病原性ウイルス、細菌、菌カビもしくは寄生体から、またはガン細胞もしくは腫瘍細胞から、またはアレルゲンから、またはアミロイドペプチドタンパク質から選択される抗原、ならびに効果的な免疫増強量の:13-O-脱アシル化モノホスホリルリピドAもしくはモノホスホリルリピドAと2顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSFを含有するアジュバント組み合わせ物を含むことを特徴とする抗原性組成物。選択される抗原が、タンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントである、請求項1に記載の抗原性組成物。3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドAが安定な水中油型エマルションの状態で使用される請求項1または2に記載の抗原性組成物。さらに希釈剤またはキャリアーを含んで成る、請求項1~3のいずれかに記載の抗原性組成物。選択される抗原がヒト免疫不全ウイルスHIVに由来する請求項1~4のいずれかに記載の抗原性組成物。選択されるHIV抗原がHIVタンパク質、該タンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたは断片である、請求項5に記載の組成物。HIVペプチドがのアミノ酸配列を有する、請求項6に記載の抗原性組成物。選択される抗原がシミアン免疫不全ウイルスSIVに由来する、請求項1~4のいずれかに記載の抗原性組成物。選択されるSIV抗原がSIVタンパク質、該タンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントである、請求項8に記載の抗原性組成物。SIVペプチドがから成るペプチドから選択される、請求項9に記載の抗原性組成物。選択される抗原が淋菌Neisseriagonorrhoeaeに由来する、請求項1~4のいずれかに記載の抗原性組成物。選択される淋菌Neisseriagonorrhoeae抗原が淋菌Neisseriagonorrhoeaeタンパク質、該タンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントである、請求項11に記載の抗原性組成物。選択される抗原が、淋菌NeisseriagonorrhoeaeポーリンBタンパク質である、請求項12に記載の抗原性組成物。選択される抗原がヒト呼吸合胞体ウイルスRSVに由来する、請求項1~4のいずれかに記載の抗原性組成物。選択されるRSV抗原が、RSVタンパク質、該タンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントである、請求項14に記載の抗原性組成物。選択される抗原が、RSV融合Fタンパク質である、請求項15に記載の抗原性組成物。選択されたアレルゲンを含む抗原性組成物の脊椎動物宿主におけるアレルギー応答を調節する能力を増す方法であって、該組成物に該アレルゲンおよび効果的な免疫増強量の:13-O-脱アシル化モノホスホリルリピドAもしくはモノホスホリルリピドAと2顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSFを含有するアジュバント組み合わせ物を配合することを特徴とする、上記方法。抗原性組成物の脊椎動物宿主におけるアミロイド沈着を特徴とする疾患を予防または処置するための能力を増すための方法であって、該組成物にアミロイドペプチドタンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントまたはそれらに対する抗体、ならびに効果的な免疫増強量の:13-O-脱アシル化モノホスホリルリピドAもしくはモノホスホリルリピドAと2顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSFを含有するアジュバント組み合わせ物を配合することを特徴とする、上記方法。本明細書に記載する発明は、抗原、選択したサイトカインまたはリンホカインアジュバント、および第2アジュバント、MPLの組み合わせを通して、抗原に特異的な免疫応答が増強されることを示す。本発明の抗原性組成物に含めるために選択される抗原は、タンパク質に由来するペプチドまたはポリペプチド、ならびに任意の以下のフラグメントを含んで成る:サッカライド、タンパク質、ポリ-またはオリゴヌクレオチド、または他の高分子成分。本明細書で使用するようにペプチドとは、少なくとも6個の連続するアミノ酸を含んで成り、そして少なくとも1つの抗原決定基を含むが、一方ポリペプチドはペプチドよりも長い分子であるものの、完全長のタンパク質は構成しない。本明細書で使用するようにフラグメントとは部分を含んで成るが、サッカライド、タンパク質、ポリ-またはオリゴヌクレオチド、または他の高分子成分のすべてではない。HIVの場合、本発明の抗原性組成物はさらに完全長のHIVタンパク質を含んで成る。本発明は、HIVに由来するペプチド抗原を使用したモデル系で例示される。これらのペプチドは、引用により本明細書に編入され、そして今、要約する米国特許第5013548号明細書および同第5019387号明細書に記載されているか、またはそれに由来する。これらのペプチドはHIV包膜タンパク質の領域に相当するアミノ酸配列を含んで成り、これに対して中和抗体およびT細胞応答が生成される。HIVは、後天的免疫不全症候群AIDSの病原であるヒトのレトロウイルスである。HIVはTリンパ球の表面上のCD4T4分子に対してその外部包膜糖タンパク質を付けることにより、すなわちT細胞に入り、そして感染させるためのレセプターとしてCD4分子を使用して免疫系のTリンパ球に感染する。免疫感作を通してHIV感染に対して特異的な防御免疫応答を誘導する試みは、大変限られた成功しか生まなかった。現在、多くの取り組みが効果的および防御的接種法を決定するために進められている。このような中には弱毒化され、そしてHIVに由来する抗原性エピトープを発現する組換え細菌ベクター、組換えアデノウイルス20またはワクシニアウイルスベクター21、DNAワクチン、およびHIVの種々のTおよびB細胞エピトープを含む合成ペプチドが含まれる。HIVの外部包膜糖タンパク質gp120は、ヒトにおいて中和抗体を誘導することができると示された。全gp120分子の約1/3をコードする組換えタンパク質PB1は、中和抗体の形成を誘導する包膜タンパク質の一部を含むことが示された。しかしチンパンジーを対象とした研究では、完全なgp120も、PB1も高力価の抗体の生産を誘導することはできないと証明された。gp120の抗原決定基に対応し、そしてウイルスを中和し、そしてウイルスに対するTヘルパーおよびCTL応答を誘導するgp120に対する抗体応答を生成する短いペプチドが常法により合成された。そのようなペプチドの1つがT1SP10MIN、およびシステイン-欠失変異体T1SP10MNと命名されたC4V3マルチエピトープ含有HIV1MNペプチドである。これらのペプチドはTh、TCTLおよびBエピトープを含むが、CD4結合を妨害する抗体は誘導しない。これまでにこのようなC4V3HIVペプチドは、CFAまたはCFA様アジュバントと投与された時、免疫応答を誘導するための有望な候補であることが示された24~29。このようなペプチドはこれまでに、マウスおよびヒトの両方でCD4Th細胞応答を誘起し、そしてBalbcマウスおよびHLAB7であるヒトの両方で、主中和決定基およびCD8CTLにより認識される部位を含むことが示された。この39アミノ酸ペプチドは最近、HIV感染患者において免疫原性および安全性の両方が証明された。T1SP10MINは、40アミノ酸の以下の配列を有する:T1SP10MNは、17位のシステイン無しで合成され、そして39アミノ酸の以下の配列を有する:システイン残基は、Th細胞、CTLまたはB細胞により認識される機能的エピトープの外側に位置する。ウイルスゲノムの様々な領域に由来する他のHIVペプチドは、米国特許第5861243号、同第5932218号、同第5939074号、同第5993819号、同第6037135号明細書および欧州特許出願公開第671947号明細書に記載され、これらも引用により本明細書に編入する。HIV抗原はタンパク質、該タンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントでよい。タンパク質はgp41、gp120またはgp160のような糖タンパク質でもよい。あるいはタンパク質はgag、pol、vif、rev、vpr、tat、nefまたはenvのような遺伝子によりコードされるタンパク質でもよい。そのようなタンパク質に由来するペプチドは、少なくとも1つの抗原決定基を少なくとも6つのアミノ酸長に含むだろう。HIVペプチドに対する免疫応答は、ペプチドを医薬的に許容され得るキャリアー分子に共有結合連結することにより増強することができる。適当なキャリアー分子の例には、破傷風毒素、ジフテリア毒素、キーホールリンペットヘモシアニンおよびHIVgp120糖タンパク質のT細胞エピトープに対応する他のペプチドを含む。現在、HIVに対する成功裏のワクチン法は、HIVに対する粘膜性免疫、ならびに良好なCTL応答を誘導する必要があると考えられている。T1SP10MNマルチエピトープペプチドおよび粘膜アジュバントであるコレラトキシンを使用した最近のマウスの研究では、鼻内免疫感作が中和血清IgG1抗体を誘導したことを示した。HIVV3ループペプチドを使用した後の研究でも、粘膜が合成したIgA抗体およびペプチド特異的CTLを含む強力な細胞性応答の誘導が証明された。HIV感染した個体の全身的な高力価、および予防または安定化における中和抗体の機能的役割は未知であるが、高力価のウイルス特異的抗体はウイルスの伝播の防止に重要であると考えられている。本発明の好適な態様では、MPLを含み、そして次にサイトカイン、IL12またはGMCSFと混合される安定な水中油型エマルションが配合される。以下に与えるデータは、このような組み合わせが高力価のHIV中和血清抗体をもたらすことを示した。MPLSEとGMCSFとの組み合わせが免疫感作したメスのマウスの膣円蓋に高力価の抗原-特異的IgGおよびIgAの誘導するMPLSEおよびGMCSFを用いて配合したいずれのT1SP10MNペプチドを用いたマウスの免疫感作でも、増強された抗原特異的な細胞の増殖およびサイトカインの培養物中への分泌ならびにペプチド-特異的なCTL応答の誘導により測定される強力な免疫応答を誘導した。一般に、GMCSFまたはIL12および選択したタンパク質またはペプチドをと混合したMPLまたはMPLSEの抗原/アジュバント製剤は、高力価の抗原特異的およびウイルス中和抗体、IgGサブクラス比のより高い比率の補体結合IgG抗体マウスでは好ましくはIgG2aへのシフト、サイトカインの生産上昇およびインビトロでの抗原刺激に対応した単核細胞からの細胞増殖を誘導した。これの特性は、GMCSFまたはIL12を用いても用いなくても、MPLの不存在下で抗原およびSEの製剤を用いては観察されなかった。本発明の製剤はCTLの誘導を通して、良好な細胞応答も誘導する。MPLSEの利点は、製剤が肉芽腫様の蓄積および注入部位の炎症を誘導しない点にあり;そのような注入部位の反応は多くが油中水型または水中油型のアジュバント製剤により典型的に誘導される。局所的な肉芽腫様の炎症無しで、GMCSFまたはIL12と組み合わせたMPL商標の刺激効果を通して増強される免疫応答を誘導する能力は、HIVの処置について現在提案されている他のアジュバント製剤では報告されていない。比較するためにMPL商標SEを含む、または含まないにGMCSFまたはIL12を加えて、各々MPL、SE、GMCSF、IL12またはCFAIFAを個別に、またはHIVペプチドを一緒に含めて、一連の実験を行った。結果の要約をここで与え、そして続いてより詳細に検討する。第1実験では、MPL商標SEおよびGMCSFを用いて配合したC4V3HIVペプチドT1SP10MNを皮下に免疫感作したBalbcマウスは、わずか2回の注射後に107を越える血清IgG力価を生成した。抗体応答はHIVを中和し、そしてIgG1、IgG2a、およびIgG2bのペプチド特異的抗体力価に有意な上昇を示した。ペプチドを含む培養物で刺激した脾臓細胞は、高レベルのIL4、IL5およびインターフェロンガンマを放出した。まとめると、これらの知見はバランスのとれたTh1Th2型応答の誘導を示している。T1SP10MNに対して特異的なIgGおよびIgA抗体は、MPL商標SEおよびGMCSFを用いて免疫感作したマウスの膣洗浄液に生成された。これらの知見は、MPL商標SEおよびGMCSFとHIVペプチド抗原との組み合わせが、好ましい免疫応答プロフィールの誘導をもたらすことを示す。この第1実験では、HIVペプチドT1SP10MNおよびSE含有アジュバント製剤、またはGMCSFを用いて免疫感作したBalbcマウスが、ペプチドに特異的なIgG抗体力価を生成した表1。スクアレン、グリセロール、および乳化剤ホスファヂルコリンから成る水中油型の安定なエマルションは、T1SP10MNと混合した時にペプチドに特異的なIgG力価を増強する能力を示した。SEを用いて配合した25gT1SP10MNを用いた免疫感作を通して誘導されたIgG力価は、ペプチドおよびCFAを用いて免疫感作し、そしてIFA中のペプチドで追加免疫したマウスに誘導された力価の約15の2次応答力価を誘導した。CFAIFA配合ワクチンの受容体は、初回免疫感作に応答してT1SP10MN特異的IgG力価を日常的に生成する。比較の目的で、マウスは25gのT1SP10MNペプチドを単独で用いて免疫感作した。MPL商標の水性およびSE製剤は、フロイントアジュバントまたはサイトカインIL12およびGMCSFでのマウスの免疫感作を通して誘導された応答と比較した。IL12と混合したT1SP10MNの受容体は、一般に数回の反復実験でペプチドに特異的な抗体力価を生成しなかった。対照的に、GMCSFまたはMPLSEにT1SP10MNを加えた受容体は低いが、しかし容易に検出可能なIgG抗体力価を生成した。IL12またはGMCSFを、T1SP10MNペプチドを加えたMPLSEを含有する製剤に加えると、免疫感作に応答してIgGの有意に高い力価を誘導した。実際に、MPLSEおよびGMCSFを組み合わせたマウスの免疫感作は、試験した他のどの製剤を用いて免疫感作したマウスから測定された力価よりもかなり大きな2次応答力価をもたらした。ペプチドに特異的なIgG力価は、フロイントアジュバントで製剤されたたとえ125μgのT1SP10MNを用いて免疫感作したマウスよりも高かった。HIV特異的免疫応答の望ましい特徴は、細胞性および体液性成分の間のバランスがとれている応答である。特定の免疫クロブリンアイソタイプのサブクラスが、Th1またはTh2のいずれかの優占に向かうTヘルパー細胞のサブセットの型を歪めることに相関していた。このような各Tヘルパー細胞サブセットが分泌するサイトカインは、IgGサブクラスの切り替えを支配する活性を証明した。IgGサブクラスの終点力価は、2次免疫感作から2週間後に集めたプール血清から測定した表2。T1SP10MN単独、あるいはGMCSFまたはIL12のいずれかを配合して免疫感作したマウスは、数回の反復実験でIgGサブクラス力価をもたらさないか、または低かった。IgG3抗体はELISA法により検出できなかった。CFAで乳化したT1SP10MNを用いて免疫感作し、そしてIFAで追加免疫したマウスの群は、T1SP10MNに特異的なIgG1抗体を優占的に生じた。SE、MPLSE、IL12を加えたMPLSE、またはGMCSFを加えたMPLSEを含むペプチド製剤も、IgG1抗体の高い力価を生じた。SEを配合したワクチンの受容体は、有意なIgGを繰り返し示したが、有意なIgG2aまたはIgG2b力価は示さなかった。MPLのSE製剤への包含は、増強されたIgG2aまたはIgG2bのT1SP10MN特異的抗体力価をもたらした。IL12またはGMCSFのいずれかをMPLSEおよびT1SP10MNに包含すると、IgG1IgG2a抗体力価の比率にずれをもたらした。サイトカイン無しでは、MPLSEを配合したワクチンは、同様な力価のIgG1およびIgG2aを誘導した。IL12およびGMCSFの両方がペプチドに特異的なIgG2aの相対的血清濃度を上昇させた。さらにMPLSEとGMCSFとの組み合わせも、T1SP10MNに特異的なIgG2a抗体力価に有意な上昇を誘導したMPLSEに比べて47倍、そしてSEに比べて74倍。MPLSEおよびGMCSFをT1SP10MNペプチドと一緒に免疫感作したマウスに生じた力価は、いかなるワクチン受容体群の中でも常に最高であった。T1SP10MN、MPLSEおよびGMCSFを用いて免疫感作したマウスからプールした血清から測定された高い抗体力価が、この群内の個々のマウスを表しているのかどうかを決定するために、この群内の個々のマウスをの力価を、フロイントアジュバントを配合したペプチドで免疫感作したマウスの力価と比較した図1。IgG、IgG1およびIgG2aに関する個々の血清力価の平均は血清プールから測定された力価に類似することが決定されたデータを示さず。T1SP10MNとMPLSEおよびGMCSFとの同時配合coformulationは、CFAIFAで免疫感作したマウスで誘導されたものよりも有意に高いIgG、IgG1およびIgG2aの力価をもたらした。MPLSEおよびGMCSFを配合したペプチドで免疫感作したすべてのマウスは、CFAIFA製剤で免疫感作したマウスから測定されたものよりも高いIgG抗体の力価を生じた。このような結果は、MPLSEとGMCSFの組み合わせが、ペプチドに特異的な抗体の高い力価により測定されるような好ましい抗体応答プロフィール、および好ましいIgGサブクラスの分布を生成することを示した。この製剤は使用する任意のワクチン製剤に最高のT1SP10MN特異的力価を日常的に誘導した。水性MPL、SEまたはMPLSEと一緒に配合したGMCSFを免疫感作したマウスの抗-T1SP10MNIgG力価の比較を行い、アジュバント補給剤としてのGMCSFの効果を測定した図2。この結果はMPLSEとGMCSFおよびペプチドとの組み合わせが、高い力価の抗体の誘導における特定の態様に独特であることを示唆している。GMCSFを加えたMPLは、CFAIFAに匹敵する力価を誘導した。すなわち、MPLおよびGMCSFの免疫増強特性は、MPLが水性状態であるか、または安定なエマルション状態のいずれかである場合に、一緒に配合した時に相乗的となる。次にT1SP10MN特異的抗体力安定を、2次免疫感作から4週間後のマウスから得た膣洗浄液中で測定した表3。GMCSFを加えたMPLSEで免疫感作したマウスは、IgAおよびIgG抗体の両方に高い力価を生じた。他の製剤を用いて免疫感作したマウスから得た膣洗浄液中の抗体力価は、日常的に検出されなかった。膣洗浄液中のIgG対IgAの比率はIgGに傾くので、そしてsIgAは測定されなかったので、膣洗浄液中で検出されたIgA抗体が粘膜組織で局所的に合成されると結論することはできない。実際に、検出されたIgAおよびIgG力価は、膣の粘膜から遠くに位置する形質膜から分泌された浸出した免疫グロブリンの結果らしい。このような結果から、IL12またはGMCSFのいずれかと組み合わせてMPLSEを配合したHIVペプチドT1SP10MNで免疫感作したマウスは、高力価のペプチド特異的血清を有することが証明された。これらの抗体力価が機能的に効果的であるかどうかを評価するために、HIVの研究室適応株により血清をインビトロで細胞の感染を阻害する抗体の能力について分析した。このアッセイは適当なHIV株で感染させた細胞からの培養上清に生成するウイルスの逆転写活性を測定した。MPLSEおよびGMCSF、またはMPLSEおよびIL12を用いて免疫感作したマウスに由来する血清は、有意にウイルスの感染性を低下させた図3。最大のウイルス逆転写酵素単位は、9481から10411の範囲であった。その製剤を用いて免疫感作したマウスからの血清はウイルスの複製を阻害した。わずか120のウイルス希釈でも、T1SP10MNと一緒にMPLSEおよびGMCSFを用いて免疫感作したマウスからの血清は、ウイルスの複製を約50まで阻害した。この製剤の血清中和力価は、MPLSE、IL12およびHIVペプチド製剤を用いて免疫感作したマウスから得た血清に関する71に比べると、1600より大きくなると決定された。これらの群のマウスからの血清の抗T1SP10MN力価は、CFAおよびIFAでのマウスの免疫感作を通して誘導されたものと同様であった幾分高く作用した。CFAIFAで乳化したT1SP10MNを用いて免疫感作したマウスの血清は、このアッセイにおいてHIVの中和を示さなかった。ペプチドおよびアジュバントとしてGMCSFを加えたMPLSEの組み合わせ物で免疫感作したマウスの血清は、他のどの血清よりも大きな中和活性を示した。均等な希釈で、GMCSFおよびHIVペプチドを加えたMPLSEで免疫感作したマウスの血清は、他のワクチン製剤の受容体からの血清よりも高いウイルス濃度を中和した。次に培養におけるHIVペプチドに特異的な脾臓細胞増殖を測定した。T1SP10MNに対する細胞応答性の測定のように、脾臓細胞をペプチドまたは対象タンパク質をインビトロで培養した。アッセイは3Hチミジンの分割している細胞のDNAへの取り込みを測定した表4。アジュバント無しで免疫感作したマウスに由来する脾臓細胞とは異なり、SEを用いて配合したT1SP10MNで免疫感作したマウスに由来する脾臓細胞は、ペプチドに応答して激しく増殖した。ワクチン受容体からの脾臓細胞は、培養で無関係な抗原リゾチームに対して応答しないか、または抗原刺激はなかった。すべての群がマイトジェンであるConAを用いた刺激に同様に応答した。ほとんどのグループ内で、抗原-特異的な用量依存的増殖応答があった。すべての3種類のペプチド用量で、最高度の増殖は、MPLSEを同時に混合したGMCSFを用いて免疫感作したマウス群について測定された。最低の増殖応答は、CFAIFAまたはHIVペプチドを加えたIL12配合ワクチンで免疫感作したマウス群の脾臓細胞から測定された。ペプチドと、SEまたはGMCSFのいずれかで免疫感作したマウスの脾臓細胞は、培養で同様なレベルのチミジンの取り込んだ。これらの結果は、GMCSFと一緒にMPLSEを用いたHIVペプチドの混合製剤が、マウスの脾臓細胞に、抗原のインビトロ提示に応答して増殖するための最高の潜在的能力を提供することを示す。培養した脾臓細胞は、それらが培養上清にサイトカインIL4表5およびインターフェロンガンマ表6を分泌する潜在的能力について調査された。これらのサイトカインは、抗原またはマイトジェンでインビトロ刺激してから3日および6日後に回収した培養上清中で測定した。IL4の測定、Tヘルパー2型に関連するサイトカインの測定では、すべての群が3日までにマイトジェンであるConAを用いた刺激に応答して検出できるレベルで生産したが、MPLSEまたはGMCSFを加えたMPLSEで免疫感作したマウスだけがペプチドの刺激に応答してIL4を生産した。GMCSFを加えたMPLSEおよびT1SP10MNで免疫感作したマウスだけが、脾臓細胞を刺激するために使用したすべての用量のペプチドで培養物に検出可能なレべルのIL4を分泌した。培養から6日までに、GMCSFを加えたMPLSEと一緒にペプチドで免疫感作したマウスからの脾臓細胞が、MPLSE、IL12を加えたMPLSE、またはSEと一緒にペプチドで免疫感作したマウスから検出されたレベルよりも高いIL4を分泌した。IL4のレベルはConAを用いた培養物中のこのような細胞の刺激を通して誘導されるレベルよりもさらに高かった。GMCSFを加えたMPLSEで免疫感作したマウスから培養した脾臓細胞も、培養物に検出可能なレベルのIL5別のTヘルパー2型サイトカイン示さずを、6日のT1SP10MNでの刺激に応答して分泌した。他の群からの脾臓細胞はこれらの培養物中に検出可能なIL5を生産しなかった。ConAを含む培養での刺激から3日の応答で、すべての群のマウスからの脾臓細胞が、検出可能なレベルのインターフェロンガンマを培養物中に分泌した表6。MPLSEまたはGMCSFを加えたMPLSEで免疫感作したマウスからの細胞だけが、3日のHIVペプチドでの刺激に応答して検出可能なレベルのインターフェロンガンマを生産した。カルチー刺激の終わりの6日には、より高い濃度のインターフェロンガンマがConAおよびペプチドの両方に応答して観察された。中でもMPLSEまたはGMCSFを加えたMPLSEで免疫感作したマウスからの脾臓細胞の培養上清から測定されたインターフェロンガンマのレベルが興味深かった。このような2種類の受容体群からの脾臓細胞は、IL12を加えたMPLSEまたはSEと一緒にペプチドで免疫感作したマウスからの脾臓細胞よりも培養上清中に顕著に高濃度のインターフェロンガンマを分泌した。第1実験の結果は、MPLを安定な水中油型エマルションに包含し、そして次いでエマルションをHIVペプチドT1SP10MNおよびGMCSFと混合することが中和抗体の誘導をもたらすことを示している。さらにGMCSFをMPLSEおよびワクチン抗原と同時配合することにより、培養上清に分泌される上昇したレベルのIL4、IL5およびインターフェロンガンマをもたらし、そして免疫感作する抗原を含む培養で刺激した脾臓細胞の増殖的応答を増強する。その製剤は調査した任意のワクチン製剤にも最高のIgG、IgG2aおよびIgG2b力価を誘導した。MPLSEおよびGMCSFをペプチドと一緒に組み合わせて免疫感作したマウスの群のみが、多数の繰り返し実験にわたり一貫して膣洗浄液中に検出可能なIgGおよびIgA力価を有した。MPLSE、IL12およびペプチドの組み合わせも、IgG1およびIgG2力価レベルの上昇、ウイルスの中和の上昇、脾臓細胞増殖の上昇およびIL4およびインターフェロン-ガンマの分泌をもたらした。HIVペプチドを配合した1つのアジュバントによるマウスの免疫感作では、中和抗体を誘導する特性を含む免疫応答を生じなかった。MPLSEまたは水性製剤としてMPLと一緒にT1SP10MNを用いたマウスの免疫感作で、良好な抗体力価が誘導されることがしばしば観察された。しかしこのような製剤は、膣の抗体力価、中和抗体力価または実験8で以下に記載する強力なCTL応答を有する免疫応答を一貫して誘導しなかった。場合により、ペプチドを組み合わせたMPLまたはMPLSEは、膣洗浄液中にIgAおよびIgGの測定可能な力価を誘導した。幾つかの実験では、ワクチン製剤中のMPLにIL12またはGMCSFのいずれかを加えることにより、CFAIFAで、またはサイトカインを含むか、または含まない任意のMPLSE製剤で免疫感作したマウスで生産された力価に類似する力価が生成された。この観察はMPLのSE形がHIVペプチドに特異的な高力価の抗血清に必要ないことを示唆している。SE賦形剤にGMCSFを加えることにより、SE単独またはSEおよびIL12で免疫感作したマウスに比べて、ペプチドに特異的な力価の上昇が与えられた。しかし一般的には、良好なIgG2aおよびIgG2b抗体力価の誘導は、MPLSEおよびGMCSFを含むペプチドの製剤に依存した。この製剤が、CFAIFAおよびペプチドのような他の製剤を用いた免疫感作を通して誘導される力価に類似するIgG力価を誘導したことは興味深い。GMCSFを含むMPLおよびペプチドとの組み合わせが、高い力価の中和抗体およびCTLの両方を誘導を示す唯一の製剤であったSEおよびペプチドに包含することも、好ましい免疫応答プロフィールを誘導した。この結果は、サイトカインGMCSFまたはIL12を同時配合したMPLSEが、CFAおよびIFAでの免疫感作と比較して抗体の応答に質的な差異を付加したことを示していた。この差異はIgG2aおよびIgG2bの上昇レベルに起因すると考えられる。第2実験では、わずかな変更を加えて第1のBalbcHIVペプチド実験のプロトコールに従った。サイトカインを含むまたは含まないMPLも水性状態で投与した。アジュバントを含まないHIVペプチドT1SP10MNを用いたBalbcマウスの免疫感作は、有意な抗体力価を誘導しなかった。対照的に、種々のアジュバント/サイトカインの組み合わせを含むペプチド抗原の製剤は、2回の免疫感作後に高い抗体力価の誘導をもたらした。ペプチドおよびIL12で、またはSEのみでの免疫感作は、アジュバントを含まずに誘導した力価と区別できない力価をもたらした表7。GMCSFを同時配合したペプチドの受容体は、力価にゆるやかな上昇を有した。CFAIFAを含むワクチンの受容体と比較して、ミクロ流動化したMPLSEは、同様にペプチドに特異的な力価の生成を示した。CFAIFAワクチンの受容体と比較して、MPLSEは高レベルのペプチド特異的IgG2aを誘導した。使用した免疫感作計画が観察される抗体力価に影響を及ぼしたのかもしれない。しかしペプチドを配合したMPLを用いたマウスの免疫感作は、高力価のペプチド特異的抗体を誘導した。この製剤へのGMCSFまたはIL12の添加は、106よりも大きな力価の上昇をもたらした。すなわちHIVペプチドとMPLおよびサイトカインIL12またはGMCSFの組み合わせにより、このペプチドに特異的な高力価の抗体が誘導された。ペプチドとMPLおよびIL12、またはMPLSEおよびGMCSFのいずれかで免疫感作したマウスの群のみが、膣洗浄から得た液体から検出された比較的高力価の抗体を発生した表8。実際には、ペプチドとMPLおよびIL12を免疫感作したマウスの群だけがペプチドに特異的なIgAを生産した。培養中の脾臓細胞の増殖能力は、ペプチドでのインビトロ刺激に応答したチミジンの取り込みを通して測定した。表9のデータは増殖を標準化するために、ConAを用いた刺激を通して測定された最大の増殖に対して増殖を標準化した。GMCSFまたはIL12のいずれかを含むMPLSEで免疫感作したマウス、ならびにGMCSFのみで免疫感作したマウスからの脾臓細胞は、ペプチドに関係する低レベルの増殖を示した。対照的に、ペプチドをMPLおよびGMCSFと組み合わせて免疫感作したマウスからの脾臓細胞は、有意な増殖を示した。インビトロで培養した脾臓細胞からのサイトカイン生産も測定した。IL4については、MPLSEをGMCSFおよびT1SP10MNと組み合わせて免疫感作したマウスだけが、ペプチドでの刺激に応答して良好なレベルのIL4を分泌した。インターフェロンガンマについては、MPLSEとGMCSFまたはIL12のいずれか、または水性MPLとGMCSFまたはIL12のいずれかで免疫感作したマウスが、容易に検出可能なレベルでこのサイトカインを培養上清中に生産した表11。すなわち、サイトカインGMCSFまたはIL12とMPLまたはMPLSEとの組み合わせが、ペプチド抗原に対して特異的な高力価の抗体を誘導した。力価はペプチドおよびCFAIFAでのマウスの免疫感作を通して誘導された力価と同様であった。このデータは、これらの組み合わせが培養で準備した脾臓細胞に最高の増殖応答、およびペプチドの刺激に応答して最高レベルのインターフェロンガンマを分泌する脾臓細胞の樹立された集合も誘導したことを示す。この第2実験の結果は、T1SP10MNとMPLおよびサイトカインGMCSFまたはIL12との同時配合が、ペプチドおよびCFAで免疫感作され、そしてペプチドおよびIFAで追加免疫感作されたマウスで誘導された免疫応答プロフィールと同様か、より良いプロフィールを誘導することを示している。第2免疫感作から2週間後の注入部位の組織学的評価示さずは、ミクロ流動化したMPLSEで免疫感作したマウスは単核細胞の真皮への浸潤を発生しないか、または維持しなかったことを示した。ヘマトキシリン/エオシン染色した組織は、アジュバント無しの受容体から調製した組織と同様に見えた。対照的に、アジュバント油中水型のエマルションとしてCFAおよびIFAで免疫感作したBalbcマウスは、この領域に単核細胞の大きな蓄積を有した。GMCSFおよびペプチドと一緒のMPLSEの受容体は、GMCSFを含まないMPLSE受容体と比べて、単核細胞の顕著ではあるが周辺部の上昇を示した。GMCSFおよびペプチドのみで免疫感作したマウスに由来する組織は、調査しなかった。第2実験のプロトコールを、Balbcマウスの代わりにSwissWebsterマウスを用いて第3実験で行った。SwissWebsterマウスはHIV抗原を用いたアジュバント効果を決定するために使用し、ここでMHC拘束ヘルパーT細胞エピトープは免疫応答に影響を及ぼさない。SwissWebsterマウスはマウスの異系交配種であり;厳密な細胞実験は行わなかった。この実験では、相互のreciprocal抗HIVペプチドIgGの終点力価および膣洗浄終点相互終点IgGおよびIgA抗体力価を測定しただけであった。表12および14に見られるように、応答プロフィールを第1実験および第2実験で測定したBalbcマウスから得たプロフィールと比較した。第4実験は、Balbcマウスを使用してわずかな変更を加えて第2実験のプロトコールに従った。表14に示すように、GMCSFまたはIL12のいずれかと一緒のMPLのアジュバント製剤は、MPL単独より顕著に高いIgGGMT応答を誘導した。表15に示すように、GMCSFと一緒のMPLSEのアジュバント製剤は、有意なIgG2bサブクラス応答を誘導した。GMCSFまたはIL12のいずれかと一緒のMPLのアジュバント製剤は、MPL単独より顕著に高いIgG2aサブクラス応答を誘導したが、GMCSFまたはIL12のいずれかと一緒のMPLSEの製剤は、MPL単独より高いIgG2aサブクラス応答を誘導した。表16に示すようにGMCSFまたはIL12のいずれかと一緒のMPLのアジュバント製剤は、MPL単独より顕著に高いIgG力価を膣洗浄液中に誘導した。最後に図4に示すようにGMCSFまたはIL12のいずれかと一緒のMPLのアジュバント製剤、ならびにGMCSFまたはIL12のいずれかと一緒のMPLSE製剤は、MPL単独またはMPLSE単独よりもそれぞれ大きな脾臓細胞の増殖を示した。第5実験では、Balbcマウスを使用してわずかな変更を加えて第2実験のプロトコールに従った;IL12はアジュバント製剤に含めなかった。表17に示すようにMPLおよびGMCSFの両方を含むアジュバント製剤は、MPL単独よりも顕著に高いIgG2aおよびIgG2b応答を誘導した。さらにMPLおよびGMCSFの両方を含むアジュバント製剤は、MPL単独よりもすべてのIgGサブクラスついて顕著に高い応答を誘導した。第6実験では、Balbcマウスを使用してわずかな変更を加えて第2実験のプロトコールに従った;IL12はアジュバント製剤に含めなかった。アミノ酸位17のシステインの存在から、HIVペプチドは40アミノ酸長であった。表18に示すように、MPLSEおよびGMCSFの両方を含むアジュバント製剤は、MPL単独よりもすべてのIgGサブクラスついて有意に高い応答、およびMPLSE単独よりもすべのサブクラスについて顕著に高い応答を誘導した。第7実験では、Balbcマウスを使用してわずかな変更を加えて第6実験のプロトコールに従った;IL12はアジュバント製剤に含めなかった。表19に示すように、MPLSEおよびGMCSFの両方を含むアジュバント製剤は、MPLSE単独よりもすべてのIgGサブクラスついて顕著に高い応答を誘導し、そしてMPLおよびGMCSFの両方を含むアジュバント製剤は、MPL単独よりもすべてのIgGサブクラスついて顕著に高い応答を誘導した。第8実験では、機能的な細胞性免疫の測定として、マルチエピトープペプチドT1SP10MNを一緒に配合したMPLSE、またはGMCSFを加えたMPLSEで免疫感作したマウスの脾臓細胞がHIVMNに特異的なCTL応答を生成する能力を評価した。図5に示すように、MPLSE、またはGMCSFを加えたMPLSEで免疫感作したマウスの脾臓細胞は、非標識またはIIIBエピトープを用いてパルス-標識したいずれかの標的細胞に対して低い活性を示した。MPLSEおよびGMCSFを用いて配合したT1SP10MNで免疫感作したマウスからの脾臓細胞は、1回の免疫感作後に良好なHIVMNに特異的なCTL活性を誘導した。HIVMNに特異的なCTLが媒介する標的細胞の溶解は、2次免疫感作から7日間経過した後に著しく増強された図5。別の実験で、アジュバント無しで免疫感作したマウスはCTL応答を誘導しなかった。水性MPLおよびペプチドを用いて免疫感作したマウスは、低い<30ペプチド特異的CTL応答を生成した。HIVに対する免疫原性組成物の潜在的効力の評価の1つの難点は、HIVに感染した非ヒト霊長類がAIDS様の症状を発症しないことである。すなわち有効な動物モデルがHIVにより引き起こされるヒトの症状を模倣しない。幸いにもHIVに極めて関連しているスミアン免疫不全症ウイルスSIVで感染した非ヒト霊長類が、AIDS様症状を発症する。これはSIV抗原の非ヒト霊長類での評価を可能とする。SIV抗原はタンパク質、該タンパク質に由来するポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントでよい。タンパク質はgp41、gp120またはgp160のような糖タンパク質でよい。あるいはタンパク質はgag、pol、vif、rev、vpr、tat、nefまたはenvのような遺伝子によりコードされるタンパク質でよい。そのようなタンパク質に由来するペプチドは少なくとも1つの抗原性決定基エピトープを、少なくとも6個のアミノ酸長で含むだろう。HIVに類似して、マルチエピトープSIVペプチドを非ヒト霊長類に使用する。この実験は、MPLSEおよびGMCSFと組み合わせた種々のペプチドがCTL応答を誘導することができるかどうかを評価するために行った。アカゲザルRhesusmacaquesを、0、4、8および18週にMPLSEおよびGMCSFと以下の3組のペプチドのいずれかを組み合わせて皮下に免疫感作した表20を参照にれたい:1各ペプチドは以下のMamuA★01拘束CTLエピトープを含む:2あるいはこのような3種の各ペプチドを、以下の配列を有する無差別なTヘルパーエピトープと連結した:すなわち、3つのペプチドは以下の配列を有した:ヘパリン処理した血液を2週間毎に集め、そして末梢血の単核細胞をCTLについて51Cr放出アッセイ、新鮮な末梢血の単核細胞PBMCの四量体染色および培養したPBMCの四量体染色により分析した。新鮮なPBMCの四量体染色および51Cr放出による細胞溶解的致死はいかなる活性も明らかにしなかった。しかしのMPLSEおよびGMCSFを用いて配合したMamuA★01拘束ThCTLペプチドカクテルでのアカゲザル免疫感作は、四二体陽性CD8陽性T細胞の検出をもたらした。表21~24に与える結果は、各ペプチドで11日間培養したPBMCで検出されたパーセント陽性、四量体陽性CD8表21~23またはCD4T細胞として示す。総じて、ThエピトープをもつRh55、Rh142またはもたないRh73、Rh80いずれかのCTLエピトープで免疫感作したすべての4匹のMamuA★01陽性動物は、gag、polまたはenvに特異的なCD8陽性四量体陽性細胞を示した。予想通り、四量体陽性CD8細胞はMamuA★01陰性動物で検出された。SIVgagおよびenv特異的免疫応答は初回免疫後に見られたが、pol特異的四量体陽性は、追加免疫後に観察された。18週目の最終追加免疫投与がさらに応答を上げなかったので、表21~24のデータには14週以降を与えていない。まとめると、MPLSEおよびヒトGMCSFで免疫増強したMamuA★01拘束ThSIVgag、polおよびenvCTLエピトープペプチドカクテルを用いてアカゲザルを免疫感作すると、選択的かつ特異的な四量体アッセイにより証明される細胞応答を誘導した。PIBタンパク質として知られている淋菌NeisseriagonorrhoeaeのポーリンBタンパク質も、組換え的に発現し42、これは引用により本明細書に編入する、そして淋菌Neisseriagonorrhoeaeにより引き起こされる感染の予防または処置に有望な抗原である。淋菌NeisseriagonorrhoeaeのポーリンBタンパク質の修飾した変異体このアミノ末端の16アミノ酸はフィージに由来し、続いてポーリンBタンパク質の成熟形が続くを一緒に含むGMCSFまたはIL12の加えたMPLを、MPL単独と比較するために、一連の実験を行った。結果のまとめは与えない。第1実験では、組換えポーリンBタンパク質で臀部の皮下に免疫感作したSwissWebstarマウスが、抗原特異的抗体力価を生成し、これはポーリンBタンパク質が実現可能な候補抗原であることを示している。GMCSFをMPL商標およびポーリンBタンパク質に加えると、MPL商標およびポーリンBタンパク質の受容体に比べて上昇した血清力価のIgGおよびIgG2aをもたらした表25および26を参照にされたい。第2実験では、IL12およびMPL商標またはMPL商標SEを加えたポーリンBタンパク質で臀部の皮下に免疫感作したSwissWebstarマウスが、MPL商標またはMPL商標SEを加えたポーリンBタンパク質の受容体に比べて高い抗原特異的抗体を誘導した。高い力価は初回および2次免疫感作後に観察された。IL12を製剤に含めると、膣洗浄液中で測定されるIgG力価に約10倍の上昇をもたらした表27。自然な二量体形のヒト呼吸合胞体ウイルスRSVの精製した天然の融合Fタンパク質は、RSVにより引き起こされる感染の予防に有望な候補抗原であるを、RSVの精製した天然のFタンパク質を一緒に含む各MPL、リン酸アルミニウムまたはStimulonQS21それぞれと比較するために、一連の実験を行った。結果のまとめを今、与える。第1実験では、天然のRSVFタンパク質を筋肉内に免疫感作したBalbcマウスは、抗原特異的な抗体力価を生成し、Fタンパク質が実現可能な候補抗原であることを示した。GMCSFをMPL商標に加えると、初回および2次免疫感作後の両方でFタンパク質に対してMPL商標単独よりも高い終点力価を誘導し表28を参照にされたい、そしてまた脾臓細胞のインビトロ刺激に対応してMPL商標単独よりも高い増強された細胞応答を誘導した。GMCSFをMPL商標SEに加えると、初回免疫感作後にFタンパク質に対してMPL商標SE単独よりも高い終点力価を誘導した表30を参照にされたい。GMCSFをMPL商標またはMPL商標SEを加えたFタンパク質の製剤に加えると、免疫感作したマウスの脾臓細胞から測定されるように、GMCSFを欠く製剤により誘導される活性より高い割合のRSVに特異的な脾臓細胞CTL活性が誘導された表31を参照にされたい。第3実験は、GMCSFをIL12に代えた。IL12をMPL商標と同時配合すると、MPL商標のみを含むFタンパク質の送達に比べて、初回免疫感作後により高いIgGの力価を誘導したを、インフルエンザウイルスNPタンパク質を一緒に含むMPLそれぞれと比較するために、1つの実験を行った。抗体力価を測定するための実験の行うにはNPの量が不十分であった。アジュバントを含む、または含まないNPペプチドで免疫感作したマウスを、最終免疫感作から14日後の抗原刺激に対する脾臓細胞応答について分析した。GMCSFをMPLまたはMPLSEを含む製剤に包含することは、CTL活性に顕著な減少をもたらしたデータは示さず。なぜ異常な結果が得られたのかは不明である。このアッセイの実施において、技術的問題があったのかもしれない。本発明の抗原性組成物は、病原性ウイルス、細菌菌カビまたは寄生体から選択された抗原、ならびにサイトカインまたはリンホカイン、特にGMCSFまたはIL12と組み合わせた免疫増強に効果的な量のMPL商標水性状または安定なエマルション状でを含んで成る抗原性組成物の投与後に、脊椎動物宿主の抗体応答および細胞性免疫を向上させることにより、免疫応答を調節する。免疫調節活性を有することが示された他のサイトカインまタはリンホカインは、限定するわけではないがインターロイキン1アルファ、1ベータ、2、4、5、6、7、8、10、13、14、15、16、17および18、インターフェロンアルファ、ベータおよびガンマ、顆粒球コロニー刺激因子および腫瘍壊死因子アルファおよびベータを含む。上記サイトカインまたはリンホカインのアゴニストまたはアンタゴニストも、本発明の範囲内にある。本明細書で使用するように、用語アゴニストは、該サイトカインまたはリンホカインの活性を、または同様に機能を増強する分子を意味する。そのようなアゴニストの例は、該サイトカインまたはリンホカインの模造物である。本明細書で使用するように、用語アンタゴニストは該サイトカインまたはリンホカインの活性を抑制または防止する分子を意味する。そのようなアンタゴニストの例は、可溶性IL4レセプターおよび可溶性TNFレセプターである。本明細書で使用するように、用語効果的な免疫増強量とは、本明細書に記載するアジュバントの組み合わせの用量を意味し、この用量は脊椎動物宿主に上昇した免疫応答を誘導するために適当である。詳細な投薬用量は、宿主の年齢、体重および医学的状態、ならびに投与法および抗原に依存する。好適な態様では、アジュバントの組み合わせは、1~100μg用量の範囲でMPLを使用することである。適当な用量は当業者により容易に決定される。本発明の抗原性組成物は、免疫学的に許容される希釈剤またはキャリアーと常法により混合して、注入可能な液体溶液または懸濁液を調製することができる。本発明の抗原性組成物は、限定するわけではないが、鼻内、経口、膣内、直腸内、非経口、皮内、経皮例えば国際公開第9820734号明細書を参照にされたい、これは引用により本明細書に編入する、筋肉内、腹腔内、皮下、静脈内および動脈内を含む様々な経路によりヒトまたは非ヒト脊椎動物に投与される。抗原性組成物の抗原性成分は、部分的には抗原の同一性、ならびに宿主の年齢、体重および医学的状態、ならびに投与法に大変依存するだろう。ここでも、適当な用量は当業者により容易に決定される。必要ではないが、抗原およびアジュバントの組み合わせを同時に投与することが好ましい。抗原性組成物の投与回数および投薬計画も、当業者により容易に決定される。場合により、アジュバントの組み合わせのアジュバント特性は、必要な投与回数または投薬計画のタイムコースを下げることができる。本発明のアジュバントの組み合わせは、限定するわけではないがヒトおよび非ヒト脊椎動物に感染するウイルス、細菌、菌カビもしくは寄生体微生物から、またはガン細胞もしくは腫瘍細胞を含む広い範囲の様々な病原性微生物に由来する広い種々の抗原を含む抗原性組成物に使用するために適している。抗原はタンパク質に由来するペプチドまたはポリペプチド、ならびに任意の以下のフラグメントを含んで成ることができる:多糖、タンパク質、ポリ-またはオリゴヌクレオチド、ガンまたは腫瘍細胞、アレルゲン、アミロイドペプチドタンパク質、または他の高分子成分。場合により、1以上の抗原をこの抗原性組成物に含む。本発明のアジュバントの組み合わせを含む望ましいウイルスワクチンは、限定するわけではないがヒト免疫不全症ウイルス、シミアン免疫不全症ウイルス、呼吸合胞体ウイルス、1~3型パラインフルエンザウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、カリシウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、アデノウイルス、狂犬病ウイルス、イヌジステンパーウイルス、牛疫ウイルス、コロナウイルス、パルボウイルス、感染性鼻気管炎ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ感染性腹膜炎ウイルス、鳥類感染性嚢性疾患ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、マルク病ウイルス、ブタ呼吸および再生産症候群ウイルス、ウマ動脈炎ウイルスおよび種々の脳炎ウイルスにより引き起こされる疾患の予防および/または処置を対象とすることを含む。本発明のアジュバントの組み合わせを含む望ましい細菌性ワクチンは、限定するわけではないがインフルエンザ菌Haemophilusinfluenzae型に分類できる、またはできない両方、ヘモフィルスソムナスHaemophilussomnus、モラクセラカターリスMoraxellcatarrhalis、肺炎連鎖球菌Streptococcuspneumoniae、化膿連鎖球菌Streptococcuspyogenes、ストレプトコッカスアガラクティアStreptococcusagalactiae、糞便連鎖球菌Streptococcusfaecalis、ヘリコバクターピロリHelicobacterpylori、髄膜炎菌Neisseriameningitidis、淋菌Neisseriagonorrhoeae、トラコーマクラミジアClamydiatrachomatis、クラミジアニューモニアClamydiapneumoniae、オウム病クラミジアClamydiapsittaci、百日咳菌Bordetellapertussis、チフス菌Salmonellatyphi、ネズミチフス菌Salmonellatyphimurium、豚コレラ菌Salmonellacholeraesuis、大腸菌Escherichiacoli、赤痢菌Shigella、コレラ菌Vibriocholerae、ジフテリア菌Corynebacteriumdiphtheriae、ヒト結核菌Mycobacteriumtuberculosis、鳥型結核菌細胞内複合体MycobacteriumaviumMycobacteriumintracellularecomplex、プロテウスミラビリスProteusmirabilis、プロテウスブルガリスProteusvulgaris、黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureus、破傷風菌Clostridiumtetani、レプトスピラインターロガンスLeptospirainterrogans、ボレリアバーグトルフェリBorreliaburgdorferi、パスツレラヘモリティカPasteurellahaemolytica、パスツレラマルトシダPasteurellamultocida、アクチノバチルスプローロニューモニアActinobacilluspleuropneumoniaeおよびマイコプラスマガリセプチカムMycoplasmagallisepticumにより引き起こされる疾患の予防および/または処置を対象とすることも含む。本発明のアジュバントの組み合わせを含む菌カビ病原体に対して望ましいワクチンは、限定するわけではないがアスルペルギルス属Aspergillis、ブラストミセス属Blastomyces、カンジダ属Candida、コクシジオイデス属Coccidiodes、クリプトコッカス属CryptococcusおよびヒストプラスマHistoplasmaにより引き起こされる疾患の予防および/または処置を対象とすることも含む。本発明のアジュバントの組み合わせを含む寄生体に対して望ましいワクチンは、限定するわけではないがリーシュマニアメジャーLeishmaniamajor、回虫属Ascaris、鞭虫属Trichuris、ジアルジア属Giardia、住血吸虫属Schistosoma、クリプトスポリジウム属Cryptosporidium、トリコモナス属Tricomonas、トキソプラスマToxoplasmagondiiおよびニューモシスティスカリニPneumocystiscariniiにより引き起こされる疾患の予防および/または処置を対象とすることも含む。本発明のアジュバントの組み合わせを含む、脊椎宿主に治療的または予防的抗ガン効果を誘導するための望ましいワクチンは、限定するわけではないが前立腺特異的抗原、癌胎児性抗原、MUC1、Her2、CA125およびMAGE3を含むガン抗原または腫瘍関連抗原の利用を含む。本発明のアジュバントの組み合わせを含む、脊椎宿主におけるアレルゲンに対する応答を調節するための望ましいワクチンは、アレルゲンまたはそれらのフラグメントを含むワクチンである。そのようなアレルゲンの例は、米国特許第5830877号明細書および国際公開第9951259号明細書に記載されこれらは引用により本明細書に編入する、そして花粉、昆虫毒、動物の鱗屑、菌カビの胞子および薬剤ペニシリンのようなを含む。ワクチンはアレルギー反応の原因であると知られているIgE抗体の生産を妨害する。本発明のアジュバントの組み合わせを含む、脊椎宿主におけるアミロイド沈着を特徴とする疾患を予防または処置するために望ましいワクチンは、アミロイドペプチドタンパク質APPの部分を含むワクチンである。この疾患はアルツハイマー疾患、アミロイドーシスまたはアミロイド形成疾患と様々に呼ばれている。βアミロイドペプチド。すなわち本発明のワクチンは、Aβペプチド、ならびにAβペプチドのフラグメントおよびAβペプチドに対する抗体またはそれらの断片を加えた本発明アジュバントの組み合わせを含む。そのようなAβペプチドの1つのフラグメントは、以下の配列を有する28アミノ酸ペプチドであるHIVおよびSIVの場合、抗原性組成物は少なくとも1つのタンパク質、該タンパク質から誘導されるポリペプチド、ペプチドまたはフラグメントを含んで成る。場合により、多数のHIVまたはSIVタンパク質、ポリペプチド、ペプチドおよび/またはフラグメントを抗原性組成物に含んでもよい。本発明のアジュバントの混合製剤は、ポリヌクレオチドワクチンDNAワクチンとしても知られているにアジュバントとして包含するためにも適当である。そのようなワクチンはさらにブピバカインのような促進剤を含んでもよい米国特許第5593972号明細書を参照にされたい。これは引用により本明細書に編入する。本発明をより良く理解するために、以下の実施例を説明する。実施例は具体的に説明することのみを目的とし、そして本発明の範囲を限定するとは解釈されない。実験1HIVペプチドおよび種々のアジュバントを用いたBalbcマウスの免疫感作例1<材料および方法><動物>7~9週齢のメスのBalbcマウスを、タコニックファーム社TaconicFarmIncの配列は以下の通りである:このペプチドは既に記載され28、29、そしてマウスおよびヒトの両方に主要な中和決定基であり、そしてBalbcマウスのCD8CTLにより認識される部位である、CD4Th細胞応答を誘起するHIV1gp120MNに由来する配列を含む。このペプチドはRScearce博士デューク大学、ダラム、ノースキャロライナ州により提供された。CTL分析のために、HIV1IIIBのV3ループ内のCTLエピトープに相当するペプチドを含有するアジュバント調製物は、リビイムノケムリサーチ社RibiImmunoChemResearchIncはトリエタノールアミンシグマSigma、セントルイス、モンタナ州を使用して水性製剤として調製した。可溶化後、MPLは製造元の使用説明書に従い超音波処理して、滅菌濾過した乳光/透明溶液を生成した。MPLSEは予め配合されたスクアレンを基材とした水中油エマルションとして提供され、0~2500μgmlのMPLの濃度範囲であった。リン酸アルミニウムは研究室で調製した。フロイント完全アジュバントおよび不完全アジュバントは、ミシガン州、デトロイトのデフコラボラトリーズDifcoLaboratoriesから購入した。T1SP10MNペプチドおよびフロイントアジュバントは、2つの連結シリンジを使用して1:1の比率に乳化した。組換え的に発現したネズミIL12は、ジォネティックインスティテュートGeneticInstituteケンブリッジ、マサチューセッツ州により提供された。組換えマウスGMCSFは、イムネックスImmunexにより提供されたか、またはバイオソースインターナショナル、またはPBSに1μgmlの濃度に懸濁し、そして1001の容量で96ウェルのマイクロタイタープレート20、002アジ化ナトリウムを加える前に、洗浄バッファー20で洗浄した。1時間インキューベーションした後、ウェルを洗浄し、そしてビオチン化抗アイソタイプ/サブクラス抗体の適当な希釈物を加えて4°Cにて一晩インキューベーションした。ウェルを洗浄し、そしてストレプトアビジンを結合した西洋ワサビペルオキシダーゼとインキューベーションした。インキューベーション後、ウェルを洗浄し、そしてABTSで発色させた。ウェルを405nmで読んだ。力価を対照血清を使用して標準化した。サイトカインの分析には、細胞培養上清をBVD611B11抗IL4用、またはR46A2インターフェロンガンマ用をコートしたウェルに加えた。インキューベーションおよび洗浄後、ウェルをビモオチンで標識したBVD624G2IL4用またはXMG12インターフェロンガンマ用を使用して発色させた。サイトカインの濃度は、組換えマウスインターフェロンガンマまたはインターロイキン4から作成した標準曲線を使用して決定した。すべてのサイトカイン試薬はファルミンゲンPharmingenサンディエゴ、カリフォルニア州から購入した。<HIV1MN中和アッセイ>中和アッセイは、デューク大学のThomasMatthew博士の研究室で行った。簡単に説明すると、コード化した血清が研究室ウイルス単離物HIV1MNの中和に提供された。このアッセイは本質的にすでに記載したように行った。簡単に説明すると、試験血清の希釈物を96ウェルのマイクロタイタープレート中でアリコートにわけた251/ウェル。等容量の連続希釈したウイルスストックを各ウェルに加えた。インキューベーション後、ウイルス/抗体混合物をAA5標的細胞に加えた。細胞は96ウェルのマイクロタイタープレートで、新しい培地を1日おきに加えることにより培養した。感染から7日後、上清はウイルス複製、成功裏の感染またはそれらの阻害の測定としてウイルスの逆転写酵素の存在についてアッセイした。例2<相互の抗T1SP10MNIgG終点力価>相互の抗HIVペプチドに特異的IgG終点力価は、初回免疫感作から示した時点にプール血清n=5から測定した。マウスは、特に示さないかぎり0日、および27日に25μgのT1SP10MNを用いて臀部に皮下で免疫感作した。フロイントアジュバントの受容体について、マウスはCFAで乳化したペプチドで初回免疫し、そしてIFAで追加免疫感作した。MPLSEは、用量あたり2スクアレンおよび50μgMPLを含むエマルションとして提供された。SEはスクアレン、グリセロールおよび乳化剤から成る水中油型のエマルションである。組換えマウスIL12は50ngマウスで送達された。組換えマウスGMCSFは10μgマウスで送達された。結果を表1に与える。例3<相互の抗T1SP10MNIgG終点サブクラス力価>相互の終点IgGサブクラス力価は、初回免疫感作から6週間後、2次免疫感作から2週間後のプール血清n=5Balbcから測定した。マウスは、特に示さないかぎり25μgのペプチドを用いて臀部の皮下に免疫感作した。フロイントアジュバントの受容体について、マウスは完全フロイントアジュバントで乳化したペプチドで初回免疫し、そして不完全フロイントアジュバントで4および6週目に追加免疫感作した。MPLSEは、用量あたり2スクアレン油および50μgMPLを含むエマルションとして提供された。SEはスクアレン、グリセロールおよび乳化剤から成る水中油型のエマルションである。組換えマウスIL12は50ngマウスで送達された。組換えマウスGMCSFは10μgマウスで送達された。結果を表2に与える。例4膣洗浄液IgGおよびIgA<抗T1SP10MN抗体力価>膣のIgGおよびIgA抗ペプチド抗体力価は、最終免疫感作から2週間後に得た洗浄液から測定した。5匹のBalbcメスマウス群は、25μgのT1SP10MNおよび示したアジュバント製剤を用いて0、28および42日に免疫感作した。膣の抗体力価は、プールした膣洗浄液から測定した。結果を表3に与える。例5<脾臓細胞の増殖>T1SP10MNおよび種々のアジュバント製剤を用いて免疫感作したマウスに由来する脾臓細胞の増殖を測定した。5匹のBalbcメスマウス群は、25μgのT1SP10MNおよび示したアジュバントを用いて0、28日に免疫感作した。脾臓細胞は56日目の培養物で樹立し、そして96時間後の3Hチミジン取り込みを測定のために回収した。マウスは水性製剤または2SEを用いた安定なエマルションとして、50ngのIL12、10μgのGMCSF、50μgのMPLで免疫感作した。データは、刺激なしの培養で成長した細胞から測定された増殖値と比較してデルタcpmとして示す。バックグラウンドの刺激のカウントは、<800cpmであった。結果を表4に与える。例6<脾臓細胞によるIL4の分泌>25μgのT1SP10MNで刺激した脾臓細胞により培養物中に分泌されたIL4を測定した。脾臓細胞は5匹のBalbcメスマウスのプールから回収し、そして示した抗原性の刺激示したような50ngIL12、10μgのGMCSF、50μgMPLを用いて3または6日間のいずれかで培養した。インターロイキン4のレベルはELISAにより測定し、そして既知の濃度を有する標準と比較した。ブランクウェルは、このアッセイがこのような培養条件からインターロイキン4を検出できなかったことを示す。検出感度の下限は22単位mlであった。結果を表5に与える。例7<脾臓細胞によるインターフェロンガンマの分泌>25μgのT1SP10MNで刺激した脾臓細胞により培養物中に分泌されたインターフェロンガンマ。脾臓細胞は5匹のBalbcメスマウスのプールから回収し、そして示した抗原性の刺激例6と同じを用いて3または6日間のいずれかで培養した。インターフェロンガンマのレベルはELISAにより測定し、そして既知の濃度を有する標準と比較した。ブランクウェルは、このアッセイがこのような培養条件からインターフェロンガンマを検出できなかったことを示す。検出感度の下限は4ピコグラムmlであった。結果を表6に与える。実験2HIVペプチドおよび種々のアジュバントを用いたBalbcマウスの免疫感作例8<材料および方法><動物>7~9週齢のメスのBalbcマウスを、上記の例1に従い使用した。<ペプチド>例1に記載したHIV1MNペプチドT1SP10MNを使用した。ペプチドは生理塩水中で1mgmlの濃度に再水和した。<アジュバント>MPLを場合により安定なエマルション状態で使用する代わりに水性の製剤として保持することを除き、使用するアジュバントは例1に記載した通りであった。<免疫感作>マウスは総容量02mlを尾の両側に均等に分割して、臀部の皮下に免疫感作した。免疫感作は以下に示す量のアジュバント1つまたは複数と一緒に25μgのHIVペプチドを用いて、0および21日に投与した。CFAIFAを受容したマウスは、0日にCFA、そして21日にIFAを受容した。希釈および混合は例1に記載した通りであった。<サンプルの採集>動物からのサンプルの採集は、各免疫感作の前日および2次免疫感作から14日後に、例1のプロトコールに従い行った。<細胞調製>細胞の調製は、例1のプロトコールに従い、作成し、そして取り扱った。<固相酵素免疫検定法>ELISAは、例1のプロトコールに従い行った。<HIV1MN中和アッセイ>中和アッセイは、ここでも例1のプロトコールに従いデューク大学で行った。例9<相互の抗T1SP10MNIgG終点力価>相互の抗ペプチドIgG終点力価は、2次免疫感作から14日後に得られた個々のマウスからの幾何平均GMTまたはプールした血清から測定した。IgG1およびIgG2aサブクラス終点力価は、プールした血清から測定した。フロイントアジュバントの受容体について、マウスはCFAで乳化した25μgのペプチドで初回免疫し、そしてIFAで追加免疫感作した。MPLSEは、用量あたり1スクアレン油および50μgMPLを含むエマルションとして提供された。水性MPLは用量あたり50μgで送達された。組換えマウスIL12は40ngマウスで送達された。組換えマウスGMCSFは10μgマウスで送達された。結果を表7に与える。例10<相互の抗T1SP10MNIgG終点サブクラス力価>HIVペプチド特異的な膣洗浄液の終点相互IgGおよびIgA抗体力価は、2次免疫感作から15日後のプール血清n=5Balbcから測定した。マウスは例9のように免疫感作した。MPLSEは、用量あたり1スクアレン油および50μgMPLを含むエマルションとして提供された。水性MPLは用量あたり50μgで送達された。組換えマウスIL12は40ngマウスで送達された。組換えマウスGMCSFは10μgマウスで送達された。結果を表8に与える。例11<脾臓細胞の増殖>T1SP10MNおよび種々のアジュバント製剤を用いたインビトロ刺激例10と同様に応答した脾臓細胞の増殖を測定した。細胞は全部で96時間培養した。3Hチミジンを最後の18時間、培養に加えた。データはConAを含む培養で刺激した細胞に対して標準化した増殖指数として与える[平均cpm抗原/平均cpmConA]-[平均cpm培地/平均cpmConA]×100。結果として、培地で培養された細胞は0のバックグラウンド増殖を有する。結果を表9に与える。刺激しなかった培養で成長した細胞未満の増殖値は括弧に示す。例12<脾臓細胞によるIL4の分泌>T1SP10MNで刺激した脾臓細胞により培養物中に分泌されたインターロイキン4を測定した。細胞は全部で96時間培養した。細胞培養上清はELISAによりIL4について分析した。すべての値は、10ngの無関係なタンパク質で刺激した細胞の上清から決定した値から差し引いた後の値であった。結果は表10にpgmlで与える。リゾチームにより誘導された刺激から差し引き後の検出限界未満の結果は、bdで示す。アジュバントは40ngのIL12、10μgのGMCSFおよび50μgMPLであった例13<脾臓細胞によるインターフェロンガンマの分泌>T1SP10MNで刺激した脾臓細胞により培養物中に分泌されたインターフェロンガンマを測定した。細胞は全部で96時間培養した。細胞培養上清はELISAによりインターフェロンガンマについて分析した。すべての値は、10μgのリゾチームで刺激した細胞の上清から決定した値から差し引いた後の値であった。結果は表11に単位mlで与える。リゾチームにより誘導された刺激から差し引き後の検出限界未満の結果は、bdで示す。アジュバントは例12で使用したものと同じであった。実験3HIVペプチドおよび種々のアジュバントを用いたSwissWebsterマウスの免疫感作Balbcマウスの代わりにSwissWebsterマウスを用いて、例2のプロトコールに従った。相互の抗ペプチドIgG終点力価および膣洗浄液終点相互終点IgGおよびIgA抗体力価のみをこの実験では測定した。例14<相互の抗HIVペプチドIgG終点力価>相互の抗T1SP10MNIgG終点力価は、2次免疫感作から14日後に得た個々のSwissWebsterマウスの幾何平均から測定した。IgG1およびIgG2aサブクラス終点力価も、プールした血清から測定した。フロイントアジュバントの受容体について、マウスはCFAで乳化したペプチドで初回免疫し、そしてIFAで追加免疫感作した。MPLSEは、用量あたり1スクアレン油および50μgMPLを含むエマルションとして提供された。水性MPLは用量あたり50μgで送達された。組換えマウスIL12は40ngマウスで送達された。組換えマウスGMCSFは10μgマウスで送達された。結果を表12に与える。例15<相互の抗HIVペプチドIgG終点サブクラス力価>HIVペプチドに特異的な膣洗浄液の終点相互IgGおよびIgA抗体力価は、2次免疫感作から15日後のプール血清n=5SwissWebsterから測定した。マウスは例14のように免疫感作した。MPLSEは、用量あたり1スクアレン油および50μgMPLを含むエマルションとして提供された。水性MPLは用量あたり50μgで送達された。組換えマウスIL12は40ngマウスで送達された。組換えマウスGMCSFは10μgマウスで送達された。結果を表13に与える。実験4HIVペプチドおよび種々のペプチドを用いたBalbcマウスの免疫感作例2のプロトコールに従ったが、マウスは0および28日に免疫感作し、そして血清学的評価のために0、27および41日に採血した。CFAIFAはCFAを用いて0日に、IFAを用いて28日に配合した。MPLSEは50μgのMPLおよび2SEを用いて配合し、50ngIL2および10μgGMCSFを使用した。例16<相互の抗HIVペプチドIgG終点力価>相互の抗T1SP10MNIgG終点力価は、初期免疫感作から41日後、2次免疫感作から13日後に、各々のSwissWebsterマウスおよび幾何平均n=5Balbcから測定した。結果を表14に与える。ゼロ日で個々の力価はすべて50未満であった。[データなし]の記述は、プロトコールの完了前に動物が死んだことを意味する。SDは標準偏差を意味する。例17<相互の抗HIVペプチドIgG終点サブクラス力価>相互の終点抗ペプチドIgGサブクラス力価は、初期免疫感作から41日後、2次免疫感作から13日後のプールした血清n=5Balbcから測定した。結果を表15に与える。例18膣洗浄液IgGおよびIgA<抗HIVペプチド抗体力価>膣のIgGおよびIgA抗ペプチド抗体力価は、初期免疫感作から41日後、2次免疫感作から13日後の洗浄液から測定した。結果を表16に与える。例19<脾臓細胞の増殖>T1SP10MNおよび種々のアジュバント製剤を用いて免疫感作したマウスに由来する脾臓細胞の増殖を測定した。脾臓細胞は33μgmlのT1SP10MNを用いて4日間インビトロで刺激した。結果は、刺激の不存在下での取り込みに対して、33μgmlのT1SP10MNを用いたインビトロ刺激の結果として標識したチミジンの取り込みの変化として表4に示すデルタcpm。実験5HIVペプチドおよび種々のペプチドを用いたBalbcマウスの免疫感作例2のプロトコールに従ったが、マウスは0および22日に皮下に免疫感作し、そして血清学的評価のために42日に採血した。MPLSEは50μgのMPLおよび1SEを用いて配合したが、10μgGMCSFを使用した。例20<相互の抗HIVペプチドIgG終点力価>相互の抗ペプチド終点IgG力価は、初期免疫感作から42日後、2次免疫感作から13日後のプール血清SEは50μgのMPLおよび1SEを用いて配合したが、10μgGMCSFを使用した。HIVペプチドT1SP10MNはアミノ酸位17にシステインを含み、そして40残基長である。T1SP10MNは、ジェノシスバイオテクノロジーズウッドランド、テキサス州から購入した。例21<相互の抗T1SP10MNIgG終点力価>相互の抗T1SP10MNIgG終点力価は、初期免疫感作から28日後に、個々のマウスから、そしてそれらの幾何平均から測定した。結果を表18に与える。実験7HIVペプチドおよび種々のアジュバントを用いたBalbcマウスの免疫感作例6のプロトコールに従ったが、マウスn=3Balbcは0および32日に皮下に免疫感作し、そしてて血清学的評価のために38日に採血した。MPLSEは50μgのMPLおよび1SEを用いて配合したが、10μgGMCSFを使用した。例22<相互の抗HIVペプチドIgG終点力価>相互の抗T1SP10MNIgG終点力価は、初期免疫感作から38日後に、個々のマウスから、そしてそれらの幾何平均n=3Balbcから測定した。結果を表19に与える。実験8Balbcマウスを対象としたCTL分析マウスの免疫感作については実験6のプロトコールに従った。2次免疫感作から7日後のマウスから単離した脾臓細胞のCTL活性を評価した。MPLSEは50μgのMPLおよび1SEを用いて配合したが、10μgGMCSFを含んだが、または含まずに50μgの抗T1SP10MNを加えた。例23<Balbcマウスを対象としたCTL分析>CTL分析に関して、脾臓細胞を初回免疫感作から14日後、そして2次免疫感作から7日後の免疫感作したマウスから取り出した。すでに記載したプロトコール34に本質的に従った。簡単に説明すると、1群あたり3匹のマウスから赤血球-涸渇脾臓細胞をプールした。脾臓エフェクター細胞4×106mlを、15~2mlの容量で24ウェルの培養プレート中にて7日間、1μgmlのMN、またはIIIB10merCTLエピトープペプチドのいずれかで再刺激した。両CTLエピトープはH2Ddに限定されていた。培養は10Umlの組換えマウスIL2バイオソース:Biosourceを、少なくとも培養の5日間、補充した。細胞傷害活性の分析には、P815細胞はCr51で標識し、そして5μgmlペプチドIIIBまたはMNを4時間適用し、そして培養した脾臓エフェクター細胞に加えた。1001から371で、標的細胞に対して3倍希釈のエフェクター細胞を使用した。パーセントCTL活性は、×100を使用して、クロム放出のパーセントとして計算した。クロム放出は6時間のインキューベーション期間後に評価した。クロムの平均自然放出は、常に最大放出の15未満であった。28日からの結果を図5に示す。実験9種々のSIVペプチドおよびアジュバントを用いたアカゲザルの免疫感作アカゲザルMacacamulattaを対象として、MPLSEおよびGMCSFアジュバント製剤を、それが抗原特異的なCTLを誘導する能力について試験した。この実験では、それぞれがデューク大学のBartonHaynes博士の研究室でSIVenvからの無差別なTヘルパーエピトープを用い、または用いずに化学的に合成した3つの別個のMamuA★01拘束CTLエピトープそれぞれgag、polおよびenvに由来するから成る三価のペプチド免疫原を用いてアジュバント製剤を試験した。MamuA★01制限CTLエピトープを含むペプチドは以下の通りである:これらのCTL含有エピトープは、以下の配列を有するT-ヘルパーエピトープにも連結した:このように、3つのマルチエピトープペプチドは、以下の配列を有した:CTL分析は、MamuA★01拘束四量体染色分析により、バーバードメディカルスクールのNormanLetvin博士の研究室で行った。動物、用量および免疫原:HLAAホモロガス分子MamuA★01およびサブタイプDRβ0201を発現しているアカゲザルは、PCRにより同定し、そしてルイジアナ州ニューイベリアでコロニーに収容した。実験には、各々表20に記載する2匹の若いアカゲザルの3群を含んだ。群1は2匹のMamuA★01陽性、DRβ0201陰性動物Rh73およびRh80から成った。これらの動物はMPL商標SEおよびGMCSFを一緒に含む三価のMamuA★01拘束SIVgag、envおよびpolCTLエピトープペプチド短いペプチドカクテルを投与した。群2は、MPL商標SEおよびGMCSFを一緒に含むThSIVCTLgag、polおよびenvエピトープペプチド長いペプチドカクテルを受容した2匹のMamuA★01陽性、DRβ0201陽性アカゲザルから成った。群3は、ThSIVCTLgag、polおよびenvエピトープペプチド長いペプチドカクテルを接種した2匹のMamuA★01陰性、DRβ0201陽性動物から成った。表20はHLA型による群および使用した免疫原を説明する。すべての群は、0、4および8週に1の油および250μgのヒトGMCSF中の50μgのMPLSEに配合した1mlの各ペプチドカクテルで皮下に免疫感作した。18週間の免疫感作で、MPLSEの用量を1の油中で125μgに増加した。すべての群について、24mgの各々の長ペプチドおよび075mgの各々の短ペプチドを900μlの蒸留した脱イオン水に溶解した。次いでペプチド溶液はヒトGMCSFを再構成するために使用し、そして100μlのMPLSE製剤を加えた。例24<アカゲザルを対象としたCTL分析>動物は2週間毎に採血し、そして新しいおよび培養した末梢血単核細胞について四量体染色によるMamuA★01拘束CTLに関して、ヘパリン処理した血液を分析した。PBMCはpllc、p68A、p41Aまたはp46のいずれかで0日に刺激し、そして次いでIL2の存在下で培養し、そして11日に分析した。標準51Cr放出アッセイも、培養したPBMCについて行った。四量体アッセイは以下のように行った:gagからのエピトープペプチドpllc、polからのp68Aまたはpolからのp68Aまたはenvからのp41Aを、精製したビオチン化MamuA★01と、β2ミクログロブリンの存在下でインキューベーションし、ついでアビジンと結合させ、そしてPEに連結した。この四量体は次いでpllc、p68Aまたはp41Aエピトープを認識するT細胞レセプターを持つマカークCD8細胞を染色するために使用した。種々のDRβ201四量体は優勢envp46エピトープの回りを包み、p46Thエピトープを特異的に認識したCD4細胞の染色を可能とした。この結果を表21~24に示す。実験10淋菌NeisseriagonorrhoeaeのポーリンBタンパク質および<種々のアジュバントでのSwissWebsterマウスの免疫感作>異系交配したSwissWebsterマウスを、各10匹の5群に分割した。各群は1μgの組換えポーリンBタンパク質FA1090株に由来し、16個のアミノ酸をファージに由来するアミノ-末端に含み、ポーリンBタンパク質の成熟形が続くを受容した。第1群はアジュバントを受容しなかった:第2群は50μgのMPLを受容した;第3群は5μgのGMCSFを加えたMPLを受容した;第4群は25μgのMPLSEを受容した;第5群は5μgのGMCSFを加えたMPLSEを受容した。マウスは全容量02mlを尾/臀部の基底の2部位に均等に分割して臀部の皮下に免疫感作した。免疫感作は0週および4週に投与した。例25<相互の抗ポーリンBタンパク質IgG終点サブクラス力価>マウスは各免疫感作前および最終免疫感作から13日後に採血した。血清を群内のマウスに由来するプールから分析した。相互の終点抗ポーリンBタンパク質IgGサブクラス力価はプールした血清n=10SwissWebsterから膣洗浄液により、3週および6週で測定した。結果を表25に与える。すべての0日の免疫感作前の力価は50未満であった。組換えポーリンBタンパク質に対する個々の6週のIgG力価の幾何平均も測定した。結果を表26に与える。実験11淋菌NeisseriagonorrhoeaeのポーリンBタンパク質および<種々のアジュバントでのSwissWebsterマウスの免疫感作>異系交配したSwissWebsterマウスを、各5匹の6群に分割した。各群は1μgの組換えポーリンBタンパク質FA1090株に由来し、16個のアミノ酸をファージに由来するアミノ-末端に含み、ポーリンBタンパク質の成熟形が続くを受容した。第1群はアジュバントを受容しなかったタンパク質はPBS中に配合した:第2群は40ngのIL12を受容した;第3群は50μgのMPLを受容した;第4群は40ngのIL12を加えたMPLを受容した;第5群は25μgのMPLSEを受容した;第6群は40ngのIL12を加えたMPLSEを受容した。マウスに全容量02mlを臀部の皮下に免疫感作した。免疫感作は0週および4週に投与した。例26相互の抗ポーリンBタンパク質IgG終点サブクラス力価<および膣洗浄液IgGおよびIgA力価>マウスは各免疫感作前および最終免疫感作から13日後に採血した。血清を群内のマウスに由来するプールから分析した。相互の終点抗ポーリンBタンパク質IgGサブクラス力価はプールした血清n=5SwissWebsterから膣洗浄液により、そしてIgGおよびIgA膣洗浄力価を、それぞれ3週および6週で測定した。結果を表27に与える。すべての0日の免疫感作前の力価は50未満であった。膣洗浄液分析用の出発希釈は1/5であった。実験12<呼吸合胞体ウイルスFタンパク質および種々のアジュバントでのBalbcrマウスの免疫感作>Balbcマウスを、各5匹の7群に分割した。各群は3μgの精製した天然のヒト呼吸合胞体ウイルスFタンパク質二量体形を受容した。第1群はアジュバントを受容しなかったタンパク質はPBS中に配合した:第2群は100μgのリン酸アルミニウムを受容した;第3群は20μgのStimulonQS21アクイラバイオファルマシューティカルズ社:AquilaBiopharmaceuticalsInc、フラミンハム、マサチューセッツ州を受容した;第4群は50μgのMPLを受容した;第5群は5μgのGMCSFを加えたMPLを受容した;第6群は25μgのMPLSEを受容した;第7群は5μgのGHCSFを加えたMPLSEを受容した。マウスに全容量02mlを上腿の筋肉内に免疫感作した。免疫感作は0週および4週に投与した。例27<相互の抗RSVFタンパク質IgG終点サブクラス力価>マウスは各免疫感作前および最終免疫感作から13日後に採血した。血清を群内のマウスに由来するプールから分析した。相互の終点抗RSVFタンパク質IgGサブクラス力価はプールした血清n=5Balbcから測定した。結果を表28に与える。すべての0日の免疫感作前の力価は50未満であった。例28<脾臓細胞の増殖>25μgmlのRSVFタンパク質および種々のアジュバント製剤を用いたインビトロ刺激実施例27と同様に応答した脾臓細胞の増殖を測定した。脾臓細胞は2次免疫感作から14時間後に回収し、そして5×105細胞の密度にて培養物中で樹立した。細胞は全部で96時間培養した。3Hチミジンを最後の18時間、培養に加えた。データはConAを含む培養で刺激した細胞に対して標準化した増殖指数として与える[平均cpm抗原/平均cpmConA]-[平均cpm培地/平均cpmConA]×100。結果として、培地で培養された細胞は0のバックグラウンド増殖を有する。結果を表29に与える。実験13<呼吸合胞体ウイルスFタンパク質および種々のアジュバントでのBalbcrマウスの免疫感作>実験12のプロトコールを繰り返した。例29<相互の抗RSVFタンパク質IgG終点サブクラス力価>マウスは各免疫感作前および最終免疫感作から13日後に採血した。血清を群内のマウスに由来するプールから分析した。相互の終点抗RSVFタンパク質IgGサブクラス力価はプールした血清n=5Balbcから測定した。結果を表30に与える。すべての0日の免疫感作前の力価は50未満であった。例30<脾臓細胞のCTL分析>RSVFタンパク質および示したアジュバントを用いた免疫感作の結果としての脾臓細胞のCTL細胞傷害性T-リンパ球活性を、最終免疫感作から2週間後に評価した。データは、331のエフェクター:標的細胞比で、RSV感染した標的細胞と培養した脾臓細胞のパーセント特異的CTL活性を表す。パーセント特異的CTL活性は実施例24に記載したように、RSV感染した標的細胞に対して特異的な活性から非感染標的に対するCTL活性を引くことにより決定した。自然な脾臓細胞をインビトロ刺激細胞の供給源として、15のMOI感染多重度でRSVを用いて2時間感染させた。免疫感作したマウスの脾臓細胞から応答細胞を刺激細胞に51の比率で加え、そして6日間培養した。5日に、標的細胞BalbcMHCH2d細胞系をRSVに10のMOIで2時間感染させ、そして一晩インキューベーションした。6日に、感染したおよび非感染標的細胞を回収し、そして31Crを適用した。次いで1001~31のET比でインビトロのエフェクター細胞を標的細胞に加えた。クロムの放出は、4時間のインキューベーション期間後に評価した。結果を表31に与える。実験14<呼吸合胞体ウイルスFタンパク質および種々のアジュバントでのBalbcrマウスの免疫感作>Balbcマウスを、各5匹の6群に分割した。各群は3μgの精製した天然のRSVFタンパク質二量体形を受容した。第1群はアジュバントを受容しなかったタンパク質はPBS中に配合した:第2群は40ngのIL12を受容した;第3群は50μgのMPLを受容した;第4群は40ngのIL12を加えたMPLを受容した;第5群は25μgのMPLSEを受容した;第6群は40ngのIL12を加えたMPLSEを受容した。マウスは、尾の両側に与える2つの容量間で等しく分割した全容量02mlを臀部の皮下に疫感作した。免疫感作は0週および4週に投与した。例31<相互の抗RSVFタンパク質IgG終点サブクラス力価>マウスは各免疫感作前および最終免疫感作から13日後に採血した。血清を群内のマウスに由来するプールから分析した。相互の終点抗RSVFタンパク質IgGサブクラス力価はプールした血清n=5Balbcから測定した。結果を表32に与える。すべての0日の免疫感作前の力価は50未満であった。例32<脾臓細胞のCTL分析>RSVFタンパク質および示したアジュバントを用いた免疫感作の結果としての脾臓細胞のCTL活性を、最終免疫感作から2週間後に評価した。データは、331のエフェクター:標的細胞比で、RSV感染した標的細胞と培養した脾臓細胞のパーセント特異的CTL活性を表す。パーセント特異的CTL活性は例24に記載したように、RSV感染した標的細胞に対して特異的な活性から非感染標的に対するCTL活性を引くことにより決定した。自然な脾臓細胞をインビトロ刺激細胞の供給源として、15のMOIでRSVを用いて2時間感染させた。免疫感作したマウスの脾臓細胞から応答細胞を刺激細胞に51の比率で加え、そして6日間培養した。5日に、標的細胞BalbcMHCH2d細胞系をRSVに10のMOIで2時間感染させ、そして一晩インキューベーションした。6日に、感染したおよび非感染標的細胞を回収し、そして31Crを適用した。次いで1001~31のET比でインビトロのエフェクター細胞を標的細胞に加えた。クロムの放出は、4時間のインキューベーション期間後に評価した。28日からの結果を表33に与える。実験15<インフルエンザウイルスのヌクレオキャプシドタンパク質および種々のアジュバントでのBalbcマウスの免疫感作>Balbcマウスを、各5匹の6群に分割した。各群は、Adron30772株に由来する1μgのインフルエンザウイルスVPタンパク質を受容した。チェック群第1群はアジュバントを受容しなかったペプチドはPBS中に配合した:第2群は100μgのリン酸アルミニウムを受容した;第3群は50μgのMPLを受容した;第4群は5μgのGMCSFを加えたMPLを受容した;第5群は25μgのMPLSEを受容した;第6群は5μgのGMCSFを加えたMPLSEを受容した。マウスは、全容量02mlを臀部の皮下に疫感作した。免疫感作は0週および4週に投与した。例33<脾臓細胞のCTL分析>インフルエンザNPペプチドおよび示したアジュバントを用いた免疫感作の結果としての脾臓細胞のCTL活性を、最終免疫感作から2週間後に評価した。評価はペプチドを適用した標的p815細胞を使用して例32の手順に従い行ったこのペプチドはNPのアミノ酸147~155に対応し、そして配列:ThrTyrGlnArgThrArgAlaLeuValを有する。MPLまたはMPLSEを含む製剤中にGMCSFを包含すると、顕著なCTL活性の低下がもたらされたデータは示さず。