"以下の段階:aその標的細胞における発現がコントロール細胞での発現と比較して差異を有するリボ核酸分子を同定することb段階aのリボ核酸分子と結合し、それを機能的に不活化する特異的なリボ核酸分子を設計することc段階bの特異的なリボ核酸分子を標的細胞へ導入することd段階bの特異的なリボ核酸分子および/または段階cの標的細胞を薬剤へと製剤化すること、を特徴とする、細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異的な薬剤の製造方法。標的細胞が転写因子および/またはホルモンおよび/またはサイトカインおよび/または増殖因子を分泌する細胞、および/または特有の表面受容体を提示する細胞であることを特徴とする、請求項1記載の方法。コントロール細胞が標的組織内の正常細胞、または同一患者のその他の部位Kompartimenten由来の同一タイプの細胞であることを特徴とする、請求項1記載の方法。標的細胞における発現がコントロール細胞での発現と比較して高いリボ核酸分子が単離されることを特徴とする、請求項1記載の方法。標的細胞における発現がコントロール細胞での発現と比較して高いリボ核酸分子が、STAT4、STAT5a、STAT1、c-Rel、CREB2、ATF-2、ATF-2、Hlx、IRF-1、c-Maf、NFAT、NIP45、AP1、Mel-18、SKAT-2、CTLA-4、Srcキナーゼ、Tecキナーゼ、RlkヒトではTxk、Itk、Tec、RIBP、PLCγ、MAPキナーゼ、ERK、JNK、P38、MKK、MKK1、MKK2、MKK3、MKK4、MKK6、MKK7、Rac2、GADD45、GADD45β、GADD45γ、SOCS、CIS、SOCS1、SOCS2、SOCS3、JAK、JAK1、JAK3、NIP45mRNAから選択されることを特徴とする、請求項1記載の方法。標的細胞における発現がコントロール細胞での発現と比較して高いリボ核酸分子がGATA-3mRNAであることを特徴とする、請求項1記載の方法。標的細胞における発現がコントロール細胞での発現と比較して高いリボ核酸分子がT-betmRNAであることを特徴とする、請求項1記載の方法。特異的なリボ核酸分子が、GATA-3mRNAと結合して、それを機能的に不活化するRNA不活化DNA-EnzymeDNAzymeまたは低分子干渉RNAsiRNAであることを特徴とする、請求項1記載の方法。特異的なリボ核酸分子が、T-betmRNAと結合し、それを機能的に不活化するRNA不活化DNA-EnzymeDNAzymeまたは低分子干渉RNAsiRNAであることを特徴とする、請求項1記載の方法。ヌクレオチド配列GGCTAGCTACAACGAを有する触媒ドメインであって、それが結合する各々のプリン-ピリミジン切断部位においてmRNAを切断する触媒ドメイン触媒ドメインの3’末端に結合する右側の基質結合ドメイン、および触媒ドメインの5’末端に結合する左側の基質結合ドメインを含み、2つの基質結合ドメインがGATA-3mRNAの2つの領域とそれぞれ相補的であるために該mRNAとハイブリダイズする、GATA-3mRNAを特異的に切断するDNAzyme。配列hgd40GTGGATGGAGGCTAGCTACAACGAGTCTTGGAGを有することを特徴とする、請求項10記載のDNAzyme。ヌクレオチド配列GGCTAGCTACAACGAを有する触媒ドメインであって、それが結合する各々のプリン-ピリミジン切断部位においてmRNAを切断する触媒ドメイン触媒ドメインの3’末端に結合する右側の基質結合ドメイン、および触媒ドメインの5’末端に結合する左側の基質結合ドメインを含み、2つの基質結合ドメインがT-betmRNAの2つの領域とそれぞれ相補的であるためにmRNAとハイブリダイズする、T-betmRNAを特異的に切断するDNAzyme。配列td69GGCAATGAAGGCTAGCTACAACGATGGGTTTCTまたはtd70TCACGGCAAGGCTAGCTACAACGAGAACTGGGTを有することを特徴とする、請求項12記載のDNAzyme。DNAzymeが修飾されていることを特徴とする、請求項1~13のいずれか1つに記載のDNAzyme。修飾が3’末端のインバースチミジンinversesThymidinおよび/または5’末端のFAM標識であることを特徴とする、請求項14記載のDNAzyme。請求項10~15のいずれか1つに記載のDNAzymeおよび薬学的に許容可能なキャリアーを含む薬剤。薬学的に許容可能なキャリアーがリポソームおよび生分解性ポリマーの群に由来することを特徴とする、請求項16記載の薬剤。慢性炎症および自己免疫疾患の治療のために、請求項1~17のいずれか1つに記載のDNAzymeを含有する薬剤を使用する方法。本発明の課題は、その発現が慢性炎症反応および自己免疫疾患の発症に関与している転写因子およびシグナル伝達経路における因子のリボ核酸分子を機能的に不活化させ、慢性炎症反応および自己免疫疾患の治療に適しており、本技術分野における従来の欠点を有していない、細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異的な薬剤を提供することにある。本発明のさらなる課題は、その発現が慢性炎症反応および自己免疫疾患の発症に関与している転写因子およびシグナル伝達経路における因子のリボ核酸分子を同定し、標的細胞内においてこれらを機能的に不活化する、細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異的な薬剤の製造方法を提供することにある。前記課題は、本発明請求項1に記載の方法、および請求項10~15に記載の特異的DNAzymeを使用する請求項16~18に記載の薬剤によって解決される。本発明の有利な点は、特異的なDNAzymeおよび/またはsiRNAを用いて、分化および/または慢性炎症反応および自己免疫疾患の発症に関与するサイトカインの発現をつかさどる転写因子およびシグナル伝達経路における因子のリボ核酸分子を、機能的に不活化することにある。このストラテジーは、従来の方法や遺伝子療法に対して、細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異性および選択性が高いこと、分子の安定性が高いことおよび抗原性が無視できることを特徴とする。慢性炎症疾患を患っている患者の平均的なmassgeschneiderte長期治療に最適な条件が得られた。実施例1:GATA-3aその標的細胞における発現が、コントロール細胞での発現と比較して差異を示すリボ核酸分子の同定i慢性炎症反応の発症に関与しているナイーブCD4細胞を標的細胞として使用した。ii該CD4標的細胞は、マグネットビーズMiltenyi社製Macs-System、Dynal社製DynaBeadsまたはBD-Bioscience社製iMAGを用いて単離し、あるいは、例えばCytomation社製MOFLOまたはBD-Bioscience社製FACS-Vantageのセルソーターで蛍光標識抗体を用いて単離した。iiiRNAの単離は、SambrookandRussell,MolecularCloning,ALaboratoryManual,3版、ColdSpringHarborLaboratory2001,NewYork並びにAusubeletal.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons1998,NewYork等に記載されている標準的な方法を用いて行った。あるいは、Qiagen社製RNeasyKitを用いる方法、またはQiagen社製OligotexmRNAKitを用いてCD4標的細胞からmRNAを直接単離する方法で、製造者の指示に従って行うこともできる。なおこれは、Qiagen社製RNeasyKitを用いる方法、或いは、Qiagen社製OligotexmRNAKitを用いて直接CD4目標細胞からmRNAを単離する方法で、製造者の指示に従って行うこともできる。iv差次的な異なるmRNA、すなわち、その標的細胞における発現がコントロール細胞に対して増加しているmRNAの同定は、遺伝子チップ例えば、MWG、CLON-TECH社を使用して、そして差次的に発現する遺伝子の同定は、InforMax社のVectorXpressionProgrammを使用して行われる。フィルターハイブリダイゼーション法例えばUnigene社は製造者の指示に従う。差次的に発現している遺伝子の同定に引き続き、クローニング、配列決定例えば、SambrookandRussell,MolecularCloning,ALaboratoryManual,3版、ColdSpringHarborLaboratory2001に参照される標準的な説明に従っておよび遺伝子データバンクwww.ncbi.nim.nih.govとの配列比較が行われる。標的細胞TH2細胞におけるGATA-3の発現は、コントロール細胞例えばTh0細胞での発現と比較して差異を有する。b段階aのリボ核酸分子に結合し、それを機能的に不活化する特異的なリボ核酸分子の設計図3に、GATA-3mRNAに特異的なDNAzymeである本発明のプールhgd1~hgd70を示す。該DNAzymeの全長は33ヌクレオチドであるが、中心の触媒ドメインは15ヌクレオチド小文字であり、公知の10-23DNAzyme図2の触媒ドメインと一致する。この触媒ドメインは、それぞれ9ヌクレオチドからなる2つの基質結合ドメイン大文字に左右から挟まれている。左右の基質結合ドメインのヌクレオチド配列は、DNAzymehgd1~hgd70において異なっており且つ可変であるため、GATA-3mRNAへのワトソンクリック対合による様々な特異的結合が生じる。図2は、10-23DNAzymeと、Nを用いて示した任意の標的RNAとの結合に関する一般的なモデルを示しており、矢印は標的mRNAにおける切断部位を示している。DNAzymeは、いかなるプリン-ピリミジン配列も確実に切断することができるが、プリン-ウラシル結合のほうがプリン-シトシン結合よりも効果的に切断されることが、文献により知られている。よってプリン-ウラシル結合を切断するDNAzymeを設計することが好ましい。図2に示したモデルは、その作用様式においてDNAzymehgd1~hgd70とGATA-3mRNAとの結合にも当てはめることができる。DNAzymehgd1~hgd70は、invitro実験には修飾されていないものを使用し、培養細胞における実験には修飾されたものEurogentec社から購入を使用した。安定化および保護のための修飾として、以下:13’末端に安定化インバースチミジンinversesThymidin2細胞のトランスフェクション効率をFACS分析で評価するための、5’末端のFAMによる標識、を使用した。invitroにおいてDNAzymeを試験するために、invitro転写で生成されたGATA-3mRNAが必要である。各段階は、以下の通りである。QIAamp-RNA-Blood-MiniキットQiagen社製、ドイツを用い、取扱説明書の指示に従って、ヒトEDTA-全血からRNAを単離する。以下のプライマー:フォワードプライマーGGCGCCGTCTTGATACTTTリバースプライマーCCGAAAATTGAGAGAGAAGGAA、を用いて逆転写し、2731ヌクレオチドの長さを持つPCR産物が増幅されるJumpStartAccuTaqDNAPolymerase,Sigma社製。PCR条件:初期変性96°C、30秒、40サイクルの増幅94°C、15秒;48°C、30秒;68°C、3分、最終伸張68°C、30分。PCR産物は、標準的な方法に従ってプラスミドpCR2.1Invitrogen社にクローニングされ、確認のために配列決定される。GATA-3mRNAの生成は、GATA-3を含有するプラスミドpCR2.1を、制限酵素SpeIを用いた切断により直線化した後、製造者の指示に従ったinvitro転写Ambion社によって行われる。該GATA-3mRNAの長さは、全体で2876ヌクレオチドである。図4は、データバンク[PubMedhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgidb=Nucleotide]に登録されている既知のヒトGATA-3遺伝子のヌクレオチド配列であるが、塩基が多様な場合は灰色のバックで強調されている。配列1:ヒトGATA-3、データバンクNo.:XM_043124、配列2:ヒトGATA3、データベースNo.:X58072、配列3:ヒトGATA-3プラスミドpCR2.1より単離。GATA-3mRNA配列は、3’-非翻訳末端または5’-非翻訳末端の長さによりお互いに区別される。mRNAの正確な全配列を得るため、プライマーの選択に、登録番号XM_043124およびX58072のmRNA配列を使用した。GATA-3クローニング用プライマーの位置は、図4において下線で強調されている。図4には更に、プラスミドpCR2.1から配列決定されたヌクレオチド配列配列3と、データバンクの配列1および2GATA-3の核酸配列とのアライメントも示されている。図から、配列は完全に同一ではなく、それぞれいくつかの塩基が異なっていることが分かる。図4のGATA-3の核酸配列3が、本発明のGATA-3mRNAに対するDNAzymeコンストラクトの基礎をなしている。図4Aには、図4のヒトGATA-3遺伝子の配列3のヌクレオチド配列が示されており、そしてその間に更なるDNAzyme切断候補となる部位がある各2つのヌクレオチドGTまたはATが灰色のバックで強調されて示されている。GATA-3mRNAのDNAzymehgd1~hgd70によるinvitro切断実験は、以下:50mMのTrispH7.4、150mMのNaCl、10mMのMgCl2、0.25μMのDNAzymeおよび0.025μMのinvitro転写されたGATA-3mRNA基質対DNAzyme比は、1:10、の反応混合物からなる容量10μl内で行われた。反応は、37°Cにおいてそれぞれ記載された時間インキュベートされた。ホルムアミドおよびEDTAを含むRNA-Sample-Loading-BufferSigma社を加えて反応を停止した。変性させた試料を、1.3TAEアガロースゲル上で分離し、UVトランスイルミネーターで解析した。図5は、ゲル電気泳動の結果として、非修飾DNAzyme[hgd11レーン2、hgd13レーン4、hgd17レーン6、hgd40レーン8]および修飾DNAzyme[hgd11-Mレーン3、hgd13-Mレーン5、hgd17-Mレーン7、hgd40-Mレーン9]によるGATA-3標的mRNAの切断を示す。レーン1は、コントロールとしてDNAzymeを加えていないmRNAを含む。修飾DNAzymeは、Mをつけて区別している。使用した分子量スタンダード図示せずは、1000bp、2000bpおよび3000bpのバンドの大きさを示した。矢印は、基質ここではGATA-3mRNAのバンドS、および切断生成物P1およびP2を示す。70個全てのDNAzyme間での比較から、hgd11、hgd13、hgd17およびhgd40が特に活性であり、修飾によりDNAzymehgd11,hgd13およびhgd17では効率が下がるものの、DNAzymeshgd40の効率は下がらないことが分かる。以下の表に、GATA-3mRNAに対するDNAzymehgd1~hgd70を4つのグループに分けて示す。この分類は、GATA-3mRNAに対するDNAzymeのin-vitro活性試験の実施結果に基づいている。グループ1:高い切断活性、グループ2:中程度の切断活性、グループ3:弱い切断活性、グループ4:測定可能な切断活性なし。c段階bの特異的なリボ核酸分子の標的細胞への導入高い活性を示したDNAzymehgd11、hgd13、hgd17およびhgd40を、上述のように修飾してまたは修飾しないで標的細胞に使用した。これにあたりまず、JurkatE6.1細胞ヒト急性T細胞性白血病細胞を、100U/mlのペニシリン、0.1mg/mlのストレプトマイシンおよび10のFKSを含むRPMI培地において、37°C、高湿度で、5のCO2雰囲気下にて培養した。トランスフェクションは、6ウェルプレートで行った。2x106個のJurkatE6.1細胞をOpti-MEM-I-細胞培地Invitrogen社に移し、DMRIE-CInvitrogen社を用いて、修飾DNAzyme0.3μMで形質転換を行った方法は、Invitrogen社の指示に従った。前記条件の培養器内で10時間インキュベーションを行った後、RPMI培地前記の成分を含むを加え、更に14時間インキュベーションを続けた。細胞をOpti-MEM培地で洗浄した後、上述のプロトコールに従って再度、形質転換を行った。各々のトランスフェクション後、トランスフェクション効率をFACS解析によって評価した。引き続き、DNAzymeの活性を、GATA-3タンパク質量をウェスタンブロット法で調べることにより評価した図6参照。ウェスタンブロット解析用に、細胞質タンパク質および核タンパク質をProtein-ExtractionキットPierce社を用いて、メーカーの指示に従って分離した。タンパク質濃度は、BCAキットPierce社で測定した。それぞれ30μgのタンパク質の分離を、10SDS-ポリアクリルアミドゲルにおける変性ゲル電気泳動によって行った。引き続き、タンパク質を標準的な方法でニトロセルロース膜上にブロットした。該膜を、5のスキムミルクを含むPBS0.01のTween20含有でブロッキングした後、マウス抗GATA-3抗体SantaCruz社1:500を、続いてHRP標識マウス抗ウサギ抗体BDBiosciences社1:2000を加えてそれぞれ1時間、室温でインキュベーションを行った。タンパク質は、化学発光によって可視化した。平行してブロット上のベータ-アクチンを検出し、ブロットされたタンパク質量のばらつきを確かめた。この際、まずニトロセルロース膜上のGATA-3を検出した。続いて、同じ膜を高湿度のチャンバー内に一晩置いた。PBSで2回洗浄後、β-アクチンを特異的抗体マウス抗ヒトベータ-アクチン抗体Sigma社による免疫染色によって検出した。図6は、細胞内におけるDNAzyme活性の結果による免疫ブロットの結果を示す。JurkatE6.1細胞を、DNAzymeレーン4=hgd11-M、レーン5=hgd13-M、レーン6=hgd17-M、レーン7=hgd40-Mを伴うリポフェクションにより形質転換した。コントロールとしては、未処理のレーン1、トランスフェクション試薬でのみ処理されたレーン2およびトランスフェクション試薬なしでDNAzymeのみで処理されたレーン3細胞を使用した。48時間インキュベーションを行った後、可溶化したタンパク質をSDS-PAGEにより分離し、GATA-3Aを特異的抗体による免疫ブロットで検出した。各レーンあたりのタンパク質量が同一であることを確認するために、同一のブロット膜上でβ-アクチンBによる免疫染色を行う。一緒に使用した分子量スタンダード図示せずは、63.8kDa、49.5kDaおよび37.4kDaの大きさのタンパク質のバンドを示す。DNAzymehgd11、hgd13およびhgd17がinvivoでは不活性であるのに対し、DNAzymehgd40はGATA-3発現をinvivoでも阻害する。従って、DNAzymehgd40によるinvivoでのGATA-3発現の特異的な阻害は、慢性炎症性疾患の治療のための有効な治療手段となる。d薬剤中への、段階bの特異的なリボ核酸および/または段階cの標的細胞の製剤化GATA-3特異的な基質結合ドメインを有する種々のDNAzymeの解析により、DNAzymehgd40がGATA-3の発現をinvivoにおいて特異的に阻害し、細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異的な薬剤を製造するための特異的なリボ核酸として適していることが示される。ここでは、hgd405’-GTGGATGGAggctagctacaacgaGTCTTGGAGまたはhgd40で形質転換された細胞を、薬学的に許容可能なキャリアー、例えばリポソームまたは生分解性ポリマーを含む医薬組成物に組み入れる。GATA-3発現の特異的な阻害、および細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異的な薬剤の製造のためのDNAzymeの代替としては、siRNAの使用が考えられる。siRNAは、マウスおよびヒトGATA-3の阻害に使用されることが好ましい。siRNAの製造方法は当業者に公知であり、文献にも記載されている。以下にsiRNA配列の例を挙げる。実施例2:T-betに対するDNAzymeaその標的細胞における発現が、コントロール細胞での発現と比較して差異を示すリボ核酸分子の同定上述の方法と同様に同定を行った。標的細胞Th1細胞におけるT-betの発現は、コントロール細胞Th0細胞における発現と比較して差異を有する。b段階aのリボ核酸分子に結合し、それを機能的に不活化する特異的なリボ核酸分子の設計T-betの切断部位の同定は、GATA-3に関する記載と同様に行った。図7は、T-betmRNAに対して特異的なDNAzymeである本発明のプールtd1~td78を示す。該DNAzymeの全長は33ヌクレオチドであるが、中心の触媒ドメインは15ヌクレオチド小文字であり、公知の10-23DNAzyme図2の触媒ドメインと一致する。この触媒ドメインは、それぞれ9ヌクレオチドからなる2つの基質結合ドメイン大文字に左右から挟まれている。左右の基質結合ドメインのヌクレオチド配列は、DNAzymetd1~td78において異なっており且つ可変であるため、T-betmRNAへのワトソンクリック対合による様々な特異的結合が生じる。DNAzymeは、プリン-シトシン結合よりもプリン-ウラシル結合において標的mRNAを効果的に切断することが、文献により知られており、プリン-ウラシル結合を切断するDNAzymeを設計することが好ましい。図2に示したモデルは、その作用様式においてDNAzymetd1~td78とT-betmRNAとの結合にも当てはめることができる。DNAzymetd1~td78は、invitro実験には修飾されていないものを使用し、培養細胞における実験にはGATA-3の時と同様に修飾されたものを用いた。DNAzymeの切断特性およびT-betmRNAの標的mRNAの機能的不活化を示すため、ヒトEDTA-全血からQIAamp-RNA-Blood-MiniキットQiagen社製、ドイツを用いて単離されたT-bet-mRNAを、製造者の指示に従ってinvitroで転写した。図8は、配列1を取り出すデータバンク[PubMedhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgidb=Nucleotide]に登録されているNo.:NM_013351の配列のような、ヒトT-bet遺伝子のヌクレオチド配列を示す。逆転写は、標準的手法Invitrogen社のThermoScriptに従って、フォワードプライマー:CGGCCCGCTGGAGAGGAAGCおよびリバースプライマー:CACACACCCACACACAACCを用いて行われ、長さ2450ヌクレオチドのPCR産物が増幅される。PCR産物は、標準的な方法に従ってプラスミドpBluescript-SKStratagene社にクローニングされ、確認のために配列決定される。図8は、T-betNo.:NM_013351配列1と配列決定された配列配列2の核酸配列の比較を示す。図から、配列は完全に同一ではなく、いくつかの塩基が置換されていることが解る。図8のT-betの核酸配列2が、本発明のT-betmRNAに対するDNAzymeコンストラクトの基礎をなしている。図8Aには、図8のヒトT-bet遺伝子の配列1のヌクレオチド配列が示されており、そしてその間に更なるDNAzyme切断候補となる部位がある各2つのヌクレオチドGTまたはATが灰色のバックで強調されて示されている。T-betmRNAの生成は、T-betを含有するプラスミドpBluescript-SKを、制限酵素XbaIFermentas社を用いた切断により直線化した後、製造者Ambion社の指示に従ったinvitro転写によって行われる。該T-betmRNAの全長は、2550ヌクレオチドである。T-betmRNAのDNAzymetd1~td78によるinvitro切断実験は、GATA-3の場合と同様に実施、分析される。図9は、ゲル電気泳動の結果として、修飾DNAzyme[td54-Mレーン3,td69-Mレーン4およびtd70-Mレーン5]によるT-bet標的mRNAの切断を示す。レーン2は、コントロールとしてDNAzymeを加えていないT-bet標的mRNAを含む。使用した分子量スタンダードレーンMは2000bpおよび3000bpのバンドの大きさを示した。矢印Aは、基質ここではT-betmRNAのバンドを、矢印Bは、2つの切断生成物のうちの1つもう一方の切断生成物はこの図には見られないを示す。78個全てのDNAzyme間での比較から、td54、td69およびtd70が特に活性であり、修飾してもDNAzymeの効率は下がらないことが分かった。以下の表にt-betmRNAに対するDNAzymetd1~td78を4つのグループに分けて示す。この分類は、t-betmRNAに対するDNAzymeのin-vitro活性試験の実施結果に基づいている。グループ1:高い切断活性、グループ2:中程度の切断活性、グループ3:弱い切断活性、グループ4:測定可能な切断活性なし。c段階bの特異的なリボ核酸分子の標的細胞への導入DNAzymetd54、td69およびtd70を、上述のように修飾してまたは修飾しないで標的細胞に使用した。JurkatE6.1細胞のトランスフェクションは、GATA-3の実施例同様に行った。JurkatE6.1細胞のトランスフェクション後、GAPDH-mRNAの発現に対する相対的なT-bet-mRNA量を、Real-Time-PCRLightCycler,Roche社を用いて定量的に測定し、DNAzymeのinvitro効率を調べた。LightCycler分析用に、JurkatE6.1細胞のRNAをRNeasyMiniKitQiagen社、ドイツで精製し、続いて分光学的photometrischに平均化した。製造者の指示に従ってSuperScriptIIGibco社により逆転写した後、LightCyclerでT-bet-mRNAおよびGAPDH-mRNAを定量的に解析した。PCRの全容量は20μlで、その中には、1μlのDNA、各1μl0.5μMのセンス-およびアンチセンス-プライマーおよび10μlのQuantiTect-SYBR-Green-PCR-Master-MixQiagen社、ドイツが含まれる。使用したT-bet用PCRプライマーは:センス5’-CCCACCATGTCCTACTACCG-3’;アンチセンス5’-GCAATCTCAGTCCACACCAA-3’である。使用したGAPDH用PCRプライマーは:センス5’-TCTTCTTTTGCGTCGCCAG-3’およびアンチセンス5’-AGCCCCAGCCTTCTCCA-3’である。使用したPCR条件は:変性15分95°C、増幅15秒95°C、25秒59°C、25秒72°Cを50サイクル、さらに最終伸張2分72°Cである。引き続いて、融解曲線を、以下のように作成する:0秒95°C、15秒60°C、続いて温度を0.2°C間隔で97°Cまで上昇させ、同時に蛍光を連続的に測定する。全てのPCR産物が特有の融解温度を持っているので、融解曲線は内部標準として使用される。SYBR-Greenは、二本鎖DNAに結合する蛍光色素QuantiTectSYBRGreenPCRMasterMixに含まれるである。伸張の間にDNAが二本鎖になると、SYBR-Greenがそこに結合して結合依存性の蛍光シグナルが発生し、各伸張の最後にLightCyclerがこれを検出する。出発物質の量が多いほど、蛍光の有意な増加が早くに検出される。LightCyclerのソフトウェアによって、各サイクルに対して収集された蛍光強度が図示される。図10において、ナンセンスDNAzyme処理と比較して、JurkatE6.1細胞をDNAzymetd54m、td69mおよびtd70mで処理した後の、T-bet-mRNAおよびGAPDH-mRNAのLightCycler増幅曲線を示す。バックグラウンドの蛍光と有意に区別される蛍光の起点をPCRサイクルとして定義する各交点Ctは、LightCyclerソフトウェアのFit-Point法において手動で決定される。DNAzymeで処理された細胞および比較としてナンセンスDNAzymeで処理された細胞内のT-bet-mRNAおよびGAPDH-mRNAの半定量化は、説明書[UserBulletin2ABIPrism7700SequencedetectionSystemUserBulletin22001Relativequantificationofgeneexpressionhttp://docs.appliedbiosystems.com/pebiodocs/04303859.pdf]の方法に従って実施した。なおコントロール実験のT-bet-mRNAの量を100とした。半定量化のデータは、図11にグラフとして示されている。ナンセンスDNAzyme処理と比較して、td69m-DNAzymeでは抑制が81.3、td70m-DNAzymeでは抑制が81.0に達する一方、td54m-DNAzymeではT-betmRNA抑制効果は見られなかった。この結果は、td54m-DNAzymeはinvivoで不活性であるが、td69m-DNAzymeおよびtd70m-DNAzymeは、細胞環境においてもT-betのmRNAを不活化することを示している。よってDNAzymetd69mおよびtd70mによるinvivoにおけるT-betmRNAの特異的な減少は、慢性炎症性疾患の治療に効果的な手段である。d薬剤中への、段階bの特異的なリボ核酸および/または段階cの標的細胞の製剤化様々なT-bet特異的な基質結合ドメインを有するDNAzymeの分析により、DNAzymetd69およびtd70がT-betの発現をinvivoにおいて特異的に阻害し、細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異的な薬剤製造のための特異的なリボ核酸として適していることが示される。ここでは、td69GGCAATGAAggctagctacaacgaTGGGTTTCTまたはtd70TCACGGCAAggctagctacaacgaGAACTGGGT、またはtd69mまたはtd70mで形質転換された細胞を、薬学的に許容可能なキャリアー、例えばリポソームまたは生分解性ポリマーを含む医薬組成物に組み入れる。T-bet発現の特異的な阻害、および細胞および/または組織および/または疾患フェーズ特異的な薬剤の製造のためのDNAzymeの代替としては、siRNAの使用が考えられる。siRNAは、ヒトT-betの阻害に使用されることが好ましい。siRNAの製造方法は、当業者に公知であり、文献にも記載されている。以下にsiRNA配列の例を挙げる。本発明の記載に基づけば、TH1細胞またはTH2細胞の分化に関与するさらなる転写因子、例えばSTAT4、STAT5a、STAT1、c-Rel、CREB2、ATF-2、ATF-2、Hlx、IRF-1、c-Maf、NFAT、NIP45、AP1、Mel-18、SKAT-2、CTLA-4に対する、またはサイトカインの分化および/または発現に関するさらなるシグナル伝達経路の因子、例えばSrcキナーゼ、Tecキナーゼ、RlkヒトではTxk、Itk、Tec、RIBP、PLCγ、MAPキナーゼ、ERK、JNK、P38、MKK、MKK1、MKK2、MKK3、MKK4、MKK6、MKK7、Rac2、GADD45、GADD45β、GADD45γ、SOCS、CIS、SOCS1、SOCS2、SOCS3、JAK、JAK1、JAK3、NIP45に対する特異的なDNAzymeまたはsiRNAを、慢性炎症性疾患および自己免疫疾患に対する薬剤として容易に製造し得るということは、当業者にとって明らかである。これらのタンパク質は、コントロール細胞での発現と比較して標的細胞において高い発現を示す。"