"生体サンプル中のG6PDHの量を検出するためのハイスループット法であって、6-ホスホグルコン酸を形成するのに適した条件下、界面活性剤およびバッファーの存在下で、生体サンプルをG6PおよびNADPと反応させるステップと、前記生体サンプルをクエンチして、クエンチされたサンプルを形成するステップと、前記クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の存在または量を、質量分析によって検出するステップとを含み、ここで、前記クエンチされたサンプル中の前記6-ホスホグルコン酸の量が、前記生体サンプル中の前記G6PDHの量と関連している、方法。前記クエンチするステップが、酵素変性剤を使用して達成される、請求項1に記載の方法。前記質量分析が、タンデム質量分析である、請求項1または請求項2に記載の方法。前記質量分析が、熱アシストエレクトロスプレーイオン化プローブを備えた質量分析計を使用して達成される、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。前記質量分析が、逆相液体クロマトグラフィーカラムを備えた質量分析計を使用して達成される、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。前記検出するステップが、約5分未満で行われる、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。前記検出するステップが、約3分未満で行われる、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。約0.01ミリ単位以下のG6PDHの検出を可能にする、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。前記検出するステップが、温度の変動によって実質的に影響を受けない、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。被験体においてG6PDH欠乏症を検出する方法であって、被験体から得た生体サンプル中のG6PDHの量を質量分析によって決定するステップと、前記生体サンプル中の前記G6PDHの量を、適当な対照と比較するステップとを含み、ここで、前記サンプル中の前記G6PDHの量が前記適当な対照より少ない場合に、G6PDH欠乏症が検出される、方法。前記被験体が、新生児または乳児である、請求項10に記載の方法。前記被験体が、妊婦である、請求項10または請求項11に記載の方法。前記対照より10少ない前記サンプル中のG6PDHの量が、前記被験体におけるG6PDH欠乏症を示す、請求項10から12のいずれか一項に記載の方法。前記対照より25少ない前記サンプル中のG6PDHの量が、前記被験体におけるG6PDH欠乏症を示す、請求項10から13のいずれか一項に記載の方法。前記対照より50少ない前記サンプル中のG6PDHの量が、前記被験体におけるG6PDH欠乏症を示す、請求項10から14のいずれか一項に記載の方法。被験体において急性溶血性貧血を診断する方法であって、請求項10に記載の方法に従って、被験体においてG6PDH欠乏症を検出するステップを含み、ここで、前記被験体におけるG6PDH欠乏症が、前記被験体における急性溶血性貧血を示す、方法。前記対照より25少ない前記サンプル中のG6PDHの量が、前記被験体における急性溶血性貧血を示す、請求項16に記載の方法。被験体において子癇前症を診断する方法であって、請求項10に記載の方法に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出するステップを含み、ここで、前記被験体におけるG6PDH欠乏症が、前記被験体における子癇前症を示す、方法。前記対照より25少ない前記サンプル中のG6PDHの量が、前記被験体における子癇前症を示す、請求項18に記載の方法。被験体における子癇前症または急性溶血性貧血に起因する死亡率および/または罹病率の増大に対する予後診断法であって、請求項10に記載の方法に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出するステップを含み、ここで、前記対照の50以下である前記生体サンプル中のG6PDHの量が、前記被験体における死亡率および/または罹病率の増大の予後を示す、方法。前記適当な対照が、正常集団中のG6PDHレベルに基づいた対照である、請求項10から20のいずれか一項に記載の方法。6-ホスホグルコン酸を形成するのに適した条件下、界面活性剤およびバッファーの存在下で、前記生体サンプルを、G6PおよびNADPと反応させるステップと、前記生体サンプルをクエンチして、クエンチされたサンプルを形成するステップと、前記クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の存在または量を、質量分析によって検出するステップとをさらに含み、ここで、前記クエンチされたサンプル中の前記6-ホスホグルコン酸の量が、前記生体サンプル中の前記G6PDHの量と関連している、請求項10から21のいずれか一項に記載の方法。前記生体サンプルが、乾燥血液サンプルである、先行する請求項のいずれか一項に記載の方法。生体サンプル中のG6PDHの量を検出するためのキットであって、グルコース-6-ホスフェートと、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートと、任意選択により、バッファーと、任意選択により、界面活性剤と、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、グルコース-6-ホスフェートおよびG6PDHの反応を促進する反応混合物を調製するための使用説明書とを含む、キット。酵素変性剤をさらに含む、請求項24に記載のキット。質量分析計で分析するためのサンプルを調製するための使用説明書をさらに含む、請求項24または請求項25に記載のキット。[6-ホスホグルコン酸/グルコース-6-ホスフェート面積]対G6PDHのミリ単位のプロットを含む較正曲線をさらに含む、請求項24から26のいずれか一項に記載のキット。要旨したがって、いくつかの実施形態では、本出願人の教示は、生体サンプル中のG6PDHの量を検出するハイスループット法を提供する。この方法は、例えば、6-ホスホグルコン酸を形成するのに適した条件下、界面活性剤およびバッファーの存在下で、生体サンプルをG6PおよびNADPと反応させることと、生体サンプルをクエンチして、クエンチされたサンプルを形成することと、クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の存在または量を、質量分析によって検出することとを含み、ここで、クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の量は、生体サンプル中のG6PDHの量と関連する。いくつかの実施形態では、クエンチングは、酵素変性剤を使用して達成される。いくつかの実施形態では、質量分析は、タンデム質量分析である。いくつかの実施形態では、質量分析は、熱アシストエレクトロスプレーイオン化プローブ、例えば、TurboIonSpray登録商標TISプローブを備えた質量分析計を使用して達成される。いくつかの実施形態では、質量分析は、逆相液体クロマトグラフィーカラムを備えた質量分析計を使用して達成される。いくつかの実施形態では、検出は、約5分未満で行われる。いくつかの実施形態では、検出は、約3分未満で行われる。いくつかの実施形態では、この方法は、約0.01ミリ単位以下のG6PDHの検出を可能にする。いくつかの実施形態では、検出は、温度の変動によって実質的に影響を受けない。いくつかの実施形態では、出願人の教示は、被験体においてG6PDH欠乏症を検出する方法を提供する。この方法は、例えば、被験体から得た生体サンプル中のG6PDHの量を質量分析によって決定することと、生体サンプル中のG6PDHの量を、適当な対照と比較することとを含み、ここで、サンプル中のG6PDHの量が適当な対照より少ない場合に、G6PDH欠乏症が検出される。いくつかの実施形態では、被験体は、新生児または乳児である。いくつかの実施形態では、被験体は、妊婦である。いくつかの実施形態では、対照より10少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体におけるG6PDH欠乏症を示す。いくつかの実施形態では、対照より25少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体におけるG6PDH欠乏症を示す。いくつかの実施形態では、対照より50少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体におけるG6PDH欠乏症を示す。いくつかの実施形態では、G6PDH欠乏症の検出は、6-ホスホグルコン酸を形成するのに適した条件下、界面活性剤およびバッファーの存在下で、生体サンプルを、G6PおよびNADPと反応させることと、生体サンプルをクエンチして、クエンチされたサンプルを形成することと、クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の存在または量を、質量分析によって検出することとをさらに含み、ここで、クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の量は、生体サンプル中のG6PDHの量と関連する。いくつかの実施形態では、出願人の教示は、被験体において急性溶血性貧血を診断する方法を提供する。この方法は、例えば、出願人の教示に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出することを含み、ここで、被験体におけるG6PDH欠乏症は、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照より25少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、出願人の教示は、被験体において子癇前症を診断する方法を提供する。この方法は、例えば、出願人の教示に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出することを含み、ここで、被験体におけるG6PDH欠乏症は、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照より25少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、出願人の教示は、被験体における子癇前症または急性溶血性貧血に起因する死亡率および/または罹病率の増大に関する予後診断法を提供する。この方法は、例えば、出願人の教示に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出することを含み、ここで、対照の50以下である生体サンプル中のG6PDHの量が、被験体における死亡率および/または罹病率の増大の予後を示す。いくつかの実施形態では、適当な対照とは、正常集団中のG6PDHレベルに基づいた対照である。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、乾燥血液サンプルである。いくつかの実施形態では、出願人の教示は、生体サンプル中のG6PDHの量を検出するためのキットを提供する。キットは、例えば、グルコース-6-ホスフェートと、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートと、任意選択により、バッファーと、任意選択により、界面活性剤と、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、グルコース-6-ホスフェートおよびG6PDHの反応を促進する反応混合物を調製するための使用説明書とを含み得る。いくつかの実施形態では、キットはまた、酵素変性剤を含む。いくつかの実施形態では、キットは、質量分析計で分析するためのサンプルを調製するための使用説明書をさらに含む。さらなる実施形態では、キットはまた、[6-ホスホグルコン酸/グルコース-6-ホスフェート面積]対G6PDHのミリ単位のプロットを含む較正曲線を含む。出願人の教示のこれらおよびその他の特徴は、本明細書に示される。説明出願人の教示は、少なくとも幾分かは、質量分析法、例えば、MS/MS、LC/MSまたはLC/MS/MSを使用して、生体サンプル中のG6PDHの量を迅速かつ正確に決定することができるという知見に基づくものである。任意の特定の理論に拘束されようとは思わないが、G6PDHの量例えば、単に、その存在または非存在ではなくを決定する能力は、例えば、被験体における部分G6PDH欠乏症の検出において有用であると考えられる。G6PDHは、グルコース-6-ホスフェートを6-ホスホグルコノラクトンに変換し、同時に、NADPをNADPHへ還元する。次いで、6-ホスホグルコノラクトンは、グルコノラクトナーゼによって6-ホスホグルコン酸に変換される。ボイトラーBeutler法を含めたG6PDH活性を決定するためのこれまでの方法は、酵素反応の指標としてNADPHの形成を利用する。しかし、NADPのC13同位体異性体が、NADPHの第1のC12同位体異性体と重複するので、NADPHの量は、質量分析法によるようなアッセイでは決定することが困難であり得る。したがって、6-ホスホグルコン酸の量が本明細書において提供される方法においてモニタリングされる。したがって、いくつかの実施形態では、出願人の教示は、生体サンプル中のG6PDHの量を検出するハイスループット法を提供する。このような方法は、6-ホスホグルコン酸を形成するのに適した条件下、例えば、界面活性剤およびバッファーの存在下で生体サンプルをG6PおよびNADPと反応させることと、生体サンプルをクエンチして、クエンチされたサンプルを形成することと、クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の存在または量を質量分析によって検出することとを含む。このような方法では、クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の量は、生体サンプル中のG6PDHの量と関連する。本明細書において、用語ハイスループットとは、比較的短期間に多数のサンプルをアッセイするプロセスを指す。ハイスループットアッセイは、例えば、96ウェルプレート、384ウェルプレートおよび1536ウェルプレートを使用して達成され得る。いくつかの実施形態では、ハイスループット法の目的は、週あたり約250サンプル、週あたり約300サンプル、週あたり約350サンプル、週あたり約400サンプル、週あたり約450サンプル、週あたり約500サンプル、週あたり約550サンプル、週あたり約600サンプル、週あたり約650サンプル、週あたり約700サンプル、週あたり約750サンプル、週あたり約800サンプル、週あたり約850サンプル、週あたり約900サンプル、週あたり約950サンプル、週あたり約1000サンプル、週あたり約1100サンプル、週あたり約1200サンプル、週あたり約1300サンプル、週あたり約1400サンプル、週あたり約1500サンプルを超える速度でサンプルをスクリーニングすることである。いくつかの実施形態では、ハイスループット法の目的は、週あたり約1000サンプルを超える速度でサンプルをスクリーニングすることである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法によって、低レベルのG6PDHの検出が可能となる。例えば、本明細書に記載された方法によって、約1.00ミリ単位以下のG6PDH、約0.90ミリ単位以下のG6PDH、約0.80ミリ単位以下のG6PDH、約0.70ミリ単位以下のG6PDH、約0.60ミリ単位以下のG6PDH、約0.50ミリ単位以下のG6PDH、約0.45ミリ単位以下のG6PDH、約0.40ミリ単位以下のG6PDH、約0.35ミリ単位以下のG6PDH、約0.30ミリ単位以下のG6PDH、約0.25ミリ単位以下のG6PDH、約0.20ミリ単位以下のG6PDH、約0.15ミリ単位以下のG6PDH、約0.10ミリ単位以下のG6PDH、約0.05ミリ単位以下のG6PDH、約0.04ミリ単位以下のG6PDH、約0.03ミリ単位以下のG6PDH、約0.02ミリ単位以下のG6PDHまたは約0.01ミリ単位以下のG6PDHでさえの検出が可能となる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法によって、約0.10ミリ単位以下のG6PDHの検出が可能となる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法によって、約0.05ミリ単位以下のG6PDHの検出が可能となる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法によって、約0.01ミリ単位以下のG6PDHの検出が可能となる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法によって、少なくとも約0.01ミリ単位のG6PDHというG6PDHのレベルの検出が可能となる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された方法によって、少なくとも0.01ミリ単位のG6PDHというG6PDHのレベルの検出が可能となる。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出が、温度、pHおよび/または塩濃度の変動によって実質的に影響を受けない方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出が、温度の変動によって実質的に影響を受けない方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出が、検出の間の温度の変動によって実質的に影響を受けない方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出が、サンプルの保存の間の温度の変動によって実質的に影響を受けない方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、サンプル中で検出される6-ホスホグルコン酸の量のより正確な測定をもたらすために、内部標準が使用される。いくつかの実施形態では、内部標準は、サンプル中のその他の物質と反応せず、したがって、一定値を提供する、サンプルに添加される化合物/物質である。いくつかの実施形態では、内部標準は、サンプル中に天然に存在するその他の化合物/物質のうちの1つのレベルである。いくつかの実施形態では、グルコース-6-ホスフェートを内部標準として使用できる。本明細書において、用語生体サンプルとは、制限するものではないが、宿主身体のサンプルを指す。出願人の教示において有用な生体サンプルは、新鮮な例えば、分析前の数時間内に採取されたものである場合も、冷蔵または凍結された例えば、採取され、分析まで冷蔵庫または冷凍庫に入れられたものである場合も、乾燥された例えば、採取され、ワットマン紙上に置かれたか、もしくは、ワットマン紙上に直接スポットされたものである場合もある。例示的生体サンプルとして、例えば、血液、間質液、脊髄液、唾液、尿、涙、汗などが挙げられる。さらなる生体サンプルとして、それだけには限らないが、細胞もしくは組織またはその培養物もしくは継代培養物、粗製の細胞溶解物または処理された細胞溶解物全細胞溶解物を含む、体液、組織抽出物または細胞抽出物、糞便、脳脊髄液、羊水、リンパ液または腺分泌物由来の流体が挙げられる。サンプルは、本明細書に記載された基質との接触に先立って、当技術分野で公知の任意の方法によって処理してもよい。例えば、サンプルを、沈殿ステップ、カラムクロマトグラフィーステップ、加熱ステップなどに付してもよい。サンプルが、G6PDHの活性を妨害し得るその他の酵素を含有する場合には、サンプルに不活化剤例えば、活性部位に向けられた不可逆性阻害剤を添加して、望ましくない活性を不活化してもよい。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、血液サンプルである。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、乾燥血液サンプルである。検出するおよび検出とは、G6PDH酵素またはその酵素活性の検出、測定および/または特性決定を包含するものとする。例えば、酵素活性は、酵素活性のモジュレーターを検出または特性決定するためのスクリーニングの過程において検出され得る。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出は、約10分未満で行われる。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出は、約7.5分未満で行われる。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出は、約5分未満で行われる。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出は、約4分未満で行われる。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出は、約3分未満で行われる。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出は、約2.5分未満で行われる。いくつかの実施形態では、G6PDHの量の検出は、約2分未満で行われる。本明細書において、用語クエンチするとは、試薬を不活化することまたは化学反応を停止することを指す。クエンチングとは、不活化または停止が達成される機序にかかわらず、不活化することまたは停止することを指すことは理解される。具体的な限定されない例として、クエンチングは、pHの変化による場合も、G6PDHまたはG6Pと反応することができ、その結果、もはやG6PDHまたはG6Pが反応にとって利用可能ではなくなるクエンチング剤の添加による場合もある。したがって、クエンチされたサンプルとは、G6PDHまたはG6Pが、もはや反応を起こしていないサンプルを指す。本明細書において、用語クエンチング試薬とは、G6PDHまたはG6Pと相互作用でき、その結果、G6PDHまたはG6Pがクエンチされ、したがって、さらに反応することができない任意の試薬である。いくつかの実施形態では、クエンチング剤は、酵素変性剤である。例えば、いくつかの実施形態では、クエンチング剤は、G6PDHを変性させる。酵素変性剤は、通常、酵素の構造例えば、二次、三次または四次構造の非共有結合性変化を引き起こす。クエンチング試薬の例として、それだけには限らないが、アセトニトリル、メタノールおよびそれらの混合物が挙げられる。用語バッファーとは、通常、弱酸およびその共役塩基または弱塩基およびその共役酸からなる溶液を指し、ここで、溶液のpHは、少量の酸または塩基の添加の際にほとんど変化しない。適したバッファーとして、SigmaカタログのBiologicalBuffersの節ならびにsigmaaldrich.com.でオンラインで記載されるものが挙げられる。例示的バッファーとして、それだけには限らないが、リン酸カリウムバッファー、MES、MOPS、HEPES、TrisTrizma、ビシンbicine、TAPS、CAPSなどが挙げられる。バッファーは、所望のpHを生成させ、維持するのに十分な量で存在する。例えば、pHは、2~12、4~11または6~10であり得る。用語界面活性剤とは、通常、水による溶媒和をエネルギー的に好む極性頭部と、通常、水によって十分に溶媒和されない疎水性尾部とを有する分子を指す。界面活性剤は、イオン性すなわち、陰イオン性、陽イオン性である場合も、非イオン性である場合もある。例示的界面活性剤として、それだけには限らないが、ポリソルベート/ツイーン例えば、ツイーン20およびツイーン80、プルロニック例えば、F68およびF88、トリトン例えば、TRITON登録商標X-114、X-102、X-45、X-15、ポロクサマー例えば、ポロクサマー188、ソルビタンエステルまたはスパンSpan例えば、スパン20およびスパン80、脂質例えば、リン脂質、レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、アルコールエトキシレート例えば、BRIJ登録商標56、C16H33OCH2CH210OH、BRIJ登録商標58、C16H33OCH2CH220OH、脂肪酸および脂肪酸エステル、ステロイド例えば、コレステロール、キレート化剤例えば、EDTA、アミンエトキシレート、グルコシド、グルカミドglucamide、ポリアルキレンオキシド、ドデシル硫酸ナトリウムSDS、ラウリルlaurel硫酸ナトリウム、ナトリウムオクチルグリコシド、ラウリル-スルホベタイン、ミリスチル-スルホベタイン、リノレイル-スルホベタイン、ステアリル-スルホベタイン、ラウリル-サルコシン、ミリスチル-サルコシン、リノレイル-サルコシンステアリル-サルコシン、リノレイル-ベタイン、ミリスチル-ベタイン、セチル-ベタイン、ラウロアミドプロピル-ベタイン、コカミドプロピル-ベタイン、リノレアミドプロピル-ベタイン、ミリスタミドプロピル-ベタイン、パルミドプロピル-ベタイン、イソステアラミドプロピル-ベタイン、ラウロアミドプロピル-ベタイン、ミリスタミドプロピル-ジメチルアミン、パルミドプロピル-ジメチルアミン、イソステアラミドプロピル-ジメチルアミン、ナトリウムメチルココイル-タウレート、二ナトリウムメチルオレイル-タウレート、MONAQUAT商標界面活性剤、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールならびにエチレンおよびプロピレングリコールのコポリマーが挙げられる。その他の界面活性剤は、例えば、McCutcheon’sEmulsifiersandDetergents、Manuf.ConfectionersPub.Co.、GlenRock、N.J.、2000年およびKirk-Othmer、EncyclopediaofChemicalTechnologies、第2版、19巻、512~564頁に見出すことができる。いくつかの実施形態では、G6PDHをG6Pと少なくとも約15秒、約30秒、約45秒、1分、2分、3分、4分、約5分、約10分、約15分、約20分、約25分、約30分、約35分、約40分、約45分、約50分、約55分または約60分の反応時間接触させる。いくつかの実施形態では、G6PDHをG6Pと少なくとも約15分の反応時間接触させる。いくつかの実施形態では、G6PDHをG6Pと少なくとも約30分の反応時間接触させる。いくつかの実施形態では、G6PDHをG6Pと少なくとも15分の反応時間接触させる。いくつかの実施形態では、G6PDHをG6Pと少なくとも30分の反応時間接触させる。出願人の教示の方法は、分子イオンを選択し、フラグメント化する能力を有するタンデム質量分析計およびその他の質量分析計を使用して実施できる。タンデム質量分析計および、ある程度は、シングルステージ質量分析計は、その質量対電荷m/z比に従って、分子イオンを選択し、フラグメント化する能力を有し、次いで、得られたフラグメント娘イオンスペクトルを記録する。より詳しくは、娘フラグメントイオンスペクトルは、選択されたイオンを解離エネルギーレベル例えば、衝突誘起解離CIDに供することによって作製できる。例えば、第1の質量分析から特定のm/z比の化合物に相当するイオンを選択し、フラグメント化し、第2の質量分析において再分析できる。このようなタンデム質量分析を実施できる代表的な機器として、それだけには限らないが、磁場4セクター型magneticfoursector、タンデム飛行時間型、三連四重極型、イオントラップ型およびハイブリッド四重極飛行時間型Q-TOF質量分析計が挙げられる。これらの種類の質量分析計を、それだけには限らないが、エレクトロスプレーイオン化ESIおよびマトリックス支援レーザー脱離イオン化MALDIを含めた種々のイオン化供給源と併せて使用できる。イオン化供給源を使用して、第1の質量分析のための荷電種を作製できるが、ここで、分析物は、固定電荷をすでに有するわけではない。さらなる質量分析機器およびフラグメント化法として、MALDI-MS機器におけるポストソース分解およびMALDI-TOF-TOFMSを使用する高エネルギーCIDが挙げられる。タンデム質量分析計の総説は、例えば、R.AebersoldおよびD.Goodlett、MassSpectrometryinProteomics.Chem.Rev.101巻:269295頁2001年に見出すことができる。いくつかの実施形態では、質量分析は、タンデム質量分析である。いくつかの実施形態では、質量分析は、熱アシストエレクトロスプレーイオン化プローブ例えば、TurboIonSpray登録商標TIS、Turbo-Vまたは同様のものを備えた質量分析計を使用して達成される。いくつかの実施形態では、質量分析は、多重反応モニタリングMRMを利用する。質量スペクトルを作製するための例示的方法は、例えば、米国特許第6,930,305号および同第7,145,133号に見出すことができ、これらは両方ともこの参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、質量分析は、ABSciexAPI4000商標タンデム質量分析計を利用する。いくつかの実施形態では、サンプルの処理は、例えば、質量分析の前の分離を含み得る。例えば、サンプルの構成成分を分離し、質量分析をサンプル混合物の画分のみで実施できる。このようにして、分離された分析物を個々に分析できるので、分析の複雑性を低減できる。分離は、クロマトグラフィーによって実施できる。例えば、液体クロマトグラフィー/質量分析LC/MSまたは液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析LC/MS/MSを使用して、このようなサンプル分離および質量分析を達成できる。さらに、対象とする分析物を分離するのに適した任意のクロマトグラフィー分離法を使用してよい。例えば、クロマトグラフィー分離は、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーであり得る。分離はまた、電気泳動的に実施できる。電気泳動分離技術の限定されない例として、それだけには限らないが、1D電気泳動、2D電気泳動および/またはキャピラリー電気泳動が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される質量分析は、逆相液体クロマトグラフィーカラムを備えた質量分析計を使用して達成される。また、被験体においてG6PDH欠乏症を検出する方法も、本明細書において提供される。このような方法は、被験体由来の生体サンプル中のG6PDHの量を質量分析によって決定することと、生体サンプル中のG6PDHの量を、適当な対照と比較することとを含み、ここで、サンプル中のG6PDHの量が適当な対照より少ない場合に、G6PDH欠乏症が検出される。G6PDH欠乏症は、一般に、X連鎖性の、通常、G6PDH遺伝子中の変異による遺伝性の遺伝子欠陥である。この欠乏症は、よく見られ、世界中で4億人を超える人通常、アフリカ、中東および南アジア系の人に存在する。G6PDH遺伝子は、X染色体の長腕上に見出されバンドXq28、およそ18.5キロ塩基に広がる。いくつかの実施形態では、G6PDH欠乏症は、G6PDH遺伝子変異による。G6PDH遺伝子変異は、例えば、BeutlerE.、G6PDDeficiencyBlood、84巻11号:3613~3636頁、1994年に見出すことができる。いくつかの実施形態では、G6PDH欠乏症は、表1に列挙される遺伝子変異のうちの1種による。いくつかの実施形態では、被験体におけるG6PDH欠乏症は、対照より約5少ない、対照より約10少ない、対照より約15少ない、対照より約20少ない、対照より約25少ない、対照より約30少ない、対照より約35少ない、対照より約40少ない、対照より約45少ない、対照より約50少ない、対照より約55少ない、対照より約60少ない、対照より約65少ない、対照より約70少ない、対照より約75少ない、対照より約80少ない、対照より約85少ない、対照より約90少ない、対照より約95少ない、または対照より約100少ない、被験体由来の生体サンプル中のG6PDHの量によって示される。例えば、いくつかの実施形態では、被験体におけるG6PDH欠乏症は、対照より少なくとも約10少ない、被験体由来の生体サンプル中のG6PDHの量によって示される。いくつかの実施形態では、被験体におけるG6PDH欠乏症は、対照よりも少なくとも約25少ない、被験体由来の生体サンプル中のG6PDHの量によって示される。いくつかの実施形態では、被験体におけるG6PDH欠乏症は、対照よりも少なくとも約50少ない、被験体由来の生体サンプル中のG6PDHの量によって示される。例えば、いくつかの実施形態では、被験体におけるG6PDH欠乏症は、対照よりも少なくとも10、少なくとも25または少なくとも50少ない、被験体由来の生体サンプル中のG6PDHの量によって示される。本明細書において、用語被験体とは、それだけには限らないが、ヒト、霊長類、牛cow、羊sheep、山羊、馬horse、豚、犬dog、猫cat、ウサギ、モルモット、ラット、マウスまたはその他のウシbovine、ヒツジovine、ウマequine、イヌcanine、ネコfeline、げっ歯類もしくはネズミ科の種を含めた哺乳動物などの動物を指す。いくつかの実施形態では、被験体は、ヒトである。いくつかの実施形態では、被験体は、新生児または小児である。いくつかの実施形態では、被験体は、妊婦である。いくつかの実施形態では、出願人の教示は、G6PDHを調節する能力について化合物をスクリーニングする方法を提供する。いくつかの実施形態では、G6PDH活性のモジュレーター例えば、エンハンサーまたは阻害剤の効果を、本明細書において記載された方法を使用して調べることができる。さらに、G6PDHの基質特異性も、本明細書に記載された方法を使用して調べることができる。いくつかの実施形態では、G6PDH関連障害を診断する方法が、本明細書に記載される。本明細書において、用語G6PDH関連障害とは、G6PDHの欠乏に少なくとも部分的に起因する疾患および/または障害を指す。いくつかの実施形態では、G6PDH関連障害は、少なくとも約10、少なくとも約20、少なくとも約30、少なくとも約40、少なくとも約50、少なくとも約60、少なくとも約70、少なくとも約80、少なくとも約90、約100のG6PDHの欠乏に起因する疾患および/または障害を含む。いくつかの実施形態では、G6PDH関連障害は、少なくとも25のG6PDHの欠乏に起因する疾患および/または障害を含む。いくつかの実施形態では、G6PDH関連障害は、少なくとも50のG6PDHの欠乏に起因する疾患および/または障害を含む。いくつかの実施形態では、G6PDH関連障害は、少なくとも75のG6PDHの欠乏に起因する疾患および/または障害を含む。いくつかの実施形態では、G6PDH関連障害は、慢性溶血、急性溶血性貧血、ソラマメ症、新生児高ビリルビン血症および子癇前症から選択される。その他のG6PDH関連障害として、例えば、血小板異常、有茎皮弁喪失skinpedicleflaploss、運動能力の機能障害、発作性疾患、白内障の頻度上昇、統合失調症または鬱病、レニン放出不全、糖尿病、異常なインスリン放出、心血管疾患、胆石症、ミオグロビン尿症myoglobuinuria、感染に対する感受性の増大、異常な白血球機能、肝炎における黄疸の増大、精神遅滞または血清デヒドロエピアンドロステロンdehydroepiandrostroneサルフェートの増大を挙げることができる。例えば、Beutler,E.、G6PDDeficiencyBlood、84巻11号:3613~3636頁、1994年を参照のこと。いくつかの実施形態では、G6PDH関連障害は、G6PDH欠乏症を誘発できる物質によって引き起こされるか、または誘発される障害である。このような物質として、それだけには限らないが、ソラマメ、抗マラリア薬例えば、プリマキン、パマキンおよびクロロキン、スルホンアミド例えば、スルファニルアミド、スルファメトキサゾールおよびマフェニド、ニトロフラントイン、アセチルサリチル酸、アセトフェネチジン、チアゾールスルホン、メチレンブルー、ナフタレン、鎮痛薬例えば、アスピリン、フェナゾピリジンおよびアセトアニリドならびに数種の非サルファ抗生物質例えば、ナリジクス酸、ニトロフラントイン、イソニアジドおよびフラゾリドンが挙げられる。いくつかの実施形態では、被験体において急性溶血性貧血を診断する方法が、本明細書において提供される。このような方法は、上記の方法に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出することを含み、ここで、被験体におけるG6PDH欠乏症は、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約90少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約80少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約70少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約60少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約50少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約40少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約30少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約20少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約10少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも75少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも50少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも25少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における急性溶血性貧血を示す。いくつかの実施形態では、被験体において子癇前症を診断する方法が本明細書において提供される。このような方法は、上記の方法に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出することを含み、ここで、被験体におけるG6PDH欠乏症は、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約90少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約80少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約70少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約60少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約50少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約40少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約30少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約20少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも少なくとも約10少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも75少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも50少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、対照よりも25少ないサンプル中のG6PDHの量が、被験体における子癇前症を示す。いくつかの実施形態では、被験体における子癇前症または急性溶血性貧血に起因する死亡率および/または罹病率の増大を予測するための予後診断法が、本明細書において提供される。このような方法は、上記の方法に従って被験体においてG6PDH欠乏症を検出することを含み、ここで、対照の50以下である生体サンプル中のG6PDHの量が、被験体における死亡率および/または罹病率の増大の予後を示す。いくつかの実施形態では、対照の75以下である生体サンプル中のG6PDHの量が、被験体における死亡率および/または罹病率の増大の予後を示す。本明細書において、用語適当な対照とは、正常集団中のG6PDHレベルに基づいた対照である。すなわち、いくつかの実施形態では、適当な対照は、所定の値である。いくつかの実施形態では、適当な対照は、正常なG6PDH活性を有すると分かっている単一の個体において検出されたレベルである。いくつかの実施形態では、適当な対照は、正常なG6PDH活性を有する個体の集団から得た平均レベルである。いくつかの実施形態では、適当な対照は、G6PDH欠乏症を誘発できる物質の投与の前に、患者において検出されたレベルである。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される診断法または予後診断法は、以下のステップのうち任意の1種を含む:6-ホスホグルコン酸を形成するのに適した条件下、界面活性剤およびバッファーの存在下で、生体サンプルをG6PおよびNADPと反応させるステップ;生体サンプルをクエンチして、クエンチされたサンプルを形成するステップ;およびクエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の存在または量を、質量分析によって検出するステップ。このような方法では、クエンチされたサンプル中の6-ホスホグルコン酸の量は、生体サンプル中のG6PDHの量と関連する。また、本明細書に記載された方法を実施するためのキットも提供される。いくつかの実施形態では、キットは、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、グルコース-6-ホスフェートおよびG6PDHの反応を促進する反応混合物を調製するための、グルコース-6-ホスフェートと、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートと、界面活性剤と、バッファーとを含む。バッファーおよび/または界面活性剤は、容器中に、乾燥形態で提供されても、液体形態で提供されてもよい。例示的な適したバッファーおよび界面活性剤が、本明細書において上記で提供されている。バッファーは、通常、キット中に、少なくとも、混合物において特定のpHを生成させるのに十分な量で存在する。いくつかの実施形態では、バッファーは、予め選択されたpHおよびバッファー濃度を有する保存溶液として提供される。いくつかの実施形態では、酸および/または塩基も、反応混合物を所望のpHに調節するためにキット中に提供される。キットは、クエンチング溶液、例えば、アセトニトリル:メタノール混合物などの酵素変性剤をさらに含み得る。キットは、1種または複数の1種または複数の希釈剤、例えば、質量分析システムにおいて使用するのに適した溶媒をさらに含み得る。キットは、塩例えば、KCl、NaClまたはNaOAc、金属塩例えば、CaCl2などのCa2塩、MgCl2、MnCl2、ZnCl2またはZnOAcなどの酵素活性にとって有益であるその他の構成成分および/またはG6PDH酵素にとって有用であり得るその他の構成成分をさらに含み得る。これらのその他の構成成分は、乾燥または液体形態で、互いに別個に、または一緒に混合されて提供され得る。グルコース-6-ホスフェートおよび/またはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートは、バッファーと一緒に、またはバッファーとは別個に乾燥または液体形態で提供され得る。グルコース-6-ホスフェートおよび/またはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートは、反応混合物における溶解を促進するために、水溶液、部分水性溶液または反応混合物のその他の構成成分と混和性である非水性保存溶液中で提供されてもよい。いくつかの実施形態では、キットは、使用のための説明書をさらに含む。例えば、キットは、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート、グルコース-6-ホスフェートおよびG6PDHの反応を促進する反応混合物を調製するための使用説明書を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、質量分析計で分析するためのサンプルを準備するための使用説明書を含む。いくつかの実施形態では、キットは、図3に示される曲線などの予め準備した較正曲線をさらに含み、これによって、使用者が、質量分析計を使用して決定された6-ホスホグルコン酸の量に基づいてサンプル中のG6PDHの量を決定することが可能となる。例えば、予め準備した較正曲線は、[6-ホスホグルコン酸/グルコース-6-ホスフェート面積]対G6PDHのミリ単位のプロットであり得る。いくつかの実施形態では、キットは、所定の量のG6PDHとともに標準サンプルを含み、その結果、使用者がそれ自身の較正曲線を作成することができる。いくつかの実施形態では、キットは、較正曲線を準備する方法に関する使用説明書をさらに含む。使用説明書は、a.バッファーおよび/または界面活性剤の存在下で、グルコース-6-ホスフェートおよびニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートを、設定された期間例えば、15分、20分、25分、30分など混合すること;b.クエンチング溶液を使用してサンプルをクエンチすること;c.クエンチされたサンプルを、質量分析計を使用して分析すること;d.較正曲線を準備すること;e.クエンチされたサンプルの分析例えば、質量スペクトルを較正曲線と比較することの任意の組合せを含み得る。種々の組成物および方法の操作は、以下の限定されない例を踏まえるとさらに理解され得るが、これらは、出願人の教示の範囲の制限とは決して解釈されてはならない。例示実施例1DBSサンプル新生児スクリーニングプログラムから得た乾燥血液スポットDBSを有する濾紙を、本実施例において利用した。濾紙から直径3mmのディスクを取り出し、このディスク上の血液サンプルを、50μLの試薬1を使用して、1.5mLのエッペンドルフチューブに加えた。試薬1は、3容量の再蒸留水、3容量の250mMK2HPO4、2容量のMolecularBiology用の1サポニン、1容量の7.5mMニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートおよび1容の10mMグルコース-6-ホスフェートを混合することによって配合した。エッペンドルフチューブを閉じ、穏やかに混合した後、チューブを37°Cのインキュベーションオーブン中に30分間入れた。100μLの1:1アセトニトリル:メタノールLC-MS等級混合物を添加することによって反応をクエンチした。遠心分離した後、10μLの清澄な上清を、20mMブチル-ジメチル-重炭酸アンモニウムBDMAB水溶液240μLを用いて希釈した。この溶液の2μLを、LC/MS/MSシステムに注入し、これは、PhenomenexC18カラムを備えたAgilent1200LCシステムおよびTISプローブを備えたABSciexAPI4000商標タンデム質量分析計を含んでいた。液体クロマトグラフィーは、サンプルを50°Cで維持したカラムに注入し、300μL/分のLC-溶出剤20mMBDMAB3MetOHをイソクラティックモードで2.5分間流すことによって実施した。質量分析計は、-4500ボルトのTISを用い、350°CのNominalGun温度を用い、MRM、NegativeIonModeで操作した。利用された遷移は、以下のとおりである:DP:-60VおよびCE:-70eVを用いてグルコース-6-ホスフェートの259.2>79.0DP:-60VおよびCE:-70eVを用いて6-ホスホ-グルコン酸の275.2>79.0DP:-80VおよびCE:-130eVを用いてNADPの742.1>79.0。QuantまたはMultiQuantモードにおいて、遷移275.2>79.0および259.2>79.0に対応するトレースをそれぞれ、分析物6-ホスホグルコン酸、および内部標準G6Pとして処理した。得られた比を、実施例2に記載したように、市販のG6PDHを使用して得られた較正曲線と比較した。酵素欠乏症は、NADPの高いシグナルを伴うので、NADPをモニタリングした遷移742.1>79.0を偽陽性結果の内部チェックとして使用した。したがって、6-ホスホグルコン酸およびNADP両方のトレースが低いか、存在しない場合には、結果は偽であると考えられる。図1は、乾燥血液サンプルから得られたMRMでの例示的質量分析読み取りを示し、G6P、6-ホスホグルコン酸およびNADPのレベルを示す。図1は、G6PDHの正常レベルの代表的なものである。図2は、正常サンプルと、G6PDH活性を有さないサンプルを比較する。実施例2酵素較正市販の酵素標準例えば、SigmaG5885番を、50の再蒸留水、30の250mMK2HPO4および20のMolecularBiology用1サポニンの溶液を用いて溶解して、100ミリ単位/mLを得た。0、1、2、4、10、20および40μLのこの溶液0、0.1、0.2、0.4、1.0、2.0および4.0ミリ単位の酵素に相当するを、1.5mLのエッペンドルフチューブ中の50μLの試薬1実施例1に記載されたに添加した。エッペンドルフチューブを閉じ、穏やかに混合した後、チューブを37°Cのインキュベーションオーブン中に30分間入れた。100μLの1:1アセトニトリル:メタノールLC-MS等級混合物を添加することによって反応をクエンチした。遠心分離した後、10μLの清澄な上清を、20mMブチル-ジメチル-重炭酸アンモニウムBDMAB水溶液240μLを用いて希釈した。実施例1におけるように、この溶液の2μLを、LC/MS/MSシステムに注入した。QuantまたはMultiQuantモードにおいて、遷移275.2>79.0および259.2>79.0に対応するトレースを、それぞれ、分析物および内部標準のものとして処理した。試料の定量的評価は、ミリ単位での絶対読み取りによって行われ、パンチされたディスク上の血液の量3.1μLに参照される。参照として、正常としておよそ3ミリ単位/DBSの酵素活性が保持された。結果は以下の表2に示されている。サンプリングされた実際の血液容量に基づいて、これらの方法の検出性は、正常サンプルの平均酵素活性の約1/300であると思われる。約3~4ミリ単位/スポットまでの線形性が観察されたが図3を参照のこと、必要に応じて、インキュベーション時間を減少することによって拡張することができる。実施例3乾燥血液サンプルの分析地方の倫理委員会のガイドラインに従って、これまでに集められ、使用される、病院における日常的な分析から得た匿名の過剰のサンプルを利用する相関研究を構築した。血液サンプルをガスリーカード上にスポットし、乾燥させ、LC/MS/MSによる測定のために送った。LC/MS/MSによる分析は、実施例1について上記で記載したように実施した。参照として、サンプルは、日常的な病院検査室において実施されるように、BioVisionキットBioVisionResearchProducts、980LindaVistaAvenue、MountainView、CA94043USA製のカタログ番号K757-100を用いて先に測定した。図4Aおよび4Bは、BioVisionキットBVによって測定された、高および低G6PDH活性に相当する、2種の乾燥血液サンプルから得たMRMでの2種の例示的質量分析読み取りを示す。これらの図によって分かるように、LC-MS/MSは、高および低G6PDH活性の両方を測定できる。両アッセイに利用可能な均一な較正はないので、極端な活性値に相当した上記のサンプルを使用してLC-MS/MSアッセイの較正曲線を作成した。LC-MS/MSの標準として使用した較正が、図5に示されている。サンプルの分析から得られた結果が、表3に提供されており、これはまた、BVキットを使用して得られた値の一覧を提供する。G6PDH活性は、LC/MS/MSおよびBVキットの両方についてミリ単位/mLmU/mLで表されており、LC/MS/MSのヘモグロビンに対する正規化はない。サンプルn8、n10およびn17は、低活性サンプルと考えられる。図6Aおよび6Bは、未知として読み取られた2種の乾燥血液サンプルから得られたMRMでの2種の例示的質量分析読み取りを表す。これらの読み取りは、低および高G6PDH活性に相当し、LC/MS/MSアッセイは、それぞれ、40および1202ミリ単位/mLの測定値を与え、BVアッセイは、それぞれ、20および1230mU/mLの測定値を与える。さらに、図7Aおよび7Bは、本研究において測定された値を使用して作製された相関プロットならびにブランドおよびアルトマンプロットである臨床的測定の2つの方法間の一致を測定する。上記のデータおよびプロットによって分かるように、LC/MS/MSを使用して得られた値とBVキットを使用して得られたものの間に、特に、低活性サンプルに関して良好な一致がある。均等物当業者ならば、単に通常の実験を使用して、本明細書に記載された教示の特定の実施形態の均等物を認識し、確認できるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されるものとする。"