"N-アセチルグルコサミン誘導体と、そのアノマー位にグリコシド結合しうる糖受容体とを糖加水分解酵素により反応させて、N-アセチルグルコサミンがαグリコシド結合した糖誘導体を選択的に調製する方法。N-アセチルグルコサミン誘導体が、化10の式で表されるGlcNAc-α-DMTまたはその誘導体である請求項1に記載の方法。式中、XはO、C、S、Nまたはなくてもよく、RはH、置換または非置換アルキル、もしくは置換または非置換ヘテロアルキルを表す。糖加水分解酵素が、グリコシルハイドロラーゼファミリー89GH89に属するα-N-アセチルグルコサミニダーゼである請求項1に記載の調製方法。糖加水分解酵素が、バクテロイデスセタイオタオミクロンBacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来のα-N-アセチルグルコサミニダーゼ1、2または3である請求項1に記載の調製方法。そのアノマー位にグリコシド結合しうる糖受容体が、アルコール類、ガラクトース誘導体、またはガラクトースを含む糖の誘導体である請求項1に記載の調製方法。本発明は前記の課題を解決するためになされたもので、N-アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を、簡便にかつ大量に製造できる、新規な酵素的調製方法を提供することを目的とする。本発明者らは、上記現状にかんがみ、まずGlcNAcがαで結合した糖鎖からGlcNAcを遊離する酵素の遺伝子と考えられるいくつかのDNA配列情報を基に、いくつかの組換えタンパク質を作製したところ、あるアミノ酸配列を持つタンパク質がGlcNAcα1→4Gal-Rの糖鎖をはじめとするいくつかのGlcNAcがαで結合した糖誘導体からGlcNAcを遊離する活性を持つことを見出していた。しかしながら、既存の糖供与体パラニトロフェニル誘導体、GlcNAc-α-pNP、およびメチルウンベリフェリル誘導体、GlcNAc-α-MUで上記α-N-アセチルグルコサミニダーゼによる糖転移を試みたが、目的とする糖誘導体を得ることはできなかった。そこで、近年、糖加水分解酵素によりすみやかに加水分解されるDMTジメトキシトリアゾール化糖非特許文献6に焦点を当て、N-アセチルグルコサミンがαで結合したジメトキシトリアゾールGlcNAc-α-DMT。4,6ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシドに対するα-N-アセチルグルコサミニダーゼの水溶液中における挙動を調査したところ、上記の合成基質よりも、すみやかに加水分解されることをつきとめ、本発明の調製方法を完成するに至った。本発明は、水溶液中一段階で調製できるジメトキシトリアゾールをαで有するN-アセチルグルコサミンもしくはその誘導体を糖供与体とし、微生物由来の糖加水分解酵素の作用により、厳密にα選択的に糖受容体へ糖転移するというものである。本発明により、結果として抗ピロリ菌効果を有するオリゴ糖鎖GlcNAcα1→4Gal-Rを特別な設備を必要とせずに簡単に調製することができる。また、用いる糖加水分解酵素により、位置特異性の異なるオリゴ糖鎖およびその誘導体を得ることもできる。以上のように、本法によって、糖転移酵素を使用せずに、はじめてN-アセチルグルコサミンをα選択的に一段階で糖転移させることができる。また糖加水分解酵素の糖受容体特異性の幅広さにより、糖転移酵素を用いた方法では成しえない多くの種類の化合物をαグルコサミニル化できることになる。すなわち、本発明は、以下の調製方法を提供するものである。[1]N-アセチルグルコサミン誘導体と、そのアノマー位にグリコシド結合しうる糖受容体とを糖加水分解酵素により反応させて、N-アセチルグルコサミンがαグリコシド結合した糖誘導体を選択的に調製する方法。[2]N-アセチルグルコサミン誘導体が、化1の式で表されるGlcNAc-α-DMTまたはその誘導体である[1]に記載の方法。式中、XはO、C、S、Nまたはなくてもよく、RはH、置換または非置換アルキル、もしくは置換または非置換ヘテロアルキルを表す。[3]糖加水分解酵素が、グリコシルハイドロラーゼファミリー89GH89に属するα-N-アセチルグルコサミニダーゼである[1]に記載の調製方法。[4]糖加水分解酵素が、バクテロイデスセタイオタオミクロンBacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来のα-N-アセチルグルコサミニダーゼ1、2または3である[1]に記載の調製方法。[5]そのアノマー位にグリコシド結合しうる糖受容体が、アルコール類、ガラクトース誘導体、またはガラクトースを含む糖の誘導体である[1]に記載の調製方法。本発明により、GlcNAcがαで結合した糖誘導体および糖鎖を、より簡単かつ大量に調製可能となる。特異的にピロリ菌増殖を抑制する化合物、およびそれを含み安全で、耐性菌を生じさせないピロリ菌増殖抑制剤の調製が可能となる。さらに、従来の方法では調製できなかった多くの種類の糖誘導体が調製可能となることから、より強い抗ピロリ剤を見出す可能性を有する。本発明において用いる糖加水分解酵素は、バクテロイデスセタイオタオミクロンBacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来の3種のα-N-アセチルグルコサミニダーゼ1、2または3が特に好ましいが、グリコシルハイドロラーゼファミリー89GH89に属するα-N-アセチルグルコサミニダーゼのホモログは上記以外の宿主にも多数見出すことができるので、それらも本法と同様に用いることができる。特に、ヒト、マウス、蛇由来のα-N-アセチルグルコサミニダーゼではGlcNAc-α-pNPだけでなくヘパリン構成糖であるGlcNAc-α1,4-IdoA-RやGlcNAc-α1,4-GlcA-Rにも加水分解活性があるので、同様に糖受容体としてイズロン酸誘導体IdoA-Rやグルクロン酸誘導体GlcA-Rも用いることができる。また、本発明において、酵素においては糖加水分解酵素や糖転移酵素が有する活性アミノ酸残基の変異体も用いることができる非特許文献7。これにより、生成したαグルコサミン化合物に対する加水分解を、野生型の糖加水分解酵素を用いた時に比べて、顕著に抑えることができ、結果的に目的物の収率向上させることができる。バクテロイデスセタイオタオミクロンBacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来の3種のα-N-アセチルグルコサミニダーゼ1、2または3は、特許文献2を参照してリコンビナント蛋白質として調製できる。グリコシルハイドロラーゼファミリー89GH89に属するα-N-アセチルグルコサミニダーゼも、それぞれの出典の文献ヒト由来のリコンビナント酵素調製ウェバービーWebberBら、プロテインエクスプレッションアンドピュアリフィケーションProteinExpressionandPurification、2001年、第21巻2号、p251-259、蛇毒からの調製アンドリュージェーエヌAndrewJNら、ジャーナルオブケミカルアンドモレキュラートキシコロジーJournalofBiochemicalandMolecularToxicology、2001年、第15巻4号、p221-227を参照してリコンビナント蛋白質としてもしくは天然からの抽出物として調製できる。本発明において糖供与体として用いるN-アセチルグルコサミン誘導体とは、糖のアノマー位に脱離基を有するN-アセチルグルコサミン誘導体であり、上記[1]に記載の調製方法により、非還元末端にN-アセチルグルコサミンがα選択的に結合した化合物を与える。N-アセチルグルコサミン誘導体としてはGlcNAc-α-DMTが好ましいが、この化合物に限られない。用いる糖加水分解酵素によっては糖加水分解酵素の活性アミノ酸残基等の変異体も含むその他の脱離基を有するN-アセチルグルコサミン誘導体も糖供与体となりうるからである。前記[2]の化1の式に記載のXは、O、C、S、Nであればよく、なくてもトリアジン基として、酵素の糖供与体となりうる。Rはアルキルを示すが、アルキルという用語は、それ自体によってまたは別の置換基の一部として、特記しない限り、完全飽和、モノまたはポリ不飽和のいずれであってもよく、指定の数の炭素原子を有するすなわち、C1-C10は1~10炭素を意味する二価または多価ラジカルを含んでいてもよい直鎖または分枝鎖、または環状炭化水素基、またはその組み合わせを意味する。飽和炭化水素基の例としては、限定はされないが、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル、シクロプロピルメチルなどの基、たとえばn-ペンチル、n-ヘキシル、n-ヘプチル、n-オクチルなどの同族体および異性体などが挙げられる。不飽和アルキル基は、1つ以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例としては、限定されないが、ビニル、2-プロペニル、クロチル、2-イソペンテニル、2-ブダジエニル、2,4-ペンタジエニル、3-1,4-ペンタジエニル、エチニル、1-および3-プロピニル、3-ブチニル、およびより高次の同族体および異性体が挙げられる。本発明において用いる、そのアノマー位にグリコシド結合しうる糖受容体とは、前記[5]に示すように、水酸基を有する化合物であり糖供与体と反応できるものであれば特に限定しないが、具体的にはメタノール、フェニルアルコールなどのアルコール類、ベンジルβ-D-ガラクトピラノシドGal-β-OBnやp-メトキシフェニル-β-D-ガラクトピラノシドGal-β-pMPなどのガラクトース誘導体、グルクロン酸やイズロン酸の誘導体などの例を挙げることができる。本発明において酵素を用いる糖転移反応の条件は、公知の条件を用いることができるが、具体的には以下のようになる。溶液は、リン酸緩衝液、炭酸緩衝液などの例を挙げることができ、特にリン酸緩衝化生理食塩水phosphatebufferedsaline,PBSが好ましい。溶液のpHは、中性付近が好ましく、pH6.0からpH8.0が特に好ましい。反応の温度は、25°Cから45°Cが好ましく、32°Cが特に好ましい。反応の時間は、酵素濃度が数十から数百nMで数時間から24時間が好ましく、さらに酵素濃度800nMとした場合に、4から5時間程度が特に好ましい。しかしながら、酵素濃度が数十nM以下においては、反応時間が24時間以上で、比較的高い糖転移収率を得ることがある。反応容器においては、系内の温度を制御でき、かつ溶解しているタンパク質や糖質化合物を特に吸着させる容器でないかぎりどのようなものを用いてもよい。また、本発明において用いているリコンビナントタンパクや基質はいずれも室温から37°C付近では比較的安定であるために、反応において、振とうや撹拌操作を行えば、出発物質の分解もほとんどなく反応時間を短縮させることができる。本発明で調製される糖誘導体には、糖鎖、糖蛋白質、糖脂質などが含まれる。糖供与体として用いる、GlcNAc-α-DMTは、次のようにして合成した。N-アセチル-D-グルコサミンGlcNAc221mg1.0mmolを水6.25mlに溶解し、塩化4-4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル-4-メチルモルホリニウムDMT-MM553mg2.0mmol、次いで2,6-ルチジン0.23ml2.0mmolを室温で加え、反応溶液を室温で24時間撹拌した。化2式の反応が進行した。薄層クロマトグラフィーTLCで反応終了を確認後、減圧下溶媒を除去し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィ展開溶媒:酢酸エチル/メタノール=7/1により精製して、4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシドGlcNAc-α-DMT288mg0.80mmol、80を得た。以下に、本発明の調製方法糖転移反応を、実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明を何ら限定するものではない。糖供与体としてGlcNAc-α-DMT1.8mg5μmol、終濃度50mMをPBS溶液に溶解し、糖受容体としてメタノール12.3μl300μM、12.3vol.、およびBacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来α-N-アセチルグルコサミニダーゼB24.95μg、0.495μg/μl、特許文献2参照のPBS溶液を加え、37°Cで22時間インキュベートした。化3式の反応が進行した。反応溶液をHPLCで分析カラム:TSK-GelAmide-804.6×250mm,TOSOH,溶離液:アセトニトリル/水=3/1,流速:1ml/min,温度:30°C,検出:UV214nmしたところ、メチル2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシドGlcNAc-α-OMeが27の収率で生成していることを確認した。その結果を図1に示す。糖供与体としてGlcNAc-αDMT1.8mg5μmol、終濃度50mM、糖受容体としてベンジルβ-D-ガラクトピラノシドGal-β-OBn9.5mg35μMをPBS溶液に溶解し、BacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来α-N-アセチルグルコサミニダーゼB24.95μg、0.495μg/μl、特許文献2参照のPBS溶液を加え、37°Cで6時間インキュベートした。化4式の反応が進行した。反応溶液をHPLCで分析カラム:COSMOSILCholester4.6×250mm,NacalaiTesque,溶離液:アセトニトリル/水=9/91,流速:1ml/min,温度:30°C,検出:UV254nmしたところ、ベンジル6-O-2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→6-Gal-β-OBn、ベンジル2-O-2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→2-Gal-β-OBnが、各々4、8の収率で生成していることを確認した。その結果を図2に示す。糖供与体としてGlcNAc-αDMT0.36mg1μmol、終濃度50mM、糖受容体としてベンジルβ-D-ガラクトピラノシドGal-β-OBn1.9mg7μmolをPBS溶液に溶解し、BacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来α-N-アセチルグルコサミニダーゼB30.10μg、0.086μg/μl、特許文献2参照のPBS溶液を加え、37°Cで29時間インキュベートした。化4式の反応が進行した。反応溶液をHPLCで分析カラム:COSMOSILCholester4.6×250mm,Nakaraitesque,溶離液:アセトニトリル/水=9/91,流速:1ml/min,温度:30°C,検出:UV254nmしたところ、ベンジル6-O-2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→6-Gal-β-OBn、ベンジル2-O-2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→2-Gal-β-OBnが、各々0.4、0.3の収率で生成していることを確認した。その結果を図3に示す。<生成物のNMR法による解析結果>ベンジル6-O-2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→6-Gal-β-OBn1HNMR500MHz,CD3OD:δ7.47-7.305H,m,Ph,4.951H,d,-CH2-,J=12.0Hz,1H,d,H-1’,4.681H,d,-CH2-,J=11.8Hz,4.381H,d,H-1,J=7.6Hz,2.033H,s,-COCH3.DEPT-135NMR126MHz,CD3OD:δ128.0-127.3Ph,102.6C-1,97.3C-1’,70.4-CH2-,66.4C-6,61.3C-6’,21.3-COCH3.MALDI-TOFMS;m/zcalcdforC21H31NO11[MNa]:496.5,Found:496.8ベンジル2-O-2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→2-Gal-β-OBn1HNMR500MHz,CD3OD:δ7.47-7.295H,m,Ph,5.321H,d,H-1’,J=3.7Hz,5.031H,d,-CH2-,J=11.4Hz,4.631H,d,-CH2-,J=11.4Hz,4.601H,d,H-1,J=7.8Hz,4.151H,ddd,H-5’,J=2.1,5.2,10.1Hz,4.01H,dd,H-2’,J=3.6,10.7Hz,3.89-3.717H,m,H-2,H-4,H-6a,H-6b,H-3’,H-6’a,H-6’b,3.64-3.532H,m,H-3,H-5,3.421H,t,H-4’,J=9.5Hz,1.833H,s,-COCH3.DEPT-135NMR126MHz,CD3OD:δ128.1-127.3Ph,102.8C-1,97.5C-1’,76.2C-2,75.4C-5,72.5C-3,72.2C-5’,71.7C-3’,70.9C-4’,70.6-CH2-,69.3C-4,61.3C-6’,61.1C-6,53.8C-2’,21.3-COCH3.MALDI-TOFMS;m/zcalcdforC21H31NO11[MNa]:496.5,Found:496.6糖供与体としてGlcNAc-αDMT0.22mg0.6μmol、終濃度30mM、糖受容体としてp-メトキシフェニルβ-D-ガラクトピラノシドGal-β-pMP0.17mg0.6μmolをPBS溶液に溶解し、BacteroidesthetaiotaomicronVPI5482由来α-N-アセチルグルコサミニダーゼB114.4μg、14.4μg/μl、特許文献2参照のPBS溶液を加え、37°Cで5時間インキュベートした。化5式の反応が進行した。反応溶液をHPLCで分析カラム:InertsilODS-34.6×250mm,GL-Science,溶離液:アセトニトリル/水=5/95→15/850→25min,流速:1ml/min,温度:30°C,検出:UV280nmしたところ、p-メトキシフェニル4-O-2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→4-Gal-β-pMPが、10の収率で生成していることを確認した。その結果を図4に示す。<生成物のNMR法による解析結果>p-メトキシフェニル-4-O-2-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシド1HNMR500MHz,CD3OD:δ7.082H,d,Ph,J=9.1Hz,6.862H,d,Ph,J=9.1Hz,4.951H,d,H-1’,J=3.6Hz,4.841H,d,H-1,J=7.6Hz,4.291H,ddd,H-5’,J=2.5,4.0,9.9Hz,4.041H,d,H-4,J=2.8Hz,3.971H,dd,H-2’,J=3.6,10.9Hz,3.831H,dd,H-6a’,J=2.2,11.8Hz,3.79-3.718H,m,H-2,H-5,H-6a,H-3’,H-6’b,-OCH3,3.69-3.652H,m,H-3,H-6b,3.461H,t,H-4’,J=9.4,9.5Hz,2.023H,s,-COCH3.13CNMR126MHz,CD3OD:δ173.8-COCH3,156.7,153.0,119.1,and115.5Ph,104.0C-1,100.3C-1’,77.7C-4,76.8C-5,74.3C-3,73.7C-5’,72.6C-3’,72.4C-2,72.0C-4’,62.3C-6’,60.7C-6,56.1-OCH3,55.5C-2’,22.7-COCH3.GlcNAc-α-DMTを50mM、pMP-β-Gal14mgを50mMになるようにpH6.5の100mMリン酸緩衝液に溶解し、37°Cで上記と同様にα-N-アセチルグルコサミニダーゼB1のPBS溶液酵素濃度0.8μMを加え、反応を8時間行い、HPLCにより測定した。上記と同様に測定し、GlcNAc-α1→4-Gal-β-OpMPが収率52で得られていることがわかった。GlcNAc-α-DMT45.0mg0.13mmol、50mM、メトキシβ-D-ガラクトピラノシドGal-β-O-Me25.0mg0.13mmol,50mMをpH6.5、100mMリン酸緩衝液に溶解し、37°Cで10分間プレインキュベート後、α-N-アセチルグルコサミニダーゼB1のPBS溶液2.88mg/ml,134μlを加え、全量2.5mlとして反応を開始した。化6式の反応1時間後に溶離液で5倍に希釈し、分取HPLCにより単離した。カラムをAmide-80Φ21.5×300mm、溶離液をアセトニトリル/水=4/1、流量を8ml/min、カラム温度を40°C、検出器をUV240nmとした。NMRにより構造決定を行ったところメトキシ-4-O-2-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→4-Gal-β-O-Meを得た。収量;7.8mg,収率;16.5<生成物のNMR法による解析結果>メトキシ-4-O-2-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシド1HNMR500MHz,CD3OD:δ4.881H,d,H-1’,J=3.7Hz,4.241H,ddd,H-5’,J=2.5Hz,4.4Hz,10.2Hz,4.211H,d,H-1,J=7.4Hz,3.971H,d,H-4,J=3.0Hz,3.941H,dd,H-2’,J=3.7Hz,10.8Hz,3.791H,dd,H-6’a,J=2.6Hz,11.8Hz,3.74-3.585H,m,H-6’b,H-6a,H-3’,H-6b,H-5,3.583H,s,-OCH3,3.551H,dd,H-3,J=3.0Hz,10.1Hz,3.501H,dd,H-2,J=7.5Hz,10.1Hz,3.431H,dd,H-4’,J=9.0Hz,10.1Hz,2.033H,s,-COCH3.13CNMR126MHz,CD3OD:δ173.7-COCH3,106.3C-1,100.3C-1’,77.6C-4,76.7C-5,74.4C-3,73.6C-5’,72.7C-3’,72.6C-2,72.0C-4’,62.3C-6’,60.8C-6,57.8-OCH3,55.5C-2’,22.7-COCH3終濃度がGlcNAc-α-DMT75mM、2-ピリジル-1-チオ-2-アセトアミド-2-デオキシ-4-O-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-グルコピラノシドLacNAc-β-Spy25mMになるようpH6.5,100mMリン酸緩衝液に溶解し、37°Cで10分間プレインキュベート後、α-N-アセチルグルコサミニダーゼB1PBS溶液2.75mg/ml3.6μlを加え、全量100μlとして反応を開始した。この反応を12サンプル用意し、反応3時間後、分取HPLCにより分取した。カラムをAmide-80Φ21.5×300mm、溶離液をアセトニトリル/水=3/1、流量を8ml/min、カラム温度を30°C、検出器をUV240nmとした。2-ピリジル-1-チオ-2-アセトアミド-2-デオキシ-4-O-4-O-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-グルコピラノシドGlcNAc-α1→4-LacNAc-β-Spy8.2mg収率39を得た。<生成物のNMR法による解析結果>2-ピリジル-1-チオ-2-アセトアミド-2-デオキシ-4-O-4-O-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-グルコピラノシド1HNMR400MHz,CD3OD:δ8.38,7.68,7,40,and7.164H,Pyridyl,5.451H,d,H-1,J=10.7Hz,4.901H,d,H-1,J=3.7Hz,4.481H,d,H-1’,J=7.4Hz,4.201H,ddd,H-5,J=2.4,4.6,7.8Hz,3.991H,dd,H-2,J=9.6,10.5Hz,3.951H,d,H-4’,J=2.2Hz,3.93-3.893H,m,H-6a,H-6b,H-2,3.811H,dd,H-6a,J=2.5,11.9Hz,3.78-3.5410H,m,H-3,H-4,H-5,H-2’,H-3’,H-5’,H-6’a,H-6’b,H-3,H-6b,3.421H,dd,H-4,J=8.9,10.1Hz,2.013H,s,-COCH3,1.953H,s,-COCH3.13CNMR101MHz,CD3OD:δ173.7and173.5-COCH3,158.9,150.3,138.5,124.4,and122.0Pyridyl,105.4C-1’,100.1C-1,84.8C-1,80.9C-5,80.6C-4,78.1C-4’,77.2C-5’,75.7C-3,74.5C-3’,73.8C-5,72.5C-2’,C-3,72.1C-4,62.4C-6,61.8C-6,61.3C-6’,55.6C-2,55.5C-2,22.9and22.7-COCH3.終濃度がGlcNAc-α-DMT75mM、2-ピリジル-1-チオ-4-O-4-O-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-グルコピラノシドLac-β-Spy25mMになるようpH6.5,100mMリン酸緩衝液に溶解し、37°Cで10分間プレインキュベート後、α-N-アセチルグルコサミニダーゼB1PBS溶液2.75mg/ml7.3μlを加え、全量100μlとして反応を行った。化7式の反応24時間後、分取HPLCにより分取した。カラムをAmide-80Φ21.5×300mm、溶離液をアセトニトリル/水=3/1、流量を8ml/min、カラム温度を30°C、検出器をUV240nmとした。2-ピリジル-1-チオ-4-O-4-O-2-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-グルコピラノシドGlcNAc-α1→4-Lac-β-Spy4.3mg収率45を得た。<生成物のNMR法による解析結果>2-ピリジル-1-チオ-4-O-4-O-2-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-グルコピラノシド1HNMR500MHz,CD3OD:δ8.42,7.73,7,49,and7.214H,Pyridyl,5.291H,d,H-1,J=10.7Hz,4.931H,d,H-1,J=3.7Hz,4.491H,d,H-1’,J=7.4Hz,4.241H,m,H-5,3.981H,d,H-4,J=1.9Hz,3.941H,dd,H-2,J=3.4,11.2Hz,3.922H,d,H-6a,H-6b,J=2.7Hz,3.841H,dd,H-6a,J=1.9,11.8Hz,3.77-3.5910H,m,H-3,H-4,H-5,H-2’,H-3’,H-5’,H-6’a,H-6’b,H-3,H-6b,3.49-3.442H,m,H-2,H-4,2.053H,s,-COCH3.13CNMR126MHz,CD3OD:δ172.4-COCH3,157.8,148.9,137.3,123.2,and120.7Pyridyl,104.0C-1’,98.6C-1,84.6C-1,79.3C-5,78.7C-4,76.8C-3,76.6C-4’,75.8C-5’,73.1C-3’,72.3C-2,C-5,71.1C-2’,C-3,70.1C-4,61.0C-6,60.4C-6,59.9C-6’,54.3C-2,21.3-COCH3.FAB-MS;m/zcalcdforC25H38N2O15S[MH]:639.2071,Found:639.2075終濃度がGlcNAc-α-DMT50mM、GNB-α-DMT25mMになるようpH6.5、100mMリン酸緩衝液に溶解し、37°Cで10分間プレインキュベート後、GlcNAcaseB1PBS溶液2.75mg/ml5.5μlを加え、全量100μlとして反応を開始した。化8式の反応を16サンプル用意し、反応4時間後、分取HPLCにより分取した。カラムをAmide-80Φ21.5×300mm、溶離液をアセトニトリル/水=3/1、流量を8ml/min、カラム温度を30°C、検出器をUV214nmとした。4,6ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル2-アセトアミド-2-デオキシ-3-O-4-O-2-アセトアミド-2デオキシα-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドGlcNAc-α1→4-GNB-α-O-DMT12.7mg収率44を得た。<生成物のNMR法による解析結果>4,6ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル2-アセトアミド-2-デオキシ-3-O-4-O-2-アセトアミド-2デオキシα-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシル-β-D-ガラクトピラノシド1HNMR400MHz,CD3OD:δ6.631H,d,H-1,J=3.72Hz,4.931H,d,H-1,J=3.7Hz,4.661H,dd,H-2,J=3.7,11.3Hz,4.561H,d,H-1’,J=7.1Hz,4.271H,d,H-4,J=2.1Hz,4.20-4.162H,m,H-3,H-5,4.02-4.007H,m,-OCH3,H-5,3.971H,d,H-4’,J=2.8Hz,3.941H,dd,H-2,J=3.7,10.9Hz,3.811H,d,H-6a,J=2.311.8Hz,3.76-3.549H,m,H-6a,H-6b,H-2’,H-3’,H-5’,H-6’a,H-6’b,H-3,H-6b,3.421H,dd,H-4,J=8.9,10.0Hz,2.023H,s,-COCH3,1.923H,s,-COCH3.13CNMR101MHz,CD3OD:δ175.1,174.3,173.8,and173.7triazine,-COCH3,106.1C-1’,100.1C-1,96.4C-1,78.4C-3,78.1C-4’,76.8C-5’,74.8C-5,74.5C-3’,73.8C-5,72.6C-3,72.5C-2’,72.1C-4,69.5C-4,62.5C-6,62.4C-6,61.3C-6’,56.1-OCH3,55.6C-2,49.6-48.4C-2inpeakofCHD2OD,22.7and22.6-COCH3.GlcNAc-α-DMT39.6mg0.11mmol,50mM、イソプロピル-1-チオ-β-Gal-β-D-ガラクトピラノシドGal-β-SiPr79.2mg0.33mmol、150mMをpH6.5、100mMリン酸緩衝液に溶解し、37°Cで10分間プレインキュベート後、GlcNAcaseB1PBS溶液2.88mg/ml118μlを加え、全量2.2mlとして反応を開始した。化9式の反応1時間後に溶離液で5倍に希釈し、分取HPLCにより単離した。カラムをAmide-80Φ21.5×300mm、溶離液をアセトニトリル/水=4/1、流量を8ml/min、カラム温度を40°Cとし、UV214nmにおける紫外吸収を測定した。NMRにより構造決定を行ったところイソプロピル-1-チオ-β-4-O-2-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシドを得た。収量;14mg、収率;28.6<生成物のNMR法による解析結果>イソプロピル-1-チオ―β―4-O-2-アセトアミド-2-デオキシ-α-D-グルコピラノシル-β-D-ガラクトピラノシド1HNMR500MHz,CD3OD:δ4.891H,d,H-1’,J=3.7Hz,4.511H,d,H-1,J=9.6Hz,4.221H,ddd,H-5’,J=2.5,4.4,10.1Hz,4.011H,d,H-4,J=3.0Hz,3.951H,dd,H-2’,J=3.7,10.8Hz,3.791H,dd,H-6’a,J=2.5,11.8Hz,3.731H,dd,H-6’b,J=4.5,11.8Hz,3.70-3.594H,m,H-3’,H-5,H-6a,H-6b,3.561H,dd,H-3,J=3.0,9.6Hz,3.481H,t,H-2,J=9.6Hz,3.431H,dd,H-4’,J=9.0,10.1Hz,3.251H,sept,isopropyl,J=6.8Hz,2.033H,s,-COCH31.343H,d,isopropyl,J=6.8Hz,1.333H,d,isopropyl,J=6.8Hz,.13CNMR126MHz,CD3OD:δ173.7-COCH3,100.53C-1’,87.3C-1,80.5C-5,78.3C-4,75.9C-3,73.6C-5’,72.7C-3’,72.0C-4’,71.7C-2,62.3C-6’,60.8C-6,55.5C-2’,36.2isopropyl,24.4,24.1isopropyl,22.7-COCH3."