"hTRAILタンパク質配列配列番号16の機能的断片であって、hTRAIL95よりも小さくない位置にあるアミノ酸で始まる断片、または70以上の配列同一性を有する前記機能的断片のホモログであるドメインa;および免疫賦活性エフェクターペプチド配列であるドメインbを含み、ドメインbの配列が、ドメインaのC末端またはN末端に付加している、融合タンパク質。ドメインaが、hTRAIL95からhTRAIL122までの範囲両端を含むのアミノ酸で始まり、hTRAIL281のアミノ酸で終わるhTRAILタンパク質配列配列番号16の断片を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。ドメインaが、95、116、120、121または122の位置のアミノ酸で始まるhTRAIL114-281配列番号16の断片からなる群から選択される、請求項1または2に記載の融合タンパク質。ドメインbが、―配列番号17のインターフェロンアルファ2bの断片;―配列番号18のインターフェロンガンマの断片;―配列番号19のインターフェロンガンマの偽二量体;―配列番号46のインターフェロンアルファ2bの偽二量体;―配列番号47のインターフェロンアルファのコンセンサス配列からなる群から選択される、請求項1~3のいずれか一項に記載の融合タンパク質。融合タンパク質が、ドメインaとドメインbとの間に、メタロメタロプロテアーゼMMPにより認識される配列、ウロキナーゼuPAにより認識される配列およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、プロテアーゼ切断部位を含むドメインcを少なくとも1つ包含する、請求項1~4のいずれか一項に記載の融合タンパク質。メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列が配列番号20であり、ウロキナーゼuPAにより認識される配列が配列番号21である、請求項5に記載の融合タンパク質。ドメインcが、相互に隣接する、メタロプロテアーゼMMPにより認識される配列とウロキナーゼuPAにより認識される配列との組み合わせである、請求項5または6に記載の融合タンパク質。融合タンパク質が、2つのドメインcの間に、配列番号22、配列番号23、配列番号24および配列番号25からなる群から選択される、PEG分子を付加するためのリンカーのドメインdを含む、請求項5~7のいずれか一項に記載の融合タンパク質。融合タンパク質が、ドメインa、b、cおよび/またはdの間に、フレキシブルなグリシン-セリン立体リンカーをさらに含む、請求項5~8のいずれか一項に記載の融合タンパク質。グリシン-セリンリンカーが、配列番号26、配列番号27、配列番号28および配列番号50からなる群から選択される、請求項16に記載の融合タンパク質アミノ酸配列が、配列番号1;配列番号2;配列番号3;配列番号4;配列番号5;配列番号6;配列番号7;配列番号8;配列番号9;配列番号10;配列番号11;配列番号12;配列番号13;配列番号14;配列番号15;配列番号44および配列番号45からなる群から選択される、請求項1に記載の融合タンパク質。融合タンパク質が、組換えタンパク質である、請求項1~11のいずれか一項に記載の融合タンパク質。請求項1~11のいずれかに記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列。ポリヌクレオチド配列が、Ecoliの遺伝子発現に最適化される、請求項13に記載のポリヌクレオチド配列。ポリヌクレオチド配列が、配列番号29;配列番号30;配列番号31;配列番号32;配列番号33;配列番号34;配列番号35;配列番号36;配列番号37;配列番号38;配列番号39;配列番号40;配列番号41;配列番号42;配列番号43;配列番号48および配列番号49からなる群から選択される、請求項14に記載のポリヌクレオチド配列。請求項13~15のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。請求項16に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。宿主細胞が、Ecoli細胞である、請求項17に記載の宿主細胞。薬学的に許容し得る担体とともに、有効成分として請求項1~12のいずれか一項に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。非経口投与のための形態にある、請求項19に記載の医薬組成物。ヒトを含む哺乳動物におけるがん疾患がんの処置のための、請求項1~12のいずれか一項に記載の融合タンパク質の使用。ヒトを含む哺乳動物におけるがん疾患を処置する方法であって、請求項1~12のいずれか一項に記載の融合タンパク質または請求項19もしくは20に記載の医薬組成物の抗がんがん有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。例1.配列番号1の融合タンパク質配列番号1のタンパク質は、345アミノ酸長および質量39.8kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列122-281のN末端でヒトインターフェロンアルファ配列番号17の165アミノ酸サブユニット2bがエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列が順次相互に隣接して組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。この融合タンパク質の構造を図1に模式的に示す。そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号1および配列番号29である。上記構造を有する配列番号1のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号29のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌BL21DE3およびTunerDE3pLysS株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例2.配列番号2の融合タンパク質配列番号2のタンパク質は、347アミノ酸長および質量40kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列120-281のC末端でヒトインターフェロンアルファ配列番号17の165アミノ酸サブユニット2bがエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列が順次相互に隣接して組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。融合タンパク質の構造を図1に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号2および配列番号30である。上記構造を有する配列番号2のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号30のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌BL21DE3株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例3.配列番号3の融合タンパク質配列番号3のタンパク質は、352アミノ酸長および質量40.4kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列122-281のN末端でヒトインターフェロンアルファ配列番号17の165アミノ酸サブユニット2bがエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列の組み合わせが2つ組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。これら配列番号20および配列番号21の2つの組み合わせの間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。融合タンパク質の構造を図1に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号3および配列番号31である。上記配列番号3のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号31のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌株BL21DE3を使用して一般的手順Bに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例4.配列番号4の融合タンパク質配列番号4のタンパク質は、353アミノ酸長および質量40.5kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列121-281のC末端でヒトインターフェロンアルファ配列番号17の165アミノ酸サブユニット2bがエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列の組み合わせが2つ組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。これら配列番号20および配列番号21の2つの組み合わせの間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。融合タンパク質の構造を図1に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号4および配列番号32である。上記配列番号4のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号32のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ストラタジーン社から入手した大腸菌BL21DE3pLysSRIL株およびノバジェン社から入手した大腸菌TunerDE3zを使用して一般的手順Bに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例5.配列番号5の融合タンパク質配列番号5のタンパク質は、300アミノ酸長および質量34.7kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のN末端でヒトインターフェロンガンマの断片配列番号18がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間で、タンパク質は、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含む。融合タンパク質の構造を図2に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号5および配列番号33である。上記構造を有する配列番号5のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号33のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌TunerDE3株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例6.配列番号6の融合タンパク質配列番号6のタンパク質は、307アミノ酸長および質量35.1kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のC末端でヒトインターフェロンガンマの断片配列番号18がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間で、タンパク質は、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含む。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、TRAIL配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカー配列番号27を、ウロキナーゼuPa切断部位とエフェクター配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカー配列番号28を含む。融合タンパク質の構造を図2に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号6および配列番号34である。上記構造を有する配列番号6のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号34のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌TunerDE3株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例7.配列番号7の融合タンパク質配列番号7のタンパク質は、310アミノ酸長および質量35.5kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のN末端でヒトインターフェロンガンマの断片配列番号18がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間で、タンパク質は、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含む。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間に配列番号26のフレキシブルなグリシン-セリンリンカーを、ウロキナーゼuPa切断部位とTRAIL配列との間に配列番号26のフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーを含む。融合タンパク質の構造を図2に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号7および配列番号35である。上記構造を有する配列番号7のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号35のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌TunerDE3株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例8.配列番号8の融合タンパク質配列番号8のタンパク質は、310アミノ酸長および質量35.3kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のC末端でヒトインターフェロンガンマの断片配列番号18がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間で、タンパク質は、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含む。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、ウロキナーゼuPa切断部位とTRAIL配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図2に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号8および配列番号36である。上記構造を有する配列番号8のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号36のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌TunerDE3株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例9.配列番号9の融合タンパク質配列番号9のタンパク質は、317アミノ酸長および質量35.9kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のN末端でヒトインターフェロンガンマの断片配列番号18がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の組み合わせが組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。配列番号20および配列番号21の間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、ウロキナーゼuPa切断部位とTRAIL配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図2に模式的に示す。そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号9および配列番号37である。上記構造を有する配列番号9のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号37のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手したEcoliRosettaDE3株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例10.配列番号10の融合タンパク質配列番号10のタンパク質は、338アミノ酸長および質量38.3kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列95-281のN末端でヒトインターフェロンガンマの断片配列番号18がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間で、融合タンパク質はメタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含み、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。配列番号21に隣接して、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、ペグ化用リンカーとTRAIL配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図2に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号10および配列番号38である。上記構造を有する配列番号10のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号の38DNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手したEcoliBL21DE3およびTunerDE3pLysS株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例11.配列番号11の融合タンパク質配列番号11のタンパク質は、317アミノ酸長および質量35.9kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のC末端でヒトインターフェロンガンマの断片配列番号18がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間で、融合タンパク質は、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含み、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。配列番号20および配列番号21の間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、ウロキナーゼuPa切断部位とTRAIL配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図2に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号11および配列番号39である。上記構造を有する配列番号11のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号39のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手したEcoliBL21DE3およびEcoliTunerDE3pLysS株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例12.配列番号12の融合タンパク質配列番号12のタンパク質は、449アミノ酸長および質量51.8kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のN末端でヒトインターフェロンガンマの一本鎖擬似ダイマー配列番号19がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間で、融合タンパク質は、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含み、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、ウロキナーゼuPa切断部位とTRAIL配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図3に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号12および配列番号40である。上記構造を有する配列番号12のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号40のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手したEcoliBL21DE3およびEcoliTunerDE3pLysS株を使用して一般的手順Aに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例13.配列番号13の融合タンパク質配列番号13のタンパク質は、449アミノ酸長および質量51.8kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のC末端でヒトインターフェロンガンマの一本鎖擬似ダイマー配列番号19がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列が順次取り込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とウロキナーゼuPa切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、メタロプロテアーゼMMP切断部位とTRAIL配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図3に模式的に示す。そのアミノ酸配列、およびEcoliにおける発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号13および配列番号41である。上記配列番号13のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号41のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手したEcoliB.21DE3株およびストラタジーン社から入手したEcoliL21DE3pLysSRIL株を使用して一般的手順Bに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例14.配列番号14の融合タンパク質配列番号14のタンパク質は、456アミノ酸長および質量52.4kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のN末端でヒトインターフェロンガンマの一本鎖擬似ダイマー配列番号19がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチドとTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列が組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。配列番号20および配列番号21の間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とウロキナーゼuPa切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、メタロプロテアーゼMMP切断部位とTRAIL配列との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図3に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号14および配列番号42である。上記の配列番号14のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号42のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌B.21DE3株およびストラタジーン社から入手した大腸菌BL21DE3pLysSRIL株を使用して一般的手順Bに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例15.配列番号15の融合タンパク質配列番号15のタンパク質は、456アミノ酸長および質量52.4kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列116-281のC末端でヒトインターフェロンガンマの一本鎖擬似ダイマー配列番号19がエフェクターペプチドとして付加している。TRAIL配列とエフェクターペプチドとの間で、融合タンパク質は、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列を含み、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。配列番号20および配列番号21の間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。タンパク質は、更にフレキシブルなリンカー、すなわち、エフェクターペプチド配列とウロキナーゼuPa切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGSGGG配列番号26を、TRAIL配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン‐セリンリンカーGSGGG配列番号26を含む。融合タンパク質の構造を図3に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号15および配列番号43である。上記の配列番号15のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号43のDNA配列を作製した。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現を行った。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌B.21DE3株およびストラタジーン社から入手した大腸菌BL21DE3pLysSRIL株を使用して一般的手順Bに従って行った。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離した。例16.配列番号44の融合タンパク質配列番号44のタンパク質は、538アミノ酸長および質量62.4kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列122-281のN末端でヒトインターフェロンアルファ2bの一本鎖擬似ダイマー配列番号46がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチド配列とTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列の組み合わせが2つ組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。配列番号20および配列番号21の2つの組み合わせの間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。融合タンパク質の構造を図4に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号44および配列番号48である。上記の配列番号44のアミノ酸配列を鋳型として使用して、それをコードする配列番号48のDNA配列を作製する。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現をすることが可能である。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌B.21DE3株およびストラタジーン社から入手した大腸菌BL21DE3pLysSRIL株を使用して一般的手順Bに従って行うことが可能である。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離可能である。例17.配列番号45の融合タンパク質配列番号45のタンパク質は、384アミノ酸長および質量44kDaを有する融合タンパク質であり、TRAIL配列95-281のN末端でヒトインターフェロンアルファのコンセンサス配列配列番号47がエフェクターペプチドとして付加している。エフェクターペプチド配列とTRAIL配列との間に、メタロプロテアーゼMMP配列番号20およびウロキナーゼuPA配列番号21により認識されるプロテアーゼ切断部位の配列の組み合わせが2つ組み込まれており、そのために、エフェクターペプチドが、融合タンパク質の内部移行の際に腫瘍環境で切断される。配列番号20および配列番号21の組み合わせの間で、融合タンパク質には、ペグ化用リンカー配列番号22が付加されている。タンパク質は、更にエフェクターペプチド配列とメタロプロテアーゼMMP切断部位との間にフレキシブルなグリシン-セリンリンカーGGSG配列番号50を含む。融合タンパク質の構造を図4に模式的に示す。そのアミノ酸配列、および大腸菌における発現に最適化されたコドンを含むDNAコード配列は、それぞれ添付の配列表に示す配列番号45および配列番号49である。上記のアミノ酸配列の配列番号45を鋳型として使用して、それをコードする配列番号49のDNA配列を作製する。上記の一般的手順に従って、DNAコード配列を含むプラスミドを作製し、融合タンパク質の過剰発現をすることが可能である。過剰発現は、ノバジェン社から入手した大腸菌B.21DE3株およびストラタジーン社から入手した大腸菌BL21DE3pLysSRIL株を使用して一般的手順Bに従って行うことが可能である。タンパク質は、上記一般的手順に従って電気泳動により分離可能である。例18.融合タンパク質の抗腫瘍活性試験融合タンパク質の抗腫瘍活性試験は、試験管テストとして腫瘍細胞株の細胞毒性試験を行い、生体内テストとしてマウスを使用して行った。比較の目的で、rhTRAIL114-281タンパク質およびプラセボを使用した。1.円二色性の測定例3、例5、例12および例14の融合タンパク質の調製物の構造品質を、円二色性CDにより決定した。円二色性は、タンパク質の二次構造および高次構造の決定のために使用される。CD法は、タンパク質構造の光学活性を利用しており、光の偏光面の回転や楕円偏光として観察される。遠紫外UVにおけるタンパク質のCDスペクトルにより、ポリペプチド主鎖の高次構造に関する正確なデータが得られる。50mMTris-HCl、100mMNaCl、10グリセリン、0.1mMZnCl2、80mMショ糖、および5mMDTTを含むpH8.0の緩衝液中で製剤したタンパク質の分析試料は、カットオフ値12kDaの透析バッグシグマアルドリッチ社中で透析した。透析は、タンパク質調製物に対して100倍量v/v過剰の緩衝液中で4°Cで数時間撹拌しながら行った。透析が完了した後、各調製物は遠心分離25000rpm、10分間、4°Cし、適切な上澄み液を採取した。このようにして得た試料中のタンパク質濃度は、ブラッドフォード法により決定した。濃度範囲が0.1~2.7mg/mLのタンパク質の円二色性は、ジャスコJ-710分光偏光計で光路長0.2mmまたは1mmの石英キュベットを使用して測定した。測定は7L/分で窒素を流しながら行ったので、波長範囲195~250nmにおける測定が可能であった。測定のパラメーター:スペクトル分解能1nm;光線の半値幅1nm;感度20mdeg、1つの波長での平均時間8秒、スキャン速度10nm/分。結果は、3回の測定の平均として示した。rhTRAIL114-281、rhTRAIL95-281、および例12、例5、例3、例14のタンパク質の円二色性スペクトルを図5に示す。得られたスペクトルは、CDProソフトウェアを使用して193~250nmの範囲で数値解析した。光電子倍増管での電圧が700Vを超える点は、この波長範囲でのシグナルノイズ比が小さすぎるため排除した。得られたデータを使用して、タンパク質分析試料における個々の二次構造の含有率をCDProソフトウェアにより計算した表1。対照サンプルrhTRAIL114-281およびrhTRAIL95-281は、大多数がβシート構造型波長220nmでの楕円率が明らかに最小となるであるタンパク質に特有のCDスペクトルを示した。これは、二次構造成分の計算と一致しており、αへリックス要素が極少ないことを示唆している。また、得られた結果は、β要素が組成物の半数以上を構成しているTRAILタンパク質の結晶構造から得たデータとも一致している。例3、例5、例12および例14の融合タンパク質の場合、二色性スペクトルは、アルファ/ベータ混合型二次構造を有するタンパク質に特有の、波長208および220nmにおける2つの極小値により特徴付けられる。融合タンパク質におけるTRAILに付加したインターフェロン分子の大多数がアルファ-へリックス構造を形成しており、それゆえ、分析したキメラタンパク質における二次構造の混合した特性により、TRAILおよびインターフェロンの両者の適切に折り畳まれた要素が存在することが確認できる。例3および例14による調製物の場合、ほぼ100がアルファ型構造であった。アルファ型構造のこの含有率は、分析に使用した波長の範囲が狭いことに因り、方法および材料に最適な処方を選択した結果である遠紫外での大量のノイズ。スペクトルの分析した領域において180~200nmの範囲に明白な形状が存在しないことにより、αへリックス構造の含有量が過大評価されている。MTT細胞毒性テストMTT試験は、細胞の増殖、生存能力および細胞毒性を測定するために使用される比色定量試験である。ミトコンドリア酵素であるコハク酸塩テトラゾリウム還元酵素1による、黄色いテトラゾリウム塩MTT4,5-ジメチル-2-チアゾリル-2、5-ジフェニルテトラゾリウムブロミドの非水溶性紫染料ホルマザンへの分解を利用する。MTTの還元は、生細胞においてのみ進行する。データ解析には、対照細胞と比較して処理された集団の細胞数の50で還元が進行する濃度である、タンパク質のIC50濃度単位ng/mLの決定が含まれる。結果は、グラフパッドプリズム5.0ソフトウェアを使用して解析した。テストは、文献の記載に基づいて行ったCelisJECellBiologyaLaboratoryHandbooksecondeditionAcademicPressSanDiegoYangYKohLWTsaiJHInvolvementofviralandchemicalfactorswithoralcancerinTaiwanJpnJClinOncol34176183。細胞培養培地を、所定の密度100μLあたりの細胞数104~105に希釈した。その後、適切に希釈された細胞懸濁液100μLを、96ウェルプレートに3ウェルずつ添加した。このように調製した細胞を、使用した培地に応じて5または10CO2中37°Cで24時間培養し、その後、細胞100μL培地中に、様々な濃度のタンパク質試料を含んだ100μLの培地を更に添加した。細胞分裂3~4回分に相当する72時間、タンパク質被検体と共に細胞を培養した後、タンパク質被検体を含む培地に20mLのMTT標準溶液[5mg/mL]を添加し、さらに5CO2中37°Cで3時間培養を続けた。その後、MTT溶液を含む培地を除去し、100μLのDMSOを添加してホルマザン結晶を溶解した。撹拌後、570nmでの吸光度を測定した参照フィルター690nm。EZ4U細胞毒性テストEZ4Uバイオメディカ社テストを使用して、非接着性細胞株におけるタンパク質の細胞障害活性をテストした。このテストは、テトラゾリウム塩の還元で生成されるホルマザンが水に可溶であるようにMTTを改変したものである。細胞生存能力の試験は、タンパク質タンパク質を7つの濃度で各3ウェルずつと共に細胞を連続72時間培養した後に行った。これに基づいて、グラフパッドプリズム5ソフトウェアによりIC50値2回の独立した実験の平均値としてを決定した。試験管内細胞毒性テストの結果は、IC50値ng/mLとして表4および表5にまとめて示してあり、溶媒のみで処理した対照細胞に対して融合タンパク質の細胞障害効果が50のレベルで観察されたタンパク質濃度に対応する。各実験は、3ウェルずつで行った少なくとも2つの独立した実験の平均値を示す。タンパク質調製物に活性が無いと判断する基準としては、IC50限度値2000ng/mLを採用した。IC50値が2000を超える融合タンパク質は不活性とみなした。このテストに使用した細胞は、TRAILタンパク質に対して自然耐性のある腫瘍細胞株TRAILに対する自然耐性の基準:TRAILタンパク質のIC50>2000、従来の抗がん薬物耐性がん系統として、TRAILタンパク質感受性、ドキソルビシンMES-SA/DX5系統耐性の腫瘍細胞株含むように選択された。未分化HUVEC細胞株を、非がん性細胞における融合タンパク質の効能/毒性の評価用の健常な対照細胞株として使用した。得られた結果により、本発明の特定の融合タンパク質をTRAIL自然耐性細胞に投与することにより、細胞株のTRAIL耐性を克服できる可能性が確認された。TRAIL感受性細胞へ本発明の融合タンパク質を投与した時、いくつかのケースでは、TRAILのみの場合のIC50値と比べて融合タンパク質のIC50値が減少し、作用効力が明白に相乗強化されたことが観察された。更に、一般的な抗がん薬物であるドキソルビシン耐性細胞においても、本発明の融合タンパク質の細胞障害活性が得られており、いくつかのケースでは、TRAILのみの活性よりも高い活性となっている。非がん性細胞株で得られた2000を超えるIC50値は、健常な細胞に対しては本発明のタンパク質の使用に関連する毒性作用が無いこと示しており、本タンパク質の全身毒性の可能性が低いことを示唆している。広範な腫瘍細胞株パネルに対する選択されたタンパク質調製物の細胞障害活性の決定表5は、広範囲の最も一般的ながんに対応している様々な臓器由来の広範な腫瘍細胞パネルに対する、本発明の選択された融合タンパク質の試験管内での細胞障害活性テストの結果を示すものある。得られたIC50値により、融合タンパク質の高い細胞障害活性と、従ってがんの処置における潜在的な有用性が確認された。2.異種移植における生体内融合タンパク質抗腫瘍有効性タンパク質調製物の抗腫瘍活性を、ヒト結腸がんHCT116のマウスモデルにおいてテストした。細胞HCT116細胞は、10ウシ胎児血清および2mMグルタミンを補充したOpti-MEMインビトロジェン社、カタログ番号22600-134を1:1の比率で添加したRPMI1640培地ハイクローン社、ローガン、ユタ州、米国中で維持した。マウスへの移植の日に、トリプシンインビトロジェン社で細胞を洗浄して、細胞をサポートから剥離し、その後、細胞を1300rpm,4°Cで8分間遠心分離し、HBSS緩衝液Hanks培地に懸濁し、カウントし、細胞数を25x106個/mLに希釈した。PLC/PRF/5CLS細胞は、10ウシ胎児血清および2mMグルタミンを補充したDMEMハイクローン社、ローガン、ユタ州、米国中で維持した。マウスへの移植の日に、トリプシンインビトロジェン社で細胞を洗浄して、細胞をサポートから剥離し、その後、細胞を1300rpm,4°Cで8分間遠心分離し、HBSS緩衝液Hanks培地に懸濁し、カウントし、細胞数を25x106個/mLに希釈した。HepG2細胞は、10ウシ胎児血清および2mMグルタミンを補充したMEMハイクローン社、ローガン、ユタ州、米国中で維持した。マウスへの移植の日に、トリプシンインビトロジェン社で細胞を洗浄して、細胞をサポートから剥離し、その後、細胞を1300rpm,4°Cで8分間遠心分離し、HBSS緩衝液Hanks培地に懸濁し、カウントし、細胞数を25x106個/mLに希釈した。マウス本発明のタンパク質の抗腫瘍活性は、チャールスリバー社独国から入手した7~9週齢CDヌードCrl:CD1-Foxn1nu1または4~5週齢Crl:SHO-PrkdcscidHrhrマウスを使用して試験した。マウスは、食糧および蒸留水は適宜自由摂取として、特定病原体感染防止条件下で保持した。動物を使用したすべての実験は、InterdisciplinaryPrinciplesandGuidelinesfortheUseofAnimalsinResearchMarketingandEducationissuedbytheNewYorkAcademyofSciencesAdHocCommitteeonAnimalResearchandwereapprovedbytheIVLocalEthicsCommitteeonAnimalExperimentationinWarsawNo712009のガイドラインに従って行った。実験の過程および評価ヒト結腸がんモデルCrl:CD1-Foxn1nu1マウス0日目に、0.2mLのHBSS緩衝液に懸濁した5x106個のHCT116細胞を0.5x25mm針付きシリンジBogMark社を使用して、Crl:CD1-Foxn1nu1マウスの右側に皮下sc移植した。腫瘍の大きさが約50~140mm3となったとき14日目、処置群の平均腫瘍サイズが約70mm3となるようにマウスをランダムに分別した。処置群には、例3、例12および例14の本発明の融合タンパク質調製物10mg/kg、比較参照としてrhTRAIL114-28110mg/kg、対照として製剤用緩衝液5mMNaH2PO4、95mMNa2HPO4、200mMNaCl、5mMグルタチオン、0.1mMZnCl2、10グリセリン、80mMショ糖、pH8.0を投与した。調製物は8~12日目および15~19日目の10日間毎日静脈内投与したi.v.。治療群の平均腫瘍サイズが約1000mm3となったとき、マウスの脊髄を損壊して屠殺した。対照群には、rhTRAIL114-281を与えた。Crl:SHO-PrkdcscidHrhrマウス0日目に、0.1mLのHBSS緩衝液に懸濁した5×106個のHCT116細胞を0.5×25mm針付きシリンジBogMark社を使用して、Crl:SHO-PrkdcscidHrhrマウスの右側に皮下sc移植した。腫瘍の大きさが200~700mm3となったとき18日目、処置群の平均腫瘍サイズが約400mm3となるようにマウスをランダムに分別した。処置群には、例14の本発明の融合タンパク質調製物50mg/kg、比較参照としてrhTRAIL114-28120mg/kg、対照として製剤用緩衝液5mMNaH2PO4、95mMNa2HPO4、200mMNaCl、5mMグルタチオン、0.1mMZnCl2、10グリセリン、80mMショ糖、pH8.0を投与した。調製物は2日毎に6回静脈内投与したi.v.。実験の32日目に、マウスの脊髄を損壊して屠殺した。ヒト肝がんモデルPLC/PRF/5細胞0日目に、HBSS:マトリゲル3:1混合物の緩衝液0.1mLに懸濁した7x106個のPLC/PRF/5細胞を0.5×25mm針付きシリンジBogMark社を使用して、Crl:SHO-PrkdcscidHrhrマウスの右側に皮下sc移植した。腫瘍の大きさが140~300mm3となったとき31日目、処置群の平均腫瘍サイズが約200mm3となるようにマウスをランダムに分別した。処置群には、例14の本発明の融合タンパク質調製物20mg/kg、比較参照としてrhTRAIL114-28130mg/kg、対照として製剤用緩衝液5mMNaH2PO4、95mMNa2HPO4、200mMNaCl、5mMグルタチオン、0.1mMZnCl2、10グリセリン、80mMショ糖、pH8.0を投与した。調製物は3日毎に4回、その後2日毎にq3dx4およびq2dx22回静脈内投与したi.v.。実験の32日目に、マウスの脊髄を損壊して屠殺した。HepG2細胞0日目に、HBSS:マトリゲル3:1混合物の緩衝液0.1mLに懸濁した7x106個のHepG2細胞を0.5×25mm針付きシリンジBogMark社を使用して、Crl:SHO-PrkdcscidHrhrマウスの右側に皮下sc移植した。腫瘍の大きさが250~390mm3となったとき19日目、処置群の平均腫瘍サイズが約330mm3となるようにマウスをランダムに分別した。処置群には、例14の本発明の融合タンパク質調製物50mg/kg、比較参照としてrhTRAIL114-28130mg/kg、対照として製剤用緩衝液5mMNaH2PO4、95mMNa2HPO4、200mMNaCl、5mMグルタチオン、0.1mMZnCl2、10グリセリン、80mMショ糖、pH8.0を投与した。調製物は2日毎に6回静脈内投与したi.v.。実験の31日目に、マウスの脊髄を損壊して屠殺した。腫瘍サイズは電子カリパスを使用して測定し、腫瘍体積を、25腫瘍の短径mmをa、腫瘍の長径mmをbとして式a2×b/2により計算した。腫瘍増殖阻害率は下記の式により計算した:TGI[]腫瘍増殖阻害率=WT/WC×100-100ここで、WTは処置群の平均腫瘍体積であり、WCは対照群の平均腫瘍体積である。実験結果は、平均値±標準偏差SDで示した。すべての計算およびグラフ作成は、グラフパッドプリズム5.0ソフトウェアを使用して行った。HCT116結腸がんを負荷したCrl:CD1-Foxn1nuマウスを、例3、例12および例14の本発明の融合タンパク質および比較としてrhTRAIL114-281で処置して得た実験結果を、腫瘍体積の変化図として図6に、対照に対する百分率として腫瘍増殖阻害率TGIを図7に示す。図6および図7のグラフに示す実験結果は、例3、例12および例14の本発明の融合タンパク質の投与により、実験の28日目に対照に対してそれぞれ71、67および75のTGIで腫瘍HCT116の増殖が阻害されることを示している。比較参照として使用したrhTRAIL114-281では、TGIが44のレベルで、対照と比して腫瘍細胞増殖に僅かな阻害効果が得られた。従って、本発明の融合タンパク質は、TRAIL単独と比較して、はるかに強力な効果を示している。HCT116結腸がんを負荷したCrl:SHO-PrkdcscidHrhrマウスを、例14の本発明の融合タンパク質20mg/kgおよび比較としてrhTRAIL114-281で処置した実験結果を、腫瘍体積の変化図として図8に、対照に対する百分率として腫瘍増殖阻害率TGIを図9に示す。図8および図9のグラフに示す実験結果は、例14の本発明の融合タンパク質の投与により、実験の32日目に対照に対して22.5のTGIで腫瘍HCT116の増殖が阻害されることを示している。比較参照として使用したrhTRAIL114-281では、TGIが5.6のレベルで、対照と比して腫瘍細胞増殖に僅かな阻害効果が得られた。従って、本発明の融合タンパク質は、TRAILと比較して、はるかに強力な効果を示している。PLC/PRF/5肝がんを負荷したCrl:SHO-PrkdcscidHrhrマウスを、例14の本発明の融合タンパク質および比較としてrhTRAIL114-281で処置した実験結果を、腫瘍体積の変化図として図10、対照に対する百分率として腫瘍増殖阻害率TGIを図11に示す。図10および図11のグラフに示す実験結果は、例14の本発明の融合タンパク質の投与により、実験の49日目に対照に対して34のTGIでPLC/PRF/5腫瘍の増殖が阻害されることを示している。比較参照として使用したrhTRAIL114-281では、TGIが18のレベルで、対照と比して腫瘍細胞増殖に僅かな阻害効果が得られた。従って、本発明の融合タンパク質は、TRAILと比較して、はるかに強力な効果を示している。HepG2肝がんを負荷したCrl:SHO-PrkdcscidHrhrマウスを、例14の本発明の融合タンパク質および比較としてrhTRAIL114-281で処置した実験結果を、腫瘍体積の変化図として図12、対照に対する百分率として腫瘍増殖阻害率TGIを図13に示す。図12および図13のグラフに示す実験結果は、例14の本発明の融合タンパク質の投与により、実験の31日目に対照に対して33.6のTGIでHepG2腫瘍の増殖が阻害されることを示している。参照調製物として使用したrhTRAIL114-281では、TGIが7のレベルで、対照と比して腫瘍細胞増殖に僅かな阻害効果が得られた。従って、本発明の融合タンパク質は、TRAILと比較して、はるかに強力な効果を示している。テストした融合タンパク質は、マウスの体重減少すなわち、基準体重の10より低いに現れるような有意な副作用は起さなかった。これは、タンパク質の全身毒性が低いことを示している。"