"式:により包含されるコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、Rは、それぞれ3個~約50個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、R1は、H、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、Qは、リンカーであり、POLY1は、水溶性非ペプチドポリマーであり、Xは、解放可能な結合を含むスペーサー部分であり、かつqは、3~約50の正の整数である、コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。Rが、ポリオールの残基である、請求項1に記載のコンジュゲート。前記ポリオールが、グリセロール、ジグリセロール、トリグリセロール、ヘキサグリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、トリペンタエリスリトール、およびグリセロールのエトキシ化形態からなる群から選択される、請求項2に記載のコンジュゲート。前記ポリオールが、ペンタエリスリトールである、請求項3に記載のコンジュゲート。R1が、Hである、請求項1に記載のコンジュゲート。R2が、Hである、請求項1に記載のコンジュゲート。R3が、-NH2である、請求項1に記載のコンジュゲート。前記リンカーが、-O-、-S-、-NH-、-NH-CO-、および-CO-NH-からなる群から選択される、請求項1に記載のコンジュゲート。前記リンカーが、-O-である、請求項8に記載のコンジュゲート。前記水溶性非ペプチドポリマーが、ポリエチレンオキシドである、請求項1に記載のコンジュゲート。前記スペーサー部分が、-Y-Z-に相当する構造を有し、ここで、Yは、-CRxRya-Kw-CRxRyb-CH2CH2Oc-CRxRyd-Kz-であり、ここで、各RxおよびRyは、それぞれの存在において、独立して、H、または、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールからなる群から選択される有機ラジカルであり、aは、ゼロまたは1~12の整数であり、bは、ゼロまたは1~12の整数であり、cは、ゼロまたは1~25の整数であり、dは、ゼロまたは1~12の整数であり、Kwは、-NH-、-CO-、-CONH-、-NH-CO-、-O-、-S-、O-CO-、CO-O-、-O-CO-O-、O-CO-NH-、-NH-CO-O-からなる群から選択され、かつKzは、-NH-、-CO-、-CONH-、-NH-CO-、-O-、-S-、O-CO-、CO-O-、-O-CO-O-、O-CO-NH-、-NH-CO-O-からなる群から選択され、かつZは、-CO-O-、O-CO-O-、-O-CO-NH-および-NH-CO-O-から選択される、請求項1に記載のコンジュゲート。前記スペーサー部分が、-Y-に相当する構造を有し、ここで、Yは、-CRxRya-Kw-CRxRyb-CH2CH2Oc-CRxRyd-Kz-であり、ここで、各RxおよびRyは、それぞれの存在において、独立して、H、または、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールからなる群から選択される有機ラジカルであり、aは、ゼロまたは1~12の整数であり、bは、ゼロまたは1~12の整数であり、cは、ゼロまたは1~25の整数であり、dは、ゼロまたは1~12の整数であり、Kwは、-NH-、-CO-、-CONH-、-NH-CO-、-O-、-S-、O-CO-、CO-O-、-O-CO-O-、O-CO-NH-、-NH-CO-O-からなる群から選択され、かつKzは、-NH-、-CO-、-CONH-、-NH-CO-、-O-、-S-、O-CO-、CO-O-、-O-CO-O-、O-CO-NH-、-NH-CO-O-からなる群から選択される、請求項1に記載のコンジュゲート。前記スペーサー部分が、構造CO-CH2b-CH2CH2Oc-CH2d-Kz-を有し、ここで、bは、1~5の整数であり、cは、1~5の整数であり、dは、1~5の整数であり、かつKzは、-NH-、-CO-、-CONH-、-NH-CO-、-O-、-S-、O-CO-、CO-O-、-O-CO-O-、O-CO-NH-、-NH-CO-O-からなる群から選択される、請求項12に記載のコンジュゲート。qが、3~10の整数である、請求項1に記載のコンジュゲート。qが、4である、請求項1に記載のコンジュゲート。以下の構造:を有する請求項1に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、R1は、H、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、かつqは、3~約50の正の整数である、コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。以下の構造:を有する請求項1に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、R1は、H、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、かつqは、3~約50の正の整数である、コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。以下の構造:を有する請求項1に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、R4は、H、CH3、CHCH32、CH2CHCH32およびCHCH3CH2CH3からなる群から選択され、各nは、10~約400の正の整数である、コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。複数のコンジュゲートを含む組成物であって、前記組成物中の前記コンジュゲートの少なくとも80が、請求項1~18のいずれか一項により包含される構造を有する、組成物。薬学的賦形剤をさらに含む、請求項19に記載の組成物。しかしながら、以下iピーク-トラフ変動peak-to-troughvariationを低減すること用量制限毒性を低減する可能性がある、ii有効性を依然として保持しながら腫瘍組織内に蓄積すること、およびiii有効半減期を延長して、それによってより低頻度の投与をもたらすこと、のうちの1つ以上を達成するような具合にペメトレキセドを改変し得れば望ましいであろう。本発明は、これらおよび/または他の必要性に対処しようとするものである。本発明の1つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式:により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、Rは、3個~約50個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、Qは、リンカー1つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカーであり、POLY1は、水溶性非ペプチドポリマーであり、Xは、解放可能な結合例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合などを含むスペーサー部分であり、かつqは、3~約50例えば、4の正の整数である。本発明の1つ以上の実施形態において、コンジュゲート含有組成物が提供され、当該コンジュゲート含有組成物は、4アームコンジュゲートを含み、ここで、当該組成物中の4アームコンジュゲートの少なくとも80は、式により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、Rは、3個~約50個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、Qは、リンカー1つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカーであり、POLY1は、水溶性非ペプチドポリマーであり、Xは、解放可能な結合例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合などを含むスペーサー部分であり、かつqは、3~約50例えば、4の正の整数である。本発明の1つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式:により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、各nは、10~約400の正の整数であり、かつqは、3~約50例えば、4の正の整数である。本発明の1つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式:により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、各nは、10~約400の正の整数である。本発明の1つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式:により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、各nは、10~約400の正の整数であり、かつqは、3~約50例えば、4の正の整数である。本発明の1つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、以下の式:により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、各nは、10~約400の正の整数である。本発明の1つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式:により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、R4は、H、CH3、CHCH32、CH2CHCH32およびCHCH3CH2CH3からなる群から選択され、各nは、10~約400の正の整数である。本発明の1つ以上の実施形態において、薬学的組成物が提供され、当該薬学的組成物は、本明細書に記載されるとおりのコンジュゲートおよび薬学的に許容できるキャリアを含む。本発明の1つ以上の実施形態において、方法が提供され、当該方法は、本明細書に記載されるとおりのコンジュゲートを好ましくは、薬学的に許容できる量のコンジュゲートを含有する薬学的組成物として個体に投与することを含む。本発明の1つ以上の実施形態において、方法が提供され、当該方法は、各個々のポリマーアームがその末端に求核剤を有しているq本のポリマーアームを有するマルチアーム水溶性非ペプチドポリマー構造を、以下の構造:[ここで、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、R5は、Hまたはカルボン酸に対する活性化基例えば、N-スクシンイミジルであり、かつPGは、カルボン酸保護基である]を有する化合物qモル以上と接触させる工程を含み、当該方法は、その接触工程に続いて、カルボン酸保護基を脱保護する工程を必要に応じてさらに含む。本発明のコンジュゲート、組成物、方法などのさらなる実施形態は、後に続く説明から明らかであろう。本発明のさらなる態様および利点は、特に付随の実施例および図面と合わせて考慮される場合の、以下の説明および特許請求の範囲において示されている。次に、本発明の種々の態様を、以下により十分に説明する。しかしながら、そのような態様は、多くの異なる形で具現化され得、本明細書に示される実施形態に限定されるものと解釈されるべきではない。むしろ、本開示が十分かつ完全となり、当業者に本発明の範囲を十分に伝えられるように、これらの実施形態は提供される。定義本明細書で使用される場合、単数形a、anおよびtheは、文脈がそうでないことを明確に要求しない限り、複数の指示対象を包含することに留意されなければならない。したがって、例えばポリマーへの言及は、単一のポリマーと2つ以上の同一または異なるポリマーの両方を包含し、コンジュゲートへの言及は、単一のコンジュゲートと2つ以上の同一または異なるコンジュゲートの両方に言及し、賦形剤への言及は、単一の賦形剤と2つ以上の同一または異なる賦形剤の両方を包含する、などである。本発明を説明する際および特許請求の範囲に記載する際に、以下の用語は下記に説明される定義に従って使用されることになる。官能基は、有機合成の通常の条件下において、それが結合している実体と、典型的にはさらなる官能基を有する別の実体との間に共有結合を形成するために使用され得る基である。官能基は、概して、多重結合および/またはヘテロ原子を含む。本発明のポリマーにおける使用に好ましい官能基については、後述される。用語反応性のとは、有機合成の従来の条件下において容易にまたは実用的な速度で反応する官能基をいう。これは、反応しないか、または反応するために強力な触媒または非実用的な反応条件を必要とする基すなわち、非反応性のまたは不活性な基と対照をなす。反応混合物中の分子上に存在する官能基に関して容易に反応しないとは、反応混合物において所望の反応を生じさせるのに有効な条件下でその基はおおむね元のままの状態を保つということを示している。カルボン酸の活性化誘導体とは、容易に、一般的には、誘導体化されてないカルボン酸よりもはるかに容易に、求核剤と反応するカルボン酸誘導体をいう。活性化カルボン酸としては、例えば、酸ハロゲン化物例えば、酸塩化物、無水物、カーボネート、およびエステルが挙げられる。そのようなエステルとしては、例えば、イミダゾリルエステル、およびベンゾトリアゾールエステル、およびイミドエステル例えば、N-ヒドロキシスクシンイミジルNHSエステルが挙げられる。活性化誘導体は、カルボン酸と、種々の試薬のうちの1つ例えば、ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートPyBOP好ましくは、1-ヒドロキシベンゾトリアゾールHOBTもしくは1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾールHOATと組み合わせて使用される;O-7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートHATU;またはビス2-オキソ-3-オキサゾリジニルホスフィン酸クロリドBOP-Clとの反応により、インサイチューで形成され得る。ある官能基の化学的等価物とは、その官能基と本質的に同じ種類の反応性を有する官能基である。例えば、SN2反応を受けるある官能基は、別のそのような官能基の官能性等価物と見なされる。保護基は、ある特定の反応条件下における分子中の特定の化学反応性官能基の反応を防止または阻止する部分である。保護基は、保護されようとする化学反応性基の種類に加えて、使用される反応条件および分子中のさらなる反応性基または保護基の存在によっても異なるものである。保護され得る官能基としては、例として、カルボン酸基、アミノ基、ヒドロキシル基、チオール基、カルボニル基などが挙げられる。カルボン酸に対する代表的な保護基としては、エステル例えば、p-メトキシベンジルエステル、アミドおよびヒドラジドが挙げられ;アミノ基に対する代表的な保護基としては、カルバメート例えば、tert-ブトキシカルボニルおよびアミドが挙げられ;ヒドロキシル基に対する代表的な保護基としては、エーテルおよびエステルが挙げられ;チオール基に対する代表的な保護基としては、チオエーテルおよびチオエステルが挙げられ;カルボニル基に対する代表的な保護基としては、アセタールおよびケタールが挙げられる、などである。そのような保護基は、当業者に周知であり、例えば、T.W.GreeneandG.M.Wuts,ProtectingGroupsinOrganicSynthesis,ThirdEdition,Wiley,NewYork,1999、およびP.J.Kocienski,ProtectingGroups,ThirdEd.,ThiemeChemistry,2003、ならびにそれらにおいて引用されている文献に記載されている。保護された形態の官能基とは、保護基を有する官能基をいう。本明細書で使用される場合、用語官能基またはそのあらゆる同義語は、その保護された形態を包含することが意図される。PEGまたはポリエチレングリコールは、本明細書で使用される場合、あらゆる水溶性ポリエチレンオキシドを包含することが意図される。典型的に、本発明における使用のためのPEGは、末端の酸素が例えば合成変換の間に置き換えられたか否か、または、例えば、隣接する官能基が何であるかによって、以下の2つの構造:-CH2CH2On-または-CH2CH2On-1CH2CH2-のうちの一方を含む。変数nは、典型的には3~約3000の範囲にあり、末端基およびPEG全体の構造は、様々であり得る。PEGまたはPEGセグメントを含むコンジュゲートがPOLYがPEG’’である場合の式Iにおけるがごとくスペーサーまたはリンカーをさらに含む場合、スペーサーXおよびリンカーQを構成する原子は、PEGセグメントに共有結合したときにi酸素-酸素結合-O-O-、過酸化物結合またはii窒素-酸素結合N-O、O-Nの形成をもたらさない。本発明における使用のためのPEGには、より詳細に後述される様々な分子量、構造または形態を有するPEGが含まれる。本発明のポリマーの文脈における水溶性の、または水溶性ポリマーセグメントとは、室温で水に溶けるあらゆるセグメントまたはポリマーである。典型的に、水溶性ポリマーまたはセグメントは、濾過後の同じ溶液により透過される光の少なくとも約75、より好ましくは少なくとも約95を透過させる。重量ベースで、水溶性ポリマーまたはそのセグメントは、好ましくは水に対して少なくとも約35重量溶解し、より好ましくは水に対して少なくとも約50重量溶解し、なおさらに好ましくは水に対して約70重量溶解し、なおさらに好ましくは水に対して約85重量溶解するものである。しかしながら、水溶性ポリマーまたはセグメントが水に対して約95重量溶解するかまたは水に対して全て溶解することが、最も好ましい。ポリマーに関して天然に存在しないとは、そのままの形では自然界には見出されないポリマーを意味する。しかしながら、天然に存在しないポリマーは、その全ポリマー構造が自然界に見出されない限りにおいて、天然に存在する1つ以上のサブユニットまたはサブユニットのセグメントを含有し得る。水溶性ポリマー例えば、PEGの文脈における分子質量とは、典型的にサイズ排除クロマトグラフィー、光散乱法、または水もしくは有機溶媒中での固有粘度測定により測定される、ポリマーの公称平均分子質量をいう。水溶性ポリマー例えば、PEGの文脈における分子量は、数平均分子量または重量平均分子量のいずれかとして表され得る。別段の表示のない限り、本明細書における分子量への言及は全て、数平均分子量に言及するものである。数平均および重量平均の両分子量測定とも、ゲル透過クロマトグラフィー法を用いて測定され得る。分子量値を測定するための他の方法例えば、数平均分子量を測定するための末端基分析の使用もしくは束一性例えば、凝固点降下、沸点上昇、または浸透圧の測定、または重量平均分子量を測定するための光散乱法、超遠心分離法もしくは粘度測定法の使用もまた用いられ得る。本発明のポリマーは、典型的に、多分散でありすなわち、ポリマーの数平均分子量および重量平均分子量は等しくない、低い多分散性値例えば、約1.2未満、約1.15未満、約1.10未満、約1.05未満、約1.03未満を有する。本明細書で使用される場合、ある重量平均分子量または数平均分子量を有する単一の水溶性ポリマーへの言及がなされることがある。そのような言及は、その単一の水溶性ポリマーが、その述べられた分子量を有する水溶性ポリマーの組成物から得られたことを意味すると理解されるであろう。本明細書において、用語スペーサー部分およびリンカーは、相互に連結される部分、すなわちそのようなペメトレキセドと水溶性非ペプチドポリマーPOLY1とを、連結するために使用される原子または原子団をいうために使用される。スペーサー部分およびリンカーは、加水分解安定性であり得る、または解放可能な結合例えば、生理的に加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合、またはインビボで開裂する別の結合を含み得る。加水分解可能な結合とは、生理学条件下で水と反応するすなわち、加水分解される比較的弱い結合である。結合が水中で加水分解する傾向は、2つの中心原子を連結する結合の一般的種類だけでなく、これらの中心原子に結合している置換基にもよる。例示的な加水分解不安定性の結合としては、カルボキシレートエステル、ホスフェートエステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチドおよびオリゴヌクレオチドが挙げられる。酵素分解可能な結合とは、1種以上の酵素による分解を受ける結合を意味する。当該結合は、分解をもたらすためには1種以上の酵素の作用を必要とする。加水分解安定性連結または結合とは、水中で実質的に安定である、すなわち、長期間にわたってどんな測定可能な程度にも生理的条件下において加水分解を受けない化学結合、典型的には共有結合をいう。加水分解安定性結合の例としては、以下:炭素-炭素結合例えば、脂肪族鎖中、エーテル、アミド、ウレタンなどが挙げられるが、これらに限定されない。概して、加水分解安定性結合とは、生理的条件下において1日に約1~2未満の加水分解速度を示す結合である。代表的な化学結合の加水分解速度は、最も標準的な化学教本において見出され得る。ポリマーの形態または全体構造に関してマルチアーム型のとは、3本以上のポリマー含有アームがコア分子または構造に連結されたポリマーをいう。したがって、マルチアーム型ポリマーは、その構成およびコア構造により、3本のポリマーアーム、4本のポリマーアーム、5本のポリマーアーム、6本のポリマーアーム、7本のポリマーアーム、8本のポリマーアームまたはそれ以上を有し得る。高分岐ポリマーの1つの特定の種類は、樹状分岐ポリマーまたはデンドリマーであるが、これは、本発明において、マルチアーム型ポリマーとは異なる構造を有するものと見なされる。すなわち、本明細書で言及される場合のマルチアーム型ポリマーは、デンドリマーを明白に除外する。さらに、本明細書において提供されるとおりのマルチアーム型ポリマーは、非架橋コアを有する。デンドリマーは、球状の、サイズ単分散のポリマーであり、当該ポリマーにおいては、全ての結合が、分岐点を各々が与える反復単位を伴って、規則的な分岐パターンで中央の中心部またはコアから半径方向に現れる。デンドリマーは、典型的に、ナノスケールの多段階製造プロセスを用いて形成される。各工程によって新たな世代が生じ、これは前の世代の2倍以上の複雑さを有している。デンドリマーは、特定の樹状分岐状態特性例えば、コア封入を示し、それにより、他の種類のポリマーとは一線を画すものとなっている。分岐点とは、そこにおいてポリマーが線状構造から1つ以上のさらなるポリマーアームへと分かれるまたは分岐するところの、1個以上の原子を含む二股に分かれている点をいう。マルチアームポリマーは、デンドリマーをもたらす規則的な繰り返しに分岐がなっていない限りにおいて、1つの分岐点または複数の分岐点を有し得る。実質的にまたは本質的にとは、ほぼ全面的にまたは完全にということ、例えば、何らかの所与の量の95以上を意味する。アルキルとは、炭化水素鎖であって、典型的には約1~20原子長の範囲のものをいう。そのような炭化水素鎖は、好ましくは飽和したものであるが、必ずしも飽和したものではなく、かつ、典型的には直鎖が好ましいが、分岐状であっても直鎖であってもよい。例示的なアルキル基としては、メチル、エチル、イソプロピル、n-ブチル、n-ペンチル、2-メチル-1-ブチル、3-ペンチル、3-メチル-3-ペンチルなどが挙げられる。本明細書で使用される場合、アルキルは、3個以上の炭素原子に言及する場合は、シクロアルキルを含む。低級アルキルとは、1個~6個の炭素原子を含有するアルキル基をいい、メチル、エチル、n-ブチル、i-ブチル、t-ブチルにより例示されるように、直鎖または分岐状であり得る。シクロアルキルとは、架橋、縮合、またはスピロ環式化合物を含む飽和または不飽和の環式炭化水素鎖をいい、好ましくは3個~約12個の炭素原子、より好ましくは3個~約8個の炭素原子からなる。非干渉性置換基とは、分子中に存在する場合に、典型的に、その分子内に含有される他の官能基と非反応性の基である。例えば置換アルキルにあるような、用語置換されたとは、1個以上の非干渉性置換基例えば、C3~C8シクロアルキル例えば、シクロプロピル、シクロブチルなど;ハロ例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨード;シアノ;アルコキシ、低級フェニル;置換フェニル;などであるが、これらに限定されないで置換されている部分例えば、アルキル基をいう。フェニル環上の置換基について、当該置換基は、任意の配向すなわち、オルト、メタ、またはパラであり得る。アルコキシとは、-O-R基をいい、ここで、Rは、アルキルまたは置換アルキル、好ましくはC1~C20アルキルであり例えば、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシなど、好ましくはC1~C7である。本明細書で使用される場合、アルケニルとは、少なくとも1個の二重結合を含有する、1~15原子長の分岐状または非分岐状の炭化水素基例えば、エテニルビニル、2-プロペン-1-イルアリル、イソプロペニル、3-ブテン-1-イルなどをいう。用語アルキニルとは、本明細書で使用される場合、少なくとも1個の三重結合を含有する、2~15原子長の分岐状または非分岐状の炭化水素基エチニル、1-プロピニル、3-ブチン-1-イル、1-オクチン-1-イルなどをいう。アリールとは、各々5個または6個の核炭素原子からなる1個以上の芳香族環を意味する。アリールは、ナフチルにおけるがごとく縮合しているか、またはビフェニルにおけるがごとく縮合していないものであり得る、多重アリール環を包含する。アリール環はまた、1個以上の環式炭化水素環、ヘテロアリール環、または複素環式環と、縮合しているかまたは縮合していないものであり得る。本明細書で使用される場合、アリールは、ヘテロアリールを包含する。ヘテロアリールは、1個~4個のヘテロ原子、好ましくはN、OもしくはS、またはそれらの組み合わせを含有するアリール基である。ヘテロアリール環はまた、1個以上の環式炭化水素環、複素環式環、アリール環、またはヘテロアリール環と、縮合したものであり得る。複素環または複素環式とは、不飽和または芳香族性を有しているかまたは有しておらず、かつ少なくとも1個の炭素でない環原子を有する、5個~12個の原子、好ましくは5個~7個の原子からなる1個以上の環を意味する。好ましいヘテロ原子としては、硫黄、酸素、および窒素が挙げられる。置換ヘテロアリールとは、1個以上の非干渉性基を置換基として有するヘテロアリールである。置換複素環とは、非干渉性置換基から形成された1つ以上の側鎖を有する複素環である。求電子剤とは、求核剤と反応することが可能な求電子中心、すなわち電子を求めている中心を有する、イオン、イオン性であり得る原子、または原子団をいう。求核剤とは、求核中心、すなわち求電子中心を求めている中心を有し、かつ求電子剤と反応することが可能な、イオンまたはイオン性であり得る原子もしくは原子団をいう。活性薬剤は、本明細書で使用される場合、インビボまたはインビトロで証明され得る、何らかの、しばしば有益な、薬理学的効果をもたらす、任意の薬剤、薬物、化合物などを包含する。本明細書で使用される場合、これらの用語はさらに、患者において局所的または全身的な効果を生じる任意の生理学的にまたは薬理学的に活性な物質を包含する。薬学的に許容できる賦形剤または薬学的に許容できるキャリアとは、本発明の組成物中に含まれ得る、かつ患者に対して重大な毒物学的悪影響を与えない、賦形剤をいう。薬理学的有効量、生理学的有効量および治療有効量は、血流中にまたは体内の標的組織もしくは部位中に所望のレベルの活性薬剤および/またはコンジュゲートをもたらすために必要とされる薬学的調製物中に存在する活性薬剤の量を意味するために、本明細書において相互交換可能に使用される。正確な量は、数多くの因子例えば、個々の活性薬剤、薬学的調製物の成分および物理的特性、意図する患者集団、患者についての考慮事項などによって決まり、本明細書において提供される情報および関連文献において入手可能な情報に基づき、当業者により容易に決定され得る。本発明のポリマーの文脈における多官能性のとは、3個以上の官能基を有するポリマーを意味し、ここで、それらの官能基は、同じであっても異なってもよく、典型的にはポリマー末端上に存在する。本発明の多官能性ポリマーは、典型的に、約3個~100個の官能基、または3個~50個の官能基、または3個~25個の官能基、または3個~15個の官能基、または3個~10個の官能基を含有するすなわち、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個または10個の官能基を含有する。典型的に、本発明のポリマーコンジュゲートを調製するために使用されるポリマー前駆体については、当該ポリマーは、加水分解可能なエステル結合を介して活性薬剤部分に連結するのに好適な官能基を各アームの末端に有する3本以上のポリマーアームを有している。典型的に、そのような官能基は同じものである。本明細書に記載される塩基性または酸性の反応物は、その中性形態、荷電形態、および任意の対応する塩形態を含む。ポリオレフィンアルコールとは、複数のペンダントヒドロキシル基がポリマー主鎖に結合している、オレフィンポリマー主鎖例えば、ポリエチレンを含むポリマーをいう。例示的なポリオレフィンアルコールは、ポリビニルアルコールである。本明細書で使用される場合、非ペプチドのとは、ペプチド結合を実質的に含まないポリマー主鎖をいう。しかしながら、ポリマーは、反復モノマーサブユニットに沿って間隔をおいて少数のペプチド結合例えば、モノマー単位約50個当たり約1個以下のペプチド結合、などを含み得る。用語被験体、個体または患者は、本明細書において相互交換可能に使用され、脊椎動物、好ましくは哺乳動物をいう。哺乳動物としては、ネズミ科の動物、齧歯動物、類人猿、ヒト、家畜、競技用動物および愛玩動物が挙げられるが、これらに限定されない。当該被験体は、典型的に、本発明のポリマーの、必ずしもそうではないが典型的には本明細書に記載されるとおりのポリマー-活性薬剤コンジュゲートの形態のもの投与により、予防または処置され得る状態を患っているかまたはそのような状態に罹りやすい。特定の状態の処置または特定の状態を処置することとは、1そのような状態を予防すること、すなわち、その状態に曝され得るかもしくは罹患しやすくされ得るが、まだその状態を経験していないもしくは呈していない被験体において、その状態が発現しないようにする、またはより低い強度でもしくはより軽い程度に発症するようにすること;および2その状態を抑制すること、すなわち、進行を阻止することまたはその状態を逆転させることを包含する。必要に応じてのまたは必要に応じてとは、続いて記載される状況が起こることもあるが、起こらないこともあるということを意味しており、したがって、当該記載は、その状況が起こる場合と、それが起こらない場合とを包含する。残基とは、合成化学反応か後の化合物放出化学反応かを問わず化学反応後に残留または存在する化合物の部分をいう。例えば、マルチアームポリマーを形成するために使用されるポリオールは、マルチアームポリマー中にそのポリオールの残基を存在させることになる。ポリオールとは、3個以上のヒドロキシル基を含有するアルコールであり、ここで、この場合の接頭語ポリは、高分子構造に関するものではなく、複数の特定の特徴に関するものである。同様に、ポリチオールは、3個以上のチオール-SH基を含有するチオールであり、ポリアミンは、3個以上のアミノ基を含有するアミンである。先に示したように、本発明の1つ以上の実施形態は、式Iにより包含される構造を有するコンジュゲートに関する。本発明のコンジュゲートは、プロドラッグ解放可能な結合を含むスペーサー部分の存在を考慮した場合でもあるし、マルチアーム型でもある。したがって、個体への投与時に、プロドラッグは、インビボ開裂により、水溶性非ペプチドポリマーへの結合のない化合物をインビボで放出する。例えば、エステルのインビボ開裂は、エステラーゼの助けを借りてまたは借りずに起こり得る。さらなる例において、アミドのインビボ開裂は、例えばγ-グルタミルヒドロラーゼの助けを借りて起こり得る。コンジュゲートはマルチアーム型であるので、放出は複数回起こり、それにより、投与に続いて出発コンジュゲート1モルにつき数モルの放出化合物を送達する。したがって、本発明の例示的なコンジュゲートは、式:により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、Rは、3個~約50個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、Qは、リンカー1つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカーであり、POLY1は、水溶性非ペプチドポリマーであり、Xは、解放可能な結合例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合などを含むスペーサー部分であり、かつqは、3~約50例えば、4の正の整数である。本明細書に記載される複素環式環のオキソ形態は、対応するR3置換ピロロ[2,3-d]ピリミジンの互変異性等価物であることが理解されよう。上記の構造により企図されるように、コンジュゲートは、q本のアーム、すなわち、3本~約50本のアームを有する。アームの例示的な数としては、3本、4本、5本、6本、7本、9本、および10本が挙げられる。1つ以上の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、マルチアーム型ポリマー試薬から調製され、そしてまた、このマルチアーム型ポリマー試薬は、マルチアームコア分子をベースとするマルチアームポリマーから調製される。例えば、1つのアプローチにおいて、マルチアームポリマーは、マルチアームコア分子の各末端上にポリマーを効果的に生長させることによってマルチアームコア分子から調製され得る。非限定的な例として、エトキシ化反応によってポリオール例えば、ペンタエリスリトール、ジグリセロールなど上にポリマーアームを合成することが可能である。別の例示的なアプローチにおいて、マルチアームポリマーは、マルチアームコア分子の各末端上に水溶性非ペプチドポリマーを結合させることによってマルチアームコア分子から調製され得る。両アプローチの原理は、文献に記載されており、例えば米国特許第7,026,440号明細書に記載されている。しかしながら、コンジュゲートが本明細書において提供される構造のうちの1つ以上により包含されるものである限りにおいて、本発明は、採られる具体的なアプローチに関して限定されない。ポリオール、ポリチオール、またはポリアミンの残基R1つ以上の実施形態において、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基Rは、有機ラジカル含有部分である。Rが由来するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンは、約3個~約150個の炭素原子例えば、約3個~約50個例えば、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、および10個の炭素原子を有する。当該残基は、1個以上のヘテロ原子例えば、O、S、またはNを含有し得る。さらに、当該残基は、線状であり得る。場合によっては、当該残基は、環状であり得る。先に示したように、本明細書において提供されるマルチアーム型コンジュゲートのための分岐のベースを形成するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基Rは、水溶性非ペプチドポリマーを含有するマルチアーム構造に組み込まれる前の対応するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンに由来するものである。1つ以上の実施形態において、対応するポリオール、ポリチオール、またはポリアミンは、それぞれ、ポリマー結合に利用可能な少なくとも3個のヒドロキシル基、チオール基、またはアミノ基を有する。好ましいポリオールは、3個以上のヒドロキシル基を含む分子である。好ましいポリチオールは、3個以上のチオール基を含む分子である。好ましいポリアミンは、3個以上のアミノ基を含む分子である。1つ以上の実施形態において、ポリオール、ポリアミンまたはポリチオールは、典型的に、それぞれ、3個~約25個のヒドロキシル、またはアミノ基またはチオール基、例えば、それぞれ、3個~約10個すなわち、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個のヒドロキシル、アミノ基またはチオール基、好ましくは、それぞれ、3個~約8個すなわち、3個、4個、5個、6個、7個、または8個のヒドロキシル、アミノ基またはチオール基を含有する。1つ以上の実施形態において、各ヒドロキシル基間、各チオール基間、または各アミノ基間の原子の数は、各ヒドロキシル基間、各チオール基間、または各アミノ基間において約1~約20例えば、1~約5介在原子例えば、炭素原子長が典型的であるが、様々であり得る。介在コア原子および長さについては、-CH2-は1介在原子長を有すると見なされ、-CH2CH2-は2原子長を有すると見なされる、などである。例示的なポリオールおよびポリアミンそれらについての対応する残基が本明細書において提供されるコンジュゲート中に存在し得るは、それぞれ、ラジカル-OHqおよびラジカル-NH2qの構造を有しており、ここで、ラジカルは有機含有ラジカルorganic-containingradicalに相当し、qは3~約50の正の整数である。式Iにおいて、変数Qは、Rと合わせて考えられる場合、典型的に、本明細書に記載されるとおりのコア有機ラジカルの残基を表すことに留意されたい。すなわち、ポリオール、ポリチオールおよびポリマーアミンを特に名称で記述する場合、これらの分子は、水溶性ポリマー含有構造への組み込み前の形態のものが言及されている。したがって、例えば、Rがポリオールのペンタエリスリトール[CCH2OH4]の残基である式Iのコンジュゲートにおいては、残基Rは炭素すなわち、Cを含み、Qと一緒になってCCH2O-4を表す。例示的なポリオールとしては、1個~10個の炭素原子および3個~10個のヒドロキシル基を有する脂肪族ポリオールが挙げられ、例えば、トリヒドロキシアルカン、テトラヒドロキシアルカン、ポリヒドロキシアルキルエーテル、ポリヒドロキシアルキルポリエーテルなどが挙げられる。脂環式ポリオールとしては、直鎖状または閉環状の糖および糖アルコール例えば、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、キシリトール、クェブラキトール、トレイトール、アラビトール、エリスリトール、アドニトール、ズルシトール、ファコースfacose、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、ソルボース、マンノース、ピラノース、アルトロース、タロース、タギトースtagitose、ピラノシド、スクロース、ラクトース、マルトースなどが挙げられる。脂肪族ポリオールのさらなる例としては、グルコース、リボース、マンノース、ガラクトース、および関連立体異性体の誘導体が挙げられる。芳香族ポリオール例えば、1,1,1-トリス4’-ヒドロキシフェニルアルカン例えば、1,1,1-トリス4-ヒドロキシフェニルエタン、2,6-ビスヒドロキシアルキルクレゾールなどもまた使用され得る。使用され得る他のコアポリオールとしては、ポリヒドロキシクラウンエーテル、シクロデキストリン、デキストリンおよび他の炭水化物例えば、単糖、オリゴ糖、および多糖、デンプンおよびアミラーゼが挙げられる。例示的なポリオールとしては、グリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、トリペンタエリスリトールおよびグリセロールのエトキシ化形態が挙げられる。また、好ましいのは、還元糖例えば、ソルビトールおよびグリセロールオリゴマー例えば、ジグリセロール、トリグリセロール、ヘキサグリセロールなどである。21アームポリマーは、21個の利用可能なヒドロキシル基を有するヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを用いて合成され得る。さらに、平均24個のヒドロキシル基を有するポリグリセロールもまた、例示的なポリオールとして含まれる。例示的なポリアミンとしては、脂肪族ポリアミン例えば、ジエチレントリアミン、N,N’,N’’-トリメチルジエチレントリアミン、ペンタメチルジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ペンタエチレンヘキサミン、ジプロピレントリアミン、トリプロピレンテトラミン、ビス-3-アミノプロピル-アミン、ビス-3-アミノプロピル-メチルアミン、およびN,N-ジメチル-ジプロピレン-トリアミンが挙げられる。本発明において使用され得る天然に存在するポリアミンとしては、プトレシン、スペルミジン、およびスペルミンが挙げられる。本発明における使用に好適な多数の適切なペンタミン、テトラミン、オリゴアミン、およびペンタミジンアナログが、参照により本明細書に援用されるBacchietal.2002AntimicrobialAgentsandChemotherapy,461:55-61に記載されている。以下に提供されるのは、ポリオールの残基に対応する例示的な構造である[各構造は対応するヒドロキシル基に由来する酸素原子Oを用いて表されているが、各Oは、硫黄SまたはNHで置き換えられて、それぞれポリチオールまたはポリアミンの対応する残基を表し得る。以下に示される残基は、式Iの化合物に関してRおよびQに対応するものと理解されることに留意されたい。いずれにせよ、以下に示される例示的な構造の任意のものに基づくコンジュゲートが、本発明の一部として包含される。ここで、mは、0~40[好ましくは0~10、例えば、0~5すなわち、0、1、2、3、4、5]の正の整数である。上記のポリオール、ポリチオールおよびポリアミンに基づく例えば、式Iにより包含されるコンジュゲートを調製するためのマルチアームポリマー試薬として使用される水溶性の非ペプチド含有マルチアームポリマーおよび他のポリマーが、国際公開第2007/098466号パンフレット、国際公開第2010/019233号パンフレットおよび米国特許第7,744,861号明細書に記載されている。これらの文献および他の文献に、そのようなマルチアームポリマーを調製するための方法が記載されている。さらに、いくつかのマルチアームポリマーは、例えばCreativePEGWorksWinstonSalem,NCUSA、SunBioPEG-ShopSunBioUSA,Orinda,CA、JenKemTechnologyUSAAllen,TX、およびNOFAmericaCorporationWhitePlains,NYから市販されている。リンカーQリンカーQは、式Iに従うコンジュゲートにおいて、3個~約50個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基Rを、各水溶性非ペプチドポリマーPOLY1に連結する役目をする。この点について、本発明は、使用される具体的なリンカーに関して限定されない。1つ以上の実施形態において、残基Rと水溶性非ペプチドポリマーPOLY1との間のリンカーは、加水分解安定性リンカーである。本発明の1つ以上の実施形態において、リンカーQは、本発明のコンジュゲートを調製する際に使用されるマルチアームポリマーを形成するために用いられるアプローチに影響される。例えば、ヒドロキシル、チオールまたはアミンに対して反応性の官能基を有する水溶性非ペプチドポリマーをそれぞれポリオール、ポリチオールまたはポリアミンと反応させれば、リンカーQは、そのポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの末端と水溶性非ペプチドポリマーPOLY1の反復モノマーの最初の部分との間に形成される結合を具体化する1つ以上の原子を含み得る。この点に関する例示的な結合化学反応は、結果として生じるリンカーと共に文献に記載されており、例えばWong1991ChemistryofProteinConjugationandCrosslinking,CRCPress,BocaRaton,FL,andBrinkley1992Bioconjug.Chem.3:2013に記載されている。式Iのコンジュゲートの1つ以上の実施形態において、Qは、少なくとも1個のヘテロ原子例えば、OまたはSまたはNHを含有しており、ここで、QにおけるRに近接する原子は、Rと合わせて考えられる場合、典型的に、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの有機ラジカル含有コアの残基である。概して、リンカーQは、1個~約10個の原子例えば、1個~約5個の原子を含有する。リンカーQは、典型的に、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、または10個からなる群から選択される数の原子を含有する。例示的なQとしては、-O-、-S-、-NH-、-NH-CO-および-CO-NH-が挙げられる。水溶性非ペプチドポリマーPOLY1本発明のコンジュゲートは、いくつかの水溶性非ペプチドポリマーを全体構造の一部として含む。コンジュゲートに関し、コンジュゲート中の各水溶性非ペプチドポリマー例えば、式Iにより包含される化合物と連結したPOLY1は独立して選択されるのであるが、好ましくは、各水溶性非ペプチドポリマーは同じポリマー種である。すなわち、例えば、マルチアーム型コンジュゲート中の各POLY1は同じである。非ペプチドでありかつ水溶性である様々な水溶性非ペプチドポリマーの任意のものが、マルチアームコンジュゲートにおいて使用され得、本発明は、この点について限定されない。水溶性非ペプチドポリマーの例としては、ポリアルキレングリコール、エチレングリコールおよびプロピレングリコールのコポリマー、ポリオレフィンアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリヒドロキシアルキルメタクリルアミド、ポリヒドロキシアルキルメタクリレート、ポリサッカリド、ポリα-ヒドロキシ酸、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリN-アクリロイルモルホリン、米国特許第5,629,384号明細書に記載されているポリマー、ならびに、上記のうちの任意の1つ以上のもののコポリマー、ターポリマー、および混合物が挙げられる。水溶性非ペプチドポリマー例えば、POLY1がPEGである場合、その構造は、典型的に、-CH2CH2On-ここで、式Iにより包含されるコンジュゲートに関して、末端のエチレンはQに共有結合しており、末端の酸素はXに結合しているを含み、ここで、nは、約5~約400、好ましくは約10~約350、または約20~約300の範囲にあり得る。水溶性非ペプチドポリマー例えば、POLY1についての例示的な分子量としては、約200、約250、約300、約400、約500、約600、約700、約800、約900、約1,000、約1,500、約2,000、約3,000、約4,000、約5,000、約6,000、約7,000、約7,500、約8,000、約9,000、約10,000、約12,000、約15,000、約17,500、約18,000、約19,000および約20,000ダルトンが挙げられる。マルチアーム型ポリマーの分子量に関しては、例示的な分子量としては、約800、約1,000、約1,200、約1,600、約2,000、約2,400、約2,800、約3,200、約3,600、約4,000、約5,000、約6,000、約8,000、約10,000、約12,000、約15,000、約16,000、約20,000、約24,000、約25,000、約28,000、約30,000、約32,000、約36,000、約40,000、約45,000、約48,000、約50,000、約60,000、約80,000および約100,000ダルトンが挙げられる。マルチアーム型ポリマーについての分子量範囲に関しては、例示的な範囲としては、約800~約80,000ダルトン、約900~約70,000ダルトン、約1,000~約40,000ダルトン、5,000~約30,000ダルトン、および約20,000~約80,000ダルトンが挙げられる。スペーサー部分Xスペーサー部分Xは、水溶性非ペプチドポリマー例えば、式Iに従うコンジュゲート中のPOLY1をペメトレキセドベースの化合物に連結する役目をする。加水分解可能な結合概してエステル結合が、スペーサー部分の一部として含まれる。この点について、連結部linkage全体がその連結部の一部として加水分解可能な結合を含む限りにおいて、本発明は、使用される具体的なリンカーに関して限定されない。スペーサー部分Xの一部として、スペーサー部分の部分は、-O-、-S-、-NH-、-CO-、-O-CO-、-CO-O-、-CO-NH-、-NH-CO-NH-、-O-CO-NH-、-CS-、-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-、-O-CH2-、-CH2-O-、-O-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-CH2-、-CH2-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-O-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-O-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-O-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-O-、-CO-NH-CH2-、-CO-NH-CH2-CH2-、-CH2-CO-NH-CH2-、-CH2-CH2-CO-NH-、-CO-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CO-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CO-NH-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CO-NH-、-CO-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CO-NH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CO-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CO-NH-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CO-NH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-NH-、-CO-O-CH2-、-CH2-CO-O-CH2-、-CH2-CH2-CO-O-CH2-、-CO-O-CH2-CH2-、-NH-CO-CH2-、-CH2-NH-CO-CH2-、-CH2-CH2-NH-CO-CH2-、-NH-CO-CH2-CH2-、-CH2-NH-CO-CH2-CH2-、-CH2-CH2-NH-CO-CH2-CH2-、-CO-NH-CH2-、-CO-NH-CH2-CH2-、-O-CO-NH-CH2-、-O-CO-NH-CH2-CH2-、-O-CO-NH-CH2-CH2-CH2-、-NH-CH2-、-NH-CH2-CH2-、-CH2-NH-CH2-、-CH2-CH2-NH-CH2-、-CO-CH2-、-CO-CH2-CH2-、-CH2-CO-CH2-、-CH2-CH2-CO-CH2-、-CH2-CH2-CO-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CO-、-CH2-CH2-CH2-CO-NH-CH2-CH2-NH-、-CH2-CH2-CH2-CO-NH-CH2-CH2-NH-CO-、-CH2-CH2-CH2-CO-NH-CH2-CH2-NH-CO-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CO-NH-CH2-CH2-NH-CO-CH2-CH2-、-O-CO-NH-[CH2]0-6-OCH2CH20-2-、-CO-NH-CH21-6-NH-CO-、および-NH-CO-NH-CH21-6-NH-CO-からなる群から選択される1つ以上の成分を含み得る。しかしながら、本開示において、ある一連の原子が水溶性ポリマーのすぐ隣にあり、その一連の原子が別のモノマーであるにすぎず、提案されるスペーサー部分がそのポリマー鎖の単なる延長部となるような場合は、その一連の原子はスペーサー部分ではない。本発明の1つ以上の実施形態において、スペーサー部分Xは、シクロアルキレン基例えば、1,3-または1,4-シクロヘキシレンを含み得る。本発明の1つ以上の実施形態において、スペーサー部分Xは、約1原子~約50原子、より好ましくは、約1原子~約25原子、さらにより好ましくは、約1原子~約10原子の原子長を有する。典型的に、スペーサー部分は、1、2、3、4、5、6、7、8、9および10からなる群から選択される原子長のものである。原子鎖長を考える場合、全距離に寄与する原子のみが考慮される。例えば、構造を有するスペーサーは、置換基はスペーサーの長さに寄与しないと見なされるので、11原子の鎖長を有する。本発明の1つ以上の実施形態において、スペーサー部分Xは、スペーサー部分Yであり、必要に応じてさらにZに結合しておりすなわち、Y-Z、後者の場合、Yは、加水分解により分解可能な連結部であるZに共有結合しているスペーサー部分である。特定の実施形態において、Z自体は、加水分解により分解可能な連結部を構成しないことがあり得るが、YまたはYの少なくとも一部分と合わせて考えられる場合、加水分解により分解可能な連結部をなす。本発明の1つ以上の実施形態において、スペーサー部分XがYを含む場合、Yは、構造:-CRxRya-Kw-CRxRyb-CH2CH2Oc-CRxRyd-Kz-を有し、ここで、各RxおよびRyは、それぞれの存在において、独立して、H、または、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールからなる群から選択される有機ラジカルであり、aは、0~12の範囲にありすなわち、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12であり得、bは、0~12の範囲にありすなわち、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12であり得、KwおよびKzの各々は、独立して、-NH-、-CO-、-CONH-、-NH-CO-、-O-、-S-、O-CO-、CO-O-、-O-CO-O-、O-CO-NH-、-NH-CO-O-から選択され、cは、0~25の範囲にあり、かつZは、CO-O-、O-CO-O-、-O-CO-NH-および-NH-CO-O-から選択され、dは、0~12の範囲にあるすなわち、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12であり得る。Kw、KzおよびZの特定の構造は、スペーサー部分Xの全体構造において以下の結合:-O-O-、NH-O-、-NH-NH-のいずれも生じることのないような具合にa、b、c、およびdの各々の値によって決まることになる。本発明の1つ以上の実施形態において、スペーサー部分XがY-Zである場合は、Yは、構造:-CRxRya-Kw-CRxRyb-CH2CH2Oc-CRxRyd-Kz-を有し、ここで、変数Rx、Ry、Kw、Kz、a、b、cおよびdは、前の段落で説明された値を有する。本発明の1つ以上の実施形態において、前2段落の各々に示したとおりのRxおよびRyは、それぞれの存在において、独立して、Hまたは低級アルキルである。本発明の1つ以上の実施形態において、RxおよびRyは、それぞれの存在において、Hである。さらに別の実施形態において、aは、0~5の範囲にある、すなわち、0、1、2、3、4、または5から選択される。さらに別の実施形態において、bは、0~5の範囲にある、すなわち、0、1、2、3、4、または5から選択される。さらに別の実施形態において、cは、0~10の範囲にある。さらに別の実施形態において、dは、0~5の範囲にある、すなわち、0、1、2、3、4、または5から選択される。さらに別の実施形態において、Kwは、-CO-NHである。1つ以上の実施形態において、スペーサー部分Xはまた、1つ以上のアミノ酸残基を含み得る。そのような実施形態において、例示的なアミノ酸残基は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、トレオニン、セリン、システイン、メチオニン、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、および天然に存在しないアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸由来の残基である。ペメトレキセドベースの化合物本明細書に記載されるマルチアームポリマーコンジュゲートは、以下の構造:を有するペメトレキセドベースの化合物の残基を含み、ここで、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、かつR3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択される。ペメトレキセドベースの化合物の特定の例示的な形態それらの合成を含むは、米国特許第5,344,932号明細書に記載されている。式IIのペメトレキセドベースの化合物の他の形態は、米国特許第5,344,932号明細書および他の文献に鑑みて、本明細書において提供される開示内容に照らして当業者により調製され得る。本発明のコンジュゲートの調製方法本発明のコンジュゲートは、有機化学の従来の合成アプローチを用いて調製され得、本発明は、コンジュゲートが作製される方法に関して限定されない。本発明のコンジュゲートを調製するための1つのアプローチにおいて、マルチアームポリマー試薬これは商業的に利用可能な供給源、例えば、CreativePEGWorks、SunBioPEG-Shop、JenKemTechnologyUSA、およびNOFAmericaCorporationから得られ得るか、または文献において提供されている説明に従い調製され得るが、コンジュゲーション条件下において、過剰量典型的には、少なくとも、試薬のポリマーアーム数qのモル過剰のペメトレキセドベースの化合物と接触させられる。コンジュゲーション条件は、当該試薬の反応性基とタキソイドベースの化合物の官能基との間の共有結合を可能にする温度、pH、時間、溶媒などの条件である。反応性基を有する所与のポリマー試薬とタキソイドベースの化合物の対応する官能基との間の例示的なコンジュゲーション条件は、本明細書において提供される開示内容に鑑みて、当業者には分かるであろう。例えばPolyethyleneglycolChemistryandBiologicalApplications,AmericanChemicalSociety,Washington,DC1997を参照されたい。コンジュゲーション条件を伴う使用に適したマルチアーム型ポリマー試薬は、典型的に、炭酸N-スクシンイミジル例えば、米国特許第5,281,698号明細書、同第5,468,478号明細書を参照されたい、アミン例えば、Buckmannetal.Makromol.Chem.182:13791981、Zalipskyetal.Eur.Polym.J.19:11771983を参照されたい、ヒドラジド例えば、Andreszetal.Makromol.Chem.179:3011978を参照されたい、プロピオン酸スクシンイミジルおよびブタン酸スクシンイミジル例えば、Olsonetal.inPolyethyleneglycolChemistryBiologicalApplications,pp170-181,HarrisZalipskyEds.,ACS,Washington,DC,1997を参照されたい;米国特許第5,672,662号明細書もまた参照されたい、コハク酸スクシンイミジル例えば、Abuchowskietal.CancerBiochem.Biophys.7:1751984およびJoppichetal.,Makromol.Chem.180:13811979を参照されたい、スクシンイミジルエステル例えば、米国特許第4,670,417号明細書を参照されたい、炭酸ベンゾトリアゾール例えば、米国特許第5,650,234号明細書を参照されたい、グリシジルエーテル例えば、Pithaetal.Eur.J.Biochem.94:111979、Ellingetal.,Biotech.Appl.Biochem.13:3541991を参照されたい、オキシカルボニルイミダゾール例えば、Beauchamp,etal.,Anal.Biochem.131:251983、Tondellietal.J.ControlledRelease1:2511985を参照されたい、炭酸p-ニトロフェニル例えば、Veronese,etal.,Appl.Biochem.Biotech.,11:1411985;およびSartoreetal.,Appl.Biochem,Biotech.,27:451991を参照されたい、アルデヒド例えば、Harrisetal.J.Polym.Sci.Chem.Ed.22:3411984、米国特許第5,824,784号明細書、米国特許第5,252,714号明細書を参照されたい、マレイミド例えば、Goodsonetal.Bio/Technology8:3431990、Romanietal.inChemistryofPeptidesandProteins2:291984、およびKogan,SyntheticComm.22:24171992を参照されたい、オルトピリジル-ジスルフィド例えば、Woghiren,etal.Bioconj.Chem.4:3141993を参照されたい、アクリロール例えば、Sawhneyetal.,Macromolecules,26:5811993を参照されたい、ビニルスルホン例えば、米国特許第5,900,461号明細書を参照されたいからなる群から選択される反応性基を有するものである。これらの文献に示されているように、ポリマー試薬の所与の反応性基についての例示的なコンジュゲーション条件温度、pH、時間および溶媒の条件を含むは開示されている。1つ以上の実施形態において、本明細書に記載されるペメトレキセドベースの化合物は、1個以上の保護されたカルボン酸基を含み得る。コンジュゲートの調製に関して、1つのアプローチにおいて、保護基は、ペメトレキセドベースの化合物をポリマー試薬とコンジュゲートさせた後に除去され得る。最初のコンジュゲーションに続いて、式Iのコンジュゲートを含有する組成物は精製され得る。精製および単離の方法は、沈殿、それに続く濾過および乾燥、ならびにクロマトグラフィーを含む。好適なクロマトグラフィー法としては、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、およびフラッシュクロマトグラフィーが挙げられる。コンジュゲートの塩コンジュゲートは、その塩基形態で使用され得る。さらに、コンジュゲートは、コンジュゲートの薬学的に許容できる塩に相当する形態で使用され得、本明細書における本発明のコンジュゲートへの言及はいずれも、薬学的に許容できる塩を包含することが意図される。使用される場合、本明細書に記載されるとおりの化合物の塩は、薬理学的にも薬学的にも受容可能であるべきであるが、遊離活性化合物またはその薬学的に許容できる塩を調製するために、薬学的に受容可能でない塩が好都合に使用され得、本発明の範囲から除外されない。そのような薬理学的かつ薬学的に許容できる塩は、文献に詳述されている標準的な方法を用いて、有機酸または無機酸との当該化合物の反応によって調製され得る。有用な塩の例としては、以下の酸:塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリサイクル酸salicyclic、p-トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン-2-スルホン酸およびベンゼンスルホン酸などから調製された塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、薬学的に許容できる塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩としても調製され得る。本発明のコンジュゲートの組成物特定の場合において、不完全な変換、100未満の収率、および化学合成の間に日常的に直面する他の不可避の厄介な問題に起因して、4アームコンジュゲートの例示的な組成物は、組成物中の4アームコンジュゲートの少なくとも80が、式により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有する組成物であり、ここで、Rは、3個~約50個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、R1は、H、ハロ例えば、クロロおよびフルオロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R2は、Hおよびメチルからなる群から選択され好ましくは、Hであり、R3は、H、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、Qは、リンカー1つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカーであり、POLY1は、水溶性非ペプチドポリマーであり、Xは、解放可能な結合例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合などを含むスペーサー部分であり、かつqは、3~約50例えば、4の正の整数である。本発明のコンジュゲートの薬学的組成物本発明は、1種以上の本発明のマルチアーム型ポリマーコンジュゲートまたはその薬学的に許容できる塩を、1種以上の薬学的に許容できるキャリア、および必要に応じて任意の他の治療成分、安定剤などと共に含む、獣医学およびヒト医学用途の両方のための薬学的組成物を提供する。当該キャリアは、処方物の他の成分と適合性がありかつそのレシピエントに過度に有害でないという意味において、薬学的に許容できるものでなければならない。本発明の組成物はまた、高分子賦形剤/添加剤またはキャリア、例えば、ポリビニルピロリドン、誘導体化セルロース例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース、Ficoll高分子糖、ヒドロキシエチルデンプンHES、デキストレートdextrate例えば、2-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンおよびスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリンなどのシクロデキストリン、ポリエチレングリコール、およびペクチンも含み得る。当該組成物はさらに、希釈剤、緩衝剤、結合剤、崩壊剤、増粘剤、滑沢剤、保存剤酸化防止剤を含む、着香料、味マスキング剤、無機塩例えば、塩化ナトリウム、抗微生物剤例えば、塩化ベンザルコニウム、甘味料、帯電防止剤、界面活性剤例えば、TWEEN20およびTWEEN80などのポリソルベート、およびBASFから入手可能なF68およびF88などのプルロニック、ソルビタンエステル、脂質例えば、リン脂質例えば、レシチンおよび他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸および脂肪酸エステル、ステロイド例えば、コレステロール、およびキレート化剤例えば、EDTA、亜鉛および他のそのような好適なカチオンを含み得る。本発明に従う組成物における使用に好適な他の薬学的賦形剤および/または添加剤は、Remington:TheSciencePracticeofPharmacy,19thed.,WilliamsWilliams,1995、およびPhysician’sDeskReference,52nded.,MedicalEconomics,Montvale,NJ1998、およびHandbookofPharmaceuticalExcipients,ThirdEd.,Ed.A.H.Kibbe,PharmaceuticalPress,2000に記載されている。当該コンジュゲートは、経口投与、直腸投与、局所投与、経鼻投与、眼投与、または非経口投与腹腔内、静脈内、皮下、または筋肉内注射を含むに好適なものをはじめとする組成物として処方され得る。当該組成物は、単位剤形で好都合に提供され得、薬学の技術分野において周知の方法の任意のものによって調製され得る。概して、当該組成物は、活性化合物を液体キャリアと会合させて溶液または懸濁液を形成することによって調製されるか、または代替的に、当該コンジュゲートを固形の必要に応じて、粒状の生成物を形成するのに好適な処方物成分と会合させ、次いで、保証されるならば、その生成物を所望の送達形態に成形することによって調製される。固形処方物は、粒状である場合、典型的に、約1ナノメートル~約500ミクロンの範囲の大きさを有する粒子を含む。概して、静脈内投与が意図される固形処方物については、粒子は、典型的に、直径約1nm~約10ミクロンの範囲にある。特に好ましいのは、注射前に水性ビヒクルで再構成される無菌凍結乾燥組成物である。処方物中のマルチアーム型ポリマーコンジュゲートの量は、使用される特定の活性薬剤、その活性、コンジュゲートの分子量、および他の因子例えば、剤形、標的患者集団、および他の考慮すべき事柄によって様々であり、一般的に、当業者により容易に決定されるものである。実際には、これは、個々のコンジュゲート、その活性、処置されるべき状態の重症度、患者、処方物の安定性などによって決まる。組成物は、概して、約1重量~約99重量のうちのいずれかのコンジュゲート、典型的には約2重量~約95重量のコンジュゲート、より典型的には約5重量~85重量のコンジュゲートを含有し、組成物に含有される賦形剤/添加剤の相対量にも依存するものである。より具体的には、当該組成物は、典型的に、以下の百分率のうちの1つ、すなわち、少なくとも約2重量、5重量、10重量、20重量、30重量、40重量、50重量、60重量、またはそれ以上の、コンジュゲートを含有する。経口投与に好適な本発明の組成物は、各々が所定の量のコンジュゲートを粉末もしくは顆粒として含有する不連続単位例えば、カプセル剤、カシェ剤、錠剤、ロゼンジなど;または水性液もしくは非水性液体中の懸濁剤例えば、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、頓服水剤などとして提供され得る。非経口投与に好適な処方物は、レシピエントの血液と等張となるように処方され得る、プロドラッグコンジュゲートの無菌水性調製物を好都合に含む。経鼻スプレー処方物は、マルチアーム型ポリマーコンジュゲートの精製された水溶液を、保存剤および等張剤と共に含む。そのような処方物は、好ましくは、鼻粘膜と適合するpHおよび等張状態に調整される。直腸投与用処方物は、好適なキャリア例えば、カカオ脂または水素化脂肪もしくは水素化脂肪カルボン酸と共に坐剤として提供され得る。眼用処方物は、pHおよび等張因子が好ましくは眼のものと一致するように調整されること以外は、経鼻スプレーと同様の方法により調製される。局所用処方物は、1種以上の媒体例えば、鉱油、石油、多価アルコールまたは局所用処方物用に使用される他の基剤に溶解または懸濁させたマルチアーム型ポリマーコンジュゲートを含む。上で述べたような他の副成分の添加が望ましいことがあり得る。エアゾール剤としての例えば吸入による投与に好適な薬学的処方物もまた提供される。これらの処方物は、所望のマルチアーム型ポリマーコンジュゲートまたはその塩の溶液または懸濁液を含む。所望の処方物は、小さなチャンバーに入れられ、霧状にされ得る。噴霧化は、圧縮空気によりまたは超音波エネルギーにより成し遂げられて、当該コンジュゲートまたはその塩を含む複数の液滴または固体粒子を形成し得る。使用方法本明細書において提供されるマルチアーム型ポリマーコンジュゲートは、本明細書に記載されるコンジュゲートの投与に応答する任意の状態例えば癌を処置または予防するために使用され得る。本発明のマルチアームポリマーコンジュゲートは、抗癌剤、すなわち、1種以上の腫瘍の増殖を低減し得る薬剤として特に有用である。例示的な癌の種類としては、乳癌、卵巣癌、結腸癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、悪性黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、頭頸部癌、リンパ腫、白血病、横紋筋肉腫、および神経芽腫が挙げられるが、これらに限定されない。投与方法は、本明細書において提供されるようなマルチアームポリマーコンジュゲートを含有する組成物または処方物の治療有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。任意の特定のマルチアームポリマーコンジュゲートの治療有効投与量は、コンジュゲートごと、患者ごとに異なり、患者の状態、使用される個々の活性薬剤の活性、送達経路、および処置されようとする状態などの因子によって決まる。処置方法はまた、本明細書に記載されるとおりのマルチアームポリマーコンジュゲートを含む組成物または処方物の治療有効量を、第2の抗癌剤例えば、5-フルオロウラシル、ロイコボリン、アバスチン、セツキシマブ、パニツムマブpanitumumab、ゼローダ、アブラキサンabraxane、シス-プラチン、カルボプラチンおよびゲムシタビンなどと共に投与することを含む。本発明のマルチアームポリマーコンジュゲートは、1日1回または数回、好ましくは1日1回以下で投与され得る。例示的な投与スケジュールとしては、週1回、2週間に1回、または3週間に1回が挙げられる。維持量である場合は、投与は、3週間に1回よりもさらに少ない頻度例えば、月1回で行われ得る。処置の期間は、2~3週間にわたり1日1回であり得、数ヶ月間またはさらには数年間にわたり継続し得る。一日用量は、個々の投与単位もしくは数個のより小さい投与単位の形態の単回用量によるか、または、細分した投薬量の特定の間隔をおいての複数回の投与により、投与され得る。本発明をその好ましい特定の実施形態に関して説明してきたが、上述の説明および後に続く実施例は、本発明の例示であり、本発明の範囲の限定ではないことが意図されることが理解されるべきである。本発明の範囲内の他の態様、利点および改変は、本発明の属する技術分野の当業者には明らかであろう。本明細書において参照される全ての論文、書物、特許、特許文献および他の文献は、その全体が参照により援用される。本明細書の教示と参照により援用される技術との間に矛盾がある場合は、本明細書における教示の意味が優先するものとする。実験本発明の実施は、別段の表示のない限り、当該技術分野の技術の範囲内にある有機合成などの従来の技術を使用する。そのような技術は、文献に十分に記載されている。試薬および材料は、そうでないことが明確に述べられていない限り、市販されているものである。例えば、M.B.SmithandJ.March,March’sAdvancedOrganicChemistry:ReactionsMechanismsandStructure,6thEd.NewYork:Wiley-Interscience,2007、上記、およびComprehensiveOrganicFunctionalGroupTransformationsII,Volumes1-7,SecondEd.:ComprehensiveReviewoftheSyntheticLiterature1995-2003OrganicChemistrySeries,Eds.Katritsky,A.R.,etal.,ElsevierScienceを参照されたい。以下の実施例において、使用される数値例えば、量、温度などに関して精度を確保するための努力がなされたが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の表示のない限り、温度は摂氏度であり、圧力は海面大気圧または海面大気圧付近である。以下の実施例は、本発明の特定の態様および利点を例示するものであるが、本発明は、決して下記の特定の実施形態に限定されるものとは見なされない。実施例14分岐PEG-γ-アミド-ペメトレキセドコンジュゲートの調製4分岐PEG-γ-アミド-ペメトレキセドコンジュゲートを合成した。使用した合成アプローチは、パートA、パートB、パートCおよびパートDの4つのパートに分割され得る。パートA-4分岐PEGの調製4-分岐PEG-γ-アミド-ペメトレキセドコンジュゲートの合成において使用される4分岐PEGを、以下に示される一般図式に従って調製した。N-t-ブトキシカルボニル-2,2’-エチレンジオキシビスエチルアミン化合物2の合成:氷浴中の0°Cの2,2’-エチレンジオキシビスエチルアミン約120g、0.81molのCH2Cl2溶液に、激しく撹拌しながら、二炭酸ジ-t-ブチル約60g、0.27molのCH2Cl2溶液を添加した。この反応混合物を、0°Cにて3時間撹拌した。溶媒のエバポレーション後、残渣を水に溶解させ、その溶液を1.0NH2SO4でpH=2に調整した。この溶液を、CH2Cl2で2回洗浄し、次いでpHを固体NaOHで10に調整し、CH2Cl2で抽出した。合わせたCH2Cl2相を、Na2SO4上で乾燥させた。エバポレーション後、化合物2を、透明液体として得た約35g、0.14mol、収率約52。生成物を、プロトンNMRによって確認した。4分岐PEG10k-BTC化合物1aの合成:共沸蒸留した4分岐PEG10k-OH約30g、3.0mmolのアセトニトリル溶液に、ピリジン約3.9mL、48mmolを添加した。この溶液を室温にて15分間撹拌した後、ジ-ベンゾトリアゾール-カーボネートdiBTC約11.8g、24mmolを添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて一晩18時間撹拌した。プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約30mLのCH2Cl2に溶解させた。この生成物CH2Cl2溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノールIPAに添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、IPAで洗浄し、真空中で乾燥させた。4分岐PEG10k-BTC化合物1aを、白色固体として得た約30.5g、2.9mmol、収率約97。4分岐PEG20k-BTC化合物1bの合成:共沸蒸留した4分岐PEG20k-OH約30g、1.5mmolのアセトニトリル溶液に、ピリジン約2.0mL、24mmolを添加した。この溶液を室温にて15分間撹拌した後、ジ-ベンゾトリアゾール-カーボネートdiBTC約6.0g、12mmolを添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて一晩18時間撹拌した。プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約30mLのCH2Cl2に溶解させた。この生成物CH2Cl2溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノールIPAに添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、IPAで洗浄し、真空中で乾燥させた。4分岐PEG20k-BTC化合物1bを、白色固体として得た約29.5g、1.4mmol、収率約96。4分岐PEG30k-BTC化合物1cの合成:共沸蒸留した4分岐PEG30k-OH約30g、1.0mmolのアセトニトリル溶液に、ピリジン約1.6mL、20mmolを添加した。この溶液を室温にて15分間撹拌した後、ジ-ベンゾトリアゾール-カーボネートdiBTC約5.4g、12mmolを添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて撹拌した17時間。プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約30mLのCH2Cl2に溶解させた。この生成物CH2Cl2溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノールIPAに添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、IPAで洗浄し、真空中で乾燥させた。4分岐PEG30k-BTC化合物1cを、白色固体として得た約26.8g、0.88mmol、収率約88。4分岐PEG40k-BTC化合物1dの合成:共沸蒸留した4分岐PEG40k-OH約30g、0.75mmolのアセトニトリル溶液に、ピリジン約1.5mL、18mmolを添加した。この溶液を室温にて15分間撹拌した後、ジ-ベンゾトリアゾール-カーボネートdiBTC約5.4g、12mmolを添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて一晩20時間撹拌した。プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約30mLのCH2Cl2に溶解させた。この生成物CH2Cl2溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノールIPAに添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、IPAで洗浄し、真空中で乾燥させた。4分岐PEG40k-BTC化合物1dを、白色固体として得た約30.0g、0.74mmol、収率約93。4分岐PEG10k-NHBoc化合物3aの合成:N-t-ブトキシカルボニル-2,2’-エチレンジオキシビスエチルアミン化合物2約6.05g、24.4mmolのCH2Cl2溶液に、トリエチルアミンTEA約6.8mL、48.9mmolおよび4分岐PEG10k-BTC化合物1a約30.5g、2.9mmolを添加した。この溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をIPA中で沈殿させて、4分岐PEG10k-NHBoc化合物3aを白色固体として得た約30.5g、2.8mmol、収率約96。4分岐PEG20k-NHBoc化合物3bの合成:N-t-ブトキシカルボニル-2,2’-エチレンジオキシビスエチルアミン化合物2約3.0g、12mmolのCH2Cl2溶液に、トリエチルアミンTEA約3.4mL、24mmolおよび4分岐PEG20k-BTC化合物1b約29.5g、1.48mmolを添加した。この溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をIPA中で沈殿させて、4分岐PEG20k-NHBoc化合物3bを白色固体として得た約30.6g、1.40mmol、収率約95。4分岐PEG30k-NHBoc化合物3cの合成:N-t-ブトキシカルボニル-2,2’-エチレンジオキシビスエチルアミン化合物2約1.75g、7.1mmolのCH2Cl2溶液に、トリエチルアミンTEA約2.0mL、14.4mmolおよび4分岐PEG30k-BTC化合物1c約26.5g、0.87mmolを添加した。この溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をIPA中で沈殿させて、4分岐PEG30k-NHBoc化合物3cを白色固体として得た約26.0g、0.84mmol、収率約96。4分岐PEG40k-NHBoc化合物3dの合成:N-t-ブトキシカルボニル-2,2’-エチレンジオキシビスエチルアミン化合物2約1.9g、7.7mmolのCH2Cl2溶液に、トリエチルアミンTEA約2.1mL、15.1mmolおよび4分岐PEG40k-BTC化合物1d約30.0g、0.74mmolを添加した。この溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をIPA中で沈殿させて、4分岐PEG40k-NHBoc化合物3dを白色固体として得た約30.0g、0.73mmol、収率約99。4分岐PEG10k-NH2化合物4aの合成:4分岐PEG10k-NHBoc化合物3a約30.5g、2.8mmolのCH2Cl2約200mL溶液に、100mLのトリフルオロ酢酸TFAを添加した。この反応溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約400mLの水に溶解させ、約50gのNaClを添加した。この水溶液を、1.0NNaOHでpH=11に調整し、CH2Cl2で3回抽出した。合わせたCH2Cl2相をNa2SO4上で乾燥させ、エバポレートし、Et2Oから沈殿させて、4分岐PEG10k-NH2化合物4aを白色固体として得た約28.1g、2.65mmol、収率約95。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約92であることが示された。4分岐PEG20k-NH2化合物4bの合成:4分岐PEG20k-NHBoc化合物3a約29.5g、1.4mmolのCH2Cl2約200mL溶液に、100mLのトリフルオロ酢酸TFAを添加した。この反応溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約400mLの水に溶解させ、約50gのNaClを添加した。この水溶液を、1.0NNaOHでpH=11に調整し、CH2Cl2で3回抽出した。合わせたCH2Cl2相をNa2SO4上で乾燥させ、エバポレートし、Et2Oから沈殿させて、4分岐PEG20k-NH2化合物4bを白色固体として得た約28.0g、1.36mmol、収率約97。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約92であることが示された。4分岐PEG30k-NH2化合物4cの合成:4分岐PEG30k-NHBoc化合物3c約26.0g、0.84mmolのCH2Cl2約150mL溶液に、150mLのトリフルオロ酢酸TFAを添加した。この反応溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約300mLの水に溶解させ、約30gのNaClを添加した。この水溶液を、2.0NNaOHでpH=11に調整し、CH2Cl2で3回抽出した。合わせたCH2Cl2相をNa2SO4上で乾燥させ、エバポレートし、Et2Oから沈殿させて、4分岐PEG30k-NH2化合物4cを白色固体として得た約23.6g、7.7mmol、収率約92。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約92であることが示された。4分岐PEG40k-NH2化合物4dの合成:4分岐PEG40k-NHBoc化合物3d約30.0g、0,73mmolのCH2Cl2約150mL溶液に、150mLのトリフルオロ酢酸TFAを添加した。この反応溶液をN2下で室温にて2時間撹拌し、プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約300mLの水に溶解させ、約30gのNaClを添加した。この水溶液を、2.0NNaOHでpH=11に調整し、CH2Cl2で3回抽出した。合わせたCH2Cl2相をNa2SO4上で乾燥させ、エバポレートし、Et2Oから沈殿させて、4分岐PEG40k-NH2化合物4dを白色固体として得た約28.0g、0.69mmol、収率約94。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約94であることが示された。パートB-ペメトレキセド前駆体の調製コンジュゲートの合成において使用されるペメトレキセド前駆体を、以下に示される一般図式に従って調製した。4-4-ヒドロキシ-1-ブチニル安息香酸メチルエステル化合物6の合成:4-ブロモ安息香酸メチル化合物5約5.0g、23.3mmolの酢酸エチル約50mL溶液に、塩化パラジウム約25mg、0.14mmol、トリフェニルホスフィン約73mg、0.28mmol、ヨウ化第一銅約53mg、0.28mmol、ジエチルアミン約5.6g、76.9mmolおよび3-ブチン-1-オール約2.1g、30.3mmolを添加した。この反応混合物を油浴中で50°Cにて4時間加熱した。室温まで冷却した後、この溶液を濾過した。濾液を、2NNaHSO4溶液で洗浄し、次いでNaClで洗浄した。Na2SO4およびシリカゲルを酢酸エチル溶液中に添加し、このスラリーを、15分間撹拌し、次いで濾過した。濾液を約20mLまで濃縮し、次いで、約100mLのヘキサンを添加し、反応を約1時間にわたり0~5°Cで維持した。冷却の間にその溶液から白色固体が沈殿し、これを濾過により回収し、冷ヘキサンで洗浄し、真空中で乾燥させた。1HNMRにより、その淡黄色の固体が純粋な化合物6約4.0g、単離収率約84であることが示された。4-4-ヒドロキシブチル安息香酸メチルエステル化合物7の合成:化合物6約2.5g、12.2mmolのCH2Cl2溶液を、TLCにより示されるように反応が完結するまでH-Cube水素化器の10Pd/Cカートリッジを通して循環させたH2圧:50バール;温度:30°C;流量:1.0mL/分。溶媒の除去後、無色の液体を得た約2.5g、12.0mmol、単離収率約98。プロトンNMRにより、所望の生成物化合物7が、何らの不純物もなしに調製されたことが示された。4-4-ブチルアルデヒド安息香酸メチルエステル化合物8の合成:化合物7約1.5g、7.2mmolのCH2Cl2溶液に、酢酸ナトリウム約590mg、7.2mmolおよびクロロクロム酸ピリジンPCC約2.3g、10.8mmolを添加した。この反応混合物を、室温にて5時間撹拌した。TLCにより、ほぼ全ての出発物質が消費されたことが示された。次いで、生成物を、Biotageフラッシュクロマトグラフィーにより、EtOAc/ヘキサンを溶離剤として用いて透明液体として単離した約1.0g、4.8mmol、単離収率約67。プロトンNMRにより、それが純粋なアルデヒド生成物化合物8であることが確認された。4-3-ブロモ-4-ブチルアルデヒド安息香酸メチルエステル化合物9の合成:新しく調製したアルデヒド生成物化合物8約1.0g、4.8mmolのCH2Cl2溶液に、5,5-ジブロモバルビツル酸dibromobarbituricacdDBBA約828mg、2.9mmolおよび酢酸中30臭化水素酸の約0.05mLを添加した。この溶液を、室温にて一晩16時間撹拌した。この反応混合物を濾過した。CH2Cl2濾液を、1Nチオ硫酸ナトリウム、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、NaCl溶液および水のそれぞれで洗浄した。プロトンNMRにより、所望の生成物化合物9が得られたことが示された。生成物CH2Cl2溶液にアセトニトリルを添加し、次いで、CH2Cl2を減圧下で除去した。結果として生じたアセトニトリル中の化合物9の溶液を、さらなる精製および単離なしで次の工程の反応に使用した。4-[2-2-アミノ-4,7-ジヒドロ-4-オキソ-1H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イルエチル]安息香酸メチルエステル化合物11の合成:上で調製した化合物9のアセトニトリル溶液に、水、2,4-ジアミノ-6-ヒドロキシピリミジン化合物10約484mg、3.84mmolおよび酢酸ナトリウム約630mg、7.7mmolを添加した。この反応混合物を、水浴中で40°Cにて3時間加熱した。沈殿物を、遠心分離により回収し、1:1のアセトニトリル/水で洗浄し、真空中で乾燥させた。プロトンNMRにより、それが極めて純粋な化合物11であることが確認された。4-[2-2-アミノ-4,7-ジヒドロ-4-オキソ-1H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-5-イルエチル]安息香酸化合物12の合成:前の工程からの化合物11を、1NNaOH溶液約15mLに添加した。この反応混合物を、水浴中で40°Cにて1.5時間加熱した。この懸濁液は、徐々に、透明な橙色の溶液となった。次いで、エタノール約25mLをその反応混合物に添加し、この混合物を室温まで冷却した。この溶液のpHを、撹拌しながら4NHClで4.4に調整すると、その溶液から、白色固体が直ちに沈殿した。沈殿物を、遠心分離により回収し、1:1のエタノール/水で洗浄し、真空中で乾燥させた。化合物12を、淡紫色固体として得た約670mg、2.2mmol、化合物8に基づく3工程の全単離収率約47。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認された。パートC-グルタミル試薬の調製コンジュゲートの合成において使用されるグルタミル試薬を、以下に示される一般図式に従って調製した。N-t-ブトキシカルボニル-α-[2-トリメチルシリルエチオキシethyoxy]-γ-ベンジル-L-グルタメート14の合成:N-t-ブトキシカルボニル-γ-ベンジル-L-グルタミン酸化合物13約5.0g、14.8mmolおよびカルボニルジイミダゾールCDI約2.64g、16.3mmolのCH2Cl2溶液を室温にて1時間撹拌した後、2-トリメチルシリルエタノール約1.93g、16.3mmolを添加し、この反応混合物を室温にて一晩20時間さらに撹拌した。次いで、この反応溶液を、NaCl水溶液で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。BiotageフラッシュクロマトグラフィーEtOAc/ヘキサンによる精製により、所望の化合物14を無色の液体として得た約6.2g、14.2mmol、単離収率約96。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認された。N-t-ブトキシカルボニル-α-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-L-グルタミン酸化合物15の合成:化合物14約6.2g、14.2mmolおよび10Pd/C約0.5gのエタノール溶液中に、H-Cubeにより生成された水素ガスを、室温にて一晩20時間通気した。TLCにより、反応が完結したことが示された。BiotageフラッシュクロマトグラフィーCH2Cl2/CH3OHによる精製により所望の生成物が得られ、透明な液体が得られた約4.8g、13.8mmol、単離収率約97。プロトンNMRにより、それが純粋な化合物15であることが示された。α-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-L-グルタミン酸化合物16の合成:化合物15約3.0g、8.65mmolの水/ジオキサン1:3溶液に、p-TsOHH2O約2.47g、13.0mmolを添加し、この溶液を油浴中で3時間加熱した。室温まで冷却した後、Dowex1×8HCO3-形、約12gを添加し、懸濁液を室温にてさらに30分間撹拌した。その樹脂を濾過により除去し、残った濾液をエバポレートして白色固体を得た。BiotageフラッシュクロマトグラフィーCH2Cl2/CH3OHによる精製により、所望の生成物化合物16を白色固体として得た約1.23g、4.98mmol、単離収率約58。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認された。パートD-コンジュゲートの最終調製コンジュゲートの最終調製は、以下に示される一般図式に従ったここで、この最終調製は、パートA、パートBおよびパートCから調製された化合物を使用する。N-[4-[2-2-アミノ-4,7-ジヒドロ-4-オキソ-1H-ピロロ[2,3-d]-ピリミジン-5-イルエチル]ベンゾイル]-α-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-L-グルタミン酸化合物17の合成:DMF中の化合物12約880mg、2.94mmolの懸濁液に、N-メチルモルホリン約892mg、8.82mmolおよび2-クロロ-4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジンCDMT約516mg、2.94mmolを添加した。この反応混合物を室温にて1時間撹拌し、次いで、N-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-L-グルタミン酸化合物16約726mg、2.94mmolを添加した。この反応混合物を、HPLCによる分析により反応が完結したことが示されるまで、室温にてさらに3時間撹拌した。次いで、CH2Cl2約300mLおよび1M酢酸約300mLをその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を15分間撹拌した。CH2Cl2相を、H2O/CH3OH/1MHOAc2:1:1およびH2O/CH3OH2:1で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して粗生成物を得た。BiotageフラッシュクロマトグラフィーCH2Cl2、0.1HOAc/CH3OHによる精製により、所望の生成物化合物17を得た約1.0g、1.89mmol、単離収率約64。プロトンNMRにより、生成物の構造が確認された。4分岐PEG10k-γ-アミド-ペメトレキセドコンジュゲート化合物20aの合成:α-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-ペメトレキセド化合物17約276mg、0.52mmolのDMSO溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド約90mg、0.78mmolおよびN-エチル-N’-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDCHCl約498mg、2.6mmolを添加した。この反応混合物を、HPLCにより反応が完結したことが示されるまで室温にて一晩17時間撹拌して、化合物18を得た。次いで化合物4a約1.01g、0.087mmolおよびトリエチルアミンTEA約525mg、5.2mmolをその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を、UVペメトレキセドおよびELSDPEG吸収の両方により示されるようにHPLC分析により所望のPEG-ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示されるまで、室温にてさらに3時間撹拌した。この反応溶液を、激しく撹拌しながらIPA/ET2Oの1:2混合物に注入すると、PEG-ペメトレキセドコンジュゲート化合物19aが沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。粗生成物化合物19aをDMSOに溶解させ、THF中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液TBAFの約5.2mLを添加した。この混合物を、室温にて一晩17時間撹拌した。プロトンNMRにより、反応が完結したことが示された。最終コンジュゲートである4分岐PEG10k-γ-アミド-ペメトレキセド化合物20aを、IPA/Et2Oの1:2混合物から2回沈殿させ、吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた約0.82g、0.064mmol、収率約73。HPLCによりコンジュゲートの純度が>98であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンNMRにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約75であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約9.5w/wであった。4分岐PEG20k-γ-アミド-ペメトレキセドコンジュゲート化合物20bの合成:α-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-ペメトレキセド化合物17約270mg、0.51mmolのDMSO溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド約88mg、0.77mmolおよびN-エチル-N’-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDCHCl約320mg、1.7mmolを添加した。この反応混合物を、HPLCにより反応が完結したことが示されるまで室温にて4.5時間撹拌して、化合物18を得た。次いで化合物4b約1.94g、0.085mmol、EDCHCl約293mg、1.5mmolおよびトリエチルアミンTEA約309mg、3.1mmolをその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を室温にて一晩17時間撹拌した。UVペメトレキセドおよびELSDPEG吸収の両方により示されるように、HPLC分析により、PEG-ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示された。この反応溶液を、激しく撹拌しながらIPA/ET2Oの1:1混合物に注入すると、PEG-ペメトレキセドコンジュゲート化合物19bが沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。次いで、粗生成物化合物19bをDMSOに溶解させ、THF中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液TBAFの約3.0mLを添加した。この混合物を、室温にて一晩18時間撹拌した。プロトンNMRにより、全ての2-トリメチルシリルエチオキシ基が除去されたことが示された。最終コンジュゲートである4分岐PEG20k-γ-アミド-ペメトレキセド化合物20bを、IPA/Et2Oの1:1混合物から2回沈殿させ、吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた約1.7g、0.072mmol、収率約85。HPLCによりコンジュゲートの純度が>98であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンNMRにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約55であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約4.0w/wであった。4分岐PEG30k-γ-アミド-ペメトレキセドコンジュゲート化合物20cの合成:α-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-ペメトレキセド化合物17約280mg、0.53mmolのDMSO溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド約92mg、0.80mmolおよびN-エチル-N’-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDCHCl約500mg、2.6mmolを添加した。この反応混合物を、HPLCにより反応が完結したことが示されるまで室温にて一晩17時間撹拌して、化合物化合物18を得た。次いで化合物4c約2.79g、0.089mmolおよびトリエチルアミンTEA約525mg、5.2mmolをその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を室温にてさらに16時間撹拌した。UVペメトレキセドおよびELSDPEG吸収の両方により示されるように、HPLC分析により、PEG-ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示された。この反応溶液を、激しく撹拌しながらIPA/ET2Oの1:1混合物に注入すると、PEG-ペメトレキセドコンジュゲート化合物19cが沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。粗生成物化合物19cをDMSOに溶解させ、THF中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液TBAFの約5.0mLを添加した。この混合物を、室温にて一晩18時間撹拌した。プロトンNMRにより、脱保護が完結したことが示された。最終コンジュゲートである4分岐PEG30k-γ-アミド-ペメトレキセド化合物20cを、IPA/Et2Oの1:1混合物から2回沈殿させ、濾過により回収し、真空中で乾燥させた約2.5g、0.076mmol、収率約86。HPLCによりコンジュゲートの純度が>98であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンNMRにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約70であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約3.7w/wであった。4分岐PEG40k-γ-アミド-ペメトレキセドコンジュゲート化合物20dの合成:α-[2-トリメチルシリルエチオキシ]-ペメトレキセド化合物17約280mg、0.53mmolのDMSO溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド約92mg、0.80mmolおよびN-エチル-N’-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドEDCHCl約500mg、2.6mmolを添加した。この反応混合物を、HPLC分析により反応が完結したことが示されるまで室温にて一晩17時間撹拌して、化合物18を得た。次いで化合物4d約3.86g、0.088mmolおよびトリエチルアミンTEA約530mg、5.3mmolをその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を室温にてさらに20時間撹拌した。UVペメトレキセドおよびELSDPEG吸収の両方により示されるように、HPLC分析により、PEG-ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示された。この反応溶液を、強く撹拌しながらIPA/ET2Oの1:1混合物に注入すると、PEG-ペメトレキセドコンジュゲート化合物19dが沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。粗生成物化合物19dをDMSOに溶解させ、THF中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液TBAFの約5.0mLを添加した。この混合物を、室温にて一晩21時間撹拌した。プロトンNMRにより、脱保護が完結したことが示された。最終コンジュゲートである4分岐PEG40k-γ-アミド-ペメトレキセド化合物20dを、IPA/Et2Oの1:1混合物から2回沈殿させ、濾過により回収し、真空中で乾燥させた約3.6g、0.080mmol、収率約91。HPLCによりコンジュゲートの純度が>98であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンNMRにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約75であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約2.7w/wであった。実施例24分岐PEG-γ-エステル-ペメトレキセドコンジュゲートの調製4-アームPEG-γ-エステル-ペメトレキセドコンジュゲート4分岐PEG-γ-エチル-エステル-ペメトレキセドコンジュゲートおよび4分岐PEG-γ-イソプロピル-エステル-ペメトレキセドコンジュゲートを含むを合成した。4分岐PEG-γ-エチル-エステル-ペメトレキセドコンジュゲートの調製に関して、化合物17を、実施例1に記載したとおりのパートB、パートC、およびパートDの最初の反応に従って調製した。その後は、下記の合成アプローチに従った。Boc-22-アミノエトキシエタノールの合成。2-2-アミノエトキシエタノール約2.0g、約19.02mmolのDCM溶液に、二炭酸ジ-tert-ブチル約6.23g、約28.5mmolおよびTEA約3.85g、約38.0mmolを添加し、この反応混合物を室温にて3時間撹拌した。全てのDCM溶媒を除去した後、生成物残渣をエタノールに溶解させ、約5mLの1NNaOHを添加し、その溶液を室温にて18時間撹拌した。その後、全ての溶媒を除去し、残渣をDCMで3回抽出した。次いで、抽出残渣を、DCM相と合わせ、NaCl溶液で1回洗浄した。DCM相をNa2SO4で乾燥させ、全ての溶媒を除去すると、無色の液体が得られた約1.6g、7.80mmol、単離収率約41。1HNMRCDCl3により、それが純粋なBoc-22-アミノエトキシエタノールであることが示された。γ-Boc-2-2-アミノエトキシエタノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物21の合成。化合物17約500mg、約0.95mmol、Boc-2-2-アミノエトキシエタノール約292mg、約1.41mmolおよびDMAP約139mg、約1.14mmolをDMFに溶解させ、次いでDCC約782mg、約3.79mmolを添加した。この反応混合物を室温にて20時間撹拌し、HPLC分析により、ほぼ全ての出発物質が反応したことが示された。濾過してDCUを除去し、次いでBiotageDCM/メタノールにより精製した結果、淡黄色の液体が得られた約560mg、約0.783mmol、単離収率約83。HPLCおよびNMRの両方により、化合物21の存在が確認された。γ-2-2-アミノエトキシエタノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物22の合成。γ-Boc-2-2-アミノエトキシエタノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物21約360mg、約0.50mmolのDCM溶液に、約1.5mLのTFAを添加した。この反応混合物を、室温にて5時間撹拌した。HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、BiotageによりDCMおよびメタノールを溶離剤として用いて精製した。後処理後、白色固体が得られ約285mg、約0.46mmol、単離収率約92、HPLCおよびNMRの両方により、それが純粋なγ-2-2-アミノエトキシエタノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物22であることが確認された。4分岐PEG-10k-γ-エチル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物23aの合成。共沸蒸留した4分岐PEG-10k-CM約512mg、0.051mmolをDCMに溶解させ、γ-2-2-アミノエトキシエタノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物22、約150mg、約0.24mmol、TEA約74mg、約0.73mmol、HOBt約35mg、約0.26mmolおよびEDC114mg、約0.73mmolをその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて18時間撹拌し、HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物中で2回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、白色固体を得た約480mg、回収率約94。HPLCにより、それが低分子不純物の全くない純粋な化合物23aコンジュゲートであることが示された。4分岐PEG-20k-γ-エチル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物23bの合成。共沸蒸留した4分岐PEG-20k-CM約1.02g、0.051mmolをDCMに溶解させ、γ-2-2-アミノエトキシエタノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物22、約150mg、約0.24mmol、TEA約123mg、約1.22mmol、HOBt約35mg、約0.26mmolおよびEDC約190mg、約1.22mmolをその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて18時間撹拌し、HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物中で2回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、化合物23bを白色固体として得た約1.02g、回収率約100。4分岐PEG-40k-γ-エチル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物23cの合成。共沸蒸留した4分岐PEG-40k-CM約2.05g、0.051mmolをDCMに溶解させ、γ-2-2-アミノエトキシエタノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物22、約150mg、約0.24mmol、TEA約123mg、約1.22mmol、HOBt約35mg、約0.26mmolおよびEDC約190mg、約1.22mmolをその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて22時間撹拌し、HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物中で2回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、化合物23cを白色固体として得た約2.05g、回収率約100。4分岐PEG-10k-γ-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24aの合成。4分岐PEG-10k-γ-エチル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物23a、約500mgのDMF溶液に、約1.5mLの1.0MTBAFTHF溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて7時間撹拌した。HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物から3回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた約500mg。HPLCおよびNMRにより、それが4分岐PEG-10k-γ-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24aであることが確認され、薬物置換は約87であった。4分岐PEG-20k-γ-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24bの合成。4分岐PEG-20k-γ-エチル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物23b、約1.02gのDMF溶液に、約1.5mLの1.0MTBAFTHF溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて24時間撹拌した。HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物をまずDCMに溶解させ、0.1NHCl/NaCl水溶液で洗浄して、過剰のTBAFを除去したのであるが、乳濁液が形成され、これによりいくらかの生成物の減少が生じた。次いで、生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物から3回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた約491mg、単離収率約49。HPLCおよびNMRにより、それが4分岐PEG-20k-γ-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24bであることが確認され、薬物置換は約57であった。4分岐PEG-40k-γ-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24cの合成。4分岐PEG-40k-γ-エチル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物23c、約2.05gのDMF溶液に、約2.0mLの1.0MTBAFTHF溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて23時間撹拌した。HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物をまずDCMに溶解させ、0.1NHCl/NaCl水溶液で2回洗浄して、過剰のTBAFを除去したのであるが、乳濁液が形成され、これによりいくらかの生成物の減少が生じた。次いで、生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物から3回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた約1.2g、単離収率約60。HPLCおよびNMRにより、それが4分岐PEG-40k-γ-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24cであることが確認され、薬物置換は約36であった。4分岐PEG-γ-イソプロピル-エステル-ペメトレキセドコンジュゲートの調製に関して、化合物17を、実施例1に記載したとおりのパートB、パートC、およびパートDの最初の反応に従って調製した。その後は、下記の合成アプローチおよび加水分解に従った。Boc-アミノ-2-プロパノールの合成。アミノ-2-プロパノール約5.0g、約66.6mmolのDCM溶液に、二炭酸ジ-tert-ブチル約14.6g、約66.6mmolをゆっくりと添加した。この反応混合物を、室温にて18時間撹拌した。このDCM溶液を、NaCl溶液で3回洗浄した。DCM相をNa2SO4で乾燥させ、全ての溶媒を除去した。Boc-アミノ-2-プロパノールを、無色の液体として得た約11.1g、63.3mmol、単離収率約95。γ-Boc-アミノ-2-プロパノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物25の合成。α-TMSE-ペメトレキセド化合物17、約250mg、約0.47mmol、Boc-アミノ-2-プロパノール約125mg、約0.71mmolおよびDMAP約70mg、約0.57mmolをDMFに溶解させ、次いでDCC約489mg、約2.37mmolを添加した。この反応混合物を室温にて24時間撹拌し、HPLC分析により、ほぼ全ての出発物質が消費されたことが示された。濾過してDCUを除去し、BiotageDCM/メタノールにより精製した後、白色固体を得た約250mg、約0.37mmol、単離収率約77。LC-MS計算値:684;実測値:684により、それがγ-Boc-アミノ-2-プロパノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物25であることが確認された。γ-アミノ-2-プロパノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物26の合成。γ-Boc-アミノ-2-プロパノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物25、約250mg、約0.37mmolのDCM溶液に、TFA約1.0mLを添加した。この反応混合物を室温にて20時間撹拌し、HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、BiotageによりDCMおよびメタノールを溶離剤として用いて精製した。後処理後、白色固体が得られ約140mg、約0.24mmol、単離収率約66、HPLCにより、それが純粋なγ-アミノ-2-プロパノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物23であることが確認された。4分岐PEG-20k-γ-イソプロパニル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物27の合成。共沸蒸留した4分岐PEG-20k-CM約1.0g、0.050mmolをDCMに溶解させ、γ-アミノ-2-プロパノール-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド23、約140mg、約0.24mmol、TEA約121mg、約1.12mmol、HOBt約34mg、約0.25mmolおよびEDC186mg、約1.12mmolをその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて48時間撹拌し、HPLC分析により、反応がほぼ完結したことが示された。生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物中で2回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、白色固体を得た約1.0g、回収率約100。HPLCにより、それが低分子不純物の全くない化合物27であることが示された。4分岐PEG-20k-γ-イソプロピル-エステル-ペメトレキセド化合物28の合成。4分岐PEG-20k-γ-イソプロピル-エステル-α-TMSE-ペメトレキセド化合物27、約1.0gのDMF溶液に、約1.5mLの1.0MTBAFTHF溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて18時間撹拌し、HPLC分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、1:1のIPA/Et2Oの混合物から3回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた約677mg、回収率約67。HPLCおよびNMRにより、それが4分岐PEG-20k-γ-イソプロピル-エステル-ペメトレキセド化合物28であることが確認され、薬物置換は約32であった。PBS緩衝液中の4分岐PEG-γ-エステル-ペメトレキセドコンジュゲートの加水分解研究約5mgの各関心のあるコンジュゲートを、約10mLのpH7.4のPBS緩衝液に溶解させた。各溶液を10個のHPLCバイアルに入れ、37°Cでインキュベートした。HPLCを用いて、コンジュゲートおよび放出されたペメトレキセドの両方を分析した。各試験コンジュゲートの半減期t1/2を、表1に示す。実施例3低葉酸食における複数回用量の最大耐用量本研究の目的は、低葉酸食を与えられた雌SCIDマウスにおける、ペメトレキセドPMX、化合物20a実施例1から、化合物20b実施例1から、化合物20c実施例1から、および化合物20d実施例1からについての最大耐用量を決定することであった。化合物は全て、1日1回、10日間続けて、静脈内投与した。PMX、化合物20a、化合物20b、化合物20cおよび化合物20dの間の用量当量を与える計算を行った。その用量当量を、投与される実際の用量と共に、表2に示す。本実施例における投薬量は全て、用量当量に換算して表し、賦形剤、塩および水和状態について調整を行った。ペメトレキセドPMXMW471.383/FW597.488、38.3親を、微細な凍結乾燥された白色粉末としてMcKessonから入手した。これを、乾燥剤を充填した密封ジャー中で、光から保護された状態で、室温で保管した。投与溶液は、0.9NaClに乾燥化合物を溶解させ、数秒約30秒間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、7.11のpHを有する透明かつ無色の溶液であった。その最高用量原液を0.9生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。化合物20aMW12906、9.5親は、微細な淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、-20°Cで保管した。投与溶液は、0.9NaClに乾燥化合物を溶解させ、数秒約30秒間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、6.49のpHを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を0.9生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。化合物20bMW23580、4親は、塊状の淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、-20°Cで保管した。投与溶液は、0.9NaClに乾燥化合物を溶解させ、数秒約30秒間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、5.74のpHを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を0.9生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。化合物20cMW32697、3.7親は、塊状の淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、-20°Cで保管した。投与溶液は、0.9NaClに乾燥化合物を溶解させ、数秒約30秒間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、6.09のpHを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を0.9生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。化合物20dMW45023、2.7親は、塊状の淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、-20°Cで保管した。投与溶液は、0.9NaClに乾燥化合物を溶解させ、数秒約30秒間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、5.02のpHを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を0.9生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。雌SCIDマウスHsdIcr:HaICR-Prkdc-scidを、Harlanから入手した。それらは、実験の1日目において7週齢であった。群1および群2のマウスに、放射線照射されたRodentDiet5053LabDiet商標を与えた。群3~19のマウスには、投薬の14日前から投薬完了の14日後まで、1スクシニルスファチアゾールsuccinylsufathiazolを補充した放射線照射された葉酸欠乏PurinaTestDietを与え、投薬完了の14日後の時点で、この研究を終了し、次いで、マウスを安楽死させた。全ての群が、飲料水を自由に与えられた。1時間に100回の完全空気交換で環境中にH.E.P.A濾過空気を供給するクリーンルームにおいて固定ケージstaticcage中にマウスを収容した。全ての処置、体重測定、および腫瘍測定を、この環境中で実施した。この環境を、70°±2°Fの温度範囲および30~70の湿度範囲に制御した。全てのマウスを、少なくとも1日1回、臨床徴候について観察した。明らかな苦痛状態にあるかまたは瀕死の状態にあると認められたマウスは、安楽死させた。本研究は、AAALAC認可施設で実施された。処置は、1日目に開始した。全てのマウスは、治療の開始時において、≧19.4gの体重があった。最初の処置時の平均群体重は、よく一致していた群平均の範囲21.0~23.7g。群3~19のマウスには、投薬前の14日間および全実験を通して、1スクシニルスファチアゾールsuccinylsufathiazolを含んだ放射線照射された葉酸欠乏PurinaTestDietを与えた。全てのマウスに、処置日における各個の体重に応じて投薬した0.2ml/20g。全てのマウスを、少なくとも1日に1回、臨床徴候について観察した。マウスの体重を、処置の各日に、次いで少なくとも週に3回計量した。各個の体重を、週に3回記録した。20を超える処置関連の体重減少は、一般的に、許容できないほど毒性があると見なされる。本報告において、投薬量レベルは、処置関連の体重減少処置の間および処置から2週間後が<20であれば、許容されると記述される。死亡または安楽死の際に、全てのマウスを剖検して、可能性のある死因および毒性の標的となる恐れのある臓器に関する、総合的な評価を得た。ペメトレキセド-普通食;PMXでの処置は、500mg/kgおよび250mg/kgで毒性であり、30を超える最大処置関連体重減少をもたらした。致死率は、500mg/kgの投薬量レベルで1005/5であった。通常の食餌を与えられたマウスにおけるPMXの最大耐用量は、<250mg/kgであった。ペメトレキセド-低葉酸食;PMXでの処置は、60mg/kg、15mg/kgおよび3.75mg/kgで毒性であり、38~31の最大処置関連体重減少をもたらした。体重の最下点は、10~12日目に生じた。60mg/kgおよび15mg/kgでのPMXでの処置は、1005/5および402/5の処置関連の死亡を生じた。これらの群において観察された一般的な臨床徴候は、粗毛および下痢であった。一般的な剖検所見は、空気で膨満した胃、蒼白な肝臓、および壊死した腸であった。1mg/kgでのPMXでの処置は許容され、12.8の最大処置関連体重減少をもたらし、処置関連の死亡をもたらさなかった。体重の最下点は、12日目に生じた。この群において観察された一般的な臨床徴候は粗毛であったが、剖検においては何ら重要なものは認められなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおけるPMXの最大耐用量は、1mg/kgであった。化合物20a-低葉酸食;15mg/kgでの化合物20aでの処置は毒性であり、402/5の処置関連死の発生率および14.9の平均最大処置関連体重減少を生じた。体重の最下点は、8日目に生じた。減少した体重は、およそ10日で回復した。3.75mg/kgおよび1mg/kgでの化合物20aでの処置は許容され、およそ3.0の最大処置関連体重減少を生じた。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。1mg/kg用量群において、5日目に1匹が死亡した。剖検において、この動物は、蒼白な肝臓および膨張した腸を有していた。この研究は最終処置の14日後に終了し、残りの動物の剖検を行った。剖検所見には、膨張した腸および空気が充満した胃が含まれた。両投薬量レベルにおける体重減少データに基づくと、1mg/kg群における死亡が本当に処置関連であったのか明らかでない。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物20aの最大耐用量は、約3.75mg/kgであった。化合物20b-低葉酸食;化合物20bでの処置は、15mg/kg、3.75mg/kg、および1mg/kgで十分に許容され、処置関連の死亡を生じなかった。最大処置関連体重減少は、用量依存的であり、16.9~1.8の範囲にあった。体重の最下点は、15mg/kg用量群については12日目に生じ、3.75mg/kgおよび1mg/kgの用量群については5日目に生じた。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検においては、何ら重要なものは認められなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物20bの最大耐用量は、体重減少に基づき約15mg/kgであった。化合物20c-低葉酸食;化合物20cでの処置は、15mg/kgで毒性であり、18.8の最大処置関連体重減少および201/5の処置関連死の発生率を生じた。体重の最下点は10日目に生じ、減少した体重は研究終了前には回復しなかった。死んでいるのが発見されたマウスの剖検において、壊死した腸が認められた。化合物20cでの処置は、3.75mg/kgおよび1mg/kgで許容され、それぞれ、1.4および4.8の最大処置関連体重減少を生じた。体重の最下点は、3.75mg/kgおよび1mg/kgの投薬量レベル群について、それぞれ、5日目および10日目に生じた。減少した体重は、それぞれ、2.2日および5.5日で回復した。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検時には、重要な所見は何もなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物20cの最大耐用量は、15~3.75mg/kgの間であった。化合物20d-低葉酸食;化合物20dでの処置は、15mg/kgで毒性であり、28.8の処置関連体重減少および402/5の処置関連死の発生率を生じた。体重の最下点は15日目に生じ、減少した体重は研究終了前には回復しなかった。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検においては、何ら重要なものは発見されなかった。化合物20dでの処置は、3.75mg/kgおよび1mg/kgで許容され、処置関連の死亡をもたらさず、それぞれ、4.5および0.9の処置関連体重減少をもたらした。体重の最下点は両群について5日目に生じ、減少した体重は、それぞれ、11.3日および0.8日で回復した。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検においては、何ら重要なものは発見されなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物20dの最大耐用量は、約3.75mg/kgであった。そのデータをまとめた表を、表3として示す。実施例4単回用量の最大耐用量の研究およびインビボ異種移植研究予備異種移植研究における10日間の毎日の投薬の恐らくは反復投薬の作用のせいで効力が高すぎたので、比較異種移植研究のためのより良い投与スケジュールを得るために、単回用量の最大耐用量の研究を、実施例3に示された研究と同様の方法を用いて行った。この最大耐用量研究においては、ペメトレキセド、4分岐PEG20K-γ-アミドペメトレキセド化合物20b、4分岐PEG30K-γ-アミドペメトレキセド化合物20c、4分岐PEG40K-γ-アミドペメトレキセド化合物20d、4分岐PEG-20k-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24b、4分岐PEG-40k-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24cおよび4分岐PEG-20k-イソプロピル-エステル-ペメトレキセド化合物28のそれぞれの単回用量のみを、静脈内投与した。本研究の結果を、表4に示す。この単回用量の最大耐用量の研究からのデータを用いて、ペメトレキセド、4分岐PEG20K-γ-アミドペメトレキセド化合物20b、4分岐PEG23K-γ-アミドペメトレキセド化合物20c、4分岐PEG40K-γ-アミドペメトレキセド化合物20d、4分岐PEG-20k-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24b、4分岐PEG-40k-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24cおよび4分岐PEG-20k-イソプロピル-エステル-ペメトレキセド化合物28を用いた異種移植研究を、雌の無胸腺nu/nuマウスにおいて行った。手短に言えば、実験作業については、以前に処置されていない8~12週齢マウス群に、生理的食塩水中で調製され、最大20mL/kgの投与量を可能にするのに適切な濃度に希釈された試験物を、静脈内投与した。関心のある各化合物を、最大耐用量の80で1回と最大耐用量単回用量の最大耐用量の研究により求められた最大耐用量の50で1回との2回試験した。マウスを臨床徴候について毎日観察し、体重を、週末日を除いて毎日、次いで研究の終わりまで週2回biweekly記録した。平均体重減少が20を超えたかまたは>10の動物が死亡した群については、いずれも投与を終了した。瀕死の動物は、安楽死させた。本研究の26日目現在ここで、研究設計は60日までの研究を見込んでいる、ペメトレキセドと、4分岐PEG20K-γ-アミドペメトレキセド化合物20b、4分岐PEG30K-γ-アミドペメトレキセド化合物20c、4分岐PEG40K-γ-アミドペメトレキセド化合物20d、4分岐PEG-20k-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24b、4分岐PEG-40k-エチル-エステル-ペメトレキセド化合物24cおよび4分岐PEG-20k-イソプロピル-エステル-ペメトレキセド化合物28との両方についての腫瘍体積は、同様の、かつ生理的食塩水コントロールよりも有意に小さい、腫瘍体積を示していた。さらに、アミド型[すなわち、4分岐PEG20K-γ-アミドペメトレキセド化合物20b、4分岐PEG30K-γ-アミドペメトレキセド化合物20c、4分岐PEG40K-γ-アミドペメトレキセド化合物20d]での処置は、全ての試験物の中で最小の腫瘍体積をもたらした。これらの結果に基づいて、本研究は続くであろう。本明細書に示される発明を、特定の例示の実施形態に関して説明してきた。しかしながら、上述の説明は、例示の実施形態に本発明を限定することが意図されるものではなく、上述の明細書において記載されるとおりの本発明の精神および範囲の内で変更が行われ得ることを、当業者は認識すべきである。"