"核酸を含有する試料溶液から核酸を分離する方法であって、以下のステップ:a.核酸と結合することができる固相、及びエチレン-アミン化合物を含む結合混合物と、前記試料溶液とを接触させ;b.前記核酸が前記固相と結合し得る条件下、前記固相を含有する前記試料溶液をインキュベートし;そしてc.前記溶液から前記固相を分離することを含む、前記方法。前記固相に結合した核酸を洗浄することをさらに含む、請求項1に記載の方法。前記固相から核酸を溶出することをさらに含む、請求項1に記載の方法。前記試料溶液が細胞の溶解によって得られる、請求項1に記載の方法。前記試料溶液が、バチルス属Bacillus、クロストリジウム属Clostridium、スタヒロコッカス属Staphylococcus、ストレプトコッカス属Streptococcus、エンテロコッカス属Enterococcus、マイコバクテリウム属Mycobacterium、及びそれらの組み合わせから成る群から選択されるグラム陽性細菌の溶解によって得られる、請求項4に記載の方法。ステップaにおける前記結合混合物が、金属イオンをさらに含む、請求項1に記載の方法。ステップaにおける前記結合混合物が、マグネシウムイオン又はマンガンイオンを含む、請求項6に記載の方法。ステップaにおける前記結合混合物が、アルカリ金属の水酸化物及び洗剤をさらに含む、請求項1に記載の方法。ステップaにおける前記結合混合物が、溶液150mMNaOH、1TritonX-100、1mMEDTA、0.05NaN3、pH12及び溶液210~65mMエチレン-アミン、200mMTris、5~25mMMgCl2、0.05NaN3、pH7.5の、等しい体積での混合物を含む、請求項8に記載の方法。核酸と結合することができる前記固相が、磁性コア、及びシリカを含む外層を有する粒子を含む、請求項1に記載の方法。固相を使用して試料から核酸を分離するための反応混合物であって:核酸と結合することができる固相、及びエチレン-アミン化合物を含む、前記反応混合物。アルカリ金属の水酸化物及び洗剤をさらに含む、請求項11に記載の反応混合物。金属イオンをさらに含む、請求項11に記載の反応混合物。マグネシウムイオン又はマンガンイオンを含む、請求項13に記載の反応混合物。核酸と結合することができる前記固相が、磁性コア、及びシリカを含む外層を有する粒子を含む、請求項11に記載の反応混合物。固相を使用して試料から核酸を分離するためのキットであって:核酸と結合することができる固相、及びエチレン-アミン化合物を含む、前記キット。溶解試薬、中和試薬、洗浄試薬及び溶出試薬の1つ又は2つ以上をさらに含む、請求項16に記載のキット。核酸と結合することができる前記固相が、磁性コア、及びシリカを含む外層を有する粒子を含む、請求項16に記載のキット。前記溶解試薬がアルカリ金属の水酸化物及び洗剤を含み、中和試薬がエチレン-アミン化合物、マグネシウムイオン又はマンガンイオン、及び緩衝液を含む、請求項16に記載のキット。発明の詳細な説明定義本明細書において、用語エチレン-アミン化合物は、一般式NH2-CH2=CH2n-NH2式中、nは1~10又はそれ以上であるを有する分子のことである。本発明において有用であるエチレン-アミン化合物は、限定されないが、エチレン-ジアミンEDA、ジエチレン-トリアミンDETA、トリエチレン-テトラミンTETA、テトラエチレン-ペンタミンTEPA及びペンタエチレン-ヘキサミンPEHAを含む。当業者であれば、他のエチレン-アミン化合物が本発明に有用であると認識し得る。本明細書において、用語試料は、対象物質、例えば核酸を含有する混合物又は溶液のことである。当該試料は、固体又は液体組織、体液、真核細胞植物、真菌、動物又はヒト細胞を含むの培養液若しくは懸濁物、原核細胞細菌細胞を含むの培養液若しくは懸濁物を含み得る。当該試料はウィルスを含んでもよい。当該試料はまた、対象物質を含む無細胞の溶液を含んでもよい。試料の性質に応じて、試料からの対象物質の単離を容易とするための化学的若しくは物理的処理をそれは必要としてもよい。例えば試料は、細胞区画及び細胞内区画から核酸を放出させるための処理を必要としてもよい。本明細書において、生物学的試料の成分なる用語は、分子の1分類のこと例えばタンパク質、核酸などであるか、又は検出が望まれる特定の標的、例えば特定のタンパク質又は核酸配列のことである。本明細書において、用語核酸は、デオキシリボヌクレオチド2-デオキシ-D-リボースを含むのポリマーすなわちDNA、ポリリボヌクレオチドD-リボースを含むすなわちRNA、並びに他の、プリン若しくはピリミジン塩基、又は修飾プリン若しくはピリミジン塩基、又はそれらの組み合わせのN-グリコシド類縁体のことである。本発明の方法において、核酸は磁性ガラス粒子を使用して試料から単離され、ここで核酸の磁性ガラス粒子への結合は、1又は2以上のエチレン-アミン化合物の存在によって向上される。幾つかの実施形態において、当該試料は全細胞を含む。細胞区画及び細胞内区画から核酸を放出させるために、細胞膜及び、存在する場合には細胞壁を破壊するために適した溶解試薬を使用して、細胞は溶解される。細胞及び組織を破壊する種々の方法が当技術分野で既知である。SambrookRussell,MolecularCloning,ALaboratoryManual第3版,2001に、多くの方法が参照され、記載されている。幾つかの実施形態において、試料はグラム陽性細菌を含有する。強い化学塩基例えば水酸化アルカリ、洗剤及び塩を含み、かつpHが12超である溶解試薬を使用して、グラム陽性細菌は溶解される。幾つかの実施形態において、グラム陽性細菌を含有する試料は、80°C~100°Cで、通常95°Cで加熱され、そして5~30分間、通常約15分間インキュベートされる。本発明において、細胞区画及び細胞内区画から放出された核酸を含有する試料は、核酸が磁性ガラス粒子と結合するために適した条件下で、磁性ガラス粒子と接触される。結合混合物へのエチレン-アミン化合物の添加によって、磁性ガラス粒子表面への核酸の結合の効率が大きく増加することが発見された。この現象は、高いpHで特に利益がある。結合効率は、結合混合物中における金属塩、例えばマグネシウム塩若しくはマンガン塩、例えば塩化物塩若しくは酢酸塩の存在によってさらに増大する。幾つかの実施形態において、エチレン-アミン化合物の濃度は10~65mM、例えば16mMである。結合ステップの後に、結合された核酸を有する磁性ガラス粒子は、エチレン-アミン化合物を含有する溶液から分離され得る。磁性ガラス粒子の大きさ及び種類に依存して、当該粒子はインキュベーション期の間に液体から分離されるか、又はインキュベーション後に懸濁液中に残存して更なる分離を必要とする。分離ステップが必要である場合、結合された核酸を有する粒子は、磁場の適用によって試料溶液から分離される。例えば磁性ガラス粒子は、インキュベーションが行われた試料容器の壁へと引っ張られ得るか、又は当該容器の底へと引っ張られ得る。試料中に存在する、任意の未結合の物質及び混入物を含有する液体はその後、ピペッティング又はアスピレーションにより試料容器から除去され得る。結合した核酸を有する磁性ガラス粒子は、1又は2回以上、1又は2以上の洗浄溶液を用いて場合により洗浄されてもよい。洗浄溶液は、核酸の磁性粒子表面からの放出を引き起こさないが、核酸又は磁性ガラス粒子になおも結合している所望ではない混入物を洗い流す組成を有する。幾つかの実施形態において、最初の洗浄溶液はアルコール、例えばエタノール又はイソプロパノールを含む。当該洗浄溶液はまた、カオトロピック塩及び緩衝液を含んでもよい。幾つかの実施形態において、その後に続く洗浄溶液はアルコールを含まないが、塩、緩衝液を含み、及び場合により保存剤を含む。この洗浄ステップは、洗浄溶液を核酸が結合している磁性ガラス粒子と共にインキュベートすることにより行われてもよい。当該磁性粒子は、洗浄液体との最大接触が達成されるために、このステップの間に再度懸濁されてもよい。汚れた洗浄溶液をその後試料容器から除去する。最後の洗浄ステップの後、結合した核酸を有する磁性ガラス粒子が真空中で短時間乾燥され得るか、又は残余の洗浄液体が留去され得る。所望であれば、核酸は磁性粒子から分離され得、場合により、当該磁性粒子を残したまま当該粒子を含有する容器から除去され得る。核酸は、低い塩含量の緩衝液を使用して磁性ガラス粒子から溶出され得る。幾つかの実施形態において、溶出緩衝液はTrisを含む。場合により、溶出緩衝液は保存剤及びヌクレアーゼ阻害剤、例えばEDTAのようなキレート剤を含有してもよい。他の実施形態において、溶出緩衝液は保存剤を含有する水か、又は含有しない水である。幾つかの実施形態において、核酸は下流応用の間、磁性粒子と結合されたままであってもよい例えば、米国特許出願第20040014070号を参照。他の実施形態において、核酸は磁性ガラス粒子から除去されるが、当該粒子は下流応用のために核酸と共に容器中に残存したままである。例えば、米国特許出願第20040014070号明細書は、ゾル-ゲル法によって製造される磁性ガラス粒子は、PCRによる核酸の増幅の効率を向上させることを教示している。他の例において、核酸は、溶出後に磁性ガラス粒子から分離されてもよい。典型的には、核酸を含有する溶液は、磁性ガラス粒子を含有する容器から除去される。幾つかの実施形態において、核酸を単離する方法は、単離された標的核酸の増幅及び検出をさらに含む。例えば、増幅及び検出はPCRを使用して行われる。PrinciplesandApplicationsforDNAAmplificationed.H.A.Erlich,FreemanPress,NewYork,N.Y.,1992;PCRProtocols:AGuidetoMethodsandApplicationseds.Innis,etal.,AcademicPress,SanDiego,Calif.,1990を参照のこと。増幅及び検出は、リガーゼ連鎖反応LCR米国特許第5,185,243号、第5,679,524号及び第5,573,907号明細書を通じて、又は任意の他の適切な核酸増幅技術を通じて行われてもよい。任意の下流における分析が、本発明の単離法と適合可能であるが、本発明の溶解溶液及び結合溶液の組成は、下流のPCR応用と特に適合性がある。リアルタイムPCRアッセイにおいて、標識されたプローブによって生じるシグナルは、投入された標的核酸の量と比例する。投入量が多いほど、より速く蛍光シグナルが既定の閾値Ctと交差する。したがって、試料を互いに比較することによって、又は既知の核酸量を有する対照試料と比較することによって、標的核酸の相対量又は絶対量が決定され得る。別の実施形態において、本発明は核酸を単離するための反応混合物である。反応混合物は:溶解試薬;1又は2以上の洗剤を含む試薬;エチレン-アミン化合物;及び場合により金属塩、例えばマグネシウム若しくはマンガン塩;1若しくは2以上の保存剤;及び/又は1若しくは2以上のキレート剤を含む。幾つかの実施形態において、溶解試薬は12以上のpH値を有する。幾つかの実施形態において、反応混合物中の溶解試薬は、1又は2以上の洗剤を1~10の濃度で、1又は2以上のEDTAのようなキレート剤を0.5~2mMの濃度で、1又は2以上のアジ化ナトリウムのような保存剤を0.01~0.1の濃度で、エチレン-アミン化合物を10~65mMの濃度で、及び金属塩、例えばマグネシウム塩若しくはマンガン塩、例えば塩化物塩若しくは酢酸塩を5~25mMの濃度で含む。幾つかの実施形態において、反応混合物は、単離されるべき核酸を含む試料をさらに含有する。幾つかの場合において、当該試料は溶解されたグラム陽性細菌を核酸源として含む。さらに他の実施形態において、反応混合物は磁性ガラス粒子を含む。幾つかの場合において、米国特許第6,870,047号明細書及びその中で引用された参考文献中に記載されたゾル-ゲル法によって当該粒子は製造される。さらに別の実施形態において、本発明は、磁性ガラス粒子を使用して核酸を単離するためのキットである。当該キットは:溶解試薬;1又は2以上の洗剤を含む試薬;及び場合により1又は2以上の保存剤;エチレン-アミン化合物;並びに場合により、マグネシウム塩又はマンガン塩を含む。幾つかの実施形態において、溶解試薬、エチレン-アミン化合物及び、マグネシウム塩又はマンガン塩は、分離したコンテナで提供される。幾つかの実施形態において、溶解試薬は12以上のpHを有してもよい。幾つかの実施形態において、キット中に含まれる溶解試薬は、1又は2以上の洗剤を1~10の濃度で、1又は2以上のEDTAのようなキレート剤を0.5~2mMの濃度で、1又は2以上のアジ化ナトリウムのような保存剤を0.01~0.1の濃度で、エチレン-アミン化合物を10~65mMの濃度で、及び金属塩、例えばマグネシウム塩若しくはマンガン塩、例えば塩化物塩若しくは酢酸塩を5~25mMの濃度で含む。当該キットは、磁性ガラス粒子をさらに含んでもよい。磁性ガラス粒子は、溶解試薬中に組み込まれてもよく、キット中の分離したコンテナ中に存在してもよい。磁性ガラス粒子が分離した容器中に存在するとき、当該粒子はアルコール、例えばイソプロパノール中で懸濁されてもよい。幾つかの場合において、本発明のキットに含まれる磁性粒子は、米国特許第6,870,047号明細書及びその中で引用された参考文献中に記載されたゾル-ゲル法によって製造される。幾つかの実施形態において、キットは中和試薬、洗浄試薬及び溶出試薬を場合により含む。中和試薬は、緩衝液、塩及び保存剤を含んでもよく、pH6~8であってもよく、最も好ましくはpH7.5であってもよい。幾つかの実施形態において、緩衝液はTrisであってもよく、塩は塩化マグネシウムであってもよく、そして保存剤はアジ化ナトリウムであってもよい。洗浄試薬はアルコールを含有してもよい。溶出試薬は緩衝剤及び保存剤を含んでもよく、pH8.5であってもよい。実施例本発明の範囲を限定するものではなく、説明のみのために、マイコバクテリウムツベルクローシスMycobacteriumtuberculosisMTBからの核酸の単離に本発明が適用された。実施例1:溶解のために、100μLのマイコバクテリウムツベルクローシスMTB細胞懸濁物、又は同量のMTBDNAを含む試料の67mMホスフェートpH6.8溶液を、400μlの溶解試薬50mMNaOH、1TritonX-100、1mMEDTA、0.05NaN3、pH12と混合し、15分間95°Cでインキュベートした。その後、400μLの中和試薬8~64mMエチレン-アミン、200mMTris、8~23mMMgCl2又はMgOAc2、0.05NaN3、pH7.5を加えた。その後、100μLの磁性ガラス粒子RocheMolecularSystems,Inc.,Branchburg,N.J.を加え、そして当該試料を5~30分間室温若しくは37°Cでインキュベートした。磁性ガラス粒子をその後、上清を除去することによって分離し、7.5mMクエン酸ナトリウム二水和物、0.05w/vMIT、pH4.1で2回洗浄した。50~100μLの溶出試薬30mMTris、pH8.5、0.2w/v4-ヒドロキシ安息香酸メチルメチルパラベン、0.09NaN3を用いて核酸を溶出させた。溶解後の手順を、手動で、又はHamiltonStar装置HamiltonRobotics,Inc.,Reno,Nev.によって自動的に行った。50μLの溶出液、及び50μLの以下のものを含むマスター混合物を用いたリアルタイムPCRとしても知られる定量的PCRによって、単離された核酸を試験した:154mMトリシン、110mM水酸化カリウム、190mM酢酸カリウム、19グリセロールv/v、2.3DMSO、1.16mMdATP、1.16mMdCTP、1.16mMdGTP、1.16mMdUTP、上流及び下流プライマー、標的プローブ、内部対照プローブ、DNAポリメラーゼ、ウラシル-N-DNAグリコシラーゼ、0.09アジ化ナトリウムw/v、pH8.50、及び20コピー/反応の内部対照DNA。COBAS登録商標TAQMAN登録商標48アナライザーにおける増幅条件は以下の通りであった:5分、50°C、その後2サイクルの98°C、20秒、61°C秒及び70°C秒、その後55サイクルの95°C、25秒、61°C40秒、及び70°C20秒。サイクル閾値cycles-to-thresholdCt試料からの蛍光がバックグラウンドの蛍光を超え、したがって閾値を横切る、サイクル数として、結果を表現する。Ctは、核酸鋳型の開始量を反映する。より低いCt値は、反応における核酸鋳型のより多くの開始量を示すが、より高いCt値は、反応における核酸鋳型のより少ない開始量を示す。表1~3は、本発明の方法を使用して単離された核酸を含む、各々のPCR反応に関するCt値を示す。固相担体、例えば磁性ガラス粒子を使用する核酸の回収を、エチレン-アミン化合物が改善することを、当該結果は実証している。当該改善は、金属塩、例えばマグネシウム塩若しくはマンガン塩、例えば塩化物塩若しくは酢酸塩の存在によってさらに高められる。本発明は、具体例に関して詳細に記載されたが、種々の改変が本発明の範囲内でなされ得ることは当業者にとって明らかである。したがって、本発明の範囲は本明細書に記載された実施例によって限定されるべきではなく、以下に記載された特許請求の範囲によって限定されるべきである。"