"式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩を含有するそのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤:式中、R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、H、SO3H、PO3Hから成る群から独立して選択され、R1~R6のうちの少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hおよび送達薬剤から選択される。R1~R6のうちの少なくとも3つがSO3HまたはPO3Hから選択される、請求項1の製剤。R1~R6のうちの少なくとも4つがSO3HまたはPO3Hから選択される、請求項1の製剤。R1~R6のうちの少なくとも5つがSO3HまたはPO3Hから選択される、請求項1の製剤。R1~R6がSO3HまたはPO3Hから選択される、請求項1の製剤。i式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩を含有する乾燥粉末医薬製剤式中、R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、H、SO3HまたはPO3Hからなる群より独立して選択され、ただし、R1-R6の少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hから選択されるi化学式IIの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩と式中、R1、R2、R5およびR6は、H、SO3HまたはPO3Hからなる群より独立して選択され;R4はSO3HまたはPO3Hから選択される、ii送達剤と、を含有する噴霧可能医薬製剤。前記式Iの化合物は下記のとおりのR1~R6を有する化合物およびその製薬学的に許容可能な塩から選択される、請求項1に記載のエアロゾル、乾燥粉末または噴霧可能製剤。エラスターゼ関連状態の治療を必要とする動物のエラスターゼ関連状態を治療または緩和する方法であって、i式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩式中、R1~R6は、SO3H、PO3HまたはHから独立して選択され、R1~R6のうちの少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hであるを含有する製剤を製薬学的に有効な量投与することを含む方法。前記製剤はエアロゾル製剤である、請求項9の方法。R1~R6のうちの少なくとも3つがSO3HまたはPO3Hから選択される、請求項9の方法。R1~R6のうちの少なくとも4つがSO3HまたはPO3Hから選択される、請求項9の方法。R1~R6のうちの少なくとも5つがSO3HまたはPO3Hから選択される、請求項9の方法。R1~R6がSO3Hから選択される、請求項9の方法。前記エラスターゼ関連状態は気管支炎である、請求項9の方法。前記エラスターゼ関連状態は肺気腫である、請求項9の方法。前記エラスターゼ関連状態はCOPDである、請求項9の方法。前記エラスターゼ関連状態は嚢胞性線維症である、請求項9の方法。前記エラスターゼ関連状態は急性呼吸窮迫症候群であり、前記製剤は静脈内投与により送達される、請求項9の方法。式Iの化合物またはその製薬学的に許容可能な塩式中、R1~R6は、SO3H、PO3HまたはHから独立して選択され、R1~R6のうちの少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hであるの肺送達のための送達装置。請求項1に記載の式Iの化合物と、抗炎症剤、ロイコトリエン拮抗薬または修飾剤、抗コリン作用薬、マスト細胞安定剤、コルチコステロイド、免疫刺激剤、ベータアドレナリン作動薬短期作用および長期作用、メチルキサンチン、ロイコトリエン拮抗薬および抗ヒスタミン薬から選択される少なくとも1つの追加の活性成分と、を含有するエラスターゼ関連障害の治療のための組み合わせ。前記少なくとも1つの追加の活性成分は、モンテルカストナトリウム、アルブテロール、レバルブテロール、サルメテロール、ホルモテロール、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、セチリジン、ロラタジン、デスロラタジン、テオフィリン、イプラトロピウム、クロモリン、ネドクロミル、ベクロメタゾン、フルニソリド、モメタゾン、トリアミシノロン、プレドニゾリン、プレドニゾン、ザフィルルカスト、ジレウトンまたはオマルジウナブomalziunabから選択される、請求項21に記載の組み合わせ。高硫酸化二糖を用いたエラスターゼ関連障害の治療方法。前記コア環は、6,6二糖または6,5二糖である、請求項23に記載の方法。前記二糖は6,5二糖部分である、請求項23に記載の方法。高硫酸化二糖の経口製剤を投与することを含む、エラスターゼ関連障害を治療する方法。米国特許仮出願第61/266,361号は、この未だに処理されていない要求に対処し、意外にも、本明細書で詳述されている高硫酸化二糖と、製薬学的に許容可能な天然ポリマーまたは合成ポリマーから成る群から選択される送達剤、ならびに、嵩高の化合物例えば、分子量が平均分子量として4,500ダルトンを超えるそれらの化合物の送達を向上させるのにこれまで利用されてきた他のビヒクルとを含むある製剤が、請求されている添加剤を用いずに経口で送達される同じ化合物と比べて吸収/バイオアベイラビリティ/効能を増していることを開示する。本発明は、化学式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩と、吸入に好適なビヒクルとを含む医薬製剤に関し、式中、R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、H、SO3HまたはPO3Hから成る群から独立して選択され、R1~R6のうちの少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hから選択される。本発明はさらに、R1~R6のうちの少なくとも3つがSO3HまたはPO3Hから選択される、化学式Iの化合物を有する製剤に関する。本発明はさらに、R1~R6のうちの少なくとも4つがSO3HまたはPO3Hから選択される、化学式Iの化合物を有する製剤にも関する。本発明はさらに、R1~R6のうちの少なくとも5つがSO3HまたはPO3Hから選択される、化学式Iの化合物を有する製剤にも関する。好ましくは、本発明は、R1~R6がSO3Hから選択される、化学式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩に関する。本発明は、R1~R6がSO3HまたはPO3Hから独立して選択される、化学式Iの化合物を有する製剤にも関する。本発明は、プロドラッグ、誘導体、活性代謝物、化学式Iの前記化合物の部分的にイオン化された誘導体および完全にイオン化された誘導体、ならびに、それらの立体異性体をさらに含む。本発明の二糖を構成する単量体は、D異性体またはL異性体であり得る。炭素環の周りのヒドロキシ部分またはそれらの硫酸化異形またはリン酸化異形またはそれらの中間体は、いずれかの特定の立体中心で、アルファ表記またはベータ表記であり得る。単糖部分の間を繋ぐ酸素原子も、アルファまたはベータであり得る。本発明の化合物の分子量は、通常、1,000ダルトン未満である。本発明はまた、エラスターゼ関連障害の治療における2つの6員環を有する多硫酸化二糖の使用に関する。最も好ましい実施形態は、R1~R6がSO3Hから選択される化学式Iの化合物とその製薬学的に許容可能な塩とを含むエアロゾル噴霧可能製剤に関する。本発明は、化学式Iの化合物の経口製剤にも関し、変数は、エラスターゼ関連障害の治療に対し上記で規定した通りである。本発明は、生物のエステラーゼ関連状態をその治療の必要に応じて治療する方法であって、化学式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩式中、R1~R6は、SO3H、PO3HまたはHから独立して選択され、R1~R6のうちの少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hであるを含む化合物を製薬学的に有効な量投与することを含む方法も含む。本発明について、以下の図面で説明する。本発明は、そのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤およびその利用に関し、その製剤は、化学式Iの化合物およびその化合物の製薬学的に許容可能な塩式中、R1、R2、R3、R4、R5およびR6は、H、SO3HまたはPO3Hから成る群から独立して選択され、R1~R6のうちの少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hから選択されるを含む。本発明は、i化学式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩式中、R1、R4、およびR5は、H、SO3HまたはPO3Hから独立して選択され、R2、R3およびR6は、SO3HまたはPO3Hから独立して選択されるを含む、そのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤にも関する。本発明は、i化学式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩、式中、R2およびR6は、H、SO3HまたはPO3Hから独立して選択され、R1、R3、R4およびR5は、SO3HまたはPO3Hから独立して選択されるを含むそのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤にも関する。本発明は、i化学式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩式中、R1、R2およびR6は、H、SO3HまたはPO3Hから独立して選択され、R3、R4およびR5は、SO3HまたはPO3Hから独立して選択されるを含むそのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤にも関する。別の実施形態では、本発明は、i化学式IIの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩式中、R1、R2、R4、R5およびR6は、SO3HまたはPO3Hから成る群から独立して選択されるを含むそのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤に関する。好ましい実施形態では、本発明は、i化学式IIの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩式中、R1およびR4はSO3Hであり、R2、R5およびR6は、H、SO3HまたはPO3Hから独立して選択されるを含むそのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤に関する。追加の好ましい追加の実施形態では、本発明は、i化学式IIの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩式中、R1はSO3Hであり、R2はHであり、R4、R5およびR6は、SO3HまたはPO3Hから独立して選択されるを含むそのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な医薬製剤に関する。本発明は、上に定義されたようなR1~R6を有する化学式IまたはIIの化合物およびそれらの製薬学的に許容可能な塩を含むそのような治療の必要な患者の肺への送達に好適な液体または固体剤形にも関する。本発明は、エラスターゼに関連するまたはエラスターゼ抗エラスターゼの不均衡における病状を治療または緩和する方法であって、i化学式Iの化合物およびその製薬学的に許容可能な塩を含む製薬学的に有効な量の製剤式中、R1~R6は、SO3H、PO3HまたはHから独立して選択され、R1~R6のうちの少なくとも2つは、SO3HまたはPO3Hであるを投与することを含む方法も含む。本発明は、好ましくは、R1、R2、R3、R4、R5およびR6が、表1に化合物1~14として示されている変異体から選択される化学式Iの化合物を含む噴霧可能、乾燥粉末またはエアロゾル医薬製剤に関する。好ましい実施形態では、本発明の製剤中の化合物は、上の表1に示されている化学式Iの化合物の金属塩から選択される。それらの化合物では、カルボン酸基がイオン化され、二糖の周りの各々の硫酸基がイオン化されて金属塩を形成し、その金属は、例えばナトリウムから選択される。加えて、アミン塩を含む他の塩が、カルボン酸塩または硫酸塩の位置に形成され得る。最も好ましい化合物は、化合物14のナトリウム塩としての完全イオン化形態である化合物14a。本発明の化合物は、本明細書で実施例において記載されているように、例えば、ヘパリンから得ることができる。用いた具体的なプロセスではブタヘパリンを用いたが、任意の哺乳類のヘパリンを用いて、本発明の化合物を生成してもよい。加えて、本化合物は、合成的に誘導してもよい。記載されている二糖の原料物質として、様々な他の多糖を用いてもよく、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ポリ硫酸ペントサンならびに、他のグリコサミノグリカンおよびムコ多糖体が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物は一般に、以下の工程を含むプロセスにより調製することができる。1ヘパリンナトリウムを水に溶解させ、pHを弱酸性約pH6に調節し、2この溶液を亜硝酸ナトリウムNaNO2水溶液で処理して亜硝酸を形成し、ヘパリンを脱重合しおよび、例えば、IdoA2SGlcNS6Sを脱アミノ化して、Ido2S-aManを形成する、3脱重合したヘパリン溶液を塩基化して、pHを約7にし、4脱重合したヘパリン溶液を希釈し、5前記溶液を濾過し、3kDa3000ダルトン未満のヘパリンオリゴ糖を収集、濃縮し、63kDA未満の脱重合したヘパリンを含む濾過溶液を塩基性に変化させ、7この塩基化した溶液を水素化ホウ素ナトリウムNaBH4で処理し、ヘパリンの酸性化および脱重合後に形成されたアルデヒドカルボニルを還元して、アルコールにし、8還元した生成物を濃酸で処理し、次に、pHを約7に調節し、9サイズ排除クロマトグラフィーを利用して、得られた還元オリゴマーをさらに分画して、二糖アンモニウム塩を得て、その二糖アンモニウム塩を陽イオン交換樹脂でさらに処理してナトリウム塩を形成し、そのナトリウム塩をさらに分画して、主成分として、式中のR1がHであり、R2がHであり、R3がSO3-であり、R4がSO3-であり、R5がHであり、R6がHであり、カルボキシ基CO2HがCO2-Naである化学式Iの化合物がナトリウム塩の形態として得られると共に、主成分として、式中のR1がHであり、R2がHであり、R3がSO3-であり、R4がSO3-であり、R5がSO3-であり、R6がHであり、カルボキシ基CO2HがCO2-Naである化学式Iの化合物が得られ、10その結果得られた二糖を適切な条件下で硫酸塩源例えば、CH33NSO3で処理し、本発明の製剤で用いる高硫酸化二糖を形成する。本明細書に限定することなく、ヘパリンおよび他の炭水化物または複合炭水化物は、ヒドロキシル基ならびに硫酸基またはカルボン酸基が規定の立体化学または絶対立体化学の環上に存在するキラル分子であることが分かる。ヘパリン中の最も一般的な二糖単位は、例えば、2-O-硫酸化イズロン酸および6-O-硫酸化グルコースアミンであるIdoA2SGlcNS6Sである。一般には、本発明の製剤で用いられる少糖類および二糖を生成する多糖源は、概して、炭水化物環の周囲にキラル中心の絶対立体化学を定めることが分かる。追加の硫酸基は、上に概要を記載したプロセスによる化学手段により、または、いずれかの既知の手段により付加され、最活性部分高硫酸化二糖およびそれらの塩が得られる。この最活性部分をさらに精製して、医薬品グレードの二糖が形成される。この二糖を賦形剤とさらに調合し、治療の必要な患者の肺に送達するのに適した剤形を形成させる。多硫酸化誘導体として上記で示した分子は、エラスターゼ関連障害の治療において活性であろう。そのような多硫酸化誘導体は、上記で示される3つの硫酸基より多くを有するであろう。核磁気共鳴造影法および/または他の既知の構造識別法を利用して、ヘパリンいずれかの既知のヘパリン源由来または他の所定の多糖の脱重合から得られた分子の化学構造を決定し得る。本化合物を合成または半合成で作製する場合、当業者は、標準の有機化学技術を用いて、所望のヒドロキシ部分を当業者に既知の保護基で保護することができる。上記で記載される化学式Iの化合物またはその混合物をその後、エアロゾル賦形剤または噴霧可能賦形剤と調合し、本発明の製剤を形成させる。賦形剤は、任意の公知のまたは発見された吸入剤、噴射剤および/または患者の肺に送達するのに好適な他の添加剤からなる群より選択される。そのような製剤および/または本明細書で記載される活性成分はまた、COPD、その下位疾患、CFまたは他のエラスターゼ関連状態のための公知の治療と共に送達され、またはこれと組み合わされ、またはこれと組み合わせて使用され得る。COPDでは、疾患は現在吸入抗コリン性気管支拡張薬臭化イプラトロピウム、チオトロピウムまたは吸入β刺激薬アルブテロール、サルメテロールまたはホルモテロールまたはそのような薬剤とステロイドの組み合わせAdvair、Symbicortまたはメチルキサンチンテオフィリンにより治療される。CFでは、現在の療法はCOPDに対する上記治療複数可と共に、DNASE、吸入抗生物質例えばトブラマイシン、抗炎症剤例えば高用量イブプロフェンを含む。患者およびその内科医の処方によって、本発明および指名された疾患のための上記治療のいずれか一つの組み合わせが、患者を治療するために使用され得る。ステロイドは、COPD患者には典型的には有効でなく、そのため、特許請求される多硫酸化二糖製剤などの療法が著しく必要とされている。本発明の製剤は、任意の適切な既知の手段により患者またはその他の生物に送達することができる。活性成分およびその他の賦形剤に対する、製剤に添加される添加剤の比率および添加剤の種類は、所望されている製剤の種類に依存する。例えば、エアロゾル製剤では、好適な噴射剤ならびに水溶液が好適な送達装置、例えば吸入器中で薬物を送達するために使用され得る。本発明の組成物は、エアロゾル送達手段または噴霧可能手段に好適な製薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む。式IおよびIIの化合物は、上述のように、製薬学的に許容可能な塩を形成する。金属塩としては、例えば、Na、K、Ca、NgもしくはBa、またはAl、Zn、Cu、Zr、Ti、Bi、MnもしくはOsを有する塩、あるいは、式IまたはIIの化合物をアミノ酸等の有機塩基または任意のアミンと反応させることにより形成される塩が挙げられる。好ましい塩はナトリウム塩である。したがって、本発明の好ましい製剤には、表1に示す化合物が含まれ、それは高硫酸化二糖であり、例えば、噴霧可能水溶液から選択される送達剤をさらに含む。好ましい活性成分は、ナトリウムが化学式I中のカルボキシル水素原子にとって代わるナトリウム塩の形態である。これらの製剤は、上昇したまたは異常レベルのヒト好中球エラスターゼと関連するそれらの病状、例えばCOPD、嚢胞性線維症などを治療するのに有用である。嚢胞性線維症は、患者肺での、病原菌による慢性感染に至らしめる異常な粘性粘液の産生により特徴づけられる。細菌コロニーは炎症細胞の流入を開始させ、これはさらに炎症性サイトカインIL-6およびIL-8の上昇を引き起こす。これにより、CF患者における感染と炎症の再発サイクルが起こり、罹患および死亡に至る。CF患者では、粘液溶解薬であり、粘液の肺からの排除を可能にし、抗炎症および抗エラスターゼ活性をも有する薬物がこの疾患を緩和し、または治療するのを助けるであろう。小さな臨床試験6人の患者においてCF患者を治療するのにヘパリンが使用され、より薄い痰および他の臨床パラメータに関してはいくらかの成功があったが、CFまたは他のエラスターゼ関連状態、例えば肺気腫またはCOPDを治療するためにこの医薬を使用することは承認されていない。本明細書で使用する場合、用語症状の治療または緩和は、本発明の製剤を投与した個人の症状を、治療を受けていない同じ個人またはとある個人の症状と比較して、軽減、予防および/または逆行させることを意味する。本発明の製剤は、ヒトならびに他の動物における有用性を予測する動物試験において有効であることが見いだされている。本明細書で記載される特定の動物試験は、製剤が全肺粘液繊毛クリアランスMCCを改善または刺激するのに有用であることを証明する。気管粘液速度TMVは、ヒツジにおけるMCCのマーカーとして測定される。TMVモデルは、様々な相対条件下で例えば障害された個人において観察される応答を模倣する測定値として使用され、障害された個人は薬物で治療される。好中球エラスターゼは、動物モデルヒツジにおいて、粘液繊毛不全を誘導する薬剤として、およびMCCを、8時間までの間ヒツジにおいて抑制する薬剤として使用される。化学式Iの化合物をその後、エラスターゼ処置動物においてTMVを増加させ、MCCを回復させる医薬として使用した。研究で使用したヒツジは、人道的な世話を用いて処置した。ヒツジは研究を通して意識があり、動物を局所麻酔薬で処置した後、器具の使用を実施した。化学式Iの化合物の効果を研究するために、ヒツジは麻酔薬鼻孔内2リドカインで局所的に処置した後、気管内チューブ直径7.5cmを経鼻的に挿管させた。チューブのカフを声帯直下に配置し、気管表面積の最大暴露を可能にした。カフを、薬物送達期間中を除き研究を通して収縮させ、チューブによるTMVの障害を最小に抑えた。吸気を温め、加湿した。TMVは出版物ChestVol1285November2005pp37423749において一般的に記載される方法により、インビボで測定した。TMVは、X線撮影技術により、5~10の放射線不透過性Teflon/三酸化ビスマスディスク、直径1mm、厚さ0.8mmおよび重量1.8mgを用いてインビボで測定した。ディスクを、連続圧縮空気源3-4L/minに接続された改造吸引カテーテルを介して気管内に吹き込んだ。カテーテルは気管内チューブ内に残ったままであり、気管表面との接触はない。個々のディスクのセファリッド軸流速度を画像増強器ユニットからビデオテープ上に記録する。個々のディスク速度を各ディスクが1分の観察期間の間進んだ距離を測定することにより計算する。各実行に対し、全ての個々のディスク速度の平均値をその後に計算する。この研究で使用したヒツジは、蛍光透視ユニットに固有の拡大誤差を較正するために標準として公知の長さの放射線不透過性基準マーカーを含むカラーを着用した。HNEをElastinProductCompanyOwensville,MOから入手した。保存液を製造者の仕様に従い調製した。ヒツジに決められた量のHNEを、約1.1μmのMMADを有する液滴を生成させるRaindropネブライザNellcorPuritan-Bennett,Carlsbad,CAエアロゾル送達システムを使用して投与した。ネブライザを電磁弁と20ポンド/平方インチpsiでの圧縮空気源とから構成される薬量計に接続させた。ネブライザの出力をT字部品に接続させ、一端をHarvardレスピレーターHarvardApparatusInc.,HollistonMAに取り付けた。レスピレーターを1:1の吸気/呼気比および20呼吸/分の速度で設定した。電磁弁をレスピレーターの呼吸サイクルの開始時に1秒間作動させた。500mlの1回換気量を使用して薬剤を送達させた。本発明では、化学式Iの化合物を患者の肺に送達させる任意の好適な手段が使用され得る。エアロゾル送達手段、噴霧可能送達手段および噴射剤および/または吸入剤装置手段が、当技術分野で知られており、本明細書で使用され得る。本明細書で使用される化合物は好ましくは、乾燥粉末として使用され、これらはその後、患者への送達日に、滅菌容器および脱イオン水または他の好適な溶媒/送達システムを使用して溶液として調製される。いくつかの装置では、化学式Iの化合物の乾燥粉末は、可溶化剤または溶液の必要なしで、患者に医薬を送達するために使用され得る。本発明の製剤はまた、他の適切な薬物または活性成分と組み合せて、治療の対象とする特定の疾患または状態に応じて投与することができる。本発明は、本明細書での定義に従うR1~R6を有する式IまたはIIの化合物すなわち、硫酸基を少なくとも2個有するを、それを必要とする生物に投与することを含む、COPDの治療法に関する。追加の活性成分は、併用療法の形式または少なくとも2つの活性成分を有する単回投与単位の形式で投与することができ、第1の活性成分は、本明細書での定義に従うR1~R6を有する式IまたはIIの化合物であり、第2の活性成分は、CF、COPDまたは任意のエラスターゼ関連状態または障害に続発する任意の状態の治療のために最先端治療として使われるいずれかの薬または薬物から選択される。そのような薬物としては、抗炎症剤、ロイコトリエン拮抗薬または修飾剤、抗コリン作用薬、マスト細胞安定剤、コルチコステロイド、免疫刺激剤、ベータアドレナリン作動薬短期作用および長期作用、メチルキサンチン、および以下に制限されないが、モンテルカストナトリウム、アルブテロール、レバルブテロール、サルメテロール、ホルモテロール、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、セチリジン、ロラタジン、デスロラタジン、テオフィリン、イプラトロピウム、クロモリン、ネドクロミル、ベクロメタゾン、フルニソリド、モメタゾン、トリアミシノロン、プレドニゾリン、プレドニゾン、ザフィルルカスト、ジレウトンまたはオマルジウナブomalziunabを含む、上記のような障害の治療に使用されるその他の一般クラスまたは特定の薬品が挙げられる。以下の実施例は、本発明の特定の実施形態をさらに詳しく説明することを目的としており、非制限的である。実施例1高硫酸化二糖の調製最初にヘパリンナトリウムを脱重合化することによって、本発明の製剤で用いる化合物を調製した。活性薬物物質の調製のための出発物質は、例えば、ブタ腸粘膜ヘパルチン1~4個の連結したグルコサミンおよびウロン酸残基から成る多分散硫酸化コポリマーである。本明細書で記述されている活性薬物物質ADS、高硫酸化二糖は、ヒツジモデルで抗アレルギー活性を有することが示された。ADSの生成は一般に、以下の手順であった。1ブタヘパリンを制御下で亜硝酸脱重合化2NaBH4を持つ末端アルデヒド基をアルコールに還元3サイズ排除クロマトグラフィSECによって、分離した二糖のアンモニウム塩を生成4二糖アンモニウム塩を三酸化硫黄ピリジン錯体と反応させ、高硫酸化二糖を生成5SECに続いてナトリウム塩への陽イオン交換を行い、最終生成物を得るこの方法で生成される好ましい生成物は、以下に示すナトリウム塩形態の硫酸基を6個有する高硫酸化二糖化合物14aであった。化合物14aの溶解度は>0.5g/mLである。以下の手順において、本明細書に記述される化合物を製造するための数多くの可能な方法の1つを説明する。室温で、水3リットルを入れたビーカーに、市販のブタヘパリン-Na例えば、Wisconsin州WaunakeeのSPL等の市販の供給源から入手250gを加え、攪拌してスラリーにし、その時点でさらに水2リットルを加え、ヘパリン塩を完全に溶解した。次にヘパリン溶液のpHをおよそpH65.98に調節した。この溶液に、NaNO20.25mmol、J.T.Baker、ACSグレードを17.25g添加し、ヘパリンの制御した亜硝酸脱重合化を達成した。攪拌を10分間続け、その間に約23°Cの温度で、37HClを約35.1mlゆっくりと加え、pHをおよそ33.00にした。溶液の温度およびpHを2時間120分モニタリングし、その間に温度は20°Cに、pHは2.16に低下した。次に50NaOHを約23mlゆっくりと加えて、pHを6.75に調節し、溶液をクエンチし、脱重合化したヘパリン溶液を得た。上記で得た脱重合化したヘパリン溶液をdtH2Oを使って最終容積8リットルに希釈し、濾過しMillipore社Mass.、Bedoford、Pellicon2、面積が0.5m2の3kPLBC-Cカセット:CatPSPLBCC05、分子量3kDaでカットオフ、サイズが3kDa3000ダルトンに満たないヘパリンオリゴ糖を採取し、濃縮したすなわち、透過液は3000ダルトンに満たないこれらのオリゴ糖から構成されていた。3000ダルトンより大きい濃縮物を、20M溶液を使って、亜硝酸の脱重合化処理に再びかけ、さらにヘパリンの分解を開始した。同じ種類のフィルター分子量3000ダルトンでカットオフを使って、この2回処理したオリゴ糖調製物を限外濾過した後、得られた透過液分子量3kDa未満を初回の限外濾過から得た透過液に加え、続いて、バッチ全体を逆浸透圧法で濃縮し、最終容積を2.5リットルに減少させた。続いて、これを凍結乾燥した。凍結乾燥したオリゴ糖調製物50gを1リットルの純水に溶解した後、2~10°Cの氷浴で冷却した。冷却したオリゴ糖溶液にNaHCO321gを添加し、完全に溶解するまで調製物を攪拌した。0.01MのNaOH溶液400mL中の0.5Mの水素化ホウ素ナトリウムNaBH4溶液を調製し、60分かけて、冷却したオリゴ糖/NaHCO3溶液にゆっくりと添加した。NaBH4溶液0.5Mの処理は、5員環上に形成されたアルデヒド脱アミノ反応後に形成されるをアルコール成分に還元することが目的だった。この反応調製物を3時間、2~10°Cで攪拌した後、濃HClでクエンチし、pH4.0にした。その後、溶液のpHをNaOHを使って、6.75に調節し、最終的に逆浸透圧法で最小容量に濃縮し、その後、凍結乾燥して、還元オリゴ糖を得た。サイズが3kDa未満の還元オリゴ糖調製物を後にBio-RadBiogelP6樹脂0.2MのNH4HCO3による溶出を使って、サイズ排除クロマトグラフィSECによって分画してオリゴミックスoliogmixを分画し、二糖アンモニウム塩を採取した。採取した画分をカルバゾールアッセイで分析し、Abs530対画分数のプロットにより、採取した画分のプロファイルを得た。プロファイル上の類似画分をプールし、後で凍結乾燥し、分離した画分をアンモニウム塩として得、NH4HCO3を除去した。AmberliteIR120Plus陽イオン交換樹脂Sigma-Aldrich社から市販されているを使った陽イオン交換によって、アンモニウム塩をナトリウム塩の形態に変えた。これらの画分から2つの二糖を得、化合物A85重量およびB3~5重量と同定された。化合物A:化合物B:上記の化合物AおよびBを含有する画分をさらに処理し、高硫酸化二糖を形成した。2つの非制限的方法を利用した。方法1では、2.5グラムの二糖を含有する上記フラクションを50mLの水に溶解させた溶液を、Sigma-Aldrich社から市販されているDowex500WX200酸性樹脂と、製造メーカーの指示に従って反応させることによって酸性化した。酸性の濾液をテトラブチルアンモニウムヒドロキシドを使って中和し、その溶液を凍結乾燥し、テトラブチルアンモニウムBu4N塩を綿状固体として得た。次にアルゴン下で、無水DMF50mLを二糖アンモニウム塩とCH33NSO35.22グラムとの混合物に添加した。この反応混合物を50°Cで48時間、加熱した。次にこの溶液を室温に冷却した。酢酸ナトリウムのエタノール飽和溶液100mlを添加し、この混合物を室温で20分間攪拌し、水2.5Lで希釈した後、500ダルトンすなわち、0.5kDaの膜で濾過した。濃縮物すなわち、0.5kDaより大きいを凍結乾燥し、NH4HCO3溶液0.2Mに再び懸濁し、製造メーカーの指示に従って、Bio-RadBiogelP6樹脂Bio-Rad社、Hercules、CAでクロマトグラフィーにかけ、0.2MのNH4HCO3で溶出し、高硫酸化二糖のNH4塩3.5グラムを得た。この塩の一部2.4グラムを、製造メーカーの指示に従って、AmberliteIR120Plus陽イオン交換樹脂Sigma-Aldrich社から市販されていると反応させ、Na塩に変換し、表1に示されており、以下に化合物14aとして示されている化合物14のナトリウム塩を得た:化合物14a:この化合物は、方法2によっても調製した。方法2では、化合物AとBを含有する画分0.5グラムとCH33NSO33グラムとのアルゴン下、15mLのDMF中の混合物を48時間、60°Cで加熱した。その後、この反応混合物を室温に冷却し、10の酢酸ナトリウム水溶液20mLで希釈し、室温で20分間攪拌し、エタノール100mLを添加し、高真空下でこの反応混合物を濃縮し、固体残渣を得た。この残渣を500mLの水に溶解し、500ダルトンの膜で濾過したH2Oで3回洗浄。高硫酸化した14a生成物を含有するナトリウム塩濃縮物を凍結乾燥して、オフホワイトの固体を得た。実施例2以下に限定されないが、本明細書に列挙された具体的な疾患および状態を含め、エラスターゼに関連する疾患および状態の治療および緩和に対する本発明による製剤の有効性を実証するために、出願者は下記実施例を提供する。動物準備この研究で使用される全ての手順は、MountSinaiMedicalCenterAnimalResearchCommittee実験動物の人道的使用を確保する責任を有するにより調査され、承認された。成体ヒツジをカート内で、特別の体用ハーネスで直立位置にて拘束した。動物の頭部を固定し、鼻孔の局所麻酔を2リドカインで誘導した後、動物に標準気管内ETチューブ7.5mm直径、Mallinckrodt,St.Louis,MOを経鼻的に挿管した。気管支ファイバースコープを使用して、ETチューブを案内し、その気管内での位置を確認した。チューブのカフを声帯直下に配置し、気管表面積の最大暴露を可能にした。気管内チューブカフ膨張により引き起こされるTMVの可能性のある障害を最小に抑えるために、我々は化合物の噴霧期間を除き研究を通してカフを収縮させた。さらに、長期挿管の効果を緩和するために、我々はBennett加湿器Puritan-Bennett;Lenexa,KSを使用して吸気を温め、加湿した。挿管後、動物は約20分間の休息が与えられ、その後に試験を開始した。動物は全研究を通して覚醒し、警戒していた。TMV測定TMVは、インビボで蛍光透視技術によりSiremobile2000フルオロスコープSiemensを用いて測定した。5~7の放射線不透過性Teflon/三酸化ビスマスディスク1mm直径、厚さ0.8-mmおよび重量1.8mgを動物の気管の中央部に吹き込んだ。3~4L/分での連続圧縮空気源に接続されたカテーテルを使用して、気管の表面上に、気管内チューブを介してディスクを送達させた。カテーテルはディスクの吹送中のみ気管内チューブ内に留まり、気管表面とは接触しなかった。ディスクが気管上に送達されるとすぐに、各個々のディスクの頭側軸流速度を、フルオロスコープとインラインの携帯用画像増強器ユニットからビデオテープ上に記録した。速度を各ディスクが1分の観察期間の間進んだ距離を測定することにより計算した。各実行に対し、全ての個々のディスク速度の平均値を計算した。公知の長さの放射線不透過性基準マーカーを含むカラーをヒツジの首周りに固定し、蛍光透視ユニットに固有の拡大誤差を較正するために標準として使用した。エアロゾル送達システム全ての薬剤は、RaindropネブライザNellcorPuritan-Bennett,Carlsbad,CAを用いてエアロゾル化した。これは約1.1μmのMMADを有する液滴を生成させる。ネブライザを電磁弁と20ポンド/平方インチpsiでの圧縮空気源とから構成される薬量計システムに接続させた。ネブライザの出力をT字部品に接続させ、一端をHarvardレスピレーターHarvardApparatusInc.,HollistonMAに取り付けた。レスピレーターを1:1の吸気/呼気比および20呼吸/分の速度で設定した。電磁弁をレスピレーターの吸気サイクルの開始時に1秒間作動させた。500mlの1回換気量を使用して薬剤を送達させた。薬剤ヒト好中球エラスターゼHNEをElastinProductsCorporation,Inc.Owenville,MOから入手した。保存液を製造者の仕様に従い調製した。1190mUの活性酵素を含む6.8μlのアリコートをストックから調製し、-80°Cで保存した。実験日に、HNEを3mLのリン酸緩衝生理食塩水に溶解し、ヒツジに上記で記載されるエアロゾル送達システムを用いて総量を投与した。二糖ナトリウムおよび高硫酸化二糖は、乾燥粉末として提供した。溶液は実験日に新たに調製した。滅菌容器を使用して化合物を秤量し、合計3.0mLの脱イオン水を容器に添加した。化合物が完全に溶解するとすぐに、溶液を動物にエアロゾルにより上記システムを使用して投与した。全ての薬剤を噴霧乾燥させた約10-12分。カプセル形態の経口剤形を1:2の活性成分対カルボポール比15mg活性/30mgカルボポールを用いて調製した。図4で示されるように使用した用量は、それぞれ15mgの2つのカプセルであった。カルボポールに類似する他の好適な賦形剤もまた経口製剤において使用され得る。プロトコルプロトコル1:TMVにおけるHNE誘導低減に対する二糖ナトリウムおよび高硫酸化二糖を用いた前処置の効果:初期ベースラインTMV測定値を得た後、動物を別々に、二糖ナトリウム10mg、30mgまたは100mgまたは高硫酸化二糖10mg、30mgまたは100mgで処置した。30分後、それから、ヒツジをエアロゾル化HNEで誘発した。TMVの測定値をHNE投与後15分、30分および45分、その後1時間毎に6時間まで、取得した。プロトコル2:TMVにおけるHNE誘導低減の逆行に関する高硫酸化二糖の効果:ベースラインTMV測定値を得た後、ヒツジをエアロゾル化HNEで誘発した。その後、TMV測定値を、HNE投与後最初の4時間の間1時間毎に取得した。直ちに、4時間TMV測定後、ヒツジを10mg、30mgまたは100mgの高硫酸化二糖で処置した。連続TMV測定値をHNE後8時間まで1時間毎に取得した。プロトコル3:TMVにおけるHNE誘導低減に対する経口高硫酸化二糖の効果:動物を、12時間毎に投与される、2回の経口高硫酸化二糖14a30mgのカルボポールを有するそれぞれ、15mgのカプセル2つ、30mgに等しい活性総用量で処置した。最後の用量は、HNEによるエアロゾル誘発前90分に投与した。TMVの測定値を、ベースラインおよびエアロゾル化HNEによる誘発後15分に取得し、その後、上記のように誘発後6時間までの間連続して取得した。結果図1はTMVにおけるHNE誘導低減に関する吸入高硫酸化二糖化合物14aの効果を示す。HNEは単独でTMVをベースラインの約60まで低減させた。吸入高硫酸化二糖により前処置により、このTMVにおけるHNE誘導低減に対し用量依存性保護が得られた。比較して、図2はHNE誘導効果に対する等用量の2’,6二硫酸二糖ナトリウムヘパリンの一酸化窒素による化学脱重合化により生成の効果を示す。高硫酸化二糖と対照的に、10mgおよび30mg用量の2’,6-二硫酸二糖ナトリウムはどちらも、HNE誘導応答に対する保護を提供しなかった。よって、高硫酸化二糖例えば、2を超える硫酸を有するは、HNE誘導効果に対する保護において増加した効能を示した。この比較例で使用される2’,6-二硫酸二糖ナトリウムは硫酸基の代わりにヒドロキシル基を有するすなわち、R1、R2、R5およびR6はHであり、R3およびR4は硫酸であり、カルボン酸アニオンのナトリウム塩を有する化学式Iの化合物として示される同一の化合物である。図3は、高硫酸化二糖がHNEの効果を逆行させることもできることを示す。この研究では、10mg用量の高硫酸化二糖は無効であったが、30mgおよび100mgの両方の高硫酸化二糖ではHNE誘導応答の著しい逆行が見られた。これらの所見は、高硫酸化二糖はTMVにおけるHNE誘導低減に対抗するように治療的に、ならびに予防的に図1で示されるように使用することができることを示す。図1-3で示される研究では、動物データは明らかに、特許請求する化合物は、ヒト好中球エラスターゼに関連する疾患または病状の有効なモジュレーターであることを示す。好ましい実施形態では、特許請求する化学式Iの化合物およびその塩は、多硫酸化塩の形態であり、その治療の必要な患者の肺に送達される。特許請求する本発明について、その具体的な実施形態に言及しながら詳しく記述してきたが、特許請求する本発明に対して、その精神と範囲から逸脱することなく、各種の変更および改変を加えられることは、当業者には明らかであろう。したがって、例えば、当業者は、単なる日常的な実験を用いることにより、特許請求する本発明の無数の実施形態のうち、明確に記述されていない可能性のある実施形態を認識するであろう。そのような実施形態は本発明の範囲内である。本発明はさらに、ヘパリン由来のそれらの二糖を含み、6-6員構造を有する任意の多硫酸化二糖を用いて、エラスターゼ関連障害を治療する方法に関し、ただし、少なくとも3つの硫酸基がその部分上に存在することを条件とする。そのような化合物は例えば、US特許公開第US20030087875号;5,690,910号;6,193,957号および7056898号において記載されており、これらは全て参照により組み込まれる。下記で示されるN-硫酸化二糖単位およびその立体異性体を含むその多硫酸化バージョンはまた、エラスターゼ関連障害の治療において有効である:高硫酸化二糖という用語はこのように、二糖コア分子上に少なくとも2つの硫酸部分を有する任意の二糖部分を意味し、ただし、そのような分子は、化学式Iの化合物においてR1、R2、R5およびR6をHとして、R3およびR4を硫酸SO3-Mとして有するナトリウム二糖を含まない。この用語はまた、ヘパリン由来で、低分子量例えば、約1,000ダルトン以下を有する任意の多硫酸化二糖および任意の多硫酸化誘導体またはその化学的/酵素的に修飾されたバージョンを含み、ただし、前記部分は少なくとも2つの硫酸基を有する。酵素処理により、上記で示される6,6二糖が提供される。NOによる化学脱重合により、6,5環構造が提供される。好ましい修飾物または誘導体は少なくとも3つの硫酸部分を有する。最も好ましい部分は、全てのヒドロキシル基が硫酸基により置換されており、いずれのN基もN-硫酸化される。参考文献SerisieretalInhaledheparininCysticFibrosisEurRespirJ200627354358BirrelletalSteroidresistantInflammationinaRatModelofChronicObstructivePulmonaryDiseaseisAssociatedwithaLackofNuclearFactorκBPathwayActivationAmJRespirCritCareMedvol172Pp74842005MicheleetalTheSafetyofTiopropiumTheFDA’sConculsionsNEnglJMed36312September162010JancinNewTherapiesBegintoFillCFPipelineSabateretalComparativeEffectsofSalmeterolAlbuterolandIpratropiumonNormalandImpairedMucociliaryFunctioninSheepChest200512837433749SpenceretalNewInsightsIntotheInhibitionofHumanNeutrophilElastasebyHeparinBiochemistry20064591049120VolpiInhibitionofHumanLeukocyteElastaseActivitybyHeparinsInfluenceofChargeDensityBiochimicaetBiophysicaActa1290299307SissietalInteractionsofLowMolecularWeightSemiSyntheticSulfatedHeparinswithHumanLeukocyteElastaseandHumanCathepsinGBiochemicalPharmacology71287293LeveretalSizeFractionatedHeparinsHaveDifferentialEffectsonHumanNeutrophilFunctioninVitroBritishJournalofPharmacology151837843RedinietalInhibitionofLeucocyteElastasebyHeparinandItsDerivativesBiochemJ252515519LedsonetalNebulizedHeparininBurkholderiacepaciaColonizedAdultCysticFibrosisPatientsEurRespirJ2001173638LafumaetalPreventionofLeucocyteElastaseInducedEmphysemainMicebyHeparinFragmentsEurRespirJ1991410041009BirrelletalSteroidResitantInflammationinaRatModelofchronicObstructiePulmonaryDiseaseisAssociatedwithaLackofNuclearFactorKappaBPathwayActivationAmJRespirCritCareMed2005Jul11727484Epub2005April1SpenceretalNewInsightsIntotheInhibitionofHumanNeutrophilElastasebyHeparinBiochemistry2006Aug145910420LeeetalLeukocyteElastasePhysiologicalFunctionsandRoleinAcuteLungInjuryAmJRespirCritCareMedvol164pp896904WalshetalHeparinandHeparanSulphateareInhibitorsofHumanLeukocyteElastaseClinicalScience81341346RedinietalInfluenceofHeparinFragmentsontheBiologicalActivitiesofElastaseandα1ProteinaseInhibitorBiochemicalPharmacologyVol37No22pp425742611988LonkyetalStimulationofHumanGranulocyteElastasebyPlateletFactor4andHeparinBiochemicalandBiophysicalResearchCommunicationsVol85No31978CadeneetalInfluenceofLowMolecularMassHeparinontheKineticsofNeutrophilElastaseInhibitionbyMucusProteinaseInhibitorTheJournalofBiologicalChemistry270No22June213204132091995FinottietalDifferentialEffectsofHeparinandGlucoseonStructuralConformationofHumanα1AntitrypsinEvidenceforaHeparinInducedCleavedFormoftheInhibitorArchivesofBiochemistryandBiophysics3471November119291997FalleretalHeparinInterfereswiththeInhibitionofNeurtophilElastasebyitsPhysiologicalInhibitorsBiolChem373503508July1992SiedleetalNaturalCompoundsasInhibitorsofHumanNeutrophilElastasePlantaMed2007May7340120KellyetalTargetingNuetrophilElastaseinCysticFibrosisExpertOpinTherTargets2008Feb1214557OhbayashiHNeutrophilElastaseInhibitorsasTreatmentforCOPD2002Jul1196580KawabataetalPharmacologicalProfileofaSpecificNeutrophilElastaseInhibitorSivelestatSodiumHydrate2003Aug12215160HagiwaraetalANeutrophilElastaseInhibitorSivelestatReducesLungInjuryFollowingEndotoxinInducedShockinRatsbyInhibitingHMGB1Inflammation2008Aug3122734BesshoetalSivelestatReducesMyocardialIschemiaandReperfusionInjuryinRateHeartsEvenWhenAdministeredAfterOnsetofMyocardialIschemiaInteractCardiovascThoracSurg2009Jun862934Epub2009Mar11RoghanianetalNeutrophilElastaseandNEInhibitorsCanonicalandNoncanonicalFunctionsinLungChronicInflammatoryDiseasesJAerosolMedPulmDrugDeliv2008Mar2112544HagiwaraetalNeutrophilElastaseInhibitorReducestheLevelsofInflammatoryMediatorsbyInhibitingNFkBInflammRes2009Apr58198203BeckeretalInhibitionofPMNElastaseActivitybySemisyntheticGlucanSulfates2003May8991525"