"ヤブコウジ科Myrsinaceaeのヤブコウジ属マンリョウArdisiacrenataSimsを、水若しくは親水性有機溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出して得られる抽出物を含有することを特徴とする、マトリックスメタロプロテアーゼMMPs阻害剤。ヤブコウジ科Myrsinaceaeのヤブコウジ属マンリョウArdisiacrenataSimsを、水若しくは有機溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出して得られる抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ阻害剤。ヤブコウジ科Myrsinaceaeのヤブコウジ属マンリョウArdisiacrenataSimsを、水若しくは有機溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出して得られる抽出物を含有することを特徴とするヒアルロニターゼ阻害剤。ヤブコウジ科Myrsinaceaeのヤブコウジ属マンリョウArdisiacrenataSimsを、水若しくは有機溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出して得られる抽出物を含有することを特徴とするシワ防止用皮膚外用剤。以下、本発明の実施の形態について、詳細に説明する。本発明に用いられるマンリョウArdisiacrenataSimsは、ヤブコウジ科Myrsinaceaeのヤブコウジ属Myrsinaceaeに属する植物種である。日本、朝鮮半島、韓国、台湾、中国などの暖地の山林内に生息する高さ50~60cmの常緑小低木である。これらの抽出物は、これらの植物の葉、樹皮、花、果実、根、いずれの部位も使用することができるが、葉を使用することが好ましい。抽出溶媒としては、水、有機溶媒又はこれらの混合溶媒を使用するのが好ましい。好適な抽出溶媒の具体例としては、水、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール、プロピレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、アセトン、エチルアセテート等の有機溶媒等を用いることができる。好ましくは、エタノールが良い。これらの溶媒は1種でも2種以上を混合しても良い。マンリョウの抽出物は常法により得ることができ、例えば、マンリョウの抽出溶媒とともに浸漬または加熱還流した後、濾過して濃縮して得ることができる。例えば、マンリョウの全草を乾燥させて重量KGの5倍から20倍、好ましくは8~10倍の重量比の水、有機溶媒又はこれらの混合溶媒によって、20~200°C、好ましくは50ないし100°Cで、30分~20時間、好ましくは2~5時間抽出して得る、あるいは5~37°C、好ましくは常温で2時間から15日間、好ましくは1~3日間抽出して、収得することができる。以上のようにして得られる抽出物は、MMPs阻害作用、エラスターゼ阻害作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用を有する。また、皮膚に適用した場合、上記作用により、シワ防止用皮膚外用剤に配合するのに好適である。本発明のマンリョウ抽出物は多様な製剤形態で投与できる。製剤中の有効成分の量は特に限定されるものではないが、0.0001~20重量、好ましくは0.0001~1重量である。0.0001重量未満では本発明効果が十分に発揮され難く、一方、20重量を越えて配合してもさほど大きな効果の向上は認められず、また製剤化が難しくなるのであまり好ましくない。製剤化の際は、効果を損なわない範囲内で、通常化粧料や医薬部外品や医薬品に配合可能な成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、洗浄剤、増粘剤、薬剤、アルコール類、香料、樹脂、アルコール類、粉末成分、色材、色素、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、これ以外に、他のMMPs阻害剤、エラスターゼ阻害剤、ヒアルロニターゼ阻害剤の併用も可能である。添加してもよい配合成分は、これに限定されるわけではなく、また、上記のどの成分も、本発明の目的や効果を損傷させない範囲で配合可能である。本発明の皮膚外用剤とは、医薬品、医薬部外品、化粧品等の分野にて、皮膚に適用される組成物を意味する。その剤型は本発明の効果が発揮される限り限定されない。溶液、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水-油二相系、水-油-粉末三相系、固形、軟膏、ゲル、エアゾール、ムースなど、任意の剤型が適用される。また、その使用形態も任意であり、例えば、ローション、乳液、パック、美容液、ジェル、クリームなどの基礎化粧料や、ファンデーションなどのメーキャップ化粧料、毛髪用化粧料、芳香化粧料、浴用剤などとすることができるが、これらに限定されるものではない。以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例によってなんら限定されるものではない。実施例に先立ち、本発明に用いられるマンリョウ抽出物の製造方法について説明する。調整例1マンリョウ葉エチルアセテート抽出物乾燥したマンリョウArdisiacrenataSimsの葉を、95v/vエタノール水溶液で、室温で24時間かけて2回抽出した。得られたマンリョウ抽出液をろ過、60°C真空下で溶媒を留去した後、水に再溶解し、エチルアセテート抽出物を得た。これを調整例1とした。調整例2マンリョウ葉ヘキサン抽出物乾燥したマンリョウArdisiacrenataSimsの葉を、95v/vエタノール水溶液で、室温で24時間かけて2回抽出した。得られたマンリョウ抽出液をろ過、60°C真空下で溶媒を留去した後、水に再溶解し、ヘキサン抽出物を得た。これを調整例2とした。MMP-1、MMP-3阻害試験調整例1で得られた抽出物について、MMP-1、MMP-3阻害試験を行った。具体的には、以下のように試験を行った。上記マンリョウの抽出物について、MMP-1、3遺伝子の発現程度を測定するために、RT-PCRReverseTranscription-PolymeraseChainReactionを実施し、下記のようにMMP-1、MMP-3のmRNA発現量を測定した。上記の実施例で得られたマンリョウの抽出物について、正常ヒト繊維芽細胞humanfibroblastcellline:ATCC、CRL-2076を60mm培養皿に1×106個の10ウシ胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地Gibco/BRL、invitrogen社で37°C、5CO2の条件下で培養した。翌日、培地を除去したのち細胞をHBSSで洗い、生理食塩水に置換した。6J/cm2のUVAを照射した後、無血清培地で24時間培養した。その後、細胞からグアニジウムチオシアネート-フェノール-クロロホルム抽出方法で全RNAを抽出した。上記の方法で得られたRNAにDNA分解酵素RNase‐freeDNase、Promega社を37°Cで30分間処理し、フェノール/クロロホルム抽出法とエタノール沈殿法により、純粋なRNAを得て、RT-PCRを実施した。MMP-1の反応条件は、95°C1分、48°C1分、72°C1分を1セットとして、29サイクル行い、MMP-3の反応条件は、95°C30秒、55°C30秒、72°C45秒を1セットとして、30サイクル行い、β-アクチンの反応条件は、95°C1分、62°C1分、72°C1分を1セットとして、22サイクル行った。PCR産物は、1.5w/vアガロースSigma社ゲルに電気泳動し、ゲルイメージアナライザーBIO-RAD社で定量した。対照群にβ-アクチンを使用し、RT-PCRに使用されたプライマーは、下記表1の序列番号に示した塩基配列のものを使用した。マンリョウ抽出物を含まない反応系コントロールUVA照射しMMP発現させたもの、マンリョウ抽出物を含む反応系UVA照射しMMP発現させ、試料添加したもののMMP-1、MMP-3発現率を算出した。結果を表2、表3に示す。また参考例として、MMPS発現阻害作用が良く知られている成分であるエピガロカテキンガラートEGCG:epigallocatechingallateについても、上記と同様の試験を行った。結果を併せて表2、3に示す。表2、3の結果から、マンリョウ抽出物が、優れたMMP-1、MMP-3阻害作用を有することが確認された。また、マンリョウ抽出物濃度が50μg/mlの時、ポジティブコントロールのEGCG2.29μg/mlと同程度であり、その効果は極めて高かった。MMP-2、MMP-9阻害試験調整例1で得られた抽出物について、MMP-2、MMP-9阻害試験を行った。具体的には、以下のように試験を行った。正常ヒト線維芽細胞humanfibroblastcellline:ATCC、CRL-2076を60mm培養皿に1×106個になるよう播種し、37°C、5CO2条件下で培養した。翌日、培地を除去したのち、細胞をHBSSで2回洗い、無血清培地に交換し10ng/mlTNF-αと試料を加え24時間曝露させた。培地を回収し、タンパク質量をBCA法にて決定した。その試料を非還元条件下で10ゼラチンを含むポリアクリルアミドゲルにアプライし、SDS-PAGEを行った。電気泳動後のゲルを、2.5Triton-X100pH7.5で洗い、更に37°Cで16時間、再生バッファー50mMTris-HCl200mM、NaCl5mM、CaCl20.0006、Triton-X100で反応させ、0.1クーマシーブリリアントブルーで染色後、10酢酸/50メタノールで脱色し、脱色後に現れるバンドの強度をイメージアナライザーBIO-RAD社で定量化した。マンリョウ抽出物を含まない反応系コントロールTNF-α10μg/mlのみ添加したもの、マンリョウ抽出物を含む反応系TNF-α10μg/mlと試料添加したもののMMP-2、MMP-9発現率を算出した。結果を表4、5に示す。参考例として、MMPs活性阻害作用で良く知られている成分であるEGCGについても、上記と同様の試験を行った。結果を併せて表4、5に示す。表4、5の結果から、マンリョウ抽出物が、優れたMMP-2、MMP-9活性阻害作用を有することが確認された。また、その作用の強さは、MMP-2において、マンリョウ抽出物濃度が50μg/mlの時、ポジティブコントロールのEGCG2.29μg/mlと同程度、かつMMP-9において、マンリョウ抽出物濃度が50μg/mlの時、ポジティブコントロールのEGCG2.29μg/mlと同程度であり、その効果は極めて高かった。エラスターゼ阻害作用の試験調整例1~2で得られた抽出物について、エラスターゼ阻害作用を試験した。具体的には、以下のように試験を行った。基質N-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE、Sigma社濃度が1.015mMになるように0.1232MTris‐HClバッファーで調製し、この溶液1300μlと終濃度100,50,10μg/mlになるように調製した試料とを混合した。それらを25°Cで10分間ボルテックスしながらプレインキュベートした。ブタ由来膵臓エラスターゼ5μl0.025units/mlSigma社をこの溶液100μlに加えた。ボルテックスした後、25°Cの水浴に10分間静置し、410nmの吸光度を測定した。試料濃度を300、150、50μg/mlに減少させて上記の阻害率の測定を行い、エラスターゼの活性を50阻害する試料溶液濃度を内挿法により求めた。結果を表6に示す。表6の結果から、マンリョウ抽出物が、エラスターゼ阻害作用を有することが確認された。ヒアルロニダーゼ阻害試験調整例1~2で得られた抽出物について、ヒアルロニダーゼ阻害作用を試験した。具体的には、以下のように試験を行った。ヒアルロン酸ナトリウムの主構成成分であるN-アセチルグルコサミンの量を分光光度計で測定することにより、ヒアルロニダーゼ活性を決定した。0.1M酢酸バッファーpH3.5に溶解したウシ由来ヒアルロニダーゼ50ml7900units/mlを決められた濃度の試料100mlと混合し、37°Cの湯浴で20分間インキュベートした。試料の代わりに40BGを100ml加えて同処理したものをコントロールと設定した。12.5mMCaCl2水溶液100mlを反応溶液に加え、37°Cの湯浴で20分間インキュベートした。250mlのヒアルロン酸ナトリウム水溶液1.2mg/mlを加え、37°Cの湯浴で40分間インキュベートした。0.4NNaOH100mlと0.4Nホウ酸カリウムをさらに加え、3分間熱湯につけインキュベートした。室温まで冷やした後、3mlDMAB溶液を加え37°Cの湯浴に20分間インキュベートした。分光光度計にて585nmにおける吸光度を測定し、反応混合液の濃度を決定した。阻害率の計算式は、阻害率=[ODc‐ODs/ODc×100]ここでODcはコントロールの585nmにおけるOD、ODsはサンプルの585nmにおけるODである。表7の結果から、マンリョウ抽出物が、優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を有することが確認された。以上の結果から、本発明に用いられるマンリョウ抽出物のMMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9活性阻害効果、エラスターゼ及びヒアルロニダーゼ活性効果は極めて優れたものであった。したがってマンリョウ抽出物を用いて、シワを効果的に予防することができる。続いて、さらに本発明の処方例を実施例5~9として挙げる。皮膚用ゲル剤11,3-ブチレングリコール1.0重量2シクロヘキサン-1,4-ジカルボン酸ビスエトキシジグリコール3.83カルボキシビニルポリマー2重量水溶液28.04水酸化カリウム10量水溶液3.05メチルパラベン0.16精製水63.97ジプロピレングリコール0.28マンリョウ葉エチルアセテート抽出物調整剤10.2製法:1~6まで混合を均一に溶解したあと、7に8をよく溶解したものを入れ、製品とする。皮膚用クリーム1流動パラフィン6.0重量2ミリスチン酸イソプロピル3.03シクロヘキサン2.54ジメチコン2.05ベヘニルアルコール3.46ワセリン2.07ステアリン酸ソルビタン1.58セテス‐203.49トコフェロール0.0210クエン酸0.05111,3-ブチレングリコール1.012メチルパラベン0.1513プロピルパラベン0.0714精製水72.9115マンリョウ葉エチルアセテート抽出物調整例10.116ジプロピレングリコール1.9製法:1~9の油相成分を80°Cにて加熱溶解する。一方10~16の水相成分を80°Cにて加熱溶解する。これに上記油相成分に攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却を開始し、16に15を加えた溶液を加え、混合する。皮膚用クリーム1セチルジメチコンポリオール3.0重量2ラウリルPEG-9ポリジメチルシロキシエチルジメチコン1.03流動パラフィン7.444水添ヒマシ油1.05マイクロクロスタインワックス0.566ジエチルヘキサン酸ネオペンチレングリコール11.87マンリョウ葉エチルアセテート抽出物調整例10.18ジプロピレングリコール0.19塩化ナトリウム1.010精製水68.9111,3-ブチレングリコール5.012メチルパラベン0.1製造:1~6の油相成分を混合し、80°Cにて加熱溶解する。一方7~12の水相成分を混合し、80°Cにて加熱溶解する。上記油相成分に水相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、冷却する。化粧水1マンリョウ葉エチルアセテート抽出物調整例10.1重量2ジプロピレングリコール0.131,3-ブチレングリコール1.04メチルパラベン0.25キサンタンガム0.26精製水98.4製造:2に1を溶解する。溶解後、3~6を順次添加した後、十分に攪拌し、均一に混合する。実施例6について使用試験を行い、シワの予防効果を評価した。その際、実施例6において、配合したマンリョウ葉エチルアセテート抽出物を精製水に代替し、比較例1として同時に使用試験を行った。具体的には以下のように試験を行った。シワの予防効果を評価するため、何もしなければ悪化するであろう、水分量の少ない冬に実施した。実施例6は、マンリョウ葉エチルアセテート抽出物以外の成分の効果が出ないように、保湿剤はほとんど入れないようにした。20~50代の男女パネラー8名を一群とし、各群に実施例2及び比較例1をそれぞれブラインドにて1日2回ずつ12週使用させ、4週、8週、12週後の目尻のシワの状況を観察し、使用前の値と比較した。シワの症状は表8に示す判定基準に従って点数化した。各グレードの標準に当てはまらない場合は、その中間値のスコアとした。4週、8週、12週のシワスコアの変化度の平均値を表9にまとめた。また、12週の8名のシワ改善度を図1にまとめた。なお、シワスコアの変化度については、-はよりしわ形成が認められ、はしわ改善が認められることを意味する。シリコーンレプリカSilflo,FLEXICODEVELOPMENTS社製で目尻のレプリカを採取、シワの体積、シワの数を測定し、図2にまとめて示した。表9及び図1~2の結果から、マンリョウ抽出物を配合した皮膚化粧料は、シワの予防作用に極めて顕著な効果を有することが確認できた。また、皮膚トラブルもなく、安全であった。"