"aβ1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合して、レセプターに結合したβ1,3グルカンの一次複合体を生成するために好適な条件下で、β1,3グルカンを含有する試料を該レセプターと接触させる工程;b前記一次複合体を単離する工程;及びc前記一次複合体からβ1,3グルカンを得る工程;を含む、試料から、β1,3グルカンを単離する方法。蛋白様レセプターが、固相に連結されてなる、請求項1の方法。固相が、フィルター、膜、ビーズ、粒子、有機樹脂、マイクロタイタプレート及びスライドからなる群より選択される、請求項2の方法。aβ1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合して、レセプターに結合したβ1,3グルカンの一次複合体を生成するために好適な条件下で、β1,3グルカン含有生物を含有する試料を該レセプターと接触させる工程;b前記一次複合体を単離する工程;及びc前記一次複合体からβ1,3グルカン含有生物を得る工程;を含む、試料から、β1,3グルカンを単離する方法。aβ1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合して、レセプターに結合したβ1,3グルカンの一次複合体を生成するために好適な条件下で、β1,3グルカンの存在を探査しようとする試料を、該レセプターと接触させる工程;及びb工程aにおいて生成した一次複合体を検出する工程;を含み、一次複合体の存在が、試料中のβ1,3グルカンの存在を示す、試料中のβ1,3グルカンの存在を検出する方法。蛋白様レセプターが、固相に結合してなる、請求項5の方法。固相が、フィルター、膜、ビーズ、粒子、有機樹脂、マイクロタイタプレート及びスライドからなる群より選択される、請求項6の方法。試料が、固相に結合してなる、請求項5の方法。固相が、フィルター、膜、ビーズ、粒子、有機樹脂、マイクロタイタプレート及びスライドからなる群より選択される、請求項8の方法。試料が、動物由来である、請求項5の方法。試料が、生物学的流体である、請求項10の方法。試料が、植物由来である、請求項5の方法。試料が、環境由来である、請求項5の方法。試料が、食物由来である、請求項5の方法。試料が、発酵由来である、請求項5の方法。一次複合体が、検出可能な標識で検出される、請求項5の方法。検出可能な標識が、放射性ヌクレオチド、染料、蛍光化合物、ビオチン及びストレプタヴィジンからなる群より選択される請求項16の方法。一次複合体が、抗体で検出される、請求項5の方法。前記抗体が、β1,3グルカンに対する抗体である、請求項18の方法。前記抗体が、レセプターに対する抗体である、請求項18の方法。aβ1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合して、レセプターに結合したβ1,3グルカン含有生物の一次複合体を生成するために好適な条件下で、β1,3グルカン含有生物の存在を探査しようとする試料を、該レセプターと接触させる工程;及びb工程aにおいて生成した一次複合体を検出する工程;を含み、一次複合体の存在が、試料中のβ1,3グルカン含有生物の存在を示す、試料中のβ1,3グルカン含有生物の存在を検出する方法。aβ1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合して、レセプターに結合したβ1,3グルカンの一次複合体を生成するために好適な条件下で、被験試料を、該レセプターと接触させる工程;b工程aにおいて生成した一次複合体を単離する工程;及びc前記一次複合体を定量する工程;を含み、試料中のβ1,3グルカンの量が、一次複合体の量と相関する、試料中のβ1,3グルカンの量を定量する方法。aβ1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合して、レセプターに結合した、非誘導化水溶性β1,3グルカンの一次複合体を生成するために好適な条件下で、被験試料を、該レセプター及び標識され、非誘導化水溶性β1,3グルカンと接触させる工程;及びb工程aにおいて生成した一次複合体の量を測定する工程;を含み、試料中のβ1,3グルカンの量が、一次複合体の量と反比例する、試料中のβ1,3グルカンの量を定量する方法。aβ1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合して、レセプターに結合したβ1,3グルカンの一次複合体を生成するために好適な条件下で、個体由来の試料を、該レセプターと接触させる工程;及びb工程aにおいて生成した一次複合体を検出する工程;を含み、一次複合体の存在が、β1,3グルカン含有生物による感染を示す、β1,3グルカン含有生物による感染を診断する方法。NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターと、非誘導化水溶性β1,3グルカンに対する抗体とを含む、β1,3グルカンの存在の検出に有用なキット。a非誘導化水溶性β1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合するために好適な条件下で、放射性同位元素標識された、非誘導化水溶性β1,3グルカンと、該レセプターと、及び被験物質とを混合する工程;b該レセプターへの、非誘導化水溶性β1,3グルカンの結合の程度を測定する工程;及びc工程bで測定した結合程度と、非誘導化水溶性β1,3グルカンが、該レセプターに結合するために好適な条件下における、被験物質の非存在下での結合程度とを比較する工程;を含み、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、該蛋白様レセプターへの結合の程度の低減により、前記物質が、該レセプターに対して親和性を有することを示す、該蛋白様レセプターに対して親和性を有する物質を同定するためのアッセイ。前記レセプターが、非誘導化水溶性β1,3グルカンに対する親和性を有する化合物である、請求項26のアッセイ。前記化合物が、レセプターアナログまたはレセプター偽剤である、請求項27のアッセイ。a非誘導化水溶性β1,3グルカンが、NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターに結合するために好適な条件下で、非誘導化水溶性β1,3グルカンと、該蛋白様レセプターと、及び被験物質とを混合する工程;bシグナル伝達経路の活性化の程度を測定する工程;及びc工程bで測定した活性化の程度と、非誘導化水溶性β1,3グルカンが、該レセプターに結合するために好適な条件下における、被験物質の非存在下での活性化の程度とを比較する工程;を含み、シグナル伝達経路の活性化の程度における相違により、前記物質が、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、シグナル伝達経路の活性化に及ぼす作用を変化させることを示す、非誘導化水溶性β1,3グルカンのシグナル伝達経路に対する作用を変化させる物質を同定するためのアッセイ。活性化の程度が、前記物質のない場合よりも該物質の存在下において高いならば、該物質が、単一の導入経路の活性化における非誘導化水溶性β1,3グルカンの作用を増強する、請求項29のアッセイ。活性化の程度が、前記物質のない場合よりも該物質の存在下において低いならば、該物質が、単一の導入経路の活性化における非誘導化水溶性β1,3グルカンの作用を低減する、請求項29のアッセイ。シグナル伝達経路の活性化が、少なくとも一の転写制御因子のモジュレーションによって測定される、請求項29のアッセイ。転写制御因子が、NFκB、NFIL6及び/またはAP1ファミリーの構成員からなる群より選択される、請求項32のアッセイ。工程bが、前記転写制御因子に対して特異的な32P標識DNAオリゴヌクレオチドによって行われる、請求項29のアッセイ。前記レセプターが、非誘導化水溶性β1,3グルカンに対して親和性を有する化合物である、請求項29のアッセイ。前記化合物が、レセプターアナログまたはレセプター偽剤である、請求項35のアッセイ。NR8383マクロファージに由来する非誘導化水溶性β1,3グルカンの蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターを含有する細胞を、該蛋白様レセプターと結合し、活性化する物質と接触させることを含み、該蛋白様レセプターが活性化され、これによってシグナル伝達経路が活性化される、該蛋白様レセプターを含有する細胞中のシグナル伝達経路を活性化する方法。シグナル伝達経路の活性化が、少なくとも一の転写制御因子のモジュレーションによって測定される、請求項37の方法。転写制御因子が、NFκB、NFIL6及び/またはAP1ファミリーの構成員からなる群より選択される、請求項38の方法。前記物質が、非誘導化水溶性β1,3グルカンである、請求項37の方法。前記レセプターが、非誘導化水溶性β1,3グルカンに対して親和性を有する化合物である、請求項37の方法。前記化合物が、レセプターアナログまたはレセプター偽剤である、請求項41の方法。非誘導化水溶性β1,3グルカンであるリガンドに結合するNR8383マクロファージに由来する蛋白様レセプターであって、非誘導化水溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で低分子量可溶性β1,3グルカンに結合し且つ極高分子量可溶性β1,3グルカンよりも高い親和性で非誘導化水溶性β1,3グルカンに結合する蛋白様レセプターを含有する、単離調製物。前記レセプターが、特異的且つ選択的にリガンドを結合する、請求項43の調製物。非誘導化水溶性β1,3グルカンが、三重螺旋構造をとる、請求項43の調製物。残念ながら、各グループは、その起源、調製方法、純度及び特徴が大幅に異なるβグルカン調製物を使用している。さらに、これらのβグルカンと標的細胞との間の相互作用の生物学及び生物化学を特徴付けるために、異なる細胞タイプ及び種、一次と株化の両方の細胞系列、及び異なる機能読み出しが使用されている。然るに、Czopによって記載されたレセプターがCR3でないことは明らかであるSzaboetalが、これらの研究者によって記載された多様なレセプターの間の関係は定義されていない。本発明は、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンが、ラットのNR8383マクロファージに位置する新規なレセプターを特異的に活性化するとの発見に関連する。ここに記載するとおり、放射性同位元素標識された、非誘導化水溶性β1,3グルカンを、ラットNR8383細胞から誘導された膜レセプターへの、このβグルカンの結合を測定するために使用した。非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターは、タンパク質であり、膜への特定且つ飽和可能な結合を示し、可溶性βグルカンのサブクラスについて高度に選択的である。ここに記載した研究結果は、この、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターを特徴付け、粒状または可溶性βグルカンについて周知のβグルカンレセプターと明確に区別し、その一方で、非誘導化水溶性β1,3グルカンの生物学的活性の機構についての、重要な情報を明らかにするものである。本発明は、ここに記載したレセプターを含有する単離調製物に関する。さらに、本発明は、β1,3グルカン並びにβ1,3グルカン含有生物を、単離、濃縮、もしくは精製する方法に関し、さらに、試験試料中のβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物の量を定量するためのアッセイにも関する。試験試料は、流体もしくは固体であってよく、動物由来例えば、血液、血清、血漿、尿、便、粘膜、痰、胆汁、腹水、創傷分泌物、腟排出物、滑液、脳脊髄液、腹膜洗浄液、肺洗浄液、眼液ocularfluid、唾液もしくは全組織抽出物等の生物学的流体;あるいはまた、試験試料は、皮膚もしくは他の組織等の固形標本;植物由来植物組織、植物組織抽出物、果実もしくは果実抽出物、種子もしくは種子抽出物、樹液、もしくはホモジナート;微生物由来;ウィルス細胞;菌細胞;組織培養物;環境由来;食物由来;または発酵工程由来の複合物を含む多様な起源のものであって良い。本発明の方法においては、ここに記載のレセプターは、試験試料から、β1,3グルカン及び/またはβ1,3グルカン含有生物を捕捉もしくは精製するために使用されている。前記β1,3グルカンレセプターもしくは試験試料は、固相もしくは流体相に連結もしくは結合可能である。試験試料は、試験試料中に存在しうるあらゆるβ1,3グルカンがレセプターに結合し;そこで得られるβ1,3グルカンとレセプターとの複合体一次複合体を単離することができ、よってβ1,3グルカンを単離することのために好適な条件下でレセプターと接触させられる。別の実施態様では、一次複合体の存在がβ1,3グルカンまたはβ1,3グルカン含有生物の存在を示すため、試験試料中のβ1,3グルカンまたはβ1,3グルカン含有生物を検出するために、一次複合体を検出することも可能である。別の実施態様では、試験試料中のβ1,3グルカンの量が、放射性同位元素標識された非誘導化水溶性β1,3グルカンとレセプターとの複合体の量に反比例するため、β1,3グルカンの存在は競争アッセイにより検出可能であり、ここでは放射性同位元素標識された非誘導化水溶性β1,3グルカンとレセプターとが、試験試料と共にインキュベートされる。試験試料中のβ1,3グルカンまたはβ1,3グルカン含有生物の存在は、菌感染または菌汚染を示す。これらの方法及びアッセイ、並びにキットに使用可能な抗体もまた、本発明の範囲内である。本発明はまた、シグナル伝達経路を変化させる例えば活性化もしくは不活性化する方法、例えばレセプターポジティブ細胞、すなわち非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターを含有する細胞において、一以上の転写制御因子のモジュレーションを経るものにも関連する。本発明の一の実施態様においては、シグナル伝達経路が、NFκB、NFIL6及び/またはAP1の転写制御因子ファミリーからの一以上の転写制御因子によってモジュレーションもしくは制御される。本発明の方法により変化されうる、別のシグナル伝達経路には、ras/raf1/MAPキナーゼERK経路、G蛋白質/ホスホリパーゼC/プロテインキナーゼC経路、非G蛋白質/ホスホリパーゼC/プロテインキナーゼC経路、JAK/STAT経路、ホスホリパーゼA経路、G蛋白質/ホスホリパーゼD/ホスファチジン酸経路、cAMP依存経路、cJunN末端キナーゼJNK、ストレス活性化プロテインキナーゼSAPKとしても既知経路、IκBキナーゼαIKKα経路、蛋白質チロシンキナーゼ経路、及び酸素ラジカル経路が含まれる。各経路において、シグナル経路の好適な活性化物質または指示薬は、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、そのレセプターへの結合によって活性化され、この結合のモジュレーションが、対応するシグナル伝達を変化させることができる。本発明の方法によれば、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターの活性は、非誘導化水溶性β1,3グルカンもしくは非誘導化水溶性β1,3グルカン活性を擬態する物質の結合によって活性化され、これによりシグナル伝達工程が活性化されて、一以上の転写制御因子例えば、NFκB、NFIL6及び/またはAP1の転写制御因子ファミリーからのものが活性化される。これらの転写制御因子もしくは、転写因子活性化の経路中の酵素ここでは経路酵素と呼称の活性化は、結合したシグナル伝達経路の活性化を測定するために使用可能である。レセプターの活性化は、他の事項に加え、レセプターコンフォメーションにおける変化、リガンドレセプター複合体の生成、またはリガンドレセプター複合体の変化を含みうる。レセプターの活動は、非誘導化水溶性β1,3グルカンの結合及び活性化能を擬態する物質、例えばグルカンの別の型によって開始可能である。独特の実施態様では、転写制御因子が、リガンド結合の結果として活性化される。別の実施態様では、転写制御因子の活性は、レセプターに結合する然るに非誘導化水溶性β1,3グルカンが排除されるが、レセプターを活性化する能力には欠ける物質によって部分的または完全に低減される。本発明はまた、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターへの結合を変化例えば増大または低減させる物質を同定するためのアッセイに関する。前記アッセイには、非誘導化水溶性β1,3グルカンがそのレセプターに結合するために好適な条件下で、放射性同位元素標識された、非誘導化水溶性β1,3グルカンと、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターと、及び被験物質とを混合する工程が含まれる。被験物質存在下における非誘導化水溶性β1,3グルカンのそのレセプターへの結合の程度は、測定され、被験物質の非存在下における結合の程度と比較され;結合の程度の差により、前記物質が非誘導化水溶性β1,3グルカンのそのレセプターへの結合を変化させることが示される。前記物質の存在下における結合程度の増大は、前記物質が、結合を促進、即ち延長または増強している、または非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターのアゴニストであることを示す。前記物質の存在下における結合程度の減少は、前記物質が、結合を縮小、即ち短縮または減少させている、または非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターのアンタゴニストであることを示す。本発明はまた、ここに記載のアッセイによって同定された物質にも関し、よって、非誘導化水溶性β1,3グルカン活性のアゴニスト及びアンタゴニストにも関する。本発明はまた、非誘導化水溶性β1,3グルカンが細胞シグナル伝達経路に及ぼす作用、例えば転写制御因子の活性化を変化例えば増加または減少させる物質を同定するための新規なアッセイにも関する。このアッセイには、非誘導化水溶性β1,3グルカンのそのレセプターへの結合が起こる条件すなわち非誘導化水溶性β1,3グルカンが、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターに結合するために好適な条件の下で、非誘導化水溶性β1,3グルカンと、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターと、及び被験物質とを混合する工程が含まれる。非誘導化水溶性β1,3グルカンのそのレセプターへの結合により、該レセプターが活性化され、これが今度は、転写制御経路のそれぞれのシグナル伝達経路において、NFκB、NFIL6及び/またはAP1ファミリーからのもしくは酵素等の、一以上の転写制御因子のモジュレーションによって例示もしくは測定される通りシグナル伝達を活性化する。被験物質の存在下での、選択された転写制御因子もしくは経路酵素の活性化の程度を測定し、被験物質の非存在下における、選択された転写制御因子もしくは経路酵素の活性化の程度と比較する。活性化の程度の差異により、前記物質が、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、転写制御因子もしくは経路酵素の活性化に及ぼす作用を変化させることが示される。前記物質の存在下における転写制御因子もしくは経路酵素の活性化における増大は、前記物質が、活性化を促進、即ち延長または増強していることを示す。前記物質の存在下における転写制御因子もしくは経路酵素の活性化の減少は、前記物質が、活性化を縮小、即ち短縮または減少させていることを示す。本発明のアッセイ及び方法は、感染症、炎症、自己免疫疾患、虚血再灌流障害、癌、喘息及び過敏性疾患の治療に使用される物質及び薬剤を同定するために使用可能である。ここに記載のアッセイ及び方法はまた、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカン作用を延長もしくは擬態する薬剤を同定するために使用可能であり、これにより、例えば炎症、造血、感染症の予防及び治療、血小板生成、末梢血液前駆体細胞援動及び創傷治癒等の非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンが使用可能なあらゆる治療もしくは予防向けの応用において使用可能である。これらの物質もしくは薬剤は、例えばグルカンのそのレセプターへの結合を延長すること、もしくはその効果によって、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンの作用を増大させる働きをする。本発明はまた、これらに限定されるものではないが、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンのレセプター上での非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンの結合部位について設計されたペプチドもしくは有機小分子にも関する。一つの実施態様においては、こうした物質もしくは薬剤は、非誘導化水溶性β1,3グルカンレセプターと結合するレセプター結合部位の活性を擬態し、よってレセプターへの結合に利用可能なβ1,3グルカンの量を減少させ、シグナル伝達などの下流の出来事の活性化を減ずるように設計可能である。本発明はまた、非誘導化水溶性β1,3グルカン活性の、その結合及び非誘導化水溶性β1,3グルカンの活性化に関するアゴニストもしくは擬剤、例えばグルカンの別の型にも関する。あるいはまた、前記物質もしくは薬剤は、レセプター結合部位に結合し、これを非誘導化水溶性β1,3グルカンによる結合に利用不可能とするように設計可能であるため、本発明は、非誘導化水溶性β1,3グルカン結合活性のアンタゴニストにも関する。ここに記載の研究は、多くの領域に応用を有する。例えば。これは非誘導化水溶性β1,3グルカン製造方法のモニタリング及び市販用発売のための製品特徴付けにおいて、流体中のβグルカンの測定し、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターと相互作用する物質の構造-活性関係を検定及び決定するために使用可能である。さらに、この研究は、薬剤及び小分子を含む多様な物質の、多形核白血球、単核細胞、マクロファージ及び上皮細胞などのレセプターポジティブ細胞への標的を定めた送達にも応用を有する。ここに記載の結果はまた、精製スキームにおいてはレセプターポジティブ細胞及びレセプターネガティブ細胞の両方について、並びにアンチレセプター抗体の生成においては診断目的に使用可能である。さらにまた、本発明の方法及びアッセイは、試験試料中のβ1,3グルカンの、特異的且つ高度に感受性の検出を可能にし、高価な装備もしくは熟練した人員を要せずに真菌血症の診断及び菌汚染の検出を容易にする。本発明の、前述の、及び他の目的、特徴及び利点は、添付の図面に示したように、以下の、本発明の好ましい実施態様のより詳細な説明から明確になるであろう。本発明は、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカン1992年8月21日に出願された米国特許出願第07/934,015号を参照のこと。その教示は、ここに参照のため取り込むこととする。がラットのNR8383マクロファージに位置する新規なレセプターに特異的に結合するとの発見に関連する。非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンはまた、米国特許出願第08/400,488号、同08/432,303号、同07/934,015号及び同08/469,233号並びに、米国特許公報第5,322,841号、同5,488,040号、同5,532,223号及び同5,783,569号にも記載されているこれら全ての教示を、参照のためここに取り込むこととする。ここに記載の研究結果は、この、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンTHグルカンとしても既知のレセプターを特徴付け、周知のβグルカンレセプターと明確に区別する一方で、非誘導化水溶性β1,3グルカンの生物学的活性の機構についての、重要な情報を明らかにするものである。非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンのレセプターは、主としてラットNR8383マクロファージ、とりわけ槽マクロファージ中に位置する。ここに用いる通り、レセプターは従来のレセプター分子並びに結合部位を包含することを企図するが、こうした結合部位が、それ自体の作用を有することができ、または第二の分子もしくは結合部位を活性化して効果第二部位のアンマスキングとしても既知SandbergetalInfectImmun6326252631を生み出すためである。ここに用いるとおり、レセプターはまた、非誘導化水溶性β1,3グルカンに対して親和性を有する化合物を包含することを企図するが、これらの化合物は、レセプター擬剤もしくはレセプターアナログであってよく、天然の産出源から単離可能、あるいは科学的もしくは合成によりに産出可能である。NR8383レセプター、NR8383細胞上のレセプター及びNR8383細胞由来のレセプターなる語は、上述のレセプターを意味し、これは以下に説明するNR8383細胞上に同定されるレセプターの、所定の特徴、例えば蛋白様組成、膜との結合、所定の結合親和性、温度感受性、β-グルカン選択性、トリプシン感受性及び/または転写因子の活性化等を有する。レセプターここでは、蛋白質レセプターもしくは蛋白様レセプターとも呼称は、NR8383細胞並びに他のタイプの細胞上に存在可能であり、単離即ち、細胞から分離することも可能である。NR8383細胞については、例えば、HelmkeRJetalInVitroCellBevelopBiol23567574HelmkeRJetalInVitroCellDevelopBiol254448が参照される。三重螺旋構造をとる、標識非誘導化水溶性β1,3グルカンの、NR8383細胞におけるレセプターへの結合は、特異的且つ飽和可能であり、二部位モデルによって、45pM及び170pMの親和性で行われた。さらに、R8383細胞における、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターへの結合は、4°Cもしくは37°Cのいずれにおいても起こった。標識した非誘導化水溶性β1,3グルカンTHグルカンと、低分子量LMWグルカン約8,000-120,000ダルトン及び極高分子量VHMWグルカンおよそ1,000,000ダルトンより大、並びに三重螺旋構造をとる非標識非誘導化水溶性β1,3グルカンとは、競争的にNR8383レセプターに結合したが、スクレログルカンはしなかった。非誘導化水溶性β1,3グルカンのNR8383細胞上のレセプターへの結合は、トリプシンを用いた予備処理によって破壊されるが、結合活性の回復は蛋白質合成に依存しており、NR8383が蛋白質であることを示した。NR8383細胞においては、LMWグルカン及びVHMWグルカンスクレログルカンではないがNFκB様因子の活性化を誘発したが、非誘導化水溶性β1,3グルカンが、MAPキナーゼJNK及びシグナルサムキナーゼIKKαのプロテインキナーゼを刺激した一方でMAPキナーゼERK1/2もしくはp38のプロテインキナーゼは刺激しなかった。以下の実施例中に記載したとおり、NR8383細胞中のレセプターのこれらの特徴は、他の、既に同定された非誘導化水溶性β1,3グルカンレセプターとは、親和性、温度感受性、βグルカン選択性及びトリプシン感受性において相違する。したがって、NR8383細胞のレセプターは、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、これまで同定されていなかったレセプターを表す。したがって、本発明は、ここに記載した蛋白様レセプターを含有する単離調製物であって、これは、三重螺旋型の非誘導化水溶性β1,3グルカン等の非誘導化水溶性β1,3グルカンであるリガンドに結合例えば、特異的及び選択的にするものである。酵母もしくは菌不溶性β1,3グルカンを含むβ1,3グルカンを捕捉、濃縮または精製する方法、並びに、β1,3グルカン含有微生物を捕捉、濃縮または精製する方法が、NR8383細胞由来のレセプターを使用して、今や利用可能である。さらに、試験試料中のβ1,3グルカンの量を定量するアッセイをここに記載したが、これらのアッセイは、菌感染の診断に利用可能である。前記アッセイ及び方法に有用なキットもまた記載した。前記方法、アッセイ及びキットは、β1,3グルカン等の可溶性β1,3グルカン及びグルカンの別の型例えば、LMWグルカン、HMWグルカン、及びVHMWグルカンについて、上述のβ1,3グルカンレセプターの親和性を利用する。本発明の方法によれば、菌またはβ1,3グルカン含有生物を含有することが既知もしくは想定される試料が得られる。試験試料は、液体もしくは固体であって良く、動物由来例えば、ほ乳類の細胞または組織;植物細胞もしくは組織、微生物細胞、ウィルス細胞、菌細胞、組織培養物、環境由来、食物由来、または発酵工程由来の複合物を含む多様な起源のものであって良い。例えば、試験試料が、菌感染が疑われる人の個体起源のものなどの動物由来である場合、試験試料は、血液全血、全血清または全血漿、尿、便、粘膜、痰、胆汁、腹水、創傷分泌物、腟排出物、滑液、脳脊髄液、腹膜洗浄液、肺洗浄液、眼液、唾液もしくは全組織抽出物等のなどの生物学的流体であって良く、あるいはまた、試験試料は、皮膚もしくは他の組織等の固形標本であっても良い。菌感染が疑われる個体が、免疫無防備状態である場合は、好ましい試験試料は尿試料である。試料が植物由来である場合、これは、植物組織、植物組織抽出物、果実もしくは果実抽出物、種子もしくは種子抽出物、樹液、もしくは植物ホモジナート等の流体もしくは固形標本であって良い。試験試料はまた、水、土壌もしくは土壌抽出物等の環境由来、あるいは調製食品などの食物由来のものであって、菌汚染の恐れのあるものであると良い。あるいはまた、試験試料は、発酵肉汁などの発酵工程起源の試料であってもよい。試験試料が、蛋白質を豊富に含有する場合は、本発明のアッセイを行う前に、標準トリクロロ酢酸もしくは過塩素酸沈降法または標準的な70エタノール沈降法を使用する沈降などの脱蛋白質工程を実行可能であるMethodsinEnzymologyVol182GuidetoProteinPurification。しかしながら、こうした工程は、本発明の方法の実行に必要ではない。本発明の方法においては、ここに記載の蛋白様レセプターは、試験試料からのβ1,3グルカン及び/またはβ1,3グルカン含有生物の捕捉または精製に使用される。本発明のこの方法の一の態様においては、前記レセプターは固相例えば、フィルター、セルロースもしくはニトロセルロースなどの膜、プラスチック例えばマイクロタイタプレート、ディップスティック、ガラス例えばスライド、ビーズ例えば、ラテックスビーズ、粒子、有機樹脂、もしくは非有機固相または流体例えば、TRIS緩衝液またはリン酸緩衝液相に連結可能である。固相もしくは流体相へのレセプターの結合は、例えば空気乾燥、熱乾燥、または化学反応を含む従来法によって達成可能である。当該方法のこの態様においては、試験試料を、試験試料中に存在しうるあらゆるβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物のレセプターへの結合に好適な条件下で、固相もしくは流体相に結合したレセプターと接触させる。レセプター二結合したβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物は、ここでは一次複合体と呼称される。一次複合体の生成は、β1,3グルカン、もしくはβ1,3グルカン含有生物が試験試料から捕捉されたことを示す。試験試料から捕捉されたβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物は、レセプターに結合したβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物である。本発明の別の実施態様では、試験試料は、試験試料中に固形支持体を浸すこと、流体試験試料を固形支持体に滴下すること、もしくは固形支持体上に固形試験試料を塗りつけることによって、固形支持体に結合例えば吸収、被覆、結合、共有結合による結合、親和力による結合可能である。所望により、試験試料は、例えば固形試験試料である場合には、固形支持体との結合に先立ち、食塩水もしくは他の適当な生物学的緩衝液等の液体と混合可能である。試験試料を固形支持体に結合させた結合試験試料の生成後、試験試料中に存在しうるあらゆるβ1,3グルカンのレセプターへの結合に好適な条件下で、レセプターを結合試験試料に接触させる。結合試験試料中であらゆるβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物に結合したレセプターもまた、一次複合体と呼称する。この方法のいずれの実施態様においても、生成したあらゆる一次複合体を単離し、試験試料からβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物を得ること、の単離すること、濃縮することもしくは精製することが可能である。一次複合体を、免疫沈降反応もしくは他の方法等の定法によって得、もしくは単離し、濃縮もしくは精製した一次複合体を生成し、ここから定法CurrentProtocolsinMolecularBiologyVolIICh10553560HossaiMAetalJClinLabAnal117377ObayashiTetalJMedVetMycology30275280、各教示は参照のためにここに取り込むこととする等による、β1,3グルカンによって沈降させた酵素反応の検出;βグルカンと反応する酵素の使用;または他の手段を含む、多様な方法が使用可能である。好ましい実施態様では、LimuluslysateG因子アッセイを使用する。該方法の部油の好ましい実施態様では、一次複合体は、放射性ヌクレオチド例えばラジオイムノアッセイ、染料、蛍光化合物、ビオチン及びストレプタヴィジン等のレセプター上で検出可能な標識の使用によって検出される。所望により、一次複合体の量は、既知のβ1,3グルカン標準で生じる標準曲線と比較することができる。本発明の別の実施態様では、競争アッセイを使用して、試験試料中に存在するβ1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物の量を決定することができる。例えば、標識された例えば、放射性ヌクレオチド、染料、または蛍光性標識によって非誘導化水溶性ベータ1,3グルカン、または低分子量LMWグルカン約8,000-120,000ダルトン、MALLSにより決定、高分子量HMWグルカンおよそ210,000より大、1,000,000より小、MALLSにより決定もしくは極高分子量VHMWグルカンおよそ1,000,000ダルトンより大、MALLSにより決定等の他の可溶性β1,3グルカンを、非誘導化水溶性β1,3グルカンがその結合剤に結合するために好適な条件下で、ここに記載の蛋白様レセプター及び試験試料と共にインキュベートする。次いで、標識された非誘導化水溶性β1,3グルカンを含有する一次複合体の量が決定される。この量を、コントロール試料すなわち、非標識β1,3グルカンの規定量を有する試料もしくは一連のコントロール試料例えば標準曲線中で、標識化非誘導化水溶性β1,3グルカンをレセプターと共にインキュベートすることにより生成する一次複合体の量と比較する。試験試料中のβ1,3グルカンの量は、標識された非誘導化水溶性β1,3グルカンを含有する一次複合体の量と反比例する。β1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物の存在の検出及び定量は、真菌血症もしくは菌感染症の診断において有用である。固体において菌感染症を診断するためには、例えば、生物学的流体試料等の試料を個体から得る。該試料を、上述の通りβ1,3グルカンの存在について調べる。試験試料中のβ1,3グルカンの存在は、菌細胞壁の構成要素の存在を示し、よって菌の存在もしくは汚染、または感染を示す。同様に、環境由来もしくは食物由来の試料中のβ1,3グルカンの存在は、菌の存在もしくは汚染を示す。さらに、β1,3グルカンもしくはβ1,3グルカン含有生物の量の定量により、感染もしくは汚染の深刻さに関する情報を提供可能である。本発明の方法及びアッセイは、試験試料中のβ1,3グルカンの存在の正確且つ特異的な同定を提供し、よって菌感染及び汚染の診断及び治療を容易にする。さらに、ここに記載の研究の結果として、非誘導化水溶性β1,3グルカン製造方法をモニターし、生成物を特徴付けることができる。換言すれば、試験試料は、標準的な競争レセプター結合アッセイに含めることができ、当該分子のレセプターに対する相対的親和性に関しての特徴付けができる。この特徴付けは、以下の特徴の幾つかもしくは全てについて、情報を得るであろう:バッチ毎の品質、特定の型のβ1,3グルカンとしての生成物の同定、及び生成物の精製。試験試料はまた、標準的捕捉もしくは競争アッセイに含めることができ、標準試料と比較して構造-活性関係を明らかにすることができる。あるいはまた、試験試料結合を、放射線同位元素標識後に直接試験することができる。試料を、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンレセプター仲介アッセイにおいて試験することもでき、これらの機能の抑制または刺激について試験する。例えば、こうしたアッセイは、ポリマーもしくは小分子レセプターアゴニストの発生において、もしくは不適切な免疫増強を抑制するためのレセプターアンタゴニストの発生、例えば免疫抑制治療の間に日和見菌感染の結果として起こりうる移植拒絶反応の回避のために使用可能である。ここに開示した発見はまた、レセプターポジティブ細胞への様々な物質の標的を定めた送達のために使用可能である。例えば、多様な物質が、マクロファージなどのレセプターポジティブ細胞を標的としうる接合分子の生成のため、非誘導化水溶性β1,3グルカンに接合例えば、化学的接合、架橋もしくは共有結合可能である。こうした標的を定めた送達システムは、耐性細胞内病原菌例えば、ミコバクテリウム、リーシュマニア、マラリアのための抗菌剤、レセプターポジティブ白血病のための細胞、遺伝子治療例えば、サイトカイン生成の増進もしくは機能不全性酵素の置き換えのための遺伝子、または特定の抗体もしくはT細胞活性化の提示及び発生を増進するための抗原等の物質の送達を増進するために使用可能である。非誘導化水溶性β1,3グルカンの、そのレセプターへの結合特異性により、レセプターポジティブ及びレセプターネガティブすなわち、レセプターを含まないの細胞両方の精製方法が提供される。例えば、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンは、固形マトリックスに付着させてアフィニティマトリックスとして使用し、レセプターポジティブ細胞を陽性選択するか、レセプターネガティブ細胞を陰性選択することが可能である。同様に、アンチレセプター抗体は、非誘導化水溶性β1,3グルカンの代わりに使用可能である。この方法によって精製された細胞は、細胞療法における使用に拡張可能である。さらにまた、本発明は、診断目的のアンチレセプター抗体の生成を可能にする。モノクローナルもしくはポリクローナル抗体は、特殊添加もしくは精製したレセプター調製物を使用し、定法によって製造可能である。したがって、本発明はまた、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターに結合する抗体にも関する。例えば、記載のレセプターに結合するポリクローナル及びモノクローナル抗体は、本発明の範囲内である。マウス、ハムスター、ヤギまたはウサギ等のほ乳類を、免疫抗原形態のレセプターすなわち、抗体反応を誘発することのできるレセプターの抗原性部分を用いて免疫化可能である。免疫抗原性を与えるための技術には、例えば、担体への接合または当業界において周知の別の技術が含まれる。抗原は、補助剤の存在下で投与可能であり、免疫化の進行は、血清もしくは血漿中の抗体滴定量の検出によりモニター可能である。標準ELISAもしくは他のイムノアッセイを、抗原としての免疫抗原と共に使用して、抗体のレベルを検定可能である。ここに記載の蛋白様レセプターに対する抗体は、例えば、CurrentProtocolsinImmunologyに記載のもの等の定法によって製造可能である。こうした抗体は、疾患病理学例えば潜在的菌感染もしくは白血病への反応を反映する、レセプターポジティブもしくはレセプターポジティブ細胞の数における変化を同定するために使用可能である。本発明はまた、レセプターポジティブ細胞、すなわち、ここに記載の非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターを含有する細胞における、例えば転写制御因子もしくはシグナル伝達酵素経路酵素の調整による、シグナル伝達経路のモジュレーション例えば、活性化もしくは不活性化の方法にも関する。本発明の一の実施態様においては、転写制御因子が、NFκB、NFIL6及び/またはAP1ファミリーの転写制御因子由来のものである。例えば、転写制御因子は、NFκB、NFIL6及び/またはAP1であってよい。本発明の方法によれば、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンのレセプターの活性は、非誘導化水溶性ベータ1,3グルカンの結合によって活性化され、それでシグナル伝達経路例えば、酵素のカスケードから成るが活性化され、そのため転写制御因子例えば、NFκB、NFIL6及び/またはAP1ファミリー由来によって制御される。レセプターの活性化は、他と共にレセプター型の変化、リガンド-レセプター複合体の生成、もしくはリガンド-レセプター複合体の変化を含むことができる。あるいはまた、レセプターの活性は、非誘導化水溶性β1,3グルカン例えば別の型のグルカンの結合及び活性化能を擬態する物質によって活性化可能である。独自の実施態様では、転写制御因子もしくは経路酵素は、リガンド結合の結果として活性化される。別の実施態様では、転写制御因子もしくは経路酵素の活性は、レセプターに結合する然るに非誘導化水溶性β1,3グルカンが排除されるが、レセプターを活性化する能力には欠ける物質によって部分的または完全に低減される。本発明の方法によって変化可能な別のシグナル伝達経路には、as/raf1/MAPキナーゼERK経路、G蛋白質/ホスホリパーゼC/プロテインキナーゼC経路、非G蛋白質/ホスホリパーゼC/プロテインキナーゼC経路、JAK/STAT経路、ホスホリパーゼA経路、G蛋白質/ホスホリパーゼD/ホスファチジン酸経路、cAMP依存経路、cJunN末端キナーゼJNK、ストレス活性化プロテインキナーゼSAPKとしても既知経路、IκBキナーゼαIKKα経路、蛋白質チロシンキナーゼ経路、及び酸素ラジカル経路が含まれる。各経路において、シグナル経路の好適な活性化物質または指示薬は、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、そのレセプターへの結合によって活性化され、この結合のモジュレーションが、対応するシグナル伝達を変化させることができる。本発明はまた、例えば転写制御因子もしくは経路酵素の活性化等の、シグナル伝達経路上での非誘導化水溶性β1,3グルカンの作用を変化させる物質を同定するための新規なアッセイにも関する。このアッセイには、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、そのレセプターへの結合が起こる条件すなわち、非誘導化水溶性β1,3グルカンが非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターに結合するために好適な条件下で、非誘導化水溶性β1,3グルカンと、非誘導化水溶性β1,3グルカンのレセプターと、及び被験物質とを混合する工程が含まれる。非誘導化水溶性β1,3グルカンのそのレセプターへの結合が、レセプターを活性化し、これが今度はNFκB、NFIL6及び/またはAP1ファミリーのものなどの転写制御因子に示されるようにシグナル伝達経路を活性化する。被験物質の存在下での、選択された転写制御因子もしくは経路酵素の活性化の程度を測定し例えば、実施例にあるように、転写制御因子に特異的な放射線同位元素胸式DNAオリゴヌクレオチドを使用、被験物質の非存在下における、選択された転写制御因子もしくは経路酵素の活性化の程度と比較する。活性化の程度の差異が、前記物質が、非誘導化水溶性β1,3グルカンの、転写制御因子もしくは経路酵素の活性化に及ぼす作用を変化させることを示す。前記物質の存在下における転写制御因子もしくは経路酵素の活性化における増大は、前記物質が、活性化を促進、即ち延長または増強していることを示す。前記物質の存在下における転写制御因子もしくは経路酵素の活性化の減少は、前記物質が、活性化を縮小、即ち短縮または減少させていることを示す。既述の方法及びアッセイにおいて有用なキットについてもまた、本発明においては考慮される。こうしたキットは、主に、固相、検出可能な標識、β1,3-グルカン結合剤、及び/または標識された非誘導化水溶性β1,3グルカン等の当該方法及びアッセイについて記載された構成要素及び試薬を含む。位置の実施態様においては、該キットは、ここに記載のレセプターをβ1,3-グルカン結合剤として含む。好ましい実施態様においては、β1,3-グルカン結合剤は、フィルター、セルロースもしくはニトロセルロースなどの膜、プラスチック支持体例えばマイクロタイタプレート、ディップスティック、ガラス支持体例えばスライド、ビーズ例えば、ラテックスビーズ、粒子、有機樹脂、または他の有機もしくは非有機の固相に結合する。下記の実施例は、本発明を詳説する目的に応じたものであり、本発明の範囲に制限を加えるものではない。ここに記載した全ての参考文献の教示は、参照のためここに取り込むこととする。実施例1:材料及び方法A.材料HamsF12組織培養培地は、LifeTechnologiesより購入し;ウシ胎児の血清fcs及びリポ多糖類LPS、血清型0128B12は、Sigmaより購入し;THグルカン、低分子量グルカンLMWグルカン、約8,000-120,000ダルトン、高分子量グルカンHMWグルカン、およそ210,000より大、1,000,000より小、極高分子量グルカン、VHMWグルカン、およそ1,000,000ダルトンより大は、米国特許第5,622,939号公報、同5,783,569号公報、及び同5,817,643号公報に記載の方法によりAlphaBetaTechnologyIncにおいて調製し;スクレログルカンACTIGUM商標は、SanofiBioIndustriesより入手した。この報告書のアッセイに使用したスクレログルカンは、穏やかな蟻酸加水分解、中和、及びゲル浸透クロマトグラフィーにおけるサイズフラクションによって変性し、THグルカンと同等の流体力学的体積とした。全てのβグルカン試料は、Limulusamoebocytelysateアッセイにより、内毒素汚染について陰性と判定された。他の全ての試薬等級の材料は、SigmaもしくはBoehringerMamheimから購入した。GST融合タンパク質ATF2、ELK1、cjunは、NewEnglandBiolabsより入手し;アンチERK12、p38、JNK、及びIKKα抗体、並びにGST融合タンパク質IκBαは、SantaCruzBiotechnologyIncより入手した。NR8383細胞については、例えば、HelmkeRJetalInVitroCellDevelopBiol23567574HelmkeRJetalInVitroCellDevelopBiol254448をを参照のこと。分子量は、MALLSによって決定した。B.3HTHグルカンの調製THグルカンAlphaBetaTechnologyWorcesterMAを、NaIO410mgml;Sigmaと共に、化膿素を含まない滅菌SPF水中で、室温にて72時間インキュベートした。0.5mlのエチレングリコールの添加により過ヨウ素酸塩をクエンチした。酸化THグルカンを、SPF水に対して透析した後、100mCiのNaB3H4NewEnglandNuclearBostonMAで還元的に標識した。3HTHグルカンを、透析及び限外濾過によってトリチウム原子を含む低分子量分解生成物から分離した。標識生成物の純度を、ゲル浸透クロマトグラフィーによって検定した。C.NR8383全細胞結合アッセイNR8383細胞を、標準組織培養技術を用いて、15のウシの胎児の血清を含有するHamsF12培地F12fcs中で成長させた。細胞を、掻爬及び遠心分離400×g、5分間、室温によって、およそ3×105細胞/mlの細胞密度で採取した。細胞をPBS中に再懸濁させ、3HTHグルカン最終的に1μgml及び、図に示したとおり食塩水もしくは競合物のいずれかと混合した。細胞濃度は、0.25-1.0×106細胞/ウェル/200μlであった。結合反応を、60分間、37°Cにて進行させた。インキュベート時間の終点で、細胞を、遠心分離により2×250μlのPBS洗浄し、0.1NのNaOHで溶解させ、液体シンチレーション計数により放射能を測定した。NR8383細胞への3HTHグルカン結合の用量依存を、3.3×106NR8383細胞/mlを、1000倍過剰の非標識THグルカンを用いて非特異的結合もしくは用いずに特異的結合、3HTHグルカンの濃度を徐々に増加させて図1に示すとおり、350μlのHanks緩衝食塩水Ca/Mg無し;HBSS中、60分間、4°Cにてインキュベートすることによって検定した。細胞を、遠心分離によりHBSS中で二度濯ぎ、細胞ペレットを溶解させ、液体シンチレーション計数により放射能を測定した。予備実験により、結合レベル平衡に60分間で達することが示された。これらの実験においては、4°Cのインキュベート温度を使用して、リガンド/レセプター内在化の工程を抑制し、結合平衡データの分析を容易にした。インキュベート培地の試料は、インキュベートの終点にて、遊離の3HTHグルカンの測定のためにとっておいた。特異的結合を、全結合と非特異的結合との差として算出した。データを、等式:Bt=Σ{Bmax1L/LKd1Bmax2L/LKd2Btは、標識リガンド結合の全量を表し、Lは、標識リガンドの濃度を表し、Bmaxは、部位nの最大結合能を表し、Kdnは、部位nに得られた解離定数であるにより、非線形回帰分析KaleidagraphSynergyReadingPAによる二部位/二親和性モデルに当てはめた。D.NR8383細胞のトリプシン化細胞を上述の通り採取し、5mMのEDTAを含有する滅菌PBS中に再懸濁させた。細胞を、別々の試験管に分け入れ、再度遠心分離にかけた後、0.25のトリプシンwv含有もしくは非含有の1mlのPBSEDTA中に再懸濁させた。細胞を、35°Cにて45分間インキュベートした。インキュベート時間の終点において、0.5mlの大豆トリプシン抑制剤0.25、wvを添加し、次いで10mlのF12fcsを添加した。細胞を、上記の通り遠心分離にかけ、0.7mlのPBS中に再懸濁させるか、または結合活性のアッセイに即座にかけるため、シクロヘキシミド1μgmlを含有もしくは非含有の10mlのF12fcs中に再懸濁させ、さらに24時間インキュベートした。結合活性のアッセイのために、細胞を血球計にて計数し、細胞数を均等にした。その後細胞を、結合反応が100μgmlの非標識THグルカンの存在下もしくは非存在下、4°Cにて行われたこと以外は、上述の通り検定した。細胞を処理し、上述の通り放射能を測定した。E.ラクトシルセラミドへの結合ラクトシルセラミドへの、3HTHグルカン結合を、上述米国特許出願第08/990,125号、代理人事件整理番号attorneydocketnoABY9704、1997年12月12日出願;その教示は、参照のため、ここにその全体を取り込むこととするの通り測定した。端的には、ラクトシルアミドSigmaChemicalCoを1mgmlにてエタノールに溶解させた。3例のアリコート20μlを、96ウェルのポリスチレンプレートCosterに塗布し、空気乾燥させた。プレートを、PBS中1のゼラチンwv300μlと共に37°Cにて1-2時間インキュベートすることでブロックした。その後プレートを、PBSで濯いだ2×200μl。PBSもしくは非標識多糖類のいずれかを、各ウェルに50ミクロリットル添加し、プレートを37°Cにて平衡させた後、3HTHグルカンを添加した1μml、最終的に100μl。プレートを1-2時間、37°Cにてインキュベートし、200μlのPBSで二度濯いだ。放射能を、150μlのSolvable商標に溶解させて計測した。F.免疫沈降/キナーゼアッセイNR8383細胞の、F120.1fcs中、5×106細胞ml×2mlの6ウェルプレート分を、一晩インキュベートした。その後細胞をLPS1μgmlもしくはTHグルカン3μgmlのいずれかと共に、規定時間、37°Cにてインキュベートした。細胞を氷上におき、ウェルから掻爬して10mlの氷温PBSに加えた。細胞を400×gにて5分間、4°Cにて遠心分離にかけ、その後1mlのPBS中に4°Cで再懸濁させた。細胞を再度遠心分離させ、1μgmlのロイペプチン、アプロチニン、ペプスタチン、1mMのNaVO4、1mMのPMSFを含有し、10分間4°Cにてインキュベートした後、15,000×gにて20分間遠心分離したリーシス緩衝液20mMのTrispH7.4、137mMのNaCl、2mMのEDTA、25mMのbグリセロホスファート、2mMのNaピロホスファート、10のグリセリン、1のTritonX100中に再度懸濁させた。タンパク質含量を、BradfordアッセイPierceによって測定した。同等のタンパク質負荷100-500μgを、予め下記の通りキナーゼ特異的抗体図参照と結合させたタンパク質AセファロースビーズPierceに加えた。免疫沈降反応混合物を、2-4時間、回転させつつ4°Cにてインキュベートした。その後ビーズを1mlのリーシス緩衝液で3回、1mlのキナーゼ反応緩衝液25mMHEPESpH7.4、25mMbグリセロリン酸塩、25mMMgCl2、2mMNaVO4で1回洗浄し、最後に2mMのDTTを含有する50μlのキナーゼ反応緩衝液中に再懸濁させた。その後、20μlのビーズ、22μlの反応混合物20μlキナーゼ反応緩衝液、1μl1mMATP、1μl10μCig32PATP、0.5μlの2μgmlキナーゼ基質を混合することにより、キナーゼ反応が開始された。反応を、15-20分間室温にて進行させた後、10μlのLaemmli緩衝液を4回添加し、5分間煮沸することによって終了させた。試料を遠心分離し、反応混合物のアリコートを10SDSPAGE上に流し、次いでオートラジオグラフィーを行った。キナーゼ特異的抗体を、下記の通り、予めタンパク質Aセファロースビーズに結合させた。ビーズは1mlのリーシス緩衝液中で二度洗浄し、遠心分離15,000×g、30秒間し、0.5体積のリーシス緩衝液中に再懸濁させた。ビーズ懸濁液20ミクロリットルを、ミクロフュージ管に分け入れ、2μl約0.4μgの抗体を添加した。ビーズ/抗体混合物を、細胞溶解物の添加前に、20-30分間氷温でインキュベートした。G.電気泳動移動度転移アッセイElectrophoreticMobilityShiftAssayEMSAEMSAを、主にAdamsetalJLeukBiol62865873に記載の通り行った。端的には、下記の通り。細胞刺激LPS1μgml、THグルカン3μgml、低分子量グルカンLMWグルカン;3もしくは30μgml、高分子量グルカンVHMWグルカン;3μgml、もしくはスクレログルカン3μgmlを培地に添加し、37°Cインキュベートを0.5-1.0時間継続した。刺激の後、細胞を氷温のPBS中に掻爬し、一度PBSで濯いだ後、核抽出に用いた。PMNを、酸シトレートデキストロースで凝固防止したドナー血液から調製した。1.5のデキストランwv中に沈殿させた後、細胞を遠心分離し400×g、7分間、自己由来血漿中に再懸濁させた。その後、細胞をFicoll勾配リンパ球分離培地;OrganonTeknikaDurhamNC上に積層させ、遠心分離した400×g、30分間。ペレットから回収された細胞を、低張状態で溶解させ、残りのRBCを除去した。残留細胞は、形態学的基準により判断して95より多くが好中球であり、この後これらを、核抽出物の調製の前に上述の通り刺激した。核抽出物EMSAのための核抽出物を、各資料に1.0-2.0×107細胞を使用して、既述の通り調製したAdamsetal1997。全ての緩衝液に、新たにDTT0.5mM、プロテアーゼインヒビターカクテル、及びホスファターゼインヒビターカクテルを補填した。タンパク質濃度を、Bradfordアッセイにより、BSA基準に対して決定した。電気泳動移動度転移アッセイEMSA活性化した転写因子を、既述のAdamsetal1997EMSAを使用して検定した。NFκBコンセンサス合成二重プローブconsensussyntheticduplexprobeは、既述の通りとしたAdamsetal1997LenardoMJandBaltimoreDCell58227229も参照のこと。32P標識二重プローブを、ポリヌクレオチドキナーゼで調製した。標識プローブ0.5pmolを、3μgの核抽出タンパク質と、10mMのTrisHClpH75、50mMのNaCl1mMのEDTA、1mMのDTT、5のグリセリン、0.02のβメルカプトエタノール、0.1-1.0μgのポリdIdCを含有する溶液Pharmacia中で混合した。反応物を25°Cにて20分間インキュベートした後、0.5XTBE緩衝液中4のポリアクリルアミドゲルに通す非変性条件下で電気泳動させた。バンドが、オートラジオグラフィーによって映像化された。実施例2:完全なNR8383細胞への3HTHグルカン結合A.NR8383細胞を、/mlを、1000倍過剰の非標識THグルカンを用いて非特異的もしくは用いずに全、3HTHグルカンの濃度を徐々に増加させて、60分間、4°Cにてインキュベートした。インキュベートの終点で、非結合放射能を洗浄により取り除き、細胞関連放射能の量を、上述のように測定した。特異的結合を、全放射能から非特異的なものを減算することにより決定した。結果を図1に示した。特異的結合曲線は、上述のように二部位モデルの非線形回帰分析に適合した。図1のデータは、NR8383細胞への3HTHグルカン結合が、用量依存型、特異的且つ飽和可能であることを示している。リガンドの濃度が増大するほど、NR8383細胞は、ますます多量の3HTHグルカンと結合した全。インキュベート混合物への非標識THグルカンの添加により、細胞と連合する3HTHグルカンの量が抑制された非特異的。全結合から、非特異的結合を減算した後、特異的結合が約30fm106細胞にて飽和可能であることが判明した。特異的結合曲線の非線形回帰分析は、明かな解離定数Kd1及びKd2がそれぞれ45pM及び170pMである二部位結合モデルに適合する。結合部位の数は、高親和性及び低親和性の部位についてそれぞれ3,200/細胞及び18,000/細胞であった。NR8383細胞について4°Cにて観察された結合活性は、ラクトシルセラミドについて観察されたものと対象を成し、4°Cにおいては結合活性のないことを示したデータ示さず。B.NR8383細胞及びラクトシルセラミドへの3HTHグルカン結合の選択性NR8383細胞上での、3HTHグルカン結合部位へのβグルカン結合の選択性を、競争結合アッセイによって測定した。これらのアッセイでは、NR8383細胞は、3HTHグルカン及び様々な濃度の非標識競争βグルカンLMWグルカン、VHMWグルカン;もしくはスクレログルカンと共に、共インキュベートされる。非結合放射能を取り除き、細胞関連放射能の量を、上述のように測定した。このタイプの実験の結果を、図2A-図2Cに示す図2A:LMWグルカン;図2B:VHMWグルカン;図2C:スクレログルカン。データの点は、平均コントロール結合±変形の係数を表し、THグルカンは、各実験にポジティブコントロールとして含めた。非標識THグルカン、LMWグルカン、及びVHMWグルカンもまた、3HTHグルカン結合に向けて競争可能であるが、スクレログルカンは、試験した濃度範囲においては有効な競争対象ではなかった。ラクトシルセラミドは、ヒトの好中球におけるTHグルカンレセプターとして同定されている米国特許出願第08/990,125号、代理人事件整理番号ABY9704、1997年12月12日出願;その教示は、参照のため、ここにその全体を取り込むこととする。これら同一のβグルカンの、3HTHグルカンのラクトシルセラミドへの結合に対して競争する能力を調査した。ラクトシルセラミドを、上述の通り96ウェルプレート上に被覆し、様々な濃度の非標識βグルカンLMWグルカン;VHMWグルカン;スクレログルカンの存在下にて、3HTHグルカン1μgmlと共にインキュベートした。ウェルを濯ぎ、残留放射能を、上述の通り測定した。結果を図3A-3Cに示す図3A:LMWグルカン;図3B:VHMWグルカン;図3C:スクレログルカン。非標識THグルカン及びVHMWグルカンは、ラクトシルセラミドへの3HTHグルカン結合の、有効な競争対象であった。NR8383細胞で得られた結果と対照的に、LMWグルカンは結合を争えず、一方でスクレログルカンが有効な競争対象であることが判明した。このデータは、NR8383レセプターがラクトシルセラミドとは異なるβグルカン選択性を有することを明確に示している。C.NR8383細胞3HTHグルカン結合活性のトリプシン選択性NR8383細胞上では、3HTHグルカンレセプターがトリプシン化に感受性であることが判明した。NR8383細胞を、3HTHグルカン結合活性の測定前にトリプシンと共にインキュベートするという実験が行われた。表1には、該実験の結果が示されている。細胞数を、結合アッセイのために標準化し、特異的結合全結合-非特異的結合は、0及び24時間の時点でのそれぞれのコントロール値に標準化した。トリプシン予備処理は、非処理コントロール細胞に対して、96の特異的結合を排除した。細胞を、トリプシン化の後に通常培地中で24時間インキュベートした場合、結合活性は、コントロールレベルを越えてほとんど50回復した。この回復は、タンパク質合成インヒビターシクロヘキシミド1μmlによって抑制された。興味深いことに、シクロヘキシミドが非処理のコントロール細胞に加えられる場合、結合活性が94減少した。これは、3HTHグルカン結合活性の継続した発現のためには、不安定なタンパク質が必要であることを示唆している。これはレセプター自体、またはタンパク質もしくはそのmRNAのいずれかを安定化するタンパク質を表していた。それにもかかわらず、これらの結果は、NR8383レセプターがタンパク質であって、グリコスフィンゴ脂質ではないことを、強力に示している。表1:NR8383細胞への3HTHグルカン結合に対する、トリプシン及びシクロヘキシミドの作用実施例3:NR8383細胞中で、THグルカンによって開始されるシグナル伝達現象A.NFκB様転写因子の活性化ヒトPMN及びネズミのBMC2.3マクロファージ上での、ラクトシルセラミドを経るTHグルカン誘発シグナル伝達は、NFκB様核転写因子を活性化することが示されている米国特許出願第08/990,125号、代理人事件整理番号attorneydocketnoABY9704、1997年12月12日出願;その教示は、参照のため、ここにその全体を取り込むこととする。NR8383細胞及びヒトPMNにおけるNFκB様DNA結合活性を活性化する、THグルカン、LMWグルカン、VHMWグルカン、及びスクレログルカンの能力を、電気泳動移動度転移アッセイEMSAを用いて比較した。細胞を、βグルカンコントロール;LPS、1μgml;THグルカン、3μgml;スクレログルカン、3μgml;LMWグルカン、3μgmlもしくは30μgml;VHMWグルカン、3μgmlと共にインキュベートした。核抽出物を、NFκB活性の測定のため、上述の通りEMSAによって調製した。NR8383細胞中では、THグルカン、VHMW-グルカン、及びLMWグルカンがNFκB様DNA結合活性を誘発するが、スクレログルカンはそうではないデータ示さず。PMN中では、THグルカン及びスクレログルカンがNFκB様DNA結合活性を誘発する一方で、LMWグルカンはそうではないデータ示さず:VHMWグルカンは、これらの細胞では試験しなかった。このように、ラットのNR8383細胞及びヒトのPMNにおけるこれらの多様なβグルカンによって開始されるシグナル伝達は、3HTHグルカン結合を競うこれらの能力と相関する。B.プロテインキナーゼの活性化最後に、NR8383細胞においてTHグルカンによって誘発される初期シグナル伝達現象を調査した。とりわけ、プロテインキナーゼアッセイにつながる免疫沈降を利用して、THグルカンシグナリングにいずれのプロテインキナーゼカスケードが関わるのかを決定した。NR8383細胞を、LPS1μgml、ポジティブコントロール、THグルカン3μgmlと共に、または添加物無しで、30分間37°Cにてインキュベートした。細胞を溶解させ、キナーゼ特異的抗体で免疫沈降させ、上述の通りキナーゼアッセイを行った。等量の蛋白質を各実験において免疫沈降に用いた。THグルカンはMAPキナーゼ細胞外ミトゲン制御キナーゼERK1/2キナーゼ基質はATF-2-GSTであったを活性化せず;p38キナーゼ基質はELK-1-GSTを活性化しなかったデータ示さず。対照的に、THグルカンは迅速且つ一時的にMAPキナーゼc-JunN末端キナーゼJNK、ストレス活性化プロテインキナーゼもしくはSAPKとしても既知;キナーゼ基質はc-Jun-GSTであったを活性化したデータ示さず。TH-グルカンもまた、迅速且つ一時的にIκBキナーゼαIKKa;キナーゼ基質は、IκBαGSTであった、IκBaをリン酸化するキナーゼを活性化し、NFκB様転写因子の活性化を引き起こしたデータ示さず。実施例4:感染モデルにおけるTHグルカンとそのコンフォーマーとの比較A.材料及び方法THグルカン及びコンフォーマーTH-グルカンAlphaBetaTechnology及び所定のコンフォーマーを、感染モデルにおけるその効果の研究に使用した。表2は、この研究に使用したTHグルカンとそのコンフォーマーの分子量を示す。コンフォーマーの分子量が、GPCカラム中の温度と共に変化しうるため、室温25°C及び高温37°Cにて分離したコンフォーマーを試験した。表2:THグルカン及びコンフォーマーの分子量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー/多角レーザー光拡散法GPCMALLSによって測定した。HTH及びLTHは、THグルカンの試料を分画することにより調製した。動物ウィルス抗体のないWistarラットを、CharlesRiverBreedingLaboratoriesから購入した。動物を、NationalInstitutesofHealthguidelinesに従って飼育し、任意に食餌及び水を与えた。ラットを、実験投入前に7日間隔離した。ラットの体重は、実験時に160gから210gの範囲であった。薬剤投与THグルカン及びコンフォーマー、並びに全グルカン粒子WGPを、25ゲージの針を使用し、細菌負荷前48時間、24時間及び4時間の時点及び細菌負荷後4時間の時点で、1mgkgにて筋内投与した。さらに、ポジティブコントロールとして、WGPもまた、腹膜内IPから5mgkgの用量にて、細菌負荷前24時間及び4時間の時点で与えた。WGPは、滅菌食塩水で懸濁液とし、各注入前に激しく攪拌した。細菌Saureusの複数抗生物質耐性の臨床分離物を、これらの研究において使用するために選択した。OnderdonkABetalInfectImmun6016421647細菌を、NutrientBroth中で、8時間37°Cにて拡張させた。滅菌グリセリンを添加して最終濃度を20とし、ストックアリコートを使用するまで-80°Cにて冷凍した。ストック細菌の生存能力を測定するために、凍結ストック試料を解凍し、順次希釈して40μlの試料をNutrientAgarプレート上で平板培養した。プレートを37°Cにて24時間培養し、細菌コロニーを計数し、ストック1ml毎の細菌コロニー形成ユニットCFU数を算出した。invitro研究のための細菌接種材料の調製のために、ストック培地を、1硫酸デキストラン及び最終濃度5の硫酸バリウムwtvolを含有するリン酸緩衝食塩水PBSGibcoLifeTechnologiesGrandIslandNYのmlあたり、所望のCFU数となるまで希釈した。適当に希釈した細菌の0.5mlアリコートを、長さ2cm×直径0.5cmのゼラチンカプセルEliLillyIncIndianapolisIN中に無菌状態で入れ、カプセルを、上述の通り、ラットの腹膜腔に移植した。手術ラットは、ケタミンFortDodgeLaboratoresIncFortDodgeIA、PromAceAyerstLaboratoresIncRousesPointMY、キシラジンPhoenixScientificIncStJosephMO、及び食塩水750mg、10mg、100mg及び20mlとする食塩水から成る混合麻酔カクテルを、25ゲージ針を使用した内科学注射iminjectionにより麻酔にかけた。麻酔剤は、体重に基づいて各ラットに適合させ、体重1g当たり0.0019mlを投与した。麻酔剤を投与した後、各ラットの腹を剃り、ヨウ素溶液で洗浄し、腹壁及び腹膜に1.5cmの前側正中切開を行った。108のSaureusCFUを含有するゼラチンカプセルを、腹膜腔内に即座におき、切開を、断続3-0絹縫合で閉じた。手術の全継続時間は、2分間未満であった。手術に次いで、動物を各檻に5匹ずつ飼育し、最初の2時間は15分毎、次の1時間には30分毎、その後実験の継続時間中は1日に3回モニターした。血液標本抽出及び分析動物を、O2:CO21:1で麻酔にかけ、2mlの血液を20ゲージの針を付けた3mlのシリンジを使用して心臓穿刺によって2mlの血液を採取した。血液を採取した直後に、約1.5mlが、ヘパリンElkinsSinnsIncCherryHillNJ5ユニットを収容した1.7mlのEppendofr遠心分離管内に排出された。その後各動物をCO2を用いて人間的に安楽死させた。正確に計数可能な血液CFUレベルを得るためには、各動物からの二種類の濃度の血液、1:10希釈及び非希釈の血液を培養した。20mlの50°CTrypticSoyAgarBectonDickinsonMicrobiologySystemsCockeysvillwMDを、滅菌ペトリ皿に入れ、即座にこの皿に希釈血液もしくは非希釈血液の0.5mlアリコートを加え、プレートを回転させることによって寒天中に完全に混合させた。寒天が固形化したところで、プレートを37°Cにて48時間インキュベートし、その後20-200コロニーを含有するプレートを、コロニー列挙のために選択した。血液CFUデータを、血液のlogCFUmlとして表した。各試料からの残りの血液は、血液細胞計数に使用した。全白血球細胞9WBC、赤血球細胞RBC、及び血小板PLT計数を、System9010HematologyAnalyzerにて行った。統計的分析結果を、複数回の実験2-6の実験、20-80の動物を含むから得られたデータの平均±平均の標準誤差SEMで表した。非対性t検定治療グループ対食塩水を、EXCEL50ソフトウェアMicrosoftCorporationRedmondWAを用いて行ったところ、差異は、p<0.05において顕著であった。B.結果血液CFUレベルにおけるTHグルカン及びコンフォーマーの効果ラットに、THグルカン、コンフォーマー、もしくはWGPを投与し、血液CFUをSaureusによる負荷の48時間後に測定した。結果を以下の表3に示す。表3:血液CFUレベルにおけるTHグルカン及びコンフォーマーの効果上記に見られるように、THグルカン並びにこれらの研究で試験した他の物質で処置したラットは、細菌負荷の48時間後には、食塩水で処置したラットよりも著しく低下した血液CFUレベルを示したP<0.05。血液CFUレベルにおける最大の減少は、可溶性WGPIP及びIMP<0.001及びp<0.01で処置したラットにおいて観察された。末梢血液細胞計数におけるTHグルカンおよびコンフォーマーの効果血液細胞計数を、Saureus負荷の48時間後に行った。全WBC数量は、THグルカン及び全てのコンフォーマー、並びにWGPで処置したラットにおいて上昇したが、統計上の有意性は、THグルカン、HTH25°C、LTH25°C及びLTH37°Cで処置したラットにおいてのみ観察された。THグルカンは、PLT計数に何の効果も与えなかったが、VHMW、HTH25°C、もしくはHTH37°Cすなわち、190,000より大なる分子量をもつコンフォーマー、またはWGPもしくはWGPIPで処置したラットは、著しく増大した末梢PLT計数を示した。RBC値は、HTH25°C、LMW及びWGPIPで処置したラットにおいて僅かに上昇したことを除いて変化しなかった。これらの結果を表4にまとめる。表4:末梢血液細胞計数におけるTHグルカン及びコンフォーマーの効果パーセント変化、対食塩水t検定、p<0.05、対食塩水死亡率におけるTHグルカン及びコンフォーマーの効果これらの研究において使用したSaureus用量は、致死感染量の50であった。全ての動物は、CFU及び血液細胞評価のために第2日目に安楽死させられたが、WGPIPp<0.01及びLMWp<0.05で処置したラットには、食塩水処置ラットに比べて著しく低下した死亡率が観察された。WGP31、対食塩水48及びLTH25°C31、対食塩水48で処置したラットにも僅かに死亡率の低下が見られた。LTH37°C処置グループにおいては、僅かに高い死亡率63、対食塩水48が観察された。しかしながら、これらの差異は、統計上の有意性には至らなかった。これらの実験は、THグルカン並びにコンフォーマーTHグルカンの活性を擬態する物質が、ホスト防御を増強するために使用可能であり、よって疾患の治療に使用可能であることを示した。コンフォーマー分子量が約100倍変化する例えばVHMWに対してLMWにも関わらず、抗感染活性が一定であったことは興味深い。本発明が、特にその好ましい実施態様について例示及び説明されている一方で、添付の請求の範囲に定義されるように、本発明の思想及び範囲から逸脱することなく、形態及び細部における様々な変形が可能であることは、当業者によって理解されるであろう。"