"抗原表示細胞自体及び抗原表示細胞を含む組織を磁気共鳴映像で特異的に可視化させることができるカルボン酸-マンナンでコーティングされた超常磁性ナノ粒子MRI造影剤。前記抗原表示細胞が、樹状細胞、大食細胞、B-細胞であることを特徴とする請求項1記載のMRI造影剤。リンパ節への癌転移診断に活用できることを特徴とする請求項1記載のMRI造影剤。敗血症診断に活用できることを特徴とする請求項1記載のMRI造影剤。前記カルボン酸-マンナンが、アルデヒド-マンナンから製造されることを特徴とする請求項1記載のMRI造影剤。前記カルボン酸-マンナンが、全体を構成するマンノ-スの10モル以上がカルボキシル化されていることを特徴とする請求項1記載のMRI造影剤。前記超常磁性ナノ粒子が、酸化鉄であることを特徴とする請求項1記載のMRI造影剤。前記酸化鉄が、マグネタイトmagnetite,Fe3O4またはマグヘマイトmaghemite,Fe2O3であることを特徴とする請求項7記載のMRI造影剤。A超常磁性ナノ粒子を合成する工程と、Bマンナンにアルデヒド基を導入してアルデヒド-マンナンを合成する工程と、C前記アルデヒド-マンナンを用いてそれを酸化させることでカルボキシル基が導入されたカルボン酸-マンナンを製造する工程、及びD前記製造されたカルボン酸-マンナンで前記合成された超常磁性ナノ粒子をコーティングする工程とを含む、MRI造影剤製造方法。請求項9によって製造される、カルボン酸-マンナンでコーティングされた超常磁性ナノ粒子MRI造影剤。造影剤が、リンパ節への癌転移診断に活用され得ることを特徴とする請求項10記載のカルボン酸-マンナンでコーティングされた超常磁性ナノ粒子MRI造影剤。造影剤が、敗血症診断に活用され得ることを特徴とする請求項10記載のカルボン酸-マンナンでコーティングされた超常磁性ナノ粒子MRI造影剤。前記カルボン酸-マンナンが、全体を構成するマンノ-スの10モル以上がカルボキシル化されていることを特徴とする請求項10記載のカルボン酸-マンナンでコーティングされた超常磁性ナノ粒子MRI造影剤。前記超常磁性ナノ粒子が、酸化鉄であることを特徴とする請求項10記載のカルボン酸-マンナンでコーティングされた超常磁性ナノ粒子MRI造影剤。前記酸化鉄が、マグネタイトmagnetite,Fe3O4またはマグヘマイトmaghemite,Fe2O3であることを特徴とする請求項14記載のカルボン酸-マンナンにコーティングされた超常磁性ナノ粒子MRI造影剤。したがって、本発明はこのような従来技術の問題点と以前から要請されてきた技術的課題を解決することを目的とする。本発明の目的は、体内安定性及び安全性に優れ抗原表示細胞または抗原表示細胞が含まれた組織の特異的照映増強性能を有するMRI造影剤を提供し、さらにそれの製造方法を提供することである。また他の本発明の目的は、リンパ節への癌転移診断に活用することができるMRI造影剤を提供することである。また他の本発明の目的は、敗血症診断に活用することができるMRI造影剤を提供することである。前記のような課題を解決するために、本発明者らは、既存のマンナンでコーティングされたMRI造影剤の短所を克服するために、マンナンにカルボキシル基を導入してそれをMRI造影剤のコーティング物質に使用すれば、毒性も低めることができるし体内半減期も増加させることができると予想し、カルボキシル基を十分にマンナンに導入することができる技術を開発し、そのように製造したカルボキシル基を導入したマンナンでコーティングされたMRI造影剤が、マンナンでコーティングされたMRI造影剤に比べてその使用が安全であることを確認して本発明を完成した。したがって、本発明は体内安定性及び安全性に優れ抗原表示細胞または抗原表示細胞が含まれた組織の特異的照映増強性能を有するカルボキシル基を導入したマンナンでコーティングされた超常磁性ナノ粒子であるMRI造影剤及びその製造方法を提供する。前記超常磁性ナノ粒子の磁性物質は、マンガン酸化物MnO、マンガンフェライトMnFe2O4、鉄-白金合金Fe-Ptalloy、コバルト-白金合金Co-Ptalloy及びコバルトCoなど多様に選択され得るが、マグネタイトmagnetite、Fe3O4またはマグヘマイトmaghemite、Fe2O3のような酸化鉄superparamagneticironoxide、SPIOが最も好ましい。前記抗原表示細胞では、樹状細胞dendriticcell、大食細胞macrophage、B-細胞Bcellなど多様な種類を挙げられるが、マンノ-ス受容体を有した細胞が好ましい対象であり、特に大食細胞が好ましい。本発明のMRI造影剤が活用され得る代表的な例としては、癌診断であり、特にリンパ節への癌転移診断が好ましい。また、本発明のMRI造影剤は、炎症関連の診断にも活用することができ、特に敗血症の診断が好ましい。本発明は、また、A超常磁性ナノ粒子を合成する工程と、Bマンナンにアルデヒド基を導入してアルデヒド-マンナンを合成する工程と、C前記アルデヒド-マンナンを用いてそれを酸化させることによってカルボキシル基が導入されたカルボン酸-マンナンを製造する工程、及びD前記製造されたカルボン酸-マンナンで前記合成された超常磁性ナノ粒子をコーティングする工程とを含むカルボキシル基が導されたマンナンでコーティングされた抗原表示細胞または抗原表示細胞を含んだ組織の照映増強MRI造影剤の製造方法に関するものである。前記でアルデヒド-マンナンは、アルデヒド基が導入されたマンナンを指称し、カルボン酸-マンナンはカルボキシル基が導入されたマンナンを指称する。本発明者らは、マンナンにカルボキシル基を導入するために多様な方法を適用してみたが、他の方法では十分な程度のカルボキシル基の導入が難しく、本発明で開示したアルデヒド-マンナンを経る方法を通じて十分な程度のカルボキシル基の導入が可能だった全体マンノ-スの10モルがカルボキシル化する。したがって、本発明の特徴は、カルボキシル基が導入されたマンナンでコーティングされたMRI造影剤を提供する点と、前記カルボキシル基が導入されたマンナンの製造においてアルデヒド-マンナンを中間体に用いた点である。高い程度にカルボキシル基が導入されたマンナンmannanでコーティングされた超常磁性superparamagneticMRI造影剤は、優れた体内安定性stability及び低い生体毒性を提供することができ、抗原表示細胞に特異的に流入し得て抗原表示細胞及び抗原表示細胞を含んだ組織を特異的に可視化することができる。このような抗原表示細胞及び抗原表示細胞を含んだ組織を特異的に可視化することができ、体内安定性に優れたMRI造影剤は、乳癌、大腸癌、胃癌などの初期リンパ節への転移metastasisを効果的に探知するのに用いることができ、また敗血症を早期診断する目的でも活用することができる。癌のリンパ節転移有無を正確に診断することは、癌治療と患者の予後を決定するにおいて非常に重要であり、敗血症の早期診断は説明する必要もなく重要であるといえる。リンパ節への癌の転移を探知するためには、現在PET-CTPositronEmissionTomographyandComputedTomographyを多く使用しているが、MRIはPET-CTに比べて放射能被爆に対する危険がなくて空間分解能が優れているので、初期の微細転移を判定することが容易であるという長所がある。敗血症は、現在ELISAEnzymelinkedimmunosorbentassayのような診断検査法を通じて主に診断が行われ、多くの診断時間が必要となる短所がある。敗血症は、死亡率が非常に高いので早期診断が必須である。本発明を敗血症診断に活用する場合、診断の迅速性と容易性を提供することができる。上述したように、本発明は高い程度のカルボキシル基が導入されたマンナンでコーティングされた体内安定性に優れ、毒性が非常に低くなった超常磁性MRI造影剤を提供するものである。以下、本発明の内容をより詳細に説明するが、該当の技術分野の熟練した当業者なら本発明の思想及び領域から逸脱しない範囲内で本発明を多様に修正及び変更することができることを理解することができるであろう。以下、実施例を通じて本発明をより具体的に説明するが、これら実施例は本発明を例示するだけであって、本発明の範囲がこれら実施例に限定されるのではない。実施例1:カルボン酸-マンナンの製造実施例1-1:アルデヒド-マンナンの合成400mgのマンナンを16mlの蒸留水に溶解した。そこに、0.1MNaIO4水溶液9mlマンノ-スに対して0.4当量をゆっくり添加して4°Cの条件で光を遮断したまま一時間反応させた。反応を終結させるためにグリセロールマンノ-スに対して0.8当量を添加して、30分間撹拌した。生成物を透析膜MWCO1,000に移して蒸留水に対して4°Cの条件で一日透析した後、凍結乾燥して393mgの白色固体であるアルデヒド-マンナンを得た。全体過程が図1に提示されている。実施例1-2:カルボン酸-マンナンの合成370mgのアルデヒド-マンナンを20mlの蒸留水に溶解した。この溶液を氷が満たされた水槽に入れてそこに過酸化水素H2O2;マンノ-スに対して1.2当量を添加した。そこに3mlの0.5MNaClO2マンノ-スに対して1.2当量をゆっくり添加して、pHを5に合わせた。以後、氷水槽を除去して継続して撹拌しながら、NaOHを用いて反応物のpHを5に維持させた。pHがこれ以上変わらない時、生成物のpHを9に合わせた後、透析膜MWCO1、000を用いて蒸留水に対して4°Cの条件で一日透析して精製した後、凍結乾燥させた。その結果、351mgの白色固体であるカルボン酸-マンナンを得た。生成されたカルボン酸-マンナンを対象に、1MHClを用いて導入したカルボキシル基の量を定量した結果、マンノ-スの約13モルのカルボキシル基が導入されたことを確認することができた。全体過程が図2に提示されている。カルボキシル基の導入は、通常の方法であるフーリエ変換赤外線分光器FouriertransforminfraredspectrometerNicoletMagna550seriesIIspectrometerMidacAtlantaGA,米国を用いて分析し、その結果を図3に示す。図3の結果から、カルボキシル基の導入による特徴的ピークが示されることを確認することができる。実施例2:超常磁性酸化鉄ナノ粒子の製造まず、超常磁性酸化鉄ナノ粒子SuperparamagneticIronOxideNanoparticles;SPIONsを製造するために、塩基性溶液NH4OHでFe2とFe3イオンを還元させてSPIONsを沈澱させた。具体的に、塩化鉄IIIFeCl36H2O2モルと塩化鉄IIFeCl24H2O1モルを蒸留水70mlに添加して混合水溶液を調製した。前記混合水溶液を激しく撹拌しながらアンモニア水溶液7mlを添加した。ここで、黒い沈殿物が形成されるが、前記沈殿物を永久磁石を用いて固定させながらpHが10から7に落ちるまで蒸留水で何回洗浄した。このようにして、pH7になった沈殿物のみを集めた。前記沈殿物に2Mの硝酸HNO3溶液20mlと0.35Mの硝酸第2鉄FeNO339H2O水溶液30mlを加えて1時間還流refluxして酸化させた。酸化によって形成された茶色の懸濁液を2日間0.01Mの硝酸に対して透析してSPIONs保存溶液stocksolutionを製造して、それを4°Cで保管した図4参照。実施例3:カルボン酸-マンナンでコーティングされた超常磁性酸化鉄ナノ粒子の製造前記SPIONs保存溶液を6.25mg/mlになるように蒸留水で希釈した。このように準備した希釈液を、4°Cで撹拌する。一方、その間に17.5mgのカルボン酸-マンナンを200μlの蒸留水に溶解してカルボン酸-マンナン溶液を準備する。カルボン酸-マンナン溶液の準備が完了すると、前に準備したSPIONs保存溶液の希釈液から800μlを取ってそこにカルボン酸-マンナン溶液を4°Cで撹拌しながらゆっくり一滴ずつ添加する。添加が完了すれば、それを4°Cで一晩中撹拌する。最終的にNH4OHを少量入れてpHを7に合わせる。最後に、NaClを0.9になるように添加してイオン強度を合わせる。このように調製された溶液をカルボン酸-マンナンがコーティングされた超常磁性酸化鉄ナノ粒子すなわち、MRI造影剤溶液に使用した。対照物質にマンナンがコーティングされたSPIONs、デキストランがコーティングされたSPIONs及びPVAポリビニルアルコールがコーティングされたSPIONsも製造したが、すべての過程はカルボン酸-マンナンがコーティングされたSPIONsの製造過程と同一であった。実施例4:カルボン酸-マンナンがコーティングされたSPIONsの特性分析実施例4-1:カルボン酸-マンナンがコーティングされたSPIONsの大きさ分布図測定本発明によって製造されたカルボン酸-マンナンがコーティングされたSPIONsの大きさと分布を測定するため、散乱角が90度に調節されたトータル光散乱測定機electrophoreticlightscatteringspectrophotometerELS8000OtsukaElectronics大阪、日本を用いて25°Cで測定した。前記トータル光散乱測定機分析のための試料は、カルボン酸-マンナンがコーティングされたSPIONsを蒸留水に入れた後、超音波処理をして準備した。図5の分析結果から分かるように均一に分布した粒子が生成されたことが分かり、粒子の大きさの平均は34.1nmだった。実施例4-2:ゼータ電位の測定カルボン酸-マンナンがコーティングされたSPIONsのゼータ電位液体の中に浮遊するコロイド粒子の表面帯電量の程度を示す指標であり、shearboundaryとbulksolutionとの電位差を通常の方法によって測定し、その結果、-31.69mVと測定された。このゼータ電位数値で、カルボン酸-マンナンがコーティングされたSPIONsが通常的コロイド基準で安定した状態を維持することを確認することができた。実施例5:対照物質との比較実施例5-1:マンナンがコーティングされたSPIONsとの毒性学的比較カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsとマンナンでコーティングされたSPIONsの毒性学的比較を実施した。通常の単回静脈投与試験を通じて比較した。試験は、化学研究院付設安全性評価研究所で実施した。具体的に、7週齢のICRマウス群当り雄と雌各5匹使用にカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsとマンナンでコーティングされたSPIONsを20、40及び80mgFe/kgの用量で単回静脈投与した後15日間一般症状を観察、死亡動物の観察及び体重測定を実施して、15日目に剖検を実施して内部臓器の異常有無などを観察した。マンナンでコーティングされたSPIONsを投与した場合、20mgFe/kg以上の用量で死亡動物の発生が一部発見され、活動性低下、不規則呼吸、伏臥胃及び下腹部汚染の一般症状が観察された。これを根拠にマンナンでコーティングされたSPIONsの雄と雌マウスでの半数致死量は、二つの場合ともに約44mgFe/kgと算出された。一方、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsを投与した場合、雄と雌すべての試験群で試験物質投与と係わる死亡が観察されなかったし、肉眼的な剖検所見も特別異常な事項がなかった。したがって、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsのマウスでの半数致死量は、80mgFe/kgを上回ることが示された。以上の結果から、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsが、マンナンでコーティングされたSPIONsに比べてずっと安全なMRI造影剤であることを確認することができた。実施例5-2:抗原表示細胞内への流入測定抗原表示細胞または抗原表示細胞が多量に含まれた組織をMRI照映の対象にするためには、使用したMRI造影剤が抗原表示細胞に効果的に流入しなければならないしまたそれが特異的であるなら好ましい。これを確認するために、次の実験を実施した。まず、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsの抗原表示細胞内への流入効率を調査してみた。抗原表示細胞のモデル細胞には、腹膜大食細胞peritonealmacrophageを選定した。Balb/Cマウスから分離した腹膜大食細胞をカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsが添加された培地状態で3時間培養した。培養後、通常のプルシアンブルー染色Prussianbluestainingを実施してカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsの細胞内への流入程度を観察した。プルシアンブルー染色法は、鉄イオンがフェロシアン化合物と反応して鉄フェロシアン化合物を生成する原理を応用した染色法であり、この染色法で鉄イオンの分布を確認することができる。その結果を図6に提示している。図6の結果から細胞内でカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsが効果的に流入していることを確認することができ、この結果からカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsが、抗原表示細胞または抗原表示細胞が多量に含まれた組織を対象に活用され得ることが分かった。このような細胞内への流入は、細胞内取込作用endocytosisで説明することができる。追加実験で他のMRI造影剤と抗原表示細胞内への流入効率を比較してみた。この実験では、前の実験で毒性が確認されたマンナンがコーティングされたSPIONsは排除した。比較対象のMRI造影剤には、デキストランcoatedSPION及びPVA-coatedSPIONを選定した。この実験でも抗原表示細胞のモデル細胞には、腹膜大食細胞を選定した。Balb/Cマウスから分離した腹膜大食細胞を、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONs,デキストランcoatedSPION及びPVA-coatedSPIONがそれぞれ添加された培地状態で3時間及び24時間培養した。培養後、2×105細胞を5ゼラチンに固定させた後、それをエッペンチューブに入れた後、遠心分離を実施した。遠心分離後、MRphantomimagingを通じて細胞内への流入程度を分析した。その結果を図7に提示している。図7の結果から、SPIONsが流入すればするほど黒く示されるが、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsの場合が、ずっと早く細胞内に流入することを確認することができた。この結果から、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsが他MRI造影剤と比較して抗原表示細胞または抗原表示細胞が多量に含まれた組織を対象にして、MRI造影剤としてより優れていることを確認することができた。実施例5-3:組織内の抗原表示細胞内への流入測定カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsの、抗原表示細胞を含んだ組織をターゲットにしたMRI造影剤としての活用可能性を調査するために、実際組織内の抗原表示細胞内への流入効率を、他のMRI造影剤と比較調査した。抗原表示細胞のモデル細胞では、大食細胞を選定し、モデル組織に大食細胞が多いリンパ節組織を選定した。各MRI造影剤を注入後、プルシアンブルー染色で流入程度を測定した。具体的に、各MRI造影剤を注入後、リンパ節組織を摘出して摘出したリンパ節を4のホルマリン溶液1mlに浸しておいた後、それをパラフィン中に固定させて染色のために切開した。リンパ節のスライスを10のフェロシアン化カリウム及び20のHClで20分間染色し、染色したスライスは光学顕微鏡で観察した。酸化鉄粒子は、青い点で示される。その結果を、図8に示す。図8の結果から分かるように、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsは、他のMRI造影剤に比べてリンパ節内によく分布していた。このことから、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsを造影剤として注入する場合、組織内の抗原表示細胞にも効果的に流入し得ることを確認することができ、このことから抗原表示細胞が含まれた組織を対象にしたMRI造影剤として活用可能であることを確認することができた。実施例6:リンパ節への癌転移診断への活用カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsを、既存に知られたMRI造影剤であるデキストランcoatedSPION及びPVA-coatedSPIONとリンパ節への癌転移診断を目的としたMRI撮影において、その性能を比較してみた。リンパ節癌転移を有した実験動物当り1mgの鉄イオンになるように各造影剤を投与した後、リンパ節をMRIして比較した。和順全南大病院の動物用コイル4channelphasedarrayratheadcoilRapidBiomedicalmdhRimpar,ドイツを用いた3TMRスキャナSiemensMedicalSystemElegan,ドイツを使用してターボスピンエコーTurbospinechoTSET2weightedrepetitiontimemsechotimemsof320086flipangle150 ゚echotrainlengthof1856mmfieldofview2mmsectionthickness02mmintersectiongap320×320matrix8NEXMRIを実施した。その結果は図9及び図10に提示されている。図9の結果から対照群の場合の磁気共鳴映像よりカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsが注入された場合の磁気共鳴映像が、時間が経つにつれてより暗くなることを確認することができた。これを通じて、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsは、投与後、相当に早い時間内に組織間のコントラスト差を提供することができ、効果的なリンパ節癌転移診断用MRI造影剤であることを確認することができた。図10の信号強度比の結果は、隣接した筋肉に対するリンパ節の相対的信号強度の比を示した結果であり、筋肉よりリンパ節にカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsがより効果的に流入して、それによって相対的信号強度比が優れていることを確認することができる。以上の結果は、本発明のカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPIONsが抗原表示細胞を有する組織を可視化する目的でのMRI造影剤として活用できることはもちろん、リンパ節への癌転移診断目的のMRI造影剤としても効果的に活用することができることを確認することができる。すなわち、本発明のMRI造影剤は、乳癌、大腸癌、胃癌などの初期リンパ節への転移を効果的に探知することに用いられ得ることを確認することができた。実施例7:敗血症診断への活用本発明のMRI造影剤が、敗血症を早期診断する目的にも活用することができるかどうか調べた。敗血症は、バクテリアの感染によって誘発される疾患で、バクテリアに感染する場合感染部位はバクテリアのリポポリサッカライドLPSに反応して大食細胞を多量生成する。このように生成された大食細胞を容易に確認することができれば、敗血症の程度を簡便に確認することができる。実験は、次のように実施した。下記の実験では、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPOINsがLPSに露出して活性化した大食細胞内でどのくらい効率的に流入されるかを調べることにした。腹膜大食細胞の一部をLPSで処理して、敗血症と同じ状態の細胞を作った。このようにLPS処理した腹膜大食細胞と、なにも処理していない腹膜大食細胞をそれぞれカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPOINsを含んだ培地で3時間培養した。培養後、各細胞に対して通常のプルシアンブルー染色を実施して、カルボン酸-マンナンでコーティングされたSPOINsの細胞内への流入程度を観察した。その結果が図11に提示されている。図11の結果から分かるように、敗血症状態の細胞であるといえるLPS処理された細胞において、なにも処理していない正常細胞に比べてカルボン酸-マンナンでコーティングされたSPOINsの流入が顕著に増加する結果を確認することができた。この結果から、本発明のMRI造影剤が敗血症の早期診断目的でも活用することができることを確認することができた。以上で、本発明の特定部分を詳しく記述したが、当業界の通常の知識を有した者において、このような具体的な技術は、単に好ましい具現例であるだけで、それに本発明の範囲が制限されるのではない点は明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とその等価物によって定義されるであろう。"