"下記の1~8に示される塩基配列又はそれぞれの相補配列からなるプライマーセットを含むことを特徴とする、サルモネラ属菌血清型の多重PCR判別法用プライマーセット;1invA遺伝子領域を増幅するためのプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号1に示される塩基配列、又は配列番号1の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号2に示される塩基配列、又は配列番号2の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなる;2Enteritidis特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号3に示される塩基配列、又は配列番号3の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号4に示される塩基配列、又は配列番号4の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;3Typhimurium特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号5に示される塩基配列、又は配列番号5の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号6に示される塩基配列、又は配列番号6の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなる;4Infantis特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号7に示される塩基配列、又は配列番号7の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号8に示される塩基配列、又は配列番号8の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;5Choleraesuis特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号9に示される塩基配列、又は配列番号9の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号10に示される塩基配列、又は配列番号10の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;6Dublin特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号11に示される塩基配列、又は配列番号11の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号12に示される塩基配列、又は配列番号12の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなる;7Heidelberg特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号13に示される塩基配列、又は配列番号13の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号14に示される塩基配列、又は配列番号14の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;8Schwarzengrund特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号15に示される塩基配列、又は配列番号15の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号16に示される塩基配列、又は配列番号16の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである。被検試料にサルモネラ属菌を増殖させる培養条件下で培養した後、被検菌株を分離して請求項1に記載のプライマーセットを用いて多重PCRを行うことを特徴とする、サルモネラ属菌血清型の多重PCR判別法。被検試料にサルモネラ属菌を増殖させる培養条件下で培養した後、被検菌株を分離せずに、請求項1に記載のプライマーセットを用いて多重PCRを行うことを特徴とする、サルモネラ属菌血清型の多重PCR判別法。本発明は、サルモネラ属菌のうちでも食中毒の原因菌として主に畜産現場で問題となる血清型について、1回の多重PCRを利用して検出、判別できる方法であって、より迅速でかつ高い感度で判別できる多重検出法を提供することを目的とする。また、被検試料由来増菌培養液からサルモネラ属菌を単離することなく直接多重PCRを行うことができる簡易判別法を提供することも目的とする。そこで本発明者らは、上記課題を解決するために、多重PCRの利点を最大限に活用するために、対象として選択したEnteritidis、Typhimurium、Choleraesuis、Dublin、Infantis、Heidelberg、Schwarzengrundの7血清型それぞれに特異的な断片を見出して、これら断片を増幅するプライマーセットを設計することができれば、1回のPCR反応によって、これら7血清型を全て検出しそれぞれを判定できる本来の多重PCR法が確立できると発想した。また、その際にサルモネラ属菌のみに存在する特異的遺伝子も同時に多重PCRで増幅させ、各血清型判別と同時に被検細菌がサルモネラ属菌に属することを確定してしまうことも発想した。しかし、そのためには、7血清型それぞれに特異的な遺伝子領域を選択するだけではなく、さらにサルモネラ属菌特異的遺伝子を選定して、それぞれの領域を増幅するための計8種類のプライマーセットを設計する必要がある。頭で思い描くことは簡単でも、実際に正確な多重PCRの実現にはプライマー間の干渉が生じないプライマーを設計する必要があり非特許文献10、プライマー数が増えるほどその困難性は指数関数的に増大する。また、サルモネラ属菌には非常に多様な血清型が存在するため、血清型特異的な配列を特定し、他の血清型に対する交差反応のないプライマーを作成すること自体も容易なことではない。上記既報の文献非特許文献3-5、9でも、1つの血清型に対し複数の増幅産物の出現パターンを検出することで血清型を特定しており、このことは、単一の断片で血清型を特定することが困難であることを示すものでもある。本発明者らは、このような困難が予想されるにもかかわらず、あえて多重PCR判別法の確立に挑み、鋭意研究の結果、上記7血清型それぞれに特異的で他のサルモネラ属菌血清型に対する交差反応のないプライマーセットを設計すると共に、サルモネラ属菌特異的なinvA遺伝子も同時に検出できるプライマーセットを設計することができた。このことにより、1回の多重PCR工程を行うことで、被検菌株がサルモネラ属菌の上記7血清型のいずれかであるか否かを迅速かつ再現性よく判別することが可能となった。しかも、この多重PCR判別法は菌株を単離しない増殖培養液の状態でも十分に識別性のある結果を得ることができたことから、増殖培養液に適用する簡易判別法としても用いることができる。以上の知見を得たことで、本発明を完成することができた。すなわち、本発明は以下に示すとおりである。1下記の1~8に示される塩基配列又はそれぞれの相補配列からなるプライマーセットを含むことを特徴とする、サルモネラ属菌血清型の多重PCR判別法用プライマーセット;1invA遺伝子領域を増幅するためのプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号1に示される塩基配列、又は配列番号1の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号2に示される塩基配列、又は配列番号2の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなる;2Enteritidis特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号3に示される塩基配列、又は配列番号3の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号4に示される塩基配列、又は配列番号4の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;3Typhimurium特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号5に示される塩基配列、又は配列番号5の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号6に示される塩基配列、又は配列番号6の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなる;4Infantis特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号7に示される塩基配列、又は配列番号7の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号8に示される塩基配列、又は配列番号8の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;5Choleraesuis特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号9に示される塩基配列、又は配列番号9の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号10に示される塩基配列、又は配列番号10の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;6Dublin特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号11に示される塩基配列、又は配列番号11の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号12に示される塩基配列、又は配列番号12の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなる;7Heidelberg特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号13に示される塩基配列、又は配列番号13の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号14に示される塩基配列、又は配列番号14の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである;8Schwarzengrund特異的なプライマーセットであって、片方のプライマーが配列番号15に示される塩基配列、又は配列番号15の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなり、他方のプライマーが配列番号16に示される塩基配列、又は配列番号16の1もしくは2個の塩基が欠失、置換もしくは付加されている塩基配列からなるプライマーセットである。2被検試料にサルモネラ属菌を増殖させる培養条件下で培養した後、被検菌株を分離して前記1に記載のプライマーセットを用いて多重PCRを行うことを特徴とする、サルモネラ属菌血清型の多重PCR判別法。3被検試料にサルモネラ属菌を増殖させる培養条件下で培養した後、被検菌株を分離せずに、前記1に記載のプライマーセットを用いて多重PCRを行うことを特徴とする、サルモネラ属菌血清型の多重PCR判別法。本発明の多重PCR判別法は血清型特異的PCR産物の検出により特定の血清型の存否を判定するため、抗血清との凝集反応で見られる擬陽性の可能性が低減される。また、単離したコロニーを用いたコロニーPCRのみならず、増菌培養液より調製したDNAを鋳型としたPCRにより血清型の判別が可能であり、増菌培養後6~30時間以内に結果が得られるので、特に医療現場での迅速な治療計画や農場での迅速な防疫に有効である。また、複数の血清型について一度の多重PCR実験で判定可能な簡便性は検査コスト低下につながり、農場に存在するサルモネラ属菌の検査を定期的に行うことを容易にする。1.本発明の多重PCR血清型判別法について本発明において、サルモネラ属菌の多重PCR血清型判別法というとき、1回の多重PCR反応で、すなわち、同一のPCR反応チューブ内での、各血清型特異的なプローブセット群に基づくPCR反応変性工程、アニーリング工程、増幅工程を20サイクル以上繰り返すのみで、多種類本発明では7種類の血清型に属するサルモネラ属菌であることを判別できる方法を指す。多重PCR法を用いる方法であっても従来法のような対象遺伝子の増幅パターンで判別する場合は含まない。本発明の多重PCR血清型判別法を従来法と比較した図を図1として示す。なお、図1における比較例としては、増幅パターンで認識する手法を用いている典型例である非特許文献3と比較した。2.本発明の検出対象となる血清型特異的プライマーセットの構築2-1検出対象の血清型本発明では、食中毒原因菌として医療現場で注目されている血清型であると共に、特に畜産物、乳製品など食品材料を提供している畜産現場の安全管理においても重要な血清型Enteritidis、Typhimurium、Choleraesuis、Dublin、Infantis、Heidelberg、Schwarzengrundの7血清型を選択した。Enteritidis、Typhimurium、Choleraesuis、Dublinは上述のように届出伝染病の原因菌として指定されており、Infantis、Heidelbergは鶏から高頻度で分離される血清型である。Schwarzengrundは、近年食中毒の発生件数が増加しており、分離株中の多剤耐性株の割合が高いことが報告されている。2-2血清型特異的プライマーセットの構築公的データベースより入手可能であったサルモネラ属菌のゲノム配列について、塩基配列の比較を行った。入手したゲノム配列は以下のとおりである:CholeraesuisstrSCB67DublinstrCT02021853EnteritidisstrP125109Gallinarumstr28791HeidelbergstrSL476ParatyphiAstrATCC9150ParatyphiBstrSPB7ParatyphiCstrainRKS4594SchwarzengrundstrCVM19633TyphistrCT18TyphimuriumstrLT2Typhimuriumstr14028STyphimuriumstrD23580TyphimuriumSL1344。ゲノム配列の比較には、公知のソフトウェアであるArtemisComparisonToolを用いた。上記の配列を適宜組み合わせて比較し、各血清型に特異的であると考えられる候補配列を探索した。血清型間での相同性がより低い配列を選抜するため、転写翻訳の単位に拘らず標的配列を選択した。選択した部位についてBLAST解析を行い、他属の細菌等を含む既報の配列との相同性が低いことを確認した後、当該部位を検出するプライマーを設計した。Infantisは全ゲノム配列が公開されていなかったため、公開されていた部分配列を基にプライマーを設計した。また、血清型特異的プライマーを用いて多重PCRを行う際に、同時にサルモネラ属菌存否の判定を行うために、サルモネラ属菌特異的な遺伝子としてinvA遺伝子を選択した。invAはほぼすべてのサルモネラ属菌が保持しており、サルモネラ属菌の簡易的な検出法に応用されている。例えば、先行特許文献にてPCR法やLAMP法での検出に用いるプライマーが報告されている米国特許5683883、特開2003-199572。当該invA遺伝子を対象とし、各血清型特異的プライマーとは干渉を起こさずに当該遺伝子の特異的な領域を増幅できるプライマーを設計した。各プライマー設計にあたっては、多重PCRを行う際にアガロースゲルによる電気泳動で目視による判別が容易となるように各増幅産物の断片長を設定した。具体的には、各増幅産物の断片長がそれぞれに50~120bp異なるように複数セットずつ設計した。2-3設計したプライマーの評価設計したプライマーは、実施例1の表1、2に示すサルモネラ属菌ならびに複数の食中毒菌のゲノムDNAを鋳型としてPCRを行い、それぞれの血清型に対応して、非特異的な増幅が見られない特異的プライマーが少なくとも1種類以上存在した同表3、4。2-4本発明の多重プライマー群本発明の実施例1の表3、4に示される各血清型での特異的プライマーから1種類ずつを選択した多重プライマー群の例を同表5に示す。本発明の多重プライマー群はこの1例に限られるものではなく、表3、4に示す他の特異的プライマーセットを組み合わせる場合も含まれる。また、本発明でプライマーとして用いられるオリゴヌクレオチド断片は、1又は2塩基の範囲内の増減又は変異が導入されても各プライマーにより増幅される対象DNA領域は同一であるから、1又は2塩基の塩基が欠失、置換もしくは付加された配列も許容される。これらプライマーは、例えばビオチンやDIG等の公知の物質により標識してもよい。3.本発明の血清型多重PCR判別法の手順3-1被検試料被検試料としては、典型的には、家畜生産現場での、家畜の糞便、尿などの排泄物、血液、唾液などの体液、あるいは飼料、飼料添加物などと共に、医療現場での患者からの糞便、尿、血液、組織ホモジェネートなどであるが、畜産加工品、乳製品、鶏卵、卵製品などの飲食品も対象となる。3-2サルモネラ属菌の培養方法これら被検試料を本発明の多重PCRの試料として用いる際に、高濃度のサルモネラ属菌の存在が明らかな場合を除き、まず試料を培地に接種して、サルモネラ属菌に好ましい培養条件下で培養し、サルモネラ属菌を増菌させる。なお、PCRを進行させるには、プライマーがハイブリダイズできる核酸が数分子から数十分子以上存在すれば十分ではあるので、被検試料から直接核酸抽出してしまうことも可能であるが、再現性の高い結果を得るためには増菌工程を設けることが好ましい。サルモネラ属菌の増菌培養条件は周知であり、例えば被検試料を緩衝ペプトン水に接種して35°Cにて一晩の培養を行った後に、その一部をRV培地に接種して42°Cにて一晩の培養を行うことが好ましい。本発明においては、当該増菌培養液から直ちにゲノムDNAを抽出する下記3-3工程に移行することもできるが、各菌株ごとのコロニーを形成させる分離培養に供し、菌株を単離することが好ましい。その場合の分離培養方法及び分離培養条件は周知であり、例えば、DHL寒天培地に増菌培養液を塗布し、37°Cにて一晩の培養を行う。3-3被検DNA溶液の調製分離培養で単離された菌株培養液、又は分離工程を省いた増菌培養液に対して溶菌酵素、界面活性剤、アルカリ等を用いる周知のDNA抽出法を適用する。例えば、培養液を遠心処理して菌体を回収して、細胞溶解液に懸濁し、加熱後遠心分離により回収した上清に対して、フェノール-クロロホルム抽出およびエタノール沈殿によりDNAを回収する。得られたDNAをTE緩衝液に溶解し、PCRに供する。3-4PCR工程本発明の多重PCRで用いるPCR法では耐熱ポリメラーゼであるTaqDNAポリメラーゼを用い、通常の使用条件の範囲内で増幅させる。具体的には、90~95°Cで熱変成させた後、37~65°Cでアニーリング操作を行い、50~75°Cで重合反応を起こさせ、これを1サイクルとして20から42サイクル行って増幅させる。3-5多重PCRによる増幅産物の検出本発明の多重PCRによる増幅産物の分子量はいずれも約150~750bpの範囲内であるため、アガロースゲル電気泳動を用いて検出できる。エチジウムブロマイド等の慣用の染料で染色する。ゲル中のバンドの確認は写真から目視確認してもよいし、ゲル写真を映像データとしてコンピュータに入力し、写真の濃淡を解析することにより確認してもよい。以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。なお、本発明で引用した先行文献の記載内容は、本明細書の記載内容として参照されるものとする。[実施例1]各プライマーセットによる増幅の特異性の確認1-1DNA溶液の調製サルモネラ属菌ならびにサルモネラ属に属しない食中毒菌の単離菌株を増菌培地に接種して培養した。培養液を15,000×gで2分間遠心し、上清を除去して菌体を回収した。回収した菌体を細胞溶解液UltraReagent、AppliedBiosystems社200μlに懸濁し、沸騰水中で10分間加熱した。加熱後の懸濁液を15,000×gで2分間遠心分離し、上清を回収した。上清からフェノール-クロロホルム抽出およびエタノール沈殿によりDNAを回収し、TE緩衝液400μlで溶解した。調製したDNA溶液をPCRに供した。1-2PCR調製したDNA溶液0.6μlを鋳型として供し、PCRを行った。ExTaqDNAポリメラーゼ0.375U、1×ExTaqbuffer、0.2mMdNTP、ならびに各0.3μMのプライマーを含む15μlの反応液を調製し、DNAサーマルサイクラー0.375U、1×ExTaqbuffer、0.2mMdNTP、ならびに各66.7nMのプライマーを含む15μlの反応液を調製し、実施例1と同一の条件で反応を行った。多重PCR用の酵素を用いる場合には、Takara社製MultiplexPCRAssayKitを用い、鋳型DNA溶液1μlを含む20μlの反応液を調製した。反応条件は、94°Cにて1分間の熱変性反応を行った後、94°Cで30秒間、58°Cで90秒間、72°Cで90秒間の3ステップからなるサイクリング反応を30回繰り返し、サイクリング反応の終了後に72°Cで10分間の伸長反応を行うこととした。増幅産物は、実施例1と同様のアガロースゲル電気泳動により確認を行った。2-2結果サルモネラ属菌標準株44株、ならびにサルモネラ属以外の食中毒菌のゲノムDNAを鋳型として、多重PCRを行った。汎用的な耐熱性DNAポリメラーゼExTaqを用いて多重PCRを行ったところ、Schwarzengrund特異的プライマーセットについての感度が低下し、サルモネラ属以外の食中毒菌の一部で非特異的増幅産物が検出される不都合が確認されたので、MultiplexPCRAssayKitを用いることとした。当該AssayKitを用いることで上記不都合は解消された。MultiplexPCRAssayKitを用いて得られた代表的な結果を図3に示す。サルモネラ属菌標準株のDNAを鋳型としたところ、すべての株においてinvAの増幅産物が検出された図3、レーン1~8。特異的プライマーを構築した7血清型については、invAの増幅産物に加え、各血清型特異的断片が検出された図3、レーン1~7。それぞれのゲノムDNAを混合して鋳型DNAとして用いたところ、それぞれの血清型に由来する特異的断片が検出され、非特異的産物は検出されなかった図3、レーン9。また、サルモネラ属以外の食中毒菌のゲノムDNAを鋳型とした場合には、いずれの増幅産物も検出されなかった図3、レーン10~18。以上の結果から、構築した多重PCR系は、invAの増幅によるサルモネラ属菌の検出、ならびにEnteritidis、Typhimurium、Choleraesuis、Dublin、Infantis、Heidelberg、Schwarzengrundの7血清型については各血清型特異的な断片の検出による血清型の判別が可能であることが示された。[実施例3]野外単離株を用いた多重PCRの検証野外検体より単離されたサルモネラ属菌を用い、多重PCRの検証を行った。用いた菌株の血清型ならびに株数を表6に示す。Enteritidis、Typhimurium、Choleraesuis、Dublin、Infantisについては、従来の手法で決定された血清型と多重PCRの結果が一致していた。I4,5,12:i:-は、検証した2株でいずれもTyphimurium特異的増幅産物を検出した。該血清型はTyphimuriumの単相型の変異株であると言われており、両者は遺伝的に非常に近いと思われる。このため、両者を判別することは非常に困難であることが容易に推測できる。この両者の判別が必要な場合は、さらに他の手法による確認が必要となる。他の血清型、ならびに血清型が確定されていない株についてはinvAの増幅産物のみを検出した。以上のように、本手法はTyphimuriumとI4,5,12:i:-の両者がTyphimuriumと判定されるものの、野外単離株の血清型別に有用であることが示された。[実施例4]コロニーPCRによる野外株の血清型別4-1コロニーPCR野外から得られた検体から、公定法に準じた作業によりサルモネラ属菌株の分離を行った。すなわち、検体1gあたり9mlのリン酸緩衝ペプトン水を加え、35°Cにて24時間の前増菌培養を行った。培養後、0.1mlの前増菌培養液を増菌培養用培地10mlに加え、42°Cにて一晩の増菌培養を行った。増菌培養液から1白金耳を寒天培地上に塗布し、一晩培養して菌株を分離した。検出されたコロニーをコロニーPCRに供した。実施例2と同様に調製した15μlの反応液にコロニーの一部を懸濁した後、サーマルサイクラーによって実施例1と同一の条件で反応を行った。増幅産物は実施例1と同様の手法により確認した。4-2結果野外検体より単離された菌株について、コロニーPCRにより血清型別を行った図4。レーン1、2、7、8、9、10、11、12、17、18について、invAならびにInfantis特異的断片が検出され、SalmonellaInfantisであることが推測された。抗血清を用いてこれらの菌株の血清型を確定したところ、Infantisであることが確認され、多重PCRの結果と一致した。また、外見上サルモネラ属菌であることが疑われたコロニーについても同様にコロニーPCRを行ったが、増幅産物は検出されなかった図4、レーン3~6、13~16、19、20。これらの菌株について16SrDNAの配列を決定したところ、Proteus属の細菌であることが確認された。このため、多重PCRによりサルモネラ属菌特異的に増幅産物が検出されることが示された。このように、野外検体より単離した菌株について、コロニーPCRによりサルモネラ属菌であることの確認、ならびに簡易的な血清型別が可能であった。[実施例5]増菌培養液由来DNAを用いたサルモネラ血清型迅速判別5-1増菌培養液のDNA溶液の調製野外検体から実施例4と同様の手法で増菌培養液を調製した。培養液2mlを15,000×gで2分間遠心し、上清を除去して菌体を回収した。回収した菌体を細胞溶解液200μlに懸濁し、沸騰水中で10分間加熱した。加熱後の懸濁液を15,000×gで2分間遠心分離し、上清を回収した。上清からフェノール-クロロホルム抽出およびエタノール沈殿によりDNAを回収し、TE緩衝液400μlに溶解した。得られたDNA溶液を鋳型として多重PCRを行った。5-2結果実施例4と同一の検体から得られた増菌培養液よりDNAを抽出し、それを鋳型として多重PCRを行った。その結果、5検体にサルモネラ属菌が存在することが確認された図5、レーン1、4~6、9。レーン1、4~6においてはinvAならびにInfantis特異的断片が検出され、これらの検体中にSalmonellaInfantisが存在することが示唆された。実施例3は各検体から得られた単離株各2株についてコロニーPCRを行っており、図4の検体1、2レーン1、2は図5の検体1レーン1から得られた菌株である。このように、検体1、4、5、6については単離菌株を用いたコロニーPCRの結果と一致することが示された。一方、検体9については、invA、Infantis特異的断片に加えEnteritidis特異的断片が検出された図5、レーン9。検体9から得られた分離菌株について、さらに6コロニーを検査したところ、8コロニー中1コロニーがEnteritidisであることが確認された。すなわち、増菌培養液由来DNAを鋳型としたPCRを行うことにより、複数の血清型を検出可能であることが示された。"