"黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼに特異的に結合し、かつ黄色ブドウ球菌のインビボ増殖を阻害する、モノクローナル抗体またはその結合部分。前記黄色ブドウ球菌がメチシリン耐性である、請求項1に記載のモノクローナル抗体。前記抗体または前記結合部分が、10-9Mを上回るアフィニティーでグルコサミニダーゼの保存されたエピトープに結合する、請求項1に記載のモノクローナル抗体。前記黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼのR3ドメイン内に全体的にまたは部分的に位置するエピトープに、前記抗体または前記結合部分が結合する、請求項1に記載のモノクローナル抗体。SEQIDNO:36に示される、自己分解酵素のアミノ酸776~873位、776~931位、776~1016位または842~948位にわたるグルコサミニダーゼポリペプチドフラグメントに結合する、請求項1に記載のモノクローナル抗体。以下のアミノ酸配列:、またはXが任意のアミノ酸である、または、または、またはXが任意のアミノ酸である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるのうちの1つを含むVHドメインを含むか、あるいは、以下のアミノ酸配列:、または、またはXが任意のアミノ酸である、または、または、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるのうちの1つを含むVLドメインを含む、請求項1に記載のモノクローナル抗体。1C11、1E12、2D11、3A8、または3H6と呼ばれるハイブリドーマ細胞株によって産生される、請求項1に記載のモノクローナル抗体。黄色ブドウ球菌の細胞非依存性溶解を促進する、請求項1に記載のモノクローナル抗体。Gmdの活性を約70~約80阻害する、請求項1に記載のモノクローナル抗体。前記インビボ増殖阻害が、500,000CFUの生物発光性黄色ブドウ球菌に感染させた下腿インプラントを移植された動物モデルを使用して測定される、請求項1に記載のモノクローナル抗体。ヒト化された、請求項1~10のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体。請求項1に記載のモノクローナル抗体結合部分。Fabフラグメント、Fvフラグメント、一本鎖抗体、VHドメイン、またはVLドメインを含む、請求項12に記載のモノクローナル抗体結合部分。請求項1~11のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または請求項12もしくは13に記載の結合部分を発現する、細胞株。ハイブリドーマ1C11、1E12、2D11、3A8または3H6である、請求項14に記載の細胞株。担体と、1つ以上の請求項1~11のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、または1つ以上の請求項12に記載のモノクローナル抗体結合部分とを含む、薬学的組成物。前記担体が水溶液である、請求項16に記載の薬学的組成物。抗生物質または免疫療法剤をさらに含む、請求項16に記載の薬学的組成物。前記抗生物質が、バンコマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、ゲンタマイシン、フシジン酸、ミノサイクリン、コトリモキサゾール、クリンダマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン-ダルフォプリスチン、ダプトマイシン、チゲサイクリン、ダルババンシン、テラバンシン、オリタバンシン、セフトビプロール、セフタロリン、イクラプリム、およびカルバペネムCS-023/RO-4908463から成る群より選択される、請求項18に記載の薬学的組成物。前記免疫療法剤が、テフィバズマブ、BSYX-A110、またはAurexis商標である、請求項18に記載の薬学的組成物。患者に整形外科用インプラントを導入する方法であって、整形外科用インプラントを必要とする患者に、請求項1~11のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、請求項12に記載のモノクローナル抗体結合部分または請求項16に記載の薬学的組成物の有効量を投与する段階、該患者に該整形外科用インプラントを導入する段階を含む、方法。前記導入する段階の前に、前記投与を繰り返す段階をさらに含む、請求項21に記載の方法。前記導入する段階の後に、前記投与を繰り返す段階をさらに含む、請求項21に記載の方法。前記投与が全身に実施される、請求項21に記載の方法。前記投与が移植部位に直接実施される、請求項21~24のいずれか1項に記載の方法。前記整形外科用インプラントが、人工関節、グラフト、または合成インプラントである、請求項21に記載の方法。前記人工関節が、人工膝関節、人工股関節、人工指関節、人工肘関節、人工肩関節、人工側頭下顎関節、または人工足関節である、請求項26に記載の方法。前記グラフトまたは前記合成インプラントが、人工椎間板、半月板インプラント、または、合成もしくは同種移植片の前十字靱帯、内側側副靱帯、外側側副靱帯、後十字靱帯、アキレス腱もしくは回旋筋腱板である、請求項26に記載の方法。前記患者に第2の治療剤を投与する段階をさらに含み、該第2の治療剤が抗生物質または免疫療法剤である、請求項21~28のいずれか1項に記載の方法。前記抗生物質が、バンコマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、ゲンタマイシン、フシジン酸、ミノサイクリン、コトリモキサゾール、クリンダマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン-ダルフォプリスチン、ダプトマイシン、チゲサイクリン、ダルババンシン、テラバンシン、オリタバンシン、セフトビプロール、セフタロリン、イクラプリム、およびカルバペネムCS-023/RO-4908463から成る群より選択される、請求項29に記載の方法。前記免疫療法剤が、テフィバズマブ、BSYX-A110、またはAurexis商標である、請求項29に記載の方法。前記整形外科用インプラントが全関節再置換術のための人工関節であり、前記方法が、前記患者に該整形外科用インプラントを導入する前記段階の前に、感染した人工関節を該患者から取り出し、かつ該感染に関して該患者を治療する段階をさらに含む、請求項21に記載の方法。前記治療する段階が、抗生物質、請求項1~11のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、請求項12に記載のモノクローナル抗体結合部分、請求項16に記載の薬学的組成物またはそれらの組み合わせの有効量を投与することを含む、請求項32に記載の方法。前記全関節再置換術の間の感染または再感染を予防するのに効果的である、請求項32または33に記載の方法。黄色ブドウ球菌感染を治療する方法であって、黄色ブドウ球菌感染を有する患者に、請求項1~11のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、請求項12に記載のモノクローナル抗体結合部分または請求項16に記載の薬学的組成物の有効量を投与する段階を含む、方法。前記投与を繰り返す段階をさらに含む、請求項35に記載の方法。前記投与が全身に実施される、請求項35に記載の方法。前記投与が前記黄色ブドウ球菌感染の部位に直接実施される、請求項35に記載の方法。黄色ブドウ球菌感染の前記部位が、皮膚、筋肉、心臓、呼吸器、胃腸、眼、腎臓および尿路、または骨および関節の感染を含む、請求項38に記載の方法。前記患者に第2の治療剤を投与する段階をさらに含み、該第2の治療剤が抗生物質または免疫療法剤である、請求項35~39のいずれか1項に記載の方法。前記抗生物質が、バンコマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、ゲンタマイシン、フシジン酸、ミノサイクリン、コトリモキサゾール、クリンダマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン-ダルフォプリスチン、ダプトマイシン、チゲサイクリン、ダルババンシン、テラバンシン、オリタバンシン、セフトビプロール、セフタロリン、イクラプリム、およびカルバペネムCS-023/RO-4908463から成る群より選択される、請求項40に記載の方法。前記免疫療法剤が、テフィバズマブ、BSYX-A110、またはAurexis商標である、請求項40に記載の方法。骨髄炎を治療する方法であって、黄色ブドウ球菌の骨感染または関節感染を有する患者に、請求項1~11のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、請求項12に記載のモノクローナル抗体結合部分または請求項16に記載の薬学的組成物の有効量を投与する段階を含む、方法。前記投与を繰り返す段階をさらに含む、請求項43に記載の方法。前記投与が全身に実施される、請求項43に記載の方法。前記投与が、前記黄色ブドウ球菌の骨感染または関節感染の部位に直接実施される、請求項43に記載の方法。前記患者に第2の治療剤を投与する段階をさらに含み、該第2の治療剤が抗生物質または免疫療法剤である、請求項43~46のいずれか1項に記載の方法。前記抗生物質が、バンコマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、ゲンタマイシン、フシジン酸、ミノサイクリン、コトリモキサゾール、クリンダマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン-ダルフォプリスチン、ダプトマイシン、チゲサイクリン、ダルババンシン、テラバンシン、オリタバンシン、セフトビプロール、セフタロリン、イクラプリム、およびカルバペネムCS-023/RO-4908463から成る群より選択される、請求項47に記載の方法。前記免疫療法剤が、テフィバズマブ、BSYX-A110、またはAurexis商標である、請求項47に記載の方法。前記患者が、50歳を超えているか、または免疫無防備状態である、請求項21~49のいずれか1項に記載の方法。発明の詳細な説明一態様において、本発明は、黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼに特異的に結合し、かつ黄色ブドウ球菌のインビボ増殖を阻害する、モノクローナル抗体に関する。本発明のモノクローナル抗体は、メチシリン耐性の黄色ブドウ球菌を標的とするようなものであってもよい。本明細書に使用される際、用語抗体は、天然源由来または組み換え源由来の免疫グロブリン、ならびに免疫グロブリンの免疫反応部分すなわち、抗原結合部分を含むように意図される。本発明のモノクローナル抗体は、例えば、実質的に純粋なモノクローナル抗体、抗体フラグメントまたは結合部分、キメラ抗体、およびヒト化抗体EdHarlowandDavidLane,USINGANTIBODIES:ALABORATORYMANUALColdSpringHarborLaboratoryPress,1999、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるを含む、様々な形態で存在してもよく、または単離されてもよい。本発明のモノクローナル抗体は、黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼまたはそのフラグメントに結合する特異性によって特徴付けられる。抗体は、黄色ブドウ球菌自己分解酵素AtlのグルコサミニダーゼGmdサブユニット中の、免疫優性エピトープに特異的に結合する。これらのモノクローナル抗体は、黄色ブドウ球菌のインビボ増殖を阻害する。免疫優性抗原は、免疫系によって最も容易に認識され、このため、誘導された抗体の特異性に最も影響を与える、抗原決定基の一部である。免疫優性エピトープは、抗原上のエピトープを指し、宿主生命体において、実質的にその抗原上の他のエピトープを除外するような免疫応答を選択的に引き起こす。通常、免疫優性エピトープを保有する可能性のある抗原は、病原性生命体の外表面上の抗原を選択することによって識別することができる。例えば、真菌類、細菌、およびウイルス等、最も単純な生命体は、病原性生命体の外表面に露出される、1つまたは2つのタンパク質を有する。これらの外表面タンパク質が、適切な抗原を保有する可能性が最も高い。免疫優性エピトープを保有する可能性が最も高いタンパク質は、全タンパク質をゲル上に泳動し、病原性生命体に感染した生命体に由来する血清に対するウエスタンアッセイ法において識別することができる。その血清由来の結合抗体は、例えば、周知のELISA技術のうちの1つにおいて、標識化された抗抗体により識別される。免疫優性エピトープは、病原性生命体に感染した宿主生命体からの血清を検査することによって識別することができる。宿主生命体において免疫応答を誘導することができる既知の抗原に結合する抗体の含有量で、その血清を評価する。もし免疫優性エピトープがこれらの抗原中に存在する場合、実質的にその血清中の全抗体が、他の抗原エピトープにほとんど結合することなく、免疫優性エピトープに結合することになる。Atlは、黄色ブドウ球菌の独特な触媒活性を有するペプチドグリカン加水分解酵素のうちの1つであり、有糸分裂中における細胞壁の消化に必須であるBabaandSchneewind,TargetingofMuralyticEnzymestotheCellDivisionSiteofGram-PositiveBacteria:RepeatDomainsDirectAutolysintotheEquatorialSurfaceRingofStaphylococcusaureus,EMBO.J.1716:4639-461998、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。増殖の必須遺伝子であることに加えて、走査電子顕微鏡により、黄色ブドウ球菌に結合する抗Atl抗体が、二分裂中、細菌の細胞壁に覆われていない部位に局在することを明らかにしているYamadaetal.,AnAutolysinRingAssociatedWithCellSeparationofStaphylococcusaureus,J.Bacteriol.1786:1565-711996、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。Atl酵素は、開裂プロセスを介して同じAtl前駆タンパク質から産生される、アミダーゼ62kDおよびグルコサミニダーゼ53kDを含むBabaandSchneewind,TargetingofMuralyticEnzymestotheCellDivisionSiteofGram-PositiveBacteria:RepeatDomainsDirectAutolysintotheEquatorialSurfaceRingofStaphylococcusaureus,Embo.J.1716:4639-461998、Komatsuzawaetal.,SubcellularLocalizationoftheMajorAutolysin,ATLandItsProcessedProteinsinStaphylococcusaureus,MicrobiolImmunol.41:469-791997、Oshidaetal.,AStaphylococcusaureusAutolysinThatHasanN-acetylmuramoyl-L-alanineAmidaseDomainandanEndo-beta-N-acetylglucosaminidaseDomain:Cloning,SequenceAnalysis,andCharacterization,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.921:285-91995、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。この自己分解酵素は、3つの約150アミノ酸の細胞壁結合ドメインR1、R2、およびR3によって、細胞壁に保持される。最終の成熟ステップにおいて、タンパク質分解開裂が、アミニダーゼドメインならびにその関連するR1およびR2ドメインを、グルコサミニダーゼおよびその関連するN末端R3ドメインから分離する。例示であり限定するものではなく、1つの例示的な黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼは、以下のSEQIDNO:36のアミノ酸配列を含む。SEQIDNO:36において、下線の残基は、コードされた自己分解酵素の783~931残基に対応し、R3ドメインを表す。残りのC末端残基下線なしは、触媒グルコサミニダーゼドメインに対応する。ある実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、10-9Mを上回るアフィニティーで、黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼの保存されたエピトープに結合する。本明細書で使用される際、エピトープは、モノクローナル抗体によって認識される、黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼの抗原決定基を指す。本発明の抗体によって認識されるエピトープは、直鎖エピトープ、すなわち、グルコサミニダーゼのアミノ酸配列の一次構造であってもよい。あるいは、本発明の抗体によって認識されるエピトープは、非直鎖または立体配座のエピトープ、すなわち、グルコサミニダーゼの三次構造であってもよい。ある実施形態において、モノクローナル抗体は、Gmdの触媒ドメインに特異的に結合することができる。他の実施形態において、モノクローナル抗体は、R3ドメインに特異的に結合することができる。本明細書において特定される5つのモノクローナル抗体が結合するエピトープは、R3ドメイン内に全体的にまたは少なくとも部分的に位置する。例示として、mAb3A8が結合するエピトープは、776~842残基を含む領域内に位置し、mAb1C11が結合するエピトープは、842~873残基を含む領域内に位置し、mAb2D11および1E12が結合するエピトープ1つまたは複数は、同じか、または異なり、842~948残基を含む領域内に位置し、mAb3H6が結合するエピトープは、907~948残基を含む領域内に位置する。ある実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、黄色ブドウ球菌Gmd阻害活性を有し、この場合、そのモノクローナル抗体はGmdの活性を少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、または少なくとも50阻害する。他の実施形態において、そのモノクローナル抗体はGmdの活性を少なくとも60、少なくとも70、または少なくとも80阻害する。本明細書に記載の5つのモノクローナル抗体mAb3A8、1C11、2D11、1E12、および3H6は、約70~約80パーセントの抗Gmd阻害活性を有する。本発明の抗体が、酵素活性を阻害する触媒ドメインではなく、細胞壁結合ドメインであるとされるR3ドメインに結合することは、予想外であり驚くべき結果である。理論に制約されるものではなく、本発明の抗体のR3ドメインへの結合は、グルコサミニダーゼの触媒ドメインの立体配座的または静電気的な変化をもたらすと考えられる。Gmd活性の阻害は、インビトロで測定することができる。1つの方法として、最初にGmdの力価を事前測定し、60分後にA490において約50の低減をもたらす濃度を確定する。次いで、PBSTに希釈した50μLの抗体を、96ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに加え、続いて、50μLの適切に希釈されたGmdを添加し、混合液を5分間以上インキュベートし、最後に100μLの0.15mLを添加し、開始A490を測定する。プレートを37°Cでインキュベートし、A490を30分および60分において測定する。阻害パーセントを、100×1-Δ60Α490阻害剤/Δ60Α490阻害剤無しの対照として算出する。ある実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、黄色ブドウ球菌の密集もしくは凝集、黄色ブドウ球菌の細胞非依存性溶解、またはその両方をもたらす活性を有する。黄色ブドウ球菌の凝集をもたらす活性を有する抗体の例には、モノクローナル抗体1C11、1E12、2D11、3A8、および3H6が挙げられるが、これらに限定されない。溶解性抗体の一例は、モノクローナル抗体1C11である。この抗体は、R3ドメイン中に存在する特有のエピトープに結合し、約70~約80パーセントのGmd阻害活性を示し、黄色ブドウ球菌の細胞非依存性溶解を促進する。本発明のモノクローナル抗体はまた、黄色ブドウ球菌のインビボ増殖を阻害する。黄色ブドウ球菌のインビボ増殖の阻害は、多数の適切な標準法に従って、測定することができる。1つのそのような実施形態において、黄色ブドウ球菌のインビボ増殖は、添付の実施例に記載の種類のバイオルミネセンスアッセイ法に従って評価することができる。具体的には、発光黄色ブドウ球菌Xen29、ATCC12600Francisetal.,MonitoringBioluminescentStaphylococcusaureusInfectionsinLivingMiceUsingaNovelluxABCDEConstruct,Infect.Immun.686:3594-6002000、また、Contagetal.,PhotonicDetectionofBacterialPathogensinLivingHosts,Mol.Microbiol.184:593-6031995も参照されたく、これらの各々は、全体として参照することによって本明細書に組み込まれるを、使用し、手術による移植の前に、下腿インプラントに500,000CFUで投与する。5週齢のメスBALB/cJマウスに、手術の3日前に、生理食塩水n=10、または0.25mlの生理食塩水に溶解した1mgの精製抗体を腹腔内注射してもよい。様々な日にち例えば、0、3、5、7、11、および14においてマウスを撮像して、発光を評価し、BLIの比較画像により、生理食塩水対照に対して、抗体が黄色ブドウ球菌のインビボ増殖を阻害するかどうかを比較評価することができる。一実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、以下のアミノ酸配列のうちの1つを含む、VHドメインを含む:、またはXが任意のアミノ酸である、または、または、またはXが任意のアミノ酸である、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:6、図13を参照、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:31、図11を参照、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:7、図15を参照、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:35、図17Aを参照。別の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、以下のアミノ酸配列のうちの1つを含むVLドメインを含む:、または、または、または、または、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:13、図14Aを参照、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:14、図16を参照、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:32、図12を参照、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:33、図14Bを参照、またはXが任意のアミノ酸もしくはその欠失であるコンセンサス配列のSEQIDNO:37、図17Bを参照。本発明の抗体はまた、合成抗体であってもよい。合成抗体は、組み換えDNA技術を使用して作製される抗体、例えば、バクテリオファージによって発現される抗体等である。あるいは、合成抗体は、本発明の抗体をコードもしくは発現させるDNA分子の合成、または抗体を特定するアミノ酸の合成によって作製され、DNAまたはアミノ酸配列は、当該技術分野で利用可能であり周知の合成DNAまたはアミノ酸配列技術を使用して得られる。本発明のモノクローナル抗体は、ヒト化されることができる。ヒト化抗体は、可変領域内に、最小限の非ヒト例えば、マウス抗体由来の配列を含む抗体である。このような抗体は、被験者に投与した際の抗原性およびヒト抗マウス抗体の反応を減弱させ、治療に使用される。実際には、ヒト化抗体は、一般的に、最小限から全く無しまでの非ヒト配列を有するヒト抗体である。ヒト抗体は、ヒトにより産生されるか、またはヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。抗体は、ヒト抗体の相補性決定領域CDRを、所望の特異性、アフィニティー、および能力を有する非ヒト抗体例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター等のものと置換することによって、ヒト化することができるJonesetal.,ReplacingtheComplementarity-DeterminingRegionsinaHumanAntibodyWithThoseFromaMouse,Nature321:522-5251986、Riechmannetal.,ReshapingHumanAntibodiesforTherapy,Nature332:323-3271988、Verhoeyenetal.,ReshapingHumanAntibodies:GraftinganAntilysozymeActivity,Science239:1534-15361988、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。ヒト化抗体を、抗体の特異性、アフィニティー、および/または能力をさらに改良するためおよび最適化するために、Fv構造領域中、および/または置換された非ヒト残基内のいずれかにおける追加の残基の置換によって、さらに修飾することができる。ヒト化抗体は、当該技術分野で既知の様々な技術を使用して産生することができる。インビトロで免疫化されたか、または免疫個体から単離され、対象とする抗原に対する抗体を産生する不死化ヒトBリンパ球が作製できる例えば、Reisfeldetal.,MONOCLONALANTIBODIESANDCANCERTHERAPY77AlanR.Lissed.,1985、およびGarrardへの米国特許第5,750,373号を参照されたく、それらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。また、ヒト化抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択することもできる。Vaughanetal.,HumanAntibodieswithSub-NanomolarAffinitiesIsolatedfromaLargeNon-immunizedPhageDisplayLibrary,NatureBiotechnology,14:309-3141996、Sheetsetal.,EfficientConstructionofaLargeNonimmunePhageAntibodyLibrary:TheProductionofHigh-AffinityHumanSingle-ChainAntibodiestoProteinAntigens,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:6157-61621998、Hoogenboometal.,By-passingImmunisation.HumanAntibodiesFromSyntheticRepertoiresofGermlineVHGeneSegmentsRearrangedinvitro,J.Mol.Biol.227:381-81992、Marksetal.,By-passingImmunization.HumanAntibodiesfromV-geneLibrariesDisplayedonPhage,J.Mol.Biol.222:581-971991、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックマウスにて作製することもでき、該トランスジェニックマウスは免疫を受けた際に内因性の免疫グロブリンを産生することなくヒト抗体の全レパートリーを産生することができる。このアプローチは、Suraniらに対する米国特許第5,545,807号、Lonbergらに対する同第5,545,806号、Lonbergらに対する同第5,569,825号、Lonbergらに対する同第5,625,126号、Lonbergらに対する同第5,633,425号、およびLonbergらに対する同第5,661,016号に記載され、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。1C11のVHおよびVLドメインのアミノ酸配列を使用したGenbankのBLASTサーチに基づいて、ヒトゲノム内の同種配列を、それぞれ、IGVH7-81およびIGVK6D-21として同定した。これらの同種VHおよびVLドメインそれぞれSEQIDNO:19および20と、対応する1C11VHおよびVLドメインとのアラインメントを、それぞれ図17A~Bに図示する。VHおよびVLドメインは、相同領域すなわち、VHのCDR3H領域を除いて全体で、それぞれ約75および67もの驚くほどに高度な同一性を共有する。これらのIGVH7-81およびIGVK6D-21配列は、実質的に純粋な本発明のモノクローナル抗体の調製に使用することができる。CDR3Hは、VH遺伝子によってコードされていないため、好適なD領域を、欠落したドメイン領域へとスプライスする必要がある。いくつかの対象D領域候補のうちの任意の1つを使用することができる例えば、IGHD5-5、18、または1201。抗体全体に加えて、本発明は、このような抗体の結合部分も包含する。このような結合部分には、一価のFabフラグメント、Fvフラグメント例えば、一本鎖の抗体、scFv、および単一可変VHおよびVLドメイン、ならびに二価のFab′2フラグメント、Bis-scFv、二量体、三量体、ミニボディ等が挙げられる。これらの抗体フラグメントは、JamesGoding,MONOCLONALANTIBODIESPRINCIPLESANDPRACTICE98-118AcademicPress,1983およびEdHarlowandDavidLane,ANTIBODIES:ALABORATORYMANUALColdSpringHarborLaboratory,1988、Houstonetal.,ProteinEngineeringofAntibodyBindingSites:RecoveryofSpecificActivityinanAnti-DigoxinSingle-ChainFvAnalogueProducedinEscherichiacoli,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-58831988、Birdetal.,Single-ChainAntigen-BindingProteins,Science242:423-4261988に記載され、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる、タンパク質分解フラグメント化法等の従来法、または当該技術分野で既知の他の方法によって作製することができる。特に抗体フラグメントの場合においては、血中半減期を増加させるように抗体を修飾することが、さらに望ましい場合がある。これは、例えば、抗体フラグメント中の適切な領域の変異によりサルベージ受容体結合エピトープを抗体フラグメントに組み込むことによって、またはペプチドタグにエピトープ結合部位を組み込み、それが抗体フラグメントの末端または中間のいずれかに融合することによって例えば、DNAまたはペプチド合成によって、達成することができる。抗体模倣体もまた、本発明による使用に好適である。多数の抗体模倣体が、当該技術分野において既知であり、10番目のヒトフィブロネクチンIII型ドメイン10Fn3から得られるモノボディとして既知のものKoideetal.,TheFibronectinTypeIIIDomainasaScaffoldforNovelBindingProteins,J.Mol.Biol.284:1141-11511998、Koideetal.,ProbingProteinConformationalChangesinLivingCellsbyUsingDesignerBindingProteins:ApplicationtotheEstrogenReceptor,Proc.Natl.Acad.Sci.USA99:1253-12582002、これらの各々は、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる、およびブドウ球菌プロテインAの安定アルファへリックス細菌受容体ドメインZに由来する、アフィボディとして既知のものNordetal.,BindingProteinsSelectedfromCombinatorialLibrariesofanalpha-helicalBacterialReceptorDomain,NatureBiotechnol.158:772-7771997、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる等が挙げられるが、これらに限定されない。これらの抗体模倣体の調製において、VHおよび/またはVL鎖のCDR配列は、これらの抗体模倣体の可変ループ領域へグラフトすることができる推定CDRドメインについては、図11および17を参照されたい。グラフトは、少なくとも2つのアミノ酸残基から、CDR配列の置換とともに特定のループ領域に現れる1つのアミノ酸残基を除いて実質的に全ての欠失を伴う場合がある。挿入は、例えば、特定のループ領域の1つ以上の位置におけるCDRドメインの挿入であってもよい。本発明の抗体模倣体は、好ましくは、本出願において開示されるVHおよび/またはVL鎖配列に対して、少なくとも50のホモログであるアミノ酸配列を有する。ポリペプチドにおける、欠失、挿入、および置換は、既知のヌクレオチド配列以下を参照から出発する組み換え技術を使用して達成することができる。モノクローナル抗体産生のための方法は、本明細書に記載の技術または当該技術分野で周知の他の技術を使用して達成することができるMONOCLONALANTIBODIES-PRODUCTION,ENGINEERINGANDCLINICALAPPLICATIONSMaryA.RitterandHeatherM.Ladymaneds.,1995、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。一般的に、そのプロセスは、目的の抗原すなわち、黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼまたはそのペプチドフラグメントで事前に免疫された哺乳動物の脾臓から、免疫細胞リンパ球を得ることを伴う。抗体分泌リンパ球は、次に、細胞培養において無限に複製することができるミエローマ細胞あるいは形質転換細胞と融合され、このことにより、不死の免疫グロブリン分泌細胞株を産生することができる。哺乳動物のミエローマ細胞との、または細胞培養において無限に複製する能力のある他の融合パートナーとの融合は、標準的な周知の技術、例えば、ポリエチレングリコールPEGまたは他の融合剤を使用することによって達成されるMilsteinandKohler,DerivationofSpecificAntibody-ProducingTissueCultureandTumorLinesbyCellFusion,Eur.J.Immunol.6:5111976、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。不死の細胞株は、好ましくはマウスではあるが、他の哺乳動物種の細胞に由来してもよい。不死の細胞株は、特定の栄養素の利用に必要な酵素を欠如するよう、急速に増殖できるよう、および良好な融合能力を有するよう選択される。得られる融合細胞、またはハイブリドーマは培養され、その結果として得られるコロニーは、所望のモノクローナル抗体の産生によりスクリーニングされる。このような抗体を産生するコロニーをクローン化し、インビボまたはインビトロいずれかで増殖させ、多量の抗体を産生させる。したがって、本発明の第2の態様は、本発明のモノクローナル抗体を発現する細胞株に関する。一実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、1C11、1E12、2D11、3A8、または3H6と呼ばれる、ハイブリドーマ細胞株によって産生される。別の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその結合部分は、組み換え細胞または組み換え細胞株によって産生される。上述のように、モノクローナル抗体は、Cabillyらに対する米国特許第4,816,567号に記載され、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる、組み換えDNA方法を使用して作製することができる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅させる、オリゴヌクレオチドプライマーを使用して、RT-PCRによって成熟B細胞またはハイブリドーマ細胞から単離される。重鎖および軽鎖をコードする単離ポリヌクレオチドは、次に、大腸菌細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、またはそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しないミエローマ細胞等の宿主細胞に形質移入される際、モノクローナル抗体を発現および分泌する宿主細胞を生成する、好適な発現ベクターにクローニングされる。さらに、所望の種の組み換えモノクローナル抗体またはそのフラグメントを、ファージディスプレイライブラリーから単離することができるMcCaffertyetal.,PhageAntibodies:FilamentousPhageDisplayingAntibodyVariableDomains,Nature348:552-5541990、Clacksonetal.,MakingAntibodyFragmentsusingPhageDisplayLibraries,Nature352:624-6281991、およびMarksetal.,By-PassingImmunization.HumanAntibodiesfromV-GeneLibrariesDisplayedonPhage,J.Mol.Biol.222:581-5971991、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。本発明はまた、本発明のポリペプチドをコードする核酸分子を含む。一実施形態において、核酸はDNAである。このようなDNA配列の例は、本発明のVHおよび/またはVLコード配列を含むものである。ハイブリドーマ2D11VH最も近似する生殖細胞系列:J558.18.108をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:21を有する。ハイブリドーマ3H6VH最も近似する生殖細胞系列:J558.18.108をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:23を有する。ハイブリドーマ1E12VH最も近似する生殖細胞系列:7183.46VH7をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:25を有する。ハイブリドーマ3A8VH最も近似する生殖細胞系列:VHJ606.4.8.2をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:27を有する。ハイブリドーマ1C11VH最も近似する生殖細胞系列:VH9-15、DST4-C57B1-6、JH3をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:29を有する。2D11VL最も近似する生殖細胞系列:at4をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:22を有する。3H6VL最も近似する生殖細胞系列:cp9、JK1をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:24を有する。1E12VL最も近似する生殖細胞系列:ai4をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:26を有する。3A8VL最も近似する生殖細胞系列:KV19-25、JK2をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:28を有する。1C11VL最も近似する生殖細胞系列:VK23-43、JK5をコードするDNA配列は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:30を有する。本発明のなおもさらなる態様は、本発明の抗体または結合部分をコードするDNA分子、DNA分子の5′に操作可能に連結するプロモーター有効性DNA分子、およびDNA分子の3′に操作可能に連結する転写終結DNA分子を含む、DNA構築物である。本発明はまた、本発明のDNA構築物が挿入されている発現ベクターを包含する。本発明のポリペプチドの合成遺伝子は、突然変異を容易にするために便利な制限部位を含み、かつ高レベルのタンパク質発現に特定のコドンを使用するように、設計することができるGribskovetal.,TheCodonPreferencePlot:GraphicAnalysisofProteinCodingSequencesandPredictionofGeneExpression,Nuc.Acids.Res.12:539-5491984、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。遺伝子は、以下のように組み立てることができる。まず、遺伝子配列は、設計された制限部位の境界で、複数の部分に分割可能であり、各部分に対して、逆鎖をコードして、約15個の塩基の相補的重複を有する1組のオリゴヌクレオチドを合成することができ、その2つのオリゴヌクレオチドをアニーリングして、一本鎖領域を、DNAポリメラーゼのクレノーフラグメントを使用して埋めfillin、二重鎖のオリゴヌクレオチドを、フラグメント末端の制限酵素部位を使用して、たとえばpET3aベクターNovagen等のベクター内にクローニングすることができ、その配列は、DNAシークエンサーによって確認することができ、これらのステップは、全遺伝子を得るために、各部分で繰り返されてもよい。このアプローチは、1ステップのポリメラーゼ連鎖反応PCR法よりも、遺伝子のアセンブルに時間がかかるSandhuetal.,DualAsymetricPCR:One-StepConstructionofSyntheticGenes,BioTech.12:14-161992、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。Taqポリメラーゼによる低いフィデリティの複製によって突然変異がもたらされる可能性があり、多大な時間を必要とする遺伝子編集が必要となる。組み換えDNA操作を、SAMBROOKRUSSELL,MOLECULARCLONING:ALABORATORYMANUAL2ded.1989に従って実行することができ、これは、別段の指定がない限り、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。当該技術分野で周知のように、1ステップのPCR中の突然変異の発生を避けるために、高フィデリティ/低エラーのポリメラーゼを採用することができる。所望の突然変異は、カセット式変異誘発、オリゴヌクレオチド部位指向性変異誘発技術DengNickoloff,Site-DirectedMutagenesisofVirtuallyanyPlasmidbyEliminatingaUniqueSite,Anal.Biochem.200:81-881992、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる、またはKunkel変異誘発Kunkeletal.,RapidandEfficientSite-SpecificMutagenesisWithoutPhenotypicSelection,Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:488-4921985、Kunkeletal.,RapidandEfficientSite-SpecificMutagenesisWithoutPhenotypicSelection,MethodsEnzymol,154:367-3821987、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれるのいずれかを使用して、本発明のポリペプチド配列に導入することができる。カセット式変異誘発および部位指向性変異誘発のいずれも、特に望ましいヌクレオチドコード配列を作製するために使用することができる。カセット式変異誘発は、上述の遺伝子構築と同じプロトコールを使用して実行することができ、新しい配列をコードする二重鎖DNAフラグメントを、好適な発現ベクター内にクローニングすることができる。多くの変異は、新たな合成鎖コード変異と、遺伝子合成のために使用されるオリゴヌクレオチドとの組み合わせによって行うことができる。本発明によるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列へ突然変異を導入するために利用されるアプローチにかかわらず、塩基配列解析を実行して、設計された突然変異かつ、他の突然変異ではないが、変異誘発反応によって導入されたことを確認することができる。対照的に、Kunkel変異誘発を利用して、スクリーニング用のポリペプチドの組み合わせライブラリーを作製するために使用可能な、複数の変異型ポリペプチドコード配列をランダムに産生することができる。基本的には、標的化されたループ領域またはC末端もしくはN末端のテール領域は、NNKコドンNはA、T、G、およびCの混合を表し、Kは、GおよびTの混合を表すを使用して、ランダム化することができるKunkeletal.,RapidandEfficientSite-SpecificMutagenesisWithoutPhenotypicSelection,MethodsEnzymol.154:367-3821987、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。本発明によるポリペプチドをコードする核酸分子を調製するために使用するアプローチにかかわらず、核酸は、従来の組み換えDNA技術を使用して宿主細胞に組み込むことができる。一般的に、これは、DNA分子が異種であるすなわち、通常は存在しない発現系にDNA分子を挿入することを伴う。異種DNA分子を、センス方向および正確なリーディングフレームで、発現系または発現ベクターに挿入する。ベクターは、挿入されたタンパク質コード配列の転写および翻訳に必要な要素プロモーター、サプレッサー、オペレーター、転写終結配列等を含む。組み換え遺伝子または組み換えDNA構築物は、発現ベクターへのそれの挿入前に調製することができる。例えば、従来の組み換えDNA技術を使用して、プロモーター有効性DNA分子は、ポリペプチドをコードするDNA分子の5′に操作可能に連結可能であり、転写終結すなわち、ポリアデニル化配列を、その3′に操作可能に連結させることができる。本発明の本態様に従い、本発明のポリヌクレオチドは、分子が異種の発現系または発現ベクターに挿入することができる。異種核酸分子は、プロモーターおよび任意の他の5′調節分子に対し適正なセンス5′→3′方向、ならびに正確なリーディングフレームで、発現系または発現ベクターに挿入することができる。核酸構築物の調製は、SAMBROOKRUSSELL,MOLECULARCLONING:ALABORATORYMANUALColdSpringsLaboratoryPress,2001によって記載される、当該技術分野で既知の標準的なクローニング方法を使用して実行することができ、それは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。CohenおよびBoyerに対する米国特許第4,237,224号もまた、制限酵素開裂およびDNAリガーゼのライゲーションを使用して、組み換えプラスミドの形態における発現系の作製を記載し、それは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。好適な発現ベクターには、宿主細胞と互換性のある種から誘導されるレプリコンおよび制御配列を含むものが挙げられる。例えば、大腸菌を宿主細胞として使用する場合、pUC19、pUC18、またはpBR322等のプラスミドを使用することができる。昆虫宿主細胞を使用する場合、昆虫宿主細胞と互換性のある適切な移入ベクターには、所望のタンパク質に融合される分泌シグナルを組み込むpVL1392、pVL1393、pAcGP67、およびpAcSecG2T、ならびにGSTおよび6xHisタグBDBiosciences,FranklinLakes,NJを含むpAcGHLTおよびpAcHLTが挙げられる。本発明の本態様の実施における使用に好適なウイルスベクターには、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクチニアウイルスベクター、ノダウイルスベクター、およびレトロウイルスベクターが挙げられる。他の好適な発現ベクターは、SAMBROOKANDRUSSELL,MOLECULARCLONING:ALABORATORYMANUALColdSpringsLaboratoryPress,2001に記載され、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。核酸の操作、例えば、核酸構築物の調製、変異誘発、シークエンシング、細胞へのDNAの導入および遺伝子発現、ならびにタンパク質の分析のための多数の既知の技術およびプロトコールは、CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGYFredM.Ausubeletal.eds.,2003に詳細に記載され、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。異なる遺伝子シグナルおよびプロセッシング事象が、様々なレベルの遺伝子発現例えば、DNA転写およびメッセンジャーRNAmRNA翻訳、およびそれに引き続く、宿主細胞によって産生および発現される抗体または抗体フラグメントの量を制御する。DNAの転写は、プロモーターの存在に依存し、プロモーターはRNAポリメラーゼの結合対象であり、それによりmRNA合成を促進するDNA配列である。プロモーターは、それらの強度すなわち、転写を促進するそれらの能力が異なる。クローン遺伝子を発現させる目的では、高レベルの転写、したがって、発現を得るために、強力なプロモーターを使用することが望ましい。利用する宿主系に応じて、多数の好適なプロモーターのうちの任意の1つを使用することができる。例えば、大腸菌、そのバクテリオファージ、またはプラスミドを使用する場合、T7ファージプロモーター、lacプロモーター、trpプロモーター、recAプロモーター、リボソームRNAプロモーター、大腸菌ファージλのPRおよびPLプロモーター、およびlacUV5、ompF、bla、lpp等を含むがこれらの限定されないその他のプロモーターを、隣接するDNAセグメントを高レベルに転写させるために使用することができる。さらに、組み換えDNA技術または他の合成DNA技術によって産生される、ハイブリッドtrp-lacUV5tacプロモーターまたは他の大腸菌プロモーターを、挿入された遺伝子の転写を提供するために使用することができる。昆虫細胞を使用する場合、好適なバキュロウイルスプロモーターには、39Kタンパク質プロモーターまたは塩基性タンパク質プロモーター等の後期プロモーター、ならびにp10およびポリヘドロンプロモーター等の超後期プロモーターが挙げられる。いくつかの場合においては、複数のバキュロウイルスプロモーターを含む移入ベクターを使用することが望ましい場合がある。哺乳類細胞内で発現させるのに好適な一般的なプロモーターには、SV40、MMTV、メタロチオネイン-1、アデノウイルスEla、CMV、immediateearly、免疫グロブリン重鎖プロモーターおよびエンハンサー、ならびにRSV-LTRが挙げられるが、これらに限定されない。プロモーターは、構造的、または、代替的に、組織特異的または誘発性であってもよい。さらに、いくつかの状況においては、誘発性TetOnプロモーターが使用されてもよい。原核生物におけるmRNAの翻訳は、真核生物のものとは異なる、適切な原核生物シグナルの存在に依存する。原核生物におけるmRNAの効果的な翻訳は、mRNA上に、シャインダルガーノSD配列と称されるリボソーム結合部位を必要とする。この配列は、開始コドン、通常はAUG、の前に配置される短いmRNAヌクレオチド配列であり、タンパク質のアミノ末端メチオニンをコードする。SD配列は、16SrRNAリボソームRNAの3′末端に相補的であり、rRNAとともに二重鎖となることによってリボソームの正確な位置調整を可能にし、mRNAのリボソームへの結合を促進する。遺伝子発現の最大化の概説については、RobertsandLauer,MaximizingGeneExpressiononaPlasmidUsingRecombinationInVitro,MethodsinEnzymology,68:473-821979を参照し、これは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。本発明はまた、本発明のDNA構築物で形質転換された宿主細胞を含む。宿主細胞は、原核生物または真核生物であってもよい。本発明のポリペプチドを発現させるのに好適な宿主細胞は、広く入手可能なグラム陰性菌のいずれか1つを含む。好適な微生物には、緑膿菌Pseudomonasaeruginosa、大腸菌Escherichiacoli、サルモネラ菌性胃腸炎Salmonellagastroenteritisチフィムリウムtyphimirium、チフス菌S.typhi、腸炎菌S.enteriditis、フレクスナー赤痢菌Shigellaflexneri、ソンネ赤痢菌S.sonnie、志賀赤痢菌S.dysenteriae、淋菌Neisseriagonorrhoeae、髄膜炎菌N.meningitides、インフルエンザ菌Haemophilusinfluenzae、H.プルロニューモニエH.pleuropneumoniae、パスツレラヘモリチカPasteurellahaemolytica、P.マルトシダP.multilocida、レジオネラニューモフィラLegionellapneumophila、梅毒トレポネーマTreponemapallidum、T.デンティコラT.denticola、T.オラーレT.orales、ライム病ボレリアBorreliaburgdorferi、ボレリア菌種Borreliaspp.、レプトスピラインターロガンスLeptospirainterrogans、肺炎桿菌Klebsiellapneumoniae、P.ブルガリスProteusvulgaris、P.モルガニーP.morganii、P.ミラビリスP.mirabilis、発疹チフスリケッチアRickettsiaprowazeki、発疹熱リケッチアR.typhi、斑点熱リケッチアR.richettsii、ポルフィロモナスPorphyromonasバクテロイデスBacteriodesジンジバリスgingivalis、オウム病クラミジアChlamydiapsittaci、クラミジアニューモニエC.pneumoniae、トラコーマクラミジアC.trachomatis、カンピロバクタージェジュニCampylobacterjejuni、C.インターメディウスC.intermedis、C.フィタスC.fetus、ヘリコバクターピロリ菌Helicobacterpylori、野兎病菌Francisellatularenisis、コレラ菌Vibriocholerae、腸炎ビブリオVibrioparahaemolyticus、百日咳菌Bordetellapertussis、類鼻疽菌Burkholderiepseudomallei、ウシ流産菌Brucellaabortus、ブタ流産菌B.susi、ヤギ流産菌B.melitensis、イヌ流産菌B.canis、鼠咬症スピリルムSpirillumminus、鼻疽菌Pseudomonasmallei、エロモナスヒドロフィアAeromonashydrophila、A.サルモニシダA.salmonicida、およびペスト菌Yersiniapestisが挙げられる。細菌細胞に加えて、動物細胞、特に哺乳類および昆虫細胞、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞、または藻細胞もまた、本発明の単離ポリヌクレオチド分子を保有する組み換え発現ベクターの形質移入/形質転換に好適な宿主細胞である。当該技術分野で広く使用される哺乳類細胞株には、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ヒーラ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、COS細胞、およびその他多数が挙げられる。好適な昆虫細胞株には、Sf9およびSf21細胞を含む、バキュロウイルスに感染しやすいものが挙げられる。発現ベクターを用いて宿主細胞を形質転換/形質移入する方法は、当該技術分野で周知であり、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる、SAMBROOKRUSSELL,MOLECULARCLONING:ALABORATORYMANUALColdSpringsLaboratoryPress,2001に記載のように、選択される宿主系に依存する。細菌細胞については、好適な技術には、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを使用した形質移入が挙げられる。真核細胞について、好適な技術には、リン酸カルシウム形質移入、DEAE-デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介形質移入、およびレトロウイルスまたは任意の他のウイルスベクターを使用した形質導入が挙げられる。昆虫細胞については、本発明のポリヌクレオチド構築物を含む移入ベクターは、AcNPV等のバキュロウイルスDNAと共に形質移入されて、組み換えウイルスの産生を促進する。その後に続くSf細胞の組み換えウイルス感染は、高い組み換えタンパク質産生率をもたらす。タンパク質産生を促進するために使用される発現系および宿主細胞に関わらず、本発明の発現された抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣体は、当該技術分野で既知であり、PHILIPL.R.BONNER,PROTEINPURIFICATIONRoutledge2007に記載され、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる、標準的な精製方法を使用して、容易に精製することができる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチド1つまたは複数は、代替の抗体を作製するために、組み換えDNA技術を使用して、さらに修飾されてもよい。例えば、軽鎖および重鎖のマウスモノクローナル抗体の定常ドメインを、上述のように、ヒト抗体のそれらの領域に置換し、ヒト化またはキメラ抗体を作製することができる。あるいは、軽鎖および重鎖のマウスモノクローナル抗体の定常ドメインを、非免疫グロブリンポリペプチドに置換して、融合抗体を作製することができる。他の実施形態において、定常領域は、モノクローナル抗体の所望の抗体フラグメントを作製するために、切断または除去される。さらに、可変領域の部位特異的または高密度の変異誘発を使用して、モノクローナル抗体の特異性およびアフィニティーを最適化してもよい。本発明の第3の態様は、担体と、本発明による1つ以上のモノクローナル抗体または1つ以上のそれらの結合部分とを含む薬学的組成物に関する。この薬学的組成物は、2つ以上の抗体または結合フラグメントを含むことができ、この場合において、全ての抗体あるいは結合フラグメントは同じエピトープを認識する。あるいは、本薬学的組成物は、抗体または結合フラグメントの混合物を含んでいても良く、この場合において、1つ以上の抗体または結合フラグメントが、黄色ブドウ球菌Gmdの1つのエピトープを認識し、1つ以上の抗体または結合フラグメントが、黄色ブドウ球菌Gmdの異なるエピトープを認識する。例えば、混合物は、黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼのR3ドメインに特異的に結合する本発明の1つ以上の抗体と、グルコサミニダーゼに結合する任意の他の抗体、例えば、グルコサミニダーゼの触媒ドメインに結合する抗体との組み合わせで、含んでもよい。本発明の薬学的組成物は、以下に記載のように、薬学的に許容される担体または他の薬学的に許容される構成要素をさらに含む。一実施形態によると、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に、mAb1C11、2D11、3H6、1E12、および3A8のうちの1つ以上を含む。別の実施形態によると、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に、mAb1C11、2D11、3H6、1E12、および3A8のうちの2つ以上を含む。本発明のモノクローナル抗体を含有する薬学的組成物は、黄色ブドウ球菌に感染しているか、または黄色ブドウ球菌に感染している危険性がある対象に、投与することができる。種々の送達システムが既知であり、本発明の抗体を投与するために使用可能である。導入方法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。治療剤は、例えば、点滴もしくはボーラス注入によって、または上皮もしくは皮膚粘膜の内層例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜等を通じた吸収によって投与することができ、他の生物活性剤、例えば、化学療法剤、抗生物質、または他の免疫療法剤とともに投与されてもよい。投与は、全身投与あるいは局所投与、すなわち、ブドウ球菌感染の部位における投与、または手術部位もしくは移植部位に直接的な投与であってもよい。本発明の薬学的組成物は、患者に第2の治療剤を投与することをさらに含み、第2の治療剤は、抗生物質または免疫療法剤である。例示の抗生物質には、バンコマイシン、トブラマイシン、セファゾリン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、ゲンタマイシン、フシジン酸、ミノサイクリン、コトリモキサゾール、クリンダマイシン、リネゾリド、キヌプリスチン-ダルフォプリスチン、ダプトマイシン、チゲサイクリン、ダルババンシン、テラバンシン、オリタバンシン、セフトビプロール、セフタロリン、イクラプリム、カルバペネムCS-023/RO-4908463、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例示の免疫療法剤には、テフィバズマブ、BSYX-A110、Aurexis商標、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。抗生物質および免疫療法剤の上記一覧は、非限定的な例を意図し、このため、他の抗生物質または免疫療法剤もまた、考慮される。第2の治療財の組み合わせまたは混合もまた、本発明の目的に使用することができる。これらの薬剤は、同時投与されるか、または単一製剤として投与されてもよい。本薬学的組成物は、典型的に、1つ以上の薬学的担体例えば、水または油等の滅菌液であり、油等には石油、動物、植物、もしくは合成由来のものを含み、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等であるを含む。水は、薬学的組成物が、静脈内投与される場合に、より一般的な担体である。食塩水ならびに水性デキストロースおよびグリセリン溶液もまた、特に注入可能溶液の液体担体として採用することができる。好適な薬学的賦形剤には、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、およびエタノール等が挙げられる。本組成物はまた、必要であれば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはpH緩衝剤を含有することができる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、および徐放性製剤等の形態をとることができる。本組成物は、トリグリセリド等の、従来的な結合剤および担体とともに、座薬として製剤されてもよい。経口製剤は、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の、標準的な担体を含むことができる。好適な薬学的担体の例は、E.W.MartinによるRemingtonsPharmaceuticalSciencesに記載されている。このような組成物は、患者への適切な投与形態を提供することができるように、好適な量の担体とともに、核酸またはタンパク質の治療有効量を、典型的には精製した形態で含有することになる。製剤は、投与方法に対応する。上述の細菌感染の治療のための本発明の組成物の有効投与量は、投与方法、標的部位、患者の生理的状態、投与される他の薬物、および治療が予防的であるか治療的であるかを含む、多くの異なる要因によって変化する。予防的適用においては、長期間にわたって、比較的低頻度の間隔で、比較的低用量を投与する。何人かの患者は、一生治療を受け続ける。治療的適用においては、疾患の進行が軽減または終結するまで、好ましくは、患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高用量が時に必要とされる。その後、患者は、予防的レジメンで投与されてもよい。ブドウ球菌の細菌感染の予防的治療において、本発明の薬学的組成物1つまたは複数は、個体が細菌に晒される前に投与が可能であり、その結果得られる免疫応答が、細菌感染を阻害するか、またはその重症度を軽減させることが可能であり、それによって細菌を個体から排除することが可能であることが意図される。例えば、モノクローナル抗体または薬学的組成物は、関節置換術または装具移植を伴う任意の手術等の、外科的手術の前、最中、および/または直後に投与することができる。本発明の抗体または結合フラグメントでの受動免疫化について、投与量は、宿主の体重あたり、約0.0001~約100mg/kg、より通例的には、約0.01~約5mg/kgの範囲に及ぶ。例えば、投与量は、約1mg/kg体重もしくは約10mg/kg体重、または約1~約10mg/kgの範囲内であってもよい。例示的な治療レジメンは、2週間に1回、または1ヶ月に1回、または3~6ヶ月に1回の投与を伴う。いくつかの方法において、異なる結合特異性を有する2つ以上のモノクローナル抗体が、同時に投与され、その場合、投与される各抗体の投与量は、示された範囲内にある。抗体は、通常、複数の場合に投与される。単回投与間の間隔は、毎日、毎週、毎月、または毎年であってもよい。いくつかの方法において、投与量は、1~1000μg/ml、およびいくつかの方法においては、25~300μg/mlの、血漿中の抗体濃度を達成するように調節される。あるいは、抗体は、徐放性製剤として投与することができ、その場合、より頻度の低い投与が必要とされる。投与量および頻度は、患者内での抗体の半減期によって異なる。一般的に、ヒト抗体が最も長い半減期を示し、次にヒト化抗体、キメラ抗体、そして非ヒト抗体へと続く。本発明のさらなる態様は、担体および黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼの少なくとも1フラグメントを含む抗原分子を含む活性ワクチン例えば、薬学的組成物に関する。抗原分子は、iグルコサミニダーゼポリペプチドおよびアジュバントポリペプチドを含む融合タンパク質、またはii別の免疫原性分子にコンジュゲートしたグルコサミニダーゼポリペプチドを含む免疫原性コンジュゲートの形態をとることができる。例示であり限定するものではなく、本発明の好適な融合タンパク質には、フラジェリン、ヒトパピローマウイルスHPVL1またはL2タンパク質、単純ヘルペス糖タンパク質DgD、補体C4結合タンパク質、トール様受容体-4TLR4リガンド、およびIL-1βの群から選択される、アジュバントポリペプチドを含有するものが挙げられる。本発明の融合ポリペプチドまたは融合タンパク質は、当該技術分野で既知の標準的な技術を使用して作製することができる。例えば、融合ポリペプチドは、本発明のポリヌクレオチド配列と、アジュバントとのインフレーム融合、すなわち、ハイブリッドまたはキメラ遺伝子の翻訳によって調製することができる。融合ポリペプチドをコードするハイブリッド遺伝子は、宿主細胞を形質転換または形質移入するために使用される、発現ベクターに挿入される。あるいは、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、アジュバントをコードするポリヌクレオチドが既に存在している発現ベクターに挿入される。融合タンパク質のペプチドアジュバントは、本発明のグルコサミニダーゼポリペプチドのN末端、または好ましくは、C末端に融合することができる。本発明のポリペプチドとタンパク質アジュバントとの間の融合は、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列が、アジュバントのアミノ酸配列と直接隣接するようなものであってもよい。あるいは、ポリペプチド部分は、短いリンカー配列によって、アジュバントに連結されてもよい。好適なリンカー配列には、グリシンリッチリンカー例えば、GGGS2-3、セリンリッチリンカー例えば、GSN、または全体として参照することにより本明細書に組み込まれる、Huangらに対する米国特許第5,516,637号に記載されるような、他の適応可能な免疫ブログリンリンカーが挙げられる。本発明の好適な免疫原性コンジュゲートには、任意のグルコサミニダーゼポリペプチドに、共有または非共有結合される免疫原性担体分子を含有するものが挙げられるが、これらに限定されない。いずれの好適な免疫原性担体分子も、使用可能である。例示的な免疫原性担体分子には、ウシ血清アルブミン、ニワトリ卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、破傷風毒素、ジフテリア毒素、サイログルブリン、肺炎球菌莢膜多糖体、CRM197、および髄膜炎菌性外膜タンパク質が挙げられるが、これらに決して限定されない。活性ワクチンの形態の薬学的組成物はまた、有効量の別個のアジュバントを含んでもよい。本発明における使用に好適なアジュバントには、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸ベリリウム、シリカ、カオリン、炭素、油中水乳化剤、水中油乳化剤、ムラミールジペプチド、細菌内毒素、脂質、QuilA、および/または非感染性百日咳菌が挙げられるが、これらに限定されない。アジュバントの選択は、アジュバントを含有する免疫原性製剤の安定性、投与経路、投与計画、予防接種される種に対するアジュバントの有効性に依存し、ヒトにおいては、薬学的に許容されるアジュバントは、承認されているものか、または関連規制機関によってヒトへの投与が承認できるものである。例えば、アラム、MPL、またはフロイント不完全アジュバントChangetal.,AdvancedDrugDeliveryReviews32:173-1861998、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる単独か、または任意のそれらの組み合わせの全てが、ヒトへの投与に好適である。予防的適用において、免疫原性グルコサミニダーゼポリペプチドを含有する薬学的組成物は、細菌感染の疑いがあるか、そうでなければその危険性がある患者に、疾患、その合併症および疾患の発症過程で現れる中間病理学的表現型を含む、疾患の危険性の排除もしくは減少、疾患の重症度の軽減、または疾患の発症の遅延に十分な量で投与される。治療的適用において、本発明によるモノクローナル抗体または結合フラグメントを含有する薬学的組成物は、このような疾患の疑いがあるか、または既にそれを患っている患者に、その合併症および疾患の発症中における中間病理学的表現型を含む、疾患の症状生化学的、組織学的、および/または行動的を治療するか、または疾患の症状の進行を少なくとも部分的に妨げるのに十分な量で投与される。治療的または予防的治療を達成するのに適切な量は、上記において特定される、治療的または予防的有効用量として定義される。予防的および治療的療法のレジメンにおいて、薬剤は、通常、十分な応答が達成されるまで、いくつかの投与量で投与される。典型的には、応答はモニターされ、応答が減弱し始めた場合には、繰り返された投与が行われる。治療投与量は、安全性および有効性を最適化するために漸増しなければならない。免疫原の量は、アジュバントも投与されるのかどうかに依存し、アジュバントの非存在下においては、より高い投与量が必要となる。投与のための免疫原の量は、時に、患者1人当たり1~500μgで、より定例的には、ヒトへ投与に対して、注入1回当たり5~500μgである。時には、注入1回当たり1~2mgの高い投与量が使用される。典型的には、約10、20、50、または100μgが、各ヒトへの注入に使用される。免疫原の質量はまた、免疫原内の免疫原性エピトープと、免疫原全体の質量との質量比に依存する。典型的には、10-3~10-5マイクロモルの免疫原性エピトープを、各マイクログラムの免疫原に使用する。注入の時期は、1日1回から、1年に1回まで、10年に1回まで、大幅に異なってもよい。免疫原の投与が行われるいずれの日においても、投与量は、アジュバントも投与される場合、1μg/患者を上回り、通常は10μg/患者を上回り、アジュバントの非存在下においては、10μg/患者を上回り、通常は100μg/患者を上回る。典型的な投与計画では、免疫化に続く、たとえば6週間間隔等の時間間隔でのブースター注射から構成される。別の投与計画では、免疫化に続く、1、2、および12ヶ月後のブースター注射で構成される。あるいは、ブースター注射は、免疫応答のモニターにより示されるように、定期的または不定期で提供されてもよい。本発明の第4の態様は、黄色ブドウ球菌感染を有する患者に、本発明のモノクローナル抗体、その結合部分または薬学的組成物の有効量を投与する段階を含む、黄色ブドウ球菌感染を治療する方法に関する。本発明の本態様の一実施形態において、黄色ブドウ球菌感染を治療する方法は、前記投与を繰り返す段階をさらに含む。黄色ブドウ球菌感染を治療する方法は、該投与が全身に実施されるか、黄色ブドウ球菌感染の部位に直接実施されるようなものであってもよい。黄色ブドウ球菌感染を治療する方法は、皮膚、筋肉、心臓、呼吸器、胃腸管、眼、腎臓および尿路、ならびに骨または関節の感染を含むが、これらに限定されない部位において、黄色ブドウ球菌感染を治療するために使用することができる。一実施形態において、本方法は、黄色ブドウ球菌の骨感染または関節感染を有する患者に、本発明のモノクローナル抗体もしくはその結合フラグメントまたは薬学的組成物の有効量を投与することによって、骨髄炎を治療するために実施される。これらの薬剤または組成物の投与は、上記のいずれかの経路を使用して実施することができるが、しかしながら、骨または関節の感染部位への直接の投与が好ましい。本発明の第6の態様は、整形外科用インプラントを必要とする患者に、本発明のモノクローナル抗体、結合部分または薬学的組成物の有効量を投与する段階と、患者に整形外科用インプラントを導入する段階と、を含む、患者に整形外科用インプラントを導入する方法に関する。一実施形態において、整形外科用インプラントを導入する方法は、整形外科用インプラントを必要とする患者に、モノクローナル抗体もしくは結合フラグメントまたは同じものを含有する薬学的組成物の有効量を、移植部位に直接投与する段階を含む。あるいは、またはさらに、整形外科用インプラントは、移植部位におけるその移植の前、最中、または直後に、モノクローナル抗体、または結合フラグメント、または同じものを含有する薬学的組成物で被覆または処置することができる。整形外科用インプラントは、人工関節、グラフト、または合成インプラントであってもよい。例示的な人工関節には、人工膝関節、人工股関節、人工指関節、人工肘関節、人工肩関節、人工側頭下顎関節、および人工足関節が挙げられるが、これらに限定されない。他の人工関節もまた、使用可能である。例示的なグラフトまたは合成インプラントには、人工椎間板、半月板インプラント、または合成もしくは同種移植片の前十字靱帯、内側側副靱帯、外側側副靱帯、後十字靱帯、アキレス腱および回旋筋腱板が挙げられるが、これらに限定されない。他のグラフトまたはインプラントも、使用可能である。一実施形態において、整形外科用インプラントを導入する方法は、全関節再置換術を設置するプロセスを包含するように意図される。元々の関節置換術に関する感染、特にブドウ球菌の感染が生じる場合、唯一の実行可能な治療は、全関節再置換術である。本実施形態において、まず、感染した人工関節が取り出され、次に、患者は、根本的な感染を治療される。感染の治療は、長期間すなわち、6ヶ月にわたって起こり、その期間中、患者は、寝たきりまたは、限られた運動性のみを有するであり、根本的な感染を治療するために、高用量の抗生物質、および任意で本発明の1つ以上のモノクローナル抗体もしくは結合部分、または薬学的組成物を受ける。根本的な感染の治療の上で、新しい人工関節が設置される。新しい人工関節の設置の直前すなわち、新しい人工関節の設置前2週間以内、および任意で新しい人工関節設置の後に、患者は、本発明の1つ以上のモノクローナル抗体もしくはその結合部分、または薬学的組成物を投与される。この治療は、設置後の期間中に、1回以上繰り返されてもよい。抗生物質治療は、本発明の1つ以上のモノクローナル抗体もしくは結合部分、または薬学的組成物との組み合わせ、またはそれらと同時に投与することができる。これらの治療は、全関節再置換術の間の感染または再感染を予防するのに効果的である。本発明による治療の方法は、それを必要とする任意の患者を治療するために使用することができるが、しかしながら、本方法は、特に、免疫力が低下したあらゆる年齢の患者、ならびに、50歳を超えている年齢の患者に有用である。本発明は、以下の実施例への参照によって説明される。これらの実施例は、特許請求される発明を制限する意図はない。実施例1-インプラントに関連する骨髄炎のマウス下腿モデル整形外科用インプラントに関連するOMは、髄内デバイスすなわち、人工関節および経皮質インプラントすなわち、図1Aの外部固定デバイスの両方に対して起こる。固定デバイスの感染率が、人工関節のすべてのものより2.5倍高く、そして発生率は8倍を超えているにも関わらず、再置換手術はより単純であるため、深刻であるとは見なされないDarouiche,TreatmentofInfectionsAssociatedWithSurgicalImplants,N.Engl.J.Med.35014:1422-92004、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。感染経皮質インプラントが関与するほとんどの事例が、1回の手術にて、ピンを再配置し、膿瘍を独立して治療することで解決されるが、感染した人工関節の多くは、2回の置換手術を必要とするDarouiche,TreatmentofInfectionsAssociatedWithSurgicalImplants,N.Engl.J.Med.35014:1422-92004、これは、全体として参照することによって本明細書に組み込まれる。まず1回目は感染を治療するために必要であり、2回目で人工関節を取り替える。このため、臨床的観点の重要性から、本分野では主に、黄色ブドウ球菌のUAMS-1ATCC49230株を伴う髄内デバイスに関わるインプラントに関連するOMのモデルに焦点を合わせているDaumetal.,AModelofStaphylococcusaureusBacteremia,SepticArthritis,andOsteomyelitisinChickens,J.Orthop.Res.86:804-131990、Rissingetal.,ModelofExperimentalChronicOsteomyelitisinRats,Infect.Immun.473:581-61985、Passletal.,AModelofExperimentalPost-TraumaticOsteomyelitisinGuineaPigs,J.Trauma244:323-61984;Worlocketal.,AnExperimentalModelofPost-TraumaticOsteomyelitisinRabbits,Br.J.Exp.Pathol.692:235-441988、Varshneyetal.,ExperimentalModelofStaphylococcalOsteomyelitisinDogs,IndianJ.Exp.Biol.279:816-91989、Kaarsemakeretal.,NewModelforChronicOsteomyelitisWithStaphylococcusaureusinSheep,Clin.Orthop.Relat.Res.339:246-521997、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれる。残念ながら、このアプローチには大幅な制限があり、最も顕著には、再現可能時間的および空間的な病変を作製できないことである。これを克服する目的で、既知のアインホルンデバイスZhangetal.,Cyclooxygenase-2RegulatesMesenchymalCellDifferentiationIntotheOsteoblastLineageandisCriticallyInvolvedinBoneRepair,J.Clin.Invest.10911:1405-152002、全体として参照することにより本明細書に組み込まれるを使用して、1×106CFUを含有する髄内ピンの挿入直後に脛骨を骨折させることによって、感染の位置を骨幹に導いた。感染経皮質ピンの移植は、常に、ピンの近隣で病変をもたらし、脛骨の他の領域の慢性OMまたはマウス内の血行性拡散を決してもたらさないことが見出された図1A~C。骨溶解を定量化するために、感染脛骨をμCΤによって分析する経時的研究を行った図1B~C。これらの結果は腐骨形成と一致し、腐骨形成では、反応性の骨膜の骨形成を伴う破骨細胞の骨吸収が感染インプラント周辺で起こる。マウスにおけるOMの存在を、組織学的に確認した。図2A~Hは、脛骨の経皮質ピンモデルが、腐骨および被膜形成、破骨細胞の皮質骨吸収、ならびにインプラント周囲の壊死骨中に存在するグラム染色された細胞外細菌およびバイオフィルムを含む、慢性OMの顕著な特色の全てを含むことを示す。熱殺菌された黄色ブドウ球菌および非病原性の大腸菌を含む陰性対照で、これらの特徴を示したものはない。実施例2-骨髄炎のリアルタイムPCR定量OMを定量化するための既知の方法は存在しない。感染した骨から生きた細菌を効果的に抽出して、古典的なコロニー形成単位CFUによって細菌量を判定することが不可能であるため、細菌量のサロゲートな結果測定としてチーズ中Heinetal.,ComparisonofDifferentApproachestoQuantifyStaphylococcusaureusCellsbyReal-TimeQuantitativePCRandApplicationofThisTechniqueforExaminationofCheese,Appl.Environ.Microbiol.677:3122-62001、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる、および血中Palomaresetal.,RapidDetectionandIdentificationofStaphylococcusaureusFromBloodCultureSpecimensUsingReal-TimeFluorescencePCR,Diagn.Microbiol.Infect.Dis.453:183-92003、全体として参照することにより本明細書に組み込まれるにおいて行われているコンタミネーション検査のように、DNA試料中の復元可能なnuc遺伝子の数を定量化するためのリアルタイムPCR法を開発した。黄色ブドウ球菌特異性nuc遺伝子に対するRTQ-PCRは、すでに報告のある269-bp作製物を増幅させるプライマーを使用して行ったHeinetal,ComparisonofDifferentApproachestoQuantifyStaphylococcusaureusCellsbyReal-TimeQuantitativePCRandApplicationofThisTechniqueforExaminationofCheese,Appl.Environ.Microbiol.677:3122-62001、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。反応は、0.3μΜのプライマー、1倍SybrGreenPCRSuperMixBioRad,Hercules,CA、および2μlの精製脛骨DNAテンプレートで構成された、最終容積20μl中において実施することができる。試料は、Rotor-GeneRG3000CorbettResearch,Sydney,AUを使用してアッセイすることができる。DNAテンプレートの試料間の統合性を制御するために、プライマーを使用して、124bpの作製物を検出するRTQ-PCRを、マウスβ-アクチン遺伝子に対してさらに実行してもよい。マウスβ-アクチン、黄色ブドウ球菌nuc、およびrRNAゲノムDNAに特異的なPCRプライマーを使用することにより、これらのPCRの特異性および予測作製物を増幅する能力が示されたLietal.,QuantitativeMouseModelofImplant-AssociatedOsteomyelitisandtheKineticsofMicrobialGrowth,Osteolysis,andHumoralImmunity,JOrthop.Res.261:96-1052008、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。次いで、nuc遺伝子を含む精製プラスミドDNAまたは黄色ブドウ球菌ゲノムDNAを使用して、用量反応性実験を行い、このRTQ-PCRの検出限界が、約100コピーであることを判定したLietal.,QuantitativeMouseModelofImplant-AssociatedOsteomyelitisandtheKineticsofMicrobialGrowth,Osteolysis,andHumoralImmunity,J.Orthop.Res.261:96-1052008、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。このアッセイ法は、感染の二次的な結果測定としてのインビボ細菌量および受動免疫化の有効性を定量化するために使用されている。実施例3-骨髄炎確立中における感染および液性免疫の動態骨髄炎確立中における微生物病因および宿主免疫を定量化するために、マウスの脛骨に感染経皮質ピン移植して経時的研究を行い、細菌量および宿主の液性応答を、それぞれnuc/β-アクチンRTQ-PCRおよびウエスタンブロットによって経時的に判定した図3A~C。結果は、感染と液性免疫との間の明らかな逆相関を示す。古典的な微生物病因および細胞外細菌に対する獲得免疫に一致して、これらの結果は、細菌が即座に自らを確立し、対数増殖期に入ると、それらは中和液性反応により11日後に認識されることを示す。特定の細菌タンパク質に対する高いアフィニティーのIgG抗体の発生と、細菌量ピークが一致することに基づくと、これらの免疫優性抗原が、OMの確立に対して診断的および防御的の両方において、機能的な免疫応答を誘発することが明らかである。実施例4-OM確立中における、特異的IgG2b反応を誘発する56kDa免疫優性抗原としての黄色ブドウ球菌自己分解酵素のグルコサミニダーゼサブユニットの同定およびクローニングOM確立中の液性応答をさらに特徴付けるために、マウスの血清中のIgアイソタイプの陽性率を、ELISAによって、感染の最初の2週間にわたり判定したLietal.,QuantitativeMouseModelofImplant-AssociatedOsteomyelitisandtheKineticsofMicrobialGrowth,Osteolysis,andHumoralImmunity,J.Orthop.Res.261:96-1052008、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。その結果、第1週目にマウスは古典的なIgM反応を開始し、第2週目にそれは、強力なオプソニンおよび黄色ブドウ球菌抗原に対する防御活性を有することが最近示された特定のIgG2b反応に転換することが示されたMaira-Litranetal.,ComparativeOpsonicandProtectiveActivitiesofStaphylococcusaureusConjugateVaccinesContainingNativeorDeacetylatedStaphylococcalPoly-N-acetyl-beta-1-6-glucosamine,Infect.Immun.7310:6752-622005、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。図3Cにおいて同定された免疫優性抗原の分子属性を解明するために、黄色ブドウ球菌全抽出物のサブトラクティブウェスタンブロットを実施し、2D-PAGEによって分離した図4A~C。この分析により、免疫前血清では検出されなかったあるポリペプチドが、免疫14日後の血清と強い反応性を有することが明らかになった。そのタンパク質を、分離用クーマシーブルー染色ゲルから単離し、トリプシンで消化し、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化法MALDIによって分析し、70個の個々のペプチドピークを決定した。全ペプチドからのアミノ酸配列は、黄色ブドウ球菌AltのGmdサブユニットの既知の配列と100一致した。興味深いことに、他にも、最近、Atlが、MRSAOMのウサギ脛骨モデルにおいて、免疫優性抗原となることを見出したものがいるBradyetal.,IdentificationofStaphylococcusaureusProteinsRecognizedbytheAntibody-MediatedImmuneResponsetoaBiofilmInfection,Infect.Immun.746:3415-262006、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。図4Cにおいて、2D-PAGEゲルから取り出したスポットが、免疫優性抗原に関連したものであることを確認するために、黄色ブドウ球菌自己分解酵素のグルコサミニダーゼサブユニットの53kDa、1,465bpのコード領域を、IPTG誘導のためのlacIプロモーターを含むpET-28a発現プラスミドNovagenのXhoI-BamHI部位にクローニングすることによって、組み換え6-Hisで標識された融合タンパク質を作製した。DNAシークエンスに続いて、そのプラスミドを使用してBL21大腸菌に形質転換し、組み換えHis-グルコサミニダーゼHis-Gmdの作製に使用した。次に、この組み換えタンパク質を使用して、免疫前血清および免疫血清の反応性を評価した。結果は、IPTG誘導57kDa組み換えタンパク質が、免疫血清によってのみ認識されることを示し、このため、Gmdが、黄色ブドウ球菌免疫優性抗原であることを裏付けた。この実験を、Xen29に感染したマウスからの抗血清を用いて繰り返し、C57Bl/6もまた、黄色ブドウ球菌のこの生物発光株に対するGmdに特異的な抗体を作製することを裏付けた。実施例5-OMおよび細菌増殖の長期的な結果測定としてのlux形質転換黄色ブドウ球菌のインビボバイオルミネセンスイメージングマウスモデルにおいてOMを定量化するRTQ-PCR方法は、非常に有用であるにも関わらず、このアプローチには、3つの主要な制限が存在する。第1に、この分析は、DNAを採取するためにマウスの殺処理が必要であるため、長期的ではない。第2には、DNA単離、PCR、およびデータ分析の際に、非常に大きな労働力と高度の注意を要する。第3には、黄色ブドウ球菌ゲノムDNAnuc遺伝子の検出は、活動的な増殖期にある細菌と、バイオフィルム中に堅く詰まった休眠中の細菌とを区別することができない。このため、RTQ-PCRは、インビボの細菌増殖へのmAb効果を評価するために容易に使用することができない。これらの欠点を克服するために、本発明は、バイオルミネセンスイメージングを使用して、インビボでの病原体をモニターするための高度に革新的なアプローチに関するContagetal.,PhotonicDetectionofBacterialPathogensinLivingHosts,Mol.Microbiol.184:593-6031995、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。より最近になって、P.R.Contagおよび同僚らが、生物発光性黄色ブドウ球菌Xen29;ATCC12600をこの目的のために作製しているFrancisetal.,MonitoringBioluminescentStaphylococcusaureusInfectionsinLivingMiceUsingaNovelluxABCDEConstruct,Infect.Immun.686:3594-6002000、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。図5A~Bは、このアプローチが、どのように本発明のOMのモデルに適応されるかを示す。Xen29を用いた経時的研究では、滅菌ピンを与えられたマウス、または非経口ゲンタマイシンで処理された感染マウスにおいては、バックグラウンドシグナルのみが検出された。対照的に、感染した未治療脛骨のBLIは、4日目にベースラインからちょうど4倍の増加を示し、続く11日目までにバックグラウンドレベルまで下落した。実施例6-組み換えGmdワクチンは、インプラントに関連するOMからマウスを防御するOMに対する抗自己分解酵素受動免疫化の可能性を評価するために、初期の活性組み換えGmdワクチン研究を実施し、マウスn=20を次のように免疫化した:群1アジュバント中のPBS陰性対照、群220μg黄色ブドウ球菌Xen29全プロテオーム抽出物をアジュバントと同容量で1:1に乳化陽性対照、群3アジュバント中の20μgHis-グルコサミニダーゼ。攻撃誘発の28日前に、各ワクチンの150μl乳化液を筋肉注射i.m.した。ブースター免疫筋肉注射、フロイント不完全アジュバント中20μgタンパク質を、攻撃誘発の14日前に実施した。これらのマウスにおけるワクチンの有効性を評価するために、抗GmdのELISAを展開し図6A、初期免疫前、ブースター免疫前、および細菌攻撃誘発前の血清抗体力価の定量化に使用した図6B。注目すべきことに、結果は、組み換えワクチンのみが、高力価の免疫応答を誘発するしたことが示された。これらのワクチンの有効性を評価するために、免疫化マウスを、前述の実施例に記載のように図5A~Cを参照、Xen29感染下腿ピンで攻撃誘発し、3日目にBLIを実施し、11日目にマウスをnucRTQ-PCRのために安楽死させた。注目すべきことに、黄色ブドウ球菌の全プロテオームで免疫された20匹のマウスのうち18匹が、攻撃誘発の48時間以内に死亡し、このため、その群からの有効性データは利用不可である。推測的な解釈のみが、この観測すなわち、他の抗原に対する高度免疫に提供可能であるが、他の群のいずれにおいても死亡を引き起こさなかった事実、ならびに、死亡が群2の4コホートの5匹のマウスに再現された事実は、結果が正しいものであることを示す。この理由により、この免疫化プロトコールは、今後の研究に陽性対照として使用されるべきではない。それは、活性ワクチンの安全性に対する懸念もまた強調し、精製mAbまたはその結合フラグメントでの受動免疫化の論理的根拠を支持する。群1および3からのBLIおよびnucRTQ-PCRのデータを、図7A~Cに提示する。結果は、His-Gmd免疫化マウスにおいて検出されるBLIの有意な減少をはっきりと示し図7A~B、細菌のプランクトン増殖の減少を示す。この発見と一致して、このモデルにおける細菌量のピーク11日目に、nuc遺伝子の数に有意な減少があることが観察された。このため、これらのデータは、組み換えGmdワクチンが、本モデルにおけるOMからマウスを防御することができることを示す。実施例7-マウス抗Gmdモノクローナル抗体の作製およびスクリーニング実施例6に記載のHis-Gmd免疫化の成功に基づき、このプロトコールを使用して、マウス抗GmdmAbを作製した。標準手順を使用して、mAbを得た。調製したハイブリドーマの初期プールから、第1のサブセットを選択し、抗Gmd活性のためのELISAによってスクリーニングし、高いアフィニティーを有する第2のサブセットを選択して、ウェスタンドットブロットアッセイ法を行った。ハイブリドーマ細胞株のうち5つを、Gmdに対するそれらの明らかに高いアフィニティー≦10-9M、およびGmdのR3ドメイン内に見られるこれらの領域の推定エピトープに基づいて選択した。R3ドメインは、Gmdタンパク質の触媒性ドメインではないため、これらのモノクローナル抗体が、抗Gmd阻害活性を有することは予想外であった。5つの選択されたハイブリドーマは、1C11、1E12、2D11、3A8、および3H6であった。全てが、マウスIgG1抗体を分泌した。実施例8-モノクローナル抗グルコサミニダーゼ抗体による黄色ブドウ球菌Xen29のインビトロ増殖の変化各細胞株1C11、1E12、2D11、3A8、および3H6の凍結アリコートを、本発明者らの依頼により調製した供給元から直接入手したPrecisionAntibodies,Inc.,Columbia,MD。凍結細胞を解凍し、次いで、50μg/mLのゲンタマイシンおよび10ウシ胎児血清FBSを補ったダルベッコ改変イーグル培地DMEMで洗浄した。採取した培養上清を、遠心分離10分、1000×gによって浄化し、凍結させた。各細胞株から30mLの培養上清を37~45°Cで解凍し、0.22μmのフィルターを通してろ過した。次いで、それぞれを、5mLのベッド体積のプロテインG-アガロースカラムGEHealthcareHiTrap商標ProteinGHP、カタログ番号17-0405-03、ロット番号10036021上で精製した。これらのカラムが合うように設計されたポンプの代わりに、アダプターで固定されるルアーロックシリンジを用いてカラムの上部に液体を添加した。カラムを、まずPBSで洗浄してエタノール防腐剤を除去し、次いで、培養上清を5~6mL/分で添加し、続いて6カラム体積分のPBSを添加して未結合タンパク質を洗い流した。吸着した抗体を、2カラム体積分のpH2.7の0.1Mグリシンで、1mLの1.0MTris、pH8.0を含有する収集容器中に溶出し、溶出産物を中和した。次いで、カラムを次の抗体の調製のために4カラム体積分のPBSで、または保管のために0.02NaN3を含有するPBSで洗浄した。溶出した抗体を濃縮し、3500×g、40分、4°Cでの継続的な遠心分離によって、Pierce登録商標濃縮器ThermoScientific7mL/20KMWCO、カタログ番号87750、ロット番号KH137631A中で、PBSに透析した。抗体濃度を、標準としてMOPC21またはPhe12.15いずれもマウスIgG1を使用して、ELISAによって判定した。非標識のヤギ抗マウスIgGSouthernBiotechnologyカタログ番号1030-01を、96ウェルNUNCMaxisorpマイクロタイタープレート上で、PBS中5μg/mL、1ウェルあたり100μLで、室温で1時間または4°Cで一晩吸着させた。ウェルを、室温で1時間または4°Cで一晩、200μLのPBS中3BSAの添加によってブロッキングした。ブロッキングしたプレートを、0.05のTween20PBSTを含有するPBSで2回洗浄し、使用に備えた。試料を、PBSTにて段階希釈して調製し、100μLを、標準および試料用に指定されたウェルに添加した。試料を、室温で1時間インキュベートし、次いで、噴出瓶からのPBSTで4回洗浄した。捕捉されたマウス抗体を、各ウェルに100μLのHRP修飾ヤギ抗マウスIgGHRP-GAM;SouthernBiotechnology、カタログ番号1031-05を添加して検出し、PBST中に1:2000で希釈し、室温で1時間インキュベートした。プレートを噴出瓶からのPBSTで4回洗浄した後、発色性HRP基剤ABTSSouthernBiotechnology、カタログ番号0401-01を、ウェル当たり100μL添加した。室温で5~10分間、色を発現させた。試料の色値を標準曲線に投影することによって抗体濃度を判定し、次いで希釈を補正した。これらの濃度を滴定研究に使用して、黄色ブドウ球菌の増殖に対するそれらの効果を判定した。黄色ブドウ球菌Xen29Kadurugamuwaetal.,RapidDirectMethodforMonitoringAntibioticsinaMouseModelofBacterialBiofilmInfection,AntimicrobAgentsChemother47:3130-72003、およびKadurugamuwaetal.NoninvasiveOpticalImagingMethodtoEvaluatePostantibioticEffectsonBiofilmInfectionInVivo,AntimicrobAgentsChemother48:2283-72004、これらは、全体として参照することによって、本明細書に組み込まれるは、これらの実験に使用した唯一の細菌株である。凍結ストックから1μLの黄色ブドウ球菌Xen29を取り出し、200rpmの回転台上で、10mLのLB培地中において、37°Cで12時間、中間対数期まで増殖させた。次いで、細菌をLB培地中で1000cfu/mLまで希釈し、100μLの希釈懸濁液を、抗体および対照の添加を指定される、平底マイクロタイター蓋付きのウェルに添加した。抗Gmdおよび陰性抗体それぞれを、PBS中約1mg/mLのストックからLB中に希釈し、0.2μフィルターを通して滅菌した。100μLの各抗体を、指定の4つ組みウェルに添加した。次いで、プレートを37°Cでインキュベートし、光散乱を、490および670nmにおいて、t=0、5、7、9、11、13、15時間で、マイクロタイタープレートリーダー上で測定した。最終時点を、24時間後のある時点でとり、測定したプラトー値を確認した。5つの抗体を、プロテインG-アガロース上でアフィニティークロマトグラフィーによって精製し、PBS中1mg/mLに濃縮し、透析して、アッセイ法に干渉する可能性のあるNaN3および抗生物質等の防腐剤を除去した。中間対数期培地からの100cfuの黄色ブドウ球菌株Xen29を、LB培地中の各マイクロタイターウェルに、50μg/mL約3×10-7Mの各抗体または対照同様にLB培地中100μLとともに、セットした。周期的に26時間以上、490および670nmでの光散乱を測定することによって、増殖をモニターした。抗Gmdモノクローナル抗体により、黄色ブドウ球菌増殖の明らかな減少が観察された。図8に描写されるように、4つの抗体が、Xen29の光散乱における増殖に関連した増加を押し下げた。光散乱を減少させた4つの抗体の全てが、同程度に押し下げたが、一方で、アイソタイプが一致する対照MOPC21は、いずれの抗体も存在しない状態におけるXen29の増殖と同一であった。第5の抗体3H6もまた、別個の実験において、類似の挙動を示した。また、Xen29の増殖に関連した光散乱の変化が、用量依存的であり、モノクローナル抗体と天然Gmdとの間の高いアフィニティー相互作用と一致することも観察された。その観察されたXen29増殖変化の用量依存性を検討するにあたり最も重大な決定は、抗体の濃度が低すぎたために、部分的にしかXen29増殖の明らかな減少が解明されなかったのか、または最大効果が既に観察されており、より高い濃度であってもさらなる効果は得られないのかどうかである。抗体のうちの4つが同程度の効果を有し、また50μg/mL3×10-7Mは、非常に高い濃度であるため、抗体レベルを、100.5段階希釈釈で50μg/mLから漸減させた。代表的なデータを図9に提示する。モノクローナル抗体1C11は、50、16、および5μg/mLで、Xen29の増殖を同程度に、1.6約1×10-8Mで部分的に変化させ、0.5ug/mLでの無関係な抗体MOPC21との違いはなかった図10。本質的に、同一の結果が、mAb2D11、1E12、および3A8に観察された。アイソタイプが一致する対照抗体MOPC21の結果を図10に提示する。増殖曲線は、本質的に、抗体無しの対照と同一であった。50μg/mLサンプルのわずかな上昇は、マイクロタイタープレートの外部ウェルへのそれらの設置のためであった周縁効果。Gmdの阻害が、高度の抗体結合のためであると仮定すると、約10倍のKdが必要であるという試算が、1nM近くのGmdに作用するアフィニティーに対して予測される。これらのデータは、4つの抗GmdmAbが、Gmd活性を阻害し、Xen29のインビトロ増殖におけるパターンの変化をもたらすが、それらは、倍増するための時間には効果がないことを示す。Gmd活性の阻害は、細胞質分裂の失敗をもたらし、すなわち、ゲノムおよび細胞膜は正常に分裂するが、細胞壁は分離に失敗し、凝集細胞の大きな塊となってしまうSugaietal.IdentificationofEndo-beta-N-acetylglucosaminidaseandN-acetylmuramyl-L-alanineAmidaseasCluster-dispersingEnzymesinStaphylococcusaureus,JBacteriol177:1491-61995、全体として参照することにより本明細書に組み込まれる。この変化は光散乱によって検出可能である。なぜならXen29が自由に細胞分裂する場合よりも、少ないより大きいが散乱中心が存在することになるからである。本発明の抗体は、いくつかの重要な基準を満たすことが既に示されている。これらは、ロバストレベル静置培養において約50μg/mLで、親ハイブリドーマによって産生される、高いアフィニティーのIgG抗体である。それらは、保存されたエピトープを認識し、その結果、いくつかまたはほとんどが、大半の黄色ブドウ球菌株のGmdを認識する。さらに、これらの実験は、これらのモノクローナル抗体が、免疫原として使用された組み換えHis-Gmdだけではなく、天然Gmdを認識し、Gmd阻害剤として機能するという証拠を提供する。モノクローナル抗体全てが、約70~約80のGmd阻害剤活性を示す。このレベルのGmd阻害活性は、5つの選択された抗体が、その触媒ドメインではなく、GmdのR3ドメイン内に位置するエピトープに結合することからすると、非常に予想外のことである。実施例9-黄色ブドウ球菌由来のグルコサミニダーゼに特異的なモノクローナル抗体は、VH遺伝子の多様なアレイを使用する調査中の5つのモノクローナル抗体が特有であることを判定するために、VHおよびVL遺伝子の配列を、前述の実施例で同定された、5つの対象ハイブリドーマ1C11、1E12、2D11、3A8、および3H6に対して判定した。黄色ブドウ球菌グルコサミニダーゼGmdに特異的なモノクローナル抗体の各セットに関する研究には、かなり多くの医学的応用および利点があるため、同一の抗体sibsを発現するハイブリドーマを同定することは有益である。5つのハイブリドーマを、それらのIg重鎖および軽鎖遺伝子のシークエンス解析に用いた。5つのハイブリドーマ細胞株の凍結アリコートを、本発明者らの指示によりハイブリドーマを調製した供給元であるAGPrecisionAntibody商標9130RedBranchRoad,SuiteU,Columbia,MD21045から入手した。細胞を解凍し、ゲンタマイシンおよび10FBSを加えたDMEMで洗浄してDMSOを除去し、次いで、ゲンタマイシンおよび10FBSを加えたDMEM中において培養した。数日後、細胞を遠心分離によって採取し、続くRNA抽出のために凍結ペレットとして-20°Cで保管した。重鎖mRNAのRT-PCR増幅を、5つのハイブリドーマにおいて成功させた。シークエンス解析は、3つの異なる生殖細胞系列VH遺伝子セグメントが使用されたことを明らかにした。ハイブリドーマのうちの2つ2D11および3H6は、同じ生殖細胞系列VHおよびJセグメントであるが異なるDセグメントを使用し、それぞれ、タンパク質レベルにおいて生殖細胞系列からわずかな配列多様性を示した。第5のハイブリドーマ1C11からの重鎖は、ごくまれにしか使用されないVH遺伝子セグメントのいくつかを増幅させるように設計されるPCRプライマーを用いてでさえも、当初はRT-PCRでは増幅しなかった。このことより、それが他とは異なるIgVH遺伝子を発現したことが示唆された。新たに増殖中のハイブリドーマ細胞から全RNAを抽出し、約5マイクログラムのRNAを、BioRadiScriptキットを使用して、逆転写した。cDNAのアリコートを、定常領域プライマーと組み合わせて、マウスの可変重領域および軽領域の5′末端に対するコンセンサスプライマーを用いてPCR増幅した。多数の作製物を、4/5VHおよび5/5VLの遺伝子について得た。PCR生成物を、ゲル精製し、ダイレクトシークエンスを行った。4つ全てのVH作製物はきれいなシークエンス結果をもたらしたが、2/4の軽鎖作製物は、混合していた。残りの2つは、良好なシークエンス結果をもたらした。重鎖作製物が得られなかった細胞株から生成された軽鎖は、シークエンスを行わなかった。フレームワーク1のプライマーを使用した最初の実験で増幅に失敗したこれらの抗体の可変領域は、可変遺伝子セグメントの分泌リーダー領域を標的とするように設定された異なるプライマーを使用したところ、増幅に成功した。これらのPCR生成物は、また、精製後にダイレクトシークエンスを行った。生殖細胞系列のV領域遺伝子のベストマッチを、IgBLASTNCBIを使用して判定した。判定したDNA配列を、Expasyウェブサイトで利用可能なオンラインプログラムを使用して、タンパク質配列に翻訳した。2D11および3H6配列の配列アラインメントを、目視検査によって実施した。上述のように、最終的には、5つのVH遺伝子の全てが、増幅およびシークエンスに成功した。5つのハイブリドーマに対する詳細なDNAおよびタンパク質配列結果を、以下に提示する。ハイブリドーマ2D11最も近似する生殖細胞系列:J558.18.108は、以下のVHヌクレオチド配列SEQIDNO:21を有する。2D11VL最も近似する生殖細胞系列:at4は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:22を有する。ハイブリドーマ2D11VHのアミノ酸配列SEQIDNO:1は、以下のとおりである。2D11VLは、以下のアミノ酸配列SEQIDNO:8を有する。ハイブリドーマ3H6最も近似する生殖細胞系列:J558.18.108は、以下のVHヌクレオチド配列SEQIDNO:23を有する。3H6VL最も近似する生殖細胞系列:cp9、JK1は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:24を有する。ハイブリドーマ3H6VHのアミノ酸配列SEQIDNO:2は、以下のとおりである。ハイブリドーマ3H6VLのアミノ酸配列SEQIDNO:9は、以下のとおりである。ハイブリドーマ1E12最も近似する生殖細胞系列:7183.46VH7は、以下のVHヌクレオチド配列SEQIDNO:25を有する。1E12VL最も近似する生殖細胞系列:ai4は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:26を有する。ハイブリドーマ1E12VHのアミノ酸配列SEQIDNO:3は、以下のとおりである。1E12VLは、以下のアミノ酸配列SEQIDNO:10を有する。ハイブリドーマ3A8最も近似する生殖細胞系列:VHJ606.4.8.2は、以下のVHヌクレオチド配列SEQIDNO:27を有する。3A8VL最も近似する生殖細胞系列:KV19-25、JK2は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:28を有する。ハイブリドーマ3A8VHのアミノ酸配列SEQIDNO:4は、以下のとおりである。ハイブリドーマ3A8VLのアミノ酸配列SEQIDNO:11は、以下のとおりである。ハイブリドーマ1C11最も近似する生殖細胞系列:VH9-15、DST4-C57Bl-6、JH3は、以下のVHヌクレオチド配列SEQIDNO:29を有する。1C11VL最も近似する生殖細胞系列:VK23-43、JK5は、以下のヌクレオチド配列SEQIDNO:30を有する。ハイブリドーマ1C11VHのアミノ酸配列SEQIDNO:5は、以下のとおりである。ハイブリドーマ1C11VLのアミノ酸配列SEQIDNO:12は、以下のとおりである。得られた配列から、生殖細胞系列VHおよびVLの遺伝子セグメントに最も近く適合するものを、表1に示されるように判定した。表1配列決定されたハイブリドーマ細胞株についての生殖細胞系列の一致5つのハイブリドーマのそれぞれが、独自のVH遺伝子を発現した。図11は、初めに配列決定された4つのVH遺伝子のアラインメントを示し、図13は、配列決定された5つ全てのVH遺伝子のアラインメントを示す。図15は、1C11および3A8のみの配列決定されたVH遺伝子のアラインメントを示す。図12は、初めに得られた2つのVL遺伝子のアラインメントを示す。図14Aは、配列決定された5つ全てのVl遺伝子のアラインメントを示し、一方で図14Bは、1C11のものを除く5つ全ての配列決定されたVl遺伝子のアラインメントを示す。1つのハイブリドーマ1C11が、最も一般的なVH遺伝子を増幅する初めのプライマーを用いてもPCR生成物を作製できなかったという事実は、それが、本明細書で同定される他のもののうちいずれとも同一でない第4のVH遺伝子セグメントを使用していることを示唆する。ハイブリドーマのうち2つは、同じVH生殖細胞系列を使用するが、同一ではない。ハイブリドーマ2D11および3H6の両方が、生殖細胞系列VH遺伝子セグメントJ558.18.108を使用した。それらの配列を、図11において、生殖細胞系列遺伝子と比較する。配列調査によると、CDR1には1つだけ、CDR2には4つ、CDR3には5つギャップを含むの差異があることが明らかになった。5つのハイブリドーマは同胞ではなく、それらの間では、少なくとも4つのVH生殖細胞系列が利用された。実施例10-mAb1C11、2D11、3H6、1E12、および3A8による黄色ブドウ球菌Gmd酵素活性の阻害Gmd酵素活性の測定方法は、本質的に、Maniらの方法Manietal.,IsolationandCharacterizationofAutolysis-DefectiveMutantsofStaphylococcusaureusCreatedbyTn917-lacZMutagenesisJ.Bacteriol.1755:1493-14991993である。凍結乾燥および再懸濁した単球菌はGmd活性によって分解され、その結果、490nmでの光散乱が減少した。Gmdを含有する100μLのサンプルを、0.05Tween20PBSTを加えたリン酸緩衝食塩水中に希釈し、96ウェルマイクロタイタープレートのウェルに添加した。100μLの0.15w/vの単球菌懸濁液を、各ウェルに添加し、光散乱を即座に測定して、開始A490を概して約0.8と定めた。次いで、プレートを37°Cでインキュベートし、光散乱を30分および60分で再測定した。60分でのA490における低減を、Gmd活性の尺度としてとらえた。わずかなバックグラウンドレートGmdなしを控除した。この方法は、Gmd活性をリゾチーム活性と区別しない。Gmd酵素活性の阻害を測定するために、Gmdを事前に力価測定し、60分でA490の約50の低減をもたらす濃度を確定した。次いで、96ウェルのマイクロタイタープレートの各ウェルに、PBSTで希釈した50μLの抗体、続いて、50μLの適切に希釈したGmdを添加し、混合液を5分間以上インキュベートし、最後に100μLの0.15単球菌を添加し、開始Α490を測定した。次いで、プレートを37°Cでインキュベートし、A490を、30分および60分で測定した。阻害パーセントを、1001-Δ60Α490阻害剤/Δ60Α490阻害剤無しの対照として算出した。図18において、5つの抗体のそれぞれの段階希釈に加え、アイソタイプが一致する陰性対照MOPC21を、組み換え黄色ブドウ球菌His-GmdGmdまたは鶏卵リゾチームHELの触媒活性を阻害する能力について評価した。5つの抗Gmdモノクローナル抗体のそれぞれは、His-Gmd活性を75~80阻害したが、HELには阻害活性を示さなかった。MOPC21は、いずれの酵素にも阻害剤活性を有しなかった。これら5つの抗体によるHis-Gmdの阻害の程度は、80を超えることはなかった。高度であるが部分的な阻害は、この群の抗体の特徴の1つである。黄色ブドウ球菌株UAMS-1によって分泌される天然Gmd酵素を阻害する、5つの抗体の能力を、図19に描写する。組み換えGmdと同様に、天然Gmdは、各抗体によって約80阻害された。酵素阻害測定から判断すると、抗体は、天然および組み換えGmdの両方に同様に反応する。いくつかのモノクローナル抗体に対する抗Gmd活性のSEM分析を、図20C~Dに示す。Xen29黄色ブドウ球菌を、12時間、Luria-Bertani培養液で増殖させ、中間対数増殖懸濁液を得た。次いで、10,000CFUを、抗体無し図20A~B、50μg/mlの1E12と共に図20C、または50μg/mlの1C11と共に図20D、1時間インキュベートした。次いで、試料を無菌シリコンチップ上に設置し、固定し、脱水させ、走査電子顕微鏡法での視覚化のために金でコーティングした。顕微鏡写真図20C~Dは、抗Gmd抗体の効果として、大きな塊の形成を促進し、さらにおおよそ20の細胞における細胞非依存性溶解矢印があることを図示する。実施例11-抗GmdmAbを含有する受動ワクチンは、マウスOMモデルにおいて、整形外科用インプラント後にインビボで黄色ブドウ球菌を阻害する下腿ピンを有するOMモデル実施例1および6を参照を使用して、対象mAb1C11および3A8の、黄色ブドウ球菌のインビボ増殖を阻害する能力を評価した。簡単にいうと、5週齢の雌のBALB/cJマウスに、手術の3日前に、生理食塩水n=10、または0.25mlの生理食塩水中の1mgの精製3A8抗Gmd抗体n=5、または0.25mlの生理食塩水中の31C11A8抗Gmd抗体n=5の腹腔内投与を行った。手術時に、マウスに、500,000CFUのXen29黄色ブドウ球菌を含有する下腿インプラントを移植した。0、3、5、7、10または11、および14日目において、マウスを撮像してバイオルミネセンスを評価し、各群の代表的な動物からのBLIヒートマップを伴う画像を、図21Aおよび22Aに示す。注目すべきは、抗体力価が有効濃度未満に減少したと推定される時の、11日目までの抗Gmd3A8動物、および5日目までの1C11動物におけるBLI信号の非存在である。本研究における各マウスに対する3日目のBLI値を、各群に対する平均とともに示す図21B、p=0.02、図22B。興味深いことには、1C11については、この治療が、3日目で、50の動物を治療したことである。14日目に取得した各群における代表的な動物からのX線写真により、抗Gmd処理動物には存在しなかった、プラセボマウスにおける骨溶解領域矢印を例示する図21C、22C。実施例12-ヒト化抗体の作製1C11抗体の軽鎖および重鎖の可変領域を、実施例9に記載の精製ハイブリドーマPCR生成物から、プライマーを使用して再増幅させ、Tillerらによって記載のヒト抗体発現ベクターEfficientGenerationofMonoclonalAntibodiesfromSingleHumanBCellsbySingleCellRT-PCRandExpressionVectorCloning,J.Immunol.Methods3291-2:112-242008、全体として参照することにより本明細書に組み込まれるにクローニングした。1C11の軽鎖および重鎖の可変領域ならびにヒトκおよびIgG1定常領域を含むプラスミドを調製し、HEK293細胞に共形質移入させた。3日後、細胞から培地を除去し、ヒトIgGの存在および固定化Gmdタンパク質への結合について、ELISAによってアッセイした。結合した抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼおよび3,3′,5,5′テトラメチルベンジデンtetramethylbenzidene基質と結合したヤギ抗ヒトIgG抗体を使用して検出した。ヒト:マウスキメラ1C11h1C11が、親マウス1C11と同様にGmdと反応することを証明するために、それぞれ、His-Gmd酵素活性の阻害能力について試験した。h1C11およびマウス1C11の両方が、ほぼ同一の阻害活性を示し図23、したがって、キメラIgG分子が、親の結合活性を保持したことを示された。図17A~Bにおいて特定される1C11のヒトCDR1およびCDR2ホモログ、ならびにIGHD5-5、18、および1201を含むがこれらに限定されない、1つ以上の対象D領域からのCDR3領域を使用して、類似の手順を実施する。ヒト化1C11抗体および1C11のヒトCDR1およびCDR2ホモログを含有する抗体を、主要な関節全置換術を受ける高齢患者65歳を超えているにおける第1相臨床試験にて利用することができる。好ましい実施形態を、本明細書に詳細に示しかつ記載したが、本発明の精神を逸脱しない範囲で、種々の改変、追加、置換等が成されてもよく、したがって、これらは、以下の請求項によって定義される本発明の範囲内であると考えられることが、当業者には明らかであろう。"