異種ポリペプチドをコードする配列に作動可能に連結されている終止コドンを含む配列に作動可能に連結されているファージ表面タンパク質をコードする配列に作動可能に連結されている第1のプロモーターおよびまたは調節領域を5→3方向に含む、第1の核酸分子を含むファージ由来核酸構築物、ならびに第2の誘導性プロモーターおよびまたは調節領域が、該終止コドンに対応するサプレッサーtRNAをコードする配列に作動可能に連結されているサプレッサー構築物を含む、発現系。構築物が、改変されたファージゲノムである、請求項1記載の系。ゲノムがT7ファージゲノムである、請求項2記載の系。第1のプロモーターおよびまたは調節領域が、ファージ由来核酸構築物を調製するのに用いられるファージに内因性のものである、請求項1記載の系。第1のプロモーターおよびまたは調節領域がT7プロモーターである、請求項1記載の系。第2の誘導性プロモーターおよびまたは調節領域がアラビノースBADプロモーターおよびaraC調節遺伝子である、請求項1記載の系。終止コドンを含む配列が、酵素切断部位をコードする配列をさらに含む、請求項1記載の系。ファージ表面タンパク質が、溶菌性ファージのファージコートタンパク質、繊維状バクテリオファージのgeneIIIキャプシドタンパク質、繊維状ファージのgeneVIIIキャプシドタンパク質、およびバクテリオファージλのキャプシドDタンパク質から選択される、請求項1記載の系。溶菌性ファージのファージコートタンパク質がλ、T4、およびT7から選択される、請求項8記載の系。ファージコートタンパク質がT7に由来する、請求項9記載の系。ファージコートタンパク質がgene10によりコードされる、請求項10記載の系。サプレッサー構築物が、クロラムフェニコール耐性をコードする発現可能な配列をさらに含む、請求項1記載の系。終止コドンがUAG、UAA、およびUGAから選択される、請求項1記載の系。終止コドンがUAGである、請求項13記載の系。サプレッサーtRNAがtRNAAlaまたはtRNAGluである、請求項1記載の系。サプレッサーtRNAがtRNAAlaである、請求項1記載の系。以下の段階を含む、試験化合物と相互作用するポリペプチドを同定する方法請求項1記載の系を細胞に導入し、異種ポリペプチドをコードする配列の発現を誘導し、該ポリペプチドを、該細胞により産生されたファージ粒子の表面に提示させる段階該ファージ粒子と該試験化合物とを接触させる段階および該ポリペプチドの提示によるファージ粒子と該試験化合物との相互作用を検出することによって、該ポリペプチドが該試験化合物と相互作用することを確かめる段階。細胞が大腸菌細胞である、請求項17記載の方法。細胞がBL21の誘導体である、請求項18記載の方法。細胞がBLT5615である、請求項19記載の方法。以下の段階を含む、試験化合物と相互作用するポリペプチドを同定する方法請求項3記載の系を細胞に導入し、異種ポリペプチドをコードする配列の発現を誘導し、該ポリペプチドを、該細胞により産生されたファージ粒子の表面に提示させる段階該ファージ粒子と該試験化合物とを接触させる段階および該ポリペプチドの提示によるファージ粒子と該試験化合物との相互作用を検出することによって、該ポリペプチドが該試験化合物と相互作用することを確かめる段階。以下の段階を含む、試験化合物と相互作用するポリペプチドを同定する方法請求項5記載の系を細胞に導入し、異種ポリペプチドをコードする配列の発現を誘導し、該ポリペプチドを、該細胞により産生されたファージ粒子の表面に提示させる段階該ファージ粒子と該試験化合物とを接触させる段階および該ポリペプチドの提示によるファージ粒子と該試験化合物との相互作用を検出することによって、該ポリペプチドが該試験化合物と相互作用することを確かめる段階。以下の段階を含む、試験化合物と相互作用するポリペプチドを同定する方法請求項6記載の系を細胞に導入し、異種ポリペプチドをコードする配列の発現を誘導し、該ポリペプチドを、該細胞により産生されたファージ粒子の表面に提示させる段階該ファージ粒子と該試験化合物とを接触させる段階および該ポリペプチドの提示によるファージ粒子と該試験化合物との相互作用を検出することによって、該ポリペプチドが該試験化合物と相互作用することを確かめる段階。以下の段階を含む、試験化合物と相互作用するポリペプチドを同定する方法請求項11記載の系を細胞に導入し、異種ポリペプチドをコードする配列の発現を誘導し、該ポリペプチドを、該細胞により産生されたファージ粒子の表面に提示させる段階該ファージ粒子と該試験化合物とを接触させる段階および該ポリペプチドの提示によるファージ粒子と該試験化合物との相互作用を検出することによって、該ポリペプチドが該試験化合物と相互作用することを確かめる段階。以下の段階を含む、試験化合物と相互作用するポリペプチドを同定する方法終止コドンがUAGであり、サプレッサーtRNAがtRNAAlaである請求項1記載の系を細胞に導入し、異種ポリペプチドをコードする配列の発現を誘導し、該ポリペプチドを、該細胞により産生されたファージ粒子の表面に提示させる段階該ファージ粒子と該試験化合物とを接触させる段階および該ポリペプチドの提示によるファージ粒子と該試験化合物との相互作用を検出することによって、該ポリペプチドが該試験化合物と相互作用することを確かめる段階。ポリペプチドをコードする配列を単離する段階をさらに含む、請求項17記載の方法。単離がPCR増幅によって行われる、請求項26記載の方法。単離が、ポリペプチドをコードする配列を別の核酸分子に直接サブクローニングすることによって行われる、請求項26記載の方法。ポリペプチドをコードする配列を単離する段階をさらに含む、請求項21記載の方法。単離がPCR増幅によって行われる、請求項29記載の方法。単離が、ポリペプチドをコードする配列を別の核酸分子に直接サブクローニングすることによって行われる、請求項29記載の方法。ポリペプチドをコードする配列を単離する段階をさらに含む、請求項22記載の方法。単離がPCR増幅によって行われる、請求項32記載の方法。単離が、ポリペプチドをコードする配列を別の核酸分子に直接サブクローニングすることによって行われる、請求項32記載の方法。ポリペプチドをコードする配列を単離する段階をさらに含む、請求項23記載の方法。単離がPCR増幅によって行われる、請求項35記載の方法。単離が、ポリペプチドをコードする配列を別の核酸分子に直接サブクローニングすることによって行われる、請求項35記載の方法。ポリペプチドをコードする配列を単離する段階をさらに含む、請求項24記載の方法。単離がPCR増幅によって行われる、請求項38記載の方法。単離が、ポリペプチドをコードする配列を別の核酸分子に直接サブクローニングすることによって行われる、請求項38記載の方法。ポリペプチドをコードする配列を単離する段階をさらに含む、請求項25記載の方法。単離がPCR増幅によって行われる、請求項41記載の方法。単離が、ポリペプチドをコードする配列を別の核酸分子に直接サブクローニングすることによって行われる、請求項41記載の方法。発明を実施する態様本発明のファージ由来核酸構築物は、プロモーターおよびまたは調節領域がファージ表面タンパク質のコード配列に作動可能に連結され、ファージ表面タンパク質のコード配列が終止コドンを含む配列にインフレームに連結され、終止コドンを含む配列が異種ポリペプチドをコードする配列にインフレームに連結されている核酸分子を含む。本明細書で使用するファージ由来とは、ファージ遺伝子産物をコードする天然に生じるポリヌクレオチドに見出される1つまたは複数の核酸配列を含む構築物を意味する。作動可能に連結されたという用語は、連結されたプロモーターおよびまたは調節領域がコード配列の発現を機能的に制御するような、核酸配列間の機能的連結を意味する。作動可能に連結されたという用語はまた、同じ列に並んだプロモーターおよびまたは調節領域がコード配列を制御できるような、コード配列間の連結も意味する。このようなコード配列間の連結はまた、コード配列によりコードされるアミノ酸を含む融合タンパク質が発現されるようにインフレームに連結している、または同じ読み枠内にあると言うこともできる。ファージ表面タンパク質という用語は、バクテリオファージの表面に通常見出される任意のタンパク質を意味する。ファージ表面タンパク質は、異種ポリペプチドとの融合タンパク質として発現され、それでもなお、ファージ粒子に組み立てられて、異種ポリペプチドがファージ表面に提示されるように適合することができる。好ましくは、ファージ表面タンパク質は溶菌性ファージのファージ表面タンパク質であり、ファージ由来核酸構築物は溶菌性ファージのファージ由来核酸構築物である。溶菌性ファージには、λ、T4、およびT7などがあるが、これに限定されない。本発明の特に好ましい態様はT7ファージコートタンパク質を使用する。T7ファージコートタンパク質には、gene10およびT7由来構築物の産物などがあるが、これに限定されない。ファージ表面タンパク質の他の限定しない例として、繊維状バクテリオファージのgeneIIIキャプシドタンパク質、繊維状ファージのgeneVIIIキャプシドタンパク質、およびバクテリオファージλのキャプシドDタンパク質が挙げられる。当業者により認められるように、ファージ表面タンパク質の選択は、ファージ由来構築物およびファージ由来構築物の増殖に用いられる細胞も考慮した上で行われる。異種ポリペプチドという用語は、本発明のファージ由来構築物を調製するのに使用された配列が得られたファージによりコードされることが通常見出されないポリペプチドを意味する。好ましい異種ポリペプチドは、真核細胞または原核細胞に見出される核酸分子またはオープンリーディングフレームによりコードされるものである。限定しない例として、細菌、マウス、ラット、ショウジョウバエ、酵母、ウサギ、非ヒト霊長類、およびゼブラフィッシュが挙げられる。他の好ましい核酸分子は、他の哺乳動物、特に、農業分野にとって重要な哺乳動物、ならびに人との交わりに重要な哺乳動物に由来する核酸分子である。別の供給源の核酸分子は、昆虫、雑草、菌類、ウイルス、および単細胞生物などの有害生物の核酸分子である。特に好ましい態様において、核酸分子またはORFは、臨床に関連する遺伝子産物をコードするもの、または臨床に関連する遺伝子産物をコードすると思われるものである。臨床に関連する遺伝子産物として、特定の疾患徴候の薬物を同定するための潜在的な標的が挙げられる。終止コドンは当技術分野において公知であり、UAGはアンバーコドンと呼ばれ、UAAはオーカーコドンと呼ばれる。UGAも適宜、使用することができる。終止コドンの選択は、終止コドンの周囲に特定の配列を導入することによって増強することもできる。例えば、アンバーコドンの後ろにプリン塩基があると、特定の条件下で抑制されることも報告されている。本発明の実施において、多種多様なファージ由来構築物を使用することができる。本発明の好ましい態様では、構築物は、本明細書に記載のように異種ポリペプチドをファージ表面タンパク質との融合タンパク質として条件付で発現できるように改変されているファージゲノムである。本発明の他の態様では、融合タンパク質を発現する能力は、一つには、調節性プロモーターまたは他の調節領域を使用することによって調節される。誘導性プロモーターの限定しない例として、lacプロモーター、lacUV5プロモーター、アラビノースプロモーター、およびtetプロモーターが挙げられる。本発明のファージゲノム由来構築物は、好ましくは、ファージ表面タンパク質および異種ポリペプチドの融合を含む感染性ファージをパッケージングするのに必要なファージ遺伝子産物をコードする配列を含む。従って、異種ポリペプチドの条件付き発現は、必要なサプレッサーtRNAの発現を条件とする。本発明の構築物が、ファージ増殖に必要なファージ遺伝子産物をコードしない態様では、足りない産物は、ファージを増殖するのに用いられる細胞に存在する配列の発現によって供給されてもよい。本発明の他の態様では、ファージ由来構築物は、核酸分子の増殖および操作を助ける非ファージベクターに由来する配列を含む。核酸を増殖または導入するための、ファージに基づくベクターを含む適切なベクターの選択は、当技術分野において周知である。ベクター構築、宿主へのベクターの導入、および宿主における増殖または発現に必要な技法は当業者の日常業務である。本発明において使用することができるベクターの限定しない例を以下で説明する。ファージ表面タンパクのコード配列および異種ポリペプチドのコード配列の配置は、好ましくは、5→3方向に存在し、ファージ表面タンパク質のコード配列の後ろに、終止コドンを含む配列、および異種ポリペプチドのコード配列が続く。5という用語は、一般的にポリヌクレオチド内のある領域または位置が、同じポリヌクレオチド内の別の領域または位置の5にあることを意味する。3という用語は、一般的にポリヌクレオチド内のある領域または位置が、同じポリヌクレオチド内の別の領域または位置の3にあることを意味する。終止コドンを含む配列は、ファージ表面タンパク質をコードする配列および異種ポリペプチドをコードする配列の両方とインフレームに配置された、他のアミノ酸をコードする配列を含むリンカーと呼ばれることもある。リンカーは、任意で酵素的切断部位をコードする配列を含んでもよい。このような部位の限定しない例として、サブチリシン、H64Aサブチリシン、ゲネナーゼGenenaseI、TEVプロテアーゼ、トロンビン、第Xa因子、およびエンテロキナーゼが挙げられる。異種ポリペプチドをコードする配列は、当業者により選択された細胞からcDNAを調製するか、またはゲノム核酸配列を単離することによって容易に調製される。配列はまた、配列によりコードされるポリペプチドの機能が決定されていても、決定されてなくても、単に当技術分野において公知の、または当技術分野において同定されたオープンリーディングフレームでもよい。配列はまた、酵素活性または受容体機能などの特定の機能を有する細胞因子をコードするものでもよい。これらの配列がコードするポリペプチドを提示するファージと、ある特定のタイプの細胞機能を標的にすることが知られている、または標的にすると考えられている化合物とを接触させる本発明の態様において、これらの配列を含む構築物は有利に用いられる。本発明を限定することはないが、例えば、様々な条件下で競合してキナーゼに結合することが知られている化合物または結合すると考えられている化合物を用いた選択のために、キナーゼ活性をコードする配列を使用してキナーゼ活性を提示することができる。これにより、相互作用の特異性を求めるために異なる条件下で化合物に結合する実際のキナーゼを同定する能力を提供する。本発明はまた、調節性プロモーターの制御下にあるサプレッサーtRNA分子を条件付で発現することができるサプレッサー構築物も提供する。サプレッサー構築物は、以下に記載のベクターを含む様々なベクターに由来してもよく、好ましくは、抑制効果を高めるために高コピー数で細胞内に維持することができる。本発明のファージ由来構築物およびサプレッサー構築物は、好ましくは、それぞれの構築物に存在する異なるマーカーに基づいて選択することができる。このようなマーカーの限定しない例として、アンピシリン耐性、カナマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カルベニシリン耐性、クロラムフェニコール耐性、およびストレプトマイシン耐性が挙げられる。選択は、細胞と、使用されるマーカーに対する適切な選択薬剤とを接触させることによって容易に行われる。もちろん、選択薬剤の量は細胞死をもたらすのに十分でなければならず、このような量は当業者に公知である、または過度の実験なく当業者により容易に決定される。もちろん、サプレッサーtRNAは、本発明のファージ由来構築物に用いられる終止コドンを抑制できるように選択される。従って、終止コドンがUAGである場合、アンバーサプレッサーtRNAが用いられる。その一方で、終止コドンがUAAである場合、オーカーサプレッサーtRNAが用いられる。サプレッサーtRNAは任意のアミノ酸を挿入してもよいが、好ましくはアラニンまたはグルタミン酸を挿入する。本発明の構築物は、過度の実験なく、当技術分野において公知の任意の手段によって細胞に導入される。もちろん、ファージによる感受性細胞の感染を使用してもよい。本開示の後に開発された方法を使用することもできる。本発明の好ましい細胞は野生型であり、従って、ファージ表面タンパク質をコードする配列と異種ポリペプチドをコードする配列との間に存在する終止コドンを抑制することはできない。本発明を実施するための細胞は、本開示を考慮すれば過度の実験なく当業者によって選択することができる。限定しない例として、大腸菌細胞およびファージ増殖およびまたはファージ感染に適した他の細菌細胞が挙げられる。好ましい細胞は、本発明の実施において用いられる終止コドンを抑制しない細胞である。このような細胞は、異種ポリペプチドの発現を伴わず、任意で過剰のファージ表面タンパク質の発現を伴うファージ産生において特に有用である。このような細胞の限定しない例は大腸菌BL21細胞である。細胞が、異種ポリペプチドの提示を伴わないファージ産生に用いられる場合、ファージ表面タンパク質をコードする配列を調節性プロモーターの制御下で発現することができる構築物を含んでもよい。このような細胞の限定しない例は、Novagenから入手可能な、BL21細胞の誘導体である大腸菌BLT5615細胞である。BLT5615細胞は、IPTG誘導性プロモーターの制御下でT7ファージコートタンパク質を発現することができる。もちろん、融合タンパク質がファージ粒子表面に発現された状態でファージ由来構築物をパッケージングするために、適切なサプレッサーtRNAを内因的に発現する細胞も使用することができる。このような細胞は、異種ポリペプチドをファージ表面に提示するファージの産生に特に有用であるが、このような細胞を使用すると、サプレッサーtRNAの発現を調節することによって異種ポリペプチドの発現を制御することができない。サプレッサーtRNAのこのような制御可能な発現は本発明のサプレッサー構築物によってもたらされる。本明細書の説明から明らかなように、ファージ由来核酸構築物およびサプレッサー構築物の組み合わせは、サプレッサーtRNAの発現と異種タンパク質の発現とを連関させている。サプレッサーtRNAの発現が条件付きであるので、異種タンパク質の発現は条件付きである。従って、サプレッサーtRNAの発現が誘導されなければ、異種ポリペプチドはファージ表面に提示されず、ファージ由来構築物は、ファージ粒子のパッケージングを可能にするファージ表面タンパク質を発現することによって単に増殖するだけである。tRNAの発現が誘導されれば、異種ポリペプチドはファージ粒子表面に提示される。本発明はまた、ファージ由来構築物の増殖およびファージ粒子のパッケージングを助けるように改変された細胞を用いて実施することができる。このような細胞の一例が、ファージ表面タンパク質の発現のために、さらなる構築物を含む細胞である。これらの細胞は、ファージ由来構築物の有効なパッケージングに十分なファージ表面タンパク質が確実に産生されるように、さらなるファージ表面タンパク質を、任意で調節制御されて発現することができる。前記のように、さらなるファージ表面タンパク質を発現させるこのような構築物の使用はまた、細胞における偽の発現事象のために起こり得る表面タンパク質および異種ポリペプチドの融合体の組み込みを希釈するのに使用することもできる。本発明は、試験化合物を用いた選択またはスクリーニングのためのポリペプチドファージディスプレイ法において使用することができ、またはポリペプチドファージディスプレイ法における使用に合わせることができる。例えば、どのファージが試験化合物と相互作用するポリペプチドをファージ粒子表面に提示するかを確かめるために、本発明は、本明細書に開示される構築物を細胞に導入してファージ粒子ライブラリーを作成することによって実施することができる。好ましくは、相互作用には、ポリペプチドと試験化合物との結合特異的相互作用が含まれる。相互作用を検出することによって、ポリペプチドが化合物と相互作用することを確かめることができる。相互作用の検出はまた、単離、後の増殖およびもしくは増幅、ならびにまたはさらなる回の選択のためにファージ粒子を選択するのに使用することもできる。好ましくは、試験化合物と相互作用するファージを同定するために、1回、2回、3回、4回、または5回のさらなる選択を使用することができる。選択されたファージ内の異種ポリペプチドをコードする配列は、当技術分野において周知の様々な方法によって単離および同定することができる。限定しない例として、選択されたファージの遺伝物質内のコード領域に隣接する公知配列に相補的なプライマーを介した簡単なPCR、およびファージ遺伝物質の直接的な単離が挙げられる。コード配列は、当技術分野において公知の方法によって配列決定することもできる。ベクター本明細書で使用するベクターという用語は、連結されている別の核酸を運ぶことができる核酸分子を意味する。この用語は、ファージに基づくベクターを含む。ファージに基づくベクターとして、ファージに基づくプラスミドおよびファージミドなどがあるが、これに限定されない。ベクターの一種がエピソーム、すなわち、染色体外複製が可能な核酸分子である。ベクターはまた、細胞ゲノムへ組み込むために核酸分子を細胞に送達するのに使用することもできる。本発明の実施に好ましいベクターは、ベクターを含むファージ粒子のパッケージングに必要な遺伝子産物を発現することができる、ファージゲノムに由来するベクターである。組換えDNA法に用いられるベクターは、多くの場合、エピソームとして維持される環状二本鎖DNAループを指すプラスミドの形をとる。さらに本発明は、等価な機能を提供し、後に当技術分野において知られるようになる他の形のベクターを含むことが意図される。ベクターは、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現に使用することができる。一般的に、このようなベクターは、発現させようとするポリヌクレオチドに作動可能に連結された、宿主での発現に有効なシス作用制御領域を含む。適切なトランス作用因子が宿主によって供給されるか、相補ベクターによって供給されるか、またはベクターが宿主に導入された時にベクター自身によって供給される。ある特定の状況では、ベクターは特異的な発現をもたらす。このような特異的発現は誘導性発現でもよく、ある種の細胞のみでの発現でもよく、誘導性発現および細胞特異的発現の両方でもよい。ベクターは、発現のために、温度および栄養添加物などの操作が簡単な環境因子によって誘導することができる。原核生物宿主および真核生物宿主において使用するための様々なベクターが周知であり、当業者によって日常的に用いられている。多種多様なベクターを本発明において使用することができる。このようなベクターとして、細菌プラスミド、バクテリオファージ、酵母エピソーム、酵母染色体成分、哺乳動物ウイルス、哺乳動物染色体に由来するベクター、ならびにこれらの組み合わせに由来するベクターが挙げられるが、これに限定されない。一般的に、細胞においてポリヌクレオチドを維持、増殖、または発現させるのに適した任意のベクターを使用することができる。以下の市販ベクターは、ファージゲノムに由来するベクターの代替として限定しない例として示される。細菌において使用するためのベクターの中には、pQE70、pQE60、およびpQE9ファージスクリプトベクター、ブルースクリプトベクター、pNH8A、pNH16a、pNH18A、pNH46Aおよびptrc99a、pKK2233、pKK2333、pDR540、pRIT5がある。これらのベクターは、本発明に従って使用するために当業者に利用可能な多くの市販されている周知のベクターの単なる例示として列挙した。例えば、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを宿主において導入、維持、増殖、およびまたは発現するのに適した他の任意のプラスミドまたはベクターを、本発明のこの局面において使用できることが理解されるだろう。様々な周知の日常的な任意の技法によって、適切なDNA配列をベクターに導入することができる。一般的に、発現用のDNA配列とベクターとの結合は、このDNA配列およびベクターを1つまたは複数の制限エンドヌクレアーゼで切断し、T4DNAリガーゼなどのDNAリガーゼ活性を用いて制限断片を結合することによって行われる。使用可能な制限および連結のための手順は周知であり、当業者にとって日常的なものである。この点に関する、および別の技法を用いてベクターを構築するための適切な手順も周知で、当業者にとって日常的なものであり、本明細書の他の場所に引用されたSambrookらに詳細に述べられている。ベクターの選択およびまたは設計は、形質転換しようとする宿主細胞およびまたは発現に望ましい種類のタンパク質の選択などの要因に左右されることがあると理解すべきである。さらに、ベクターのコピー数、コピー数を制御する能力、およびベクターによりコードされる他の任意のタンパク質の発現も考慮すべきである。特別の定めのない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。今や、本発明が大まかに説明されたが、以下の実施例を参照することによってさらに容易に理解されるだろう。実施例は例示として示され、特別の定めのない限り本発明を限定することが意図されない。実施例1ファージ構築物および細胞株代表例としてT7を用いて、T7ゲノムに由来するファージディスプレイ構築物が本発明に従って構築された。T7ゲノムの全配列は当技術分野において公知である。この構築物は、野生型T7プロモーターおよびシャインダルガルノリボソーム進入部位の制御下にあるgene10によりコードされるコートタンパク質を有する。これらの配列は両方ともgene10のATG開始コドンの上流にある。gene10は、前記および本明細書に記載の異種ポリペプチドをコードする配列との融合を容易に可能にする制限部位を含むように3末端で改変されている。この構築物をATVファージまたはATVファージ構築物と名付けた。本発明の別の態様では、gene10からの発現レベルを低下させるために、T7プロモーターを欠失させてもよく、およびまたはシャインダルガルノ配列は変異されてもよい。任意で、発現をさらに低下させるために、シャインダルガルノ配列を欠失させてもよい。コートタンパク質の発現に影響を及ぼすこのような変化の使用と共に、ファージ産生に十分なコートタンパク質をもたらすために、細胞内の別の構築物からコートタンパク質を発現させることが好ましい。好ましくは、このようなさらなる構築物は、前記および本明細書に記載の調節可能なプロモーターの制御下にある。pBADtRNAAlaTAGと名付けたサプレッサー構築物を構築するために、アラビノース誘導性BADプロモーターの制御下にあるアンバーtRNAサプレッサーも本発明に従ってプラスミドベクターに導入された。このプラスミドは複製起点およびクロラムフェニコール耐性選択マーカーを有する。このプラスミドは、BADプロモーターの正の調節因子または負の調節因子として作用する調節DNA結合タンパク質をコードするaraC調節遺伝子も有する。Lアラビノースが存在すると、BADプロモーターからの転写が誘導されるのに対して、アラビノースが存在しなければ、転写は非常に低いレベルまたは検出不可能なレベルで生じる。BADプロモーターの負の調節因子として作用するグルコースが存在すると、この低いレベルをさらに低下させることができる412141301995を参照のこと。サプレッサー構築物の前記のプロモーター系はまた、異なる濃度のLアラビノースを用いて異なるレベルの活性化を可能にするのに有用である。この構築物を使用すると、最終濃度02~0002のLアラビノースにおいて直線的な反応が生じることが観察されている。この構築物は、サプレッサーtRNAの存在下での増殖には適合させていないが、提示のためのT7ファージ産生に理想的なBL21またはBLT5615などの宿主細胞において本発明のファージディスプレイ構築物と共に使用するのに理想的である。BLT5615は2つの重要なプロテアーゼ遺伝子および2つの制限メチル化防御系が欠失し、ならびにIPTG調節性プロモーターの制御下で野生型コートタンパク質を発現するベクターを含むので特に好ましい。本発明の実施において使用する他の株として、BLT5403、またはファージ構築物内のファージ表面タンパク質をコードする配列と異種ポリペプチドをコードする配列との間に用いられる終止コドンを抑制しない任意の大腸菌株が挙げられる。本発明の実施の一例として、ATVが宿主細胞に導入される。任意で、宿主細胞は、ATVファージの増殖のために、IPTG調節性プロモーターの制御下でgene10コートタンパク質を発現するための構築物を含む。次いで、アラビノースによって誘導されるとT7ファージ粒子上に異種ポリペプチドを提示するファージが産生されるように、前記のpBADtRNAAlaTAGを含むBLT5615への感染に、産物であるファージを使用することができる。これは、様々な異種ポリペプチドコード配列を含むATVファージのライブラリーを用いて実施することができる。実施例2アンバー抑制によるファージディスプレイの誘導2つの異なるcDNA配列を、アンバーコドンを含むATVファージ構築物に挿入した。これらのcDNAは、FK506結合タンパク質およびp38マイトジェン活性化プロテインMAPキナーゼをコードする。pBADtRNAAlaTAGを含むBL21細胞を対数期まで増殖させ、サプレッサーtRNAAlaTAGを発現させるために2つの異なる濃度のLアラビノースを用いて30分間誘導した。誘導後、細胞に、gene10コートタンパク質との融合体としてFKBPまたはp38MAPKのいずれかをコードするcDNAインサートを含むATVファージを感染させた。結果として得られたファージタンパク質のウエスタンブロットの結果を図1に示す。図1から、Lアラビノースの非存在下では融合タンパク質の発現は全くといってよいくらい検出されないことがはっきりと分かる。使用した2種類の濃度のLアラビノースの添加によって、融合タンパク質の発現がアラビノース濃度依存的に増大する。同様の結果が、図2のレーン1~4に示すように、グリコーゲン合成酵素キナーゼ3、MAPK10、アデニル酸キナーゼ、およびサイクリン依存性キナーゼインヒビター1AをコードするcDNAインサートをファージ構築物に導入し、ファージ構築物をサプレッサー株および非サプレッサー株において増殖させた時に見られた。示されたように、サプレッサー株においてファージを増殖させるとcDNAインサートが発現されるのに対して、非サプレッサー株において増殖させても発現は起こらない。実施例3アラビノース濃度に対する抑制活性の依存性対数期まで増殖させ、5つの異なる濃度のLアラビノースを用いて30分間誘導したBL21細胞に感染させるために、ATVFKBPファージを使用した。同じ実験において、融合タンパク質の発現レベルを、同じFKBPcDNAを含むNovagenT7103株およびT711ファージ株と比較した。ファージタンパク質のウエスタンブロット分析の結果を図3に示す。図3から、産生された融合タンパク質の量は、誘導に使用した漸増量のLアラビノースによって増大することが分かる。ATV株において産生され、観察された融合タンパク質の濃度は、T711で観察されたものより高いが、T7103ファージで観察されたものより低い。細胞培地に含まれるグルコース量を減らすことによって、ATV株を用いた発現をさらに高めることができる。グルコース濃度が低いほど、BADプロモーターの誘導が大きくなる。実施例4ATVファージにおけるクローン収集物の改善ATVファージが、異種ポリペプチドをコードする配列の変異率を小さくできることを図4に示す。6種類のタンパク質をコードするcDNAをNovagen103T7株またはATVファージに導入し、その後、1回の増殖および発現を行った。103株またはATV株を使用した、変異cDNA配列に対する野生型cDNA配列の数を示す。6種類全てのcDNAについて、ATV株を使用した時には変異配列は観察されなかったが、103株では、6種類のcDNAのうち4種類について変異配列が観察された。特に、103ファージを使用した時に、CamKIVおよびグリセロールキナーゼをコードする全てのcDNAが変異したと観察された。特許、特許出願、および刊行物を含む本明細書に引用された参考文献は全て、以前に明確に組み入れられていてもいなくても、その全てが参照として本明細書に組み入れられる。今や、本発明は十分に説明されたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、かつ過度の実験なく、広範囲の等価なパラメータ、濃度、および条件の範囲内で本発明を実施できることが当業者に理解されるだろう。本発明は、本発明の特定の態様に関連して説明されたが、さらなる変更が可能なことが理解されるだろう。本願は、本発明の原理に一般的に従い、かつ本発明が属する当技術の範囲内の公知の実施または通常の実施に入り、前記の必須の特徴に適用できるような本開示からの逸脱を含む、本発明の任意の変化、使用、または適合を含むことが意図される。