばリポフェクション法、リポソーム法、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム共沈殿法、DEAEデキストラン法、マイクロインジェクション法、遺伝子銃法などを用いて該ベクターを細胞に導入することができる。具体的には、例えばScience324797801等に記載される方法を用いることができる。iPS細胞から導入遺伝子の複製に必要なベクター要素が除去されたか否かの確認は、該ベクター要素内部および/またはloxP配列近傍の塩基配列を含む核酸をプローブまたはプライマーとして用い、該iPS細胞から単離したエピソーム画分を鋳型としてサザンブロット分析またはPCR分析を行い、バンドの有無または検出バンドの長さを調べることにより実施することができる。エピソーム画分の調製は当該分野で周知の方法により行えばよく、例えば、Science324797801等に記載される方法を用いることができる。核初期化物質本発明において核初期化物質とは、体細胞に導入することにより、あるいは本発明の樹立効率改善因子すなわちGLISファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質、およびKlfファミリーのメンバーおよびそれらをコードする核酸からなる群より選択される1種以上の物質と共に体細胞に接触させることにより、該体細胞からiPS細胞を誘導することができる物質群であれば、タンパク性因子またはそれをコードする核酸ベクターに組み込まれた形態を含む、あるいは低分子化合物等のいかなる物質から構成されてもよい。タンパク性因子またはそれをコードする核酸である公知の核初期化物質としては、好ましくは以下の組み合わせが例示される以下においては、タンパク性因子の名称のみを記載する。Oct34Klf4cMycOct34Klf4cMycSox2ここで、Sox2はSox1Sox3Sox15Sox17またはSox18で置換可能である。また、Klf4はKlf1Klf2またはKlf5で置換可能である。さらに、cMycはT58A活性型変異体LMycで置換可能である。Oct34Klf4cMycSox2Fbx15NanogERasTclIOct34Klf4cMycSox2TERTSV40LargeTantigen以下、SV40LTOct34Klf4cMycSox2TERTHPV16E6Oct34Klf4cMycSox2TERTHPV16E7Oct34Klf4cMycSox2TERTHPV16E6HPV16E7Oct34Klf4cMycSox2TERTBmi1以上、WO2007069666を参照但し、上記の組み合わせにおいて、Sox2からSox18への置換、Klf4からKlf1もしくはKlf5への置換については、NatureBiotechnology26101106を参照。Oct34Klf4cMycSox2の組み合わせについては、Cell126663676、Cell131861872等も参照。Oct34Klf2またはKlf5cMycSox2の組み合わせについては、NatCellBiol11197203も参照。Oct34Klf4cMycSox2hTERTSV40LTの組み合わせについては、Nature451141146も参照。Oct34Klf4Sox2NatureBiotechnology26101106を参照Oct34Sox2NanogLin28Science31819171920を参照Oct34Sox2NanogLin28hTERTSV40LTStemCells2619982005を参照Oct34Klf4cMycSox2NanogLin28CellResearch18600603を参照Oct34Klf4cMycSox2SV40LTStemCells2619982005も参照Oct34Klf4Nature454646650、CellStemCell2525528を参照Oct34cMycNature454646650を参照Oct34Sox2WO2008118820を参照Oct34Sox2NanogOct34Sox2Lin28Oct34Sox2cMycEsrrbを参照Oct34Sox2Esrrbを参照Oct34Klf4LMyc1415214157を参照Oct34Klf4Sox2LMycLin28Oct34NanogOct34、Nature08436doi101038publishedonlineOct34Klf4cMycSox2NanogLin28SV40LTScience324797801を参照上記において、Oct34に代えて他のOctファミリーのメンバー、例えばOct1A、Oct6などを用いることもできる。また、Sox2またはSox1、Sox3、Sox15、Sox17、Sox18に代えて他のSoxファミリーのメンバー、例えばSox7などを用いることもできる。さらに上記の組合せにおいてcMycまたはLin28を核初期化物質として含む場合、cMycまたはLin28に代えてそれぞれLMycまたはLin28Bを用いることもできる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子と組み合わせて用いられる核初期化物質としては、上記1の因子の組合せにおいてKlfファミリーのメンバーが含まれる場合には、これらを除いた残りの因子を含むものが好適に用いられる。また、上記の組合せにKlfファミリーのメンバーが含まれていない場合には、本発明の樹立効率改善因子と組み合わせて用いられる核初期化物質として、該因子の組合せを用いればよい。また、上記の核初期化物質に加えて任意の他の物質をさらに含む組み合わせも、本発明における核初期化物質として好適に用いられる。核初期化の対象となる体細胞が上記のいずれかにおける構成要素の一部を、核初期化のために十分なレベルで内在的に発現している条件下にあっては、当該構成要素を除いた残りの構成要素のみの組合わせもまた、本発明における核初期化物質の範疇に含まれ得る。これらの組み合わせの中で、Octファミリーのメンバー、Soxファミリーのメンバー、Mycファミリーのメンバー、Lin28ファミリーのメンバーおよびNanogから選択される一以上の物質が、好ましい核初期化物質の例として挙げられる。特に、Oct34およびSox2の組合せ、Oct34、Sox2およびcMycの組合せ、Oct34、Sox2およびLMycの組合せ、またはOct34、Sox2、LMycおよびLin28の組合せが好ましい。なおcMycはiPS細胞の樹立を促進するが、cMycはまたnoniPStransformedcellspartiallyreprogrammedcellsやnullipotenttransformedcellsの発生をも促進してしまう。本発明者らはGLIS1をOct34Sox2およびKfl4と共に発現させることにより、マウスおよびヒトのadultskinfibroblastsからのiPS細胞の樹立を劇的に促進することを明らかにしただけでなく、cMycと異なりGLIS1は、前述のnoniPStransformedcellsの発生を促進しないことも明らかにした。従ってcMycを使用することなくGLIS1を使用する形態が、特に好ましい。上記の各タンパク性因子のマウス及びヒトcDNA配列情報は、WO2007069666に記載のNCBIaccessionnumbersを参照することにより取得することができNanogは当該公報中ではECAT4との名称で記載されている。尚、Lin28、Lin28b、Esrrb、Esrrg、LMycのマウス及びヒトcDNA配列情報は、それぞれ下記NCBIaccessionnumbersを参照することにより取得できる。、当業者は容易にこれらのcDNAを単離することができる。遺伝子名マウスヒトLin28NM145833NM024674Lin28bNM001031772NM001004317EsrrbNM011934NM004452EsrrgNM011935NM001438LMycNM008506NM001033081核初期化物質としてタンパク性因子自体を用いる場合には、得られたcDNAを適当な発現ベクターに挿入して宿主細胞に導入し、培養した細胞またはその馴化培養液から組換えタンパク性因子を回収することにより調製することができる。一方、核初期化物質としてタンパク性因子をコードする核酸を用いる場合、得られたcDNAを、上記本発明の核酸性iPS細胞樹立効率改善因子の場合と同様にして、ウイルスベクター、エピゾーマルベクターもしくはプラスミドベクターに挿入して発現ベクターを構築し、核初期化工程に供される。必要に応じて、上記CreloxPシステムやpiggyBacトランスポゾンシステムを利用することもできる。尚、核初期化物質として2以上のタンパク性因子をコードする核酸を細胞に導入する場合、各核酸を別個のベクターに担持させてもよいし、複数の核酸をタンデムに繋いでポリシストロニックベクターとすることもできる。後者の場合、効率的なポリシストロニック発現を可能にするために、口蹄疫ウイルスの2Aselfcleavingpeptideを各核酸の間に連結することが望ましい例えば、Science3229499532008を参照。核初期化物質の体細胞への接触は、該物質がタンパク性因子である場合、上記本発明のタンパク性iPS細胞樹立効率改善因子と同様にして、また該物質がタンパク性因子をコードする核酸である場合、上記本発明の核酸性iPS細胞樹立効率改善因子と同様にして、それぞれ行うことができる。また、核初期化物質が低分子化合物である場合の体細胞への接触は、該低分子化合物を適当な濃度で水性もしくは非水性溶媒に溶解し、ヒトまたは他の哺乳動物より単離した体細胞の培養に適した培地例えば、約5~20の胎仔ウシ血清を含む最小必須培地MEM、ダルベッコ改変イーグル培地DMEM、RPMI1640培地、199培地、F12培地など中に、核初期化物質濃度が体細胞において核初期化が起こるのに十分で且つ細胞毒性がみられない範囲となるように該溶液を添加して、細胞を一定期間培養することにより実施することができる。核初期化物質濃度は用いる核初期化物質の種類によって異なるが、約01nM~約100nMの範囲で適宜選択される。接触期間は細胞の核初期化が達成されるのに十分な時間であれば特に制限はないが、通常は陽性コロニーが出現するまで培地に共存させておけばよい。他のiPS細胞の樹立効率改善物質従来iPS細胞の樹立効率が低いために、近年、その効率を改善する物質が種々提案されている。よって前記本発明のiPS細胞樹立効率改善因子に加え、他のiPS細胞樹立効率改善物質を体細胞に接触させることにより、iPS細胞の樹立効率をより高めることが期待できる。他のiPS細胞の樹立効率改善物質としては、例えば、VPA以外のヒストンデアセチラーゼHDAC阻害剤[例えば、トリコスタチンATSA、酪酸ナトリウム、MC1293、M344等の低分子阻害剤、HDACに対するsiRNAおよびshRNA例、HDAC1siRNASmartpool、HuSH29mershRNAConstructsagainstHDAC1等等の核酸性発現阻害剤など]、DNAメチルトランスフェラーゼ阻害剤例えば5’azacytidineNatBiotechnol26795797、G9aヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤[例えば、BIX01294等の低分子阻害剤、G9aに対するsiRNAおよびshRNA例、G9asiRNA等等の核酸性発現阻害剤など]、Lchannelcalciumagonist、p53阻害剤例えばp53に対するsiRNA、shRNA、ドミナントネガティブ体などNature46011321135、WntSignalingactivator例えばsolubleWnt3aCellStemCell3132135、2iLIF22372247、ES細胞特異的miRNA例えば、miR302367クラスター、miR30214110、miR2913pmiR294およびmiR295等が挙げられるが、それらに限定されない。前記で核酸性の発現阻害剤はsiRNAもしくはshRNAをコードするDNAを含む発現ベクターの形態であってもよい。尚、前記核初期化物質の構成要素のうち、例えばSV40largeT等は、体細胞の核初期化のために必須ではなく補助的な因子であるという点において、iPS細胞の樹立効率改善物質の範疇にも含まれ得る。核初期化の機序が明らかでない現状においては、核初期化に必須の因子以外の補助的な因子について、それらを核初期化物質として位置づけるか、あるいはiPS細胞の樹立効率改善物質として位置づけるかは便宜的であってもよい。即ち、体細胞の核初期化プロセスは、体細胞への核初期化物質およびiPS細胞の樹立効率改善物質の接触によって生じる全体的事象として捉えられるので、当業者にとって両者を必ずしも明確に区別する必要性はないであろう。iPS細胞の樹立効率改善物質の体細胞への接触は、該改善物質がタンパク性因子である場合、該タンパク性因子をコードする核酸である場合、あるいは低分子化合物である場合に応じて、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子および核初期化物質についてそれぞれ上記したのと同様の方法により、実施することができる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子を含む、iPS細胞の樹立効率改善物質は、該物質の非存在下と比較して体細胞からのiPS細胞樹立効率が有意に改善される限り、核初期化物質と同時に体細胞に接触させてもよいし、また、どちらかを先に接触させてもよい。一実施態様において、例えば、核初期化物質がタンパク性因子をコードする核酸であり、iPS細胞の樹立効率改善物質が化学的阻害物質である場合には、前者は遺伝子導入処理からタンパク性因子を大量発現するまでに一定期間のラグがあるのに対し、後者は速やかに細胞に作用しうることから、遺伝子導入処理から一定期間細胞を培養した後に、iPS細胞の樹立効率改善物質を培地に添加することができる。別の実施態様において、例えば、核初期化物質とiPS細胞の樹立効率改善物質とがいずれもウイルスベクターやプラスミドベクターの形態で用いられる場合には、両者を同時に細胞に導入してもよい。培養条件による樹立効率の改善体細胞の核初期化工程において低酸素条件下で細胞を培養することにより、iPS細胞の樹立効率をさらに改善することができるCellStemCell5p237241を参照。本明細書において低酸素条件とは、細胞を培養する際の雰囲気中の酸素濃度が、大気中のそれよりも有意に低いことを意味する。具体的には、通常の細胞培養で一般的に使用される510CO29590大気の雰囲気中の酸素濃度よりも低い酸素濃度の条件が挙げられ、例えば雰囲気中の酸素濃度が18以下の条件が該当する。好ましくは、雰囲気中の酸素濃度は15以下例、14以下、13以下、12以下、11以下など、10以下例、9以下、8以下、7以下、6以下など、または5以下例、4以下、3以下、2以下などである。また、雰囲気中の酸素濃度は、好ましくは01以上例、02以上、03以上、04以上など、05以上例、06以上、07以上、08以上、095以上など、または1以上例、11以上、12以上、13以上、14以上などである。細胞の環境において低酸素状態を創出する手法は特に制限されないが、酸素濃度の調節可能なCO2インキュベーター内で細胞を培養する方法が最も容易であり、好適な例として挙げられる。酸素濃度の調節可能なCO2インキュベーターは、種々の機器メーカーから販売されている例えば、Thermoscientific社、池本理化学工業、十慈フィールド、和研薬株式会社などのメーカー製の低酸素培養用CO2インキュベーター。低酸素条件下で細胞培養を開始する時期は、iPS細胞の樹立効率が正常酸素濃度20の場合に比して改善されることを妨げない限り特に限定されず、体細胞への本発明のiPS細胞樹立効率改善因子および核初期化物質の接触より前であっても、該接触と同時であっても、該接触より後であってもよいが、例えば、体細胞に本発明のiPS細胞樹立効率改善因子および核初期化物質を接触させた直後から、あるいは接触後一定期間例えば、1ないし10例、2345678または9日おいた後に低酸素条件下で培養することが好ましい。低酸素条件下で細胞を培養する期間も、iPS細胞の樹立効率が正常酸素濃度20の場合に比して改善されることを妨げない限り特に限定されず、例えば3日以上、5日以上、7日以上または10日以上で、50日以下、40日以下、35日以下または30日以下の期間等が挙げられるが、それらに限定されない。低酸素条件下での好ましい培養期間は、雰囲気中の酸素濃度によっても変動し、当業者は用いる酸素濃度に応じて適宜当該培養期間を調整することができる。また、本発明の一実施態様において、iPS細胞の候補コロニーの選択を、薬剤耐性を指標にして行う場合には、薬剤選択を開始する迄に低酸素条件から正常酸素濃度に戻すことが好ましい。さらに、低酸素条件下で細胞培養を開始する好ましい時期および好ましい培養期間は、用いられる核初期化物質の種類、正常酸素濃度でのiPS細胞樹立効率などによっても変動する。iPS細胞の選択および確認本発明のiPS細胞樹立効率改善因子と核初期化物質および他のiPS細胞の樹立効率改善物質とを接触させた後、細胞を、例えばES細胞の培養に適した条件下で培養することができる。マウス細胞の場合、通常の培地に分化抑制因子としてLeukemiaInhibitoryFactorLIFを添加して培養を行う。一方、ヒト細胞の場合には、LIFの代わりに塩基性線維芽細胞増殖因子bFGFおよび/または幹細胞因子SCFを添加することが望ましい。また通常、細胞は、フィーダー細胞として、放射線や抗生物質で処理して細胞分裂を停止させたマウス胎仔由来の線維芽細胞MEFの共存下で培養される。MEFとしては、通常STO細胞等がよく使われるが、iPS細胞の誘導には、SNL細胞McMahonAPBradleyACell6210731085等がよく使われている。フィーダー細胞との共培養は、本発明のiPS細胞樹立効率改善因子および核初期化物質の接触より前から開始してもよいし、該接触時から、あるいは該接触より後例えば110日後から開始してもよい。iPS細胞の候補コロニーの選択は、薬剤耐性とレポーター活性を指標とする方法と目視による形態観察による方法とが挙げられる。前者としては、例えば、分化多能性細胞において特異的に高発現する遺伝子例えば、Fbx15、Nanog、Oct34など、好ましくはNanogまたはOct34の遺伝子座に、薬剤耐性遺伝子および/またはレポーター遺伝子をターゲッティングした組換え細胞を用い、薬剤耐性および/またはレポーター活性陽性のコロニーを選択するというものである。そのような組換え細胞としては、例えばFbx15遺伝子座にβgeoβガラクトシダーゼとネオマイシンホスホトランスフェラーゼとの融合タンパク質をコードする遺伝子をノックインしたマウス由来のMEFやTTFTakahashiYamanakaCell126663676、あるいはNanog遺伝子座に緑色蛍光タンパク質GFP遺伝子とピューロマイシン耐性遺伝子を組み込んだトランスジェニックマウス由来のMEFやTTFOkitaetalNature448313317等が挙げられる。一方、目視による形態観察で候補コロニーを選択する方法としては、例えばTakahashietalCell131861872に記載の方法が挙げられる。レポーター細胞を用いる方法は簡便で効率的ではあるが、iPS細胞がヒトの治療用途を目的として作製される場合、安全性の観点から目視によるコロニー選択が望ましい。選択されたコロニーの細胞がiPS細胞であることの確認は、上記したNanogもしくはOct34レポーター陽性ピューロマイシン耐性、GFP陽性などおよび目視によるES細胞様コロニーの形成によっても行い得るが、より正確を期すために、アルカリフォスファターゼ染色や、各種ES細胞特異的遺伝子の発現を解析したり、選択された細胞をマウスに移植してテラトーマ形成を確認する等の試験を実施することもできる。本発明のiPS細胞樹立効率改善因子をコードする核酸を体細胞に導入した場合、得られるiPS細胞は、当該外来性核酸を含む点で、従来公知のiPS細胞とは異なる新規細胞である。特に、当該外来性核酸がレトロウイルスやレンチウイルス等を用いて体細胞に導入された場合、当該外来性核酸は通常、得られるiPS細胞のゲノム中に組み込まれているので、外来性核酸を含むという形質は安定に保持される。iPS細胞の用途このようにして樹立されたiPS細胞は、種々の目的で使用することができる。例えば、ES細胞などの多能性幹細胞で報告されている分化誘導法例えば、神経幹細胞への分化誘導法としては、特開2002291469、膵幹様細胞への分化誘導法としては、特開2004121165、造血細胞への分化誘導法としては、特表2003505006に記載される方法などがそれぞれ例示される。胚葉体の形成による分化誘導法としては、特表2003523766に記載の方法などが例示される。を利用して、iPS細胞から種々の細胞例、心筋細胞、血液細胞、神経細胞、血管内皮細胞、インスリン分泌細胞等への分化を誘導することができる。したがって、患者本人やHLAの型が同一もしくは実質的に同一である他人から採取した体細胞を用いてiPS細胞を誘導すれば、そこから所望の細胞即ち、該患者が罹病している臓器の細胞や疾患に対する治療効果を発揮する細胞などに分化させて該患者に移植するという、自家移植による幹細胞療法が可能となる。さらに、iPS細胞から分化させた機能細胞例、肝細胞は、対応する既存の細胞株よりも実際の生体内での該機能細胞の状態をより反映していると考えられるので、医薬候補化合物の薬効や毒性のinvitroスクリーニング等にも好適に用いることができる。以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明がこれらに限定されないことは言うまでもない。[参考例1新規初期化因子のスクリーニング]Goshimaらが作製したヒトGatewayエントリークローンNGoshimaetalNaturemethods2008記載のライブラリーを用いる。YMaruyamaetalNucleicAcidRes2009でデータベース公開をもとに、図1に記載の方法で、ヒトの網羅的遺伝子約20000クローンを整列化した。即ち、ヒトGatewayエントリークローン中全長ORFを含む約50000クローンを、NCBIRefSeqの37900配列24200遺伝子に対してcoverage80以上、アミノ酸同一性95以上の基準でblastp検索をかけ、ORFの3’末端に終止コドンを持つNtypeと、終止コドンを持たないFtypeの各type内で配列に重複のない、約20000エントリークローンからなるサブライブラリーを構築した。この整列化した約20000エントリークローンを、バイオインフォマティクス手法によりタンパク質キナーゼ、タンパク質フォスファターゼ、転写因子、GPCR、及びその他のクローン群に分類し、転写因子のエントリークローンからなるサブライブラリーヒトの全転写因子の50以上をカバーを構築したの皮膚由来線維芽細胞を用いて行った。その際、フィーダー細胞であるMSTO上でレトロウイルスの感染を行う系以下MSTO法、Cell126663676と、感染時はフィーダー細胞を用いず、感染後、細胞を播き直した後にMSTO上で培養を行う系以下Reseed法、NatureBiotech26p101106の両方の系で実験を行った。1stスクリーニングとして24wellplateでiPS細胞誘導を行った。GelatinReseed法またはMSTO上MSTO法にNanogGFPマウスの皮膚由来線維芽細胞を播き、翌日、各種プラスミドから作製したレトロウイルスを感染させた。具体的にはOct34、Sox2およびcMycの3遺伝子と前述の転写因子ライブラリーからの1遺伝子とを、1111の割合で感染させた。ネガティブコントロールとしてOct34、Sox2およびcMycの3遺伝子を111の割合で感染させた。またポジティブコントロールとしてOct34、Sox2、Klf4およびcMycの4遺伝子を1111の割合で感染させた。感染から2日目までは10FBSDMEMで、3日目からはES培地Cell126663676で培養した。はじめにGelatin上に播いた場合Reseed法は、3日目にMSTO上に播き直した。以後2日ごとに培地の交換を行い、21日目からはピューロマイシン選択を行い、28日目に細胞の観察を行った。その結果、3遺伝子と共に、サンプルF09遺伝子名:IRX6、サンプルG06においては、導入に用いたcMycがゲノム上に挿入されていなかった図5。レトロウイルスベクターはゲノム上に挿入されなければ安定的に発現しないので、このクローンG61はOct34Sox2およびGLIS1の3因子のみの発現で樹立されたと考えられた。次に、ReverTraAcekitTakaraを使用してRTPCR解析を行った。結果を図7および図8に示す。参考例1で樹立したiPS細胞は、いずれもES細胞特異的なマーカー遺伝子であるNanogOct34Sox2Rex1およびECAT1を発現していた。以上の結果から、新規初期化因子を用いて樹立した細胞はiPS細胞であることが確認された。[実施例1:G6とKlf4の併用によるマウスiPS細胞の樹立]マウスiPS細胞樹立効率に及ぼすG6とKlf4の併用効果参考例1で同定されたKlf4の代替えとなる新規初期化因子であるG6Oct34、Sox2Oct34、Sox2、G6遺伝子名:GLIS1Oct34、Sox2、H8遺伝子名:DMRTB1Oct34、Sox2、H10遺伝子名:PITX2Oct34、Sox2、Klf4Oct34、Sox2、Klf4、G6Oct34、Sox2、Klf4、H8Oct34、Sox2、Klf4、H10初期化に使用するレトロウイルスは、前日に100mm培養ディッシュの1枚当り25x106で播種したPlatE細胞にレトロウイルス発現ベクターを個々に導入して作製した。培養液はDMEM10FCSにウシ胎仔血清を10加えたものを使用し、37°C、5CO2で培養した。ベクターの導入のためにFuGene6transfectionreagent27μLをOptiMEMIReducedSerumMedium300μLに入れ、細胞を室温で5分間静置した。その後、各発現ベクターを9μg加え、細胞をさらに室温で15分静置してからPlatEの培養液に加えた。2日目にPlatEの上清を新しい培地に換え、3日目に培養上清を回収して045μmsterilefilterで濾過し、polybreneを4μgmLとなるように加えてウイルス液とした。NanogGFPマウスの皮膚由来線維芽細胞は、マウスの背腹部分の皮膚から真皮を剥がし、ゼラチンコートしたディッシュ上に置いて培養することにより得られた細胞を使用した。前記線維芽細胞を100mmデッシュに1枚当り80x105で播種した。培養液はDMEM10FCSを使用し、37°C、5CO2で培養した。翌日、レトロウイルス液前記~のいずれかの組み合わせを加え、一晩感染させて遺伝子を導入した。ウイルス感染の翌日、レトロウイルス液を除去し、DMEM10FCSに交換して感染3日目までDMEM10FCSで培養した。感染から3日目に培地を除き、PBS10mLを加えて細胞を洗浄した。PBSを除いた後、025Trypsin1mMEDTAを加えて、37°Cで5分間程度反応させた。細胞が浮き上がったらES細胞用培地DMEMに15牛胎仔血清、2mMLグルタミン、100μM非必須アミノ酸、100μM2メルカプトエタノール、50UmLペニシリンと50μgmLストレプトマイシンを加えたものを加えて懸濁し、あらかじめフィーダー細胞を播いておいた100mmデッシュに播いた。なおフィーダー細胞にはマイトマイシンCで処理して、細胞分裂を止めたSNL細胞McMahonAPBradleyACell6210731085を用いた。以後コロニーが観察できるようになるまで2日ごとにES細胞用培地の交換を行い、感染から26~28日目にGFP陽性コロニー数をカウントした。3回の独立した実験結果を表3および図9に示す図9は表3をグラフ化したものである。コントロールのみ4回の独立した実験結果を示す。Oct34およびSox2にG6、H8またはH10を加えても、この条件ではiPS細胞が樹立できないか、樹立できてもごくわずかであった。またOct34、Sox2およびKlf4にH8またはH10を加えても、加えない場合Oct34、Sox2およびKlf4に比べてiPSコロニー数は上昇しなかった。それに対してOct34、Sox2およびKlf4にG6を加えることにより、iPSコロニー数の劇的な上昇が認められた。この値はOct34およびSox2にG6を加えた場合のコロニー数と、Oct34およびSox2にKlf4を加えた場合のコロニー数とを合わせた値をはるかに超える値であり、Klf4とG6とを併用することによりiPS細胞樹立効率に対する相乗効果が認められることが明らかになった。3初期化因子OSKによるマウスiPS細胞樹立に及ぼすGLIS1とcMycの樹立改善効果の比較次に、OSKでのiPSC樹立を促進する能力についてGLIS1とcMycとを比較した。アダルトマウスの皮膚由来線維芽細胞では、形成されたGFP陽性コロニー数による評価で、GLIS1の効果はcMycの効果と同等であった図10。GLIS1とcMycの両方をOSKと共に共導入した場合のGFP陽性コロニー数の相乗的な増加も観察された。次に、導入後に出現した全コロニーに対するGFP陽性コロニーの割合を解析した。一元配置反復測定分散分析検定およびポストホックボンフェローニ検定を分析のために用いた。005未満または001未満のP値を統計的に有意な差とした。結果を図11に示す。重要なことに、GLIS1はGFP陽性コロニーの形成を特異的に促進し、部分的に初期化された細胞または形質転換された細胞のいずれかを表すGFP陰性コロニーの形成を促進しなかった図11。対照的に、cMycはGFP陽性コロニーよりもGFP陰性コロニーの数を顕著に増加させた図11。cMycのこの望ましくない効果は、GLIS1を共発現させた場合に抑制された。同様の結果がマウス胚性線維芽細胞で得られた。GFP陽性コロニーを図12および図15に示す。OSKGLIS1によりMEFから樹立したiPS細胞はgermlinecompetentであることも確認された。[実施例2:G6とKlf4の併用によるヒトiPS細胞の樹立]ヒトiPS細胞樹立効率に及ぼすG6とKlf4の併用効果Klf4とG6との併用による相乗効果がヒト細胞に対しても認められるかどうか、成人の皮膚由来線維芽細胞HDFを用いて検討を行った。導入に用いた遺伝子の組み合わせを以下に示す。Oct34、Sox2、cMycOct34、Sox2、cMyc、Klf4Oct34、Sox2、cMyc、G6遺伝子名:GLIS1Oct34、Sox2、cMyc、Klf4、G6HDFに対して、TakahashiKetalCell131861872に記載の方法に従い、レンチウイルスを用いて、マウスエコトロピックウイルスレセプターSlc7a1遺伝子を発現させた。この細胞26×105個60mmdishに対して、TakahashiKetalCell131861872に記載の方法に従い、前記~の組み合わせの遺伝子をレトロウイルスで導入した。ウイルス感染から6日後に細胞を回収し、フィーダー細胞上への蒔き直しを行った5×104個または5×105個100mmディッシュ。フィーダー細胞にはマイトマイシンCで処理して、細胞分裂を止めたSNL細胞McMahonAPBradleyACell6210731085を用いた。感染7日後から霊長類ES細胞培養用培地に4ngmLの組換えヒトbFGFWAKOを加えた培地で培養を行った。感染から30~35日目にES細胞様のコロニー数をカウントした。3回の独立した実験結果を図16ES様コロニーおよび図17非ES様コロニーに、またOct34、Sox2、cMyc、Klf4およびG6で樹立したiPSコロニーの位相差像を図18に、それぞれ示す。Oct34、Sox2およびcMycにKlf4を加えた場合、および、Oct34、Sox2およびcMycにG6GLIS1を加えた場合に比して、Oct34、Sox2およびcMycにKlf4とG6の両方を加えることにより、格段に多数のES細胞様コロニーが出現した図16。またこれらのコロニーはES細胞様の形態を示した図18。以上のようにヒト細胞においても、Klf4とG6とを併用することによりiPS細胞樹立効率に対する相乗効果が認められた。3初期化因子OSKによるヒトiPS細胞樹立に及ぼすGLIS1とcMycの樹立改善効果の比較次に、実施例1に記載した手法と同様の手法で、OSKと組み合わせてiPSCを樹立する場合における、GLIS1による樹立促進効果とcMycによる樹立促進効果とを比較した。ヒト成人由来の線維芽細胞を用いた場合において、GLIS1はcMycと同等の効果を示し、OSKと共導入されたときにESC様コロニーの形成を促進した図19。重要なことに、GLIS1はESC様コロニーの形成を特異的に促進し、非ESC様コロニーの形成を促進しなかった。対照的に、cMycはESC様コロニーよりも非ESC様コロニーの数を顕著に増加させた図20。OSKGis1により生じたヒトESC様コロニーを図21に示す。次に、QIAGENのGentraPuregeneCellKitを用いてゲノムを抽出し、PCR用酵素TakaraExTaqを用いてゲノミックPCRを行った。結果を図22に示す。樹立されたヒトiPSC株において導入遺伝子の存在が確認された図22。ReverTraAcekitを用いてRTPCR解析を行った。結果を図23に示す。OSKGLIS1により生じた細胞は、Oct34、Sox2、NanogおよびRex1を含む未分化ESCマーカー遺伝子を発現した図23。続いてDNAマイクロアレイ解析を行った。トータルRNAをCy3で標識し、製造者のプロトコルに従ってWholeHumanGenomeMicroarrayにハイブリダイズさせた。G2505CMicroarrayScannerSystemを用いてアレイをスキャンした。データ解析はGeneSpringGX1101ソフトウェアプログラムを用いて行った。結果を図24に示す。OSKGLIS1により樹立された細胞の全体的な遺伝子発現は、OSKMで生じたiPSCと類似していた図24。次に、以前に記載されたようにしてテラトーマ形成を行った861872。OSKGLIS1により生じた細胞は、3胚葉全ての様々な組織を含むテラトーマを生じた図25。以上の結果により、GLIS1はOSKによるヒトiPSCの樹立を強力かつ特異的に促進することが実証された。実施例3:GLIS1の発現および機能解析次に、GLIS1の発現パターンを調べた。マウス発現配列タグESTデータベース解析により、GLIS1の表示は接合子、特に受精卵に偏っていることが予測された。また、MGIにより提供されるGeneExpressionDataは、第二減数分裂中期の卵母細胞におけるGLIS1の中程度の発現、2細胞胚における弱い発現、および8細胞~E45の胚では発現は検出されないことを示した。これらのウェブベースの解析は、GLIS1が卵母細胞および1細胞胚において特異的に発現することを強く示した。これらの知見を実験的に確かめるために、未受精卵、1細胞胚、2細胞胚、および胚盤胞から、ならびに腎臓、胎盤、脳、肺、肝臓、脾臓および卵巣を含むアダルトマウスのいくつかの組織からトータルRNAを単離した。また、マウスESC、MEF、および成人皮膚由来線維芽細胞から単離したトータルRNAも用いた。リアルタイムPCR解析により、1細胞胚および未受精卵でGLIS1の最も高い発現が検出され図26、2細胞胚および胎盤組織で穏やかな発現レベルが検出され図26、腎臓、卵巣、ESC、MEF、および皮膚由来線維芽細胞を含むいくつかの組織での発現は弱かった図26。これらのデータにより、GLIS1RNAは未受精卵および1細胞胚において豊富であることが確かめられた。線維芽細胞において内因性GLIS1の発現レベルは低いが、内因性GLIS1がOSKによるiPSC樹立の際に役割を果たしているかどうかを次に調べた。そのためにいくつかのレトロウイルスベクターを構築し、GLIS1shRNAを発現させた。shRNAによるノックダウンは以前に記載されたようにして行った11321135。shRNA2ggcctcaccaaccctgcacct配列番号13およびshRNA6gcccttcaatgcccgctacaa配列番号14をアダルトマウスの皮膚由来線維芽細胞にトランスフェクトした場合、それらは効果的にGLIS1を抑制したが、shRNA4gggcaatgaacccatctcaga配列番号15の効果はより低かった。次に、NanogGFPレポーターを含む線維芽細胞に、これらのshRNAの各々をOSKと共に導入したところ、shRNA2およびshRNA6は、GFP陽性コロニー数を有意に減少させた図28。shRNA4で観察された効果はより弱かった。この結果は、内因性GLIS1はOSKによるiPSC樹立の際に補助的役割を果たすことを示唆する。本発明を好ましい態様を強調して説明してきたが、好ましい態様が変更され得ることは当業者にとって自明であろう。本発明は、本発明が本明細書に詳細に記載された以外の方法で実施され得ることを意図する。したがって、本発明は添付の特許請求の範囲の精神および範囲に包含されるすべての変更を含むものである。ここで述べられた特許および特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、ここに引用されたことによって、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。本出願は米国仮特許出願第61305107号および同第61379949号に基づくものであり、それらの出願の内容は、ここに引用されたことによって本明細書に組み込まれる。"