"細菌が再現可能に得られると共に経時的に増殖するように、単離され、かつ培養において樹立された、ウィップル病の原因であるTropherymawhippelii細菌。請求項1に記載の細菌に対する特異的抗体。動物起源のポリクローナル抗体であることを特徴とする、請求項2に記載の抗体。モノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項2に記載の抗体。Tropherymawhippelii細菌により引き起こされる感染に関連する病気のインビトロ診断のための、請求項1に記載の細菌の使用方法。Tropherymawhippelii細菌により引き起こされる感染に関連する病気のインビトロ診断のための、請求項2乃至4のいずれか一項に記載の抗体の使用方法。ウィップル病のインビトロ血清学的診断方法であって、本質的に、請求項1に記載の細菌を認識するヒト免疫グロブリンに特異的な抗体と、請求項1に記載の細菌を認識する前記ヒト免疫グロブリンとの免疫学的反応を検出する工程から成る方法。請求項1に記載の細菌を含む溶液を、固体支持体中に、または固体支持体上に付着させるステップと、試験血清または生物学的液体を、前記支持体中に、または前記支持体上に導入するステップと、前記細菌を認識するヒト免疫グロブリンに特異的な標識抗体の溶液を、前記固体支持体中に、または前記固体支持体上に導入するステップと、インキュベーション期間を観察するステップと、前記固体支持体を洗浄するステップと、免疫学的反応を検出するステップとを含む、請求項7に記載の血清学的診断方法。本質的に、以下の成分:請求項1に記載の細菌を含む溶液、請求項2~4のいずれか一項に記載の少なくとも1つの抗体を含む溶液、および請求項1に記載の細菌を認識するヒト免疫グロブリンに特異的な少なくとも1つの抗体を含む溶液のうちの少なくともいずれか1つを含む、請求項6乃至8のいずれか一項に記載の方法によるウィップル病のインビトロ検出のためのキット。少なくとも1つの標識特異的抗体を含むことを特徴とする、請求項9に記載のキット。培地と、ウィップル病の原因であるTropherymawhippelii細菌とを含む培養物であって、細菌が、該培地において再現可能かつ経時的に増殖するように、単離され、かつ培地の細胞中で培養において樹立された、ウィップル病の原因であるTropherymawhippelii細菌である、培養物。前記培地がMEMを主成分とする培地であり、前記細胞がヒト線維芽細胞である請求項11に記載の培養物。前記細菌がパスツール研究所のCNCMに番号I-2202で寄託されていることを特徴とする請求項11に記載の培養物。前記細胞の分裂時間が前記細菌の倍化時間よりも長い請求項11に記載の培養物。前記細胞が少なくとも72日目間増殖可能であり、これが倒立顕微鏡で検出される請求項11に記載の培養物。ウィップル病の原因であるTropherymawhippelii細菌を培養する方法であって、細菌が、培地中において再現可能かつ経時的に増殖するように、細菌を単離し、かつ培地の細胞中で培養において樹立させる工程からなる方法。前記培地がMEMを主成分とする培地であり、前記細胞がヒト線維芽細胞である請求項16に記載の方法。前記細菌がパスツール研究所のCNCMに番号I-2202で寄託されていることを特徴とする請求項16に記載の方法。前記細胞の分裂時間が前記細菌の倍化時間よりも長い請求項16に記載の方法。前記細胞を培地中少なくとも72日間維持する工程をさらに含む請求項16に記載の方法。前記細胞が少なくとも72日目間増殖可能であり、これが倒立顕微鏡で検出される請求項16に記載の方法。請求項1に記載の細菌を培養する方法であって、培地中において再現可能かつ経時的に増殖するように、請求項1に記載の細菌を単離し、かつ樹立させる工程からなり、前記培地がMEMを主成分とする培地であり、前記細胞がヒト線維芽細胞である方法。請求項11に記載の培養物を得る方法であって、前記培地がMEMを主成分とする培地であり、前記細胞がヒト線維芽細胞である方法。培地とTropherymawhippeliiウィップル病の原因である細菌とを含む培養物であって、前記細菌は再現可能、かつ少なくとも72日目間培地中で増殖可能であり、これが倒立顕微鏡で検出される培養物。前記細胞の分裂時間が前記細菌の倍化時間よりも長い請求項24に記載の培養物。前記細菌が、前記培地中での連続的な継代培養により、細菌が再現可能に得られ、かつ経時的に増殖する請求項24に記載の培養物。前記細菌は、細胞の分裂時間が細菌の倍化時間よりも長い細胞中に存在し、該細胞は前記培地中に存在する請求項24に記載の培養物。培地とTropherymawhippeliiウィップル病の原因である細菌とを含む培養物であって、前記細菌は単離され、かつ前記培地中の細胞内で樹立され、細胞の希釈効果が生じるように細菌の増殖に比べて細胞が早く増殖できないように細胞が選択される培養物。ウィップル病の原因であるTropherymawhippelii細菌を培養する方法であって、細菌が、培地中において再現可能かつ少なくとも72日目間経時的に増殖可能であり、これが倒立顕微鏡で検出されるように、細菌を単離し、かつ培地の細胞中で培養において樹立させる工程からなる方法。前記細菌の倍化時間は18日であり、前記細菌は18日よりも長い分裂時間を有する細胞中に存在し、該細胞は培地中に存在する請求項29に記載の方法。前記細菌は培地中の細胞内に存在する請求項29に記載の方法。前記細胞の分裂時間は前記細菌の倍化時間よりも長い請求項31に記載の方法。前記倍化時間は18日である請求項32に記載の方法。前記細胞は繊維芽細胞である請求項31に記載の方法。前記樹立させる工程は、前記培地中での連続的な継代培養により、細菌を樹立させることを含む請求項29に記載の方法。今まで、血清学試験の実施に適するように、ウィップル病の原因である細菌を単離および培養することは事実上不可能であった。予想に反して、本出願人は、ウィップル病の原因である細菌を培養する方法を開発した。請求項1-35に記載された発明が提供される。本発明者らは、細菌Tropherymawhippeliiの単離と増殖を可能にする細胞培養物は、寿命が長くかつ増殖時間が長くならなければならないことを発見した。実際に、本発明者らは、前記細菌の倍化時間が非常に長い18日ことを証明している。好ましくは、初代培養を、直接、不死化細胞上で行うべきである。ヒト血液単球の初代培養に関して行われた初期研究SHOEDONら,JornalofInfectiousDiscases,volume176,number3,1997,672-677頁を、細菌Tropherymawhippeliiが増殖するような培養において、この細菌を樹立するための基礎として使用することができなかった。なぜなら、これらの単球の平均寿命が、細菌の倍化時間の観点からすると不十分な30日しかなかったからである。さらに、細菌の増殖時間と比較して細胞があまりに急速に増殖する場合、細菌を培養することができない。なぜなら、希釈効果が生じ、感染細胞と非感染細胞とを分離することができなくなるからである。1つの有利な実施態様では、本発明者らは不死化線維芽細胞を使用した。これらの線維芽細胞は培養皿の底に広がり、細胞マット全体をふさぐと増殖を止めるが、そのような条件下で数ヶ月間、生存することができる。さらに正確には、以下の実施例1および2に詳細に記載する、細菌を単離および培養する方法は、ヒト線維芽細胞HEL株に、MEMに溶かした粉砕心臓弁調製物を接種することを含む。最低2ヶ月間インキュベートした後に培地を定期的に交換する、ウィップル病の原因である細菌を単離し、培養において樹立した。培養において樹立するという言い回しは、特に、細胞培養物上での連続的な継代培養により、細菌が再現可能に得られ、経時的に増殖する意味であると理解される。従って、本発明は、抗原供給源として、このように単離および樹立された細菌に関する。本細菌は、CNCMフランス、パリに番号I-2202および識別参照TWIST-Marseilleで寄託されている。さらに、本発明は、本発明による細菌の抗原に関する。さらに詳細には、本発明は、SDS-PAGE技術を使用したポリアクリルアミドゲル電気泳動とウエスタンブロッティングとにより決定された、約10,20,35,50,60,80,100,120,150,170および200kDの分子量を有するものから選択されるタンパク質である抗原に関する。さらに、本発明は、本発明による細菌または抗原に対する特異的抗体、さらに詳細には、動物起源のポリクローナル抗体特に、マウスもしくはウサギ免疫グロブリンまたはモノクローナル抗体特に、パスツール研究所のCNCMに、登録番号I-2411および識別参照TW17G2で寄託されたハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体に関する。さらに、本発明は、前記細菌を認識するヒト免疫グロブリン好ましくは、IgG、IgM、またはIgAに特異的な抗体、より詳細には、動物免疫グロブリン特に、抗ヒトヤギ免疫グロブリンの検出に関する。さらに、本発明は、より詳細には、本発明による前記ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体と反応する200kDのタンパク質であることを特徴とする抗原に関する。さらに、本発明は、細菌Tropherymawhippeliiにより引き起こされる感染に関連する疾患のインビトロ診断のための方法における本発明による細菌、細菌の抗原、または特異的抗原の使用と、本発明による細菌Tropherymawhippeliiにより引き起こされる感染症の血清学的診断のための方法に関する。前記方法は、患者の血清または任意の他の生物学的液体を前記細菌と接触させ、免疫学的反応を検出することを含む。より詳細には、本発明は、Tropherymawhippeliiにより引き起こされる感染症のインビトロ血清学的診断のための方法に関する。ここで、本発明による細菌、本発明による細菌の抗原、または本発明による特異的抗体を、患者から採取し、ヒト血清、生物学的液体、またはスワブからなる試料と接触させる。本発明による方法は、本質的に、本発明による細菌に特異的な抗体と前記細菌の抗原との免疫学的反応、または前記細菌を認識する本発明による免疫グロブリンに特異的な抗体と、前記細菌を認識するヒト免疫グロブリンとの免疫学的反応を検出することにあるステップを含む。さらに、本発明は、ウィップル病のインビトロ血清学的診断のための方法に関する。前記方法は、患者の血清または任意の他の生物学的液体を、前記で定義された細菌と接触させることと、免疫学的反応を検出することを含む。1つの実施態様では、本発明による診断方法は以下の工程から成る。-本発明による細菌の溶液、特に0.5~5μl、好ましくは1μlの前記細菌を含む前記溶液を、固体支持体中に、または固体支持体上に付着させること-試験血清または生物学的液体好ましくは、希釈した試験血清または生物学的液体を、前記支持体中に、または前記支持体上に導入すること-標識抗体特に、前記細菌を認識するヒト免疫グロブリン特に、IgG、IgM、またはIgAタイプに特異的な抗ヒト動物免疫グロブリンを、前記支持体中に、または前記支持体上に導入すること-インキュベーション期間を観察すること-適宜、前記固体支持体を洗浄すること-特に、前記細菌を認識するヒト抗体と前記抗ヒト免疫グロブリンとの免疫学的反応を実際に検出すること。有利なことに、本発明の診断方法は、ELISAタイプの酵素イムノアッセイまたは免疫蛍光アッセイを含む。より詳細には、本発明による方法は、以下の工程から成る。-前記のように単離および樹立した細菌の溶液を、固体支持体中に、または固体支持体上に付着させること-希釈した試験血清または生物学的液体を、前記支持体中に、または前記支持体上に導入すること-標識抗ヒト免疫グロブリンを、前記支持体中に、または前記支持体上に導入すること-インキュベーション期間を観察すること-適宜、前記固体支持体を洗浄すること-免疫学的反応を実際に検出すること。使用する固体支持体は、細胞懸濁液および細菌懸濁液の操作に適した任意の装置特に、チューブ、ガラススライド、bijouxチューブ、または堅いマイクロタイタープレートポリエチレン、ポリスチレン、塩化ビニル、またはニトロセルロースで作られ、マイクロウェルを有するであってよい。ガラススライドが好ましい。検出される抗体は、ウィップル病の原因である細菌に特異的な、特に、G、M、またはAタイプの免疫グロブリンである。抗ヒト免疫グロブリンに使用される標識のタイプは、酵素標識、放射性標識、または蛍光標識である。最後のタイプの標識が好ましい。蛍光標識という言い回しは、適切な蛍光剤例えば、フルオレセインイソチオシアネートと、ヒト抗体を認識する動物免疫グロブリンとの結合により、抗体が蛍光を発するようになっていることを意味する。放射性標識という言い回しは、抗体が、その構造要素例えば、構成チロシン残基またはそれに固定されている適切なラジカルに、放射能をカウントすることにより分析することができる放射性同位体を有することを意味する。酵素標識という言い回しは、抗体が、適切な薬剤と会合した場合にこの特異的抗体を定量的に測定することができる酵素と結合していることを意味する。基質および試薬は、この酵素により引き起こされ、これらの基質を必要とする反応または反応順序の最終生成物が、次のうちのいずれか一方となるように選択される。-着色基質または蛍光基質試験試料を取り囲む液体培地に拡散し、それぞれ最終的な分光光度測定もしくは蛍光測定または目視評価任意に、カラースケールと照らし合わせるに供される-不溶性着色基質試験試料に付着し、反射光度計による測定または目視評価任意に、カラースケールと照らし合わせるに供することができる蛍光を発するようになっている抗体を使用する場合、試験試料に関連する蛍光は、適切な装置により直接読み取る。放射性プローブ例えば、ヨウ素125を使用する場合、試験試料に関連する放射能は、任意の適切な実施方法例えば、細胞をアルカリ溶液例えば、水酸化ナトリウム溶液で可溶化し、吸収プラグを使用して放射能を含む溶液を回収した後にによりガンマカウンターでカウントする。特異的抗体に酵素を使用する場合、前記で説明したような、培地に溶ける着色生成物、不溶性着色生成物、または可溶性蛍光生成物を反応生成物として最終的に得ることができる、酵素基質と1または複数の補助試薬を含む溶液を添加することにより、着色生成物または蛍光生成物が出現する。次いで、このように処理した試料から生じる光シグナルを、それぞれの場合に適した装置すなわち、それぞれ、透過光度計、反射光度計、または蛍光計を使用して測定する。あるいは、得られた色を、目視により任意に、着色溶液のスケールを使用して評価することもできる。アルカリホスファターゼを酵素として使用する場合、BoehringerMannheim-Biochemicaにより提案された方法により、この酵素を特異的抗体と結合させる。この酵素に好ましい基質は、最終測定が分光光度計によるものである場合、パラニトロフェニルリン酸、または測定が蛍光計によるものである場合、4-メチル-ウンベリフェリルリン酸、または不溶性着色反応生成物が得られる場合、5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルリン酸である。同様に、β-ガラクトシダーゼを酵素として使用することができる。好ましい基質は、オルトニトロフェニルβ-D-ガラクトピラノシドまたは4-メチルウンベリフェリルβ-D-ガラクトピラノシドである。特異的抗体をペルオキシダーゼと結合できることが好ましい。この場合、結合プロセスは、M.B.WILSONおよびP.K.NAKANE,ImmunofluorescenceandRelatedStainingTechniques,W.Knapp,K.Kolubar,G.Wicks編,Elsevier/NorthHolland,Amsterdam1978,215-224頁により記載されているものに基づいている。特異的抗体と共役したペルオキシダーゼを明らかにするために使用する試薬には、過酸化水素酵素基質と適切な色原体例えば、培地に溶ける着色最終生成物を得るためにはオルトフェニレンジアミンまたは2,2’-アジノビス-3-エチルチアゾリン-6-スルホン酸ABTS、不溶性最終反応生成物を得るためには3,3’-ジアミノベンジジン、3-アミノ-9-エチルカルバゾール、または4-クロロ-α-ナフトール、培地に溶ける蛍光反応生成物を得るためにはパラヒドロキシフェニルプロピオン酸が含まれる。本発明の別の実施態様は、アセチルコリンエステラーゼが結合している特異的抗体の使用である。フランス特許第2550799号に記載に基づくプロセスによるか、または簡単に述べると、周知の技術により抗体フラグメントを調製し、適切なヘテロ二価性薬剤との反応により酵素を修飾し、最後に、結果として生じる生成物を結合させることを含むプロセスにより、アセチルコリンエステラーゼを抗体と結合させることが好ましい。この場合、免疫酵素結合体を構築する他の周知のプロセスも使用することができる。アセチルコリンエステラーゼ結合体により認識される抗原に特異的に関連する酵素活性は、この場合に適した任意の変異体例えば、Pradellesら,Anal.Chem.1985,57:1170-1173に記載の変異体を使用して、酵素基質としてアセチルチオコリンと色原体としてエルマン試薬5,5’-ジチオ-2-ニトロ安息香酸を利用する周知の技術により明らかにされることが好ましい。言及した色原体は、それ自体で、または水溶性の塩の形態で使用される。本発明の血清学的診断の方法は、生物学および/または病理解剖学研究室での使用に適している。このために、本方法の実施のために提案された装置は固体支持体を備える。この固体支持体の上に、または固体支持体中に、前記で定義された細菌を含む溶液が付着されている。別の特徴によれば、さらに、本発明は、ウィップル病の原因である細菌のインビトロ検出のためのキットに関する。このキットは、以下の成分を含む溶液を備えている。-本発明による細菌または抗原を含む溶液、および/または-本発明による少なくとも1つの抗体を含む溶液、および/または-前記細菌を認識にするヒト免疫グロブリンに特異的な少なくとも1つの抗体。さらに詳細には、前記キットは、以下のものを含む。-陽性対照として、前記のように単離および樹立されたウィップル病の原因である細菌を含む溶液-標識特異的抗体を含む溶液-任意の洗浄溶液。本発明のキットに使用される特異的抗体は、放射性プローブ、酵素、または蛍光剤で有利に標識される。特異的抗体を酵素で標識する場合、前記キットはまた、酵素基質と、酵素活性を視覚化するための1または複数の試薬を含む。特異的抗体を蛍光剤で標識する場合、フルオレセインイソチオシアネートを使用することが好ましい。本発明の1つの好ましい実施態様では、使用される特異的抗体は、免疫グロブリン、特に、マウス免疫グロブリンである。さらに、本発明は、本発明による細菌TropherymawhippeliiのrpoB遺伝子に関する。rpoB遺伝子の配列は、異なる属および種の多数の他の細菌の中でコンセンサスなプライマーを使用した酵素的増幅と直接的自動配列決定により決定した。rpoB遺伝子は、細菌RNAポリメラーゼのサブユニットの1つをコードし、細菌種Tropherymawhippeliiの特異的検出を可能にする遺伝子マーカーを構成する。さらに詳細には、本発明は、添付の配列表中のヌクレオチド配列である配列番号3を有することを特徴とするrpoB遺伝子のフラグメントに関する。従って、さらに本発明は、Tropherymawhippelii種に特異的な核酸配列に関し、このヌクレオチド配列は、前記細菌のrpoB遺伝子に由来し、特に、前記rpoB遺伝子のフラグメントに由来する。LazcanoらJ.Mol.Evol.198827:365-376によれば、RNAポリメラーゼは、その起源により2つのグループに分類される。一方は、RNA依存性またはDNA依存性ウイルスRNAポリメラーゼからなり、他方は、真核生物または原核生物起源古細菌および真正細菌のDNA依存性RNAポリメラーゼからなる。真正細菌DNA依存性RNAポリメラーゼは、αββ’により表されるコア酵素またはαββ’σにより表されるホロ酵素と呼ばれる単純な、保存された多量体構造により特徴付けられるYuraおよびIshihama,Ann.Rev.Genet.197913:59-97。非常に多くの研究により、多量体酵素複合体内での、真正細菌RNAポリメラーゼβサブユニットの機能的役割が証明されている。古細菌および真核細菌のRNAポリメラーゼに関する限りでは、これらは、約10または11~約30のサブユニットになることができる、さらに複雑な構造を有するPuhlerら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA198986:4569-4573。真正細菌におけるDNA依存性RNAポリメラーゼの異なるαββ’σサブユニットをコードする遺伝子すなわち、それぞれ、rpoA、rpoB、rpoC、およびrpoD遺伝子が、リボソームサブユニットの構成タンパク質またはゲノムの複製および修復に関与する酵素をコードする遺伝子を含む、それぞれ異なるグループに分類されるYuraおよびIshihama,Ann.Rev.Genet.197913:59-97。著者の中には、rpoBおよびrpoC遺伝子の核酸配列を使用して、生物界の中で異なる分枝および小分枝を分離することを可能にする系統樹を構築できることを証明したものもいるRowlandら、Biochem.Soc.Trans.199221:40s。本発明のこの特徴をさらに詳細に説明する前に、説明および特許請求の範囲で使用する様々な用語を以下で定義する。細菌から抽出した核酸は、全核酸、ゲノムDNA,メッセンジャーRNA、またはメッセンジャーRNAの逆転写から得られたDNAのいずれかを意味すると理解される。ヌクレオチドフラグメントおよびオリゴヌクレオチドは、同義の2つの用語であり、厳しいストリンジェンシーの所定条件下で相補的なまたは実質的に相補的なヌクレオチドフラグメントと、天然核酸と同様にハイブリダイズすることができる天然または、ことによると修飾された核酸の情報配列により特徴付けられる、ヌクレオチド単位が連結したものを意味する。この連結は、構造が天然核酸とは異なるヌクレオチド単位を含んでもよい。ヌクレオチドフラグメントまたはオリゴヌクレオチドは、例えば、100ヌクレオチド単位までを含んでもよい。これは、一般に、少なくとも10ヌクレオチド単位、特に、少なくとも12ヌクレオチド単位を含み、天然核酸分子から、ならびに/あるいは遺伝子組換えおよび/または化学合成により得ることができる。ヌクレオチド単位は単量体に由来する。前記単量体は、その構成要素が、糖と、リン酸基と、アデニン、グアニン、ウラシル、シトシン、およびチミンから選択される窒素塩基である天然核酸ヌクレオチドでもよい。あるいは、前記単量体は、前記で列挙した3つの構成要素のうち少なくとも1つで修飾されているヌクレオチドである。一例として、塩基では、イノシン、5-メチルデオキシシチジン、デオキシウリジン、5-ジメチルアミノデオキシウリジンなどの修飾塩基またはハイブリダイゼーションが可能な他の任意の修飾塩基を使用して、あるいは糖では、例えば、少なくとも1つのデオキシリボースをポリアミドで置換することによりP.E.Nielsenら,Science1991254:1497-1500、あるいはリン酸基では、例えば、特に、ジホスフェート、アルキルホスホネートおよびアリルホスホネート、ならびにホスホロチオエートから選択されるエステルで置換することにより、修飾を行うことができる。情報配列は、その化学的性質と基準方向referencedirectionへの順序が天然核酸の配列により与えられるものと類似する情報を構成する、任意の順序付けられた一連のヌクレオチド型単位を意味すると理解される。ハイブリダイゼーションは、適切な条件下で、十分に相補的な配列を有する2つのヌクレオチドフラグメントが安定かつ特異的な水素結合を介して互いに会合し、二本鎖を形成することができるプロセスを意味すると理解される。ハイブリダイゼーション条件は、ストリンジェンシーすなわち、操作条件の厳しさにより決定される。ストリンジェンシーが大きくなればなるほど、ハイブリダイゼーションは特異的になる。ストリンジェンシーは、特に、プローブ/標的二重鎖の塩基組成物の関数であり、2つの核酸間のミスマッチの程度によるものである。ストリンジェンシーはまた、ハイブリダイゼーション反応のパラメータ例えば、ハイブリダイゼーション溶液に存在するイオン種の濃度およびタイプ、変性剤の性質および濃度、ならびに/またはハイブリダイゼーション温度の関数であり得る。ハイブリダイゼーション反応を行わなければならない条件のストリンジェンシーは、特に、使用するプローブによって決まる。これらの事実の全てが周知であり、適切な条件を、その都度、日常的な実験により必要に応じて決定することができる。一般に、使用するプローブの長さに応じて、ハイブリダイゼーション反応の温度は、濃度が約0.8~1Mの食塩水中で、約20~65°C、特に、35~65°Cである。プローブは、例えば、10~100ヌクレオチド単位、特に、12~35ヌクレオチド単位からなり、核酸この場合では、メッセンジャーRNAすなわち、転写産物に含まれる、またはメッセンジャーRNAの逆転写により得られるDNAに含まれるヌクレオチド配列を有する核酸とハイブリダイゼーション複合体を形成する所定の条件下でハイブリダイゼーション特異性を有するヌクレオチドフラグメントである。プローブを診断のために使用してもよく特に、キャプチャープローブまたは検出プローブ、治療のため使用してもよい。キャプチャープローブは、任意の適切な手段により例えば、共有結合、吸着、または固体上への直接合成により、固体支持体上に固定化されるか、または固定化することができる。支持体の例として、マイクロタイタープレートおよびDNAチップが挙げられる。検出プローブは、例えば、放射性同位体、酵素特に、発色基質、蛍光基質、発光基質に作用することができる酵素特に、ペルオキシダーゼまたはアルカルホスファターゼ、発色団化学物質、発色化合物、蛍光化合物、または発光化合物、ヌクレオチド塩基アナログ、およびリガンド例えば、ビオチンから選択されるマーカーで標識することができる。種プローブは、細菌の種を同定するためのプローブである。属プローブは、細菌の属を同定するためのプローブである。プライマーは、例えば、10~100ヌクレオチド単位からなり、例えば、PCRなどの増幅技術、配列決定プロセス、転写法などで酵素的重合を開始するための所定の条件下でハイブリダイゼーション特異性を有するプローブである。本発明の主題の1つは、添付の配列表中の配列番号4および配列番号5の配列の1つに含まれる少なくとも12の連続的なヌクレオチド単位からなる配列を有するオリゴヌクレオチドならびにこれらのオリゴヌクレオチドに相補的なオリゴヌクレオチドから選択される1本鎖オリゴヌクレオチドである。これらのオリゴヌクレオチドは、オリゴデオキシリボヌクレオチドDNAでもよく、TをUで置換したオリゴリボヌクレオチドRNAでもよい。特に、本発明によるオリゴヌクレオチドは、前記のように少なくとも12単位、多くても50単位を有する。さらに詳細には、本発明によるオリゴヌクレオチドは、12~35単位を有する。好ましいオリゴヌクレオチドは、配列番号4および5の配列から選択される配列を有する。イノシンは、他の任意の塩基と対合することができる。配列番号4および5の配列は、当業者に周知な例えばItakuraK.ら1984Annu.Rev.Biochem.53:323による論文に記載されている技術を使用した化学合成により調製することができる。本発明のオリゴヌクレオチドの第1の応用例は、細菌種Tropherymawhippeliiを生物学的試料中で検出するためのプローブとしての使用である。このプローブは、配列番号4および配列番号5の1つに含まれる少なくとも12の連続したヌクレオチド単位からなるヌクレオチド配列とこれらの相補的配列を含む。本説明ではこれより、本発明のこのようなプローブを種プローブと呼ぶ。本発明によるプローブは、周知の任意のハイブリダイゼーション技術特に、DOT-BLOTと呼ばれる技術Maniatisら1982MolecularCloning,ColdSpringHarbor、SOUTHERNBLOTTINGと呼ばれるDNA転写技術Southern,E.M.,J.Mol.Biol.197598:503、NOTHERNBLOTTINGと呼ばれるRNA転写技術、またはいわゆるサンドイッチ技術Dunn,A.R.,Hassel,J.A.1977Cell12:23により、試料中に標的核酸が存在するか存在しないかを検出するための試験において診断目的に使用することができる。特に、サンドイッチ技術は、キャプチャープローブおよび/または検出プローブと共に使用される。これらのプローブは標的核酸の2つの異なる領域とハイブリダイズすることができ、これらのプローブの少なくとも一方一般に、検出プローブが、種に特異的な標的領域とハイブリダイズすることができる。キャプチャープローブおよび検出プローブには、少なくとも部分的に異なるヌクレオチド配列がなければならないことが理解されている。検出しようとする核酸標的はDNAでもRNAでもよい任意に、どちらか一方をPCRにより増幅した後に得る。二本鎖核酸型の標的を検出する場合、検出プロセスを行う前に二本鎖核酸を変性することが適切である。標的核酸は、周知の方法を使用して試験試料の核酸から抽出することにより得ることができる。二本鎖核酸を、化学的、物理的、または酵素的変性の周知の方法により、特に、80°C以上の適切な温度まで加熱することにより変性することができる。前記のハイブリダイゼーション技術、特に、サンドイッチ技術を行うために、キャプチャープローブと呼ぶ本発明のプローブを固体支持体に固定化し、検出プローブと呼ぶ本発明のもう1つのプローブをマーカーで標識する。支持体およびマーカーの例は、前記で定義した通りである。本発明のさらなる主題は、Tropherymawhippelii細菌が、少なくとも1つのこのような細菌の核酸を含むかまたは含む可能性がある試料中に存在するか、存在しないかを決定するプロセスである。前記プロセスは、前記試料を少なくとも1種類の本発明のプローブと接触させ、次いで、それ自体は周知の方法で、前記プローブと前記試料の核酸とのハイブリダイゼーション複合体が形成したか、または形成しなかったかを決定することにあるステップを含む。プローブと核酸とのハイブリダイゼーション複合体が形成したか、または形成しなかったかを検出する方法の例として、前記の技術、すなわち、DOT-BLOT、SOUTHERNBLOTTING、およびサンドイッチ技術が挙げられる。Tropherymawhippelii種が存在するか、または存在しないかを決定する、このプロセスを行う特定の態様の1つでは、数種類の本発明のプローブを使用する。これらのプローブは、TropherymawhippeliiのrpoB遺伝子に対応する核酸の非重複領域とハイブリダイズできることが理解される。有利なことには、ある1つの種類のプローブを固体支持体上に固定化し、別の種類のプローブをマーカーで標識する。本発明のオリゴヌクレオチドの別の応用例は、配列番号4および5の配列の1つに含まれる少なくとも12ヌクレオチド単位からなる配列を有するオリゴヌクレオチドから選択される1本鎖オリゴヌクレオチドを含むヌクレオチドプライマーとしての使用である。このプライマーは、それ自体は周知のプロセスにより、ポリメラーゼ存在下での核酸合成において特に、ポリメラーゼの存在下で、このような合成を利用する増幅法PCR、RT-PCRなどにおいて使用することができる。特に、本発明のプライマーを、TropherymawhippeliiのメッセンジャーRNA配列の特異的逆転写に使用して、対応する相補的DNA配列を得ることができる。このような逆転写はRT-PCR技術の第1段階を構成することができる。次の段階は、結果として生じる相補的DNAのPCRによる増幅である。本発明のプライマーはまた、ポリメラーゼ連鎖反応により、TropherymawhippeliiのrpoB遺伝子の全DNA配列を特異的に増幅するために使用することができる。1つの特定の場合では、本発明のオリゴヌクレオチドを含むプライマーはまた、RNAポリメラーゼにより認識されるプロモーター例えば、T7、T3、またはSP6プロモーターStudier,F.W.,B.A.Moffatt1986J.Mol.Biol.189:113のセンスまたはアンチセンス配列を含む。このようなプライマーは、転写ステップを伴う核酸増幅プロセス例えば、NASBAまたは3SR技術VanGemenB.ら,AbstractMA1091,7thInternationalConferenceonAIDS1991Florence,Italyに使用することができる。本発明のさらなる主題は、配列番号4および配列番号5の配列の1つに含まれる少なくとも12の連続したヌクレオチド単位からなる配列を有するオリゴヌクレオチドから選択される1本鎖オリゴヌクレオチドを含むヌクレオチドプライマーである。このプライマーは、Tropherymawhippeliiの任意の株のrpoB遺伝子を、全てまたは部分的に配列決定するために使用することができる。特に、このヌクレオチドプライマーを、増幅核酸を配列決定するために使用することができる。それ自体は周知のプロセスすなわち、ジデオキシヌクレオチドを使用した吸収重合SangerF.,CoulsonA.R.1975J.Mol.Biol.94:441またはDNAチップを使用した複数ハイブリダイゼーションによる配列決定から、rpoB遺伝子の全配列または部分配列が得られる。プライマーとしての使用またはrpoB遺伝子の配列決定には、配列番号4および配列番号5の配列を使用することが好ましい。最後に、本発明の最後の主題は、Tropherymawhippeliiの株により引き起こされる感染症を治療するための遺伝子治療プローブである。このプローブは、前記で定義したようなオリゴヌクレオチドを含む。前記細菌のメッセンジャーRNAおよび/またはゲノムDNAとハイブリダイズすることができる、この遺伝子治療プローブは、翻訳および/または転写および/または複製の現象をブロックすることができる。遺伝子治療法の原理は周知であり、特に、アンチセンス鎖に対応するプローブを使用することに基づいている。このプローブとセンス鎖とのハイブリッドの形成により、遺伝子情報の解読に関与するステップの少なくとも1つを混乱させることができる。従って、遺伝子治療プローブは、スピロヘータにより引き起こされる感染症と戦うための抗細菌薬として使用することができる。本発明は、実施例に分けられた以下の説明により、さらに詳細に理解されるだろう。実施例は、本発明を実施するために行われた実験に関し、単に例として示される。実施例1:細菌の初代単離ATCCから入手可能なヒト線維芽細胞HEL株を接種したbijouxチューブでの遠心分離技術により、初代単離を行った。HEL細胞を、10胎児ウシ血清Gibcoおよび2mLL-グルタミンGibcoを添加したMEMGibco上で培養した。直径12mmのキャリアスライドを備えるbijouxチューブSterilin-Feltham-England,3.7mlに、約50,000個の細胞を含む培地1mlを接種し、5CO2下、37°Cで3日間インキュベートして、コンフルエント細胞マットを得た。研究されている心臓弁をMEM中で粉砕し、この懸濁液を使用して3個のbijouxチューブに接種した。次いで、これらのチューブを、22°Cで1時間、700gで遠心分離した。次いで、上清を取り出し、マットを滅菌PBSで2回洗浄し、次いで、5CO2下、37°Cで培地1mlと共にインキュベートした。培養物を、bijouxチューブ中の上清100μlの細胞遠心分離とGimenez染色によりモニターした。この手順を、10、20、および30日後に繰り返した。30日後に、bijouxチューブ中の上清および細胞マットを収集し、培地15mlを含む25cm2培養皿中のコンフルエント細胞マット上に継代培養し培養皿I、5CO2下、37°Cでインキュベートした。それから6週間、毎週D72、細胞マットを、細胞変性効果を探すために倒立顕微鏡で調べ、培地を新鮮な培地と交換した。培地を交換する前に、上清200μlを使用して、細胞遠心分離とGimenez染色を行った。65日目前では、細胞変性効果は検出されなかった。72日目に、倒立顕微鏡で細胞マットを調べると、HEL細胞内に小さな、黒っぽい、不ぞろいな封入体を検出することができた。培養皿Iの上清を細胞遠心分離し、Gimenez染色した後に、いくつかの微細なバチルスを検出した。バチルスの大部分は細胞内にあり、細胞内のバチルスは細胞外のバチルスより小さく見えた。それにもかかわらず、その大部分は、Gimenez染色により、あったとしても十分には染色されず、薄青色に見えた。グラム染色後にも、非常に多くのバチルスが検出された。その大部分はグラム陽性に見えたが、いくつかは部分的に紫色になっているだけであるか、グラム陰性に見えた。これらのバチルスは、Ziehl染色後、酸によって脱色された。PAS染色後、PAS陽性バチルスは、前の染色より非常に多く見えた。長く微細なバチルスの大部分を細胞外で観察することができた。HEL細胞は、PAS陽性凝集塊と、短く微細なPAS陽性バチルスで満たされているように見えた。実施例2:単離物の増殖全増殖手順を、10ウシ胎児血清と2mML-グルタミンを添加したMEM培地で培養したHEL細胞上で行い、5CO2下、37°Cでインキュベートした。75日目に、培養皿I中の上清3mlを使用して、前記方法により10個のbijouxチューブに接種し、上清2mlを使用して、培地15mlを含む25cm2培養皿中のコンフルエント細胞マットに接種した培養皿A。培養皿I中の細胞と上清の残りを収集して、10mlの懸濁液を得た。次いで、この懸濁液を、5つの2mlアリコートに分けた。アリコートの1つを液体窒素で凍結した。別のアリコートを、培地15mlを含む25cm2培養皿中のコンフルエント細胞マットに接種した培養皿B。別のアリコートの細胞を、液体窒素と温水55°Cを使用した4回の凍結融解サイクルにより溶解し、次いで、培地15mlを含む25cm2培養皿中のコンフルエント細胞マットに接種した培養皿C。別のアリコートを、培地15mlを含むが、細胞マットが無い25cm2培養皿に接種した培養皿D。85日目に、これら全ての培養皿およびbijouxチューブ中の培地を、新鮮な培地と交換した。細胞を収集し、培地30mlを含む75cm2培養皿に接種した培養皿D2。培地を交換する前に、上清200μlを使用して細胞遠心分離とPAS染色を行い、血清学用の抗原として使用するために、上清の残りを凍結した。95および105日目に、全ての培養皿およびbijouxチューブ中の培地を前記のように交換した。PAS染色用の細胞スメアを調製するために、細胞マットの一部をかき集めた。染色により増殖効率を半定量的に評価した。PAS陽性バチルスの存在を、以下の通りに0、存在しない;、存在するが見つけにくい;、見つけ易いが、全視野には存在しない;、全視野で存在する、倍率1000倍で顕微鏡により評価した。これらの評価を盲検で行った。単離物を継代培養の30日後に見つけることができたので、増殖方法は全て有効であることが分かった表1。半定量的評価により、最も有効な手順がbijouxチューブ中での継代培養、上清の継代培養培養皿A、および細胞の継代培養培養皿D、D2であることを観察することができた。実施例3:免疫蛍光法による検出細胞内細菌を、105日目に免疫蛍光法によりbijouxチューブ中で直接検出した。アセトンで固定した後に、チューブをPBSで2回洗浄した。3脱脂粉乳を含むPBSで1:50に希釈した患者血清100μlを添加し、チューブを加湿チャンバー内で37°Cで30分間インキュベートした。PBSで3回洗浄した後に、0.2エバンスブルーを添加したPBSで1:200に希釈したフルオレセインイソチオシアネート標識抗ヒトヤギ免疫グロブリンFluolineH,BioMerieux,Marcyl’Etoilc,France100μlと共に、チューブを37°Cで30分間インキュベートした。PBSで3回洗浄した後に、スライド細胞は下方に向いているを緩衝化グリセロールpH8中で固定し、Zeiss蛍光顕微鏡と、100×NA.1.4液浸系対物レンズを備える共焦点顕微鏡LEICADMIRBEを使用して倍率400倍で調べた。免疫蛍光法により調べると、PAS染色および他の染色では細胞感染は過小評価されることが分かった。継代培養の30日後、スライド上の細胞は全て細菌抗原で満たされている。共焦点顕微鏡による研究から細菌の細胞内位置が確かめられた。いくつかの細菌が、単離物中に、PAS染色後に観察されるものに似た微細バチルスの形態で観察された。それにもかかわらず、免疫陽性物質の大部分はより大きな封入体と一致し、この封入体では細菌を個別化することができない。免疫陽性物質は細胞核で検出されない。実施例4:電子顕微鏡105日目に、培養皿D2から収集された細胞を含む溶液300μlを、電子顕微鏡による研究のために調製した。細胞を、0.1Mスクロースを含む0.1Mカコジル酸緩衝液に溶かした2.5グルタルアルデヒド溶液で、4°Cで1時間固定した。細胞を同じ緩衝液で一晩洗浄し、次いで、0.1Mカコジル酸緩衝液に溶かした四酸化オスミウムで、室温で1時間固定した。漸増濃度のエタノール溶液での連続洗浄により、脱水を行った。次いで、細胞を、Epon812のブロックに包埋した。次いで、LKBUltratomeIIIミクロトームを使用してブロックから薄切片を切り、その後、メタノールに溶かした飽和酢酸ウラニル溶液とクエン酸鉛水溶液で染色した後、JcolJEM1200EX電子顕微鏡で調べた。電子顕微鏡研究により、PAS陽性封入体と免疫陽性物質は、無傷の細菌または分解している細菌と一致することが確かめられた。これらの細菌の細胞質膜は、電子密度が高い2つの層からなる。薄い細菌壁は、所定の位置で、3層の外観を示す外側偽膜で覆われている。分裂過程にある細菌が観察された。実施例5:ウィップル病の原因である細菌に対するマウスポリクローナル抗体の作製BalbC系統のマウスの腹腔内に、ウィップル病の原因である104個の細菌を含む上清0.5mlを注射した。次いで、1、2、および3週間後に、このマウスに同じ上清0.5mlを注射した。この最後の接種の1週間後に、このマウスから血を出した。免疫蛍光法を1回、免疫ペルオキシダーゼ法を1回行うことにより、血清を、一方では、ウィップル病の原因である細菌の培養物に対して、他方では、ウィップル病に罹患している患者の弁に対して試験した。明らかにする抗体は、フルオレセインまたは免疫ペルオキシダーゼで標識した抗マウス抗体Immunotechにより供給であった。細菌を、細胞内で視覚化することができた。従って、さらに、本特許出願は、ウィップル病の原因である細菌を、生検材料および様々なスワブ例えば、心臓弁、消化器生検材料、またはウィップル病の原因である細菌に感染していると思われる他の任意の器官の生検材料中で直接検出することに関する。実施例6:TropherymawhippeliiTwist-Marseille株の産物に対するモノクローナル抗体の作製および使用、ならびに抗原の決定装置と方法Tropherymawhippelii株。ハイブリドーマを作製およびスクリーニングし、モノクローナル抗体Mabの特異性を試験するために使用するTropherymawhippeliiの株は、番号I-2202でCNCMに寄託されたTwist-Marseille株である。Tropherymawhippeliiを、前記の培養条件下で、ヒト胎児線維芽細胞HEL上で培養した。75日目に、感染細胞を1つのフラスコから採取し、4000gで10分間、遠心分離した。次いで、遠心分離残渣を、5mlのPBSに再懸濁した。この懸濁液0.5mlを、それぞれのマウスに接種した。細菌をまたRenografin勾配下で精製し、SDS-PAGEの場合、脱イオン水に、マイクロ免疫蛍光法MIFの場合、PBSに再懸濁した。モノクローナル抗体Mabの作製。PBSに溶かしたTropherymawhippeliiTWIST-Marseille番号I-2202の懸濁液0.5mlを腹腔内注射することにより、6週齢の雌BALB/Cマウスに7日間隔で3回接種した。3回注射の最後から1週間後に、静脈内追加抗原量の、PBSに溶かしたTropherymawhippeliiの懸濁液0.1mlを、マウスに与えた。3日後に、免疫化マウスの脾臓を取り出し、50ポリエチレングリコール分子量:1300~1600;SigmaChemicalCo.,St.Louis,Moを使用して、脾細胞をSP2/0-Ag14ミエローマ細胞と融合させた10:1。融合細胞を、20ウシ胎児血清Gibco,BRLとヒポキサンチン-アミノプテリン-チミジンSigmaChemicalCo.,St.Louis,Moを添加したハイブリドーマ培地Seromed,Berlin,Germany中で、5CO2に富む加湿雰囲気中、37°Cで培養した。上清中の抗T.whippelii抗体の存在をMIFにより検出した。陽性ハイブリドーマを、腹水産生のために継代培養した。IgM、IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b、およびIgG3マウス抗血清Sigmaを含むImmunoTypeMouseMonoclonalAntibodyIsotypingKitSIGMAを使用して、Mabのアイソタイプを決定した。Mabの特異性をウエスタンブロッティングにより試験した。マウスに、プリスタン2,6,10,14-テトラメチルペンタデカン;Sigma0.5mlを腹腔内注射した1週間後に、0.5mlのPBSに溶かした3×106個ハイブリドーマの懸濁液を腹腔内注射することにより、腹水抗体を作製した。マイクロ免疫蛍光法MIF。MIFを使用して、ハイブリドーマをスクリーニングし、Mabの特異性を決定した。Tropherymawhippelii培養物からなる抗原を、細く尖った棒quillを使用して24ウェルスライド上に付着させた。メタノールを使用して室温で10分間固定した後に、Mabを付着させ、加湿チャンバ内で37°Cで30分間インキュベートした。その後、スライドをPBS、次いで、蒸留水で2×5分間洗浄し、風乾させ、次いで、0.2エバンスブルーを含むPBSで1/200に希釈したフルオレセイン結合抗マウスIgMヤギ抗体およびフルオレセイン結合抗マウスIgGヤギ抗体BioMerieux,Marcyl’Etoilc,Franceと37°Cで30分間インキュベートした。洗浄後に、スライドをFluorepBioMerieuxを使用して固定し、次いで、蛍光顕微鏡Axioskop20;CarlZeiss,Gottingen,Germanyで、倍率400×で読み取った。免疫化マウスの血清を陽性対照として使用し、健康なマウスの血清を陰性対照として使用した。ウィップル病に罹患している患者の血清中の抗Tropherymawhippelii抗体を検出するために、MIFを、LabtechスライドRaoultD.ら,N.Engl.J.Med.,2000上で行った。血清を、1:50、1:100、1:200、1:400、および1:800まで希釈した。SDS-PAGEおよびウエスタンブロッティング。SDS-PAGEおよびウエスタンブロッティングを、12ポリアクリルアミド分離ゲルおよび5トランスファーゲルを使用することで改良されたLaemmliの方法で行った。緩衝液0.0625MTris塩酸塩pH8.0、2SDS、52-メルカプトエタノール、10グリセロール、0.02ブロモフェノールブルー中に4mg/mlのタンパク質を含むTropherymawhippelii懸濁液を、100°Cで5分間、加熱した。溶解した抗原を、電気泳動槽MiniProteinII:BioRad,Richmond,Calif中で、8~10mAの一定強度で3~4時間のゲル電気泳動により分離した泳動用緩衝液:25mMTris、192mMグリシン、0.1SDS。タンパク質サイズを、ペプチド量マーカーLowRange;BioRadとの比較により決定した。このように分離された抗原を、ウエスタンブロッティング槽MiniTrans-Blot;BioRad中、50Vの電流で、4°Cで1時間、転写緩衝液2.5mMTris、192mMグリシン、20メタノールを使用してニトロセルロース膜0.45μm孔に移した。転写した後、非特異的結合部位をブロックするために、ニトロセルロース膜を5脱脂粉乳溶液と一晩インキュベートした。その後、膜を3回、PBSで洗浄し、次いで、風乾させた。次いで、膜を、3乳を添加したPBSで1:4に希釈したハイブリドーマ上清または1:100に希釈した患者血清と室温で1時間インキュベートし、次いで、前記のように洗浄した。その後、膜を、3脱脂粉乳を添加したPBSで1:500に希釈したペルオキシダーゼ結合抗マウスIgGヤギ抗体Fab’2フラグメント重鎖および軽鎖:AffiniPure;JacksonImmunoRsearchと室温で1時間インキュベートし、次いで、PBSで洗浄した。特異的抗体の存在を、基質4-クロロ-1-ナフトールを使用してペルオキシダーゼ活性の存在により明らかにした。Mabに対する盲検法。モノクローナル抗体の特異性を、19種類の細菌:12種類のBartonellaすなわち、5種類のB.quintana、B.henselaeMarseille、B.henselaeHouston、B.vinsoniiBaker、B.elizabethae、B.grahamii、B.doshiae、およびB.taylorii、CoxiellaburnetiiNineMileと、本発明者らの研究室において診療試料から単離された様々な6種類の株すなわち、Listeriamonocytogenes、Staphylococcusaureus、Streptococcusbovis、Mycobacteriumavium、CorynebacteriumANF群、およびActinomycesmayeriiに対してMIFにより盲検で評価した。PBSに懸濁し、ウェルを備えるスライドに付着させた後に、Mabと細菌との反応性を、1:100に希釈した腹水を使用して前記のようにMIFにより評価した。患者。15人の患者を試験した。8人の患者は、組織学および/または消化器生検材料のPCRによるT.whippelii増幅により診断された、消化系だけにあるウィップル病に罹患している。7人の患者は、弁生検材料のPCRにより診断された、T.whippeliiにより引き起こされた心内膜炎に罹患している。マウスおよびウサギ。どの抗原が抗体反応により認識されるかを決定するために、5匹のマウスと1匹のウサギにT.whippelii懸濁液を接種した。結果SDS-PAGEプロフィール図1。T.whippeliiのSDS-PAGEから、7つの主要バンドが10、20、80、120、150、170、および200kDaにあることがさらに詳細に分かった。Mabの作製。4種類のハイブリドーマの上清をMIFにより試験した。4種類のハイブリドーマが、T.whippeliiに特異的であることが分かった。1種類のハイブリドーマを、パスツール研究所のCNCM25rueduDocteurRoux,PARIS75724に番号I-2411および識別参照TW17G2で寄託した。患者に対して行った血清学試験。15人の患者のうち13人86.7が陽性の血清学試験結果IgMレベル>1:100を示した。ウスタンブロッティングで観察された抗原プロフィールから、IgGに関する200kDaの主要バンドを含む、いくつかのバンドと反応性があることが分かった図2。100、60、50、および35kDaのタンパク質に対する反応性を含む、いくつかのタンパク質プロフィールをIgMについて同定した図3。免疫化マウスおよび免疫化ウサギに対して行った血清学試験。免疫化マウスおよび免疫化ウサギは、陽性の血清学試験結果IgMレベル>1:100を示した。ウエスタンブロッティングで観察された抗原プロフィールから、マウスとウサギとで反応性が異なり、患者で観察されたものとは異なることが分かった。他方で、主要な反応性が200kDaのバンドで観察された。Mabの特徴付け図2。4種類のMabは、200kDa抗原に特異的な反応性を示した。これは、患者、マウス、およびウサギのウエスタンブロットで既に証明されている。これらのMabは全てIgMとして同定された。認識される抗原は、プロテイナーゼKの作用により破壊された。このことから、抗原はタンパク質であることが分かった。Mabに対する盲検法。4種類のハイブリドーマの腹水は、T.whippeliiのみと反応した。実施例7:TropherymawhippeliirpoB遺伝子の配列TropherymawhippeliirpoB遺伝子の配列を、コンセンサスプライマーを使用する酵素的増幅と直接自動配列決定により決定した。使用したコンセンサスプライマーの配列は、以下の通りであった。配列番号1=5’-TIATGGGIICIAAIATGCA-3’配列番号2=5’-GCCCAICATTCCATITCICC-3’I=イノシンであった。機械的溶解および化学的溶解Fast-PrepBio101により、TropherymawhippeliiTwist-Marseille株CNCMI-2202から抽出したDNAを、以下の実験条件:35回の増幅サイクル各サイクルが、94°C30秒のDNA変性、50°C30秒の初回プライマーハイブリダイゼーション1サイクル当たり-0.1°Cの勾配を含む、次いで、72°C60秒の伸長からなるに組み込んだ。配列番号1および配列番号2の配列を、以下の細菌の以下のアクセッション番号でGenbankに寄託されたペプチド配列のアラインメントにより決定した。Bacillussubtilis,L43593、Bartonellahenselae,AF171070、Borreliaburgdorferi,AE001144、Buchneraaphidicola,Z11913、Chlamydiapneumoniae,AE001593、Chlamydiatrachomatis,AE001304、Coxiellaburnetti,U86688、Escherichiacoli,U76222、Haemophilusinfluenzae,U32733、Helicobacterpylori,E000625、Legionellapneumophila,AF087812、Mycobacteriumleprae,Z14314、Mycobacteriumsmegmatis,U24494、Mycobacteriumtuberculosis,L27989、Mycoplasmagallisepticum,L38402、Mycoplasmagenitalium,U39715、Mycoplasmapneumonlae,AE000030、Neisseriameningitidis,Z54353、Pseudomonasputida,X15849、Rickettsiaprowazekii,AF034531、Rickettsiatyphi,P77941、Salmonellaentericatyphimurium,X04642、Spiroplasmacitri,U25815、Staphylococcusaureus,U970062、Synechocystisspp.,D90905、Thermotogamaritima,X72695、Treponemapallidum,AE001205、およびHumanGranulocyticEhrlichiosisagent,AF237414。配列番号1および配列番号2を配列、これらの配列がTropherymawhippeliiにも存在すると仮定して、最も保存されている配列を選択することにより選択した。プライマー配列番号1および配列番号2を使用して得られた、配列番号3に対応する、TropherymawhippeliiGenbankアクセッション番号AF243072rpoB遺伝子の部分配列は、以下の通りである。BASE157a117c176g150tその他12実施例8:TropherymawhippeliirpoB遺伝子の特異的検出Tropherymawhippeliiに特異的な以下の配列:配列番号4:5’-GCATTGTGGGGGATGTTT-3’配列番号5:5’-TTGGGGTCACCTTACCAA-3’を、フラグメント配列番号3から選択した。選択した配列は、Genbankに列挙された前記28種類の細菌のrpoB遺伝子の既知配列と比較して、Tropherymawhippeliiに特異的な配列である。実施例9:TropherymawhippeliirpoB遺伝子の特異的増幅TropherymawhippeliirpoB遺伝子を、35回の増幅サイクル各サイクルが、94°C30秒の変性段階、52°C30秒のプライマー配列番号4と配列番号5のハイブリダイゼーション段階、72°C90秒の伸長段階からなるを使用するPCR技術により増幅した。増幅産物を、臭化エチジウム染色後に視覚化した図4。対照細菌すなわち、Mycobacteriumavium、Mycobacteriumtuberculosis、Nocardiaotitidiscaviarum、Escherichiacoli、Staphylococcuseperdimilis、およびCorynebacteriumamycolatumは検出されなかった。このことから、試験したプライマーの特異性が証明された。Tropherymawhippeliiとの遺伝子類似性のために、または予想される汚染菌としてTropherymawhippelii検出のために提出された臨床スワブに存在するために、以下のアクセッション番号でGenbankに寄託された、これらの対照種のrpoB配列:MycobacteriumaviumATCC25291,AF060336、Mycobacteriumtuberculosis,U12205、およびEscherichiacoliK-12,U77436を選択した。"