"システイン残基を1つ以上含むオリゴペプチドをFc結合性タンパク質のN末端側またはC末端側に付加したタンパク質。システイン残基を1つ以上含むオリゴペプチドが配列番号55に記載のアミノ酸配列からなるオリゴペプチドである、請求項1に記載のタンパク質。Fc結合性タンパク質が、1配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含むタンパク質、または2配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含み、かつ前記アミノ酸のうちの一つ以上を他のアミノ酸に置換、挿入または欠失したタンパク質である、請求項1または2に記載のタンパク質。請求項1から3のいずれかに記載のタンパク質をコードするポリヌクレオチド。請求項4に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。請求項5に記載のベクターにより宿主を形質転換して得られる形質転換体。請求項6に記載の形質転換体を培養することでタンパク質を製造する方法。請求項1から3のいずれかに記載のタンパク質を担体に固定化して得られる抗体吸着剤。担体が、その表面に活性基を有しており、かつ前記活性基が、エポキシ基、マレイミド基、クロロアセチル基、ブロモヒドリン基、ブロモメチル基、ヨードアセチル基のいずれかである、請求項8に記載の抗体吸着剤。請求項8または9に記載の吸着剤を用いた抗体の精製方法。タンパク質のN末端側またはC末端側に付加することで、前記タンパク質に方向性を付与した状態で担体へ固定化可能な、配列番号55に記載のアミノ酸配列からなるオリゴペプチド。本発明は、Fc結合性タンパク質を担体に固定化させる際、その方向性を有した状態で固定化させることが可能なタンパク質、当該タンパク質の製造方法、および当該タンパク質を担体に固定化して得られる吸着剤を提供することにある。本発明者らは前記課題を解決すべく鋭意検討した結果、Fc結合性タンパク質のN末端側またはC末端側にシステインを含むオリゴペプチドを付加することで、担体へ固定化させる際、該タンパク質に方向性を付与した状態で固定化させることができ、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は以下の態様を包含する:第一の態様は、システイン残基を1つ以上含むオリゴペプチドをFc結合性タンパク質のN末端側またはC末端側に付加したタンパク質である。第二の態様は、システイン残基を1つ以上含むオリゴペプチドが配列番号55に記載のアミノ酸配列からなるオリゴペプチドである、前記第一の態様に記載のタンパク質である。第三の態様は、Fc結合性タンパク質が、1配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含むタンパク質、または2配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含み、かつ前記アミノ酸のうちの一つ以上を他のアミノ酸に置換、挿入または欠失したタンパク質である、前記第一または第二の態様に記載のタンパク質である。第四の態様は、前記第一から第三の態様のいずれかに記載のタンパク質をコードするポリヌクレオチドである。第五の態様は、前記第四の態様に記載のポリヌクレオチドを含むベクターである。第六の態様は、前記第五の態様に記載のベクターにより宿主を形質転換して得られる形質転換体である。第七の態様は、前記第六の態様に記載の形質転換体を培養することでタンパク質を製造する方法である。第八の態様は、前記第一から第三の態様のいずれかに記載のタンパク質を担体に固定化して得られる抗体吸着剤である。第九の態様は、担体が、その表面に活性基を有しており、かつ前記活性基が、エポキシ基、マレイミド基、クロロアセチル基、ブロモヒドリン基、ブロモメチル基、ヨードアセチル基のいずれかである、前記第八の態様に記載の抗体吸着剤である。第十の態様は、前記第八または第九の態様に記載の吸着剤を用いた抗体の精製方法である。第十一の態様は、タンパク質のN末端側またはC末端側に付加することで、前記タンパク質に方向性を付与した状態で担体へ固定化可能な、配列番号55に記載のアミノ酸配列からなるオリゴペプチドである。以下、本発明を詳細に説明する。本発明において、システイン残基を1つ以上含むオリゴペプチド以下、システインタグというを付加するFc結合性タンパク質とは、Fc領域を含む抗体IgGと結合可能なタンパク質のことをいい、Fc受容体およびその部分領域を例示することができる。Fc受容体がヒトFc受容体の場合、構造と機能からヒトFcγRI、ヒトFcγRIIa、ヒトFcγRIIbおよびヒトFcγRIIIに分類され、その中でもヒトFcγRIは抗体との親和性が高い点で、システインタグを付加するFc結合性タンパク質として好ましい。ヒトFcγRIは、抗体と結合するα鎖と、α鎖と作用し免疫信号を細胞質内に伝達するγ鎖からなり、α鎖の構造の概略を図1に示す。ヒトFcγRIのα鎖は、N末端側から15アミノ酸からなるシグナルペプチドSS、配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち1番目のメチオニンから15番目のグリシンまでの領域、277アミノ酸からなる細胞外領域EC、配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち16番目のグルタミンから292番目のヒスチジンまでの領域、21アミノ酸からなる細胞膜貫通領域TM、配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち293番目のバリンから313番目のイソロイシンまでの領域、61アミノ酸からなる細胞内領域C、配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち314番目のアルギニンから374番目のスレオニンまでの領域から構成される。本発明におけるシステインタグを付加するFc結合性タンパク質として、前記FcγRIの全領域を用いてもよいが、ヒトFcγRIの細胞外領域図1のEC領域中の少なくとも16番目のグルタミンから289番目のバリンまでの領域を含むタンパク質とすると、Fc領域結合能を有しつつ遺伝子工学的手法により細胞外にタンパク質を発現させることができるため、好ましい。なお、Fc結合性タンパク質の熱、酸およびアルカリに対する安定性をさらに向上させることを目的に、配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち16番目のグルタミンから289番目のバリンまでの領域にあるアミノ酸の一つ以上を他のアミノ酸に置換、挿入または欠失したポリペプチドを含むFc結合性タンパク質であってもよい。さらに、ポリヒスチジンタグといった、精製等を行なうためのタグペプチドをN末端側またはC末端側に付加してもよい。配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち16番目のグルタミンから289番目のバリンまでの領域にあるアミノ酸の一つ以上を他のアミノ酸に置換したポリペプチドを含むFc結合性タンパク質の例として、配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち16番目のグルタミンから289番目のバリンまでのアミノ酸を含み、かつ以下の1から168のいずれかに記載のアミノ酸置換を1つ以上含む、タンパク質があげられる特開2011-206046号公報。1配列番号53の20番目のスレオニンがプロリンに置換2配列番号53の25番目のスレオニンがリジンに置換3配列番号53の38番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換4配列番号53の46番目のロイシンがアルギニンまたはプロリンに置換5配列番号53の62番目のアラニンがバリンに置換6配列番号53の63番目のスレオニンがイソロイシンに置換7配列番号53の69番目のセリンがフェニルアラニンまたはスレオニンに置換8配列番号53の71番目のアルギニンがヒスチジンに置換9配列番号53の77番目のバリンがアラニンまたはグルタミン酸に置換10配列番号53の78番目のアスパラギンがアスパラギン酸に置換11配列番号53の94番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換12配列番号53の100番目のイソロイシンがバリンに置換13配列番号53の110番目のセリンがアスパラギンに置換14配列番号53の114番目のフェニルアラニンがロイシンに置換15配列番号53の125番目のヒスチジンがアルギニンに置換16配列番号53の131番目のロイシンがアルギニンまたはプロリンに置換17配列番号53の149番目のトリプトファンがロイシンに置換18配列番号53の156番目のロイシンがプロリンに置換19配列番号53の160番目のイソロイシンがメチオニンに置換20配列番号53の163番目のアスパラギンがセリンに置換21配列番号53の195番目のアスパラギンがスレオニンに置換22配列番号53の199番目のスレオニンがセリンに置換23配列番号53の206番目のアスパラギンがリジン、セリンまたはスレオニンに置換24配列番号53の207番目のロイシンがプロリンに置換25配列番号53の218番目のロイシンがバリンに置換26配列番号53の240番目のアスパラギンがアスパラギン酸に置換27配列番号53の248番目のロイシンがセリンに置換28配列番号53の283番目のロイシンがヒスチジンに置換29配列番号53の285番目のロイシンがグルタミンに置換30配列番号53の17番目のバリンがグリシンまたはグルタミン酸に置換31配列番号53の19番目のスレオニンがイソロイシンに置換32配列番号53の20番目のスレオニンがイソロイシンに置換33配列番号53の25番目のスレオニンがメチオニンまたはアルギニンに置換34配列番号53の27番目のグルタミンがプロリンまたはリジンに置換35配列番号53の35番目のグルタミンがロイシン、メチオニンまたはアルギニンに置換36配列番号53の36番目のグルタミン酸がグリシンに置換37配列番号53の41番目のロイシンがメチオニンに置換38配列番号53の42番目のヒスチジンがロイシンに置換39配列番号53の44番目のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換40配列番号53の45番目のバリンがアラニンに置換41配列番号53の46番目のロイシンがアラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、セリンまたはトリプトファンに置換42配列番号53の47番目のヒスチジンがグルタミン、ロイシンまたはアスパラギンに置換43配列番号53の49番目のプロリンがセリンまたはアラニンに置換44配列番号53の50番目のグリシンがアルギニンまたはグルタミン酸に置換45配列番号53の51番目のセリンがアラニン、スレオニン、ロイシン、プロリンまたはバリンに置換46配列番号53の52番目のセリンがグリシンに置換47配列番号53の53番目のセリンがロイシン、スレオニンまたはプロリンに置換48配列番号53の55番目のグルタミンがアルギニンに置換49配列番号53の57番目のフェニルアラニンがチロシンに置換50配列番号53の58番目のロイシンがアルギニンに置換51配列番号53の60番目のグリシンがアスパラギン酸に置換52配列番号53の61番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換53配列番号53の62番目のアラニンがグルタミン酸に置換54配列番号53の63番目のスレオニンがロイシン、フェニルアラニンに置換55配列番号53の64番目のグルタミンがプロリン、ヒスチジン、ロイシン、リジンに置換56配列番号53の65番目のスレオニンがアラニンまたはバリンに置換57配列番号53の66番目のセリンがスレオニンに置換58配列番号53の67番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換59配列番号53の69番目のセリンがアラニンに置換60配列番号53の70番目のチロシンがヒスチジンまたはフェニルアラニンに置換61配列番号53の71番目のアルギニンがチロシンに置換62配列番号53の73番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換63配列番号53の74番目のセリンがフェニルアラニンに置換64配列番号53の76番目のセリンがアスパラギンに置換65配列番号53の77番目のバリンがアスパラギン酸またはリジンに置換66配列番号53の78番目のアスパラギンがセリンまたはグリシンに置換67配列番号53の80番目のセリンがアラニンに置換68配列番号53の84番目のアルギニンがセリンに置換69配列番号53の88番目のグリシンがセリンに置換70配列番号53の89番目のロイシンがグルタミンまたはプロリンに置換71配列番号53の90番目のセリンがグリシンに置換72配列番号53の92番目のアルギニンがシステインまたはロイシンに置換73配列番号53の96番目のイソロイシンがバリンまたはリジンに置換74配列番号53の97番目のグルタミンがロイシンまたはリジンに置換75配列番号53の101番目のヒスチジンがロイシンに置換76配列番号53の102番目のアルギニンがセリンまたはロイシンに置換77配列番号53の103番目のグリシンがアスパラギン酸またはセリンに置換78配列番号53の111番目のセリンがアラニンに置換79配列番号53の114番目のフェニルアラニンがアラニン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、スレオニンまたはバリンに置換80配列番号53の115番目のスレオニンがイソロイシンまたはフェニルアラニンに置換81配列番号53の118番目のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換82配列番号53の121番目のアラニンがスレオニンまたはバリンに置換83配列番号53の128番目のリジンがアルギニンまたはグリシンに置換84配列番号53の129番目のアスパラギン酸がグリシンに置換85配列番号53の131番目のロイシンがグルタミンに置換86配列番号53の133番目のチロシンがヒスチジンまたはアルギニンに置換87配列番号53の134番目のアスパラギンがセリンに置換88配列番号53の137番目のチロシンがフェニルアラニンに置換89配列番号53の138番目のチロシンがヒスチジンに置換90配列番号53の139番目のアルギニンがヒスチジンに置換91配列番号53の140番目のアスパラギンがアスパラギン酸に置換92配列番号53の141番目のグリシンがアスパラギン酸またはバリンに置換93配列番号53の142番目のリジンがグルタミン酸またはアルギニンに置換94配列番号53の144番目のフェニルアラニンがイソロイシンに置換95配列番号53の147番目のフェニルアラニンがセリンに置換96配列番号53の148番目のヒスチジンがアルギニンまたはグルタミンに置換97配列番号53の149番目のトリプトファンがアルギニンに置換98配列番号53の151番目のセリンがスレオニンに置換99配列番号53の152番目のアスパラギンがスレオニン、イソロイシンまたはプロリンに置換100配列番号53の154番目のスレオニンがセリンに置換101配列番号53の156番目のロイシンがヒスチジンに置換102配列番号53の157番目のリジンがアルギニンに置換103配列番号53の159番目のアスパラギンがスレオニンまたはアスパラギン酸に置換104配列番号53の160番目のイソロイシンがスレオニン、バリンまたはロイシンに置換105配列番号53の161番目のセリンがスレオニンに置換106配列番号53の165番目のスレオニンがメチオニンに置換107配列番号53の171番目のメチオニンがスレオニンに置換108配列番号53の173番目のリジンがアルギニンに置換109配列番号53の174番目のヒスチジンがグルタミンに置換110配列番号53の177番目のスレオニンがセリンに置換111配列番号53の181番目のイソロイシンがスレオニンに置換112配列番号53の182番目のセリンがスレオニン、ロイシン、バリンまたはグルタミン酸に置換113配列番号53の184番目のスレオニンがセリンに置換114配列番号53の190番目のプロリンがセリンに置換115配列番号53の193番目のバリンがロイシンに置換116配列番号53の195番目のアスパラギンがアラニンに置換117配列番号53の196番目のアラニンがセリンに置換118配列番号53の198番目のバリンがグリシンまたはメチオニンに置換119配列番号53の199番目のスレオニンがアラニンに置換120配列番号53の200番目のセリンがグリシンまたはアルギニンに置換121配列番号53の202番目のロイシンがメチオニンに置換122配列番号53の203番目のロイシンがヒスチジン、グルタミン、チロシン、アルギニン、プロリンに置換123配列番号53の204番目のグルタミン酸がバリンに置換124配列番号53の207番目のロイシンがグルタミン、ヒスチジンまたはアルギニンに置換125配列番号53の209番目のスレオニンがアラニンに置換126配列番号53の211番目のセリンがアルギニンまたはグリシンに置換127配列番号53の213番目のグルタミン酸がバリンまたはイソロイシンに置換128配列番号53の215番目のリジンがアルギニンまたはグルタミン酸に置換129配列番号53の217番目のロイシンがアルギニンまたはグルタミンに置換130配列番号53の218番目のロイシンがイソロイシン、メチオニンまたはリジンに置換131配列番号53の219番目のグルタミンがプロリンまたはアルギニンに置換132配列番号53の223番目のロイシンがアルギニン、グルタミンまたはメチオニンに置換133配列番号53の224番目のグルタミンがアルギニンに置換134配列番号53の225番目のロイシンがグルタミンに置換135配列番号53の227番目のフェニルアラニンがイソロイシンに置換136配列番号53の230番目のチロシンがヒスチジンまたはフェニルアラニンに置換137配列番号53の231番目のメチオニンがリジンまたはアルギニンに置換138配列番号53の233番目のセリンがグリシンまたはアスパラギンに置換139配列番号53の234番目のリジンがグルタミン酸に置換140配列番号53の240番目のアスパラギンがグリシンに置換141配列番号53の244番目のグルタミン酸がバリンに置換142配列番号53の245番目のチロシンがヒスチジンまたはグルタミン酸に置換143配列番号53の246番目のグルタミンがアルギニンまたはリジンに置換144配列番号53の248番目のロイシンがイソロイシンに置換145配列番号53の249番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換146配列番号53の250番目のアラニンがバリンに置換147配列番号53の251番目のアルギニンがセリンに置換148配列番号53の252番目のアルギニンがヒスチジンに置換149配列番号53の253番目のグルタミン酸がグリシンに置換150配列番号53の257番目のロイシンがアルギニンまたはグルタミンに置換151配列番号53の261番目のグルタミン酸がバリンまたはアラニンに置換152配列番号53の262番目のアラニンがバリンに置換153配列番号53の263番目のアラニンがセリンに置換154配列番号53の264番目のスレオニンがセリンに置換155配列番号53の265番目のグルタミン酸がアラニンまたはグリシンに置換156配列番号53の268番目のアスパラギンがセリン、イソロイシンまたはスレオニンに置換157配列番号53の270番目のロイシンがヒスチジン、アルギニンまたはバリンに置換158配列番号53の271番目のリジンがアルギニンに置換159配列番号53の272番目のアルギニンがグルタミンに置換160配列番号53の277番目のグルタミン酸がバリンに置換161配列番号53の279番目のグルタミンがアルギニンまたはヒスチジンに置換162配列番号53の282番目のグリシンがアスパラギン酸に置換163配列番号53の283番目のロイシンがプロリンに置換164配列番号53の285番目のロイシンがアルギニンまたはヒスチジンに置換165配列番号53の286番目のプロリンがグルタミン、アルギニンまたはグルタミン酸に置換166配列番号53の287番目のスレオニンがイソロイシン、プロリン、アラニンまたはバリンに置換167配列番号53の288番目のプロリンがアラニン、セリンまたはスレオニンに置換168配列番号53の289番目のバリンがアラニン、アスパラギン酸、グリシン、ロイシンまたはイソロイシンに置換本発明において、システインタグの長さは当該タグを付加するFc結合性タンパク質が有する抗体Fc領域結合能を損なわない限り、1残基から100残基の範囲の中から任意に設定でき、特に5残基から20残基の範囲に設定するとよい。システインタグに含まれるシステイン残基は1つ以上あればよいが、2つ以上含む場合はシステインタグ内でS-S結合が形成されないよう設計する必要がある。システインタグを構成するシステイン以外のアミノ酸残基の種類は、担体表面の物性を考慮の上、担体表面と相互作用しやすい物性を有したアミノ酸残基を適宜選択すればよい。本発明におけるシステインタグの一例として配列番号55に記載のアミノ酸配列からなるオリゴペプチドがあげられる。Fc結合性タンパク質のN末端側またはC末端側にシステインタグを付加して得られる本発明のタンパク質をコードするポリヌクレオチド以下、単に本発明のポリヌクレオチドというの作製方法としては、I本発明のタンパク質のアミノ酸配列からヌクレオチド配列に変換し、当該ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを人工的に合成する方法や、II本発明のタンパク質のうちFc結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、直接人工的に、またはFc結合性タンパク質のcDNA等からPCR法などのDNA増幅法を用いて調製後、当該調製したポリヌクレオチドの5’末端側または3’末端側に遺伝子工学的手法によりシステインタグをコードするオリゴヌクレオチドを付加する方法、が例示できる。なお、アミノ酸配列をヌクレオチド配列に変換する際、形質転換させる宿主におけるコドンの使用頻度を考慮して変換するのが好ましい。一例として、宿主が大腸菌Escherichiacoliの場合は、アルギニンArgではAGA/AGG/CGG/CGAが、イソロイシンIleではATAが、ロイシンLeuではCTAが、グリシンGlyではGGAが、プロリンProではCCCが、それぞれ使用頻度が少ないためいわゆるレアコドンであるため、それらのコドンを避けるように変換すればよい。コドンの使用頻度の解析は公的データベース例えば、かずさDNA研究所のホームページにあるCodonUsageDatabase等を利用することによっても可能である。また、前記IまたはIIの方法で作製した本発明のポリヌクレオチドの5’末端側にシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドを付加してもよく、宿主が大腸菌の場合は、前記シグナルペプチドとしてpelB、DsbA、MalEUniProtNo.P0AEX9に記載のアミノ酸配列のうち1番目から26番目までの領域、TorTといったペリプラズムにタンパク質を分泌させるシグナルペプチドをあげることができる特許文献2。本発明のポリヌクレオチドを用いて宿主を形質転換する場合、本発明のポリヌクレオチドそのものを用いてもよいが、発現ベクター例えば、原核細胞や真核細胞の形質転換に通常用いるバクテリオファージ、コスミドやプラスミド等の適切な位置に本発明のポリヌクレオチドを挿入したものを用いると、より好ましい。なお、当該発現ベクターは、形質転換する宿主内で安定に存在し複製できるものであれば特に制限はなく、大腸菌を宿主とする場合は、pETプラスミドベクター、pUCプラスミドベクター、pTrcプラスミドベクター、pCDFプラスミドベクター、pBBRプラスミドベクター等を例示することができる。また、前記適切な位置とは、発現ベクターの複製機能、所望の抗生物質マーカー、伝達性に関わる領域を破壊しない位置を意味する。前記発現ベクターに本発明のポリヌクレオチドを挿入する際は、発現に必要なプロモータといった機能性ポリヌクレオチドに連結される状態で挿入すると好ましい。当該プロモータの例として、宿主が大腸菌の場合は、trpプロモータ、tacプロモータ、trcプロモータ、lacプロモータ、T7プロモータ、recAプロモータ、lppプロモータ、さらにはλファージのλPLプロモータ、λPRプロモータ等を例示することができる。前記方法により作製した本発明のポリヌクレオチドを挿入した本発明のポリヌクレオチドを含むベクターで宿主を形質転換するには、当業者が通常用いる方法で行なえばよい。本発明のタンパク質は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換された宿主形質転換体を培養することで製造することができる。具体的には、当該形質転換体を培養し、その培養物から本発明のタンパク質を何らかの方法で回収すればよい。なお、本明細書において、培養物とは、培養された形質転換体の細胞そのもののほか、培養に用いた培地も含まれる。本発明のタンパク質製造方法で用いる形質転換体は、対象宿主の培養に適した培地で培養すればよく、宿主が大腸菌の場合は、必要な栄養源を補ったLBLuria-Bertani培地が好ましい培地の一例としてあげられる。なお、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターの導入の有無によって選択的に形質転換体を増殖させるために、培地に当該ベクターに含まれる薬剤耐性遺伝子に対応した薬剤を添加して培養すると好ましい。例えば、当該ベクターがカナマイシン耐性遺伝子を含んでいる場合は、培地にカナマイシンを添加すればよい。また培地には、炭素、窒素および無機塩供給源の他に、適当な栄養源を添加してもよく、所望により、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレートおよびジチオスレイトールからなる群から選択される一種類以上の還元剤を含んでもよい。さらに、グリシンといった前記形質転換体から培養液へのタンパク質分泌を促す試薬を添加してもよく、具体的には、宿主が大腸菌の場合、培地に対してグリシンを2w/v以下で添加すると好ましい。培養温度は宿主が大腸菌の場合、一般に10°Cから40°C、好ましくは25°Cから35°C、より好ましくは30°C前後であるが、発現させるFc結合性タンパク質の特性により選択すればよい。培地のpHは宿主が大腸菌の場合、pH6.8からpH7.4、好ましくはpH7.0前後である。本発明のポリヌクレオチドを含むベクターに誘導性のプロモータが含まれている場合は、本発明のタンパク質が良好に発現できるような条件下で誘導をかけると好ましい。誘導剤としてはIPTGisopropyl-β-D-thiogalactopyranosideを例示することができる。宿主が大腸菌の場合、培養液の濁度600nmにおける吸光度を測定し、約0.5から1.0となったときに適当量のIPTGを添加後、引き続き培養することで、本実施形態のFc結合性タンパク質の発現を誘導することができる。IPTGの添加濃度は0.005から1.0mMの範囲から適宜選択すればよいが、0.01から0.5mMの範囲が好ましい。IPTG誘導に関する種々の条件は当該技術分野において周知の条件で行なえばよい。本発明のタンパク質を回収するには、培養物から何らかの方法でFc結合性タンパク質を抽出すればよい。本発明の形質転換体の培養液から、本発明のタンパク質を抽出するには、当該タンパク質の発現の形態により適宜抽出方法を選択すればよい。培養上清に発現する場合は菌体を遠心分離操作によって分離し、得られる培養上清から本発明のタンパク質を抽出すればよい。一方、細胞内原核生物においてはペリプラズムも含むに発現する場合には、遠心分離操作により菌体を集めた後、酵素処理剤や界面活性剤等を添加することにより菌体を破砕し、本発明のタンパク質を抽出すればよい。抽出した本発明のタンパク質を含む溶液から本発明のタンパク質を分離精製するには、当該技術分野において公知の方法を用いればよく、一例として液体クロマトグラフィーを用いた分離精製があげられる。液体クロマトグラフィーには、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等があり、これらのクロマトグラフィーを組み合わせて精製操作を行なうことにより、本発明のタンパク質を高純度に調製することができる。調製した高純度な本発明のタンパク質は、還元剤存在下で保存すると安定に保存できるため好ましく、還元剤としてはジチオスレイトール、2-メルカプトエタノール、還元型グルタチオン、酸化型グルタチオンまたはトリカルボキシエチルフォスフィンを例示することができる。還元剤の濃度は、1nMから100mMの範囲の中から使用する還元剤の還元力より判断し適宜設定すればよく、1μMから10mMの範囲とすると好ましい。本発明のタンパク質を不溶性の担体に固定化させることで、本発明の抗体吸着剤を作製することができる。本発明の抗体吸着剤の作製に用いる不溶性の担体は特に限定はないが、アガロース、アルギネートアルギン酸塩、カラゲナン、キチン、セルロース、デキストリン、デキストラン、デンプンといった多糖質ゲル、またはポリビニルアルコール、ポリメタクリレート、ポリ2-ヒドロキシエチルメタクリレート、ポリウレタンといった合成高分子ゲルが好ましい。前記好ましい担体の一例として、トヨパール東ソー社製等の水酸基を導入したポリメタクリレートゲル、SepharoseGEヘルスケア社製等のアガロースゲル、セルファインJNC社製等のセルロースゲルがあげられる。担体の形状については特に限定はなく、粒状物または非粒状物、多孔性または非多孔性、いずれであってもよい。本発明のタンパク質を不溶性の担体に固定化する際は、N-ヒドロキシコハク酸イミドNHS活性化エステル基、エポキシ基、マレイミド基、トレシル基、ホルミル基、ハロアセトアミド等の活性基を介して担体と共有結合により固定化すればよい。活性基を有した担体は市販の担体をそのまま用いてもよいし、適切な反応条件にて担体表面に活性基を導入し調製してもよい。表面に活性基を有した市販の担体としてはTOYOPEARLAF-Epoxy-650M、TOYOPEARLAF-Tresyl-650Mいずれも東ソー社製、HiTrapNHS-activatedHPColumns、NHS-activatedSepharose4FastFlow、Epoxy-activatedSepharose6BいずれもGEヘルスケア社製、SulfoLinkCouplingResinThermoScientific社製を例示できる。担体表面に活性基を導入する方法としては、担体表面に存在する水酸基やエポキシ基、カルボキシル基、アミノ基等に対して2個以上の活性部位を有する化合物の一方を反応させる方法が例示できる。当該化合物の一例として、担体表面の水酸基やアミノ基にエポキシ基を導入する化合物としては、エピクロロヒドリン、エタンジオールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテル、ヘキサンジオールジグリシジルエーテルを例示できる。また前記化合物により担体表面に導入したエポキシ基にカルボキシル基を導入する化合物としては、2-メルカプト酢酸、3-メルカプトプロピオン酸、4-メルカプト酪酸、6-メルカプト酪酸、グリシン、3-アミノプロピオン酸、4-アミノ酪酸、6-アミノヘキサン酸を例示できる。担体表面に存在する水酸基やエポキシ基、カルボキシル基、アミノ基にマレイミド基を導入する化合物としてはN-ε-マレイミドカプロン酸ヒドラジド、N-ε-マレイミドプロピオン酸ヒドラジド、4-[4-N-マレイミドフェニル]酢酸ヒドラジド、2-アミノマレイミド、3-アミノマレイミド、4-アミノマレイミド、6-アミノマレイミド、1-4-アミノフェニルマレイミド、1-3-アミノフェニルマレイミド、4-マレイミドフェニルイソシアナート、2-マレイミド酢酸、3-マレイミドプロピオン酸、4-マレイミド酪酸、6-マレイミドヘキサン酸、N-α―マレイミドアセトキシコハク酸イミドエステル、m-マレイミドベンゾイルN-ヒドロキシコハク酸イミドエステル、コハク酸イミジル-4-[マレイミドメチル]シクロヘキサンー1-カルボニル-[6-アミノヘキサン酸]、コハク酸イミジル-4-[マレイミドメチル]シクロヘキサンー1-カルボン酸、p-マレイミドベンゾイルN-ヒドロキシコハク酸イミドエステル、m-マレイミドベンゾイルN-ヒドロキシコハク酸イミドエステルを例示できる。担体表面に存在する水酸基やアミノ基にハロアセチル基を導入する化合物としては、クロロ酢酸、ブロモ酢酸、ヨード酢酸、クロロ酢酸クロリド、ブロモ酢酸クロリド、ブロモ酢酸ブロミド、クロロ酢酸無水物、ブロモ酢酸無水物、ヨード酢酸無水物、2-ヨードアセトアミド酢酸-N-ヒドロキシコハク酸イミドエステル、3-ブロモアセトアミドプロピオン酸-N-ヒドロキシコハク酸イミドエステル、4-ヨードアセチルアミノ安息香酸-N-ヒドロキシコハク酸イミドエステルを例示できる。また、担体表面に存在する水酸基やアミノ基にω―アルケニルアルカングリシジルエーテルを反応させた後、ハロゲン化剤でω―アルケニル部位をハロゲン化し活性化する方法も例示できる。ω―アルケニルアルカングリシジルエーテルとしては、アリルグリシジルエーテル、3-ブテニルグリシジルエーテル、4-ペンテニルグリシジルエーテルを例示でき、ハロゲン化剤としてはN-クロロコハク酸イミド、N-ブロモコハク酸イミド、N-ヨードコハク酸イミドを例示できる。担体表面に活性基を導入する方法の別の例として、担体表面にあるカルボキシル基に対して縮合剤と添加剤を用いて活性化基を導入する方法もある。縮合剤としては1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDC、ジシクロヘキシルカルボジアミド、カルボニルジイミダゾールが例示できる。また添加剤としてはN-ヒドロキシコハク酸イミドNHS、4-ニトロフェノール、1-ヒドロキシベンズトリアゾールを例示できる。担体への活性基導入量は担体1mLあたり1nmolから1mmolが好ましく、より好ましくは1μmolから100μmolである。本発明のタンパク質を不溶性の担体に固定化させる際は、本発明のタンパク質を緩衝液に溶解し、担体が有する活性基と反応させればよく、緩衝液としては酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、MES緩衝液、HEPES緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液を例示することができる。固定化させるときの反応温度は、5°Cから50°Cの範囲の中から活性基の反応性や本発明のタンパク質の安定性を考慮の上適宜設定すればよく、好ましくは10°Cから35°Cの範囲である。本発明のタンパク質を不溶性の担体に固定化させる方法の具体例として、本発明のタンパク質に含まれるカルボキシル基を、1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドとN-ヒドロキシコハク酸イミドを作用させてN-ヒドロキシコハク酸イミドNHS活性化エステル基に変換し、アミノ基を有する担体に固定化させる方法があげられる。本発明のタンパク質を不溶性の担体に固定化して得られる抗体吸着剤以下、単に本発明の抗体吸着剤というで精製可能な抗体は、Fc領域を有する抗体IgGであれば特に制限はなく、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、ウサギ抗体を例示することができる。本発明の抗体吸着剤を用いた、抗体の精製方法に特に制限はないが、空カラムに本発明の抗体吸着剤を充填して得られるカラムを用いたクロマトグラフィーによる精製方法が抗体を高純度に精製できる点で好ましい。本発明の抗体吸着剤により精製する、抗体を含む溶液としては、抗体を生産する宿主の培養液や、当該培養液を遠心分離等により細胞を除去した培養上清を例示できる。カラムの大きさ本発明の抗体吸着剤の充填量は精製原料の処理量を考慮の上、適宜決定すればよい。本発明の抗体吸着剤を充填したカラムに抗体を含む溶液を添加する際は、送液量を考慮しポンプ等の送液手段を用いて添加すればよい。なお、本発明の抗体吸着剤を充填したカラムは、抗体を添加する前に、あらかじめ適切な緩衝液を用いて平衡化すると、抗体をより高純度に精製できるため好ましい。緩衝液としてはリン酸緩衝液等無機塩を成分とした緩衝液を例示することができる。なお、緩衝液のpHは、pH3から10、好ましくはpH5から8である。前記抗体吸着剤に吸着させた抗体を溶出させるには、前記抗体吸着剤と抗体との相互作用を弱める緩衝液を用いればよく、具体的には、クエン酸緩衝液、グリシン塩酸緩衝液、酢酸緩衝液を例示することができる。緩衝液のpHは、抗体が有する機能を損なわない範囲で設定すればよく、好ましくはpH3から6、より好ましくはpH3.3から4.0である。本発明のタンパク質は、システイン残基を1つ以上含むオリゴペプチドシステインタグをFc結合性タンパク質のN末端側またはC末端側に付加したタンパク質であり、前記Fc結合性タンパク質に方向性を付与した状態で担体に固定化させることができる。その結果、担体に固定化したFc結合性タンパク質のうち抗体への結合能を保持しているタンパク質の割合有効固定化率を向上させることができる。よって、本発明のタンパク質を担体に固定化して得られる抗体吸着剤は、システインタグを付加しないFc結合性タンパク質を担体に固定化して得られる抗体吸着剤と比較し、ゲル当たりの抗体吸着量を向上させることができ、抗体精製コストを低減させることができる。なお、本発明のタンパク質を得る際、Fc結合性タンパク質に付加したシステインタグ例えば、配列番号55に記載のアミノ酸配列からなるオリゴペプチドは、Fc結合性タンパク質以外のタンパク質に対しても、本発明のタンパク質と同様、N末端側またはC末端側に付加することで、方向性を付与した状態で担体に固定化することができる。このため、前記システインタグはタンパク質を効率的に担体に固定化させるのに有効といえる。以下、本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示すが、本発明は実施例に限定されるものではない。実施例1Fc結合性タンパク質をコードする発現ベクターの作製配列番号1に示す、Fc結合性タンパク質を含むポリペプチドを発現可能なベクターを以下の方法により作製した。配列番号1のうち、1番目のメチオニンから26番目のアラニンまでがMalEシグナルペプチドUniProtNo.P0AEX9に記載のアミノ酸配列のうち1番目から26番目までの領域、27番目のリジンから33番目のグリシンまでがリンカーペプチド、34番目のグルタミンから307番目のバリンまでがFc結合性タンパク質FcRm32、308番目から313番目までのヒスチジンがFc結合タンパク質の定量または精製のために導入したポリヒスチジンタグである。なおFcRm32は、配列番号53に記載のアミノ酸配列のうち、16番目のグルタミンから289番目のバリンまでの領域に相当し、かつThr20Pro配列番号53の20番目のスレオニンをプロリンに置換、以下同じ、Thr25Lys、Glu36Gly、Thr38Ser、Val45Ala、Leu46Pro、Pro49Ser、Gly60Asp、Thr63Ile、Thr65Ala、Ser69Thr、Arg71His、Val77Glu、Asn78Asp、Ile100Val、Phe114Leu、Tyr133His、Arg139His、Trp149Arg、Leu156Pro、Ile160Thr、Asn163Ser、Lys173Arg、Ile181Thr、Asn195Thr、Leu203His、Asn206Thr、Leu207Gln、Met231Lys、Asn240Asp、Leu283HisおよびLeu285Glnの置換を導入したFc結合性タンパク質である。またThr20Proのプロリンは配列番号1において38番目、Thr25Lysのリジンは43番目、Glu36Glyのグリシンは54番目、Thr38Serのセリンは56番目、Val45Alaのアラニンは63番目、Leu46Proのプロリンは64番目、Pro49Serのセリンは67番目、Gly60Aspのアスパラギン酸は78番目、Thr63Ileのイソロイシンは81番目、Thr65Alaのアラニンは83番目、Ser69Thrのスレオニンは87番目、Arg71Hisのヒスチジンは89番目、Val77Gluのグルタミン酸は95番目、Asn78Aspのアスパラギン酸は96番目、Ile100Valのバリンは118番目、Phe114Leuのロイシンは132番目、Tyr133Hisのヒスチジンは151番目、Arg139Hisのヒスチジンは157番目、Trp149Argのアルギニンは167番目、Leu156Proのプロリンは174番目、Ile160Thrのスレオニンは178番目、Asn163Serのセリンは181番目、Lys173Argのアルギニンは191番目、Ile181Thrのスレオニンは199番目、Asn195Thrのスレオニンは213番目、Leu203Hisのヒスチジンは221番目、Asn206Thrのスレオニンは224番目、Leu207Glnのグルタミンは225番目、Met231Lysのリジンは249番目、Asn240Aspのアスパラギン酸は258番目、Leu283Hisのヒスチジンは301番目、Leu285Glnのグルタミンは303番目の位置に、それぞれある。1MalEシグナルペプチドおよびリンカーペプチドMKIKTGARILALSALTTMMFSASALAKIEEM、配列番号54をコードするポリヌクレオチドを作製するために、下記に示す2段階のPCRを行なった。1-11段階目のPCR反応を、表1に示す反応液を用い、98°Cで10秒間の第1ステップ、55°Cで5秒間の第2ステップ、72°Cで1分間の第3ステップを1サイクルとする反応を5サイクル行なうことで実施した。なお表1に示す反応液の組成のうち、オリゴヌクレオチドミックスは、配列番号25’-TATA[CATATG]AAAATAAAAACAGGTGCACGCATCC-3’;角かっこ内の塩基は制限酵素NdeIサイト、配列番号35’-GCATTAACGACGATGATGTTTTCCGCCTCGGCTCTCGCC-3’、配列番号45’-ATCGTCGTTAATGCGGATAATGCGAGGATGCGTGCACCTG-3’、および配列番号55’-TTGTC[CCATGG]CTTCTTCGATTTTGGCGAGAGCCG-3’;角かっこ内の塩基は制限酵素NcoIサイトに記載の配列からなる各オリゴヌクレオチド本明細書の実施例で用いたオリゴヌクレオチドはいずれもSigmaGenosys社製である溶液濃度:50pmoL/μLを、それぞれ等量ずつ採取し混合した溶液である。1-22段階目のPCR反応を、表2に示す反応液を用い、98°Cで10秒間の第1ステップ、55°Cで5秒間の第2ステップ、72°Cで1分間の第3ステップを1サイクルとする反応を30サイクル行なうことで実施し、MalEシグナルペプチドおよびリンカーペプチドをコードするポリヌクレオチドを作製した。なお、表2に示す反応液の組成のうち、鋳型は1段階目のPCR反応液を用い、PCRプライマーは配列番号2および5に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドを使用した。21で調製したMalEシグナルペプチドおよびリンカーペプチドをコードするポリヌクレオチドを、制限酵素NdeIとNcoIで消化後、あらかじめ制限酵素NdeIとNcoIで消化したpET26bプラスミドベクターNovagen社製にライゲーションし、大腸菌E.coliJM109株タカラバイオ社製を50μg/mLのカナマイシンタカラバイオ社製を含むLB寒天培地を用いて形質転換した。3得られた形質転換体を50μg/mLのカナマイシンを含むLB培地で培養し、形質転換体よりプラスミドDNAを抽出することで、プラスミドpETMalEを調製した。pETMalEの構造を図2に示す。4配列番号1に記載のアミノ酸配列のうち34番目のグルタミンから307番目のバリンまでの領域からなるポリペプチドFcRm32、274アミノ酸をコードするポリヌクレオチド配列番号6を、下記に示すPCRを用いてアッセンブリーする方法NucleicAcidsRes.,3010,e43,2002:非特許文献1により作製した。4-11段階目のPCR反応は、表3に示す反応液を用いて、94°Cで5分間熱処理後、94°Cで30秒間の第1ステップ、62°Cで30秒間の第2ステップ、72°Cで1分間の第3ステップを1サイクルとする反応を25サイクル行ない、最後に72°Cで7分間熱処理することで行なった。なお、表3に示す反応液の組成のうち、オリゴヌクレオチドミックスは、設計した配列番号7から配列番号44に記載の配列からなる、38種類のオリゴヌクレオチド溶液濃度:50pmoL/μLをそれぞれ等量ずつ採取し混合した溶液である。4-22段階目のPCR反応は、表4に示す反応液を用いて、94°Cで5分間熱処理後、94°Cで30秒間の第1ステップ、65°Cで30秒間の第2ステップ、72°Cで1分間の第3ステップを1サイクルとする反応を25サイクル行ない、最後に72°Cで7分間熱処理することで行なった。なお、表4に示す反応液の組成のうち、鋳型は1段階目のPCRの反応液を用い、PCRプライマーは、配列番号455’-TCAG[CCATGG]GACAAGTAGATACCCCCAAAGCTGTGATTA-3’;角かっこ内は制限酵素NcoIサイトおよび配列番号465’-CC[AAGCTT]AATGATGATGATGATGATGGACCGGGGTCGGCTGTTGATGACCCAG-3’;角かっこ内は制限酵素HindIIIサイトに記載の配列からなるオリゴヌクレオチドを用いた。また、配列番号46に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドはFc結合性タンパク質FcRm32のC末端側に精製を容易にするためのポリヒスチジンタグヒスチジン6残基からなるが付加されるよう設計したオリゴヌクレオチドである。4-32段階目のPCRの反応液をアガロースゲルから抽出精製QIAquickGelextractionkit:キアゲン社製することで、Fc結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを調製した。53で作製したベクターpETMalE図2と、4で作製したFc結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドとを、制限酵素NcoIとHindIIIで消化し、ライゲーション後、大腸菌E.coliJM109株タカラバイオ社製を50μg/mLのカナマイシンを含むLB寒天培地を用いて形質転換した。6得られた形質転換体を50μg/mLのカナマイシンを含むLB培地にて培養し、定法に従いプラスミドを抽出後QIAprepSpinMiniprepKit:キアゲン社製、発現ベクターpETFcRm32を得た。図3に概略構造を示す。7FcRm32を発現させるために、ベクターpETFcRm32により大腸菌E.coliBL21DE3株タカラバイオ社製を50μg/mLのカナマイシンを含むLB寒天培地を用いて形質転換した。実施例2ポリヌクレオチドの塩基配列の解析前述したベクターpETFcRm32図3に挿入されたポリヌクレオチドの塩基配列をチェーンターミネータ法に基づくBigDyeTerminatorCycleSequencingFSreadReactionkitPEアプライドバイオシステム社製を用いてサイクルシークエンス反応に供し、全自動DNAシークエンサーABIPrism3700DNAanalyzerPEアプライドバイオシステム社製にて解析した。なお、シークエンス用プライマーとして、配列番号475’-TAATACGACTCACTATAGGG-3’および、配列番号485’-TATGCTAGTTATTGCTCAG-3’に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドを用いた。解析の結果、pETFcRm32に挿入されたポリヌクレオチドの配列は設計通りであることを確認した。実施例3Fc結合性タンパク質へのシステインタグの導入1表4に示す反応液の組成のうち、鋳型を実施例1で作製したベクターpETFcRm32図3に、PCRプライマーを、配列番号495’-AACATG[CCATGG]GACAAGTAGATACCCCCAAAGCTGTGATTA-3’;角かっこ内は制限酵素NcoIサイト、および配列番号505’-TTCCC[AAGCTT]AGCCGCAGCCACCCGAGCCACCGACCGGGGTCGGCTGTTG-3’;角かっこ内は制限酵素HindIIIサイトに記載の配列からなるオリゴヌクレオチドに、それぞれ変更した他は実施例14-2と同様な方法でPCR反応を行なった。2実施例15から6と同様な方法により、Fc結合性タンパク質FcRm32のC末端側にシステインタグGGSGGCG、配列番号55を付加したポリペプチド以下、FcRm32Cを発現可能なベクターpETFcRm32Cを調製した。3FcRm32Cを発現させるために、ベクターpETFcRm32Cにより大腸菌E.coliBL21DE3株タカラバイオ社製を50μg/mLのカナマイシンを含むLB寒天培地を用いて形質転換した。4ベクターpETFcRm32Cに挿入されたポリヌクレオチドの塩基配列を実施例2と同様な方法で確認した。ベクターpETFcRm32Cの構造概略を図4に示す。また、FcRm32Cをコードするポリヌクレオチドの塩基配列を配列番号52に、FcRm32Cのアミノ酸配列を配列番号51にそれぞれ示す。なお、配列番号51のうち1番目のメチオニンから26番目のアラニンまでがMalEシグナルペプチドUniProtNo.P0AEX9に記載のアミノ酸配列のうち1番目から26番目までの領域、27番目のリジンから33番目のグリシンまでがリンカーペプチド、34番目のグルタミンから307番目のバリンまでがFc結合性タンパク質FcRm32、308番目のグリシンから314番目のグリシンまでがシステインタグである。実施例4システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm32Cの調製1実施例3で作製したFcRm32Cを発現可能なベクターpETFcRm32C図4を導入した形質転換体を50μg/mLのカナマイシンを添加した2×TY液体培地に接種し、37°Cで一晩振とうすることで前培養を行なった。2前培養液を50μg/mLのカナマイシンを添加した2×TY培地2Lに添加し37°Cで振とう培養した。3培養開始1.5時間後に培養温度を20°Cに切り換え、さらにIPTGを終濃度0.01mMとなるよう添加して、引き続き20°Cで一晩振とう培養した。4培養終了後、遠心分離操作10000×gで20分間により得られた湿菌体を、150mMのNaClと0.1mMのPMSFphenylmethylsulfonylfluorideとを含む20mMのTris-HCl緩衝液pH8.0に懸濁させ、4°Cに冷却しながら超音波破砕処理を行なった。5遠心分離操作4°C、10000×gで20分間により、FcRm32Cを含む溶液を遠心上清として回収した。65の遠心上清に114g/Lとなるように硫酸アンモニウムを添加し、生成した沈殿を遠心分離操作4°C、12000×gで20分間により除去した。76の遠心上清を、あらかじめ114g/Lの硫酸アンモニウムを含む20mMのTris-HCl緩衝液pH8.0で平衡化したTOYOPEARLPhenyl-650Mゲル東ソー社製を充填したカラム内径16mm×長さ6cmに添加し、同緩衝液で洗浄後、20のグリセロールを含む20mMのTris-HCl緩衝液pH8.0を用いてゲルに吸着したFcRm32Cを溶出した。87の溶出液に純水を添加して導電率を10mS/cm以下まで低下させた後、終濃度1Mとなるように尿素を添加した。この溶液を、あらかじめ1Mの尿素を含む20mMのリン酸緩衝液pH6.0で平衡化したTOYOPEARLCM-650Mゲル東ソー株式会社製を充填したカラム内径9mm×長さ15cmに添加し、同緩衝液で洗浄後、1Mの尿素と2MのNaClとを含む20mMのリン酸緩衝液pH7.0を用いてゲルに吸着したFcRm32Cを溶出した。98の溶出液を、あらかじめ150mMのNaClと0.05のTween20とを含む50mMのTris-HCl緩衝液pH8.0で平衡化したIgGSepharose6FastFlowゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ3cmに添加し、同緩衝液で洗浄後、0.05のTween20と10のグリセリンとを含む20mMのクエン酸緩衝液pH3.0でゲルに吸着したFcRm32Cを溶出した。なお溶出の際は、溶出液を中性付近に戻すため、溶出量に対し約1/4量の1MのTris-HCl緩衝液pH8.0を添加した試験管に溶出液を集めた。10溶出されたFcRm32Cの純度を、ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGEおよびクマシーブリリアントブルーCBB染色で確認し、均一なタンパク質であることを確認した。11精製したFcRm32Cを、プロテインアッセイキットBio-Rad社製、標準タンパク質:キット添付の抗体を用いて定量した。結果、FcRm32Cは大腸菌培養液1Lあたり約5mg調製することができた。比較例1Fc結合性タンパク質FcRm32の調製1実施例1で作製したFcRm32を発現可能なベクターpETFcRm32図3により形質転換された形質転換体を50μg/mLのカナマイシンを添加した2×TY液体培地に接種し、37°Cで一晩振とうすることで前培養を行なった。2前培養液を50μg/mLのカナマイシンを添加した2×TY培地2Lに添加し37°Cで振とう培養した。3培養開始1.5時間後に培養温度を20°Cに切り換えて、さらにIPTGを終濃度0.01mMとなるよう添加して、引き続き20°Cで一晩振とう培養した。4培養終了後、遠心分離操作10000×g、20分間により得られた湿菌体を、500mMのNaClと0.1mMのPMSFphenylmethylsulfonylfluoride、和光純薬社製および20mMイミダゾール和光純薬社製を含む20mMのTris-HCl緩衝液pH8.0に懸濁させ、4°Cに冷却しながら超音波破砕処理を行なった。5遠心分離操作4°C、10000×gで20分間により、FcRm32を含む溶液を遠心上清として回収した。65の遠心上清を、あらかじめ500mMのNaClと0.1のTween20と20mMのイミダゾールとを含む20mMのTris-HCl緩衝液pH8.0で平衡化したニッケルキレートゲルHisBindResin、Novagen社製を充填したカラム内径16mm×長さ3cmに添加し、同緩衝液で洗浄後、500mMのNaClと0.1のTween20と500mMのイミダゾールとを含む20mMのTris-HCl緩衝液pH8.0を用いて、ゲルに吸着したFcRm32を溶出した。76の溶出液を、あらかじめ150mMのNaClと0.05のTween20とを含む50mMのTris-HCl緩衝液pH8.0で平衡化したIgGSepharose6FastFlowGEヘルスケア社製に添加し、同緩衝液で洗浄後、0.05のTween20と10のグリセリンとを含む20mMのクエン酸緩衝液pH3.0でFcRm32を溶出した。なお溶出の際は、溶出液を中性付近に戻すため、溶出量に対して約1/4量の1MのTris-HCl緩衝液pH8.0を添加した試験管に溶出液を集めた。8溶出されたFcRm32の純度を、ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGEおよびクマシーブリリアントブルーCBB染色で確認し、均一なタンパク質であることを確認した。9精製したFcRm32を、プロテインアッセイキットBio-Rad社製、標準タンパク質:キット添付の抗体を用いて定量した。結果、FcRm32は大腸菌培養液1Lから約21mg調製することができた。実施例5ポリメタクリレートゲルへのエポキシ基の導入ポリメタクリレートゲルTOYOPEARLHW-65東ソー社製約2mLをグラスフィルター上で吸引ろ過後、そのまま吸引乾燥して得られたゲル2.0gに水1.0mL、0.2M水酸化ナトリウム水溶液1.0mL、1,2-エタンジオールジグリシジルエーテルEDGE2.0gを添加し、50°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水20mLで4回、1,4-ジオキサン20mLで4回、水20mLで4回洗浄することでエポキシ基を導入したゲル以下、エポキシトヨパールとするを作製した。実施例6システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm32Cの固定化その11実施例4で調製したFc結合性タンパク質FcRm32C溶液を、20mMの酢酸緩衝液pH5.3に対して透析し、同緩衝液にて平衡化したTOYOPEARLSP-650Mゲル東ソー社製を充填したカラム内径9mm×長さ15cmに添加し、同緩衝液にて洗浄後、1MのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液pH7.0によりFcRm32Cを濃縮溶液として溶出させた。21の濃縮溶液を、あらかじめ50mMのリン酸緩衝液pH7.0で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、脱塩処理を行なった。3得られたFcRm32C溶液0.1mL濃度5.3mg/mLに終濃度1mMとなるようにトリス2-カルボキシエチルホスフィン塩酸塩TCEPを添加し、1時間静置後、実施例5で作製したエポキシトヨパール0.1mLベッドボリュームおよび3Mのリン酸緩衝液pH7.073μLを添加し、20°Cで14時間反応させた。4反応終了後、150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にてゲルを洗浄することで、FcRm32C固定化ゲルを調製した。エポキシトヨパールへのFcRm32Cの固定化量を、反応に供したFcRm32Cの量から反応液に残存したFcRm32Cの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm32Cの固定化率は54.7であり、ゲル1mLあたり2.9mgのFcRm32Cが固定化されていた。実施例7システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm32Cの固定化その21カルボキシル基を導入したトヨパール登録商標以下、単にカルボキシトヨパールとするを、1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDCおよびN-ヒドロキシコハク酸イミドNHSを用いて活性エステルへと誘導し、20mMのN-[ε-マレイミドカプロン酸]ヒドラジドを添加することでマレイミド基を導入した。2マレイミド基を導入した担体に、250mMのエタノールアミンと0.25MのNaClを含む100mMのリン酸緩衝液pH7.0を加え、25°Cで30分反応させることで残存するNHS活性基を不活化した。3NHS活性基を不活化させた後、150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にて洗浄することで、マレイミド基を導入したゲルA以下、マレイミドトヨパールAを調製した。43で得られたマレイミドトヨパールA0.1mLベットボリュームに、FcRm32C溶液0.1mL濃度5.3mg/mLおよびTCEP終濃度1mMを添加し、1時間静置後、3Mのリン酸緩衝液pH7.073μLを添加し、20°Cで14時間反応させた。5反応終了後、ゲルを150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にて洗浄することで、FcRm32C固定化ゲルを調製した。マレイミドトヨパールAへのFcRm32Cの固定化量を、反応に供したFcRm32Cの量から反応液に残存したFcRm32Cの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm32Cの固定化率は26.4であり、マレイミドトヨパールA1mLあたり1.4mgのFcRm32Cが固定化されていた。比較例2Fc結合性タンパク質FcRm32の固定化その11実施例61から2と同様な方法で、参考例1で調製したFcRm32の濃縮および脱塩操作を行なった。2濃縮脱塩処理後のFcRm32溶液0.1mL濃度8.5mg/mLに0.1mLのエポキシトヨパール0.1mLベットボリュームおよび3Mのリン酸緩衝液pH7.073μLを添加し、20°Cで14時間反応させた。3反応終了後、実施例64と同様な方法で洗浄処理することで、FcRm32固定化エポキシトヨパールを調製した。エポキシトヨパールへのFcRm32の固定化量を、反応に供したFcRm32の量から反応液に残存したFcRm32の量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm32の固定化率は49.4であり、ゲル1mL当たり4.2mgのFcRm32が固定化されていた。比較例3Fc結合性タンパク質FcRm32の固定化その21実施例71から3の方法で得られたマレイミドトヨパールAを0.1mLベットボリューム分取し、FcRm32溶液0.1mL濃度5.3mg/mLおよびTCEP終濃度1mMを添加し、1時間静置後、3Mのリン酸緩衝液pH7.073μLを添加し、20°Cで14時間反応させた。2反応終了後、実施例75と同様な方法で洗浄処理することで、FcRm32固定化ゲルを調製した。マレイミドトヨパールAへのFcRm32の固定化量を、反応に供したFcRm32の量から反応液に残存したFcRm32の量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算したが、FcRm32の固定化を確認することはできなかった。実施例8抗体結合量と有効固定化率の算出1実施例6および7で作製したFcRm32C固定化ゲル、ならびに比較例2で作製したFcRm32固定化ゲル比較例3で作製したゲルはFcRm32の固定化が確認できなかったため除外、各50μLをそれぞれ1mL容量のカラムに充填した。250mMリン酸緩衝液pH7.0を150μL添加することでゲルを平衡化後、50mMのリン酸緩衝液pH7.0に溶解したヒトポリクローナル抗体ガンマグロブリン製剤、化学及血清療法研究所製10mg添加し、10分間静置した。3150mMのNaClを含む50mMリン酸緩衝液で十分洗浄することで未吸着のヒト抗体をカラムから溶出させた後、100mMのクエン酸緩衝液pH3.0をカラムに添加することでゲルに吸着したヒト抗体を溶出させた。4溶出液の中の抗体濃度を280nmの吸光度を測定することで算出した。なお、1濃度の抗体溶液の280nmにおける吸光度光路長:10mmを14.0として算出している。結果を表5に示す。システインタグを付加したFc結合性タンパクであるFcRm32Cをエポキシトヨパールに固定化したゲル実施例6では1mLあたり6.4mgの抗体が吸着され、FcRm32CをマレイミドトヨパールAに固定化したゲル実施例7では1mLあたり4.8mgの抗体が吸着された。一方、システインタグを付加しないFc結合性タンパクであるFcRm32をエポキシトヨパールに固定化したゲル比較例2では1mLあたりの抗体吸着量は4.9mgにとどまった。またゲルに固定したFc結合性タンパク質が機能している割合有効固定化率を計算した。なお、抗体およびFc結合性タンパク質の分子量はそれぞれ約15万、約3万であり、抗体とFc結合性タンパク質とは1対1結合する前提の下、計算している。表5に示すように、FcRm32Cをエポキシトヨパールに固定化したゲル実施例6の有効固定化率は44であり、FcRm32CをマレイミドトヨパールAに固定化したゲル実施例7の有効固定化率は69である一方、FcRm32をエポキシトヨパールに固定化したゲル比較例2の有効固定化率は23であった。実施例9Fc結合性タンパク質FcRm56bおよびFcRm56bCの調製1前述したFcRm32とは異なるFc結合性タンパク質FcRm56bを含むポリペプチドを発現可能なベクターを、特開2011-206046号公報に記載の方法に従い調製した。なお、FcRm56bは配列番号53に記載のアミノ酸のうち、16番目から289番目のバリンまでの領域に相当し、かつThr20Pro配列番号53の20番目のスレオニンをプロリンに置換、以下同じ、Thr25Lys、Glu35Leu、Glu36Gly、Thr38Ser、Leu41Met、His42Leu、Leu46Pro、Pro49Ser、Ser51Ala、Ser52Gly、Leu58Arg、Gly60Asp、Thr63Ile、Thr65Ala、Ser69Thr、Arg71His、Thr73Ala、Val77Glu、Asn78Asp、Gln97Leu、Ile100Val、Ser111Ala、Phe114Leu、Thr115Ile、Ala121Val、Lys128Arg、Leu131Gln、Tyr133His、Tyr137Phe、Arg139His、Trp149Arg、Ser151Thr、Asn152Thr、Leu156Pro、Lys157Arg、Ile160Thr、Asn163Ser、Lys173Arg、Ile181Thr、Ser182Leu、Thr184Ser、Asn195Thr、Thr199Ala、Leu203His、Asn206Thr、Leu207Gln、Glu213Val、Leu218Ile、Met231Lys、Lys234Glu、Asn240Asp、Thr249Ala、Leu270Val、Leu283HisおよびLeu285Glnの置換を導入したFc結合性タンパク質である。21で調製した発現ベクターを用いて大腸菌を形質転換し、比較例1に記載の方法に従ってFcRm56bを調製した。結果、FcRm56bは大腸菌培養液1Lあたり約21mg調製することができた。3FcRm56bにシステインタグ配列番号55を付与したポリペプチド以下、FcRm56bCを実施例3および4の方法に従って調製した。結果、FcRm56bCは大腸菌培養液1Lあたり約13mg調製することができた。実施例10Fc結合性タンパク質FcRm60cおよびFcRm60cCの調製1前述したFcRm32とは異なるFc結合性タンパク質FcRm60cを含むポリペプチドを発現可能なベクターを、特開2011-206046号公報に記載の方法に従い調製した。なお、FcRm60cは配列番号53に記載のアミノ酸のうち、16番目から289番目のバリンまでの領域に相当し、かつThr20Pro配列番号53の20番目のスレオニンをプロリンに置換、以下同じ、Thr25Lys、Glu35Leu、Glu36Gly、Thr38Ser、Leu41Met、His42Leu、Leu46Pro、Pro49Ser、Ser51Ala、Ser52Gly、Leu58Arg、Gly60Asp、Thr63Ile、Thr65Ala、Ser69Thr、Tyr70Phe、Arg71His、Thr73Ala、Val77Glu、Asn78Asp、Gln97Leu、Ile100Val、Ser111Ala、Phe114Leu、Thr115Ile、Ala121Val、Lys128Arg、Tyr133His、Tyr137Phe、Arg139His、Trp149Arg、Ser151Thr、Asn152Thr、Leu156Pro、Lys157Arg、Ile160Thr、Asn163Ser、Thr165Met、Lys173Arg、Ile181Thr、Ser182Leu、Thr184Ser、Asn195Thr、Thr199Ala、Asn206Thr、Leu207Pro、Glu213Val、Leu217Gln、Leu218Ile、Tyr230Phe、Met231Lys、Ser233Gly、Lys234Glu、Asn240Asp、Thr249Ala、Leu270Val、Leu283His、Leu285GlnおよびVal289Aspの置換を導入したFc結合性タンパク質である。21で調製した発現ベクターを用いて大腸菌を形質転換し、比較例1に記載の方法に従ってFcRm60cを調製した。結果、FcRm60cは大腸菌培養液1Lあたり約12mg調製することができた。3FcRm60cにシステインタグ配列番号55を付与したポリペプチド以下、FcRm60cCを実施例3および4の方法に従って調製した。結果、FcRm60cCは大腸菌培養液1Lあたり約5mg調製することができた。実施例11ポリメタクリレートゲルへのマレイミド基の導入その11ポリメタクリレートゲルTOYOPEARLHW-65東ソー社製約20mLをグラスフィルター上で吸引ろ過し、そのまま吸引乾燥して得られたゲル17gに水24.7mL、0.2M水酸化ナトリウム水溶液8.5mL、1,6-ヘキサンジオールジグリシジルエーテルHDGE0.17gを添加し、50°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水100mLで5回、1,4-ジオキサン100mLで5回、水100mLで5回洗浄し、エポキシ基を導入したゲルを作製した。21で作製したゲル12gに水24mL、エチレンジアミン6.5gを添加し、45°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水50mLで4回、N,N-ジメチルホルムアミドDMF50mLで4回洗浄した。3洗浄後、吸引乾燥して得られたゲル5gにDMF10mLを加えて0°Cに冷却後、3-マレイミドプロピオン酸N-コハク酸イミジル40mgを加えた。4さらにN,N-ジイソプロピルエチルアミン/DMF=1:4の混合液0.75mLを加え、25°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、ゲルをDMF15mLで4回、水15mLで4回洗浄することで、マレイミド基を導入したゲル以下、マレイミドトヨパールBとするを作製した。実施例12ポリメタクリレートゲルへのマレイミド基の導入その21グラスフィルター上で吸引乾燥して得られたポリメタクリレートゲルTOYOPEARLHW-65東ソー社製3gに0.2M水酸化ナトリウム水溶液3mL、HDGE3gを添加し、50°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水30mLで4回、1,4-ジオキサン30mLで4回、水30mLで4回洗浄した。2洗浄したゲルに0.5Mの2-メルカプト酢酸ナトリウム水溶液水酸化ナトリウムでpH8.0に調整9mLを添加し、45°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水30mLで4回洗浄した。3洗浄後吸引乾燥により得られたゲルに0.1Mの硫酸3mL加え、70°Cで1時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水30mLで4回、DMF30mLで4回洗浄した。4洗浄したゲル0.5gにDMF0.65mLを加え0°Cに冷却後、3-マレイミドプロピオン酸N-コハク酸イミジルのDMF溶液34.6mg/mLDMF0.05mLを加えた。5さらにN,N-ジイソプロピルエチルアミン:DMF=1:4の混合液0.15mLを加え、25°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、ゲルをDMF5mLで4回、水5mLで4回で洗浄することで、マレイミド基を導入したゲル以下、マレイミドトヨパールCとするを作製した。実施例13ポリメタクリレートゲルへのクロロアセチル基の導入1実施例5で作製したエポキシトヨパール1gに水0.5mL、28アンモニア水2mLを添加し、45°Cに設定した撹拌振とう器内で4時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水50mLで4回、アセトニトリル50mLで4回洗浄した。2洗浄後吸引乾燥により得られたエポキシトヨパール1gにアセトニトリル2mLを加え0°Cに冷却後、2-クロロ酢酸クロリド80μLを加えた。3さらにN,N-ジイソプロピルエチルアミン200μLを加え、25°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、エポキシトヨパールをアセトニトリル10mLで4回、水10mLで4回洗浄することで、クロロアセチル基を導入したゲル以下、クロロアセチルトヨパールとするを作製した。実施例14ポリメタクリレートゲルへの3-ブロモ-2-ヒドロキシル基の導入1グラスフィルター上で吸引乾燥して得られたポリメタクリレートゲルTOYOPEARLHW-65東ソー社製1.5gに水1.95mL、0.2M水酸化ナトリウム水溶液0.75mL、アリルグリシジルエーテル0.75gを添加し、50°Cに設定した撹拌振とう器内で16時間撹拌振とうした。反応終了後、反応液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水15mLで4回、1,4-ジオキサン15mLで4回、水15mLで4回洗浄した。2洗浄後のゲルに水4.2mL、DMSO1.4mL、N―ブロモコハク酸イミド414mgを添加し、水浴上、常温で1時間撹拌振とうした。反応終了後、溶液をグラスフィルター上で吸引ろ過し、水20mLで4回洗浄することで、ブロモヒドリン基を導入したゲル以下、ブロモヒドリントヨパールとするを作製した。実施例15システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm56bCのエポキシ基を導入したゲルへの固定化1実施例9で調製したFc結合性タンパク質FcRm56bC溶液を、20mMの酢酸緩衝液pH5.3に対して透析後、同緩衝液にて平衡化したTOYOPEARLSP-650Mゲル東ソー社製を充填したカラム内径9mm×長さ15cmに添加した。同緩衝液にて洗浄後、1MのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液pH7.0を用いてFcRm56bCを濃縮溶液として溶出させた。21の濃縮溶液を、50mMのリン酸緩衝液pH8.0で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、脱塩処理を行なった。3得られたFcRm56bC溶液0.5mL濃度4.0mg/mLに終濃度1mMとなるようにTCEPを添加し、1時間静置した。静置後の溶液に、実施例5で作製したエポキシトヨパール0.1mLと、3Mのリン酸緩衝液pH8.0218μLを添加し、35°Cで5時間反応させた。4反応終了後、150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にてエポキシトヨパールを洗浄した。エポキシトヨパールへのFcRm56bCの固定化量を、反応に供したFcRm56bCの量から反応液に残存したFcRm56bCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm56bCの固定化率は65.3であり、エポキシトヨパール1mLあたり13.0mgのFcRm56bCが固定化されていた。また、実施例8と同様の手法にて抗体結合量と有効固定化率の算出を行なったところ、FcRm56bC固定化エポキシトヨパール1mLあたりの抗体結合量は24.7mg、有効固定化率は37.8であった。実施例16システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm56bCのマレイミド基を導入したゲルへの固定化1実施例9で調製したFc結合性タンパク質FcRm56bC溶液を、20mMの酢酸緩衝液pH5.3に対して透析し、同緩衝液にて平衡化したTOYOPEARLSP-650Mゲル東ソー社製を充填したカラム内径9mm×長さ15cmに添加し、同緩衝液にて洗浄後、1MのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液pH7.0によりFcRm56bCを濃縮溶液として溶出させた。21の濃縮溶液を、50mMのリン酸緩衝液pH7.0で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、脱塩処理を行なった。3実施例11で調製したマレイミドトヨパールB0.1mLにFcRm56bC溶液0.2mL濃度8.1mg/mLおよびトリカルボキシエチルフォスフィン終濃度1mMを添加し、1時間静置した。静置後の溶液に、3Mのリン酸緩衝液pH7.063μLを添加し、35°Cで5時間反応させた。4反応終了後、マレイミドトヨパールBを150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液を用いて洗浄した。マレイミドトヨパールBへのFcRm56bCの固定化量を、反応に供したFcRm56bCの量から反応液に残存したFcRm56bCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm56bCの固定化率は60.3であり、マレイミドトヨパールB1mLあたり19.4mgのFcRm56bCが固定化されていた。また、実施例8と同様の手法にて抗体結合量と有効固定化率の算出を行なったところ、FcRm56bC固定化マレイミドトヨパールB1mLあたりの抗体結合量は49.7mg、有効固定化率は51.2であった。実施例17システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm60cCのエポキシ基を導入したゲルへの固定化1実施例10で調製したFc結合性タンパク質FcRm60cC溶液を、20mMの酢酸緩衝液pH5.3に対して透析し、同緩衝液にて平衡化したTOYOPEARLSP-650Mゲル東ソー社製を充填したカラム内径9mm×長さ15cmに添加し、同緩衝液にて洗浄後、1MのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液pH7.0によりFcRm60cCを濃縮溶液として溶出させた。21の濃縮溶液を、500mMのNaClを含む100mMのホウ酸緩衝液pH9.0で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、バッファー交換処理を行なった。3得られたFcRm60cC溶液0.3mL濃度2.1mg/mLに終濃度1mMとなるようにTCEPを添加し、4°Cで1時間静置後、実施例5で作製したエポキシトヨパール0.05mLベッドボリューム添加し、35°Cで2時間反応させた。4反応終了後、100mMのクエン酸緩衝液pH3.0および150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にて順次ゲルを洗浄することで、FcRm60cC固定化エポキシトヨパールを調製した。エポキシトヨパールへのFcRm60cCの固定化量を、反応に供したFcRm60cCの量から反応液に残存したFcRm60cCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm60cCの固定化率は76.3であり、エポキシトヨパール1mLあたり9.7mgのFcRm60cCが固定化されていた。また、実施例8と同様の手法にて抗体結合量と有効固定化率の算出を行なったところ、FcRm60cC固定化エポキシトヨパール1mLあたりの抗体結合量は16.8mg、有効固定化率は34.7であった。実施例18システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm60cCのマレイミド基を導入したゲルへの固定化その11実施例10で調製したFc結合性タンパク質FcRm60cC溶液を、20mMの酢酸緩衝液pH5.3に対して透析し、同緩衝液にて平衡化したTOYOPEARLSP-650Mゲル東ソー社製を充填したカラム内径9mm×長さ15cmに添加し、同緩衝液にて洗浄後、1MのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液pH7.0によりFcRm60cCを濃縮溶液として溶出させた。21の濃縮溶液を、500mMのNaClを含む100mMのリン酸緩衝液pH7.0で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、バッファー交換処理を行なった。3実施例11で調製したマレイミドトヨパールB0.03mLにFcRm60cC溶液0.2mL濃度2.7mg/mLおよびTCEP終濃度1mMを添加し、4°Cで1時間静置後、35°Cで2時間反応させた。4反応終了後、マレイミドトヨパールBを100mMのクエン酸緩衝液pH3.0および150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にて順次洗浄することで、FcRm60cC固定化マレイミドトヨパールBを調製した。マレイミドトヨパールBへのFcRm60cCの固定化量を、反応に供したFcRm60cCの量から反応液に残存したFcRm60cCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm60cCの固定化率は26.0であり、マレイミドトヨパールB1mLあたり4.6mgのFcRm60cCが固定化されていた。また、実施例8と同様の手法にて抗体結合量と有効固定化率の算出を行なったところ、FcRm60cC固定化マレイミドトヨパールB1mLあたりの抗体結合量は21.2mg、有効固定化率は91.1であった。比較例4Fc結合性タンパク質FcRm56bのエポキシ基を導入したゲルへの固定化1実施例15の1から2と同様な方法で、実施例9で調製したFc結合性タンパク質FcRm56bの濃縮および脱塩操作を行なった。2濃縮脱塩処理後のFcRm56b溶液0.3mL濃度6.6mg/mLに、実施例5で作製したエポキシトヨパール0.1mLベットボリュームと、3Mのリン酸緩衝液pH8.0146μLを添加し、35°Cで5時間反応させた。3反応終了後、実施例154と同様な方法で洗浄処理することで、FcRm56b固定化エポキシトヨパールを調製した。エポキシトヨパールへのFcRm56bの固定化量を、反応に供したFcRm56bの量から反応液に残存したFcRm56bの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm56bの固定化率は56.6であり、ゲル1mL当たり11.2mgのFcRm56bが固定化されていた。また、FcRm56b固定化エポキシトヨパールについて、実施例8と同様の手法にて抗体結合量と有効固定化率の算出を行なったところ、エポキシトヨパール1mLあたりの抗体結合量が16.2mg、有効固定化率が28.9となった。比較例5Fc結合性タンパク質FcRm60cのエポキシ基を導入したゲルへの固定化1実施例171から2と同様な方法で、実施例10で調製したFc結合性タンパク質FcRm60cの濃縮およびバッファー交換操作を行なった。2得られたFcRm60c溶液0.3mL濃度2.4mg/mLに実施例5で作製したエポキシトヨパール0.05mLベットボリュームを添加し、35°Cで2時間反応させた。3反応終了後、実施例174と同様な方法で洗浄処理することで、FcRm60c固定化ゲルを調製した。エポキシトヨパールへのFcRm60cの固定化量を、反応に供したFcRm60cの量から反応液に残存したFcRm60cの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm60cの固定化率は59.4であり、エポキシトヨパール1mL当たり8.6mgのFcRm60cが固定化されていた。また、FcR60c固定化エポキシトヨパールについて、実施例8と同様の手法にて抗体結合量と有効固定化率の算出を行なったところ、エポキシトヨパール1mLあたりの抗体結合量が9.7mg、有効固定化率が22.5となった。実施例19システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm56bCのクロロアセチル基を導入したゲルへの固定化1実施例151から2に記載の方法でFc結合性タンパク質FcRm56bC溶液の濃縮および脱塩操作を行なった。2得られたFcRm56bC溶液0.12mL濃度12.8mg/mLに終濃度1mMとなるようにTCEPを添加し、1時間静置後、実施例13で作製したクロロアセチルトヨパール0.05mLベッドボリューム、3Mのリン酸緩衝液pH7.043μLおよび1mg/mLのヨウ化カリウム1.5μLを添加し、35°Cで5時間反応させた。3反応終了後、150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液を用いてクロロアセチルトヨパールを洗浄した。クロロアセチルトヨパールへのFcRm56bCの固定化量を、反応に供したFcRm56bCの量から反応液に残存したFcRm56bCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、反応残渣中にFcRm56bCは検出されずすなわち固定率100、クロロアセチルトヨパール1mLあたり30.7mgのFcRm56bCが固定化されていた。また、調製したFcR固定化クロロアセチルトヨパールの抗体結合量と有効固定化率を、実施例8と同様に算出したところ、クロロアセチルトヨパール1mLあたりの抗体結合量が20.5mg、有効固定化率が13.4であった。実施例20システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm56bCのブロモヒドリン基を導入したゲルへの固定化1実施例15の1から2に記載の方法でFc結合性タンパク質FcRm56bC溶液の濃縮および脱塩操作を行なった。2得られたFcRm56bC溶液0.15mL濃度12.3mg/mLに終濃度1mMとなるようにTCEPを添加し、1時間静置後、実施例14で作製したブロモヒドリントヨパールを0.05mL、3Mのリン酸緩衝液pH7.050μL、および1mg/mLのヨウ化カリウム1.5μL添加し、35°Cで5時間反応させた。3反応終了後、150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にてゲルを洗浄することで、FcRm56bC固定化ブロモヒドリントヨパールを調製した。ゲルへのFcRm56bCの固定化量を、反応に供したFcRm56bCの量から反応液に残存したFcRm56bCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm56bCの固定率は53.6、ブロモヒドリントヨパール1mLあたり19.8mgのFcRm56bCが固定化されていた。また、調製したFcRm56b固定化ゲルの抗体結合量と有効固定化率を、実施例8と同様に算出したところ、ゲル1mLあたりの抗体結合量が33.3mg、有効固定化率が33.4であった。実施例21システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm60cCのブロモメチル基を導入したゲルへの固定化1実施例171に記載の方法でFc結合性タンパク質FcRm60cC溶液の濃縮を行なった。21の濃縮溶液を、600mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液pH7.0で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、バッファー交換処理を行なった。3得られたFcRm60cC溶液0.2mL濃度3.5mg/mLに終濃度1mMとなるようにTCEPを添加し、1時間静置後、実施例14で作製したブロモヒドリントヨパール0.03mL、および1mg/mLのヨウ化カリウム1.5μLを添加し、35°Cで5時間反応させた。4反応終了後、150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にてゲルを洗浄することで、FcRm60cC固定化ブロモヒドリントヨパールを調製した。ブロモヒドリントヨパールへのFcRm60cCの固定化量を、反応に供したFcRm60cCの量から反応液に残存したFcRm60cCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm60cCの固定率は43.9、ブロモヒドリントヨパール1mLあたり10.1mgのFcRm60cCが固定化されていた。また、調製したFcRm60cC固定化ブロモヒドリントヨパールの抗体結合量と有効固定化率を、実施例8と同様に算出したところ、ブロモヒドリントヨパール1mLあたりの抗体結合量が14.1mg、有効固定化率が27.8であった。実施例22システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm60cCのヨードアセチル基を有したゲルへの固定化1実施例171に記載の方法でFc結合性タンパク質FcRm60cC溶液の濃縮を行なった。21の濃縮溶液を、5mMのEDTAを含む50mMのトリス緩衝液pH8.5で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、脱塩処理を行なった。3得られたFcRm60cC溶液0.15mL濃度6.1mg/mLに終濃度1mMとなるようにTCEPを添加し、1時間静置後、SulfoLinkCouplingResin活性基:ヨードアセチル基、ThermoScientific社製を0.05mL添加し、25°Cで1時間反応させた。4反応終了後、150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にてゲルを洗浄することで、FcRm60cC固定化ゲルを調製した。ゲルへのFcRm60cCの固定化量を、反応に供したFcRm60cCの量から反応液に残存したFcRm60cCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm60cCの固定化率は49.9であり、ゲル1mLあたり9.1mgのFcRm60cCが固定化されていた。また、調製したFcRm60cC固定化ゲルの抗体結合量と有効固定化率を、実施例8と同様に算出したところ、ゲル1mLあたりの抗体結合量が14.4mg、有効固定化率が31.7であった。実施例23システインタグを付加したFc結合性タンパク質FcRm60cCのマレイミド修飾ゲルへの固定化その21実施例10で調製したFc結合性タンパク質FcRm60cC溶液を、20mMの酢酸緩衝液pH5.3に対して透析し、同緩衝液にて平衡化したTOYOPEARLSP-650Mゲル東ソー社製を充填したカラム内径9mm×長さ15cmに添加し、同緩衝液にて洗浄後、1MのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液pH7.0によりFcRm60cCを濃縮溶液として溶出させた。21の濃縮溶液を、200mMのNaClを含む100mMのリン酸緩衝液pH7.0で平衡化したHiTrapDesaltingゲルGEヘルスケア社製を充填したカラム内径16mm×長さ2.5cmに通液し、バッファー交換処理を行なった。3実施例12で作製したマレイミドトヨパールC0.03mLベットボリュームに、FcRm60cC溶液0.33mL濃度5.5mg/mLおよびTCEP終濃度1mMを添加し、4°Cで1時間静置後、35°Cで0.5時間反応させた。4反応終了後、ゲルを100mMのクエン酸緩衝液pH3.0および150mMのNaClを含む50mMのリン酸緩衝液にて順次洗浄することで、FcRm60cC固定化マレイミドトヨパールCを調製した。マレイミドトヨパールCへのFcRm60cCの固定化量を、反応に供したFcRm60cCの量から反応液に残存したFcRm60cCの量前述のプロテインアッセイキットを用いて定量を差し引いて計算した。その結果、FcRm60cCの固定化率は27.2であり、マレイミドトヨパールC1mLあたり16.5mgのFcRm60cCが固定化されていた。また、調製したFcRm60cC固定化マレイミドトヨパールCの抗体結合量と有効固定化率を、実施例8と同様に算出したところ、マレイミドトヨパールC1mLあたりの抗体結合量が51.6mg、有効固定化率が62.7であった。反応に供したゲル基材、リガンドFcRおよび有効固定化率について、表5前述および6にまとめた。以上の結果をまとめると、システインタグを付加したFc結合性タンパク質は、担体表面における方向性が著しく向上するため、抗体への結合能を保持した状態で担体に固定化することができ、結果としてゲルあたりの抗体吸着量を向上させることができることが分かる。"