"気道炎症の予防又は治療を必要とする患者の気道炎症を予防又は治療するための方法であって、前記患者の前記気道へのダプソンを含有する製剤の投与工程を含み、前記製剤はエアロゾル化した製剤又は水性製剤である方法。前記製剤はエアロゾル化した製剤であり、前記投与工程は、定量吸入器及びドライパウダー吸入器からなる群から選ばれる装置を用いて行われる請求項1に記載の方法。前記製剤は水性製剤であり、前記投与工程は、装置installationを介して行われる請求項1に記載の方法。前記患者は、嚢胞性線維症、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、慢性鼻副鼻腔炎、吸引毒性傷害、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症、喘息及び慢性気道炎症からなる群から選ばれる疾病又は疾患を患っている請求項1に記載の方法。気道の粘液線毛輸送機能異常の予防又は治療を必要とする患者における気道の粘液線毛輸送機能異常を予防又は治療する方法であって、前記患者の前記気道へのダプソンを含有する製剤の投与工程を含み、前記製剤はエアロゾル化した製剤又は水性製剤である方法。前記製剤はエアロゾル化した製剤であり、前記投与工程は、定量吸入器及びドライパウダー吸入器からなる群から選ばれる装置を用いて行われる請求項5に記載の方法。前記製剤は水性製剤であり、前記投与工程は、装置installationを介して行われる請求項5に記載の方法。前記患者は、嚢胞性線維症、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、慢性鼻副鼻腔炎、吸引毒性傷害、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症、喘息及び慢性気道炎症からなる群から選ばれる疾病又は疾患を患っている請求項5に記載の方法。このように、先行技術では、エアロゾル化したダプソン製剤を用いた好中球支配性気道炎症の治療法を提供するには全く至っていない。本発明は、ダプソンのエアロゾル化した又は、水性製剤を用いた、気道炎症、特に、好中球支配性炎症の治療方法を提供する。本発明は、この方法のようにダプソンを哺乳類に投与した場合、患者の気道の好中球支配性炎症に伴う症状を解消例えば、軽減、低下又は低減することを実証する初めてのものである。また、本発明は、免疫抑制剤としてよりも免疫変調成分として機能するというダプソンの作用形態の初めての実証も含む。従って、炎症を治療するために、例えば、ステロイドの代わりにダプソンを投与することで、治療を受けている患者の感染症リスクが高まりにくくなる。更に、化合物が微生物に選択圧を加えることがないため、ダプソンの使用が抗生物質耐性菌株の増加に寄与することはない。特に重要なのは、本明細書で実証されるように、ダプソンは、経口及びエアロゾルのいずれにおいてもLPS誘導性上皮内好中球蓄積を減少させたが、エアロゾルのダプソンでの治療のみがしかも、経口投与に求められる低濃度で粘液線毛輸送機能を正常な状態に回復させたことである。更に、ダプソンの投与に的を絞ったこのやり方であれば、経口の全身ダプソン投与に起因する厄介な副作用例えば、貧血が発生しにくい。本発明は、ダプソンのエアロゾル製剤投与による気道炎症の治療方法を提供する。理論により拘束されないが、ダプソンは、IL-8及びIL-13を抑制することにより、免疫抑制に対立するものとしての免疫調節効果を発揮すると思われる。システインXシステインCXCケモカインファミリーであるIL-8は、最も強力な好中球化学誘引物質の1つとして作用する。従って、IL-8活性の減衰は、炎症部位への好中球の動員を低下又は減少させ、これにより、その部位での好中球支配性炎症が減少又は低下する。IL-13は、喘息患者の杯細胞過形成を誘導することで知られており、この過程の抑制は、気道炎症の症状を制御するためにも役立つ。ステロイドが免疫抑制剤であり、その使用で炎症を抑えることができる一方で、その使用により免疫が抑制されてしまい、感染症例えば、日和見感染症のリスクが高くなることから、本発明の方法は、炎症に対するステロイドの使用と比べ、有利である。同様に、ダプソンの使用がマクロライド耐性菌の進化に寄与しないことから、ダプソンの使用は、マクロライド系抗生物質の使用と比べ、有利である。また、本明細書で実証されるように、ダプソンは、経口及びエアロゾルのいずれにおいてもLPS誘導性上皮内好中球蓄積を減少させたが、エアロゾルのダプソンでの治療のみが粘液線毛輸送機能を正常な状態に回復させている。気道上皮に存在する繊毛によって行われる気管支の自浄機構である粘膜毛様体クリアランスは、気道表面の健康の目安である。このように、この重要な機能の回復において、エアロゾル化したダプソンが経口投与されたダプソンよりも優れているという発見は、非常に重要である。別の実施の形態において、ダプソンは、以下に示すように、例えば、ダプソンからなる水性の生理学的に受容可能なキャリアを導入することで気道に投与される。本発明の方法を実施することで、エアロゾル化したダプソン調合剤を使った治療対象の気道炎症の症状が抑えられる。投与により、IL-8が抑制され、粘液線毛輸送機能及び粘膜毛様体クリアランスが回復する。完全に軽減低減、改善、解消などする症状が完全になくなる場合もあるが、常にそうであるとは限らない。例えば、患者が通常若しくはほぼ通常レベルで活動ができる水準まで症状が単に和らいだ又は部分的に改善した患者にとっては大いに有益であることを当業者は認識するであろう。当業者は、例えば、肺活量、気道閉塞の程度、血中酸素濃度の測定や、症状例えば、喘鳴、咳などの有無及び/又は頻度の観察、様々な撮像技術などによるこのような治療の効果についての評価と測定を熟知している。一般に、本発明の方法を実施することで、炎症の症状が、少なくとも約10、20、30、40、50、60、70、80又は90、更には100低減する。本発明の方法は、患者又は対象の呼吸器系への、生理学的に適合するダプソンのエアロゾル組成物又は、別の実施の形態では、水溶性キャリア中のダプソンの投与を伴う。呼吸器系という表現は、空気通常、酸素を豊富に含む空気の肺への又は肺からの搬送及びCO2を多く含む空気の肺からの排出に関わる全ての開口部及び経路と、肺自体を含むよう意図される。例えば、鼻及び鼻腔、口、喉頭、気管、気管支及び細気管支とその枝管、及び肺胞末梢気道例えば、線維筋性壁を有する非軟骨性誘導気道である膜性細気管支、及び、線維筋性壁が部分的に胞状となった気道である呼吸細気管支が含まれる。エアロゾル化したダプソンの投与ができる通常の2つの開口部とは鼻と口であり、これらのうちの一方又は双方を介した投与が、本発明に包含される。ただし、エアロゾルは、外科的に導入された開口例えば、気管切開を介して、また更には、例えば、挿管法により、例えば、肺へ直接投与してもよい。このように、経口吸入器ドライパウダー吸入器、定量吸入器など、フェイスマスク、経鼻又は気管内チューブ、ネブライザなどを含むが、これに限定されない多種多様な既知のエアロゾル投与装置のいずれかを用いて投与を行うことができる。選択される装置の種類は、例えば、エアロゾルが患者により自己投与されるのかどうか、又は、例えば、急性発作又は発症の状況で、医療関係者により投与されるのかどうかなど、状況によって異なる。一般に、慢性疾患の治療に使用される装置は、患者の自己投与に適したものである。このような投与は、当分野で知られる幾つかの種類又は様式のエアロゾル投与装置のいずれかを用いて行うことができる。典型的な装置は、噴射剤例えば、134a又は227などのフッ化炭素、圧搾空気、アルカンなどが入った加圧キャニスタ内の溶液懸濁液もよい中に最も一般的に薬剤が保存されている定量吸入器metereddoseinhaler:MDI、例えば、パッファー、1回分の薬を粉末エアロゾルとして放出するドライパウダー吸入器drypowderinhaler:DPI、及び、水性製剤から作られたエアロゾルとして薬剤を供給するネブライザを含むが、これに限定しない。装置は、例えば、単回投与又は反復投与、使い捨て又は再利用可能/詰め替え可能などでもよく、また、様々な材料から様々な形状で作られたものでもよく、また、様々な機構例えば、息止め、呼吸駆動型などにより操作するものでもよい。いくつかの実施の形態において、本発明で使用する吸入装置は、呼吸駆動型、即ち、エアロゾル化した製剤の投与が、患者の実際に吸入する時間に制限されるものである。本発明を実施するにあたり使用に適した呼吸駆動型の代表的な吸入装置の1つに、Aerogen社カリフォルニア州サニーベール製のAerodose商標吸入器がある。この吸入器は、圧電発振器により作用する多孔質膜を用いてエアロゾルを発生させる。使用してもよい別の吸入器又はネブライザは、例えば、PARILCPLUS商標ジェット式ネブライザPARI社、ドイツStambergなどの従来のエアジェット式ネブライザ、及び、当分野で周知のその他のものを含む。エアロゾル投与用の様々なシステム、装置及び組成物が、例えば、内容全体が引用されることによりそれぞれ本明細書に取り込まれる以下の交付済み米国特許に記載されている。米国特許第7740463号、米国特許第7683029号、米国特許第7497214号、米国特許第7223381号、米国特許第7163014号、米国特許7040314号、米国特許第6932962号、米国特許第6743413号及び米国特許第6575162号。本明細書で使用されるエアロゾルという用語は、気体媒質中の固体又は液体粒子の懸濁液を言う。本明細書において、この用語は、例えば、ミスト、噴霧製剤なども含む。本発明により投与される製剤は、治療を必要とする患者へのエアロゾル化投与に適している。従って、製剤は生理学的に適合するものである。少なくとも、製剤は、ダプソンに加え、生理学的/生物学的に適合した又は適切なキャリアを含む。製剤中のダプソンの量は変えてもよいが、一般に、約1~99重量/体積の範囲である。患者の肺への投与に適した製剤は、一般に、投与の際に気体媒質中に浮遊されたダプソンからなる固体粒子、又は、投与の際に気体媒質中に浮遊されたダプソンからなる液滴のいずれかからなる。ダプソンの商業的供給源は、当業者によく知られている。また、当業者は、活性薬剤のダプソンに加え、1つ以上の追加成分を含んでもよいこのような製剤の生産及び製造にも精通している。液体キャリアを使用する場合は、無菌食塩水又は生理学的に適合するpH例えば、約6.5~8、通常約7.3~7.4で緩衝した食塩水であってもよい。典型的な追加成分は、安定剤、保存剤、様々な有機物及び無機物の医薬品賦形剤様々なポリマ、低分子量オリゴマー、自然産物など、湿潤剤、及び界面活性剤、特に、非イオン性及びイオン性界面活性剤を含むが、これに限定されない。追加成分表面改質剤でもよいの代表的な例は、セチルピリジニウム塩化物、ゼラチン、カゼイン、レシチンリン脂質、デキストラン、グリセロール、アカシアゴム、コレステロール、トラガカント、ステアリン酸、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、グリセロールモノステアレート、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ワックス、ソルビタンエステル類、ポリオキシエチレンアルキルエーテル類例えば、セトマクロゴール1000などのマクロゴールエーテル類、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体類、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類例えば、ポリソルベート20である商品名Tween20米国登録商標及びTween80米国登録商標ICISpecialtyChemicals社などの市販のTween類、ポリエチレングリコール例えば、Carbowaxs3350米国登録商標、1450米国登録商標及びCarbopol934米国登録商標UnionCarbide社、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ステアリン酸ポリオキシエチレン類、コロイド状二酸化ケイ素、リン酸塩類、ドデシル硫酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロースHPC、HPC‐SL及びHPC‐L、ヒドロキシプロピルメチルセルロースHPMC、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、非結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコールPVA、ポリビニルピロリドンPVP、酸化エチレン及びホルムアルデヒド含有4‐1133‐テトラメチルブチルフェノールポリマチロキサポール、スペリオンsuperione及びトリトンとしても知られる、ポロキサマー類例えば、酸化エチレン及び酸化プロピレンのブロックコポリマー類であるPluronicsF68米国登録商標及びF108米国登録商標、ポロキサミン類例えば、酸化プロピレン及び酸化エチレンのエチレンジアミンへの逐次付加に由来する四官能性ブロックコポリマーである、Poloxamine908米国登録商標としても知られるTetronic908米国登録商標BASFWyandotteCorporation社、ニュージャージー州パーシッパニー、ジミリストイルホスファチジルグリセロールなどの荷電リン脂質、スルホコハク酸ジオクチルDOSS、Tetronic1508米国登録商標T-1508BASFWyandotteCorporation社、スルホコハク酸ナトリウムのジアルキルエステル類例えば、スルホコハク酸ナトリウムのジオクチルエステルであるAerosolOT米国登録商標AmericanCyanamid社、ラウリル硫酸ナトリウムであるDuponolP米国登録商標、スルホン酸アルキルアリールポリエーテルであるTritonsX-200米国登録商標RohmandandHaas社、ステアリン酸スクロースとジステアリン酸スクロースの混合物であるCrodestasF-110米国登録商標Croda社、Olin‐10G米国登録商標又はSurfactant10-G米国登録商標としても知られるp-イソノニルフェノキシポリ-グリシドールOlinChemicals社、コネチカット州スタンフォード市、CrodestasSL-40米国登録商標Croda社、及びC18H37CH2CH242であるSA9OHCOEastmanKodak社、デカノイル-N-メチルグルカミド、n-デシルβ-D-グルコピラノシド、n-デシルβ-D-マルトピラノシド、n-ドデシルβ-D-グルコピラノシド、n-ドデシルβ-D-マルトシド、ヘプタノイル-N-メチルグルカミド、n-ヘプチル-β-D-グルコピラノシド、n-ヘプチルβ-D-チオグルコシド、n-ヘキシルβ-D-グルコピラノシド、ノナノイル-N-メチルグルカミド、n-ノイルβ-D-グルコピラノシド、オクタノイル-N-メチルグルカミド、n-オクチル-β-D-グルコピラノシド、オクチルβ-D-チオグルコピラノシドなどを含む。チロキサポールは、肺送達又は鼻腔内投与にとって、更には噴霧療法にとって特に好ましい表面改質剤である。これら化合物の多くは、医薬品賦形剤として知られており、特に本明細書に参考として組み込まれるアメリカ薬学会AmericanPharmaceuticalAssociation及び英国薬学会ThePharmaceuticalSocietyofGreatBritainの共同出版による医薬品賦形剤ハンドブックHandbookofPharmaceuticalExcipients1986年PharmaceuticalPress出版に詳しく記載されている。これらは市販されており、及び/又は、当分野で既知の技術によって生成される。また、ダプソンのエアロゾルは、例えば、ステロイド、抗生物質例えば、マクロライド、充血除去剤、抗がん剤などの抗炎症性又はその他の性質を有するその他の化合物など、その他の生物学的活性成分を含んで処方されてもよい。あるいは、エアロゾルのダプソン製剤は、それらが同じ製剤に含まれなければ、そのような生物学的活性成分と併せて用いてもよい。患者又は、患者の世話をする健康管理士が守る投与スケジュールは、幾つかの要因、例えば、治療する疾病又は疾患、疾患の重症度、患者の年齢、性別及び体重、服薬遵守を達成又は最大化するためのスケジューリング利便性に応じて変更してもよい。一般に、投与は、毎日2~4回例えば、約12時間毎、又は8時間毎、又は4時間毎行われるが、場合によっては、頻度を減らしても例えば、1日に1回のみ又は増やしても例えば、2時間毎よい。各投与の継続期間は、投与される量、使用される装置の種類などに応じて異ならせてもよい。一般に、投与に要する時間は、約5~30分、例えば、約5、10、15、20、25又は30分である。しかし、一部の短時間の投与装置では、たった数分例えば、1~4分で投与を完了できる。更に、一部の患者例えば、急性喘息発作を起こしている患者への投与は、例えば、患者が病院に搬送されるまで、又は、患者が医療機関において安定するまでなど、更に長期間にわたって連続的且つ継続的に行ってもよい。熟練した医療関係者例えば、医者、呼吸療法士などは、これらの要素をよく心得ており、それに応じて治療プロトコールを計画及び調整することができる。一服につき投与されるダプソンの量は、例えば、治療する疾病又は疾患、疾患の重症度、患者の年齢、性別及び体重、治療に対する患者の耐性などの様々な要因によっても変わる。一般に、吸入で投与される量は、体重1kgあたり約0.5~約5mgの範囲であり、例えば、体重1kgあたり約0.5~約1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5又は5.0mgであり、1回の服用で体重1kgあたり約2mgであることが多い。本発明の方法で治療できる疾病は、様々な気道炎症、特に、中球支配性炎症を含み、これには、気管支が狭くなり、空気が肺へ、特に肺から移動し難くなる、例えば、慢性閉塞性肺疾患COPDや喘息進行中の慢性喘息、重症喘息及び喘息の発作又は急性発作、特に好中球性の重症喘息、嚢胞性線維症、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、肺線維症例えば、特発性肺線維症、肺気腫、急性呼吸促迫症候群、気管支炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、鼻副鼻腔炎及び慢性鼻副鼻腔炎、慢性気道感染症、毒性の吸入傷害などの様々な閉塞性肺疾患が含まれるが、これに限定されない。炎症を起こしうる多種多様な要因は、喫煙又は受動喫煙への曝露、炭坑、金鉱及び木綿工業で見られる労働現場の粉塵、カドミウムやイソシアネートなどの化学薬品及び溶接時の煙への職業的暴露、大気汚染例えば、二酸化硫黄、一酸化炭素、煤などの微粒子、粉塵などへの暴露、例えば、調理時の煙や暖炉の煙に起因する屋内空気汚染、遺伝的感受性例えば、アルファ‐1‐抗トリプシン欠乏症、及び自己免疫反応例えば、自己抗体及び自己反応性T細胞を介した持続性炎症、例えば、イエダニ、ペットのふけ、花粉、食品、虫刺されなどによって引き起こされるアレルギー性免疫反応及び/又はアナフィラキシーなどを含むが、これに限定されない。本発明の方法は、気道炎症に苦しむ患者への、ダプソンのエアロゾル化した製薬の投与を伴う。このような患者は、一般に、哺乳類、通常人間であるが、常にそうであるとは限らない。この技術の獣医学的用途も考えられる。本発明の方法は、一般に、気道炎症又は粘液線毛輸送機能MCT障害例えば、通常又は基礎レベルのMCTより遅い、特に、好中球が関与する炎症の特徴がある又はそれにより引き起こされる疾病又は疾患を患う患者の特定を含む。典型的な疾病としては、嚢胞性線維症、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、肺気腫、慢性気管支炎、慢性鼻副鼻腔炎、吸引毒性傷害、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症、喘息及び慢性気道炎症を含むが、これに限定されない。この方法は、罹患患者の気道に、例えば、気道上皮細胞、特に、上皮繊毛に接触するようにダプソンを投与することにより行われる。本発明の方法は、一般に、IL-8の過剰発現を低減又は軽減する例えば、方法は、正常レベル、規制レベル又は基礎レベルを超えるレベルのIL8mRNA発現を防止する。これにより、IL-8の過剰発現に伴う疾病を患う患者の、そのような過剰発現で起こる病徴が和らげられる。例えば、粘液線毛輸送機能が、正常又はほぼ正常レベルに回復する。当業者は、例えば、呼吸特性、肺及び気道の画像解析、酸素やCO2などの血中濃度、患者の自己報告、生体組織検査、痰分析などの特定のパラメータを観察及び/又は測定することにより、そのような患者を判断、特定及び/又は診断する方法及び試験に精通している。一旦エアロゾルのダプソン治療の対象となりそうな患者が特定されると、医療専門家は、通常、患者への服用量及び/又は投与計画を処方するとともに、吸入器の使用の指示を与え、おそらくはそれに関する指導又はその実演を行う。その後、医療専門家は、エアロゾル投与の成果を監視する。服用量及び/又は服用回数は、治療に対する患者の反作用又は反応と、疾病の臨床症状の調整又は解消に向かった進展に応じて調節してもよい。治療期間は、患者ごとに、又は、一人の患者でもその時々により異なってもよく、短期でも長期でもよい。治療する疾患の慢性的性質により、エアロゾルのダプソン治療はしばしば長期間となり、例えば、数週間、又は数ヶ月、又は数年、更には患者の残りの人生にわたって継続される。当業者は、患者の気道への活性薬剤の投与が、常にエアロゾル化した製薬を用いて行われる必要はないことを認識するであろう。例えば、薬の導入例えば、気管切開チューブ、鼻腔チューブなどの既存の導管を介したには、例えば、生理学的に受容可能な液体キャリア中のダプソンといった、水性製剤の使用が必要となる場合がある。当業者は、エアロゾルに関して上述したようなエアロゾル調剤薬と多くの性質を共有するそのような製剤の調合に通じている例えば、調剤薬中に存在する活性薬剤や賦形剤の量、pH、治療する疾病、患者の特定、診断及びモニタリング、投与スケジュール、別の薬剤と併せた投与など。しかし、そのような調剤薬はドライパウダーではなく、液体である。そのような製剤の投与経路と方法は、例えば、手動で投与された鼻用ミスト又はスプレー例えば、容器又は装置を手で圧迫又はポンプを押すことによる投与を介した、又は、点鼻薬若しくは鼻洗浄を介するなどした導入を含むが、これに限定されない。実施例1:ダプソンは、LPSで刺激されたヒト気管支上皮細胞からのIL8分泌を抑制し、フェレットの気道炎症を解消する。序説気道を、患者の体内環境を外部から隔てる上皮細胞で覆う。気道上皮は、外的刺激及び細菌に対する機械的バリアであるだけでなく、先天性且つ後天性免疫応答、及び、気道炎症に積極的に関与している。細菌が侵入すると、粘膜毛様体クリアランスが活性化され、炎症性メディエータ及びサイトカインが防衛として分泌されるが、これらもまた気道を損傷しうる。上皮由来の多面的サイトカインの中で、ステインXシステインCXCケモカインファミリーの1つであるIL-8は、最も強力な好中球走化性因子の1つとして作用する。好中球支配性炎症は、慢性閉塞性肺疾患COPD、びまん性汎細気管支炎diffusepanbronchiolitis:DPB及び嚢胞性線維症cysticfibrosis:CFの特性を示す。IL-8は、気道上皮細胞により作られる。痰及び気管支肺胞洗浄bronchoalveolarlavage:BAL液中の増量したIL-8は、DPB及びCFの重症度に関連するものであり、重症喘息及びCOPDを患う対象の気管支上皮内のIL-8遺伝子発現が増加する。炎症誘発性サイトカイン、細菌性フラジェリン及びリポ多糖体lipopolysaccharide:LPSは、正常ヒト気管支上皮normalhumanbronchialepithelial:NHBE細胞によるIL-8生成を増加させ得る。有機塵中に存在する様々な物質の中で、LPSは、炎症反応の主な誘導因子である。LPSは、核因子κBnuclearfactorκΒ:ΝΚκΒ経路、ホスファチジルイノシトール‐3‐キナーゼphosphatidylinositol3kinase:PI3K及びマイトジェン活性化プロテインキナーゼmitogenactivatedproteinkinase:MAPK経路を含む細胞内シグナル伝達経路を活性化させるToll様受容体4tolllikereceptor4:TLR4と結合する。IL-8遺伝子発現に寄与する3つのMAPK経路は、細胞外シグナル制御プロテインキナーゼextracellularregulatedproteinkinase:ERK、c-JunNH2末端タンパク質キナーゼcJunNH2terminalproteinkinase:JNK及びp38MAPKカスケードである。これら経路のそれぞれの活性化の相対的度合いと機能的結果は、細胞の種類と実験システムにより異なる。マクロライド系抗生物質は、DPBを患う対象のBAL中の好中球及びIL-8濃度、及び、CF患者における痰IL-8濃度を減少させる。マクロライドは、ERK又はΝΚκΒの不活性により、培養液中の気道上皮細胞からのIL-8放出を抑制することができる。ダプソンは、刺激された気道細胞によるIL8分泌を抑制するという仮説を我々は立てた。従って、我々は、LPSにより刺激されたNHBE細胞からのIL8分泌に対するダプソンの作用を研究し、更に、関連するシグナル伝達経路を調査した。そして、我々は、気道がLPSに暴露されたLPSにより炎症を起こしたフェレットに経口で又はエアロゾルとして投与した場合の、気道への好中球動員を抑えるとともに粘膜毛様体クリアランスを持続させるダプソンの有効性の評価を行った。材料及び方法試薬ダプソン4,4’-ジアミノジフェニルスルホン、LPS大腸菌血清型0111:B4及びその他の全ての試薬は、特に記載しない限り、SigmaAldrich社ミズーリ州セントルイスから購入した。MAPK/ERKキナーゼMEK、ERK1/2の上流のキナーゼ阻害剤であるPD98059は、Calbiochem社カリフォルニア州ラホーラから入手した。リン酸化及び非リン酸化特異的ERK1/2、抗p38MAPK、抗SAPK/JNK、リン酸化特異的NFκBp65Ser536及び抗ウサギIgGHRP抗体は、CellSignalingTechnology社マサチューセッツ州ベバリーから購入した。DMSOジメチルスルホキシドをダプソンの溶媒として用い、最終的濃度が0.01v/vを超えないようにした。体外での予備実験は、0.01のDMSO媒体では、72時間までの細胞の生存率及びIL8分泌に対し著しい作用がなかったことを示したデータ不掲載。NHBE細胞培養NHBE細胞LonzaWalkersville社、メリーランド州ウォーカービルを、抗生物質を含まずSingleQuot米国登録商標キットLonza社が補充された気管支上皮細胞増殖培地bronchialepithelialcellgrowthmedium:BEGMで、1cm2あたり3500個の細胞を培養皿に播種し、37°Cの5CO2培養器内で培養した。全ての実験で、無エンドトキシン培地0.005単位/ml未満のエンドトキシンと第2継代細胞を使った。細胞を、密集するまで6日間増殖させた。その後、抗生物質を含まない培養液を、1型ラット尾コラーゲンでコーティングした6ウェルプレート又は35mm培養皿に移し、1cm2あたり3500個の細胞を播種した。24時間おきに培地を交換した。細胞シグナリングとIL8分泌に対する増殖因子の影響を避けるため、刺激する前の24時間の間、補充物無しの気管支上皮細胞用基礎培地bronchialepithelialcellbasalmedium:BEBM内で細胞を培養した。細胞成熟が細胞シグナリングとサイトカイン分泌に影響を及ぼす可能性があり、密集の際に全ての細胞が同様の成長段階にあることから、細胞の相対数に標準化するのではなく、細胞密集時の細胞応答を評価した。NHBE細胞分化のため、1型ラット尾コラーゲンでコーティングした直径6.5mm、細孔径0.4μm及び厚さ10μmのポリカーボネートインサートCostarTranswellClear、アメリカマサチューセッツ州ケンブリッジ上に1cm2あたり2.0×105個の細胞を播種し、ITS-Aを含む無血清DMEM/F12培地1.0、Invitrogen社、カリフォルニア州カールスバッド、上皮細胞増殖因子epidermalgrowthfactor:EGF0.5ng/mlの遺伝子組換えヒトEGF、Invitrogen社、トリヨードチロニン10ng/ml、MPBiomedicals社、オハイオ州ソロン、ヒドロコルチゾン0.5μg/ml、MPBiomedicals社、オールトランス型レチノイン酸1.0×10-7M、SigmaAldrich社、ウシ血清アルブミン2.0μg/ml、SigmaAldrich社及びウシ下垂体抽出物30μg/ml、Invitrogen社で培養した。密集がなされた後、頂端側培地を除去し、気液界面airliquidinterface:ALI法で細胞を培養した。48時間おきに培地を交換し、10~14日間37°Cの5CO2下で細胞を維持した。細胞毒性アッセイ生存細胞数を判別するため、CellCountingKit-8CCK-8、株式会社同仁堂、日本熊本を用いて、ホルマザン色素の生成を測定した。CCK-8アッセイ溶液で処理した細胞を2時間培養し、マイクロプレートリーダーで450nmの吸光度を測定した。データは、ダプソンに暴露されなかった対照細胞に対するとして表わした。IL8分泌の測定培養上清を採取し、200×gで5分間遠心分離機にかけ、分析がされるまで-20°Cで保管した。ELISABeckmanCoulter社、カリフォルニア州ブレアを用い、製造元の使用説明書に従ってIL-8を測定した。各サンプルの濃度を、標準曲線から補間して得た後、サンプル希釈の結果の平均として計算した。免疫ブロット法刺激を行った後、播種した細胞を冷PBSで洗浄し、その後、改良放射線免疫沈降緩衝液1のノニデットP-40、1のデオキシコール酸ナトリウム、150mMのNaCl、10mMのTrispH7.5、5mMのピロリン酸ナトリウム、1mMのNaVO4、5mMのNaF、1μg/mlのアプロチニン、1μg/mlのロイペプチン及び0.1mMのPMSF中で15分間氷上で溶解させ、そして、培養皿からこすり取った。27ゲージ注射針に溶解物を通してDNAを剪断し、20,000gを4°Cで15分間遠心分離することで不溶性物質を除去した。得られた上清のタンパク質濃度を、DCプロテインアッセイBioRad社、カリフォルニア州ハーキュリーズにより測量した。同量のタンパク質抽出物を、それぞれ12のSDS‐PAGE用ミニゲルに載せ、ニトロセルロース膜BioRad社に移した。膜は、5の脱脂粉乳を含むブロッキング緩衝液150mMのNaCl、20mMのTris及び0.1のTween20pH7.6を用い、4°Cで一晩ブロッキングした。その後、膜をすすぎ、以下の一次抗体で、室温で2時間培養した。リン酸化されたp‐p44/42MAPKThr202/Tyr204希釈1:2000、p-p38MAPKThrl80/Tyrl82希釈1:1000、p-SAPK/JNKThr183/Tyr185希釈1:1000又はリン酸化したNF‐κBp65ウサギポリクローナル免疫グロブリンGIgG希釈1:1000CellSignalingTechnology社。そして、膜を室温で1時間、抗ウサギIgGHRP二次抗体希釈1:2000で培養した。その後、ブロット膜を、化学発光基質過酸化物LumiGLOCellSignalingTechnology社で成長させた。30°Cで30分間かけて、ストリッピング緩衝液100mMの2-メルカプトエタノール、2のSDS及び62.5mMのTris/HClpH6.7で膜を剥離した。ブロットは、抗p44/42MAPK、抗p38MAPK又は抗SAPK/JNK抗体それぞれ希釈1:1000、それに続き抗ウサギIgGHRP二次抗体希釈1:2000で再プローブした。NF‐κBp65を載せる際のわずかな違いを補正するため、ブロットを剥離し、抗ヒトβアクチン抗体希釈1:5000と引き続き抗マウスIgGHRP二次抗体希釈1:5000で再プローブした。ウェスタンブロット画像をスキャンし、画像解析ソフトNIHimageJ18で解析した。リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応IL8mRNA発現の相対的定量化において、グリセルアルデヒド‐3‐リン酸デヒト ゙ロゲナーゼGAPDHの発現が、内在性コントロールの役割を果たした。DNAインターカレーター色素としてEvaGreenを用い、増幅したDNAの定量化を監視し、各サンプルの閾値サイクルCt値を得るため、CFXManager商標ソフトウェアBioRad社によりリアルタイム定量的PCR曲線を分析した。定量化は、標準曲線に基づいて行った。適切なIL-8及びGAPDHのフォワード及びリバースプライマーを用いた。動物実験成フェレットの雄体重1.3~2.0kg20匹を、MarshallFarmsニューヨーク州ローズから入手した。フェレットに40mg/kgのケタミンと5mg/kgのキシラジンで麻酔をかけ、300μlの水溶性K‐YゼリーJohnsonJohnson社、ニュージャージー州ニューブランズウィックに混合された10mgのLPSでコーティングした3.0カフなし気管内チューブETTを挿管することにより、5日間毎日1日1回30分間エンドトキシンに暴露した2009年Abansesetal。対照群として、2匹のフェレットには、LPSを含まないK‐Yゼリーを用いた。経口投与用に、最終的濃度が3mg/mlで、5v/vのエタノール/5v/vのジメチルスルホキシドDMSO/0.5w/vのメチルセルロース溶液の賦形剤中にダプソンを調合した。噴霧形態で投与するため、0.67v/vのDMSO/生理食塩水に、0.5mg/mlの濃度でダプソンを溶解させた。LPS処置されたフェレット18匹を無作為に選び、4日目LPS処置の3日後から5日間ダプソン治療を行い、5日間継続した。経口投与の際、経鼻胃チューブを通して、2mg/kgのダプソンn=4又は賦形剤のみn=4が毎日与えられた。これは、皮膚病患者の治療に用いる経口投与量に相当する。エアロゾル吸引の際、フェレットには、喉頭下1cmまでETTを浅く挿管した。毎日1日1回15分間、ジェット式ネブライザPariMasterPARIRespiratoryEquipment社、バージニア州リッチモンドを用い、霧状にした0.5mg/mlのダプソンn=5又は0.67のDMSO/生理食塩水賦形剤n=5でフェレットの治療を行った。フェレット体重1.5kgの肺胞被覆液の総体積は、0.3~0.4mlである。したがって、肺に送達される投与量は、報告されている噴霧効率を考えると、このシステムにおいては0.1~1.0μgと推定される。9日目に、ダプソン治療したフェレットと賦形剤での対照分のフェレットとに犠牲になってもらい、気管を取り出した。各気管切片を10ホルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、光学顕微鏡CKX41、オリンパス社、日本東京を用いた組織学的分析用に処理され、及びデジタルカメラ装置AxioCamICc1、CarlZeiss社、ニューヨーク州ソーンウッドを用いた写真撮影がなされた。組織を4μmの厚さにカットし、スライドをヘマトキシリン及びエオシンで染色した。炎症細胞の蓄積と炎症の全体的重症度を測るため、上皮内好中球の総数を、4つの異なる部位からの試料ごとにランダムな8か所で150μmにわたって数え、平均化した。摘出した気管切片を、気管の粘液線毛輸送MCT速度を測定するためにも用いた。繊毛によって口へと運ばれた、例えば、異物や微生物を含む粘液は、そこで咳を介して飲み込まれるか吐き出される。炎症状態においては、線毛細胞がその運輸機能を中断するため、細菌性の胚のコロニー形成、更なる刺激及び炎症が容易に引き起こされる。相対湿度が95~100に保たれ、温度が22°C~24°Cに保たれたチャンバ内で、リンガー溶液を染み込ませたガーゼ片上に気管切片を置いた。MCTは、十字線グリッド線付き接眼レンズを有する顕微鏡下で気管切片に焦点を合わせ、気管上皮上に載せられた非常に細かいプラスチックの削りくずの先端の輸送時間を記録することによって測定した。3mmの粒子を輸送する時間を、MCTmm分を計算するために用いた。各気管切片につき、5回繰り返し測定を行った。この研究は、バージニアコモンウェルス大学の動物実験委員会により認可されている。統計結果を、平均値±SE又は必要に応じて±SDで表わしている。統計パッケージStatview5SASInstitute社、ノースカロライナ州ケアリーでデータの統計分析を行った。2つのグループの比較は、2標本t検定により行った。多重比較については、FisherのPLSDテストを用いた一元配置分散分析により行い、0.05未満のP値を有意であるとした。結果NHBE細胞の生存率に対するダプソンの作用培養したNHBE細胞の総数がダプソン治療に影響されなかったことを確認するために、CCK-8株式会社同仁堂を用いて細胞の生存率を評価した。96ウェルプレート1ウェルにつき3000細胞上に播種したNHBE細胞を、37°Cで72時間培養した70までの密集。濃度0.3、1又は10μg/mlのダプソンを、24又は72時間の間添加した。結果は、ダプソンで治療した細胞では、生存細胞の総数が、72時間以上治療のなかった対照群と同様であったことを示した図示せず。LPS誘導性IL8分泌に対するダプソンの作用NHBE細胞からのIL8分泌に対するダプソンの作用を評価するため、LPSと同時に添加されたダプソンの存在下又は非存在下において、LPSでの刺激から24時間後に細胞上清を採取した。細胞成熟が細胞シグナリングとサイトカイン分泌に影響を及ぼす可能性があり、密集の際に全ての細胞が同様の成長段階にあることから、細胞の相対数に標準化するのではなく、細胞密集時の細胞応答の評価を選んだ。LPSは、10μg/mlで、NHBE細胞からのIL8分泌を大幅に増加させたがP<0.001、ダプソンは、0.3、1又は10μg/mlで、これを抑えたそれぞれP<0.01図1A。1μg/mlのダプソンでは、48及び72時間での基礎IL8分泌に影響はなかった図1B。1μg/mlのダプソンの存在下では、LPS誘導性のIL8分泌が、最大72時間まで大幅且つ持続的に減少した図1C。ALI調整したNHBE細胞におけるダプソンの作用ダプソンのIL-8抑制効果が分化した細胞にも見られるかどうかを確認するため、14日間ALI調整下で培養したNHBE細胞を用いた。ALIの細胞については、サンプルを、フィルタ上で成長した細胞の頂端側チャンバ及び側底側チャンバの双方から採取した。頂端側チャンバから細胞を採取するため、150μlのハンクス平衡塩類溶液HBSS、LonzaWalkersville社を頂端側に添加した。頂端側のIL-8濃度は、側底側培地の体積600μlと等しくなるような4倍希釈値として表わした。LPSで、頂端側からAP‐LPS又は側底側からBL-LPS、24時間NHBE細胞を刺激し、両チャンバにおけるIL8分泌レベルを測定した。ダプソンは、側底側培地にのみ添加した。図2Aに示すように、頂端側IL8レベルは、AP‐LPSにより大幅に増加しP<0.001、ダプソンがこの反応を抑制したP<0.05。同様に、側底側IL8レベルは、AP‐又はBL-LPSにより大幅に増加しそれぞれP<0.001図2B、ダプソンが頂端側及び側底側両方の反応を抑制したAP‐LPSではP<0.001、BL-LPSではP<0.01。コルチコステロイドと比較するため、LPS誘導性のIL8分泌に対するデキサメタゾンDEXの作用を調べた。DEXは、頂端側及び側底側の双方において、基礎IL8レベルを抑止したそれぞれP<0.05図2C及び2D。また、DEXは、AP‐LPS又はBL-LPS誘導性のIL8の増加を大幅に抑制したそれぞれP<0.05。LPS誘導性IL8mRNA発現に対するダプソンの作用IL8mRNAに対するダプソンの作用を調べるため、LPS、ダプソン、DEX又はその組み合わせでの刺激から4時間後に細胞からRNAを抽出し、リアルタイム定量PCR用に準備した。図3に示すように、1μg/mlのダプソンでは、基礎IL8mRNAレベルに影響はなかったが、0.1μg/mlのDEXは、これを~40まで減少させているP<0.05。10μg/mlのLPSは、IL8mRNAレベルを対照群の5倍を超えて増加させたP<0.001。1及び10μg/mlのダプソンは、LPS誘導性IL8mRNAの過剰発現を大幅に抑制したそれぞれP<0.05。また、DEXも0.1μg/mlでこれを抑制したP<0.01。MAPKのLPS誘導性リン酸化反応に対するダプソンの作用MAPKシグナリングは、IL8合成において重要な経路である。NHBE細胞内におけるERK1/2、p38及びJNKのLPS誘導性リン酸化反応に対するダプソンの作用を評価した。10μg/mlのLPSは、1、4及び24時間の時点でERK1/2を大幅にリン酸化したがそれぞれP<0.05、p38及びJNKはそうではなかった図4。1μg/mlのダプソンは、1時間の時点ではLPS誘導性のERK1/2リン酸化反応を抑制したがP<0.05、4時間後にはこの効果は消えた。そこで、選択的細胞透過性のMEK阻害剤であるPD980592‐アミノ‐3‐メトキシフラボンの効果を評価した。図5Aに示すように、LPSは、用量依存的にERK1/2のリン酸化反応とIL8分泌を増加させ、PD98059は20μMで10μg/mlのLPSで誘導されたERK1/2のリン酸化反応を消滅させた。しかし、この濃度のPD98059では、IL8分泌は抑制されなかった図5B。NFκBp65のLPS誘導性リン酸化反応に対するダプソンの作用LPSはTLR4を刺激し、NFκB経路を介してIL-8を誘導するので、NHBE細胞内におけるNFκBp65のリン酸化反応に対するダプソンの作用を調べた。増殖因子は、LPS又はダプソンの暴露の24時間前に培地から引き上げた。NFκBp65のトレオニンリン酸化を、ウェスタンブロッティング法により測定した。バンド強度は、NIHimageJソフトウェアで計算した。結果は、LPSは10μg/mlで、NFκBp65のリン酸化反応を15分の時点で大幅に増加させP<0.01、この効果は最大2時間まで持続したP<0.05ことを示した。ダプソンは1μg/mlで、LPS誘導性NFκBp65リン酸化反応を対照レベルまで大幅に抑えた15及び30分ではP<0.01、1及び2時間ではP<0.05。更に、この抑制作用は、用量依存的である0.3μg/mlのダプソンでP=0.16、また、1及び10μg/mlのダプソンでP<0.01。フェレットの活動及び体重に対するダプソンの存在下又は非存在下における気管LPSの作用フェレットをLPSで5日間刺激し、5日間のダプソン治療又は賦形剤のみの投与を行った検査した各時点で、賦形剤はn=8、ダプソン群はn=9。フェレットの活動又は食欲に対してダプソンの存在下又は非存在下におけるLPSの計測可能な作用はなく、これら2つのグループを比較した際、9日間にわたって体重の差もなかった図示せず。LPSで炎症を起こしたフェレットの気管における上皮内好中球蓄積ダプソンの生体内での効果を評価するにあたり、好中球を動員し、麻酔下にあり自発呼吸するフェレットの気管に炎症を起こさせるため、局所的にLPSをコーティングした気管内チューブETTを使用した2009年Abansesetal。水溶性ゼリー他のグループではLPSの賦形剤として使用のみをコーティングしたETTを挿管した対照のフェレットは、3/150μm未満のわずかな上皮内好中球を示した。LSPで気管が炎症を起こし、噴霧化した賦形剤で治療された1匹のフェレットは、6日目に死亡したことから実験を終了できず、この動物については、更なる分析から除外した。LPS暴露で、フェレットの気管上皮に著しい好中球蓄積を誘発し、ダプソン治療で上皮内好中球数を減少させた図示せず。経口投与したダプソンは、好中球動員を抑制する傾向がありp=0.3図6A、噴霧化したダプソンは、好中球蓄積を大幅に抑制したP<0.05図6B。摘出した気管切片の粘液線毛輸送機能MCT粘液線毛輸送機能又は粘膜毛様体クリアランスmucociliaryclearance:MCCは、気道表面の健全性及び完全性の全般的尺度である。3mmの切片におけるMCTの時間を測った。LPSは、MCTを1~3mm/分まで劇的に遅くした通常、およそ7mm/分である。経口のダプソンはMCTを増進させたが、その伸び率は著しいものではなかったP=0.09。しかし、エアロゾルのダプソンは、図7A及び7Bに示すように、ほぼ通常速度でMCTを持続させた6mm/分、LPS対照との比較でP=0.007。考察ダプソンがLPSで刺激されたNHBE細胞からのIL8分泌を抑制することを示してきた。ダプソンは、皮膚疾患、とりわけ好中球浸潤を伴ったものの治療に用いられる。ダプソンは、高い日和見感染リスクもなく炎症箇所の好中球走化性と機能を減じる、と仮定されてきた。これは、免疫調節とは一致するが、免疫抑制とは一致しない。ダプソンは、有毒な活性酸素種、ミエロペルオキシダーゼ及びエラスターゼの局所産生を抑制するが、これは主な作用形態ではなさそうである。ダプソンに対する臨床反応が、好中球数が減少することにより特徴づけられるからである。別の研究者らは、ダプソンは、体外で接着分子CD11b/CD18の活性化を妨げることで、好中球走化性を減じる可能性があることを示している。しかし、これには、生体内で用いられる治療レベルよりも高濃度のダプソンが必要であると思われる。本研究において用いたダプソンの濃度は、治療に必要とされる血清レベル0.5~5μg/mlの範囲内である2001年Zhuetal。0.3μg/mlの低濃度のダプソンが、LPS誘導性のIL8分泌を抑制したが、この効果が、生存細胞数を尺度とした細胞毒性によるものではなかったことを発見した。Schmidtetal2001年は、治療濃度のダプソンが、培養された正常ヒト表皮角化細胞NHEKからの水疱性類天疱瘡IgG媒介性のIL-8放出を抑制し、ダプソンが基礎IL8レベルを低下させることはなかった、と報告している。これらのデータは、NHBE細胞を使った本発明の結果と類似している。気道上皮は機能的に二極化されており、上皮細胞が双方向にサイトカインを分泌できるとことが証明されている。分化し、二極化した気道上皮モデルにおけるダプソンの作用形態をより理解するため、NHBE細胞をALIで培養した2001年、Kanoletal。ダプソンの存在下においては、LPS刺激によって誘導されたIL8分泌は大幅に減少する一方で、構成的IL-8放出はダプソンでは抑えられることはなかった。興味深いことに、頂端側から刺激した場合気道感染時に起こるように、NHBE細胞は、IL-8を頂端側及び側底側に向かって分泌したが、側底側から刺激した場合には、側底側に向かってのみ分泌している。フィルタ上で成長し、頂端側で黄色ブドウ球菌によって刺激された気道上皮細胞は、T細胞に頂端側への走化性を起こしたが、底側の上清には起こさなかった2006年、Escotteetal。頂端側に方向づけられた化学誘引物質勾配の存在は、上皮表面全域で好中球やリンパ球のような免疫細胞を働かせるために必要である可能性がある2007年、Chinetal。また、培養細胞系において、作用の強力な合成コルチコステロイドであるデキサメタゾンDEXの作用をテストした。DEXは、NHBE細胞からのIL-8放出を抑制すると報告されており、DEXがダプソンよりもIL8mRNA発現を抑制したことを確認した。しかし、ダプソンとは異なり、DEXが基礎IL8レベル及びLPS誘導性の増加も抑制したことから、DEXが免疫抑制性であるのに対し、ダプソンは免疫調節性であることを意味している。ダプソンがIL-8を抑制する細胞内シグナル伝達経路については、あまり明らかにされていない。MAPKが気道上皮細胞におけるIL-8遺伝子発現を制御することから、これら経路に対するダプソンの作用を評価した。LPSは、NHBE細胞におけるリン酸化反応をERK1/2では用量依存的に増進させるが、JNK及びp38では増進させず、少なくとも24時間の間継続的にp-ERK1/2レベルを上昇させたことがわかった。ERK1/2の持続的活性化は、刺激されていないNHBE細胞からの基礎IL8分泌に必要であること、及び、IL-8は、特定のMEK阻害剤のPD98059では抑制されるが、JNK又はp38の薬理学的阻害剤では抑制されないことをこれまでに示してきた。PD98059での前治療が、1及び2時間の時点でERK1/2のLPS誘導性リン酸化反応を抑制することを示す者もいる。現在の研究においては、PD98059の抑制効果が、4時間の時点でさえ確認されている。しかし、PD98059は、LPS誘導性のIL8分泌を減少させなかった。ダプソンが1μg/mlでは、1時間の時点でのp-ERK1/2は抑制されたが、4時間後は抑制されなかった。総合すれば、ERK1/2の抑制だけでLPSで刺激された細胞内のIL-8を抑制するとは考えにくく、よって、ダプソンによる一時的なERK1/2の抑制は、IL-8に対する効果のうちには入らない。そこで、NFκB活性化に対するダプソンの効果を調べた。NFκBは、気道上皮細胞内において炎症性メディエータ及びサイトカインの遺伝子発現を誘導することができ、LPSは、TLR4を介してNFκBを活性化させることができる。基礎NFκB複合体は、Relファミリータンパク質のうちの2つであるp50とp65RelAの二量体である。いずれのサブユニットもDNAと接触するが、p65のみが、転写装置と直接接触するC末端領域内にトランス活性化ドメインを含んでいる。NFκBp65は、その転写活性を促進し、核転座に関わるリン酸化反応により活性化される。10μg/mlのLPSが、刺激のあと15分~2時間で、NHBE細胞内に著しいNFκBp65リン酸化反応を誘発したことを示した。LPSに応じた同様の反応が、ネズミ腸筋線維芽細胞に見られ、NFκBp65のリン酸化反応がLPS処理の30分以内に検知され、4時間かけてゆっくりと減少した。ダプソン1μg/mlで、LPS誘導性のNFκBp65リン酸化反応が2時間かけて基礎レベルまで抑制されることを発見した。これは、ダプソンが、NFκBp65リン酸化反応をブロッキングすることによりIL8分泌の誘導を抑制する可能性があることを意味する。また、リン酸化NFκBp65に対する用量依存的な抑制効果は、IL8mRNA発現での実験結果と一致する。よって、ダプソンの作用は、少なくとも部分的に、遺伝子転写においてIL-8を下方調整することによるものである。しかし、0.3μg/mlのダプソンでは、NFκBp65活性化を大幅に抑制することはない一方で、同じ濃度のダプソンがIL-8放出を強く抑制している。LPS誘導性のIL8mRNA発現を抑制するためには、1μg/mlを超えるダプソンが必要であった。Schmidtetal28は、ダプソンは、mRNA濃度に影響を与えることなく、転写後レベルでNHEKからのIL8放出を抑制する、という仮説をたてた。これらの免疫調節効果は、エリスロマイシン、クラリスロマイシン及びアジスロマイシンなどのマクロライドの免疫調節効果に似ていた。クラリスロマイシンは、NHBE細胞におけるERK1/2リン酸化反応を調節し、アジスロマイシンは、CF細胞株内のNFκB活性化を抑制し、結果、IL-8を調整する。ダプソンは、IL-8の調節を介して気道炎症も調節すると思われる。局所的に適用されたLPSを用いてフェレットに気管炎症を誘導した後、上皮の完全性の総合的尺度である好中球炎症及びMCTに対する5日間にわたる経口又はエアロゾルのダプソンの効果を評価した。経口のダプソンは、上皮内好中球蓄積を減少させたが、統計的に著しいものではなかった。ダプソンが、好中球性皮膚病の治療にクリームとして局所的に使用した場合に効果的であると認識したことから、エアロゾルのダプソンの投与量を更に下げてLPS誘導性の気管炎症を抑制する可能性を評価した。噴霧化したダプソンは、気道の好中球浸潤を大幅に抑制し、LPS暴露にも関わらず、MCTを維持又は回復させた。気道への正確な投与量を計算することは難しいが、たとえ総投与量の10が気管38に効率的に送達されたとしても、投与されるダプソンは、0.3mgのみであった。この投与量は、1.5kgのフェレットに経口による全身投与量のおよそ10分の1である。要するに、ダプソンは、刺激をしていない基礎IL8分泌には影響を及ぼさなかった。頂端側のLPS刺激は、頂端側及び側底側の双方のIL-8を誘導したが、側底側のLPSは、側底側のIL-8のみを増加させた。ダプソンは、ALI調整した細胞からの二極化したIL8分泌を抑制した。また、ダプソンは、LPS誘導性IL8mRNAレベルを減少させた。LPSによるリン酸化反応は、細胞外シグナル制御キナーゼERK1/2では起こったが、p38MAPK又はc-JunN端末キナーゼでは起こらなかった。LPSは、NFκBp65リン酸化反応も誘導し、その作用はダプソンにより抑制された。ダプソンは、経口でもエアロゾルでもLPS誘導性の上皮内好中球蓄積を減少させたが、エアロゾルのダプソン治療でのみ粘液線毛輸送機能が正常に回復した。総合すると、これらのデータは、ダプソンは、MCTを維持しながら、ヒト気道細胞におけるIL-8及び生体内の炎症を起こした哺乳類の気管における好中球動員を抑制することを示している。エアロゾルのダプソンは、嚢胞性線維症、慢性気管支炎及び重症喘息などの慢性気道炎症性疾患治療のための有望な治療法である。よって、全身に、特にエアロゾルとして与えられるダプソンは、好中球性気道炎症の治療において有用となろう。実施例2:ダプソンのIL-13抑制特性杯細胞は円柱状の上皮細胞であり、その唯一の機能が、水に溶解して粘液を形成するムチンの分泌である。杯細胞過形成は、喘息患者の気管支上皮細胞によって生じる病理学的分泌過多に関与するものであり、IL-13は、喘息の生体内及び生体外モデルのいずれにおいても、胚細胞過形成を調整する中心的役割を果たすことで知られる。杯細胞過形成を抑制するダプソンの能力は、生体外で実験した。杯細胞過形成の生体外モデルは、気液界面ALI条件下で培養した正常ヒト気管支上皮NHBE細胞を用いて発達させた。細胞分染及び顕微鏡法を用いて分析した対照実験は、ダプソン3μg/mlでは、ALI調整したNHBE細胞の成長に対する計測可能な作用はなかったことを示した図示せず。しかし、IL-13を用いて杯細胞過形成を誘導した場合、ダプソン10μg/mlは、対照細胞培養よりも、杯細胞過形成の量と範囲を軽減した図示せず。このように、ダプソンは、IL-13で誘導された杯細胞過形成を抑制することによっても、炎症回復に有益な効果を発揮する可能性がある。参考文献AbansesJCArimaSRubinBKVicksVapoRubinducesmucinsecretiondecreasesciliarybeatfrequencyandincreasestrachealmucustransportintheferrettracheaChest2009135143148BerlowBALiebhaberMIZebDandSpiegelTMJAllergyClinImmunol1991Mar87710715ChinACParkosCAPathobiologyofneutrophiltransepithelialmigrationimplicationsinmediatingepithelialinjuryAnnuRevPathol20072111143ChouguleMPadhiBandMisraAAAPSPharmSciTech94753SchmidtEReimerSKruseNBrockerEBZillikensDTheIL8releasefromculturedhumankeratinocytesmediatedbyantibodiestobullouspemphigoidautoantigen180isinhibitedbydapsoneClinExpImmunol2001124157162EscotteSAlAlamDLeNaourRPuchelleEGuenounouMGangloffSCTcellchemotaxisandchemokinereleaseafterStaphylococcusaureusinteractionwithpolarizedairwayepitheliumAmJRespirCellMolBiol200634348354KanohSKondoMTamaokiJKobayashiHMotoyoshiKNagaiADifferentialregulationsbetweenadenosinetriphosphateanduridinetriphosphateinducedClsecretioninbovinetrachealepitheliumAmJRespirCellMolBiol200125370376ZhuYIStillerMJDapsoneandsulfonesindermatologyoverviewandupdateJAmAcadDermatol200145420434本発明を好適な実施の形態に関して説明してきたが、当業者であれば、添付の請求項の精神及び範囲を逸脱することなく、本発明を変形例とともに実施できることを認識するであろう。よって、本発明は、上述した実施の形態に限定されるものではなく、本明細書に記載の精神と範囲を逸脱することなく、その全ての変形例及び均等物を更に含むものである。"