"試験試料中のADAM8ポリペプチドの発現をインビトロで検出すること、及び該試験試料中の発現レベルをコントロールと比較することを含み、このときコントロール試料と比較して該試験試料中の該ポリペプチドレベルの発現が高い場合に、試験試料を採取した該哺乳動物に腫瘍があることを示す、新生物性疾患のインビトロ検出方法。抗ADAM8抗体に結合させることによって試験試料中のADAM8ポリペプチドをインビトロで検出すること、及び該試験試料中の抗体とポリペプチドの複合体レベルをコントロールのものと比較することを含み、このときコントロールと比較して該試験試料中の複合体レベルが高い場合に、試験試料を採取した該哺乳動物に腫瘍があることを示す、新生物性疾患のインビトロ検出方法。前記抗体が検出可能に標識されている、請求項2に記載の方法。前記の組織細胞の試験試料が、腫瘍を有すると思われる個体から得たものである、請求項2に記載の方法。請求項2に記載の方法に従って用いる場合に、抗ADAM8抗体と担体を適切にパッケージ化して具備する診断用キット。さらに、腫瘍細胞を含有すると思われる試料中のADAM8ポリペプチドの存在を検出するための前記抗体の使用についての指示書を具備する、請求項5に記載のキット。全RNA試料中のADAM8mRNAをインビトロで検出すること、及び該試験試料中のmRNAレベルをコントロールのものと比較することを含み、このときコントロールと比較して該試験試料中のmRNAレベルが高い場合に、試験試料を採取した該哺乳動物に腫瘍があることを示す、新生物性疾患のインビトロ検出方法。腫瘍が乳、大腸又は肺の腫瘍である、請求項1から4及び7の何れか一に記載の方法。発明の詳細な説明I.定義遺伝子増幅及び遺伝子複製なる語句は交換可能に用いられ、遺伝子又は遺伝子断片の複数のコピーが特定の細胞又は株化細胞で生成されるプロセスを意味する。複製された領域増幅されたDNAの伸展は、しばしば単位複製配列と呼ばれる。通常は、生成されるメッセンジャーRNAmRNAの量、即ち遺伝子発現レベルも、発現された特定遺伝子の作成されたコピー数に比例して増加する。ここで用いられる腫瘍は、悪性又は良性に関わらず、全ての腫瘍形成細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を意味する。癌及び癌性という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか記述する。癌の例には、これらに限定されるものではないが、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれる。このような癌のより特定の例には、乳癌、前立腺癌、結腸癌、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、結腸直腸癌、子宮体癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、産卵口癌、甲状腺癌、肝癌及び様々な種類の頭部及び頸部の癌が含まれる。治療とは、疾患の病理の進展阻止又は変更の本発明で実施される介入である。従って、治療は治療的処置及び予防的又は保護的手段の両方を指す。治療が必要なものは、既に疾患に罹っているもの並びに疾患が防止されるべきものを含む。腫瘍例えば、癌治療では、治療薬は直接的に腫瘍細胞の病理を低下させてもよいし、又は腫瘍細胞を他の治療媒介物、例えば放射線及び/又は化学治療に対してより敏感にしてもよい。癌の病理は、患者の良好な生存を危うくさせる全ての現象を含む。これは、限定されるものではないが、異常又は制御不能な細胞成長、転移、隣接細胞の正常機能の阻害、サイトカイン又は他の分泌生成物の異常レベルでの放出、炎症又は免疫反応の抑制又は悪化などを含む。治療の目的とされる哺乳動物は、哺乳類に分類される任意の動物を意味し、ヒト、家畜用及び農場用動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジなどを含む。好ましくは、哺乳動物はヒトである。ここで用いられる担体は製薬的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤を含み、それらは、用いられる用量及び濃度でそれに暴露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。生理学的に許容される担体は、pH緩衝化水溶液であることが多い。生理学的に許容される担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸バッファー;アスコルビン酸を含む酸化防止剤;低分子量約10残基未満のポリペプチド;タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン;ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸;グルコース、マンノース又はデキストラン等の単糖類、二糖類及び他の炭水化物;EDTA等のキレート化剤;マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール;ナトリウム等の自己形成対イオン;及び/又はTWEEN、ポリエチレングリコールPEG、及びPLURONICS等の非イオン性界面活性剤を含む。1つ又は複数のさらなる治療薬と組み合わせての投与は、同時一時及び任意の順序での連続投与を含む。ここで用いられる細胞毒性薬なる用語は、細胞の機能を阻害又は抑制する及び/又は細胞破壊を生ずる物質を意味する。この用語は、放射性同位体例えば、I131、I125、Y90及びRe186、化学治療薬、及び細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素的活性毒素といった毒素、又はその断片を含むとされる。化学治療薬は、癌の治療に有用な化合物である。化学治療薬の例は、アドリアマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、5フルオロウラシル、シトシンアラビノシドAra-C、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、サイトキシン、タキソイド、例えばパクリタキセルTaxolBristolMyersSquibbOncologyPrincetonNJ及びドキセタキセルTaxotereRhonePoulencRorerAntonyFrance、トキソテール、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イフォスファミド、マイトマイシンC、マイトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラマイシン米国特許第4675187号、5-FUフルオロウラシル、6-チオグアニン、6-メルカプトプリン、アクチノマイシンD、VP-16、クロランブシル、メルファラン、及び他の関連するナイトロジェンマスタードを含む。また、この定義に含まれるのは、タモキシフェン及びオナプリストンなどの腫瘍へのホルモン作用を調節又は阻害するように作用するホルモン様薬剤である。ここで用いられる際の増殖阻害剤は、細胞、特にここで同定される任意の遺伝子を過剰発現する癌細胞の成長を、インビトロ又はインビボで阻害する化合物又は組成物を意味する。即ち、増殖阻害剤は、S期でそのような遺伝子を過剰発現する細胞の割合を有意に減少させるものである。増殖阻害剤の例は、細胞周期をS期以外の位置で阻害する薬剤、例えばG1期停止又はM期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なM期ブロッカーは、ビンカスビンクリスチン及びビンブラスチン、タキソール、及びトポII阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンを含む。G1期停止させるこれらの薬剤は、S期停止にも溢流し、例えば、DNAアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、5フルオロウラシル、及びaraCである。さらなる情報は、TheMolecularBasisofCancerMendelsohn及びIsrael編Chapter1表題CellcycleregurationoncogeneandantineoplasticdrugsMurakamiら、特にp13に見出すことができる。ドキソルビシンはアントラサイクリン抗生物質である。ドキソルビシンの完全な化学名は、10オキシ7,8,9,10テトラヒドロ6,8,11トリヒドロキシ81メトキシ5,12ナフタセンジオンである。サイトカインなる用語は、1つの細胞集団から放出され、他の細胞に細胞間メディエータとして作用するタンパク質の一般用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、及び伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Nメチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン;副甲状腺ホルモン;チロキシン;インシュリン;プロインシュリン;レラキシン;プロレラキシン;糖タンパク質、例えば濾胞刺激ホルモンFSH、甲状腺刺激ホルモンTSH、及び黄体化ホルモンLH;肝臓増殖因子;線維芽増殖因子;プロラクチン;胎盤ラクトゲン;腫瘍壊死因子α及びβ;ミューラー阻害因子;マウス生殖腺刺激ホルモン関連ペプチド;インヒビン;アクチビン;血管内皮増殖因子;インテグリン;トロンボポエチンTPO;NGFβ等の神経成長因子;血小板増殖因子;TGFα及びTGFβ等のトランスフォーミング増殖因子TGF;インシュリン様成長因子I及びII;エリスロポエチンEPO;骨誘発因子;インターフェロンα、β、及びγ等のインターフェロン;コロニー刺激因子CSFs、例えばマクロファージCSFMCSF;顆粒球マクロファージCSFGMCSF;及び顆粒球CSFGCSF;インターロイキンILs、例えばIL1、IL1α、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL11、IL12;腫瘍壊死因子、例えばTNFα及びTNFβ;及びLIF及びキットリガンドKLを含む他のポリペプチド因子である。ここで用いられる際、用語サイトカインは、天然供給源から、又は組換え細胞培養からのタンパク質を含み、天然配列サイトカインの生物学的な活性等価物である。本出願で使用されるプロドラッグという用語は、親薬物に比べて、腫瘍細胞に対する細胞毒性が低く、より活性な親形態に、酵素的に活性化又は転換され得る製薬的に活性な物質の先駆体又は誘導体形態を意味する。例えば、WilmanProdrugsinCancerChemotherapyBiochemicalSocietyTransactions14pp375382615thMeetingBelfast及びStellaらProdrugsAChemicalApproachtoTargetedDrugDeliveryDirectedDrugDeliveryBorchardtらpp247267HumanaPressを参照。限定するものではないが、本発明のプロドラッグには、ホスファート含有プロドラッグ、チオホスファート含有プロドラッグ、スルファート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Dアミノ酸変性プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、βラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ又は任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、より活性のある細胞毒のない薬剤に転換可能な5フルオロシトシン及び他の5フルオロウリジンプロドラッグが含まれる。限定するものではないが、本発明で使用されるプロドラッグ形態に誘導体化可能な細胞障害剤の例には、前掲の化学療法剤が含まれる。ここで用いられる場合のADAM8又はADAM8ポリペプチドという用語は、天然配列ADAM8ポリペプチド及びADAM8ポリペプチド変異体さらにここで定義されるを含み、好ましくはヒトポリペプチドである。ADAM8ポリペプチドは、例えばヒト組織型又はその他のソースなどの種々のソースから単離することができ、或いは組み換え体及び/又は合成法によって調製することができる。天然配列ADAM8ポリペプチドは、天然由来のADAM8ポリペプチドポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ADAM8ポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換え又は合成手段により生産することもできる。天然配列ADAM8ポリペプチドという用語には、特に、ADAM8ポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態例えば、細胞外ドメイン配列、自然に生じる変異形体及びADAM8ポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明の或る実施態様では、天然配列ADAM8ポリペプチドは、上記に示したアミノ酸配列配列番号:1を含む成熟又は全長の天然配列ADAM8ポリペプチドである。ここで各天然ポリペプチドの断片は、これらに限られないが、そのような切断分泌形態が自然に生ずるか否かに関わらず、そこから天然N末端シグナル配列が全部又は一部欠失され、又は他の配列に置換されたポリペプチド変異体及び各天然配列の細胞外ドメインを含む。断片は、好ましくは対応する天然ADAM8ポリペプチドに特異的に結合する抗体の生産のために十分な長さである。ADAM8ポリペプチド変異体とは、上記に示されたアミノ酸配列配列番号:1と約80のアミノ酸配列同一性を有する、或いはそれの特に誘導された断片を有する下記に定義されるような活性ADAM8ポリペプチドを意味する。このようなADAM8ポリペプチド変異体には、例えば、配列番号:1の配列において、各々、内部ドメインと共にN及び/又はC末端で1つ又は複数のアミノ酸残基が付加、又は欠失したADAM8ポリペプチドが含まれる。通常、ADAM8ポリペプチド変異体は、配列番号:1のアミノ酸配列又はその誘導ポリペプチド断片の各々と、少なくとも約80のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約81のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約82のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約83のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約84のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約85のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約86のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約87のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約88のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約89のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約90のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約91のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約92のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約93のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約94のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約95のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約96のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約97のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約98のアミノ酸配列同一性、そして、さらにより好ましくは少なくとも約99のアミノ酸配列同一性を有している。変異体は、天然ADAM8ポリペプチド配列を含まない。ここで定義されるADAM8ポリペプチドに関するパーセントアミノ酸配列同一性とは、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、ADAM8ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2又はMegalignソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。ここで使用される同一性の値は、WU-BLAST-2AltschulらMethodsinEnzymology266460480を用いることで発生する。殆どのWU-BLAST-2検索パラメータはデフォルト値に設定される。デフォルト値に設定されないものすなわち調節可能なパラメータは、次の値に設定する:オーバーラップスパン=1、オーバーラップフラクション=0.125、ワード閾値T=11、及びスコアリングマトリクス=BLOSUM62。アミノ酸配列同一性の値は、aWU-BLAST-2により決定される対象のADAM8ポリペプチドのアミノ酸配列と対象の比較アミノ酸配列すなわち、対象のADAM8ポリペプチドが比較されている配列の間の一致するアミノ酸残基の数をb対象のADAM8ポリペプチドのアミノ酸残基の全数でそれぞれ除することにより決定される。上記にもかかわらず、アミノ酸配列同一性値は、ジェネンテク社によって作成され、ユーザー資料と共に米国著作権庁、WashingtonDC20559へ提出されて米国著作権登録番号TXU510087で登録されている、コンピュータプログラムALIGN-2を用いることでも決定することができる。全ての配列比較パラメータはALIGN-2プログラムにより設定され、変動しない。表2A-Qを参照のこと。ADAM8変異体ポリヌクレオチド又はADAM8変異体核酸配列とは、上記に示したヌクレオチド配列配列番号:2と少なくとも80の配列同一性を有する、或いは特にそれの誘導化された断片を有する、下記に定義されるような活性ADAM8ポリペプチドをコードする核酸分子である。通常は、ADAM8変異体ポリペプチドヌクレオチドは、配列番号:2の核酸配列又はその誘導化断片と、少なくとも約80の核酸配列同一性、好ましくより好ましくは少なくとも約81の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約82の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約83の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約84の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約85の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約86の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約87の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約88の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約89の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約90の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約91の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約92の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約93の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約94の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約95の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約96の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約97の核酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約98の核酸配列同一性、そしてさらにより好ましくは少なくとも約99の核酸配列同一性を有している。変異体は、天然ヌクレオチド配列を含まない。この点については、遺伝子コードの縮重のために、配列番号:2の核酸配列に対して少なくとも80の核酸配列同一性を有する多くのADAM8変異体ポリヌクレオチドが、配列番号:1のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることは、普通の当業者は直ぐに認識できる。ここで同定されるADAM8ポリペプチドコード化核酸配列に対するパーセント核酸配列同一性は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、ADAM8ポリペプチドコード化配列のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセントとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の知る範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2又はMegalignソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。ここで使用される同一性の値は、WU-BLAST-2Altschulら上掲を用いることで発生する。殆どのWU-BLAST-2検索パラメータはデフォルト値に設定される。デフォルト値に設定されないものすなわち調節可能なパラメータは、次の値に設定する:オーバーラップスパン=1、オーバーラップフラクション=0.125、ワード閾値T=11、及びスコアリングマトリクス=BLOSUM62。核酸配列同一性の値は、aWU-BLAST-2により決定される対象のADAM8ポリペプチドコード化核酸配列と対象の比較核酸配列すなわち、対象のADAM8ポリペプチドコード化核酸配列が比較されている配列の間の一致する核酸残基の数をb対象のADAM8ポリペプチドの核酸残基の全数でそれぞれ除することにより決定される。上記にもかかわらず、核酸配列同一性値は、ジェネンテク社によって作成され、ユーザー資料と共に米国著作権庁、WashingtonDC20559へ提出されて米国著作権登録番号TXU510087で登録されている、コンピュータプログラムALIGN-2を用いることでも決定することができる。全ての配列比較パラメータはALIGN-2プログラムにより設定され、変動しない。表2A-Qを参照のこと。他の実施態様では、ADAM8変異体ポリペプチドは、好ましくは厳密なハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、全長ADAM8ポリペプチド配列番号:1をコードするヌクレオチド配列へハイブリッド形成することが可能であり、活性ADAM8ポリペプチドをコードする核酸分子である。ADAM8変異体ポリペプチドは、ADAM8変異体ポリヌクレオチドによってコードされうるものである。上記のように実施された配列比較において、ポジティブ陽性という用語は、比較された配列において同一ではないが類似の特性を有している残基例えば、保存的置換の結果として;表3を参照のことを含む。ポジティブの値は、BLOSUM62マトリクス内でポジティブな値が付けられた残基のフラクションによって決まる。この値は、aWUBLAST2により決定される対象のADAM8ポリペプチドアミノ酸配列と比較アミノ酸配列すなわち、ADAM8ポリペプチド配列が比較されているアミノ酸配列の間のWU-BLAST-2のBLOSUM62マトリックスにおけるポジティブな値をつけるアミノ酸残基の数をb対象のADAM8ポリペプチドのアミノ酸残基の全数で除することにより決定される。表1A-Dを参照のこと。ここで開示される種々のポリペプチドを記述するために用いられる単離されたとは、その自然環境の成分から同定され及び単離され及び/又は回収されたポリペプチドを意味する。好ましくは、単離されたポリペプチドは、天然に付随しているすべての成分をまったくともなっていない。その自然環境の汚染成分とは、ポリペプチドの診断又は治療への使用を典型的には妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様において、ポリペプチドは、スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも15のN末端あるいは内部アミノ酸配列の残基を得るのに充分なほど、あるいは、クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのSDSPAGEによる均一性が得られるように充分なほど精製される。ADAM8の自然環境の少なくとも1つの成分が存在しないため、単離されたポリペプチドには、組換え細胞内のインサイツのポリペプチドが含まれる。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチドは少なくとも1つの精製工程により調製される。単離されたADAM8ポリペプチドをコードする核酸分子は、同定され、ADAM8ポリペプチドをコードする核酸の天然源に通常付随している少なくとも1つの汚染核酸分子から分離された核酸分子である。単離されたADAM8ポリペプチドコード化核酸分子は、天然に見出される型あるいは設定以外のものである。ゆえに、単離されたADAM8ポリペプチドコード化核酸分子は、天然の細胞中に存在するADAM8をそれぞれコードする核酸分子とは区別される。しかし、単離されたADAM8ポリペプチドコード化核酸分子は、例えば、核酸分子が天然細胞のものとは異なった染色体位置にあるADAM8ポリペプチドを通常発現する細胞に含まれるADAM8ポリペプチドをそれぞれコードする核酸分子を含む。コントロール配列という用語は、特定の宿主生物において作用可能に連結したコード配列を発現するために必要なDNA配列を指す。例えば原核生物に好適なコントロール配列は、プロモーター、場合によってはオペレータ配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核生物細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに作用可能に連結している。例えば、プレ配列あるいは分泌リーダーのDNAは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現されているなら、ポリペプチドのDNAに作用可能に連結している;プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に連結している;又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にあるなら、コード配列と作用可能に連結している。一般的に、作用可能に連結しているとは、連結しているDNA配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。連結は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、通常の手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターあるいはリンカーが使用される。バイブリダイゼーション反応の厳密性は、当業者によって容易に決定され、一般的にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングのための温度が高くなり、プローブが短くなると温度は低くなる。バイブリダイゼーションは、一般的に、相補的ストランドがその融点より低い環境に存在する場合に変性DNAが再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリッド形成可能な配列との間の所望の相同性の程度が高くなると、使用できる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をより厳密性にするが、低い温度は厳密性を低下させる。バイブリダイゼーション反応の厳密性の更なる詳細と説明は、AusubelらCurrentProtocolsinMolecularBiologyWileyIntersciencePublishersを参照のこと。ここで定義される厳密性条件又は高厳密性条件は、1洗浄のために低イオン強度及び高温度、例えば、50°Cにおいて0.015Mの塩化ナトリウム/0.0015Mのクエン酸ナトリウム/0.1のドデシル硫酸ナトリウムを用いるもの;2バイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤、例えば、42°Cにおいて50vvホルムアミドと0.1ウシ血清アルブミン/0.1フィコール/0.1のポリビニルピロリドン/50mMのpH6.5のリン酸ナトリウムバッファー、及び750mMの塩化ナトリウム、75mMのクエン酸ナトリウムを用いるもの;又は342°Cにおける50ホルムアミド、5xSSC0.75MのNaCl、0.075Mのクエン酸ナトリウム、50mMのリン酸ナトリウムpH6.8、0.1のピロリン酸ナトリウム、5xデンハート液、超音波処理サケ精子DNA50μg/ml、0.1のSDS、及び10のデキストラン硫酸と、42°Cにおける0.2xSSC塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム中の洗浄及び55°Cでの50のホルムアミド、次いで55°CにおけるEDTAを含む0.1xSSCからなる高厳密性洗浄を用いるものによって特定される。中程度の厳密性条件は、SambrookらMolecularCloningALaboratoryManualに記載されているように特定され、上記の厳密性より低い洗浄溶液及びバイブリダイゼーション条件例えば、温度、イオン強度及びSDSの使用を含む。中程度の厳密性条件の例は、20ホルムアミド、5xSSC150mMのNaCl、15mMのクエン酸三ナトリウム、50mMリン酸ナトリウムpH7.6、5xデンハート液、10デキストラン硫酸、及び20mg/mLの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中の37°Cでの終夜のインキュベーションに、1xSSC中約35-50°Cでのフィルターの洗浄が続くといったものである。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させる必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかを認識する。ここで用いられる場合のエピトープタグという用語は、タグポリペプチドに融合したADAM8ポリペプチド、又はそのドメイン配列を含んでなるキメラポリペプチドを意味する。タグポリペプチドは抗体がそれに対して生成されるか、ある他の薬剤によって同定することができるエピトープを提供するのに十分であるが、ADAM8ポリペプチドの活性を妨害しないように十分に短い残基を有する。タグポリペプチドはまた好ましくは抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないようにかなり独特である。好適なタグポリペプチドは一般に少なくとも6のアミノ酸残基、通常は約8~約50のアミノ酸残基好ましくは、約10~約20残基を有する。ADAM8ポリペプチド又は有機或いは無機小分子、ペプチドなどに相当する。ここに開示されるスクリーニングアッセイによって同定できる抗体又は他のアンタゴニスト分子例えば、有機又は無機小分子、ペプチド等の文脈における生物学的活性は、それらの分子がここに同定される増幅された遺伝子にコードされるペプチドと結合又は複合体形成する能力、又はコード化ポリペプチドと他の細胞性タンパク質との相互作用を妨害する能力、又はADAM8ポリペプチドの転写又は翻訳を妨害する能力を指す。好ましい生物学的活性は、標的細胞の増殖阻害である。他の好ましい生物学的活性は、標的腫瘍細胞の死をもたらす細胞毒性活性である。免疫学的特性なる語句は、ADAM8ポリペプチドの少なくとも1つのエピトープとの免疫学的交差反応性を意味する。ここで用いられる免疫学的交差反応性とは、候補ポリペプチドが、この活性を持つADAM8ポリペプチドの定性的生物学的活性を、周知の活性ADAM8ポリペプチドに対して生じたポリクローナル抗血清と競合的に阻害できることを意味する。そのような抗血清は、例えばヤギ又はウサギに、完全フロイントアジュバント中の周知の活性類似物を皮下注射し、次いで不完全フロイント中で腹膜内又は皮下に追加免疫することにより従来の方法で調製される。免疫学的交差反応性は好ましくは特異的であり、これは同定される免疫学的交差反応性分子例えば抗体のADAM8ポリペプチドに対する結合親和性が、その分子の他の任意の知られた天然ポリペプチドに対する結合親和性より有意に高い好ましくは少なくとも約2倍、より好ましくは少なくとも約4倍、さらにより好ましくは少なくとも約6倍、最も好ましくは少なくとも約8倍高いことを意味する。アンタゴニストという用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示する天然ADAM8ポリペプチドの生物学的活性を部分的又は完全に阻止、阻害、又は中和する任意の分子を含む。同様の方法で、アゴニストという用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示する天然ADAM8ポリペプチドの生物学的活性に類似する任意の分子を含む。適したアゴニスト又はアンタゴニスト分子は、特にアゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、天然ポリペプチドの断片又はアミノ酸配列変異体、ペプチド、小有機分子などを含む。ここで、小分子は、約500ダルトン未満の分子量を持つと定義される。抗体Absと免疫グロブリンは同じ構造的特徴を有する糖タンパク質である。抗体は特定の抗原に対して結合特異性を示すものであるが、免疫グロブリンは、抗体と抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含むものである。後者の種類のポリペプチドは、例えばリンパ系により低レベルで、骨髄腫により増加したレベルで産生される。抗体という用語は最も広い意味において使用され、特に、限定がなく、少なくとも二つの無傷の抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも二つの無傷の抗体から形成される多特異性抗体鎖及び2つの同一の重鎖からなる、約150,000ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は一つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合しており、ジスルフィド結合の数は、異なった免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の中で変化する。また各重鎖と軽鎖は、規則的に離間した鎖間ジスルフィド結合を有している。各重鎖は、多くの定常ドメインが続く可変ドメインを一端に有する。各軽鎖は、一端に可変ドメインを、他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられている。可変という用語は、可変ドメインのある部位が、配列に関して抗体の中でかなり異なっており、特定の抗原に対する個々の抗体の結合性及び特異性として使用されているという事実を意味する。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメインの全体に渡って一様には分布していない。軽鎖及び重鎖の可変ドメインの両方の高頻度可変領域又は、相補性決定領域と呼ばれる3つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保持された部分はフレームワーク領域と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、βシート構造を結合し、ある場合にはその一部を形成するループ結合を形成する、3つのCDRにより連結されたβシート配置を主にとる4つのFR領域をそれぞれ含んでいる。各鎖のCDRは、FRにより近接して結合せしめられ、他の鎖のCDRと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関連しているものではないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞障害活性への抗体の関与を示す。ここで使用される場合の高頻度可変領域は、抗原結合の原因となる抗体のアミノ酸残基を指す。高頻度可変領域は、相補性決定領域又はCDR例えば、軽鎖可変領域の残基24-34、50-56及び8997及び重鎖可変領域の31-35、50-65及び95-102;KabatらSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5版PublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMDからのアミノ酸残基、及び/又は高頻度可変ループ例えば、軽鎖可変領域の残基26-32、50-52及び91-96及び重鎖可変領域の残基26-32、53-55及び96-101;Chothia及びLeskJMolBiol196901917からの残基を含む。フレームワーク又はFR残基は、ここに定義した高頻度可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。抗体断片は、未変性の抗体の一部、好ましくは未変性の抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Fab、Fab’、F2、及びFv断片;ダイアボディ;直鎖状抗体ZapataらProteinEng8105710621995;一本鎖抗体分子;及び抗体断片から形成される多重特異的抗体を含む。抗体のパパイン消化は、Fab断片と呼ばれ、各々単一の抗原結合部位を持つ2つの同一な抗原結合断片、及び容易に結晶化する能力を反映した名称の残りのFc断片を生成する。ペプシン処理により、2つの抗原結合部位を有するが、交差結合抗原であり得るF2断片が生成される。Fvは、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小抗体断片である。この領域は、緊密に非共有的に結合した1つの重鎖と1つの軽鎖の二量体からなる。この配置では、VH-VL二量体の表面における抗原結合部位を決定するために各可変領域の3つのCDRが相互作用する。正確には、6つのCDRが抗体に抗原結合特異性を与える。しかし、単一の可変ドメイン又は抗原特異的な3つのCDRしか含まないFvの半分でさえも抗原を認識し結合する能力を持つが、結合部位全体よりは親和性が低い。また、Fab断片は軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第1の定常ドメインCH1も含む。Fab断片は、抗体ヒンジ領域からの1つ又は複数のシステインを含む重鎖CH1ドメインのカルボキシル末端における数個の残基の付加によりFab断片と相違する。FabSHは、ここにおいて、定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を持つFabの記号である。F2抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを持つFab断片の対として生成された。抗体断片の他の化学的結合も知られている。任意の種からの抗体免疫グロブリンの軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパκ及びラムダλと呼ばれる1つ又は2つの明らかに異なる型に分類できる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、免疫グロブリンは異なるクラスに分けられる。免疫グロブリンの5つの主要なクラス:IgA、IgD、IgE、IgG、及びIgMがあり、これらの幾つかは、更にサブクラスアイソタイプ、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA及びIgA2に分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、各々α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元配置は良く知られている。ここで用いられるモノクローナル抗体なる用語は、実質的に均一な抗体の集団、即ち、集団を構成する個々の抗体が少量で存在する自然に起こりうる突然変異以外は同一である集団から得られる抗体を意味する。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に向けられている。さらに、典型的に異なる決定基エピトープに対して向けられた異なる抗体を含む従来のポリクローナル抗体とは異なり、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対して向けられている。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンに汚染されない点において有利である。モノクローナルという修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られ、任意の特定の方法による抗体の生産を必要とするとは解釈されない抗体の特徴を示す。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、KohlerらNature2564951975によって最初に記載されたハイブリドーマ法により作成してもよいし、組換えDNA法例えば、米国特許第4816567号参照により作成してもよい。またモノクローナル抗体はファージ抗体ライブラリから、例えば、ClacksonらNature3526246281991及びMarksらJMolBiol222581597に記載された技術を用いて単離してもよい。ここで、モノクローナル抗体は特に、キメラ抗体免疫グロブリンを含み、それは、重鎖又は軽鎖の一部が特定の種から誘導された又は特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同であるが、鎖の残りの部分は他の種から誘導された又は特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である抗体、並びにそれらが所望のお生物学的活性を示す限りにおいてそれらの抗体の断片である米国特許第4816567号;MorrisonらProcNatlAcadSciUSA81685168551984。非ヒト例えばマウス抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリンから誘導された最小配列を含有する特定のキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はそれらの断片例えば、Fv、Fab、Fab、F2あるいは抗体の他の抗原結合性配列である。大部分において、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリンレシピエント抗体であって、そのレシピエントの相補性決定領域CDRが、マウス、ラット、ヤギなどのヒト以外の種のCDRドナー抗体に由来する所望の特異性、親和性及び容量を持つ残基で置換されている。ある場合は、ヒト免疫グロブリンのFvFR枠残基が対応する非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、輸入されるCDR又は枠配列にも見られない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体の性能をさらに精密かつ最適化するために施される。一般にヒト化抗体は、CDR領域の全て又は実質上全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、FR領域の全て又は実質上全てがヒト免疫グロブリン共通配列のものである少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全部を含有するであろう。また、最適なヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域Fc、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含有するであろう。さらなる詳細については、JonesらNature321522525;ReichmannらNature332323329;PrestaCurrOpstructBiol2593596を参照のこと。ヒト化抗体は、抗体の抗原結合領域が、関心のある抗原でマカクザルを免疫化することにより生産された抗体から由来するプリマタイズしたPRIMATIZED抗体を含む。一本鎖Fv又はsFv抗体断片は、抗体のVH及びVLドメインを含む抗体断片を含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、FvポリペプチドはVH及びVLドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはsFVが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。sFvの概説については、ThePharmacologyofMonoclonalAntibodiesvol113Rosenburg及びMoore編SpringerVerlagNewYorkpp269315のPluckthunを参照のこと。ダイアボディなる用語は、二つの抗原結合部位を持つ小さい抗体断片を指し、その断片は同一のポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメインに重鎖可変ドメインが結合している。非常に短いために同一鎖上で二つのドメインの対形成を可能にするリンカーを使用して、ドメインを他の鎖の相補ドメインと強制的に対形成させ、二つの抗原結合部位を創製する。ダイアボディーは、例えば、EP404097;WO93/11161;及びHollingerらProcNatlAcadSciUSA9064446448に更に詳細に記載されている。単離された抗体とは、その自然環境の成分から同定され分離され及び/又は回収されたものを意味する。その自然環境の汚染成分とは、抗体の診断又は治療への使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他の非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様において、抗体は、ローリー法によって決定した場合95重量以上の、最も好ましくは99重量の抗体まで、2スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも15のN末端あるいは内部アミノ酸配列の残基を得るのに充分な程度まで、あるいはクーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた還元又は非還元条件下でのSDSPAGEによる均一性まで精製される。単離された抗体には、組換え細胞内のインサイツの抗体が含まれるが、これは抗体の自然環境の少なくとも1つの成分が存在しないからである。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも1つの精製工程により調製される。標識という語は、ここで用いられる場合、抗体に直接的又は間接的に結合して標識化抗体を生成する検出可能な化合物又は組成物を意味する。標識はそれ自身によって検出可能でもよく例えば、放射性同位体標識又は蛍光標識、あるいは、酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変換を触媒してもよい。検出可能な標識を提供しうる放射性ヌクレオチドは、例えば、I131、I123、I125、Y90、Re188、Re186、At211、Cu67、Bi212、及びPd109を含む。固相とは、本発明の抗体が接着できる非水性マトリクスを意味する。ここに包含される固相の例は、部分的又は全体的にガラス例えば、孔の制御されたガラス、ポリサッカリド例えばアガロース、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシリコーンで形成されたものを含む。或る実施態様では、前後関係に応じて、固相はアッセイ用プレートのウェル;その他では精製用カラム例えばアフィニティクロマトグラフィカラムを含むことができる。また、この用語は、米国特許第4275149号に記載されたような別々の粒子の不連続な固体相も含む。リポソームは、哺乳動物への薬物ADAM8ポリペプチド又はそれらに対する抗体、場合によっては化学治療薬の送達に有用な、脂質、リン脂質及び/又は界面活性剤を含む種々の型の小さな小胞である。リポソームの成分は、通常は生物学的メンバーの脂質配列に類似した2層構造に配列される。ここで用いるイムノアドヘシンという用語は、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能を持つ異種タンパク質アドヘシンの結合特異性を付与した抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは抗体の抗原認識及び結合部位以外の所望の結合特異性を持つアミノ酸配列即ち異種と免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物である。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む近接アミノ酸配列である。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4サブタイプ、IgAIgA1及びIgA2を含む、IgE、IgD又はIgMなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。II本発明の組成物と方法A.全長ADAM8ポリペプチド本発明は、本出願においてADAM8と称されるポリペプチドをコードする、新規に同定され単離されたヌクレオチド配列を提供する。特に、以下の実施例で更に詳細に開示するように、ADAM8ポリペプチドをコードするcDNAを同定し単離した。本明細書では、ここに開示される核酸配列によりコードされるタンパク質並びに前述のADAM8の定義に含まれる更なる天然相同体及び変異体は、それらの起源又は調製方法に関わらず、ADAM8と呼ばれる。B.ADAM8変異体ここに記載した全長天然配列ADAM8ポリペプチドに加えて、ADAM8変異体も調製できると考えられる。ADAM8変異体は、ADAM8DNAに適当なヌクレオチド変化を導入することにより、あるいは所望のADAM8ポリペプチドを合成することにより調製できる。当業者は、グリコシル化部位の数又は位置の変化あるいは膜固着特性の変化などのアミノ酸変化がADAM8の翻訳後プロセスを変えうることを理解するであろう。天然全長配列ADAM8又はここに記載したADAM8の種々のドメインにおける変異は、例えば、米国特許第5364934号に記載されている保存的及び非保存的変異についての任意の技術及び指針を用いてなすことができる。変異は、結果として天然配列ADAM8と比較してADAM8のアミノ酸配列が変化するADAM8をコードする1つ又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入であってよい。場合によっては、変異は少なくとも1つのアミノ酸のADAM8の1つ又は複数のドメインの任意の他のアミノ酸による置換である。いずれのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を与えることなく挿入、置換又は欠失されるかの指針は、ADAM8ポリペプチドの配列を相同性の知られたタンパク質分子の配列と比較し、相同性の高い領域内でなされるアミノ酸配列変化を最小にすることによって見出される。アミノ酸置換は、一のアミノ酸の類似した構造及び/又は化学特性を持つ他のアミノ酸での置換、例えばロイシンのセリンでの置換、即ち保存的アミノ酸置換の結果とすることができる。挿入及び欠失は、場合によっては1から5のアミノ酸の範囲内とすることができる。許容される変異は、配列においてアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に作成し、得られた変異体を下記の実施例に記載するインビトロアッセイの任意のもので活性について試験することにより決定される。ADAM8ポリペプチド断片がここに提供される。このような断片は、例えば、全長天然タンパク質と比較した際に、N末端又はC末端で切断されてもよく、又は内部残基を欠いていてもよい。或る種の断片は、ADAM8ポリペプチドの所望の生物学的活性に必須ではないアミノ酸残基を欠いている。ADAM8断片は、多くの従来技術の任意のものによって調製してよい。所望のペプチド断片は化学合成してもよい。代替的方法は、酵素的消化、例えば特定のアミノ酸残基によって決定される部位のタンパク質を切断することが知られた酵素でタンパク質を処理することにより、あるいは適当な制限酵素でDNAを消化して所望の断片を単離することによるADAM8断片の生成を含む。さらに他の好適な技術は、ポリメラーゼ連鎖反応PCRにより、所望のポリペプチド断片をコードするDNA断片を単離し増幅することを含む。DNA断片の所望の末端を決定するオリゴヌクレオチドは、PCRの5’及び3’プライマーで用いられる。好ましくは、ADAM8ポリペプチド断片は、ここに開示した天然ADAM8ポリペプチドと少なくとも1つの生物学的及び/又は免疫学的活性を共有する。特別の実施態様では、対象とする保存的置換を、好ましい置換を先頭にして表1に示す。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表3に例示的置換と名前を付けた又は以下にアミノ酸分類でさらに記載するように、より置換的な変化が導入され生成物がスクリーニングされる。表3元の残基例示的置換好ましい置換AlavalLeuilevalArglysglnasnlysAsnglnhislysargglnAspglugluCysserserGlnasnasnGlnaspaspGlyproalaalaHisasnglnlysargargIleleuvalmetalapheノルロイシンleuLeuノルロイシンilevalmetalapheileLysargglnasnargMetleupheileleuPheleuvalilealatyrleuProalaalaSerthrthrThrserserTrptyrphetyrTyrtrpphethrserpheValileleumetphealaノルロイシンleuポリペプチドの機能及び免疫学的同一性の置換的修飾は、a置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又は螺旋配置、b標的部位の電荷又は疎水性、又はc側鎖の嵩を維持しながら、それらの効果において実質的に異なる置換基を選択することにより達成される。天然発生残基は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる:1疎水性:ノルロイシンmetalavalleuile2中性の親水性:cysserthr3酸性:aspglu4塩基性:asnglnhislysarg5鎖配向に影響する残基:glypro及び6芳香族:trptyrphe。非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。また、そのように置換された残基は、保存的置換部位、好ましくは残された非保存部位に導入されうる。変異は、オリゴヌクレオチド媒介部位特異的突然変異誘発、アラニンスキャンニング、及びPCR突然変異誘発[CarterらNuclAcidsRes134331ZollerらNuclAcidsRes106487]、カセット突然変異誘発[WellsらGene34315]、制限的選択突然変異誘発[WellsらPhilosTransRSocLondonSerA317415]等のこの分野で知られた方法を用いてなすことができ、又は他の知られた技術をクローニングしたDNAに実施してPEACH変異体DNAを作成することもできる。また、隣接配列に沿って1つ又は複数のアミノ酸を同定するのにスキャンニングアミノ酸分析を用いることができる。好ましいスキャンニングアミノ酸は比較的小さく、中性のアミノ酸である。そのようなアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、及びシステインを含む。アラニンは、ベータ炭素を越える側鎖を排除し変異体の主鎖構造を変化させにくいので、この群の中で典型的に好ましいスキャンニングアミノ酸である[Cuningham及びWellsScience24410811085]。また、アラニンは最もありふれたアミノ酸であるため典型的には好ましい。さらに、それは埋もれた及び露出した位置の両方に見られることが多い[CreightonTheProteinsChothiaJMolBiol1501]。アラニン置換が十分な量の変異体を生じない場合は、アイソテリックアミノ酸を用いることができる。C.ADAM8の修飾ADAM8の共有結合的修飾は本発明の範囲内に含まれる。共有結合的修飾の一つの型は、ADAM8ポリペプチドの標的とするアミノ酸残基を、ADAM8の選択された側鎖又はN又はC末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることである。二官能性試薬での誘導体化が、例えばADAM8を水不溶性支持体マトリクスあるいは抗ADAM8抗体の精製方法又はその逆で用いるための表面に架橋させるのに有用である。通常用いられる架橋剤は、例えば、1,1ビスジアゾアセチル2フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Nヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば4アジドサリチル酸、3,3’ジチオビススクシンイミジルプロピオネート等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビスNマレイミド1,8オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル3ジチオ]プロピオイミダート等の試薬を含む。他の修飾は、グルタミニル及びアスパラギニル残基の各々対応するグルタミル及びアスパルチルへの脱アミノ化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のαアミノ基のメチル化TECreightonProteinsStructureandMolecularPropertiesWHFreemanampampampCoSanFranciscopp7986、N末端アミンのアセチル化、及び任意のC末端カルボキシル基のアミド化を含む。本発明の範囲内に含まれるADAM8ポリペプチドの共有結合的修飾のその他の型は、ポリペプチドの天然グリコシル化パターンの変更を含む。天然グリコシル化パターンの変更とは、ここで意図されるのは、天然配列ADAM8に見られる一つ又は複数の炭水化物部分の欠失存在するグリコシル化部位の除去又は化学的及び/又は酵素的手段によるグリコシル化の削除のいずれかによる、及び/又は天然配列ADAM8に存在しない1又は複数のグリコシル化部位の付加を意味する。さらに、この文節は、存在する種々の炭水化物部分の性質及び特性の変化を含む、天然タンパク質のグリコシル化における定性的変化を含む。ADAM8ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加はアミノ酸配列の変更を伴ってもよい。この変更は、例えば、1又は複数のセリン又はトレオニン残基の天然配列ADAM8O結合グリコシル化部位への付加、又は置換によってなされてもよい。ADAM8アミノ酸配列は、場合によっては、DNAレベルでの変化、特に、ADAM8ポリペプチドをコードするDNAを予め選択された塩基において変異させ、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンを生成させることを通して変更されてもよい。ADAM8ポリペプチド上に炭水化物部分の数を増加させる他の手段は、グリコシドのポリペプチドへの化学的又は酵素的結合による。このような方法は、この技術分野において、例えば、1987年9月11日に発行されたWO8705330、及びAplin及びWristonCRCCritRevBiochempp259306に記載されている。ADAM8ポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に、あるいはグルコシル化の標的として提示されたアミノ酸残基をコードするコドンの変異的置換によってなすことができる。化学的脱グリコシル化技術は、この分野で知られており、例えば、HakimuddinらArchBiochemBiophys25952により、及びEdgeらAnalBiochem118131により記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、ThotakuraらMethEnzymol138350に記載されているように、種々のエンド及びエキソグリコシダーゼを用いることにより達成される。本発明のADAM8の共有結合的修飾のその他の型は、ADAM8ポリぺプチドの、種々の非タンパク質様ポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの一つへの、米国特許第4640835号;第4496689号;第4301144号;第4670417号;第4791192号又は第4179337号に記載された方法での結合を含む。また、本発明のADAM8は、他の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したADAM8を含むキメラ分子を形成する方法で修飾してもよい。一実施態様では、このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合できるエピトープを提供するタグポリペプチドとADAM8ポリペプチドとの融合を含む。エピトープタグは、一般的にはADAM8のアミノ又はカルボキシル末端に位置する。このようなADAM8のエピトープタグ形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出することができる。また、エピトープタグの提供は、抗タグ抗体又はエピトープタグに結合する他の型の親和性マトリクスを用いたアフィニティ精製によってADAM8を容易に精製できるようにする。種々のタグポリペプチド及びそれら各々の抗体はこの分野で良く知られている。例としては、ポリ-ヒスチジンpolyhis又はポリ-ヒスチジン-グリシンpolyhisglyタグ;fluHAタグポリペプチド及びその抗体12CA5[FieldらMolCellBiol821592165];cmycタグ及びそれに対する8F9、3C7、6E10、G4、B7及び9E10抗体[EvanらMolecularandCellularBiology536103616];及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質DgDタグ及びその抗体[PaborskyらProteinEngineering3547553]を含む。他のタグポリペプチドは、フラッグペプチド[HoppらBioTechnology612041210];KT3エピトープペプチド[MartinらScience255192194];αチューブリンエピトープペプチド[SkinnerらJBiolChem2661516315166];及びT7遺伝子10タンパク質ペプチドタグ[LutzFreyermuthらProcNatlAcadSciUSA8763936397]を含む。それに換わる実施態様では、キメラ分子はPROの免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定領域との融合体を含んでもよい。キメラ分子の二価形態イムノアドヘシンとも呼ばれるについては、そのような融合体はIgG分子のFc領域であり得る。Ig融合体は、好ましくはIg分子内の少なくとも1つの可変領域に換えてADAM8ポリペプチドの可溶化膜貫通ドメイン欠失又は不活性化形態を含む。特に好ましい実施態様では、免疫グロブリン融合体は、IgG分子のヒンジ、CH2及びCH3、又はヒンジ、CH1、CH2及びCH3領域を含む。免疫グロブリン融合体の製造については、1995年6月27日発行の米国特許第5428130号を参照のこと。D.ADAM8の調製以下の説明は、主として、ADAM8核酸を含むベクターで形質転換又は形質移入された細胞を培養することによりADAM8を生産する方法に関する。もちろん、当該分野においてよく知られている他の方法を用いてADAM8を調製することができると考えられる。例えば、ADAM8配列、又はその一部は、固相技術を用いた直接ペプチド合成によって生産してもよい[例えば、StewartらSolidPhasePeptideSynthesisWHFreemanCoSanFranciscoCA;MerrifieldJAmChemSoc8521492154を参照のこと]。手動技術又は自動によるインビトロタンパク質合成を行ってもよい。自動合成は、例えば、アプライドバイオシステムズペプチド合成機FosterCityCAを用いて、製造者の指示により実施してもよい。ADAM8の種々の部分は、別々に化学的に合成され、化学的又は酵素的方法を用いて結合させて全長ADAM8を生産してもよい。a.ADAM8ポリペプチドをコードするDNAの単離ADAM8をコードするDNAは、ADAM8mRNAを保有していてそれを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製されたcDNAライブラリから得ることができる。従って、ヒトADAM8DNAは、実施例に記載されるように、ヒトの組織から調製されたcDNAライブラリから簡便に得ることができる。またADAM8コード化遺伝子は、ゲノムライブラリから又は公知の合成方法例えば、自動化核酸合成により得ることもできる。ライブラリは、対象となる遺伝子あるいはその遺伝子によりコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブによってスクリーニングできる。選択されたプローブによるcDNA又はゲノムライブラリのスクリーニングは、例えばSambrookらMolecularCloningALaboratoryManualに記載されている標準的な手順を使用して実施することができる。所望のPROポリペプチドをコードする遺伝子を単離する他の方法はPCR法を使用するものである[Sambrookら上掲;DieffenbachらPCRPrimer:ALaboratoryManual]。下記の実施例には、cDNAライブラリのスクリーニング技術を記載している。プローブとして選択されたオリゴヌクレオチド配列は、充分な長さで、疑陽性が最小化されるよう充分に明瞭でなければならない。オリゴヌクレオチドは、スクリーニングされるライブラリ内のDNAとのハイブリッド形成時に検出可能であるように標識されていることが好ましい。標識化の方法は当該分野において良く知られており、32P標識されたATPのような放射線標識、ビオチン化あるいは酵素標識の使用が含まれる。中程度の厳密性及び高度の厳密性を含むハイブリッド形成条件は、上掲のSambrook等に与えられている。このようなライブラリースクリーニング法において同定された配列は、Genbank等の公共データベース又は個人の配列データベースに寄託され公衆に利用可能とされている周知の配列と比較及びアラインメントすることができる。分子の決定された領域内又は全長に渡ってのアミノ酸又は核酸レベルのいずれかでの配列同一性は、この分野で知られた、そしてここに記載した方法を用いて決定することができる。タンパク質コード化配列を有する核酸は、初めてここで開示された推定アミノ酸配列を使用し、また必要ならば、cDNAに逆転写されなかったmRNAの生成中間体及び先駆物質を検出する上掲のSambrook等に記述されているような従来のプライマー伸展法を使用し、選択されたcDNA又はゲノムライブラリをスクリーニングすることにより得られる。b.宿主細胞の選択及び形質転換宿主細胞を、ここに記載したADAM8生産のための発現又はクローニングベクターで形質移入又は形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適当に変性された常套的栄養培地で培養する。培養条件、例えば培地、温度、pH等々は、過度の実験をすることなく当業者が選ぶことができる。一般に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実用技術は、MammalianCellBiotechnologyaPracticalApproachMButler編及びSambrookら上掲に見出すことができる。原核生物細胞形質移入及び真核生物細胞形質移入の方法、例えば、CaCl2、CaPO4、リポソーム媒介及びエレクトロポレーションは当業者に知られている。用いられる宿主細胞に応じて、その細胞に対して適した標準的な方法を用いて形質転換はなされる。前掲のSambrook等に記載された塩化カルシウムを用いるカルシウム処理又はエレクトロポレーションが、一般的に原核生物に対して用いられる。アグロバクテリウムトゥメファシエンスによる感染が、ShawらGene23315及び1989年6月29日公開のWO8905859に記載されているように、或る種の植物細胞の形質転換に用いられる。このような細胞壁のない哺乳動物の細胞に対しては、Graham及びvanderEbVirology52456457のリン酸カルシウム沈降法が好ましい。哺乳動物細胞の宿主系形質転換の一般的な態様は米国特許第4399216号に記載されている。酵母菌中への形質転換は、典型的には、VansolingenらJBact130946及びHsiaoらProcNatlAcadSciUSA763829の方法に従って実施される。しかしながら、DNAを細胞中に導入する他の方法、例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、無傷の細胞、又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等を用いる細菌プロトプラスト融合もまた用いることもできる。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の技術については、KeownらMethodsinEnzymology185527537及びMansourらNature336348352を参照のこと。ここに記載のベクターにDNAをクローニングあるいは発現するために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母菌、又は高等真核生物細胞である。適切な原核生物は、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えば大腸菌のような腸内細菌科を含む。種々の大腸菌株が公衆に利用可能であり、例えば、大腸菌K12株MM294ATCC31446;大腸菌X1776ATCC31537;大腸菌株W3110ATCC27325及びK5772ATCC53635である。他の好ましい原核動物宿主細胞は、大腸菌、例えば、Ecoli、エンテロバクター、エルビニア、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ、例えば、ネズミチフス菌、セラチア、例えば、セラチアマルセサンス、及び赤痢菌、並びに桿菌、例えばバシリスブチリス及びバシリリチェニフォルミス例えば、1989年4月12日発行のDD266710に記載されたバシリリチェニフォルミス41P、シュードモナス、例えば緑膿筋及びストレプトマイセスなどの腸内細菌科を含む。これらの例は限定ではなく例示である。株W3110は、組換えDNA生産発行のための共通の宿主株であるので一つの特に好ましい宿主又は親宿主である。好ましくは、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、株W3110は、細胞に外来のタンパク質をコードする遺伝子における遺伝子変異をするように修飾してもよく、そのような宿主の例としては、完全な遺伝子型tonAを有する大腸菌W3110株1A2;完全な遺伝子型tonAptr3を有する大腸菌W3110株9E4;完全な遺伝子型tonAprt3phoAE15169degPompTkanを有する大腸菌W3110株27C7ATCC55244;完全な遺伝子型tonAptr3phoAE15169degPompTrbs7ilvGkanを有する大腸菌W3110株37D6;非カナマイシン耐性degP欠失変異を持つ37D6株である大腸菌W3110株40B4;及び1990年8月7日発行の米国特許第4946783号に開示された変異周辺質プロテアーゼを有する大腸菌株を含む。あるいは、クローニングのインビトロ法、例えばPCR又は他の核酸ポリメラーゼポリメラーゼ反応が好ましい。原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ADAM8コード化ベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセスセレヴィシアは、通常用いられる下等真核生物宿主微生物である。他に、シゾサッカロミセスプロンブBeach及びNurseNature29014019811985年5月2日発行のEP139383;クルベロミセスホスツ米国特許第4943529号FleerらBioTechnology9968975、例えばケーラクチスMW988CCBS683CBS4574LouvencourtらJBacteriol7371983、ケーフラギリスATCC12424、ケーブルガリクスATCC16045、ケーウィケラミイATCC24178、ケーワルチイATCC56500、ケードロソフィラルムATCC36906VandenBergらBioTechnology8135、ケーテモトレランス及びケーマルキシアナス;ヤロウィアEP402226;ピッチャパストリスEP183070SheekrishnaらJBasicMicrobiol282652781988;カンジダ;トリコデルマレーシアEP244234;アカパンカビCaseらProcNatlAcadSciUSA76525952631979;シュワニオマイセス、例えばシュワニオマイセスオクシデンタリス1990年10月31日発行のEP394538;及び糸状真菌、例えば、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム1991年1月10日発行のWO9100357;及びコウジ菌、例えば偽巣性コウジ菌BallanceらBiochemBiophysResCommun1122842891983TilburnらGene262052211983YeltonらProcNatlAcadSciUSA81147014741984及びクロカビKelly及びHynesEMBOJ44754791985が含まれる。ここで好ましいメチロトロピック酵母は、これらに限られないが、ハンセヌラ、カンジダ、クロエケラ、ピチア、サッカロミセス、トルロプシス、及びロドトルラからなる属から選択されるメタノールで成長可能な酵母を含む。この酵母の分類の例示である特定の種のリストは、CAnthonyTheBiochemistryofMethylotrophs269に記載されている。グリコシル化ADAM8の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては、ショウジョウバエS2及びスポドスペラSf9等の昆虫細胞並びに植物細胞が含まれる。有用な哺乳動物宿主株化細胞の例は、チャイニーズハムスター卵巣CHO及びCOS細胞を含む。より詳細な例は、SV40によって形質転換されたサル腎臓CV1株ヒト胚腎臓株293又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された293細胞、GrahamらJGenVirol3659チャイニーズハムスター卵巣細胞/DHFRマウスのセルトリ細胞TM4MatherBiolReprod23243251ヒト肺細胞ヒト肝細胞及びマウス乳房腫瘍細胞を含む。適切な宿主細胞の選択は、この分野の技術常識内にある。c.複製可能なベクターの選択及び使用ADAM8をコードする核酸は、クローニング又は発現のために複製可能なベクター内に挿入される。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態とすることができる。適切な核酸配列が、種々の手法によってベクターに挿入される。一般に、DNAはこの分野で周知の技術を用いて適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。ベクター成分としては、一般に、これらに制限されるものではないが、1つ又は複数のシグナル配列、複製開始点、1つ又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列を含む。これらの成分の1つ又は複数を含む適当なベクターの作成には、当業者に知られた標準的なライゲーション技術を用いる。ADAM8は直接的に組換え手法によって生産されるだけではなく、シグナル配列あるいは成熟タンパク質あるいはポリペプチドのN末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドである異種性ポリペプチドとの融合ペプチドとしても生産される。一般に、シグナル配列はベクターの成分であるか、ベクターに挿入されるADAM8コード化DNAの一部である。シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、lppあるいは熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であってよい。酵母の分泌に関しては、シグナル配列は、酵母インベルターゼリーダー、アルファ因子リーダー及びクルイベロマイシスα因子リーダーを含み、後者は米国特許第5010182号に記載されている、又は酸ホスフォターゼリーダー、白体グルコアミラーゼリーダー、又は1990年11月15日に公開されたWO9013646に記載されているシグナルであり得る。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列は、同一あるいは関連ある種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列並びにウイルス分泌リーダーのようなタンパク質の直接分泌に使用してもよい。発現及びクローニングベクターは共に1つ又は複数の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。そのような配列は多くの細菌、酵母及びウイルスに対してよく知られている。プラスミドpBR322に由来する複製開始点は大部分のグラム陰性細菌に好適であり、2μプラスミド開始点は酵母に適しており、様々なウイルス開始点は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。発現及びクローニングベクターは、典型的には、選べるマーカーとも称される選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートあるいはテトラサイクリンのような抗生物質あるいは他の毒素に耐性を与え、栄養要求性欠陥を補い、又は例えば桿菌バシリに対する遺伝子コードDアラニンラセマーゼのような、複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。哺乳動物細胞に適切な選べるマーカーの例は、DHFRあるいはチミジンキナーゼのように、ADAM8コード化核酸を取り込むことのできる細胞成分を同定することのできるものである。野生型DHFRを用いた場合の好適な宿主細胞は、UrlaubらによりProcNatlAcadSciUSA774216に記載されているようにして調製され増殖されたDHFR活性に欠陥のあるCHO株化細胞である。酵母菌中での使用に好適な選択遺伝子は酵母プラスミドYRp7に存在するtrp1遺伝子である[StinchcombらNature282:39;KingmanらGene7:141;TschemperらGene10:157]。trp1遺伝子は、例えば、ATCC番号44076あるいはPEP41のようなトリプトファン内で成長する能力を欠く酵母菌の突然変異株に対する選択マーカーを提供する[JonesGenetics8512]。発現及びクローニングベクターは、通常、PROコード化核酸配列に作用可能に結合し、mRNA合成を制御するプロモーターを含む。種々の可能な宿主細胞により認識される好適なプロモーターが知られている。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターはβラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系[CahngらNature275615;GoeddelらNature281544]、アルカリホスファターゼ、トリプトファンプロモーター系[GoeddelNucleicAcidsRes84057EP36776]、及びハイブリッドプロモーター、例えばtacプロモーター[deBoerらProcNatlAcadSciUSA802125]を含む。細菌系で使用するプロモータもまたPROをコードするDNAと作用可能に結合したシャインダルガーノ配列を有する。酵母宿主と共に用いて好適なプロモーター配列の例としては、3ホスホグリセラートキナーゼ[HitzemanらJBiolChem2552073]又は他の糖分解酵素[HessらJAdvEnzymeReg7149;HollandBiochemistry17:4900]、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース6リン酸イソメラーゼ、3ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオセリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが含まれる。他の酵母プロモーターとしては、成長条件によって転写が制御される付加的効果を有する誘発的プロモーターであり、アルコールデヒドロゲナーゼ2、イソチトクロムC、酸ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域がある。酵母菌での発現に好適に用いられるベクターとプロモータはEP73657に更に記載されている。哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからのADAM8転写は、例えば、ポリオーマウィルス、伝染性上皮腫ウィルス、アデノウィルス、ウシ乳頭腫ウィルス、トリ肉腫ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、B型肝炎ウィルス及びサルウィルス40のようなウィルスのゲノムから得られるプロモーター、異種性哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター、及び熱衝撃プロモーターから得られるプロモーターによって、このようなプロモーターが宿主細胞系に適合し得る限り制御される。より高等の真核生物による所望のADAM8をコードするDNAの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強され得る。エンハンサーは、通常は約10から300塩基対で、プロモーターに作用してその転写を増強するDNAのシス作動要素である。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている。しかしながら、典型的には、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製起点の後期側のSV40エンハンサー、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、ADAM8コード化配列の5’又は3’位でベクター中にスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから5’位に位置している。また真核生物宿主細胞に用いられる発現ベクターは、転写の終結及びmRNAの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物又はウィルスのDNA又はcDNAの通常は5’、時には3’の非翻訳領域から取得できる。これらの領域は、ADAM8をコードするmRNAの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。組換え脊椎動物細胞培養でのADAM8の合成に適応化するのに適切な他の方法、ベクター及び宿主細胞は、GethingらNature293620625ManteiらNature2814046EP117060及びEP117058に記載されている。d.遺伝子増幅/発現の検出遺伝子の増幅及び/又は発現は、ここで提供された配列に基づき、適切に標識されたプローブを用い、例えば、従来よりのサザンブロット法、mRNAの転写を定量化するノーザンブロット法[ThomasProcNatlAcadSciUSA7752015205]、ドットブロット法、又はインサイツハイブリッド形成法によって、直接的に試料中で測定することができる。あるいは、DNA二本鎖、RNA二本鎖及びDNA-RNAハイブリッド二本鎖又はDNAタンパク二本鎖を含む、特異的二本鎖を認識することができる抗体を用いることもできる。次いで、抗体を標識し、アッセイを実施することができ、ここで二本鎖は表面に結合しており、その結果二本鎖の表面での形成の時点でその二本鎖に結合した抗体の存在を検出することができる。あるいは、遺伝子の発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量する免疫学的な方法、例えば細胞又は組織切片の免疫組織化学的染色及び細胞培養又は体液のアッセイによって、測定することもできる。試料液の免疫組織化学的染色及び/又はアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の哺乳動物で調製することができる。簡便には、抗体は、天然配列ADAM8ポリペプチドに対して、又はここで提供されるDNA配列をベースとした合成ペプチドに対して、又はADAM8DNAに融合し特異的抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製され得る。e.ポリペプチドの精製ADAM8の形態は、培地又は宿主細胞の溶菌液から回収することができる。膜結合性であるならば、適切な洗浄液又は酵素的切断を用いて膜から引き離すことができる。ADAM8の発現に用いられる細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤などの種々の化学的又は物理的手段によって破壊することができる。ADAM8を組換え細胞タンパク又はポリペプチドから精製することが望ましい。適切な精製手順の例である次の手順により精製される:すなわち、イオン交換カラムでの分画;エタノール沈殿;逆相HPLC;シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばDEAEによるクロマトグラフィー;クロマトフォーカシング;SDSPAGE;硫酸アンモニウム沈殿;例えばセファデックスG75を用いるゲル濾過IgGのような汚染物を除くプロテインAセファロースカラム;及びADAM8のエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。この分野で知られ、例えば、DeutcherMethodesinEnzymology182;ScopesProteinPurificationPrinciplesandPracticeSpringerVerlagNewYorkに記載された多くのタンパク質精製方法を用いることができる。例えば、選ばれる精製過程は、用いられる生産方法及び生産される特定のADAM8の性質によって決まる。E.ADAM8ポリペプチドをコードする遺伝子の腫瘍組織及び細胞系での増幅この発明は或る種の癌細胞で増幅される遺伝子の同定及び特徴付けに基づいている。原核生物及び真核生物ゲノムに2つの見掛け上は矛盾する要件を課した。一方は、遺伝情報としてのDNAのその最初の形態での保存及び繁殖であり、複数の世代を通して安定な遺伝を確保する。他方では、細胞又は生物が最近の環境変化を採用しなければならない。適応メカニズムは遺伝子物質の質的又は量的改変を含みうる。質的改変は、コード化配列が変化して構造的又は機能的に異なるタンパク質を生ずるDNA変異を含む。遺伝子増幅は量的改変であり、それにより実際の完全なコード化配列、即ち遺伝子の数が増加し、転写に利用できるテンプレート数の増加、翻訳可能な転写物の数の増加、及び最終的には増幅された遺伝子にコードされるタンパク質の量の増加をもたらす。遺伝子増幅の現象及びそこにあるメカニズムは、幾つかの原核及び真核生物細胞培養系でインビトロ実験されている。遺伝子増幅の最も特徴づけられた例は、種々の濃度の細胞毒性薬メトトレキセートMTXを含有する培地での真核生物細胞の培養を含む。MTXは葉酸類似物であり酵素デヒドロフォレートレダクターゼDHFRのブロックによりDNA合成を妨害する。低濃度のMTXに最初に暴露すると殆どの細胞>99.9が死亡する。少量の細胞は生き残り、多量のDHFRRNA及びタンパク質を生産することによりMTX濃度を増加させても成長できる。この過剰生産の基礎は単一のDHFR遺伝子の増幅である。遺伝子のさらなるコピーは、小さく過剰な染色体二重微小の形態で染色体外コピーとして、又は一体化染色体コピーとして見られる。遺伝子増幅は、細胞毒性薬最近に対する抗生物質及び真核生物に対する化学治療薬への耐性の進行及び腫瘍形成性形質転換において最も普通に起こる。自発的事象としての又はウイルス又は化学/環境侵襲による真核生物の形質転換は典型的にその細胞の遺伝物質における変化を伴う。ヒト悪性腫瘍で観察される最も通常の遺伝的変化はp53タンパク質の突然変異である。p53は、定常G1から複製S期への細胞の転移を制御し、DNA損傷の存在下でこの転移を防止する。言い換えれば、p53変異不全の主な結果の一つは、DNA損傷の蓄積及び成長、即ち遺伝的変化である。腫瘍形成細胞における遺伝的変化の通常の型は、点変異に加えて、増幅及び全体、構造的改変、例えば転位置である。DNA配列の増幅は、DHFR実験系で例示したように特定の機能的要件を示す。従って、悪性におけるある種のオンコジーンの増幅は悪性形質転換及び形質転換フェノタイプの維持のプロセスにおけるこれらの遺伝子の原因となる役割を示す。この仮説が最近の研究で支持されている。例えば、bcl2タンパク質はある型の非ホジキンリンパ腫において増幅されることが見いだされた。このタンパク質はアポトーシスを阻害して腫瘍形成細胞の蓄積を進行させる。増殖因子レセプターの遺伝子ファミリのメンバーが種々の型の癌で増幅されることが見いだされ、これらのレセプターの過剰発現が、腫瘍細胞の制限された量の利用可能な増殖因子に対する感受性を低下させる。例としては、アンドロゲン欠乏治療の間の再発前立腺癌におけるアンドロゲンレセプターの増幅、及び乳癌における増殖因子レセプター相同体ERB2の増幅を含む。最近、細胞間シグナル伝達及び細胞周期進行に含まれる遺伝子が悪性形質転換の間に増幅を受けうる。これは、種々の上皮及びリンパ腫瘍形成におけるbclI及びras遺伝子の増幅によって例示される。これらの初期の研究は、これらの方法が悪性形質転換に重要な遺伝子の同定が可能であるため、腫瘍形成において増幅されたDNA配列の同定の可能性を例示する。ERB2の場合も、形質転換タンパク質が腫瘍治療のための新規で特異的な標的を示すので、治療的立場からの可能性を示す。増幅されたゲノム配列を示すのに幾つかの異なる技術を使用できる。癌細胞から調製した染色体展開の古典的な細胞発生分析は、転位置、欠失及び変換といった全体構造変化を同定するには十分である。増幅ゲノム領域は、それらが高いコピー数を含むか染色体外物質として存在する場合にのみ可視化される。細胞発生は特定の腫瘍形成を持つ特定の染色体変化の一貫した関係を示すための第1の技術だが、管理可能なDNA配列の同定及び単離には不十分である。より最近に開発された技術の競合ゲノムハイブリッド形成CGHは腫瘍形成におけるゲノム増幅の広範な現象を例示する。腫瘍及び正常DNAは正常細胞の分裂中期に同時にハイブリッド形成し、腫瘍に高頻度で存在するDNA配列についての画像分析で全ゲノムをスクリーニングするWO9318186GrayらRadiationRes1372752891994。スクリーニング法として、このタイプの分析は、種々のヒト腫瘍における再発アンプリコン増幅DNAの伸展の多数を明らかにした。CGHは古典的細胞発生分析よりDNAの増幅伸展の同定において感度が高いが、それは標準的な遺伝子技術によりアンプリコン内のコード化配列の迅速な同定及び単離ができない。遺伝子増幅の検出に最も感度の良い方法はポリメラーゼ連鎖反応PCRベースのアッセイである。これらのアッセイは極めて少量の腫瘍DNAを出発材料として用い、精巧で感度が良く、配列決定などの更なる分析に利用できるDNAを提供し、高容量スループット分析に適している。上記のアッセイは相互に排他的ではなく、腫瘍形成における増幅の同定にしばしば組み合わせて使用される。細胞発生分析及びCGHは増幅領域の全ゲノムの概観のためのスクリーニング法を代表し、PCRベースのアッセイはコード化配列、即ち増幅領域の遺伝子を最終的に同定するのに最も適している。本発明により、このような遺伝子は定量的PCRSGelminiらClinChem437521997により、乳、肺、結腸、前立腺、脳、肝臓、腎臓、膵臓、脾臓、精巣、卵巣、子宮など、腫瘍、又は腫瘍株化細胞を含む種々の原発腫瘍からのDNAを健常ドナーからのプールしたDNAと比較することにより同定される。定量的PCRは、TaqMan商品名装置ABIを用いて実施された。遺伝子特異的プライマー及び蛍光発生プローブは、DNAのコード化配列に基づいて設計される。ヒト肺癌株化細胞は、A549、Calu1、Calu6、H157、H441、H460、H522SRC832、H810SRC833、SKMES1及びSW900を含み、全てATCCから入手可能である。原発ヒト肺腫瘍細胞は通常は腺癌、扁平上皮細胞癌、大細胞癌、非小細胞癌、小細胞癌、及び気管支肺胞癌から誘導され、例えば、SRC724SqCCaと略記される扁平上皮癌LT1、SRC725、SRC726、SRC727、SRC728、SRC729腺癌、SRC730、SRCC731、SRC732扁平上皮細胞癌、SRC733腺癌、SW620、Colo320、Colo205癌、SRC828、HCC2998癌、SRC830、HT29腺癌、SRCC779、HM7、HCT15、HCT116、SKCO1、SW403、LS174T、及びHM7ATCC大腸腺癌株化細胞LS174Tの高ムチン産生変異体、、RobertWarren博士UCSFから得たを含む。原発大腸腫瘍は、CT1SRC751、CT2、CT3、CT4、CT6、CT7、CT8SRC744、CT9、CT10、CT11、CT12、CT14、CT15、CT16、CT17、CT18と称される大腸腺癌を含む。ヒト乳癌株化細胞は、例えば、HBL100、MB435s、T47D、MB468、MB175、MB361、BT20、MCF7、SKBR3SRCC767を含む。F.組織分布ここでの遺伝子増幅アッセイの結果は、種々のヒト組織でのmRNA発現の測定などのさらなる実験により確認できる。上記したように、種々の組織における遺伝子増幅又は遺伝子発現は、mRNAの転写の定量化のための従来のサザンブロット、ノーザンブロットThomasProcNatlAcadSciUSA77520152051980、ドットブロットDNA分析、又はインサイツハイブリッド形成により、ここに提供する配列にもとづいて適切な標識プローブを用いて測定できる。あるいは、DNA二重鎖、RNA二重鎖、及びDNARNAハイブリッド二重鎖又はDNAタンパク質二重鎖を含む特定の二重鎖を認識する抗体を用いてもよい。あるいは、種々の組織における遺伝子発現は、遺伝子産物を直接定量化するための、組織断片及び細胞培地又は体液の免疫組織学的染色などの免疫的方法によっても測定できる。免疫組織学的染色及び/又は試料液のアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の動物から調製される。便利には、抗体は天然配列ADAM8ポリペプチドに対して、又はここに提供するDNA配列に基づく合成ペプチドに対して、又はADAM8DNA配列に融合し特異的抗体エピトープをコードする細胞外配列に対して調製される。抗体を生成する一般的技術、及びノーザンブロット及びインサイツハイブリッド形成のプロトコールは以下に提供する。G.染色体マッピング与えられた遺伝子の増幅が機能的に関連する場合は、その遺伝子は、腫瘍生存に重要でない隣接ゲノム領域より多く増幅すべきである。これを試験するために、例えば放射性ハイブリッド分析により、遺伝子を特定染色体にマッピングできる。次いで、増幅レベルを特定した位置及び隣接ゲノム領域において測定する。遺伝子がマッピングされたゲノム領域での選択的又は優先的増幅は、観察された遺伝子増幅が腫瘍成長又は生存を促進する可能性と一致する。染色体マッピングはフレームワーク及びエピセンターマッピングの両方を含む。さらなる詳細は、例えば、StewartらGenomeResearch7422433を参照のこと。H.抗体結合実験遺伝子増幅実験の結果は、腫瘍癌細胞上でのADAM8ポリペプチドの発現を阻害する抗ADAM8抗体の能力が試験される抗体結合実験によって更に確認できる。例示的な抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性、及びへテロ抱合体抗体を含み、その調製は以下に記載する。抗体結合実験は、競合的結合アッセイ、直接及び間接サンドウィッチアッセイ、及び免疫沈降アッセイなどの既知のアッセイ法で実施してよい。ZolaMonoclonalAntibodiesAManualofTechniquespp147158。競合的結合アッセイは、標識標準物の、限られた量の抗体との結合について試験分析物と競合する能力による。試験試料中の腫瘍細胞で増幅された遺伝子にコードされる標的タンパク質の量は、抗体に結合し始める標準物の量に逆比例する。結合し始める標準物の量の測定を促進するために、抗体は好ましくは競合の前又は後に固定化し、抗体に結合した標準品及び分析物が未結合で残っている標準物及び分析物から容易に分離できるようにする。サンドウィッチアッセイは2つの抗体の使用を含み、各々が検出すべきタンパク質の異なる免疫原部分、又はエピトープに結合できる。サンドウィッチアッセイにおいて試験試料分析物は固体支持体上に固定化された第1の抗体に結合し、その後第2の抗体が分析物に結合し、よって不溶性の3成分複合体が形成される。例えば米国特許第4376110号参照。第2の抗体は検出可能部分で標識され直接サンドウィッチアッセイ、あるいは検出可能部分で標識された抗免疫グロブリン抗体を用いて測定してもよい間接サンドウィッチアッセイ。例えば、サンドウィッチアッセイの一形態はELISAアッセイであり、この場合の検出可能部分は酵素である。免疫組織学のために、腫瘍試料は新鮮でも凍結したものでもよく、パラフィンに包埋して、例えばホルマリン等の保存剤で固定してもよい。I.細胞ベースの腫瘍アッセイ細胞ベースアッセイ及び腫瘍例えば、癌の動物モデルを用いて、遺伝子増幅アッセイに発見を確認し、ここでの遺伝子増幅と腫瘍形成細胞成長の進行及び病理との関係をさらに理解することができる。ここで同定する遺伝子産物の腫瘍又は癌の進行及び病理における役割は、ここで遺伝子を増幅すると同定された原発腫瘍細胞又は株化細胞を用いて試験することができる。このような細胞は、例えば、上記した乳、大腸及び肺癌細胞及び株化細胞を含む。異なる方法では、特定の腫瘍に含まれることが知られた細胞型の細胞をここのcDNAで形質移入し、これらのcDNAの過剰成長誘発能力を分析する。適当な細胞は、例えば、B10411neuプロトオンコジーンで形質移入された安定なNIH3T3細胞液及びras形質移入NIH3T3細胞等の安定な腫瘍株化細胞を含み、これらは所望の遺伝子で形質移入し、そして腫瘍形成的成長を監視できる。このような形質移入株化細胞は、次いで、形質転換細胞の成長に対する細胞分裂停止又は細胞毒性活性の発揮により、又は抗体依存性細胞性細胞毒性ADCCの媒介により、ポリ-又はモノクローナル抗体又は抗体組成物の腫瘍形成細胞成長を阻害する能力を試験するのに使用できる。ここに同定した遺伝子のコード化配列で形質移入した細胞は、さらに、癌治療用の候補薬の同定に使用できる。さらに、下記のようなトランスジェニック動物の腫瘍から誘導された一次培地は、ここでの細胞ベースアッセイに使用できるが、安定な株化細胞が好ましい。トランスジェニック動物から連続株化細胞を誘導する技術はこの分野で良く知られているSmallらMolCellBiol56426481985参照。J.動物モデル腫瘍の進行及び原因におけるここに同定される遺伝子の役割を更に理解するために、そして抗体、及び小分子アゴニストを含む天然ポリペプチドの他のアゴニストを含む候補治療薬の有効性を試験するために、種々の良く知られた動物モデルが使用できる。これらのモデルのインビボ性質により、特にヒト患者における反応を予測できる。腫瘍及び癌例えば、乳癌、結腸癌、前立腺癌、肺癌などの動物モデルは、非組換え及び組換えトランスジェニック動物の両方を含む。非組換え動物モデルは、例えば、齧歯類、例えばマウスモデルを含む。このようなモデルは、標準的な技術、例えば、皮下注射、尾部静脈注射、脾臓移植、腹膜内移植、腎被膜下移植、又はオルトピン移植、例えば大腸組織に移植された結腸癌細胞により、腫瘍細胞を同系マウスに導入することにより作成される。1997年9月18日に発行されたPCT公報WO9733551参照。癌遺伝子の研究におそらく最もしばしば用いられる動物種は、免疫不全マウス、特にヌードマウスである。ハイポ/形成不全を持つヌードマウスがヒト腫瘍異種移植の宿主として行動するという観察は、この目的のための広い用途を導いた。常染色体劣性nu遺伝子が、例えば、ASW、A/He、AKR、BALB/c、B10.LP、C17、C3H、C57BL、C57、CBA、DBA、DDD、I/st、NC、NFR、NFS、NFS/N、NZB、NZC、NZW、P、RIII及びSJLを含むヌードマウスの極めて多数の異なる共通遺伝子系統に導入された。さらに、遺伝的な免疫不全を持つヌードマウス以外の広範な他の動物が生育され、腫瘍異種移植のレシピエントとして用いられた。さらなる詳細については、TheNudeMouseinOncologyResearchEBoven及びBWinograd編CRCPressInc1991を参照のこと。これらの動物に導入される細胞は、周知の腫瘍/癌株化細胞、例えば上記列挙した腫瘍株化細胞、及び、例えばB10411株化細胞neuプロトオンコジーンで形質移入された安定NIH3T3株化細胞;ras形質移入NIH3T3細胞:Caco2ATCCHTB-37、中程度に良く分化したグレードIIヒト大腸腺癌株化細胞、HT29ATCCHTB-38から、あるいは腫瘍及び癌から誘導することができる。腫瘍又は癌細胞の試料は、手術を受けている患者から、液体窒素中での凍結及び保存を含む標準的な条件を用いて得ることができるKarmaliらBrJCancer486896961983。腫瘍細胞は、ヌードマウスなどの動物に、種々の手法によって導入できる。マウスの皮下sc空間は、腫瘍移植に非常に好ましい。腫瘍は、固体ブロックとして、トロチャーを用いてニードル生検として、細胞懸濁物としてsc移植できる。固体ブロック又はトロチャー移植のために、適切な大きさの腫瘍組織断片がsc空間に導入される。細胞懸濁物は、原発腫瘍又は安定な腫瘍株化細胞から新たに調製され、皮下注射される。また腫瘍細胞は、皮下植え込みとして注射することもできる。この位置において、種菌が皮膚結合組織の下層とsc組織との間に析出される。Boven及びWinograd上掲。乳癌の動物モデルは、例えば、神経芽腫細胞それからneu癌遺伝子が最初に単離される、又はneu形質移入NIH3T3細胞をヌードマウスに移植することにより、基本的にはDrebinらPNASUSA8391299133に記載されているように生成される。同様に、結腸癌の動物モデルは、結腸癌細胞を動物、例えばヌードマウスに継代し、これらの動物における腫瘍の発現を導くことにより生成される。ヌードマウスにおけるヒト結腸癌の同所性移植モデルは、例えば、WangらCancerResearch5447264728及びTooらCancerResearch55681684に記載されている。このモデルは、いわゆるAntiCancerIncから市販のMETAMOUSEに基づく。動物に生じた腫瘍は、取り出してインビトロで培養することができる。インビトロ培地からの細胞は、次いで動物に継代することができる。これらの腫瘍は、さらなる試験及び薬物スクリーニングの標的として提供され得る。あるいは、継代から得られる腫瘍は単離でき、継代前細胞及び1又はそれ以上の継代後に単離した細胞のRNAを、対象とする遺伝子の識別可能な発現について分析する。このような継代技術は、周知の腫瘍又は癌株化細胞で実施することができる。例えば、MethA、CMS4、CMS5、CMS21、及びWEHI164がBALB/c雌マウスの線維肉腫に導入されDeLeoらJExpMed1467201977、それは、種々の抗原の抗腫瘍活性の研究のための高度に制御可能なモデル系を提供するPalladinoらJImmunol138402340321987。簡便には、腫瘍細胞は細胞培地中でインビトロで成長させる。動物に注射する前に、株化細胞は洗浄してバッファー中に約10x106から10x107細胞/mlの細胞密度で懸濁する。次いで動物を10から100μlの細胞懸濁物で皮下感染し、腫瘍が現れるまで1から3週間放置する。さらに、最も完全に研究された実験的腫瘍の一つであるマウスのルイス肺3LL癌腫は、研究用腫瘍モデルとして用いることができる。この腫瘍モデルにおける有効性は、肺の小細胞癌腫SCCLと診断されたヒト患者の治療における有利な効果と相関していた。この腫瘍は、影響を受けたマウスからの腫瘍断片又は培地に残った細胞の注射に際して正常マウスに導入できZupiらBrJCancer41suppl43091980、証拠は、腫瘍がたった一つの細胞の注射から開始され、感染した腫瘍細胞の極めて高い集団が生存することを示している。この腫瘍モデルに関する更なる情報については、ZacharskiHaemostasis163003201986を参照のこと。移植された腫瘍の動物モデルにおける試験化合物の有効性を評価する一つの方法は、治療前後での腫瘍の大きさを測定することである。伝統的に、移植した腫瘍の大きさは、二又は三次元のスライドキャリパーで測定される。二次元に制限された測定は、腫瘍の大きさを正確に反映せず、従って、通常は数式を用いて対応する容積に換算される。しかしながら、腫瘍の大きさの測定は極めて不正確である。候補薬の治療効果は、治療誘発性の成長遅延及び特異的な成長遅延としてより良く記述できる。腫瘍成長の記述における他の重要な変数は、腫瘍容積倍加時間である。Rygaard及びSpangThomsenProc6thIntWorkshoponImmuneDeficientAnimalsWu及びSheng編Basel1989301によって報告されたプログラムなどの、腫瘍成長の計算及び記述のためのコンピュータプログラムも利用可能である。しかし、腫瘍に続く壊死及び炎症反応が実際には少なくとも初期に腫瘍の大きさを増大させ得ることを注記しておく。従って、これらの変化は、形態学的方法及びフローサイトメトリー分析を組み合わせて、注意深く監視する必要がある。組換えトランスジェニック動物モデルは、ここに同定された遺伝子のコード部分を、トランスジェニック動物作成のための標準的技術を用いて、対象とする動物のゲノムに導入することにより加工できる。トランスジェニック操作の標的として提供できる動物は、限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、及び非ヒト霊長類、例えばヒヒ、チンパンジー及びサルを含む。これらの動物に導入遺伝子を導入するのにこの分野で知られた技術は、全核マイクロインジェクションHoppe及びWanger米国特許第4873191号;胚系列へのレトロウイルス媒介遺伝子転移例えば、VanderPuttenらProcNatlAcadSciUSA8261486151985;胚性肝細胞での遺伝子標的化ThompsonらCell563133211989;胚のエレクトロポレーションLoMolCelBiol3180318141983;精子媒介遺伝子転移LavitranoらCell57717731989を含む。概説のためには、例えば、米国特許第4736866号を参照のこと。本発明の目的のために、トランスジェニック動物は、その一部にのみ導入遺伝子を有するものモザイク動物を含む。導入遺伝子は、単一の導入遺伝子として、又はコンカテマー、例えば頭部と頭部又は頭部と尾部の直列型として組み込まれる。特定の細胞型への導入遺伝子の選択的導入も、例えば、LaskoらProcNatlAcadSciUSA896232636の技術に従って可能である。トランスジェニック動物における導入遺伝子の発現は、標準的技術によって監視できる。例えば、導入遺伝子の組み込みの確認にサザンブロット分析又はPCR増幅が用いられる。次いで、mRNA発現のレベルは、インサイツハイブリッド形成、ノーザンブロット分析、PCR、又は免疫組織化学などの技術を用いて分析できる。動物は、腫瘍又は癌発生の徴候についてさらに試験される。あるいは、動物の胚性細胞に導入されたADAM8ポリペプチドをコードする変更ゲノムDNAと、そのポリペプチドをコードする内在性遺伝子との間の相同的組換えによって、ここに同定するADAM8ポリペプチドをコードする欠陥又は変更遺伝子を有するノックアウト動物を作成することができる。例えば、ADAM8ポリペプチドをコードするcDNAは、確立された技術に従い、ADAM8ポリペプチドをコードするゲノムDNAのクローニングに使用できる。特にADAM8ポリペプチドをコードするゲノムDNAの一部を欠失したり、組み込みを監視するために使用する選択可能なマーカーをコードする遺伝子等の他の遺伝子で置換することができる。典型的には、ベクターは無変化のフランキングDNAを数キロベース含む[例えば、相同的組換えベクターについてはThomas及びCapecchiCell51503を参照のこと]。ベクターは胚性幹細胞に導入し、導入されたDNAが内在性DNAと相同的に組換えられた細胞を選択する[例えば、LiらCell69915を参照のこと]。選択された細胞は次に動物の胚盤胞内に注入され、集合キメラを形成する[例えば、BradleyTeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsAPracticalApproachEJRobertsonedpp113152参照]。その後、キメラ性胚を適切な偽妊娠の雌性乳母に移植し、ノックアウト動物を作ると言われる。胚細胞に相同的に組換えられたDNAを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたDNAを含む動物を繁殖させることができる。ノックアウト動物は、ADAM8ポリペプチドが不在であることによるある種の病理的状態及び病理的状態の進行に対して防御する能力によって特徴付けられる。自発的な動物腫瘍の治療におけるここに同定されるポリペプチドに特異的に結合する抗体、及び他の候補薬の有効性も試験できる。このような研究のための適切な標的は、ネコ口腔扁平上皮癌SCCである。ネコ口腔SCCは高度に侵襲的な悪性腫瘍で、ネコに最も通常の口腔悪性腫瘍であり、この種に報告される口腔腫瘍の60以上を占める。それは、離れた部位には殆ど転移しないが、この転移の低い発生率は単にこの腫瘍を持つネコの短い生存期間を反映しているにすぎない。これらの腫瘍は通常手術できないが、主にネコの口腔の解剖学的形状による。現在では、この腫瘍の有効な治療法は存在しない。研究に入る前に、各々のネコに完全な臨床検査、生体組織検査を施し、コンピュータ断層撮影CTによりスキャンした。舌下口腔扁平上皮細胞腫瘍を持つと診断されたネコは研究から排除した。舌はこの腫瘍のために麻痺し始め、治療がこの腫瘍を殺した後でも、動物は自分で餌を取ることができないであろう。各々のネコを長期に渡って繰り返し治療する。腫瘍の写真を治療期間中の毎日及び引き続く再チェックの時点で撮影した。治療の後、各ねこに再度CTスキャンを施した。CTスキャン及びラジオグラフは、その後8週間ごとに評価した。データは、対照群と比較した生存数、反応性及び毒性における相違について評価した。ポジティブ反応は、腫瘍の縮小、好ましくは生存の質の向上又は生存期間の延長を必要とする。さらに、他の自発的動物腫瘍、例えばイヌ、ネコ、及びヒヒの線維肉腫、腺癌、リンパ腫、クロンドローマ、平滑筋肉腫も試験できる。これらのイヌ及びネコでの乳腺癌は、その発現及び挙動がヒトのものに極めて類似しているので、好ましいモデルである。しかし、このモデルの使用は動物におけるこの型の腫瘍の発生比率によって制限される。K.候補薬についてのスクリーニングアッセイ候補薬のスクリーニングアッセイは、ここで同定される遺伝子にコードされるポリペプチドと結合又は抱合する化合物、あるいはコード化ポリペプチドと他の細胞性タンパク質との相互作用を阻害する化合物を同定するために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、特に小分子候補薬の同定に適したものにする、化学的ライブラリの高スループットスクリーニングに従うアッセイを含む。小分子とは、抗体合成有機又は無機化合物を含むと考え、それらは、ペプチド、好ましくは可溶性ペプチド、ポリペプチド免疫グロブリン融合体、特に、限定されないが、ポリ及びモノクローナル抗体及び抗体断片、一本鎖抗体、抗イディオタイプ抗体、及びそれらの抗体又は断片のキメラ又はヒト化形、並びにヒト抗体及び抗体断片を含む抗体を含んでいる。アッセイは、種々の形式で実施でき、この分野で良く特徴付けられたタンパク質タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ及び細胞ベースのアッセイを含む。全てのアッセイは、それらが候補薬をここで同定される核酸にコードされるポリペプチドと、それら2成分が相互作用するのに十分な時間接触させることで共通している。結合アッセイにおいて、相互作用は結合であり、形成された複合体は単離されるか、又は反応混合物中で検出される。特別な実施態様では、ここに同定された遺伝子にコードされるポリペプチドのレセプター即ち候補薬が、共有又は非共有結合により固相、例えばマイクロタイタープレートに固定化される。非共有結合は、一般的に固体表面をポリペプチドの溶液で被覆し乾燥させることにより達成される。あるいは、固定化すべきペプチドに特異的な固定化抗体、例えばモノクローナル抗体を、そのペプチドを固体表面に固着させるために用いることができる。アッセイは、固定化成分、例えば固着成分を含む被覆表面に、検出可能な標識で標識されていてもよい非固定化成分を添加することにより実施される。反応が完了したとき、未反応成分を例えば洗浄により除去し、固体表面に固着した複合体を検出する。最初の非固定化成分が検出可能な標識を有している場合、表面に固定化された標識の検出は複合体形成が起こったことを示す。最初の非固定化成分が標識を持たない場合は、複合体形成は、例えば、固定化された複合体に特異的に結合する標識抗体によって検出できる。候補化合物がここで同定される遺伝子にコードされる特定のADAM8ポリペプチドと相互作用するが結合しない場合、その相互作用は、タンパク質-タンパク質相互作用を検出するために良く知られた方法によってアッセイすることができる。そのようなアッセイは、架橋、同時免疫沈降、及び勾配又はクロマトグラフィカラムを通す同時精製などの伝統的な手法を含む。さらに、タンパク質-タンパク質相互作用は、Fields及び共同研究者ら[Fiels及びSongNature340245246ChienらProcNatlAcadSciUSA8895789582]に記載された酵母菌ベースの遺伝子系を用いることにより、Chevray及びNathans[ProcNatlAcadSciUSA8957895793]に開示されているように監視することができる。酵母菌GAL4などの多くの転写活性化剤は、2つの物理的に別個のモジュラードメインからなり、一方はDNA結合ドメインとして作用し、他方は転写活性化ドメインとして機能する。以前の文献に記載された酵母菌発現系一般に2ハイブリッド系と呼ばれるは、この特性の長所を利用して、2つのハイブリッドタンパク質を用い、一方では標的タンパク質がGAL4のDNA結合ドメインに融合し、他方では、候補となる活性化タンパク質が活性化ドメインに融合している。GAL1lacZリポーター遺伝子のGAL4活性化プロモーターの制御下での発現は、タンパク質タンパク質相互作用を介したGAL4活性の再構成に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、βガラクトシダーゼに対する色素生産性物質で検出される。2ハイブリッド技術を用いた2つの特定なタンパク質間のタンパク質タンパク質相互作用を同定するための完全なキットMATCHMAKERは、Clontechから商業的に入手可能である。この系は、特定のタンパク質相互作用に含まれるタンパク質ドメインのマッピング、並びにこれら相互作用にとって重要なアミノ酸残基の特定にも拡張することができる。ここで同定されるPROのコード化配列と他の細胞外成分との相互作用を阻害する化合物は、次のように試験することができる:通常は、増幅された遺伝子の生成物及び細胞内又は外成分を含む反応混合物を、条件下で2つの生成物が相互作用及び結合する時間に渡って調製する。試験化合物が結合を阻害する能力を試験するために、反応は試験化合物有り又は無しで実施する。さらに、第3の反応混合物にプラシーボを添加してポジティブ対照としてもよい。混合物中に存在する試験化合物と細胞内又は外成分との結合複合体形成は上記のように監視する。対照反応において複合体が形成され、試験化合物を含む反応混合物ではしないことは、試験化合物が試験化合物とその反応パートナーとの相互作用を妨害することを示す。L.腫瘍治療のための組成物及び方法ここで同定した遺伝子の増幅を伴う腫瘍の治療に有用な組成物は、限定されないが、抗体、小有機及び無機分子、ペプチド、ホスホペプチド、アンチセンス及びリボザイム分子、三重螺旋分子などを含み、標的遺伝子産物の発現又は活性を阻害するものである。例えば、アンチセンスRNA及びRNA分子は、標的mRNAにハイブリッド形成してタンパク質翻訳を防止することによりmRNAの翻訳を直接阻止する。アンチセンスDNAが用いられる場合、翻訳開始部位、例えば標的遺伝子ヌクレオチド配列の-10から10位置の間から誘導されるオリゴデオキシリボヌクレオチドが好ましい。リボザイムは、RNAの特異的切断を触媒できる酵素的RNA分子である。リボザイムは、相補的標的RNAへの配列特異的ハイブリッド形成、次いでヌクレオチド鎖切断的切断により作用する。潜在的RNA標的内の特異的リボザイム切断部位は、既知の技術で同定できる。更なる詳細は、例えば、RossiCurrentBiology4469471及びPCT公報、番号WO97335511997年9月18日発行を参照。転写阻害に用いられる三重螺旋形成における核酸分子は一本鎖でデオキシヌクレオチドからなる。これらのオリゴヌクレオチドの基本組成は、フーグスチン塩基対則を介する三重螺旋形成を促進するように設計され、それは一般に二重鎖の一方の鎖上のプリン又はピリミジンのサイズ変更可能な伸展を必要とする。さらなる詳細は、例えば、PCT公報、番号WO9733551上掲を参照。これらの分子は上記のスクリーニングアッセイの任意のもの又は任意の組み合わせにより、又は当業者に知られた他のスクリーニング技術により同定できる。M.抗体本発明で最も有望な候補薬剤の幾つかは、ここで同定される増幅遺伝子の生成又は遺伝子産物を阻害する及び/又は遺伝子産物の活性を低下させる抗体及び抗体断片である。1.ポリクローナル抗体ポリクローナル抗体の調製方法は当業者に知られている。哺乳動物においてポリクローナル抗体は、例えば免疫化剤、及び所望するのであればアジュバントを、一又は複数回注射することで発生させることができる。典型的には、免疫化剤又はアジュバントを複数回皮下又は腹腔内注射により、哺乳動物に注射する。免疫化剤は、PROポリペプチド又はその融合タンパク質を含みうる。免疫化剤を免疫化された哺乳動物において免疫原性が知られているタンパク質に抱合させるのが有用である。このような免疫原タンパク質の例は、これらに限られないが、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン及び大豆トリプシンインヒビターが含まれる。使用され得るアジュバントの例には、フロイント完全アジュバント及びMPLTDMアジュバントが含まれる。免疫化プロトコールは、過度の実験なく当業者により選択されるであろう。2.モノクローナル抗体あるいは、抗ADAM8抗体はモノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、Kohler及びMilsteinNature256495に記載されているようなハイブリドーマ法を使用することで調製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター又は他の適切な宿主動物を典型的には免疫化剤により免疫化することで、免疫化剤に特異的に結合する抗体を生成するかあるいは生成可能なリンパ球を誘発する。また、リンパ球をインビトロで免疫化することもできる。免疫化剤は、典型的には断片を含むADAM8ポリペプチド、又はそのタンパク質又はその断片の融合タンパク質を含む。一般にヒト由来の細胞が望まれる場合には末梢血リンパ球が使用されるか、あるいは非ヒト哺乳動物源が望まれている場合は、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、ポリエチレングリコール等の適当な融合剤を用いてリンパ球を不死化株化細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する[GodingMonoclonalAntibodiesPrinciplesandPracticeAcademicPresspp59103]。不死化株化細胞は、通常は、形質転換した哺乳動物細胞、特に齧歯動物、ウシ、及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウスの骨髄腫株化細胞が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、未融合の不死化細胞の生存又は成長を阻害する一又は複数の物質を含有する適切な培地で培養される。例えば、親細胞が、酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼを欠いていると、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサチン、アミノプチリン及びチミジンを含み、この物質がHGPRT欠乏性細胞の増殖を阻止する。好ましい不死化株化細胞は、効率的に融合し、選択された抗体生成細胞による安定した高レベルの抗体発現を支援し、HAT培地のような培地に対して感受性のものである。より好ましい不死化株化細胞はマウス骨髄腫系であり、これは例えばカリフォルニア州サンディエゴのソーク研究所SalkInstituteCellDistributionCenterやヴァージニア州マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクションATCCより入手可能である。ヒトモノクローナル抗体を生成するためのヒト骨髄腫及びマウスヒト異種骨髄腫株化細胞も開示されている[KozborJImmunol1333001、BrodeurらMonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplicationsMarcelDekkerIncNewYorkpp5163]。次いでハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、ADAM8に対するモノクローナル抗体の存在について検定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生成されたモノクローナル抗体の結合特異性は免疫沈降又はラジオイムノアッセイや酵素結合免疫測定法等のインビトロ結合検定法によって測定する。このような技術及びアッセイは、当該分野において公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えばMunson及びPollardAnalBiochem107220によるスキャッチャード分析法によって測定することができる。所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを制限希釈工程によりサブクローニングし、標準的な方法で成長させることができる[Goding上掲]。この目的のための適当な培地には、例えば、ダルベッコの改変イーグル培地及びRPMI1640倍地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は哺乳動物においてインビボで腹水として成長させることもできる。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えばプロテインA-セファロース法、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー法、ゲル電気泳動法、透析法又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製方法によって培養培地又は腹水液から単離又は精製される。また、モノクローナル抗体は、組換えDNA法、例えば米国特許第4816567号に記載された方法により作成することができる。本発明のモノクローナル抗体をコードするDNAは、常套的な方法を用いて、容易に単離し配列決定することができる。本発明のハイブリドーマ細胞はそのようなDNAの好ましい供給源となる。ひとたび単離されたら、DNAは発現ベクター内に配することができ、これが宿主細胞、例えばサルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、あるいは免疫グロブリンタンパク質を生成などしない骨髄腫細胞内に形質移入され、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成をすることができる。また、DNAは、例えば相同マウス配列に換えてヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより[USPatentNo4816567;Morrisonら上掲]、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の一部又は全部を共有結合することにより修飾することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインの代わりに置換するか、本発明の抗体の一つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに置換し、キメラ性二価抗体を産生することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインに置換でき、あるいは本発明の抗体の1つの抗原結合部位の可変ドメインに置換でき、キメラ性二価抗体を生成する。抗体は一価抗体であってもよい。一価抗体の調製方法は当該分野においてよく知られてる。例えば、一つの方法は免疫グロブリン軽鎖と修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は一般的に、重鎖の架橋を防止するようにFc領域の任意のポイントで切断される。あるいは、関連するシステイン残基を他のアミノ酸残基で置換するか欠失させて架橋を防止する。一価抗体の調製にはインビトロ法がまた適している。抗体の消化による、その断片、特にFab断片の生成は、当該分野において知られている慣用的技術を使用して達成できる。3.ヒト及びヒト化抗体抗PRO抗体は、さらにヒト化抗体又はヒト抗体を含む。非ヒト抗体のヒト化形とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖あるいはその断片2あるいは抗体の他の抗原結合サブ配列であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体はレシピエントの相補性決定領域の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種のCDRの残基によって置換されたヒト免疫グロブリンを含む。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたCDRもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいはほとんど全てのCDR領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てあるいはほとんど全てのFR領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含んでなる[JonesらNature321522525RiechmannらNature332323329及びPrestaCurrOpStructBiol2593596]。非ヒト抗体をヒト化する方法はこの分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入される。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には移入可変ドメインから得られる移入残基と称される。ヒト化は基本的に齧歯動物のCDR又はCDR配列でヒト抗体の該当する配列を置換することによりウィンター及び共同研究者[JonesらNature321522525;RiechmannらNature332323327;VerhoeyenらScience23915341536]の方法に従って、齧歯類CDR又はCDR配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施される。よって、このようなヒト化抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのCDR残基及び場合によっては幾つかのFR残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。また、ヒト抗体は、ファージ表示ライブラリ[Hoogenboom及びWinterJMolBiol227381;MarksらJMolBiol222581]を含むこの分野で知られた種々の方法を用いて作成することもできる。また、Coleら及びBoernerらの技術も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用することができる[ColeらMonoclonalAntibodiesandCancerTherapyAlanRLissp77及びBoernerらJImmunol147:8695]。同様に、ヒト抗体はヒト免疫グロブリン座位をトランスジェニック動物、例えば内在性免疫グロブリン遺伝子は部分的又は完全に不活性化されたマウスに導入することにより産生することができる。投与の際に、遺伝子再配列、組立、及び抗体レパートリーを含むあらゆる観点においてヒトに見られるものに非常に類似しているヒト抗体の生産が観察される。このアプローチは、例えば米国特許第5545807号;同第5545806号;同第5569825号;同第5625126号;同第5633425号;同第5661016号、及び次の科学文献:MarksらBioTechnology10779783LonbergらNature368856859MorrisonNature36881213FishwildらNatureBiotechnology1484551NeubergerNatureBiotechnology14826Lonberg及びHuszarInternRevImmunol136593に記載されている。4.抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ治療法また、本発明の抗体は、プロドラッグを活性な抗癌剤に転化させるプロドラッグ活性化酵素に抗体をコンジュゲートさせることにより、ADEPTにおいて使用することができる。例えばWO8807378及び米国特許第4975278号を参照されたい。ADEPTに有用な免疫コンジュゲートの酵素成分には、より活性な細胞毒形態に転化するように、プロドラッグに作用し得る任意の酵素が含まれる。限定するものではないが、この発明の方法に有用な酵素には、グリコシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ヒトリソザイム、ヒトグルコロニダーゼ、ホスファート含有プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なアルカリ性ホスファターゼ;スルファート含有プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なアリールスルファターゼ;非毒性5フルオロシトシンを抗癌剤5フルオロウラシルに転化するのに有用なシトシンデアミナーゼ;プロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ例えば、カルボキシペプチダーゼG2及びカルボキシペプチダーゼA及びカテプシンで、ペプチド含有プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なもの;Dアミノ酸置換基を含有するプロドラッグの転化に有用なDアラニルカルボキシペプチダーゼ;炭水化物切断酵素、例えばグリコシル化プロドラッグを遊離の薬剤に転化するのに有用なノイラミニダーゼ及びβガラクトシダーゼ;βラクタムで誘導体化された薬剤を遊離の薬剤に転化させるのに有用なβラクタマーゼ;及びペニシリンアミダーゼ、例えばそれぞれフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基で、それらのアミン性窒素において誘導体化された薬剤を遊離の薬剤に転化するのに有用なペニシリンVアミダーゼ又はペニシリンGアミダーゼが含まれる。あるいは、アブザイムとしてもまた公知の酵素活性を有する抗体を、遊離の活性薬剤に本発明のプロドラッグを転化させるために使用することもできる。抗体アブザイムコンジュゲートは、ここで記載されているようにして、腫瘍細胞個体群にアブザイムを送達するために調製することができる。この発明の酵素は、当該分野においてよく知られている技術、例えば上で検討したヘテロ二官能性架橋試薬を使用することにより、抗ADAM8抗体に共有的に結合させることができる。あるいは、本発明の抗体の少なくとも結合領域を本発明の酵素の少なくとも機能的に活性な部位に結合せしめてなる融合タンパク質を、当該技術においてよく知られている組換えDNA技術を使用して作成することができる。5.二重特異性抗体二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒトもしくはヒト化抗体である。本発明の場合において、結合特異性の一方はADAM8に対してであり、他方は任意の他の抗原、好ましくは細胞表面タンパク質又はレセプター又はレセプターサブユニットに対してである。二重特異性抗体を作成する方法は当該技術分野において周知である。伝統的には、二重特異性抗体の組換え生産は、二つの重鎖が異なる特異性を持つ二つの免疫グロブリン重鎖/軽鎖対の同時発現に基づく[Milstein及びCuelloNature305537539]。免疫グロブリンの重鎖と軽鎖を無作為に取り揃えるため、これらハイブリドーマは10種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、その内一種のみが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、アフィニティークロマトグラフィー工程によって通常達成される。同様の手順が1993年5月13日公開のWO9308829、及びTrauneckerらEMBOJ1036553656に開示されている。所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合できる。融合は、好ましくは少なくともヒンジ部、CH2及びCH3領域の一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。少なくとも一つの融合には軽鎖結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域が存在することが望ましい。免疫グロブリン重鎖融合体をコードするDNA、及び望むのであれば免疫グロブリン軽鎖を、別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。二重特異性抗体を作成するための更なる詳細については、例えばSureshらMethodsinEnzymology121210を参照されたい。WO9627011に記載された他のアプローチ法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体のパーセントを最大にすることができる。好適な界面は抗体定常ドメインのCH3ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第1抗体分子の界面からの一又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖と置換される。大きな側鎖と同じ又はより小さいサイズの相補的キャビティを、大きなアミノ酸側鎖を小さいものと置き換えることにより第2の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモ二量体のような不要の他の最終産物に対してヘテロダイマーの収量を増大させるメカニズムが提供される。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片例えば、F2二重特異性抗体として調製できる。抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。BrennanらScience22981は無傷の抗体をタンパク分解性に切断してF2断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。産生されたFab断片はついでチオニトロベンゾアート誘導体に転換される。FabTNB誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりFabチオールに再転換し、他のFabTNB誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。大腸菌からFabフラグメントを直接回収でき、これは化学的に結合して二重特異性抗体を形成することができる。ShalabyらJExpMed175217225は完全にヒト化された二重特異性抗体F2分子の製造を記述している。各Fabフラグメントは大腸菌から別個に分泌され、インビトロで定方向化学共役を受けて二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、正常なヒトT細胞及びErbB2レセプターを過剰発現する細胞に結合可能で、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞障害性リンパ球の細胞溶解活性の誘因となる。組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体フラグメントを作成し分離する様々な方法もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生産されている。KostelnyらJImmunol14815471553。Fos及びJunタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のFab部分に結合させる。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた抗体ホモダイマーの生産に対して使用することができる。HollingerらProcNatlAcadSciUSA9064446448により記述されたダイアボディ技術は二重特異性抗体フラグメントを作成する別のメカニズムを提供した。フラグメントは、同一鎖上の2つのドメイン間の対形成を可能にするには十分に短いリンカーにより軽鎖可変ドメインに重鎖可変ドメインを結合してなる。従って、一つのフラグメントのVH及びVLドメインは他のフラグメントの相補的VL及びVHドメインと強制的に対形成させられ、2つの抗原結合部位を形成する。単鎖Fvダイマーの使用により二重特異性抗体フラグメントを製造する他の方策もまた報告されている。GruberらJImmunol1525368を参照されたい。二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tuttら,JImmunol14760。例示的二重特異性抗体は、ここで与えられるタンパク質上の2つの異なるエピトープに結合しうる。あるいは、抗ポリペプチドアームは、T細胞レセプター分子例えばCD2、CD3、CD28又はB7等の白血球上のトリガー分子、又はFcγRI、FcγRII及びFcγRIII等のIgGのFcレセプターFcγRに結合するアームに結合し、細胞防御メカニズムを特定のタンパク質発現細胞に集中するようにしてもよい。二重特異性抗体は、特定のポリペプチドを発現する細胞に対する局所的細胞毒性薬として使用してもよい。これらの抗体は、ポリペプチド結合アーム及び細胞毒性薬又はキレート化剤、例えばEOTUBE、DPTA、DOTA、又はTETAに結合するアームを有する。他の対象とする二重特異性抗体は、ポリペプチドに結合し、さらに組織因子TFに結合する。6.ヘテロ抱合体抗体ヘテロ抱合抗体もまた本発明の範囲に入る。ヘテロ抱合抗体は、2つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため[米国特許第4676980号]及びHIV感染の治療のために[WO9100360WO92200373EP03089]提案されている。この抗体は、架橋剤に関連したものを含む合成タンパク化学における既知の方法を使用して、インビトロで調製することができると考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用するか又はチオエーテル結合を形成することにより、免疫毒素を作成することができる。この目的に対して好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル4メルカプトブチリミデート、及び例えば米国特許第46767980号に開示されているものが含まれる。7.エフェクター機能の設計本発明の抗体をエフェクター機能について改変し、例えばガンの治療における抗体の効能を増強することが望ましい。例えば、システイン残基をFc領域に導入して、この領域における鎖間ジスルイド結合を形成させる。このようにして産生されたホモダイマー抗体は改善されたインターナリゼーション能力及び/又は増加した補体媒介細胞死滅及び抗体依存性細胞障害活性を有しうる。CaronらJExpMed17611911195及びShopesBJImmunol14829182922を参照されたい。抗腫瘍活性が高められたホモダイマー抗体は、WolffらCancerResearch5325602565に記載されているようなヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製することもできる。あるいは二重Fc領域を有し、よって増強された補体溶解及びADCC能を有しうる抗体を設計することができる。StevensonらAnticancerDrugDesign3219230を参照。8.免疫複合体本発明はまた、化学治療薬、毒素例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素、又はその断片などの細胞毒性薬、あるいは放射性同位体即ち、放射性抱合に抱合された抗体を含む免疫複合体にも関する。このような免疫複合体の生成に有用な化学治療薬は上記した。用いることのできる酵素活性毒素及びその断片は、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、コレラ毒素、ボツリヌス毒素、緑膿菌からの外毒素A鎖、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデクシンA鎖、アルファサルシン、アレウリテスフォーディタンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカアメリカーナタンパク質PAPI、PAPII、及びPAPS、モモルディカチャランチアインヒビター、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリスインヒビター、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンを含む。小分子毒素は、例えばカリケアマイシンcalicheamicinsUS5053394、マイタンシノイドUS5208020、パリトキシンpalytoxin及びCC1065を含む。様々な放射性ヌクレオチドが放射性抱合抗体の生成に利用可能である。例として、212Bi、131I、131In、90Y及び186Reを含む。抗体及び細胞毒性薬の複合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Nスクシンイミジル3プロピオネートSPDP、イミノチオランIT、イミドエステルの二官能性誘導体ジメチルアジピミデートHCL等、活性エステルジスクシンイミジルスベレート等、アルデヒドグルタルアルデヒド等、ビスアジド化合物ビスヘキサンジアミン等、ビスジアゾニウム誘導体ビスエチレンジアミン等、ジイソシアネートトリエン2,6ジイソシアネート等、及びビス活性フッ素化合物1,5ジフルオロ2,4ジニトロベンゼン等を用いて作成できる。例えば、リシン免疫毒素は、VitettaらScience2381098に記載されたように調製することができる。カーボン14標識1イソチオシアナトベンジル3メチルジエチレントリアミン五酢酸MXDTPAは、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のためのキレート剤の例である。WO9411026を参照のこと。他の実施態様では、腫瘍の予備標的化で使用するために、抗体はレセプターストレプトアビジン等に抱合されてもよく、抗体レセプター複合体は患者に投与され、次いで清澄化剤を用いて未結合複合体を循環から除去し、次に細胞毒性薬例えば、放射性ヌクレオチド等に抱合されたリガンド例えばアビジンを投与する。9.免疫リポソームまた、ここに開示する抗体は、免疫リポソームとして調製してもよい。抗体を含むリポソームは、EpsteinらProcNatlacadSciUSA823688HwangらProcnatlAcadSciUSA774030及び米国特許第4485045号及び第4544545号に記載されたような、この分野で知られた方法で調製される。向上した循環時間を持つリポソームは、米国特許第5013556号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びPEG誘導ホスファチジルエタノールアミンPEGPEを含む脂質組成物での逆相蒸発法によって生成される。リポソームは、所定サイズのフィルターを通して押し出され、所望の径を有するリポソームが生成される。本発明の抗体のFab’断片は、MartinらJBiolChem257286288に記載されているように、ジスルフィド交換反応を介してリポソームに抱合され得る。化学治療薬ドキソルビシン等は、場合によってはリポソーム内に包含される。GabizonらJNationalCancerInst811484を参照のこと。10.製薬組成物ここで同定される増幅遺伝子の産物に特異的に結合する抗体、並びに上記に開示したスクリーニングアッセイで同定された他の分子は、癌を含む腫瘍の治療のために、製薬組成物の形態で投与することができる。増幅された遺伝子にコードされるタンパク質が細胞内であり、全抗体が阻害剤として用いられる場合、内在化抗体が好ましい。しかし、リポフェクション又はリポソームも抗体、又は抗体断片を細胞に導入するのに使用できる。抗体断片が用いられる場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害断片が通常は好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持したペプチド分子が設計できる。このようなペプチドは、化学的に合成でき、又は組換えDNA技術によって生成できる例えば、MarascoらProcNatlAcadSciUSA90788978931993を参照のこと。抗体の治療用製剤は、所望される程度の純度を持つ抗体を、親油性製剤又は水性溶液の形態で、任意の製薬上許容される担体、賦形剤又は安定化剤と混合することにより調製され保存されるRemingtonsPharmaceuticalScience16theditionOsolAEd1980。許容される担体、賦形剤、又は安定化剤は、用いられる用量及び濃度で受容者に非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などのバッファー;アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤;防腐剤オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド;ヘキサメトニウムクロライド;ベンズアルコニウムクロライド;ベンズエトニウムクロライド;フェノール;ブチル又はベンジルアルコール;メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3ペンタノール;及びmクレゾールなど;低分子量約10残基未満ポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質;ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン等のアミノ酸;グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物EDTA等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖;ナトリウムなどの塩形成対イオン;金属錯体例えば、Znタンパク質錯体又はトゥイーン商品名、プルロニクス商品名、及びポリエチレングリコールPEG等の非イオン性界面活性剤を含む。本発明のスクリーニングアッセイで同定された非抗体化合物は、同様の方式で、この分野で知られた標準技術を用いて製剤される。ここでの製剤は、治療すべき特定の徴候に必要な場合に1以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的仮性を持つものも含んでよい。あるいは、又はそれに加えて、組成物は、細胞毒性薬、サイトカイン又は増殖阻害剤を含んでもよい。これらの分子は、適切には、意図する目的に有効な量の組み合わせで存在する。また、活性成分は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリメタクリル酸メチルマイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系ampltBR例えば、リポソーム、アルブミン小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル中、又はマイクロエマルション中に包括されていてもよい。これらの技術は、RemingtonsPharmaceuticalScience16theditionOsolAEd1980に開示されている。インビボ投与に使用される製剤は無菌でなけらばならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは成形された物品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形状である。除放性マトリクスの例は、ポリエステルヒドロゲル例えば、ポリ又はポリ乳酸グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドの注射可能な小球などの分解性乳酸グリコール酸コポリマー、ポリ3ヒドロキシブチル酸を含む。エチレン酢酸ビニル及び乳酸グリコール酸などのポリマーは分子を100日に渡って放出することができるが、ある種のヒドロゲルはより短時間でタンパク質を放出してしまう。カプセル化された抗体が身体内に長時間残ると、それらは37°Cの水分に露出されることにより変性又は凝集し、その結果、生物学的活性の低下及び起こりうる免疫原性の変化をもたらす。合理的な方法は、含まれる機構に依存する安定化について工夫することができる。例えば、凝集機構がチオ-ジスルフィド交換を通した分子間SS結合形成であると発見された場合、安定化はスルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の制御、適切な添加剤の付加、及び特異的ポリマーマトリクス組成物の開発によって達成されうる。11.治療方法本発明の抗体及び他の抗腫瘍化合物は、ここで同定される増幅遺伝子の過剰発現及び/又は活性化を特徴とするものを含む種々の状態の治療に用いてもよいと考えられる。このような抗体及び、これらに限られないが有機及び無機小分子、ペプチド、アンチセンス分子等を含む他の化合物で治療される状態又は疾患の例としては、良性又は悪性腫瘍例えば、腎臓、肝臓、腎臓、膀胱、乳房、胃、卵巣、大腸直腸、前立腺、膵臓、肺、外陰部、甲状、肝臓の癌;肉腫;膠芽細胞腫;及び種々の頭部及び頸部の腫瘍;白血病及びリンパ悪性疾患;ニューロン、グリア、星状細胞、視床下部及び他の腺、マクロファージ、上皮、間質及び胞胚腔の疾患;及び炎症、脈管形成及び免疫学的な疾患が含まれる。本発明の抗腫瘍剤、例えば抗体は、哺乳動物、好ましくはヒトに、周知の方法、例えば、ボーラスとして又は所定時間に渡る連続注入による静脈内投与、筋肉内、腹膜内、脳脊髄内、皮下、関節間、滑膜内、鞘内、経口、局所、又は吸入経路などにより投与される。抗体の静脈内投与が好ましい。他の治療的養生法を抗癌剤、例えば本発明の抗体の投与と組み合わせてもよい。例えば、このような抗癌剤で治療される患者は放射線治療を受けてもよい。あるいは、又はそれに加えて、患者に化学治療薬を投与してもよい。このような化学治療薬の調製法及び用量スケジュールは、製造者の指示に従って使用されるか、熟練した実務者により経験的に決定される。そのような化学治療に対する調製法及び用量スケジュールはまたChemotherapyServiceMCPerry編WilliamsWilkinsBaltimoreMDにも記載されている。化学治療薬は、本発明の抗腫瘍剤、例えば抗体の投与に先立って、又は続いて投与してもよく、あるいはそれらと同時に投与してもよい。本発明の抗体は、タモキシフェン等の抗エストロゲン化合物又はオナプリストンなどの抗プロゲステロンEP616812参照の、それらの分子について知られた用量と組み合わせてもよい。また、腫瘍関連抗原に対する抗体、例えばErbB2、EGFR、ErbB3、ErbB4、又は血管内皮因子VEGFに結合する抗体を投与することも好ましい。ときどきは、患者にサイトカインを投与することも有利である。好ましい実施態様では、ここの抗癌剤は、増殖阻害剤と同時投与される。例えば、まず増殖阻害剤を投与し、続いて本発明の抗癌剤を投与する。しかしながら、同時投与、又は本発明の抗癌剤を最初に投与することも考えられる。増殖阻害剤についての適切な用量は現在用いられている量であるが、増殖阻害剤とこの抗体との組み合わせ相乗効果により減少させ得る。疾患の防止又は治療のための、ここでの抗腫瘍剤の適切な用量は、上記で定義したような治療される疾患の型、疾患の重篤さ及び経過、防止又は治療目的で薬剤が投与されるか否か、従前の治療、患者の臨床履歴及び薬剤に対する反応、及び主治医の裁量に依存する。薬剤は、適切には患者に一回又は一連の治療に渡って適切に投与される。例えば、疾患の型及び重篤さに応じて、約1μg/kgから15mg/kg例えば、0.1-20mg/kgの抗体が、例えば、1又はそれ以上の別々の投与あるいは連続注入のいずれにしても、患者に投与するための最初の候補用量である。典型的な1日の用量は、上記の要因に応じて、約1μg/kgから100mg/kg又はそれ以上であろう。数日以上に渡る繰り返し投与のためには、状態に応じて、疾患の徴候に所望の抑制が現れるまで治療が続けられる。しかしながら、他の用量計画が有用であることもある。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。さらに、ADAM8の活性を阻害する薬剤は、種々の炎症疾患を診断又は治療することに用いることができる。急性及び慢性炎症の双方の惹起、悪化、又は進行中の症状には、多様な個体群の白血球、例えば単球の組織傷害を引き起こす組織内外への輸送及び遊走が含まれる。ADAM8を阻害して白血球による遊走、輸送及び組織破壊の阻害は、炎症プロセスを和らげる。乾癬、皮膚炎、炎症性腸疾患、関節炎、多発性硬化症及び慢性閉塞性肺疾患等の疾患が、ADAM8の阻害剤で治療できる疾患の例である。このような疾患の更なる例としては、炎症性腸疾患クローン病及び潰瘍性大腸炎などと関連した反応包含する炎症性皮膚疾患;成人呼吸窮迫症候群;髄膜炎、脳炎;ブドウ膜炎;湿疹及び喘息のようなアレルギー症状;T細胞の浸潤及び慢性炎症反応を包含する症状;皮膚超過敏反応ツタウルシ及び有毒オークを包含する;アテローム性動脈硬化症;白血球接着不全;リウマチ様関節炎、全身性紅斑性狼瘡SLE、糖尿病、レーノー症候群、自己免疫性甲状腺炎、実験的自己免疫性脳脊髄炎、sjorgens症候群、若年型糖尿病、並びに結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎に典型的に見出されるT-リンパ球及びサイトカインによって媒介される遅延型過敏症と関連している免疫応答などの自己免疫疾患;悪性貧血;慢性閉塞性肺疾患COPD;気管支炎;膵島炎;鼻炎;じんま疹;糸球体腎炎;白血球血管外遊出を含有する疾患;CNS炎症疾患;敗血症又は外傷の次の多臓器傷害症候群;自己免疫溶血性貧血;mythemiagravis;疾患によって媒介される抗原抗体複合体;ネフローゼ症候群;悪性腫瘍例えば、慢性リンパ球性白血病又はヘアリー細胞白血病のようなB細胞悪性腫瘍;移植片対宿主又は宿主対移植片病を包含するすべての種類の移植;HIV及びライノウイルス伝染;肺線維症;腫瘍細胞の二次器官などへの浸潤などのようなT細胞炎症反応を含む。これらの疾患は、抗癌条件の利用のために上記にて議論した製剤、投与経路、服用量及び投薬形式を利用して治療することができる。12.製造品本発明の他の実施態様では、上記の疾患の診断又は治療に有用な物質を含む製造品が提供される。この製造品は容器とラベルとを含んでなる。好適な容器は、例えば、ビン、バイアル、シリンジ、及び試験管を含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの材料から形成されてよい。容器は、状態を診断し治療するのに有効な組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい。組成物中の活性剤は通常、ここで同定される遺伝子産物の活性を妨害することのできる抗腫瘍剤、例えば抗体である。容器上又は添付されるラベルは、組成物が選択した状態の診断又は治療のために使用されることを示す。製造品はさらに、リン酸緩衝塩水、リンガー液及びデキストロース溶液などの製薬的に許容されるバッファーを含む第2の容器を具備してもよい。さらに、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用上の指示を付けたパッケージ挿入物を含む商業的及び使用者の見地から望ましい他の材料を含んでもよい。13.腫瘍の診断及び予知或る種の腫瘍で過剰発現される成長レセプター等の細胞表面タンパク質は候補薬剤又は腫瘍例えば、癌治療の優れた標的であるが、同じタンパク質は腫瘍細胞で増幅された遺伝子にコードされる分泌タンパク質とともに腫瘍の診断及び予知に用途が見出される。例えば、腫瘍細胞で増幅された遺伝子のタンパク質産物に対する抗体は腫瘍診断又は予知として使用できる。例えば、抗体断片を含む抗体は、増幅された遺伝子にコードされるタンパク質マーカー遺伝子産物の発現の定性的又は定量的検出に用いることができる。抗体は、好ましくは検出可能な、例えば蛍光標識を備え、結合は光学顕微鏡、フローサイトメトリー、フルオロメトリー、又はこの分野で知られた他の技術によって監視できる。これらの技術は、増幅された遺伝子が細胞表面タンパク質、例えば増殖因子をコードする場合に特に好ましい。このような結合アッセイは、上記5節に実質的に記載されたように実施される。マーカー遺伝子産物に結合する抗体のインサイツ検出は、例えば、免疫蛍光又は免疫電子顕微鏡によって実施できる。この目的のために、組織学的試料を患者から取り出し、好ましくは生物学的試料に抗体を被せることにより、標識抗体をそれに適用する。この手法はまた、試験される組織におけるマーカー遺伝子産物の分布も決定できるようにする。当業者には、インサイツ検出のために広範な組織学的方法が容易に利用できることは明らかであろう。以下の実施例は例示するためにのみ提供されるものであって、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。本明細書で引用した全ての特許及び文献の全体を、出典明示によりここに取り込む。実施例実施例で言及されている全ての他の市販試薬は、特に示さない限りは製造者の使用説明に従い使用した。ATCC登録番号により以下の実施例及び明細書全体を通して特定されている細胞の供給源はアメリカンタイプカルチャーコレクション、10801ユニヴァーシティービルディング、マナッサス、VA20110-2209である。特に記さない限り、本発明は上記及び以下の教科書に記載されたもののような組換えDNA技術の標準的な手法を用いた:SambrookらMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborPressNY1989AusubelらCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenPublishingAssociatesandWileyInterscienceNY1989InnisらPCRProtocolsAGuidetoMethodsandApplicationsAcademicPressIncNY1990HarlowらAntibodiesALaboratoryManualColdSpringHarborPressColdSpringHarbor1988GaitOligonucleotidesynthesisIRLPressOxford1984RIFreshneyAnimalCellCulture1987ColiganらCurrentProtocolsinImmunology1991。実施例1:遺伝子増幅この実施例は、ADAM8mRNAが或る種の乳、肺、結腸癌の細胞において高レベルで存在していることを示す。mRNAのレベルの増加は、細胞表層で発現されるADAM8タンパク質の量を示す。大腸、乳、肺及び他の癌等の或る種の癌において過剰発現されているタンパク質は、治療的処置の有用な標的である。治療薬はADAM8ポリペプチドのアンタゴニストの形態をとることができ、例えばADAM8-ポリペプチドに対するマウス-ヒトキメラ、ヒト化又はヒト抗体がある。スクリーニングの出発物質は、種々の癌の薄切りの凍結切片から単離した全RNAである。全RNAは蛍光的に定量される。比較手段として、RNAは、また、各腫瘍の近くから取り出された正常な健全組織から単離された。腫瘍細胞に対して正常細胞のmRNAレベルの違いを見出すために、リアルタイム定量的PCRABIPrizm7700SeqenceDetectionSystemTMPerkinElmerAppliedBiosystemsDivisionFosterCityCAを使用した。その結果は、ADAM8をコードするDNAが、スクリーニングされた任意の原発肺、大腸又は乳癌において過剰反応しているか否かを決定するために用いられる。TaqmanTM分析の結果は、デルタΔCt単位で報告される。1単位は正常に対して約2倍増加の1PCRサイクルに相当し、2単位は4倍、3単位は8倍増幅等々に相当する。定量化は、プライマー及びADAM8コード化遺伝子から誘導したTaqmanTM蛍光プローブを用いて得た。最もスプライシングされたイントロンを持たないと思われており、独特の核酸配列を含むと思われ領域は、プライマー及びプローブ誘導に好ましく、例えば3非翻訳領域がある。二組のプライマー/プローブ組み合わせをTaqmanTM分析に用いた。ADAM8mRNA分析に用られたプライマー及びプローブの配列は次の通りであった:セット1-3’-非翻訳領域の一部分を増幅するプライマー/プローブの一組前方向プライマー8-2570F22merGCTCAGCCCTAGACCCTGACTT配列番号:3プローブ8-2594T32merCAGGCTCAGCTGCTGTTCTAACCTCAGTAATG配列番号:4逆方向プライマー8-2655R18merCGTGGACAGCAGGAGCCT配列番号:5セット2-コード化配列の一部分を増幅するプライマー/プローブの一組前方向プライマーADAM8.3-1797F19merTTGCTGGAAAGGACGTTGC配列番号:6プローブADAM8.3-1817T32merAGGACTTACACGTTTACAGATCCAGCAACTGC配列番号:7逆方向プライマーADAM8.3-1881R19merGTTGCACACCCCATGGTTG配列番号:85’ヌクレアーゼアッセイ反応は蛍光PCRベースの技術であり、リアルタイムでの増幅監視のためのTaqDNAポリメラーゼ酵素の5’エキソヌクレアーゼ活性を使用する。PCR反応に典型的な単位複製配列の生成に2つのオリゴヌクレオチドプライマーを使用した。第3のオリゴヌクレオチド、又はプローブは、2つのPCRプライマーの間に位置する核酸配列を検出するために設計された。プローブはTaqDNAポリメラーゼ酵素により非伸展性であり、レポーター蛍光染料及び消光剤蛍光染料で標識される。2つの染料がプローブ上に接近して位置する場合、レポーター染料からのレーザー誘導発光は消光染料によって消光される。増幅反応の間、プローブはTaqDNAポリメラーゼ酵素によりテンプレート依存的方式で切断される。得られたプローブ断片は溶液中に解離し、放出されたレポーター染料からのシグナルは第2のフルオロホアからの消光効果を受けない。レポーター染料の一分子は、新たに合成された各分子について標識され、非消光レポーター染料の検出がデータの定量的解釈の基礎を提供する。5’ヌクレアーゼ法は、ABIPrism7700TM配列検出などのリアルタイム定量的PCR装置で実施される。系は温度サイクル器、レーザー、電荷結合装置CCDカメラ及びコンピュータからなる。系は温度サイクル器上で96ウェルでの試料を増幅させる。増幅中に、レーザー誘導蛍光シグナルは光ファイバーケーブルで96ウェルに集められ、CCDで検出される。系は装置の実行及びデータの分析のためのソフトウェアを含む。5’ヌクレアーゼアッセイデータは、最初はCt又は境界サイクルで表現される。これは、レポーターシグナルが蛍光のバックグラウンドを越えて蓄積されるサイクルとして定義される。癌DNAの結果と正常ヒトDNAの結果を比較する際に、Ct値を核酸試料における特定の標的配列の出発コピー相対数の定量的尺度として使用した。RNAの調製及び定量化RNAを、凍結した一対のヒト腫瘍及び正常組織の薄切り切片から調製した。その単離は、製造者の指示書及び下記に示す説明に従って、バッファー、カラム、QiagenRNeasyminiキットの他の試薬を包含する精製キットを用いておこなわれた。RNAの単離を始める前に、10μlのベーターメルカプトエタノールを各1mlRLTバッファーへ添加した。クリオスタットを用いて、組織単位より1から4の各腫瘍及び正常組織の10又は20μ-切片を切り出した。これらの切片を、直ちに、ベーターメルカプトエタノールが添加されている350又は600μlバッファーRLTを含有する1.5mlマイクロ遠心管チューブへ置いた。VerTis携帯型ホモジナイザーを1.5mlマイクロ遠心管チューブに適合するのに十分に小さなジェネレイターとともに用いて、この組織切片をおよそ30分に渡ってホモジュナイズした。ジェネレイターを、無菌H2Oで約10秒、0.1SDSで約10秒、そして再び無菌H2Oで約10秒間作動させることで洗浄した。これは、最初の組織試料を処理する前に行われ、そして各組織試料の処理の間に再実行された。ホモジュナイズされた試料を含有する1.5mlマイクロ遠心管チューブを、微量遠心管によって最高スピードで3分間に渡って回転した。その上澄みを、新鮮なマイクロ遠心管へ移した。次に、各試料は、22ga針の付いた3cc注射器で20回汲み出され、そして排出された。この付加的段階の目的は、ホモジナイゼーション及びマイクロ遠心管による回転の後に試料に存在するであろうすべてのゲノムDNAを剪断することである。次に、1容量通常は350又は600μlの何れかの70エタノールを各試料へ添加し、ピペット操作で混合した。700μlの試料を、2ml収集管に置いたRNeasyminispinカラムへ負荷した。このカラムを、15秒間に渡って少なくとも8000xgで遠心分離した。試料の容量が700μlを越えた場合は、RNeasyminiカラムへ連続的にその一定分量を負荷し、上記のように再び遠心分離した。各遠心回転の後、フロースルーを廃棄した。これと同じカラムを700μlのバッファーRW1で負荷し、15秒間に渡って少なくとも8000xgで遠心分離してカラムを洗浄した。RNeasyminiカラムを新しい2-ml収集管へ移し、500μlのバッファーRPEを負荷して15秒間に渡って少なくとも8000xgで遠心分離してカラムを洗浄した。そのフロースルーを廃棄し、収集管は再使用された。カラムを500μlのバッファーRPEで負荷し、2分間に渡って最高速度で遠心分離してRNeasy膜を乾燥させた。RNeasyカラムを新しい1.5ml収集管へ移し、カラム膜へ直接に展開した30-50μlのRNaseを除いた水で負荷した。カラムを1分間に渡って少なくとも8000xgで遠心分離し、RNAを溶出した。RNAは、溶出試料をH2Oで1:20又は1:25で希釈して標準A260、A280分光光度法によって定量化した。希釈試料を0.1ml石英キュベットへ置き、BeckmanDU640分光光度計で計測した。遺伝子増幅アッセイヒト乳、肺及び大腸腫瘍から調製され、腫瘍近辺から採取された正常組織切片と比較された全RNA試料中のADAM8mRNAを増幅するために、ADAM8プライマー/プローブセットをTaqman分析に使用した。全RNAをH2Oで2.5ng/μlへ希釈した。試料は二重又は三重に試験され、プレートに包含されたのはGAPDH及び/又はb-アクチンTaqmqnTMプライマー及びプローブで、テンプレートコントロールは無く、逆転写酵素コントロールは無い。反応は、以下の通りであった:10μl25mMMgCl2PerkinElmerreagent5μl10XバッファーAPerkinElmerreagent6μl10mMdNTPsPerkinElmerreagent0.5μl前方向プライマー1OD/100μl0.5μl逆方向プライマー1OD/100μl2.5μlプローブ2μM1μlRNaseインヒビター20単位/μlPerkinElmerreagent0.25μlMuLV逆転写酵素50単位/μlPerkinElmerreagent0.5μlTaqGoldTaqPolymerase5単位/μlPerkinElmerreagent13.75μlH2O10μl全RNA2.5ng/μl反応は、96ウェルプレートMicroAmpOpticalreactionplatesN8010560PerkinElmerで調製された。プレートをPerkinElmerSequenceDetectionSystem7700に置き、以下の温度と時間で装置をプログラムした:48°C30分mRNAの逆転写95°C10分TaqGoldの活性化以下特定のmRNAの増幅の40サイクル:95°C15秒60°C1分データ分析をSequenceDetectionSystemソフトウェアでおこない、計算をExcelでおこない、そして腫瘍と正常の間の相違をデルタΔCtで報告した。結果正常組織に対してADAM8mRNAの増加乳腫瘍:5X乳腫瘍:1600X肺腫瘍:4.6X大腸腫瘍:3.4X大腸腫瘍辺緑:2.2X実験の他に、定量化を最初に分光光度法によっておこなった。RNA試料をTaqman商品名実験で展開し、次に希釈RNA試料を、製造者の指示に従ってRiboGreenRNA定量化キットMolecularProbesR11490を用いることで再び定量化した。蛍光プレートリーダーSepctroMaxGeminiMolecularDevicesで読み取った。分光光学的示度を用いて、試料を2.5ng/μlへ希釈した。Taqman商品名実験を展開した後、蛍光定量化法によって測定されたRNA濃度のどのような相違に対してもCt値を調整した。さらに、より正確なデータは、その他の遺伝子へ規準化することなしに得られた。これら更なる方法を用いて、上記にて報告された大腸腫瘍試料を再び展開し、幾つかの他の試料を下記に示す。正常組織に対して増加したADAM8mRNA:大腸腫瘍:10X再展開大腸腫瘍辺縁:6.8X再展開大腸腫瘍7.4X大腸腫瘍:3.5X乳腫瘍:4.8X実施例2:遺伝子増幅この実施例は、ADAM8コード化遺伝子が、或る種のヒト肺、大腸及び/又は乳癌及び/又は株化細胞のゲノムにおいて増幅されることを示す。増幅は遺伝子産物の過剰発現を伴い、ポリペプチドが大腸、肺、乳、及び他の癌等のある種の癌における治療的処置のための有用な標的であることを示している。このような治療薬は、ADAM8ポリペプチドのアンタゴニスト、例えば、ADAM8ポリペプチドに対するマウス-ヒトキメラ、ヒト化又はヒト抗体の形態をとりうる。スクリーニングの出発材料は、種々の癌より単離したゲノムDNAであった。DNAは、例えば蛍光的に,正確に定量された。負のコントロールとして、10人の正常で健康な個体からDNAを単離し、それをプールして健常個体における遺伝子コピーのアッセイ用コントロールとして用いた示されていない。或る種の癌で潜在的に増幅されている遺伝子を見出すために、5’ヌクレアーゼアッセイ例えば,TaqMan商品名及びリアルタイム定量的PCR例えば、ABIPrizm7700SequenceDetectionSystem商品名PerkinElmerAppliedBiosystemsDivisionFosterCityCAを用いた。この結果は、スクリーニングされた任意の原発肺又は大腸癌或いは癌株化細胞又は乳癌株化細胞において、ADAM8をコードするDNAが過剰表示されているか否かを決定するために用いられた。原発肺癌は、表2に示されている型及び段階の腫瘍を有する個人より得られた。原発腫瘍の命名に用いられる略記の説明は、表2に収掲され、この実施例を通して言及されている原発腫瘍及び株化細胞は、上文に提供されている。Taqman商品名の結果は、デルタΔCT単位で報告されている。1単位は、1PCRサイクル又は平常に対して約2倍増幅に相当し、2単位は4倍に相当し、3単位は8倍増幅に相当する等々である。定量化は、ADAM8コード化遺伝子から誘導したプライマー及びTaqman商品名蛍光プローブを用いて得た。独特な核酸配列を含む可能性が最も高く、イントロンのスプライスアウトを持つ可能性が最も低いADAM8の領域、例えば、3’-非翻訳領域がプライマー及びプローブ誘導に好ましい。ADAM8遺伝子増幅に用いたプライマー及びプローブの配列前方向、逆方向及びプローブは次の通りである:前方向プライマー8-2570F22merGCTCAGCCCTAGACCCTGACTT配列番号:3プローブ8-2594T32merCAGGCTCAGCTGCTGTTCTAACCTCAGTAATG配列番号:4逆方向プライマー8-2655R18merCGTGGACAGCAGGAGCCT配列番号:55’ヌクレアーゼアッセイ反応は、蛍光PCR-ベース技術であり、リアルタイムにおける増幅の監視にTaqDNAポリメラーゼ酵素の5’エキソヌクレアーゼ活性を使用する。PCR反応の典型的な単位複製配列を作製するために2つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いた。第3のオリゴヌクレオチド、又はプローブは、2つのPCRプライマー間に局在化したヌクレオチド配列の検出に用いた。プローブは、TaqDNAポリメラーゼ酵素で延長不可能であり、リポーター蛍光染料及び消光剤蛍光染料で標識される。リポーター染料からの任意のレーザー励起放出は、それらがプローブ上にあるように2つの染料が接近している場合には消光染料で消光される。増幅反応の間、プローブはTaqDNAポリメラーゼ酵素でテンプレート依存的に切断される。得られたプローブ断片は、溶液中で分解し、リポーター染料放出からのシグナルは第2のフルオロフォアの消光効果を受けない。リポーター染料の1分子が、合成された新たな分子のために遊離され、消光されないリポーター染料がデータの定量的解釈の基礎とされる。5’ヌクレアーゼ法は、ABIPrizm7700TMSequenceDetectionのようなリアルタイム定量的PCR装置で行われる。系は、温度サイクル器、レーザー、電荷結合素子CCDカメラ、及びコンピュータからなる。系は、温度サイクル器において96ウェル形式で試料を増幅する。増幅の間、レーザー励起された蛍光シグナルが、96ウェル全てについての光ファイバーケーブルを通して実時間で回収され、CCDカメラで検出される。系は、器具を作動させデータを分析するソフトウェアを備えている。5’ヌクレオチドアッセイデータは、最初にCt又は閾値サイクルとして表現される。これは、リポーターシグナルが蛍光のバックグラウンドレベルより上まで蓄積されるサイクルとして定義される。Ct値は、癌DNAの結果を正常ヒトDNAの結果と比較する場合に、核酸試料における特定標的配列の出発コピー相対数の定量的尺度として用いられる。表4は、本発明のADAM8化合物をスクリーニングするために利用した種々の原発腫瘍の段階、T段階及びN段階を記載している。原発肺癌は、表4に示された腫瘍の型及び段階にある個人より得られた。原発腫瘍の命名に用いられる略記の説明は、表4に収掲され、この実施例を通して言及されている原発腫瘍及び株化細胞は、上文に提供されている。DNA調製:DNAは培養した細胞系、原発腫瘍、正常ヒト血液から調製した。その単離は、全てQuiagenの精製キット、バッファーセット及びプロテアーゼを用い、製造者の指示と下記に従って実施した。細胞培養溶解:細胞を洗浄し、チップ当たり7.5x108の濃度でトリプシン化し、4°Cで5分間1000rpmで遠心分離してペレット化し、次いで1/2容量のPBS再遠心で洗浄した。ペレットを3回洗浄し、懸濁細胞を回収して2xPBSで洗浄した。次いで細胞を10mLのPBSに懸濁させた。バッファーC1を4°Cで平衡化させた。Quiagenプロテアーゼ19155を6.25mlの冷ddH2Oで最終濃度20mgmlまで希釈して4°Cで平衡化させた。10mLのG2バッファーを、QuiagenRNAseAストック100mg/mlを200μg/mlの最終濃度まで希釈して調製した。バッファーC110mL、4°C及びddH2O40mL、4°Cを、次いで10mlの細胞懸濁物に添加し、反転させて混合し、氷上で10分間インキュベートした。細胞核をBeckmanスイングバケットロータで4°Cにおいて2500rpmで15分間遠心分離することによりペレット化した。上清を捨て、核をボルテックスしながら2mlのバッファーC14°C及び6mlのddH2Oに懸濁し、4°Cにおいて2500rpmで15分間2回目の遠心分離をした。次いで核を残りのバッファー中にチップ当たり200μlを用いて再懸濁した。G2バッファー10mlを懸濁した核に添加しながら緩いボルテックスを適用した。バッファー添加が完了したら、強いボルテックスを30秒間適用した。Quiagenプロテアーゼ200μl、上記のように調製を添加し、50°Cで60分間インキュベートした。インキュベーション及び遠心分離を、溶解物が透明になるまで繰り返した例えば、さらに30-60分間インキュベートし、4°Cで10分間3000xgでペレット化する。固体ヒト腫瘍試料の調製及び溶解:腫瘍試料を秤量し50mlのコニカル管に配して氷上に保持した。加工は調製当たり250mgの組織未満に制限した1チップ/調製。プロテアーゼ溶液を6.25mlの冷ddH2O中に最終濃度20mg/mlまで希釈することにより新たに調製して4°Cで貯蔵した。DNAseAを最終濃度200mg/mlまで希釈することによりG2バッファー20mlを調製した100mg/mlのストックから。エアロゾルの吸入を避けるために層流TCフード内でポリトロンの大きなチップを用いて、腫瘍組織を19mlのG2バッファー中で60秒間均一化し、室温に保持した。試料間で、各々2LのddH2Oで2x30秒間、次いでG2バッファー50mlでスピンさせることによりポリトロンを清浄化した。組織がジェネレータチップ上に存在する場合は、装置を分解して清浄化した。Quiagenプロテアーゼ上記のように調製、1.0mlを添加し、次いでボルテックスして50°Cで3時間インキュベートした。インキュベーション及び遠心分離を、溶解物が透明になるまで繰り返した例えば、さらに30-60分間インキュベートし、4°Cで10分間3000xgでペレット化する。ヒト血液調製及び溶解:健常なボランティアから標準的な感染薬プロトコールを用いて血液を採りだし、チップ当たり10mlの試料にクエン酸化した。Quiagenプロテアーゼを6.25mlの冷ddH2O中に最終濃度20mg/mlまで希釈することにより新たに調製して4°Cで貯蔵した。DNAseAを100mg/mlのストックから最終濃度200mg/mlまで希釈することによりG2バッファー20mlを調製した。血液10mlを50mlのコニカル管に配し、10mlのC1バッファー及び30mlのddH2Oともに4°Cで平衡化したものを添加し、反転させて混合して氷上に10分間保持した。Beckmanスイングバケットローターで、4°Cにおいて2500rpmで15分間核をペレット化し、上清を捨てた。ボルテックスしながら、核を2mlのC1バッファー4°C及び6mlのddH2O4°C中に懸濁させた。ボルテックスはペレットが白くなるまで繰り返した。次いで核を残りのバッファー中に200μlチップを用いて懸濁させた。G2バッファー10mlを懸濁核に添加しながら緩くボルテックスし、次いで30秒間強くボルテックスした。Quiagenプロテアーゼを添加200μlし、50°Cで60分間インキュベートした。インキュベーション及び遠心分離を、溶解物が透明になるまで繰り返した例えば、さらに30-60分間インキュベートし、4°Cで10分間3000xgでペレット化する。透明化溶解物の精製:1ゲノムDNAの単離:ゲノムDNAを10mlのQBTバッファーで平衡化した最大チップ調製当たり1試料。QF溶離バッファーを50°Cで平衡化した。試料を30秒間ボルテックスし、次いで平衡化チップに負荷して重力により排液した。チップを2x15mlのQCバッファーで洗浄した。DNAを、30mlのシラン化したオートクレーブ30mlCortex管に15mlのQFバッファー50°Cで溶離した。イソプロパノール10.5mlを各試料に添加し、管をパラフィンで被覆し、DNAが沈殿するまで繰り返し反転させて混合した。試料を、SS34ロータで4°Cにおいて15,000rpmで10分間遠心分離してペレット化した。ペレット位置をマークして上清を捨て、10mlの70エタノール4°Cを添加した。試料を、SS34ロータで4°Cにおいて10,000rpmで10分間遠心分離して再度ペレット化した。ペレット位置をマークして上清を捨てた。次いで管を乾燥棚の各面に置き、37°Cで10分間乾燥させたが、使用の過剰乾燥には注意した。乾燥後、ペレットを1.0mlのTEpH8.5に溶解し、50°Cに1-2時間置いた。試料を4°Cに終夜保持して溶解を続けた。次いでDNA溶液を、ツベルクリンシリンジ上に26ゲージの針を具備する1.5ml管に移した。DNAを剪断するために移行を5x繰り返した。次いで試料を50°Cに1-2時間置いた。2ゲノムDNAの定量及び遺伝子増幅アッセイのための調製:各管のDNAレベルを1:20希釈5μlDNA95μlddH2Oでの標準的なA260、A280分光光学により、BeckmanDU640分光光度計の0.1ml石英キュベットを用いて定量した。A260/A280比率は1.8-1.9の範囲であった。次いで各DNA試料をTEpH8.5中に約200ng/mlまで希釈した。最初の材料が高濃度約700ng/μlである場合、材料を50°Cに再懸濁するまで数時間置いた。次いで、希釈した材料20-600ng/mlに対して、製造者の指示を以下のように改変して蛍光DNA定量を実施した。これは、HoefferDyNAQuant200蛍光計を約15分間暖めて実施した。Hoechst染料作業溶液H33258、10μl、使用の12時間以内に調製を100mlの1xTNEバッファーに希釈した。2mlキュベットを蛍光計溶液で満たし、機械に配し、機械をゼロ調節した。pGEM3Zf2μl、ロット360851026を2mlの蛍光計溶液に添加して200単位で校正した。次いで、さらに2μlのpGEM3ZfDNAを試験し、400/-10単位で読みを確認した。次いで各試料を少なくとも3回読んだ。3試料が互いに10以内であることが見られたとき、それらの平均をとり、この値を定量化値として用いた。次いで、蛍光測定で決定した濃度を、各試料をddH2O中に10ng/μlまで希釈するのに用いた。これは、1回のTaqManプレートアッセイについて全てのテンプレート試料について同時に行い、500-1000アッセイを実施するのに十分な材料で行った。試料は、Taqmanプライマー及びプローブで3回試験し、Bアクチン及びGAPDHともに正常なヒトDNAを持ちテンプレート対照を持たない単一のプレート上にある。希釈した試料を用いたが、試験DNAから減算した正常ヒトDNAのCT値は1CTであった。希釈した、ロット定性化したゲノムDNAを、1.0mlアリコートで-80°Cにおいて保存した。続いて遺伝し増幅アッセイに使用するアリコートは、4°Cで保存した。各1mlのアリコートは、8-9プレート又は64試験に十分である。遺伝子増幅アッセイ:下記の原発腫瘍においてADAM8遺伝子をスクリーニングし、その結果であるCt値を表5において報告する。ADAM8:種々のヒト腫瘍のCt値を表5に報告する。Ct>1は典型的に増幅評点化の閾値として用い、これは2倍の遺伝子コピーを表す。表5は、原発肺腫瘍LT11、LT13、LT15、LT17、及びLT18で生じたADAM8の有意な増幅を示す。これら原発肺腫瘍の平均Ct値は、1.12、1.43、1.68、1.59及び1.07であり、遺伝子コピーにおいて正常組織に対しては、各々約2.17、2.69、3.2、3.01及び2.1倍の増加を表す。また、ADAM8の有意な増幅が、原発大腸腫瘍CT1、CT2、CT4、CT5、CT6、CT10、CT11、及びCT12で生じたことを表5は示す。これら原発腫瘍の平均Ct値は、1.5、1.38、1.75、2.32、1.14、1.32、2.76及び1.2であり、遺伝子コピーにおいて正常組織に対しては、各々約2.83、2.6、3.36、4.99、2.2、2.5、6.77及び2.3倍の増加を表す。種々の腫瘍においてADAM8の増幅が起こるために、ADAM8は腫瘍の形成及び/又は成長に関連しているものと思われる。結果としては、ADAM8に対するアンタゴニスト例えば抗体は、癌治療において有用である。実施例3:ADAM8をコードするcDNAクローンの単離全脾臓RNAをClonetech640341より購入した。cDNA合成のための試薬をGibcoBRLSuperscriptTMPreamplificationSystem18089011より購入した。製造者の指示書に従い、RNAをオリゴdTプライムcDNAの合成に使用した。ADAM8mRNAの5’末端からの約880bpDNA断片を作製するために、このcDNA5μgをADAM8特異的プライマーとともにPCR反応で使用した。使用される特異的プライマーは、以下の通りである:h8-9FBAM前方向プライマー29merATGTGGATCCATGCGCGGCCTCGGGCTCT配列番号:9h8-913R逆方向プライマー21merCCACAGTAGTCCCGGTGAAGT配列番号:10下記のPCR反応を組み立てた:66.43μlH2O10μl10XPCRバッファーPerkinElmer6μl25mMMgCl2PerkinElmer8μldNTPMixPerkinElmer4μlDMSO0.5μlTaqGoldPerkinElmer1.73μlh8-9FBAM前方向プライマー1OD/100ml1.34μlh8-913R逆方向プライマー1OD/100ml2μlcDNA上記を参照のこと100μl総量以下のプロトコールに従ってADAM8断片を増幅するために、EricompTMTwinBlockサーモサイクラーを使用した:初期taqポリメラーゼ活性化:95°C10分間35サイクル:95°C15秒53°C30秒70°C2分最終伸張72°C20分このPCR増幅断片をConcertTMPCR精製キットGibcoBRLで洗浄し、製造者指示書に従って制限酵素BamHI及びSalINewEnglandBiolabsで消化して、1アガロースゲルFMCコーポレーション上で880bp断片を単離した。BamHI部位を前方向PCRプライマーにおいて作製したが、SalI部位はADAM8cDNA配列において生じた。生じた断片は、ConcertTMGel精製キットGibcoBRLコーポレーションを使用して洗浄した。この断片を、pRK5tkneoと呼ばれる発現ベクターへライゲーションNewEnglandBiolabsリガーゼし、さらにマルチプルクローニング部位のBamHI及びSalI部位を消化して上記と同じ方法によって精製した。形質転換は、製造者指示書に従い、StratageneSupercompetentXL1Blueを用いておこなった。生じたコロニーは、終夜に渡る5ml培養で生育させ、QiagenminiprepキットでDNAの少量調製物を作製した。クローンを確かなものにするために、公開されている配列に基づく種々の制限消化をおこなった。1つのクローンを、大規模なDNA調製のために、ConcertTMDNApreparationsystemGibcoBRLを使用して選択した。全長ADAM8cDNAのクローニング全長ADAM8クローンを全UCLAP3株化細胞RNAから得た。RNAを培養で生育させたUCLAP3細胞株から得、ペレット化し、PBSで洗浄して再び市販のキットを使用してペレット化してDNaseQiagenRNeasyキットで処理した。特に、RT-PCRキットGibcoBRLThermoscriptRTPCRSystem11146016及びADAM8mRNAに対して特異的なオリゴヌクレオチドを使用してプライムcDNAを作製した。h8-3109Rと呼ばれる,使用されたプライマーの配列:5’AGCTGACTCTCCCACATAGCCC3’配列番号:11cDNAは、製造者指示書に従い、約5μgの全RNA及び逆転写酵素のインキュベーション温度である60°Cによって作製した。PCR反応を、最終濃度が2mMのMgSO4を使用し、PlatinumTaqDNAPolymeraseHighFidelity酵素GibcoBRLでおこなった。逆方向プライマーは、cDNA反応及び前方向プライマーに関して上記に収掲されているものと同じであり、h8-9Fbamと呼ばれ,次の配列を有する:5’ATGTGGACCCATGCGCGGCCTCGGGCTCT3’配列番号:9PCR増幅サイクルパラメーターは、次の通りであった:初期変性段階として95°Cを2分間;95°Cを30秒;55°Cを30秒;68°C、3分間を40サイクル;回収するまで反応を保持するために4°Cに浸す。期待されるPCRバンドの大きさは、約3100bpで、これはゲル電気泳動によって確かめられた。PCR反応物をBamHI及びHindIII制限酵素で消化し,その結果生じた混合物をアガロースゲル電気泳動によって分離した。約3100bpのバンドをゲルから抽出し、同じようにBamHI及びHindIIIで消化したプラスミドベクターへライゲーションした。この結果生じたクローンの配列が決定され、公開されているADAM8の配列に対して幾つかの配列の違いが含まれていることが見出された。これらのクローンは、ADAM8変異体を表している可能性がある。これらのうちの二つが、アミノ酸第171のArgからGly、及びアミノ酸第223のLysからArgのアミノ酸変化を生じていた。これら配列は、標準的な分子生物学的手法を用いて、346bpのSanDI/SalI断片を消化して除き、これをADAM8クローンの5’末端の880bpからの類似の断片で置き換えることで、これらの位置が公開されていた配列を含むものに戻った。全長クローン及び880bpの5’末端クローンの双方に他の二つの相違が見出された:1公開されている配列のように、ヌクレオチド番号249GenBank配列ではD26579として測定されたは、TよりもむしろCであってアミノ酸64でGlyをコードすることが見出された、そして2ヌクレオチド番号327は、AよりもむしろCで、アミノ酸位置90でLeuよりもPheをコードすることが見出された。さらには、全長クローンのみでは、ヌクレオチド番号1263はTよりもむしろCであって、公開されている配列のようにアミノ酸位置402でArgをコードすることが見出された。また、全長クローンにおいて、配列AGAに代わって開始コドンATGが見出された。配列の決定は、市販で入手可能な蛍光標識ヌクレオチドBigDyeTerminatorCycleSequencingKitPEAppliedBiosystemsを利用するキットによっておこなわれた。実施例4:インサイツハイブリダイゼーションインサイツハイブリッド形成は、細胞又は組織調製物内での核酸配列の検出及び局在化のための強力で多用途の技術である。それは、例えば、遺伝子発現部位の同定、転写物の組織分布の分析、ウイルス感染の同定及び局在化、特定mRNA合成の追跡変化及び染色体マッピングにおける補助に有用である。インサイツハイブリッド形成は、Lu及びGillettCellVision1169176のプロトコールの最適な変形に従って、PCR生成33P標識リボプローブを用いて実施される。簡単には、ホルマリン固定、パラフィン包埋ヒト組織を切片化し、脱パラフィンし、プロテイナーゼK20gmlで15分間37°Cで脱タンパクし、さらに上掲のLu及びGillettに記載されたようにインサイツハイブリッド形成する。[33P]UTP標識アンチセンスリボプローブをPCR産物から生成し、55°Cで終夜ハイブリッド形成する。スライドをKodakNTB2核トラックエマルションに浸漬して4週間露出する。33P-リボプローブ合成6.0μl125mCiの33P-UTPAmershamBF1002SA2000Cimmolをスピード真空乾燥させた。乾燥33P-UTPを含む管に以下の成分を添加した:2.0μlの5x転写バッファー1.0μlのDTT100mM2.0μlのNTP混合物2.5mM:10μ;10mMのGTP,CTPATP10μlのH2O1.0μlのUTP50μM1.0μlのRnasin1.0μlのDNAテンプレート1μg1.0μlのH2O1.0μlのRNAポメラーゼPCR産物についてT3=AS,T7=S,通常管を37°Cで1時間インキュベートし、1.0μlのRQ1DNaseを添加し、次いで37°Cで15分間インキュベートした。90μlのTE10mMトリスpH7.6/1mMのEDTApH8.0を添加し、混合物をDE81紙にピペットした。残りの溶液をMicrocon50限外濾過ユニットに負荷し、プログラム10を用いてスピンさせた6分間。濾過ユニットを第2の管に変換し、プログラム2を用いてスピンさせた3分間。最終回収スピンの後、100μlのTEを添加した。1μlの最終生成物をDE81紙にピペットし6mlのBiofluorIIで数えた。プローブをTBE/尿素ゲル上で走らせた。1-3μlのプローブ又は5μlのRNAMrkIIIを3μlの負荷バッファーに添加した。37°Cの加熱ブロック上で3分間加熱した後、プローブを即座に氷上に置いた。ゲルのウェルをフラッシングし、試料を負荷し、180-250ボルトで45分間走らせた。ゲルをサランラップでラップし、-70°C冷凍機内で補強スクリーンを持つXARフィルムに1時間から終夜露出した。33Pハイブリダイゼーションパラフィン包埋切片の前処理スライドを脱パラフィンし、SQH2O中に配置し、2xSSCで室温において各々5分間2回すすいだ。切片を20μg/mlのプロテイナーゼK250mlのRNase無しRNaseバッファー中10mg/mlを500μl;37°C、15分間で脱タンパクした。スライブを続く0.5xSSCでリンスし、段階的なエタノール及び空気乾燥によって脱水した。プレハイブリダイゼーションスライドをBoxバッファー4xSSC、50ホルムアミド-飽和濾紙で列を作ったプラスチックボックスに並べた。組織を50μlのハイブリダイゼーションバッファー10デキストラン硫酸、50ホルムアルデヒド、1xSSCで被覆し、42°Cで1-4時間インキュベートした。ハイブリッダイゼーションスライド当たり1.0x106cpmのプローブ及び1.0μlのtRNA50mg/mlストックを95°Cで3分間加熱した。スライドを氷上で冷却し、スライド当たり48μlのハイブリッド形成バッファーを添加した。ボルテックスの後、50μlの33P混合物をスライド上のプレハイブリッド50μlに添加した。スライドを55°Cで終夜インキュベートした。洗浄洗浄は、2x10分間、2xSSC、EDTAで室温で実施し400mlの20xSSC16mlの0.25MEDTA、Vf=4L、次いでRNaseA処理を37°Cで30分間行った250mlRNaseバッファー中10mg/mlを500μl=20μg/ml。スライドを2x10分間、2xSSC、EDTAで室温において洗浄した。緊縮性洗浄条件は次の通り:55°Cで2時間、0.1xSSC、EDTA20mlの20xSSC16mlのEDTA、Vf=4L。下記は、インサイツハイブリダイゼーションのプローブとして利用するpRK5tkneoベクター内に含有されている、ADAM8配列の一部を増幅するために使用されるプライマーである。上段T7プロモーターADAM8:GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGACTCAGCCGCCAGCCTCAGC配列番号:12下段T3プロモーターADAM8:CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGAGCCGCCGTGTCCGTTGC配列番号:13製造者指示書に従い、Clonetech84171のAdvantagecDNApolymerasemixを使用してプローブを増幅した。サイクルの条件は、以下の通りである:10サイクルの:94°Cで30秒68°Cで30秒72°Cで1分15サイクルの:94°Cで30秒55°Cで30秒72°Cで1分続いて:72°Cで7分4°Cを維持組織のADAM8ADAM8は、肺扁平上皮癌の悪性上皮、肺腺癌、大腸癌腫、前立腺癌腫、乳癌腫及び炎症組織等に見出された。悪性細胞で発現があり、ある腫瘍は、腫瘍の極めて近くの間質に存在していた。種々の正常組織で、ある程度の弱いむらのある発現があった。正常組織:1.正常大腸n=2:固有層及び粘膜リンパ系濾胞でのむらがあって弱い発現から低レベル発現。2.胎児ヒト皮膚、表皮:弱いポジティブの発現。3.胎児ヒト胸腺:胸腺髄質での低レベルの拡散性発現。正常ヒト組織マイクロアレイH2000-214-1:副腎皮質H97-621及びH99-346:副腎上皮質上皮細胞でのポジティブ発現Clinomicarrayでは、正常副腎皮質は負から弱いネガティブ肺H97-621:ネガティブ胎盤H97-621:絨毛膜でポジティブ発現。小脳H97-619:ネガティブ大脳皮質H97-619:ネガティブ脳幹H97-621:ネガティブ眼HP000971及び972:ネガティブ大腸粘膜P9600313A及びH97-621及びH97-254:ネガティブ肝臓、肝細胞H97-621:ネガティブ腎皮質H97-621:ネガティブ卵巣HP001216:間質での低レベルから弱いポジティブ発現。前立腺H97-621:ネガティブリンパ節H97-621及びHP001373:弱いポジティブ発現:脾臓H97-621及びHP-001249:赤脾髄でのポジティブ発現;拡散評価のために、白脾髄は切片には存在しない。扁桃腺H99-346及びHP001366:弱い発現皮膚、真皮H97-528:ネガティブ乳、管H97-528:ネガティブ成人多組織区分KH97-066、KH97-04、misc021.脾臓の赤脾髄における低レベル拡散発現2.準急性化膿性気管支炎の肺:大気道の患部における化膿性浸潤の好中球での低レベルな特異的発現3.膵臓:銀目の凝集体のランダムパターン。4.ネガティブであった組織は、前立腺、肝臓、膵臓、正常肺2切片、胎盤、胆管及び腎臓を包含する。新生物:肺扁平上皮細胞CAn=17腫瘍1.ネガティブ。2.ネガティブ。3.悪性腫瘍の数領域に近接する反応性の線維性結合組織のむらのある領域での弱いポジティブ発現4.悪性腫瘍の数領域に近接する反応性の線維性結合組織のむらのある領域での弱いポジティブ発現、及び悪性腫瘍のある領域での弱いポジティブ発現。5.悪性腫瘍細胞94/15524E1でのむらのある弱い発現。6.高いバックグラウンド及び明確で一貫したシグナルが存在しない;低いバックグラウンドの領域ではシグナルが無く、バックグラウンドのある領域では、拡散する低シグナル5552/96。7.新生物細胞及び近傍の間質に発現がある;すべての領域に発現発現があるのではない;この腫瘍には、SCC及びアデノ成物の両方を有すると思われる5156A1。8.ネガティブ2272A2。9.SCC又はこの試料の成分では、有意な発現がない。10.SCCは、大気道に存在する。扁平上皮癌に焦点を合わせた弱から1の発現;反応性増殖及び二次卵胞形成をともなう皮質の領域性臍リンパ節での2拡散発現2641A4。大気道患部の粘膜下組織での混合リンパ節顆粒球炎症浸潤物での1。11.SCC又はこの試料の成分では、有意な発現がない4727A4/9812.扁平上皮癌には、壊死及び繊維増殖、そし近接する非腫瘍肺の領域を有する;結うな発現はない98/14964。13.この扁平上皮細胞/アデノ扁平上皮癌及び近傍の非腫瘍肺は、有意な発現を有しない98/8946。14.腫瘍には、ポジティブでむらのある低レベル発現がある。化膿性炎症である1つの気管支では、非腫瘍の正常/過形成性粘膜上皮でむらのある発現がる11046。15.有意な発現がない7915/98。16.有意な発現がない98/15715。17.有意な発現がない98/9210。肺腺癌AdCA;n=171.悪性上皮での低レベル拡散発現2484A/982.悪性上皮での弱から低レベル拡散発現96/746813.悪性上皮及び近傍の線維性間質での弱から低レベルのむらのある発現191D24.悪性上皮での中程度の拡散発現94/15851B5.ネガティブ95/55906.悪性上皮での低レベルのむらのある発現2943A3/987.ネガティブ526A48.悪性上皮でのポジティブ低レベル発現95/103021B9.この腺癌の腫瘍上皮では、ポジティブで有意な発現がある。正常な気管支での発現のレベルを評価するために十分な正常な肺が切片にはない。センスプローブはネガティブであるH97-618.1B。10.有意な発現はない3284A4/98。11.幾つかの腫瘍上皮細胞集団には、むらがあり中程度の発現があるが、腫瘍細胞は大部分がネガティブである。また、腫瘍の近傍の繊維増殖の幾つかの領域では、むらがある中程度の発現がある。腫瘍及び領域性リンパ濾胞MALTに近接して存在する炎症の領域好中球減少、リンパ組織球性は、ネガティブである8014/98。12.有意なポジティブだが、この腺癌の腫瘍性上皮ではむらのある発現。発現は、正常肺上皮には存在せず、腫瘍の線維性間質では最小である;発現は、殆ど腫瘍性上皮に限られている。ISHで検出されるような発現をすべての腫瘍が有してはいない14366。13.リンパ節、腺癌は転移する。これは、領域性リンパ節で存在する転移である;腫瘍又はリンパ節のどちらも有意な発現を有しない10509。14.この腺癌の腫瘍性上皮では、有意中程度から強いレベルな発現がある。発現は正常上皮には存在せず、腫瘍の線維性間質では最小である;発現は殆ど腫瘍性上皮に限られている95/2527。15.腫瘍性細胞には、一貫した発現はない;壊死及び分解を有する少数の病巣において、むらのある低レベルの発現が存在する。線維芽細胞のfobroplasiaの幾つかの領域において中程度の発現があり、大気道を支える軟骨に存在する軟骨細胞において中程度の発現がある。軟骨のISHシグナルは、時折、人為的硝子質マトリックスへのプローブの非特異的固着である可能性がある。;しかしながら、ここでは、発現は細胞体及び個々の軟骨細胞の核へ負担をかけ過ぎる98/10720。16.有意なポジティブ中程度だが、この腺癌の腫瘍性上皮ではむらのある発現。発現は、正常肺上皮には存在せず、腫瘍の線維性間質では最小である;発現は、殆ど腫瘍性上皮に限られている1072。17.有意な発現はない98/15029。肺腫瘍多区分:H1999-6371:9パンチ切片1.HP001217:癌腫:腫瘍細胞において強いポジティブ発現。2.HP001261:癌腫:腫瘍細胞において中程度のポジティブ発現;幾つかの線維性間質組織において低レベル発現。3.HP001263:AdCA:腫瘍細胞において中程度のポジティブ発現。4.HP001218:AdCA:腫瘍細胞において中程度のポジティブ発現:気管支上皮において発現なし。5.HP001233:拡散低レベル発現;正常気管支上皮において発現低い。6.H97-618.2D:AdCA:腫瘍細胞において中程度のポジティブ発現。7.H97-618.1D:拡散低レベル発現。8.H97-618.1C:癌腫:腫瘍細胞において中程度の発現。9.HP001297:正常:肺胞及び気管支粘膜において拡散で弱い発現。非小細胞肺癌腫.SCC:8試料のうち2つがポジティブ発現を有していた;腺癌及び大細胞癌腫:17試料のうち11が発現していた。1.不十分に分化した腺癌:ネガティブ2.混合腺扁平上皮癌の弱い発現3.腺癌:弱い発現4.不十分に分化した扁平上皮癌:ネガティブ5.大細胞未分化:ポジティブ低発現6.腺癌:ポジティブ低発現7.腺癌:ポジティブ低発現8.類表皮癌:ポジティブ低発現9.腺癌:弱い発現10.扁平上皮癌:弱い発現11.腺癌:弱い発現12.扁平上皮癌:ネガティブ13.腺癌:ポジティブ低発現14.扁平上皮癌:ポジティブ低発現15.腺癌:ポジティブ発現16.腺癌:ポジティブ発現17.気管支肺胞癌腫:ポジティブ発現18.腺癌:ポジティブ発現19.腺癌:ポジティブ発現20.腺癌:弱い発現21.腺癌:ポジティブ発現22.扁平上皮癌:ネガティブ23.扁平上皮癌:ネガティブ24.扁平上皮癌:ネガティブ25.腺癌:ポジティブ26.扁平上皮癌:ポジティブ低発現27.腺癌:ポジティブ小細胞肺癌腫8試料のうち4つが発現を有していた1.扁平上皮癌:ネガティブ2.小細胞癌腫:ネガティブ3.小細胞癌腫炎症:ポジティブ低発現4.小細胞癌腫:ネガティブ5.扁平上皮癌炎症:ポジティブ低発現6.小細胞癌腫:弱い発現7.扁平上皮癌:ポジティブ低発現8.扁平上皮癌:ポジティブ低発現インサイツの肺癌腫1.弱い発現2.弱い発現3.弱い発現4.弱い発現5.弱い発現転移性肺腫瘍1.大細胞癌腫:弱い発現2.扁平上皮癌:弱い発現3.扁平上皮癌:弱い発現4.腺癌:弱い発現5.腺癌:ポジティブ低発現6.扁平上皮癌:ネガティブ7.扁平上皮癌:弱い発現8.腺癌:ポジティブ低発現9.腺癌:弱い発現10.腺癌:ポジティブ低発現11.腺癌:ポジティブ低発現12.腺癌:ポジティブ低発現好酸球気管支炎の肺喘息n=21.HP0011911AIF984:慢性好酸球炎症喘息をともなう気管支炎:この切片は、BALT及び2門部リンパ節と関連している大気道を含む。;気道には、粘膜下組織に重い好酸球炎症がある。好酸球においては1から2の発現、リンパ節の皮質及び粘膜下組織のBALT内では1から2の発現がある。2.HP0011921CIF984:喘息、好酸球気管支炎の肺。浸潤している好酸球及びBALTのリンパ様凝集体、そして動脈周囲のリンパ球性炎症の部分には、特定の発現がある。大腸癌腫n=101.ネガティブ9729/98F2.ネガティブ7560/98F3.ネガティブ7380/914.ネガティブ9490/98H5.ネガティブ7470/98C6.ネガティブ7698/9897.ネガティブ7151/988.ネガティブ7306/98C39.悪性腫瘍に近接する炎症している間質での、むらのある弱いポジティブ;腫瘍性細胞には発現がない9153/98C。10.悪性上皮細胞での低レベルポジティブな発現6561/91大腸腫瘍の多区分N999-63613パンチ切片1.HP001277:AdCA:腫瘍性大腸粘膜細胞には、特定の中程度の発現がある;正常大腸粘膜のかなり弱い発現と同程度かそれ以下。しかしながら、白血球の固有層、特に球形の白血球/好酸球及び幾つかのリンパ球及び繊維芽細胞において中程度の明白な発現がある。2.HP001232:AdCA:発現は、殆ど固有層内の白血球;少数の腫瘍性粘膜細胞が発現する。3.HP001223:AdCA:腫瘍細胞には、発現がない;白血球の固有層及び繊維芽細胞にむらのある発現が存在する.4.HP001209:AdCA:腫瘍細胞及び固有層での低発現。5.HP001210:AdCA:腫瘍細胞での,むらのある低レベルから中程度の発現。6.HP001243:AdCA:腫瘍細胞での低発現。乳癌腫n=111.悪性上皮でのポジティブな低レベル拡散発現IF97-015371E;H97-5282.悪性腫瘍の侵入端に即近傍の間質におけるポジティブな低レベル発現;固体小結節/索状組織の腫瘍性細胞には発現がないIF96-283031B、H97-528。3.ネガティブIF97-128551C、H97-528。4.乳腺では、低レベルの特異的発現がる;腺は、多重層上皮対して単一;周辺組織は、密度の高いコラーゲン2340/98。5.この腺癌の固体小結節/索状組織では,特異的発現がある4202A2。6.覆い被さっている皮膚上皮性被覆組織には、発現がある拡散。炎症性腫瘍間質及び或る腫瘍病巣の或る腫瘍性細胞には、発現があった。後者は、低レベルで、腫瘍を通して一貫性はなかった5156A1。7.この腺癌の腫瘍細胞には、特異的発現がる。また、悪性病巣の近傍の炎症性間質の或る領域には、発現がある。比較上、存在する正常な腺は、全くないか、まれに発現がある13327/97。8.乳小葉癌。発現がない5159B1H。9.乳腺管癌。腫瘍性細胞での低レベルの拡散発現;少数の部分において、腫瘍の即近傍の間質成分線維芽細胞は、低レベルの発現を有した88A。10.乳腺癌。発現がない銀目の多巣性小凝集体がランダムパターンで存在;人為産物と解釈された9183/97。11.乳腺癌。発現がない3885B1。炎症性組織マイクロアレイH2000-294ClinomicsMicroarratリウマチ様関節炎滑膜:放射状茎状突起:滑膜でのポジティブ発現膝:副滑膜血管subsynovialvesselでのポジティブな発現;試料には、評価する滑膜がない。膝:滑膜でのポジティブな発現全身性エリテマトーデスでの腎生検1.炎症部分の間質での弱いポジティブな発現正常な腎臓1.尿細管上皮での弱いポジティブな発現2.ネガティブ3.尿細管上皮での弱いポジティブな発現甲状腺炎橋本甲状腺炎:ネガティブ慢性リンパ性甲状腺炎:ネガティブ慢性リンパ性甲状腺炎:炎症部分で弱いポジティブな発現慢性リンパ性甲状腺炎:ポジティブ橋本甲状腺炎:炎症部分で弱いポジティブな発現橋本甲状腺炎:ネガティブ病巣自己免疫甲状腺炎:ネガティブ橋本甲状腺炎:ネガティブ甲状腺好酸性細胞化生を伴う慢性甲状腺炎正常な甲状腺1.上皮で弱いポジティブな発現2.ネガティブn=3正常膵臓1.ネガティブn=4乾癬1.乾癬表皮でのポジティブな発現n=4慢性皮膚炎1.皮膚糸状菌症をともなう苔癬状慢性皮膚炎:真皮でのポジティブで低レベル発現2.非定型リンパ性皮膚炎、菌状息肉腫:感染真皮でのポジティブで中程度の発現正常皮膚1.表皮でのポジティブで低レベルの発現n=2喘息:肺喘息をともなう線維性肺胞炎:感染肺胞間質での弱い発現n=3喘息をともなう無気肺:ネガティブn=3喘息:ネガティブn=2慢性閉塞性肺疾患外因性アレルギー性肺胞炎、COPD:感染肺胞間質での弱い発現COPD及びうっ血:感染肺胞間質での弱い発現急性及び慢性うっ血及びCOPD:ネガティブCOPD:炎症性間質での弱い発現急性及び慢性胸膜炎、COPD:感染肺胞間質での弱い発現COPD:炎症性線維性組織でのポジティブで中程度の発現COPD、胸膜炎及び膿胸:炎症性線維性組織でのポジティブで中程度の発現細菌肺炎1.病巣リポイド肺炎:恐らく肺胞の炎症性間質でのポジティブで低発現2.閉塞性肺炎及びCOPD:恐らく肺胞の炎症性間質でのポジティブで中程度の発現3.肺炎、形成:ネガティブ4.リンパ系凝集体をともなう気管支肺炎:恐らく肺胞の炎症性間質でのポジティブで低発現5.急性気管支肺炎:炎症性間質でのポジティブで低発現6.黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureusでの嚥下性肺炎:炎症性間質でのポジティブで中程度の発現正常肺ネガティブn=8結核慢性間質性炎症:炎症性間質でポジティブで中程度の発現n=2扁桃腺1.95-8950:発現はなし。2.H1999-6638-31372:扁桃腺陰窩上皮細胞での1から2の発現上皮細胞及び又は浸潤単核細胞;扁桃腺の副皮質領域及び周辺帯の単核細胞で拡散的に、ほぼ樹状突起細胞のような胚中心の分散した細胞での1の発現。覆っている口腔粘膜上皮において,低レベル0から1発現がある。3.H1999-6636-31370:扁桃腺陰窩上皮細胞での2の発現上皮細胞及び又は浸潤単核細胞;ほぼ樹状突起細胞のような胚中心の分散した細胞での1の発現、扁桃腺の副皮質領域及び周辺帯の単核細胞で拡散的に1の発現。覆っている口腔粘膜上皮において,低レベル0から1発現がある。4.H1999-6637-31371:扁桃腺陰窩上皮細胞での2の発現上皮細胞及びある浸潤単核細胞;ほぼ樹状突起細胞のような胚中心の分散した細胞での1の発現、扁桃腺の副皮質領域及び周辺帯の単核細胞で拡散的に1の発現。覆っている口腔粘膜上皮において,低レベル0から1発現がある。5.H1999-6635-31369:扁桃腺陰窩上皮細胞での2の発現上皮細胞及びある浸潤単核細胞;ほぼ樹状突起細胞のような胚中心の分散した細胞での1の発現、扁桃腺の副皮質領域及び周辺帯の単核細胞で拡散的に1の発現。脾臓1.H1999-66312-31376:高いバックグラウンドは、発現の評価を妨げる;このバックグラウンドを越える特定の発現はない。2.H1999-66314-41378:赤脾髄での1の拡散発現;動脈周囲のリンパ系鞘PALSの単核細胞及び一次又は二次濾胞の周辺帯での1の発現。3.H1999-66310-31374:有意なシグナルはない。4.H1999-66313-41377:有意なシグナルはない。5.H1999-66318-31382:赤脾髄での1の拡散発現;動脈周囲のリンパ系鞘PALSの単核細胞及び一次又は二次濾胞の周辺帯での1から2の発現;二次濾胞の濾胞胚中心の1の発現。6.H1999-66311-31375:赤脾髄での1の拡散発現;動脈周囲のリンパ系鞘PALSの単核細胞及び一次又は二次濾胞の周辺帯での1の発現;二次濾胞の濾胞胚中心の発現。7.H1999-66317-31381:赤脾髄での1の拡散発現;動脈周囲のリンパ系鞘PALSの単核細胞及び一次又は二次濾胞の周辺帯での1の発現;二次濾胞の濾胞胚中心の1の発現。8.H1999-66319-31383:赤脾髄での弱から1の拡散発現;動脈周囲のリンパ系鞘PALSの単核細胞及び一次又は二次濾胞の周辺帯での1の発現;二次濾胞の濾胞胚中心の1の発現。9.H1999-66315-41379:赤脾髄での弱から1の拡散発現;動脈周囲のリンパ系鞘PALSの単核細胞及び一次又は二次濾胞の周辺帯での1の発現;二次濾胞の濾胞胚中心の1の発現。前立腺腫瘍群H2000-264;Clinomics:正常前立腺CL1999-1:粘膜が存在しない:ネガティブCL1999-2:粘膜が存在しない:ネガティブCL1999-3:前立腺粘膜上皮で低いポジティブ発現CL1999-4:前立腺粘膜上皮で低いポジティブ発現良性過形成CL1999-6:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現;基礎を成す線維状間質での弱いポジティブなシグナル。CL1999-7:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現;基礎を成す線維状間質での弱いポジティブなシグナル。CL1999-10:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現PIN:低度CL1999-11:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-12:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-13:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-14:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-15:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現PIN:高度CL1999-16:ネガティブCL1999-18:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-19:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-20:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現;基礎を成す線維状間質での弱い発現。前立腺癌CL1999-21:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-22:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-23:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-24:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-25:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-26:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-27:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-28:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-29:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-30:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-31:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-32:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-33:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-34:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-35:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-36:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-37:ネガティブCL1999-38:ネガティブCL1999-39:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-40:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-41:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-42:ネガティブCL1999-43:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-44:ネガティブCL1999-45:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-46:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-48:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-49:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-50:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-51:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-52:ネガティブCL1999-53:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-54:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-55:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-56:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-57:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-58:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-59:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-60:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-61:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-62:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-63:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-64:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-65:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-66:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-67:前立腺粘膜上皮で弱い発現CL1999-68:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-69:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-70:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現CL1999-71:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現前立腺癌:CL1999-73:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-74:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-75:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-76:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-77:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-78:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-79:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-80:前立腺上皮でポジティブ発現転移性前立腺癌:CL1999-81:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-82:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-83:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-84:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-85:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-86:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-87:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-88:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-89:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-90:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-91:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-92:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-93:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-94:前立腺上皮でポジティブ発現CL1999-95:前立腺上皮でポジティブ発現前立腺萎縮症:CL1999-99:前立腺粘膜上皮でポジティブ発現胸腺1.H97-08401:胎児胸腺年齢は特定されていないの切片;胸腺皮質に限定される特定のシグナルがある。ここのシグナルは細胞のサブセットの範囲内にあり、この領域の胸腺のリンパ球成分に対抗する延髄性胸腺上皮細胞に特異的と思われる。皮質での発現は存在しない皮質に存在する網状上皮細胞の異なる型に注意する。ヒト胎児組織14.5週1.H97-10631:EMHをともなう肝臓、腸、腹壁、膵臓、肋骨、骨格筋、腎臓を含有する腹部横切片:有意な発現はない。実施例5:ハイブリダイゼーションプローブとしてのADAM8の利用以下の方法は、ADAM8ポリペプチドをコードする核酸配列のハイブリダイゼーションプローブとしての使用を記載する。ここにおいて開示されている全長又は成熟ADAM8ポリペプチドのコード化配列を含有するDNA及び/又はその断片は、ヒト組織cDNAライブラリー又はヒト組織ゲノムライブラリーにおける同種DNAADAM8の天然発生変異体などのスクリーニングのためのプローブとして用いられる。いずれかのライブラリーDNAを含むフィルターのハイブリダイゼーション及び洗浄は、以下の高い緊縮条件で実施した。放射標識ADAM8誘導プローブのフィルターへのハイブリダイゼーションは、50ホルムアルデヒド、5xSSC、0.1SDS、0.1ピロリン酸ナトリウム、50mMリン酸ナトリウム、pH6.8、2xデンハード溶液、及び10デキストラン硫酸の溶液中で、42°Cにおいて20時間行った。フィルターの洗浄は、0.1xSSC及び0.1SDSの水溶液中、42°Cで行った。次いで、全長天然配列ADAM8をコードするDNAと所望の配列同一性を有するDNAは、この分野で知られた標準的な方法を用いて同定できる。実施例6:大腸菌でのADAM8ポリペプチドの発現この実施例は、大腸菌における組み換え発現による、ADAM8の非グリコシル化形態の調製を例示する。ADAM8ポリペプチドをコードするDNA配列は、最初に選択されたPCRプライマーを用いて増幅した。プライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位を持たなければならない。種々の発現ベクターが用いられる。好適なベクターの例は、pBR322大腸菌から誘導されたもの;BolivarらGene295であり、アンピシリン及びテトラサイクリン耐性についての遺伝子を含む。ベクターは、制限酵素で設計され、脱リン酸される。PCR増幅した配列は、次いで、ベクターに結合させる。ベクターは、好ましくは抗生物質耐性遺伝子、trpプロモーター、polyhisリーダー最初の6つのSTIIコドン、polyhis配列、及びエンテロキナーゼ切断部位を含む、ADAM8コード領域、ラムダ転写終結区、及びargU遺伝子を含む。ライゲーション混合物は、次いで、選択した大腸菌のSambrookら上掲に記載された方法を用いた形質転換に使用される。形質転換体は、それらのLBプレートで成長する能力により同定され、次いで抗生物質耐性クローンが選択されるプラスミドDNAが単離され、制限分析及びDNA配列分析で確認される。選択されたクローンは、抗生物質を添加したLBブロスなどの液体培地で終夜成長させることができる。終夜培地は、続いて大規模培地の播種に用いられる。次に細胞を最適密度で成長させ、その間に発現プロモーターが作動する。更に数時間の培養の後、細胞を採集して遠心分離した。遠心分離で得られた細胞ペレットは、この分野で知られた種々の試薬を用いて可溶化され、可溶化ADAM8タンパク質を金属キレート化カラムを用いてタンパク質を緊密に結合させる条件下で精製した。以下の手法を用いて、ポリHisポリヒスタグ形態でADAM8を大腸菌で発現させてもよい。ADAM8をコードするDNAを、選択したPCRプライマーを用いて最初に増幅した。プライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位、及び効率的で信頼性のある翻訳開始、金属キレートカラムでの迅速な精製、及びエンテロキナーゼでのタンパク質分解的除去を与える他の有用な配列を含む。次いでPCR増幅された、ポリHisタグ配列を発現ベクターに結合させ、それを株52W3110fuhAlongalErpoHtscllpPに基づく大腸菌宿主の形質転換に使用した。形質転換体は、最初に50mg/mlのカルベニシリンを含有するLB中、30°Cで振盪しながら3-5のO.D.600に達するまで成長させた。ついで培地をCRAP培地3.57gのNH42SO4、0.71gのクエン酸ナトリウム2H2O、1.07gのKCl、5.36gのDifco酵母抽出物、500mL水中の5.36gのShefieldhycaseSF、並びに110mMのMPOS、pH7.3、0.55w/vのグルコース及び7mMのMgSO4の混合で調製中に50-100倍希釈し、30°Cで振盪させながら約20-30時間成長させた。試料を取り出してSDSPAGEにより発現を確認し、バルク培地を遠心分離して細胞のペレットとした。細胞ペレットを精製及びタンパク質のリフォールディング再折りたたみまで凍結させた。0.5から1Lの発酵6-10gペレットからの大腸菌ペーストを、7Mのグアニジン、20mMのトリス、pH8バッファー中で10容量w/vで再懸濁させた。固体硫酸ナトリウム及びテトラチオン酸ナトリウムを添加して最終濃度を各々0.1M及び0.02Mとし、溶液を4°Cで終夜撹拌した。この工程により、すべてのシステイン残基が亜硫酸によりブロックされた変性タンパク質がもたらされた。溶液をBeckmanUltracentrifuge中で40,000rpmで30分間濃縮した。上清を金属キレートカラムバッファー6Mのグアニジン、20mMのトリス、pH7.4の3-5容量で希釈し、0.22ミクロンフィルターを通して濾過して透明化した。透明化抽出物を、金属キレートカラムバッファーで平衡化させた5mlのQiagenNi-NTA金属キレートカラムに負荷した。カラムを50mMのイミダゾールCalbiochemUtrolgradeを含む添加バッファー、pH74で洗浄した。タンパク質を250mMのイミダゾールを含有するバッファーで溶離した。所望のタンパク質を含有する画分をプールし、4°Cで保存した。タンパク質濃度は、そのアミノ酸配列に基づいて計算した吸光係数を用いて280nmにおけるその吸収により見積もった。試料を、20mMのトリス、pH8.6、0.3MのNaCl、2.5Mの尿素、5mMのシステイン、20mMのグリシン及び1mMのEDTAからなる新たに調製した再生バッファー中に徐々に希釈することによりタンパク質を再生させた。リフォールディング容量は、最終的なタンパク質濃度が50~100マイクログラム/mlとなるように選択した。リフォールディング溶液を4°Cで12-36時間ゆっくり撹拌した。リフォールディング反応はTFAを採取濃度0.4約3のpHで添加することにより停止させた。タンパク質をさらに精製する前に、溶液を0.2ンフィルターを通して濾過し、アセトニトリルを最終濃度2-10で添加した。再生したタンパク質を、PorosR1H逆相カラムで、0.1TFAの移動バッファーと10~80のアセトニトリル勾配での溶離を用いてクロマトグラフにかけた。A280吸収を持つ画分のアリコートをSDSポリアクリルアミドゲルで分析し、相同な再生タンパク質を含有する画分をプールした。一般的に、殆どの正しく再生したタンパク質種は、これらの種が最もコンパクトであり、その疎水性内面が逆相樹脂との相互作用から遮蔽されているので、アセトニトリルの最低濃度で溶離される。凝集した種は通常、より高いアセトニトリル濃度で溶離される。誤って再生したタンパク質を所望の形態から除くのに加えて、逆相工程は試料からエンドトキシンも除去する。所望の再生したADAM8タンパク質を含有する画分をプールし、溶液に向けた窒素の弱い気流を用いてアセトニトリルを除去した。タンパク質を、透析又は調製バッファーで平衡化したG25SuperfinePharmacia樹脂でのゲル濾過及び滅菌濾過により、0.14Mの塩化ナトリウム及び4のマンニトールを含む20mMのHepes、pH6.8に調製した。例えば、PCR反応は全長ADAM8を用いて設定され、ADAM8の5’末端クローン由来の346bpのSanDIからSalI断片をテンプレートとして含んだ.この作成物は、実施例3に記載されている。この反応のための前方向プライマー、ST239A8TCR54merは次の通りである:5’CCGAGCTCGAGCGGCCGCAGTCGATTAGCTCCCGGACGCTGCGTGCACCT3’配列番号:15前方向配列は、ADAM8の成熟配列の開始配列が後に続く5’末端へ向かって、NsiI制限部位によって設計され、アミノ酸配列:DSLPSRETR配列番号:21で構成された。逆方向プライマー配列は、NotI制限部位、終止コドン、及び膜貫通タンパク質の最初にあるADAM8末端の配列が後に続く5’末端の近傍のSstI制限部位によって設計された:TEVHAASGS配列番号:22。それ故に、発現ベクターへ挿入されたADAM8配列は、成熟した細胞外ドメインを構成する。PCR反応は、最終的に、PlatinumTaq、HFPCRバッファー、及び2mMMgSO4GibcoBRLを用いて設定された。反応物は、次のようにインキュベートされた:95°Cを2分間、次に95°C、30秒を40サイクル、55°Cを30秒、そして3分間の68°Cに続き、反応が回収されるまで4°Cで浸す。反応物をConcertrapidPCR精製カラムGibcoBRLを用いて精製し、NsiI及びSacIで消化した。また、pST239と呼ばれるベクターをNsiI及びSacIで消化した。二つの断片をゲル精製及びライゲーションし、配列が確かめられている最終構築物、pST239.ADAM8matを形成させた。ベクターpST239はpBR322から誘導され、NsiI制限部位が存在する3’末端にN末端polyhisリーダーを含む。このリーダーは、最適翻訳開始、Niキレート化カラム上での精製、及び所望するならばTAGZymeシステムUnizymeLaboratoriesHorsholnDenmarkで効率的な除去を提供する。リーダーのアミノ酸配列は次の通りである:MKHQHQHQHQHQHQMHQlonΔgalErpoHtsΔclpPlacIqΔompTΔΔslyDへ形質転換した。1つの形質転換体のルリア培地を最初に30°Cで終夜生育させ、次にリン酸制限培地で100倍に希釈してアルカリホスファターゼプロモーターを誘導した。24時間後に10°Cで振盪後、培地を遠心分離し、次に精製を開始するまでに細胞ペレットを凍結した。大腸菌ペースト6-10gmペレットを7MグアニジンHCl、2mMTris,pH8、バッファーの10容量W/Vに懸濁した。これに固体硫酸ナトリウム及び四チオン酸ナトリウムを添加し、各々の最終濃度を0.1M及び0.02Mとし、この溶液を4°Cで終夜に渡って攪拌した。この溶液を遠心分離によって浄化し、6Mグアニジン、HCl、20mMTris、pH7.4で平衡化したQiagenNiNTA金属キレートカラムに負荷した。このカラムを50mMイミダゾールCalbiochemUtrolgradeを含むさらなるバッファーで洗浄した。タンパク質は、250mMイミダゾールを含むバッファーで溶出した。この溶出液を、さらに6Mグアニジン,20mMMES、pH6.0を含むバッファー中のPharmaciaS-200ゲル濾過カラムで精製した。所望するタンパク質を含む分画をプールし、これを2M尿素、20mMグリシン、10mMDTT、50mMTris、pH7.4に対して透析して、4°Cで貯蔵した。実施例7:哺乳類細胞でのADAM8の発現この実施例は、哺乳動物細胞における組み換え発現による潜在的に非グリコシル化形態のADAM8の調製を例示する。発現ベクターとしてpRK51989年3月15日発行のEP307247参照を用いた。場合によっては、ADAM8DNAを選択した制限酵素でpRK5に結合させ、上掲のSambrookらに記載されたようなライゲーション方法を用いてADAM8DNAを挿入する。得られたベクターは、pRK5-ADAM8と呼ばれる。一実施態様では、選択された宿主細胞は293細胞とすることができる。ヒト293細胞ATCCCCL1573は、ウシ胎児血清及び場合によっては滋養成分及び/又は抗生物質を添加したDMEMなどの媒質中で組織培養プレートにおいて成長させて集密化した。約10μgのpRK5-ADAM8DNAを約1μgのVARNA遺伝子をコードするDNA[ThimmappayaらCell31543]と混合し、500μlの1mMトリスHCl、0.1mMEDTA、0.227MCaCl2に溶解させた。この混合物に、滴状の、500μlの50mMHEPESpH7.35、280mMのNaCl、1.5mMのNaPO4を添加し、25°Cで10分間沈殿物を形成させた。沈殿物を懸濁し、293細胞に加えて37°Cで約4時間定着させた。培養媒質を吸引し、2mlのPBS中20グリセロールを30秒間添加した。293細胞は、次いで血清無し媒質で洗浄し、新鮮な媒質を添加し、細胞を約5日間インキュベートした。トランスフェクションの約24時間後、培養媒質を除去し、培養媒質のみ又は200μCi/mlの35S-システイン及び200μCi/mlの35S-メチオニンを含む培養媒質で置換した。12時間のインキュベーションの後、条件媒質を回収し、スピンフィルターで濃縮し、15SDSゲルに添加した。処理したゲルを乾燥させ、Apo3リガンドポリペプチドの存在を現す選択された時間にわたってフィルムにさらした。形質転換した細胞を含む培地は、更なるインキュベーションを施し血清無し媒質、媒質を選択されたバイオアッセイで試験した。それに換わる技術において、ADAM8DNAは、SomparyacらProcNatlAcadSci127575に記載されたデキストラン硫酸法を用いて293細胞に過渡的に導入される。293細胞は、スピナーフラスコ内で最大密度まで成長させ、700μgのpRK5-ADAM8DNAを添加する。細胞は、まずスピナーフラスコから遠心分離によって濃縮してPBSで洗浄した。DNA-デキストラン沈殿物を細胞ペレット上で4時間インキュベートした。細胞を20グリセロールで90秒間処理し、組織培養媒質で洗浄し、組織培養媒質、5μg/mlウシインシュリン及び0.1μg/mlウシトランスフェリンを含むスピナーフラスコに再度導入した。約4日後に、条件媒質を遠心分離して濾過し、細胞及び細胞片を除去した。次いで、発現されたADAM8を含む試料を濃縮し、透析及び/又はカラムクロマトグラフィー等の選択した方法によって精製した。他の実施態様では、ADAM8をCHO細胞で発現させることができる。pRK5-ADAM8ベクターを、CaPO4又はDEAE-デキストランといった周知の試薬を用いてCHO細胞にトランスフェクトできる。上述したように、細胞培地をインキュベートし、次いで媒質を培養媒質のみ又は35S-メチオニンなどの放射性標識を含む媒質と置換することができる。ADAM8ポリペプチドの存在を測定した後、培養媒質を血清無し媒質に置換してもよい。好ましくは、培地を約6時間インキュベートし、次いで条件媒質を収集する。次に、発現されたADAM8を含む媒質を、選択された任意の方法によって濃縮し精製することができる。また、エピトープタグADAM8を宿主CHO細胞で発現させてもよい。ADAM8は、pRK5ベクターからサブクローニングすることができる。サブクローン挿入物は、PCRを施してバキュロウイルス発現ベクター中のポリ-hisタグのような選択したエピトープタグを持つ枠に融合させることができる。ポリ-hisタグADAM8挿入物は、次いで、安定なクローンの選択のためのDHFR等の選択マーカーを含むSV40誘導ベクターにサブクローニングすることができる。最後に、CHO細胞をSV40誘導細胞で上記のようにトランスフェクトすることができる。標識化は、上記のように、発現を検証するために施される。発現されたポリ-hisタグADAM8を含む培養媒質は、次いで、Ni2キレートアフィニティクロマトグラフィ等の選択された方法により濃縮して精製することができる。CHO細胞における安定な発現は以下の方法を用いて実施された。タンパク質は、それぞれのタンパク質の可溶化形態のコード化配列例えば、細胞外ドメインがヒンジ、CH2及びCH2ドメインを含むIgG1定常領域配列に融合したIgG作成物イムノアドヘシン、又はポリHisタグ形態として発現された。PCR増幅に続いて、各DNAを、AusubelらCurrentProtocolsofMolecularBiologyUnit316JohnWileyandSonsに記載されたような標準的技術を用いてCHO発現ベクターにサブクローニングした。CHO発現ベクターは、対象とするDNAの5’及び3’に適合する制限部位を有し、cDNAの便利なシャトル化ができるように作成される。ベクターは、LucasらNuclAcidsRes24917741779に記載されたようにCHO細胞での発現を用い、対象とするcDNA及びジヒドロフォレートレダクターゼDHFRの発現の制御にSV40初期プロモーター/エンハンサーを用いる。DHFR発現は、形質移入に続くプラスミドの安定な維持のための選択を可能にする。所望のプラスミドDNAの12マイクログラムを、市販の形質移入試薬SuperfectDosper及びFugeneBoehringerMannheim約一千万のCHO細胞に導入する。細胞は、上掲のLucasらに記載されているように成長させた。約3x10-7細胞を、下記のような更なる成長及び生産のためにアンプル中で凍結させた。プラスミドDNAを含むアンプルを水槽に配して解凍し、ボルテックスにより混合した。内容物を10mLの媒質を含む遠心管にピペットして、1000rpmで5分間遠心分離した。上清を吸引して細胞を10mLの選択培地0.2μm濾過PS20、5の0.2μm透析濾過ウシ胎児血清を添加中に懸濁させた。次いで細胞を90mLの選択培地を含む100mlスピナーに分ける。1-2日後、細胞を150mLの選択培地を満たした250mLスピナーに移し、37°Cでインキュベートする。さらに2-3日後、250mL、500mL及び2000mLのスピナーを3x105細胞/mLで播種した。細胞培地を遠心分離により新鮮培地に交換し、生産培地に再懸濁させた。任意の適切なCHO培地を用いてもよいが、実際には1992年6月16日に発行された米国特許第5122469号に記載された生産培地を使用した。3Lの生産スピナーを1.2x106細胞/mLで播種した。0日目に、細胞数とpHを測定した。1日目に、スピナーをサンプルし、濾過空気での散布を実施した。2日目に、スピナーをサンプルし、温度を33°Cに変え、500g/Lのグルコース及び0.6mLの10消泡剤例えば35ポリジメチルシロキサンエマルション、DowCorning365MedicalGradeEmulsionの30mLとした。生産を通して、pHは7.2近傍に調節し維持した。10日後、又は生存率が70を下回るまで、細胞培地を遠心分離で回収して0.22μmフィルターを通して濾過した。濾過物は、4°Cで貯蔵するか、即座に精製用カラムに充填した。ポリHisタグ作成物について、タンパク質はNiNTAカラムを用いて精製した。精製の前に、イミダゾールを条件培地に5mMの濃度まで添加した。条件培地を、0.3MのNaCl及び5mMイミダゾールを含む20mMのHepespH7.4バッファーで平衡化した6mlのNiNTAカラムに4-5ml/分の流速で4°Cにおいてポンプ供給した。充填後、カラムをさらに平衡バッファーで洗浄し、タンパク質を0.25Mイミダゾールを含む平衡バッファーで溶離した。高度に精製されたタンパク質は、続いて10mMのHepes、0.14MのNaCl及び4のマンニトール,pH6.8,を含む貯蔵バッファー中で25mlのG25SuperfinePharmaciaカラムを用いて脱塩し、-80°Cで貯蔵した。イムノアドヘシンFc含有作成物を以下のようにして条件培地から精製した。条件培地を、20mMのリン酸ナトリウムバッファーpH6.8で平衡化した5mlのプロテインAカラムPharmaciaに汲み上げた。充填後、カラムを平衡バッファーで強く洗浄した後、100mMのクエン酸pH3.5で溶離した。溶離したタンパク質は、1mlの画分を275μLの1MトリスバッファーpH9を含む管に回収することにより即座に中性化した。高度に精製されたタンパク質は、続いてポリHisタグタンパク質について上記した貯蔵バッファー中で脱塩した。均一性はSDSポリアクリルアミドゲルで試験し、エドマン分解によりN末端アミノ酸配列決定した。例えば、PCR反応を全長ADAM8クローンを用いて設定し、ADAM8の5’末端クローン由来の346bpのSanDIからSalI断片をテンプレートとして含んだ。この作成物は、実施例3に記載されている。前方向プライマーであるPRKA8Rは、次の通りである:5’GCTGCATGAATTCATGCGCGGCCTCGGGCTCTGGCTGCTGGGC3’43mer配列番号:17逆方向プライマーの配列であるPRKA8Rは、次の通りである:5’GAGTTTTGTCGGTGACCGACCCGGACGCTGCGTGCACCTCAGTCAG3’46mer配列番号:18前方向配列は、ADAM8のシグナル配列の開始配列が後に続く5’末端へ向かって、EcoRI制限部位によって設計され、アミノ酸配列:MRGLGLWLLG配列番号:19で構成された。逆方向プライマー配列は、膜貫通タンパク質の最初にあるADAM8の末端配列が後に続く5’末端の近傍のBstEII制限部位によって設計された:LTEVHAASGS配列番号:20。それ故に、発現ベクターへ挿入されたADAM8配列は、シグナル配列、プロドメイン、メタロプロテイナーゼドメイン、ディスインテグリンドメイン、システインリッチドメイン及びEGFドメインを包含する細胞外ドメインを構成する。PCR反応は、最終的に、PlatinumTaq、HFPCRバッファー、及び2mMMgSO4GibcoBRLを用いて設定された。反応物は、次のようにインキュベートされた:95°Cを2分間、次に40サイクルの95°C、30秒、55°Cを30秒、そして3分間の68°Cに続いて、反応が回収されるまで4°Cで浸す。反応物をConcertrapidPCR精製カラムGibcoBRLを用いて精製し、EcoRI及びBstEIIで消化した。また、細胞外ドメインのライゲーションがヒトIgG1Fcとの融合となるようにBstEII制限部位で設計されたヒトIgG1のFc部分を含有するpRK5ベクターを、BstEII及びEcoRIで消化した。この二つの断片をゲル精製及びライゲーションし、配列が確かめられている最終構築物、pRK.ADAM8Igを形成させた。ヒトIgG1Fcへ融合したヒトADAM8の細胞外ドメインを含有するこのプラスミドを、リン酸カルシウム法GormanCらScience221551553及びネオマイシン耐性を付与する遺伝子を含有する1μgのプラスミドとともに10μgのプラスミドを用いて293細胞GrahamFLらJGenVirol3659741977へトランスフェクションした。これらの細胞を800μg/mlのジェネテシンGibcoBRLで選択し、1XL-グルタミン酸GibcoBRL及び10FBSを補充した50:50F112:DMEMで生育させた。これらの細胞を,実施例10に記載したアッセイに用いた。組み換えタンパク質の生産を、DP12-DHFR1989年3月15日に公開のEP307247と命名されたチャイニーズハムスター卵巣CHO株化細胞を用いておこなった。これらの細胞は、懸濁培養にて早く生育することを可能にするために、安定的にDHFRプラスミドでトランスフェクションしたジヒドロ葉酸マイナスdhfrDUKXCHO宿主Urlaub及びChasinProcNatlAcadSciUSA7742161980から誘導された。次の大規模な一過性のトランスフェクション法を用いて、プラスミドpADAM8.IgGをこの株化細胞へ導入した:密度が1.5x106細胞/mlの1.95リッターのDP12-DHFR細胞を、選択生育培地米国特許5122469に記載の微量成分を含む改良HAMF12/DMEMへ播種した。DMEM及びHAM12培地の組成物としては、AmericanTypeCultureCollectionCatalogueofCellLinesandHybridomas第6版、1988、346-349ページの培養公式を参照のこと。この培地は、2mg/Lインシュリン、1ウシ胎仔血清Gibco、及び0.15g/L硫酸ゲンタマイシンで補充した。トランスフェクションをおこなう前に、細胞をこの培地で1から2時間に渡ってインキュベートした。添加物含まない1.05リッターの天然培地改良HAMSF12/DMEM、上に同じ中で、6mgのプラスミドDNAQiagenGigaprep法で精製を12mlのカチオン性脂質薬剤DMRIECと同等、LifeTechnologiesIncで混合することによってトランスフェクション複合物を作製した。トランスフェクション複合物を30-60分に渡ってインキュベートし、次に細胞と混ぜた。トランスフェクト細胞培養を三つの1L培養へ分割し、3Lの攪拌容器で37°Cにてインキュベートした。24時間目に、トランスフェクト細胞培養は、血清を除くために培地を交換し、8分間の1000rpmによる遠心分離でトランスフェクション薬剤を除いた。2mg/Lインシュリン、0.15g/L硫酸ゲンタマイシン、30g/Lグルコース及び125ml/Lの20プリマトーンP3Questを補充した生産培地米国特許5122469に記載の微量成分及びスーパーアミノ酸を含む改良HAMF12/DMEMに、トランスフェクト細胞を懸濁した。残りの生産期間の間、この細胞培養を33°Cに置いた。pHは、Na2CO3の添加によってコントロールした。7日目に培養を収集し、組み換えタンパク質をプロテインAProSepクロマトグラフィーによって精製した。3.5リッターの培養上清へ添加したのは、1mMアジ化ナトリウム、並びに後に終夜、4°Cで6mlProsepプロテインAカラムに負荷した1mMPMSFであった。このカラムは、ベースラインO.D.となるまでPBSで洗浄し、0.5MTMACを含むPBSで洗浄し、PBSで洗浄して50mMクエン酸ナトリウムpH3.0で溶出させ、直ちに1/5容量の1MHepespH7.2で中和した。次に、溶出物を終夜、PBSで透析し、無菌濾過し、4°Cで貯蔵した。産出高は、32mlx0.47mg/ml=15mg。精製の後、SDSゲルによってジスルフィド凝集が明らかになった。ジスルフィド凝集は、あるFc作成物で生じることが知られている。凝集のより少ないものを提供するものとして、一般的に上記に記載の方法を利用してバキュロウイルス又はCHOHisC末端タッグ又はCHOFlagN末端タッグ種を調製することが可能である。実施例8:酵母菌でのADAM8の発現以下の方法は、酵母菌中での所望のADAM8の組換え発現を記載する。第1に、ADH2/GAPDHプロモーターからのADAM8の細胞内生産又は分泌のための酵母菌発現ベクターを作成する。所望のADAM8をコードするDNA、選択されたシグナルペプチド及びプロモーターを、選択したプラスミドの適当な制限酵素部位に挿入してADAM8の細胞内発現を指示する。分泌のために、ADAM8をコードするDNAを、選択したプラスミドに、ADH2/GAPDHプロモーターをコードするDNA、酵母菌アルファ因子分泌シグナル/リーダー配列、及び必要ならばADAM8の発現のためのリンカー配列とともにクローニングすることができる。酵母菌株AB110等の酵母菌は、次いで上記の発現プラスミドで形質転換し、選択された発酵培地中で培養できる。形質転換した酵母菌上清は、10トリクロロ酢酸での沈降及びSDS-PAGEによる分離で分析し、次いでクマシーブルー染色でゲルの染色をすることができる。続いて組換えADAM8は、発酵培地から遠心分離により酵母菌細胞を除去し、次いで選択されたカートリッジフィルターを用いて培地を濃縮することによって単離及び精製できる。ADAM8を含む濃縮物は、選択されたカラムクロマトグラフィー樹脂を用いてさらに精製してもよい。実施例9:バキュロウイルス感染昆虫細胞でのADAM8の発現以下の方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞中での所望する組換え発現を記載する。ADAM8をコードする配列を、バキュロウイルス発現ベクターに含まれるエピトープタグの上流に融合させた。このようなエピトープタグは、ポリhisタグ及び免疫グロブリンタグIgGのFc領域などを含む。pVL1393Navogenなどの市販されているプラスミドから誘導されるプラスミドを含む種々のプラスミドを用いることができる。簡単には、ADAM8又はADAM8のコード化配列の所望の部分、例えば膜貫通タンパク質の細胞外ドメインをコードする配列、或いはタンパク質が細胞外である場合の成熟タンパク質をコードする配列が5’及び3’領域に相補的なプライマーでのPCRにより増幅される。5’プライマーは、隣接する選択された制限酵素部位を包含していてもよい。生産物は、次いで、選択された制限酵素で消化され、発現ベクターにサブクローニングされる。組換えバキュロウイルスは、上記のプラスミド及びBaculoGoldウイルスDNAPharmingenを、SpodopterafrugiperdaSf9細胞ATCCCRL1711中にリポフェクチンGIBCOBRLから市販を用いて同時形質移入することにより作成される。28°Cで4-5日インキュベートした後、放出されたウイルスを回収し、更なる増幅に用いた。ウイルス感染及びタンパク質発現は、OReilleyらBaculovirusexpressionvectorsAlaboratoryManualOxfordOxfordUniversityPressに記載されているように実施した。次に、発現されたポリhisタグADAM8は、例えばNi2-キレートアフィニティクロマトグラフィーにより次のように精製される。抽出は、RupertらNature362175179に記載されているように、ウイルス感染した組み換えSf9細胞から調製した。簡単には、Sf9細胞を洗浄し、超音波処理用バッファー25mLのHepes、pH7.9;12.5mMのMgCl2;0.1mMEDTA;10グリセロール;0.1のNP-40;0.4MのKCl中に再懸濁し、氷上で2回20秒間超音波処理した。超音波処理物を遠心分離で透明化し、上清を負荷バッファー50mMリン酸塩、300mMのNaCl、10グリセロール、pH7.8で50倍希釈し、0.45μmフィルターで濾過した。Ni2-NTAアガロースカラムQiagenから市販を5mLの総容積で調製し、25mLの水で洗浄し、25mLの負荷バッファーで平衡させた。濾過した細胞抽出物は、毎分0.5mLでカラムに負荷した。カラムを、分画回収が始まる点であるA280のベースラインまで負荷バッファーで洗浄した。次に、カラムを、結合タンパク質を非特異的に溶離する二次洗浄バッファー50mMリン酸塩;300mMのNaCl、10グリセロール、pH6.0で洗浄した。A280のベースラインに再度到達した後、カラムを二次洗浄バッファー中で0から500mMイミダゾール勾配で展開した。1mLの分画を回収し、SDSPAGE及び銀染色又はアルカリホスファターゼQiagenに複合したNi2-NTAでのウェスタンブロットで分析した。溶離したHis10-タグADAM8を含む画分をプールして負荷バッファーで透析した。あるいは、IgGタグ又はFcタグADAM8の精製は、例えば、プロテインA又はプロテインGカラムクロマトグラフィーを含む公知のクロマトグラフィー技術を用いて実施できる。PCR増幅に続いて、各コード化配列をバキュロウィルス発現ベクターIgG融合のためのpbPHIgG及びポリ-Hisタグタンパク質のためのpbPHHisc中にサブクローニングし、ベクターとBaculogold商品名バキュロウィルスDNAPharmingenを105のSpodopterafrugiperdaSf9細胞ATCCCRL1711中にリポフェクチンGibcoBRLを用いて同時形質移入した。pbPHIgG及びpbPHHisは商業的に利用できるバキュロウィルス発現ベクターpVL1393Pharmingenの改変物で、His又はFcタグ配列を含む修飾ポリリンカー領域を持つ。10FBSを補填したHinkのTNM-FH培地Hycloneで細胞を増殖させた。細胞を38°Cで5日間インキュベートした。上清を収集し、続いて10FBSを補填したHinkのTNM-FH培地中のSf9細胞を10のおよその感染効率MOIで感染させることにより最初のウィルス増幅に使用した。細胞を38°Cで3日間インキュベートした。上清を収集し、バキュロウィルス発現ベクター中における作成物の発現を、ヒスチジンタグタンパク質に対して25mLのNi-NTAビードQIAGENへ、又はIgGタグタンパク質に対してプロテインAセファロースCL-4BビードPharmaciaへ1mlの上清をバッチ結合させ、続いてSDS-PAGE分析を行って、クーマシーブルー染色により既知の濃度のタンパク質標準と比較することにより決定した。最初のウィルス増幅上清は、0.1のおよそのMOIでESF-921培地ExpressionSystemsLLC中で増殖したSf9細胞の撹拌培養500mlを感染させるために使用した。細胞を28°Cで3日間インキュベートした。上清を収集し、濾過した。撹拌培養の発現が確認されるまでバッチ結合とSDS-PAGE分析を必要に応じて繰り返した。形質移入細胞からの条件培地0.5から3Lを遠心分離により収集して細胞を除去し、0.22ミクロンフィルターで濾過した。ポリ-Hisタグ作成物に対しては、Ni-NTAカラムQiagenを使用してタンパク質作成物を精製した。精製前に、5mMの濃度まで条件培地にイミダゾールを添加した。条件培地を、4°Cで4-5ml/minの流量で20mMHepes、pH7.4、0.3MのNaClと5mMのイミダゾールを含むバッファーで平衡化した6mlのNi-NTAカラムに汲み上げた。充填後、カラムを更なる平衡化バッファーで洗浄し、タンパク質を0.25Mのイミダゾールを含む平衡化バッファーで溶出させた。高度に精製されたタンパク質は続いて25mlのG25SuperfinePharmaciaカラムで10mMHepes、0.14MのNaCl及び4のマンニトール、pH6.8を含む貯蔵バッファー中で脱塩し、-80°Cで貯蔵した。タンパク質のイムノアドヘシンFc含有作成物を次のようにして条件培地から精製した。20mMのリン酸ナトリウムバッファー、pH6.8で平衡化された5mlのプロテインAカラムPharmaciaに条件培地を汲み上げた。充填後、100mMのクエン酸、pH3.5での溶出前にカラムを平衡化バッファーで十分に平衡化した。溶出したタンパク質を、275mLの1MTrisバッファーpH9を含むチューブ中に1mlのフラクションを収集することにより即座に中和させた。高度に精製したタンパク質を上述のようにポリ-Hisタグタンパク質の貯蔵バッファー中に脱塩した。タンパク質の一様性はSDSポリアクリルアミドゲルPEG電気泳動法とエドマン分解によるN末端アミノ酸配列決定により証明した。あるいは、high5細胞を取り込んだ変更を加えたバキュロウィルスの手段を使用してもよい。この手段では所望の配列をコード化しているDNAは、適切な系、例えばPfuStratageneで増幅され、又はバキュロウィルス発現ベクターに含まれていたエピトープタグの上流5’側に融合される。そのようなエピトープタグはポリHisタグ及び免疫グロブリンタグIgGのFc領域を含む。pIE-1Novagenのような商業的に入手可能なプラスミドから得られるプラスミドを含む様々なプラスミドが利用されてもよい。pIEI-1及びpIEI-2ベクターは安定に形質転換された昆虫細胞1におけるバキュロウィルスie1プロモーターからの組み替えタンパク質の構成的な発現のために設計される。プラスミドは複数のクローン化部位の配向でのみ異なり、hr5エンハンサーエレメント並びに感染していない昆虫細胞でのie1媒介遺伝子発現に重要であることが知られているすべてのプロモーター配列を含む。pIEI-1及びpIEI-2は翻訳開始部位を含み、融合タンパク質の生産に使用される。簡単に言えば、所望の配列または配列の所望部分例えば膜貫通タンパクの細胞外ドメインをコード化する配列はPCRによって5’と3’領域に相補的なプライマーを使って増幅される。5’プライマーはフランキング選択された制限酵素部位を組み込む。次いで生成物はこれらの選択された制限酵素で消化された発現ベクター中にサブクローニングされる。例えば、pIE1-1の誘導体はヒトIgGpbPHIgGのFc領域又は所望の配列の下流3’側の8ヒスチジンpbPHHisを含む。好ましくは、ベクター作成物は確認のために配列決定される。Hi-5細胞は27°C、CO2無しの、NOpen/strepの条件下で50の集密度まで生育する。それぞれの150mmプレートに対し塩基配列を含む条件30μgのpIEベースベクターを1mlのEx-Cell培地培地:ExCell4011100LGluJRHBioscience1440178Pと混合され、分離したチューブで100μlのCellFectinCellFECTINGibcoBRL10362010ボルテックスで混合を1mlのEx-Cell培地でと混合する。2つの溶液を混ぜ合わせ、室温で15分間インキュベートする。8mlのEx-Cell培地を2mlのDNA/CellFECTIN混合物に加え、先にEx-Cell培地で洗浄しておいたhigh-5細胞上に重ねる。ついでプレートを室温で1時間暗所でインキュベートする。DNA/CellFECTIN混合物は時に吸引され、細胞は一度Ex-Cellで洗浄して過剰のCellFECTIN混合物を除去し、30mlの新鮮なEx-Cell培地を加え、28°Cで3日間インキュベートする。上清を収集し、バキュロウィルス発現ベクターでの配列の発現をヒスチジンタグタンパク質に対してはNi2-NTAビーズQIAGENの、IgGタグタンパク質に対してはプロテインAセファロースCL-4BビーズPharmaciaの25mlに対する1mlの上清をバッチ結合させ、次いでクーマーシブルー染色によりタンパク質標準の既知の濃度と比較するSDS-PAGE分析により決定する。形質移入細胞からの条件培地05~3Lを、遠心分離により細胞を除去し022ミクロンフィルターを通して濾過することにより回収する。ポリHisタグ作成物については、配列を含むタンパク質をNi2NTAカラムQiagenを用いて精製する。精製前に、イミダゾールを条件培地に5mMの濃度まで添加する。条件培地を、03MのNaCl及び5mMイミダゾールを含む20mMのHepespH74バッファーで平衡化した6mlのNi-NTAカラムに45ml/分の流速で48°Cでポンプ供給する。負荷後、カラムを更なる平衡バッファーで洗浄し、タンパク質を025Mイミダゾールを含む平衡バッファーで溶離する。高度に精製されたタンパク質は、続いて10mMのHepes、014MのNaCl及び4のマンニトールを含む貯蔵バッファーpH68中で25mlのG25SuperfinePharmaciaを用いて脱塩し、-80°Cで貯蔵する。タンパク質のイムノアドヘシンFc含有作成物を以下のようにして条件培地から精製する。条件培地を、20mMのリン酸ナトリウムバッファー、pH68で平衡化した5mlのプロテインAカラムPharmaciaに負荷する。負荷後、カラムを平衡バッファーで強く洗浄した後、100mMのクエン酸、pH35で溶離する。溶離したタンパク質は、1mlの画分を275mlの1Mトリスバッファー、pH9を含む管に回収することにより即座に中性化する。高度に精製されたタンパク質は、続いてポリHisタグタンパク質について上記した貯蔵バッファー中で脱塩する。タンパク質の均一性はSDSポリアクリルアミドゲルとエドマン分解によるN末端アミノ酸配列決定及び所望又は必要に応じて他の分析手段により評価される。実施例10:ADAM8に結合する抗体の調製この実施例は、PROに特異的に結合できるモノクローナル抗体の調製を例示する。モノクローナル抗体の生産のための技術は、この分野で知られており、例えば、上掲のGodingに記載されている。用いられ得る免疫原は、精製ADAM8、ADAM8を含む融合タンパク質、細胞表面に組換えADAM8を発現する細胞を含む。免疫原の選択は、当業者が過度の実験をすることなくなすことができる。例えば、ヒトADAM8は、大腸菌内のエピトープタグポリHQのN末端で生産され、標準的方法によって20mMグリシン、2M尿素及び10mMジチオスレイトール、pH7.4を含有する50mMTrisで製剤化された。また、同一のエピトープタグで生産された組み換え体とは関連性のないヒトタンパク質アルテミンを、タッグを認識する抗体に対するスクリーニングのために生産した。例えば、ポリHis6、ポリHis8等のどの適切なエピトープ、及びどの適切なタッグタンパク質、又はエピトープタッグのみを、タッグを認識する抗体を除くためのスクリーニングに用いることができる。Balb/c等のマウスを、完全フロイントアジュバントに乳化して皮下又は腹腔内に1100マイクログラムで注入したADAM8免疫原で免疫化する。あるいは、免疫原をMPL-TDMアジュバントRibiImmunochemicalResearhHamiltonMTに乳化し、動物の後足蹠に注入してもよい。免疫化したマウスは、次いで10から12日後に、選択したアジュバント中に乳化した付加的免疫源で追加免疫する。その後、数週間、マウスをさらなる免疫化注射で追加免疫する。抗ADAM8抗体の検出のためのELISAアッセイで試験するために、レトロオービタル出血からの血清試料をマウスから周期的に採取してもよい。適当な抗体力価が検出された後、抗体にポジティブ陽性な動物に、ADAM8の静脈内注射の最後の注入をすることができる。3から4日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を取り出した。次いで脾臓細胞を35ポリエチレングリコールを用いて、ATCCから番号CRL1597で入手可能なP3X63AgU.1等の選択されたマウス骨髄腫株化細胞に融合させた。融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、次いで、HATヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン培地を含む96ウェル組織培養プレートに蒔き、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、及び脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害した。ハイブリドーマ細胞は、ADAM8に対する反応性についてのELISAでスクリーニングされる。ADAM8に対する所望のモノクローナル抗体を分泌するポジティブ陽性ハイブリドーマ細胞の決定は、技術常識の範囲内である。陽性ハイブリドーマ細胞を同系のBalb/cマウスに腹腔内注入し、抗ADAM8モノクローナル抗体を含む腹水を生成させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコ又はローラーボトルで成長させることもできる。腹水中に生成されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈降、それに続くゲル排除クロマトグラフィ-を用いて行うことができる。あるいは、抗体のプロテインA又はプロテインGへの親和性に基づくアフィニティクロマトグラフィーを用いることもできる。抗ADAM8モノクローナル抗体の開発10匹のBALB/cマウスCharlesRiverLaboratoriesWilmingtonDEをRiBiアジュバントRibiImmunochemResearchIncIncHamiltonMT中の精製ヒトADAM8で過免疫した。最も高い抗ADAM8抗体力価を示した5匹のマウス由来のBリンパ球を膝窩及び鼠径部のリンパ節より収集し、前出に示したようにKohlerら1975、マウスメラノーマ細胞X63Ag8653;AmeericanTypeCultureCollectionRockvilleMDと融合させた。8-14日後、上澄みを収集し、直接酵素結合免疫吸着検定法ELISAによって抗体生産についてスクリーニングした。最も高いADAM8特異性免疫結合を示した67のポジティブクローンについて、さらに免疫細胞化学的分析をおこなった。限界希釈法によって、23のポジティブクローンをサブクローニングした。2回目のサブクローニングの後、MAbのインビボ生産のために、選択した系統をプリスタンで初回抗原刺激を受けたマウスPristaneprimedmiceFreund及びBlair1982へ注入した。生じた腹水をプールし、前出に記載したように、プロテインAアフィニティークロマトグラフィーPharmaciafastproteinliquidchromatographyFPLC;PharmaciaUppsalaSwedenによって精製したHongoら1995。精製抗体調製物を無菌濾過0.2μm孔径;NalgeneRochesterNYし、リン酸緩衝食塩水PBSにて4°Cで貯蔵した。抗ADAM8分泌ハイブリドーマの選択のための直接ELISAマイクロタイタープレートNUNCを、100μl/ウェルの0.05M炭酸バッファー、pH9.6中の関連性のないポリHQタッグタンパク質1μg/ml又はヒトADAM8のどちらかで終夜、4°Cでコーティングした。アッセイの残りの部分は、前出に記載したようにおこなったHongoら1995。アイソタイピング抗体のアイソタイプを、市販で入手可能なアイソタイピングキットMouseAntibodyIsotypingKitdipstickformat;GibcoBRLLifeTechnologiesGaithersburgMDを用いて決定した。固定細胞へ結合する、抗ADAM8分泌ハイブリドーマのスクリーニング免疫組織化学的実験において固定化された細胞へ結合する抗ADAM8分泌ハイブリドーマを選択するために、ADAM8Ig融合物をコードする発現ベクターでトランスフェクトした固定化細胞に対するハイブリドーマをスクリーニングするようにアッセイを開発した。ヒト腎臓細胞293細胞をADAM8Ig発現ベクター、並びにネオマイシン耐性を付与するタンパク質をコードする遺伝子を発現するプラスミドであるpRSVneoでトランスフェクションした。トランスフェクト細胞を、特にADAM8を発現する細胞を選択するために、800μg/mlのジェネテシンGibcoBRLで選択した。10FBS及び1XL-グルタミン酸GiboBRLで補充したDMEM:F12の50:50の混合培地で、細胞を生育させた。これらの細胞を、約50の集密で、2.5μg/cm2のポリ-D-リジンでコーティングした6ウェル組織培養プレートCostarへプレートした。翌日、培地を吸引して取り除き、細胞をPBS2mlで2回洗浄した。この細胞を、2分間に渡って、氷冷メタノールで固定化した他の固定液を用いてもよい、例えば50:50のメタノール:アセトン、エタノール、又は10中性ホルマリン。この細胞を、洗浄バッファー10FBSを含むPBSで2回洗浄した。一次抗体を10FBSを加えたPBSへ添加し、ウェルへ塗布した。この場合、試験された一次抗体は、1mlにおいて1:10に希釈された分泌ハイブリドーマであった。インキュベーションは、室温で約2.5時間に渡って、極めて温和な回転でおこなった。この細胞を洗浄バッファーで5回洗浄し、二次抗体を適用した。この場合、抗体は、ヤギ抗マウスIgGで、Fc特異性、HRPで共役SigmaA0168されており、10FBSを含むPBSで1:5000に希釈されていた。インキュベーションは、再び、室温で約2.5時間に渡って、極めて温和な回転でおこなった。2mlのPBSで希釈したo-ジアニシジン飽和エタノール50mlPBS、0.5mlo-ジアニシジン飽和エタノール、5μlH2O2を適用する前に、細胞を洗浄バッファーで5回洗浄した。色の展開は、約1時間に渡って室温でおこなった。細胞をH2Oで2回洗浄し、プレートを4°Cで貯蔵した。細胞を染色の程度によって記録したなし、弱い、中程度、強い。ADAM8Igへ結合する、抗ADAM8分泌ハイブリドーマのスクリーニング更に、抗ADAM8分泌ハイブリドーマを評価するために、哺乳動物細胞でIg融合タンパク質として作製したADAM8を用いて、上澄み液をELISAでスクリーニングした。96ウェルマイクロタイタープレートNuncMaxisorbを4°Cで終夜に渡って2μg/mlのヤギ抗ヒトFcCaltagH10700でコーティングした。このプレートは、洗浄バッファー0.05Tween20を加えたPBSで3回洗浄した。プレートを室温で1時間に渡って1BSAのPBS150μlでブロックした。このプレートを洗浄バッファーで3回洗浄した。ADAM8IgpRK.ADAM8Igを発現するCHO細胞作成物での大規模な過度トランスフェクションによる上澄み液を、0.3BSAのPBSで1:9に希釈して約500ng/mlとした。希釈上澄み液50μlをプレートへ塗り付け、室温で2時間に渡ってインキュベートした。このプレートを洗浄バッファーで3回洗浄した。抗ADAM8分泌ハイブリドーマの上澄み液をプレート50μlへしっかりと塗り付け、室温で2時間に渡ってインキュベートした。プレートを洗浄バッファーで3回洗浄し、ヤギ抗マウスIgG、Fc特異的、HRP共役抗体SigmaA0168を1:5000に希釈した0.3BSAを添加したPBSを室温で1時間渡って塗り付けた。プレートを洗浄バッファーで3回洗浄し、着色を100μlTMBパーオキシダーゼ基質/H2O2Kirkegaard及びPerryLaboratoriesで10分間に渡っておこなった。反応は、100μlの1Mリン酸で止めた。プレートの読みとりは、450nmの波長でマイクロプレートリーダー上でおこなった。融合により、10の96ウェルプレートをクローンでプレートした。元の免疫原によるELISAではポジティブであって、関連性のないタッグタンパク質によるELISAではネガティブであった67のクローンを得た。これら67のクローンのうち、33のクローンはpRK.ADAM8Ig一過性トランスフェクトCHO細胞の上澄みによるELISAでポジティブであった。メタノール固定細胞に対するスクリーニングにおいて、23のクローンがADAM8への結合に関してはポジティブであった。これら23のクローンはサブクローンニングされた。また、10ホルマリンで固定された細胞に対するスクリーニングにおいて、これら23のクローンのうちの1つがADAM8との結合に関してポジティブであった。メタノール又はホルマリンで固定された細胞へ結合する抗体は、試料組織におけるADAM8の発現及びその程度を分析するための標準的な免疫組織化学実験において特に有用である。生存細胞の表面のADAM8及び固定された細胞のADAM8を認識して結合する抗体は、例えばホルマリンで細胞を固定化することが抗原構造を改変するので、特に興味あるものである。これら抗体は、細胞/組織が固定された場合に保持されるADAM8上のエピトープを認識するの可能性がある。このような抗体は、診断試薬及び治療用抗体として臨床的に用いられることが可能である。上文の明細書は、当業者によって本発明を実施するためには十分であると考えられる。実際に、ここにおいて記載の内容に加えて本発明の種々の改良は、上文の説明からは当業者にとって明かなものであり、捕捉請求項の範囲内におさまるものである。実施態様1.ADAM8ポリペプチドへ結合する単離された抗体。2.前記ポリペプチドへ特異的に結合する、請求項1の抗体。3.前記ポリペプチドを発現する細胞の死を誘導する、請求項1の抗体。4.前記細胞が正常細胞の同型組織と比較して前記ポリペプチドを過剰発現する、請求項3の抗体。5.モノクローナル抗体である、請求項1の抗体。6.非ヒト相補性決定領域CDR又はヒトフレームワーク領域FRを含む、請求項5の抗体。7.標識化された請求項1の抗体。8.固体支持体に固定化された、請求項1の抗体。9.抗体断片又は一本鎖抗体である、請求項1の抗体。10.製薬的に許容可能な担体と混合した請求項1の抗体を含んでなる製造品。11.前記抗体の治療的有効量を含む、請求項10の製造品。12.細胞傷害又は化学療法剤をさらに含んでなる、請求項10の製造品。13.無菌である、請求項10の製造品。14.請求項1の抗体をコードする、単離された核酸。15.請求項14の核酸分子を含んでなるベクター。16.請求項15のベクターを含んでなる宿主細胞。17.細胞培養からADAM8ポリペプチドへ結合する抗体の発現及びその抗体を回収するを可能にする十分な条件下で請求項16の宿主細胞を培養することを含んでなる方法である、前記ポリペプチドへ結合する抗体を生産する方法。18.ADAM8ポリペプチドのアンタゴニスト。19.ADAM8ポリペプチドをコードする核酸配列の補体とハイブリッド形成する単離された核酸分子。20.ADAM8ポリペプチドを含有すると思われる試料を抗ADAM8抗体へ曝露し、その試料中でのADAM8ポリペプチドへの抗ADAM8抗体の結合を確かめる、前記ポリペプチドを含有すると思われる試料での前記ポリペプチドの存在を確かめる方法。21.前記試料がADAM8ポリペプチドを含んでなると思われる細胞を含む、請求項20の方法。22.a哺乳類から得られた組織細胞の試験試料、及びb同じ細胞型の既知の正常組織細胞のコントロール試料からADAM8ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを検出することを含んでなり、試験試料中でのより高い発現レベルが試験組織細胞が得られた哺乳類での腫瘍の存在を示す、哺乳類の腫瘍を診断する前記方法。23.a哺乳類から得られた組織細胞の試験試料と抗ADANM8抗体を接触させること、及びb試験試料中の抗ADAM8抗体及びADAM8ポリペプチド間の複合体の形成を検出することを含んでなり、複合体の形成が組織細胞の試験試料を得た前記哺乳類での腫瘍の存在を示す、哺乳類の腫瘍を診断する方法。24.前記抗体が検出可能に標識化されている、請求項23の方法。25.組織細胞の前記試験試料が新生物の成長又は増殖を有すると思われる個人から得られる、請求項23の方法。26.抗ADAM8抗体及び適切な包装の担体を含んでなる、癌診断キット。27.ADAM8ポリペプチドを含有すると思われる試料にADAM8ポリペプチドの存在を検出するための前記抗体を使用するための指示書をさらに含む請求項26のキット。28.ADAM8ポリペプチドを発現する腫瘍細胞へADAM8ポリペプチドの活性を阻害する薬剤の有効量を曝露することを含んでなり、前記腫瘍細胞の成長が阻害される、腫瘍細胞の成長を阻害する方法。29.同じ組織型の正常細胞と比較し、前記腫瘍細胞が前記ポリペプチドを過剰発現する、請求項28の方法。30.前記薬剤が抗ADAM8抗体である、請求項28の方法。31.前記抗ADAM8抗体が細胞死を誘発する、請求項30の方法。32.前記腫瘍細胞をさらに放射線処理、細胞傷害性剤又は化学療法剤へ曝露する、請求項28の方法。33.ADAM8ポリペプチドを発現する腫瘍細胞へADAM8ポリペプチドの発現を阻害する薬剤の有効量を曝露することを含んでなり、これにより前記腫瘍細胞の増殖が阻害される、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法。34.同じ組織型の正常細胞と比較し、前記腫瘍細胞が前記ポリペプチドを過剰発現する、請求項33の方法。35.前記薬剤がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項33の方法。36.前記腫瘍細胞をさらに放射線処理、細胞傷害性剤又は化学療法剤へ曝露する、請求項35の方法。37.組成物が腫瘍細胞の増殖の阻害に効果的であり、正常細胞の同じ組織型と比較し、前記腫瘍細胞のADAM8ポリペプチドの過剰発現によって特徴付けられる症状を治療するために組成物が効果的であることを容器上の標識が示す、容器、容器上の標識、及び容器に含有される活性剤を含んでなる組成物を含んでなる製造品。38.前記活性剤が前記ADAM8ポリペプチドの発現及び/又は活性を阻害する、請求項37の製造品。39.前記活性剤が抗ADAM8抗体である、請求項38の製造品。40.前記活性剤がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項38の製造品。41.候補化合物をADAM8ポリペプチドと相互作用することができる十分な条件下及び時間に渡って接触させること、並びに前記ADAM8ポリペプチドの活性が阻害されているか否かを確定することを含んでなる、ADAM8の活性を阻害する化合物を同定する方法。42.前記候補化合物が抗ADAM8抗体である、請求項41の方法。43.前記化合物又は前記ADAM8ポリペプチドが固体支持体へ固定化されている、請求項41の方法。44.非固定化成分が検出可能に標識化されている、請求項43の方法。45.a通常はADAM8ポリペプチドによって誘導される細胞応答の誘発に適した条件下のADAM8の存在において、スクリーングされる候補化合物と細胞を接触させること、及びb試験化合物が効果的なアンタゴニストであるか否かを確定するために前記細胞応答の誘導を確定することの段階を含んでなる、ADAM8ポリペプチドの活性を阻害する化合物を同定する方法。46.ADAM8ポリペプチドを発現する細胞と候補化合物を接触させること、並びに前記ADAM8ポリペプチドの発現が阻害されているか否かを確定することを含む方法である、前記ポリペプチドを発現する細胞において前記ポリペプチドの発現を阻害する化合物を同定する方法。47.前記候補化合物がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項46の方法。"