ターゲット化医用イメージング及び/又は治療のためのキットであり、前記キットは少なくとも1つのプレターゲットプローブ及び少なくとも1つのエフェクタープローブを含み、前記プレターゲットプローブが第1のターゲット部及び第1の生体直交反応性部を、前記エフェクタープローブが、ラベル又は医薬的活性化合物などのエフェクター部及び第2の生体直交反応性部を含み、前記第1及び第2の生体直交反応性部のいずれかがジエノフィルであり、前記第1及び第2の生体直交反応性部がジエンであり、前記ジエノフィルが式1を満たす8-員環ジエノフィルであり:ここでRの位置はエクアトリアルであり、Raの位置はアキシャルであり、X、Y、R及びRaのそれぞれは独立して、H又は最大6まで、アルキル、アリール、O-アルキル、O-アリール、S-アリール、S-アルキル、SO-アリール、SO-アルキル、SO2-アリール、SO2-アルキル、Si-アリール、Si-アルキル、Si-O-アルキル、OCO-アルキル、OCO-アリール、SCO-アルキル、SCO-アリール、OCS-アルキル、OCS-アリール、SCS-アルキル、SCS-アリール、F、Cl、Br、I、N3、SO2H、SO3H、SO4H、PO4H、OH、SH、NO2、NO、CN、OCN、SCN、NCO、NCS、CF3、NR’R’’R’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、アリール、C=OO-アルキル、C=OO-アリール、C=SO-アルキル、C=SO-アリール、C=OS-アリール、C=SS-アルキル、C=SS-アリール、C=ONR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル、NR’CO-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’CO-アリールここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’C=OO-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’C=OO-アリールここでR’はH、アルキル又はアリールNR’CONR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CONR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CONR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CONR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CSNR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CSNR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、CR’NR’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール;からなる群から選択される置換基を表し;R又はRaの1つで、場合によりスペーサーを介して前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブへのリンカー部に含まれ;R又はRa基の2つが共に環を形成し;及び少なくとも1つかつ最大4つのRaは水素ではない。請求項1に記載のキットであり、式1のジエノフィルが次の要求の少なくとも1つを満たす:aXはメチル;bYはメチル:cR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アルキル;dR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アリール;eR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がアルキル;fR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がアリール。請求項1又は2のいずれか一項に記載のキットであり、前記ジエンが、下式2、3、4及び5の化合物からなる群から選択され:ここで、R1は、H、アルキル、アルール、CF3、CF2、CF2-R’、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=OR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’=SSR’’、NR’C=ONR’’R’’’、NR’C=SNR’R’’R’’’ここで、R’、R’’、R’’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルキルからなる群から選択され;A及びBはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、NO-、NRA及びBは共に炭素でない場合にRはアルキルからなる群から選択され;Xは、O、N-アルキル及びC=Oからなる群から選択され、及びYは、CRであり、RはH、アルキル、アリール、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’ここで、R’、R’’はH、アリール又はアルキルからなる群から選択され;R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、CF3、CF2-R’、NO2、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、OC=OR’’’、SC=OR’’’、OC=SR’’’、SC=SR’’’、S=OR’、S=O2R’’’、S=O2NR’R’’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’C=SSR’’、OC=ONR’R’’、SC=ONR’R’’、OC=SNR’R’’、SC=SNR’R’’、NR’C=ONR’R’’、NR’C=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール及びアルキルであり、R’’’は独立してアリール又はアルキルからなる群から選択され;Aは、N-アルキル、N-アリール、C=O及びCN-アルキルからなる群から選択され;BはO又はSであり:Xは、N、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=OR’、CC=SR’、CS=OR’、CS=O2R’’’、CC=OO-R’、CC=OS-R’、CC=SO-R’、CC=SS-R’、CC=ONR’R’’、CC=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル基であり、R’’’はそれぞれ独立してアリール又はアルキルから成る群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここで、R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、CF3、CF2-R’、NO2、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、OC=OR’’’、SC=OR’’’、OC=SR’’’、SC=SR’’’、S=OR’、S=O2R’’’、S=O2NR’R’’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’C=SSR’’、OC=ONR’R’’、SC=ONR’R’’、OC=SNR’R’’、SC=SNR’R’’、NR’C=ONR’R’’、NR’C=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール及びアルキルであり、R’’’は独立してアリール又はアルキルからなる群から選択され;Aは、N、C-アルキル、C-アリール及びNO-からなる群から選択され;BはNであり;Xは、N、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=OR’、CC=SR’、CS=OR’、CS=O2R’’’、CC=OO-R’、CC=OS-R’、CC=SO-R’、CC=SS-R’、CC=ONR’R’’、CC=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はarukiru基であり、R’’’はそれぞれ独立してアリール又はアルキルから成る群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、H、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、2、6-ピリミジル、2、5-ピリミジル、3、5-ピリミジル、2、4-ピリミジル又はフェニールであって、これらは場合によりNO2、F、Cl、CF3、CN、COOH、COOR、CONH2、CONHR、CONR2、CHO、COR、SO2R、SO2OR、NO、Arなどの1以上の電子吸引基で置換されていてもよいRはC1~C6アルキルであり、Arとは芳香族基、特にフェニール、ピリジル又はナフチル基を表す、からなる群から選択され;及び、前記ジエンは、場合によりスペーサーを介して前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブへの少なくとも1つのリンケージを含む、キット。第1のターゲット部分と生体直交反応性基を含むプレターゲット試薬であり、前記生体直交反応性基が、請求項3で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、請求項1又は2のいずれかに定めたジエノフィルとしての式1のジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、プレターゲット試薬。検出可能なラベル、好ましくは、3H、11C、13N、15O、18F、19F、51Cr、52Fe、52Mn、55Co、60Cu、61Cu、62Zn、62Cu、63Zn、64Cu、66Ga、67Ga、68Ga、70As、71As、72As、74As、75Se、75Br、76Br、77Br、80Br、82Br、82Rb、86Y、88Y、89Sr、89Zr、97Ru、99Tc、110In、111In、113In、114In、117Sn、120I、122Xe、123I、124I、125I、166Ho、167Tm、169Yb、193Pt、195Pt、201Tl及び203Pbからなる群から選択される同位体および生体直交反応性基を含み、前記生体直交反応性基が、請求項3で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、請求項1又は2のいずれかに定めた式1のジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、イメージングプローブ。好ましくは、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される医薬活性化合物と生体直交反応性基を含む治療用プローブであり、前記生体直交反応性基が、請求項3で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、請求項1又は2のいずれかで定めた式1よるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、治療用プローブ。請求項4によるプレターゲット試薬を対処物に投与し、前記試薬を前記対象物のシステム内に、前記第1のターゲット部分が第1のターゲットへ結合するための有効な時間循環させ、次に前記体内から非結合試薬を除去することを含む、プレターゲット方法。請求項7のプレターゲット方法を実施して、請求項5のイメージングプローブを投与することを含むイメージング方法であり、前記プレターゲット試薬および前記イメージングプローブの生体直交反応性基が、[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、イメージング方法。対象物のターゲット医療治療の方法であり、請求項7のプレターゲット方法を実施し、次に請求項6の治療用プローブを投与することを含み、前記プレターゲット試薬および前記治療プローブの生体直交反応性基が一緒になって、前記[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、方法。請求項4に記載の試薬の、請求項7乃至9のいずれか一項に記載の方法での使用。請求項1又は2のいずれか一項に定められる式1を満たす化合物の、動物又はヒトのプレターゲット方法での使用。1以上のアキシャル置換基を持つトランスシクロオクテン、好ましくは実施態様1乃至4のいずれかで定められた式1を満たす化合物の、前記レトロディールスアルダー反応に基づくプレターゲット方法でジエノフィルとしての使用。ターゲット化医用イメージング及び/又は治療のためのキットであり、前記キットは少なくとも1つのプレターゲットプローブ及び少なくとも1つのエフェクタープローブを含み、前記プレターゲットプローブが第1のターゲット部及び第1の生体直交反応性部を、前記エフェクタープローブが、ラベル又は医薬的活性化合物などのエフェクター部及び第2の生体直交反応性部を含み、前記第1及び第2の生体直交反応性部のいずれかがジエノフィルであり、前記第1及び第2の生体直交反応性部がジエンであり、前記ジエノフィルが式1を満たす8-員環ジエノフィルであり:ここで、Rの位置はエカトリアルであり、Raのちはアキシャルであり、X、Y、RおよびRaは独立してそれぞれ、H又は最大6の、アルキル、O-アルキル、O-アリール、S-アルキル、Si-アルキル、F、Cl、Br、I、SO2、SO3、SO4、NO2、NR’R’’ここでR’およびR’’は独立してH又はアルキル、C=OO-アルキル、C=OO-アリール、C=ONR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル、OCO-アルキル、OCO-アリール、NR’CO-アルキルここでR’はH又はアルキル、NR’CO-アリールここでR’はアルキル、NR’C=OO-アルキルここでR’はH又はアルキル、NR’C=OO-アリールここでR’はH又はアルキル、OCONR’-アルキルここでR’はH又はアルキル、NR’CONR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、NR’CONR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、NR’CSNR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してHまアルキル、NR’CSNR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、R又はRaの1つは、場合によりスペーサーを介して前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブへのリンカー部に含まれ;R又はRa基の2つが共に環を形成し;及び少なくとも1つかつ最大4つのRaは水素ではない、キット。請求項13に記載のキットであり、前記ジエンが以下式2、3、4及び5に示される化合物:ここで、R1は、アルキル、アルール、O-アルキル、C=OO-アルキル、O-、及びNH2からなる群から選択され;A及びBはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、窒素、NO-、NRA及びBは共に炭素でない場合にRはアルキルからなる群から選択され;Xは、O、N-アルキル及びC=Oからなる群から選択され、及びYは、CRであり、RはH、アルキル、アリール、C=O-アルキルからなる群から選択され;ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、OH、C=OO-アルキル、CF3、C=ONH-アルキル及びNO2からなる群から選択され:Aは、N-アルキル、N-アリール、C=O及びCN-アルキルからなる群から選択され;BはOであり:Xは、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=O-アルキル及びNからなる群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここで、R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、OH、C=OO-アルキル、CF3、C=ONH-アルキル及びNO2からなる群から選択され;Aは、N、C-アルキル、C-アリール及びNO-からなる群から選択され;BはNであり;Xは、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=O-Oアルキル及びNからなる群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、2-ピリジル、フェニール、又はNO2、CN、COOH、COOR、CONH2、CONHR、CONR2、CHO、COR、SO2R、SO2OR、NO、Arなどの1以上の電子吸引基で置換されたフェニールRはC1~C6アルキルであり、Arとは芳香族基、特にフェニール、ピリジル又はナフチル基を表す、からなる群から選択される。第1のターゲット部分と生体直交反応性基を含むプレターゲット試薬であり、前記生体直交反応性基が、請求項13で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、請求項14で規定された式1のジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、プレターゲット試薬。本発明は、プレターゲットキット、プレターゲット方法及びその使用試薬を提供することを課題とする。前記望みに対応するために、本発明は、1つの側面で、ターゲット化医用イメージング及び/又は治療のためのキットを提供し、前記キットは少なくとも1つのプレターゲットプローブ及び少なくとも1つのエフェクタープローブを含み、前記プレターゲットプローブが第1のターゲット部及び第1の生体直交反応性部を、前記エフェクタープローブが、ラベル又は医薬的活性化合物などのエフェクター部及び第2の生体直交反応性部を含み、前記第1及び第2の生体直交反応性部のいずれかがジエノフィルであり、前記第1及び第2の生体直交反応性部がジエンであり、前記ジエノフィルが式1を満たす8-員環ジエノフィルであり:ここでRの位置はエクアトリアルであり、Raの位置はアキシャルであり、X、Y、R及びRaのそれぞれは独立して、H又は最大6まで、アルキル、アリール、O-アルキル、O-アリール、S-アリール、S-アルキル、SO-アリール、SO-アルキル、SO2-アリール、SO2-アルキル、Si-アリール、Si-アルキル、Si-O-アルキル、OCO-アルキル、OCO-アリール、SCO-アルキル、SCO-アリール、OCS-アルキル、OCS-アリール、SCS-アルキル、SCS-アリール、F、Cl、Br、I、N3、SO2H、SO3H、SO4H、PO4H、OH、SH、NO2、NO、CN、OCN、SCN、NCO、NCS、CF3、NR’R’’R’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、アリール、C=OO-アルキル、C=OO-アリール、C=SO-アルキル、C=SO-アリール、C=OS-アリール、C=SS-アルキル、C=SS-アリール、C=ONR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル、NR’CO-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’CO-アリールここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’C=OO-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’C=OO-アリールここでR’はH、アルキル又はアリールOCONR’-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、OCONR’-アリールここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’CONR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CONR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CSNR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CSNR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、CR’NR’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール;からなる群から選択される置換基を表し;R又はRaの1つで、場合によりスペーサーを介して前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブへのリンカー部に含まれ;R又はRa基の2つが共に環を形成し;及び少なくとも1つかつ最大4つのRaは水素ではない。他の側面で、本発明は、プレターゲット方法、同じくそこで使用するプレターゲット試薬、及びこのキットが使用されるターゲット化医用イメージング又は治療を提供する。さらなる側面で、本発明は、動物又はヒトでのプレターゲット方法の使用のための前記式1を満たす化合物である。さらに他の側面は、本発明は、レトロディールスアルダー反応に基づくプレターゲット方法でのジエノフィル反応物として1以上のアキシャル置換基を持つトランスシクロオクテンの使用に関する。本発明で使用される歪シクロオクテンジエノフィルは以下E-シクロオクテンとする。前記従来命名を参照する上で理解されるべきことは、置換基X又はYの結果として、前記置換基の位置及び分子量に依存して、同じシクロオクテン異性体が形式的にZ異性体となり得る、ということである。本発明及び本発明の全ての変更例において、形式的E又はZ、又はシス又はトランス異性体かどうかは、無置換トランス-シクロオクテン又は無置換E-シクロオクテンの誘導体と考えられる。用語トランス-シクロオクテンTCOはE-シクロオクテン同様、交換可能に使用され、本発明の全てのジエノフィルについて維持され、又置換基が形式的に逆の命名を必要とする場合であっても、維持される。即ち、本発明は、シクロオクテンに関し、ここで以下で炭素原子1及び6と数字付けされた炭素原子がEエントゲーゲン又はトランス位置にある。一般的には、本発明は、ジエノフィルとして、トランス-シクロオクテン誘導体、例えばトランス-シクロオクテノールを使用するシステムにおいて、前記異性体は、リンカー構造に誘導体化するために使用される前記ヒドロキシル基が、アキシャル位置となるように選択される。E-シクロオクテノールは、所謂クラウンエーテル立体配座であるが、2つの異性体を含み、その1つはOHをエカトリアル位置に持ちメジャー異性体となり、他の1つはOHをアキシャル位置に持ちマイナー異性体となる。後者異性体は、本発明により選択され以下E-マイナーとされる。理論に縛られるものではないが、本発明者は、この知見に基づき、TCOの1以上のアキシャル置換基の存在が、前記レトロディールスアルダー反応に基づくプレターゲット方法でのより高い反応性の必要性に答えることができるものである、と考える。広い意味で、本発明は従って、前記の式1を参照して与えられた置換基の定義を超えるものである。1以上のアキシャル置換基が存在するという事実は、結果としてより高いHOMOエネルギーとなる、と考えられる。当業者に知られるHOMOは、最高占有分子軌道の略である。本発明によれば、MOPACシミュレーションが前記TCOのHOMOエネルギーを決定するために使用される。MOPAC分子軌道パッケージは計算化学の分野ではよく知られたソフトウェアである。前記MOPACソフトウェアは、AMITIEやPM3を含むいくつかのよく知られた半経験的分子軌道計算方法を取り込んでいる。用語AMI及びPM3は異なるハミルトニアンを参照し、即ちオースチンモデルodel1及びパラメータ化モデル3ハミルトニアンであるAMIについては、M.J.S.Dewar、etal、J.Am.Chem.Soc、107、39021985;PM3についてはJ.J.P.Stewart、J.Comput.Chem.、10、2091989及びJ.Comput.Chem.、10、2211989を参照。本発明においては、コンピュータ環境下で、シクロオクテン誘導体の分子構造を与え、それぞれの分子構造を最低エネルギーが形成されるように最適化し、前記AMI及びPM3ハミルトニアンを決定し、及びそれにより最高占有分子軌道HOMOを決定する、ことを含む方法が使用される。表6のMOPACデータは、アキシャル置換基の存在は、トランス-シクロオクテン環にHOMOエネルギーを増加させる目的を達成する、ということを示す。本発明は、さらに、具体的な実施態様及び添付図面を参照して説明されるが、本発明はこれらに限定されるものではなく、特許請求の範囲にのみ限定される。請求項の全ての参照符号は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されてはならない。記載される図面は概略的なものであり限定するものではない。図面で、いくつかの要素のサイズは誇張されている場合があるが、これは説明のためだけに描かれており寸法通りではない場合がある。用語含むは、本発明の説明及び特許請求の範囲で使用される場合には、他の要素又はステップを排除するものではない。単数を示す不定冠詞1つの、ひとつのは、特に記載がない限り、複数を含む。さらに留意すべきことは、詳細な説明及び特許請求の範囲で使用される用語含むは、続いて列挙される手段に限定されるものではなく、他の要素及びステップを排除するものではない、ということである。従って、手段A及びBを含む装置なる表現の範囲は、部品A及びBのみからなる装置に限定されるものではない。本発明に関しては、これは、前記装置の単に関連する部品がA及びBである、ということを意味する。いくつかの化学式で、アルキル及びアリールが参照される。この観点で、アルキルとは、それぞれ独立して、O、N又はSなどの1~3のヘテロ原子を含み得る、炭素原子10まで、好ましくは1~6の炭素原子の、脂肪族、直鎖、分岐又は環状アルキル基を示し、アリールとは、それぞれ独立して、N又はSなどの1~3のヘテロ原子を含み得る、炭素原子10までの芳香族又はヘテロ芳香族基を示す。いくつかの式で、基又は置換基は、A、B、X、Yなどの文字、及びR基の種々の数字を参照して示される。これらの文字の定義は、それぞれの式に付されており、即ち特に記載のない限り異なる式ではこれらの文字はそれぞれ独立して異なる意味を持ち得る。本発明のさらなる好ましい実施態様では、以下いくつかの化学式において、アルキル及びアリールが参照される。この側面で、アルキルとは、それぞれ独立して、1~10のO、N又はSなどのヘテロ原子を含み得る、10までの炭素電子の、脂肪族、直鎖、分岐、飽和、不飽和及び/又は環状ヒドロカルビル基を示し、及びアリールとは、それぞれ独立して、20炭素原子までの芳香族又はヘテロ方構造基を示し、これは1~10のO、N又はSなどのヘテロ原子を含み得る。アリール基はまた、アルキルアリール又はアリールアルキル基簡単例:ベンジル基を含む。アルキル、アリール、アルキルアリール及びアリールアルキルが含み得る炭素原子の数は、かかる用語に先行する指定用語により示される砂割、C1~10アルキルとは、前記アルキル基が炭素原子を1~10含み得る、ということを意味する。本発明のいくつかの化合物は、キラル中心及び/又は互変異性体トートマーを含み得るが、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー及び互変異性体は本発明の範囲に含まれる。レトロディールスアルダー反応前記レトロディールスアルダーカップリング化学は一般的には、1対の反応物を含み、これらはカップリングして不安定な中間体を形成し、前記中間体はレトロディールスアルダー反応の唯一の副生成物として小分子これは出発物質に依存し、例えばN2、CO2、RCNなどを除去して安定な生成物を形成する。前記一対の反応物は、1つの反応物として即ち1つの生体直交反応性基、テトラジンの誘導体、例えば電子欠乏テトラジンなどの好適なジエン、及び他の反応物として即ち他の生体直交反応性基、式1により歪シクロオクテンを含む。例えば電子欠乏性置換テトラジンと本発明の歪E-シクロオクテンとの例外的に速い反応により、中間体を経て、N2を[42]レトロディールスアルダーシクロ付加での唯一の副生成物として除去することで安定なジヒドロピリダジンへ変換される結果となる。これは図2に示される。前記2つの反応種は非生物的であり、従って、インビボで迅速に代謝されることはない。それらは生体直交性であり、例えばこれらは生理的媒体中でお互いに選択的に反応する。その利点は、前記ジエン及びシクロオクテンは共に、細胞の内部又は表面及び血清などの全ての領域において生体分子とは反応しない、ということである。従って、本発明の前記化合物及び方法は、生体細胞、組織又は器官で使用され得る。さらに、前記反応種は比較的小さく、生体サイズを大きく変化させることなく生体サンプル又は生体器官内に導入可能である。[42]レトロディールスアルダー反応を用いることで、抗体などの大きいサイズの第1のターゲット部と、ラベル化剤、又は小さい反応相手、例えばテトラジン又はシクロオクテンを用いる他の分子と結合させることが可能となる。より大きな利点は、比較的小さい、例えばペプチドである第1のターゲット部は、ラベル化剤又は小さい適合化された反応相手、例えばテトラジン又はシクロオクテンを用いる他の分子と結合させることが可能となる。プレターゲットプローブ及びエフェクタープローブのサイズ及び性質は、第2のターゲット及び第2のターゲット部でそれほど影響されず、プレターゲット方法を小さいターゲット部のために使用されることを可能にする。このために、他の組織がターゲットされ得ることとなり、即ち前記プローブの目標は、抗体-ストレプトアビジンによる現在のプレターゲット方法の場合のように、血管系及び間質空間に限定されるものではない。前記逆電子要求ディールスアルダー反応についての参考文献は:Thalhammer、F;Wallfahrer、U;Sauer、J、TetrahedronLetters、1990、3147、6851-6854;Wijnen、JW;Zavarise、S;Engberts、JBFN、JournalOfOrganicChemistry、1996、61、2001-2005;Blackman、ML;Royzen、M;Fox、JM、JournalOfTheAmericanChemicalSociety、2008、13041、13518-19;R.Rossin、P.RenartVerkerk、SandraM.vandenBosch、R.C.M.Vulders、1.Verel、J.Lub、M.S.Robillard、AngewChemIntEd2010、49、3375;N.K.Devaraj、R.Upadhyay、J.B.Haun、S.A.Hilderbrand、R.Weissleder、AngewChemIntEd2009、48、7013及びDevarajetal、Angew.Chem.Int.Ed.、2009、48、1-5を含む。理解されるべきことは、広い意味で、本発明により、前記カップリング化学は、プレターゲットで使用され得る基本的に全ての、分子、基又は部分に適用され得る。即ち、かかる対の1つは、第1のターゲット部を持ち、これは第1のターゲットへ結合でき、及びさらに少なくとも1つの第2のターゲットを含む。他の1つは、前記第2のターゲットとの結合に使用される好適な第2のターゲット部であり、さらに、治療作用通常は医薬活性化合物を発揮するか、又はイメージング技術即ちラベルを適用されるか、又はその両方のために好適な部分を含む。従って、本発明によれば、プレターゲットプローブ及びエフェクタープローブのいずれかは、前記のアキシャル置換されたシクロオクテンで官能基化され、かつ他方はテトラジン又は他の好適なジエンで官能基化されている。これは図3に示される。図3の上図3aは、プレターゲットプローブを示し、これはジピリジルテトラジンを含み、これはリンカー部場合によりフレキシブルなスペーサーを含むを介して前記第1のターゲット部としての抗体へ結合されており、及びエフェクタープローブがリンカーフレキシブルなスペーサーを介して検出可能なラベルに結合されている。図3の下図3bは、丁度逆の場合を示し、即ちプレターゲットプローブがシクロオクテンを含み、及びエフェクタープローブがテトラジンを含む。図には立体化学が明記されていないが、本発明において前記シクロオクテンが前記式1によるアキシャル置換シクロオクテンであることは、理解される。ジエノフィル本発明の基本的な成果は、ジエノフィル、即ち前記の式1によるアキシャル置換TCOの選択であり、これにより前記生体直交カップリング反応の反応速度を10倍以上増加させることができる、ということである。又は言い換えると、反応時間はとうh粗生成物必要とされていた時間のほんの10である、ということである。さらに言い換えると、1つの反応物の濃度が10倍低いということである。広い意味で、ジエノフィルは、少なくとも1つアキシャル置換を持つトランス-シクロオクテンであり、即ち少なくとも1つの飽和炭素の少なくとも1つの位置が水素ではない、ということである。前記の通り、少なくとも1つで最大4のRaは水素ではなく、これはかかるRaが置換基又はリンカー構造に一部であることを意味する。好ましくは非水素のRaの数は1又は2である。より好ましくは、少なくとも1つ、最大4の非水素Raは、R2a、R3a、R4a及びR5aからなる群から選択される位置である。さらに好ましくは、R2a、R3a、R4a及びR5aの1又は2が非水素である。最も好ましくは、置換又はリンカー構造が、R3a及びR4aの1つ又は両方に存在することである。好ましくは、前記置換基は前記式1の説明に定義された基から選択される。より好ましくは、前記置換基Raはアルキル基又はO-アルキル基、より好ましくはメチル又O-t-ブチル基である。留意すべきことは、Raの前記選択は、エカトリアル位置即ち前記式1のR基に、他の炭素原子又は同じ炭素原子にいかなる置換基が存在するかどうかには関係ない、ということである。好ましくは、1又は2のアキシャル置換に加えてまた、1又は2のエカトリアル置換基が存在し、前記置換基が好ましくはリンカー構造の一部分であるR又はRaを含む。しかし、他の選択では、合成の努力と反応性の間のバランスをとるために、1又は2のRaが水素ではなく、かつ全ての他のR及びRaは水素である。さらなる選択では、X及び/又はYは、O-アルキル又はアルキルであり、さらの好ましくはメチルである。ジエン当業者は、前記レトロディールスアルダー反応で反応性であるジエンの多くを認識する。好ましくはジエンは、以下式2から5に示される。ここで、R1は、H、アルキル、アルール、CF3、CF2、CF2-R’、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=OR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’=SSR’’、NR’C=ONR’’R’’’、NR’C=SNR’R’’R’’’ここで、R’、R’’、R’’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルキルからなる群から選択され;A及びBはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、NO-、NRA及びBは共に炭素でない場合にRはアルキルからなる群から選択され;Xは、O、N-アルキル及びC=Oからなる群から選択され、及びYは、CRであり、RはH、アルキル、アリール、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’ここで、R’、R’’はH、アリール又はアルキルからなる群から選択される。シクロオクテンの反応相手として好適なジエンは:であり、ここで、R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、CF3、CF2-R’、NO2、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、OC=OR’’’、SC=OR’’’、OC=SR’’’、SC=SR’’’、S=OR’、S=O2R’’’、S=O2NR’R’’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’C=SSR’’、OC=ONR’R’’、SC=ONR’R’’、OC=SNR’R’’、SC=SNR’R’’、NR’C=ONR’R’’、NR’C=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール及びアルキルであり、R’’’は独立してアリール又はアルキルからなる群から選択され;Aは、N-アルキル、N-アリール、C=O及びCN-アルキルからなる群から選択され;BはO又はSであり:Xは、N、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=OR’、CC=SR’、CS=OR’、CS=O2R’’’、CC=OO-R’、CC=OS-R’、CC=SO-R’、CC=SS-R’、CC=ONR’R’’、CC=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル基であり、R’’’はそれぞれ独立してアリール又はアルキルから成る群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択される。シクロオクテンの反応相手として好適な他のジエンは:であり、ここで、R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、CF3、CF2-R’、NO2、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、OC=OR’’’、SC=OR’’’、OC=SR’’’、SC=SR’’’、S=OR’、S=O2R’’’、S=O2NR’R’’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’C=SSR’’、OC=ONR’R’’、SC=ONR’R’’、OC=SNR’R’’、SC=SNR’R’’、NR’C=ONR’R’’、NR’C=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール及びアルキルであり、R’’’は独立してアリール又はアルキルからなる群から選択され;Aは、N、C-アルキル、C-アリール及びNO-からなる群から選択され;BはNであり;Xは、N、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=OR’、CC=SR’、CS=OR’、CS=O2R’’’、CC=OO-R’、CC=OS-R’、CC=SO-R’、CC=SS-R’、CC=ONR’R’’、CC=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はarukiru基であり、R’’’はそれぞれ独立してアリール又はアルキルから成る群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択される。特に有用なテトラジン誘導体は、電子欠乏テトラジン、即ち一般的に電子供与として保持せず、好ましくは電気吸引性置換基を持つ基又は部分で置換されたテトラジンである。これらの電子欠乏タトラジンは一般的には次の構造式を持ち:ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、H、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、2、6-ピリミジル、2、5-ピリミジル、3、5-ピリミジル、2、4-ピリミジル又はフェニールであって、これらは場合によりNO2、F、Cl、CF3、CN、COOH、COOR、CONH2、CONHR、CONR2、CHO、COR、SO2R、SO2OR、NO、Arなどの1以上の電子吸引基で置換されていてもよいRはC1~C6アルキルであり、Arとは芳香族基、特にフェニール、ピリジル又はナフチル基を表す、からなる群から選択される。式2から5のそれぞれによる化合物で、R1及びR2基そのX及びY基を含むは、さらに、以下説明するような好適なリンカー又はスペーサーを含み得る。同様に又は独立して、前記式1のジエノフィルはさらに、以下説明するような好適なリンカー又はスペーサーを含み得る。1つの実施態様では、本発明はターゲットイメージングのために使用される。この実施態様によると、第1のターゲットのイメージングが、前記プレターゲットプローブの前記第1のターゲット部の特異的な結合及びこの結合を前記エフェクタープローブに含まれる検出可能なラベルを用いて検出することにより達成され得る。第1のターゲット本発明で使用される第1のターゲットは、診断及び/又はイメージング方法で検出されるターゲット、及び/又は変更され、結合され又は医薬活性化合物が輸送されるターゲットに関連する。前記第1のターゲットは、ヒト又は動物体内又は病原体や寄生虫の全ての好適なターゲットから選択され得るものであり、例えば、細胞膜や細胞壁などの細胞、細胞膜受容体のような受容体、ゴルジ体やミトコンドリアなどの細胞内構造、酵素、受容体、DNA、RNA、ウイルスまたはウイルス粒子、抗体、タンパク質、炭水化物、単糖類、多糖類、サイトカイン、ホルモン、ステロイド、ソマトスタチン受容体、モノアミン酸化酵素、ムスカリン受容体、心筋神経系、例えば白血球上ロイコトリエン受容体、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体μPAR、葉酸受容体、アポトーシスマーカー、抗血管新生マーカー、ガストリン受容体、ドーパミン系、セロトニン作動系、GABA作動性システム、アドレナリン作動系、コリン作動系、オポイド受容体、GPIIb/IIIa受容体や他の血栓関連受容体、フィブリン、カルシトニン受容体、タフシン受容体、インテグリン受容体、VEGF/EGF受容体、EGFマトリックスメタロプロテアーゼMMP、P/E/L-セレクチン受容体、LDL受容体、P-糖蛋白質、ニューロテンシン受容体、神経ペプチド受容体、サブスタンスP受容体、NK受容体、CCK受容体、シグマ受容体、インターロイキン受容体、単純ヘルペスウイルスチロシンキナーゼ、ヒトチロシンキナーゼを含む群から選択される。本発明の特に具体的な実施態様によると、前記第1のターゲットはレセプターなどのタンパク質である。又は、前記第1のターゲットは、感染や癌などの疾患の際にアップレギュレートされる代謝経路であり得、例えばDNA、合成、タンパク質合成、膜合成及び炭水化物取り込みなどである。疾患組織で、前記マーカーは健康な組織とは異なり、早期検出、特異的診断及び治療、特にターゲット治療のためのユニークな可能性を提供し得る。プレターゲットプローブプレターゲットプローブは、対象とする前記第1のターゲットへ結合し得る部分を含む。ターゲット部分は通常は、細胞表ターゲット例えば膜レセプター、構造タンパク質例えばアミロイド斑、又は細胞内ターゲット例えば、RNA、DNA、酵素、細胞シグナル伝達系に親和性を持つ構造物である。これらの部分は、抗体断片、タンパク質、アプタマー、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、同様にペプチド、ペプタイド及び医薬化合物などであって、特定の疾患又は異常において蓄積されることが知られているものである得る。本発明のきっとで使用される好適な第1のターゲット部分の具体的な実施態様は、個々に記載されレセプター結合性ペプチド及び抗体を含む。本発明の具体的な実施態様は、ペプチドなどの小さいターゲット部分の使用に関し、それにより細胞透過性ターゲットプローブを得ることが可能となる。本発明で使用される第1のターゲット部分は、第1のターゲットに結合する前記ターゲットプローブの部分に関する。第1のターゲット部分の具体的例示はレセプターに結合するペプチド又はタンパク質である。第1のターゲット部分の他の例示は細胞性化合に結合する抗体又はその断片である。抗体は、タンパク質又はペプチド同様に、非タンパク質性化合物とすることも可能である。他の第1のターゲット部分は、アプタマー、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖と同様に、ペプトイド及び有機医薬化合物からも作成され得る。第1のターゲット部分は好ましくは、高特異性、高親和性で、場合により共有結合で結合し、前記第1のターゲットとの結合は好ましくは体内安定である。前記列挙の第1のターゲットの特異的ターゲットを可能にするために、前記ターゲットプローブの第1のターゲット部分は、限定されるものではないが、Fab2、Fab、scFVなどの抗体断片、二重特異的抗体、ポリマーEPR効果による腫瘍ターゲット化タンパク質、ペプチド例えばオクトレオチド及び誘導体、VIP、MSH、走化性ペプチド、ボンベシン、エラスチン、ペプチド類似物、炭水化物、単糖類、多糖類、ウイルス、全細胞、ファージ、医薬物、化学療法医薬、レセプター作動薬及び拮抗剤、が含まれる。本発明に含まれる有機化合物の例は、エストラジオール、アンドロゲン、プロゲスチン、コルチコステロイド、パクリタキセル、エトポシド、ドキソルブリシン、メトトレキサート、葉酸及びコレステロールなどのエストラゲン又はその誘導体である。本発明の1つの具体的実施態様によると、前記第1のターゲットは、限定されるものではないが、レセプターなどのリガンド又はその一部分であってなお前記レセプターに結合するもの、例えばレセプター結合性タンパク質リガンドの場合のレセプター結合性ペプチドである。タンパク質性の第1のターゲット部分の他の例は、アルファ、ベータ、ガンマインターフェロンなどのインターフェロン、インターロイキン、及び腫瘍成長因子などのタンパク質成長因子、例えばアルファ、ベータ腫瘍成長因子、血小板成長因子PDGF、μPARターゲットタンパク質、アポリポタンパク質、LDL、アネキシンV、エンドスタチン及びアンジオスタチンを含む。第1のターゲット部分の他の例は、例えば前記第1のターゲットと相補的である、DNA、RNA、PNA及びLNAを含む。本発明の1つの具体的実施態様によると、細胞内の第1のターゲットへ結合し得る小さい脂質親和性第1のターゲット部分が使用される。本発明のさらなる具体的実施態様によると、前記第1のターゲット及び第1のターゲット部分は、癌、炎症、感染症、心血管疾患などの組織又は疾患、血栓、アテローム性動脈硬化症などの心臓欠陥疾患、脳卒中などの低酸素サイト、腫瘍、心臓血管疾患、脳疾患、アポトーシス、血管形成、器官、およびレポーター遺伝子/酵素などの特異的ターゲット化又は強調ターゲット化を可能にする。これは、組織、細胞又は疾患特異的発現を用いて第1のターゲットを選択することで達成できる。例えば、膜葉酸レセプターは、葉酸エステル及びメトトレキサートなどの類似物の細胞内特席を媒介する。発現は正常組織では元適されているが、種々の腫瘍細胞タイプではレセプターが過剰発現している。1つの実施態様によると、前記プレターゲットプローブ及び前記エフェクタープローブは、多量体化合物であって、複数の第1の及び/又は第2のターゲット及び/又はターゲット部分を含む。これらの多量体化合物は、ポリマー、デンドリマー、リポソーム、ポリマー粒子又は他のポリマー性構造物であり得る。検出シグナルの増幅の特に興味あることは、1以上の第2のターゲットを持つターゲットプローブであり、これはいくつかのエフェクタープローブの結合を可能にする。プレターゲットプローブはさらに、前記の第1の生体直交反応基を持つ。この基は、前記レトロディールスアルダーカップリング化学の前第1の反応相手を与える前記ターゲットプローブの部分として、第2のターゲットとして作用する。前記第2のターゲットは前記の通り、前記カップリング反応のいずれかの相手となり得る。即ち、1つの実施態様では、電子欠乏テトラジンである。他の実施態様では、前記式1のアキシャル置換TCOである。前記プレターゲットでは、前記第1のターゲット部分及び前記第1の生体直交反応基はお互いに直接リンクされている。これらはまた、お互いにリンカーを介して結合され、さらにこれらは共に第1のターゲット足場scaffold、例えばポリペプチドなどの生体ポリマーにリンクされ得る。即ち、最も単純な意味で、前記リンカー部は1つの結合である。好適なリンカー部はさらに、限定されるものではないが、2から200、具体的には3から113、及び好ましくは5から50の間の繰り返し単位のポリエチレングリコール鎖PEGを含む。前記PEG鎖長を調節することで、生理的システム中での前記プローブの循環時間を変更することができる。これはプレターゲットプローブについて特に関係がある前記第1のターゲット部分と前記第1のターゲットをリンクする最初のターゲットステップが、比較的遅いプロセスを含み、比較的長い循環時間を必要とするからである。リンカー部は場合により生体ポリマー断片、例えばオリゴ又はポリペプチド又はポリラクトドを含む。理解されるべきは、本発明は、前記ジエンとジエノフィルが前記プレターゲット又はエフェクタープローブのいずれかに攻撃され得る全ての方法を含む、ということである。例えばリジンやシステインなどの反応性アミノ酸によりこれらのプローブへ共役させる方法は当業者に知られている。エフェクタープローブエフェクタープローブは、望ましい診断、イメージング、及び/又は治療の効果を与えることのできるエフェクター部分を含む。前記エフェクタープローブは第2のターゲット部分を含む。前記第2のターゲット部分は、利用可能な第2のターゲットの反応相手、即ち前記プレターゲットプローブ内に含まれる前記生体直交反応基を形成する前記エフェクタープローブの部分である。理解されるべきことは、前記第2のターゲットが前記式1のアキシャル置換TCOであるという範囲において、前記第2のターゲット部分はテトラジンなどのジエンであり、又はその逆である、ということである。前記エフェクター部分は例えば検出可能なラベルであり得る。ここで使用される検出可能なラベルとは、前記エフェクタープローブの部分であり、例えば細胞、粗生成物s基又は器官内に存在する場合に前記プローブの検出を可能にする部分を意味する。本発明の範囲に含まれる検出可能なラベルの1つのタイプは造影剤である。異なるタイプの検出可能なラベルが本発明の範囲に含まれ以下説明される。従って、本発明の具体的な実施態様によれば、本発明のプレターゲットキット及び方法はイメージングにおいて使用され、特に医用イメージングにおいて使用される。前記第1のターゲットを識別するために、エフェクタープローブとして、1以上の検出可能なラベルを含むイメージングプローブが使用される。前記イメージングプローブの検出可能なラベルの具体的な例は、MRI-イメージング可能構造物、スピンラベル、光学ラベル、超音波応答構造物、X線応答部分、放射性元素、生体発光及びFRETタイプの色素などの従来のイメージングシステムで使用される造影部分である。本発明に含まれる検出可能なラベルの例は、限定されるものではないが、蛍光分子、例えば自動発光分子、試薬に接触すると発光する分子、放射性元素ラベル;ビオチン、例えばアビジンによるビオチンの結合を介して検出される;蛍光タグ、常磁性金属を含むMRIのためのイメージング構造物、米国特許第4、741、900号及び5、326、856号に記載されたイメージング試薬を含む。イメージングに使用される放射性元素は、3H、11C、13N、15O、18F、19F、51Cr、52Fe、52Mn、55Co、60Cu、61Cu、62Zn、62Cu、63Zn、64Cu、66Ga、67Ga、68Ga、70As、71As、72As、74As、75Se、75Br、76Br、77Br、80Br、82Br、82Rb、86Y、88Y、89Sr、89Zr、97Ru、99Tc、110In、111In、113In、114In、117Sn、120I、122Xe、123I、124I、125I、166Ho、167Tm、169Yb、193Pt、195Pt、201Tl及び203Pbからなる群から選択される。他の元素及び同位体で、治療のためなどに使用されるものはまた、ある応用においてイメージングのために適用され得る。MRIイメージング可能部分は、例えば常磁性イオン又は超常磁性粒子であり得る。前記常磁性イオンは、Gd、Fe、Mn、Cr、Co、Ni、Cu、Pr、Nd、Yb、Tb、Dy、Ho、Er、Sm、Eu、Ti、Pa、La、Sc、V、Mo、Ru、Ce、Dy、Tlからなる群から選択され得る。超音波応答部分は、マイクロバブル、リン脂質からなるシェル及び/又は生分解性ポリマー、及び/又はヒト血清アルブミンを含み得る。前記マイクロバブルは、フッ化ガス又は液体で充填され得る。X線応答部分は、限定されるものではないが、ヨウ素、バリウム、硫酸バリウム、ガストログラフィンを含み、又ベシクル、リポソーム又はヨウ素及び/又は硫酸バリウムで充填されたポリマー性カプセルを含み得る。さらに、本発明に含まれる検出可能なラベルはまた、例えば検出可能なラベル化抗体の結合により又はサンドイッチタイプのアッセイにより結合抗体を検出することにより、検出されるペプチド又はポリペプチドを含む。1つの実施態様では、検出可能なラベルは小さいサイズの有機PET及びSPECTラベルでえあり、18F、11C又は123Iである。この小さいサイズにより、有機PET又はSPECTラベルは、細胞内事象をモニターするための理想的に好適であり、というのはそれらは一般に前記ターゲット装置の性質及び具体的にその膜輸送へ大きくは影響しないからである。PETラベル及び第2のターゲット部分としていずれかの前記レトロディールスアルダー活性部分を含むイメージングプローブは脂質親和性であり、結合相手を見出すまで細胞内を又は細胞から能動的に拡散され得る。さらに、両方の成分は、血液脳関門の横断を排除せず、従って脳内の領域をイメージングすることを可能にする。前記エフェクタープローブが、ランタニド例えばGdなどの金属に基づくMRIの造影強化のための脱着可能なラベルを含むことができ、これは好ましくはキレートに形で提供される。かかる場合には、エフェクタープローブは好ましくは、かかる金属と配位錯体を形成し得る構造部分を持つ。ここで好ましい例は、大環状ランタニドIIIキレートであり、1、4、7、10-テトラアザシクロドデカン-1、4、7、10-四酢酸H4dota、及び1、4、7、10-テトラアザシクロドデカン-α、α’、α’’、α’’’-テトラメチル-1、4、7、10-四酢酸H4dotmaである。前記エフェクター部分はまた、医薬活性化合物などの治療部分である得る。医薬活性化合物の例はここで与えられている。治療プローブは、場合によりまた検出可能なラベルを含む。従って、他の実施態様によると、本発明の前記プレターゲットキット及び方法は、ターゲット治療に使用される。これは、第2のターゲット部分及び1以上の医薬活性試薬即ち、医薬又は放射線治療での放射性同位元素を含むエフェクタープローブの使用を行うことで達成される。ターゲット医薬輸送の使用に好適な医薬は当技術部分野で知られている。場合により、治療プローブはまた、1以上のイメージング試薬などの検出可能なラベルを含むことができる。治療のために使用される放射性同位元素は、例えば、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される。または、治療プローブ内の医薬は、光動的治療のための増感剤から選択される。又は前記治療プローブは、インビボで治療位置、例えばT細胞、ナチュラルキラー細胞又はその他のタンパク質などの内因性構造物へ結合する認識部分を含む。エフェクタープローブで、前記第2のターゲット部分、即ち第2の生体直交反応基及び前記エフェクター部分は、お互いに直接リンクされ得る。これらはまた、リンカーを介してお互いに結合され、さらにこれらは共に第2のターゲット足場scaffoldに結合され得る。前記リンカーは、独立して、同じ部分から選択されることができ、例えば前記のポリエチレングリコールである。前記第2のターゲット足場は、例えばポリペプチドなどの生体ポリマーであり得る。本発明はまた、レトロディールスアルダー反応を用いるプレターゲット方法に関する。ここで、好適なジエン、好ましくは前記式2から5のいずれかの化合物、又は前記式1のシクロオクテンで官能基化された第1のターゲット部分を含むプレターゲットプローブ例えば抗体及び抗体断片又はレセプター結合ペプチドを対象物に注入される。前記ターゲット例えば第1の又は転移性腫瘍性病変、動脈硬化性プラーク、梗塞領域、炎症又は感染サイトなどへの結合及び前記循環及び非ターゲット組織例えば血液、肝臓、脾臓、腎臓などからの除去の後、第2のターゲット部分を含むエフェクタープローブ、例えばE-シクロオクテン又はテトラジン誘導体それぞれ即ち、前記プレターゲットプローブの前記生体直交反応基の対向反応相手、及び医薬又はイメージング可能ラベルが注入される。前記エフェクタープローブは前記第1のターゲット部分に結合し、前記疾患サイトの造影又は選択的処置を提供する。本発明はまた、一般的な代謝経路のターゲットに関し、これは疾患感染や癌などの際にアップレギュレートされるものであり、例えばDNA、タンパク質及び膜合成及び炭水化物取り込みなどである。好適なプローブは、[11C]-メチオニン、[18F]-フルオロデオキシグルコースFDG、デオキシ-[18F]-フルオロチミジンFLT及び[11C]-コリンで現在使用されている代謝トレーサーに類似する、ジエン又はジエノフィルラベル化アミノ酸、糖、核酸及びコリンが含まれる。高い代謝や増殖を行う細胞はこれらをより多く取り込む。この方法で、例えばテトラジン又はE-シクロオクテン誘導体がこれらの又は他の経路に入り細胞内及び/又は細胞上に蓄積される。十分な蓄積がなされ遊離プローブを洗浄した後、検出可能にラベル化された又は医薬担持細胞透過性テトラジンプローブ又はE-シクロオクテンプローブ又は本発明により他のジエン/ジエノフィル担持プローブは、前記蓄積されたE-シクロオクテン、テトラジン代謝物それぞれに結合するために送られる。通常のFDGフッ素18フルオロデオキシグルコースタイプのイメージングでの利点は、放射活性物を導入する前に前記ターゲット部分を高蓄積させる十分な時間があり、それにより前記ターゲットと非ターゲットとの比率を増加させることができる、ということである。又は、疾患に特異的な代謝経路及び/又は代謝物がターゲットされ得る。本発明はまた、細胞内ターゲットのプレターゲットに関する。サイズが小さいことから、有機PETラベル18F、11Cは細胞内事象をモニターするために理想的であり、というのは一般に前記ターゲット装置及び特に大ききかつ極性の放射性金属キレート構造共役と対照的に前記膜輸送に対して大きな影響を与えないからである。本発明で使用される前記置換テトラジン部分及び前記E-シクロオクテンは、小さいことは必須ではなく、それらは比較的非極性であり、細胞内のタンパク質、mRNA、シグナル伝達経路などのイメージングのために使用され得る。前記第2例えばPETラベルのち管テトラジン部分又はE-シクロオクテンプローブ即ちエフェクタープローブは、その結合相手を見出すまで細胞内で又は細胞外へ能動的に拡散核酸することができ、又は活性取り込み機構の対象となる。これらの性質はまた、両方の成分が脳血管関門を溶断することを排除しないからである脳内でプレターゲットのためにレトロディールスアルダー反応の使用を可能にする。本発明はまた、プレターゲットシグナル増幅及び/又は多価装備に関する。少なくとも1つの第1のターゲット装置が、多数のテトラジン部分を含むデンドリマー、ポリマーー又はナノ粒子へ共役される。レセプター結合後、核イメージング例えば放射性金属キレート、放射性ハロゲンなど又はMRI例えばGdキレートのための1以上の造影部分が共役された1又はそれ以上のシクロオクテンが注入される。その結果前記続くレトロディールスアルダー反応により、前記ターゲット組織でMRI造影剤は高濃度となる。さらに、前記ターゲットサイトでの多価性は、前記アキシャル置換TCOエフェクター共役の反応速度を増加させ、例えばMRI造影剤の効果的なターゲット蓄積を可能にする。通常は、前記アキシャル置換TCOはまた、前記ターゲット装置共役で、及び前記レセプターと共役された前記テトラジン又は本発明の他のジエンで使用され得る。共役経路及びキット本発明はさらに、イメージング剤と医薬をペプチドなどのターゲット構造物に共役させる経路としてレトロディールスアルダー反応を使用することに関する。前記エフェクターは、有機PET又はSPECT核ラベル化合成基、PET/SPECT/MRI用金属錯体及び超音波イメージングのためのマイクロバブルを含みことができるが、しかしまた、放射線治療用α線及びβ線放射及び一般に細胞毒性抗癌剤を含み得る。前記イメージング剤/治療薬は、ペンダントテトラジン又はその他の好適なジエン部分で官能基化され、前記ターゲット基が前記アキシャル置換TCO誘導体で官能基化されるか、又はそれらの逆が可能である。現在の経路は特に核イメージング及び放射線治療のために試薬にとって有利である:放射性核の減衰の点から、最も時間を要するステップ対象物の体内で実際のターゲット化するをプレターゲットステップとして実施することは有利である。本発明によれば、前記第2のターゲット化のための前記の非常に速いレトロディールスアルダー化学を得るためにアキシャル置換TCOの選択することで、既存の方法と比べてより短寿命の種を含む広い範囲の放射線核種を使用することを可能にする。アキシャル置換TCO官能基化エフェクタープローブ及び好適なジエン、例えばテトラジン担持プレターゲットプローブは、インビボで、エフェクター部分例えば放射性核を持続的に血液循環させる必要がなく、非常に低い濃度でカップリングさせることを可能にする。理解されるべきことは、このことは、ジエン特にタトラジンと結合されたアキシャル置換TCO担持プレターゲットプローブ、官能基化エフェクタープローブについても該当する、ということである。さらに、前記反応基は有利には安定であり、及び従って副反応を容易に生じることなくより長い寿命反応性を表す。理解されるべきことは、前記方法は、患者へ放射線投与を最小化するなどの利点を与えるということである。またこれは、SPECT即ち、シングルフォトンエにッションコンピュータトモグラフの代わりにPET即ちポジトロンエミッショントモグラフ剤の使用を可能にするということである。さらには前記反応性の増加は、インビボより低濃度で適用することを可能にする。本発明は、特に、マルチモーダルイメージング、場合により同じターゲットを可視化させる異なるイメージング剤を用いる、マルチモーダルイメージンに好適である。又は前記イメージングプローブは、少なくとも2つの異なるラベルを有しマルチモーダルイメージングを可能にする。本発明の前記改良[42]レトロディールスアルダー化学の分子イメージングへの適用は、プレターゲット方法を、全てのタイプ及びサイズのターゲット構造体へ適用可能にするものである。これは、細胞内及び代謝イメージングが、プレターゲット蓄積から達成可能となる、高ターゲット蓄積及び低バックグランドにより、利益を得ることを可能にする。同様に、プレターゲットシグナル増幅方法、例えばポリテトラジン及び/又はポリアルキレンデンドリマー又はリポソームは、より小さく、かつより広範囲のターゲット装置を利用可能なものとする。前記反応相手が非生物的であり生体直交性であることから、アキシャル置換TCOを前記ジエノフィルとして用いる[42]レトロディールスアルダー反応を用いるプレターゲットは、内因性競合及び代謝/分館には邪魔されず安定な共有結合を可能にする。ターゲット代謝経理、及び例えば正常細胞に対して腫瘍細胞でその高い濃度の対応するテトラジン代謝誘導体は、高濃度の人工テトラジンレセプターの装備又は細胞中又はターゲット細胞の表面で他の化学的ハンドルの装備を可能にし、場合により低レベルであり得る内因細胞表面レセプターの使用を回避することを可能にする。本発明のさらなる具体的実施態様はキットに関し、このキットは代謝前駆体とイメージングプローブを含み、より具体的には、前記イメージングプローブは検出可能なラベルを含み、これは通常のイメージングシステインで使用される造影剤である。かかる検出可能なラベルは、限定されるものではないが、MRI-イメージング可能な構造物、スピンラベル、光学ラベル、超音波応答剤、X線応答剤、放射性核及びFレT-タイプの色素が挙げられる。本発明の具体的な実施態様では、レセプタープローブが使用される。かかるレセプタープローブは、酵素の基質であり、前記酵素はより具体的には前記細胞には内因性でなく、遺伝子治療又は外部試薬の感染により導入されたものであり得る。ここで細胞又は組織に関して非内因性とは、前記遺伝子が天然には存在せず及び/又は細胞又は組織で発現しないものを意味する。又は、かかるレセプタープローブは、レセプター又はポンプの方法で細胞内に導入された分子であり、内因性であるか、又は遺伝子治療又は外部試薬の感染により細胞内に導入されたものであり得る。又は前記レセプタープローブは、細胞又は組織環境である変化条件に反応する分子であり得る。本発明はまた、前記キットのための試薬を含む。1つのかかる試薬は、プレターゲット剤であり、第1のターゲット部分及び生体直交反応基を含み、前記生体直交反応基が、[42]レトロディールスアルダー反応の相手である。具体的な反応相手はこれまで説明されたものであり、即ち一般的には、電子欠乏性テトラジン又はその他の前記好適なジエンであるか、又は本発明によるアキシャル置換されたシクロオクテンのいずれかである。本発明はまた、これらの試薬を、ターゲット医用イメージング又はターゲット治療での使用に関し、及びかかる方法でのそれらの試薬の使用に関する。具体的には、本発明はこれらの試薬のプレターゲット方法での使用、及びかかる方法での使用のためのこれらの試薬に関する。他のかかる試薬は、イメージングプローブであり、検出可能なラベル及び生体直交反応基を含み、前記生体直交反応基が、[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手である。本発明はまた、イメージングプローブに関し、検出可能なラベル及び生体直交反応基を含み、前記生体直交反応基が、[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手である。本発明はさらに、治療プローブに関し、医薬活性化合物及び生体直交反応基を含み、前記生体直交反応基が、[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手である。本発明の一部はまた、プレターゲット方法であり、これは前記プレターゲット試薬を対象物に投与し、及び前記試薬を前記対象物のシステム内に、前記第1の対象物部分が第1のターゲットに到達する有効な時間の間循環させ、続いて非結合の試薬を前記体内から除去することを含む。通常このための時間は12から96時間であり、具体的には≒時間である。さらに、本発明はイメージング方法を提供するものであり、前記方法は、前記のプレターゲット方法を実行し、続いてまた本発明によるイメージングプローブを投与し、前記プレターゲット試薬及び前記イメージングプローブ中の前記生体直交反応基が[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成させることを含む。同様に、本発明は、対象物内で、ターゲット医学治療の方法を提供し、前記方法は、前記プレターゲット方法を実行し、続いてまた本発明による治療プローブを投与し、前記プレターゲット試薬及び前記イメージングプローブ中の前記生体直交反応基が[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成させることを含む。本発明はまた、前記イメージング又は治療で使用するための前記プレターゲット試薬を含む。まとめると、レトロディールスアルダー化学に基づき、生体直交プレターゲット分子イメージング及び治療が患者に大きな利益をもたらす。一方で、これは、癌及び血液循環器系疾患の顕著な画像を取得することを可能にする。他方で、放射性化合物及び一般的に潜在的に毒性の医薬物の投与から生じる本来的な副作用は、疾患組織へ到達する有効用量が増加することから、大きく低減され得る。さらには、疾患を生じる追跡可能な分子事象の収集を大きく広げるものである。特にこの技術は、血管からずっと離れたターゲット組織への到達させ、情報の豊富な細胞内環境のイメージングを容易にするものである。本発明は、以下の非限定的な実施例及び添付された非限定的な図面に基づいて説明される。材料全ての試薬及び溶媒は、市販品試薬はSigma-Aldrich、Acros、ABCR、Invitrogen及びMerckから入手、通常及び重水素化溶媒はBiosolve、Merck及びCambridgeIsotopeLaboratoriesから入手から入手し、特に記載されていない限りさらに精製することなく使用した。1-アミノ-3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36-ドデカオキサノトリアコンタン-39-酸21はPolypureから入手。111In塩化物及び[125I]ヨウ化ナトリウム溶液はPerkinElmerから入手した。水は蒸留して、milli-Q水濾過システムMilliporeで脱イオン化18MΩcmした。前記ラベル緩衝液は、Chelex-100樹脂BioRadLaboratoriesで一晩処理し、次に0.22μmを通して4°Cで貯蔵した。Iodogenヨウ素化チューブ、ビシンコニン酸BCAアッセイのキット、ゲルコード青色タンパク質染色溶液及びZeba脱塩スピンカラム40kDaMWカットフ、0.5-2mLはPierceProteinResearchThermoFisherScientificから入手した。リン酸緩衝生理食塩水PBSpH7.4を調製するための錠剤はCalbiochemMerckから入手した。AmiconUltra-4及びUltra-15遠心濾過ユニット50kDaMWカットオフはMilliporeから入手した。マウス血清はInnovativeResearchから入手した。テトラジン28の合成及び放射性ラベル化は、RossinらのAngewChemIntEd2010、49、3375に記載の方法で実施した。方法NMRスペクトルはCDCl3又は[D6]DMSO中で、BrukerDPX300スペクトルメータ又はBrukerAvance600スペクトルメータで測定した。13CNMR多重性q=4級、t=3級、s=2級及びp=1級はDEPTパルスシーケンスを用いて識別した。高分解能ESIスペクトルHRMSは、AgilentESI-TOF質量分析装置で、陽イオンモードで測定された。分取用カラムクロマトグラフは、CombiflashCompanion装置TeledyneIscoによりSiliCycleシリカカラムを用いて行った。分取用HPLCは、Agilent1200装置を用いて実施され、C18Zorbaxカラム21.2x150mm、5μm粒子で、水及びMeCN0.1TFA含有の勾配を用いて行った。分析放射性-HPLCは、Gabi放射性検出装置Raytestを付けたAgilent1100システムを用いて行った。サンプルを、AgilentEclipseXDB-C18カラム4.6X150mm、5μm粒子に負荷し、0.1TFAを含む水中でMeCNの直線的勾配2分間は19MeCNで、次に11分間45MeCNに増加を用いて1mL/分で溶出した。、UV波長は254nmmと設定された。サイズ排除SECHPLCは、Gabi放射性検出装置Raytestを付けたAgilent1200システムを用いて行った。サンプルを、BioSep-SEC-S2000カラム300x7.8mm、5μm粒子、Phenomenexに負荷し、20mMリン酸、150mMNaCl、pH6.8を用いて、1mL/分で溶出した。UV波長は260及び280nmに設定された。111In及び177Luラベル化の収率は、ITLC-SGストリップPallによる放射性TLCにより行い、0.9NaCl水溶液中の200mMEDTAで溶出させ、発光イメージング装置FLA-7000、Fujifilm上で画像化された。これらの条件で、遊離の111IN及び177Luは、Rf=0.9で移動し、一方111In/177Lu-テトラジンは最初の位置にとどまった。125Iラベル化収率はまた、ITLC-SGストリップPallによる放射性TLCにより行い、1:1MeOH/酢酸エチル混合物で溶出させ、発光イメージング装置上で画像化された。この条件で、遊離の125I及び125I-SHPPは、Rf=0.9で移動し、一方125I-mAbは最初の位置にとどまった。等電点電気泳動IEF分析及びSDS-PAGEはPhastgelシステムを用いて、IEF-3-9ゲル及び7.5PAGE均一ゲルGEHealthcareLifeSciencesをそれぞれ使用して行った。前記IEF標準溶液広いPI、pH3~10はGEHealthcareから入手し、タンパク質MW標準溶液精度及び色標準はBioRadから入手した。電気泳動で、前記ゲルを2時間ゲルコード青で染色し、水中で脱染色し、次に従来に平坦麺スキャナーでデジタル化した。CC49の濃度は、NanoDrop1000スペクトルメータ吸収波長280nm;ThermoFisherScientific又はBCA試験で決定された。LS174T腫瘍モデル。ヒト大腸癌細胞下部LS174TはATCCから入手し、10熱不活性化ウシ胎児血清Gibco、ペニシリン100U/mL、ストレプトマイシン100μg/mL及び2mMのGlutamaxを追加したEagleの最小必要培地Sigma中に保持した。ヌードメスBalb/Cマウス20~25g体重、CharlesRiverLaboratoriesに、100μLの滅菌PBS中の5x106細胞を皮下接種した。実施例1図3aで概要が示される抗体へテトラジン誘導体部分をリンクする例として、分子1図5参照が合成された。E-シクロオクテンから誘導される、対応するプローブ2の例は、図6で表される。両方の分子はPEG鎖を含む。分子1はN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含み、これは前記抗体中のアミノ基を持つ前記分子とカップリングするために使用される。分子2のDOTA誘導部分は、MRイメのためのGd又は核イメージング及び治療SPECTのためのLu-177などの貴金属イオンを担持するために使用され得る。1の合成は図5に概説されている。出発テトラジン誘導分子5は、BlackmanらのBlackman、ML;Royzen、M;Fox、JM、JournalofTheAmericanChemicalSociety、2008、13041、13518-19により合成された。これは、無水グルタル酸との反応で酸6に変換され、次にそのN-ヒドロキシスクシンイミドエステル7へ変換される。このN-ヒドロキシスクシンイミドエステルは、市販IRISbiochemのPEG誘導体8と反応させて酸9とし、さらにそのN-ヒドロキシスクシンイミドエステル1に変換する。2の合成は図6に概説されている。E-シクロオク-4-テノールは、YapらのYap、GPA;Royzen、M;Fox、JM、JournalofTheAmericanChemicalSociety、2008、13012、3760-61により合成した。市販Aldrichのイソシアネート誘導体11で、これはエステル12へ変換され、次に加水分解されて酸13へ変換される。13から形成されるN-ヒドロキシスクシンイミドエステル14は、DOTA及びPEG誘導アミン18との反応で最終生成物2が合成される。DOTA誘導体18は前記17の脱保護の後合成され、17はDOTAKEN誘導体15とPEG誘導体16から合成され、両方共市販品が利用できるそれぞれMacrocyclics及びIRISBiotechから入手。実施例2この例は実施例1の分子の逆対ペアを示す、前記抗体へ共役した後前記プレターゲット部分を形成するための前記E-シクロオクテン誘導体3は図7に示されている。前記テトラジン/DOTA誘導体プローブ4は、図3bで概説されるエフェクタープローブとして作用し得るものであり、図8に示される。E-シクロオクテン誘導体3は、市販IRISbiochemのPEG誘導体8図5参照とN-ヒドロキシスクシンイミドエステル14との反応により酸19を形成し、次にこの酸からN-ヒドロキシスクシンイミド誘導体を形成する。前記テトラジン/DOTA誘導プラークの合成は図8に概説されている。このプローブは、DOTAとPEG誘導体アミン18図6参照とN-ヒドロキシスクシンイミドエステル7図5参照との反応で合成される。実施例3この例は図9に示され、E-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル1-4-シクロオク-4-テン-1-イルオキシメチルフェニル-1-オキソ-5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38-ドデカオキサ-2-アザヘンテトラコンタ-41-ノエートTCO-O-PEG10-N-ヒドロキシスクシンイミドNHS、メジャー及びマイナー異性体、それぞれ23a及び23bの合成のスキームを示す。本化合物の数字aはE-メジャー異性体、及び本化合物の数字bはE-マイナー異性体を表す。E-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル4-シクロオク-4-テニルオキシメチルベンゾエート20a。E-シクロオク-4-テノール約13のZ異性体を含む、10aメジャー異性体は文献記載の手順M.Royzen、G.P.A.Yap、J.M.Fox、JAmChemSoc2008、130、3760.により合成した。60の水素化ナトリウム分散物1.8g、45mmolを、氷冷された、60mLのDMF中の10a1.70g、13.5mmolに添加した。室温で4時間撹拌後、4-ブロモメチル安息香酸3.85g、17.9mmolを小分けにして添加し、前記分散物を室温で一晩撹拌した。混合物を水100mLに投入し、t-ブチルメチルエーテル100mLを加えて、さらに37塩酸水5mLを添加した。分離後、水層をt-ブチルメチルエーテルで抽出した2x100mL。有機層を集めて、水25mLで洗浄し、MgSO4上で乾燥して、蒸発させた。残渣を薄シリカ層を、4:1ヘキサン/酢酸エチルを用いて通した。蒸発後得られた残渣をヘプタン50mLに70°Cでの溶解させた後冷却して19aを得た。生成物をジクロロメタン40mLに溶解し、N-ヒドロキシスクシンイミド0.57g、4.9mmolを添加し、混合物を氷冷し、次にN、N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド1.03g、4.99mmolを添加した。30分後、氷冷バスを外し、反応混合物を室温で18時間撹拌した。濾過して蒸発させた後、残渣はシリカのカラムクロマトグラフにより、ヘプタン中の酢酸エチル勾配0~15を用いて精製した。次に、残渣をt-ブチルメチルエーテル20mL中に溶解し、これをヘプタン50mL中に投入して、20a1.42g、29を白色個体として得た。1HNMR300MHz、CDCl3:δ=8.10d、J=8.5Hz、2H、7.45d、J=8.5Hz、2H、5.60m、1H、5.34m、1H、4.54d、J=13.4Hz、1H、4.47d、J=13.4Hz、1H、3.09m、1H、2.91s、4H、2.43-1.40m、10H;13CNMR75MHz、CDCl3:δ=169.0q、161.5q、146.7q、135.1t、132.1t、130.4t、127.0t、123.7q、85.3t、68.0s、40.5s、37.7s、34.2s、32.7s、31.4s、25.4s;HRMSESI、m/z:計算値:C20H23NO5Na[M-Na]:380.1474、実測値:380.1472。E-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル1-4-シクロオク-4-テ-1-イルオキシメチルフェニル-1-オキソ-5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38-ドデカオキサ-2-アザヘンテトラコンタ-41-ノエート23a。ジクロロメタン2mL中の20a100mg、0.280mmolの溶液を、氷冷して撹拌されたジクロロメタン2mL中の21175mg、0.283mmol及びトリエチルアミン290μL、2.08mmolの溶液中に滴下した。反応混合物を室温で16時間撹拌した。蒸発させて得られた粗中間物22aをジクロロメタン5ml中に溶解し氷冷した。ビス2、5-ジオキソピロリジン-1-イルカーボネート170mg、0.664mmol及びピリジン28μL、0.35mmolを添加し反応混合物を室温で3時間撹拌した。混合物を濾過し、蒸発させ、生成物をシリカカラムクロマトグラフで、ジクロロメタン中のメタノール勾配0~10を用いて精製し、23aを粘調なオイル状物として93収率で得た。1HNMR600MHz、CDCl3:δ=7.79d、J=8.2Hz、2H、7.36d、J=8.2Hz、2H、7.00s、1H、5.59m、1H、5.33m、1H、4.49d、J=12.5Hz、1H、4.42d、J=12.5Hz、1H、3.85t、J=6.5Hz、2H、3.8-3.5m、48H、3.09m、1H、2.90t、J=6.5Hz、2H、2.85s、4H、2.43-1.40m、10H;13CNMR150MHz、CDCl3:δ=167.0q、165.4q、164.8q、140.8q、133.5t、131.7q、130.4t、125.3t、83.4t、68.7s、68.4s、68.0s、67.6s、68.4s、63.9s、38.9s、37.9s、36.1s、32.6s、31.1s、30.3s、29.8s、23.7s;HRMSESI、m/z:計算値:C47H76N2O18H[M-H]:957.5171、実測値:957.5174。E-マイナー2、5-ジオキソピロリジン-1-イル4-シクロオク-4-テニルオキシメチルベンゾエート20b。E-シクロオク-4-テノール10b、マイナー異性体は前記文献の手順で合成された。60水素化ナトリウム2.1g、53mmolを、氷冷した50mLテトラヒドロフラン中の10b2.53g、20.1mmolの溶液中に添加した。室温で4時間撹拌後、混合物を再び冷却し、そこに4-ブロモメチル安息香酸4.53g、21.1mmolを小分けにして5分間で添加した。25mLのテトラヒドロフランを添加し懸濁液を室温で4日間撹拌した。氷を添加し、次に12.0gのクエン酸を添加した。混合物を2回150mLのt-ブチルメチルエーテルで抽出した。有機層を25mLの水で洗浄し、乾燥して溶媒を揮発させた。残渣は、80gのシリカゲルクロマトグラフで、溶出液としてヘプタン中の酢酸エチルの量を徐々に増加させて精製した。生成物の分画生成物と出発物質アルコールとの完全な分離ではないを集め、約30mLヘプタン-150°Cへ冷却から再結晶させて、白色固体として19bを得た0.86g、17。これをジクロロメタン40mLに溶解させた。N-ヒドロキシスクシンイミド0.48g、4.17mmolを添加し、混合物を氷で冷却した。N、N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド0.80g、3.88mmolを添加し、混合物を30分間氷冷して撹拌し、次に室温で18時間撹拌した。濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、ロータリーエバポレータ処理し、残渣を25gのシリカゲル上で、溶出液ヘプタン-酢酸エチルでクロマトグラフして生成物を得た。蒸発生成物画分を75mLのt-ブチルメチルエーテルと混同し、混合物を60°Cに温めて溶液を作った。前記溶液を20mLへ濃縮した。ここにヘプタンをゆっくりと添加することで生成物を沈殿させた。濾過して集め、ヘプタンで洗浄して、1.05gの20bを得た15を超える。1HNMR300MHz、CDCl3:δ=8.10d、J=8.5Hz、2H、7.46d、J=8.5Hz、2H、5.73m、1H、5.52m、1H、4.60d、J=13.4Hz、1H、4.45d、J=13.4Hz、1H、3.65m、1H、2.92s、4H、2.43-1.10m、10H;13CNMR75MHz、CDCl3:δ=169.0q、161.5q、146.7q、135.1t、132.1t、130.4t、127.0t、123.7q、85.3t、68.0s、40.5s、37.7s、34.2s、32.7s、31.4s、25.4s;HRMSESI、m/z:計算値:C20H23NO5Na[M-Na]:380.1474、実測値:380.1472。E-マイナー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル1-4-シクロオク-4-テ-1-ニルオキシメチルフェニル-1-オキソ-5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38-ドデカオキサ-2-アザヘンテトラコンタ-41-ノエート23bこれは、20bを出発物質として23aと同様の方法で得られた。23bは粘調オイルとして93収率で得られた。1HNMR300MHz、CDCl3:δ=7.80d、J=8.2Hz、2H、7.43d、J=8.2Hz、2H、6.83s、1H、5.67m、1H、5.55m、1H、4.57d、J=12.5Hz、1H、4.48d、J=12.5Hz、1H、3.85t、J=6.5Hz、2H、3.8-3.5m、49H、2.90t、J=6.5Hz、2H、2.84s、4H、2.43-0.90m、10H;13CNMR75MHz、CDCl3:δ=169.2.0q、167.6.4q、167.0q、143.4q、136.2t、133.8q、131.6t、127.4t、127.1t、74.7f、71.1s、70.9s、70.6s、70.2s、70.1s、66.1s、40.5s、40.1s、34.9s、33.3s、32.5s、30.2s、28.0s、25.9s;HRMSESI、m/z:計算値:C47H76N2O18H[M-H]:957.5171、実測値:957.5179.実施例4この実施例は図10に、E-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル1-4-シクロオク-4-テ-1-ニイルオキシカルボニルアミノフェニル-1-オキソ-5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38-ドデカオキサ-2-アザヘンテトラコンタ-41-ノエートの合成スキームが示される。前記化合物数字aはE-メジャー異性体を、及び化合物数字bはE-マイナー異性体を示す。E-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル4-シクロクオク-4-テ-1-ニルオキシカルボニルアミノベンゾエート14aN、N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド9.50g、0.046molを、小分けして、氷冷した60mLのイソプロパノールとN-ヒドロキシスクシンイミド5.0g、0.044molに添加した。室温で16時間撹拌後、前記懸濁物を濾過し、得られた固体をイソプロパノール60mL中でさらに1時間撹拌した。濾過及び真空乾燥して得られた粗固体生成物24を100mLのジクロロメタンと混合し氷冷した。トルエン26mL、49.4mmol中の20ホスゲン溶液を添加した後、溶液を30分間撹拌した。蒸発させて得られた固体を2回トルエンで洗浄し、真空乾燥した。4.03gの2536を超えるが白色固体として得られた。固体を小分けして、35mLのジクロロメタン中10a1.40g、11.1mmolの溶液中に添加した。懸濁液を一晩撹拌し、その後2時間40°Cに暖めた。これをシリカ上でジクロロメタンで溶出してトルエンから再結晶させて、固体の1.77の14a41を得た。得られた生成物は約12のZ異性体を含み、これはクロマトグラフ又は再結晶では除去できなかった。1HNMR300MHz、CDCl3:δ=8.06d、J=8.8Hz、2H、7.51d、J=8.8Hz、2H、6.82m、1H、5.57m、2H、3.48m、1H、2.91s、4H、2.40m、3H、2.23-1.50m、7H;13CNMR75MHz、CDCl3:δ=169.7q、161.6q、152.7q、135.2t、133.4t、132.5t、119.4.0q、117.9t、82.3t、41.3s、38.9s、34.6s、32.8s、31.3s、26.0s;HRMSESI、m/z:計算値:C20H22N2O6Na[M-Na]:409.1376、実測値:409.1372E-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル1-4-シクロオク-4-テ-1-ニルオキシカルボニルアミノフェニル-1-オキソ-5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38-ドデカオキソ-2-アザヘンテトラコンタ-41-ノエート27aジクロロメタン2mL中の14a100mg、0.26mmol溶液を、氷冷撹拌されたジクロロメタン2mL中の21160mg、0.26mmol及びトリエチルアミン400μl、2.9mmolへ滴下した。反応混合物を室温で16時間撹拌した。蒸発させて得られた粗中間物26aをジクロロメタン5mLに溶解させ、氷冷した。ビス2、5-ジオキソピロリジン-1-イルカーボネート89mg、0.35mmolを添加し反応混合物を室温で16時間撹拌した。混合物を濾過し、3回3mLの水、1会の3mLの食塩水で抽出した。硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を揮発させて、粘調なオイルとして1.23gの27aを得た47。1HNMR300MHz、CDCl3:δ=7.77d、J=8.7Hz、2H、7.46d、J=8.7Hz、2H、7.16s、1H、6.93s、1H、5.56m、2H、4.46m、1H、3.84t、J=6.5Hz、2H、3.8-3.5m、48H、2.90t、J=6.5Hz、2H、2.84s、4H、2.43-1.50m、10H;13CNMR75MHz、CDCl3:δ=169.2q、167.2q、167.1q、153.2q、141.6q、135.2t、133.4f、129.3q、128.6t、118.1t、81.7s、70.9s、70.6s、70.2s、66.1s、.41.4s、40.1s、38.9s、34.6s、32.9s、32.5s、31.4s、28.4s、25.9s;HRMSESI、m/z:計算値:C47H75N3O19H[M-H]:986.5073、実測値:986.5085.E-マイナー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル4-シクロオク-4-テ-1-ニルオキシカルボニルアミノベンゾエート14bこの化合物は、14aと類似の方法であるが、出発物質を10bとして、32を超える収率で得られた。10bが純粋に得られたことから、この生成物はZ異性体を含まなかった。1HNMR300MHz、CDCl3:δ=8.04d、J=8.9Hz、2H、7.55d、J=8.9Hz、2H、7.11s、1H、5.61m、2H、5.05m、1H、2.92s、4H、2.36m、4H、2.23-1.20m、6H;13CNMR75MHz、CDCl3:δ=169.8q、161.6q、152.7q、144.6q、135.7t、132.5t、132.1t、119.4.0q、118.0t、72.1t、41.3s、34.6s、32.9s、30.3s、28.5s、26.0s;HRMSESI、m/z:計算値:C20H22N2O6Na[M-Na]:409.1376、実測値:409.1367.E-マイナー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル1-4-シクロオク-4-テ-1-ニルオキシカルビニルアミノフェニル-1-オキソ-5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38-ドデカオキサ-2-アザヘンタトラコンタ-41-ノエート27bこの化合物は出発物質14bを用いて27aと類似の方法で89収率で得られた。1HNMR300MHz、CDC13:δ=7.79d、J=8.7Hz、2H、7.54d、J=8.7Hz、2H、7.44s、1H、6.90m、1H、5.60m、2H、5.03m、1H、3.83t、J=6.5Hz、2H、3.8-3.5m、48H、2.89t、J=6.5Hz、2H、2.84s、4H、2.50-1.20m、10H;13CNMR75MHz、CDCl3:δ=169.2.0q、167.2q、167.0q、153.2q、141.6q、135.7t、132.1t、129.3q、128.5t、118.3t、71.0s、70.9s、70.6s、70.1s、66.0s、.41.4s、40.1s、34.6s、32.9s、32.5s、30.3s、28.4s、25.9s;HRMSESI、m/z:計算値:C47H75N3O19H[M-H]:986.5073、実測値:986.5058.実施例5テトラジン放射性ラベル化DOTA共役テトラジン28;図12、RossinらのAngewChemIntEd2010、49、3375に記載を、0.2M酢酸アンモニウムpH7.0中に溶解し、使用前に-80°Cで保存した。28の一定量を[111In]塩化インジウム又は、[177Lu]塩化ルテチウムの適切な量と組み合わせて、ゆっくりと撹拌しつつ37°Cで10分間インキュベートした。次に、5μLの10mmDTPAを添加して溶液をさらに5分間インキュベートした。支持体添加ラベル化反応を、前記テトラジンに対して0.9モル当量のInCl3又はLuCl3を添加することで実施した。通常は定量的ラベル収率及び98を超える放射化学純度がこの方法で得られた。mAbとシクロオクテンTCONHSエステルとの共役14、20、23、27ここで、続くステップと同様、全ての化合物の数字は、前記a異性体もb異性体も意味するものとする。通常、1mgのCC495mg/mLPBS溶液が、250μLPBSの全容積内に、TCO-NHS構造物が0.6モル動力学測定又は10モル当量インビボ研究変性される。pHは1M炭酸ナトリウム緩衝液で9に調節された。反応は、暗室で室温30分間撹拌下実施された。続いて、TCO-変性mAbをAmiconUltra-15遠心装置を用いてPBSで.激しく洗浄した。抗体あたりのTCO基の数は、以下概説するテトラジン滴定で決定された。テトラジン-DOTA28は担持体付加177Luで放射線ラベル化された。約0.6モル当量のTCOで変性されたmAb25μgを、177Lu-280.5nMと反応させた。約10モル当量のTCOで変性されたmAb25μgを、177Lu-282.5nMと反応させた。前記反応は、50μLのPBSpH7.4中で、37°Cで10分間行った。反応混合物はSDS-PAGE及び発光イメージングで分析され、反応収率は、前記mAbに対応するバンドの放射線から決定された。計数カウントはAIDAImageAnalyzerソフトウェアRaytestを用いて定量化された。前記TCO-mAb共役収率は、80~90の範囲であることが見出された。mAb放射性ラベル化50μLのPBS中の[125I]ヨウ素5~15MBqの適切な量に、DMSO中のBolton-Hunter試薬N-スクシミジル-3-[4-ヒドロキシフェニル]プロピオネートSHPPの1mg/mL溶液の1μL、及びPBS中のクロラミン-TN-クロロ-4-メチルベンゼンスルホンアミド、ナトリウム塩の4mg/mLの25μLを添加した。得られた溶液を10~20秒混合して、5μLDMF及び100μLトルエンを前記容器に投入し、及び125I-SHPPを有機層に抽出し、次にこれをガラスバイアルに移した。トルエンをN2のゆっくりとした流れで除去し、その後CC49-TCO溶液50~250μLPBS、中の0.1~0.5mgを加え、pHを炭酸塩緩衝液で9に調節し、及び反応混合物を室温で30分間ゆっくりと振り混ぜながらインキュベートした。インキュベート後、前記ラベル化収率を放射性-ITLCで決定した。粗反応混合物を次に、生理食塩水で前平衡化させたZebaスピン脱塩カラムに負荷した。前記反応バイアルを20μL生理食塩水でリンスし、リンスされたものも前記カラムに同様に負荷した。Zeba精製後、125I-CC49-TCO溶液の放射性純度を放射性-ITLC及びSDS-PAGEで決定し;タンパク質濃度はBCAアッセイで決定した。通常、この手順で、70を超える125I-SHPPmAb共役及び、精製125I-CC49-TCOの放射性純度は98を超えるものが得られた。反応速度テトラジンDOTA28は、比活性3MBq/μgの担持体付加177Luで、放射線ラベル化した。177Lu-2833nMは、pH7.4の200μLのPBS中で37°C5分間1当量のTCOで変性されたCC49と増加する濃度0.33、1、及び1.67μMで反応させた。選択された時間で15、30、45、60、90、120、180及び300秒、20μLのサンプルを取り出し、テトラジン6図5;RossinらのAngewChemIntEd2010、49、3375に記載で失活させたDMF中5mg/mLの1.5μL。それぞれの混合物の一定量をSDS-PAGE及び発光イメージング装置で分析し、シクロ付加反応収率は、前記mAbに対応するバンドの放射能から決定された。係数カウントは、AIDAImageAnalyzerソフトウェアRaytestで定量化した。実施例6インビボでのトランスシクロオクテン安定性無腫瘍性マウス群あたりn=3に、CC49-PEG10-TCO-OメジャーCC49-23a;CC49あたり8.4TCO;マウス当たり300μg/100μL、CC49-PEG10-TCO-CマイナーCC49-27b;CC49あたり3.3TCO;マウス当たりμg/100μL及びスペーサーなしCC49-TCO-OメジャーCC49-20a;CC49あたり8.0TCO;マウス当たり300μg/100μLを皮下注射した。選択された時点注射後、1時間から4日までで、伏在静脈から血液サンプルが取り出され、ヘパリン含有バイアルに集められた。血液サンプルを秤量し、過剰の111In-テトラジン28が添加された。37°Cでインキュベートした後、一定量の血液がPBS速度で10倍希釈されSDS-PAGEで分析された。シクロ付加収率は、mAbに対応するバンドでの放射能から決定され、係数カウントはAIDAImageAnalyzerソフトウェアで定量化された。それぞれの時点で血液中に存在するmAbの量ID/g血液が対応する125I-CC49-TCOマウス当たり300μg/100μL、約0.2MBqで注射されたマウスn=3の3つの別の群で評価された。データは、mAbのクリアランスが補正され、t=0で100IDTCOに標準化された。この実験の結果は、PEG10スペーサーを介してCC49へTCOが共役された構造物を注射された両方の群のマウスにおいて、血液からのmAbクリアランスによるTCOの生理的減少の他に、時間と共に循環する反応性TCO基の量が減少する、ということを示す図12A及びB。これは、スペーサーなしでTCOがmAbと共役された構成物を注射されたマウスの場合では起こらなかった。このことは、前記CC49-PEG10-TCO構成物に関してインビボでスペーサーなしのCC49-TCO構成物の高い安定性を示唆する。実施例7生体内分布実験二重同位体生体内分布実験が、PEG10スペーサー有り及び無しの125I-ラベル化CC49-TCO構成物を腫瘍保持マウスn=3に皮下注射しマウス当たり100μg/100μL、約0.2MBq、24又は72時間後、111In-テトラジン28マウス当たり21μg/75μL、約0.8MBqを注射して実施した。テトラジン投与後3時間、動物をイソフルランで麻酔し頚椎脱臼により屠殺した。血液を心臓穿刺により取り出し、対象となる器官及び組織を取り出し、ドライブロッティングし秤量した。サンプルの放射能は、ID/gを決定するための標準品と共にγ計数器で測定した。エネルギー窓は、125I及び111Inについてそれぞれ、10~80keV、100~510keVとした。放射性ラベル化mAb及び111In-テトラジンの分布が表2~5に示される。前記生体内分布データは、前記第1のCC49-PEG10-TCO-Oメジャ23aに関してスペーサーの無いCC49-TCO構成物のインビボでのより高い安定性を確認する。テトラジンの注射前にCC49-PEG10-TCOOCC49-23aで処理されたマウスでは、腫瘍内に存在する高いmAb量15.81±0.22ID/gは、前記TCO及びテトラジンとの反応により、3.09±0.01ID/gの177Lu蓄積を与える結果となった。残念なことに、177Lu-テトラジンと血液中循環する高濃度のmAb-TCOとの反応はまた、低腫瘍対血液比率T/B=3.1±1.0を与える結果となった。前記T/Bは、前記放射性ラベル化テトラジンがmAb後4日で投与される場合には、mAbクリアランスにより改善された21.3±4.0。しかしこの時点では腫瘍中には約4倍低い177Lu-テトラジン蓄積がまた観測された0.86±0.39ID/g。絶対的なテトラジン蓄積の減少は、組織からmAb-TCOが放出された結果ではなく10.99±4.24ID/gの125I-mAbはなお腫瘍に存在する、注射の間に4日間でインビボでのTCO分解によると考えられる。逆に、前記マウスがPEG10スペーサーの無いCC49TCO構成物で処理される場合、111In-テトラジンの腫瘍での取り込みの減少は、mAb注射後1日に対してmAb注射後3日でも観測されなかった。同時に、前記T/B比率は、血液からmAb-TCOクリアランスのために約2から4異常に増加した。この時間の間の前記腫瘍結合TCOの維持された反応性は、前記第1のCC49-PEG10-TCOに対してそのより高い安定性を強化する。実施例8イメージング実験腫瘍保持マウスにPEG10スペーサー無しのCC49-TCO構成物を投与した後3又は4日後に111In-テトラジン28マウス当たり21μg/75μL、20~50MBqを注射した。約1時間後、マウスを麻酔し、麻酔のためのノーズコーンと呼吸モニターセンサを付けた動物ベッドに置いた。シングルフォトンエミッションコンピュータトモグラフSPECTは、4ヘッドマルチピンホール小動物用SPECT/CTイメージングシステムNanoSPECT、BioscanInc.を用いてテトラジン注射後2時間で実施した。前記SPECT取得全1時間は、1.4mm直径ピンホールで、及び1視野当たり120~140秒の取得時間で実施された。111Inのエネルギー窓は、135keV±15及び171keV±20に設定された。最初のスキャンから2から4日後、マウスを過剰麻酔により安楽死させ、第2のSPECT/CTスキャンを一晩取得した。それぞれのSPECT測定の前にCTスキャン1投影当たり2秒、360投影を実行して放射能分布の解剖学的情報を得た。前記取得後、データは製造者のソフトウェアInVivoScope1.39、patch1を持ち知恵繰り返し再構成した。興味対象領域ROIは手動で、腫瘍、肝臓、腎臓及び大腿筋で3回描かれた。既知量の111Inを充填したファントムを、組織放射能定量化のためにスキャナーを較正するために使用した。CC49-TCO-OマイナーCC49-20b、CC49-TCO-OメジャーCC49-20a及びCC49-TCO-CマイナーCC49-14bを注射された3マウスのそれぞれの時間でのイメージが、図13A~Cにそれぞれ示される。図13の左側は、CC49-TCO-OマイナーCC49-20bA、CC49-TCO-OメジャーCC49-20aB又はCC49-TCO-CマイナーCC49-14bCの注射の3から4日後に、111Inーテトラジン28マウス当たり21μg/75μL、約40MBqを注射後2時間での生きたマウスのSPECT/CT投影画像である。図13の右側は、最初のイメージング実験の後2から4日後の同じマウスの死後SPECT/CTスキャンを示す。マウスでの縦SPECT/CT研究は、CC49-TCO-Oメジャー及びマイナーの両方での前処理後3日で腫瘍への111In-テトラジン取り込みを示し、それによりこれらのTCO-構成物のインビボでの安定性を確認する図13A及びB。この時点で、非腫瘍結合のmAb-TCOのほとんどが循環系から除去され、従って、腫瘍以外の可視化される器官は、111IN-テトラジン尿中排泄による腎臓及び膀胱のみである。重要なことは、血液中及び肝臓などの血液の多い器官には放射能が見られないということである。バックグランド放射能が非常に低いことは、前記第1のCC49-PEG10-TCOで得られる結果に関して基本的な改善となりR.Rossin、P.RenartVerkerk、SandraM.vandenBosch、R.C.M.Vulders、1.Verel、J.Lub、M.S.RobillardのAngewChemIntEd2010、49、3375参照、これは患者の骨髄及び投与制限される器官へのより低暴露を与えることとなる。注目すべきことは、CC49-TCO-Oで処理されたマウスの腫瘍は、111In-テトラジン注射後72から96時間でもなお高い放射能を持つということであり、これは前記TCO-テトラジンシクロ付加生成物のインビボでの高い安定性を示唆するものである。後の時点で、いくらかの活性がなおマウス腎臓で見られ、いくらかが肝臓に蓄積されているが、これは抗原脱離、及びテトラジン注射の時点で血液中になお循環するmAbの除去によると考えられる。相当な長い時間の間腫瘍での放射能が維持されることはまた、癌患者でプレターゲットRITが目的とされる場合に非常に重要となる。事実、治療用放射性核がより長くターゲット組織に結合することは、前記腫瘍へのより高い用量を輸送することとなる。驚くべきことに、CC49-TCO-Cマイナーの投与の後に111In-テトラジンを注射されたマウスではむしろ低放射能取り込みが観察されたということであり、これは前記2つの処置の間の4日の遅延によると考えられる。しかしこの場合はなた、腫瘍でのシグナルは、最初のスキャン後2日でもなお存在し、このことはインビボでのディールスアルダー反応から得られるシクロ付加生成物のインビボでの安定性を確認するものである。実施例9この実施例は、シクロオクテンの種々の位置での種々の置換基のインシリコ試験に関する。種々の置換シクロオクテンについて、HOMOエネルギーをMOPACソフトウェアCambridgestwareMopacProversion8.03を用いて計算された。得られた結果を以下表6に示す。表6異なる置換基についてMIPACで決定されたHOMO。エネルギーここでaはアキシャル;eはエカトリアルを示す。炭素原子は次の構造式により番号付けされている。実施例10テトラジン28の他の合成手順及び対応するGd-錯体、28-Gd図15に、5-オキソ-5-6-6-ピリジン-2-イル-l、4-ジホドロ-1、2、4、5-tテトラジン-3-イルピリジン-3-イルアミノペンタン酸30の合成経路が示される。6-6-オイリジン-2-イル-1、4-ジホドロ-1、2、4、5-テトラジン-3-イルピリジン-3-アミン29は文献M.L.Blackman、M.Royzen、M.J.Fox、J.Am.Chem.Soc.2008、130、13518-13519に従った。29428mg、1.69mmol及び無水グルタル酸231mg、2.03mmolのTHF10mL中混合物を60°Cに40時間、アルゴン不活性雰囲気下で加熱した。冷却後、オレンジ色の沈殿をTHF5mLで洗浄し、乾燥してオレンジ色固体として30を得た537mg、87。1H-NMR400MHz、DMSO-d6:δ=12.1br.s、1H、10.37s、1H、8.92s、1H、8.87s、1H、8.82d、J=1.8Hz、1H、8.64d、J=4.8Hz、1H、8.15dd、J1=8.4Hz、J2=2.4Hz、1H、8.0-7.9m、3H、7.53dt、J1=1.8Hz、J2=4.8Hz、1H、2.43t、J=7.4Hz、2H、2.29t、J=7.4Hz、2H、1.83q、J=7.4Hz、2H;13C-NMR100MHz、DMSO-d6:5=174.2、171.6、148.6、147.3、146.3、146.1、141.4、138.9、137.4、137.2、126.6、125.3、121.3、120.9、35.3、32.9、20.2;MSESI、m/z:計算値:C17H18N7O3[MU]:368.15、実測値:368.255-オキソ-5-6-6-ピリジン-2-イル-1、2、4、5-テトラジン-3-イルピリジン-3-イルアミノペンタン酸6化合物30166mg;0.452mmolを酢酸3mL中に懸濁させ、亜硝酸ナトリウム93.5mg;1.36mmolを添加した。紫色懸濁液に直ぐに変化した。撹拌15分後、反応混合物を濾過し、水2x6mL及びアセトン3mLで洗浄し乾燥して、紫色固体として生成物を得た152mg、92。1H-NMR300MHz、DMSO-d6:δ=12.13s、1H、10.58s、1H、9.05d、J=2.3Hz、1H、8.94d、J=4.2Hz、1H、8.62d、J=8.8Hz、1H、8.60d、J=8.8Hz、1H、8.43dd、J1=2.3Hz、J2=8.8Hz、1H、8.16td、J1=7.8Hz、J2=1.7Hz、1H、7.73ddd、J1=1.1Hz、J2=4.4Hz、J3=7.4Hz、2.50t、J=7.3Hz、2H、2.33t、J=7.3Hz、2H、1.86q、J=7.3Hz、2H;13C-NMR75MHz、DMSO-d6:δ=174.1q、172.0q、163.0q、162.7q、150.6t、150.2q、143.8q、141.3t、138.4q、137.7t、126.5t、126.1t、124.8t、124.1t、35.4s、32.9s、20.2s;HRMSESI、m/z:計算値:C17H16N7O3[MH]:366.1314、実測値:366.1313.tert-ブチル37、41-ジオキソ-41-6-6-ピリジン-2-イル-1、2、4、5-テトラジン-3-イルピリジン-3-イルアミノ-3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33-ウンデカオキサ-36-アザヘンテトラコンチルカルバメート31PyBOP148mg、0.284mmolを、694.4mg、0.258mmol、アミノ-PEG10-アミノ-Boc150mg、0.233mmol、及びN、N-ジイソプロピルエチルアミン新規に蒸留した。100mg、0.774mmolのDMF2mL9中混合物に0°Cで添加した。混合物を室温に戻し撹拌を15分間続けた。透明、暗赤色溶液を揮発させて乾燥し、生成物をクロロホルム5mLに再度溶解させ、0.2MのKH2PO4pH=4.3、3.3mL溶液及び飽和Na2CO32.3mL溶液で洗浄し、その後ジエチルエーテル20mL中で沈殿させた。沈殿は遠心装置で収集し、シリカ上で、クロロホルム中のメタノールの勾配0~10を用いてカラムクロマトグラフにより精製し、紫色ワックス状固体として31を得た148mg、64。1H-NMR300MHz、CDCl3:δ=9.07d、J=2.2Hz、1H、8.97d、J=4.6Hz、1H、8.73d、J=8.8Hz、1H、8.72d、J=8.8Hz、1H、8.63dd、J1=2.3Hz、J2=8.8Hz、1H、8.03td、J1=7.8Hz、J2=1.7Hz、1H、7.59ddd、J1=1.1Hz、J2=4.6Hz、J3=7.4Hz、7.01s、1H、5.14s、1H、3.9-3.2broads、48H、2.60t、J=7.1Hz、2H、2.37t、J=7.1Hz、2H、2.09q、J=7.1Hz、2H、1.43s、9H;13C-NMR75MHz、CDCl3:δ=173.8q、173.1q、163.8q、163.7q、151.3t、150.5q、144.0q、142.7t、139.2q、137.9t、127.0t、126.9t、125.5t、124.7t、79.5q、70.5s、70.1s、40.7s、39.7s、36.5s、35.5s、28.8p、21.9s;HRMSESI、m/z:計算値:C46H74N9O15[MH]:992.5304、実測値:992.53012、2’、2’’-10-2、40、44-トリオキソ-44-6-6-ピリジン-2-イル-1、2、4、5-テトラジン-3-イルピリジン-3-イルアミノ-6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36-ウンデカオキサ-3、39-ジアザテトラテトラコンチル-1、4、7、10-テトラアザシクロドデカン-1、4、7-トリイルトリ酢酸28生成物3172.3mg、0.0727mmolをDCM1mL中に溶解して、TFA1mLを添加した。混合物を室温で1時間撹拌した。蒸発させた後、残渣をアセトニトリル1.5mLに溶解し、ジエチルエーテル15mLで沈殿させた。紫色沈殿をろ過して分離し、32のTFA塩を定量的に得た。これをDMF1.5mL中に溶解し、DOTA-NHS69.6mg、0.075mmol及びN、N-ジイソプロピルエチルアミン新たに蒸留して使用。44mg、0.341mmolを添加した。混合物を室温で30分撹拌した。当家な暗赤色/紫色溶液を揮発させて、粗生成物を水に溶解し、分取用HPLCで精製した。凍結乾燥後、2880.5mg、収率87を超えるが得られた。1H-NMR600MHz、DMSO-d6:5=9.22d、J=2.4Hz、1H、9.10dd、J1=4.7Hz、J2=1.1Hz、1H、8.78d、J=8.7Hz、1H、8.75d、J=7.8Hz、1H、8.59dd、J1=2.4Hz、J2=8.7Hz、1H、8.32td、J1=7.8Hz、J2=1.7Hz、1H、8.08ddd、J1i=1.1Hz、J2=4.7Hz、J3=7.8Hz、3.9-3.1m、80H、2.60t、J=7.3Hz、2H、2.34t、J=7.3Hz、2H、2.02q、J=7.3Hz、2H;13C-NMR150MHz、DMSO-d6:5=172.8q、172.5q、163.8q、163.5q、151.3t、150.9q、144.5q、142.0t、139.3q、138.5t、127.3t、126.9t、125.6t、124.9t、70.5s、70.3s、69.9s、69.5s、39.2s、36.4s、35.2s、21.7s;HRMSESI、m/z:計算値:C57H92Ni3020[MH]:1278.6582、実測値:1278.655728のGdIII-錯体28-GdIII化合物28204mg、0.160mmolを水溶性酢酸アンモニウム0.1M、pH=5.5、5mL中に溶解し、酢酸ガドリニウムIII水和物96.8mg、0.239mmolを添加した。前記混合物を室温で30分撹拌し、直ぐに分取HPLCで精製した。凍結乾燥後、GdIII-錯体が、紫色固体として得られた188mg、82収率。MSESI、m/z:計算値:C57H89Ni13O20Gd[MH]:1433.56、実測値:1433.58.実施例11新テトラアザプローブの化学合成他のテトラジン部分を持ついくつかのテトラジン型プローブが合成された。合成経路は図16に示されている。3-5-ブチルアミド-2-ピリジル-6-5-トリフルオロメチル-2-ピリジル-1、2、4、5-テトラジン352-シアノ-5-トリフルオロメチル-ピリジン200mg、1.16mmol、2-シアノ-5-アミノ-ピリジン300mg、2.52mmol及び硫黄80mg、2.52mmolをエタノール2mL中、アルゴン不活性雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン水和物0.60g;12.0mmolを添加し、混合物を80°Cで一番加熱した。反応混合物を冷却し、水2mLを添加した。遠心文して得た固体を水/エタノール=1/2で洗浄し、乾燥して粗生成物33を135mg得た。遠心分離の上澄みを集めて水を加えることでさらに粗生成物の沈殿させ、遠心分離して乾燥させた。この粗生成物アミン33及び無水酪酸285mg、1.80mmolを、THFの5mL中で一晩65°Cで撹拌した。反応混合物を脳hスクして残渣をヘキサン/ジエチルエーテル=3/1中で撹拌した。この懸濁液をガラスフィルタで濾過し、残渣を、溶出液としてヘキサン/アセトン勾配を用いてシリカカラムクロマトグラフし、粗生成物34約60純度を90mg得た。前記粗アミド化ジヒドロテトラジン3462mgを、THF1.5mLと水2.0mLとの混合物に懸濁させた。撹拌の間に、NaNO288mg、1.28mmolを添加し、その後水1mL中の硫酸130mg、1.33mmol溶液を、0°Cで滴下した。撹拌3分後、反応混合物をクロロホルムと水で希釈し、紫色沈殿を得、これをガラスフィルタで濾過して分離した。濾液の有機層を濃縮し、ジエチルエーテルで希釈して、第2の紫色固体生成物を得た。固体を一緒にして、クロロホルム及びジエチルエーテルの混合物で粉砕し、濾過して、純粋なテトラジン35約25mg、2-シアノ-5-トリフルオロメチル-ピリジンから計算して全収率8を得た。1HNMRCDCl3/CD3OD:δ=9.2s、1H、8.9d、1H、8.75多重シグナル、3H、8.3d、1H、2.45t、2H、1.8m、2H、1.05t、3Hppm.19FNMRCDCl3/CD3OD:δ=-62.9ppm.LC-MS/PDA:クロマトグラムの1つのピーク、m/z=390.2MH及び800.82MNa、λmax=329及び526nm3-5-フルオロ-2-ピリジル-6-5-ブタンアミド-2-ピリジルイ-1、2、4、5-テトラジン382-シアノ-5-フルオロ-ピリジン100mg、0.82mmol、2-シアノ-5-アミノ-ピリジン200mg、1.68mmol及び硫黄55mg、1.72mmolを、エタノール1.5mL中アルゴン不活性雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン水和物0.35g、7.0mmolを添加し、混合物を90°Cで一晩加熱した。反応混合物を冷却し、エタノール5mLを添加した。ガラスフィルタで濾過して固体を得、これをヘキサンで洗浄して、乾燥して、粗生成物36を90mg得た。続いて、この組成アミン生成物36及び無酪酸93mg;0.59mmolを、THF1.5mL中で65°Cで撹拌加熱した。アルゴン下で一晩反応させた後、反応混合物を冷却し、いくらかのヘキサン約3mLで希釈してガラスフィルタで濾過した。残渣を、溶出溶媒としてヘキサン/アセトン混合物でシリカカラムクロマトグラフにより精製し、純粋なアミド化生成物37約28mg、2-シアノ-5-フロロ-ピリジンから計算して全収率10を得た。1HNMRCDCl3/CD3OD:δ=9.25bs、1H、NH、8.7s、1H、8.5s、1H、NH、8.4multiplesignals、2H、8.2m、1H、8.1m、1H、7.95m、1H、7.5m、1H、2.4t、2H、1.75m、2H、1.05t、3Hppm.13CNMRCDCl3/CD3OD:δ=172.8、161.6、159.0、146.6、146.1、143.5d、141.6、139.3、136.8、136.6、136.4、127.0、124.0、123.8、122.6、121.5、38.9、18.8、13.5ppmC-Fカップリングによる、いくつかの炭素シグナルはダブレット.LC-MS/PDA:クロマトグラムの1つのピークm/z=342.1MH、λmax=288nm.アミド化ジヒドロテトラジン3728mg;0.082mmolを、THF2mL及び水2mLの混合物中に懸濁させた。撹拌の間に、NaNO285mg;1.23mmol、及び水2mL9中の硫酸120mg;1.23mmolを0°Cで滴下した。直ぐに紫色懸濁液となった。撹拌3分後、クロロホルムと水を添加した。紫色のクロロホルム層を水で2回線上し、濃縮した。固体表面対残渣を少量のクロロホルム中で撹拌し、そこのヘキサンを添加した。ほとんど無職の上澄みを除き、固体を乾燥させて21mgの紫色粉末収率75を得た。1HNMRCDCl3/CD3OD:δ=8.8multiplesignals、5H、7.75m、1H、2.45t、2H、1.8m、2H、1.05t、3Hppm.13CNMRCDCl3/CD3OD:δ=173.4、162.9、162.6、162.4、159.8、146.0、143.2、141.3、139.7and139.4、138.8、126.9、125.8d、125.2、124.4、124.2、39.0、18.7、13.5ppmC-Fカップリングによる、炭素シグナルのいくつかはダブレット.19FNMRCDCl3/CD3OD:δを=-120.4ppm.LC-MS/PDA:クロマトグラムの1つのピークm/z=340.2MH、λmax=324及び529nm.3-2-ピリジル-6-メチル-1、2、4、5-テトラジン402-シアノピリジン500mg、4.8mmol、アセタミジンヒドロクロリド2.00g、21.2mmol及び硫黄155mg、4.8mmolをエタノール5mL中でアルゴン不活性雰囲気下で撹拌した。ヒドラジン水和物2.7g;55.2mmolを展開して混合物を20°Cで一晩撹拌した。混濁を濾過し、濾液を蒸発乾燥させ、オレンジ色粗生成物39を2.9g得た。続いて、この粗生成物800mgをTHF3mL及び酢酸4mLの混合物中に懸濁させた。水3mL9中のNaNO22.0g;29.0mmolを0°Cで添加した。直ぐに赤/紫色懸濁液となった。0°Cで5分間撹拌後、クロロホルムと水を添加した。紫色クロロホルム層を水で2回洗浄し、その後濃縮した。固体表面対残渣を、クロロホルムとヘキサンの1:1混合物中で撹拌し、その後濾過した。濾液を濃縮し、粗生成物を、クロロホルム/アセトン混合物を溶出溶媒として用いてシリカクロマトグラフで精製し、純粋な生成物40を得た48mg、2-シアノピリジンから計算して全収率21。1HNMRCDCl3:δ=8.96d、2H、8.65d、2H、7.99t、2H、7.56dd、3H、3.17s、3Hppm.13CNMRCDCl3:δ=168.1.163.6、150.9、150.3、137.4、126.3、123.9、21.4ppm.LC-MS/PDA:クロマトグラムから1つのピーク、m/z=174.3MH、λmax=274及び524nm.3、6-ビス4-ピリジル-1、2、4、5-テトラジン424-シアノピリジン858mg;8.24mmol及びヒドラジン水和物1.24g;24.7mmolを、アルゴン不活性雰囲気下で90°Cで16時間加熱した。混合物を室温に冷却し、水で希釈した。オレンジ色の沈殿41を濾過し、水3mLで洗浄し、続いてDMSO10mL中に溶解した。DDC372mg;1.64mmolをこの溶液に添加した。直ぐに暗赤色溶液となった。60分後、飽和水素化炭酸ナトリウム20mLを添加し、生成物をクロロホルムで抽出した30mL、3回。有機層を集めてNa2SO4で乾燥し、蒸発させて乾燥して、表題の化合物をピンク色固体として得た52mg;4-シアノピリジンから計算した全収率5。1H-NMRCDCl3:δ=8.97d、4H、8.52d、4Hppm.LC-MS/PDA:クトマトグラムからの1ピーク、m/z=237.2MH、λmax=271及び523nm.実施例12さらなるトランスーシクロオクテン構成物の化学合成詳細な合成経路は図17に示される。E-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル2-シクロオク-4-テン-1-ニルオキシアセテート44aTHF40mL中の10a1.73g、13.73mmol、約10のシス異性体が混入の氷冷溶液に、オイル中の水素化ナトリウム60、2.60g、65.0mmolを添加した。室温で15分間混合物を撹拌した後、50°Cで1時間加熱した。混合物を氷冷し、ブロモ酢酸2.50g、17.9mmolを添加した。得られた懸濁液を1時間氷冷して撹拌し、その後25°Cで64時間撹拌し、さらにTHFを撹拌可能にするために添加した合計100mL。50°Cで1時間加熱後、混合物を冷却し水をゆっくりと添加した。ロータリーエバポレーターでほとんどのTHFを除去し、さらに水を加えた合計50mL。水溶性混合物を、MTBEで抽出し2x75ml、その後有機層を25mLの水で洗浄した。水溶を集めて、16gのクエン酸で酸性化し、生成物を2x75mLのMTBEで抽出した。乾燥しロータリーエバポレーターで除去し、残渣をカラムクロマトグラフで精製した40g、SiO2。生成物画分を集め、痕跡量のMTBEを含むヘプタンから再結晶させた。これにより810mgの生成物43aを得た810mg、4.40mmol、32少量のシス異性体を含む。1H-NMRCDCl3:δ=1.4-2.45m、10H、3.1-3.2m、1H、3.9-4.1AB、2H、5.3-5.65m、2H.生成物43aを30mLのクロロホルムに溶解した。N-ヒドロキシコハク酸イミド715mg、6.22mmolを添加し、混合物を氷冷した。DCC1.42g、6.89mmolを添加し、混合物を氷冷して30分撹拌し、その後室温で4時間撹拌した。濾過して、ロータリーエバポレーターで濃縮し、40gのシリカ上で、ヘプタン/酢酸エチル勾配を溶出溶媒として用いてクロマトグラフにより、44aを得た。生成物画分を集め、少量のMTBEを含むヘプタンから再結晶した。生成物はこすると結晶化した。濾過後、生成物180mgが得られた0.64mmol、15、シス異性体が約20混在。1H-NMRCDCl3:δ=1.4-2.45m、10H、2.8s、4H、3.1-3.2m、1H、4.3s、2H、5.3-5.65m、2H.E-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル2-シクロオク-4-テン-1-ニルオキシアセテート44bTHF30mL中の10b0.78g、6.19mmolの氷冷溶液に、オイル中の水素化ナトリウム60を超える、0.94g、23.5mmolを添加した。室温で15分間混合物を撹拌した後、50°Cで1時間加熱した。混合物を氷冷し、ブロモ酢酸1.41g、10.14molを添加した。この懸濁液を約35°Cで20時間撹拌しサンプルはカップリングが生じていないことを示した、続いて55°Cで6時間、25°Cで3日間、さらに6時間55°Cで撹拌した。ロータリーエバポレーターでほとんどのTHFを除去し、さらに50mLのMRBE、続いて氷と水25mLを加えた。層分離させ、水層を30mLのMTBEで抽出した。有機層を合せて25mLの水で洗浄した。水層を合せて氷で冷却し、50mLのMRBEを添加し、続いて5.1gのクエン酸を添加した。相分離させ、水層を50mLのMTBEで抽出した。乾燥させロータリーエバポレーターで濃縮して得られた残渣43bを次のステップに使用した。1H-NMRCDCl3:δ=1.2-2.45m、10H、3.65-3.75m、1H、4.1s、2H、5.45-5.65m、2H.生成物43bを30mLのジクロロメタンに溶解した。N-ヒロソキシスクシンイミド1.60g、13.91mmolを添加し、混合物を氷冷した。DCC3.11g、15.10mmolを添加し、混合物を氷冷して30分、その後室温で3時間撹拌した。濾過して、ロータリーエバポレーターで濃縮し、40gのシリカ上で、トルエンを溶出溶媒として用いてクロマトグラフして44bを得、これをブロモ酢酸のNHSエステルと混合した。混合物を25mLMTBE中に溶解させ、25mLのヘプタンを溶液に添加した。2時間撹拌後、混合物を濾過した固体はブロモ酢酸のNHSエステル。濾液をロータリーエバポレーターし、残渣を暖めたMTBEに溶解し、いくらかのヘプタンを添加して溶液を室温に戻した。これにより沈殿を得た。ろ過して生成物44bを30mg得た0.11mmol、2。1H-NMRCDCl3:δ=1.1-2.45m、10H、2.85s、4H、3.65-3.75m、1H、4.4s、2H、5.4-5.7m、2H.E-メジャーr-2、5-ヂオキソピロリジン-1-イル2-シクロオク-4-テ-1-イルオキシ-2-フェニルアセテート46aTHF40mL中の10a3.0g、23.8mmol、10未満のシス異性体混入溶液にオイル中の60NaH3.0g、75.0mmolを添加した。混合物を室温で10分間撹拌し、1.5時間50°Cに加熱した。氷冷後、DL-2-ブロモフェニル酢酸3.87g、18.0mmolを分けて添加した。THF20mLを得られた粘性ペースト状物の添加し、得られた懸濁液を25°Cで18時間撹拌した。THFのほとんどをロータリーエバポレーターで55°Cで除去した後、55mLのMTBEを加えた。混合物を冷水で冷却して、いくらかの氷を加え、続いて50mLの水を添加した。層を分離し、水層を50mLのMTBEで抽出した。有機層を集めて20mLの水で洗浄した。水層を集めて氷冷し、50mLのMRBEを添加し、続いて10gのクエン酸を加えた。層を分離し、水層を50mLのMTBEで抽出した。乾燥してロータリーエバポレーターして残った5.05gの生成物45aを次のステップに使用した。1H-NMRCDCl3:δ=1.2-2.45m、10H、3.05-3.15m、1H、4.82s、1H、5.15-5.3m、1H、5.45-5.65m、1H、7.3-7.5m、5H.生成物54aを50mLnoジクロロメタンに溶解した。N-ヒドロキシスクシンイミド2.51g、21.8mmolを添加して、混合物を氷冷した。DCC5.03g、24.4mmolを添加し、混合物を氷冷して15分、その後室温で3時間撹拌した。濾過、ロータリーエバポレーター、さらにトルエン/ジクロロメタン勾配溶出溶媒で55gのシリカ上でクロマトグラフにより、2.8gの46aを得た7.83mmol、10aから33収率、約5のシス異性体が混入。1H-NMRCDCl3:δ=1.4-2.45m、10H、2.7s、4H、3.25-3.35m、1H、3.35-3.45m、1H、5.2s、2H、5.35-5.65m、2H9、7.35-7.55m、5H.E-マイナー-2、5-2、5-ジオキソピリジン-1-イル2ーシクロオク-4-テ-1-ニルオキシ-2-フェニルアセテート46b前記混合物とオイル中NaH1.26g、31.5mmolを1.5時間50°Cに加熱した。0°Cに冷却後、D、L-2-ブロモフェニル酢酸2.22g、10.3mmolを、THF5mL中の溶液として添加し、粘調懸濁液を激しく室温で16時間撹拌した。さらに24時間40°Cで加熱した後、混合物を水100mL中のクエン酸9.2g溶液中へ投入した。水性混合物をMTBEで抽出し3x50mL、Na2SO4で乾燥し、溶媒を蒸発させて黄色油状物を得た。カラムクロマトグラフSiO2、CH2Cl2/MeOH2で精製し、生成物、未反応TCO及び副生成物の混合物を得た。さらに精製は、MTBE及び水に溶解し、これを33NaOH溶液で塩基性とすることで行った。水層をMTBEで洗浄し、クエン酸で酸性化し、ついでMTBEで抽出した3x。有機層を集めてNa2SO4で乾燥し、溶媒を蒸発させて、化合物45bを黄色油状物として得た463mg、1.8mmol、23収率。1H-NMRCDCl3:δ=1.2-2.45m、10H、3.7-3.8m、1H、4.9及び4.952s、1H、5.4-5.7m、2H、7.3-7.55m、5H.45b463mg、1.8mmol及びN-ヒドロキシスクシンイミド250mg、2.2mmolのTHF9mL溶液中に、0°Cで、DCC372mg、1.8mmolのTHF2mL養溶液を添加した。反応混合物を室温で16時間撹拌し、沈殿を濾過して除去した。濾液を真空で濃縮しカラムクロマトグラフSi2、ヘプタン/酢酸エチル勾配25~40により精製して、46b451mg、1.3mmol、71収率でム速シロップ状物として得た。1H-NMRCDCl3:δ=1.1-2.6m、10H、2.8s、4H、3.8-3.9m、1H、5.2and5.32s、2H、5.4-5.75m、2H、7.3-7.6m、5H.E-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル2-シクロオク-4-テ-1-ニルオキシ-2-メチルプロパノエート49aTHF120ml中の10a3.0g、23.8mmolの溶液を氷冷し、オイル中の60を超える水素化ナトリウム3.8g、95mmolを添加した。氷冷バスを取り除き、混合物を室温で30分間撹拌し、次に50°Cで1時間撹拌した。氷冷後、DL-ブロモプロピオン酸3.3mL、35.6mmolをゆっくりと添加した。混合物は添加の間に非常に粘調となり、THF50mLで希釈した。添加を完了した後氷冷バスを外し、反応混合物を室温で16時間撹拌した。反応の進行は、NMRで追跡し、16時間後40の変換が示された。反応混合物を次にさらに24時間35°Cで撹拌して84の変換を達成した。反応混合物を真空で濃縮し、MTBEで希釈し、その後水200mLで失活させた。層を分離させ、水層を水60mL9中のクエン酸22.5gの溶液で酸性化した。水層をMTBEで抽出した3x200mL。有機層を合せて、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を蒸発させて、47aを含む混合物5.19gを得た。これをさらに精製することなく次のステップで使用した。1H-NMRCDCl3:δ=1.1-2.45m、1.4d13H、3.1-3.2m、1H、3.9-4.0q、1H、5.3-5.65m、2H.-70°CでTHF200mL中のジイソプロピルアミン13mL、92mmolに、ヘキサン中2.5Mのn-ブチルリチウム32mL、80mmolをゆっくりと添加した。混合物をゆっくりと-20°Cに上げ、再び-70°Cに冷却した。化合物47a5.19gをTHF溶液として添加し、得られた混合物をー20°Cに上げた。この温度でヨードメタン10.7mL、1.72mmolを添加し、混合物を5°Cに上げた。サンプルを取り出してNMR分析して、反応の完了を確認した。反応混合物を水200mL中のクエン酸40g溶液中に入れ、MTBEで抽出した3x150mL。有機層を集めて塩含有水溶性クエン酸で洗浄した。Na2SO4上で乾燥した後溶媒を蒸発させて黄色オイル状物を得た9.4g。カラムクロマトグラフSiO2、CH2CH2/MeOH1~4勾配で精製し、純粋な48aを黄色シロップ状物として得た1.15g、5.4mmol、2ステップで収率23。1H-NMRCDCl3:δ=1.1-2.45m及び1.42s16H、3.2-3.3m、1H、5.3-5.7m、2H.48a1.15g、5.4mmol及びN-ヒドロキシスクシンイミド622mg、5.4mmolのTHF27mL溶液に、0°Cで、DCC1.12g、5.4mmolのTHF5mL溶液を添加した。勾配を室温に上げた後その温度で16時間撹拌した。勾配をMTBEで希釈し、沈殿を濾過して除いた。溶媒を蒸発させた後残渣をカラムクロマトグラフSO2、ヘプタン/酢酸エチル20~40勾配で精製した。ヘプタン/酢酸エチルから再結晶して、49aを無色結晶として得た707mg、2.3mmol、収率42。1H-NMRCDCl3:δ=1.5-2.4m、1.55s、1.60s16H、2.85s、4H、3.2-3.3m、1H、5.4-5.65m、2H.E-マイナー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル2-シクロオク-4-テ-1-ニルオキシ-2-メチルプロパノエート49b氷冷したTHF60mL9中の10b1.5g、11.9mmolの溶液中に、60を超えるオイル中の水素化ナトリウム1.5g、11.9mmolを添加した。氷冷バスを外して混合物を50°Cで1.5時間撹拌した。氷冷して、DL-ブロモプロピオン酸1.7mL、17.8mmolをゆっくりと添加した。混合物は添加の間に非常に粘調になり、THF35mLで希釈した。添加を終了後、氷冷バスを外し、反応混合物を室温で16時間撹拌した。混合物は次に43°Cに上げさらに24時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、MTBEで希釈し、水で失活させた200mL。層分離させ、水層を水中のクエン酸で酸性化した。水層をMTBEで抽出した3x100mL。有機層を集め、Na2SO4で乾燥し、溶媒を蒸発させて47bを含む混合物を得た2.26g。この物はさらに精製することなく次のステップで使用した。1H-NMRCDCl3:δ=1.2-2.5m及び1.52d13H、3.65-3.75m、1H、3.95-4.152q、1H、5.4-5.65m、2H.THF100mL中のジイシプロピルアミン5.6mL、39.6mmolの溶液中に、-70°Cで、ヘキサン中2.5Mのn-ブチルリチウム13.5mL、33.8mmolをゆっくりと添加した。混合物を次の0°Cに上げ、再び-70°Cへ下げた。この温度で、ヨードメタン4.6mL、73.9mmolを添加し、この混合物を15°Cに上げた。サンプルを取り出しNMR分析により反応終了を確認した。反応混合物を水140mL中のクエン酸に入れてMTBEで抽出した3x100mL。有機層を集めて、塩含有水溶性クエン酸で洗浄した。Na2SO4で乾燥後、溶媒を蒸発させて黄色シロップ状物を得た4.6g。カラムクロマトグラフSiO2、CH2CH2/MeOH1~4勾配で繰り返し精製して純粋な48bを白色結晶性固体として得た181mg、0.85mmol、2ステップで収率7。1H-NMRCDCl3:δ=1.1-2.45m及び1.452s16H、3.9-4.0m、1H、5.45-5.65m、2H.THF5mL9中の48b181mg、0.85mmolとN-ヒドロキシスクシンイミド98mg、0.85mmolに、0°CでDCC175mg、0.85mmolのTHF溶液を添加した。添加後、混合物を室温に上げ、その温度で5時間撹拌した。混合物をMTBEで希釈し、沈殿を濾過して除いた。蒸発後の残渣をカラムクロマトグラフSiO2、ヘプタン/酢酸エチル25勾配で精製して、49bを白色固体として得た257mg、0.83mmol。1H-NMRCDCl3:δ=0.8-2.6m、1.55s、1.60s16H、2.85s、4H、3.8-3.9m、1H、5.4-5.7m、2HE-メジャー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル4-シクロオク-4-テ-1-ニルオキソベンゾエート52aTHF50mL中の10a3.54g、27.38mmolの氷冷溶液にオイル中水素化ナトリウム60を超える、2.5g、62.5mmolを添加した。混合物を15分間氷冷して撹拌し、その後50°Cにして1時間撹拌した。混合物を氷冷して、4-フロロベンゾイルクロリド1.72g、10.84mmolを5mLのTHFに溶解して、5分間で添加した。混合物を2日25°Cで撹拌しサンプルのNMRは多くの生成物を示したが、また4-フロロ安息香酸のTCOエステルの存在も示した、その後3時間50°Cで撹拌した。混合物を水で冷却し、10mLの水をゆっくりと添加し、次に2gの水酸化ナトリウム及び5mLの水を添加した。ロータリーエバポレーターで溶媒をほとんど除去し、THF及び2gの水酸化ナトリウムを添加し、混合物を50°Cで4時間暖めた。ロータリーエバポレーターでほとんどの溶媒を除去し、メタノールを残渣ペースト状物に添加した。混合物を50°Cで2時間温め、次にロータリーエバポレーターで55°Cで暖めた。残渣懸濁物を50mLの水で希釈した。MTBE100mlを添加し、前記層を分離して有機層を水25mLで洗浄した。有機層は、a.o.トランスシクロオクテノールを含有する。氷冷した水層を集めて、20gのクエン酸で処理し、生成物を2x75mLのMTBEで抽出した。乾燥してロータリーエバポレーターで溶媒を除去して得られた固体残渣は、生成物と4-フロロ安息香酸を含んでいた。前記固体を40mLのメタノールで暖めた。水15~20mLをゆっくりと前記暖めた溶液に、濁りが生じるまで添加した。濾過して濾液を冷却することで生成物を沈殿させた。これを濾過し、1/1のメタノール/水で洗浄し、真空乾燥して、望ましい生成物51aを0.827g得た3.36mmol、4-フロロベンゾイルクロリドから計算して収率30。1H-NMRCDCl3:δ=1.5-2.5m、10H、4.0-4.1m、1H、5.45-5.75m、2H、6.8d、2H、8.05d、2H.メジャートランス酸51a1.14g、4.63mol及びN-ヒドロキシスクシンイミド725mg、6.30mmolの50mLジクロロメタンの氷冷混合物を、DCC1.46g、7.08mmolで処理した。混合物を1時間氷冷温度で撹拌し、次に室温で3時間撹拌した。濾過し、ロータリーエバポレーターで溶媒を除いた後、40gのシリカゲルでヘプタン/酢酸エチル勾配を用いてクロマトグラフして、シス異性体を含有した52aの画分を得た。次の生成物画分と合せ、ヘプタンと酢酸エチル混合物と共に60°Cに暖めた。懸濁液を室温へ冷却し、次に濾過した。これにより生成物52aを0.973g得た2.83mmol、61。1H-NMRCDCl3:δ=1.6-2.5m、10H、2.85s、4H、4.0-4.1m、1H、5.45-5.75m、2H、6.8d、2H、8.05d、2H.E-マイナー-2、5-ジオキソピロリジン-1-イル4-シクロオク-4-テ-1-ニルオキシベンゾエート52bTHF40mL中の10b2.82g、22.38mmolの氷冷溶液にオイル中水素化ナトリウム60を超える、2.0g、505mmolを添加した。混合物を15分間氷冷して撹拌し、その後室温で30分、その後50°Cにして1時間撹拌した。混合物を氷冷して、4-フロロベンゾイルクロリド1.72g、10.84mmolを8mLTHFに溶解して、15分間で添加した。混合物を18時間室温で撹拌しサンプルのNMRは多くのトランスシクロオクテノールを示した、その後3時間50°Cで、3日間25°Cで撹拌した。水5mL中の2.0gの水酸化ナトリウム溶液をゆっくりと添加し、次に5mLの水を添加した。ロータリーエバポレーターでTHFをほとんど除去し、40mLのメタノールを添加してペースト状物を得た。混合物を50°Cで3時間温め、20mLのTHFを添加し、加熱を4時間続けた。混合物を一晩25°Cで撹拌しNMRは、なお少量のエステルの存在を示した、次の4時間50°Cに加熱し、続いてロータリーエバポレーター蒸発させた。残留懸濁物を50mLの水で希釈した。MTBE100mLを添加し、前記層を分離し、有機層を25mLの水で洗浄した。有機層は、a.o.トランスシクロオクテノールを含む。合せて氷冷した水層を15gのクエン酸で処理し、生成物を2x75mLのMTBEで抽出した。乾燥後ロータリーエバポレーターで蒸発させて得られた固体残渣は生成物と4-フロロ安息香酸との混合物からなっていた。固体を40mLのメタノールで暖めた。水25mLを、前記暖めた溶液中にゆっくりと添加し、続いて室温へ冷却し一晩撹拌した。濾過し、1/1のメタノール/水で洗浄し、真空乾燥して、望む生成物51bを0.76g得た3.09mmol、4-フロロベンゾイルクロリドから計算して28。1H-NMRCDCl3:δ=1.3-2.6m、10H、4.55-4.65m、1H、5.55-5.85m、2H、6.9d、2H、8.05d、2H.前記マイナートランス酸51b0.66g、2.68mmol及びN-ヒドロキシスクシンイミド460mg、4.0mmolの50mLジクロロメタン氷冷混合物を、DCC460mg、4.61mmolで処理した。混合物を氷冷して1時間撹拌し、次に室温で16時間撹拌した。濾過し、ロータリーエバポレーターした後、ジクロロメタンを溶出溶媒として用いて30gのシリカゲルでクロマトグラフを行った。生成物を5mLの酢酸エチルに溶解した。ヘプタンを添加し、溶液を沈殿が現れるまで部分的に60°Cでロータリーエバポレーターした。ヘプタンを加えて混合物を5分間60°Cで撹拌し、次の室温へ冷却した。濾過して、生成物52bを0.437g得た1.27mmol、47。1H-NMRCDCl3:δ=1.4-2.6m、10H、2.9s、4H、4.55-4.65m、1H、5.55-5.8m、2H、6.9d、2H、8.05d、2H.E-メジャー、マイナー2、5-ジオキソピロリジン-1-イル2-メチルシクロオク-4-テン-1-イルアセテート58過酸化水素25mL、300mmolの35溶液を、酢酸パラジウム45Engelhard、1.0g、2mmol、ベンゾキノン432mg、4mmol及び1、5-シクロオクタジエン27mL、200mmolの混合物へ添加した。混合物を30°Cで5日間、NMR分析が出発物質の95変換を示すまで撹拌した。混合物をEt2O1Lへ投入し、水を添加した1L。混合物を、氷冷下で、33のNaOH溶液でゆっくりと塩基性とした。前記層を分離し、水層をEt2Oで抽出した2x。有機層を合せて、1NのNaOHで2回洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を注意して蒸発させて、粗生成物53を黄色オイル状物として得た16.1g、130mmol、収率65。ヘキサン中1.6Mのn-ブチルリチウム溶液45mL、72mmolを、ジイソプロピルアミン14mL、100mmolのTHF250mL溶液中に、-80°Cで添加した。混合物を徐々に0°Cに温めて次に-80°Cに冷却した。THF100mL中のトリエチルホスホノアセテート15mL、75mmol溶液を添加し、混合物を45分間-70°Cで撹拌した。その後、THF50mL中の536.21g、50mmolの溶液を添加し、混合物をゆっくりと室温へ戻した。16時間後混合物をさらに加熱し、NMR分析により変換が完了したことを示すまで8時間還流した。混合物を水250mLに投入し、MTBEで抽出した3x。有機層を合せて塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒をロータリーエバポレーターで除き、カラムクロマトグラフSiO2、ヘプタン/酢酸エチル5で精製して54を無色オイル状物として得た4.74g、24mmol、49収率。メチルリチウム59mL、94mmolの1.6M溶液を、Et2O21mL中ヨウ化銅I9.53g、50mmolの懸濁物を氷冷して添加した。灰色溶液を真空で0°Cで濃縮し、CH2Cl2で2回抽出した。残渣を冷CH2Cl2100mL中で懸濁させ、-80°Cに冷却して後、TMSCl4.0mL、46.5mmolをゆっくりと添加した。その後、CH2Cl260mL中の544.74g、24mmolの溶液を滴下し、混合物を室温で2時間以上暖めた。混合物をさらに16時間室温で撹拌し、その後飽和水溶性NH4Cl150mLで失活させた。混合物を室温で撹拌し、アンモニア50mL9を添加した。混合物を濾過し、濾液をCH2Cl2で抽出した3x75mL。有機層を合せて水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒をロータリーエバポレーター蒸発させ、カラムクロマトグラフSiO2、ヘプタン/酢酸エチル3で精製して、55を無色オイル状物として得た4.47g、21mmol、89収率。1H-NMRCDCl3:δ=0.8-1.9m、1.05s及び1.25t16H、2.15-2.3m、2H、4.0-4.2q、2H、5.4-5.55m、1H、5.65-5.75m、1H.水銀ランプを備え、及びポンプと、10硝酸銀I含有シリカゲル36g、底部にはいくらかの通常グレードのシリカゲルを含むを充填したカラムに接続されたフラスコに、ヘプタン/Et2O3:1体積/体積約500mLを充填した。554.47g、21.3mmol及びメチルベンゾエート2.7mL、21.3mmolを少量のEt2Oの溶液を添加した後、水銀ランプのスイッチを入れた。前記カラムを通じる照射溶液の連続流に20時間照射した後、NMR分析で出発物質がもはや観測されなくなり、前記反応物及びカラムをヘプタン中30のMTBEで洗浄した。前記カラム内容物をアンモニアで処理し、CH2Cl2で抽出した3x.有機層を合せてNa2SO4で乾燥し、溶媒を蒸発させた後、カラムクロマトグラフSiO2、ヘプタン/酢酸エチル3~4勾配で精製して、化合物56を得た1.41g、6.7mmol、収率31。前記メジャー及びマイナー異性体は分離されず、従って、これらの異性体は混合物としてさらに使用した。1H-NMRCDCl3:δ=0.8-1.9m、1.0s及び1.25t16H、2.1-2.4m、2H、4.0-4.2q、2H、5.5-5.65m、2H.水1mL及びEtOH1mL中の水酸化リチウム1水和物84mg、2.0mmolを56210mg、1.0mmolに添加した。前記化合物をより溶解させるために、THF1mL及びMeOH2mLを添加した。室温で16時間撹拌後、変換はなお完了しなかった。追加の水酸化リチウム85mgを添加して、混合物を45°Cに4時間加熱し、後30°Cで16時間及び50°Cで4時間、変換が完了するまで加熱した。混合物を真空で濃縮し、クエン酸溶液で中和した。MTBEで抽出3xし、Na2SO4で乾燥し、ロータリーエバポレーターで溶媒を蒸発させて、57を黄色オイル状物として得た150mg、0.82mmol、収率82。1H-NMRCDCl3:δ=1.02s、3H、1.3-2.0m、10H、2.1-2.45m、2H、5.55.65m、2H.57150mg、0.82mmol及びN-ヒドロキシスクシンイミド113mg、0.98mmolの氷冷THF5mL溶液に、DCC170mg、0.82mmolのTHF1mL溶液を添加した。混合物を室温で16時間撹拌し、その後MTBEで希釈した。沈殿を濾過して除去し、溶媒を蒸発させた後、カラムクロマトグラフSiO2、ヘプタン/酢酸エチル10~30勾配で精製し、無色オイル状物として化合物58を得た197mg、0.71mmol、86収率。1H-NMRCDCl3:δ=1.05and1.12s、3H、1.35-2.35m、10H、2.4s、1H、2.5-2.75AB、1H、2.85s、4H、5.5-5.65m、2H.実施例13新規なTCOの反応速度論新規に合成したTCO構成物がそれぞれのテトラジン28に対する反応性について評価された。手順は実施冷5に記載されている。全てのTCOについて、前記メジャーエカトリアル及びマイナーアキシャル異性体の間に一貫した一定の反応性の違いがあり、マイナー異性体がメジャー異性体よりもずっと反応性が高い。さらに、TCO58の高い反応性は、抗体へのリンカーなしでもアキシャル位置での置換はなお、トランスシクロオクテン環の反応性を増加させること、を支持する。実施例14新規モデルテトラジンプローブの安定性と反応性他のテトラジン部分を含むいくつかのテトラジンモデルプローブが、水中でのそれらの反応性及び安定性につき評価された。テトラジンの加水分解安定性DMSO25mM中の特定のテトラジンの10μL溶液をPBS緩衝液3mLで希釈し、この溶液を濾過した。UVスペクトル分析を用いて、525nmの吸収バンドの減少をモニタし、加水分解速度のデータから半減期を決定した。テトラジンの、トランス-シクロオク-4-テ-1-ノールマイナー異性体、10bに対する反応性競争実験を、特定にテトラジン及び3-5-アセタミド-2-ピリジル-6-2-ピリジル-1、2、4、5-テトラジンこれは標準テトラジンとして選択されたとの反応性の比率を、トランス-シクロオク-4-テ-1-ノールマイナーいせおタイ、10bとの逆-電子要求ディールスアルダー反応において、決定するために実施した。アセトニトル0.100mLに、DMSO25mM中の特定のテトラジン溶液5μL及びDMSO25mM前記標準テトラジン5μLを添加した。この混合物を水0.9mLで希釈し、両方のテトラジンの絶対量をLC-MS/PDA分析装置で決定した。続いて、DMSO25μL、2.5mMのトランス-シクロオク-4-テ-1-ノールマイナー異性体、10bを添加し、混合物を5分撹拌した。再び、両方のテトラジンの絶対量をLC-MS/PDA分析装置で決定し、両方のテトラジンの変換を計算した。この変換から、両方のテトラジンの反応性比率を決定した。表8から、テトラジンのち換気は、安定性及び反応性に対して一定の効果を持ち、特定の応用に合わせたプローブの設計において使用することができる、ということを明らかになる。実施例15メジュアー対マイナーTCO、20a対20bのテトラジンプローブ28との、インビトロ反応性の違いこの実験は、より高いTCO反応性は、放射性ラベル化テトラジンと、両方の試薬が低濃度でより高い反応収率を与える、ということを示すために実施された。この目的で、我々は、CC49メジャー及びマイナーそれぞれの分子当たり6.1及び6.6TCOと共役したTCOメジャー20ak2=19600±1400M-1s-1及びTCOマイナー20bk2=136700±2300M-1s-1を用いた。2つのmAb溶液をPBSで希釈し、TCO濃度を、1x10-5Mから1x10-8Mの範囲とし、支持体付加177Lu-テトラジンmAbに対して1当量と37ドで1分間反応させた。その後過剰のテトラジン6で失活させた前記反応混合物の一部20μlに、非減少性サンプル緩衝液を加えSDS-PAGEで分析した。シクロ付加反応は、前記mAbに対応するバンドの放射能から決定し、計数カウントをAIDAImageAnalyzerソフトウェアで定量化した。実験は3回繰り返した。生体分子反応について予期されるように、溶液中での2つの反応種の濃度における減少は、1分のインキュベート後ではより低い反応性となる図18。しかし、アキシャルTCO20bを用いる場合には、反応収率は、エカトリアルTCO20aでマイクロモル濃度以下で得られるよりもずっと高く、これはテトラジンとのより速い反応速度によるものである。実施例16TCO20bのインビボ安定性この実験は、実施例6で説明したインビボTCO安定性測定を拡張するために実施された。この一連において、PEGスペーサーでCC49と結合されたTOCメジャー及びマイナー23a及び27bはインビボでは不安定であることが示され、一方PEGスペーサのないTCOメジャー20aは、少なくとも4日間インビボで安定であることが見出された図13。新たな実験では、同じ手順に従って、我々は、PEGスペーサなしでCC49-結合TCOマイナーのインビボ安定性を試験した。前記インビボ安定性データは、mAbクリアランスで補正して、図19に示される。前記CC49-結合TCO20bは、インビボではゆっくりと分解されることが見出され、さらに、抗体との短いリンカーを持つTCOはインビボでは、より長いリンカーで共役されたTCOよりもより安定であることが見出された。実施例17種々の範囲のTCO20b部分で官能基化されたCC49抗体の血中動態及び生体内分布一連の研究が、CC49分子当たりのTCO20bの数の、血液循環及び腫瘍ターゲットに対する影響の評価するために実施された。予想されることは、多すぎるTCO部分で抗体を修飾することは血液循環半減期を下げることとなり、CC49TCO構成物の腫瘍での取り込みに影響を与えるであろう、ということである。CC49-TCO構成物の血中動態図20及び21参照ヌードメスBalb/Cマウス20~25g体重、CharlesRiverLaboratories、n=3に、mAbマウス当たり100μg/100μL、約0.5MBq当たり0、4.9、9.3または15.8TCO20bを担持する125I-CC49担持を注射した。選択された時間5分、3時間、6時間、1日、2日、3日で、血液サンプルを在副静脈から取り出し、秤量して1mLPBSで希釈した。mAb注射後4日で、動物は麻酔され頚椎脱臼で屠殺し、血液を心臓穿刺で集め、興味対象である器官及び組織を取り出し、乾燥ブロットし、秤量し1mLPBSを添加した。全てのサンプルの放射能がガンマカウンターWizardII、PerkinElmerで、1グラムの組織当たりの注入された投与量ID/gを決定するための標準品当業者ともに測定した。血液中のCC49-TCOの半減期は、GraphPadPrismversion5.01を用いて、血液曲線を2相減衰にフィッティングさせて決定した。CC49-TCO20b構成物の腫瘍ターゲット腫瘍保持マウス方法を参照;100mm3腫瘍サイズに、mAbマウス当たり100μg/100μ、約0.2~0.4MBq、n=4当たり、0、8.5、12.7又は18.7グループで官能基化された125I-CC49を注射した。125I-CC49を受けたマウスをmAb注射後4日で屠殺した。125-CC49-TCO20bを受けたマウスは、mAb注射後28及び72時間後に111In-DOTA-テトラジン28mAbに関し25当量、約0.8MBqを注射し、3時間後屠殺された。屠殺の時点で、血液を心臓穿刺で集め、興味対象である器官及び組織を集め、ブロット乾燥し、秤量し、1mLのPBSを加えた。全てのサンプルの放射能をガンマ計数器Wizard3、PerkinElmerで、二重同位体手順エネルギー窓は、125I、111Inのそれぞれで、10~80keV及び100から510keVで設定により、1グラム組織当たりのパーセント注入投与量ID/gを決定するための標準と共に測定した。表9から表11のデータから、TCO就職比率は9を超えるべきではないことが明らかとなる。実施例18CC49-TCO44bの血液反応速度及びインボビ安定性血中動態無腫瘍マウス群ごとにn=3に、7.5TCO44bグループマウス当たり100μg、0.2~0.4MBqで修飾されたCC49の125I-ラベル化CC49を注射した。選択された時点1、3、6、24、48及び72時間で、伏在静脈から血液サンプルを取り出し、ヘパリン含有バイアルに集めた。mAb注射後4日で、マウスを麻酔して脊椎脱臼で屠殺した。血液を心臓穿刺で集め、興味対象器官と組織を取り出し、ブロット乾燥し、秤量して1mLのPBSを添加して、器官当たりのパーセント注射投与量IDを決定するために標準と共に、ガンマ係数器Wizard3、PerkinElmerで放射能を測定した。この研究で、TCO修飾CC49は、修飾していないCC49の比較してやや速いクリアランスを示した図22.曲線下領域から計算された血液中の半減期T1/2=ln2xAUC/C0は、CC49-TCO及びCC49でそれぞれ、22.2及び26.3時間であった。我々はこれは、mAbのLys側鎖の官能基化によると考える。短い血液循環の結果として、125I-CC49-TCOの低濃度がまた、ほとんどの器官で観察され、これは実験の終了時で、計数の前に灌流されなかった。インビボ安定性無腫瘍マウスの別の群n=3に、125I-ラベル化CC49-TCO44bマウス当たり220μg、0.4MBqを注射した。選択された時間1、3、6、24、48及び72時間で、血液サンプルを伏在静脈から取り出し、ヘパリン含有バイアルに集めた。mAb注射後4日でマウスを麻酔し、脊椎脱臼で屠殺した。血液を心臓穿刺で取り出し、胃と甲状腺を除去し、ブロット乾燥し、器官当たりにパーセント注射投与量IDを決定するため標準と共にガンマ計数器で計数した。これらの器官の低い125Iの取り込み胃で0.17±0.03ID及び甲状腺で0.88±0.33IDは、前記放射線ラベル化mAbが4日の評価の間、インビボで前記ラベルを維持することを確認する。血液サンプルを秤量し、PBSで100μlに希釈し、0.1MBq/μgの比放射能で放射性ラベル化過剰の担持体付加177Lu-テトラジン28を添加した。この混合物を、20分37ドでインキュベートし、400zgで5分間遠心して血液細胞を分離した。その後、30μlの上澄みをZeba脱塩スピンカラム0.5ml、40kDaMWカット、Pierceへ適用した。遠心後、高分子量ディールスアルダー反応生成物をカートリッジから溶出し、一方で過剰のテトラジンを保持させた。溶出液中に含まれる放射能を、二重同位体手順125I及び177Luに対してそれぞれ、10~80keV、155~380keVの窓を設定でガンマ計数器で測定した。177Luのみを含む血清サンプルが前記カートリッジから漏れる177Luを補正するために使用された。前記I計数は、放射性崩壊を補正し、177Lu/125I比率が計算された。177Lu/125I比率の減少は、マウス血液サンプル中に存在する過剰の177Lu-テトラジンと125I-CC49-TCOとのより低い反応収率を意味し、それによりインビボでの前記TCO器の不活性化を意味する。図24は、時間と共に177Lu/125I比率の変化を、当初インタクトTCOt=0で100に規格化されているで示す。注目すべきことは、TCO44bはmAb注射後48時間までインビボで完全に安定であるインタクトTCOの97.8±1.6であり、一方後にはいくらかの分解が見られるmAb注射後4日でインタクトTCOの80.4±1.8となる、ということである。実施例19CC49-TCO44bでプレターゲットされた腫瘍保持マウスでの177Lu-テトラジン28の生体内分布腫瘍保持マウス方法を参照;100mm3腫瘍サイズ;n=4に、7.544b基で官能基化された125I-CC49マウス当たり、100μg、約0.2MBqを注射した。mAb注射後30及び48時間後、前記マウスは1投与の洗浄試薬ガラクトース-MSA-テトラジン、1投与当たり160μgを投与され、続いて2時間後177Lu-テトラジン28を投与されたmAbに対して10当量、約0.5MBq。テトラジン注射後3時間、マウスは麻酔され脊椎脱臼で屠殺され、血液を心臓穿刺で取り出し、興味対象の器官と組織を取り出しブロット乾燥した。集めたサンプルを秤量し、1mLPBSを添加した。サンプルの放射能を、二重同位体手順125I及び177Luについてそれぞれ、10~80keV、155~380keVの窓を設定で、1グラム当たりの組織のパーセント投与量ID/gを決定するために標準と共にガンマ計数器で計数した。生体内分布データは、125I-CC49-TCO44bの高い腫瘍取り込みを示す。前記腫瘍取り込みは、他のTCO構成物で得られるよりも高く下記参照、これは7.5TCO-44b器で官能基化されたCC49noより長い血液内循環によると考えられる。対照的に、全ての他の器官でのmAbの保持は、2つの洗浄試薬を投与することで低くなるが、これらは前記循環CC49-TCOを補足し、肝臓へ輸送し、そこで迅速に分解させるからである。腫瘍での高いmAbの取り込みの結果として、また、177Lu-テトラジン取り込みも以前の実験で得られた結果よりもずっと高くなった。また、テトラジン投与の前の段階で非腫瘍結合性のCC49-TCOが除去されるために、全ての他の器官への177Lu取り込みは無視出来る程度となる。腎臓のみがむしろ高い177Luの保持を示すが、これはテトラジンの尿内排泄の結果である。これにより、腎臓以外の全ての器官において、高いターゲット対非ターゲット比率が得られる結果と成る。注目すべきことは、腫瘍及び血液に存在するTCOの34±4および10±1がそれぞれテトラジンと反応したことである。以下本発明のいくつかの実施態様をまとめる。1.ターゲット化医用イメージング及び/又は治療のためのキットであり、前記キットは少なくとも1つのプレターゲットプローブ及び少なくとも1つのエフェクタープローブを含み、前記プレターゲットプローブが第1のターゲット部及び第1の生体直交反応性部を、前記エフェクタープローブが、ラベル又は医薬的活性化合物などのエフェクター部及び第2の生体直交反応性部を含み、前記第1及び第2の生体直交反応性部のいずれかがジエノフィルであり、前記第1及び第2の生体直交反応性部がジエンであり、前記ジエノフィルが式1を満たす8-員環ジエノフィルであり:ここでRの位置はエクアトリアルであり、Raの位置はアキシャルであり、X、Y、R及びRaのそれぞれは独立して、H又は最大6まで、アルキル、アリール、O-アルキル、O-アリール、S-アリール、S-アルキル、SO-アリール、SO-アルキル、SO2-アリール、SO2-アルキル、Si-アリール、Si-アルキル、Si-O-アルキル、OCO-アルキル、OCO-アリール、SCO-アルキル、SCO-アリール、OCS-アルキル、OCS-アリール、SCS-アルキル、SCS-アリール、F、Cl、Br、I、N3、SO2H、SO3H、SO4H、PO4H、OH、SH、NO2、NO、CN、OCN、SCN、NCO、NCS、CF3、NR’R’’R’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、アリール、C=OO-アルキル、C=OO-アリール、C=SO-アルキル、C=SO-アリール、C=OS-アリール、C=SS-アルキル、C=SS-アリール、C=ONR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル、NR’CO-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’CO-アリールここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’C=OO-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’C=OO-アリールここでR’はH、アルキル又はアリールOCONR’-アルキルここでR’はH、アルキル又はアリール、OCONR’-アリールここでR’はH、アルキル又はアリール、NR’CONR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CONR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CSNR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、NR’CSNR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール、CR’NR’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルール;からなる群から選択される置換基を表し;R又はRaの1つで、場合によりスペーサーを介して前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブへのリンカー部に含まれ;R又はRa基の2つが共に環を形成し;及び少なくとも1つかつ最大4つのRaは水素ではない、キット。2.実施態様1によるキットであり、前記式1のジエノフィルが、次の要求の1以上を持たすキット:aXはメチル;bYは]メチル:cR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アルキル;dR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アリール;eR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がアリール。3.実施態様1又は2のいずれか一つに記載のキットであり、Xがメチル又は水素、Yがメチル又は水素、およびR3a又はR4aがO-アルキル又はO-アリールである。4.実施態様1乃至3のいずれかに記載のキットであり、前記リンカー部分がR3aのO-アルキル又はO-アリール基へ結合する。5.実施態様1乃至4のいずれかに記載のキットであり、前記ジエンが、式2、3、4および5の化合物からなる群から選択される:ここで、R1は、H、アルキル、アルール、CF3、CF2、CF2-R’、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=OR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’=SSR’’、NR’C=ONR’’R’’’、NR’C=SNR’R’’R’’’ここで、R’、R’’、R’’’はそれぞれ独立してH、アルキル又はアルキルからなる群から選択され;A及びBはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、NO-、NRA及びBは共に炭素でない場合にRはアルキルからなる群から選択され;Xは、O、N-アルキル及びC=Oからなる群から選択され、及びYは、CRであり、RはH、アルキル、アリール、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’ここで、R’、R’’はH、アリール又はアルキルであり;R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、CF3、CF2-R’、NO2、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、OC=OR’’’、SC=OR’’’、OC=SR’’’、SC=SR’’’、S=OR’、S=O2R’’’、S=O2NR’R’’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’C=SSR’’、OC=ONR’R’’、SC=ONR’R’’、OC=SNR’R’’、SC=SNR’R’’、NR’C=ONR’R’’、NR’C=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール及びアルキルであり、R’’’は独立してアリール又はアルキルからなる群から選択され;Aは、N-アルキル、N-アリール、C=O及びCN-アルキルからなる群から選択され;BはO又はSであり:Xは、N、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=OR’、CC=SR’、CS=OR’、CS=O2R’’’、CC=OO-R’、CC=OS-R’、CC=SO-R’、CC=SS-R’、CC=ONR’R’’、CC=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル基であり、R’’’はそれぞれ独立してアリール又はアルキルから成る群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここで、R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、CF3、CF2-R’、NO2、OR’、SR’、C=OR’、C=SR’、OC=OR’’’、SC=OR’’’、OC=SR’’’、SC=SR’’’、S=OR’、S=O2R’’’、S=O2NR’R’’、C=OOR’、C=OSR’、C=SOR’、C=SSR’、C=ONR’R’’、C=SNR’R’’、NR’R’’、NR’C=OR’’、NR’C=SR’’、NR’C=OOR’’、NR’C=SOR’’、NR’C=OSR’’、NR’C=SSR’’、OC=ONR’R’’、SC=ONR’R’’、OC=SNR’R’’、SC=SNR’R’’、NR’C=ONR’R’’、NR’C=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール及びアルキルであり、R’’’は独立してアリール又はアルキルからなる群から選択され;Aは、N、C-アルキル、C-アリール及びNO-からなる群から選択され;BはNであり;Xは、N、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=OR’、CC=SR’、CS=OR’、CS=O2R’’’、CC=OO-R’、CC=OS-R’、CC=SO-R’、CC=SS-R’、CC=ONR’R’’、CC=SNR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はarukiru基であり、R’’’はそれぞれ独立してアリール又はアルキルから成る群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、H、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、2、6-ピリミジル、2、5-ピリミジル、3、5-ピリミジル、2、4-ピリミジル又はフェニールであって、これらは場合によりNO2、F、Cl、CF3、CN、COOH、COOR、CONH2、CONHR、CONR2、CHO、COR、SO2R、SO2OR、NO、Arなどの1以上の電子吸引基で置換されていてもよいRはC1~C6アルキルであり、Arとは芳香族基、特にフェニール、ピリジル又はナフチル基を表す、からなる群から選択され;および前記ジエンは、前記プレターゲットプローブ又はエフェクタープローブとの少なくとも1つのリンケージを、場合によりスペーサを介して含む、キット。6.実施態様1乃至5のいずれかに記載のキットであり、前記プレターゲットプローブが、第1のターゲット部分として抗体を含む、キット。7.実施態様1乃至6のいずれかに記載のキットであり、前記エフェクタープローブが、エフェクター部分として検出可能なラベルを含み、前記ラベルが好ましくは、イメージングシステムで使用される造影剤であり、前記イメージング造影剤が、MRIイメージング可能試薬、スピンラベル、光学ラベル、超音波応答試薬、X線応答試薬、放射性核、FRET-タイプ色素、生体発光又は蛍光分子又はタグ、ビオチン、常磁性イメージング剤および超常磁性イメージング剤からなる群から選択される、キット。8.実施態様1乃至7のいずれかに記載のキットであり、前記エフェクタープローブが、エフェクター部分として、医薬的に活性な化合物を含む、キット。9.実施態様8によるキットであり、前記医薬活性化合物が、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される、キット。10.第1のターゲット部分と生体直交反応性基を含むプレターゲット試薬であり、前記生体直交反応性基が、実施態様5で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、プレターゲット試薬。11.検出可能なラベル、好ましくは、3H、11C、13N、15O、18F、19F、51Cr、52Fe、52Mn、55Co、60Cu、61Cu、62Zn、62Cu、63Zn、64Cu、66Ga、67Ga、68Ga、70As、71As、72As、74As、75Se、75Br、76Br、77Br、80Br、82Br、82Rb、86Y、88Y、89Sr、89Zr、97Ru、99Tc、110In、111In、113In、114In、117Sn、120I、122Xe、123I、124I、125I、166Ho、167Tm、169Yb、193Pt、195Pt、201Tl及び203Pbからなる群から選択される同位体および生体直交反応性基を含み、前記生体直交反応性基が、実施態様5で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、イメージングプローブ。12.好ましくは、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される医薬活性化合物と生体直交反応性基を含む治療用プローブであり、前記生体直交反応性基が、実施態様5で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、治療用プローブ。13.実施態様10によるプレターゲット試薬を対処物に投与し、前記試薬を前記対象物のシステム内に、前記第1のターゲット部分が第1のターゲットへ結合するための有効な時間循環させ、次に前記体内から非結合試薬を除去することを含む、プレターゲット方法。14.実施態様13のプレターゲット方法を実施して、実施態様11のイメージングプローブを投与することを含むイメージング方法であり、前記プレターゲット試薬および前記イメージングプローブの生体直交反応性基が、[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、イメージング方法。15.対象物にターゲット医療治療の方法であり、実施態様13のプレターゲット方法を実施し、次に実施態様12の治療用プローブを投与することを含み、前記プレターゲット試薬および前記治療プローブの生体直交反応性基が一緒になって、前記[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、方法。16.実施態様13乃至15のいずれか1つの方法で使用するための実施態様10の試薬。17.動物又はヒトでプレターゲットで使用するための、実施態様1乃至4のいずれかで定めた式1を満たす化合物の使用。18.1以上のアキシャル置換基を持つトランスシクロオクテン、好ましくは実施態様1乃至4のいずれかで定められた式1を満たす化合物の、前記レトロディールスアルダー反応に基づくプレターゲット方法でジエノフィルとしての使用。19.ターゲット化医用イメージング及び/又は治療のためのキットであり、前記キットは少なくとも1つのプレターゲットプローブ及び少なくとも1つのエフェクタープローブを含み、前記プレターゲットプローブが第1のターゲット部及び第1の生体直交反応性部を、前記エフェクタープローブが、ラベル又は医薬的活性化合物などのエフェクター部及び第2の生体直交反応性部を含み、前記第1及び第2の生体直交反応性部のいずれかがジエノフィルであり、前記第1及び第2の生体直交反応性部がジエンであり、前記ジエノフィルが式1を満たす8-員環ジエノフィルであり:ここでRの位置はエクアトリアルであり、Raの位置はアキシャルであり、X、Y、R及びRaのそれぞれは独立して、H又は最大6まで、アルキル、O-アルキル、O-アリール、S-アルキル、Si-アルキル、F、Cl、Br、I、SO2、SO3、SO4、NO2、NR’R’’R’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、C=OO-アルキル、C=OO-アリール、C=ONR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル、OCO-アルキル、OCO-アリール、NR’CO-アルキルここでR’はH又はアルキル、NR’CO-アリールここでR’はアルキル、NR’C=OO-アルキルここでR’はH又はアルキル、NR’C=OO-アリールここでR’はH又はアルキルOCONR’-アルキルここでR’はH又はアルキル、OCONR’-アリールここでR’はH又はアルキル、NR’CONR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、NR’CONR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、NR’CSNR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してHまアルキル、NR’CSNR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、Raの1つは、場合によりスペーサーを介して前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブへのリンカー部に含まれ;R又はRa基の2つが共に環を形成し;及び少なくとも1つかつ最大4つのRaは水素ではない、キット。20.実施態様19に記載のキットであり、式1のジエノフィルが次の要求の少なくとも1つを満たす:aXはメチル;bYは]メチル:cR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アルキル;dR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アリール。21.実施態様19又は20のいずれか一つに記載のキットであり、Xがメチル又は水素、Yがメチル又は水素、およびR3a又はR4aがO-アルキル又はO-アリールである。22.実施態様19乃至21のいずれかに記載のキットであり、前記リンカー部分がR3aO-アルキル又はO-アリール基へ結合する。23.実施態様19乃至22のいずれかに記載のキットであり、前記ジエンが、式2、3、4および5の化合物からなる群から選択される:ここで、R1は、H、アルキル、アルール、O-アルキル、C=OO-アルキル、O-、およびNH2:A及びBはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、窒素、NO-、NRA及びBは共に炭素でない場合にRはアルキルからなる群から選択され;Xは、O、N-アルキル及びC=Oからなる群から選択され、及びYは、CRであり、RはH、アルキル、アリール、C=OOアルキルから選択され;R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、C=OO-アルキル、CF3、C=ONH-アルキルおよびNO2からなる群から選択され;Aは、N-アルキル、N-アリール、C=O及びCN-アルキルからなる群から選択され;BはOであり:Xは、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=O-アルキル、およびNから選択され:Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここで、R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、OH、OC=O-アルキル、CF3、C=ONH-アルキル、およびNO2からなる群から選択され、Aは、N、C-アルキル、C-アリール及びNO-からなる群から選択され;BはNであり;Xは、N、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=O-アルキルからなる群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、2-ピリジル、フェニール又は、NO2、CN、COOH、COOR、CONH2、CONHR、CONR2、CHO、COR、SO2R、SO2OR、NO、Arなどの1以上の電子吸引基で置換されているフェニールRはC1~C6アルキルであり、Arとは芳香族基、特にフェニール、ピリジル又はナフチル基を表す、からなる群から選択され;24.実施態様19乃至23のいずれかのキットであり、前記プレターゲットプローブが、第1のターゲット部分として抗体を含む、キット。25.実施態様19乃至24のいずれかに記載のキットであり、前記エフェクタープローブが、エフェクター部分として検出可能なラベルを含み、前記ラベルが好ましくは、イメージングシステムで使用される造影剤であり、前記イメージング造影剤が、MRIイメージング可能試薬、スピンラベル、光学ラベル、超音波応答試薬、X線応答試薬、放射性核、FRET-タイプ色素、生体発光又は蛍光分子又はタグ、ビオチン、常磁性イメージング剤および超常磁性イメージング剤からなる群から選択される、キット。26.実施態様19乃至25のいずれかに記載のキットであり、前記エフェクタープローブが、エフェクター部分として、医薬的に活性な化合物を含む、キット。27.実施態様26によるキットであり、前記医薬活性化合物が、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される、キット。28.第1のターゲット部分と生体直交反応性基を含むプレターゲット試薬であり、前記生体直交反応性基が、実施態様23で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、プレターゲット試薬。29.検出可能なラベル、好ましくは、3H、11C、13N、15O、18F、19F、51Cr、52Fe、52Mn、55Co、60Cu、61Cu、62Zn、62Cu、63Zn、64Cu、66Ga、67Ga、68Ga、70As、71As、72As、74As、75Se、75Br、76Br、77Br、80Br、82Br、82Rb、86Y、88Y、89Sr、89Zr、97Ru、99Tc、110In、111In、113In、114In、117Sn、120I、122Xe、123I、124I、125I、166Ho、167Tm、169Yb、193Pt、195Pt、201Tl及び203Pbからなる群から選択される同位体および生体直交反応性基を含み、前記生体直交反応性基が、実施態様23で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、イメージングプローブ。30.好ましくは、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される医薬活性化合物と生体直交反応性基を含む治療用プローブであり、前記生体直交反応性基が、実施態様23で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、治療用プローブ。31.実施態様28によるプレターゲット試薬を対処物に投与し、前記試薬を前記対象物のシステム内に、前記第1のターゲット部分が第1のターゲットへ結合するための有効な時間循環させ、次に前記体内から非結合試薬を除去することを含む、プレターゲット方法。32.実施態様13のプレターゲット方法を実施して、実施態様29のイメージングプローブを投与することを含むイメージング方法であり、前記プレターゲット試薬および前記イメージングプローブの生体直交反応性基が、[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、イメージング方法。33.対象物にターゲット医療治療の方法であり、実施態様31のプレターゲット方法を実施し、次に実施態様30の治療用プローブを投与することを含み、前記プレターゲット試薬および前記治療プローブの生体直交反応性基が一緒になって、前記[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、方法。34.実施態様31乃至33のいずれか1つの方法で使用するための実施態様28の試薬。35.動物又はヒトでプレターゲットで使用するための、実施態様19乃至22のいずれかで定めた式1を満たす化合物の使用。36.1以上のアキシャル置換基を持つトランスシクロオクテン、好ましくは実施態様19乃至22のいずれかで定められた式1を満たす化合物の、前記レトロディールスアルダー反応に基づくプレターゲット方法でジエノフィルとしての使用。さらなる実施態様を以下まとめる。実施態様1.ターゲット化医用イメージング及び/又は治療のためのキットであり、前記キットは少なくとも1つのプレターゲットプローブ及び少なくとも1つのエフェクタープローブを含み、前記エフェクタープローブが、ラベル又は医薬的活性化合物などのエフェクター部及び第2の生体直交反応性部を含み、前記第1及び第2の生体直交反応性部のいずれかがジエノフィルであり、前記第1及び第2の生体直交反応性部がジエンであり、前記ジエノフィルが式1を満たす8-員環ジエノフィルであり:ここで、Rの位置はエカトリアルであり、Raのちはアキシャルであり、X、Y、RおよびRaは独立してそれぞれ、H又は最大6の、アルキル、O-アルキル、O-アリール、S-アルキル、Si-アルキル、F、Cl、Br、I、SO2、SO3、SO4、NO2、NR’R’’ここでR’およびR’’は独立してH又はアルキル、C=OO-アルキル、C=OO-アリール、C=ONR’R’’ここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH、アリール又はアルキル、OCO-アルキル、OCO-アリール、NR’CO-アルキルここでR’はH又はアルキル、NR’CO-アリールここでR’はアルキル、NR’C=OO-アルキルここでR’はH又はアルキル、NR’C=OO-アリールここでR’はH又はアルキル、OCONR’-アルキルここでR’はH又はアルキル、OCONR’-アリールここでR’はH又はアルキル、NR’CONR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、NR’CONR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、NR’CSNR’’-アルキルここでR’及びR’’はそれぞれ独立してHまアルキル、NR’CSNR’’-アリールここでR’及びR’’はそれぞれ独立してH又はアルキル、R又はRaの1つは、場合によりスペーサーを介して前記プレターゲットプローブ又は前記エフェクタープローブへのリンカー部に含まれ;R又はRa基の2つが共に環を形成し;及び少なくとも1つかつ最大4つのRaは水素ではない、キット。実施態様2.実施態様1に記載のキットであり、式1のジエノフィルが次の要求の少なくとも1つを満たす:aXはメチル;bYは]メチル:cR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アルキル;dR2a、R3a、R4a、R5aの1以上がO-アリール。実施態様3.実施態様1又は2のいずれかのキットであり、Xがメチル又は水素であり、Yがメチル又は水素であり、およびR3a又はR4aがO-アルキル又はO-アリールである、キット。実施態様4.実施態様1乃至3のいずれかのキットであり、前記リンカー部分が、R3aのO-アルキル又はO-アリール部分に結合される、キット。実施態様5.実施態様1乃至4のいずれかのキットであり、前記ジエンは、以下式2、3、4及び5に示される化合物:ここで、R1は、アルキル、アルール、O-アルキル、C=OO-アルキル、O-、及びNH2からなる群から選択され;A及びBはそれぞれ独立して、アルキル置換炭素、アリール置換炭素、窒素、NO-、NRA及びBは共に炭素でない場合にRはアルキルからなる群から選択され;Xは、O、N-アルキル及びC=Oからなる群から選択され、及びYは、CRであり、RはH、アルキル、アリール、C=O-アルキルからなる群から選択され;ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、OH、C=OO-アルキル、CF3、C=ONH-アルキル及びNO2からなる群から選択され:Aは、N-アルキル、N-アリール、C=O及びCN-アルキルからなる群から選択され;BはOであり:Xは、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=O-アルキル及びNからなる群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここで、R1及びR2はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アリール、OH、C=OO-アルキル、CF3、C=ONH-アルキル及びNO2からなる群から選択され;Aは、N、C-アルキル、C-アリール及びNO-からなる群から選択され;BはNであり;Xは、CH、C-アルキル、C-アリール、CC=O-Oアルキル及びNからなる群から選択され;Yは、CH、C-アルキル、C-アリール、N及びNO-からなる群から選択され;ここでR1及びR2はそれぞれ独立して、2-ピリジル、フェニール、又はNO2、CN、COOH、COOR、CONH2、CONHR、CONR2、CHO、COR、SO2R、SO2OR、NO、Arなどの1以上の電子吸引基で置換されたフェニールRはC1~C6アルキルであり、Arとは芳香族基、特にフェニール、ピリジル又はナフチル基を表す、からなる群から選択される。実施態様6.実施態様1乃至5のいずれかのキットであり、前記プレターゲットプローブが、第1のターゲット部分として抗体を含む、キット。実施態様7.実施態様1乃至6のいずれかに記載のキットであり、前記エフェクタープローブが、エフェクター部分として検出可能なラベルを含み、前記ラベルが好ましくは、イメージングシステムで使用される造影剤であり、前記イメージング造影剤が、MRIイメージング可能試薬、スピンラベル、光学ラベル、超音波応答試薬、X線応答試薬、放射性核、FRET-タイプ色素、生体発光又は蛍光分子又はタグ、ビオチン、常磁性イメージング剤および超常磁性イメージング剤からなる群から選択される、キット。実施態様8.実施態様1乃至7のいずれかに記載のキットであり、前記エフェクタープローブが、エフェクター部分として、医薬的に活性な化合物を含む、キット。実施態様9.実施態様8によるキットであり、前記医薬活性化合物が、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される、キット。実施態様10.第1のターゲット部分と生体直交反応性基を含むプレターゲット試薬であり、前記生体直交反応性基が、実施態様5で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、プレターゲット試薬。実施態様11.検出可能なラベル、好ましくは、3H、11C、13N、15O、18F、19F、51Cr、52Fe、52Mn、55Co、60Cu、61Cu、62Zn、62Cu、63Zn、64Cu、66Ga、67Ga、68Ga、70As、71As、72As、74As、75Se、75Br、76Br、77Br、80Br、82Br、82Rb、86Y、88Y、89Sr、89Zr、97Ru、99Tc、110In、111In、113In、114In、117Sn、120I、122Xe、123I、124I、125I、166Ho、167Tm、169Yb、193Pt、195Pt、201Tl及び203Pbからなる群から選択される同位体および生体直交反応性基を含み、前記生体直交反応性基が、実施態様5で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、イメージングプローブ。実施態様12.好ましくは、24Na、32P、33P、47Sc、59Fe、67Cu、76As、77As、80Br、82Br、89Sr、90Nb、90Y、103Ru、105Rh、109Pd、111Ag、111In、121Sn、127Te、131I、140La、141Ce、142Pr、143Pr、144Pr、149Pm、149Tb、151Pm、153Sm、159Gd、161Tb、165Dy、166Dy、166Ho、169Er、172Tm、175Yb、177Lu、186Re、188Re、198Au、199Au、211At、211Bi、212Bi、212Pb、213Bi、214Bi、223Ra、及び225Acからなる群から選択される医薬活性化合物と生体直交反応性基を含む治療用プローブであり、前記生体直交反応性基が、実施態様5で規定された式2から5のいずれかによるジエンと、実施態様1から4のいずれかによるジエノフィルとの間の[42]レトロディールスアルダー反応のための反応相手である、治療用プローブ。実施態様13.実施態様10によるプレターゲット試薬を対処物に投与し、前記試薬を前記対象物のシステム内に、前記第1のターゲット部分が第1のターゲットへ結合するための有効な時間循環させ、次に前記体内から非結合試薬を除去することを含む、プレターゲット方法。実施態様14.実施態様13のプレターゲット方法を実施して、実施態様11のイメージングプローブを投与することを含むイメージング方法であり、前記プレターゲット試薬および前記イメージングプローブの生体直交反応性基が、[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、イメージング方法。実施態様15.対象物のターゲット医療治療の方法であり、実施態様13のプレターゲット方法を実施し、次に実施態様12の治療用プローブを投与することを含み、前記プレターゲット試薬および前記治療プローブの生体直交反応性基が一緒になって、前記[42]レトロディールスアルダー反応の反応相手を形成する、方法。実施態様16.実施態様13乃至15のいずれか1つの方法で使用するための実施態様10の試薬。実施態様17.動物又はヒトでプレターゲットで使用するための、実施態様1乃至4のいずれかで定めた式1を満たす化合物の使用。実施態様18.1以上のアキシャル置換基を持つトランスシクロオクテン、好ましくは実施態様1乃至4のいずれかで定められた式1を満たす化合物の、前記レトロディールスアルダー反応に基づくプレターゲット方法でジエノフィルとしての使用。