"対象における眼の障害または疾患を処置および/または防止する方法であって、眼の疾患または障害を有する対象を同定すること、ならびにLp-PLA2タンパク質の活性および/または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物をそれを必要とする前記対象に投与することを含んでなる、方法。前記眼の疾患または障害が黄斑浮腫である、請求項1に記載の方法。前記眼の疾患または障害が糖尿病性網膜症である、請求項1に記載の方法。対象における黄斑浮腫を処置および/または防止する方法であって、黄斑浮腫を有する対象を同定すること、ならびにLp-PLA2タンパク質の活性および/または発現を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物をそれを必要とする前記対象に投与することを含んでなる、方法。前記黄斑浮腫が、糖尿病性の眼の疾患または障害に関連する、請求項3に記載の方法。前記黄斑浮腫が、網膜静脈閉塞症、炎症、手術後、牽引、またはぶどう膜炎に関連する、請求項3に記載の方法。対象における異常な内側血液網膜関門に関連する疾患または障害を処置および/または防止する方法であって、Lp-PLA2タンパク質の発現および/または活性を阻害する薬剤を含んでなる医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含んでなる、方法。前記異常なiBRBが、透過性血液網膜関門である、請求項7に記載の方法。前記疾患または障害が、糖尿病性の眼の疾患または障害である、請求項7に記載の方法。前記疾患または障害が糖尿病性網膜症である、請求項7に記載の方法。前記疾患または障害が黄斑浮腫である、請求項7に記載の方法。前記黄斑浮腫がぶどう膜炎に関連する、請求項4に記載の方法。前記黄斑浮腫が網膜静脈閉塞症に関連する、請求項4に記載の方法。前記疾患または障害が嚢胞性黄斑浮腫である、請求項4に記載の方法。前記薬剤が、小分子、核酸、核酸アナログ、タンパク質、抗体、ペプチド、アプタマー、またはその変異体もしくは断片である、請求項1、4、または7に記載の方法。前記核酸薬剤がRNAi剤である、請求項15に記載の方法。前記RNAi剤が、siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA、またはリボザイム、またはその変異体である、請求項15に記載の方法。前記小分子が、N-[2-ジエチルアミノエチル]-2-[[4-フルオロフェニルメチル]チオ]-4,5,6,7-テトラヒドロ-4-オキソ-N-[[4’-トリフルオロメチル[1,1’-ビフェニル]-4-イル]メチル]-1H-シクロペンタピリミジン-1-アセトアミド、またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項15に記載の方法。前記小分子が、N-[2-ジエチルアミノエチル]-2-{2-[2-2,3-ジフルオロフェニルエチル]-4-オキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-1H-シクロペンタ[d]ピリミジン-1-イル}-N-{[4’-トリフルオロメチル-4-ビフェニリル]メチル}アセトアミド酒石酸水素塩またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項15に記載の方法。前記小分子が、2-[[2,3-ジフルオロフェニルメチル]チオ]-N-[1-2-メトキシエチル-4-ピペリジニル]-4-オキソ-N-[[4’-トリフルオロメチル[1,1’-ビフェニル]-4-イル]メチル]-14H-キノリンアセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項15に記載の方法。前記小分子が、N-[2-ジメチルアミノエチル]-2-[[4-フルオロフェニルメチル]チオ]-5-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イルメチル]-4-オキソ-N-[[4’-トリフルオロメチル[1,1’-ビフェニル]-4-イル]メチル]-14H-ピリミジンアセトアミドまたはその薬学的に許容可能な塩である、請求項15に記載の方法。Lp-PLA2を阻害する薬剤を含んでなる前記医薬組成物の投与後に前記対象の視力を測定することにより処置をモニタリングすることを更に含んでなる、請求項1、4、7、または15に記載の方法。網膜厚または内側血液網膜関門機能を評価することにより処置をモニタリングすることを更に含んでなる、請求項1、4、7、または15に記載の方法。前記対象に少なくとも1つの追加の治療剤を投与することを更に含んでなる、請求項1、4、7、または15に記載の方法。前期対象が哺乳動物である、請求項1、4、7、または15に記載の方法。眼の疾患または障害を処置および/または防止するための医薬の製造における、Lp-PLA2タンパク質の発現および/または活性を阻害する薬剤の使用。黄斑浮腫を処置および/または防止するための医薬の製造における、Lp-PLA2タンパク質の発現および/または活性を阻害する薬剤の使用。本明細書に提示する例は、Lp-PLA2の阻害による、任意の原因の、例えばRVO、炎症、手術後、牽引等による黄斑浮腫;加齢性黄斑変性AMD;ぶどう膜炎;糖尿病性の眼の疾患および障害;糖尿病性網膜症等を含む眼の疾患を防止および/または処置するための方法および組成物に関する。本願全体で種々の公開物を参照する。本発明が関する分野の水準をより完全に記述するために、公開物およびそれらの公開物中で引用されている参照文献の全ての開示の全体を参照により本願に援用する。以下の実施例は発明の請求範囲を限定することを意図しておらず、特定の態様の例であることが意図される。当業者に考えられる例示されている方法のあらゆるバリエーションが本発明の範囲に含まれることが意図される。いくつかの態様では、CNS血管透過性を低減させる効果について、本明細書に開示のモデル動物においてLp-PLA2を阻害する薬剤が評価され得る。いくつかの態様では、本明細書に開示のモデル動物、例えばSTZ誘発糖尿病ラットにおいて、Lp-PLA2を阻害する薬剤が評価され得る。いくつかの態様では、糖尿病および高コレステロール血症の組合せで誘発された血液/網膜関門透過性増大を示すモデル動物において、Lp-PLA2を阻害する薬剤が評価され得る。実施例1CNS血管透過性の低減におけるLp-PLA2阻害剤の効果糖尿病DM/高コレステロール血症HCブタ中でのLp-PLA2阻害剤方法:ブタにおける糖尿病の誘発ヨークシャー飼育農場ブタ約25~35kg;アーチャーファームズ社ArcherFarms製で、125mg/kgストレプトゾトシンの単回静脈内注射により糖尿病を誘発したMohleretal2008。血中のグルコースおよびコレステロールを詳細にモニタリングした。糖尿病誘発の3日後、高脂質食を用いて、血清コレステロール濃度が400~800mg/dlに固定された高コレステロール血症を実現した。ブタは高コレステロール食に対して変わりやすい血清コレステロール応答を示すので、コレステロール濃度を2ヶ月毎にチェックした。DMHC誘発の1ヶ月後、10mg/kg/dの選択的Lp-PLA2阻害剤Darapladibグラクソスミスクライン社製を経口投与された処置群または対照群に動物を無作為に割り当てた。誘発の28週間後すなわち、処置開始の24週間後にブタを屠殺した。実験終了時点では、対照群のブタ3頭を持続的にコレステロールレベルが上昇していたので分析から除外したため、対照群はブタ17頭、Darapladib処置群は20頭であった。3頭のブタを、DM-HCを誘発せずに、年齢が一致した対照として用いた。具体的な実験が公開されているWilenskyetal2008が、この論文中では血管漏出データは示されていない。形態学的および定量的な免疫組織化学的解析のためのブタ脳組織の調製非処置対照3頭、DMHC13頭、Darapladibで処置したDMHC13頭Rxを含むブタ29頭の脳の標本をパラフィンワックスで包埋した。各脳標本の連続切片を作製し、各サンプルを代表する第1の切片をヘマトキシリンおよびエオシンHEで染色し、染色の差に基づいて皮質領域を非皮質領域と区別して決定できるようにした。本実験全体で、解析する組織の量を最大にしてその後の定量化を有利にするために、全大面組織ブロックを用いた。コンピューター支援画像解析およびImageProPlusソフトウェアを用いて、HE染色切片中で、各切片中の皮質および非皮質脳組織の総面積平方mmを測定した。BBBの完全性および透過性の示標としての脳血管からの免疫グロブリンGIgGの漏出の免疫組織化学的検出脳の間質腔中にあるまたはニューロンもしくはアストロサイトに関連する全ての非血管性IgGの位置を特定するために、ブタ免疫グロブリンGIgGに特異的な抗体で各標本ブロックを代表する切片を免疫染色した。BBBが無傷intactと考えられる正常な脳では、BBBの完全性により、脳実質特に大脳皮質からIgGが効率的に排除される。これに基づき、間質IgG、IgGを含む血管周囲クラウド、ならびにニューロンおよび/またはアストロサイトに関連するIgGの存在を、局所的血漿漏出およびBBBの透過性増大または破綻の証拠と解釈した。パラフィン包埋組織の免疫組織化学を以前に報告されているように行ったD’Andreaetal2001;Nageleetal2002。簡潔に述べると、脳組織切片をキシレンで脱パラフィンし、濃度を段階的に下げたエタノール系列で再水和した。クエン酸バッファー中で切片にマイクロ波を照射することによりタンパク質の抗原性を高めた。0.3H2O2で切片を30分間処理することにより内因性ペルオキシダーゼをクエンチした。切片を、最初にブロッキング血清中でインキュベートし、次いで、適切に希釈した一次抗体抗ブタIgを用いて室温で1時間処理した。PBS中で十分にすすいだ後、ビオチン標識二次抗体を30分間アプライした。切片をアビジン-ペルオキシダーゼ標識ビオチン複合体ABC、ベクターラボ社VectorLabs製、フォスターシティー、カリフォルニア州で処理し、3-3-ジアミノベンジジン-4-HCLDAB/H2O2バイオメディア社Biomeda製、フォスターシティー、カリフォルニア州で処理することにより可視化した。次いで、切片をヘマトキシリンで軽く対比染色し、漸増濃度のエタノールで脱水し、キシレン中でクリアリングし、Permount中にマウントした。対照は、非免疫血清、すなわち一次抗体を含まない血清で処理した脳切片からなる。標本を調べ、ニコン社製FXA顕微鏡で写真を撮り、ニコン社製DXM1200Fデジタルカメラを用いてデジタル画像を記録し、ImageProPlusフェーズ3イメージング社Phase3Imaging製、グレンミルズ、ペンシルベニア州画像ソフトウェアで処理した。IgG漏出を示す血管の密度の定量分析血管BBB漏出の密度=脳組織切片中の単位面積当たりの漏出の数を以下のように計算した。コンピューター支援画像解析およびImageProPlusソフトウェアを用いた各HE染色切片の皮質および非皮質脳組織の総面積平方mm。HE染色手法を少し改変して、色の差に基づいて皮質と非皮質を容易に識別できるようにした。この染色手法の、非皮質と皮質を区別して示す能力を、詳細な顕微鏡検査で確認した。各切片の面積決定後、次の連続的組織切片を、脳組織中の全てのIgGの存在を検出するために、抗ブタIgG抗体で前述したように免疫染色した。各切片中の内部陽性対照は、当然、血管内IgGを含む血管から得た。皮質および非皮質中に見える血管で血管周囲漏クラウドを示した血管の輪郭の総数を数えることにより、各免疫染色切片を評価した。原因となる血管が切片の面の上または下にある多くの他の漏出クラウドも観察されたが、血管輪郭を含む漏出クラウドだけをカウントに含めた。各漏出クラウドに関連する血管を、細動脈、細静脈、または毛細血管として記録し、皮質または非皮質のいずれかとした。皮質または非皮質の単位面積平方mm当たりの漏出の数として漏出の密度を計算した。血管BBB漏出の程度の定量分析脳切片中に見られた個々の漏出クラウドを、漏出の程度、脳の具体的な領域、血管の種類細動脈、細静脈、または毛細血管、およびその皮質または非皮質的位置についてスコア化した。ここで、血管周囲漏出クラウドは、原因の血管が中心または中心付近にある円として現れるが、これらのクラウドは実際には3次元において円柱状であることに留意されたい。これらは円柱状であるので、切片中で見られる漏出クラウドの直径が2倍であれば、実際には、漏出クラウドの体積量はおよそ4倍になる。したがって、ここで使用および記載される値は、本当の3Dの値より過小評価されたものである。最後に、漏出クラウドの相対的サイズを漏出量または漏出の程度の尺度として用いた。DMHCブタ脳の大脳皮質全体にわたるアミロイドベータ1-42Aβ42ペプチドの量および分布の定量分析定量的免疫組織化学およびAβ42ペプチドに特異的な抗体を用いて、ブタ脳大脳皮質の組織切片中でAβ42を検出および定量化した。各標本ブロックを代表する切片を、Aβ42に特異的な抗体で免疫染色して調べ、ニコン社製FXA顕微鏡で写真を撮り、ニコン社製DXM1200Fデジタルカメラで画像を記録し、ImageProPlusフェーズ3イメージング社製、グレンミルズ、ペンシルベニア州画像ソフトウェアを用いて解析した。組織内の無作為に選択された5つの皮質部位のそれぞれで、20倍画像を、最も近い皮質層2~3領域で2枚、対応する皮質層4~6領域で2枚の4枚撮影した。このやり方で、各スライドから最大20枚の20倍画像を得た。画像解析には、ImageProPlus画像解析プログラム内で作動する自動サブプログラムを用いた。Aβ42免疫応答をほとんどまたは全く示さない対照画像を、同一の光強度、光フィルター、集光レンズおよび絞りの設定、ならびにデジタルカメラによる光増幅の条件下における基準閾値の設定に用いた。各20倍組織切片中に存在する全Aβ42を自動で測定し、データをエクセルのスプレッドシートにダウンロードし、解析した。観察結果糖尿病DM/高コレステロール血症HCブタにおける血管漏出に対するLp-PLA2阻害剤’848の効果Lp-PLA2の薬理学的阻害剤でブタを処置した結果、DM/HC対照動物嗜眠性、一般に反応がにぶいと比べて、10mg/kg/日のDarapladibを投薬された動物で全般的な健康促進効果活動および注意力の増加が示された。死体解剖後、SB480848処置DM/HC動物、対照DM/HC動物、および非糖尿病/非高コレステロール血症動物の脳を調べた。血液脳関門BBBが無傷である正常な脳では、BBBの完全性により、脳実質特に大脳皮質中からIgGが効率的に排除される。したがって、間質IgG、IgGを含む血管周囲漏出クラウド、ならびにニューロンおよび/またはアストロサイトに関連するIgGの存在は、局所的血漿漏出およびBBBの透過性増大または破綻の証拠であると解釈した。対照DM/HC動物は、脳の全種類の血管からの著しい血管漏出の証拠を示し、これは顕著な行動的特徴の説明となり得る。これは、血管内IgGを含む血管領域中の脳実質中における強力な組織化学的IgG免疫応答性により証明された。Darapladibは、脳微小血管系内の全種類の血管において漏出の程度を低減するのに有効であった図1および2参照。血液は、Aβ42ペプチドの主要供給源であり、Aβ42ペプチドは血清中では脳脊髄液の10倍濃縮されており、BBB透過性増大期間中に脳内に漏出することが分かっている。脳に入った後、Aβ42ペプチドは特定の種類の神経細胞内に蓄積し得るCliffordetal2007。DM/HCブタは、対照動物と比べて、大脳皮質および調べた脳の全ての領域の錐体ニューロン中で選択的にアミロイド蓄積の増加を示した。Darapladibは、非処置DM/HCブタと比べた時、皮質の全ての層で、DM/HCブタの脳中でのアミロイド蓄積を低減した。効果は、特定のニューロンに関連するAβ42ペプチドの量の減少これは中程度であったによるものではなく、Aβ42ペプチド陽性ニューロンの数密度の減少によるものであることが決定された図3、4、および5参照。総合すると、DM/HCブタの脳内におけるIgG染色およびAβ42ペプチド局在は、脳血管からの管腔物質が脳血管系から正常組織実質に逃げていることおよびそのような血管漏出が高コレステロール血症および糖尿病により誘発された代謝ストレスに起因することを示した。Darapladibによる処置は、代謝ストレスを受けた動物における行動変化を誘導すると考えられるだけでなく、代謝ストレスにより誘導されたBBB透過性の低減に高い有効性を示すようである。実施例2銅を与えた高コレステロール血症ウサギにおけるLp-PLA2阻害剤の効果方法:ウサギにおける高コレステロール血症の誘発3~4ヶ月の雄のSPFニュージーランドホワイト系マウスをコーヴァンス社Covance;デンバー、ペンシルベニア州から購入し、個々に収容し、12/12時間の光暗サイクルで、ウサギ用の固形飼料および水を自由に摂取させた。実験は3週間空けて到着した動物で2回繰り返した。ウサギを、1群当たり8頭のサンプルサイズで5つの処置群に無作為に割り当てた。32頭のウサギをコレステロール/銅食で飼育し、8頭のウサギには通常の固形飼料を与えた。コレステロール/銅食は、2コレステロールを添加したまたは添加していない、1日当たり160gの市販食PurinaMillsHighFibreDietからなる。コレステロール添加食を割り当てたウサギの飲料水には硫酸銅0.12mg/lを加えた。動物への投薬動物の体重を量り、首のひだへの皮下注射により、薬物または賦形剤を3ml/kgで投与して10mg/kgの投与量になるようにした。処置群8頭の動物からなる6群の動物を以下の処置群に割り当てた。第1~5群は、コレステロール添加食および硫酸銅を含む飲料水で飼育した。N-1-エチルピペリジン-4-イル-2-2-2-2,3-ジフルオロフェニル-エチル-4-オキソ-4H-クニナゾリン-1-イル-N-4’-クロロ-ビフェニル-4-イルメチルアセトアミド酒石酸水素塩がLp-PLA2阻害剤化合物、すなわち、Lp-PLA2阻害剤’859である。第1群:29~72日目まで賦形剤で毎日処置第2群:29から72日目までLp-PLA2阻害剤’85910mg/kgで毎日処置第3群:1~72日目まで賦形剤で毎日処置第4群:1~72日目までLp-PLA2阻害剤’85910mg/kgで毎日処置第5群:通常食で飼った処置なしの動物ウサギ血漿Lp-PLA2活性の測定1、29、32、および72日目に採取した血漿サンプル中のLp-PLA2活性を、所有のGSK技術を用いて測定した。ウサギ血液脳関門の透過性5つの処置群それぞれのウサギ3頭、合計ウサギ15頭に、血液脳関門透過性を評価するためのトレーサーを注射した。蛍光トレーサーのフルオレセインナトリウムNaFを用いてBBB透過性の変化を評価した。行った方法は、以前に報告されている方法Lenzseretal2005;Pharesetal2007;Morreyetal2008を改変したものである。動物にイソフルランで麻酔し、2NaFを含むPBS5mlを静脈内i.v.注射して30分間循環させた。次いで、動物を、無色の灌流液が観察されるまでPBSで5分間経心灌流45ml/minした。灌流後、動物を断頭し、脳を取り出し、左半球および右半球を単離した。左半球の重さを量り、10倍体積の50w/vトリクロロ酢酸に入れ、ホモジナイズし、13,000gで10分間遠心し、上清を5M水酸化ナトリウムで中和した。44/525nm励起/発光波長でNaF量を決定した。10~200ng/mlの基準を参照して蛍光色素含量を算出した。観察結果血漿Lp-PLA2へのLp-PLA2阻害剤’859によるウサギの処置反復測定分散分析ANOVAにより4つの時点でLp-PLA2活性を分析した。効果群は有効であったp<0.0001。有意効果群の事後分析から、高脂肪食の開始時からLp-PLA2阻害剤’859で処置されたウサギは72日のタイムコース全体で有意に低いレベルのLp-PLA2活性を示し、29日目から処置を受けた動物は72日目にLp-PLA2活性の低下を示すことが示された図6参照。血液脳関門の透過性通常食で飼育したウサギではBBB透過性がより低かったが、コレステロールおよび硫酸銅を添加した食餌で飼育したウサギはBBB透過性の大きな増大を示した。6つの群の透過性を比較した1元配置分散分析は統計的に有意であったF5,16=15.31、p<0.0001。ダネットの事後検定は、通常食動物と高コレステロール/CuSO4食で飼育した動物の透過性の間における有意な差を示した。高コレステロール/CuSO4を与えた動物において、賦形剤処置群と比べて、Lp-PLA2阻害剤’859処置動物における透過性の数的低下が観察された。これは、29~72日目および1~27日目に薬物を投与した時に顕著であった図7参照。しかし、サンプルサイズが小さ過ぎたため、これらの差は統計的に有意ではなかった。動物1頭を灌流がうまくいかなかったので分析から除いた。実施例3ストレプトゾトシンSTZ誘発糖尿病ラットにおけるLp-PLA2阻害剤STZ誘発糖尿病は一般的に使用されている1型糖尿病モデルであり、STZ糖尿病ラットは、血管拡張、基底膜肥厚、ニューロンおよびグリアの機能障害、ならびにiBRB破綻を含むヒトで見られる背景糖尿病性網膜症の病理学的特徴のほとんどをその網膜が示すので、前臨床モデルとして最も頻繁に使用されている動物種である。この糖尿病性網膜症モデルは薬物の有効性を評価するために広く使用されてきた。方法動物、糖尿病誘発、および薬物投与6週齡、体重180~200gの雄のSDラットを本実験に用いた。ラットは食料および水を自由に摂取でき、12時間の明暗サイクルで環境制御されたケージ中で飼育された。ストレプトゾトシンプロトコールの最初の3日間のそれぞれで、50mg/kg/日を腹腔内i.p.投与を含む10mMクエン酸ナトリウムバッファーpH4.6を動物に投与して糖尿病を誘発した。N-[2-ジメチルアミノエチル]-2-[[4-フルオロフェニルメチル]チオ]-5-1-メチル-1H-ピラゾール-4-イルメチル]-4-オキソ-N-[[4’-トリフルオロメチル[1,1’-ビフェニル]-4-イル]メチル]-14H-ピリミジンアセトアミドLp-PLA2阻害剤’495を10ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリンまたはDMSO:1メチルセルロース1:99に可溶化し、Lp-PLA2阻害剤’859をDMSO:1メチルセルロース1:99に可溶化し、それぞれ、4~31日目および4~18日目に10mg/kg/日でi.p.注射により投薬した。9mMを超える上昇した血糖値を維持した動物を糖尿病と見なした。SDラットにおける血糖の測定一晩絶食後、尾静脈から25~40μlの血液を取り、ジョンソン社ライフスキャン事業部製OneTouchUltraEasyBloodGlucoseMonitoringSystemを用いて、メーカーの説明書に従い操作して血糖値を測定した。ストレプトゾトシン投与の前と後の両方で血糖値を測定した。SDラットの血漿Lp-PLA2活性の測定市販のLp-PLA2アッセイキットのAZWellAutoPAF-AHアッセイコスモバイオ株式会社製、日本、wwwcosmobiocojpをメーカーの説明書に従って用いて、血清サンプル中のLp-PLA2活性を測定した。実験的光干渉断層法OCTシステム市販のフーリエドメインOCTRTVue-100;バージョン2.1;オプトビュー社Optovue,Inc.製、カリフォルニア州、米国で網膜画像をスキャンした。中心波長が840nm、全帯域幅が50nmのスーパールミネセントダイオード光源をOCTに適応させた。手動で調整したRTVueスキャナーの自動ソフトウェアで網膜厚を評価した。網膜色素上皮から網膜神経節細胞層GCLまでの層から網膜厚を定義した。光干渉断層法OCTイメージングならびに網膜厚および網膜液滲出の測定の方法2つの別個の実験を行った。第2の実験では、実験の4、10、13、17、22、28、および31日目に、第1の実験では、実験の0、4、7、10、14および、18日目に網膜画像を撮った。5イソフロウランの吸入により動物に麻酔をかけ、1トロピカミドおよび1フェニルエフリンで瞳孔を拡張させた。OCT分析の前に、動物をサポートフレームに固定し、画像化する眼を、眼底に垂直なスキャンビームの中心と整列するように配置した。スキャン長さが2mmのラインスキャンパターン1024軸方向スキャンを用いて画像を得た。画像化後、動物を回復させ、ケージに戻した。6つの時点のOCT測定から得られた網膜厚を、Prismソフトウェアを用いて反復測定分散分析ANOVAで分析した。ANOVAが有意な主効果を示した場合、更にスチューデントt検定を用いて化合物処置群と賦形剤対照との間の差を明らかにした。全てのデータは平均値±SEMで表される。エバンスブルーを用いた網膜血管透過性の決定この方法は、実験動物の網膜中に存在するエバンスブルーの測定にLC-MS/MSを用いたこと以外は以前に公開されている方法Xuatel2001に従って行った。動物を30mg/kgのアベルチンで麻酔し、腹部の皮膚および筋肉を切開し、腸骨の動脈および静脈を注意深く露出させ、それぞれ内径0.28mmおよび0.58mmのポリエチレンチューブでカニューレ処置し、ヘパリン添加食塩水で満たした。エバンスブルー食塩水中30mg/mlを45mg/kgの用量で10秒かけて腸骨静脈から注射した。エバンスブルー注射の2分後、腸骨動脈から50μlの血液を抜き取り、初期エバンスブルー血漿濃度を得た。その後、注射後2時間まで30分間隔で腸骨動脈から50μlの血液を抜き取り、時間平均エバンスブルー血漿濃度を得た。注入から正確に2時間後に、50μlの血液を左心室から抜き取り、最終エバンスブルー血漿濃度を得た。結果を血漿1マイクロリットル当たりのエバンスブルーのマイクログラム数で表す。灌流の直後、両眼の眼球を摘出し、赤道で二分した。次いで、手術用顕微鏡下で網膜を注意深く解剖して分離した。解剖後、網膜サンプルをspeed-vacで乾燥させ、次いで、重さを量った後、メタノール20μl/mg組織を添加した。その後、組織をホモジナイズし、12000rpmで10分間の遠心によりタンパク質を沈殿させた。上清30μlを、30μlのH2Oおよび6μlの内部標準液2,3-ジヒドロ-5-メチル-n-[6-[2-メチル-3-ピリジニルオキシ]-3-ピリジニル]-6-トリフルオロメチル-1H-インドール-1-カルボキサミド、国際公開第97/48699号に開示、H2O中20ng/mlで希釈した。更にボルテックスし、4000rmpで5分間遠心した後、上清10μlをLC-MS/MSシステムに注入して、網膜サンプル中のエバンスブルー濃度を測定した。LC法の移動相はA1mMCH3COONH4-CH3CN9/1、v/vおよびBCH3CN-CH3OH4/1、v/vとした。グラジエントを表1に定義されるように流した。表2:網膜組織中のエバンスブルーのLC-MS/MS測定のMSパラメーターを表2Aおよび2Bに示す。網膜の乾燥重量および網膜中へのエバンスブルー色素漏出をアッセイした。以下の式を用いて血液網膜関門破綻を計算した。ラット脳微小血管内皮細胞BMECの単離3週齢のSprague-DawleySDラットを頸椎脱臼により屠殺した。白質、髄膜、および肉眼で見える軟膜血管を除去した後、氷冷したダルベッコ変法イーグル培地DMECで灰白質を十分にトリチュレートした。次いで、コラゲナーゼII1mg/mlおよびDNaseI39U/mlを含むDMEM5つのラット脳に7ml中、振盪速度130rpm、37°Cで1時間、組織を消化した。消化した組織を同じ体積のDMEMで希釈し、1000g、4°Cで8分間遠心した。細胞ペレットを20ウシ血清アルブミンBSA-DMEM溶液に再懸濁し、1000g、4°Cで20分間遠心した。ペレット中に得られた微小血管を、コラゲナーゼ-ディスパーゼ1mg/mLおよびDNaseI39U/mlを含むDMEM5つのラット脳に3mlを用いて37°Cで0.5時間更に消化した。消化した微小血管溶液を同じ体積のDMEMで希釈し、700g、4°Cで6分間遠心した。ペレットを再懸濁し、33連続パーコールグラジエント上に層にし、1000g、4°Cで10分間遠心した。微小血管層を回収し、同じ体積のDMEMで2回洗浄した。得られた微小血管断片を、6×105細胞/cm2の密度で、ECM-コラーゲンコートTranswellインサート0.33cm2中の補足内皮基本培地ヒドロコルチゾン、hEGF、VEGF、hFGF-B、R3-IGF-1、アスコルビン酸、ゲンタマイシン/アムホテリシンB、および5FBSを含むEBM商標-2、ロンザ社Lonza製にプレーティングした。BMECを付着させ、24時間遊走させた後、培地を、4μg/mlのピューロマイシンを含む補足EBM商標-2に変えた。ピューロマイシン処置の2日後、培養培地を補足EBM商標-2に交換して更に2日間維持した後、共培養モデル構築のためのそれらの準備が整った。ラットアストロサイトの単離および培養新生仔SDラットからラット大脳アストロサイトを得た。髄膜を含まない脳皮質を刻んで、0.125トリプシン-EDTAで10分間3mL/ラット脳で消化した。同じ体積の10FBS-DMEMを添加することによりトリプシンの活性を停止させた。懸濁液を分散させ、1000gで5分間遠心した。細胞ペレットを10FBS-DMEM溶液で再懸濁し、その後、100μmおよび40μmのフィルターに通した。ろ液を遠心し、10FBS-DMEMに再懸濁した後、ポリLリジンコートされたフラスコに密度1×105細胞/cm2でプレーティングした。培地は3日に1回交換した。培養9日後、混入しているミクログリアを除去するために、37°C、95相対湿度、および5CO2の雰囲気でフラスコを一晩振盪した。得られたアストロサイトを更に継代するか-80°Cで冷凍保存した。共培養したインビトロBBBモデルの構築および経内皮電気抵抗の測定10FBS-DMEMに懸濁したアストロサイトを継代1~4代目に密度1.5×104/cm2でポリLリジンコート24ウェル培養プレートに播種した。24時間後、Transwell上で5日間培養したBMECを、アストロサイトを含む24ウェル培養プレートに移した。管腔側および反管腔側コンパートメントの培地を、550nMヒドロコルチゾンを含む無血清補足EBM商標-2に2日間交換した。Millicell-ERSミリポア社製、ベッドフォード、マサチューセッツ州を用いて毎日、単分子層の経内皮電気抵抗TEERを測定し、TEER>150Ωcm2の場合、単分子層は輸送実験への準備が整っているとした。リゾホスファチジルコリンリゾ-PCでBMEC単分子層を処理した後、同一のTEER測定を行った。対応のないスチューデントの両側t検定により統計解析を行った。BMEC-アストロサイト共培養中でのルシファーイエローの透過性0.3、1、3、6、および10μg/mLのリゾPCをTranswellシステム共培養プレートのアピカル側に加えてBMEC単分子層を処理し各濃度につきn=4、次いで、2μLのルシファーイエローを同様にアピカル側に加えてルシファーイエローの終濃度が100μMになるようにした。吸い込みと分注を複数回行うことで各ウェルのアピカル側の組織培養液を十分に混合した。投与されたBMEC単分子層を、130rpmのオービタルシェーカー上で混合しながら、37°C、95相対湿度、5CO2の加湿したチャンバー中で90分間インキュベートした。90分間インキュベートした後、50μLのドナー培地アピカルおよび100μLのレシーバーバソラテラル培地を吸引した。蛍光検出励起波長485nm、発光波長530nmを用いて、ドナーおよびレシーバーコンパートメント中のルシファーイエロー濃度を測定した。以下の式を用いてルシファーイエローの透過性を決定した。式中、VDおよびVRはそれぞれ、mLで表したドナーおよびレシーバーの培地体積である。Aは、cm2で表した膜表面積であり、tは秒で表した輸送時間である。CRtは、時間t90分におけるレシーバーコンパートメントのルシファーイエローの測定濃度である。CDtは、時間t90分におけるドナーコンパートメントのルシファーイエローの測定濃度である。対応のないスチューデントの両側t検定により統計解析を行った。観察結果STZで3日間のSDラットにおける糖尿病の誘発により、空腹時血糖が上昇し、これは実験期間中維持された。予想された通り、Lp-PLA2阻害剤’49510mg/kg/日での処置は、STZで誘発された高血糖を変化させなかった。STZで処置しなかった動物は、実験期間全体を通して、およそ5mMの正常な血糖値を維持した図8参照。STZによるSDラット処置は、血漿Lp-PLA2活性も上昇させ、これはその後、投薬後3時間および投薬後24時間で観察されるように、Lp-PLA2阻害剤’49510mg/kgの単回投与により抑制された。この効果は、10mg/kgLp-PLA2阻害剤’495の連日投薬の2回目の24時間後に更により顕著であり、血漿Lp-PLA2活性は、STZで処置した動物では更に上昇していたが、Lp-PLA2阻害剤’495では上昇していなかった図9参照。これらのデータは、Lp-PLA2阻害剤’495が血漿Lp-PLA2活性を阻害するインビボ活性の直接的証拠を提供する。SDラットにおける高血糖の誘発は、網膜中でアルブミンに会合したエバンスブルー色素の血管外漏出を増加させた。このことは、そのような高血糖が血液網膜関門の透過性を増大させることができることの直接的証拠を提供する。網膜実質へのエバンスブルー透過性および血管外漏出は、高血糖等の刺激に応答したインビボ血液網膜関門透過性を示すための、数多く利用されており且つ確立された技術であるXuetal2001。31日間の高血糖の誘発は、非糖尿病動物と比べて動物の大部分で血液網膜関門の透過性を増大させた。網膜透過性の増大は、Lp-PLA2阻害剤’49510mg/kgで毎日動物を処置することにより弱まったが、これは非糖尿病対照が示すレベルまでは弱められず、非処置糖尿病動物と統計的に有意な差はなかったが、効果の傾向は明確であった図10、A、B参照。インビボで網膜透過性を評価するための更なる方法は、光干渉断層法OCTで網膜を直接画像化することであり、これにより、生きた動物中で網膜の個々の層を区別することができ、網膜層の構造中の乱れを評価することができる。網膜内の網膜下液の存在を識別することも可能であり、そのような計測手段は、糖尿病性眼疾患の診断および処置のモニタリングに臨床的に使用されている。この技術を用いて、正常血糖動物、高血糖動物、およびLp-PLA2阻害剤’49510mg/kg/日で28日間処置した高血糖動物における液の網膜下滲出を評価した。正常血糖動物はいずれも14日目までに網膜下液蓄積の証拠を示さなかったが、高血糖動物は動物の40が網膜液蓄積の徴候を示してスクリーニングされた。しかし、Lp-PLA2阻害剤’49510mg/kg/日で処置した高血糖動物は、OCTによれば、明確な網膜液蓄積を有する動物を示さなかった図11参照。このデータは、SDラットにおいて急性高血糖に続く網膜透過性を緩和するこのクラスの化合物の効果を示している点でエバンスブルー透過性データを裏付けている。血液網膜関門透過性が増大すると、網膜の恒常性が失われ、神経網膜が変性する。この特徴は前臨床モデルおよびヒト糖尿病黄斑浮腫患者の両方で観察されるBurselletal1996;Ahlersetal2009。前臨床モデルでは、これは、網膜の層中で組織化されている神経細胞数の減少、その後、網膜神経節細胞層RGCと網膜色素上皮RPEの間の層として定義される神経網膜層全体の菲薄化として現れる。OCTを用いて、網膜層の厚さを決定した。2つの個々の実験を行い、50mg/kg/d、i.pのSTZで3日間動物を処置すると、網膜厚が時間依存的に劇的に減少した。第1の実験では、10mg/kg/日のLp-PLA2阻害剤’495での処置により、8日目の処置開始後、STZ誘発網膜菲薄化が部分的ではあるが有意に阻害され、10日目および18日目に統計的差を評価した。図12、A、B、C参照、両方の時点でp<0.05。Lp-PLA2阻害剤’859での処置4日目に開始も、網膜厚の減少を示したが、この効果は賦形剤のみで処置した動物と統計的に有意な差ではなかった図12、A、B、およびC。但し、Lp-PLA2阻害剤’859は、ラットLp-PLA2酵素に対してLp-PLA2阻害剤’495よりも有意に弱い阻害剤であることに注意されたい。独立した第2の実験では、STZ50mg/kg/d、i.p.で3日間処置した動物で、網膜厚が時間依存的に劇的に減少し、これは糖尿病誘発処置されていない動物と比べて有意な差であったp<0.001、t検定。後からLp-PLA2阻害剤’495STZで処置したSTZ処置動物は、賦形剤で処置した糖尿病ラットと比べて網膜菲薄化の発現が有意に減弱されたp<0.001、t検定図13参照。酸化リン脂質に対するLp-PLA2の作用は、リゾ-ホスファチジルコリンの生成を仲介し、リゾ-ホスファチジルコリンは強力な炎症性脂質であると提唱されており、白血球動員および炎症を誘導することが知られているTanetal2009。血液CNS関門脳または網膜のインビトロモデルにリゾPCを加えると、この薬剤は、そのようなインビトロ培養物を通常は透過できず、インビボ実験ではCNSから完全に排除される、ルシファーイエロー等の物質の輸送増大を仲介することができるSarkeretal2000。密着した内皮単分子層を誘導するためにラット脳アストロサイトと共培養したラット脳微小血管内皮細胞を用いた実験により、内皮単分子層のアピカル面にリゾPCを添加するとルシファーイエローの輸送が用量依存的に減少することが実証された図14A参照。ルシファーイエローの輸送増大は、細胞単分子層の密着結合の完全性の示標である経内皮電気抵抗TEER測定値の低下とも関連していた図14B参照。透過性増大の仲介におけるリゾPCの作用はヒト冠状動脈内皮細胞でも観察されており、単分子層の透過性を増大させ、密着結合に関連するタンパク質および接着結合に関連するタンパク質の両方の発現を低下させることが示されているYanetal2005。リゾPCの作用は更に、これらの実験においてかなりのスーパーオキシドを発生させ、抗酸化剤処置により、リゾPCで刺激された単分子層の透過性は有意に阻害されたYanetal2005。Lp-PLA2活性の生成物、すなわちリゾPCの、内皮単分子層透過性制御における作用は、網膜血管系におけるLp-PLA2活性が糖尿病黄斑浮腫で起こる血管透過性増大の原因の一部であるという考えを更に裏付けている。リゾPCが発生すると、当然その後、血清酵素リゾホスホリパーゼDの作用を介してリゾホスファチジン酸LPAが発生しUmezuGotoetal2002、これは血管系および白血球の両方に対して種々の薬理学的活性を有する。実施例4ストレプトゾトシンSTZ誘発糖尿病Brown-NorwayラットにおけるLp-PLA2阻害剤STZ誘発糖尿病は一般的に使用されている1型糖尿病モデルであり、STZ糖尿病BNラットは、血管拡張、基底膜肥厚、ニューロンおよびグリアの機能障害、ならびにiBRB破綻を含むヒトで見られる背景糖尿病性網膜症の病理学的特徴のほとんどをその網膜が示すので、前臨床モデルとして最も多く使用されている動物種である。この糖尿病性網膜症モデルは薬物の有効性評価に広く使用されている。方法動物、糖尿病の誘発、および薬物投与6週齡、体重180~200gのBrownNorwayBNラットを本実験に用いた。ラットは食料および水に自由に摂取でき、12時間の明暗サイクルで環境制御されたケージ中で飼育された。ストレプトゾトシンプロトコールの最初の3日間のそれぞれに65mg/kg/日を腹腔内i.p.投与を含む10mMクエン酸ナトリウムバッファーpH4.6を動物に投与して糖尿病を誘発した。Lp-PLA2阻害剤’495を10ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリンまたはDMSO:1メチルセルロース1:99に可溶化し、Lp-PLA2阻害剤’859をDMSO:1メチルセルロース1:99に可溶化し、それぞれ、4~31日目および4~18日目に10mg/kg/日でi.p.注射により投薬した。9mMを超える上昇した血糖値を維持した動物を糖尿病と見なした。BNラットにおけるエバンスブルーを用いた網膜血管透過性の決定この方法は、EDを分光測定で決定したこと以外は、SDラットについて以前に報告されている、以前に公開されている方法Xuatel2001に従って行った。血液網膜関門の完全性および透過性の示標としての網膜血管からのラット免疫グロブリンGIgGの漏出の免疫組織化学的検出眼球を摘出し、鋸状縁に沿って半分に分割し、硝子体液を除去した。眼杯を4w/vパラホルムアルデヒド中で30分間浸漬固定し、PBSで洗浄し、網膜を剥離した。固定網膜を凍結保護し、液体窒素で冷却したイソペンタン中で瞬間凍結したsnapfrozenTissue-TekOCTcompoundに包埋し、12μmの凍結切片を作製した。非血管性のIgGおよびイソレクチンB4の位置を特定して網膜切片中の網膜血管の位置を決定するために、ラット免疫グロブリンGIgGに特異的な抗体で切片を免疫染色し、共焦点顕微鏡で観察した。ニコン社製TE-2000C1共焦点システムニコン社製、キングストンアポンテムズ、英国を用いて蛍光を可視化した。いくつかのケースでは、ヨウ化プロプリジウム染色で網膜血管を強調した。観察結果エバンスブルーによる網膜血管透過性の評価アルブミン測定2週間の実験で、実験中の通常の血糖モニタリングおよびHbA1cの測定により、ストレプトゾトシン処置群における持続的な高血糖が示された。持続的高血糖は、網膜におけるアルブミンの漏出を少し増大させた。しかし、このモデル固有のばらつきおよび一般的に高血糖により誘発されるEB漏出の程度が低いことにより、この漏出は統計的に有意ではなかった。Lp-PLA2阻害剤’49510mg/kg、i.p.、QDでの処置はこの漏出を正常血糖群が示すレベルまで低減させたが、やはり、ばらつきが大きいため、このデータは統計的に堅固robustでなかった図3、上および中央のパネル。しかし、糖尿病誘発後にLp-PLA2阻害剤’495i.p.、QDで4週間処置したBNラットは、高血糖後に続くアルブミンの血管透過性増大の抑制におけるLp-PLA2阻害剤’49510mg/kg、i.p.、QDの統計的に有意な効果を示したp<0.04、糖尿病賦形剤処置動物に対して、図15。BNラットへの投薬10mg/kg、i.p.、QDは、高血糖ラットにおいてトラフLp-PLA2阻害レベル89.72週間実験および93.24週間実験を示し、これは、クリニックで12週間後に88のLp-PLA2活性阻害を示した160mg投与量のLp-PLA2阻害剤’848実験LPL104884と比べて遜色がない。これらの観察結果は、免疫組織化学による決定で網膜中へのアルブミンの血管外漏出が容易に観察可能であった同一動物におけるLp-PLA2阻害剤’495の効果と一致する。免疫組織学的検出による網膜血管透過性の評価エバンスブルー用の処理を行わなかった動物に由来する網膜を用いて免疫組織化学的アルブミン検出を行った。凍結切片内の網膜血管をヨウ化プロピヅイムPI染色またはイソレクチンB4染色IB4のいずれかで強調した。抗アルブミンmAbを用いてラットアルブミンを強調した。非糖尿病網膜では、両方の標識が強く共局在しており、アルブミンが血管内に制限されていることが示されている。表層superficial:SPおよび深部神経叢deepplexus:DPの血管を認識することができる。このことは、iBRBが正常に機能していることを示している。糖尿病ラットSTZ処置後31日目では、特に血管層矢印に隣接する領域付近の血管コンパートメントおよび神経網にアルブミンが局在しており、これは、サイズが約40kDaのタンパク質に対するiBRBの破綻、したがって、網膜中への血清の漏出を示している。SB435495で処置した糖尿病動物は、賦形剤のみで処置した高血糖動物と比べて、漏出が少なく、アルブミンと網膜血管の広範囲な共局在を示している。これらの知見は、2および4週間実験の動物に由来する切片中に明白である。脈絡膜は元々漏出性の血管床であるので、予想された通り脈絡膜に大量のアルブミンがある図16および17参照。これらの実験は、SB435495の10mg/kg図17および20mg/kgi.p、QD図16投与が、アルブミンタンパク質の血管外漏出によって示される高血糖で誘発される血管透過性の増大を抑制できることを明確に示しているが、CNS血管における血管透過性の増大は、種々のサイズの分子に対する血管透過性の制御の変化を特に伴い得る。総合すると、糖尿病および高コレステロール血症の組合せにより誘導した血液網膜関門透過性の増大が薬理学的に活性なLp-PLA2阻害剤を用いた処置に応答性であることを示すウサギおよびラットのデータは、疾患進行の主な原因要素がCNS血管系関門の破綻である疾患例えば糖尿病性黄斑浮腫においてそのような薬理学的阻害剤による介入が有益であることを実証している。ブタ脳データは、この網膜データと一致する。CNS血液関門破綻の結果、しばしば虚血および浮腫が起こり、これは究極的に、患部組織の神経変性および血管変性の両方を生じ、細胞死/細胞喪失を招く。神経変性はしばしば、網膜厚の減少として現れ且つ容易に測定される。STZ処置ラットにおいて糖尿病を誘発すると網膜厚が減少し、これが、開示されているLp-PLA2の薬理学的阻害剤を用いた処置により部分的に逆転したことは注目に値する。これらの薬剤の透過性に対する効果および網膜厚の維持により評価される網膜保護は、糖尿病の眼への影響に苦しむ糖尿病患者で進行中の血管変性プロセスから網膜を保護するのにこれらの化合物が有益であることを示唆する説得力のある事例を提供している。種々の活性Lp-PLA2阻害剤の有意な薬理学的効果は、高血糖または高血糖および高コレステロール血症で疾患が開始される様々な種speciesに治療上有益な効果を示した。例示した実験におけるLp-PLA2化合物の効果に加えて、Lp-PLA2活性の産物が高度に炎症性の脂質であり、これが低血糖症および高脂血症に続くこれらのヒト疾患に関連する血管透過性効果および炎症効果の仲介を担っていると考えられる詳細な証拠がある。いくつかの態様では、Lp-PLA2を阻害する薬剤の最適用量は、Lp-PLA2の活性および/または発現を低減する用量、例えば、Lp-PLA2遺伝子にコードされるmRNA等の核酸の発現を低減したまたはLp-PLA2タンパク質の発現もしくは活性を低減した用量である。別の態様では、Lp-PLA2を阻害する薬剤の最適用量は、例えば、限定されるものではないが、あらゆる原因による、例えばRVO、炎症、手術後、牽引等による黄斑浮腫;AMD;ぶどう膜炎;糖尿病性の眼の疾患および障害;糖尿病性網膜症等を含む眼の疾患もしくは障害の処置もしくは防止またはそのような眼の疾患もしくは障害の症状の軽減において最大の保護効果を生じる用量である。いくつかの態様では、処置対象の患者集団は、中心部に影響する成人DME患者である。別の態様では、患者集団は真性糖尿病1型または2型に罹患している。一態様では、DMEの確認はフルオレセイン血管造影を用いてなされる。一態様では、中心窩を含む網膜の肥厚DMEは、SD-OCTの中央亜領域の厚さがHeidelbergSpectralisでは330ミクロン超、ZeissCirrusでは310超であることにより決定される。いくつかの態様では、投薬は硝子体内注射による。いくつかの態様では、投薬は経口送達による。具体的な有効量は、160mgを超えない最大1日経口投与量である。好ましくは、有効量は、Lp-PLA2阻害剤の、腸溶性コーティングされたマイクロ化遊離塩基錠剤として製剤化される。より具体的な有効量は、Darapladibの、腸溶性コーティングされたマイクロ化遊離塩基錠剤160mgを超えない最大1日経口投与量である。いくつかの態様では、特にDMEに対する処置前のベースラインと比較した、最高矯正視力BCVAおよび網膜厚を、本明細書に開示のLp-PLA2阻害剤を用いた処置の有効性の示標とする。いくつかの態様では、投薬は、処置効果が認識される前に、一定期間行われる。特定の態様では、処置は、30日間が推奨される、Lp-PLA2阻害剤を含む医薬組成物の連日経口投与である。別の態様では、処置は、60日間が推奨される、Lp-PLA2阻害剤を含む医薬組成物の連日経口投与である。更に別の態様では、処置は、90日間が推奨される、Lp-PLA2阻害剤を含む医薬組成物の連日経口投与である。一態様では、中心部に及ぶDMEに罹患した対象におけるLp-PLA2阻害剤の投与の有効性を決定するために、BCVAで測定を行った。別の態様では、中心部に及ぶDMEに罹患した対象におけるLp-PLA2阻害剤の投与の有効性を決定するために、眼の中心亜領域についてスペクトラルドメインOCTSD-OCTイメージングを用いて分析を行った。別の態様では、眼のフルオレセイン血管造影漏出領域、眼底写真網膜肥厚領域、およびSD-OCT黄斑体積、網膜下液、網膜内嚢胞の1または複数によって評価される網膜の解剖学的形態の変化を用いて処置の有効性を決定した。いくつかの態様では、処置の有効性を評価するために、対象は1または複数の以下の追加的な眼の疾患または障害を有さない。例えば、白内障、緑内障、虚血性視神経障害、色素性網膜炎、糖尿病性網膜症、虚血性黄斑症、脈絡膜血管新生、眼内手術。組成物の処方化合物、例えば、本明細書に開示のLp-PLA2を阻害する薬剤は、医薬として用いることができ、あるいは、本明細書に開示の有用性の1または複数を備えた医薬組成物を製剤化するために用いることができる。これらは、インビトロで培養中の細胞に、インビボで体内の細胞に、または後で同じもしくは異なる個体の体に戻すことができる個体の外側の細胞にエクスビボで投与することができる。そのような細胞は、脱凝集されていてもよく、固形組織として提供されてもよい。化合物、例えば、本明細書に開示のLp-PLA2を阻害する薬剤は、医薬または他の医薬組成物を製造するために用いることができる。薬学的に許容可能な担体を更に含んでなるLp-PLA2を阻害する薬剤および個体への組成物の送達に有用な構成要素を更に含んでなる組成物の使用は当該技術分野で公知である。そのような担体および他の構成要素を本明細書に開示の薬剤に添加することは当業者の技術水準に十分含まれる。いくつかの態様では、組成物は、全身送達用に適合された製剤として投与され得る。いくつかの態様では、組成物は、特定の臓器、例えば、限定されるものではないが、肝臓、骨髄への送達または全身送達用に適合された製剤として投与され得る。あるいは、医薬組成物は、エクスビボで細胞の培養培地に添加することができる。活性化合物に加えて、そのような組成物は、薬学的に許容可能な担体と、投与を容易にするおよび/または取り込みを促進することが知られている他の成分例えば、食塩水、ジメチルスルホキシド、脂質、ポリマー、親和性に基づく細胞特異的標的システムを含み得る。組成物は、例えば、ペレットまたはディスクとして形成されたゲル、スポンジ、または他の浸透性マトリックス中に組み込まれて局所的持続放出のために内皮の近くに配置されてよい。組成物は、単回投与で投与されてもよく、異なる時点で投与される複数回投与で投与されてもよい。医薬組成物は任意の公知の経路で投与することができる。例えば、組成物は、粘膜、肺、経口、局所等の局所経路または全身経路例えば、経腸および非経口により投与することができる。本発明において、非経口投与および非経口投与されたという語句は、経腸および局所投与以外の、通常は注射による投与形態を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、室内intraventricular、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、脳脊髄内、および胸骨内の注射、注入、および他の注射または注入技術を含み、これらに限定されない。本発明において、全身投与、全身投与された、末梢投与、および末梢投与されたという語句は、本明細書に開示の薬剤が動物の全身に入り、したがって、代謝および同様のプロセスを受けるような、本明細書に開示の薬剤の投与、例えば皮下投与を意味する。本発明において薬学的に許容可能なという語句は、健全な医学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、アレルギー応答等の問題または合併症がなく、妥当なベネフィット/リスク比と釣り合っており、ヒトおよび動物の組織に接触させての使用に適した、化合物、材料、組成物、および/または製剤を指して使用される。本発明において薬学的に許容可能な担体pharmaceuticallyacceptablecarrierという語句は、1つの臓器または体の一部から別の臓器または体の一部への目的薬剤の運搬または輸送に関わる、薬学的に許容可能な材料、組成物、または賦形剤、例えば液体または固体の充填剤、希釈剤、補形剤、溶媒、または封入材料を意味する。各担体は、製剤のその他の成分と共存可能であるいう意味で許容される必要があり、例えば、担体は処置への薬剤の影響を低下させない。換言すると、担体は薬剤的に不活性である。投薬の量およびタイミング、製剤、ならびに投与経路の好適な選択は、糖尿病性眼疾患に罹患しているまたはそのリスクがある対象において好ましい反応を実現しすなわち有効性、対象への過度な毒性またはその他の害を回避するすなわち安全性という目標が達成されるようになされ得る。したがって、有効なeffectiveとは、所望の効果を実現するための条件の日常的な操作を含む選択を意味する。1日1回短時間で個体に投与される製剤のボーラスは便利な投与スケジュールである。あるいは、有効な一日量を、投与のために複数回投与量、例えば1日2~12回投与量に分割することができる。医薬組成物中の活性成分の用量レベルも、個体中において化合物またはその誘導体の一過的または持続的な濃度が実現されるようにおよび所望の治療的反応または保護が得られるように、変更することができる。しかし、所望の治療効果を達成するのに要求されるよりも少ないレベルで投薬を開始して所望の効果が得られるまで用量を徐々に増やすことも当該技術分野の技術に含まれる。投与されるLp-PLA2を阻害する薬剤の量は、化合物の生理活性およびバイオアベイラビリティ例えば、体内での半減期、安定性、および代謝;化合物の化学的特性例えば、分子量、疎水性、および溶解度;投与の経路およびスケジューリング等の当業者に公知の因子によって異なる。任意の特定の個体用に達成される特定の投与量レベルが年齢、性別、健康、病歴、体重、1または複数の他の薬物との組合せ、および疾患の重症度を含む種々の因子に依存し得ることも理解される。眼疾患の処置に関連する処置treatmentという用語は、とりわけ、疾患の進行を防止することまたは疾患の経過を変化させること例えば、限定されるものではないが、疾患の進行を遅くする、疾患の症状を逆転させること、対象における1もしくは複数の症状および/または1もしくは複数の生化学マーカーを軽減すること、1もしくは複数の症状の悪化もしくは進行を防止すること、回復を促進するもしくは予後を改善すること、ならびに/またはそれらのない対象において疾患を防止すること、ならびに既に存在する疾患の進行を遅くするもしくは軽減することを意味する。所定の対象について、症状の改善、その悪化、後退、または進行は、客観的または主観的尺度により決定することができる。予防的方法例えば、再発の防止または軽減も処置とみなされる。いくつかの態様では、処置は更に、他の既存の処置形態、例えば、眼疾患を処置するための既存の薬剤、例えば抗VEGF治療薬、例えばルセンティス商標、アバスチン商標、およびアフリベルセプト商標、ならびにステロイド、例えば、トリアムシノロン、およびフルオシノロンアセトニドを含むステロイドインプラントとの組合せも含み得る。いくつかの態様では、本明細書に開示のLp-PLA2を阻害する薬剤は、他の薬剤、例えば神経変性疾患を防止および/または処置する治療剤と組み合わせることができる。そのような薬剤は、神経変性性の疾患または障害の処置および/または防止のために現在使用されているまたは開発されている、予防的および/または治療的効果を有し得且つ/または眼の障害または疾患の症状を軽減し得る任意の薬剤であり得る。したがって、Lp-PLA2を阻害する1または複数の薬剤と1または複数の他の医学的手法を更に併用した処置が実施され得る。更に、処置は、Lp-PLA2の発現または活性を阻害する複数の薬剤を含んでなってもよい。対象に投与される量は、好ましくは、その投与により得られる利点を超える毒作用を誘導しない量である。更なる目的は、認められているケアの標準と比較して、個体において、疾患の症状による数値を下げること、重症度を下げること、および/またはその他の点で苦痛を軽減することである。現在の規制に従う化合物の製造は、政府機関例えば米国食品医薬品局により優良試験所基準GLPおよび優良製造規範GMPで規制されている。これは、正確且つ完全な記録の保持およびQA/QCの監視を要求する。インフォームドコンセントが得られていること;製品の安全性、生理活性、適切な用量、および有効性がフェーズ中に研究されていること;結果が統計的に有意であること;および倫理指針に従っていることを確実にするための、機関または機関委員会による患者プロトコールの監督も想定される。モデル動物を用いたプロトコールならびに毒性化学物質の使用および規制の遵守の同様な監督も要求される。Lp-PLA2の発現および/または活性を阻害することを目的とした、用量、製剤、用量体積、投与計画、および結果の分析方法は異なり得る。したがって、最小および最大の有効量は投与方法に応じて変わる。眼疾患に関連した臨床的および組織学的変化の抑制が特定の用量範囲内で起こり得るが、この用量範囲は、投薬を受ける生物、投与経路、Lp-PLA2を阻害する薬剤が他の共刺激分子と組み合わせて投与されるのかどうか、およびLp-PLA2阻害剤投与の具体的投与計画によって異なる。例えば、一般的に、経鼻投与で必要な用量は、経口、経腸、直腸、または膣内投与よりも少ない。本発明と使用するための経口または経腸製剤では、当該技術分野で周知の固形担体を用いて定法に従って錠剤が製剤化され得る。本発明の方法と使用する経口製剤のために使用されるカプセル剤は、ゼラチンまたはセルロース誘導体等の任意の薬学的に許容可能な材料から製造することができる。経口投与製剤用の徐放性経口送達システムおよび/または腸溶性コーティング、例えば、1987年11月3日付けで付与された米国特許第4,704,295号EntericFilmCoatingCompositions、1985年12月3日付けで付与された米国特許第4、556,552号EntericFilmCoatingCompositions、1982年1月5日付けで付与された米国特許第4,309,404号SustainedReleasePharmaceuticalCompositions、および1982年1月5日付けで付与された米国特許第4,309,406号SustainedReleasePharmaceuticalCompositionsに記載されているものも予期される。本明細書中の使用のための具体的な有効量は、Lp-PLA2阻害剤の、160mgの腸溶性コーティングされたマイクロ化遊離塩基錠剤である。より具体的な有効量は、Darapladibの、160mgの腸溶性コーティングされたマイクロ化遊離塩基錠剤である。固形担体の例としては、デンプン、糖、ベントナイト、シリカ、および他の一般的に使用される担体が含まれる。本発明の製剤中で使用することができる担体および希釈剤の更なる非限定的な例としては、食塩水、シロップ、デキストロース、および水が含まれる。腸溶性コーティングされた製剤本明細書に開示されている式I~IVのようなLp-PLA2阻害剤の小さな化学的実体を投与するための製剤に関して、特に有用な態様の1つは、腸溶性ポリマー剤皮を備えたLp-PLA阻害剤を含んでなる錠剤である。そのような製剤の例は国際公開第2005/021002号に見出すことができる。コア中の活性材料は、マイクロ化または可溶化された形態で存在し得る。活性材料に加えて、コアは、圧縮錠剤の分野で慣習的な添加剤を含み得る。そのような錠剤中の適切な添加剤は、希釈剤、例えば無水ラクトース、ラクトース一水和物、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、またはこれらの混合物;結合剤、例えば微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピル-セルロース、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、またはアラビアゴム、またはこれらの混合物;崩壊剤、例えば微結晶性セルロース結合剤および崩壊剤の両方の機能を果たす架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、またはこれらの混合物;滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、滑剤または流動補助剤flowaid、例えばコロイダルシリカ、タルク、またはデンプン、および安定化剤、例えば乾燥非晶質シリカ、着色剤、香味剤等を含んでなり得る。好ましくは、錠剤は、ラクトースを希釈剤として含んでなる。結合剤が存在する場合、結合剤は好ましくはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。好ましくは、錠剤はステアリン酸マグネシウムを滑沢剤として含んでなる。好ましくは、錠剤は、クロスカルメロースナトリウムを崩壊剤として含んでなる。好ましくは、錠剤は微結晶性セルロースを含んでなる。希釈剤はコアの10~80重量の範囲で存在し得る。滑沢剤はコアの0.25~2重量の範囲で存在し得る。崩壊剤はコアの1~10重量の範囲で存在し得る。微結晶性セルロースは、存在する場合、コアの10~80重量の範囲で存在し得る。活性成分は、好ましくは、コアの重量の10~50、より好ましくはコアの重量の15~35を構成する遊離塩基相当物として計算。コアは、任意の治療上好適な用量レベルの活性成分を含み得るが、好ましくは最大150mgを活性成分の遊離塩基として含む。特に好ましくは、コアは、20、30、40、50、60、80、または100mgを活性成分の遊離塩基として含む。活性成分は、遊離塩基としてまたは任意の薬学的に許容可能な塩として存在し得る。活性成分が塩として存在する場合、塩の遊離塩基として計算して、錠剤が所望の量の活性成分を含むように重量を調整する。コアは、その構成要素を小型化した混合物から作製され得る。構成要素は、直接圧縮してもよく、造粒してから圧縮してもよい。そのような顆粒は、当該技術分野で公知の従来の造粒プロセスにより形成することができる。別の態様では、顆粒は、腸溶性剤皮entericcasingで個々にコーティングされた後、標準的なカプセル剤皮に封入されてよい。コアは、腸溶性ポリマーを含んでなる剤皮で覆われている。腸溶性ポリマーの例としては、酢酸フタル酸セルロース、セルロースアセタートスクシナート、フタル酸メチルセルロース、エチルヒドロキシセルロースフタラート、ポリビニルアセタートフタラート、ポリビニルブチラートアセタート、酢酸ビニル-無水マレイン酸コポリマー、スチレン-マレイン酸モノエステルコポリマー、メチルアクリラート-メタクリル酸コポリマー、またはメタクリラート-メタクリル酸-オクチルアクリラートコポリマーが挙げられる。これらは、単独または組み合せて用いてよく、あるいは上記以外のポリマーと一緒に用いてもよい。剤皮は、生きた体の中で分解も可溶化もしない不溶性物質、例えばアルキルセルロース誘導体、例えばエチルセルロース、架橋ポリマー、例えばスチレン-ジビニルベンゼンコポリマー、ヒドロキシルを有する多糖、例えばデキストラン、二官能性架橋剤、例えばエピクロロヒドリン、ジクロロヒドリン、または1、2-、3、4-ジエポキシブタンで処理されたセルロース誘導体を含んでもよい。剤皮はデンプンおよび/またはデキストリンを含んでもよい。好適な腸溶性コーティング材料は、単独でまたは可塑剤と共に使用される、市販のオイドラギット腸溶性ポリマー、例えば、オイドラギットL、オイドラギットS、およびオイドラギットNEである。そのようなコーティングは通常、液体媒体を用いて適用され、可塑剤の性質は、媒体が水系であるか非水系であるかによって異なる。水系溶媒と用いる可塑剤としては、プロピレングリコール、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、またはCitroflexもしくはCitroflexA2が含まれる。非水系可塑剤としては、これらならびにフタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、およびセバシン酸ジブチルが含まれる。好適な可塑剤はクエン酸トリエチルである。含められる可塑剤の量は当業者に明らかである。剤皮は、粘着防止剤、例えばタルク、シリカ、またはモノステアリン酸グリセリンも含んでよい。好ましくは、粘着防止剤はモノステアリン酸グリセリンである。典型的には、剤皮は、約5~25wtの可塑剤および最大約50wtの粘着防止剤、好ましくは1~10wtの粘着防止剤を含み得る。所望であれば、ポリマーの水性懸濁液形成を促進するために界面活性剤を含めてよい。可能な界面活性剤の多くの例が当業者に公知である。界面活性剤の好適な例は、ポリソルベート80、ポリソルベート20、またはラウリル硫酸ナトリウムである。存在する場合、界面活性剤は、剤皮の0.1~10、好ましくは0.2~5、特に好ましくは0.5~2を形成し得る。一態様では、コアと腸溶性コーティングとの間にシールコートが含まれる。シールコートとは、コア中のあらゆるアルカリ性成分により起こり得る化学的攻撃から腸溶性剤皮を保護するために用いることができるコーティング材料である。シールコートは更に、表面をより滑らかにすることにより、腸溶性剤皮の付着をより容易にする。好適なコーティングは当業者に公知である。好ましくはシールコートは、Opadryコーティングで作られており、特に好ましくはOpadryWhiteOY-S-28876である。あらゆる原因による、例えばRVO、炎症、手術後、牽引等による黄斑浮腫;AMD;ぶどう膜炎;糖尿病性の眼の疾患および障害;糖尿病性網膜症等の、LpPLA2による処置は、局所的に、局所的点眼薬、眼周囲注射例えばテノン嚢下として、または硝子体内注射により投与されてもよい。固体インプラント生分解性であってもなくてもよいまたは生分解性ポリマーマトリックス例えばマイクロ粒子等の技術を用いることにより薬物の持続放出を実現してもよい。これらは眼周囲または硝子体内のいずれかで投与されてよい。参照文献本明細書中および本願中で引用した参照文献を参照により本明細書に援用する。"