"a1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメイン、またはそれらの機能的等価物と、b前記1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメインに作動可能に連結され、そのC末端側に位置するAdB-2/3線維ポリペプチドノブドメイン、またはそれらの機能的等価物と、c前記1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメインに作動可能に連結され、そのN末端側に位置する1つまたはそれより多い非AdB-2/3由来二量体形成ドメインとを含む組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。AdB-2/3線維ポリペプチド尾部ドメインを含まない、請求項1に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。各シャフトドメインが、Ad3線維ポリペプチドシャフトドメイン、Ad7線維ポリペプチドシャフトドメイン、Ad11線維ポリペプチドシャフトドメイン、Ad14線維ポリペプチドシャフトドメイン、Ad14a線維ポリペプチドシャフトドメイン、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項1または2に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記1つまたはそれより多いシャフトドメインが1~22個のシャフトドメインを含む、請求項1から3までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。各シャフトドメインが、配列番号11:によるアミノ酸配列を含む、請求項1から4までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。各シャフトドメインが、配列番号12:によるアミノ酸配列を含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。各シャフトドメインが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、および配列番号5からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1から4までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記ノブドメインが、Ad3線維ポリペプチドノブドメイン、Ad7線維ポリペプチドノブドメイン、Ad11線維ポリペプチドノブドメイン、Ad14線維ポリペプチドノブドメイン、Ad14a線維ポリペプチドノブドメイン、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項1から7までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記ノブドメインが、配列番号13:によるアミノ酸配列を含む、請求項1から8までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記ノブドメインが、配列番号14:によるアミノ酸配列を含む、請求項1から8までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記ノブドメインが、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、および配列番号10からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1から8までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記二量体形成ドメインが、EVSALEK配列番号22および/またはKVSALKE配列番号23からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1から11までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。aそれぞれがAd3シャフトドメイン配列番号1を含む1つまたはそれより多いシャフトドメインと、bAd3ノブドメイン配列番号6を含むノブドメインとを含む、請求項1から12までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。結合開口薬-1JO-1配列番号20のアミノ酸配列を含む、請求項13に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。単一のAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメインを含有する、請求項1から14までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。多量体形成している、請求項1から15までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。二量体形成している、請求項1から15までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記組換えAdB-2/3線維ポリペプチドに結合体化した、1種またはそれより多い種の化合物をさらに含む、請求項1から17までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記1種またはそれより多い種の化合物が、治療薬、診断薬、およびイメージング剤からなる群より選択される、請求項18に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。前記1種またはそれより多い種の化合物が、少なくとも1種の治療薬を含み、前記治療薬が、抗体、免疫複合体、ナノ粒子、化学療法薬、放射性粒子、ウイルス、ワクチン、細胞免疫療法薬、遺伝子療法構築物、核酸治療薬、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項19に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチド。請求項1から19までのいずれか一項に記載の組換えAdB-2/3線維ポリペプチドをコードする単離された核酸。請求項21に記載の単離された核酸を含む組換え発現ベクター。請求項22に記載の組換え発現ベクターを含む宿主細胞。aAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と、b薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。前記AdB-2/3線維多量体が、請求項16から20までのいずれか一項に記載の多量体形成している組換えAdB-2/3線維ポリペプチドを含む、請求項23に記載の医薬組成物。上皮組織に関連する障害の治療的処置または診断を増強するため、および/または上皮組織をイメージングするための方法であって、それを必要とする被験体に、a前記障害を処置するために十分な量の1種またはそれより多い種の治療薬、前記障害を診断するために十分な量の診断薬、および/または前記上皮組織をイメージングするために十分な量のイメージング剤と、b前記1種またはそれより多い種の治療薬、診断薬、および/またはイメージング剤の有効性を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物とを投与することを含む、方法。前記上皮組織に関連する障害が、固形腫瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸障害、クローン病、潰瘍性大腸炎、便秘、胃食道逆流性疾患、バレット食道、慢性閉塞性肺疾患、喘息、気管支炎、肺気腫、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、肺炎、原発性肺高血圧症、肺塞栓症、肺サルコイドーシス、結核、膵炎、膵管障害、胆管閉塞症、胆嚢炎、総胆管結石症、脳障害、乾癬、皮膚炎、糸球体腎炎、肝炎、糖尿病、甲状腺障害、蜂巣炎、感染症、腎盂腎炎、および胆石からなる群より選択される、請求項26に記載の方法。前記上皮組織に関連する障害が固形腫瘍である、請求項26に記載の方法。前記固形腫瘍が、乳房の腫瘍、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、直腸の腫瘍、胃の腫瘍、前立腺の腫瘍、卵巣の腫瘍、子宮の腫瘍、皮膚の腫瘍、内分泌の腫瘍、子宮頸部の腫瘍、腎臓の腫瘍、黒色腫、膵臓の腫瘍、肝臓の腫瘍、脳腫瘍、頭頸部の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、胃の腫瘍、扁平上皮癌、腺癌、膀胱の腫瘍、および食道の腫瘍からなる群より選択される、請求項28に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項26から29までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、またはその機能的等価物である、請求項26から30までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項26から31までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体がAd3のPtDdを含む、請求項26から32までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、結合開口薬1JO-1配列番号20を含む、請求項26から32までのいずれか一項に記載の方法。1種またはそれより多い種の化合物が、少なくとも1種の治療薬を含み、前記治療薬が、抗体、免疫複合体、ウイルス、ナノ粒子、化学療法薬、放射性粒子、ワクチン、細胞免疫療法薬、遺伝子療法構築物、核酸治療薬、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項26から34までのいずれか一項に記載の方法。前記治療薬が、化学療法薬またはモノクローナル抗体を含む、請求項25から35までのいずれか一項に記載の方法。前記治療薬が、抗腫瘍モノクローナル抗体を含む、請求項25から35までのいずれか一項に記載の方法。前記抗腫瘍モノクローナル抗体が、トラスツズマブ、セツキシマブ、ペルツズマブ、アポマブ、コナツムマブ、レクサツムマブ、ベバシズマブ、ベバシズマブ、デノスマブ、ザノリムマブ、リンツズマブ、エドレコロマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、ミツモマブ、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、オレゴボマブ、ペムブモマブ、ダクリズマブ、パニツムマブ、カツマキソマブ、オファツムマブ、およびイブリツモマブからなる群より選択される抗体を含む、請求項37に記載の方法。前記上皮組織に関連する障害が、Her-2陽性腫瘍を含む、請求項25から38までのいずれか一項に記載の方法。前記Her-2陽性腫瘍が、乳房の腫瘍、胃の腫瘍、結腸の腫瘍、および卵巣の腫瘍からなる群より選択される、請求項39に記載の方法。前記治療薬が、トラスツズマブを含む、請求項39または40に記載の方法。前記治療薬が、化学療法薬、照射、またはそれらの組み合わせを含む、請求項39から41までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3のPtDd、JO-1、またはその機能的等価物を含む、請求項39から42までのいずれか一項に記載の方法。前記被験体が、トラスツズマブ療法に応答しなかった、請求項39から43までのいずれか一項に記載の方法。前記上皮組織に関連する障害が、EGFR陽性腫瘍を含む、請求項26から38までのいずれか一項に記載の方法。前記EGFR陽性腫瘍が、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、乳房の腫瘍、直腸の腫瘍、頭頸部の腫瘍、および膵臓の腫瘍からなる群より選択される、請求項45に記載の方法。前記治療薬が、セツキシマブを含む、請求項45または46のいずれか一項に記載の方法。前記治療薬が、VEGF阻害剤を含む、請求項28から34までのいずれか一項に記載の方法。前記治療薬が、化学療法薬、照射、またはそれらの組み合わせを含む、請求項45から48までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3のPtDd、JO-1、またはそれらの機能的等価物を含む、請求項45から49までのいずれか一項に記載の方法。前記被験体が、セツキシマブ療法に応答しなかった、請求項45から50までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が二量体である、請求項26から51までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、JO-1、またはその機能的等価物を含む、請求項52に記載の方法。上皮組織に関連する障害を処置するための方法であって、前記障害の処置を必要とする被験体に、前記障害を処置するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物を投与することを含む、方法。前記障害が、AdB-2/3ウイルス感染症または固形腫瘍である、請求項54に記載の方法。前記障害が、固形腫瘍であり、前記固形腫瘍が、乳房の腫瘍、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、直腸の腫瘍、胃の腫瘍、前立腺の腫瘍、卵巣の腫瘍、子宮の腫瘍、皮膚の腫瘍、内分泌の腫瘍、子宮頸部の腫瘍、腎臓の腫瘍、黒色腫、膵臓の腫瘍、肝臓の腫瘍、脳腫瘍、頭頸部の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、胃の腫瘍、扁平上皮癌、腺癌、膀胱の腫瘍、および食道の腫瘍からなる群より選択される、請求項55に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項54から56までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、およびそれらの機能的等価物である、請求項54から57までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項54から58までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体がAd3のPtDdを含む、請求項54から59までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、結合開口薬1JO-1配列番号20を含む、請求項54から59までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が二量体である、請求項54から61までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、JO-1、またはその機能的等価物を含む、請求項62に記載の方法。上皮組織への化合物の送達を改善するための方法であって、前記上皮組織を、a前記上皮組織に送達すべき1種またはそれより多い種の化合物、およびb前記上皮組織への前記1種またはそれより多い種の化合物の送達を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む、方法。前記1種またはそれより多い種の化合物が、診断薬またはイメージング剤を含む、請求項64に記載の方法。前記上皮組織が固形腫瘍を含む、請求項65に記載の方法。前記固形腫瘍が、乳房の腫瘍、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、直腸の腫瘍、胃の腫瘍、前立腺の腫瘍、卵巣の腫瘍、子宮の腫瘍、皮膚の腫瘍、内分泌の腫瘍、子宮頸部の腫瘍、腎臓の腫瘍、黒色腫、膵臓の腫瘍、肝臓の腫瘍、脳腫瘍、頭頸部の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、胃の腫瘍、扁平上皮癌、腺癌、膀胱の腫瘍、および食道の腫瘍からなる群より選択される、請求項66に記載の方法。デスモグレイン2DSG2を発現している組織への物質の送達を改善するための方法であって、DSG2を発現している前記組織を、a前記組織に送達すべき1種またはそれより多い種の化合物、およびb前記組織への前記1種またはそれより多い種の化合物の送達を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む、方法。組織における上皮間葉転換EMTを誘導するための方法であって、上皮組織を、EMTを誘導するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む、方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項64から69までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、またはその機能的等価物である、請求項64から70までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項64から71までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体がAd3のPtDdを含む、請求項64から72までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、結合開口薬1JO-1配列番号20を含む、請求項64から73までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が二量体である、請求項64から74までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、JO-1配列番号20、またはその機能的等価物を含む、請求項75に記載の方法。上皮組織に関連する障害を処置すること、上皮組織への物質の送達を改善すること、DSG2を発現している組織への物質の送達を改善すること、組織におけるEMTを誘導すること、および/またはAdB-2/3感染症を処置することのうちの1つまたはそれより多いための候補化合物を同定するための方法であって、aAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物を、1種またはそれより多い種の試験化合物の存在下、DSG2への多量体の結合を促進する条件下でDSG2と接触させるステップと、b対照と比較して、DSG2との結合についてAdB-2/3線維多量体と競合する陽性の試験化合物を同定するステップとを含み、前記陽性の試験化合物が、上皮組織に関連する障害を処置すること、上皮組織への物質の送達を改善すること、DSG2を発現している組織への物質の送達を改善すること、組織におけるEMTを誘導すること、および/またはAdB-2/3感染症を処置することのうちの1つまたはそれより多いための候補化合物である、方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項77に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3線維多量体、またはその機能的等価物である、請求項77または78のいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される、請求項77から79までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、Ad3のPtDdを含む、請求項77から80までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、結合開口薬1JO-1配列番号20を含む、請求項77から80までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が二量体である、請求項77から82までのいずれか一項に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体が、JO-1、またはその機能的等価物を含む、請求項83に記載の方法。前記AdB-2/3線維多量体がJO-1二量体を含む、請求項24または25に記載の医薬組成物。上皮組織に関連する障害を処置するために十分な量の1種またはそれより多い種の治療薬、上皮組織に関連する障害を診断するために十分な量の診断薬、および/または上皮組織をイメージングするために十分な量のイメージング剤をさらに含む、請求項24、25または85のいずれか一項に記載の医薬組成物。第1の態様では、本発明は、上皮組織に関連する障害の治療的処置または診断を増強する、かつ/または上皮組織をイメージングするための方法であって、それを必要とする被験体に、a障害を処置するために十分な量の1種またはそれより多い種の治療薬、障害を診断するために十分な量の診断薬、および/または上皮組織をイメージングするために十分な量のイメージング剤と、b1種またはそれより多い種の治療薬、診断薬、および/またはイメージング剤の有効性を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体またはその機能的等価物とを投与することを含む方法を提供する。本発明の方法は、上皮組織に関連する障害を処置する、かつ/または診断する、かつ/または、上皮組織、例えば、そのような障害が存在すると考えられる上皮組織などをイメージングするために用いることができ、そのような障害としては、これらに限定されないが、固形腫瘍、過敏性腸症候群、炎症性腸障害、クローン病、潰瘍性大腸炎、便秘、胃食道逆流性疾患gatroesophagealrefluxdisease、慢性閉塞性肺疾患、喘息、気管支炎、肺気腫、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、肺炎、原発性肺高血圧症、肺塞栓症、肺サルコイドーシス、結核、膵炎、膵管障害、脳障害すなわち:上皮の血液脳関門を通る薬物の輸送を改善することが有効であり得る任意の脳障害、胆管閉塞症、胆嚢炎、総胆管結石症、感染症これらに限定されないが、蜂巣炎、肺炎、および腎盂腎炎を含む、および胆石が挙げられる。好ましい実施形態では、障害は、これらに限定されないが、乳房の腫瘍、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、直腸の腫瘍、胃の腫瘍stomachtumor、前立腺の腫瘍、卵巣の腫瘍、子宮の腫瘍、子宮頸部の腫瘍cervicaltumor、腎臓の腫瘍、皮膚の腫瘍、黒色腫、膵臓の腫瘍、肝臓の腫瘍、内分泌の腫瘍、脳腫瘍、頭頸部の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、胃の腫瘍gastrictumor、扁平上皮癌、腺癌、膀胱の腫瘍、および食道の腫瘍を含めた固形腫瘍である。本発明の任意の実施形態の方法では、例えば、Ad3線維多量体、およびAd7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択されるAdB-2/3線維多量体を利用することができる。好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、またはそれらの機能的等価物である。別の実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物を含んでよい。好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDdまたは結合開口薬junctionopener1JO-1配列番号20を含む。任意の適切な治療薬、診断薬、またはイメージング剤をこれらの方法において使用することができる。治療薬を使用する実施形態では、そのような治療薬としては、これらに限定されないが、抗体、免疫複合体immunoconjugate、ワクチン、放射性粒子/放射線療法照射、化学療法薬、養子T細胞療法および樹状細胞療法を含めた細胞免疫療法、ナノ粒子、吸入治療薬、遺伝子療法構築物、および核酸治療薬、またはそれらの組み合わせを挙げることができる。好ましい実施形態では、治療薬は、化学療法薬または抗腫瘍モノクローナル抗体を含む。本発明の方法において使用することができる例示的な抗腫瘍モノクローナル抗体としては、これらに限定されないが、トラスツズマブtrastuzumab、セツキシマブcetumiximab、ペルツズマブpetuzumab、アポマブapomab、コナツムマブconatumumab、レクサツムマブlexatumumab、ベバシズマブbevacizumab、ベバシズマブbevacizumab、デノスマブdenosumab、ザノリムマブzanolimumab、リンツズマブlintuzumab、エドレコロマブedrecolomab、リツキシマブrituximab、チシリムマブticilimumab、トシツモマブtositumomab、アレムツズマブalemtuzumab、エプラツズマブepratuzumab、ミツモマブmitumomab、ゲムツズマブgemtuzumab、オゾガマイシンozogamicin、オレゴボマブoregovomab、ペムブモマブpemtumomab、ダクリズマブdaclizumab、パニツムマブpanitumumab、カツマキソマブcatumaxomab、オファツムマブofatumumab、およびイブリツモマブibritumomabが挙げられる。好ましい一実施形態では、上皮組織に関連する障害は、Her-2陽性腫瘍を含む。この実施形態の下で処置することができる例示的なHer-2陽性腫瘍としては、これらに限定されないが、乳房の腫瘍、胃の腫瘍、結腸の腫瘍、および卵巣の腫瘍が挙げられる。この実施形態では、治療薬が、トラスツズマブを含むことがさらに好ましく;さらに好ましい実施形態では、治療薬が、1種またはそれより多い種の化学療法薬および/または照射をさらに含む。この実施形態では、AdB-2/3線維多量体が、Ad3のPtDd、JO-1配列番号20、またはそれらの機能的等価物を含むことがさらに好ましい。別の好ましい実施形態では、処置される被験体は、トラスツズマブ療法に応答していない。別の好ましい実施形態では、上皮組織に関連する障害は、EGFR陽性腫瘍を含む。例示的なEGFR陽性腫瘍としては、これらに限定されないが、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、乳房の腫瘍、直腸の腫瘍、頭頸部の腫瘍、および膵臓の腫瘍が挙げられる。この実施形態では、治療薬が、セツキシマブを含むことが好ましく;さらに好ましい実施形態では、治療薬が、1種またはそれより多い種の化学療法薬および/または照射をさらに含む。この実施形態では、AdB-2/3線維多量体が、Ad3のPtDd、JO-1配列番号20、またはそれらの機能的等価物を含むことがさらに好ましい。別の好ましい実施形態では、処置される被験体は、セツキシマブ療法に応答していない。別の実施形態では、上皮組織に関連する障害は固形腫瘍を含み、治療薬は血管内皮増殖因子VEGF阻害剤を含む。第2の態様では、本発明は、上皮組織に関連する障害を処置するための方法であって、それを必要とする被験体に、障害を処置するために十分な量のAdB-2/3線維多量体またはその機能的等価物を投与することを含む方法を提供する。この実施形態では、AdB-2/3線維多量体を単独療法として投与する。一実施形態では、この方法を、AdB-2/3ウイルス感染症を処置するために使用する。別の実施形態では、処置される障害は固形腫瘍である。本発明のこの態様を使用して処置することができる例示的な固形腫瘍としては、これらに限定されないが、乳房の腫瘍、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、直腸の腫瘍、胃の腫瘍、前立腺の腫瘍、卵巣の腫瘍、子宮の腫瘍、子宮頸部の腫瘍、腎臓の腫瘍、皮膚がん、黒色腫、膵臓の腫瘍、肝臓の腫瘍、内分泌の腫瘍、脳腫瘍、頭頸部の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、胃の腫瘍、扁平上皮癌、腺癌、膀胱の腫瘍、および食道の腫瘍が挙げられる。この態様では、使用するための例示的なAdB-2/3線維多量体としては、これらに限定されないが、Ad3線維多量体、およびAd7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物が挙げられる。好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、およびそれらの機能的等価物である。さらに好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。種々のさらに好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDdまたは結合開口薬1JO-1配列番号20を含む。第3の態様では、本発明は、a1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメイン、またはそれらの機能的等価物と、b1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメインに作動可能に連結され、そのC末端側に位置するAdB-2/3線維ポリペプチドノブドメイン、またはその機能的等価物と、c1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメインに作動可能に連結され、そのN末端側に位置する1つまたはそれより多い非AdB-2/3由来二量体形成ドメインとを含む組換えAdB-2/3線維ポリペプチドを提供する。一実施形態では、組換えAdB-2/3線維ポリペプチドは、AdB-2/3尾部ドメインを含まない。別の実施形態では、各シャフトドメインは、Ad3シャフトドメイン、Ad7シャフトドメイン、Ad11シャフトドメイン、Ad14シャフトドメイン、Ad14aシャフトドメイン、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。別の実施形態では、1つまたはそれより多いシャフトドメインは、1~22個のシャフトドメインを含む。種々の別の実施形態では、各シャフトドメインは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号11または配列番号12によるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。別の実施形態では、ノブドメインは、Ad3ノブドメイン、Ad7ノブドメイン、Ad11ノブドメイン、Ad14ノブドメイン、Ad14aノブドメイン、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。種々の別の実施形態では、ノブドメインは、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号13または配列番号14によるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。別の実施形態では、二量体形成ドメインは、EVSALEK配列番号22および/またはKVSALKE配列番号23からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、組換えAdB-2/3ポリペプチドは、aそれぞれがAd3シャフトドメイン配列番号1を含む、またはそれからなる1つまたはそれより多いシャフトドメインを含み、bノブドメインがAd3ノブドメイン配列番号6を含む、またはそれからなる。さらに好ましい実施形態では、組換えAdB-2/3線維ポリペプチドは、JO-1配列番号20のアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。さらに好ましい実施形態では、AdB-2/3線維ポリペプチドは、多量体を形成しており、二量体を形成していることが最も好ましい。他の態様では、本発明は、本発明の組換えAdB-2/3線維ポリペプチドをコードする単離された核酸;本発明の単離された核酸を含む組換え発現ベクター;本発明の組換え発現ベクターを含む宿主細胞;および本明細書に記載のAdB-2/3多量体を含む医薬組成物を提供する。別の態様では、本発明は、上皮組織への化合物の送達を改善するための方法であって、上皮組織を、a上皮組織に送達すべき1種またはそれより多い種の化合物;およびb上皮組織への1種またはそれより多い種の化合物の送達を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む方法を提供する。この方法により、これらに限定されないが診断用化合物およびイメージング化合物を含めた、上皮細胞を標的とする任意の化合物の送達を改善することが可能になる。好ましい一実施形態では、上皮組織は固形腫瘍を含む。さらに別の態様では、本発明は、デスモグレイン2DSG2を発現している組織への化合物の送達を改善するための方法であって、DSG2を発現している組織を、a組織に送達すべき1種またはそれより多い種の化合物;およびb組織への1種またはそれより多い種の化合物の送達を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む方法を提供する。本発明のこの態様の方法は、DSG2を発現している組織への、任意の対象の化合物の送達を改善するために用いることができる。さらなる態様では、本発明は、組織における上皮間葉転換EMTを誘導する方法であって、上皮組織を、EMTを誘導するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む方法を提供する。これらの本発明のさらなる態様のそれぞれの好ましい一実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、およびAd7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。種々のさらに好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、またはその機能的等価物であり;AdB-2/3線維多量体は、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択され;AdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDdを含み;AdB-2/3線維多量体は、結合開口薬1JO-1配列番号20を含み;AdB-2/3線維多量体は二量体である。別の態様では、本発明は、上皮組織に関連する障害を処置すること、上皮組織への物質の送達を改善すること、DSG2を発現している組織への物質の送達を改善すること、組織におけるEMTを誘導すること、および/またはAdB-2/3感染症を処置することのうちの1つまたは複数に対する候補化合物を同定するための方法であって、aAdB-2/3線維多量体とDSG2を、DSG2への多量体の結合を促進する条件下、1種またはそれより多い種の試験化合物の存在下で接触させるステップと;b対照と比較して、AdB-2/3線維多量体がDSG2と結合することに競合する陽性の試験化合物を同定するステップとを含み、陽性の試験化合物が、上皮組織に関連する障害を処置すること、上皮組織への物質の送達を改善すること、DSG2を発現している組織への物質の送達を改善すること、組織におけるEMTを誘導すること、および/またはAdB-2/3感染症を処置することのうちの1つまたは複数に対する候補化合物である方法を提供する。引用されている参考文献は全て、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。本出願の範囲内では、別段の指定のない限り、利用される技法は、いくつかの周知の参考文献、例えば、MolecularCloning:ALaboratoryManualSambrookら、1989年、ColdSpringHarborLaboratoryPress、GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology、185巻、D.Goeddel編、1991年、AcademicPress、SanDiego、CA、GuidetoProteinPurification、MethodsinEnzymologyM.P.Deutshcer編、1990年AcademicPress,Inc.;PCRProtocols:AGuidetoMethodsandApplicationsInnisら、1990年、AcademicPress、SanDiego、CA、CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechnique、第2版R.I.Freshney.1987年、Liss,Inc.NewYork、NY、GeneTransferandExpressionProtocols、109~128頁、E.J.Murray編、TheHumanaPressInc.、Clifton、N.J.、およびAmbion1998年CatalogAmbion、Austin、TXなどのいずれかにおいて見ることができる。本明細書で使用される場合、単数形であるa1つの、an1つのおよびtheそのは、文脈により明確に別段の規定がなされない限り、複数の指示対象を包含する。およびandは、本明細書で使用される場合、明示的に別段の規定がない限りまたはorと互換的に使用される。本明細書で使用される場合、アミノ酸残基は以下の通り省略される:アラニンAla;A、アスパラギンAsn;N、アスパラギン酸Asp;D、アルギニンArg;R、システインCys;C、グルタミン酸Glu;E、グルタミンGln;Q、グリシンGly;G、ヒスチジンHis;H、イソロイシンIle;I、ロイシンLeu;L、リジンLys;K、メチオニンMet;M、フェニルアラニンPhe;F、プロリンPro;P、セリンSer;S、トレオニンThr;T、トリプトファンTrp;W、チロシンTyr;Y、およびバリンVal;V。本明細書で使用される場合、Adという略語は、アデノウイルスを指し、一般には、その後にアデノウイルスの血清型を示す数が続く。例えば、Ad3とは、アデノウイルス血清型3を指す。本発明の任意の態様の実施形態は全て、文脈により明確に別段の規定がなされない限り組み合わせて用いることができる。第1の態様では、本発明は、上皮組織に関連する障害の治療的処置、診断、またはイメージングを増強するための方法であって、それを必要とする被験体に、a障害を処置するために十分な量の1種またはそれより多い種の治療薬、障害を診断するために十分な量の診断薬、および/または上皮組織をイメージングするために十分な量のイメージング剤;およびb1種またはそれより多い種の治療薬、診断、および/またはイメージング剤の有効性を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物を投与することを含む方法を提供する。本発明のこの態様の方法を用いて、治療薬、診断薬、および/またはイメージング剤の、それらの標的への接近および上皮組織への散在を改善することにより、上皮組織に関連する障害の治療的処置、診断、またはイメージングを増強することができる。いかなる機構にも縛られるものではないが、出願人らは、これは、相補的な機構を通じて生じると考える:したがって標的受容体が側底から頂端の細胞表面に移動することにより、受容体を標的とする治療薬、診断薬、および/またはイメージング剤、例えば、モノクローナル抗体などの標的となる上皮組織への接近が向上すること、および細胞間結合の破壊を通じて治療薬の浸透が向上することが可能になる。本明細書において詳細に開示されている通り、出願人らは、デスモグレインdesmogelin-2DSG2がAdB-2/3に対する主要な高親和性受容体であることを発見した。DSG2は、カドヘリンタンパク質ファミリーに属するカルシウム結合性膜貫通糖タンパク質である。上皮細胞では、DSG2は細胞間接着構造の構成成分である。その細胞質尾部は、細胞接着および細胞間結合/細胞形態の調節因子と直接接触している一連のタンパク質と相互作用する。DSG2は、胃がん、扁平上皮癌、黒色腫、転移性前立腺がん、および膀胱がんを含めた一連の上皮の悪性疾患において過剰発現されることが示されている。特定の作用機構に縛られるものではないが、出願人らは、AdB-2/3線維多量体がDSG2と結合することは、DSG2に媒介される一過性の細胞間結合の開口を誘発するために役立ち、DSG2に媒介される一過性の細胞間結合の開口は、そうでなければ少なくともいくらかの程度で細胞間結合内に閉じ込められている上皮細胞内の標的と結合する治療薬、診断薬、イメージング剤、または任意の他の対象の化合物の接近を改善するために役立つと考える。そのような活性の詳細な例は本明細書において提供される。DSG2は上皮細胞において広範に発現されるので、本発明の方法は、対象の標的への接近が限定され得る細胞間結合を含む上皮組織に任意の治療薬、診断薬、イメージング剤、または他の化合物を送達するための広範な適用を有する。本明細書で使用される場合、上皮組織に関連する障害とは、上皮細胞/上皮組織に投与される/接近する治療薬、診断薬、またはイメージング剤により、治療の有効性、診断の有効性、および/またはイメージングの有効性のいずれの改善であろうと患者に臨床的利益がもたらされる任意の障害である。そのような障害としては、これらに限定されないが、固形腫瘍すなわち:上皮細胞結合を有する任意の腫瘍、胃腸障害これらに限定されないが、過敏性腸症候群、炎症性腸障害、クローン病、潰瘍性大腸炎、便秘、胃食道逆流性疾患、バレット食道などを含む、皮膚疾患これらに限定されないが、乾癬および皮膚炎を含む、肺障害これらに限定されないが、慢性閉塞性肺疾患、喘息、気管支炎、肺気腫、嚢胞性線維症、間質性肺疾患、肺炎を含む、膵管障害、脳障害すなわち:血液脳関門を通る薬物の輸送を改善することが有効であり得る任意の脳障害、原発性肺高血圧症、肺塞栓症、肺サルコイドーシス、結核など、腎障害これに限定されないが、糸球体腎炎を含む、肝疾患これに限定されないが、肝炎を含む、内分泌障害これらに限定されないが、糖尿病および甲状腺障害を含む、膵管障害これらに限定されないが、膵炎を含む、および胆管障害これらに限定されないが、胆管閉塞症、胆嚢炎、総胆管結石症、胆石などを含むおよび上皮組織の感染症これらに限定されないが、蜂巣炎、肺炎、肝炎、および腎盂腎炎を含むが挙げられる。好ましい一実施形態では、上皮組織に関連する障害は、これらに限定されないが、乳房の腫瘍、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、直腸の腫瘍、皮膚の腫瘍、内分泌の腫瘍、胃の腫瘍、前立腺の腫瘍、卵巣の腫瘍、子宮の腫瘍、子宮頸部の腫瘍、腎臓の腫瘍、黒色腫、膵臓の腫瘍、肝臓の腫瘍、脳腫瘍、頭頸部の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、胃の腫瘍、扁平上皮癌、腺癌、膀胱の腫瘍、および食道の腫瘍を含めた固形腫瘍を含む。当業者には理解される通り、そのような腫瘍は、原発腫瘍、局所浸潤性腫瘍、ならびに転移した腫瘍を包含する。本明細書で使用される場合、有効性の増強とは、治療薬、診断薬、および/またはイメージング剤を単独で使用すると見られるものに対する治療の有効性、診断の有効性、および/またはイメージングの有効性の任意の増大を意味する。例えば、治療効果の測定は、処置されている障害に応じて変動するが、主治医によりすぐに同定される。例えば、そのような効力の増大としては、これらに限定されないが、治療薬を単独で用いた処置と比較して、a障害の重症度が軽減すること;b処置されている障害複数可に特徴的な症状の発生が限定または予防されること;c処置されている障害複数可に特徴的な症状の悪化が阻害されること;d以前障害複数可を有していた患者における障害複数可の再発recurrenceが限定または予防されること;およびe以前、障害複数可の症候があった患者における症状の再発recurrenceが限定または予防されることのうちの1つまたは複数が増大することが挙げられる。1つの非限定的な例では、固形腫瘍の治療により、腫瘍受容体が上皮細胞の基底外側から出て来ることを誘導して、接近の改善および腫瘍の死滅を可能にする能力がもたらされる。がんに関して、腫瘍の反応を定義するための標準および反応を測定する標準の方法がある。これらとしては、腫瘍サイズの変化をモニタリングによって決定する腫瘍の反応または疾患の血清マーカーが挙げられる。部分奏効とは、腫瘍が50超縮小することであり、一方、完全奏効は、腫瘍が完全に消失することと定義される。腫瘍を測定するために用いられる方法は、医師には周知であり、それらとしては、理学的検査、放射線学的検査、例えば、CTスキャン、MRI、PETスキャン、X線など、ならびに血清マーカー、例えば、前立腺がんをモニターするために使用される前立腺特異的抗原などが挙げられる。癌治療の治療有効性の他の測定としては、無進行期間、無増悪生存および全生存の測定が挙げられる。診断有効性の改善としては、これらに限定されないが、診断検査の特異度および/または感度の増大を含めた、診断薬単独での投与と比較した有効性の任意の改善が挙げられる。イメージングの有効性の改善としては、これらに限定されないが、特異度、感度、再現性、コントラスト増強、疾患のより小さな部位の検出、腫瘍、膿瘍などの疾患のサイズおよび形状などの疾患のより正確な描写を含めた、イメージング剤単独での投与と比較した有効性の任意の改善が挙げられる。種々の実施形態では、有効性の増大は、患者集団全体にわたって治療薬、診断薬、および/またはイメージング剤を単独で用いた有効性と比較して、5、10、15、20、25、50、75、100、またはそれ以上の利益である。本発明の方法を用いて任意の適切な被験体、好ましくはヒト被験体を処置することができる。本明細書で使用される場合、AdB-2/3とは、ウイルスが結合するための上皮細胞受容体としてDSG2を使用する任意のアデノウイルス血清型である。現在まで、Ad3、Ad7、Ad11、Ad14、およびAd14aの血清型が同定されている。他のAd血清型が同定されるので、当業者は、本明細書に開示されているDSG2結合アッセイに基づいて、AbD-2/3ファミリーに属するものを容易に同定することができる。例えば、固定化した組換えDSG2を含有するセンサーを使用した表面プラズモン共鳴SPR試験を用いて、DSG2競合試験と組み合わせて、新規のAd血清型がDSG2と結合するかどうかを決定することができる。機能の損失および獲得についての分析などの別の例示的な試験は、実施例1に詳しく記載されている。アデノウイルスビリオンは、カプシドの12個の頂点のそれぞれの基部に位置する線維を特徴とする20面体である。ビリオン上の線維は、3つの個々の線維ポリペプチドからなるホモ三量体の構造である。アデノウイルス線維ポリペプチドのそれぞれは、N末端尾部からなる非対称な構造であり、カプシドのペントンベースタンパク質と相互作用し、また、タンパク質を細胞核へ輸送するために必要なシグナル;いくつもの15残基の繰り返し単位を含有するシャフト;および受容体の結合に対する決定因子を含有するC末端ノブドメインを含有するJ.S.HongおよびJ.A.Engler、JournalofVirology70巻:7071~7078頁1996年。全てのアデノウイルスは、それらの受容体に線維の末端上のノブ構造を通じて付着する。したがって、本明細書で使用される場合、AdB-2/3線維ポリペプチドという用語は、AdB-2/3によって発現される、N末端尾部ドメイン、シャフトドメイン、およびC末端ノブドメインを含む全長の線維ポリペプチドを指す例えば、配列番号15~19、配列番号15はAd3線維ポリペプチドであり、配列番号16はAd7線維ポリペプチドであり、配列番号17はAd11ポリペプチドであり、配列番号18はAd14線維ポリペプチドであり、配列番号19はAd14a線維ポリペプチドである。線維ポリペプチドは、自然にホモ三量体に組み立てられ、それは線維と称され、カプシドの12個の頂点のそれぞれの基部においてアデノウイルスビリオンの外側に位置する。本明細書で使用される場合、AdB-2/3線維多量体とは、AdB-2/3線維の多量体二量体、三量体など、またはその機能的等価物を含む任意の構築物である。当業者には理解される通り、AdB-2/3線維は、ホモ三量体のノブを含む。AdB-2/3線維多量体は、ホモ三量体のAdB-2/3線維の多量体、例えば、二量体などである。下記の実施例において詳細に開示されている通り、AdB-2/3線維多量体は、そうでなければ細胞間結合内に閉じ込められている標的への治療薬の接近を改善するために役立つ、DSG2に媒介される一過性の細胞間結合の開口を誘発するDSG2との結合のために必要である。一実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体である。1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体またはそれらのキメラ/機能的等価物を含む例示的な構築物としては、これらに限定されないが、AdB-2/3ビリオン例えば、死滅したビリオン、例えば、UV処理されたビリオンなど、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDdAdB-2/3の複製時にそれらにより産生されるウイルス成分の12面体粒子、組換えAdB-2/3線維多量体これらに限定されないが、下記の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせにおいて開示されているものを含めた、およびそれらの機能的等価物が挙げられる。好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDdなどのAdB-2/3のPtDdを含む、またはそれからなる。別の好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、下記の本発明の組成物の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせを含む、またはそれからなる。さらに好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、本明細書においてJO-1結合開口薬-1と称される、ポリペプチド配列番号20、またはそれらの機能的等価物を含む、またはそれからなる。下記の実施例に示されている通り、JO-1実施例において自己二量体形成性Ad3線維誘導体と記載されているは、単鎖の組換えAdB-2/3線維ポリペプチドドメインの多量体であり、ポリペプチドは、ホモ三量体化することができるノブドメインを含む。したがって、JO-1は、本発明によるAdB-2/3線維多量体である。多量のAdB-2/3ビリオンおよびカプシドを調製するための方法は当技術分野で周知であり、同様に、PtDdを大規模生産するための方法も当技術分野で周知である。同様に、二量体形成ドメインを組換えポリペプチドに組み入れることによってAdB-2/3線維多量体例えば、JO-1などを組換作製するための方法は、本明細書における教義に基づいて、十分に当業者のレベルの範囲内である。したがって、本発明の方法は、DSG2と結合し、DSG2に媒介される一過性の細胞間結合の開口を誘発することができる任意のAdB-2/3線維多量体を用いて行うことができる。したがって、本明細書に開示されているAdB-2/3線維多量体に対する天然に存在しない修飾異なるAd血清型線維タンパク質およびそのドメインなどの欠失、付加、置換、キメラは、AdB-2/3線維多量体の等価物であり、DSG2と結合する働きをし、また、多量体形成し、DSG2に媒介される細胞間結合の開口を誘発することができる限りは本発明の範囲内である。DSG2との結合についての試験およびDSG2に媒介される細胞間結合の開口についての評価に関する本明細書における教義に基づいて、そのようなAdB-2/3線維多量体の機能的等価物を同定することは十分に当業者のレベルの範囲内である。1つの非限定的な例では、標識した化合物例えば、FITC-デキストランなどの、候補AdB-2/3線維多量体の存在下における集密的な分極上皮細胞を通る流束を評価するためのアッセイが、下記の実施例1および2において実証されている。別の非限定的な例では、候補AdB-2/3線維多量体の存在下での、上皮細胞結合に起因して通常は利用できないタンパク質例えば、CD46、クローディン7、およびZO-1などへの接近を評価するためのアッセイは、下記の実施例1および2において実証されている。別のそのようなアッセイも本明細書において開示されている。AdB-2/3線維の多量体形成は、当業者に周知の方法に従って決定することができる。例えば、組換えAdB-2/3線維構築物の多量体形成は、ショ糖勾配での沈降、トリプシンによるタンパク質分解に対する抵抗性、およびポリアクリルアミドゲルにおける電気泳動移動度を含めた判断基準によって評価することができるHongおよびEngler、JournalofVirology70巻:7071~7078頁1996年。電気泳動移動度に関しては、線維多量体は、非常に安定な複合体であり、SDS-PAGEの前に試料を煮沸しない場合、多量体の分子量と一致する分子量で流れる。しかし、煮沸すると、多量体の構造は破壊され、その後、タンパク質は、タンパク質単量体と一致するサイズで流れる。上皮組織を標的とすることができる任意の治療薬、診断薬、イメージング剤、または他の化合物およびその上皮組織への送達は、本発明の方法において用いることができる一過性の細胞間結合の開口によって改善することができる。一実施形態では、治療薬は、抗体、免疫複合体、ナノ粒子、核酸治療薬、およびそれらの組み合わせ、化学療法薬、ワクチン、放射性粒子/放射線療法照射、養子T細胞療法および樹状細胞療法を含めた細胞免疫療法例:投与されたT細胞の腫瘍内への浸透、吸入治療薬、遺伝子療法構築物これらに限定されないが、遺伝子療法ベクターとしてのAdB-2/3ウイルス、およびAd5に基づく遺伝子療法ベクターとの同時投与を含む、他の核酸治療薬、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。種々の実施形態では、治療薬は、アルキル化剤、血管新生阻害剤、抗体、代謝拮抗薬、抗有糸分裂薬、抗増殖薬、オーロラキナーゼ阻害剤、アポトーシスプロモーター例えば、Bcl-xL、Bcl-wおよびBfl-1阻害剤、細胞死受容体経路の活性化因子、Bcr-Ablキナーゼ阻害剤、BiTEBi-SpecificTcellEngager抗体、生物学的応答修飾因子、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、細胞周期阻害剤、シクロオキシゲナーゼ-2阻害剤、増殖因子阻害剤、熱ショックタンパク質HSP-90阻害剤、脱メチル化剤、ヒストン脱アセチル化酵素HDAC阻害剤、ホルモン療法、免疫薬immunological、アポトーシスタンパク質の阻害剤IAP、インターカレーティング抗生物質、キナーゼ阻害剤、ラパマイシン阻害剤の哺乳動物標的、マイクロRNAのマイトジェン活性化細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤、多価の結合性タンパク質、非ステロイド性抗炎症薬NSAID、ポリADPアデノシン二リン酸-リボースポリメラーゼPARP阻害剤、プラチナ化学療法薬、ポロ様キナーゼPlk阻害剤、プロテアソーム阻害剤、プリン類似体、ピリミジン類似体、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、レチノイド/デルトイドdeltoid植物アルカロイド、低分子阻害性リボ核酸siRNA、トポイソメラーゼ阻害剤などからなる群より選択される。これらの種々のクラスの中に入る例示的な治療薬としては、これらに限定されないが、ドセタキセル、ドキソルビシン、イリノテカン、パクリタキセルTaxol登録商標、パクリタキセルアルブミン結合粒子Abraxane登録商標、ドキソルビシンHCLリポソームDoxil登録商標、BiTE抗体、例えば、アデカツムマブadecatumumabMicrometMT201、ブリナツモマブblinatumomabMicrometMT103など、siRNAに基づく治療薬、アルトレタミン、AMD-473、AP-5280、アパジコン、ベンダムスチン、ブロスタリシン、ブスルファン、カルボコン、カルムスチンBCNU、クロラムブシル、CLORETAZINE登録商標ラロムスチンlaromustine、VNP40101M、シクロホスファミド、ダカルバジン、デシタビン、5’-アザシチジン、エストラムスチン、フォテムスチン、グルホスファミド、イホスファミド、KW-2170、ロムスチンCCNU、マホスファミド、メルファラン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ニムスチン、ナイトロジェンマスタードN-オキシド、ラニムスチン、テモゾロミド、チオテパ、TREANDA登録商標ベンダムスチン、トレオスルファン、ロホスファミドrofosfamideなどを含めたアルキル化剤;内皮特異的受容体チロシンキナーゼTie-2阻害剤、上皮増殖因子受容体EGFR阻害剤、インスリン増殖因子-2受容体IGFR-2阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ-2MMP-2阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ-9MMP-9阻害剤、血小板由来増殖因子受容体PDGFR阻害剤、トロンボスポンジン類似体、血管内皮増殖因子受容体チロシンキナーゼVEGFR阻害剤などを含めた血管新生阻害剤;ALIMTA登録商標ペメトレキセド二ナトリウム、LY231514、MTA、5-アザシチジン、XELODA登録商標カペシタビン、カルモフール、LEUSTAT登録商標クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、シタラビンオクホスファート、シトシンアラビノシド、デシタビン、デフェロキサミン、ドキシフルリジン、エフロルニチン、EICAR5-エチニル-1-β-D-リボフラノシルイミダゾール-4-カルボキサミド、エノシタビン、エチニルシチジンethnylcytidine、フルダラビン、5-フルオロウラシル単独、または5-フルオロウラシルとロイコボリンの組み合わせ、GEMZAR登録商標ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、ALKERAN登録商標メルファラン、メルカプトプリン、6-メルカプトプリンリボシド、メトトレキサート、メトトレキサート類似体例えば、トリメトレキサートtrimetrexateおよびプララトレキサートpralatraxateなど、ミコフェノール酸、ネララビン、ノラトレキシド、オクホスファート、ペリトレキソールpelitrexol、ペントスタチン、ラルチトレキセド、リバビリン、トリアピンtriapine、トリメトレキサート、S-1、チアゾフリン、テガフール、TS-1、ビダラビンなどを含めた代謝拮抗薬;AT-101-ゴシポール、GENASENSE登録商標G3139またはオブリメルセンBcl-2-ターゲティングアンチセンスオリゴヌクレオチド、IPI-194、IPI-565、N-4-4-4’-クロロ1,1’-ビフェニル-2-イルメチルピペラジン-1-イルベンゾイル-4--1R-3-ジメチルアミノ-1-フェニルスルファニルメチルプロピルアミノ-3-ニトロベンゼンスルホンアミドABT-737、N-4-4-2-4-クロロフェニル-5,5-ジメチル-1-シクロヘキサ-1-エン-1-イルメチルピペラジン-1-イルベンゾイル-4-1R-3-モルホリン-4-イル-1-フェニルスルファニルメチル-プロピルアミノ-3-トリフルオロメチルスルホニルベンゼンスルホンアミドABT-263、GX-070オバトクラックスなどを含めたBcl-2タンパク質阻害剤;DASATINIB登録商標BMS-354825、GLEEVEC登録商標イマチニブなどを含めたBcr-Ablキナーゼ阻害剤;AZD-5438、BMI-1040、BMS-032、BMS-387、CVT-2584、フラボピリドールflavopyridol、GPC-286199、MCS-5A、PD0332991、PHA-690509、セリシクリブseliciclibCYC-202、R-ロスコビチン、ZK-304709などを含めたCDK阻害剤;ABX-EGF、抗EGFR免疫リポソームimmunoliposome、EGF-ワクチン、EMD-7200、ERBITUX登録商標セツキシマブ、HR3、IgA抗体、IRESSA登録商標ゲフィチニブ、TARCEVA登録商標エルロチニブまたはOSI-774、TP-38、EGFR融合タンパク質、TYKERB登録商標ラパチニブなどを含めたEGFR阻害剤;CP-724-714、CI-1033カネルチニブ、HERCEPTIN登録商標トラスツズマブ、TYKERB登録商標ラパチニブ、OMNITARG登録商標2C4、ペルツズマブ、TAK-165、GW-572016イオナファルニブionafarnib、GW-282974、EKB-569、PI-166、dHER2HER2ワクチン、APC-8024HER-2ワクチン、抗HER/2neu二重特異性抗体、B7.her2IgG3、ASHER2三機能性二重特異性抗体、mAbAR-209、mAb2B-1などを含めたErbB2受容体阻害剤;ロミデプシン、LAQ-824、MS-275、トラポキシン、ヒドロキサミン酸サブエロイルアニリドSAHA、TSA、バルプロ酸などを含めたヒストン脱アセチル化酵素阻害剤;17-AAG-nab、17-AAG、CNF-101、CNF-1010、CNF-2024、17-DMAG、ゲルダナマイシン、IPI-504、KOS-953、MYCOGRAB登録商標HSP-90に対するヒト組換え抗体、NCS-683664、PU24FC1、PU-3、ラディシコール、SNX-2112、STA-9090VER49009などを含めたHSP-90阻害剤;TRAIL、TRAIL受容体または細胞死受容体例えば、DR4およびDR5を標的とする抗体または他の作用剤、例えば、アポマブapomab、コナツムマブconatumumab、ETR2-ST01、GDC0145、レクサツムマブ、HGS-1029、LBY-135、PRO-1762およびトラスツズマブなどを含めた細胞死受容体経路の活性化因子;シスプラチン、ELOXATIN登録商標オキサリプラチンエプタプラチンeptaplatin、ロバプラチン、ネダプラチン、PARAPLATIN登録商標カルボプラチン、サトラプラチン、ピコプラチンpicoplatinなどを含めたプラチナ化学療法薬;AVASTIN登録商標ベバシズマブ、ABT-869、AEE-788、アキシチニブAG-13736、AZD-2171、CP-547、632、IM-862、MACUGENペガプタニブpegaptamib、NEXAVAR登録商標ソラフェニブ、BAY43-9006、パゾパニブGW-786034、バタラニブPTK-787、ZK-222584、SUTENT登録商標スニチニブ、SU-11248、VEGFトラップ、ZACTIMAThiバンデタニブ、ZD-6474などを含めたVEGFR阻害剤;樹状細胞療法シプロイセルT、Provenge登録商標;アクラルビシン、9-アミノカンプトテシン、アモナファイド、アムサクリン、ベカテカリンbecatecarin、ベロテカン、BN-80915、CAMPTOSAR登録商標塩酸イリノテカン、カンプトテシン、デクスラゾキサンdexrazoxine、ジフロモテカンdiflomotecan、エドテカリン、ELLENCE登録商標またはPHARMORUBICIN登録商標エピルビシン、エトポシド、エクサテカンexatecan、アブラキサン、イリノテカンirenotecan、10-ヒドロキシカンプトテシン、ジャイマテカン、ラルトテカン、ミトキサントロン、オラテシンorathecin、ピラルビシンpirarbucin、ピキサントロン、ルビテカンrubitecan、ソブゾキサン、SN-38、タフルポシドtafluposide、トポテカンなどを含めたトポイソメラーゼ阻害剤;AVASTIN登録商標ベバシズマブ、CD40特異的抗体、chTNT-1/B、デノスマブ、ERBITUX登録商標セツキシマブ、HUMAX-CD4登録商標ザノリムマブzanolimumab、IGFIR特異的抗体、リンツズマブlintuzumab、PANOREX登録商標エドレコロマブ、RENCAREX登録商標WXG250、RITUXAN登録商標リツキシマブ、チシリムマブ、トラスツズマブtrastuzimabなどを含めた抗体;ARIMIDEX登録商標アナストロゾール、AROMASIN登録商標エキセメスタン、アルゾキシフェン、CASODEX登録商標ビカルタミド、CETROTIDE登録商標セトロレリクス、デガレリクス、デスロレリン、DESOPAN登録商標トリロスタン、デキサメタゾン、DROGENIL登録商標フルタミド、EVISTA登録商標ラロキシフェン、AFEMA登録商標ファドロゾール、FARESTON登録商標トレミフェン、FASLODEX登録商標フルベストラント、FEMARA登録商標レトロゾール、ホルメスタン、グルココルチコイド、HECTOROL登録商標ドキセルカルシフェロール、RENAGEL登録商標セベラマー炭酸塩、ラソフォキシフェン、酢酸リュープロリド、MEGACE登録商標メゲストロールmegesterol、MIFEPREX登録商標ミフェプリストン、NILANDRON登録商標ニルタミド、NOLVADEX登録商標クエン酸タモキシフェン、PLENAXIS登録商標アバレリクス、プレドニゾン、PROPECIA登録商標フィナステリド、トリロスタンrilostane、SUPREFACT登録商標ブセレリン、TRELSTAR登録商標黄体形成ホルモン放出ホルモンLHRH、VANTAS登録商標ヒストレリンインプラントHistrelinimplant、VETORYL登録商標トリロスタンまたはモドラスタンmodrastane、ZOLADEX登録商標フォスレリンfosrelin、ゴセレリンなどを含めたホルモン療法薬;インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ-2a、インターフェロンアルファ-2b、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ-1a、ACTIMMUNE登録商標インターフェロンガンマ-1bまたはインターフェロンガンマ-n1を含めた免疫薬、それらの組み合わせなどが挙げられる。他の作用剤としては、ALFAFERONE登録商標IFN-アルファ、BAM-002酸化型グルタチオン、BEROMUN登録商標タソネルミン、BEXXAR登録商標トシツモマブ、CAMPATH登録商標アレムツズマブ、CTLA4細胞傷害性リンパ球抗原4、デカルバジン、デニロイキンdenileukin、エプラツズマブ、GRANOCYTE登録商標レノグラスチム、レンチナン、白血球アルファインターフェロン、イミキモド、MDX-010抗CTLA-4、黒色腫ワクチン、ミツモマブmitumomab、モルグラモスチム、MYLOTARG商標ゲムツズマブ、オゾガマイシン、NEUPOGEN登録商標フィルグラスチム、OncoVAC-CL、OVAREX登録商標オレゴボマブ、ペムブモマブpemtumomabY-muHMFG1、PROVENGE登録商標シプロイセルT、サルグラモスチムsargaramostim、シゾフィラン、テセロイキン、THERACYS登録商標カルメット-ゲラン桿菌、ウベニメクス、VIRULIZIN登録商標免疫療法薬、LorusPharmaceuticals、Z-100丸山ワクチンSSM、WF-10テトラクロロデカオキシドTetrachlorodecaoxideTCDO、PROLEUKIN登録商標アルデスロイキン、ZADAXIN登録商標チマルファシン、ZENAPAX登録商標ダクリズマブ、ZEVALIN登録商標90Y-イブリツモマブチウキセタンなど;オファツムマブofatumumab;クレスチン、レンチナン、シゾフィランsizofuran、ピシバニールPF-3512676CpG-8954、ウベニメクスなどを含めた生物学的反応修飾剤;シタラビンaraCまたはアラビノシドC、シトシンアラビノシド、ドキシフルリジン、FLUDARA登録商標フルダラビン、5-FU5-フルオロウラシル、フロクスウリジン、GEMZAR登録商標ゲムシタビン、TOMUDEX登録商標ラルチトレキセドratitrexed、TROXATYL登録商標トリアセチルウリジントロキサシタビンなどを含めたピリミジン類似体;LANVIS登録商標チオグアニンおよびPURI-NETHOL登録商標メルカプトプリンを含めたプリン類似体;バタブリンbatabulin、エポチロンDKOS-862、N-2-4-ヒドロキシフェニルアミノピリジン-3-イル-4-メトキシベンゼンスルホンアミド、イキサベピロンBMS247550、パクリタキセル、TAXOTERE登録商標ドセタキセル、PNU100940109881、パツピロンpatupilone、XRP-9881ラロタキセル、ビンフルニン、ZK-EPO合成エポチロンなどを含めた抗有糸分裂薬;および他の化学療法剤、例えば、ABRAXANE登録商標ABI-007、ABT-100ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ADVEXIN登録商標Ad5CMV-p53ワクチン、ALTOCOR登録商標またはMEVACOR登録商標ロバスタチン、AMPLIGE登録商標ポリI:ポリC12U、合成RNA、APTOSYN登録商標エクシスリンド、AREDIA登録商標パミドロン酸、アルグラビン、L-アスパラギナーゼ、アタメスタン1-メチル-3,17-ジオン-アンドロスタ-1,4-ジエン、AVAGE登録商標タザロテン、AVE-8062コンブレタスタチンcombreastatin誘導体BEC2ミツモマブmitumomab、カケクチンまたはカケキシンcachexin腫瘍壊死因子、カンバキシンcanvaxinワクチン、CEAVAC登録商標がんワクチン、CELEUK登録商標セルモロイキン、CEPLENE登録商標ヒスタミン二塩酸塩、CERVARIX登録商標ヒトパピローマウイルスワクチン、CHOP登録商標C:CYTOXAN登録商標シクロホスファミド;H:ADRIAMYCIN登録商標ヒドロキシドキソルビシン;O:ビンクリスチンONCOVIN登録商標;P:プレドニゾン、CYPAT登録商標酢酸シプロテロン、コンブレタスタチンcombrestatinA4P、DAB389EGFHis-Alaリンカーを介してヒト上皮増殖因子と融合したジフテリア毒素の触媒ドメインおよび転座ドメインtranslocationdomainまたはTransMID-107R登録商標ジフテリア毒素、ダカルバジン、ダクチノマイシン、5,6-ジメチルキサンテノン-4-酢酸DMXAA、エニルウラシル、EVIZON商標乳酸スクアラミン、DIMERICINE登録商標T4N5リポソームローション剤、ディスコデルモリド、DX-8951fメシル酸エキサテカン、エンザスタウリン、EPO906エポチロンepithiloneB、GARDASIL登録商標四価のヒトパピローマウイルス型6、11、16、18組換えワクチン、GASTRIMMUNE登録商標、GENASENSE登録商標、GMKガングリオシド結合体化ワクチン、GVAX登録商標前立腺がんワクチン、ハロフジノン、ヒストレリンhisterelin、ヒドロキシカルバミド、イバンドロン酸ibandronicacid、IGN-101、IL-13-PE38、IL-13-PE38QQRシントレデキンベスドトクスcintredekinbesudotox、IL-13-シュードモナス外毒素、インターフェロン-アルファ、インターフェロン-ガンマ、JUNOVAN登録商標またはMEPACT登録商標ミファムルチド、ロナファルニブ、5,10-メチレンテトラヒドロ葉酸、ミルテホシンヘキサデシルホスホコリン、NEOVASTAT登録商標AE-941、NEUTREXIN登録商標グルクロン酸トリメトレキサート、NIPENT登録商標ペントスタチン、ONCONASE登録商標リボヌクレアーゼ酵素、ONCOPHAGE登録商標黒色腫ワクチン治療薬、ONCOVAX登録商標IL-2ワクチン、ORATHECIN登録商標ルビテカンrubitecan、OSIDEM登録商標抗体ベースの細胞薬celldrug、OVAREX登録商標MAbマウスモノクローナル抗体、パクリタキセル、PANDIMEX登録商標20SプロトパナキサジオールaPPDおよび20SプロトパナキサトリオールaPPTを含む、チョウセンニンジン由来のアグリコンサポニン、パニツムマブ、PANVAC登録商標-VF治験がんワクチン、ペグアスパラガーゼ、PEGインターフェロンA、フェノクソディオール、プロカルバジン、レビマスタト、REMOVAB登録商標カツマキソマブ、REVLIMID登録商標レナリドマイド、RSR13エファプロキシラル、SOMATULINE登録商標LAランレオチド、SORIATANE登録商標アシトレチン、スタウロスポリンStreptomycesstaurospores、タラボスタットPT100、TARGRETIN登録商標ベキサロテン、TAXOPREXIN登録商標DHA-パクリタキセル、TELCYTA登録商標カンホスファミドcanfosfamide、TLK286、テミリフェンtemilifene、TEMODAR登録商標テモゾロミド、テスミリフェンtesmilifene、サリドマイド、THERATOPE登録商標STn-KLH、チミタク2-アミノ-3,4-ジヒドロ-6-メチル-4-オキソ-5-4-ピリジルチオキナゾリンジヒドロクロリド、TNFERADE登録商標アデノベクター:腫瘍壊死因子-アルファの遺伝子を含有するDNA担体、TRACLEER登録商標またはZAVESCA登録商標ボセンタン、トレチノインRetin-A、テトランドリン、TRISENOX登録商標三酸化ヒ素、VIRULIZIN登録商標、ウクラインより大きなクサノオウ植物体由来のアルカロイドの誘導体、ビタキシン抗アルファvベータ3抗体、XCYTRIN登録商標モテキサフィンガドリニウム、XINLAY登録商標アトラセンタン、XYOTAX登録商標パクリタキセルポリグルメクス、YONDELIS登録商標トラベクテジン、ZD-6126、ZINECARD登録商標デクスラゾキサン、ZOMETA登録商標ゾレドロン酸、クリゾチニブ、ゾルビシンなどが挙げられる。別の好ましい実施形態では、治療薬は、デスモグレイン-2と結合する化合物、好ましくは、DSG2と結合し、密着結合を開口させる化合物を含む。他の実施形態では、治療薬は、放射性粒子/放射線療法を含む。これらに限定されないが、コバルト-60、ヨウ素131、イリジウム-192、ストロンチウム89、サマリウム153、レニウム186および鉛212を含めた、主治医により適切だとみなされる任意の適切な放射性の療法または粒子を用いることができる。好ましい実施形態では、治療薬は、抗腫瘍治療薬であり、本明細書に記載の化学療法薬または抗腫瘍モノクローナル抗体を含む。さらに好ましい実施形態では、抗腫瘍治療薬は、トラスツズマブ、セツミキシマブ、ペルツズマブ、アポマブ、コナツムマブ、レクサツムマブ、ベバシズマブ、ベバシズマブ、デノスマブ、ザノリムマブ、リンツズマブ、エドレコロマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、ミツモマブ、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、オレゴボマブ、ペムツモマブ、ダクリズマブ、パニツムマブ、カツマキソマブ、オファツムマブ、およびイブリツモマブからなる群より選択される抗体を含む。有用な抗腫瘍mAbおよびそれらの特定の使用の非限定的な例が表1に列挙されており、また、参照により本明細書に組み込まれるCampoli、M.ら、PrinciplesPracticeofOncology23巻12号:1~19頁2009年においてさらに記載されている。モノクローナル抗体治療薬は、これらに限定されないが、マウスまたは他の供給源から生成した標準モノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、完全ヒト抗体、キメラモノクローナル、およびその断片を含めた任意の種類のモノクローナル抗体であってよい。ヒト化モノクローナル抗体とは、マウスモノクローナル抗体などの非ヒトモノクローナル抗体に由来するモノクローナル抗体を指す。あるいは、ヒト化モノクローナル抗体は、親の非ヒトモノクローナル抗体の抗原結合性を保持する、または実質的に保持するが、親のモノクローナル抗体と比較してヒトに投与される場合の免疫原性が減弱しているキメラ抗体に由来してよい。例えば、キメラモノクローナル抗体は、ヒト抗体断片とマウス抗体断片、一般にヒト定常領域とマウス可変領域とを含んでよい。ヒト化モノクローナル抗体は、これらに限定されないが、1非ヒトモノクローナル抗体由来の相補性決定領域をヒトフレームワーク領域および定常領域にグラフティングすることヒト化、および2非ヒトモノクローナル抗体の可変ドメインを移植するが、表面残基を交換することによってそれらをヒト様表面で覆い隠すことベニアリングを含めた、当技術分野で公知の種々の方法を用いて調製することができる。これらの方法は、例えば、Jonesら、Nature321巻:522~525頁1986年;Morrisonら、Proc.Natl.Acad.Sci.、U.S.A.、81巻:6851~6855頁1984年;MorrisonおよびOi、Adv.Immunol.、44巻:65~92頁1988年;Verhoeyerら、Science239巻:1534~1536頁1988年;Padlan、Molec.Immun.28巻:489~498頁1991年;Padlan、Molec.Immunol.31巻3号:169~217頁1994年;およびKettleborough、C.A.ら、ProteinEng.4巻7号:773~83頁1991年において開示されている。モノクローナル抗体は、従来の技法を使用して断片化し、その断片を、全抗体についてと同じ方法で有用性についてスクリーニングすることができる。例えば、抗体をペプシンで処理することによってFab’2断片を生成することができる。生じたFab’2断片を、ジスルフィド架橋が減るように処理してFab’断片を作製することができる。Fab断片は、IgG抗体をパパインで処理することによって得ることができ;Fab’断片はIgG抗体をペプシンによって消化して得ることができる。Fab’断片は、下記のFab’をチオエーテル結合またはジスルフィド結合を介して結合させることによっても作製することができる。Fab’断片は、Fab’2のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することによって得られる抗体断片である。Fab’断片は、Fab’2断片をジチオスレイトールなどの還元剤で処理することによって得ることができる。抗体断片ペプチドは、そのようなペプチドをコードする核酸を組換え細胞において発現させることによっても生成することができる例えば、Evansら、J.Immunol.Meth.184巻:123~38頁1995年を参照されたい。例えば、Fab’2断片の一部をコードするキメラ遺伝子は、そのような切断された抗体断片分子をもたらすために、H鎖のCH1ドメインおよびヒンジ領域をコードするDNA配列、その後に翻訳終止コドンを含んでよい。モノクローナル抗体断片の非限定的な例としては、iVLドメイン、VHドメイン、CLドメインおよびCH1ドメインから本質的になる一価の断片であるFab断片;iiヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結した2つのFab断片を含む二価の断片であるFab2およびFab’2断片;iiiVHドメインおよびCH1ドメインから本質的になるFd断片;iv抗体の単一の腕のVLドメインおよびVHドメインから本質的になるFv断片;vVHドメインから本質的になるdAb断片Wardら、1989年Nature341巻:544~546頁;およびvi1種またはそれより多い種の単離されたCDRまたは機能的なパラトープが挙げられる。本発明の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせと組み合わせることができる好ましい一実施形態では、障害はHer-2陽性腫瘍を含み、方法は、単独で、または化学療法薬、照射、またはそれらの組み合わせと組み合わせて、AdB-2/3線維多量体を適切なモノクローナル抗体療法薬と同時投与することを含む。さらに好ましい実施形態では、モノクローナル抗体はトラスツズマブである。これらの実施形態のいずれかと組み合わせることができるさらに好ましい実施形態では、Her-2陽性腫瘍は、乳房の腫瘍、胃の腫瘍、結腸の腫瘍、および卵巣の腫瘍からなる群より選択される。最も好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDd、JO-1多量体配列番号20、またはそれらの機能的等価物を含む。下記の実施例に示されている通り、AdB-2/3線維多量体をトラスツズマブと同時投与することにより、乳房の腫瘍モデルにおいてトラスツズマブのHer-2受容体への接近が改善され、それにより、トラスツズマブの治療有効性が著しく改善される。さらに好ましい実施形態では、方法を、腫瘍の寛解の欠乏によって、腫瘍の再発relapseによって、またはトラスツズマブに対する抵抗性の発生によってなど、トラスツズマブに対する応答が十分でない患者に対して行う。これらの実施形態の方法は、治療有効性を得るために必要なトラスツズマブの投与量を減少させることを補助するためにも使用することができ、したがって、副作用例えば、トラスツズマブに関連する心毒性などを限定する機能を果たし得る。本発明の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせと組み合わせることができる別の好ましい実施形態では、障害は、EGFR陽性腫瘍を含み、方法は、単独で、または化学療法薬、照射、またはそれらの組み合わせと組み合わせて、AdB-2/3線維多量体を適切なモノクローナル抗体療法薬と同時投与することを含む。さらに好ましい実施形態では、モノクローナル抗体はセツキシマブである。これらの実施形態のいずれかと組み合わせることができるさらに好ましい実施形態では、EGFR陽性腫瘍は、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、乳房の腫瘍、直腸の腫瘍、頭頸部の腫瘍、および膵臓の腫瘍からなる群より選択される。最も好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDd、JO-1多量体配列番号20、またはそれらの機能的等価物を含む。下記の実施例に示されている通り、AdB-2/3線維多量体をセツキシマブと同時投与することにより、肺の腫瘍モデルにおいてセツキシマブのEGFR受容体への接近が改善され、それにより、セツキシマブの治療有効性が著しく改善される。さらに好ましい実施形態では、方法を、腫瘍の寛解の欠乏によって、腫瘍の再発relapseによって、またはセツキシマブに対する抵抗性の発生によってなど、セツキシマブに対する応答が十分でない患者に対して行う。これらの実施形態の方法は、治療有効性を得るために必要なセツキシマブの投与量を減少させることを補助するためにも使用することができ、したがって、副作用例えば、セツキシマブ療法中に起こることも多いざ瘡様発疹などを限定する機能を果たし得る。本発明の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせと組み合わせることができる好ましい一実施形態では、障害は上皮腫瘍を含み、方法は、単独で、または他の化学療法薬、照射、またはそれらの組み合わせと組み合わせて、AdB-2/3線維多量体を血管内皮増殖因子VEGF阻害剤とを同時投与することを含む。これに限定されないが、ベバシズマブを含めた任意の適切なVEGF阻害剤を使用することができる。本明細書の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせと組み合わせることができる別の実施形態では、固形腫瘍に関する方法は、腫瘍間質タンパク質を分解することができる化合物を投与することをさらに含む。下記の実施例に示されている通り、そのような手法腫瘍間質タンパク質を分解するための化合物とJO-1多量体配列番号20およびトラスツズマブとの組み合わせにより、乳がんモデルにおいて腫瘍が完全に根絶する。これらに限定されないが、レラキシン、コラゲナーゼ、トリプシン、ディスパーゼ、MMPメタロプロテイナーゼ-1、およびMMP8を含めた、腫瘍間質タンパク質を分解するための任意の適切な化合物を使用することができる。そのような化合物の送達は、遺伝子療法、AdB-2/3線維多量体および治療薬とは別に投与すること、またはAdB-2/3線維または治療薬との結合体として投与することを含めた任意の適切な機構によるものであってよい。本明細書の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせと組み合わせることができる別の実施形態では、方法は、AdB-2/3多量体を他の結合開口薬と組み合わせて投与することをさらに含む。本明細書で使用される場合、結合開口薬は、細胞間結合を一過性に開口させることができる化合物である。任意の適切な結合開口薬を使用することができる。1つの非限定的な実施形態では、結合開口薬は、腸の上皮の結合を可逆的に変化させ、巨大分子が粘膜関門を通って通過することを可能にする能力を保有する、VibriocholeraeV.choleraeにより産生される毒素であるZonaoccludens毒素Zotを含むFasanoら1991年ProcNatlAcadSciUSA88巻:5242~5246頁]。Zot由来のヘキサペプチドAT-1001が開発されてきた。別の実施形態では、Clostridiumperfringensエンテロトキシンにより、密着結合からクローディン3およびクローディン4を除去して、細菌の浸潤を容易にするSonodaNら1999年JCellBiol147巻:195~204頁]。別の実施形態では、ヒトAd、HPV、HTLV-1にコードされる腫瘍性タンパク質により、結合タンパク質ZO-1を誤った場所に局在化させることによって上皮の結合を一過性に開口させることができるLatorreIJら2005年JCellSci118巻:4283~4293頁。他の実施形態では、いくつかのヒトウイルスが、密着結合または他の細胞結合分子に関与して上皮細胞への侵入を実現する。これらのウイルスとしては、C型肝炎ウイルスEvansMJら2007年Nature446巻:801~805頁、レオウイルスBartonESら2001年Cell104巻:441~451頁、および単純ヘルペスウイルスGeraghtyRJら1998年Science280巻:1618~1620頁がある。別の実施形態では、治療薬は吸入治療薬である。任意の適切な吸入治療薬を本発明の方法において使用することができる。種々の非限定的な実施形態では、吸入治療薬は、コルチコステロイド、気管支拡張薬、ベータアゴニスト、抗コリン作用薬、アルブテロールPROVENTIL登録商標;VENOLIN登録商標;ACCUNEB登録商標;PROAIR登録商標、レバルブテロールlevalbuterolXOPENEX登録商標、ピルブテロールpirbutrolMAXAIR登録商標、臭化イプラトロピウムATROVENT登録商標、ベクロメタゾン、ブデソニド、フルニソリドAEROBID登録商標、フルチカゾン、トリアムシノロンアセトニド、フルチカゾンコルチコステロイドおよびサルメテロールADVAIR登録商標、ホルモテロールformotorol長時間作用性、ベータ-アゴニスト気管支拡張薬およびブデソニドコルチコステロイドSYMICORT登録商標、アルブテロールベータアゴニストおよびイプラトロピウムCOMBIVENT登録商標;抗コリン作用薬ブデソニドPULMICORTRESPULES登録商標、およびチオトロピウムtiopropiumSPIRIVA登録商標;抗コリン作用性気管支拡張薬からなる群より選択される。別の実施形態では、化合物は、診断薬またはイメージング剤を含む。本発明の方法には、任意の診断薬、イメージング剤、または他の化合物を、対象の標的への接近が限定され得る細胞間結合を含む上皮組織に送達するための広範な適用がある。種々の非限定的な実施形態では、イメージング剤は、検出可能なシグナルを直接的または間接的に生じさせることができる任意の化学化合物を含んでよい。多くのそのようなイメージング剤は、当業者に公知である。本開示の方法および組成物において使用するために適したイメージング剤の例は放射性同位元素、蛍光分子、磁気粒子ナノ粒子を含む、金属粒子ナノ粒子を含む、リン光分子、酵素、抗体、リガンド、およびそれらの組み合わせであり、一方診断薬は、そのようなイメージング剤と結合した、特定の上皮の障害に対する診断マーカーである化合物を含んでよい。イメージング剤によって生成されるシグナルを検出し、測定するための方法も当業者に公知である。例えば、放射性同位元素はシンチレーション測定または直接的な可視化によって検出することができ;蛍光分子は蛍光分光光度計を用いて検出することができ;リン光分子は分光光度計を用いて検出すること、またはカメラを用いて直接可視化することができ;酵素は酵素によって触媒される反応の生成物を検出または可視化することによって検出することができ;抗体は抗体とカップリングさせた二次的な検出用標識を検出することによって検出することができる。好ましい一実施形態では、イメージング剤および/または診断薬は、直接腫瘍と結合することによって、またはイメージング剤または診断薬を腫瘍と結合することができる化合物とカップリングさせることによってのいずれであっても、腫瘍を検出するために使用することができるものである。一実施例では、イメージング剤は、蛍光イメージング剤を含んでよく、一方診断薬は、蛍光イメージング剤と結合した、特定の上皮の障害に対する診断マーカーである化合物を含んでよい。蛍光イメージング剤は、検出可能な蛍光シグナルを有する任意の化学的部分である。このイメージング剤は、単独で、または他のイメージング剤と組み合わせて使用することができる。本明細書に開示されている組成物および方法において使用することができる適切な蛍光剤の例としては、これらに限定されないが、フルオレセインFITC、5-カルボキシフルオレセイン-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、5,6-カルボキシメチルフルオレセイン、ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イルNBD、フルオレスカミン、OPA、NDA、インドシアニングリーン色素、シアニン色素例えば、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5およびCy7、4-アセタミド-4’-イソチオシアン酸スチルベン-2,2’ジスルホン酸、アクリジン、アクリジンイソチオシアネート、5-2’-アミノエチルアミノナフタレン-1-スルホン酸EDANS、4-アミノ-N-[3-ビニルスルホニルフェニルナフタルイミドphenylinaphthalimide-3,5ジスルホネート、N-4-アニリノ-1-ナフチルマレイミド、アントラニルアミド、BODIPY、ブリリアントイエロー、クマリン、7-アミノ-4-メチルクマリンAMC、Coumarin120、7-アミノ-4-トリフルオロメチルクマリンCoumaran151、シアノシン、4’,6-ジアミニジノ-2-フェニルインドールDAPI、5’,5’’-ジブロモピロガロール-スルホナフタレインブロモピロガロールレッド、7-ジエチルアミノ-3-4’-イソチオシアナトフェニル-4-メチルクマリンジエチレントリアミンペンタアセテート、4,4’-ジイソチオシアナトジヒドロ-スチルベン-2,2’-ジスルホン酸、4,4’-ジイソチオシアナトスチルベン-2,2’-ジスルホン酸、5-[ジメチルアミノ]ナフタレン-1-スルホニルクロリドDNS、ダンシルクロリド、4-4’-ジメチルアミノフェニルアゾ安息香酸DABCYL、4-ジメチルアミノフェニルアゾフェニル-4’-イソチオシアネートDABITC、エオシン、エオシンイソチオシアネート、エリスロシンB、エリスロシン、イソチオシアネート、臭化エチジウム、エチジウム、5-カルボキシフルオレセインFAM、5-4,6-ジクロロトリアジン-2-イルアミノフルオレセインDTAF、2’,7’-ジメトキシ-4’5’-ジクロロ-6-カルボキシフルオレセインJOE、フルオレセインイソチオシアネート、IR144、IR1446、マラカイトグリーンイソチオシアネート、4-メチルウンベリフェロン、オルトクレゾールフタレイン、ニトロチロシン、パラローザニリン、フェノールレッド、B-フィコエリトリン、o-フタルジアルデヒド、ピレン、ピレン酪酸、スクシンイミジル1-ピレン酪酸、リアクティブレッド4Cibacron[R]ブリリアントレッド3B-A、6-カルボキシ-X-ローダミンROX、6-カルボキシローダミンR6G、リサミンローダミンBスルホニルクロリドローダミンRhod、5,6-テトラメチルローダミン、ローダミンB、ローダミン123、ローダミンXイソチオシアネート、スルホローダミンB、スルホローダミン101、スルホローダミン101のスルホニルクロリド誘導体TexasRed、N,N,N’,N’-テトラメチル-6-カルボキシローダミンTAMRA、テトラメチルローダミン、テトラメチルローダミンイソチオシアネートTRITC、リボフラビン、ロゾール酸、クマリン-6などが、それらの組み合わせを含め、挙げられる。これらの蛍光イメージング部分は、MolecularProbes、Eugene、OregおよびResearchOrganics、Cleveland、Ohioを含めた種々の商業的な供給源から入手することができる、または当業者が合成することができる。別の例では、イメージング剤は、磁気共鳴画像法MRI作用剤を含んでよく、一方、診断薬は、MRI作用剤と結合した、特定の上皮の障害に対する診断マーカーである化合物を含んでよい。MRI作用剤は、検出可能な磁気共鳴シグナルを有する、または別の作用剤の磁気共鳴シグナルに影響を及ぼし得る例えば、増加またはシフト任意の化学的部分である。この種類のイメージング剤は、単独で、または他のイメージング剤と組み合わせて使用することができる。さらに別の例では、ガドリニウムベースのMRI作用剤が、イメージング剤としての機能を果たし得る。開示されているイメージング剤に組み入れることができる適切なMRI作用剤の例は、パラ-アミノ-ベンジルジエチレントリアミン五酢酸p-NH2-Bz-DTPA、化合物7、結合体化可能な形態のジエチレントリアミン五酢酸DTPAであり、ガドリニウムに強力と結合することが公知であり、磁気共鳴造影剤としての臨床使用について認可されている。本明細書に開示されているデンドリマー基質などの大きな巨大分子にMRI作用剤を組み入れることにより、大きなT1弛緩高い対比および単一分子における作用剤の多数のコピーが可能になり得、それによりシグナルが増加し得る。MRIイメージング剤と、例えば、蛍光イメージング剤とを組み合わせることにより、生じた作用剤を、MRIを介してリアルタイムで検出、画像化、および追跡することができる。他のイメージング剤としては、18F、または64Cuもしくは68Gaのキレート化剤を組み入れることによって調製することができるPET作用剤が挙げられる。また、放射性核種を添加することを用いて、SPECTイメージングまたは放射線量の送達を容易にすることができ、一方診断薬は、PET作用剤と結合した、特定の上皮の障害に対する診断マーカーである化合物を含んでよい。いくつかの実施形態では、診断薬は、これらに限定されないが、ポジトロン放出断層撮影法PET作用剤、コンピュータ断層撮影法CT作用剤、磁気共鳴画像法MRI作用剤、核磁気イメージング剤NMI、蛍光透視法作用剤および超音波造影剤を含めた診断的なイメージング作用剤である。そのような診断薬としては、123I、125I、131Iなどを含めたヨウ素I、バリウムBa、ガドリニウムGd、99Tcを含めたテクネチウムTc、31Pを含めたリンP、鉄Fe、マンガンMn、タリウムTl、51Crを含めたクロムCr、14Cを含めた炭素Cなどの元素の放射性同位元素、蛍光標識した化合物、またはそれらの複合体、キレート、付加物および結合体が挙げられる。これらに限定されないが、炭素11、窒素13、酸素15、フッ素18、11C-メトミデート、および、これらに限定されないが、フルデオキシグルコースフッ素18で標識したグルコース類似体を含めたそのグルコース類似体を含めた任意の適切なPET作用剤を使用することができる。他の実施形態では、診断薬は、細胞において発現されるとすぐに検出可能なタンパク質をコードするマーカー遺伝子これらに限定されないが、ベータガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼなどを含むおよび標識した核酸プローブ例えば、放射標識したプローブまたは蛍光標識したプローブである。いくつかの実施形態では、診断作用剤と本明細書において提供されるAdB-2/3多量体との共有結合性結合体化は種々の結合体化プロセスに従って実現される。他の実施形態では、診断薬は、提供されるAdB-2/3多量体と非共有結合的に結びついている。別の態様では、本発明は、上皮組織への物質の送達を改善するための方法であって、上皮組織を、a上皮組織に送達すべき1種またはそれより多い種の化合物;およびb上皮組織への1種またはそれより多い種の化合物の送達を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む方法を提供する。この態様では、化合物は、上に詳細に記載されているものなどの任意の適切な化合物であってよい。好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種の化合物は、イメージング剤を含む。さらに好ましい実施形態では、上皮組織は、本出願に開示されている任意のものを含めた固形腫瘍を含む。種々の非限定的な実施形態では、固形腫瘍は、乳房の腫瘍、肺の腫瘍、結腸の腫瘍、直腸の腫瘍、胃の腫瘍、前立腺の腫瘍、卵巣の腫瘍、子宮の腫瘍、皮膚の腫瘍、内分泌の腫瘍、子宮頸部の腫瘍、腎臓の腫瘍、黒色腫、膵臓の腫瘍、肝臓の腫瘍、脳腫瘍、頭頸部の腫瘍、鼻咽頭の腫瘍、胃の腫瘍、扁平上皮癌、腺癌、膀胱の腫瘍、および食道の腫瘍からなる群より選択される。さらに別の態様では、本発明は、デスモグレイン2DSG2を発現している細胞または組織への物質の送達を改善するための方法であって、DSG2を発現している細胞または組織を、a細胞または組織に送達すべき1種またはそれより多い種の化合物;およびb組織への1種またはそれより多い種の化合物の送達を増強するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む方法を提供する。DSG2を発現している例示的な組織の種類としては、これらに限定されないが、上皮細胞/組織例えば、本明細書に開示されているものなど、ヒト血小板および顆粒球が挙げられる。下記の実施例に示されている通り、DSG2は、非極性細胞において受容体としても作用する。したがって、これらの方法は、上皮細胞および組織における適用だけでなく、例えば、AdB-2/3の病態発生および遺伝子療法のためにAdB-2/3ベクターを血管内の適用に関連することを見いだす。さらに別の態様では、本発明は、組織における上皮間葉転換EMTを誘導するための方法であって、上皮組織を、EMTを誘導するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と接触させることを含む方法を提供する。EMTは、上皮細胞が細胞間結合などの特性を失い、間葉細胞の性質を獲得する細胞の分化転換プログラムである。EMTは、間葉系のマーカーの発現の増加、細胞外マトリックス化合物の発現の増加、上皮のマーカーの発現の減少、転写因子の位置の変更、およびキナーゼの活性化、および細胞間結合の解離を特徴とする。これらのさらなる態様のそれぞれでは、本明細書に記載の化合物およびAdB-2/3線維多量体の任意の実施形態を用いることができる。1つの非限定的な実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。別の実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、またはその機能的等価物である。別の実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDd、組換えAdB-2/3線維多量体、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。種々の好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDdまたは結合開口薬1JO-1配列番号20多量体例えば、二量体など、またはその機能的等価物を含む。これらの実施形態のそれぞれと組み合わせることができるさらに好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は二量体である。特定の作用機構に縛られるものではないが、これらのさらなる態様のそれぞれは、細胞間結合を攪乱する機能を果たすAdB-2/3線維多量体を活用すると考えられている。本発明の方法の全ての態様および実施形態では、治療薬、診断薬、および/またはイメージング剤は、AdB-2/3多量体と一緒に投与することができる、または、一緒に投与することができる。一実施形態では、治療薬とAdB-2/3多量体は、任意の適切な共有結合または非共有結合によって付着する。1つの非限定的な実施形態では、固形腫瘍細胞を死滅させるために、AbB-2/3多量体を毒素または他の薬物に付着することができる。AdB-2/3線維多量体および/または治療薬は、局所的な投与形式または全身投与形式のどちらが処置されている状態に最適であるかに応じて、主治医により適切だとみなされる任意の形で投与することができる。本明細書で使用される場合、全身送達および全身投与という用語は、これらに限定されないが、送達作用剤を、単一または多数の意図された治療の作用部位に有効に分散させる筋肉内IM投与経路、皮下投与経路、静脈内IV投与経路、動脈内投与経路、吸入による投与経路、舌下投与経路、頬側投与経路、局部投与経路、経皮投与経路、経鼻投与経路、直腸投与経路、膣投与経路、および他の投与経路を含めた経口経路および非経口経路を包含するものとする。本組成物を全身送達するための好ましい経路としては、静脈内経路、筋肉内経路、皮下経路、および吸入による経路が挙げられる。好ましい一実施形態では、例えば、播種性腫瘍を処置するためにおよびモノクローナル抗体を送達するために、静脈内投与を使用する。別の実施形態では、例えば、胃腸GI上皮の障害を処置するために経口送達が好ましい場合がある。別の実施形態では、肺に送達するため、例えば、肺上皮の障害に対してなど経鼻送達またはエアロゾル送達が好ましい場合がある。ポリペプチドを酵素による分解から保護するために、AdB-2/3線維多量体を脂質またはリポソームなどの別の分子と併せて導入することができる。例えば、特定のタンパク質を体内での酵素による加水分解から保護し、したがって、半減期を延長するために、ポリマー、特にポリエチレングリコールPEGの共有結合による付着が用いられている。AdB-2/3線維多量体および/または治療薬は、所望のレベルの治療効果を維持するように決定された間隔で定期的に全身投与することができる。例えば、静脈内注射による投与は、1日1回、1週間に1回、2~4週間ごと、またはそれよりも頻度が少ない間隔であってよい。投薬レジメンは、医師が、作用剤の組み合わせの作用に影響を及ぼす可能性があるさまざまな因子を考慮することによって決定する。これらの因子としては、処置されている状態の進行の程度、患者の年齢、性別および体重、ならびに他の臨床的因子が挙げられる。AdB-2/3線維多量体および/または治療薬の投与量は、投与されている多量体および/または治療薬、ならびに任意の薬物送達ビヒクル例えば、持続的放出送達ビヒクルの存在および本質に応じて変動する。さらに、投与の頻度および送達される作用剤複数可の薬物動態学的挙動が変動するように投与量を調整することができる。AdB-2/3線維多量体の投与量の範囲は、一般に0.01mg/kgから250mg/kgの間にわたり、好ましくは0.1mg/kgから10mg/kgの間にわたり、より好ましくは、0.10mg/kgから0.5mg/kgの間にわたる。認可された治療薬の投与量は、医者が容易に同定することができる。治療薬は、がんなどの上皮組織への浸透を増強させることにより用量を減らして投与することも可能であり得る。AdB-2/3線維多量体は、被験体に、治療薬を投与する前、それと同時に、またはその後に投与することができる。好ましい実施形態では、治療薬およびAdB-2/3線維多量体を同時に投与する。AdB-2/3線維多量体に対して治療薬を投与するタイミングは、最大の治療効果を実現するために変動し得る。治療薬は、それを、AdB-2/3線維多量体とDSG2が結合することによって引き起こされる一過性の細胞間結合の開口と確実に接触する時に投与することが好ましい。例えば、治療薬は、AdB-2/3線維多量体の各投与の前に、それと同時に、その後に投与することができる。他の好ましい実施形態では、治療薬は、AdB-2/3線維多量体を投与した後、例えば、AdB-2/3線維多量体を投与した最大5分後、10分後、15分後、30分後、45分後、1時間後、2時間後、3時間後、4時間後、5時間後、6時間後、8時間後、10時間後、12時間後、18時間後、24時間後、30時間後、36時間後、40時間後、42時間後、48時間後、54時間後、60時間後、66時間後、72時間後、78時間後、84時間後、90時間後、または、さらには最大96時間後に投与することができる。別の態様では、本発明は、上皮組織に関連する障害を処置するための方法であって、それを必要とする被験体に、障害を処置するために十分な量のAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物を投与することを含む方法を提供する。この実施形態では、他の治療薬は送達されない。非限定的な実施形態では、AdB-2/3ウイルス感染症、固形腫瘍、またはAdB-2/3ベースの遺伝子送達ベクターを用いて処置することができる障害からなる群より選択される障害を処置するために単独療法を使用する。例えば、固形腫瘍の治療では、方法は、浸透などによる免疫系細胞の障害部位への接近例えば、既存のナチュラルキラー細胞、T細胞または樹状細胞の腫瘍内への浸透などを改善することを含む。該方法は、免疫系細胞の、標的上皮細胞への接近を改善することが有益であり得る上記の任意の上皮細胞に関連する障害を処置するためにも使用することができる。好ましい一実施形態では、障害は、固形腫瘍であり、該方法は、免疫系による腫瘍の攻撃を改善することを含む。該方法は、上記の任意の固形腫瘍と一緒に使用することができる。文脈により明確に別段の規定がなされない限り、本発明の第1の態様の全ての実施形態および複数の実施形態の組み合わせをこの第2の態様においても同様に使用することができる。したがって、この第2の態様の種々の実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、およびAd14a線維多量体からなる群より選択される。同様に、本発明のこの態様において使用するための1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体またはそれらのキメラ/機能的等価物を含む例示的な構築物としては、これらに限定されないが、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDdAdB-2/3の複製時にそれらにより産生されるウイルス成分の12面体粒子、組換えAdB-2/3線維多量体これに限定されないが、JO-1多量体、例えば、JO-1二量体などの、下記の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせにおいて開示されているものを含む、およびそれらの機能的等価物が挙げられる。好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDdなどのAdB-2/3のPtDdを含む、またはそれからなる。別の好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、JO-1二量体などの、下記の本発明の組成物の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせを含む、またはそれからなる。さらに、本発明のこの態様の方法は、DSG2と結合し、DSG2に媒介される一過性の細胞間結合の開口を誘発することができる任意のAdB-2/3線維多量体を用いて行うことができる。したがって、本明細書に開示されているAdB-2/3線維多量体に対する天然に生じない修飾異なるAd血清型線維タンパク質およびそのドメインなどの欠失、付加、置換、キメラは、それらが、DSG2と結合し、DSG2に媒介される細胞間結合の開口を誘発する働きをする限りは本発明の範囲内である。DSG2との結合についての試験およびDSG2に媒介される細胞間結合の開口についての評価に関する本明細書における教義に基づいて、そのようなAdB-2/3線維多量体の機能的等価物を同定することは、十分に当業者のレベルの範囲内である。別の態様では、本発明は、a1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメイン、またはそれらの機能的等価物と、b1つまたはそれより多いAdB-2/3線維タンパク質シャフトドメインに作動可能に連結され、そのC末端側に位置するAdB-2/3線維ポリペプチドノブドメイン、またはその機能的等価物と;c1つまたはそれより多いAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメインに作動可能に連結され、そのN末端側に位置する1つまたはそれより多い非AdB-2/3由来二量体形成ドメインとを含む組換えAdB-2/3線維ポリペプチドを提供する。好ましい実施形態では、組換えポリペプチドはAd線維ポリペプチド由来の尾部ドメインを含まない。下で詳細に開示されている通り、出願人らは、線維ポリペプチドの多量体形成およびDSG2とAdB-2/3タンパク質のシャフトドメインおよびノブドメインの結合のために必要な部位を突き止めた。したがって、本発明のこの態様のポリペプチドは、例えば、上記の本発明の種々の方法において使用するためのAdB-2/3線維多量体を形成するために使用することができる。この態様では、組換えポリペプチドは、任意のAdB-2/3ウイルス由来のシャフトドメインおよびノブドメイン、または、DSG2に対する結合親和性を保持または改善し、二量体形成ドメインを介して多量体例えば、二量体などを形成することができる、そのようなシャフトドメインおよびノブドメインに対する任意の突然変異体置換体、付加体、欠失体、キメラなど機能的等価物を含んでよい。そのような突然変異体を生成することは、十分に当業者のレベルの範囲内であり、また、そのような突然変異体をDSG2との結合について試験すること、および結果として生じる、本発明の組換えポリペプチドにおいて使用するための適合性も、本明細書における教義に基づいて当業者のレベルの範囲内である。例えば、固定化した組換えDSG2を含有するセンサーを使用した表面プラズモン共鳴SPR試験を用いて、DSG2競合試験と組み合わせて、評価されている組換えポリペプチドがDSG2と結合するかどうかを決定することができる。1つの非限定的な実施形態では、ポリペプチドは、当業者に周知の技法を用いてそのアミノ酸配列を変化させることにより、その免疫原性が低下するように修飾することまたは突然変異させることができる。機能の損失および獲得についての分析などの別の例示的な試験は、実施例1に詳しく記載されている。本出願全体を通して使用される場合、ポリペプチドという用語は、その最も広範な意味で使用され、サブユニットアミノ酸の配列を指す。本発明のポリペプチドは、L-アミノ酸、D-アミノ酸invivoにおいてL-アミノ酸に特異的なプロテアーゼに対して抵抗性である、またはD-アミノ酸とL-アミノ酸の組み合わせを含んでよい。本明細書に記載のポリペプチドは、化学的に合成すること、または組み換えによって発現させることができる。ポリペプチドは、invivoにおける半減期の増加を促進するために、例えば、ペグ化、HES化HESylation、PAS化PASylation、グリコシル化によってなど、他の化合物と連結させることができる、または、Fc融合物としてもしくは脱免疫化deimmunized変異体で作製することができる。そのような連結は、当業者には理解される通り、共有結合性または非共有結合性であってよい。本明細書で使用される場合、作動可能に連結されたという用語は、ドメインが、それらの意図された目的のための単位として機能するように形づくられる、要素の配置を指す。この用語は、ドメインがポリペプチドのすぐ隣にあることを必要とせず、ドメイン間にスペーサー/リンカー配列が存在してよく、その長さは、かなり変動してよい。1つの非限定的な実施形態では、組換えAdB-2/3線維ポリペプチドの任意の2つのドメイン間のスペーサーの長さは、約0アミノ酸から約20アミノ酸の間であってよい。種々の他の非限定的な実施形態では、スペーサーの長さは、の長さであってよい。本明細書で使用される場合、組換えポリペプチドとは、天然に生じないタンパク質産物を意味し、組換えポリペプチドのドメインは、1種またはそれより多い種の他のタンパク質または人工的に誘導された配列に由来する。例えば、各ドメインは、異なる天然に存在するタンパク質配列に由来してよい例えば:あるAdB-2/3血清型由来のシャフト配列;異なるAdB-2/3血清型由来のノブドメイン;など。組換えポリペプチドは、これらに限定されないが、標準のDNA操作技法および組換えポリペプチドのサブユニット部分を介した化学的な組立てを含めた種々の機構によって構築することができる。化学的な組立てにより、分子遺伝的な形態としての等価形態または等価な機能を伴う代替物がもたらされ得る。好ましい実施形態では、標準の組換えDNA技法によって組換えポリペプチドを作製する。本発明の組換えポリペプチドをそのように組換えにより作製し単離するための技法は、本明細書における教示に基づいて、十分に当業者のレベルの範囲内である。一実施形態では、各シャフトドメインは、Ad3シャフトドメイン、Ad7シャフトドメイン、Ad11シャフトドメイン、Ad14シャフトドメイン、Ad14aシャフトドメイン、それらの組み合わせ、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。DSG2と結合し、それにより一過性の細胞間結合の開口をもたらすために必要である線維ノブ二量体形成のためにはシャフトドメインが必要である。したがって、これらのAdウイルス血清型のシャフトドメインの機能的等価物は、以下に提供される実施例に基づいて当業者が容易に決定することができる。例えば、固定化した組換えDSG2を含有するセンサーを使用した表面プラズモン共鳴SPR試験を用いて、DSG2競合試験と組み合わせて、評価されている組換えポリペプチドがDSG2と結合するかどうかを決定することができる。機能の損失および獲得についての分析などの別の例示的な試験は、実施例1に詳しく記載されている。組換えポリペプチドは、1個から22個の間のAdB-2/3線維ポリペプチドシャフトドメインを含んでよい。したがって、種々の実施形態では、ポリペプチドは、を含む。単一の組換えポリペプチドにおいて、2個以上のAdB-2/3線維タンパク質シャフトドメインが存在する場合、各シャフトドメインは同一であってよい、またはシャフトドメインの1つまたはそれより多いコピーは異なってよい。好ましい実施形態では、組換えAdB-2/3線維ポリペプチドは単一のシャフトドメインを有する。別の実施形態では、組換えポリペプチド内の1つまたはそれより多いまたは全てのシャフトドメインは、配列番号11:によるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。この配列および本明細書において示されている他の可変性配列では、可変性の残基は括弧内に示されており、-は、その残基が存在しない場合があることを示す。別の実施形態では、組換えポリペプチド内の1つまたはそれより多いまたは全てのシャフトドメインは、配列番号12:によるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。さらに別の実施形態では、組換えポリペプチド内の1つまたはそれより多いまたは全てのシャフトドメインは、配列番号1Ad3、配列番号2Ad7、配列番号3Ad11、配列番号4Ad14、および配列番号5Ad14aからなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。AdB-2/3線維ポリペプチドのアラインメントおよびそれらのドメイン構造については図24を参照されたい。一実施形態では、組換えポリペプチド内のノブドメインは、Ad3ノブドメイン、Ad7ノブドメイン、Ad11ノブドメイン、Ad14ノブドメイン、Ad14aノブドメイン、およびそれらの機能的等価物からなる群より選択される。DSG2と結合するためにはノブドメインが必要である。したがって、これらのAdウイルス血清型のノブドメインの機能的等価物は、DSG2との結合を評価するためのさまざまなアッセイの本明細書における教義に基づいて当業者が容易に決定することができる。例えば、固定化した組換えDSG2を含有するセンサーを使用した表面プラズモン共鳴SPR試験を用いて、DSG2競合試験と組み合わせて、評価されている組換えポリペプチドがDSG2と結合するかどうかを決定することができる。機能の損失および獲得についての分析などの別の例示的な試験は、実施例1に詳しく記載されている。別の実施形態では、ノブドメインは、配列番号13:によるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。別の実施形態では、ノブドメインは、配列番号14:によるアミノ酸配列を含む、またはそれからなるさらに別の実施形態では、ノブドメインは、配列番号6Ad3、配列番号7Ad7、配列番号8Ad11、配列番号9Ad14、および配列番号10Ad14aからなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、またはそれからなる。AdB-2/3線維ポリペプチドのアラインメントおよびそれらのドメイン構造については図24を参照されたい。本明細書で使用される場合、二量体形成ドメインとは、それを含有する組換えポリペプチド内の、二量体形成を促進するペプチド配列である。本発明の組換えポリペプチドには、それにより組換えポリペプチドの二量体形成、したがって、DSG2との結合が可能になる限りは、任意の適切な非AdB-2/3由来二量体形成ドメインを使用することができる。二量体形成ドメインは非AdB-2/3由来である、すなわち、AdB-2/3線維ポリペプチド内に天然に存在するドメインではない。当業者に公知であり、本発明において使用するために適した多数の二量体形成ドメインの非限定的な例としては、これらに限定されないが、少なくとも1つのへリックスを含有するペプチドへリックス、またはへリックス、コイルおよび別のへリックスなどによって形成される構造、コイルドコイル構造、例えば、多くの細胞表面シグナル伝達受容体内の二量体形成ドメイン、抗体のFc領域またはヒンジ領域、ロイシンジッパー、STATタンパク質のN末端ドメイン、FK506結合性タンパク質、LexAタンパク質のC末端ドメイン、核受容体、FkpAのN末端ドメイン、A.maxima由来のオレンジ色のカルテノイドタンパク質、インフルエンザ由来のM1マトリックスタンパク質、インフルエンザウイルス由来のノイラミニダーゼ、E.coliフクロースアルドラーゼなどが挙げられる。例えば、O’Shea、Science.254巻:539頁1991年、Barahmand-Pourら、Curr.Top.Microbiol.Immunol.211巻:121~128頁1996年;Klemmら、Annu.Rev.Immunol.16巻:569~592頁1998年;Klemmら、Annu.Rev.Immunol.16巻:569~592頁1998年;Hoら、Nature.382巻:822~826頁1996年;およびPomeranzら、Biochem.37巻:965頁1998年を参照されたい。さらなる例としては、ウシパピローマウイルスE2タンパク質内の残基325~410Dostatni、N.ら、EMBOJ7巻1988年3807~3816頁;Haugen、T.らEMBOJ7巻1988年4245~4253頁;McBride、A.ら、EMBOJ7巻1988年533~539頁;McBride、A.ら、ProcNatlAcadSciUSA86巻1989年510~514頁、1型脱ヨード酵素D1:DFLVIYIEEAHASDGW配列番号24またはADFL--YI-EAH-DGW配列番号25;HIV-1カプシドタンパク質:QGPKEPFRDYVDRFYKTLRA配列番号26;酵母GCN4のロイシンジッパー二量体形成モチーフ:HMKQLDVEELSNYHLNVARLKVGER配列番号27;Escherichiacoli転写性抗ターミネータータンパク質内のロイシンジッパー;およびBglG:GVTQLMREMLQLIKFQFSLNYQEESLSYQRLVT配列番号28が挙げられる。好ましい実施形態では、二量体形成ドメインは、EVSALEK配列番号22および/またはKVSALKE配列番号23の1つまたはそれより多いコピーを含む。本発明の組換えポリペプチド内の、二量体形成ドメインとしての機能を果たし得る適切なペプチド配列、およびその突然変異体を同定することは、下記の実施例2において開示されているものなどの本明細書における教義に基づいて、十分に当業者のレベルの範囲内である。例えば、組換えAdB-2/3線維ポリペプチドの二量体形成は、ショ糖勾配での沈降、トリプシンによるタンパク質分解に対する抵抗性、およびポリアクリルアミドゲルにおける電気泳動移動度を含めた判断基準によって評価することができるHongおよびEngler、JournalofVirology70巻:7071~7078頁1996年。組換えポリペプチドは、1つまたはそれより多い非AdB-2/3由来二量体形成ドメインを含んでよい。したがって、種々の実施形態では、組換えポリペプチドは、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、またはそれ以上の非AdB-2/3由来二量体形成ドメインを含む。ポリペプチド内に多数のドメインが存在する場合、二量体形成ドメインのそれぞれは同じであることが好ましい。好ましい実施形態では、スペーサーペプチドは、二量体形成ドメインと1つまたはそれより多いシャフトドメインの間に位置する。さらに好ましい実施形態では、スペーサーペプチドは、構造が柔軟なペプチドである。実質的にあらゆる、構造が柔軟なペプチドを使用することができる。例として、可動性のペプチドは、アミノ酸残基の繰り返し、例えば、Gly-Gly-Gly-Serなど、または任意の他の適切なアミノ酸残基の繰り返しを含んでよい。別の実施形態では、抗体のヒンジ領域を使用することができる。スペーサーは、組換えポリペプチドの二量体を形成する能力が維持され、組換えポリペプチドとDSG2の結合が維持される任意の適切な長さであってよい。好ましい一実施形態では、組換えAdB-2/3ポリペプチドは、aそれぞれがAd3シャフトドメイン配列番号1を含む、またはそれからなる1つまたはそれより多いシャフトドメインとbAd3ノブドメイン配列番号6を含む、またはそれからなるノブドメインとを含む。この好ましい実施形態は、本明細書に記載の実施形態のいずれかまたは複数の実施形態の組み合わせと一緒に用いることができる。例えば、これらに限定されないが、EVSALEK配列番号22および/またはKVSALKE配列番号23の1つまたはそれより多いコピーを含めた任意の適切な二量体形成ドメインを使用することができる。同様に、二量体形成ドメインとシャフトドメインの間および/またはシャフトドメインとノブドメインの間の任意の適切なスペーサーペプチドを使用することができる。最も好ましい実施形態では、組換えAdB-2/3ポリペプチドは、JO-1配列番号20、またはその多量体例えば、二量体などを含む、またはそれからなる。組換えポリペプチドは、別のドメイン、例えば、ポリペプチドを単離するためのドメインおよび/または検出ドメインなどを含んでよい。例えば、実施例および配列番号21のHisタグを有するJO-1を参照されたい。例えば、組換えポリペプチドを作製した後にポリペプチドの精製/単離を容易にするために、単離ドメインを付加することができる。これらに限定されないが、HIS、CBP、CYD共有結合性だが解離可能なNorpDペプチド、StrepII、FLAG、HPCプロテインCの重鎖ペプチドタグ、GST親和性タグおよびMBP親和性タグを含めた任意の適切な単離ドメインを使用することができる。本明細書で使用される場合、検出ドメインとは、検出することができる1つまたはそれより多いアミノ酸配列を意味する。これらに限定されないが、本質的に蛍光性のタンパク質例えば、非生物発光性Anthozoa種由来の緑色蛍光タンパク質および蛍光タンパク質、補因子要求性蛍光タンパク質または発光タンパク質例えば、フィコビリタンパク質またはルシフェラーゼ、および特異的抗体に認識され得るエピトープ、またはこれらに限定されないが、蛍光性または発光性に標識した、色素、酵素補因子および遺伝子工学で操作された結合性分子を含めた他の特異的な天然または非天然の結合性プローブを含めた任意の適切な検出ドメインを使用することができる。別の実施形態では、組換えポリペプチドは、多量体の形態、例えば、二量体、三量体などである。好ましい実施形態では、JO-1配列番号20多量体は、JO-1ホモ三量体のそれぞれの二量体形成ドメインを通じた二量体形成によって形成されたJO-1二量体を含むすなわち:JO-1ポリペプチドは、ノブドメインの三量体形成によるホモ三量体である。多量体の形態例えば、二量体などでは、組換えポリペプチドは、AdB-2/3線維多量体を含み、上記の本発明の種々の方法において使用することができる。当業者には理解される通り、そのような多量体は、本発明の同一の組換えポリペプチドの多量体を含んでよい、または、本発明の異なる組換えポリペプチドの多量体を含んでよい。一実施形態では、多量体の一部を形成している組換えポリペプチドのそれぞれにおいて二量体形成ドメインは同じである。別の実施形態では、多量体の一部を形成している組換えポリペプチドのそれぞれにおいて二量体形成ドメインは異なる。別の実施形態では、多量体の一部を形成している組換えポリペプチドのそれぞれにおいてシャフトドメインおよび/またはノブドメインは同じである。別の実施形態では、多量体の一部を形成している組換えポリペプチドのそれぞれにおいてシャフトドメインおよび/またはノブドメインは異なる。AdB-2/3線維の多量体形成は、当業者に周知の方法に従って決定することができる。例えば、組換えAdB-2/3線維構築物の多量体形成は、ショ糖勾配での沈降、トリプシンによるタンパク質分解に対する抵抗性、およびポリアクリルアミドゲルにおける電気泳動移動度を含めた判断基準によって評価することができるHongおよびEngler、JournalofVirology70巻:7071~7078頁1996年。電気泳動移動度に関しては、線維多量体は、非常に安定な複合体であり、SDS-PAGEの前に試料を煮沸しない場合、多量体の分子量と一致する分子量で流れる。しかし、煮沸すると、多量体の構造は破壊され、その後、タンパク質は、タンパク質単量体と一致するサイズで流れる。組換えポリペプチド、またはその多量体型は、溶液中で、または凍結させて保管することができる。別の実施形態では、本発明の組換えポリペプチドを、上皮組織に関連する障害に対する1種またはそれより多い種の治療薬と組み合わせる例えば、それと結合体化するなど。そのような結合体は、例えば、本発明の治療方法において使用することができる。本発明のポリペプチドと対象の治療薬を結合体化するための方法、例えば、共有結合または化学的架橋によるものなどは、当業者に周知である。それらに限定されないが、上に開示されているもの、ならびにレラキシンなどの腫瘍間質分解性化合物を含めた任意の適切な治療薬を使用して、本発明のこの実施形態による結合体を形成することができる。好ましい実施形態では、治療薬は、抗腫瘍治療薬であり、本明細書に記載の化学療法薬または抗腫瘍モノクローナル抗体を含む。さらに好ましい実施形態では、抗腫瘍治療薬は、トラスツズマブ、セツキシマブ、ペルツズマブ、アポマブ、コナツムマブ、レクサツムマブ、ベバシズマブ、ベバシズマブ、デノスマブ、ザノリムマブ、リンツズマブ、エドレコロマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、ミツモマブ、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、オレゴボマブ、ペムブモマブ、ダクリズマブ、パニツムマブ、カツマキソマブ、オファツムマブ、およびイブリツモマブからなる群より選択される抗体を含む。別の態様では、本発明は、本発明の任意の実施形態のポリペプチドをコードする核酸を提供する。核酸は、RNAまたはDNAを含んでよく、また、標準の分子生物学的技法を用いて本明細書における教義に基づいて調製および単離することができる。核酸は、これらに限定されないが、ポリA配列、修飾されたコザック配列、ならびにエピトープタグ、輸出シグナル、および分泌シグナルをコードする配列、核局在化シグナル、ならびに原形質膜局在化シグナルを含めた、コードされるタンパク質の発現および/または精製を促進するために有用な追加的なドメインを含んでよい。別の態様では、本発明は、プロモーターに作動可能に連結された本発明の任意の態様の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。組換え発現ベクターは、核酸のコード領域または遺伝子を、遺伝子産物の発現に影響を及ぼすことができる任意のプロモーターと作動可能に連結させるベクターを含む。哺乳動物系において開示されている核酸の発現を駆動するために使用するプロモーター配列は、構成的なものこれらに限定されないが、CMV、SV40、RSV、アクチン、EFを含めた種々のプロモーターのいずれかによって駆動されるまたは誘導性のものこれらに限定されないが、テトラサイクリン反応性プロモーター、エクジソン反応性プロモーター、ステロイド反応性プロモーターを含めたいくつもの誘導性プロモーターのいずれかによって駆動されるであってよい。原核細胞のトランスフェクトにおいて使用するための発現ベクターの構築も当技術分野で周知であり、したがって、標準の技法によって実現することができる例えば、Sambrook、Fritsch、およびManiatis、MolecularCloning、ALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratoryPress、1989年;GeneTransferandExpressionProtocols、109~128頁、E.J.Murray編、TheHumanaPressInc.、Clifton、N.J.、およびAmbion1998年CatalogAmbion、Austin、TXを参照されたい。発現ベクターは、宿主生物体において、エピソームとしてか、または宿主染色体DNAに組み込まれることによって複製可能でなければならず、また、これらに限定されないが、抗生物質抵抗性遺伝子などの選択マーカーを含めた、所与の使用に適しているとみなされる任意の他の構成要素を含んでよい。さらに別の態様では、本発明は、本明細書に開示されている組換え発現ベクターを含む宿主細胞、およびその後代を提供し、宿主細胞は原核生物であっても真核生物であってもよい。細胞は、一過性または安定にトランスフェクトすることができる。そのような、原核細胞および真核細胞への発現ベクターのトランスフェクションは、これらに限定されないが、標準の細菌の形質転換、リン酸カルシウム共沈澱、電気穿孔、またはリポソーム媒介性トランスフェクション、DEAEデキストラン媒介性トランスフェクション、ポリカチオン媒介性トランスフェクション、またはウイルス媒介性トランスフェクションを含めた、当技術分野で公知の任意の技法によって実現することができる例えば、MolecularCloning:ALaboratoryManualSambrookら、1989年、ColdSpringHarborLaboratoryPress;CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechnique、第2版R.I.Freshney.1987年、Liss,Inc.NewYork、NYを参照されたい。発現ベクターをトランスフェクトした培養細胞を利用して多量のポリペプチドを作製する技法は当技術分野で周知である。別の態様では、本発明は、aAdB-2/3線維多量体、またはその機能的等価物と、b薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。AdB-2/3線維多量体は、本発明の態様、実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせにより本明細書に記載されている多量体のいずれであってもよい。種々の好ましい実施形態では、AsB-2/3線維多量体は、本発明のAdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3のPtDd、または組換えAdB-2/3線維多量体、またはそれらの機能的等価物を含む。種々の他の好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、Ad3線維多量体、Ad7線維多量体、Ad11線維多量体、Ad14線維多量体、Ad14a線維多量体、およびそれらの組み合わせまたはキメラからなる群より選択される。好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、AdB-2/3のPtDd例えば、Ad3のPtDdなどを含む、またはそれからなる。別の好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせの組成物、例えば、JO-1配列番号20二量体などを含む、またはそれからなる。医薬組成物は、これらに限定されないが、上に開示されているものを含めた、上皮組織に関連する障害を処置するための1種またはそれより多い種の治療薬をさらに含んでよい。好ましい実施形態では、治療薬は、抗腫瘍治療薬であり、本明細書に記載の化学療法薬または抗腫瘍モノクローナル抗体を含む。さらに好ましい実施形態では、抗腫瘍治療薬は、トラスツズマブ、セツキシマブ、ペルツズマブ、アポマブ、コナツムマブ、レクサツムマブ、ベバシズマブ、ベバシズマブ、デノスマブ、ザノリムマブ、リンツズマブ、エドレコロマブ、リツキシマブ、チシリムマブ、トシツモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、ミツモマブ、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、オレゴボマブ、ペムブモマブ、ダクリズマブ、パニツムマブ、カツマキソマブ、オファツムマブ、およびイブリツモマブからなる群より選択される抗体を含む。薬学的に許容される担体は、無毒性であり、生体適合性であり、多量体およびそれと組み合わせた任意の他の治療剤の生物活性に有害な影響を及ぼさないように選択される。例示的な、ペプチドに対する薬学的に許容される担体は、Yamadaの米国特許第5,211,657号に記載されている。組成物は、経口投与、非経口投与、または外科的投与が可能になる、固体の形態、半固体の形態、ゲルの形態、液体の形態または気体の形態の調製物、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、溶液、坐剤、吸入剤、および注射剤などに製剤化することができる。注射、注入、または洗浄および局部送達によって非経口的に送達するための適切な担体としては、蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、規定のリンゲル液または乳酸リンゲル液、ブドウ糖溶液、ハンクス液、またはプロパンジオールが挙げられる。さらに、滅菌した不揮発性油を、溶媒または懸濁媒として使用することができる。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含めた任意の生体適合性油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射剤の調製において使用される。担体および作用剤は、液剤、懸濁剤、重合性ゲルまたは非重合性ゲル、ペースト剤または膏薬として配合することができる。担体は、作用剤複数可の送達を持続させるすなわち、延長する、遅延させる、または調節するため、または治療剤複数可の送達、取り込み、安定性、または薬物動態を増強するための送達ビヒクルも含んでよい。そのような送達ビヒクルとしては、非限定的な例として、微小粒子、ミクロスフェア、ナノスフェア、またはタンパク質で構成されるナノ粒子、リポソーム、炭水化物、合成の有機化合物、無機化合物、ポリマーヒドロゲルまたはコポリマーヒドロゲル、およびポリマーミセルを挙げることができる。適切なヒドロゲル送達系およびミセル送達系としては、国際特許公開第WO2004/009664A2号に開示されているPEO:PHB:PEOコポリマーおよびコポリマー/シクロデキストリン複合体、および米国特許出願公開第2002/0019369A1号に開示されているPEOおよびPEO/シクロデキストリン複合体が挙げられる。そのようなヒドロゲルは、意図された作用部位に、または皮下または筋肉内に局所的に注射して、持続的放出デポ剤を形成することができる。くも膜下腔内ITまたは脳室内ICVに送達するために、適切に滅菌された送達系例えば、液体;ゲル、懸濁液などを使用して組成物を投与することができる。非ペプチド作用剤を経口投与するためには、組成物を不活性な増量剤または希釈剤、例えば、スクロース、コーンスターチ、またはセルロースなどに担持させることができる。本発明の組成物は、生体適合性賦形剤、例えば、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤、希釈剤、緩衝液、浸透エンハンサー、乳化剤emulsifier、結合剤、増粘剤、調味料経口投与用なども含んでよい。例示的な製剤は、注射可能な投与量の、水、油、生理食塩水、グリセロール、またはエタノールなどの滅菌された液体であってよい医薬担体を伴う生理的に許容される希釈剤中の多量体の溶液または懸濁剤として非経口的に投与することができる。さらに、補助的な物質、例えば、湿潤剤または乳化剤emulsifyingagent、界面活性物質、pH緩衝物質などが修飾されたポリペプチドを含む組成物に存在してよい。医薬組成物の追加的な構成成分としては、石油例えば、動物起源、植物起源、または合成起源のものなど、例えば、大豆油および鉱油が挙げられる。一般に、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが注射用溶液に好ましい液体担体である。医薬組成物は、多量体および他の治療薬存在する場合の持続性放出またはパルス放出が可能になるように製剤化することができるデポ剤注射剤または埋め込み調製物の形態で投与することもできる。医薬組成物は、本発明のポリペプチドに加えて、a分散保護剤lyoprotectant;b界面活性物質;c充填剤;d張度調整剤;e安定剤;f保存料および/またはg緩衝液を含んでよい。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の緩衝液は、トリス緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液または酢酸緩衝液である。医薬組成物は、分散保護剤、例えば、スクロース、ソルビトールまたはトレハロースも含んでよい。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、保存料、例えば、塩化ベンザルコニウム、ベンゼトニウム、クロロヘキシジン、フェノール、m-クレゾール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、o-クレゾール、p-クレゾール、クロロクレゾール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、安息香酸、および種々のそれらの混合物を含む。他の実施形態では、医薬組成物は、グリシンのような充填剤を含む。さらに他の実施形態では、医薬組成物は、界面活性物質、例えば、ポリソルベート-20、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-65、ポリソルベート-80、ポリソルベート-85、ポロキサマー-188、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミタート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタントリラウレート、ソルビタントリステアレート、ソルビタントリオレエートsorbitantrioleaste、またはそれらの組み合わせを含む。医薬組成物は、張度調整剤、例えば、製剤に、ヒト血液との実質的な等張性isotonicまたは等浸透圧性isoosmoticを与える化合物も含んでよい。例示的な張度調整剤としては、スクロース、ソルビトール、グリシン、メチオニン、マンニトール、ブドウ糖、イノシトール、塩化ナトリウム、アルギニンおよびアルギニン塩酸塩が挙げられる。他の実施形態では、医薬組成物は、安定剤、例えば、対象のタンパク質と組み合わせると、凍結乾燥した形態または液体の形態における対象のタンパク質の化学的な不安定性および/または物理的な不安定性を実質的に予防するまたは低下させる分子をさらに含む。例示的な安定剤としては、スクロース、ソルビトール、グリシン、イノシトール、塩化ナトリウム、メチオニン、アルギニン、およびアルギニン塩酸塩が挙げられる。医薬組成物は、任意の適切な様式に包装することができる。一実施形態では、医薬組成物を、AdB-2/3線維多量体の容器例えば、バイアルなどを含有するキットとして包装する。好ましい実施形態では、キットは、同じ容器または別の容器例えば、バイアルなど内に、AdB-2/3線維多量体と一緒に、被験体に投与しようとする治療薬、診断薬、またはイメージング剤をさらに含む。任意の適切なAdB-2/3線維多量体をキットに使用することができる;最も好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、JO-1の多量体例えば、二量体などである。別の態様では、本発明は、a1種またはそれより多い種の組換えポリペプチド/AdB-2/3線維多量体、単離された核酸、組換え発現ベクター、および/または本発明の宿主細胞;およびbその/それらの、上皮組織に関連する障害を処置することにおける使用についての説明書を含むキットを提供する。キットは、本発明の方法において使用するための治療薬をさらに含んでよい。別の態様では、本発明は、上皮組織に関連する障害を処置すること、上皮組織への物質の送達を改善すること、DSG2を発現している組織への物質の送達を改善すること、組織におけるEMTを誘導すること、および/またはAdB-2/3感染症を処置することのうちの1つまたはそれより多いための候補化合物を同定するための方法であって、aAdB-2/3線維多量体とDSG2を、1種またはそれより多い種の試験化合物の存在下、DSG2への多量体の結合を促進する条件下で接触させるステップと;b対照と比較して、DSG2との結合についてAdB-2/3線維多量体と競合する陽性の試験化合物を同定するステップとを含み、陽性の試験化合物が、上皮組織に関連する障害を処置すること、上皮組織への物質の送達を改善すること、DSG2を発現している組織への物質の送達を改善すること、組織におけるEMTを誘導すること、および/またはAdB-2/3感染症を処置することのうちの1つまたはそれより多いための候補化合物である方法を提供する。DSG2との結合についてAdB-2/3線維多量体と競合する陽性の試験化合物は、それらがDSG2と相互作用することによる、細胞内の結合の一過性の開口のための候補化合物である。化合物の、それらがDSG2と相互作用することによって細胞内の結合を一過性に開口させる能力を検証するための経過観察アッセイは、これらに限定されないが、続く実施例に開示されている試験を含めた任意の適切な方法によって行うことができる。そのように、上皮組織に関連する障害を処置すること、上皮組織への物質の送達を改善すること、DSG2を発現している組織への物質の送達を改善すること、または組織におけるEMTを誘導することについて同定された化合物は、本発明の方法のいずれにおいてもAdB-2/3多量体の代替物として使用することができる。さらに、AdB-2/3は、気道感染症いくらか重篤なおよび咽頭結膜熱を引き起こす重要なヒト病原体を示す。したがって、AdB-2/3感染症を処置することができる化合物が有用であると思われる。本明細書に開示されている通り、DSG2はAdB-2/3により主要な高親和性受容体として使用され、したがって、AdB-2/3とDSG2の結合を減らすことができる化合物は、AdB-2/3感染症の発症を処置または限定するための候補化合物である。この態様では、AdB-2/3多量体は、実施形態のいずれかまたは複数の実施形態の組み合わせに開示されているAdB-2/3多量体のいずれであってもよい。したがって、種々の非限定的な実施形態では、AdB-2/3多量体は、AdB-2/3ビリオン、AdB-2/3カプシド、AdB-2/3の12面体粒子PtDdAdB-2/3の複製時にそれらにより産生されるウイルス成分の12面体粒子、組換えAdB-2/3線維多量体これらに限定されないが、下記の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせにおいて開示されているものを含めた、およびそれらの機能的等価物であってよい。好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、Ad3のPtDdなどのAdB-2/3のPtDdを含む、またはそれからなる。別の好ましい実施形態では、1種またはそれより多い種のAdB-2/3線維多量体は、下記の本発明の組成物の実施形態のいずれか、または複数の実施形態の組み合わせを含む、またはそれからなる。さらに好ましい実施形態では、AdB-2/3線維多量体は、JO-1配列番号20二量体、またはそれらの機能的等価物を含む、またはそれからなる。これに限定されないが、試験化合物の非存在下におけるAdB-2/3多量体とDSG2の結合を含めた任意の適切な対照を使用することができる。一実施形態では、DSGは、組換えDSG2を含む。別の実施形態では、方法は、細胞表面上にDSG2内因的にまたは組換えによってを発現している細胞を使用する。1つの非限定的な実施形態では、固定化した組換えDSG2を含有するセンサーを使用した表面プラズモン共鳴SPR試験を用いて、DSG2競合試験と組み合わせて、DSG2と結合するAdB-2/3線維多量体である候補化合物を同定することができる。機能の損失および獲得についての分析などの別の例示的な試験は、実施例1に詳しく記載されている。別の実施形態では、同定は、実施例1に開示されているものなどの、試験化合物の、結合を減少させる能力が、DSG2を発現している上皮細胞に機能的なAdB-2/3ビリオンを形質導入する能力の減少として検出される形質導入試験を含む。別の実施形態では、DSG2を発現している細胞抽出物を電気泳動によって分離し、ウエスタンブロット分析し、標識したAdB-2/3線維多量体を使用して、試験化合物の存在下でウエスタンブロットを探索する。別の実施形態では、Wangら、J.Virology2007年81巻:12785~12792頁;およびWangら2008年82巻:10567~10579年に記載のものなどのドットブロットアッセイを使用することができる。AdB-2/3感染症を処置するための候補化合物を同定するための技法のさらなる例が、続く実施例において提供される。試験化合物がポリペプチド配列を含む場合、そのようなポリペプチドは、化学的に合成すること、または組み換えによって発現させることができる。組換え発現は、上に開示されている通り当技術分野における標準の方法を用いて実現することができる。そのような発現ベクターは、細菌発現ベクターまたはウイルス発現ベクターを含んでよく、そのような宿主細胞は、原核生物または真核生物であってよい。固相、液相、またはペプチド縮合技法の周知の技法、またはそれらの任意の組み合わせを用いて調製した合成ポリペプチドは、天然アミノ酸および非天然アミノ酸を含んでよい。ペプチド合成のために使用するアミノ酸は、標準の脱保護、中和、カップリングおよび洗浄のプロトコールを用いた標準のBocNα-アミノ保護されたNα-t-ブチルオキシカルボニルアミノ酸樹脂、または標準の塩基に不安定なNα-アミノ保護された9-フルオレニルメトキシカルボニルFmocアミノ酸であってよい。FmocNα-アミノ保護されたアミノ酸およびBocNα-アミノ保護されたアミノ酸はどちらも、Sigma、CambridgeResearchBiochemical、または当業者によく知られている他の化学薬品会社から入手することができる。さらに、他のNα-保護基を用いて合成することができるポリペプチドは当業者によく知られている。固相ペプチド合成は、当業者によく知られている技法によって実現することができ、例えば自動合成機を使用することによって提供することができる。試験化合物が抗体を含む場合、そのような抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであってよい。抗体は、ヒト化形態、完全ヒト形態、またはマウス形態の抗体であってよい。そのような抗体は、HarlowおよびLane、Antibodies;ALaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratory、ColdSpringHarbor、N.Y.、1988年に記載のものなどの周知の方法によって作出することができる。試験化合物が核酸配列を含む場合、そのような核酸は、同様に、化学的に合成すること、または組み換えによって発現させることができる。組換え発現技法は、当業者に周知である例えば、Sambrookら、1989年、上記を参照されたい。核酸は、DNAまたはRNAであってよく、一本鎖または二本鎖であってよい。同様に、そのような核酸は、当技術分野における標準の技法を用いて、手動の反応または自動化された反応により化学的または酵素的に合成することができる。化学的にまたはinvitro酵素的合成により合成された場合、核酸は、細胞に導入する前に精製することができる。例えば、核酸は、溶媒または樹脂、沈澱、電気泳動、クロマトグラフィー、またはそれらの組み合わせを用いて抽出することによって混合物から精製することができる。あるいは、核酸は、試料を加工することによる損失を回避するために、精製することなく、または最小限に精製して使用することができる。試験化合物がポリペプチド、抗体、または核酸以外の化合物を含む場合、そのような化合物は、有機化学合成を行うための当技術分野の種々の方法の任意の変形によって作出することができる。実施例1デスモグレイン2は、アデノウイルス血清型3、7、11、および14に対する受容体である要約アデノウイルスAd血清型Ad3、Ad7、Ad11、およびAd14によって使用される主要な高親和性受容体としてデスモグレイン2DSG2を同定した。これらの血清型は、気道感染症を引き起こす重要なヒト病原体を示す。上皮細胞において、アデノウイルスがDSG2と結合することにより、上皮間葉転換によく似た事象が誘発され、一過性の細胞間結合の開口がもたらされる。これにより、細胞間結合内に閉じ込められている受容体、例えば、CD46およびHer2/neuへの接近が改善される。組換えAd3のPtDdを用いた試験によって示されている通り、完全なビリオンに加えて、ウイルスの複製時にウイルスのペントンおよび線維によって過剰に形成される12面体粒子PtDdにより、DSG2に媒介される細胞間結合の開口が誘発され得る。本発明者らの発見は、アデノウイルスの生物学的性質および病原性を明らかにし、また、がん療法のために意味を有する。諸言ヒトアデノウイルスAdは、現在55血清型を含有する6種A~Fに分類されている。Ad血清型の大部分は、主要な付着受容体としてコクサッキーアデノウイルス受容体CARを利用する1。しかしこれは、B種のAd血清型の場合は違う。最近、本発明者らはそれらの受容体の使用に基づいたB種Adの新しいグループ分けを提案した2。グループ1Ad16、Ad21、Ad35、Ad50は、ほぼCD46のみを受容体として利用する;グループ2Ad3、Ad7、Ad14は、CD46ではない、仮に受容体Xと名付けた一般的な、未確認の受容体複数可を共有する;グループ3Ad11は、CD46と優先的に相互作用するが、CD46が遮断されている場合には受容体Xも利用する。B種Adは、一般的なヒト病原体である。2005年から、血清型Ad3、Ad7、およびAd14を含めた多様なB種血清型の同時出現が観察された。2007年に、米国およびアジアのいくつかの場所で、Ad14の新規の病原性が高く毒性が強いと思われる株であるAd14aが発見された3~4。本発明者らは最近、Ad14aが、それらの受容体の使用に関してAdのB種グループ2に属することを実証した5。まとめると、受容体Xを利用する血清型Ad3、Ad7、Ad14、Ad14a、およびAd11は全て、AdB-2/3と称する。AdB-2/3は、特に上皮起源の腫瘍に関して、遺伝子移入ベクターとしての潜在性を有する6。上皮細胞は、いくつかの細胞間結合密着結合、接着結合、ギャップ結合、およびデスモソームを維持し、その特徴は、多くの場合、上皮内がんにおいて、およびがん細胞株において保存されている7。CARとCD46はどちらも上皮がん細胞の細胞間結合内に閉じ込められており、これらの付着受容体を使用するAdと接近できない8~9。対照的に、AdB-2/3は、上皮がん細胞に効率的に感染し、これは、部分的に、上皮細胞が細胞間結合などの特性を失い、間葉細胞の性質を獲得する細胞の分化転換プログラムである10上皮間葉転換EMTによく似たプロセスを誘導することによって実現される8。AdB-2/3の別の示差的な特徴は、それらが、複製時にAd線維とペントンベースとからなるウイルス成分の12面体粒子を産生することができることである11。ペントン12面体PtDdは、全長のペントンベースタンパク質から組み立てることができないが、残基37と残基38の間におけるタンパク質分解による自然発生的なN末端の切断を必要とする12。この切断部位はAd3、Ad7、Ad11、およびAd14において保存されているが、Ad2およびAd5には存在しない図1a。Ad3の場合では、PtDdは、非常に過剰に形成され感染性ウイルス当たりPtDd5.5×106個、PtDdがウイルスの脱出および伝播の一因となるという仮説が立てられている13。受容体Xを同定するための最初の試みは、1995年に遡る。これらの最初の試験により、Ad3と、約130kDaのHeLa細胞タンパク質との相互作用が示されている14。最近、CD46、CD80および/またはCD86などに対する受容体Xのいくつかの候補が提唱された15~18。しかし、本発明者らおよび他者は、これらのタンパク質がAdB-2/3に対する高親和性受容体としての機能を果たし得ることをこれまでに検証することができていない2,19~23。本試験では、Ad3ビリオンおよび組換えAd3のPtDdを受容体Xについてのプローブとして使用し、AdB-2/3血清型に対する高親和性受容体としてデスモグレイン2DSG2を同定した。DSG2は、カドヘリンタンパク質ファミリーに属するカルシウム結合性膜貫通糖タンパク質である。上皮細胞において、DSG2は、細胞間接着構造の構成成分である24。その細胞質尾部は、細胞接着および細胞間結合/細胞形態の調節因子と直接接触している一連のタンパク質と相互作用する25。DSG2は、胃がん26、扁平上皮癌27、黒色腫28、転移性前立腺がん29、および膀胱がん30を含めた一連の上皮の悪性疾患において過剰発現されることが示されている。結果DSG2は、AdB-2/3ウイルスに対する受容体である。本発明者らの以前の試験により、Ad3が、高密度細胞受容体にナノモルの親和性で結合することが示された2。Ad3の結合は、トリプシンに対して感受性であり、EDTAによって遮断することができた、つまり、結合には二価カチオンが必要であった。まず、細胞との高親和性結合を媒介するAd3カプシドタンパク質を同定し、後にそれを用いて高親和性受容体Xを検索した。特に、Ad5とCARの高親和性結合およびAd35とCD46の結合は、それぞれ、対応する線維ノブによって媒介される31。しかし、本発明者らの以前の試験により、単一の組換えの三量体Ad3ノブでは、非常に高い濃度を使用した場合でさえ、Ad3ウイルスの結合を完全に遮断することができないことが明らかになり、これは、他のまたは追加的なカプシド部分がAd3の結合に関与していることを示している32。したがって、本発明者らは、Ad3の結合と競合させるためにAd3ペントンベースBsDdまたはAd3ペントンベースと線維PtDdで構成される組換えAd312面体を利用した図1b33。PtDdはAd3の細胞への付着を遮断するが、BsDdはそれを遮断しないことが示された図2a。PtDdはまた、CD46も遮断されている場合、他のAdB-2/3、例えば、Ad14、Ad14a、ならびにAd11の結合も遮断したが、Ad5の結合は阻害せず、Ad35の結合は部分的にのみ遮断した図2a、図1c。細胞をPtDdと一緒にプレインキュベートすることにより、BsDdと混合したAd3ノブよりもAd3の結合が阻害された図1d。形質導入試験では、PtDdは、Ad3ベクターAd3-GFPを効率的に遮断したが、Ad35ベクターAd35-GFP受容体としてCD46を使用するの形質導入は遮断せず図2b、PtDdのAd3と競合する能力も確認された。Ad3-GFP図1eおよびAd35-GFP34は、E3領域にCMV-GFP発現カセットを挿入した、野生型Ad3ベースのベクターおよび野生型Ad35ベースのベクターである。受容体Xを同定するために最適な細胞株を選択するために、いくつかのヒト細胞株および動物細胞株へのAd3ウイルスの結合を比較した図2c。Ad3はげっ歯類細胞には結合せず、これは、これらの細胞において受容体Xが発現されていなかった、またはAd3に接近できなかったことを示している。最初に試験したヒト細胞株10株HeLa、K562、SKOV3、293、HT29、SKHep1、Saos、Y79、Ramosのうち、Ad3の結合は、Ramosヒトバーキットリンパ腫細胞においてのみ見られなかった。Ad受容体候補を同定するために、HeLa細胞膜タンパク質を可溶化し、ポリアクリルアミドゲル上で分離し、ブロッティングした。ブロットをウイルス粒子とハイブリダイズさせ、ウイルス線維ノブ特異的抗体を用いて結合を可視化した。特異的なゲルバンドを切り取り、タンデムな質量分析法MS/MSによって分析した。まず、このアッセイによって公知のAd受容体であるCD46を検出することができるかどうかを試験した。フィルターを、CD46-ターゲティングAd5/35ビリオンと一緒にインキュベートし35、CD46と一致する単一のバンドが見いだされた図2d。フィルターをAd3ビリオンと一緒にインキュベートすることにより、160kDaの分子量および90kDaの分子量の2つのバンドが明らかになった図2e。これらの2つのバンドに加えて、Ad3のPtDdは、130kDaの範囲内のHeLaタンパク質とも反応した。Ramos細胞、すなわち、Ad3と結合しない細胞では、160kDaのバンドおよび90kDaのバンドはどちらも存在しなかった。HeLa細胞およびRamos細胞の両方で約130kDaのPtDd結合バンドが現れ、これは、それがAd3ウイルス受容体ではないことを示している。160kDaのバンドのMS/MS分析により、ヒトデスモグレイン2DSG2と一致する14ペプチドが同定された図2f。HeLa膜タンパク質のIP/ウエスタン分析により、160kDaのバンドおよび90kDaのバンドがどちらも、DSG2特異的抗体によって認識されたことが実証された図2e、右側のパネル。これは、160kDaのバンドが完全なサイズのDSG2を表すこと、および90kDaのバンドが、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、および膜近傍細胞外アンカードメインを欠くDSG2変異体であることを示す以前のウエスタンブロット試験と一致する36~37。固定化した組換えヒトDSG2を含有するセンサーを用いたBIAcore表面プラズモン共鳴SPR試験により、Ad3ビリオンはDSG2と相互作用するが、Ad2ビリオンまたはAd5ビリオンはDSG2と相互作用しないことが実証された図2g。組換えPtDdはDSG2と結合したが、BsDd粒子はDSG2と結合しなかった図2h。PtDd-DSG2相互作用のKD平衡解離定数は2.5nMであった。固定化したDSG2とPtDdの結合は、可溶性のDSG2がそれと競合したという事実によって実証された通り特異的であったデータは示していない。結合動力学のSPR分析により、Ad3線維ノブがDSG2からより早く解離することも示され、これは、線維シャフト内に追加的なDSG2結合部位複数可が存在すること、および/またはDSG2と高親和性で結合するために線維多量体形成が必要であることを示している図2i、図1dも参照されたい。DSG2をAdB-2/3の結合/感染についての重大な受容体として検証するために、細胞株に対して機能の損失および獲得試験を実施した。組換えDSG2タンパク質は、Ad3ならびに他のAdB2/3Ad、すなわち、Ad7、Ad14、Ad14a、およびAd11とHeLa細胞の結合を遮断したが、Ad5およびAd35の結合は遮断しなかった図3a。Ad3-GFPの感染は、DSG2タンパク質によって効率的に阻害されたが、カドヘリンスーパーファミリーの他の構造的に関連するメンバーデスモグレイン1-DSG1およびデスモコリン1-DSC1によっては阻害されなかった38図3b。この試験により、DSG2タンパク質は、CD46-ターゲティングベクターAd35-GFPによる形質導入に影響を及ぼさなかったことも示された。細胞外ドメイン3および4に対するモノクローナル抗体mAbを用いるとAd3の付着の有意な阻害が観察された図3cDSG2の概略図については、図2fを参照されたい。DSG2特異的siRNAのプールをHeLa細胞にトランスフェクトすることにより、表面のDSG2レベルが約7分の1に下方制御されたデータは示していない。Ad3の付着は、DSG2-siRNAで処置したHeLa細胞では、対照siRNAで処置した細胞と比較して3分の1であったP<0.001図3d。Ad3-GFPに感染した後のGFPの発現レベルは、DSG2-siRNAをトランスフェクトした細胞では、対照siRNAをトランスフェクトした細胞の13.9分の1であった図3e。DSG2特異的siRNAは、CAR-ターゲティングベクターAd5-GFPを用いた形質導入に影響を及ぼさなかった。しかし、DSG2-siRNAをトランスフェクトすることにより、結合およびCD46特異的ベクターAd35-GFPおよびAd5/35-GFPの形質導入も減少した。DSG2-siRNAによりHeLa細胞におけるCD46レベルは低下しなかった。この時点では、この現象を説明することができない。しかし、これはHeLa細胞に特異的であると思われる。DSG2-siRNAをトランスフェクトした293細胞または乳がんBT474細胞ではAd35-GFPまたはAd5/35-GFPの形質導入の低下は検出されなかったデータは示していない。siRNAに媒介されるDSG2の下方制御によっても、100集密において細胞当たり1pfuのMOIでAd3-GFPを感染させた細胞におけるウイルス細胞溶解および拡散が減少した。感染多重度MOIを調整して用いて感染の16時間後に匹敵するGFPの発現の百分率が実現されるように、ある期間にわたってウイルス細胞溶解を追跡し、感染の7日後に、対照siRNAをトランスフェクトした細胞において、DSG2siRNAをトランスフェクトした細胞よりも大規模な溶解性プラークが見いだされた。これは、組織培養ウェルに付着したままである生存細胞、すなわちウイルス感染による細胞変性の影響を生じなかった細胞のクリスタルバイオレット染色に反映される図3f。細胞の生存率の定量的分析により、siRNAによってDSG2が下方制御されている細胞において、対照siRNAで処置した細胞と比較して有意に少ない細胞死が示された図3g。機能獲得試験のために、DSG2の発現レベルが異なる一連の細胞株を選択し、Ad3-GFPの形質導入を測定した図4a。DSG2の発現を欠く全ての細胞株リンパ腫Ramos細胞、Raji細胞、Mino細胞、およびHH細胞は、Ad3-GFPが形質導入されにくかったが、CD46ターゲティングAd5/35-GFPベクターにより形質導入することができたこれらの細胞ではCD46も発現しているため39。他方では、DSG2陽性K562細胞にはAd3-GFPを効率的に形質導入することができた。BJAB細胞の約70がDSG2陽性であり、対応して、GFP陽性細胞の百分率は約50でプラトーに達した。Ad3の感染におけるDSG2の決定的な役割を決定的に証明するために、レンチウイルスベクター遺伝子移入により、Ad3-GFPが形質導入されにくい組織球性リンパ腫細胞株U937においてDSG2を異所発現させた図4b。U937-DSG2細胞におけるDSG2の異所発現により、効率的なAd3の付着および形質導入が付与されたが、一方これらの細胞におけるAd35の付着およびAd5/35-GFPの形質導入は影響を受けなかった図4cおよび4d。ヒト細胞におけるDSG2の局在:予測通り、正常な上皮組織包皮および結腸および上皮がん乳がんおよび卵巣がんの細胞膜においてDSG2が見いだされた図5a。極性結腸がんT84およびCaCo-2細胞の共焦点免疫蛍光顕微鏡検査により、DSG2と細胞間結合タンパク質であるクローディン7の共局在が実証された図5b。積み重なったXZ画像切片において図5bまたは細胞層の異なる深さで取得したXY切片データは示していない、DSG2は細胞間結合の先端に現れる。DSG2は、上皮細胞において接着結合タンパク質であるE-カドヘリンとも共局在した。Cy3で標識したAd3を極性細胞に加えた15分後、ウイルス粒子は結合に局在するDSG2に伴って検出可能であった図5c。Cy5-PtDd、DSG2、およびE-カドヘリンの三重の標識によって示されている通り、PtDdと一緒に15分インキュベートした正常な小気道上皮細胞で同様の結果が得られた図5d、上のパネル。PtDdシグナルは細胞膜上図5d、下のパネル、薄い矢印および細胞質内太い矢印にあり、内部移行した粒子を反映する可能性が最も高い。分極上皮細胞株と対照的に、HeLa細胞などの非極性細胞では、細胞間結合すなわち、膜に局在するクローディン7およびE-カドヘリンシグナルは存在しなかった。DSG2およびAd3が細胞表面に分散して見いだされた図5e。HeLa細胞のAd3の感染についての本発明者らの試験図2および3は、DSG2が非極性細胞においても受容体として作用することを示している。この場合、ヒト血小板および顆粒球においてDSG2およびAd3の結合/形質導入が検出されたことに注目すべきであるデータは示していない。これらの発見はAd3の病原性および遺伝子療法のためのAd3ベクターの血管内適用と関連するが、本発明者らは、この試験では、分極上皮細胞におけるAd3-DSG2相互作用の影響を分析することに焦点を合わせた。Ad3とDSG2の相互作用によりEMTが誘発される。最近、本発明者らは、AdB-2/3と上皮の卵巣がん細胞の相互作用により、EMTが誘発されることを見いだした。EMTは、間葉系のマーカーの発現の増加、細胞外マトリックス化合物の発現の増加、上皮のマーカーの発現の減少、転写因子の位置の変更、およびキナーゼの活性化を特徴とする7。本発明では、Ad3とDSG2の相互作用によりEMT様事象が誘発されることを証明することを試みた。ウイルス遺伝子の発現による細胞形態に対する潜在的な副作用を回避するために、試験では紫外線UVにより不活化したAd粒子および組換えAd3のPtDdを利用した。全体的に、どちらの種類の粒子を用いた結果も同様であった。上皮がん細胞をPtDd図6またはUVにより不活化したAd3示されていないと一緒にインキュベートすることにより、膜/結合に局在するクローディン7図6aまたはE-カドヘリンシグナル図6bの減少に反映される通り、結合のリモデリングが引き起こされた。さらに、PtDdで処置した後、間葉系のマーカーであるビメンチンおよびリポカリン2のより強力な免疫蛍光法シグナルが見いだされた図6cおよびd。PtDdとDSG2の相互作用によって誘発される細胞内シグナル伝達経路を同定するために、mRNA発現プロファイルを試験した。極性BT474細胞を、PBS、BsDd、またはPtDdと一緒に12時間インキュベートした後、AffymetrixヒトST遺伝子アレイを用いてmRNAを分析した。PtDdで処置することにより、PBSで処置した細胞と比較して430の遺伝子が>1.5倍に上方制御され、352の遺伝子が>1.5分の1に下方制御されることが見いだされた図6e。遺伝子の変更の一覧を、Pathway-Expressソフトウェア40によってさらに加工した。このコンピュータによる計算により、PtDdが、ホスファチジルイノシトールPI、マイトジェン活性化プロテインキナーゼMAPKakaERK、Wnt、接着結合、限局性の接着、およびアクチン細胞骨格シグナル伝達経路の調節を含めたEMTに関与するいくつものシグナル伝達経路の顕著な活性化を媒介したことが示唆された。リン酸化特異的抗体を使用したウエスタンブロット分析により、PtDdは、PI3KおよびMAPK/ERK1/2、すなわち、EMTに関与する重要なキナーゼの活性化を誘発するが、BsDdはそれを誘発しないことが示された図6f。これらの経路の活性化は、DSG2特異的mAb6D8、およびそれよりも劣った程度で、10D2、および13B11によっても誘発されたが、CD46を対象とするmAbでは誘発されなかった。DSG2siRNAをトランスフェクトした細胞におけるMAPK/ERK1/2およびPI3Kのリン酸化が減少したが、対照siRNAで処置した細胞ではそれが減少しなかったので、経路のPtDdによる活性化はDSG2によって媒介される。最後に、細胞を、ERK1/2阻害剤であるUO126上のパネルまたはPI3K阻害剤であるWortmannin下のパネルを用いて前処置した場合には、PtDdに誘発されるキナーゼのリン酸化は存在しなかった。総合すると、本発明者らのデータにより、上皮細胞においてAd3またはAd3PtDdがDSG2と結合することによりEMTが誘発されることが示唆されている。Ad3およびPtDdにより、細胞間結合内に閉じ込められている受容体への接近が増大する。Ad3ビリオンに誘発されるEMTまたはAd3のPtDdに誘発されるEMTにより、細胞間結合の開口ももたらされるかどうかを試験するために、上皮細胞の単層における関門の性質について試験した。まず、4kDaのFITC-デキストランの、transwellチャンバー内で培養した集密的な極性BT474細胞を通る流束を測定した図7a。PtDdインキュベーションにより、リン酸緩衝生理食塩水PBSと比較して透過係数が有意に増加するがBsDdインキュベーションによっては増加しないことが見いだされた。次いで、Ad3に誘発されるEMTまたはPtDdに誘発されるEMTおよび一過性の結合の開口により、通常は上皮細胞結合が原因で接近できないタンパク質への接近が増大するかどうかを試験した。そのような結合に局在する受容体の例は、Ad35およびAd5/35に対する高親和性受容体であるCD46である8。多数のCD46分子がBT474細胞の結合に局在することが確認された図7b、左側のパネル。PtDdで前処置することにより、BsDd処置と比較して3H-Ad35のBT474細胞への付着が有意に増加した図7b、右側のパネル。皮下の上皮腫瘍においてinvivoで、CD46-ターゲティングAdベクターの形質導入に対するPtDdの効果の増強も実証された図7c。Ad5/35-bGalを適用する8時間前にPtDdを静脈内注射することにより、ウイルスの形質導入が増加した。Adを注射した3日後に腫瘍溶解物において測定されたベータガラクトシダーゼ活性は、偽注射したマウス、BsDdを同時注射したマウス、およびPtDdを同時注射したマウスについて、それぞれタンパク質1μg当たり2.3/-0.2×105rlu、2.7/-0.6×105rlu、および38/-3.5×105rluであった。乳がん細胞培養物における一連の別の実験では、広く使用されているモノクローナル抗体であるハーセプチントラスツズマブに対する受容体であるHer2/neuが、細胞間結合タンパク質であるクローディン7と共染色されることが見いだされた図7d。これは、Her2/neu分子の全てがハーセプチンと接近できるわけではないことを示唆している。Her2/neu陽性乳がん細胞株BT474をPtDdと一緒にインキュベートすることにより、Her2/neuの細胞表面への再局在が誘発された図7e。この知見を強化するために、Ad3またはAd3PtDdにより、ハーセプチンによるBT474細胞死が改善されるかどうかを試験した。以前の試験と一致して41、ハーセプチンにより、BT474細胞のおよそ25の死が引き起こされた図7f。BT474細胞を、UVにより不活化したAd3粒子またはPtDdと一緒にプレインキュベートすることにより、ハーセプチン細胞傷害性が2倍超増加した。UVにより不活化したAd5粒子またはBsDdと一緒にインキュベートすることはハーセプチンによる死滅に影響を及ぼさなかった。さらに、ハーセプチンおよびPtDd/ハーセプチンは、Her2/neu陰性乳がん細胞株MDA-MB-231に対して細胞傷害性効果を有さなかった図8a。BT474細胞のハーセプチンによる死滅に対するPtDdおよびAd3の効果の増強は、BT474細胞においてDSG2siRNAによりDSG2が下方制御されることによってこの効果が消失したので、DSG2によって媒介された図7g。EMTに関与する重要な経路を阻害することが、ハーセプチン細胞傷害性に対するPtDdの効果の増強に影響を及ぼすかどうかも試験した。これらの試験により、WortmanninによってPI3Kを阻害すること、ならびにUO126によってMAPK/ERKを阻害することにより、ハーセプチン療法のPtDdによる増強が打ち消されることが示された図7g。重要なことに、ハーセプチン処置の前にBT474-M1-腫瘍を担持するマウスにPtDd2mg/kgを静脈内注射することにより、ハーセプチン注射を単独で用いた場合には実現することができなかった転帰である腫瘍の排除がもたらされた図7h。PtDdで前処置すると、EGFR特異的mAbであるアービタックスセツキシマブをinvitroで用いたEGFR陽性結腸がんLoVo細胞の死滅が増加するので、この抗体の治療効果を発展させることも可能である図8b。考察この試験では、2つの主要な発見:iDSG2は、一般的な病原体であり、重要な生物医学的ツールである一連のヒトアデノウイルスの感染のために重大な受容体であること、iiAdとDSG2の相互作用により細胞間結合が開口し、したがって、その中に閉じ込められている受容体への接近が増大することについて説明する。DSG2は、Adの付着受容体である。完全なAd3粒子またはPtDdを受容体プローブとして使用することは、Ad3、Ad7、Ad11、およびAd14に対する付着受容体としてDSG2を同定することにおいて役に立った。Ad3線維ノブドメインをベイトとして用いた以前の試みでは、意味のある受容体候補はもたらされなかった32。図2に示されている本発明者らの競合試験および表面プラズモン共鳴試験により、Ad3内のDSG2相互作用ドメイン複数可は線維により、ウイルス粒子に存在する空間的配置でのみ形成されることが示されている。これにより、これまで、線維ノブと細胞受容体、すなわち、CARまたはCD46の高親和性相互作用にのみ関連すると考えられていたAdの付着機構に関する本発明者らの理解が明確に広がる。ウイルス伝播におけるAd3とDSG2の相互作用およびPtDdとDSG2の相互作用の役割。Ad5の複製時、線維が過剰に産生されることにより、CAR二量体形成結合を維持するために重要であるが干渉されることによってか、または細胞間結合の再編成をもたらす細胞内シグナル伝達が誘発されることによって、上皮の結合が破壊される42~43。どちらの機構も、Ad3ビリオン/DSG2に媒介される細胞間結合の開口およびAd3のPtDd/DSG2に媒介される細胞間結合の開口にも関与し得る。本発明者らは、上皮細胞においてAd3とDSG2の結合およびPtDdとDSG2の結合によって誘発される細胞内シグナル伝達についての実験的な裏付けを有する。免疫蛍光法、PI3K/MAPKリン酸化、mRNA発現アレイ、および代謝経路の阻害のデータにより、上皮細胞においてAd3およびPtDdによりEMTが誘発され、それにより一過性の細胞間結合の開口がもたらされることが示唆されている。Ad3粒子または組換えPtDdとDSG2の相互作用によって媒介される細胞間結合の開口は、細胞浸透性および細胞間結合内に閉じ込められている受容体CD46およびHer2/neuへの接近が増大することによってさらに裏付けられる。これに沿って、最近の試験により、DSG2の細胞外ドメインに対する抗体により、CaCo-2細胞の単層における細胞間結合の開口がもたらされることが示された44。Ad3ビリオンに誘発されるEMTおよびPtDdに誘発されるEMT、すなわち、細胞間結合の解離は、重要な生物学的役割を有すると思われる。特に、ウイルス感染の間にPtDdが大量に過剰産生されること、およびPtDdとDSG2の相互作用により、上皮細胞における側方へのウイルスの拡散、および潜在的に、Adの上皮下の細胞層および血流への浸透が容易になることが推測される。Ad病原性に対する意味。DSG2が、さらなるウイルスの拡散を容易にする付着受容体であるという本発明者らの発見により、気道上皮のAd3の感染機構が明らかになる。さらに、Ad3が血小板および顆粒球上でDSG2と結合するという知見は、このウイルスが一度血流に侵入すれば全身に拡散することについて潜在的な意味を有する。マウスDSG2はヒトDSG2と76の相同性を共有するが45、本発明者らのデータでは、マウス細胞はAd3-GFPに感染しにくいことが示されており、これは、マウスDSG2がAd3受容体として機能することができないことを示している。AdB-2/3血清型の病原性を試験するために、DSG2をヒトと同様のパターンおよびレベルで発現させる適切な内在性の調節エレメントの制御下でヒトDSG2を発現するトランスジェニックマウスが重要なツールになるであろう。がん療法に対する意味。DSG2は、上皮腫瘍のマーカーとして提唱された46。がん細胞の上皮の表現型および物理的関門を形成する能力は、薬物、抗体、腫瘍退縮ウイルス、または免疫細胞の腫瘍部位への接近を制限する機構を示し、したがって、そのような治療モダリティの有効性を減らす47。本発明では、3つの例Ad5/35ベクター、ハーセプチン、およびアービタックスにおいて、DSG2と相互作用するAd3構成成分を使用することによって、癌療法におけるこの重要な問題に対処することができ得ることを実証した。結論として、本発明者らは、一連の一般的なヒトAdに対する高親和性受容体の発見について報告する。本発明者らの試験は、上皮組織に接近するために、Adが細胞のプロセスをどのように誘導するかを理解することに寄与する。本発明者らの発見は、がん療法を改善するために意味がある。方法タンパク質および抗体。Ad3線維、Ad5線維、およびAd35線維のノブドメインを、他で記載されている通りE.coliにおいて産生させた48。組換えAd3ペントン12面体PtDdおよび基部の12面体BsDdを、以前に記載されている通り昆虫細胞において産生させ、精製した33。精製された組換えAd3およびAd35Kノブに対するポリクローナルウサギ抗体は、PickCellLaboratoriesB.V.Amsterdam、TheNetherlandsによって作製された。DSG2特異的モノクローナル抗体である20G1、7H9、13B11、10D2および8E549を、ハイブリドーマ培養物の上清から精製した。細胞株。SIに記載の通り細胞を培養した。BT474は、上皮細胞の特徴を有するHer2/neu陽性乳がん細胞株である。細胞の極性化を実現するために、1.4×105個のBT474細胞、T84細胞およびCaCo-2細胞を、コラーゲンでコーティングした6.5mmのTranswellインサート孔サイズ0.4μmCostarTranswellClears中で、経上皮抵抗性が安定するまで10日間にわたって培養した。アデノウイルス。野生型のAd3GB株、Ad7pGomen染色、Ad11pSlobitski株、Ad14DeWit株、およびAd35Holden株を、ATCCから得た。Ad14aはAd14の新規のゲノム変異体である5。Adの繁殖、メチル-3Hチミジンによる標識、精製および力価決定を他で記載されている通り実施した2。Ad5/35-GFPおよびAd5-GFPは、Ad35線維およびAd5線維とCMV-GFP発現カセットとを含有するAd5ベクターである50。Ad3-GFPおよびAd35-GFPは、E3領域にCMV-GFP発現カセットを挿入した、野生型Ad3ベースのベクターおよび野生型Ad35ベースのベクターである。Ad3-GFPの構築については、SIに記載されている。Ad35-GFPについては以前に記載されている34。形質導入試験のために、細胞を、示されているMOIで1時間にわたってAdベクターに曝露させ、洗浄し、18時間後にフローサイトメトリーによってGFPの発現を測定した。膜タンパク質の調製。HeLa細胞膜タンパク質を以前に記載されている通り調製した51。簡単に述べると、HeLa細胞ペレットを氷冷の均質化緩衝液20mMのHepes、1.5mMのMgCl2、5mMのKCl、150mMのNaCl、15のグリセロール、0.25Mのスクロース、0.1mMのEDTA、2mMのβ-メルカプトエタノール、1mMのPMSFに再懸濁させた。溶解物を、3mlのシリンジおよび21Gのニードルを用いて破壊した後、400×gで15分間遠心分離した。上清を2倍体積のPBSで希釈し、Beckman超遠心機において35,000rpmで1時間遠心分離した。膜タンパク質ペレットを可溶化緩衝液50mMのHepes、5mMのMgCl2、5mMのKCl、150mMのNaCl、15のグリセロール、0.25Mのスクロース、0.1mMのEDTA、2mMのβ-メルカプトエタノール、1mMのPMSF、0.5のBrij96VFluka、StLouis、MOに再懸濁させた。デスモソームタンパク質は、極めて不溶性であるのでBrij96Vを界面活性剤として使用することが役立った。Ad3およびPtDdを用いたウエスタンブロット。質量分析についての技術的な詳細は、他で記載されている51。DSG2を可溶性の粗製の膜タンパク質調製物から免疫沈降させるために、DSG2特異的mAb6D8、およびPierceCrosslinkImmunoprecipitationKitPierceBiotechnology、Rockford、ILを使用した。HeLa細胞由来の粗製の膜タンパク質を、0.5の界面活性剤Brij96Vを用いて可溶化し、対照樹脂と一緒に4°Cで3時間プレインキュベートして、非特異的な結合を減少させ、次いで、プロテインA/Gアガロースと架橋結合したDSG2抗体と一緒に4°Cで一晩インキュベートした。結合したタンパク質を製造者の説明書に従って溶出させた。表面プラズモン共鳴SPR分析。BIAcore3000機器で取得を行った。全ての実験において、2mMのCaCl2を補充したHBS-NGE-Healthcare、Pittsburgh、PAを毎分5μlの流速でランニング緩衝液として使用した。DSG2LeincoTechnology,Inc.を10mMの酢酸ナトリウム緩衝液、pH4.2中に0.1mg/mlに希釈し、EDC-NHSで活性化したフローセルに10分間注入してCM4センサーチップBIAcoreへの固定化を行った。対照フローセルを、EDC-NHSによって活性化し、エタノールアミンによって不活化した。異なる濃度のPtDd、BsDd、Ad3線維ノブを5分間注入し、その後3分を解離時間とし、シグナルをエタノールアミンで非活性化したEDC-NHSフローセルのバックラウンドから自動的に差し引いた。アデノウイルス結合実験のために、野生型Ad2、Ad3およびAd5を1ml当たり5.109vpで注入し、同様のプロトコールを使用した。siRNA試験。DSG2特異的siRNAのセットはDharmaconThermoScientificによって合成された。標的配列は、CAAUAUACCUGUAGUAGAA配列番号29、GAGAGGAUCUGUCCAAGAA配列番号30、CCUUAGAGCUACGCAUUAA配列番号31およびCCAGUGUUCUACCUAAAUA配列番号32であった。対照siRNAは、Qiagen、Valencia、CAから購入した。HyperFectトランスフェクション試薬Qiagenを使用してsiRNAトランスフェクションを実施した。DSG2を発現しているU937細胞。CapitalBiosciencesRockville、MDからのDSG2cDNA受託番号BC099657をEF1αプロモーターの対照下でレンチウイルスベクターpRRL-SIN52にクローニングした。以前に記載されている通りVSVG-偽型レンチウイルスベクターを作製し、力価を決定した53。動物試験:動物を必要とする全ての実験は、UniversityofWashingtonにより定められた施設のガイドラインに従って行った。マウスを特定の病原体を含まない施設内に収容した。マトリゲル中のがん細胞1:1vol/volをCB17SCID-ベージュマウスの乳房の脂肪パッドに注射することによって乳がん異種移植を確立した。ハーセプチンを10mg/kgの用量で腹腔内に注射した。PtDdを2mg/kgの用量で静脈内に与えた。腫瘍体積を以前に記載されている通り測定した54。実施例1の参考文献:実施例2ウイルスがデスモグレイン2と効率的に結合するためおよびその後の上皮の結合の開口のためには、アデノウイルス血清型3線維ノブドメインの多量体形成が必要である。要約実施例1では、ヒト集団において広範に分布している血清型であるAd3を含めたB種アデノウイルスAdの一群に対する主要な受容体として、デスモグレイン2DSG2を同定した。本実施例では、Ad3とDSG2の相互作用の構造的な詳細を説明することを試みた。CARと相互作用するAd血清型およびCD46と相互作用するAd血清型について、細胞への付着は、過剰な組換え線維ノブタンパク質によって完全に遮断することができ、一方、可溶性のAd3線維ノブでは、Ad3の感染は非効率的にしか遮断されない。Ad3内のDSG2相互作用ドメイン複数可はウイルス粒子に存在する空間的配置になければならないいくつかの線維ノブドメインによって形成されることが見いだされた。この発見に基づいて、Ad3線維ノブを含有する小さな組換え自己二量体形成性タンパク質を生成したAd3-K/S/Kn。Ad3-K/S/KnはDSG2と高親和性で結合し、Ad3の感染を遮断した。共焦点免疫蛍光法および透過型電子顕微鏡分析により、Ad3-K/S/Knは、DSG2と結合することにより上皮細胞における一過性の細胞間結合の開口を誘発することが実証された。上皮細胞をAd3-K/S/Knで前処置することにより、上皮の結合に局在している、またはそれにより遮蔽されている受容体、例えば、CARまたはHer2/neuへの接近が増大した。Ad3-K/S/Knで処置することにより、密着結合からCARが解放され、したがって、血清型Ad5ベースのベクターによる上皮細胞への形質導入が増加する。さらに、Her2/neu陽性乳がん細胞をAd3-K/S/Knで前処置することにより、Her2/neu-ターゲティングモノクローナル抗体であるトラスツズマブハーセプチンによるがん細胞の死滅が増加した。この試験により、Adが、それらの受容体に対する高い結合活性および上皮組織への感染をどのように実現するかに関する本発明者らの理解が広がる。小さな組換えタンパク質Ad3-K/S/Knは、上皮がんの療法および正常な上皮組織への遺伝子/薬物送達に対する実用的な意味を有する。諸言突出線維は、主要な付着受容体との親和性の高い結合を媒介するAdカプシド内の部分である。Adカプシドはそれぞれ、ペントンベースに連結した12個の線維を有する。線維はそれぞれ、ペントンベースの内部に繋ぎ止められている尾部ドメインと、β-シート異なる血清型において6から23までにわたる反復の数を有するを形成する最大14アミノ酸の反復からなるシャフトドメインと、C末端のホモ三量体ノブドメインとからなる。CARと相互作用するAdおよびCD46と相互作用するAdに関して、ノブドメインは、受容体と高親和性で結合し、可溶性の線維ノブは感染を完全に遮断する。この試験では、Ad3とDSG2の相互作用の構造的な詳細を説明することを試みた。本発明者らは、DSG2と高親和性で結合するためにはAd3線維ノブの多量体三量体が必要であることを報告する。これは、CARと相互作用するAd血清型およびCD46と相互作用するAd血清型の、感染を実現するための戦略とは明確に異なる。このAd3-DSG2相互作用の特異的な方式は、それにより上皮の結合の開口が可能になるので、Ad3にとって機能的に重大である。材料および方法タンパク質および抗体。組換えヒトDSG2タンパク質はLeincoTechnologies,Inc.St.Louis、MOから入手した。組換えAd3線維は、他で記載されている通り、N末端の6-Hisタグを使用し、pQE30発現ベクターQiagen、Valencia、CAを用いてE.coliにおいて産生させ、Ni-NTAアガロースクロマトグラフィーによって精製した34。組換えAd3ペントン12面体PtDdは、以前に記載されている通り昆虫細胞において産生させ、精製した8。免疫蛍光法試験のために以下の抗体を使用した:ポリクローナルヤギ抗DSG2RDSystems,Inc.、Minneapolis、MN、マウスmAb抗DSG2クローン6D8CellSciences、Canton、MA、ウサギ抗クローディン7abcam、Cambridge、MA、FITCと結合体化したヤギ抗アデノウイルスMilliporeBillerica、MA、モノクローナル抗6xHisSerotec、MCA1396、ウサギ抗ZO-1抗体CellSignalingTechnologyInc.、Beverly、MA。精製された組換えAd3ノブに対するポリクローナルウサギ抗体は、PickCellLaboratoriesB.V.Amsterdam、TheNetherlandsによって作製された。モノクローナル抗DSG2抗体である20G1、7H9、13B11、10D2および8E512は、ハイブリドーマ培養物の上清から精製した。組換えAd3線維ノブ。組換えAd3線維ノブであるS/Kn、S2/Kn、S3/Kn、S4/Kn、S5/Kn、およびS6/Knを、Ad3ゲノムDNAを鋳型として用いたPCRによって生成した。次いで、PCR産物を、BclI/HindIII断片またはBamHI/HindIII断片としてE.coli発現ベクターpQE30にクローニングした。以下のプライマーを使用した:Ad3線維ノブを含有するK-コイルまたはE-コイルを生成するために、以下のオリゴヌクレオチドをアニーリングし、BamHI断片としてpQE30にクローニングした。Ad3-E/S2/KnおよびAd3-K/S2/Knを生成するために、以下のプライマーを使用した:次いで、PCR産物を、pQE30-KcoilおよびpQE30-EcoilのBamHI/HindIII部位にクローニングした。Ad3-E/S/KnおよびAd3-K/S/Knを生成するために、以下のプライマーを使用した:次いで、PCR産物を、pQE30-KcoilおよびpQE30-EcoilのBamHI/HindIII部位にクローニングした。細胞株。293Microbix、Toronto、Ontario、Canada、HeLaAmericanTypeCultureCollection、ATTCを、10のウシ胎仔血清FCS、2mmol/LのL-グルタミンGlu、100ユニット/mLのペニシリン、および100μg/mLのストレプトマイシンP/Sを補充したダルベッコ改変イーグル培地DMEM中で培養した。BT474-M1細胞16を、10のFBS、1のPen/StrepおよびL-グルタミンを伴うDMEM/F:12中で培養した。結腸がんT84細胞ATCCCCL-248を、Ham’sF12培地とDMEMの1:1混合物、10のFBS、GluおよびP/S中で培養した。細胞の極性化を実現するために、T84細胞1.4×105個を6.5mmのTranswellインサート孔サイズ0.4μmCostarTranswellClears内で、経上皮抵抗性が安定するまで21日以上培養した。アデノウイルス。Adの繁殖、メチル-3Hチミジンによる標識、精製および力価決定を他で記載されている通り実施した31。Ad5/35-GFPおよびAd5-GFPは、Ad35線維およびAd5線維とCMV-GFP発現カセットとを含有するAd5ベクターである24。Ad3-GFPは、E3領域にCMV-GFP発現カセットを挿入した野生型Ad3ベースのベクターである33。Ad5/3L-GFPおよびAd5/3S-GFPは、E1/E3が欠失したAd5ベースのベクターであり、同じCMV-GFP発現カセットがE3領域に挿入されている。キメラAdベクターの構築は、以前に記載されているプロトコールに従った23。キメラ線維遺伝子を構築するために使用したプライマー配列は以下の通りである:Ad5/3L-GFP用SpeI制限部位またはXhoI制限部位を、それぞれAd5/3L-GFPまたはAd5/3S-GFPについての線維終止コドンの後ろに導入した。全長のE1/E3を欠失したベクターゲノムを生成するために、対応する、キメラ線維遺伝子およびGFP発現カセットを含有するシャトルプラスミドを、E.coli株BJ1583において相同組換えによってpAdHM4に挿入した。生じたプラスミドpAd5/3L-GFPおよびpAd5/3S-GFPを制限分析および配列決定によって分析した。対応するウイルスを作製するために、以前に記載されている通り、pAd5/3L-GFPおよびpAd5/3S-GFPをPacIで消化してウイルスのゲノムを放出させ、293細胞にトランスフェクトした。組換えウイルスを293細胞において繁殖させ、標準の方法によって精製した。260nmにおける光学濃度OD260を測定することによって分光光度法でAd粒子ウイルス粒子、VP濃度を決定し、他で記載されている通り、293細胞を使用してプラーク力価決定プラーク形成単位、pfuを実施した24。全てのウイルス調製物についてVPとpfuの比は20:1であった。付着および形質導入アッセイ。Verseneと一緒にインキュベートすることによって接着性細胞を培養皿から引き離し、PBSで洗浄した。チューブ当たり合計1.8×105個の細胞を、3Hで標識したAdを細胞当たり8,000VPの感染多重度MOIで含有する氷冷の接着緩衝液100μlに再懸濁させた。4°Cで1時間インキュベートした後、細胞をペレットにし、氷冷の洗浄緩衝液PBS、1FBS0.5mlで2回洗浄した。最後の洗浄後、上清を除去し、シンチレーション計数器を用いて細胞に伴う放射活性を決定した。細胞当たりの結合したウイルス粒子VPの数を、ビリオンに特異的な放射活性および細胞の数を用いることによって算出した。競合試験のために、競合剤PtDd、線維ノブ、抗体4.5μgを接着緩衝液中、4°Cで60分にわたり付着させ、細胞をPBSで2回洗浄することによって結合していない競合剤を除去した後、細胞を、3Hで標識したAdを含有する付着緩衝液に再懸濁させた。形質導入試験のために、細胞を、示されているMOIで1時間にわたってAdベクターに曝露させ、洗浄し、18時間後に、細胞20,000個におけるGFPの発現をフローサイトメトリーによって測定した。Ad5感染試験。HeLaの形質導入試験の全てにおいて、形質導入の線形範囲内に入るように以前に最適化されている条件MOI、ウイルス濃度、曝露時間を用いた33。ウエスタンブロット:Mini-PROTEANプレキャストゲルBIO-RAD、Hercules、CAを、4~15勾配のポリアクリルアミドを用いて使用した。図2Bに示されている試験のために、合計0.5μgのタンパク質を2×ローディング緩衝液10mMのトリス-HCl、pH6.8、200mMのDTT、4のSDS、20のグリセロール、0.2のブロモフェノールブルーと混合した。試料を、5分間煮沸Bするか、または煮沸せずにUBローディングするかした。以下のランニング緩衝液を使用した:25mMのトリス、0.192Mのグリシン、0.1のSDS、pH8.3。以前に記載されている通り、電気泳動した後、タンパク質をニトロセルロースに転写し、抗DSG2抗体または抗Ad3ノブ抗体と一緒にインキュベートした33。ネイティブなポリアクリルアミドゲル電気泳動:図2Fに示されている試験のために、合計0.4μgのタンパク質を2×試料緩衝液62.5mMのトリス-HCl、pH6.8、40のグリセロール、0.01のブロモフェノールブルー中に混合し、煮沸せず、25mMのトリス、pH8.3、0.192Mのグリシン中に流した。浸透性アッセイ。合計5×105個のT84細胞を、12mmのtranswellインサートPET膜、孔サイズ0.4μmCorning、NYに播種し、経上皮抵抗性が安定するまで>20日間培養した。培地を2~3日ごとに交換した。細胞を接着培地DMEM、1FBS、2mMのMgCl2、20mMのHEPES中のDSG2リガンド20μg/mlに室温で15分間曝露させた。次いで、DMEM/K12培地で希釈した1mCiの[14C]ポリエチレングリコール-4000PEG-4000;PerkinElmer、CovinaCAを内部チャンバーに加えた。15分の時点および30分の時点で内部チャンバーおよび外側のチャンバーから培地の一定分量を採取し、シンチレーション計数器によって測定した。浸透性を他で記載されている通り算出した36。トラスツズマブ細胞毒性アッセイ。ウェル当たり5×104個のBT474-M1細胞を、96ウェルプレートに3連で播種し、集密になるまで成長させた。Ad3線維ノブまたはモノクローナル抗体5μg/mlを内部チャンバーに加えた。1時間後、トラスツズマブGenentech、SanFrancisco、CA15μg/mlを加え、2時間後にWST-1アッセイRoche、SanFrancisco、CAによって細胞の生存率を測定した。3回の独立した試験を実施した。免疫蛍光分析。8つのチャンバーガラススライドBDFalconにおいて細胞を培養し、氷冷のPBSで2回洗浄し、次いで、メタノール/アセトン1:1vol/volを用いて4°Cで15分間、または4のパラホルムアルデヒドを用いて4°Cで30分間、固定した。固定した後、細胞をPBSで2回洗浄し、500μlのPBS/2の粉乳を用いて室温で20分間遮断した。抗体染色を、100μlのPBS中、37°Cで90分間または4°Cで一晩実施した。必要であれば、PBSを用いて室温で45分にわたって3回洗浄した後に、適切な宿主を対象とする二次抗体を適用した。PBSで3回洗浄した後、DAPIを伴うVECTASHIELDVectorLabsを用いてガラススライドをマウントした。LeicaDFC300FXデジタルカメラを用いて写真を取得した。ZeissMETA共焦点顕微鏡で、40×油浸レンズoillensまたは100×油浸レンズおよびZeiss510ソフトウェアZeissMicroImaging、Thornwood、NYを使用して共焦点像を取得した。電子顕微鏡。Transwellチャンバー内の極性細胞を、半強度カルノフスキー固定液2のパラホルムアルデヒド、2.5のグルタルアルデヒド、0.2Mのカコジル酸緩衝液を用いて室温で1時間にわたって固定した。内部チャンバー内の固定液は、0.2のルテニウムレッドを含有した。ルテニウムレッド塩化ルテニウムIII酸化物、アンモニア処理されているは、AlfaAesarWardHill、MAから購入した。1のOsO4-リン酸緩衝液を用いた後固定を行った。次いで、Transwellチャンバーから膜を切り取り、MedcastTedPella、Redding、CA中に包埋した。超薄切片を酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛で染色した。加工した格子をJEOLJEM1200EXII透過形電子顕微鏡を用いて評価した。OlympusSISMoradaデジタルCCDカメラを用いて画像を獲得し、画像を加工するためにiTEMソフトウェアを使用した。siRNA試験。DSG2特異的siRNAのセットは、DharmaconThermoScientificによって合成された。標的配列は、CAAUAUACCUGUAGUAGAA配列番号29、GAGAGGAUCUGUCCAAGAA配列番号30、CCUUAGAGCUACGCAUUAA配列番号31およびCCAGUGUUCUACCUAAAUA配列番号32であった。対照siRNAは、Qiagen、Valencia、CAから購入した。HyperFectトランスフェクション試薬Qiagenを使用してsiRNAトランスフェクションを実施した。合計1×105個のHeLaに、1ugのDSG2siRNAまたは対照siRNAをトランスフェクトした。siRNAをトランスフェクトした48時間後、上記の通りverseneを用いて細胞を収集し、3H-Ad3ウイルスまたは3H-Ad35ウイルスの付着を分析した。siRNAをトランスフェクトした48時間後、細胞を、Adベクターを50pfu/細胞のMOIで用いて感染させ、18時間後にGFPの発現を分析した。表面プラズモン共鳴SPR分析。BIAcoreX機器で取得を行った。全ての実験において、2mMのCaCl2を補充したHBS-NGE-Healthcare、Pittsburgh、PAをランニング緩衝液として、毎分5μlの流速で使用した。DSG2LeincoTechnology,Inc.を10mMの酢酸ナトリウム緩衝液、pH4.2中に0.1μg/mlに希釈し、EDC-NHSで活性化したフローセルに10分間注入してCM4センサーチップBIAcoreへの固定化を行った。対照フローセルを、エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDC/N-ヒドロキシスクシンイミドNHSによって活性化し、エタノールアミンによって不活化した。異なる濃度のAd3線維ノブまたはPtDdを5分間の会合、その後3分の解離時間で注入し、シグナルをエタノールアミンにより非活性化したEDC-NHSフローセルのバックラウンドから自動的に差し引いた。ビオチン化したリガンドを用いた実験のために、CM4センサーチップの2つのフローセルを上記の通り活性化し、次いで、ストレプトアビジン酢酸緩衝液中0.1μg/ml、pH4.1を5分間にわたって注入することによってコーティングした。次いで、ビオチン化したリガンドをこれらの2つのフローセルのうちの一方のランニング緩衝液中に0.1μg/mlで5分間にわたって注入し、他方は、実行中のバックグラウンド除去のために使用した。次いで、これらのフローセル上のランニング緩衝液中に異なる濃度の可溶性のDSG2を注入し、バックラウンドを自動的に差し引いた。陰性染色電子顕微鏡法。組換え線維ノブタンパク質を陰性染色EMによって可視化して、それらの組立ての状態を評価した。標準の雲母/炭素調製物を、タンパク質を0.1mg/mlで用いて使用した。1w/vケイタングステン酸ナトリウムpH7.0を使用して試料を染色し、PhilipsCM12電子顕微鏡において100kVで可視化した。統計分析:結果は全て、平均/-SDとして表されている。適用可能な場合にはウィルコクソンの符号順位検定を適用した。p値<0.05を有意とみなした。結果Ad3線維を含有するキメラAd5ベクターは受容体としてDSG2を使用する。本発明者らの予備試験により、Ad3内のDSG2相互作用ドメイン複数可はウイルス粒子に存在する空間的配置にある線維または線維/ペントンのみ、すなわち、Ad3ビリオンまたはPtDdによって形成されることが示された。DSG2との結合におけるAd3ペントンPtDdに存在するの潜在的な役割を評価するために、Ad3線維を含有するが、他のカプシドタンパク質ペントンを含むは全てAd5に由来するAdベクターAd5/3S-GFPを生成した。Ad3線維シャフトが、Ad3-DSG2相互作用において極めて重要な役割を有する、例えばDSG2が追加的な結合部位を含有するかどうかを評価するために、Ad3シャフトをAd5シャフトで置換したキメラAd5/3ベクターも生成したAd5/3L-GFP図9A。特に、Ad3線維シャフトは6個のシャフト反復モチーフを含有するが、一方Ad5シャフトはそれよりも長く、22個のシャフトモチーフを含有する。比較のために、Ad5/3ベクター33と同じGFP発現カセットを含有するAd3ベクターAd3-GFPを使用した。Ad5/3S-GFPベクターおよびAd5/3L-GFPベクターが、感染するためにDSG2を使用するかどうかを分析した。3Hで標識したAdベクターのHeLa細胞への付着は、組換えDSG2タンパク質により、Ad3-GFP、Ad5/3S-GFP、およびAd3/5L-GFPに対してと同じ程度で遮断された図9B。予測通り、HeLa細胞を感染させた18時間後にGFP強度に基づいて測定したところ、この3種のベクター全ての形質導入も組換えDSG2によって遮断された図9C。Adビリオン内のDSG2相互作用ドメインに対する競合剤として使用したPtDdにより、Ad3-GFP、Ad5/3S-GFP、およびAd3/5L-GFPの形質導入が同様のレベルで遮断された図9D。Ad3ベクターおよびAd5/3ベクターの感染におけるDSG2の極めて重要な役割を証明するために、HeLa細胞にDSG2mRNAに特異的なsiRNAまたは対照siRNAをトランスフェクトした。siRNAをトランスフェクトした48時間後のDSG2の平均蛍光強度は、DSG2siRNAをトランスフェクトしたHeLa細胞および対照siRNAをトランスフェクトしたHeLa細胞について、それぞれ22.1および195であり、これは、DSG2の発現がDSG2siRNAにより効率的に阻害されることを示している。DSG2mRNAをノックダウンすることにより、Ad3-GFP、Ad5/3S-GFP、およびAd3/5L-GFPの形質導入が有意に減少したP<0.001図9E。興味深いことに、DSG2をノックダウンすることにより、Ad5/3L-GFPの形質導入が、Ad3線維を含有するベクターAd3-GFPおよびAd5/3S-GFPの形質導入よりも低い程度P<0.01で減少した。Ad5/3L-GFPは、DSG2以外の受容体を使用し得ることが推測される。総合すると、これらの試験では、:iAd5/3ベクターが受容体としてDSG2を使用することを示す。これは、Ad5/3ベクターは患者に使用されているので14、35臨床試験に対して意味を有する、およびiiAd3のDSG2相互作用ドメインは、線維内に位置する。AdペントンPtDdまたはAd5ビリオンおよびAd3ビリオン内にあるは、ただ単に、Ad3線維ノブとDSG2の相互作用のための空間的配置を補正するための足場をもたらすだけだと思われる。DSG2と効率的に結合するには、Ad3線維ノブの架橋が必要である。本発明者らは、次いで、Ad3線維に着目した。E.coliにおいて、線維ノブを含有し、Ad3シャフトの反復の数が増加した1~6の反復一連の組換えAd3線維ノブタンパク質を産生させた図10A。DSG2または抗Ad3線維ノブ抗体を用いたウエスタンブロット分析により、全ての組換え線維ノブが三量体を形成したことが示された図10B、C。以前に観察された通り33、Ad3線維ノブ1つのシャフトドメインS/Knはウエスタンブロット分析においてDSG2と結合せず、これは、Ad3ノブコンフォメーションに対するシャフトモチーフの立体的な影響の可能性を示している。6個のシャフトモチーフを含有するタンパク質S6/Knは、凝集体を形成する傾向があり、したがって、さらなる試験では使用しなかった。競合試験において使用した場合、全ての組換え線維ノブタンパク質により、Ad3-GFPの形質導入がPtDdよりも有意に低く阻害された図10D、E。次いで、Ad3線維ノブの二量体形成により、DSG2との結合が増加するかどうかを試験することを試みた。全ての組換え線維ノブはN末端のHisタグタンパク質を精製するために使用するを含有したので、Ad3線維ノブと、Hisタグに対する抗体を混合してそれらの架橋を実現した。ネイティブなポリアクリルアミドゲルにおける電気泳動により抗Hisタグ抗体と線維ノブとの間の複合体の形成が実証された図10F。抗His抗体と架橋結合した線維ノブを競合剤として使用した場合、Ad3-GFPの形質導入の有意な阻害対照IgGと混合した線維ノブと比較してが観察され図10G、これは、DSG2と結合するためにはAd3線維ノブの二量体が必要であることを示唆している。これは、Ad35線維ノブと抗His抗体の架橋は、CD46と相互作用するベクターであるAd35-GFPによる感染には影響を及ぼさなかったので、Ad3に独特の新しいAd結合戦略であると思われた図10H。Ad3線維ノブ二量体はAd3の感染を遮断する。抗体と架橋することにより、含有するシャフトモチーフが野生型Ad3線維ノブよりも少ないAd3線維ノブの遮断効果が増強された。Ad3線維ノブを結合開口薬として治療に適用する可能性のために、さらなる試験の焦点を、最小数のシャフトモチーフを有する線維ノブ変異体、すなわち、S2/Knを評価することによって分子のサイズを縮小することに合わせた。線維ノブの架橋によりDSG2との結合が増加したという所見に基づいて、二量体形成ドメインを組み入れることによってS2/Knの二量体を生成した。E.coliにおいて産生される間の自然発生的な線維ノブ二量体形成および潜在的な封入体の形成を回避するために、高親和性で互いと相互作用するE-コイルペプチドとK-コイルペプチドとからなるヘテロ二量体系を利用した17。それぞれEVSALEK配列番号22K-コイルの5つの反復およびKVSALKE配列番号23E-コイルの5つの反復を含有する2つの線維ノブ変異体、後ろに2つのシャフトモチーフが続くG/Sリッチ柔軟性ドメインおよびホモ三量体の線維ノブドメインを生成した図11A。Ad3-K/S2/KnおよびAd3-E/S2/Knを別々にE.coliにおいて産生させ、親和性クロマトグラフィーによって精製した。二量体形成させるために、精製されたタンパク質の両方を1:1の濃度比で混合した。Ad3-K/S2/KnとAd3-E/S2/Knの混合物により、PtDdと同様の効率でAd3の感染が遮断された図11B。興味深いことに、Ad3-K/S2/Kn単独では両方のペプチドの混合物と同じ競合強度があるが、一方Ad3-E/S2/Kn単独では、感染は非効率的にしか遮断されなかった。これは、Ad3-K/S2/Knはホモ二量体化することができるが、Ad3-E/S2/Knはホモ二量体化することができないことを示唆している。この裏付けにおいて、抗His抗体とさらに架橋することにより、Ad3-E/S2/Knの遮断効果が増大するがP<0.05、Ad3-K/S2/Knの遮断効果は増大しないことが見いだされた図11C。最小の二量体Ad3線維ノブタンパク質とDSG2の結合。次いで、K-コイル二量体形成ドメインまたはE-コイル二量体形成ドメイン、ただ1つのシャフトモチーフ、およびホモ三量体のAd3線維ノブを含有する最小のAd3線維ノブ二量体Ad3-K/S/KnおよびAd3-E/S/Knを作製することを試みた図12A。そのようなタンパク質はサイズがより小さいので、血管からの放出、組織への浸透において潜在的な治療上の利点を有し、理論的に、含有する免疫原性エピトープも少ない。Ad3-K/S/KnおよびAd3-E/S/KnをE.coliにおいて産生させ、親和性クロマトグラフィーによって精製した。ポリアクリルアミドゲル電気泳動による分析により、Ad3-K/S/KnおよびAd3-E/S/Knの大部分が三量体約65~70kDaとして存在していたことが示された図12B。Ad3-K/S/Kn単独、およびAd3-E/S/Knとの組み合わせを陰性染色電子顕微鏡検査によって分析して、それらの組立ての状態を評価した図12C。Ad3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knの両方について線維ノブの二量体およびその凝集体が見いだされたが、より大きな凝集体は、Ad3-K/S/Kn調製物のほうが少なかった。Ad3-K/S/KnとAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knのどちらによっても、Ad3のHeLa細胞への付着がPtDdに匹敵するレベルで遮断された図12D。HeLa細胞をAd3-K/S/Knと一緒にプレインキュベートすることおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knと一緒にプレインキュベートすることは、Ad5の付着に影響を及ぼさなかった図12E。予測通り、Ad3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knによっても、Ad3の感染が効率的に阻害された図12F、G。線維ノブと2つのシャフトモチーフおよび1つのシャフトモチーフを並べた比較では、それらのAd3の感染を遮断する能力に有意差は示されなかった図12H、I。二量体Ad3線維ノブとDSG2の結合のSPR分析。Ad3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knの、DSG2との相互作用をより詳細に試験するために、表面プラズモン共鳴SPR試験を実施した。最初に、結合実験を設計し、DSG2分子を、固定化した線維ノブと結合させた図13A。固定化するために、線維ノブをビオチン化し、ストレプトアビジンを介してセンサーチップに連結させた。動力学分析により、Ad3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/KnはどちらもDSG2を同様に認識し、注入の終わりの時点の解離は少なかったことが示された。明確に、可溶性のDSG2と線維の結合は、細胞表面とウイルスの間の生理的相互作用を不十分にしか模倣しない。したがって、受容体であるDSG2をセンサーチップ表面に固定化し、Ad3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Kn、および比較のためにPtDdおよび単量体のAd3線維ノブを同様のSPR反応を生じる濃度で注入した図13B。これらの試験の転帰は線維ノブの数価に依存するはずであり、数価は、Ad3線維ノブ単量体については三量体、Ad3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knについては2×三量体、PtDdについては12×三量体である。これは、PtDd内の全ての線維が同時にDSG2と相互作用し得るわけではないという事実により、さらに複雑になる。線維ノブ二量体の会合は同様であったが図13C会合終了時の結合、解離挙動には明白な差異があった。Ad3線維ノブ非二量体形成性、以前に記載されている33Ad3ノブは、他の3種のリガンドよりも速く解離した。PtDdおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knについては、解離はほとんど見られなかった。Ad3-K/S/Knの解離は、Ad3線維ノブの解離とAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knの解離の間であった。複雑ではあるが、これらのデータは、二量体のAd3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knが、Ad3線維ノブよりもゆっくりとDSG2から解離することを明確に示している。これは、結合活性機構、つまり、Ad3-K/S/KnおよびAd3-K/S/KnAd3-E/S/KnがいくつかのDSG2分子と結合すること;全体的な低解離速度および高度に安定な付着の実現を可能にする機構によって説明することができる。特に、Ad3-K/S/KnAd3-E/S/Kn内の全ての二量体がAd3-K/S/Knによって形成される可能性があるが、それは解離速度の差異により反証される。これを詳細に証明するために、さらなる試験が必要である。Ad3といくつかのDSG2分子の相互作用は、上皮細胞の免疫蛍光分析によって裏付けられる図13DおよびE。Cy3で標識したAd3ビリオンを使用したこれらの試験により、1つのビリオンがその周りのいくつかのDSG2タンパク質を群がらせることが示唆される。後で概説している通り、本発明者らは、この特異的な受容体が群がることは、細胞内シグナル伝達および上皮の結合の開口を誘発することに関して機能的な重要性を有するという仮説を立てている。特に、実施例1において、PtDdとDSG2が結合することにより、上皮細胞において上皮間葉転換EMTが誘発され、それにより一過性の細胞間結合の開口がもたらされることが示された。多量体のDSG2リガンドAd3ビリオン、PtDd、Ad3-K/S/Knにより上皮の結合の開口が誘発される。上皮細胞は、いくつかの細胞間結合密着結合、接着結合、ギャップ結合、およびデスモソームを維持し、その特徴は、多くの場合、上皮内がんおよびがん細胞株において保存されている29。図14Aは、極性結腸がんT84細胞の共焦点免疫蛍光顕微鏡画像を示す。側方からの細胞、すなわち、積み重なったXZ層の細胞が示されている。細胞間結合は、接着結合タンパク質であるクローディン7およびデスモソームタンパク質であるDSG2がマーカーとなる長い垂直方向の筋として目に見える。DSG2緑色はクローディン7シグナルの頂端に局在する。密着結合タンパク質であるZO-1は、DSG2のさらに頂端に見いだすことができる下のパネル。後者は、XY画像においても可視化され、頂端の細胞表面のZO-1がマーカーとなる密着結合の金網ネットワークを示し、一方、1μm深部の切片は、DSG2染色を示す図14B。重要なことに、T84細胞をAd3-K/S/Knに曝露させることにより、上皮の結合の部分的な溶解が誘発され、これは、無処置の細胞と比較して図14A、下のパネルDSG2およびZO-1に対する染色が減少する図14Cことに反映される。Ad3-K/S/Knによる上皮の結合の開口を、電子顕微鏡EM試験によってさらに確認した。無処置の上皮細胞のEM画像は、頂端に適用された色素であるルテニウムレッドが側底の空間には入れないことによって判定されるインタクトな密着結合およびデスモソーム結合を示す図14D、左側のパネル。この色素は、細胞膜表面に沿った高電子密度の線として現れる。上皮細胞をAd3-K/S/Knと一緒にインキュベートすることにより、Ad3-K/S/Knを加えてから1時間以内にルテニウムレッドが側方への空間に深く漏出する図14D、右側のパネル。図14Eでは、Ad3-K/S/Knで処置した細胞においてデスモソームの部分的な分解矢印によって示されているがはっきり目に見える。Ad3-K/S/Knに加えて、Ad3ビリオン、PtDd、およびAd3-K/S/KnAd3-E/S/Knを用いた共焦点免疫蛍光法およびEM試験において上皮の結合の開口が観察されたデータは示していない。細胞をAd3線維ノブ非二量体形成性またはAd3-E/S/Kn、すなわち、多量体形成することができないDSG2リガンドに曝露させることは上皮の結合に影響を及ぼさなかったデータは示していない。これらの試験は、上皮の結合の開口にはAd3線維ノブの二量体または多量体が必要であることを示している。ルテニウムレッドを用いた漏出試験に加えて、3つの機能アッセイを用いてAd3-K/S/Knによる上皮の結合の開口を実証した:i14C-PEG-4000貫流transflux試験によって示されている通り、分極上皮細胞をAd3-K/S/Knに曝露させることにより、30分以内に経上皮の浸透性が増加した図15A。重要なことに、非二量体形成性Ad3-E/S/Kn線維ノブまたはDSG2の細胞外ドメインの種々の領域に対するmAbと一緒にインキュベートした後の浸透性は、Ad3-K/S/Knと一緒にインキュベートした後の浸透性よりも>5分の1低かった。ii以前の試験により、極性乳がんBT474-M1細胞において、ハーセプチン/トラスツズマブの標的であるHer2/neuが上皮の結合内に閉じ込められていること、およびBT474-M1細胞をAd3のPtDdと一緒にインキュベートすることにより、Her2/neuへの接近が増大し、トラスツズマブによるがん細胞の死滅が増加することが示された33。本発明では、このアッセイを用いて、追加的なDSG2リガンドのトラスツズマブの細胞傷害性に対する効果を試験した図15B。Ad3-K/S/Knにより、トラスツズマブによるBT474-M1細胞の死滅が有意に増加したことが見いだされた。対照的に、二量体を形成することができないDSG2リガンド、すなわち、Ad3-E/S/Knおよび一連の抗DSG2抗体は、トラスツズマブによる死滅に対して有意な効果を有さなかった。特に、細胞外ドメイン3/4に対する抗DSG2抗体の1つmAb6D8が腫瘍細胞の増殖を刺激すると思われた。iiiAd5に対する受容体であるCARは極性T84上皮細胞の密着結合内に局在する3。これは、T84細胞の共焦点免疫蛍光顕微鏡によって示されている図15C、上のパネルおよび図15D、上のパネル。これらの細胞をAd3-K/S/Knと一緒にインキュベートすることにより、CAR染色が著しく増加し、今では側膜に沿って図15C、下のパネルおよび細胞表面に図15D、下のパネル現れている。これは、密着結合が分解し、T84細胞の頂端側に適用されたCARが抗CAR抗体へより接近しやすくなった結果であると推測された。密着結合の破壊およびCARの接近しやすさについての別の潜在的なアッセイは、CAR-ターゲティングAdベクターを形質導入することである。極性T84細胞頂端側にAd5-GFPを細胞当たり250pfuのMOIで感染させることにより、細胞の8/-2が形質導入された感染の20時間後に計数されたGFP陽性細胞に基づく図15E。Ad5-GFPをAd3-K/S/Knの存在下で感染させることにより、38/-9のGFP-陽性細胞がもたらされた。希釈緩衝液またはAd3-K/S/Knの存在下では、それぞれ、T84細胞の17/-6または68/-17にAd3-GFPが形質導入された。後者は、以前の試験と一致し、Ad3が、Ad5よりも効率的に分極上皮細胞に感染することを示している28。これは、そのDSG2と結合し、結合開口を誘発する能力に起因する可能性が最も高い。Ad3-K/S/Knにより、Ad3-GFPの形質導入が増加した。比較的小さなAd3-K/S/Knタンパク質およびその高濃度が、Ad3ビリオンよりも多くのDSG2受容体に最初に到達し、したがって、密着結合の開口を増強することが推測される。図15Eに示されている全ての設定において、単層の周辺にある細胞すなわち、密着結合せずに内部チャンバーの壁と接触している細胞の大部分がGFP陽性であった。したがって、transwellの中央の領域にあるGFP陽性細胞を計数した。後者は、希釈緩衝液またはAd3-K/S/Knの存在下でAd5-GFPを感染させた後のGFPの発現のフローサイトメトリー分析を解釈する際に考慮しなければならない図15F。バックラウンドのGFP蛍光レベルは比較的高かったが、Ad5-GFPを感染させた後のGFPの発現レベルは、Ad3-K/S/Knが存在することによっては有意に上昇したが、Ad3-E/S/Knまたは抗DSG2mAbが存在することによっては有意に上昇しなかった。全体的に、本発明者らの機能的試験により、Ad3-K/S/Knにより上皮の結合の開口が誘発され得るが、多量体形成することができないリガンドは結合に影響を及ぼさないことが示された。考察この試験では、2つの発見:i高親和性かつ安定なDSG2との結合を実現するためにはAd3線維ノブの多量体形成が必要であること、およびii多量体型のAd3-線維ノブ/DSG2相互作用により、上皮の結合の開口が誘発されることについて説明する。CARと相互作用するAd5、DSG2と相互作用するAd3、およびCD46と相互作用するAd35による感染を含めたAd感染の大部分は、気道上皮を標的とする22。Adが感染するためには、ウイルスと標的細胞の接触を維持するため、およびより重要なことに、ウイルスが上皮の関門を破壊し、標的細胞に進入し、標的組織内に拡散することを可能にするその後の事象を誘発するために、受容体に対する低解離速度の高い結合活性を実現することが極めて重要であると思われる。CAR結合性AdおよびCD46結合性Adについては、高い結合活性の結合は、三量体の線維ノブと3つの受容体ユニットの間の相互作用によって実現される。さらに、Ad11とCD46の相互作用について示されている通り、最初のAdと受容体の結合により、受容体のコンフォメーションの変化が誘発されて、結合が安定化し得るが21;Ad11以外のAdが後者の機構を使用することはまだ示されていない。CARと相互作用するAdおよびCD46と相互作用するAdに関して、付着には線維ノブおよび受容体が関与し、これは過剰な可溶性の線維ノブによって完全に遮断することができる。これは、DSG2結合性Ad3の場合は違う。Ad3の結合および感染を完全に阻害するには、物理的な連結、および、大概は、少なくとも2つの線維ノブの特異的な空間的配置が必要であることが示された。これは、Adビリオン、Ad3のPtDdまたは二量体のAd3-K/S/Knを用いて実現される。これらのリガンドは、一方では、高い結合活性をもたらし、他方では、上皮の結合の開口に機能的に関連する、いくつかのDSG2分子への同時の結合を実現すると思われる。Ad3-DSG2相互作用に関する本発明者らの発見をさらに裏付けるために、本発明者らは現在、結晶構造試験および突然変異誘発試験を行っている。感染を開始するために、多くの病原体が結合の完全性を破壊するための機構を進化させてきた。Vibriocholera株は、腸の上皮の結合を可逆的に変化させ、巨大分子が粘膜関門を通って通過することを可能にすることができるZonaoccludens毒素Zotを産生する6。Clostridiumperfringensエンテロトキシンにより、密着結合からクローディン3およびクローディン4が除去され、細菌の浸潤が容易になる25。さらに、ヒトAd、HPV、HTLV-1にコードされる腫瘍性タンパク質により、結合タンパク質であるZO-1を誤った場所に局在化させることによって上皮の結合を一過性に開口させることができる15。ウイルスが使用する後者の機構は、側方へのウイルスの拡散において役割を果たすと思われる。しかし、効率的な初感染のためには、ウイルスの付着が上皮の結合の開口を誘発することと連携しなければならない。免疫蛍光法、PI3K/MAPKリン酸化、mRNA発現アレイ、および代謝経路阻害手法を用いた実施例1において、Ad3ビリオンおよびAd3のPtDdがDSG2と結合することにより、上皮細胞において上皮間葉転換が誘発され、それにより一過性の細胞間結合の開口がもたらされることを報告した。Ad3粒子または組換えPtDdとDSG2の相互作用によって媒介される細胞間結合の開口は、上皮細胞の浸透性および細胞間結合内に閉じ込められている受容体例えば、Her2/neuへの接近が増大したことによってさらに裏付けられた。本試験では、Ad3-K/S/Knによっても結合の開口が誘発されることを示す形態学的なデータ共焦点免疫蛍光法、EMおよび機能的なデータ浸透性、トラスツズマブによる死滅、Ad5の感染を提供する。重要なことに、多量体形成し、DSG2を群がらせることができない他のDSG2リガンド、例えば、単量体のAd3-E/S/KnまたはDSG2の異なる領域に対するモノクローナル抗体などは、結合を効率的に開口することができなかった。しかし、Ad3が、DSG2/デスモソームの頂端側に位置する密着結合をどのように通過することができるのかは疑問のままである。Ad-DSG2に媒介される結合開口は数分以内に起こり、それにより、結合の内部に閉じ込められているDSG2が感染部位に存在するウイルス粒子に曝露されるので、効率的な感染は正のフィードフォワード機構を通じて起こることが推測される。Ad3の感染機構の考察では、Ad3の複製時に、PtDdが、感染性ウイルス当たりPtDd5.5×106個と、非常に過剰に形成されることにも注目すべきである7。これは、PtDdの形成が、Ad3にとって機能的に重要である、すなわち、Ad3の拡散または持続にとって有利であることを示唆している。同様の機構が、上皮細胞へのAd5の感染において起こると思われる。Ad5の複製時に線維が過剰に産生されることにより、CAR二量体形成が干渉されることによってか、または細胞内シグナル伝達が誘発され、それにより細胞間結合の再編成がもたらされることによって、上皮の結合が破壊される4、32。最近、invitro試験に基づいてCD46は極性呼吸上皮細胞の頂端に露出しており、したがって、invivoにおける初感染のAd受容体としてより機能しやすいことが示された9。これは、CD46の発現パターンがAdの形質導入と相関しなかったヒトCD46トランスジェニックマウスにおいては確認することができなかった19。さらに、極性上皮がん培養物において、細胞間結合内に閉じ込められていて、細胞表面に適用されたAd35と接近できないCD46が見いだされた33。この時点では、本発明者らは、CD46結合性Adがどのように上皮性関門を破壊するかという疑問の答えは得られていないままであると考える。細胞間結合は、抗がん治療薬の接近および腫瘍内への散在に対する物理的な障害を意味するので、Ad3-K/S/Knにより結合の開口が誘発されるという知見には実用的な意味がある26-27。上皮の結合開口薬は、上皮の結合内に閉じ込められている腫瘍に関連する抗原例えば、Her2/neuまたはEGFR1に対するモノクローナル抗体を用いたがん療法と関連すると思われる33。結合開口薬により、養子T細胞療法5またはリポソーム化学療法薬を用いた治療10の有効性も改善される可能性がある。最後に、Ad3-K/S/Knにより、Ad5ベースの遺伝子療法ベクターによる正常な組織または悪性の組織への形質導入の有効性が増大する可能性がある。Ad3-K/S/Knのバイオテクノロジーへの適用性は、その産生および精製の容易さによって、およびそれが自然発生的にホモ二量体を形成するという事実によってさらに強まる。結論として、本発明者らの試験により、上皮細胞へのAd3の感染の機構が明らかになる。小さな組換えタンパク質であるAd3-K/S/Knにより、上皮の結合の開口が誘発されるという所見はがん療法および上皮組織への薬物送達に関して意味を有する。実施例2の参考文献実施例3組換え上皮の結合開口薬により、がんのモノクローナル抗体療法が改善される要約がん治療のためのモノクローナル抗体mAbの治療有効性は、上皮腫瘍細胞を互いにしっかりと連結している細胞間結合によって限定される。本発明者らは、上皮の結合タンパク質であるデスモグレイン2DSG2と結合する小さな組換えアデノウイルス血清型3由来タンパク質である結合開口薬1JO-1を生成した。Her2/neu陽性ヒトがん細胞株およびEGFR陽性ヒトがん細胞株に由来する腫瘍を有するマウスモデルにおいて、静脈内注射後1時間以内に、JO-1により細胞間結合におけるDSG2二量体の切断が媒介されること、ならびに密着結合タンパク質であるE-カドヘリンのレベルの低下を導く細胞内シグナル伝達経路の活性化を実証する。JO-1に誘発される上皮の結合の変化により、抗Her2/neumAbであるトラスツズマブハーセプチンの腫瘍内への浸透の向上、ならびに部分的に結合内に閉じ込められている、その標的受容体であるHer2/neuへの接近の改善が可能になった。これは、Her2/neu陽性の乳がん細胞、胃がん細胞、および卵巣がん細胞を用いた異種移植モデルにおけるトラスツズマブのより優れた治療効果に直接転換される。さらに、JO-1とEGFRターゲティングmAbであるセツキシマブアービタックスの組み合わせにより、転移性EGFR陽性肺がんのモデルにおける治療転帰が有意に改善された。JO-1/トラスツズマブ処置と腫瘍間質タンパク質の一過性の分解を可能にする追加的な手法の組み合わせにより、腫瘍が完全に根絶する。癌治療に対するその臨床的な関連性に加えて、この試験では、上皮細胞へのアデノウイルス血清型3の感染の機構も明らかになる。諸言モノクローナル抗体mAbは、新規の腫瘍治療薬の1つのクラスとして現れた。現在までに、がんを治療するための治療用mAbは21種販売されており、数百種超が現在臨床開発中である。販売されているmAbの中にトラスツズマブハーセプチンおよびセツキシマブアービタックスがある。トラスツズマブは、ヒト上皮増殖因子受容体2Her2/ErbB-2を標的とする。セツキシマブに対する受容体は、ヒト上皮増殖因子受容体1Her1/ErbB-1である。どちらの受容体も、チロシンキナーゼ受容体ファミリーに属し、細胞の生存および増殖を促進するいくつかの経路を通じてシグナル伝達を開始するHarariら、2007年。トラスツズマブは、Her2/neu陽性乳がん患者において第一選択療法として使用され、転移性Her2/neu陽性胃がんについても認可されている。現在FDAに認可されているセツキシマブに対する適応症としては、結腸直腸がん、頭頸部癌、肺がん、および膵癌が挙げられるWheelerら、2010年。初期の乳がんまたは結腸がんの患者の大部分は、トラスツズマブ療法およびセツキシマブ療法に対して、測定可能な腫瘍の応答がある。しかし、進行疾患または再発疾患の患者では、これらのmAbに対する応答率はたったの8~10であるAdamsおよびWeiner、2005年。トラスツズマブおよびセツキシマブの作用機構は、抗体依存性細胞毒性または補体依存性細胞毒性の活性化、および腫瘍細胞が生存するために必要なチロシンキナーゼ受容体シグナル伝達への干渉を含むWheelerら、2010年。これらの機構の間の統一的な態様は、腫瘍細胞の増殖阻害がmAbとそれらの対応する受容体の結合に左右されることである。したがって、受容体への接近および結合を、血管から悪性細胞への腫瘍内輸送を物理的に阻害することによってか、または受容体を遮蔽することによって妨げる分子は、トラスツズマブおよびセツキシマブの活性を遮断することが予測されるLesniakら、2009年。これらの分子としては、コラーゲンまたはラミニンなどの腫瘍間質タンパク質が挙げられるLiら、2004年。最近の試験において、本発明者らは、これらの間質タンパク質が一過性に分解されることにより、トラスツズマブ療法が有意に改善されたことを実証したBeyerら、2011年。腫瘍間質タンパク質によって形成される障害に加えて、がん細胞の上皮の表現型によっても、がん療法に対する物理的関門が創出されるStraussおよびLieber、2009年;Straussら、2009年。いくつかの試験により、上皮のタンパク質の発現または上方制御が、乳がんのトラスツズマブ療法Fesslerら、2009年および結腸直腸がんのセツキシマブ療法Oliveras-Ferrarosら、2011年に対する抵抗性の増加と相関したことが実証された。上皮細胞は、いくつかの細胞間結合密着結合、接着結合、ギャップ結合、およびデスモソームを維持し、その特徴は、多くの場合、上皮内がんおよびがん細胞株において保存されているTurleyら、2008年。上皮の結合は、2つの隣接する細胞に由来するカドヘリン分子からなる接着性二量体で構成されるKoeserら、2003年。デスモグレイン1、2、および3DSG1~3およびデスモコリン1、2、および3DSC1~3は、カドヘリンのサブクラスである。DSC2およびDSG2は広範に発現され、上皮細胞の基底層のデスモソームにおいて共に見いだされる。デスモソームのカドヘリンの細胞質尾部は、原形質膜と細胞骨格を、プラコグロビン、デスモプラキン、およびプラコフィリンを含むタンパク質の複合体を通じて連結する。デスモグレイン2DSG2は、乳がんWangら、2011年b付録図1、卵巣がんWangら、2011年b付録図1、肺がんWangら、2011年b、胃がんBiedermannら、2005年、扁平上皮癌Haradaら、1996年、黒色腫Schmittら、2007年、転移性前立腺がんTrojanら、2005年、および膀胱がんAbbodら、2009年を含めた一連の上皮の悪性疾患において過剰発現される。実施例1において、ヒトアデノウイルスAdの一群Ad血清型3、7、11、および14は、細胞に感染するための主要な付着受容体としてDSG2を使用することが実証された。重要なことに、上皮細胞においてAd3がDSG2と結合することにより、シグナル伝達経路の活性化が誘発され、それにより、一過性の上皮の結合の開口がもたらされる。結合の開口は、経上皮の浸透性が増大すること、および密着結合内に閉じ込められているタンパク質、例えば、コクサッキーアデノウイルス受容体またはzonulaoccludens-1タンパク質が露出することにより反映された。上皮の結合の開口は、組換えウイルス成分の粒子、例えば、ペントンベースと連結した12個のAd3線維からなるペントン12面体PtDdなどによっても実現されたFuschiottiら、2006年;Norrbyら、1967年。その後、本発明者らは2つの線維ノブドメインによって形成される最小のAd3由来のDSG2リガンドを生成した。このタンパク質は、分子量がおよそ50kDaであり、E.coliにおいて産生され、また容易に精製することができる。一連の機能的試験において、本発明者らは、このタンパク質により、結合の開口が効率的に誘発されることを実証した。したがって、以下の試験では、このタンパク質を結合開口薬-1JO-1と称する。この試験では、JO-1に媒介される結合の開口のinvivo機構を部分的に説明した。異種移植腫瘍においてHer2/neuおよびEGFRが細胞間結合内に閉じ込められていることが示された。JO-1処置により、腫瘍におけるmAbの浸透が有意に増加し、また、一連の異種移植腫瘍モデルにおけるトラスツズマブ療法およびセツキシマブ療法の有効性が有意に増大した。結果JO-1により、上皮の結合の開口が誘発される。上記の実施例において、Ad3粒子または組換えAd3ペントン12面体PtDd図16AがDSG2と結合し、一過性の上皮の結合の開口を誘発し、それが今度は、Her2/neu陽性のBT474乳がん細胞のトラスツズマブによる死滅を増加させることが示された。大きなサイズのAd3またはPtDd粒子は、それらの血管からの放出および組織への浸透に影響を及ぼし得るので、本発明者らは、上皮の結合開口薬として機能的に活性なより小さなAd3由来のDSG2リガンドを生成した。DSG2との高親和性結合およびその後の結合開口には、Ad3線維二量体が必要であることが見いだされた。この所見に基づいて、結合開口薬1JO-1と称する小さな自己二量体形成性Ad3線維誘導体を設計した図16A、B。JO-1の分子量は約50kDaであり、E.coliにおいて産生させた後、親和性クロマトグラフィーにより精製する。極性結腸がんT84細胞においてJO-1の機能活性を試験した。これにより、クローディン7およびDSG2についての共焦点顕微鏡検査によって示されている通り、細胞をJO-1と一緒にインキュベートすることにより、上皮の結合のリモデリングが誘発されることが実証された図16C。デスモソームタンパク質であるDSG2は、クローディン7がマーカーとなる接着結合とオーバーラップしている。JO-1がDSG2と結合してから30分以内に、クローディン7の染色が増加し、これは、大概は、クローディン7に対する抗体transwell培養物の内部チャンバー、すなわち、分極上皮細胞の頂端側に適用されるがより接近しやすいことの結果である。デスモソーム結合および接着結合に対して頂端に局在する密着結合の開口が電子顕微鏡により例示されている図16D。無処置の上皮細胞の顕微鏡検査により、頂端に適用された色素であるルテニウムレッドが側底の空間には入れないことによって判定されるインタクトな密着結合が示されている。上皮細胞をJO-1と一緒に1時間インキュベートすることにより、密着結合が分解され、ルテニウムレッドが側底の空間に漏出する図16D、右側のパネル。分極上皮細胞をJO-1に曝露させることによっても、分子量が4000Daである14C-PEG-4000の貫流によって示されている通り、経上皮の浸透性が増大した図16E。重要なことに、DSG2の細胞外ドメインの種々の領域に対するモノクローナル抗体によっては経上皮の浸透性は有意に増大しなかった。結合の開口を誘発するためには、いくつかのDSG2分子のライゲーションが必要であることが推測される。顕微鏡検査および浸透性試験により、JO-1により数分以内に結合の開口が誘発されることが示された。JO-1パルス処置を解除した60分後に、結合構造および浸透性は正常な形態に回復したという事実によって例示されるように、JO-1の効果は一過性である。JO-1を細胞上に放置した場合、最初にJO-1を加えた24時間後に、依然として形態学的な上皮の結合の変化を見ることができたデータは示していない。invivoにおいて、JO-1により、細胞内シグナル伝達が誘発され、上皮腫瘍内へのmAbの浸透が増大する。乳がん異種移植モデルを使用して、invivoにおける上皮の結合に対するJO-1の効果を試験した。ヒト乳がんHCC1954細胞を、CB17-SCID/ベージュマウスの乳房の脂肪パッドに注射した。生じた腫瘍は、ヒトにおける乳がんの組織構造と似ていたLiら、2004年、すなわち、腫瘍は血管化し、上皮の結合でくっついた上皮細胞の巣を含有し、細胞外マトリックスで囲まれていた。腫瘍の体積が約200mm3に達した時、JO-1を静脈内注射した。JO-1は、早ければ注射した1時間後に、免疫蛍光顕微鏡により、腫瘍内で検出することができた。注射した12時間後に免疫蛍光が増大したことよって示される通り、JO-1は腫瘍内に蓄積した図17A、左側の3つのパネル。これは、腫瘍溶解物のウエスタンブロット分析によっても確認された図17A、右側のパネル。PBSで処置した動物における、免疫蛍光顕微鏡検査による腫瘍切片についてのDSG2の分析により、膜局在シグナルが示された図17B、左側のパネル。JO-1を注射した1時間後には、DSG2分子は、主に腫瘍細胞の細胞質において見いだされた2番目のパネル。12時間までに、DSG2の膜局在化が部分的に回復すると思われた3番目のパネル。DSG2の細胞外ドメインに対する抗DSG2抗体を使用したウエスタンブロット分析により、1時間の時点で、おそらくタンパク質分解性の切断によって産生されるDSG2細胞外ドメインECDのより小さな断片が明らかになった図17B、右側のパネル。総合すると、これらのデータにより、JO-1により、DSG2ECD内部の切断およびDSG2の内部移行が誘発されることが示唆されている。これにより、2つの隣接する上皮腫瘍細胞間のDSG2二量体が破壊され、側方結合のリモデリングの一因となることが推測される。JO-1で処置した動物の組織学的検査では、胃腸管または気道の正常な上皮組織に毒性の副作用または変化は観察されなかった。上記の実施例において、invitro試験において、Ad3が上皮細胞のDSG2と結合することにより、上皮間葉転換EMTに関与する経路を含めた細胞内シグナル伝達が誘発されることが見いだされた。EMTは胚発生に関与する再プログラミング過程であるが、腫瘍における転移にも関与する。EMTを特徴付ける特徴としては、上皮のマーカーの発現の減少、転写因子の位置の変更、およびErk1/2MAPKの活性化が挙げられるTurleyら、2008年。異種移植腫瘍を用いた本発明者らの試験では、JO-1を静脈内注射した12時間後に腫瘍内に見られたリン酸化されていない形態およびリン酸化された形態のE-カドヘリンは少なかった図17C、左側のパネル。E-カドヘリンの変化に先立って、リン酸化されたErk1/2が増大した図17C、pErk1/2PBSとJO-1を比較1時間。ERK1/2が活性化されることにより、EMT時のE-カドヘリンの発現およびリン酸化が減少することはよく確立されているAndarawewaら、2007年;Larsenら、2003年;Turleyら、2008年。JO-1を注射すると、E-カドヘリンが減少し、また、リン酸化されたErk1/2のシグナルが増加することも、免疫蛍光顕微鏡によって確認された図17C、右側のパネル。全体的に、これらの試験は、HCC1954腫瘍において、invivoにおいてJO-1によりErk1/2経路の活性化が誘発されることを示している。これに基づいて、本発明者らは、JO-1がDSG2と結合することによる上皮の結合の開口には、少なくとも2つの機構:iDSG2ECDの切断、およびその後の内部移行を伴うDSG2二量体の破壊;ならびにiiErk1/2の活性化によるEMT様事象の誘導が関与するという仮説を立てている。次に、腫瘍におけるJO-1に誘発される上皮の結合の開口により、異種移植腫瘍へのモノクローナル抗体の浸透が増大するかどうかを試験した。この試験のためにヒト化IgG1mAbであるトラスツズマブを最初に利用した。以前の試験の場合と同様に、トラスツズマブを10mg/kgの用量で腹腔内に注射した。ヒトIgGに特異的な抗体を用いて腫瘍内のトラスツズマブを可視化した。腫瘍切片の分析およびウエスタンブロット分析において、トラスツズマブは、注射した1時間後に検出可能であり、注射した12時間後にはより高レベルで検出可能であった図18。トラスツズマブを投与する1時間前にJO-1を静脈内注射することにより、腫瘍内のトラスツズマブの量が目に見えて増加し、これは、血管から放出したこと、腫瘍内への浸透が向上したこと、および/または腫瘍内の半減期が長くなったことのいずれかを示している。mAb標的は上皮の結合内に閉じ込められている。乳がん異種移植切片および培養した乳がん細胞において、Her2/neuと接着結合タンパク質であるクローディン7の共染色が見いだされた図19A。乳がんBT474細胞の共焦点顕微鏡写真により、Her2/neuが側方結合内に閉じ込められていることが確認された。これは、以前の試験と一致し、Her2/neuが、密着結合が破壊された際にのみ頂端の表面から接近可能になる側底のタンパク質であることを実証しているVermeerら、2003年。Her2/neu陽性乳がん細胞株BT474図19またはHCC1954示されていないをJO-1と一緒にインキュベートすることにより、1時間以内に上皮の側方結合の組成が変化した。この結果として、Her2/neu染色が、細胞表面では染まり方がより強くなったが、細胞表面より遠位の領域ではあせた。これは、JO-1に媒介される結合の開口により、Her2/neuの側膜から細胞表面への移行が誘発されたことを示唆している。側方結合に対するJO-1の効果は一過性であり、細胞の形態は、JO-1パルス処置した16時間後までに対照細胞の形態に戻った。上皮の結合内に閉じ込められていることはまた、EGFRと密着結合タンパク質であるE-カドヘリンの共染色によって示唆されるように、EGFR1セツキシマブ/アービタックスの標的などの他のがん療法の標的に関しても問題であると思われる図19B。セツキシマブを用いた本発明者らの試験では、結腸がん細胞株は大部分がセツキシマブに対する抵抗性を付与するK-rasの突然変異を有するのでKaramouzisら、2007年、肺がんモデルA549細胞に焦点を合わせている。Her2/neuに関して観察されたことと同様に、A549細胞をJO-1と一緒にインキュベートすることにより、EGFRが細胞表面に移行した。mAb受容体が閉じ込められている状態から解放されることは、トラスツズマブおよびセツキシマブによるがん細胞の死滅が増強されることによって裏付けられる。トラスツズマブによるBT474乳がんのinvitroにおける死滅およびセツキシマブによるA549肺がん細胞のinvitroにおける死滅は、それぞれ非効率的であった図19CおよびD。これらの細胞をJO-1で前処置することにより、どちらの抗体もinvitroでの対応する細胞株における細胞傷害性が有意に増大する。全体的に、これらの試験は、JO-1により、結合の開口が媒介され、それにより、mAbの腫瘍内への浸透を向上させること、ならびに、そうでなければ結合内に閉じ込められているそれらの標的受容体への接近を改善することが可能になることを示す。これに基づいて、JO-1で前処置することにより、異種移植モデルにおけるmAbの治療効果が改善され得るかどうかを調査するために一連のinvivo試験を実施した。JO-1により、invivoでトラスツズマブ療法が改善される。まず、トラスツズマブ療法のJO-1による潜在的な増強を、Her2/neu陽性BT474-M1細胞に基づく同所性乳がんモデルにおいて試験した。JO-1を単独で注射することは、腫瘍の増殖に対して有意な効果がなかった図20A。BT474-M1腫瘍は、トラスツズマブに最初に良好に応答したが、JO-1を前注射することにより、トラスツズマブの治療効果が有意に増強された図20A。これらの発見は、このモデルにおいてPtDdを用いた本発明者らの試験と一致する。処置したマウスを長期、すなわち、136日間にわたって追跡すると、JO-1での前処置の増強効果がより明白になる。トラスツズマブ単独療法を受けた動物の60が、およそ100日目に再発relapseし、JO-1トラスツズマブで処置した動物はいずれも腫瘍の再増殖を示さなかったデータは示していない。第2の乳がんモデルはHCC1954細胞を伴う。これらの細胞に由来する腫瘍は、トラスツズマブに対する抵抗性がより高い図20B。BT474-M1モデルにおいて見られるように、JO-1で前処置することにより、トラスツズマブ療法が有意に改善され、腫瘍の増殖が失速した。JO-1の増強効果は、PtDdの増強効果に匹敵したデータは示していない。PtDdを用いた本発明者らの試験に基づいて、JO-1注射とトラスツズマブ注射の間に10時間の時間間隔を選択した。このレジメンは、腫瘍におけるJO-1の蓄積の動力学およびE-カドヘリン減少の動力学によって裏付けられる図17AおよびCを参照されたい。他方では、結合の開口、すなわち、DSG2の切断またはErk1/2が活性化されることに関連づけられると思われる事象は、JO-1を注射してから1時間以内にすでに起こる。したがって、JO-1/トラスツズマブを同時に注射すること、およびJO-1を適用した1時間後にトラスツズマブを注射することが、治療転帰にどのように影響を及ぼすかを調査した図20C。この試験では、最初に用いた治療手法JO-1の10時間後にトラスツズマブと比較して有意差は見いだされなかった。これは、腫瘍におけるタンパク質の蓄積が相対的に遅いことに起因することが推測される。トラスツズマブに対する併用治療薬としてのJO-1の臨床的な関連性をさらに強化するために、Her2/neu陽性胃がんNCI-N87モデルにおいて有効性試験を実施した図21。乳がんモデルと同様に、NCI-N87培養物および異種移植腫瘍においてHer2/neuとクローディン7の共染色が見いだされ、これは、Her2/neuが上皮の結合に閉じ込められていることを示唆している。胃がん異種移植モデルを確立するために、NCI-N87細胞を皮下注射した。腫瘍を担持するマウスをJO-1で前処置することにより、腫瘍の増殖が遅延したことに反映された通り、トラスツズマブ療法が有意に改善された。JO-1により、invivoでセツキシマブ療法が改善される。A549肺がん細胞に由来する皮下腫瘍を有する異種移植モデルを最初に利用した。以前確立されたA549腫瘍を有するマウスをセツキシマブで処置することでは、PBS処置と比較して腫瘍の増殖の有意な遅延はもたらされなかった。JO-1を静脈内注射または腹腔内注射した12時間後にセツキシマブを注射した。どちらの処置手法でも有意な治療効果があり、腫瘍体積が減少した図22A。JO-1の静脈内注射と結合開口薬の腫瘍内適用の追加的な組み合わせで治療効果がさらには増大することはなかった。乳がんモデルにおいて見られるように、JO-1処置単独では、有意な抗腫瘍効果は発揮されなかった。JO-1で前処置することにより、セツキシマブ療法がPtDdで見られるのと同程度に増強された図22B。次に、同所性肺がんモデルにおいて併用療法を試験した。このモデルを確立するために、A549細胞を静脈内注射した。このモデルでは、マウスは腫瘍細胞を移植してから37日以内に罹患し、腫瘍は肺に優勢に局在した図22C、PBS群。マウスの処置は、10日目、すなわち、対照群の動物が試験のエンドポイントに到達する27日前に開始した。全ての動物を40日目に屠殺した。対照群、JO-1群、ならびにセツキシマブで処置した動物では肺転移がはっきり目に見えたが、JO-1セツキシマブで処置した動物の肺の80で、肉眼検査時には腫瘍がなかった。肺切片の顕微鏡検査により、PBS処置した動物では、腫瘍細胞はほぼ完全に正常な肺組織にとって代わり、細気管支も満たしたことが示された図22C、右側のパネル。細気管支への浸潤は、セツキシマブを注射した動物において有意性が低かった。重要なことに、セツキシマブで処置した動物はかなりの浸潤性腫瘍の増殖を有したが、大多数のJO-1セツキシマブを注射した動物は微小転移のみを示した。腫瘍間質タンパク質分解と結合の開口の組み合わせ。本発明者らは最近、がん患者由来の腫瘍切片および異種移植片の免疫組織化学的試験において、細胞外マトリックスタンパク質が、悪性の乳がんおよび結腸がん細胞の巣をしっかりと包囲する腫瘍間質を形成していることを示したLiら、2009年。ペプチドホルモンであるレラキシンが腫瘍内で発現することによる腫瘍間質タンパク質の一過性の分解により、トラスツズマブ療法が有意に増強されたBeyerら、2011年。本発明では、追加的な一過性の腫瘍間質タンパク質分解により、トラスツズマブ療法に対するJO-1の効果がさらに増大するかどうかを試験するために、HCC1954モデルを利用した図23A。レラキシン遺伝子を腫瘍に送達するために、造血幹細胞HSCに基づいた手法Liら、2009年を用いた。この手法では、腫瘍細胞が、骨髄から骨髄系前駆細胞を活発に動員し、それらを、そこでそれらが腫瘍関マクロファージTAMに分化する腫瘍間質に動員するいくつものケモカインを分泌するという知見を利用する。TAMは、腫瘍の増殖、血管新生、免疫エスケープおよび間質発生を誘発/支持する因子を産生するので、腫瘍が生存するために重要である。この手法は、骨髄由来HSCに、ドキシサイクリンDox誘導性転写カセットの制御下で、導入遺伝子を発現しているレンチウイルスベクターをexvivoで形質導入すること、およびこれらの細胞を、骨髄に植え付け、腫瘍に向かう遺伝子改変された細胞の長期供給源をもたらす骨髄調整myelo-conditionedレシピエントに移植することを伴う。この試験図23Bにより、レラキシンの発現単独で、有意に腫瘍の増殖が遅延し、トラスツズマブ療法が増大したことが示された。レラキシンの発現とJO-1処置の組み合わせにより、腫瘍の増殖が停止した。処置終了時に、レラキシントラスツズマブ療法またはJO-1トラスツズマブ療法のいずれかを受けた群とは対照的に、腫瘍は再成長しなかった。観察期間の最後にJO-1/レラキシン/トラスツズマブ群に残留していた腫瘤の組織学的分析では結合組織のみが示された。対照的に、他の群から外植された腫瘍は腫瘍細胞を含有し、それは腫瘍をプロテアーゼによって消化した際にinvitroで培養することができた。特に、三重の組み合わせJO-1/レラキシン/トラスツズマブ処置を受けたマウスにおいて有害な副作用は観察されなかった。本発明者らのデータにより、腫瘍における物理的な障害がトラスツズマブ療法に対する抵抗性の媒介に関与することが強調される。JO-1に対する抗体の存在下での、invitro細胞毒性アッセイに対する効果。Ad3は、広範に分布した病原体である。そのため、JO-1は、潜在的に免疫原性であり得、繰り返し投与した後にその治療的活性に干渉し得るウイルスタンパク質である。試験した乳がん患者由来の血清試料30のうち10が、中和性Ad3抗体について陽性であったデータは示していない。これは、ヒトにおける10歳まで中和性抗Ad3抗体の血清分布率は約40であるという報告と一致するSakamotoら、1995年。しかし、本発明者らは、抗Ad3抗体陽性ヒト血清がJO-1と反応しないことを示したデータは示していない。中和性抗体の大部分はAdのヘキソンを対象とするので、これは驚くべきことではないSumidaら、2005年。抗JO-1陽性血清を得るために、マウスに、JO-1を用いてワクチン接種したデータは示していない。invitro細胞毒性試験では、抗JO-1抗体による、Her2/neu陽性BT474細胞のトラスツズマブによる死滅に対するJO-1の増強効果への干渉は見いだされなかったデータは示していない。これに沿って、健康なボランティアまたは乳がん患者由来のプールしたヒト血清も、JO-1の機能に干渉しなかった。考察新規の併用治療薬としてのJO-1。多くの領域におけるそれらの成功にもかかわらず、mAbの治療有効性は限られており、少数の患者のみが単独療法としてのこれらの作用剤に応答している。トラスツズマブおよびセツキシマブを含めた多くの抗がんmAbの作用は、腫瘍細胞上の対応する標的受容体に結合することを必要とする。標的受容体が遮蔽されることまたはmAbの腫瘍内の散在が妨げられることは、がん細胞の潜在的な遮蔽およびエスケープ機構であるLesniakら、2009年。コラーゲンまたはラミニンなどの腫瘍間質タンパク質によって形成される関門に加えて、上皮がんの上皮の表現型によっても、mAb療法に対する障害が創出される。最近の試験では、ムチン1などの上皮の特徴の発現が、トラスツズマブ抵抗性と相関することが報告されたFesslerら、2009年。さらに、E-カドヘリンが上方制御されることが、結腸直腸がんのセツキシマブ療法に対する抵抗性の一因となるOliveras-Ferrarosら、2011年。腫瘍の浸潤および転移はEMTを伴うことが長年にわたり公知であるが、最近の試験により、このプロセスは、間葉上皮転換METによって逆転させることができることが示されたThieryおよびSleeman、2006年。上皮の結合を含めた上皮の特徴を回復させることは、同様に腫瘍を抗がん治療から遮蔽する腫瘍の防御機構を示すと思われるBrennanら、2010年;Straussら、2009年;ThieryおよびSleeman、2006年。この状況において、主要な卵巣がん細胞に対する試験において、化学療法抵抗性の獲得および推定上のがん幹細胞の形成は、METによく似た過程を伴うことが見いだされたStraussら、2011年。本発明者らは、上皮の結合の一過性の溶解を可能にする手法により、トラスツズマブおよびセツキシマブなどのmAbの治療有効性が改善され得るという仮説を立てた。基本的なアデノウイルス学的adenovirological試験の状況において、小さな組換えタンパク質JO-1を設計した。JO-1がDSG2と結合することにより、一過性の密着結合の開口がもたらされた。これにより、ヒト上皮腫瘍細胞を伴う一連の異種移植モデルにおいて、腫瘍におけるトラスツズマブの浸透が増大し、mAb標的受容体へより接近しやすくなり、それが今度は、mAb療法を容易にした。潜在的に、JO-1とトラスツズマブおよびJO-1とセツキシマブの組み合わせにより、これらのmAbの有効用量を減らし、それにより、重大な副作用、すなわち、トラスツズマブに関連する心毒性およびセツキシマブ療法中に起こることも多いざ瘡様発疹を軽減することが可能になり得る。JO-1は、E.coliにおいて高収率で産生させることができるので、開発するのに魅力的な治療薬である。特に、DSG2を群がらせることができないDSG2リガンド、例えば、DSG2に対するモノクローナル抗体などは、この試験において使用する腫瘍モデルにおける結合の開口において非効率的である。本発明者らの知るところでは、DSG2と結合し、腫瘍をmAbに対して感作することができる他の開発中の療法はない。一連の病原体は、結合の完全性を破壊するための機構を進化させてきた。例えば、Vibriocholerae株は、腸の上皮の結合を可逆的に変化させ、巨大分子が粘膜関門を通って通過することを可能にすることができるZonaoccludens毒素Zotを産生するFasanoら、1991年。Zot由来のヘキサペプチドAT-1001が開発されてきたが、セリアック病の患者における臨床試験は、最近、安全性の懸念および有効性の欠如により中止された。作用機構。本発明者らのデータにより、JO-1により、上皮腫瘍において、2つの潜在的に関連する機構:細胞間結合におけるDSG2二量体の破壊および/またはE-カドヘリンおよび潜在的に他の結合タンパク質を減少させる細胞内シグナル伝達を通じて、結合の開口が誘発されることが示唆されている。カドヘリンは隣接する細胞間で二量体を形成するので、いくつもの病原体は、カドヘリンの細胞外ドメイン内の切断を誘発するための機構を進化させてきた。胃腸管を介して血流に浸潤することができる生物体であるCandidaalbicansは、E-カドヘリンと結合し、E-カドヘリンの細胞内ドメインと細胞外ドメインの両方の切断を誘発し、それにより、近接する上皮細胞間のホモタイプの相互作用を不安定にするFrankおよびHostetter、2007年。さらに、BacteroidesfragilisエンテロトキシンおよびPorphyromonasgingivalisジンジパインがE-カドヘリンの分解に関連づけられているKatzら、2000年;Wuら、1998年。これらの試験ではどちらも、E-カドヘリンの切断の原因が、特異的な細菌のプロテアーゼであるとされた。本発明者らのデータにより、Ad3が同様の機構を使用して気道内の上皮性関門を突破することが示唆されている。本発明者らは現在、DSG2切断の機構について試験している。進行中の試験では、JO-1の結合により、DSG2内部のコンフォメーションの変化が誘発されることを決定することを試みている。最近考察されている通り、DSG2二量体の溶解により、今度は、頂端により多く局在している密着結合が不安定になり得るKoeserら、2003年。上記のinvitro試験に基づいて、Ad3がDSG2と結合することにより、Erk1/2およびEMTに関与する他の経路の活性化が誘発される。この試験により、静脈内にJO-1を注射してから1時間以内に腫瘍におけるErk1/2が活性化されることが示されている。本発明者らの所見は、カドヘリンが、受容体チロシンキナーゼを伴う双方向的なシグナル伝達に関わって細胞間結合を調節することを示す以前の報告と一致するKlessnerら、2009年。本発明者らは現在、上皮の結合の維持におけるDSG2の役割をよりよく説明するために、種々のDSG2ノックアウトモデルおよび切断/突然変異DSG2変異体を生成している。正常な上皮組織に対する副作用。ヒトおよび非ヒト霊長類において、DSG2は胃腸管および気道で発現されるLiら、2011年。DSG2のマウスオルソログはAd3またはJO-1によって認識されないのでWangら、2011年b、正常なマウスにおける安全性試験は比較的不十分である。したがって、ヒトDSG2遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスを生成した。これらの動物におけるヒトDSG2の発現パターンおよびレベルは、ヒトにおいて見いだされるものと同様であった。さらに、トランスジェニックマウス上皮細胞においてJO-1がヒトDSG2と結合することにより、ヒト細胞において観察されたデータと同様の程度に結合の開口が誘発されることが示された。DSG2-トランスジェニックマウスを用いた予備試験では、静脈内にJO-1を注射すること2mg/kgによる重大な副作用は見いだされなかったLiら、2011年。正常な上皮細胞内のDSG2は、静脈内に適用されたJO-1とすぐには接近可能ではないことが推測される。他方では、腫瘍に関連する血管の漏出および厳密な細胞の極性化の欠如が増すことにより、上皮腫瘍のJO-1に対する反応性がより高くなる可能性がある。JO-1リガンドを静脈内注射した後の毒性がないことは、Ad3線維を含有するアデノウイルスを用いた試験によっても強調される。これらのウイルスは、DSG2と結合し、JO-1と同じ様に結合に作用する。Ad5/3腫瘍退縮ベクターまたはAd3腫瘍退縮ベクターのヒトへの静脈内注射は安全であることが見いだされたHemminkiら、2010年;Koskiら、2010年。本発明者らは現在、安全な治療薬としてのJO-1の可能性を検証するために、非ヒト霊長類およびDSG2-トランスジェニックマウスにおいて詳細な毒性試験を行っている。JO-1免疫原性。JO-1は、ウイルスタンパク質であるので、特に、繰り返し注射した後にはヒトにおいて適応性の免疫応答が発生する可能性がある。しかしこれは、臨床的な問題ではないと思われる。Her2/neu陽性転移性乳がんの第一選択治療は、化学療法薬ドキソルビシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、またはドセタキセルと組み合わせたトラスツズマブである。また、非小細胞肺がん患者においては、セツキシマブを化学療法薬ビノレルビンシスプラチンと組み合わせて使用する。免疫抑制性の化学療法により、JO-1に対する免疫応答予防される可能性がある。さらに、この予想は、腫瘍退縮性のアデノウイルスベクターを用いた試験によって裏付けられる。これらの試験では、免疫抑制により、繰り返しベクターを適用することが可能になるThomasら、2008年。他方では、免疫適格性のがん患者においてJO-1を使用することができれば、有益だと思われる。例えば、JO-1は、理論的に、既存の抗腫瘍T細胞または移植された抗腫瘍T細胞の接近および腫瘍内への浸透を増大させることにより、免疫賦活性の単独療法としての機能を果たし得る。腫瘍に特異的なT細胞は、無処置の乳がん患者において、疾患の後期においてさえ頻繁に見いだされ、これらの細胞をマウスに移すと、異種移植された自己の腫瘍を拒絶することが示されているBeckhoveら、2004年;Disisら、1994年;Disisら、2000年;Feuererら、2001年;Tosoら、1996年。したがって、本発明者らは、JO-1免疫原性のより詳細な調査を開始した。ヒトのおよそ3分の1がAd3に対する中和性抗体を有するという事実にもかかわらず、本発明者らの試験により、これらの抗体はJO-1と相互作用しないことが示された付録図5。さらに、マウスにワクチン接種することにより生成された抗JO-1抗体は、invitroにおいて、トラスツズマブによる死滅に対するJO-1の増強効果に影響を及ぼさなかった。これは、JO-1-DSG2相互作用の親和性が高いことに起因する可能性が最も高いWangら、2011年a。本発明者らは現在、抗JO-1免疫応答が、その有効性にどのように影響を及ぼすかを調査するために、hu-DSG2-トランスジェニックマウスにおいて同系の腫瘍を確立している。腫瘍の浸潤および転移の増強に対する潜在的な危険性。他の試験Wangら、2011年b、Biedermannら、2005年、Haradaら、1996年、Schmittら、2007年、Trojanら、2005年、Abbodら、2009年と一致して、本発明者らは、悪性の組織におけるDSG2の発現が周囲の正常な上皮組織よりも高いことを見いだした。さらに、子宮頚部扁平上皮がんsquamouscellcervicalcancerにおける最近の試験により、他の全てのデスモソームタンパク質とは対照的に、DSG2は浸潤がんにおいて上方制御されることが実証されたKurzenら、2003年。しかし、浸潤性の膵臓癌または胃がんにおいてDSG2の量が減少していることが報告されている試験もあるRamaniら、2008年;Yashiroら、2006年。後者、ならびにJO-1によりEMT様シグナル伝達が誘発されるという所見は、JO-1により転移が容易になるかどうかという疑問を生じる可能性がある。特に、この試験において使用する全てのモデルでは、JO-1単独で処置した動物において腫瘍の増殖への刺激または肉眼で見える/顕微鏡レベルの転移の徴候は見られなかった。腫瘍の浸潤および転移には、一過性を超えるEMT経路の活性化が必要である。上皮がんからの脱離および腫瘍細胞の遊走は、腫瘍間質の変化および上皮細胞の間葉細胞への表現型の再プログラミングをもたらす悪性細胞と腫瘍微小環境の間の長期のクロストーク後にのみ可能であるGuarino、2007年。要約すると、上皮の結合開口薬であるJO-1は、がんのmAb療法を有効性と安全性の両方に関して、すなわち、治療用mAbの用量の低減を可能にすることによって改善する可能性を有する。この試験により、上皮細胞でのAd3の感染の機構も明らかになる。材料および方法タンパク質および抗体。JO-1Ad3-K/S/Knとしても公知の生成については、以前に記載されているWangら、2011年a。JO-1は、他で記載されている通り、pQE30発現ベクターQiagen、Valencia、CAを用いてE.coliにおいて産生させ、Ni-NTAアガロースクロマトグラフィーによって精製したWangら、2007年。組換えAd3ペントン12面体PtDdタンパク質複合体は、他で記載されている通り、昆虫細胞において産生させ、精製したFenderら、1997年。免疫蛍光試験またはウエスタンブロットのために以下の抗体を使用した:ポリクローナルヤギ抗DSG2RDSystems,Inc.、Minneapolis、MN、マウスmAb抗DSG2クローン6D8CellSciences、Canton、MA、ウサギ抗クローディン7Abcam、Cambridge、MA、抗ヒトIgG-FITCSantaCruz、ウサギ抗EGFRAbcam、マウス抗Her2/neuAbcam、マウス抗E-カドヘリンCellSignaling、マウス抗ヒトIgGFcRDSystems、ホスホ-p44/42MAPKに対するマウスmAbErk1/2Thr202/Tyr204CellSignaling、マウス抗Erk1/2CellSignaling、マウス抗ホスホ-E-カドヘリンpS838/840Epitomics,Inc.、マウス抗6-HisQiagen。細胞株。BT474-M1細胞は、10のFBS、1のPen/Strepおよび2mMのL-グルタミンを伴うDMEM/F12中で培養した。HCC1954乳がん、A549肺がんおよびNCI-N87細胞は、10のFBSおよび1のPen/Strepを伴うRMPI中で培養した。SKOV3-ip1細胞はMEBM培地中で培養した。結腸がんT84細胞は、10のFBS、GluおよびPen/Strepを加えたHam’sF12培地とDMEMの1:1混合物中で培養した。細胞の極性化を実現するために、1.4×105T84細胞をコラーゲンでコーティングした6.5mmのTranswellインサート孔サイズ0.4μmCostarTranswellClears中で、経上皮抵抗性が安定するまで14~20日の期間にわたり培養したWangら、2011年b。免疫蛍光分析。細胞をチャンバーガラススライドBDFalcon内で培養し、氷冷のPBSで2回洗浄し、次いで、メタノール/アセトン1:1vol/volを用いて4°Cで15分間にわたって、または4のパラホルムアルデヒドを用いて4°Cで30分間わたって固定した。固定後に細胞をPBSで2回洗浄し、その後、2の粉乳BioRadを含有するPBSを用いて室温で20分間にわたって遮断した。抗体をPBS中に希釈しクローディン71:100、DSG21:100、Her2/neu1:50、EGFR1:50、E-カドヘリン1:100、ヒトIgG1:400、ホスホ-p44/42MAPK1:400、Penta-His1:500、細胞を室温で90分間にわたって、または4°Cで一晩染色した。必要な場合には、PBSを用いて室温で30分間にわたって3回洗浄した後に、適切に指向させた二次抗体を適用した。DAPIを伴うVECTASHIELDVectorLabsを用いてガラススライドをマウントした。写真をLeicaDFC300FXデジタルカメラを使用して得た。ZeissMETA共焦点顕微鏡で、40×油浸レンズまたは100×油浸レンズおよびZeiss510ソフトウェアZeissMicroImaging、Thornwood、NYを使用して共焦点像を取得した。組織。ヒト乳がんのパラフィン切片を脱パラフィンし、再水和させた。VectorAntigenUnmaskingsolutionspH6.0Vectorlaboratories,Inc.、Burlingame、CAを用いて抗原の回収retrievalを実施した。マウス抗DGS2抗体3G132Abcamを1:10に希釈した。Polink-2HRPBroadKitGoldenBridgeInternational,Inc.Mukilteo、WAおよび基質としてDABを使用して免疫組織学的検査を実施した。ウエスタンブロット。異種移植腫瘍組織を解剖し、手動でホモジナイズし組織破壊器、タンパク質溶解緩衝液[20mMのHepespH7.5、2mMのEGTA、10のグリシン、1のトリトンX100、150mMのNaCl全てSigma-Aldrichから入手、およびプロテアーゼ/ホスファターゼphospatase阻害剤CompleteProteaseInhibitorCocktailandPhosSTOP、Roche]中、氷上で30分インキュベートした。集密になった培養細胞を氷冷のPBSで2回洗浄し、次いで、タンパク質溶解緩衝液中、氷上で30分溶解させた。試料をペレットにし10分、4°C、15,000RPM、タンパク質を含有する上清を-80°Cで保管した。ウエスタンブロット手順のために合計80μgの総タンパク質を使用した。タンパク質試料を煮沸し95°Cで5分、10のビス-トリスゲルおよびMOPS緩衝液Novex、InVitrogenを用いたポリアクリルアミドゲル電気泳動PAGEによって分離し、次いで、供給者iBlot,InVitrogenのプロトコールに従ってニトロセルロース膜に転写した。膜を0.1のTween20PBS-T、Sigmaおよび5の粉乳を含有するPBS中でブロックした。一次抗体および二次抗体についてのインキュベーション時間は、それぞれ4°Cで16時間および室温で1時間であった。抗体をPBS-Tおよび5の粉乳中に希釈した[ヒトIgG1:1000、DSG21:500、Ad3-K血清1:2000、p-E-カドヘリン1:2000、E-カドヘリン1:1000、クローディン71:500、ビメンチン1:2000、ホスホ-p44/42MAPKErk1/21:2000、Erk1/21:2000]。抗体をインキュベートしている間に膜をPBS-T中で5回洗浄し、ECLプラスAmershamまたはOdysseyシステムLI-CORBioSciencesを用いて薄膜を展開した。DSG2mRNAPCR:乳がんにおけるDSG2の発現レベルを評価するために、1μgの全RNAについて、QuantitectReverseTranscriptionKitQiagenを使用して逆転写を実施した。ハウスキーピング遺伝子であるGAPDHの発現を参照として使用した。7900HTFastReal-TimePCRSystemAppliedBiosystems/LifeTechnologiesにおいてSensiMixSYBRKitQuantaceを使用して定量的PCRqPCRを3連で実行した。以下のプライマーを使用した:qPCRを以下の条件下で実施した:最初の95°Cで10分の酵素活性化ステップの後、それぞれ95°Cで15秒および60°Cで1分間からなる増幅サイクルを40サイクル行った。最後に、最終的な伸長ステップを60°Cで2分実施した。浸透性アッセイ。合計5×105個のT84細胞を12mmのtranswellインサート[PET膜Corning、NY、孔サイズ0.4μm]に播種し、経上皮抵抗性が安定するまで14~20日間培養した。2~3日ごとに培地を交換した。細胞を、接着培地DMEM、1のFBS、2mMのMgCl2、20mMのHEPES中でDSG2リガンド20μg/mlに室温で15分間にわたって曝露させた。その後、DMEM/F12培地で希釈した1mCiの[14C]ポリエチレングリコール-4000PEG-4000PerkinElmer、CovinaCAを内部チャンバーに加えた。15分の時点および30分の時点で内部チャンバーおよび外側のチャンバーから培地の一定分量を採取し、シンチレーション計数器によって測定した。浸透性を他で記載されている通り算出したYangら、2004年。トラスツズマブおよびセツキシマブ細胞毒性アッセイ。BT474細胞またはA549細胞を、3連で、96ウェルプレートにウェル当たり細胞5×104個の密度で播き、集密になるまで成長させた。JO-1500ng/mlを培地に加えた。12時間後に、トラスツズマブまたはセツキシマブ15μg/mlを加え、その2時間後にWST-1アッセイRoche、SanFrancisco、CAによって細胞の生存率を測定した。3回の独立した試験を実施した。電子顕微鏡法。transwellチャンバー内の極性細胞を、半強度カルノフスキー固定液2のパラホルムアルデヒド、2.5のグルタルアルデヒド、および0.2Mのカコジル酸緩衝液を用いて、室温で1時間にわたって固定した。内部チャンバー内の固定液は、0.2のルテニウムレッドを含有した。ルテニウムレッド[塩化ルテニウムIII酸化物、アンモニア処理した]は、AlfaAesarWardHill、MAから購入した。1のOsO4-リン酸緩衝液を用いて後固定を行った。transwellチャンバーから膜を切り取り、MedcastTedPella、Redding、CAに包埋した。超薄切片を酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛で染色した。加工した格子をJEOLJEM1200EXII透過形電子顕微鏡を用いて評価した。OlympusSISMoradaデジタルCCDカメラを用いて画像を獲得し、画像を加工するためにiTEMソフトウェアを使用した。動物試験:動物を必要とする全ての実験は、UniversityofWashingtonにより定められた施設のガイドラインに従って行った。マウスを特定の病原体を含まない施設内に収容した。がん細胞4×106個をCB17SCID-ベージュマウスの乳房の脂肪パッドに注射することによって乳がん異種移植片を確立した。トラスツズマブを10mg/kgの用量で腹腔内に注射したi.p.。PtDdまたはJO-1を2mg/kgの用量で静脈内に与えたi.v.。腫瘍体積を以前に記載されている通り測定したTuveら、2007年。腫瘍体積が1,000mm3に到達するか、または潰瘍化したらマウスを屠殺した。4×106個のA549をCB17SCIDベージュマウスの右側腹部に皮下注射s.c.することによって肺がん異種移植片を確立した。12日目にJO-1をi.v.注射した10時間後にセツキシマブを10mg/kgi.p.で注射し、これを3日後に繰り返した。播種性肺の腫瘍モデルについては、8週齢の雄のCB17SCID-ベージュマウスに、1日目にA549細胞2×106個を静脈内注射した。JO-12mg/kgi.vおよびセツキシマブ10mg/kgi.p.を用いた処置を10日目に開始し、3日ごとに繰り返した。動物を、体重減少および呼吸困難の徴候についてモニターした。非処置群の最初のマウスが瀕死の状態になったら動物を屠殺した。墨汁PBS中15を気管内に注射した後、肺を取り出した。正常な組織が黒いのに対して転移は非染色白色として現れた。抗JO-1抗体を産生させるために、他で記載されている通りマウスにフロイントアジュバントと混合したJO-1を皮下注射したLiら、2009年。HSCベースのレラキシンの発現:プロトコールは、他で記載されているBeyerら、2011年。簡単に述べると、移植レシピエントは、6~10週齢の雌のCB17SCID-ベージュマウスであり、レンチウイルスベクターで形質導入された、5-FU-処置したマウス由来の骨髄細胞6×105個を尾静脈注射する直前に350cGyを用いて亜致死的に放射線を照射した。細胞がレシピエントの骨髄に生着したことを確認した後、合計4×106個のHCC1954を乳房の脂肪パッドに注射した。ドキシサイクリンDoxの制御下で、レラキシンを発現しているレンチウイルスベクターについては、以前に記載されているBeyerら、2011年。中和性抗体アッセイ:患者に化学療法を行う前にがん患者由来の血清試料を取得した。簡単に述べると、293細胞を、96ウェルプレートにウェル当たり細胞4×104個で播種し、37°Cでインキュベートした。次の日に、血清試料を56°Cで30分間にわたって熱失活させ、2のFCSを含有するMEM中に1:2から1:1,204まで段階的に希釈した。10μlのMEM中の野生型Ad5または野生型Ad11の細胞当たり合計20のプラーク形成単位PFUを各血清希釈液100μlと一緒に37°Cで1時間インキュベートした。前日に播いた細胞から培地を除去し、ウイルスを含有する血清55μlを293増殖培地45μlと一緒に細胞に加えた。感染後3日目および6日目に、さらに100μlの293増殖培地を細胞に加えた。感染後8日目に、細胞を、細胞変性の効果CPEの存在について分析し、1:2以上の希釈度においてCPEが見られなかった場合、血清試料を中和性抗体の存在について正にスコア化した。統計分析:結果は全て、平均/-SDとして表されている。多数の試験に対して、適用可能な場合ステューデントのt検定または二元配置ANOVAを適用した。p値<0.05を有意とみなした。実施例3の参考文献"