"止血剤として使用するための、少なくとも7の等電点を有する架橋済みゼラチンを含む組成物。架橋しようとするゼラチンの等電点が架橋前に少なくとも7である、請求項1に記載の組成物。架橋しようとするゼラチンの等電点が架橋前に少なくとも9である、請求項2に記載の組成物。架橋後の架橋済みゼラチンの等電点が少なくとも9である、請求項1~3のいずれかに記載の組成物。架橋しようとするゼラチンが組み換えゼラチンである、請求項1~4のいずれかに記載の組成物。前記組み換えゼラチンは、ヒドロキシプロリン残基およびヒドロキシリジン残基を含まない、請求項5に記載の組成物。前記組み換えゼラチンが、架橋前、少なくとも0.40ミリモル/gリシン残基を含む、請求項5または6に記載の組成物。前記組み換えゼラチンが、少なくとも1.0であるアルギニンおよびリシンの総数とグルタミンおよびアスパラギンアミノ酸残基の総数との間の比を含む、請求項5~7のいずれかに記載の組成物。前記組み換えゼラチンの分子量が少なくと50kDaである、請求項5~8のいずれかに記載の組成物。前記組み換えゼラチンが、少なくとも一つのRGDモチーフを含む、請求項5~9のいずれかに記載の組成物。ゼラチンを、カルボジイミドを使用して架橋する、請求項1~10のいずれかに記載の組成物。ゼラチンを、1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド塩酸塩を使用して架橋する、請求項11に記載の組成物、止血剤として使用するための医薬の製造における、請求項1~12のいずれかに記載したとおりの等電点が少なくとも7の架橋済みゼラチンを含む組成物の使用。請求項1~12のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、a水中に少なくとも0.1~35重量容量のゼラチンを溶解させること;b得られた溶液を凍結乾燥させること;c得られた凍結乾燥物を、少なくとも0.1~10重量濃度のカルボジイミドを含む極性溶媒中で架橋すること、ここで、架橋は少なくとも10分~24時間まで行うことを含む上記組成物の製造方法。請求項1~12のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、a水中に少なくとも0.1~35重量容量のゼラチンを溶解させること;b得られた溶液aのpHを3~6の間に調整すること;c少なくとも0.6のモル比で少なくとも10分で最高24時間、EDC/リシン残基中のEDCを加えることにより、得られた溶液を架橋させること;d架橋済みゼラチンヒドロゲルを超トラックスしultrauxing、水で濯ぐこと;e得られた架橋済みゼラチンヒドロゲル粒子を凍結乾燥し、粉末を得ること;を含む上記組成物の製造方法。より十分に本発明を記載する。しかし、本発明は多くの異なる形態に具現化でき、本明細書で記載する特定の実施態様に限定されると解釈すべきでない。本発明は、止血剤として使用するために少なくとも7の等電点を示す架橋ゼラチンを含む組成物を提供する。好ましくは、架橋されるべきゼラチンの等電点は、架橋前、少なくとも7、より好ましくは少なくとも8、特に少なくとも9、より特に少なくとも10、そして特別に少なくとも11である。好ましくは、架橋後の架橋ゼラチンの等電点は、少なくとも8、より好ましくは少なくとも9、特に少なくとも10、そして、より特に少なくとも11である。ゼラチンおよび架橋ゼラチンの等電点は、ゼラチンのアミノ酸組成に基づいて算出する。架橋されているゼラチンは、好ましくは、組み換えゼラチンである。EP0926543号、EP1014176号およびWO01/34646号各公報、ならびに、具体的には、EP0926543号およびEP1014176号各公報の実施例は好適な組み換えゼラチンおよびメチロトローフィック酵母特に、Pichapastorisを使用するその製造方法を記載するこれらの特許公報を参照として全体を本明細書中に含める。組み換えゼラチンの利点は、一定の特性を引き出すためにアミノ酸配列を上手く処理できることである。これらの特性の例は、i組み換えゼラチンの等張点および電荷密度例えば、アスパラギンAsn、アスパラギン酸Asd、グルタミンGln、グルタミン酸GluまたはリシンLysのような荷電アミノ酸を導入または除去できる、iiグリコシル化パターン例えば、一定位置のトレオニンおよび/またはセリンアミノ酸の欠如がグリコシル化の欠如をもたらす、iii組み換えゼラチンのサイズ、iv架橋性アミノ酸の量例えば、リシンの量、v生分解性をメタロプロテイナーゼの開裂サイト有無により修正できる。好適な実施態様では、架橋されているゼラチンは、少なくとも1.0そしてより好ましくは少なくとも1.1である、アルギニンおよびリシン残基の総数とグルタミンおよびアスパラギンアミノ酸残基の総数との間の比を含む。より好適な実施態様では、本発明は止血用組成物を提供し、ここで、架橋されたゼラチン、好ましくは、組み換えゼラチンは、架橋前に少なくとも0.40ミリモル/gリシン残基、より好ましくは、少なくとも0.60ミリモル/g、そして特に少なくとも0.80ミリモル/gを含む。明らかに、一層架橋可能な基が入手できるとき、架橋量は、原則として、架橋可能な基がより少なく存在する場合に比較してより多い。また、架橋基の量は、架橋ゼラチンの生分解性を決定する。組み換えゼラチンを使用するとき、架橋性基の量を制御でき、したがって、架橋ゼラチンの生分解性を上手く処理できる。架橋の最適度は止血剤の意図する使用および意図する塗布方法に依存する。架橋の最小量は塗布後溶解しない止血剤をもたらし得る。別の好適実施態様では、組成物中の組み換えゼラチンは、10g未満のブルーム強度を示す非ゲル化性組み換えゼラチンである。ヒドロキシプロリンおよびヒドロキシリシン残基の存在しない組み換えゼラチンも好ましい。これらのようなヒドロキシル化残基は、分子内および分子間水素橋の形成ができ、ホモまたはヘテロ三量コラーゲン構造をもたらし、これらは、酵母、特にPichapastorisによる細胞外分泌による好適な方法と両立できない。細胞外分泌と両立できる組み換えゼラチンの例は、EP0926543、EP1014176およびWO01/34646号公報に開示されている。別の好適な実施態様では、細胞結合性を増強するためおよび/または可及的に少ない免疫原性のため官能化組み換えゼラチンを架橋し本発明の止血用組成物を形成できる、例えば、EP1608681号およびEP1368055号公報に開示されており、これらの特許文献全体を参照として本明細書に含める。別の好適な実施態様では、本発明の組成物に使用する組み換えゼラチンの分子量は、少なくとも24kDa、より好ましくは、少なくとも35kDa、そして最も好ましくは少なくとも50kDaである。別の好適な実施態様では、組み換えゼラチンはRGDモチーフに富んだゼラチンである。本発明の文脈でRGDに富んだゼラチンという用語は、ゼラチン様ポリペプチドが、分子当たりアミノ酸の総数の百分率として算出して、RGDモチーフの一定のレベルおよびRGDモチーフのより均等な分布を示すことを意味する。本発明の文脈では、RGDに富んだゼラチンは、国際特許出願WO2004/085473号およびWO2008/103041号公報に記載されているこれらの公報を参照として本明細書中に全体として含める。好ましくは、組み換えゼラチンは、組み換えゼラチン構造当たり少なくとも1のRGDモチーフ、より好ましくは、少なくとも3のそして特に少なくとも5のRGDモチーフを含む。1種以上の異なるゼラチンは架橋していても良い。好ましくは、単一のゼラチンが架橋される。本発明の架橋止血組成物の重要な特徴は、当該組成物は生分解性であり、それを除去するのに侵襲性外科的方法を要しない。推測するに、天然ゼラチンの分解をもたらすのと同じメカニズムにより組み換えゼラチンが分解するがどうか自明でない。天然ゼラチンおよびコラーゲンが、プロテアーゼ、具体的にマトリックス-メタロプロテアーゼMMPにより人体中で分解されることは知られている。マトリックスメタロプロテアーゼMMP’sは亜鉛依存性エンドペプチダーゼである。MMP’sはメトジンシン科metzincinsuperfamilyとして知られているプロテアーゼの上科に属する。集合的に、これらのプロテアーゼは総ての種類の細胞外マトリックス蛋白質を分解できるが、しかし、多くの生物活性分も処理できる。MMP’sの重要なグループはコラゲナーゼである。これらのMMP’sは、3重らせん線維コラーゲンを識別3/4および1/4フラグメントに分解できる。これらのコラーゲンは骨や軟骨の主要成分であり、MMP’sはコラーゲンを分解できる唯一の公知のほ乳類酵素である。伝統的に、コラゲナーゼは、MMP-1間質コラゲナーゼ、MMP-8好中球コラゲナーゼ、MMP-13コラゲナーゼ3およびMMP-18コラゲナーゼ4である。MMP’sの別の重要なグループは、ゼラチナーゼにより形成される。これらのMMP’sの主要基質は、タイプIVコラーゲンおよびゼラチンであり、これらの酵素は触媒ドメイン中に挿入された追加のドメインの存在により区別される。このゼラチン結合領域は、亜鉛結合モチーフ直前に位置し、触媒ドメインの構造を崩壊させない別の折りたたみ単位を形成する。このサブグループの2メンバーはMMP-272kDaゼラチナーゼ、ゼラチナーゼ-AおよびMMP-992kDaゼラチナーゼ、ゼラチナーゼ-Bである。しかし、国際特許出願WO/2008103045号公報は、MMPの公知の開裂部位を含まない組み換えゼラチンがヒトマトリックスメタロプロテナーゼ1MMP1による酵素的分解性であったことを開示する参照として明細書中に含める。予測されるより明らかに多くの種類の組み換えゼラチンが分解されうる。したがって、架橋組み換えゼラチンは、止血剤組成物に望ましい漸次生分解性要求を発揮し得る。本発明の止血剤組成物の製造は、表面電荷において中性作用示すか、または架橋したゼラチンにおいて陽電荷をもたらすをいずれかの架橋剤を使用する当業界で公知のいずれかの方法により達成できる。好ましくは、架橋剤は、ジシクロヘキシルカルボジイミド、N,N’-ジイソプロピルカルボジイミドおよび1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミドのようなカルボジイミド類であるが、これらに限定されない。好適な実施態様では、本発明の止血剤組成物の製造方法は、水溶性カルボジイミドを使用する、ゼラチンを架橋することにより達成される。さらにより好適な実施態様では、1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド塩酸塩EDCもしくはEDACを使用してゼラチンを架橋する。架橋反応条件は使用する架橋剤に依存し、当該条件は当業者に周知である。本発明の好適な組成物は、等電点が少なくとも7の架橋済み組み換えゼラチンを92~99.0重量含む。本発明の組成物は当業者に公知であるいずれかの方法により製造できる。本発明の組成物は、好適には、下記:aゼラチン、好ましくは、組み換えゼラチンを水中に、少なくとも0.1、0.5、1,3、6、12、24~35重量容量溶解させること;b得られた溶液を凍結乾燥させること;c少なくとも0.1、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5~10重量の濃度のカルボジイミド架橋剤、好ましくはEDCを含む極性溶媒、好ましくは、エタノール中で、凍結乾燥させた物質を、少なくとも10分で最高24時間までの間で架橋させること;を含む方法により製造される。本発明の組成物は、好適には、下記:aゼラチン、好ましくは、組み換えゼラチンを水中に、少なくとも0.1、0.5、1,3、6、12、24~35重量容量溶解させること、b得られた溶液aのpHを、3~6、より好ましくは、4~5そしてさらにより好ましくは4.5に調整すること、c少なくとも0.6、1.2、3.6、7.2、12.5のモル比で少なくとも10分で最高24時間、EDC/リシン残基中のEDCを加えることにより、得られた溶液を架橋させること;d架橋済みゼラチンヒドロゲルを超トラックスしultrauxing、水で濯ぐこと;e得られた架橋済みゼラチンヒドロゲル粒子を凍結乾燥し、粉末を得ること;を含む方法により好適に製造できる。本発明の別の局面は、少なくとも7の等電点を示す架橋済みゼラチンを含む組成物の止血剤として使用するための医薬の製造における使用を提供する。ゼラチンおよび架橋済みゼラチンの組成物および総ての態様の好適なものは上述した通りである。本発明の止血剤は、表面、特に大きな表面からの出血の阻止に特に適用できる。例えば、当該止血剤は、a切除もしくは切断骨、b切断器官、例えば、外科的にもしくは外傷的に切断された脾臓、肝臓もしくは腎臓、c微小血管が優先する中枢神経系、d補綴手術、e壊死組織の外科的切除によりもたらされる滲血表面、f美容整形外科およびg一以上の小さな源例:顔面切からの滲血や出血に有用である。止血剤は、種々の形態、例えば、表面に対して直接的粉末として;鉛筆型の止血薬として;ゲル、スポンジもしくは繊維形態として;または医薬器具、創傷用包帯もしくはその他の医薬用具の表面上の被覆として施用され得る。使用する止血剤の量は、出血表面や血液の流れの重篤度の程度で変動する。充分な止血剤を施用して所望の阻止を行う。総ての適用は、その自身最適な架橋度を示し得る。本発明を下記の非制限的実施例で例証するが、特記しない限り総ての部および百分率は重量を基準とする。本発明の実施例を添付の図面で例証する。図1は、血液試料の血小板数における種々の架橋済みゼラチンの影響を示し;図2は、架橋済みゼラチンと接触後の血液試料のβ-トロンボグロブリンの量を示し;図3は、種々の架橋済みゼラチンの存在下におけるトロンビン-抗トロンビンコンプレックスの形成を示し;図4は、種々の架橋済みゼラチンの存在下の血液凝固時間を示し;図5は、種々の架橋済みゼラチンの存在下の血液凝固を妨げるのに必要なヘパリンの最小量を示す。異なる架橋方法を使用する止血剤の製造国際特許出願WO2008103041号に記載されている通りにして製造した組み替えゼラチンCBE3を使用した。架橋手順は下記の通りである:すなわち、CBE3溶液1をEDC架橋のためpH4でまたはヘキサメチレンジイソシアナートHMDICもしくは脱ヒドロ化熱処理架橋DHTのためpH10で緩衝化させ、次いで、凍結乾燥させた。凍結乾燥させたCBE3溶液を、無水エタノール中に溶解させたEDC0.25またはHMDIC0.0075と24時間反応させることにより架橋した。反応の最後にエタノールを室温で減圧乾燥により除去した。DHT架橋は、凍結乾燥させたCBE3を1夜80°Cで熱処理をし、次いで、8時間160°Cで減圧条件下熱処理することにより行った。動的チャンドラーループ法を使用する止血活性の評価種々の架橋済みゼラチンの止血作用を動的チャンドラーループ法ChandlerAB等、1958、LabInvest,7:p110-114を使用して試験した。この試験は、血液凝固モデルとして回転ミキサー中の管内部の止血材料を使用する。このモデルは、ヒト止血系の異なるカスケード反応凝固、細胞変化、血小板および補体活性化を開始するため人工表面の能力を研究する働きをする。標準範囲の活性化部分トロンボプラスチン時間を有する3人の健常ボランティア年齢:20~50歳から血液を採取した。これらの実験に使用した血液の品質は決定的重要性を有する。したがって、血液提供者の次の除外基準を厳格に行った:2週間前から喫煙したり服薬特に、アセチルサリチル酸、経口避妊薬、非ステロイド性抗炎症薬等のような止血に影響を与える薬剤を服薬したボランティアはいなかった。血液は、血流停止なく、非常に注意してバタフライ約、1.4mmを用いて滅菌し、予め抗凝血化処理した容器中に直接静脈穿刺により採取した。使用した抗凝血剤は5IU/mlHeparin-Natrium-25000-ratiopharmRatiopharmGmbH,Ulm,Germanyだった。総ての実験は、同じロット番号の抗凝固剤を使用した。各実験は、3人の提供者の各々から12.5mlの血液を使用して3回行った。実験を37°Cで行った。血液に加えた止血剤試料の表面積は50cm2だった。コントロールは架橋済みゼラチン無しの血液である。下記のようにして血液凝固試験を行った:結果図1EDC架橋済み組み換えゼラチンは血小板の減少をもたらす。血液と人工表面との接触は、血小板機能の連続した損失を伴う血小板の活性化と変性をもたらす。血小板量の大きな減少は、高いトロンボゲン形成能に関連する。顕著な減少は、EDCを用いて架橋した組み換えゼラチンで観察された。その他の架橋方法では減少は観察されなかった。図2動的チャンドラーループ実験は、EDC架橋済み組み換えゼラチンが血小板の活性化をもたらすことを示す。表面への接着性による血小板の活性は、4段階の事象をもたらす:すなわち、偽足の形成を伴う形態変化、接着、凝固および血小板因子のα-顆粒血小板因子4、β-トロンボグロブリン、等外への放出である。血漿中のβ-トロンボグロブリンの濃度は血小板活性化度に一致する。図3動的チャンドラーループ実験は、EDC架橋済み組み換えゼラチンがトロンビン-抗トロンビンコンプレックスの形成をもたらすことを示す。トロンビン-抗トロンビンコンプレックスTATは、トロンビン形成の感受性高いマーカーであり、したがって、凝固活性検出の卓越したマーカーでもある。TATコンプレックスは、生成したトロンビンと抗トロンビンIIIとの結合後に形成される。極度に高いTAT濃度は、特に、高ヘパリン濃度5IU/mlを用いる実験におけるゼラチンの強力な凝血促進能に反映する。凝固速度図4凝固メーターBiomatic2000,Sarstedtを使用して凝固速度を測定した。当該凝固メーターは、試料にする特定の光波長の試料の吸光度を測定し、吸光度が経過時間と共にどのように変化するかによる光学的に凝固の過程をモニターする。上述したようにして4人の健常なボランティアから血液を採取した。これらの試料にヘパリンを加えなかった。表面積50cm2の架橋済みゼラチン止血剤を血液に加えた。最も早い凝固時間をEDC架橋済み組み換えゼラチンで検出し、それは強力な凝固促進能を示す。実施例5動的チャンドラーループ実験に記載されている通りにして提供者から血液を採取した。Heparin-Natrium-25000-ratiopharmRatiopharmGmbH,Ulm,Germanyを、1、3または5IU/ml濃度で、12.5ml血液に加えた。血液を50cm2止血剤試料と共にチャンドラーループシステム中で1時間にわたって37°Cで回転させ、その後、肉眼で目視できる血栓形成を防止するためにヘパリンの最小濃度を決定した。肉眼的に目視できる血液凝固の形成を防止するために必要なヘパリンの濃度は、止血剤の性能を示す。1IU/mlヘパリン濃度は、アミン-アミン架橋したゼラチンに必要であるが、EDC架橋済み組み換えゼラチンは、このヘパリン濃度で血液凝固を依然として引き起こす。ヘパリン濃度を3UL/mlまで増加させても、EDC架橋済み組み換えゼラチンを用いると依然として血液凝固を阻止しなかった。EDC架橋済み組み換えゼラチンを加えた血液中の血栓形成を防止するのに、5UL/mlヘパリンの添加が必要だった。"