"1週間に約1回またはそれより長い投与間隔で、少なくとも約25IU/kgの用量の、第IX因子およびFcRn結合パートナーFcRnBPを含むキメラポリペプチドをヒト対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象への第IX因子の投与方法。1週間に約1回またはそれより長い投与間隔で、少なくとも約10または少なくとも約20IU/kgの用量の、第IX因子およびFcRn結合パートナーFcRnBPを含むキメラポリペプチドをヒト対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象への第IX因子の投与方法。1週間に約1回またはそれより長い投与間隔で、少なくとも約10IU/kgの用量の、第IX因子およびXTENを含むキメラポリペプチドをヒト対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象への第IX因子の投与方法。前記キメラポリペプチドの血漿レベルが、少なくとも約80の患者集団において、少なくとも約6日後、少なくとも約1IU/dLのトラフに達するか、または前記対象において、少なくとも約6日後、少なくとも約1IU/dLのトラフに達する、請求項1~3のいずれかに記載の方法。前記キメラポリペプチドの血漿レベルが、患者集団において、約1~5IU/dLの平均トラフに達するか、または前記対象において、約1~5IU/dLのトラフに達する、請求項1~3のいずれかに記載の方法。前記用量中25未満の前記第IX因子のキメラポリペプチドが完全にリン酸化され、前記用量中25未満の前記第IX因子のキメラポリペプチドが完全に硫酸化される、請求項1~5のいずれかに記載の方法。前記用量中約10未満の前記キメラポリペプチドが、リン酸化され、前記用量中約9未満の前記キメラポリペプチドが硫酸化される、請求項6に記載の方法。前記用量が、1IU/kg当たり0.75IU/dLを超える平均増分回収率K値活性;観察値を有する、請求項1~7のいずれかに記載の方法。前記用量が、1IU/kg当たり少なくとも約0.8、少なくとも約0.9、または少なくとも約1IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値を有する、請求項8に記載の方法。前記キメラポリペプチドが、前記患者集団または前記対象において、前記患者集団において、約3.36±0.93mL/時間/kgの平均クリアランスCL活性、前記患者集団において、約3.0~3.72、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、または3.72mL/時間/kgの平均クリアランスCL活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドのクリアランスよりも約2.5倍低い平均クリアランスCL活性、前記対象において、約1.84~4.58mL/時間/kgのクリアランスCL活性、前記患者集団において、少なくとも約68.05±11.16時間の平均平均滞留時間MRT活性、前記患者集団において、約60~78、60、62、64、66、68、70、72、74、76、または78時間の平均MRT活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均MRTよりも約3倍長い平均MRT活性、前記対象において、約53.1~85.8時間の平均滞留時間MRT活性、前記対象において、少なくとも約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、または約90時間の平均滞留時間MRT活性、前記患者集団において、約52.5±9.2時間の平均t1/2β活性、前記患者集団において、約47~60時間、約47、約48、約49、約50、約51、約52、約53、約54、約55、約56、約57、約58、約59、約60時間の平均t1/2β活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均t1/2βよりも約3倍長い平均t1/2β活性、前記対象において、約40~67.4、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、または約75時間のt1/2β活性、前記患者集団において、1IU/kg当たり約0.93±0.18IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、1IU/kg当たり約0.85~1.15、約0.85、約0.86、約0.87、約0.88、約0.89、約0.90、約0.91、約0.92、約0.93、約0.94、約0.95、約0.96、約0.97、約0.98、約0.99、約1.0、約1.05、約1.10、または約1.15IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、前記FcRNBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均増分回収率よりも約24良好である平均増分回収率K値活性;観察値、前記対象において、1IU/kg当たり約0.62~1.17IU/dLの増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、約226±67.76mL/kgの平均Vss活性、前記患者集団において、約200~300、約200、約210、約220、約230、約240、約250、約260、約270、約280、約290、または約300mL/kgの平均Vss活性、前記対象において、約145~365mL/kgのVss活性、前記患者集団において、1IU/kg当たり約32.44±10.75IU時間/dLの平均AUC/用量活性、前記患者集団において、1IU/kg当たり約26~40、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、または約40IU時間/dLの平均AUC/用量活性、および前記対象において、1IU/kg当たり約21.80~54.30IU時間/dLのAUC/用量、からなる群から選択される、1つ以上の薬物動態パラメーターを示す、請求項1~7のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、6~10日である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が、約25~110、約30~110、約40~110、約50~110、約60~110、約70~110、約80~110、約90~110、および約100~110IU/kgからなる群から選択される、請求項11に記載の方法。前記用量が、約30~100、約30~90、約30~80、約30~70、約30~60、約30~50、および約30~40IU/kgからなる群から選択される、請求項11に記載の方法。前記用量が、約40~110、約50~100、約60~90、および約70~80IU/kgからなる群から選択される、請求項11に記載の方法。前記用量が、約40~50、約50~60、約60~70、約70~80、約80~90、約90~100、および約100~110IU/kgからなる群から選択される、請求項11に記載の方法。前記用量が、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、および約110IU/kgからなる群から選択される、請求項11に記載の方法。前記投与間隔が、約7~10、約7~9、および約7~8日からなる群から選択される、請求項11~16のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、約8~10および約9~10日からなる群から選択される、請求項11~16のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、約6~7および約8~9日からなる群から選択される、請求項11~16のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、約6、約7、約8、約9、および約10日からなる群から選択される、請求項11~16のいずれかに記載の方法。前記用量が、約30~50IU/kgであり、前記投与間隔が、約7日である、請求項11に記載の方法。前記患者集団の少なくとも約90で前記トラフに達する、請求項4~21のいずれかに記載の方法。前記患者集団の約100で前記トラフに達する、請求項22に記載の方法。前記用量が、約50IU/kgであり、前記投与間隔が、約7日である、請求項1~11、22、および23のいずれかに記載の方法。前記用量が、約50IU/kgであり、前記投与間隔が、約7日であり、かつ、前記患者集団の約100で前記トラフに達する、請求項4~11のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、9~18日である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が、約90~180、約100~180、約110~180、約120~180、約130~180、約140~180、約150~180、約160~180、および約170~180IU/kgからなる群から選択される、請求項26に記載の方法。前記用量が、約90~170、約90~160、約90~150、約90~140、約90~130、約90~120、約90~110、および約90~100IU/kgからなる群から選択される、請求項26に記載の方法。前記用量が、約100~170、約110~160、約120~150、および約130~140IU/kgからなる群から選択される、請求項26に記載の方法。前記用量が、約90~100、約100~110、約110~120、約120~130、約130~140、約140~150、約150~160、および約160~170IU/kgからなる群から選択される、請求項26に記載の方法。前記用量が、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160、約165、約170、約175、および約180IU/kgからなる群から選択される、請求項26に記載の方法。前記投与間隔が、約9~17、約9~16、約9~15、約9~14、約9~13、約9~12、約9~11、および約9~10日からなる群から選択される、請求項26~31のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、約10~18、約11~18、約12~18、約13~18、約14~18、約15~18、約16~18、および約17~18日からなる群から選択される、請求項26~31のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、約10~11、約11~12、約12~13、約13~14、約14~15、約15~16、および約16~17日からなる群から選択される、請求項26~31のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、および約18日からなる群から選択される、請求項26~31のいずれかに記載の方法。前記用量が、約100IU/kgであり、前記投与間隔が、少なくとも約12日である、請求項26に記載の方法。前記トラフが、前記患者集団の少なくとも約70、約80、または約90で少なくとも約1IU/dLである、請求項36に記載の方法。前記投与間隔が、約12~13日である、請求項26に記載の方法。前記用量が、約100IU/kgであり、前記投与間隔が、少なくとも約9日である、請求項26に記載の方法。前記トラフが、前記患者集団の約100で少なくとも約1IU/dLである、請求項39に記載の方法。前記投与間隔が、約9~15日である、請求項26または39に記載の方法。前記用量が、約150IU/kgであり、前記投与間隔が、少なくとも約14日である、請求項26に記載の方法。前記トラフが、前記患者集団の約100で少なくとも約1IU/dLである、請求項42に記載の方法。前記対象が、出血または出血症状の制御または予防を必要とする、請求項1~43のいずれかに記載の方法。前記対象が、軽度の出血、関節血症、筋肉表面の出血、軟組織出血、中等度の出血、切開による筋肉内もしくは軟組織出血、粘膜出血、血尿、重篤な出血、咽頭出血、咽頭後部の出血、腹腔後部の出血、中枢神経系の出血、打撲、切り傷、こすり傷、関節出血、鼻血、口の出血、歯茎の出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、軽度の特発性出血、大外傷後の出血、中等度の皮膚打撲、または関節、筋肉、内臓器官、もしくは脳の特発性出血の制御または予防を必要とする、請求項44に記載の方法。前記対象が、周術期管理を必要とする、請求項1~43のいずれかに記載の方法。前記対象が、外科手術または抜歯と関連する出血の管理を必要とする、請求項46に記載の方法。前記対象が、大外科手術を行う、行っている、または行ったことがある、請求項46に記載の方法。前記大外科手術が、整形外科手術、大規模な口腔外科手術、泌尿器外科手術、またはヘルニア外科手術である、請求項48に記載の方法。前記整形外科手術が、膝、臀部、または他の大関節の置換術である、請求項49に記載の方法。前記対象が、予防的治療を必要とする、請求項1~43のいずれかに記載の方法。前記対象が、オンデマンド治療を必要とする、請求項1~43のいずれかに記載の方法。前記対象が、出血症状の治療を必要とする、請求項52に記載の方法。前記対象が、関節血症、筋肉出血、口の出血、出血、筋肉への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷traumacapitis、胃腸出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系の出血、咽頭後隙の出血、後腹膜腔内出血、または腸腰筋鞘illiopsoassheath内の出血のための治療を必要とする、請求項53に記載の方法。前記対象が、外科的予防、周術期の管理、または外科手術のための治療を必要とする、請求項51に記載の方法。前記外科手術が、簡単な外科手術、大外科手術、抜歯、扁桃摘出術、鼠径ヘルニア切除術、滑膜切除術、人工膝関節置換術、開頭術、骨接合術、外傷外科手術、頭蓋内外科手術、腹腔内外科手術、胸腔内外科手術、または人工関節置換術である、請求項53に記載の方法。前記対象が、ヒトである、請求項1~56のいずれかに記載の方法。前記キメラポリペプチドにおいて前記第IX因子が、ヒト第IX因子である、請求項1~57のいずれかに記載の方法。前記キメラポリペプチドにおいて前記第IX因子が、変異体第IX因子である、請求項1~58のいずれかに記載の方法。前記キメラポリペプチドにおいて前記FcRnBPが、ヒトFcである、請求項1~59のいずれかに記載の方法。キメラポリペプチドにおいて前記FcRnBPが、変異体Fcである、請求項1~60のいずれかに記載の方法。前記第IX因子が、シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される第IX因子アミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~415と少なくとも90または95同一である、請求項58に記載の方法。前記第IX因子が、シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される第IX因子アミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~415と同一である、請求項62に記載の方法。前記Fcが、シグナル配列を含まない表2Bに示されるFcアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と少なくとも90または95同一である、請求項60に記載の方法。前記Fcが、シグナル配列を含まない表2Bに示されるFcアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と同一である、請求項64に記載の方法。前記キメラポリペプチドが、前記キメラポリペプチドと会合する第2ポリペプチドを含むハイブリッドの形であり、前記第2ポリペプチドが、FcRnBPを含む、請求項1~65のいずれかに記載の方法。前記キメラポリペプチドが、シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される前記第IX因子およびFcアミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~642と少なくとも90または95同一である配列を含む、請求項66に記載の方法。前記キメラポリペプチドが、シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される前記第IX因子およびFcアミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~642と同一である配列を含む、請求項67に記載の方法。前記第2ポリペプチドが、シグナル配列を含まない表2Bに示されるアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と少なくとも90または95同一である配列を含む、請求項66~68のいずれかに記載の方法。前記第2ポリペプチドが、シグナル配列を含まない表2Bに示されるアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と同一である配列を含む、請求項69に記載の方法。前記患者が、1週間に1回またはそれ以上長い投与間隔で、長期治療を必要とする、請求項1~70のいずれかに記載の方法。前記キメラポリペプチドが、少なくとも1つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与される、請求項1~71のいずれかに記載の方法。シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される第IX因子アミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~415と少なくとも90または95同一である第IX因子、およびFcRnBPを含む、ポリペプチド。前記第IX因子が、シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される第IX因子アミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~415と同一である、請求項73に記載のポリペプチド。シグナル配列およびプロペプチドおよびプロペプチドを含む表2Aに示される第IX因子アミノ酸配列配列番号2のアミノ酸-46~415と少なくとも90および95同一である第IX因子、およびFcRnBPを含む、ポリペプチド。前記第IX因子が、シグナル配列およびプロペプチドを含む表2Aに示される第IX因子アミノ酸配列配列番号2のアミノ酸-46~415と同一である、請求項75に記載のポリペプチド。前記FcRnBPが、表2Bに示される前記Fcアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と少なくとも90または95同一である、請求項73~65のいずれかに記載のポリペプチド。前記Fcが、表2Bに示される前記Fcアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と同一である、請求項77に記載のポリペプチド。シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される前記第IX因子およびFcアミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~642と少なくとも90または95同一である配列を含む、請求項73または75に記載のポリペプチド。シグナル配列およびプロペプチドを含まない表2Aに示される前記第IX因子およびFcアミノ酸配列配列番号2のアミノ酸1~642と同一である配列を含む、請求項79に記載のポリペプチド。第2ポリペプチドを含むハイブリッドの形であり、前記第2ポリペプチドがFcRnBPを含む、請求項73~80のいずれかに記載のポリペプチド。前記第2ポリペプチドが、シグナル配列を含まない表2Bに示されるアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と少なくとも90または95同一である配列、またはシグナル配列を含む表2Bに示されるアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸-20~227と少なくとも90または95同一である配列を含む、請求項81に記載のポリペプチド。前記第2ポリペプチドが、シグナル配列を含まない表2Bに示されるアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸1~227と同一である配列、またはシグナル配列を含む表2Bに示されるアミノ酸配列配列番号4のアミノ酸-20~227と少なくとも90または95同一である配列を含む、請求項81に記載のポリペプチド。血漿由来第IX因子と比較して、大幅に減少したリン酸化および硫酸化を有する、請求項73~83のいずれかに記載のポリペプチド。約10未満リン酸化され、かつ約9未満硫酸化される、請求項84に記載のポリペプチド。0.7または0.75を超えるK値を有する、請求項73~85のいずれかに記載のポリペプチド。少なくとも約0.8、少なくとも約0.9、または少なくとも約1のK値を有する、請求項86に記載のポリペプチド。前記患者集団または前記対象において、前記患者集団において、約3.36±0.93mL/時間/kgの平均クリアランスCL活性、前記患者集団において、約3.0~3.72、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、または3.72mL/時間/kgの平均クリアランスCL活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドのクリアランスよりも約2.5倍低い平均クリアランスCL活性、前記対象において、約1.84~4.58mL/時間/kgのクリアランスCL活性、前記患者集団において、少なくとも約68.05±11.16時間の平均平均滞留時間MRT活性、前記患者集団において、約60~78、60、62、64、66、68、70、72、74、76、または78時間の平均MRT活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均MRTよりも約3倍長い平均MRT活性、前記対象において、約53.1~85.8時間の平均滞留時間MRT活性、前記対象において、少なくとも約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、または約90時間の平均滞留時間MRT活性、前記患者集団において、約52.5±9.2時間の平均t1/2β活性、前記患者集団において、約47~60時間、約47、約48、約49、約50、約51、約52、約53、約54、約55、約56、約57、約58、約59、約60時間の平均t1/2β活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均t1/2βよりも約3倍長い平均t1/2β活性、前記対象において、約40~67.4、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、または約75時間のt1/2β活性、前記患者集団において、1IU/kg当たり約0.93±0.18IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、1IU/kg当たり約0.85~1.15、約0.85、約0.86、約0.87、約0.88、約0.89、約0.90、約0.91、約0.92、約0.93、約0.94、約0.95、約0.96、約0.97、約0.98、約0.99、約1.0、約1.05、約1.10、または約1.15IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、前記FcRNBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均増分回収率よりも約24良好である平均増分回収率K値活性;観察値、前記対象において、1IU/kg当たり約0.62~1.17IU/dLの増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、約226±67.76mL/kgの平均Vss活性、前記患者集団において、約200~300、約200、約210、約220、約230、約240、約250、約260、約270、約280、約290、または約300mL/kgの平均Vss活性、前記対象において、約145~365mL/kgのVss活性、前記患者集団において、1IU/kg当たり約32.44±10.75IU時間/dLの平均AUC/用量活性、前記患者集団において、1IU/kg当たり約26~40、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、または約40IU時間/dLの平均AUC/用量活性、および前記対象において、1IU/kg当たり約21.80~54.30IU時間/dLのAUC/用量、からなる群から選択される、1つ以上の薬物動態パラメーターを示す、請求項73~87のいずれかに記載のポリペプチド。請求項73~80のいずれかに記載のポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。請求項81~88のいずれか1項に記載の、前記第IX因子-FcRnBPポリペプチドおよび前記第2ペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。ベクター、プラスミド、ファージ、またはウイルスである、請求項89または90に記載のポリヌクレオチド。DNAまたはRNAである、請求項89~91のいずれかに記載のポリヌクレオチド。請求項89~92のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含む、ヒト胚性培養細胞。HEK293細胞である、請求項93に記載の細胞。第IX因子-FcRnBPハイブリッドタンパク質の産生方法であって、前記コード化第IX因子FcRnBPキメラポリペプチドおよびFcRnBPから本質的になる前記コード化ポリペプチドの発現を可能にする条件下で、請求項93または94に記載の細胞を培養することと、前記コード第IX因子-FcRnBPハイブリッドタンパク質を回収することを含む方法。請求項95に記載の方法によって産生される、ハイブリッドタンパク質。血漿由来第IX因子と比較して、大幅に減少したリン酸化および硫酸化を有する、請求項96に記載のハイブリッドタンパク質。約10未満リン酸化され、かつ約9未満硫酸化される、請求項97に記載のハイブリッドタンパク質。0.7または0.75を超えるK値を有する、請求項96~98のいずれかに記載のハイブリッドタンパク質。少なくとも約8、約9、または約1のK値を有する、請求項99に記載のハイブリッドタンパク質。前記キメラポリペプチドが、ハイブリッドの形であり、前記ハイブリッドが、前記キメラポリペプチドの一本鎖および前記第2ポリペプチドの一本鎖から本質的になり、前記鎖が、a非共有相互作用、b2つのジスルフィド結合、またはcaおよびbの両方を介して会合する、請求項66~72のいずれかに記載の方法。前記キメラポリペプチドが、ハイブリッドの形であり、前記ハイブリッドが、前記キメラポリペプチドの一本鎖および前記第2ポリペプチドの一本鎖から本質的になり、前記鎖が、a非共有相互作用、b2つのジスルフィド結合、またはcaおよびbの両方を介して会合する、請求項81~88および96~100のいずれかに記載のポリペプチド。ヒトにおいて、1IU/kg当たり0.75IU/dLを超える増分回収率K値を有し、調製時、25未満のrFIXが、完全にリン酸化され、硫酸化される、組換え型第IX因子rFIX調製物。1IU/kg当たり少なくとも約0.8、少なくとも約0.9、または少なくとも約1IU/dLの増分回収率K値を有する、請求項103に記載のrFIX調製物。前記rFIXが、FcRnBPを含む、請求項103に記載のrFIX調製物。FcのFcRn結合領域を含む、請求項105に記載のrFIX調製物。アルブミンのFcRn結合領域を含む、請求項105に記載のrFIX調製物。前記用量が10~50、10~30、20~50、20~100、10、または20IU/kgであり、前記投与間隔が1週間に1回である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が15~50または40IU/kgであり、前記投与間隔が10日ごとである、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が100IU/kgであり、前記投与間隔が2週間ごと、または1ヶ月に2回である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記投与間隔が1週間に1回である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が15~100IU/kgであり、前記投与間隔が10~13日である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が50~100IU/kgであり、前記投与間隔が10~14日であり、前記用量が50~150IU/kgであり、前記投与間隔が14~15日であるか、または前記用量が100~150IU/kgであり、前記投与間隔が14~16日である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が15~50IU/kgであり、前記投与間隔が10日であり、前記用量が20~70IU/kgであり、前記投与間隔が11日であり、前記用量が25~85IU/kgであり、投与間隔が12日であり、前記用量が30~100IU/kgであり、前記投与間隔が13日であり、前記用量が40~125IU/kgであり、前記投与間隔が14日であるか、または前記用量が50~150IU/kgであり、前記投与間隔が15日である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。1週間に1回の予防的投与間隔からなる、請求項1~10のいずれかに記載の方法。10~14日の予防的投与間隔からなる、請求項1~10のいずれかに記載の方法。15~18日または16~18日の予防的投与間隔からなる、請求項1~10のいずれかに記載の方法。1ヶ月に2回の予防的投与間隔からなる、請求項1~10のいずれかに記載の方法。1ヶ月に1回の予防的投与間隔からなる、請求項1~10のいずれかに記載の方法。一定のまたは個人に合わせた予防的用量および/または投与間隔である、請求項1~10のいずれかに記載の方法。前記用量が、静脈内投与されるか、または皮下投与される、請求項1~10のいずれかに記載の方法。死亡率の低下、関節損傷の予防、生活の質の改善は、血漿由来および組換え型第IX因子の開発による重要な成果である。出血からの長期保護は、B型血友病患者の治療において、別の重要な進歩を示す。しかしながら、今まで、長期保護を可能にする製品が開発されていない。したがって、現在の治療法よりもさらに耐性があり、かつさらに有効である、第IX因子欠損症に起因する血友病を治療する改善された方法が必要である。本発明は、第IX因子を含むキメラポリペプチドおよびそのようなキメラポリペプチドのハイブリッドを用いた第IX因子の投与方法、第IX因子を含むキメラポリペプチドおよびそのようなキメラポリペプチドのハイブリッド、そのようなキメラおよびハイブリッドポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドを含む細胞、ならびにそのような細胞を用いたそのようなキメラおよびハイブリッドポリペプチドの産生方法を提供する。幾つかの実施形態において、第IX因子キメラポリペプチドは、第IX因子Fcキメラポリペプチド等の第IX因子FcRn結合パートナーBPキメラポリペプチドである。他の実施形態において、第IX因子キメラポリペプチドは、第IX因子-XTENポリペプチドである。本発明は、少なくとも約10、少なくとも約20、または少なくとも約25IU/kgの用量の第IX因子FcRnBPキメラポリペプチド、例えば第IX因子-Fcキメラポリペプチドまたは第IX因子-XTENキメラポリペプチドを、1週間に約1回またはそれ以上長い投与間隔で、対象に投与することを含む、それを必要とする対象への第IX因子の投与方法を提供する。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドの血漿レベルが、患者集団の少なくとも約70、少なくとも約80、少なくとも約90、または約100において、少なくとも約6日後、少なくとも約1IU/dLの平均トラフに達するか、または対象において、少なくとも約6日後、少なくとも約1、2、3、4、または5IU/dLのトラフに達する。幾つかの実施形態において、前記キメラポリペプチドの血漿レベルが、約1~5または1~3IU/dLの平均トラフに達する。そのようなトラフまたは平均トラフに、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、または約40日後、達し得る。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、血漿由来第IX因子と比較して、大幅に減少したリン酸化および硫酸化を有する。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、25未満リン酸化され、かつ25未満硫酸化される、例えば25未満完全にリン酸化され、かつ硫酸化される。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、約10未満リン酸化され、かつ約9未満硫酸化される。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、実施例5~6における第IX因子Fcキメラポリペプチドのものと同様即ち、10以内または同一である、γカルボキシル化型/分布、γカルボキシル化の含有量、シアル化型/分布、および/またはシアル化の含有量を有する。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、0.7を超える、または0.75ug/mLを超える増分回収率抗原を有する。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、1IU/kg当たり少なくとも約0.8、少なくとも約0.9、または少なくとも約1IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値を有する。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、前記患者集団または前記対象において、a前記患者集団において、約3.36±0.93mL/時間/kgの平均クリアランスCL活性、前記患者集団において、約3.0~3.72、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、または3.72mL/時間/kgの平均クリアランスCL活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドのクリアランスよりも約2.5倍低い平均クリアランスCL活性、前記対象において、約1.84~4.58mL/時間/kgのクリアランスCL活性、b前記患者集団において、少なくとも約68.05±11.16時間の平均平均滞留時間MRT活性、前記患者集団において、約60~78、60、62、64、66、68、70、72、74、76、または78時間の平均MRT活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均MRTよりも約3倍長い平均MRT活性、前記対象において、約53.1~85.8時間の平均滞留時間MRT活性、前記対象において、少なくとも約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、または約90時間の平均滞留時間MRT活性、c前記患者集団において、約52.5±9.2時間の平均t1/2β活性、前記患者集団において、約47~60時間、約47、約48、約49、約50、約51、約52、約53、約54、約55、約56、約57、約58、約59、約60時間の平均t1/2β活性、前記患者集団において、前記FcRnBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均t1/2βよりも約3倍長い平均t1/2β活性、前記対象において、約40~67.4、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、または約75時間のt1/2β活性、d前記患者集団において、1IU/kg当たり約0.93±0.18IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、1IU/kg当たり約0.85~1.0、約0.85、約0.86、約0.87、約0.88、約0.89、約0.90、約0.91、約0.92、約0.93、約0.94、約0.95、約0.96、約0.97、約0.98、約0.99、約1.0、約1.05、約1.10、または約1.15IU/dLの平均増分回収率K値活性;観察値、前記患者集団において、前記FcRNBPを含まずに前記第IX因子を含むポリペプチドの平均増分回収率よりも約24良好である平均増分回収率K値活性;観察値、前記対象において、1IU/kg当たり約0.62~1.17IU/dLの増分回収率K値活性;観察値、e前記患者集団において、約226±67.7669.8に修正mL/kgの平均Vss活性、前記患者集団において、約200~300、約200、約210、約220、約230、約240、約250、約260、約270、約280、約290、または約300mL/kgの平均Vss活性、前記対象において、約145~365mL/kgのVss活性、f前記患者集団において、1IU/kg当たり約32.44±10.75IU時間/dLの平均AUC/用量活性、前記患者集団において、1IU/kg当たり約26~40、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、または約40IU時間/dLの平均AUC/用量活性、前記対象において、1IU/kg当たり約21.80~54.30IU時間/dLのAUC/用量、からなる群から選択される、1つ以上の薬物動態パラメーターを示す。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドの用量は、MONONINE商標pdFIX;CSLBehringまたはBENEFIX商標Wyeth;rFIX0.1等の現在市販されている第IX因子製品よりも、著しく低い10~100倍レベル0.01~0.001の活性化されたFIXFIXaを含有する。そのようなレベルは、現在市販されている製品よりも、10、20、30、40、50、60、70、80、90、または100倍低くても、0.01、0.05、0.0033、0.0025、0.002、0.00167、0.00142、0.00125、0.00111、または0.001であってもよい。幾つかの実施形態において、投与間隔は、6~18日、6~10日、9~18日、少なくとも6日、少なくとも7日、少なくとも8日、少なくとも9日、少なくとも10日、少なくとも11日、少なくとも12日、少なくとも13日、少なくとも14日、少なくとも15日、少なくとも16日、少なくとも17日、または少なくとも18日、1週間に1回、1ヶ月に2回、または1ヶ月に1回である。投与間隔は、予防的投与間隔、一定の予防的投与間隔、または個人に合わせた予防的投与間隔であってもよい。本発明の方法は、出血または出血症状の制御もしくは予防を必要とする、断続的治療を必要とする、予防的治療を必要とする、またはオンデマンド治療を必要とする対象に実行される。本発明の方法で使用してもよい治療用量は、約25~180、約20~180、約20~50、約20~100、約10~180、約10~50、約10~30、または約50~100IU/kgである。該用量は、一定の用量であっても、個人に合わせた用量であってもよい。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドは、静脈内投与されるか、または皮下投与される。本発明の方法において、対象は、ヒト対象であっても、または非ヒト哺乳動物であってもよい。非ヒト哺乳動物には、マウス、イヌ、霊長類、サル、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ならびに他の家畜および小動物が含まれる。キメラポリペプチドは、前記キメラポリペプチドと関連する第2ポリペプチドを含むハイブリッドの形であってもよく、前記第2ポリペプチドは、FcRnBP、例えばFcを含むか、またはそれから本質的になる。キメラポリペプチドは、シグナル配列およびプロペプチドを含む、または、含まない、表2A配列番号2および/または2B配列番号4の第IX因子配列、Fc配列、あるいは第IX因子とFc配列の両方の配列と少なくとも90、少なくとも95、または100同一であってよい。キメラポリペプチドまたはハイブリッドは、少なくとも1つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与されてもよい。本発明はまた、上記のキメラおよびハイブリッドポリペプチドそれ自体、それらをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含む培養されたヒト胚細胞、そのようなキメラおよびハイブリッドポリペプチドの産生方法、およびそのような方法によって産生されたポリペプチドも提供する。本発明は、より長い投与間隔および/または現在知られている第IX因子製品を用いて可能であるよりも改善された薬物動態パラメーターを用いる、第IX因子欠損症、例えばB型血友病の第IX因子による治療方法を提供する。本発明はまた、改善された第IX因子キメラポリペプチド、第IX因子キメラポリヌクレオチド、および産生方法も提供する。本明細書で使用される投与とは、薬剤的に許容される経路によって、薬剤的に許容される本発明の第IX因子ポリペプチドを対象に投与することを意味する。投与の好ましい経路は、静脈内であり、例えば中心静脈アクセスによる、例えば静脈内注射および静脈内注入である。投与のさらなる経路には、皮下、筋肉内、経口、経鼻、および肺投与が含まれ、好ましくは、皮下投与である。第IX因子キメラポリペプチドおよびハイブリッドタンパク質は、少なくとも1つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与されてもよい。本発明の利点には、改善されたレジメンのコンプライアンス、破断出血の低下、出血からの関節保護の向上、関節損傷の予防、罹患率の低下、死亡率の低下、出血からの長期保護、血栓事象の低下、および改善された生活の質が含まれる。本明細書で使用されるキメラポリペプチドは、その中に、異なる源からの少なくとも2つのポリペプチドまたは例えば部分配列もしくはペプチド等のその一部を含むポリペプチドを意味する。キメラポリペプチドは、異なる遺伝子、異なるcDNA、または異なる動物もしくは他の種等の異なる源からの2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、またはそれ以上のポリペプチドまたはその一部を含んでもよい。キメラポリペプチドは、異なるポリペプチドまたはその一部を連結する1つ以上のリンカーを含んでもよい。したがって、ポリペプチドまたはその一部は、単一のキメラポリペプチド内で直接連結され得るか、またはリンカーを介して、間接的に連結され得るか、あるいはそれらの両方であり得る。キメラポリペプチドは、さらなるペプチド、例えば、シグナル配列、ならびにタンパク質の精製または検出に役立つ6HisおよびFLAG等の配列等を含んでもよい。加えて、キメラポリペプチドは、Nおよび/またはC末端へのアミノ酸またはペプチド付加を有してもよい。本発明の例示的なキメラポリペプチドは、第IX因子FcRnBPキメラポリペプチド、例えば、そのシグナル配列およびプロペプチドを含む、または、含まない、図1、配列番号2表2、および実施例1~4のFIXFc等の第IX因子-Fcキメラポリペプチドである。本発明の別の例示的なキメラポリペプチドとしては、第IX因子-XTENキメラポリペプチドが挙げられるが、これに限定されない。第IX因子は、XTENのN末端またはC末端のいずれかに融合することができる。キメラポリペプチドは、表2Aに示される第IX因子およびFcRnBP、例えば、Fcのアミノ酸配列でシグナル配列およびプロペプチド配列を含まない配列配列番号2のアミノ酸1~642、または代わりに、プロペプチド配列を含む配列、または代わりに、シグナル配列およびプロペプチド配列を含む配列と、少なくとも90または少なくとも95または100同一である配列を含んでよい。本明細書で使用される培養するCulture、培養することtoculture、および培養culturingは、細胞増殖または細胞分割を可能にするインビトロ条件下で、細胞をインキュベートするか、または生存状態で細胞を維持することを意味する。本明細書で使用される培養細胞は、インビトロで増殖する細胞を意味する。本明細書で使用される第IX因子およびFIXは、特に明記されない限り、凝血におけるその通常の役割において、機能的第IX因子ポリペプチドを意味する。したがって、用語第IX因子には、機能的である変異体ポリペプチド、およびそのような機能的変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。好ましい第IX因子ポリペプチドは、ヒト、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、およびネズミ第IX因子ポリペプチドである。第IX因子の全長ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列は、多くの機能的変異体、例えば、フラグメント、突然変異体、および修飾された変形等が知られている。第IX因子ポリペプチドには、全長第IX因子、全長第IX因子からN末端のMetを引いたもの、全長第IX因子からシグナル配列を引いたもの、成熟第IX因子シグナル配列およびプロペプチドを引いたもの、およびN末端でさらにMetを有する成熟第IX因子が含まれる。第IX因子は、好ましくは、組み換え手段によって作製される組換え型第IX因子またはrFIX、即ち、それは、自然発生でも、血漿由来でもない。非常に多くの機能的第IX因子変異体が知られている。国際公開WO第02/040544A3号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、4頁の9~30行、および15頁の6~31行で、ヘパリンによる阻害に対する耐性の増加を示す変異体を開示する。国際公開WO第03/020764A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、表2および314~24頁、および12頁の1~27行で、T細胞免疫原性の低下を有する第IX因子変異体を開示する。国際公開WO第2007/149406A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、4頁の1行~19頁の11行で、タンパク質安定性の増加、インビボおよびインビトロ半減期の増加、およびプロテアーゼに対する耐性の増加を示す、第IX因子の機能的変異体の分子を開示する。国際公開WO第2007/149406A2号はまた、19頁の12行~20頁の9行で、第IX因子のキメラおよび他の変異体分子も開示する。国際公開WO第08/118507A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、5頁の14行~6頁の5行で、凝固活性の増加を示す第IX因子変異体を開示する。国際公開WO第09/051717A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、9頁の11行~20頁の2行で、半減期の増加および/または回復の増加をもたらす、N結合型および/またはO結合型糖鎖付加部位数の増加を有する第IX因子変異体を開示する。国際公開WO第09/137254A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるはまた、2頁の段落[006]~5頁の段落[011]および16頁の段落[044]~24頁の段落[057]で、糖鎖付加部位数の増加を有する第IX因子変異体も開示する。国際公開WO第09/130198A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、4頁の26行~12頁の6行で、半減期の増加をもたらす、糖鎖付加部位数の増加を有する、機能的な第IX因子変異体の分子を開示する。国際公開WO第09/140015A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、11頁の段落[0043]~13頁の段落[0053]で、ポリマー例えばPEGの結合のために使用され得るCys残基の数の増加を有する機能的な第IX因子変異体を開示する。加えて、第IX因子における数百の非機能的変異体が、血友病患者において特定されており、これらの多くは、国際公開WO第09/137254A2号参照によってその全体が本明細書に組み込まれるの11~14頁の表1に開示される。そのような非機能的変異体は、本発明には含まれないが、どの変異が、機能的な第IX因子ポリペプチドをもたらす可能性が高く、または、低いかということについて、さらなるガイダンスを提供する。第IX因子またはキメラポリペプチドの第IX因子部分は、表2Aに示される第IX因子アミノ酸配列でシグナル配列およびプロペプチド配列を含まない配列配列番号2のアミノ酸1~415、または代わりに、プロペプチド配列を含む配列、またはプロペプチドおよびシグナル配列を含む配列全長第IX因子と少なくとも90または少なくとも95または100同一であってもよい。第IX因子の凝固活性は、国際単位IUとして表される。第IX因子活性の1IUは、正常ヒト血漿の1ミリリットル中の第IX因子の量にほぼ相当する。幾つかのアッセイが、第IX因子活性を測定するために利用可能であり、これには、一段階凝固アッセイ活性部分トロンボプラスチン時間;aPTT、トロンビン生成時間TGA、および回転トロンボエラストメトリーROTEM登録商標が含まれる。例えば、実施例3を参照のこと。本明細書で使用されるFcRn結合パートナーまたはFcRnBPは、特に明記されない限り、機能的な新生児Fc受容体FcRn結合パートナーを意味する。FcRn結合パートナーは、FcRn受容体によって特異的に結合され得、その結果、FcRn受容体によって該FcRn結合パートナーが能動輸送される、任意の分子である。したがって、FcRnBPという用語には、機能的であるIgGFcの任意の変異体が含まれる。例えば、FcRn受容体に結合するIgGのFc部分の領域は、X線結晶学に基づいて、記載されているBurmeisteretal.1994,Nature372:379、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。FcRnとFcの主な接触領域は、CH2ドメインおよびCH3ドメインの接合部付近である。Fc-FcRn接点は全て、単一Ig重鎖内である。FcRnBPは、IgG全体、IgGのFc断片、およびFcRnの完全結合領域を含む他の断片を含む。主な接触部位には、CH2ドメインのアミノ酸残基248、250~257、272、285、288、290~291、308~311、および314、ならびにCH3ドメインのアミノ酸残基385~387、428、および433~436が含まれる。免疫グロブリンまたは免疫グロブリン断片、あるいは領域のアミノ酸番号付けに対して行う言及は全て、Kabatetal.1991,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.DepartmentofPublicHealth,Bethesda;MDに基づき、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。FcRn受容体は、ヒトを含む幾つかの哺乳類種から単離されている。ヒトFcRn、ラットFcRn、およびマウスFcRnの配列が知られているStoryetal.1994,J.Exp.Med.180:2377、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。。FcRnBPは、免疫グロブリンのCH2ドメインおよびCH3ドメインを免疫グロブリンのヒンジ領域と共に、または、ヒンジ領域無しで含んでもよい。例示的なFcRnBP変異体は、国際公開WO第2004/101740号およびWO第2006/074199号に提供され、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。FcRnBPはまた、FcRnに結合するアルブミンおよびその断片も含む。好ましくは、アルブミンは、ヒトアルブミンである。第IX因子アルブミン融合タンパク質の第IX因子要素が、酵素的に活性な前駆タンパク質転換酵素によって処理されて、処理された第IX因子含有ポリペプチドを得ることが可能である場合、第IX因子は、アルブミンのN末端またはアルブミンのC末端のいずれかに融合され得る。アルブミンの例、例えば、本発明で使用され得るその断片が、知られている。例えば、米国特許第7,592,010号、米国特許第6,686,179号、およびSchulte,ThrombosisRes.124Suppl.2:S6-S82009であり、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。FcRnBPまたはキメラポリペプチドのFcRnBP部分は、1つ以上の変異、および変異の組み合わせを含有してもよい。FcRnBPまたはキメラポリペプチドのFcRnBP部分は、Oganesyanetal.,Mol.Immunol.46:17502009参照によってその全体が本明細書に組み込まれるに開示される、M252Y、S254T、T256E、およびその組み合わせ、ならびにVaccaroetal.,Nat.Biotechnol.23:12832005参照によってその全体が本明細書に組み込まれるに開示される、H433K、N434F、およびその組み合わせ等の半減期の増加を与える変異、1~2頁の段落[0012]、および米国特許第2009/0264627A1号の実施例9および10参照によってその全体が本明細書に組み込まれるに開示される変異体、ならびに米国特許第20090163699A1号の2頁の段落[0014]~[0021]参照によってその全体が本明細書に組み込まれるに開示される変異体を含んでもよい。FcRnBPまたはキメラポリペプチドのFcRnBP部分はまた、以下の変異体も含んでよい。部位特異的変異形成等のよく認識される手法に従って、IgGのFc領域を修飾して、FcRnによって結合されるであろう修飾IgGまたはFc断片またはその部分を得ることも可能である。そのような修飾には、FcRn接触部位から遠く離れた修飾、ならびにFcRnへの結合を保持するかまたは増進しさえする、接触部位内の修飾が含まれる。例えば、FcRnへのFc結合親和性を著しく損なうことなく、ヒトIgG1FcFcy1中の以下の単一アミノ酸残基を置換することも可能である:P238A、S239A、K246A、K248A、D249A、M252A、T256A、E258A、T260A、D265A、S267A、H268A、E269A、D270A、E272A、L274A、N276A、Y278A、D280A、V282A、E283A、H285A、N286A、T289A、K290A、R292A、E293A、E294A、Q295A、Y296F、N297A、S298A、Y300F、R301A、V303A、V305A、T307A、L309A、Q311A、D312A、N315A、K317A、E318A、K320A、K322A、S324A、K326A、A327Q、P329A、A330Q、A330S、P331A、P331S、E333A、K334A、T335A、S337A、K338A、K340A、Q342A、R344A、E345A、Q347A、R355A、E356A、M358A、T359A、K360A、N361A、Q362A、Y373A、S375AD376A、A378Q、E380A、E382A、S383A、N384A、Q386A、E388A、N389A、N390A、Y391F、K392A、L398A、S400A、D401A、D413A、K414A、R416A、Q418A、Q419A、N421A、V422A、S424A、E430A、N434A、T437A、Q438A、K439A、S440A、S444A、およびK447A。ここで、例えば、P238Aは、位置番号238で野生型プロリンがアラニンによって置換されたことを示す。アラニンに加えて、他のアミノ酸が、上記に明記する位置で野生型アミノ酸を置換することも可能である。Fcに単一変異を導入して、天然Fcと異なる、100を超えるFcRn結合パートナーを生じることも可能である。さらに、これらの個々の変異のうちの2つ、3つ、またはそれ以上からなる組み合わせを、一緒に導入して、さらに数百のFcRn結合パートナーを生じることも可能である。ある種のこれらの変異は、FcRn結合パートナーに新たな機能性を与えることも可能である。例えば、1つの実施形態は、N297Aを取り込み、非常に保存されたN-グリコシル化部位を取り除く。この変異の影響は、免疫原性を減少させて、それによって、FcRn結合パートナーの循環半減期を向上させ、FcRn結合パートナーが、FcRnへの親和性を損なうことなく、FcyRI、FcyRIIA、FcyRIIB、およびFcyRIIIAに結合不能であるようにすることであるRoutledgeetal.1995,Transplantation60:847、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる;Friendetal.1999,Transplantation68:1632、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる;Shieldsetal.1995,J.Biol.Chem.276:6591、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。さらに、少なくとも3つのヒトFcガンマ受容体が、ヒンジ領域下部内にあるIgG上の結合部位、一般には、アミノ酸234~237を認識するようである。したがって、新規機能性および潜在的に減少した免疫原性の別の例は、この領域の変異から生じることも可能であり、例えば、ヒトIgG1のアミノ酸233~236のELLGを、IgG2由来の対応する配列PVAで置換することによって生じることも可能である1つのアミノ酸欠失を伴う。様々なエフェクター機能を仲介するFcyRI、FcyRII、およびFcyRIIIは、そのような転移が導入されるとき、IgG1に結合しないことが示されているWardandGhetie1995,TherapeuticImmunology2:77、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる;およびArmouretal.1999,Eur.J.Immunol.29:2613、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。上記の変異から生じる新たな機能性のさらなる例として、幾つかの場合、FcRnに対する親和性を、野生型のものより増加させることも可能である。この親和性の増加は、オン速度の増加、オフ速度の減少、またはオン速度の増加およびオフ速度の減少の両方を反映する可能性がある。FcRnに対する親和性を増加させると考えられる変異には、T256A、T307A、E380A、およびN434Aが含まれるShieldsetal.2001,J.Biol.Chem.276:6591、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。FcRnBPまたはキメラポリペプチドのFcRnBP部分は、表2AまたはBに示されるFcアミノ酸配列であってシグナル配列を含まない配列配列番号2のアミノ酸1~227、または代わりに、シグナル配列を含む配列と少なくとも90または少なくとも95または100同一であってもよい。本明細書で使用されるハイブリッドポリペプチドおよびタンパク質は、キメラポリペプチドと第2ポリペプチドの組み合わせを意味する。ハイブリッドにおけるキメラポリペプチドおよび第2ポリペプチドは、電荷-電荷または疎水性相互作用等の非共有タンパク質-タンパク質相互作用を介して互いに会合し得る。ハイブリッドにおけるキメラポリペプチドおよび第2ポリペプチドは、ジスルフィド結合等の共有結合を介して互いに会合し得る。キメラポリペプチドおよび第2ポリペプチドは、非共有結合およびジスルフィド結合等の1種類よりも多い結合を介して互いに会合し得る。ハイブリッドは、国際公開WO第2004/101740号、WO第2005/001025号、米国特許第7,404,956号、米国特許第7,348,004号、およびWO第2006/074199号に記載されており、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。第2ポリペプチドは、同一のキメラポリペプチドの2つ目のコピーであっても、同一でないキメラポリペプチドであってもよい。好ましい実施形態において、第2ポリペプチドは、FcRnBP、例えばFcを含むポリペプチドである。好ましい実施形態において、キメラポリペプチドは、第IX因子-FcRnBP、例えば、第IX因子-Fcキメラポリペプチドであり、第2ポリペプチドは、Fcから本質的になる。例えば、図1、実施例1~3、および表2配列番号2および4を参照のこと。例えば、米国特許第7404956号を参照されたく、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。ハイブリッドにおける第2ポリペプチドは、表2Bに示されるアミノ酸配列であってシグナル配列を含まない配列配列番号4のアミノ酸1~227、または代わりに、シグナル配列を含む配列と、少なくとも90または少なくとも95または100同一である配列を含んでも、配列から本質的になってもよい。本発明のポリペプチドはまた、1つ以上のXTENポリペプチドに融合される第IX因子も含む。Schellenburgeretal.,Nat.Biotech.27:1186-902009を参照されたく、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。第IX因子は、XTENポリペプチドのN末端またはXTENポリペプチドのC末端のいずれかに融合され得る。XTENポリペプチドとしては、国際公開WO第2009/023270号、WO第2010/091122号、WO第2007/103515号、米国特許第2010/0189682号および米国特許第2009/0092582号に開示されるものが挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される投与間隔は、対象に投与される複数回投与間で経過する時間を意味する。キメラFIX-FcRnBP、例えばキメラFIX-Fcを用いる本発明の方法において、投与間隔は、FcRnBP、例えばFc部分を含まない前記第IX因子即ち、前記FIXからなるポリペプチドの当量IU/kgに対して必要とされる投与間隔よりも少なくとも約1.5~8倍長くてもよい。例えば、本発明の第IX因子-Fcキメラポリペプチドまたはハイブリッドを投与するとき、投与間隔は、FcRnBP、例えばFc部分を含まない前記第IX因子即ち、前記FIXからなるポリペプチドの当量に対して必要とされる投与間隔よりも少なくとも約1.5~8倍長くてもよい。投与間隔は、例えば、Fc部分を含まない前記第IX因子すなわち、前記第IX因子からなるポリペプチドの当量に対して必要とされる投与間隔よりも少なくとも約1.5~8倍長くてもよい。幾つかの実施形態において、投与間隔は、6~18、6~10、9~18、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも16、少なくとも17、または少なくとも18日である。投与間隔は、1週間に少なくとも約1回であってもよく、6~10日、例えば約7~10、約7~9、約7~8、約8~10、約9~10、約6~7、約8~9、約6、約7、約8、約9、または約10日であってもよい。投与間隔は、9~18日、例えば、約9~17、約9~16、約9~15、約9~14、約9~13、約9~12、約9~11、約9~10日、約10~18、約11~18、約12~18、約13~18、約14~18、約15~18、約16~18、約17~18日、約10~11、約11~12、約12~13、約13~14、約14~15、約15~16、および約16~17日、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、または約18日であってもよい。投与間隔は、約10~14日であってもよい。投与間隔は、約2週間ごと、または1ヶ月に2回であってもよい。投与間隔は、18日より長い、例えば、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、または約40日であってもよい。投与間隔は、一定の間隔、例えば、25~50IU/kgにおいては7日、50~100IU/kgにおいては10~13日、または100~150IU/kgにおいては14日であってもよい。一定の間隔および用量は、間隔および用量の組み合わせが、対象の集団または個人の対象において、少なくとも約1~5、少なくとも約1~3、少なくとも約1、少なくとも約2、または少なくとも約3IU/dLのFIX活性のトラフをもたらすように、決定される。一定の投与間隔はまた、20~50IU/kgにおいては7日、50~100IU/kgにおいては10~14日、100~150IU/kgにおいては14~16日、10~50IU/kgにおいては7日、15~100IU/kgにおいては10~13日、または50~150IU/kgにおいては14~15日であってもよい。一定の投与間隔はまた、10~30IU/kgにおいては7日、15~50IU/kgにおいては10日、20~70IU/kgにおいては11日、25~85IU/kgにおいては12日、30~100IU/kgにおいては13日、40~125IU/kgにおいては14日、および50~150IU/kgにおいては15日であってもよい。好ましい実施形態において、投与間隔は、20IU/kgで1週間に1回、40IU/kgで10日ごと、または100IU/kgで2週間ごと1ヶ月に2回である。投与間隔は、あるいは、その対象に関する薬物動態データまたは他の情報に基づいて、それぞれの対象に対して決定される個人に合わせた間隔であってもよい。個人に合わせた用量/投与間隔の組み合わせは、実施例に示されるように、前の段落における一定した間隔レジメンに対するものと同一であっても、異なってもよい。レジメンは、初めに、一定した投与間隔であってよく、その後、個人に合わせた投与間隔に変更してもよい。本明細書で使用されるオンデマンド治療は、短期間で行われることを意図され、出血症状等の現状、または予定されている手術等の予測される短期間の必要性に応える治療を意味する。オンデマンド治療を必要とし得る状態には、出血症状、関節血症、筋肉出血、口の出血、出血、筋肉への出血、口腔出血、外傷、頭部外傷traumacapitis、胃腸出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、胸腔内出血、骨折、中枢神経系の出血、咽頭後隙の出血、後腹膜腔内出血、または腸腰筋鞘illiopsoassheath内の出血が含まれる。これら以外の出血症状も含まれる。対象は、外科的予防、周術期の管理、または外科手術のための治療を必要とし得る。そのような外科手術には、簡単な外科手術、大外科手術、抜歯、扁桃摘出術、他の歯/胸~顔の外科手術、鼠径ヘルニア切除術、滑膜切除術、人工膝関節置換術、他の人工関節置換術、開頭術、骨接合術、外傷外科手術、頭蓋内外科手術、腹腔内外科手術、胸腔内外科手術が含まれる。これら以外の外科手術も含まれる。オンデマンド治療を必要とし得るさらなる状態には、表26に列記されるものが含まれる。オンデマンド治療を必要とし得るさらなる状態には、軽度の出血、関節血症、筋肉表面の出血、軟組織出血、中等度の出血、切開による筋肉内もしくは軟組織出血、粘膜出血、血尿、重篤な出血、咽頭出血、咽頭後部の出血、腹腔後部の出血、中枢神経系の出血、打撲、切り傷、こすり傷、関節出血、鼻血、口の出血、歯茎の出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、軽度の特発性出血、大外傷後の出血、中等度の皮膚打撲、または関節、筋肉、内臓器官、もしくは脳の特発性出血が含まれる。オンデマンド治療のさらなる理由には、外科手術または抜歯の周術期の管理、大外科手術、大規模な口腔外科手術、泌尿器外科手術、ヘルニア外科手術、膝、臀部、または他の大関節等の整形外科手術の必要性が含まれる。薬物動態PKパラメーターには、特に示されていない限り、上記の用語、および当該技術分野でそれらの通常の意味を有する、以下の用語が含まれる。用語の幾つかは、実施例においてより詳細に説明される。PKパラメーターは、FIX抗原レベルしばしば、抗原として本明細書で挿入句的に示されるまたはFIX活性レベルしばしば、活性として本明細書で挿入句的に示されるに基づき得る。文献では、一部の患者の血漿における内因性の不活性FIXの存在が、FIXに対する抗体を用いて投与された即ち、外因性FIXを測定する能力を妨げるため、PKパラメーターは、しばしば、FIX活性レベルに基づく。しかしながら、FIXが、FcRnBP等の異種ポリペプチドを含有する融合タンパク質の一部として投与されるとき、投与された即ち、外因性FIX抗原は、異種ポリペプチドへの抗体を用いて、正確に測定することができる。加えて、ある種のPKパラメーターは、モデル予測データしばしば、モデル予測として本明細書で挿入句的に示されるまたは観察されたデータしばしば、観察値として本明細書で挿入句的に示されるに基づくことができ、好ましくは、観察されたデータに基づく。本明細書で使用されるベースラインは、用量を投与する前、対象における最低の測定された血漿第IX因子レベルである。実施例1に記載されるヒト初回試験では、第IX因子の血漿レベルは、スクリーニング訪問時および投与直前の投与前の2つの時点で測定された。投与前時間は、計算の目的のために、即ち、ベースラインを差し引いたデータを生成するために、0ベースラインとして処理された。例えば、図4を参照のこと。あるいは、a処置前のFIX活性が1未満であり、検出可能なFIX抗原がなく、ナンセンス遺伝子型を有する患者のベースラインは、0として定義され、b処置前のFIX活性が1未満であり、検出可能なFIX抗原を有する患者のベースラインは、0.5で設定され、c処置前のFIX活性が1~2の間である患者のベースラインは、CminPK試験を通して最低活性であり、d処置前のFIX活性が2以上である患者のベースラインは、2である。投与前にベースラインよりも上の活性は、事前の治療からの薬物が残留していると考えられ、ベースラインまで減少させ、rFIXFc投与後、PKデータから差し引かれた。実施例11を参照のこと。本明細書で使用される血漿濃度対時間曲線下面積AUCは、投与後の第IX因子の消失の速度および程度に基づく。AUCは、12、18、24、36、48、または72時間等の特定の時間に関して決定され、または無限大については、曲線の傾きに基づいた外挿を用いて決定される。特に本明細書で特定されない限り、AUCは、無限大AUCINFについて決定される。AUCはまた、1用量当たりを基準に計算され得る。多くの他のPKパラメーターと同様に、AUCの決定は、単一対象または対象の集団において実行されることができ、対象の集団について、平均が計算される。実施例1では、患者集団において、AUC/用量は、1IU/kg当たり32.44IU時間/dLであり、個人の対象についてその範囲は、1IU/kg当たり21.80~54.30IU時間/dLであった活性に基づく平均AUC/用量については、表13を参照のこと。したがって、患者集団において、平均AUC/用量は、1IU/kg当たり約26~40、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、または約40IU時間/dLであり得る。AUC/用量および抗原に基づく他のAUCパラメーターについては、表14を参照のこと。生体内回収率IVRは、観察されたピーク活性から投与前レベルを差し引き、その用量で除算された、増分回収率K値によって示される。IVRはまた、実施例に記載されるような、百分率基準で計算されてもよい。明確にするために、単位K値、すなわち、に対して1IU/kg当たりIU/dLが、本明細書で使用される。平均IVRが、患者集団において決定され得るか、または個々のIVRが、単一対象において決定され得る。実施例1に記載されるヒト初回試験に使用されたFIXFcは、患者集団において、1IU/kg当たり約0.93IU/dLの平均IVRを示し、それぞれの対象におけるIVRは、1IU/kg当たり0.62~1.17IU/dLの範囲であった表13。したがって、本発明のキメラポリペプチドは、患者集団において、1IU/kg当たり0.85~1.15例えば、約0.85、約0.86、約0.87、約0.88、約0.89、約0.90、約0.91、約0.92、約0.93、約0.94、約0.95、約0.96、約0.97、約0.98、約0.99、約1.0、約1.05、約1.10、約1.15の平均IVR、および対象において、少なくとも約0.6、約0.7、0.8、約0.9、約1.0、約1.1、または約1.2IU/dLのIVRを示す。本明細書で使用されるクリアランス率CLは、薬物を消失する体の能力の尺度であり、時間と共に、薬物の除去された血漿の体積として表される。実施例1に記載される試験に使用されたFIXFcは、約3.36mL/時間/kgの平均CLを示し表13を参照、これは、第IX因子BENEFIX商標からなるポリペプチドのCL8.2mL/時間/kgよりも約2.5倍低く、個々の対象におけるCL値の範囲は、1.84~4.58mL/時間/kgであった。したがって、本発明のキメラポリペプチドは、集団において、3.0~3.72、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、または3.72mL/時間/kgの平均CLを示す。抗原に基づくCLについては、表14を参照のこと。本明細書で使用される平均滞留時間MRTは、体内の薬物分子の平均寿命の尺度である。実施例1に記載される試験に使用されたFIXFcは、約68.05時間の平均MRTを示し表13を参照、MRT値の範囲は、個々の対象において、53.1~85.8時間であった。したがって、本発明のキメラポリペプチドは、集団において、60~78、約60、約62、約64、約66、約68、約70、約72、約74、約76、または約78時間の平均MRT、および対象において、少なくとも約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、または約90時間のMRTを示す。抗原に基づくMRTに関しては、表14を参照のこと。本明細書で使用されるt1/2βまたはt1/2ベータ、またはベータHLは、消失相と関連する半減期であり、t1/2β=ln2/終末相と関連する消失速度定数である。実施例1に記載される試験では、使用されたFIXFcは、患者集団において、約52.5時間である平均t1/2zを示し表13を参照、個々の対象において、t1/2β値の範囲は、47~60時間であった。したがって、本発明のキメラポリペプチドは、約47、約48、約49、約50、約51、約52、約53、約54、約55、約56、約57、約58、約59、または約60時間を超える平均t1/2βを示す。抗原に基づくt1/2βに関しては、表14を参照のこと。本明細書で使用されるトラフは、本発明のキメラポリペプチドまたは別の第IX因子の分子の用量を投与した後、およびもしあれば、次の用量が投与される前に達する、最低血漿第IX因子活性レベルである。トラフは、本明細書で閾値と互換的に使用される。ベースラインの第IX因子レベルは、測定された第IX因子レベルから差し引かれ、トラフレベルを計算する。幾つかの実施形態において、トラフは、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、または約14日後、1~5または1~3IU/dLである。幾つかの実施形態において、キメラポリペプチドの血漿レベルが、患者集団の少なくとも約70、少なくとも約80、少なくとも約90、または約100において、少なくとも約6日後、少なくとも約1IU/dLの平均トラフに達するか、または対象において、少なくとも約6日後、少なくとも約1、2、3、4、または5IU/dLのトラフに達する。幾つかの実施形態において、前記キメラポリペプチドの血漿レベルが、約1~5または1~3IU/dLの平均トラフに達する。そのようなトラフまたは平均トラフは、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、または約40日後、達し得る。本明細書で使用される定常状態での分布容積Vssは、薬物が分布する見かけのスペース体積である。Vss=定常状態での血漿濃度で除算された体内の薬物量。実施例1では、集団において見出されるVssは、約226mL/kgであり、対象についてその範囲は、約145~365mL/kgであった表13を参照。したがって、患者集団において、平均Vssは、200~300、約200、約210、約220、約230、約240、約250、約260、約270、約280、約290、または約300mL/kgであり得る。個々の対象におけるVssは、約145、約150、約160、約170、約180、約190、約200、約210、約220、約230、約240、約250、約260、約270、約280、約290、約300、約310、約320、約330、約340、約350、約360、または約370mL/kgであり得る。抗原に基づくVssについては、表14を参照のこと。ポリペプチド、ペプチド、およびタンパク質は、互換的に使用され、共有結合しているアミノ酸残基からなる高分子化合物を指す。ポリヌクレオチドおよび核酸は、互換的に使用され、共有結合しているヌクレオチド残基からなる高分子化合物を指す。ポリヌクレオチドは、DNA、cDNA、RNA、一本鎖、または二重鎖、ベクター、プラスミド、ファージ、またはウイルスであり得る。ポリヌクレオチドは、表2のポリペプチドをコードする表1にあるものを含む表1を参照。ポリヌクレオチドはまた、表1のポリヌクレオチドの断片、例えば、第IX因子、Fc、シグナル配列、プロペプチド、6Hisおよび表2のポリペプチドの他の断片などの表2のポリペプチドの断片をコードするものも含む。本明細書で使用される予防的治療は、対象の血漿中の第IX因子活性レベルを増加させるために、時間の経過と共に、対象に複数回投与で第IX因子ポリペプチドを投与することを意味する。好ましくは、増加したレベルは、突発性出血の発生を減少させる、または不慮の損傷の場合の出血を予防するのに十分である。予防的治療は、出血症状、例えば、オンデマンド治療下で記載されるものを減少または予防する。予防的治療は、例えば、患者間の変動性を補うために、投与間隔で論じられるように、一定であっても、個人に合わせてもよい。本明細書で使用される対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物を意味する。非ヒト哺乳動物には、マウス、イヌ、霊長類、サル、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ならびに他の家畜および小動物が含まれる。対象はまた、小児期のヒトも含む。小児期のヒト対象は、出生~20歳、好ましくは、出生~18歳、出生~16歳、出生~15歳、出生~12歳、出生~11歳、出生~6歳、出生~5歳、出生~2歳、および2~11歳である。本発明の方法は、出血または出血症状の制御または予防を必要とする対象において実行され得る。そのような対象には、軽度の出血、関節血症、筋肉表面の出血、軟組織出血、中等度の出血、切開による筋肉内もしくは軟組織出血、粘膜出血、血尿、重篤な出血、咽頭出血、咽頭後部の出血、腹腔後部の出血、中枢神経系の出血、打撲、切り傷、こすり傷、関節出血、鼻血、口の出血、歯茎の出血、頭蓋内出血、腹腔内出血、軽度の特発性出血、大外傷後の出血、中等度の皮膚打撲、または関節、筋肉、内臓器官、もしくは脳の特発性出血の制御または予防を必要とする者が含まれる。そのような対象はまた、外科手術または抜歯と関連する出血の管理等の周術期の管理を必要とする者も含まれる。本明細書で使用される治療用量は、本明細書に記載される、治療の目的を達成する用量を意味する。血漿由来第IX因子pdFIXの必要とされる投与量の計算は、平均して、体重1kg当たり1IUのpdFIXが、血漿第IX因子活性を約1IU/dL1上昇させる、実証的事実に基づく。そのような方式で、必要とされる投与量は、以下の式を用いて決定される:必要な単位=体重kg×所望の第IX因子上昇IU/dLまたは正常値に対する×11IU/dL当たりIU/kg例えば、実施例および図1に記載される、FIXFcが、pdFIXBENEFIX商標のものとは異なると同様の増分回収率を有するため、必要とされる用量は、上記の式を用いて決定されるか、またはそれを若干調節して決定される。様々なオンデマンド治療に必要とされる特定の推奨された用量については、表26も参照のこと。pdFIXを用いる小児期の対象については、投与量ガイダンスは、成人と同様である。しかしながら、小児期の患者は、より低い増分回収率を有する場合があり、したがって、投与量は、上方に調節される必要があり得る。本発明の方法に使用され得る治療用量は、10~180、20~180、または25~180IU/kgであり、より具体的には、6~10日の投与間隔における好ましい用量は、以下の通りである:約25~110、約30~110、約40~110、約50~110、約60~110、約70~110、約80~110、約90~110、および約100~110;約30~100、約30~90、約30~80、約30~70、約30~60、約30~50、約30~40IU/kg;約40~110、約50~100、約60~90、および約70~80IU/kg;約40~50、約50~60、約60~70、約70~80、約80~90、約90~100、および約100~110IU/kg;約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、および約110IU/kg。6~10日の投与間隔には、1週間に1回の投与間隔が含まれる。6~10日、例えば、1週間に1回の投与間隔におけるさらなる治療用量には、20~50、20~100、および20~180IU/kg、より具体的には、6~10日、例えば、1週間に1回の投与間隔における好ましい用量は、以下の通りである:約20~110、約20~100、約20~90、約20~80、約20~70、約20~60、約20~50、約20~40、約20~30、約20~40、および約20IU/kg。実施例10および11も参照のこと。用量は、特定の患者において有効である場合、20IU/kgより低い、例えば、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、または約19IU/kgであってもよい。9~18日、例えば、1ヶ月に2回の投与間隔における好ましい治療用量は、以下の通りである:約50~180、約60~180、約70~180、約80~180、約90~180、約100~180、約110~180、約120~180、約130~180、約140~180、約150~180、約160~180、および約170~180IU/kg;約90~170、約90~160、約90~150、約90~140、約90~130、約90~120、約90~110、および約90~100IU/kg;約100~170、約110~160、約120~150、および約130~140IU/kg;約90~100、約100~110、約110~120、約120~130、約130~140、約140~150、約150~160、および約160~170IU/kg;約60、約70、約80、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160、約165、約170、約175、および約180IU/kg。実施例10および11も参照のこと。好ましい治療用量は、10~50、15~100、20~100、20~50、50~100、10、20、40、50、および100IU/kgである。治療用量は、約20~50、約20~100、約20~180、25~110、約30~110、約40~110、約50~110、約60~110、約70~110、約80~110、約90~110、約100~110、約30~100、約30~90、約30~80、約30~70、約30~60、約30~50、約30~40IU/kg、約40~110、約50~100、約60~90、約70~80IU/kg、約40~50、約50~60、約60~70、約70~80、約80~90、約90~100、約100~110IU/kg、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95、約100、約105、および約110IU/kgであってもよい。そのような用量は、約6~10、約7~10、約7~9、約7~8、約8~10、約9~10、約6~7、約8~9、約6、約7、約8、約9、および約10日、ならびに1週間に1回の投与間隔において好ましい。治療用量は、約90~180、約100~180、約110~180、約120~180、約130~180、約140~180、約150~180、約160~180、および約170~180IU/kgであってもよい。用量は、約90~170、約90~160、約90~150、約90~140、約90~130、約90~120、約90~110、および約90~100IU/kgであってもよい。用量は、約100~170、約110~160、約120~150、および約130~140IU/kgであってもよい。用量は、約90~100、約100~110、約110~120、約120~130、約130~140、約140~150、約150~160、および約160~170IU/kgであってもよい。用量は、約90、約95、約100、約105、約110、約115、約120、約125、約130、約135、約140、約145、約150、約155、約160、約165、約170、約175、および約180IU/kgであってもよい。そのような用量は、約9~18、約9~17、約9~16、約9~15、約9~14、約9~13、約9~12、約9~11、約9~10、約10~18、約11~18、約12~18、約13~18、約14~18、約15~18、約16~18、約17~18、約10~11、約11~12、約12~13、約13~14、約14~15、約15~16、および約16~17日、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、および約18日、1ヶ月に1回、および1ヶ月に2回2週間ごとの投与間隔において好ましい。好ましい治療用量および投与間隔は、以下の通りである:1週間に1回20IU/kg、10日ごとに40IU/kg、および2週間ごとに1ヶ月に2回100IU/kg。用量および投与間隔のさらなる組み合わせには、:1用量少なくとも約50IU/kgおよび少なくとも約7日の投与間隔、1用量少なくとも約100IU/kgおよび少なくとも約9日の投与間隔、1用量少なくとも約100IU/kgおよび少なくとも約12日の投与間隔、1用量少なくとも約150IU/kgおよび少なくとも約14日の投与間隔、20~50または20~100IU/kgおよび前記投与間隔が1週間に1回であり、1用量20~50IU/kgおよび7日の投与間隔、1用量50~100IU/kgおよび10~14日の投与間隔、または1用量100~150IU/kgおよび14~16日の投与間隔が含まれる。また、投与間隔および用量の好ましい組み合わせにはまた、7日間で10~50IU/kg、10~13日間で15~100IU/kg、14~15日間で50~150IU/kg、7日間で10~30IU/kg、10日間で15~50IU/kg、11日間で20~70IU/kg、12日間で25~85IU/kg、13日間で30~100IU/kg、14日間で40~125IU/kg、および15日間で50~150IU/kgが含まれる。本明細書で使用される変異体とは、元のポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるが、その基本的な性質、例えば第IX因子の凝固活性またはFcFcRn結合活性を維持する、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドを指す。概して、変異体は、全般的にほぼ同様であり、多くの領域では、元のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと同一である。変異体には、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの断片、元のポリペプチドの欠失、挿入、および修飾された変形が含まれる。変異体ポリヌクレオチドは、例えば、配列番号1または3におけるヌクレオチドコード配列第IX因子部分、Fc部分、個別にもしくは一緒にまたはそれに相補的な鎖、本明細書で参照される刊行物および特許に開示されているもの等の公知の変異体および組換え型第IX因子またはFcのヌクレオチドコード配列またはそれに相補的な鎖、配列番号2または4のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列第IX因子部分、Fc部分、個別にもしくは一緒に、ならびに/またはこれらの核酸分子のいずれかのポリヌクレオチド断片例えば、本明細書に記載されるこれらの断片と、少なくとも85、90、95、96、97、98、または99同一であるヌクレオチド配列を含んでも、または代わりに、それらからなってもよい。また、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件または低ストリンジェントな条件下で、これらの核酸分子にハイブリダイズするポリヌクレオチドは、それらが機能的である限り、これらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと同様、変異体として含まれる。変異体ポリペプチドは、例えば、配列番号2または4に示されるポリペプチド配列第IX因子部分、Fc部分、個別にもしくは一緒に、ならびに/またはこれらのポリペプチドのいずれかのポリペプチド断片例えば、本明細書に記載されるこれらの断片と、少なくとも85、90、95、96、97、98、99同一であるアミノ酸配列を含んでも、または代わりに、それらからなってもよい。参照ヌクレオチド配列と、少なくとも、例えば、95同一であるヌクレオチド配列を有する核酸という表現によって、ヌクレオチド配列が参照ヌクレオチド配列の各100ヌクレオチド当たり最大5個の点変異を含んでもよいことを除いては、核酸のヌクレオチド配列が、参照配列と同一であることが意図される。つまり、参照ヌクレオチド配列と少なくとも95同一であるヌクレオチド配列を有する核酸を得るために、参照配列において、最大5のヌクレオチドが、欠失されても、別のヌクレオチドと置換されてもよいか、あるいは、参照配列において、全ヌクレオチドの最大5の多くのヌクレオチドが、参照配列に挿入されてもよい。クエリー配列は、例えば、配列番号1または3に示される配列全体、ORFオープンリーディングフレーム、または本明細書に記載されるように、特定される任意の断片であってもよい。実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリペプチドが、本発明のヌクレオチド配列またはポリペプチドと少なくとも85、90、95、96、97、98、または99同一であるかどうかは、公知のコンピュータプログラムを用いて、通常決定することができる。グローバル配列アラインメントとしても称される、クエリー配列参照または元の配列と対象配列との間の最良の全体の一致を決定するための好ましい方法はまた、Brutlagらのアルゴリズムに基づいたFASTDBコンピュータプログラムを用いて決定することができComp.App.Biosci.19906:237~245、これは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。配列アラインメントでは、クエリーおよび対象配列は両方とも、DNA配列である。RNA配列は、UウリジンをTチミンに転換することにより、比較することができる。前記グローバル配列アラインメントの結果は、パーセント同一性で表される。パーセント同一性を計算するためのDNA配列のFASTDBアラインメントに使用される好ましいパラメーターは、以下である:マトリックス=単一、k-タプル=4、ミスマッチペナルティ=1、結合ペナルティ=30、ランダム化グループ長=0、カットオフスコア=1、ギャップペナルティ=5、ギャップサイズペナルティ0.05、ウィンドウサイズ=500または対象ヌクレオチド配列の長さのどちらか短い方。対象配列が、内部欠失ではなく、5′または3′欠失のため、クエリー配列よりも短い場合、結果に手作業による補正を行わなければならない。これは、FASTDBプログラムが、パーセント同一性を計算するとき、対象配列の5′および3′短縮には対処しないためである。5′または3′末端で短縮された対象配列については、クエリー配列と比較して、一致/アラインされない、対象配列の5′および3′であるクエリー配列の塩基数をクエリー配列の総塩基のパーセントとして計算することによって、パーセント同一性が補正される。ヌクレオチドが、一致/アラインされるかどうかは、FASTDB配列アラインメントの結果によって決定される。次いで、このパーセンテージは、パーセント同一性から減算され、特定のパラメーターを用いて上記のFASTDBプログラムによって計算され、最終パーセント同一性スコアに到達する。この補正されたスコアは、本発明の目的のために使用されるものである。クエリー配列と一致/アラインされない、FASTDBアラインメントによって示される、対象配列の5′および3′塩基の外側の塩基のみが、パーセント同一性スコアの手作業による調節の目的のために計算される。例えば、90塩基の対象配列が、パーセント同一性を決定するために、100塩基のクエリー配列とアラインされる。欠失は、対象配列の5′末端で起こり、それ故に、FASTDBアラインメントは、5′末端における最初の10塩基の一致/アラインメントを示さない。10個の不対塩基が、配列の10一致しない5′末端および3′末端における塩基の数/クエリー配列における塩基の総数を示すため、10が、FASTDBプログラムによって計算されたパーセント同一性スコアから減算される。残りの90塩基が、完全に一致した場合、最終パーセント同一性は、90である。別の例では、90塩基の対象配列が、100塩基のクエリー配列と比較される。今回は欠失が内部欠失であり、その結果、クエリーと一致/アラインしない、対象配列の5′末端または3′末端上の塩基は存在しない。この場合、FASTDBによって計算されたパーセント同一性は、手作業で補正されない。再度、クエリー配列と一致/アラインしない、対象配列の塩基の5′および3′への塩基のみが、手作業で補正される。他の手作業の補正は、本発明の目的のためには行われない。本発明のクエリーアミノ酸配列と、少なくとも、例えば、95同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドという表現によって、対象ポリペプチド配列がクエリーアミノ酸配列の各100アミノ酸当たり最大5個のアミノ酸の変化を含んでもよいこと以外は、対象ポリペプチドのアミノ酸配列が、クエリー配列と同一であることが意図される。つまり、クエリーアミノ酸配列と少なくとも95同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るために、対象配列において、最大5のアミノ酸残基が、挿入、欠失、消失、または別のアミノ酸で置換されてもよい。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端の位置で、またはこれらの末端間の任意の位置に、参照配列中の残基間でばらばらに、もしくは参照配列内の1つ以上の連続する残基の群としてのどちらかで散在して生じてもよい。実際問題として、任意の特定のポリペプチドが、例えば、配列番号2第IX因子部分、Fc部分、個々にもしくは一緒にもしくは4のアミノ酸配列、または公知の第IX因子もしくはFcポリペプチド配列と、少なくとも85、90、95、96、97、98、または99同一であるかどうかは、公知のコンピュータプログラムを用いて、通常決定することができる。グローバル配列アラインメントとしても称される、クエリー配列参照または元の配列と対象配列との間の最良の全体の一致を決定するための好ましい方法はまた、BrutlagらのComp.App.Biosci.6:237-2451990のアルゴリズムに基づいたFASTDBコンピュータプログラムを用いて決定することができ、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。配列アラインメントでは、クエリーおよび対象配列は、両方ともヌクレオチド配列であるか、両方ともアミノ酸配列であるかのいずれかである。前記グローバル配列アラインメントの結果は、パーセント同一性で表される。FASTDBアミノ酸アラインメントにおいて使用される好ましいパラメーターは、以下である:マトリックス=PAM0、k-タプル=2、ミスマッチペナルティ=1、結合ペナルティ=20、ランダム化グループ長=0、カットオフスコア=1、ウィンドウサイズ=配列長、ギャップペナルティ=5、ギャップサイズペナルティ=0.05、ウィンドウサイズ=500または対象アミノ酸配列の長さのどちらか短い方。対象配列が、内部欠失ではなく、N末端またはC末端欠失のため、クエリー配列よりも短い場合、結果に手作業による補正を行わなければならない。これは、FASTDBプログラムが、グローバルパーセント同一性を計算するとき、対象配列のN末端およびC末端短縮には対処しないためである。N末端およびC末端で短縮された対象配列については、クエリー配列と比較して、対応する対象残基と一致/アラインされない、対象配列のN末端およびC末端であるクエリー配列の残基数をクエリー配列の総塩基のパーセントとして計算することによって、パーセント同一性が補正される。残基が、一致/アラインされるかどうかは、FASTDB配列アラインメントの結果によって決定される。次いで、このパーセンテージは、パーセント同一性から減算され、特定のパラメーターを用いて上記のFASTDBプログラムによって計算され、最終パーセント同一性スコアに到達する。この最終パーセント同一性スコアは、本発明の目的のために使用されるものである。クエリー配列と一致/アラインされない、対象配列のN末端およびC末端に属する残基のみが、パーセント同一性スコアを手作業で調節する目的のためのものと見なされる。即ち、クエリー残基のみが、対象配列の最も遠いN末端およびC末端の残基の外側に位置合わせされる。例えば、90アミノ酸残基の対象配列が、パーセント同一性を決定するために、100残基のクエリー配列とアラインされる。欠失は、対象配列のN末端で起こり、それ故に、FASTDBアラインメントは、N末端における最初の10残基の一致/アラインメントを示さない。10個の不対残基が、配列の10一致しないN末端およびC末端における残基の数/クエリー配列における残基の総数を示すため、10が、FASTDBプログラムによって計算されたパーセント同一性スコアから減算される。残りの90残基が、完全に一致した場合、最終パーセント同一性は、90である。別の例では、90残基の対象配列が、100残基のクエリー配列と比較される。今回は欠失が内部欠失であり、その結果、クエリーと一致/アラインしない、対象配列のN末端およびC末端上の残基は存在しない。この場合、FASTDBによって計算されたパーセント同一性は、手作業で補正されない。再度、FASTDBアラインメントに示されるような、クエリー配列と一致/アラインしない、対象配列のN末端およびC末端の外側で位置合わせされる残基のみが、手作業で補正される。他の手作業の補正は、本発明の目的のためには行われない。ポリヌクレオチド変異体は、コード領域、非コード領域、または両方に変化を含んでもよい。特に好ましいものは、サイレント置換、付加、または欠失を生じるが、コードされたポリペプチドの性質または活性は変えない改変を含む、ポリヌクレオチド変異体である。遺伝コードの縮重によるサイレント置換によって産生したヌクレオチド変異体が好ましい。さらに、5~10、1~5、または1~2個のアミノ酸が、任意の組み合わせで置換、欠失、または付加した変異体も好ましい。ポリヌクレオチド変異体は、例えば、特定の宿主に対してコドン発現を最適化すること大腸菌等の細菌宿主によって好まれるものにヒトmRNA中のコドンを変化させること等の様々な理由で産生され得る。自然に発生する変異体は、対立遺伝子変異体と呼ばれ、生物体の染色体上の特定の座を占める遺伝子の幾つかの代替形態の1つを指すGenesII,Lewin,B.,ed.,JohnWileySons,NewYork1985。これらの対立変異体は、ポリヌクレオチドおよび/またはポリペプチドレベルで異なってよく、および本発明に含まれる。あるいは、自然に発生しない変異体は、突然変異誘発技法または直接合成によって産生してもよい。タンパク質工学および組換えDNA技法の公知の方法を用いて、ポリペプチドの特徴を改善または改変するために変異体が作製されてもよい。例えば、生物学的機能の実質的な損失を伴わずに、分泌されたタンパク質のN末端またはC末端から、1つ以上のアミノ酸を欠失させることができる。Ronら、J.Biol.Chem.268:2984-29881993参照によってその全体が本明細書に組み込まれるの著者らは、3、8、または27個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失した後でさえ、ヘパリン結合活性を有する変異体KGFタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンガンマは、このタンパク質のカルボキシ末端から8~10個のアミノ酸残基を欠失した後、活性が最高10倍まで高くなることが示されたDobelietal.,J.Biotechnology7:199-2161988、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。さらに、変異体が、多くの場合天然タンパク質のものと類似する生物活性を保持することを、十分な証拠が立証している。例えば、Gayleと共同研究者らJ.Biol.Chem.268:22105-221111993、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるは、ヒトサイトカインIL-1aの大規模な変異分析を行った。彼らは、ランダムな突然変異誘発を利用して、分子全長にわたって、1変異体当たり平均2.5個のアミノ酸の変化がある、3,500個を超える個々のIL-1a変異体を作製した。起こり得る各アミノ酸位置について複数の突然変異を調べた。研究者らは、結合または生物活性のいずれかにほとんど影響することなく、分子の大部分が改変できることを見出した。要約を参照実際に、調べた3,500個を超えるヌクレオチド配列のうち、わずか23個のユニークなアミノ酸配列のみが、野生型の活性とは著しく異なるタンパク質を生じた。上記のように、ポリペプチド変異体には、修飾されたポリペプチドが含まれる。修飾には、アセチル化、アシル化、ADP-リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールphosphotidylinositolの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合による架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ-カルボキシル化、グリコシル化、GPIアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリスチル化、酸化、ペグ化、タンパク質分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、トランスファーRNAが仲介するタンパク質へのアミノ酸の付加例えば、アルギニル化、およびユビキチン化が挙げられる。約という用語は、ほぼ、およそ、大体、または~の辺りを意味するために本明細書で使用される。約という用語が、数値域と併せて使用されるとき、これは、示された数値の上下の境界を拡大することによりその範囲を修飾している。一般に、約という用語は、10の分散により表示値よりも上下より高いまたはより低いに数値を修飾するために本明細書で使用される。これまで詳細に本発明を説明してきたが、これの理解が以下の実施例への言及によりより明確になり、これらは、例示のみの目的で本明細書に含まれるが、本発明の限定を限定するものではない。本明細書で言及する全ての特許および刊行物は、参照により明示的に組み込まれる。実施例1.ヒト初回FiH試験ヒト初回試験は、FIXFc組換え型ヒト凝固第IX因子融合タンパク質の安全性、耐性、および薬物動態PKパラメーターを決定するために、非盲検第1/2相用量増加試験であった。FIXFcは、ヒトIgG1からのFcドメインに結合されるヒト凝固第IX因子を含む組換え融合タンパク質である。融合タンパク質は、ヒト胚腎臓細胞HEK293中に発現される。実施例3を参照のこと。FIXFcは、B型血友病先天性第IX因子欠損症またはクリスマス病を患っている患者における、外科手術設定における出血の制御および予防を含む、出血症状の制御および予防のために開発されている。FIXFcは、凝固第IX因子FIXおよびヒト抗体IgG1イソタイプのFcドメインからなる組換え融合タンパク質である。FIXFc分子はヘテロ二量体型であり、Fcのヒンジ領域内の2つのジスルフィド結合によりFIXFの一本鎖FIXFc-scおよびFcの一本鎖Fc-scが一緒に結合される。図1および表2を参照のこと。rFIXFc製剤は、静脈内IV投与を対象にした透明無色溶液である。rFIXFcは、10mLの使い捨てのみのバイアル中に5mLの体積当たり1000IUとして供給される。製剤は、ブロモブチル製のゴム栓および切り取り線のある普通のアルミニウムの封止用キャップを用いて、USPのタイプIガラス製バイアル中にパッケージ化される。rFIXFc製剤は、145mMのNaClおよび0.1ポリソルベート20を添加した10mMのリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0中に200IU/mL含有する。rFIXFc溶液は、希釈してはならない。試験設計。重篤なB型血友病に罹患している合計14人の以前に治療されたことのある患者が、登録され、約10分間にわたって静脈内IV注入として、FIXFcにより治療された。6つの用量レベルの1、5、12.5、25、50、および100IU/kgが、本研究において評価された。1、5、12.5、および25IU/kgの用量レベルで1用量レベル当たり1人の患者が登録され、50および100IU/kgで1用量レベル当たり少なくとも3人の評価可能な患者が登録された。スクリーニング後FIXFc投与から14日以内に予定された、患者に対する治療期間を開始した。各用量レベルの治療期間には、1および5IU/kgの用量レベルについてはFIXFcの単回投与1日目から72時間の安全性観察期間3日の完了まで、または12.5~100IU/kgの用量レベルの患者について最終PK試料が採取されるまで約10日が含まれた。1、5、12.5、または25IU/kgを用いて治療される患者が登録され、1IU/kgから始めて逐次的に治療された。50IU/kgを受容している患者は、同日に治療されず、少なくとも1日あけて投与された。50IU/kgの患者の治療後、100IU/kgの患者の治療が開始された。治療後期間は、患者がFIXFcの投与を受けた日から始まる30日の安全性観察期間であり、この期間中、患者がPKサンプリング等の必要とされる試験評価を受けるので、治療期間と重複した。12.5~100IU/kgの用量レベルに割り当てられた患者は、血液試料を採取され、FIX活性およびFIXFc濃度を評価された。血液試料は、FIXFcの投与直前、注入が終了してから15分後、注入が終了してから1、3、6、9、24、48、72、96、120、168、および240時間後、またはベースラインFIXレベルに達するまで採取された。患者が、240時間の時点研究11日目でベースラインを超えるFIXレベルを継続して有する場合、288時間研究13日目で試料が採取され、FIXレベルが、研究13日目でベースラインを超えた場合、336時間研究15日目で試料が再度採取された。患者10は、投与後216時間で、予定されていたFIXFcサンプリング前に、出血のためBENEFIX商標治療を受けた。そのため、216時間およびその後の時点のFIXFc活性および抗原データは、分析から除外された。本研究の中間解析結果に影響を及ぼしたと思われるさらなる逸脱は起こらなかった。第IX因子抗原については、薬物動態解析が、FIXFcの静脈内注入後、個々の患者に観察されたFIXFc濃度対時間データに行われた。一次解析は、モデル依存的方法を用いて行われた。FIXFc濃度データは、初期パラメーター値の計算のために、ユーザ定義された初期パラメーターの推定値を用いて、中央コンパートメントからの消失を有する2コンパートメントオープンモデルにコンピュータで適合された。WinNonlinで推定された微視的速度定数が生成され、FIXFc濃度データが1/Y-hatY-hatの関数で加重された。2人の対象例えば、患者5および6について観察されたデータは、2コンパートメントモデルによって不適切に記載された。その結果として、WinNonlin非コンパートメント解析IV注入投与モデルAUCの計算については、線形台形法則を用いて、これらの2人の患者についてモデル非依存的解析が行われた。非コンパートメント解析については、半減期は、回帰状態の終末対数線形の減少を説明するデータ点を用いてβ相から計算された。最低3点を使用して、消失相を説明した。これは、ほぼ4~14日に生じた。抗原のPK解析については、mg/kg用量当量が利用された。これらの値は、60.2IU/mgのFIXFcの特定の活性に基づいて決定された。実際のサンプリング時間、用量、および注入期間が、計算のために使用された。名目サンプリング時間および用量が、表の作成および濃度-時間の図のために使用された。個々および平均PKパラメーターおよび記述統計が示される。各コホートにおける対象の用量範囲および数が、有意な解析には小さすぎたため、正式な統計的解析は、行われなかった。第IX因子活性については、ベースライン減算法が、ベースライン減算決定木に従って活性対時間プロファイルに適用された図4。1未満の活性値は、ベースライン減衰について、1IU/dLで定義された。投与前時間は、計算の目的のためにゼロとして処理された。加えて、ベースライン補正した活性データは、ベースラインレベルへの回帰を示した時点で切り捨てられた。薬物動態解析は、FIXFcの静脈内注入投与後に得られた、ベースラインを減算したFIX活性対時間データに行われた。モデル依存的評価は、静脈内注入投与群の解析のために利用された。ベースラインを減算したデータは、初期パラメーター値の計算のために、WinNonlinで定義されたパラメーターの境界を用いて、中央コンパートメントからの消失を有する2コンパートメントオープンモデルにコンピュータで適合された。WinNonlinで推定された微視的速度定数が生成され、FIXFc濃度データが1/Y-hatY-hatの関数で加重された。実際のサンプリング時間、用量、および注入期間が、計算のために使用された。名目サンプリング時間および用量が、表の作成および濃度-時間の図のために使用された。実際のデータから得られないときは、FIXFc活性レベル対時間データをシミュレートするためのWinNonlinが生成した微視的速度定数を用いて、rFIXFcの投与から168時間後C168の活性およびベースラインよりも1IU/dL上に至るまでの時間TBLP1を得た。個々および平均PKパラメーターおよび記述統計が、本実施例において示される。各コホートにおける対象の用量範囲および数が、有意な解析には小さすぎたため、正式な統計的解析は、行われなかった。FIXFc抗原薬物動態の結果は、FIXFc血漿濃度が、FIXFcの短期IV注入後、急速に増加し、それぞれ、12.5、25、50、および100IU/kgの名目用量レベルに対して1670n=1、2730n=1、7510±2480、および15400±3960ng/mLの平均±標準偏差Cmax値を有し、全ての患者について開始から30分以内に達したことを示した。全てのFIXFcで治療した患者は、全身のFIXFc血漿曝露において、用量依存的な増加があったCmaxおよびAUCINFによって評価される。12.5および25IU/kgの名目用量で1人の評価可能な患者に限定されるが、CmaxおよびAUCINFの両方において観察された増加は、評価された用量範囲について用量に対して適度に比例した。表3は、個々の患者および群平均FIXFc抗原濃度対時間データを示し、名目用量、実際の用量、注入期間、および患者番号別に分類される。表4は、個々の患者および群平均FIXFc抗原の薬物動態の要約データを示し、個々の患者および群平均FIXFc抗原の薬物動態の要約データを示し、名目用量、実際の用量、mg/kg用量当量、および患者番号別により分類される。表11を参照のこと。FIXFc血漿濃度は、短期IV注入後、二重指数関数的に低下した。分布α半減期値および消失β半減期値の両方は、個々の患者のαおよびβ半減期値が、それぞれ、9.79~21.2時間および71.0~140時間の範囲である、評価された用量範囲にわたって用量非依存的であると思われた。50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均α半減期値±標準偏差は、それぞれ、13.1±4.77および12.1±2.33時間であった。50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均β半減期値±標準偏差は、それぞれ、110±26.5および95.8±11.1時間であった。加えて、Cl、VSS、およびMRTの一次PKパラメーター値が決定され、一般に、全てが、評価された用量範囲にわたって用量非依存的であると思われた。示されたように、この評価は、12.5および25IU/kgの名目用量レベルでの1人の患者データによって限定される表12ならびに図2、7、および8。さらに、50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均CL値は、それぞれ、2.28±0.374および2.11±0.464mL/h/kgであった。50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均VSS値は、それぞれ、259±78.5および238±52.2mL/kgであった。加えて、50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均MRT値は、112±21.5および114±17.1時間であった。ベースライン補正したFIXFc活性薬物動態の結果は、FIXFc活性が、FIXFcの短期IV注入後、急速に増加し、それぞれ、12.5、25、50、および100IU/kgの名目用量レベルに対して11.9n=1、19.9n=1、41.6±8.97、および98.2±8.21IU/dLのモデル予測された平均Cmax値±標準偏差を有し、全ての患者について開始から30分以内に達したことを示した。表5は、名目用量、実際の用量、注入期間、および患者番号別に分類された、個々の患者および群平均のベースライン補正したFIXFc活性対時間データを示す。表6は、名目用量、実際の用量、mg/kgの等価用量、および患者番号別に分類された、個々の患者および群平均FIXFc活性PKの要約データを示す。全てのFIXFcで治療した患者に用量依存的なFIX活性の増加があった投与前ベースライン応答と比較して。12.5および25IU/kgの名目用量で1人の評価可能な患者に限定されるが、CmaxおよびAUCINFの両方において観察された増加は、評価された用量範囲について用量に対して適度に比例した表6、9、および13ならびに図3および5。注入終了後、ベースライン補正したFIX活性の低下は、二重指数関数減衰を示し、急速な分布α相、続いて、対数線形消失β相によって特徴付けられた。α相の期間中、FIXFc活性の低下速度は、0.140~16.6時間の範囲に及ぶ、個々の患者のα半減期値と共に可変的であった。一見したところ、平均α半減期値の用量依存的な増加は、12.5および25IU/kgの名目用量レベルで1人の患者により予想を裏切られた。対照的に、消失β半減期値は、25~100IU/kgの用量範囲にわたって、個々の患者のβ半減期値は42.1~67.4時間の範囲であり、この用量範囲にわたって用量非依存的であるように思われた。推定され、報告されたが、12.5IU/kgのrFIXFcにより治療された患者1の消失半減期は、この患者のFIXレベルが最長96時間までのみ検出可能であり、短縮された終末相をもたらし、終末消失半減期の過小評価の一因となるため、要約の評価に含まれない。50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均β半減期値±標準偏差は、それぞれ、52.1±10.4および52.5±10.1時間であり、25、50、および100IU/kgを組み合わせた名目用量に対しては、52.5±9.2範囲40~67.4時間であった表6、8、および13。加えて、Cl、V1、VSS、およびMRTに対する一次PKパラメーター値が決定され、一般に、全ては、評価された用量範囲にわたって用量非依存的であるように思われた。さらに、50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均Cl値は、それぞれ、3.77±1.12および2.89±0.615mL/時間/kgであり、25、50、および100IU/kgを組み合わせた名目用量に対しては、3.36±0.928mL/時間/kgであった表6、8、および13。50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均VSS値は、それぞれ、264±77.6および179±31.1mL/kgであり、25、50、および100IU/kgを組み合わせた名目用量に対しては、226±69.8mL/kgであった。表6、8、および13。加えて、50および100IU/kgの名目用量レベルに対する平均MRT値は、それぞれ、71.7±13.0および62.8±8.82時間であり、25、50、および100IU/kgを組み合わせた名目用量に対しては、68.05±11.16時間であった。表6、8、および13。一次PKパラメーターに加えて、二次PKパラメーター例えば、C168、K値、IVR等を決定して、FIXFc効果の持続時間を評価した。予想される通りに、C168、TBLP1、TBLP3、およびTBLP5値において、用量依存的な増加が、観察された。対照的に、K値およびIVR値は、評価された用量範囲にわたって用量非依存的であるように思われた。全用量範囲にわたって、個々の患者のモデル予測および観察されたK値は、それぞれ、1IU/kg当たり0.61~1.02および0.62~1.17IU/dLであった。50および100IU/kgの名目用量レベルに対するモデル予測された平均K値は、それぞれ、1IU/kg当たり0.76および0.90IU/dLであり、25、50、および100IU/kgを組み合わせた名目用量に対しては、1IU/kg当たり0.821±0.1387範囲0.61~1.02IU/dLであった。50および100IU/kgの名目用量レベルに対するモデル予測された平均IVR値は、それぞれ、34.5および35.1であった。50および100IU/kgの名目用量レベルに対する観察された平均K値は、それぞれ、1IU/kg当たり0.86および1.02IU/dLであり、25、50、および100IU/kgを組み合わせた名目用量に対しては、1IU/kg当たり0.926±0.1787範囲0.97~1.17IU/dLであった。50および100IU/kgの名目用量レベルに対する観察された平均IVR値は、それぞれ、39.2および39.8であった表6、7、8、および13。表7A~7Bは、名目用量、実際の用量、および患者番号別に分類された、個々の患者および群平均FIXFc活性二次PKの要約データを示す。注入されたrFIXFcは、1IU/kgごとに血漿FIX活性を平均で0.93±0.18IU/dL上昇させ、この増分回収率K値は、体重と弱い正の相関を示したR2=0.336、p=0.048図23。FIXFc活性の薬物動態の推定値は、rFIXFc抗原のものと一致した例えば、表13および14を比較。さらに、rFIXFcインビボ活性の保持を示す、rFIXFc活性と抗原レベルとの間に卓越した相関があった図9。加えて、BENEFIX商標Wyethの過去のデータと比較して、rFIXFcは、以下の通りに示した表8:25~100IU/kgの用量線形性t1/2βの3倍の増加平均滞留時間の3倍の増加24改善された増分回収率クリアランスの2.5倍の低下FIXFcは、ヒトIgG1のFcドメインに結合したFIXからなる組換え融合タンパク質である。FIXFcは、FIXの長時間作用型バージョンであるように設計されている。FIXFcを用いた前臨床研究は、市販の組換え型FIX製品のBENEFIX商標と比較して、FIX活性の半減期の延長を示している。本研究の理論的根拠は、重篤なB型血友病患者における、FIXFcの安全性およびPKを評価することであった。本研究のために、18~76歳の12人の評価可能な対象が、PK評価に利用できた。各対象は、約10分間静脈内注入により体重に対して12.5、25、50、または100IU/kgの名目用量でFIXFcの単回投与を受けた。FIXFc活性および抗原濃度の両方のPK評価のために血漿試料を、注入前、ならびに投与から14日後まで得た。FIXFc抗原および活性の両方の薬物動態は、本研究において、モデル依存的およびモデル非依存的方法を用いて、独立して特徴付けられた。FIXFcは、体重に対して12.5、25、50、および100IU/kgの単回IV用量の投与後、良好な忍容性を示した。本研究において、薬物関連の重篤な副作用の兆候はなかった。rFIXFcに対する中和または結合抗体は、いかなる対象においても検出されなかった。CmaxおよびAUCINFにおけるほぼ用量に比例した増加が、12.5~100IU/kgの用量の投与後、FIXFc抗原および活性の両方について観察されたが、VおよびClは、全ての用量にわたって同様であった。これらの結果は、FIXFc抗原および活性が、評価された用量範囲にわたって線形薬物動態を示したことを示す。比較的小さいVパラメーター値は、FIXFcが、間質液に侵入するが、細胞膜を通過して細胞内液まで至ってはいないことを示し得る。FIXFc抗原および活性のピーク血漿レベルは、注入終了後0.5時間以内に観察され、投与後数日間検出可能であった。クリアランス低下および半減期の延長の証拠が、FIXFc抗原および活性の両方において観察された。50および100IU/kgの用量レベルにおけるFIXFc抗原濃度と関連する平均クリアランスおよび終末消失半減期の値は、それぞれ、2.28および2.11mL/時間/kgならびに110および95.8時間であった。同様に、同一の用量範囲にわたるFIXFc活性レベルと関連する平均クリアランスおよび終末消失半減期の値は、それぞれ、3.77および2.89mL/時間/kgならびに52.1および52.5時間であった。BENEFIX商標活性に対して報告されたPK2009年11月18日付のBENEFIX商標の製品概要との、本研究において観察されたFIXFc活性PKの結果の比較は、BENEFIX商標と比較して、FIXFcクリアランスの約3倍の低下ならびにFIXFc終末消失半減期および平均滞留時間の両方の約3倍の増加を示した。PKにおける観察された改善により、FIXFcは、出血からの長期保護を提供し、B型血友病に罹患している個人について、注射頻度の低下を可能にする。この試験の結果に基づいて、rFIXFcは、100IU/kgの用量を用いて、2週間ごとまたは1ヶ月に2回、およびより低い用量を用いて少なくとも1週間に1回投与され得る。そのようなレジメンは、より少ない注射を必要とする。加えて、rFIXFcの使用は、中心静脈アクセス、改善されたレジメンのコンプライアンス、破断出血の低下、および出血からの関節保護の増加等の他の潜在的な臨床的影響を有する。実施例2.B-LONGの第1/2/3相試験これは、重篤なB型血友病に罹患している以前に治療されたことのある対象における、出血の保護および治療時の組換え型長時間作用型凝固第IX因子Fc融合rFIXFcの安全性、薬物動態、および有効性の非盲検多施設評価である。現在市販されているFIX製品による治療は、1週間に2~3回の投与を必要とする。1週間に1回またはそれより長くまで所要投与間隔を延長する長期間の半減期を有する製品が、重篤な血友病患者の治療のために著しい改善として医学界で検討されている。臨床的予防研究において、用量レベルは、rFIX製品について大きく異なる:報告された用量は、10~171IU/kgRothetal.,Blood98:36002001または40~100IU/kgMASACRecommendation177,NationalHemophiliaFoundationOct.2006である。さらに、出血の臨床的兆候のない対象における、予防治療中のFIX活性のトラフレベルは、0.2~3.8IU/dLの範囲であると予測されるCarlssonetal.,Hemophilia4:831998。患者個人間の変動性を考慮して、患者の臨床状態に基づいた個人に合わせた用量レジメンが、一般的な慣行である。rFIXFcの冷凍液剤の単回投与の安全性および薬物動態を評価する第1/2a相試験の結果実施例1は、薬物が1~100IU/kgの範囲に及ぶ用量で忍容性が良好であることを示し、PK特性が現在利用可能な治療を超える幾つかの利点、即ち、BENEFIX商標に対して以前に報告されたものよりも3倍長い半減期およびMRT61時間対19時間を示唆している。本研究の目的は、ヒトにおける凍結乾燥されたrFIXFcのPKパラメーターの推定値を予測決定すること、ヒトにおけるBENEFIX商標PKパラメーターの推定値とこれらを比較することと、ならびに出血の予防および治療時の凍結乾燥されたrFIXFcの有効性および重篤なB型血友病に罹患している以前に治療されたことのある対象に対するその反復投与の安全性を示すことである。本研究は、4つの治療群:低用量の予防レジメンn=25、高用量の予防レジメンn=25、オンデマンドレジメンn=20、および大外科手術レジメンn=5を必要とする。低用量のレジメン治療群は、BENEFIX商標による投与後、rFIXFcとの交差混合を有するPK亜群n=16を含む。本研究の第1の目的は、全ての治療群におけるrFIXFcの安全性および忍容性を評価すること、全ての治療群におけるrFIXFcの有効性を評価すること、ならびにオンデマンド療法について予防効果を評価すること治療群1および2対オンデマンドレジメン治療群3の間での出血症状の年率の比較である。本研究の第2の目的は、rFIXFcおよびBENEFIX商標のPKパラメーターの推定値を比較すること、オンデマンドおよび外科手術治療群におけるrFIXFcの有効性を評価すること、PK亜群におけるベースラインおよび26週目±1週間のrFIXFcのPKパラメーターの推定値を評価し、比較すること、全ての治療群における治療に対する対象の応答を評価すること、ならびに全ての治療群におけるrFIXFcの消費量を評価することである。主な組み入れ基準:12歳以上の少なくとも40kgの体重のある男性B型血友病2以下のベースライン第IX因子レベルであると診断されるいかなる第IX因子製品に対して少なくとも100日の曝露日の経歴血小板数が100,000細胞/μL以上試験室の正常範囲によって定義される、1.40以下のINR国際標準比CD4数が200細胞/μL以上主な除外基準:第IX因子インヒビターの経歴腎臓または肝機能障害B型血友病以外の別の凝固障害であると診断されるいかなるFIXまたはIV免疫グロブリン投与に伴うアナフィラキシーの前歴全身免疫抑制薬を摂取例えば、全身性コルチコステロイド;しかしながら、HAART高活性抗レトロウイルス療法は認められる実施例3.HEK293細胞におけるFIXFc産生FIXFcは、FIXFcFc領域に直接融合される天然FIXの発現カセットおよびFcのみの発現カセットを含む安定にトランスフェクトされたHEK293細胞中で産生された。細胞はまた、FIXプロペプチドの全てのプロセシングを可能にするプロセシング酵素である、PC5の発現カセットでもトランスフェクトされた。トランスフェクトされた細胞は、ビタミンKを含有する無血清懸濁培地中で増殖し、それらは、3つのタンパク質:FIXFcダイマー、FIXFcモノマー1本のFIXFc鎖および1本のFc鎖、Fcダイマーを分泌した。FIXFcモノマーFIXFcは、カラムクロマトグラフィープロテインA、FractogelDEAE、および低イオン強度のCaCl2により溶出した擬似親和性のQセファロースによって精製し、ヒト対象への投与のために、ウイルス不活性化、および濾過された。Petersetal.,Blood.2010Mar11;11510:2057-64Epub2010Jan7、および米国特許第7,566,565号も参照されたく、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。FIXFcの凝固活性は、MLAElectra1600CMedicalLaboratoryAutomation/InstrumentLabs,Pleasantville,NYを用いて、FIX欠損血漿の凝固活性を回復されるその能力を定量化することによって測定された。結果は、世界保健機関のFIX標準品の連続希釈を用いて生成した較正曲線と比較された。第IX因子のセリンリン酸化およびチロシン硫酸化は、生体内回収において重要であると考えられている。MONONINE商標CSLBerhingにより市販されている血漿を精製した第IX因子pdFIXが、MONONINE商標のより高いリン酸化/硫酸化レベル>90/>90対<10/5のため、BENEFIX商標Wyethにより市販されている組換え型FIXrFIXよりもより良好な生体内回収率を有することが報告されている。しかしながら、HEK293細胞中で産生されたFIXFcは、ほとんどリン酸化/硫酸化<10/4、これは、BENEFIX商標と非常に類似しているがなく、BENEFIX商標0.7よりも良好なIVR1IU/kg当たり1.0IU/dLを示す。加えて、上記のように産生されたFIXFcは、MONONINE商標pdFIXまたはBENEFIX商標rFIX0.1のいずれかよりも、著しく低い10~100倍レベル0.01~0.001の製品関連の不純物である活性化FIXFIXaを有した。得られたFIXFcは、投与時、MONONINE商標またはBENEFIX商標よりも望ましくない血栓事象が少ない。実施例4.小児科研究:成人および小児科集団における発達間の外挿および相互関係FIX薬物動態との関係を示す患者特性には、年齢によって異なる生理的変化BjorkmanandBerntorp,Clin.Pharmacokinetics40:815-322001;およびBjorkman,Hemophilia9suppl1:101-102003、ならびに体の大きさおよび構成Shapiro,Hemophilia11:571-822005が含まれる。したがって、FIXの体重によって調整されたクリアランスCLは、概して、幼年期から成人期への成長期間中、年齢および/または体重と共に減少し、対応して終末相半減期tl/2が増加することが分かっている。rFIX製品BENEFIX商標については、CLおよび定常状態での分布容積Vssは、子供において増加し、成人期中、一定のままであり、それ故に、これらのパラメーターは、小児科研究において、注意深く監視される。FIX凝固促進剤の活性FIX:Cのピークレベルは、FIXの単回および/または反復投与後、FIX:Cの初期分布容積によって異なる。FIXの初期分布は、急速である。しかしながら、BENEFIX商標の生体内回収率平均増分回収率は、一般に、モノクローナル抗体で精製した血漿由来凝固因子pdFIXのものよりも30低いRothetal.,Blood98:3600-36062001。さらに、pdFIXを用いた研究は、15歳以下の対象は、15歳を超えるものよりも著しく低い回収率を有することを示しているWhiteetal.,Thromb.Haemost.73:779-841995。したがって、トラフおよびピークレベルのモニタリングもまた、小児科研究において行われる。子供が、成人と比較して異なる応答を示すことを研究が示しているので、、50IU/kgのrFIXFcを用いるベースラインでの薬物動態評価は、簡易な薬物動態サンプリングを用いて子供において行われる。重篤なB型血友病に罹患している18歳以上のPTPにおける、rFIXFcの単回静脈内投与の安全性および薬物動態プロファイルを評価する第1/2a相試験SYN-FIXFc-07-001が、最近、完了した。ヒトにおけるこの最初の調査からの予備試験の結果は、BENEFIX商標についての文献において報告されているものと比較して、rFIXFcの薬物動態パラメーター平均終末相半減期、MRT、およびAUCにおける約3倍の増加を示す上記参照。さらに、rFIXFcは、良好な忍容性を示し、注射部位反応の兆候、ならびにインヒビターの発生もなかった。同時に、これらの安全性および薬物動態の結果は、重篤なB型血友病に罹患している12歳以上<2の104人のPTP既存の製品に少なくとも100治療EDにおいて、出血の予防および治療時、rFIXFcの安全性、薬物動態、および有効性を評価する第1/2/3相登録研究998HB102研究B-LONG、上記参照の開始を支持する。一旦十分な安全性データが登録研究から利用可能になると、子供におけるrFIXFcの安全性および有効性をさらに調査するために小児科プログラムが開始される。ヒトにおけるrFIXの長期間の半減期の表示は、出血の予防および治療に必要とされる、B型血友病に罹患している個人への注射頻度がより少ないことを意味する。以前に治療されたことがある子供12歳未満における第2/3相の小児科PTP試験一旦、登録研究998HB102研究から26EDの間の10人のPTP12歳以上についてデータが利用可能になると、小児科研究の第3相が開始される。この第2/3相小児科研究は、登録前にFIX製品に対して少なくとも50EDを有したことがあるPTPにおいて、約25の臨床施設で世界的に行われる。重篤なB型血友病2IU/dL未満[2未満]の内因性FIXに罹患している2~11歳の約25人のPTP20人の評価可能な対象を確保するためが、予め定められた基準に従ってスクリーニングおよび選択される。全ての評価可能な対象は、本研究の薬物動態部分試験前のFIX製品のPK、次いで、rFIXFcのPKを完了し、52週間、1週間に1回、rFIXFcの投与を受ける。本研究は、rFIXFcの増分回収率、インビボ半減期、AUC、およびクリアランスを記録する。全ての対象は、試験前のFIXおよびrFIXFcについてベースラインで薬物動態評価を行い、各対象に対する試験期間は、スクリーニングおよび追跡試験を含み、約69週間である。各対象は、薬物動態評価に関してベースラインで50IU/kgのrFIXFcを受け、続いて、1週間に1回、50~60IU/kgのrFIXFcによる反復投与を受ける。患者のコンプライアンスに関しては、簡易な薬物動態サンプリングが、試験前製品およびrFIXFcについて以下のように利用される:投与前、注射終了、注射終了から3010分後、3±1時間後、24±31日目、72±33日目、120±35日目、および168±3時間後7日目。免疫原性に対処するために、全ての対象は、最低50EDの間、1週間に1回、rFIXFcにより治療される。arFIXFcの注入前および注入から30分後のバイタルサイン脈、血圧、呼吸数、温度、b血液学および凝固パラメーター、c臨床化学、dNijmegen改変Bethesdaアッセイを用いた頻繁なFIXインヒビターの判定第1の曝露直前、ED4[4週目]、ED12、ED24、ED36、およびED50、ならびにe副作用等の安全性パラメーターが、即時的な安全性および忍容性評価に含まれる。有効性は、出血症状数、出血間隔、年および事象当たりのFIXの治療数および消費量の評価によって評価される。以前に治療されたことがない子供0~11歳における第2/3相の小児科PUP試験一旦、薬物動態を完了し、および50EDを有する10人の以前に治療されたことがある子供2~11歳からのデータが先行する研究において利用可能になると、第2/3相の小児科PUP研究が開始される。本研究は、約60の臨床施設で世界的に行われる。重篤なB型血友病2IU/dL未満[2未満]の内因性FIXに罹患している0歳以上の最大30人のPUP20人の評価可能な対象を確保するためが、予め定められた基準に従ってスクリーニングおよび選択される。本研究への参加は、治療の開始が修正された予防レジメンとしてrFIXFcを用いて始まり得るため、異なる。患者当たりの研究の参加は、スクリーニングおよび追跡試験を含む、約4年であると期待される。この期間中、ほとんどの患者は、rFIXFcに対して50EDを達することが期待される。免疫原性に対処するために、全ての対象は、約50EDのrFIXFcまたは最高4年間、治療される。aNijmegen改変Bethesdaアッセイを用いた頻繁なFIXインヒビターの判定およびb副作用等の安全性パラメーターが即時的な安全性および忍容性に含まれる。有効性は、出血症状数、出血間隔、年および事象当たりのFIXの治療数および消費量の評価によって評価される。実施例5.非ヒト動物における生化学特性、活性、およびPK解析実施例3において産生されたrFIXFcは、その翻訳後修飾について特徴を調べられ、以下の結果を得た表15および図11を参照。rFIXFcのプロペプチドは、産生中、適切にプロセッシングを受けた。rFIXFcのγカルボキシル化型は、rFIXのものと同様であった。さらに、rFIXFcの全Gla/分子11.2±0.7は、rFIXに匹敵する。ある残基でのγカルボキシル化は、FIX活性にとって不可欠であるため、これらは、重要な結果である。加えて、rFIXFcのSer158のリン酸化およびTyr155の硫酸化は、rFIXに匹敵する。FIXにおけるN結合型グルカンは、完全にシアル化されず、rFIXと同様である。第1のEGFドメインにおけるrFIXFcO結合型グルコシル化は、異なる相対比率であっても、FIXと同一であった。rFIXFcのAsp64は、rFIXまたは血漿由来FIXpdFIXよりもより高度のβヒドロキシル化があった。活性化FIXは、実施例3に詳細が論じられるように、rFIXまたはpdFIX調製物においてよりもrFIXFc調製物においてはるかに低いレベルで存在した。加えて、rFIXFcは、様々な動物種に投与され、その活性およびPKパラメーターを決定した。結果を表16および図12~16に示す。実施例6.γカルボキシル化本研究の目的は、前臨床ロットのFIXFc材料および市販されているFIX製品におけるグルタミン酸のγカルボキシル化Glaを分析および特徴付けること、擬似親和性クロマトグラフィーのイオン交換ステップに由来する濃縮されたピーク画分および高塩溶出ストリップ画分のGlaの含有を特徴付けること、陰イオン交換HPLCによって濃縮されたピーク画分および高塩溶出ストリップ画分をさらに分離すること、ならびに分離された種をさらに特徴付けることであった。これらの目的を達成するために、多くの相補的解析方法が開発された。これらには、全Glaの含有を判定するために塩基性加水分解を用いるアミノ酸分析AAA、Gla分布を判定するためのLys-Cペプチドを用いるペプチドマップLC/MS、アイソフォームを分離するための無傷分子の分析的陰イオン交換HPLC、および生物活性を判定するための活性化部分トロンボプラスチン時間aPTTが含まれる。2つのGlaEを含有するペプチドは、以下のものである30マイクログラムの試料濃縮されたピーク画分、高塩ストリップ画分、分析的陰イオン交換HPLCからのそれぞれの種に由来が、変性、還元、アルキル化、およびLys-C1:20、E:Sで消化された。この消化は、2TFAで反応停止させ、JupiterC182.0×250mmPhenomenexカラム上に注入された。分離は、Agilent1100システムにおいて行われた。カラムは、25°Cで維持され、ペプチドは、マルチステップのアセトニトリル勾配で溶出された。質量分析法Thermo-FisherLCQは、トリプルプレーTriplePlayモードで行われた。前臨床rFIXFc材料のGlaの含有および分布を分析および特徴付けるために相補的方法が開発された。前臨床のロットのrFIXFc濃縮されたピーク画分において、γカルボキシル化されたグルタミン酸Glaの含有および分布が行われ、市販されている製品と比較された。分析は、市販されている製品について同様のGlaの含有および分布を示した。高塩溶出ストリップ画分が分析され、濃縮されたピーク画分と比較された。分析は、γカルボキシル化レベルの低下を示した。FIXFc濃縮ピーク画分は、擬似親和性クロマトグラフィーのイオン交換ステップから単離され、分析的陰イオン交換HPLCによって、3つのアイソフォームにさらに分離された。AEXカラムロードおよび分離された種は、高度にγカルボキシル化されていたAEXカラムロードは、擬似親和性クロマトグラフィーのイオン交換ステップからの高塩溶出ステップ中に回収されたストリップ画分である。。AEXカラムロードおよび分離された種は、生物学的に活性があった。Glaの含有および分布は、rFIXと同様であった。ペプチドマップは、K3ペプチドにおける4/5/6Glaの分布を示す。ペプチドマップは、K1K2ペプチドにおける高集団の6Glaおよびトレースレベルの5Glaを示す。FIXFcストリップピーク画分は、擬似親和性クロマトグラフィーのイオン交換ステップから単離され、分析的陰イオン交換HPLCによって、2つのアイソフォームにさらに分離された。AEXカラムロードおよび分離された種は、γカルボキシル化レベルが低下していた。FIXFcが濃縮されたピーク画分と比較して、Glaの含有量の低下があった。生物活性レベルの低下が観察された。ペプチドマップは、濃縮されたピーク画分と比較して、K1K2において、増加した集団の5Glaを示し、生物活性における影響を示唆し得る。参照文献これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる:DumontJA,etal.,MonomericFcFusionMoleculesinTherapeuticAbs-FromBenchtoClinic,Ch.33p779-795、GillisS,etal.,ProteinScience19976:185、WhiteGC,etal.,J.ThrombosisandHaemostasis199778:261、HanssonK,andStenfloJ,JournalThrombosisandHaemostasis20053:2633、およびPetersRT,etal.,Blood2010115:2057。実施例7.B型血友病マウス出血モデルにおけるrFIXFc凝固促進剤活性の評価rFIXFcおよびBENEFIX商標の同等の効能が、インビトロでのB型血友病マウスの全血ROTEMおよびインビボでのB型血友病マウスの尾部切断出血モデルにおいて示された。強力かつ安定した凝固を形成するrFIXFcの能力は、活性剤として塩化カルシウムを用いるRotationThromoboelastometryROTEM登録商標、PentapharmGmbH,Munich,GermanyNATEMによって評価された。B型血友病マウスからの大静脈を介して採取されたプールされた全血を、7つのアリコートに分割し、これに、最終濃度が正常な血漿FIX活性の7.4、0.74、および0.074になるようにrFIXFcを混入するか、または正常な血漿FIX活性の10、1、0.1になるようにBENEFIX商標を混入した。陰性対照として、血液試料に、FIX配合緩衝液を混入した。5匹のB型血友病マウスから合計10個の血液プールを生成して、評価を完成させた。NATEM反応は、CaCl2の添加によって開始された。凝固時間CT、凝固形成時間CFT、およびα角度を含む、凝固パラメーターを評価した。CT、CFT、およびα角度の平均および標準偏差を表17に要約する。3つのパラメーターに対する用量反応を図17にプロットする。3つのパラメーターは全て、試験した用量範囲において、rFIXFcとBENEFIX商標との間で同等であった一元配置分散クラスカルワリス分析によりp>0.05。rFIXFcの急激な有効性もまた、B型血友病マウス尾部切断出血モデルにおいて評価された図18。雄B型血友病マウスを、異なる処置群において体重および年齢の同等の提示のために階級化した。尾部切断損傷前に、マウスを、50mg/kgのケタミンおよび0.5mg/kgのデクスメデトミジンのカクテルで麻酔し、加温パッド上に置いて、体温の維持に役立てた。次いで、マウスの尾を37°Cの水中で10分間浸漬し、尾静脈を拡張させた。静脈を拡張させた後、rFIXFc、BENEFIX商標、または媒体を、尾静脈を介して注入し、5分後、尾の先端から4mmを、直刃の11番外科用メスを用いて切断した。流出した血液を13mLの温生理食塩水中に30分間採取し、血液損失を重量測定法で定量化した。6つのrFIXFc処置群720、360、240、120、80、40IU/kg、n=15および3つのBENEFIX商標処置群360、120、40IU/kg、n=15を試験した。個々の動物の血液損失値および中央血液損失の用量反応曲線を図19Aに示し、各処置群の中央血液損失体積を表18に要約する。rFIXFcおよびBENEFIX商標の両方について中央血液損失体積の用量反応は、同等であるウェルチ補正付き不対t検定によりp=0.9315。BENEFIX商標と比較して、rFIXFcの3倍延長した半減期が、rFIXFcの有効性の延長をもたらすか判定するために、本発明の発明者は、エクスビボROTEM登録商標アッセイおよびB型血友病マウスにおける尾静脈切断出血モデルTVTの両方において、rFIXFcおよびBENEFIX商標の有効性を評価した。図20。エクスビボROTEM登録商標のために、雄B型血友病マウスは、静脈内注入によって50IU/kgのrFIXFcまたは100IU/kgのBENEFIX商標を受容した。全血を、rFIXFcを投与してから5分後、24、72、96、120、168、および216時間後各時点でn=8匹のマウス、またはBENEFIX商標を投与してから5分後、24、48、72、および96時間後n=4匹のマウス/時点、処置した動物の大静脈から採取した。血液試料は、NATEMによって直ちに分析された。CT、CFT、およびα角度の平均および標準偏差を表19に要約し、CT、CFT、およびα角度対時間曲線を図21に示す。BENEFIX商標と比較して、rFIXFcは、5分で、同等のCT、CFT、およびα角度を示したが、BENEFIX商標と比較して2倍低い用量にもかかわらず、72時間後、著しく改善されたCT、CFT、およびα角度を示した。rFIXFcおよびBENEFIX商標の予防的有効性を評価するために、雄B型血友病マウスを、9つの異なる処置群において体重および年齢の同等の提示のために階級化した。rFIXFcは、尾静脈切断の72時間前に、4IU/kg、13IU/kg、40IU/kg、および120IU/kgの用量で、静脈内注入によって投与され、一方、同じ用量のBENEFIX商標が、損傷の24時間前に投与された。尾静脈切断前に、マウスを、50mg/kgのケタミン/0.125mg/kgのデクスメデトミジン/0.1mg/kgのBuprenexのカクテルで麻酔した。尾静脈切断後、マウスに正常な活動を維持させるために、1mg/kgのアチパメゾール溶液を与えて、デクスメデトミジンの作用を低減し、尾の直径が約3mmである領域で直刃の11番外科手術用ナイフを用いて直ちに尾静脈切断を行った。流出する血液を温生理食塩水で洗浄し、外傷の観察を確保し、マウスを、その後24時間、白色紙を敷いた清潔なケージに一匹ずつ収容した。損傷後、最高12時間まで1時間ごとに再出血および身体的活性を観察し、記録した。瀕死のマウスは、同定後直ちに殺処分し、損傷から24時間後の検査を行い、本研究を完了した。殺処分までの時間のカプランマイヤー曲線およびTVTから24時間後の生存率の図表を図22に示す。ログランク検定は、4IU/kgよりも高い用量を用いた全ての処置群が、媒体群よりも有意に良好であると判定したp<0.001。さらに、生存率は、損傷の24時間前にBENEFIX商標の用量と、損傷の72時間前に同じ用量のrFIXFcを受容したマウス間で同等である4、13、40、および120IU/kgの用量群で、それぞれ、p=0.4886、0.9268、0.7279、および0.5209。TVTから24時間後の生存率が、プロットされ、各分子のED50値が、曲線から補外法により推定され、2つの処置のED50は、rFIXFcについては17.8IU/kgで、rFIXについては15.4IU/kgで同様である。したがって、rFIXFcは、尾静脈切断損傷後の生存および再出血によって測定されたように、BENEFIX商標の同等の用量と比較して、B型血友病マウスにおいて、3倍長い保護持続時間を提供した。したがって、rFIXFcは、尾静脈切断損傷後の生存および再出血によって測定されたように、BENEFIX商標の同等の用量と比較して、B型血友病マウスにおいて、3倍長い保護持続時間を提供した。結論として、データが示すように、15.4IU/kgのBENEFIX商標により、投与から24時間後に50のB型血友病マウスが尾静脈切断から生存する結果になるのに対して、17.8IU/kgのrFIXFcが、投与から72時間後、損傷した動物において、50の生存率を達成した。したがって、rFIXFcは、BENEFIX商標と比較してその半減期延長との相関において、3倍長い予防的有効性を示す。出血モデルからの結果は、100IU/kgのBENEFIX商標または50IU/kgのrFIXFcのいずれかで処置されたB型血友病マウスからの全血のエクスビボROTEM登録商標分析によってさらに確認される。投与から5分後、凝固形成における同等の改善が、両方の処置群において観察された。しかしながら、凝固時間、凝固形成時間、およびα角度等の主要なROTEM登録商標パラメーターが、BENEFIX商標と比較して2倍低い用量のrFIXFcにもかかわらず、投与から72~216時間後、rFIXFcで処置されたマウスにおいて、著しく改善された。要約すると、rFIXFcの急激な効能は、インビトロでの全血ROTEM登録商標およびB型血友病マウスにおける尾部切断出血モデルの両方において示されるように、BENEFIX商標のものと同等である。rFIXFcの予防的有効性の延長が、処置されたB型血友病マウスからのエクスビボ全血ROTEM登録商標において示され、B型血友病マウスにおける尾静脈切断出血モデルにおいて、BENEFIX商標と比較して、約3倍長いと決定された。rFIXFcの有効性の延長は、B型血友病マウスにおける薬物動態研究において上に示されるBENEFIX商標と比較して、3倍長いrFIXFcのT1/2とよく相関する。したがって、rFIXFcは、投与頻度を軽減する可能性と共に予防的保護の著しい延長を達成しつつ、オンデマンド治療に対して十分活性があるが、このことは、第3相試験において調査中である。実施例8.FIX欠損マウスにおける単回皮下投与後のrFIXFcおよびBENEFIX商標の薬物動態および薬力学的分析組換え型第IX因子FcrFIXFcおよびBENEFIX商標rFIXの薬物動態PKおよび薬力学的PDプロファイルは、FIX欠損マウスにおいて、200または400IU/kgの単回静脈内注入または皮下注入後、決定された。全血が、大静脈を介して採取されたn=4匹のマウス/時点/処置。血漿中のrFIXFcおよびBENEFIX商標の濃度は、ヒトFIXに特異的なELISAを用いて測定された。rFIXFcおよびBENEFIX商標の活性は、活性化部分トロンボプラスチン時間aPTTアッセイを用いて、決定された。PK分析は、WinNonLinを使用するモデル依存的方法を用いて行われた。これらの結果を表22および23に示す。FIXFcについては、FIX欠損マウスにおけるバイオアベイラビリティは、それぞれ、23および19であるrFIXと比較して、200IU/kgの用量で、38、混合した用量で、38~46抗原ELISAであり、200IU/kgの用量で、29、混合した用量で、29~39aPTT活性アッセイであった。rFIXFcは、BENEFIX商標と比較して、1.5~1.7倍200IU/kgの用量および1.5~2.5倍混合した用量の改善されたバイオアベイラビリティを有した。rFIXFcについては、終末相半減期抗原ELISAは、200IU/kgの用量で、62時間、混合した用量で、51~62時間であり、終末相半減期aPTT活性アッセイは、200IU/kgの用量で、42時間であり、混合した用量で、40~42時間であった、一方、BENEFIX商標については、終末相半減期は、200IU/kgの用量で、24時間抗原ELISAであり、200IU/kgの用量で、17時間aPTT活性アッセイであった。これは、rFIXFcについて、2.5~2.6倍200IU/kgの用量および混合した用量の半減期の改善を示す。加えて、表22および23が示すように、rFIXFcに、BENEFIX商標に対して、AUC/用量の4.5~5.6倍の増加およびCmax/用量の1.9~3.7倍の増加があった。組換え型第IX因子Fc融合rFIXFcタンパク質は、B型血友病の治療のためにrFIXのより少ない頻度の投与を提供する長時間作用型の組換え型FIXrFIXである。マウスから非ヒト霊長類まで、およびB型血友病患者において、rFIXFcは、rFIXBENEFIX商標に対して、約3倍長い半減期を有する。予防的治療については、rFIXの静脈内送達は、特に、子供およびアクセスしにくい血管を有する患者にとっては、依然として負担となる送達方法である。rFIXの皮下投与は、より低侵襲的であり、かつより少ない頻度の投与による、より魅力のある送達経路として存在する。したがって、rFIXFcの皮下投与は、静脈内経路よりも投与しやすく、より短時間で投与されるため、静脈内送達よりも痛みも不快感も少なく、改善されたコンプライアンスをもたらす。予防レジメンはまた、生活の質も改善し、臨床転帰には、出血の発生を減少が含まれるであろう。マウス血漿中のrFIXFcの濃度は、分子のFIX部分を測定するヒトFIXに特異的なELISAを用いて測定され、mg/kgの名目用量が、分析において使用された。rFIXFcおよびBENEFIX商標についてのPKパラメーターの要約を、n=4/群について、表20抗原ELISAおよび表21aPTT活性アッセイに示す。抗原および活性による両方の分析は、CmaxおよびAUCが、BENEFIX商標に対してrFIXFcにおいて著しく改善されたことを示した。抗原ELISAを用いるとき、バイオアベイラビリティFは、BENEFIX商標で23であるのに対してrFIXFcで38であった。同様に、aPTT活性アッセイを用いるとき、バイオアベイラビリティは、BENEFIX商標で19であるのに対して、rFIXFcで29であった。したがって、rFIXFcは、BENEFIX商標に対して1.5~1.6倍のバイオアベイラビリティの増加を示した。消失半減期の測定は、rFIXFcが、抗原アッセイBENEFIX商標の24時間に対してrFIXFcの62時間によって測定されようとも、活性アッセイBENEFIX商標の17時間に対してrFIXFcの42時間によって測定されようとも、半減期を著しく増加したことを示した。これらのデータは、rFIXFcが、BENEFIX商標と比較して、2.6~2.5倍延長した半減期を有したことを示す。FIX欠損マウスに皮下投与されたrFIXFcは、BENEFIX商標と比較して、rFIXFcに対してCmaxおよびAUCの増加を有するPKおよびPDプロファイルを示した。それぞれ、19~23のバイオアベイラビリティおよび17~24の半減期を有するBENEFIX商標と比較して、rFIXFcに対するバイオアベイラビリティは、概して、29活性~38抗原に及び、42時間活性~62時間抗原の半減期を有する。したがって、FIX欠損マウスにおいて皮下送達されたrFIXFcの半減期は、静脈内投与された現在市販されているrFIX製品に対して約2.2抗原~3.3活性倍の増加を示した。概して、これらのデータは、皮下送達されたrFIXFcは、B型血友病患者における予防的治療に臨床的有益性があるという考えを支持する。実施例9.カニクイザルにおける単回皮下投与後のrFIXFcの薬物動態分析組換え型第IX因子FcrFIXFcの薬物動態PKプロファイルは、50IU/kg、100IU/kg、または200IU/kgの単回皮下投与後のカニクイザルにおいて、研究された。血漿中のrFIXFcの濃度は、FIXに特異的なELISAを用いて測定された。一次解析は、WinNonLinを使用するモデル依存的方法を用いて行われた。表22~25を参照のこと。血漿濃度対時間データFIXに特異的なELISAにより測定の薬物動態分析は、バイオアベイラビリティおよび終末相半減期が用量間で同様であったことを示した。rFIXFcのバイオアベイラビリティは、4050IU/kg、34100IU/kg、36200IU/kg、および36~45混合した用量であった。rFIXFcの終末相半減期は、61時間50IU/kg、45時間100IU/kg、49時間200IU/kg、および44~58時間混合した用量であった。サル血漿中のrFIXFcの濃度は、分子のFIX部分を測定するFIXに特異的なELISAを用いて測定され、mg/kgの名目用量が、分析において使用された。スパイクおよび回収解析は、評価した血漿濃度の範囲にわたって、rFIXFcを検出するためのこのFIXに特異的なELISAアッセイの正確性を示した。rFIXFcのPKパラメーターの要約を、n=3/群について、表2250IU/kg、表23100IU/kg、および表24200IU/kgに示す。rFIXFcについては、SC、幾何平均、およびCmaxについての幾何平均のCVは、それぞれ、8602250IU/kg、163097100IU/kg、および3,75026200IU/kgであり、用量依存的な増加を示した。同様の増加が、AUCに対して見られた。バイオアベイラビリティFについての幾何平均は、401650IU/kg、3075100IU/kg、および3627200IU/kgであり、バイオアベイラビリティが用量間で同様であったことを示した。終末相半減期の測定は、半減期が5839時間50IU/kg、4513時間100IU/kg、および4644時間200IU/kgで用量間で同様であったことを示した。カニクイザルに皮下投与されたrFIXFcは、CmaxおよびAUCの用量依存的な増加を有するPKプロファイルを示した。概して、バイオアベイラビリティは、30~40に及び、45~58時間の半減期を有した。したがって、サルにおいて皮下送達されたrFIXFcの半減期は、静脈内投与された現在市販rFIX製品に対して約2.8倍の増加を示した。概して、これらのデータは、皮下送達されたrFIXFcが、B型血友病患者における予防的治療に臨床的有益性があるという考えを支持する。実施例10.予測される予防的投与レジメン1週間に2回または3回、25~40IU/kgのFIXの標準的な推奨される用量レジメンと比較して、上記の第1/2a相試験からの中央rFIXFc活性PK結果は、約22.5IU/kgで1週間に約1回、約45IU/kgで約10日ごと、または約120IU/kgで約2週間ごとのrFIXFの投与が、ベースラインよりも1上のトラフを維持するのに十分であることを示唆している図24。これらのモデルシミュレートされた推定値は、第1/2a相試験から利用可能なデータによって検証され、これらはシミュレートされた活性-時間曲線の95信頼間隔内に完全に入る。これらのレジメンは、しばしば、療法の開始時に役立つ。血漿FIX活性のトラフレベルに対して、報告された臨床的破断出血事象の不均一性を考慮すると、維持量は、個人に合わせて調整される必要がある。第1/2相試験実施例11を参照からのPK結果の再計算後の、例えば予防のための新しい予測される投与レジメンは、1週間に1回、20IU/kg、10日ごとに40IU/kg、または2週間ごと1ヶ月に2回に100IU/kgである。表27および図25も参照のこと。実施例11.ヒト初回FiH試験実施例1からの薬物動態データの再計算終止コドン/ナンセンス変異およびミスセンス変異等の様々なB型血友病の遺伝子型を有する対象は、実施例1において論じられるFiH試験に含まれた。幾人かの対象は、著しく減少したFIX活性と相関する著しく減少した内因性FIX抗原レベルを有したが、一方、ミスセンス遺伝子型を有する対象の中には測定された活性よりも多い抗原を有する者もあり、これは循環タンパク質の機能異常を示す。2人の対象における治療前FIX活性は、2IU/dLを超え、これは、過去の試験および疾病表現型に基づき、FIX濃縮物の最終注入からの不完全なウォッシュアウトによる可能性がある。この情報に基づいて、実施例1からのPKデータは、以下に詳細されるように、ベースライン減算することなく、再計算された。表27を参照のこと。糖PEG化rFIXのPK解析について最近報告されたNegrieretal.,BloodDOI10.1182/blood2011023355962011、これは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるように、rFIXFc活性PKがベースライン減算することなく、モデル化される場合、実施例1におけるPK計算活性に基づくと対照的に、消失半減期およびMRTの得られた推定値は、それぞれ、82.2±21.6および96.8±22.0時間平均値±標準偏差で、実施例1における推定値よりもはるかに長い。しかしながら、全ての重篤なB型血友病患者が、0の内因性FIX活性を有するとは限らないと知っているので、患者の遺伝子型および内因性FIX抗原レベルを考慮して、本発明の発明者は、PKモデリングにおいて、ベースライン減算解析法を採用した。具体的には、a2人の患者におけるベースラインは、治療前FIX活性が1未満であり、これらの患者はFIX抗原が検出されず、ナンセンス遺伝子型を有したため、0として定義され、b3人の患者のベースラインは、治療前FIX活性が1未満であり、これらの患者はFIX抗原が検出されたため、0.5で設定され、c治療前FIX活性が1~2であった患者については、CminPK研究を通しての最低活性がベースラインとして定義され、d治療前FIX活性が2以上であった患者については、本試験への登録の上限であった2がベースラインであった。投与前にベースラインを超える活性は、事前の治療からの薬物が残留していると考えられ、ベースラインまで減少させ、rFIXFc投与後、PKデータから差し引かれた。rFIXFcの得られた平均終末相半減期56.7±10.9時間、42.4~74.5時間の範囲およびMRT71.8±10時間、53.2~85.9時間の範囲は、rFIXについて報告されたものよりも約3倍長い。rFIXの報告された終末相半減期は、19.3±4.97時間11.1~36.4時間の範囲であり、MRTは、26.0±6.07時間15.8~46.1時間の範囲である。Rothetal.,Blood98:3600-36062001、およびBENEFIX商標の製品特性の概要、ElectronicMedicinesCompendium2010http://www.medicines.org.uk/emc/medicine/20376/SPC/BENEFIXTM/PHARMACODYNAMIC_PROPS、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。したがって、rFIXFcの範囲は、rFIXの範囲と重複しない。同様に、rFIXFc活性の平均CL3.18±0.78mL/時間/kg、2.05~4.18mL/時間/kgの範囲は、rFIXに対して報告されたもの8.40±2.01mL/時間/kg、4.66~13.64mL/時間/kgの範囲よりも約2.6倍少ないが、その一方、両方のタンパク質のVssは、血漿体積の4~5倍で同等である。改善に向かっての同じ傾向がrFIXFc抗原PKにおいて観察されたが、rFIXFc抗原のT1/2αおよびT1/2βの両方は、FIX活性測定に由来したものよりも著しく長かった。rFIXFc抗原について推定されたT1/2αは、FIXと通常関連するもの2~3時間から明らかに逸脱する。さらに、rFIXFcの注入前に試験前置換療法からのありそうな不完全なウォッシュアウトが、時々、より高いベースライン値をもたらすことがあり、これは、つまり、FIX活性によって測定される、rFIXFcのT1/2βの過小評価をもたらし得る。多くの対象は、投与から最高336時間14日後の時点で、aPTTアッセイの定量限度1IU/dLを軽く超えて、最大3IU/dLのaPTT活性があった。しかしながら、これらの時点は、値が治療前のベースラインであるか、またはわずかに上回っただけのため、終末相半減期の推定値から除外され、それ故に、ベースラインに戻ったと見なされた。対照的に、低いが検出可能なrFIXFcの終末相レベルは、1.0IU/dLというaPTTの下限と比較して、たった0.1IU/dLを検出する特異的かつ感受性の高いrFIXFc抗原ELISAによって明らかにされ得る。残りのPKパラメーター活性は、消失半減期およびMRTに関して、少量変化した。表27Bを参照のこと。FIX活性の用量に比例した線形増加が、注入直後に生じるCmaxおよびAUCINFに基づいて観察された表4。FIX活性は、rFIXFcの注入後、二重指数関数的減衰を示し、急速な分布α相、続いて、対数線形消失β相によって特徴付けられた。平均分布半減期T1/2αは、個々の対象について極めて可変的であった2つのより高用量群について、3.4および10.3時間という平均値表27B。平均消失半減期T1/2βは、試験した治療用量の範囲にわたって用量非依存的、即ち、25IU/kg、50IU/kg、および100IU/kgで、それぞれ、53.5時間、57.5±8.2時間、および56.5±14.1時間であった。rFIXFc活性の評価値であるベースラインよりも11IU/dL上に至るまでの時間は、用量に比例した増加を示した。それは、25、50、および100IU/kgの用量について、それぞれ、7.3、10.1±1.5、および12.3±2.5日であった。投与から168時間1週間後、血漿FIX活性は、25、50、および100IU/kgの用量群に対して、それぞれ、ベースラインよりも1.1IU/dL、2.5±0.9IU/dL、および4.6±1.7IU/dL上で持続した。また、25~100IU/kgの用量範囲にわたってMRT、CL、およびVssは、用量非依存的であった。さらに、注入されたrFIXFcの1IU/kgごとに、血漿FIX活性が平均で0.93±0.18IU/dL上昇し表27B、この増分回収率Kは、体重と弱い正の相関を示したR2=0.336、p=0.048。長期間の実験的な臨床経験が、1~2IU/dLもの低さである持続的な血漿因子活性が、重篤なA型およびB型血友病患者において、突発性出血事象を防ぐのに十分でありNilssonetal.,J.Intern.Med.232:25-321992、これは参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる、出血事象の増加は、正常なFVIII活性が1未満である時間と関連していることを示唆している。Collinsetal.,ThrombHaemost7:413-4202009、これは参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。したがって、PK解析は、ベースラインの11IU/dL上のトラフレベルの持続を達成し、ピーク/トラフ変動を減少させ、治療の費用対効果を改善するために、個人に合わせた用量モデリングを用いて予防的治療を最適化するための手段を提供する。Carlssonetal.,Haemophilia4:83-881998、Kiskeretal.,Haemophilia9:279~2842003、これらのそれぞれは参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。異なる投与レジメン後、濃度-時間プロファイルを作成するために、rFIXFcの集団PKモデルを用いて、モンテカルロシミュレーションを行った。試験した集団におけるモデルパラメーターCL、分布容積、コンパートメント間クリアランス、第2のコンパートメント容積の平均推定値、個人間分散、および残差変動が、この第1/2a相試験において採用された。Wangetal.,J.Clin.Pharmacol.49:1012~10242009、これは参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。各対象について14~16のサンプリング点を有する投与レジメンにつき、1000人の対象がシミュレートされた。1週間に1回の投与について14のサンプリング点、10日ごとの投与について15のサンプリング点、2週間ごとの投与について16のサンプリング点があった。体重BWを、Wangら2009の公開された方法に従って、即ち、Z=BW-0.5の指数方程式に基づいて得た。1000人の対象における中央BW値は、75kgであると仮定された。シミュレートされた濃度-時間プロファイルに基づいて、1000人の対象の薬物濃度-時間プロファイルの平均値±標準偏差SDが、異なる投与レジメンについてグラフを使って構築された。図25。1週間に2回、25~40IU/kgのFIXの標準的な推奨される用量レジメンと比較して、本研究からの中央rFIXFc活性PKモデリングの結果は、約20IU/kgで1週間に約1回、約40IU/kgで10日ごと、または約100IU/kgで2週間ごとのrFIXFの投与が、ベースラインよりも1上にトラフを維持するのに十分であることを示す。図25。これらのモデルシミュレートされた推定値は、第1/2a相試験から利用可能なデータによって検証され、これらはシミュレートされた活性-時間曲線の95信頼間隔内に完全に入る。しかしながら、血漿FIX活性のトラフレベルに対して、報告された臨床的破断出血事象の不均一性を考慮するとBjorkman,Haemophilia9:101-1102003、Ahnstrometal.,Haemophilia10:689-6972004、これらのそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、維持用量は、個人に合わせて調整される必要がある可能性があるであろう。"