"細胞の集団または亜集団であって、前記細胞の実質的に全てがBDCA-1を発現するか、またはBDCA-1の発現に基づいて単離、濃縮、もしくは数え上げられ、前記細胞の集団または亜集団の少なくとも80がBDCA-1を発現する、細胞の集団または亜集団。前記細胞の実質的に全てがBDCA-2、BDCA-3および/もしくはBDCA-4ニューロピリン1ジーンバンク受託番号003873をさらに発現するか、または発現に基づいて単離、濃縮、もしくは数え上げられる、請求項1に記載の細胞の集団または亜集団。前記細胞の少なくとも90または少なくとも95がBDCA-1を発現する、請求項1または2に記載の細胞の集団または亜集団。請求項1から3のいずれか1項に記載の細胞の集団または亜集団、および生理学的に受容可能な賦形剤を含む組成物。ヒト細胞の混合物から樹状細胞を単離または濃縮するための方法であって、aヒト細胞の混合物を、BDCA-1に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントと、前記抗体または抗原結合フラグメントがBDCA-1樹状細胞を特異的に認識する条件下で、接触させる工程、およびb細胞の集団または亜集団を形成するために、前記混合物中の他の細胞から、前記抗体または抗原結合フラグメントによって認識される樹状細胞を分離する工程であって、前記細胞の集団または亜集団の少なくとも80が、BDCA-1を発現する工程、を含む前記方法。前記樹状細胞が、免疫磁気細胞ソーティングMACSによって分離される、請求項5に記載の方法。前記樹状細胞が、フローサイトメトリーFACSによって分離される、請求項5に記載の方法。樹状細胞のサイトカイン産生を調節するインビトロ方法であって、BDCA-1に対して特異的な抗原結合フラグメントを用いて樹状細胞の実質的に純粋な集団または亜集団を単離する工程;および樹状細胞のサイトカイン産生を調節する薬剤で前記細胞を処理する工程、を含む方法。樹状細胞が富化された造血細胞の組成物を得るための方法であって、ヒト造血細胞の混合物を画分に分離する工程を包含し、前記細胞の少なくとも80がBDCA-1である前記方法。請求項1に記載の細胞の集団または亜集団を含む細胞製剤であって、i自己免疫疾患であって、場合によりSLE、多発性硬化症、関節炎、強皮症、および乾癬からなる群より選択される自己免疫疾患;iiアレルギー応答であって、場合によりアレルギー、じんま疹、アナフィラキシーショック、および喘息からなる群より選択されるアレルギー応答;またはiii癌であって、場合により神経膠星状細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、乏突起神経膠腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、未分化神経外胚葉性腫瘍PNET、軟骨肉腫、骨原性肉腫、膵管腺癌、小細胞肺腺癌および大細胞肺腺癌、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、扁平上皮癌、気管支肺胞癌腫、上皮腺癌、およびその肝臓転移、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、肝細胞癌、胆管癌、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、基底細胞癌、汗腺癌、乳頭状癌、脂腺癌腫、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、胆管癌腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、多発性骨髄腫、ヴァルデンシュトレームマクログロブリン血症、およびH鎖病、管の腺癌および小葉腺癌のような乳房の腫瘍、子宮頚の扁平上皮および腺癌、子宮上皮癌腫および卵巣上皮癌腫、前立腺腺癌、膀胱の移行性扁平上皮癌、B細胞およびT細胞リンパ腫結節性およびびまん性、プラズマ細胞腫、急性および慢性白血病、悪性黒色腫、軟部組織肉腫、ならびに平滑筋肉腫からなる群より選択される癌からなる群より選択される状態を治療する方法における使用のための細胞製剤。発明の詳細な説明本発明は、DCにおいて富化された細胞集団およびそれらのサブセットについて富化する方法に関する。DCについて富化された組成物およびそれらから得られた細胞集団もまた、本発明によって提供される。改変された細胞についての方法および組成物も提供される。遺伝的に改変された細胞を含む、改変された細胞の組成物もまた提供される。改変と非改変の両方の細胞の使用方法が提供される。抗原結合フラグメントおよびそれらによって認識される抗原も提供される。免疫磁性的に精製したCD4linDCこれらは、3つのDC抗原を同定する:BDCA2、BDCA3およびBDCA4に対して惹起される新規のmAbのパネルが本明細書中に記載される。BDCA2、BDCA3は新規である。BDCA4の場合、DC特異的抗原として以前に記載されていないが、抗原はニューロピリンneuropilin-1神経細胞誘導を媒介するコラプシン/セマホリンファミリーに対するレセプターとして同定された。HeらCell90739751。非培養ヒト血液において、BDCA2およびBDCA4の発現は、プラスマ細胞様CD123brightCD11cDCに厳密に制限され、一方、BDCA3は、CD123CD11cdimDCの小集団に制限される。このBDCA3集団は、伝統的なCD123dimCD11cbrightDCと多くの免疫表現型特性を共有するが、CD123dimCD11cdimDCと異なって、BDCA3DCはCD1cを用いた磁性分離;アフィニティークロマトグラフィー;mAbに結合するか、またはmAbと組み合わせて使用される細胞毒性剤相補体および細胞毒素を含むが、これらに限定されない;および固体マトリックス例えば、プレートに付着した抗体によるパニング、洗浄または任意の他の便利な技術。正確な分離および分析を提供する技術としては、以下があげられるが、これらに限定されない:磁気ビーズ分離およびフローサイトメトリーこれらは、洗練さの程度を変化し得る例えば、複数の色チャネル、ローアングルおよび鋭い光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネルなど。細胞は、ヨウ化プロピジウムPIのような死細胞に関連する染料を利用して、死細胞と対比して選択され得る。好ましくは、細胞は、ウシ胎仔血清FCSのような2血清、またはヒト血清アルブミンHSAを含む培地、あるいは任意の他の適切な、好ましくは、無菌の等張培地中を収集される。生理学的指標として、HASが好ましい。細胞の遺伝的改変は、RNAでトランスフェクトされた組換えDNA構築物を有する実質的に均質な細胞組成物の形質導入、細胞融合、抗原の充填および当該分野において公知の種々の方法および/または本明細書に中で記載される種々の方法よってそれらが維持される間の任意の点で達成され得る。細胞の改変のために、レトロウイルスベクターが利用され得るが、任意の他の適切なベクター、送達システムまたは細胞改変が利用され得る。これらは、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、人工染色体、酵母または腫瘍のような抗原供給抗原由来のRNAを含む。遺伝子改変は、あるならば、成熟DCが有限の寿命を有するので永続する必要がない。遺伝子アプローチは、免疫または寛容を誘導するために、DCにおいて外来腫瘍、ウイルス、寄生物などの抗原または自己抗原を発現するために使用される。改変の寿命はまた、T細胞によるように治療を制限する自殺遺伝子によって制御され得る。形質導入の方法としては、当該分野において周知の任意の以下のものが挙げられるが、これらの限定されない:例えば、BregniらBlood8014181422によって記載される方法によって、プロデューサー細胞と共に細胞を直接同時培養する方法、または、例えば、XuらExpHemat22223230;およびHughesらJClinInvest891817によって記載される方法によって、適切な増殖因子およびポリカチオンと共に、あるいはそれらなしで、ウイルス上清のみと共に培養すること。宿主への抗原を発現するための抗原を発現するか、または抗原を充填された改変細胞の再導入実施形態に、T細胞は活性化されるか、アネルギーanergizeされるか、または除去され、そして抗原に対して特異的に指向する。通常、適切な抗原としては、ウイルス的に感染された細胞、または癌細胞によって発現された抗原、微生物、酵母、原生動物、自己抗原寛容源およびアレルギー源が挙げられる。より具体的に、適切な抗原としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない;ウイルスタンパク質、癌細胞のタンパク質、組織特異的タンパク質または免疫寛容タンパク質。T細胞の誘導は、欠失またはアネルギーによるような抗原特異的T細胞の不活性化を含み得る。不活性化は、それぞれ器官移植および自己免疫疾患におけるような寛容を確立または再確立するために特に有用である。改変されたDCは、当該分野において公知の任意の方法によって投与され得、これは、静脈内、皮下内、結節内および胸腺に直接を含むが、これらに限定されない。好ましくは、投与は静脈内IVである。しばしば、細胞免疫治療は、骨髄血球搬出収集物またはヒト宿主由来の他の細胞の供給源の除去、供給源からの細胞の単離を含む。一方、宿主は、造血幹細胞移植が行われる場合、ネイティブの造血能力を部分的、実質的または完全に除去するために処置され得る。単離された細胞は、所望の改変を有する細胞を提供するために、この時間の間改変され得る。完全な造血除去の場合、幹細胞増強がまた必要とされる。次いで、細胞または改変された細胞は、宿主に貯蔵され、新規の能力を提供する。細胞除去の方法、宿主除去および幹/前駆細胞再増殖が当該分野において公知である。改変された細胞は、通常、静脈内、結節内および皮下内に、任意の生理学的に受容可能なビヒクルの形態で投与され得る。通常、少なくとも、1×105の細胞、好ましくは、1×106以上の細胞が投与される。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入され得る。所望される場合、因子はまた以下を含み得るが、これらに限定されない;インターロイキン例えば、IL2、IL3、IL4、IL12およびflt-リガンドおよび他のインターロイキン、コロニー刺激因子例えば、G-、M-およびGM-CSFインターフェロン例えば、γ-インターフェロン。用語ポリペプチド、ペプチドおよびタンパク質は、任意の長さのアミノ酸残基のポリマーをいうために、本明細書中で交換可能に使用される。ポリマーは、直鎖または分枝であり得、これは、改変されたアミノ酸残基またはアミノ酸アナログを含み得、そしてこれは、アミノ酸残基以外の化学的部分によって中断され得る。この用語はまた、自然にまたは介入によって改変されたアミノ酸ポリマーを含み、これは以下を含むが、これらに限定されない:ジスルフィド結合フォーメーション、グリコシル化、脂質化lipidation、アセチル化、リン酸化、あるいは任意の他の操作または改変例えば、標識または生物活性化成分との結合。他に記述または示されない場合、用語、抗原結合フラグメントは、免疫学的な特異性を有する任意のポリペプチドモノマーまたはポリマーこれは、インタクトな抗体を含む、および本明細書中に記載されるような、より小さい、およびより大きい機能的に等価なポリペプチドを含む。1.抗原結合フラグメントおよびそれらの組成物本発明は、DCを特異的に認識する抗原結合フラグメントを含む。すなわち、抗原は、DC上で見出され、その結果、抗原を認識する抗原結合フラグメントは優先的にDCまたはそれらのサブセットを認識するか、または結合する。あるいは、BDCA4によるように、抗原は、他の細胞型で見出される;しかし、造血細胞内で、抗原はDC上に主に発現する。本発明はさらに、少なくとも1つのDC抗原に結合する単離された抗原結合フラグメントを含む物質の組成物を包含する。好ましくは、抗原結合フラグメントは、AC144、AD513A11、AD520E5、AD517F6、AD54B8、AD55E8、AD514H12およびAD58E7と命名されたmAbであるか、またはこれに由来する。表1は、各mAbによって認識される抗原およびエピトープ、ならびにDCに特異的なmAbのアイソタイプを示す。非培養ヒト血液において、BDCA2およびBDCA4はCD123brightCDC11cDC集団により発現される。このDC集団は、現在一般にプラスマ細胞様DCJImmunol157541548;FangerらJImmunol15830903098;およびMaurerらJImmunol157607616。本明細書で示されるように、BDCA3は100kDのタンパク質である。CD1cCD11cdimDCと対比して、DC1cCD11cbrightDCが、GMCSF、IL4およびTGFβ1と共に培養された場合、ランゲルハルス細胞の特性Lag抗原、E-カドヘリン、およびランゲリンの発現、ならびにバーベック顆粒の存在を取得する能力を有することについての証拠がある。BDCA3DCおよびCD1cDCが小細胞型の成熟工程を示す場合、このことは、BDCA3DCがランゲルハルス細胞に分化する能力をすでに失っているかまたはまだ獲得していないかのいずれかであることを示す。本明細書で示される結果とは逆に、Itoら1999は、CD1cCD11cdimDCと異なり、CD1cCD11cbrightDCが、CD1aを発現することを報告した。BL6およびB5の2つのmAbは、CD1aの染色のために使用され、そしてこの2つのmAbを比較した場合、染色強度の違いが実際に観察されたBB5での染色がおそらくより鮮やかであった。本明細書中で示されるように、DCの染色は、CD1amAbであるBL6およびHI49の至適滴定量を用いた場合明らかに陰性であったが、BB5を用いた場合陽性であった。さらに、BL6およびHI149と異なり、BB5は血液中の高い割合のCD19B細胞を染色した。従って、BBの染色パターンは、CD1amAbよりもCD1cmAbのはっきりとした暗示であり、そして実際にCD1cmAbAD58E7は、BB5のMOLT4細胞への結合を阻害する。従って、本発明者らは、B5がCD1cを認識すること、およびCD1cDCがCD1aを発現しないことを結論づける。CD1c、CD2およびCD14についてのCD1cDCの染色は、低い割合のDCが、変動し得る程度でCD14を発現すること、およびこれらの細胞でのCD1cおよびCD2の発現レベルが、CD14の発現レベルと反比例することを明らかにした。この観察は、直系の分化モデル従い、CD1cCD2CD11cbrightCD14DCは、両方の細胞型の共通の前駆体の子孫というよりはCD14CD1cCD2単球の子孫である。かなりの割合のCD14単球がすでに非常に低レベルのCD2を発現し、そしてGMCSFおよびIL4と共に培養された場合に、代表的な樹枝状の形態および強力なT細胞刺激性を有する成熟DCに急速に分化する能力を有することの観察によりこの概念はさらに支持されるCrawfordらJImmunol16359205928。CD1cBDCA1、BDCA2、BDCA3およびBDCA4のmAbの使用は利便性、および明白な機能的摂動なしにPBMC、白血球搬出物質、全血、扁桃などからDCを迅速に検出、列挙および単離する簡便でかつ有効な方法を提供する。これは、これらのさらなる機能的および分子的な特徴付けに対する補助として価値があり、これらの相互関係を明らかにする際に有用であり得る。さらに、非常に均質にDC集団を容易に単離する能力はこれらの病理的な使用を容易にする。この抗原結合フラグメントはまた、組織非造血組織限定することなく、気道上皮、皮膚、腸、肺および肝臓が挙げられるおよび造血組織限定することなく、扁桃、脾臓、リンパ節および胸腺が挙げられるの両方からのDCの検出、列挙および/または単離の際に有用である。抗体を分泌するハイブリドーマもまた、本発明に含まれ、それらの抗原結合フラグメントを発現する他の細胞についても同様に本発明に含まれる。BCDA2またはBCDA3またはBCDA4を特異的に認識する任意の抗原フラグメントもまた本発明に含まれる。表1および本発明で提供される実施例に見られるように、これらの抗原を特異的に認識する複数のタイプのmAbが産生され得る。また、本明細書に示される結果に見られるように、抗原結合フラグメントは、同じ抗原に対する同じエピトープであると認識する必要はない。このような全ての抗原結合フラグメントおよびこれらの組成物は、本発明に含まれる。用語抗原結合フラグメントは、優先的にDCまたはこれらの亜集団に結合する任意の一部分を含む。適切な一部分としては、所望の標的分子と結合するアプトマーとして公知のオリゴヌクレオチドHermannおよびPantelScience289820825、炭水化物、レクチン、Fab、F2、Fab、scFv単量体形態および多量体形態の両方および単離されたH鎖およびL鎖のようなIgフラグメント、が挙げられるがこれらに限定されない。抗原結合フラグメントは、インタクトなIgの特異性を保持するが、アビディティーおよび/またはアフィニティーは変化され得る。該して、本明細書中に記載される特定の化合物、組成物および方法は、含有する抗原決定基が提供されれば、標準的な免疫化学技術により慣用的に生成され得る抗体およびこれらの誘導体に関する。これらとしては、例えば、化学結合により、もしくは賦形剤またはアジュバンドと混合することにより結合した別の化合物と結合した抗原結合フラグメントが挙げられるがこれらに限定されない。特異的な結合パターンおよびこれらを作製する方法は、本明細書中に記載されており、そして当該分野で公知である。抗原結合フラグメントこれらの誘導体もまた含むは、代表的に遺伝子操作により生成されるが、これらは他の方法および方法の組み合わせにより代替的に獲得され得る。これらの種別としては、加工ペプチドフラグメントおよび融合タンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。好ましい化合物として、抗DCCDRを含むポリペプチドフラグメント、サイトカインエフェクター要素を含む抗体融合タンパク質、アジュバンドまたは薬剤を含む抗体融合タンパク質、腫瘍細胞由来の抗原を含む抗体融合タンパク質、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生虫抗原、酵母抗原、自己抗原またはそれから誘導された抗原性ペプチドT細胞エピトープ、および単鎖V領域タンパク質が挙げられる。抗原結合フラグメントは、これらがヒト供給源から単離された場合、ヒト起源の抗原結合フラグメントであると考えられ、そして直接使用されるかあるいは他の細胞型およびこれらの誘導体またはヒト染色体全体もしくはその一部分例えば、VH、DH、JH、VL、JL、CH、CLの遺伝子セグメントをコードするヒト染色体を有するマウスおいてクローン化されそして発現される。融合ポリペプチドは、天然で見出されるものとは異なる位置で連続するペプチド領域を含むポリペプチドである。この領域は、通常別々のタンパク質に存在し得、1つにされて融合タンパク質となる;これらは通常同じタンパク質内に存在し得るが、この融合ポリペプチドにおいて新しい配置に置かれる;またはこれらは合成的に配置され得る。例えば、本発明は、抗原結合フラグメントの機能的部分およびトキシンのような別のペプチドからなる組換えタンパク質およびこのタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたはこれに相補なポリヌクレオチドを含む。これらの融合タンパク質を作製する方法は当該分野で公知であり、例えばこれらは、WO9307286に記載される。ポリペプチドの機能的に等価なフラグメントは、付加、欠損、置換の任意の組み合わせによりネイティブの配列と異なるが、用いられる状況に関連するフラグメントの少なくとも1つの機能的特性は保護されている。抗原結合フラグメントは、免疫性疾患に関連する臨床的状態を緩和する際に有用である。本発明はさらに、抗原結合フラグメントのポリペプチド誘導体および診断、処置、および新規薬剤の製造においてこれらの組成物を使用するための方法を包含する。本発明はまた、科学的機能部分と結合した抗原結合フラグメントを包含する。代表的には、この部分は、検出可能なシグナルを生成し得る標識である。これらの複合化した抗原結合フラグメントは、例えば、幹細胞移植後および化学療法のような免疫切除療法後の種々の組織、種々の疾患におけるDCの定量、ならびに例えば化学療法または自己免疫療法後のDCの照射および画像化のような決定システムにおいて有用である。このような標識は当該分野で公知であり、放射性同位体、酵素、蛍光化合物、化学発光化合物、生物発光化合物、基質コファクターおよび基質インヒビターならびに磁粉が挙げられるがこれらに限定されない。これらの標識の使用を教示する特許の例については、例えば、米国特許番号第3817837号;3850752号;3939350号;3996345号;4227437号;4275149号;および4366241号を参照のこと。この部分は、共有結合され得るか、組換え的に結合され得るか、または第2の薬剤例えば、二次抗体、プロテインA、またはビオチン-アビジン複合体を通じて共有的にまたは非共有的に結合され得る。他の機能的部分としては、シグナルペプチド、免疫学的応答性を増強する薬剤、固体支持体との結合を容易にする薬剤、ワクチンキャリアー、生物応答修飾因子、常磁性標識および常磁性薬物が挙げられるがこれらに限定されない。シグナルペプチドは、原核生物形態および真核生物形態を含む。免疫学的応答性を増強する薬剤としては、細菌スーパー抗原およびアジュバンドが挙げられるがこれらに限定されない。固体支持体との結合を容易にする薬剤としては、ビオチン、アビジンまたはこれらの誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。免疫原キャリアとしては、任意の生理学的に受容可能なバッファーが挙げられるがこれに限定されない。生物応答修飾因子としては、サイトカイン、特定の腫瘍壊死因子TNF、IL2、インターロイキン-4Science23810981104;およびWinterおよびMilsteinNature349293299で見出される。適切な毒素としては、リシン、放射性核種、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、Pseudomonas外毒素A、ジフテリア毒素、リシンA鎖、真菌毒素例えば、真菌リボソーム不活性化タンパク質例えば、ゲロニン、レストリクトシンおよびホスホリパーゼ酵素が挙げられるがこれらに限定されない。該して、ChimericToxins、OlsensおよびPihl、PharmacTher15355391Cytometry11231238を参照のこと。ここで、本出願人は、当該分野において記載される問題ODohertyら;およびYamaguchiらを、近年記載された対側性contralateralフットパッド免疫化手順を用いて克服した。Yinら、1997Blood9050025012を参照のこと。このシステムは、抗原に遭遇しない限り末梢リンパ器官を継続的に再循環するが、いったん抗原により活性化された場合1週間でないとしても、数日間末梢リンパ器官に直ちに保持されるナイーブな抗原特異的T細胞およびB細胞を使用する。PICKERらAnnuRevImmunol10561591;ButcherらScience27260―66;BradleyらCurrOpinImmunol8312320;WatsonらCellAdhesCommun6105110;KearneyらImmunity1327339;JacobらJExpMed176679687;RidderstaadらJImmunol16046884695;およびTarlintonCurrOpinImmunol10245251を参照のこと。本明細書で提供される実施例において、-3、0、4、7、11および14日目にブリストロール-8Bリンパ芽球腫細胞をマウスの左フットパッドに注射し、一方で0、4、7、11および14日目にDCを右フットパッドに注射した。共有抗原に対する特異性を有するナイーブなB細胞およびT細胞例えば、HLAクラスII分子は、-3日目と0日目との間の左膝窩リンパ節において、ブリストール-8細胞により活性化され、その上そこで保持される。他方、DCに対する固有の抗原に対して特異性を有する全てのリンパ球は0日目以降の右膝窩リンパ節において活性化について利用可能なまま維持される。この免疫化技術を、大多数のDCの迅速な単離のための強力な手順と組み合わせ、そして3つの新規のDC抗原BDCA2、BDCA3およびBDCA4を認識するmAbのパネルの生成を可能にした。さらなるDC特異的抗体を生成する際でのこの抗原の使用により、より多くの成功の機会を有する抗体生成のより伝統的な方法の使用が可能になる。抗体の産生および単離の方法は当該分野で周知である。例えば、HarlowおよびLaneAntibodiesALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratory、NewYorkを参照のこと。一般的な抗体精製方法としては、塩析例えば、硫酸アンモニウムを用いる塩析;イオン交換クロマトグラフィー例えば、カチオンまたはアニオン交換カラムを中性pHで行い、そして漸増イオン強度の段勾配で溶出するイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーゲル濾過HPLCを含む;およびアフィニティー樹脂例えば、プロテインA、プロテインG、ヒドロキシアパタイトまたは抗Igでのクロマトグラフィーが挙げられるがこれらに限定されない。抗原結合フラグメントはまた、DCまたはこれらの抗原部分を含むアフィニティーカラムで精製され得る。好ましくは、フラグメントは、ProteinACLSepharoseTM4Bクロマトグラフィー、その後にDEAESepharoseTM4Bイオン交換カラムを用いて精製される。本発明はまた、ハイブリッド抗体を包含する。この抗体において、一対のH鎖およびL鎖は一次抗体からえられ、他の対のH鎖およびL鎖は異なる二次抗体から得られる。本発明の目的のためには、一対のL鎖およびH鎖は抗DC抗体由来である。1つの例において、それぞれのL-H鎖は、DC特異的抗原の異なるエピトープに結合する。このようなハイブリッドはまた、ヒト化したH鎖またはL鎖を用いて形成し得る。本発明はまた、他の二特異性抗体例えば、定常領域を通じて共有結合した2つの別々の抗体を含む抗体を包含する。本発明に包含される他の抗原特異的フラグメントは、H鎖またはL鎖が付加的な特性を提供するため改変された抗体である。例えば、アミノ酸配列の変化は、生じたポリペプチドの免疫原性の減少を引き起こし得る。この変化は、1つ以上のアミノ酸残基からC領域ドメインのような領域の完全な再設計までの範囲に及ぶ。代表的な変化としては、補体結合、膜レセプターとの相互作用および他のエフェクター機能に関与する変化が挙げられるがこれらに限定されない。組換え抗体はまた、基質例えば、サイトカインの細胞への特異的な送達を補助するために設計され得る。種々のIgドメインが天然で存在するものとは異なる秩序に置かれたペプチドもまた、本発明に包含される。抗原結合フラグメントの大きさは、所望の機能を提供するために必要な最小限の大きさのみであり得る。これは、必要に応じてさらなるアミノ酸配列望ましくは、この抗原結合フラグメントにネイティブなアミノ酸配列またはヘテロ供給源由来のアミノ酸配列のいずれかを含み得る。抗DC抗原結合フラグメントは、抗体V領域配列由来の5つの連続したアミノ酸残基のみを含み得る。抗体L鎖またはH鎖V領域由来の7個のアミノ酸残基、より好ましくは約10個のアミノ酸残基、より好ましくは約15個のアミノ酸残基、より好ましくは約25個のアミノ酸残基、より好ましくは約50個のアミノ酸残基、より好ましくは約75個のアミノ酸残基を含むポリペプチドもまた含まれる。抗体L鎖またはH鎖V領域の全体を含むポリペプチドでさえ、より好ましい。置換は、1つ以上のアミノ酸残基の交換または改変からV領域のような領域の完全な再設計までの範囲に及び得る。もし存在する場合、アミノ酸残基の置換は、好ましくはペプチドのフォールディングまたは機能的性質が悪化するように影響を及ぼさない保存的置換である。保存的置換がなされ得る機能的に関連するアミノ酸残基のグループは、グリシン/アラニン;バリン/イソロイシン/ロイシン;アスパラギン/グルタミン;アスパラギン酸/グルタミン酸;セリン/スレオニン/メチオニン;リジン/アルギニン;およびフェニルアラニン/チロシン/トリプトファンである。抗原結合フラグメントは、グリコシル化され得るかもしくはグリコシル化され得ないか、翻訳後に改変され得るか例えば、アセチル化およびリン酸化または合成的に改変され得る例えば、標識基の結合。L鎖およびH鎖の両方を含むポリペプチド誘導体は、L鎖およびH鎖を分離し、次いで合成されて形成され得るか、またはインサイチュで両鎖の発現系により合成されて形成され得る。このような発現系は、L鎖およびH鎖について別々に転写可能な領域を含有するプラスミドでトランスフェクトするか、またはそれぞれの鎖に対するプラスミドで同じ細胞を同時トランスフェクトするかにより作製され得る。第3の方法では、H鎖をコードする領域を有する適切なプラスミドを、H鎖欠損変異体にトランスフェクトする。H鎖欠損変異体は、フルオレセイン標識ウサギ抗マウスIgGH鎖特異的、DAKOCorporation、Carpinteria、CAを有する細胞が産生する抗DC抗体を販売元の説明書に従って処理することにより獲得され得る。染色した細胞集団および染色していない細胞集団を、フローサイトメトリーにより分析する。染色していない細胞を滅菌チューブに回収し、そして限界希釈により1細胞/ウェルで96ウェルプレートに置く。次いで培養上清を、ヤギ抗マウスIgGH鎖特異的およびヤギ抗マウスκを用いてELISAでアッセイする。κポジティブ、IgGネガティブの表現型を有するクローンを少なくとも3回サブクローニングし、安定な抗DC変異体を得た。推定H鎖欠損変異体由来のmRNAを単離し得、そしてL鎖V領域cDNAの配列を決定する。VHについてのmRNAのリバースPCRを、2セットの5プライマーおよび3プライマーを用いて行い、抗DCcDNAのクローニングに用いた。H鎖欠損変異体は、これらのプライマーを含む検出可能なDNAを産生しなかった。この細胞のトランスフェクションを、適切なH鎖プラスミドを用いて進めた。本発明に包含される別の抗原結合フラグメント融合体は、H鎖およびL鎖の定常領域が改変されて付加的な特性を提供する抗体である。例えば、アミノ酸配列の変化は、生じたポリペプチドの免疫原性の変化を引き起こし得る。この変化は、1つ以上のアミノ酸残基から定常領域ドメインの完全な再設計までの範囲に及ぶ。予想される変化は、補体結合、膜レセプターとの相互作用、および他のエフェクター機能に影響を及ぼすものである。組換え抗体はまた、基質例えば、リンホカインまたは抗原もしくは腫瘍、ウイルス、寄生虫または細菌由来の抗原性ペプチド、あるいは寛容原自己抗原の細胞への特異的な送達を補助するよう設計され得る。種々のIgドメインが天然とは異なる順序で配置されているタンパク質もまた、本発明に包含される。本発明はまた、抗DC抗体の単鎖V領域フラグメントscFvを包含する。単鎖V領域フラグメントは、短い連結ペプチドを用いてL鎖および/またはH鎖V領域を連結することにより作製されるBirdらScience242423426。十分な可撓性および長さを有する任意のペプチドがscFvのリンカーとして用いられ得る。通常このリンカーは、免疫原性がほとんど有さないか全く有さないよう選択される。連結ペプチドの例は、GGGGS3である。これは、あるV領域のカルボキシ末端と別のV領域のアミノ末端との間の約35nmを橋渡しする。他のリンカー配列もまた用いられ得、そしてさらなる機能例えば、薬物または固体支持体との結合あるいは基質例えば、リンホカインまたは抗原もしくは腫瘍、ウイルス、寄生虫または細菌由来の抗原ペプチド、あるいは寛容原自己抗原の細胞への特異的な送達が提供され得る。全てのまたは任意のH鎖またはL鎖が任意の組み合わせで用いられ得る。代表的に、V領域全体が、scFvに含まれる。例えば、L鎖V領域は、H鎖V領域と連結され得る。あるいは、L鎖V領域の一部は、H鎖V領域またはその一部と連結され得る。H鎖V領域は、本明細書中に記載される抗体に由来し、そしてL鎖V領域が別のIgに由来するようなscFvもまた意図される。1つの成分が抗原結合フラグメントであり、そして別の成分がT細胞エピトープのような異なるポリペプチドである二相性のscFvが作製され得る。このscFvは、任意の順序で合成され得る例えば、VHリンカーVLまたはVLVH。特定の発現系におけるこれら2つの構成の発現レベルにおいて差異があり得る。この場合、これらの形態の1つが優先され得る。Xのような直列scFvもまた作成され得るここで,XはscFvまたはこれらの他のポリペプチドとの組み合わせである。別の実施形態において、単鎖抗体ポリペプチドは、リンカーポリペプチドを有さないか、またはごく短い、可撓性のないリンカーを有する。可能な構成は、VLVHおよびVHVLである。この連結は、短すぎてこの鎖内のVLとVHとの間の相互作用を許さず、そしてこの鎖は、それぞれの末端にVL/VH抗原結合部位を有するホモ二量体を形成する。このような分子は、二重特異性抗体diabodiesと呼ばれる。scFvは、組換え的にかまたは合成的に生成され得る。scFvの合成的な生成に関して、自動合成装置が用いられ得る。scFvの組換え生成に関して、scFvをコードするポリヌクレオチドを含有する適切なプラスミドが、適切な宿主細胞真核生物細胞例えば、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞かまたは原核細胞生物例えば、Escherichiacoliのいずれかに導入され得、そして発現したタンパク質が、標準的なタンパク質精製技術を用いて単離され得る。scFvはまた、ファージ提示ライブラリーから獲得され得る。scFvの生成について特定の有用な系は、プラスミドpET22bJBiolChem26317191725;およびTamMetEnz168715を参照のこと。この結果は、コアに対して高モル比の抗原結合フラグメントポリペプチドを有する大きな高分子である。MAPは有効な免疫原であり、そして免疫アッセイについての有用な抗原である。MAPを生成するためのコアは、標準的なペプチド合成技術により作製され得るか、または商業的に獲得され得るQualityControlledBiochemicals、Inc、Hopkinton、MA。代表的なコアマトリックスは3つのレベルでのリシンおよび8つのアミノ酸残基から構成される。本発明はさらに、本発明のDC特異的抗原結合フラグメントに対する抗イディオタイプ抗原結合フラグメントを含む。このような抗イディオタイプは、当該分野で公知の任意の方法によって作成され得る。癌患者は、しばしば免疫抑制されており、そしていくつかの腫瘍関連抗原TAAに対して耐性である。このようなTAAに対する活性な免疫応答を誘引することは、癌治療における重要なチャレンジを示す。所定の抗原での免疫化は、CTL応答を含む免疫応答、好ましくは強力なCTL応答を生成する。この抗原に対する抗体の産生は、腫瘍細胞がADCC抗体依存性細胞性細胞傷害によって殺傷される場合に、役立ち得る。本発明は、当該分野で公知の方法により特定の免疫応答を誘導するにおける、本発明の抗原結合フラグメントの使用によって、同定および単離されたDCの使用を包含する。免疫応答は、癌、感染性ウイルス、感染性細菌、感染性寄生生物、感染性酵母、および自己免疫疾患耐性誘導に関連したものを含むが、これに限定されない、任意の抗原に対して特異的であり得る。このような応答を誘導するのに特に適している小集団を単離する能力により、小集団の混合物よりも効果的なDCの調製を生じる。ハイブリッド細胞例えば、DC/腫瘍細胞はまた、癌特異的療法として用いられ得る。改変細胞細胞のヘルパーT細胞分極能力に関して活性化された、インビトロ成熟された、調節されたTh1vTh2vTh3ThR、そして細胞のT細胞刺激、またはアネルギー化、または欠失能力に関して調節された、細胞を含むがこれに限定されないが、同様に、本発明に包含され、そして遺伝子改変された細胞またはトランスフェクトされた細胞、および抗原提示または内部移行について適切なペプチドまたはタンパク質とともにインキュベートされた細胞を含むがこれに限定されない。小集団は、分化の1つの系列および別の系列の1つにおける特定の分化の段階を含むがこれに限定されない。本発明はさらに、DC、その小集団およびその混合物を提供する。この細胞は、当該分野で公知の任意の分別方法によって、本明細書で提供される抗原結合フラグメントを用いて選択される。単離された細胞を含む組成物はまた、本発明によって包含される。これらは、薬学的組成物および治療組成物、ならびに単離された細胞を含む任意の他の組成物を含む。本明細書に記載の方法によって単離されたDC小集団は、好ましくは実質的に均質である。すなわち、BDCA特異的抗原結合フラグメントによって単離された細胞は、好ましくは、約80BDCAを超え、より好ましくは約90BDCAを超え、そして最も好ましくは約95BDCAを超える。当然ながら、この細胞と他のDC、または他の造血細胞との引き続く組み合わせは、BDCA細胞のパーセンテージを減少させ得、このような組み合わせがまた、本発明によって包含される。同様に、本明細書に記載の方法によって得られるDCは、当該分野で公知の任意の処置方法における使用に適切である。これらの方法を達成するために変更されたDCはまた、本発明によって包含される。これらの方法としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない:a自己免疫疾患、アレルギー、移植片対宿主病GvHD、異種同種移植変拒絶における、特定のT細胞耐性刺激の代わりの殺傷またはアネルギーを誘導するための、単離されたDCを用いた治療。例えば、このようなT細胞に特異的なDCは、溶解、不活性化、または死誘導部分を含み、これにより、例えば、CD95Lトランスフェクションにおけるような抗原標識または遺伝子改変による望ましくない免疫反応に関与するT細胞を特異的に標的するように、改変され得る。T細胞に対するDC特異性は、主に、MHCIおよびIIを介した適切なT細胞エピトープペプチドの提示により生じる。耐性誘導機能を有するDCの特定のサブセットは、患者に直接投与され得る。末梢耐性は、改変されたDCによって媒介され得、T細胞の欠失殺傷、アネルギーおよび抑制/調節を誘導し得る;b特定のT細胞において、特定のサイトカイン発現プロフィールを誘導するための、単離されたDCを用いる免疫調節。これは、Th1特定の炎症性免疫応答についてのサイトカイン、Th2特定の体液性免疫応答のサイトカイン、またはTh3特定の免疫抑制のサイトカインの産生に影響するのに特に有用である。例えば、アレルギーおよび喘息の場合、Th1応答の誘導は、Th2応答を生じる兆候を減少または排除し得る;c腫瘍抗原、ウイルス抗原、および細胞抗原を含むがこれに限定されない、DC提示抗原での治療;d免疫反応を誘導するのに十分な量および条件下での、DC提示抗原とともにまたは提示抗原なしにおよび種々のコファクター補助因子これは、サイトカイン、同時刺激分子、およびエフェクター分子を含むがこれに限定されないを用いた治療;およびe抗原提示細胞を得るためのインビトロでのT細胞刺激。本明細書に記載される抗原結合フラグメントはまた、多くの処置方法に適切である。これらとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない:a自己免疫あるいは至適のおよび選択的な取り込み/トランスフェクションについてDCに対する抗原または核酸ウイルス、プラスミドDNA、RNAなどのインビボ標的化に関与するDC例えばのリガンド-またはリガンド媒介免疫治療を模倣する抗体。BDCA2が、抗原取り込みおよびプロセシング機能を有する分子であるらしいのと同様に、この文脈において特に有用であり得る。b免疫モニタリング:例えば、種々の疾患においておよび、例えば、増殖誘導リガンド例えば、flt3-リガンドまたはGCSFを用いた、動員の際の、BDCA2、BDCA3、およびBDCA4DCの列挙および特徴付け。宿主に対して有害でない任意のキャリアが、DCに用いられ得る。適切なキャリアは、代表的には、大きく、緩徐に代謝された高分子例えば、タンパク質;ポリサッカライド例えば、ラテックス機能化セファロース、アガロース、セルロース、セルロースビーズなど;ポリマー性重合体アミノ酸残基例えば、ポリグルタミン酸、ポリリジンなど;アミノ酸コポリマー;および不活性なウイルス粒子または弱毒化細菌例えば、サルモネラである。2.さらなるDC特異的抗原結合フラグメントの獲得方法。本発明は、DC特異的抗原結合フラグメントを得る方法を包含する。詳細には以下に記載のように、新しいDC特異的抗原結合フラグメントを生成する方法としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない:1ファージディスプレイ技術の使用これにより抗体レパートリーをコードするcDNAは、好ましくは、PCRおよび種特異的V領域に特異的なオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、リンパ球または脾臓RNAから増幅される;2抗原を用いた哺乳動物の免疫、およびポリクローナル抗体またはmABの生成工程;ならびに3ファージ非常に大きく多様なV遺伝子レパートリー上での提示による、事前免疫なしに抗体を作成するためのファージディスプレイの使用。一般に、HoogenboomらImmunotechnol4120を参照のこと。好ましくは、治療目的のために、非ヒト抗原結合フラグメントが用いられるべき場合、これらは、当該分野で公知の方法によってヒト化され得る。MedezらNatureGenetics18410により記載の方法が用いられ得る。要するに、精製した抗原を用いて、ナイーブなマウス抗体レパートリーを欠き、代わりに生殖細胞系においてほとんどのヒト抗体V遺伝子を有するトランスジェニックマウスを免疫する。続いて、ヒト抗体がマウスB細胞により産生される。この抗体遺伝子は、PCRライブラリー選択または古典的ハイブリドーマ技術によりB細胞から回収される。あるいは、抗体は、精製されたDC特異的抗原での注射後、マウス例えば、BALBcマウスから得られ得る。mAbは、標準的ハイブリドーマ技術を用いて生成される。MaltiらBiotechnolInt18593ヒトハイブリドーマ;およびKohlerおよびMilsteinNature256495497マウスハイブリドーマ。引き続き、マウス抗体は、例えば、RosokらJBiolChem2712261122618;BacaらJBiolChem2721067810684;Raderら、ProcNatlAcadSciUSA9589108915;およびWinterおよびMilsteinNature349293299に記載の方法により、ヒト化され得る。ファージディスプレイアプローチをまた用いて、DCに対するヒト抗体を迅速に生成し得る。このアプローチは、HenderikxらCancerRes58432432によって記載の方法を使用し得る。ファージ上で提示された抗体フラグメントは、固定された抗原またはDCに結合する抗体を分離することにより、異なる単鎖抗体を含む大きいナイーブなファージ抗体/フラグメントライブラリーから選択される。ヒト抗体フラグメントを、生殖系列Vドメインから構築するか、またはフレームワークおよびCDR領域の両方において、多くの変異変異は、相同遺伝子再配列reassortmentまたはエラープローンerrorpronePCRのいずれかによって標的されるにより合成したナイーブなレパートリーから選択する。DCと特異的に反応性の抗原結合フラグメントは、本明細書に記載のように、腫瘍および正常細胞に対するスクリーニングによって同定され、DC特異的抗原結合フラグメントを同定し得る。本発明はまた、適切なファージディスプレイライブラリーを作成することにより、DCに特異的な抗原結合フラグメントを同定する方法;DC特異的抗原を単離する方法;DCに特異的に結合する抗原結合フラグメントを提示するファージを得るための標準的免疫化学技術による、抗原を用いたファージディスプレイライブラリーのスクリーニング方法;またはDCおよび他の関連細胞例えば、APCに対するスクリーニングおよびDCに優先的に結合するファージの選択によって、DC特異的抗原結合フラグメントについて得られたファージディスプレイライブラリーをスクリーニングする方法、を包含する。ファージディスプレイによる抗原結合フラグメントを生成する方法は、当該分野で周知である。HoogenboomらNatBiotechnol15258;およびHoogenboomらEMBOJ13692698;およびVaughamらNatBiotechnol14309314。成功に影響する重大なパラメーターは、特定の抗原に対して生成された抗体フラグメントの数およびアフィニティーである。最近まで、多くの多様なライブラリーの産生は、いくらか困難なままであった。歴史的に、scFvレパートリーは、VHおよびVLRTPCR産物から直接アセンブルされてきた。RNAのアベイラビリティーおよびRTPCRの効率は、利用可能なV遺伝子の数という因数を制限している。また、アセンブルには、3つのフラグメントすなわち、VHおよびVLならびにリンカー領域を連結することが必要であった。MarksらJMolBiol222581597。改善されたライブラリー構築方法は、別のプラスミドベクターにおいて、クローニングされたVHおよびVL遺伝子レパートリーを用いて、scFvアセンブリのための物質の安定かつ無限の適用をもたらす。SheetsらProcNatlAcadSciUSA9561756162。また、効率性は、VLライブラリーの5末端でリンカー領域をコードするDNAを有することにより増大される。従って、3つでなく、連結されるべき2つのフラグメントしか有さない。抗DC抗原結合フラグメントをまた、送達または操作し得る。例えば、L鎖およびH鎖のV領域の免疫原性活性は、一連の短いポリペプチドV領域アミノ酸配列全体にまたがるを調製することによりスクリーニングされ得る。20または50アミノ酸残基長の一連のポリペプチドを用いて、各V領域が、有用な機能的特性について調査され得る。タンパク質配列のコンピューター分析を実行して潜在的に免疫原性のポリペプチドを同定することも可能である。次いで、このようなペプチドを合成して試験し得る。本発明はさらに、所望の特性を有する他の抗DC抗原結合フラグメントを生成するために種々の様式で合わされた、本明細書に記載の抗原結合フラグメントの種々の適合を包含する。例えば、改変残基を有する抗原結合フラグメントが、MAPに含まれ得る。別の例において、scFvをサイトカイン例えば、IL2に融合する。このような組み合わせの全てが本発明によって包含される。抗原結合フラグメントは、任意の適切な手順タンパク質分解、組み換え方法または化学的合成によって作成され得る。これらの方法は、当該分野で公知であるので詳細に記載する必要はない。タンパク質分解酵素の例としては、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、V8プロテアーゼ、スブチリシン、プラスミン、およびトロンビンが挙げられるがこれらに限定されない。インタクトな抗原結合フラグメントは、同時にまたは引き続いて、1つ以上のプロテアーゼとともにインキュベートされ得る。あるいは、またはさらに、インタクトな抗体は、ジスルフィド還元剤で処理され得る。次いで、ペプチドは、当該分野で公知の技術ゲルろ過クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、および逆相HPLCが挙げられるがこれらに限定されないによって互いに分離され得る。抗DC抗原結合フラグメントがまた、当該分野で公知の任意の方法による適切な発現系において、このペプチドをコードするポリヌクレオチドからの発現によって作成され得る。代表的には、適切なポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、適切なプロモーターの制御下で発現ベクターに連結され、そして意図される宿主細胞を遺伝子的に変更するために用いられる。真核生物および原核生物の両方の宿主系を用い得る。次いで、ポリペプチドが溶解した細胞から、または培養培地から単離され、そしてその意図される用途に必要な程度まで精製される。本発明の用途に適切な原核生物宿主細胞の例としては、Ecoli、Bacillussubstilis、および任意の他の適切な宿主細胞が挙げられる。真核生物宿主細胞の例としては、酵母、鳥類、昆虫、植物、および動物細胞例えば、COS7細胞、HeLa細胞、およびCHO細胞が挙げられるがこれらに限定されない。必要に応じて、マトリックスコートしたチャネルまたはビーズおよび細胞同時培養が、抗原結合フラグメント産生細胞の増殖を強化するために含まれ得る。大量のmAbの産生のため、腹水を得ることが一般に、より都合がよい。腹水を得る方法は、免疫学的にナイーブな、組織適合性または免疫耐性の哺乳動物特にマウスにハイブリドーマ細胞を注射する工程を一般的に含む。この哺乳動物は、適切な組成物;例えば、Pristaneの事前投与による腹水産生のためにプライミングされ得る。腹水を動物から取り出し、そして抗体を単離するために処理する。あるいは、抗原結合フラグメントは、タンパク質合成の標準的方法と組み合わせて、アミノ酸配列データおよび本開示において提供される他の情報を用いて化学的に合成され得る。適切な方法は固相メリフィールド法である。AppliedBiosystemsInc領域を含む融合ポリペプチドである。別のバージョンでは、CDR領域は、抗DCアミノ酸配列を含み、一方Vフレームワーク領域はまた、ヒト配列に変換されている。例えば、EP0329400を参照のこと。第三のバージョンでは、V領域は、ヒトおよびマウスV領域のコンセンサス配列を設計することにより、ならびにコンセンサス配列の間で異なるCDR外側の残基を変換することにより、ヒト化される。ヒト化抗体の作成において、フレームワーク残基の選択が、高い結合親和性を保持することを助け得る。原理的には、任意のヒト抗体由来のフレームワーク配列が、CDR接合グラフティングのためのテンプレートとして働き得る;しかし、このようなフレームワークへの直鎖状CDR置換は、抗原結合アフィニティーの有意な損失を導き得る。GlaserらJImmunol1492606;TempestらBiotechnol926;およびShalabyらJExpMed17217。元来のマウス抗体に対してより相同なヒト抗体であればあるほど、ヒトフレームワークは、アフィニティー親和性を減じ得るマウスCDRへと歪みを誘導する可能性が低くなる。抗体配列データベースに対する配列相同性検索に基づいて、ヒト抗体IC4は、muM4TS22に対して良好なフレームワーク相同体を提供するが、他の高度に相同なヒト抗体特にヒトサブグループI由来のκL鎖またはヒトサブグループIII由来のH鎖が同様に適切である。Kabatら1987。種々のコンピュータープログラム例えば、ENCADは、V領域の理想的配列を予想する。LevittらJMolBiol168595。従って、本発明は、異なるV領域を有するヒト抗体を包含する。適切なV領域配列を決定し、そしてこれらの配列を至適化することは、当業者の範囲内である。免疫原性の低下した抗体を得るための方法はまた、米国特許第5270202号およびEP699755に記載されている。特定の適用例えば、抗原結合フラグメントまたはDCAが、植物種子のような適切な貯蔵媒体で発現される場合において、抗原結合フラグメントが、精製なしに保存され得る。FielderらBiotechnol1310901093。ほとんどの適用について、このポリペプチドが他の細胞性成分から少なくとも部分的に精製されていることが一般に好ましい。好ましくは、このペプチドは、総タンパク質の少なくとも約50重量程度までの純度である。より好ましくは、このペプチドは少なくとも50~75純粋である。臨床使用には、このペプチドは好ましくは少なくとも約80純粋である。このペプチドが個体に投与されるべき場合、好ましくはそれは、少なくとも80純粋であり、より好ましくは少なくとも90純粋、なおより好ましくは少なくとも95純粋、そして発熱物質パイロジェンおよび他の混入物を含まない。この文脈では、純度は、調製物の総タンパク質含量の重量パーセントとして算出され、そして組成物精製に意図的に添加される成分を含まない。本発明はまた、生物学的サンプルにおいて、DCおよびそのサブセットを検出、列挙、および/または同定する方法、ならびに体液中で可溶性BDCA2、BDCA3もしくはBDCA4のような抗原および/またはDCを測定する工程を包含する。この方法は、生物学的サンプルを獲得する工程、コントロールの生物学的サンプルに対して比較した場合、このサンプルに対する抗体の抗体-抗原結合および結合の検出もしあればを可能にする条件下で、本明細書に記載の抗原結合フラグメントとこのサンプルを接触する工程を包含する。生物学的サンプルが、例えば、DC濃度または抗原濃度について富化することにより、適切に調製された後、DCまたは抗原と抗体との間の複合体の形成を可能にする条件下で、過剰の抗原結合フラグメントとこれを混合する。次いで、形成された複合体の量または複合体の数DCを保有するを決定し、そして予期されるまたは既知のDC濃度の範囲に既知の量の標的抗原を含む標準的サンプルと形成された複合体と最終的に比較する。複合体形成は、免疫沈澱または比濁法によって観察され得るが、これは、標識例えば、125Iのような放射性同位体、ペルオキシダーゼおよびβガラクトシダーゼのような酵素、またはフルオレセインのような蛍光色素で標識した試薬を用いて、一般により高感度である。細胞および抗原を検出する方法は、当該分野で周知である。細胞検出のためには、フローサイトメトリーが特に有用であり、抗原を用いる、ELISAが好ましい。抗原に対する抗DC抗原結合フラグメントの特異的認識は、当該分野で公知の任意の免疫アッセイによって試験され得る。直接結合アッセイの任意の形式が適切である。このようなアッセイの1つでは、結合パートナーの1つ、抗原または推定抗原結合フラグメントが標識される。適切な標識としては、125Iのような放射性同位体、ペルオキシダーゼのような酵素、フルオレセインのような蛍光標識および化学発光標識が挙げられるがこれらに限定されない。代表的には、他の結合パートナーが、例えば、マイクロタイタープレートのような固相へのコーティングによって不溶化され、未結合の可溶性結合パートナーの除去を容易にする。標識した結合パートナーと未標識の結合パートナーを合わせた後、固相を洗浄し、そして結合した標識の量を決定する。免疫療法に用いる場合、本明細書に記載の抗原結合フラグメントは、本明細書で記載の、および当該分野で公知の治療剤で、未標識であってもまたは標識されていてもよい。これらの試薬は、本発明の抗原結合フラグメントに直接または間接的にのいずれかで結合され得る。間接結合の1例は、スペーサー部分の使用による。これらのスペーサー部分は、順に、不溶性または可溶性のいずれかであり得DienerらScience231148、そして標的部位で薬物を放出できるように選択され得る。免疫療法のための抗原結合フラグメントに結合され得る治療剤の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない:抗原腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生生物由来抗原、および自己抗原を含む、生体反応修飾因子、薬物、放射性同位体、レクチンおよび毒素。体反応修飾因子としては、サイトカインおよびケモカインが挙げられ、これには、以下:IL2、IL3、IL4、GCSF、GMCSF、IL10、IL12、TGFβ、MTPAB、SDF1、リンホタクチン、DCCK1、エオトキシンEotoxin、IP10、TARC、Rantes、MIP1α、MIP1β、SLC、ITAC、MIE、MDC、MCP1、TCA3、MCP2、3、4およびインターフェロンが挙げられるがこれらに限定されない。それによって抗原結合フラグメントが標識され得るインターフェロンとしては、IFNα、IFNβ、およびIFNγ、ならびにそれらのサブタイプが挙げられ得る。免疫療法のための放射性同位体的に結合体化された抗原結合フラグメントを用いることにおいて、特定の同位体が、同位体の安定性および放射のような因子に依存して他のものよりも好ましくあり得る。所望の場合、抗原結合フラグメントによる細胞集団認識は、以下に記載されるインビボ診断技術により評価され得る。一般に、αおよびβ粒子を放射する放射性同位体が免疫療法に好ましい。例えば、組織に数ミリメートル浸透し得る高エネルギーβエミッター例えば、90Yが、好ましくあり得る。一方ではショートレンジの高エネルギーαエミッター例えば、212Biが、好ましくあり得る。治療目的のため、本発明の抗原結合フラグメントに結合し得る放射性同位体の例としては、125I、131I、90Y、67Cu、212Bi、211At、212Pb、47Sc、109Pd、および188Reが挙げられるがこれらに限定されない。レクチンは、植物材料から通常単離されるタンパク質であり、これは、特定の糖部分に結合する。多くのレクチンがまた、細胞を凝集させ、そしてリンパ球を刺激する。しかし、リシンは免疫療法的に用いられる毒性のレクチンである。これは、好ましくは、リシンのαペプチドこれが毒性を担うを抗体分子に結合して、毒性効果の特異的送達を可能にすることによって達成される。毒素は、植物、動物、または微生物によって産生される毒性物質であり、十分な用量ではしばしば致死性である。ジフテリア毒素は、治療的に用いられ得るCorynebacteriumdiphtheriaにより産生される物質である。この毒素は、αサブユニットおよびβサブユニット適切な条件下では分離可能であるからなる。この毒性のA鎖成分は、本明細書に記載される抗原結合フラグメントに結合し得、そしてDCの特定のサブユニットへの部位特異的送達に用いられ得る。組み換え方法が当該分野で周知である。本発明の実行は、他に示さない限り、当業者の範囲内である、分子生物学組み換え技術を含む、微生物学、細胞生物学、生物化学および免疫学の従来の技術を用いる。このような技術は、文献、例えば、MolecularCloningALaboratoryManual第二版Sambrookら、1989;OligonucleotideSynthesisGait編、1984;AnimalCellCultureFreshney編、1987;MethodsinEnzymologyAcademicPressInc;HandbookofExperimentalImmunologyWeiBlackwell編;GeneTransferVectorsforMammalianCellsMillerCalos編、1987;CurrentPrptocolsinMolecularBiologyVirol198477488;およびMiyamuraらProcNatlAcadSciUSA9185078511によって記載される。目的のポリヌクレオチドを含むベクターは、以下を含む多くの適切な手段のいずれかによって、宿主細胞に導入され得る:エレクトロポレーション、あるいは塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、DEAEデキストランまたは他の物質を使用するトランスフェクション、;微粒子銃;リポフェクション;および感染。BDCAをコードするベクターまたはポリヌクレオチドを導入する手段の選択は、しばしば、宿主細胞の特徴に依存する。一旦適切な宿主細胞に導入されると、BDCAの発現は、当該分野で公知の任意のアッセイを使用して決定され得る。例えば、それらの存在は、培養上清ポリペプチドが分泌される場合または細胞溶解物のRIAまたはELISAによって検出され得る。本発明のベクターは、BDCAをコードする1以上のポリヌクレオチドを含み得る。これはまた、所望の結果を増強、促進または調節する他のポリペプチド例えば、サイトカインIL2、IL4、GMCSF、TNFαおよびIFNγを含むが、これらに限定されないをコードするポリヌクレオチド配列を含み得る。組換えBDCAをコードするワクシニアベクターもまた、本発明に含まれる。本発明の他の実施形態は、上記のような、BDCAをコードするポリヌクレオチドで形質転換した宿主細胞およびこのポリヌクレオチド配列を含むベクターで形質転換した宿主細胞である。原核生物細胞および真核生物細胞の両方が、使用され得る。原核生物宿主としては、細菌細胞例えば、EcoliおよびMycobacteriaが挙げられるが、これらに限定されない。真核生物宿主としては、酵母、昆虫、鳥類、植物および哺乳動物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。宿主系は、当該分野で公知であり、そして本明細書中に詳細に記載する必要はない。哺乳動物宿主細胞の例としては、CHOおよびNS0BioTechnology8662667。本発明の宿主細胞は、とりわけ、BDCAをコードするポリヌクレオチドの貯蔵所として、またはその産生のためのビヒクルとして、使用され得る。これらは、BDCAのインビボ発現のためのビヒクルとしてもまた使用され得る。本発明のポリヌクレオチドは、いくつかの用途を有する。これらは、例えば、BDCAの産生のための発現系において有用である。これらはまた、当該分野で周知の方法を使用してサンプル中のBDCAまたは関連する配列をコードするポリヌクレオチドの存在についてアッセイするためのハイブリダイゼーションプローブとして有用である。さらに、これらのポリヌクレオチドはまた、所望のポリヌクレオチドの増幅をもたらすためのプライマーとして有用である。本発明のポリヌクレオチドはまた、薬学的組成物ワクチンを含むにおいて、および遺伝子治療のために有用である。これらのポリヌクレオチドはまた、BDCAコード配列の検出のためのハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る。適切なハイブリダイゼーションサンプルとしては、遺伝子治療における使用のためにエキソビボで形質転換された細胞が挙げられる。1つの例において、DNAまたはRNAは、サンプルから抽出され、そして必要に応じて、ゲル上で泳動しそして/または制限ヌクレアーゼで消化する。この処理したサンプルポリヌクレオチドは、代表的に、洗浄に適切な媒体に移される。次いで、このサンプルポリヌクレオチドに、BDCAコードポリヌクレオチドプローブを接触させる。これは、このサンプルが相補的ポリヌクレオチド配列を含む場合に安定な二重鎖が形成するのを可能にする条件下で行う。形成される任意の適切な二重鎖を、任意の適切な手段によって検出する。例えば、ポリヌクレオチドプローブは、標識された形態で供給され得、そして洗浄後にサンプルと共に残存する標識は、形成された安定な二重鎖の量を反映する。第2の例において、ハイブリダイゼーションを、インサイチュで行う。適切に調製された組織サンプルに、標識プローブを被せて、BDCAコード配列の位置を示す。短いポリヌクレオチドもまた、PCR反応のためのプライマー特に、このプライマーとハイブリダイズする領域を含む長い配列を増幅するためのとして使用され得る。これは、さらなる遺伝子操作のためのポリヌクレオチドを産生するために、分離目的で行われる。これはまた、BDCAコードポリヌクレオチドが、例えば、診断目的のサンプルに存在するか否かを決定するために、分析目的で行われる。これらのポリヌクレオチドの別の用途は、ワクチンおよび遺伝子治療における。一般原理は、このポリヌクレオチドを投与して、その結果、これによってコードされるポリペプチドの発現を促進するかまたは減弱することである。従って、本発明は、免疫応答を誘導する方法および処置方法を包含し、これらは、BDCAをコードする有効量のポリヌクレオチドを個体に投与する工程を包含する。これらの方法において、BDCAをコードするポリヌクレオチドは、直接的にかまたはこのポリヌクレオチドをトランスフェクトした細胞を介して、個体に投与される。好ましくは、このポリヌクレオチドは、環状プラスミド好ましくは、スーパーコイル形態にあるの形態にある。好ましくは、このポリヌクレオチドは、細胞内で複製される。従って、このポリヌクレオチドは、適切なプロモーター例えば、標的組織型の細胞において内因的に活性である異種プロモーターに作動可能に連結されている。好ましくは、一旦細胞核に存在すると、プラスミドは、環状の非複製エピソーム分子として存続する。インビトロ変異は、例えば、より高い親和性および/または結合力を有する分子をコードするように、プラスミド構築物に対して行われ得る。BDCAポリヌクレオチドを含有するプラスミドが、真核生物細胞において発現可能であるか否かを決定するために、細胞例えば、COS7、CHOまたはHeLaを、これらのプラスミドでトランスフェクトし得る。次いで、発現を、イムノアッセイ;例えば、ウエスタンブロットによって、決定する。小さいBDCAは、例えば、得られたポリペプチドがタグ例えば、標的エピトープまたは酵素標識と融合されるようなプラスミドを構築することによって、検出され得る。発現されたポリペプチドのさらなる特徴づけは、ポリペプチドを精製し、次いで、本明細書中に記載の機能的アッセイの1つを行うことによって、達成され得る。遺伝子治療の1つの様式において、本発明のポリヌクレオチドは、エキソビボで細胞を遺伝的に改変するために使用される。このストラテジーにおいて、ドナーから取り出した細胞または細胞株から得た細胞を、BDCAベクターで形質導入またはトランスフェクトし、次いで、レシピエントに投与する。トランスフェクションのために適切な細胞株としては、末梢血単核細胞が挙げられる。遺伝子治療の別の様式において、本発明のポリヌクレオチドは、インビボで細胞を改変するために使用される。この目的には、種々の型の癌を処置することが含まれ得るが、これらに限定されない。これらのポリヌクレオチドはまた、BDCA2を発現しない細胞、およびBDCA2を発現するトランスジェニック動物を産生するために使用され得る。本発明から、BDCA2を発現しないかまたは有意に減少されたレベルでBDCA2を発現するように操作された細胞が得られる。このような細胞は、細胞好ましくは、DCを選択し、そしてその細胞にBDCA2をコードするポリヌクレオチドを含む発現構築物を提供することによって産生され、ここで、このポリヌクレオチドは、アンチセンスの状態でありかつプロモーターに作動可能に連結される。このようなポリヌクレオチドの発現は、BDCA2欠損性の細胞を効果的に産生する。他の実施形態において、本発明は、BDCA2を有意に減少された量で産生するかまたはさらにBDCA2の産生をノックアウトする、組換え宿主細胞を調製するために方法を提供する。これらの組換え宿主細胞は、当該分野で周知の1以上の手段を使用することによって調製され得る。例えば、遺伝子発現は、ゲノム内へのアンチセンスDNAまたはRNAの構築物の組み込みによって阻害され得る。内因性BDCA2遺伝子の欠失または変異は、これらを非機能的にし得る。BDCA2mRNAを特異的に切断するリボザイムRNA切断酵素をコードする核酸を、この組換え宿主細胞に導入し得る。用語ノックアウトとは、細胞中の内因性DNA配列例えば、BDCA2によってコードされるタンパク質の少なくとも一部の発現の、部分的または完全な抑制をいう。用語ノックアウト構築物とは、細胞中の内因性DNAによってコードされるタンパク質の発現を減少または抑制するように設計された核酸配列をいう。これらの組換え構築物は、ノックアウト動物に組み込まれ、その結果、BDCA2の産生がDCにおいて抑制される。ノックアウトおよびトランスジェニック動物の調製は、当該分野で公知であり、そして米国特許第5434340号、同第5530179号および同第5557032号に記載される。本発明はさらに、BDCA2を過剰発現する動物を産生するための方法およびBDCA2を過剰発現するように産生された動物を提供する。これらの方法は、一般に、動物に細胞を導入する工程を包含し、これらの動物細胞は、その中にBDCA2ポリペプチドをコードするDNAセグメントを挿入するためにインビトロで処置され、これらの動物細胞は、この動物中でインビボにてBDCA2を発現する。D.キット本発明は、血清および他の供給源におけるBDCA-2可溶性BDCA-2そのアイソフォームを含むを含むを測定するための、抗DC特異的抗原結合フラグメントを含むキットを包含する。これらのキットを使用する診断手順は、診断室、実験室、医師、または個人によって行われ得る。臨床サンプルは、試験される標的の富化のために、必要に応じて前処理される。次いで、使用者は、キットに含まれる試薬を適用して、その診断成分における変化したレベルまたは変更を検出する。必要に応じて、試薬は、標識と結合体化され得、サンプル中の標的と共に形成される任意の複合体の検出を可能にする。別の選択肢において、第1の試薬がその標的を見出した後にその第1の試薬と結合し得そしてそれによって検出可能な標識を供給し得る、第2の試薬が、提供される。例えば、標識した抗マウスIgGは、二次試薬として提供され得る。標識したアビジンは、一次試薬が、ビオチンと結合体化されている場合の、二次試薬である。これらのキットは、種々の生物学的サンプル液体サンプル、細胞懸濁物および組織サンプルを含むに対して使用され得る。キット形態で供給され得る適切なアッセイとしては、本明細書中に記載のアッセイが含まれる。各試薬は、固体形態で供給されるか、または貯蔵およびその後に試験を行う時の反応媒体の交換または反応媒体への添加のために適切な液体緩衝液中に溶解/懸濁されている。適切なパッケージングが提供される。このキットは、必要に応じて、この手順に有用なさらなる成分を提供する。これらの任意の成分としては、緩衝液、捕捉試薬、発色試薬、標識、反応表面、検出手段、コントロールサンプル、指示書および説明書が挙げられるが、これらに限定されない。E.治療組成物1.合成物本明細書中に記載される薬学的組成物の調製は、薬学的調製物の調製のための一般に受け入れられた手順に従って行われる。例えば、RemingtonsPharmaceuticalSciences第18版BiochemBiophysActa802259。別のこのような送達系は、抗原結合フラグメントの提示のために、キメラパルボウイルスB19キャプシドを利用する。BrownらVirol198477488;およびMiyamuraらProcNatlAcadSciUSA9185078511。このようなキメラ系は、本明細書中に記載の使用のために包含される。本発明の実施形態の組成物は、多くの方法でそれらの効力について評価され得る。従って、試験化合物は、適切な薬学的組成物として調製され、そして試験被験体に投与される。初期研究は、好ましくは、小動物例えば、マウスまたはウサギにおいてなされ、必要に応じて、次に、非ヒト霊長類において、そして最後に、ヒトにおいてなされる。免疫原性は、好ましくは、以前に抗体応答を有さない個体において試験される。適切な試験用量の試験組成物が、適切な処置スケジュールで投与される。予測される範囲内の異なる用量およびスケジュールを比較することが適切であり得る。抗原結合フラグメントの投与についての投薬範囲は、所望の効果を生じるのに十分大きく、ここで、疾患の症状は、過度の副作用例えば、望ましくない交差反応およびアナフィラキシー反応を引き起こすことなく回復される。一般に、投薬は、患者の年齢、状態、性別および疾患の程度に伴い変化し、そして当業者によって決定され得る。投薬は、任意の合併症が生じる場合に個々の医師によって調整され得る。一般に、これらの組成物が、治療因子と共に結合体化されて投与される場合に、より低用量インビボ免疫診断画像化に使用される用量に匹敵するで使用され得る。2.抗原結合フラグメント本発明は、本明細書中に記載の抗原結合フラグメントを含む薬学的組成物を包含する。このような薬学的組成物は、単独でかまたは他の治療形態化学療法、放射線療法または免疫療法WO9823735;WO9834642;WO9710000;WO9710001;およびWO9706821に記載されると組み合わせて、免疫応答の誘導または補助および新生物疾患の処置、あるいは自己免疫疾患GvHD、同種移植片拒絶、アレルゲンなどの寛容および処置に有用である。他の処置方法は、本明細書中に記載され、そして/または当該分野で公知である。適切な疾患としては、ウイルス疾患、寄生生物疾患、細菌疾患、真菌疾患、新生物疾患および自己免疫疾患が挙げられるが、これらに限定されない。マウス乳癌モデルにおいて、Flt3LigandCancerRes5735116。DCはまた、腫瘍抗原で負荷され得るかまたは腫瘍抗原を発現するように形質導入され得;次いで、これらの細胞は、腫瘍ワクチン接種に対するアジュバントとして使用される。DCは、適切なMHC拘束状況下で輸入リンパ系に、内因的に腫瘍関連抗原を提示する。WanらHumGeneTher8135563;PeiperらSurgery12223541;およびSmithらIntImmunol9108593。現在の黒色腫ワクチンは、抗原提示網を操作し、そして腫瘍保護免疫の媒介に効果的な最良の細胞性免疫応答と抗体抗腫瘍免疫応答を合わせる。これらの治療は、副作用を伴わずに、いくつかの場合において、後退、疾患の進行の遅延、または生存の改善を生じた。KuhnらDermatolSurg2364954。黒色腫ワクチンはまた、ConfortiらJSurgOncol665564に概説される。ワクチンは、薬学的に受容可能なキャリアにパッケージングされ得るか、当該分野で公知のアジュバントまたは他の成分例えば、サイトカインと混合される。獣医学用途のワクチンは、細菌および細菌成分を含むアジュバントフロイント完全アジュバントまたはフロイント不完全アジュバントが、処方物において許容されるという例外を除いて、実質的にヒトのワクチンと類似する。F.処置方法種々の障害本明細書中に記載され、そして/または当該分野で公知のようなを処置するための方法もまた、本発明に含まれる。これらの方法は、所望の効果を達成する既存の状態を軽減するかまたは再発を防止するのに有効量の本発明の組成物を含有する、ある量の薬学的組成物を投与する工程を包含する。癌の処置について、投与される薬学的組成物の量は、その所望の効果を精製するのに有効な量である。有効量は、1回または一連の投与において提供され得る。有効量は、ボーラスでまたは連続灌流によって提供され得る。適切な活性薬剤としては、抗新生物薬剤、生物応答bioresponse変更因子およびエフェクター細胞例えば、DouillardらHybridomasNatureBiotech1710751081を参照のこと。単離されたDCもまた、アジュバントとしての使用について示唆されている。その中における使用のための組成物が、本発明中に包含される。癌診断または癌処置の状況で、アジュバントは、臨床的に検出可能な腫瘍塊を有さないが、再発の危険が疑われる、癌患者の種類をいう。この群は、さらに高リスク個体および低リスク個体へと部分分割され得る。この部分分割は、最初の処置の前または後に観察される特徴に基づいてなされる。これらの特徴は、臨床的分野で公知であり、そして種々の各癌について適切に規定される。高リスク部分群を代表する特徴は、腫瘍が隣接組織に侵襲したか、リンパ節の関与を示す、特徴である。別の適切な群は、癌に対する遺伝的素因を有するが、なお癌の臨床的徴候を有未だ示さない、群である。例えば、乳癌に関連する遺伝子変異について試験の結果がポジティブであるがなお妊娠可能な年齢である女性は、予防手術を実施するのが適切であるまで、癌の発症を予防するような予防的処置において本明細書中に記載される抗原結合フラグメントの1つ以上を受けることを望み得る。ヒト癌患者神経膠芽細胞、黒色腫、神経芽細胞腫、腺癌、神経膠腫、軟部組織肉腫および種々の癌腫小細胞肺癌を含むを含むが、これらに限定されないは、特に適切な被験体である。適切な癌腫は、さらに、以下を含むがこれらに限定されない、腫瘍学の分野で公知の任意の癌腫を含む:神経膠星状細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、乏突起神経膠腫、脳室上衣細胞腫、髄芽細胞腫、未分化神経外胚葉性腫瘍primitiveneuralectodermaltumorLymphokineRes645;RabinowichらCancerRes47173;RosenbergらScience2331318;およびPizzらJIntCancer34359。さらに、処置が必要な領域へ局所的にその組成物を投与することが望ましくあり得;これは、例えば、注射、カテーテル、または移植片による手術の間の局所注入によって達成され得、その移植片は、多孔性、非多孔性またはゼラチン状の物質であり、これらとしては、シラスチック膜または繊維のような、膜が挙げられる。そのような適切な膜は、Guilfordsceincesにより提供されるGliadel登録商標である。抗BDCA2モノクローナル抗体AC144とのBDCA2の連結が細胞内Ca2移動を誘導するという事実は、プラスマ細胞様DCおよびBDCA2を発現する他のすべての細胞は、BDCA2シグナル伝達の誘発またはBDCA2シグナル伝達の誘発の阻害によって、機能的に調節され得ることを示す。DCの機能的調節に関して、以下の局面が、特許請求の範囲によって包含される:ACD4およびCD8T細胞応答の誘導およびダウンレギュレーション。B寛容または免疫への免疫応答の分極偏向:polarization。CTh1細胞発達development、Th2細胞発達またはTh3T調節性1CD4T細胞発達への、CD4T細胞応答の分極偏向:polarization。後者は、おそらくTGFβおよびまたはIL10の分泌を介して、免疫応答をダウンレギュレートする。DDCは、通常、T細胞についての抗原提示細胞と考えられる。しかし、いくつかの実験室からの最近の研究は、これらがB細胞活性化および抗体合成の調節において、重要な役割を有すると示された。従って、B細胞応答は、DC上のBDCA2を介して調節され得る。同じことが、NK細胞応答についても真であり得る。I型インターフェロンはヒトにおいてTh1型免疫応答を誘導し得るのでParronchiらEurJImmunol26697~703、BDCA2の誘発は、Th2細胞発達developmentにCD4T細胞応答を分極するが偏向させる:polarize、BDCA2シグナル伝達の阻害は、Th1細胞発達にCD4T細胞応答を分極する。従って、本発明は、それぞれBDCA2シグナル伝達の誘発またはBDCA2シグナル伝達の誘発の阻害による、Th2細胞発達またはTh1細胞発達へのCD4T細胞応答の分極を包含する。本明細書中に引用されるすべての刊行物は、本明細書中においてその全体が参考として援用される。以下の実施例は、本発明を例示するために提供されるが、本発明を限定はしない。実施例1DC特異的モノクローナル抗体mAbの生成6~8週齢の5匹の雌性BalbcマウスSimonsenLaboratories、Gilroy、CAに、麻酔下で、右足蹠に約5×105~1×106の精製HLADRlin血液DCを0日目、4日目、7日目、11日目および14日目に、そして左足蹠に約1×106のHLAA2Bristol8Bリンパ芽球腫を、-3日目、0日目、4日目、7日目、11日目、および14日目に接種した。両方の細胞型を、室温で10分間1100PHAGibcoBRL、Gaithersburg、MDとともにインキュベートし、そして注射前にPBSで洗浄した。この処置は、非特異的アジュバント効果を提供し、そしてフロイントアジュバントのようなアジュバントについての必要性を除去する。15日目、HLADRlinDCの5回目の注射の1日後、マウス右脚の膝窩リンパ節を除去した。リンパ球懸濁物を調製し、そして細胞を、KohlerおよびMilsteinNature256495により記載される方法の改変形を使用して、SP20Ag14黒色腫細胞に融合した。融合細胞を、20FCSHyClone、Logan、UT、2mmolLLグルタミン、15mmolLHepes、104mmolLヒポキサンチンGibcoBRLを補充したDMEM中で96ウェルプレート上にプレートし、そして9CO2を含む37°Cインキュベーター中に配置した。目に見えるハイブリドーマコロニーが明らかな場合、これらのウェルからの上清を、抗体分泌およびPBMCに対する非反応性<1ポジティブ細胞についてフローサイトメトリーによってスクリーニングした。簡単には、ラット抗マウスκmAb結合体化ポリスチレンビーズ直径25μm、InterfacialDynamicsCorp、Portland、ORとPBMCの混合物を、室温で20分間50μlハイブリドーマ上清とともにインキュベートした。次いで、ビーズ/細胞混合物を、5mmolLEDTAおよび05BSAを含むPBSで2回洗浄し、そしてビーズおよび試験細胞へのこの上清由来のマウスIgM、IgG1、IgG2aおよびIgG2bの結合を、PE結合体化ラット抗マウスIgMmAbクローンX54、BDBiosciences、SanJose、CA、PE結合体化ラット抗マウスIgG1mAbクローンX56、BDBiosciencesおよびPE結合体化ラット抗マウスIgG2mAbクローンX57、BDBiosciencesで染色することによって、検出した。PBMCおよびポリスチレンビーズを、スキャッターシグナルによりフローサイトメトリー分析において容易に区別し得る。次いで、第1回のスクリーニング基準を満たした培養上清を、有意な比率の血液DCに対する反応性についてのフローサイトメトリー分析によってスクリーニングした。手短かには、ラット抗マウスmAb結合体化ポリスチレンビーズおよび富化した血液DCB細胞、T細胞および単球を除去した、PBMCの混合物を、室温で20分間、50μlハイブリドーマ上清とともにインキュベートした。次いで、この混合物を2回、PBSEDTABSAで洗浄し、そしてPE結合体化ラット抗マウスIgMmAb、PE結合体化ラット抗マウスIgG1mAbおよびPE結合体化ラット抗マウスIgG2mAbで染色して、ビーズおよび富化した血液DCへのこの上清由来のマウスIgM、IgG1、IgG2aおよびIgG2bの結合を検出した。フローサイトメトリー分析におけるHLADR細胞からのHLADRDC細胞の識別のために、ビーズ/細胞混合物を1回洗浄し、PE結合体化ラット抗マウスIgG2mAbの遊離結合部位およびビーズ結合体化ラット抗マウスκmAbの遊離結合部位freebindingsiteを、室温で5分間、100μgmlのマウスIgG2aとのインキュベーションによって飽和させ、そしてこの混合物を、抗HLADRFITCクローンAC122、IgG2aにより対比染色した。選択したハイブリドーマ細胞を培養中で増殖して、ストックを液体窒素中で凍結し、サブクローンを、限界希釈によって確立し、そして一連のポジティブサブクローンもまた液体窒素中で凍結した。mAbのアイソタイプを、ISOTYPEAbSTATKitSangStatMedicalCorp、PaloAlto、CAにより決定した。mAb生成のために、ハイブリドーマ細胞を、mAbリッチな腹水のコレクションを用いてBalbcマウスにおける腹水腫瘍としてか、またはmAbリッチな培養上清のコレクションを用いて細胞培養ローラー培養または中空線維培養中でのいずれかで、増殖させた。純粋なIgGmAbを、ProteinAアフィニティークロマトグラフィーにより、いくつかの場合ではその後に疎水性相互作用クロマトグラフィーにより、腹水または細胞培養上清から調製し、そして5mmolLEDTAおよび005アジ化ナトリウムを含むPBS中に4°Cで貯蔵した。精製mAbを、標準的技術に従って、FITCSigma、StLouis、MO、PECyanotechCorp、KailuaKona、HI、Cy5AmershamLifeScienceInc、ArlingtonHeights、IL、APCEuropaBioproductsLtd、Cambridge、UK、ビオチンPierce、Rockford、ILおよびコロイド状超常磁性ビーズ直径約50mm、MiltenyiBiotecGmbH、BergischGladbach、Germanyに結合体化した。HermansonBioconjugateTechniquesAcademicPressInc、SanDiego、785頁;Aslamら1998Bioconjugationproteincouplingtechniquesforthebiomedicalsciences、MacmillanReferenceLtd、London、833頁;ならびにKantorらMagneticcellsortingwithcolloidalsuperparamagneticparticles、CellSeparationMethodsandApplications、Recktenwaldsら編、MarcelDekkerInc、NewYork、153173頁。細胞調製物正常な健常なボランティアからのバフィコートを、theInstituteforTransfusionmedicine、HospitalMerheim、Cologne、Germanyから得た。PBMCを、標準的FicollPaquePharmacia、Uppsala、Sweden密度勾配遠心分離によりバフィコートから調製した。末梢血白血球を、等張性塩化アンモニウム緩衝液155mmolLNH4Cl、10mmolLKHCO3および01mMEDTA中での赤血球の溶解によって、バフィコートから調製した。HanselらJImmunolMet145105110。CD4lin血液DCを、本明細書の他の場所に詳細に記載されるような2工程免疫磁気細胞ソーティングMACSにより、PBMCから単離した。Robertら1999;およびMiltenyiらHighgradientmagneticcellsorting、Flowcytometryandcellsorting、Radbruch編、SpringerVerlag、Berlin、218~247頁。簡単には、単球、T細胞およびNK細胞を、CD3クローンBW26456、CD11bクローンM17015115、CD16クローンVEP13に対するmAbを使用し、いくつかの実験においては、B細胞および単球上で発現する不十分にしか規定されていない抗原クローンL179に対するmAbを使用して、除去した。除去した細胞画分から、その後、血液DCを、CD4の生成のために、精製CD14単球を、培地[2mmolLL-グルタミン、10FCSSigma、100mmolLピルビン酸ナトリウムGibcoBRL、100UmlペニシリンGibcoBRLおよび100μgmlストレプトマイシンGibcoBRLを補充した、RPMI1640]中で5×1051×106細胞mlの細胞密度で、500~1000UmlrIL4PeproTech、RockyHill、NJおよび100ngmlrGMCSFPeptoTechの存在下で、加湿5CO2含有雰囲気下で37°Cで7日間培養した。成熟MoDCの生成のために、未成熟MoDCを1回洗浄し、そして20ngmlTNFαの生成のために、精製CD34細胞を、100ngmlrFlt3Ligand、05ngmLrTGFβ1および100ngmlrGMCSFの存在下で、培地中で11日間、細胞密度5×104細胞mlで培養した。新鮮に単離したCD4lin血液DCを、10ngmlrIL3および100ngmlGMCSFの存在下で、培地中で48時間まで、細胞密度5×105~1×106細胞mlで培養した。実施例2血液DCのフローサイトメトリー分析FACScaliburBDBiosciencesを、1色フローサイトメトリー、2色フローサイトメトリー、3色フローサイトメトリーまたは4色フローサイトメトリーのために使用した。5×103~2×105細胞/サンプルのデータを、リスト様式で得、そしてCellQuestソフトウェアBDBiosciencesを使用して分析した。以下のmAbクローン名を、フローサイトメトリーについてのこの研究において使用した:PharMingenSanDiegoCAからのCD1a、CD11a;CLBAmsterdamNetherlandsからのCD5;CD18;CoulterImmunotechMarseillesFranceからのCD58;MiltenyiBiotecGmbHからのCD4;AmcellSunnyvaleCAからのCD36;AncellBayportMNからのCD1c;SouthernBiotechnologyAssociatesBirminghamAlabamaからのポリクローナル抗IgG、抗IgM;JMollForschungszentrumKarlsruheKarlsruheGermanyからのCD44;CaltagLaboratoriesBurlingameCAからのCD20;EButcherDepartmentofPathologyStanfordUniversityStanfordCAからの抗CLA;JPKinetMolecularAllergyandImmunologySectionNationalInstituteofAllergyandInfectiousDiseasesNationalInstitutesofHealthRockvilleMarylandからの抗FcεRI;MRParwareschDepartmentofPathologyChristianAlbrechtsUniversityKielGermanyからのCD11c;DNHartMaterMedicalResearchInstituteMaterMisericordiaeHospitalsSouthBrisbaneQueenslandAustraliaからのCMRF44およびCMRF56;ならびにSigmaからの抗HLAA、抗HLAB、抗HLACDCをゲートオンし得るように、CD123FITCおよびHLADRCy5で対比染色した。実施例4エンドサイトーシスアッセイ血液DCサブセットのエンドサイトーシスを評価するために、精製したCD1c、BDCA2およびBDCA3血液DC、ならびにコントロールとして精製したCD3T細胞を、37°Cで、1mgmlLuciferイエローLYを含む培地中で、0分間、15分間、45分間、および75分間インキュベートした。その後、細胞を氷冷PBSEDTABSA中で3回洗浄し、そしてフローサイトメトリーによって分析した。実施例5単離された血液DCの非培養血液細胞との反応性表1に列挙するmAbの血液細胞との反応性によって、これらを以下の4つの群に分割し得る:1AC144、AD513A11およびADB4B8;2AD517F6;3AD55E8およびAD514H12;ならびに4AD58E7。第1群のmAbAC144、AD513A11およびADB4B8は、全てのPBMCの約041±017n=10を染色する図1A。前方向散乱シグナルと側方向散乱シグナルとのドットプロットにおいて、これらの希少な細胞は、小さな休止リンパ球と単球との間に位置する均一な細胞集団を構成する図1B。従って、これらの希少な細胞は、αβT細胞レセプターTCRαβ、CD14、CD19およびCD56それぞれT細胞、単球、B細胞およびNK細胞において発現される系列マーカーを発現しない図1A。高度に精製された血液DC95より多いHLADR、TCRαβ、CD14、CD19およびCD56の染色は、第1群のmAbが、CD11cCD123bright血液DCと反応性である図2がCD11c血液DCとは反応性ではないことを明らかにする。これらの全てが単一の抗原と反応するか否かを分析するために、本発明者らは、二色染色および交差阻害研究を実施した。その結果は、この群の全てのmAbが、同じ抗原の単一のエピトープを認識することを示す。この抗原を、BDCA2と命名した。図3に示すように、第2群のmAbAD517F6は、AC144第1群のBDCA2特異的mAbの1つと同じPBMCの間で細胞を認識する。それにもかかわらず、AD517F6は、BDCA2とは異なる抗原を染色する。このことは、AD517F6がBDCA2の抗BDCA2mAb媒介インターナリゼーションの前後で等強度の表面染色を示した同時インターナリゼーション実験によって、ならびにAC144mAbおよびAD517F6mAbが全体的に異なる染色パターンを示した培養後のDCの染色によって、明らかに実証された図4。AD517F6によって認識される抗原を、BDCA4と命名した。これは、ニューロピリン-1neuropilin1と同一である。Heら1997。第3群のmAbAD55E8およびAD514H12は、全てのPBMCの約004±001n=10を染色する図lA。散乱シグナル図1BならびにTCRαβ、CD14、CD19およびCD56に対するmAbでの対比染色図1Aによれば、これらの細胞は、リンパ球および単球とは異なり、そして第1群の抗体によって認識される細胞よりわずかに大きい。従って、血液DCの染色は、異なるサブセットが、AD55E8およびAD514H12によって認識されることすなわち、CD11cdimCD123血液DCを示す図2。二色染色、交差ブロッキング研究および同時キャッピング実験によれば、両方のmAbが、同じ抗原の、空間的に関連していない2つのエピトープを認識するようである。本発明者らは、この抗原をBDCA3と命名した。第4の群mAbAD58E7は、239±096n=10までの分画されていないPBMCと反応する図1A。系列マーカーTCRαβ、CD14、およびCD19の光散乱分析図1Bおよび対比染色は、mAbが、T細胞および単球とは反応性ではなく、小さな休止CD19B細胞の主要なサブセットと反応性であることを明らかにする。精製したDCの染色は、AD58E7が、B細胞に加えて、第1群および第2群のmAbによって認識されるサブセットとは異なる、血液DCの第3のサブセットすなわち、CD11cbrightCD123dim血液DCを染色することを示す。かなりの割合のCD11CbrightCD123dim血液DCが、CD56を発現する以下を参照のこと。この理由により、いくらかのAD58E7反応性PBMCは、CD56図1Aを染色する。AD58E7は、精製したNK細胞に対して反応性ではない。AD58E7によって認識される抗原を、最初は、BDCA1と命名した。なぜならこれは、新たな抗原であるようであったからである。しかし、AD58E7はCD1cmAbM241のMOLT4細胞に対する結合を完全にブロックすることが、後に明らかとなった図6。従って、AD58E7によって認識される抗原は、CD1cである。表1に列挙されるmAbのいずれも、顆粒球、血小板、赤血球、精製した好塩基性細胞および精製したCD34造血前駆細胞と反応性ではない。実施例6培養された血液DC、MoDCおよびCD34DCにおける、BDCA2、BDCA3およびBDCA4の発現新たに単離されたプラスマ細胞様CD11c血液DCは、生存および変異に関してIL3に依存するが、一方でCD11c血液DCの生存および変異は、サイトカイン依存性がはるかに低い。CD11cおよびCD11c血液DCにおける、BDCA2、BDCA3およびBDCA4の発現を、rIL3の存在下での全血液DCの培養の0時間、1時間、3時間、6時間、9時間、12時間、18時間、24時間、36時間、および48時間後に、分析した。この結果を図4に示す。BDCA2の発現は、CD11c血液DCにおいて、48時間以内に完全にダウンレギュレーションされる。対照的に、BDCA4は、CD11c血液DCにおいてなおさらにアップレギュレートされ、そしてBDCA2とは異なり、これはまた、全てでなければ大部分のCD11cDCにおいて、高レベルに発現される。BDCA3の発現は、CD11c血液DCにおいて迅速に誘導され、24時間後に最も高い発現レベルに達する。その後、BDCA3発現は、再度ダウンレギュレートされるようである。CD11c血液DCにおけるBDCA3の発現の分析は、BDCA3CD11cbrightおよびBDCA3CD11cdimサブセットが培養の開始時に存在するという事実によって、複雑になる。BDCA3の発現は、BDCA3CD11cdim血液DC集団における培養の少なくとも6時間まで変化しないままであり、そしてBDCA3CD11cbright血液DCサブセットの少なくともいくらかの細胞において、3時間以内で誘導される。MoDCおよびCD34DCにおける、BDCA2、BDCA3およびBDCA4の発現機能的CD1aDCを、エキソビボで、単球およびCD34造血前駆細胞から生成した。Benderら;Picklら;Romaniら;Sallustoら;Cauxら;Mackensenら;Szabolcsら;Herbstら;deWynterら;およびStrunkら。図7は、MoDCこれらは、rGMCSFの存在下で単球を7日間培養することによって生成したならびにIL4およびCD34DCrFlt3リガンド、rTGFβ1、rTNFα、rSCFおよびrGMCSFの存在下でCD34造血前駆細胞を11日間培養することによって生成したが、CD1a、CD1cおよびBDCA4を発現するが、BDCA2もBDCA3もいずれも発現しないことを示す。実施例7抗BDCA2mAb媒介架橋の際のBDCA2のインターナリゼーション抗DCA2mAb標識BDCA2細胞の37°CでのインキュベーションがmAbインターナリゼーションを生じる可能性を、FITC結合体化AC144mAbIgG1でのPBMCの染色によって、検討した。次いで、37°Cでのインキュベーションに続いて、残っている細胞表面関連mAbを、PE結合体化ラット抗マウスIgG1mAbでの染色によって検出した。図8に示すように、細胞を37°Cでインキュベートした場合に、ラット抗マウスIgG1PE染色の強度は、バックグラウンドレベルまで非常に迅速に低下する。対照的に、AC144FITC染色の強度は、約50のレベルまで一時的にのみ低下するが、その後、ほぼインキュベーション前のレベルまで戻る。このことは、BDCA2が、レセプター媒介エンドサイトーシスと類似の速度論で、抗BDCA2mAb架橋の際にインターナリゼーションされることを実証する。AC144FITC染色強度の一時的な低下は、恐らく、エンドサイトーシス前のBDCA2抗BDCA2mAb複合体のパッチングおよびキャッピングに起因する。実施例8単離されたCD1c、BDCA2およびBDCA3血液DCの形態CD1c、BDCA2およびBDCA3細胞を、PE結合体化一次mAbおよび抗PEAb結合体化マイクロビーズで間接的に磁気によって標識すること、ならびに標識した細胞をMACSによって濃縮することによって、PBMCから単離した図9。細胞遠心分離スライドのメイ-グリュンヴァルト/ギームザ染色図9の際に、新たに単離されたBDCA2発現細胞は、血液および扁桃由来のCD11cCD4linDCの代表的なリンパプラスマ細胞様形態を示す:すなわち、楕円形または湾入した核を有する、中程度の大きさの円形細胞。対照的に、新たに単離されたCD1c血液DCと新たに単離されたBDCA3血液DCとの両方が、血液または扁桃由来のCD11cCD4linDCの代表的な形態学的特性を示す:すなわち、短い細胞プロセスおよびさらに過度に小裂片に分かれた核を有する、あまり円形ではない細胞。CD1cBDCに加えて、小さな休止リンパ球の代表的な形態を有するCD1cB細胞は、単離されたCD1cPBMCの細胞遠心分離スライドにおいて、見られ得る。高度に純粋なCD1cBDCは、CD1c細胞の濃縮の前に、CD19B細胞が磁気的にPBMCから除去された場合に、得られる。実施例9CD1c、BDCA2およびBDCA3血液DCの表面表現型BDCA2およびBDCA3血液DCの表現型を、PE結合体化mAbおよびFITC結合体化mAbを用いる二色免疫蛍光によって分析した。CD1c血液DCの分析のために、B細胞の排除のために、CD19Cy5を使用して、三色染色を実施した。表現型分析の結果を表2に示し、そして以下のように要約し得る:血液DCサブセットのいずれも、CD1a、CD8、CD15、CD16、CD19、CD20、CD23、CD25、CD27、CD34、CD61、CD69、CD71、CD77、CD80、CD83、グリコホリンAJExpMed182389400;ならびにSallustoらJImmunol2827602769。図10に示すように、未熟MoDCおよび成熟MoDCとは対照的に、血液DCサブセットのいずれも、この培養期間の後に、CD1aを発現しない。しかし、同時刺激分子であるCD80およびCD86、DC活性化抗原CD83Zhouら;ZhouらJImmunol149735742;およびZhouらProcNatlAcadSciUSA9325882592、ならびにHLADR分子は、培養の際に、3つ全ての血液DCサブセットにおいて、成熟MoDCと比較して類似のレベルまで、アップレギュレートされる。これらの結果は、3つ全ての血液DCサブセットをIL3、IL4およびGMCSFで補充した培地中で2日間培養した別の実験と有意には異ならなかった。血液および扁桃由来のCD11cCD4linDCに関して以前に示されたように、BDCA2血液DCは、IL3を含まない培地中で培養される場合に、急速に死滅する。実施例11新たに単離されたCD1c、BDCA2およびBDCA3血液DCのエンドサイトーシス能力精製したCD1c、BDCA2およびBDCA3血液DC、ならびにコントロールとして、精製したCD3T細胞のエンドサイトーシス能力を、これらの細胞を37°Cで、LYの存在下で培養し、そして種々の時間の後のLYの取込みをフローサイトメトリーによって分析することによって、試験した。図11に示すように、精製したCD3T細胞とは異なり、精製したCD1c血液DC、BDCA3血液DC、およびいくらかの程度まではBDCA2血液DCもまた、LYをエンドサイトーシスする能力を有する。類似の結果が、FITC-デキストランを使用して得られた。全ての血液DC集団のエンドサイトーシス能力は、MoDCと比較した場合に、ずっと低い。BDCA4のアミノ酸配列を、この抗原をAD517F6mAbAD517F6アフィニティーカラムで精製し、そしてこの精製した抗原をMALDITOF質量分析によって分析することによって、得た。BDCA4は、ニューロピリン-1と同一である。Heら1997。実施例12BDCA2の抗BDCA2モノクローナル抗体AC144との連結は、細胞内Ca2移動を誘導するが、BDCA4ニューロピリン-1の抗BDCA4との連結は、Ca2移動を誘導しない材料および方法:BDCA2BDCA4BDCおよびBDCA2でトランスフェクトしたかまたはトランスフェクトしていないU937細胞における、細胞質ゾルカルシウムの測定。BDCA2BDCA4血液DCおよびBDCA2でトランスフェクトしたかまたはトランスフェクトしていないU937細胞を、Indo1AMSigmaStLouisMOとともに、ValituttiらEurJImmunol23790795によって記載されるように、装填した。抗BDCA2AC144、IgG1または抗BDCA4AD517F6、IgG1mAbを、それぞれ新たに単離されたBDCA2BDCA4BDCおよびBDCA2でトランスフェクトされたかまたはトランスフェクトされていないU937細胞に添加し、続いて架橋剤としてラット抗マウスIgG1mAbPharmacolTher603962;SiegalらScience28418351837;CellaらNatureMed5919923。この理由によって、これらはまた、天然I型インターフェロン産生細胞NIPCと呼ばれてきた。プラスマ細胞様DCは、BDCA2およびBDCA4を発現する。図14に示すように、プラスマ細胞様DCにおける表面BDCA2の、特定のmAbとの連結、続いて二次架橋mAbラット抗マウスIgG1、X56との連結は、インフルエンザウイルス株PR85HAUmlでの刺激に応答して、血液または扁桃由来の、免疫磁気的に精製したプラスマ細胞様BDCA2BDCA4DCによって、I型インターフェロンの分泌を阻害する。抗BDCA2、インフルエンザウイルスおよび架橋mAbを含む培養物における、I型インターフェロン産生のレベル図14、AC144RamG1FLUは、インフルエンザウイルス単独図14、FLUまたはアイソタイプコントロールmAb抗サイトケラチンmAbCK311D5、IgG1、インフルエンザウイルスおよび架橋mAb図14、CK3RamG1FLUを含む培養物よりずっと低い。対照的に、プラスマ細胞様DCにおける表面BDCA4の、特定のmAbとの連結、続いて二次架橋mAbラット抗マウスIgG1、X56との連結は、血液または扁桃由来の、免疫磁気的に精製したプラスマ細胞様BDCA2BDCA4DCによって、インフルエンザウイルス株PR85HAUmlでの刺激に応答して、I型インターフェロンの分泌を阻害しない。抗BDCA4、インフルエンザウイルスおよび架橋mAbを含む培養物における、I型インターフェロン産生のレベル図14、17F6RamG1FLUは、アイソタイプコントロールmAb抗サイトケラチンmAbCK311D5、IgG1、インフルエンザウイルスおよび架橋mAb図14、CK3RamG1FLUを含む培養物におけるレベルと同じである。材料および方法:BDCA2発現およびBDCA4発現のプラスマ細胞様plasmacytoidDCを、PBMC図14Aまたは扁桃細胞図14Bから、抗BDCA4AD517F6結合体化微小ビーズを用いた直接的な磁気標識およびMACSによる標識細胞の富化によって単離した。単離したBDCA2発現およびBDCA4発現のプラスマ細胞様DCを、24時間培地中で、aIL3単独図14、コントロール;bIL3、抗BDCA2mAbAC144、IgG1およびラット抗マウスIgG1mAb図14、AC144RamGl;cIL3、抗BDCA2mAbAC144、IgG1、ラット抗マウスIgG1mAb、およびインフルエンザウイルス菌株PR8図14、AC144RamGlFLU;dIL3およびインフルエンザウイルス菌株PR8図14、FLU;eIL3、抗サイトケラチンmAbCK311D5、IgG1、ラット抗マウスIgG1mAb、およびインフルエンザウイルス菌株PR8図14、CK3RamGlFLU;およびfIL3、抗BDCA4mAbAD517F6、ラット抗マウスIgG1mAb、およびインフルエンザウイルス菌株PR8図14、17F6RamGlFLUの存在下で培養した。培地上清中の分泌I型インターフェロンを、標準IFNα曲線を参照して、Daudi細胞増殖の阻害を評価することによって測定したNedermanらBiologicals182934。BDCA2BDCA4プラスマ細胞様DCによるI型インターフェロン産生の阻害に関して、増加したレベルの循環しているI型インターフェロンおよび増加したレベルのI型インターフェロン誘導因子抗DNA抗体およびDNAの複合体のようなものは、SLE患者に見出され、疾患の活性と相関している。さらに、I型インターフェロンで処置された非自己免疫障害を有する患者は、頻繁に自己抗体を発生し、そして時々SLEを発生する。Ronnblomらからのいくつかの論文ClinExpImmunol115196202;JImmunol16363066313;およびJImmunol16535193526は、患者由来のI型インターフェロン誘導因子が、健康なドナー由来のPBMCにおけるI型インターフェロンの分泌を誘導し、そしてこれらが、選択的に天然のI型インターフェロン産生細胞NIPC=プラズマ細胞様DCを活性化することを示した。本明細書中に示される、BDCA2の連結がウイルス刺激によって誘導されるI型インターフェロンの産生を抑制するという知見は、BDCA2に対する結合が、単にBDCA2の連結によってだけではなく、NIPC=BDCA2BDCA4プラスマ細胞様DCを枯渇することによってもまた疾患を処置するために、適用され得ることを示す。従って、本発明は、NIPCのインビボ、インビトロ、およびエキソビボ枯渇をさらに含む。このような枯渇は、自己免疫疾患の処置または予防における使用に適切である。図14は、BDCA4ではなくBDCA2と特定のmAbとの連結、続く、2次架橋mAbとの連結が、インフルエンザウイルス菌株PR8を用いた刺激に応答した血液または扁桃由来のプラスマ細胞様BDCA2BDCA4DCによる、I型インターフェロンの分泌を阻害することを示す。血液Aまたは扁桃B由来のプラスマ細胞様BDCA2BDCA4DCを、IL3単独コントロール;IL3、抗BDCA2mAbおよびラット抗マウスIgG1mAbAC144RamGl;IL3、抗BDCA2mAb、ラット抗マウスIgG1mAb、およびインフルエンザウイルス菌株PR8AC144RamGlFLU;IL3およびインフルエンザウイルス菌株PR8FLU;IL3、抗サイトケラチンmAb、ラット抗マウスIgG1mAb、およびインフルエンザウイルス菌株PR8CK3RamGlFLU;IL3、抗BDCA4mAb、ラット抗マウスIgG1mAb、およびインフルエンザウイルス菌株PR817F6RamGlFLUの存在下で24時間培養した。培養上清中の分泌されたI型インターフェロンUmlを、標準I型インターフェロン曲線を参照してバイオアッセイによって測定した。実施例14BDCA2は、リガンドをエンドサイトーシスし得るだけでなく、リガンドを抗原プロセシングおよびローディング区画に送達して、リガンドをCD4クラスII制限T細胞に対して提示し得る材料および方法BDCA2発現およびBDCA4発現のプラスマ細胞様DCを、PBMCから、抗BDCA4AD517F6結合体化微小ビーズを用いた直接的な磁気標識およびMACSによる標識細胞の富化によって単離した。単離したBDCA2発現およびBDCA4発現のプラスマ細胞様DCを、96ウェル平底マイクロプレート中IgG1mAbs02μgmlの存在下で、B13T細胞クローンの4×104細胞/ウェルと共に共培養したLanzavecchiaらJExpMed167345352。アッセイに使用したmAbは以下であった:AC144抗BDCA2、IgG1、ZM38抗ILT3、IgG1およびCK311D5抗サイトケラチン、IgG1。48時間後、培養物を、3Hチミジン1μCi/ウェルを用いてパルスし、そして取り込まれた放射能を、さらに16時間後に測定した。3Hチミジン取り込みcpmを、培養物中の単離BDCA2発現およびBDCA4発現プラスマ細胞様DCの数に対してプロットした図15。図15は、単離されたBDCA2発現およびBDCA4発現プラスマ細胞様DCによる、マウスIgG1に特異的なT細胞クローンに対する抗BDCA2mAbAC144、IgG1の提示を示す。BDCA2BDCA4プラスマ細胞様DCは、抗ILT3mAbZM38、IgG1、黒三角および抗サイトケラチンmAbCK311D5、IgG1、黒丸よりもはるかに効果的に、T細胞に対して抗BDCA2mAbAC144、IgG1、黒四角を提示した。抗BDCA2mAbAC144、IgG1標識BDCA2BDCA4プラスマ細胞様DCの37°Cでのインキュベーションは、細胞表面上で抗BDCA2mAbBDCA2複合体の極めて急速なインターナリゼーションを生じた図8を参照のこと。ここで、抗BDCA2mAbAC144、IgG1は抗原プロセシングおよびローディング区画にアクセスし、そして抗体由来のペプチドは、マウスIgG1ペプチドエピトープに特異的なCD4クラスII制限T細胞クローンB13に効果的に提示されることを示す。抗BDCA2mAbの提示を、IgG1mAbリガンドをプロセシングおよびペプチドローディング区画に標的化し得ることが公知のレセプターILT3に結合するIgG1mAbの提示、および、BDCA2BDCA4プラスマ細胞様DC上の細胞表面分子に結合しないが、流体相を占め得るIgG1mAb抗サイトケラチンmAbCK311D5、IgG1の提示に対して比較した。図15に示されるように、BDCA2BDCA4プラスマ細胞様DCは、抗ILT3mAbおよび抗サイトケラチンmAbよりもはるかに効果的に、T細胞に対して抗BDCA2mAbAC144を提示した。実施例15扁桃細胞において、BDCA2の発現は、CD123T細胞-ゾーン関連プラスマ細胞様DCに対して制限され、一方BDCA4はまた、数個の他の細胞に対して低いレベルで発現され得る図16は、扁桃プラスマ細胞様CD123DCに対するBDCA2およびBDCA4の発現を示す。それぞれ、BDCA2に対するFITC結合体化mAbAC144ならびにCD123およびBDCA4に対するPE結合体化mAbAD517F6を用いた扁桃細胞の2色染色を示す。BDCA2の発現がCD123brightプラスマ細胞様DCに対して制限され、一方、BDCA4がまた数個の他の細胞に対して低いレベルで発現されることに注意する。実施例16BDCA4mAbAD517F6は、ニューロピリン1を認識するニューロピリン1は、神経細胞ガイダンスを媒介するコラプシン/セマホリンsemaphorinファミリーに対するレセプターである。ニューロピリン1はまた、血管内皮増殖因子に対するアイソフォーム特異的レセプターとして内皮細胞および腫瘍細胞によって発現される。しかし、以前は、ニューロピリン1が血液および扁桃のプラスマ細胞様DCに対して発現されること、およびニューロピリン1が少なくとも新鮮な非培養血液においてプラスマ細胞様DCに対して優れたマーカーを示すことは、知られていなかった。材料および方法ニューロピリン1を、抗BDCA4mAbAD517F6抗NRP1を用いて、トランスフェクトされていないPAE細胞Pおよびニューロピリン1をトランスフェクトしたPEA細胞NPの細胞溶解物から免疫沈降したSokerらCell92735745。沈降したタンパク質を、SDSPAGEおよびBDCA4特異的mAbAD517F6MLまたはニューロピリン1特異的mAbShaySoker、ChildrensHospital、Boston、MASよりを用いるウエスタンブロットにより分析した。図17は、ニューロピリン1を、ニューロピリン1をトランスフェクトしたPAE細胞NPの細胞溶解物から、抗BDCA4mAbAD517F6抗NRP1を用いて免疫沈降したが、トランスフェクトされていないPAE細胞Pでは免疫沈降されなかったことを示す。沈降したタンパク質を、SDSPAGEおよびBDCA4特異的mAbAD517F6MLまたはニューロピリン1特異的mAbNatureMed21267;NatureMed21096103;GabrilovichらClinCancerRes5296370;OhmらJImmunol16332608;OyamaらJImmunol160122432;GabrilovichらBlood92415066;IshidaらJImmunol161484251は、大きなパーセンテージの腫瘍によって産生されるVEGFが、インビボにおいてDC生成および機能を減少したことを示す。これらのDCに対する効果がニューロピリン1BDCA4によって媒介されるか否かは明らかではないが、本発明はニューロピリン1に媒介されるDCの機能調節を含む。実施例17ポリICでの刺激に応答した精製BDCA2BDCA4BDCによるI型インターフェロンの産生は、抗BDCA2mAbを用いてBDCA2を誘発することによって阻害されるCD4CD123brightCD11cプラスマ細胞様DCは、エンベロープウイルス、細菌および腫瘍細胞に応答した主要なI型インターフェロンインデューサーであることが示された。FitzgeraldBocarslyらPharmacolTher603962;SiegalらScience28418351837;CellaらNatureMed5919923。こういうわけで、これらはまた、天然I型インターフェロン産生細胞NIPCと呼ばれる。プラスマ細胞様DCは、BDCA2およびBDCA4を発現する。図19に示されるように、プラスマ細胞様DC上での表面BDCA2と特異的mAbとの連結、続く2次架橋mAbヤギ抗マウスIgGとの連結は、ポリI:Cでの刺激に応答した血液または扁桃から免疫磁気的に精製されたプラスマ細胞様BDCA2BDCA4DCによるIFNαの分泌を阻害する。抗BDCA2、ポリI:Cおよび架橋mAbを用いた培養物中のIFNαの産生レベル図18、AC144ヤギ抗マウスIgGポリICは、マウスIgG1、ポリICおよび架橋mABを用いた培養物図18、マウスIgG1ヤギ抗マウスIgGポリICと同様に低かった。材料および方法CD11cCD123brightプラスマ細胞様DCを、BDCA4微小ビーズを用いてヒト末梢血単核球から分離した。CD11cC123brightプラスマ細胞様DC1×106細胞mlを、10μgmlのAC144mAbまたはマウスIgG1mAbCF6B、抗TPOを用いて、RPMI、10FCS、l0mMHEPES、50μM2ME、20μgmlジェネティシン中、37°Cで30分間インキュベートした。20μgmlのヤギ抗マウスIgGChemiconInternationalを添加し、そして細胞を、再び37°Cで30分間インキュベートした。これらの細胞を、20μgのポリICSigmaの有りまたは無しで、37°Cで24時間培養した。細胞上清を収集し、そしてIFN-α濃度を、ELISAEndogenによって決定した。アッセイの感度は、3pgmlである。図18、BDCA4ではなくBDCA2と特定のmAbとの連結、続く、2次架橋mAbとの連結が、ポリICを用いた刺激に応答した血液または扁桃由来のプラスマ細胞様BDCA2BDCA4DCによる、IFN-αの分泌を阻害することを示す。血液由来のプラスマ細胞様BDCA2BDCA4DCを、10μgmlのAC144mAb2および4またはマウスIgG1mAbCF6B、抗TPO、1および3を用いて37°Cで30分間培養した。20μgのヤギ抗マウスIgGを添加し、そしてこの細胞をさらに37°Cで30分間インキュベートした。これらの細胞を、20μgのポリICの有り3および4または無し1および2で、37°Cで24時間培養した。培養上清を収集し、そしてIFN-α濃度を、ELISAによって決定した。実施例18種々の組織および精製血球集団におけるRTPCRによるBDCA2mRNAの発現分析核酸配列およびアミノ酸配列BDCA2をコードするcDNAを、COS細胞における発現クローニングによって得た。図5は、BDCA2のアミノ酸配列発現される6個のエキソンを有するアイソフォームを示す。BDCA2は、C型レクチンII型膜タンパク質である。このようなレクチンは、例えば、BatesらJImmunol16319731983に記載される。既知のC型レクチンに対するBDCA2の比較を、実施例20に示す。図19は、BDCA2cDNAの存在に関する、Clonetechからのヒトの複数組織のcDNAパネルの分析レーン1:心臓;レーン2:脳;レーン3:胎盤;レーン4:肺;レーン5:肝臓;レーン6:骨格筋;レーン7:腎臓;レーン8:膵臓;レーン9:脾臓;レーン10:胸腺;レーン11:精巣;レーン12:卵巣;レーン13:小腸;レーン14:リンパ節;レーン15:骨髄;レーン16:胎児肝臓;レーン17:扁桃、および異なる集団の白血球から調製されたcDNAの分析レーン18:T細胞;レーン19:B細胞;レーン20:NK細胞;レーン21:単球;レーン22:CD11cbrightCD123低DC;レーン23CD11cCD123brightプラスマ細胞様BDCを示す。全てのcDNAをいくつかの異なるハウスキーピング遺伝子グリセルアルデヒド-3リン酸デヒドロゲナーゼ、ホスホリパーゼA2、α-チューブリン、およびβ-アクチンのmRNA発現レベルに対して標準化した。標準化は、組織特異性および相対的な標的mRNAの量の正確な評価を確実にする。同じ量のcDNA約50pgを、各RTPCR反応に使用した。RTPCR反応を、BDCA2に特異的なプライマー順方向:5-TTGAAAGAACCACACCCCGAAAGT配列番号7および逆方向:5-TAGCTTTCTACAACGGTGGATGCC配列番号8ならびに上記の4つのハウスキーピング遺伝子に対するプライマーCLONTECHを用いて、AdvanTaqPlusDNAポリメラーゼCLONTECHを使用して実施した。サイクル条件を以下のようにした:94°Cで30秒および68°Cで2分。34サイクルをBDCA2に関して使用し、そして38サイクルをグリセルアルデヒド-3リン酸デヒドロゲナーゼG3PDHに関して使用した。BDCA2mRNAシグナルを、CD11cCD123brightプラスマ細胞様DCのみに検出することに注意する。さらに4回のPCRサイクルをBDCA2cDNAの増幅に対して使用した場合34サイクルの代わりに38サイクル、弱いシグナルをまた、膵臓、精巣、卵巣、骨髄および扁桃に検出した。精巣由来のcDNAを用いて38PCRサイクル、より短い転写物スプライス改変体のシグナルが、CD11cCD123brightプラスマ細胞様DC由来のシグナルに対して比較した場合より顕著であり、そして全長転写物由来のシグナルは、実際には、さらにより多くのPCRサイクルでのみ検出可能であった。実施例19BDCA2およびBDCA2スプライス改変体のエキソン/イントロン構造BDCA2スプライス改変体に関する情報を、開始コドンの前のmRNA配列に相補的なプライマー順方向プライマー:5-TTGAAAGAACCACACCCCGAAAGT配列番号7および終止コドンの後ろのmRNA配列に相補的なプライマー逆方向:5-TAGCTTTCTACAACGGTGGATGCC配列番号8を用いたプラスマ細胞様DC由来のRTPCR増幅、生じるフラグメントのプラスミドへのクローニング、および挿入物の配列決定によって得た。結果を図20に示す。比較に関して、マウス樹状細胞関連C型レクチン2デクチン-2Dectin2のスプライス改変体を、図21に示す。図22は、示される推定イントロンの位置と共に、BDCA2とマウスデクチン-2とのmRNA配列のアラインメントを示す。表5は、エキソンのパラメーターを示す。イントロンの位置は、HomosapiensChromosome12CloneRP11277J24WorkingDraftSequence21unorderedpiecesGenBank登録番号AC006517および転写物のスプライシングに関する規則に基づく。BDCA2のイントロン/エキソン構造は、デクチンのイントロン/エキソン構造に類似する。少なくとも4個のBDCA2スプライス改変体が生成される。6個のエキソン全てを有するタンパク質をコードするmRNA;エキソン1、3、4、5、および6を含むタンパク質をコードするmRNA;エキソン1、2、4、5、および6を含むタンパク質をコードするmRNA、ならびにエキソン1、2、3、5、および6を含むタンパク質をコードするmRNAが存在する。実施例20BDCA2相同性およびタンパク質ドメインヒトBDCA2、ヒトDCIR樹状細胞免疫レセプター、およびマウスデクチン-2樹状細胞関連C型レクチン2のアミノ酸配列のアラインメントを、図23に示す。ヒトDCIRGenBank登録番号AJ133532は、約51のaaが191aaのストレッチにわたって同一である、ヒト分子間でBDCA2に対する最も高い相同性を有する分子であるBatesらJImmunol1631973を参照のこと。マウスデクチン-2GenBank登録番号AF240357は、約51のaaが211aaのストレッチにわたって同一である、おそらくヒトBDCA2のホモログであるAriizumiらJBiolChem1611957;WO9828332;PCTUS9723761;および米国特許第6046158号を参照のこと。BDCA2213aa、DCIR237aaおよびDectin2209aaは全て、カルシウム依存C型レクチンファミリーのII型膜糖タンパク質である。各分子は、推定細胞質ドメインBDCA2aa121;DCIRaa144;デクチン-2:aa117、推定膜貫通ドメインBDCA2aa2241;DCIR4469;デクチン-2:1840、および推定細胞外ドメインBDCA2aa42213;DCIR70237;デクチン-2:40209を含む。推定細胞外ドメイン内において、各分子は、COOH-末端に単一炭水化物認識ドメインCRDを含むBDCA2aa83206;DCIR106230;デクチン-2:79202。図23は、ヒトBDCA2、ヒトDCIRおよびマウスデクチン-2のアラインメントを示す。PROSITEデータベースを用いて見いだされる推定タンパク質ドメイン/モチーフを、表6に示す。BDCA2は、3つの推定N-グリコシル化部位を含みaa110113NCSV;aa137140NSSY;aa164167NVTF、一方、デクチン-2aa131134NESLおよびDCIRaa185188NESSは、1つの推定N-グリコシル化部位のみを含む。BDCA2およびデクチン-2の全ての推定リン酸化部位は、推定細胞外ドメインに位置する。従って、これらは細胞内キナーゼによってリン酸化されるようにはあまりならないようである。ナチュラルキラー遺伝子複合体にコードされる多くのC型レクチン例えば、CD94、Ly49、およびNKG2と同様に、DCIRは、コンセンサス免疫レセプターチロシンベースの阻害モチーフITIMモチーフ;IVXYXXを細胞質ドメインaa510ITYAEVに含む。興味深いことに、このITIMモチーフは、BDCA2およびデクチン-2の相対的に短い細胞質テイルBDCA221aa;デクチン-2:17aaには見出されない。実施例21BDCA3タンパク質分析BDCA3発現HDMYZ細胞を、BDCA3発現をアップレギュレートするために10ngmlPMASigmaおよび05mgmlイオノマイシンを用いて24時間刺激した。3×107個のPMAイオノマイシン刺激HDMYZ細胞を、1mgmlSulfoNHSLCビオチンPierceを用いた15分間4°Cでのインキュベーションによって表面ビオチン化し、そして2回洗浄した。細胞を、10スクロースおよびプロテイナーゼインヒビターフェニルメチルスルホニルフルオライド、ペプスタチンA、ロイペプチン、アプロチニンServaよりを補充した50mMTrisHClpH80中に再懸濁し、そして0°Cで超音波処理した5×4秒、70アウトプット。超音波処理した細胞を、900×g、4°Cで10分間遠心分離して、核およびインタクトな細胞を除去した。この上清を、30000×g、4°Cで2時間遠心分離して、精製細胞膜を得た。膜を、プロテイナーゼインヒビターおよび1NP40を補充した50mMTrisHClpH80、150mMNaCl中で1時間0°Cでインキュベートすることによって溶解した。不溶性膜フラグメントを、30000×g、4°Cで遠心分離することによって除去した。上清に対して、MnCl2およびCaCl2を、各々1mMの終濃度で添加した。溶解物を、ConASepharoseカラム1ml上で吸着させ、そして結合タンパク質を、10mlの溶出緩衝液05MDマンノース、20mMTrisHCIpH74、05MNaCl、1NP40を用いて溶出し、そしてCetriprep-10遠心分離濃縮器Amiconを用いて1mlの容積に濃縮した。タンパク質を、150μlの抗NIPmAb結合体化MicroBeadsMiltenyiBiotecを用いた30分間、4°Cでのインキュベート、およびμMACSカラム分離によって、予備切断した。BDCA3の特異的な免疫沈降に関して、タンパク質を、2μgのNIP結合体化BDCA3特異的mAbAD514H12IgG1、または特異性のコントロールのために一次試薬として2μgのNIP結合体化CD19特異的mAbSJ25C1IgG1を用いるかのいずれかで14時間4°Cでインキュベートし、そして二次試薬として抗NIPmAb結合体化MicroBeadsを用いて3時間4°Cでインキュベートした。沈降したタンパク質を、μMACSカラム分離によって単離した。保持されたタンパク質を、DTTを含む70μlのSDSPAGE緩衝液を用いて溶出した。沈降されたタンパク質を、SDS-PAGE4~12およびストレプトアビジン-ペルオキシダーゼを用いたウエスタンブロティングによって分析した。図24の結果は、BDCA3特異的mAbAD514H12が、HDMYZ細胞から約100kDの細胞表面タンパク質を特異的に免疫沈降することを示す。従って、BDCA3は、見かけ上100kDの分子量を有する。上述の本発明は、明確さおよび理解のために例示および実施例によっていくらか詳細に記載されているが、特定の変化および改変が実施され得ることは当業者に明らかである。従って、説明および実施例は、本発明の範囲の制限として解釈されるべきではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって線引きされる。"