"式I:の活性成分及びポリエチレングリコールとポリ乳酸のコポリマーのコンジュゲートであって、式中、-mPEGはメトキシ-ポリエチレングリコールであり;-PLAはポリ乳酸であり;-mはポリエチレングリコール断片mPEGの平均分子量であり、100から15000Daで表示の範囲であり;-nはポリ乳酸断片の平均分子量であり、1000から50000Daで表示の範囲であり;-APは活性成分残基であり;-Lはリンカーであり;-Xは水素原子、または場合によりハロゲン原子、OR、CN、CF3、NRR’及びCOOR基から選択される1個以上の置換基で置換されているアルキル基であり、R及びR’は同一または相互に異なっており、水素原子またはアルキル基であるコンジュゲート、及びその医薬的に許容され得る塩。AP残基は該AP中に存在しているOH基によりLに結合している、請求項1に記載のコンジュゲート。APはタキソイドである、請求項1または2に記載のコンジュゲート。タキソイドはパクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル及びラロタキセルから選択される、請求項3に記載のコンジュゲート。活性成分は2’位にグラフトされているカバジタキセルである、請求項1から4のいずれか1項に記載のコンジュゲート。PLAは、場合により残存している遊離ヒドロキシル末端において保護基を表す、請求項1から5のいずれか1項に記載のコンジュゲート。式Ia:に相当し、式中、L、AP及びXは請求項1から6のいずれか1項に定義されている通りであり並びにpは1から340の範囲であり、並びにqは10から700の範囲である請求項1から6のいずれか1項に記載のコンジュゲート。式Ib:に相当し、式中、L及びAPは請求項1から6のいずれか1項に定義されている通りであり並びにpは1から340の範囲であり、並びにqは10から700の範囲である請求項1から7のいずれか1項に記載のコンジュゲート。Lはコハク酸、グルタル酸またはジグリコール酸のジカルボキシレート誘導体を表す、請求項1から8のいずれか1項に記載のコンジュゲート。請求項1から9のいずれか1項に記載のコンジュゲートの製造方法であって、式III:の化合物を式:AP-L-Hに相当する活性成分の誘導体とカップリングすることを含み、式中、mPEG、m、PLA、n、X、AP及びLは請求項1から9のいずれか1項に定義されている、方法。式III:の化合物であって、式中、mPEG、PLA、m、n及びXは請求項1から9のいずれか1項に定義されている、化合物。請求項11に記載の式IIIの化合物の製造方法であって、1.式IV:の化合物のヒドロキシル基を適切な保護基により選択的にモノ保護する段階、2.こうして得たモノ保護されている化合物とPLAn基の前駆体をカップリングする段階、及び3.段階1で導入した前記保護基を脱保護する段階を含み、mPEG、m、PLA、n及びXは請求項1から9のいずれか1項に記載されている、方法。モノ保護をにより実施し、Lgはハロゲン原子またはトリフルオロメタンスルホネート基のような離脱基を表す、請求項12に記載の方法。段階2を前駆体3,6-ジメチル-[1,4]-ジオキサン-2,5-ジオンを用いる開環重合ROPにより実施する、請求項12または13に記載の方法。請求項1から9のいずれか1項に記載のコンジュゲートを含むナノ粒子。請求項1から9のいずれか1項に記載のコンジュゲートを含む医薬組成物。癌の治療及び/または予防において使用するための、請求項1から9のいずれか1項に記載のコンジュゲート。よって、化学量論的カプセル化及び活性成分の限定された沈殿を可能にする共有結合性カプセル化を用いてこのタイプの製剤中のコポリマーからの活性成分の放出のコントロールを改善することが望ましい。本発明は、コポリマーと活性成分の間にリンカーを導入することによりコンジュゲーションと称される共有結合性カプセル化を行うことにより、加水分解のための活性成分の接近可能性を大きく改善することにより、この技術的問題に対して答えることを提案する。よって、本発明者らは、上記した要件を満たすポリエチレングリコールとポリ乳酸の官能化コポリマーを見出した。よって、第1の主題によれば、本発明は、式I:の活性成分及びポリエチレングリコールとポリ乳酸のコポリマーのコンジュゲート及びその医薬的に許容され得る塩に関する。上記式I中、-mPEGはメトキシ-ポリエチレングリコールであり、-PLAはポリ乳酸であり、-mはポリエチレングリコール断片mPEGの平均分子量であり、100から15000Daで表示、特に100~10000、より特に1000から5000の範囲であり、例えば約2000であり、-nはポリ乳酸断片の平均分子量であり、1000から50000Daで表示、より特に3000から20000、更により特に5000から20000の範囲から選択され、例えば約10000または14000であり、-APは好ましくはタキソイドから選択される活性成分残基であり、-Lはリンカーであり、-Xは水素原子、または場合によりハロゲン原子、或いはOR、CN、CF3、NRR’またはCOOR基から選択される1個以上の置換基で置換されているアルキル基であり、ここでR及びR’は同一であるかまたは相互に異なっており、水素原子またはアルキル基である。用語平均分子量は重量平均分子量を指す。通常、AP残基は、AP中に存在しているOH基によりLに結合している。好ましくは、PLAは、場合により残存している遊離ヒドロキシル末端において保護基、例えばC=OCH3基のようなC=Oアルキル基を呈する。好ましくは、Xはメチル基である。mPEGm基は、式:式中、pはコポリマー中のエチレンオキシド単位の平均数を表すで表され得る。通常、pは1から340、例えば約20から110の範囲である。PLAn基は、式:式中、qはコポリマー中の乳酸単位の平均数を表すで表され得る。通常、qは10から700、例えば約40から300の範囲である。本発明に従うコンジュゲートにより、ポリマーの鎖あたり1から50、通常最高15w/w、特に約5~6の活性成分の化学量論的カプセル化が可能になり、水性相中の活性成分の少ない沈殿及びリンカーによる活性成分のコントロールされた放出を示す。更に、mPEG/PLAコポリマーの特別のY構造のために、活性成分は疎水性/親水性界面に存在し、よって特異的及び非特異的加水分解に接近可能であり、疎水性コア中に位置している活性成分と比較して放出をコントロールすることができる。上記した式Iにおいて、APはタキソイドから選択され得る。このタキソイドは特にパクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル及びラロタキセルから選択され、例えば式:を有している。通常、タキソイドの場合、OH基はタキソイドの側鎖の2’位または7位に存在している。より特に、活性成分は2’位でグラフトされているカバジタキセルである。特に、よって、式Iの化合物は式:を有する。用語リンカーは、1から10個の炭素原子を含み、mPEG/PLAコポリマーに結合しているその末端に酸素原子、APに結合しているその末端の他方に活性成分中に存在しているヒドロキシル基と反応する基、例えばカルボン酸基を有するアルキル鎖を意味すると理解される。このアルキル鎖は、場合により-O-、-C=O-、-NR-または-O-C=O-NR-、-S-、-S-S-から選択される1個以上の原子または基により中断されていてもよい。リンカーは、特にコハク酸、グルタル酸またはジグリコール酸のジカルボキシレート誘導体から選択され得る。特に、コハク酸、グルタル酸及びジグリコール酸のジカルボキシレート誘導体、より好ましくはコハク酸のジカルボキシレート誘導体を挙げることができる。好ましくは、式Iのコンジュゲートは、式Ia:式中、AP、X、L、p及びqは上に定義した通りであるに相当する。より特に、式Iの化合物は、次式Ib:式中、AP、L、p及びqは上に定義した通りであるに相当する。特定実施形態によれば、本発明に従うコンジュゲートは上記式Ib式中、Lはコハク酸、グルタル酸またはジグリコール酸のようなジカルボキシレート誘導体であるに相当する。式Iの化合物は1個以上の不斉炭素原子を含み得る。よって、前記化合物はエナンチオマーまたはジアステレオマーの形態で存在し得る。これらのエナンチオマー、ジアステレオマー、及びラセミ混合物を含めたその混合物が本発明の範囲内である。式Iの化合物は塩基または酸との付加塩の形態で存在し得る。これは、特にXがNRR’基を含む場合である。前記付加塩も本発明の範囲内である。これらの塩は医薬的に許容され得る酸を用いて製造され得るが、例えば式Iの化合物を精製または単離する際に使用される他の酸の塩も本発明の範囲内である。式Iの化合物は水和物または溶媒和物の形態、すなわち1分子以上の水または溶媒との結合または会合の形態でも存在し得る。前記水和物及び溶媒和物も本発明の範囲内である。本発明に関連して:-ハロゲン原子はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味すると理解される;-アルキル基は飽和の線状または分岐状C1-C6脂肪族炭化水素基を意味すると理解される。例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチルまたはペンチル基等が挙げられ得る;-アリール基は5から10個の炭素原子を含む芳香族環式基を意味すると理解される。アリール基の例としてフェニルまたはナフチルが挙げられ得る。別の主題によれば、本発明は本発明に従うコンジュゲートの製造方法に関する。第1の実施形態によれば、式Iのコンジュゲートは、式III:の化合物を式:AP-L-H式中、Lは一般式Iに定義されている通りであるに相当する活性成分の誘導体とカップリングすることにより得られ得る。よって、タキソイドの場合、AP-L-Hは、タキソイドの側鎖の遊離OH基が通常LHのカルボン酸基を介してLH基でエステル化されているAP誘導体に相当する。このカップリング反応は当業者に公知のエステル化条件下で、特にカルボジイミド例:ジイソプロピルカルボジイミドDIPCのような活性化剤の存在下、場合によりジメチルアミノピリジンDMAPのような触媒を用いて実施され得る。この反応は、ジクロロメタン、クロロホルムまたは酢酸エチルのような適切な溶媒中、0°Cから溶媒の還流温度の範囲の温度で、より一般的には周囲温度で実施され得る。修飾された活性成分AP-L-Hは、活性成分APから所望のリンカーLの前駆体とのカップリングにより得られ得る。よって、Lがジスクシネート化合物を表す場合には、使用される前駆体は無水コハク酸である。Lがジグリコレート基を表す場合には、使用される前駆体は無水ジグリコール酸である。このカップリング反応は、通常ピリジンのような溶媒または塩素化溶媒中、DMAPまたはピリジンのような触媒の存在下、0°Cから溶媒の還流温度の範囲の温度で、より一般的には周囲温度で実施される。第2の実施形態によれば、前記方法は、OH基を有する活性成分APを式II:式中、LHは末端カルボン酸基COOHを有し、mPEG、m、X、PLA及びnは式Iに定義されている通りであるのPEG/PLAコポリマーとカップリングする段階を含む。前記カップリング反応は、ジクロロメタンまたはクロロホルムのような溶媒中、カルボジイミド例:ジイソプロピルカルボジイミドDIPCのような活性化剤の存在下、場合によりジメチルアミノピリジンDMAPのような触媒を用いて実施され得る。この反応は、通常0°Cから溶媒の還流温度の範囲の温度で、より一般的には周囲温度で実施される。式IIの化合物は、式III:式中、mPEG、m、PLA、n及びXは式Iに定義されている通りであるの化合物からリンカーLHの前駆体とカップリングすることにより得られ得る。よって、LHがジスクシネート基を表す場合には、使用される前駆体は無水コハク酸である。Lがジグリコレート基の場合には、使用される前駆体は無水ジグリコール酸である。所望されるL基に従って利用される前駆体は通常当業者に公知であり、市販されている。前記カップリング反応は、通常トルエンまたはジクロロメタンのような溶媒中、ピリジンのような触媒の存在下、周囲温度から溶媒の還流温度の範囲の温度で実施される。この反応は、特にDMAPのような適当な触媒を用いて促進され得る。上記合成ルートの1つまたは他に従って使用される式IIIの化合物は新規である。よって、本発明は、式III:式中、mPEG、PLA、m、n及びXは式I、Ia及び/またはIbに定義されている通りであるの化合物にも関する。好ましくは、化合物IIIは以下の式IIIa及びIIIb:に相当する。別の主題によれば、本発明は式IIIの中間体の製造方法にも関する。この方法は、1.式IV:の化合物のヒドロキシル基を適当な保護基を用いて選択的にモノ保護する段階;2.こうして得たモノ保護されている化合物をPLAn基の前駆体とカップリングする段階;3.段階1で導入した保護基を脱保護する段階;を含む。段階1に対して、適当な保護基は特にシリル誘導体、例えばT.W.GreenandP.G.M.Wuts,ProtectiveOrganicGroupsinOrganicChemistry,WileyandSons,1991、またはJ.F.W.McOmie,ProtectiveGroupsinOrganicChemistry,Plenum13,1973に記載されているものから選択され得る。特に有利な態様によれば、保護のために以下のシリル誘導体:の1つまたは他、好ましくは式中、Lgは離脱基、例えばハロゲン原子またはトリフルオロメタンスルホネート基、好ましくは塩素のようなハロゲン原子を表すが使用される。この反応は当業者に公知の条件下で、例えば塩基、特にトリエチルアミンのような有機塩基及びジクロロメタンのような溶媒の存在下、周囲温度から溶媒の還流温度の範囲の温度で、特に約40°Cで実施され得る。PLAnの前駆体とのカップリングの段階2は、有利には前駆体3,6-ジメチル-1,4-ジオキサン-2,5-ジオンを用いる開環重合ROPにより実施され得る。純粋な代表として、この反応は以下のスキームにより説明され得る。通常、この開環重合をチオ尿素例:N-シクロヘキシル-N’-[3,5-ビストリフルオロメチルフェニル]チオ尿素、アミン例:スパルテイン及び/またはその混合物のような有機触媒の存在下、周囲温度から溶媒の還流温度の範囲の温度で実施することが有利である。適切な溶媒として、ジクロロメタンを挙げ得る。脱保護段階3は当業者に公知の脱保護方法、例えば上に掲げたGreenら及びMcOmieらに記載されている方法の適用または改変により実施され得る。有利には、フッ化物、例えばフッ化テトラブチルアンモニウムTBAF:Bu4N,F-またはトリフルオロボランBF3Et2Oが使用され得る。この反応は、THFまたはジクロロメタンのような適当な溶媒中、周囲温度から反応混合物の還流温度の範囲の温度で、例えば約40°Cで所望の変換度を得るのに十分な時間実施され得る。化合物IV:は、式V:式中、mPEG、m及びXは上に定義した通りであり、Pg1及びPg2は同一または相互に異なっており、各々独立してヒドロキシル基に対する保護基を表すか、或いはPg1及びPg2はこれらが結合している酸素原子と一緒に場合により例えば置換または未置換のアリール基により置換されているアセタール基を形成することによりジオール基に対する保護基を形成するの化合物から、保護基Pg1及びPg2を特に接触水素化Pd/Cまたは酸性加水分解により脱保護することにより得られ得る。特定態様によれば、Pg1及びPg2は一緒にベンジリデン基を形成し、よって式Vの生成物が以下の式Va:式中、iは0、1または2であり、各Rは同一または異なり、独立してHまたはOC1-C6アルキル、好ましくはOMeを表すに相当する。式Vの化合物は、式VI:の化合物を、特に1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミド、4-ジメチルアミノピリジニウムp-トルエンスルホネートDPTS及び/またはその混合物のようなカップリング剤、またはDMAPの存在下でmPEGmとカップリングすることにより得られ得る。この反応は通常周囲温度で実施される。化合物VIは、当業者に公知の方法に従って化合物VII:を保護することにより得られ得る。特に、化合物VIa:の場合、後者は化合物VII及びベンズアルデヒドから、特にU.Annbyら,TetrahedronLetters,1998,39,3217を適用及び/または改変することにより得られ得る。式VIIの化合物は市販されており、または当業者に公知の方法を適用または改変することにより及び/または当業者の範囲内で、特にLarockら,ComprehensiveOrganicTransformations,VCHPublishers,1989に記載されている手順にてらして得られ得る。本発明に従う方法は、更に所望化合物の単離及び/または精製を含む後続段階を含み得る。こうして製造された所望化合物は慣用の手段により反応混合物から回収され得る。例えば、化合物は反応混合物から溶媒を蒸留することにより、または所要により溶液の混合物から溶媒を蒸留した後残渣を水に注ぎ、その後水非混和性有機溶媒で抽出し、抽出物から溶媒を蒸留することにより回収され得る。加えて、化合物は、所望により各種技術により、例えば再結晶化、再沈殿または各種クロマトグラフィー技術、特にサイズ排除分取クロマトグラフィーにより精製され得る。別の主題によれば、本発明は、本発明に従うコンジュゲートを含むナノ粒子にも関する。これらのナノ粒子は一般的に10から300nm、通常20から200nmの範囲のサイズを有する。典型的には、ナノ粒子はAPが存在する界面にPLAコア及びPEGコロナを含む。ナノ粒子は、通常ナノ沈殿、特にアセトンのような適当な溶媒中にコンジュゲートを溶解し、前記溶媒を蒸発させることにより製造され得る。別の主題によれば、本発明は、本発明に従うコンジュゲートを含む医薬組成物にも関する。別の主題によれば、本発明は、癌の治療及び/または予防において使用するための本発明に従うコンジュゲートにも関する。図1は、本発明に従って得たナノ粒子の透過型電子顕微鏡により得た像を表す。図2は、T0及びT3週でのDLS動的光散乱測定によるナノ粒子のサイズの分布を表す。図3は、ラット血漿中のカバジタキセルコンジュゲートナノ粒子製剤すなわち、PLA-PEG-Y-スクシニル-カバジタキセル、PLA-PEG-Y-グルタリル-カバジタキセル及びPLA-PEG-Y-ジグリコリル-カバジタキセルのインビトロプロフィールを表す。本発明の代表及び説明として下記実施例を提示する。特定されている場合を除いて、溶媒及び反応物質はそのまま使用する。合成及び重合はすべて不活性アルゴン雰囲気下、標準シュレンク技術を用いて実施する。使用前に、溶媒を予め脱水し、蒸留する:ジクロロメタンDCMはCaH2、トルエンはナトリウムまたは溶媒精製装置MbraunMB-SPS-800システムを用いて、テトラヒドロフランTHFはナトリウムを用いて、ジエチルエーテルはナトリウムを用いて脱水する。DL-ラクチドPURACは共沸蒸留し、トルエンから再結晶させることにより精製する。その後、昇華させ、次いでグローブボックス中アルゴン下で保存する。核磁気共鳴NMR:NMRスペクトルは凍結探針を備えているBrukerAvance300MHz、BrukerAvance400MHz及びBrukerAvance500MHzデバイスを用いて周囲温度で記録する。1H及び13Cにおける化学シフトδは残留溶媒に対してppmで報告し、29Siにおける化学シフトδは外部標準としてのMe4Siに対してppmで報告する。カップリング定数Jはヘルツで示す。シグナルを示すために以下の略号が使用されている:s一重項、br広幅、d二重項、t三重項、q四重項及びm多重項。立体排除クロマトグラフィーSEC:数平均モル質量Mn、重量平均モル質量Mw及び多分散指数Mw/Mnは、AllianceWaterse2695、MALSminiDAWNWyatt光散乱デテクター、Viscostar-IIWyatt粘度計及びWaters2414屈折計から構成されるトリプル検出ラインを用いて35°Cで立体排除クロマトグラフィーSECにより測定する。THFを溶離液として1.0ml/分の流速で使用する。StyragelWAT054405予備カラム及び2つのShodexKF-802.5及びKF-804カラムを使用する。校正はポリスチレン標準400~100000g/molを用いて実施する。サンプルは以下のように作成する:分析しようとする生成物10から20mgをマーカーとしてトルエンを含有しているTHF1ml中に溶解させる。その後、溶液を0.45μmフィルターを用いて濾過する。質量分析:化学イオン化DCI質量スペクトルをThermoFisherScientificDSQ分光計を用いて記録する。透過型電子顕微鏡法TEM:ナノ粒子のモルホロジーを加速場が200keVのJEOL-JEM2100F顕微鏡を用いてTEMにより観察する。サンプルを作成するために、10倍希釈した0.5mg/ml数滴のナノ粒子分散液を0.2w/vのリンタングステン酸と30分間インキュベートする。その後、サンプルを銅グリッド上に置き、周囲温度で乾燥する。動的光散乱DLS:ナノ粒子のサイズ流体力学的径をゼータサイザー3000HSMalvernを用いてDLSにより測定する。濾過1.2μmPVDFフィルター後、サンプル5mg/mlを毛細管セル中に配置する。測定は25°C、90°Cの検出角度で実施する。使用した波長は633nmである。以下の実施例中、mPEGm及びPLAn中の添字m及びnは重量平均分子量である。nはSEC分析により得た重量から実験的に求められる。5-メチル-2-フェニル-1,3-ジオキサン-5-カルボン酸Bn-ビス-MPAIの合成2,2’-ビスヒドロキシメチルプロピオン酸ビス-MPA10g,74.6mmol、ベンズアルデヒド8.3g,78.2mmol及びメタンスルホン酸MSA1.5g,15.6mmolをトルエン100ml中に溶解させる。反応媒体を周囲温度で5時間撹拌する。その後、溶媒を真空下で蒸発させ、次いで残渣が完全に溶解するまで10NaHCO3溶液300ml及びエーテル300mlを添加する。水性相を回収し、氷酢酸数滴を添加する。ガスが強く発生した後、白色沈殿が形成される。沈殿を濾別し、水20mlで濯ぎ、真空下で一晩乾燥する。Wobt=13.3g,Y=80。1HNMRd6-アセトン,300MHz:δppm1.04s,3H,-C-CH3,3.73d,2H,1a,J2Ha-Hb=11.4Hz,4.57d,2H,1b,J2Ha-Hb=11.3Hz,5.52s,1H,O2-CH-,7.32m,3H,ArH,7.42m,2H,ArH。13CNMRd6-アセトン,75.5MHz:δppm18.4-CH3,42.8Cq,74.2-CH2-,102.1-O2-CH-,127.3アリールCH,128.8アリールCH,129.5アリールCH,140.0アリールCq,176.2-COOH。DCI計算値C12H14O4[MNH4]=240.12;実測値=239.90。メトキシ-ポリエチレングリコール-ベンジリデンmPEG2000-O2BnIIの合成メトキシ-ポリエチレングリコール平均分子量:2000g/mol、ここではmPEG2000と称する10g,5mmol及び保護されているビス-MPAI1.35g,6.1mmolを250mlのシュレンク容器において無水DCM45ml中に溶解させる。その後、1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDCI0.96g,5mmol及びp-トルエンスルホン酸4-ジメチルアミノ-ピリジニウムDPTS0.6g,2mmolを媒体に添加する。反応媒体をアルゴン下40°Cで48時間撹拌する。その後、反応媒体を1MHCl溶液20ml、10NaHCO3溶液20ml及びH2O20mlで抽出する。有機相をNa2SO4で脱水し、濾過し、溶媒を蒸発させた後、残渣を0°Cでエーテルから沈殿させる。次いで、沈殿を濾別し、真空下で一晩乾燥する。白色固体を得る。Wobt=9.68g,Y=88。1HNMRCDCl3,300MHz:δ1.05s,3H,6,3.37s,3H,1,3.63bs,180H,2,2’7b,4.36t,2H,3,J3H-H=4.8Hz,4.66d,2H,7a,J2Ha-Hb=11.5Hz,5.44s,1H,8,7.32m,3H,ArH,7.42m,2H,ArH。13CNMRCDCl3,75.5MHz:δppm17.8C6,42.3C5,58.9C1,64.1C3,68.9C7,70.5C2,71.8C2’,73.4C2,101.2C8,126.1アリールCH,128.0アリールCH,128.8アリールCH,137.8アリールCq,173.8C4。SEC:Mn=2867g/mol,PI=1.06。メトキシ-ポリエチレングリコール-ジオールmPEG2000-OH2IIIの合成化合物II9.5g,4.3mmol及び炭素担持パラジウム10Pd/C0.95g,10w/wを水素H2が充填されているバルーンを備えた250mlの2口丸底シュレンクフラスコにおいて混合した後、真空-アルゴンサイクルにかける。その後、DCM40ml及びメタノールMeOH40mlを添加する。真空-H2サイクルを実施する。反応媒体を静的H2下、Atで4時間撹拌する。その後、混合物をセライトを介して濾過する。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を真空下で一晩乾燥する。黄色っぽい固体を得る。Wobt=8.7g,Y=95。1HNMRCDCl3,300MHz:δ1.11s,3H,6,3.37s,3H,1,3.63bs,180H,3.69-3.78m,4H,7a7b,4.33t,2H,3,J3H-H=4.8Hz。13CNMRCDCl3,125.7MHz:δ16.9C6,49.5C5,58.8C1,63.2C3,67.1C7,68.7C2’,70.4C2,71.8C2’,72.6C2,175.5C4。mPEG2000-OH-Y-OTBDPSIVの合成化合物III4g,1.90mmolを100mlのシュレンク容器において無水DCM18ml中に溶解させる。その後、KOHで蒸留したトリエチルアミンTEA0.4g,3.95mmolを添加し、次いでtert-ブチルジフェニルクロロシランTBDPSiCl1.1g,3.92mmolを0°Cで一滴ずつ添加する。反応媒体をアルゴン下40°Cで撹拌する。24時間後、形成された塩を濾別し、次いで有機相を1MHCl溶液15ml、次いでNaHCO3溶液15ml、最後にH2O15mlで抽出する。有機相をNa2SO4で脱水する。濾過後、混合物を真空下で濃縮し、次いで残渣を0°Cでエーテルから沈殿させる。次いで、得られた白色沈殿を濾別し、洗浄し、真空下で乾燥する。その後、生成物をトルエン中での共沸混合物を用いて乾燥する。生成物をグローブボックスにおいて保存する。Wobt=4.1g,Y=90。RMN1HCDCl3,300MHz:δ1.02s,9H,10,1.19s,3H,6,3.37s,3H,1,3.63br,180H,2/2’/2/2’,3.73-3.80m,4H,78,4.26t,2H,3,J3H-H=4.8Hz,7.35-7.64m,10H,11。RMN13CCDCl3,75.5MHz:δ16.9C6,19.1C9,26.5C10,50.3C5,58.7C1,63.1C3,65.6C7,66.4C8,68.6C2’,70.3C2,71.7C2’,72.3C2,127.5CHアリール,129.5CHアリール,132.9Cqアリール,135.3CHアリール,174.8C4。RMN29SiCDCl3,59.6MHz:δ-4.33-O-Si-。mPEG2000-PLA14000-Y-OTBDPSコポリマーVの合成高分子開始剤IV0.8g,0.34mmol及びDL-ラクチド5g,35mmol,DP100を無水DCM25ml中に溶解させる。その後、触媒の溶液10ml,4当量のチオ尿素N-シクロヘキシル-N’-[3,5-ビストリフルオロメチルフェニル]チオ尿素及び4当量の--スパルテインを添加する。作用を1HNMRによりモニターしてラクチドが完全に消費されるまで反応媒体をアルゴン下35°Cで撹拌する。6時間後、無水酢酸166μl,1.71mmol及び4-ジメチルアミノピリジンDMAP4.5mg,0.35mmolを反応媒体に添加する。後者を更に1時間撹拌する。その後、混合物を真空下で濃縮し、次いで0°CでMeOH150mlから沈殿させる。形成された白色沈殿を濾別し、MeOH20mlで洗浄し、次いで真空下で一晩乾燥する。RMN1HCDCl3,500MHz:δ1.02s,9H,10,1.19s,3H,6,1.58br,595H,14,2.12s,3H,PLA:16,3.37s,3H,1,3.63br,180H,2/2’/2/2’,3.73-3.80m,2H,8,4.20-4.40m,4H,37,5.16br,192H,13,7.35-7.64m,10H,11。RMN13CCDCl3,125.7MHz:δ16.6C14C6,20.4C9,26.6C10,48.5C5,58.8C1,63.5C3,65.0C7,66.6C8,68.9C13,68.2C2’,70.1C2,71.7C2’,72.2C2,127.7,129.8,132.8,135.5C11,169.50C12C15,174.82C4。平均分子量NMRによる:M=16150g/mol。開環重合ROP反応も35及び150当量のラクチドを用いて実施して、mPEG2000-PLA5000及びmPEG2000-PLA21000コポリマーを得た。mPEG2000-PLA14000-Y-OHコポリマーVIの合成コポリマーV3.96g,0.28mmolを無水THF40ml中に溶解させる。その後、フッ化テトラブチルアンモニウムTBAFをTHF中に含む1M溶液1.5ml,1.5mmolを一滴ずつ添加する。反応媒体をアルゴン下30°Cで7時間撹拌する。その後、THFを真空下で蒸発させる。残渣をDCM15ml中に溶解させた後、0°Cでエーテル800mlから沈殿させる。白色沈殿を濾別した後、真空下で一晩乾燥する。Wobt=2.14g,Y=55。RMN1HCDCl3,300MHz:δ1.57br,590H,PLA:11,2.12s,3H,PLA:13,3.37s,3H,1,3.63br,180H,8,2/2’/2/2’,4.33m,4H,37,5.15br,186H,PLA:10。RMN13CCDCl3,75.5MHz:δ16.5PLA:C11,48.5C5,58.7C1,63.4C3,64.2C7,66.5C8,68.8PLA:C10,68.2C2’,70.1C2,71.7C2’,72.2C2,169.5PLA:C9,174.8PEG:C4。平均分子量NMRによる:M=15495g/mol。保護もトリイソプロピルクロロシランTIPSClを用いて次のように実施した。mPEG2000-OH-Y-OTIPSの合成25mlのシュレンクにおいてmPEG-ジオール誘導体0.5g,0.24mmolを無水DCM5ml中に溶解させる。次いで、トリエチルアミンTEAKOHで蒸留0.2g,2.01mmolを添加し、トリス-イソプロピルクロロシランTIPSCl0.40g,2mmolを0°Cで一滴ずつ添加する。反応混合物をアルゴン下40°Cで撹拌する。24時間後、形成された塩を濾過し、有機相をHCl1M溶液5ml、NaHCO3溶液5ml及びH2O5mlで抽出する。有機相をNa2SO4で脱水する。濾過後、混合物を真空下で濃縮し、残渣を0°Cでエーテル中に沈殿させる。次いで、白色沈殿を濾過し、洗浄し、真空下で乾燥する。次いで、生成物をトルエン中の共沸混合物を用いて乾燥する。生成物を密封ボックス中に保存する。Mobt=0.4g,R=74。NMR1HCDCl3,500MHz:δ0.98-1.03br,21H,1.16s,3H,3.37s,3H,3.63m,180H,3.73-3.80m,4H,4.26t,2H,J3H-H=4.8Hz。コポリマーmPEG2000-PLA10000-Y-OTIPSV’の合成高分子開始剤0.18g,79.6μmol及びDL-ラクチド0.8g,5.6mmol,70当量を無水DCM7ml中に溶解させる。次いで、触媒の溶液1ml,4当量のチオ尿素N,N’-シクロヘキシル-3,5-ビス[トリフルオロメチル]フェニルチオ尿素及び2当量の-スパルテインを添加する。1HNMRによりコントロールしながらラクチドが完全に消費されるまで反応混合物をアルゴン下35°Cで撹拌する。3時間後、反応混合物に無水酢酸39μl,0.40mmol及び4-ジメチルアミノピリジンDMAP10mg,82μmolを添加する。これをもう1時間撹拌する。次いで、混合物を真空下で濃縮した後、0°Cでエーテル50ml中に沈殿させる。次いで、白色沈殿を濾過し、MeOH20mlで洗浄し、次いで真空下で一晩乾燥する。Mobt=1g,R~75。NMR1HCDCl3,500MHz:δ0.98-1.03br,21H,1.16s,3H,1.58m,423H,2.12s,3H,3.37s,3H,1,3.63m,180H,3.73-3.80m,2H,4.20-4.40m,4H,5.16m,141H,13。SEC:Mw=13628g/mol,Mn=11850g/mol,IP=1.15。コポリマーmPEG2000-PLA10000-Y-OHVI’の合成保護されているコポリマー1g,71μmolを無水DCM10ml中に溶解させる。次いで、BF3Et2O0.5g,3.56mmolを0°Cで一滴ずつ添加する。反応混合物をアルゴン下0°Cで1時間、次いで30°Cで19時間撹拌する。次いで、DCMを真空下で蒸発させる。残渣をDCM5ml中で可溶化した後、0°Cでエーテル50ml中に沈殿させ、MeOH20ml、次いでペンタン20mlで洗浄する。白色沈殿を濾過し、真空下で一晩乾燥する。Mobt=0.85g,R~85。NMR1HCDCl3,500MHz:δ1.58m,425H,2.12s,3H,3.37s,3H,3.63m,180H,4.33m,4H,5.16m,142H。SEC:Mw=13925g/mol,Mn=11800g/mol,IP=1.18。カバジタキセル-2’-スクシニルVIIの合成カバジタキセル0.2g,0.24mmolをKOHで蒸留したピリジン4ml中に溶解させる。その後、無水コハク酸0.2g,2mmolを添加する、反応媒体をアルゴン下30°Cで撹拌する。反応を薄層クロマトグラフィーTLCDCM/MeOH:9/1によりモニターする。8時間後、ピリジンを真空下で蒸発させ、残渣をクロマトグラフカラム溶離液:CHCl3/MeOH:99/1から97/3に勾配を用いて精製する。その後、各種画分を蒸発させ、真空下で乾燥して、白色粉末を得る。Wobt=0.180g,Y=80。RMN1HCDCl3,300MHz:δ1.19s,3H,16,1.20s,3H,17,1.35s,9H,7’,1.63s,1H,-OH第3級,1.70s,3H,19,1.78m,1H,6a,1.86s,3H,18,2.15s,6H,-CH3アセトン,2.18-2.33m,2H,14a14b,2.34s,3H,-CH3アセチル,4,2.65m,5H,-CH2スクシニックa,a’6b,3.28s,3H,-OCH3,7,3.44s,3H,-OCH3,10,3.80d,1H,3,J=7.5Hz,3.84dd,1H,7,J=6.5及び10.5Hz,4.16d,1H,20a,J=8.5Hz,4.28d,1H,20b,J=8.5Hz,4.80s,1H,10,4.95d,1H,5,J=10Hz,5.28-5.44br,2H,2’/4’,5.61d,1H,2,J=7.5Hz,6.19b,1H,13,7.31,7.38,7.47,7.59,m,9H,ArH,8.10d,2H,Hオルトベンゾエート。RMN13CCDCl3,75.5MHz:δ10.8C19,15.1C18,21.2C16,23.2CH3アセチル,27.3C17,28.35,28.62-CH2スクシニックaa’,28.7C7’,32.6C6,35.7C14,43.8C15,47.9C3,56.7C3’,57.4C8,57.5OCH3,C7,57.8OCH3,C10,73.1C13,74.7C2’,75.0C2,77.0C20,79.2C1,80.7C6’,81.2C7,82.3C4,83.1C10,84.6C5,127.3-138.9Ar,136.2C11,139.1C12,155.8C5’,167.5COベンゾエート,168.7COアセチル,4,170.0-174.0C1’,-COO-スクシニック,205.4C9。mPEG2000-PLA14000-Y-スクシニル-2’-カバジタキセルコンジュゲートVIIIの合成コポリマーVI2g,163μmol及びカバジタキセル-2’-スクシニルVII0.33g,353μmolを無水DCM40ml中に溶解させる。その後、N,N’-ジイソプロピルカルボジイミドDIPC45mg,357μmol、次いでDMAP45mg,368μmolを添加する。反応媒体をアルゴン下35°Cで24時間撹拌する。その後、有機相を1MHCl溶液30ml、10NaHCO3溶液30ml及び水30mlを用いて抽出する。その後、有機相をNa2SO4で脱水した後、濾過する。真空下で濃縮した後、残渣をMeOH400ml中に沈殿させる。濾過後、沈殿を真空下で一晩乾燥する。Wobt=1.5g,Y=75。1HNMRCDCl3,500MHz:粗な生成物をMeOHから沈殿させた後、完全カップリング100を定量する。化合物VI及びVIIの同じ化学シフトが1/1比で検出される。13CNMR:化合物VI及びVIIの化学シフトに加えて、スクシニックリンカー-CH2-のシグナルのシフト:28.13及び26.71ppm。平均分子量NMRによる:M=16430g/mol。ナノ粒子製剤:上で得たコンジュゲートVIII20mgをアセトン2ml中に溶解させる10mg/ml。得られた溶液を脱イオン水4mlに撹拌しながら一滴ずつ添加する。アセトンを例えば回転蒸発器を用いて蒸発させる。こうして、5mg/mlのコンジュゲートの最終濃度を得る。こうして得たナノ粒子は以下のように特性づけられる。TEM:得られた写真を図1に示す。27nmの平均直径が観察される。DLS:サンプルを濾過する1.2μm:62nmの平均直径を得る。分布は3週間の間未変化のままであった。結果を図2に示す。mPEG2000-PLA10000-Y-スクシニル-2’-カバジタキセルコンジュゲートVIII’の合成コポリマーVI’Mw=12700g/mol14g及びスクシニル-カバジタキセル2.24gを乾燥ジクロロメタン中に溶解させ、活性化モレキュラーシーブ4Å7gを粉末として添加する。溶液をRTで10分間撹拌し、DMAP310mg及びDIPC305mgを添加する。溶液を35°Cで24時間撹拌する。濾過後、溶液を真空下40°Cで濃縮乾固する。残渣をメタノール2.8L及びジクロロメタン1mlと一緒に0°Cで2時間撹拌する。懸濁液を濾過し、固体をメタノール100mlで洗浄する。RTで一晩乾燥して、14gの白色粉末を得る。7.5gの固体をRTで一晩撹拌することによりメタノール749mlを用いて再精製し、濾過し、乾燥後、7.1gの白色粉末を得る。1HNMRスペクトル600MHz,δppm,CDCl3-d1:1.21m,9H;1.36s,9H;1.42-1.72m,468H;1.79m,1H;1.98広幅s,3H;2.13s,3H;2.18m,1H;2.29m,1H;2.43広幅s,3H;2.54-2.77m,5H;3.31s,3H;3.38s,3H;3.44s,3H;3.50-3.78m,180H;3.84d,J=6.5Hz,1H;3.89dd,J=6.510.6Hz,1H;4.08-4.41m,8H;4.82s,1H;4.99d,J=9.8Hz,1H;5.01-5.31m,156H;5.32m,1H;5.47m,2H;5.64d,J=6.5Hz,1H;6.24広幅t,J=9.0Hz,1H;7.31m,3H;7.40t,J=7.9Hz,2H;7.50t,J=7.9Hz,2H;7.61t,J=7.9Hz,1H;8.11d,J=7.7Hz,2H。SECMw=13530g/mol,Mn=11770g/mol,IP=1.15。ナノ粒子製剤:1PLA-PEG-Y-スクシニル-カバジタキセルVIII’30mgをアセトン1.5ml中に溶解させる。溶液を撹拌しながら500rpmで20分間WFI3ml中に一滴ずつ添加する。次いで、アセトンを回転蒸発器300から45mbarで30分間を用いて真空下37°Cで蒸発させる。次いで、蒸発中の水の損失を補うためにナノディスパージョンの最終容量を3mLに調節する。ナノディスパージョンの最終濃度:10mg/mL。平均直径DLSを用いる=43nm、PDI=0.14。2PLA-PEG-Y-スクシニルカバジタキセルVIII’1gを室温で撹拌しながらアセトン50mL中に溶解させた。有機溶液を0.45μmナイロンフィルターを介して濾過した後、50mLのハミルトンシリンジに導入した。SolutolHS15マクロゴール15ヒドロキシステアレート0.2g及びデオキシコール酸ナトリウム0.04gを撹拌しながらWFI450mL中に溶解させた。この水溶液を0.22μmフィルターを用いて濾過した。有機溶液をシリンジポンプを用いることにより水性相に20mL/hの速度で注入した。均質に分散させるために、前記シリンジに接続させたテフロン登録商標チューブを水性相に潜らせた。次いで、ナノディスパージョン30nmの平均サイズ,PDI=0.14により、マルバーンナノサイドー準弾性光散乱を用いて測定して≦100nmのサイズのナノ粒子を得た。アセトン及び若干の水を真空下37°Cで回転蒸発器を用いることにより除去した。最終ナノディスパージョン濃度は10から200mg/gであった。ナノ粒子のサイズは≦100nmすべての濃度について30nmの平均サイズのままであった。より大きな粒子は0.45μmでの濾過により除去され得る。mPEG-PLA-スクシニル-ラロタキセルIXの合成スクシニル-ラロタキセルの製造フラスコに窒素下でラロタキセル二水和物2.36g,2.72mmol、ジクロロメタン47ml、無水コハク酸2.72g,27.19mmol及びDMAP33mg,0.27mmolを添加する。溶液を30°Cに一晩加熱し、次いで水47mlで2回洗浄する。有機溶液をMgSO4で脱水した後、溶液を減圧下40°Cで濃縮乾固する。乾燥抽出物を3容量のジイソプロピルエーテルで処理し、懸濁液を2時間撹拌し、濾過し、固体を2容量のジイソプロピルエーテルで2回洗浄する。減圧下40°Cで乾燥後、2.28gの白色粉末を得る。NMR1Hスペクトル500MHz,δppm,CDCl3-d:1.26s,3H;1.28s,3H;1.32s,9H;1.38m,1H;1.68m,1H;1.93s,3H;2.11d,J=15.9Hz,1H;2.19広幅s,4H;2.25dd,J=4.810.3Hz,1H;2.35m,1H;2.38s,3H;2.49td,J=4.815.9Hz,1H;2.61-2.82m,4H;4.07d,J=8.6Hz,1H;4.12d,J=7.5Hz,1H;4.31d,J=8.6Hz,1H;4.75広幅d,J=4.8Hz,1H;5.35-5.51m.2H;5.69dねJ=7.5Hz,1H;6.23広幅t,J=9.4Hz,1H;6.34s,1H;7.30m,3H;7.39t,J=7.8Hz,2H;7.51t,J=7.8Hz,2H;7.60t,J=7.8Hz,1H;8.16d,J=7.8Hz,2H。スクシニル-ラロタキセルとコポリマーVI’のコンジュゲーション25mlのフラスコに窒素下でmPEG-PLA-Y-OHコポリマーVI’0.2g,0.0157mmol、DCM4ml中のスクシニル-ラロタキセル31.6mg,2.2eq、次いで粉末状の活性化モレキュラーシーブ4A100mgを添加する。10分間撹拌した後、DMAP4.4mg,2.3eq.及びDIPC4.3mg,2.2eq.を添加する。懸濁液を35°Cで24時間撹拌した後、濾過する0.22ミクロン。有機相を濃縮乾固し、抽出物をメタノール40ml及びジクロロメタン2滴で処理する。懸濁液をRTで2時間撹拌し、次いで濾過し、固体を減圧下RTで乾燥して、174mgの予想される化合物を得る。NMR1Hスペクトル500MHz,δppm,CDCl3-d:1.22m,3H;1.24s,3H;1.27s,3H;1.29s,9H;1.35-1.85m,512H;1.91広幅s,3H;2.08-2.75m,9H;2.13s,3H;2.20s,3H;2.41広幅s,3H;3.39s,3H;3.48-3.81m,192H;4.02-4.39m,8H;4.75広幅d,J=4.0Hz,1H;5.01-5.33m,169H;5.34m,1H;5.40-5.52m,2H;5.68d,J=7.6Hz,1H;6.26広幅t,J=9.0Hz,1H;6.34s,1H;7.30m,3H;7.39t,J=7.7Hz,2H;7.51t,J=7.7Hz,2H;7.61t,J=7.7Hz,1H;8.18d,J=7.7Hz,2H。SECMw=14140g/mol,Mn=11260g/mol,D=1.25。ナノ粒子製剤:PLA-PEG-Y-スクシニル-ラロタキセル30mgをアセトン1.5ml中に溶解させる。溶液を撹拌しながら500rpmで20分間注射用水WFI3mlに一滴ずつ添加する。次いで、アセトンを回転蒸発器を用いて真空下37°Cで蒸発させる。次いで、蒸発中の水の損失を補うためにナノディスパージョンの最終容量を3mLに調節する。ナノディスパージョンの最終濃度:10mg/mL平均直径DLSを用いる=48nm,PDI=0.17。mPEG-PLA-グルタリル-カバジタキセルXの合成グルタリル-カバジタキセルの製造500mlのフラスコに窒素下でカバジタキセルアセトン溶媒和物10g,11.24mmol、ジクロロメタン200ml、無水グルタル酸13.51g,112.45mmol及びDMAP0.14g,1.12mmolを添加する。溶液を30°Cに一晩加熱した後、水100mlで数回洗浄する。有機溶液をMgSO4で脱水した後、溶液を減圧下40°Cで濃縮乾固する。乾燥抽出物を10容量のジイソプロピルエーテルで処理し、懸濁液を濾過し、固体を2容量のジイソプロピルエーテルで2回洗浄する。減圧下RTで乾燥した後、6.75gの白色粉末を得る。NMR1Hスペクトル500MHz,δppm,CDCl3-d:0.97s,3H;0.98s,3H;1.38s,9H;1.50m,5H;1.79m,6H;2.24s,3H;2.28t,J=7.3Hz,2H;2.46t,J=7.4Hz,2H;2.66m,1H;3.21s,3H;3.29s,3H;3.59d,J=7.1Hz,1H;3.75dd,J=6.610.7Hz,1H;4.02s,2H;4.47s,1H;4.70s,1H;4.95広幅d,J=10.7Hz,1H;5.02-5.12m,2H;5.37d,J=7.1Hz,1H;5.81広幅t,J=9.0Hz,1H;7.18t,J=7.7Hz,1H;7.36d,J=7.7Hz,2H;7.43t,J=7.7Hz,2H;7.66t,J=7.7Hz,2H;7.74t,J=7.7Hz,1H;7.85d大きい,J=9.1Hz,1H;7.98d,J=7.7Hz,2H;12.13非常に広幅s,1H。グルタリル-カバジタキセルのコポリマーVI’とのコンジュゲーション25mlのフラスコに窒素下でmPEG-PLA-Y-OHコポリマーVI’0.2g,0.0157mmol、DCM4ml中のグルタリル-カバジタキセル31.6mg,2.2eq、次いで粉末状活性化モレキュラーシーブ4A100mgを添加する。10分間撹拌した後、DMAP4.4mg,2.3eq.及びDIPC4.3mg,2.2eq.を添加する。懸濁液を35°Cで24時間撹拌した後、濾過する0.22ミクロン。有機相を濃縮乾固し、抽出物をメタノール40ml及びジクロロメタン2滴で処理する。懸濁液をRTで2時間撹拌し、次いで濾過し、固体を減圧下RTで乾燥して、170mgの予想される化合物を得る。NMR1Hスペクトル500MHz,δppm,CDCl3-d:1.21s,3H;1.22s,3H;1.25m,3H;1.35s,9H;1.40-1.70m,452H;1.72s,3H;1.80m,1H;1.87m,2H;2.00s,3H;2.13s,3H;2.15-2.51m,6H;2.45広幅s,3H;2.71m,1H;3.32s,3H;3.39s,3H;3.45s,3H;3.48-3.81m,172H;3.86d,J=7.3Hz,1H;3.91dd,J=6.311.0Hz,1H;4.10-4.40m,8H;4.83s,1H;5.00d,J=10.7Hz,1H;5.01-5.33m,152H;5.35m,1H;5.44-5.63m,2H;5.66d,J=7.3Hz,1H;6.27広幅t,J=9.0Hz,1H;7.32m,3H;7.40t,J=7.7Hz,2H;7.50t,J=7.7Hz,2H;7.61t,J=7.7Hz,1H;8.12d,J=7.7Hz,2H。SECMw=14140g/mol,Mn=11210g/mol,D=1.26。ナノ粒子製剤:PLA-PEG-Y-グルタリル-カバジタキセル30mgをアセトン1.5ml中に溶解させる。この溶液を撹拌500rpmで20分間しながらWFI3mlに一滴ずつ添加する。次いで、アセトンを回転蒸発器を用いて真空下37°Cで蒸発させる。次いで、蒸発中の水の損失を補うためにナノディスパージョンの最終容量を3mLに調節する。ナノディスパージョンの最終濃度:10mg/mL平均直径DLSを用いる=60nm,PDI=0.21。mPEG-PLA-ジグリコリル-カバジタキセルXIの合成ジグリコリル-カバジタキセルの製造250mlのフラスコに窒素下でカバジタキセルアセトン溶媒和物5g,5.62mmol、ジクロロメタン100ml、無水ジグリコール酸6.53g,56.22mmol及びDMAP0.107,0.56mmolを添加する。溶液を22°Cに一晩加熱した後、水50mlで2回洗浄する。有機溶液をMgSO4で脱水した後、溶液を減圧下40°Cで濃縮乾固する。乾燥抽出物を4容量のジイソプロピルエーテルで処理し、懸濁液を30分間撹拌し、次いで濾過し、固体を2容量のジイソプロピルエーテルで2回洗浄する。減圧下40°Cで乾燥した後、5.04gの白色粉末を得る。1HNMRスペクトル500MHz,δppm,CDCl3-d:0.96s,3H;0.98s,3H;1.37m,9H;1.44-1.58m,2H;1.51s,3H;1.80広幅s,4H;2.23s,3H;2.67m,1H;3.21s,3H;3.28s,3H;3.58d,J=7.3Hz,1H;3.75dd,J=6.810.5Hz,1H;4.02s,2H;4.13s,2H;4.31d,J=17.0Hz,1H;4.38d,J=17.0Hz,1H;4.51s,1H;4.70s,1H;4.95d,J=10.5Hz,1H;5.06m,1H;5.16d,J=8.5Hz,1H;5.37d,J=7.3Hz,1H;5.82広幅t,J=9.4Hz,1H;7.19t,J=7.8Hz,1H;7.36d,J=7.8Hz,2H;7.43t,J=7.8Hz,2H;7.66t,J=7.8Hz,2H;7.73t,J=7.8Hz,1H;7.88d,J=9.3Hz,1H;7.97d,J=7.8Hz,2H;12.78非常に広幅s,1Hジグリコリル-カバジタキセルのコポリマーVI’とのコンジュゲーション25mlのフラスコに窒素下でmPEG-PLA-Y-OHコポリマーVI’0.2g,0.0157mmol、DCM4ml中のジグリコリル-カバジタキセル32.3mg,2.2eq、次いで粉末状活性化モレキュラーシーブ4A100mgを添加する。10分間撹拌した後、DMAP4.4mg,2.3eq.及びDIPC4.3mg,2.2eq.を添加する。懸濁液を35°Cで24時間撹拌した後、濾過する0.22ミクロン。有機相を濃縮乾固し、抽出物をメタノール40ml及びジクロロメタン2滴で処理する。懸濁液をRTで2時間撹拌し、次いで濾過し、固体を減圧下RTで乾燥して、184mgの予想される化合物を得る。NMR1Hスペクトル500MHz,δppm,CDCl3-d:1.21s,3H;1.22s,3H;1.26m,3H;1.35s,9H;1.40-1.70m,486H;1.72s,3H;1.80m,1H;2.01広幅s,3H;2.13s,3H;2.21m,1H;2.32m,1H;2.45広幅s,3H;2.71m,1H;3.31s,3H;3.38s,3H;3.45s,3H;3.48-3.81m,180H;3.86d,J=7.3Hz,1H;3.91dd,J=6.611.0Hz,1H;4.08-4.40m,8H;4.83s,1H;5.02d,J=10.7Hz,1H;5.03-5.33m,162H;5.40-5.57m,3H;5.67d,J=7.3Hz,1H;6.29広幅t,J=9.0Hz,1H;7.31m,3H;7.40t,J=7.7Hz,2H;7.50t,J=7.7Hz,2H;7.60t,J=7.7Hz,1H;8.11d,J=7.7Hz,2H。SECMw=14830g/mol,Mn=11920g/mol,D=1.24。ナノ粒子製剤:PLA-PEG-Y-ジグリコリル-カバジタキセル30mgをアセトン1.5ml中に溶解させる。溶液を撹拌500rpmで20分間しながらWFI3mlに一滴ずつ添加する。次いで、アセトンを回転蒸発器を用いて真空下30分間で300mbarから45mbarに37°Cで蒸発させる。次いで、蒸発中の水の損失を補うためにナノディスパージョンの最終容量を3mLに調節する。ナノディスパージョンの最終濃度:10mg/mL平均直径DLSを用いる=52nm,PDI=0.18。カバジタキセルコンジュゲートナノ粒子製剤のインビトロ放出研究3つのカバジタキセルコンジュゲートナノ粒子製剤、すなわちPLA-PEG-Y-スクシニル-カバジタキセル、PEG-Y-グルタリル-カバジタキセル及びPLA-PEG-Y-ジグリコリル-カバジタキセルからの遊離カバジタキセルのインビトロ放出カイネティックスをSpragueDawleyラットから得た血漿血漿中10mMの最終濃度まで500mMリン酸緩衝液を用いて予め緩衝したにおいて高速液体クロマトグラフィーHPLC技術を用いて評価した。血漿アリコートを収容しているバイアルに、標準カバジタキセルまたはカバジタキセルコンジュゲートナノ粒子製剤1mg/mLを800μLの最終容量に達するようにマイクロピペットを用いて添加した。次いで、バイアルを撹拌装置撹拌速度250rpm上に37°Cで置いた。サンプル分析を0時間目、1時間目、2時間目、4時間目、16時間目及び24時間目に実施した。時間間隔毎に、100μLのサンプルをアセトニトリル:水85:15v/v0.3mLを収容しているバイアル中に集め、5分間撹拌してタンパク質を沈殿させ、遊離カバジタキセルを抽出した。次いで、内容物を10,000rpmで10分間遠心にかけ、透明な上清を集め、HPLCを用いて定量した。使用したHPLC条件は次の通りであった:カラム:150mmZorbaxSBフェニル3.5μm流束:1mL分;カラム温度は30°Cであった。230nm滴定のために使用した原理及び210nmでの紫外UV二重検出モード無勾配移動相:アセトニトリル60/水40/トリフルオロ酢酸0.006カバジタキセルの保持時間=4.1分。結果を下表に要約する。ラット血漿でのインビトロ放出研究から、すべてのカバジタキセルコンジュゲート製剤が持続性薬物放出プロフィールを示し、異なるリンカーを用いて合成したコンジュゲートにより異なる放出プロフィールが生じた図3ことが明らかとなった。スクシニルリンカーを含有しているコンジュゲートは最も遅い放出プロフィール24時間で~17の遊離カバジタキセルが放出されたを示し、次いでグルタリルリンカーを含有しているコンジュゲート24時間で~27の遊離カバジタキセルが放出されたであった。一方、ジジリコリルリンカーを含有しているコンジュゲートの場合には比較的迅速な放出が観察された24時間で~47の遊離カバジタキセルが放出された。特に、PLA-PEG-Y-スクシニル-カバジタキセルの場合には、スクシニル-カバジタキセルの放出をHPLCを用いて定量した。結果は、無視できる濃度ナノ粒子中に最初に存在するカバジタキセルの<1のスクシニル-カバジタキセルしか製剤から放出されなかったことを示した。結局、薬物放出の順序は次の通りであった:PLA-PEG-Y-ジグリコリル-カバジタキセル>PLA-PEG-Y-グルタリル-カバジタキセル>PLA-PEG-Y-スクシニル-カバジタキセルナノ粒子。これらの結果は、異なるリンカーを有するカバジタキセルコンジュゲートによりインビトロ放出プロフィールが異なることを示している。"