"明細書中に記載の一発明。発明の要旨本発明の1実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つについて有効な薬学的組成物であって、有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体と、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を含む薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つについて有効な薬学的組成物であって、有効な量の少なくとも1つの抗CD74抗体と、有効な量の少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を含む薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、およびその組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つについて有効な薬学的組成物であって、有効な量の少なくとも1つの抗TNFR抗体と、有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体と、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を含む薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗MIF抗体をこの被験体に投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、被験体における熱傷関連心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗MIF抗体をこの被験体に投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗CD74抗体をこの被験体に投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗MIF抗体をこの被験体に投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、MIFインヒビターを同定するための方法であって、少なくとも1つの筋細胞を少なくとも1つのMIFに対して曝露する工程;少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この筋細胞をこのMIFおよび少なくとも1つの候補因子に対して曝露する工程;この候補因子の存在下でこのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この候補因子がこのMIF関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して、有効な量の少なくとも1つの抗TNFR抗体と有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体とを投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して、有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体を投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、被験体における熱傷関連の心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して、少なくとも1つの抗MIF抗体と少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して、少なくとも1つの抗CD74抗体と少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、この被験体に対して、少なくとも1つの抗MIF抗体と少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、この被験体に対して、少なくとも1つの抗TNFR抗体と、少なくとも1つの抗MIF抗体と、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性における抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つのための方法であって、低分子MIFインヒビター、その塩、そのプロドラッグおよびそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つの有効な量をこの被験体に投与する工程を包含する方法に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、およびその組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つのための方法であって、少なくとも1つの抗TNFR抗体の有効な量と必要に応じて少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとをその必要な被験体に投与する工程を包含する方法に関する。本発明はさらに、以下の項目を提供する。項目1心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つのために有効な薬学的組成物であって、有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体と、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を含む、薬学的組成物。項目2少なくとも1つのCD74インヒビターをさらに含む、項目1に記載の薬学的組成物。項目3上記CD74インヒビターが少なくとも1つの抗CD74抗体を含む、項目2に記載の薬学的組成物。項目4心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つのために有効な薬学的組成物であって、有効な量の少なくとも1つの抗CD74抗体と、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を含む、薬学的組成物。項目5心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つのために有効な薬学的組成物であって、有効な量の少なくとも1つの抗TNFR抗体と、有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体と、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を含む、薬学的組成物。項目6被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗MIF抗体を該被験体に投与する工程、を包含する、方法。項目7上記心機能障害が、心筋活性における不規則性、心筋活性における抑制、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、項目6に記載の方法。項目8被験体における熱傷関連心機能障害を処置または予防するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗MIF抗体を該被験体に投与する工程、を包含する、方法。項目9上記熱傷関連の心機能障害が、心筋活性における不規則性、心筋活性における抑制、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、項目8に記載の方法。項目10被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗CD74抗体を該被験体に投与する工程、を包含する、方法。項目11急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、有効量の少なくとも1つの抗MIF抗体を該被験体に投与する工程、を包含する、方法。項目12心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つのための方法であって、該必要な被験体に対して、有効な量の少なくとも1つの抗TNFR抗体と、必要に応じて、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを投与する工程を包含する、方法。項目13MIFインヒビターを同定するための方法であって、少なくとも1つの筋細胞を少なくとも1つのMIFに対して曝露する工程;少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;該筋細胞を該MIFおよび少なくとも1つの候補因子に対して曝露する工程;該候補因子の存在下で該MIF関連筋細胞活性を決定する工程;該候補因子が該MIF関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程、を包含する、方法。項目14急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、該被験体に対して、有効な量の少なくとも1つの抗TNFR抗体と有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体とを投与する工程、を包含する、方法。項目15被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、該被験体に対して、有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体を投与する工程、を包含する、方法。項目16被験体における熱傷関連の心機能障害を処置または予防するための方法であって、該被験体に対して、少なくとも1つの抗MIF抗体と少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する、方法。項目17被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、該被験体に対して、少なくとも1つの抗CD74抗体と少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する、方法。項目18急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって、該被験体に対して、少なくとも1つの抗MIF抗体と少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する、方法。項目19急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置または予防するための方法であって、該被験体に対して、少なくとも1つの抗TNFR抗体と、少なくとも1つの抗MIF抗体と、少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む組成物の有効な量を投与する工程、を包含する、方法。項目20心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における不規則性をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心筋活性における抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、心臓抑制をその処置または予防が必要な被験体において処置または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つのための方法であって、低分子MIFインヒビター、該低分子MIFインヒビターの塩、該低分子MIFインヒビターのプロドラッグおよびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つの有効な量を該被験体に投与する工程を包含する、方法。発明の詳細な説明本発明の種々の他の目的、特徴および付随する利点は、他に示さない限り、限定はしないが、本発明の以下の詳細な説明からよりよく理解されるのと同じようにさらに詳細に理解される。本発明の1つの好ましい実施形態は、心臓由来の心筋抑制因子としてマクロファージ遊走阻止因子MIFに関与する処置方法およびバイオアッセイに関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、熱傷に関連する心機能障害の処置および/または予防の方法に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、心筋梗塞のための治療としてのMIFの調節に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、心機能障害におけるTNF-αの調節に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、CD74の阻害による心保護の方法に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、抗MIF抗体によるMIFの調節に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、MIF活性を阻害する因子を同定するためのバイオアッセイに関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、抗MIF抗体でのMIFの阻害および心機能の付随する回復火傷後に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、抗MIF抗体の投与による熱傷関連心臓抑制の改善のための方法に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、抗MIF抗体の投与による急性心筋梗塞後の心臓機能の改善に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、心臓、肝臓および脾臓からのMIFの放出が、TNF-αレセプターI/IIシグナル伝達に依存しており、従ってTNF-αは治療標的であり得るという観察に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、組み換えヒトTNFR:FcでのTNF-αの中和に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、1つ以上の抗MIF抗体でのMIF活性の中和に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、MIFの上流のメディエーターとしてのTNF-αの発見に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、CD74MIFレセプターが、心筋細胞で発現され、そして心機能障害の重要なcriticalメディエーターであるという観察に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、MIFの阻害および1つ以上の抗CD74モノクローナル中和抗体でCD74レセプターを阻害することによる心保護の改善に関する。本発明の1つの好ましい実施形態は、心筋活性の不規則性または抑制のような心機能障害を処置および/または予防するための方法に関する。この方法は好ましくは、マクロファージ遊走阻止因子MIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含する。このインヒビターは抗体であってもよい。このインヒビターは、タウトメラーゼ活性またはオキシドレダクターゼ活性のような酵素活性を含む、特定のMIF活性に影響し得る。本発明の1つの好ましい実施形態は、MIF活性を阻害する因子を同定するためのアッセイに関する。このアッセイは好ましくは、筋細胞を、インビトロまたはインビボのいずれかで、そしてMIFを、MIF活性を阻害し得る因子の有無において、その両方を包含する。このアッセイは、例えば、MIFおよび潜在的なインヒビターの存在に基づいて、免疫組織化学または心エコーのようなツールを用いて、筋細胞活性を分析する。本発明の1つの好ましい実施形態は、MIF活性を阻害する因子を同定するためにこのアッセイを用いる方法であって、MIF活性を阻害し得る因子の存在下に筋細胞およびMIFを置く工程、筋細胞活性に対するその影響を決定する工程とを包含する方法に関する。筋細胞は、インビトロであってもインビボであってもよく、そしてその効果は、免疫組織化学または心エコー図を利用して測定されてもよい。本発明者らは、MIFが心筋の障害の誘発因子であり、ヒトの敗血症の罹患率および死亡率に有意に寄与することが公知であるということを見出している。ヒト患者および動物の両方のモデルにおいて、敗血症関連心機能障害は、両室の拡張、収縮期収縮性の低下、および拡張期弛緩の低下によって特徴付けられる。理論によって束縛されることは望まないが、その病原性は多因子性であって、その発現の誘発に関与する腫瘍壊死因子αTNFαのような全身および心筋に由来するサイトカインによると考えられる。本発明の1実施形態は、MIFまたは他の心臓由来タンパク質が、自己分泌または傍分泌機構によって、敗血症および他の心疾患において心機能障害を媒介するか否かを決定する工程に関する。マウスにおける心臓の遺伝子発現のマイクロアレイ分析をスクリーニングすることによって、MIFが心臓で発現されること、およびリポポリサッカライドLPSチャレンジ後に示差的に調節されることが示唆される。MIF阻害が実験的な敗血症を有する動物において転帰を改善するというデータを考慮し、以下の実施例を構築して、MIFがインビボで心筋細胞によって発現されるか否か、この発現がエンドトキシンチャレンジによって偏向されるか否か、そしてMIFが心機能に対して生理学的に重要な効果を有することが確認された。本明細書の実施例のいくつかによって、インビボの心臓MIF発現が実証され、そしてMIFがインビボで致死量未満の内毒素チャレンジにおいて心機能を抑制することが確認される。MIFは、正常な心筋において構成的に発現され、そして、内毒素チャレンジ後に心筋細胞によって放出されて、心臓組織レベルはチャレンジ後12時間で最低に達する。遅延型放出を支持する証拠は、心臓および脾臓の組織から12時間の有意な放出を実証している、ウエスタンブロットおよび免疫組織化学によって本出願において示されており、そして8時間で開始してその後継続する心臓保護の遅延型発現によって間接的に支持される。抗MIFモノクローナル抗体を用いたLPSをチャレンジされたマウスの処置によって、左室の円周短縮率の改善によって証明されるとおりインビボで心機能が有意に改善される。MIFの心筋抑制効果をさらに実証するため、切り離された拍動中のマウス心臓Langendorff灌流を、ある濃度の組み換えMIFrMIFを含有する溶液で灌流させた。rMIFを用いた灌流によって、収縮および拡張性の能力の両方の有意な抑制が生じる。本発明者らは、MIFがインビボで心筋細胞によって合成され、LPSチャレンジ後に放出されるということを実証した。従って、MIFは心機能障害を直接媒介し、そしてMIFは、敗血症および他の心疾患における心機能の改善の薬理学的標的として実証される。心臓遺伝子発現に対するマイクロアレイデータによって、MIFは心臓組織においても発現されるということが強調される。本明細書におけるいくつかの実施例によって、MIF灌流はインビトロにおいて心機能を直接抑制すること;そしてさらに、MIFに対する2つの独立したモノクローナル抗体のいずれかでの処置が後期の心筋抑制を軽減することが示される。本発明の別の好ましい実施形態は、限定はしないが、心筋活性の不規則性または抑制のような心機能障害を含む、熱傷関連状態を処置および/または予防するための方法に関する。この方法は好ましくは、マクロファージ遊走阻止因子MIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含する。このインヒビターは、MIF活性および/またはMIF産生を阻害し得る。このインヒビターは好ましくは、抗体またはタンパク質である。このインヒビターは、タウトメラーゼ活性またはオキシドレダクターゼ活性のような酵素活性を含む、特定のMIF活性に影響し得る。このインヒビターは、心筋組織におけるMIF活性またはMIF産生を阻害またはブロックし得る。このインヒビターはまた、ABC輸送体のインヒビターのように、MIF放出を阻害または予防し得る。本発明の別の好ましい実施形態は、MIFの活性または産生を阻害する因子を同定するためのアッセイに関する。このアッセイは、心筋細胞を、インビトロまたはインビボのいずれかで、そしておそらくMIFを、MIF活性またはMIF産生を阻害する因子の有無において包含する。このアッセイは、MIFおよび潜在的なインヒビターの存在に基づいて、免疫組織学または心エコー図のようなツールを用いて、筋細胞活性を分析する。本発明の1実施形態は、予防/処置の方法および診断のアッセイにおける火傷関連の心機能障害におけるMIFの役割を利用する。マウス熱傷モデルを用いて40TBSA、本発明者らは、構成的な心臓MIFは、ウエスタンブロット分析によって決定されるように熱傷の8時間後、有意に低下した2.1分の一ことを確認した。血清MIFは、熱傷の4時間後に最大であった2.2倍増大。これらのパターンは、熱傷後の心臓および全身に由来する、事前に成形された細胞質貯蔵からのMIF放出と一致している。本明細書の実施例に示されるとおり、熱傷後にみられる心機能障害におけるMIFの効果を決定するために、マウスを抗MIF中和モノクローナル抗体で事前に処置した。熱傷の4時間後に開始そして48時間にわたって継続して、熱傷のみを有するマウスは、38.6/-1.8ニセのFS56.0/-2.6という抑制された左室円周短縮率FSを示した。抗MIF処置マウスは、熱傷後に心機能改善の遅延を示し、機能の完全な回復は24時間までであった。これによって、サイトカインMIFは、熱傷関連心機能障害の遅延を媒介することが示され、そしてまた、MIFは熱傷関連心機能障害および他のMIF媒介性の合併症、例えば熱傷関連ARDSの処置のための薬理学的標的であることが示される。熱傷後、MIFは、4時間までに血清中に最大放出され図9;組織放出は、8時間まで最大になる心臓および脾臓図7および8。MIFが抗体によって中和される場合、心機能は12時間まで有意に、そして24時間で完全に改善して、これによって、MIFの調節は、熱傷後のインビボにおける心機能障害のメディエーターとして実証される図12。熱傷のマウスモデルでは、LPSがそのTlr-4トール様レセプター4との相互作用、およびそのIRAK-1との相互作用を通じて関連の心機能障害を媒介することが実証されている。LPSの供給源は、熱傷に関連するいくつかの潜在的な損傷insultに起因して腸由来であると考えられる。これらとしては、腸の虚血、菌の移行、および腸透過性の増大が挙げられる。理論によって束縛されることは望まないが、炎症性因子の産生および放出は、腸関連リンパ組織を通じて全身性になると考えられる。マウスでの致死量未満の内毒素中毒症のモデルでは4mg/kgLPS、MIFが、インビボにおける遅延型の心臓抑制効果を媒介したことが観察される。組み換えMIFは、LPSと独立した方式でLangendorffアッセイによってエキソビボで直接的な心臓抑制を誘発することも確認されている。熱傷に関して、本発明の1実施形態は適切には、内毒素中毒症のモデルにおいて得られた観察と比較していくつかの利点を有する。第一に、MIFは、LPSチャレンジ8時間に比較して、火傷モデル4時間、図7では早期の時点で放出され、そして全身性のMIF濃度の増大は有意に高い2.2倍増大図9対1.5倍。第二に、心機能障害の程度は、心エコーによって測定されるとおり、内毒素中毒症モデルに比較して熱傷モデルにおいてそれほど大きくない。熱傷に関して、本発明者らは望ましくは、円周短縮率心拍出量の評価を、4時間の内毒素中毒症モデルでの53.7に比較して67.2FS-31.1FS/67.2FS、4時間までにベースラインから38低下56.2FS-34.8FS/56.2FSさせることが可能である。MIF阻害は、本発明の1実施形態によれば、24時間までに完全な心保護を生じ図12、これは、内毒素中毒症モデルでは48時間まで生じないが、内毒素中毒症モデルでは8時間までに有意な保護が最初にみられ、そして熱傷モデルでは12時間までない。これによって、MIFは熱傷関連心機能障害でさらに大きい役割を果たすことが実証される。最後に、心臓のMIFmRNAレベルの増大は、熱傷では8時間までに有意に増大して図10、内毒素中毒症モデルでは48時間まで増大されなかったことが確認された。熱傷の心臓効果は、腸由来LPSに関連することが示されているが、効力のある損傷insultは、それが、皮膚および腸に関与しており、さらに生理学的に関連する疾患プロセスであるという点で、内毒素中毒症モデルよりも複雑である。MIFの中和は、12時間で開始する心保護を生じ、そして顕著な心機能障害は、熱傷を有するマウスでは、4時間程度の早期に確認された図12。TNF-α、IL-1β、IL-6、およびIL-10が、心筋細胞によって分泌され、そしてTNF-αおよびIL-1βが、心筋抑制の主なメディエーターである。本発明は、MIF媒介性の心機能障害の前に生じる早期心機能障害においてこれらが役割を果たすことを考慮する。MIFは、心エコー検査によって示される抗MIF処置12時間の保護効果の直前8時間に心臓から局所的に放出されるので、本発明は、このモデルでは後期の時点でみられる心機能障害においてMIFが重大な役割を果たすことを考慮する熱傷後12~48時間。系統的に検討されたさらなる10のサイトカインのうち図9、全身性のIL-6およびIL-12のみが熱傷後に調節された。外科手術後の敗血症患者において報告されているように、全身性のIL-12レベルは最初の12時間で有意に低下された。このTH1サイトカインにおける低下は、敗血症における生存が、熱傷で同定されている感染に対する生得的な免疫応答の障害によって低下されるという1つの機構として仮説されている。大きな熱傷は、組織における酸化的ストレスから生じる脂質過酸化の主な産物である、血漿および心臓のマロンジアルデヒドMDAレベルの有意な増大を生じることが示されている。さらに、抗酸化療法は、酸化的ストレスの増大に対する、熱傷関連炎症性応答において、炎症性サイトカインの放出を減少させることが示されている。以前の研究によって、MIFは酸化的ストレス後の心筋細胞から分泌され、そして理論によって束縛はされないが、これはMIFが放出される機構であり得るということが実証されている。H2O2によって開始される酸化的ストレスは、ERK1/2シグナル伝達経路およびプロテインキナーゼCの活性化を生じ、この後者がMIFの分泌を担うと考えられる。従って、事前に形成されたMIFの心臓放出は、心臓における酸化的ストレスの増大で開始され得、これがMIFの放出をシグナルして図7および8、そしてその転写を上方制御図10して、心筋細胞における貯蔵を再補充する。ほとんどのサイトカインは、刺激後に上方制御される、緊密に制御された発現を有する。しかし、MIFは、かなりの量で予備形成されて、その発現は、新規なタンパク質合成にのみ依拠するのではなく、ABC輸送体に関与する分泌機構によって制御される既存の貯蔵にも依拠する。MIF遺伝子は、その役割がそれを小胞体に転位することである、N末端シグナル配列はコードしない。MIFは、小胞中のサイトゾルおよび核に主に位置しており、これが摘み取られて細胞の外側に放出される。従って、壊死性の細胞傷害は、事前に貯蔵されたMIFの放出をもたらす。理論によって束縛されることは望まないが、以前の研究では、熱傷は本発明者らのモデルにおける皮膚壊死に関与することが明確に実証されているので、MIF放出は、皮膚の壊死細胞から直接放出され得る。なぜならMIFは、皮膚で同定されており、そして上皮の基底層に局在しているからである。予備成形されたMIFの壊死性の放出に加えて、損傷された上皮および線維芽細胞は、MIFの発現および分泌を増大することが示されている。例えば、アトピー性皮膚炎では、MIFは上方制御されて、疾患の病理学で中心的な役割を果たす。インビボでの全身のUVB被曝はMIF産生を増大させることが示されており、これによって、組織損傷におけるその関与が示唆される。損傷された上皮および培養された線維芽細胞はまた、創傷治癒プロセスに対して陽性に寄与するMIFの発現を増大する。MIFの全身レベルは、火傷損傷の皮膚から放出されたMIFに関与する因子に起因して、内毒素中毒症モデルに比較してこの熱傷モデルにおいては、さらに急速かつ劇的に増大し得る熱傷モデルにおける4時間までの2.2倍対、内毒素中毒症モデルにおける8時間までの1.5倍の増大。MIFは、ARDSおよび敗血症の肺合併症においてある役割を果たすと仮説されていることが示されている。抗MIF治療は、敗血症に関連する急性の肺損傷において肺の好中球蓄積を低下させることが示されている。MIFは、ARDS患者由来の肺胞毛細管内皮および非浸潤性マクロファージにおいて発現される。MIF発現は、ARDSにおいてこれらの2つのサイトカインに対する重篤な炎症に効率的に関連するTNF-αとの増幅ループを形成することが示されている。ARDSは、熱傷の重要かつ一般的な合併症であるので、本発明は、心臓保護適応以外で有用であり、そして転帰に深く影響する抗MIF治療を考慮する。MIFは、サイトカインのなかでも固有である。なぜなら、MIFは、オキシドレダクターゼおよびタウトメラーゼの活性を含む、多数の酵素活性を有するからである。そのタウトメラーゼ活性の阻害は、そのグルココルチコイドの主要な活性のような公知のMIF活性を相殺することが示されている。MIFタウトメラーゼ活性の薬理学的インヒビターは、敗血症、喘息、アトピー性皮膚炎および急性呼吸急迫症候群ARDSのような抗MIF治療が有効である疾患のために開発されている。サイトカインMIFは、熱傷に関連する遅発性の心機能障害において重要な役割を果たす。MIF自体は、直接の心臓抑制因子であり、そして心臓からの遅延型の放出を有する。MIFの遅延型の放出およびMIFの活性を潜在的に阻害するインヒビターの開発によって、MIFは、その心肺効果に関連する罹患率および死亡率に関連して、疾患、例えば熱傷について潜在的な標的となる。本発明の別の実施形態では、本発明者らは、心臓、肝臓および脾臓からのMIF放出がLPSチャレンジ後のTNFレセプターI/IIシグナル伝達に依存することを見出した。さらに、本発明者らは、TNFレセプターI/IIシグナル伝達がMIFの血清への放出とは独立していることを確認する。TNFレセプターシグナル伝達なしに、MIFレベルは、わずかに遅延し野生型での8時間に比較して12~24時間、そしてわずかに増大する野生型での1.5倍の増大に比較して、ベースラインの1.7~2.3倍ようである。さらに、TNFレセプターI/II欠損マウスTNFR-/-におけるTNFレセプターと独立したMIF放出は、野生型マウスで以前に同定されている、組織からのMIF放出の欠乏にかかわらずLPSチャレンジ後少なくとも24時間まで心機能障害を媒介するのに十分である。早期の心機能障害がTNFR-/-マウスで確認されており、そして理論によって束縛されることは望まないが、他の潜在的なメディエーター例えば、IL-18および他のメディエーターに加えて、このモデルにおいて高度に発現されることを本発明者らが確認した公知のメディエーターIL-1β、IL-6におそらく起因すると考えられる。分離された心臓Langendorf調製では、MIFは、即時的な20分内の心機能障害収縮期および拡張期を、直接、TNFR-/-マウスおよび野生型マウスの両方で同じ程度まで誘発することが確認された。しかし、TNFR-/-マウスにおけるLPS誘発性心機能障害は、抗体でのMIF中和によって48時間まで完全に消失され、これによって、TNFレセプター媒介性のMIFの独立した放出が、内毒素中毒症のモデルにおいて顕著な後期心機能障害を誘発し得る24時間および48時間ことが示された。サイトカインMIFは、リンパ球、マクロファージおよび下垂体前葉を含む多くの細胞タイプで構成的に発現される。心臓、肺、肝臓、副腎、脾臓、腎臓、皮膚、筋肉、胸腺、皮膚および精巣を含む多くの組織がまたMIFを含む。分泌の機構は、LPS刺激単球で最近記載されている。モネンシンまたはブレフェルディングbrefeldingAのような古典的なタンパク質分泌物のインヒビターは、MIFの分泌を阻害せず、このことによって、非古典的なタンパク質輸出経路が示唆される。ABCA1ATP結合カセットA1輸送体グリブリドおよびプロベネシドのインヒビターが与えられた場合、MIF分泌は生じなかった。MIFは、小胞中のサイトゾルおよび核に主に位置しており、これが摘み取られて細胞の外側に放出される。この非古典的な、小胞媒介性の分泌経路は、炎症性疾患および特に敗血症において重要な役割を果たすことが示されているHMGB1のような他の重要な炎症性メディエーターの分泌の機構であることが示されている。本発明では、いくつかの組織におけるTNF-αシグナル伝達に対するMIF分泌の依存を最初に記載している。MIFは、活性化補助因子JAB1/CSN5および細胞表面タンパク質CD74/Ii鎖を通じて調節される触媒特性である、糖質コルチコイド拮抗特性を含む多くの生物学的活性を有する。MIFの特異的な分泌は、内毒素LPSおよび腫瘍壊死因子のような炎症性刺激、ならびにACTHおよびアンジオテンシンIIのようなホルモンの後に生じる。免疫細胞に加えて、内分泌細胞およびいくつかの上皮細胞はMIFを分泌する。分泌は、MIF発現の増強および新規の合成、ならびに既存の貯蔵からの放出の誘発に起因する;この両方とも、心臓で前に実証されている。心臓MIFは、野生型マウスにおけるLPSチャレンジの12時間後に最大に放出されることが報告されている。LPSチャレンジ後の野生型マウスにおける血清MIFレベルは、心機能障害の早期の保護に対応して、8時間で最大放出する。TNF-αシグナル伝達が、Enbrel登録商標前処理またはTNFR-/-マウスのいずれかによってLPSチャレンジ後に阻害される場合、MIFレベルのピークはさらに遅くかつわずかに高く、このことは、TNF-αが血清MIFレベルに対するある程度の制御を有するが、MIF放出は阻害しないことを示す。野生型マウスを抗MIF中和抗体で前処置して、LPSチャレンジ4mg/kgに供した場合、最初の重篤な心機能障害は、4時間で見られ、これはLPS単独を投与されたマウスと同一であった。しかし、最初の有意な保護は、8時間でみられ、そして48時間までに改善され、心機能がコントロールの動物と有意に異なることはなかった。MIFは、単離された野生型の心臓においてほぼ即時的かつ直接的な心臓効果を有したので、MIFは、その遅延型放出と平行して心機能における役割を果たしたと考えられた。しかし、本発明では、MIFの非心臓の放出はインビボで同様に24時間および48時間機能に有意な影響を有し得るということが実証されている。これらの効果は、以前に記載されたよりも遅れて生じ8時間で最初の保護、そしてTNF-αシグナル伝達が野生型マウス8時間で最大のMIF放出に比較してブロックされる12~24時間場合、全身的なMIF放出は平行して遅れる。早期の心機能障害は、TNF-α、IL-1β、およびIL-18のような敗血症およびLPS関連の心機能障害を媒介することが示されているいくつかのサイトカインに起因し得ると考えられる。内毒素血症における心筋TNF-αレベルと収縮性の機能障害との間の一時的な不一致が報告されている。LPS関連心筋障害のこれらの知見は、TNF-αの中和後のLPS誘発性心機能障害から保護を報告している他の知見と矛盾して、TNF-αレベルが、ベースラインに戻るまで生じなかった。これらの知見およびその他の知見によって、まだ同定されていない他の因子のなかでもIL-1β、IL-6、IL-18のような下流のメディエーターのLPS誘発性の増大のために、TNF-αが必要であるという仮説が導かれた。本発明者らは、内毒素血症のそれらのモデルにおいてMIFの効果のうち全てではないがある程度心臓、肝臓、脾臓からのMIF分泌をTNFシグナル伝達が媒介するということを実証する。TNF-αシグナル伝達の指標的な役割は、他の研究者によって、特に内毒素血症モデルにおけるサイトカインIL-18との関係において、研究されている。TNF-αノックアウト-/-マウスにおけるLPSチャレンジ後、心臓でのIL-18レベルは有意に変化せず、一方野生型マウスは、IL-18レベルの有意な増大を実証した。IL-18が中和される場合、この研究によって、LPS誘発性の心機能障害は、軽減されること、およびIL-18が組織のTNF-α、IL-1β、およびICAM-1/VCAM-1のレベルに対して下流の効果を有すると考えられることが実証された。この研究はIL-18の心筋産生および心筋でのIL-18の放出に集中していたが、IL-18の心臓以外の供給源は検討されなかった。この研究は、IL-18の組織心臓産生/放出に対するTNR-α依存性における本発明者らの研究と同様であると考えられる。同様に、心筋のサイトカインmRNA発現およびLPSチャレンジ後の血漿サイトカインレベルに対するTNF-α阻害の効果を確認した以前の研究に注目することが重要である。TNFの阻害は、2時間で、IL-1β、IL-6およびMCP-1の血漿レベルを有意に低下したが、MIFも、TNFも、IL-10もIL-12も低下しなかった;対照的に、抗TNF事前処置は、この早期の時点で、IL-1βの心筋発現を有意に低下したが、MIFを含む他のサイトカインは低下しなかった。本発明者らは、MIFが2時間より後に放出する12時間でピークことが示されるということを示しているので、本発明者らは、この以前の研究において、TNF非依存性およびTNF依存性のMIF経路を、IL-1β、IL-6、およびMCP-1と平行して初めて記載している。これらは、重要な知見である。なぜならこれらのサイトカインのほとんどが、心機能障害を直接媒介することが示されているからである。この研究におけるLPSチャレンジ後のTNFR-/-マウスの心機能障害18.245.9-27.7FSは、本発明者らの以前の研究における野生型マウスで確認された心機能障害、36.767.3-30.6ほど顕著ではないが、この抑制は、有意である。多数のサイトカインが、LPSチャレンジ後の早期の心機能障害の結果であると考えられたので、本発明者らは、TNFR-/-モデルにおいて血清サイトカインのレベルを確認した。TNF-αのレベルは、野生型マウスに比較して劇的に増大したが、機能的なレセプターTNFレセプターまたはTNFレセプターIIがなければ、早期の心機能障害が媒介されることはなかった。しかし、IL-1βおよびIL-6の増大は、4時間で明確にみられそれぞれ、野生型マウスを31.2倍および8.5倍上回る、そしておそらく、他のサイトカイン、例えば、近年記載されたIL-1βおよびまだ記載されていない他のメディエーターに加えて、早期の心機能障害に寄与する可能性がある。TNF-α分泌の調節におけるTNF-αシグナル伝達の役割は、以前に記載されている。しかし、本発明者らは、TNF-αレセプターシグナル伝達が負のフィードバック機構によって、IL-1β、IL-12およびIL-10を調節し、そしてIFN-γを正に調節することを初めて実証した図19。同様に、IL-6欠損マウスは、LPSチャレンジ後にIL-1βおよびTNF-αの発現を増強し、そして本発明者らは、心臓のIL-6、それ自体を含む炎症促進性メディエーターの発現を負のフィードバック機構によって抑制するということを考慮する。TNF-αシグナル伝達は、TNF-αレセプター1および2という2つのレセプターを通じて生じる。これらの2つの経路は、多様なシグナル伝達経路を有する。TNF-αとレセプター1との相互作用は、TNF-αレセプターが活性化しない、NF-kBを含むいくつかのシグナル伝達経路を活性化する。2つの可能なTNFレセプターのいずれが心臓におけるMIF放出の阻害を担っているかを検討するために、本発明者らは、心臓においてIkBを過剰発現しているマウスをチャレンジして、ほぼ完全なNF-kB阻害を得た。ウエスタン分析によって、本発明者らは、放出が試験した全ての時点でTNFR-/-マウスと同じ方式で生じなかったことを実証したデータ示さず、図2Aと同一。これらのマウスは、野生型に匹敵する循環中のTNF-αを有するなぜなら、NF-kB阻害は、心臓特異的であるから。さらに、これらのマウスは、野生型マウスと同様に血清中でMIFを発現する。従って、本発明は、TNFレセプター1が、心臓から野生型マウスでみられる組織放出を媒介し得ることを考慮する。この心臓の表現型は最初の48時間の間のエコーによって、LPSチャレンジ後に完全に保護されるデータ示さずので、本発明者らは、循環中のMIFは上流のNF-kB媒介性タンパク質がシグナル伝達することを必要とするということTNF-α、IL-1βまたは、MIFがNF-kB自体によってその効果を媒介することを考慮する。野生型マウスにおけるLPSチャレンジ後のIL-10およびIFN-γの放出は、それらがMIF中和抗体で事前処置される場合、減弱される図20。MIFは、遅延型の放出であるので、このサイトカインは、MIFが放出された後に生じる、MIFに対するその一時的な関係に起因して影響される可能性が高い図13。これらの知見によって、MIF活性は、内毒素チャレンジ後にIL-10およびIFN-γ放出において有意な役割を果たすことが示されるが、これは、それらの放出についての唯一のシグナルではないようである。TNFR-/-マウス図19Cでは、IFN-γ放出は同様に阻害され、その放出に必要なTNFおよびMIFの両方を作製するということに注目することが興味深い。同様に、抗MIF抗体による、硫酸デキストラン誘発性大腸炎のモデルでは、IFN-γは有意に抑制される。心筋細胞におけるiNOSの発現によって、TNF-αおよびLPSがIFN-γとともに与えられた場合に発現されるが、ただしIFN-γなしでは発現されないことが示されている。iNOS自体はLPS関連性の心機能障害の調節経路においてある役割を果たすので、これらのサイトカイン経路は複雑であり、かつ密接に相互作用するようである。敗血症および敗血性ショックにおける罹患率および死亡率を軽減するためのTNF-αを阻害する努力は以前には、内毒素チャレンジに対して保護されたマウスでの前臨床試験でさえ、臨床的には失敗している。本発明者らは、LPSチャレンジの前のTNF-αシグナル伝達の阻害は組織からのMIF分泌の阻害を生じるが、血清MIF放出は影響されないことを見出した。さらに、Enbrelが90分前ではなく、LPSチャレンジの直前または直後に与えられた場合、MIFの組織放出は散発的にデータ示さず生じ、これは、この治療によるさらに下流のMIF効果を説明し得る。理論によって束縛されることは望まないが、これらの知見によって、抗TNF治療がMIF効果に起因して作用し得ない機構が示される。肝臓感染なしでのLPSチャレンジのこの研究は、敗血症誘発性心筋障害に対して直接推定できないが、MIFは肝臓の複数菌による腹膜炎CLPのモデルにおいて生理学的に関連することが示されていることに注目することが重要である。MIF中和抗体がTNF-α-/-マウス特にCLP損傷に感受性に与えられた場合、MIFは、15時間の死亡率CLPのみでの0に比較してMIF中和マウスでは9日目に62生存に対して保護的であった。同様に、野生型マウスでは、MIF中和抗体は、9日間実験のエンドポイント保護的であって、ここで、抗体が損傷insultの4.5時間後までに与えられた場合でさえ、31と比較して81で生存していた5に比較して61生存。従って、本発明者らは、敗血症誘発性心筋障害に対する抗MIF療法を考慮する。MIF放出は、TNF-αのような重要な上流のメディエーターのブロッキングによって遅延されて部分的には影響されないので、これは、1つの良好な治療用標的であるかもしれない。このためには、その生物学的機能のいくつかを媒介するMIFのタウトメラーゼ活性の阻害は、薬理学的に介入され得る。さらに、放出の近年の非古典的な分泌機構はまた、治療の潜在的な標的である。しかし、公知であってHMGB1そして記載されている標的である、敗血症における他の有意な標的が既に存在することが理解されることが重要である。従って、これらのメディエーターの全てのうちで本発明の治療の効果を理解することが重要である。本発明者らは、敗血症の間の心筋障害に寄与すると考えられるLPS誘発性の心機能障害においてMIFが重要な役割を果たすことを実証している。TNF-αは、LPS誘発性の心機能障害において重要な指標的サイトカインであると考えられるので、MIF誘発性の心機能障害に対する、インビボにおけるTNF-αシグナル伝達経路のブロック効果を検討している。血清濃度およびMIFの時間的分布は、わずかに増大されて、TNF-αシグナル伝達の阻害によって遅延された最大の増大は12~24時間TNF-αシグナル伝達阻害対野生型での8時間のベースラインの1.7~2.3倍1.5倍増大。心臓、肝臓および脾臓からの事前に形成されたMIFの放出は、野生型のマウスで以前にみられた12時間の遅延した最大放出とは異なり、TNF-αシグナル伝達の阻害後LPSチャレンジ後には生じなかった。心臓MIFmRNAのノーザン分析は、LPSチャレンジ後に転写の有意な変化を示さなかった。組み換えMIFを単離されたTNFR-/-心臓Langendorff調製に与えた場合、心機能の有意な低下は、野生型マウスと同等に検出され、このことは、MIFシグナル伝達がTNF-αであったことを示した。LPSチャレンジ後のTNFR-/-マウスの心エコー図は、早期の心機能障害円周短縮率で18.2の低下を示し、48時間後には最小に改善された。MIFがモノクローナル抗体によって中和された場合、心機能は24時間までに有意に改善され、そして48時間で完全に回復し、このことは、MIFが組織放出の欠損にかかわらず遅発性のLPS関連心機能障害においてある役割を果たしたことを示す。この研究によって、心臓および他の組織からのMIF放出は、TNFシグナル伝達に依存し、MIFの血清放出は、LPSチャレンジ後のTNFシグナル伝達を欠くことによって影響されず、心機能障害を媒介するに十分であることが初めて示される。マクロファージ遊走阻止因子MIFは、敗血症重篤な感染の間に心機能に対して直接かつ有意に有害な影響を有する多能性サイトカインである。本発明の1実施形態は、MIF活性の阻害が急性の心筋梗塞の後に心機能を顕著に改善し得るということをマウスモデルにおいて実証する図21~25を参照のこと。この改善は、数時間内に認められ、そして実験の期間にわたって存続する1週間。MIFの調節は梗塞のサイズおよび他の病理的パラメーターを軽減させる可能性が高いと考えられる。心機能の改善の程度は、顕著であり、そして実質的に、TNF-αのような他の免疫標的に比較して少なくとも10倍過剰である。本発明の以前には、心機能の障害および急性の心筋組織損傷の化学的/サイトカインのメディエーターを標的する、心筋梗塞のための処置はなかった。TPAのような治療によって梗塞を最小化することが現在の技術の目的である。一旦TPAまたは同様の治療を行なえば、標準的な変力性ドブタミンの、または機械的なデバイス動脈内バルーンポンプから生じる心原性ショック/不全を予防する薬物療法はない。短期および長期の両方で心機能をさらに改善するため、そして潜在的には梗塞のサイズを最小化するためにTPAまたはバルーン血管形成術と同時に与えたMIFをブロックする療法を、本明細書では考慮する。本発明の1実施形態は、急性心筋梗塞後の急性および慢性の心機能障害の問題を解決する。本発明によって、免疫メディエーター、すなわちMIFを調節するという点で、特有の分類の療法を得ることができるようになる。理論によって束縛されることは望まないが、本発明は、梗塞のサイズを直接低下させ得ると考えられる。長期心機能を保存するような等価な療法はない。短期の機能については、本発明によるMIF活性の調節は、動脈内バルーンポンプおよび他の機械的デバイスの必要性を最小にする。適切なモノクローナル抗MIF抗体は、KingofPrussia,PAのCytokinePharmaScience,Inc.から入手する。本発明の別の実施形態は、敗血症、外傷、急性MIおよび慢性心不全のような重篤な疾患に関連する心機能障害を防御するためのCD74の阻害に関する。CD74は、循環中の免疫細胞および抗原提示細胞MHCクラスIIに従って上に表現されているが、本発明より前には、心臓および他の器官中のCD74の存在は報告されていない。さらに重要な事には、病理学的または疾患のプロセスにおける心機能に対するCD74の機能的な役割は、以前には実証されていない。CD74は、インビトロでMIF活性を媒介することが示されているが、これは、独立しては確認されておらず、そして線維芽細胞および白血球に限定される。適切な抗ヒトCD74抗体は、例えば、BDBiosciences製品のカタログ番号555538クローンM-B741;精製型;アイソタイプマウスIgG2a,κ;W.S.NoVCD74.4;反応性ヒトおよび555612クローンLN2;精製型;アイソタイプマウスIgG1、κ;W.S.NoVCD74.3;反応性ヒトから入手可能である。本発明によって、心疾患において抗サイトカイン治療抗MIFを含むを用いることが可能になる。敗血症モデルにおける抗TNF治療を用いる予備的実験は機能しなかった。さらに、CD74阻害によってブロックされる推定のサイトカインであるMIFは、後期に生じるサイトカインであり、急性のMIの本発明者らのモデルでは、損傷insult後数週間にわたって増大され、これによってその期間中の介入が可能になる。急性MIおよび敗血症における早期の心機能障害は、これらの疾患の各々に関連する高い罹患率および死亡率の原因となる。本発明者らは、能力を向上させて、各々に関連する罹患率を潜在的に低下させ得るサイトカイン療法を考慮する。心疾患におけるほとんどの治療的な介入は、再灌流MIまたは変力作用MIおよび敗血症に集中してきた。本発明の1実施形態によれば、MIFの推定のレセプターであるCD74レセプターへ介入すれば、急性および慢性の両方の心原性障害が緩和されて、生存/転帰が改善され得る。MIFは、LPSチャレンジ後に心筋細胞から分泌され、そして後期発症>6時間の心機能障害を直接媒介する。免疫細胞では、CD74は、ERK1/2細胞内シグナル伝達経路を介して効果を発揮する、MIFレセプターであることが確認された。CD74が敗血症でMIF誘発性の心機能障害を媒介するか否かを決定するために、本発明者らは、1LPSを用いて野生型マウスC57BL/6をチャレンジし;2抗CD74モノクローナル中和抗体で事前処置された野生型マウスをLPSを用いてチャレンジし、そして3LPS4mg/kgを用いてCD74ノックアウトマウスをチャレンジした。連続的な心エコー検査を行なって、円周短縮率FSを決定した。24時間で、コントロールFS=58±1に比較して、LPSを与えたWTマウスでは有意な障害が観察されたFS=31.6±3.3。LPSを用いてチャレンジされた、抗CD74抗体処置されたマウス、そしてCD74ノックアウトマウスの両方で、心機能はLPSのみを与えられた野生型マウスに比較して有意に改善されたそれぞれ、FS=49±3.6および53.3±2.4、p<0.05。CD74発現は、心臓ではいまだかつて実証されていないので、本発明者らは、イムノブロットおよび組織化学を行なって、CD74が心臓細胞膜上におよびサイトゾル中に構成的に存在すること;そしてLPSチャレンジ後に実質的に調節された12時間でほぼなし、4倍以上低下ことを確認した。本発明者らは、CD74が、心筋細胞上で発現されること、そして心機能障害の重要なメディエーターであることを実証する。本発明の別の実施形態は、1つ以上の可溶性MIFレセプターまたはMIFレセプターアンタゴニストの使用によるMIF活性の阻害に関する。例えば、抗TNFα療法では、REMICADE商標またはINFLIXIMAB商標抗体TNFαおよびENBREL商標またはETANERCEPT商標可溶性TNF-レセプターが適切である。この方法は、心機能障害をその必要な被験体において処置および/または予防するために、心筋活性の不規則性をその必要な被験体において処置および/または予防するために、心筋活性の抑制をその必要な被験体において処置および/または予防するために、熱傷に関連する心機能障害をその必要な被験体において処置および/または予防するために、急性心筋梗塞後の心機能障害をその必要な被験体において処置および/または予防するために、心臓抑制をその必要な被験体において処置および/または予防するために、あるいはそれらの組み合わせについて、その必要な被験体に対して、1つ以上の可溶性のMIFレセプターおよび/またはMIFレセプターアンタゴニストを有効量で投与する工程を包含する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける、低分子MIFインヒビター時には、MIFアンタゴニストMIFantagonists、またはイソキサゾリン化合物isoxazolinecompoundsと呼ばれるの使用に関する。以下の化学式では、置換基の上つき文字の使用は、置換基の名称を特定するため例えば、R2は、R2と命名された置換基を示すために用いられるであるが、下付き文字の使用は、ある置換基がその分子部位に存在する回数を数え上げるために用いられる例えば、R2またはR2は両方とも、単にRと命名された2つの置換基を示すために用いられる。本明細書の方法における使用のための適切な低分子MIFインヒビターは、以下の構造式I:を有し、ここで、R1-4は独立して、R、ハロ、N3、CN、OH、NRR’、またはSHであり;RおよびR’は独立してHまたはC1-6アルキルであり;Xは、R、ハロ、N3、CN、OR、NRR’、SH、=O、=CH2、またはAであり;Aは、置換または非置換芳香族環であり;YはR、NRR’、NRR’’またはCH2n-Aであり;Zは、R、OR、OR’’、NRR’、NRR’’またはAであり;R’’は置換もしくは非置換、直鎖もしくは分枝鎖のC2-C18であり;そしてnは0または1である。好ましくは、構造式Iの化合物は、p-ヒドロキシフェニル-イソキサゾリン含有化合物であって、ここで各々のR、R1-4、XおよびYはHまたは-CH2-Aであり、そしてZがORである。さらに好ましくは、構造式Iの化合物は、R-3-4-ヒドロキシフェニル-4,5-ジヒドロ-5-イソキサゾリン酢酸のエステル、特に、その酸メチルエステル本明細書において、時には、ISO-1またはCPSIまたはCPSI-26として特定されるであり、これはまた、p-ヒドロキシフェノール-イソキサゾリンメチルエステルとして公知である。さらにより好ましくは、この化合物は、2-{3-4-ヒドロキシ-フェニル-4,5-ジヒドロ-イソキサゾール-5-イル}-3-フェニル-プロピオン酸のエステル、特にそのメチルエステルISO-2として特定されるである。本明細書の方法における使用のための他の適切な低分子MIFインヒビターは、以下の構造式IIまたはIII:を有し、ここでBが、酸素またはイオウのいずれかであり、そして各々のRは独立して:で規定され、ただし、これは、各々のRが構造式IIまたはIIIのいずれかにおいて水素としてのみ存在することはできずすなわち、構造式IIまたはIIIのいずれかの上の少なくとも1つのRが水素以外のR置換基である、そして任意のBが独立して酸素またはイオウのいずれかであり;任意のR1が独立して水素、C1-C6アルキルまたはいくつかの他の適切な置換基であり、任意のR2がアミン、アルコキシまたはいくつかの他の適切な置換基であり;そしてmが独立して0または1~20の整数のいずれかであるという条件下であり;各々のXが独立して、炭素または窒素原子のいずれかであり;そして任意のXが炭素であれば、Yが各々のXについて、として独立して規定される置換基であり、各々のZが独立して水素、ヒドロキシル、ハロゲン、またはいくつかの他の適切な置換基のいずれかであり;そしてnが独立して0、1、2、3または4のいずれかである、低分子MIFインヒビター;ならびにその薬学的に受容可能な塩およびプロドラッグである。本発明はまた、一般式I、IIまたはIIIの化合物の薬学的に受容可能な酸富化塩に関する。本発明の上述のベース化合物の薬学的に受容可能な酸付加塩を調製するために用いられる酸は、非毒性の酸付加塩、すなわち、薬理学的に受容可能な陰イオンを含む塩、例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、酒石酸水素塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルタミン酸塩、L-乳酸塩、L-酒石酸塩、トシレート、メシレート、グルコン酸塩、サッカラート、安息香酸塩、メタンスルホナート、エタンスルホナート、ベンゼンスルホナート、p-トルエンスルホナート、およびパモエートすなわち、1,1’-メチレン-ビス-2-ヒドロキシ-3-ナフトエート塩を形成する酸である。本発明はまた、低分子MIFインヒビターの塩基付加塩に関する。天然には酸性である、一般式I、IIまたはIIIのそれらの化合物の薬学的に受容可能な塩基塩を調製するための試薬として用いられ得る化学塩基は、このような化合物と非毒性の塩基の塩を形成する塩基である。このような非毒性の塩基の塩としては限定はしないが、アルカリ金属陽イオン例えば、カリウムおよびナトリウムおよびアルカリ土類金属陽イオンたとえば、カルシウムおよびマグネシウムのような薬学的に受容可能な陽イオンに由来する塩、N-メチルグルカミン-メグルミンのようなアンモニウムまたは水溶性アミン付加塩、ならびに薬学的に受容可能な有機アミンの低級アルカノールアンモニウムおよび他の塩基の塩が挙げられる。低分子MIFインヒビターの化合物およびプロドラッグは、いくつかの互変異性型、および幾何異性体、ならびにその混合物で存在し得る。このような互変異性型の全てが、本発明の範囲内に包含される。互変異性体は、溶液中に互変異性体の混合物として存在する。固体型では、通常1つの互変異性型が優勢である。1つの互変異性型が記載され得るが、本発明は、低分子MIFインヒビターの全ての互変異性型を包含する。本発明はまた、低分子MIFインヒビターのアトロプ異性体を包含する。アトロプ異性体とは、回転の制限された異性体に分離され得る低分子MIFインヒビターの化合物をいう。低分子MIFインヒビターは、オレフィン様二重結合を含み得る。このような結合が存在する場合、低分子MIFインヒビターは、シス型立体配置としておよびトランス型立体配置として、そしてその混合物として存在する。適切な置換基suitablesubstituentとは、化学的および薬学的に受容可能な官能基、すなわち、低分子MIFインヒビターの阻害活性を打ち消さない部分を意味するものとする。このような適切な置換基は、当業者によって慣用的に選択され得る。適切な置換基の例示的な例としては、限定はしないが、ハロ基、ペルフルオロアルキル基、ペルフルオロアルコキシ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシ基、オキソ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アルコキシ基、アリール基またはヘテロアリール基、アリールオキシ基またはヘテロアリールオキシ基、アラルキル基またはヘテロアラルキル基、アラルコキシ基またはヘテロアラルコキシ基、HO-C=O-基、アミノ基、アルキル基およびジアルキルアミノ基、カルバモイル基、アルキルカボニル基、アルコキシカルボニル基、アルキルアミノカルボニル基ジアルキルアミノカルボニル基、アリールカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基などが挙げられる。好ましい低分子MIFインヒビターは、全ての目的のためにその各々の内容全体が参照として本明細書に援用される、2004年3月26日提出、米国仮出願第60/556,440号、2001年6月8日提出米国仮出願第60/296,478号;および2002年6月10日出願、米国出願第10/164,630号に見出すことができる。好ましくは、この実施形態では、有効量の1つ以上の低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩を、その必要な被験体に対して活性な成分として投与する。低分子MIFインヒビターの組み合わせも可能である。低分子MIFインヒビター化合物はまた、必要に応じて、その薬学的に活性な塩および/またはプロドラッグの形態で投与され得る。塩および/またはプロドラッグの組み合わせは、この低分子MIFインヒビターの塩型および非塩型の組み合わせと同様に可能である。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、1つ以上の低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩を活性成分として、そして少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび/または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグおよび少なくとも1つの抗MIF抗体を含む有効量の組成物の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグおよび少なくとも1つの抗MIF抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび/または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグ、少なくとも1つの抗TNFR抗体および少なくとも1つの抗MIF抗体の組み合わせを含む組成物の有効量の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグ、少なくとも1つの抗TNFR抗体および少なくとも1つの抗MIF抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび/または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグ、少なくとも1つの抗CD74抗体および少なくとも1つの抗MIF抗体の組み合わせを含む有効量の組成物の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグ、少なくとも1つの抗CD74抗体および少なくとも1つの抗MIF抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび/または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。本発明の別の実施形態は、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグおよび少なくとも1つの抗CD74抗体の組み合わせを含む組成物の有効量の、その必要な被験体に対する投与であって、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおける投与に関する。本発明の別の実施形態は、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、あるいはそれらの組み合わせにおいて適切な薬学的組成物であって、少なくとも1つの低分子MIFインヒビター、その塩および/またはそのプロドラッグ、少なくとも1つの抗CD74抗体の組み合わせの有効量、ならびに少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび/または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。理論によって束縛されることは望まないが、低分子MIFインヒビターでのタウトメラーゼ活性サイトカインMIFが有することが示されているの中和は、心筋梗塞後に生じる心臓抑制の阻害を生じるかまたはそれに寄与すると考えられる。低分子インヒビターでのタウトメラーゼの阻害は、抗MIF抗体と同様の心臓保護を生じる。MIFは、タウトメラーゼ活性を有することが示されており、その活性を媒介することがインビトロ研究で示唆されているので、MIFの中和は、そのタウトメラーゼ活性が阻害された後に生じ得ると考えられる。本発明者らは、MIFを阻害すること、および/またはMIFタウトメラーゼ活性を中和することによって、心疾患に対する抗サイトカイン/炎症療法が得られることを見出している。MIFの阻害によって、心筋梗塞後の心機能が改善され、そして心筋梗塞の急性の続発症を助けること、例えば、急性心筋梗塞における早期の心機能障害を軽減すること、および付随する高罹患率および死亡率を軽減することが可能になる。現在の技術を上回る本発明の1つの利点は、変力作用に集中する、心疾患における治療介入とは異なり、本発明は、心機能障害の原因を処置および/または予防することによって、急性および慢性の両方の心原性障害が軽減され得、そして生存/転帰を改善し得るということである。本発明の1実施形態は、本発明の少なくとも1つの化合物を活性成分としておよび/またはその塩および/またはプロドラッグそして少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントおよび/または希釈剤を含む薬学的組成物に関する。この化合物はまた、必要に応じて実質的に非毒性の薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、アジュバントまたは希釈剤を用いて、その薬学的に活性な塩の形態で投与されてもよい。本発明の組成物は、任意の従来の固体または液体のキャリアまたは希釈剤および必要に応じて任意の従来の薬学的に作製されたアジュバントにおいて、適切な投薬レベルで公知の方法で調製され得る。好ましい調製物は、口腔適用のために適切である投与可能形態である。これらの投与可能な形態としては、例えば、丸剤、錠剤、フィルム錠剤、コートされた錠剤、カプセル、粉末およびデポ製剤が挙げられる。経口投与可能な形態以外の形態も可能である。本発明の化合物、および/またはその化合物を含む薬学的調製物は、限定はしないが、上皮または粘膜皮膚裏層口腔粘膜、結腸および膣上皮裏層、鼻咽頭粘膜、腸粘膜を通じた吸収による注射静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下を含む任意の適切な方法;経口、直腸、経皮、局所的、皮内、胃内、皮内、膣内、脈管内、鼻腔内、口腔内、経皮的、舌下または製薬業界で利用可能な任意の他の方法によって投与され得る。本発明の少なくとも1つの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を活性成分として含む本発明の薬学的組成物は代表的には、投与の意図される形態、すなわち、経口錠剤、カプセル固体充填、半固体充填または液体充填された、構成用の粉末、経口ゲル、エリキシル、分散性顆粒、シロップ、懸濁液などに関して適切に選択される適切なキャリア物質と混合して、従来の薬学的手段に従って投与される。例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与のためには、活性薬物成分は、任意の経口的な非毒性の薬学的に受容可能な不活性キャリア、例えば、ラクトース、デンプン、スクロース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、滑石、マンニトール、エチルアルコール液体型などと組み合わせられてもよい。さらに、所望される場合、または必要に応じて、適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤および着色剤をまたこの混合物中に組み込んでもよい。薬学的組成物は、活性成分の重量の約5~約95重量から構成され得るが、この範囲としては、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、90.5、91、91.5、92、92.5、93、93.5、94、94.5、および95重量を含む、その範囲の間の全ての値および部分的範囲が挙げられる。適切な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然の糖、コーン甘味料、天然および合成のガム、例えば、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチル-セルロース、ポリエチレングリコールおよびワックスロウ状物質が挙げられる。潤滑剤のなかでも、これらの投薬形態における使用について言及され得るのは、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどである。崩壊剤としては、デンプン、メチルセルロース、グアールガムなどが挙げられる。甘味料および香味料および防腐剤はまた、必要に応じて包含されてもよい。上記の用語のいくつかは、すなわち錠剤分解物質、希釈剤、潤滑剤、結合剤などは以下にさらに詳細に考察される。さらに、本発明の化合物または組成物は、任意の1つ以上の成分または活性成分の徐放性の放出を提供して治療効果、すなわち抗ヒスタミン活性などを最適化するために、徐放性の形態で処方され得る。徐放性のための適切な投薬形態としては、崩壊速度を変化させる層または活性成分を浸透された徐放性ポリマーマトリクスを含み、このように含浸されるかまたはカプセル化された多孔性ポリマーマトリクスを含む錠剤型またはカプセルに成形された層状の錠剤が挙げられる。液体型調製物としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。例えば、非経口注射または甘味料の添加のための水、エタノール、水-エタノールまたは水プロピレングリコール溶液、ならびに経口溶液、懸濁液およびエマルジョンのための乳白剤が言及され得る。液体型調製物はまた、経鼻投与のための溶液を包含し得る。吸入のために適切なエアロゾル調製物としては、薬学的に受容可能なキャリア、例えば、不活性な圧縮ガス、例えば窒素と組み合わせられ得る、溶液および粉末型の固体を挙げることができる。坐剤を調製するためには、ココアバターのような脂肪酸グリセリドの混合物などの低融点ワックスを最初に融解して、その活性成分を、撹拌または同様に混合することによってそこで均一に分散させる。次いでこの溶かされた均一の混合物を従来のサイズの型に注いで、冷却しそれによって固化させる。また、経口もしくは非経口投与のいずれかのための液体型調製物に使用直前に変換されるものとする固体型調製物も包含される。このような液体型としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。本発明の化合物はまた、経皮的に送達され得る。経皮組成物は、クリーム、ローション、エアロゾルおよび/またはエマルジョンの形態をとってもよく、そしてその目的のために当該分野において従来と同様に、マトリックスまたはリザーバーのタイプの経皮パッチに含まれてもよい。カプセルという用語は、活性成分を含む組成物を保持または含有するための、メチルセルロース、ポリビニルアルコールまたは変性されたゼラチンもしくはデンプンからなる、特別な容器または封入物をいう。硬性シェルカプセルは代表的には、比較的高いゲル強度の骨およびブタの皮膚のゼラチンの混合物からなる。このカプセル自体は、少量の色素、不透明な因子、可塑剤および防腐剤を含み得る。錠剤とは、適切な希釈剤とともに活性な成分を含む圧縮または成型された固体投薬形態を意味する。この錠剤は、当業者に周知の、湿式造粒法、乾式造粒法によって、または圧縮成型によって得られた混合物または顆粒の圧縮によって調製され得る。経口のゲルとは、親水性の半固体マトリックス中に分散または可溶化された活性成分をいう。構成のための粉末とは、活性成分および適切な希釈物を含む粉末混合物であって、水またはジュース中に懸濁され得るものを指す。適切な希釈物は、組成物または投薬形態の主な部分を通常構成する物質である。適切な希釈物としては、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトールのような糖、コムギ、コーンライスおよびポテト由来のデンプン、ならびに微結晶性セルロースのようなセルロースが挙げられる。この組成物中の希釈物の量は、総組成物の約5~約95重量、好ましくは約25~約75重量、さらに好ましくは約30~約60重量の範囲であってもよい。崩壊剤という用語は、組成物に添加される物質であって、それが医薬を壊し分解て、放出することを補助する物質を指す。適切な崩壊剤としては、デンプン、冷水可溶性coldwatersoluble、修飾デンプン、例えば、カルボキシルメチルスターチナトリウム、天然および合成のガム、例えば、イナゴマメゴム、カラヤゴム、グアールゴム、トラガカントゴムおよび寒天、セルロース誘導体、例えば、メチルセルロースおよびカルボキシルメチルセルロースナトリウム、微結晶性セルロースおよび架橋微結晶性セルロース、例えば、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、例えば、アルギン酸およびアルギン酸ナトリウム、粘土、例えば、ベントナイトおよび発泡性混合物が挙げられる。この組成物での崩壊剤の量は、この組成物の約2~約20重量、さらに好ましくは約5~約10重量の範囲におよんでもよい。結合剤とは、粉末を一緒に結合するかまたは接着しglueて、顆粒を成型することによってそれらを粘着性にさせ、これによって処方物中で接着剤adhesiveとして作用する物質を特徴付ける。結合剤は、希釈物または充填剤において既に利用可能な結合力を加える。適切な結合剤としては、スクロースのような糖、コムギ、コーンライスおよびポテト由来のデンプン、;天然ゴム、例えば、アカシアゴム、ゼラチンおよびトラガカントゴム;海草由来物、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウムおよびアルギン酸アンモニウムカルシウム;セルロース性物質、例えば、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムおよびヒドロキシプロピル-メチルセルロース;ポリビニルピロリドン;およびケイ酸マグネシウムアルミニウムのような無機物が挙げられる。組成物中の結合剤の量は、この組成物の約2~約20重量、より好ましくは、約3~約10重量、さらに好ましくは、約3~約6重量におよんでもよい。潤滑剤とは、圧縮された後に、錠剤、顆粒などを成型できるように投薬形態に添加される物質であって、摩擦または磨耗を軽減することによって、型または金型から遊離させるための物質を指す。適切な潤滑剤としては、ステアリン酸金属、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸カリウム;ステアリン酸;高融点ワックス;および水溶性潤滑剤、例えば、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコールおよびd,1-ロイシンが挙げられる。潤滑剤は通常、圧縮前に最終工程で添加される。なぜなら、それらは、顆粒の表面上に、そして表面と錠剤圧迫部分との間に存在しなければならないからである。組成物中の潤滑剤の量は、その組成物の約0.2~約5重量、好ましくは約0.5~約2重量、さらに好ましくは約0.3~約1.5重量におよんでもよい。グライデントglidentsは、流動が円滑かつ均一になるように、固化を防いで、顆粒化の流動特徴を改善する物質である。適切なグライデントとしては、二酸化ケイ素および滑石が挙げられる。組成物中のグライデントの量は、組成物全体の約0.1~約5重量、好ましくは約0.5~約2重量におよび得る。着色料は、組成物または投薬形態に色を与える賦形剤である。このような賦形剤は、食品用色素および粘土または酸化アルミニウムのような適切な吸収剤上に吸着された食品用色素を包含し得る。着色料の量は、組成物の約0.1~約5重量、好ましくは約0.1~約1におよんでもよい。本発明の化合物の処方および投与のための技術は、その内容全体が参照によって本明細書に援用されるRemington’sPharmaceuticalSciencesMackPublishingCo.,EastonPa.,に見出すことができる。本発明の少なくとも1つの化合物を含む適切な組成物は、適切な液体の薬学的キャリア中の化合物の溶液、または任意の他の処方物、例えば、錠剤、丸剤、フィルム錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠、カプセル、粉末およびデポ剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物、エマルジョンなどであってもよい。本明細書において用いる場合処置および/または予防することtreatingand/orpreventingという用語は、この用語が適用される障害もしくは状態の進行、またはその障害もしくは状態の1つ以上の症状を逆転、緩和、阻害すること、または予防することを指す。本明細書において用いる場合、処置treatmentという用語は、上記の用語のように処置および/または予防する作用を指す。好ましくは、処置されるまたは投与される被験体は、ヒト被験体であり、そしてさらに好ましくは処置の必要なヒト被験体である。有効量effectiveamountまたは治療上有効な量therapeuticallyeffectiveamountという用語は、任意の観察可能なまたは測定可能な相違を生じ、そして好ましくは被験体の状態または兆候を改善するのに、そして好ましくはその状態または兆候が処置されるのに十分な量を意味する。マウス抗MIF抗体のアクセッション番号は、以下に示す:III.D.9mAbについて:HB-12220XIV.15.5mAbについて:HB-12221好ましくは、急性acute状態、例えば、急性心筋梗塞は、慢性chronic状態、例えば慢性うっ血性心不全から識別される。本明細書において用いる場合、抗体という用語は適切には、当業者に公知であるとおり、抗体由来のフラグメント単数または複数、Fab、Fabフラグメント単数または複数、Fab2、CDR由来領域、抗体由来ペプチド、および/または単鎖抗体を包含する。Fabが好ましい。本明細書において用いる場合、心機能障害cardiacdysfunctionという用語は、適切には、心機能障害、心筋活性における不規則性、心筋活性における抑制、熱傷に関連する心機能障害、急性心筋梗塞後の心機能障害、心臓抑制およびその組み合わせを含む群から選択される1つ以上の兆候を包含し得る。これらの用語は、当該分野の通常の技術の医師によって理解される。本発明の他の実施形態は、以下に示される。A.被験体において熱傷関連の心臓抑制および/または心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの抗MIF抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。B.被験体において熱傷関連心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの抗MIF抗体の有効量を投与する工程を包含し、ここでこの熱傷関連心機能障害は、心筋活性の不規則性もしくは心筋活性の抑制またはその両方を包含する、方法。C.被験体において熱傷関連心臓抑制を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対してMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、ここでこのMIFインヒビターが少なくとも1つの抗MIF抗体を包含する、方法。D.被験体において熱傷関連心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、ここでこのMIFインヒビターは、少なくとも1つの抗MIF抗体を包含し、そしてこの抗体はモノクローナル抗体である、方法。E.被験体において熱傷関連心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、ここでこのMIFインヒビターが少なくとも1つの抗MIFモノクローナルヒト化抗体を包含する、方法。F.被験体において熱傷関連心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物は、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つの経路を介して投与される、方法。G.被験体における熱傷関連心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって:少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含する薬学的組成物。H.被験体における熱傷関連心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって:少なくとも1つのMIFインヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含み、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIF抗体を含む、薬学的組成物。I.被験体における心臓抑制および/または心機能障害の処置および予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗CD74抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。J.被験体における心臓抑制および/または心機能障害の処置および予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗CD74抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、ここでこの心機能障害および/または心臓抑制としては、心筋活性の不規則性もしくは心筋活性の抑制またはその両方を包含する、方法。K.被験体における心機能障害の処置および/または予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗CD74抗体の有効量を投与する工程を包含し、この心機能障害としては、少なくとも1つの熱傷関連心機能障害が挙げられる、方法。L.被験体における心機能障害の処置および/または予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗CD74インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このCD74インヒビターとしては、少なくとも1つの抗CD74抗体が挙げられる、方法。M.被験体における心機能障害および/または心臓抑制の処置および予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗CD74インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このCD74インヒビターとしては、少なくとも1つの抗CD74モノクローナル抗体が挙げられる、方法。N.被験体における心機能障害の処置および/または予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのCD74インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このCD74インヒビターとしては、少なくとも1つの抗CD74モノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。O.被験体における心機能障害の処置および/または予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗CD74抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つの経路を介して投与される、方法。P.被験体における心機能障害および/または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって:少なくとも1つの抗CD74抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含する薬学的組成物。Q.被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって:少なくとも1つのCD74インヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含み、このCD74インヒビターとしては少なくとも1つの抗CD74抗体を含む、薬学的組成物。R.急性心筋梗塞後の被験体において心臓機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗MIF抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。S.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターの有効量を投与する工程を包含し、このMIFインヒビターとしては、少なくとも1つの抗MIF抗体を包含する、方法。T.急性心筋梗塞後の被験体において心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターの有効量を投与する工程を包含し、このMIFインヒビターとしては、少なくとも1つの抗MIFモノクローナル抗体が挙げられる、方法。U.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターの有効量を投与する工程を包含し、このMIFインヒビターとしては、少なくとも1つの抗MIFモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。V.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗MIF抗体および少なくとも1つの抗CD74抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。W.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターおよび少なくとも1つのCD74インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このCD74インヒビターとしては、少なくとも1つの抗CD74抗体が挙げられる、方法。X.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターおよび少なくとも1つのCD74インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このCD74インヒビターとしては少なくとも1つの抗CD74モノクローナル抗体が挙げられる、方法。Y.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターおよび少なくとも1つのCD74インヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このCD74インヒビターとしては、少なくとも1つの抗CD74モノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。Z.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗MIF抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つの経路を介して投与される、方法。AA.被験体における心機能障害および/または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって:少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含する薬学的組成物。BB.被験体における心機能障害および/または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって:少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの抗CD74抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。CC.急性心筋梗塞後の被験体において心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗TNFR抗体および少なくとも1つの抗MIF抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。DD.急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのTNFRインヒビターおよび少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFR抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIF抗体が挙げられる、方法。EE.急性心筋梗塞後の被験体において心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのTNFRインヒビターおよび少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFR抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIF抗体が挙げられ、この抗TNFR抗体としては、少なくとも1つのモノクローナル抗体が挙げられる、方法。FF.急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのTNFRインヒビターおよび少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFR抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIF抗体が挙げられ、そしてこの抗TNFR抗体としては、少なくとも1つのモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。GG.急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのTNFRインヒビターおよび少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFR抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIFモノクローナル抗体が挙げられる、方法。HH.急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのTNFRインヒビターおよび少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFR抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIFモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。II.急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つのTNFRインヒビターおよび少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFRモノクローナルヒト化抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIFモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、方法。JJ.被験体における心機能障害および/または心臓抑制の処置および予防のための薬学的組成物であって、少なくとも1つの抗TNFR抗体と;少なくとも1つの抗MIF抗体と、を包含する薬学的組成物。KK.被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、少なくとも1つのTNFRインヒビターと;少なくとも1つのMIFインヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し;このTNFRインヒビターが、少なくとも1つの抗TNFR抗体を包含する、薬学的組成物。LL.被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、少なくとも1つのTNFRインヒビターと;少なくとも1つのMIFインヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し;このMIFインヒビターが、少なくとも1つの抗MIF抗体を包含する、薬学的組成物。MM.被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、少なくとも1つのTNFRインヒビターと;少なくとも1つのMIFインヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し;このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFR抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては、少なくとも1つの抗MIF抗体が挙げられる、薬学的組成物。NN.被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、少なくとも1つのTNFRインヒビターと;少なくとも1つのMIFインヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し;このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFRモノクローナル抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては、少なくとも1つの抗MIFモノクローナル抗体が挙げられる、薬学的組成物。OO.被験体における心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって、少なくとも1つのTNFRインヒビターと;少なくとも1つのMIFインヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し;このTNFRインヒビターとしては、少なくとも1つの抗TNFRモノクローナルヒト化抗体が挙げられ、このMIFインヒビターとしては、少なくとも1つの抗MIFモノクローナルヒト化抗体が挙げられる、薬学的組成物。PP.被験体における心機能障害の処置および/または予防のための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの抗MIF抗体の有効量を投与する工程を包含する、方法。QQ.被験体において心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの抗MIF抗体を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、ここでこの心機能障害としては、心筋活性の不規則性、心筋活性の抑制およびその組み合わせを含む群から選択される少なくとも1つを包含する、方法。RR.被験体において心機能障害および/または心臓抑制を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このMIFインヒビターが少なくとも1つの抗MIF抗体を包含する、方法。SS.被験体において心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このMIFインヒビターとしては、少なくとも1つの抗MIFモノクローナル抗体が挙げられる、方法。TT.被験体において心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つのMIFインヒビターを含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、このMIFインヒビターが少なくとも1つの抗MIFヒト化抗体を包含する、方法。UU.薬学的組成物であって、治療上有効な量の少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを包含する、薬学的組成物。VV.薬学的組成物であって、少なくとも1つのMIFインヒビターと;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含し、このMIFインヒビターとしては少なくとも1つの抗MIF抗体が挙げられる、薬学的組成物。WW.MIFインヒビターを同定するための方法であって、少なくとも1つの筋細胞をMIFに対して曝露する工程;少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この筋細胞を少なくとも1つのMIFおよび少なくとも1つの候補因子に対して曝露する工程;この候補因子の存在下で少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この候補因子がこのMIF関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程;を包含する、方法。XX.MIFインヒビターを同定するための方法であって、少なくとも1つの筋細胞をMIFに対して曝露する工程;少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この筋細胞を少なくとも1つのMIFおよび少なくとも1つの候補因子に対して曝露する工程;この候補因子の存在下で少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この候補因子がこのMIF関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程;を包含し、このMIF関連筋細胞活性が免疫化学によって決定される、方法。YY.MIFインヒビターを同定するための方法であって、少なくとも1つの筋細胞をMIFに対して曝露する工程;少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この筋細胞を少なくとも1つのMIFおよび少なくとも1つの候補因子に対して曝露する工程;この候補因子の存在下で少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この候補因子がこのMIF関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程;を包含し、このMIF関連筋細胞活性がLangendorffアッセイによって決定される、方法。ZZ.MIFインヒビターを同定するための方法であって、少なくとも1つの筋細胞をMIFに対して曝露する工程;少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この筋細胞を少なくとも1つのMIFおよび少なくとも1つの候補因子に対して曝露する工程;この候補因子の存在下で少なくとも1つのMIF関連筋細胞活性を決定する工程;この候補因子がこのMIF関連筋細胞活性に影響するか否かを決定する工程;を包含し、このMIF関連筋細胞活性が心エコー法によって決定される、方法。AAA.心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つのための方法であって、この被験体に対して、少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩の有効量を投与する工程を包含する、方法。BBB.心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つのための方法であって、この被験体に対して、少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。CCC.被験体において熱傷関連の心臓抑制および/または心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩の有効量を投与する工程、を包含する方法。DDD.被験体において熱傷関連の心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩の有効量を投与する工程、を包含し、この熱傷関連心機能障害としては、心筋活性の不規則性もしくは心筋活性の抑制またはその両方が挙げられる、方法。EEE.被験体において熱傷関連の心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程、を包含する、方法。FFF.被験体において熱傷関連の心機能障害を処置および/または予防するための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つの経路を介して投与される、方法。GGG.被験体における熱傷関連の心機能障害の処置および予防のための薬学的組成物であって:少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアと、を包含する薬学的組成物。HHH.急性心筋梗塞後の被験体における心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して、少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩の有効量を投与する工程を包含する、方法。III.急性心筋梗塞後の被験体において心機能を改善するための方法であって:この被験体に対して少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程を包含し、この組成物が、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、脈管内注射およびその組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つの経路を介して投与される、方法。JJJ.急性心筋梗塞後の被験体における心機能障害を処置および/または予防するための方法であって:この被験体に対して、少なくとも1つの低分子MIFインヒビターおよび/またはその塩を含む組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。KKK.心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つのために有効な薬学的組成物であって、少なくとも1つの抗TNFR抗体と;少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを包含する組み合わせの有効量を含む、薬学的組成物。LLL.心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つのために有効な薬学的組成物であって、少なくとも1つの抗CD73抗体と;少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを包含する組み合わせの有効量を含む、薬学的組成物。MMM.心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つのための方法であって、この被験体に対して、少なくとも1つの抗TNFR抗体と;少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを包含する組み合わせの有効量を投与する工程を包含する、方法。NNN.心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを包含する群より選択される少なくとも1つのための方法であって、この被験体に対して少なくとも1つの抗CD73抗体と;少なくとも1つの抗MIF抗体と;少なくとも1つの薬学的に受容可能なキャリアとを包含する組み合わせの有効量を投与する工程を包含する、方法。OOO.本発明の別の実施形態は、1つ以上の可溶性MIFレセプターおよび/またはMIFレセプターアンタゴニスト必要に応じて薬学的に受容可能なキャリアに含まれるの有効量をその必要な被験体に投与する工程であって、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つのための投与工程に関する。PPP.本発明の別の実施形態は、任意の組み合わせで、以下:低分子MIFインヒビター;可溶性MIFレセプター;MIFレセプターアンタゴニスト;抗CD74抗体;抗MIF抗体;抗TNFR抗体;および必要に応じて薬学的に受容可能なキャリアの1つ以上の有効量をその必要な被験体に投与する工程であって、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つのための投与工程に関する。QQQ.本発明の別の実施形態は、任意の組み合わせで、以下:低分子MIFインヒビター;可溶性MIFレセプター;MIFレセプターアンタゴニスト;抗CD74抗体;抗MIF抗体;抗TNFR抗体;および必要に応じて薬学的に受容可能なキャリアの1つ以上の有効量を含む組成物であって、この組成物が、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つのために有効である組成物に関する。RRR.本発明の別の実施形態は、有効量の抗TNFR抗体;および必要に応じて薬学的に受容可能なキャリアをその必要な被験体に投与する工程であって、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つのための投与工程に関する。SSS.本発明の別の実施形態は、有効量の抗TNFR抗体;および必要に応じて薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、この組成物が、心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の不規則性をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心筋活性の抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、熱傷に関連する心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、急性心筋梗塞後の心機能障害をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、心臓抑制をその処置および/または予防が必要な被験体において処置および/または予防すること、ならびにそれらの組み合わせを含む群より選択される少なくとも1つのために有効である組成物に関する。実施例本発明を一般的に記載してきているが、例示のみの目的で本明細書に提供されるが、他に特定しない限り限定は意図していない、特定の実施例によってさらなる理解を深めることができる。実施例1抗体およびサイトカインヤギ抗hMIFIgGおよびrhMIFRDSystems,Minneapolis,NINを、それぞれ、PBSおよび0.1BSA含有PBS中に再構成して、アリコートして、使用するまで-20°Cで保管した。ウサギ抗-ヤギIgG-HRPBioRadCorp.,Hercules,CAは、使用するまで4°Cで保管した。動物および実験デザイン。C57BL/6JおよびC3H/HeJマウスは、6~10週齢で得たJacksonLabs,BarHarbor,Me.。325~360gの体重の成体のSprague-DawleyラットHarlanLaboratories,Houston,TXをこの研究に用いた。市販の固形飼料および水道水を自由に利用可能にさせた。全ての動物プロトコールは再審査されて、UniversityofTexasSouthwesternMedicalCenterInstitutionalAnimalCareAdvisoryCommitteeによって承認されて、NIHによって公開された、動物使用を管理する規則に従った。C57BL/6Jマウスには、4mg/kgE.coli0111:B4LPSSigma-AldrichCorp.,St.Louis,Mo.を腹腔内i.p.に注射して、CO2窒息および引き続く頚部脱臼によって、注射後、テキストに示された時点で屠殺した。注射していないマウスをコントロールとして用いた。2つの抗MIF抗体III.D.9およびXIV.15.5,RocklandImmunochemicals,Inc.,Gilbertsville,PAおよびそれらのアイソタイプコントロールHB-49,RocklandImmunochemicals,Inc.,Gilbertsville,PAを、心エコー研究におけるLPSチャレンジの90分前に腹腔内にi.p.注射した100μgを200μlPBS中に含有。心臓全体を取り出して、液体窒素中で急速凍結させ、-80°Cで保管するか、または免疫組織化学のために、10天然の緩衝化ホルマリン中で24時間固定して、70エタノールに入れた。実施例2タンパク質抽出およびウエスタンブロッティング心臓を解凍して、1NP40、0.5デオキシコール酸、0.1SDS、2mMEDTA、および1mMPMSFを含有するTris-緩衝化生理食塩水TBS,50mMTris,150mMNaCl、pH7.5中で氷上でホモジナイズした。溶解物の濃度は、Bio-RadProteinAssayHercules,CAを用いて定量した。タンパク質20μgを、Laemmliサンプル緩衝液Bio-Rad,Hercules,CAを用いて1:1希釈して、還元条件下で18SDSポリアクリルアミドゲル上で再溶解した。このゲルを、半乾燥転写装置semi-drytransferapparatusBio-Rad,Hercules,CAを15Vで15分間用いて、PVDFメンブレンNEN,Boston,MAに転写した。メンブレンを、0.5脱脂粉乳を含むTBS/0.1Tween-20TBS-Tを用いて30分間ブロックして、ヤギ抗-hMIFIgG1:750を含有するTBS/0.1Tween-20/5脱脂乳とともに4°Cで一晩インキュベートした。このメンブレンをTBS-T中で10分間3回洗浄して、抗ヤギIgG-HRP1:1000とともに室温で1時間インキュベートして、TBS-Tを用いて10分間4回洗浄した。このメンブレンを、アルカリ条件SuperSignalWestPico,Pierce,Rockford,ILのもとでルミノールに過酸化水素を加えた5mlの混合物に5分間曝して、得られた化学発光反応を、KodakX-OMATARFilmEastmanKodakCo.,Rochester,New.Yorkによって検出した。実施例3RNA抽出、プローブ調製およびノーザンブロッティング全RNAを、製造業者のプロトコールに従って氷上で解凍した心臓からトリゾールInvitrogen,Carlsbad,CAで抽出して、分光測定法によって定量した。MIF特異的ノーザンプローブを、MIFプラスミドResearchGenetics,Huntsville,ALからDNADNeasyTissueKit,Qiagen,Valencia,CAを単離すること、および引き続きECOR1およびNOTI制限酵素FisherScientific,Pittsburgh,PAを用いてそれを切断することによって調製した。得られたDNAを1.2アガロースゲル上で分離して、精製しGenEluteAgaroseSpinColumns,Supelco,Bellefonte,PA、Ready-To-GoLabelingBeadsAmershamPharmacia,Piscatany,NJを用いて、5μl32P-dCTP3000Ci/mmolPerkinElmer,Boston,MAで標識して、製造業者のプロトコールに従って、ProbeQuantMicrocolumnsAmershamPharmacia,Piscatany,NJ中で精製した。mRNA10μgを、1.2アガロースゲル上で、100Vで、1時間分離させて、転写電気泳動ユニットTransPhorPowerLid,HoeferScientificInstruments,SanFrancisco上で、Hybond-NメンブレンAmershamPharmacia,Buckingham,Englandに対して100Vで1時間転写させた。GSGeneLinkerBio-Rad,Hercules,CAを用いてこのメンブレンにRNAを2分間結合させた。メンブレンは、Perfect-HybPlusSigma,St.Louis,Mo.中で4~5時間42°Cでプレハイブリダイズさせ、次いで、32P標識したMIFDNAプローブとともに42°Cで一晩インキュベートさせた。このメンブレンを2×SSC/0.1SDS中で30分間2回46°Cで洗浄して、0.2×SSC/0.1SDS中で30分間2回46°Cで洗浄し、KodakX-OMATARFilmEastmanKodakCo.,Rochester,NewYorkによって検出した。次いで、この同じメンブレンを放射性標識したβ-アクチンを用いてプローブして、タンパク質の等しいローディングを確実にした。実施例4免疫組織化学組織を天然の緩衝化ホルマリン中で固定して、パラフィンに処理して、引き続き、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびジアミノベンジジンDAB色素原SignetLaboratories,Dedham,MAを用いる、ウルトラ-ストレプトアビジンビオチンシステムUltra-streptavidinbiotinsystemを用いて、BioTekSolutionsTechmate商標1000自動免疫染色機automatedimmunostainerVentanaMedicalSystems,Tucson,AZ上で室温で免疫染色した。最適の一次抗体希釈は、公知の陽性コントロール組織を用いて事前に決定したラットのLPSチャレンジ後。パラフィン切片を、ロータリーミクロトーム上で3μmに切断して、正に荷電したガラススライドPOP100キャピラリーギャップスライド、VentanaMedicalSystems,Tucson,AZ上に装着して、一晩風乾した。次いで切片をキシレンおよびエタノール中で脱パラフィン化して、新鮮な3過酸化水素を用いて10分間クエンチして、内因性の組織ペルオキシダーゼ活性を阻害して、脱イオン水を用いてリンスした。二次抗体の非特異的結合をブロックするために15分間、未標識のブロック血清中で切片をインキュベートし、次いで1クエン酸緩衝液BioPath,OklahomaCity,OK中で希釈したウサギ抗MIF1:400,TorreyPinesBioLabs,Inc.,Houston,TX、または陰性の試薬コントロールとしては緩衝液単独のいずれかとともに25分間インキュベートした。緩衝液中での洗浄後、切片をビオチン化した多価二次抗体溶液ヤギ抗ウサギ免疫グロブリン含有とともに25分間インキュベートした。次に、切片を緩衝液を用いて洗浄して、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン-ビオチン複合体中で15分間インキュベートした、緩衝液中で再度洗浄し、次いでDABおよびH2O2を含有する緩衝液液の新鮮調製混合物を2回交換して各々5分間インキュベートして、その後に緩衝液中で次いで水中で洗浄した。次いで切片をヘマトキシリンで対比染色し、エタノールおよびキシレンの段階的な系列中で脱水して、カバースリップをかけた。スライドを光学顕微鏡によって検査して、DABとの陽性の反応は、濃褐色の反応生成物として特定された。実施例5rMIFに対する応答における心機能の決定C57BL/6JおよびC3H/HeJマウスをLangendorffアッセイ中で用いた。要するに、200Uの硫酸ヘパリンを複空内に与えて、20分後にマウスを屠殺して、直ちに心臓を取り出して、氷上でKrebs-Hanseleit緩衝液2mMNaHCO3、118mMNaCl、4.7mMKCL、1.2mMKH2PO4、1.2mMMgSO4、2.5mMCaCl2、11.1mMグルコース、pH7.4、これは、脱塩された脱イオン水で新鮮に調製され、そして95O2および5CO2PO2590mmHg、pCO238mmHgでバブリングした中に入れた。この大動脈をPE50チューブングによってカニューレ挿入し、事前に濾過した酸素化Krebs-HanseleitBufferを用いて、1.5ml/mT37°Cという一定の流速および100mlの再循環容積で、大動脈起始部を通じて逆行性の方法で心臓を灌流させた。心臓をウォータージャケットチャンバに入れて一定の温度および湿度を維持した。Statham圧力トランスデューサーに接続された、PE60intratnedicポリエチレン管を左室LV中に挿入して、LV圧を測定した。LV筋肉に挿入した27Gサーミスタニードルを用いて温度をモニターした。計測後、心臓を10分間安定化させて、安定な圧力に達することができないか、またはこの時間中に不整な脈が続いていた心臓は研究から除外した。安定化後、LV圧力およびその一次導関数dP/dT、心拍および冠動脈潅流をマルチチャネルGrass7DポリグラフGrassInstruments,Quincy,MAを用いて同時に測定した。全ての心臓についての心機能を、冠動脈潅流速度の変化に対して、ピークの収縮期LV圧力、および±dP/dt,Ia値をプロットすることによって決定した。心臓を、灌流液に添加した20ng/mlRMIFの有無とともに灌流させた。実施例6心エコー法による心機能障害の決定収縮期機能を評価するための心エコー図をMモードの測定を用いて行なった。5イソフルランを2.5L/mO2で20秒間意識消失まで、続いて2イソフルランおよびO2を平均12~15分間用いて、マウスを麻酔した。Nair登録商標ヘアリムーバーを用い、ガーゼを用いて3分間置いた後、胸郭および上腹部から毛を取り除いた。一過性の心臓抑制を生じさせるための導入の約5~8分後に、麻酔したマウスで心エコー測定を得た。心エコー図によって検出した心機能におけるこれらの一過性の最小の変化は、吸入イソフルランを用いて報告されているが、FSは安定であることが報告されている。心臓の心エコー図は、ランダムな方式および盲検的な方式で300~500フレーム/秒のフレーム速度でHewlett-PackardSonos5500AgilentTechnologies;Edmonton,Alberta,Canadaを用いて行なった。12MHzの直線のトランスデューサを、US移動ゲルAquasonic100,ParkerLaboratories;Fairfield,N.J.の層と接した左側の胸郭に置いた。2次元の胸骨傍の短軸画像によって、乳頭筋レベルに近いLVのMモードトレーシングが導かれた。深さは、150m/sの走査速度で最小2cmに設定された。トレーシングは、SonyのカラープリンターUP-5200,Sonyで印刷された。実施例7Mモード測定データは、その各々が少なくとも3つの選択された拍動の平均にあたる少なくとも2つの別のスキャンの平均に相当する。心臓拡張末期は、最大のLV拡張期径として規定され、そして心臓収縮末期は、後壁運動のピークとして規定された。収縮機能は、以下のようにLV径から円周短縮率FSとして算出された:図5Aに示されるとおり、FS:LVED-LVES/LVED×100。実施例8統計学的分析ノーザンおよびウエスタンのデータは、平均±標準誤差として表され、そして一元分散分析を用いて統計学的に分析される。実験群とコントロール群との間の有意差の決定は、チューキー法を用いて行なったp≦0.05。Langendorff調製によって決定した心臓機能は、平均±標準誤差として表し、そして別の分析を各々のLVP、dP/dtmax、および-dP/dtmaxについて、処置群の関数として、そして冠血流速度について、反復測定分散分析を用いて行なった。Bonferroni法を使用する多重比較手順を用いて、群間の有意差を決定したp<0.05。心エコー図によって決定した心機能は、円周短縮率LVED-LVES/LVEP×100.±標準偏差によって表され、そして一元の反復測定分散分析を用いて分析される。チューキー検定を用いてさらなる比較を行ない、特定の群の間の有意差を決定したp<0.05。全ての統計学的分析は、SigmaStat2.03SPSSInc.,Chicago,ILおよびMicrosoftExcelMicrosoftCorp.,Seattle,WAを用いて行なった。実施例9MIFタンパク質は、インビボにおいて心筋細胞によって構成的に発現されて、LPSチャレンジに応答して放出される。心臓組織で行なった免疫組織およびウエスタン分析の両方によって、心室および心房の筋細胞を含む心臓細胞におけるMIFの存在が、ベースラインのコントロール条件下で実証された図1および2。内毒素チャレンジ後、免疫組織化学およびイムノブロット分析の両方によって、内毒素後の心臓組織のMIFの有意な減少が証明される。この減少は、12時間で最も顕著75低下であったが、24時間までにほぼベースラインのコントロールレベルに戻った。心臓におけるこの発現パターンは、肝臓および脾臓において証明されたパターンと同様であり図2、そしてMIFがLPSチャレンジ後に組織内の予め形成された貯蔵から放出されるという仮説と一致している。組織からのMIFの放出は、4時間でイムノブロットで証明され図1、内毒素曝露後の血清レベルの増大と相関している表1。実施例10内毒素チャレンジ後の心筋でのMIFMRNA発現コントロールのマウスまたはLPSチャレンジマウスのいずれかの心臓から所定の時点で得られたRNAのノーザン分析によって、MIFmRNAは、コントロールマウスで構成的に発現されること、およびLPSチャレンジ後に、心臓全体の調製物においてMIFmRNAの濃度に有意な変化は検出できないことが示される。実施例11MIFは、収縮期および拡張期の心機能障害を誘発する。MIFが心機能に直接影響するか否かを決定するために、自発的に拍動している正常なマウス心臓Langendorff調製を、組み換えMIFrMIFを用いて、敗血性ショックを有するヒトの血清で実証された濃度20に近い20ng/mlの濃度で灌流させた。MIFに対する応答は、C57BL/6JマウスおよびC3H/HeJマウスの両方由来の心臓において確認された。C3H/HeJマウスは、内毒素41-43に対して耐性であり、従って、観察される任意の抑制が灌流液中の微量の内毒素に起因し得る可能性は限定される。表2は、コントロールの灌流液、または20ng/mlの組み換えMIFを含有する灌流液での1.5ml/分の逆行性の心房灌流に対する、両方のマウス系統の応答を図示する。MIFでの灌流によって、両方のマウス系統でLVP、dP/dtmax、および-dP/dtmaxの有意な低下がもたらされた。図4は、ある範囲の冠血流速度を超えるMIFの効果を例示する。実験群の割り当てに関わらず、全ての心臓において収縮能力の段階的な増大が存在する。MIFに曝された心臓とコントロールの心臓との比較によって、機能曲線の下向きのシフトが明らかになり、これによって、20ng/mlrMIFに応答する有意な収縮期および拡張期の抑制が示されたp<0.05。MIFの効果は、内毒素感受性系統C57BL/6Jおよび内毒素耐性系統C3H/HeJの両方で統計学的に同一であった。同様に、rMIFで灌流させたC57BL/6JとC3H/HeJの研究心臓の間でLVP、dP/dtmaxおよび-dP/dtmaxに相違はなかった。実施例12抗MIF抗体は、インビボにおいてLPS誘発性の心臓抑制を改善する。インビボにおいて心機能障害の病原性におけるMIFの影響を決定するために、連続的な心エコーMモードを、抗MIFモノクローナル抗体、アイソタイプコントロール抗体、または処置なしのいずれかを用いて事前に処置90分前されている、LPSチャレンジしたマウスで行なった図5。LPSチャレンジ4時間後、全てのLPSチャレンジしたマウスの円周短縮率FSは、群の割り当てにかかわらず、同様に抑制されたFSにおいて50減少。しかし、LPSチャレンジの8時間後、いずれかの抗MIFモノクローナル抗体を注射されたマウスは、処置なしまたはアイソタイプ抗体コントロールのいずれかを受けている、LPSチャレンジされた群に比較してFSの統計学的に有意な回復を実証した図5。機能のこの増強された回復は、12時間、24時間および48時間継続した。チャレンジ後48時間で、抗MIF処置群は、FSのほぼ完全な回復を示したが、LPSチャレンジした群は、顕著に抑制されたままであった。48時間にわたって、ニセマウスのFSは、有意に変化されず、このことは、心機能が麻酔または試験レジメン自体によって影響されなかったことを示している。さらに、全ての時点で、アイソタイプの抗体コントロールを注射されたマウスは、LPSチャレンジされた動物に同一であって、このことは抗MIF抗体効果の特異性を示す。実施例13材料および方法抗体およびサイトカイン。ポリクローナルウサギ抗ラットMIFIgGTorreyPinesBioLabs,Inc.,Houston,TXを、ウエスタンイムノブロットおよび免疫組織化学に用いた。この抗体は以前にマウスMIFと交差反応することが示されており、前に記載されたとおり調製された23。ポリクローナルヤギ抗ウサギIgG-HRPBioRadCorp.,Hercules,CAをウエスタンイムノブロットのための二次抗体として用いて、4°Cで保管した。2つのモノクローナルマウス抗マウスおよびヒトMIFIgG1抗体XIV.15.5およびIII.D.9、CytokinePharmaSciences,Inc.から贈呈およびモノクローナルマウスIgG1アイソタイプコントロール抗体HB-49、CytokinePharmaSciences,Inc.から贈呈を、心エコー法研究において用いた。XIV.15.5およびIII.D.9クローンの両方によるMIF活性のインビボ中和は、以前に実証されている。動物、実験デザインおよび熱傷。6~10週齢の雄性C57BL/6JマウスJacksonLabs,BarHarbor,MEを、特異的な病原体なしの環境で維持した。市販の固形飼料および水道水を自由に利用させた。全ての動物プロトコールは再審査されて、UniversityofTexasSouthwesternMedicalCenterInstitutionalAnimalCareAdvisoryCommitteeによって承認されて、NIHによって公開された、動物使用を管理する規則に従った。マウスは、40TBSAの熱傷に供した。要するにマウスは、効果を発揮するためにソフルラン1~2を2.5L/mの酸素とともに用いて麻酔した。次いで、外科用調製ブレードおよび70エタノールを用いて、そのマウスの背中および横腹から毛を取り除いた。煮沸水中で黄銅プローブを100°Cに加熱して、次いで動物の横腹および背中に5秒間、対であてた表面に全部で8つのプローブ。あるいは、ニセのマウスは麻酔して、剃毛したが熱傷は与えなかった。麻酔が除去された酸素を継続することによって後、Buprenex2ccLR0.2ccBuprenex=0.05mg/kgを含む乳酸リンゲルの腹腔内注射を、熱傷後に与えた。次いで、マウスを、約1時間加熱ランプ下で、そして研究の期間中加熱パッド上で、個々のケージに入れて、厳密にモニターした。マウスを、CO2窒息と引き続く頚部脱臼によって、図に示した時点で屠殺した。モノクローナル抗MIF抗体III.D.9およびXIV.15.5またはアイソタイプコントロールHB-49を、心エコー図研究において熱傷の90分前に腹腔内に注射した100μgを200μlPBSに含有。心臓全体を取り出して、液体窒素中で凍結し、-80°Cで保管した。平行する実験では、心臓を10の天然の緩衝化ホルマリン中で24時間固定し、次いで免疫組織化学のために処理するまで70エタノール中に入れた。全血を後眼窩採血によって採集して、血清を収集して保管した。タンパク質抽出およびウエスタンブロッティング。-80°Cで保管した心臓を氷上で溶解緩衝液10mMHEPES、2mMEDTA,0.1Chaps,pH7.4中で、10mlの緩衝液あたり1の完全Mini-EDTA-Freeプロテアーゼインヒビターカクテル錠剤、RocheDiagnostics,Mannheim,Germanyとともにホモジナイズした。タンパク質濃度をBio-RadProteinAssayHercules,CAを用いて定量した。次いで、50μgの総タンパク質溶解物であって、Laemmeliサンプル緩衝液Bio-Rad中に1:1の比で最終容積10μlに希釈したものを、還元条件下で12SDSポリアクリルアミドゲル上で溶解した。事前に染色したSDS-PAGE標準KaleidoscopeBroadrange,Bio-RadLaboratories,Inc.,Hercules,CAを各々のゲルで泳動して、検出されたバンドの適切な分子量を決定した。このゲルを、ミニトランスブロットトランスファー装置Bio-Rad,Hercules,CAを100Vで70分間用いて、PVDFメンブレンNEN,Boston,MAに転写して、氷嚢で冷却した。このメンブレンをメタノールで再度湿らせて、100mlの水で最低3回洗浄し、そして4°Cで一晩ブロックした5脱脂粉乳Bio-Rad/TBS/0.1Tween-20TBS-T。次いでこのメンブレンを一次ウサギ抗-MIF1:1250希釈を用いて室温で2時間、5乳/TBS-T中でインキュベートして、TBS-T中で1回、15分間洗浄し、続いてTBS-T中で5回各々5分洗浄した。次いで、これをTBS-T中のHRP結合体化ヤギ抗ウサギ抗体1:5000とともに室温で1時間インキュベートして、15分間2回洗浄し、続いてさらに5回各々5分TBS-T中で洗浄した。発色するために、5mlのECL試薬SuperSignalWestPico,Pierce,Rockford,ILを、PVDFメンブレン上に5分間置いて、得られた化学発光反応をKodakX-OMATARFilmEastmanKodakCo.,Rochester,NewYorkによって検出した。ほぼMIFの分子量12.5kDを有する単一のバンド密度の定量を、Scanjet3400cHewlettPackard,PaloAlto,CAを用いるTIFFファイル8ビットグレースケールへの放射線用フィルムの変換後にQuantityOneソフトウェアBio-Rad,Hercules,CA,Ver.4.4.0,Build36を用いて決定して、任意の単位A.U./mm2で報告した。免疫組織化学組織を天然の緩衝化ホルマリン中で固定して、パラフィン処理し、引き続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびジアミノベンジジンDAB色素原SignetLaboratories,Dedham,MAを備えるウルトラ-ストレプトアビジンビオチンシステムUltra-streptavidinbiotinsystemを用いて、室温でBioTekSolutionsTechmate商標1000自動化免疫染色機VentanaMedicalSystems,Tucson,AZ上で免疫染色した。最適の一次抗体濃度は、公知の陽性コントロール組織LPSチャレンジしたラットを用いて事前に決定した。パラフィン切片は、ロータリーミクロトームで3μmに切断し、正に荷電したガラススライドPOP100キャピラリーガススライド,VentanaMedicalSystems,Tucson,AZ上に装着して、一晩風乾した。次いで切片をキシレンおよびエタノール中で脱パラフィンして、新鮮な3過酸化水素で10分間クエンチして内因性の組織ペルオキシダーゼ活性を阻害して、脱イオン水でリンスした。切片を、15分間未標識のブロッキング血清中でインキュベートして、二次抗体の非特異的結合をブロックし、次いで1クエン酸緩衝液BioPath,OklahomaCity,OK中で希釈したポリクローナルウサギ抗ラットMIFIgG1:400,TorreyPinesBioLabs,Inc.,Houston,TXまたは、陰性の試薬コントロールとして緩衝液単独のいずれかとともに25分間インキュベートした。陰性の試薬コントロールは、各々の時点についておよび各々の器官について行なった。緩衝液中での洗浄後、切片を、ビオチン化多価二次抗体溶液ヤギ抗ウサギ免疫グロブリンを含有とともに25分間インキュベートした。次に、切片を緩衝液で洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン-ビオチン複合体中で15分間インキュベートして、緩衝液中で再度洗浄し、次いでDABおよびH2O2を有する緩衝液の新鮮に調製した混合物を2回交換して各々5分間インキュベートして、続いて緩衝液、次いで水中で洗浄した。次いで切片をヘマトキシリンで対比染色して、段階的な一連のエタノールおよびキシレン中で脱水し、カバースリップをかけた。スライドを蛍光顕微鏡によって観察して、DABとの陽性の反応は、濃褐色反応生成物として同定された。血清MIFレベルの決定。6匹のマウス由来の血清を、製造業者の指示に従って、Chemikine商標ラット/マウスマクロファージ阻害因子macrophageinhibitoryfactorMIFEIAキットChemiconInternational,Inc.,Temecula,CAを用いてマウスMIFについてアッセイした。要するに、5μlの標準、サンプル、または反応緩衝液ブランクを、各々のウェルに3連で添加した。次に、100μlの希釈MIF-HRP抗体結合体を各々のウェルに添加して、室温で2時間インキュベートした。次いでウェルを5回洗浄して、100μlの3,3’,5,5’-テトラメチルベンジジンTMB基質を添加して、暗野で30分間室温でインキュベートさせた。停止試薬を各々のウェルに加えて、穏やかに混合し、アッセイの終了30分内に450nmバックグラウンド630nmでELISAプレートリーダーEL312eMicroplateReader,Bio-TekInstruments,Winooski,VTでELISAを読みとった。Luminexによる多重サイトカイン検出。血漿の炎症性サイトカインIL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、TNF-α、およびGM-CSFの濃度は、製造業者の指示に従って、LuminexxMAP商標システムLuminexCorp.,Austin,TX上で、マウスサイトカインTen-Plex抗体ビーズキットBiosourceInternational,Inc.,Camarillo,CAを用いて検出した。このプレートをLuminexXYP商標プラットフォーム上にロードして、この装置を50μlを除去するようにセットして、総ての事象をビーズセットあたり100に等しく設定した。各々のサイトカインについて少なくとも100の事象ほとんど>200を各々のサンプル中で収集して、統計学的に有意な結果を確認した。Luminex商標DataCollectorSoftwareLuminexCorp.,Austin,TXを用いてデータを収集した。各々の試行に用いたロット特異的な再構成した標準の濃度をソフトウェアに入れて、次いで未知のサンプルについての分析濃度をMasterPlex商標QTソフトウェアVersion1.2.8.58,MiraiBio,Inc.,Alameda,CAを用いてサイトカイン特異的な標準曲線から推定した。最初の希釈係数を考慮するために最終濃度に2を掛けた。いずれかのサイトカインについての標準曲線よりも高いサンプルは検出されなかった。総RNA単離、MIFおよびβアクチンプローブ調製およびノーザンブロッティング。-80°Cで保管した心臓を、液体窒素を充填した乳棒に入れて乳鉢で微細な粉末になるまで細かくした。次いで、各々の粉砕された心臓を2mlのTrizolInvitrogen,Carlsbad,CAに直ちに入れて、総RNAを製造業者のプロトコールに従って単離し、分光測定によって定量した。MIF特異的なノーザンプローブは、GeneluteHPPlasmidMidiPrepキットSigma,St.Louis,MOを用いて単離したMIF含有プラスミドImageCloneI.D.634910,ResearchGenetics,Huntsville,ALから調製した。EcoR1およびNot1消化FisherScientific,Pittsburgh,PAによってフラグメントを調製して、ゲル精製し、GenEluteAgaroseSpinColumnsSupelco,Bellefonte,PAを用いて1.2アガロースゲル上で単離した。βアクチンプローブDNAフラグメントは、AmbionAustin,TXから購入した。MIFおよびβ-アクチンプローブの両方を、Strip-EZ商標DNAプローブ合成キットAmbion,Austin,TXを用いて5μl[α-32P]dATP3000Ci/mmol,10mCi/mlPerkinElmer,Boston,MAで標識して、製造業者のプロトコールに従ってProbeQuantMicrocolumnsAmershamPharmacia,Piscatany,NJ中で精製した。RNA10μgを、1.2アガロースゲル上で100ボルトで1時間分離して、転写電気泳動ユニットTransPhorPowerLid,HoeferScientificInstruments,SanFrancisco上で、Hybond-NメンブレンAmershamPharmacia,Buckingham,Englandに対して1.5アンペアで70分間転写した。GSGeneLinkerBio-Rad,Hercules,CAを用いて約2分間RNAをこのメンブレンに結合させた。このメンブレンは、Perfect-HybPlusSigma,St.Louis,MO中で、68°Cで1時間ハイブリダイゼーションオーブンSorvallLifeScience,Inc.,Greensboro,NC中でプレハイブリダイズさせた。次いで、剪断された変性された、サケまたはニシンの精巣DNA100μg/mlを1時間加え、続いて、>5×108cpm/μgで標識された約0.1μgのプローブを添加した。次いでこのブロットをハイブリダイゼーションオーブン中で68°Cで12時間ハイブリダイズさせ、続いて2×SSC、0.1SDS中で68°Cで洗浄した。このメンブレンを1時間洗浄して、その緩衝液を交換し、次いでメンブレンをさらに1時間68°Cで洗浄した。このメンブレンをサランラップで包み、24時間後にmRNAをKodakX-OMATARFilmEastmanKodakCo.,Rochester,NewYorkによって検出した。次いでサンプルのメンブレンを、同様の方式で、放射性標識されたβアクチン>5×108cpm/μgで標識した0.1μgのプローブAmbion,Austin,TXを用いて再プローブさせた。濃度測定は、ウエスタンブロットについて上記したとおり行った。βアクチンのmRNAバンドは、MIFmRNA濃度測定を正規化するコントロールとして役立った。Langendorffによるエキソビボ心機能決定。マウス心臓機能を、Langendorffアッセイ手順を用いて決定した。要するに、200単位の硫酸ヘパリンを腹腔内に注射して、20分後にマウスを屠殺した。心臓を直ちに取り出して、氷上でKrebs-Henseleit緩衝液脱塩、脱イオンした水で新鮮に調製され、そして95O2および5CO2PO2590mmHg,pCO238mmHgでバブリングされた、2mMNaHCO3,118mMNaCl,4.7mMKCL,1.2mMKH2PO4,1.2mMMgSO4,2.5mMCaCl2,11.1mMグルコース,pH7.4中に入れた。大動脈にPE50チューブングをカニューレ挿入し、事前に濾過した酸素化Krebs-HanseleitBufferを用いて、1.5ml/mT37°C、100mlの再循環容積という一定の流速で、大動脈起始部を通じて逆行性の方法で心臓を灌流させた。心臓をウォータージャケットチャンバに入れて一定の温度および湿度を維持した。Statham圧力トランスデューサに接続した、PE60intramedicポリエチレン管を左室LV中に挿入して、LV圧を測定した。LV筋肉に挿入した27ゲージのサーミスタニードルを用いて温度をモニターした。計測後、心臓を10分間安定化させて、安定な圧力に達することができないか、またはこの時間中に不整な脈が続いていた心臓はこの研究から除外した。安定化後、LV圧力およびその一次導関数dP/dT、心拍数および冠動脈潅流をマルチチャネルGrass7DポリグラフGrassInstruments,Quincy,MAを用いて同時に測定した。冠動脈灌流の関数としての心室の能力を、冠血流速度の段階的な増大に対して、ピークの収縮期LV圧力、および±dP/dtmax値をプロットすることによって全ての心臓について決定した。心エコー法による心機能障害の決定収縮期機能を評価するための心エコー図をMモードの測定を用いて行なった。5イソフルランを2.5L/mO2で20秒間意識消失まで、続いて2イソフルランおよびO2を平均12~15分間用いて、マウスを麻酔した。Nair登録商標ヘアリムーバーおよびガーゼを用いて、3分間置いた後、胸郭および上腹部から毛を取り除いた。導入の約5~8分後に、麻酔したマウスで心エコー測定を得た。心臓の心エコー図は、ランダムな方式および盲検的な方式で300~500フレーム/秒のフレーム速度でHewlett-PackardSonos5500AgilentTechnologies;Edmonton,Alberta,Canadaを用いて行なった。12MHzの直線のトランスデューサを、USトランスミッションtransmissionゲルAquasonic100,ParkerLaboratories;Fairfield,NJの層と接した左側の胸郭に置いた。2次元の胸骨傍の短軸画像によって、乳頭筋レベルに近いLVのMモードトレーシングが導かれた。深さは、150m/sの走査速度で最小2cmに設定された。トレーシングは、SonyのカラープリンターUP-5200,Sonyで印刷された。Mモード測定データは、少なくとも2つの別のスキャン由来の9つの選択された心周期の平均に相当する。心臓拡張末期は、最大のLV拡張期径として規定され、そして心臓収縮末期は、後壁運動のピークとして規定された。収縮機能の代用である円周短縮率FSは、以下のようにLV径から算出された:図12に示されるとおり、FS:LVED-LVES/LVED×100。統計学的分析ノーザンおよびウエスタンのデータは、平均±標準誤差SEとして表され、そして一元分散分析ANOVAを用いて統計学的に分析される。多重比較手順はチューキー法を用いて使用して、群間の統計学的有意差を決定した。Langendorff調製安定化データを含むによって決定した心臓機能は、平均±SEとして表し、そして別の分析を各々のLVP、dP/dtmax、および-dP/dtmaxについて、処置群の関数として、そして冠血流速度について、反復測定ANOVAを用いて行なった。Bonferroni法を使用する多重比較手順を用いて、群間の有意差を決定した。血清MIFレベルは、平均±SEとして表されて、Bonferroni法を使用する多重比較手順とともに、一元ANOVAを用いて統計学的に分析されて、群間の有意差が決定された。M-モード心エコー図によって決定した心機能は、円周短縮率±SEとして表され、一元反復測定ANOVAを用いて分析される。チューキー検定を用いてさらなる比較を実施して、特定の群間の有意差を決定した。全ての分析についての統計学的有意差は、p≦0.05として規定した。全ての統計学的分析は、SigmaStat2.03SPSSInc.,Chicago,ILおよびMicrosoftExcelMicrosoftCorp.,Seattle,WAを用いて行なった。結果-実施例13MIFタンパク質は、インビボにおいて心筋細胞によって構成的に発現されて、熱傷に応答して放出される。このサイトカインであるマクロファージ遊走阻止因子MIFは、ウエスタンおよび免疫組織化学によって実証されるとおり、心室および心房の両方の筋細胞にベースラインで存在する図7および8。熱傷後、有意な減少21倍がMIFの組織濃度で、8時間で同定され、これは12時間でベースラインのレベルに戻った図7。この発現パターンは、熱傷後の肝臓、脾臓および肺において平行であって図8、これは、熱傷の応答メディエーターにおいてMIFが放出されるという仮説と一致している。合成MIFおよびIL-6レベルが熱傷後に増大される。MIFの最大の全身放出2.2倍増大は、血清中において4時間で特定され、そして8時間でベースラインレベルに戻った図9。最大血清IL-6レベルは、12時間で同定され、これは48時間までにベースラインレベルに戻った。血清IL-12レベルは、熱傷後に低下して、24時間で最低で、48時間までにベースラインに戻った。試験した材料および方法で列挙したように他のサイトカンで、血清中で検出されたものはなかった。心臓におけるMIFmRNAは熱傷後8時間までに心臓で有意に増大する。MIFmRNAのレベルは、ニセのマウスまたは熱傷後4、8、12、24および48時間後のマウスのいずれかの心臓から単離された総RNAからのノーザン分析によって検出された図10。MIFmRNAは、心臓で構成的に発現され、そして転写の有意な増大は最初に8時間で生じ、これは試験の残りの時間経過48時間の間、上方制御される48時間図10。抗MIF抗体は、LPS誘発性心臓抑制をエキソビボで改善する。ニセの操作、熱傷または熱傷とともに抗MIF抗体の事前処置を受けているマウスから1.5ml/分の逆行性の大動脈灌流に対する心臓の応答は、心機能のLangendorff分析を用いて決定した。熱傷を受けた18時間後のマウスにおいて、LVP、dP/dtmax、-dP/dtmax、DR、dP40、TPP、RT90および最大-dP/dt時間における有意な低下が確認された。抗MIFクローンIII.D.9で事前処置された、熱傷を受けているマウスは、18時間まで完全に保護され表3たが、アイソタイプコントロールで処置されたマウスは、熱傷のみと有意に異なることはなかったデータ示さず。図11は、ニセマウス、熱傷マウス、および抗MIF抗体で事前処置した熱傷マウス由来の熱傷またはニセの手順の18時間後の、ある範囲の冠血流速度にわたる心臓の機能を図示する。冠血流の増大によって、試験した全ての心臓群において収縮能力の段階的な増大が生じた。熱傷を受けているマウスは、LVP、dP/dtmaxおよび-dP/dtmax機能曲線において下向きのシフトを生じ、このことは有意な収縮期および拡張期の機能障害を実証した図11。しかし、この機能障害は、抗MIF抗体が与えられた場合には存在せず、ニセマウスに対して有意な相違は確認されなかった図11。抗MIFモノクローナル抗体療法は、インビボにおいて熱傷関連心臓抑制を改善する。連続的な心エコーMモードを、熱傷を受けているマウス、および2つの抗MIF抗体、アイソタイプコントロール、または処置なしのいずれかで熱傷の90分前に事前に処置されたマウスにおいて行なった図12。4および8時間で、全ての熱傷処置したマウスの円周短縮率FSは、抗MIF処置にかかわらず、同様に抑制された21.4FS56.2FS-34.8。しかし、熱傷の12時間後、2つのモノクローナル抗MIF抗体のいずれかを注射されたマウスは、アイソタイプ抗体コントロールの処置なしのいずれかを受けている、熱傷マウスに比較してFSの統計学的に有意な回復を実証した図12。24時間までに、処置されたマウスのFSは、コントロールと有意に異なることはなく、このことは、付随する心機能障害の完全な保護を示している。48時間にわたって、ニセマウスのFSは有意に変化せず、これによって、この試験レジメンおよび麻酔が心機能に影響しなかったことが示される。最後に、アイソタイプコントロール抗体を投与されているマウスは、熱傷のみを受けている動物と有意な相違を示さず、これによって抗MIF抗体の効果の特異性が示された。実施例14TNF-αシグナル伝達がMIF分泌において有する役割、およびその関連する心機能障害を致死量未満の内毒素中毒症のモデルにおいて決定するため、以下の実験を実施例14において実行した。材料および方法抗体およびサイトカインマウスMIFと交差反応するポリクローナルウサギ抗ラットMIFIgGTorreyPinesBioLabs,Inc.,Houston,TXをウエスタンイムノブロットおよび免疫組織化学のために用いた。ポリクローナルヤギ抗ウサギIgG-HRPBioRadCorp.,Hercules,CAをウエスタンイムノブロットのための二次抗体として用いた。2つのモノクローナルマウス抗マウスおよびヒトMIFIgG1抗体XIV.15.5およびIII.D.9、CytokinePharmaSciences,Inc.,KingofPrussia,PAから贈呈およびモノクローナルマウスIgG1アイソタイプコントロール抗体HB-49,CytokinePharmaSciences,Inc.から贈呈を、心エコー研究において用いた。XIV.15.5およびIII.D.9クローンの両方によるMIF活性のインビボ中和は以前に実証されている。TNF-αを中和するために用いた組み換えヒトTNFR:FcEnbrel登録商標は、ImmunexCorp./Amgen,Inc.、ThousandOaks,CAから贈呈された。組み換えヒトMIFは、Bernhagenらの方法に従って合成して、CytokinePharmasciences,Inc.によって提供された。動物および実験デザイン。病原体なしの成体雄性C57BL/6Jマウスを、6~10週齢で入手して、約12週齢で利用したJacksonLabs,BarHarbor,ME。B6:129PF1/JおよびB6;129S-Tnfrsflatm1ImxTnfrsflbtm1ImxマウスTNFR-/-の繁殖するペアをJacksonLaboratoryBarHarbor,MEから購入して、雄性の子孫を遺伝子型決定後に20~24週30~40グラムで利用した。市販の固形飼料および水道水は自由に利用させた。全ての動物プロトコールは再審査されて、UniversityofTexasSouthwesternMedicalCenterInstitutionalAnimalCareAdvisoryCommitteeによって承認されて、NIHによって公開された、動物使用を管理する規則に従った。マウスに、4mg/kgE.coli0111:B4LPSSigma-AldrichCorp.,St.Louis,Mo.を腹腔内注射して、CO2窒息および引き続く頚部脱臼によって屠殺した。注射していないマウスをコントロールとして用いた。2つの抗-MIF抗体III.D.9およびXIV.15.5,CytokinePharmaSciences,Inc.,KingofPrussia,PAから贈呈およびそのアイソタイプコントロールHB-49,CytokinePharmaSciences,Inc.から贈呈を、心エコー研究においてLPSチャレンジの前に複空内に90分注射した100μgを200μgPBSに含有。Enbrel登録商標rhTNFR:Fcを、野生型マウスにおいてLPSチャレンジの75分前に複空内に注射した5mg/kgまたは300μgを0.5mlPBSに含有。心臓全体を取り出して、液体窒素中で凍結し、-80°Cで保管するか、または10の天然の緩衝化ホルマリン中で24時間固定して、免疫組織化学のために70エタノール中に入れた。全血を後眼窩採血によって採集して、分離試験管を用いて分離した。血清を無菌のスナップトップsnap-top試験管に移して、ELISAによって分析するまで-80°Cで凍結させた。血清MIFレベルの決定。6匹のマウス由来の血清を製造業者の指示に従って、Chemikine商標ラット/マウスマクロファージ阻害性因子Rat/MousemacrophageinhibitoryfactorMIFEIAキットChemiconInternational,Inc.,Temecula,CAを用いてマウスMIFについて分析した。要するに、5μlの標準物、サンプルまたは反応緩衝液blankを各々のウェルに2連で添加した。希釈されたMIF-HRP抗体結合体を各々のウェル100μlに添加して、室温で2時間インキュベートさせた。次いで、ウェルを5回洗浄し、TMB基質100μlを、暗野で30分間室温でインキュベートさせた。停止試薬を各々のウェルに添加して、穏やかに混合し、そしてアッセイの終了30分内に450nmバックグラウンド630nmでELISAプレートリーダーEL312eMicroplateReader,Bio-TekInstruments,Winooski,VTでELISAを読みとった。タンパク質抽出およびウエスタンブロッティング。-80°Cで保管した心臓を氷上で溶解緩衝液10mMHEPES、2mMEDTA,0.1Chaps,pH7.4中で、10mlの緩衝液RocheDiagnostics,Mannheim,Germanyあたり1錠のCompleteMini-EDTA-Freeプロテアーゼインヒビターカクテル錠剤とともにホモジナイズした。タンパク質濃度をBio-RadProteinAssayHercules,CAを用いて定量して、Laemmeliサンプル緩衝液Bio-Rad中に希釈した50μgのタンパク質を、1:1の比で最終容積10μlまで添加して、還元条件下で12SDSポリアクリルアミドゲル上で溶解した。事前に染色したSDS-PAGE標準KaleidoscopeBroadrange,Bio-RadLaboratories,Inc.,Hercules,CAを各々のゲルで泳動して10μl/レーン、検出されたバンドの適切な分子量を決定した。このゲルを、MiniTransblot登録商標電気泳動転写セルtransfercellBio-Rad,Hercules,CAを用いて100Vで70分間、PVDFメンブレンNEN,Boston,MAに転写して、氷嚢で冷却した。引き続き、このメンブレンをメタノールで再度湿らせて、100mlの水で最低3回洗浄し、そしてブロック5脱脂粉乳Bio-Rad/TBS/0.1Tween-20TBS-T中に4°Cで一晩おいた。次いでこのメンブレンを一次ウサギ抗-MIF1:1250希釈を用いて室温で2時間、5乳/TBS-T中でインキュベートさせた。このメンブレンをTBS-T中で1回、15分間洗浄し、続いて5回各々5分洗浄した。次いで、このメンブレンをTBS-T中でHRP結合体化ヤギ抗ウサギ抗体1:5000に希釈とともに室温で1時間インキュベートさせた。次いでこのメンブレンを15分間2回洗浄し、続いてさらに5回各々5分洗浄した。次いで、このメンブレンを、5mlのECL試薬SuperSignalWestPico,Pierce,Rockford,ILとともに5分間発色させて、得られた化学発光反応をKodakX-OMATARFilmEastmanKodakCo.,Rochester,NewYorkによって検出した。ほぼMIFの分子量12.5kDを有する単一のバンド密度の定量を、Scanjet3400cHewlettPackard,PaloAlto,CAを用いるTIFFファイル8ビットグレースケールへの放射線用フィルムの変換後にQuantityOneソフトウェアBio-Rad,Hercules,CA,Ver.4.4.0,Build36を用いて決定して、任意の単位A.U./mm2で報告した。免疫組織化学組織を天然の緩衝化ホルマリン中で固定して、パラフィンに処理し、引き続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびジアミノベンジジンDAB色素原SignetLaboratories,Dedham,MAを備えるウルトラ-ストレプトアビジンビオチンシステムUltra-streptavidinbiotinsystemを用いて、室温でBioTekSolutionsTechmate商標1000自動化免疫染色機VentanaMedicalSystems,Tucson,AZ上で免疫染色した。パラフィン切片は、ロータリーミクロトームで3μmに切断し、正に荷電したガラススライドPOP100キャピラリーガススライド,VentanaMedicalSystems,Tucson,AZ上に装着して、一晩風乾した。次いで切片をキシレンおよびエタノール中で脱パラフィンして、新鮮な3過酸化水素で10分間クエンチして内因性の組織ペルオキシダーゼ活性を阻害して、脱イオン水でリンスした。切片を、15分間未標識のブロッキング血清中でインキュベートして、二次抗体の非特異的結合をブロックし、次いで1クエン酸緩衝液BioPath,OklahomaCity,OK中で希釈したウサギ抗ラットMIF1:400,TorreyPinesBioLabs,Inc.,Houston,TXまたは、陰性の試薬コントロールとして緩衝液単独のいずれかとともに25分間インキュベートした。緩衝液中での洗浄後、切片を、ビオチン化多価二次抗体溶液ヤギ抗ウサギ抗体を含有とともに25分間インキュベートした。次に、切片を緩衝液で洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン-ビオチン複合体中で15分間インキュベートして、緩衝液中で再度洗浄し、次いでDABおよびH2O2を含有する緩衝液の新鮮に調製した混合物を2回交換して各々5分間インキュベートして、続いて緩衝液、次いで水中で洗浄した。次いで切片をヘマトキシリンで対比染色して、段階的な一連のエタノールおよびキシレン中で脱水し、カバースリップをかけた。スライドを蛍光顕微鏡によって観察して、DABとの陽性の反応は、濃褐色反応生成物として同定された。総RNA単離、MIFおよびβアクチンプローブ調製およびノーザンブロッティング。-80°Cで保管した心臓を、液体窒素を充填した乳棒に入れて乳鉢で微細な粉末になるまですりつぶした。次いで、各々の粉砕された心臓を2mlのTrizolInvitrogen,Carlsbad,CAに直ちに入れて、総RNAを製造業者のプロトコールに従って単離し、分光測定によって定量した。MIF特異的なノーザンプローブは、GeneluteHPPlasmidMidiPrepキットSigma,St.Louis,MOを用いて単離したMIF含有プラスミドImageCloneI.D.634910,ResearchGenetics,Huntsville,ALから調製した。EcoR1およびNot1消化FisherScientific,Pittsburgh,PAによってフラグメントを調製して、ゲル精製し、GenEluteAgaroseSpinColumnsSupelco,Bellefonte,PAを用いて1.2アガロースゲル上で単離した。βアクチンプローブDNAフラグメントは、AmbionAustin,TXから購入した。MIFおよびβ-アクチンプローブの両方を、Strip-EZ商標DNAプローブ合成キットAmbion,Austin,TXを用いて5μl[α-32P]dATP3000Ci/mmol,10mCi/mlPerkinElmer,Boston,MAで標識して、製造業者のプロトコールに従ってProbeQuantMicrocolumnsAmershamPharmacia,Piscatany,NJ中で精製した。単離された総RNA10μgを、製造業者のプロトコールに従って、1:3のサンプル:ローディング色素の比で、ホルムアルデヒドローディング色素Ambion,Inc.と合わせた。各々のゲルは、サンプル10μgと平行して泳動した0.24~9.5kBのRNAラダーInvitrogenCorp.を有した。サンプルおよびRNAのラダーは、電気泳動前に10分間65°Cにおいて、1.2アガロースゲル上で1×TAE緩衝液Ambion,Inc.を用いて100ボルトで1時間分離して、転写電気泳動ユニットTransPhorPowerLid,HoeferScientificInstruments,SanFrancisco上において0.5×TAE中で、Hybond-NメンブレンAmershamPharmacia,Buckingham,Englandに対して、1.5アンペアで70分間、転写した。GSGeneLinkerBio-Rad,Hercules,CAを用いて約2分間RNAをこのメンブレンに結合させた。このメンブレンを、ハイブリダイゼーションオーブンSorvallLifeScience,Inc.,Greensboro,NC中でPerfect-HybPlusSigma,St.Louis,MO中で、剪断された、変性されたサケ精子DNA100μg/mlとともに68°Cで1時間、プレハイブリダイズさせた。90°Cに10分間加熱することによって10μlのプローブとともに100μl10mMEDTA、続いて、ハイブリダイゼーション緩衝液に対して>5×108cpm/μgで標識された約0.1μgのプローブを添加することによって、プローブを調製した。次いでこのブロットを68°Cで12時間ハイブリダイズさせ、続いて2×SSC、0.1SDS中で68°Cで洗浄した。このメンブレンを1時間洗浄して、その緩衝液を交換し、次いでメンブレンをさらに1時間68°Cで洗浄した。このメンブレンをサランラップで包み、24時間後にmRNAをKodakX-OMATARFilmEastmanKodakCo.,Rochester,NewYorkによって検出した。次いでサンプルのメンブレンを、同様の方式で、放射性標識されたβアクチン>5×108cpm/μgで標識した0.1μgのプローブAmbion,Austin,TXを用いて再プローブさせた。濃度測定は、ウエスタンブロットについて上記したとおり行った。βアクチンのmRNAバンドは、MIFmRNA濃度測定を正規化するコントロールとして役立った。Langendorffによるエキソビボ心機能決定。マウス心臓機能を、Langendorffアッセイ手順を用いて決定した。要するに、200単位の硫酸ヘパリンを腹腔内に注射して、20分後にマウスを屠殺した。心臓を直ちに取り出して、氷上でKrebs-Henseleit緩衝液脱塩、脱イオンした水で新鮮に調製され、そして95O2および5CO2PO2590mmHg,pCO238mmHgでバブリングされた、2mMNaHCO3,118mMNaCl,4.7mMKCL,1.2mMKH2PO4,1.2mMMgSO4,2.5mMCaCl2,11.1mMグルコース,pH7.4中に入れた。大動脈にPE50チューブングをカニューレ挿入し、事前に濾過した酸素化したKrebs-HanseleitBufferを用いて、1.5ml/m37°Cの定温、100mlの再循環容積という一定の流速で、大動脈起始部を通じて逆行性の方法で心臓を灌流させた。心臓をウォータージャケットチャンバに入れて一定の温度および湿度を維持した。Statham圧力トランスデューサに接続した、intramedicポリエチレン管PE60を左室LV中に挿入して、LV圧を測定した。LV筋肉に挿入した27ゲージのサーミスタニードルを用いて温度をモニターした。計測後、心臓を10分間安定化させて、安定な圧力に達することができないか、またはこの時間中に不整な脈が続いていた心臓はこの研究から除外した。安定化後、LV圧力およびその一次導関数dP/dT、心拍数および冠動脈潅流をマルチチャネルGrass7DポリグラフGrassInstruments,Quincy,MAを用いて同時に測定した。冠動脈灌流の関数としての心室の能力を、冠動脈潅流速度の段階的な増大に対してピークの収縮期LV圧力および±dP/dtmax値をプロットすることによって全ての心臓について決定した。心臓は、灌流液に対する20ng/mlのrMIFの添加の有無において灌流させた。心エコー法による心機能障害の決定収縮期機能を評価するための心エコー図はMモードの測定を用いて行なった。5イソフルランを2.5L/mO2とともに20秒間意識消失まで、続いて2イソフルランおよびO2を平均12~15分間用いて、マウスを麻酔した。Nair登録商標ヘアリムーバーおよびガーゼを用いて、3分間置いた後、胸郭および上腹部から毛を取り除いた。導入の約5~8分後に、麻酔したマウスで心エコー測定を得た。心臓の心エコー図は、ランダムな方式および盲検的な方式で300~500フレーム/秒のフレーム速度でAcusonSequoia商標ModelC256SiemensMedicalSolutions,USA,Inc.,MountainView,CAを用いて行なった。15MHzの直線のトランスデューサ15L8,SiemensMedicalSolutions,USA,Inc.を、超音波伝動ゲルAquasonic100,ParkerLaboratories;Fairfield,NJの層と接した左側の胸郭に置いた。2次元の胸骨傍の短軸画像によって、乳頭筋レベルに近いLVのMモードトレーシングが導かれた。深さは、200m/秒の走査速度で最小2cmに設定された。Mモード測定データは、少なくとも2つの別のスキャン由来の9つの選択された心周期の平均に相当する。心臓拡張末期は、最大のLV拡張期径として規定され、そして心臓収縮末期は、後壁運動のピークとして規定された。収縮機能の代用である円周短縮率FSは、以下のようにLV径から算出された:図18に示されるとおり、FS:LVED-LVES/LVED×100。Luminexによる多重サイトカイン検出。血漿の炎症性サイトカインIL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、TNF-α、およびGM-CSFの濃度は、製造業者の指示に従って、LuminexxMAP商標システムLuminexCorp.,Austin,TX上で、マウスサイトカインTen-Plex抗体ビーズキットBiosourceInternational,Inc.,Camarillo,CAを用いて検出した。このプレートをLuminexXYP商標プラットフォーム上にロードして、この装置を50μlを除去するようにセットして、総ての事象をビーズセットあたり100に等しく設定したほとんどについて200収集。Luminex商標DataCollectorSoftwareLuminexCorp.,Austin,TXを用いてデータを収集した。各々の試行に用いたロット特異的な再構成した標準の濃度をソフトウェアに入れて、次いで未知のサンプルについての分析濃度をMasterPlex商標QTソフトウェアVersion1.2.8.58,MiraiBio,Inc.,Alameda,CAを用いてサイトカイン特異的な標準曲線から推定した。最初の希釈係数を考慮するために最終濃度に2を掛けた。いずれかのサイトカインについての標準曲線よりも高いサンプルは検出されなかった。統計学的分析ノーザンおよびウエスタンのデータは、平均±標準誤差SEとして表され、そして一元分散分析ANOVAを用いて統計学的に分析される。多重比較手順はチューキー法を用いて使用して、群間の統計学的有意差を決定した。Langendorff調製安定化データを含むによって決定した心臓機能は、平均±SEとして表し、そして別の分析を各々のLVP、dP/dtmax、および-dP/dtmaxについて、処置群の関数として、そして冠血流速度について、反復測定ANOVAを用いて行なった。Bonferroni法を使用する多重比較手順を用いて、群間の有意差を決定した。血清MIFレベルは、平均±SEとして表されて、Bonferroni法を使用する多重比較手順とともに、一元ANOVAを用いて統計学的に分析されて、群間の有意差をが決定された。M-モード心エコー図によって決定した心機能は、円周短縮率±SEとして表され、一元反復測定ANOVAを用いて分析される。チューキー検定を用いてさらなる比較を実施して、特定の群間の有意差を決定した。全ての分析についての統計学的有意差は、p≦0.05として規定した。全ての統計学的分析は、SigmaStat2.03SPSSInc.,Chicago,ILおよびMicrosoftExcelMicrosoftCorp.,Seattle,WAを用いて行なった。結果-実施例14WTマウス、Enbrel登録商標で事前処置したWTマウスおよびTNFR-/-マウスの血清MIFレベル。MIFの血清レベルは、LPSチャレンジ後野生型マウスでは8時間で最大ベースラインの約1.5倍に達する図13A。TNFR-/-マウスにLPSをチャレンジするとき、最大の血清MIFレベルは、12時間で生じるベースラインの1.7倍図13B。最大血清MIFレベルベースラインの約2.3倍は、Enbrel登録商標で事前に処置し60分てLPSをチャレンジした野生型マウスにおいて24時間で確認された図13C。心臓MIFは、LPSチャレンジ後のTNFR-/-マウスにおいて、心臓、脾臓または肝臓からは放出されない。心臓、肝臓および脾臓において行なったウエスタンおよび免疫組織化学の両方によって、LPSチャレンジ後の野生型マウスにおいて以前に証明された放出は、その両方ともTNF-αシグナル伝達を妨げる、Enbrel登録商標で事前処置されたTNFR-/-マウスでも野生型マウスでも、いずれの時点でも生じなかった図14および図15。心臓のMIF転写は、LPSチャレンジ後TNFR-/-マウスでは調節されない。LPSをチャレンジしたTNFR-/-マウス由来の心臓組織から単離した総RNAからのMIFmRNAの検出によって、MIFの転写は、LPSチャレンジ後に上方制御されないことが実証される図16が、これは野生型マウスでは以前に48時間で同定されている。MIFは、WTマウスと同じ程度までTNFR-/-マウスにおいて直接の心臓抑制効果を有する。MIFがTNFと独立して心臓機能に直接影響するか否かを決定するために、自発的に拍動している正常なマウス心臓Langendorff調製を、敗血性ショックを有する患者で実証された血清レベルに近い2520ng/mlの濃度で組み換えヒトMIFrMIFを用いて灌流させた。Langendorff灌流試験において用いたヒトMIFは、マウスMIFとほぼ90の相同性を有することが示されており、そして種に交差する生物学的機能を有することが示されている。表4は、コントロール灌流液または20ng/mlのrMIFを含有する灌流液を1.5ml/分で用いた逆行性の大動脈灌流に対するTNFR-/-マウス、C57BL/6マウスおよびTNFR-/-マウスのバックグラウンド系統の応答を実証する。rMIFの灌流は、両方のマウス系統におけるLVP、dP/dtmax、-dP/dTmax、およびdp40mmHg/秒の有意な減少を生じたが、一方他のパラメーター最大±dP/dt時間、CPP、CVR、aおよびHRは影響されなかった。図18は、冠血流速度にわたってのrMIFの効果を例示する。冠血流量の増大によって、実験群の割り当てにかかわらず、収縮の威力の段階的な増大が生じた。MIFチャレンジした心臓によって、機能曲線における下向きのシフトが実証され、これによって20ng/mlに応答して有意な収縮性dP/dtおよび拡張性-dP/dtの機能曲線が生じたp<0.05。抗MIF抗体によるMIF中和によって、TNFR-/-マウスにおけるLPSチャレンジの24~48時間後に完全な保護が生じる。インビボにおける心機能障害の病理においてMIFに対するTNFシグナル伝達の影響を決定するために、連続的な心エコーMモードを、2つの抗MIFモノクローナル抗体、アイソタイプコントロール抗体、または処置なしのいずれかで事前に処置90分前されている、LPSチャレンジしたTNFR-/-マウスで行なった図17。LPSチャレンジの4、8および12時間後、全てのLPSチャレンジしたマウスの円周短縮率FSは、群の割り当てにかかわらず、ベースライン45.9/-0.002FSに比べて、同様に抑制された27.7/-0.01FS図17B、C、E。しかし、LPSチャレンジの24時間後、2つのモノクローナル抗MIF抗体のいずれかを注射されたマウスは、LPSもしくはLPSおよびアイソタイプ抗体を受けている、LPSチャレンジされた群に比較してFSの統計学的に有意な回復を実証した。機能のこの増強された回復は、48時間継続し、この48時間で、機能は完全な回復を示し、アイソタイプコントロールを投与されたLPSチャレンジマウスは、顕著に抑制されたままであった図17D,17E。48時間にわたって、未処置のコントロールのTNFR-/-マウスのFSは、有意に変化されず、このことは、心機能が試験レジメンによって影響されなかったことを示している。野生型マウスおよびTNFR-/-マウスにおける血清サイトカイン放出。他の炎症性サイトカインが、TNF-αに加えてLPSチャレンジ後早期に心機能障害においてある役割を果たすことが示されているのですなわち、IL-1β、IL-6、本発明者らは、野生型およびTNFR-/-マウスにおける炎症性パネルの血清レベルを決定した図19。この図では野生型マウスにおけるTNF-α、IL-1βの放出は明らかではない。この理由は、図19Aおよび19Bに示されるような、TNFR-/-マウスでのこれらのサイトカインの有意な増大であるLPSチャレンジ後4時間で野生型を31.2倍4934/158pg/mlおよび94.7倍7099/75pg/ml上回る。同様に、IL-12は、野生型マウスに比較してTNFR-/-マウスでは増大していた1.7倍5128/2937pg/ml図19Cが、IFN-γのレベルは、3.6倍210/58pg/ml低下した図19D。IL-10およびIL-6は、野生型およびTNFR-/-マウスで同様に増大したが、これらのサイトカインの各々の遅延はTNFR-/-マウスでは小さかった図19Eおよび19F。IL-6のレベルは、野生型マウスに比較してTNFRKOマウスでは4時間で8.5倍であった7099/835pg/ml。GM-CSFの全身性の増大は、野生型およびTNFR-/-マウスの両方で確認され、そして時間的な応答はほぼ同一であった図19G.サイトカインIL-2、IL-4およびIL-5は、野生型またはTNFR-/-マウスのいずれかにおけるLPSチャレンジ後ごくわずかな変化も示さなかった。野生型マウスにおけるMIF中和後の血清サイトカイン放出。本研究においてアッセイした10のサイトカインのうち、MIF中和抗体LPSで事前にチャレンジのみが野生型マウスでのLPSチャレンジ後に血清のIFN-γおよびIL-10のレベルの調節増大または減少に影響した図20。詳細には、IFN-γの放出は、LPSチャレンジの8時間後にピークになり図19C、そして3分の一に減弱された210/69pg/ml図20A。48時間でピークに達する、野生型マウスにおけるIL-10の遅延性の放出は、野生型マウスにおけるLPSチャレンジ後2.9分の一に減弱された244/84pg/ml図20B。表4.Langendorff灌流実験における単離された心臓からのインビトロ安定化データ心機能は、平均±SEとして表される。別々の分析を各々のパラメーター左列について、処置群および冠血流速度の関数として行なった。Bonferroni法を使用する多重比較手順による反復測定ANOVAを用いて、群間の有意差を決定したコントロールに比較して、p<0.05。実施例15動物:CharlesRiverのC57BL/6マウス12~15週齢には、市販の固形飼料および水道水を自由に利用させて飼育した。全ての動物プロトコールは再審査されて、NIHによって公開された動物使用を管理する規則に従うUniversityofTexasSouthwesternIACACによって承認された。冠動脈結紮:マウスを1~1.5のイソフルランで麻酔して、その後に冠動脈結紮を行なった。アトロピン筋肉内に0.75mg/kg与える、リドカイン筋肉内に1mg/kg、および生理食塩水腹腔内に1mlを手技の前に与えた。マウスの鼻面にフィットする特注のマスクおよび小型動物用呼吸器HarvardApparatus,Inc.,Holliston,MAを用いて換気を行なった。左胸郭の第四肋間腔に切開約5mmを行い、心膜切開術を行なって左室を露出させた。左の冠動脈を、左心耳の約2mm下に8-0のプロレンproleneを用いて閉塞した。引き続き、胸部を層を成して閉じて、シリンジ吸引によって胸部の陰圧を戻した。ブプレノルフィン0.10mg/kgは手術後1回疼痛のために与えた。ニセの手順は、冠動脈の結紮なしに同じく行なった。抗MIF抗体:モノクローナル抗マウスMIFIgG1抗体III.D.9,CytokinePharmaScience,Inc.より贈呈およびモノクローナルIgG1アイソタイプコントロール抗体HB-49,CytokinePharmaScience,Inc.より贈呈を、心エコーの研究に用いた。以前の研究は、MIFのインビボ中和を実証している。図21~25は、本実施例で得られた結果を示す。図21は、LAD結紮後の、LADのみ、および抗MIFLADでの心機能円周短縮率を比較する。図22は、LAD前の抗MIF治療の効果であって、LADのみ、および抗MIFLADでの効果を示す。図23は、いくつかの処置群についてのLAD48時間後の心機能データを示す。図24は、LAD48時間後の血清トロポニン濃度であって、抗MIF処置前および遅れた抗MIF処置での濃度を示す。図25は、結紮後2週間にわたる血清トロポニンIおよびMIFの濃度を示す。実施例16MIFは、LPSチャレンジ後の心筋細胞から分泌され、そして遅発性>6時間の心機能障害を直接媒介する。哺乳動物細胞では、CD74は近年、ERK1/2細胞内シグナル伝達経路を介して効果を発揮する、MIFレセプターであることが確認された。CD74が敗血症においてMIF誘発性心機能障害を媒介するか否かを決定するために、本発明者らは、1LPSを用いて野生型マウスC57BL/6をチャレンジし;2抗CD74モノクローナル中和抗体で事前処置された野生型マウスをLPSを用いてチャレンジし、そして3LPS4mg/kgを用いてCD74ノックアウトマウスをチャレンジした。連続的な心エコー検査を行なって、円周短縮率FSを決定した。24時間で、コントロールFS=58±1に比較して、LPSを与えたWTマウスでは有意な障害が観察されたFS=31.6±3.3。LPSを用いてチャレンジされた、抗CD74抗体処置されたマウス、そしてCD74ノックアウトマウスの両方で、心機能はLPSのみを与えられた野生型マウスに比較して有意に改善されたそれぞれ、FS=49±3.6および53.3±2.4、p<0.05。CD74発現は、心臓ではいまだかつて実証されていないので、本発明者らは、イムノブロットおよび組織化学を行なって、これによって、CD74が心臓細胞膜上におよびサイトゾル中に構成的に存在すること;そしてLPSチャレンジ後に実質的に調節された12時間でほぼなし、4倍以上低下ことを確認した。図26~30および表5~7。これらのデータは、CD74が心筋細胞上で発現されて、心機能障害の重要なメディエーターであることを初めて実証する。表5ゲルの名称:CD74シリーズ1列1-Dイメージバックグラウンド差引き法:局所データ単位:強度INT。表6CD74KOマウス-灌流液にrh/MIFを添加表7実施例17冠動脈結紮マウスを1~1.5のイソフルランで麻酔して、その後に冠動脈結紮を行なった。アトロピン筋肉内に0.075mg/kg与えた、リドカイン筋肉内に1mg/kg、および生理食塩水腹腔内に1mlを手技の前に与えた。マウスの鼻面にフィットする特注のマスクおよび小型動物用呼吸器HarvardApparatus,Inc.,Holliston,MAを用いて換気を行なった。左胸郭の第四肋間腔に切開約5mmを行い、心膜切開術を行なって左室を露出させた。左の冠動脈を、左心耳の約2mm下に8-0のプロレンproleneを用いて閉塞した。引き続き、胸部を、層を成して閉じて、シリンジ吸引によって胸部の陰圧を戻した。R-3-4-ヒドロキシフェニル-4,5-ジヒドロ-5-酢酸イソキサゾリンの酸性メチルエステルISO-1、CPSI-26またはp-ヒドロキシフェノール-イソキサゾリンメチルエステルを、25μlのDMSO中に含む200mg/kgの投薬量で2週間毎日複空内に与えた。ブプレノルフィン0.10mg/kgは手術後1回疼痛のために与えた。ニセの手順は、冠動脈の結紮なしに同じく行なった。結果を図31に示す。略語:ABC輸送体、ATP結合カセット輸送体;FS、円周短縮率;IL-10、インターロイキン-1β;IRAK、IL-1レセプター会合キナーゼM;LPS、リポポリサッカライド;MDA、マロンジアルデヒド;MIF、マクロファージ輸送阻止因子;Tlr-4、トール様レセプター-4;CLP、盲腸結紮穿刺;Enbrel登録商標、組み換えヒトTNFR:FcインビボでTNF活性を中和する可溶性TNFレセプターの商品名;IL-1β、インターロイキン-1β;TNF-α、腫瘍壊死因子α;TNFR-/-、TNF-αレセプターI/レセプターIIノックアウトマウス。上記および以下の、本明細書に援用される各々の参考文献の内容は、全ての目的のために参照によって本明細書に援用される。AbeR,ShimizuT,OhkawaraA,andNishihiraJ.EnhancementofmacrophagemigrationinhibitoryfactorMIFexpressionininjuredepidermisandculturedfibroblasts.BiochimBiophysActa1500:1-9,2000.AbrahamE,AnzuetoA,GutierrezG,TesslerS,SanPedroG,WunderinkR,DalNogareA,NasrawayS,BermanS,CooneyR,LevyH,BaughmanR,RumbakM,LightRB,PooleL,AllredR,ConstantJ,PenningtonJ,andPorterS.Double-blindrandomisedcontrolledtrialofmonoclonalantibodytohumantumournecrosisfactorintreatmentofsepticshock.NORATIIStudyGroup.Lancet351:929-933,1998.AbrahamE,WunderinkR,SilvermanH,PertTM,NasrawayS,LevyH,BoneR,WenzelRP,BalkR,AllredRetal.,Efficacyandsafetyofmonoclonalantibodytohumantumornecrosisfactorαinpatientswithsepsissyndrome.Arandomized,controlled,double-blind,multicenterclinicaltrial.TNF-αMAbSepsisStudyGroup.Jama273:934-941,1995.Ammann,P.ら、ElevationofTroponinIinSepsisandSepticShock,IntensiveCareMed.,27,965-9692001.Bacher,Mら、MigrationInhibitoryFactorExpressioninExperimentallyInducedEndotoxemia,Am.J.Pathol.,150,235-2461997.BaronP,TraberLD,TraberDL,NguyenT,HollyoakM,HeggersJP,andHerndonDN.Gutfailureandtranslocationfollowingburnandsepsis.JSurgRes57:197-204,1994.Bernhagen,J.ら、AnEssentialRoleforMacrophageMigrationInhibitoryFactorintheTuberculinDelayed-TypeHypersensitivityReaction,J.Exp.Med.,183,277-2821996.Bernhagen,Jら、RegulationoftheImmuneResponsebyMacrophageMigrationInhibitoryFactor:BiologicalandStructuralFeatures,J.Mol.Med.,76,151-1611998.Bernhagen,J.ら、MIFisaPituitary-DerivedCytokinethatPotentiatesLethalEndotoxaemia,Nature,365,756-75919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