"式、EEXEEZを有する配列からなるRHAMM結合ペプチドであって、ここでXがアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zがチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とするRHAMM結合ペプチド。SEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列からなることを特徴とするRHAMM結合ペプチド。前記RHAMM結合ペプチドが、SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO11、SEQIDNO12およびSEQIDNO14から選択されるものである請求項2に記載のRHAMM結合ペプチド。前記RHAMM結合ペプチドが、SEQIDNO1、SEQIDNO9およびSEQIDNO14から選択されるものである請求項2に記載のRHAMM結合ペプチド。チューブリン由来ペプチドであって、単離されたチューブリン由来ペプチドがRHAMMを結合することができるもの。前記チューブリン由来ペプチドがSEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列からなる請求項5に記載のチューブリン由来ペプチド。前記チューブリン由来ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXがアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zがチロシン又はグルタミン酸から選択されるものである請求項5に記載のチューブリン由来ペプチド。請求項1、2、3、4、5、6又は7のいずれか1項に記載のペプチドの機能性類似化合物。請求項2に記載のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸。前記RHAMM結合ペプチドが検出可能なラベルと共役していることを特徴とする請求項1~7のいずれかのRHAMM結合ペプチド又は請求項8に記載の機能性類似化合物。前記の検出可能なラベルがビオチンベースのラベル、磁気ラベル、放射性ラベル、フルオレセインラベル、エレクトロデンスelectrodense試薬、酵素、ジゴキシゲニンdigoxigenin又はハプテンhaptensから選択されるものである請求項10に記載のRHAMM結合ペプチド。前記RHAMM結合ペプチドが細胞毒性分子又は放射性分子に共役していることを特徴とする請求項1ないし9のいずれか1項に記載のRHAMM結合ペプチド。請求項1又は2に記載のペプチドの1又はそれ以上、又は請求項9に記載の核酸の有効量と、薬理学的に許容し得るキャリアとからなることを特徴とする薬剤組成物。前記組成物が更に佐剤を含有する請求項13に記載の薬剤組成物。前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド又は核酸が、リポソーム、イムノリポソーム又は脂質製剤内に提供されていることを特徴とする請求項13に記載の薬剤組成物。RHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなることを特徴とするプローブ。前記の検出可能なラベルがビオチンベースのラベル、磁気ラベル、放射性ラベル、フルオレセインラベル、エレクトロデンスelectrodense試薬、酵素、ジゴキシゲニンdigoxigenin又はハプテンhaptensから選択されるものであることを特徴とする請求項16に記載のプローブ。前記のRHAMM結合ペプチドが検出可能なラベルと共役していることを特徴とする請求項16に記載のプローブ。前記RHAMM結合ペプチドが、式、EEXEEZを有する配列からなるここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものことを特徴とする請求項16、17又は18のいずれか1項に記載のプローブ。前記RHAMM結合ペプチドが、SEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列からなることを特徴とする請求項16、17又は18のいずれか1項に記載のプローブ。プローブがRHAMMを発現する細胞を研究するために使用される請求項16ないし18のいずれか1項に記載のプローブ。前記プローブがSEQIDNOs2527293133および35から選択されるものである請求項16記載のプローブ。前記RHAMM結合ペプチドがGaDOTAラベル又はRe3ラベルに共役していることを特徴とする請求項16に記載のプローブ。被験者の組織又は器官内のRHAMM発現を画像化する方法であって、その方法が、請求項16に記載の前記プローブを前記被験者に投与すること;前記被験者の前記組織又は器官内のラベルを検出するための画像化技法を適用することからなることを特徴とする方法。前記検出可能なラベルが放射性核種であり、前記技法がSPECT、CTおよびPETからなる群から選択されるものである請求項24に記載の方法。前記プローブが静脈内、筋肉内、皮下、腹膜内、経口又は鼻腔投与により被験者に前記移送される請求項24に記載の方法。前記プローブが関連する前記組織又は器官内にインプラントされる請求項24に記載の方法。前期被験者がヒトである請求項24に記載の方法。前記RHAMM結合ペプチドが、式、EEXEEZを有する配列からなるここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるもの請求項24、25、26、27又は28のいずれか1項に記載の方法。前記RHAMM結合ペプチドが、SEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列からなる請求項24、25、26、27又は28のいずれか1項に記載の方法。細胞内のRHAMMの存在を判定する方法であって、請求項16に記載のプローブを細胞に接触させ、ついで前記細胞内の前記ラベルを検出するための前記画像化技法を適用することからなり、ここで、細胞内のラベルの検出は前記細胞内のRHAMMの存在を示唆するものであることを特徴とする方法。被験者の腫瘍前駆細胞を画像化する方法であって、請求項16に記載のプローブを該被験者に投与すること、該被験者内の前記ラベルを検出するための前記画像化技法を適用することからなり、ここで、前記被験者内のラベルの検出は被験者における腫瘍前駆細胞の存在を示唆するものであることを特徴とする方法。動物の細胞、組織又は器官の腫瘍前駆細胞を画像化する方法であって、請求項16に記載のプローブを前記細胞、組織又は器官と接触させること、前記細胞、組織又は器官内のラベルを検出するための前記画像化技法を適用することからなり、ここで、前記細胞、組織又は器官内のラベルの検出は前記細胞、組織又は器官における腫瘍前駆細胞の存在を示唆するものであることを特徴とする方法。ガン患者についての予後を判定する方法であって、前記患者から腫瘍組織のサンプルを得ること;請求項16に記載のプローブを前記サンプルと接触させること;前記サンプル内のラベルを検出するための前記画像化技法を適用すること;前記患者についての予後を判定すること、からなり、ここで前記予後が前記患者の前記ガンの攻撃性又は転移性の見込みを予測するものであり、前記サンプル内のRHAMM発現の検出が良くない予後を示唆するものであることを特徴とする方法。ガン患者についての治療方針を判定する方法であって、前記患者から腫瘍組織のサンプルを得ること;請求項16のプローブを前記サンプルと接触させること;前記サンプル内の前記ラベルを検出するための画像化技法を適用すること;前記患者についての予後を判定すること、からなり、ここで前記予後が前記患者の前記ガンの攻撃性の見込みを予測するものであり、前記サンプル内のRHAMM発現の前記検出が良くない予後を示唆するものであり、この予後に基づいて前記患者についての治療方針を指示することを特徴とする方法。細胞内のRHAMM発現と関連する病気又は症状を有する患者を診断する方法であって、前記患者から組織のサンプルを得ること;請求項16に記載のプローブを前記サンプルと接触させること;前記サンプル内の前記ラベルを検出するための前記画像化技法を適用すること、からなり、ここで前記サンプル内のRHAMM発現の検出が前記病気又は症状の確定診断を示唆するものであることを特徴とする方法。前記病気又は症状がガンである請求項35に記載の方法。前記RHAMM結合ペプチドが、式、EEXEEZを有する配列からなるここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるもの請求項31、32、33、34、35又は36のいずれか1項に記載の方法。前記RHAMM結合ペプチドが、SEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列からなる請求項31、32、33、34、35又は36のいずれか1項に記載の方法。細胞内のRHAMM発現と関連する病気又は症状を患っている患者を治療する方法であって、前記患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量と、薬理学的に許容し得るキャリアとからなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする方法。細胞内のRHAMM発現と関連する病気又は症状を患っている患者を治療する方法であって、前記患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は前記1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量と、薬理学的に許容し得るキャリアとからなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする方法。前記組成物が1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドの有効量を具備してなり、該1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが、RHAMMを発現する細胞に対し細胞毒性であり得る分子に共役している請求項40又は41に記載の方法。前記病気又は症状がガンである請求項40又は41に記載の方法。前記方法が更に従来のガン療法を併用する請求項43に記載の方法。前記ガン療法がガンワクチン、化学療法、免疫療法、放射線療法又はこれらの組合せから選択されるものである請求項44に記載の方法。前記病気又は症状の治療が組織の傷痕化を防止すること又は減少させる請求項40又は41に記載の方法。RHAMMを発現する細胞の増殖を抑制する方法であって、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、前記細胞に接触させることからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXがアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zがチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする方法。RHAMMを発現する細胞の増殖を抑制する方法であって、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、細胞に接触させることからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする方法。RHAMMを発現する細胞の運動性を抑制する方法であって、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、前記細胞に接触させることからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする方法。RHAMMを発現する細胞の運動性を抑制する方法であって、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子を含有してなる組成物の有効量を、前記細胞に接触させることからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする方法。RHAMMを発現する細胞はガン細胞である請求項47、48、49又は50に記載の方法。ガンを有する患者における転移を防止する方法であって、前記患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子を含有してなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする方法。ガンを有する患者における転移を防止する方法であって、前記患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子を含有してなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで前記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする方法。RHAMM発現と関連する病気又は症状の治療、改善又は予防におけるRHAMM結合ペプチドの使用であって、前記のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする使用。RHAMM発現と関連する病気又は症状の治療、改善又は予防におけるRHAMM結合ペプチド又は該RHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の使用であって、ここで前記のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする使用。前記病気又は症状が組織の傷痕化である請求項54又は55に記載の使用。前記病気又は症状がガンである請求項54又は55に記載の使用。SEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される配列を有することを特徴とする単離ペプチド。請求項58に記載のペプチドを符号化する単離DNA分子。本発明はRHAMMに対し結合し得る新規なペプチドを発見することである。すなわち、1態様として、本発明は、少なくとも以下のアミノ酸配列:SEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列からなる単離されたペプチドを提供するものである。他の形態として、本発明は分離されたDNAを提供するものであり、このDNAはSEQIDNO1~SEQIDNO17に従ってペプチドを符号化する核酸配列からなる。本発明は更に、RHAMMに対し特異性および親和性を以って結合するペプチドの発見に関するものであり、ここで、このペプチドはチューブリンから得られるものである。1形態として、本発明のRHAMM結合ペプチドはチューブリンのカルボキシ末端尾部から得られるものである。1態様として、本発明はRHAMM結合ペプチドを提供するものであり、ここで、このRHAMM結合ペプチドはSEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸配列からなる。他の態様として、本発明はRHAMM結合ペプチドを提供するものであり、このRHAMM結合ペプチドが、式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXは、アラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zは、チロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする。他の態様として、本発明は薬剤組成物を提供するものであり、これは本発明のRHAMM結合ペプチドの1又は2種類以上の有効量と、薬理学的に許容し得るキャリアとを具備してなることを特徴とする。他の態様として、本発明はプローブを提供するものであり、これは本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなる。更に1つの態様として、本発明は被験者の組織又は器官においてRHAMM発現を画像化する方法を提供するものであり、その方法は、本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなるプローブを投与すること;被験者の組織又は器官内のラベルを検出するための画像化技法を適用することからなることを特徴とする。他の態様として、細胞内のRHAMMの存在を判定する方法が提供され、これは本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなるプローブを、細胞に接触させ、ついで細胞内のラベルを検出するための画像化技法を適用することからなり、ここで、細胞内のラベルの検出は細胞内のRHAMMの存在を示唆するものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明は被験者subjectの腫瘍前駆細胞を画像化する方法を提供するものであり、その方法は、本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなるプローブを被験者に投与すること、被験者内のラベルを検出するための画像化技法を適用することからなり、ここで、被験者内のラベルの検出は被験者における腫瘍前駆細胞の存在を示唆するものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明は動物の細胞、組織又は器官の腫瘍前駆細胞を画像化する方法を提供するものであり、その方法は、本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなるプローブを上記細胞、組織又は器官と接触させること、上記細胞、組織又は器官内のラベルを検出するための画像化技法を適用することからなり、ここで、上記細胞、組織又は器官内のラベルの検出は上記細胞、組織又は器官における腫瘍前駆細胞の存在を示唆するものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明はガン患者についての予後prognosisを判定する方法を提供するものであり、その方法は、患者から腫瘍組織のサンプルを得ること;本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなるプローブを上記サンプルと接触させること;上記サンプル内のラベルを検出するための画像化技法を適用すること;患者についての予後を判定すること、からなり、ここで上記予後が患者のガンの攻撃性又は転移性の見込みを予測させるものであり、上記サンプル内のRHAMM発現の検出が良くない予後を示唆するものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明はガン患者についての治療treatment方針を判定する方法を提供するものであり、その方法は、患者から腫瘍組織のサンプルを得ること;本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなるプローブを上記サンプルと接触させること;上記サンプル内のラベルを検出するための画像化技法を適用すること;患者についての予後を判定すること;からなり、ここで上記予後が患者のガンの攻撃性の見込みを予測するものであり、上記サンプル内のRHAMM発現の検出が良くない予後を示唆するものであり、この予後に基づいて患者についての治療方針を指示することを特徴とする。更に1つの態様として、本発明は細胞内のRHAMM発現と関連する病気又は症状を有する患者を診断する方法を提供するものであり、その方法は、患者から組織のサンプルを得ること;本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出技法により検出され得る検出可能なラベルとを具備してなるプローブを上記サンプルと接触させること;上記サンプル内のラベルを検出するための画像化技法を適用すること;からなり、ここで上記サンプル内のRHAMM発現の検出が上記病気又は症状の確定診断を示唆するものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明は細胞内のRHAMM発現と関連する病気又は症状を患っている患者を治療する方法を提供するものであり、その方法は、患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量と、薬理学的に許容し得るキャリアとからなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明は細胞内のRHAMM発現と関連する病気又は症状を患っている患者を治療する方法を提供するものであり、その方法は、患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量と、薬理学的に許容し得るキャリアとからなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする。更に他の態様として、本発明はRHAMMを発現する細胞の増殖を抑制する方法を提供するものであり、その方法は、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、上記細胞に接触させことからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする。更に他の態様として、本発明はRHAMMを発現する細胞の増殖を抑制する方法を提供するものであり、その方法は、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、上記細胞に接触させことからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする。更に他の態様として、本発明はRHAMMを発現する細胞の運動性を抑制する方法を提供するものであり、その方法は、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、上記細胞に接触させことからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする。更に他の態様として、本発明はRHAMMを発現する細胞の運動性を抑制する方法を提供するものであり、その方法は、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子を含有してなる組成物の有効量を、上記細胞に接触させことからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする。本発明の形態において、上記のRHAMMを発現する細胞はガン細胞である。更に1つの態様として、本発明はガンを有する患者における転移を防止する方法を提供するものであり、その方法は、患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子を含有してなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明はガンを有する患者における転移を防止する方法を提供するものであり、その方法は、患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド、又は1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子を含有してなる組成物の有効量を投与することからなり、ここで上記の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする。更に1つの態様として、本発明はRHAMM発現と関連する病気又は症状の治療、改善又は予防におけるRHAMM結合ペプチドの使用を提供するものであり、ここで上記のRHAMM結合ペプチドが式、EEXEEZを有する配列からなり、ここでXはアラニン又はグリシンから選択されるものであり、Zはチロシン又はグルタミン酸から選択されるものであることを特徴とする。更に他の態様として、本発明はRHAMM発現と関連する病気又は症状の治療、改善又は予防におけるRHAMM結合ペプチド又はRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の使用を提供するものであり、ここで上記のRHAMM結合ペプチドがSEQIDNOs117からなる群から選択されるものであることを特徴とする。本発明の形態において、上記のRHAMM発現と関連する病気又は症状が傷痕組織である。本発明の形態において、上記のRHAMM発現と関連する病気又は症状がガンである。本発明の形態において、本発明のペプチドは付加されたものでもよい。すなわち、ペプチドの一方又は双方の末端にシステインを付加しジスルフィド結合形成により環化したもの、含リン基およびアセチル基を付加したものなどである。更に本発明の範囲内に包含されるものは、本発明のペプチドの任意のものの機能性類似化合物並びに本発明のペプチドの多量体マルチマーmultimers、例えば本発明のペプチドの二量体、三量体である。本発明におけるマルチマーは同一のペプチドの多重のものからなるホモマーであっても、あるいは異なるペプチドからなるヘテロマーであってもよい。本発明におけるペプチドの特徴的アミノ酸配列はランダムなアミノ酸配列が側面についていてもよい。その好ましいものは、ペプチドに対し安定化作用stabilizingeffectを奏する側面配列であり、それにより生物学的利用性を増大させるものである。側面配列は薬物動態学的挙動を改善するのに使用することもできる。更に本発明の範囲内に包含されるものは、代謝的安定性を改善し、生物利用性を増大させ、たんぱく質分解に対する感受性を下げることができる融合ペプチドおよびペグ化ペプチドである。更に本発明の範囲内に包含されるものは、少なくとも1つのアミノ酸が同様の化学的特性を有する他のアミノ酸により置換されていること;少なくとも1つのアミノ酸が自然のものでないアミノ酸例えば、Nメチル化アミノ酸、Dアミノ酸又は他の天然のものでないアミノ酸構造のものにより置換されていること;少なくとも1つの付加的アミノ酸がN及び/又はC末端に存在すること;少なくとも1つのアミノ酸が削除されていること;又は少なくとも1つのアミノ酸が化学的に変性されていることにより特徴づけられているペプチドである。ここに記載した発明の詳細な説明並びに添付図面から本発明をよりいっそう理解できると思われるが、これらは説明のためだけのものであり、本発明の範囲を制限することを意図したものではない。定義アミノ酸残基residuesについての以下の標準的1文字および3文字略語は本明細書全体を通して使用されている。AAlaアラニン;RArgアルギニン;NAsnアスパラギン;DAspアスパラギン酸;CCysシステイン;QGlnグルタミン;EGluグルタミン酸;GGlyグリシン;HHisヒスチジン;IIleイソロイシン;LLeuロイシン;KLysリジン;MMetメチオニン;FPheフェニルアラニン;PProプロリン;SSerセリン;TThrトレオニン;WTrpトリプトファン;YTyrチロシン;VValバリン。類似化合物analogには、本発明のRHAMM結合ペプチドの配列と実質的に同等のアミノ酸残基配列を有する全てのペプチドが含まれ、その場合、1又はそれ以上の残基が機能的に同様の残基で控えめに置換されていたり、HA結合ペプチドを模倣する能力を示すものが含まれる。誘導体Derivativeとは、官能性側基の反応により化学的に誘導された1又はそれ以上の残基を有するペプチドを指すものである。そのような誘導体分子には例えば、遊離アミノ基が誘導されてアミン塩酸塩、pトルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、tブチロキシカルボニル基、クロロアセチル基又はホルミル基を形成した分子が含まれる。遊離カルボキシル基が誘導されて塩、メチルエステル、エチルエステル又は他のタイプのエステル又はヒドラジドを形成していてもよい。遊離ヒドロキシル基が誘導されてOアシル又はOアルキル誘導体を形成していてもよい。ヒスチジンのイミダゾール窒素が誘導されNimベンジルヒスチジンを形成していてもよい。更に、誘導体として含まれるものは、20の標準アミノ酸の1又はそれ以上の天然のアミノ酸誘導体を含むペプチドである。例えば、4ヒドロキシプロリンがプロリンの代わりに用いられていてもよい。5ヒドロキシリジンがリジンの代わりに用いられていてもよい。3メチルヒスチジンがヒスチジンの代わりに用いられていてもよい。ホモセリンがセリンの代わりに用いられていてもよい。オルニチンがリジンの代わりに用いられていてもよい。フラグメントfragmentの用語は、アミノ酸残基配列がここに示されているペプチドよりも短いアミノ酸残基配列を有する任意の従属するペプチドを指している。単離ペプチド又は単離DNAの用語は、場合により、ペプチド分子又はDNA分子として定義されており、これはペプチド分子又はDNA分子に自然に伴うことがある他の細胞成分から実質的に分離されたものである。この用語には、非限定的に、組換え又はクローン化DNA単離体および化学的に合成された類似化合物又は異種系により生物学的に合成された類似化合物が含まれる。ここで使用されているペプチドの用語は、所定の配列を通常有するアミノ酸残基の連鎖として定義される。更に、ここで使用されているペプチドの用語は、ペプチドおよびたんぱく質の用語を相互的に包含するものである。本文献中において、RHAMMとは、ヒアルロン酸媒介運動性のためのレセプターを指すもので、CD168としても知られている。RHAMMは非一体的細胞表面CD168および細胞内ヒアルロナン結合たんぱく質であり、これはinvitroで細胞運動性を促進し、その発現は攻撃性腫瘍において強く上方規制upregulatedされるWO2008140587。ここで使用されているRHAMM結合ペプチドの用語は、RHAMMを結合することのできるペプチドを意味する。被験者又は患者とは、症状、疾患又は病気の治療を必要とするヒトを含む動物を指すものである。概要:本発明はペプチドおよびペプチドを符号化する核酸配列であってRHAMMを結合し得るものに関するものである。本発明は更に、細胞内のRHAMM発現と関連する病気、症状、疾患の治療において、上記のRHAMM結合ペプチド並びにこのRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸配列を使用する方法に関する。本発明のRHAMM結合ペプチドはRHAMMを発現する細胞を認識することのできるプローブに使用することができる。本発明は更に、RHAMMを発現する細胞を含むサンプルの認識のためRHAMM結合ペプチドを使用する方法に関する。本発明の利点として以下のことが含まれる。特異性を以ってRHAMMと結合する新規な小さなペプチドが発見されたこと;本発明者等の知る限り、腫瘍前駆細胞は直接、画像化されることはなかった。この新規なペプチドは非侵襲的noninvasivelyに画像化するための分子画像化プローブとして使用することができる。RHAMMを特異的に結合する新規なペプチドの機能は、前駆細胞を選択的に標的として治療用薬剤と共に用いるべく開発することができる。これはリガンドレセプター相互作用を介して直接的に、又は治療用ペイロードを標的細胞に移送することにより間接的に行うことができる。RHAMMに対する本発明のペプチドの結合はエピトープ露出epitopeexposureおよび抗RHAMMMab結合を増大させ、それにより画像化が向上し、かつ、RHAMM陽性細胞を治療的標的とさせることができる。本発明の他の特徴および利点は以下に記載の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、この詳細な説明および具体的実施例は本発明の具体例を示すものであるが、これらは説明のためだけのものである。なぜならば、当業者にとって明らかなように、この詳細な説明から鑑みて本発明の趣旨および範囲内において種々の変更および改良が可能であるからである。RHAMM結合ペプチド:本発明者等は、約6乃至14のアミノ酸残基を有する新規なペプチドを単離し、配列させ、特徴づけた。それにより、1具体例において、本発明はペプチドを符号化する単離されたDNAを提供するものであり、このペプチドはSEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。他の具体例において、本発明はSEQIDNO1~SEQIDNO17からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する単離されたペプチドを提供するものである。本発明の新規なペプチドはRHAMMと結合することができる。本発明の態様として、本発明の新規なRHAMM結合ペプチドは特異的にRHAMMと結合することができる。本発明の態様として、本発明の新規なRHAMM結合ペプチドは実質的に高い親和性を以ってRHAMMと結合することができる。本発明の態様として、本発明の新規なRHAMM結合ペプチドは実質的に高い親和性を以って特異的にRHAMMと結合することができる。1具体例において、本発明の新規なRHAMM結合ペプチドは下記1の配列を有する。1EEXEEZSEQIDNO18ここで、XはA又はGから選択されるもの、ZはY又はEから選択されるものである。他の具体例において、本発明の新規なRHAMM結合ペプチドはSEQIDNO1~SEQIDNO17から選択される配列を有するものでもよい。他の具体例において、本発明はRHAMM結合ペプチドを提供するものであり、ここでこのペプチドはSEQIDNO1、39101112および14からなる群から選択される。他の具体例において、本発明はRHAMM結合ペプチドを提供するものであり、ここでこのペプチドはSEQIDNO19および14からなる群から選択される。1具体例において、本発明のペプチドはチューブリンのカルボキシ末端尾部領域から得られるものでもよい。他の具体例において、RHAMM結合ペプチドはチューブリンのCTT領域に直接隣接する配列から得られるものでもよい。驚くことに、本発明者等は、RHAMMが有糸分裂紡錘体の維持に必須であるたんぱく質と構造的および機能的類似性を共有することを見出した。更に本発明者等は、RHAMMのHA結合ドメイン領域が、多くのキネシンおよび微小管関連たんぱく質MAPsのチューブリン結合ドメイン領域に対し配列相同性を示すことを見出した。チューブリンのCTT領域は従来のキネシンおよびMAPsと相互作用することを示した。例として、ヒト乳癌細胞ラインMDAMB231RHAMMを発現するものとして知られているは、図6Aおよび図7に示すように、本発明の染料共役ペプチドで培養したとき、細胞内蛍光を示した。抗RHAMMでブロックされた細胞は図6Bに示すように、細胞内蛍光が約65ないし約85減少したことを示した。他のRHAMM発現ガン細胞例えばPC3mLN4および患者由来卵巣腫瘍細胞も、図13および図14に示すように、本発明のRHAMMペプチドで培養したとき、細胞内蛍光を示した。更に本発明者等は、RHAMMに対する本発明のRHAMM結合ペプチドの結合がエピトープ露出および抗RHAMMモノクローン抗体結合を増大させることを見出した。本発明のRHAMM結合ペプチドのこの能力、つまり、抗RHAMMmabsに対しエピトープ露出を増大させる能力は、治療的に、並びに画像化向上に利用することができる。従って、本発明のペプチドは例えば、腫瘍この病気に限定されないがにおいて利用可能なRHAMMを活性化させるのに使用することができる。ついで、治療的又は画像化例えばFabフラグメント抗RHAMMmAbが施され、これはRHAMMを発現する腫瘍細胞を標的化するのにより効果的である。ひとまとめで言うと、本発明は1組のRHAMM結合ペプチドを実証するものであり、これは或る形態においてチューブリン配列のCTTから得られるものであり、他の形態において人工のペプチド配列に基づくものである。本発明のペプチドはペプチドの一方又は双方の末端にシステイン残基を付加しジスルフィド結合形成により環化することにより変性させることが出来る。更に、本発明のペプチドはリン基およびアセチル基を付加することにより変性させることが出来る。リン酸化は動物の細胞で発生する最も一般的なたんぱく質変性の1つである4。これは最も一般的にトレオニン、セリンおよびチロシン残基において生じるものであり、多くの細胞上のプロセス例えば、細胞のサイクル、成長、アポトーシス、分化などの規定において重要な役割を果している4。この手法は可能である。なぜならば、本発明のペプチドの或るものはチロシンを有しているからであり、アシル基をN末端アミノ酸に付加することができるからである5。本発明のペプチドにおける芳香族アミノ酸、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンを他の芳香族アミノ酸で置換し、ペプチド活性に対するそれらの作用を評価してもよい。同様に、本発明のペプチドにおける脂肪族アミノ酸、例えばグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシンを他の脂肪族アミノ酸で置換し、ペプチド活性に対するそれらの作用を評価してもよい。本発明のペプチドは、長さが約6乃至約14のアミノ酸のもので、その長さの範囲は当業者に公知のように如何なるものでもよいすなわち、6136126116106968677137127117107978813812811810899149139129119101011101210131014。長さが約14のアミノ酸を超えるペプチドも本発明の範疇に包含される。ペプチドの長さはRHAMMに対する結合能力によってのみ制限される。本発明のペプチドは更にペプチドの2量体および3量体並びに当業者にとって自明の付加的安定化フランキング配列を含むものであってよく、これらについては米国特許No5824315および米国特許No6184204その内容全体を参照として組み込まれるものとするに記載されている。本発明の多量体は同じペプチドの多重からなるホモマーであっても、あるいは異なるペプチドからなるヘテロマーであってもよい。上述のように、本発明のペプチドのアミノ酸配列はランダムアミノ酸配列が側面に位置するものでもよい。好ましいものは、ペプチドに対し安定化作用を奏するフランキング配列であって、それにより生物学的利用性を増大させるものである。更に、他のペプチド模倣体も本発明のペプチドにおいて有用である。本発明のペプチドは更に、燐酸化、グリコシル化、ペグ化pegylation又は脂質化により変性されたペプチドも包含するものである。更に、本発明のペプチドは、本発明のペプチドに対して機能的に同等の変異体又は類似体のものも包含される。従って、限定的ではないが、これらには部分的な配列相同性を有するペプチド、1又はそれ以上の特定の保守的及び/又は非保守的なアミノ酸変質を有するペプチド、ペプチドの生物学的又は構造的特性を変更させないすなわち、RHAMMに対し結合する能力を有するペプチド共役体が含まれる。機能的類似性functionalanaloguesについて言うと、当業者に自明なように、生物学的に機能的なペプチド類似体の本来の定義は、その分子の所定の部分内になし得る変化の数には制限があるが、許容し得るレベルの同等の生物学的活性この場合、RHAMMと結合し得る能力が含まれるを有する分子をもたらすものという考えである。異なる置換を有する複数の独特なペプチドたんぱく質を、本発明に従って容易に作成し、使用することができる。更に、或る種の残基はたんぱく質又はペプチドの生物学的又は構造的特性にとって特に重要であることが理解される。つまり、レセプター認識領域における残基であり、このような残基は一般に交換されない。機能的類似体は保守的又は非保守的なアミノ酸置換により発生することができる。アミノ酸置換は一般にアミノ酸の側鎖置換の相対的類似性に基づくものである。例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどである。従って、本発明の範囲内において、保守的なアミノ酸の変化とは、当初に存在していたものと同じタイプのものの特定の位置でのアミノ酸の変化を意味する。すなわち、或る疎水性アミノ酸が別の疎水性アミノ酸と交換されたり、或る塩基性アミノ酸が別の塩基性アミノ酸と交換されたりすることである。保守的な置換の例としては、限定的ではないが、或る非極性疎水性残基例えば、イソロイシン、バリン、ロイシン、メチオニンを他のものと代わっての置換、或る極性親水性残基を他のものと代わっての置換、例えば、アルギニンとリジンとの間の置換、グルタミンとアルパラギンとの間の置換、グリシンとセリンとの間の置換、或る塩基性残基例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジンを他のものと代わっての置換、或る酸性残基例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸を他のものと代わっての置換、或る有枝鎖アミノ酸例えばイソロイシン、ロイシン、バリンを他のものと代わっての置換、或る芳香族アミノ酸例えばフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンを他のものと代わっての置換などが含まれる。このようなアミノ酸の変化は、ペプチドの全体的電荷及び/又は配置を有意に変化させない機能的類似体をもたらすものとなる。このような保守的な変化の例は当業者にとって公知のものであり、本発明の範囲に包含されるものである。保守的な置換には更に、非誘導化残基に代わって化学的に誘導化した残基の使用が含まれる。但し、この場合、結果としてのペプチドが本発明のペプチドと生物学的および機能的に同等のものであることを要する。従って、本発明のペプチドはSEQIDNO1~SEQIDNO17とは異なるアミノ酸配列を有するペプチドを包含するものである。更に、本発明のペプチドは単一の突然変異によってSEQIDNO1~SEQIDNO17とは異なるアミノ酸配列を有するペプチドを包含するものである。この場合、この単一の突然変異は、単一のアミノ酸削除、挿入又は置換を表すものである。例えば、図10Aおよび図10Bは、RHAMM結合ペプチドSEQIDNO1の場合、1356および11の位置でのアラニン置換はRHAMMに対する置換されたRHAMM結合ペプチドの特有の結合に影響を及ぼすものでないことを示している。例えば、図17Aおよび図17Bは、RHAMM結合ペプチドSEQIDNO14の場合、147811および12の位置でのアラニン置換はRHAMMに対する置換されたRHAMM結合ペプチドの特有の結合に影響を及ぼすものでないことを示している。RHAMM結合ペプチドの作成:本発明のペプチドは当業者に公知の方法により、特に又好ましくはたんぱく質の化学分野で周知の化学的合成手法により作成することができる。例えば、固相合成法678、これらは参照として組み込まれるものとする又は均質溶液中での合成9、これは参照として組み込まれるものとするにより合成たんぱく質を合成する方法である。その他、本発明のペプチドは当業者に公知の組換えDNA技法を利用して作成することができる。更に本発明はベクターを包含するものであり、これには本発明のペプチドの少なくとも1つを符号化する核酸が含まれる。RHAMM結合ペプチドの単離:RHAMM結合ペプチドは、RHAMMに対し結合するペプチドについてサンプルを分析することにより単離することができる。たんぱく質たんぱく質相互作用を検出することができる任意のシステム又は試験方法を利用することができる。例えば、限定的ではないが、共免疫沈降法、架橋法、勾配又はクロマトグラフィーカラムを介しての共精製法などを利用することができる。生体試料および市販のライブラリーをRHAMM結合ペプチドについてテストしてもよい。例えば、実施例1により詳述されているように、ラベル付きRHAMMをファージディスプレイライブラリーを探るのに使用してもよい。更に、本発明のペプチドに対し用意された抗体を使用してRHAMM結合親和性を有する他のペプチドを単離するのに使用してもよい。例えば、ラベル付き抗体を使用してファージディスプレイライブラリー又は生体試料を探るようにしてもよい。更に、RHAMMたんぱく質を符号化するDNA配列を使用して、HA結合たんぱく質を符号化する核酸についての生体試料又はライブラリーを探るようにしてもよい。組成物:1形態として、本発明は、invivoでの投与に適した生体適合性の形態で被験者に投与するための本発明の1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを含む組成物を提供する。他の形態として、本発明は、invitroでサンプルを研究するために使用される1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを含む組成物を提供する。使用されるサンプルには細胞、組織および器官が含まれるが、これらに限定されない。invivoでの投与に適した生体適合性の形態とは、如何なる毒性作用も治療作用により覆されるよう投与される物質の形態を意味する。これらの物質は如何なる動物にも、好ましくはヒトに投与され得るものである。本発明の薬剤組成物の治療活性量又は有効量の投与とは、ヒトにおいて免疫応答を引き出すという所望の結果を達成するのに必要な投与量および投与時間としての効果的な量と定義づけることができる。適当な投与経路は、筋肉注射、皮下注射、静脈注射、腹膜内注射、経口又は鼻腔投与などである。許容し得るキャリア担体については当業者に周知のものでよく、例えば滅菌生理食塩水、ラクトース、スクロース、燐酸カルシウム、ゼラチン、デキストリン、寒天、ペクチン、落花生油、オリーブ油、ゴマ油、脱イオン水などである。更に、本発明の組成物は、1又はそれ以上の安定化剤、例えば炭水化物ソルビトール、マンニトール、澱粉、スクロース、デキストリン、グルコースなど、たんぱく質アルブミン、カゼインなど、緩衝剤アルカリ性燐酸塩などなどを含有していてもよい。更に、本発明の組成物は、本発明のペプチドの抗細胞増殖特性を向上させる1又はそれ以上の補佐薬を含有していてもよい。注射のための組成物は、限定的な意味ではなく、本発明のペプチド又は核酸と、これに関連して1又はそれ以上の薬理学的に許容し得る賦形剤又は希釈剤を含み、適当なpH並びに生理液と等浸透圧の緩衝溶液に溶解されたものである。注射のための組成物には、任意の薬理学的に適当な希釈剤を使用することができる。例えば、蒸留水、生理液又は塩溶液、及び/又は緩衝液である。注射用の組成物は従来の容積重量手法により作ることができる。上記ペプチドの或る量を、希釈剤又は溶媒を用いて必要な容量に希釈する。この溶液はついで滅菌したフィルターを介してろ過され、ビン詰め又はアンプル化される。その結果得られた溶液は安定な透明液であり、化学的又は他の不純物を全く含まないものである。検出用プローブ:試料中限定するものではないが、例えば、細胞、組織又は器官内のRHAMM発現の検出は適当なプローブにより行うことができる。このプローブには少なくとも本発明のRHAMM結合ペプチドと、検出可能なラベルとが含まれる。この検出可能なラベルは検出手段により検出可能なものである。この検出手段は検出可能なラベルに対し測定可能な応答をおこなうことができる任意の検出技法であればよい。本発明の形態として、この測定可能な応答は画像の形で提供される。前記の検出可能なラベルは、適当な検出手段を用いてRHAMM陽性細胞の位置の検出を可能にするものである。本発明のプローブはRHAMM陽性細胞の動きおよび発達を追跡することを可能にする。従って、1形態として、本発明のプローブは、限定的ではないが、診断並びに予後の方法においてRHAMM陽性細胞を検討するのに使用することができる。プローブの作成方法は当業者に周知である1011、これらは参照としてここに組み込まれるものとする。ラベリングの方法は当業者に周知である。好ましいラベルは、invivo画像化で使用するのに適するものである。抗RHAMMプローブは検出の前に検出可能なようにラベル付けすることができる。その他、交雑形成物に結合する検出可能なラベルを使用することもできる。そのような検出可能なラベルとしては、限定的ではないが、検出可能な物理的又は化学的特性を有し、免疫測定法の分野において満足に開発された物質が含まれる。本発明で使用されるラベルは、検出手段により検出可能な組成物であればよい。この検出手段としては、限定的ではないが、分光手段、光化学的手段、生化学的手段、免疫化学的手段、化学的手段などが含まれる。本発明で使用されるラベルとしては、ビオチンベースのラベル、磁気ラベル例えば、DYNABEADS、放射性ラベル例えば、3H35S32P51Cr125I、フルオレセインラベル例えば、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッドなど、電子密度試薬例えば金、酵素例えば、アルカリ性ホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ELISAで一般に使用されている他のもの、ジゴキシゲニン、ハプテン、たんぱく質これに対し抗血清又はモノクローン抗体が利用可能である例えば、本発明のペプチドは、識別用放射性同位元素をペプチド内に組み込むことにより検出可能とすることができる。つまり、これをペプチドと特異的に反応する抗体を検出するのに使用する。本発明のRHAMM結合ペプチドはキャリア例えば、ウシ血清アルブミン又はキーホールリンペトヘモシアニンと結合したものと共に提供することができる。上記のRHAMM結合ペプチドは、金又はポリスチレンのミクロスフェア、スライドグラス、チップなどの固体キャリアに、又はマイクロタイタープレートの壁面に共有結合的又は非共有結合的に結合させることができる。このRHAMM結合ペプチドは、限定的ではないが、ビオチン、フルオレセインおよび酵素例えばセイヨウワサビペルオキシダーゼなどから選択されるラベルで直接的に又は間接的にラベル付けすることができる。使用される特定のラベルについては、RHAMMRHAMM結合ペプチド錯体の形成に妨害しない限り、本発明にとって重要ではない。しかし、1態様として、RHAMMRHAMM結合ペプチド錯体および腫瘍前駆細胞のinvivo検出のためのSPECT、CTおよびPET画像化技法の使用の容易性のため、画像化成分は放射性核種例えば、18F11C13N64Cu68Ga123I111In99mTcなどであってもよい。SPECT又はPET画像化で使用される薬剤のための適当な画像化成分についての決定は、放射性核種がジェネレータ又はサイクロトンにより発生するか否か、又はこれらがキレータ又は有機ハロゲン化物であるか否かにより行われる。図15および16は、GaDOTA共役ペプチドSEQIDNO1およびRe3配位結合ペプチドSEQIDNO1の合成および質量分光分析特性評価を示している。ここで使用されている直接ラベル付きプローブは、検出可能なラベルが付着されたプローブであってもよい。なぜならば、この直接ラベルが既にプローブに付着されているから、プローブを検出可能なラベルで関連させるための後の工程を必要としないからである。これと対照的に、間接ラベル付きプローブは、検出可能なラベルが後に典型的には、RHAMM結合ペプチドが標的RHAMMで交雑化された後に結合される部分を有するものということができる。他の形態において、本発明のRHAMM結合ペプチドの任意のものを認識できるモノクローン抗体mAbも作成することができ、これを試料中のRHAMM結合ペプチドの存在を検出するのに使用することができる。mAbは本発明の組成物をその品質についてテストするための迅速、かつ、簡単な方法を提供する。一般に、抗体の作成方法は周知である。例えば、本発明のRHAMM結合ペプチドを特異的に認識するmAbを生産する方法は当業者にとって周知である。一般に、ペプチドはフロイントアジュバント中でマウスに注射される。3週間に亘って9回注射した後、マウスの脾臓が取除かれ、燐酸塩緩衝生理食塩水PBS中に再懸濁される。この脾臓細胞はリンパ球源として役立ち、その或るものは適当な特異性の抗体を生産する。ついで、これらは永久に生育する骨髄腫パートナー細胞で融解され、この融解生産物は、HATのような選択剤の存在下で多数の組織培養ウェル中で培養される。これらのウェルはついでスクリーンにかけられ、有用な抗体を作る細胞を含有するものがELISAにより識別される。ついで、これらは新しく培養される。生育期間の後、これらのウェルは再びスクリーンにかけられ、抗体生産細胞が識別される。抗体生産について陽性である単一のクローンを含有するウェルが90を超えるまで、幾つかのクローニング法が実行される。この手法により、mAbを生産する安定なクローンのライン系統が確立される。ついで、このmAbはProteinA又はProteinGセファロースを用いてアフィニティクロマトグラフィにより精製される米国特許Nos460989347133254714681471611147161174720459参照。RHAMM結合ペプチドの適用:本発明は、検出、画像化、診断および治療手法を包含するものであり、これには、非限定的に、本発明のRHAMM結合ペプチドを用いてRHAMMを標的として捉えることが含まれ、これはリガンドRHAMMが媒介する細胞運動性応答を刺激する役割を果たすRHAMMリガンド錯体の形成を粉砕させるものである。これらの方法は、他の公知の治療法、すなわち、病原性症状、炎症および病原性感染に関連する症状を治療するための治療法との組合せで利用することができる。1.RHAMM陽性細胞の検出図9を参照すると、本発明のRHAMM結合ペプチドが生物学的環境下において適度の安定性を有することが示されている約110ないし約250分の半減期。これはinvitro又はinvivo画像化を容易にするのに十分な長さである。本発明の1態様として、RHAMM結合ペプチドを、RHAMM陽性細胞を識別するための方法に使用することができる。このRHAMM陽性細胞の識別方法は、細胞を本発明のプローブと接触させ、この細胞内の検出可能なラベルを検出するための適当な検出技法を適用することが含まれる。RHAMM陽性細胞の識別は検出技法による検出可能なラベルの検出に基づいて決定される。他の1態様として、被験者の組織又は器官内におけるRHAMM発現を検出する方法が提供される。この方法は、本発明のプローブを被験者に投与すること;被験者の組織又は器官内のラベルを検出するための検出技法を適用することからなる。腫瘍形成性前駆細胞がRHAMM発現により特徴付けられるため、他の態様においては、本発明のRHAMM結合ペプチドが、腫瘍生検のようなサンプルが腫瘍形成性前駆細胞これはガン患者に転移を発展させる危険性を示唆させるを含むか否かを判定するための診断方法に使用される。このような診断方法は、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを使用してサンプル中のRHAMMの存在を検出することからなる。RHAMM陽性サンプルはサンプルがガン前駆細胞を含むことを示唆するものである。本発明の1形態におけるガン患者の診断方法は、患者から組織試料を得ること;この試料に本発明のプローブを接触させること;該試料中のプローブによる検出可能なラベルを検出するため検出技法を適用することからなる。試料内のRHAMM発現の検出はガン診断を示唆するものとなる。本発明の他の形態におけるガン患者の診断方法は、本発明のプローブを被験者に投与すること;被験者の組織又は器官内のプローブラベルを検出するための検出技法を適用することからなる。被験者におけるRHAMMの検出はガン診断を示唆するものとなる。本発明の他の形態におけるガン患者の予後の判定方法は、患者から腫瘍組織試料を得ること;この試料に本発明のプローブを接触させること;該試料中のプローブラベルを検出するため検出技法を適用すること;患者の予後を判定することからなる。この予後は、患者におけるガンの攻撃性又は転移の可能性を予測するものである。試料内のRHAMM発現の検出は好ましくない予後を示唆するものとなる。他の形態として、本発明はガン患者のための治療方針を判定する方法を提供する。この方法は、患者から腫瘍組織試料を得ること;この試料に本発明のプローブを接触させること;該試料中のプローブラベルを検出するため検出技法を適用すること;患者の予後を判定することからなる。この予後は、患者におけるガンの攻撃性又は転移の可能性を予測するものである。試料内の測定可能なRHAMM発現の検出は好ましくない予後を示唆するものとなり;この予後に基づいて患者のための治療方針を処方する。本発明の診断および予後の方法における1態様として、試料中のRHAMM発現が公知のネガティブ対照又は公知の標準と比較される。この公知のネガティブ対照又は公知の標準との対比での試料中の測定可能なRHAMM発現の検出は、場合に応じて、試料内のRHAMMの存在、ガンの診断、又は好ましくない予後を示唆するものである。図6および7はフルオレセイン共役RHAMM結合ペプチドSEQIDNO14およびSEQIDNOs1および9を使用したヒト乳癌細胞の可視化を説明する図である。図13はフルオレセイン共役RHAMM結合ペプチドSEQIDNO1を使用したヒト卵巣ガン細胞の可視化を説明する図であり、図14はフルオレセイン共役RHAMM結合ペプチドSEQIDNO9を使用したヒト前立腺ガン細胞の可視化を説明する図である。図14に示すように、PC3mLN4ヒト前立腺ガンライン攻撃的に侵襲性で転移性のものは蛍光染色について強い陽性を示し、HAペプチド模倣薬SEQIDNO9の急速な摂取を示唆している。本発明のRHAMM結合ペプチドの細胞による摂取は、特定の抗RHAMMmAbによりブロックされるが、特定の抗CD44mAbによってはブロックされない。しかし、この抗CD44mAbはCD44に対するHAの結合をブロックする図671314参照。これらの結果は、本発明のHAペプチド模倣薬が、RHAMM依存機構により、前立腺ガン、乳癌および卵巣ガン細胞と関連し、これらガンにより取り上げられることを示唆するものである。2.治療学図9を参照すると、本発明のRHAMM結合ペプチドが生物学的環境下において実質的に安定であることが示されている約110ないし約250分の半減期。これは治療法におけるその使用を容易にするのに十分な長さである。本発明のRHAMM結合ペプチドは、哺乳類において、細胞ロコモーション例えば、ガン、炎症、自己免疫疾患および組織外傷と関連する線維性疾患が関連する病状の予防又は治療並びにそれらの回復に使用することができる。本発明のRHAMM結合ペプチドは、RHAMMリガンド錯体の形成から生じる病気又は疾患の治療のための組成物および方法において使用することができ、これは、このRHAMMリガンド錯体の形成を粉砕することによりなされる。1態様として、本発明は細胞におけるRHAMMの発現と関連する病気又は症状から患っている被験者を治療するための方法を提供する。この方法は、患者に対し、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド又はこの1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量と、薬理学的に許容し得るキャリアとからなる組成物の有効量を少なくとも投与することからなる。1形態として、本発明は組織傷痕を防止し、又は減少させる方法を提供する。この方法は、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド又はこの1又はそれ以上の本発明のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、必要とする患者に対して少なくとも投与することからなる。ガン細胞の増殖を抑制するRHAMM結合ペプチドの能力は、腫瘍転移を防止する効果およびガン化学療法薬としての有用性を示唆するものである。従って、本発明は腫瘍転移を防止ないし減少させる方法を提供するものであり、これはRHAMM結合ペプチド又は本発明のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、これを必要とする被験者に投与することからなる。従って、本発明のRHAMM結合ペプチドは、RHAMM発現と関連するガンを治療するのに有用である。このガンの例としては、限定的ではないが、肺、胃腸、胸部、膀胱などのガン、皮膚ガン黒色腫および非黒色腫、並びに脳、頚部および白血病などのガンが含まれる。従って、本発明は被験者におけるガンを防止乃至治療するための方法を提供するものである。この方法は、1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチド又は本発明のこの1又はそれ以上のRHAMM結合ペプチドを符号化する核酸分子の有効量を、これを必要とする被験者に投与することからなる。1形態として、本発明のRHAMM結合ペプチドは、ガンなどのRHAMM発現と関連する病気又は症状を有する患者の罹患率および死亡率を減少させるため、現存する治療法との組合せで使用してもよい。従って、1態様として、本発明はRHAMM発現と関連する病気又は症状を目的として被験者を治療する方法を提供するものである。この方法は、RHAMMと関連する病気のための少なくとも1つの他の療法との組合せで、本発明のRHAMM結合ペプチドを被験者に少なくとも投与することが含まれる。RHAMM結合ペプチドと、少なくとも1つの他の療法との組合せは、病気治療の効能を高めるものとなる。例えば、ガン治療の場合、血管形成を実質的に減少させることができる治療も被験者に施すすることができる。例えば、小分子薬剤、siRNAs、アンチセンスantisense治療又はこれらの組合せであって、血管形成スイッチとして作用する1又はそれ以上の成長因子を標的とするもの、又はトロホブラストtrophoblastおよび内皮細胞についての増殖信号を提供するものを施すことができる。成長因子は種々のガンの成長および生存に必要なもので、ガンの進行には必須のものである。従って、RHAMM結合分子を使用する本発明の抗ガン治療法は、VEGF、FGRおよびhCGを含む1又はそれ以上の成長因子を標的とする治療法と組合わせることができる。本発明のRHAMM結合ペプチドは更に、放射線療法又は化学療法とも組合わせることができる。このような組合せ療法はガン治療に対する相乗作用に寄与するものとなる。本発明者等は、例えば、本発明のRHAMM結合ペプチドがヒトの上皮性卵巣ガン細胞の増殖を抑制し得ることを示した図11参照。本発明者等は更に、本発明のRHAMM結合ペプチドがヒトのEOC細胞の生存率を減少させることを示した図12参照。前述のように、ガン前駆細胞を識別することにより、本発明の検出方法は、これらの前駆細胞を選択的に死滅させたり、最終分化を強制させたりする新規な治療法の開発を可能にすることになる。例えば、本発明の技法は、高い発がん性前駆細胞サブセットを含有する腫瘍のinvivo画像化に使用することができ、転移の危険のある患者と、その危険のない患者とを選別して治療することを可能にする。最も重要なことは、本発明の技法が、乳癌などの原発性ガン内に存在する高い発がん性前駆細胞サブセットに対し抗がん薬を移送するのに使用できることである。例えば、RHAMMを発現する細胞に対する細胞毒性薬の標的移送を可能にするため、上記ペプチドを細胞毒性薬と共役させてもよい。同様の機構により、他の治療用エンティティentitiesの移送も可能である。例えば、限定的ではないが、アルキル化剤、抗血管形成剤、抗有糸分裂剤、ホルモン治療薬、ヌクレオシド類似体又はそれらのプロドラッグなどが用いられる。更に、放射線治療薬の使用も考えられる。その場合、本発明のRHAMM結合ペプチドを放射性核種を発生する粒子に結合させ、それにより細胞破壊性エンティティをRHAMM陽性細胞に対し選択的に移送するしくみmechanismが提供される。治療用放射性核種の例としては、ベータ線放射の放射性核種90Y185Reなど、ベータガンマー線放射の放射性核種47Sc153Sm177Lu188Reなど、アルファ線放射の放射性核種213Bi223Ra225Acなど、オージェ放射の放射性核種67Ga111Inなどが含まれる。3.投与および投与量本発明のプローブ及び/又はペプチドは当該分野で公知の任意の経路を介して哺乳動物被験者に直接投与することができる。例えば、限定的ではないが、注射静脈注射、腹腔内注射、皮下注射、筋肉注射、皮内注射、吸入、経皮投与、直腸投与、鼻腔投与、経口投与などを利用することができる。1形態として、本発明の検出用プローブ及び/又はペプチドは皮下投与することができる。他の形態として、本発明の検出用プローブ及び/又はペプチドは静脈内投与することができる。他の形態として、プローブ及び/又はRHAMM結合ペプチドの有効量を非全身投与又は局部投与例えば、末梢投与を介して投与することができる。これには、抹消筋肉内投与、腺内投与、皮下投与などの経路が含まれる。これにより、プローブ及び/又はペプチドを数時間に亘ってinvivoでRHAMMを発現する細胞および発ガン性細胞集団を有する部位に移送させることができる。本発明の他の形態において、RHAMM結合ペプチドが移植可能なデバイスを介して投与される。本発明の態様として、この移植可能なデバイスはRHAMM結合ペプチドを制御させながら放出させることができる。本発明のRHAMM結合ペプチドは上述のように、全身的に提供することができる。当業者に自明なように、本発明のRHAMM結合ペプチドは従来のリポソーム、特殊なリポソーム、脂質製剤および免疫リポソームを用いて使用することができる。これらのリポソームは、単層又は多層であってもよく、ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、デミリストイルホスファチジルコリンおよびこれらの組合せから選択される成分から形成されたものでよい。多層リポソームには単層小胞に似た組成物の多層小胞が含まれる。しかし、溶液又はエマルジョン中の銀成分が捕捉されている複数のコンパートメントをもたらすように作成することができる。更に、他の補助剤およびモデファイアー例えば、ポリエチレングリコール又は他の物質をリポソーム製剤に含めることもできる。リポソーム製剤として、ジパルミトイルホスファチジルコリン:コレステロール11が含まれるが、当業者に自明のように、任意の数のリポソーム二重層組成物を本発明の組成物に使用することができる。これらリポソームは種々の公知の方法米国特許No4235871RRCLiposomeAPracticalApproachIRLPressOxford199033101頁、これらは参照として組み込まれるものとするで作成することができる。RHAMM結合ペプチドを含有するリポソームは修正を有するものとすることができる。例えば、非ポリマー分子がリポソームの外部に結合したものを有するものとすることができる。その例としては、ハプテン、酵素、抗体又は抗体フラグメント、サイトキン、ホルモンおよび他の小たんぱく質、ポリペプチド又は非たんぱく質分子であってリポソームに所望の酵素的又は表面認識特性を与えるものが含まれる。特定の器官又は細胞型に対し標的としてリポソームを優先的に向ける表面分子としては、例えば、特定の抗原を有する細胞を標的としてリポソームを向けさせる抗体が含まれる。そのような分子を結合させるための技法は当業者に公知である例えば、米国特許No.4762951参照。これは参照として組み込まれるものとする。その他、あわせて、ポジティブ又はネガティブな正味荷電を有する任意の数の脂質を、リポソーム皮膜の表面荷電又は表面荷電密度を変更させるために使用できることは当業者にとって自明であろう。このリポソームは、脂質二重層の1成分として熱感応性又はpH感応性脂質を組み込み、脂質小胞皮膜の劣化を制御するようにしてもよい。本発明において、患者に対する投与量は、RHAMMRHAMM結合リガンド錯体および発がん性細胞集団の部位を十分な特異性を以って効果的に画像化するのに適した投与量とし、それにより外科医がRHAMMRHAMM結合ペプチド錯体の画像化により検出された腫瘍細胞集団を取除くための生検又は他の手法を実行できるようにする。この投与量は使用される特定のベクターおよび患者の症状、治療すべき患者の体重又は表面領域などにより決定される。更に、投与量のサイズは、特定の患者におけるプローブの投与に伴う悪い副作用の存在、性質および程度により決定される。投与について言うと、本発明の検出用プローブは、ポリペプチド又は核酸のLD50並びに患者の質量および全体的健康を鑑みての種々の濃度でのポリペプチド又は核酸の副作用を考慮し決定された割合で投与される。投与は単一又は分割された投与量で、例えば一定の期間例えば、2,3,4,5、6日間又は1~3週間又はそれ以上での規則的ベースで投与される投与量でなされる。更なる態様において、ラベル付きプローブの約5乃至約2000LD50単位が、認められた臨床基準およびプラクティスを用いて患者に投与される。上述の開示は本発明を一般的に記載したものである。より完全な理解が以下の具体的実施例を参照することにより得られるであろう。これらの実施例は全く説明のためのものであり、本発明の範囲を制限することを意図したものではない。形態の変更および均等物の置換は状況により提示され好便となることも考えられる。ここでは特定の用語が使用されているが、これらは記載上の感覚によるもので制限を目的としたものではない。実施例:以下の実施例は説明を目的としたものであり、本発明の範囲を制限することを意図したものではない。実施例1-BLAST検索および配列アラインメント:RHAMMのHA結合ドメインaa718750に相当する照合配列を基本検索アラインメント検索ツールBLASTに使用し、配列相同性を示すたんぱく質のリストを編集した。図1Bは分子画像化プローブの設計および最適化のフロー図である。HA結合ドメインはBLASTにおける照合配列として使用し、相同たんぱく質配列を決定した。ついで、相同配列についての推定結合パートナーリガンドを解明した。ペプチドのライブラリーはリガンド配列のトランケーションに基づいて合成し、表面プラズモン共鳴SPR結合検定を用いてスクリーンにかけ、高親和性リガンドを決定した。候補のペプチドリガンドを更に、種々のinvitro結合検定を用いて評価した。RHAMMと、MAPsの微小管結合ドメインと、キネシンとの一対比較の結果、RHAMMのHA結合ドメインに対し、適度の配列相同ClustalX212を使用して計算して約1724が示された。しかし、MAPsおよびRHAMMは、チューブリン結合部位のアミノ酸配列に関して同様の物理化学的特性を分かち合っている。換言すれば、MAPsおよびRHAMMの双方は塩基性残基のストレッチstretchを有し、これがチューブリンに結合するものと仮定される。更に、MAPsのチューブリン結合部位およびRHAMMのヒアルロナン結合部位の二次構造は同じ程度のらせん度を有し、双方ともベイシックジッパードメインbasiczipperdomainとして分類できる13。RHAMMは細胞質ゾルにおいて、細胞外表面および微小管中のHAと関連するのに共通の結合部位を使用すると報告されている14。微小管関連モータたんぱく質およびMAPsはチューブリンのCCTsへの直接結合を示すから、本発明者等は、RHAMMが、異なるチューブリン亜型のCCTsを表す合成ペプチドとの直接的相互作用を示すことができるという仮説をたてた。HAは、RHAMM上での負に帯電した基と、正に帯電した基と間での主なイオン相互作用を介してRHAMMと相互作用するから、負の帯電の類似した分布を有する分子は原則としてHA模倣体として役立つものとなる。例えば、チューブリンCCTs上のGluおよびAsp残基は、HA上のカルボキシレートを模倣するものとなる。従って、RHAMMのHA結合ドメインに対する合成CCTsの結合は、HA結合にとって重要であると思われる同じに荷電された側鎖を利用するものと思われる。実施例2-RHAMMに対するチューブリン由来ペプチドのスクリーニング:物質:全ての溶媒は更なる精製なしに使用し、VWRFisherScientific又はSigmaAldrich社から購入した。フルオレニルメチロキシカルボニルRinkアミドMBHA樹脂、Fmocアミノ酸、Fmoc保護アミノヘキサノン酸およびHBTU1133テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートカップリング試薬ペプチド合成のためのものは、PeptidesInternational社から購入した。NNエチルカルボジイミド塩酸塩EDAC、Nヒドロキシスルホスクシンイミドナトリウム塩、フルオレセインイソチオシアナートFITC異性体Iおよびウシ胎仔血清はSigmaAldrich社から購入した。NHSBiotinはNovaBioChem社から購入した。抗RHAMM、抗CD44およびIgGabのような抗体は市販のものである。ペプチドの合成:異なるチューブリン亜型のCTTおよびH12区域に相当する12のアミノ酸残基を有する17のペプチドを、Fmocプロトコルに従った固相ペプチド合成法を用いて合成させた。リンクアミドMBHA樹脂上のペプチド鎖の伸長を、自動化法及び/又は手動法を用いて行った。この場合、Fmoc脱保護およびアミノ酸カップリングサイクルを関与させた標準固相ペプチド合成が用いられ、この各サイクルはKaiserテスト15、16を用いてモニターした。この合成を通しての繰返しFmoc脱保護15分および20分は、N,Nジメチルホルムアミド中の20ピペリジン溶液を用いて行われた。全てのアミノ酸カップリングは30分および90分の間隔で、005M以上の濃度のFmoc保護アミノ酸およびHBTU、DMF中のN,Nジイソプロピルエチルアミンを用いて行われた。各脱保護およびカップリング工程の後、樹脂をDMFおよびジクロロメタンを用いて繰返し洗浄した。FmocAhxは同じパラメータを用いてカップリングした。アミノ末端のアシル化はFmoc脱保護に続いてDMF中の10無水酢酸を用いて行われた15および10分。フルオレセインカップリングは4時間をかけて、ペプチドのアミノ基をDMF中のFITC蛍光染料4当量およびDIPEA2当量と反応させることにより行われた。システイン含有ペプチドの完全な脱保護は、1015時間に亘って、94vvトリフルオロ酢酸、1vvトリイソプロピルシラン、25vvH2Oおよび25vv12エタンジチオールからなる溶液を用いて達成された。他の全ての完全な脱保護は、24時間に亘って、88vvTFA、5vv水、5mvフェノール、2vvTIPSからなる溶液を用いて行われた。ろ液を集め、冷tertブチルメチルエーテルを用いて析出させ、ついで-5°Cで10分間、3000rpmで遠心分離を介してペレット化させた。ついで、このペレットを蒸留脱イオン水に溶解させ、凍結乾燥させ固相粉体を得た。たんぱく質の精製:この研究で使用された全てのペプチドは逆相HPLCにより92を超えるよう精製され、これはESI質量分析により特徴づけられた。ペプチドの精製はH2O01TFAおよびCH3CN01TFAからなる勾配溶媒系を用い、分析用および分取用HPLCにより線流速15mL分および20mL分でそれぞれ行われた。分析用HPLCはGraceVydacたんぱく質ペプチドRPC18カラムを用いて行われ、分取用HPLCはGraceVydacたんぱく質ペプチドRPC18カラムを用いて行われた。吸光度はWaters2998PhotodiodeArray検出器を用い、220nmおよび254nmの波長で検出された。精製の間、フラクションを集め、凍結乾燥させ、ESIMSにより分析した。組換えたんぱく質RHAMMCTカルボキシ末端に対してのみ相応する切頭RHAMMであって、HA結合ドメイン、アミノ酸706766配列:RDSYAQLLGHQNLKQKIKHVVKLKDENSQLKSEVSKLRSQLVKRKQNELRLQGELDKALGIMW71kDapl101SEQIDNO20を有するものを、組換えプラスミドpPAL7RHAMMを担持するEcoliBL21菌株から単離した。細菌はアンピシリン100μgmLおよび05グルコースを含有するLB媒体中、37°Cで一晩生育させ、中期対数増殖期まで成長させた。組換えRHAMM遺伝子発現は2mMIPTGを用い37°Cで4時間に亘り誘起させ、細菌細胞は遠心分離10000xg20分により取得した。この細菌細胞は溶解緩衝液中で再懸濁させ、超音波処理氏、遠心分離4°C、12000xg20分した。得られた上澄液をきれいなチューブに移し、ろ過した045μmフィルターを用いて。eXactタグ付き組換えRHAMMの精製は、製造者のプロトコルに従ってProfinityeXactアフィニティ樹脂を用いて行われた。この実験において、溶解物は、ProfinityeXactアフィニティ樹脂4mL樹脂、カラム15x15cmを充填した重力カラムに詰め込み、洗浄用緩衝液を用いて平衡化させた。このカラムを洗浄用緩衝液で洗浄し、不純物を取除き、組換えRHAMMを溶出用緩衝液を用いて溶出させた。ついで、02M燐酸ナトリウムおよび02M酢酸カリウムからなる緩衝液中にてMilliporeフィルターMilliporeUSAカットオフ3kDaを用いて、たんぱく質を透析し、濃縮させた。この単離されたたんぱく質は1DSDSPAGEに基づいて実証された。RHAMMの識別は、Westernブロット分析による抗RHAMM抗体を用いて確認された。SPRスクリーイング検定:RHAMMに対する異なるチューブリン由来ペプチドの選択およびランク付けのためProteONXPR36システムを使用した。RHAMMの不動態化のため、ProteONGLCセンサーチップ表面を、100mMEDACおよび24mMsulfoNHSを使用したアミンカップリングにより活性化させた。RHAMMを30μL分の流量で注入させた。緩衝液サンプルは、参照として使用するための異なるセンサープレート上に注入した。ついで、エタノールアミンHClを、残存する表面の基を脱活性化するため注入した。ペプチドはRHAMM官能化表面に、50μL分で3分間注入した。続いて、10分間の解離を行った。これらの表面は、次のペプチドの注入の前に、1MNaClの30μLの2回の注入を用いて再生させた。全ての実験において、参照サブトラクションは、参照プレートおよびRHAMM官能化プレートから得られたデータを使用して行われた。フルオレセインラベル付きペプチドを使用しての拮抗的ELISA実験:RHAMMとの結合部位について、HAと競争するFITCラベル付きチューブリン由来ペプチドの能力をテストするためELISAを行った。組換えRHAMMを96ウェルELISAプレート上で不動態化し、4°Cで一晩培養して1μgウェルのたんぱく質の最終量を得た。これらプレートを、PBSTween20緩衝液で3回洗浄し、ブロッキング緩衝液で洗浄し、その後、室温で1時間培養した。上述のような3回の洗浄の後、FITCラベル付きチューブリン由来ペプチドおよびHAをプレートに添加し、一晩4°Cで培養した。これらプレートを上述のようにして洗浄し、吸光度を485535nmで測定した。フルオレセインラベル付きRHAMMを使用しての拮抗的ELISA実験:RHAMMについて、染料共役HAと競争するラベル無しチューブリン由来ペプチドの能力をテストするためELISAを行った。RHAMMを96ウェルELISAプレート上で不動態化し、4°Cで一晩培養した。これらプレートを、PBSTween20緩衝液で3回洗浄し、ブロッキング緩衝液で、1時間室温で培養した。上述のような3回のPBSTween20緩衝液での洗浄の後、チューブリン由来ペプチドおよびHA共役AlexaFluor647結合検定:ペプチドスクリーニングの後、GWCSPRimagerTMIIシステムを使用し、結合速度定数を決定した。ミリQ水中1nM濃度のチオール含有ペプチドを3時間に亘ってマレイミド官能化金メッキチップ上で不動態化した。過剰のペプチドをミリQ水で洗浄することにより除去した。結合の研究のため、RHAMMの一連の濃度のもの500nM750nM1000nMを不動態化ペプチド上に注入した。15分の解離段階の後、センサーチップ表面を次のペプチドサンプル注入のため再生させた。これは100mL分での再生用緩衝液の2回の10分パルス注入で処理することにより行われる。この再生工程の後、ベースラインは当初の値に戻され、全ての結合された分析対象物の除去が確認される。データが分析され、対応する解離定数をラングミュア結合モデルへの非線形回帰フィッティングを介して得た17。全ての実験において、参照サブトラクションは、参照プレートおよびペプチド官能化プレートから得られたデータを使用して行われた。血清安定性の検討:血清中のチューブリンCTTsの安定性が11時間までについて評価された。各ペプチドを予熱37°C、pH73±01ウシ胎仔血清と混合させた。最初の時間を記録し、各30分の時点で、40μLアリコートを反応混合物から取り出し、C18逆相C18Se-Pakカートリッジを通過させた。ペプチドを、01TFAと共に3mLのエタノールを用いてカートリッジから溶出させ、凍結乾燥させ、分析用RPHPLCを用いて分析した。このシステムの使用された移動相は、水中の01TFAおよびCH3CN中の01TFAであった。20分に亘っての15mL分の流量での溶離剤Bの1095の直線勾配を各ペプチドサンプルについて使用した。無傷ペプチドのパーセントを、220nmおよび254nmにセットさせたWaters2998フォトダイオードアレイ検出器を用いて検出し、ESIMSを用いて識別した。ペプチドの半減期はGraphPadPrismバージョン501を用いて決定された。細胞取込みの研究:RHAMMCTに対し高い親和性を示す候補のペプチドを蛍光染料と共役させ、ガン細胞MDAMB231を発現するRHAMMに対する特異性を細胞蛍光画像化検定を用いて評価した。MDAMB231細胞をDMEM媒体および10FBS中で90密集度まで培養した。ついで、これらの細胞を2x24ウェル組織培養域20000ウェルの密集度内のガラスカバースリップ上に播種した。播種後1日目に、DMEM01FCSを用い37°Cで一晩、飢餓工程を実行した。ついで、培養基を吸引し、DMEM01FCSを用い37°Cで一晩、濯いだ。ついで細胞をDMEM中3BSA01FCSを用い、室温で1時間ブロッキングした。このブロッキングの実験において、抗体を添加し37°Cで1時間培養した。抗マウスIgGでブロックされた細胞はポジティブ対照として利用される。なぜならば、この抗体はRHAMMに対し結合親和性を示さないからである。ついで、得られた培養基を吸引し、細胞をDMEM01FCSを用い室温で洗浄した。フルオレセイン共役ペプチドを添加し、37°Cで30分間培養した。ついで、細胞をDMEM01FCSで洗浄し、更にPBSで洗浄した。製造者のプロトコルに従いDAPIを含有するFluorogel11を用いて装着した。ついで、オリンパス社のFluoViewFV1000連結IX81電動倒立顕微鏡システムを用いて細胞を撮影した。Tiff画像はImageJソフトウェアを用いて分析した。各画像を8-ビットフォーマットに変換し、20および255の閾値に当てた。細胞体に相当する関心の領域を選択した。次に、各ROIの平均蛍光度を8-ビット取得データを用いて計算した。データはワンウェイANOVAのためのPrism統計プログラムを用いて分析した。結果:RHAMMに対するチューブリン由来ペプチドのスクリーニング:図2Aは非変性チューブリン由来ペプチドの全体的構造、Nアセチルシステインに共役したペプチドの全体的構造およびフルオレセインイソチオシアナートの全体的構造を示している。図2Bはこの研究のため作成された17の全てのペプチドを記載した表である。17の合成ペプチドの配列は、異なるチューブリン亜型のCTTs並びに、α1aおよびβIIIaCTTを直接隣接させた配列を包含している。6炭素リンカーを使用して、ペプチドと、追加のペプチド変性体との間の距離を増大させた。図2Bは更に、誘導体化ペプチドも含めている。誘導体化ペプチドは、フルオレセイン又はNアセチルシステイン変性N末端を用いて作成された。全てのペプチドはESI質量分析法により特徴づけられ、逆相HPLCにより純度について分析された。図2Bは、ESI-MSおよびRPHPLCを使用して、17の合成されたチューブリン由来ペプチドを分析した結果を示す表である。計算され、観察されたmz値は、ESIにより決定された顕著な観察信号に基づくものである。純度は220nmで検出されたRPHPLCにより決定された。SPRベースのスクリーニング法は、RHAMMのHA結合ドメインを認識することができる潜在的ペプチド候補の迅速、かつ、正確な決定を下すために利用された。17のチューブリン由来ペプチドがスクリーニングされ、得られたセンサーグラムを使用してRHAMMに対し親和性を示すペプチドを導出させた。スクリーニングの前に、リガンド不動態化のためのセンサープレートに対する最適条件を決定した。不動態化緩衝液のための最適pHは、たんぱく質脱活性化を最小にしながら、センサープレートに対するたんぱく質の静電気引力と釣り合うものとなる。この研究において、不動態化のための最適pHは、最高リガンド密度を生じさせるpHであるとして決定された。種々のpHの重炭酸ナトリウム緩衝液を用い、30μL分の流量で、かつ、EDACおよびsulfoNHSの濃度を一定にして、RHAMMをセンサープレートに結合させた。各pH不動態化条件についてのRHAMMリガンド密度は、6個の測定値の平均SPR応答およびpH97で生じた最大リガンド不動態化から決定された図3A。リガンド不動態化は、一部、等電点でのRHAMM上の正味荷電の損失により、pH101のものよりも若干低かった。SPRセンサーチップ上のRHAMMの不動態化の後、チューブリン由来ペプチドの一連の注入が行われた。ペプチドのRHAMMとの会合は3分間おこなわれ、分析対象物無しの緩衝液内での解離を10分間おこなった。図3Bは10μMの濃度で得られた実験的センサグラムを示している。各ペプチド注入について、対照センサーグラムはテストセンサグラムから差し引き、如何なる残存する結合されたペプチドをも除去するため、次のペプチド注入の前に、チップ表面を再生させた。17のペプチドのスクリーニングにより、RHAMMに対し向上した親和性を実証した6つのペプチドが得られた。すなわち、1a3a9a11a12aおよび14aである。RHAMMに対する不動態化チューブリン由来ペプチドの親和性:先のセクションで導出された6つのペプチドのRHAMMに対する結合を定量化した。トランケーションtruncation切頭の研究により、CTTは、MAP指示微小管アセンブリーを誘起させるのに十分であることが示された18。従って、リンカー部分によりスペースが設けられたラベルをCTTのアミノ末端基上に配置することが、ペプチドたんぱく質相互作用に影響を及ぼすということはない。ペプチドはセンサープレート上で不動態化され、RHAMMは誘導体化表面上に異なった濃度および一定の流量で流された。図4Aは得られたセンサーグラムを示している。再び、実行緩衝液と、サンプル溶液との間の屈折率差を考慮するため、参照センサーグラムから各曲線を差し引くことにより各センサーグラムを修正した。実験のセンサーグラムに、11ラングミュア結合モデルについての動態モデルから生じる曲線を当てはめた。異なるRHAMM濃度から得られた6つのペプチドのKDについての平均値が、各標準偏差と共に図4Bの表に示されている。ポジティブ対照として、抗RHAMMmAbの動態プロフィールも測定され、その結果はRHAMMに対する553nM親和性を示した。ペプチドSEQIDNO1、SEQIDNO9およびSEQIDNO14は、低いナノモル範囲の解離定数を示し、RHAMMに対する高い親和性を示唆した。6つのペプチドの各々の相対結合親和度もELISAを用いて測定した。この検定において、ペプチドにフルオレセインでラベル付けし、この染料はアミノヘキサノン酸リンカーの付加によりペプチドから離された。図3Cに示すように、ELISAの結果は更に、ペプチドSEQIDNOs19および14が全ての濃度において最も高い相対結合親和性を示したことを示唆するものであった。ペプチドに対する蛍光色素変性がリガンドRHAMM相互作用又は非特異性結合に対し効果を奏するということができる。従って、SPRおよびELISAの結果は正確にマッチしないかもしれない。チューブリン由来ペプチドのHAによる競合的置換:RHAMMのHA結合ドメインに対するペプチドの選択性を判定するため、競合的ELISAをおこなった。この検定において、フルオレセインラベル付きペプチドを使用し、RHAMMに対するペプチドの結合をブロックするラベル無しHAの効能を評価した。フルオレセインラベル付きペプチドSEQIDNOs1391112および14に対応するを、不動態化RHAMMを含有するELISAプレートに添加し、ついで、種々の濃度のHAを添加した。HAがフルオレセインラベル付きペプチドを置換したときこれらが同じ結合サイトについて競合したとき、観察された蛍光度に減少が認められた。図5AはHAによる、RHAMMに対するペプチド結合の競合的置換を示している。競合HA濃度が増加したとき、蛍光度の濃度依存的減少が6つのリガンド全てについて観察された。ここで、最も効果的な相対的置換はフルオレセインラベル付きペプチドSEQIDNOs112および14のときに生じた。ただし、SEQIDNO9も置換された。ペプチドリガンドを更に評定するため、別の競合実験をおこなった。なぜならば、フルオレセインラベルの存在がこれらの低分子量ペプチドの物理的特性並びに結果的結合能に影響を及ぼすからである。ELISAを使用し、ラベル無しペプチドSEQIDNOs1391112および14を用いて染料ラベル付きHAと競合させた。この検定は、染料ラベルとたんぱく質との間の相互作用又はペプチドリガンドへの粗大染料の付加により生じる親和性の変化から生起される混同する結果を排除するものである。図5Bに示すように、チューブリンから得られる無蛍光ペプチドによるラベル付きHAの置換は蛍光信号の減少により容易に観察される。ラベル無しRHAMMリガンド又はフルオレセインラベル付きリガンドSEQIDNO14およびラベル無しRHAMMリガンド又はフルオレセインラベル付きリガンドSEQIDNO9は結合について一貫してHAと特に競合し得るものと思われる。従って、ペプチドのアミノ末端基での更なる変性がRHAMMに対する結合について殆んど効果がないとする考えを強化するものである。しかし、配列SEQIDNO1を含有するフルオレセインラベル付きα1aCTTはHAとの競合において、SEQIDNO1の非変性ペプチドと比較して、より優れていると思われる。RHAMM対CD44についての特異性:先の結果は、これらのペプチドがRHAMMのHA結合ドメインを標的とし得ることを示している。しかし、これらのHA模倣体がRHAMMを特異的に標的とすることを示すためには、CD44のような他のヒアラデリンに対するペプチドの親和性をテストする必要がある。この目的のため、固相ペプチド結合検定ELISAが図5cに示すようにCD44官能化表面を用いておこなわれた。上述のように、SEQIDNOs1391112および14の各FITC共役ペプチドを各ヒアラデリンRHAMM又はCD44に対し培養し、蛍光測定を行い、その結果を広範な洗浄プロトコルに続いて記録した。予想通り、RHAMMおよびフルオレセインペプチドから生じた蛍光測定は最高の信号を示し、そして、HAの添加に続いて蛍光度の著しい下落が示された。反対に、蛍光により示されるように、CD44およびフルオレセインペプチド相互作用はかなり低くなり、HAの添加の後の蛍光測定の予想された減少を示さなくなる。すなわち、ペプチドの結合はRHAMMとの特異的相互作用により生じるものであり、他方、これらはCD44との限定的相互作用を示すものとなる。血清の安定性:標的体又は治療薬としてのこれらの能力をテストするため、生物学的環境でのRHAMM結合ペプチドの安定性を検査する必要がある。ペプチドSEQIDNOs1391112および14の各々のinvitro血清安定性を11時間に亘って評価した。残存する無傷のペプチドの定量化をRPHPLCを用いて導出した。この検定において、ペプチドは37°Cでウシ胎仔血清にさらし、アリコートを30分間隔で分取した。各時点において、トリフルオロ酢酸を用いて血清蛋白質を析出させることにより、反応を停止させた。遠心分離によりペプチドを含有する粗製溶液を得た。この溶液をC18逆相カラムC18Sep-Pakに通過させ低分子量の不純物を除去した。無傷のペプチドをカラムから溶出させ、凍結乾燥させ、分析した。図9に示すように、無変性のRHAMM結合ペプチドは、ほぼ24時間の妥当な半減期を有する血清安定性を示した。細胞蛍光検定および図7に示すように、蛍光信号の蓄積がブロッキング処理を受けていない細胞並びに非特異性抗体で培養された細胞においても観察された。これはフルオレセインラベル付きプローブの高い摂取を示唆するものである。興味深いことに、抗CD44でブロックされた細胞は信号の減少を示さなかった。しかし、抗RHAMMmAbでブロックされた細胞は細胞蛍光の可なりの減少を示し、それによりRHAMMに対するペプチドSEQIDNOs19および14の特異性が確認されたp0001。図6Bに示すように、抗RHAMMmAbでブロックされた細胞は細胞蛍光に関して約65ないし約85の減少を示したフルオレセインラベル付きSEQIDNOs19および14は細胞蛍光に関して約85、約76および約65の減少をそれぞれ示した。検討:RHAMMは種々のガンにおいて過剰発現するガン遺伝子である。更に、RHAMM発現ガン細胞内でのHA、RHAMMの細胞外リガンドの蓄積の増大は、良くない臨床結果についての予後因子である。従って、結合についてHAと競合し得るものであって、RHAMMを標的にする低分子量リガンドは診断並びに治療目的において有用であると言える。この研究において、本発明者等は、RHAMMのHA結合ドメインを標的にし得るリガンドを識別することを探し求めた。HA結合ドメインを有するRHAMMのカルボキシ末端が細胞内の微小管網ネットワークでの局在性を媒介するから、データベース調査並びにRHAMMと、公知のチューブリン関連たんぱく質例えば、MAPsの微小管結合ドメインとの間の対方式の比較をおこなうことが妥当であると本発明者等は考えた。更に、これらのたんぱく質がチューブリンのCTTsへの直接的結合を示すため、本発明者等は、RHAMMが、異なるチューブリン亜型のCTTsを表す合成ペプチドと直接的相互作用を示すかもしれないと推論した。MAPsのチューブリン結合ドメインと、RHAMMのHA結合ドメインとの間の適度の相同性のため、チューブリンのどのペプチドフラグメントがRHAMMと相互作用するかについて判定する更なる調査がおこなわれた。この研究において、RHAMMと、新規なリガンドとの間の特異的相互作用が導出された。異なるチューブリン亜型のカルボキシ末端ドメインすなわち、CTT領域から由来するペプチドフラグメント並びに上記ドメインに直接隣接する配列が、固相ペプチド合成を用いて合成された。得られたペプチドをRHAMMに対しスクリーニングにかけ、高親和性リガンドを判定した。この目的のため、SPRスクリーニング法を用いた。この場合、RHAMMたんぱく質をSPRセンサープレートに固定し、ペプチドを流して高親和性および特異性を有するリガンドを見出した。この方法を利用した理由は、単一のRHAMM充填センサープレートを使用して高いスクリーニングスループットが可能となること、並びにSPR結合RHAMMが、細胞レセプターとして自然な皮膜結合状態を反映するものとなることからである。このスクリーニングにより6個の高親和性リガンドが得られた。これらはRHAMMのHA結合領域についてHAと競合できるものであり、これはELISAにより決定される。これらのペプチドはCD44であって、これもHAと結合すると比較して、より高い対RHAMM特異性を示すことが更なる評価により判定された。これらペプチドは生物学的環境において適度の安定性を示した。これはinvitroexvivo又はinvivo画像化を容易にするのに十分なものである。RHAMMについてより高い親和性を示す3つのHAペプチド模倣体の特異性を、RHAMM発現ガン細胞中のリガンドの相対的摂取を定量化することにより分析した。この目的のため、SEQIDNOs19及び14のペプチドをフルオレセインと共役させ、MDA-MB-231細胞を用いて培養した。細胞蛍光が3つの全てのペプチドについて観察され、摂取は抗CD44又は非特異的抗体の添加によって減少することはなかった。しかし、抗RHAMM抗体の添加によりプローブ摂取の劇的な減少が観察され、プローブ摂取の特異的ブロッキングが示唆された。このように、適度の安定性を合わせ持つプローブの高い特異性により、RHAMM発現ガン細胞のための診断薬としての更なる開発が可能となる。この明細書に示された上記結果は、チューブリンの可変性カルボキシ末端部分でのRHAMMのHA結合ドメインについての共通サイトの存在を示唆している。繰返しのヘキサペプチドモチーフが殆んどの候補ペプチドで示された。この酸性カルボキシ末端セグメントを分担するペプチドはRHAMMと相互作用した。このモチーフ、つまりEEXEEZは、図8Bに示すように、合成αIa、αIIIa、βIaおよびβIVCTTに存在している。この結果は、先の報告、つまり、短い配列EEGEEはチューブリンおよびMAP結合に関与するであろうという先の報告と合致するものである。HAおよびRHAMM相互作用における酸性官能基の役割にも拘わらず、これらの結果は以下のことも示唆している。つまり、CTT領域内のこれらの酸性残基のランダムな発生又は増大はRHAMMチューブリン相互作用に直接影響を及ぼすとは思われないということを示唆している。DEXEEZおよびEEXEDZモチーフを含有するペプチドが最初のスクリーニングに失敗したことは驚くべきことであり、これは1番目および5番目の配列内のAsp残基が、このモチーフ内の同様の酸性Glu残基を置換できないことを示唆するものである。これは更に、CTTのRHAMMとの相互作用が静電力および配座効果の双方により媒介されることを示唆している。意義:この研究は少なくとも6個の新規なリガンド、つまりRHAMMのHA結合ドメインと相互作用するリガンドの発見を開示するものである。これら6個のペプチドはRHAMMに対し強い親和性を示し、内因性HAにより置換されることができる。このことはHA結合ドメインに対する特異的標的性を実証するものである。更に、これらのリガンドのRHAMMとの結合におけるより大きな性向無細胞ベースすなわち、ELISAおよび細胞ベースすなわち、細胞蛍光の検定の双方においては、標的用実体としてのそれらの可能性を実証するものである。RHAMMの過剰発現およびその結果もたらされるHAとの相互作用はガンの病理に関与するものである。従って、これらのペプチドはRHAMMHA相互作用をブロックできる、従ってRHAMMの形質転換能を制限する拮抗薬として役立つものである。実施例3-RHAMMに対するアラニン置換RHAMM結合ペプチドの親和性:物質:溶媒は更なる精製なしに使用し、VWRFisherScientific又はSigmaAldrich社から購入した。フルオレニルメチロキシカルボニルRinkアミドMBHA樹脂、Fmocアミノ酸、Fmoc保護アミノヘキサノン酸およびHBTU1133テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートカップリング試薬ペプチド合成のためのものは、PeptidesInternational社から購入した。ペプチドの合成:リンクアミドMBHA樹脂上のペプチド鎖の伸長を、自動化法及び/又は手動法を用いて行った。この場合、Fmoc脱保護およびアミノ酸カップリングサイクルを関与させた標準固相ペプチド合成が用いられた。この合成を通しての繰返しFmoc脱保護15分および20分は、N,Nジメチルホルムアミド中の20ピペリジン溶液を用いて行われた。全てのアミノ酸カップリングは30分および90分の間隔で、005M以上の濃度のFmoc保護アミノ酸およびHBTU、DMF中のN,Nジイソプロピルエチルアミンを用いて行われた。各脱保護およびカップリング工程の後、樹脂をDMFおよびジクロロメタンを用いて繰返し洗浄した。FmocAhxは同じパラメータを用いてカップリングした。フルオレセインカップリングは4時間をかけて、ペプチドのアミノ基をDMF中のFITC蛍光染料4当量およびDIPEA2当量と反応させることにより行われた。その後の樹脂は、88のTFAおよび12のスカベンジャーからなる劈開カクテルで処理した。得られた樹脂を700rpmで3時間攪拌し、RP-HPLCを介して精製した。ELISA結合検定:RHAMMに対する結合に重要な残基を決定するため、フルオレセインラベル付きペプチドSEQIDNO1SEQIDNO25又はフルオレセインラベル付きペプチドSEQIDNO14SEQIDNO35内のアラニン置換の作用をテストする酵素連結免疫吸着検定をおこなった。組換えRHAMMを96ウェルプレートに添加し、4°Cで一晩培養した。これらプレートを、PBSTween20緩衝液で3回洗浄し、BSAブロッキング溶液を用い、室温で1時間培養した。フルオレセインラベル付きペプチドSEQIDNO25又はSEQIDNO35を添加し、PBSTween20緩衝液で洗浄し、吸光度を485535nmで測定した。拮抗的ELISA:拮抗的ELISAを用い、アラニン置換フルオレセインラベル付きSEQIDNO1SEQIDNO25又はフルオレセインラベル付きSEQIDNO14SEQIDNO35の能力がHAを置換し、RHAMMについて拮抗する能力を測定した。たんぱく質の不動態化および上述のような3回の洗浄の後、フルオレセインラベル付きチューブリン由来ペプチドおよびHAをプレートに添加し、4°Cで一晩培養した。洗浄プロトコルの後、吸光度を485535nmで測定した。結果:図10Aは、12のアラニン置換フルオレセイン共役ペプチドSEQIDNO1SEQIDNO25のRHAMMに対する親和性を示している。このデータは、SEQIDNO1の残基24710および12がRHAMMに対する正しい結合にとって重要であることを示している。図10Bは、SEQIDNO1SEQIDNO25の12のアラニン置換フルオレセインラベル付きペプチドの、HAによる拮抗的置換を示している。データは、位置24710および12でのSEQIDNO1のアラニン置換が、HAと競合するペプチドの能力を消滅させることを示している。ネガティブな対照不動態化RHAMMのないものは測定値のそれぞれから差し引かれている。又、全てのデータは2つの独立した実験における3つの測定値の平均である。図17Aは、11のアラニン置換フルオレセイン共役ペプチドSEQIDNO14SEQIDNO35の、RHAMMのHA結合領域に対する親和性を示している。このデータは、SEQIDNO14の残基23569および10がRHAMMに対する正しい結合にとって重要であることを示している。図17Bは、11のアラニン置換フルオレセインラベル付きSEQIDNO14SEQIDNO35の、HAによる拮抗的置換を示している。データは、位置23569および10でのSEQIDNO14のアラニン置換が、HAと競合するペプチドの能力を消滅させることを示している。ネガティブな対照不動態化RHAMMのないものは測定値のそれぞれから差し引かれている。又、全てのデータは2つの独立した実験における3つの測定値の平均である。実施例4-ヒトの上皮性卵巣がん細胞:物質:緩衝液および媒体は、Invitrogen社Sigma社およびVWR社から購入した。AlamarBlue検定キットはInvitrogen社から購入した。ジメチルスルフォキシドはAldrich社から購入した。上皮性卵巣がん細胞は、患者の同意を得て、LondonRegionalCancerCenterから得た。増殖検定:1つのRHAMM結合ペプチドSEQIDNO1の能力、つまり、患者の上皮性卵巣がんの腫瘍の増殖を制限する能力並びに他のRHAMM結合ペプチドSEQIDNO3の能力、つまり、腹水由来のヒトのEOC細胞の生存力を減少させる能力について検査した。この検定において、上皮性卵巣がん細胞を96ウェルプレート中で5000細胞ウェルの密度で培養させ、37°C、5CO2で24時間生育させた。ペプチドを1日目に細胞に添加し、増殖を6日間測定した。110th量のAlamarBlue試薬を毎日、6日間培養基中の細胞に直接添加した。蛍光を570590nmで読み取った。データは2つの実験の平均から採ったものである。DMSOのみで処置した細胞および細胞なし対照サンプルをこの実験に含めた。EOC細胞摂取の研究:EOC細胞をDMEM媒体10FBS中で90の密集度まで培養した。ついで、これらの細胞を2x24ウェル組織培養プレートに接種させた20000細胞ウェルの密集度。次に、3BSA01FCSを用いて室温で1時間、細胞のブロッキングをおこなった。このブロッキング実験において、抗体を添加し37°Cで1時間培養した。ついで、得られた培養基を吸引し、細胞をDMEM01FCSを用い室温で洗浄した。フルオレセイン共役ペプチドを添加し、37°Cで30分間培養した。ついで、細胞をDMEM01FCSで洗浄し、更にPBSで洗浄した。製造者のプロトコルに従いDAPIを含有するFluorogel11を用いて装着した。ついで、オリンパス社のFluoViewFV1000連結IX81電動倒立顕微鏡システムを用いて細胞を撮影した。Tiff画像はImageJソフトウェアを用いて分析した。各画像を8-ビットフォーマットに変換し、20および255の閾値に当てた。関心の領域を選択し、平均細胞蛍光度を導出した。ヒトの上皮性卵巣がん細胞の増殖:図11はヒトの上皮性卵巣がん細胞におけるペプチドSEQIDNO1の増殖検定を示している。EOC細胞は上皮性卵巣ガン患者の腹水から得たサンプルである。AlamarBlue検定を用いて増殖レベルを測定した。SEQIDNO1のペプチドを1日目に添加し、時間経過での作用を測定した。データは4つの患者OC細胞サンプル中の3つにおける増殖の抑制を示したものである。図13は卵巣腫瘍細胞におけるフルオレセイン共役ペプチドSEQIDNO1SEQIDNO25の取込みを蛍光顕微鏡を用いて可視化したものを示している。予想した通り、EOC細胞を抗RHAMMで培養したときフルオレセインラベル付きSEQIDNO1SEQIDNO25の摂取が減少し、細胞を抗IgG又は抗CD44で処理したときは、このプローブの摂取に影響を及ぼすことはなかった。図12はRHAMM結合ペプチドによる腹水由来ヒトEOC細胞の生存率減少を示すグラフであるp005。患者のEOCサンプルからの初代細胞を24ウェル培養皿に接種し、24時間後にRHAMM結合ペプチドSEQIDNO37および07uM濃度又はDMSOベヒクル対照を用いて処置を開始した。再投与を6日間毎日行い、細胞生存率を蛍光光度法により、AlamarBlueTM試薬を用いて評定した。実施例5-PC3mLN4ヒトの前立腺がんライン:物質および方法:細胞摂取の研究:侵襲性転移性前立腺腫瘍細胞により発現される2つのヒアルロナンレセプターはCD44およびRHAMMである。従って、前立腺ガン細胞を選択的に標的にする本発明のペプチドの能力が評価された。この検定において、PC3mLN4ヒトの前立腺がん細胞をDMEM媒体10FBS中で90の密集度まで培養した。ついで、これらの細胞を、2x24ウェル組織培養域20000細胞ウェルの密集度内のガラスカバースリップ上に播種した。次に、3BSA01FCSを用いて室温で1時間、細胞のブロッキングをおこなった。このブロッキング実験において、抗体を添加し37°Cで1時間培養した。ついで、得られた培養基を吸引し、細胞をDMEM01FCSを用い室温で洗浄した。フルオレセイン共役ペプチドを添加し、37°Cで30分間培養した。ついで、細胞をDMEM01FCSで洗浄し、更にPBSで洗浄した。製造者のプロトコルに従いDAPIを含有するFluorogel11を用いて装着した。ついで、オリンパス社のFluoViewFV1000連結IX81電動倒立顕微鏡システムを用いて細胞を撮影した。Tiff画像はImageJソフトウェアを用いて分析した。各画像を8-ビットフォーマットに変換し、20および255の閾値に当てた。関心の領域を選択し、平均細胞蛍光度を導出した。PC3mLN4ヒトの前立腺がんラインにおけるペプチド摂取:図14Aは、PC3mLN4ヒトの前立腺がんラインによる、HA模倣体SEQIDNO29であるフルオレセイン共役ペプチドSEQIDNO9の取込みを示している。このがんラインは攻撃的に侵襲性、転移性のものである。共焦点顕微鏡を用い、腫瘍細胞内のフルオレセイン共役ペプチドを検出した図14A、しかし、RHAMMたんぱく質が抗RHAMMmAbでブロックされたとき、FITC信号は減少した図14A。これは、プローブの摂取が特定の抗RHAMMモノクローン抗体によりブロックされたことを示している。更に、フルオレセイン共役HA模倣体の摂取は、細胞が抗CD44モノクローン抗体で処理去れたときには変化しない図14A。これらの結果は、本発明のHAペプチド模倣体が、RHAMM依存機構により、前立腺がん細胞と関連し、かつ、前立腺がん細胞により摂取されるということを示している。摂取の定量化は、抗体の処理を受けていない細胞と、抗CD44でブロックされた細胞との間で統計的な差異がないことを示している。抗RHAMM抗体で処理された細胞においては、プローブの摂取が劇的に減少したp0001。実施例6-GaDOTA共役ペプチドの合成および特徴付け:物質:使用された溶媒は、VWRFisherScientific又はSigmaAldrich社から購入した。RinkアミドMBHA樹脂、標準Fmocアミノ酸およびHBTUカップリング試薬は、PeptidesInternational社から購入した。1ブロモヘキサノン酸、グリシン、ブロモエチルアセテートおよび硝酸ガリウムはSigmaAldrich社から購入した。サイクレンCyclenおよびRe5BrはStremChemicals社から購入した。ペプチドの合成:Fmoc脱保護およびアミノ酸カップリングサイクルが関与する標準固相ペプチド合成を使用して、リンクアミドMBHA樹脂上にペプチドを合成させた。この合成を通して15分および20分、繰返しFmoc脱保護がおこなわれ、その際、N,Nジメチルホルムアミド中の20ピペリジン溶液が用いられた。全てのアミノ酸カップリングは30分および90分の間隔で、005M以上の濃度のFmoc保護アミノ酸およびHBTU、DMF中の5当量のN,Nジイソプロピルエチルアミンを用いて行われた。各脱保護およびカップリング工程の後、樹脂をDMFおよびジクロロメタンを用いて繰返し洗浄した。同じパラメータを使用して6ブロモヘキサノン酸をカップリングさせた。DMF中のサイクレン14710テトラアザシクロドデカン10当量をピプチジル鎖の末端と3日間反応させた。DMF中のエチルブロモアセテート3当量アミンを24時間、サイクレンの第2アミンと反応させ、ガリウムキレータを生成させた。ペプチドの精製は、88TFAでの処理ののち、H2O01TFAおよびCH3CN01TFAからなる勾配溶媒系を用い、分析用および分取用HPLCにより線流速15mL分および20mL分でそれぞれ行われた。分析用HPLCはGraceVydacたんぱく質ペプチドRPC18カラムを用いて行われ、分取用HPLCはGraceVydacたんぱく質ペプチドRPC18カラムを用いて行われた。吸光度はWaters2998PhotodiodeArray検出器を用い、220nmおよび254nmの波長で検出された。精製の間、フラクションを集め、凍結乾燥させ、ESIMSにより分析した。Ga6971のラベリング:ガリウムコーディネーションは、6971Ga3を用い、アセテート緩衝液中、pH=55で15分間おこなった。生産物をC18逆相C18Sep-Pakカートリッジを用いて単離させた。生産物を、脱イオン水中30アセトニトリルを1トリフルオロ酢酸と共に使用して上記カートリッジから溶出させた。得られた製品は質量分光分析を用いて特徴付けられ、純度はRPHPLCを用いて分析された。GaDOTA共役ペプチドの合成および特徴付け:6771GaDOTA共役ペプチドSEQIDNO1を合成し、PET画像化のため、68Ga配位放射線追跡子のための可能な非放射性サロゲート代替物として特徴づけられた。図15AはDOTA共役ペプチドのガリウムラベリングを示している。図15Bは、973分での精製ガリウム配位ペプチドのRPHPLCクロマトグラムを示している。図15Cは、図15Aの化合物のESI質量スペクトルを示している。実施例7-Re3配位ペプチドの合成および特徴付け:物質:使用された溶媒は、VWRFisherScientific又はSigmaAldrich社から購入した。RinkアミドMBHA樹脂、標準Fmocアミノ酸およびHBTUカップリング試薬は、PeptidesInternational社から購入した。グリシン、ナトリウムシアノボロハイドライドおよび3ピリジンカルボキシアルデヒドはSigmaAldrich社から購入した。Re5BrはStremChemicals社から購入した。Re3キレータの合成アミノ酢酸:10酢酸中のグリシン溶液に対し、3ピリジンカルボキシアルデヒドを過剰に添加した。室温での1時間の攪拌後、ナトリウムシアノボロハイドライドを添加し、得られた反応混合物を24時間攪拌した。その結果得られた混合物をクロロホルムを用いて抽出し、MgSO4を用いて乾燥させた。ついで、揮発性物質を蒸発させて黄色油を得た。この粗製製品をシリカクロマトグラフィを用いて精製した。ペプチドの合成:Fmoc脱保護およびアミノ酸カップリングサイクルが関与する標準固相ペプチド合成を使用して、リンクアミドMBHA樹脂上にペプチドを合成させた。この合成を通して15分および20分、繰返しFmoc脱保護がおこなわれ、その際、N,Nジメチルホルムアミド中の20ピペリジン溶液が用いられた。全てのアミノ酸カップリングは30分および90分の間隔で、005M以上の濃度のFmoc保護アミノ酸およびHBTU、DMF中の5当量のN,Nジイソプロピルエチルアミンを用いて行われた。各脱保護およびカップリング工程の後、樹脂をDMFおよびジクロロメタンを用いて繰返し洗浄した。Fmocアミノヘキサノン酸およびアミノ酢酸を上述の方法を用いてカップリングさせた。過剰のRe3Br32を用いてレニウム配位を実行した。固相支持体からの劈開は88のトリフルオロ酢酸を用いて実行した。ペプチドの精製は、H2O01TFAおよびCH3CN01TFAからなる勾配溶媒系を用い、分析用および分取用HPLCにより線流速15mL分および20mL分でそれぞれ行われた。分析用HPLCはGraceVydacたんぱく質ペプチドRPC18カラムを用いて行われ、分取用HPLCはGraceVydacたんぱく質ペプチドRPC18カラムを用いて行われた。吸光度はWaters2998PhotodiodeArray検出器を用い、220nmおよび254nmの波長で検出された。精製の間、フラクションを集め、凍結乾燥させ、ESIMSにより分析した。Re3配位ペプチドSEQIDNO1を合成し、そのSPECT画像化のため、99Tc3配位放射線追跡子のための可能な非放射性サロゲート代替物として特徴づけられた。図16AはRe3配位ペプチドSEQIDNO1の合成を示している。図16Bは、1106分での精製レニウム配位ペプチドのRPHPLCクロマトグラムを示している。図16Cは、レニウム配位ペプチドのESI質量スペクトルを示している。"