"被検者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖を測定する工程を含む、泌尿器科がんの検査方法。前記ラミニンγ2単鎖を測定する工程において、抗ラミニンγ2単鎖抗体を用いたイムノアッセイによってラミニンγ2単鎖量を測定する、請求項1に記載の検査方法。前記イムノアッセイがELISA法である、請求項2に記載の検査方法。被検者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖が、非泌尿器科がん患者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖より多いか否かを分析する工程を含む、請求項1から3のいずれか1項に記載の検査方法。被検者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖の濃度を、カットオフ値と比較する工程を含む、請求項1から3のいずれか1項に記載の検査方法。前記ラミニンγ2単鎖の濃度を尿中クレアチニン濃度で補正した後、カットオフ値と比較する、請求項5に記載の検査方法。前記被検者から採取した尿は、遠心処理により細胞およびその破片を除いた後急速に冷凍して保存し、10分以内で急速に融解した後、尿中のラミニンγ2単鎖を測定に用いられる、請求項1から6のいずれか1項に記載の検査方法。前記泌尿器科がんが、膀胱がん、腎盂がん、尿管がん、腎がん、及び前立腺がんから選択される少なくとも一種類のがんである、請求項1から7のいずれか1項に記載の検査方法。抗ラミニンγ2単鎖抗体を含む、泌尿器科がんの検査用キット。本発明は、泌尿器科がん患者の尿中で検出される泌尿器科がんマーカーを見出し、これを用いた感度及び特異度の高い泌尿器科がんの検査方法を提供することを課題とする。本発明者らは、上記課題を解決するために研究を重ねた結果、ラミニンγ2単鎖量が膀胱がん、腎がん、前立腺がん患者の尿において増加していること、ラミニンγ2単鎖は尿細胞診では陽性とならない早期のがんにおいても検出可能であること、尿中のラミニンγ2単鎖量を測定することによって約90の感度で膀胱がんのスクリーニング検査を行うことができること、等を見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、1被検者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖を測定する工程を含む、泌尿器科がんの検査方法;2前記ラミニンγ2単鎖を測定する工程において、抗ラミニンγ2単鎖抗体を用いたイムノアッセイによってラミニンγ2単鎖量を測定する、上記1に記載の検査方法;3前記イムノアッセイがELISA法である、上記2に記載の検査方法;4被検者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖が、非泌尿器科がん患者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖より多いか否かを分析する工程を含む、上記1から3のいずれか1項に記載の検査方法;5被検者から採取した尿中のラミニンγ2単鎖の濃度を、カットオフ値と比較する工程を含む、上記1から3のいずれか1項に記載の検査方法;6前記ラミニンγ2単鎖の濃度を尿中クレアチニン濃度で補正した後、カットオフ値と比較する、上記5に記載の検査方法;7前記被検者から採取した尿は、遠心処理により細胞およびその破片を除いた後急速に冷凍して保存し、10分以内で急速に融解した後、尿中のラミニンγ2単鎖を測定に用いられる、上記1から6のいずれか1項に記載の検査方法。;8前記泌尿器科がんが、膀胱がん、腎盂がん、尿管がん、腎がん、及び前立腺がんから選択される少なくとも一種類のがんである、上記1から7のいずれか1項に記載の検査方法;及び9抗ラミニンγ2単鎖抗体を含む、泌尿器科がんの検査用キット、に関する。本発明の泌尿器科がんの検査方法は、従来の検査方法より感度及び特異度が高い。また、尿中のタンパク質を検出するので、患者の負担も少なく低コストで行うことができ、スクリーニング検査に適する。本発明の検査方法で検出するラミニンγ2単鎖は分泌タンパク質であり、細胞破壊や組織破壊が起こらなくても細胞外に分泌されるので、がんの浸潤度、悪性度、初発か再発かに関わらず尿中で検出できるものと期待でき、この点でもスクリーニング方法に適している。スクリーニング検査の感度及び特異度を改善することにより、さらなる検査が必要な被検者を絞り込むことができるので、罹患可能性の低い被検者にまで生検や画像診断を行ってコストや患者の負担が増大するのを防ぐことができる。また、罹患しているのにスクリーニング検査で陰性となって診断の機会を逸し、末期になって初めて発見されるようなことも防ぐことができる。[泌尿器科がんの検査方法]本発明に係る泌尿器科がんの検査方法は、被検者の尿中のラミニンγ2単鎖を測定する工程を含む。ラミニンγ2単鎖とは、ラミニン5の構成要素であるγ2鎖が単量体モノマーとして発現したものをいう。ラミニン5は、基底膜の主要な構成成分の一つであり、α3鎖、β3鎖、γ2鎖の3つのポリペプチド鎖が、コイルドコイル構造部分で会合するヘテロ三量体である。3つのポリペプチド鎖のうち、γ2鎖は、悪性のがん細胞において単量体として発現することが報告されている。本明細書では、三量体として発現しているγ2鎖をラミニン5γ2鎖と呼び、単量体として発現しているγ2鎖をラミニンγ2単鎖と呼ぶ。上述のとおり、これまでにも尿路上皮がんの細胞内でγ2鎖の発現が亢進していることが報告されているが、これがラミニン5γ2鎖なのかラミニンγ2単鎖なのかは明らかになっていなかった。本発明者らは、後述する実施例で示すとおり、膀胱がん細胞において発現が亢進しているのがラミニンγ2単鎖であることを確認した。また、このラミニンγ2単鎖が細胞外に分泌され尿中で検出されること、及び、尿中のラミニンγ2単鎖量は、泌尿器科がん患者と健常者で有意に差があることを見出した。ラミニンγ2単鎖は分泌タンパク質であるため、がんの浸潤度や悪性度に関わりなく、がん細胞中で発現すれば尿中で検出できるものと考えられる。ラミニンγ2単鎖は、マトリックスメタロプロテアーゼMatrixmetalloprotease;MMPによってプロセシングを受け、EGF様活性を有するフラグメントを含め、いくつかのフラグメントを生じる。一方、ラミニン5γ2鎖はMMPによるプロセシングを受けないため、尿中のγ2鎖フラグメントはラミニンγ2単鎖に由来すると考えることができる。従って、本明細書において、尿中のラミニンγ2単鎖を測定するという場合、これらのフラグメントを測定してもよい。本発明の検査に用いられる尿は、常法に従って採取したものを用いることができる。微量のラミニンγ2単鎖を検出するためには、濃縮された起床時尿が好ましい。また採取した尿は、検査時まで-40°C以下、例えば-80°Cで保存し、凍結融解を繰り返さないことが好ましい。採取した尿は、冷凍する前に遠心処理によって細胞やその破片を除去してもよい。遠心処理は例えば3000gとすることができる。凍結した尿は、急速に融解させて測定に用いることができる。例えば、ヒートブロックを使用して10分以内に急速に融解してもよい。尿中のラミニンγ2単鎖を測定する方法は、液体中の特定のタンパク質を検出、測定するためのあらゆる方法を用いて行うことができ、例えば、イムノアッセイ、凝集法、比濁法、ウエスタンブロッティング法、表面プラズモン共鳴SPR法等が挙げられるが、これらに限定されない。この中で抗ラミニンγ2単鎖抗体と、尿サンプル中のラミニンγ2単鎖との抗原抗体反応を利用してラミニンγ2単鎖量を測定するイムノアッセイは特に簡便で好ましい。イムノアッセイは、検出可能に標識した抗ラミニンγ2単鎖抗体、又は、検出可能に標識した抗ラミニンγ2単鎖抗体に対する抗体二次抗体を用いる。抗体の標識法により、エンザイムイムノアッセイEIA又はELISA、ラジオイムノアッセイRIA、蛍光イムノアッセイFIA、蛍光偏光イムノアッセイFPIA、化学発光イムノアッセイCLIA等に分類され、これらのいずれも本発明の方法に用いることができる。ELISA法では、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素、RIA法では、125I、131I、35S、3H等の放射性物質、FPIA法では、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ダンシルクロリド、フィコエリトリン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート、近赤外蛍光材料等の蛍光物質、CLIA法では、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン等の発光物質で標識した抗体が用いられる。その他、金コロイド、量子ドットなどのナノ粒子で標識した抗体を検出することもできる。また、イムノアッセイでは、抗ラミニンγ2単鎖抗体をビオチンで標識し、酵素等で標識したアビジン又はストレプトアビジンを結合させて検出することもできる。イムノアッセイの中でも、酵素標識を用いるELISA法は、簡便且つ迅速に抗原を測定することができて好ましい。ELISA法には競合法とサンドイッチ法がある。競合法では、マイクロプレート等の固相担体に抗ラミニンγ2単鎖抗体を固定し、尿サンプルと酵素標識したラミニンγ2単鎖を添加して、抗原抗体反応を生じさせる。いったん洗浄した後、酵素基質と反応、発色させ、吸光度を測定する。尿サンプル中のラミニンγ2単鎖が多ければ発色は弱くなり、尿サンプル中のラミニンγ2単鎖が少なければ発色が強くなるので、検量線を用いてラミニンγ2単鎖量を求めることができる。サンドイッチ法では、固相担体に抗ラミニンγ2単鎖抗体を固定し、尿サンプルを添加し、反応させた後、さらに酵素で標識した別のエピトープを認識する抗ラミニンγ2単鎖抗体を添加して反応させる。洗浄後、酵素基質と反応、発色させ、吸光度を測定することにより、ラミニンγ2単鎖量を求めることができる。サンドイッチ法では、固相担体に固定した抗体と尿サンプル中のラミニンγ2単鎖を反応させた後、非標識抗体一次抗体を添加し、この非標識抗体に対する抗体二次抗体を酵素標識してさらに添加してもよい。酵素基質は、酵素がペルオキシダーゼの場合、3,3-diaminobenzidineDAB、3,35,5-tetramethylbenzidineTMB、o-phenylenediamineOPD等を用いることができ、アルカリホスファターゼの場合、p-nitrophenyphosphateNPP等を用いることができる。本明細書において固相担体は、抗体を固定できる担体であれば特に限定されず、ガラス製、金属性、樹脂製等のマイクロタイタープレート、基板、ビーズ、ニトロセルロースメンブレン、ナイロンメンブレン、PVDFメンブレン等が挙げられ、標的物質は、これらの固相担体に公知の方法に従って固定することができる。また、上記イムノアッセイの中で、微量のタンパク質を簡便に検出できる方法として凝集法も好ましい。凝集法としては、例えば、抗体にラテックス粒子を結合させたラテックス凝集法が挙げられる。ラテックス粒子に抗ラミニンγ2単鎖抗体を結合させて尿サンプルに混合すると、ラミニンγ2単鎖が存在すれば、抗体結合ラテックス粒子が凝集する。そこで、サンプルに近赤外光を照射して、吸光度の測定比濁法又は散乱光の測定比朧法により凝集塊を定量し、抗原の濃度を求めることができる。なお、上述の方法では、抗ラミニンγ2単鎖抗体として、ラミニン5γ2鎖、即ち三量体を構成するγ2鎖を認識する抗体を用いてもよい。後述する実施例で示すとおり、尿中で検出されるγ2鎖はほとんどがラミニンγ2単鎖であるため、ラミニン5γ2鎖を認識する抗体を用いても、ラミニンγ2単鎖の測定値に与える影響は小さいからである。また、上記イムノアッセイでは、またMMP等によってプロセシングを受けたラミニンγ2単鎖断片を認識する抗体を用いてもよい。抗ラミニンγ2単鎖抗体は、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体のいずれも公知の方法に従って作製することができる。モノクローナル抗体は、例えば、ラミニンγ2単鎖又はその断片で免疫した非ヒト哺乳動物から抗体産生細胞を単離し、これを骨髄腫細胞等と融合させてハイブリドーマを作製し、このハイブリドーマが産生した抗体を精製することによって得ることができる。また、ポリクローナル抗体は、ラミニンγ2単鎖又はその断片で免疫した動物の血清から得ることができる。抗ラミニンγ2単鎖抗体は、既存の抗体を用いてもよい。例えば、ラミニン5γ2鎖を認識せず、ラミニンγ2単鎖を特異的に認識する抗体として、1H3モノクローナル抗体非特許文献4が挙げられる。また、ラミニン5γ2鎖及びラミニンγ2単鎖を認識する抗体としては、D4B5モノクローナル抗体非特許文献4、2778ポリクローナル抗体KoshikawaetalCancerRes685302008が挙げられ、いずれも本発明の方法に好ましく用いられる。本明細書において泌尿器科がんは通常の意味で用いられ、腎臓、尿管、膀胱、尿道などの尿路系、前立腺などの男性生殖器系の悪性腫瘍を意味する。本発明の検査方法は、膀胱がん、腎盂がん、尿管がん、腎がん、前立腺がんのスクリーニング検査として特に有効である。本明細書において検査は、診断に必要な情報を得るために、被検者から採取した試料を調べることを意味し、本発明の検査方法は、例えば検査会社等で実施され得る。特に、スクリーニング検査とは、いわゆるふるい分け検査であり、特定の病気を診断するのではなく、症状のない段階で病気を発見するための検査をいい、健康診断等においても行われる。本発明の検査方法の一態様は、被検者の尿中のラミニンγ2単鎖が、非泌尿器科がん患者の尿中のラミニンγ2単鎖より多いか否かを分析する工程を含む。非泌尿器科がん患者の尿と比較して、被検者の尿中のラミニンγ2単鎖量が有意に多い場合に、該被検者は泌尿器科がんに罹患している可能性が高いと判定される。実施例に示すとおり、非泌尿器科がん患者の尿中ラミニンγ2単鎖濃度の平均は、約4.73±1.83ng/mlであった。従って、被検者の尿中のラミニンγ2単鎖量がこれより多い場合、当該被検者は高い確率で泌尿器科がんに罹患していると考えられる。なお、上述のとおりラミニンγ2単鎖はがん細胞からの分泌タンパク質であるため、BTAと異なり、被検者が初発であるか再発であるかによって感度に違いは生じないものと考えられる。従って、本発明の検査方法は、泌尿器科がんの治療後の被検者に対して行う泌尿器科がんの再発検査にも有用である。非泌尿器科がん患者の尿と比較して、かかる被検者の尿中のラミニンγ2単鎖量が有意に多い場合、該被検者は泌尿器科がんが再発している可能性が高いと判定される。また、本発明の検査方法の別の態様は、被検者の尿中のラミニンγ2単鎖の量を、カットオフ値と比較する工程を含む。カットオフ値とは、この値を超えると泌尿器科がんに罹患している可能性、又は泌尿器科がんが再発している可能性が高いと判断される基準となる値をいう。スクリーニング検査の有効度は、感度と特異度で評価される。感度は実際に罹患している被検者が陽性となる割合を意味し、特異度は非罹患者が陰性となる割合を意味する。カットオフ値を高く設定すると、偽陰性が多くなり、感度が低く、特異度が高い検査となる。一方、カットオフ値を低くすると偽陽性が多くなり、感度が高く、特異度の低い検査となる。そこで、カットオフ値は、検査結果のデータを蓄積し、感度及び特異度が最適となるように決定される。感度、特異度ともに高いことが理想であるが、その両方が高い検査は存在せず、スクリーニング検査においては、病気の見逃しが極力少ないように感度が優先される場合が多い。実施例5においては、カットオフ値を0.5ng/mlとすると、感度は89.5、特異度は57.9であり、実施例63においては、カットオフ値を1.3ng/mlとすると、感度及び特異性は、それぞれ100、50.0であった。感度がこれほど高い泌尿器科がんの検査はこれまでになく、スクリーニング検査として非常に有用である。[泌尿器科がんの検査用キット]本発明に係る泌尿器科がんの検査用キットは、上述した検査方法を使用して泌尿器科がんの検査を行うためのキットであり、抗ラミニンγ2単鎖抗体を含む。本発明の検査用キットは、抗ラミニンγ2単鎖抗体とラミニンγ2単鎖との抗原抗体反応を利用するイムノアッセイによって、ラミニンγ2単鎖量を測定するために必要な試薬及び装置を含む。検査用キットの一態様は、サンドイッチ法によってラミニンγ2単鎖を測定するためのものであり、マイクロタイタープレート;捕捉用の抗ラミニンγ2単鎖抗体;アルカリホスファターゼ又はペルオキシダーゼで標識した抗ラミニンγ2単鎖抗体;及び、アルカリホスファターゼ基質NPP等又はペルオキシダーゼの基質DAB、TMB、OPD等、を含む。捕獲抗体と標識抗体は、異なるエピトープを認識する。このようなキットでは、まず、マイクロタイタープレートに捕獲抗体を固定し、ここに尿サンプルを適宜希釈して添加した後インキュベートし、サンプルを除去して洗浄する。次に、標識した抗体を添加した後インキュベートし、基質を加えて発色させる。マイクロタイタープレートリーダー等を用いて発色を測定することにより、ラミニンγ2単鎖量を求めることができる。検査用キットの別の態様は、二次抗体を使用してサンドイッチ法によりラミニンγ2単鎖を測定するためのものであり、マイクロタイタープレート;捕捉用の抗ラミニンγ2単鎖抗体;一次抗体として、抗ラミニンγ2単鎖抗体;二次抗体として、アルカリホスファターゼ又はペルオキシダーゼで標識した、抗ラミニンγ2単鎖抗体;及び、アルカリホスファターゼNPP等又はペルオキシダーゼの基質DAB、TMB、OPD等、を含む。捕獲抗体と一次抗体は、異なるエピトープを認識する。このようなキットでは、まず、マイクロタイタープレートに捕獲抗体を固定し、ここに尿サンプルを適宜希釈して添加した後インキュベートし、サンプルを除去して洗浄する。続いて、一次抗体を添加してインキュベート及び洗浄を行い、さらに酵素標識した二次抗体を添加してインキュベートを行った後、基質を加えて発色させる。マイクロタイタープレートリーダー等を用いて発色を測定することにより、ラミニンγ2単鎖量を求めることができる。二次抗体を用いることにより、反応が増幅され検出感度を高めることができる。また、検査用キットの別の態様は、マイクロタイタープレート;一次抗体としての抗ラミニンγ2単鎖抗体又は抗ラミニン5γ2鎖抗体;アルカリホスファターゼ又はペルオキシダーゼで標識した、抗ラミニンγ2単鎖抗体又は抗ラミニン5γ2鎖抗体に対する抗体;及び、アルカリホスファターゼ又はペルオキシダーゼの基質、を含む。かかるキットによれば、まず、適当な濃度に希釈したサンプルでマイクロタイタープレートをコーティングし、一次抗体を添加する。インキュベート及び洗浄を行った後、酵素標識した二次抗体を添加し、インキュベート及び洗浄を行い、基質を加えて発色させる。マイクロタイタープレートリーダー等を用いて発色を測定することにより、ラミニンγ2単鎖量を求めることができる。各検査用キットは、さらに、必要な緩衝液、酵素反応停止液、マイクロプレートリーダー等を含むことも好ましい。標識抗体は、酵素標識した抗体に限定されず、放射性物質25I、131I、35S、3H等、蛍光物質フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ダンシルクロリド、フィコエリトリン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート、近赤外蛍光材料等、発光物質ルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン等、ナノ粒子金コロイド、量子ドット等で標識した抗体であってもよい。また標識抗体としてビオチン化抗体を用い、キットに標識したアビジン又はストレプトアビジンを加えることもできる。キットに用いる抗ラミニンγ2単鎖抗体は、ラミニンγ2単鎖を特異的に認識するものであってもよいし、ラミニン5γ2鎖も認識するものであってもよい。またMMP等によってプロセシングを受けたラミニンγ2単鎖断片を認識するものであってもよい。抗体は、公知の方法に従って作製したものでもよいし、上述した既存の抗体である1H3抗体、D4B5抗体、2778抗体等を用いることもできる。本発明の検査用キットのさらに別の態様として、ラテックス凝集法によってラミニンγ2単鎖を測定するためのものも挙げられる。このキットは、抗ラミニンγ2単鎖抗体感作ラテックスを含み、尿サンプルと抗ラミニンγ2単鎖抗体とを混合し、光学的方法で集塊を定量する。キットに凝集反応を可視化する凝集反応板が含まれていることも好ましい。以下に示す実施例は、単なる例示であって、上述した実施形態と共に本発明を詳細に説明することのみを意図しており、本発明を限定するものではない。実施例1.がん患者の尿中におけるラミニンγ2単鎖の発現ウエスタンブロッティングによる分析膀胱がんを含む泌尿器科疾患患者より採取した尿を-20°Cに冷却したアセトンにて5倍濃縮した後、SDS-電気泳動サンプル緩衝液と混合した。尿80μl/laneは5アクリルアミドゲルによる非還元下のSDS-PAGEを行い、ゲル内に分離された尿蛋白質はPVDF膜上にウエスタンブロットした。同膜は抗体の非特異的な吸着を防止するためにブロッキング緩衝液5ドライミルク/PBS/0.05Tween20にて室温、1時間のブロッキングを行った後、抗ラミニンγ2鎖モノクローナル抗体D4B5,1μg/mlinブロッキング緩衝液を室温16時間で反応させた。1次抗体の反応後、同膜はPBS/0.05Tween20洗浄緩衝液にて5分、3回の洗浄を行い、続けて、ペルオキシダーゼ標識抗マウスIgG抗体を反応させた室温、1時間。反応後、洗浄緩衝液にて3回洗浄した後、ECLplusにて1次抗体に反応した2次抗体の検出を行った。陽性対照として、ラミニン5γ2鎖およびラミニンγ2単鎖の精製標品を用いた。結果を図1に示す。種々の患者尿中にD4B5抗体で認識されるスメアなバンドが分子量150kDa、100kDa、80kDa付近に検出された。分子量150kDaはインタクトなラミニンγ2単鎖、100および80kDaはMMPsやBMP-1などのメタロプロテアーゼによるプロセシングを受けたラミニンγ2単鎖の断片と予想される。また、検出バンドがスメアである理由は、ラミニンγ2鎖に翻訳後修飾で糖鎖が付加されることが上げられる。一方、非還元条件下のラミニン5はα3、β3鎖とジスルフィド結合により会合しているために、分子量はラミニン単鎖より大きな450kDa付近にインタクト、プロセシング断片として検出されたが、ラミニンγ2単鎖に比較するとわずかな量であった。膀胱がんについては、21例中13例においてラミニンγ2単鎖が陽性であった。実施例2.患者のがん組織におけるラミニンγ2単鎖の発現免疫組織化学による分析実施例1で分析した膀胱がん患者より生検、手術で得られたがん組織をホルマリン-パラフィンにて固定し、ミクロトームで4μmの薄層切片とした。薄層切片は脱パラフィンしたのち、0.05ProteasesXXIVSIGMAにて抗原の賦活化を行った。その後、組織切片はD4B5抗体2μg/mlと4°Cで16時間の反応をさせたのち、ヒストファインSAB-POニチレイを用いて結合した1次抗体の検出を行った。免疫染色後、ヘマトキシリンを用いた対比染色を行い、がん組織は正立型顕微鏡100倍、400倍で検鏡した。結果を図2~4に示す。D4B5はラミニン5γ2鎖、ラミニンγ2単鎖ともに反応する抗体であるが、前者は基底膜に沿って線状に染色される。一方、後者は主に細胞質が染色されることが報告されている。ウエスタンブロッティングにより、尿中のラミニンγ2単鎖の発現レベルがと評価されたNo.166のがん組織は、間質に浸潤したがん細胞にラミニンγ2単鎖陽性染色が見られた。また、ウエスタンブロッティングにより、尿中のラミニンγ2単鎖がと評価されたNo.179では、膀胱正常組織の大部分に浸潤したほぼすべてのがん細胞の細胞質でラミニンγ2単鎖陽性染色が見られた。一方、尿中にラミニンγ2単鎖が検出できなかったNo.128のがん組織でも、ごく一部の細胞の細胞質でラミニンγ2単鎖陽性染色が得られた。同じ膀胱がん患者より得られた尿、がん組織でのラミニンγ2単鎖は非常に相関した発現性を示した。これまでにも膀胱がん組織においてラミニン5のγ2鎖が発現していることは報告されていたが、これらの結果から、それがラミニンγ2単鎖であることが初めて明らかとなった。尿サンプルのウエスタンブロッティングで検出されたラミニンγ2単鎖は、膀胱がん細胞で発現が亢進したラミニンγ2単鎖が尿中に分泌されたものと考えられる。従って、わずかではあるが細胞質でラミニンγ2単鎖が発現していたNo.128についても、検出方法の感度を上げることにより、尿中のラミニンγ2単鎖を検出し、非常に早期のがんを診断できる可能性が示唆された。実施例3.尿中と組織中のラミニンγ2単鎖の検出の相関実施例1及び2の結果に基づき、ウエスタンブロッティングによる尿中のラミニンγ2単鎖の検出結果と、免疫組織化学による腫瘍組織中のラミニンγ2単鎖の検出結果の相関を以下の表に示す。免疫組織化学で又はと判定されたものはほとんど、尿サンプルのウエスタンブロッティングによってもラミニンγ2単鎖の発現を検出できることを確認した。尿細胞診では検出困難な表在性膀胱癌においても、4例中4例で、尿サンプルにおけるラミニンγ2単鎖の発現が確認された。一方、免疫組織化学で±と判定されたもの染色された細胞数が少なかったもの、又は染色が薄かったものは尿サンプルのウエスタンブロッティングではラミニンγ2単鎖の発現を確認できなかった。これらについては、尿サンプルにおけるラミニンγ2単鎖の検出感度を改善することにより、尿サンプルを用いた診断が実現されるものと考えられる。実施例4.尿中のラミニンγ2単鎖の定量1患者から採取した尿は回収後、そのまま-80°Cで急速に凍結して保存した。測定時は、4°Cで徐々に融解させた。尿中ラミニンγ2単鎖は次の2種の抗ラミニンγ2単鎖抗体を用いたサンドイッチELISA法により定量を行った。まず、ELISAプレートの下層にPBSで希釈した抗ラミニンγ2単鎖ポリクローナル抗体1μg/mlを固相化した。捕獲抗体を固相化したウェルは5ドライミルク/PBS200μl/wellでブロッキングを行い、プレートをPBS150μl/wellで5回洗浄した。その後、50μlの患者尿を各ウェルに添加した後、37°C、3時間の反応を行った。同時に、ラミニンγ2鎖の定量曲線を作成するため、階段希釈した精製したラミニン5γ2鎖0~200ng/mlもウェルに加えた。反応終了後、PBSでプレートを5回洗浄し、下層の抗体に結合したラミニンγ2単鎖を検出するためD4B5抗体1μg/mlを加え、室温で2時間の反応を行った。反応後、PBS/0.05Tween-20にて各ウェルを洗浄し、ペルオキシダーゼ標識抗マウスIgG抗体を各ウェルに添加し、室温、1時間の反応を行った。反応終了後、TMB発色液100μl/wellを加えて発色を行い、反応させて3分後にマルチウェルリーダーにて各ウェルの595nmの吸光度を測定した。結果を図5に示す。各種のがんにおいて尿中のラミニンγ2単鎖量が有意に上昇していることが確認された。実施例5.尿中のラミニンγ2単鎖検出の感度及び特異度上記の結果から、膀胱癌19名と健常者19名のサンプルについて、尿中のラミニンγ2単鎖のELISAによる測定値の平均値は、それぞれ21.14ng/ml、4.73ng/mlで、t検定で有意差が認められたP0.05。現在の最小測定値は0.5ng/mlであるので、これをカットオフ値として感度と特異度を求めた。結果を図6に示す。感度は89.5、特異度は57.9と求められ、尿中のラミニンγ2単鎖が、従来膀胱癌診断に用いられているマーカーよりも高感度なマーカーであることが確認された。さらに、尿中のラミニンγ2単鎖の感度は、より高感度にすることが可能であり、膀胱癌スクリーニング検査として有用なものとなり得る。実施例6.尿中のラミニンγ2単鎖の定量21除去症例について臨床データを解析した結果、尿中ラミニン5γ2鎖の発現は尿中の白血球数と相関関係があることが判明した。このことは、炎症で尿路組織の崩壊が起こることによって、基底膜中のラミニン5γ2鎖が尿中に遊離している可能性を示唆している。ウエスタンブロットによる解析から、膀胱全摘出手術後に回腸を利用した尿路再建症例回腸導管作成、回腸利用新膀胱作成や組織崩壊が伴う膀胱炎症例の尿中にはラミニン5γ2鎖が多量に検出され、ELISAにおいてもラミニンγ2鎖が高値を示していたdatanotshown。以上から、上記の患者尿は正確なラミニンγ2モノマー鎖の定量ができないため除去症例とした。2ELISAによる定量補正なし尿検体数を増やして、尿中のラミニンγ2単鎖の定量をさらに行った。患者から採取した尿は、室温3000gの遠心処理を行い、細胞及びその破片を除去した後、-80°Cに急速に冷凍して保存した。測定時は、37°Cのヒートブロックで10分以内に急速に融解した。急速に融解することにより、尿石が析出するのを防ぐことができた。非がん患者尿104例および膀胱がん患者尿32例、回腸利用尿路再建症例、膀胱炎症例は含まずのラミニンγ2鎖をELISAで測定した。結果を図7に示す。非がん患者尿ではラミニンγ2鎖の測定値が1.42±1.72ng/ml、一方膀胱がん患者尿ではAV.2.48±2.39ng/mlとなりT-testp=0.0068となり有意差が得られた。これら結果をもとに統計処理を行ったところ、カットオフ値は0.3ng/ml、感度及び特異性は、それぞれ90.6、37.5となった図8。未補正尿による解析結果から、ラミニンγ2鎖は膀胱がんを診断できる感度が十分であることがわかった。3ELISAによる定量補正ありさらに特異性を改善するため、一般的な尿の標準化に使われるクレアチニンを使った尿サンプル間の標準補正を行った。26検体のうち、非がん患者尿中n=16のラミニンγ2鎖の平均値は1.42±2.05ng/ml、膀胱がん患者尿中では4.32±3.12ng/mlであった。T-testにおいてはp=0.0014となり、有意差が得られた図9。この結果について統計的に処理を行ったところ、カットオフ値は1.3ng/ml、感度及び特異性は、それぞれ100、50.0と飛躍的に向上した図10。感度が100になったのは解析数が少ないためと思われる。カットオフ値を1.3ng/mlに設定しているが、これを下げることで、特異性はさらに向上すると考えられる。以上から、クレアチンによる補正を行うことで、より正確な定量解析ができると考えられた。"