式I:により表される化合物、その単一の立体異性体、立体異性体の混合物、ならびにその医薬的に許容される塩、溶媒和物、および医薬的に許容される塩の溶媒和物。次の条件の1つ以上を満たしている請求項1に記載の化合物:R1、R2およびそれらが結合している窒素が、置換されていてもよい5、6もしくは7員ヘテロ環を形成している;R3が、ハロゲン、低級アルコキシ、置換されていてもよいアリールもしくはヘテロアリール基で置換されていてもよい、フェニル、イソキサゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、テトラゾール5イル、チアゾリル、チアジアゾリルまたはイミダゾリル基である;R4がクロロである;ならびにR5、R6およびR7が水素である。次の条件の1つ以上を満たしている請求項2に記載の化合物:R1、R2およびそれらが結合している窒素が、ピペリジン1イル;ピペラジン1イル;モルホリン4イル;ピロリジン1イル;チオモルホリン4イルまたはジアゼパン1イルを形成しており、これらは以下の基:置換されていてもよいアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキレンジオキシ、カルボキシ、置換されていてもよいアシルオキシ、置換されていてもよいアルコキシカルボニル、置換されていてもよいアミノカルボニル、シアノ、置換されていてもよいアシル、オキソ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、置換されていてもよいアミノスルホニル、アミジノ、フェニル、ベンジル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、アリールオキシ、アラルコキシ、ヘテロアリールオキシ、およびヘテロアラルコキシのうちの1、2または3個で置換されていてもよい;ならびにR3が置換されていてもよいフェニル基で置換されていてもよい134チアジアゾール2イル基であるか、またはR3が1Hイミダゾール2イル基である。R1、R2およびそれらが結合している窒素が置換されていてもよいジアゼパン1イル環を形成している、請求項3に記載の化合物。R1、R2およびそれらが結合している窒素が置換されていてもよいピペラジン1イル環を形成している、請求項3に記載の化合物。R1、R2およびそれらが結合している窒素が置換されていてもよいピペリジン1イル環を形成している、請求項3に記載の化合物。R1、R2およびそれらが結合している窒素が置換されていてもよいピロリジン1イル環を形成している、請求項3に記載の化合物。R3がオキサゾール2イル、5フェニル134チアジアゾール2イルまたは1Hイミダゾール2イルである、請求項1~7のいずれか1項に記載の化合物。R1、R2およびそれらが結合している窒素が、置換されていてもよい5、6もしくは7員ヘテロ環を形成しており;R3が置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリールであり;R4がハロゲンであり;ならびにR5、R6およびR7が水素である、請求項1に記載の化合物。R4がクロロである、請求項9に記載の化合物。R1、R2およびそれらが結合している窒素が、置換されていてもよい5、6もしくは7員ヘテロ環を形成しており;R3が置換されていてもよいフェニル基で置換されていてもよい134チアジアゾール2イル基であるか、またはR3が1Hイミダゾール2イル基であり;R4がハロゲンであり;ならびにR5、R6およびR7が水素である、請求項1に記載の化合物。R1、R2およびそれらが結合している窒素が、置換されていてもよい5、6もしくは7員ヘテロ環を形成しており;R3が5フェニル134チアジアゾール2イルまたは1Hイミダゾール2イルであり;R4がハロゲンであり;ならびにR5、R6およびR7が水素である、請求項1に記載の化合物。哺乳動物の心臓病治療用医薬の製造のための、請求項1~12のいずれか1項に記載の化合物、単一の立体異性体、立体異性体の混合物、医薬的に許容される塩、溶媒和物、または医薬的に許容される塩の溶媒和物の使用。医薬的に許容される賦形剤と、治療的に有効な量の請求項1~12のいずれか1項に記載の化合物、単一の立体異性体、立体異性体の混合物、医薬的に許容される塩、溶媒和物、または医薬的に許容される塩の溶媒和物とを含む、医薬製剤。他の態様および実施形態は、以下の詳細な説明から、当業者には明らかであると思われる。詳細な説明本発明は、例えば心臓ミオシンを増強することにより心臓筋節を選択的にモジュレートするのに有用な化合物を提供するものである。本化合物を用いて、CHF、特に収縮期心不全のような心不全を治療することができる。本発明はさらに、本発明の化合物を含む医薬製剤、および、そのような化合物または組成物を用いた治療方法に関する。本組成物は心臓筋節の選択的モジュレーターであり、例えば、心臓ミオシンを増強する。定義本明細書で使用される場合、以下に示されている用語表現は通常下記に記載されている意味をもつことが意図されるが、それらが使用されているところでそうでないと記載されている場合はこの限りではない。次の略号記号は、全体を通して、記載されている意味をもつ:AcアセチルBoctブチルオキシカルボニルcシクロCBZカルボベンゾキシベンジルオキシカルボニルDCMジクロロメタン塩化メチレンCH2Cl2DIEADIPEANNジイソプロピルエチルアミンDMFNNジメチルホルムアミドDMSOジメチルスルホキシドEtエチルEtOAc酢酸エチルEtOHエタノールGCガスクロマトグラフィーh時間HATUONNNNテトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートHBTU21133テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートHOAt7アザ1ヒドロキシベンゾトリアゾールHOBt1ヒドロキシベンゾトリアゾールMeメチルmin分mLミリリットルPhフェニルrt室温s第二級t第三級TESトリエチルシランTFAトリフルオロ酢酸THFテトラヒドロフランTLC薄層クロマトグラフィー。用語任意のまたは~されていてもよいとは、それに関して記載される事象または状況が起る場合もあるし起らない場合もあることを意味し、またその記載には、そのような事象または状況が起る場合と起らない場合が含まれることを意味する。例えば、置換されていてもよいアルキルは、後に定義するアルキルもしくは置換アルキルを意味する。当業者なら、1つ以上の置換基を含む基に関して、そのような基は、立体的に実現性のない、合成の点から可能でない、および/または固有的に不安定である置換または置換パターンを導入するものではないことは理解されると思われる。アルキルには線状、分岐状、または環状炭化水素構造およびそれらの組み合せが含まれるものとする。低級アルキルは、炭素原子1~5個のアルキル基を意味する。低級アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sブチル、tブチルなどが挙げられる。好ましいアルキル基はC20またはそれ以下のものである。より好ましいアルキル基はC13またはそれ以下のものである。さらにより好ましいアルキル基はC6またはそれ以下のものである。シクロアルキルはアルキルのサブセットであり、炭素原子3~13個の環状炭化水素基が含まれる。シクロアルキル基の例としては、cプロピル、cブチル、cペンチル、ノルボルニル、アダマンチルなどが挙げられる。本出願では、アルキルは、アルカニル、アルケニルおよびアルキニル残基を意味する。それには、シクロヘキシルメチル、ビニル、アリル、イソプレニルなどが含まれるものとする。アルキレンはアルキルのもう1つのサブセットであり、アルキルと同じ残基を意味するが、2つの結合点をもっている。アルキレンの例としては、エチレンCH2CH2、プロピレンCH2CH2CH2、ジメチルプロピレンCH2C2CH2およびシクロヘキシルプロピレンCH2CH2CHが挙げられる。ある特定の炭素数をもつアルキル残基が書かれている場合、その炭素数をもつ全ての幾何異性体も包含されるものとする。つまり、例えばブチルには、nブチル、secブチル、イソブチルおよびtブチルが含まれることになり、プロピルにはnプロピルおよびイソプロピルが含まれる。用語アルコキシまたはアルコキシルは基Oアルキルを意味し、好ましくは親構造に酸素を介して結合している炭素数1~8個の直鎖状、分岐状、環状構造およびこれらの組み合せが含まれる。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシなどが挙げられる。低級アルコキシは、1~4個の炭素を含む基を意味する。用語置換アルコキシは、基Oを意味する。好ましい置換アルコキシ基の1つはポリアルコキシまたはOであり、例えばOCH2CH2OCH3のような基、および、ポリエチレングリコールおよびOxCH3[式中、xは、約2~20、好ましくは約2~10、より好ましくは約2~5の整数である]のようなグリコールエーテルが挙げられる。もう1つの好ましい置換アルコキシ基はヒドロキシアルコキシまたはOCH2yOH[式中yは、約1~10、好ましくは約1~4の整数である]である。アシルは、親構造にカルボニル官能基を介して結合している飽和、不飽和および芳香族ならびにこれらの組み合せの1~10個の炭素原子の直鎖状、分岐状、環状構造を有する基を意味する。アシル残基中の1つ以上の炭素は、親構造への結合点がカルボニル基に残っている限り、窒素、酸素または硫黄で置換されていてもよい。例としては、アセチル、ベンゾイル、プロピオニル、イソブチリル、tブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどが挙げられる。低級アシルは1~4個の炭素を含む基を意味し、またアシルオキシは基Oアシルを意味する。用語アミノは基NH2を意味する。用語置換アミノは基NHRまたはNRRを意味し、この場合各Rは次の群:置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルコキシ、置換されていてもよいアミノ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロシクリル、アシル、アルコキシカルボニル、スルファニル、スルフィニルおよびスルホニルから独立に選択され、例えばジエチルアミノ、メチルスルホニルアミノ、フラニルオキシスルホンアミノである。アリールは、5または6員芳香族環系、二環式9または10員芳香族環系、または三環式12~14員芳香族環系を意味する。例としては、シクロペンタ13ジエン、フェニル、ナフチル、インダン、テトラリン、フルオレン、シクロペンタbナフタレンおよびアントラセンが挙げられる。アラルコキシは基Oアラルキルを意味する。同様に、ヘテロアラルコキシは基Oヘテロアラルキルを意味し;アリールオキシはOアリールを意味し;ヘテロアリールオキシは基Oヘテロアリールを意味する。アラルキルは、アリール部分構造が親構造にアルキル残基を介して結合している残基を意味する。例としては、ベンジル、フェネチル、フェニルビニル、フェニルアリルなどが挙げられる。ヘテロアラルキルは、ヘテロアリール部分構造が親構造にアルキル残基を介して結合している残基を意味する。例としては、フラニルメチル、ピリジニルメチル、ピリミジニルエチルなどが挙げられる。ATPアーゼはATPを加水分解する酵素を意味する。ATPアーゼは、ミオシンのような分子モーターを含むタンパク質を含む。ハロゲンまたはハロは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。フッ素、塩素および臭素が好ましい。ジハロアリール、ジハロアルキル、トリハロアリールなどは、複数のハロゲンただし必ずしも複数の同じハロゲンではないで置換されたアリールおよびアルキルを意味する。従って4クロロ3フルオロフェニルはジハロアリールの範囲内である。ヘテロアリールは、1~4個のヘテロ原子を含む5または6員芳香族環、1~4またはそれ以上個のヘテロ原子を含む二環式8、9または10員芳香族環系、または1~4またはそれ以上個のヘテロ原子を含む三環式11~14員芳香族環系を意味し;ヘテロ原子は、O、NおよびSから選択される。例としては、フラン、ピロール、チオフェン、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ジチオール、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、チアゾール、チオピラン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、キノリン、イソキノリンおよびキノキサリンが挙げられる。ヘテロ環またはヘテロシクリルは、その炭素の1~4個が酸素、窒素または硫黄などのヘテロ原子で置換されたシクロアルキル残基を意味し、1~4個のヘテロ原子を含む4、5、6または7員非芳香族環系、1~4またはそれ以上個のヘテロ原子を含む二環式8、9または10員非芳香族環系、または1~4またはそれ以上個のヘテロ原子を含む三環式11~14員非芳香族環系があり;そのヘテロ原子はO、NおよびSから選択される。例としては、ピロリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、チアゾリジン、ピペリジン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオピラン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリンおよびジオキサンが挙げられる。ヘテロ環には不飽和結合を含む環系も含まれるが、この場合不飽和の数と配置はその基を芳香族にしないものとする。例としては、イミダゾリン、オキサゾリン、テトラヒドロイソキノリン、ベンゾジオキサン、ベンゾジオキソールおよび35ジヒドロベンゾキサジニルが挙げられる。置換ヘテロ環の例としては、4メチル1ピペラジニルおよび4ベンジル1ピペリジニルが挙げられる。異性体は、同じ分子式をもつが異なる化合物である。立体異性体は、原子が空間に配置される様式のみが異なる異性体である。鏡像異性体は、互いが重ね合わさることができない鏡像である立体異性体対である。11の鏡像異性体対混合物はラセミ混合物である。記号は適切な場合ラセミ混合物を表わすのに使用される。ジアステレオマーは、少なくとも2つの不斉原子をもつが、互いに鏡像ではない立体異性体である。絶対立体化学はカーンインゴールドプレログRS系により規定される。ある化合物が純粋な鏡像異性体である場合、各キラル炭素におけるその立体化学はRかSで規定することができる。絶対配置が分からない分割された化合物は、それらがナトリウムD線波長の面偏光を回転する方向右旋性または左旋性に応じてまたはと表わすことができる。本明細書に記載される化合物の一部は1つ以上の不斉中心を含むので、絶対立体化学でまたはと定義することができる鏡像異性体、ジアステレオマー、およびその他の立体異性形を生じることがある。本発明には、ラセミ混合物、光学純粋体および中間混合物を含めたそのような全ての考えられ得る異性体が含まれるものとする。光学的に活性なおよび異性体はキラルシントンまたはキラル試薬を用いて調製することができ、あるいは慣用の手法を用いて分割することができる。本明細書に記載される化合物がオレフィン性二重結合またはその他の幾何的不斉中心を含む場合で特に特定されない場合、その化合物にはEおよびZの幾何異性体の両方が含まれるものとする。同様に、全ての互変異性体も含まれるものとする。用語医薬的に許容される担体または医薬的に許容される賦形剤にはあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張遅延剤および吸収遅延剤などが含まれる。そのような媒体および試剤を医薬的に活性な物質に使用することは当技術分野では周知である。在来の媒体または試剤が本活性成分と相溶性がない場合を除いて、本治療用組成物中にそれを使用することが検討される。本組成物の中には補足的な活性成分を組み込むこともできる。用語医薬的に許容される塩は、生物学的にあるいはその他の意味において望ましくないものではない、本発明の化合物の生物学的な効能および特性を保持している塩を意味する。多くの場合、本発明の化合物は、アミノ基および/またはカルボキシル基またはそれらに似た基の存在によって酸塩および/または塩基塩を形成することが可能である。医薬的に許容される酸付加塩は無機酸および有機酸で生成させることができる。塩を誘導することができる無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。塩を誘導することができる有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、酒石酸、フマル酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、シナモン酸、マンデリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、pトルエンスルホン酸、サルチル酸などが挙げられる。医薬的に許容される塩基付加塩は無機塩基および有機塩基で生成させることができる。塩を誘導することができる無機塩基としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムなどが挙げられ;特に好ましいのはアンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウムの塩である。塩を誘導することができる有機塩基としては、例えば、第一級、第二級、および第三級アミンや、天然に存在する置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂などを含めた置換アミンが挙げられ、具体的にはイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミンなどが挙げられる。用語溶媒和物は、医薬的に許容される溶媒の1個以上の分子と物理的会合状態にある化合物例えば式Iで表わされる化合物またはその医薬的に許容される塩を意味する。式Iの化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物のような表現には、その式Iの化合物、その化合物の医薬的に許容される塩、その化合物の溶媒和物、およびその化合物の医薬的に許容される塩の溶媒和物が包含されるものとすることは理解されると思われる。置換アルキル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルは、それぞれ1個以上最大約5個、好ましくは最大約3個の水素原子が、次の群:アシル、置換されていてもよいアルキル例えば、フルオロアルキル、置換されていてもよいアルコキシ、アルキレンジオキシ例えばメチレンジオキシ、置換されていてもよいアミノ例えば、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ、置換されていてもよいアミジノ、置換されていてもよいアリール例えば、フェニル、置換されていてもよいアラルキル例えば、ベンジル、置換されていてもよいアリールオキシ例えば、フェノキシ、置換されていてもよいアラルコキシ例えば、ベンジルオキシ、カルボキシCOOH、アシルオキシ、およびSを意味する。用語スルフィニルは基:SH、S、およびSを意味する。用語スルホニルは基:SH、S、S、およびSを意味する。用語治療的に有効な量または有効量は、治療を必要とする哺乳動物に投与した場合、後に定義するように、治療を行うのに十分な式Iの化合物の量を意味する。治療的に有効な量は、患者や治療を受けている疾患の状態、患者の体重や年齢、疾患状態の重症度、選んだ式Iの特定の化合物、後に続く投薬計画、投与のタイミング、投与の方法などに応じて変わるもので、これら全ては当業者なら容易に決めることができる。用語治療または治療するは、下記:a疾患の予防、すなわち、疾患の臨床症状を発症させないこと;b疾患の抑制、すなわち、臨床症状の発症を遅延または停止させること;および/またはc疾患の軽減、すなわち、臨床症状の退行を引き起こすこと;などの哺乳動物における疾患のあらゆる治療を意味する。本発明の化合物本発明は、式I:により表される、心臓筋節の選択的モジュレーターである化合物、その単一の立体異性体、立体異性体の混合物、およびその医薬的に許容される塩に関する。式Iの化合物は、治療方法の実施における活性成分として、および本発明の医薬製剤の製造において、ならびにそのような活性成分の合成における中間体として有用である。命名法式Iの化合物を、以下に記載のように命名し、番号付けることができる。例えば、化合物:すなわち、R1およびR2が、それらが結合している窒素と一緒になって置換されたピペラジン環を形成し;R3が置換されたチアジアゾール環であり;R4がクロロであり;ならびにR5、R6およびR7が水素である式Iの化合物は、44クロロ3ベンゼンスルホニルピペラジン1カルボン酸エチルエステルと命名することができる。同様に、化合物:すなわち、R1およびR2がそれらが結合している窒素と一緒になって置換されたピペラジン環を形成し;R3がイミダゾール環であり;R4がクロロであり;ならびにR5、R6およびR7が水素である式Iの化合物は、2クロロ54ピペラジン1スルホニルNベンズアミドと命名することができる。式Iの化合物の合成本発明の化合物を、反応スキームを参照して、例えば、以下に例示するように、当業界で公知の技術を用いて合成することができる。合成反応パラメーター別の指示がない限り、本明細書に記載の反応は大気圧下、一般的には10°C~110°Cの温度範囲で行う。さらに、実施例での使用または別に特定した場合を除いて、反応時間および条件は、適当であると意図されるもの、例えば、約1~約24時間に渡って、ほぼ大気圧下、約10°C~約110°Cの温度範囲で行い、反応物を、一晩、平均約16時間放置する。用語溶媒、有機溶媒または不活性溶媒はそれぞれ、それに関連して記載される反応の条件下で不活性な溶媒を意味する、ジメチルホルムアミド、クロロホルム、塩化メチレン、ジエチルエーテル、メタノール、ピリジンなど。逆に特定しない限り、本発明の反応において用いる溶媒は不活性な有機溶媒である。本明細書に記載の化合物および中間体の単離および精製を、必要に応じて、例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーもしくは厚層クロマトグラフィー、またはこれらの手順の組合せなどの任意の好適な分離または精製手順により行うことができる。好適な分離および単離手順の特定例は、以下に記載の実施例を参照して得ることができる。しかしながら、他の等価な分離または単離手順も、勿論用いることができる。必要に応じて、および異性体を、例えば、結晶化により分離することができるジアステレオ異性体塩もしくは複合体の形成;例えば、結晶化、気体液体もしくは液体クロマトグラフィーにより分離することができるジアステレオ異性体誘導体の形成;一方のエナンチオマーと、エナンチオマー特異的試薬との選択的反応、例えば、酵素的酸化もしくは還元の後、改変された、および未改変のエナンチオマーの分離;または、例えば、結合したキラルリガンドを含むシリカなどのキラル支持体上、もしくはキラル溶媒の存在下などのキラル環境下での気体液体もしくは液体クロマトグラフィーなどの、当業者には公知の方法により分割することができる。例えば、式Iの化合物を低級アルカノール中に溶解し、ヘキサン中の70EtOAcで60分間コンディショニングしたChiralpakADカラム上に置くことができる。所望のエナンチオマーを、上記の分離手順の1つにより別の化学体に変換する場合、所望のエナンチオマー形態を遊離させるためのさらなる工程が必要になることが理解されるであろう。あるいは、特定のエナンチオマーを、光学的に活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を用いる非対称合成により、または対称変換により一方のエナンチオマーを他方に変換することにより合成することができる。出発材料式101の置換されていてもよい安息香酸は、例えば、AcrosOrganicもしくはAldrichChemicalCompanyMilwaukeeWIから市販されているか、または一般的に用いられる合成方法を用いて、当業者により容易に調製することができる。当業者であれば、市販の化合物はカルボキシル保護基PGを欠いているかもしれないことを理解できるであろう。他の反応体も同様に市販されているか、または一般的に用いられる合成方法を用いて、当業者により容易に調製することができる。式103の化合物の調製反応スキーム1の工程1を参照して、式101の化合物をバイアル中に入れる。バイアルを窒素でフラッシュし、陽圧を維持する。無水の非極性溶媒、例えば、ジクロロメタンを加えた後、過剰の式R1R2NHの化合物およびエチルジイソプロピルアミンなどの塩基を加える。混合物を約15時間攪拌した後、さらなるアリコートの式R1R2NHのアミンを加える。約14時間後、混合物を、陰イオン化モードで逆相HPLCMSにより分析する。フッ化スルホニル出発材料が存在する場合、さらなる量の式R1R2NHのアミンおよびエチルジイソプロピルアミンを加え、混合物を約4時間攪拌する。これを必要に応じて再度繰り返す。得られた生成物、式103の化合物を、クロマトグラフィー、濾過、蒸発、結晶化などの従来の方法により回収するか、または精製および/もしくは単離せずに次の工程で用いることができる。反応の開始時の過剰の求核アミンの添加が、有意なビス付加をもたらし、スルホンアミドおよびカルボキシアミド生成物が得られることに留意すべきである。必要に応じた求核アミンの段階的添加はこの副生成物の形成を抑制する。式105の化合物の調製反応スキーム1の工程2を参照して、式103の化合物を、過剰の式R3NH2の化合物、過剰のHBTUおよび過剰のHoBt水和物と共にバイアル中に入れる。バイアルを窒素でフラッシュし、陽圧を維持する。無水溶媒、例えば、ジメチルホルムアミドを加えた後、エチルジイソプロピルアミンなどの塩基を加え、混合物を約14時間攪拌する。得られた生成物、式105の化合物を、クロマトグラフィー、濾過、蒸発、結晶化などの従来の方法により回収するか、または精製および/もしくは単離せずに次の工程で用いることができる。式203の化合物の調製反応スキーム2の工程1を参照して、過剰のジフェニルシアノカルボンイミダートを、nが1または2である式201の化合物に加える。バイアルを密閉し、窒素でフラッシュし、陽圧を維持する。無水の不活性溶媒、例えば、THFを加えた後、エチルジイソプロピルアミンなどの塩基を加える。混合物を約1時間攪拌する。得られた生成物、式203の化合物を、クロマトグラフィー、濾過、蒸発、結晶化などの従来の方法により回収するか、または精製および/もしくは単離せずに次の工程で用いることができる。式205の化合物の調製反応スキーム2の工程2を参照して、式203の化合物をバイアル中に入れる。バイアルを窒素でフラッシュし、陽圧を維持する。THFなどの無水不活性溶媒を加えた後、過剰の式R10NH2のアミンを加える。混合物を、反応が完了するまで攪拌する。得られた生成物、式205の化合物を、クロマトグラフィー、濾過、蒸発、結晶化などの従来の方法により回収するか、または精製および/もしくは単離せずに次の工程で用いることができる。本発明の上記プロセスにより調製された化合物を、例えば、検出可能な量の1種以上の出発材料または試薬の存在により同定することができる。医薬品は認可および/またはマーケティングの前に薬局方の標準を満たさなければならないこと、ならびに合成試薬および前駆体は薬局方の標準により規定された限界を超えるべきではないことが公知であるが、本発明の方法により調製された最終化合物は、少量であるが、検出可能な量のそのような物質が存在してもよく、例えば、1未満の単一純度を有する95の純度範囲のレベルで存在してもよい。これらのレベルは、例えば、放射分光分析により検出することができる。そのような物質の存在について、医薬化合物の純度をモニターすることが重要であり、その存在を本発明の合成方法の使用を検出する方法としてさらに開示する。特定のプロセスおよび最終工程式Iの化合物の異性体のラセミ混合物を、クロマトグラフィーカラム上に入れ、およびエナンチオマーに分離する。式Iの化合物を、医薬的に許容される酸と接触させて、対応する酸付加塩を形成させる。式Iの医薬的に許容される酸付加塩を、塩基と接触させて、式Iの対応する遊離塩基を形成させる。特定の化合物本発明の化合物、医薬製剤、製造方法および使用には、式Iの置換基の以下に示す組合せおよび順列が提供される。本発明の特定の実施形態では、以下に示す置換基の組合せおよび順列を有する式Iの化合物が含まれるか、または用いられる。これらは、置換基の他の組合せおよび順列をサポートするための添付の特許請求の範囲のサポートに示されるもので、その置換基の他の組合せおよび順列は、簡潔を期すために詳細には特許請求しなかったが本開示の教示内に包含されると解すべきである。R1およびR2式Iの化合物について言及する場合、特定の実施形態においては、R1およびR2は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアラルキル、および置換されていてもよいヘテロアラルキルからなる群より独立に選択される。Brad非環式バージョンについての任意の下位優先。式Iの化合物について言及する場合、別の特定の実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、置換されていてもよい5、6または7員のヘテロ環を形成する。より具体的な実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、以下の基:置換されていてもよいアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキレンジオキシ、カルボキシ、置換されていてもよいアシルオキシ、置換されていてもよいアルコキシカルボニル、置換されていてもよいアミノカルボニル、シアノ、置換されていてもよいアシル、オキソ、ニトロ、置換されていてもよいアミノ、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、置換されていてもよいアミノスルホニル、アミジノ、フェニル、ベンジル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、置換されたヘテロシクリル、アリールオキシ、アラルコキシ、ヘテロアリールオキシ、およびヘテロアラルコキシのうちの1、2または3個で置換されていてもよい、ピペリジン1イル;ピペラジン1イル;モルホリン4イル;ピロリジン1イル;チオモルホリン4イルまたはジアゼパン1イルを形成する。R1、R2およびそれらが結合した窒素が置換されていてもよいジアゼパン1イル環を形成する場合、特定の実施形態においては、ジアゼパン窒素を、置換されていてもよいアシル、置換されていてもよいアルコキシカルボニル、または置換されていてもよいアミノスルホニルでさらに置換する。R1、R2およびそれらが結合した窒素が置換されていてもよいピペラジン1イル環を形成する場合、特定の実施形態においては、ピペラジン窒素を、水素、置換されていてもよいアシル、置換されていてもよいアルコキシカルボニル、置換されていてもよいアミノスルホニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいスルホニルでさらに置換する。R1、R2およびそれらが結合した窒素が置換されていてもよいピペラジン1イル環を形成する場合、特定の実施形態においては、ピペリジン環を、水素、置換されていてもよいアルコキシカルボニル、置換されていてもよいアミノカルボニル、置換されていてもよいアミノ、ヒドロキシ、置換されていてもよいアルコキシ、またはアルキレンジオキシでさらに置換する。R1、R2およびそれらが結合した窒素が置換されていてもよいピロリジン1イル環を形成する場合、特定の実施形態においては、ピロリジン環を、置換されていてもよいアミノでさらに置換する。R3式Iの化合物について言及する場合、特定の実施形態においては、R3は置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいヘテロアリールである。より具体的には、R3は、ハロゲン、低級アルコキシ、置換されていてもよいアリールもしくはヘテロアリール基で置換されていてもよいフェニル、イソキサゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、テトラゾール5イル、チアゾリル、チアジアゾリルまたはイミダゾリルである。1つの特定の実施形態においては、R3はハロゲンまたは低級アルコキシで置換されていてもよいフェニルである。別の特定の実施形態においては、R3は、置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基で置換されていてもよいヘテロアリール基である。さらにより具体的には、R3は、置換されていてもよいフェニル基で置換されていてもよい134チアジアゾール2イルであるか、またはR3は、1Hイミダゾール2イルである。最も特定の実施形態においては、R3はオキサゾール2イル、5フェニル134チアジアゾール2イルまたは1Hイミダゾール2イルである。R4式Iの化合物について言及する場合、特定の実施形態においては、R4はハロゲンである。より具体的には、R4はクロロである。R5、R6およびR7式Iの化合物について言及する場合、特定の実施形態においては、R5は水素、ハロゲン、ヒドロキシ、または置換されていてもよい低級アルキルであり;R6およびR7は水素、ハロゲン、ヒドロキシ、および置換されていてもよい低級アルキルからなる群より独立に選択される。別の実施形態においては、R5、R6およびR7は水素である。特定の亜属式Iの化合物を考慮する場合、特定の実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、置換されていてもよい5、6、もしくは7員のヘテロ環を形成し;R3は置換されていてもよいアリールもしくは置換されていてもよいヘテロアリールであり;R4はハロゲンであり;ならびにR5、R6およびR7は水素である。別の特定の実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、置換されていてもよい5、6、もしくは7員のヘテロ環を形成し;R3は置換されていてもよいアリールもしくは置換されていてもよいヘテロアリールであり;R4はクロロであり;ならびにR5、R6およびR7は水素である。別の特定の実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、置換されていてもよい5、6、もしくは7員のヘテロ環を形成し;R3は置換されていてもよいフェニル基で置換されていてもよい134チアジアゾール2イルであるか、もしくはR3は1Hイミダゾール2イル基であり;R4はハロゲンであり;ならびにR5、R6およびR7は水素である。別の特定の実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、置換されていてもよい5、6、もしくは7員のヘテロ環を形成し;R3は置換されていてもよいフェニル基で置換されていてもよい134チアジアゾール2イルであるか、もしくはR3は1Hイミダゾール2イル基であり;R4はクロロであり;ならびにR5、R6およびR7は水素である。別の特定の実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、置換されていてもよい5、6、もしくは7員のヘテロ環を形成し;R3は5フェニル134チアジアゾール2イルもしくは1Hイミダゾール2イルであり;R4はハロゲンであり;ならびにR5、R6およびR7は水素である。別の特定の実施形態においては、R1、R2およびそれらが結合した窒素は、置換されていてもよい5、6、もしくは7員のヘテロ環を形成し;R3は5フェニル134チアジアゾール2イルもしくは1Hイミダゾール2イルであり;R4はクロロであり;ならびにR5、R6およびR7は水素である。特定の化合物としては以下のものが挙げられる:より具体的には、本発明の化合物としては以下のものが挙げられる:用途、試験法、投与用途本発明の化合物は心臓筋節に対し選択的でありかつそれをモジュレートするので、心臓ミオシンに結合させるのに、および/または、心臓ミオシンの活性を増強するのに有用であり、ミオシンがATPを加水分解する速度を増大させる。本明細書で使用される場合、モジュレートするとは、ミオシン活性を増大させるか減少させることを意味し、一方増強するは活性を増大させることを意味する。また、本発明の代表的な化合物の試験において、該化合物を投与することにより心筋線維の収縮力を増大させることもできることが確認された。本発明の化合物、医薬製剤および医療方法は、限定するものではないが:急性または代償不全性うっ血性心不全、および慢性うっ血性心不全;特に収縮期心臓機能障害が関与する疾患;の心臓疾患を治療するのに使用される。さらなる治療用途としては、心臓移殖を待っている患者の心臓機能を安定化させるための投与、および、停止したまたは遅くなった心臓がバイパスポンプの使用の後、正常機能を取り戻すのを支援するための投与が挙げられる。試験筋節中のミオシンはATP加水分解によって力をつくる。従って、ATP加水分解の増加は筋肉収縮の力または速度の増加に対応すると考えられる。アクチンの存在下では、ミオシンATPアーゼ活性は100倍刺激される。つまりATP加水分解により、ミオシンの酵素的活性のみならずそのアクチンフィラメントとの相互作用も測定される。心臓筋節をモジュレートする化合物は、ミオシンによるATP加水分解の速度が増加または減少することによって確定することができ、好ましくは10μM未満より好ましくは、1μM未満の濃度で14倍の増加を呈する。そのような活性の好ましいアッセイではヒトから採ったミオシンを使うが、他の生物から採ったミオシンを使うこともできる。ミオシン結合におけるカルシウムの調節的役割を模擬するシステムも好ましい。別の方法として、生化学的に機能する筋節プレパラートを用いて、インビトロATPアーゼ活性を測定することもでき、これは、例えば2000年3月29日に出願の米国特許出願第09539164号に記載されている。ATPアーゼ加水分解のカルシウム感受性も含めた、筋節の機能的生化学挙動は、その精製された個々の成分好ましくはその調節成分およびミオシンも含んだを合わせることにより再生することができる。もう1つの機能するプレパラートは、インビトロ運動性アッセイである。これは、ミオシンを結合したスライドガラスに試験化合物を加え、ミオシンでカバーされたスライドガラス表面上をアクチンフィラメントが滑る速度を観測することにより行うことができるKronSJ1991MethodsEnzymol196399416。インビトロのATP加水分解速度はミオシンの増強化活性と相関しており、これはADPかまたはリン酸塩の生成を追跡することにより測定することができ、例えば1999年5月18日に出願の出願番号第09314464号に記載されている。ADPの産生は、ADP産生をNADH酸化にカップリングし酵素ピルビン酸キナーゼおよび乳酸デヒドロゲナーゼを用いて、吸光度かまたは蛍光発光によりNADHのレベルを追跡することにより追跡することもできるGreengardPNature178Part45346326341956MolPharmacol1970Jan63140。リン酸塩の産生は、プリンヌクレオシドホスホリラーゼを用いてリン酸塩産生をプリン類似体の開裂にカップリングさせることで追跡することができ、これは吸光度の変化を生じるProcNatlAcadSciUSA1992Jun18948847か、蛍光発光の変化を生じるBiochemJ1990Mar12666114。タンパク質活性の絶対速度を決定するためには、単一の測定で行うこともできるが、同一のサンプルの異なる時間における複数の測定を行うのが好ましい。そのような測定は、特に酵素についての読み出し値の吸光度特性または蛍光発光特性と似たものをもつ試験化合物の存在下ではより高い特異性をもっている。試験化合物は、マルチウェルプレートを用いた高度に並行的な方法で、化合物を個々にウェル中に配置するか、またはそれらを混合物で試験することによりアッセイすることができる。次に、標的タンパク質複合体、カップリング酵素と基質、およびATPを含むアッセイ成分をウェルに加えることができ、各プレートウェルの吸光度または蛍光発光をプレート読取機で測定することができる。好ましい方法では、384ウェル方式および25μL反応容量が用いられる。ピルビン酸キナーゼ/乳酸デヒドロゲナーゼがカップリングされた酵素システムHuangTGandHackneyDD1994JBiolChem2691649316501を用いて、各ウェル中のATP加水分解速度が測定される。当業者なら解かるように、アッセイ成分は緩衝液および試薬に加えられる。ここで概要を記した方法によって反応速度の測定が可能になるので、バックグラウンド信号を越える適切な検出用信号を得るためのインキュベーション期間が最適化される。このアッセイはリアルタイムで行われのでATP加水分解の動態が得られ、これによりアッセイのシグナル対ノイズ比が大きくなる。例えば、HaikalaHetal1995JCardiovascPharmacol25794801に記載されているように、心筋線維収縮力のモジュレーションは、界面活性剤を浸透可能にした心筋線維スキンド心筋線維とも呼ばれるを用いて測定することができる。スキンド心筋線維はその固有の筋節組織を保持しているが、細胞カルシウム周期の全側面は保持していないので、このモデルは2つの利点を提供する。第1に細胞膜が化合物の進入に対してバリアーとならないことと、第2にカルシウム濃度が制御されていることである。それゆえ、収縮力の増加は筋節タンパク質に対する試験化合物の影響の直接の測定となる。張力測定は、筋線維の一方を固定柱に取り付け、もう一方を、力を計ることができるトランスデューサに取り付けることで行われる。線維を伸ばして弛みをとった後、線維が収縮を開始したときに力トランスデューサが張力の増加を記録する。この測定は、線維を縮めさせないので等尺性張力と呼ばれる。浸透可能筋肉線維の活性化は、それを緩衝化カルシウム溶液に入れ、その後試験化合物または対照化合物を加えることで行われる。このような方法で試験された場合、本発明の化合物は、生理的収縮活性を引き起こすカルシウム濃度において力の増大を引き起こしたが、低カルシウム濃度やカルシウムの不存在下の弛緩緩衝液中では力の増加はほとんどなかったEGTAデータポイント。心臓筋節および心臓ミオシンに対する選択性は、上記で説明したアッセイの1つまたは複数において非心臓筋節の成分およびミオシンを代りに使い、得られた結果を、心臓筋節成分および心臓ミオシンを用いて得られた結果と比較することにより測定することができる。インビトロ再生筋節アッセイで観測されるATPアーゼの速度を増大させる化合物の能力は、S1ミオシンの代謝回転率の増加、あるいは修飾されたアクチンフィラメントのCa活性に対する感受性の増大から生じると考えられる。これら2つの考えられる作用モードを互いに区別するには、修飾されていないアクチンフィラメントをもつS1のATPアーゼ活性に対するその化合物の影響を最初に測定する。活性の増大が観測された場合は、Ca応答性調節機構に対するその化合物の影響はないことになると考えられる。第2の、より感度の高いアッセイを用いて、修飾されたアクチンの存在下ではS1ミオシンに対する活性化作用が増強されている純粋なアクチンフィラメントと比較して化合物を確定することができる。この第2のアッセイでは、心臓S1および骨格S1の心臓調節アクチンフィラメントおよび骨格調節アクチンフィラメントに対する活性が4つの並べ替え全てで比較される。心臓S1/心臓アクチンシステム、および、心臓S1/骨格アクチンシステムに対してはその効果を示すが、骨格S1/骨格アクチンシステム、および、骨格S1/心臓アクチンシステムに対してはその効果を示さない化合物は、確信して心臓S1アクチベーターと分類することができる。インビボ活性の最初の評価は筋細胞収縮能の細胞モデルで行うことができ、例えば、PoppingS他[モデルで評価することもできる。最終的には、心疾患を治療するための活性は、プラセボを対照としたヒトによるブラインド臨床試験で立証する。投与式Iの化合物は、治療的に有効な用量、例えば前に記載した疾患状態に対して治療を加えるのに十分な用量で投与される。本発明の化合物に対してはヒトに用いる用量レベルはなお最適化されなければならないが、一般には、1日あたりの投与は、約005~100mgkg体重、好ましくは約010~100mgkg体重、最も好ましくは約015~10mgkg体重である。つまり、70kgの人についての投与に対しては、用量範囲は、約35~7000mg日、好ましくは約70~7000mg日、および最も好ましくは約100~1000mg日になると考えられる。投与される活性化合物の量は当然治療を受けている患者およびその疾患状態、疾患の重症度、投与の方法およびスケジュール、ならびに処方をだす医師の判断に依存するものである。例えば、経口投与のあり得る用量範囲は約70~700mg日であると考えられ、一方経静脈投与のあり得る用量範囲は約700~7000mg日であると考えられ、活性薬剤は、より長いあるいはより短い血漿半減期のものがそれぞれ選択される。本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩の投与は、同様の用途に役に立つ薬剤の認められている投与方式のいずれにもよることができ、例えば限定するものではないが、経口的、皮下的、経静脈的、経鼻的、局所的、経皮的、腹腔内的、筋内的、肺内的、膣的、直腸的、あるいは眼内的が挙げられる。経口的投与および非経口的投与が、本発明の被対象課題である症状の治療では通例である。医薬的に許容される組成物の剤形としては固体、半固体、液体、エアロゾルが挙げられ、例えば錠剤、カプセル剤、粉剤、液体剤、懸濁液剤、坐剤などである。本化合物は持続放出型剤形あるいは制御放出型剤形で投与することもでき、予め決められた量での長期的および/または時限的パルス式投与用のデポー注射、浸透圧ポンプ、経皮電気的移送も含めるパッチなどが挙げられる。好ましくは、本組成物はちょうどその薬量を1回で投与するのに適した単一の剤形で提供される。本組成物は、単独でか、または、より典型的には在来の医薬用担体や賦形剤例えば、マンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、タルカム滑石紛、セルロース、ナトリウムクロスカルメロースsodiumcrosscarmellose;カルメロースナトリウムの架橋重合物崩壊剤、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウム、他と組み合せて投与することができる。望ましいなら、本医薬組成物には、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、pH緩衝剤、他例えば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンアセテート、トリエタノールアミンオレエート、他の少量の無毒補助的物質を入れることができる。意図する投与方式に依るが、本医薬製剤には通常本発明の化合物を約0005~95、好ましくは約05~50入れる。そのような剤形を調製する実際の方法は当業者には知られているか、または明らかであると思われ;例えば、RemingtonsPharmaceuticalSciencesMackPublishingCompanyEastonPennsylvaniaを参照されたい。さらに、本発明の化合物は、他の医薬、医薬製剤、アジュバントなどと並行投与することができ、本医薬製剤にはそれらを入れることができる。適した付加的に加える活性薬剤としては、例えば:心臓の神経ホルモンによる刺激を下方調節することで心不全の進行を遅らせ、心臓のリモデリングを妨げようとする治療薬例えば、ACE阻害薬またはβ遮断薬;心臓が収縮するのを刺激することで心臓機能を改善する治療薬例えば、陽性強心薬で、βアドレナリン作動薬であるドブタミンやホスホジエステラーゼ阻害薬であるミルリノンなど;および、心臓前負荷を減らす治療薬例えば、利尿薬で、フロセミドなどが挙げられる。1つの好ましい実施形態では、本組成物はピルまたはタブレットの形態をとることがあり、つまり本組成物は、本活性成分とともに、希釈剤例えばラクトース、スクロース、リン酸二カルシウムなど;潤滑剤例えばステアリン酸マグネシウムなど;および、結合剤例えばスターチ、ガムアカシア、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、セルロース、セルロース誘導体など;を含むことになる。もう1つの固体剤形では、粉剤、粒剤、溶液剤または懸濁剤例えば、プロピレンカーボネート、植物油またはトリグリセリド中のがゼラチン製カプセルの中にカプセル化される。医薬として投与可能な液体組成物は、例えば、上記で定義した活性化合物、および、任意的な医薬アジュバントを担体例えば、水、生理食塩水、水性のデキストロース、グリセロール、グリコール、エタノール他中に溶解、分散等させて溶液または懸濁液をつくることで調製することができる。注射可能な薬剤は、液体の溶液または懸濁液として、乳液として、あるいは、注射する前に液体中に溶解または懸濁させるのに適した固体の形態で、慣用の剤形で調製することができる。このような非経口投与用組成物に入っている活性化合物のパーセントは、その特異的な特性ならびにその化合物の活性および患者のニーズによって大きく変わる。そうは言うものの、溶液中の活性成分のパーセントが001~10であるものは採用可能で、その組成物が、後に上記パーセントに希釈されることになる固体剤である場合は、この値はもっと高くなる。好ましくは本組成物は、溶液で活性成分02~2を含むようにする。本活性化合物または塩の製剤は、単独で、あるいは、ラクトースのような不活性担体と組み合せて、呼吸器路にネブライザー用エアロゾルまたは溶液として、あるいは、通気法用微細粉末として投与することもできる。このような場合、製剤粒子直径は50ミクロン未満、好ましくは10ミクロン未満である。スクリーニングにおける使用本発明の化合物をミオシン結合についてのスクリーニング法において用いるには通常、ミオシンを支持体に結合させ、本発明の化合物をアッセイに加える。別のやり方としては、本発明の化合物を支持体に結合させ、そうしておいてミオシンを加えることもできる。新規な結合性作用物質を捜し求めることができるかも知れない化合物の群としては、特異的抗体、ケミカルライブラリー、ペプチド類似体などのスクリーニングで明らかにされた非天然の結合性作用物質が挙げられる。特に興味を引くのは、ヒト細胞に対して低い毒性をもつ候補作用物質についてのスクリーニングアッセイである。各種のアッセイをこの目的のために用いることができ、例えば標識化インビトロタンパク質タンパク質結合アッセイ、電気泳動度シフトアッセイ、タンパク質結合の免疫学的アッセイ、機能性アッセイホスホリル化アッセイ、他が挙げられる。例えば、米国特許第6495337号を参照されたい参照で本明細書に組み込む。以下の実施例は、上記の本発明の使用様式をより完全に記述し、ならびに本発明の様々な態様を実施するために意図される最良の様式を説明するのに役立つ。これらの実施例はいずれも、本発明の真の範囲を限定するのではなく、むしろ例示目的で提供されるものであることが理解される。本明細書で引用される全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み入れられるものとする。実施例14ピペラジン1カルボン酸エチルエステルの調製2クロロ5フルオロスルホニル安息香酸をバイアルに入れ、このバイアルを窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水ジクロロメタンを加えた後、エチル1ピペラジンカルボキシレートおよびエチルジイソプロピルアミンを加えた。混合物を15時間攪拌した後、さらにピペラジンを加えた。14時間後、混合物を、陰イオンモードの逆相HPLCMSにより分析した。出発材料フッ化スルホニル、ならびにイオンを示す極性の低い化合物が約3565の比で存在した。さらに035当量のピペラジンおよびエチルジイソプロピルアミンをそれぞれ加え、混合物を4時間攪拌した。この時点でのHPLCMSはわずかな進行を示し、さらに025当量のピペラジンを加えた。14時間攪拌した後、HPLCMSは反応が完了したことを示した。反応混合物を2mLの酢酸エチルで希釈し、1MHCl溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を濾過し、溶媒を回転式エバポレーターおよび減圧ポンプ上で除去したところ、134mgの白色固体が得られた。注記:反応開始時での過剰の求核アミンの添加は有意なビス付加をもたらし、スルホンアミドおよびカルボキシアミド生成物が得られる。必要に応じた求核アミンの段階的添加はこの副生成物の形成を抑制する。44クロロ3ベンゼンスルホニルピペラジン1カルボン酸エチルエステルの調製上記の安息香酸ピペラジンエチルエステルを、2アミノ5フェニル134チアジアゾールサルフェート、HBTUおよびHOBt水和物と共にバイアルに入れた。バイアルを窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水ジメチルホルムアミドを加えた後、エチルジイソプロピルアミンを加え、混合物を14時間攪拌した。ポジティブモードでの逆相HPLCMSによる分析により、酸出発材料が消費され、所望のを示すより極性の低い化合物と置換されたことが示された。反応混合物を4mLの水で希釈し、得られた沈殿物を濾過により回収し、以下のもの:水x2、1MHCl溶液x2、飽和炭酸水素ナトリウム溶液x2、水x2およびヘキサンx1で洗浄し、吸引下で乾燥した。119mgの灰白色固体が得られた。実施例24ピペラジン1カルボン酸tertブチルエステルの調製以下の改変を加えて上記の化合物と同様に調製した:1日目に総計20当量のtertブチル1ピペラジンカルボキシレートの添加後、HPLCMS分析により反応が13だけ完了したことが示された。さらに14当量のピペラジンを加え、反応物を24時間攪拌した。この時間の後、反応が完了したことが判明し、反応をエチルの場合と同様に実施した。1MHCl溶液で洗浄する代わりに、03M硫酸水素カリウム溶液を用い、飽和塩化ナトリウム溶液での洗浄も加えた後、乾燥、濃縮した。所望の収量の生成物が得られた。44クロロ3ベンゼンスルホニルピペラジン1カルボン酸tertブチルエステルの調製上記の安息香酸ピペラジンtertブチルエステルを、2アミノイミダゾールサルフェート、HATUおよびHOAtと共に100mLの丸底フラスコに入れた。フラスコを隔壁でキャップし、窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水ジメチルホルムアミドを加えた後、エチルジイソプロピルアミンを加え、混合物を14時間攪拌した。ポジティブモードでの逆相HPLCMSによる分析により、酸出発材料が消費され、所望のを示すより極性の低い化合物と置換されたことが示された。反応混合物を80mLの水で希釈し、得られた沈殿物を濾過により回収し、以下のもの:水x3、ヘキサンx2で洗浄し、吸引下で乾燥したところ、146gの灰白色固体が得られた。粗物質を、EtOAcヘキサントリエチルアミン、次いでEtOAcで溶出して精製したところ、896mgの灰白色が得られた。TLCEtOAcトリエチルアミンRf027。2クロロ54ピペラジン1スルホニルNベンズアミドの調製上記のBocピペラジンイミダゾール化合物をバイアルに入れ、26mLのトリフルオロ酢酸/ジクロロメタン/トリエチルシランで処理した。15分後、逆相HPLCMSにより示されたように、Boc除去が完了し、溶媒を減圧下で除去した。残渣をクロロホルムで3回共沸させ、減圧下に1時間置いた。1エチルカルボジイミドHCl、HOBt水和物をバイアルに加え、バイアルを密閉し、窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水ジクロロメタンを加えた後、エチルジイソプロピルアミンおよびシクロヘキシル酢酸を加え、混合物を14時間攪拌した。ポジティブモードでの逆相HPLCMSによる分析により、出発材料ピペラジンが消費され、所望のを示すより極性の低い化合物と置換されたことが示された。反応混合物を4mLのEtOAcで希釈し、有機相をそれぞれ2mLの以下のもの:水x3、飽和炭酸水素ナトリウム溶液x1、飽和塩化ナトリウムx1で洗浄した。有機抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮したところ、61mgの灰白色固体が得られた。44クロロ3ベンゼンスルホニルピペラジン1カルボン酸secブチルエステルの調製上記のBocピペラジンイミダゾール化合物をバイアルに入れ、シクロヘキシルアセトアミド化合物について上記したように36mLのトリフルオロ酢酸/ジクロロメタン/トリエチルシランで処理した。カルボン酸secブチルエステル4ニトロフェニルエステル、93重量および3mgのDMAPをバイアルに加え、バイアルを密閉し、窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水DMFを加えた後、エチルジイソプロピルアミンを加え、混合物を40°Cで14時間攪拌した。ポジティブモードでの逆相HPLCMSによる分析により、非常に極性の高い未保護ピペラジン出発材料が消費され、所望のを示すより極性の低い化合物、ならびに少量のさらに極性の低いビスアシル化された材料と置換されたことが示された。熱を除去し、反応混合物を4mLの2NNaOH溶液で希釈し、10分間攪拌した。混合物をEtOAcで抽出し、有機相をそれぞれ2mLの以下のもの:2NNaOHx5、水x1、10HOAc溶液x1、水x1、飽和炭酸水素ナトリウム溶液x1、飽和塩化ナトリウムx1で洗浄した。有機抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮したところ、121mgの灰白色固体が得られた。44クロロ3ベンゼンスルホニルピペラジン1カルボン酸イソプロピルエステルの調製上記のBocピペラジンイミダゾール化合物をバイアルに入れ、シクロヘキシルアセトアミド化合物について上記したように18mLのトリフルオロ酢酸/ジクロロメタン/トリエチルシランで処理した。DMAPをバイアルに加え、バイアルを密閉し、窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水DCMを加えた後、エチルジイソプロピルアミンおよびトルエン中のイソプロピルクロロホルマートの10M溶液を加え、混合物を14時間攪拌した。ポジティブモードでの逆相HPLCMSによる分析により、非常に極性の高い未保護のピペラジン出発材料が消費され、所望のを示すより極性の低い化合物と置換されたことが示された。固体が沈殿した。溶媒を減圧下で除去し、固体を1mLのDMF中に取り、4mLの水で再沈降させ、濾過により単離し、水x3、ヘキサンx2で洗浄し、吸引下で乾燥した。白色の固体が得られた。実施例344クロロ3ベンゼンスルホニルNシアノピペラジン1カルボキシイミジン酸フェニルエステルの調製上記のBocピペラジンイミダゾール化合物をシクロヘキシルアセトアミド化合物について上記したように18mLのトリフルオロ酢酸/ジクロロメタン/トリエチルシランで処理した。残渣を、pH8になるまで飽和炭酸水素ナトリウムで処理した後、溶液をEtOAcで抽出し、減圧下で濃縮したところ、16gの遊離アミンが得られた。ジフェニルシアノカルボンイミダートをフラスコに加え、それを密閉し、窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水THFを加えた後、エチルジイソプロピルアミンを加え、混合物を1時間攪拌した。ポジティブモードでの逆相HPLCMSによる分析により、非常に極性の高い未保護のピペラジン出発材料が消費され、所望のを示す化合物と置換されたことが示された。溶媒を減圧下で除去した。2クロロ54ピペラジン1スルホニルNベンズアミドの調製上記のフェニルイミダートをバイアルにいれ、密閉し、窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水THFを加えた後、シクロペンチルアミンを加え、混合物を48時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣を逆相HPLCにより精製したところ、27mgの生成物が得られた。実施例42クロロ5安息香酸の調製2クロロ5フルオロスルホニル安息香酸をバイアルに入れ、バイアルを窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水ジクロロメタンを加えた後、1メチルピペラジンを加えた。混合物を2時間攪拌した後、さらに12当量を加えた。14時間後、混合物を陽イオンモードの逆相HPLCMSにより分析した。極性の低いフッ化スルホニル出発材料が消費され、所望のを有する非常に極性の高い化合物と置換された。溶媒を減圧下で除去したところ、407mgの淡黄色固体が得られた。1HNMRにより、メチルピペラジンと夾雑した所望の化合物が存在した。2クロロ5安息香酸メチルエステルの調製上記の粗メチルピペラジン安息香酸を4mLのベンゼン中の30MeOHに溶解した。ヘキサン溶液中の20Mトリメチルシリルジアゾメタンを滴下しながら加えた。15分後、混合物をポジティブモードの逆相HPLCMSにより分析した。出発材料、ならびに極性の低い生成物が存在した。別の10当量のジアゾメタン化合物を加え、15分後、反応を再びモニターした。さらに02当量のジアゾメタンを加え、15分後、反応が完了したことをHPLCMSにより判定した。数滴の氷HOAcを黄色が消失するまで加え、溶媒を減圧下で除去したところ、491mgの黄色のガラスが得られた。これを2mLの50飽和炭酸水素ナトリウム溶液中に取り、ジクロロメタンで抽出した。抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮したところ、224mgの黄色の油が得られた。2クロロ5安息香酸リチウムの調製上記のメチルピペラジンメチルエステルをバイアルに入れ、15mLのMeOHおよび30μLの水に溶解した。LiOH水和物を加え、バイアルを密閉し、窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。混合物を60°Cで4時間加熱し、逆相HPLCMSにより反応が完了したことを判定した。溶媒を減圧下で除去したところ、197mgの白色固体が得られた。2クロロ5Nベンズアミドの調製上記のメチルピペラジン酸塩を、酸塩を中和し、溶解を行うために、反応開始の1時間後にエチルジイソプロピルアミンを加えたこと以外は上記と同様のHBTUプロトコルを用いて、2アミノ5フェニル134チアジアゾールサルフェートとカップリングさせた。合計3時間後、ポジティブモードの逆相HPLCMS分析により反応が完了した。反応混合物を3mLの水で希釈し、飽和炭酸水素塩溶液の添加によりpH8にした。得られた沈殿物を濾過により回収し、以下のもの:水x2およびヘキサンx1で洗浄した。生成物を109mgの灰白色固体として単離した。実施例5出発材料の合成2アミノ4フェニルイミダゾールを、LittleTLWebberSEASimpleandPracticalSynthesisof2AminoimidazolesJOrgChem19945972997305の手順から合成した。2アミノ5フェニルピリミジンを、GongYPaulsHWAConvenientSynthesisofHeteroarylbenzoicAcidsviaSuzukiReactionSynlett20006829831に記載の手順と類似の様式で合成した。2アミノオキサゾールを、CockerillAFDeaconAHarrisonRGOsborneDJPrimeDMRossWJToddAVergeJPAnImprovedSynthesisof2Amino13OxazolesUnderBasicConditionsSynthesis1976591593の手順から調製した。2アミノ4メチルイミダゾールを、LittleTLWebberSEASimpleandPracticalSynthesisof2AminoimidazolesJOrgChem19945972997305に記載の手順に従って調製した。実施例6カルボン酸secブチルエステル4ニトロフェニルエステルの調製4ニトロフェニルクロロホルマートをバイアルに入れ、バイアルを窒素でフラッシュし、陽圧を維持した。無水ジクロロメタンを加えた後、secブチルアルコールおよび無水ピリジンを加えた。15時間後、1種類の非極性化合物がHPLCMSにより観察されたが、ポジティブモードでもネガティブモードでもイオン化しなかった。反応混合物を10mLの酢酸エチルで希釈し、それぞれ7mLの以下のもの:05MNaOH溶液x2、水x1、1MHCl溶液x1、水x1、飽和塩化ナトリウムx1で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶液を濾過し、溶媒を回転式エバポレーター上で除去し、減圧したところ、211gの淡黄色固体が得られた。これは、1HNMRにより11molの4ニトロフェノールを含むことが示され、93重量の純度であると判定された。従って、合計収率は95であった。実施例7標的同定アッセイ特異性アッセイ:心臓ミオシンに対する化合物の特異性は、単一の50μMの化合物濃度におけるミオシンアイソフォームのパネル、すなわち心筋、骨格筋および平滑筋、のアクチン刺激によるATPアーゼに対する化合物の影響を比べることで評価する。筋原線維アッセイ:天然筋節での全長心臓ミオシンのATPアーゼ活性に対する化合物の影響を評価するのにスキンド筋原線維アッセイを行った。界面活性剤の存在下にラット心臓組織をホモジネートすることでラット心臓筋原線維を得た。このような処理は膜および可溶性細胞質タンパク質の大部分を除去するが、心臓筋節のアクトミオシン器官はそのまま残す。筋原線維プレパラートは、ATPをCa制御方式で加水分解する能力を維持している。化合物の存在下および不存在下におけるそのような筋原線維調製物のATPアーゼ活性は、最大速度の50および100を示すCa濃度においてアッセイした。実施例8用量依存性心臓ミオシンATPアーゼモジュレーションのインビトロモデル用量応答は、以下の試薬記載されている濃度は最終アッセイ濃度である:カリウムPIPES12mM、MgCl22mM、ATP1mM、DTT1mM、BSA01mgmL、NADH05mM、PEP15mM、ピルビン酸キナーゼ4UmL、乳酸デヒドロゲナーゼ8UmL、および消泡剤90ppmを含む、カルシウム緩衝の、ピルビン酸キナーゼおよび乳酸デヒドロゲナーゼ結合ATPアーゼアッセイを用いて測定する。pHは、水酸化カリウムを加えることで22°Cにて68に調整する。カルシウム濃度は、06mMEGTAおよび様々な濃度のカルシウムを含有する緩衝システムにより制御して、1x104M~1x108Mの遊離カルシウム濃度を達成する。このアッセイに特異的なタンパク質成分は、ウシ心臓ミオシンサブフラグメント1典型的には05μM、ウシ心臓アクチン14μM、ウシ心臓トロポミオシン典型的には3μM、およびウシ心臓トロポニン典型的には3~8μMである。1mMEGTAの存在下で測定した場合のATPアーゼ活性と、02mMCaCl2の存在下で測定した場合のATPアーゼ活性との間に最大差を達成するトロポミオシンおよびトロポニンの正確な濃度は、滴定により経験的に決定される。アッセイにおいて、所望のATP加水分解速度を達成するミオシンの正確な濃度も滴定により経験的に決定される。これは、各タンパク質プレパラートにおける活性分子の割合がばらついていることからプレパラート間で変わる。化合物用量応答は、典型的には最大ATPアーゼ活性の50に対応するカルシウム濃度pCa50において測定するので、予備的な実験を行って、1x104M~1x108Mの遊離カルシウム濃度に対するATPアーゼ活性の応答を試験する。その後、アッセイ混合物をpCa50典型的には3x107Mに調整する。アッセイは、最初に試験化合物の希釈シリーズを調製することで行い、各々には、カリウムPipes、MgCl2、BSA、DTT、ピルビン酸キナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ミオシンサブフラグメント1、泡消剤、EGTA、CaCl2、および水を含むアッセイ混合物が入っている。このアッセイは、カリウムPipes、MgCl2、BSA、DTT、ATP、NADH、PEP、アクチン、トロポミオシン、トロポニン、泡消剤、および水を含む溶液の等容量を加えることで開始する。ATP加水分解は340nmにおける吸光度で追跡する。得られた用量応答曲線は、4パラメーター方程式yBottomHillで近似する。AC14は、ATPアーゼ活性が用量曲線のBottomよりも14倍高い濃度と定義される。実施例9筋細胞アッセイラット成体心臓心室筋細胞の調製成体雄性SpragueDawleyラットをイソフルランガス酸素混合物で麻酔する。心臓を素早く切除し、リンスし、その上行大動脈にカニューレを挿入する。心臓に対し灌流圧力60cmH20で連続的逆行灌流を開始する。心臓を、以下の成分:110mMNaCl、26mMKCL、12mMKH2PO47H20、12mMmgSO4、21mMNaHCO3、11mMグルコースおよび4mMHepes全てSigma社の、名目上Ca2が入っていない変性Krebs溶液で最初に灌流を行う。この培地は循環させず、絶えずO2をガス供給する。約3分後、心臓が十分に白化、軟化するまで、33コラゲナーゼ169μmg活性、ClassII、WorthingtonBiochemicalCorpFreeholdNJおよび25μM最終カルシウム濃度が補足された変性Krebs緩衝液で心臓を灌流した。心臓をカニューレから取り外し、心房と血管を捨て、心室を小片にカットする。心室組織をコラゲナーゼ含有新鮮Krebs中に穏やかに掻き混ぜることで筋細胞を分散させ、その後50ccの管の中にある200μMナイロンメッシュを穏やかに通過させる。得られた筋細胞を、25μmカルシウム含有変性Krebs溶液中に再懸濁させる。カルシウム溶液100mMストック液を10分間隔で100μMカルシウムが達成されるまで加えることで、筋細胞をカルシウム耐性にする。30分後、上澄み液を捨て、Tyrode緩衝液137mMNaCL、37mMKCL、05mMMgCL、11mMグルコース、4mMHepes、および12mMCaCl2、pH7430~50mLを細胞に加える。細胞を37°Cに60分間保持してから実験を開始し、単離して5時間以内に使用した。細胞が標準ベース基準の150およびイソプロテレノールイソ;ベースの250にこたえることでQC判定基準をパスした場合のみ、細胞のプレパラートは用いる。さらに、ベース収縮能が3~8である細胞のみを以下の実験に用いた。成体心室筋細胞収縮能の実験筋細胞が入っているTyrode緩衝液のアリコートを、加熱台を備えた灌流チャンバーRC27NEシリーズ20WarnerInstrumentsに入れた。筋細胞をくっ付かせ、チャンバーを37°Cに加熱し、細胞をこの後37°CのTyrode緩衝液で灌流した。筋細胞を白金電極間の中で1Hzで場励起する閾値の20上で。はっきりとした条線をもちかつペーシングの前に無活動である細胞のみを収縮能実験に使用する。ベース収縮能を測定するため、可変フレーム速度60~240Hz式電荷結合型デバイスカメラを用いて、筋細胞を40x対物レンズで撮像し、その画像をデジタル化し、サンプリングスピード240Hzでコンピュータースクリーン上に表示する。[フレームグラッバー、ミオペーサー、収集、および細胞収縮能についての分析ソフトウエアは、IonOptixMiltonMAから入手可能である。]最低5分のベース収縮期間の後、試験化合物001~15μMを筋細胞に5分間灌流する。この時点以降、新鮮なTyrode緩衝液を灌流して、化合物のウォッシュアウト特性を評価する。端部検出法を用いて、筋細胞の収縮能ならびに収縮速度および弛緩速度を連続的に記録する。収縮能の分析:2つまたはそれ以上の異なる筋細胞プレパラートを用いて、化合物1つあたり3つまたはそれ以上の個別の筋細胞を試験した。各細胞について、ベースにおける化合物インフュージョンの前1分と定義する、および、化合物を加えたあとの収縮能トランジエントの20個またはそれ以上を平均し、比べる。これらの平均トランジエントを分析して拡張期長さの変化を決定し、Ionwizard分析プログラムIonOptixを用いて短縮率拡張期長さの減少、ならびに最大収縮速度および弛緩速度um秒を決定する。個々の細胞の分析データを合わせる。ベースに対する短縮率の増加は、筋細胞収縮能の増強を意味する。カルシウムトランジエント分析:Fura負荷:細胞透過性Fura2MolecularProbes社をプルロニックMolProbes社およびFBSの等量中にRTにて10分間溶解させる。1μMのFuraストック溶液を、500mMのプロベネシドSigma社を含有するTyrode緩衝液でつくる。細胞を負荷するため、この溶液をRTにて筋細胞に加えた。10分後緩衝液を除去し、細胞をプロベネシド含有Tyrodeで洗い、RTにて10分間インキュベートする。洗浄とインキュベートを繰り返す。収縮能とカルシウムの同時測定を負荷の40分内に行う。撮像:試験化合物を細胞に灌流する。同時の収縮能とカルシウムトランジエント比をベースラインおよび化合物を加えた後において測定する。蛍光発光によるカルシウム測定との干渉を避けるため光路中に赤色フィルターを使用して、細胞をデジタル的に撮像し、収縮能を上記したようにして測定する。カルシウムトランジエント分析についての収集、分析用ソフトウエアおよびハードウエアはIonOptixから得られる。この蛍光発光測定用機器中にはキセノンアークランプ、および、ガルバノ駆動ミラーにより波長340と380との間で交互するHyperswitchデュアル励起光源が入っている。液体充満ライトガイドによりこのデュアル励起光が顕微鏡まで送達され、発光蛍光が光電子増倍管photomultipliertubePMTを用いて測定される。蛍光発光システムインターフェイスがこのPMT信号の配信路を決め、その比がIonWizard収集プログラムを用いて記録される。分析:各細胞について、ベースにおける、および化合物を加えた後における10またはそれ以上の収縮能/カルシウム比トランジエントを平均し、比較した。収縮能平均過渡データをIonwizard分析プログラムを用いて分析して、拡張期長さにおける変化、および、短縮率拡張期長さの低下を決定する。平均カルシウム比トランジエントをIonwizard分析プログラムを用いて分析して、拡張期比および収縮期比における変化、および、ベースラインの75時間T75を決定する。持続性:応答の持続性を評価するため、筋細胞を、試験化合物に25分間曝露し、その後2分間ウォッシュアウトを行った。収縮能応答を、化合物インフュージョン後5分および25分において比較する。閾値電圧:筋細胞は閾値より約20高い電圧で場励起する。これらの実験では閾値電圧細胞をペース運動させる最低電圧は経験的に決められ、細胞をこの閾値においてペース運動させ、そうして試験化合物をインフュージョンする。化合物活性が定常状態になった後、電圧を20秒間下げ、その後再スタートさせる。イオンチャネルの交互変化は、閾値作用電圧を上げることまたは下げることに相当する。HZ周波数:筋細胞の収縮性は3Hzで以下のようにして測定される:1分のベース時間点の後試験化合物を5分間灌流、その後2分間のウォッシュアウト。細胞の収縮が完全にベースラインに戻った後Hz周波数を1に下げる。初期の順化期間の後、細胞を同じ化合物に曝露する。この種ラットは1Hzにおいて負の力収縮頻度を示すので、3Hzにおいてはその細胞のFSはもっと小さいと考えられるが、細胞は、本化合物の存在下ではその短縮率を大きくすることでなお応答すると考えられる。イソプロテレノールによる添加物:化合物がアドレナリン刺激薬イソプロテレノールとは異なるメカニズムで作用することを実証するため、細胞にfura2を負荷し、収縮/カルシウム比の同時測定を行う。筋細胞を、5μmの試験化合物、緩衝液、2nMのイソプロテレノール、緩衝液、および、試験化合物とイソプロテレノールの組み合せに順次曝露する。実施例10用量依存性心臓ミオシンATPアーゼモジュレーションのインビトロモデルウシおよびラットの心臓ミオシンをそれぞれの心臓組織から精製する。特異性試験に使用する骨格筋ミオシンおよび平滑筋ミオシンはウサギ骨格筋およびニワトリ砂嚢からそれぞれ精製する。アッセイに使用するミオシンを全て、キモトリプシンによる限定的タンパク分解により単頭型可溶形singleheadedsolubleform;S1に変換する。その他の筋節構成要素:トロポニン複合体、トロポミオシンおよびアクチンは、ウシ心臓心臓筋節またはニワトリ胸筋骨格筋節から精製した。ミオシンの活性は、ATPの加水分解速度を測定することで追跡する。ミオシンATPアーゼはアクチンフィラメントにより極めて顕著に活性化される。ATPターンオーバーは、ピルビン酸キナーゼPKおよび乳酸デヒドロゲナーゼLDHを用いる結合酵素的アッセイで検出する。このアッセイでは、ATP加水分解の結果として生成したADPのそれぞれは、LDHによるNADH分子の同時酸化でPKによりATPに再生される。NADH酸化は、340nmの波長における吸光度の減少により都合よく追跡することができる。用量応答は、以下の試薬記載されている濃度は最終アッセイ濃度である:カリウムPIPES12mM、MgCl22mM、ATP1mM、DTT1mM、BSA01mgmL、NADH05mM、PEP15mM、ピルビン酸キナーゼ4UmL、乳酸デヒドロゲナーゼ8UmL、および消泡剤90ppmを含む、カルシウム緩衝の、ピルビン酸キナーゼおよび乳酸デヒドロゲナーゼ結合ATPアーゼアッセイを用いて測定する。pHは、水酸化カリウムを加えることで22°Cにて68に調整する。カルシウム濃度は、06mMEGTAおよび様々な濃度のカルシウムを含有する緩衝システムにより制御して、1x104M~1x108Mの遊離カルシウム濃度を達成する。このアッセイに特異的なタンパク質成分は、ウシ心臓ミオシンサブフラグメント1典型的には05μM、ウシ心臓アクチン14μM、ウシ心臓トロポミオシン典型的には3μM、およびウシ心臓トロポニン典型的には3~8μMである。1mMEGTAの存在下で測定した場合のATPアーゼ活性と、02mMCaCl2の存在下で測定した場合のATPアーゼ活性との間に最大差を達成するトロポミオシンおよびトロポニンの正確な濃度は、滴定により経験的に決定される。アッセイにおいて、所望のATP加水分解速度を達成するミオシンの正確な濃度も滴定により経験的に決定される。これは、各タンパク質プレパラートにおける活性分子の割合がばらついていることからプレパラート間で変わる。化合物用量応答は、典型的には最大ATPアーゼ活性の50に対応するカルシウム濃度pCa50において測定するので、予備的な実験を行って、1x104M~1x108Mの遊離カルシウム濃度に対するATPアーゼ活性の応答を試験する。その後、アッセイ混合物をpCa50典型的には3x107Mに調整する。アッセイは、最初に試験化合物の希釈シリーズを調製することで行い、各々には、カリウムPipes、MgCl2、BSA、DTT、ピルビン酸キナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ミオシンサブフラグメント1、泡消剤、EGTA、CaCl2、および水を含むアッセイ混合物が入っている。このアッセイは、カリウムPipes、MgCl2、BSA、DTT、ATP、NADH、PEP、アクチン、トロポミオシン、トロポニン、泡消剤、および水を含む溶液の等容量を加えることで開始する。ATP加水分解は340nmにおける吸光度で追跡する。得られた用量応答曲線は、4パラメーター方程式yBottomHillで近似する。AC14は、ATPアーゼ活性が用量曲線のBottomよりも14倍高い濃度と定義される。化合物が心臓ミオシンを活性化する化合物の能力は、S1サブフラグメントのアクチン刺激によるATPアーゼに対する化合物の効果により評価する。アッセイにおけるアクチンフィラメントはトロポニンおよびトロポミオシンで修飾し、Ca濃度は、最大活性の50を生じると考えられる値に調整する。S1ATPアーゼを、化合物の希釈系の存在下で測定する。コントロールの存在下で測定されたATPアーゼ速度よりも40高い活性化に必要な化合物濃度をAC40として報告する。実施例11インビトロ短縮率アッセイ動物CharlesRiverLaboratoriesの雄SpragueDawleyラット275~350gをボーラス効果およびインフュージョン実験に使用する。心不全動物は後に述べる。ラットは1ケージあたり2匹入れ、エサおよび水に自由にアクセスできるようにしておく。実験の前に最低3日の順化期間を置く。心エコー検査動物をイソフルランで麻酔し、手術の間、手術平面内に保持する。中心体温を、加熱パッドを使って37°Cに維持する。麻酔をしたら、動物の毛を剃り、脱毛器をあてて、胸部から残っている全ての柔皮毛を除去する。胸部をさらに70ETOHで下準備し、超音波ジェルをつける。GESystemVingmed超音波システムGeneralElectricMedicalSystemsを使用して、10MHzプローブを胸壁上に置き、乳頭筋のレベルにおいて短軸ビューで画像を得る。左心室の2DMモードの画像を、化合物ボーラスのインジェクションまたはインフュージョンの前および後に撮る。インビボ短縮率[拡張末期径-収縮末期径/拡張末期径×100]を、GEEchoPakソフトウエアプログラムを用いたMモード画像分析により決定する。ボーラスおよびインフュージョンの効果ボーラスおよびインフュージョンのプロトコルについては、短縮率は上述した心エコー検査により測定する。ボーラスおよびインフュージョンのプロトコルに対しては、5つの投薬前MMode画像を化合物のボーラスインジェクションまたはインフュージョンの前に30秒間隔で撮る。インジェクションの後は、Mモード画像を1分間隔および5分間隔で、その後は最大30分間隔で撮る。ボーラスインジェクション05~5mgkgまたはインフュージョンは、尾静脈カテーテルによる。インフュージョンパラメーターは化合物の薬物速度論プロファイルから決定する。インフュージョンについては、動物に尾静脈カテーテルから1分の負荷用量、その後直ちに29分のインフュージョン用量を入れる。負荷用量は、目標濃度×定常状態分布容量を決めることで計算される。維持用量濃度は、目標濃度×クリアランスを計算することで決める。化合物を25キャビトロン賦形剤中に調剤してボーラスおよびインフュージョンのプロトコルを行う。血液サンプルを採って化合物の血漿濃度を測定する。実施例12正常動物および心不全動物の血流力学動物をイソフルランで麻酔し、手術平面内に維持して、カテーテル挿入に備えて毛を剃る。首部を切開し、右頸動脈を除去分離する。この右頸動脈の中に2本組FrenchMillarMicrotipPressureCatheterMillarInstrumentsHoustonTXをカニューレ挿入し、大動脈を過ぎて左心室の中まで通す。化合物または賦形剤がインフュージョンされる間、拡張末期圧、最大dpdt、収縮期圧および心拍数を連続測定する。PowerLab機とそのChart4ソフトウエアプログラムAdinstrumentsMountainViewCAを用いて測定を記録分析する。血流力学測定を選択インフュージョン濃度において行う。血液サンプルを採取して化合物の血漿濃度を測る。実施例13うっ血性心不全の左冠動脈閉塞モデル動物雄SpragueDawleyCD220~225g;CharlesRiverラットをこの実験に使用した。動物は、標準的な実験室条件下に置いて水と市販のげっ歯類用餌に自由にアクセスできるようにしておいた。部屋の温度を20~23°Cに維持し、部屋の灯かりを1212時間明暗の周期においた。動物は実験の前に5~7日この実験室環境に順応させた。動物は手術の前一晩絶食させた。閉塞手術動物をケタミン/キシラジン95mgkgおよび5mgkgで麻酔し、14~16ゲージ改良型静脈内カテーテルを挿管した。麻酔レベルを足指をピンチすることでチェックした。中心体温を加熱ブランケットを用いて37°Cに維持した。手術部域をクリップ留めし、スクラブした。ラットを右側面横臥に置き、初めにピーク吸息圧10~15cmH2Oおよび呼吸速度60~110呼吸分の人工呼吸器上に置いた。動物には人工呼吸器により100O2を送達した。手術部位を手術用スクラブとアルコールでスクラブした。胸郭を4本目の肋骨と5本目の肋骨の肋間腔で切開した。下に在る筋肉を、外側胸静脈を避けるように注意しながら切り裂いて、肋間筋を露出させた。胸腔に4本目と5本目の肋骨の肋間腔から進入し、切開部を広げて心臓を目視できるようにした。心膜を開口して心臓を露出させた。テーパー状ニードルを用いて60絹縫合糸を、左心耳の挿入部から約1mmのところに肺動脈円錐左縁と接触して存在する、左冠動脈の起点近傍のその左冠動脈の周りに通した。縫合糸を動脈の周りに縛ることで左冠動脈を閉塞させたLCO。偽ラットを、縫合糸を縛らない以外は同じに処置した。切開部を3層に閉鎖した。ラットは、自分で呼吸できるまで人工呼吸に付された。ラットから抜管し、加熱パッド上で回復させた。手術後鎮痛のためにブプレノルフィン001005mgkgSQをラットに投与した。覚醒したら、ラットをそのケージに戻した。感染または苦痛の徴候についてラットを毎日追跡調査した。感染したまたは瀕死のラットは安楽死させた。ラットの体重を1週間に1度計った。薬効分析梗塞形成術の約8週間後に、心エコー検査によって心筋梗塞の徴候についてラットを調べた。偽ラットに比べて短縮率が減っているラットだけをさらに薬効実験に利用した。全ての実験において、4つのグループ、すなわち偽賦形剤、偽化合物、LCL賦形剤、およびLCL化合物が存在した。LCLの10~12週間後に、ラットに選択インフュージョン濃度でインフュージョンした。前と同じように、化合物をインフュージョンする前に5つの投与前MMode画像を30秒間隔で撮り、その後Mモード画像を30秒間隔で10分まで、その後毎分または5分間隔で撮った。このMモード画像から短縮率を決定した。投与前短縮率と化合物処理短縮率間の比較は、ANOVAとポスドク学生NewmanKeulsによって行われた。ラットを回復させ、7~10日内にラットに化合物を血流力学プロトコルにより再びインフュージョンして、心不全ラットにおける化合物の血流力学的変化を測った。インフュージョンの終了とともに、ラットを殺し、心臓の重量を測定した。上述のようにして試験したら、式Iの化合物は所望の作用をもっていることが示された。本発明をその特定の実施形態を参照しながら説明してきたが、当業者なら、本発明の真の精神および範囲を逸脱することなく様々な変形体をつくることができること、また等価体で置き換えることができることを理解すべきである。加えて、本発明の目的、精神および範囲に、特定の状況、物質、物質の組成物、製法、製法工程を適応させて多くの改良をなすこともできる。そのような改良の全ては本明細書に添付の特許請求の範囲の中にあるものとみなす。これまでに引用した全ての特許および文献は本明細書に参照で組み入れられる。