機能的なチラコイドを含む光合成細胞抽出物の有効量および許容される担体を含み、任意選択によって日焼け止めをさらに含む、化粧用組成物。抽出物が、組成物の合計重量をベースにして約001から約01の量で存在する、請求項1に記載の組成物。局所適用用に製剤化されている、請求項1に記載の組成物。皮下適用用に製剤化されている、請求項1に記載の組成物。担体が、脂肪、乳化剤、共乳化剤、親水性または親油性のゲル化剤、親水性または親油性の有効成分、保存剤、抗酸化剤、溶媒、香料、充填剤、親水性または親油性のフィルタ、色素、中和剤、浸透促進剤、およびポリマーからなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。抽出物が凍結乾燥されておらず、液体組成物中に製剤化されている、請求項1に記載の組成物。抽出物が、水中に、局所投与に適合する生理食塩水もしくは任意の他の溶液中に、プロピレングリコール中に、または固体組成物中に再構成される凍結乾燥抽出物である、請求項1に記載の組成物。皮膚におけるしわの数および深さの低減、皮膚の弾性の増大、皮膚の水和作用の増大、およびこれらの組合せからなる群から選択される、皮膚の美的外観の改善のための、請求項1から7のいずれか一項に記載の組成物の有効量の使用。紫外線照射によって引き起こされる酸化損傷からの皮膚の長期間の保護を提供するための、請求項1から7のいずれか一項に記載の組成物の有効量の使用。紫外線照射によって損傷された皮膚を処置するための、請求項1から7のいずれか一項に記載の組成物の有効量の使用。UV照射がUVA照射である、請求項9または10に記載の使用。UV照射がUVB照射である、請求項9または10に記載の使用。酸化損傷が脂質過酸化である、請求項9に記載の使用。酸化損傷が赤血球溶血である、請求項9に記載の使用。酸化損傷がDNA損傷である、請求項9に記載の使用。皮膚の美的外観の改善のための化粧用組成物を調製するための光合成細胞抽出物の使用であって、改善が、皮膚におけるしわの数および深さの低減、皮膚の弾性の増大、皮膚の水和作用の増大、およびこれらの組合せからなる群から選択され、抽出物が機能的なチラコイドを含む、使用。紫外線照射によって誘発される酸化損傷からの、皮膚に対する長期間の保護を提供するための、化粧用組成物の調製のための光合成細胞抽出物の使用であって、抽出物が機能的なチラコイドを含み、組成物が日焼け止めを含む、使用。紫外線によって損傷された皮膚を処置するための化粧用組成物の調製のための、光合成細胞抽出物の使用であって、抽出物が機能的なチラコイドを含む、使用。UV照射がUVA照射である、請求項17または18に記載の使用。UV照射がUVB照射である、請求項17または18に記載の使用。酸化損傷が脂質過酸化である、請求項17に記載の使用。酸化損傷が赤血球溶血である、請求項17に記載の使用。機能的なチラコイド系を含む光合成細胞抽出物の有効量を含み、使用者の皮膚に対して抗しわ効果および抗加齢効果を有する、化粧用および局所用組成物が必要とされている。紫外線Aおよび紫外線Bの損傷から皮膚の長期の保護をもたらすのに有効な量の光合成細胞抽出物を含む化粧用および局所用組成物も必要とされている。本発明は、光合成細胞抽出物に対する、すなわち、使用者の皮膚のハリおよび水和作用を増大するための、ならびに使用者の皮膚をUVAおよびUVBの損傷から保護するための抗加齢および抗酸化の適用における、光合成細胞抽出物を含む化粧用組成物における新たな使用を提供する。本発明は、光合成細胞抽出物を含む化粧用組成物の局所的適用、または皮下適用によるしわの化粧的処置にも関する。本発明は、UVAまたはUVBの照射によって誘発される組織およびDNAの損傷に対する光合成細胞抽出物の使用、ならびに光合成細胞抽出物および局所投与用の賦形剤を含む組成物にも関する。本発明者らは、光合成細胞抽出物と、UVAおよびUVBの損傷から皮膚を保護するための日焼け止めとの両方を組み合わせることによって得られる驚くべき相乗効果を発見した。さらに、本発明者らは、光合成細胞抽出物を局所用組成物に加えると、UVAおよびUVB損傷から皮膚を保護する組成物の能力が延長されることを発見した。抽出物を含むクリーム製剤は、抽出物を含まない製剤に比べて、UV照射による脂質過酸化から保護し、赤血球溶血から保護することが見出されている。光合成細胞抽出物は、ROSによって産生される有害なエネルギーを継続的に捕捉し、散逸させる能力を有する、独特な天然抗酸化複合体を含んでいる。したがって、抽出物は、ROSを捕捉し、ROSによって産生される有害なエネルギーを散逸させることによってROSを中和し、サイクルを何度も繰り返す準備ができているその最初の状態に戻すことができる。前例のない、持続性の抗酸化保護を有する抽出物を提供するのは、このダイナミズムおよび再生する能力である。本発明による組成物は、局所適用用に通常用いられる薬剤形態全てにおいて調製され、具体化され得る。さらに、組成物は、脂肪、乳化剤および共乳化剤、親水性または親油性のゲル化剤、親水性または親油性の有効成分、保存剤、抗酸化剤、溶媒、香料、充填剤、親水性または親油性のフィルタ、色素、中和剤、浸透促進剤、およびポリマーなど、化粧分野および皮膚科学分野における通常の添加剤を含むことができる。抽出物は、液体組成物において、水中に、局所投与に適合する生理食塩水もしくは任意の他の溶液中に、プロピレングリコール中に、または固体組成物中に再構成される凍結乾燥抽出物において製剤化されてよい。UVAおよびUVBの損傷から皮膚を保護するための抽出物の使用本発明にしたがって、抽出物001を含むもの、および抽出物01を含むものの、2つの局所用組成物を開発した。UVAおよびUVB照射の人工光源、ならびに2つの濃度の抽出物を含む局所用組成物、およびいかなる抽出物も含まない局所用組成物を用いて、本発明者らは、非保護のEHSと比べた場合の、人工ヒト皮膚における形態学的変化、CPD形成、およびDNA損傷を評価した。形態学的分析は、抽出物は、UVAの構造的損傷からEHSの保護をもたらすことを示していた。本発明者らは、光合成細胞抽出物を市販の日焼け止めローションに加えた場合、EHSにおけるUVAUVB誘発性DNA損傷を低減することをさらに発見した。2つの濃度の抽出物を含む組成物は、UVBおよびUVAの両方によって誘発されるEHS構造上の損傷およびDNA損傷の修復において明らかな改善を実証した。したがって、本発明者らは、抽出物はUVA誘発性DNA光酸化損傷の修復を促進することを発見した。さらに、低濃度の抽出物を従来の日焼け止めに加えると、UV誘導性DNA損傷からの保護において驚くべき著しい増大が実証されることが示された。UVB誘発性EHS組織損傷に対する抽出物の有効性本発明者らは、01抽出物、001抽出物、および抽出物なしを含む局所用組成物で処置したEHSを、非処置のEHSと比較した。EHSを10kJm2および25kJm2のUVBに曝露した。図1に示す通り、UVBに曝露したEHSの様々な層、顆粒膜、有棘層、および角質層は、UVB非曝露の組織に比べて、相互に識別することが難しかった。UVB照射量を10kJm2から25kJm2に増大すると、角質層の肥厚によって決定して表皮組織崩壊における増大、および表皮細胞層の数における低減が存在した。形態学的に分化したケラチノサイトも、これらの照射した組織において誘発された。ビヒクル処置したEHSにおいて匹敵する変化が観察された。抽出物保護されたEHSは組織または細胞の損傷のわずかな低減を示した。しかし、保護および非保護両方のEHSの様々な表皮層は依然として見ることができた。これらの組織学的分析は、両方の濃度の抽出物を含む組成物は、UVB照射の照射量の上昇からの効率的な組織構造保護物質として働かなかったことを示唆している。UVA誘発性EHS組織損傷に対する抽出物の有効性本発明者らは、抽出物01、抽出物001、および抽出物なしを含む局所組成物で処置したEHSを、非処置のEHSと比較した。EHSを750kJm2および250kJm2のUVAに曝露した。図2に示す通り、UVAに曝露したEHSの様々な層は、UVA非曝露の組織に比べて完全に組織崩壊されており、相互に識別することが難しかった。組織崩壊は、角質層の肥厚および表皮細胞層の数の低減によって決定して、250kJm2に比べて750kJm2に曝露した後に高かった。形態学的に、本発明者らはUVA照射した表皮における細胞を同定することができなかった。ビヒクル処置したEHSにおいて、低い程度であるが、匹敵する変化が観察された。それとは反対に、抽出物保護したEHSは、UVAによって誘発される組織または細胞の損傷のわずかな低減を示した。保護されたEHSの様々な表皮層は、両方の抽出物濃度に対して、依然として見ることができた。これらの組織学的分析により、抽出物を含む組成物はUVA損傷から組織構造を保護することが明らかになった。UVB誘発性EHSのDNA損傷に対する抽出物の有効性免疫蛍光顕微鏡検査法を用いて、本発明者らは、抽出物の、UVB曝露後のCPD形成および分布に対する効果を評価した。図3に示す通り、10kJm2および25kJm2の2つの照射量のUVBは、非保護のEHSにおける表皮細胞のほとんどにおいてCPDを誘発した。CPD陽性の核が表皮の全層にわたって分布し、基底層においてCPD染色された核の比率が高かった。ビヒクル処置の適用は、CPD陽性細胞の出現を妨げなかった。CPD染色された細胞の数は、抽出物保護した組織に比べて、非保護の組織においてわずかに多く、CPDの形成の防止は著しくなかった。本発明者らは、中性グリオキサールゲル電気泳動を用いてCPD頻度も測定した。EHSの表皮におけるCPDの全体的な頻度に対するUVBの効果を図4に示し、図中、低分子量のDNAフラグメントはUVB誘発性の損傷を示す。DNAフラグメント移動性分布の分析は、処置した組織全てにおいてはるかに小型のDNAフラグメントが存在したことを示していた。10kJm2のUVBに曝露した後、DNAスメアによって明らかである通り、2つの濃度の抽出物を含む組成物は照射の間DNA損傷をわずかに防いだが、25kJm2の照射では抽出物による保護は観察されなかった。これらの結果は、両方の濃度の抽出物は、10kJm2および25kJm2のUVB照射によって誘発されるDNA損傷からEHS細胞を著しく保護しないことを指摘している。UVA誘発性のEHS細胞損傷に対する抽出物の有効性本発明者らはまた、中性グリオキサールゲル電気泳動を用いてCPD頻度に対するUVAの効果を測定した。FpgおよびendoIIIで消化したDNAの中性グリオキサールゲル電気泳動から得られた結果は、250kJm2および750kJm2のUVA照射の間のDNA損傷からのEHS細胞の保護において、いずれかの濃度の抽出物の著しい有効性を最終的に実証しなかった。抽出物プラス日焼け止めの使用組織学的パラメータの評価は、抽出物を日焼け止めに加えてもUVAおよびUVB光線に対する日焼け止めの保護効果を低減せず、EHS組織に対する光感受性効果がないことを指摘している。しかし、抽出物を市販の日焼け止めに加えると、日焼け止め単独に比べた場合、UVAおよびUVBのDNA損傷からの保護において驚くべき著しい増大が実証される。結果は、市販の日焼け止めと抽出物との間の相乗効果を実証するものであり、抽出物を日焼け止めに加えると、UVB誘発性損傷からの細胞のDNA保護が著しく増大され、UVA誘発性光酸化損傷に対する保護能力が改善される。概して、抽出物を日焼け止めに加えると、UVA誘発性DNA損傷から著しく保護された。UVB誘発性EHS組織損傷に対する抽出物プラス日焼け止めの有効性図6に示す通り、25kJm2のUVBへの曝露は組織崩壊を誘発した。UVBに曝露されたEHSの様々な層は、UVB非曝露の組織に比べて、相互に識別することが難しかった。形態学的に、照射した組織に存在する分化したケラチノサイトは、UVBの有害な効果を確証するものであった。図6f、6g、および6hは、UVB曝露の効果が、日焼け止め単独によって、およびSS抽出物混合物によって妨げられたことを説明している。実際、日焼け止めと混合した抽出物の両方の濃度に対して、保護されたEHSの異なる表皮層は依然として見ることができた。非照射の組織において、SS抽出物混合物は人工組織に対して構造上の変化を誘発しなかった。UVA誘発性EHS組織損傷に対するSS抽出物の有効性図7に表す結果は、非保護の組織を750kJm2のUVAに曝露すると組織崩壊を誘発することを示している。照射した組織において、角質層以外の非保護の組織において層の分化は存在しなかった。角質層は非常に厚く、UVA照射による組織および細胞の壊死が確認された。図7gおよび図7hを検討すると、UVA曝露の効果が、日焼け止め単独によって、およびSS抽出物混合物によって妨げられたことが明らかである。実際、保護されているEHSの様々な表皮層は、日焼け止めと混合した抽出物の両方の濃度に対して依然として見ることができる。非照射の組織において、SS抽出物混合物は、人工組織に対して構造上の変化を誘発しなかった。UVB誘発性EHSのDNA損傷に対するSS抽出物の有効性免疫蛍光顕微鏡検査を用いて、本発明者らは、UVB曝露後のCPDの形成および分布に対するSS抽出物の効果も評価した。図8に示す通り、UVBへの曝露は、非保護のEHSにおける表皮細胞においてCPDを誘発した。CPD陽性の核が表皮の全層にわたって分布し、基底層においてCPD染色された核の比率は高かった。日焼け止めおよび両方の濃度のSS抽出物の適用は、照射した細胞においてCPDの形成を妨げた。抽出物と日焼け止めとの間の相乗効果を評価するために、中性グリオキサールゲル電気泳動を用いて評価を行った。EHSの表皮におけるCPDの全体的な頻度に対するUVBの効果を図9に示す。DNAフラグメント移動性分布の分析は、はるかに小型のDNAフラグメントが、非保護の、および日焼け止め保護したEHSにおいて著しく存在したことを実証していた。しかし、組織をSS抽出物の混合物で保護し、UVBに曝露した場合、高分子量のDNAスメアの存在によって判断すると、CPD頻度の著しい低減が存在した。UVA誘発性EHSのDNA損傷に対するSS抽出物の有効性UVA照射は著しい量の光酸化損傷を生成することが知られているので、FpgおよびendoIIIで消化したDNAに対して中性グリオキサールゲル電気泳動を用いて評価を行った。DNAフラグメント移動性分布の分析は、はるかに小型のDNAフラグメントが非保護の組織中に著しく存在したことを示していた。日焼け止め単独で保護した組織において、高分子量のDNAスメアの位置によって判断して、光酸化損傷が妨げられた。SS抽出物保護した組織において、非保護の組織および日焼け止め保護した組織に比べた場合、より高い分子量のDNAスメアが本質的に存在した。これらの結果は、抽出物を日焼け止めローションに加えると、UVA誘発性光酸化損傷に対する抽出物の保護能力が著しく改善されることを説明している。概して、抽出物を日焼け止めに加えると、UVA誘発性DNA損傷から著しく保護された。UV誘発性の組織およびDNAの損傷を修復するための抽出物の使用両方の濃度の抽出物を含む組成物は、UVBおよびUVAの両方によって誘発されるEHSの構造的損傷およびDNA損傷の修復において明らかな改善を実証した。本発明者らは、抽出物がUVB誘発性組織損傷を修復し、UVB誘発性CPDの修復を非常に著しく促進し、UVA誘発性DNA光酸化損傷の修復を促進することを実証した。UVB誘発性EHS組織損傷の修復に対する抽出物の有効性図11に示す通り、150Jm2のUVBへの曝露が誘発する組織崩壊は、照射3時間後に修復されなかった。UVBに曝露されたEHSの様々な層は、相互に容易に識別できず、基底層が完全に非存在であることが明らかになった。これは、この照射された組織における細胞は、UVB照射によって高度に影響を受け、UVB誘発性損傷を修復することができなかったことを示唆していた。同じことをビヒクル処置した組織に言うことができ、ビヒクル処置した組織は分化したケラチノサイトであることが明らかになった。図11は、UVBの副作用は全て、抽出物を含む組成物で処置した組織において修復されたことを実証している。実際、保護されたEHSの様々な表皮層は、抽出物の両方の濃度に対して依然として見ることができた。UVA誘発性EHS組織損傷の修復に対する抽出物の有効性図12は、非保護の組織およびビヒクル保護した組織に対する250kJm2のUVAへの曝露が誘発する組織崩壊は、基底層の非存在および角質層の肥厚によって実証される通り、3時間後に修復されなかったことを説明している。UVA誘発性の損傷は、基底層において特異的に、両方の濃度の抽出物を含む組成物で処置した組織において修復された。これらの組織学的分析は、抽出物がUVA損傷した組織における修復過程を促進することを示唆している。UVB誘発性EHSのDNA損傷の修復に対する抽出物の有効性免疫蛍光顕微鏡検査法を用いて、UVB誘発性CPDの修復に対する抽出物の効果を評価した。図13に示す通り、CPD陽性細胞の数は、ビヒクル処置した組織に比べた場合、非保護の組織において非常に多かった。これとは反対に、両方の濃度の抽出物を含む組成物で処置した組織中で3時間インキュベートした後、CPD陽性細胞は存在せず、UVB誘発性CPDの修復が著しく高かったことを示していた。CPDの修復過程に対する抽出物の効果は、中性グリオキサールゲル電気泳動分析によって確認された。実際、図14は、抽出処置した組織におけるDNAスメアは、非処置およびビヒクル処置した組織に比べた場合、高分子量に局在していた。UVA誘発性EHS細胞損傷の修復に対する抽出物の有効性抽出物の修復の有効性を、FpgおよびendoIIIで消化したDNA上の中性グリオキサールゲル電気泳動を用いてUVA照射に対してやはり評価した。図15に示す通り、DNAフラグメント移動性分布の分析により、抽出物処置したEHSにおけるよりも、非処置の組織およびビヒクル処置した組織においてはるかに小型のDNAフラグメントが明らかになった。実際、抽出物を含む組成物で保護した組織、DNAスメアは高分子量に本質的に存在した。化粧上の有効性効果本発明にしたがって、異なる3つの濃度の抽出物を含む化粧用組成物を開発し、市販の化粧用クリームと比較した。用いたパラメータは、皮膚に対する水和作用、弾性、および抗プロフィロメトリー効果であった。1日目、7日目、および28日目の各対象の前頭部、こめかみ、目の下の領域、頬、および顎の領域上で得られた水和作用のデータを図16に提供する。A群およびB群では3つ全ての測定点の、ならびにC群では28日目の、0日目に対する改善は著しかった。本発明の化粧用組成物は、28日目までの17の統計上有意な皮膚の水和作用の最高レベルと関連していた。図17は、皮膚の即時伸展性または変形し易さを表す、Ueの進化を説明するものである。Ueにおける低減は、変形に対する皮膚の抵抗によって測定した、ハリにおける改善を示している。Ueのパラメータは、処置群Aに対して、1日目に5、7日目に1、および28日目に26、徐々に低減した。1日目および7日目の低減はp005で有意であり、28日目の低減はp001で有意であった。処置群BおよびCもUeパラメータにおける低減を実証し、特に、28日目にB群では27、C群では26であった。これらの低減は、p001で統計上有意であった。図18は、皮膚の最大振幅または最大変形を表し、年齢とともに増大するパラメータである、Ufの進化を説明するものである。処置群Aは1日目に最大変形における5の有意な低減を実証し、それに対して処置群BおよびCは同時の測定でこの弾性パラメータにおいて改善が見られなかった。7日目、皮膚の最大変形は処置群Aおよび処置群Bにおいて有意に改善し、処置群Cでみとめられた改善は統計上有意ではなかった。28日目、3つの処置群全てが、以下の通り、皮膚の最大変形における改善を実証したA群に対して25、B群に対して28、およびC群に対して27。これらの改善は、p001で統計上有意であった。皮膚の疲労性は、一般に年齢とともに増大するパラメータである。図19において見られる通り、処置による有意な変化は、1日目および7日目の皮膚の疲労性に対して、A群、B群、およびC群に対して観察されなかった。しかし、28日目、3つの処置群全てにおいて皮膚の疲労性における低減がみとめられたが、処置群Aにおいて見られた改善だけが統計上有意であった。UrUeは、年齢とともに低減する正味の弾性またはハリを表し、皮膚の弾性の試験において最も重要なパラメータであると考えられている。1日目および7日目、図20に示す通り、このパラメータに対して、処置に起因する著しい変化は観察されなかった。しかし、請求する化粧用組成物での処置は、28日目までにハリにおける5の統計上有意な増大を実証した。図21、22、および23に示す通り、本発明の化粧用組成物は、処置1日目という早期にベースラインに比べて以下のしわのパラメータにおける統計上有意な改善を示し、これは処置とともに規模が増大し、28日目に依然として著しかったしわの面積1日目に12および28日目に17しわの全長1日目に11および28日目に13ならびにしわの平均長さ1日目に5および28日目に11。図24に見られる通り、1日目のしわの合計数において7の有意な改善も、本発明の化粧用組成物で観察された。これとは対照的に、他の2つの高級製品ラインでの処置はしわのパラメータを改善したが、改善は本発明の化粧用組成物に対して見られる改善の規模の18から47にすぎず、ベースラインに比べて統計上有意ではなかった。しわのクラスに関して、また図25、26、および27に示す通り、本発明の化粧用組成物は、処置1日目という早期に、クラス3のしわの数を7、有意でなく低減し、処置28日目のクラス3のしわにおけるベースラインからの有意な13の低減および処置1日目のクラス2のしわにおける9の有意な低減をもたらした唯一の処置であった。他の2つの匹敵する高級製品ラインは、クラス3のしわを、28日目にそれぞれ7および5増大した。3つのいずれかの処置に対して、クラス1のしわの数の低減において、有意な結果は見られなかった。しわの深さの統計学的分析は、3つのいずれかの処置に対して徐々に有意な低減を表さなかった。スピラントールとの相乗効果スピラントールは、皮下の筋肉における収縮を阻害し、抗しわ製品として用いられていることが知られている、アクメラオレラシア抽出物である。スピラントールを光合成細胞抽出物と一緒に用いると、抗しわ化粧用組成物において相乗効果を引き起こす。人工ヒト皮膚の調製皮膚ドナーは、年齢15歳から20歳の健康な女性であった。先に記載されている乳房縮小手術の後、UV非曝露の正常ヒト皮膚生検からケラチノサイトおよび線維芽細胞を単離した。人工ヒト皮膚を、仔ウシ皮膚I型およびIII型コラーゲンを正常ヒト線維芽細胞と混合して真皮を生成することによって生成した。組織を、5ウシ胎仔血清補充培地で4日間培養し、次いでケラチノサイトを接種してEHSを得た。EHSを7日間、水浸条件下で増殖させ、次いでさらに5日間、空気液体界面に上げて表皮を様々な層に分化させた。各段階を、同じ皮膚の生検から単離したケラチノサイトおよび線維芽細胞を用いて行った。抽出物処置およびUV照射2つの濃度の抽出物を試験した。抽出物ビヒクル単独を第1対照とした。正常の非処置組織を第2対照とした。体積60μlの抽出物またはそのビヒクルを、照射30分前にEHSの角質層上に適用した。3つの実験条件を試験した。培地由来の毒性物質のUV誘発性の形成を避けるために、照射前に、培養培地を、フェノールレッドおよびヒドロコルチゾンなしの照射培地によって置き換えた。EHSを含むペトリ皿を氷上に配置し、覆いをせずにEHSをUV光線に直接曝露した。3つの照射量のUVAおよび3つの照射量のUVBを用いて、処置および比処置のEHSを照射した。UVA源は、およそ360nmのピークを含む発光スペクトルを有するネオンBLB光45cmであった。UVB源は、290nmから320nmの間にピークを含む発光スペクトルを有するFS20T12UVBBPランプであった。施した照射量は全て、YSIKettering65A放射計を用いてモニタリングした。UV曝露後の組織学的および免疫組織化学的分析照射直後に各EHSから生検を採取した。これらを、ブアン溶液で固定し、次いでパラフィン中に包埋するか、または最適な切断温度で直接包埋し、液体窒素中凍結し、使用まで80°Cで貯蔵した。パラフィン包埋した生検の薄い切片をマッソン3色染料で染色して、他所に記載した通り、組織の構造を評価した。CPD評価に対して、UVBで照射した組織のみを用いた。この目的では、UVB照射した凍結した生検の薄いクリオスタット切片を、特異的なマウスモノクローナルCPD抗体と一緒に室温で45分間インキュベートした。CPD抗体は、2本鎖または1本鎖DNA中UV誘発したチミジンダイマーと特異的に反応する。次いで、切片を、1100希釈したヤギ抗マウス免疫グロブリンに対してフルオレセインイソチオシアネートコンジュゲート中、室温で30分間インキュベートした。切片を、インキュベートの間に、リン酸緩衝食塩水で大々的に洗浄した。これらに、50グリセロール封入剤中カバーガラスとともに搭載し、落射蛍光顕微鏡を用いて観察し、写真撮影した。太陽UV照射曝露後の分子分析照射直後、表皮細胞を、先に記載した通り単離した。ホモジナイズ後、細胞を遠心分離し、細胞ペレットを2mlの015MNaCl0005MEDTApH78および2mlの002MTrisHClpH80002MNaCl002MEDTApH781SDS中に再懸濁した。先に記載した通りDNAを精製し、UVB照射に特異的であるCPD光産物の全体的な頻度、およびUVA照射に特異的である光酸化損傷を評価するのに用いた。CPDを特異的に切断するために、UV照射したDNA10μgをH2O50μl中に溶解した。以下の溶液10×二重バッファー10μL、1MDTT01μL、5mgmLBSA2μL、飽和量のT4エンドヌクレアーゼVを含む溶液50μLを各DNA試料に加え、H2Oで最終体積50μLにして完了した。反応を37°Cで1時間行った。光酸化損傷を特異的に切断するために、UV照射したDNA10μgを水50μlおよび2×Nthタンパク質バッファー50μL中に溶解した。酵素を希釈バッファーグリセロール5μlに加え、全消化体積は105μlであった。試料を37°Cで60分間インキュベートした。エタノール沈降後、消化したDNAを再懸濁して最終濃度1μgμLとした。各クラスの光生成物の全体的な頻度を、先に記載した通り、グリオキサールジメチルスルホキシド変性させたゲノムDNAの中性アガロースゲル電気泳動で決定した。簡潔に述べると、処置したDNA5μg10μlを蒸留水中に溶解し、100mMリン酸ナトリウム、pH702μL、6Mグリオキサール35μL、およびジメチルスルホキシド10μLを加えた。DNA試料を50°Cで1時間インキュベートした。ローディング前にローディングバッファー38μLを加えた。ゲルを、バッファーを絶えず循環させ3~4ボルトcmでバッファーを流しながら、10mMリン酸ナトリウムpH70中を流した。ゲルを、TAEpH80中1×SYBRGold核酸ゲル染色溶液中2時間染色し、写真撮影した。DNA光生成物の1本鎖中断への酵素的変換後、全体の付加物の頻度を推定した。アガロースゲルによるDNAフラグメントの遊走により、これらの分子量による分離が可能となる。Willisらは、ランダムに切断されたDNA分子がゲル分画化される場合、各フラグメントの移動性は、移動範囲の中央にわたって分子量の対数に比例することを示している。したがって、DNA染色色素の最高強度の分子量を推定することによって、各DNAスメアのおよその質量を算出することができる。得られた数を2によって除し、1メガベースあたりの損傷の数として表した。人工ヒト皮膚の調製皮膚ドナーは、年齢15歳から20歳の健康な女性であった。先に記載されている乳房縮小手術の後、UV非曝露の正常ヒト皮膚生検からケラチノサイトおよび線維芽細胞を単離した。人工ヒト皮膚を、上記に記載した通り生成した。日焼け止めプラス抽出物処置およびUV照射2つの濃度の抽出物を、別々にSPF15の日焼け止めと混合したvv。抽出物と混合した後、得られた日焼け止めのSPFは75であった。ビヒクルを対照とした。正常の非保護の組織を第2対照とした。SS抽出物またはSSビヒクルの60μlの体積を、照射30分前、EHSの角質層上に適用した。照射手順は上記に記載したのと同じであった。2つの照射量のUVAおよび2つの照射量のUVBを用いて、保護および非保護のEHSを照射した。UV曝露後の組織学的および免疫組織化学的分析照射直後、各EHSから生検を採取した。これらを、ブアン溶液で固定し、パラフィン中に包埋するか、または最適な切断温度で直接包埋し、液体窒素中凍結し、使用まで80°Cで貯蔵した。組織学的および免疫蛍光分析を、上記に記載した通りに行った。CPD評価に対して、UVBを照射した組織だけを用いた。UV曝露後の分子分析照射直後、表皮細胞を単離し、DNAを抽出するのに用いた。精製したDNAを用いて、UVB照射に特異的であるCPD光生成物の全体的な頻度、およびUVA照射に特異的である光酸化損傷を評価した。この目的では、本発明者らは、上記に記載した様々な段階を用いた。人工ヒト皮膚の調製皮膚ドナーは、年齢15歳から20歳の健康な女性であった。先に記載されている乳房縮小手術の後、UV非曝露の正常ヒト皮膚生検からケラチノサイトおよび線維芽細胞を単離した。人工ヒト皮膚を、上記に記載した通り生成した。UVに対する組織の曝露とその後の抽出物での処置これらを生成した後、EHSを紫外線源に曝露した。1照射量のUVAおよび1照射量のUVBを用いて非保護のEHSを照射した。照射手順はセクション12に記載したものと同じであった。照射直後、組織を抽出物で処置した。体積60μlの抽出物またはそのビヒクルを、分析前に3時間、EHSの角質層上に適用した。組織学的および免疫組織化学的分析インキュベート期間の後、各EHSから生検を採取した。これらを、ブアン溶液で固定し、パラフィン中に包埋するか、または最適な切断温度で直接包埋し、液体窒素中凍結し、使用まで80°Cで貯蔵した。組織学的および免疫蛍光分析を、上記に記載した通りに行った。CPD評価に対して、UVBを照射した組織だけを用いた。UV曝露後の分子分析インキュベート期間の後、表皮細胞を単離し、DNAを抽出するのに用いた。精製したDNAを用いて、UVB照射に特異的であるCPD光生成物の全体的な頻度、およびUVA照射に特異的である光酸化損傷を評価した。年齢35歳から72歳の健康女性志願者72人の、比較上の化粧有効性試験において、本化粧用組成物の有効性を28日の使用期間にわたって、2つの主要な市販の抗加齢ブランドの化粧用組成物と比較した。有効性パラメータは、皮膚の外観、水和作用、弾性、およびプロフィロメトリーに対する効果を含んでいた。各志願者に、非有効成分と組み合わせて、抽出物001、0015、および002を含む本化粧用組成物の3つの製剤を、28日の期間にわたって用いるように、適用指示書とともに提供した。測定は、0日目、1日目、7日目、および28日目に行った。水和作用をCorneometerを用いて評価し、弾性をCutometerを用いて評価し、プロフィロメトリー測定をVisiaCRImagingsystemを用いて目の輪郭ゾーンのシリコーン複製物から取った。製品使用の検証を、製品試料を重量測定することによって決定した。最初の来所時、志願者に、3つの試験処置の1つの容器、毎回の適用後に完成させるフォローアップシート、ならびに28日の処置の後に完成させる自己評価アンケート用紙を無作為に配布した。志願者に、毎朝、顔面および手を洗浄した後、各自の顔面のカラスの足跡領域を含めた目の輪郭領域をカバーするのに十分な量のアイローションを適用するように指示した。アイローションが十分に浸透した後、志願者は、目の輪郭領域を避けて各自の顔全体をカバーするのに十分な量のデイクリームを適用しなければならなかった。さらに、志願者に、毎朝、目の輪郭領域を避けて各自の顔全体をカバーするのに十分なナイトクリームを適用するよう指示した。他の全てのスキンケア製品の使用は、試験の間禁止した。各自のいつもの顔面洗浄剤またはメーキャップ製品のブランドに関する変更は、試験開始前の週の間も、試験の間も許可しなかった。0日目、12枚の顔面のデジタル写真、UV、および平行偏光の4つの異なる画像モードにおいて、前向き、右横顔および左横顔を、VisiaCRImagingSystemを用いて撮影した。引き続き、温度および相対湿度を制御した実験室において試験を行った。制御した部屋において15分安定化させた後、処置前のCorneometerを用いた水和作用の測定、Cutometerを用いた弾性の測定、および目の輪郭ゾーンのシリコーンインプリントによるプロフィロメトリーをとった。D0に行った測定を、D1、D7、およびD28に、上記に記載したのと同じやり方で繰り返した。D1、D7、およびD28に、志願者は日誌を完成させるために戻る必要があった。志願者はまた、試験製品の未使用部分を有する試料容器を実験室に戻すことになっていた。試料容器の使用しなかった部分および日誌は、プロトコールに対する志願者の遵守を評価しようとするものであった。水和作用角質層の表皮の水分は、皮膚の電気的性質である静電容量に基づいた非侵襲性のinvivoの機器試験方法によって評価することができる。角質層は誘電体であり、水和状態における変化は全て静電容量における変化によって反映され、Corneometeによって任意の単位において表される。弾性皮膚の外観は、皮膚の弾性の性質に関連し、それによって非常に影響を受ける。皮膚の弾性は、化粧品の使用により変化を受けやすい。皮膚の機械的特性および粘弾性特性における変化は、皮膚の弾性を反映する。弾性に関連するパラメータは、CutometerSEM575によって測定される。機器に、1秒に4回繰り返す皮膚上の制御された吸引を含むプローブを装着する。各々の頬の中央から2回測定を行った。各測定部位に対する結果は、以下のパラメータとして表すUe真空の適用による伸展性または即時弾性変形Uf皮膚の全体の振幅または最大振幅Ur緊張度UrUe正味の弾性または純粋な弾性またはハリ最後に、4回の吸引後、Cutometerは皮膚の疲労度の尺度を提供する。抗しわ効果志願者がまっすぐであるが座った姿勢を維持している間に、シリコーンポリマーを目の輪郭ゾーンのカラスの足跡領域上に適用することによって、目の輪郭ゾーンのインプリントを得た。本試験に用いたシリコーンポリマーは、Silfoからなっていた。カラスの足跡のインプリントを、Quantiridesソフトウエアに連結したコンピュータ化デジタル画像処理システムによって分析して、皮膚のトポグラフィを得た。この標準化された技術は、入射光線がレプリカ上35°の角度に傾いた時に投影される影を測定することに基づいている。分析したパラメータは、しわのある皮膚の合計面積、皮膚の解放による陥凹の数および平均深さ、ならびに深いしわおよび中等度のしわの深さであった。所与の製品の有効性をよりよく実証するために、処置の前および後に、しわを深さによって鑑別した。