人工多能性幹細胞の製造方法であって、末梢血由来の単核球集団を材料とすることを特徴とする方法。請求項1に記載の人工多能性幹細胞の製造方法であって、イ末梢血由来の単核球集団を抗CD3抗体およびインターロイキン2の存在下で3~14日間培養する工程と、ロ培養後の前記単核球集団に対して脱分化処理を行う工程とを含むことを特徴とする方法。請求項2に記載の人工多能性幹細胞の製造方法であって、前記工程ロにおいて、前記単核球集団に脱分化因子の導入操作を行うことを特徴とする方法。請求項3に記載の人工多能性幹細胞の製造方法であって、前記脱分化因子の導入操作において、前記脱分化因子を発現する組み換え発現ベクターの導入操作を行うことを特徴とする方法。請求項3または4に記載の人工多能性幹細胞の製造方法であって、前記工程ロにおいて、前記脱分化因子がSox2、Oct3/4、Klf4およびc-Mycであることを特徴とする方法。請求項4または5に記載の人工多能性幹細胞の製造方法であって、前記組み換え発現ベクターがセンダイウイルスベクターであることを特徴とする方法。請求項2~6のいずれかに記載の人工多能性幹細胞の製造方法であって、ハ脱分化処理を行った前記単核球集団を、増殖因子の存在下で14~25日間培養する工程をさらに含むことを特徴とする方法。請求項1~7のいずれかに記載の人工多能性幹細胞の製造方法であって、前記末梢血がヒト由来であることを特徴とする方法。しかしながら、従来のiPS細胞作製方法では、皮膚や肝臓等の組織を採取する必要があるため患者の負担が大きく、また、iPS細胞作製効率も低かった。そこで、侵襲性が低く、かつ、高い効率でiPS細胞を製造する方法を提供することを目的とする。本発明に係る人工多能性幹細胞iPS細胞の製造方法は、末梢血由来の単核球集団を材料とすることを特徴とする。上記iPS細胞の製造方法は、イ末梢血由来の単核球集団を抗CD3抗体およびインターロイキン2の存在下で3~14日間培養する工程と、ロ培養後の前記単核球集団に対して脱分化処理を行う工程とを含むことが好ましい。また、工程ロにおいて、前記単核球集団に脱分化因子の導入操作を行うことがさらに好ましい。前記脱分化因子の導入操作において、前記脱分化因子を発現する組み換え発現ベクターの導入操作を行ってもよい。ここで、脱分化因子がSox2、Oct3/4、Klf4およびc-Mycであることが好ましく、組み換え発現ベクターがセンダイウイルスベクターであることがより好ましい。本発明に係るiPS細胞の製造方法は、ハ脱分化処理を行った前記単核球集団を、増殖因子の存在下で14~25日間培養する工程をさらに含むことが好ましい。また、末梢血がヒト由来であることが好ましい。なお、本明細書で遺伝子、cDNAなどが付加されず、Sox2、Oct3/4、Klf4、c-Mycというように因子名のみで用いられた場合、これらの遺伝子の遺伝子産物であるタンパク質を指すこととする。==クロスリファレンス==本出願は、2010年4月16日付で出願した日本国特許出願2010-95404に基づく優先権を主張するものであり、当該基礎出願を引用することにより、本明細書に含めるものとする。以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。実施の形態及び実施例に特に説明がない場合には、JSambrookEFFritschTManiatisMolecularcloningalaboratorymanualColdSpringHarborPressColdSpringHarborNewYorkFMAusubelRBrentREKingstonDDMooreJGSeidmanJASmithKStruhlCurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySonsLtd等の標準的なプロトコール集に記載の方法、あるいはそれを修飾したり、改変した方法を用いる。また、市販の試薬キットや測定装置を用いる場合には、特に説明が無い場合、それらに添付のプロトコールを用いる。なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例等は、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図ならびに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々に修飾ができることは、当業者にとって明らかである。以下に、末梢血由来の単核球集団を材料としてiPS細胞を製造する方法を詳述する。末梢血は、哺乳動物に由来することが好ましく、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ネコ、イヌ、サル等の動物に由来してもよいが、ヒトに由来することがより好ましい。これらの動物の成長段階は、成体、仔、胎児、胚のいずれであってもよく、単核球の含まれる末梢血が得られる範囲内で制限されない。採血方法は、動物のサイズや採血量を考慮して当業者が周知の方法から適宜選択すればよく、特に制限されないが、動物の負担を軽減するためには注射器で採血することが好ましい。なお、本発明に係る方法で製造したiPS細胞を何らかの疾病に罹患した患者あるいは患獣の治療に用いる場合には、末梢血は、患者や患獣と同種の動物に由来することが好ましく、患者や患獣自身に由来することがより好ましい。単核球集団は、単核球以外の末梢血由来の細胞や成分と混在していても、単核球のみが含まれてもよいが、iPS細胞の製造効率を考慮すると、単核球が高い割合で含まれていることが好ましい。末梢血から単核球集団を調製する方法は、周知の方法から当業者が適宜選択することができ、例えば、密度勾配遠心法、リンフォクイック法OneLambda社、免疫磁気ビーズ法等を用いてもよい。密度勾配遠心法の比重液としては、例えば、ショ糖溶液やフィコール溶液、または、フィコールコンレイ、フィコールハイパック等のショ糖とエピクロロヒドリンとの水溶性共重合体の溶液、あるいは、パーコール等のポリビニルピロリドンで被覆したコロイドシリカの溶液等の周知の溶液から当業者が適宜選択すればよい。なお、末梢血は、新鮮なものであることが好ましいが、冷蔵冷凍保存されたものであっても構わない。==末梢血由来の単核球集団の培養==まず、末梢血から調製した単核球集団を、抗CD3抗体およびインターロイキンの存在下で3~14日間、好ましくは3~7日間培養する。この培養により、単核球のうち、CD3陽性T細胞の増殖が特異的に促進されると考えられる。培養条件は、当業者が適宜選択すればよく、例えば5CO2存在下で35~40°C、好ましくは37°Cで培養すればよい。培地は単核球の培養に通常用いられる培地から当業者が適宜選択でき、例えば、KBM502、DMEM/F12、DMEM、KBM530、KBM540、KBM560、RPM1640であってもよいが、KBM502であることが好ましい。ここで、抗CD3抗体は、培養皿や培養管に固定されていても、あるいは、液体培地中に浮遊した状態であってもよい。抗CD3抗体が固定化されている場合、例えば、共有結合、または、静電相互作用等の非共有結合を介して、培養皿や培養管を構成するプラスチック等に固定化されていてもよいが、固定化方法は特に制限されず、当業者に周知の方法から適宜選択できる。また、抗CD3抗体の固定化された培養皿等は、BDBioCoat社等から購入することもできる。液体培地中の抗CD3抗体の濃度は、当業者が最適濃度を設定すればよいが、最終的なiPS細胞の収率を考慮すると、1~100μg/mlであることが好ましい。なお、抗CD3抗体は、材料となる単核球のCD3抗原に対して特異的に刺激を与え、CD3抗原陽性単核球の増殖を促進することのできる抗体であればよく、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよく、また、何れの動物から得られた抗体であっても特に制限されない。ここで、抗体は、可変領域を含む抗原結合部位を含む抗体の一部であってもよく、例えば、Fabフラグメント、Fab’2フラグメント等であってもよい。インターロイキンは、周知のいずれのインターロイキンであってもよく、例えば、インターロイキン1、インターロイキン2、インターロイキン4、インターロイキン6、インターロイキン8、インターロイキン11、インターロイキン12等が挙げられるが、取り扱いや調製の容易さを考慮すると、市販されているインターロイキン2を用いることが好ましい。なお、上記抗体やインターロイキンに加え、単核球の培養に通常添加される1種類以上の物質が、培地に含まれていてもよい。このような物質として、例えば、繊維芽細胞増殖因子FGFや上皮成長因子EGF等の増殖因子、FBSやknockoutserumreplacement、L-グルタミン、非必須アミノ酸、ペニシリンやストレプトマイシン等の抗生物質、メルカプトエタノール等が挙げられるが、これらに限定されない。==単核球集団の脱分化処理==次に、単核球集団に対して脱分化処理を行う。単核球集団の脱分化処理は、当業者に周知の方法によって行うことができ、所望のiPS細胞が作製できる範囲で制限されない。例えば、脱分化因子を用いても、あるいは、単核球の脱分化を促進する周知の薬剤を投与してもよい。脱分化因子を用いる場合、iPS細胞を作製する際に通常用いられる脱分化因子初期化因子を用いることができる。例えばTakahashiらの論文に記載された初期化方法を用いることができ、本刊行物を引用することにより、本明細書に含めるものとする。特に、Oct遺伝子群、Klf遺伝子群、Sox遺伝子群のそれぞれから選択された遺伝子産物の組み合わせを含むことが好ましく、Myc遺伝子群の遺伝子産物をさらに含むことが好ましい。Oct遺伝子群に属する遺伝子としては、Oct3/4、Oct1A、Oct6等の各遺伝子が挙げられる。Klf遺伝子群に属する遺伝子としては、Klf1、Klf2、Klf4、Klf5等の各遺伝子が挙げられる。Sox遺伝子群に属する遺伝子としては、Sox1、Sox2、Sox3、Sox7、Sox15、Sox17、Sox18等の各遺伝子が挙げられる。Myc遺伝子群に属する遺伝子としては、c-Myc、N-Myc、L-Myc等の各遺伝子が挙げられる。さらに、これら遺伝子の組み合わせに加え、サイトカインや化合物を補助因子として培地に添加しても良い。上記以外の脱分化因子の組み合わせとして、Oct遺伝子群の遺伝子産物、Sox遺伝子群の遺伝子産物に加え、Nanog遺伝子の遺伝子産物、lin-28遺伝子の遺伝子産物等を含む組み合わせが例示できる。また、これらの脱分化因子の組み合わせに加え、例えば、SV40LargeT抗原遺伝子産物、およびTERT遺伝子産物、不死化誘導因子等を用いてもよい。なお、脱分化因子により脱分化される単核球において、上記の脱分化因子のいずれか、または複数がすでに発現している場合には、その脱分化因子を省略することもできる。また、特定の脱分化因子の機能を代替できる化合物があれば、その脱分化因子の代わりに用いてもよい。例えば、Myc遺伝子群の遺伝子産物は、サイトカインや化合物で置換できる場合があり、この場合のサイトカインとして、SCFやbFGF等が挙げられる。また、c-Myc遺伝子やKlf4遺伝子を代替できる化合物として、例えばバルプロ酸などが挙げられる。脱分化因子をコードする遺伝子は、いずれも脊椎動物で高度に保存されている遺伝子であり、本明細書では特に動物名を示さない限り、ホモログを含めた遺伝子を表すものとする。また、遺伝子多型を含め、変異を有する遺伝子の遺伝子産物であっても野生型の遺伝子産物と同等の機能を有する遺伝子産物、例えば、野生型遺伝子産物の1~10、好ましくは1~6、より好ましくは1~4、さらに好ましくは1~3、特に好ましくは1~2アミノ酸が置換、挿入、または欠失した変異遺伝子産物もまた、含まれるものとする。以上のような脱分化因子を用いた、単核球集団の脱分化処理方法は特に制限されないが、例えば、単核球集団に対し、脱分化因子の導入操作を行うことによって脱分化処理することができる。具体的には、SAINTPhDコスモバイオ株式会社やCellvaderGEHealthcare社等の陽イオン性脂質試薬と脱分化因子との複合体、あるいは、ProteinTransductionDomainPTDと呼ばれるペプチドと脱分化因子との複合体等を調製する。これらの複合体を単核球集団の培地に添加し、単核球集団に接触させることにより、脱分化因子を単核球に導入することができる。こうして脱分化因子が導入された単核球は脱分化し、多能性を獲得する。なお、添加する脱分化因子の量は、当業者が適宜決定できる。一方、単核球集団に対し、脱分化因子を発現させることのできる発現ベクターの導入操作を行うことによって、単核球集団の脱分化処理を行ってもよい。DNAベクターの場合、脱分化因子をコードする遺伝子脱分化因子遺伝子を、単核球で発現させるための適切なプロモーターの下流に導入し、組み換え発現ベクターを調製する。あるいはセンダイウイルスのようなマイナス鎖RNAウイルスの場合は、ウイルス由来のプロモーターを利用して脱分化因子遺伝子を発現させるが、このようなウイルス由来のRNAベクターの場合、脱分化因子をコードするRNAをゲノムに有する組み換えウイルスベクターを調製する。この時、1つのベクターに2種類以上の脱分化因子遺伝子を挿入してもよい。ここで、使用する発現ベクターは、所望の脱分化誘導機能を有する範囲で特に制限されず、野生型、変異型、天然型、人為的改変型等のいずれであっても制限されないが、ウイルスベクターであることが好ましい。例えば、センダイウイルス由来、レトロウイルス由来、アデノウイルス由来、アデノ随伴ウイルス由来、ボックスウイルス由来等のウイルスベクターであってもよいが、宿主染色体への転移による融合を起こさないという特徴を有するセンダイウイルス由来のベクターであることが好ましい。このようなセンダイウイルスベクターは、単核球における脱分化の誘導機能を果たすために、Nタンパク質、Pタンパク質、およびLタンパク質等の、ゲノム複製に必要なタンパク質をコードする遺伝子を有することが好ましい。ここで、人為的改変型のセンダイウイルスベクターは、細胞傷害性や温度感受性についての変異を有するセンダイウイルスベクターであってもよい。例えば、マイナス鎖RNAウイルス由来のF遺伝子、H遺伝子、HN遺伝子、またはG遺伝子等のウイルスのエンベロープタンパク質や外殻タンパク質をコードする遺伝子に変異または欠損を有しているセンダイウイルスベクターであってもよいWO00/70055、WO00/70070、LiHOetalJVirol7465646569参照。このようなセンダイウイルスベクターは、単核球においてゲノムを複製できるが感染性ウイルス粒子を形成できないため、安全性が高い。特に、F遺伝子欠失型センダイウイルスベクターを用いることが好ましい。このように調製した組み換え発現ベクターやウイルス粒子を単核球に導入する。この際、プラスミド等の組み換え発現ベクター、あるいは、ウイルス粒子を培地に添加することにより、単核球に目的遺伝子を導入することができる。プラスミド等の組み換え発現ベクターを添加した場合、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、DEAEデキストラン法、エレクトロポレーション法等の周知の遺伝子導入方法に従って処理することによって組み換え発現ベクターを単核球に導入することができる。一方、組み換えセンダイウイルスなどのウイルス粒子を添加した場合、単核球にウイルスが感染することによって単核球に目的遺伝子が導入される。組み換え発現ベクターが導入された単核球では脱分化因子が発現するため、その単核球は発現した脱分化因子によって脱分化する。なお、添加する組み換え発現ベクターの量は、当業者が適宜決定できる。なお、単核球集団に対する脱分化因子導入操作の間、無血清培地中で1~5日、好ましくは2日間、5CO2存在下、35°C~40°C、好ましくは37°Cで培養する。無血清培地は、DMEM/F12、VP-SFM、DMEM、KBM530、KBM540、KBM560、ROM1640、あるいはKBM502であってもよいが、KBM502であることが好ましい。この際、MEFマウス胚性繊維芽細胞やSNL株化マウス胚性繊維芽細胞等で作製したフィーダー細胞を用いてもよい。==脱分化処理後の培養==以上のようにして脱分化処理した単核球集団を10~30日、好ましくは14~25日、より好ましくは20日間、iPS細胞を培養する一般的な条件下で培養する。例えば、増殖因子含有DMEM/F12を用い、5CO2存在下、35°C~40°C、好ましくは37°Cで培養すればよい。あるいは、DMEM等の培地を用いてもよく、MEFやSNL等で作製したフィーダー細胞を用いてもよい。また、増殖因子は特に制限されず、周知の増殖因子から当業者が適宜選択できるが、例えば、繊維芽細胞増殖因子FGFや上皮成長因子EGFであってもよい。なお、上記増殖因子に加え、単核球の培養に通常添加される1種類以上の物質が、培地に含まれていてもよい。このような物質として、FBS等の血清やknockoutserumreplacement、L-グルタミン、非必須アミノ酸、ペニシリンやストレプトマイシン等の抗生物質、メルカプトエタノール等が挙げられるがこれらに限定されない。本実施例では、本発明に係るiPS細胞製造方法によって、末梢血由来単核球集団から効率的にiPS細胞を製造できることを示す。なお、培養は全て37°C、5CO2条件下で行った。==単核球分画の調製==慶應大学病院倫理委員会で承認されたプロトコールに従って、インフォームドコンセントを行った各健常人ボランティア11歳~66歳、男女、計5名から、1~20mlの末梢血を採血した。フィコールハイパックGEHealthcare社を比重液とし、遠心分離30分間、400×gを行い、末梢血から単核球分画を単離した。==組み換えセンダイウイルスベクター==以下1~4の脱分化因子遺伝子を公知の方法WO2010/008054に従って、SeV18/TSΔFベクターWO2010/008054に導入したセンダイウイルスの調製を行った。1Oct3/4遺伝子2Klf4遺伝子3c-Myc遺伝子4Sox2遺伝子具体的には、1~4の遺伝子を含む、マイナス鎖RNAウイルスゲノムRNAマイナス鎖またはその相補鎖プラス鎖をコードするcDNAの組み換えウイルスゲノムを発現するプラスミドベクター、及びウイルスの自己複製に必要な蛋白質F、N、P、L、T7RNAポリメラーゼを発現するプラスミドベクターを293T/17細胞に導入し、さらにFタンパク質を発現するLLC-MK2/F/A細胞を重層して培養を行い、生成したウイルスを含む培養上清を回収することにより製造した。==フィーダー細胞の調製==株化マウス胚性繊維芽細胞、SNLディッシュに0.1ゼラチンを加え、37°Cで約1時間静置し、ディッシュをコーティングした。SNLEGACC社を1.5×105細胞/mlの密度に調製し、1ディッシュ直径10cmあたり10mlを加え、一晩培養し、フィーダー細胞を調製した。==抗CD3抗体を用いた単核球集団の培養==抗CD3抗体BDBiosciences社をPBSで10μg/mlに調製した。この抗体希釈液で6ウェルディッシュの底面を覆い、37°Cで30分間~3時間インキュベートした。使用直前に抗体希釈液を取り除き、PBSで洗浄して抗CD3抗体結合ディッシュとした。末梢血由来単核球集団を、1×105~1×106細胞/mlの密度で抗CD3抗体結合ディッシュに播種し、含有KBM502培地20U/ml組み換えインターロイキン2が含有されている10mlにおいて5日間培養した。==単核球の脱分化処理==脱分化処理1日目抗CD3抗体を用いて培養した単核球集団を7.5×105細胞/mlの密度に調製し、ここにMOI1、3、5、10、あるいは20でセンダイウイルスを添加することによって、組み換えベクターを導入した後、KBM502培地中で24時間培養した。脱分化処理2日目セルスクレーパーで細胞を剥がし取り、細胞を含む培地を、ウェル毎にチューブに回収した。20°C、800~1000rpmで5分間遠心した後、ペレットにKBM502培地2mlを加え、数回ピペッティングし、ペレットをシングルセルにならない程度に破壊し、懸濁した。この懸濁液を、元のディッシュのウェルに戻し、KBM502培地中で24時間培養した。脱分化処理3日目セルスクレーパーで細胞を剥がし取り、細胞を含む培地をウェル毎にチューブに回収した。ピペッティングによって、細胞をシングルセルにし、細胞数を計数した。20°C、800~1000rpmで5分間遠心した後、ペレットに適量のKBM502培地を加えた。ピペッティングによって、ペレットをシングルセルにし、10cmディッシュに調製したフィーダー細胞SNL上に、5×104、5×105、5×106/ディッシュの密度で単核球を播種し、KBM502培地中で24時間培養した。==脱分化処理後の培養==上記のように脱分化処理した細胞を、フィーダー細胞SNL上に播種し、培地を10ng/mlヒト塩基性繊維芽細胞増殖因子bFGF、和光純薬工業添加iPS細胞培地10ml/10cmディッシュに交換した。その後、48時間毎に培地を交換し、20日間培養を続けた。なお、iPS細胞培地は、DMEM/F12Invitrogen社、20knockoutserumreplacementInvitrogen社、2mML-グルタミン、Invitrogen社、1×104M非必須アミノ酸Invitrogen社、1×104M2-メルカプトエタノールInvitrogen社、0.5ペニシリン-ストレプトマイシン和光純薬工業から成る。==アルカリフォスファターゼ染色およびクリスタルバイオレット染色==脱分化処理により得られたコロニーに対し、アルカリフォスファターゼ染色、および、クリスタルバイオレット染色を行った。まず、コロニーを10中性緩衝ホルマリン液和光純薬工業で固定した後、1StepNBTBCIPPierce社で染色した。さらに、クリスタルバイオレットをメタノールに溶解して4クリスタルバイオレット溶液を調製し、細胞に添加して30分間染色した。なお、アルカリフォスファターゼは幹細胞で発現することが知られており、幹細胞のマーカーとして用いられている例えば、RiekstinaUetalStemCellRev2009Dec5378386参照。また、クリスタルバイオレット染色により生細胞のみが染色される。さらに、DAPIMolecularProbes社を用いて適宜核の対比染色を行った。図1に示すように、MOI3~20のいずれで脱分化処理を行った場合でも、生細胞の80~90のコロニーがアルカリフォスファターゼ陽性であった==免疫組織化学的染色による幹細胞マーカータンパク質発現の解析==上記アルカリフォスファターゼ陽性細胞のコロニーのうち、3コロニーをランダムにクローニングし、これらの細胞がiPS細胞であることを確認するため、DAPI染色およびアルカリフォスファターゼ染色を行い形態学的観察を行ったところ、3つのクローンとも、胚性幹細胞あるいはiPS細胞に典型的な形態を有し、アルカリフォスファターゼ陽性であった。次に、脱分化処理により得られたクローンのコロニーを、10中性緩衝ホルマリン液和光純薬工業で固定した後、抗Nanog抗体リプロセル社、1000倍希釈、抗Oct3/4抗体SantaCruz社、100倍希釈、抗SSEA3抗体Millipore社、200倍希釈、抗SSEA4抗体Millipore社、200倍希釈、抗Tral60抗体Millipore社、200倍希釈、抗Tral81抗体Millipore社、200倍希釈と反応させた。その後、Alexa488またはAlexa568で標識された抗ウサギIgG抗体、抗マウスIgG抗体あるいは抗マウスIgM抗体を二次抗体全てMolecularProbes社として適宜用いた。染色した細胞を蛍光顕微鏡IX70、オリンパス株式会社下で観察したところ、図3に示すように、3つのクローン全てにおいて、調べた全ての幹細胞マーカーのタンパク質が検出された。==RT-PCR法による幹細胞マーカー遺伝子発現の解析==さらに、各クローンの細胞について各種幹細胞マーカーのタンパク質および遺伝子発現を、免疫組織学的染色および逆転写ポリメラーゼ連鎖反応RT-PCR法により解析した。RT-PCR法では、脱分化処理前の単核球、および、脱分化処理後の単核球について同様に解析を行い、陽性コントロール細胞としてヒト胚性幹細胞を用いたKhES-2、京都大学より入手。各クローンの細胞から、TRIZOLInvitrogen社を用いて全RNAを単離した。この全RNAから、SuperscriptFirstStrandSynthesisSystemInvitorgen社を用いてcDNAを調製した。このcDNAを鋳型とし、下記のプライマーを用いてKODplusDNAポリメラーゼ、東洋紡社によるRT-PCRを行ったところ、図4に示すように、ヒト胚性幹細胞に発現する幹細胞マーカー遺伝子が、3クローン全ての細胞において検出された。プライマー:NanogFCAGCCCCGATTCTTCCACCAGTCCC配列番号1NanogRCGGAAGATTCCCAGTCGGGTTCACC配列番号2Oct34FGACAGGGGGAGGGGAGGAGCTAGG配列番号3Oct34RCTTCCCTCCAACCAGTTGCCCCAAAC配列番号4Sox2FGGGAAATGGGAGGGGTGCAAAAGAGG配列番号5Sox2RTTGCGTGAGTGTGGATGGGATTGGTG配列番号6Klf4FACGATCGTGGCCCCGGAAAAGGACC配列番号7Klf4RTGATTGTAGTGCTTTCTGGCTGGGCTCC配列番号8cMycFGCGTCCTGGGAAGGGAGATCCGGAGC配列番号9cMycRTTGAGGGGCATCGTCGCGGGAGGCTG配列番号10GDF3FCTTATGCTACGTAAAGGAGCTGGG配列番号11GDF3RGTGCCAACCCAGGTCCCGGAAGTT配列番号12Rex1FCAGATCCTAAACAGCTCGCAGAAT配列番号13Rex1RGCGTACGCAAATTAAAGTCCAGA配列番号14DPPA4FGGAGCCGCCTGCCCTGGAAAATTC配列番号15DPPA4RTTTTTCCTGATATTCTATTCCCAT配列番号16DPPA2FCCGTCCCCGCAATCTCCTTCCATC配列番号17DPPA2RATGATGCCAACATGGCTCCCGGTG配列番号18GAPDHFCAGAACATCATCCCTGCCTCTAG配列番号19GAPDHRTTGAAGTCAGAGGAGACCACCTG配列番号20これらの結果は、本実施例において作製した細胞はiPS細胞であることを示している。このように、末梢血由来単核球集団からFACSなどを用いて抗CD3陽性T細胞を単離せず、末梢血由来単核球集団を抗CD3抗体の存在下で培養した後、脱分化処理することにより、高い効率でiPS細胞が作製できる。比較例1比較例では、FACSにより末梢血単核球分画からT細胞を選別し、iPS細胞を製造する。まず、実施例で用いたのと同量の末梢血由来単核球分画から、FACSによりCD3陽性T細胞を選別した。この選別により末梢血由来単核球分画の約30~40がCD3陽性T細胞として得られた。選別されたT細胞を抗CD3抗体結合ディッシュに播種し、組み換えインターロイキン220U/ml含有KBM502培地10mlにおいて5日間培養した。培養後のT細胞を7.5×105細胞/mlの密度に調製し、実施例と同様にMOI3あるいは20で組み換えセンダイウイルスを添加することによって、組み換えベクターを導入し、CD3陽性T細胞の脱分化処理を行った。脱分化処理により得られたコロニーの細胞において、アルカリフォスファターゼ染色、および、クリスタルバイオレット染色を行った。本比較例でMOI20で脱分化処理を行った場合のコロニー数を、実施例でMOI20で脱分化処理を行った場合のコロニー数と比較したグラフを図5に示す。比較例で得られたコロニーは、アルカリフォスファターゼ陽性、陰性を含めても数コロニーであった。比較例の結果を実施例の結果と比較すると、実施例の方法では、比較例の方法に比較して、iPS細胞樹立の効率が約100倍高いことが示された。[比較例2]本比較例では、実施例に記載の単核球集団からiPS細胞を作製する際、抗CD3抗体およびインターロイキン2の存在下で単核球集団を培養する工程が必要であることを示す。まず、実施例の記載に従い、末梢血から取得した単核球集団を抗CD3抗体結合ディッシュに播種し、インターロイキン2存在下で5日間培養した細胞を脱分化させてiPS細胞を樹立した抗CD3IL2群。一方、末梢血から取得した単核球集団を、抗CD3抗体の結合していないディッシュに播種し、インターロイキン2を含有しないKBM502培地を用いて5日間培養した細胞を脱分化させてiPS細胞を樹立した抗CD3-IL2-群。なお、抗CD3IL2群、抗CD3-IL2-群共に、単核球の脱分化処理は、単核球集団に、MOI3で、初期化因子を発現するセンダイウイルスを添加して行った。以上のiPS樹立工程において、センダイウイルスを添加した単核球数に対するアルカリフォスファターゼ陽性コロニー数の割合をiPS細胞樹立効率として算出したところ、図6に示すように、iPS細胞樹立効率は抗CD3-IL2-群では0であったが、抗CD3IL2群では0.016であった。このように、単核球集団からiPS細胞を作製するためには、抗CD3抗体およびインターロイキン2の存在下での培養工程が必要である。