"イソプロピルアルコール生産系を備えた大腸菌において、強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性、強化されたNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性、及び、強化されたチオラーゼ活性からなる群より選択された少なくとも1つの強化酵素活性を有するイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記強化酵素活性が、前記強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性を含む請求項1記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記強化酵素活性が、前記強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及び前記強化されたチオラーゼ活性を含む請求項1記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記強化酵素活性が、前記強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及び前記強化されたNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性を含む請求項1記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記強化酵素活性が、前記強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及び前記強化されたNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性及び前記強化されたチオラーゼ活性である請求項1記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記強化酵素活性が、菌体外から導入にされた酵素遺伝子による強化及び菌体内の酵素遺伝子の発現増強による強化の少なくとも一方に由来するものである請求項1~請求項5のいずれか1項記載のイソプロピルアルコール生産系大腸菌。前記強化酵素活性が、宿主大腸菌のゲノム上の強化及びプラスミド導入による強化の少なくとも一方に由来するものである請求項1~請求項6のいずれか1項記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記強化酵素活性が、エシェリヒア属細菌由来の各酵素をコードする遺伝子に由来するものである請求項1~請求項7のいずれか1項記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記イソプロピルアルコール生産系が、前記アセト酢酸デカルボキシラーゼ、イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ、CoAトランスフェラーゼ及びチオラーゼの各酵素遺伝子により構築されたものである請求項1~請求項8のいずれか1項記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記イソプロピルアルコール生産系が、前記アセト酢酸デカルボキシラーゼ、イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ、CoAトランスフェラーゼ及びチオラーゼの各酵素遺伝子により構築されたものであり、かつ各酵素遺伝子が、それぞれ独立に、クロストリジウム属細菌、バチルス属細菌及びエシェリヒア属細菌からなる群より選択された少なくとも1種の原核生物に由来するものである請求項1~請求項8のいずれか1項記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。前記アセト酢酸デカルボキシラーゼ活性が、クロストリジウムアセトブチリカム由来の酵素をコードする遺伝子に由来するものであり、前記イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ活性がクロストリジウムベイジェリンキ由来の酵素をコードする遺伝子に由来するものであり、前記CoAトランスフェラーゼ活性、チオラーゼ活性、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及びNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性がエシェリヒアコリ由来の各酵素をコードする遺伝子に由来するものである請求項1~請求項8のいずれか1項記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌。請求項1~請求項11のいずれか1項記載のイソプロピルアルコール生産大腸菌を用いて植物由来原料からイソプロピルアルコールを生産することを含むイソプロピルアルコール生産方法。しかしながら、イソプロピルアルコールを生産可能な上記細菌のいずれも、充分な生産能力を有しているとは言い難く、イソプロピルアルコール生産細菌によるイソプロピルアルコール生産の収率と生産速度を向上させることは、解決すべき大きな課題であった。本発明は、イソプロピルアルコールを、速く且つ高い収率で生産できる大腸菌及び該大腸菌を用いたイソプロピルアルコール生産方法を提供することを目的とする。本発明のイソプロピルアルコール生産大腸菌は、イソプロピルアルコール生産系を備えると共に、強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性、強化されたNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性、及び、強化されたチオラーゼ活性からなる群より選択された少なくとも1つの強化酵素活性を有するイソプロピルアルコール生産系大腸菌である。本発明のイソプロピルアルコール生産大腸菌では、上記の3種の酵素活性のうちの少なくとも1つの強化酵素活性を備えているため、イソプロピルアルコールを速く且つ高い収率で生産することができる。即ち本発明は、イソプロピルアルコール生産系の活性を高めるために種々検討した結果、グルコースの代謝経路にある酵素の一つであるリンゴ酸デヒドロゲナーゼの活性、NADH及びNADPの酸化還元に関与する酵素であるNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性、イソプロピルアルコール生産系のひとつであるチオラーゼ活性の少なくともいずれかの活性を強化することによって、該大腸菌による生成物であるイソプロピルアルコールの生産速度が上がり、収率が向上することを見出したものである。本発明における活性又は能力の強化とは、強化前のイソプロピルアルコール生産大腸菌での各種酵素活性が強化後に高まることを広く意味する。強化の方法としては、イソプロピルアルコール生産大腸菌が本来有している各種酵素の活性が高まれば、特に制限はなく、菌体外から導入された酵素遺伝子による強化、菌体内の酵素遺伝子の発現増強による強化又はこれらの組み合わせを挙げることができる。菌体外から導入された酵素遺伝子による強化としては、具体的には、宿主由来の酵素よりも高活性の酵素をコードする遺伝子を、宿主細菌の菌体外から菌体内に導入して、導入された酵素遺伝子による酵素活性を追加又は、宿主由来の酵素遺伝子による酵素活性を当該導入された酵素遺伝子による酵素活性に置換すること、宿主由来の酵素遺伝子又は菌体外からの酵素遺伝子の数を2以上に増加させること、又はこれらの組み合わせを挙げることができる。菌体内の酵素遺伝子の発現増強による強化としては、具体的には、酵素遺伝子の発現を増強する塩基配列を宿主細菌の菌体外から菌体内に導入すること、宿主細菌がゲノム上に保有する酵素遺伝子のプロモーターを他のプロモーターと置換することによって酵素遺伝子の発現を強化させること、又はこれらの組み合わせを挙げることができる。本発明において宿主とは、ひとつ以上の遺伝子の菌体外からの導入を受けた結果、本発明のイソプロピルアルコール生産大腸菌となる当該大腸菌を意味する。なお、本明細書において工程との語は、独立した工程だけでなく、他の工程と明確に区別できない場合であっても本工程の所期の作用が達成されれば、本用語に含まれる。本明細書において~を用いて示された数値範囲は、~の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。以下に、本発明について説明する。本発明におけるリンゴ酸デヒドロゲナーゼとは、国際生化学連合I.U.B.酵素委員会報告に準拠した酵素番号1.1.1.40に分類され、L-リンゴ酸からピルビン酸とCO2を生成する反応を触媒する酵素の総称を指す。そのようなものとしては、例えば、Tritrichomonasvaginalis等のTritrichomonas属原虫、Rhizobiummeliloti等のRhizobium細菌、Sulfolobusfataricus等のSulfolobus細菌、Corynebacteriumglutamicum等のCorynebacterium属細菌、Escherichiacoli等のEscherichia属細菌、Sinorhizobiummeliloti等のSinorhizobium属細菌由来のものが挙げられる。本発明において用いられるリンゴ酸デヒドロゲナーゼの遺伝子としては、上述した各由来生物から得られるリンゴ酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子の塩基配列を有するDNA又はその公知の塩基配列に基づいて合成された合成DNA配列を利用することができる。好適なものとしては、Rhizobium細菌、Sulfolobus細菌、Corynebacterium属細菌、Escherichia属細菌又はSinorhizobium属細菌などの原核生物に由来するものを挙げることができ、特に好ましくは、Escherichiacoli由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAである。有用物質の生産向上を目的として、リンゴ酸デヒドロゲナーゼの活性及び該酵素をコードする遺伝子の発現を強化した知見は、現在までに一切見られない。むしろ、微生物による物質生産においては、WO2009/023493、WO2009/012210、WO2009/111672に記載されているように、生産性や収率を向上させるためには微生物内に存在するリンゴ酸デヒドロゲナーゼの活性又は該酵素をコードする遺伝子を欠失させるべきであるとの考え方が一般的である。よって、リンゴ酸デヒドロゲナーゼの活性を強化することによりイソプロピルアルコールの生産速度と収率が向上することは、全く予想外であった。本発明におけるNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的とは、国際生化学連合I.U.B.酵素委員会報告に準拠した酵素番号1.6.1.2に分類され、以下の反応を触媒する酵素の総称を指す。NADPHNAD⇔NADPNADHここで、NADPとはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸nicotinamideadeninedinucleotidephosphateであり、NADPHとはその還元型を指す。また、NADとはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドnicotinamideadeninedinucleotideであり、NADHとはその還元型を指す。NADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的としては、例えば、Escherichiacoli等のEscherichia属細菌、Rhodobactersphaeroides及びRhodobactercapsulatus等のRhodobacter属細菌、Klebsiellapneumoniae等のKlebsiella属細菌由来のものが挙げられる。本発明において用いられるNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的の遺伝子としては、上述した各由来生物から得られるNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的をコードする遺伝子の塩基配列を有するDNA又はその公知の塩基配列に基づいて合成された合成DNA配列を利用することができる。好適なものとしては、Escherichia属細菌、Rhodobacter属細菌、Klebsiella属細菌などの原核生物に由来するものを挙げることができ、例えばEscherichiacoliの遺伝子の塩基配列を有するDNAが例示される。特に好ましくは、Escherichiacoli由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAである。本発明におけるチオラーゼとは、国際生化学連合I.U.B.酵素委員会報告に準拠した酵素番号2.3.1.9に分類され、アセチルCoAからアセトアセチルCoAを生成する反応を触媒する酵素の総称を指す。そのようなものとしては、例えば、クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicum、クロストリジウムベイジェリンキClostridiumbeijerinckii等のクロストリジウム属細菌、エシェリヒアコリEscherichiacoli等のエシェリヒア属細菌、ハロバクテリウム種Halobacteriumsp.細菌、ズーグロアラミゲラZoogloearamigera等のズーグロア属細菌、リゾビウム種Rhizobiumsp.細菌、ブラディリゾビウムジャポニカムBradyrhizobiumjaponicum等のブラディリゾビウム属細菌、カンジダトロピカリスCandidatropicalis等のカンジダ属細菌、カウロバクタークレセンタスCaulobactercrescentus等のカウロバクター属細菌、ストレプトマイセスコリナスStreptomycescollinus等のストレプトマイセス属細菌、エンテロコッカスファカリスEnterococcusfaecalis等のエンテロコッカス属細菌由来のものが挙げられる。本発明において用いられるチオラーゼの遺伝子としては、上述した各由来生物から得られるチオラーゼをコードする遺伝子の塩基配列を有するDNA又はその公知の塩基配列に基づいて合成された合成DNA配列を利用することができる。好適なものとしては、クロストリジウムアセトブチリカム、クロストリジウムベイジェリンキ等のクロストリジウム属細菌、エシェリヒアコリ等のエシェリヒア属細菌、ハロバクテリウム種の細菌、ズーグロアラミゲラ等のズーグロア属細菌、リゾビウム種の細菌、ブラディリゾビウムジャポニカム等のブラディリゾビウム属細菌、カンジダトロピカリス等のカンジダ属細菌、カウロバクタークレセンタス等のカウロバクター属細菌、ストレプトマイセスコリナス等のストレプトマイセス属細菌、エンテロコッカスファカリス等のエンテロコッカス属細菌由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAが例示される。より好適なものとしては、クロストリジウム属細菌又はエシェリヒア属細菌などの原核生物に由来するものを挙げることができ、特に好ましくは、クロストリジウムアセトブチリカム又はエシェリヒアコリ由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAである。本発明のイソプロピルアルコール生産大腸菌は、上記の3種の酵素活性をそれぞれ高めた強化酵素活性のうち少なくとも1つの酵素活性を備えている。3種の強化酵素活性のうち、チオラーゼ活性は、後述するイソプロピルアルコール生産系のひとつを構成する酵素でもあるため、本大腸菌の強化酵素活性の対象として含まれる場合、チオラーゼ活性を更に強化したものであることを要する。このような強化としては前述の通り、チオラーゼをコードする遺伝子の発現をプラスミド又はゲノム上で強化すること、チオラーゼ遺伝子のコピー数を増加すること又はこれらの組み合わせなどを挙げることができる。本発明におけるイソプロピルアルコール生産大腸菌は、イソプロピルアルコール生産系を備えた大腸菌であり、遺伝子組み換えにより導入又は改変されたイソプロピルアルコール生産能力を保有する大腸菌をいう。このようなイソプロピルアルコール生産系は、対象となる大腸菌にイソプロピルアルコールを生産させるものであればいずれのものであってもよい。好ましくは、イソプロピルアルコールの生産に関与する酵素活性の強化を挙げることができる。本発明におけるイソプロピルアルコール生産大腸菌は、アセト酢酸デカルボキシラーゼ活性、イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ活性、CoAトランスフェラーゼ活性及び前述したチオラーゼ活性の4種類の酵素活性が、菌体外から付与され若しくは菌体内において発現増強され、又はこれら双方がなされていることが更に好ましい。本発明における遺伝子組み換えによりとの文言は、生来の遺伝子の塩基配列に対する別のDNAの挿入、あるいは遺伝子のある部分の置換、欠失又はこれらの組み合わせによって塩基配列上の変更が生じているものであれば全て包含し、例えば、突然変異が生じた結果得られたものであってもよい。本発明におけるアセト酢酸デカルボキシラーゼとは、国際生化学連合I.U.B.酵素委員会報告に準拠した酵素番号4.1.1.4に分類され、アセト酢酸からアセトンを生成する反応を触媒する酵素の総称を指す。そのようなものとしては、例えば、クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicum、クロストリジウムベイジェリンキClostridiumbeijerinckii等のクロストリジウム属細菌、バチルスポリミクサBacilluspolymyxa等のバチルス属細菌由来のものが挙げられる。本発明の宿主細菌に導入されるアセト酢酸デカルボキシラーゼの遺伝子としては、上述した各由来生物から得られるアセト酢酸デカルボキシラーゼをコードする遺伝子の塩基配列を有するDNA又はその公知の塩基配列に基づいて合成された合成DNA配列を利用することができる。好適なものとしては、クロストリジウム属細菌又はバチルス属細菌に由来するものを挙げることができ、例えばクロストリジウムアセトブチリカム、バチルスポリミクサ由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAが例示される。特に好ましくは、クロストリジウムアセトブチリカム由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAである。本発明におけるイソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼとは、国際生化学連合I.U.B.酵素委員会報告に準拠した酵素番号1.1.1.80に分類され、アセトンからイソプロピルアルコールを生成する反応を触媒する酵素の総称を指す。そのようなものとしては、例えば、クロストリジウムベイジェリンキClostridiumbeijerinckii等のクロストリジウム属細菌由来のものが挙げられる。本発明の宿主細菌に導入されるイソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼの遺伝子としては、上述した各由来生物から得られるイソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子の塩基配列を有するDNA又はその公知の塩基配列に基づいて合成された合成DNA配列を利用することができる。好適なものとしては、クロストリジウム属細菌に由来するものを挙げることができ、例えばクロストリジウムベイジェリンキ由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAである。本発明におけるCoAトランスフェラーゼとは、国際生化学連合I.U.B.酵素委員会報告に準拠した酵素番号2.8.3.8に分類され、アセトアセチルCoAからアセト酢酸を生成する反応を触媒する酵素の総称を指す。そのようなものとしては、例えば、クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicum、クロストリジウムベイジェリンキClostridiumbeijerinckii等のクロストリジウム属細菌、ローセブリアインテスチナリスRoseburiaintestinalis等のローセブリア属細菌、ファカリバクテリウムプラウセンツFaecalibacteriumprausnitzii等ファカリバクテリウム属細菌、コプロコッカスCoprococcus属細菌、トリパノソーマブルセイTrypanosomabrucei等のトリパノソーマ、エシェリヒアコリEscherichiacoli:大腸菌等エシェリヒア属細菌由来のものが挙げられる。本発明において用いられるCoAトランスフェラーゼの遺伝子としては、上述した各由来生物から得られるCoAトランスフェラーゼをコードする遺伝子の塩基配列を有するDNA又はその公知の塩基配列に基づいて合成された合成DNA配列を利用することができる。好適なものとしては、クロストリジウムアセトブチリカム等のクロストリジウム属細菌、ローセブリアインテスチナリス等のローセブリア属細菌、ファカリバクテリウムプラウセンツ等のファカリバクテリウム属細菌、コプロコッカス属細菌、トリパノソーマブルセイ等のトリパノソーマ、エシェリヒアコリ等のエシェリヒア属細菌由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAが例示される。より好適なものとしては、クロストリジウム属細菌又はエシェリヒア属細菌に由来するものを挙げることができ、特に好ましくは、クロストリジウムアセトブチリカム又はエシェリヒアコリ由来の遺伝子の塩基配列を有するDNAである。本発明におけるイソプロピルアルコール生産のために用いられるチオラーゼとは、前述の通り、国際生化学連合I.U.B.酵素委員会報告に準拠した酵素番号2.3.1.9に分類され、アセチルCoAからアセトアセチルCoAを生成する反応を触媒する酵素の総称を指す。そのようなチオラーゼに関する事項については、前述した事項がそのまま適用される。このうち、上記4種類の酵素はそれぞれ、クロストリジウム属細菌、バチルス属細菌及びエシェリヒア属細菌からなる群より選択された少なくとも1種由来のものであることが酵素活性の観点から好ましく、なかでも、アセト酢酸デカルボキシラーゼ及びイソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼがクロストリジウム属細菌由来であり、CoAトランスフェラーゼ活性及びチオラーゼ活性がエシェリヒア属細菌由来である場合と、これら4種類の酵素がいずれもクロストリジム属細菌由来である場合が更に好ましい。なかでも本発明にかかる4種類の酵素はそれぞれ、クロストリジウムアセトブチリカム、クロストリジウムベイジュリンキ又はエシェリヒアコリのいずれか由来のものであることが酵素活性の観点から好ましく、アセト酢酸デカルボキシラーゼがクロストリジウムアセトブチリカム由来の酵素であり、CoAトランスフェラーゼ及びチオラーゼが、それぞれクロストリジウムアセトブチリカム又はエシェリヒアコリ由来の酵素であり、イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼが、クロストリジウムベイジェリンキ由来の酵素であることがより好ましく、上記4種類の酵素は、酵素活性の観点から、アセト酢酸デカルボキシラーゼ活性がクロストリジウムアセトブチリカム由来であり、前記イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ活性がクロストリジウムベイジェリンキ由来であり、CoAトランスフェラーゼ活性及びチオラーゼ活性がエシェリヒアコリ由来であることが特に好ましい。本発明において、チオラーゼ活性を含むイソプロピルアルコール生産系を備えているイソプロピルアルコール生産大腸菌の例として、WO2009/008377号に記載のpIPAB株又はpIaaaB株を例示できる。また、該大腸菌には、イソプロピルアルコールの生産に関与する酵素のうち、CoAトランスフェラーゼ活性とチオラーゼ活性の増強は該大腸菌のゲノム上の各遺伝子の発現を強化することで行い、イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ活性とアセト酢酸デカルボキシラーゼ活性の増強は各遺伝子の発現をプラスミドで強化した株pIaB::atoDAB株と呼ぶことがあるを含む。本発明では、強化酵素活性としては、イソプロピルアルコール生産性をより効果的に向上させる観点から、強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性が含まれることが好ましい。強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及び強化されたチオラーゼ活性が含まれること、又は強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及び強化されたNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性が含まれることが更に好ましく、強化されたリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及び強化されたNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性及び強化されたチオラーゼ活性の強化酵素活性をいずれも備えていることが最も好ましい。また、本発明では、上記リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、NADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的及びチオラーゼをコードする各遺伝子の発現を増強することが最も好ましい。これにより、各酵素の活性を単独で強化した場合と比してイソプロピルアルコールの生産性及び収率を驚異的に向上させることできる。本発明におけるイソプロピルアルコール生産大腸菌の好ましい態様としては、上記pIPAB株、pIaaaB株又はpIaB::atoDAB株に、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性又は、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性に加えてNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的及び/又はチオラーゼ活性を強化した株である。この株におけるチオラーゼ活性は、プラスミドとゲノム上の両方でチオラーゼをコードする遺伝子の発現を増強したものであってもよい。更に好ましい態様としては、上記pIPAB株、pIaaaB株又はpIaB::atoDAB株に、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性又は、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性に加えてNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的及び/又はチオラーゼの活性を同時に強化した株である。この株においてチオラーゼ活性は、プラスミドとゲノム上の両方でチオラーゼをコードする遺伝子の発現を増強したものであってもよい。特に好ましい態様としては、上記pIPAB株、pIaaaB株又はpIaB::atoDAB株にリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性、NADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性及びチオラーゼ活性を同時に強化した株である。この株においてチオラーゼ活性は、プラスミドとゲノム上の両方でチオラーゼをコードする遺伝子の発現を増強したものであってもよい。更に最も好ましい態様としては、上記又はpIaB::atoDAB株にリンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性、NADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性及びチオラーゼ活性を同時に強化した株である。この株において、チオラーゼ活性は、プラスミドとゲノム上の両方でチオラーゼをコードする遺伝子の発現を増強したものであってもよい。本発明における遺伝子のプロモーターとは、上記いずれかの遺伝子の発現を制御可能なものであればよいが、恒常的に微生物内で機能する強力なプロモーターで、かつグルコース存在下でも発現の抑制を受けにくいプロモーターであり、具体的にはグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ以下GAPDHと呼ぶことがあるのプロモーターやセリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼのプロモーターを例示することができる。本発明におけるプロモーターとはシグマ因子を有するRNAポリメラーゼが結合し、転写を開始する部位を意味する。例えばエシェリヒアコリ由来のGAPDHプロモーターはGenBankaccessionnumberX02662の塩基配列情報において、塩基番号397-440に記されている。大腸菌由来のCoAトランスフェラーゼ遺伝子atoD及びatoAとチオラーゼ遺伝子atoBは、atoD、atoA、atoBの順番で大腸菌ゲノム上でオペロンを形成しているためJournalofBaceteriologyVol169pp4252LaurenSallusJenkinsら、atoDのプロモーターを改変することによって、CoAトランスフェラーゼ遺伝子とチオラーゼ遺伝子の発現を同時に制御することが可能である。このことから、CoAトランスフェラーゼ活性及びチオラーゼ活性が宿主大腸菌のゲノム遺伝子より得られたものである場合、充分なイソプロピルアルコール生産能力を獲得する観点から、両酵素遺伝子の発現を担うプロモーターを他のプロモーターと置換する等によって両酵素遺伝子の発現を増強することが好ましい。CoAトランスフェラーゼ活性及びチオラーゼ活性の発現を増強するために用いられるプロモーターとしては、前述のエシェリヒアコリ由来GAPDHプロモーター等を挙げることができる。本発明におけるこれらの酵素の活性は、菌体外から菌体内へ導入されたもの又は、宿主細菌がゲノム上に保有する酵素遺伝子のプロモーター活性を強化又は他のプロモーターと置換することによって酵素遺伝子を強発現させたものとすることができる。酵素活性の導入は、例えば酵素をコードする遺伝子を遺伝子組換え技術を用いて宿主細菌の菌体外から菌体内に導入することにより行うことができる。このとき、導入される酵素遺伝子は、宿主細胞に対して同種又は異種のいずれであってもよい。菌体外から菌体内へ遺伝子を導入する際に必要なゲノムDNAの調製、DNAの切断及び連結、形質転換、PCRPolymeraseChainReaction、プライマーとして用いるオリゴヌクレオチドの設計、合成等の方法は、当業者によく知られている通常の方法で行うことができる。これらの方法は、SambrookJetalMolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPressなどに記載されている。本発明において酵素の活性を強化した大腸菌とは、何らかの方法によって該酵素活性が強化された大腸菌を指す。これらの大腸菌は、例えば該酵素及び蛋白質をコードする遺伝子を、前述したものと同様の遺伝子組換え技術を用いて菌体外から菌体内にプラスミドを用いて導入する又は、宿主大腸菌がゲノム上に保有する酵素遺伝子のプロモーター活性を強化又は他のプロモーターと置換することによって酵素遺伝子を強発現させる、等の方法を用いて作出することができる。本発明において大腸菌とは、本来、植物由来原料からイソプロピルアルコールを生産する能力を有するか否かに関わらず、何らかの手段を用いることにより植物由来原料からイソプロピルアルコールを生産する能力を有し得る大腸菌を意味する。ここで上記の遺伝子組換えの対象となる大腸菌としては、イソプロピルアルコール生産能を有しないものであってもよく、上記の各遺伝子の導入及び変更が可能であればいずれの大腸菌であってもよい。より好ましくは、イソプロピルアルコール生産能が予め付与された大腸菌であることができ、これにより、より効率よくイソプロピルアルコールを生産させることができる。このようなイソプロピルアルコール生産大腸菌としては、例えばWO2009/008377号パンフレットに記載されているアセト酢酸デカルボキシラーゼ活性、イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ活性、CoAトランスフェラーゼ活性、及びチオラーゼ活性を付与され、植物由来原料からイソプロピルアルコールを生成しうるイソプロピルアルコール生成大腸菌などを挙げることができる。本発明のイソプロピルアルコール生産方法は、上記イソプロピルアルコール生産大腸菌を用いて植物由来原料からイソプロピルアルコールを生産させることを含むものであり、即ち、上記イソプロピルアルコール生産大腸菌と植物由来原料とを接触させて、培養する工程と、接触により得られたイソプロピルアルコールを回収する回収工程とを含むものである。上記イソプロピルアルコール生産方法に用いられる植物由来原料は、植物から得られる炭素源であり、植物由来原料であれば特に制限されない。本発明においては、根、茎、幹、枝、葉、花、種子等の器官、それらを含む植物体、それら植物器官の分解産物を指し、更に植物体、植物器官、またはそれらの分解産物から得られる炭素源のうち、微生物が培養において炭素源として利用し得るものも、植物由来原料に包含される。このような植物由来原料に包含される炭素源には、一般的なものとしてデンプン、スクロース、グルコース、フルクトース、キシロース、アラビノース等の糖類、またはこれら成分を多く含む草木質分解産物、セルロース加水分解物など又はこれらの組み合わせを挙げることができ、更には植物油由来のグリセリン又は脂肪酸も、本発明における炭素源に含んでもよい。本発明における植物由来原料の例示としては、穀物等の農作物、トウモロコシ、米、小麦、大豆、サトウキビ、ビート、綿等、又はこれらの組み合わせを好ましく挙げることができ、その原料としての使用形態は、未加工品、絞り汁、粉砕物等、特に限定されない。また、上記の炭素源のみの形態であってもよい。培養工程におけるイソプロピルアルコール生産大腸菌と植物由来原料との接触は、一般に、植物由来原料を含む培地でイソプロピルアルコール生産大腸菌を培養することにより行われる。植物由来原料とイソプロピルアルコール生産大腸菌との接触密度は、イソプロピルアルコール生産大腸菌の活性によって異なるが、一般に、培地中の植物由来原料の濃度として、グルコース換算で初発の糖濃度を混合物の全質量に対して20質量以下とすることができ、大腸菌の耐糖性の観点から好ましくは、初発の糖濃度を15質量以下とすることができる。この他の各成分は、微生物の培地に通常添加される量で添加されればよく、特に制限されない。また培地中のイソプロピルアルコール生産大腸菌の含有量としては、大腸菌の種類及び活性によって異なるが一般に、初発の菌濃度を培養液に対して0.1質量から30質量、培養条件制御の観点から好ましくは1質量~10質量とすることができる。イソプロピルアルコール生産大腸菌の培養に用いられる培地としては、炭素源、窒素源、無機イオン、及び乳酸を生産するために微生物が要求する有機微量元素、核酸、ビタミン類等が含まれた通常用いられる培地であれば特に制限はない。本発明の培養に際して、培養条件は特別の制限はなく、例えば好気条件下でpH4~9、好ましくはpH6~8、温度20°C~50°C、好ましくは25°C~42°Cの範囲内でpHと温度を適切に制御しながら培養することができる。前記混合物中への気体の通気量は、特に制限はないが、気体として空気のみを用いる場合には、一般的に0.02vvm~2.0vvmvvm;通気容量mL/液容量mL/時間分であり、大腸菌への物理的ダメージを抑制する観点から0.1vvm~2.0vvmで行うことが好ましい。培養工程は、培養開始から混合物中の植物由来原料が消費されるまで、又はイソプロピルアルコール生産大腸菌の活性がなくなるまで継続させることができる。培養工程の期間は、混合物中のイソプロピルアルコール生産大腸菌の数及び活性並びに、植物由来原料の量により異なるが、一般に、1時間以上、好ましくは4時間以上であればよい。一方、植物由来原料又はイソプロピルアルコール生産大腸菌の再投入を行うことによって、培養期間は無制限に連続することができるが、処理効率の観点から、一般に5日間以下、好ましくは72時間以下とすることができる。その他の条件は、通常の培養に用いられる条件をそのまま適用すればよい。培養液中に蓄積したイソプロピルアルコールを回収する方法としては、特に制限はないが、例えば培養液から菌体を遠心分離などで除去した後、蒸留や膜分離等通常の分離方法でイソプロピルアルコールを分離する方法が採用できる。なお、本発明のイソプロピルアルコールの生産方法は、イソプロピルアルコール生産のための培養工程の前に、使用するイソプロピルアルコール生産大腸菌を適切な菌数又は適度な活性状態とするための前培養工程を含んでいてもよい。前培養工程は、イソプロピルアルコール生産細菌の種類に応じた通常用いられる培養条件による培養であればよい。本発明のイソプロピルアルコールの生産方法は、好ましくは、前記イソプロピルアルコール生産細菌及び植物由来原料を含む混合物中に気体を供給しながら、該イソプロピルアルコール生産大腸菌を培養する培養工程と、前記培養により生成したイソプロピルアルコールを混合物から分離し回収する回収工程とを含む。この方法によれば、混合物に気体を供給しながら生産大腸菌を培養する通気培養。この通気培養により、生産されたイソプロピルアルコールは混合物中に放出されると共に、混合物から蒸散し、この結果、生成したイソプロピルアルコールを混合物から容易に分離することができる。また、生成したイソプロピルアルコールが混合物から連続的に分離するため、混合物中のイソプロピルアルコールの濃度の上昇を抑制することができる。これにより、イソプロピルアルコール生産大腸菌のイソプロピルアルコールに対する耐性を特に考慮する必要がない。なお、本方法における混合物とは、大腸菌の培養に一般的に用いられる基本培地を主体とすればよい。培養条件については、前述した事項がそのまま適用される。回収工程では、培養工程で生成され、混合物から分離したイソプロピルアルコールを回収する。この回収方法としては、通常培養により混合物から蒸散したガス状又は飛沫状のイソプロピルアルコールを収集することができるものであればよい。このような方法としては、一般に用いられる密閉容器等の収集部材へ収容すること等を挙げることができるが、なかでも、イソプロピルアルコールのみを純度高く回収できる観点から、イソプロピルアルコールを捕捉するための捕捉液と、混合物から分離したイソプロピルアルコールとを接触することを含むものであることが好ましい。本方法では、イソプロピルアルコールは、捕捉液又は混合物に溶解した態様として回収することができる。そのような回収方法としては、例えば国際公開2009/008377号パンフレットに記載された方法などが挙げられる。回収されたイソプロピルアルコールは、HPLC等の通常の検出手段を用いて確認することができる。回収されたイソプロピルアルコールは、必要に応じて更に精製することができる。このような精製方法としては、蒸留等をあげることができる。回収されたイソプロピルアルコールが水溶液の状態である場合には、本イソプロピルアルコールの生産方法は、回収工程に加えて、脱水工程を更に含んでいてもよい。イソプロピルアルコールの脱水は、常法により行なうことができる。捕捉液又は混合物に溶解した態様として回収可能なイソプロピルアルコールの生産方法に適用可能な装置としては、例えば、国際公開2009/008377号パンフレットの図1に示される生産装置を挙げることができる。この生産装置では、イソプロピルアルコール生産細菌と植物由来原料とを含む培地が収容された培養槽に、装置外部から気体を注入するための注入管が連結され、培地に対してエアレーションが可能となっている。また、培養槽には、連結管を介して、捕捉液としてのトラップ液が収容されたトラップ槽が連結されている。このとき、トラップ槽へ移動した気体又は液体がトラップ液と接触してバブリングが生じる。これにより、培養槽で通気培養により生成したイソプロピルアルコールは、エアレーションによって蒸散して培地から容易に分離される共に、トラップ槽においてトラップ液に補足される。この結果、イソプロピルアルコールを、より精製された形態で連続的に且つ簡便に生産することができる。本発明のイソプロピルアルコールの生産方法では、イソプロピルアルコールを速く生成することができ、同様の方法で通常得られる生産速度は本発明を適用しない場合と比較して高い。生産方法の条件や用いられるイソプロピルアルコール生産大腸菌の状態によって異なるが、生産速度が0.7~2.0g/L/hr、好ましくは0.9~1.9g/L/hrとすることができる。また、本発明のイソプロピルアルコールの生産方法では、イソプロピルアルコールをグルコースから効率よく生成することができ、同様の方法で通常得られる収率は本発明を適用しない場合と比較して高い。生産方法の条件や用いられるイソプロピルアルコール生産大腸菌の状態によって異なるが、培養工程終了時において収率が51~80、好ましくは51~66とすることができる。本発明において収率とは、基質であるグルコースが代謝産物であるイソプロピルアルコールに変換される化学量論式に基づく変換率を示している。イソプロピルアルコール製造大腸菌においてはグルコース1molからイソプロピルアルコールは1mol生成されるため、グルコース及びイソプロピルアルコールの分子量グルコース=180、イソプロピルアルコール=60を勘案すると、グルコース180gを全てイソプロピルアルコールへ変換したとしてもイソプロピルアルコールは60gしか生成されず、それ以上にはなり得ない。この理論上最大となる変換率を本発明では収率100とする。このように本発明のイソプロピルアルコール生産大腸菌は、イソプロピルアルコールを速く、高い収率で生産することが出来るため、例えば、本発明の大腸菌触媒を用いてイソプロピルアルコールの製造を行った場合、培養72時間で97g/L以上のイソプロピルアルコールを蓄積することができ、従来触媒と比較してはるかに高い生産性を獲得することができる。以下に、本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。なお、記載中のは特に断らない限り、質量基準である。[実施例1]<[B::pntA]エシェリヒアコリB株pntゲノム強化株の作製>エシェリヒアコリB株のゲノム上のpntA遺伝子プロモーターをGAPDHプロモーターへ置換し、pntA遺伝子の発現を強化した。エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAの全塩基配列は公知でありGenBankaccessionnumberU00096、エシェリヒアコリのNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的αサブユニットをコードする遺伝子以下、pntAと略することがあるの塩基配列も報告されているGenBankaccessionnumberX04195。また、エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNA上において、pntAは膜トランスヒドロゲナーゼβサブユニットpntBとオペロンを形成していることも知られている。上記の遺伝子を発現させるために必要なプロモーターの塩基配列として、GenBankaccessionnumberX02662の塩基配列情報において、397-440に記されているエシェリヒアコリ由来のグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ以下GAPDHと呼ぶことがあるのプロモーター配列を使用することができる。GAPDHプロモーターを取得するためエシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAをテンプレートに用いてcgctcaattgcaatgattgacacgattccg配列番号1、及びacagaattcgctatttgttagtgaataaaagg配列番号2によりPCR法で増幅し、得られたDNAフラグメントを制限酵素MfeI及びEcoRIで消化することで約100bpのGAPDHプロモーターをコードするDNAフラグメントを得た。得られたDNAフラグメントとプラスミドpUC19GenBankaccessionnumberX02514を制限酵素EcoRIで消化し、さらにアルカリフォスファターゼ処理したものとを混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られたコロニー10個を、それぞれアンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、プラスミドを回収し、制限酵素EcoRI及びKpnIで消化した際、GAPDHプロモーターが切り出されないものを選抜し、さらに、DNA配列を確認しGAPDHプロモーターが正しく挿入されたものをpUCgapPとした。得られたpUCgapPを制限酵素EcoRI及びHindIIIで消化した。さらにpntAを取得するために、エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAをテンプレートに用いてgcagcaattgctggtggaacatatgcgaattggcataccaag配列番号3、及びggacaagcttaatttttgcggaacattttcagc配列番号4によりPCR法で増幅し、得られたDNAフラグメントを制限酵素MfeI及びHindIIIで消化することで約1.6kbpのpntAフラグメントを得た。このDNAフラグメントを先に制限酵素EcoRI及びHindIIIで消化したpUCgapPと混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られた菌体からプラスミドを回収し、pntAが正しく挿入されていることを確認し、このプラスミドをpGAPpntAと命名した。なおエシェリヒアコリMG1655株はアメリカンタイプカルチャーコレクションより入手することができる。先述した通り、エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAは明らかとされており、pntAの近傍の塩基配列も報告されている。エシェリヒアコリMG1655株のpntAの5’近傍領域の遺伝子情報に基づいて作成された、atggtaccgcagtaatacgctggttgc配列番号5とcctctagacttccatcggttttattgatgatgg配列番号6を用いて、エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAを鋳型としてPCRを行うことにより約1.0kbpのDNA断片を増幅した。このDNA断片を制限酵素KpnIとXbaIで処理した。また、エシェリヒアコリMG1655株のGAPDHプロモーターの配列情報に基づいて作製されたggtctagagcaatgattgacacgattccg配列番号7と、エシェリヒアコリMG1655株のpntAの配列情報に基づいて作製された配列番号4のプライマーを用いて、先に作製した発現ベクターpGAPpntAを鋳型としてPCRを行い、GAPDHプロモーターとpntAからなる約1.7kbpのDNA断片を得た。このDNA断片を制限酵素XbaIとHindIIIで処理した。上記により得られたpntA5’近傍領域のDNA断片、およびGAPDHプロモーターとpntAからなるDNA断片を温度感受性プラスミドpTH18cs1GenBankaccessionnumberAB019610HashimotoGotohTGene241185191をKpnIとHindIIIで消化して得られるDNA断片と混合し、リガーゼを用いて結合した後、DH5α株に形質転換し、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに30°Cで生育する形質転換体を得た。得られたコロニーを、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB液体培地で30°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収し、pntA5’近傍領域、GAPDHプロモーター、pntAが正しく挿入されていることを確認した。このプラスミドをエシェリヒアコリB株ATCC11303に形質転換し、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに30°Cで一晩培養し、形質転換体を得た。得られた形質転換体を、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB液体培地に接種し、30°Cで一晩培養した。得られた培養菌体を、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに塗布し、42°Cで培養しコロニーを得た。得られたコロニーを、抗生物質を含まないLB液体培地で30°Cで4時間培養し、抗生物質を含まないLB寒天プレートに塗布して42°Cで生育するコロニーを得た。出現したコロニーの中から無作為に100コロニーをピックアップしてそれぞれを、抗生物質を含まないLB寒天プレートとクロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに生育させ、クロラムフェニコール感受性のクローンを選んだ。さらにこれらのクローンのゲノムDNAからPCRによりGAPDHプロモーターとpntAを含む約1.7kbp断片を増幅させ、pntAプロモーター領域がGAPDHプロモーターに置換されている株を選抜し、以上を満足するクローンをエシェリヒアコリB株pntA欠失GAPppntAゲノム挿入株以降、B::pnt株と略することがあると命名した。なお、エシェリシアコリB株ATCC11303は細胞微生物遺伝子バンクであるアメリカンタイプカルチャーコレクションより入手することができる。[実施例2]<[pGAP-Iaaa/B::pnt]エシェリヒアコリ由来チオラーゼ遺伝子、エシェリヒアコリ由来CoAトランスフェラーゼ遺伝子、クロストリジウム属細菌由来アセト酢酸デカルボキシラーゼ遺伝子、クロストリジウム属細菌由来イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子発現ベクターを導入したエシェリヒアコリB株pntゲノム強化株の作製>以下のように、NADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的遺伝子pntの発現を強化したイソプロピルアルコール製造大腸菌を作製した。WO2009/008377の実施例4に記載されているpGAP-Iaaaを、実施例1で作製したB::pnt株に形質転換することで、pGAP-Iaaa/B::pnt株を得た。pGAP-Iaaaとは、エシェリヒアコリ由来チオラーゼ遺伝子、エシェリヒアコリ由来CoAトランスフェラーゼ遺伝子、クロストリジウムアセトブチリカム由来アセト酢酸デカルボキシラーゼ遺伝子、及びクロストリジウムベイジェリンキ由来イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を、エシェリヒアコリ由来のグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼGAPDHのプロモーターを用いて強発現する機能を持つ発現ベクタープラスミドのことである。pGAP-Iaaaの作製方法は、WO2009/008377の実施例4に明記されている。[実施例3]<[B::atoDAB]エシェリヒアコリB株atoDABゲノム強化株の作製>大腸菌由来のCoAトランスフェラーゼ遺伝子atoD及びatoAとチオラーゼ遺伝子atoBは、atoD、atoA、atoBの順番で、大腸菌ゲノム上でオペロンを形成しているためJournalofBaceteriologyVol169pp4252LaurenSallusJenkinsら、atoDのプロモーターを改変することによって、CoAトランスフェラーゼ遺伝子とチオラーゼ遺伝子の発現を同時に制御することが可能である。そこで、宿主大腸菌のゲノム上のatoD遺伝子のプロモーターをGAPDHプロモーターに置換し、ゲノム上のatoD、atoA及びatoB遺伝子の発現を強化した大腸菌を作製した。エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAの全塩基配列は公知でありGenBankaccessionnumberU00096、エシェリヒアコリMG1655株のCoAトランスフェラーゼαサブユニットをコードする遺伝子以下、atoDと略することがあるの塩基配列も報告されている。すなわちatoDはGenBankaccessionnumberU00096に記載のエシェリヒアコリMG1655株ゲノム配列の2321469~2322131に記載されている。上記の遺伝子を発現させるために必要なプロモーターの塩基配列として、GenBankaccessionnumberX02662の塩基配列情報において、397-440に記されているエシェリヒアコリ由来のグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼGAPDHのプロモーター配列を使用することができる。GAPDHプロモーターを取得するためエシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAをテンプレートに用いてcgctcaattgcaatgattgacacgattccg配列番号1、及びacagaattcgctatttgttagtgaataaaagg配列番号2によりPCR法で増幅し、得られたDNAフラグメントを制限酵素MfeI及びEcoRIで消化することで約100bpのGAPDHプロモーターをコードするDNAフラグメントを得た。得られたDNAフラグメントとプラスミドpUC19GenBankaccessionnumberX02514を制限酵素EcoRIで消化し、さらにアルカリフォスファターゼ処理したものとを混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られたコロニー10個を、それぞれアンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、プラスミドを回収し、制限酵素EcoRI及びKpnIで消化した際、GAPDHプロモーターが切り出されないものを選抜し、さらに、DNA配列を確認しGAPDHプロモーターが正しく挿入されたものをpUCgapPとした。得られたpUCgapPを制限酵素EcoRI及びKpnIで消化した。さらにatoDを取得するために、エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAをテンプレートに用いてcgaattcgctggtggaacatatgaaaacaaaattgatgacattacaagac配列番号8、及びgcggtaccttatttgctctcctgtgaaacg配列番号9によりPCR法で増幅し、得られたDNAフラグメントを制限酵素EcoRI及びKpnIで消化することで約690bpのatoDフラグメントを得た。このDNAフラグメントを先に制限酵素EcoRI及びKpnIで消化したpUCgapPと混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られた菌体からプラスミドを回収し、atoDが正しく挿入されていることを確認し、このプラスミドをpGAPatoDと命名した。なおエシェリヒアコリMG1655株はアメリカンタイプカルチャーコレクションより入手することができる。上述した通り、エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAにおけるatoDの塩基配列も報告されている。エシェリヒアコリMG1655株のatoDの5’近傍領域の遺伝子情報に基づいて作製されたgctctagatgctgaaatccactagtcttgtc配列番号10とtactgcagcgttccagcaccttatcaacc配列番号11を用いて、エシェリヒアコリMG1655株のゲノムDNAを鋳型としてPCRを行うことにより約1.1kbpのDNA断片を増幅した。また、エシェリヒアコリMG1655株のGAPDHプロモーターの配列情報に基づいて作製されたggtctagagcaatgattgacacgattccg配列番号12とエシェリヒアコリMG1655株のatoDの配列情報に基づいて作製された配列番号9のプライマーを用いて、先に作製した発現ベクターpGAPatoDを鋳型としてPCRを行い、GAPDHプロモーターとatoDからなる約790bpのDNAフラグメントを得た。上記により得られたフラグメントをそれぞれ、制限酵素PstIとXbaI、XbaIとKpnIで消化し、このフラグメントを、温度感受性プラスミドpTH18cs1GenBankaccessionnumberAB019610HashimotoGotohTGene241185191をPstIとKpnIで消化して得られるフラグメントと混合し、リガーゼを用いて結合した後、DH5α株に形質転換し、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに30°Cで生育する形質転換体を得た。得られたコロニーを、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB液体培地で30°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収した。このプラスミドをエシェリヒアコリB株ATCC11303に形質転換し、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに30°Cで一晩培養し、形質転換体を得た。得られた形質転換体をクロラムフェニコール10μg/mlを含むLB液体培地に接種し、30°Cで一晩培養した。得られた培養菌体をクロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに塗布し、42°Cで培養しコロニーを得た。得られたコロニーを、抗生物質を含まないLB液体培地で30°Cで2時間培養し、抗生物質を含まないLB寒天プレートに塗布して42°Cで生育するコロニーを得た。出現したコロニーの中から無作為に100コロニーをピックアップしてそれぞれを、抗生物質を含まないLB寒天プレートとクロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに生育させ、クロラムフェニコール感受性のクローンを選んだ。さらにはこれらのクローンの染色体DNAからPCRによりGAPDHプロモーターとatoDを含む約790bp断片を増幅させ、atoDプロモーター領域がGAPDHプロモーターに置換されている株を選抜し、以上を満足するクローンをエシェリヒアコリB株atoD欠失GAPpatoDゲノム挿入株以降、B::atoDAB株と略することがあると命名した。[実施例4]<[pGAP-Ia]クロストリジウム属細菌由来アセト酢酸デカルボキシラーゼ遺伝子、クロストリジウム属細菌由来イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子発現ベクターの構築>イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子IPAdhを取得するために、ClostridiumbeijerinckiiNRRLB-593のゲノムDNAをテンプレートに用いて、aatatgcatgctggtggaacatatgaaaggttttgcaatgctagg配列番号13、及びgcggatccctcgagttataatataactactgctttaattaagtc配列番号14によりPCR法で増幅し、得られたDNAフラグメントを制限酵素SphI、BamHIで消化することで約1.1kbpのイソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼフラグメントを得た。得られたDNAフラグメントと、pBRgapPWO2009/008377の実施例4に記載されているを制限酵素SphI及びBamHIで消化することで得られるフラグメントを混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られたコロニーを、アンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収しIPAdhが正しく挿入されていることを確認し、このプラスミドをpGAP-IPAdhと命名した。アセト酢酸デカルボキシラーゼ遺伝子adcを取得するために、ClostridiumacetobutylicumATCC824のゲノムDNAをテンプレートに用いて、cactcgaggctggtggaacatatgttaaaggatgaagtaattaaacaaattagc配列番号15、及びggaattcggtaccgtcgactctagaggatccttacttaagataatcatatataacttcagc配列番号16によりPCR法で増幅し、得られたDNAフラグメントを制限酵素XhoI及びEcoRIで消化することで約700bpのアセト酢酸デカルボキシラーゼフラグメントを得た。得られたDNAフラグメントと、先に作製したプラスミドpGAP-IPAdhを制限酵素XhoI及びEcoRIで消化することで得られるフラグメントとを混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られたコロニーをアンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収し、adcが正しく挿入されていることを確認し、このプラスミドをpGAPIaと命名した。なお、ClostridiumbeijerinckiiNRRLB-593は細胞微生物バンクであるVTTカルチャーコレクションより入手することができる。[実施例5]<[pGAP-Ia-gapP-atoB]クロストリジウム属細菌由来アセト酢酸デカルボキシラーゼ遺伝子、クロストリジウム属細菌由来イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子及びエシェリヒアコリ由来チオラーゼ遺伝子発現ベクターの構築>エシェリヒアコリB株のゲノムDNAの全塩基配列は公知でありGenBankaccessionnumberCP000819、エシェリヒアコリのチオラーゼアセチルCoAC-アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子atoBの塩基配列も報告されているGenBankaccessionnumberU08465。atoB1,185bpをクローニングするため、cgggatccttaattcaaccgttcaatcac配列番号17、ttccatatgaaaaattgtgtcatcgtc配列番号18、に示すオリゴヌクレオチドプライマーを2種合成した。配列番号17のプライマーは5’末端側にNdeII認識部位を、配列番号18のプライマーは5’末端側にBamHI認識部位それぞれ有している。エシェリヒアコリB株ATCC11303のゲノムDNAをQIAGEN社製のDNeasyTissuekitを用いて調製し、得られたゲノムDNAを鋳型とし、配列番号17と配列番号18のプライマーペアで、PCRを行うことにより約1.2kbのDNA断片を増幅した以下atoB断片と呼ぶことがある。このatoB断片をアガロース電気泳動にて分離、回収し、NdeI及びBamHIで消化した。この消化断片と、前記pBRgapPのNdeI及びBamHI消化物とを混合し、T4DNAリガーゼで反応した後、エシェリヒアコリDH5αコンピテントセル東洋紡績社製に形質転換し、アンピシリン50μg/mlを含むLB寒天プレートに37°Cで生育する形質転換体を得た。得られたコロニーを、アンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収し、atoBが正しく挿入されていることを確認し、このプラスミドをpGAP-atoBと命名した。得られたプラスミドpGAP-atoBをBglII及びBamHIで消化し、GAPDHプロモーターとatoBを含む断片をアガロース電気泳動にて分離、回収し、この断片をgapP-atoBとした。この断片gapP-atoBと、実施例4で作成したプラスミドpGAP-Iaを制限酵素BamHIで消化することで得られる断片とを混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られたコロニーを、アンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収し、gapP-atoBが正しく挿入されていることを確認し、このプラスミドをpGAP-Ia-gapP-atoBと命名した。[実施例6]<[pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB株]pGAP-Ia-gapP-atoBを導入したエシェリヒアコリB株atoDABゲノム強化株の作製>上記実施例5に記載されているpGAP-Ia-gapP-atoBを、実施例3で作成したB::atoDAB株に形質転換し、チオラーゼ遺伝子atoBの発現をプラスミドとゲノムの両方で強化したイソプロピルアルコール製造大腸菌pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB株を得た。[実施例7]<[pGAP-Ia-maeB]クロストリジウム属細菌由来アセト酢酸デカルボキシラーゼ遺伝子、クロストリジウム属細菌由来イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子及びエシェリヒアコリ由来リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子発現ベクターの構築>リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子を取得するために、エシェリヒアコリB株ATCC11303のゲノムDNAをテンプレートに用いて、cgggatcccggagaaagtcatatggatgaccagttaaaacaaag配列番号19、及びgctctagattacagcggttgggtttgcgc配列番号20によりPCR法で増幅し、得られたDNAフラグメントを制限酵素BamHI及びXbaIで消化することで約2300bpのリンゴ酸デヒドロゲナーゼフラグメントを得た。得られたDNAフラグメントと、実施例4で作成したプラスミドpGAP-Iaを制限酵素XbaI及びBamHIで消化することで得られるフラグメントとを混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られたコロニーを、アンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収し、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子が正しく挿入されていることを確認し、本プラスミドをpGAP-Ia-maeBと命名した。[実施例8]<[pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB株]pGAP-Ia-maeBを導入したエシェリヒアコリB株atoDABゲノム強化株の作製>上記実施例7に記載されているpGAP-Ia-maeBを、実施例3で作成したB::atoDAB株に形質転換し、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子maeBの発現を強化したイソプロピルアルコール製造大腸菌pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB株を得た。[実施例9]<[pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB]クロストリジウム属細菌由来アセト酢酸デカルボキシラーゼ遺伝子、クロストリジウム属細菌由来イソプロピルアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子、エシェリヒアコリ由来リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子及びエシェリヒアコリ由来チオラーゼ遺伝子発現ベクターの構築>上記実施例7で作製したプラスミドpGAP-Ia-maeBを制限酵素BamHIで消化することで得られるフラグメントと、実施例5と同様にして得たDNA断片gapP-atoBを混合し、リガーゼを用いて結合した後、エシェリヒアコリDH5α株コンピテントセル東洋紡績株式会社DNA-903に形質転換し、アンピシリン50μg/mLを含むLB寒天プレートに生育する形質転換体を得た。得られたコロニーをアンピシリン50μg/mLを含むLB液体培地で37°Cで一晩培養し、得られた菌体からプラスミドを回収し、gapP-atoBが正しく挿入されていることを確認し、このプラスミドをpGAP-Ia-maeB-gapP-atoBと命名した。[実施例10]<[pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB株]pGAP-Ia-maeB-gapP-atoBを導入したエシェリヒアコリB株atoDABゲノム強化株の作製>上記実施例9に記載されているpGAP-Ia-maeB-gapP-atoBを、実施例3で作成したB::atoDAB株に形質転換し、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子maeBとチオラーゼ遺伝子atoBの両方の発現を強化したイソプロピルアルコール製造大腸菌pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB株を得た。[実施例11]<[B::atoDAB::pnt]エシェリヒアコリB株atoDABおよびpntゲノム強化株の作製>実施例1と同様にして得られた、pntA5’近傍領域のDNA断片とGAPDHプロモーター及びpntAからなるDNA断片とを温度感受性プラスミドpTH18cs1に導入したプラスミドを、実施例3で作製したB::atoDAB株に形質転換し、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに30°Cで一晩培養し、形質転換体を得た。得られた形質転換体を、クロラムフェニコール10μg/mlを含むLB液体培地に接種し、30°Cで一晩培養した。得られた培養菌体をクロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに塗布し、42°Cで培養しコロニーを得た。得られたコロニーを、抗生物質を含まないLB液体培地で30°Cで2時間培養し、抗生物質を含まないLB寒天プレートに塗布して42°Cで生育するコロニーを得た。出現したコロニーの中から無作為に100コロニーをピックアップしてそれぞれを、抗生物質を含まないLB寒天プレートとクロラムフェニコール10μg/mlを含むLB寒天プレートに生育させ、クロラムフェニコール感受性のクローンを選んだ。さらにはこれらのクローンの染色体DNAからPCRによりGAPDHプロモーターとpntAを含む約1.7kbp断片を増幅させ、pntAプロモーター領域がGAPDHプロモーターに置換されている株を選抜し、以上を満足するクローンをエシェリヒアコリB株atoD欠失GAPpatoDGAPppntAゲノム挿入株以降、B::atoDAB::pnt株と略することがあると命名した。[実施例12]<[pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB::pnt]pGAP-Ia-maeBを導入したエシェリヒアコリB株atoD欠失GAPpatoDGAPppntAゲノム挿入株の作成>実施例7に記載されているpGAP-Ia-maeBを、実施例11で作製したB::atoDAB::pnt株に形質転換し、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子maeBとNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的遺伝子pntの両方の発現を強化したイソプロピルアルコール製造大腸菌pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB::pntを得た。[実施例13]<[pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt]pGAP-Ia-gapP-atoBを導入したエシェリヒアコリB株atoD欠失GAPpatoDGAPppntAゲノム挿入株の作成>実施例5に記載されているpGAP-Ia-gapP-atoBを実施例11で作製したB::atoDAB::pnt株に形質転換し、チオラーゼ遺伝子atoBの発現をプラスミド及びゲノムの両方で強化し、かつNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的遺伝子pntの発現を強化したイソプロピルアルコール製造大腸菌pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB::pntを得た。[実施例14]<[pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt株]pGAP-Ia-maeB-gapP-atoBを導入したエシェリヒアコリB株atoDABおよびpntAゲノム強化株の作製>上記実施例9に記載されているpGAP-Ia-maeB-gapP-atoBを、実施例11で作製したB::atoDAB::pnt株に形質転換し、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子maeBとNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的遺伝子pntの発現を強化し、更にチオラーゼ遺伝子atoBの発現をプラスミド及びゲノムの両方で強化したイソプロピルアルコール製造大腸菌pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt株を得た。[評価実験1]<[pGAP-Iaaa/B株][pGAP-Iaaa/B::pntA株][pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB株][pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB株][pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB株][pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB::pnt][pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt][pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt株]によるイソプロピルアルコールの生産>本評価実験では、WO2009/008377号パンフレット図1に示される生産装置を用いてイソプロピルアルコールの生産を行った。培養槽には3リットル容のものを使用し、トラップ槽には10L容のものを使用した。培養槽、トラップ槽、注入管、連結管、排出管は、すべてガラス製のものとした。トラップ槽には、トラップ液としての水トラップ水を9Lの量で注入した。なお、培養槽には廃液管を設置して、糖や中和剤の流加により増量した培養液を適宜培養槽外に排出した。WO2009/008377号パンフレットに記載のpGAP-Iaaa/B株、上記実施例2で作製したpGAP-Iaaa/B::pnt株、実施例6で作製したpGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB株、実施例8で作製したpGAP-Ia-maeB/B::atoDAB株、実施例10で作製したpGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB株、実施例12で作製したpGAP-Ia-maeB/B::atoDAB::pnt株、実施例13で作製したpGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt株、及び実施例14で作製したpGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt株を、前培養としてアンピシリン50μg/mLを含むLBBroth,Miller培養液Difco244620100mLを入れた500mL容三角フラスコに植菌し、一晩、培養温度30°C、120rpmで、攪拌しながら前培養を行った。なおWO2009/008377号パンフレットに記載のpGAP-Iaaa/B株は、イソプロピルアルコールを生産するためにチオラーゼ活性を付与しているに過ぎず、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ活性及びNADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的活性の双方の強化も成されていないため、本発明のイソプロピルアルコール生産大腸菌には該当しない。得られた前培養物45mLを、以下に示す組成の培地855gの入った3L容の培養槽ABLE社製培養装置BMS-PIに移し、培養を行った。培養は大気圧下、通気量0.9L/min、撹拌速度550rpm、培養温度30°C、pH7.0NH3水溶液で調整で行った。培養開始から8時間後までの間、45wt/wtのグルコース水溶液を7.5g/L/時間の流速で添加した。その後は45wt/wtのグルコース水溶液を20g/L/時間の流速で添加した。培養開始から72時間までに数回、菌体培養液をサンプリングし、遠心操作によって菌体を除いた後、得られた培養上清中及びトラップ水中のイソプロピルアルコールの蓄積量をHPLCで定法に従って測定した。なお、測定値は、培養後の培養液とトラップ水9L中の合算値である。結果を図1及び表1に示した。更に、生産速度、収率及びイソプロピルアルコール蓄積量を表2にまとめて示した。なお表1中の数値はg/Lを表し、図1におけるシンボルは次の通りである:黒丸:pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt株、黒四角:pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB株白丸;pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB株、白三角;pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB株、白四角;pGAP-Iaaa/B::pnt株、×;pGAPIaaa/B株、白菱形;pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB::pnt株、黒菱形;pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt株。<培地組成>コーンスティープリカー日本食品化工製:20g/LFe2SO47H2O:0.1g/LK2HPO4:2g/LKH2PO4:2g/LMgSO47H2O:2g/LNH42SO4:2g/LアデカノールLG126旭電化工業0.1g/L残部:水これらの結果により、従来のイソプロピルアルコール製造大腸菌pGAP-Iaaa/B株に、NADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的遺伝子pntの発現のみを強化した株pGAP-Iaaa/B::pntA株、チオラーゼ遺伝子atoBの発現のみを付与及びゲノム強化の双方にて強化した株pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB株、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子maeBの発現のみを強化した株pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB株は、いずれも従来のイソプロピルアルコール生産大腸菌よりも高い生産性を示し、蓄積量としては、それぞれ、約1.7倍、約2.0倍、及び約2.1倍となった。また、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子maeBの発現のみを強化した株pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB株では、アセトン、ギ酸、酢酸等の副産物が減少していた。また、atoB及びmaeBの双方を強化した場合pGAP-Ia-maeB-gapP-atoB/B::atoDAB株、maeB及びpntの双方の発現を強化した場合pGAP-Ia-maeB/B::atoDAB::pnt、atoB及びpntを強化した場合pGAP-Ia-gapP-atoB/B::atoDAB::pnt、atoB及びmaeB及びpnt3種全ての酵素遺伝子の発現を強化した場合では、イソプロピルアルコール生産性が更に向上し、蓄積量としては、それぞれ、約2.4倍、約2.3倍、約2.4倍、及び約2.8倍となった。特に、NADPトランスヒドロゲナーゼAB特異的pnt、チオラーゼ遺伝子atoB及びリンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子maeBの発現を同時に強化した場合は、pGAP-Iaaa/B株と比較して生産速度は3.2倍、収率は2.1倍、蓄積量は2.8倍に驚異的に向上することが分かった。2010年3月9日に出願された日本国特許出願第2010-052249号の開示はその全体が参照により本明細書に取り込まれる。本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に援用されて取り込まれる。"