"ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸とを含んでなる、ナノ粒子。前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リジン、ヒスチジンおよびこれらの混合物からなる群から選択されるものである、請求項1に記載のナノ粒子。生物学的に活性な化合物をさらに含んでなる、請求項1または2に記載のナノ粒子。前記生物学的に活性な化合物が、脂溶性の生物学的に活性な化合物および水溶性の生物学的に活性な化合物から選択されるものである、請求項3に記載のナノ粒子。前記脂溶性の生物学的に活性な化合物が、aポリフェノール;bビタミンA群、D群、E群またはK群のビタミン;cbのビタミンの前駆体または誘導体;dリン脂質;eカロチノイド;f脂肪酸;g植物スタノールまたは植物ステロール;h上述の化合物a~gのいずれかの塩またはエステル;およびiこれらの組み合わせからなる群から選択されるものである、請求項4に記載のナノ粒子。前記脂溶性の生物学的に活性な化合物が、フラボノール、アントシアニン、フィトアレキシン、ヒドロキシチロソール、レチノイン酸、レチナール、レチノール、カルシフェロール、α-トコフェロール、トコトリエノール、フィトメナジオン、α-カロテン、β-カロテン、リコピン、カプサンシン、ルテイン、ゼアキサンチン、キサントフィル、EPA、DHA、リノール酸、カンペステロール、スチグマステロール、シトステロール、これらの食品グレードの又は医薬的若しくは化粧品的に許容される誘導体、エステルまたは塩、およびこれらの混合物からなる群から選択されるものである、請求項5に記載のナノ粒子。前記脂溶性の生物学的に活性な化合物が、ケルセチン、レスベラトロル、これらの食品グレードの又は医薬的若しくは化粧品的に許容される誘導体、エステルまたは塩、およびこれらの混合物から選択されるものである、請求項5に記載のナノ粒子。前記水溶性の生物学的に活性な化合物が、:aB群またはC群のビタミン;baのビタミンの誘導体;cヒアルロン酸、硫酸コンドロイチンおよびチオクト酸から選択される化合物;d上述の化合物a~cのいずれかの塩またはエステル;並びにeこれらの組み合わせからなる群から選択されるものである、請求項4に記載のナノ粒子。前記水溶性の生物学的に活性な化合物が、葉酸、その食品グレードの又は医薬的若しくは化粧品的に許容される誘導体、エステルまたは塩、およびこれらの混合物から選択されるものである、請求項8に記載のナノ粒子。ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸とを含んでなるナノ粒子を製造する方法であって、aゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコールを調製する工程と、b工程aの溶液に水を加える工程とを含んでなる、方法。ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸と、脂溶性の生物学的に活性な化合物とを含んでなるナノ粒子を製造する方法であって、aゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iを調製する工程と、b脂溶性のBACを含んでなるアルコール溶液を調製し、この溶液を水で希釈し、脂溶性のBACを含んでなる含水アルコール溶液iiを得る工程と、c前記ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iと、前記脂溶性のBACを含んでなる含水アルコール溶液iiとを混合する工程と、d工程cで得られた混合物に水を加える工程とを含んでなる、方法。ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸と、水溶性の生物学的に活性な化合物とを含んでなるナノ粒子を製造する方法であって、aゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iを調製する工程と、b水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含んでなる水溶液を調製し、この水溶液をアルコールで希釈し、水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含んでなる含水アルコール溶液iiを得る工程と、c前記ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iと、前記水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含んでなる含水アルコール溶液iiとを混合する工程と、d場合により、工程cで得られた混合物に界面活性剤を加える工程と、e工程cまたは工程dで得られた混合物に水を加える工程とを含んでなる、方法。前記含水アルコール溶液が、エタノール水溶液である、請求項10~12のいずれか一項に記載の方法。a作成したゼインナノ粒子を含有する懸濁物を、100~800MPaの間の圧力で、少なくとも1つの静水圧サイクルに付す工程と、b所望な場合、作成したナノ粒子を含有する懸濁物を乾燥させる工程を含んでなり、この乾燥工程が、場合により、保護剤および/または酸化防止剤の存在下で行われることを特徴とする、請求項10~13のいずれか一項に記載の方法。請求項10~14のいずれか一項に記載の方法によって得られる、ナノ粒子。少なくとも1種の請求項1~9または15のいずれか一項に記載のナノ粒子と、食品、医薬品または化粧品において許容される担体とを含んでなる、組成物。前記ナノ粒子の平均径が、100~450nmの間に含まれ、好ましくは約200nmである、請求項16に記載の組成物。-15重量~45重量のゼインと、-1重量~4重量の塩基性アミノ酸と、-0.5重量~5重量のケルセチンまたはレスベラトロルと、-45重量~80重量の糖とを含んでなり、全ての比率が、当該組成物の合計重量に対する重量である、請求項16または17のいずれか一項に記載の組成物。-15重量~45重量のゼインと、-4重量~10重量の塩基性アミノ酸と、-場合により、0.05重量~0.5重量のポリソルベートと、-0.5重量~5重量の葉酸と、-45重量~80重量の糖とを含んでなり、全ての比率が、当該組成物の合計重量に対する重量である、請求項16~17のいずれか一項に記載の組成物。請求項16~19のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる食品。本発明は、ゼインマトリックスおよび塩基性アミノ酸を含むナノ粒子、並びに外部因子例えば、光、pH、酸化などによって分解しないように保護するために、生物学的に活性な化合物BACをカプセル化する方法を提供する。このナノ粒子は、バイオアベイラビリティを高めるために、BACを放出制御するように設計することができ、バイオアベイラビリティは、カプセル化されたBACを腸内で一貫して放出することによって食品マトリックス中でのおよび/または貯蔵によって、および、胃の酸性状態に対して与えられる保護によって、分解は元々最小限に抑えられている、および、制御された手法でのまたは長期間にわたって継続するBACの放出効果によって、という2つの経路によって高めることができる。定義本発明を理解しやすくするための、本明細書で使用されるいくつかの用語および表現の意味は以下のとおりである。本明細書において、塩基性アミノ酸は、アミノ基-NH2およびカルボキシル基-COOHおよび正電荷を含む有機分子を指し、塩基性アミノ酸は、好ましくは、リジン、アルギニンおよびヒスチジンのような塩基性α-アミノ酸である。本明細書において、おおよそは、所定の値に近い値の範囲を指す例えば、所定の値の±10。例えば、おおよそ20は、20の±10、すなわち、18~22を含む。さらに、用語おおよそが明記されているか否かに関わらず、当業者は、本明細書で示す任意の数値が、その値に近い範囲を包含することを理解する。このような所定の値の変動量は、対応する測定中の実験誤差から生じ得る。本明細書において、生物学的に活性な化合物またはBACは、栄養、治療および/または美容作用を有する化合物を指し、この化合物は、脂溶性であっても水溶性であってもよい。本発明のBACの非限定的な具体例としては、アミノ酸、抗菌剤、香味剤、防腐剤、甘味剤、ステロイド、薬物、ホルモン、脂質、ペプチド、ポリヌクレオチド、多糖類、タンパク質、プロテオグリカン、香味料、ビタミンなどが挙げられる。本明細書において、水溶性の生物学的に活性な化合物または水溶性のBACは、栄養、治療および/または美容作用を有し、スペイン薬局方によって規定される基準にしたがって、水溶液中で可溶性極めて溶けやすい、溶けやすい、やや溶けやすい、やや溶けにくい、または溶けにくいである、化合物を指す。水溶性のBACの非限定的な具体例としては、ビタミン例えば、B群またはC群のビタミンおよびこれらの誘導体、塩またはエステル;ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、チオクト酸、これらの塩またはエステルなどが挙げられる。特定の実施形態では、水溶性のBACは、葉酸、4-アミノ安息香酸、ナイアシン、パントテン酸、チアミン一リン酸、チアミンピロリン酸、チアミン三リン酸、アスコルビン酸、プテロイルポリグルタミン酸葉酸誘導体:葉酸結合型のポリグルタメート;ポリグルタミン酸結合型の葉酸塩、フォリン酸、ニコチン酸、ヒアルロン酸、チオクト酸α-リポ酸、p-クマル酸、コーヒー酸、これらの食品グレードのまたは医薬的もしくは化粧品的に許容される誘導体、エステルまたは塩、およびこれらの混合物からなる群から選択される。本明細書において、脂溶性の生物学的に活性な化合物または脂溶性のBACは、栄養、治療および/または美容作用を有し、スペイン薬局方によって規定される基準にしたがって、脂中および油中で可溶性極めてて溶けやすい、溶けやすい、やや溶けやすい、やや溶けにくい、または溶けにくいである化合物を指す。脂溶性のBACの非限定的な具体例としては、ビタミン、例えば、A群、D群、E群、K群のビタミンおよびこれらの誘導体、リン脂質、カロチノイドカロテン、リコピン、ルテイン、カプサンシン、ゼアキサンチンなど、ω-3脂肪酸ドコサヘキサエン酸DHA、エイコサペンタエン酸EPAなど、植物スタノールおよび植物ステロールシトステロール、カンペステロール、スチグマステロールなど、ポリフェノールケルセチン、ルチン、レスベラトロル、ケンペロール、ミリセチン、イソラムネチンなどおよびこれらの誘導体が挙げられる。国または機関例えば、国連食糧農業機関FAOまたは世界保健機関WHOの国際食品規格にしたがって、ある製品がヒト用または動物用の食品に使用するのが安全であるとき、食品グレードの製品であると言われ、その結果、食品グレードの製品は、非毒性の食用に適した製品であり、そのため、この両表現は、同義語であり、本明細書では区別なく使用される。本明細書において、水性媒体は、水を含む媒体を指す。特定の実施形態では、水性媒体は、本質的に水からなる。本明細書において、含水アルコール媒体は、水とアルコールとを様々な相対比率で含む媒体を指す。特定の実施形態では、含水アルコール媒体は、前記化合物間における任意の相対比率でエタノール水溶液を含む。本明細書において、ナノ粒子は、1マイクロメートルμm未満、好ましくは、10~900ナノメートルnmの粒径を有する球状またはこれに類似する形状のコロイド系を指す。本明細書において、平均径は、水性媒体中で一緒に移動するナノ粒子集団の平均直径を指す。これらの系の平均径は、当業者に知られている標準的な方法によって測定することができ、例えば、実験例に記載されている後記参照。本明細書において、用語ゼインは、プロラミン類に属する任意の球状タンパク質を含み、このタンパク質は、一般的に、胚乳種子植物の胚嚢で作られる栄養組織であり、通常は、種々の被子植物の種子の胚のための食物の貯蔵庫を形成するの成長中に合成される。ゼインは、任意の適切な供給源から得ることができるが、好ましくは、トウモロコシから得られる。トウモロコシの胚乳からゼインを抽出する種々の方法および技術が知られており、市販のゼインは、一般的に、コーングルテンミールから抽出されるUS2009/0258050号。ゼインの研究は、遺伝子レベルで著しい変動性があり、そのため、ゼインとして知られているタンパク質群の一部を形成する異なるタンパク質の中で、複雑な状況があることがわかっている。天然のゼインは、実際は、分子の大きさ、溶解度、電荷が異なるいくつかの群のタンパク質からなる大きな異種のファミリーである。20種類を超える異なるゼインが存在すると見積もられている。高速液体クロマトグラフィーHPLC、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル排除クロマトグラフィー、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGE、等電点電気泳動IEF、アミノ酸分析、およびDNAクローニング技術によるゼイン抽出物の分析によって、ゼインタンパク質がよりよく理解されてきている。ゼインのアミノ酸組成の分析から、大量のロイシン、アラニン、グルタミンおよびフェニルアラニンが明らかになっているが、リジンおよびトリプトファンは存在していないか、または、非常に少量だけ存在している。非極性アミノ酸残基の比率が大きく、イオン性基が例外的に存在していないことが、その疎水性の性質および特定の溶解度の原因となっている。ゼインのタンパク質集団は、アルファ-ゼインα-ゼイン、ガンマ-ゼインγ-ゼイン[ベータゼインβ-ゼインを含む]、およびデルタ-ゼインδ-ゼインといった構造的に異なる3種類のタンパク質によって作られている。このタンパク質は、溶解度および配列の違いに基づき、4種類α-ゼイン、β-ゼイン、γ-ゼイン、およびδ-ゼインに分類することができる。還元剤を用いずに抽出されたゼインは、α-ゼインと呼ばれるポリペプチドの多くの多重遺伝子族を形成する。α-ゼインは、一般的に、天然のゼインに最も多く含まれるフラクションであり、アミノ末端に約40のアミノ酸を含み、その後に、20アミノ酸の9または10の繰り返し配列ペプチドを含む。これらの繰り返し配列は、αらせんであり、棒状の分子にタンパク質が巻きついていると考えられる。ゼインの他のフラクションβ-、γ-およびδ-ゼインは、ジスルフィド結合を破壊するための還元剤を含有するアルコールのアルコール溶液を用いて抽出しなければならない。実例として、メルカプトエタノールは、実験室での抽出に使用される。β-、γ-およびδ-ゼインは、α-ゼインと配列同一性を示さない。γ-ゼインは、還元条件下で水性溶媒およびアルコール溶媒の双方に可溶性である。γ-ゼインはそれぞれ固有のN末端配列を有する。例として、50kDaのγ-ゼインにおいて、この領域は、136アミノ酸長であり、ヒスチジンが非常に豊富である。27kDaのγ-ゼインは、アミノ末端の後に一連の8個のヘキサペプチド縦列反復配列11個のアミノ酸を生成するを有する。16kDaのγ-ゼインタンパク質の1つ目の8個のアミノ酸は、27kDaのγ-ゼインの1つ目の8個のアミノ酸と同一であるが、16kDaのγ-ゼインは、プロリンを豊富に含む繰り返し配列の3種類の縮重態様を有する。γ-ゼインは、通常は、ゼイン全体の10~15に相当する。β-ゼインは、γ-ゼインに関連し、メチオニンが豊富な17kDaポリペプチドを含み、ゼイン全体の10を構成する。β-ゼインおよびγ-ゼインのおおよそ最後の140アミノ酸は、85同一である。β-ゼインは、反復ペプチドを含まず、ほとんどがβ-シートを構成し、逆向きに配置していると考えられる。δ-ゼインは、10kDaのタンパク質であり、ゼインの少量のフラクションである。δ-ゼインは、群の中で最も疎水性であり、反復ペプチドを含まず、例外的にメチオニンおよびシステインが豊富である。ゼインは、食品医薬品局米国によって、1985年から一般に安全と認められるGRAS製品であるとみなされている[CAS化学情報検索サービス番号:9010-66-6]。本発明において、ゼインの供給源またはグレードは、1種類のゼインに限定されず、実際、本発明を実施するために、任意のゼインを使用することができる。実例として、本発明で使用可能な市販のゼインとしては、Sigma-Aldrichによって供給されるゼイン製品番号Z3625;WakoPurasChemicalIndustriesによって供給されるゼイン製品番号261-00015、264-01281および260-01283;SpectrumChemicalによって供給されるゼイン製品番号Z1131およびZE105;ScienceLabunitsSLZ1150;SJZChem-Pharma社によって供給されるゼイン製品名ZEINGLIDZIN;ArcoOrganicsによって供給されるゼインカタログ番号17931-0000、17931-1000および17931-5000;およびFreemanIndustries、ゼイン一般グレードF4000、ゼイン一般グレードF4400、ゼイン特殊グレードF6000などが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、Sigma-Aldrichによって供給される、トウモロコシから得られる市販のゼイン製品番号Z3625が用いられる。本明細書において、ゼインとの用語は、天然ゼインおよび改質ゼインの双方を含む。改質ゼインとの用語は、通常天然には存在しないアミノ酸配列を有するが、本物のゼインと同様の挙動を示し、アルコールに可溶性である任意のゼインを含む。アミノ酸の置換、特に、疎水性を実質的に変えない置換を導入してもよい。実例として、アミノ酸の置換は、反復領域内で行われてもよく、または、1個のアミノ酸を置換してもよく、さらにまた、置換は、反復配列のドメインを連結するセグメント中で行われてもよい。また、挿入および置換が、ゼイン分子のカルボキシル末端およびアミノ末端に導入されてもよい。さらに、得られるタンパク質がゼインと機能的に等価であるすなわち、その性質を維持する場合は、アミノ酸配列において、欠失が行われてもよい。本発明のナノ粒子一つの態様では、本発明は、ゼインマトリックスと塩基性アミノ酸とを含むナノ粒子以下本発明のナノ粒子というに関する。事実上、任意のゼインが本発明のナノ粒子のマトリックスを形成することができる。しかし、特定の実施形態では、前記ゼインは、トウモロコシ由来のゼインであり、例えば、Sigma-Aldrichによって供給されるゼイン製品番号Z3625である。特定の実施形態では、前記塩基性アミノ酸は、アルギニン、リジン、ヒスチジンおよびこれらの混合物からなる群から選択される。本発明のナノ粒子は、生物学的に活性な化合物BACをカプセル化するのに用いることができる。本発明のナノ粒子は、さらに、技術的助剤として使用することができ、例えば、水性マトリックス内への脂溶性のBACの組み込みを容易にすることなどができる。したがって、別の特定の実施形態では、本発明のナノ粒子は、BACをさらに含む。前記BACは、水溶性のBACであっても脂溶性のBACであってもよく、この場合、本発明のナノ粒子は、BACを含んでいない本発明の他のナノ粒子時に、本発明の空のナノ粒子として特定すると区別するために、本明細書では、時に、本発明の保持しているナノ粒子として特定する。特定の実施形態では、前記BACは、脂溶性のBACである。さらに特定の実施形態では、脂溶性のBACは、aポリフェノール;bビタミンA群、D群、E群またはK群のビタミン;cbのビタミンの前駆体または誘導体;dリン脂質;eカロチノイド;f脂肪酸;g植物スタノールまたは植物ステロール;h上述の化合物a~gのいずれかの塩またはエステル;およびiこれらの組み合わせからなる群から選択される。さらに特定の実施形態では、前記脂溶性のBACは、iポリフェノール、例えば、フラボノール例えば、カテキン、エピカテキン、イソラムネチン、ケンペロール、ミリセチン、ケルセチンなど;アントシアニン例えば、シアニジン、デルフィニジン、マルビジン、ペオニジン、ペツニジンなど;フィトアレキシン例えば、レスベラトロルなど;ヒドロキシチロソールなど;ii脂溶性ビタミン、例えば、ビタミンAおよびその誘導体例えば、レチノイン酸、レチナール、レチノールなど;ビタミンEおよびその誘導体例えば、トコフェロール、例えば、α-トコフェロールなど、トコトリエノールなど;ビタミンDおよびその誘導体例えば、ビタミンD1、ビタミンD2エルゴカルシフェロール、ビタミンD3コレカルシフェロール、ビタミンD422-ジヒドロエルゴカルシフェロール、ビタミンD5シトカルシフェロールなど;ビタミンKまたはフィトメナジオンおよびその誘導体例えば、ビタミンK1フィロキノン、ビタミンK2メナキノン、メナジオンなど;iiiカロチノイド、例えば、カロテン例えば、α-カロテン、β-カロテン、クリプトキサンチン、リコピンなど;キサントフィル例えば、アスタキサンチン、カンタキサンチン、カプサンシン、クリプトキサンチン,フラボキサンチン、ルテイン、ロドキサンチン、ルビキサンチン、ビオラキサンチン、ゼアキサンチンなど;iv脂肪酸、例えば、ω-3脂肪酸例えば、α-リノレン酸ALA、エイコサペンタエン酸EPA、ドコサヘキサエン酸DHAなど;ω-6脂肪酸例えば、γ-リノール酸など;またはv植物ステロールまたは植物スタノール例えば、ブラシカステロール、カンペステロール、エルゴステロール、スチグマステロール、シトスタノール、シトステロールなどである。特定の実施形態では、前記脂溶性のBACは、フラボノール例えば、ケルセチンなど、アントシアニン、フィトアレキシン例えば、レスベラトロルなど、ヒドロキシチロソール、レチノイン酸、レチナール、レチノール、カルシフェロールエルゴカルシフェロールおよびコレカルシフェロールcolecalciferol、α-トコフェロール、トコトリエノール、フィトメナジオン、α-カロテン、β-カロテン、リコピン、カプサンシン、ルテイン、ゼアキサンチン、キサントフィル、EPA、DHA、リノール酸、カンペステロール、スチグマステロール、シトステロール、これらの食品グレードのまたは医薬的もしくは化粧品的に許容される誘導体、エステルまたは塩、およびこれらの混合物からなる群から選択される。さらに特定の実施形態では、前記脂溶性のBACは、ケルセチン、レスベラトロル、これらの食品グレードのまたは医薬的もしくは化粧品的に許容される誘導体、エステルまたは塩、およびこれらの混合物からなる群から選択される。別の特定の実施形態では、前記BACは、水溶性のBACである。さらに特定の実施形態では、前記水溶性のBACは、aB群またはC群のビタミン;baのビタミンの誘導体;cヒアルロン酸、硫酸コンドロイチンおよびチオクト酸から選択される化合物;d上述の化合物a~cのいずれかの塩またはエステル;およびeこれの組み合わせである。特定の実施形態では、前記水溶性のBACは、葉酸、その食品グレードのまたは医薬的もしくは化粧品的に許容されるエステルまたは塩、およびこれらの混合物からなる群から選択される。本発明のナノ粒子を、抗酸化化合物をカプセル化するための系として使用することは、特に好ましい実施形態である。本発明のナノ粒子を得る方法別の態様では、本発明は、ゼインマトリックスと塩基性アミノ酸とを含むナノ粒子本発明のナノ粒子を製造する方法以下、本発明の方法[1]に関し、この方法は、aゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコールを調製する工程と、b工程aの溶液に水を加える工程とを含む。本発明の方法[1]の工程aで使用する含水アルコール溶液は、水とアルコール典型的には、エタノールとを含み、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液は、25~75w/vのアルコール、好ましくは、30~60、さらに好ましくは、おおよそ50のアルコールを含む。本発明の方法[1]の工程aで調製される含水アルコール溶液が含み得るゼインの量は、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液に含まれるゼインの量は、0.1~10w/v、好ましくは、0.2~2.5、さらに好ましくは、0.5~1に含まれる。本発明の方法[1]の工程aで調製される含水アルコール溶液が含み得る塩基性アミノ酸の量は、広範囲に変わり得る。一般的に、この量は、通常、溶解するゼインの量によって表される。したがって、前記含水アルコール中に存在する塩基性アミノ酸とゼインの重量比[塩基性アミノ酸:ゼイン]は、一般的に、カプセル化されるBACの種類によって変わり、広範囲に変わり得るが、特定の実施形態では、前記塩基性アミノ酸:ゼインの重量比は、1:0.01~1:50、典型的には、1:0.5~1:25、好ましくは、1:1~1:20、さらに好ましくは、1:5~1:15に含まれ、特定の実施形態では、塩基性アミノ酸:ゼインの重量比は、おおよそ1:6である。本発明の方法[1]の工程bにおいて、本発明のナノ粒子を形成するのに十分な量の水が加えられる。加えられる水の量は広範囲に変わり得るが、特定の実施形態では、水は、媒体中のアルコールの最終的な割合に対して十分な量で加えられ、10~60w/v、好ましくは、15~30、さらに好ましくは、おおよそ25に含まれる。別の態様では、本発明は、ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸と、脂溶性のBACとを含むナノ粒子脂溶性のBACを保持する本発明のナノ粒子を製造する方法以下、本発明の方法[2]というに関し、この方法は、aゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iを調製する工程と、b脂溶性のBACを含むアルコール溶液を調製し、この溶液を水で希釈し、脂溶性のBACを含む含水アルコール溶液iiを得る工程と、c前記ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iと、前記脂溶性のBACを含む含水アルコール溶液iiとを混合する工程と、d工程cで得られた混合物に水を加える工程とを含む。本発明の方法[2]の工程aで使用する、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iは、水とアルコール典型的には、エタノールとを含み、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液は、25~75w/vのアルコール、好ましくは、30~60、さらに好ましくは、おおよそ50のアルコールを含む。前記含水アルコール溶液iは、適切な量で成分を混合することによって調製される。本発明の方法[2]の工程aで使用する、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iが含み得るゼインの量は、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液iに含まれるゼインの量は、0.1~10w/v、好ましくは、0.2~2.5、さらに好ましくは、0.5~1に含まれる。本発明の方法[2]の工程aで使用する、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iが含み得る塩基性アミノ酸の量は、広範囲に変わり得る。この量は、一般的に、溶解するゼインの量によって表される。したがって、前記含水アルコールi中に存在する塩基性アミノ酸とゼインの重量比[塩基性アミノ酸:ゼイン]は、広範囲に変わり得るが、特定の実施形態では、前記塩基性アミノ酸:ゼインの重量比は、1:0.01~1:50、典型的には、1:0.5~1:25、好ましくは、1:1~1:20、さらに好ましくは、1:5~1:15に含まれ、特定の実施形態では、塩基性アミノ酸:ゼインの重量比は、おおよそ1:6BACがレスベラトロルである場合およびおおよそ1:11BACがケルセチンである場合である。本発明の方法[2]の工程bで調製される脂溶性のBACを含む含水アルコール溶液iiは、前記脂溶性のBACをアルコール例えば、エタノールに溶解または可溶化し、次いで、得られたアルコール溶液を水で希釈することによって得ることができる。したがって、本発明の方法[2]の工程bで調製される脂溶性のBACを含む含水アルコール溶液iiは、水とアルコール典型的には、エタノールとを含み、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液iiは、25~75w/vのアルコール、好ましくは、30~65、さらに好ましくは、50~60のアルコールを含む。前記含水アルコール溶液iiが含み得る脂溶性のBACの量は、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液iiに含まれる脂溶性のBACの量は、0.05~10w/v、好ましくは、0.1~1、さらに好ましくは、0.2~0.3に含まれる。本発明の方法[2]の工程cによれば、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iを、脂溶性のBACを含む含水アルコール溶液iiと混合し、ゼインと、塩基性アミノ酸と、脂溶性のBACとを含む混合物をこのようにして含水アルコール媒体中で作成する。工程cで作成した混合物中に存在する脂溶性のBAC:ゼインの重量比は、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、脂溶性のBACとゼインの重量比[脂溶性のBAC:ゼイン]は、1:0.5~1:70、好ましくは、1:5~1:50、さらに好ましくは、1:10~1:30に含まれる。本発明の方法[2]の工程dによれば、工程cで作成られる混合物に、本発明のナノ粒子の形成に十分な量の水が加えられる。加えられる水の量は広範囲に変わり得るが、特定の実施形態では、水は、媒体中のアルコールの最終的な比率に対して十分な量で加えられ、10~60w/v、好ましくは、15~30、さらに好ましくは、おおよそ25含まれる。別の態様では、本発明は、ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸と、水溶性の生物学的に活性な化合物とを含むナノ粒子水溶性のBACを保持する本発明のナノ粒子を製造する方法以下、本発明の方法[3]というに関し、この方法は、aゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iを調製する工程と、b水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含む水溶液を調製し、この水溶液をアルコールで希釈し、水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含む含水アルコール溶液iiを得る工程と、c前記ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iと、前記水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含む含水アルコール溶液iiとを混合する工程と、d場合により、工程cで得られた混合物に界面活性剤を加える工程と、e工程cまたは工程dで得られた混合物に水を加える工程とを含む。本発明の方法[3]の工程aで使用する、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含む含水アルコール溶液iは、水とアルコール典型的には、エタノールとを含み、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液は、25~75w/vのアルコール、好ましくは、30~60、さらに好ましくは、おおよそ50のアルコールを含む。前記含水アルコール溶液iは、適切な量で成分を混合することによって調製される。本発明の方法[3]の工程aで使用する、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iが含み得るゼインの量は、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液iに含まれるゼインの量は、0.1~10w/v、好ましくは、0.2~2.5、さらに好ましくは、0.5~1に含まれる。本発明の方法[3]の工程aで使用する、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iが含み得る塩基性アミノ酸の量は、広範囲に変わり得る。この量は、一般的に、溶解するゼインの量によって表される。したがって、前記含水アルコールi中に存在する塩基性アミノ酸とゼインの重量比[塩基性アミノ酸:ゼイン]は、広範囲に変わり得るが、特定の実施形態では、塩基性アミノ酸:ゼインの重量比は、1:0.01~1:50、典型的には、1:0.5~1:25、好ましくは、1:1~1:20、さらに好ましくは、1:5~1:15に含まれ、特定の実施形態では、塩基性アミノ酸:ゼインの重量比は、おおよそ1:6.7である。本発明の方法[3]の工程bで調製される水溶性のBACを含む含水アルコール溶液iiは、場合により第2の塩基性アミノ酸の存在下、前記水溶性のBACを水に溶解または可溶化し、次いで、得られた水溶液をアルコール例えば、エタノールで希釈することによって得ることができる。したがって、本発明の方法[3]の工程bで調製される水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含む含水アルコール溶液iiは、水とアルコール典型的には、エタノールとを含み、特定の実施形態では、含水アルコール溶液iiは、25~75w/vのアルコール、好ましくは、30~60、さらに好ましくは、おおよそ50のアルコールを含む。水溶性のBACを、場合により前記第2の塩基性アミノ酸の存在下で水に溶解して得られる水溶液は、特定の実施形態では、前記水溶性のBACと水とを含み、別の特定の実施形態では、前記水溶性のBACと、前記塩基性アミノ酸と、水とを含む。ある種の水溶性のBAC例えば、葉酸の可溶化は、塩基性アミノ酸で塩基性にした水溶液を使用することによって促進することができるため、水溶性のBACを溶解するために前記第2の塩基性アミノ酸の存在が必要な場合には、前記第2の塩基性アミノ酸は、一般的に、水溶液で[それゆえ、前記含水アルコール溶液iiで]存在するであろう。この場合には、この塩基性にした水溶液中の前記水溶性のBACと前記第2の塩基性アミノ酸の重量比は、1:0.25~1:5、好ましくは、1:0.5~1:2、さらに好ましくは、1:0.8~1:1.8に含まれてもよく、その後、上に述べたように、この水溶液を含水アルコール媒体例えば、エタノールで希釈し、前記含水アルコール溶液iiを得る。この溶液は、上で述べたように、25~75w/vのアルコール、好ましくは、30~60、さらに好ましくは、おおよそ50のアルコールを含む。本発明の方法[3]は、2種類の異なる塩基性アミノ酸を用いる可能性を想定している。したがって、特定の実施形態では、ゼインおよび塩基性アミノ酸第1の塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iの調製において使用される塩基性アミノ酸と、水溶性のBACおよびこの場合には第2の塩基性アミノ酸第2の塩基性アミノ酸を含む含水アルコール溶液iiの調製において使用される塩基性アミノ酸は、同じであり、アルギニン、リジン、ヒスチジンおよびこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくは、リジンである。含水アルコール溶液iiが含み得る水溶性のBACの量は、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、前記含水アルコール溶液iiに含まれる水溶性のBACの量は、0.01~10w/v、好ましくは、0.05~5、さらに好ましくは、0.1~1に含まれる。本発明の方法[3]の工程cによれば、ゼインおよび塩基性アミノ酸を含有する含水アルコール溶液iを、水溶性のBACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含む含水アルコール溶液iiと混合し、ゼインと、塩基性アミノ酸と、水溶性のBACと、場合により第2の塩基性アミノ酸上述のように、前記含水アルコール溶液iに含有される塩基性アミノ酸と同じであってもよいとを含む混合物をこのようにして形成する。工程cで形成された混合物中に存在する水溶性のBAC:ゼインの重量比は、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、工程cで形成された前記混合物中に存在する水溶性のBAC:ゼインの重量比[水溶性のBAC:ゼイン]は、1:0.2~1:50、好ましくは、1:1~1:15、さらに好ましくは、1:6~1:12に含まれる。本発明の方法[3]の任意の工程dにおいて、工程cで得られた混合物に界面活性剤を加える。如何なる理論によって束縛されるものではないが、界面活性剤は、水溶性のBACを脂溶性のポリマーマトリックスゼインに近づくように移動させ、それにより、液滴形成を誘導するとき、その捕捉を容易にするため、水溶性のBACをナノ粒子中にカプセル化しやすくすると考えられる。特定の実施形態では、前記界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート、例えば、脂肪酸例えば、オレイン酸およびポリオキシエチレンソルビタンから誘導されるエステル例えば、Tween登録商標80という名称で上市されているものである。工程dで形成される混合物中の界面活性剤:水溶性のBACの重量比は、適切な場合、広範囲に変わり得る。しかし、特定の実施形態では、界面活性剤と水溶性のBACの重量比[界面活性剤:水溶性のBAC]は、1:10~1:50、好ましくは、1:15~1:45、さらに好ましくは、1:20~1:30に含まれる。最後に、本発明の方法[3]の工程eでは、工程cまたは工程dで形成された混合物に、本発明のナノ粒子を形成するのに十分な量の水が加えられる。加えられる水は、広範囲に変わり得るが、特定の実施形態では、水は、媒体中のアルコールの最終的な比率に対して十分な量で加えられ、10~60w/v、好ましくは、15~30、さらに好ましくは、おおよそ25含まれる。実際に、任意のゼインを使用し、本発明の方法[1]、[2]および[3]を実施することができるが、特定の実施形態では、ゼインは、トウモロコシ由来のゼインであり、例えば、Sigma-Aldrichによって供給されるゼイン製品番号Z3625である。非常に多様な性質をもつアルコールを使用することができるが、本発明の特定の好ましい実施形態では、本発明の方法[1]、[2]および[3]で使用される含水アルコール溶液は、エタノールである。実際に、任意の塩基性アミノ酸を使用し、本発明の方法[1]、[2]および[3]を実施することができるが、特定の実施形態では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リジン、ヒスチジンおよびこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくは、リジンである。塩基性アミノ酸は、本発明のナノ粒子の内側または外側にあってもよいが、以下の理由で基本的な技術的な役割をはたす。-塩基性アミノ酸は、ナノ粒子が形成される前に、成分の溶解を促進する。具体的には、ゼインは、塩基性アミノ酸の存在下では、塩基性アミノ酸の非存在下での溶解に比べて、アルコールの比率がより低い例えば50含水アルコールに溶解することができる。塩基性アミノ酸はさらに、BAC、特に、ある種の水溶性のBAC、特に、酸性の水溶性のBAC例えば、葉酸の溶解を促進する;-塩基性アミノ酸は、ナノ粒子の両側内側および外側で、ナノ粒子を製造した後に、適切なpHを維持する;そして、-塩基性アミノ酸は、±10mVとは大きく離れた負の表面電荷をもつナノ粒子を得ることができ、その凝集を妨げる。したがって、塩基性アミノ酸は、本発明のBACを保持するナノ粒子および保持しないナノ粒子双方の製造において非常に重要な役割を果たす。本発明のナノ粒子は、平均粒径が1μ未満、典型的には、1~999nm、好ましくは、10~900nm、さらに好ましくは、50~500nm、さらに一層好ましくは、100~450nm、よりさらに一層好ましくは、140~400nmであることを特徴とする。本発明のナノ粒子は、官能特性舌触りを変えてしまうことを予防する目的で、粒径がおおよそ約200nmであるのが有利であり、このことは、本発明のナノ粒子が食品分野で使用される場合特に適している。本発明のナノ粒子BACを保持しているもの、および保持していないもの空のナノ粒子は、温度および酸化に対する安定性を高める目的で、製剤中に、酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸ビタミンCなどを組み込むことができる。この場合、酸化防止剤を、BACとともに導入し、一緒にカプセル化してもよく適切な場合、または本発明のナノ粒子のエンベロープ外殻に導入してもよい。このため、本発明の方法[1]、[2]および[3]は、例えば、BACおよび場合により第2の塩基性アミノ酸を含む水溶液に酸化防止剤を加えることによって、ナノ粒子の製剤中に酸化防止剤を組み込むように適切に合わせられるであろう。特定の実施形態では、BACは葉酸であり、酸化防止剤はアスコルビン酸であり、葉酸が紫外線照射、pH変化、熱、酸素などによって分解しないように保護することによって、さらに、アスコルビン酸自体が、栄養的に寄与することによって作用すると考えられる。酸化防止剤をBACと共に導入し、一緒にカプセル化してもよく、または本発明のナノ粒子のエンベロープに導入してもよい。さらに、所望な場合、本発明の方法[1]、並びに本発明の方法[2]および[3]は、異なる処理を用いることによって得られるナノ粒子を安定化するための1つ以上のさらなる安定化工程を含んでいてもよい。特定の実施形態では、この安定化処理は、形成された本発明のナノ粒子BACを保持しているもの、および保持していないもの双方を含む懸濁物を、例えば、100~800MPa、典型的には、350~600MPaの圧力で高圧処理に付すことを含む。特定の実施形態では、この処理は、ナノ粒子の懸濁物を、100~800MPa、典型的には、350~600MPaの圧力で、3~5分間のサイクルに付すことを含み、実際には、400MPaの圧力が良好な結果を与える。別の特定の実施形態では、この安定化処理は、形成された本発明のナノ粒子BACを保持しているもの、および保持していないもの双方を含む懸濁物を、2~5秒間、UHT超高温処理、例えば、130°C~140°Cの温度で処理した後、急速に冷却する工程に付すことを含む。同様に、所望な場合、本発明の方法[1]、並びに本発明の方法[2]および[3]は、本発明のナノ粒子BACを保持しているもの、および保持していないもの双方を粉末の形態で得る目的で、形成されたナノ粒子を含む懸濁物を乾燥させる工程を含んでいてもよい。このナノ粒子の存在形態は、その安定性の一因となり、さらに具体的には、固体食品例えば、小麦粉、パン、ペーストリー製品、シリアル、ミルク粉末など並びに化粧品および/または医薬品への適用可能性に対し有用である。実際、ナノ粒子を含む懸濁物を乾燥させるのに適した任意の従来の方法または技術を用い、この乾燥工程を行ってもよいが、特定の実施形態では、ナノ粒子を含む懸濁物を、アスピレーションもしくは噴霧による乾燥スプレー乾燥または凍結乾燥によって乾燥させる。この処理は、一般的に、ナノ粒子の懸濁物に、ナノ粒子に適した保護剤例えば、糖、例えば、ラクトース、トレハロース、マンニトール、ショ糖、マルトデキストリン、グルコース、ソルビトール、マルトースなど、およびこれらの混合物を加えることによって行われる。保護剤は、本発明のナノ粒子を乾燥工程中の熱分解および酸化から保護する。ゼイン:糖の重量比は、広範囲に変わり得るが、特定の実施形態では、ゼイン:糖の重量比は、1:1~1:4に含まれ、好ましくは、約1:2である。同様に、特定の実施形態では、糖を含有する溶液は、さらに酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸ビタミンCなどを含むことができ、この場合、ゼイン:糖:保護剤例えば、ビタミンCの重量比は、1:0.75~2.5:0.25~1.5、好ましくは、1:1.5:0.5であることができる。本発明の方法[1]により得られた本発明のナノ粒子すなわち、方法[1]によって形成された、ゼインマトリックスと塩基性アミノ酸とを含むナノ粒子は、本発明のさらなる態様である。同様に、本発明の方法[2]または[3]により得られた本発明の保持しているナノ粒子すなわち、脂溶性のBACまたは水溶性のBACを保持している、ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸とを含むナノ粒子は、本発明のさらなる態様である。用途本発明のナノ粒子は、BAC例えば、水溶性のBACまたは脂溶性のBACをカプセル化する能力を有する。本発明のナノ粒子は、さらに技術的助剤として使用することができ、例えば、その中では可溶性とならない媒体中でBACの均一な分散物になりやすくなる。特定の実施形態では、本発明のナノ粒子は、BACをカプセル化することができ、医薬組成物、化粧品組成物および食品組成物に組み込むことができる。天然ポリマー合成ポリマーに関連する毒性を予防するではない他の成分および食品グレードの成分ではない他の成分が、これらの調製物にも最終的な生産物ナノ粒子にも使用されていないためである。このナノ粒子は、BACが外部因子光、pH変化、酸化などに対して分解しないように保護する。本発明のナノ粒子は、水性媒体に再懸濁させ、BACが溶液中で分解しないように保護することができる。本発明のナノ粒子は、さらに乾燥粉末の形態で存在し、BACを安定に保ち、長期間にわたって貯蔵可能にすることができる特に、固体の食品調製物への組み込みにとって。さらに、本発明のナノ粒子は、局所用途のための化粧品組成物および医薬組成物の調製にも適している。したがって、別の態様では、本発明は、少なくとも1つの本発明のナノ粒子と、食品、医薬品または化粧品に許容される担体とを含む組成物以下、本発明の組成物というに関し、特定の実施形態では、本発明の組成物は、複数の本発明のナノ粒子を含む。特定の実施形態では、本発明のナノ粒子は、ゼインマトリックスと塩基性アミノ酸とを含むナノ粒子であり、別の特定の実施形態では、本発明の組成物は、本発明の保持しているナノ粒子すなわち、ゼインマトリックスと、塩基性アミノ酸と、栄養、治療および/または美容作用を有するBACとを含むナノ粒子、および医薬的または化粧品的に許容される担体または食品に適した担体である。本発明のナノ粒子は、平均粒径が1μm未満、典型的には、1~999nm、好ましくは、10~900nm、さらに好ましくは、50~500nm、さらに一層好ましくは、100~450nm、よりさらに一層好ましくは、140~400nmである。本発明のナノ粒子は、官能特性舌触りを変えてしまうことを予防する目的で、粒径がおおよそ200nmであるのが有利であり、このことは、本発明のナノ粒子が食品分野で使用される場合特に適している。特定の実施形態では、BACは、アミノ酸、抗菌剤、香味剤、防腐剤、甘味剤、ステロイド、薬物、ホルモン、脂質、ペプチド、ポリヌクレオチド、多糖類、タンパク質、プロテオグリカン、香味料、ビタミンおよびこれらの混合物からなる群から選択される。特定の実施形態では、BACは、脂溶性のBACである。脂溶性のBACの非限定的な具体例としては、ビタミン、例えば、A群、D群、E群、K群のビタミンおよびこれらの誘導体、リン脂質、カロチノイドカロテン、リコピン、ルテイン、カプサンシン、ゼアキサンチンなど、ω-3脂肪酸例えば、DHA、EPAなど、アミノ酸例えば、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリン、植物スタノールおよび植物ステロール例えば、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロールなど、ポリフェノール例えば、ケルセチン、ルチン、レスベラトロル、ケンペロール、ミリセチン、イソラムネチンなどおよびこれらの誘導体が挙げられる。別の特定の実施形態では、BACは、水溶性のBACであり、好ましくは、水溶性のBACの酸である。水溶性のBACの非限定的な具体例としては、ビタミン例えば、B群またはC群のビタミンおよびこれらの誘導体、塩またはエステル;ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、チオクト酸、その塩またはエステルなどが挙げられる。特定の実施形態では、水溶性のBACは、葉酸、4-アミノ安息香酸、ナイアシン、パントテン酸、チアミン一リン酸、チアミンピロリン酸、チアミン三リン酸、アスコルビン酸、プテロイルポリグルタミン酸葉酸誘導体:葉酸結合型のポリグルタメート;ポリグルタミン酸結合型の葉酸塩、フォリン酸、ニコチン酸、ヒアルロン酸、チオクト酸、p-クマル酸、コーヒー酸、これらの食品グレードのまたは医薬的もしくは化粧品的に許容される誘導体、エステルまたは塩、およびこれらの混合物からなる群から選択される。特定の実施形態では、本発明の組成物は、局所投与に適した医薬組成物であり、このために、この組成物は、局所投与に適した1つ以上の賦形剤を含む医薬的に許容される担体を、例えば、ゲル、軟膏、クリームなどの形態で含む。これらの局所投与を目的とする医薬組成物の製剤に適した賦形剤、およびこの医薬組成物の製造についての情報は、TratadodeFarmaciaGalenica、C.FauliiTrilloによる、第10版、1993、Luzan5、S.A.deEdicionesという本の中に見いだすことができる。本発明のナノ粒子を投与する投薬量は、広範囲に変えることができ、例えば、0.1~30、好ましくは0.5~5の本発明のナノ粒子を含む本発明の組成物のおおよそ0.5g/治療される面積cm2~おおよそ2g/治療される面積cm2である。別の特定の実施形態では、本発明の組成物は、局所投与に適した化粧品組成物であり、このために、この組成物は、局所投与に適した1つ以上の賦形剤を含む化粧品的に許容される担体を、例えば、ゲル、クリーム、シャンプー、ローションなどの形態で含む。これらの局所投与を目的とする化粧品組成物の調製に適した賦形剤、およびこの化粧品組成物の製造についての情報は、ManualdeCosmetologia、OctavioDiezSalesによる、第1版、1998、EditorialVideocinco、S.A.という本の中に見いだすことができる。別の特定の実施形態では、本発明の組成物は、食品組成物であり、例えば、固体、液体または半固体の食品調製物である。特定の実施形態では、本発明の組成物は、-15重量~45重量のゼインと、-1重量~4重量の塩基性アミノ酸と、-0.5重量~5重量のケルセチンまたはレスベラトロルと、-45重量~80重量の糖とを含み、全ての比率が、組成物の合計重量に対する重量である。別の特定の実施形態では、本発明の組成物は、-15重量~45重量のゼインと、-4重量~10重量の塩基性アミノ酸と、-場合により、0.05重量~0.5重量のポリソルベート例えば、tween80と、-0.5重量~5重量の葉酸と、-45重量~80重量の糖とを含み、全ての比率が、組成物の合計重量に対する重量である。また、本発明の組成物は食料品に組み込むことができる。したがって、別の態様では、本発明は、本発明の組成物を含む食料品に関する。この食料品は、液体、半固体または固体の形態であることができる。本発明のナノ粒子が全体的または部分的に溶解するのを防ぐか、または最小限に抑え、本発明のナノ粒子の安定性に寄与するため、食料品は、酸性pH、すなわち、7未満、好ましくは、6以下、さらに好ましくは、5以下のpHを有することが有利である。本発明の組成物を豊富に含むか、または本発明の組成物で強化され得る食料品の具体例としては、ミルクおよびその誘導体ヨーグルト、チーズ、カードなど、ジュース、ジャム、パンおよびペーストリー製品、発酵肉、ソースなどが挙げられる。同様に、本発明の組成物は動物用食品例えば、餌に組み込むことができる。以下の実施例は、生物学的に活性な化合物[BAC]具体的には、レスベラトロル、ケルセチンまたは葉酸をその中に組み込むことができるナノゼイン粒子および塩基性アミノ酸例えば、リジンの製造を説明する。ナノ粒子は、pHの変化、光、酸化などに起因して食品で起こり得る分解からBACを保護することができる。空のゼインナノ粒子を製造する一般的な方法ゼインナノ粒子を製造する一般的な方法は、ゼインタンパク質Sigma-Aldrich-製品番号Z3625を含水アルコール溶液、例えば、50w/vエタノール溶液に、特定量のリジンSigma-Aldrichとともに溶解した後、磁気攪拌下、一定流量で、特定量の水を加え、黄色がかった乳白色の懸濁物の外観を有するナノ粒子を形成することを含む。ナノ粒子の物理化学的特性ナノ粒子の完全な物理化学的特性を得るのに必要な種々の試験を以下に記載する。ナノ粒子の粒径および表面電荷を物理化学的試験で測定した。第1のパラメータ粒径は、ZetasizerNanoZ-SMalvernInstruments/Optilas、スペインを用いて、光子相関分光法によって得た。第2のパラメータ表面電荷は、ZetaPotentialAnalyzerBrookhavenInstrumentsCorporation、ニューヨーク、米国を用いて、ゼータ電位の測定によって測定した。ナノ粒子を形成する方法の収率は、製剤を遠心分離17,000×g、20分して得た上澄みから回収したナノ粒子を得た後に残った遊離ゼインの定量によって算出した。定量化のために、75w/vのアルコール濃度が得られるまで、上澄みをエタノールで希釈し、このエタノールは、検量線の標準を用意するのと同じ媒体であった。製剤中で粒子を形成するタンパク質ゼインの量は、初期に加えた量と、精製工程中に回収した上澄み中の定量された量との差として概算した。収率は、以下のように概算した。さらに、ゼインの合計量と上澄みのゼイン含有量の差によって得られる結果を確認するために、遠心分離後に得られたペレットの定量試験を行った。この場合、75w/vのエタノールを含む含水アルコール溶液を使用して粒子を破壊し、この溶液は、検量線を用意するのに用いたのと同じ媒体であった。したがって、この場合には、収率は、以下のように概算された。さらに、定量方法の妥当性を確認し、マトリックス効果がないことを確認するために、遠心分離していない既知の量の製剤を採取し、エタノール濃度75が得られるまで希釈した。このように、製剤中に存在するゼインの合計量を定量し、これと初期に加えたゼインの量とを比較することができ、あらゆる場合に、偏差が5未満であることがわかった。様々な計算を行うために、90~1,200μg/mLの検量線を使用したR2=0.999;LOD=43μg/mL;LOQ=143μg/mL。全ての定量は、278nmにおけるUV分光光度法Agilent8453、UV-可視光分光システムによって行われた。ナノ粒子の形態を走査型電子顕微鏡Zeiss、DSM940A、ドイツによって観察した。そのために、ナノ粒子を、約9nmの金分子の層で覆いEmitechK550Equipment、Sputter-Coater、英国、ZeissDMS940A顕微鏡米国によって写真を撮った。ケルセチンまたはレスベラトロルを含むゼインナノ粒子を製造する一般的な方法ケルセチンまたはレスベラトロルを保持するゼインナノ粒子を製造する一般的な方法は、タンパク質ゼインを、含水アルコール媒体50エタノールw/vに、所定量のリジンとともに溶解し、その後、磁気攪拌しながら、予め調製した酸化防止剤ケルセチンまたはレスベラトロルのアルコール溶液を水で希釈したものを所定量加える工程を含む。混合物を数分間インキュベートした後、最後の工程は、所定量の水を加え、黄色がかった乳白色の懸濁物の外観を有するナノ粒子を形成する工程からなる。次いで、所望な場合、撹拌によって3分間均質化した後、所定量の糖ラクトース、トレハロース、マンニトール、グルコース、ソルビトール、マルトデキストリン、マルトースなど溶液を、撹拌を止めずに加える。最後に、懸濁物をスプレードライヤーBuechiMiniSprayDrierB-191、BuechiLabortechnikAG、スイスによって、以下の条件で噴霧した。-空気注入口温度:70~110°C-空気排出口温度:30~90°C-空気圧:2~10bar[2×105~10×105Pa]-サンプルポンプ流量:2~9mL/分-アスピレーションアスピレーター:30~100-空気流:200~900L/h場合により、製剤は、糖を加えた後、アスピレーションまたは噴霧スプレー乾燥の代わりに凍結乾燥によって乾燥させることができる。ゼイン粒子に結合するケルセチンまたはレスベラトロルの量の測定ナノ粒子に結合するケルセチンまたはレスベラトロルの量を、いくつか変更したものの、LacopiniLacopiniら、JFoodCompAnal2008;21:589-598に記載されている方法にしたがって、高速液体クロマトグラフィーHPLCにより定量した。この分析は、ダイオードアレイUV検出システムと組み合わせたクロマトグラフモデル1100シリーズLCAgilent、ワルドブロン、独国で行った。製造直後のサンプル乾燥前を分析するため、ナノ粒子の精製工程の後に得られた上澄み[所定量の製剤を、Vivaspin登録商標300,000MWCO透析管VIVASPIN2、SartoriusStedimBiotech、ドイツで濾過することによる]を、エタノール含有量が75w/vの含水アルコール溶液が得られるまで希釈した。次いで、このペレットを75w/vエタノールに溶解して粒子を破壊し、ゼインおよびBACケルセチンまたはレスベラトロルおよびアミノ酸を溶液中に維持し、これにより定量を行った。両フラクション上澄みおよびペレット中に見出されたBAC含有量の合計は、常に、初期に加えた合計量と合致していた。さらに、所定量の製剤を75エタノールw/vに溶解することによって、BACの合計量を定量することも可能であった。この試験から、加えたBACの量と、上述のクロマトグラフ法による定量によって得られた量の差が、全ての場合で10未満であることを確認することができた。さらに、粉末サンプル乾燥製剤を調製するために、おおよそ15mgのナノ粒子製剤を採取し、エタノールに再懸濁させた。所定量の製剤を、Vivaspin登録商標300,000MWCO透析管VIVASPIN2、SartoriusStedimBiotech、ドイツで濾過することによって得られた上澄みを、エタノール濃度75w/vになるまで蒸留水で希釈した。このペレットを所定量の75エタノールw/vに溶解した。さらに、15mgの粉末に含まれるBACの合計も、75w/vエタノールに直接溶解することによって定量した。適合性のあるGemini登録商標C18AJ0-7596プレカラムを取り付け、40°Cに加熱したAlltechC18AlltimaTMカラム5μm、150mm×2.1mmを用い、勾配のついた水/メタノール/氷酢酸の混合物表1を参照を移動相として流量0.25mL/分でポンプ注入し、サンプルを分析した。検出は、ケルセチンの場合360nmで、レスベラトロルの場合306nmで行った。サンプルの注入量は10μLであった。保持時間は、ケルセチンの場合24.2±0.2分、レスベラトロルの場合22.8±0.5分であった。サンプルを定量する前に、濃度が1~100μg/mLの含水アルコール媒体75エタノール中の異なる検量線を用意し、5未満の精度および確度の結果を得た。最後に、ナノ粒子に結合したケルセチンまたはレスベラトロルの量[カプセル化効率E.E.]を、初期に加えたBACの量と、上澄み中で定量したBACの量との差として算出した。葉酸を含有するゼインナノ粒子を製造する一般的な方法葉酸を保持するゼインナノ粒子を製造する一般的な方法は、タンパク質ゼインを、含水アルコール媒体50エタノールw/vに所定量のリジンとともに溶解し、その後、磁気攪拌しながら、予め調製したビタミン水溶液を所定量のアルコールで希釈する工程を含む。混合物を数分間インキュベートした後、最後の工程は、所定量の水を加え、黄色がかった乳白色の懸濁物の外観を有するナノ粒子を形成する工程からなる。次いで、所望な場合、撹拌によって3分間均質化した後、所定量の糖ラクトース、トレハロース、マンニトール、グルコース、ソルビトール、マルトデキストリン、マルトースなど溶液を、撹拌を止めずに加える。最後に、懸濁物をスプレー乾燥機BuechiMiniSprayDrierB-191、BuechiLabortechnikAG、スイスによって、以下の条件で噴霧した。-空気注入口温度:70~130°C-空気排出口温度:30~90°C-空気圧:2~10bar[2×105~10×105Pa]-サンプルポンプ流量:2~9mL/分-アスピレーションアスピレーター:30~100-空気流:200~900L/h場合により、製剤は、糖を加えた後、アスピレーションまたは噴霧スプレー乾燥の代わりに凍結乾燥によって乾燥させることができる。ゼイン粒子に結合する葉酸の量の測定ナノ粒子と結合する葉酸の量を、Faye[FayeRussell、L.、QuantitativeDeterminationofWater-SolubleVitamins.InFoodAnalysisbyHPLC、Nollet、L.M.L.編集、MarcelDekker,Inc.、ニューヨーク、第2版、Chapter102000pp.444-445]に記載されている方法にしたがって、高速液体クロマトグラフィーHPLCにより定量した。この分析は、ダイオードアレイUV検出システムと組み合わせたクロマトグラフモデル1100シリーズLCAgilent、ワルドブロン、独国で行った。データは、Chem-StationG2171ソフトウエアを用い、Hewlett-Packardコンピュータで分析した。葉酸を分離するために、適合性のあるGemini登録商標C18AJ0-7596プレカラムを取り付け、40°Cに加熱したAlltechC18AlltimaTMカラム5μm、150mm×2.1mmを用いた。移動相は、H3PO433mM、pH2.3/アセトニトリルの混合物によって、勾配をつけて表2作成し、0.25mL/分の流量でポンプ注入した。290nmで検出を行った。サンプルの注入量は10μLであった。葉酸の保持時間は、22.6±0.5分であった。サンプルを定量する前に、濃度が2~400μg/mLの異なる検量線を用意し、精度および確度は95より大きくなり、溶液中にゼインおよび/またはアミノ酸が存在しても、葉酸の正確な定量を妨害しなかったことを確認した。製造直後のサンプル乾燥前を分析するため、所定量の製剤を、Vivaspin登録商標300,000MWCO透析管VIVASPIN2、SartoriusStedimBiotech、ドイツで濾過した後に、得られた上澄みを定量した。次いで、このペレットを0.05MNaOHに溶解して粒子を破壊し、ゼインおよび葉酸およびアミノ酸を溶液中に維持し、これにより定量を行った。両フラクション上澄みおよびペレット中に見出された葉酸の合計は、常に、初期に加えた合計量と合致していた。さらに、製剤1mLを0.05MNaOH1mLに溶解することによって、葉酸の合計量を定量することもできた。この試験から、加えた葉酸の量と、上述のクロマトグラフ法による定量によって得られた量の差が、全ての場合で10未満であることを確認することができた。それに加え、粉末サンプルを定量するために、15mgのナノ粒子を採取し、水2mLに再懸濁させ、遠心分離処理し、次いで、製造直後のサンプルと同様の方法で手順を進めた。薬物動態試験、ゼインナノ粒子内にカプセル化された葉酸のバイオアベイラビリティ治験倫理委員会の規則および欧州の実験動物に関する法律86/609/EUにしたがって薬物動態試験を行った。このために、平均体重200gの雄ウィスターラット20匹を通常の明-暗条件12時間-12時間に付し、試験の1週間前からは、葉酸欠乏性の餌FolicAcidDeficientDiet.TD.95247.Harlan、USAと水を摂取させた。製剤を投与する12時間前に、餌は摂取できないが、水は自由に飲むことができるメタボリックケージへラットを隔離した。動物を4つの治療群に分けた1群あたりラット5匹。第1群には、1mLのPBSリン酸バッファ、pH7.4のみを経口投与した。続く2つの群には、ゼインナノ粒子に組み込んだ葉酸Aditio、PanreacQuimica、バルセロナ、スペイン、または水に溶解した遊離形態カプセル化していないの葉酸を1mg/kg200μg/ラットで1回経口投薬して治療した。水に分散した異なる製剤1mLを、胃食道カニューレを介して投与した。最後に、同じ投薬量の遊離葉酸1mg/kgをリン酸バッファPBS0.5mLに溶解したものを第4群に伏在静脈から静脈内投与した。製剤を投与する前に、それぞれのラットにおいて、ビタミンのベースライン濃度を調べるために、尾の伏在動脈から血液を採取した。投与後、おおよそ500μLの血液を血清分離管SARSTEDTMicrotube1.1mLZ-Gelを用いて異なる時間点で採取した。全ての試験例で、ラットの痛みを予防するために、吸入麻酔イソフルラン:酸素によって動物を麻酔した後に採取を行い、全ての時間点でバイタルサインをチェックした。次いで、その血液量を、あらかじめ動物の温度に暖めておいた生理食塩水500μLを腹腔内投与することによって置き換えた。この期間中、動物の状態運動性、攻撃性、アレルギー反応および温度を試験し、有意な変化は観察されなかった。血清サンプルの葉酸の前処理および定量血液の入った管を遠心分離処理6,000rpm、20分、20°Cした後に得られた血清サンプル中の葉酸の定量を、酵素イムノアッセイ法を用いて行った。このために、食品中の葉酸の定量的な測定についてFDAによって承認されたElisaキットDiagnosticautomation、INC.カラバサス、カリフォルニア州、米国を使用した。血清サンプルは、前処理を行わず、製造業者の仕様にしたがって定量した。このキットが食品で使用するために設計されているという事実から、血清サンプル中のビタミンを定量する能力を確認するために、一連の予備試験を行った。この試験は、以下の前準備過程:1w/vアスコルビン酸ナトリウム中で調製した50mMの四ホウ酸ナトリウム溶液に溶解した様々な量0~300μLの葉酸を、血清50μLに加える過程を有することで、キットによって得られた結果と、前項に記載した高速液体クロマトグラフィーによって得られた結果とを徹底的に比較することからなる。得られた溶液を、50mMの四ホウ酸ナトリウム溶液を用いて最終量が350μL血清の1:7希釈になるように採取した。各混合物を採取し、30分間沸騰し、次いで、2°Cまで冷却し、この温度で一晩保存した。得られたサンプルを20,000rpmで20分間遠心分離し、これを20μmのフィルタで濾過した後、上述の方法を用い、高速液体クロマトグラフィーによって、葉酸含有量を定量した。この場合、血清のビタミン濃度が低いため、標準添加法を用いて、定量化の誤差を最小限に抑え、マトリックスによる任意の干渉を除去した。このHPLCによる抽出方法および定量方法は、FDAによって確立された基準にしたがって検証された。全ての試験例において、両方法によって見出された血清葉酸濃度の差は、10未満であった。したがって、分析のための血清の量が少なくてよく、より簡便で迅速な方法であり、その検出限界2ng/mLはクロマトグラフィー技術の検出限界よりもかなり低いため、酵素イムノアッセイ法が全てのサンプルを定量するために選択された。実施例1空のゼインナノ粒子の調製および特性決定、これを得る方法の収率、製剤に組み込まれたリジンの量の、ナノ粒子の物理化学的特性に与える影響60mgのゼインSigma-Aldrichを、10mgのリジンSigma-Aldrichとともに、8.8mLの50w/vエタノール溶液に溶解した。次いで、磁気撹拌しながら、一定流量の下、8.8mLの水をこの溶液に加え、ナノ粒子を形成した。この方法は3回行った。図1AおよびBに、この方法によって得られたゼイン粒子の、透過型電子顕微鏡によって得られた画像を示す。リジンおよび初期の含水アルコール溶液のエタノールの割合が、ナノ粒子の物理化学的特性に与える影響を知るために、以下のパラメータを変えることによって、3種類の新しい製剤を調製した。iこれらのうち、1つはリジンを含まず、ii他の1つは、リジンを含み、初期の含水アルコール溶液を、50w/vの代わりに75w/vエタノールで調製し、iii3番目のものは、75w/vエタノールで調製し、リジンも含まない。第3表に、得られたナノ粒子の主な物理化学的パラメータをまとめる。実施した統計学的試験独立したサンプルのノンパラメトリック検定:クラスカルウォリスにより、リジンの存在が、表面電荷を高めることを確認する統計学的に有意な証拠の存在が明らかになった。初期量が多いエタノール75w/vを用いて調製された製剤は、初期量が50w/vのエタノールを用いて調製された製剤と比べ、粒径が大きめであり、収率が大きいことが示されたが、表面電荷について有意な差はなかった。リジンを含まなかったサンプルで見られる表面電荷は、きわめてゼロに近く、このことは、この粒子が、凝集する傾向が大きいことを意味する。しかし、リジンの存在下では、表面電荷は、この現象を予防するのに十分なほど高い。したがって、BACをカプセル化するために、リジン存在下で、50w/vエタノールを含む含水アルコールから得られた製剤を選択した。なぜなら、このことが、ナノ粒子の凝集を防ぎ、脂溶性のBACおよび水溶性のBACの双方のカプセル化への用途を広げ、さらに、試薬の使用の顕著な節約を達成するからである。実施例2レスベラトロルを含むゼインナノ粒子の調製および特性決定、リジンおよびレスベラトロルの含有量の、カプセル化効率に与える影響各溶液がいずれも、最終量が8.8mLの50エタノールの当該溶液中に、60mgのゼインと、様々な量のリジン0、5、10または20mgとを含む、異なる含水アルコール溶液を調製した。さらに、47mgのレスベラトロルを、15mLのエタノールに溶解し、次いで、24mLの水で希釈した。次いで、調製した異なるゼイン溶液に、様々な量のレスベラトロル溶液1、2または3mLを加えた。インキュベートして5分後に、磁気撹拌しながら、一定流量の下、8.8mLの水を混合物に加えた。この方法は、それぞれの種類の製剤について、3回行った。第4表に、各試験例で得られたナノ粒子の物理化学的特性を示す。得られた結果は、リジンの存在が、カプセル化効率に有意な影響を及ぼさないことを示している。したがって、このアミノ酸が粒子の表面電荷を変え、凝集性を低下させるということを考慮し、さらに、粒子の形成収率を高めるということを考慮して、このアミノ酸が組み込まれた製剤を選択し、試験を継続した。第5表に、リジンの含有量を一定にしたとき、レスベラトロルの含有量を変えることによって得られたナノ粒子の物理化学的特性を示す。得られた結果から、製剤に加えるレスベラトロルの量が増えるにつれて、カプセル化効率が低下するが、粒子の内側にカプセル化された生物活性物質の量が増えることがわかる。実施例3アスピレーションスプレー乾燥によって乾燥させた、レスベラトロルを含むゼインナノ粒子の調製および特性決定126mgのゼインを、21mgのリジンとともに、14mLの50w/vエタノールに溶解した。これに加え、60mgのレスベラトロルを10mLのエタノールに溶解し、次に、この溶液を1.4mL集め、水で最終容積を2.8mLにして採取した。次いで、この希釈したレスベラトロル溶液1.1mLをゼイン溶液に加え、混合物を5分間インキュベートした。その後、磁気撹拌しながら、一定流量でこの混合物に水15mLを加えた。最後に、この混合物に260mgのマルトデキストリンを加えた後、スプレー乾燥機を用いて乾燥させた。この方法の条件は、以下のとおりであった。-空気注入口温度:110°C-空気排出口温度:70°C-空気圧:6bar[6×105Pa]-サンプルポンプ流量:4.5mL/分-アスピレーション:94-空気流:700L/h第6表に、得られた製剤の物理化学的特性をまとめる。ナノ粒子1mgあたりカプセル化された量およびカプセル化効率は、スプレー乾燥によって変わらない。図2に、レスベラトロルを含むゼイン粒子の走査型電子顕微鏡によって得られた画像を示す。さらに、ナノ粒子を形成した後で、ナノ粒子をスプレー乾燥機に流す前に、高圧技術5分間のサイクルで150MPa、5分間のサイクルで400MPaを施し、同じ実験を行った。得られたカプセル化の結果は、この処理をしないで得られたものと同様であった。実施例4ケルセチンを含むゼインナノ粒子の調製および特性決定、リジンおよびケルセチンの含有量がカプセル効率に与える影響各溶液がいずれも、最終量が8.8mLの50エタノールの当該溶液中に、60mgのゼインと、10mgのリジンとを含む、異なる溶液を調製した。さらに、150mgのケルセチンを50mLのエタノールに溶解し、次いで、この溶液31mLを採取し、最終量が50mLになるように水で希釈した。次いで、様々な量のケルセチン溶液0.5~3mLを、調製した異なるゼイン溶液に加えた。インキュベーションして5分後、磁気撹拌しながら、一定流量で8.8mLの水を混合物に加えた。この方法は、それぞれの種類の製剤について、3回行った。図3に、この方法によって得られたカプセル化されたケルセチンを含むゼイン粒子の透過型電子顕微鏡によって得られた画像を示す。表7に、各試験例で得られた物理化学的特性を示す。実施した統計学的試験独立したサンプルのノンパラメトリック検定:クラスカルウォリスにより、異なる製剤の物理化学的特性に差があると考える統計的に有意な証拠の存在が明らかになった。得られた結果の観点で、製剤に加えるケルセチンの量が増えるにつれて、以下の数式を考慮しつつ、カプセル化効率は低下し、カプセル化されるBACケルセチンの量は潜在的に増えると考えることができる図4。y=369.92x-0.7526;R2=0.9955[式3]式中、yは、カプセル化されたケルセチンの量に対応しμgQ/mgNP、そしてxは、ケルセチンとゼインの初期の比率に対応するmgゼイン/mgケルセチン。粒径および電位に関し、分析した異なるサンプル間で統計的に有意な差はみられなかった。さらに、製剤中のリジンの量の多少が、ナノ粒子の物理化学的特性に与える影響を知ろうとする試みがなされ、そのため、この試験例では、初期のケルセチン含有量は一定にしたままで、加えるアミノ酸の量を変えて同じ試験を行った。したがって、様々な量のリジン0~20mgを含む異なるゼイン溶液を調製した。製剤に加えられた上述のケルセチン溶液の量は、ケルセチン:ゼインの重量比が1:11になるように、全ての試験例で3mLであった。第8表に、各試験例で得られた物理化学的特性を示す。得られた結果は、ケルセチンの場合には、10mgよりも多い量を初期のゼイン溶液に加えると、カプセル化効率は、少量のリジンを含む製剤に対し、おおよそ20低下し、これはおそらく、この量のアミノ酸が、活性成分の部分的な酸化を誘発するという事実のためであろう。しかし、リジンを含まないサンプルと、約5mgのリジンを製剤に含むサンプルとでカプセル化効率に統計学的に有意な差はみられなかった。したがって、この製剤を、乾燥試験を続けるための製剤に選択した。実施例5スプレー乾燥によって乾燥させた、ケルセチンを含むゼインナノ粒子の調製および特性決定602mgのゼインとともに、51mgのリジンを、80mLの50w/vエタノールに溶解した。これに加え、250mgのケルセチンを50mLのエタノールに溶解し、次いで、この溶液20mLを集め、水で最終容積を32mLにして採取した。次いで、この希釈したケルセチン溶液20mLをゼイン溶液に加え、混合物を5分間インキュベートした。その後、磁気撹拌しながら、一定流量で80mLの水をこの混合物に加えた。最後に、この混合物に1,209mgのマンニトールを加えた後、スプレー乾燥機によって乾燥させた。この方法の条件は、以下のとおりであった。-空気注入口温度:90°C-空気排出口温度:45°C-空気圧:6bar[6×105Pa]-サンプルポンプ流量:4.5mL/分-アスピレーション:100-空気流:600L/h第9表に、得られた製剤の物理化学的特性をまとめる。ナノ粒子1mgあたりカプセル化された量およびカプセル化効率は、スプレー乾燥によって変わらない。図5に、ケルセチンを含むゼイン粒子の走査型電子顕微鏡によって得られた画像を示す。アジュバントとしてマンニトールの代わりにマルトデキストリンを用いて同じ試験を行い、マルトデキストリンは、ナノ粒子をコーティングし、ナノ粒子の外側に残ったケルセチン部分をコーティングすることによってより作用するため、より大きなカプセル化効率を得た。さらに、ナノ粒子を形成した後で、ナノ粒子をスプレー乾燥機に流す前に、高圧技術5分間のサイクルで150MPa、5分間のサイクルで400MPa、および5分間のサイクルで800MPaを施し、同じ実験を行った。得られたカプセル化の結果は、この処理をしないで得られたものと同様であった。実施例6葉酸を含むゼインナノ粒子の調製および特性決定121mgのゼインとともに、18mgのリジンを、14mLの50w/vエタノールに溶解した。これに加え、303mgの葉酸とともに402mgのリジンを50mLの水に溶解し、次いで、エタノールで半分に希釈した。次いで、この希釈した葉酸溶液5mLをゼイン溶液に加え、混合物を5分間インキュベートした。その後、混合物に0.6mLのTween登録商標80ポリソルベートを加え、混合物をさらに5分間インキュベートした。次いで、磁気撹拌しながら、一定流量で15mLの水を加え、ナノ粒子を形成した。最後に、253mgのラクトースを混合物に加えた後、スプレー乾燥機を用いて乾燥させた。この方法の条件は、以下のとおりであった。-空気注入口温度:125°C-空気排出口温度:90°C-空気圧:6bar[6×105Pa]-サンプルポンプ流量:4.5mL/分-アスピレーション:90-空気流:750L/h第10表に、得られた製剤の物理化学的特性をまとめる。さらに、葉酸を含む新しいゼインナノ粒子製剤を調製し、この場合には、界面活性剤を加える工程を省いた。このために、1,270mgのゼインとともに200mgのリジンを、140mLの50w/vエタノールに溶解した。121mgの葉酸および200mgのリジンを、25mLの水中に含む別の溶液をさらに調製し、その後、エタノールで半分に希釈した。次いで、この希釈した葉酸溶液43mLをゼイン溶液に加え、混合物を5分間インキュベートした。その後、磁気撹拌しながら、一定流量で150mLの水を加え、ナノ粒子を得た。最後に、この混合物に2,415mgのマンニトールを加えた後、スプレー乾燥技術を用いて乾燥させた。この方法の条件は、以下のとおりであった。-空気注入口温度:120°C-空気排出口温度:80°C-空気圧:6bar[6×105Pa]-サンプルポンプ流量:4.5mL/分-アスピレーション:90-空気流:750L/h第11表に、得られた製剤の物理化学的特性をまとめる。得られたナノ粒子は、容易に再懸濁し、界面活性剤を使用したときに得られたナノ粒子よりも粒径が小さい。実施例7ゼインナノ粒子内にカプセル化された葉酸の薬物動態試験図12に、薬物動態試験で調べたナノ粒子の主な物理化学的特性をまとめる。このナノ粒子は、実施例6の第2項界面活性剤を用いないに記載した方法にしたがって得た。薬物動態試験を3つの段階に分けた。第1段階は、リン酸バッファに溶解した1mg/kgの葉酸を静脈内投与することからなり、第2段階は、5匹の雄ウィスターラット群に対し、1mLのリン酸バッファPBSをこのラットに経口投与することからなっていた経時的なビタミンのベースライン濃度は、この群のラットで試験した。最後に、第3段階は、1mg/kgのi水に溶解した葉酸、iiゼインナノ粒子内にカプセル化された葉酸を、5匹の動物によって構成されたラット群に経口投与することからなっていた。投与後、おおよそ500μLの血液を異なる時間0、1、2、3、8および24時間に採取し、血清分離管に集めた後、その血液量と同量の生理食塩水を腹腔内経路によって動物に戻した。葉酸の投与後に得られたデータの薬物動態分析を、薬物動態フィットプログラムWiNNonlin1.5PharsightCorporation、マウンテンビュー、米国のノンコンパートメンタルフィット法non-compartmentalfitprocessを用いて行った。得られた結果ベースライン濃度を差し引いた後を図6に示す。これからわかるように、葉酸の静脈内投与図6Aは、第1のサンプリング中に血清薬物濃度のピークを示し、その後、血清薬物濃度の著しい低下を示している。ビタミンを経口投与したときに得られたプロフィール図6Bは、より長い時間で観測される有意により低い濃度が現れており、より徐々に低下しているため、異なっている。しかし、葉酸を、遊離形態カプセル化されていないまたはゼインナノ粒子内にカプセル化された形態で経口投与した後にみられるビタミン濃度を比較すると、時間経過に伴って同様の濃度プロフィールがみられているが、最大レベルおよび曲線の下の面積の双方は、ビタミンをカプセル化した形態で投与したときの方が大きかった。第13表に、この試験の実験データのノンコンパートメンタル分析を行った後の薬物動態パラメータの値を示す。これからわかるように、AUC値は、投与するサンプルの種類によって有意に変動する。ビタミンがゼインナノ粒子内にカプセル化されているとき、AUC値は、遊離葉酸を投与した後にみられる値よりも有意に大きくなり、さらに、投与してから24時間までにわたって維持されている。さらに、血漿中の葉酸の平均滞留時間MRTも、遊離ビタミンを投与したときに得られる値よりも有意に大きいことが観測された。これらの結果によって、カプセル化された葉酸を含むゼインナノ粒子の経口バイオアベイラビリティが計算され、その値は、葉酸を経口投与した後に得られる値よりも70~95大きかった。"