乳がんを治療するための遺伝子組み換えウイルスであって、NS1遺伝子を欠失させた腫瘍溶解性RSウイルスRSVを含むことを特徴とする遺伝子組み換えウイルス。NS1遺伝子が逆遺伝学的ストラテジーにより欠失させたものである請求項1に記載のRSウイルス。ベロ細胞において、NS1欠損ウイルスcDNAクローン、ウイルスN、M2-1、P及びLタンパク質を含む形質転換プラスミドの5つのウイルス成分の共発現をする請求項1に記載のRSウイルス。RSVNS1として機能する他の遺伝子を欠失させたウイルスで置き換えた請求項1に記載の遺伝子組み換えウイルス。乳がんを治療する方法であって、NS1遺伝子に変異がある腫瘍溶解性RSウイルスRSVを送達することを特徴とする方法。NS1遺伝子を逆遺伝学的ストラテジーにより欠失させる請求項5に記載のRSウイルス。ベロ細胞において、NS1欠損ウイルスcDNAクローン、ウイルスN、M2-1、P及びLタンパク質を含む形質転換プラスミドの5つのウイルス成分の共発現をする請求項5に記載のRSウイルス。NS1としての遺伝子機能を有する他のウイルスで置き換えた請求項5に記載の遺伝子組み換えウイルス。本発明は、正常ヒト細胞を殺すことなく乳がん細胞を殺すのに利用できるNS1遺伝子欠損RSVΔNS1RSVを提供する。一実施形態において、逆遺伝学的アプローチを利用し、アンチゲノムcDNAから122~630個のヌクレオチドを除去してNS1の上流の非翻訳領域をNS2の翻訳開始コドンに連結することによってNSI遺伝子を欠失させる。ΔNS1RSVは、ベロ細胞にNS1欠損RSVcDNA及びN、P、M2-1、Lをエンコードする発現プラスミドを共導入することによって回収する。RSVNS1タンパク質はタイプI-IFNアンタゴニストとして機能するが、ΔNS1RSVウイルス療法ではより多くのタイプI-IFNが産生され、これによって正常細胞でのウイルスの複製は防止され、また抗腫瘍作用が誘導される。別の実施形態において、遺伝子組み換えウイルスは、タイプI-IFNアンタゴニストとしての関連するタンパク質をエンコードする遺伝子として機能するNS1遺伝子を欠失させるための同様のストラテジーを有するいずれの他のウイルスにもなり得る。別の実施形態において、ΔNS1RSVを、直接注射によりがんの部位に適用することができる。あるいは、ΔNS1RSVを、輸血によりがんの部位に送達することができる。RSウイルスRSVを本研究において使用した。逆遺伝学的アプローチを利用し、アンチゲノムcDNAから122~630個のヌクレオチドを除去してNS1の上流の非翻訳領域をNS2の翻訳開始コドンに連結することによってNSI遺伝子を欠失させた。ΔNS1RSVは、ベロ細胞にNS1欠損ウイルスcDNAクローン及びN、P、M2-1、Lをエンコードする発現プラスミドを共導入することによって回収された。あるいは、遺伝子組み換えウイルスは、同様のNS1遺伝子を欠失させたいずれの他のウイルスにもなり得る。ΔNS1RSVがNS1遺伝子を欠いているか否かを確認するために、発明者はベロ細胞IFN-β遺伝子欠損細胞に野生株RSV及びΔNS1RSVMOI=5を感染させ、NS1タンパク質を免疫ブロット法によりNS1特異性抗体を使用して試験した。図2Aに示すように、NS1タンパク質は野生株RSV感染ベロ細胞でのみ視覚化され、ΔNS1RSV感染細胞では視覚化されず、これはΔNS1RSVがNS1遺伝子を欠くことを示す。ΔNS1RSVは、インビトロ及びインビボの両方において乳がん細胞を優先的に殺す。MDA-MB-231乳がん細胞及び正常CCD-1059SKヒト正常乳房線維芽細胞をATCCAmericanTypeCultureCollectionの指示通りに培養し、次に野生株及びΔNS1RSVMOI=5を感染させた。細胞形態の変化を観察し、ウイルス複製を測定した。図2Bは、ΔNS1RSVが選択的に細胞変性効果CPEをMDA-MB-231乳がん細胞において誘導することを示し、またΔNS1RSVが感染から24時間後にCCD-1059SK細胞よりこの腫瘍細胞においてより高いウイルス力価を有することは図2C、MDA-MB-231細胞がΔNS1RSVの増殖を効率的に支援することを示唆している。ΔNS1RSVが他の乳がん細胞株も殺すか否かを試験するために、本発明者は、乳がん細胞株T-47D及びMCF-7にΔNS1RSVMOI=5を感染させた。CPEを感染から48時間後に観察したところ表1、ΔNS1RSVが乳がん細胞を特異的に殺すことが示された。ΔNS1RSV感染が腫瘍成長の退行をインビボで誘導するか否かを解明するために、MDA-MB-231乳がん細胞を生後4~6週間のヌードBALB/cマウス1グループあたりn=6の左及び右脇腹に皮下注射し、得られた腫瘍を発達させた。ウイルス1x1010pfu/mlを3回にわたって腫瘍に局所注射し、腫瘍のサイズをデジタルノギスで測定した。図2C、Dは、ΔNS1RSV感染が、コントロールと比較して腫瘍成長の退行を引き起こしたことを示す。局所投与したウイルスの安全性を試験するために、感染マウスの様々な臓器におけるウイルス力価をプラークアッセイ法及びRT-PCRアッセイにより求めた。図2E、Fに示すように、ウイルスは腫瘍に特異的に局在する。ΔNS1RSV感染は腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導するが、正常ヒト乳房線維芽細胞CCD-1059SK細胞では誘導しない。ΔNS1RSV感染のアポトーシスに対する差別効果を試験するために、MDA-MB-231腫瘍細胞及び正常CCD-1059SK細胞に指定のウイルスMOI=5を感染させ、アポトーシスをアネキシンV結合アッセイにより測定した。図3Aは、コントロールで見られる細胞の自発的アポトーシスと比較すると、ΔNS1RSVが腫瘍細胞において選択的にアポトーシスを誘導することを示す。RSVNS1遺伝子のノックダウンは、A549細胞におけるより多くのIFN-βの産生を可能にする非特許文献9。乳がん細胞でのウイルス誘導性アポトーシスにおけるIFN-βの関与について更に調査するために、IFN-βに対する中和抗体を使用してIFN活性を阻害したが、ウイルス感染によって誘導された乳がん細胞におけるアポトーシスを減弱させることはできなかった図3B。この発見を裏付けるために、本発明者は、ベロ細胞IFN-β遺伝子欠損細胞にΔNS1RSVを感染させ、アポトーシスをアネキシンV結合アッセイにより測定した。図3Cは、コントロールと比較して、ΔNS1RSVが依然としてベロ細胞においてアポトーシスを誘導することを示し、これはIFNがウイルス誘導性のアポトーシスに関与していない可能性を示唆している。表1は、ΔNS1RSVがヒト乳がん細胞を選択的に殺すことを示す細胞変性効果CPE試験である。