"i配列番号:1に示される塩基配列の部分配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNAii配列番号:5に示される塩基配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNA、及びiii前記i又はiiに記載のアンチセンスRNAの変異体、バリアント、又は、前記i及びiiに記載のアンチセンスRNAにおいて1又は数個の塩基が欠失、付加若しくは置換されているアンチセンスRNAのいずれかのアンチセンスRNA以下、CTBP1-ASという。が発現している細胞の増殖抑制剤であって、CTBP1-ASの発現阻害物質又は機能阻害物質を有効成分として含む、細胞増殖抑制剤。前記CTBP1ASが、配列番号17~20のいずれかに記載の塩基配列からなるアンチセンスRNAである、請求項1に記載の細胞増殖抑制剤。前記発現阻害物質又は機能阻害物質が、以下のa~dからなる群より選択される化合物である、請求項1又は2に記載の細胞増殖抑制剤。aCTBP1-AS又はその一部に対するアンチセンス核酸bCTBP1-ASを特異的に切断するリボザイム活性を有する核酸cCTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖核酸da乃至cのいずれかに記載の核酸をコードする核酸前記発現阻害物質又は機能阻害物質が、CTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖RNAであって、該二本鎖RNAの一方が、CTBP1-ASにおける連続した19~30塩基の部分に相補的な配列からなる、請求項3に記載の細胞増殖抑制剤。前記発現阻害物質又は機能阻害物質が、CTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖RNAであって、該二本鎖RNAの一方が、配列番号:3~6及び24~52のいずれかに示される塩基配列に相補的な塩基配列からなる、請求項3に記載の細胞増殖抑制剤。前記CTBP1-ASが発現している細胞が、前立腺癌細胞及び/又はその転移癌細胞である、請求項1から5のいずれか1項に記載の細胞増殖抑制剤。請求項1から6のいずれか1項に記載の細胞増殖抑制剤を含む医薬組成物。請求項1から6のいずれか1項に記載の細胞増殖抑制剤を治療有効量投与することを含む、前立腺癌の予防又は治療方法。CTBP1-ASが発現している細胞の増殖抑制剤のスクリーニング方法であって:CTBP1-ASが発現している細胞又はその細胞抽出液と被検化合物とを、アンドロゲン存在下で接触させる工程と;CTBP1-ASの発現レベルを測定する工程と;被検化合物の非存在下で測定した場合と比較して、CTBP1-ASの発現レベルを低下させる被検化合物を選択する工程と、を含む方法。CTBP1-ASが発現している細胞の増殖抑制剤のスクリーニング方法であって:CTBP1遺伝子が発現している細胞又はその細胞抽出液と被検化合物とを、アンドロゲン存在下で接触させる工程と;前記CTBP1遺伝子の発現レベルを測定する工程と;被検化合物の非存在下で測定した場合と比較して、前記CTBP1遺伝子の発現レベルを上昇させる被検化合物を選択する工程と、を含む方法。前記CTBP1-ASが発現している細胞が、前立腺癌細胞及び/又はその転移癌細胞である、請求項9又は10に記載の方法。前立腺癌の予後を判定する検査方法であって:患者の前立腺から採取した細胞におけるCTBP1-ASの発現レベルを測定する工程と;前記発現レベルを正常な前立腺細胞における発現レベルと比較する工程と、を含む方法。前立腺癌の予後を判定する検査方法であって:患者の前立腺から採取した細胞におけるCTBP1遺伝子の発現レベルを測定する工程と;前記発現レベルを正常な前立腺細胞における発現レベルと比較する工程と、を含む方法。本発明は、アンドロゲン非依存性前立腺癌にも有効な、細胞増殖抑制剤を提供することを課題とする。上記課題を解決するために、本発明者らは、ARの阻害が前立腺癌の重要な治療法となっていること、また、内分泌治療が無効となるアンドロゲン非依存性癌においてはARのシグナルがARの変異や増幅によって活性化されていることから、ARの下流シグナルが治療標的として有効であると考えた。そこで、クロマチン免疫沈降法とタイリングアレイを組み合わせる方法ChIP-chip法;例えば、CawleySetalCell1162002499509、KaneshiroKetalGenomics892007178188を参照。によりヒト全ゲノムレベルでAR結合部位とヒストンH3アセチル化部位を同定し、さらに、CapanalysisgeneexpressionCAGE法;例えば、ShirakiTetalProcNatlAcadSciUSA10020031577681、FANTOMConsortiumNatGenet412009553562を参照。により、転写開始点をゲノムワイドで同定してプロモータの使用状況をプロファイルした。その結果、核内でコリプレッサーとして機能することが知られるCTBP1タンパク質が、ARの転写抑制因子として機能することを見出した。そして、CTBP1について研究を進めるなかで、CTBP1遺伝子のAR結合部位付近のセンスDNAの転写産物、即ち、CTBP1遺伝子のAR結合部位付近のアンチセンスRNAが、アンドロゲンによって強く誘導されることを見出した。そこで、RNAi法によって当該アンチセンスRNAの機能を抑制すると、CTBP1の発現がmRNAレベル、タンパク質レベルのいずれにおいても上昇する一方で、ARの転写活性は抑制され、前立腺癌細胞の増殖も抑制されることを確認した。また、当該アンチセンスRNAの発現量は、正常な前立腺に比較して、前立腺癌及びその転移癌細胞において有意に高く、CTBP1の発現量は、正常な前立腺に比較して、前立腺癌及びその転移癌細胞において有意に低いことを確認した。ヌードマウスの前立腺癌細胞移植モデルにおいても、当該アンチセンスRNAがCTBP1を負に制御していること、当該アンチセンスRNAに対するRNAi効果を有する二本鎖RNAを投与すると、前立腺癌の増殖が抑制されることを確認した。さらに、CTBP1ASを抑制することによって前立腺癌の増殖が抑制されるメカニズムについて、RNA結合性転写抑制因子であるPSFがCTBP1ASと結合し、この複合体が細胞周期を抑制する遺伝子の転写を抑制することによって、細胞増殖を促進すること;同複合体がCTBP1の発現を抑制する結果、ARによる転写活性化を促進すること;従って、CTBP1ASの発現を抑制すれば、細胞増殖を抑制し、ARの活性化を抑制すること、を見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、1i配列番号:1に示される塩基配列の部分配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNAii配列番号:5に示される塩基配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNA、及びiii前記i又はiiに記載のアンチセンスRNAの変異体、バリアント、又は、前記i及びiiに記載のアンチセンスRNAにおいて1又は数個の塩基が欠失、付加若しくは置換されているアンチセンスRNAのいずれかのアンチセンスRNA以下、CTBP1-ASという。が発現している細胞の増殖抑制剤であって、CTBP1-ASの発現阻害物質又は機能阻害物質を有効成分として含む、細胞増殖抑制剤;2前記CTBP1ASが、配列番号17~20のいずれかに記載の塩基配列からなるアンチセンスRNAである、請求項1に記載の細胞増殖抑制剤;3前記発現阻害物質又は機能阻害物質が、以下のa~dからなる群より選択される化合物である、上記1又は2に記載の細胞増殖抑制剤、aCTBP1-AS又はその一部に対するアンチセンス核酸bCTBP1-ASを特異的に切断するリボザイム活性を有する核酸cCTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖核酸da乃至cのいずれかに記載の核酸をコードする核酸;4前記発現阻害物質又は機能阻害物質が、CTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖RNAであって、該二本鎖RNAの一方が、CTBP1-ASにおける連続した19~30塩基の部分に相補的な配列からなる、上記3に記載の細胞増殖抑制剤;5前記発現阻害物質又は機能阻害物質が、CTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖RNAであって、該二本鎖RNAの一方が、配列番号:3~6及び24~52のいずれかに示される塩基配列に相補的な塩基配列からなる、上記3に記載の細胞増殖抑制剤;6前記CTBP1-ASが発現している細胞が、前立腺癌細胞及び/又はその転移癌細胞である、上記1から5のいずれか1項に記載の細胞増殖抑制剤;7上記1から6のいずれか1項に記載の細胞増殖抑制剤を含む医薬組成物;8上記1から6のいずれか1項に記載の細胞増殖抑制剤を治療有効量投与することを含む、前立腺癌の予防又は治療方法;9CTBP1-ASが発現している細胞の増殖抑制剤のスクリーニング方法であって:CTBP1-ASが発現している細胞又はその細胞抽出液と被検化合物とを、アンドロゲン存在下で接触させる工程と;CTBP1-ASの発現レベルを測定する工程と;被検化合物の非存在下で測定した場合と比較して、CTBP1-ASの発現レベルを低下させる被検化合物を選択する工程と、を含む方法;10CTBP1-ASが発現している細胞の増殖抑制剤のスクリーニング方法であって:CTBP1遺伝子が発現している細胞又はその細胞抽出液と被検化合物とを、アンドロゲン存在下で接触させる工程と;前記CTBP1遺伝子の発現レベルを測定する工程と;被検化合物の非存在下で測定した場合と比較して、前記CTBP1遺伝子の発現レベルを上昇させる被検化合物を選択する工程と、を含む方法;11前記CTBP1-ASが発現している細胞が、前立腺癌細胞及び/又はその転移癌細胞である、上記9又は10に記載の方法;12前立腺癌の予後を判定する検査方法であって:患者の前立腺から採取した細胞におけるCTBP1-ASの発現レベルを測定する工程と;前記発現レベルを正常な前立腺細胞における発現レベルと比較する工程と、を含む方法;及び13前立腺癌の予後を判定する検査方法であって:患者の前立腺から採取した細胞におけるCTBP1遺伝子の発現レベルを測定する工程と;前記発現レベルを正常な前立腺細胞における発現レベルと比較する工程と、を含む方法、に、関する。本発明の細胞増殖抑制剤によれば、CTBP1-ASの発現又は機能を阻害することにより、前立腺癌細胞などCTBP1-ASの発現が亢進している細胞の増殖を効率的に抑制することができる。本発明の細胞増殖抑制剤は、CTBP1-ASの発現又は機能を阻害することによってARの下流シグナルの転写活性を抑制するので、ARの変異や増幅によってARのシグナルが活性化されているアンドロゲン非依存性癌に対しても有効であるものと考えられる。本発明の細胞増殖抑制剤として、CTBP1-ASに対するRNAi効果を有する二本鎖核酸を用いれば、標的選択制が高く、細胞が本来持っている機構を利用するので安全性も高い。また、本発明は、CTBP1-ASの発現が亢進している細胞の増殖抑制剤を被検化合物から効率よく選択するスクリーニング方法、前立腺癌の予防又は治療方法、並びに、前立腺癌の予後を判定する検査方法も提供する。本発明に係る細胞増殖抑制剤は、CTBP1-ASが発現している細胞の増殖を抑制することを特徴とし、CTBP1-ASの発現阻害物質又は機能阻害物質を有効成分として含む。本明細書において、CTBP1とは、C末端結合タンパク質C-terminalbindingprotein1を意味し、CTBP1遺伝子とは、CTBP1タンパク質をコードする遺伝子を意味する。CTBP1は、核内でコリプレッサーco-repressorとして機能することが知られているKimJHetalNatStructMolBiol122005423428、SenyukVetalArchBiochemBiophys4412005168173。例えば、ZEB1遺伝子などの転写抑制に関与することが報告されており、一般に転写を負に制御すると考えられているChinnaduraiGIntJBiochemCellBiol39200715931607。後述する実施例に示されるとおり、本発明者らは、CTBP1が前立腺癌細胞において有意に発現が低下していること、また、mRNAレベル及びタンパク質レベルのいずれの発現においても、アンドロゲンに抑制されることを見出した。本明細書において、CTBP1-ASとは、CTBP1遺伝子のAR結合部位付近で発現する、以下のi~iiiのいずれかのCTBP1遺伝子のアンチセンスRNAを意味する。i配列番号:1に示される塩基配列の部分配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNA、及びii配列番号:5に示される塩基配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNA、及びiii前記i又はiiに記載のアンチセンスRNAの変異体、バリアント、又は、前記i又はiiに記載のアンチセンスRNAにおいて1又は数個の塩基が欠失、付加若しくは置換されているアンチセンスRNAなお、アンチセンスRNAとは、遺伝子の二本鎖DNAのうちセンス鎖センスDNAを鋳型として作られる転写産物を意味する。CTBP1ASは、本発明に係る細胞増殖抑制剤の標的となる分子である。生体内において、上記i~iiiのいずれかを満たすアンチセンスRNAは複数存在するが、それらのすべてがCTBP1ASとなり得る。以下、i~iiiをそれぞれ具体的に説明する。i配列番号:1に示される塩基配列の部分配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNA配列番号:1に示される塩基配列からなるCTBP1遺伝子のアンチセンスRNAは、そのcDNAがAccessionNumber:AX747592配列番号:2として知られるものであり、CTBP1遺伝子のAR結合部位付近のセンスDNAの転写産物である。配列番号:1に示される塩基配列の部分配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNAとしては、配列番号:1に示される塩基配列の一部の塩基配列のみからなるアンチセンスRNA;配列番号:1に示される塩基配列の5’末端を含む部分配列を含み、さらにその5’末端に1以上の塩基が結合しているアンチセンスRNA;及び、配列番号:1に示される塩基配列の3’末端を含む部分配列を含み、さらにその3’末端に1以上の塩基が結合しているアンチセンスRNA、が挙げられる。配列番号:1に示される塩基配列の部分配列を含む限り、生体内で発現しているアンチセンスRNAは、すべてiのアンチセンスRNAに該当するが、本発明の細胞増殖抑制剤の標的としては、配列番号:1に示される塩基配列の3’末端を含む部分配列からなるアンチセンスRNA、及び、配列番号:1に示される塩基配列の3’末端を含む部分配列を含み、さらにその3’末端に1以上の塩基が結合しているアンチセンスRNAが特に好ましい。ここで、配列番号:1に示される塩基配列の3’末端を含む部分配列としては、例えば、配列番号:1に記載の塩基配列の1300位から3’末端までの部分配列、1200位から3’末端までの部分配列、800位から3’末端までの部分配列、等が挙げられるがこれらに限定されない。ii配列番号:5に示される塩基配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNA配列番号:5に示される塩基配列を含むCTBP1遺伝子のアンチセンスRNAとしては、配列番号:5に記載の塩基配列のみからなるアンチセンスRNA、及び、配列番号:5に記載の塩基配列の3’末端及び/又は5’末端に1以上の塩基が結合しているアンチセンスRNA、が挙げられる。配列番号:5に示される塩基配列は、配列番号:1に記載の塩基配列の2348位~2372位に相当する。3’末端及び/又は5’末端に結合する塩基の数は特に限定されない。本発明者らは、後述する実施例に示すとおり、この領域を標的とするsiRNAを投与すると、ARの転写活性が抑制され、前立腺癌細胞の増殖も抑制されることを確認した。従って、配列番号:5に示される塩基配列を含むCTBP1-ASの発現阻害物質又は機能阻害物質が、本発明の細胞増殖抑制剤の有効成分として好適であることは明らかである。iiのアンチセンスRNAの例として、配列番号:23に記載の塩基配列を含むアンチセンスRNAも好ましい。iiii又はiiに記載のアンチセンスRNAの変異体、バリアント、又は、前記i及びiiに記載のアンチセンスRNAにおいて1又は数個の塩基が欠失、付加若しくは置換されているアンチセンスRNAi又はiiに記載のアンチセンスRNAの変異体又はバリアントとしては、例えば、5’オルタナティブスプライシングや3’オルタナティブスプライシングなどのスプライシングバリアントを含む各種のバリアント、一塩基多型SNPやコピー数多型CNVなどの多型、突然変異体例えば癌による突然変異体が挙げられる。これらの変異体やバリアントも、CTBP1遺伝子のAR結合部位付近のセンスDNAの転写産物として発現し得るものであり、本発明に係る細胞増殖抑制剤の標的となり得る。i又はiiに記載のアンチセンスRNAにおいて1又は数個の塩基が欠失、付加若しくは置換されているアンチセンスRNAで、欠失等する塩基の数は、それがCTBP1遺伝子のAR結合部位付近のセンスDNAの転写産物である限り特に限定されないが、1~10個、好ましくは1~5個、より好ましくは1~3個程度、あるいは全体の長さの10以内、好ましくは5以内、より好ましくは1以内である。欠失等する塩基の場所も特に限定されず、それぞれのアンチセンスRNAの5’末端又は3’末端であってもよく、末端以外の塩基であってもよい。また、複数個所において欠失、付加及び/又は置換されていてもよい。このようなアンチセンスRNAも、CTBP1遺伝子のAR結合部位付近のセンスDNAの転写産物として発現し得るものであり、本発明に係る細胞増殖抑制剤の標的となり得る。CTBP1ASの具体例としては、配列番号:17~21に記載の塩基配列からなるRNAが挙げられる。配列番号:17に記載の塩基配列からなるRNAは、配列番号:1に記載の塩基配列の698位から3’末端を含み、さらに3’末端に522塩基のRNAが結合した、全長3710塩基のRNAである以下、CTBP1AScと呼ぶ。。配列番号:18に記載の塩基配列からなるRNAは、配列番号:1に記載の塩基配列の698位から3’末端を含み、さらに3’末端に1853塩基のRNAが結合した、全長5041塩基のRNAである以下、CTBP1ASbと呼ぶ。。配列番号:19に記載の塩基配列からなるRNAは、配列番号:1に記載の塩基配列の698位から3’末端を含み、さらに3’末端に12568塩基のRNAが結合した、全長15756塩基のRNAである以下、CTBP1ASaと呼ぶ。。配列番号:20に記載の塩基配列からなるRNAは、配列番号:1に記載の塩基配列の697位から3’末端までに相当する全長3189塩基のRNAである以下、CTBP1ASdと呼ぶ。。これらのいずれのアンチセンスRNAも、CTBP1遺伝子のAR結合部位付近のセンスDNAの転写産物として発現していることが確認されたものであり、本発明に係る細胞増殖抑制剤の標的となり得る。本発明者らは、前立腺癌細胞LNCaPを用いた解析によって、CTBP1-ASの発現がアンドロゲンで強く誘導されることを今般新たに見出した。CTBP1-ASはタンパク質モチーフをコードしないノンコーディングRNAである。CTBP1-ASの発現レベルは前立腺癌細胞において上昇している。CTBP1-ASをRNAi法で阻害すると、ARの転写活性が抑制され、癌細胞の増殖が著しく抑制される。後述する実施例に示されるとおり、CTBP1ASは、RNA結合性の転写抑制因子であるPSFと結合して複合体を形成すると、細胞周期を抑制する遺伝子例えばSMAD3、p53の転写を抑制する。その結果、細胞増殖が促進される。一方、CTBP1ASとPSFの複合体は、ヒストン脱アセチル化酵素と協調して、CTBP1の転写も抑制する。本来、CTBP1はアンドロゲン受容体の転写を抑制する機能を有しているので、CTBP1の転写が抑制されることでアンドロゲン受容体による転写活性化が亢進する。その結果、細胞増殖につながる。従って、CTBP1ASの発現を抑制すると、後述する実施例に示されるとおり、アンドロゲン抵抗性癌細胞においてもその増殖を抑制することができる。なお、本明細書において、細胞の増殖を抑制するとは、細胞の増殖を停止又は遅延させることを意味する。本発明に係る細胞増殖抑制剤は、CTBP1-ASを発現するすべての細胞に有効であるが、特にCTBP1-ASの発現が亢進している細胞の増殖抑制に有用である。本明細書において、CTBP1-ASの発現が亢進している細胞とは、CTBP1-ASの発現レベルが、正常な非分裂細胞に比較して有意に上昇している細胞を意味する。CTBP1-ASの発現が亢進している細胞としては、例えば、前立腺癌細胞及びその転移癌細胞が挙げられるが、これらに限定されない。なお、前立腺癌の転移癌細胞とは、前立腺癌の転移巣における癌細胞を意味する。本明細書において、CTBP1-ASの発現阻害物質とは、CTBP1-ASの転写、即ちCTBP1遺伝子のDNAを鋳型としてCTBP1-ASを産生する転写を完全に阻害する物質、又は当該転写を有意に低減させる物質を意味する。なお、本明細書において発現は、DNAを鋳型として転写酵素により相補的なRNAが産生される転写、DNAが有する遺伝情報に基づくタンパク質の合成、及び、mRNAが有する遺伝情報に基づいてタンパク質が合成される翻訳を含む。本明細書において、CTBP1-ASの機能阻害物質とは、CTBP1-AS自体に作用してその機能を完全に阻害する物質、又は当該機能を有意に低減させる物質を意味する。例えば、CTBP1-ASの分解を促進する物質やCTBP1-ASにハイブリダイズする物質が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において、CTBP1-ASの機能とは、CTBP1の発現を抑制し、AR下流シグナルを活性化することを意味する。従って、CTBP1-ASの機能を阻害することは、CTBP1の発現を亢進させ、AR下流シグナルの活性化を抑制することを意味する。本発明で用いられるCTBP1-ASの発現阻害物質又は機能阻害物質は、上記機能を有する限りどのような物質であってもよく、例えば、低分子化合物;高分子化合物;抗体、酵素等を含むタンパク質;一本鎖DNA、二本鎖DNA、一本鎖RNA、二本鎖RNA、一本鎖若しくは二本鎖のDNA及びRNAを含むキメラ核酸、その他人工核酸ペプチド核酸PNA、lockednucleicacidLNA等を含む核酸、などが挙げられる。CTBP1-ASの発現阻害物質又は機能阻害物質としては、例えば、以下のものが好ましく用いられる。aCTBP1-AS若しくはその一部に対するアンチセンス核酸bCTBP1-ASを特異的に切断するリボザイム活性を有する核酸cCTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖核酸d上記a乃至cのいずれかに記載の核酸を発現し得る核酸aCTBP1-AS若しくはその一部に対するアンチセンス核酸アンチセンス核酸法は、発現阻害方法としてよく知られている。標的遺伝子基本的には転写産物であるmRNAに相補的な塩基配列を有する一本鎖核酸アンチセンス核酸を細胞内に導入し、当該標的遺伝子にハイブリダイズさせることによって遺伝子の発現を阻害する方法である。本発明で用いられるアンチセンス核酸は、CTBP1-ASの一部に相補的な配列であることが好ましいが、完全に相補的でなくてもよい。例えば、アンチセンス核酸の90以上、好ましくは95以上、より好ましくは98以上がCTBP1-ASの一部に相補性を有する。アンチセンス核酸の長さは、CTBP1-ASの機能阻害効果が得られる限り特に限定されないが、一般的には10塩基長~100塩基長、好ましくは15~30塩基長である。アンチセンス核酸は、CTBP1-ASの塩基配列に基づき、公知のソフトウェア等を用いて当業者が適宜設計し、合成することができる。なお、アンチセンス核酸はDNA、RNA、DNA及びRNAを含むキメラ核酸のいずれであってもよく、また、修飾されていてもよい。修飾された核酸としては、例えば、リン酸エステル基をチオリン酸エステル基又はメチルホスホネート基で置換したもの等が挙げられる。bCTBP1-ASを特異的に切断するリボザイム活性を有する核酸CTBP1-ASの機能阻害物質としては、CTBP1-ASを特異的に切断するリボザイム活性を有する核酸も挙げられる。リボザイムは、標的RNAを触媒的に加水分解する核酸分子であり、標的RNAと相補的な配列を有するアンチセンス領域と、切断反応を担う触媒中心領域から構成されている例えば、Ribozyme:BiochemistryandBiotechnologyKruppGGaurRKeds:EatonPublishingMA2000。CTBP1-ASを特異的に切断するリボザイムも、当業者が公知の方法に従って適宜設計することができる。リボザイムは一般的にはRNA分子であるが、DNA-RNAキメラ型分子を用いることもできる。cCTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖核酸CTBP1-ASの機能阻害物質としては、CTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖核酸も好ましい。RNAiは、二本鎖核酸によって誘導される配列特異的な遺伝子発現抑制機構である。標的特異性が非常に高く、生体内にもともと存在する遺伝子発現抑制メカニズムを利用する方法なので安全性が高い。哺乳動物細胞に用いられる場合は、通常19~30塩基程度、好ましくは21塩基~25塩基程度の二本鎖の小分子RNAsmallinterferenceRNA;siRNAが用いられる。但し、細胞内で酵素Dicerにより切断されてsiRNAとなりうる、より長い二本鎖RNAを用いてもよい。RNAiによる標的RNA分子の切断は、まず、siRNAがArgonauteと呼ばれるタンパク質による片側鎖切断又はRNAヘリカーゼによる巻き戻しによって一本鎖化され、Argonauteと結合して作動複合体であるRISCRNAinducedsilencingcomplexを形成する。RISC内では、siRNAは標的RNAを探索するガイド分子として働き、Argonauteは標的RNAを切断するRNA分解酵素Slicerとして機能する。一般的なsiRNAは、19塩基の完全に相補的な二本鎖領域をもち、センス鎖及びアンチセンス鎖のそれぞれの3’末端に2塩基の突出塩基オーバーハングを有しているが、オーバーハングを有しないブラントエンド型であってもよい。例えば、25塩基のブラントエンドRNAは、インターフェロン応答遺伝子の活性化を最小にし、センス鎖由来のオフターゲット効果を防ぎ、血清中で安定性が非常に高いという利点を有し、invivoでの使用にも適している。本発明に用いられるsiRNAは、CTBP1-ASの配列から、他の遺伝子に類似した配列がない領域であること、活性の高いsiRNAのコンセンサス配列を含むこと、配列に3塩基の周期性をもつこと、GC含量が約35~45であること等、活性の高いsiRNAを得るための公知の方法に従って、設計することができる。siRNAの設計には、公知の活性予測アルゴリズムを用いることもでき、かかる活性予測アルゴリズムとしては、siExplorer、siDirect、BIOPREDsi等が公開されている。RNAi効果を有する二本鎖核酸は、二本鎖RNAであってもよいし、DNA-RNAキメラ型二本鎖核酸であってもよく、人工核酸を含んでいてもよい。キメラ型はRNAi効果を有する二本鎖RNAの一部をDNAに換えたものであり血清中での安定性が高く、免疫応答誘導性が低いことが知られている。また、上記二本鎖核酸は、2’-OH基の修飾、バックボーンのホスホロチオエートによる置換やボラノホスフェート基による修飾、リボースの2位と4位が架橋されたLNAlockednucleicacidの導入などによって、ヌクレアーゼに対する耐性や安定化を高めることもでき、このような修飾された二本鎖核酸も本発明に包含される。d上記a乃至cのいずれかに記載の核酸を発現し得る核酸上記a~cはいずれも核酸であり、合成後に生体に投与することもできるが、これらの核酸をコードする核酸を生体内に導入し、細胞内で上記a~cの核酸を発現するように構成してもよい。例えば、転写によってアンチセンス核酸を発現しうるDNA、又は転写によってリボザイム活性を有する核酸を発現しうるDNAを含むベクターを細胞内に導入すれば、細胞内で発現したRNAがCTBP1-ASの機能を阻害しうる。また、CTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖RNAの各鎖をコードするDNAを含むベクターを細胞内に導入すればよい。細胞内で二本鎖がそれぞれ発現しハイブリダイズすることによって、CTBP1-ASに対するRNAi効果が発揮される。また、RNAi効果を有する二本鎖RNAを発現させるために、二本鎖RNAの各鎖がループを介して結合した一本鎖RNAをコードするDNAを含むベクターを用いることもできる。発現した一本鎖RNAは分子内でハイブリダイズしてshorthairpinRNAを構成し、Dicerによってループ構造部分が切断され、siRNAとなる。このように、目的の核酸を細胞内で発現させることができるコンストラクトは、当業者が適宜設計し、細胞内に導入することが可能である。上記cCTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖核酸としては、例えば、配列番号:1に示されるCTBP1-ASの塩基配列において、1804位~1828位配列番号:3、1894位~1918位配列番号:4、2348位~2372位配列番号:5、3063位~3087位配列番号:6の領域を標的とするものが挙げられる。これらを標的とする二本鎖核酸は、いずれか一本がこれらの標的と相補的な塩基配列を有するRNAであり、もう一本がそれに相補的な塩基配列を有するRNAであるものが挙げられる。このような、二本鎖核酸としては以下の表に示すものがある。また上記4つの領域を標的とする二本鎖核酸は、いずれか一本が標的RNAと1~3塩基ミスマッチを有するRNAであり、もう一本がそれに相補的な塩基配列を有するRNAであっても、RNAi効果を得られる限り本発明の二本鎖核酸に含まれる。CTBP1-ASの機能阻害物質又は発現阻害物質としては、配列番号:5に示される領域を標的とするsiRNA例えば、siRNA[3]が特に好ましい。また、cCTBP1-ASに対してRNAi効果を有する二本鎖核酸としては、CTBP1-ASにおける配列番号:24~52で表される配列を標的とするものも挙げられる。かかる二本鎖核酸としては、配列番号:53~78で表される塩基配列からなるRNAと、それぞれに相補的なRNAとの二本鎖核酸が挙げられる。中でも、No3、4、6、10、12、18及び24の核酸はCTBP1ASの発現を抑制する効果が高い。本発明の医薬組成物は、上述した本発明に係る細胞増殖抑制剤を含む。従って、本発明の医薬組成物は、CTBP1-ASの発現が亢進している細胞に投与すると当該細胞に対して増殖抑制効果を発揮するので、AR依存的な細胞増殖が関与する疾患の予防又は治療薬として特に有用である。AR依存的な細胞増殖が関与する疾患としては、例えば、AR依存的な癌典型的には前立腺癌や前立腺肥大症が挙げられる。本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体や添加物を含んでいてもよい。かかる担体としては、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等薬学的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ぺクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、界面活性剤、賦形剤、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の医薬組成物は、様々な形態、例えば、液剤例えば注射剤、分散剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末剤、坐剤などとすることができる。好ましい態様は、注射剤であり、非経口例えば、静脈内、経皮、腹腔内、筋内で投与することが好ましい。本発明の医薬組成物が、細胞増殖抑制剤として上記a~c等の核酸を含む場合、リポソーム、高分子ミセル、カチオン性キャリア等のキャリアに核酸を封入して製剤化することができる。また、プロタミンのような核酸キャリアを利用してもよい。これらのキャリアに抗体等を結合させて、患部を標的化することも好ましい。また、核酸にコレステロール等を結合させて血中滞留性を高めることも可能である。細胞増殖抑制剤として、上記a乃至cのいずれかに記載の核酸をコードする核酸を含む場合には、当該核酸を、レトロウイルス、アデノウイルス、センダイウイルスなどのウイルスベクターやリポソームなどの非ウイルスベクターに挿入し、細胞内に投与することができる。本発明に係る前立腺癌の予防又は治療方法は、本発明の細胞増殖抑制剤を治療有効量投与することを特徴とする。本明細書において、治療有効量とは、治療する疾患の一つ又は複数の症状が、それによりある程度緩和される作用物質の量を意味する。従って前立腺癌の場合、腫瘍サイズの低下;腫瘍の転移の阻害遅延又は停止;腫瘍増殖の阻害遅延又は停止、及び癌と関連する一つ又は複数の症状の緩和、の少なくとも1つを示す量を意味する。細胞増殖抑制剤は、上述した医薬組成物として投与することができる。本発明に係る細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法の第一の態様は、CTBP1-ASを発現する細胞又は細胞抽出液と被検化合物とを、アンドロゲン存在下で接触させる工程と、CTBBP1-ASの発現レベルを測定する工程と、被検化合物の非存在下で測定した場合と比較して、CTBP1-ASの発現レベルを低下させる被検化合物を選択する工程と、を含む。CTBP1-ASを発現する細胞としては、CTBP1-ASを発現している細胞である限り特に限定されないが、例えば、ヒトの各種癌細胞を用いることができる。中でもCTBP1-ASを高発現する前立腺癌細胞LNCap細胞等や、その転移癌細胞が好ましい。また、子宮頸癌細胞株HeLa細胞、腎臓由来の細胞株293細胞、乳癌細胞株MCF7細胞なども用いることができる。十分にCTBP1-ASを発現していない細胞は、CTBP1-ASをコードするDNAを含む発現ベクターを導入することにより、CTBP1-ASを発現する細胞として使用することも可能である。本発明のスクリーニング方法では、細胞自体ではなく、細胞抽出液を用いることもできる。細胞抽出液は、当業者が公知の方法によって調製することが可能である。本発明のスクリーニング方法に用いられる被検化合物は特に限定されないが、例えば、有機化合物、無機化合物、核酸アンチセンス核酸、リボザイム、siRNA、RNAアダプター等、ペプチド、タンパク質抗体等、糖などが挙げられる。被検化合物と、CTBP1-ASを発現する細胞又は細胞抽出液との接触は、例えば、被検化合物を細胞の培地や細胞抽出液に添加することにより行うことができる。また、被検化合物が核酸の場合は、カチオニックリポソーム法、エレクトロポレーション法、マイクロインジェクション法などによって細胞内に被検化合物を導入することができる。被検化合物がsiRNAの場合は、市販のトランスフェクションキットを用い、指示書に従って行ってもよい。被検化合物と細胞又は細胞抽出液との接触をアンドロゲン存在下で行うことにより、CTBP1-ASの発現を安定的に上昇させられるので、被検化合物の効果を確認することができる。例えば、被検化合物と接触させた後、3日後に細胞の培地や細胞抽出液にアンドロゲンを添加するとよい。CTBP1-ASの発現レベルを測定する工程は、mRNAの発現量を測定可能なあらゆる方法を用いて行うことができるが、例えば、細胞からRNAを回収し、Real-timePCRやノーザンハイブリダイゼーション法によって解析することができる。なお、CTBP1-ASはノンコーディングRNAであるため、ここでいう発現レベルとはRNAレベルでの発現である。被検化合物の非存在下で測定した場合とは、被検化合物を接触させたのと同じ細胞又は細胞抽出液に、被検化合物を添加せずにアンドロゲンのみを添加して、CTBP1-ASの発現レベルを測定した場合を意味する。この場合の測定値と、被検化合物と接触させた場合の測定値とを比較して、後者のほうが有意に低い値であった場合、当該被検化合物は、CTBP1-ASの発現が亢進している細胞の増殖抑制剤として選択される。本発明に係る細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法の第二の態様は、CTBP1遺伝子を発現する細胞又は細胞抽出液と被検化合物とを、アンドロゲン存在下で接触させる工程と、CTBBP1遺伝子の発現レベルを測定する工程と、被検化合物の非存在下で測定した場合と比較して、CTBP1遺伝子の発現レベルを上昇させる被検化合物を選択する工程と、を含む。第二の態様は、第一の態様と比較して、CTBP1遺伝子を発現している細胞を使用する点と、CTBP1遺伝子の発現レベルを測定する点、及び、CTBP1遺伝子の発現レベルを上昇させる被検化合物を選択する点が異なる。CTBP1遺伝子を発現する細胞としては、例えば、前立腺癌細胞LNCap細胞等や、その転移癌細胞を用いることができる。また、CTBP1遺伝子を発現する細胞は、CTBP1遺伝子を発現しない細胞に、CTBP1遺伝子をコードするDNAを含む発現ベクターを導入して作製することもできる。なお、発現ベクターを導入する場合、CTBP1遺伝子の全長をコードするDNAのみでなく、一部をコードするDNAを用いて、CTBP1遺伝子の一部を発現させてもよい。CTBP1遺伝子はCTBP1タンパク質をコードするので、ここでいう発現は、転写と翻訳の両方を含む。CTBP1遺伝子の発現レベルは、mRNAレベルでの発現、タンパク質レベルの発現のいずれも、当業者が公知の方法に従って測定することができる。mRNAレベルの場合、例えばCTBP1-ASと同様に、Real-timePCRやノーザンハイブリダイゼーション法を用いて測定することができる。タンパク質レベルの場合、SDS-PAGE等の電気泳動法や、CTBP1タンパク質に対する抗体を用いたウェスタンブロッティング法により測定を行うことも可能である。上述のとおり、CTBP1-ASの発現又は機能を阻害することにより、CTBP1タンパク質の発現は上昇し、ARの転写活性は抑制され、CTBP1-ASの発現が亢進している細胞の増殖も抑制される。従って、被検化合物の非存在下で測定した場合と比較して、CTBP1遺伝子の発現レベルを上昇させる被検化合物を選択すれば、CTBP1-ASの発現が亢進している細胞に対する増殖抑制剤を得ることができる。本発明に係るスクリーニング方法は、さらに、被検化合物を前立腺癌細胞等、CTBP1-ASの発現が亢進している細胞に投与して細胞増殖アッセイMTSアッセイを行う工程や、被検化合物を担癌動物に投与して腫瘍細胞の増殖への効果を確認する工程等を含んでもよい。これらの工程により、被検化合物の効果をさらに検証することができる。本発明の前立腺癌の予後を判定する検査方法は、患者の前立腺から採取した細胞におけるCTBP1-AS又はCTBP1遺伝子の発現レベルを測定する工程と、その発現レベルを正常な前立腺細胞における発現レベルと比較する工程と、を含む。本発明者らは、患者の前立腺癌細胞及びその転移癌細胞においては、CTBP1-ASの発現量が正常細胞に比較して有意に高く、CTBP1遺伝子の発現量が正常細胞に比較して有意に低いことを確認した。また、CTBP1-ASの発現量の上昇、又は、CTBP1遺伝子の発現量の減少が、前立腺癌患者の予後と相関関係を有することを見出した。従って、本発明の検査方法による検査の結果、CTBP1-ASの発現が正常細胞に比較して有意に高い場合、予後は不良となる可能性が高いものと予測することができ、CTBP1の発現が正常細胞に比較して有意に低い場合、予後は良好となる可能性が高いものと予測することができる。以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明するが何らこれらに限定されるものではない。以下の実施例において使用された方法を説明する。[RNAFishならびに蛍光免疫染色]CTBP1ASを検出するためのアンチセンスCTBP1ASプローブは、RNAlabelingkitRoche社を用い、その使用説明書に従って作製した。colocalizationstudyのために、LNCaP細胞は、24ウェルの培養容器においてカバーグラス上で培養した。アンドロゲン処理から24時間後に、PBSで細胞を洗浄し、36ホルムアルデヒドと10酢酸inPBS中に20分室温で静置して固定し、05TritonX100中に5分室温で静置して透過処理を行った。PBS洗浄後、プローブとハイブリダイズさせた湿室で42°C、一晩。Alexa555を結合させたロバ抗DIG抗体で検出した。次に内因性PSFは、ウサギ抗PSF抗体と4°Cで一晩反応させた後、Alexa488を結合させた抗ウサギIgG抗体で検出した。共焦点顕微鏡で撮像した。[RNA免疫沈降RIP]15cmディッシュでコンフルエントなLNCaP細胞を回収し、1mlのNP40lysisbuffer50mMTrispH80、150mMNaCl、1NP40に再懸濁した。Sin3A、PSF、NONOに対する抗体又はIgGそれぞれ、SantacruzBiotechnology社、Sigma社、BD社、Sigma社を上清に加え、4°Cで一晩回転させた。30μLのプロテインGビーズを加え、4°Cで2時間、穏やかに回転させながらインキュベートした。Lysisbufferを用いてビーズを3回洗浄し、1mlのISOGENに再懸濁した。共沈したRNAを単離し、CTBP1ASのmRNAレベルをqRTPCRで解析した。[ノーザンブロッティング]アンチセンスCTBP1ASプローブの調製と、それに続くノーザンブロッティングによる解析は、NorthernblotstarterkitRoche社を用い、使用説明書に従って行った。1μgのトータルRNAを変性させ、ホルムアルデヒド含有アガロースゲル1×MOPSbuffer中にローディングした。RNAをHybondXLmembraneRoche社に移し、DIGで標識した、CTBP1ASの中央部にわたるRNAプローブで検出した。[マイクロアレイ]LNCaP細胞のトータルRNAをISOGEN試薬NipponGene社で回収した。発現解析マイクロアレイとして、Genechiphumanexon10STarrayAffymetrix社を使用説明書に従って用いた。データ解析は、AffymetrixMicroarraySuitesoftwareを用いて行った。比較用アレイについては、すべてのプローブセットからのデータを用いて標準化した。[ChIP及び定量リアルタイムPCR]ChIPは常法に従って行った。1ホルムアルデヒド5分間処理により蛋白、DNA架橋を行った後、細胞を回収し蛋白DNA抽出液を作成し超音波処理を行った。特異抗体および非特異的IgGにより一晩反応させた後、proteinAGアガロースにより蛋白DNA複合体を回収した。洗浄した後、65度一晩反応させ脱架橋した。DNAはエタノール沈殿により回収した。IgGコントロールに対するFoldenrichmentは、SYBRgreenIfluorescenceを用いて、SYBRgreenPCRmastermixAppliedBiosystems社と、ABIPrism7000systemAppliedBiosystems社とにより、リアルタイムPCRで定量した。それぞれのPCR産物は、Comparativecyclethreshold法Ct法により相対的に定量した。外部標準としてはGAPDHを用いた。使用したプライマーの配列は下表に示す。[リアルタイムRTPCR]トータルRNAをISOGEN試薬を用いて単離した。最初のcDNA鎖はPrimescriptRTreagentkitTakara社を用いて産生した。mRNAはリアルタイムPCRで定量した。使用したプライマーを下表に示す。[siRNA]CTBP1AS、CTBP1HSS102437、NONO、PSF、Sin3Aを標的とするStealthRNAiシステムと、ネガティブコントロールをInvitrogen社から購入した。細胞のトランスフェクションは、LipofectamineRNAiMAXreagentInvitrogen社を用いて、実験の48から72時間前に行った。CTBP1ASに対するsiRNAの配列は、5’UUAUGUCUCCAGCAAGCUUGGである。[Invivo腫瘍形成アッセイ]LNCaP細胞3×106細胞又はLTAD細胞1×107細胞を、5週齢のオスのヌードマウス20匹の両側に皮下注射した。LTAD細胞を移植したマウスは、腫瘍体積が100mm3に達した時点で精巣摘出を行った。5μgのCTBP1ASに対するsiRNA又はコントロールsiRNAを、LipofectamineRNAiMAXtransfectionReagentを用いて、週に3回、腫瘍中にトランスフェクトした。腫瘍体積は、05×r1×r2×r3r1<r2<r3の式に従って求めた。[細胞増殖アッセイ]細胞は、96ウェルプレートで、3×103細胞/ウェルで培養した。pcDNA3CTBP1ASの安定な細胞株を1FBSを含むRPMI培地に播種した。RNAi実験のためには、細胞は、プレートに移した24時間後にステルスRNAでトランスフェクトした。MTSアッセイは、celltiterreagentPromega社を用い、使用説明書に従って行った。実験は5回ずつ繰り返した。[細胞培養及び試薬]LNCaP細胞ヒト前立腺癌細胞は、10FBS、50unitsmlのペニシリン、及び50μgmlのストレプトマイシンを含むRPMI培地で培養した。アンドロゲン処理に先立ち、細胞は、5dextrancharcoalstrippedFBSを含むフェノールレッドフリー培地で48時間から72時間培養した。使用した抗体は、Sin3A、p53、p21、CyclinD1、CyclinA、CyclinB1、CTBP1、NONO、AcH3K9、PSF、SMAD3。AR、AcH3およびβactinに対する抗体は、Takayamaらの報告に述べられているTakayamaK,etalOncogene26445363;CancerRes6913742;Oncogene3061930。DihydrotestosteroneBicaltamideはWako社より購入した。[ウェスタンブロッティング、免疫沈降]常法に従って行った。細胞をNP40バッファーにより回収し蛋白抽出液を作成した。適当量をLaemmlisampleバッファー中で5分間沸騰させ、SDSPAGEにより分離した。PVDF膜に転写したのち5スキムミルクによりブロッキングを行い一次抗体と4°Cにて一晩反応させた。ウサギもしくはマウスIgGに対する二次抗体と一時間反応させたのち発色し撮影を行った。[ルシフェラーゼアッセイ]LNCaP細胞は、トランスフェクションに先立って、5のcharcoalstrippedFBSを加えたフェノールレッドフリー培地で24時間インキュベートした。次に、FuGENE6reagentRocheDiagnostics社を用い、ARBSを含むpGL3ベクターならびにtkPRLを細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの24時間後、常法に従ってルシフェラーゼ活性を測定した。RNAiを組み合わせたルシフェラーゼアッセイでは、RNAのトランスフェクションは、アンドロゲン刺激の72時間前に行った。[細胞周期解析]コントロールsiRNA又はPSFに対するsiRNAのトランスフェクションのあと、96時間インキュベートしてから細胞を回収した。細胞は遠心処理し、PBSで洗浄した後、穏やかに振とうしながら、3mlの氷冷した70エタノールをゆっくり加えて固定した。使用時までに4°Cで保管した。細胞周期解析の日、細胞を遠心処理し、PBSで洗浄した後、100μgmlのRNaseATakara社を含むPBS中に、106個/1mlで再懸濁し、37°Cで30分インキュベートした。DNA含有量を測定するため、30000個の細胞をFACSCaliburflowcytometryで、CellQuestsoftwareBDBiosciences社を用いて解析した。[マイクロアレイデータの解析]CTBP1ASに対するsiRNAと、PSFに対するsiRNAを用いたマイクロアレイ解析をそれぞれ独立に行った。PSFに対するsiRNAを用いた実験により、700の遺伝子がPSFにより抑制を受ける遺伝子であるものと推測された。これらの標的遺伝子の機能の特定にはDAVIDを用い、パスウェイ解析にはREACTOMEを用いた。両方の解析において、コントロールサンプルから300の遺伝子がアンドロゲンにより抑制される遺伝子として同定された。本発明者らは、ARの下流シグナルの阻害が前立腺癌治療の治療標的として有効であると考え、クロマチン免疫沈降法とタイリングアレイを組み合わせる方法ChIP-chip法により、ARが直接標的とする遺伝子を解明する方法を確立したTakayamaKetalOncogene26200744534463、TakayamaKetalCancerRes692009137142。さらに、アンドロゲンによる転写ネットワークを解明するため、ARに加えてヒストンH3K9/K14アセチル化の抗体を用いてヒト全ゲノムレベルでChIP-chip解析を行い、AR結合部位ARBSとヒストンH3アセチル化部位AcH3を同定した。また、LNCaP細胞を用いて、CapAnalysisgeneexpressionCAGEを行った。CAGEは、mRNAの5’末端から20塩基のDNAタグのコンカテマーをシークエンスして、転写開始点をゲノムワイドで同定し、プロモータの使用状況をプロファイルするハイスループットな方法である。CAGE解析により、ヒトゲノム中にCAGEタグをマッピングし、タグの集積する領域をタグクラスターTCと定義した。TC内で、時間によってタグの分布が有意に変化するものを同定した。近年アンチセンス転写産物が近傍の遺伝子発現を制御することが報告されていることKatayamaSetalScience309200515641566、また、ARの転写制御は前立腺癌の発症の重要なシグナルであることから、AR転写活性とアンチセンス転写産物の関係は癌の進行を説明するための重要な要素であると考えられた。そこで、アンチセンスTCに制御されるアンドロゲン応答遺伝子を探索したところ、CTBP1を見出した。また、CTBP1のARBS付近に、アンドロゲンで活性化されるアンチセンスのTCを見出した。GENBANKによれば、これはAX747506のex3を転写開始点とするものであることがわかった。そこで、このアンチセンスRNAをCTBP1ASdと名付けた配列番号:20。CTBP1ASdは、330アミノ酸の配列をコードする配列を含む。しかしながら、本発明者らによるPfamを用いた解析で、このアミノ酸配列はタンパク質モチーフをコードしないことがわかった。また、Netstartを用いて解析したところ、最初のメチオニンがタンパク質翻訳開始点として機能する可能性が低いことがわかった。さらに、IVT法invitrotranscription法により実験したところ、CTBP1ASdからのタンパク質合成は認められなかったデータ示さず。これらの結果は、CTBP1ASdがタンパク質モチーフをコードしないノンコーディングRNAであることを意味する。siRNAは、CTBP1ASdの塩基配列を基に設計したstealthRNAiInvitrogen社を用いた。一般的なsiRNAより長い25塩基長のブラントエンド型二本鎖RNAであり、インターフェロン応答遺伝子の活性化を最小にできる、センス鎖由来のオフターゲット効果を防ぐことができる、血清中での安定性が非常に高い、等の特徴を有し、invivoでの使用実績もある。siRNAの配列は、Invitrogen社のウェブサイトのRNAiデザイナーにより最適部位を決定した。作製したsiRNAの配列は以下のとおりである。以下の実施例において、siRNA投与群には、上記siRNA[3]を投与した。また、siRNA実験invivoの実験を除くのコントロールには、CTBP1ASdに対してRNAi効果を示さない二本鎖RNAStealthtmRNAiNegativeControlMediumGCDuplexInvitrogen12935300を投与した。実験には、AR陽性のヒト前立腺細胞株LNCaP細胞を用いた。細胞培養には、10ウシ胎児血清FBS,Sigma社、100μg/mlストレプトマイシン、100U/mlペニシリンInvitrogen社を含むRPMI1640Sigma社を細胞培養液として用いた。空気中に5の炭酸ガスを含む培養器内にて37°Cで培養した。LNCaP細胞1×105個を6穴プレートで培養した。翌日、20nM、50nMのsiRNAを、HiperfectTransfectionReagentQuiagen社と、OPTI-MEMInvitrogen社を用いて細胞内に導入した。48時間後に10nMのアンドロゲンR1881またはVehicleにより刺激した。さらに24時間培養した後、ISOGENNippongene社を用いてRNAを回収した。mRNAの発現解析をReal-timePCRPrism7000システム;Appliedbiosystems社により行った。Real-timePCR法により得られる増幅曲線から、細胞内での転写産物の発現量をΔΔCt法で求めた。GADPH遺伝子の発現量を基準に発現量を補正した。CTBP1ASの発現を測定した結果を図1に示す。コントロールにおいては、アンドロゲン依存的にCTBP1ASの発現が促進されたが、siRNA投与群の細胞では、siRNAの濃度依存的にCTBP1ASの発現が抑制された。50nMのsiRNAを投与した細胞では、アンドロゲンによる発現誘導は60-80の発現抑制を受けた。CTBP1のmRNAの発現を測定した結果を図2に示す。コントロールにおいては、アンドロゲンにより、CTBP1のmRNA発現は抑制された。一方、siRNA投与群では、siRNA濃度依存的に、アンドロゲンによるCTBP1の発現抑制効果が消失した。また、10nMのR1881で処理し、24時間後にタンパク質を回収してウエスタンブロット法によりCTBP1のタンパク質レベルでの発現量を測定した。結果を図3に示す。タンパク質レベルでもアンドロゲン投与により発現が抑制されるが、siRNA投与により、発現抑制効果がsiRNAの濃度依存的に減少した。CTBP1ASによるARの転写活性への影響を確認するため、ルシフェラーゼアッセイを行った。ルシフェラーゼベクターは、pGL3-basicPromega社のプロモータ領域に、代表的なアンドロゲン応答遺伝子であるPSAProstatespecificantigenのプロモータとエンハンサーを挿入して作製したPSA-LUC。PSA-LUCは、AR結合部位を有し、アンドロゲン応答性にプロモータが活性化される。LNCaP細胞を24穴プレート3×104個/ウェルとなるように散布し培養した。25チャコール血清含有フェノールレッドフリー培地にて2日間培養後、PSA-LUCを導入し、翌日、10nMのR1881又はVehicleにより刺激した。24時間後に細胞を回収した。ルシフェラーゼ活性をDual-LuciferaseReporterAssaySystemPromega社を用いて測定した。siRNA及びコントロール二本鎖RNAは、ベクターを細胞に導入する2日前に前述の方法で投与した。結果を図4Aに示す。コントロールでは、ルシフェラーゼ活性が著しく上昇し、アンドロゲンの投与によりARの転写活性が亢進して、PSAプロモータ及びエンハンサーが活性化されたことが示された。一方、siRNA投与群では、ルシフェラーゼ活性は著しく抑制を受けた。また同じ細胞におけるアンドロゲン応答遺伝子の発現を調べた結果を図4B及びCに示す。コントロールでは、アンドロゲンにより、代表的なアンドロゲン応答遺伝子であるFKBP5及びTMPRSS2の発現量が増加しているが、siRNAを投与群では、siRNAの濃度依存的に発現量の増加が抑制された。以上の結果から、CTBP1ASを抑制するとARの転写活性も抑制されることが確認された。CTBP1ASによるLNCaP細胞への細胞レベルの影響をMTSアッセイにより解析した。96穴プレートに、LNCaP細胞を3×103個/ウェルになるように継代培養した。ルシフェラーゼアッセイと同様に、翌日siRNAを投与した。48時間、72時間、96時間後にCelltiter96Promega社を用いて1時間反応させた。MTSアッセイは、PESphenazineethosulfateを介して、テトラゾリウム塩3-4,5-dimethylthiazol-2-yl-5-3-carboxymethoxyphenyl-2-4-sulfophenyl-2H-tetrazolium,innersalt;MTSを発色物質であるホルマザン産物へ変換する還元反応に基づいて、生細胞数を測定する方法である。マイクロプレートリーダーにて、吸光度490nmで細胞増殖能を測定した。結果を図5に示す。コントロールに比較して、siRNA投与群では細胞増殖が有意に抑制され、CTBP1ASがLNCaP細胞の増殖を促進していることがわかった。CTBP1AS、及びCTBP1ASの機能抑制が、invivoで腫瘍増殖に与える影響を解析した。LNCaP細胞をマウスの皮下に移植するために、PBS及びマトリゲルBDbioscience社と混合した。マウス1匹あたり、1×107個、PBS100μl、マトリゲル100μlとなるようにし、20匹分を一度に調製した。6週齢のオスのBALB/cヌードマウス日本クレア社の皮下に、25G注射針を用いて注入した。siRNAの腫瘍内への注入には、GenesilencerGenlantis社を用いた。5μgのsiRNAを、5μlのGenesilencerとOPTI-MEMにて混合し、マウスの腫瘍内に局注した。コントロール群には、以下の塩基配列からなる二本鎖RNAを同様に投与した。AAGACGAUCGUUCGGGACAACAUAA配列番号:15UUAUGUUGUCCCGAACGAUCGUCUU配列番号:16siRNAの注入は、マウスへの癌細胞移植後、細胞が皮下に生着したと考えられる2週間後より、週2回行った。マウスの腫瘍の大きさは週1回計測した。長径r1及び短径r2、r3を2ヶ所計測し、r1×r2×r3/2の式に従って腫瘍の大きさを求めた。移植後10週にマウスを犠牲死させ、腫瘍を皮下から摘出した。腫瘍は重量を計測した後、一部はISOGENによるRNA抽出に供し、cDNA合成後、Realtime-PCRによりCTBP1AS及びCTBP1のRNAレベルの発現量を測定した。一部はSDSlysisbuffer10mMTris-HCl,pH75、2SDS、10メルカプトエタノールにより溶解してタンパク質抽出に供し、ウエスタンブロット法によりCTBP1の発現量を測定した。結果を図6乃至9に示す。図6に示されるように、コントロールと比較して、siRNA投与群では、腫瘍の増殖が有意に抑制されたp値NCBIhttpwwwncbinlmnihgovのGEODatasetsより公開されているアフィメトリックス社HumanGenomeU133Plus20アレイを用いた前立腺、および前立腺癌症例の発現プロファイルのデータGSE3325をダウンロードした。正常、癌、転移それぞれのサンプルのCTBP1ASAX747592特異的なprobe1563571atに着目しシグナル量を抽出した。各群の間でMann-Whitney順位検定を行い、発現量の比較検討を行った。結果を図10に示す。癌及び遠隔転移の癌組織におけるCTBP1ASの発現量は、正常の前立腺に比較して有意に高かったp値実際の前立腺癌におけるCTBP1の発現を免疫染色法により評価した。免疫染色法は、鈴木らの方法に従ったSuzukiTetalClinCancerRes2005Sep111614854。症例は東京大学医学部附属病院泌尿器科で1987年より2001年に摘出された前立腺癌の手術標本を有する104症例から選択された。正常部位にあたる切片99例と前立腺癌に該当する切片101例につき、ホルマリン固定後、パラフィン切片を作成した。一次抗体はCTBP1特異的マウスモノクローナル抗体BDバイオサイエンス社製を用いた。染色は、免疫組織染色のキットHistofineKitニチレイ社を用い、33diaminobenzidinesolution1mmolL33diaminobenzidine50mmolLTrisHClbufferand0006H2O2により発色させた。正常前立腺と前立腺癌の代表的な切片の像を図11Cに示す。各切片につきCTBP1の核内での陽性率を計測し、正常組織及び癌組織におけるCTBP1タンパク質の発現を定量化し比較検討した。結果を図11Aに示す。正常細胞に比較して、前立腺癌細胞ではCTBP1の発現量は低下していた。また、前立腺癌の101例について、手術後3ヶ月ごとに5年間外来で経過を追ったデータを使用して、CTBP1高発現群と低発現群の生存率を比較し、Longrank検定によるKaplanMeier法を用いて解析した。なお、高発現群と低発現群は、CTBP1の発現を表すLabelingIndexの中央値を基準に分類した。結果を図11Bに示す。CTBP1高発現群は、低発現群に比較して生存率が有意に高かった。以上の結果から、CTBP1ASによるCTBP1の抑制のメカニズムが実際の腫瘍の腫瘍増殖においても機能していることが確認された。前立腺癌細胞に発現しているCTBP1ASd以外のCTBP1-ASを以下の方法で探索した。LNCaP細胞にR188110nMにて刺激した後、24時間後にRNAを回収した。RNA1μgをDNaseIμl処理をしたのちRACEKitをもちいて逆転写反応を行った。つぎにCAGE法により得られた転写開始点付近からのprimerおよび末端のアダプター特異的な配列を有するprimerをもちいてPCR反応を行い、得られたPCR産物をTACloningKitを用いてプラスミドへ挿入した。プラスミドのシークエンスを行いPCR反応により得られた転写産物の配列を解析した。得られた配列をヒトゲノム配列へマッピングを行い転写産物の範囲を決定した。使用した3’RACEprimerとPCRadaptorprimerは以下のとおりである。3RACEprimer5GACCACGCGTATCGATGTCGACTTTTTTTTTTTTTTTTV3配列番号:21PCRadaptorprimer5GACCACGCGTATCGATGTCGAC3配列番号:22この結果、少なくとも図12に示す4種類のCTBP1ASが存在することがわかった。そのうち一つは上述のCTBP1ASdであった。CTBP1ASaの塩基配列は配列番号:19に、CTBP1ASbの塩基配列は配列番号:18に、CTBP1AScの塩基配列は配列番号:17にそれぞれ示す。これらのCTBP1ASは、いずれも上表に記載のsiRNAの標的配列を含むものである。従って、上述の実施例におけるsiRNAによる発現抑制実験では、これらのCTBP1-ASの発現も抑制されていたと考えられる。また、CTBP1ASa乃至CTBP1ASdが共通して有する配列として、配列番号:1に記載のRNA配列の1286位~3515位の領域配列番号:23検出するプローブを作成し、ノーザンブロットを行った。プローブの作製は、DIGNorthernStarterKitRoche社を用いてプロトコル通りに行った。LNCaP細胞にR188110nM刺激を行い0612182448時間にRNAを回収した。RNAはホルムアルデヒド入りのアガロースゲルにて泳動しメンブレンに転写した。メンブレンに上記のプローブをハイブリダイゼーションさせ、DIG特異抗体を用いて検出した。実験に用いたRNA量を測定するため同時にβアクチンに対するプローブを購入し同じメンブレンを用いて検出した。結果を図13に示す。約5kbの長さの転写産物が検出され、上記4種類のCTBP1ASのうち、CTBP1ASbがおもに発現していることが示唆された。LNCaP細胞をR188110nM又はVehicleにて24時間処理した。細胞を回収し、PARISkitAmbion社を用いて核内RNA、細胞質RNAをそれぞれ抽出した。それぞれのサンプルより、RNA1μgを泳動し、ノーザンブロットにより発現量を解析した。LoadingControlとしてβactinに対するプローブをハイブリダイズさせ、発現量を測定した。それぞれの遺伝子の発現量は、GAPDHで補正した。結果を図14に示す。CTBP1ASは核内に局在することが確認された。LTAD細胞、ならびにLNCaP細胞のLysateを回収し、CTBP1抗体を用いてウェスタンブロッティングを行った。βactinに対するプローブをRodingControlとして用いた。また、CTBP1ASのLTAD、LNCaP細胞における発現量を比較するために、LTAD細胞とLNCaP細胞のTotalRNAを回収した。RNA1μgを泳動、転写し、CTBP1ASに対するプローブを用いてノーザンブロッティングを行った。結果を図15a及びbに示す。LTAD細胞は、アンドロゲン枯渇状態で培養され、ホルモン療法抵抗性モデルとなる。LNCaP細胞にアンドロゲン刺激を行うと、CTBP1の発現はLTAD細胞の場合と同程度に低下し、LTAD細胞においてはCTBP1ASの発現が著しく増加した。次に、ホルモン依存性又はホルモン枯渇状態での前立腺癌細胞の増殖におけるCTBP1ASの影響の解析を行った。LNCaP細胞を25チャコール血清、フェノールレッドフリー培地にて3×103個well散布し、翌日CTBP1ASに対するRNAiをtransfectionした。2日後、EtまたはR1881にて刺激し、Day1、3、5にMTSassayを行い、増殖能を評価した。また、LTAD細胞を25チャコール血清、フェノールレッドフリー培地にて3×103個well散布し、翌日CTBP1ASに対するRNAiをtransfectionし、2日後EtまたはR1881にて刺激した。day1、3、5にMTSassayを行い、増殖能を評価した。結果を図15cに示す。アンドロゲン枯渇抵抗性のLTAD細胞では、アンドロゲン刺激を行わなくても、癌細胞が増殖するが、アンドロゲン依存性の増殖、アンドロゲン非依存性の増殖のいずれも、CTBP1ASのノックダウンにより抑制された。invivoで、ホルモン療法耐性株細胞の増殖におけるCTBP1ASの役割を解析した。ヌードマウスにLTAD細胞1×107個/匹を皮下移植した。腫瘍が100mm3径に達したところで精巣摘出を施行し、コントロールsiRNA又はCTBP1ASに対するsiRNAを局注した5μg/匹、2回/週。結果を図16に示す。invivoにおいても、CTBP1ASの発現を抑制することによって、アンドロゲン枯渇抵抗性の腫瘍体積の増加が抑制された図16a及びb。また、腫瘍中のCTBP1ASの発現量をqRTPCRで測定したところ、mRNAレベルで発現が低下していることが確認された図16c。一方、腫瘍中のCTBP1をウェスタンブロッティングで測定したところ、CTBP1ASのノックダウンにより、CTBP1の発現量が増加していた図16d。PSF、NONO、Sin3Aの3種類の遺伝子の発現を、RNAiにより抑制した。LNCaP細胞に、PSF、NONO、Sin3Aに対するsiRNAをトランスフェクションし、2日後にLysateを回収し、ウェスタンブロッティングにより発現量を検証した。いずれのsiRNAも標的の発現を特異的に抑制することを確認できた。LNCaP細胞をエタノール又はR1881で24時間処理し、刺激の2日前にコントロールsiRNA又はPSFに対するsiRNAをトランスフェクションした。RNAを回収し、cDNAを合成し、RTPCRによりCTBP1の発現量を解析した。結果を図17bに示す。PSFの発現を抑制すると、アンドロゲン刺激によるCTBP1発現の抑制の程度が減少した。また、AcH3抗体によりChIPを行った。リアルタイムPCRにより、CTBP1、CTBP1ASのプロモータ領域のヒストンアセチル化レベルを計測し、GAPDHにより補正した。Myoglobinexon領域をネガティブコントロールとして使用した。結果を図17cに示す。PSFを抑制すると、アンドロゲン刺激によるCTBP1発現の抑制度が低下した。このことは、PSFが、CTBP1の発現にプロモータレベルで関与していることを示唆した。PSFは、RNA結合性の転写抑制因子である。そこで、PSFとCTBP1ASとの結合の有無を解析した。LNCaP細胞をエタノール又はR1881で24時間処理し、刺激の2日前にコントロールsiRNA又はPSFに対するsiRNAをトランスフェクションした。核分画を抽出し、Lysateを回収したのち、NormanIgGPSF、NONOに対する特異抗体を用いて、免疫沈降を行った。ProteinGを利用して免疫沈降を行い、洗浄後、Isogenを用いてRNAを抽出した。トータルRNAより逆転写反応を行い、リアルタイムRTPCRにより、GAPDH、MyoglobinMG、CTBP1ASの発現量を測定した。結果を図18に示す。CTBP1ASはPSFと、アンドロゲン依存的に結合することが確認された。PSFとCTBP1ASの核内における局在を解析した。LNCaP細胞にエタノール又はR1881を加えて24時間反応させた後、CTBP1ASに対してRNAFISHを行った。ホルマリン、メタノールにて固定した後、DIGラベルしたCTBP1ASに対するプローブを使用して、42°Cで一晩反応させ、結合させた。翌日、DIGに対する蛍光標識された抗体を結合させ、洗浄後、抗PSF抗体により免疫染色を行った。マウス抗体に対する2次抗体を反応させて検出した。核は、DAPIにより染色した。結果を図19に示す。PSFとCTBP1ASの局在はほぼ一致しており、両者が結合していることが示唆された。次に、PSFが転写を抑制する他の遺伝子を探索した。コントロールsiRNA又はPSFに対するsiRNAをトランスフェクションした。エタノール又はR1881による刺激から24時間後にRNAを回収した。RNAを増幅し、マイクロアレイを用いて遺伝子発現を解析した。発現が抑制される遺伝子群と発現が亢進する遺伝子群の中で、アンドロゲンにより変化が抑制される遺伝子を抽出した。アンドロゲンによる遺伝子発現の変化率をLog2変換し、Cluster、TreeviewによりHeatmapを作成した図20a。転写に抑制がかかるとより明るい色で示される。アンドロゲンにより抑制される遺伝子の70は、siPSFにより当該抑制が解除された。さらに、ほとんどのアンドロゲン仲介性遺伝子の誘導が、siPSFにより抑制された。このことは、PSFがアンドロゲンによる発現抑制を広く介在していることを示唆する。また、PSFがアンドロゲン作用にかかわる遺伝子群のパスウェイ解析を行った。アンドロゲンにより抑制される遺伝子群の中で、PSF抑制により変化が抑制される遺伝子群について解析したところ、p53やSMAD3など細胞周期に関与する遺伝子が濃縮していた図中UGT2B15は、アンドロゲンにより発現が抑制されるがPSFによっては影響を受けないネガティブコントロールである。。次に、PSF抑制が細胞周期に与える影響をFACSにより解析した。LNCaP細胞、LTAD細胞及びBicR細胞に、コントロールsiRNA又はPSFに対するsiRNAをトランスフェクションし、96時間後に細胞を回収した。FACSにより細胞周期を解析した。S期の細胞分画の割合の変化を、図20bに示す。PSFをノックダウンすると、DNAが合成されるS期の割合が減少し、細胞周期が遅くなる傾向が見られた。また、図20aと同様の実験を、PSFに代えてCTBP1ASをノックダウンして行い、アンドロゲンによる抑制が解除される遺伝子の種類を比較した。結果を図20cに示す。PSFのノックダウンによりアンドロゲンによる抑制が解除される細胞のうち約50は、CTBP1ASのノックダウンによってもアンドロゲンによる抑制が解除される方向を示した。このことは、CTBP1ASとPSFがアンドロゲンによる遺伝子発現抑制に強調して関与していることを示唆する。p53、SMAD3の発現に対するPSFの影響を解析した。コントロールsiRNA又はPSFに対するsiRNAをLNCaP細胞にトランスフェクションし、48時間後にエタノール又はR1881で刺激した。24時間後にRNA及びタンパク質を回収した。qRTPCRによるp53とSMAD3の発現量の測定結果を図21aに示すGAPDHで補正。ウェスタンブロッティングの結果を図21bに示すβアクチンをLoadingcontrolとした。SMAD3及びp53は、アンドロゲン刺激により、mRNAレベル及びタンパク質レベルのいずれにおいても発現が減少したが、PSFの発現を抑制すると、アンドロゲンによる発現の抑制が解除される傾向があった。このことは、SMAD3やp53は、PSFがないとアンドロゲンによる影響を受けにくいこと、即ち、アンドロゲンによるSMAD3やp53の発現抑制は、PSFを介したものであることを示唆する。p53、SMAD3の発現に対するCTBP1ASの影響を解析した。コントロールsiRNA又はCTBP1ASに対するsiRNAをLNCaP細胞にトランスフェクションし、48時間後にエタノール又はアンドロゲンにより刺激した。48時間後にRNA及びタンパク質を回収し、p53、p21及びSMAD3の発現量を、ウェスタンブロッティングにより解析した。結果を図22aに示す。p53、p21及びSMAD3の発現は、いずれもアンドロゲン刺激により減少したが、CTBP1ASの発現を抑制することにより、その減少度は低下した。また、ホルモン枯渇抵抗性前立腺癌細胞であるLTAD細胞をヌードマウスに移植し、腫瘍が形成された後、精巣摘出を行い、コントロールsiRNAまたはCTBP1ASに対するsiRNAを局注した。3週間後に腫瘍を摘出し、タンパク質を回収してウェスタンブロッティングにより、細胞周期関連遺伝子産物の発現量を解析した。結果を図22bに示すそれぞれn2。CTBP1ASの発現を抑制すると、アンドロゲン依存的な細胞周期関連遺伝子産物の発現抑制が解除された。上記の結果から示唆される、CTBP1ASとPSFによる遺伝子発現制御機構について、図23に模式図を示す。まず、アンドロゲンがアンドロゲン受容体ARに結合すると、CTBP1ASの転写が増加する。これにより、ゲノムのグローバルな領域では図中左の枠内、CTBP1ASがPSFに結合して複合体を形成し、この複合体がSMAD3やp53の発現を抑制する。SMAD3やp53は細胞周期を阻害する遺伝子であるため、その発現が抑制されることにより細胞増殖が促進される。一方、ローカル図中右の枠内には、CTBP1ASの転写が増加すると、CTBP1ASとPSFの複合体とヒストン脱アセチル化酵素HDACが結合し、CTBP1の転写を抑制する。CTBP1はアンドロゲン受容体の転写抑制因子であるため、CTBP1の転写が抑制されると、アンドロゲン受容体の転写が増加し、活性化される。このように、グローバルにおいても、ローカルにおいても、CTBP1ASの転写が増加すると癌細胞を増殖させる方向に動く。このメカニズムは、CTBP1AS又はPSFを抑制することにより、癌細胞の増殖を抑制できることを裏付けるものである。以下表に示されるCTBP1ASに対するsiRNAを設計及び合成し、CTBP1ASの発現抑制への効果を測定した。結果を図24に示す。図中、NC、NC2は、ネガティブコントロールを示す。No3、4、6、10、12、18及び24のsiRNAは、ネガティブコントロールと比較して、CTBP1ASの転写を抑制することが確認された。"