"図2配列番号2、図4配列番号4、図6配列番号6、図8配列番号8、図10配列番号10、図12配列番号12、図14配列番号14、図16配列番号16、図18配列番号18、図20配列番号20、図22配列番号22、図24配列番号24、図26配列番号26、図28配列番号28、図30配列番号30、図32配列番号32、図34配列番号34、図36配列番号36、図38配列番号38、図40配列番号40、又は図42配列番号42に示すポリペプチドをコードする核酸配列に対し、少なくとも80の核酸配列同一性を有する単離された核酸。図1配列番号1、図3配列番号3、図5配列番号5、図7配列番号7、図9配列番号9、図11配列番号11、図13配列番号13、図15配列番号15、図17配列番号17、図19配列番号19、図21A-B配列番号21、図23配列番号23、図25配列番号25、図27配列番号27、図29配列番号29、図31配列番号31、図33配列番号33、図35配列番号35、図37配列番号37、図39配列番号39及び図41配列番号41に示すヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対し、少なくとも80の核酸配列同一性を有する単離された核酸。図1配列番号1、図3配列番号3、図5配列番号5、図7配列番号7、図9配列番号9、図11配列番号11、図13配列番号13、図15配列番号15、図17配列番号17、図19配列番号19、図21A-B配列番号21、図23配列番号23、図25配列番号25、図27配列番号27、図29配列番号29、図31配列番号31、図33配列番号33、図35配列番号35、図37配列番号37、図39配列番号39及び図41配列番号41に示すヌクレオチド配列の完全長コード化配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対し、少なくとも80の核酸配列同一性を有する単離された核酸。請求項1に記載の核酸を有するベクター。ベクターを用いて形質転換した宿主細胞によって認識される制御配列に作用可能に結合する請求項5に記載のベクター。請求項5に記載のベクターを含む宿主細胞。CHO細胞、大腸菌細胞又は酵母細胞である、請求項7に記載の宿主細胞。PROポリペプチドの産生方法において、請求項7に記載の宿主細胞を、前記PROポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、前記PROポリペプチドを細胞培養物から回収することを含む方法。図2配列番号2、図4配列番号4、図6配列番号6、図8配列番号8、図10配列番号10、図12配列番号12、図14配列番号14、図16配列番号16、図18配列番号18、図20配列番号20、図22配列番号22、図24配列番号24、図26配列番号26、図28配列番号28、図30配列番号30、図32配列番号32、図34配列番号34、図36配列番号36、図38配列番号38、図40配列番号40、又は図42配列番号42に示すポリペプチドのアミノ酸配列に対し、少なくとも80のアミノ酸配列同一性を有する単離されたポリペプチド。異種アミノ酸配列に融合した請求項10に記載のポリペプチドを含んでなるキメラ分子。前記異種アミノ酸配列がエピトープタグ配列又は免疫グロブリンのFc領域である、請求項11に記載のキメラ分子。請求項10に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体。モノクローナル抗体、ヒト化抗体又は一本鎖抗体である、請求項13に記載の抗体。担体との組み合わせで、a請求項10に記載のポリペプチド、b前記ポリペプチドのアゴニスト、c前記ポリペプチドのアンタゴニスト、又はd前記ポリペプチドに結合する抗体を有する物質の組成物。前記担体が製薬的に許容可能な担体である、請求項15に記載の物質の組成物。a、b、c又はdの治療的有効量を含む請求項16に記載の物質の組成物。容器、前記容器上に貼付されるラベル、及び前記容器に収容された、a請求項10に記載のポリペプチド、b前記ポリペプチドのアゴニスト、c前記ポリペプチドのアンタゴニスト、又はd前記ポリペプチドに結合する抗体を含有する物質の組成物、を含み、前記容器上のラベルが前記物質の組成物が乾癬の治療に有用であることを示す、製造品。乾癬の治療を必要とする哺乳動物に対し、a請求項10に記載のポリペプチド、b前記ポリペプチドのアンタゴニスト、又はc前記ポリペプチドに結合する抗体の治療的有効量を投与することを含む、哺乳動物の乾癬を治療する方法。PROポリペプチドを含むことが疑われる試料中の前記ポリペプチドの存在を決定する方法であって、抗PRO19597、抗PRO83469、抗PRO1189、抗PRO83470、抗PRO28700、抗PRO1246、抗PRO83471、抗PRO6244、抗PRO83472、抗PRO19600、抗PRO4977、抗PRO83473、抗PRO83474、抗PRO617、抗PRO71057、抗PRO83475、抗PRO1065、抗PRO83476、抗PRO200、抗PRO1361又は抗PRO83477抗体に前記試料を曝し、前記抗体の前記試料の成分への結合を決定することを含む方法。哺乳動物の乾癬の診断方法であって、a哺乳動物から採取した組織細胞の試験試料中と、b同一の細胞型の既知の正常組織のコントロール試料中におけるPRO19597、PRO83469、PRO1189、PRO83470、PRO28700、PRO1246、PRO83471、PRO6244、PRO83472、PRO19600、PRO4977、PRO83473、PRO83474、PRO617、PRO71057、PRO83475、PRO1065、PRO83476、PRO200、PRO1361又はPRO83477ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを検出することを含み、コントロール試料と比較して試験試料中の前記遺伝子の発現レベルが高いか又は低い場合、試験組織細胞を採取した哺乳動物における乾癬が存在が示される方法。哺乳動物の乾癬の診断方法であって、a前記哺乳動物から採取した試験試料に抗PRO19597、抗PRO83469、抗PRO1189、抗PRO83470、抗PRO28700、抗PRO1246、抗PRO83471、抗PRO6244、抗PRO83472、抗PRO19600、抗PRO4977、抗PRO83473、抗PRO83474、抗PRO617、抗PRO71057、抗PRO83475、抗PRO1065、抗PRO83476、抗PRO200、抗PRO1361又は抗PRO83477抗体を接触させ、b試験試料中における抗体とポリペプチドの間の複合体形成を検出することを含み、前記複合体の形成により試験組織細胞を採取した哺乳動物における乾癬が存在が示される方法。PRO19597、PRO83469、PRO1189、PRO83470、PRO28700、PRO1246、PRO83471、PRO6244、PRO83472、PRO19600、PRO4977、PRO83473、PRO83474、PRO617、PRO71057、PRO83475、PRO1065、PRO83476、PRO200、PRO1361又はPRO83477ポリペプチドの活性を抑制する化合物を同定する方法であって、前記ポリペプチドに通常は反応する細胞をa前記ポリペプチド及びb候補化合物に接触させ、前記細胞のaに対する反応性の不足を決定することを含む方法。PRO19597、PRO83469、PRO1189、PRO83470、PRO28700、PRO1246、PRO83471、PRO6244、PRO83472、PRO19600、PRO4977、PRO83473、PRO83474、PRO617、PRO71057、PRO83475、PRO1065、PRO83476、PRO200、PRO1361又はPRO83477ポリペプチドをコードする遺伝子の発現を抑制する化合物の同定方法であって、前記ポリペプチドを通常は発現する細胞を候補化合物に接触させ、前記遺伝子の発現の不足を決定することを含む方法。前記候補化合物がアンチセンス核酸である、請求項24に記載の方法。PRO19597、PRO83469、PRO1189、PRO83470、PRO28700、PRO1246、PRO83471、PRO6244、PRO83472、PRO19600、PRO4977、PRO83473、PRO83474、PRO617、PRO71057、PRO83475、PRO1065、PRO83476、PRO200、PRO1361又はPRO83477ポリペプチドの活性を模倣する化合物の同定方法であって、前記ポリペプチドに通常は反応する細胞を候補化合物に接触させ、前記候補化合物に対する前記細胞の反応性を決定することを含む方法。実施例で言及されている市販試薬は、特に示さない限りは製造者の使用説明に従い使用した。ATCC受託番号により以下の実施例及び明細書全体を通して同定されている細胞の供給源はアメリカンタイプカルチャーコレクション、マナッサス、VAである。実施例1乾癬のマイクロアレイ分析乾癬患者及び健常ドナー正常な皮膚由来の皮膚バイオプシーを用意した。各乾癬患者からは、乾癬組織に差別的に発現するこの疾患に特異的な遺伝子を同定するため、病変部位と非病変部位から皮膚試料を採取した。乾癬皮膚試料のすべてについて、免疫組織化学によるケラチン16染色と上皮の厚さを分析した。RNA単離の準備が整うまで、すべての試料を-70°Cで保存した。皮膚バイオプシーを600μlのRLT緩衝液BMEで均質化し、製造者の指示に従うオンカラムDNase処理を行うQiagen登録商標RneasyMiniカラムQiagenを用いてRNAを単離した。RNAを単離した後、製造者の指示に従ってRiboGreen登録商標を用いてRNAを定量化し、完全性をアガロースゲルでチェックした。RNAの収量は、乾癬病変皮膚では19~54μg、同一の対照の非病変皮膚では7.7~24μg、正常な皮膚では5.4~10μgであった。マイクロアレイ分析用に4μgのRNAに標識し、試料をジェネンテック社専売のマイクロアレイとAffymetricsマイクロアレイにかけた。感染皮膚において発現が上方制御された遺伝子を非病変皮膚と比較し、よって同じ患者由来の非病変皮膚と乾癬皮膚における発現特性を比較した。また、更なる対照として正常で健常なドナー由来の正常な皮膚バイオプシーとの比較も行った。本実験の結果、同じ感染患者の非病巣皮膚、及び乾癬を有しない対象由来の正常皮膚と比較して、乾癬病変皮膚において図1~42の核酸及びコードされたタンパク質の発現度合いが高いことが示された。実施例2:ハイブリッド形成プローブとしてのPROの使用以下の方法は、PROをコードするヌクレオチド配列のハイブリッド形成プローブとしての使用を記載する。全長又は成熟PROのコード配列を含むDNAは、ヒト組織cDNAライブラリー又はヒト組織ゲノムライブラリーにおける同種DNA類のスクリーニングのためのプローブとして用いられる。いずれかのライブラリーDNAを含むフィルターのハイブリッド形成及び洗浄は、以下の高い緊縮条件で実施した。放射性標識PRO誘導プローブのフィルターへのハイブリッド形成は、50ホルムアミド、5xSSC、0.1SDS、0.1ピロリン酸ナトリウム、50mMリン酸ナトリウム、pH6.8、2xデンハート液、及び10デキストラン硫酸の溶液中で、42°Cにおいて20時間行った。フィルターの洗浄は0.1xSSC及び0.1SDSの水溶液中、42°Cで行った。次いで、全長天然配列PROをコードするDNAと所望の配列同一性を有するDNAは、この分野で知られた標準的な方法を用いて同定できる。実施例3:大腸菌におけるPROの発現この実施例は、大腸菌における組み換え発現によるPROの非グリコシル化形態の調製を例示する。PROをコードするDNA配列は、選択されたPCRプライマーを用いて最初に増幅する。プライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位を持たなければならない。種々の発現ベクターを用いることができる。好適なベクターの例は、pBR322を参照であり、アンピシリン及びテトラサイクリン耐性についての遺伝子を含む。ベクターは制限酵素で消化され、脱リン酸化される。PCR増幅した配列は、次いで、ベクターに結合させる。ベクターは、好ましくは抗生物質耐性遺伝子、trpプロモーター、polyhisリーダー、PROコード化領域、ラムダ転写終結区、及びargU遺伝子を含む。ライゲーション混合物は、次いで、上掲のSambrook等に記載された方法を用いた選択した大腸菌株の形質転換に使用される。形質転換体は、それらのLBプレートで成長する能力により同定され、次いで抗生物質耐性クローンが選択される。プラスミドDNAが単離され、制限分析及びDNA配列分析で確認される。選択されたクローンは、抗生物質を添加したLBブロスなどの液体培地で終夜成長させることができる。終夜培養は、続いて大規模培養の播種に用いられる。次に細胞を最適光学密度まで成長させ、その間に発現プロモーターが作動する。更に数時間の培養の後、細胞を遠心分離して採集することができる。遠心分離で得られた細胞ペレットは、この分野で知られた種々の試薬を用いて可溶化され、次いで可溶化PROタンパク質を金属キレート化カラムを用いてタンパク質を緊密に結合させる条件下で精製することができる。以下の手法を用いて、大腸菌においてポリHisタグ形態でPROを発現させてもよい。PROをコードするDNAを選択したPCRプライマーを用いて最初に増幅する。プライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位、及び効率的で信頼性のある翻訳開始、金属キレートカラムでの迅速な精製、及びエンテロキナーゼでのタンパク質分解的除去を与える他の有用な配列を含む。次いでPCR増幅された、ポリHisタグ配列を発現ベクターに結合させ、それを株52longalErpoHtsclpPに基づく大腸菌宿主の形質転換に使用する。形質転換体は、最初に50mg/mlのカルベニシリンを含有するLB中、30°Cで振盪しながら3-5のO.D.600に達するまで成長させる。ついで培養をCRAP培地2SO4、0.71gのクエン酸ナトリウム2H2O、1.07gのKCl、5.36gのDifco酵母抽出物、500mL水中の5.36gのShefieldhycaseSF、並びに110mMのMPOS、pH7.3、0.55のグルコース及び7mMのMgSO4の混合で調製中に50-100倍希釈し、30°Cで振盪させながら約20-30時間成長させる。試料を取り出してSDSPAGE分析により発現を確認し、バルク培養を遠心分離して細胞をペレット化する。細胞ペレットを精製及び再折りたたみまで凍結させる。0.5から1Lの発酵6-10gペレットからの大腸菌ペーストを、7Mのグアニジン、20mMのトリス、pH8バッファー中で10容量w/vで再懸濁させる。固体硫酸ナトリウム及びテトラチオン酸ナトリウムを添加して最終濃度を各々0.1M及び0.02Mとし、溶液を4°Cで終夜撹拌する。この工程により、亜硫酸化によりブロックされた全てのシステイン残基を持つ変性タンパク質がもたらされる。溶液をBeckmanUltracentrifuge中で40000rpmで30分間遠心分離する。上清を金属キレートカラムバッファーの3-5容量で希釈し、0.22ミクロンフィルターを通して濾過して透明化する。透明化抽出物を、金属キレートカラムバッファーで平衡化させた5mlのQiagenNiNTA金属キレートカラムに充填する。カラムを50mMのイミダゾールを含む添加バッファー、pH74で洗浄する。タンパク質を250mMのイミダゾールを含有するバッファーで溶離する。所望のタンパク質を含有する画分をプールし、4°Cで保存する。タンパク質濃度は、そのアミノ酸配列に基づいて計算した吸光係数を用いて280nmにおけるその吸収により見積もる。試料を、20mMのトリス、pH8.6、0.3MのNaCl、2.5Mの尿素、5mMのシステイン、20mMのグリシン及び1mMのEDTAからなる新たに調製した再折りたたみバッファー中でゆっくりと希釈することによりタンパク質を再折りたたみさせる。リフォールディング容量は、最終的なタンパク質濃度が50~100マイクログラム/mlとなるように選択する。リフォールディング溶液を4°Cで12-36時間ゆっくり撹拌する。リフォールディング反応はTFAを最終濃度0.4約3のpHで添加することにより停止させる。タンパク質を更に精製する前に、溶液を0.22ミクロンフィルターを通して濾過し、アセトニトリルを最終濃度2-10になるまで添加する。再折りたたみされたタンパク質を、PorosR1/H逆相カラムで、0.1TFAの移動バッファーと10~80のアセトニトリル勾配での溶離を用いてクロマトグラフにかける。A280吸収を持つ画分のアリコートをSDSポリアクリルアミドゲルで分析し、相同な再折りたたみされたタンパク質を含有する画分をプールする。一般的に、殆どのタンパク質の正しく再折りたたみされた種は、これらの種が最もコンパクトであり、その疎水性内面が逆相樹脂との相互作用から遮蔽されているので、アセトニトリルの最低濃度で溶離される。凝集した種は通常、より高いアセトニトリル濃度で溶離される。タンパク質の誤って折りたたまれた形態を所望の形態から除くのに加えて、逆相工程は試料からエンドトキシンも除去する。所望の折りたたまれたPROポリペプチドタンパク質を含有する画分をプールし、溶液に向けた窒素の弱い気流を用いてアセトニトリルを除去する。タンパク質を、透析又は調製バッファーで平衡化したG25Superfine樹脂でのゲル濾過及び滅菌濾過により、0.14Mの塩化ナトリウム及び4のマンニトールを含む20mMのHepes、pH6.8に処方した。上述したように、ここに開示された多くのPROポリペプチドが成功裏に発現した。実施例4:哺乳動物細胞でのPROの発現この実施例は、哺乳動物細胞における組み換え発現による潜在的にグリコシル化した形態のPROの調製を例示する。発現ベクターとしてベクターpRK5を用いる。場合によっては、PRODNAを選択した制限酵素を持つpRK5に結合させ、上掲のSambrook等に記載されたようなライゲーション方法を用いてPRODNAを挿入させる。得られたベクターは、例えばpRK5PROと呼ばれる。一実施態様では、選択された宿主細胞は293細胞とすることができる。ヒト293細胞は、ウシ胎児血清及び場合によっては滋養成分及び/又は抗生物質を添加したDMEMなどの培地中で組織培養プレートにおいて成長させて集密化する。約10μgのpRK5PRODNAを約1μgのVARNA遺伝子コード化DNA[Thimmappaya等Cell31543]と混合し、500μlの1mMトリス-HCl、0.1mMEDTA、0.227MCaCl2に溶解させる。この混合物に、滴状の、500μlの50mMHEPESpH7.35、280mMのNaCl、1.5mMのNaPO4を添加し、25°Cで10分間析出物を形成させる。析出物を懸濁し、293細胞に加えて37°Cで約4時間定着させる。培地を吸引し、2mlのPBS中20グリセロールを30秒間添加する。293細胞を、次いで無血清培地で洗浄し、新鮮な培地を添加し、細胞を約5日間インキュベートする。形質移入の約24時間後、培地を除去し、培地のみ又は200μCi/ml35Sシステイン及び200μCi/ml35S-メチオニンを含む培地で置換する。12時間のインキュベーションの後、条件培地を回収し、スピンフィルターで濃縮し、15SDSゲルに充填する。処理したゲルを乾燥させ、PROポリペプチドの存在を現す選択された時間にわたってフィルムにさらす。形質移入した細胞を含む培地に、更なるインキュベーションを施し、培地を選択されたバイオアッセイで試験する。これに換わる技術において、PROは、Somparyrac等ProcNatlAcadSci127575に記載されたデキストラン硫酸法を用いて293細胞に一過的に導入される。293細胞は、スピナーフラスコ内で最大密度まで成長させ、700μgのpRK5PRODNAを添加する。細胞は、まずスピナーフラスコから遠心分離によって濃縮し、PBSで洗浄する。DNAデキストラン沈殿物を細胞ペレット上で4時間インキュベートする。細胞を20グリセロールで90秒間処理し、組織培地で洗浄し、組織培地、5μg/mlウシインシュリン及び0.1μg/mlウシトランスフェリンを含むスピナーフラスコに再度導入する。約4日後に、条件培地を遠心分離して濾過し、細胞及び細胞片を除去する。次いで発現されたPROを含む試料を濃縮し、透析及び/又はカラムクロマトグラフィー等の選択した方法によって精製する。他の実施態様では、PROをCHO細胞で発現させることができる。pRK5PROは、CaPO4又はDEAE-デキストランなどの既知の試薬を用いてCHO細胞に形質移入することができる。上記したように、細胞培地をインキュベートし、培地を培養培地又は35Sメチオニン等の放射性標識を含む培地に置換することができる。PROポリペプチドの存在を決定した後、培地を無血清培地に置換してもよい。好ましくは、培地を約6日間インキュベートし、次いで条件培地を収集する。次いで、発現されたPROを含む培地を濃縮して、任意の選択した方法によって精製することができる。また、エピトープタグPROは、宿主CHO細胞において発現させてもよい。PROはpRK5ベクターからサブクローニングしてもよい。サブクローン挿入物は、PCRを施してバキュロウイルス発現ベクター中のポリHisタグ等の選択されたエピトープタグを持つ枠に融合できる。関心あるポリhisタグPRO挿入物は、次いで、安定なクローンの選択のためのDHFR等の選択マーカーを含むSV40プロモーター/エンハンサーにサブクローニングできる。最後に、CHO細胞をベクターを含むSV40プロモーター/エンハンサーで形質移入することができる。発現を確認するために、上記のように標識化を行ってもよい。発現されたポリhisタグPROを含む培地を次いで濃縮し、Ni2-キレートアフィニティクロマトグラフィー等の選択された任意の方法により精製できる。またPROは、一過性発現法によりCHO及び/又はCOS細胞で、又は他の安定な発現方法によりCHO細胞で発現させてもよい。CHO細胞における安定な発現は以下の方法を用いて実施された。タンパク質はそれぞれのタンパク質の可溶化形態のコード配列がヒンジ、CH2及びCH2ドメインを含むIgG1定常領域配列に融合したIgG作成物、及び/又はポリHisタグ形態として発現する。PCR増幅に続いて、それぞれのDNAを、Ausubel等CurrentProtocolsofMolecularBiologyUnit316JohnWileyandSonsに記載されたような標準的技術を用いてCHO発現ベクターにサブクローニングする。CHO発現ベクターは、関心あるDNAの5’及び3’に適合する制限部位を有し、cDNAの便利なシャトル化ができるように作成される。CHO細胞における発現に使用されたベクターは、Lucas等NuclAcidsRes24917741779に記載されたようなものであり、関心あるcDNA及びジヒドロフォレートレダクターゼの発現の制御にSV40初期プロモーター/エンハンサーを用いる。DHFR発現は、形質移入に続くプラスミドの安定な維持のための選択を可能にする。所望のプラスミドDNAの12マイクログラムを、市販の形質移入試薬SuperfectDosper及びFugeneを使用し約一千万のCHO細胞に導入する。細胞は、上掲のLucas等に記載されているように成長させる。約3x10-7細胞を、下記のような更なる成長及び生産のためにアンプル中で凍結させる。プラスミドDNAを含むアンプルを水槽に配して解凍し、ボルテックスにより混合する。内容物を10mLの媒質を含む遠心管にピペットして、1000rpmで5分間遠心分離した。上清を吸引して細胞を10mLの選択培地0.2μm濾過PS20、5の0.2μm透析濾過ウシ胎児血清中に懸濁させる。次いで細胞を90mLの選択培地を含む100mlスピナーに分ける。1-2日後、細胞を150mLの選択培地を満たした250mLスピナーに移し、37°Cでインキュベートする。更に2-3日後、250mL、500mL及び2000mLのスピナーを3x105細胞/mLで播種する。細胞培地を遠心分離により新鮮培地に交換し、生産培地に再懸濁させる。任意の適切なCHO培地を用いてもよいが、実際には1992年6月16日に発行された米国特許第5122469号に記載された生産培地を使用した。3Lの生産スピナーを1.2x106細胞/mLで播種する。0日目に、pHを測定する。1日目に、スピナーをサンプルし、濾過空気での散布を実施する。2日目に、スピナーをサンプルし、温度を33°Cに変え、500g/Lのグルコース及び0.6mLの10消泡剤の30mLとする。生産を通して、pHを7.2近傍に調節し維持した。10日後、又は生存率が70を下回るまで、細胞培地を遠心分離で回収して0.22μmフィルターを通して濾過する。濾過物を、4°Cで貯蔵するか、即座に精製用カラムに充填する。ポリHisタグ作成物について、タンパク質をNiNTAカラムを用いて精製する。精製の前に、イミダゾールを条件培地に5mMの濃度まで添加する。条件培地を、0.3MのNaCl及び5mMイミダゾールを含む20mMのHepes,pH7.4バッファーで平衡化した6mlのNi-NTAカラムに4-5ml/分の流速で4°Cにおいてポンプ供給した。充填後、カラムを更に平衡バッファーで洗浄し、タンパク質を0.25Mイミダゾールを含む平衡バッファーで溶離する。高度に精製されたタンパク質は、続いて10mMのHepes、0.14MのNaCl及び4のマンニトールを含む貯蔵バッファー中でpH6.825mlのG25Superfineカラムを用いて脱塩し、-80°Cで貯蔵した。イムノアドヘシン作成物を以下のようにして条件培地から精製する。条件培地を、20mMのリン酸ナトリウムバッファー、pH6.8で平衡化した5mlのプロテインAカラムに汲み上げる。充填後、100mMのクエン酸、pH3.5で溶離する前に、カラムを平衡バッファーで強く洗浄する。溶離したタンパク質を、1mlの画分を275μlの1Mトリスバッファー、pH9を含む管に回収することにより即座に中性化する。高度に精製されたタンパク質を、続いてポリHisタグタンパク質について上記した貯蔵バッファー中で脱塩する。均一性はSDSポリアクリルアミドゲルとエドマン分解によるN末端アミノ酸配列決定により評価した。ここに開示したPROポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。実施例5:酵母菌でのPROの発現以下の方法は、酵母菌中でのPROの組換え発現を記載する。第1に、ADH2/GAPDHプロモーターからのPROの細胞内生産又は分泌のための酵母菌発現ベクターを作成する。PROをコードするDNA及びプロモーターを選択したプラスミドの適当な制限酵素部位に挿入してPROの細胞内発現を指示する。分泌のために、PROをコードするDNAを選択したプラスミドに、ADH2/GAPDHプロモーターをコードするDNA、天然配列PROシグナルペプチド又は他の哺乳動物シグナルペプチド、又は、例えば酵母菌アルファ因子又はインベルターゼ分泌シグナル/リーダー配列、及びPRO発現のためのリンカー配列とともにクローニングすることができる。酵母菌株AB110等の酵母菌を、次いで上記の発現プラスミドで形質転換し、選択された発酵培地中で培養できる。形質転換した酵母菌上清を、10トリクロロ酢酸での沈降及びSDSPAGEによる分離で分析し、次いでクマシーブルー染色でゲルの染色をすることができる。続いて組換えPROは、発酵培地から遠心分離により酵母菌細胞を除去し、次いで選択されたカートリッジフィルターを用いて培地を濃縮することによって単離及び精製できる。PROを含む濃縮物は、選択されたカラムクロマトグラフィー樹脂を用いて更に精製してもよい。ここに開示されるPROポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。実施例6:バキュロウイルス感染昆虫細胞でのPROの発現以下の方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞中におけるPROの組換え発現を記載する。PROをコードする配列を、バキュロウイルス発現ベクターに含まれるエピトープタグの上流に融合させる。このようなエピトープタグは、ポリhisタグ及び免疫グロブリンタグを含む。pVL1393などの市販されているプラスミドから誘導されるプラスミドを含む種々のプラスミドを用いることができる。簡単には、PROをコードする配列又はPROのコード配列の所望部分、例えば膜貫通タンパク質の細胞外ドメインをコードする配列又はタンパク質が細胞外である場合の成熟タンパク質をコードする配列が、5’及び3’領域に相補的なプライマーでのPCRにより増幅される。5’プライマーは、側方に位置する制限酵素部位を包含していてもよい。生産物は、次いで、選択された制限酵素で消化され、発現ベクターにサブクローニングされる。組換えバキュロウイルスは、上記のプラスミド及びBaculoGoldウイルスDNAを、Spodopterafrugiperda細胞中にリポフェクチンを用いて同時形質移入することにより作成される。28°Cで4-5日インキュベートした後、放出されたウイルスを回収し、更なる増幅に用いる。ウイルス感染及びタンパク質発現は、OReilley等BaculovirusexpressionvectorsALaboratoryManualOxfordOxfordUniversityPressに記載されているように実施する。次に、発現されたポリhisタグPROは、例えばNi2キレートアフィニティクロマトグラフィーにより次のように精製することができる。抽出は、Rupert等Nature362175179に記載されているように、ウイルス感染した組み換えSf9細胞から調製する。簡単には、Sf9細胞を洗浄し、超音波処理用バッファー25mLのHepes、pH7.9;12.5mMのMgCl2;0.1mMEDTA;10グリセロール;0.1のNP40;0.4MのKCl中に再懸濁し、氷上で2回20秒間超音波処理した。超音波処理物を遠心分離で透明化し、上清を負荷バッファー50mMリン酸塩、300mMのNaCl、10グリセロール、pH7.8で50倍希釈し、0.45μmフィルターで濾過する。Ni2NTAアガロースカラムを5mLの総容積で調製し、25mLの水で洗浄し、25mLの負荷バッファーで平衡させる。濾過した細胞抽出物を、毎分0.5mLでカラムに負荷する。カラムを分画回収が始まる点であるA280のベースラインまで負荷バッファーで洗浄する。次に、カラムを、結合タンパク質を非特異的に溶離する二次洗浄バッファー50mMリン酸塩;300mMのNaCl、10グリセロール、pH6.0で洗浄する。A280のベースラインに再度到達した後、カラムを二次洗浄バッファー中で0から500mMイミダゾール勾配で展開する。1mLの分画を回収し、SDS-PAGE及び銀染色又はアルカリホスファターゼに結合したNi2NTAでのウェスタンブロットで分析する。溶離したHis10タグPROを含む画分をプールして負荷バッファーで透析する。あるいは、IgGタグPROの精製は、例えば、プロテインA又はプロテインGカラムクロマトグラフィーを含む既知のクロマトグラフィー技術を用いて実施できる。ここに開示されるPROポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。実施例7:PROに結合する抗体の調製この実施例は、PROに特異的に結合できるモノクローナル抗体の調製を例示する。モノクローナル抗体の生産のための技術はこの分野で知られており、例えば、上掲のGodingに記載されている。用いられ得る免疫原は、本発明の精製PRO、PROを含む融合タンパク質、及び細胞表面にPROを発現する細胞を含む。免疫原の選択は、当業者が過度の実験をすることなくなすことができる。Balb/c等のマウスを、完全フロイントアジュバントに乳化して皮下又は腹腔内に1-100マイクログラムの量で注入したPRO免疫原で免疫化する。あるいは、免疫原をMPL-TDMアジュバントに乳化し、動物の後足蹠に注入する。免疫化したマウスを、次いで10から12日後に、選択したアジュバント中に乳化した付加的免疫源で追加免疫する。その後、数週間、マウスを更なる免疫化注射で追加免疫する。抗PRO抗体の検出のためのELISAアッセイで試験するために、レトロオービタル出血からの血清試料をマウスから周期的に採取してもよい。適当な抗体力価が検出された後、抗体にポジティブ陽性な動物に、PROの最後の静脈内注射を注入することができる。3から4日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を取り出す。次いで脾臓細胞を35ポリエチレングリコールを用いて、ATCC番号CRL1597で入手可能なP3X63AgU.1等の選択されたマウス骨髄腫株化細胞に融合させる。融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、次いで、HATヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン培地を含む96ウェル組織培養プレートに蒔き、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、及び脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害する。ハイブリドーマ細胞を、PROに対する反応性についてELISAでスクリーニングする。PROに対する所望のモノクローナル抗体を分泌するポジティブハイブリドーマ細胞の決定は、技術常識の範囲内である。ポジティブハイブリドーマ細胞を同系のBalb/cマウスに腹腔内注入し、抗PROモノクローナル抗体を含む腹水を生成させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコ又はローラーボトルで成長させることもできる。腹水中に生成されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈降、それに続くゲル排除クロマトグラフィーを用いて行うことができる。あるいは、抗体のプロテインA又はプロテインGへの結合性に基づくアフィニティクロマトグラフィーを用いることもできる。実施例8:特異的抗体を用いたPROポリペプチドの精製天然又は組換えPROポリペプチドは、この分野の種々の標準的なタンパク質精製方法によって精製できる。例えば、プロPROポリペプチド、成熟ポリペプチド、又はプレPROポリペプチドは、関心あるPROポリペプチドに特異的な抗体を用いた免疫親和性クロマトグラフィーによって精製される。一般に、免疫親和性カラムは抗PROポリペプチド抗体を活性化クロマトグラフィー樹脂に共有結合させて作成される。ポリクローナル免疫グロブリンは、硫酸アンモニウムでの沈殿又は固定化プロテインAでの精製のいずれかにより免疫血清から調製される。同様に、モノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム沈殿又は固定化プロテインAでのクロマトグラフィーによりマウス腹水液から調製される。部分的に精製された免疫グロブリンは、CnBr活性化セファロースTM等のクロマトグラフィー樹脂に共有結合される。抗体が樹脂に結合され、樹脂がブロックされ、誘導体樹脂は製造者の指示に従って洗浄される。このような免疫親和性カラムは、可溶化形態のPROポリペプチドを含有する細胞からの画分を調製することによるPROポリペプチドの精製において利用される。この調製物は、洗浄剤の添加又はこの分野で公知の方法により微分遠心分離を介して得られる全細胞又は細胞成分画分の可溶化により誘導される。あるいは、シグナル配列を含む可溶化PROポリペプチドは、細胞が成長する培地中に有用な量で分泌される。可溶化PROポリペプチド含有調製物は、免疫親和性カラムを通され、カラムはPROポリペプチドの好ましい吸着をさせる条件下で洗浄される。次いで、カラムは、抗体/PROポリペプチド結合を分解する条件下で溶離され、PROポリペプチドが回収される。実施例9:薬物スクリーニング本発明は、PROポリペプチド又はその結合断片を任意の種々の薬物スクリーニング技術において使用することによる化合物のスクリーニングに特に有用である。そのような試験に用いられるPROポリペプチド又は断片は、溶液中の遊離状態でも、固体支持体に固定されても、細胞表面に担持されていても、細胞内に位置していてもよい。薬剤スクリーニングの1つの方法は、PROポリペプチド又は断片を発現する組換え核酸で安定に形質移入される真核生物又は原核生物宿主細胞を利用する。薬剤は、そのような形質移入細胞に対して、競合的結合アッセイにおいてスクリーニングされる。そのような細胞は、生存可能又は固定化形態のいずれかにおいて、標準的な結合アッセイに使用できる。例えば、PROポリペプチド又は断片と試験される試薬の間での複合体の形成を測定してよい。あるいは、試験する試薬によって生ずるPROポリペプチドとその標的細胞又は標的レセプターとの間の複合体形成における減少を試験することもできる。しかして、本発明は、PROポリペプチド関連疾患又は疾病に影響を与えうる薬剤又は任意の他の試薬のスクリーニング方法を提供する。これらの方法は、その試薬をPROポリペプチド又は断片に接触させ、試薬とPROポリペプチド又は断片との間の複合体の存在について、又はPROポリペプチド又は断片と細胞との間の複合体の存在について、当該技術でよく知られた方法でアッセイすることを含む。これらの競合結合アッセイでは、PROポリペプチド又は断片が典型的には標識される。適切なインキュベーションの後、自由なPROポリペプチド又は断片を結合形態のものから分離し、自由又は未複合の標識の量が、特定の試薬がPROポリペプチドに結合する又はPROポリペプチド/細胞複合体を阻害する能力の尺度となる。薬剤スクリーニングのための他の技術は、ポリペプチドに対して適当な結合親和性を持つ化合物についての高スループットスクリーニングを提供し、1984年9月13日に公開されたWO8403564に詳細に記載されている。簡単に述べれば、多数の異なる小型ペプチド試験化合物が、プラスチックピン等の固体支持体又は幾つかの他の表面上で合成される。PROポリペプチドに適用すると、ペプチド試験化合物はPROポリペプチドと反応して洗浄される。結合したPROポリペプチドはこの分野で良く知られた方法により検出される。精製したPROポリペプチドは、上記の薬剤スクリーニング技術に使用するためにプレート上に直接被覆することもできる。更に、非中和抗体は、ペプチドを捕捉し、それを固体支持体上に固定化するのに使用できる。また、本発明は、PROポリペプチドに結合可能な中和抗体がPROポリペプチド又はその断片について試験化合物と特異的に競合する競合薬剤スクリーニングアッセイに使用されることも考慮する。この方法において、抗体は、PROポリペプチドで一又は複数の抗原決定基を持つ任意のペプチドの存在を検出するのに使用できる。実施例10:合理的薬物設計合理的薬物設計の目的は、関心ある生物学的活性ポリペプチド又はそれらが相互作用する小分子、例えばアゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターの構造的類似物を製造することである。これらの例の任意のものが、PROポリペプチドのより活性で安定な形態又はインビボでPROポリペプチドの機能を向上又は阻害する薬物の創作に使用できる。1つの方法において、PROポリペプチド、又はPROポリペプチドインヒビター複合体の三次元構造が、x線結晶学により、コンピュータモデル化により、最も典型的には2つの方法の組み合わせにより決定される。分子の構造を解明し活性部位を決定するためには、PROポリペプチドの形状及び電荷の両方が確認されなければならない。数は少ないが、PROポリペプチドの構造に関する有用な情報が相同タンパク質の構造に基づいたモデル化によって得られることもある。両方の場合において、関連する構造情報は、類似PROポリペプチド様分子の設計又は効果的なインヒビターの同定に使用される。合理的な薬剤設計の有用な例は、Braxton及びWellsBiochemistry3177967801に示されているような向上した活性又は安定性を持つ分子、又はAthauda等JBiochem113742746に示されているような天然ペプチドのインヒビター、アゴニスト、又はアンタゴニストとして作用する分子を含む。また、上記のような機能アッセイによって選択された標的特異的な抗体を単離しその結晶構造を解明することもできる。この方法は、原理的には、それに続く薬剤設計が基礎をおくことのできるファーマコアを生成する。機能的で薬理学的に活性な抗体に対する抗イディオタイプ抗体を生成することにより、タンパク質結晶学をバイパスすることができる。鏡像の鏡像として、抗idsの結合部位は最初のレセプターの類似物であると予測できる。抗idは、次いで、化学的又は生物学的に製造したペプチドのバンクからペプチドを同定及び単離するのに使用できる。単離されたペプチドは、ファーマコアとして機能するであろう。本発明により、十分な量のPROポリペプチドがX線結晶学などの分析実験を実施するために入手可能である。更に、ここに提供したPROポリペプチドアミノ酸配列の知識は、x線結晶学に換える、又はそれに加えるコンピュータモデル化技術で用いられる指針を提供する。上記の文書による明細書は、当業者が本発明を実施するためには十分であると考えられる。寄託された実施例は、本発明のある側面の一つの例証としてのものであり、あらゆる機能的に等価な構築物がこの発明の範囲内にあるため、寄託された構築物により、本発明の範囲が限定されるものではない。ここでの材料の寄託は、ここに含まれる文書による説明が、そのベストモードを含む、本発明のあらゆる側面の実施を可能にするには不十分であることを認めるものではないし、それが表す特定の例証に請求の範囲を制限するものと解釈されるものでもない。実際、ここに示し記載したものに加えて、本発明を様々に変形することは、前記の記載から当業者にとっては明らかなものであり、添付された請求の範囲の範囲内に入るものである。"