"がん細胞においてアポトーシスを誘発する方法であって、がん細胞において腫瘍壊死因子αTNFα活性を上向き調節し、それによって前記がん細胞のAKTの抑制に対する感受性を高める工程と、前記感受性が高められたがん細胞を化合物と接触させる工程とを含み、前記化合物は、レチノイドX受容体αRXRαと相互作用することがわかっており、また前記化合物は、プロテインキナーゼBAKTの活性を、シクロオキシゲナーゼ-2COX-2経路とは無関係に抑制することがわかっている方法。前記TNFα活性の上向き調節が、前記がん細胞への外因性TNFαの導入を含む、請求項1に記載の方法。前記TNFα活性の上向き調節が、前記がん細胞における内因性TNFαの上向き調節を含む、請求項1に記載の方法。前記がん細胞が、肺がん細胞、乳がん細胞、前立腺がん細胞、肝臓がん細胞、および結腸がん細胞からなる群から選択されたがん細胞である、請求項1に記載の方法。前記がん細胞が、A549細胞、H460細胞、ZR-75-1細胞、MCF-7細胞、LNCaP細胞、PC3細胞、HepG2細胞、Caco2細胞、およびSW480細胞からなる群から選択されたがん細胞である、請求項1に記載の方法。前記候補化合物が、スリンダクの類似体であり、前記類似体は、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択される少なくとも一方の特性を示す、請求項1に記載の方法。前記類似体が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択された化合物である、請求項6に記載の方法。前記類似体がK-80003である、請求項7に記載の方法。がん細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法であって、がん細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物が、前記がん細胞におけるAKTの活性の抑制、カスパーゼ8の活性化、BAXの活性化、cFLIPの阻害、およびBidの分解からなる群から選択された少なくとも1つの活性の能力を有するかどうかを判定する工程とを含む方法。前記候補化合物がAKTの活性を抑制し得るかどうかの判定が、前記がん細胞を全トランス型レチノイン酸ATRAまたは9-シス-RAで前処理することによりAKTを活性化する工程と、前記候補化合物を投与した後の前記がん細胞におけるAKTのレベルの変化を測定する工程とを含む、請求項9に記載の方法。細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法であって、細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物が切断型RXRαtRXRαタンパク質に選択的に結合し得るかどうかを判定する工程とを含む方法。前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である、請求項11に記載の方法。細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法であって、細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかを判定する工程とを含む方法。前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である、請求項13に記載の方法。前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかの判定が、前記候補化合物により、tRXRαがp85αタンパク質に結合することを妨ぎ得るかどうかの判定を含む、請求項13に記載の方法。前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかの判定が、前記候補化合物により、RXRαがタンパク質修飾を受けることを妨ぎ得るかどうかの判定を含む、請求項13に記載の方法。前記タンパク質修飾がリン酸化を含む、請求項16に記載の方法。前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかの判定が、前記候補化合物により、前記tRXRαタンパク質が核から細胞質に移動することを妨ぎ得るかどうかの判定を含む、請求項13に記載の方法。細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法であって、tRXRαを発現する細胞を特定する工程と、前記細胞を候補化合物と接触させる工程と、前記候補化合物が前記細胞のアポトーシスを誘発するかどうかを判定する工程とを含む方法。前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である、請求項19に記載の方法。前記候補化合物が小分子ライブラリーからの化合物である、請求項19に記載の方法。前記候補化合物がペプチドライブラリーからの化合物である、請求項19に記載の方法。前記細胞が乳房または肝臓からのものである、請求項19に記載の方法。腫瘍の成長を阻害する能力について候補化合物をスクリーニングする方法であって、tRXRαを発現する腫瘍を特定する工程と、前記腫瘍を候補化合物と接触させる工程と、前記候補化合物が前記腫瘍の成長を阻害するかどうかを判定する工程とを含む方法。前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である、請求項24に記載の方法。前記候補化合物が小分子ライブラリーからの化合物である、請求項24に記載の方法。前記候補化合物がペプチドライブラリーからの化合物である、請求項24に記載の方法。前記腫瘍が乳房または肝臓の腫瘍である、請求項24に記載の方法。対象においてがんを予防する方法であって、がんのリスクが一般集団に比べて高まっている対象を特定する工程と、前記対象に、AKTの活性を抑制する薬剤を提供する工程とを含み、前記対象の細胞の表面上で前記薬剤がRXRαに結合する結果、AKT活性が抑制される方法。前記薬剤を投与する前に、前記対象にTNFαを投与し、それによって、前記薬剤によるAKT阻害に対する、前記対象のがん細胞の感受性を高める工程をさらに含む、請求項29に記載の方法。前記薬剤がスリンダクの類似体である、請求項29に記載の方法。前記類似体が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択された化合物である、請求項31に記載の方法。前記類似体がK-80003である、請求項32に記載の方法。哺乳動物においてがんを治療する方法であって、がんに罹患している哺乳動物を特定する工程と、前記哺乳動物に、シクロオキシゲナーゼ-2COX-2経路とは無関係にAKTの活性を抑制することがわかっている薬剤を治療有効量与える工程とを含む方法。前記薬剤を投与する前に、前記哺乳動物にTNFαを投与し、それによって、前記薬剤によるAKT阻害に対する、前記哺乳動物のがん細胞の感受性を高める工程をさらに含む、請求項34に記載の方法。前記薬剤がスリンダクの類似体である、請求項34に記載の方法。前記類似体が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択された化合物である、請求項36に記載の方法。前記類似体がK-80003である、請求項37に記載の方法。前記哺乳動物がヒトである、請求項34に記載の方法。哺乳動物においてがんを予防または治療する方法であって、その必要のある哺乳動物に、式Iの化合物を含む組成物を投与する工程を含む方法[式中、Aは、アリールまたはヘテロアリールであり、Aは、R3、および0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、Bは、アリールまたはヘテロアリールであり、Bは、0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、R1は、CR5R6nCOOHであり、R2は、H、C1~10アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、アルキルO、アルキルS、ハロアルキルO、NH2、およびアルキルNからなる群から選択され、R3およびR4は、H、C1~10アルキル、ハロアルキル、ハロ、CN、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルO、アルキルS、CR4R6nCONR7R8、OH、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルO、およびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、R5およびR6は、H、C1~7アルキル、OH、アルコキシ、シクロアルキルからなる群から独立に選択され、または、一緒になって、シクロアルキル基もしくはヘテロシクリル基を形成しており、nは、0、1、2または3である]。哺乳動物においてがんを予防または治療する方法であって、その必要のある哺乳動物に、式IIの化合物:を含む組成物を投与する工程を含み、前記化合物は、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択される少なくとも一方の特性を示す方法。R1が、CH2COOHおよびCH2CH2COOHからなる群から選択され、R2が、CH3およびHからなる群から選択され、R3が、4-SCH3、4-CH3、4-CH2CH3、および4-CHCH32からなる群から選択された、請求項41に記載の方法。がん細胞においてRXRα選択的な形でアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法であって、がん細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物が、前記がん細胞において、COX-2活性を阻害することなくRXRαに結合し得るかどうかを判定する工程とを含む方法。前記候補化合物がRXRαに結合し得るかどうかの判定が、前記がん細胞におけるRXRαのキモトリプシン消化に対する感受性の変化の検出を含む、請求項43に記載の方法。前記候補化合物がRXRαに結合し得るかどうかの判定が、前記がん細胞における示差走査熱量測定DSCプロファイルの変化の検出を含む、請求項43に記載の方法。式Iの化合物:を含む組成物[式中、Aは、アリールまたはヘテロアリールであり、Aは、R3、および0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、Bは、アリールまたはヘテロアリールであり、Bは、0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、R1は、CR5R6nCOOHであり、R2は、H、C1~10アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、アルキルO、アルキルS、およびハロアルキルOからなる群から選択され、R3およびR4は、H、C1~10アルキル、ハロアルキル、ハロ、CN、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルO、アルキルS、CR4R6nCONR7R8、OH、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルO、およびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、R5およびR6は、H、C1~7アルキル、OH、アルコキシ、シクロアルキルからなる群から独立に選択され、または、一緒になって、シクロアルキル基もしくはヘテロシクリル基を形成しており、nは、0、1、2または3である]。式IIの化合物:を含み、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択される少なくとも一方の特性を示す組成物。式IIの化合物:を含む組成物[式中、R1は、CH2COOHおよびCH2CH2COOHからなる群から選択され、R2は、CH3およびHからなる群から選択され、R3は、4-SCH3、4-CH3、4-CH2CH3、および4-CHCH32からなる群から選択される]。前記組成物が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択された、請求項48に記載の組成物。前記組成物がK-80003である、請求項49に記載の組成物。式IIIの化合物:を含む組成物[式中、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択され、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択され、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される]。式IVの化合物:を含む組成物[式中、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択され、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択され、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される]。式Vの化合物:を含む組成物[式中、R1は、COOH、CH2CH2COOH、CH=CHCOOH、CH2-テトラゾール、CH2-CH2-テトラゾール、CH2COOCH3、CH3、CH2CONH2、CH2CONHCH3、CH2OH、CH2CH2OH、およびCH2NH2からなる群から選択され、R2は、H、Cl、CH2CH3、OCH3、NH2、NHCH3、CF3、CH2NH2、CH2OH、CH2Cl、CHCH32、およびOCH2CH3からなる群から選択され、R3は、H、CH=CH2、CCH、CCH33、CF3、OH、OCH3、OCH2CH3、NH2、NHCH3、CN、NHCOCH3、、およびからなる群から選択され、R4は、H、Cl、CH3、CH2CH3、CHCH32、OCH3、OCHCH3、NH2、およびNHCH3からなる群から選択される]。スリンダクの類似体を含み、前記類似体は、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択された少なくとも一方の特性を示す組成物。3-4-フルオロフェニル-2-メチルアクリル酸;3-4-フルオロフェニル-2-メチルプロパン酸、6-フルオロ-2-メチル-2,3-ジヒドロインデン-1-オン;エチル2-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イルアセテート;Z-2-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;Z-2-3-4-メチルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;Z-2-3-4-エチルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;Z-2-3-4-イソ-プロピルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;エチル2-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルアセテート;E-2-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-3H-インデン-1-イル酢酸;スピロジヒドロ-23Hフラノン-5-1’2’H3’H-6-フルオロ-インダン;メチル3-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルプロパノエート;E-メチル3-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルプロパノエート;K-80003類似体第1号;K-80003類似体第2号;K-80003類似体第3号;K-80003類似体第4号;K-80003類似体第5号;K-80003類似体第6号;K-80003類似体第7号;K-80003類似体第8号;K-80003類似体第9号;K-80003類似体第10号;K-80003類似体第11号;K-80003類似体第12号;K-80003類似体第13号;K-80003類似体第14号;K-80003類似体第15号;K-80003類似体第16号;K-80003類似体第17号;K-80003類似体第18号;K-80003類似体第19号;K-80003類似体第20号;K-80003類似体第21号;K-80003類似体第22号;K-80003類似体第23号;K-80003類似体第24号;K-80003類似体第25号;K-80003類似体第26号;K-80003類似体第27号;K-80003類似体第28号;K-80003類似体第29号;K-80003類似体第30号;K-80003類似体第31号;K-80003類似体第32号;K-80003類似体第33号;およびK-80003類似体第34号からなる群から選択される化合物を含む組成物。諸実施形態は、レチノイド受容体に選択的な経路に関する方法および組成物に関する。一部の実施形態では、この経路をターゲットとして、腫瘍微小環境を操作する。一実施形態では、がん細胞においてアポトーシスを誘発する方法を提供する。たとえば、本明細書に記載の式IIの化合物などの、がんを予防または治療する組成物を提供することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載する、化合物K-80003またはK-80003類似体を含む組成物を、がん治療に使用する。本明細書で示すように、スリンダク硫化物以下では、スリンダクまたはスルジナク硫化物Suldinacsulfideは、臨床的に妥当な濃度で化合物RXRαに結合し、RXRα依存的な形でアポトーシスを誘発しており、RXRαが、スリンダク作用の細胞内ターゲットであることが確認される。同じく本明細書で示すように、スリンダクは、がん細胞において、肝要な生存キナーゼであるAKTプロテインキナーゼBの活性化を強力に阻害する。さらに、N末端切断型RXRαtRXRαは、がん細胞において、生存シグナル伝達を媒介することも示されている。本明細書で示すように、スリンダクは、TNFαと組み合わされると、TNFαが誘発するtRXRα/p85α相互作用を阻害して、この細胞死受容体によって媒介されるアポトーシス経路の活性化をもたらす。さらに、本明細書に記載のとおりに設計および合成したスリンダク類似体K-80003は、COX阻害活性なしに、RXRαに対する親和性が増大しており、動物におけるtRXRα依存的なAKT活性化およびtRXRα腫瘍成長の阻害において、効力が強化されている。本明細書では、がん治療のためにアポトーシス経路をターゲットとする、スリンダクから誘導されたRXRαリガンドについて記載する。一実施形態では、がん細胞において腫瘍壊死因子αTNFα活性を上向き調節し、それによって、がん細胞のAKTの抑制に対する感受性を高める工程と、感受性が高められたがん細胞を化合物と接触させる工程とを含み、ここで、化合物は、レチノイドX受容体αRXRαと相互作用することがわかっており、また化合物は、プロテインキナーゼBAKTの活性を、シクロオキシゲナーゼ-2COX-2経路とは無関係に抑制することがわかっている、がん細胞においてアポトーシスを誘発する方法を提供する。この実施形態の一態様では、TNFα活性の上向き調節は、がん細胞への外因性TNFαの導入を含む。この実施形態の別の態様では、TNFα活性の上向き調節は、がん細胞における内因性TNFαの上向き調節を含む。この実施形態の別の態様では、がん細胞は、肺がん細胞、乳がん細胞、前立腺がん細胞、肝臓がん細胞、および結腸がん細胞からなる群から選択されたがん細胞である。この実施形態の別の態様では、がん細胞は、A549細胞、H460細胞、ZR-75-1細胞、MCF-7細胞、LNCaP細胞、PC3細胞、HepG2細胞、Caco2細胞、およびSW480細胞からなる群から選択されたがん細胞である。この実施形態の別の態様では、候補化合物が、スリンダクの類似体であり、前記類似体は、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択された少なくとも一方の特性を示す。この実施形態の別の態様では、類似体が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択された化合物である。この実施形態の別の態様では、類似体がK-80003である。別の実施形態では、がん細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物が、前記がん細胞におけるAKTの活性の抑制、カスパーゼ8の活性化、BAXの活性化、cFLIPの阻害、およびBidの分解からなる群から選択された少なくとも1つの活性の能力を有するかどうかを判定する工程とを含む、がん細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記候補化合物がAKTの活性を抑制し得るかどうかの判定が、前記がん細胞を全トランス型レチノイン酸ATRAまたは9-シス-RAで前処理することによりAKTを活性化する工程と、前記候補化合物を投与した後の前記がん細胞におけるAKTのレベルの変化を測定する工程とを含む。別の実施形態では、細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物が切断型RXRαtRXRαタンパク質に選択的に結合し得るかどうかを判定する工程とを含む、細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である。別の実施形態では、細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかを判定する工程とを含む、細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかの判定が、前記候補化合物により、tRXRαがp85αタンパク質に結合するのを妨げ得るかどうかの判定を含む。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかの判定が、前記候補化合物により、RXRαがタンパク質修飾を受けるのを妨げ得るかどうかの判定を含む。この実施形態の別の態様では、前記タンパク質修飾がリン酸化を含む。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物がtRXRαタンパク質を調節し得るかどうかの判定が、前記候補化合物により、前記tRXRαタンパク質が核から細胞質に移動するのを妨げ得るかどうかの判定を含む。別の実施形態では、tRXRαを発現する細胞を特定する工程と、前記細胞を候補化合物と接触させる工程と、前記候補化合物が前記細胞のアポトーシスを誘発するかどうかを判定する工程とを含む、細胞においてアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物が小分子ライブラリーからの化合物である。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物がペプチドライブラリーからの化合物である。この実施形態の別の態様では、前記細胞が乳房または肝臓からのものである。別の実施形態では、tRXRαを発現する腫瘍を特定する工程と、前記腫瘍を候補化合物と接触させる工程と、前記候補化合物が前記腫瘍の成長を阻害するかどうかを判定する工程とを含む、腫瘍の成長を阻害する能力について候補化合物をスクリーニングする方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記候補化合物が、ペプチド、タンパク質、核酸、および小分子からなる群から選択された化合物である。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物が小分子ライブラリーからの化合物である。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物がペプチドライブラリーからの化合物である。この実施形態の別の態様では、前記腫瘍が乳房または肝臓の腫瘍である。別の実施形態では、がんのリスクが一般集団に比べて高まっている対象を特定する工程と、前記対象に、AKTの活性を抑制する薬剤を提供する工程とを含み、前記対象の細胞の表面上で前記薬剤がRXRαに結合する結果、AKT活性が抑制される、対象においてがんを予防する方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記薬剤を投与する前に、前記対象にTNFαを投与し、それによって、前記薬剤によるAKT阻害に対する、前記対象のがん細胞の感受性を高める工程をさらに含む。この実施形態の別の態様では、前記薬剤がスリンダクの類似体である。この実施形態の別の態様では、前記類似体が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択された化合物である。この実施形態の別の態様では、前記類似体がK-80003である。別の実施形態では、がんに罹患している哺乳動物を特定する工程と、前記哺乳動物に、シクロオキシゲナーゼ-2COX-2経路とは無関係にAKTの活性を抑制することがわかっている薬剤を治療有効量与える工程とを含む、哺乳動物においてがんを治療する方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記薬剤を投与する前に、前記哺乳動物にTNFαを投与し、それによって、前記薬剤によるAKT阻害に対する、前記哺乳動物のがん細胞の感受性を高める工程をさらに含む。この実施形態の別の態様では、前記薬剤がスリンダクの類似体である。この実施形態の別の態様では、前記類似体が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択された化合物である。この実施形態の別の態様では、前記類似体がK-80003である。この実施形態の別の態様では、前記哺乳動物がヒトである。別の実施形態では、その必要のある哺乳動物に、式Iの化合物[式中、Aは、アリールまたはヘテロアリールであり、Aは、R3、および0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、Bは、アリールまたはヘテロアリールであり、Bは、0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、R1は、CR5R6nCOOHであり、R2は、H、C1~10アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、アルキルO、アルキルS、およびハロアルキルOからなる群から選択され、R3およびR4は、H、C1~10アルキル、ハロアルキル、ハロ、CN、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルO、アルキルS、CR4R6nCONR7R8、OH、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルO、およびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、R5およびR6は、H、C1~7アルキル、OH、アルコキシ、シクロアルキルからなる群から独立に選択され、または一緒になって、シクロアルキル基もしくはヘテロシクリル基を形成しており、nは、0、1、2または3である]を含む組成物を投与する工程を含む、哺乳動物においてがんを予防または治療する方法を提供する。別の実施形態では、その必要のある哺乳動物に、式IIの化合物を含む組成物を投与する工程を含み、前記化合物は、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択された少なくとも一方の特性を示す、哺乳動物においてがんを予防または治療する方法を提供する。この実施形態の一態様では、R1が、CH2COOHおよびCH2CH2COOHからなる群から選択され、R2が、CH3およびHからなる群から選択され、R3が、4-SCH3、4-CH3、4-CH2CH3、および4-CHCH32からなる群から選択される。別の実施形態では、がん細胞に候補化合物を供給する工程と、前記候補化合物が、前記がん細胞において、COX-2活性を阻害することなくRXRαに結合し得るかどうかを判定する工程とを含む、がん細胞においてRXRα選択的な形でアポトーシスを誘発する能力について候補化合物をスクリーニングする方法を提供する。この実施形態の一態様では、前記候補化合物がRXRαに結合し得るかどうかの判定が、前記がん細胞におけるRXRαのキモトリプシン消化に対する感受性の変化の検出を含む。この実施形態の別の態様では、前記候補化合物がRXRαに結合し得るかどうかの判定が、前記がん細胞における示差走査熱量測定DSCプロファイルの変化の検出を含む。別の実施形態では、式Iの化合物[式中、Aは、アリールまたはヘテロアリールであり、Aは、R3、および0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、Bは、アリールまたはヘテロアリールであり、Bは、0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよく、R1は、CR5R6nCOOHであり、R2は、H、C1~10アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、アルキルO、アルキルS、およびハロアルキルOからなる群から選択され、R3およびR4は、H、C1~10アルキル、ハロアルキル、ハロ、CN、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルO、アルキルS、CR4R6nCONR7R8、OH、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルO、およびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択され、R5およびR6は、H、C1~7アルキル、OH、アルコキシ、シクロアルキルからなる群から独立に選択され、または一緒になって、シクロアルキル基もしくはヘテロシクリル基を形成しており、nは、0、1、2または3である]を含む組成物を提供する。別の実施形態では、式IIの化合物を含み、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択された少なくとも一方の特性を示す組成物を提供する。別の実施形態では、式IIの化合物[式中、R1は、CH2COOHおよびCH2CH2COOHからなる群から選択され、R2は、CH3およびHからなる群から選択され、R3は、4-SCH3、4-CH3、4-CH2CH3、および4-CHCH32からなる群から選択される]を含む組成物を提供する。この実施形態の一態様では、前記組成物が、K-80001、K-80002、K-80003、K-80004、およびK-80005からなる群から選択される。この実施形態の別の態様では、前記組成物がK-80003である。別の実施形態では、式IIIの化合物[式中、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択され、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択され、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される]を含む組成物を提供する。別の実施形態では、式IVの化合物[式中、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択され、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択され、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される]を含む組成物を提供する。別の実施形態では、式Vの化合物[式中、R1は、COOH、CH2CH2COOH、CH=CHCOOH、CH2-テトラゾール、CH2-CH2-テトラゾール、CH2COOCH3、CH3、CH2CONH2、CH2CONHCH3、CH2OH、CH2CH2OH、およびCH2NH2からなる群から選択され、R2は、H、Cl、CH2CH3、OCH3、NH2、NHCH3、CF3、CH2NH2、CH2OH、CH2Cl、CHCH32、およびOCH2CH3からなる群から選択され、R3は、H、CH=CH2、CCH、CCH33、CF3、OH、OCH3、OCH2CH3、NH2、NHCH3、CN、NHCOCH3、、およびからなる群から選択され、R4は、H、Cl、CH3、CH2CH3、CHCH32、OCH3、OCHCH3、NH2、およびNHCH3からなる群から選択される]を含む組成物を提供する。別の実施形態では、式IIIの化合物[式中、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択され、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択され、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される]を含む組成物を提供する。別の実施形態では、式IVの化合物[式中、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択され、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択され、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される]を含む組成物を提供する。別の実施形態では、式Vの化合物[式中、R1は、COOH、CH2CH2COOH、CH=CHCOOH、CH2-テトラゾール、CH2-CH2-テトラゾール、CH2COOCH3、CH3、CH2CONH2、CH2CONHCH3、CH2OH、CH2CH2OH、およびCH2NH2からなる群から選択され、R2は、H、Cl、CH2CH3、OCH3、NH2、NHCH3、CF3、CH2NH2、CH2OH、CH2Cl、CHCH32、およびOCH2CH3からなる群から選択され、R3は、H、CH=CH2、CCH、CCH33、CF3、OH、OCH3、OCH2CH3、NH2、NHCH3、CN、NHCOCH3、、およびからなる群から選択され、R4は、H、Cl、CH3、CH2CH3、CHCH32、OCH3、OCHCH3、NH2、およびNHCH3からなる群から選択される]を含む組成物を提供する。別の実施形態では、スリンダクの類似体を含み、前記類似体は、RXRαに結合させたときIC50がスリンダクよりも小さいこと、およびCOX-2に結合させたときIC50がスリンダクよりも大きいことからなる群から選択された少なくとも一方の特性を示す組成物を提供する。別の実施形態では、3-4-フルオロフェニル-2-メチルアクリル酸;3-4-フルオロフェニル-2-メチルプロパン酸、6-フルオロ-2-メチル-2,3-ジヒドロインデン-1-オン;エチル2-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イルアセテート;Z-2-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;Z-2-3-4-メチルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;Z-2-3-4-エチルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;Z-2-3-4-イソ-プロピルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸;エチル2-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルアセテート;E-2-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-3H-インデン-1-イル酢酸;スピロジヒドロ-23Hフラノン-5-1’2’H3’H-6-フルオロ-インダン;メチル3-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルプロパノエート;E-メチル3-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルプロパノエート;K-80003類似体第1号;K-80003類似体第2号;K-80003類似体第3号;K-80003類似体第4号;K-80003類似体第5号;K-80003類似体第6号;K-80003類似体第7号;K-80003類似体第8号;K-80003類似体第9号;K-80003類似体第10号;K-80003類似体第11号;K-80003類似体第12号;K-80003類似体第13号;K-80003類似体第14号;K-80003類似体第15号;K-80003類似体第16号;K-80003類似体第17号;K-80003類似体第18号;K-80003類似体第19号;K-80003類似体第20号;K-80003類似体第21号;K-80003類似体第22号;K-80003類似体第23号;K-80003類似体第24号;K-80003類似体第25号;K-80003類似体第26号;K-80003類似体第27号;K-80003類似体第28号;K-80003類似体第29号;K-80003類似体第30号;K-80003類似体第31号;K-80003類似体第32号;K-80003類似体第33号;およびK-80003類似体第34号からなる群から選択された化合物を含む組成物を提供する。本明細書で開示する種々の実施形態は、一般に、レチノイド受容体に選択的な経路に関する組成物および方法を対象とする。この経路を本明細書に記載のとおりに操作して、がんを治療し、またはがんになるリスクを低減することができる。本明細書で示すように、tRXRαは、細胞質中に構成性に存在し、p85αと相互作用し、AKTを活性化し、足場非依存的な細胞の増殖をもたらす。これらの知見から、がん細胞におけるtRXRαを媒介とする生存経路が明かになり、RXRαおよびそのリガンドのがんにおける役割の新たな見通しが示されている。RXRαのタンパク質プロセシングによるこのようなPI3K/AKT生存経路の活性化は、切断型BidtBidによるアポトーシス経路の活性化および切断型Notchタンパク質によるNotch経路の活性化に類似している。興味深いことに、BidおよびNotchの切断も、RXRα切断での影響と同様に、その細胞内局在を変化させる。RXRαがスリンダク作用の細胞内ターゲットとして働くという発見は、本明細書に記載の、AKT活性を抑制するRXRα選択的なスリンダク誘導体を設計する刺激となった。たとえば、本明細書では、RXRαに対する親和性がより高く、AKTの阻害において効力が強化されているが、COX阻害活性は欠如している、スリンダクから導いたRXRαリガンドのK-80003の設計および合成を示す。加えて、本明細書に記載するように、内因性TNFαの上向き調節および/または外因性TNFαの導入は、反応性を得るためのがん細胞の予備刺激において有用となり得る。一部の実施形態では、組成物は、式Iを有するコア構造を含む。一部の実施形態では、Aは、アリールまたはヘテロアリールであり、任意に、R3、および0、1または2個のR4で置換されていてもよい。一部の実施形態では、Bは、アリールまたはヘテロアリールであり、0、1または2個のR4によって任意に置換されていてもよい。一部の実施形態では、R1は、CR5R6nCOOHである。一部の実施形態では、R2は、H、C1~10アルキル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、アルキルO、アルキルS、ハロアルキルO、NH2、およびアルキルNからなる群から選択される。一部の実施形態では、R3およびR4は、H、C1~10アルキル、ハロアルキル、ハロ、CN、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルO、アルキルS、CR4R6nCONR7R8、OH、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルO、およびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択される。一部の実施形態では、R5およびR6は、H、C1~7アルキル、OH、アルコキシ、およびシクロアルキルからなる群から独立に選択され、または、一緒になってシクロアルキル基もしくはヘテロシクリル基を形成する。一部の実施形態では、nは、0、1、2および3からなる群から選択される。一部の実施形態では、組成物は、式II:を有するコア構造を含む。一部の実施形態では、R1は、CH2COOHおよびCH2CH2COOHからなる群から選択される。一部の実施形態では、R2は、CH3およびHからなる群から選択される。一部の実施形態では、R3は、4-SCH3、4-CH3、4-CH2CH3、および4-CHCH32からなる群から選択される。一部の実施形態では、組成物は、式III:を有するコア構造を含む。一部の実施形態では、n=2である。一部の実施形態では、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択される。一部の実施形態では、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択される。一部の実施形態では、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される。一部の実施形態では、Bおよび/またはDは、ヘテロ環であるたとえば、ヘテロ原子に限定される。一部の実施形態では、式IIIのCOOHが、テトラゾールで置き換えられる。たとえば、一部の実施形態では、組成物は、式IVを有するコア構造を含む。一部の実施形態では、n=2である。一部の実施形態では、R1は、CH3、F、およびClからなる群から選択される。一部の実施形態では、R2は、H、CH3、Cl、およびFからなる群から選択される。一部の実施形態では、R3は、CH3、CH2CH3、CHCH32、CCH33、CH2Cl、OCH3、およびSCH3からなる群から選択される。一部の実施形態では、Bおよび/またはDは、ヘテロ環であるたとえば、ヘテロ原子に限定される。一部の実施形態では、組成物は、式Vを有するコア構造を含む。一部の実施形態では、R1は、COOH、CH2CH2COOH、CH=CHCOOH、CH2-テトラゾール、CH2-CH2-テトラゾール、CH2COOCH3、CH3、CH2CONH2、CH2CONHCH3、CH2OH、CH2CH2OH、およびCH2NH2からなる群から選択される。一部の実施形態では、R2は、H、Cl、CH2CH3、OCH3、NH2、NHCH3、CF3、CH2NH2、CH2OH、CH2Cl、CHCH32、およびOCH2CH3からなる群から選択される。一部の実施形態では、R3は、H、CH=CH2、CCH、CCH33、CF3、OH、OCH3、OCH2CH3、NH2、NHCH3、CN、NHCOCH3、、およびからなる群から選択される。一部の実施形態では、R4は、H、Cl、CH3、CH2CH3、CHCH32、OCH3、OCHCH3、NH2、およびNHCH3からなる群から選択される。さらに、R1~R4は、当業者に知られている任意の他の適切な基であってもよい。一部の実施形態では、組成物は、式VIを有するコア構造を含み、R1は、COOH、CH2CH2COOH、CH=CHCOOH、CH2-テトラゾール、CH2-CH2-テトラゾール、CH2COOCH3、CH3、CH2CONH2、CH2CONHCH3、CH2OH、CH2CH2OH、およびCH2NH2からなる群から選択される。一部の実施形態では、組成物は、式VIIを有するコア構造を含み、R2は、H、Cl、CH2CH3、OCH3、NH2、NHCH3、CF3、CH2NH2、CH2OH、CH2Cl、CHCH32、およびOCH2CH3からなる群から選択される。一部の実施形態では、組成物は、式VIIIを有するコア構造を含み、R3は、H、CH=CH2、CCH、CCH33、CF3、OH、OCH3、OCH2CH3、NH2、NHCH3、CN、NHCOCH3、、およびからなる群から選択される。一部の実施形態では、組成物は、式IXを有するコア構造を含み、R4は、H、Cl、CH3、CH2CH3、CHCH32、OCH3、OCHCH3、NH2、およびNHCH3からなる群から選択される。本発明の一部の実施形態は、実施例16に示し、かつ/または本明細書で別な形で提供する化合物の類似体および誘導体を含めて、式I~IXのいずれかのコア構造を有する、化合物の類似体をさらに提供する。既知の方法を使用して、本明細書に記載の化合物に様々な変更を加えて、類似体を生成してもよいことが理解される。さらに、種々のコア構造のR基は、様々に変えてよいことも理解される。また、本明細書で開示する化合物の類似体は、既知の化学合成法を使用し、構造活性相関SAR研究を実施して、当業者が容易に調製できることも理解される。さらに、当業者であれば、本明細書に記載の方法を使用して、様々な類似体の活性を容易に判定することができる。一部の実施形態では、RXRαに結合した類似体のIC50は、RXRαに結合したときのスリンダクのIC50の約1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、または99である。一部の実施形態では、COX-1に結合した類似体のIC50は、COX-1に結合したときのスリンダクのIC50より約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、または100大きい。一部の実施形態では、COX-1に結合した類似体のIC50は、COX-1に結合したときのスリンダクのIC50の約1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、50倍、100倍、250倍、500倍、または1000倍である。一部の実施形態では、COX-2に結合した類似体のIC50は、COX-2に結合したときのスリンダクのIC50より約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、または100大きい。一部の実施形態では、COX-2に結合した類似体のIC50は、COX-2に結合したときのスリンダクのIC50の約1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、50倍、100倍、250倍、500倍、または1000倍である。以下の定義は、本明細書で本発明を説明するのに使用する種々の用語の意味および範囲を例示および規定するために記載する。本明細書では、アルコキシとは、親分子部分に酸素原子を介して結合しているアルキル基を指す。本明細書では、アルコキシアルキルとは、1個、2個、または3個のアルコキシ基で置換されているアルキル基を指す。本明細書では、アルキルとは、1個~10個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素から誘導された基を指す。本明細書では、アリールとは、フェニル基、または環の一方もしくは両方がフェニル基である二環式縮合環系を指す。二環式縮合環系は、4~6員の芳香環または非芳香族炭素環に縮合したフェニル基からなる。本開示のアリール基は、その基の任意の置換可能な炭素原子を介して親分子部分に結合することができる。アリール基の典型例として、それに限らないが、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニル、およびテトラヒドロナフチルが挙げられる。本明細書では、アリールアルキルとは、1個、2個、または3個のアリール基で置換されているアルキル基を指す。本明細書では、シクロアルキルとは、3個~10個の炭素原子および0個のヘテロ原子を有する単環式または二環式の飽和炭化水素環系を指す。シクロアルキル基の典型例として、それに限らないが、シクロプロピル、シクロブチル、およびシクロペンチルが挙げられる。本明細書では、シクロアルキルアルキルとは、1個、2個、または3個のシクロアルキル基で置換されているアルキル基を指す。本明細書では、ハロおよびハロゲンとは、F、Cl、Br、およびIを指す。本明細書では、ハロアルキルとは、1個、2個、3個、または4個のハロゲン原子で置換されているアルキル基を指す。本明細書では、ヘテロシクリルとは、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択された1個、2個、または3個のヘテロ原子を含む5員、6員、または7員環を指す。5員環は、0個~2個の二重結合を有し、6員環および7員環は、0個~3個の二重結合を有する。用語ヘテロシクリルは、ヘテロシクリル環が、4~6員の芳香環もしくは非芳香族炭素環または別の単環式ヘテロシクリル基に縮合している二環式の基も包含する。本開示のヘテロシクリル基は、その基の炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に結合することができる。ヘテロシクリル基の例として、それらに限らないが、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。本明細書では、薬学的にまたは治療上許容される担体とは、活性成分の生物学的活性の有効性の妨げとならず、宿主または患者に対する毒性が最小限に抑えられている担体媒質を指す。本明細書では、立体異性体とは、分子量、化学組成、および構造は別のものと同じであるが、原子が異なって集まっている化学化合物を指す。すなわち、特定の同一の化学的部分が、空間において異なる配向をとっており、したがって、純粋であるとき、偏光面を回転させる能力を有する。しかし、一部の純粋な立体異性体は、旋光が、本計装では検出不可能なほどかすかである場合がある。本明細書に記載の化合物は、1個または複数の不斉炭素原子を有し、したがって種々の立体異性体を含むことがある。すべての立体異性体が本発明の範囲内に含まれる。本明細書では、AKTの活性を抑制するとは、AKT活性の予防、寛解、消失、または他のいずれかの低減を指す。たとえば、AKTの活性を抑制することとして、AKTの基礎レベルを低下させ、またはAKT活性化を阻害することが挙げられる。本明細書では、治療上または薬学的に有効な量とは、開示する組成物に適用するとき、所望の生物学的成果を引き出すのに十分な組成物の量を指す。その成果は、疾患の徴候、症状、原因の予防、緩和、もしくは寛解、または所望される他のいずれかの生体系の変化でよい。たとえば、成果には、がん性細胞増殖の減少および/または逆転を含めることができる。本明細書では、用語阻害剤は、アンタゴニストを表すのに区別なく使用する。これらの用語は両方とも、特定の酵素活性を低下させ、または前記酵素の基質の活性もしくは機能と競合する能力を有する組成物を規定する。本明細書では、がんおよびがん性とは、哺乳動物における任意の悪性の細胞増殖を指す。本明細書で開示する医薬組成物は、ホルモン不応性前立腺がん、前立腺がん、乳がん、卵巣がん、結腸がん、黒色腫もしくは他の皮膚がん、肺がん、肝臓がん、急性骨髄性白血病、膀胱がん、子宮頚がん、胆管がん、慢性骨髄性白血病、結腸直腸がん、胃肉腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、骨肉腫、膵臓がん、胃がん、または局部の腫瘍手術不能の腫瘍、または腫瘍の局所治療が有益となる腫瘍、および固形腫瘍を含めるを始めとする、当業者に知られている任意の悪性腫瘍の予防および治療に使用することができる。インビボinvivo適用では、所与の細胞傷害性薬物の適切な用量は、その薬剤およびその製剤によりけりであり、投与量および製剤を所与の患者のために最適化することは、十分に当業者の技量の範囲内である。したがって、たとえば、そのような薬剤は、標準の製剤方法を使用して、経口、皮下、非経口、粘膜下、静脈内、または他の適切な経路による投与用に製剤することができる。化合物の有効量および投与方法は、患者の性別、年齢、体重、および疾患段階、投与が治療的であるか予防的であるか、ならびに当業者には明白な他の要素に基づき様々となる。当業者は、たとえば、対象の体重、苦痛の重症度、投与方式、および処方を出す医師の判断に応じて、患者の詳細な状況およびニーズに合わせるべく、適切な投与量および投与スケジュールを導き出すであろう。通常、患者に投与する組成物の用量範囲は、患者の体重1kgあたり約0.5~1000mgとし得る。投与量は、患者の必要に応じて、単回のものでも、または1日またはそれ以上の日程で投与する2回以上の連続したものでもよい。一部の実施形態では、本発明は、類似物について確立されたヒト投与量と同じ投与量、またはその約0.1~500の間、より好ましくは約25~250の間にある投与量を使用する。適切なヒト投与量は、たとえば、動物における毒性および効力研究によって適格とされるような、ED50値もしくはID50値、またはインビトロinvitroもしくはインビボinvivo研究から導かれた他の適切な値から推測することもできる。正確な投与量は、個々の薬物に応じて決定されるものの、ほとんどの場合、投与量に関して多少の一般化を行うことができる。成人患者のための日用投与計画は、たとえば、0.1mg~500mgの間、好ましくは約1mg~約250mgの間、たとえば約150mg~約200mgの経口用量でよい。一部の実施形態では、経口投与剤形は、約5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、または1000mgである。化合物は、継続的な治療の期間、たとえば、1週間以上、または数ヶ月もしくは数年間投与することができる。投与量および投与間隔は、モジュレート効果modulatingeffectを維持するのに十分である、活性部分の血漿レベル、すなわち最小有効濃度MECを得るために、個々に調節することができる。MECは、各化合物で様々となるが、インビトロinvitroデータから推定することができる。MECを実現する投与量は、個体の特徴および投与経路によりけりである。しかし、HPLCアッセイまたは生物検定を使用して、血漿濃度を求めることができる。組成物は、所望であれば、活性成分を含有する1または複数の単位剤形を収容することのできる包装品または分注装置の体裁にすることができる。包装品または分注装置には、投与の説明書を添付することができる。包装品または分注装置には、医薬品の製造、使用、または販売を取り締まる政府機関によって定められた形で容器に添えられた、薬物の形態がヒトまたは動物への投与についてその機関に認可されていることを反映する公告を添付する場合もある。そのような公告は、たとえば、米国食品医薬局によって処方薬用に認可されたラベル、または認可された製品挿入物でよい。本発明の化合物を含む組成物を、適合性のある医薬担体中に製剤化したものを、適応症である状態の治療用に調製し、適切な容器に入れ、ラベルを貼ることもできる。実施例1RXRαに結合するスリンダク競合的リガンド結合アッセイ図1A、およびHEK293T細胞においてRXRα、Nur77、またはRARβに結合するスリンダクのHPLC分析図1Bを行った。RXRαLBDタンパク質を、スリンダクまたは未標識9-シス-RAの存在下または非存在下で[3H]9-シス-RAと共にインキュベートした。結合した[3H]9-シス-RAを、液体シンチレーション計数によって定量化した図1A。C末端側TAPタグに融合したRXRαを安定して発現するHEK293T細胞Stratagene、カリフォルニア州LaJollaを、100μMのスリンダク硫化物で、またはこれなしで3時間処理した。処理後、細胞を精製し、スリンダク硫化物の存在についてHPLCで分析した。スリンダク硫化物の標準溶液を使用して検量線を得た。特徴的なピークスペクトルおよび保持時間を同定に使用し、定量化に使用する最大のピーク面積を算出した図1Bおよび図10。スリンダク硫化物はRXRαに結合し、IC50は、アポトーシスを誘発する濃度範囲にある80μMであった図1A。HPLC分析では、スリンダクはRXRαに直接結合するが、RARやNur77などの、細胞中の他の核内受容体には結合しないことが示された図1Bおよび図10。精製したRARγタンパク質を、スリンダクまたは未標識全トランス型RAの存在下または非存在下で、[3H]全トランス型RAと共にインキュベートした。結合した[3H]全トランス型RAを、液体シンチレーション計数によって定量化した。スリンダクは、図1Bで示した細胞ベースの実験と一致して、RARγに結合しなかった図9A。受容体発現ベクターおよびレポーター遺伝子RXRα/TRαヘテロ二量体図9B用のTREpal2-tk-CAT、および、RXRα/PPARγヘテロ二量体図9C用のDR1tk-CATを、CV-1細胞に一過性に形質移入した。スリンダクの存在下または非存在下で、細胞をリガンドシグリタゾン、106M;T3、107Mで処理し、またはそれなしで処理した。CAT活性を求めた。スリンダクは、RXRα/PPARγヘテロ二量体のトランス活性化を阻害したが、RXR/TRヘテロ二量体の方は阻害しなかった図9B、C。スリンダク100μMによる、RXRαリガンド結合ドメインLBDのキモトリプシンug/mlに対する感受性の変更図1C、および10μMのRXRαLBDまたはNur77タンパク質の非存在下および存在下でのスリンダク100μMの19FNMRスペクトルを比較する、示差走査熱量測定DSC走査データ図1Dも明らかにした。RXRαへの結合は、スリンダクによる、RXRαのキモトリプシン消化に対する感受性の変更図1Cおよび示差走査熱量測定DSC図1Dによって確認した。加えて、SR11237106Mによって活性化されたRXRαトランス活性化の、スリンダクによる阻害も測定した図1F、実施例2参照。Nur77および/またはRXRαを、CV-1細胞に一過性に形質移入した。スリンダクの存在下または非存在下において、細胞をRXR選択的アゴニストであるSR11237106Mで処理し、またはこれなしで処理した。TREpal2-tk-CATZhangら、Nature358、587~5911992a図1EおよびβRARE-tk-CATZhangら、Nature355、441~4461992b図1FCAT活性を明らかにした。レポーターアッセイにおいて、スリンダク結合は、RXRαホモ二量体およびヘテロ二量体トランス活性化を阻害し図1E、F、および図10、スリンダクがRXRα転写アンタゴニストであることが示された。実施例2スリンダクの細胞死効果スリンダクが誘発するアポトーシスにおけるRXRαの役割を明らかにするために、F9細胞およびRXRα欠如F9細胞F9-RXRα-/-におけるスリンダクの細胞死効果を調べた。核形態変化分析に向けて、細胞をトリプシン処理し、PBSで洗浄し、3.7パラホルムアルデヒドで固定し、DAPI4,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール1mg/mlで染色して、核を蛍光顕微鏡で可視化した。核の断片化および/またはクロマチンの凝縮を伴う少なくとも300個のGFP陽性細胞をカウントすることにより、アポトーシス細胞のパーセンテージを求めた。DNA断片化の判定には、CellDeathDetectionELISAPLUSRocheAppliedScience、ドイツ国バイエルン州Penzbergを使用した。RXRαsiRNAsiGENOMESMARpoolM-003443-02、RARγsiRNAsiGENOMESMARpoolM-003439-01、およびsiRNA非特異的対照IXD-001206-09-05をDHARMACONコロラド州Lafayetteから購入した。Oligofectamine試薬Invitrogen、カリフォルニア州カールズバッドを製造者の勧めに従って使用することにより、1ウェルあたり分割量2.5μlの20mMsiRNAを、12ウェルプレートで増殖させた細胞に形質移入した。形質移入してから2日後、ウエスタンブロット法用に細胞を回収した。F9細胞またはRXRα欠如F9細胞F9RXRα-/-をスリンダク75μMで24時間処理し、DAPI染色図2A、ポリADP-リボースポリメラーゼPARP切断図2B、およびDNA断片化図2Cによって分析した。H460肺がん細胞に対照またはRXRαsiRNAを形質移入し、スリンダク75μMで24時間処理し、アポトーシスについてDAPI染色で分析した図2Dおよび2E。CV-1細胞にGFP-RXRα図2FまたはGFP-RXRα/F313S/R316E図2Gを形質移入し、スリンダク75μMで24時間処理し、DAPI染色によって分析した。GFP-RXRαを形質移入した細胞では、広範な核の断片化および凝縮が起こった図2F。受容体を形質移入した細胞において、アポトーシスを記録した図2Gおよび11。RXRαリガンド結合ポケットの崩壊によって、そのホモ二量体トランス活性化が弱められた図11Aおよび11B。RXRαリガンド結合ポケットの崩壊によって、さらに、そのヘテロ二量体トランス活性化も弱められた図11C、11D。RXRα20ng、RXRα/F313S/R316E20ng、β-ガラクトシダーゼ100ng、および/またはNur77100ng発現ベクターを、TREpal2-tk-CAT100ng図11A、11BまたはβRARE-tk-CAT100ng図11C、Dと共に、CV-1細胞に一過性に形質移入した。漸増濃度のスリンダク10、37.575、150300μMの存在下または非存在下において、細胞をSR11237106Mで処理し、またはこれなしで処理した。CAT活性を求めた。スリンダクは、F9細胞において広範なアポトーシスを誘発したが、F9-RXRα-/-細胞においてはほとんど効果を示さなかった図2A~2C。スリンダクのアポトーシス効果は、RXRαsiRNAを形質移入した細胞においても低下したが図2E、RXRαの形質移入によって、その細胞死効果は強化された図2F、G。RXRα/F313S/R316Eは、リガンドが誘発するホモ二量体またはヘテロ二量体トランス活性化に反応せず図11、スリンダクに対するアポトーシス反応の低下を示した図2G。したがって、RXRαは、スリンダクが誘発するアポトーシスに関与することがわかった。HCT116細胞またはBax欠如HCT116細胞Bax-/-を、スリンダク75μMで、またはこれなしで24時間処理した。アポトーシスをPARP切断図2HおよびDAPI染色図2Iによって明らかにした。RXRαsiRNAもしくは対照siRNAを48時間かけて形質移入し、またはこれなしで形質移入したHCT116細胞を、スリンダクで6時間処理し、Baxオリゴマー化図2Jについて、またBax/Δ21、Bax/6A7、または抗Hsp60抗体を使用する免疫染色/共焦点顕微鏡観察によるBax立体構造変化およびミトコンドリア標的化図2Kについて分析した。約60の細胞が、BAX立体構造変化を示した。スリンダクは、HCT116結腸がん細胞においてPARPの切断図2Hおよびアポトーシス図2Iを誘発したが、Bax欠如HCT116細胞Bax-/-では誘発しなかった。HCT116細胞は、COX-2を欠損しているという事実により、スリンダクが誘発するアポトーシスが、COX-2非依存的であり得ることが示された。免疫ブロット法アッセイによって、Baxは、ミトコンドリア上で広範なオリゴマー化を経たが、RXRαsiRNAによって抑止されたことが示された図2J。加えて、抗Bax抗体Bax/Δ21およびBax立体構造に感受性のある抗体Bax/6A7Nechushtanら、BiochemBiophysResCommun254、388~3941999を使用した免疫染色によって、スリンダクが誘発するBax立体構造変化およびミトコンドリア標的化が、RXRαsiRNAによって弱められたことが実証された図2K。総合して、これらの結果は、RXRαが、スリンダクのアポトーシス効果を媒介する細胞内ターゲットとして働く可能性があることを示している。実施例3RXRα突然変異体RXRαに結合するスリンダクの役割に対応するために、RXRαリガンド結合ポケットLBPの機能の完全性の維持に不可欠なアミノ酸Bourguet,W.ら、MolCell52、289~2982000を変えた、RXRα突然変異体RXRα/F313S/R316Eを構築した。Flag-p85αは、順方向プライマー5’ccggaattccatgagtgctgaggggtacc3’および逆方向プライマー5’acgcgtcgactcatcgcctctgctgtgcat3’を使用するポリメラーゼ連鎖反応PCRによって構築した。PCR産物をEcoRIおよびSalIで消化し、pCMV-Flagベクターにクローン化した。RXRα突然変異体は、QUIKCHANGE登録商標突然変異誘発キットStratagene、カリフォルニア州LaJollaを使用し、次のオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いて構築した。RXRα/F313S/R316E、5’GGAACGAGCTGCTGATCGCCTCCTCCTCCCACGAGTCCATAGCTGTGAAAGATGGG順方向-配列番号1および5’CCCATCTTTCACAGCTATGGACTCGTGGGAGGAGGAGGCGATCAGCAGCTCGTTCC逆方向-配列番号2;RXRα/Δ80、5’CCGGAATTCGGaccacacccaccctgggc3’順方向-配列番号3および5’CCGCTCGAGctaagtcatttggtgcggcg3’逆方向-配列番号4;RXRα/Δ100、5’CCGGAATTCGGgtcagcagcagcgaggac3’順方向-配列番号5;および5’CCGCTCGAGctaagtcatttggtgcggcg3’逆方向-配列番号6。PCR産物をEcoRIおよびXhoIで消化し、pCMV-Mycベクターに連結した。RXRα20ng、RXRα/F313S/R316E20ng、β-ガラクトシダーゼ100ng、および/またはNur77100ng発現ベクターを、TREpal2-tk-CAT100ng図11AまたはβRARE-tk-CAT100ng図11Bと共に、CV-1細胞に一過性に形質移入した。細胞をSR11237106Mで、またはこれなしで処理した。CAT活性を求めた。突然変異体は、リガンドが誘発するトランス活性化に反応せず図11、スリンダクに対する反応の低下を示した図2G実施例2参照。実施例4スリンダクによるAKT活性化の阻害AKTがん細胞生存の原因である鍵タンパク質活性化のスリンダクによる阻害を調査した。HepG2、SW480、RAW264.7、HCT116、LNCaP、PC3、ZR-75-1、およびHaCat細胞を一晩栄養欠乏させ、スリンダク100μMで1時間処理し、AKT活性化について免疫ブロット法で分析した図3A。HepG2細胞にはまた、RXRαsiRNAを48時間かけて形質移入し、スリンダク100μMで1時間処理し、AKT活性化およびRXRα発現について免疫ブロット法で分析した図3B。MEFおよびMCF-7細胞を一晩栄養欠乏させ、スリンダクで1時間前処理し、EGF100ng/mlで15分間刺激した。AKT活性化を免疫ブロット法によって分析した図12A。MEFおよびCaco-2細胞を一晩栄養欠乏させ、スリンダクで30分間前処理した後、全トランス型レチノイン酸ATRA107Mに30分間曝し、AKT活性化について分析した図12B。RXRαsiRNAを48時間かけて形質移入した後、9-シス-RA107Mに30分間曝したZR-75-1乳がん細胞におけるAKT活性化も、免疫ブロット法によって分析した図13C。RXRαまたは対照siRNAを形質移入したA549肺がん細胞図3C、ならびに、ZR-75-1およびPC3細胞図3Dを、スリンダク100μMで1時間前処理した後、TNFα10ng/mlに30分間曝し、AKT活性化およびRXRα発現について免疫ブロット法で分析した。基礎AKT活性化のスリンダクによる有意な阻害が、COX-2陰性のSW480およびHCT116結腸がん細胞を始めとする種々のがん細胞系で観察され図3A、COX-2非依存的な機序が示された。スリンダクは、EGFによるAKT活性化を阻害しなかったが、レチノイン酸によるAKT活性化を強力に阻害した。RXRαsiRNAを形質移入すると、スリンダクの効果と同様に、構成性のAKT活性化が有意に低下した図3B。細胞を全トランス型RAATRAで30分間処理すると、AKT活性化が強力に誘発されたが、スリンダクによって用量依存的に図12B、またRXRαsiRNAによって図12C阻害された。スリンダクは、上皮増殖因子が誘発するAKT活性化を阻害しなかったが図12A、レチノイン酸が誘発するAKT活性化を、RXRα依存的な形で強力に阻害した図12B、C。したがって、スリンダクは、RAが誘発する急速なRXRα依存的AKT活性化を妨げることができる。TNFαが誘発するAKT活性化の抑制についてスリンダクを調べた。TNFαは、A549肺がん細胞においてAKTを強力に活性化したが、スリンダクおよびRXRαsiRNAによって強力に阻害され図3C、TNFαによるAKTの活性化がRXRα依存的であることが示唆された。TNFαは、基礎AKT活性化の高い細胞ZR-75-1細胞やPC3細胞などにおいてAKTを活性化せず、またスリンダクは、これら細胞においてAKT活性化に対する阻害効果をほとんど示さなかったが、スリンダクをTNFαと組み合わせると、相乗的に、またほぼ完全に、AKT活性化が阻害された図3D。したがって、TNFαは、スリンダクによるAKT阻害に対するがん細胞の感受性を高めることができ、TNFαは、可能性としてはAKT活性化をRXRα非依存的な形からRXRα依存的な形へと変換することにより、がん細胞のスリンダクに対する反応性を予備刺激し得ることが示唆される。9-シス-RA107Mで30分間処理したMCF-7細胞およびベビーハムスター腎臓BHK細胞を、D20またはΔN197抗RXRα抗体を使用する免疫共沈降によって、RXRα-p85α相互作用について分析した図12D。9-シス-RAおよび/またはスリンダク100μMで30分間処理したH292肺がん細胞を、ΔN197抗体を使用する免疫共沈降によって、RXRα-p85α相互作用について分析した図12E。スリンダクは、EGFによるAKT活性化を阻害しなかったが、レチノイン酸によるAKT活性化を強力に阻害した。さらに、9-シス-レチノイン酸は、tRXRαのp85αとの相互作用を、ΔN197抗RXRα抗体を使用したときには促進したが、D20抗RXRα抗体を使用したときには促進しなかった。実施例5p85αのtRXRαおよびRXRαとの相互作用RXRαのp85αとの相互作用を調べた。抗RXRα抗体SantaCruzBiotechnology、カリフォルニア州サンタクルーズを免疫共沈降Co-IPおよびウエスタンブロット法WBアッセイで使用した。BHK細胞をATRA107Mで30分間処理した。可溶化液を調製し、D20抗RXRα抗体またはΔN197抗RXRα抗体を使用してRXRα-p85α相互作用について分析した図12D。免疫共沈降アッセイによってRXRαのNH2末端側にある配列に対する抗RXRα抗体D20を使用した最初の試みでは、抗体がRXRαタンパク質を有効に免疫沈降させたものの、明確な相互作用が検出されなかった。しかし、RXRαのCOOH末端側のリガンド結合ドメインLBDに対する別の抗RXRα抗体ΔN197を使用したとき、p85αが、TNFα図3EまたはRA図12D、Eに依存的な形で容易に免疫共沈降した。D20抗RXRα抗体は、N末端側のA/Bドメインのアミノ酸2~21を認識し、ΔN197抗RXRα抗体は、C末端側のE/Fドメインを認識するものであった図3E。ΔN197抗RXRα抗体によるp85αの免疫共沈降には、D20RXRα抗体によって検出されなかった切断型RXRαtRXRαの免疫沈降が伴い、切断型RXRαがN末端側の配列を欠いていることが示された図12D。ΔN197抗RXRα抗体を使用すると、p85αのtRXRαおよび/またはRXRαとの相互作用は、TNFαによって強化され、スリンダクによって阻害された図3E。TNFα存在下でのp85αのtRXRαとの相互作用も、スリンダクによって阻害された図12E。これらの結果は、tRXRαがp85αに結合し、AKTを活性化することを示唆するものである。実施例6RXRαのアミノ酸80から100は、p85αへの結合にとって極めて重要である細胞内でのタンパク質切断を調べた。細胞を9-シス-RA107Mで、またはこれなしで30分間処理し、可溶化液を、ΔN197RXRα抗体を使用する免疫ブロット法によって分析した図3F。免疫ブロットにより、RXRαは、異なる細胞内状況および生物学的過程で、そのアミノ末端において切断される場合が多いことが実証された図3F。A549肺がん細胞も、9-シス-RAで、またはこれなしで30分間処理した。核Nuおよび細胞質Cyt画分を、D20またはΔN197抗RXRα抗体を使用する免疫ブロット法によって分析した。調製物の純度を保証するために、画分は、Hsp60細胞質特異的およびPARP核特異的タンパク質の存在に対しても免疫ブロットした図13。MEFにおける内因性RXRαの細胞内局在を、抗RXRαΔN197を使用した免疫染色後の共焦点顕微鏡観察によって可視化した。細胞をDAPIで染色して、核も可視化した図4B。RXRαは、形質膜で見受けられ図4A、上部パネル、一部の細胞において細胞膜上で点状構造を示した図4A、下部パネル。MEFにおける44kDaのtRXRαの産生は、細胞密度によっても調節された図4A。低密度で培養した細胞で観察された44kDaのtRXRαのレベルは、細胞を高密度で増殖させたとき低下し、より小さいRXRα断片の出現を伴った。興味深いことに、44kDaのtRXRαタンパク質のレベルは、AKT活性化と相関しており図4A、RXRαの細胞密度依存的なタンパク質切断が、AKT活性化を調節する重要な機序であるかもしれないことが示唆された。tRXRαの細胞質局在図13と一致して、MEF細胞をΔN197抗RXRα抗体によって免疫染色したとき、RXRαは主として細胞質中に見られた図4B。したがって、RXRαの極めてN末端側の末端配列が欠失すると、その細胞内局在が変更され、p85αと相互作用するその能力が付与され得ることになる。本明細書に記載するように、p85αがtRXRαと免疫共沈降したという知見は、tRXRαがp85αに結合し、tRXRα依存的なAKT活性化をもたらす可能性があることを示唆するものである。MEF細胞を異なる細胞密度で播き、可溶化液を調製し、AKT活性化について免疫ブロット法で分析した。可溶化液は、ΔN197抗RXRα抗体を使用する免疫ブロット法によっても調べた図4A。マウス胚性線維芽細胞MEFにおけるtRXRαのレベルは、細胞密度依存的な形でAKT活性化と相関した図4A。tRXRαの細胞質局在と矛盾せず、MEFは、多くの場合、RXRαの形質膜局在を示した図4B。p85α相互作用およびAKT活性化におけるtRXRαの役割に直接対応するために、そのN末端側の80個のアミノ酸RXRα/Δ80を欠いているRXRα突然変異体を構築し、これによって、内因性tRXRαと類似した分子量のRXRα突然変異体タンパク質が産生された。Mycタグ付きRXRα/Δ80をFlag-p85αと共に細胞に同時形質移入したとき、これらは強力に相互作用し、相互作用は、TNFαによってさらに強化された図5A。対照的に、全長RXRαまたは100個のN末端側アミノ酸を欠いているRXRα突然変異体RXRα/Δ100は、同じ条件下でFlag-p85αと相互作用しなかった。したがって、RXRαのアミノ酸80から100は、p85αへの結合にとって極めて重要である。これを裏付けて、そのLBDRXRα/224~462でなく、RXRαN末端側A/BドメインRXRα/1~134が、p85αと相互作用した図5B。tRXRαの細胞質局在図13と一致して、RXRα/Δ80は、多くが細胞質に存在し、拡散した、時には点状の形質膜局在を示した図5D。RXRα/Δ100でなくRXRα/Δ80を形質移入すると、種々の細胞タイプにおいてAKTも強力に活性化された図5C。RXRα/Δ80免疫複合体をインビトロinvitroでPI3K活性について調べた。Mycタグ付きRXRα/Δ80およびp85αをA549細胞に同時形質移入し、Myc-RXRα/Δ80を含有する複合体を抗Myc抗体によって免疫沈降させ、PI3K活性について検定した。細胞から調製した特異的なMyc-RXRα/Δ80免疫沈降物は、TNFα依存的な形で強力なPI3K活性を示し図5Eおよび15、p85αと相互作用するその能力図5AおよびAKTの活性化図5Cと十分に相関した。したがって、TNFαが誘発するtRXRα/p85α相互作用は、PI3K/AKTシグナル伝達を活性化することがわかった。RXRα/Δ80は、SW480およびHCT116結腸がん細胞において安定に発現され、得られる安定なクローンSW480/RXRα/Δ80およびHCT116/RXRα/Δ80は、AKT活性化の上昇およびその下流ターゲットであるc-MycおよびサイクリンD1の誘導を示した図5F。クローン原性生存アッセイを使用して、SW480/RXRα/Δ80およびHCT116/RXRα/Δ80の増殖を評価した。安定なクローンは、対照細胞よりはるかに多くのコロニーを形成した図5G。RXRα/Δ80ががん細胞の増殖に及ぼす影響を動物において調べた。このために、同じ数のRXRα/Δ80発現細胞または対照細胞を、同じヌードマウスの異なる側腹部に注射し、その増殖を明らかにした。動物において、SW480/RXRα/Δ80およびHCT116/RXRα/Δ80によって形成された腫瘍は、対照細胞によって形成された腫瘍よりもはるかに速く成長した図5H~I。総合して、これらの結果は、N末端切断型RXRαがインビボinvivoでのがん細胞増殖の強力なプロモーターであることを実証するものである。実施例7AKT活性化および細胞形質転換における内因性tRXRα全長RXRαがp85αと相互作用しなかったという知見から、A/Bドメインにあるp85α結合モチーフがRXRαでは遮蔽されることが示唆された。したがって、RXRαのN末端側A/Bドメインは、全長RXRαと相互作用することがあり補足図8a、分子内相互作用が明らかになった。発現ベクターGFP-RXRα/1~134およびMyc-RXRαをHEK293T細胞に形質移入した。相互作用を、抗Myc抗体を使用するCo-IPによって分析した補足図8a。そのN末端においてGFPと融合させた全長RXRαまたはRXRα/1~134、およびそのC末端においてMycエピトープでタグ付けした全長RXRαをHEK293T細胞に同時形質移入した。36時間後、細胞可溶化液を、IPおよび抗Myc抗体でのWBによって分析した。N末端側A/Bドメインは、RXRαに結合した補足図8a。RXRαN末端側断片の発現は、RXRα切断を誘発した補足図8b。RXRα/1~134を全長RXRαと共に形質移入すると、おそらくは競合により分子内相互作用が崩壊する結果としてRXRαN末端にあるタンパク質分解部位が露出するために、tRXRαのレベルが高まった補足図8b。RXRαのN末端領域であるRXRα/1~134を形質移入すると、tRXRαレベルを高めることができた図14。内因性tRXRαの役割を研究するために、RXRα/1~134をHeLa細胞において安定して発現させ、RXRα/1~134を安定して発現させる細胞では、tRXRαタンパク質が有意に増加し、これに伴って内因性全長RXRαタンパク質は減少した図4C。親HeLa細胞と比べて、HeLa/RXRα/1~134安定クローンは、より高いAKT活性化を伴い図4C、軟寒天において急速に増殖し図4D、AKT活性化における内因性tRXRαの役割および細胞形質転換活性が示唆された。コロニー形成アッセイでは、スリンダクは、安定クローンが形成したコロニーを強力に阻害した図4E。tRXRαの臨床的関連性は、乳がん患者からの腫瘍組織中にはtRXRαが存在するが、対応する腫瘍周辺組織および正常組織中には存在しないことによって例証された図4F。同様の結果が肝臓がん患者でも得られた。ヒト肝臓がん検体におけるRXRαの免疫組織化学分析では、腫瘍組織において強い細胞質RXRα染色が明らかになったが、対応する腫瘍周辺組織においては明らかにならなかった図4G。まとめると、これらの結果は、tRXRαが、AKTを活性化することによりがん細胞の増殖および生存の一因となり得ること、ならびにtRXRαによって媒介される活性は、スリンダクによって負に調節できることを実証するものである。実施例8スリンダク類似体の合成RXRαがスリンダク作用の細胞内ターゲットの働きをするという発見は、AKT活性を抑制するためのRXRα選択的なスリンダク誘導体を特定する機会をもたらした。スリンダクのRXRαおよびCOX-2への結合図7A、18Bを比較して、RXRα結合には好都合であるが、COX結合には不都合であるスリンダク類似体を設計した。スリンダク硫化物とインドメタシンとの二次元構造を比較した図18A。COX-2の活性部位において結合したスリンダクとインドメタシンのオーバーレイ画像を作成した図18B。スリンダクは、インドメタシンと同様にCOX-2に結合するように直感的にモデルが作られたものである。類似体を設計し、合成した図19。置換ベンズアルデヒド1を出発材料として使用して、置換インダノン誘導体4を調製した。パーキン反応において、誘導体1を適切な無水物で処理して誘導体2を得、次いでこれを接触水素化によって還元して誘導体3を得た。ポリリン酸PPAを触媒とする分子内のフリーデル-クラフツアシル化によって5員環を閉環して、1-インダノン誘導体4を得た。誘導体4を、酢酸エチルとリチウムヘキサメチルジシリルアミドLHMDSとから発生させたエノレートで処理した後、酸性条件下で脱水すると、所望のアセテート5が得られた。生成したインデン-3-アセテート5を置換ベンズアルデヒドと反応させてクライゼン-シュミット反応、酸性化した後、スリンダク類似体Z-6を得た。スリンダク類似体9の合成の一工程は、1-インダノン誘導体4のアクリル酸メチルとの、二ヨウ化サマリウムSmI2を介した還元カップリングであり、これによってスピロラクトン7が得られた。7のメタノール溶液を触媒量のpara-トルエンスルホン酸p-TsOHで処理すると、脱水生成物8が得られ、これをクライゼン-シュミット反応にかけ、酸性化して、スリンダク類似体9を得た。注目すべきは、化合物5/8のクライゼン-シュミット反応において、R2=CH3であるとき、化合物6/9のシスZ異性体が主に生成し、一方R2=Hである場合、化合物6/9のトランスE異性体が主に生成した。実施例9スリンダク類似体の評価9-シス-RAを基準とした、スリンダクのRXRαLBPへのドッキングを評価して、RXRα結合活性からそのCOX阻害を切り離すための、スリンダクの構造を改変する戦略を割り出した。スリンダクのRXRαへのドッキングを図7Aに示す。ドッキングしたスリンダクの配向および位置を、9-シス-RA、DHA、およびBMS649の結晶構造と比較した図7B。スリンダクは、RXRαLBPにあるArg316と相互作用しながら、そのカルボキシレート基が、調べたすべてのRXRαリガンドで見られるカルボキシレート基と一直線に並んだ方式で結合した図7B。スリンダクのベンジルメチルスルフィド部分は、9-シス-RAのa-イオノン環と一部重なりながら、RXRαLBPの疎水性領域に結合した。この結合方式では、4位にある-SCH3基図7CのRXRαタンパク質とのファンデルワールス相互作用は最適でなく、RXRαへの結合を改善するための改変の余地があった。RXRα選択的類似体の設計に4位を使用する発想は、スリンダクプロドラッグ、スリンダクスルホキシド、および代謝産物のスリンダクスルホンがCOX阻害活性を示さない一方で、代謝産物のスリンダク硫化物本明細書で使用するものが強力なCOX阻害剤であるHaanen、2001という事実によって十分に裏付けられた。図7Aに示すように、スリンダクのカルボキシレート基は、RXRαリガンドのDHA、BMS649、および9-シス-RAにおける同等の基と比べて、Arg316から離れた位置にあった。D位にある-CH2COOHを、-CH2CH2COOHなどのより嵩のある基で置き換えれば、カルボキシレート基をArg316により近づけて配置して、RXRαで、9-シス-RAで観察されたような良好な電荷-電荷相互作用を実現する助けになることになる。候補化合物は、COX-2の結晶構造図18にもドッキングさせて調べて、非COX結合化合物を特定した。これらの検討に基づき、5種の類似体を設計し、合成した図7Cおよび図19。それらを評価すると、すべての類似体がRXRα結合活性を保持していたことが示され、K-80003が、おそらくは4位にあるそのイソプロピルi-Pr基においてRXRαのヘリックス7上の疎水性残基との相互作用が改善されているために、最も強力であったスリンダクの約34倍。意義深いことに、K-80003およびK-80005は、COX活性の検出可能な阻害を伴わず図7C、構成性の、TNFα図7DまたはIL-1β示さないによって誘発されるプロスタグランジンE2PGE2産生を阻害しなかった。K-80003のRXRαへの結合は、19FNMR結合アッセイによっても確認された図7E。したがって、スリンダクのRXRα結合は、そのCOX結合から切り離すことができる。24ウェルプレートにおいて、10ウシ胎児血清を含有するDMEMにA549細胞を播いた。一晩培養した後、血清を含まないDMEM培地において細胞を10ng/mlのIL-1βで24時間刺激した。細胞を、表示する濃度のスリンダクまたは類似体で10分間前処理した後、10μMのアラキドン酸、およびスリンダクまたはその類似体で、37°Cにて30分間同時に処理した。培地を集め、直ちにアッセイにかけた。PGE2産生を、ProstaglandinE2EIAKit-Monoclonalを用い、製造者の説明書に従って測定したCaymanChemical、ミシガン州AnnArbor。PGE2産生は、化合物の存在下で産生されたPGE2の、媒体のみでのPGE2に対する比として示す。類似体を評価すると、それらはすべて、RXRα結合活性を保持していたことが示され、K-80003が、おそらくは4位にあるイソプロピルi-Pr基においてRXRαのヘリックス7上の疎水性残基との相互作用が改善されているために、最も強力であったスリンダクの約34倍図7C。K-80003およびK-80005は、COX活性の検出可能な阻害を伴わず図7C、構成性の、またはTNFα図7DもしくはIL-1β示さないによって誘発されるプロスタグランジンE2PGE2産生を阻害しなかった。K-80003100μMの19FNMRスペクトルを、10μMのRXRαLBDの非存在下と存在下とで比較した図7E。Caco-2およびMEF細胞を、表示する濃度のスリンダクまたはK-80003で30分間処理し、次いで全トランス型RA107Mで15分間刺激した。AKT活性化を免疫ブロット法によって分析した。RXRαまたはRARγsiRNAを形質移入したPC3細胞を、K-8000350μMで1時間前処理した後、TNFα10ng/mlに30分間曝したpRXRα:リン酸化RXRα。A549細胞にFlag-p85αおよびMyc-RXRα/Δ80を形質移入し、スリンダク50μMまたはK-8000350μMで1時間処理し、TNFαに30分間曝し、抗Flag抗体を使用する免疫共沈降によって分析した。K-8000350μMは、ATRAが誘発するAKT活性化図20およびTNFαが誘発するAKT活性化図8A、HeLa/RXRα/1~134安定クローンのコロニー形成図8B、ならびにp85αのRXRα/Δ80との相互作用図8Cの阻害において、スリンダク50μMよりもはるかに有効であった。siRNAによってRXRα発現を減少させることで、PC3細胞におけるAKT活性化に対するK-80003の阻害効果は、大幅に弱まった。比較において、RARα発現がRARαsiRNAによって減少すると、そのような効果は示されなかった。したがって、AKT活性化のK-80003による阻害も、RXRα発現に依存的であった図8B。免疫共沈降アッセイでは、TNFαの非存在下または存在下におけるRXRα/Δ80のp85αとの相互作用が、K-80003によって、スリンダクの効果と比べて強力に阻害されたことが実証された図8C。ZR-75-1細胞をTNFαおよび/またはスリンダク75μMもしくはK-8000350μMで6時間処理し、免疫ブロット法によって分析した。K-80003は、ZR-75-1細胞においてTNFαと共に使用したとき、PARP切断の誘発でもスリンダクより有効であった図8D。スリンダクと同様に、TNFαと組み合わせたK-80003は、HepG2およびPC3細胞において、PARP切断およびカスパーゼ8活性化を相乗的に誘発した図8E。クローン原性生存アッセイでは、HeLa/RXRα/1~134安定クローンおよびRXRα/Δ80安定クローンのコロニー形成が、K-80003によってほぼ完全に抑制され、K-80003の細胞増殖阻害能が明らかになった図8F。K-80003がAKT活性化に与える阻害効果は、RXRαsiRNAによって消失したが、RARγsiRNAでは消失せず図8F、K-80003の効果の媒介におけるRXRαの役割が示唆された。マウスn=6をトウモロコシ油、スリンダク60mg/kg、またはK-8000360mg/kgで2週間腹腔内処置した。腫瘍を取り出し、測定した。意義深いことに、K-80003は、動物におけるRXRα/Δ80腫瘍の成長に対してスリンダクよりはるかに強力な阻害効果を示した図8G。まとめると、RXRα選択的なスリンダク類似体K-80003は、RXRαを媒介とするPI3K/AKTシグナル伝達およびがん細胞増殖の強力な阻害剤である。実施例10哺乳動物におけるスリンダク類似体のスクリーニング一群のスリンダク類似体を選択して、細胞においてアポトーシスを誘発する能力を有する化合物をスクリーニングする。各候補化合物をマウスに導入し、分析して、候補化合物が、細胞においてAKTの活性化を抑制し、カスパーゼ8を活性化し、BAXを活性化し、cFLIPを阻害し、かつ/またはBidを分解し得るかどうかを判定した。スクリーニングの際に特定された化合物は、本明細書で開示するさらなるスクリーニングアッセイまたは治療方法に使用することができる。実施例11ヒト患者においてがんを治療するがんの治療を必要とするヒト患者を特定し、RXRαと相互作用し、COX-2経路と無関係に機能することがわかっている化合物を投与する。化合物を投与した結果としてがんが安定化または改善するかについて患者をモニターする。化合物を投与した後の患者において抗腫瘍性効果が認められる。実施例12ヒト患者においてがんを予防するがんになるリスクが一般集団に比べて高まっているヒト患者を特定し、活性成分のK-80003を含有する150mgの錠剤を1日2回服用するように指示する。患者はモニターされ、化合物投与後にがんにならない。実施例13TNFαが誘導する外因性アポトーシス経路のスリンダクによる活性化1FBSを含有する培地で培養したHepG2細胞をSR112371μMで1時間、次いでTNFα10ng/mlおよび/またはスリンダク75μMで4時間処理し、免疫ブロット法によって分析した。対照またはRXRαsiRNAを形質移入したHepG2細胞をTNFαおよび/またはスリンダクで処理し、免疫ブロット法によって分析した。HepG2肝臓がん細胞図6Aおよび他のがん細胞系図16および図17をスリンダクおよびTNFαで処理すると、PARP切断およびカスパーゼ8活性化カスパーゼ8切断産物であるp43/p41を指標とするが有効に誘発されたが、これらの細胞をスリンダクまたはTNFαのどちらか単独で処理すると、効果がほとんどなかった。スリンダク/TNFαの組合せのアポトーシス効果は、RXRα選択的リガンドのSR11237図6AまたはRXRαsiRNAの形質移入図6Bによって部分的に抑制され、RXRαの役割が重ねて実証された。対照またはカスパーゼ8siRNAを形質移入し、またはZIETD-fmk40μMで1時間前処理したHepG2細胞を、TNFαおよびスリンダクで処理し、免疫ブロット法によって分析した。スリンダク/TNFαが誘発するPARP切断の完全な抑制図6Cおよび16B~C。細胞にカスパーゼ8siRNAを形質移入した場合も同様の結果が得られた図6Dおよび16D。したがって、スリンダク/TNFαが誘発するアポトーシスは、外因性のアポトーシス経路を媒介とする。スリンダクおよびTNFαによるBaxの活性化。TNFαおよび/またはスリンダクで処理したHepG2細胞をBax/6A7抗体で免疫染色した。スリンダク処理細胞では約15、スリンダク/TNFα処理細胞では約60が、Bax染色を示した。Bax活性化をもたらした、外因性アポトーシス経路のスリンダクによる潜在的な活性化も調べた。TNFαもしくはスリンダク単独で、または合わせて処理したHepG2細胞を、立体構造に感受性のあるBax/6A7抗体を使用する免疫染色によって、Bax活性化について調べた。細胞をTNFαとスリンダク両方で処理した場合にだけ、有意なBax染色が観察された図6E。外因性アポトーシス経路と内因性アポトーシス経路のクロストークは、Bidの切断および活性化によって結び付けることができるLiら、Cell944、491~5011998。実際に、Bidは、TNFαおよびスリンダクで処理した細胞で有意に分解され図6A、スリンダク/TNFαが誘発するBax活性化に、Bid活性化が介在している可能性があることが示唆された。CA-AKTまたはDN-AKTを形質移入したPC3細胞を、TNFαおよび/またはスリンダクで処理し、免疫ブロット法によって分析した図6F。カスパーゼ8図6GおよびBax図6HのスリンダクおよびTNFαによる活性化。CA-AKTを形質移入したHepG2細胞をTNFαおよびスリンダクで処理し、抗切断型カスパーゼ8またはBax/6A7抗体で免疫染色した。約80の非形質移入細胞および15のCA-AKT形質移入細胞がカスパーゼ8染色を示した。約60の非形質移入細胞および約13のCA-AKT形質移入細胞がBax染色を示した。スリンダク/TNFαが誘発するPARP切断は、構成的活性型AKTCA-AKTの形質移入によって阻害されたが、ドミナントネガティブAKTDN-AKT図6Fの形質移入によって強化された。スリンダク/TNFαの組合せによるアポトーシスの誘発図17Bならびにカスパーゼ8図6GおよびBax図6Hの活性化は、一貫して、CA-AKTによって阻害された。TNFαおよび/またはスリンダクで6時間処理した細胞を、免疫ブロット法によって分析した図6I。カスパーゼ8活性化を阻害することにより外因性アポトーシス経路の強力な阻害剤として働く、AKTシグナル伝達の下流ターゲット遺伝子であるc-FLIPの発現を調べた。HepG2、A549、およびSW480細胞をTNFαで処理すると、短鎖型c-FLIPSと長鎖型c-FLIPLとの両方のc-FLIPが強力に誘導されたが、スリンダクによって阻害された図6I。したがって、スリンダクは、TNFαがc-FLIP発現に与える誘導効果を抑制することにより、アポトーシスを誘発し得る。実施例14K-80003による乳房腫瘍の成長阻害K-80003の経口投与が、マウスにおけるMCF-7乳房腫瘍組織成長に与える成長阻害効果を調査した。K-80003をNaHCO3に溶解させたpH8.0。MCF-7乳房腫瘍組織を有するマウスに、15mg/kgのK-80003、30mg/kgのK-80003、60mg/kgのK-80003、または対照を、総体積100ulにして、1日1回胃管栄養法によって投与した。20日間にわたり測定した腫瘍体積から、経口K-80003で処置したマウスは、対照で処置したマウスと比べて、腫瘍体積の用量依存的な縮小を見せたことが示された図21A。実施例15K-80003の前臨床研究毒性、生物学的利用能、および薬物動態の調査を含めた、K-80003の前臨床研究を行った。K-80003は、毒性が非常に低く図22A、静脈内製剤と比べて経口での生物学的利用能が高くなっており図22B、PKプロファイルは望ましかった図22C。実施例16類似体の生成3-4-フルオロフェニル-2-メチルアクリル酸2a炭酸カリウム18.2g、132mmolに、0°Cでプロピオン酸無水物31.0mL、242mmolを加えた。5分間撹拌してよく混合した後、p-フルオロベンズアルデヒド1a13.0mL、120mmolを加えた。混合物を160°Cで12時間加熱した。氷浴で冷却した後、反応混合物に水を加えた。得られた黄色の沈殿を濾過し、EtOAcで洗浄して、未精製の酸2aを得、これをそのまま次の工程で使用した。既知のアクリル酸2a40の分析用サンプルを、MeOHから再結晶させて取得した。2a:淡黄色の結晶。融点155158°CIRνmax3429307629721665159615081425131312981224cm11HNMRδ209722711752743769ppm13CNMRδ12711481151131413151321132213751613163751704ppmMSmz1793-4-フルオロフェニル-2-メチルプロパン酸3a未精製アクリル酸2a14.3g、79.4mmolおよび10Pd/C1.35gをメタノール190mLに混ぜた混合物を、20気圧の水素中で10時間水素化した。触媒を濾別し、濾液を濃縮して未精製の3aを得、これをそのまま次の工程で使用した。化合物3a40の分析用サンプルを、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:PE、1:2によって取得した。3a:無色の油状物。IRνmax340629722933170115601509146014061223cm11HNMRδ117277261302700693716711ppm13CNMRδ164384414115111511303130413451346160416281826ppmMSmz1816-フルオロ-2-メチル-2,3-ジヒドロインデン-1-オン4a未精製のプロパン酸誘導体3a3.20gとポリリン酸47.0gの混合物を80°Cで4時間加熱した。得られる混合物を氷水中に注ぎ、EtOAcで抽出した。抽出物を合わせてNaHCO3飽和水溶液で洗浄して、出発材料の酸を除去し、次いでブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:PE、1:30によって精製して、化合物4a40を淡黄色の油状物1.44g、50として得た。NaHCO3層を濃HClで酸性化し、EtOAc3×30mLで抽出した。抽出物を合わせてブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、回収された出発材料3a34を得た。4aについてのデータ:IRνmax30642968293228731716161115091486144412641158cm11HNMRδ132282265337733726744736ppm13CNMRδ162344429763109710991222122512781279138114881496161116362085ppmMSmz187エチル2-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イルアセテート5aHMDS15.0mL、56.9mmolを無水THF38.0mLに溶かした0°Cの溶液に、n-BuLi2.5Mのn-ヘキサン溶液、17.0mL、42.8mmolを滴下した。約30分間撹拌した後、混合物を-78°Cに冷却し、EtOAc4.20mL、42.8mmolを加えた。混合物を-78°Cでもう30分間撹拌した。得られる混合物に、インデノン4aの無水THF溶液40mLを滴下した。混合物を-78°Cでもう4時間撹拌し、次いでNH4Cl飽和水溶液で失活させた。混合物をEtOAc3×20mLで抽出した。有機層を合わせて無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣にHOAc/H2SO410/1、55mLを加えた。室温で5時間撹拌した後、混合物をCH2Cl23×15mLで抽出した。抽出物を合わせて水、飽和NaHCO3、およびブラインで続けて洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:PE、1:30によって精製して、化合物5a40を無色の油状物3.26g、70として得た。IRνmax298129111736161415901473136813291308125611541034cm11HNMRδ125212329348414679696725ppm13CNMRδ1411433154216091056105911021104123612371296129613721372144614781479161216361707ppmMSmz257Z-2-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸スリンダク硫化物6aインデン5a650mg、3mmolのMeOH4.6mL溶液に、室温で2NNaOMe4.6mL、9mmolを加えて、橙色の混合物を得た。20分間撹拌した後、混合物にp-メチルチオベンズアルデヒド0.8mL、7.5mmolを加えた。得られる混合物を80°Cで3.5時間還流させた。減圧下で濃縮した後、残渣を1NHCl溶液中に注いだ。室温でもう10時間撹拌した後、混合物をEtOAc3×15mLで抽出した。有機層を合わせて無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー酢酸エチル:PE、1:2.5によって精製して、主としてシスZ異性体の6aスリンダク硫化物40を黄色の固体868mg、85として得た。トランスE異性体は、約2得られた。融点182185°C融点180184°CIRνmax3445301229142850170216021589146514101320124011711085cm11HNMRδ2152543576776717017257461240ppm13CNMRδ107147315106110641106110812341235125813001303131013211326138513951395139514721473161516161721ppmMSmz331スリンダク硫化物6aについて記載した手順に従い、インデン5aを適切な芳香族アルデヒドと縮合させることにより、化合物K-80001~K-80003をそれぞれ合成した。Z-2-3-4-メチルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸6bK-80001黄色の固体。融点155158°C収率87IRνmax34263022295929151733171716551599151214701408138112141172cm11HNMRδ219241358659653687744716ppm13CNMRδ10612143297331441055410577110481107112373123831292112932129781298012984129871310013102133481382913895139761461314622161841642917668ppmMSmz363元素分析C20H17FO2の計算値C7790H556実測値C7788H599Z-2-3-4-エチルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸6cK-80002黄色の固体。融点159162°C収率83IRνmax308230242965292317051604147314651413131212291168cm11HNMRδ129220271359660654688719744ppm13CNMRδ106154287314105510571105110712371238128012941297129913101337138913971446161816421764ppmMSmz345元素分析C21H19FO2の計算値C7824H594実測値C7821H555Z-2-3-4-イソ-プロピルベンジリデン-6-フルオロ-2-メチル-3H-インデン-1-イル酢酸6dK-80003黄色の固体。融点146149°C収率79IRνmax3025295828711701162916031507146414121315129311711134cm11HNMRδ1312220297235966168871974613CNMRδ10623931334076710551057110511071237123812651294129712981310133713901396146114621493161816421761ppmMSmz359元素分析C22H21FO2の計算値C7855H629実測値C7813H602エチル2-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルアセテート5bイソプロピルアミン0.27mL、2mmolを無水THF4mLに溶かした0°Cの溶液に、n-BuLi2.5Mのn-ヘキサン溶液、0.8mL、2mmolを滴下した。約30分間撹拌した後、混合物を-78°Cに冷却し、EtOAc0.2mL、2mmolを加えた。-78°Cでもう30分間撹拌した後、インデノン4b150mg、1mmolを含有する無水THF0.7mLを滴下した。混合物を-78°Cでもう2時間撹拌し、次いで飽和NH4Clで失活させた。混合物をEtOAc3×5mLで抽出した。有機層を合わせて無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をAcOH/H2SO410/1、3mLで溶かした。室温で3時間撹拌した後、混合物をCH2Cl23×5mLで抽出した。抽出物を合わせて水、飽和NaHCO3、およびブラインで続けて洗浄した。有機相を無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:PE、1:30によって精製して、5bを無色の油状物99mg、49として得た。IRνmax30542982293117041636148614461369134512881276cm11HNMRδ128335356419652693736ppm13CNMRδ14234137461010641067111411161243124413411363136413921393146314641611163517072ppm元素分析C13HFOの計算値C7090H595実測値C7130H623E-2-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-3H-インデン-1-イル酢酸6eK-80004インデン誘導体5b506mg、2.50mmolのMeOH4mL溶液に、室温で2NNaOMe4mL、4mmolを加えた。20分間撹拌した後、得られる混合物に、p-メチルチオベンズアルデヒド0.65mL、2.50mmolを加えた。混合物を80°Cで3.5時間還流させた。得られる溶液を減圧下で濃縮し、次いで1NHCl中に注いだ。室温で10時間撹拌した後、混合物をEtOAc3×10mLで抽出した。有機層を合わせて無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー酢酸エチル:PE、1:2.5によって精製して、トランスE異性体の6eK-80004を黄色の固体429mg、48として得た。融点180182°C1HNMRδ2543697097841252ppm13CNMRδ136115511571273131713181399161516391740ppm元素分析C19H15FO2Sの計算値C6992H463F582O980S982実測値C7016H492スピロジヒドロ-23Hフラノン-5-1’2’H3’H-6-フルオロ-インダン7a6-フルオロ-1-インダノン4b75.0mg、0.50mmol、イソプロパノール0.190mL、2.50mmol、およびアクリル酸メチル0.45mL、5mmolをTHF10mLに溶かした溶液を、アルゴンで20分間パージし、0°Cに冷却した。Sml21.50mmolのTHF15mL溶液を、トランスファーニードルで加えた。5分後、飽和K2CO32mLで反応を失活させた。得られる混合物をEtOAc3×3mLで抽出した。有機相を合わせてブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、EtOAc-PE1:6を溶離液とするシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物7a74.5mg、0.37mmol、73を無色の油状物として得た。IRνmax3058294528561766160314941155cm11HNMRδ22825227728129030030969670371872313CNMRδ2872953333949411097116612621388144716221760ppm元素分析C12H11FO2の計算値C6989H538実測値C6997H562メチル3-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルプロパノエート8aスピロジヒドロ-23Hフラノン-5-1’2’H3’H-6-フルオロ-インダン7a61mg、3mmolのCH3OH1.5mL溶液に、p-TsOH6mgを加えた。混合物を2時間還流させた。NaHCO3の飽和水溶液2.0mLで反応を失活させた。得られる混合物をEtOAc3×2mLで抽出した。有機相を合わせてブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、EtOAc-PE1:300を溶離液とするシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物8a61mg、0.28mmol、94を淡黄色の油状物として得た。IRνmax29592901173915851606147312541162cm11HNMRδ26827328228832833137163068369170270673373813CNMRδ229324373517106011141244130313951424146916241734ppm元素分析C13H13FO2の計算値C7090H595実測値C7050H597E-メチル3-3-4-メチルチオベンジリデン-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルプロパノエート9aK-80005メチル3-6-フルオロ-3H-インデン-1-イルプロパノエート8a110mg、0.5mmolのCH3OH1mL溶液を、窒素で10分間パージし、0°Cに冷却した。新たに調製したCH3ONa0.75mmol含有CH3OH1mLを滴下した。30分間撹拌した後、4-メチルチオベンズアルデヒド63μL、0.6mmolを滴下した。混合物を2時間還流させた。冷却した後、水3mLで反応を失活させ、室温で10分間撹拌した。混合物を1MHClで酸性化してpH=4とした。減圧下で溶媒を除去し、残渣をEtOAc3×5mLで抽出した。有機層を合わせてブライン2mLで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、EtOAc-PE1:4を溶離液とするシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、トランスE異性体の9a112mg、66を黄色の固体として得た。融点182184°CIRνmax3055298829251711164014881445165612901277cm11HNMRδ253268284696784122113CNMRδ143226320106111151205122612581273130413281341136413941432146316221738ppm元素分析C20H17FO2Sの計算値C7057H503S942実測値C7020H462S901K-80003類似体第1号R1変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第2号R1変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第3号R1変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第4号R1変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第5号R1変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第6号R1変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第7号R1変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第8号R2変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第9号R2変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第10号R2変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第11号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第12号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第13号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第14号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第15号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第16号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第17号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第18号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第19号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第20号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第21号R3変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第22号R4変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第23号R4変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第24号R4変形形態、黄色の固体:K-80003類似体第25号R1変形形態:K-80003類似体第26号R1変形形態:K-80003類似体第27号R3変形形態:R3=2-CNである。K-80003類似体第28号R3変形形態:R3=2-CF3である。K-80003類似体第29号R3変形形態:R3=である。K-80003類似体第30号R3変形形態:R3=である。K-80003類似体第31号R4変形形態:R4=Etである。K-80003類似体第32号R4変形形態:R4=EtOである。K-80003類似体第33号R4変形形態:R4=i-Prである。K-80003類似体第34号R4変形形態:R4=Clである。方法の概略プラスミドRXRαおよびMyc-RXRαの構築については、記載されているKolluri,S.K.ら、ProcNatlAcadSciUSA1027、2525~25302005;Cao,X.ら、RetinoidXreceptorregulatesNur77/TR3-dependentapoptosis[corrected]bymodulatingitsnuclearexportandmitochondrialtargeting.MolCellBiol2422、9705~97252004;Masia,S.ら、Rapid,nongenomicactionsofretinoicacidonphosphatidylinositol-3-kinasesignalingpathwaymediatedbytheretinoicacidreceptor.MolEndocrinol2110、2391~24022007;Ohashi,E.ら、CancerRes698、3443~34502009;Balkwill,F.、NatRevCancer95、361~3712009;Han,Y.H.ら、Oncogene2521、2974~29862006。Flag-p85αは、順方向プライマー5’ccggaattccatgagtgctgaggggtacc3’および逆方向プライマー5’acgcgtcgactcatcgcctctgctgtgcat3’を使用するポリメラーゼ連鎖反応PCRによって構築した。PCR産物をEcoRIおよびSalIで消化し、pCMV-Flagベクターにクローン化した。RXRα突然変異体は、QUIKCHANGE登録商標突然変異誘発キットStratagene、カリフォルニア州LaJollaを使用し、次のオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いて構築した。RXRα/F313S/R316E、5’GGAACGAGCTGCTGATCGCCTCCTCCTCCCACGAGTCCATAGCTGTGAAAGATGGG順方向-配列番号1および5’CCCATCTTTCACAGCTATGGACTCGTGGGAGGAGGAGGCGATCAGCAGCTCGTTCC逆方向-配列番号2;RXRα/Δ80、5’CCGGAATTCGGaccacacccaccctgggc3’順方向-配列番号3および5’CCGCTCGAGctaagtcatttggtgcggcg3’逆方向-配列番号4;RXRα/Δ100、5’CCGGAATTCGGgtcagcagcagcgaggac3’順方向-配列番号5および5’CCGCTCGAGctaagtcatttggtgcggcg3’逆方向-配列番号6。PCR産物をEcoRIおよびXhoIで消化し、pCMV-Mycベクターに連結した。細胞培養ZR-75-1ヒト乳がん、LNCaPおよびPC3前立腺がん、ならびにH460肺がん細胞は、10ウシ胎児血清FBSを補充したRPMI1640で培養した。HepG2肝臓がんおよびMCF-7ヒトがん細胞は、10FBSを含有するMEMで維持した。HEK293Tヒト胚性腎細胞、CV-1ミドリザル腎臓細胞、MEF細胞、A549ヒト肺がん細胞、HaCatヒトケラチノサイト細胞、BHKベビーハムスター腎臓細胞、Caco2ヒト結腸がん癌腫細胞、SW480ヒト結腸腺癌細胞、およびHCT116ヒト結腸細胞は、10FBSを補充したDMEMで維持した。F9ネズミ胎児性癌細胞系は、両方の対立遺伝子がRXRα崩壊型であったClifford,J.ら、EmboJ1516、4142~41551996。細胞培養物は、5CO2加湿雰囲気中にて37°Cで維持した。抗体および試薬抗ホスホAktSer473、D9E、4060は、セルシグナリングテクノロジーマサチューセッツ州ダンヴァーズからのものであった。抗β-アクチン抗体A1978および抗Flag抗体M2、F3165は、シグマ-アルドリッチミズーリ州セントルイスから入手した。抗p85α06~195抗体は、ミリポアマサチューセッツ州ビルリカから購入した。Akt1C-20sc-1618、GFPB-2sc-9996、HSP60N-20sc-1052、c-Myc9E10sc-40PI3、RARγC-19sc-550、RXRαD20sc-553、RXRαΔN197sc-774、PARPH-250sc-7150の抗体は、サンタクルーズバイオテクノロジーカリフォルニア州サンタクルーズからのものであった。ECL、抗ウサギおよび抗マウスIgG、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合種特異的抗体は、GEヘルスケア英国バッキンガムシア州リトルチャルフォントからのものであった。アレクサフルオル登録商標594ヤギ抗ウサギIgGA-11012およびアレクサフルオル登録商標488ヤギ抗マウスIgGA-10667は、インビトロジェンカリフォルニア州カールズバッドから購入した。プロテインA/Gプラス-アガロースsc-2003は、サンタクルーズバイオテクノロジーカリフォルニア州サンタクルーズからのものであった。リコンビナントヒトTNFα210-TAは、RDシステムズミネソタ州ミネアポリスからのものであった。プロテアーゼインヒビターカクテルタブレッツは、ロッシュスイス国バーゼルからのものであった。9-シス-レチノイン酸9-シス-RAR4643。スリンダク硫化物およびその類似体は、ジメチルスルホキシドDMSOに溶解させて100mMの保存液とした。全トランス型レチノイン酸ATRAR2625およびキモトリプシンは、Sigma-Aldrichミズーリ州セントルイスからのものであった。SR11237は、マルシアI.ドーソンMarciaI.Dawson博士バーナムインスティテュートの厚意により提供を受けた。リガンド結合アッセイ細菌中で発現させたHisタグ付きRXRαリガンド結合ドメインLBDaa223~462を、リガンド結合アッセイ緩衝液中にて、様々な濃度の未標識9-シス-RAまたはスリンダク硫化物の存在下または非存在下で[3H]-9-シス-RAアマシャムバイオサイエンス、英国アマシャムと共にインキュベートした。RXRαLBDタンパク質を、ニッケルコーティングされたビーズによって捕捉した。結合された放射標識9-シス-RAを、記載されているとおりにシンチレーションカウンターで定量したKolluri,S.K.ら、ProcNatlAcadSciUSA1027、2525~25302005。細胞中のRXRαタンパク質に結合するスリンダク硫化物のHPLC分析C末端TAP融合物ストラタジーン、カリフォルニア州ラホ-ヤに融合させた受容体を含む発現ベクターを、FuGene6形質移入試薬ロッシュ、スイス国バーゼルを使用して、HEK293細胞に形質移入した。10の仔ウシ血清SCS、ユタ州ハイクロンローガン、2mMのグルタミン、ペニシリン100U/ml、およびストレプトマイシン100μg/mlを補充した完全培地DMEMメディアテックInc.、バージニア州ハーンドンにおいて、細胞を指数増殖で維持した。形質移入後2日目に、細胞を、400mg/mlのG418を含有する培地に入れ替えて、形質移入後20日目に達したとき、薬物耐性コロニーについてシャーレの記録をつけた。RXRα融合タンパク質の発現を、免疫ブロット法によって明らかにした。細胞を4枚の150mmプレートにおいて集密に増殖させ、引き続いて100mMのスリンダク硫化物で、またはこれなしで3時間処理した。処理後、細胞を50mlの冷PBSで2回洗浄し、ストレプトアビジンベースの精製を、ストレプトアビジンビーズを、提供されたストレプトアビジン結合緩衝液で最初に洗浄するまでは、インタープレイ商標ママリアンTAPシステムストラトジーン、カリフォルニア州ラホーヤマニュアルに記載のとおりに実施した。次いで0.1ml分の希硫酸溶液pH2を加えた後、1.0mlのアセトニトリルを加えた。次いで、サンプルをボルテックスミキサーで30秒間ボルテックス撹拌し、引き続いて遠心分離した1000g×5分。次いで液体サンプルを第2の試験管に移し、窒素流中で蒸発乾燥させた。残渣を0.12mlのクロマトグラフィー用移動相に溶解し直し、0.1ml分をHPLCに注入した。HPLC分析は、ミクロソーブ-mv100~3C18100×4.6カラムバリアン、カリフォルニア州パロアルトを使用して実施した。移動相は、1.0ml/分の流量でポンプ注入される4v/v酢酸水溶液とアセトニトリル30:70からなるものとした。スリンダク硫化物の検出は、フォトアレイ検出装置Watersmodel2996、ウォーターズ社、マサチューセッツ州ミルフォードを使用して実施し、これにより200~450nMの間のスペクトルを収集した。スリンダク硫化物の標準液を使用して検量線を得た。同定には特徴的なピークスペクトルおよび保持時間を使用し、定量化に使用する4maxのピーク面積を、ミレニアムクロマトグラフィマネージャーソフトウェアウォーターズ社、マサチューセッツ州ミルフォードを使用して算出した。同様の3通りの実験の1つを示した。タンパク質分解保護アッセイウサギ網状赤血球可溶化液Promega、ウィスコンシン州フィッチバーグを使用するインビボinvitro転写-翻訳によって、以前に記載されているとおりにRXRαLBDを合成したKolluri,S.K.ら、ProcNatlAcadSciUSA1027、2525~25302005;Zhang,X.K.ら、Nature3556359、441~4461992;Zhang,X.-K.ら、Nature.3586387、587~5911992。インビトロinvitro翻訳された35[S]メチオニン標識RXRα-LBDを、溶媒1DMSO、スリンダク100μM、または9-シス-RA107Mと共に30分間プレインキュベートし、次いで示した濃度のキモトリプシンで消化した。消化された断片をPAGEによって分離した。一過性形質転換アッセイ24ウェルプレートに播いた細胞1×105細胞/ウェルに、変法のリン酸カルシウム沈殿手順を使用して、記載されているとおりに一過性に形質移入したKolluri,S.K.ら、ProcNatlAcadSciUSA1027、2525~25302005;Cao,X.,ら、MolCellBiol2422、9705~97252004。アポトーシスアッセイ核形態変化分析に向けて、細胞をトリプシン処理し、PBSで洗浄し、3.7パラホルムアルデヒドで固定し、DAPI4,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール1mg/mlで染色して、核を蛍光顕微鏡で可視化したMasia,S.ら、Rapid,nongenomicactionsofretinoicacidonphosphatidylinositol-3-kinasesignalingpathwaymediatedbytheretinoicacidreceptor.MolEndocrinol2110、2391~24022007;Ohashi,E.ら、CancerRes698、3443~34502009;Balkwill,F.、NatRevCancer95、361~3712009。核の断片化および/またはクロマチンの凝縮を伴う少なくとも300個のGFP陽性細胞をカウントすることにより、アポトーシス細胞のパーセンテージを求めた。DNA断片化の判定には、セルデスディテクションELISAPLUSロシュアプライドサイエンス、ドイツ国バイエルン州ペンツブルクを使用した。同様の3通りの実験の1つを示した。RXRαおよびRARγsiRNARXRαsiRNAsiGENOMESMARpoolM-003443~02、RARγsiRNAsiGENOMESMARpoolM-003439~01、およびsiRNA非特異的対照IXD-001206~09-05をダルマコロンコロラド州ラファイエットから購入した。オリゴフェクトアミン試薬インビトロジェン、カリフォルニア州カールズバッドを製造者の勧めに従って使用することにより、1ウェルあたり分割量2.5μlの20mMsiRNAを、12ウェルプレートで増殖させた細胞に形質移入した。形質移入してから2日後、ウエスタンブロット法用に細胞を回収した。免疫ブロット法免疫ブロット法については、細胞可溶化液をSDSサンプル緩衝液中で煮沸し、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離し、ニトロセルロースに移した。移した後、抗体を含む5乳含有TBST10mMのTris-HCl、pH.8.0、150mMのNaCl、0.05のTween20で膜をブロックした。次いで膜をTBSTで3回洗浄し、次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合抗免疫グロブリンを含む5乳含有TBST中にて室温で1時間インキュベートした。免疫共沈降CoIPアッセイCoIPアッセイについては、細胞、または示した発現ベクターを形質移入した細胞を、溶解緩衝液50mMのTris-HCI、pH7.4;150mMのNaCl;20mMのEDTA;1のNP-40;1mMのPMSF;50mg/mlのロイペプチン;20mg/mlのアプロチニン;0.1mMのNa3VO4;および1mMのDTTに懸濁させた。プロテインA/Gプラスアガロースビーズサンタクルーズバイオテクノロジー、カリフォルニア州サンタクルーズと共にインキュベートして細胞抽出物を清澄にし、次いで適切な抗体および30mlのプロテインAまたはGプラスアガロースビーズと共に4°Cで一晩インキュベートした。次いでレムリゲル添加液においてビーズを洗浄および煮沸した後、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を使用してSDS-PAGE/免疫ブロット法を実施した。強化型化学発光系ECL商標アマシャムバイオサイエンス、英国アマシャムを用い、化学発光によって免疫反応産物を検出した。HeLa-RXRα/1~134安定クローンおよび軟寒天アッセイRXRαN末端側断片1~134を、pNTAPベクターストラトジーン、カリフォルニア州ラホーヤにクローン化した。得られるpNTAP-RXRα/1~134をHeLa細胞に形質移入した。形質移入から48時間後、細胞を400mg/mlのG418で2週間かけて選択した。単一クローンを取り出し、免疫ブロット法によって調べた。HeLaRXR/α1~134安定クローン、および対照pNTAPベクターを形質移入したHeLa細胞を、10FBSおよび0.35アガロースを0.5床寒天と共に補充したDMEMに5×103細胞/ウェル6ウェルプレートで播いた。37°Cで12日間インキュベートした後、コロニーを0.005クリスタルバイオレットで1時間染色し、カウントした。コロニー形成アッセイHeLaRXR/α1~134安定クローンおよび対照HeLa細胞を、6ウェルプレートに350細胞/ウェルで播いた。5日後、細胞を、0.5血清培地中のスリンダク50μMおよびK-8000325μMで3日間処理した。PBSで洗浄した後、細胞をPBS中4パラホルムアルデヒドで20分間かけて固定した。コロニーを0.1クリスタルバイオレットで30分間染色し、写真を撮り、コロニーをカウントした。ヒト組織および評価乳房および肝臓腫瘍組織ならびにこれらの周囲組織を、がん患者からの外科的切除によって取得した。組織学的正常検体は、腫瘍小結節から少なくとも約3~5cm離れたものとしたが、対応する患者から取得した。当研究は、生物医学研究倫理委員会に対してシアメンユニバーシティインスティテュートが認可しており、患者は全員、説明を受けた上で同意した。RXRαの発現を検出するために、原発性肝細胞癌HCC、n=6または乳がんn=6患者からの組織を集めた。免疫ブロット法アッセイに向けて、腫瘍およびその周囲組織を別個に調製し、変更型RIPA緩衝液に溶解させた。可溶化液を8SDS-PAGEゲル上で電気泳動にかけ、PVDF膜に移した。膜は、引き続いて、ΔN197抗RXRα抗体1:1000と共に4°Cで一晩、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合抗ウサギIgG抗体1:5000と共に室温で1時間インキュベートし、強化型化学発光ECL商標アマシャムバイオサイエンス、英国アマシャムによって検出した。はがしたブロットを、負荷対照についてモノクローナル抗GAPDH抗体1:2000で探索し直した。免疫組織化学分析については、組織切片をΔN197抗RXRα抗体1:500と共に4°Cで一晩インキュベートし、ヤギ抗ウサギ特異的免疫グロブリン1:100を用いて室温で30分間検出した。スライドをヘマトキシリンで対比染色した。共焦点顕微鏡観察Mycタグ付きRXRα/Δ80およびFlagタグ付きp85αを形質移入した細胞を、一晩チャンバースライドに播いておいた。細胞を、3.7パラホルムアルデヒドを含有するPBSで10分間固定し、PBSで2回洗浄した。次いで細胞を、PBS中0.1のTritonX-100で5分間透過処理した。固定された細胞を、5BSAを含有するPBS中にて室温で30分間プレインキュベートした。細胞を、ポリクローナル抗Myc抗体1:500希釈および抗Flag抗体1:500希釈に続いて、Cy3結合抗ウサギIgG1:1000、シグマ-アルドリッチ、ミズーリ州セントルイスまたはFITC標識抗マウスIgG1:500、シグマ-アルドリッチ、ミズーリ州セントルイスで染色した。原稿において示す共焦点顕微鏡観察データは、少なくとも3通りの同様の実験を代表するものである。細胞成分分画細胞成分分画は、それほど変更せずに記載されているとおりに実施したCao,X.,ら、MolCellBiol2422、9705~97252004;Ohashi,E.ら、CancerRes698、3443~34502009。簡潔に述べると、0.5mlの低張性緩衝液250mMのスクロース、20mMのHEPES-KOH、pH7.4、10mMのKCl、10mMのMgCl2、0.5mMのEGTA、1.5mMのEDTA、pH8.0、および1mMのDTTにプロテイナーゼ阻害剤と共に懸濁させた細胞1×107細胞をホモジナイズし、細胞抽出物を800×gで10分間遠心分離した。核を含むペレットを、200μlの1.6Mスクロースを含有するプロテアーゼ阻害剤を加えた低張性緩衝液に再懸濁し、2.0Mのスクロースを含有する同じ緩衝液1mlをかけ、次いで4°Cで90分間150,000×gで遠心分離して、核画分を得た。上清を4°Cで30分間10,000×gで遠心分離して、細胞質画分を得た。核画分および細胞質画分を100μlの溶解緩衝液10mMのTris、pH7.4、150mMのNaCl、1のTritonX-100、5mMのEDTA、pH8.0にプロテイナーゼ阻害剤カクテルと共に再懸濁して、免疫ブロット法分析に備えた。COXアッセイCOX蛍光活性FluorescentActivityアッセイキット700200、COX蛍光阻害FluorescentInhibitorスクリーニングアッセイキット700100、およびプロスタグランジンE2エンザイムイムノアッセイEIAキット514010を、ケイマンケミカルミシガン州アナーバーから入手した。COX-1およびCOX-2活性アッセイは、製造者のプロトコールに従って実施した。化学合成1HNMRおよび13CNMRスペクトルは、ブルカーAV400分光計ドイツ国ブレーメン州で記録した。1HNMRスペクトルは、示した溶媒中で記録したものであり、化学シフトは、内部Me4Siを基準とした百万分率δで表示する。IRスペクトルは、ニコレットアベーターNicoletAvatar360FT-IR分光光度計サーモフィッシャーサイエンティフィック、マサチューセッツ州ウォルサムで記録した。質量スペクトルは、ブルカーダルトンエスクワイア3000プラスESI直接注入ドイツ国ブレーメン州で記録した。元素分析は、VarioRL分析装置を使用して行った。融点は、X-4マイクロメルティングポイント装置で決定し、補正はしていない。この研究で使用した6-フルオロ-1-インダノン4bは、市販されている。テトラヒドロフランは、使用前にナトリウムベンゾフェノンケチルから蒸留した。ジクロロメタンは、五酸化リンから蒸留した。メタノールは、マグネシウム旋削くずおよびヨウ素から蒸留した。ヤンタイシリカゲル工場中国のシリカゲルzhifu、300~400メッシュを、別段記載しない限り酢酸エチル/石油エーテルPE60~90°C混合物またはジクロロメタン/メタノールを溶離液とするカラムクロマトグラフィーに使用した。本発明について、明確にし、理解してもらう目的で多少詳しく記載してきたが、当業者であれば、本発明の真の範囲から逸脱することなく、形態および細部に様々な変更を施してよいことを理解するであろう。本明細書で言及するすべての図、表、特許、特許出願、および刊行物は、その全体が参照により本明細書に援用される。"