"Hif1αcDNASEQIDNO:1中の下記の表16に記載されたSEQIDNO:2、3、および5乃至14の中で選択されたいずれか一つに該当するmRNAを標的とする15乃至30bpの二重鎖siRNAsmallinterferingRNA。<表1>前記siRNAは、SEQIDNO:6、10、および12からなる群より選択される一つ以上の塩基配列に該当するmRNAを標的とする、請求項1に記載のsiRNA。前記siRNAは、3’末端または5’末端または両末端に1乃至5ヌクレオチドntからなる突出部を含む、請求項1に記載のsiRNA前記siRNAは、下記の表17に記載されたsiRNA1乃至13および18乃至20からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項1に記載のsiRNA:<表2>SEQIDNO:27のセンス配列およびSEQIDNO:28のアンチセンス配列を含むsiRNA5、SEQIDNO:35のセンス配列およびSEQIDNO:36のアンチセンス配列を含むsiRNA9、SEQIDNO:39のセンス配列およびSEQIDNO:40のアンチセンス配列を含むsiRNA11、SEQIDNO:53のセンス配列およびSEQIDNO:28のアンチセンス配列を含むsiRNA18、SEQIDNO:54のセンス配列およびSEQIDNO:36のアンチセンス配列を含むsiRNA19、SEQIDNO:55のセンス配列およびSEQIDNO:40のアンチセンス配列を含むsiRNA20からなる群より選択される、請求項4に記載のsiRNA。前記siRNAは、一つ以上のリボ核酸の糖構造、または塩基構造、または前記リボ核酸間の結合部位が化学的に変形modificationされる、請求項1に記載のsiRNA。前記化学的変形は、バックボーンのホスホジエステル結合をボラノホスフェートboranophosphateまたはホスホロチオエートphosphorothioateで置換すること、およびリボース環riboseringの2’-OH位置にメチル基2’-O-methylまたはフルオロ基2’-fluoroを導入することからなる群より選択された1種以上である、請求項6に記載のsiRNA。前記ボラノホスフェートboranophosphateまたはホスホロチオエートphosphorothioateは、3’末端または5’末端または両末端に導入される、請求項7に記載のsiRNA。前記siRNAは、下記の表10に記載されたsiRNA21乃至50からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項6に記載のsiRNA:<表3>上記表10で、化学的変形modificationの表記法は次の通りであり:<表4>変形modificationの内容は次の通りであり、但し、mod1からmod7まではアンチセンス鎖の10番および11番位置の塩基には変形を加えず、mod1からmod10までの全てのsiRNAのセンスおよびアンチセンス鎖の3’末端にあるdTdTホスホジエステル結合がホスホロチオエート結合3’-dTdT、:Phosphorothioatebondで置換される:<表5>請求項1乃至9のうちのいずれか一項によるsiRNAを含む発現ベクター。前記発現ベクターは、プラスミド、アデノ随伴ウイルスadeno-associatedvirusベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、および癌細胞溶解性ウイルスoncolyticadenovirusベクターからなる群より選択される、請求項10に記載の発現ベクター。請求項1乃至9のうちのいずれか一項によるsiRNAを有効性分として含有する抗癌組成物。前記siRNAを核酸伝達体nucleicaciddeliverysystemとの複合体形態に含む、請求項12に記載の抗癌組成物。前記核酸伝達体は、ウイルス性ベクター、非ウイルス性ベクター、リポソーム、陽イオン性高分子、ミセルmicelle、エマルジョン、および脂質ナノ粒子solidlipidnanoparticlesからなる群より選択される、請求項13に記載の抗癌組成物。抗癌化学療法剤、または成長因子、成長因子受容体、下位信号伝達タンパク質、ウイルス性腫瘍誘発因子、および抗ガン剤耐性遺伝子からなる群より選択されるものの発現を阻害するsiRNAを追加的に含む、請求項12に記載の抗癌組成物。動物の生体から分離されたHif1αを発現する細胞を準備する段階と、請求項1乃至9のうちのいずれか一項によるsiRNAを前記生体から分離されたHif1αを発現する細胞と接触させる段階と、を含む、Hif1αの合成または発現を抑制する方法。動物の生体から分離されたHif1αを発現する癌細胞を準備する段階と、請求項1乃至9のうちのいずれか一項によるsiRNAを前記生体から分離されたHif1αを発現する癌細胞と接触させる段階と、を含む、癌細胞の成長を抑制する方法。請求項1乃至9のうちのいずれか一項によるsiRNAまたは請求項10の発現ベクターを有効性分として含有する薬学組成物。よって、本発明者らは本発明の配列特異性が高くて標的遺伝子の転写体に特異的に結合してRNAi効率性を増加させ、免疫毒性を誘発しないsiRNAを開発して本発明を完成した。本発明の一例は、Hif1α転写体塩基配列に相補的に結合してHif1αの合成および/または発現を特異的に阻害するsiRNAを提供する。また他の例は、前記siRNAを発現する発現ベクターを提供する。また他の例は、前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターを有効性分として含むHif1αの合成および/または発現阻害用薬学的組成物を提供する。また他の例は、前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターを有効性分として含む抗癌組成物を提供する。また他の例は、前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターをHif1αを発現する細胞と接触させて、Hif1αの合成および/または発現を抑制する方法および前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターのHif1αを発現する細胞でのHif1αの合成および/または発現抑制のための用途を提供する。また他の例は、前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターをHif1αを発現する癌細胞に接触させて癌細胞の成長を抑制する方法および前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターのHif1αを発現する癌細胞での癌細胞の成長抑制のための用途を提供する。また他の例は、前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターを治療的有効量で投与して癌を予防および/または治療する方法および前記siRNAまたはsiRNAを発現する発現ベクターの癌の予防および/または治療のための用途を提供する。本発明は、Hif1α転写体塩基配列に相補的に結合して細胞内でHif1αの合成および/または発現を抑制するsiRNA、これを含む医薬組成物、およびその用途を提供する。一実施例で、本発明はHif1αの合成および/または発現を特異的に阻害するsiRNAを提供する。また他の例で、本発明は前記Hif1αの合成および/または発現を特異的に阻害するsiRNAを有効性分として含むHif1α合成および/または発現抑制用薬学的組成物を提供する。また他の例で、本発明は前記Hif1αの合成および/または発現を特異的に阻害するsiRNAを有効性分として含む癌細胞成長阻害剤または癌の予防および/または治療用薬学的組成物抗癌組成物を提供する。本発明は、人を含む哺乳動物のHif1αmRNA、その選択的スプライシング形態alternativespliceform、および/または同一系統のHif1α遺伝子の発現を阻害する技術に関し、これは本発明で提供されるsiRNAの特定容量を患者に投与した時にターゲットmRNAが減少することによって成就され得る。以下、これをより詳しく説明する。前記Hif1αは、哺乳動物由来、好ましくは人または人と同一な系統のHif1αおよびそのスプライシング構造体であり得る。人と同一な系統とは、遺伝子またはmRNAが人のHif1α遺伝子またはこれから由来するmRNAと80以上の配列類似性を有する他の哺乳動物を意味し、具体的に、人、霊長類、げっ歯類などを含むことができる。本発明の一実施例で、Hif1αをコーディングするmRNAに該当するセンス鎖のcDNA配列はSEQIDNO:1であり得る。本発明によるsiRNAは、Hif1αのmRNAまたはcDNA例えば、SEQIDNO:1内部の連続する15乃至25bp、好ましくは18乃至22bpからなる領域、具体的に、SEQIDNO:2、3、および5乃至14からなる群より選択された1種以上の塩基配列cDNA上の塩基配列に該当するmRNA領域を標的とするものであり得る。前記好ましいcDNA上の標的領域を下記の表1に整理した。したがって、本発明の一実施例で、SEQIDNO:1のHif1αcDNA領域の中のSEQIDNO2、3、および5乃至14からなる群より選択された1種以上の塩基配列に該当するmRNA領域を標的とするsiRNAを提供する。例えば、SEQIDNO:6、10、および12からなる群より選択された塩基配列に該当するmRNA領域を標的とするsiRNAを提供する。本明細書で使用された‘標的mRNA’とは、人のHif1αmRNA、人と同一な系統のHif1αmRNA、その選択的スプライシング構造体を称す。具体的に、Human:NM001530、NM181054NM001530で塩基配列2203~2248が削除されたスプライシング形態、Musmusculus:NM0010431、Macacafascicularis:AB169332などが含まれる。したがって、本発明のsiRNAは、人または人と同一な系統のHif1αmRNAまたはその選択的スプライシング形態を標的とするものであり得る。本明細書で、‘mRNAまたはcDNA領域を標的とする’というのは、siRNAが前記mRNAまたはcDNA領域塩基配列の中の全部または一部、例えば塩基配列の85~100と相補的な塩基配列を有して、前記mRNAまたはcDNA領域に特異的に結合できることを意味する。本明細書で‘相補的’というのは、ポリヌクレオチドの両鎖が塩基対を形成することができるのを意味する。相補的ポリヌクレオチドの両鎖はワトソン-クリック方式で塩基対を形成して二重鎖を形成する。本発明で塩基Uが言及される場合、特別な言及がない限り塩基Tで置換可能である。本発明の薬学的組成物のHif1α合成および/または発現抑制効果と癌治療効果はHif1αの効果的な合成および/または発現抑制によって成就されるので、前記薬学組成物に有効性分として含有されるsiRNAは前記特定mRNA領域のうちの一つ以上を標的とする15~30bpの二重鎖siRNAであり得る。前記siRNAは突出部がない平滑blunt末端を有する対称構造であるか、または3’末端または5’末端または両末端に1~5個のヌクレオチドntの突出部を有する構造であり得る。前記突出部ヌクレオチドはいかなる配列でも関係がないが、dTデオキシチミジン2乃至4個、例えば2つを付けることができる。好ましい具体的な例で、前記siRNAはSEQIDNO:19乃至116、好ましくはSEQIDNO:19乃至22、25乃至44、および53乃至115のヌクレオチド配列からなる群より選択された1種以上のヌクレオチド配列を含むものであり得る。より具体的に、前記siRNAは下記の表2に示すsiRNA1乃至siRNA50、好ましくはsiRNA1、siRNA2、siRNA4、およびsiRNA13およびsiRNA18乃至siRNA50からなる群より選択された1種以上であり得る。上記表4において、mod1からmod7まではアンチセンス鎖の10番および11番位置の塩基には変形を加えず、mod1からmod10までの全てのsiRNAのセンスおよびアンチセンス鎖の3’末端にあるdTdTホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合3’-dTdT、:Phosphorothioatebondで置換する。前記siRNAはHif1α転写体mRNAtranscript塩基配列の特定標的領域に対する配列特異性が高くて、標的遺伝子の転写体に特異的に相補的結合してRNA干渉効率性が増加し細胞内でHif1αの発現および/または合成抑制効率に優れている。また、免疫誘発活性が最小化なされたことを特徴とする。前記のように、本発明で提供するsiRNAはSEQIDNO:1のHif1αcDNA領域の中のSEQIDNO:2、3、および5乃至14からなる群より選択された1種以上の領域に対するmRNAを標的とするsiRNA、好ましくはSEQIDNO:19乃至22、25乃至44、および53乃至115のヌクレオチド配列からなる群より選択された1種以上のヌクレオチド配列を含むsiRNA、さらに好ましくはSEQIDNO:19乃至22、25乃至44、および53乃至115からなる46種のsiRNAからなる群より選択された1種以上であり得る。前記siRNAはリボ核酸配列自体、またはこれを発現する組み換えベクター発現ベクター形態を全て含む概念である。前記発現ベクターはプラスミドまたはアデノ随伴ウイルスadeno-associatedvirus、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、癌細胞溶解性ウイルスoncolyticadenovirusなどからなる群より選択されるウイルスベクターであり得る。また、本発明による薬学的組成物は有効成分としてsiRNAと薬学的に許容される担体を含む場合を含む。前記薬学的に許容される担体はこの分野に通常使用される全ての担体を含み、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストリン、グリセロール、エタノールなどからなる群より選択された1種以上であり得るが、これに制限されるのではない。本発明のsiRNAまたは薬学的組成物の投与対象患者は哺乳動物、好ましくは人、猿、げっ歯類マウス、ラットであり得、特にHif1αの発現と関連する疾病や症状を有するか、Hif1α発現抑制を必要とする全ての哺乳動物、例えば、人であり得る。Hif1α抑制に有効な効果を得ながら免疫反応などの好ましくない副反応を最少化するために、組成物内のsiRNAの濃度または使用または処理濃度は、0.001乃至1000nM、好ましくは0.01乃至100nM、さらに好ましくは0.1乃至10nMとすることができるが、これに制限されるのではない。本発明によるsiRNAまたはこれを含む薬学的組成物によって治療可能な癌は、肺ガン、肝癌、大腸癌、すい臓癌、胃ガン、乳癌、卵巣ガン、腎臓ガン、甲状腺癌、食道癌、前立腺癌、および脳ガンなどの各種固形癌、皮膚癌、骨肉腫、軟部組織肉腫、神経膠腫、リンパ腫などからなる群より選択された1種以上であり得る。以下、siRNAの構造、設計過程およびこれを含む薬学的組成物をより詳しく説明する。本発明のsiRNAはRNAi機構によってHif1αmRNAの分解を起こしてHif1αタンパク質の発現を誘発しないか減少させる機能を果たす。一実施例で、siRNAはRNA干渉interferenceRNAi経路を誘発する低分子阻害RNA二重鎖smallinhibitoryRNAduplexesを意味する。具体的に、siRNAはセンスRNA鎖とそれに相補的なアンチセンス鎖を含み、両鎖が15~30bp、具体的には15~25bp、さらに具体的には15~22bpを含むRNA二重鎖である。siRNAは二重鎖領域を含み単一鎖がヘアピンhairpinまたはステムループstem-loop構造を形成する構造であるか、2つの分離された鎖の二重鎖であり得る。センスRNA鎖は標的遺伝子のmRNA配列のヌクレオチド配列と同一な配列を有し、センス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖が互いにワトソンとクリックの相補的な塩基配列結合によって二重鎖をなしている。siRNAのアンチセンス鎖はRISCRNA-InducedSilencingComplexに捕集されて、RISCがアンチセンス鎖と相補的な目標mRNAを確認した後、切断または翻訳translational阻害を誘導するようにする。一実施例で、二重鎖siRNAは3’末端、5’末端または両側末端に1乃至5ヌクレオチドの突出部overhangを有することができる。または、両末端が切断された形態の平滑末端bluntendを有するものであり得る。具体的には、US20020086356、およびUS7056704に開示されたsiRNAであり得る前記文献は本明細書に参照として含まれる。本発明の一実施例で、siRNAはセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が15~30bpの二重鎖であり、突出部がない平滑末端を有する対称構造、または少なくとも一つ、例えば1~5個のヌクレオチドの突出部を有する非対称構造であり得る。突出部ヌクレオチドはいかなる配列でも関係がないが、dTデオキシチミジン2乃至4個、例えば2つを付けることができる。前記アンチセンス鎖は生理学的条件でSEQIDNO:1のmRNAの標的領域に混成化する。‘生理学的条件での混成化’とは、siRNAのアンチセンス鎖がインビボinvivoでmRNAの特定標的領域と混成化することを意味する。具体的に、前記アンチセンス鎖はmRNAの標的領域、好ましくは前記表1のSEQIDNO:2、3、および5乃至14の塩基配列のうちの一つ以上と85以上の配列相補性を有するものであり得、さらに具体的に前記アンチセンス鎖はSEQIDNO:1の塩基配列内の連続する15乃至30bp塩基配列、好ましくは連続する15乃至25bp塩基配列、より好ましくは連続する15乃至22bpの塩基配列、さらに好ましくは前記表1のSEQIDNO:2、3、および5乃至14の塩基配列から選択された一つ以上に完全相補的な配列を含むものであり得る。また、一実施例で、siRNAは一鎖が他の鎖より短い非対称的な二重鎖構造であり得る。具体的に、19乃至21ヌクレオチドnucleotide、ntのアンチセンス鎖;および前記アンチセンスに相補的な配列を有する15乃至19ntのセンス鎖但し、アンチセンス鎖が19ntである場合、センス鎖は19ntではないから構成される二重鎖doublestrandのsiRNA分子smallinterferingRNAmoleculeであって、前記siRNAはアンチセンスの5’方向の末端が平滑末端bluntendであり、アンチセンスの3’末端に1~5ヌクレオチド突出部overhang例えば、dTn、n=1~5、好ましくは2~4の整数を有する非対称siRNAであり得る。具体的に、WO09/078685に開示されたsiRNAであり得る。siRNAを用いた治療で最も優先して考慮されなければならない点は、標的化された遺伝子の塩基配列で最も大きい活性を有する最適の塩基配列を選定することが必要である。具体的に、一実施例で、前臨床試験と臨床試験間の関連性を高めるために種間保存された配列を含むHif1αsiRNAをデザインするのが好ましい。また、一実施例で、RISCに結合するアンチセンス鎖がRISCとの結合力が高いようにデザインするのが好ましい。したがって、センス鎖とアンチセンス鎖の熱力学的安定性に差が出るようにデザインされて、センス鎖はRISCと結合せず、ガイド配列であるアンチセンス鎖がRISCと結合力を高めるようにする。具体的に、センス鎖のGC配列が60を超えず、センス鎖の5’末端から15番目および19番目の間にはアデニン/グアニン塩基が3つ以上あり、1乃至7番目の間にはG/C塩基が多いものであり得る。また、反復塩基配列によってsiRNA自体内部の塩基配列同士が結合してmRNAに相補的に結合する能力を下げることがあるので、4つ以上の反復塩基配列があるようにデザインすることは避けるのが好ましい。また、19個の塩基からなるセンス配列の場合、標的遺伝子のmRNAに結合して転写体分解をよく起こすためにはセンス鎖の5’末端から3番目、10番目、および19番目塩基配列がアデニンであり得る。また、本発明の一実施例で、siRNAは非特異的結合および免疫誘発活性が最小化されたことを特徴とする。siRNAによるインターフェロンなどの免疫反応誘導は主に抗原を提示する免疫細胞のエンドソームendosomeに存在するTLR7Toll-likereceptor-7を通じて起こり、siRNAのTLR7との結合bindingはGUが豊富な配列のように配列特異的に起こるので、TLR7によって認知されない配列を含むものであり得る。具体的に、5’-GUCCUUCAA-3’と5’-UGUGU-3’のような免疫誘発配列を有せず、Hif1α以外の他の遺伝子との相補性が最小70以下であり得る。本発明の一実施例のHif1αcDNA標的配列の例は前記表1に記載した配列のヌクレオチドを含む。表1の標的配列に基づいてsiRNAの長さを標的配列の長さよりさらに長いか短くデザインするか、前記DNA配列に相補的なヌクレオチドを加えるか除いてsiRNA配列をデザインすることができる。本発明の一実施例で、siRNAはセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が15~30bpの二重鎖であり、突出部がないか、少なくとも一つの末端が1~5ヌクレオチドの突出部を有し、前記アンチセンス鎖は生理学的条件でSEQIDNO:2、3、および5乃至14、好ましくはSEQIDNO:6、10、12に対応するmRNA領域に混成化する。つまり、前記アンチセンス鎖がSEQIDNO:2、3、および5乃至14、好ましくはSEQIDNO:6、10、12の相補的な配列を含む。つまり、本発明のHif1αsiRNAおよびこれを含む薬学的組成物は有害なインターフェロン反応を誘導しないながらHif1α遺伝子の発現を阻害させる特徴を有する。本発明はSEQIDNO:65’-CGAGGAAGAACTATGAACA-3’、SEQIDNO:105’-GCTGATTTGTGAACCCATT-3’、およびSEQIDNO:125’-GCATTGTATGTGTGAATTA-3’からなる群より選択された1種以上の配列に対応するmRNA領域に相補的に結合して細胞内でHif1αの発現を抑制する。本発明の具体例によるHif1αsiRNAは前記表2に記載した通りである。一実施例で、前記Hif1αsiRNAはSEQIDNO:27のセンス配列およびSEQIDNO:28のアンチセンス配列を含むsiRNA5、SEQIDNO:35のセンス配列およびSEQIDNO:36のアンチセンス配列を含むsiRNA9、SEQIDNO:39のセンス配列およびSEQIDNO:40のアンチセンス配列を含むsiRNA11、SEQIDNO:53のセンス配列およびSEQIDNO:28のアンチセンス配列を含むsiRNA18、SEQIDNO:54のセンス配列およびSEQIDNO:36のアンチセンス配列を含むsiRNA19、SEQIDNO:55のセンス配列およびSEQIDNO:40のアンチセンス配列を含むsiRNA20からなる群より選択される1種以上であり得る。ノックダウンHif1α発現抑制は、定量PCRqPCR増幅、bDNAbranchedDNAアッセイassay、ウェスタンブロット、ELISAなどの方法でmRNAまたはタンパク質水準の変化を測定して確認できる。本発明の一実施例で、リポソーム複合体を製造して腫瘍細胞株に処理した後、リボ核酸媒介による発現干渉現象をmRNA段階でbDNA測定法を用いて確認できる。本発明のsiRNA配列は、Hif1αの合成または発現を効果的に阻害するだけでなく、免疫誘発活性が低いという特徴を有する。本発明の一実施例で、免疫毒性は、人の末梢血単核細胞peripheralbloodmononuclearcells:PBMCにsiRNA-DOTAPN-[1-2,3-Dioleoyloxypropyl]-N,N,N-trimetylammoniummetylsulfate複合体complexを処理した後、培養液中に遊離されたサイトカインであるインターフェロンアルファおよびガンマINF-αおよびINF-γ、腫瘍壊死因子Tumornecrosisfactor-α:TNF-α、インターロイキン-12Interleukin-12、IL-12などの増加有無を測定して確認できる。siRNAは自然に存在する変形されないリボ核酸単位構造を有することができ、一つ以上のリボ核酸の糖構造や塩基構造、リボ核酸間の結合部位が一つ以上の化学的変形modificationを有するように合成されるなどの化学的に変形されたものであり得る。前記のようなsiRNAの化学的変形を通じて、siRNAの本来のRNAi能力に影響を与えず、ヌクレアーゼnucleaseに対する抵抗性増進、細胞内吸収uptake増加、細胞標的化ターゲット特異性向上、安定性増加、またはインターフェロン活性減少、免疫反応およびセンスsense効果のようなオフターゲット効果off-targeteffect減少などの効果を得ることができる。siRNAの化学的変形方法は特に制限されず、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する当業者であれば当該技術分野に公知された方法を用いて所望の方式のとおりに前記siRNAを合成し変形させることができるAndreasHenschel、FrankBuchholz1andBiancaHabermann2004DEQOR:awebbasedtoolforthedesignandqualitycontrolofsiRNAs.NucleicAcidsResearch32WebServerIssue:W113-W120。siRNAの化学的変形の一例として、siRNAセンスまたはアンチセンス鎖のホスホジエステル結合をボラノホスフェートboranophosphateまたはホスホロチオエートphosphorothioateで置換して核酸分解に対する抵抗性を高めることができる。一例として、siRNAセンスまたはアンチセンス鎖の3’末端または5’末端または両末端、好ましくはRNAの終結位置、例えば、3’末端突出部例えばdTn、n=1~5、好ましくは2~4の整数にのみ導入することができる。他の一例として、siRNAセンスsenseまたはアンチセンス鎖の5’末端、3’末端、または両末端にENAEthylenebridgenucleicacid或いはLNALockednucleicacidを導入する方法があり、好ましくはsiRNAセンスsense鎖の5’末端に導入することができる。これによってRNAi能力に影響を与えずsiRNA安定性を増加させ免疫反応および非特異的抑制効果を減らすことができる。また他の一例として、リボース環riboseringの2’-位置にある-OHヒドロキシ基を-NH2アミノ基、-C-アリルアリル基、-Fフルオロ基、または-O-MeまたはCH3、メチル基で置換する化学的変形を加えることができる。例えば、センス鎖の1番および2番核酸のリボース環において2’-OHを2’-O-Meで置換するか、アンチセンス鎖の2番核酸のリボース環において2’-OHを2’-O-Meで置換、またはグアニンGまたはウリジンUを含む一部ヌクレオチドでリボース環の2’-OHを2’-O-Meメチル基または2’-Fフルオロ基で置換することができる。上述の化学的変形以外にも多様な化学的変形を加えることができ、このような化学的変形はある一つの形態の変形のみが行われることもでき、様々な化学的変形が共に行われることもできる。本発明の一例で、化学的変形は前記表4の化学的変形のうちの一つであり得、表4において、mod1からmod7まではアンチセンス鎖の10番および11番位置の塩基には変形を加えず、mod1からmod10までの全てのsiRNAのセンスおよびアンチセンス鎖の3’末端にあるdTdTホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合3’-dTdT、:Phosphorothioatebondで置換することができる。前記化学的変形において、siRNA二重鎖構造を安定化させると同時に、遺伝子発現阻害活性を減少させないのが好ましいので、最小限の変形が好ましい。また、siRNAにコレステロール、ビオチン、細胞浸透性質を有するペプチドcellpenetratingpeptideのようなリガンドligandをセンス鎖の5’-または3’-末端に付けるのも可能である。本発明のsiRNAは、化学的合成、インビトロinvitro転写またはダイサーDicerやその他類似の活性を有するヌクレアーゼで長い二重鎖RNAを切断して製造することができる。または、前記のように、siRNAをプラスミドやウイルス性発現ベクターなどを通じて発現させて使用することができる。siRNA特定配列がインターフェロンを誘導するかどうかを樹枝状細胞を含む人の末梢血単核細胞peripheralbloodmononuclearcells:PBMCで実験的に確認した後、免疫反応を誘発しない配列を選別して候補siRNA配列に選定することができる。以下、前記siRNAの伝達のための薬物伝達システムDDSを説明する。siRNAの細胞内伝達効率を高めるためには、核酸伝達体nucleicaciddeliverysystemが活用できる。細胞内に核酸物質を伝達するための核酸伝達体にはウイルス性ベクター、非ウイルス性ベクター、リポソーム、陽イオン性高分子、ミセルmicelle、エマルジョン、脂質ナノ粒子solidlipidnanoparticlesなどがある。ウイルスベクターviralvectorは伝達効率が高くて持続時間が長い利点がある。前記ウイルスベクターにはレトロウイルスベクターretroviralvector、アデノウイルスベクターadenoviralvector、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターadeno-associatedviralvector、癌細胞溶解性ウイルスベクターなどが含まれる。非ウイルスベクターnonviralvectorはプラスミドを含むことができる。その以外にもリポソーム、陽イオン性高分子、ミセルmicelle、エマルジョン、脂質ナノ粒子solidlipidnanoparticlesなどの多様な剤形が使用される。核酸伝達のための陽イオン性高分子にはキトサン、アテロコラーゲンatelocollagen、陽イオン性ポリペプチドcationicpolypeptideなどのような天然高分子とポリL-リシンpolyL-lysin、線形または分枝型PEIpolyethyleneimine、シクロデキストリン系列多価陽イオンcyclodextrin-basedpolycation、デンドリマーdendrimerなどのような合成高分子が含まれる。本発明のsiRNAまたはsiRNAと核酸伝達体との複合体薬学的組成物は、癌の治療のためにインビボinvivoまたはエクスビボexvivo上で細胞内に導入できる。下記の実施例で確認できるように、本発明のsiRNAまたはsiRNAと核酸伝達体との複合体を細胞内に導入すると、標的タンパク質であるHif1αの発現を選択的に減少させて癌の生成に関与するHif1αの発現が抑制され癌細胞が死滅して癌の治療が可能になる。本発明のsiRNAまたはこれを含む薬学的組成物は、局所、経口または非経口的などに投与するために製剤化することができる。具体的に、siRNAの投与は、目の粘膜、膣、または肛門内投与を含む局所投与、または肺、気管支、鼻腔、外皮、内皮投与、静脈、動脈、皮下、腹腔、筋肉、頭蓋脳硬膜または脳室などの非経口投与、または経口投与などの経路を通じて行われ得る。局所投与のために、siRNAまたはこれを含む薬学的組成物は、パッチと軟膏、ローション、クリーム、ジェル、滴剤、座薬、スプレー、溶液、パウダーなどの形態に製剤化できる。非経口的投与、脳硬膜或いは脳室内投与のために、siRNAまたはこれを含む薬学的組成物は、バッファー、希釈剤、透過促進剤、その他通常薬剤学的に使用可能な伝達体或いは賦形剤のような適切な添加剤を含有する滅菌水溶液を含むことができる。また、本発明のsiRNAまたはこれを含む薬学的組成物は、siRNAを注射用組成物と混合して腫瘍が発生した部位に注射形態で投与するか、ゲル組成物または経皮吸収用粘着組成物と混合して、直接患部に塗ったり付けて経皮経路で投与することができるように実現するのが好ましい。前記注射用組成物は特別な制限はないが、等張性水溶液または懸濁液形態であるのが好ましく、滅菌処理、および/または補助剤例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤溶液促進剤、浸透圧調節のための塩、緩衝剤および/またはリポソーム製剤を含有することができる。前記ゲル組成物はカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、アクリル酸重合体、カルボポールcarbopolなどの通常のゲル製剤と薬学的に許容される担体および/またはリポソーム製剤を含有し、前記経皮吸収用粘着組成物は有効成分層が粘着剤層、皮脂吸収のための吸着層および治療薬物層を含み、治療薬物層は薬学的に許容される担体および/またはリポソーム製剤を含有するものであり得るが、これに制限されるのではない。また、本発明の癌治療用薬学的組成物は、Hif1αの発現を抑制するsiRNA以外に従来に公知された抗癌化学療法剤を追加的に含むことによって、併用効果が期待できる。本発明のHif1αの発現を抑制するsiRNAと併用投与が可能な抗癌化学療法剤は例えば、シスプラチンcisplatin、カルボプラチンcarboplatin、オキサリプラチンoxaliplatin、ドキソルビシンdoxorubicin、ダウノルビシンdaunorubicin、エピルビシンepirubicin、イダルビシンidarubicin、ミトキサントロンmitoxantrone、バルビシンvalubicin、クルクミンcurcumin、ゲフィチニブgefitinib、エルロチニブerlotinib、セツキシマブcetuximab、ラパチニブlapatinib、トラスツズマブtrastuzumab、スニチニブsunitinib、ソラフェニブsorafenib、ベバシズマブbevacizumab、ボルテゾミブbortezomib、テムシロリムスtemsirolimus、エベロリムスeverolimus、ボリノスタットvorinostat、イリノテカンirinotecan、トポテカンtopotecan、ビンブラスチンvinblastine、ビンクリスチンvincristine、ドセタキセルdocetaxel、パクリタキセルpaclitaxelなどからなる群より選択された1種以上であり得る。また、このような化学療法剤との併用と共にまたは別個に、Hif1αsiRNAと共に各種成長因子VEGF、EGF、PDGFなど、成長因子受容体および下位信号伝達タンパク質、ウイルス性腫瘍誘発因子、抗ガン剤耐性遺伝子の発現を阻害するsiRNAと併用して癌の様々な経路を同時に遮断することによって、抗癌効果を極大化させることができる。本発明のまた他の例は、Hif1αの合成および/または発現抑制のための有効量の前記Hif1αsiRNAをHif1αを発現する細胞に接触させる段階を含むHif1α発現および/または合成を抑制する方法を提供する。前記細胞はHif1αを発現する全ての細胞であって、例えば癌細胞であり得、動物、好ましくは哺乳動物、例えば、人、猿、げっ歯類マウス、ラットなどなどの生体内細胞であるか、生体から分離された細胞であり得る。例えば、前記Hif1α発現および/または合成を抑制する方法は、動物の生体から分離されたHif1αを発現する細胞を準備する段階;および請求項1乃至9のうちのいずれか一項によるsiRNAを前記生体から分離されたHif1αを発現する細胞と接触させる段階を含むことができる。前記Hif1αを発現する細胞は生体から分離されたHif1αを発現する細胞を人工的に培養したものであり得る。また他の例は、Hif1αの合成および/または発現抑制のための有効量の前記Hif1αsiRNAをHif1αを発現する癌細胞に接触させて癌細胞の成長を抑制する方法を提供する。前記癌細胞は動物、好ましくは哺乳動物、例えば、人、猿、げっ歯類マウス、ラットなどなどの生体内に存在する細胞であるか、生体から分離された細胞であり得る。例えば、前記癌細胞の成長を抑制する方法は、動物の生体から分離されたHif1αを発現する癌細胞を準備する段階;および請求項1乃至9のうちのいずれか一項によるsiRNAを前記生体から分離されたHif1αを発現する癌細胞と接触させる段階を含むことができる。また他の例は、前記治療学的有効量のHif1αsiRNAを患者に投与する段階を含む癌の予防および/または治療方法を提供する。前記癌の予防および/または治療方法は、前記投与段階前に癌の予防および/または治療が必要な患者を確認する段階を追加的に含むことができる。本発明によって治療可能な癌は、大部分の固形癌肺ガン、肝癌、大腸癌、すい臓癌、胃ガン、乳癌、卵巣ガン、腎臓ガン、甲状腺癌、食道癌、前立腺癌、脳ガン、皮膚癌、骨肉腫、軟部組織肉腫、神経膠腫、リンパ腫などからなる群より選択された1種以上であり得る。前記患者は哺乳動物、好ましくは人、猿、げっ歯類マウス、ラットなどなどであり得、特にHif1αの発現と関連する疾病や症状例えば、癌を有するか、Hif1α発現抑制を必要とする全て哺乳動物、例えば、人であり得る。本発明によるsiRNAの有効量は、Hif1α発現または合成抑制またはこれによる癌細胞成長阻害および癌治療効果を得るために投与に要求される量を意味する。したがって、疾患の種類、症状の程度、投与されるsiRNAの種類、剤形の種類、患者の年令、体重、一般健康状態、性別および食餌、投与時間、投与経路および治療期間、同時使用される化学抗ガン剤などの薬物をはじめとする多様な因子によって適切に調節できる。例えば、1日投与容量は0.001mg/kg~100mg/kgであることが良く、前記容量は一度に全て投与されるか、数回にわたって分量して投与できる。本発明のHif1α転写体mRNAの塩基配列に相補的なsiRNAはリボ核酸媒介干渉現象RNA-mediatedinterference、RNAiによって癌細胞に共通的に発現されるHif1αの発現を抑制して癌細胞を死滅させるので、優れた抗癌効果を発揮することができる。また、免疫反応を最小限に誘発することができる長所がある。本発明で採択したリボ核酸媒介干渉現象を用いたRNAi技術が高い活性と精密な遺伝子選択性によってHif1αの発現を選択的に阻害する最も効果的な方法として提示されており、既存の大部分の薬物が既に発現されたタンパク質の機能を抑制するのに反して、人体に存在する遺伝子調節naturalgenesilencingpathway機構であるRNAi技術は特定疾病誘発タンパク質の発現を選択的に阻害することができるだけでなく、タンパク質が合成される前段階であるmRNAを分解するので、副作用を誘発せず癌の成長と転移を抑制してより根源的な癌治療技術になることと期待する。また、siRNAと共に化学療法を併用して化学療法剤に対する敏感度を高めることによって治療効果を極大化し、副作用を減少させることができるだけでなく、Hif1αsiRNAと共に各種成長因子VEGF、EGF、PDGFなど、成長因子受容体および下位信号伝達タンパク質、ウイルス性腫瘍誘発因子、抗ガン剤耐性遺伝子の発現を阻害するsiRNAと併用して癌の様々な経路を同時に遮断することによって抗癌効果を極大化することができる付加的な利点がある。以下、本発明を実施例によって詳しく説明する。但し、下記の実施例は本発明を例示するものに過ぎず、本発明の内容が下記の実施例に限定されるのではない。実施例1.Hif1α発現抑制用siRNAが結合できるターゲット塩基配列のデザインsiDesignCenterDharmacon、BLOCK-iTTMRNAiDesignerInvitrogen、AsiDesignerKRIBB、siDirectUniversityofTokyoおよびsiRNATargetFinderAmbionのsiRNAデザインプログラムを用いてHif1αmRNA配列NM001530の中でsiRNAが結合できる標的塩基配列を導出した。下記の表5に標的塩基配列としてcDNA配列で表現された配列を示した。実施例2.Hif1α発現抑制用siRNAの製造実施例1でデザインした標的塩基配列に結合できるsiRNA20種を三千里製薬韓国に合成依頼して使用した。20種のsiRNAの配列は表6のようにし、両鎖の3’末端にdTdTを含むようにした。実施例3.siRNAを用いた腫瘍細胞株でのHif1αの発現抑制試験前記実施例2で製造したそれぞれのsiRNAを用いて、腫瘍細胞株である人間肺ガン細胞株A549、ATCCを形質転換させ、形質転換された腫瘍細胞株でHif1αの発現様相を測定した。実施例3-1.腫瘍細胞株の培養米国種菌協会AmericanTypeCultureCollection、ATCCから入手した人間肺ガン細胞株A549を10v/v牛胎児血清、ペニシリン100units/mlおよびストレプトマイシン100ug/mlを含むRPMI培養培地GIBCO/Invitrogen、USAで37°C、5v/vCO2の条件下に培養した。実施例3-2.Hif1α発現抑制用siRNAとリポソームの複合体製造実施例1でデザインして合成製造したsiRNA1乃至20の20個のsiRNAに対してHif1α発現抑制用siRNAとこれを伝達するリポソームリポフェクタミン2000Lipofectamine2000、Invitrogenとの複合体を製造した。siRNA10nMを含むOpti-MEM培地Gibco25ulとウェルwell当り0.4ulのリポフェクタミン2000Lipofectamine2000、Invitrogenを含むOpti-MEM培地を同一体積で混合し常温で20分間反応させてsiRNAとリポソームとの複合体を製造した。実施例3-3.Hif1αターゲットsiRNAを用いた腫瘍細胞株でのHif1αmRNA発現抑制前記実施例3-1で培養した肺ガン細胞株を96ウェル-プレートにそれぞれウェル当り細胞を104細胞数ずつ分注seedingした。24時間後に培地を除去し、Opti-MEM培地をウェルwell当り50μlずつ添加した。前記実施例3-2で製造したsiRNAとリポソームの複合体組成物50μlを添加して24時間37°C、5v/v二酸化炭素が維持される細胞培養器に培養した。Hif1αmRNA発現が50阻害される薬物濃度であるIC50数値の計算のためにA549細胞株にそれぞれのsiRNAを0.001nM乃至10nMの間の7個の濃度範囲で処理した。実施例3-4.Hif1αmRNAの定量分析肺ガン細胞siRNAリポソーム複合体によって発現抑制されたHif1αmRNAの発現程度はQuantigene2.0systemPanomics社を用いたbDNA測定法で測定した。siRNAリポソーム複合体を細胞に24時間処理した後、mRNAを定量した。製造社のプロトコルの通り96-ウェルプレート1ウェルwell当り100μlのLysismixturePanomics、Quantigene2.0bDNAkitを処理して50°Cで1時間細胞を溶解させた。Panomics社でHif1αのmRNAに特異的に結合するプローブPanomics、Cat.SA-11598を購買して、得られた細胞サンプル中の80μlと共に96ウェルプレートに混合した。mRNAがウェルに固定されプローブと結合できるように55°Cで16時間乃至20時間反応させた。その次に、各ウェルにキットの増幅作用試薬100μlを入れて55°Cで反応させ洗浄washする過程を2段階行った。3番目増幅作用試薬100μlを入れ50°Cで反応させた後、発光を誘導する試薬を100μl入れ5分後に蛍光および発光測定器Bio-Tek、Synergy-HTに入れて発光値を測定してリポフェクタミンlipofectamineのみ処理した対照群の発光値100に対する百分率値を算出した。この百分率は対照群と各siRNAを処理した試験群でのHif1αmRNAの発現率を示す。人間肺ガン細胞株であるA549でリポソームのみ処理した対照群の発光luciferin測定値に対比して10nMのHif1αsiRNAリポソーム複合体を処理した実験群の発光luciferin測定値の相対的な値を計算して、siRNAに形質転換させたA549細胞株で発現されるHif1αmRNAの水準を測定し、その結果を下記の表7に示した。表7でSEQIDNO:2、3および5乃至14siRNA番号1、2、および4乃至13は本発明の実施例に該当し、SEQIDNO:4、および15乃至18siRNA番号3、および14乃至17は比較例として提示されたものである。表7に示されているように、総17種のsiRNAによって形質転換された細胞株でHif1αmRNAの発現程度を見てみた結果、本発明の13種のsiRNAが比較例の4種のsiRNAより優れた抑制効果を示した。具体的に、本発明の13種のsiRNAの中でHif1α発現の抑制率が40以下発現率が60以上であるsiRNAが1種であり、抑制率が40超過70以下発現率が30以上60未満であるsiRNAが9種、抑制率が70以上発現率が30未満であるsiRNAが3種であるのを確認した。前記表7で優れた遺伝子発現抑制効果を有する3種のsiRNAであるsiRNA5、9、および11番に対してA549細胞株を用いて10nMから0.001nMの範囲でHif1αmRNA発現減少効果を調査してIC50を求めて下記の表8に示した。IC50数値はSpectraMax190ELISA機器モデルで支援されるSofrMaxprosoftwareBiotekSynergy-HT社ELISA機器モデルで支援されるKC4ソフトウェアKC4softwareを用いて計算した。siRNA5、9および11のIC50数値をsiRNA3および16と比較した時、4乃至500倍程度優れていることが分かる。実施例3-5.非対称構造siRNAのHif1αmRNA抑制効果肺ガン細胞SEQIDNO:6、10、または12を標的とする、対称構造のsiRNA5、9、および11とセンス鎖がアンチセンス鎖より短い非対称構造のsiRNAであるsiRNA18、19、および20をそれぞれ10nMの濃度で肺ガン細胞株であるA549にそれぞれ処理し、Hif1αmRNA抑制効能を調査して下記の表9に示した。実験方法は実施例3-4と同様な方式とした。表9に示されているように、SEQIDNO:6、10、および12を標的とする場合、非対称構造siRNAでも対称構造siRNAと類似の程度にHif1α発現を効果的に抑制することが分かった。実施例4.siRNAの化学的構造変形siRNA番号5、9、および12の化学的構造変形体を製作した。表10に示されているように、siRNAの化学的構造変形は10個の形態に製作し、2’-O-Me、ホスホロチオエート結合、2’-Fを用いた化学的構造変形、或いは末端にENAEthylenebridgenucleicacidを導入した化学的構造変形をした。デザインした化学的構造変形siRNAは三千里製薬韓国に合成依頼して使用した。但し、mod1からmod7まではアンチセンス鎖の10番および11番位置の塩基には変形を加えず、mod1からmod10までの全てのsiRNAのセンスおよびアンチセンス鎖の3’末端にあるdTdTホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合3’-dTdT、:Phosphorothioatebondで置換する。実施例5.化学的構造変形siRNAの腫瘍細胞株でのmRNA抑制効果実施例4の化学的構造変形されたsiRNAの腫瘍細胞株でmRNA抑制効能が維持されるかを確認しようと、化学的構造変形しないsiRNAsiRNA5、9、および11と構造変形したsiRNA21乃至50の30個のsiRNAを実施例3-2のようにリポソーム複合体を製造して、人間肺ガン細胞株A549、ATCCを形質転換させ10nMsiRNA、形質転換された腫瘍細胞株でHif1αの発現様相を実施例3-4と同一に定量分析し、その結果を下記の表13に示した。化学的構造変形をしない元のsiRNAはmod0と表示した。表13に示されているように、siRNA5、9、11を化学的構造変形させた時にも腫瘍細胞株でmRNA抑制効能が維持されることが分かった。特に、mod5、mod6、mod7、mod8、mod9、およびmod10の場合、化学的構造変形しないsiRNAと比較する時、同等以上の効能を示した。実施例6.siRNAによる免疫活性サイトカイン遊離抑制効果本発明のsiRNAが免疫毒性があるかを評価するために下記のような過程で実験を行った。実施例6-1.末梢血単核細胞準備人の末梢血単核細胞PBMCは、試験当日に健康な支援者から供給を受けた血液からHistopaque1077試薬Sigma、StLouis、MO、USAを使用して密度勾配遠心法densitygradientcentrifugationを用いて分離したBoyumA.Seperationofleukocytesfrombloodandbonemarrow.ScandJClinLabInvest21Suppl97:77、1968。血液は1:1比率重量基準で互いに混ざらないように15mlチューブに分注されたHistopaque1077試薬の上に慎重に入れた。400xg、常温で30分間遠心分離した後、滅菌ピペットでPBMCが含まれている層のみを分離した。分離されたPBMCが入っているチューブに10mlのリン酸塩緩衝液Phosphatebufferedsaline:PBSを入れた後、250xgで10分間遠心分離し、5mlのPBSで2回さらにPBMCを洗浄した。分離されたPBMCは血清が含まれない培地であるx-vivo15培地Lonza、Walkersville、MD、USAで4x106細胞/mlになるように浮遊させた後、96-ウェルプレートにウェルwell当り100ulずつ分注した。実施例6-2.siRNA-DOTPA複合体製造前記実施例6-1で準備されたPBMC細胞に分注するためのsiRNA-DOTPA複合体を次のような方法で製造した。DOTAPトランスフェクションtransfection試薬ROCHE、Germany5ulとx-vivo15培地45ulおよびsiRNA番号5、9、11のmod1乃至mod10の化学的変形体1ul50uMとx-vivo15培地49ulをそれぞれ混合して製造した後、10分間室温で反応させた。10分後にDOTAPが含まれている溶液とsiRNAが含まれている溶液を混合した後、20分間20乃至25°C温度で反応させてsiRNA-DOTAP複合体を製造した。実施例6-3.細胞の培養実施例6-1の分注されたPBMC培養液100ulに実施例6-2の方法によって製造されたsiRNA-DOTAP複合体をウェル当り100ulずつ添加した後siRNA最終濃度250nM、37°CのCO2細胞培養器で18時間培養後培養した。対照群としてsiRNA-DOTAP複合体を処理しない細胞培養群およびsiRNAを含まないままDOTAPのみが処理された細胞培養群を使用し、陽性対照群としてはsiRNAの代わりに免疫反応を誘発すると知られた物質であるPolyI:CPolyinosinic-polycytidylicacidpostassiumsalt、Sigma、USAおよびsiApoB-1siRNAsenseGUCAUCACACUGAAUACCAAUSEQIDNO:117、アンチセンスantisense:AUUGGUAUUCAGUGUGAUGACAC、:5’ホスフェートphosphatesSEQIDNO:118、三千里製薬を前記実施例6-2と同様な方法でDOTAPと複合体を製造して処理した細胞培養群を使用した。培養後に細胞上層液のみを分離した。実施例6-4.免疫活性の測定免疫毒性程度を確認するために、前記実施例6-3のようにsiRNA-DOTAP複合体を末梢血単核細胞PBMCに処理して遊離されるサイトカインを定量した。上層液内に含まれているインターフェロンアルファINF-αおよびインターフェロンガンマINF-γ、腫瘍壊死因子TNF-α、およびインターロイキン-12IL-12の含量をProcartaCytokineassaykitAffimetrix、USAを用いて測定した。つまり、サイトカインcytokineに対する抗体が付着されたビードantibodybead50ulをフィルタープレートfilterplateに移して洗浄緩衝液washbufferで1回洗浄した後、50ulのPBMC培養液の上層液およびサイトカインcytokine標準液を分注して常温で60分間500rpmで振りながら培養した。前記サイトカインに対する抗体が付着されたビード、洗浄緩衝液、サイトカイン標準液などの測定器具および試料は全て前記ProcartaCytokineassaykitに含まれたものを使用した。以後、洗浄緩衝液で1回洗浄し、キット内に含まれている検出用detection抗体25ulを分注して500rpmで振りながら30分間常温で反応させた。再び減圧下に反応液を除去して洗浄した後、キット内に含まれているストレプトアビジン-PEstreptavidinphycoerythrin50ulを分注して500rpmで振りながら常温で30分間反応させた後、減圧下に反応液を除去して3回洗浄をする段階を経た。120ulの測定緩衝液readingbufferを分注して500rpmで5分間振った後にルミネックス機器Bioplexluminexsystem、Biorad、USAを用いて各サイトカインビードcytokinebead別PE蛍光程度を測定した。PBMCにsiRNAをそれぞれ250nM処理した時、遊離された細胞培養液中のサイトカイン濃度pg/mlを下記の表14に示した。試料中のサイトカインCytokine濃度は1.22~20,000pg/ml範囲の標準検量曲線から計算した。表14で‘Medium’は何も処理しない対照群、‘DOTAP’はDOTAP単独処理群、‘POLYI:C’または‘siApoB-1は陽性対照物質処理群、‘siRNA5’はSEQIDNO:27および28のsiRNAを処理した試験群、‘siRNA9’はSEQIDNO:35および36のsiRNAおよび‘siRNA12’はSEQIDNO:39および40のsiRNAを表示されたように化学変形させた試験群を示す。前記で、化学的構造変形されたmod1~10の場合、インターフェロンアルファの数値が低い増加のみを示し、その他残りのサイトカインは大きい変化がないか非常に低い水準の増加のみを示した。インターフェロンアルファの数値がmod1-mod2-mod3、4、5、7、8、9の順に顕著に減少してDOTAP単独処理群の水準に落ちるので、本発明のsiRNA番号5、9および11の化学的構造変形体は免疫活性を減少させることができる。実施例7.化学的構造変形siRNAのセンス鎖によるオフターゲット効果off-targeteffectの抑制効果本発明のsiRNAの化学的構造変形を通じてセンス鎖によるオフターゲットoff-target効果を除去することができるかを下記のような過程で実験を行った。センス鎖によるオフターゲットoff-target効果が起こる程度は、センス鎖がRISCと結合してセンス鎖と相補的な塩基配列を有する配列に作用する場合に、センス鎖の相補的な配列を有するホタルルシフェラーゼプラスミドによって発現されるルシフェラーゼ量がsiRNAを処理しない細胞に比べて減少するのを確認することによって分かる。また、アンチセンスの相補的な配列を有するホタルルシフェラーゼプラスミドを処理した細胞に対してはsiRNAによって示されるルシフェラーゼの減少程度でアンチセンスによるsiRNAの効能が化学的構造変形をした後にどの程度維持されるかが確認できる。実施例7-1.ホタルルシフェラーゼベクターfireflyluciferasevector準備ホタルルシフェラーゼを発現するpMIR-REPORTAmbionベクターにそれぞれのsiRNAに対して、アンチセンス鎖に相補的な配列およびセンス鎖に相補的な配列をそれぞれクローニングして入れて2つの異なるプラスミドplasmidをそれぞれ準備した。前記相補的な配列はコスモジーンテックに依頼して両端にSpeIとHindIIIのenzymesiteoverhangを有するようにデザインして合成した後に、pMIR-REPORTベクターのSpeIとHindIIIenzymesiteを用いてクローニングして入れた。実施例7-2.siRNAの化学的構造変形を通じたオフターゲットoff-target効果の抑制測定前記実施例7-1で準備された、siRNAのセンスとアンチセンス各鎖の相補的な配列が含まれているプラスミドを用いてsiRNAのアンチセンスとセンス鎖の効能程度を測定した。具体的に、実施例7-1で準備されたホタルルシフェラーゼベクターfireflyluciferasevectorをsiRNAと共にA549細胞ATCC内にトランスファクションtransfectionさせた後に発現されるホタルルシフェラーゼの量をルシフェラーゼアッセイluciferaseassayで測定した。トランスフェクションtransfection一日前にA549細胞株を24ウェルプレートwellplateに6104cells/wellで準備した。相補的な塩基配列がクローニングされたルシフェラーゼベクター100ngをsiRNA10nMと補正ベクターであるレニラルシフェラーゼrenillaluciferaseを発現するpRL-SV40ベクター2ng、Promegaと共にリポフェクタミン2000lipofectamine2000Invitrogenを用いてOpti-MEM培地Gibcoでトランスフェクションさせた。細胞はトランスフェクション24時間後に、自然型溶解バッファーPassivelysisbuffer、Promegaを用いて溶解lysisさせた後、デュアルルシフェラーゼアッセイキットDualluciferaseassaykit、Promegaでルシフェラーゼ活性luciferaseactivityを測定した。ホタルルシフェラーゼ測定値はレニラルシフェラーゼrenillaluciferase測定値でトランスフェクション効率を補正した後、siRNAなしに各鎖の相補的な配列をクローニングして入れたホタルルシフェラーゼベクターとレニラルシフェラーゼベクターのみトランスフェクションさせた対照群の補正されたルシフェラーゼ数値100に対する百分率値を算出して下記表15に示した。化学的構造変形をしない元のsiRNAはmod0と示した。前記表15に示されているように、人の肺ガン細胞株ではsiRNA11の場合に化学的構造変形をしないsiRNAmod0それ自体でもセンス鎖によるオフターゲットoff-target効果がなかった。しかし、siRNA5、9番のセンス鎖に相補的な配列を有するホタルルシフェラーゼの活性が減少することを通じて若干のセンス鎖によるオフターゲットoff-target効果を示したが、化学的構造変形をさせた場合に特に、siRNA5番はmod3で、siRNA9番はmod2でオフターゲットoff-target効果は減少し、アンチセンスターゲットantisensetargetに対する効果は維持された。"