"本願明細書に記載された発明。微生物および真菌による汚染の検出は、非常に重要であり得るが、これらの異なる生物organism間を区別する能力は、個体への感染の原因となっている感染物質、あるいはテストサンプル中に存在する汚染源および汚染タイプに関する有用な情報を提供し得る。例えば、一度、感染物質が同定されると、医師は、感染を処置するのに最も適切な投薬を処方し得る。さらに、一度、微生物または真菌の汚染のタイプが同定されると、このタイプの情報は、例えば、水の供給における汚染源を同定するプロセスをスピードアップし得る。その結果、一度、汚染源が同定されると、さらなる汚染が軽減され得る。しかしながら、一回のアッセイで、対象とするサンプル中のグラム陰性菌、グラム陽性菌、および真菌の間を区別し得る、シンプルで、ルーチンな方法に対するニーズは、今日もなお継続して存在する。本発明は、その一部は、生体サンプル中に存在する微生物を分類し得る一回のルーチンアッセイに血球試料を用いることが可能であるという発見に基づく。換言すれば、本発明の方法は、対象のサンプルから隔離された微生物が、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌であるかどうかを判断することを可能にする。一局面において、本発明は、テストサンプル中に存在する微生物を分類する方法を提供する。該方法は、aテストされるべき該サンプルを血球試料と結合して、混合物を生成するステップと、bi所定の時間における該混合物の光学特性と、あるいはii該混合物の光学特性に、所定の変化が生じる時間とのうちのいずれかを測定するステップと、cステップbiの該光学特性、またはステップbiiの該時間値を1つ以上例えば、2つまたは3つの標準値と比較し、該サンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌例えば、酵母菌または糸状菌が含まれるかどうかを判断するステップとを包含する。ステップbiで測定される上記光学特性は、所定の波長での光の吸収率であり得る。代替として、ステップbiで測定される該光学特性は、所定の波長での光の透過率であり得る。代替として、ステップbiで測定される該光学特性は、上記サンプルの濁度であり得る。この方法において、該光学特性の第一の標準値は、該サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標である。該光学特性の第二の標準値は、該サンプル中の真菌の存在の指標である。該光学特性の第三の標準値は、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標である。各標準値は、指標例えば、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌の指標となる所与の光学特性の範囲を備え得る。ステップbiiで測定される上記光学特性は、所定の波長での光の吸収率であり得る。代替として、ステップbiiで測定される該光学特性は、所定の波長での光の透過率であり得る。代替として、ステップbiiで測定される該光学特性は、上記サンプルの濁度であり得る。この方法において、時間の第一の標準値は、該サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標である。時間の第二の標準値は、該サンプル中の真菌の存在の指標である。時間の第三の標準値は、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標である。時間の各標準値は、指標例えば、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌の指標となる時間の範囲を備え得る。生物の各タイプの存在は、個別のアッセイで、あるいは組み合わせたアッセイで分析され得る。例えば、上記アッセイは、iグラム陽性菌、iiグラム陰性菌、iii真菌、ivグラム陰性菌とグラム陽性菌との組み合わせ、vグラム陰性菌と真菌との組み合わせ、viグラム陽性菌と真菌との組み合わせ、ならびにviiグラム陰性菌、グラム陽性菌、および真菌の組み合わせを検出し得る。ステップaで有用な血球試料は、変形細胞溶解物例えば、Limulus変形細胞溶解物であり得る。さらに、実行されるアッセイに依存して、ステップaにおいて、上記混合物は、発色基質をさらに備え得る。例として、該発色基質は、パラニトロアニリン発色団を備え得る。また、例として、該発色基質は、Ile-Glu-Ala-Arg-pNAを備え得、ここで、pNAは、パラニトロアニリン基である。本発明の方法は、様々な動的アッセイまたはエンドポイントアッセイを用いて、容易になされ得ることは、理解される。例示的なエンドポイントアッセイには、エンドポイント色素形成アッセイ、およびエンドポイント比濁アッセイを含む。例示的な動的アッセイには、ワンステップ動的アッセイ、マルチステップ動的アッセイ、および動的比濁アッセイを含む。上記のアッセイは、カートリッジの中で、あるいは堅固なサポートsolidsupportよって規定されるウェルの中のいずれかにおいて実行され得ることは、理解される。本発明の上記および他の対象、特徴および利点は、以下の図面および本発明の好ましい実施形態の詳細な説明から、より明らかにされる。本発明の対象および特徴は、以下に示される添付図面を参照して、より良く理解され得る。図面において、図面は、必ずしも縮尺通りに描かれておらず、同様な記号は、図面全体を通して、同じまたは類似のパーツを意味する。例えば、本願発明は以下の項目を提供する。項目1テストサンプル中の微生物を分類する方法であって、該方法は、a該テストサンプルを血球試料と結合して、混合物を生成するステップと、bi所定の時間における該混合物の光学特性と、あるいはii該混合物の光学特性に所定の変化が生じる時間とのうちのいずれかを測定するステップと、cステップbiの該光学特性、あるいはステップbiiの時間値を1つ以上の標準値と比較して、該サンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかを判断するステップとを包含する、方法。項目2ステップcにおいて、前記光学特性の第一の標準値が、前記サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標となり、該光学特性の第二の標準値が、該サンプル中の真菌の存在の指標となり、該光学特性の第三の標準値が、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標となる、項目1に記載の方法。項目3ステップcにおいて、時間の第一の標準値が、前記サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標となり、値の第二の標準値が、該サンプル中の真菌の存在の指標となり、時間の第三の標準値が、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標となる、項目1に記載の方法。項目4ステップbiにおいて、前記光学特性は、所定の波長での光の吸収率、または所定の波長での光の透過率である、項目1~項目3のいずれか1項に記載の方法。項目5ステップbiにおいて、前記光学特性は、前記サンプルの濁度である、項目1~項目3のいずれか1項に記載の方法。項目6ステップbiiにおいて、前記光学特性は、所定の波長での光の吸収率、または所定の波長での光の透過率である、項目1~項目3のいずれか1項に記載の方法。項目7ステップbiiにおいて、前記光学特性は、前記サンプルの濁度である、項目1~項目3のいずれか1項に記載の方法。項目8ステップaにおいて、前記血球試料は、変形細胞溶解物である、項目1~項目7のいずれか1項に記載の方法。項目9前記変形細胞溶解物は、Limulus変形細胞溶解物である、項目8に記載の方法。項目10テストサンプル中の微生物を分類する方法であって、該方法は、a該テストサンプルを血球試料と結合して、混合物を生成するステップと、b所定の時間に、該混合物の光学特性を測定するステップと、cステップbの該光学特性を標準値と比較して、該サンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかを判断するステップとを包含する、方法。項目11ステップcにおいて、前記光学特性の第一の標準値が、前記サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標となり、該光学特性の第二の標準値が、該サンプル中の真菌の存在の指標となり、該光学特性の第三の標準値が、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標となる、項目10に記載の方法。項目12ステップbにおいて、前記光学特性は、所定の波長での光の吸収率、または所定の波長での光の透過率である、項目10または項目11に記載の方法。項目13ステップbにおいて、前記光学特性は、前記サンプルの濁度である、項目10または項目11に記載の方法。項目14ステップaにおいて、前記血球試料は、変形細胞溶解物である、項目10~項目13のいずれか1項に記載の方法。項目15前記変形細胞溶解物は、Limulus変形細胞溶解物である、項目14に記載の方法。項目16テストサンプル中の微生物を分類する方法であって、該方法は、a該サンプルを血球試料と結合して、混合物を生成するステップと、b該混合物の光学特性に所定の変化が生じる時間を測定するステップと、cステップbで測定された該時間を標準値と比較して、該サンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかを判断するステップとを包含する、方法。項目17ステップcにおいて、第一の標準値が、前記サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標となり、第二の標準値が、該サンプル中の真菌の存在の指標となり、第三の標準値が、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標となる、項目16に記載の方法。項目18ステップbにおいて、前記光学特性は、所定の波長での光の吸収率、または所定の波長での光の透過率である、項目16または項目17に記載の方法。項目19ステップbにおいて、前記光学特性は、前記サンプルの濁度である、項目16または項目17に記載の方法。項目20ステップaにおいて、前記血球試料は、変形細胞溶解物である、項目16~項目19のいずれか1項に記載の方法。項目21前記変形細胞溶解物は、Limulus変形細胞溶解物である、項目20に記載の方法。項目22ステップaは、カートリッジの中で実行される、項目1~項目21のいずれか1項に記載の方法。項目23ステップaは、堅固なサポートによって規定されるウェルの中で実行される、項目1~項目21のいずれか1項に記載の方法。項目24ステップaにおいて、前記混合物は、発色基質をさらに備える、項目1~項目23のいずれか1項に記載の方法。項目25前記発色基質は、パラニトロアニリン発色団を備える、項目24に記載の方法。項目26前記発色基質は、Ile-Glu-Ala-Arg-pNAを備え、pNAは、パラニトロアニリン基である、項目24に記載の方法。項目27ステップcは、ステップbでの前記測定結果と、前記サンプル中におけるグラム陰性菌の存在の指標となる前記光学特性の標準値とを比較することを包含する、項目1~項目26のいずれか1項に記載の方法。項目28ステップcは、ステップbでの前記測定結果と、前記サンプル中におけるグラム陽性菌の存在の指標となる前記光学特性の標準値とを比較することを包含する、項目1~項目27のいずれか1項に記載の方法。項目29ステップcは、ステップbでの前記測定結果と、前記サンプル中における真菌の存在の指標となる前記光学特性の標準値とを比較することを包含する、項目1~項目28のいずれか1項に記載の方法。項目30前記標準値は、前記光学特性の値の範囲である、項目1、項目10、または項目16のいずれか1項に記載の方法。項目31前記標準値は、前記光学特性に、所定の変化が生じる時間の範囲である、項目1、項目10、または項目16のいずれか1項に記載の方法。項目32前記真菌は、酵母菌または糸状菌である、項目1~項目30のいずれか1項に記載の方法。発明の詳細な説明本発明は、その一部は、テストサンプル中に存在する微生物を分類し得る一回のルーチンアッセイに、血球試料を用いることが可能であるという発見に基づく。例えば、本方法は、対象サンプルから採取または隔離された微生物が、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌例えば、酵母菌または糸状菌であるかどうかを判断することを可能にする。上記方法は、a上記対象サンプルを血球試料と結合して、混合物を生成するステップと、bi所定の時間における該混合物の光学特性と、あるいはii該混合物の光学特性に、所定の変化が生じる時間とのうちのいずれかを測定するステップと、cステップbiの該光学特性、またはステップbiiの該時間値を1つ以上例えば、2つまたは3つの標準値と比較し、該サンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌例えば、酵母菌または糸状菌が存在するかどうかを判断するステップとを包含する。上記測定ステップは、所定の時間における上記混合物の光学特性を測定することを含む一つのアッセイフォーマットすなわち、ステップbiにおいて、該光学特性の第一の値が、該サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標となり得、該光学特性の第二の値が、該サンプル中の真菌の存在の指標となり得、該光学特性の第三の値が、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標となり得ることは、キャリブレーションアッセイから理解される。様々な異なる光学特性が、本発明の実施に使用され得る。該光学特性は、例えば、所定の波長での光の吸収ユニットまたは透過ユニットであり得る。代替として、測定された該光学特性は、該サンプルの懸濁であり得る。上記測定ステップは、所定の変化が上記混合物の光学特性に生じる時間を測定することを含む場合すなわち、ステップbiiの別のアッセイフォーマットにおいて、第一の時間値が、上記サンプル中のグラム陰性菌の存在の指標となり得、第二の時間値が、該サンプル中の真菌の存在の指標となり得、第三の時間値が、該サンプル中のグラム陽性菌の存在の指標となり得るキャリブレーションアッセイから理解される。該光学特性は、例えば、所定の波長での光の吸収ユニットまたは透過ユニットであり得、あるいは該サンプルの懸濁であり得る。生物の各タイプの存在は、個別のアッセイで、あるいは組み合わせたアッセイで分析され得る。例えば、上記アッセイは、iグラム陽性菌、iiグラム陰性菌、iii真菌、ivグラム陰性菌とグラム陽性菌との組み合わせ、vグラム陰性菌と真菌との組み合わせ、viグラム陽性菌と真菌との組み合わせ、ならびにviiグラム陰性菌、グラム陽性菌、および真菌の組み合わせを検出し得る。様々な血球試料が、本発明の実施に有用であり得ることは理解される。血球は、様々な生物例えば、昆虫および甲殻類から採取され得る。例示的な昆虫には、カイコの幼虫を含む。例示的な甲殻類には、Cancer属に属するカニ、例えば、Cancerborealis、Cancerirratus、Carcinusmaenas、Hemigrapsussanguineus日本のイソガニ、Limulus属に属するカニ例えば、Limuluspolyphemus、Tachypleus属に属するカニ例えば、Tachypleusgigas、例えば、Tachypleustridentatus、およびCarcinoscorpius属に属するカニ例えば、Carcinoscorpiusrotundicaudaを含む。本発明の実施で有用な血球試料は、当分野で公知の従来技術例えば、浸透圧衝撃、均質化、超音波化ultrasonication、および超遠心分離を用いる溶解による血球に由来し得る。例えば、粗溶解物crudelysateは、Levinら1968THROMB.DlATH.HAEMORRH.19:186、またはPrior1990ClinicalApplicationsoftheLimulusAmebocyteLysateTestCRCPress28-36および159-166、ならびに米国特許第4,322,217号明細書に当初記載されたような手順に改変を加えて、生成され得る。一実施形態において、有用な血球試料は、血球溶解物を含む。血球溶解物は、任意の溶解物、あるいはその溶解物のフラクションfractionまたは成分を含み、血球の溶解および/または膜の浸透化によって生成され、例えば、i甲殻類または昆虫から抽出された変形細胞または血リンパ細胞、および/またはii宿主hostから抽出された後、試験管で培養された変形細胞または血リンパ細胞を含む。Ca2イオン透過担体などのような膜浸透化物質で接触することによって、血リンパ細胞から押し出されたすなわち、溶解以外によって押し出された血球細胞材料、あるいは、さもなくば、細胞の溶解なしに抽出された血球細胞材料も、また、血球溶解物であると考えられる。好ましい血球溶解物は、甲殻類例えば、カブトガニの血液から調製された変形細胞溶解物である。血球溶解物が、図1に示される酵素カスケードの1つ以上の天然純化された成分または合成成分のカクテルを含み得ることは、また考慮される。変形細胞溶解物は、甲殻類例えば、カブトガニから抽出された変形細胞からの細胞含有物cellularcontentsの溶解、押し出しextrusion、抽出によって生成される任意の溶解物、あるいはそのフラクションまたは成分である。変形細胞溶解物は、例えば、図1に示される酵素カスケードの少なくとも1つの成分を備え、および/または、酵母菌または糸状菌によって生成された内毒素例えば、グラム陰性菌内毒素および/またはグルカン例えば、1→3-β-Dグルカンの存在する中で凝固を生成する。好ましい変形細胞溶解物は、カブトガニに由来し得る。カブトガニには、Limulus属に属するカニ例えば、Limuluspolyphemus、Tachypleus属に属するカニ例えば、Tachypleusgigas、およびTachypleustridentatus、Carcinoscorpius属に属するカニ例えば、Carcinoscorpiusrotundicaudaを含む。また、米国特許第6,391,570号、同第6,270,982号に記載された方法によって生成されたG因子劣化溶解物のような溶解物から、G因子活動を除去して、内毒素特有の溶解物を生成することが、可能である。また、溶解物は、G因子活動の特定のインヒビタinhibitorまたはモジュレータmodulator例えば、米国特許第5,155,032号、同第5,179,006号、同5,318,893号、同5,474,984号、同5,641,643号、同6,270,982号、および同6,341,570号に記載された特定の洗剤、糖類、多糖類、および他の試薬を追加して、G因子活動を劣化させ得る。内毒素特有の溶解物は、微生物内毒素と反応可能な溶解物であるが、この内毒素において、1→3-β-Dグルカンへの反応性は、内毒素特有の溶解物が調製される粗溶解物に対して、少なくとも80、より好ましくは、少なくとも約90、そして、より好ましくは、少なくとも約95劣化される。C因子活動の劣化した溶解物を生成して、1→3-β-Dグルカン特有の溶解物を生成することが、可能である。米国特許出願公開第2004/0241788号2004年12月2日公開は、G因子特有の溶解物を生成する方法を記載している。この方法において、グルカン特有の溶解物は、少なくとも0.15Mの塩、より好ましくは0.25Mの塩例えば、ナトリウムイオンまたはカリウムイオンのような一価の陽イオンを含む塩の存在する中で変形細胞を溶解することによって調製される。グルカン特有の溶解物は、グリカン例えば、1→3-β-Dグルカンと反応することが可能であるが、微生物内毒素またはリポ多糖類に対するその反応性は、グルカン特有の溶解物が調製される粗溶解物に対して、少なくとも80、より好ましくは、少なくとも90、そして、より好ましくは、好ましくは95劣化される。さらに、有用な血球試料が、異なる溶解物の組み合わせをまた含み得ることは、理解される。例えば、G因子活動は劣化したが、C因子活動は保持している溶解物を、C因子活動は劣化したが、G因子活動は保持している異なる溶解物と結合することによって、本発明の実施に有用な溶解物を生成することが可能である。その結果得られる溶解混合物は、C因子活動とG因子活動との双方を含む。当業者には明らかなように、血球溶解物のプロ凝固酵素の活性化を促進することで公知の二価の金属塩は、凝固酵素を不活性にし得るpHが極端になるのを避けるためのバッファとともに、血球試料に含まれることが好ましい。変形細胞溶解物システムと互換性のある当分野で理解されている任意のバッファと塩とが、使用され得る。典型的な調製添加物は、約100~300mMのNaCl、約10~100mMの二価の陽イオン例えば、Mg2またはCa2、生体適合性のあるバッファ例えば、Trisトリスヒドロキシアミノメタンを含み得るが、これらに限定されず、最終pH約6.0~約8.0を与え、溶解物が、凍結乾燥される場合、糖例えば、マンニトールまたはデキストランである。適切な調製添加剤の選択は、ルーチンの実験によって、また決定され得る。合成発色基質は、TachypleustridentatusおよびLimuluspolyphemusという双方のカブトガニの血液リンパから調製されたLALにおける内毒素で活性化されたプロ凝固酵素のレベルを測定するために使用されてきたIwanagaら1978HEMOSTASIS7:183-188。発色基質を使用するLALアッセイの間に、LALにおけるプロ凝固酵素セリンプロテアーゼは、内毒素によって活性化され、その基質からその色素形成基を遊離するように、アルギニンのカルボキシル側でその基質のペプチド鎖を切断し、それにより、例えば、分光光度計によって容易に検出され得るマーカー化合物を遊離する。従来のLALゲル化テストの代わりに、LALアッセイにおいて合成発色基質を使用する一つの利点は、活性化された凝固酵素の量が定量され得、そのサンプル中の内毒素レベルに相関付けられ得ることである。血球試料の凝固酵素により切断される任意の発色基質は、本発明の実施において使用され得る。米国特許第5,310,657号は、例えば、式R1-A1-A2-A3-A4-B-R2を有する例示的発色基質を記載し、ここでR1は、水素、ブロックしている芳香族炭化水素またはアシル基を表し;A1は、Ile、ValまたはLeuから選択されるL-アミノ酸またはD-アミノ酸を表し;A2は、GluまたはAspを表し;A3は、AlaまたはCysを表し;A4は、Argを表し;Bは、エステルおよびアミドから選択される連結を表し;そしてR2は、B連結を介してアルギニンのCカルボキシル末端に共有結合される色素形成基または蛍光発生基を表し、その蛍光発生部分または色素形成部分は、発色基質の残りから切断されて、発色団または発蛍光団を生成し得る。例示的な発色基質は、コンセンサス配列アセテート-Ile-Glu-Ala-Arg-pNAを有する。ここでpNAは、パラニトロアニリン基を表す。米国特許第4,188,264号は、配列R1-Gly-Arg-R2におけるL-アミノ酸からなる構造を有するペプチド基質を記載する。ここでR1は、N-ブロックされたアミノ酸を表し、R2は、酵素加水分解によって遊離されて、着色化合物HR2を生じ得る基である。米国特許第4,510,241号は、色素形成性ペプチド基質を開示し、この基質は、Gly部分がAlaまたはCysによって配列中で置換されているという点で、以前の基質とは異なる。代替として、その発色基質は、発蛍光団例えば、7-アミノ-4-メチルクマリン、7-アミノ-4-トリフルオロメチルクマリン、および4-メトキシ-2-ナフタルアミンnaphthalyamineを含み得る。アッセイの考察本発明の方法は、様々なエンドポイントアッセイまたは動的アッセイを用いて、容易にされ得ることは、理解される。例示的なエンドポイントアッセイは、エンドポイント色素形成アッセイまたはエンドポイント比濁アッセイを含む。例示的な動的アッセイには、動的比濁アッセイ、ワンステップ動的アッセイまたはマルチステップ動的アッセイを含む。アッセイのそれぞれは、以下に、より詳細に検討される。さらに、アッセイは、特定のアッセイフォーマット例えば、カートリッジまたはプレートのウェルにおいて、例えば、96ウェルプレートで実行されるように改変され得ることは、理解される。1動的アッセイ例示的な動的アッセイには、マルチステップ動的アッセイ、シングルステップ動的アッセイ、および動的比濁アッセイを含む。iマルチステップ動的アッセイマルチステップ動的アッセイに関わる様々なステップが、図2に模式的に示される。アッセイは、サンプルを大量の血球試料と結合することによって開始され、サンプル-血球試料の混合物を生成する。この混合物は、次いで、所定の期間にわたって、インキュベートされる。混合物は、次いで、基質例えば、発色基質と接触され、サンプル-血球試料-基質の混合物を生成する。その後、光学的性質の所定の変化例えば、吸収の値の特定の変化、または透過の値の特定の変化における時間が、測定される。特定の量のグラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が、このアッセイに導入されるときに、光学特性に所定の変化が生じる時間を測定することによって、このアッセイは、キャリブレーションされ得る。グラム陰性菌が第一の値例えば、第一の時点の範囲を与え、真菌が第二の値例えば、第二の時点の範囲を与え、グラム陽性菌が第三の値例えば、第三の時点の範囲を与えることは、理解される。第一、第二、および第三の値は、互いにオーバーラップしないことが好ましい。テストサンプルによって得られた結果を第一、第二、および第三の値のうちの1つ以上と比較することによって、テストサンプル中に存在する微生物が、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌であるかどうかを判断することが可能になる。マルチステップ動的アッセイは、カートリッジフォーマット内で実行され得ることは、理解される。カートリッジは、光学検出器例えば、米国特許第Des.390,661号に図示され、記載されたような携帯光学検出器とともに使用されることが好ましい。例示として、図3A~図3Dに示されるように、カートリッジ1は、例えば、成形可能でmoldable生体適合可能な材料から製造される実質的に平面の筺体を有する。筺体は、任意の材料から製造され得るが、透明および/または半透明のガラスまたはポリマが好ましい。好ましいポリマには、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、アクリル、ポリエステル、光学グレードのポリマ、または光学セルopticalcellが実質的に透明である任意のプラスチックを含む。筺体は、少なくとも1つの入口ポート4と、少なくとも1つの光学セル6と、この入口ポート4と光学セル6との間で流体流れ連絡を提供する流体接触表面を有する少なくとも1つの導管conduit8とを含む。光学セル6に対して、ただ要求されることは、この光学セル6が、テストされるべきサンプルを含むことの可能なボイドを規定することと、光学セル6の部分が光透過性であることのみである。カートリッジ1は、また、そのカートリッジ1をポンプに取り付けるために、流体入口ポート4および光学セル6とが流体流れ連絡にある少なくとも1つのポンプポート12を有し得る。次いで、そのポンプは、ポンプポート12を介して陰圧を付与して、そのサンプルを流体入口ポート4から光学セル6へと引っ張り得る。血球溶解物は、導管8の流体接触表面の第一の領域14上に配置され、その結果、サンプルが流体入口ポート4に付与されるとき、そのサンプルは、領域14を横断し、そのサンプルが光学セル6に向かって動く際に、その血球溶解物をサンプルに可溶化または再構成する。導管8の流体接触表面の第二の領域16は、第一の領域14から間隔を空けて離れ、第一の領域14の下流にある。この構成において、血球溶解物は、第一の領域14に配置され、発色基質は、第二の領域に配置される。それは、サンプルが、領域14で血球溶解物と接触された後、サンプル-溶解物の混合物が、導管8を横切って、領域16の発色基質に接触するようにするためである。サンプル-溶解物-基質の混合物は、次いで、導管8を横切って、光学セル6に向かう。これらのカートリッジは、必要とされるテストのタイプおよび/または回数に従って、設計され、使用され得る。例えば、単一のサンプルは、例えば、研究実験用途または医療用機器および生物薬剤テストのために、例えば、二連duplicateまたは三連triplicateでテストされ得る。代替として、2つ以上の異なるサンプルが、例えば、水および透析液の透析施設でのテストのために、個々にテストされ得る。このカートリッジは、好ましくは、一度使用したら処分される一回使用使い捨てカートリッジである。このカートリッジは、マルチウェルプレートにおいて行われる従来型のエンドポイント色素形成アッセイまたは動的色素形成アッセイにおいて使用されているものよりも、1サンプルあたりに使用する血球溶解物が、約20分の1~100分の1と少ないので、したがって、より低コストでかつより環境に優しいテストを提供する。図3Aを参照すると、例示的なカートリッジ1におけるマルチステップ動的アッセイを実行するために、サンプルは、例えば、最初に、ポンプ動作によって、血球試料を含む第一の領域14に移動し、ここで、混合され、所定の期間にわたって、インキュベートされる。サンプル-血球試料の混合物は、次いで、例えば、ポンプ動作によって基質例えば、発色基質を含む第二の領域16に移動し、ここで、可溶化される。サンプル-発色基質の混合物は、次いで、光学特性測定のために、光学セル6に移動する。混合するステップに要する時間インターバルとインキュベートするステップに要する時間インターバルとは、最適な感度と微生物汚染物質濃度範囲とに対して事前にプログラムされる。例示的なカートリッジベースのマルチステップ動的アッセイは、実施例1に記載される。マルチステップアッセイが、以上で検討されたタイプのカートリッジで実行され得るが、様々な他のフォーマット例えば、マイクロタイターmicrotiterプレートのウェル内でも、また使用され得る。このタイプのアッセイにおいて、対象のサンプルは、血球試料と結合され、所定の期間にわたって、インキュベートされる。次いで、所定の期間経過後、発色基質が、ウェルに追加される。混合後、光学特性における所定の変化が生じる時間が、測定される。その結果が、次いで、1つ以上の標準値に対して比較され得、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかが判断される。ウェルタイプのフォーマットにおいて、好ましくは、ロボットのような自動化システムを用いて、サンプルおよび試薬は、ウェルのそれぞれに追加され、プレートは、繰り返して、各ウェルの吸光度を連続的に読むようにプログラムされ得るマイクロプレートリーダによって処理される。iiシングルステップ動的アッセイシングルステップ動的アッセイ例えば、シングルステップ色素形成アッセイは、米国特許第5,310,657号に記載されている。簡単に言えば、その動的色素形成アッセイは、i血球試料を分析されるべきサンプルおよび基質例えば、発色基質とともに、同時に可溶化するステップと、iiその結果得られた混合物を、約0°C~約40°C、好ましくは約25°C~約40°Cの温度で、所定の時間範囲にわたってインキュベートするステップと、iii従来型の分光光度計を用いて、測色値の読みの所定の値または変化に到達する測色変化に要する時間を測定するステップとを含む。このタイプのアッセイは、マルチステップの動的アッセイのように、カートリッジタイプまたはウェルタイプのフォーマットで実行され得る。マルチステップ動的アッセイに対して上述されたのと同様なカートリッジが、シングルステップ動的アッセイで使用するように改変され得る。図3Aを参照すると、発色基質が、例えば、血球溶解物とともに、導管8の表面に、第一の領域14で付与される。カートリッジ1内の動的色素形成アッセイを実行するために、図3Aを参照して、サンプルが、例えば、ポンプ動作によって、血球試料と発色基質との双方を含む導管8の第一の領域14に移動し、ここで、この双方は、例えば、順方向および逆方向のポンプ動作の間の循環によって可溶化される。サンプル-血球試料-基質の混合物は、次いで、光学特性の測定例えば、光学検出器によるサンプルの吸光度または透過率特性のために、光学セル6に移動する。検出器は、各光学特性に対して、例えば、光学透過率が5の低下を示すのに要する時間を決定し得る。複数回のアッセイ例えば、2回のアッセイからの結果は、平均化され得る。特定の量のグラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が、このアッセイに導入されるときに、光学特性に所定の変化が生じる時間を測定することによって、このアッセイは、キャリブレーションされ得る。グラム陰性菌が第一の値例えば、第一の時点の範囲を与え、真菌が第二の値例えば、第二の時点の範囲を与え、グラム陽性菌が第三の値例えば、第三の時点の範囲を与えることは、理解される。第一、第二、および第三の値は、互いにオーバーラップしないことが好ましい。テストサンプルによって得られた結果を第一、第二、および第三の値のうちの1つ以上と比較することによって、テストサンプル中に存在する微生物が、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌であるかどうかを判断することが可能になる。このタイプのアッセイフォーマットは、様々な他のフォーマット例えば、マイクロタイタープレートのウェル内で使用され得る。このタイプのアッセイにおいて、対象のサンプルは、血球試料および発色基質とともに混合される。混合後、光学特性における所定の変化が生じる時間が、測定される。その結果が、標準値に対して比較され、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかが判断され得る。例示的なウェルベースのシングルステップ動的アッセイは、実施例3に記載される。iii動的比濁アッセイ動的比濁アッセイは、前述のPrior1990のpp.28~34に記載されている。簡単に言えば、その動的比濁アッセイは、i血球溶解物を分析されるべきサンプルとともに可溶化するステップと、iiその結果得られた混合物を、約0°C~約40°C、好ましくは約25°C~約40°Cの温度で、所定の時間範囲にわたってインキュベートするステップと、iii従来型の凝固測定計、比濁計、または分光光度計を用いて凝固によって生じた濁度の変化が、所定の値に達するまでに要する時間か、あるいは濁度の変化の比かのいずれかを測定するステップとを含む。このタイプのアッセイは、上述のアッセイと同様に、カートリッジタイプまたはウェルタイプのフォーマットで実行され得る。マルチステップまたはシングルステップの動的アッセイに対して上述されたのと同様のカートリッジが、動的比濁アッセイにおける使用のために、改変され得る。図3Aを参照すると、発色基質が、第一の領域14または第二の領域16のいずれかに付与される必要は一切ない。図3Aを参照すると、動的比濁アッセイを実行するために、サンプルが、例えば、血球試料を含む導管8の第一の領域14に移動し、ここで、例えば、順方向および逆方向のポンプ動作の間の循環によって可溶化される。サンプル-溶解物の混合物は、次いで、光学特性例えば、濁度の測定のために、光学セル6に移動する。この濁度は、例えば、光学検出器を用いて、サンプル-溶解物の混合物の吸光度または透過率を測定することによる。検出器は、各光学特性に対して、例えば、光学透過率が5の低下を示すのに要する時間を決定し得る。複数回のアッセイ例えば、2回のアッセイからの結果は、平均化され得る。特定の量のグラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が、このアッセイに導入されるときに、光学特性例えば、濁度に所定の変化が生じる時間を測定することによって、このアッセイは、キャリブレーションされ得る。グラム陰性菌が第一の値例えば、第一の時点の範囲を与え、真菌が第二の値例えば、第二の時点の範囲を与え、グラム陽性菌が第三の値例えば、第三の時点の範囲を与えることは、理解される。第一、第二、および第三の値は、互いにオーバーラップしないことが好ましい。テストサンプルによって得られた結果を第一、第二、および第三の値に対して比較することによって、テストサンプル中に存在する微生物が、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌であるかどうかを判断することが可能になる。このタイプのアッセイフォーマットは、様々な他のフォーマット例えば、マイクロタイタープレートのウェル内で使用され得る。このタイプのアッセイにおいて、対象のサンプルは、血球試料と混合される。混合後、光学特性例えば、濁度における所定の変化が生じる時間が、測定される。その結果が、次いで、標準値に対して比較され得、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかが判断される。例示的なウェルベースの動的比濁アッセイは、実施例2に記載される。2エンドポイントアッセイ例示的なエンドポイントアッセイは、エンドポイント色素形成アッセイおよびエンドポイント比濁アッセイを含む。iエンドポイント色素形成アッセイエンドポイント色素形成アッセイは、上述のPrior1990、pp.28-34、米国特許第4,301,245号、および同第4,717,658号に記載されている。簡単に言えば、そのエンドポイント色素形成アッセイは、i血球試料を分析されるべきサンプルと可溶化するステップと、iiその結果得られた混合物を、約0°C~約40°C、好ましくは約25°C~約40°Cの温度で、所定の時間にわたってインキュベートするステップと、iii基質例えば、発色基質をインキュベートされたサンプル-血球試料の混合物と接触するステップと、ivオプションとして、反応インヒビタ例えば、酢酸を追加するステップと、v酵素活性によって、基質から生成された物質substanceを、例えば、測色変化によって測定するステップとを含む。このタイプのアッセイは、カートリッジタイプまたはウェルタイプのフォーマットで実行され得る。エンドポイント色素形成アッセイが、カートリッジ1図3A参照で実行されるとき、サンプルは、例えば、血球試料を含む導管8の第一の領域14に移動し、ここで、例えば、順方向および逆方向のポンプ動作の間の循環によって可溶化される。所定のインキュベーション期間に引き続き、サンプル-血球試料の混合物は、次いで、例えば、ポンプ動作によって、発色基質を含む導管8の第二の領域16に移動し、ここで、例えば、順方向および逆方向のポンプ動作の間の循環によって、可溶化される。サンプル-血球試料-基質の混合物は、オプションとして、次いで、反応インヒビタを含む第三の領域に移動する。その後、サンプル-血球試料-基質の混合物は、光学検出器によって、サンプルの光学特性例えば、吸光度または透過率を測定するために、光学セル6に移動する。しかしながら、カートリッジ内でエンドポイント色素形成アッセイを実行するとき、反応インヒビタを用いて、反応を停止することは必ずしも必要はないことは、考慮される。このタイプのアッセイでは、最終的な光学の読みエンドポイントでの読みは、所定の時間に記録される。特定の量のグラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が、このアッセイに導入されるときに、光学特性例えば、吸光度または透過率を測定することによって、このアッセイは、キャリブレーションされ得る。グラム陰性菌が第一の値例えば、吸光度または透過率の第一の値の範囲を与え、真菌が第二の値例えば、吸光度または透過率の第二の値の範囲を与え、グラム陽性菌が第三の値例えば、吸光度または透過率の第三の値の範囲を与えることは、理解される。第一、第二、および第三の値は、互いにオーバーラップしないことが好ましい。テストサンプルによって得られた結果を第一、第二、および第三の値のうちの1つ以上に対して比較することによって、テストサンプル中に存在する微生物が、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌であるかどうかを判断することが可能になる。検討されたように、このタイプのアッセイフォーマットは、様々な他のフォーマット例えば、マイクロタイタープレート内で使用され得る。このタイプのアッセイにおいて、対象のサンプルは、血球試料と混合され、所定の期間にわたって、インキュベートされる。次いで、発色基質が、別の所定の期間にわたってインキュベートされた混合物およびサンプルに追加される。次いで、反応インヒビタ例えば、酢酸が、サンプルに追加され、サンプルの光学特性例えば、吸光度または透過率が測定される。その結果が、標準値に対して比較され得、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかが判断される。例示的なウェルベースの色素形成アッセイは、実施例4に記載される。iiエンドポイント比濁度アッセイエンドポイント比濁アッセイは、上述のPrior1990、pp.28-34に記載されている。簡単に言えば、そのエンドポイント比濁アッセイは、i血球溶解物を分析されるべきサンプルとともに可溶化するステップと、iiその結果得られた混合物を、約0°C~約40°C、好ましくは約25°C~約40°Cの温度で、所定の時間にわたってインキュベートするステップと、iiiオプションとして、反応インヒビタ例えば、酢酸を追加するステップと、iv凝固の結果としての濁度の増加がある場合、それを従来型の凝固測定計、比濁計、または分光測光計を用いて測定するステップとを含む。エンドポイント比濁アッセイは、カートリッジタイプのフォーマットで実行され得る。図3Aを参照すると、サンプルは、カートリッジ1に付与され、例えば、血球溶解物を含む導管8の第一の領域14に移動し、ここで、例えば、順方向および逆方向のポンプ動作の間の循環によって可溶化される。サンプル-溶解物の混合物は、次いで、サンプルの光学特性例えば、濁度を光学検出器を用いて測定するために、光学セル6に移動する。複数回のアッセイ例えば、2回のアッセイからの結果は、平均化され得る。特定の量のグラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が、このアッセイに導入される所定の時間に、例えば、濁度を測定することによって、このアッセイは、キャリブレーションされ得る。グラム陰性菌が第一の値例えば、第一の濁度値の範囲を与え、真菌が第二の値例えば、第二の濁度値の範囲を与え、グラム陽性菌が第三の値例えば、第三の濁度値の範囲を与えることは、理解される。第一、第二、および第三の値は、互いにオーバーラップしないことが好ましい。テストサンプルによって得られた結果を第一、第二、および第三の値のうちの1つ以上に対して比較することによって、テストサンプル中に存在する微生物が、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌を含むかどうかを判断することが可能になる。このタイプのアッセイフォーマットは、他のフォーマット例えば、マイクロタイタープレートのウェル内で実行され得る。このタイプのアッセイにおいて、対象のサンプルは、血球試料と混合され、所定の期間にわたって、インキュベートされる。次いで、インヒビタの追加によって、反応が停止され得る。サンプルの光学特性例えば、濁度は、次いで、所定の時点に測定される。その結果は、次いで、標準値に対して比較され得、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、グラム陽性菌、または真菌が存在するかどうかが判断される。検体収集および調整の考察一般に、テストされるべきサンプルを採取、保存、またはさもなければ接触するために使用される材料、ならびにテスト試薬は、微生物汚染がないべきであり、例えば、発熱物質がないべきである。材料は、例えば、250°Cで30分間加熱することによって、発熱物質がないようにされ得る。発熱物質除去した材料が、その後の環境による汚染から保護されるべく、適切な予防措置がとられるべきである。一度、サンプルが採取されると、微生物汚染物質は、好ましくは、無菌条件下で培養され、個々のコロニーを提供する。18時間~24時間の隔離培養の使用が、最適な結果を提供し得る。コロニーは、次いで、培養が成長媒体のフラグメントで汚染されるのを防止するために、培養プレートから注意深く除去される。セルは、次いで、リポ多糖類のない溶液例えば、生理食塩水または水に懸濁される。その結果得られる懸濁液は、次いで、本明細書に記載されたアッセイのうちの1つ以上を用いて、アッセイされ得る。これらのアッセイは、例えば、流体例えば、哺乳動物に、局所的または全身に例えば、非経口的に投与されるべき流体、または感染についてテストされるべき体液例えば、血液、リンパ液、尿、血清、血漿、腹水、肺吸引液などを含む中の対象のサンプル中に存在する微生物のタイプを分類するために使用され得る。さらに、このアッセイは、水の供給例えば、飲料水の供給中に存在する微生物のタイプを分類するために使用され得る。さらに、本発明のこのアッセイは、食品、医薬品または医療用機器に存在する微生物汚染物質のタイプを分類するために使用され得る。さらに、本発明のアッセイは、表面上に存在する微生物のタイプを分類するために使用され得る。例えば、対象の表面は、スワッブswabされ、このスワッブは、液体中に導入されるか、あるいは液体中で溶解される。この液体は、次いで、本明細書に記載されたように、アッセイされ得る。本発明の実施は、以下の実施例からより十分に理解される。これらの実施例は、例示目的でのみ本明細書に示されるのであって、決して本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。実施例1:カートリッジベースのマルチステップ動的アッセイ図3に示される例示的なカートリッジが、以下のように準備された。図4Aを参照すると、LALおよび発色基質が、Champion3700自動カートリッジフィラーCreativeAutomationCompany、カリフォルニア州SunValleyを用いて、カートリッジ1の下部半体2の導管8’のそれぞれの領域14’および16’に付与された。簡単に言えば、1マンニトールOsmitrol、Baxter、イリノイ州Deerfieldおよび0.1デキストランMW10~100K、Sigma-Aldrich、ミズーリ州St.Louisを含む4~5.0μLのEndosafeLALCharlesRiverEndosafe、サウスカロライナ州Charlestonが、領域14’に付与された。1ポリビニルアルコールPVAMW7K~30K、Sigma-Aldrich、ミズーリ州St.Louisを含む4~5.0μLの1.3mg/mL発色基質Ile-Glu-Ala-Arg-pNAChromogenixS-2423InstrumentationLaboratories、イタリアMilanが、領域16’に付与された。そのカートリッジ1の下部半体2は、LunaireEnvironmentalSteadyStateStabilityTestChamberLunaireEnvironmental、ペンシルベニア州Williamsport中で、PuregasHF200HeatlessDryerMTIPuregas、コロラド州Denverで1時間、25°C±2°Cの制御された温度および5±5の湿度下で乾燥された。温度および湿度は、WatlowSeries961/16DINTemperatureControllerWatlowElectricManufacturingCompany、ミズーリ州St.Louisによって、制御された。製造後、その2つの半体2および3は、領域14’および14が一方を他方の上部に並び、そのカートリッジ半体2および3の縁が、DukaneDynamicProcessControllerDukaneCorporation、イリノイ州St.Charlesの制御下で、DukaneModel210UltrasonicSealerDukaneCorporation、イリノイ州St.Charlesを用いて超音波でシールされるように、アセンブリされた。マルチステップ動的アッセイは、以下により詳細に記載されるように、次いで、カートリッジを用いて実行された。簡単に言えば、表1に列挙された微生物の幾つかの種が、AmericaTypeCultureCollectionATCCから入手され、標準条件下で、ペトリ皿に寒天を含む標準微生物成長媒体上で成長された。一晩成長させた後、個々のコロニーが、滅菌ループを用いて、寒天の表面から取り出された。次いで、コロニーは、滅菌した清浄なLPSまたは他の微生物汚染のない生理食塩水に懸濁された。懸濁密度は、McFarland等価懸濁標準上で、0.5ユニットの密度を与えるように、調整された。次いで、カートリッジは、CharlesRiverEndosafeサウスカロライナ州Charlestonから入手したEndosafePortableTestSystemPTSに挿入された。次いで、25μLの各懸濁液が、カートリッジの個々のサンプルウェルに置かれた。サンプルは、PTSによってカートリッジの中に引っ張られた。最初に、サンプルは、血球試料と結合された。所定の期間の後に、サンプルは、発色基質p-ニトロアニリンと混合された。各サンプルにおける反応性の度合いは、395nmでの発色の動的な読みによって測定された。結果は、表1に総括され、特定の色密度オンセットonsetO.D.に到達するまでに要した時間を秒で示す。表1に総括された結果は、テストされた条件下で、グラム陰性菌が、オンセットO.D.に到達するのに、18秒~20秒を要し、酵母菌および糸状菌が、オンセットO.D.に到達するのに、250秒~271秒を要し、グラム陽性菌が、オンセットO.D.に到達するのに、1200秒を要したことを示す。様々な研究の結果、グラム陰性菌に対するオンセット時間は、ルーチンで150秒未満であり得、酵母菌および糸状菌に対するオンセット時間は、ルーチンで151秒~399秒の範囲であり得、グラム陽性菌に対するオンセット時間は、ルーチンで400秒以上を要し得ることが見出された。テストサンプルによって得られたオンセット時間に基づいて、このアッセイは、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、真菌、またはグラム陽性菌が存在するかどうかを判断するために、使用され得る。実施例2:ウェルベースの動的比濁アッセイ多数のサンプルが、動的比濁アッセイ技術を用いて、マルチウェルのマイクロプレートで実行され得る。KTA試薬LALLotU2251LR1900KTA2,CharlesRiverEndosafe、サウスカロライナ州Charlestonが、メーカの手引書に従って、調製され、等しい体積の微生物懸濁液0.5McFarlandユニットと混合された。反応は、メーカの手引書に従って、実行された。オンセットO.D.に到達するまでの時間は、個々の懸濁液E.coliグラム陰性、S.aureusグラム陽性、およびC.albicans酵母に対して、秒で記録された。サンプルは、三連で実行された。その結果は、表2に総括される。標準動的懸濁方法は、実施例1で使用されたマルチステップ動的色素形成方法よりも遅かったが、全体的な結果は、同じであった。グラムのタイプは、LALとの反応性の度合いによって解釈された。その結果は、テストされた条件下で、グラム陰性菌が、オンセットO.D.に到達するのに、384秒~388秒を要し、酵母菌が、オンセットO.D.に到達するのに、1464秒~1509秒を要し、グラム陽性菌が、オンセットO.D.に到達するのに、3600秒超を要したことを示す。このアッセイは、テストサンプル中の微生物を分類するために使用され得る。例えば、このアッセイは、テストサンプルによって得られたオンセット時間に基づいて、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、真菌、またはグラム陽性菌が存在するかどうかを判断するために、使用され得る。実施例3:ウェルベースの動的色素形成アッセイ多数のサンプルが、動的色素形成LALアッセイを用いて、マルチウェルのマイクロプレートで実行され得る。LALLotU4132ER170Endochrome-k,CharlesRiverEndosafe、サウスカロライナ州Charlestonが、メーカの手引書に従って、調製され、等しい体積の微生物懸濁液0.5McFarlandユニットと混合された。反応は、メーカの手引書に従って、実行された。オンセットO.D.に到達するまでの時間は、個々の懸濁液E.coliグラム陰性、S.aureusグラム陽性、およびC.albicans酵母に対して、秒で記録された。サンプルは、三連で実行された。その結果は、表3に総括される。標準動的色素形成方法は、実施例1で使用されたマルチステップ動的色素形成方法よりも遅かったが、全体的な結果は、同じであった。グラムのタイプは、LALとの反応性の度合いによって解釈された。その結果は、テストされた条件下で、グラム陰性菌が、オンセットO.D.に到達するのに、213秒~218秒を要し、酵母菌が、オンセットO.D.に到達するのに、874秒~889秒を要し、グラム陽性菌が、オンセットO.D.に到達するのに、2463秒~3061秒を要したことを示す。したがって、このアッセイは、テストサンプル中の微生物を分類するために使用され得る。例えば、このアッセイは、テストサンプルによって得られたオンセット時間に基づいて、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、真菌、またはグラム陽性菌が存在するかどうかを判断するために、使用され得る。実施例4:ウェルベースのエンドポイント色素形成アッセイサンプルは、エンドポイント色素形成LALアッセイを用いて、マルチウェルのマイクロプレートで実行された。LALLotT2092CTR160Endochrome,CharlesRiverEndosafe、サウスカロライナ州Charlestonが、メーカの手引書に従って、調製され、等しい体積の微生物懸濁液0.5McFarlandと等価な懸濁標準でと混合された。反応は、メーカの手引書に従って、実行された。テストの終わりに、反応は、等しい体積の20酢酸を追加して、中止させ、405nmでの光学密度が、個々の懸濁液E.coliグラム陰性、S.aureusグラム陽性、およびC.albicans酵母に対して、記録された。サンプルは、三連で実行された。この場合における反応の度合いは、各サンプルに対する最終光学密度で測定された。この結果は、表4に総括される。テストされた条件下で、グラム陰性菌は、そのLPS含有のために、かなり大きな反応性を有し、その結果、O.D.の読みは、1.97~2.43であった。酵母菌は、より低い反応性0.18~0.19を有し、グラム陽性菌は、非常に低い反応性~0.02を有した。グラムのタイプは、LALとの反応性の度合いによって解釈された。したがって、このアッセイは、テストサンプル中の微生物を分類するために使用され得る。例えば、このアッセイは、テストサンプルによって得られたO.D.値に基づいて、対象のサンプル中に、グラム陰性菌、真菌、またはグラム陽性菌が存在したかどうかを判断するために、使用され得る。実施例5:カートリッジベースのマルチステップ動的アッセイのさらなるテストカートリッジが準備され、本質的に実施例1に記載されたように使用された。この実施例において、テストされ、正しく同定された微生物の隔離集団isolateは、表5に列挙される。実験中、Bacilluscereus長時間aged培養で細胞外プロテアーゼを生成することで公知のグラム陽性菌は、24時間を超えて成長された培養での擬似結果を与えることが見出された。24時間までの培養の繰り返しテストは、正しいグラム同定を与えた。さらに、Sphingomonaspaucimobilisは、期待された結果を生成しないことが見出された。理論によって束ねることを欲しないと、リポ多糖類を欠く珍しいグラム陰性菌の種であるこの生物は、この実験に対して使用された条件下で、LALと反応しなかったことが、考慮される。それにも関わらず、本実施例で総括される結果は、この方法が、対象のサンプル中に、グラム陽性菌、グラム陰性菌、または真菌が存在するかどうかを同定するのに、一般的な適用性を有することを証明する。均等物本発明は、その精神またはその本質的な特徴から逸脱することなく、他の具体的な形態において具現化され得る。上述の実施形態は、したがって、全ての点において、本明細書に記載された発明を限定するのではなく、例示するものと考えられるべきである。よって、本発明の範囲は、上述の説明によって示されるのではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内に入る全ての変化は、その範囲内に包含されると意図される。参考として援用本出願で引用された刊行物および特許文献の全ては、個々の各刊行物または各特許文献の全内容が本明細書に組み込まれるかのように、同じ程度に、あらゆる目的で、その全体を参考として援用する。"