"下記化合物Iと化合物IIを重合反応に供する工程、得られた重合体にペプチドを導入する工程を含む、ペプチド提示微粒子の製造方法。XはハロゲンまたはOYを示し、ここでYはアルキル基、芳香族基、ピリジル基、キノリル基、スクシンイミド基、マレイミド基、ベンゾオキサゾール基、ベンゾチアゾール基、又はベンゾトリアゾール基を示し、これらの基における水素原子は、ハロゲンで置換されていても良い。ペプチドが熱帯熱マラリア原虫のエノラーゼ由来ペプチドである、請求項1に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。エノラーゼ由来ペプチドが配列番号2~4のいずれかのアミノ酸配列を含む、請求項2に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。微粒子がヒトに感染する熱帯熱マラリア、三日熱マラリア、卵形マラリア、四日熱マラリア、サルマラリアの診断薬である、請求項2または3に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。微粒子がヒトに感染する熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、サルマラリア原虫に由来する抗原の抗体価検査材料である、請求項2または3に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。本発明は、ペプチド結合物質の検出に使用可能なペプチドを表面に提示した微粒子を効率よく製造できる技術を提供することを課題とする。本発明者は上記課題を解決するために鋭意検討を行った。その結果、下記化合物Iと化合物IIを重合反応に供し、得られた重合体にペプチドを導入することによりペプチド提示微粒子を効率よく製造することができ、得られたペプチド提示微粒子を用いることにより、ペプチドおよびこのペプチド配列を含む蛋白質に対する抗体を効率よく凝集反応により検出することができることを見出し、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は以下を提供する。1下記化合物Iと化合物IIを重合反応に供する工程、得られた重合体にペプチドを導入する工程を含む、ペプチド提示微粒子の製造方法。2ペプチドが熱帯熱マラリア原虫のエノラーゼ由来ペプチドである、1に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。3エノラーゼ由来ペプチドが配列番号2~4のいずれかのアミノ酸配列を含む、2に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。4微粒子がヒトに感染する熱帯熱マラリア、三日熱マラリア、卵形マラリア、四日熱マラリア、またはサルマラリアの診断薬である、2または3に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。5微粒子がヒトに感染する熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、サルマラリア原虫に由来する抗原に対する抗体価検査材料である、2または3に記載のペプチド提示微粒子の製造方法。本発明の方法により、ペプチド提示微粒子を効率よく製造することができ、得られたペプチド提示微粒子を用いることにより、ペプチドおよびこのペプチド配列を含む蛋白質、アミノ酸残基が変異した相同性のあるペプチド配列を含む蛋白質に対する、抗体などのペプチド結合物質を効率よく検出することができる。本発明の方法は、下記化合物Iと化合物IIを重合反応に供する工程、得られた重合体にペプチドを導入する工程を含む、ペプチド提示微粒子の製造方法である。Xはハロゲン塩素、フッ素、臭素等またはOYを示し、ここでYは、アルキル基、芳香族基、ピリジル基、キノリル基、スクシンイミド基、マレイミド基、ベンゾオキサゾール基、ベンゾチアゾール基、又はベンゾトリアゾール基を示し、これらの基における水素原子は、ハロゲン塩素、フッ素、臭素等で置換されていても良い。前記アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、t-ブチル基、イソブチル基及びsec-ブチル基などの基が挙げられ;前記芳香族基としては、例えば、フェニル基、1-ナフチル基及び2-ナフチル基などの基が挙げられ;前記ピリジル基としては、例えば、2-ピリジル基、3-ピリジル基及び4-ピリジル基などの基が挙げられ;前記キノリル基としては、例えば、2-キノリル基、3-キノリル基、4-キノリル基、5-キノリル基、6-キノリル基、7-キノリル基及び8-キノリル基などの基が挙げられ;前記ベンゾオキサゾール基としては、例えば、2-ベンゾオキサゾール基などが挙げられ;前記ベンゾチアゾール基としては、例えば、2-ベンゾチアゾール基などが挙げられ;前記ベンゾトリアゾール基としては、例えば、1-ベンゾトリアゾール基などが挙げられる。これらのうち、フェニル基、3-ピリジル基、8-キノリル基、スクシンイミド基OSu基、2-ベンゾチアゾール基、及び1-ベンゾトリアゾール基OBt基が、活性エステルの活性がより高いという点で好ましい。重合方法は、通常のラジカル重合によって行うことができ、放射線γ線や重合開始剤を用いる方法が例示される。重合開始剤としては、公知のラジカル重合開始剤を使用することができ、例えば、アゾビスイソブチロニトリル、11アゾビスABCNなどを使用することができる。溶媒は、各化合物を溶解し、重合反応を進行させうる溶媒であればよいが、例えば、酢酸エチル、プロピオン酸エチル、酢酸、プロピオン酸、アセトン、メチルエチルイソブチルケトンMIBK、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、N-メチルピロリドン、およびこれらの混合溶媒などが例示される。重合反応によって得られる微粒子の粒径は0.1~10μmが好ましい。なお、化合物I、化合物IIはそれぞれ複数種類重合に使用してもよい。微粒子表面へのペプチドの導入は微粒子の活性エステル基のOYとペプチドのアミノ基の反応により行うことができる。ペプチドのアミノ基は末端のアミノ基でもよいし、側鎖のアミノ基でもよい。また、ペプチドの末端にリンカーやキャリアーを付加し、リンカーやキャリアーのアミノ基と結合させてもよい。微粒子へのペプチドの導入割合は好ましくは重量比として0.05~2である。抗原ペプチドの配列には、好ましくは5~150残基のペプチドが好ましい。合成や精製の簡便さからは、より好ましくは5~50残基であり、さらに好ましくは8~30残基である。その配列は特に制限されず、目的に応じて適宜設定することができるが、標的分子に結合するペプチドの配列を含むことにより、微粒子を標的分子の検出に使用できるため好ましい。標的分子としては、受容体、酵素、抗体などが挙げられ、ペプチドとしてはリガンド、ホルモン、抗原ペプチドなどが挙げられる。ペプチドは蛍光物質等で標識されたものでもよいし、非天然アミノ酸を含むものでもよい。抗原としては、熱帯熱マラリア原虫への感染診断や原虫抗原への抗体価測定を行うためには、熱帯熱マラリア原虫由来の部分ペプチドを含むペプチドとすることができる。熱帯熱マラリア原虫由来の部分ペプチドとしては、熱帯熱マラリア原虫由来のエノラーゼの部分ペプチドが例示される。熱帯熱マラリア原虫由来のエノラーゼのアミノ酸配列を配列番号1に例示する図1。熱帯熱マラリア原虫由来のエノラーゼの部分ペプチドとしては特に制限されるものではないが、以下の3種類のペプチドが例示される。GL16:GlyPheAlaProAsnIleLeuAsnAlaAsnGluAlaLeuAspLeuLeu配列番号2AD22:AlaSerGluPheTyrAsnSerGluAsnLysThrTyrAspLeuAspPheLysThrProAsnAsnAsp配列番号3LN17:LeuGlyAsnAsnAlaValPheAlaGlyGluLysPheArgLeuGlnLeuAsn配列番号4同様にしてhistidinerichproteinIIの部分配列を用いたり、乳酸脱水素酵素の部分配列を用いたりすることによっても、熱帯熱マラリア原虫への感染診断や原虫抗原への抗体価測定は容易に実施が可能である。抗原の配列は類似しているので、さらに同様にして、その他のヒトに感染する三日熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、および一部のサルマラリアについても、感染診断や原虫抗原への抗体価測定は容易に実施が可能である。また、微粒子に導入するペプチドは複数の配列が直線状または分岐鎖状に連結されたものでもよい。ペプチド配列の連結に使用し得るキャリアー分子の一例として、破傷風トキソイド、オボアルブミン、血清アルブミン、ヘモシアニン等のような天然タンパク質が挙げられる。キャリアーがヘモシアニンである場合は、例えばBoquetらの方法PBoquetetalMolecularImmunologyvol19,pp14411549によって、ペプチドおよびキャリヤーそれぞれのアミノ基同士をグルタールアルデヒドで結合させることもできる。例えばMAPmultipleantigenicpeptideまたはリジンデンドリマーと呼ばれる合成高分子キャリアーも使用可能である。MAPまたはリジンデンドリマーと呼ばれる合成高分子キャリアーを用いた多量体ペプチドの合成は、例えばTamの方法が挙げられるJamesPTamProcNatlAcadSciUSAvol85、54095413。公知の合成法により、βアラニンシステインSアセトアミドメチルのジペプチドを固定した樹脂にリジンをステップワイズに反応結合させることにより目的とする架橋体を調製することができる。すなわち、ジペプチドにリジンひとつの結合体は2量体の分岐ペプチドとして、さらにリジンを反応させて得られるリジン3残基の結合体は4量体の分岐ペプチドとして、さらにリジンを反応させて得られるリジン7残基の結合体は8量体の架橋体として使用することができる。また8量体はシステイン残基のアセトアミドメチル基をヨウ素で酸化的に脱保護し、ジスルフィド結合を形成させることでも得ることができる。これら架橋体に目的とするペプチドの構成アミノ酸を通常の方法により順次反応結合させることにより多量体ペプチドを合成することができる。本発明の微粒子を用いることにより、試料中のペプチド結合物質を検出することができる。例えば、ペプチドを熱帯熱マラリアのエノラーゼ部分ペプチドとすることにより、被験者の血液試料中の抗エノラーゼ抗体を検出でき、マラリアの診断感染履歴の調査やワクチン投与後の抗体価維持の確認を検査する材料として利用することができる。検出方法は結合反応を検出する方法である限り特に制限されないが、ELISA法、凝集反応によるアッセイ、蛍光検出法、発光検出法、可視紫外吸光検出法、電気化学的検出法などが挙げられる。この中では凝集反応によるアッセイが好ましい。凝集反応によるアッセイの原理を図6に示す。ペプチド抗原が抗体と反応することにより微粒子が凝集し、目視により抗体の検出が可能である。検出できる抗体は、微粒子に導入されたペプチド配列への抗体抗ペプチド抗体、例えば抗AD22抗体、またはこのペプチド配列を含む蛋白質抗蛋白質抗体、例えばAD22配列を認識する抗Plasmodiumfalciparumエノラーゼ抗体、さらにまたはアミノ酸残基が変異した相同性のあるペプチド配列や蛋白質近縁種の蛋白質やペプチド配列から作成された抗体、例えばAD22配列を認識する抗Plasmodiumbergheiエノラーゼ抗体に対する抗体が挙げられる。アミノ酸残基が変異した相同性のあるペプチド配列の例としては、例えば近縁種の蛋白質に由来する配列、突然変異した蛋白質に由来する配列、相同性の高いアミノ酸の相同性>60蛋白質に由来するアミノ酸配列が挙げられる。近縁種のエノラーゼの配列例をGL16、AD22、LN17に対してそれぞれ図3、4、5に示す。例えば、微粒子に導入されたPlasmodiumfalciparumのエノラーゼに由来するAD22ペプチド配列によって、Plasmodiumbergheiへの抗体抗Pbエノラーゼ抗体を検出することなどが可能である。<ポリマーの重合>下記化合物i市販品、中村化学製0.4gと化合物iiメタクリル酸クロリドとHOSuNヒドロキシスクシンイミドの反応生成物を使用を0.1gを溶媒プロピオン酸エチル10mL中、室温25°Cで3時間γ線照射下30kGyで反応させ、重合反応を行った。微粒子表面に結合させるペプチドは以下のものを用いた。GL16分子量017kDGlyPheAlaProAsnIleLeuAsnAlaAsnGluAlaLeuAspLeuLeu配列番号2LN17G分子量019kDLeuGlyAsnAsnAlaValPheAlaGlyGluLysPheArgLeuGlnLeuAsnGly配列番号5AD22MAP化した分子量として14kDAlaSerGluPheTyrAsnSerGluAsnLysThrTyrAspLeuAspPheLysThrProAsnAsnAsp配列番号3これらの抗原ペプチドは手動合成装置を用いて合成し、SepPackwaters社製の使い捨てODSカラムにて精製した。4MAP分子量14kD図2は抗原ペプチドと同様に合成と精製を行った。<ペプチドの導入>続いて、活性エステル基スクシンイミド基を介して300mgの微粒子表面に熱帯熱マラリア原虫の抗原ペプチド実施例1:LN17G、実施例2:4MAP3mgを化学結合させた検査材料を作製した。このとき化学結合には37°C4時間、さらに物理吸着に37°C20時間の条件にて反応させた。<ペプチドが導入されたことの確認>上記ペプチドの化学結合に伴って遊離するHOSuNヒドロキシスクシンイミド量をHPLCによってモニターすることで、微粒子表面への飽和化学結合量0-4時間と飽和物理吸着0-24時間を判断した。結果を図10,11に示す。その結果、エノラーゼ全長の場合比較例2:図8と異なりペプチドは安定性が比較的高く、さらに直鎖構造よりもMAPによる分岐構造の方が安定性が比較的高く、37°C24時間の条件でも免疫活性を失わないことがわかった。<比較例1>化合物iiの活性エステル基にGL16を結合させて得られたモノマーと化合物iを共重合させて抗原提示微粒子を得た。しかし、抗原モノマーは溶媒にとけにくかったため、得られた微粒子は均質な球状微粒子とはならなかったデータは示さず。<比較例2>ペプチドの代わりに、組み替えエノラーゼ全長分子量47kDを微粒子100mg当たり06mg加え、37°C4時間、4°C20時間の条件にて反応させて微粒子の表面にエノラーゼ全長を化学結合させた。このときHPLCによってHOSu量をモニターすることで微粒子表面への結合の飽和を判断した図8。<凝集試験>ウサギ抗エノラーゼ血清ウサギへ組み換え体の熱帯熱マラリア原虫エノラーゼを免疫後、採血して調製した血清およびウサギプレ免疫血清同じウサギで免疫前に採血して調整した血清を判別する凝集試験を行った。96穴プレートに、8個のウェルに、リン酸緩衝生理食塩水PBSで16~2048倍希釈したウサギ抗エノラーゼ血清またはウサギプレ血清を50μLずつ、および1個のウェルにリン酸緩衝液のコントロールを50μLを加え、最後に上記微粒子を25μL01mgmLずつ加えた。96穴プレートを1分間振動撹拌後に、室温で8時間静置して反応させることで、凝集反応を検出した。結果を図7比較例1,図9比較例2,図12実施例1,2に示す。その結果、実施例1,2では抗血清とプレ血清を明瞭に区別する陽性凝集像と陰性凝集像を得ることに成功できた実施例3。一方、比較例1では16倍希釈で凝集反応は見られたものの、マラリア患者と健常者を区別できなかった。また、比較例2でも陽性と陰性を明確に区別できる凝集像が得られなかった。引き続いて国立国際医療研究センター研究所において保管されている熱帯熱マラリア患者血漿Pf患者、正常なボランティア血漿正常、熱発患者としてマラリア疑い採血を受けたが抗原検出迅速診断キットと顕微鏡によるスメアー観察から陰性と診断された患者血漿熱発患者を用いて凝集試験を行った。陽性凝集像と陰性凝集像の判断はウサギ血清を用いた場合と同様に行った。その結果、図13に示すように、Pf患者と正常、Pf患者と熱発患者について一定の違いを表す陽性凝集像と陰性凝集像を得ることに成功した。ただし、目視による本方法の限界として、ウサギプレ血清の場合と異なり、正常血漿には希釈率の低いところにおいて擬陽性凝集像が観察されることがわかった。ヒト血漿試料において擬陽性を示した原因は、採血時に用いる真空採血管は内部にEDTAを用いることで採血時の凝固反応を抑えているため、フィブリンが96穴プレートに吸着して擬陽性を生じたためと考えられる。その他にも血液中の脂肪成分が吸着して擬陽性を生じたためと考えられる。これらの問題は容易に改善することが可能である。すなわち血漿はカルシウム添加処理やガラスビーズ処理することでフィブリンを除去することが可能であり、擬陽性を抑制できることが容易に推測される。またすなわち、食事前の採血を行うことで脂肪含有量の抑制や希釈後の遠心分離処理で脂肪成分を除去することが可能であり、擬陽性を抑制できることが容易に推測される。"