"被験体における生物学的活性を刺激するための、有効量のアンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4アゴニストを含む組成物。発明の要旨本発明は、アンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4に関する。本発明は、異常なANGPTL4の発現もしくは活性によって特徴付けられる状態もしくは疾患、ならびに/またはANGPTL4発現および/もしくは活性に関連する状態もしくは疾患を治療するための、ANGPTL4もしくはそのサブ配列、またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストの使用を提供する。ANGPTL4、またはそのアゴニストまたはアンタゴニストによって肝細胞の増殖を変調する方法が提供される。ある実施形態において、方法は、肝細胞の増殖を誘導することを含む。例えば、方法は、有効量のANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを、肝細胞またはプレ肝細胞pre-hepatocyteの集団に投与し、それにより、増殖を誘導することを含む。1つの態様において、該投与工程は、ANGPTL4をコードする核酸を投与することを含む。別法として、または加えて、肝細胞またはプレ肝細胞においてANGPTL4の産生を誘導する有効量の因子を投与して、増殖を刺激することができる。ANGPTL4またはANGPTL4のアゴニストは、有効量のANGPTL4またはアゴニストを投与することによって、肝臓の機能障害、疾患および損傷の治療で用いることができる。1つの態様において、ANGPTL4は,ANGPTL4をコードする核酸によって供される。本発明の1つの実施形態において、ANGPTL4アゴニストはαVβ5受容体に対するアゴニストである。肝細胞の増殖を阻害するための方法も提供される。ある実施形態においては、該方法は、ANGPTL4アンタゴニストを含む組成物の有効量を肝細胞またはプレ肝細胞の集団に投与することを含む。1つの態様において、ANGPTL4アンタゴニストは、ANGPTL4タンパク質の産生を阻害する因子例えば、アンチセンス分子またはリボザイム分子である。1つの態様において、ANGPTL4アンタゴニストは抗ANGPTL4抗体である。もう1つの態様において、ANGPTL4アンタゴニストは抗αvβ5アンタゴニスト抗体である。1つの実施形態において、ANGPTL4アンタゴニストはANGPTL4-SiRNAである。ANGPTL4アンタゴニストは、有効量のANGPTL4アンタゴニストを肝細胞に投与することによって、例えば、肝癌または望ましくない肝臓肥大の治療で用いることができる。肝細胞の細胞接着を変調するための方法も提供される。ある実施形態において、該方法は、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを含む組成物の有効量を肝細胞の集団に投与することによって、肝細胞の細胞接着を誘導することを含む。他の実施形態において、該方法は、ANGPTL4アンタゴニストを含む組成物の有効量を肝細胞の集団に投与し、それにより、肝細胞の細胞接着を阻害することを含む。脂質ホメオスタシスに関与する、肝細胞の増殖および細胞接着を変調することに加えて、ANGPTL4は、血清中のトリグリセリドおよびコレステロールのレベルを変調し、やはり脂質ホメオスタシスに関与するプレ脂肪細胞pre-adipocyteの増殖を刺激する。本発明は、脂質ホメオスタシスの多数の種々の態様を変調する方法を提供する。例えば、本発明の方法は、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを含む組成物の有効量をプレ脂肪細胞の集団に投与し、それにより、プレ脂肪細胞の増殖を誘導することによって、プレ脂肪細胞の増殖を刺激することを含む。プレ脂肪細胞の増殖を阻害する方法も提供される。例えば、該方法は、ANGPTL4アンタゴニストを含む組成物の有効量をプレ脂肪細胞の集団に投与することを含む。プレ脂肪細胞の細胞移動を変調する方法も含まれる。例えば、本発明の方法は、有効量のANGPTL4またはANGPTL4アゴニストをプレ脂肪細胞の集団に投与することによってプレ脂肪細胞の細胞移動を誘導することを含む。プレ脂肪細胞の細胞移動を阻害する方法も提供され、これは、例えば、有効量のANGPTL4アンタゴニストをプレ脂肪細胞の集団に投与し、それにより、細胞移動を阻害することを含む。被験体においてトリグリセリドまたはコレステロールの血清中レベルを変調する方法も本発明で提供される。例えば、該方法は、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストを含む組成物の有効量を被験体に投与し、それにより、被験体におけるトリグリセリドおよび/またはコレステロールの血清中レベルを変調することを含む。1つの実施形態において、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストが投与され、その結果、対照と比較して被験体の血清中にトリグリセリドおよび/またはコレステロールが蓄積される。もう1つの実施形態において、有効量のANGPTL4アンタゴニストが被験体に投与され、それにより、被験体の血清中の少なくとも1つのトリグリセリド、遊離脂肪酸および/またはコレステロールのレベルを低下させる。本発明のある実施形態において、対照は治療前の被験体、または治療を受けていないまたは治療を減らした被験体由来の血清である。ANGPTL4およびANGPTL4モジュレーターそのアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、これらの分子の有効量を被験体に投与することによる脂質ホメオスタシス障害の治療で用いることができる。本明細書中における定義の項目の脂質ホメオスタシス障害参照。例えば、方法は、高脂血症を治療するのに有効な量のANGPTL4アンタゴニストを含む組成物を被験体に投与することを含む。被験体において肥満を治療し、および/または全体重を低下させる方法も提供される。例えば、該方法は、有効量のANGPTL4モジュレーターを被験体に投与し、それにより、治療無し、または対照での処置と比較して、被験体において肥満を治療し、および/または全体重を低下させることを含む。1つの実施形態において、被験体の肥満症脂肪が低下する。このようにして、肥満に関連する状態、例えば、心血管疾患、糖尿病なども治療することができる。本発明のある実施形態において、細胞、例えば、肝細胞、プレ脂肪細胞は被験体中のものである。典型的には、被験体はヒトである。本発明のANGPTL4は、全長タンパク質ならびに生物学的に活性な分子、例えば、ヒトANGPTL4のN-末端、N-末端コイルドコイルドメイン、C末端、C末端フィブリノーゲン様ドメイン、またはANGPTL41~183、ANGPTL423~183、ANGPTL41~約162、ANGPTL4約162~406、ANGPTL423~406、もしくはANGPTL4184~406アミノ酸サブ配列、および/またはマウスANGPTL4のmANGPTL41~183、mANGPTL423~183、mANGPTL41~約165、mANGPTL423~約165、mANGPTL423~410またはmANGPTL4184~410アミノ酸サブ配列に対応する残基を含む。他のサブ配列は、限定されるものではないが、例えば、hANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~406、60~406、80~406、100~406、120~406、140~406、および160~406、および例えば、mANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~410、60~410、80~410、100~410、120~410、140~410、および160~410も含む。アゴニストANGPTL4は、ANGPTL4を活性化する分子、またはANGPTL4活性を生じる分子、例えば、活性なポリペプチド、低分子、およびANGPTL4の活性または発現を増加させる分子を含む。ANGPTL4アゴニストはαvβ5アゴニストも含む。本発明のANGPTL4アンタゴニストは、ANGPTL4の活性を阻害するか、または低下させる分子である。ANGPTL4阻害剤は低分子量の物質、ポリヌクレオチド、アンチセンス分子、RNAアプタマー、ANGPTL4またはその受容体ポリペプチドに対するリボザイム、ポリペプチド、ANGPTL4のアンタゴニスト改変体、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはその結合体または融合タンパク質を含むことができ、それは、直接的または間接的にANGPTL4活性を阻害する。本発明のある実施形態において、アンタゴニストANGPTL4抗体は、ANGPTL4タンパク質の特異的なサブ配列または領域、例えば、ヒトANGPTL4のN-末端、N-末端コイルドコイルドメイン、C末端、C末端フィブリノーゲン様ドメイン、またはANGPTL41~183、ANGPTL423~183、ANGPTL41~約162、ANGPTL4約162~406、ANGPTL423~406、またはANGPTL4184~406アミノ酸サブ配列、および/またはマウスANGPTL4のmANGPTL41~183、mANGPTL423~183、mANGPTL41~約165、mANGPTL423~約165、mANGPTL423~410またはmANGPTL4184~410アミノ酸サブ配列に結合することによって、ANGPTL4の活性を阻害し、または低下させる抗体である。他のサブ配列は、限定されるものではないが、例えばhANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~406、60~406、80~406、100~406、120~406、140~406、および160~406ならびに、例えば、mANGPTL4の40~183、60~183、80~183、100~183、120~183、140~183、40~410、60~410、80~410、100~410、120~410、140~410、および160~410も含む。本発明のある実施形態において、ANGPTL4のアンタゴニストは抗―αvβ5抗体、例えば、アンタゴニスト抗―αvβ5抗体である。ある実施形態において、本発明の抗体はヒト化抗体である。本発明のある実施形態において、ANGPTL4アンタゴニストはSiRNA分子である。1つの実施形態において、SiRNA分子はANGPTL4-SiRNA分子であり、該分子は、ANGPTL4をコードする核酸のDNA配列例えば、GTGGCCAAGCCTGCCCGAAGA配列番号3を標的とする。ANGPTL4のイムノアドヘシンは、少なくとも、免疫グロブリン配列に融合したANGPTL4の受容体―結合領域を含む。ある実施形態において、ANGPTL4、アゴニストまたはアンタゴニストは担体、例えば、医薬上許容される担体と一緒にされる。ANGPTL4トランスジェニックおよびノックアウト動物が記載され、これらのトランスジェニック動物の使用も提供される。本発明は、そのゲノムがANGPTL4をコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物に由来する単離された細胞も提供する。ある実施形態において、単離された細胞はマウス細胞例えば、胚性幹細胞を含む。ANGPTL4の突然変異型の遺伝子破壊の結果、アテローム性動脈硬化症を含む、心血管、内皮または血管形成障害;脂質ホメオスタシス障害を含む異常な代謝障害;または免疫学的障害および炎症障害を含む、種々の疾患状態または機能不全に関連する表現型が観察された。本発明の方法は、有効量のANGPTL4、ANGPTL4のアゴニストまたはアンタゴニストを被験体に投与し、それにより、当該障害または疾患を効果的に治療することによって、心血管、内皮または血管形成障害;異常な代謝障害、免疫学的障害;脂質ホメオスタシス障害、あるいはANGPTL4をコードする遺伝子の破壊に関連した、あるいはANGPTL4活性に関連した腫瘍学的障害を治療することを含む。ANGPTL4をコードする遺伝子の破壊に関連した表現型を同定する方法も提供される。例えば、該方法はaそのゲノムがANGPTL4をコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定し;次いで、b測定された生理学的特徴を、性が一致する野生型動物のそれと比較することを含む。遺伝子破壊に由来する表現型は、野生型動物の生理学的特徴とは異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴として同定される。非ヒトトランスジェニック動物は、ANGPTL4をコードする遺伝子の破壊に関してホモ接合性またはヘテロ接合性であり得る。ANGPTL4をコードする遺伝子の破壊に関連する表現型を変調する因子を同定する方法も提供される。例えば、該方法は、aそのゲノムがANGPTL4をコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定し;次いで、baの測定された生理学的特徴を、性が一致する野生型動物のそれと比較することを含む。非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に由来する表現型は、野生型動物の生理学的特徴とは異なる非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴である。試験因子をaの非ヒトトランスジェニック動物に投与し;次いで、試験因子が遺伝子破壊に関連する同定された表現型を変調するか否かを決定する。表現型を変調する試験因子は、その表現型を変調する因子である。ある実施形態において、性が一致する野生型同腹仔と比較した、ANGPTL4遺伝子破壊に関連する表現型、または非ヒトトランスジェニック動物によって呈された表現型は、以下のうちの少なくとも1つであるが、これらに限定されない:例えば、心血管、内皮または血管形成障害;免疫学的障害;脂質ホメオスタシス障害;または異常な代謝障害。ANGPTL4をコードする遺伝子の破壊に関連する生理学的特徴を変調する因子を同定する方法も提供される。ある実施形態において、該方法は、aそのゲノムが、ANGPTL4をコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物によって呈される生理学的特徴を測定し;次いで、baの測定された生理学的特徴を、性が一致する野生型動物のそれと比較することを含む。野生型動物によって呈される生理学的特徴とは異なる、非ヒトトランスジェニック動物によって呈される生理学的特徴は、遺伝子破壊に関連する生理学的特徴として同定される。試験因子をaの非ヒトトランスジェニック動物に投与し;次いで、遺伝子破壊に関連する生理学的特徴が変調されたか否かを決定する。生理学的特徴を変調する試験因子は、その特徴を変調する因子である。ある実施形態において、非ヒトトランスジェニック動物は、性が一致する野生型同腹仔と比較した以下の生理学的特徴、例えば、平均血清中コレステロールレベルにおける変調、平均血清中トリグリセリドレベルにおける変調、グルコース耐性テストにおける変調、グルコースホメオスタシスの変調、平均血清中グルコースレベルの減少;平均血清インスリンレベルの増加;平均血清中インスリンレベルの減少;平均血清中IgMレベルの増加および平均絶対好中球カウントの増加、平均パーセント体脂肪の増加;体重の減少および身長、全組織質量および脂肪以外のlean体質量の減少、全脂肪質量の減少、体重および身長の減少に伴う成長の遅延、および/または全体脂肪、全組織質量の平均パーセントの減少の少なくとも1つを呈する。1つの実施形態において、平均血清中コレステロールレベルにおける変調は、平均血清中コレステロールレベルの減少である。1つの実施形態において、平均血清中トリグリセリドレベルにおける変調は平均血清中トリグリセリドレベルの減少である。もう1つの実施形態において、グルコース耐性テストにおける変調はグルコース耐性の増強である。ANGPTL4をコードする遺伝子における破壊に関連した、心血管、内皮または血管形成障害;免疫学的障害;腫瘍学的障害;脂質代謝障害;または異常な代謝障害を緩和する因子を同定する方法が提供される。例えば、該方法はa試験因子を、ANGPTL4遺伝子における破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物に投与し;次いで、b試験因子が、非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する心血管、内皮または血管形成障害;免疫学的障害;腫瘍学的障害;脂質代謝障害;または代謝障害を緩和するか否かを決定することを含む。本発明は、ANGPTL4をコードする遺伝子の破壊に関連する状態に影響することができる治療剤を評価する方法を提供する。例えば、該方法は、aそのゲノムがANGPTL4をコードする遺伝子の破壊を含む、非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴を測定し;baの測定された生理学的特徴を、性が一致する野生型動物のそれと比較し;c試験因子をaの非ヒトトランスジェニック動物に投与し;次いで、d非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に関連する同定された状態に対する試験因子の効果を評価することを含む。野生型動物の生理学的特徴とは異なる、非ヒトトランスジェニック動物の生理学的特徴は、非ヒトトランスジェニック動物における遺伝子破壊に由来する状態として同定される。例えば、該状態は心血管、内皮または血管形成障害;免疫学的障害;腫瘍学的障害;脂質ホメオスタシス障害;または代謝障害である。ANGPTL4の発現を変調する因子を同定する方法も提供される。例えば、該方法は、a試験因子を、ANGPTL4を発現する宿主細胞と接触させ;次いで、b試験因子が、宿主細胞によるANGPTL4の発現を変調するか否かを決定することを含む。前記方法のいずれかによって同定された因子も本発明に含まれる。1つの実施形態において、該因子はアゴニストを含む。もう1つの実施形態において、該因子はANGPTL4のアンタゴニストを含む。治療剤である因子もまた、治療剤を含む医薬組成物と共に本発明に含まれる。本発明の種々の方法において、本発明の分子、例えば、ANGPTL4、ANGPTL4のアゴニストまたはアンタゴニスト、因子などを全身送達系を通じて被験体に投与することができる。1つの態様において、全身送達系は、主題の因子の組換え形態を発現する哺乳動物細胞例えば、CHO細胞を含む細胞調製物を含む。もう1つの態様において、全身送達系は、精製された因子およびポリマーマトリクスを含む徐放調製物を含むことができる。ある実施形態において、該分子を、医薬上許容される担体と共に被験体に投与する。別法として、本発明の分子は、該分子をコードする核酸を含む組織例えば、脂肪細胞、肝臓等標的化遺伝子送達ベクターを介して投与することができる。遺伝子治療のためのよく確立されたウイルスベクターまたは非ウイルスベクターを、本発明における組織標的化遺伝子送達ベクターとして用いることができる。例えば、本発明は以下の項目を提供する。項目1肝細胞の増殖を刺激する方法であって、該方法は、有効量のアンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4を肝細胞またはプレ肝細胞の集団に投与し、それにより、増殖を刺激する工程を包含する、方法。項目2前記肝細胞が被験体内にある、項目1に記載の方法。項目3前記被験体がヒトである、項目2に記載の方法。項目4前記ANGPTL4がヒトANGPTL4のアミノ酸残基23~406を含む、項目1に記載の方法。項目5前記ANGPTL4がヒトANGPTL4のアミノ酸残基184~406を含む、項目1に記載の方法。項目6投与工程が、ANGPTL4をコードする核酸配列を投与する工程を包含する、項目1に記載の方法。項目7肝細胞の増殖を刺激する方法であって、該方法は、肝細胞またはプレ肝細胞においてANGPTL4の産生を刺激する因子の有効量を投与し、それにより、増殖を刺激する工程を包含する、方法。項目8肝細胞の増殖を刺激する方法であって、該方法は、有効量のANGPTL4アンタゴニストを肝細胞またはプレ肝細胞の集団に投与する工程を包含する、方法。項目9前記アンタゴニストが前記肝細胞においてANGPTL4タンパク質の産生を阻害する因子である、項目8に記載の方法。項目10前記因子がアンチセンスまたはリボザイム分子である、項目8に記載の方法。項目11前記ANGPTL4アンタゴニストが抗ANGPTL4抗体である、項目8に記載の方法。項目12前記ANGPTL4アンタゴニストが抗αvβ5抗体である、項目8に記載の方法。項目13肝細胞の細胞接着を誘導する方法であって、該方法は、ANGPTL4を含む組成物の有効量を肝細胞の集団に投与し、それにより、肝細胞の細胞接着を誘導する工程を包含する、方法。項目14前記ANGPTL4がヒトANGPTL4のアミノ酸残基23~406を含む、項目13に記載の方法。項目15前記ANGPTL4がヒトANGPTL4のアミノ酸残基185~406を含む、項目13に記載の方法。項目16前記組成物が担体と共にANGPTL4を含む、項目13に記載の方法。項目17肝細胞の細胞接着を阻害する方法であって、該方法は、ANGPTL4アンタゴニストを含む組成物の有効量を肝細胞の集団に投与し、それにより、肝細胞の細胞接着を阻害する工程を包含する、方法。項目18前記アンタゴニストが抗ANGPTL4抗体である、項目17に記載の方法。項目19前記アンタゴニストが抗αvβ5抗体である、項目17に記載の方法。項目20プレ脂肪細胞の増殖を刺激する方法であって、該方法は、ANGPTL4またはアゴニストを含む組成物の有効量をプレ脂肪細胞の集団に投与し、それにより、プレ脂肪細胞の増殖を誘導する工程を包含する、方法。項目21前記プレ脂肪細胞が被験体内にある、項目20に記載の方法。項目22前記被験体がヒトである、項目20に記載の方法。項目23前記組成物が担体と共にANGPTL4を含む、項目20に記載の方法。項目24前記ANGPTL4がヒトANGPTL4のアミノ酸残基23~406を含む、項目20に記載の方法。項目25前記ANGPTL4が約23~約162のアミノ酸残基を含む、項目24に記載の方法。項目26プレ脂肪細胞の増殖を阻害する方法であって、該方法は、ANGPTL4アンタゴニストを含む組成物の有効量をプレ脂肪細胞の集団に投与する工程を包含する、方法。項目27前記ANGPTL4アンタゴニストが抗ANGPTL4抗体である、項目26に記載の方法。項目28ANGPTL4の生物学的活性を阻害する方法であって、該方法は、ANGPTL4のC末端に結合するANGPTL4アンタゴニストを投与する工程を包含する、方法。項目29前記ANGPTL4アンタゴニストが抗ANGPTL4抗体である、項目28に記載の方法。項目30前記ANGPTL4アンタゴニストが抗αvβ5抗体である、項目28に記載の方法。項目31前記ANGPTL4アンタゴニストが、Angptl4がαvβ5に結合することをブロックする、項目28に記載の方法。項目32前記生物学的活性が細胞増殖または細胞分化を誘導することを含む、項目28に記載の方法。項目33ANGPTL4のC末端に結合する抗体。項目34前記抗体が中和抗体である、項目32に記載の抗体。項目35ANGPTL4の改変体を含む組成物であって、該改変体ANGPTL4はタンパク質分解により処理されない、組成物。項目36ANGPTL4の前記改変体がアミノ酸162および/または164の改変を含む、項目35に記載の組成物。項目37前記改変が置換である項目36に記載の組成物。項目38前記置換が位置162および位置164におけるものである項目37に記載の組成物。詳細な説明定義本発明を詳細に説明する前に、本発明は、当然変動し得る特定の組成物または生物系に制限されないことが理解されるべきである。また、本明細書中に用いる用語は、特定の実施形態のみを記載する目的であり、限定的であることを意図しないことも理解されるべきである。本明細書および添付の請求の範囲で用いるように、単数形a、anおよびtheは、文脈が明瞭に他のことを指示しない限り複数への言及を含む。かくして、例えば、ある分子に対する言及は、所望により、2以上のそのような分子の組み合わせを含む。他に定義されない限り、全ての科学的および技術的用語は、それが属する分野で通常用いられるものと同一の意味を有すると理解される。本発明の目的では、以下の用語が後に定義される。用語ANGPTL4またはAngptl4とは、その天然に存在する対立遺伝子、分泌された形態およびプロセシングされた形態と共に、アンジオポエチン様4ポリペプチドまたはタンパク質をいう。例えば、ヒト由来のANGPTL4は406アミノ酸のタンパク質であり、他方、マウスANGPTL4は410アミノ酸のタンパク質である。用語ANGPTL4は、例えば、ヒトアンジオポエチン様4タンパク質のN-末端フラグメント、コイルドコイルドメイン、C末端フラグメント、フィブリノーゲン様ドメイン、アミノ酸1~183、23~183、1~約162、23~約162、23~406、184~406、約162~406、または23~184、あるいはマウスアンジオポエチン様4タンパク質のアミノ酸1~183、23~183、1~約165、23~約165、23~410、または184~410を含むポリペプチドのフラグメント例えば、サブ配列、短縮形態等をいうためにも用いられる。他のフラグメントは、限定されるものではないが、例えば、hANGPTL4の40~183,60~183,80~183,100~183,120~183,140~183,40~406,60~406,80~406,100~406,120~406,140~406,および160~406ならびに、例えば、mANGPTL4の40~183,60~183,80~183,100~183,120~183,140~183,40~410,60~410,80~410,100~410,120~410,140~410および160~410を含む。ANGPTL4のいずれかのそのような形態への言及は、例えば、ANGPTL423~406、ANGPTL4184~406、ANGPTL423~183、mANGPTL423~410、mANGPTL4184~410等によって、本出願において確認することもでき、mはマウス配列を示す。フラグメントの天然ANGPTL4についてのアミノ酸位置は、天然ANGPTL4配列で示されるようにナンバリングされる。例えば、フラグメントのANGPTL4におけるアミノ酸位置22Serは、天然ヒトANGPTL4における位置22Serでもある。例えば、図2参照。一般には、フラグメントの天然ANGPTL4は生物学的活性を有する。天然配列のポリペプチドは、天然に由来するポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。かくして、天然配列のポリペプチドは、いずれかの哺乳動物由来の、天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。そのような天然配列のポリペプチドは天然から単離することができるか、あるいは組換えまたは合成手段によって製造することができる。用語天然配列のポリペプチドは、具体的には、当該ポリペプチドの天然に存在する短縮形態または分泌形態例えば、細胞外ドメイン配列、当該ポリペプチドの天然に存在する改変体形態例えば、可変スプライシングされた形態および天然に存在する対立遺伝子改変体を含む。ポリペプチド改変体は、対応する天然配列のポリペプチドに対して少なくとも約80アミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチド、またはそのフラグメントを意味する。そのような改変体は、例えば、1以上のアミノ酸残基が当該ポリペプチドのN-および/またはC末端において付加されているか、または欠失されているポリペプチドを含む。通常、改変体は、天然配列のポリペプチド、またはそのフラグメントに対して少なくとも約80アミノ酸配列同一性、または少なくとも約90アミノ酸配列同一性、または少なくとも約95以上のアミノ酸配列同一性を有するであろう。本明細書中で用いる用語ANGPTL4改変体とは、前記した改変体および/または天然ANGPTL4配列において1以上のアミノ酸突然変異を含むANGPTL4を言う。所望により、1以上のアミノ酸突然変異はアミノ酸置換を含む。本発明で用いられるANGPTL4およびその改変体は、当該分野でよく知られた種々の方法によって調製することができる。ANGPTL4のアミノ酸配列改変体は、ANGPTL4のDNA中の突然変異によって調製することができる。そのような改変体は、例えば、ANGPTL4のアミノ酸配列例えば、ATCC受託番号209284下で寄託されたか、あるいは図2に示される、核酸によってコードされたヒトアミノ酸配列内での残基の欠失、残基の挿入、または残基の置換を含む。欠失、挿入、および置換のいずれの組み合わせを、所望の活性を有する最終的構築体に至るように作製し得る。改変体をコードするDNAにより作製される突然変異は、配列をリーディングフレームから外してはならず、好ましくは、二次的なmRNA構造を生じるかも知れない相補的領域を生じさせないものである。EP75,444A。ANGPTL4改変体は、所望により、天然ANGPTL4をコードするDNAにおけるヌクレオチドの部位特異的突然変異誘発、またはファージ提示技術によって調製され、それにより、改変体をコードするDNAが生じ、その後、組換え細胞培養においてDNAを発現させる。アミノ酸配列変異を導入するための部位は予め決定されるが、突然変異それ自体は予め決定される必要はない。例えば、所定の部位における突然変異の性能を最適化するためには、標的コドンまたは領域においてランダムな突然変異誘発を行うことができ、発現されたANGPTL4改変体を、所望の活性の最適な組み合わせについてスクリーニングすることができる。例えば、部位特異的突然変異誘発のような、公知の配列を有するDNA中の所定の部位において置換突然変異を行うための技術はよく知られている。本明細書中に記載されたANGPTL4改変体の調製は、PCT公開WO00/63380に記載されたようなファージ提示技術によって達成することができる。そのようなクローンを選択した後、突然変異したタンパク質領域を取り出し、タンパク質生産のための適当なベクター、一般には、適当な宿主の形質転換で使用することができるタイプの発現ベクターに入れることができる。アミノ酸配列の欠失は、一般には、約1~30残基、所望により1~10の残基、所望により1~5以下の残基の範囲であり、典型的には、連続している。アミノ酸配列の挿入は、本質的に制限されていない長さのポリペプチドへの1つの残基のアミノおよび/またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。配列内挿入すなわち、天然ANGPTL4配列内の挿入は、一般には、約1~10残基、所望により1~5残基、または所望により1~3残基の範囲とすることができる。末端挿入の例は、組換え宿主からの分泌を促進するための、N-末端に対する、宿主細胞に対して同種または異種であるかを問わず、シグナル配列の融合を含む。さらなるANGPTL4改変体は、天然ANGPTL4における少なくとも1つのアミノ酸残基が除去され、異なる残基がその箇所に挿入されたものである。本発明の1つの実施形態において、ANGPTL4改変体は、ANGPTL4の162および/または164での置換、およびmANGPTL4の169での置換を含む。そのような置換は、表1に示されたものに従ってなすことができる。ANGPTL4改変体は、本明細書中に記載された非天然アミノ酸を含むこともできる。アミノ酸は、それらの側鎖の特性における類似性に従ってグループ分けすることができるA.L.Lehninger,Biochemistry,第二版,頁73-75,WorthPublishers,NewYork1975:1非極性:AlaA,ValV,LeuL,IleI,ProP,PheF,TrpW,MetM2非荷電極性:GlyG,SerS,ThrT,CysC,TyrY,AsnN,GlnQ3酸性:AspD,GluE4塩基性:LysK,ArgR,HisH別法として、天然に存在する残基は共通の側鎖特性に基づいグループに分けることができる:1疎水性:ノルロイシン、Met,Ala,Val,Leu,Ile;2中性親水性:Cys,Ser,Thr,Asn,Gln;3酸性:Asp,Glu;4塩基性:His,Lys,Arg;5鎖の向きに影響する残基;Gly,Pro;6芳香族:Trp,Tyr,Phe.天然に存在するアミノ酸残基すなわち、遺伝暗号によってコードされたアミノ酸残基は:アラニンAla;アルギニンArg;アスパラギンAsn;アスパラギン酸Asp;システインCys;グルタミンGln;グルタミン酸Glu;グリシンGly;ヒスチジンHis;イソロイシンIle:ロイシンLeu;リシンLys;メチオニンMet;フェニルアラニンPhe;プロリンPro;セリンSer;スレオニンThr;トリプトファンTrp;チロシンTyr;およびバリンValよりなる群から選択することができる。天然に存在しないアミノ酸残基とは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基に共有結合することができる、先に列挙した天然に存在するアミノ酸残基以外の残基をいう。天然に存在しないアミノ酸残基の例は、例えば、ノルロイシン、オルニチン、ノルバリン、ホモセリン、およびEllmanら、Meth.Enzym.202:301-3361991、および米国特許出願公開20030108885および20030082575に記載されたもののような他のアミノ酸残基アナログを含む。簡単に述べれば、これらの手法は、天然に存在しないアミノ酸残基でのサプレッサーtRNAの活性化、続いて、RNAのインビトロまたはインビボ転写および翻訳を含む。例えば、米国特許出願公開20030108885および20030082575;Norenら、Science244:1821989;およびEllmanら、上記を参照のこと。本明細書でのパーセントアミノ酸配列同一性とは、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性を達成させた後に、選択された配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージと定義され、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しない。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的での整列は、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2またはMegalignDNASTARソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて、当該分野の技術範囲内にある種々の方法で達成することができる。当業者であれば、比較すべき配列の全長にわたって最大限の整列を達成するのに必要とされるあらゆるアルゴリズムを含む、整列を測定するための適当なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的では、アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムALIGN-2を用いることによって以下に記載するように得られる。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムはGenentech,Inc.によって著され、これは使用者書面userdocumentationとともに合衆国著作権局U.S.CopyrightOffice、WashingtonD.C.,20559に提出されて、合衆国著作権登録番号TXU510087の下で登録されており、Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,Californiaを通じて公に入手可能である。ALIGN-2プログラムはUNIX登録商標オペレーティングシステム、例えば、デジタルUNIX登録商標V4.0Dで用いるために編集されなければならない。全ての配列比較パラメータはALIGN-2プログラムによって設定され、変動しない。本明細書の目的のために、所定のアミノ酸配列Bとの、またはそれに対する所定のアミノ酸配列A所定のアミノ酸配列Bとの、またはそれに対するあるアミノ酸配列同一性を有するか、またはそれを含む所定のアミノ酸配列Aと代わりに言うこともできるのアミノ酸配列同一性は、以下のように計算される:率X/Yの100倍。ここで、Xは、AとBとのプログラムによる整列における配列整列プログラムALIGN-2の同一マッチとしてスコア付けされるアミノ酸残基の数であり、YはBのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと同等でない場合、Bに対するAのアミノ酸配列同一性はAに対するBのアミノ酸配列同一性と等しくないことが認識されるであろう。単離されたポリペプチドはその天然環境の成分から同定、分離および/または回収されたものである。その天然環境の混入成分は、ポリペプチドに関する診断使用または治療使用に干渉する物質であり、それとしては酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられ得る。ある実施形態において、ポリペプチドは1Lowry方法によって決定されるポリペプチドの95重量より高くか、もしくは99重量より高くか、2回転カップspinningcup配列決定装置を使用して、N-末端または内部アミノ酸配列の少なくとも15残基を得るのに十分な程度までか、または3クーマシーブルーまたは銀染色を用いる還元または非還元条件下でのSDS-PAGEによる均質性まで精製される。単離されたポリペプチドとしては、組換え細胞内のインサイチュのポリペプチドが挙げられる。なぜなら、ポリペプチドの天然環境の少なくとも1つの成分は存在しないからである。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチドは少なくとも1つの精製工程によって調製される。用語ANGPTL4モジュレーターとは、ANGPTL4またはその発現を活性化できる分子例えば、アゴニスト、あるいはANGPTL4の活性またはその発現を阻害することができる分子例えば、アンタゴニストまたは阻害剤をいう。ANGPTL4アゴニストは抗体および活性なフラグメントを含む。ANGPTL4アンタゴニストとは、ANGPTL4の活性例えば、ANGPTL4受容体例えば、αvβ5へのその結合を含む、細胞の増殖または成長、移動、接着または代謝例えば、脂質変調、またはその発現の中和、ブロック、阻害、妨害、低下、またはそれに対する干渉を可能とする分子をいう。ANGPTL4アンタゴニストとしては、例えば、抗ANGPTL4抗体およびその抗原-結合フラグメント、受容体分子、およびANGPTL4に特異的に結合し、それにより、1以上の受容体へのその結合を隔離する誘導体、抗ANGPTL4受容体抗体、および受容体の低分子阻害剤のようなANGPTL4受容体アンタゴニストが挙げられる。他のANGTPL4アンタゴニストはANGPTL4のアンタゴニスト改変体、アンチセンス分子例えば、ANGPTL4-SiRNA、RNAアプタマー、およびANGPTL4またはその受容体に対するリボザイムも含む。ある実施形態において、アンタゴニストANGPTL4抗体は、ANGPTL4の特異的サブ配列または領域、例えば、ヒトアンジオポエチン様4タンパク質のN-末端フラグメント、コイルドコイルドメイン、C末端フラグメント、フィブリノーゲン様ドメイン、アミノ酸1~183、23~183、1~約162、23~約162、23~406、184~406、約162~406または23~184、およびマウスアンジオポエチン様4タンパク質のアミノ酸1~183、23~183、1~約165、23~約165、23~410、または184~410へ結合することによってANGPTL4の活性を阻害し、または低下させる抗体である。他のサブ配列は、限定されるものではないが、例えば、hANGPTL4の40-183,60-183,80-183,100-183,120-183,140-183,40-406,60-406,80-406,100-406,120-406,140-406,および160-406ならびに、例えば、mANGPTL4の40-183,60-183,80-183,100-183,120-183,140-183,40-410,60-410,80-410,100-410,120-410,140-410および160-410も含む。ANGPTL4のモジュレーターは、ANGPTL4の活性を変調する分子、例えば、アゴニストおよびアンタゴニストである。用語アゴニストは、ANGPTL4のペプチドおよび非ペプチドアナログ、およびそのようなANGPTL4分子に特異的に結合する抗体をいうのに用いられ、但し、それらは天然ANGPTL4受容体例えば、αvβ5インテグリンを通じてシグナル伝達する能力を有する。用語アゴニストは、ANGPTL4受容体例えば、αvβ5の生物学的役割の文脈で定義される。ある実施形態においては、アゴニストは、細胞の増殖、移動および/または接着の促進、および/または脂質ホメオスタシスの変調のような、先に定義される天然ANGPTL4の生物学的活性を保有する。用語アンタゴニストは、それらがANGPTL4またはその受容体、例えば、αvβ5に結合する能力を有するか否かに拘らず、ANGPTL4の生物学的活性を阻害する能力を有する分子をいうのに用いられる。例えば、ANGPTL4またはその受容体に結合する能力を有するアンタゴニストは抗ANGPTL4抗体および抗αvβ5抗体を含む。ANGPTL4の発現を阻害するアンタゴニスト、例えば、ANGPTL4-SiRNAが含まれる。アンタゴニストANGPTL4は、例えば、ANGPTL4の活性、例えば、接着、移動、増殖、および/またはANGPTL4の脂質ホメオスタシス活性の変調を阻害することによって評価することができる。αvβ5インテグリン受容体活性に関してαvβ5インテグリン受容体のモジュレーターは、当該分野で知られた方法によって測定することができる。例えば、J.Biol.Chem.265:12267-122711990中でJ.W.Smithら、によって記載された方法を用いることができる。用語抗ANGPTL4抗体は、十分な親和性および特異性でANGPTL4に結合する抗体である。本発明のある実施形態において、本発明の抗ANGPTL4抗体は、ANGPTL4活性が関与する疾患または状態を標的とし、それに干渉する治療剤として用いることができる。一般に抗ANGPTL4抗体は、通常は、他のANGPTL4ホモログ、例えば、ANGPTL3に結合しない。用語抗体は最も広い意味で用いられ、所望の生物学的活性を呈する限り、全長またはインタクトなモノクローナル抗体を含めたモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、多重特異性抗体例えば、二重特異性抗体、および抗体フラグメント以下参照を含む。特記しない限り、表現多価抗体は、本明細書を通じて、3以上の抗原結合部位を含む抗体を示すのに用いられる。多価抗体は、典型的には、3以上の抗原結合部位を有するように設計され、一般には、天然配列のIgMでもIgA抗体でもない。抗体フラグメントは、インタクトな抗体の一部のみを含み、これとしては、一般には、インタクトな抗体の抗原結合部位が挙げられ、したがって抗原に結合する能力を保有する。本定義に含まれる抗体フラグメントの例は:iVL、CL、VHおよびCH1ドメインを有するFabフラグメント;iiCH1ドメインのC末端において1以上のシステイン残基を有するFabフラグメントであるFab’フラグメント;iiiVHおよびCH1ドメインを有するFdフラグメント;ivVHおよびCH1ドメイン、およびCH1ドメインのC末端の1以上のシステイン残基を有するFd’フラグメント;v抗体の片方のアームarmのVLおよびVHドメインを有するFvフラグメント;viVHドメインよりなるdAbフラグメントWardら、Nature341,544-5461989;vii単離されたCDR領域;viiiヒンジ領域におけるジスルフィドブリッジによって連結された2つのFab’フラグメントを含む二価フラグメントであるFab’2フラグメント;ix単一鎖抗体分子例えば、単一鎖Fv;scFvBirdら、Science242:423-4261988;およびHustonら、PNASUSA85:5879-58831988;x同一ポリペプチド鎖中の軽鎖可変ドメインVLに連結された重鎖可変ドメインVHを含む、2つの抗原結合部位を有するダイアボディdiabody例えば、EP404,097;WO93/11161;およびHollingerら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-64481993参照;xi相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって抗原結合領域の一部を形成するタンデムFdセグメントVH-CH1-VH-CH1の対を含む直線状抗体linearantibodyZapataら、ProteinEng.810:105710621995;および米国特許第5,641,870号を含む。本明細書中で用いられる用語モノクローナル抗体とは、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体をいい、すなわち、該集団を構成する個々の抗体は少量で存在し得る可能な天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一抗原に対して向けられる。さらに、異なる決定基エピトープに対して向けられた異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に各モノクローナル抗体は抗原上の単一決定基に対して向けられる。修飾語モノクローナルは、任意の特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って用いるべきモノクローナル抗体はKohlerら、Nature256:4951975によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作製することができるか、あるいは、組換えDNA方法によって作製することができる例えば、米国特許第4,816,567号参照。モノクローナル抗体は、例えば、Clacksonら、Nature352:624-6281991またはMarksら、J.Mol.Biol.222;581-5971991に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリから単離することもできる。本明細書において、モノクローナル抗体は、具体的には、重鎖および/または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であり、他方、該鎖の残りは別の種に由来するか、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるキメラ抗体、ならびに所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体フラグメントを含む米国特許第4,816,567号;およびMorrisonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-68551984。非ヒト例えば、マウス抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類のような非ヒト種ドナー抗体の超可変領域由来の残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリンレシピエント抗体である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域FR残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含むことができる。これらの改変は、抗体性能をさらに精巧化するようになされる。一般に、ヒト化抗体は少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの全てを実質的に含み、この超可変ループの全てまたは実質的な全ては非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、FRの全てまたは実質的な全てはヒト免疫グロブリン配列のそれである。ヒト化抗体は、所望により、免疫グロブリン定常領域Fc、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれの少なくとも一部も含むであろう。さらなる詳細については、Jonesら、Nature321:522-5251986;Riechmannら、Nature332:323-3291988;およびPresta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-5961992参照。ヒト抗体は、ヒトによって産生される抗体のそれに対応するアミノ酸配列を保有し、および/または本明細書中に開示されたヒト抗体を作製する技術のいずれかを用いて作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を排除する。ヒト抗体は、当該分野で知られた種々の技術を用いて産生することができる。1つの実施形態において、ヒト抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリから選択されるVaughanら、NatureBiotechnology14:309-3141996;Sheetsら、PNASUSA95:6157-61621998;HoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksら、J.Mol.Biol.,222:5811991。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的にか、または完全に不活化されているマウスに導入することによって作製することもできる。抗原投与に際して、ヒト抗体産生が観察されており、これは、遺伝子再編成、アセンブリー、および抗体レパートリーを含めて、全ての点においてヒトで観察されるものと酷似している。このアプローチは、例えば、米国特許第5,545,807号;第5,545,806号;第5,569,825号;第5,625,126号;第5,633,425号;第5,661,016号;および以下の科学刊行物:Marksら、Bio/Technology10:779-7831992;Lonbergら、Nature368:856-8591994;Morrison,Nature368:812-131994;Fishwildら、NatureBiotechnology14:845-511996;Neuberger,NatureBiotechnology14:8261996;LonbergandHuszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-931995に記載されている。別法として、ヒト抗体は、標的抗原に対して向けられた抗体を産生するヒトBリンパ球の不死化を介して調製することができるそのようなBリンパ球は個体から回収することができるか、あるいはインビトロで免疫化することができる。例えば、Coleら、MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,p.771985;Boernerら、J.Immunol.,1471:86-951991;および米国特許第5,750,373号参照。用語可変とは、可変ドメインのある部分の配列が抗体の間でかなり異なっている事実をいい、その特定の抗原に関して、各特定の抗体の結合および特異性で用いる。しかしながら、可変性は抗体の可変ドメイン全体に均一に分布しているのではない。それは、軽鎖および重鎖可変ドメイン双方において超可変領域と呼ばれる3つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域FRと呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々、βシート構造を連結し、ある場合にはその部分を形成するループを形成する、3つの超可変領域によって連結された、大まかなβシート立体配置を取る4つのFRを含む。各鎖中の超可変領域はFRによって近接して一緒に保持され、他の鎖由来の超可変領域と共に、抗体の抗原-結合部位の形成に寄与するKabatら、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.1991参照。定常ドメインは、抗体が抗原に結合するのに直接的には関与していないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCにおける抗体の関与のような種々のエフェクター機能を呈する。用語超可変領域は、本明細書中で用いる場合、抗原-結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、一般には、相補性決定領域またはCDR由来のアミノ酸残基例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基24~34L1、50~56L2および89~97L3、および重鎖可変ドメインにおける31~35H1、50~65H2および95~102H3;Kabatら、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.1991および/または超可変ループ由来の残基例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基26~32L1、50~52L2および91~96L3、および重鎖可変ドメインにおける26~32H1、53~55H2および96~101H3;ChothiaandLeskJ.Mol.Biol.196:901~9171987を含む。フレームワーク領域またはFR残基は、ここに定義された超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、インタクトな抗体を異なるクラスに帰属させることができる。インタクトな抗体の5つの主なクラス:IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMがあり、これらのいくつかはさらにサブクラスイソタイプ、例えば、IgG1非AおよびAアロタイプを含む、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、およびIgA2に分けることができる。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、各々、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニットの構造および三次元立体配置はよく知られている。任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ6およびλ8と呼ばれる2つの明瞭に区別されるタイプの1つに帰属させることができる。用語Fc領域は、インタクトな抗体のパパイン消化によって生じさせることができる免疫グロブリン重鎖のC末端領域を規定するのに用いられる。Fc領域は、天然配列Fc領域または改変体Fc領域であり得る。免疫グロブリン重鎖のFc領域の境界は変化し得るが、ヒトIgG重鎖Fc領域は、通常、およそ位置Cys226または位置Pro230におけるアミノ酸残基から、Fc領域のカルボキシル-末端に延びると定義される。免疫グロブリンのFc領域は、一般には、2つの定常領域、CH2ドメインおよびCH3ドメインを含み、所望により、CH4ドメインを含む。Fc領域鎖とは、本明細書中においては、Fc領域の2つのポリペプチド鎖のうちの1つを意味する。ヒトIgGFc領域のCH2ドメインCg2ドメインとも呼ばれるは、通常、およそ位置231におけるアミノ酸残基から、およそ位置340におけるアミノ酸残基まで広がる。CH2ドメインは、それがもう1つのドメインと密接にペアを形成しない点でユニークである。むしろ、2つのN結合型分岐炭水化物鎖は、インタクトな天然IgG分子の2つのCH2ドメインの間に位置する。炭水化物はドメイン-ドメイン対合のための代替物を提供することができ、CH2ドメインの安定化に役立つことができると推測されている。Burton,Molec.Immunol.22:161-2061985。CH2ドメインは、本明細書中においては、天然配列CH2ドメインまたは改変体CH2ドメインであり得る。CH3ドメインは、Fc領域におけるCH2ドメインに対してC末端側である残基のストレッチを含むすなわち、IgGのおよそ位置341におけるアミノ酸残基から、およそ位置447におけるアミノ酸残基。CH3領域は、本明細書中においては、天然配列CH3ドメインまたは改変体CH3ドメイン例えば、その1つの鎖における導入されたプロトロベランスprotroberanceおよびその他の鎖に導入された対応するキャビティcavityを有するCH3ドメイン;本明細書において、参考として明示的に援用する米国特許第5,821,333号参照であり得る。そのような改変体CH3ドメインを用いて、本明細書中に記載された多重特異性例えば、二特異性抗体を作製することができる。ヒンジ領域は、一般には、ヒトIgG1のおよそGlu216またはCys226から、およそPro230までのストレッチと定義されるBurton,Molec.Immunol.22:161-2061985。他のIgGイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間S-S結合を形成する最初および最後のシステイン残基を同じ位置に置くことによって、IgG1配列と整列させることができる。ヒンジ領域は、本明細書中においては、天然配列ヒンジ領域または改変体ヒンジ領域であり得る。改変体ヒンジ領域の2つのポリペプチド鎖は、一般には、改変体ヒンジ領域の2つのポリペプチド鎖が2つの鎖の間にジスルフィド結合を形成できるように、一本のポリペプチド鎖あたり少なくとも1つのシステイン残基を保有する。好ましいヒンジ領域は、本明細書中においては、天然配列ヒトヒンジ領域、例えば、天然配列ヒトIgG1ヒンジ領域である。機能的Fc領域は、天然配列Fc領域の少なくとも1つのエフェクター機能を保有する。例示的なエフェクター機能はC1q結合;補体依存性細胞傷害CDC;Fc受容体結合;抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCC;ファゴサイトーシス;細胞表面受容体例えば、B細胞受容体;BCRのダウンレギュレーションなどを含む。そのようなエフェクター機能は、一般には、Fc領域が、結合ドメイン例えば、抗体可変ドメインと組み合わせることを必要とし、そのような抗体エフェクター機能を評価するための当該分野で知られた種々のアッセイを用いて評価することができる。天然配列Fc領域は、天然で見出されるFc領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。改変体Fc領域は、少なくとも1つのアミノ酸改変によって、天然配列Fc領域のそれとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、改変体Fc領域は、天然配列Fc領域と、または親ポリペプチドのFc領域と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換例えば、天然配列Fc領域または親ポリペプチドのFc領域における、約1~約10アミノ酸置換、好ましくは、約1~約5アミノ酸置換を有する。改変体Fc領域は、本明細書中においては、例えば、天然配列Fc領域および/または親ポリペプチドのFc領域に対して少なくとも約80配列同一性、またはそれらに対して少なくとも約90配列同一性、あるいはそれらに対して少なくとも約95配列またはそれ以上の同一性を典型的には保有する。抗体依存性細胞媒介性細胞傷害およびADCCとは、Fc受容体FcRを発現する非特異的細胞傷害性細胞例えば、ナチュラルキラーNK細胞、好中球、およびマクロファージが標的細胞上の結合した抗体を認識し、引き続いて、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応をいう。ADCCを媒介するための初代細胞、NK細胞は、FcγRIIIのみを発現し、他方、単球はFcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIを発現する。造血系細胞上でのFcR発現は、RavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol9:457-921991の464ページの表3にまとめられている。目的の分子のADCC活性を評価するためには、米国特許第5,500,362号または第5,821,337号に記載されたもののようなインビトロADCCアッセイを行うことができる。そのようなアッセイで有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞PBMCおよびナチュラルキラーNK細胞を含む。別法として、あるいは加えて、目的の分子のADCC活性は、例えば、Clynesら、PNASUSA95:652-6561998に開示されたもののような動物モデルにおいて、インビボで評価することができる。ヒトエフェクター細胞は、1以上のFcRを発現し、エフェクター機能を行う白血球である。典型的には、該細胞は少なくともFcγRIIIを発現し、ADCCエフェクター機能を行う。ADCCを媒介するヒト白血球の例は末梢血単核細胞PBMC、ナチュラルキラーNK細胞、単球、細胞傷害性T細胞および好中球を含み;PBMCおよびNK細胞が一般には好ましい。エフェクター細胞はその天然源から、例えば、本明細書中に記載された血液またはPBMCから単離することができる。用語Fc受容体およびFcRは、抗体のFc領域に結合する受容体を記載するのに用いられる。好ましいFcRは天然配列ヒトFcRである。さらに、好ましいFcRは、IgG抗体γ受容体に結合するものであり、対立遺伝子改変体およびこれらの受容体の可変スプライシングされた形態を含めた、FcγRI、FcγRII、およびFcγRIIIサブクラスの受容体を含む。FcγRII受容体はFcγRIIA活性化受容体およびFcγRIIB阻害受容体を含み、これらは類似のアミノ酸配列を有するが、その細胞質ドメインにおいて主に異なる。活性化受容体FcγRIIAは、その細胞質ドメインにおいて免疫受容体チロシン-ベースの活性化モチーフITAMを含有する。阻害受容体FcγRIIBは、その細胞質ドメインにおいて免疫受容体チロシン-ベースの阻害モチーフITIMを含有するDaeron,Annu.Rev.Immunol.15:203-2341997で概説されている。FcRはRavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol9:457-921991;Capelら、Immunomethods4:25-341994;およびdeHaasら、J.Lab.Clin.Med.126:330-411995に概説されている。将来同定されるものを含めた他のFcRは本明細書中においては用語FcRに含まれる。該用語は、母親のIgGの胎児への移動を担う新生児受容体FcRnも含むGuyerら、J.Immunol.117:5871976;およびKimら、J.Immunol.24:2491994。補体依存性細胞傷害およびCDCとは、補体の存在下における標的の溶解をいう。補体活性化経路は、同起源の抗原と複合体化した分子例えば、抗体への、補体系の第一の成分C1qの結合によって開始される。補体活性化を評価するためには、例えば、Gazzano-Santoroら、J.Immunol.Methods202:1631996に記載されたCDCアッセイを行うことができる。用語イムノアドヘシンとは、異種タンパク質の結合特異性を、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能と組み合わせる抗体様分子付着分子をいう。構造的には、イムノアドヘシンは、抗体の抗原認識および結合部位以外であるすなわち、異種である所望の結合特異性を有するアミノ酸配列、および免疫グロブリン定常ドメイン配列の融合体を含む。イムノアドヘシン分子の付着分子の部分は、典型的には、受容体またはリガンドの少なくとも結合部位を含む、連続するアミノ酸配列である。イムノアドヘシンにおける免疫グロブリン定常ドメイン配列は、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4サブタイプ、IgAIgA1およびIgA2を含む、IgE、IgDまたはIgMのような任意の免疫グロブリンから得ることができる。本発明の目的での活性なまたは活性とは、天然または天然に存在するANGPTL4の生物学的および/または免疫学的活性を保有するANGPTL4の形態をいい、生物学的活性は、天然または天然に存在するANGPTL4によって保有される抗原性エピトープに対する抗体の産生を誘導する能力以外の天然または天然に存在するANGPTL4によって引き起こされる生物学的作用阻害性作用または刺激性作用のいずれかをいい、免疫学的活性とは、天然または天然に存在するANGPTL4によって保有される抗原性エピトープに対する抗体の産生を誘導する能力をいう。親和性成熟化抗体は、改変を保有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の改良をもたらすその1以上のCDRにおける1以上の改変を有するものである。好ましい親和性成熟化抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはピコモル濃度までの親和性を有する。親和性成熟化抗体は、当該分野で知られた手法によって産生される。Marksら、Bio/Technology10:779-7831992は、VHおよびVLドメインシャフリングshufflingによる親和性成熟化を記載する。CDRおよび/またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、Barbasら、Proc.Nat.Acad.Sci,USA91:3809-38131994;Schierら、Gene169:147-1551995;Yeltonら、J.Immunol.155:1994-20041995;Jacksonら、J.Immunol.1547:3310-91995;およびHawkinsら、J.Mol.Biol.226:889-8961992によって記載されている。抗体の機能的抗原結合部位は、標的抗原に結合することができるものである。抗原結合部位の抗原結合親和性は、抗原結合部位が由来する親抗体と必ずしも同程度に強くはないが、抗原に結合する能力は、抗原への抗体の結合を評価するための公知の種々の方法のいずれか1つを用いて測定可能であるはずである。さらに、多価抗体の抗原結合部位の各々の抗原結合親和性は、本明細書中においては、定量的に同一である必要はない。本明細書中におけるマルチマー抗体では、機能的抗原結合部位の数は、超遠心分離分析を用いて評価することができる。分析のこの方法に従えば、マルチマー抗体に対する標的抗原の異なる比率を組み合わせ、複合体の平均分子量は、機能的結合部位の異なる数を前提として計算される。これらの理論的値は、得られた現実の実験値と比較して機能的結合部位の数を評価する。指定の抗体の生物学的特徴を有する抗体は、それを、同一抗原に結合する他の抗体と区別する抗体の生物学的特徴を1以上保有するものである。目的の抗体によって結合された抗原上のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするためには、Antibodies,ALoboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlowandDavidLane1988に記載されたもののような慣用的な交差ブロッキングアッセイを行うことができる。ポリペプチド鎖は、非共有結合性の相互作用ともジスルフィド結合とも異なり、そのドメインの各々がペプチド結合によって他のドメインに連結されるポリペプチドである。フレキシブルリンカーは、本明細書中においては、ペプチド結合によって連結された2以上のアミノ酸残基を含むペプチドをいい、それにより連結された2つのポリペプチド例えば、2つのFd領域へより大きな回転自由度を提供する。そのような回転自由度により、フレキシブルリンカーによって連結された2以上の抗原結合部位が、各々、より効果的に標的抗原に接近するのが可能となる。適当なフレキシブルリンカーペプチド配列の例は、gly-ser、gly-ser-gly-ser、ala-ser、およびgly-gly-gly-serを含む。二量体化ドメインは、少なくとも2つのアミノ酸残基一般には、システイン残基、または同一、または異なるアミノ酸配列を有し得る少なくとも2つのペプチドまたはポリペプチドの会合によって形成される。ペプチドまたはポリペプチドは、共有結合および/または非共有結合を通じて相互作用することができる。二量体化ドメインの例は、本明細書中においては、Fc領域;ヒンジ領域;CH3ドメイン;CH4ドメイン;CH1-CL対;米国特許第5,821,333号本明細書において、参考として明示的に援用されるに記載された、操作されたノブknobおよび/またはプロトルベランスprotruberanceとの境界面;ロイシンジッパー例えば、jun/fosロイシンジッパー、Kostelneyら、J.Immunol.,148:1547-15531992参照;または酵母GCN4ロイシンジッパー;イソロイシンジッパー;受容体ダイマー対例えば、インターロイキン-8受容体IL-8R;およびLFA-1およびGPIIIb/IIIaのようなインテグリンヘテロダイマー、またはその二量体化領域;ダイマーリガンドポリペプチド例えば、神経成長因子NGF、ニューロトロフィン-3NT-3、インターロイキン-8IL-8、血管内皮成長因子VEGF、VEGF-C、VEGF-D、PDGFメンバー、および脳由来神経栄養因子BDNF;Arakawaら、J.Biol.Chem.26945:27833-278391994およびRadziejewskiら、Biochem.3248:13501993、またはその二量体化領域;ジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基の対;各々が、ジスルフィド結合をペプチドまたはポリペプチドの間で形成できるように少なくとも1つのシステイン残基例えば、約1、2または3~約10システイン残基を含むペプチドまたはポリペプチドの対以下、合成ヒンジ;および抗体可変ドメインを含む。最も好ましい二量体化ドメインは、本明細書中においては、Fc領域またはヒンジ領域である。句細胞の増殖を刺激するは、インビトロまたはインビボのいずれかにおいて、未処理細胞または処理を減らした細胞と比較して、細胞の成長および/または再生の程度を増加させる工程を含む。細胞培養における細胞増殖の増大は、目的の分子への曝露の前および後において細胞の数をカウントすることによって検出することができる。増殖の程度は、密集の程度の顕微鏡観察を介して定量することができる。細胞増殖は、当該分野で知られたアッセイ、例えば、チミジン取り込みアッセイ、および市販のアッセイを用いて定量することもできる。句細胞の増殖を阻害するは、インビトロまたはインビボのいずれかにおいて、未処理細胞または処理を減らした細胞と比較して、細胞の成長および/または再生の程度を減少させる工程を含む。それは前記したように定量することができる。1以上のさらなる治療剤と組み合わせた投与は、同時並行および/またはいずれかの順序での連続投与を含む。治療の目的での被験体は任意の動物をいう。一般には、動物は哺乳動物である。治療の目的での哺乳動物とは、哺乳動物として分類される任意の動物をいい、ヒト、家畜および農場動物、およびイヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタなどのような動物園、スポーツまたはペット動物を含む。典型的には、哺乳動物はヒトである。本明細書中で用いるように、用語緩和するまたは緩和とは、異常または症状を含めた、状態、疾患、障害または表現型の減少、低下または排除をいう。障害は、本発明の分子での治療から利益を受けるであろういずれかの状態である。これは、問題とする障害に対して被験体が罹りやすい病理学的状態を含めた慢性および急性の障害または疾患を含む。用語有効量または治療有効量とは、被験体において疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量をいう。処置とは、治療的処置および予防的または防止的手段の両方をいう。処置を必要とするものは、既に障害を有するもの、ならびに障害を予防すべきものを含む。本明細書中で用いるように、肥大は、腫瘍形成を伴わない、ネイティブな成長とは独立した器官または構造の質量の増加と定義される。器官または組織の肥大は、個々の細胞の質量の増加真の肥大、または組織をなす細胞の数の増加過形成のいずれか、または両方に起因する。例えば、脂肪細胞の肥大成長は、脂質蓄積によって刺激される脂肪細胞のサイズの増加である。脂肪細胞の過形成成長は、脂肪組織における脂肪細胞の数の増加である。句心血管および内皮障害、心血管および内皮機能障害および心血管、内皮または脈管形成障害は交換可能に用いられ、典型的には、脈管形成および/または心血管形成を刺激する全身性の障害をいう。これは、血管に影響する疾患、ならびに動脈、毛細血管、静脈および/またはリンパ管のような血管それ自体の疾患を含む。そのような障害は、限定されるものではないが、例えば、アテローム性動脈硬化症、真性糖尿病、高血圧、炎症性脈管炎、レーノルド病およびレーノルド現象、動脈瘤、および動脈再狭窄のような動脈疾患;血栓性静脈炎、リンパ管炎、およびリンパ浮腫のような静脈およびリンパ管障害;血管腫瘍、例えば、血管腫毛細血管および空洞性、糸球腫瘍、毛細血管拡張症、棹状血管腫症、血管内皮腫、血管肉腫、血管周囲細胞腫、カポシ肉腫、リンパ管腫およびリンパ管肉腫のような癌;腫瘍脈管形成;ならびに末梢血管病、外傷例えば、創傷、火傷および他の傷害組織、インプラント固定、瘢痕、虚血性再灌流損傷、慢性関節リウマチ、脳血管疾患、腎臓病例えば、急性腎不全のような他の血管障害;発作、冠動脈病、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、および/または骨粗しょう症を含む。これはアンギナ、急性心筋梗塞のような心筋梗塞、心臓肥大、およびうっ血性心不全CHFのような心不全を含むであろう。例えば、限定されるものではないが、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈病、肥満、糖尿病等を含めた、異脂肪血症dyslipidemiaに伴う心血管疾患も含まれる。用語脂質ホメオスタシス障害は、脂質代謝の異常な調節例えば、アップレギュレーションまたはダウンレギュレーションに関連するか、それに起因するか、および/またはそれに伴う障害、疾患または状態を含む。脂質ホメオスタシス障害は、異常な脂肪分解、異常な脂質取り込み、異常な脂質合成および/または分泌、異常な細胞内脂質放出および/または代謝回転、異常な細胞内トリグリセリド放出および/または代謝回転、異常な細胞内脂質および/またはトリグリセリドの量、および/または細胞、例えば、肝臓細胞内の、またはそれらからの異常に分泌された脂質および/またはトリグリセリドの量に起因し得るか、あるいはそれに関連し得る。脂質ホメオスタシス障害は、限定されるものではないが、アテローム性動脈硬化症、肥満、肥満に関連する状態、糖尿病、インスリン耐性、高脂血症、低脂血症、異脂肪血症、高コレステロール血症、低コレステロール血症、トリグリセリド貯蔵疾患、心血管疾患、冠動脈疾患、高血圧、発作、体重過剰、食欲不振、悪液質、高リポタンパク質血症、低リポタンパク質血症、ニーマンピック病、高トリグリセリド血症、低トリグリセリド血症、膵臓炎、汎発性特発性骨増殖症DISH、アテローム発生性リポタンパク質表現型ALP、癲癇、肝臓病、脂肪肝、脂肪肝炎、多嚢胞卵巣症候群、癌等を含む。用語脂質代謝障害とは、コレステロールおよびトリグリセリドの異常な臨床化学レベルをいう。用語高脂肪血症または高脂血症とは、正常な血清脂質レベルよりも高いレベルである状態をいう。血清脂質はコレステロールエステルおよび遊離、リポタンパク質、トリグリセリド、遊離脂肪酸および他のステロールを含む。1つの態様において、これらの脂質の増大したレベルはアテローム性動脈硬化症に対する指標である。用語肥満とは、哺乳動物が、少なくとも25.9の、体重kg/身長2メートル2として計算されるボディマス指数BMIを有する状態をいう。通常、正常な体重を有する個人は19.9~25.9未満のBMIを有する。肥満は、本明細書中においては、遺伝的または環境的を問わず、あらゆる原因に起因し得る。肥満をもたらし得る、または肥満の原因となり得る障害の例は、例えば、限定されるものではないが、過食および過食症、多嚢胞卵巣病、頭蓋咽頭腫、プラーダー-ヴィリー症候群、フローリッヒ症候群、II型糖尿病、GH-欠乏被験体、正常な変種の低身長、ターナー症候群、および代謝活性の低下、または脂肪を含まない総質量のパーセンテージとしての休止時のエネルギー消費の減少を示す他の病理学的状態、例えば、急性リンパ芽球白血病を有する小児を含む。肥満-決定特性は脂肪細胞および組織例えば、脂肪パッド、合計体重、筋肉、肝臓および脂肪におけるトリグリセリドレベル、ならびに血液中のレプチン、遊離脂肪酸およびトリグリセリドの空腹時レベルおよび非空腹時レベルを含む。用語肥満に関連する状態とは、限定されるものではないが、感染のような皮膚科学的障害、静脈瘤、黒色表皮腫、および湿疹、運動非耐性、真性糖尿病、インスリン耐性、高血圧、高コレステロール血症、胆石症、骨関節炎、整形外科的傷害、血栓塞栓症、癌例えば、乳癌、結腸癌、前立腺癌等、および冠動脈または心血管心臓疾患、被験体において高トリグリセリドおよび遊離脂肪酸に関連する特定の心血管状態のような、肥満の結果であるか、またはそれによって悪化する状態をいう。肥満は、西側世界における中年人口の推定30~50に影響する体重障害の最も流行しているものである。あわせて西側世界の女性人口のほぼ0.2に影響する、神経性食欲不振および神経性過食症のような他の体重障害もまた健康に深刻な脅威を与える。さらに、食欲不振および悪液質るいそうのような障害もまた、癌、嚢胞性線維症、およびAIDSのような他の疾患の顕著な特徴である。用語るいそう障害例えば、るいそう症候群、悪液質、サルコペニアとは、体重の望ましくない減少および/または不健康な減少または体細胞質量の減少に起因する障害をいう。高齢者ならびにAIDS患者および癌患者においては、消耗病の結果、脂肪および脂肪を含まない区画の両方を含む体重の望ましくない減少が起こり得る。消耗病は、食物の不適切な摂取および/または疾患に関連する代謝の変化および/または老化のプロセスの結果であり得る。癌患者およびAIDS患者、ならびに重大な外科的処置後の患者、または慢性感染、免疫疾患、甲状腺機能亢進症、小腸外クローン病、精神病、慢性心不全または他の重度の外傷を有する患者は、頻繁に消耗病時折、悪液質、代謝障害および摂食障害ともいわれるにかかる。悪液質は、加えて、過剰代謝および過剰異化によって特徴づけられる。悪液質および消耗病は頻繁に交換可能に用いられて、るいそう状態をいうが、悪液質を、脂肪を含まない質量特に、体細胞質量の減少としてのるいそう症候群から区別する少なくとも一群の研究があるMayer,1999,J.Nutr.1291SSuppl.:256S-259S。老化する個体に影響し得るさらにもう1つのそのような障害であるサルコペニアは、典型的には、筋肉質量の減少によって特徴づけられる。最終段階の上記消耗病は、悪液質またはサルコペニアいずれかに罹った個体において発症し得る。糖尿病は、動物において炭水化物、脂肪およびタンパク質代謝に影響する慢性障害である。糖尿病は成人における失明、腎不全および下肢切断の主な原因であり、心血管疾患および発作に対する主な危険因子である。I型真性糖尿病またはインスリン依存性真性糖尿病IDDMまたは若年発症糖尿病は、糖尿病の全症例のほぼ10を構成する。該疾患は、膵臓のβ細胞によるインスリン分泌機能の進行性喪失によって特徴づけられる。この特徴は、その起源を膵臓病に有する非特発性または二次的糖尿病も有する。I型真性糖尿病は以下の臨床的兆候または症状、例えば、持続的に増大した血漿中グルコース濃度または高脂血症、多尿症;多渇症および/または過食症;網膜障害、腎臓障害および神経障害のような慢性微小血管合併症;ならびに、失明、最終段階の腎臓病、四肢切断および心筋梗塞をもたらし得る高脂血症および高血圧のような大血管macrovascular合併症に関連する。II型真性糖尿病非インスリン依存性真性糖尿病またはNIDDMは、グルコース代謝の調節不全およびインスリン感度障害に関連する代謝障害である。II型真性糖尿病は、通常、成人期に発症し、身体が十分なインスリンを利用または生成することが不可能になることに関連する。標的組織で観察されるインスリン耐性に加えて、II型真性糖尿病に罹った患者は、相対的なインスリン欠乏を有し、すなわち、患者は所定の血漿グルコース濃度に対して予測されるインスリンレベルよりも低いレベルを有する。II型真性糖尿病は以下の臨床的兆候または症状、例えば、持続的に増大した血漿中グルコース濃度または高脂血症、多尿症;多渇症および/または過食症;網膜障害、腎臓障害および神経障害のような慢性微小血管合併症;ならびに、失明、最終段階の腎臓病、四肢切断および心筋梗塞をもたらし得る高脂血症および高血圧のような大血管合併症によって特徴づけられる。インスリン耐性症候群IRS、代謝症候群または代謝症候群Xとも言われる症候群Xは、診断上の冠動脈カテーテル処置のほぼ2において認められる。しばしば体に障害をおこし、それはII型真性糖尿病、および例えば、グルコース耐性障害IGT、空腹時グルコース障害IFG、高インスリン血症、インスリン耐性、異脂肪血症例えば、高トリグリセリド、低HDL、高血圧および肥満を含めた心血管疾患の発症に関する症状または危険因子を示す。免疫学的障害は、限定されるものではないが、例えば、全身性エリテマトーデス;慢性関節リウマチ;若年性慢性関節炎;脊椎関節障害;全身性硬化症強皮症;特発性炎症筋肉障害皮膚筋炎、多発性筋炎;シェーグレン症候群;全身性血管炎;サルコイドーシス;自己免疫溶血性貧血免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症;自己免疫性血小板減少症特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症;甲状腺炎グレーヴズ病、橋本甲状線炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎;真性糖尿病;免疫-媒介性腎臓病糸球体腎炎、管状間隙性腎炎;多発性硬化症、特発性脱髄多発性神経障害またはギヤン-バレー症候群、および慢性炎症性脱髄多発性神経障害のような中枢および末梢神経系の脱髄疾患;感染性肝炎A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、E型肝炎および他の非肝臓向性ウイルス肝炎、自己免疫慢性活性autoimmunechronicactive肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎のような肝胆管疾患;炎症性腸疾患潰瘍性結腸炎:クローン病;グルテン感受性腸症、およびホウィップル病;水泡性皮膚病、多形性紅斑および接触皮膚炎、乾癬を含めた自己免疫性または免疫媒介性皮膚病;喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症およびじんま疹のようなアレルギー疾患;好酸球性肺炎、特発性肺線維症および過敏性肺実質炎のような肺の免疫学的疾患;ならびに/または移植片拒絶および移植片対宿主病を含めた移植関連疾患を含む。発生障害例えば、胚性致死、神経学的障害例えば、開放視野活動openfieldactivityテストの間における応答のような不安の減少、ホームケージ活動homecageactivityテストの間における異常な概日リズム等、眼の異常例えば、網膜異常;および/あるいは骨代謝異常または障害例えば、関節炎、骨粗しょう症、および/または大理石骨病のような他の障害が存在し得る。語標識は、本明細書中で用いる場合には、ポリペプチドに直接的または間接的に結合体化する検出可能な化合物または組成物をいう。標識はそれ自体が検出可能であり例えば、放射性同位体標識または蛍光標識、あるいは酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物または組成物の化学的改変を触媒し得る。単離された核酸分子は、それが通常ポリペプチド核酸の天然源においては会合している少なくとも1つの混入核酸分子から同定および分離された核酸分子である。単離された核酸分子は、それが天然で見出される形態または設定ではない。単離された核酸分子は、従って、それが天然細胞に存在する場合、核酸分子から区別される。しかしながら、単離された核酸分子は、通常はポリペプチドを発現する細胞に含まれた核酸分子を含み、例えば、核酸分子は天然細胞のそれとは異なる染色体位置にある。表現制御配列とは、特定の宿主生物において、作動可能に連結したコード配列の発現に必要なDNA配列をいう。原核生物に適した制御配列は、例えば、プロモーター、所望によりオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核生物細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを利用することが知られている。核酸は、それがもう1つの核酸配列との機能的関係に置かれる場合に作動可能に連結されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのDNAは、もしそれが、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現されるならば、ポリペプチドのためのDNAに作動可能に連結されており;プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響するならば、コード配列に作動可能に連結されており;あるいはリボソーム結合部位は、もしそれが転写を容易にするように位置しているならば、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、作動可能に連結されたは、連結されたDNA配列が連続しており、分泌リーダーの場合には、連続し、かつ読み枠を合わせてあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは連続している必要がない。連結は、便利な制限部位における連結によって達成される。もしそのような部位が存在しないならば、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを、慣用的な実施に従って用いる。本明細書中で用いるように、表現細胞、細胞株および細胞培養物は相互交換可能に用いられ、全てのそのような指定は子孫を含む。かくして、語形質転換体および形質転換された細胞は、初代の被験体細胞、および移行の回数に関連することなくそれに由来する培養物を含む。また、全ての子孫は、計画的または偶発的な突然変異に起因して、DNA含有量において正確には同一ではない可能性があることが理解される。形質転換された元の細胞においてスクリーニングされた同一の機能または生物学的活性を有する突然変異体の子孫が含まれる。区別される指定が意図される場合、文脈からそれは明らかであろう。用語遺伝子とはaANGPTL4をコードするDNA配列を含有する遺伝子、例えば、ATCC寄託番号209284、または図1参照;bANGPTL4アミノ酸配列をコードするいずれかのDNA配列例えば、図2参照、および/あるいは;c本明細書中で開示されたコード配列の相補体にハイブリダイズするいずれかのDNA配列をいう。ある実施形態においては、該用語はコード領域ならびに非コード領域を含み、好ましくは正常な遺伝子発現に必要な全ての配列を含む。用語遺伝子標的化とは、ゲノムDNAのフラグメントが哺乳動物細胞に導入された場合に起こる相同組換えのタイプをいい、そのフラグメントは内因性相同配列に位置し、それと組み換えられる。相同組換えによる遺伝子標的化は、特定のゲノム配列を特別な設計の内因性DNAと置き換えるために組み換えDNA技術を使用する。用語相同組換えとは、2つのDNA分子の間の、または相同ヌクレオチド配列の部位における染色分体の間のDNAフラグメントの交換をいう。用語標的遺伝子あるいは、標的遺伝子配列または標的DNA配列といわれるとは、相同組換えによって改変すべきいずれかの核酸分子、ポリヌクレオチド、または遺伝子をいう。標的配列はインタクトな遺伝子、エクソンまたはイントロン、調節配列または遺伝子の間のいずれかの領域を含む。標的遺伝子は、個体のゲノムDNAにおける特定の遺伝子または遺伝子座の一部を含み得る。ANGPTL4遺伝子の破壊は、ゲノムDNAのフラグメントを内因性相同配列とともに配置し、それらが組み換えられる場合に起こり、該破壊は天然遺伝子またはその部分の欠失、あるいは天然遺伝子中の突然変異であり、あるいは該破壊は天然遺伝子の機能的不活化である。別法として、配列の破壊は、遺伝子捕捉ベクターすなわち、ランダムに挿入された導入遺伝子を含有し、それを発現する非ヒトトランスジェニック動物;例えば、2002年8月20日に発行された米国特許第6,436,707号参照を用いる非特異的挿入不活化によって生成することができる。これらの配列の破壊または改変はDNA配列の挿入、ミスセンス、フレームシフト、欠失または置換、あるいは置き換えまたはそのいずれかの組み合わせを含むことができる。挿入は、動物、植物、真菌、昆虫、原核生物またはウイルス起源のものであり得る全遺伝子の挿入を含む。破壊は、例えば、その生産を部分的または完全に阻害することによって、あるいは正常な遺伝子産物の活性を増強することによって、正常な遺伝子産物を改変することができる。1つの実施形態において、該破壊は完全なnull破壊であり、ANGPTL4遺伝子の有意な発現は存在しない。用語ネイティブな発現とは、野生型マウスに存在する発現レベルでの、ANGPTL4遺伝子によってコードされる全長ポリペプチドの発現をいう。かくして、内因性ANGPTL4遺伝子のネイティブな発現がない破壊とは、哺乳動物の単一細胞、選択された細胞、または細胞の全ての内因性ANGPTL4遺伝子によってコードされるポリペプチドの少なくとも一部の発現の部分的または完全な低下をいう。用語ノックアウトとは、天然遺伝子の機能的不活化;天然遺伝子またはその部分の欠失;または天然遺伝子中の突然変異をもたらすANGPTL4遺伝子の破壊をいう。用語ノック-インとは、マウスオルソログまたは他のマウス遺伝子を、ANGPTL4-コード遺伝子またはその改変体をコードするヒトcDNAで置き換えることをいうすなわち、該破壊の結果、天然マウス遺伝子が天然ヒト遺伝子で置き換えられる。用語構築体とは、標的組織、細胞株または動物に導入すべき人工的に組み立てられたDNAセグメントをいう。典型的には、該構築体は、特に目的の遺伝子または核酸配列、マーカー遺伝子および適当な制御配列を含む。本明細書中で提供されるように、標的化ANGPTL4構築体は、ANGPTL4遺伝子の少なくとも1つの部分に相同なDNA配列を含み、宿主細胞においてANGPTL4遺伝子に破壊を生じさせることができる。用語トランスジェニック細胞とは、遺伝子標的化方法によって完全または部分的に破壊され、修飾され、改変され、または置き換えられたANGPTL4遺伝子をそのゲノム内に含有する細胞をいう。用語トランスジェニック動物とは、本明細書中に記載された方法、あるいは当該分野で他によく知られた方法によって、破壊され、あるいはそうでなければ改変され、または突然変異された特定の遺伝子をそのゲノム内に含有する動物をいう。ある実施形態において、非ヒトトランスジェニック動物は哺乳動物である。1つの実施形態において、哺乳動物はラットまたはマウスのようなげっ歯類である。加えて、トランスジェニック動物はヘテロ接合性動物すなわち、1つの不完全な対立遺伝子および1つの野生型対立遺伝子またはホモ接合性動物すなわち、2つの不完全な対立遺伝子であり得る。胚は、動物の定義内に入ると考えられる。動物の規定は、接合またはその他によるか否かを問わず、および胚が出産に至るか至らないかを問わず、子宮内における胚または胎児の規定を含む。本明細書中で用いるように、用語選択マーカーおよび位置選択マーカーとは、ある条件下で遺伝子を保持する細胞のみが生存および/または成長することを可能とする産物をコードする遺伝子をいう。例えば、導入されたネオマイシン耐性Neor遺伝子を発現する植物および動物細胞は化合物G418に対して耐性である。Neorマーカー遺伝子を保持しない細胞はG418によって死滅させられる。他の陽性選択マーカーは当業者に知られているか、あるいは当業者の範囲内にある。本明細書中で用いる用語変調するまたは変調とは、ANGPTL4遺伝子の機能、発現、活性、または代替的にANGPTL4遺伝子に関連する表現型の減少、阻害、低下、緩和、増加または増強をいう。用語異常とは、病理学的状態および挙動的観察を含む、ANGPTL4が関連する任意の疾患、障害、状態または表現型もいう。ANGPTL4本発明は、ANGPTL4の生物学的機能、および疾患状態におけるその役割をさらに解明する要望に起因する。ANGPTL4発現は、主として、胎盤、脂肪、肝臓および腎臓組織に見出される。本発明は、肝細胞、脂肪細胞および脂質ホメオスタシスの領域におけるANGPTL4およびANGPTL4のモジュレーターのさらなる使用を提供する。また、本発明は、ANGPTL4遺伝子中に破壊を含有するトランスジェニックまたはノックアウトマウス、およびその使用も記載する。アンジオポエチン様4タンパク質ANGPTL4は分泌タンパク質であり、アンジオポエチンファミリーのメンバーである。それは、肝臓フィブリノーゲン/アンジオポエチン関連タンパク質HFARPKimら、Biochem.J.346:603-6102000、PGARPPARγアンジオポエチン関連タンパク質Yoonら、Mol.CellBiol.,20:5343-53492000、空腹時誘導脂肪因子FIAFKertenら、J.Biol.Chem.,275:28488-284932000;アンジオポエチン関連タンパク質ARP-4;NL2米国特許第6,348,350号;第6,372,491号;および第6,455,496号を参照のこと;およびAng6としても知られている。ヒト由来のANGPTL4タンパク質は406アミノ酸タンパク質であり例えば、米国特許第6,348,350号、第6,372,491号および第6,455,496号、他方、マウスANGPTL4は410アミノ酸タンパク質Kimら、Biochem.J.346:603-6102000である。マウスおよびヒトはアミノ酸レベルで約75の同一性を有する。Kimら、Biochem.J.346:603-6102000。ANGPTL4はシグナルペプチド、3つの潜在的N-グリコシル化部位、および分子内ジスルフィド結合に関与し得る4つのシステインを有する。ANGPTL4は、例えば、図3、パネルAに示されるように、より高次の分子構造を形成する。また、例えば、Geら、J.Biol.Chem.,2793:2038-20452004;Geら、J.LipidRes.45:2071-20792004;およびMandardら、J.ofBiol.Chem.,27933:34411-344202004参照。ANGPTL4はタンパク質分解によりプロセシングされ得、例えば、ANGPTL4のR162GおよびR164Eの置換の結果、野生型タンパク質よりもSDS-ゲル上でより高い分子量にて泳動する改変体ANGPTL4が得られる図3、パネルB参照。また、例えば、Geら、J.Biol.Chem.,2793:2038-20452004;およびMandardら、J.ofBiol.Chem.,27933:34411-344202004参照。アンジオポエチンファミリーの保存された領域は、コイルドコイルドメインおよびC末端フィブリノーゲンFBN様ドメインを含む。例えば、Kimら、Biochem.J.346:603-6102000参照。ANGPTL4は制御された様式でタンパク質分解によりプロセシングされて、C末端フィブリノーゲン様ドメインを放出すると示唆される。例えば、Geら、J.Biol.Chem.2793:2038-20452004参照。ANGPTL4はインテグリンαvβ5に結合する。例えば、図9、パネルA~E参照。該ファミリーのもう1つのメンバーであるアンジオポエチン様3タンパク質ANGPTL3は、インテグリンαvβ3に結合する脈管形成因子である。例えば、2003年11月20日に公開された米国特許出願20030215451、およびCamenischら、J.Biol.Chem.,27719:17281-172902002参照。ANGPTL3は受容体Tie2に結合しないようである。Camenishら、JournalofBiol.Chem.27719:17281-172902002。ANGPTL3は血漿中脂質レベルの調節因子でもある。例えば、Koishiら、Nat.Genetics30:151-1572002参照。インテグリンαvβ5は、ビトロネクチンおよびDel-1を含めた細胞外マトリクスタンパク質に対する受容体である例えば、StupackandCheresh,JournalofCellScience115:3729-37382002参照。αv-インテグリンは腫瘍の進行および転移に関連付けられている。例えば、Marshall,JFandHart,IRSemin.CancerBiol.73:129-381996参照。加えて、脈管形成の間におけるαv-インテグリンの役割もまた示されている。例えば、Eliceiri,BPandCheresh,DAMolecularMedicine4:741-7501998参照。例えば、αvβ5に対するモノクローナル抗体は、ウサギ角膜およびニワトリ絨毛尿膜モデルにおいてVEGF誘導性脈管形成を阻害することが示されている。例えば、M.C.Friedlanderら、Science270:1500-15021995参照。αvβ3およびαvβ5のアンタゴニストもまた、成長因子および腫瘍誘導性脈管形成を阻害することが示されている。例えば、EliceiriandCheresh,CurrentOpinioninCellBiology,13:563-5682001参照。ANGPTL4およびANGPTL4のモジュレーターの使用本発明は、種々の細胞活性およびプロセス例えば、肝細胞増殖および/または細胞接着および、プレ脂肪細胞増殖および/またはプレ脂肪細胞移動を変調する、ANGPTL4またはそのアンタゴニストもしくはアゴニストの使用を提供する。ANGPTL4は、トリグリセリドおよびコレステロールの血清中レベルの変調に関与する。加えてANGPTL4は、炎症性応答の負の調節因子でもあり得る。ANGPTL4のモジュレーターを用いて、これらの活性に関連する障害および疾患を治療することができる。肝臓ANGPTL4は肝細胞の増殖および肝細胞の接着を刺激する。肝臓はコレストロールホメオスタシスについての主な器官である。本明細書中における、セクション脂質ホメオスタシスも参照。肝臓はコレステロール生合成およびコレステロールの異化を担う。肝臓は超低密度リポタンパク質VLDLを合成し、分泌する。循環において、VLDLは代謝されて、低密度リポタンパク質LDLとなり、これは血漿中の主要なコレステロール担持リポタンパク質である。肝臓は消化管と身体のそれら以外のものとの間に置かれた保護者として作用する。主な肝臓の機能は、炭水化物、脂質、アミノ酸、ビタミンおよび微量元素のような多量の物質の効果的な取り込み、貯蔵、代謝、および血液および胆汁への分配を含む。肝臓のもう1つの機能は、相I酸化/還元機構および相II抱合機構の両方を介しての生体異物汚染物、薬物および内因性代謝産物の解毒である。肝臓は、数千の、該器官の機能的単位である微細な小葉肝小葉を含むヒト身体の主な代謝制御器官である。肝臓組織は2つの主な分化した細胞型:実質細胞すなわち、肝細胞および非実質細胞を含有する。肝臓の複雑な機能の大部分は肝細胞によって実行され、他方、クップファー細胞、伊東細胞および肝臓洞様毛細血管内皮細胞LSECのような非実質細胞は、肝細胞に対する供給を支持および提供する重要な役割を果たす。Mochidaら、Biochem.Biophy.Res.Comm.226:176-1791996。初期発生の間における正常な成長に加えて、肝臓組織は成人段階において再生するユニークな能力を有する。肝組織の喪失後の肝臓の再生は、肝毒性、ウイルス感染、血管損傷および部分的肝臓切除のような種々の形態の肝臓損傷に応答する修復プロセスの基本的な構成要素である。部分的肝臓切除後、例えば、肝臓のサイズは、通常、約6日以内にその元の質量に回復する。肝臓の成長および再生は、肝細胞および洞様毛細血管内皮細胞のような非実質細胞の両方の増殖を含む。典型的に、肝細胞がまず増殖し、肝臓の他の細胞は肝細胞から約24時間後にDNA合成に入る。MichalopoulosandDeFrancesScience276:60-651997。本発明は、有効量のANGPTL4またはそのアゴニストを投与することによって、肝臓成長および/または肝細胞増殖を促進する方法を提供する。本発明の促進効果は、当該分野で知られた方法を用い、インビトロまたはインビボいずれかで評価することができる。例えば、Drakesら、J.Immunol.159:42681997;Omoriら、Hepatology26:7201997;および米国特許第5,227,158号参照。例えば、細胞増殖は、限定されるものではないが、DNA合成の速度の測定例えば、Nakamuraら、Biochem.Biophy.Res.Comm.122:14501984、トリパンブルー染料排除/血球計算板のカウント例えば、Omoriら、1997前掲参照、またはフローサイトメトリー例えば、Drakes1997前掲参照を含めた当該分野で公知の方法を用いて培養の間に評価される。本発明のある実施形態において、ANGPTL4またはそのアゴニストを投与して、肝細胞の細胞接着を誘導する。肝細胞の接着は、例えば、クリスタルバイオレットアッセイを含めた当該分野で知られた方法によって評価することができる。また、Landegren,U.J.ImmunologicalMethods,67:379-3881984参照。本発明の1つの実施形態において、肝細胞および他の非実質肝細胞は標的の肝臓から単離され、ANGPTL4またはそのアゴニストを含む適当な組織培養培地に再懸濁されて、細胞接着を誘導する。必要であれば、異なる速度での異なる時間の間の遠心分離によって、異なる細胞画分をさらに分離することができる例えば、非実質細胞から実質細胞を。もう1つの実施形態において、全体としての肝細胞および肝臓器官に対するANGPTL4またはANGPTL4アゴニストの増殖効果は、例えば、肝臓組織試料の組織化学アッセイを用いてインビボで測定される。1つの態様において、肝細胞のインビボ増殖は、非増殖細胞よりも増殖細胞においてより高い濃度で存在することが知られているタンパク質例えば、増殖している細胞の核の抗原PCNAまたはサイクリンに対して向けられる抗体に対する反応性によって評価される。Rodgersら、J.BurnCareRehabil.18:381-3881997。もう1つの態様において、BrdU免疫組織化学アッセイは、Gerberら、Development126:1149-11591999によって記載されたように用いることができる。生命に対するその必須の役割のため、肝臓の機能不全および疾患は、しばしば、衰弱させ、そして生命を脅かす。多数の急性または慢性病理学的状態は、肝臓の構造的および/または機能的異常に関連する。これらは、限定されるものではないが、肝臓不全、肝炎急性、慢性またはアルコール性、肝硬変、中毒性肝臓損傷、薬物性肝臓損傷、肝性脳障害、肝性昏睡および肝臓壊死を含む。肝細胞の細胞成長促進は、肝臓病を治療するのに有用であり得る。本発明の化合物および方法は、肝臓損傷の修復を提供できる。理論に拘束されないが、これは、肝臓細胞を刺激して成長させ、分裂させることによって、直接的または間接的に達成することができると考えられる。1つの実施形態によると、本発明は、有効量の本発明のANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを投与することによって、被験体において病理学的肝臓状態を治療する方法を提供する。句病理学的肝臓状態は肝臓障害または肝臓病と交換可能に用いて、任意の構造的および/または機能的な肝臓の異常を示す。病理学的肝臓状態の非限定的例は、肝臓不全、肝炎急性、慢性またはアルコール性、肝硬変、中毒性肝臓損傷、薬物性肝臓損傷、肝性脳障害、肝性昏睡または肝臓壊死と関連する状態を含む。1つの態様において、本発明は、肝臓損傷の状態またはその原因因子に感受性である被験体において肝臓を損傷から保護する方法を提供する。句肝臓損傷は、本明細書中においては、最も広い意味で用いられ、内部または外部因子あるいはそれらの組み合わせから直接的または間接的に由来する任意の構造的または機能的な肝臓傷害を示す。肝臓損傷は、限定されるものではないが、肝毒性化合物への曝露、放射線曝露、機械的な肝臓傷害、遺伝的素因、ウイルス感染、自己免疫慢性肝炎のような、かつアクチビンおよびTGF-βのようなタンパク質のインビボレベルの増大の結果としての自己免疫疾患を含めた多数の因子によって誘導され得る。肝毒性化合物によって誘導された肝臓損傷は、薬物過敏反応、胆汁うっ滞、および血管内皮への傷害を含めた直接的細胞傷害を含む。治療的または純粋に有害な多くの化学薬剤および生物学的薬剤は肝臓損傷を誘導し得、それゆえ肝毒性である。肝毒性化合物は、脂肪肝、肝炎、肝硬変、および肝臓の血管および新形成病変を含めた慢性肝臓病の重要な原因でもある。Sinclairら、TextbookofInternalMedicine,569-5751992,編集者,Kelley;出版社,J.B.LippincottCo.。本発明においては、ANGPTL4またはアゴニストを被験体に投与することを含む、肝毒性剤への曝露による損傷から被験体の肝臓を保護する方法が提供され、該ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストは肝臓を損傷から効果的に保護する。1つの態様において、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストは、肝毒性剤への該被験体への曝露の前にか、またはそれと同時に投与され、該肝毒性剤は癌を治療するための化学療法剤または放射線剤radiationagentのような治療剤である。したがって、該方法は、被験体を高用量の治療剤に耐性とすることによって、治療の効力を増大させるように働く。もう1つの態様において、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストは、肝毒性剤への被験体の曝露後であるが、被験体における任意の肝臓損傷が検出可能である前に投与される。そのような方法は、肝毒性剤への被験体の偶発的な曝露による肝臓損傷を治療するのに有用であり得る。肝毒性剤は、直接的にか、または毒性代謝産物の産生このカテゴリーは、薬物アレルギーを模倣する過敏反応を含む;胆汁うっ滞胆管の閉塞による胆汁の流れの阻止;および血管病変例えば、血管内皮への傷害が肝静脈血栓をもたらす血管内inveno閉塞病VODを介する、肝臓への細胞毒性によって肝臓損傷を誘導し得る。肝毒性剤によって誘導された肝臓損傷に対する個体の罹患性は、遺伝的因子、年齢、性別、栄養状態、他の薬物への曝露および全身疾患によって影響を受けるSinclairら、TextbookofInternalMedicine,前掲。多くの肝毒性化合物は、受容者に、低い比率で肝臓損傷を予想外に生成する。数人の患者において、肝臓損傷は過敏反応と言われ、薬物反応のそれと似ており、患者は発熱と共に、発疹および好酸球増加症を呈し、薬物の再投与に際して症状が再発する。他の状況において、傷害に対する機構は知られておらず、これは肝毒性代謝産物の産生または蓄積を許容する感受性患者において異常な代謝を呈し得る。直接的な化学物質の攻撃により細胞毒性を誘導する薬物としては、以下が挙げられる:エンフルラン、フルオロキセン、ハロタン、およびメトキシフルランのような麻酔剤、コカイン、ヒドロジド、メチルフェニデート、および三環系剤tricyclicsのような神経精神作用剤neuropsychotropics;フェニトインおよびバルプロ酸のような抗痙攣剤;アセトアミノフェン、クロルゾキサゾン、ダントロレン、ジクロフェナク、イブプロフェン、インドメタシン、サリシレート、トルメチン、およびゾキサゾラミンのような鎮痛剤;アセトヘキサミド、カルブタミド、グリピジト、メタヘキサミド、プロピルチオウラシル、タモキシフェン、ジエチルスチルベストロールのようなホルモン;アンホテリシンB、クリンダマイシン、ケトコナゾール、メベンダゾール、メトロニダゾール、オキサシリン、パラアミノサリチル酸、ペニシリン、リファンピシン、スルホンアミド、テトラサイクリン、およびジドブジンのような抗菌剤;アミオダロン、ジリチアゼム、a-メチルドパ、メキシレチン、ヒドラザリン、ニコチン酸、パパベリン、ペルヘキシリン、プロカインアミド、キニジン、およびトカインアミドtocainamideのような心血管薬物;ならびに、アスパラキナーゼ、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、メトトレキセート、ニトラマイシン、6-MP、ニトロソ尿素、タモキシフェン、チオグアニン、およびビンクリスチンのような免疫抑制剤および抗新形成剤;ならびに、ジスルフィラン、ヨウ素イオン、オキシフェンイサチン、ビタミンAおよびパラアミノ安息香酸のようなその他の薬物。肝臓において過敏反応を生じる肝毒性化合物は以下のものを含む:フェニトイン、パラアミノサリチル酸、クロルプロマジン、スルホンアミド、エリスロマイシンエストレート、イソニアジド、ハロタン、メチルドパ、およびバルプロ酸。胆汁うっ滞胆汁の流れの阻止を含む肝毒性化合物はいくつかの形態を取り得る。中心性のcentribular胆汁うっ滞には、門脈の炎症の変化が伴う。エリスロマイシンのようないくつかの薬物で胆管変化が報告されており、他方、純粋な小管胆汁うっ滞は、同化ステロイドのような他の薬物の特徴である。慢性胆汁うっ滞はメチルテストステロンおよびエストラジオールのような薬物に関連付けられてきた。胆汁うっ滞疾患に関連する肝毒性化合物は以下のものを含む:避妊ステロイド、アンドロゲンステロイド、同化ステロイド、アセチルサリチル酸、アザチオプリン、ベンゾジアゼピン、ケノデオキシコール酸、クロルジアゼポキシド、エリスロマイシンエストレート、フルフェナジン、フロセミド、グリセオフルビン、ハロペリドール、イミプラミン、6-メルカプトプリン、メチマゾール、メトトレキセート、メチルドパ、メチレンジアミン、メチルテストステロン、ナプロキセン、ニトロフラントイン、ペニシラミン、パーフェナジン、プロクロルペラジン、プロマジン、チオベンダゾール、チオリダジン、トルブタミド、トリメトプリムスルファメトキサゾール、砒素、銅、およびパラクアット。数種の薬物は、主として胆汁うっ滞性であるが、肝毒性も生成し得、それゆえそれらが引き起こす肝臓傷害は混合される。混合性肝臓傷害を引き起こす薬物は、例えば、以下のものを含む:クロルプロマジン、フェニルブタゾン、ハロタン、クロルジアゼポキシド、ジアゼパム、アロプリノール、フェノバルビタール、ナプロキセン、プロピルチオウラシル、クロラムフェニコール、トリメトプリム‐スルファメトキサゾール、アムリノン、ジソピラミド、アザチオプリン、シメチジン、およびラニチジン。肝静脈の血栓症、肝細静脈の閉塞または静脈閉塞病VOD、および紫斑病性肝炎を含めた肝臓の血管病変は薬物によって生成され得る。加えて、洞様毛細血管拡張、洞様毛細血管周囲線維症、および肝門脈硬化症を含めた病変が起こり得る。中間帯および中央周囲洞様毛細血管拡張は、経口避妊療法の合併症として最初に報告された。紫斑病性肝炎は、内皮バリアーを通過しての赤血球の漏洩、続いての洞様毛細血管周囲線維症に由来する大規模な血液で満たされた内腔cavityよりなる状態である。それは、経口避妊薬、同化ステロイド、アザチオプリンおよびダナゾールを服用する患者で記載されてきた。中央肝臓細静脈の傷害および閉塞は、ブッシュティーbushteaのようなピロリジジンアルカロイドの摂取に関連することが知られている。最初の病変は、細静脈管腔直径の進行性の減少を伴う中心壊死である。これらの病変の全ては、薬物を停止した場合に部分的に可逆的にあるにすぎず、肝硬変は発達し得る。数種のタイプの良性および悪性肝新生物は肝毒性化合物の投与に由来し得る。出産可能な年代の女性に限定される病変であるアデノーマは、避妊ステロイドの使用に関連し、その危険性は使用の持続に伴って増加する。肝細胞癌腫は、無形成貧血または下垂体機能不全症に対してアンドロゲンホルモンを服用する患者において観察され得る。肝臓病変を引き起こすことが知られている肝毒性化合物は以下のものを含む:避妊ステロイド、ピロリジジンアルカロイド、ウレタン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、マイトマイシン、BCNU、ビンクリスチン、アドリアマイシン、静脈内ビタミンE、同化-アンドロゲンステロイド、アザチオプリン、酢酸メドロキシプロゲステロン、硫酸エストロン、タモキシフェン、無機砒素物質、二酸化トリウム、ビタミンA、メトトレキセート、メチルアンフェタミン塩酸塩、ビタミンA、コルチコステロイド、二酸化トリウム、およびラジウム療法。他の因子によって引き起こされた肝臓損傷は、通常、同様の形態を取る。肝臓損傷は、化合物、放射線療法、遺伝的素因、機械的傷害、またはそのようなおよび他の因子のいずれかの組み合わせの肝毒性によって引き起こされたかを問わず、いくつかの手段によって検出することができる。生化学テストが、肝毒性の標準的尺度として、臨床的に長年用いられてきた。ほとんどの生化学的テストは、一般的には、以下の2つのカテゴリーに分けられる:特定の肝臓マーカー、例えば、プロトロンビン凝固時間、および/または肝臓血流を測定するテスト、または壊死、胆汁うっ滞、進行性線維形成、または肝癌の検出のために血清マーカーを分析するテストCornelius,C.inHepatotoxicology,Meeksら編、pgs.181-1851991。そのようなテストの重要性は、それらの簡便性、およびそれらが非侵襲性であるという事実にある。肝臓損傷を評価することにおいて血清酵素を用いる合理性は、通常は肝臓細胞に含まれるこれらの酵素が、肝臓細胞が傷害した場合に、一般的な循環への進入することである。血清酵素活性の増大は、壊死および/または胆汁うっ滞を示す。血清ビリルビン結合体のレベルの増大は、肝臓内または肝臓外胆汁うっ滞を示す。しかしながら、肝臓傷害を診断する単一手段として、血清酵素レベルの使用にはある限界が存在する。血清酵素レベルは、化学物質によって引き起こされた特異的な肝臓傷害よりはむしろ因子の全身的効果での浸透性の改変による細胞からの漏出の結果として増加し得る。肝臓の組織病理学的調査は、肝臓傷害の性質および程度を同定および定量する際の次の論理的工程である。肝臓傷害のマーカーとしての血清酵素は、肝臓傷害に対する特異性および感受性に基づいて4つのグループに分けることができるKodavantiら、ToxicologicPathology204:556-691992;Kodavantiら、ArchivesofToxicology635:367-751989。グループI:これらの酵素は増大した場合により選択的に肝臓胆汁うっ滞を示す。例えば、アルカリホスファターゼAP、5′-ヌクレオチターゼ5′-ND、およびa-グルタミルトランスペプチダーゼG-GTおよびロイシンアミノペプチダーゼLAP。グループII:これらの酵素は、増大した場合に実質性傷害を示す。例えば、アスパラギン酸トランスアミナーゼAST、アラニントランスアミナーゼALT、フルクトース-1,6-二リン酸アルドラーゼALD、乳酸デヒドロゲナーゼLDH、イソクエン酸デヒドロゲナーゼICDH、オルニチン-カルバモイル-トランスフェラーゼOCT、およびソルビトールデヒドロゲナーゼSDHアルギナーゼおよびグアナ―ゼ。グループIII:これらの酵素は、増大した場合に他の組織の傷害を表す。例えば、クレアチンホスホキナーゼCPK。グループIV:これらの酵素は肝臓傷害において減少する。例えば、コリンエステラーゼChE。他の血清マーカーは、肝臓線維形成が活性であるか否かを評価するためのプロコラーゲンIII型ペプチドレベルPIIIP;肝性脳障害におけるアンモニア血中レベル;壊死および肝癌におけるレベルでのリガンド;肝臓内皮細胞損傷によるヒアルロネートレベル;肝癌を検出するためのa-1-フェトプロテインAFPレベル;肝臓への癌の転移を検出するための癌胎児性抗原CEAレベル;ミトコンドリア、および核および特異的肝臓膜タンパク質のような種々の細胞成分に対する抗体の増大;アルブミン、グロビン、アミノ酸、コレステロール、および他の脂質のようなタンパク質の検出を含む。また、肝臓バイオプシーから得られた種々の無機質、代謝産物、および酵素の生化学分析は、遺伝性、後天性、および実験的に誘導された肝臓障害における特異的生化学的欠陥を調べることにおいて有用であり得る。肝機能のテストを行って、肝臓傷害を評価することができる。肝機能のテストは以下のものを含む:グループI、ビリルビン、インドシアニングリーンICG、スルホブロモフタレインBSPおよび胆汁酸のような有機アニオンの肝臓クリアランスの評価;グループII、ガラクトースおよびICGクリアランスの測定による肝臓血流の評価;グループIII、アミノプリン呼気テストおよびカフェインクリアランステストの使用を介する、肝臓ミクロソーム機能の評価。例えば、血清ビリルビンを測定して、黄疸の存在および重症度を確認し、実質肝臓病で見られる、高ビリルビン血症の程度を決定することができる。アミノトランスフェラーゼトランスアミナーゼの増大は活性な肝細胞損傷の重症度を反映し、他方アルカリホスファターゼ増大は胆汁うっ滞および肝臓浸潤に伴って見出されるIsselbacher,K.andPodolsky,D.inHarrisson’sPrinciplesofInternalMedicine,12thedition,Wilsonら編、2:1301-13081991。血清酵素分析を行うための方法は当該分野で知られており、例えば、Kodavantiら、前掲に記載されている。広範な肝臓傷害はアルブミン、プロトロンビン、フィブリノーゲン、および肝細胞によって専ら合成される他のタンパク質の血中レベルの減少をもたらし得るので、これらのタンパク質のレベルは肝臓傷害の指標として測定することができる。血清酵素の測定とは対照的に、血清タンパク質レベルは単に細胞傷害よりはむしろ肝臓合成機能を反映するPodolsky,D.Harrison’sPrinciplesofInternalMedicine,12thedition,Wilsonら編、2:1308-13111991。多くの患者において、コンピュータ断層撮影CT、超音波、シンチスキャン、または肝臓バイオプシーが、肝臓病の性質を決定するのに必要とされ得るIsselbacher,K,andFriedman,L.andNeedleman,L.inHarrison’sPrinciplesofInternalMedicine,12thedition,Wilsonら編、2:1303-13071991。本発明は被験体において療法の効果を増強する方法を提供し、該方法は、該療法に先立って、またはそれと同時に、肝毒性化合物によって引き起こされた損傷から被験体の肝臓を保護するのに有効な方法で、ANGPTL4、またはANGPTL4アゴニストを被験体に投与し、それにより、該療法に対する被験体の耐性を増加させることを含む。例えば、化学療法の過程の間に用いられる化学療法剤は、肝細胞に対して細胞毒性効果を有しかねず、従って、患者に投与すべき化学療法剤の用量および/または期間を制限する。ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを含む組成物に肝臓を曝露することによって、そのような毒性効果を防止し、または低下させることができる。それゆえ、化学療法剤の用量は増加させることができ、それにより、癌療法の効率を高めることができる。ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストは、本明細書中で記載した方法において他の因子と組み合わせることができる。例えば、いくつかの成長因子およびサイトカイン、最も顕著には、肝細胞成長因子HGF、表皮成長因子EGF、トランスフォーミング成長因子-TGF-、インターロイキン-6IL-6、腫瘍壊死因子-TNF-α、塩基性および酸性線維芽細胞成長因子、CTGF、HB-EGF、およびノルエピネフリンは、肝臓再生を誘導することができるものとして示されている。Fujiwaraら、Hepatol.18:1443-91993;Baruchら、J.Hepatol.23:328-321995;Itoら、Biochem.Biophys.Res.Commun.198:25-311994;Suzumaら、J.Biol.Chem.275:40725-312000;およびMichalopoulosandDeFrances1997前掲。これらはANGPTL4またはANGPTL4アゴニストと組み合わせることができる。HGF最も強力な肝臓マイトゲンの1つが、培養した肝細胞においてDNA合成を刺激することができる因子としてまず同定されたが、今日では、種々の表皮細胞に対して多数の区別される機能を有することが知られている。Nakamuraら、Biochem.Biophys.Res.Comm.122:14501984;およびRussellら、J.Cell.Physiol.119:183-1921984。HGFは細胞分散因子SFとしても知られており、命名HGF/SFにつながる。StokerandPerrymanJ.CellSci.77:209-2231985;およびGherardiandStoker,Nature346:2281990。HGFの生物学的効果は、単一のチロシンキナーゼ受容体を介して、Metプロトオンコジーンの産物であるMetに変換される。肝臓においては、HGFは伊東細胞およびLSECのような非肝細胞で発現され、他方、Met転写物は肝細胞で強く発現される。Huら、Am.J.Pathol.142:1823-18301993。化学的または機械的な肝臓傷害後に、HGFのレベルは鋭敏に増加し、強力な肝細胞増殖に導く。Horimotoら、J.Hepatol.23:174-1831995。HGFの肝臓-特異的過剰発現を伴うトランスジェニックマウス由来の肝臓は、対照動物の肝臓の2倍のサイズであり、それは部分的な肝臓切除後にかなり速く再生する。Sakataら、1996CellGrowthDiffer.7:1513-1523;Shiotaら、1994Hepatol.19:962-972。脈管形成は、血管内皮細胞が増殖し、余分な部分を取り除き、再度組織されて、予め存在する血管ネットワークから新しい血管を形成するという重要な細胞的事象である。血管供給の発達は、正常なおよび病理学的な増殖プロセスに必須であるという強力な証拠があるFolkmanandKlagsbrun1987Science235:442-447。再生している肝臓は、迅速に成長している腫瘍と同様に、新しい支質および血管を合成するはずである。例えば、WO03/103581;Yamaneら、Oncogene9:2683-26901994;Mochidaら、Biochem.Biophy.Res.Comm.226:176-1791996;Ajiokaら、Hepatology29:396-4021999;およびAssyら、J.Hepatol.30:911-9151999。MichalopoulosandDeFrances1997前掲;Mochidaら、1996。本発明の1つの実施形態において、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストは、脈管形成剤、例えば、VEGFまたはVEGFRのアクチベーターと組み合わせて投与される。脈管形成因子または脈管形成剤は、血管の発達を刺激し、例えば、脈管形成、内皮細胞成長、血管の安定性、および/または脈管形成等を促進する成長因子である。例えば、脈管形成因子は限定されるものではないが、例えば、VEGFおよびVEGFファミリーのメンバーA、B、C、DおよびE、PlGF、PDGFファミリー、線維芽細胞成長因子ファミリーFGF、TIEリガンドアンジオポエチン、ANGPTL3、エフリン等を含む。それは、成長ホルモン、インスリン様成長因子-IIGF-I、VIGF、表皮成長因子EGF、CTGFおよびそのファミリーのメンバー、およびTGF-αおよびTGF-βのような、創傷治癒を加速する因子も含む。例えば、KlagsbrunandD’Amore,Annu.Rev.Physiol.,53:217-391991;StreitandDetmar,Oncogene,22:3172-31792003;FerraraAlitalo,NatureMedicine512:1359-13641999;Toniniら、Oncogene,22:6549-65562003例えば、公知の脈管形成因子を列挙する表1;およびSatoInt.J.Clin.Oncol.,8:200-2062003参照。脂質ホメオスタシスANGPTL4は、肝臓以外に、エネルギーホメオスタシスの他の態様の変調に関連する。ANGPTL4は脂肪分化adiposedifferentiation、全身脂質代謝、および脈管形成に関連付けられている。例えば、Yoonら、MolecularandCellularBiology,2014:5343-53492000;LeJanら、AmericanJournalofPathology,1625:1521-15282003;およびEP1403367参照。ANGPTL4の発現は脂肪組織においてPPARガンマおよびアルファによっても誘導され、空腹時によって誘導される。例えば、Yoonら、Mol.Cell.Biol.,20:5343-53492000;およびKerstenら、J.Biol.Chem.,275:28488-284932000参照。ANGPTL4の発現は空腹時の間にアップレギュレートされ、豊富な血漿中のタンパク質は高脂肪供給により減少する。加えて、ANGPTL4はリポタンパク質リパーゼLPL活性を阻害する。例えば、EO1403367参照。リポタンパク質リパーゼLPLは、キロミクロンに存在するトリグリセリドおよび超低密度リポタンパク質VLDLを加水分解して、遊離脂肪酸およびリン脂質を生じさせることによって、リポタンパク質代謝を媒介する分泌糖タンパク質である。本明細書中で提供するように、ANGPTL4ノックアウトマウスは、その性が一致する野生型同腹仔と比較してコレステロールおよび血清トリグリセリドのレベルが低い。本明細書のトランスジェニックノックアウト動物および実施例4との表題のセクション参照。加えて、ANGPTL4の静脈内注射はマウスにおいて循環血漿脂質レベルを増加させ、超低密度リポタンパク質のレベルを増加させる。例えば、Yoshidaら、JournalofLipidResearch,43:1770-17722002および図10参照。被験体においてトリグリセリドまたはコレステロールの血清中レベルを変調する方法が本発明で提供される。例えば、該方法は、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストもしくはANGPTL4アンタゴニストを含む組成物の有効量を被験体に投与し、それにより、被験体におけるトリグリセリドまたはコレステロールの血清中レベルを変調することを含む。1つの実施形態において、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを投与し、その結果、トリグリセリドまたはコレステロールが血清に蓄積される。もう1つの実施形態において、有効量のANGPTL4アンタゴニストを被験体に投与し、それにより、処置前の被験体、または処置を受けていない、または減じた処置を受けた被験体と比較して、被験体の血清中の少なくとも1つのトリグリセリド、遊離脂肪酸および/またはコレステロールのレベルを低下させる。平均血清中コレステロールおよびトリグリセリドレベルは当該分野で知られているようにアッセイできる。ANGPTL4は脂肪細胞を変調することもできる。例えば、ANGPTL4はプレ脂肪細胞の増殖を刺激し、またはプレ脂肪細胞の細胞移動を誘導することができる。脂肪組織は、エネルギーホメオスタシスにおいて非常に重要な役割を演じる脂肪細胞から主になる。脂肪細胞は脂質を合成し、栄養素が豊富な場合には脂質を貯蔵し、栄養素が必要な場合には脂肪酸を循環に放出する。白色脂肪組織WATおよび褐色脂肪組織BATは脊椎動物に見出される。WATは動物の栄養要求に応じて脂肪を貯蔵し、放出する。WAT貯蔵脂肪は、1断熱例えば、皮下脂肪、2例えば、内臓を囲う機械的クッション、および3エネルギーの源として用いられる。BATは脂肪を燃焼し、より低い温度に応答して熱発生を増加させることによって恒温性を維持するために、そしてカロリー摂取の増加に応答してエネルギー消費を増加させることによってエネルギーバランスを維持するために、熱発生を通じてエネルギーを熱として放出する。例えば、Sears,I.B.ら、1996Mol.Cell.Biol.167:3410-34191996参照。一般にBATは年齢と共に減少するが、ある条件下、例えば、冷気への長時間の曝露、高脂肪食の維持、および腫瘍を生じるノルアドレナリンの存在下で再度活性化され得る。脂肪生成は、形態学的変化、成長の阻止、脂質生成酵素の発現、脂質蓄積に関連し、種々のホルモン、例えば、インスリンに対する感受性を獲得する。有効量のANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを投与することによって、脂肪細胞の増殖を刺激することを含む方法が提供される。細胞増殖は、限定されるものではないが、DNA合成の速度の測定例えば、Nakamuraら、Biochem.Biophy.Res.Comm.122:14501984参照、トリパンブルー染料排除/へマサイトメーターカウンティング例えば、Omoriら、1997前掲、またはフローサイトメトリー例えば、Drakes1997前掲参照を含めた、当該分野で知られた方法を用いて培養の間に評価することができる。ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストは、例えば、限定されるものではないが、例えば、数種類の癌、免疫無防備状態の患者例えば、AIDSに罹った人等、高齢の個体のような消耗病を含めた、追加的な脂肪細胞が有益であろう障害において脂肪細胞の増殖を誘導するのに有用であり得る。また、有効量のANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを投与することによって、プレ脂肪細胞移動を誘導することを含む方法も提供される。ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストは、脂肪細胞の分化を促進する他の因子と組み合わせることもできる。これらの因子は、限定されるものではないが、例えば、IGF-1、インスリン、グルココルチコイド、3,3’,5-トリヨードチロニン、レチノイン酸、PGF2α、PGI2等を含む。さらなる因子は、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストと組み合わせることもできる。例えば、脂肪生成はホルモンおよび転写制御に供される。例えば、脂肪生成は、例えば、ペルオキシソーム増殖剤-活性化受容体PPAR、例えば、PPARα、γファミリー、CCAAT/エンハンサー結合タンパク質C/EBPファミリー、および塩基性ヘリックス-ループ-ヘリックスロイシンジッパーbHLHファミリー、例えば、ADD1/SREBP1のメンバーを含めた転写因子のカスケードによって媒介され得る。例えば、Wuら、CurrentOpin.CellBiol11:689-6941999;RosenandSpiegelmanAnnuRevCellDevBiol16:145-1712000;Gregoireら、PhysiologicalReviews7831998;およびKimandSpiegelmanGenesDevel10:1096-11071996参照。PPARγは脂肪組織で作用し、脂肪生成および脂質貯蔵を促進する。例えば、Rosenら、Annu.Rev.CellDev.Biol.,16:145-1712000;Rosenら、Mol.Cell.4:611-6171999;Renら、GenesDev.16:27-322002;Rosenら、GenesDev.,16:22-262002;およびFukumuraら、Circ.Res.93:e88-e972003参照。PPARもまた、脂肪細胞および他の細胞においてリポタンパク質リパーゼmRNAおよびタンパク質レベルを媒介し例えば、Gbaguidiら、FEBSLetters512:85-902002参照、PPARもまた癌に関連付けられている例えば、Yoshimuraら、Int.J.Cancer104:597-6022003;およびKubotaら、CancerResearch58:3344-521998参照。しかしながら、脂肪組織の成長および/または形成はしばしば望まれない。例えば、肥満は、エネルギー摂取がエネルギー消費を超える場合に典型的には起こり、その結果、肥大および過形成成長を介して脂肪組織の成長および/または形成がもたらされる。肥大成長は、脂質蓄積によって刺激された脂肪細胞のサイズの増大である。過形成成長は、脂肪組織における脂肪細胞の数の増加と定義される。肥満は、現代社会において高度に蔓延する慢性疾患であり、社会の汚点のみならず、寿命の短縮、および有害な精神学的発達、多嚢胞性卵巣病のような生殖器障害、感染、静脈瘤、黒色表皮肥厚症、および湿疹のような皮膚科学的障害、運動非耐性、インスリン耐性、高血圧、高コレステロール血症、胆石症、骨関節炎、整形外科的傷害、血栓塞栓症、癌、および冠動脈心臓病を含めた多数の医学的問題に関連する。Rissanenら、BritishMedicalJournal,301:835-8371990。肥満の治療は、食欲抑制剤および他の体重低下インデューサー、食事改変等の使用を含むが、インスリン耐性を有する患者と同様に、肥満患者の大部分は経時的に主要な節食に失敗し、それにより、理想的な体重を達成できない。ANGPTL4アンタゴニストを用いて、有効量のANGPTL4アンタゴニストを用い、被験体において肥満を治療し、および/または全体重を減少させることができる。肥満は、当該分野で知られており、かつ本明細書中に記載するBMIおよび/または肥満-決定特性によって決定することができる。例えば、肥満の治療とは、一般には、哺乳動物のBMIを約25.9未満まで低下させ、その体重を少なくとも6ヶ月間維持することをいう。該治療の結果、適切に、哺乳動物による食物またはカロリー摂取が低下する。加えて、この意味での治療は、もし治療を肥満状態の発症に先立って投与すれば、肥満が起こるのを妨げることを言う。治療は、肥満哺乳動物における脂肪生成、すなわち、人および動物肥満の主な特徴の一つである脂肪細胞における脂質の過剰な蓄積、または脂肪細胞の蓄積の阻害および/または完全な抑制ならびに全体重の低下を含む。全体重の低下は、標準的な技術例えば、秤を用いて測定することができる。1つの実施形態において、被験体の脂肪症脂肪が低下する。このようにして、肥満に関連する状態、例えば、心血管疾患、糖尿病等を治療することもできる。ANGPTL4は、脂肪細胞-由来ホルモンであるレプチンの変調にも関連する。サイトカインに構造的に関連するレプチンは、サイトカイン-受容体スーパーファミリーに属する受容体に作用する。例えば、ZhangFら、Nature387:206-2091997;TartagliaLAら、Cell83:1263-12711995;およびLeeG-Hら、Nature379:632-6351996参照。レプチンは肥満ob突然変異により影響を受ける遺伝子によってコードされるZhangFら、Nature387:206-2091997。レプチン受容体の長い形態は糖尿病db突然変異において影響を受ける遺伝子によってコードされるTartagliaLAら、Cell83:1263-12711995。いくつかのイソ形態があるレプチン受容体は、IL-6、LIFおよびCNTFのようなサイトカイン、およびエリスロポエチンのような成長ホルモンに対するホルモン受容体によって活性化されるgp130、およびLIFRシグナル変換サブユニットに最も密接に関連する。例えば、TartagliaLAら、前掲参照。機能的レプチンまたはその受容体の欠如は、重度の肥満を引き起こす。例えば、Zhangら、前掲;Leeら、前掲;およびChenHら、Cell84:491-4951996参照。レプチンは脳の特定の領域例えば、視床下部において作用して、食物摂取、エネルギー消費および神経内分泌機能を調整することが知られており、例えば、それは脂肪貯蔵の重要な調節因子であることが示されており、レプチンレベルは脂肪貯蔵の増加と共に増加する。例えば、ZhangYら、Nature372:425-4321994;HalaasJLら、Science269:543-5461995;CampfieldLAら、Science269:546-5491995;およびPellymounterMAら、Science269:540-5431995参照。レプチンは脈管形成因子であることも判明した。例えば、Sierra-Honigmannら、BiologicalActionofLeptinasanAngiogenicFactorScience281:1683-16861998;およびBouloumieら、Circ.Res.83:1059-10661998参照。脂肪組織の成長は新生血管形成に依存する。例えば、Rupnickら、PNASUSA9916:10730-107352002参照。レプチンは免疫においても役割を演じる。例えば、LaCavaandMatarese,TheWeightofLeptininImmunityNatureReviews4:371-3792004参照。他のレプチンの活性は生殖の変調、造血の変調、グルコースの代謝の変調、および炎症誘発性免疫応答の変調を含む。例えば、Chelabら、NatureGenetics12:318-3201996;Stroebelら、NatureGenetics18:213-2151998;Clementら、Nature392:398-4011998;Cioffiら、NatureMedicine2:585-5891996;Gainsfordら、PNASUSA,93:14564-145681996;Kamoharaら、Nature389:374-3771997;Loffredaら、FASEBJ.12:57-651998;およびLordら、Nature394:897-9011998参照。ANGPTL4はob/obレプチンノックアウトおよびdb/dbレプチン受容体ノックアウトマウスにおいてアップレギュレートされる。本発明は、有効量のANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストを投与することによって、レプチンおよび/またはレプチン活性を変調する方法を提供する。レプチンレベルは、標準的な技術、例えば、SDS-PAGE、イムノブロット等を用いてアッセイすることができる。ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストおよび/またはANGPTL4アンタゴニストは、限定されるものではないが、例えば、心臓障害、心血管、内皮、または脈管形成障害、異脂肪血症、高血圧、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、冠動脈病CAD、冠動脈心臓病、高コレステロール血症、心不全、発作、糖尿病、膵臓機能障害、骨関節炎、胆石、癌、緑内障、肥満のような代謝疾患、ならびに脂肪症、摂食障害、るいそう症候群悪液質、睡眠無呼吸、その他のような関連障害を含む、脂質ホメオスタシスおよび脂肪の代謝の破壊に関連する疾患および障害の治療で用いることができる。例えば、いくつかのヒトの状態は、組織、細胞、膜、および細胞外領域または構造の区別される脂質組成物によって特徴付けられる。例えば、アテローム性動脈硬化症においては、コレステロール未エステル化、エステル化、および酸化された形態および他の脂質が、細胞、および動脈壁の細胞外領域その他に蓄積する。これらの脂質は、例えば、遺伝子発現を含めた細胞機能を変化させることによって、および血管内腔を狭め、血流を閉塞することによって、潜在的に有害な生物学的効果を有する。脂質レベルの調節は、多数の実質的な利点を供するであろう。ANGPTL4、アゴニストまたはアンタゴニストの投与の効果は、同様に、脂肪体のような脂肪細胞および組織、全体重、筋肉、肝臓および脂肪におけるトリグリセリドのレベル、レプチンの空腹時および非空腹時レベル、および血液中の遊離脂肪酸およびトリグリセリドのレベルの分析を含めた、当該分野で知られた種々のアッセイによって測定することができる。ANGPTL4アンタゴニストを用いて、有効量のANGPTL4アンタゴニストを投与することによりプレ脂肪細胞の移動を阻害することもできる。本発明のある態様において、ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニスト治療剤を他の治療レジメンと組み合わせるのが望ましい。ANGPTL4またはANGPTL4アンタゴニストは、例えば、本明細書中に記載されたもののような他の因子の投与と組み合わせることができる。アンタゴニストに関しては、ANGPTL4アンタゴニストは、例えば、限定されるものではないが、ナイアシン、コレスチラミン、コレスチポール、ゲムフィブロジル、クロフィブレート、スタチン、フルバスタチンレスコール、プラバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチンカルシウムZD-4522、ピタバスタチンNK-104、プレマリン/プラバポールエストロゲン/プラバスタチン、エゼチミブ/シンバスタチン、スーパースタチン、リピトール、CETi-1ワクチン、CETPコレステロールエステル転移タンパク質に対する抗体、BMS-201038ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質、FM-VP4コレステロール輸送阻害剤、フィオスタノール、低血糖症剤、インスリン、プラムリンタイド、アミリン、AC2993合成エキセンジン-4、キセニカールオリスタット、線毛神経栄養因子、アキソカインAxokine、メトフォルミンXT、メルフォルミン、グルコバンスメトフォルミン/グリブリド、デクスリポタムR/-アルファ-リポ酸、PPARアゴニスト、β-3-アドレナリン作動性受容体アゴニスト、リパーゼ阻害剤、ATL-962、レプチン、食欲不振剤または食欲抑制剤、フェンテルミン、メリジアシルブトラミン、ウェルブトリンブプロイオン、プロサイグレムProcyglemジアゾキシド、テヌエートジエチルプロピオン、レビアナルトレキソン、ボントリルフェンジメトラジン、ゾロフトセルトラリン、線毛神経栄養因子CNTF、アキソカイン、CB1-カンナビノイド受容体アンタゴニスト、SR141716、フィトファルム、AOD9604,hGH177-191、体重減少剤、およびそれらの誘導体例えば、塩、PEG化バージョン等を含めた、高脂血症および高脂血症に関連する疾患、例えば、肥満、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、真性糖尿病、甲状腺機能低下症、クッシング症候群を治療するための治療剤の投与と組み合わせることができる。また、WO96/04260II型糖尿病の治療用の化合物、WO94/01420、WO95/17394、WO97/36579、WO97/25042、WO99/08501、WO99/19313、およびWO99/16758参照。ライフスタイルの変化も本発明の治療剤と組み合わせることができる。それらは、限定されるものではないが、例えば、節食、運動、制限されたコレステロール摂取、禁煙等を含む。また、WO91/19702低血糖症および低コレステロール血症剤参照。ある態様において、ANGPTL4アンタゴニストは、例えば、サイトカインおよび他の炎症誘発性分子、および脂肪生成を阻害するいくつかの成長因子と組み合わせることができる。これらは、限定されるものではないが、例えば、腫瘍壊死因子TNF-α、IL-1、PDGF、FGF、EGF、トランスフォーミング成長因子TGF-α、-β、プレ脂肪細胞因子-1pref-1等を含む。例えば、Gregoireら、PhysiologicalReviews783:783-8091998参照。体重減少剤とは、肥満の治療または予防で有用な分子をいう。そのような分子は、例えば、ホルモンカテコールアミン、グルカゴン、ACTH、およびIGF-1と組み合わせた成長ホルモン;Obタンパク質;クロフィブレート;ハロゲネート;シンコカイン;クロルプロマジン;マチンドールおよびフェネチルアミンの誘導体、例えば、フェニルプロパノールアミン、ジエチルプロピオン、フェンテルミン、フェンジメトラジン、ベンズフェタミン、アンフェタミン、メタムフェタミン、およびフェンメトラジンのようなノルアドレナリン作動性神経伝達物質に作用する食欲-抑制薬物;フェンフルラミン、トリプトファン、5-ヒドロキシトリプトファン、フルオキセチン、およびセルトラリンのようなセロトニン神経伝達物質に作用する薬物;ナロキソン、ニューロペプチド-Y、ガラニン、コルチコトロピン-放出ホルモン、およびコレシストキニンのような中枢的に活性な薬物;ピリドスチグミンのようなコリン作動性アゴニスト;リソスフィンゴ脂質またはその誘導体のようなスフィンゴ脂質;甲状腺ホルモンのような熱発生薬物;エフェドリン;β-アドレナリン作動性アゴニスト;酵素阻害剤のような胃腸管に影響する薬物、例えば、テトラヒドロリポスタチン、スクロースポリエステルのような非消化性食物、およびスレオ-クロロクエン酸またはその誘導体のような胃内容物排出の阻害剤;イソプロテレノールおよびヨヒンビンのようなβ-アドレナリン作動性アゴニスト;ヨビンヒン、クロニジンのようなα2-アドレナリン作動性ブロッキング薬物単独での、または成長-ホルモン放出ペプチドと組み合わせた場合のβ-アドレナリン作動性様効果を増加させるためのアミノフィリン;メトフォルミンおよびフェンフォルミンのような、ビグアニドのような腸吸収に干渉する薬物;メチルセルロースのような増量充填剤;ヒドロキシシトレートのような代謝ブロッキング薬物;プロゲステロン;コレシストキニンアゴニスト;ケト酸を模倣する低分子;コルチコトロピン放出ホルモンに対するアゴニスト;体脂肪貯蔵を減少させるための麦角関連プロラクチン-阻害化合物1998年11月8日に発行された米国特許第4,783,469号;β-3-アゴニスト;ブロモクリプチン;オピオイドペプチドに対するアンタゴニスト;ニューロペプチドYに対するアンタゴニスト;グルココルチコイド受容体アンタゴニスト;成長ホルモンアゴニスト;その組み合わせ;等を含む。他の使用ANGPTL4は炎症応答の負の調節因子であるようである。本発明のある実施形態においては、例えば、望ましくないまたは有害な免疫応答の場合において、例えば、移植片拒絶または移植片対宿主病において、免疫応答を阻害するために、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストを用いることができる。ANGPTL4アンタゴニストは、免疫系を刺激することにおいて有用であり得る。例えば、免疫系の刺激は白血病、他のタイプの癌、免疫無防備状態の患者例えば、AIDSに罹ったヒト等等で望まれうるであろう。ANGPTL4は癌にも関連する。ANGPTL4は、腫瘍細胞で発現させた場合、腫瘍細胞増殖をインビトロおよびインビボで引き起こす全ての目的で参考として援用される仮出願第60/589,782号および本出願と同時に出願された代理人書類番号P2144R1参照。ANGPTL4が抗脈管形成因子、例えば、抗VEGF抗体で治療されている腫瘍で発現される場合、腫瘍は依然として成長する能力を維持する。それは、腎臓癌においてアップレギュレートされることも示されている。例えば、代理人書類番号P5032R1;WO02/07941;およびLeJanら、AmericanJournalofPathology,1625:1521-15282003参照。加えて、ANGPTL4は脈管形成促進因子でありS.LeJanら、Am.J.Pathol.,1625:1521-15282003参照、これは癌療法に対する標的であり、内皮細胞に対するアポトーシス生存因子である例えば、Kimら、Biochem.K.346:603-6102000。VEGFShweikiら、Proc.Natl.Acad.Sci,USA92:768-7721995のようにANGPTL4発現は低酸素に応答して増加する。例えば、LeJanら、AmericanJournalofPathology,1625:1521-15282003参照。研究者は、脈管形成および脂肪生成または脂肪組織成長の間の関連を報告している。例えば、Sierra-Honigmannら、BiologicalActionofLeptinasanAngiogenicFactorScience281:1683-16861998;Rupnickら、AdiposetissuemasscanberegulatedthroughthevasculatureProc.Nat.Acad.Sci.USA,9916:10730-107352002;Koloninら、ReversalofobesitybytargetedablationofadiposetissueNatureMedicineAdvanceOnlinepublicationMay9,2004:1-8;およびFukumuraら、ParacrineRegulationofAngiogenesisandAdipocyteDifferentiationDuringInVivoAdipogenesis.Circ.Res.93:e88-e972003参照。ANGPTL4は診断アッセイで用いることもできる。多くの異なるアッセイおよびアッセイ形式を用いて、対照試料に対する試料中のANGPTL4の量を検出することができる。これらの形式が、今度は、本発明の診断アッセイで有用であり、これを用いて、被験体において本明細書中で記載した障害の存在または発症を検出する。可溶性分析物の測定のための当該分野で知られたいずれの手法も、本発明の実施で用いることができる。そのような手法は、限定されるものではないが、ラジオイムノアッセイ、酵素免疫アッセイEIA、例えば、ELISA、サンドイッチイムノアッセイ、沈降素反応、ゲル拡散反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体-固定アッセイ、イムノラジオメトリーアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインAイムノアッセイ、および免疫電気泳動アッセイのような技術を用いる競合および非競合アッセイ系を含む。例えば、米国特許第4,845,026号および第5,006,459号参照。ANGPTL4のトランスジェニックノックアウト動物ANGPTL4またはその改変形態をコードする核酸を用いて、今度は、治療上有用な試薬の開発およびスクリーニングで有用なトランスジェニック動物またはノックアウト動物いずれかを創製することもできる。トランスジェニック動物例えば、マウスまたはラットは、導入遺伝子を含有する細胞を有する動物であり、その導入遺伝子は誕生前、例えば、胚段階で、動物、または動物の先祖に導入されたものである。導入遺伝子は、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノムに組み込まれるDNAである。本発明は、ANGPTL4をコードするcDNAを提供し、これを用いて、ANGPTL4をコードするDNAを発現する細胞を含有するトランスジェニック動物を創製するのに用いられる確立された技術およびゲノム配列に従ってANGPTL4をコードするゲノムDNAをクローン化することができる。当該分野で知られたいずれかの技術を用いて、標的遺伝子導入遺伝子を動物に導入して、トランスジェニック動物の創始系を生産することができる。そのような技術は、限定されるものではないが、前核マイクロインジェクション米国特許第4,873,191号、第4,736,866号および第4,870,009号;生殖系へのレトロウイルス媒介性遺伝子導入VanderPuttenら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,82:6148-61521985;胚性幹細胞における遺伝子標的化Thompsonら、Cell,56:313-3211989;遺伝子トラップベクターを用いる非特異的挿入不活化米国特許第6,436,707号;胚のエレクトロポレーションLoMol.Cell.Biol.,3:1803-18141983;および精子媒介性遺伝子導入Lavitranoら、Cell,57:717-7231989;等を含む。典型的には、特定の細胞は、組織-特異的エンハンサーによるANGPTL4導入遺伝子取り込みについて標的化されるであろう。胚段階で動物の生殖系に導入されたANGPTL4をコードする導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物を用いて、ANGPTL4ポリペプチドをコードするDNAの増大した発現の効果を調べることができる。そのような動物は、例えば、その過剰発現に関連する病理学的状態からの保護を付与すると考えられる試薬についてのテスター動物として用いることができる。本発明のこの局面に関連して、動物を該試薬で処理し、導入遺伝子を保持する未処理動物と比較した、病理学的状態の発生率の低下は、病理学的状態についての潜在的治療介入を示すであろう。別法として、ANGPTL4の非ヒトホモログを用いて、ANGPTL4をコードする内因性遺伝子および動物の胚性幹細胞に導入されたANGPTL4をコードする改変ゲノムDNAの間の相同組換えの結果として、ANGPTL4タンパク質をコードする欠陥または改変遺伝子を有するANGPTL4ノックアウト動物を構築することができる。ある実施形態において、ノックアウト動物は哺乳動物、例えば、ラットまたはマウスのようなげっ歯類である。例えば、ANGPTL4をコードするcDNAを用いて、確立された技術に従い、ANGPTL4をコードするゲノムDNAをクローン化することができる。ANGPTL4をコードするゲノムDNAの一部を欠失させるか、あるいは組み込みをモニターするのに用いることができる選択マーカーをコードする遺伝子のようなもう1つの遺伝子で置き換えることができる。典型的には数キロベースの5’および3’双方における未改変の隣接するDNAのを、ベクターに含める例えば、相同組換えベクターの記載についてはThomasandCapecchi,Cell,51:5031987参照。ベクターは例えば、エレクトロポレーションによって胚性幹細胞株に導入し、導入されたDNAが内因性DNAと相同組換えされた細胞を選択する例えば、Liら、Cell.69:9151992参照。次いで、選択された細胞を動物例えば、マウスまたはラットの胚盤胞に注入して、凝集キメラを形成させる例えば、Bradley,TeratocarcinomasandEmbryonicStemCells,APracticalApproach,E.J.Robertson,ed.IRL,Oxford,1987,pp.113-152参照。次いで、キメラ胚を適当な偽妊娠雌仮腹動物に着床させ、該胚を出産まで導いてノックアウト動物を作製する。生殖細胞に相同組換えDNAを保有する子孫は標準的な技術によって同定することができ、これを用いて、動物の全ての細胞が相同組換えDNAを含む動物を育種することができる。ノックアウト動物は、例えば、ある病理学的状態に対して防御する能力について、およびANGPTL4をコードする遺伝子の非存在に起因する病理学的状態の発症について特徴付けすることができる。加えて、ノックアウトマウスは、薬物標的についての遺伝子機能および医薬用途の発見、ならびに所定の標的に関連する潜在的かつ正確な副作用の決定においてかなりの情報を与えることができる。遺伝子機能および病理学はマウスおよびヒトの間でかなり十分に保存されている。というのは、それらは共に哺乳動物であって、種の間で高度に保存された同様な数の遺伝子を含むからである。例えば、マウス第16染色体上の遺伝子の98がヒトオルソログを有することは最近十分に記載されているMuralら、Science296,1661-712002。胚性幹ES細胞における遺伝子標的化は、ヒト疾患に関連する多くの遺伝子においてヌル突然変異を有するマウスの構築を可能としたが、全ての遺伝病がヌル突然変異に帰属させることはできない。マウス遺伝子座を破壊し、突然変異を有するヒト対応物に導入する遺伝子置き換えノック-インのための方法を確立することによって、ヒト疾患の価値あるマウスモデルを設計することができる。その結果、ヒトタンパク質を標的化するインビボ薬物研究を行うことができるKitamotoら、BiochemicalandBiophysicalRes.Commun.222:742-471996。トランスジェニック動物の使用ある実施形態において、本発明は、ANGPTL4を模倣するものアゴニスト、またはANGPTL4の効果を妨げるものアンタゴニストを同定するための化合物をスクリーニングする方法を含む。ANGPTL4を模倣するアゴニストは、例えば、本明細書中に記載したように、ANGPTL4の活性を誘導する際に、およびそのゲノムがANGPTL4をコードする遺伝子の破壊を含む非ヒトトランスジェニック動物での発見に基づいて負の表現型が観察される場合において、特に治療的に価値があろう。ANGPTL4の効果を妨げるアンタゴニストは、例えば、本明細書中に記載されたように、ANGPTL4活性を妨げる際に、および非ヒトトランスジェニックノックアウト動物での観察に基づいて正の表現型が観察される場合に、特に治療的に価値があろう。アンタゴニスト薬物候補についてのスクリーニングアッセイは、本明細書中で確認される遺伝子によってコードされるANGPTL4に結合し、それと複合体化し、あるいはそうでなければ、他の細胞タンパク質、例えば、ANGPTL4受容体例えば、αvβ5、リポリパーゼタンパク質等とのコードされたポリペプチドの相互作用に干渉する化合物を同定するように設計される。例えば、ANGPTL4に対するアンタゴニストの効果は、ANGPTL4アンタゴニストを野生型マウスに投与して、公知のノックアウト表現型を模倣することによって評価することができる。かくして、最初に、目的のANGPTL4遺伝子をノックアウトし、ANGPTL4遺伝子をノックアウトし、そして破壊した結果としての、得られた表現型を観察する。引き続いて、ANGPTL4に対するアンタゴニストを野生型マウスに投与することによって、ANGPTL4に対するアンタゴニストの有効性を評価することができる。有効なアンタゴニストはノックアウト動物で最初に観察された表現型効果を模倣すると予測される。同様に、ANGPTL4アゴニストを非ヒトトランスジェニックマウスに投与して、公知の負のノックアウト表現型を緩和することによって、ANGPTL4に対するアゴニストの効果を評価することができよう。かくして、最初に、目的のANGPTL4遺伝子をノックアウトし、ANGPTL4遺伝子をノックアウトし、または破壊する結果としての、得られた表現型を観察する。引き続いて、ANGPTL4に対するアゴニストを非ヒトトランスジェニックマウスに投与することによってANGPTL4に対するアゴニストの有効性を評価することができる。効果的なアゴニストは、ノックアウト動物で最初に観察された負の表現型効果を緩和すると予測されるであろう。アンタゴニストについての、もう1つのアッセイにおいて、受容体を発現する哺乳動物細胞または膜調製物を、候補化合物の存在下で標識されたANGPTL4と共にインキュベートする。次いで、この相互作用を増強し、またはブロックする化合物の能力を測定することができよう。抗体本発明の抗体は抗ANGPTL4抗体またはANGPTL4の抗原-結合フラグメント、抗αvβ5抗体または本明細書中に記載された他の抗体を含む。例示的抗体は、例えば、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、フラグメント、多特異的、ヘテロ結合体化、多価、エフェクトeffecto機能等の抗体を含む。抗体はアゴニストまたはアンタゴニストであり得る。ポリクローナル抗体本発明の抗体はポリクローナル抗体を含むことができる。ポリクローナル抗体を調製する方法は当業者に知られている。例えば、ANGPTL4に対するポリクローナル抗体は関連する抗原およびアジュバントの単回または複数回の皮下scまたは腹腔内ip注射によって動物において惹起させる。二官能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステルシステイン残基を通じての結合体化、N-ヒドロキシスクシンイミドリシン残基を介する、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、SOCl2、またはRおよびR1が異なるアルキル基であるR1N=C=NRを用い、免疫化すべき種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、または大豆トリプシン阻害剤に対して関連抗原を結合体化するのが有用であり得る。例えば、各々、ウサギまたはマウスのための100μgまたは5μgのタンパク質または結合体を3容量のフロイントの完全アジュバントと組み合わせ、該溶液を複数の部位にて皮内注射することによって動物をANGPTL4、免疫原性結合体、または誘導体に対して免疫化する。1ヶ月後、動物を複数部位での皮下注射によってフロイントの完全アジュバント中のペプチドまたは結合体の元の1/5~1/10の量をブースター注射する。7~14日後に、動物から採血し、血清を抗体力価についてアッセイする。力価がプラトーとなるまで動物にブースター注射する。典型的には、動物に、同一抗原の結合体であるが、異なるタンパク質に対して、および/または異なる架橋剤を通じて結合体化した結合体をブースター注射する。結合体は、タンパク質融合体として組換え細胞培養において作製することもできる。また、ミョウバンのような凝集剤を適切に用いて、免疫応答を増強させる。モノクローナル抗体モノクローナル抗体は、Kohlerら、Nature,256:4951975によって最初に記載されたハイブリドーマ方法を用いて作製することができるか、あるいは組換えDNA方法米国特許第4,816,567号によって作製することができる。ハイブリドーマ方法においては、マウス、あるいはハムスターまたはカニクイザルのような他の適当な宿主動物を前記したように免疫化して、免疫化で用いられるタンパク質に特異的に結合するであろう抗体を生産する、または生産することができるリンパ球を誘導する。別法として、リンパ球はインビトロで免疫化することができる。次いで、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用い、リンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成するGoding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103AcademicPress,1986。このように調製されたハイブリドーマ細胞を、典型的には、融合されていない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する1以上の物質を含有する適当な培養培地に撒き、増殖させる。例えば、もし親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼHGPRTまたはHPRTを欠くならば、ハイブリドーマに対する培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンHAT培地を含み、この物質は、HGPRT-欠損細胞の増殖を妨げる。典型的な骨髄腫細胞は、効果的に融合し、選択された抗体-生産細胞による抗体の安定な高レベル生産を支持し、HAT培地のような培地に対して感受性であるものである。それらの中で、好ましい骨髄腫細胞株は、SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,California,USAから入手可能なMOPC-21およびMPC-11マウス腫瘍に由来するもの、およびAmericanTypeCultureCollection,Rockville,MarylandUSAから入手可能なSP-2またはX63-Ag8-653細胞のようなマウス骨髄腫系である。ヒト骨髄腫およびマウス-ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体に関して記載されているKozbor,J.Immunol.,133:30011984;Brodeurら、MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp51-63MarcelDekker,Inc.NewYork,1987。ハイブリドーマ細胞がその中で増殖している培養培地を、ANGPTL4に対して向けられたモノクローナル抗体の生産についてアッセイする。ハイブリドーマ細胞によって生産されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、あるいはラジオイムノアッセイRIAまたは酵素-結合免疫吸着アッセイELISAのようなインビトロ結合アッセイによって測定することができる。そのような技術およびアッセイは当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、MunsonandPollard,Anal.Biochem.,107:2201980のスカチャードScatchard分析によって測定することができる。所望の特異性、親和性、および/または活性の抗体を生じるハイブリドーマ細胞を同定した後、限界希釈法によってクローンをサブクローン化し、標準的な方法によって増殖させることができるGoding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103AcademicPress,1986。この目的のための適当な培養培地は、例えば、D-MEMまたはRPMI-1640培地を含む。加えて、ハイブリドーマ細胞は動物において腹水液腫瘍としてインビボで増殖させることができる。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインA-セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーのような慣用的な免疫グロブリン精製手法によって、培養培地、腹水液、または血清から適切に分離される。モノクローナル抗体は、米国特許第4,816,567号に記載されたもののような組換えDNA方法によって作製することもできる。モノクローナル抗体をコードするDNAは、例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって慣用的な手法を用いて、容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞はそのようなDNAの源として役だつ。一旦単離されれば、DNAを発現ベクターに入れ、これを、次いで、E.Coli細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞、またはそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を生産しない骨髄腫細胞のような宿主細胞にトランスフェクトして、組換え宿主細胞によるモノクローナル抗体の合成を得ることができる。抗体の組換え生産は後により詳細に記載する。もう1つの実施形態において、抗体または抗体フラグメントは、McCaffertyet.al.,Nature,348:552-5541990に記載された技術を用いて生じさせた抗体ファージライブラリから単離することができる。Clacksonら、Nature,352:624-6281991およびMarksら、J.Mol.Biol.,222:581-5971991は、各々、ファージライブラリを用いるマウスおよびヒト抗体の単離を記載する。引き続いての刊行物は、鎖シャフリングMarksら、Bio/Technology,10:779-7831992、ならびにコンビナトーリアル感染、および非常に大きなファージライブラリを構築するための戦略としてのインビトロ組換えWaterhouseら、Nuc.Acids.Res.,21:2265-22661993による、高親和性nM範囲ヒト抗体の生産を記載する。かくして、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替法である。DNAは、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのためのコード配列を置き換えることによって米国特許第4,816,567号;Morrisonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:68511984、あるいは非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列の全てまたは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合させることによって、改変することもできる。典型的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドを、抗体の定常ドメインと置き換え、あるいはそれらは抗体の1つの抗原-組み合わせ部位の可変ドメインと置き換えて、抗原に対する特異性を有する1つの抗原-組み合わせ部位、および異なる抗原に対する特異性を有するもう1つの抗原-組み合わせ部位を含むキメラ二価抗体を作り出す。ヒト化抗体およびヒト抗体本発明の抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体を含むことができる。ヒト化抗体は、非ヒトである源由来のそれに導入された1以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、輸入残基といい、これは、典型的には、輸入可変ドメインから取られる。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列をげっ歯類CDRまたはCDR配列で置き換えることによって、Winterおよび共同研究者の方法Jonesら、Nature,321:522-5251986;Riechmannら、Nature,332:323-3271988;Verhoeyenら、Science,239:1534-15361988に従って本質的に行うことができる。従って、そのようなヒト化抗体はキメラ抗体であり米国特許第4,816,567号、インタクトなヒト可変領域よりも実質的に少ないものが、非ヒト種由来の対応する配列によって置き換えられている。現実には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのCDR残基および、恐らくは、いくつかのFR残基がげっ歯類抗体中の同様な部位由来の残基によって置き換えられたヒト抗体である。ヒト化抗体を作製するのに用いられる、軽鎖および重鎖双方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低下させるのに非常に重要である。いわゆるベスト-フィット方法に従って、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列を、公知のヒト可変-ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングする。次いで、げっ歯類のそれに最も近いヒト配列をヒト化抗体についてのヒトフレームワークFRとして許容されるSimsら、J.Immunol.,151:22961993;Chothiaら、J.Mol.Biol.,196:9011987。もう1つの方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを用いる。同一フレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体のために用いることができるCarterら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:42851992;Prestaら、J.Immunol.,151:26231993。抗体は、抗原に対する高い親和性および他の好都合な生物学的特性を保持させつつヒト化するのがさらに重要である。この目標を達成するためには、典型的な方法に従って、親およびヒト化配列の三次元モデルを用いる親配列および種々の概念的なヒト化産物の分析のプロセスによってヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは通常に入手可能であり、当業者は精通している。選択された候補免疫グロブリン配列の恐らくは三次元立体配座構造を説明し、それを表示するコンピュータプログラムが入手可能である。これらの表示の精査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析を可能とする。このように、FR残基を、標的抗原に対する増大した親和性のような所望の抗体特徴が達成されるように、レシピエントおよび輸入配列から選択し、組み合わせることができる。一般には、CDR残基は、抗原結合に影響するのに直接的かつ最も実質的に関与している。別法として、免疫化に際して、内因性免疫グロブリン生産の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを生産することができるトランスジェニック動物例えば、マウスを生産することが今日では可能である。例えば、キメラおよび生殖系突然変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域JH遺伝子のホモ接合性欠失の結果、内因性抗体生産の完全な阻害がもたらされることが記載されている。そのような生殖系突然変異体マウスへの、ヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイの導入の結果、抗原投与に際してヒト抗体が生産されるであろう。例えば、Jakobovitsら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:25511993;Jakobovitsら、Nature,362:255-2581993;Bruggermannら、YearinImmuno.,7:331993;およびDuchosalら、Nature355:2581992参照。ヒト抗体はファージ-ディスプレイライブラリから得ることもできるHoogenboomら、J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksら、J.Mol.Biol.,222:581-5971991;Vaughanら、NatureBiotech14:3091996。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含めた、当該分野で知られた種々の技術を用いて生産することもできるHoogenboomandWinter,J.Mol.Biol.,227:3811991;Marksら、J.Mol.Biol.,222:5811991。この技術に従って、抗体Vドメイン遺伝子は、M13またはfdのようなフィラメント状バクテリオファージの主要または微量なコートタンパク質遺伝子いずれかにインフレームにてクローン化し、ファージ粒子の表面に機能的抗体フラグメントとして提示される。フィラメント状粒子はファージゲノムの一本鎖DNAコピーを含むので、抗体の機能的特性に基づく選択の結果、それらの特性を呈する抗体をコードする遺伝子も選択される。かくして、該ファージはB-細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、例えば、Johnson,KS.andChiswell,DJ.,CurOpininStructBiol3:564-5711993に概説された種々の形式で行うことができる。V-遺伝子セグメントのいくつかの源は、ファージディスプレイで用いることができる。例えば、Clacksonら、Nature,352:624-6281991は、免疫化マウスの脾臓から得られたV遺伝子の小さなランダムコンビナトーリアルライブラリから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。未免疫化ヒトドナー由来のV遺伝子のレパートリーを構築することができ、自己-抗原を含めた抗原の多様なアレイに対する抗体を、例えば、Marksら、J.Mol.Biol.,222:581-5971991、またはGriffithら、EMBOJ.12:725-7341993によって記載された技術に本質的に従うことによって単離することができる。また、米国特許第5,565,332号および第5,573,905号も参照。Coleら、およびBoernerら、の技術もヒトモノクローナル抗体の調製で入手可能であるColeら、MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,P.771985およびBoernerら、J.Immunol.,1471:86-951991。ヒト抗体はインビトロ活性化B細胞によって作製することもできる米国特許第5,567,610号および第5,229,275号参照。抗体フラグメント抗体フラグメントも本発明に含まれる。抗体フラグメントの生産のために種々の技術が開発されている。伝統的には、これらのフラグメントはインタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して得られた例えば、Morimotoら、JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-1171992およびBrennanら、Science,229:811985参照。しかしながら、これらのフラグメントは、今日、組換え宿主細胞によって直接的に生産できる。例えば、抗体フラグメントは、前記した抗体ファージライブラリから単離することができる。別法として、Fab’-SHフラグメントはE.coliから直接的に回収することができ、化学的にカップリングさせて、Fab’2フラグメントを形成することができるCarterら、Bio/Technology10:163-1671992。もう一つのアプローチに従い、Fab’2フラグメントは組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。抗体フラグメントの生産のための他の技術は当業者に明らかであろう。他の実施形態において、選択した抗体は単一鎖FvフラグメントscFvである。WO93/16185;米国特許第5,571,894号;および米国特許第5,587,458号参照。FvおよびsFvは、定常領域を欠くインタクトな組み合わせ部位を有する唯一の種であり、かくして、それらはインビボで用いる間は低下した非特異的結合のために適切である。SFv融合タンパク質は、sFvのアミノまたはカルボキシ末端いずれかにおいてエフェクタータンパク質の融合を生じるように構築することができる。AntibodyEngineering,ed.Borrebaeck,前掲参照。抗体フラグメントは、例えば、米国特許第5,641,870号に記載されているような線状抗体であってもよい。そのような線状抗体フラグメントは単特異性または二重特異性であってよい。多重特異性抗体例えば、二重特異性本発明の抗体は、例えば、少なくとも2つの異なる抗原に対する結合特異性を有する多重特異性抗体も含む。そのような分子は通常は2つの抗原のみに結合するすなわち、二重特異性抗体、BsAb、三重特異性抗体のようなさらなる特異性を有する抗体は、本明細書中で用いる場合にこの表現に含まれる。BsAbの例は、抗FcγRI/抗CD15、抗p185HER2/FcγRIIICD16、抗CD3/抗悪性B-細胞1D10、抗CD3/抗p185HER2、抗CD3/抗p97、抗CD3/抗腎臓細胞癌腫、抗CD3/抗OVCAR-3、抗CD3/L-D1抗結腸癌腫、抗CD3/抗メラノサイト刺激ホルモンアナログ、抗EGF受容体/抗CD3、抗CD3/抗CAMA1、抗CD3/抗CD19、抗CD3/MoV18、抗神経細胞接着分子NCAM/抗CD3、抗葉酸結合タンパク質FBP/抗CD3、抗汎癌腫関連抗原AMOC-31/抗CD3のような、細胞抗原に対して向けられた一つのアーム、および細胞傷害誘発性分子に対して向けられた他方のアームを有するもの;抗サポリン/抗Id-1、抗CD22/抗サポリン、抗CD7/抗サポリン、抗CD38/抗サポリン、抗CEA/抗リシンA鎖、抗インターフェロン-αIFN-α/抗ハイブリトーマーイディオタイプ、抗CEA/抗ビンカアルカロイドのような、細胞上の抗原に特異的に結合する一つのアーム、および毒素に結合する一つのアームを有するBsAb;リン酸マイトマイシンプロドラッグからマイトマイシンアルコールへの変換を触媒する抗CD30/抗アルカリホスファターゼのような酵素活性化プロドラッグを変換するためのBsAb;抗フィブリン/抗組織プラスミノーゲンアクチベーターtPA、抗フィブリン/抗ウロキナーゼ-タイプのプラスミノーゲンアクチベーターuPAのような、フィブリン溶解剤として用いることができるBsAb;抗低密度リポタンパク質LDL/抗Fc受容体例えば、FcγRI、FcγRIIまたはFcγRIIIのような細胞表面受容体に対する免疫複合体を標的化するためのBsAb;抗CD3/抗単純疱疹ウイルスHSV、抗T-細胞受容体:CD3複合体/抗インフルエンザ、抗FcγR/抗HIVのような感染症の療法で用いるBsAb;抗CEA/抗EOTUBE、抗CEA/抗DPTA、抗p185HER2/抗ハプテンのようなインビトロまたはインビボでの腫瘍検出のためのBsAb;ワクチンアジュバントとしてのBsAb;および抗ウサギIgG/抗フェリチン、抗ホースラディッシュペルオキシダーゼHRP/抗ホルモン、抗ソマトスタチン/抗サブスタンスP、抗HRP/抗FITC、抗CEA/抗β-ガラクトシダーゼのような診断ツールとしてのBsAbを含む。三重特異性抗体の例は抗CD3/抗CD4/抗CD37、抗CD3/抗CD5/抗CD37および抗CD3/抗CD8/抗CD37を含む。二重特異性抗体は全長抗体または抗体フラグメント例えば、Fab’2二重特異性抗体として調製することができる。二重特異性抗体を作製する方法は当該分野で知られている。全長二重特異性抗体の伝統的生産は、2つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の共発現に基づき、2つの鎖は異なる特異性を有するMillsteinら、Nature,305:537-5391983。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな組み合わせのため、これらのハイブリドーマクワドローマは、そのうち1つのみが正しい二重特異性構造を有する10の異なる抗体分子の潜在的混合物を生じる。通常はアフィニティークロマトグラフィー工程によって行われる正しい分子の精製はむしろ面倒であり、生成物の収率は低い。同様な手法はWO93/08829、およびTrauneckerら、EMBOJ.,10:3655-36591991に開示されている。異なるアプローチに従って、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン抗体-抗原組み合わせ部位を免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させる。該融合は、好ましくは、少なくともヒンジの一部、CH2、およびCH3領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。融合体の少なくとも1つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含有する第一の重鎖定常領域CH1を有するのが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体、および所望であれば、免疫グロブリン軽鎖をコードするDNAを別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に同時トランスフェクトする。これにより、構築で用いる3つのポリペプチド鎖の等しくない比率が最適な収率を適用する場合の実施形態において3つのポリペプチドフラグメントの相互の割合を調整する際に高い柔軟性が提供される。しかしながら、等しい比率の少なくとも2つのポリペプチド鎖の発現が高い収率をもたらす場合、あるいは該比率が特に有意性がない場合、1つの発現ベクターに2または3つすべてのポリペプチド鎖についてのコード配列を挿入するのが可能である。このアプローチの1つの実施形態において、二重特異性抗体は、1つのアームにおける第一の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖および他のアームにおける第二の結合特異性を供するハイブリット免疫グロブリン重鎖-軽鎖対から構成される。この非対称構造は、望ましくない免疫グロブリン鎖組み合わせからの所望の二重特異性化合物の分離を容易とすることが見出された。というのは、二重特異性分子の半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在は、分離の容易な方法を提供するからである。このアプローチはWO94/04690に開示されている。二重特異性抗体を作製するさらなる詳細については、例えば、Sureshら、MethodsinEnzymology,121:2101986参照。WO96/27011に記載されたもう1つのアプローチに従うと、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーのパーセンテージを最大とするように操作することができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのCH3ドメインの少なくとも一部を含む。この方法においては、第一の抗体分子の界面からの1以上の小さなアミノ酸側鎖を、より大きな側鎖例えば、チロシンまたはトリプトファンで置き換える。大きな側鎖に対して同一または同様なサイズの補填性キャビティを、大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの例えば、アラニンまたはスレオニンで置き換えることによって、第二の抗体分子の界面に作り出す。これは、ホモダイマーのような他の望ましくない目的産物よりもヘテロダイマーの収率を増大させる機構を供する。抗体フラグメントから二重特異性抗体を作製するための技術も文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製することができる。Brennanら、Science,229:811985は、インタクトな抗体がタンパク質分解により切断されて、Fab’2フラグメントを生じる手法を記載する。これらのフラグメントは、ジチオール複合体化剤である亜ヒ酸ナトリウム存在下で還元させ、隣接するジチオールを安定化し、分子内ジスルフィド形成を妨げる。次いで、生じたFab’フラグメントをチオニトロベンゾエートTNB誘導体に変換する。次いで、メルカプトエチルアミンでの還元によって、Fab’-TNB誘導体の1つをFab’-チオールに再度変換し、等モル量の他のFab’-TNB誘導体と混合して、二重特異性抗体を形成する。生じた二重特異性抗体を、酵素の選択的固定化のための因子として用いることができる。最近の進歩は、E.coli由来のFab’-SHフラグメントの直接的回収を容易とし、これは、化学的にカップリングさせて、二重特異性抗体を形成することができる。Shalabyら、J.Exp.Med.,175:217-2251992は、十分にヒト化された二重特異性抗体Fab’2分子の生産を記載する。各Fab’フラグメントをE.coliから別々に分泌し、インビトロでの誘導性の化学的カップリングに付して、二重特異性抗体を形成した。かく形成された二重特異性抗体は、VEGF受容体を過剰発現する細胞、および正常なヒトT細胞に結合し、ならびにヒト乳癌標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。組換え細胞培養物から直接的に二重特異性抗体フラグメントを作製し、単離する種々の技術もまた記載されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを用いて生産された。Kostelnyら、J.Immunol.,1485:1547-15531992。FosおよびJunタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって2つの異なる抗体のFab’部分に連結させた。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元させ、モノマーを形成し、次いで、再度酸化して、抗体ヘテロダイマーを形成した。この方法は、抗体ホモダイマーの生産のために利用することもできる。Hollingerら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-64481993によって記載されたダイアボディ技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替機構を提供している。該フラグメントは、余りにも短くて、同一鎖上の2つのドメインの間の対合できないリンカーによって、軽鎖可変ドメインVLに連結された重鎖可変ドメインVHを含む。従って、1つのフラグメントのVHおよびVLドメインをもう1つのフラグメントの相補的VLおよびVHドメインと対合させ、それにより、2つの抗原-結合部位を形成する。単一鎖FvsFvダイマーの使用によって二重特異性抗体フラグメントを作製するためのもう1つの戦略も報告されている。Gruberら、J.Immunol.,152:53681994参照。2価を超える抗体が考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tuttら、J.Immunol.147:601991。ヘテロ結合体抗体二重特異性抗体は架橋されたまたはヘテロ結合体抗体を含み、これらは本発明の抗体である。例えば、ヘテロ結合体における抗体の1つはアビジンにカップリングさせることができ、他方はビオチンに結合体化させることができる。そのような抗体は、例えば、望ましくない細胞に対して免疫系細胞を標的化するために米国特許第4,676,980号、およびHIV感染の治療のために提案されているWO91/00360、WO92/200373、およびEP03089。ヘテロ結合体抗体は、いずれかの便利な架橋方法を用いて作製することができる。適当な架橋剤は当該分野で良く知られており、多数の架橋技術と共に、米国特許第4,676,980号に開示されている。多価抗体本発明の抗体は多価抗体を含む。多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞によって二価抗体よりも速く内部移行され、および/または異化され得る。本発明の抗体は、3以上の抗原結合部位を有する例えば、四価抗体IgMクラス以外のものである多価抗体であり得、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え体発現によって容易に生産することができる。多価抗体は、二量体化ドメインおよび3以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましい二量体化ドメインはFc領域またはヒンジ領域を含むまたはそれよりなる。このシナリオにおいて、抗体はFc領域、および該Fc領域に対してアミノ末端側の3以上の抗原結合部位を含む。本明細書において好ましい多価抗体は、3~約8、好ましくは4つの抗原結合部位を含むまたはそれよりなる。多価抗体は少なくとも1つのポリペプチド鎖好ましくは、2つのポリペプチド鎖を含む。該ポリペプチド鎖は2以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-X2n-Fcを含むことができ、VD1は第一の可変ドメインであり、VD2は第二の可変ドメインであり、FcはFc領域の1つのポリペプチド鎖であり、X1およびX2はアミノ酸またはポリペプチドを表し、そしてnは0または1である。例えば、ポリペプチド鎖はVH-CH1-フレキシブルリンカー-VH-CH1-Fc領域鎖;またはVH-CH1-VH-CH1-Fc領域鎖を含むことができる。多価抗体は、本明細書において好ましくはさらに、少なくとも2つの好ましくは4つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含む。多価抗体は、本明細書において例えば、約2~約8の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含むことができる。ここで考えられている軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、所望により、さらにCLドメインを含む。エフェクター機能工学エフェクター機能に関しては本発明の抗体を改変して、例えば、癌を治療することにおいて抗体の有効性を増強させるのが望ましいであろう。例えば、システイン残基をFc領域に導入し、この領域における鎖間ジスルフィド結合の形成を可能とすることができる。かく生じたホモダイマー抗体は、改良された内部移行能力および/または増加した補体媒介性細胞殺傷および抗体依存性細胞傷害ADCCを有することができる。Caronら、J.ExpMed.176:1191-11951992およびShopes,B.J.Immunol.148:2918-29221992参照。増大した標的化活性を有するホモダイマー抗体は、Wolffら、CancerResearch53:2560-25651993に記載されたように、ヘテロ二官能性架橋剤を用いて調製することもできる。別法として、二重dualFc領域を有し、それにより、増強された補体溶解およびADCC能力を有することができる抗体を操作することができる。Stevensonら、Anti-CancerDrugDesign3:219-2301989参照。抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第5,739,277号に記載されているように、サルベージsalvage受容体結合エピトープを抗体特に、抗体フラグメントに取り込むことができる。本明細書中に記載するように、用語サルベージ受容体結合エピトープとは、IgG分子のインビボ血清半減期を増加させることを担うIgG分子例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のFc領域のエピトープをいう。免疫結合体本発明は、化学療法剤、毒素例えば、細菌、真菌、植物または動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメントのような細胞傷害性剤、または放射性同位体すなわち、放射性結合体radioconjugateに結合体化した本明細書中に記載された抗体を含む免疫結合体にも関する。放射性結合体抗体の生産のために、種々の放射性核種が入手可能である。その例は、限定されるものではないが、例えば、212Bi、131I、131In、90Yおよび186Reを含む。そのような免疫結合体の生成で有用な化学療法剤は前記した。例えば、BCNU、ストレプトゾイシン、ビンクリスチン、5-フルオロウラシル、米国特許第5,053,394号、第5,770,710号に記載された集合的にLL-E33288複合体として知られた因子のファミリー、エスペラミシンesperamicin米国特許第5,877,296号等また、本明細書中における化学療法剤の定義も参照を、抗ANGPTL4または抗脈管形成抗体またはそのフラグメントに結合体化することができる。細胞の選択的破壊のためには、抗体は強い放射性の原子を含むことができる。放射性結合体化抗ANGPTL4またはそのフラグメントの生産のために種々の放射性同位体が入手可能である。その例は、限定されるものではないが、例えば、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、212Pb、111In、Luの放射性同位体などを含む。該結合体を診断で用いる場合、それは、シンチグラフィー実験のための放射性原子、例えば、99mtcまたは123I、またはヨウ素-123、ヨウ素-131、インジウム-111、フッ素-19、炭素-13、窒素-15、酸素-17、ガトリニウム、マンガンまたは鉄のような、磁気共鳴イメージングMRIとしても知られた核磁気共鳴NMRイメージングのためのスピン標識を含むことができる。放射性または他の標識を公知の方法で結合体に取り込むことができる。例えば、ペプチドを生合成することができるか、あるいは例えば、水素の代わりにフッ素-19を含む適当なアミノ酸前駆体を用いる化学的アミノ酸合成によって合成することができる。99mtcまたは123I、186Re、188Reおよび111Inのような標識をペプチド中のシステイン残基を介して結合することができる。イットリウム-90をリシン残基を介して結合させることができる。IODOGEN方法Frakerら、Biochem.Biophys.Res.Commun.80:49-571978を用いて、ヨウ素-123を取り込むことができる。例えば、他の方法を詳細に記載するMonoclonalAntibodiesInImmunoscintigraphyChatal,CRCPress1989参照。用いることができる酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントはジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、Pseudomonasaeruginosa由来のエキソトキシンA鎖、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシンA鎖、アルファ-サルシン、Aleuritesfordiiタンパク質、ジアンチインタンパク質、Phytolaccaamericanaタンパク質PAPI、PAPII、およびPAP-S、モモルジカカランチアmomordicacharantia阻害剤、クルチン、クロチン、サパオナリアオフィシナリスsapaonariaofficinalis阻害剤、ゲロリンgelonin、マイトゲリンmitogellin、レストリクトシンrestrictocin、フェノマイシン、ネオマイシン、およびトリコテセンを含む。例えば、1993年10月28日に公開されたWO93/21232参照。抗体および細胞傷害因子の結合体は、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオールプロピオネートSPDP、スクシンイミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート、イミノチオランIT、ジメチルアジピミデートHCLのようなイミドエステルの二官能性誘導体、ジスクシンイミジルスベレートのような活性エステル、グルタルアルデヒドのようなアルデヒド、ビスp-アジドベンゾイルヘキサンジアミンのようなビス-アジド化合物、ビス-p-ジアゾニウムベンゾイルエチレンジアミンのようなビス-ジアゾニウム誘導体、トリエン2,6-ジイソシアネートのようなジイソシアネート、および1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼンのようなビス-活性フッ素化合物のような種々の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Vitettaら、Science238:10981987に記載されたように調製することができる。炭素-14-標識1-イソチオシアナトベンゾイル-3-メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸MX-DTPAは、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲージョンのための例示的キレート化剤である。WO94/11026参照。リンカーは、細胞における細胞傷害薬剤の放出を容易とする切断可能リンカーであり得る。例えば、酸-不安定性リンカー、ペプチダーゼ-感受性リンカー、光不安定リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド-含有リンカーChariら、CancerResearch52:127-1311992;米国特許第5,208,020号を用いることができる。別法として、抗ANGPTL4および細胞傷害剤を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製することができる。DNAの長さは、相互に隣接した、あるいは結合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離された、結合体の2つの部分をコードする各領域を含むことができる。ある実施形態において、抗体を、細胞プレ標的化pretargetingでの利用のためにストレプトアビジンのような受容体に結合体化させ、抗体-受容体結合体を患者に投与し、続いて、清澄化因子を用いて循環から未結合結合体を除去し、次いで、細胞傷害因子例えば、放射性ヌクレオチドに結合体化されたリガンド例えば、アビジンを投与する。ある実施形態において、抗体、および核溶解活性を有する化合物例えば、リボヌクレアーゼ、またはデオキシリボヌクレオアーゼのようなDNAエンドヌクレアーゼ;Dnaseの間で免疫結合体が構成される。メイタンシンmaytansineおよびメイタンシノイドmaytansinoid本発明は、1以上のメイタンシノイド分子に結合体化された本発明の抗体を提供する。メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。マイタンシンは、最初に、東アフリカ低木Maytenusserrataから単離された米国特許第3,896,111号。引き続いて、ある種の微生物もまた、メイタンシノールおよびC-3メイタンシノールエステルのようなメイタンシノイドを生じることも発見された米国特許第4,151,042号。合成メイタンシノールおよびその誘導体およびアナログは、例えば、米国特許第4,137,230号;第4,248,870号;第4,256,746号;第4,260,608号:第4,265,814号;第4,294,757号;第4,307,016号;第4,308,268号;第4,308,269号;第4,309,428号;第4,313,946号;第4,315,929号;第4,317,821号;第4,322,348号;第4,331,598号;第4,361,650号;第4,364,866号;第4,424,219号;第4,450,254号;第4,362,663号;および第4,371,533号に開示されている。例えば、抗―ANGPTL4抗体または抗―αvβ5抗体は、該抗体またはメイタンシノイド分子いずれかの生物学的活性を有意に減少させることなくメイタンシノイド分子に結合体化される。抗体分子当たり結合体化した平均3~4のメイタンシノイド分子は、毒素/抗体の1つの分子さえが、裸の抗体の使用よりも細胞傷害性を増強するにもかかわらず、抗体の機能または溶解性に悪影響を与えることなく標的分子の細胞傷害性を増強するのに効果を示した。メイタンシノイドは当該分野でよく知られており、公知の技術によって合成することができるか、あるいは天然源から単離することができる。適当なメイタンシノイドは、例えば、米国特許第5,208,020号、および前記にて言及した他の特許および非特許刊行物に開示されている。1つの実施形態において、メイタンシノイドは、種々のメイタンシノールエステルのような、芳香族環においてか、またはメイタンシノール分子の他の位置において修飾されたメイタンシノールおよびメイタンシノールアナログである。例えば、米国特許第5,208,020号またはEP特許0425235B1、およびChariら、CancerReserch52:127-1311992に開示されたものを含めた抗体―メイタンシノイド結合体を作製するための当該分野で知られた多くの連結基が存在する。連結基は、前記した特許に開示されたジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、光不安定基、ペクチダーゼ不安定基、またはエステラーゼ不安定基を含み、ジスルフィドおよびチオエーテル基が好ましい。抗体およびメイタンシノイドの結合体は、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDP、スクシンイミジル-4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレート、イミノチオランIT、ジメチルアジピミデートHCLのようなイミドエステルの二官能性誘導体、ジスクシンイミジルスベレートのような活性エステル、グルタルアルデヒドのようなアルデヒド、ビスp-アジドベンゾイルヘキサンジアミンのようなビスーアジド化合物、ビスーp-ジアゾニウムベンゾイル-エチレンジアニンのようなビス-ジアゾニウム誘導体、トルエン2,6-ジイソシアネートのようなジイソシアネート、および1,5-ジフルオロー2,4-ジニトロベンゼンのようなビス-活性フッ素化合物のような種々の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製することができる。典型的なカップリング剤は、ジスルフィド結合を提供するための、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDPCarlssonら、Biochem.J.173:723-737[1978]およびN-スクシンイミジル-4-2-ピリジルチオペンタノエートSPPを含む。リンカーは、結合のタイプに応じて、種々の位置においてメイタンシノイド分子に結合させることができる。例えば、エステル結合は、慣用的なカップリング技術を用いるヒドロキシル基との反応によって形成することができる。反応は、ヒドロキシル基を有するC-3位置、ヒドロキシメチルで修飾されたC-14位置、ヒドロキシル基で修飾されたC-15位置、およびヒドロキシル基を有するC-20位置で起こり得る。該結合はメイタンシノールまたはメイタンシノールアナログのC-3位置で形成される。カリケアミシン目的のもう1つの免疫結合体は、1以上のカリケアミシン分子に結合体化された抗ANGPTL4抗体または抗αvβ5抗体を含む。抗生物質のカリケアミシンファミリーは、ピコモル以下の濃度において二本鎖DNA切断を生じさせることができる。カリケアミシンファミリーの結合体の調製については、例えば、全てAmericanCyanamidCompanyに対する米国特許第5,712,374号、第5,714,586号、第5,739,116号、第5,767,285号、第5,770,701号、第5,770,710号、第5,773,001号、第5,877,296号参照。用いることができるカリケアミシンの構造的アナログは、限定されるものではないが、γ1I,α2I、α3I、N-アセチル-γ1I、PSAGおよびθI1を含むHinmanら、CancerReserch53;3336-33421993,Lodeら、CancerReserch58:2925-29281998およびAmericanCyanamidに対する前記した米国特許。抗体を結合体化することができるもう1つの抗腫瘍薬物は、抗葉酸であるQFAである。カリケアミシンおよびQFAは、共に、細胞内作用部位を有し、原形質膜を容易に横切らない。従って、抗体媒介性内部移行を介するこれらの因子の細胞の取り込みは、それらの細胞傷害性効果を大いに増強させる。他の抗体の改変抗体の他の改変は、本明細書で意図される。例えば、抗体は種々の非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールのコポリマーのうちの1つに連結することができる。抗体は、コロイド状薬物送達系例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、ミクロエマルジョン、ナノ-粒子およびナノカプセルにおいて、あるいはマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション技術によって、あるいは界面重合例えば、各々、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン-ミクロカプセルおよびポリ-メチルメタクリレートミクロカプセルによって調製されたミクロカプセルに捕捉することもできる。そのような技術は、Remington’sPharmaceuticalSiences,16thedition,Oslo,A.,Ed.,1980に開示されている。リポソームおよびナノ粒子本発明のポリペプチドは、リポソームに処方することができる。例えば、本発明の抗体は免疫リポソームimmunoliposomeとして処方することもできる。抗体を含有するリポソームは、Epsteinら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:36881985;Hwangら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:40301980;および米国特許第4,485,045号および第4,544,545号に記載されたような当該分野で知られた方法によって調製される。増強された循環時間を有するリポソームは米国特許第5,013,556号に開示されている。一般に、リポソームの処方および使用は当業者に知られている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびPEG-誘導体化ホスファチジルエタノールアミンPEG-PEを含む脂質組成物での逆相蒸発方法によって生じさせることができる。リポソームは規定されたポアサイズのフィルターを通して押し出して、所望の直径を有するリポソームを得る。本発明の抗体のFab’フラグメントは、ジスルフィド交換反応を介して、Martinら、J.Biol.Chem.257:286-2881982に記載されたようにリポソームに結合体化させることができる。ナノ粒子またはナノカプセルを用いて、本発明のポリペプチドを捕捉することもできる。1つの実施形態において、生分解性ポリアルキル-シアノアクリレートナノ粒子を本発明のポリペプチドと共に用いることができる。他の使用抗―ANGPTL4抗体は種々の用途を有する。例えば、抗ANGPTL4抗体は、例えば、本明細書中に記載された障害の疾患検出のために、例えば、特異的な細胞、組織または血清におけるその発現を検出する、ANGPTL4またはANGPTL4のフラグメントについての診断アッセイで用いることができる。1つの実施形態において、ANGPTL4抗体は、本明細書中で提供した方法での治療のために患者集団を選択するのに用いられる。不均一相または均一相のいずれかで行われる、競合結合アッセイ、直接的または間接的サンドイッチアッセイ、および免疫沈降アッセイのような、当該分野で知られた種々の診断アッセイ技術を用いることができるZola,MonoclonalAntibodies:AManualofTechniques,CRCPress,Inc.1987pp.147-158。診断アッセイで用いる抗体は検出可能な部分で標識することができる。検出可能な部分は、検出可能なシグナルを直接的または間接的に生じさせることができるべきである。例えば、検出可能な部分は、3H、14C,32P,35S、または125Iのような放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、またはルシフェリンのような蛍光または化学発光化合物、またはアルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼまたはホースラディッシュペルオキシダーゼのような酵素であり得る。抗体を検出可能な部分に結合体化するための当該分野で知られた任意の方法を使用することもでき、それは、Hunterら、Nature,144:9451962;Davidら、Biochemistry,13;10141974;Painら、J,Immunol.Meth.,40:2191981;およびNygren,J.Histochem.AndCytochem.,30:4071982に記載された方法を含む。抗ANGPTL4抗体は、組換え細胞培養物または天然源由来のANGPTL4のアフィニティー精製でも有用である。このプロセスにおいて、ANGPTL4に対する抗体は、当該分野で良く知られた方法を用い、Sephadex樹脂または濾紙のような適当な支持体に固定化される。次いで、固定化された抗体を、精製すべきANGPTL4を含有する試料と接触させ、その後、固定化された抗体に結合するANGPTL4を除いて、試料中の実質的に全ての物質を除去する適当な溶媒で支持体を洗浄する。最後に、支持体を、抗体からANGPTL4を放出するもう1つの適当な溶媒で洗浄する。ベクター、宿主細胞および組換え方法本発明のポリペプチドは、容易に得ることができる技術および物質を用い、組換えにより生産することができる。本発明のポリペプチド、例えば、ANGPTL4、抗ANGPTL4抗体、または抗αvβ5抗体の組換え生産のためには、それをコードする核酸を単離し、さらなるクローン化DNAの増幅のために、あるいは発現のために複製可能なベクターに挿入する。本発明のポリペプチドをコードするDNAは、慣用的な手法を用いて容易に単離し、配列決定される。例えば、モノクローナル抗体をコードするDNAは、例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって、単離され、配列決定される。多くのベクターが入手可能である。ベクター成分は、一般には、限定されるものではないが、シグナル配列、複製起点、1以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終止配列のうちの1以上を含む。シグナル配列の成分本発明のポリペプチドは、直接的のみならず、典型的には、成熟タンパク質またはポリペプチドのN-末端に特異的切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドである異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても組換え生産され得る。選択された異種シグナル配列は、典型的には、宿主細胞によって認識され、処理されるすなわち、シグナルペプチダーゼによって切断されるものである。天然ポリペプチドシグナル配列を認識せず、処理しない原核生物宿主細胞では、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、lpp、または熱-安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列によって置き換えられる。酵母の分泌では、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、SaccharomycesおよびKluyveromycesα-因子リーダーを含めたα因子リーダー、または酸性ホスファターゼリーダー、C.albicansグルコアミラーゼリーダー、またはWO90/13646に記載されたシグナルによって天然シグナル配列を置き換えることができる。哺乳動物細胞発現においては、哺乳動物シグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、例えば、単純疱疹gDシグナルが入手可能である。そのような前駆体領域についてのDNAは、本発明のポリペプチドをコードするDNAに読み枠にて連結させる。複製起点の成分発現ベクターおよびクローリングベクターは、共に、1以上の選択された宿主細胞においてベクターが複製できるようにする核酸配列を含有する。一般には、クローニングベクターにおいては、この配列は、ベクターが宿主染色体DNAから独立して複製できるようにするものであり、複製起点または自律複製配列を含む。そのような配列は、種々の細菌、酵母およびウイルスでよく知られている。プラスミドpBR322由来の複製起点はほとんどのグラム-陰性細菌で適しており、2μプラスミド起点は酵母で適しており、および種々のウイルス起点SV40、ポリオーマ、アデノウイルス、VSVまたはBPVは哺乳動物細胞においてベクターをクローン化するのに有用である。一般に、複製起点の成分は、哺乳動物発現ベクターでは必要がないSV40起点が典型的に使用され得る。なぜならそれは単に初期プロモーターを含有するからである。選択遺伝子成分発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択マーカーとも言われる選択遺伝子を含有することができる。典型的な選択遺伝子は、a抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセート、またはテトラサイクリンに対する耐性を付与する、b栄養素要求株の欠損を補う、またはc天然培地からは入手できない決定的な栄養素を供給するタンパク質をコードする例えば、BacilliのためのD-アラニンラセマーゼをコードする遺伝子。選択スキームの1つの例は、宿主細胞の成長を阻止する薬物を利用する。異種遺伝子で首尾よく形質転換される細胞は薬物耐性を付与するタンパク質を生産し、かくして、選択レジメンで生き残る。そのような優性選択の例は、薬物ネオマイシン、マイコフェノール酸およびハイグロマイシンを用いる。哺乳動物細胞についての適当な選択マーカーのもう1つの例は、抗体核酸例えば、DHFR、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン-Iおよび-II、典型的には霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ等を取り込む形質転換受容性の細胞の同定を可能とするものである。例えば、DHFR選択遺伝子で形質転換された細胞は、まず、メトトレキセートMtxDHFRの競合アンタゴニストを含有する培養培地中で形質転換体の全てを培養することによって同定される。適当な宿主細胞は、野生型DHFRを使用する場合、DHFR活性を欠損したチャイニーズハムスター卵巣CHO細胞株である。別法として、本発明のポリペプチド、野生型DHFRタンパク質、およびアミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼAPHのようなもう1つの選択マーカーをコードするDNA配列で形質転換または同時トランスフェクトされた宿主細胞特に、内因性DHFRを含有する野生型宿主は、アミノグリコシド抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン、またはG418のような選択マーカーについての選択因子を含有する培地中での細胞増殖によって選択することができる。米国特許第4,965,199号参照。酵母で用いるのに適した選択遺伝子は酵母プラスミドYrp7に存在するtrp1遺伝子であるStinchcombら、Nature,282:391979。trp1遺伝子は、トリプトファンにより増殖する能力を欠如する酵母の突然変異体株についての選択マーカーを提供する例えば、ATCCNO.44076またはPEP4-1。Jones,Genetics,85:121977参照。ついで、酵母宿主細胞ゲノムにおけるtrp1損傷の存在は、トリプトファン非存在下での増殖による形質転換を検出するための有効な環境を提供する。同様に、Leu2-欠損酵母株ATCC20,622または38,626は、Leu2遺伝子を保持する公知のプラスミドによって補充される。加えて、1.6μm環状プラスミドpKD1から誘導されたベクターは、Kluyveromyces酵母の形質転換で用いることができる。別法として、組換え子ウシキモシンの大規模生産のための発現系がK.lactisで報告された。VandenBerg,Bio/Technology,8:1351990。Kluyveromycesの工業株による成熟組換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定なマルチコピー発現ベクターも開示されている。Fleerら、Bio/Technology,9;968-9751991。プロモーター成分発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識され、本発明のポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含有する。原核生物宿主で用いるのに適したプロモーターは、phoAプロモーター、β-ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファンtrpプロモーター系、およびtacプロモーターのようなハイブリッドプロモーターを含む。しかしながら、他の公知の細菌プロモーターが適当である。細菌系で用いられるプロモーターは、本発明のポリペプチドをコードするDNAに作動可能に連結されたシャイン-ダルガルノS.D.配列も含有するであろう。プロモーター配列は真核生物で知られている。実質的に全ての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からほぼ25~30塩基上流に位置したAT-リッチな領域を有する。多くの遺伝子の転写の起点から70~80塩基上流に見出されるもう1つの配列は、Nがいずれかのヌクレオチドであり得るCNCAAT領域である。ほとんどの真核生物遺伝子の3’末端においては、コード配列3’末端へのポリAテイルの付加のためのシグナルであり得るAATAAA配列である。これらの配列の全ては、適切に、真核生物発現ベクターに挿入される。酵母宿主で用いるための適当な促進配列の例は、3-ホスホグリセリン酸キナーゼ、あるいはエノラーゼ、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース-6-リン酸イソメラーゼ、3-ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、およびグルコキナーゼのような他の解糖酵素についてのプロモーターを含む。増殖条件によって制御される転写のさらなる利点を有する誘導性プロモーターである他の酵母プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ2、イソチトクロームC、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連する分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ、およびマルトースおよびガラクトース利用を担う酵素についてのプロモーター領域である。酵母発現で用いる適当なベクターおよびプロモーターは、EP73,657にさらに記載されている。酵母エンハンサーもまた、有利には、酵母プロモーターと共に用いられる。哺乳動物宿主細胞におけるベクター由来の本発明のポリペプチドの転写は、ウイルスのゲノム例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス2のようなアデノウイルス、ウシパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、B型肝炎ウイルスおよび、典型的には、サルウイルス40SV40、異種哺乳動物プロモーター例えば、アクチンプロモーター、または免疫グログリンプロモーター、熱-ショックプロモーターから得られるプロモーターによって制御され、但し、そのようなプロモーターは宿主細胞株と適合するものとする。SV40ウイルスの初期および後期プロモーターは便宜的には、SV40ウイルス複製起点も含有するSV40制限フラグメントとして得られる。ヒトサイトメガロウイルスの即時初期プロモーターは、便宜的には、HindIIIE制限フラグメントとして得られる。ベクターとしてのウシパピローマウイルスを用いて哺乳動物宿主においてDNAを発現するための系は、米国特許第4,419,446号に開示されている。この系の改変は、米国特許第4,601,978号に記載されている。また、単純疱疹ウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ-インターフェロンcDNAの発現についてはReyesら、Nature297:598-6011982参照。別法として、ラウス肉腫ウイルスの長い末端リピートをプロモーターとして用いることができる。エンハンサーエレメント成分高等真核生物による本発明のポリペプチドをコードするDNAの転写は、しばしば、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増大する。多くのエンハンサー配列が、今日、哺乳動物遺伝子から知られているグロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン、およびインスリン。典型的には、真核生物細胞ウイルス由来のエンハンサーを用いる。その例は、複製起点の後期側のSV40エンハンサーbp100~270、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーを含む。また、真核生物プロモーターの活性化のための促進エレメントについてはYaniv,Nature297:17-181982参照。エンハンサーは、ポリペプチド-コード配列に対して5’または3’側の位置にてベクターに接続され得るが、典型的には、プロモーターから5’側の部位に配置する。転写終止成分真核生物宿主細胞酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物由来の有核細胞で用いられる発現ベクターは、転写の終止およびmRNAの安定化に必要な配列も含む。そのような配列は、通常、真核生物またはウイルスDNAまたはcDNAの5’および、場合によっては、3’の非翻訳領域から入手できる。これらの領域は、本発明のポリペプチドをコードするmRNAの非翻訳部分におけるポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。1つの有用な転写終止成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。WO94/11026およびそこに開示された発現ベクター参照。宿主細胞の選択および形質転換本明細書において、ベクターにおいて本発明のポリペプチドをコードするDNAをクローン化または発現させるのに適した宿主細胞は原核生物、酵母、または前記した高等真核生物細胞である。この目的で適当な原核生物はグラム-陰性またはグラム-陽性生物、例えば、Escherichia、例えば、E.coliのようなEnterobacteriaceae、Enterobacter、Erwinia、Klebsiella、Proteus、Salmonella、例えば、Salmonellatyphimurium、Serratia、例えば、Serratiamarcescans、およびShigella、ならびにB.subtilisおよびB.licheniformis例えば、1989年4月12日に公開されたDD266,710に開示されたB.licheniformis41PのようなBacilli、P.aeruginosaのようなPseudomonas、およびStreptomycesのような真性細菌を含む。E.coliB、E.coliX1776ATCC31,537、およびE.coliW3110ATCC27,325のような他の株は適当であるが、典型的には、E.coliクローン化宿主はE.coli294ATCC31,446である。これらの例は限定的であるというよりも説明的である。原核生物に加えて、フィラメント状真菌または酵母のような真核生物微生物は、本発明のコードベクターのポリペプチドについての適当なクローン化または発現宿主である。Saccharomycescerevisiae、または通常のパン酵母は、下等な真核生物宿主微生物の中で最も一般的に用いられる。しかしながら、Schizosaccharomycespombe;例えば、K.lactis、K.fragilisATCC12,424、K.bulgaricusATCC16,045、K.wickeramiiATCC24,178、K.waltiiATCC56,500、K.drosophilarumATCC36,906、K.thermotolerans、およびK.marxianusのようなKluyveromyces宿主;yarrowiaEP402,226;PichiapastorisEP183,070;Candida;TrichodermareesiaEP244,234;Neurosporacrassa;SchwanniomycesoccidentalisのようなSchwanniomyces;ならびに例えば、Neurospora、Penicillium、Tolypocladiumのようなフィラメント状真菌、ならびにA.nidulansおよびA.nigerのようなAspergillus宿主のような多数の他の属、種および株が通常は入手可能であって、本明細書では有用である。本発明のグリコシル化ポリペプチドの発現に適した宿主細胞が多細胞生物から得られる。無脊椎動物細胞の例は植物および昆虫細胞を含む。多数のバキュロウイルス株および改変体、およびSpodopterafrugiperda青虫、Aedesaegypti蚊、Aedesalbopictus蚊、Drosophilamelanogasterミバエ、およびBombyxmoriのような宿主由来の対応する許容性昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、AutographacalifornicaNPVのL-1改変体、およびBomdyxmoriNPVのBm-5株が公に入手可能であり、そのようなウイルスは、特に、Spodopterafrugiperda細胞のトランスフェクションのために、本発明に従って本明細書でウイルスとして用いることができる。綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、およびタバコの植物細胞培養物も宿主として利用することができる。しかしながら、脊椎動物細胞への関心が最大となり、培養組織培養における脊椎動物細胞の増殖は慣用的手法となった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、SV40によって形質転換されたサル腎臓CV1株COS-7、ATCCCRL1651;ヒト胚腎臓系懸濁培養における増殖のためにサブクローン化された293または293細胞、Grahamら、J.GenVirol.36:591977;ベビーハムスター腎臓細胞BHK、ATCCCCL10;チャイニーズハムスター卵巣細胞/-DHFRCHO,Urlaubら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:42161980;マウスセルトリ細胞TM4,Mather,Biol.Reprod.23:243-2511980;サル腎臓細胞CV1ATCCCCL70;アフリカミドリザル腎臓細胞VERO-76,ATCCCRL-1587;ヒト頸部癌種細胞HELA,ATCCCCL2;イヌ腎臓細胞MDCK,ATCCCCL34;バッファローラット肝臓細胞BRL3A,ATCCCRL1442;ヒト肺細胞W138,ATCCCCL75;ヒト肝臓細胞HepG2,HB8065;マウス乳癌MMT060562,ATCCCCL51;TRI細胞Matherら、AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-681982;MRC5細胞;FS4細胞;およびヒト肝臓腫系HepG2である。宿主細胞は、本発明のポリペプチドの生産のために前記した発現ベクターまたはクローニングベクターで形質転換し、適切であれば、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために改変された慣用的な栄養培地中で培養する。宿主細胞の培養本発明のポリペプチドを生産するのに用いる宿主細胞は、種々の培地中で培養することができる。HamのF10Sigma、最小必須培地MEMSigma、RPMI-1640Sigma、ダルベッコの改変イーグル培地DMEM、Sigma、肝細胞のための通常の増殖培地Cambrex、プレ脂肪細胞のための増殖培地Cambrexのような市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適している。加えて、Hamら、Meth.Enz.58:441979、Barnesら、Anal.Biochem.102:2551980、米国特許第4,767,704号;第4,657,866号;第4,927,762号;第4,560,655号;または第5,122,469号;WO90/03430;WO87/00195;または米国再発行特許第30,985号に記載された培地のいずれも、宿主細胞のための培養培地として用いることができる。これらの培地のいずれも、必要であれば、インスリン、トランスフェリン、または表皮成長因子のようなホルモンおよび/または他の成長因子、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩のような塩、HEPESのような緩衝剤、アデノシンおよびチミジンのようなヌクレオチド、GENTAMYCIN登録商標薬物のような抗生物質、ミクロモラー範囲の最終濃度で通常は存在する無機化合物として定義される微量元素、およびグルコースまたは同等なエネルギー源を補充することができる。いずれの他の必要な補充物も、当業者に知られた適当な濃度で含めることができる。温度、pH等のような培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で従前に用いられるものであり、当業者に明らかであろう。ポリペプチド精製組換え技術を用いる場合、本発明のポリペプチド、例えば、ANGPTL4、抗ANGPTL4抗体、または抗αvβ5抗体は、細胞内で、ペリプラズム空間において生産することができ、あるいは直接的に培地に分泌することができる。本発明のポリペプチドは培養培地から、あるいは宿主細胞溶解物から回収することができる。膜結合型である場合、それは、適当な洗剤溶液例えば、トリトン-X100を用い、あるいは酵素切断によって膜から放出することができる。本発明のポリペプチドの発現で使用される細胞は、凍結-解凍サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤のような種々の物理的または化学的手段によって破壊することができる。本発明のポリペプチドを、組換え細胞タンパク質またはポリペプチドから精製するのが望ましくあり得る。以下の手法は適当な精製手順の例である:イオン-交換カラムでの分画;エタノール沈殿;逆相HPLC;シリカ上でのクロマトグラフィー、ポリアスパラギン酸カラム、DEAE等のようなアニオンまたはカチオン交換樹脂上でのヘパリンHAROSE登録商標クロマトグラフィー上でのクロマトグラフィー;等電点電気泳動;SDS-PAGE;硫酸アンモニウム沈殿;例えば、SephadexG-75を用いるゲル濾過;IgGのような混入物を除去するためのプロテインASepharoseカラム;および本発明のポリペプチドのエピトープタグ付き形態に結合させるための金属キレーティングカラム。タンパク質精製の種々の方法を使用することができ、そのような方法は当該分野で知られており、例えば、Deutscher,MethodsinEnzymology,1821990;Scopes,ProteinPurification:PrinciplesandPractice,Springer-Verlag,NewYork1982に記載されている。選択された精製工程は、例えば、用いる生産プロセスの性質、および生産される本発明の特定のポリペプチドに依存するであろう。例えば、細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、およびアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーは典型的な精製技術である。アフィニティーリガンドとしてのプロテインAの適当性は、抗体に存在するいずれかの免疫グロブリンFcドメインの種およびイソタイプに依存する。プロテインAを用いて、ヒトγ1、γ2またはγ4重鎖に基づく抗体を精製することができるLindmarkら、J.Immunol.Meth.62:1-131983。プロテインGは全てのマウスイソタイプで、およびヒトγ3で推奨されるGussら、EMBOJ.5:156715751986。アフィニティーリガンドが結合したマトリクスは大半はアガロースであるが、他のマトリクスが利用可能である。制御された多孔性ガラスまたはポリスチレンジビニルベンゼンのような機械的に安定なマトリクスは、アガロースで達成できるより速い流速およびより短い処理時間を可能とする。抗体がCH3ドメインを含む場合、BakerbondABX登録商標樹脂J.T.Baker,Phillipsburg,NJは精製で有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えば、先に示した技術もまた、回収すべき抗体に応じて利用可能である。E.coliのペリプラズム空間に分泌される抗体を単離するための手法を記載するCarterら、Bio/Technology10:163-1671992を参照。本発明のポリペプチドに対する共有結合修飾本発明のポリペプチド、例えば、ANGPTL4、またはポリペプチドアゴニストまたはポリペプチドアンタゴニストの共有結合修飾は本発明の範囲内に含まれる。それらは、適用可能であれば、化学的合成によって、あるいはポリペプチドの酵素的または化学的切断によって作製することができる。ポリペプチドの他のタイプの共有結合修飾は、選択された側鎖またはN-またはC末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と、ポリペプチドの標的化アミノ酸残基と反応させることによって、あるいは改変されたアミノ酸または非天然アミノ酸を伸長するポリペプチド鎖に取り込むことによって、分子に導入される。例えば、Ellmanら、Meth.Enzym.202:301-3361991;Norenら、Science244:1821989;および米国特許出願第20030108885号および第20030082575号。システイニル残基は、最も一般的には、クロロ酢酸またはクロロアセトアミドのようなα-ハロアセテートおよび対応するアミンと反応させて、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を得る。システイニル残基もまた、ブロモトリフルオロアセトン、α-ブロモ-β-5-イミドゾイルプロピオン酸、リン酸クロロアセチル、N-アルキルマレイミド、3-ニトロ-2-ピリジルジスルフィド、メチル2-ピリジルジスルフィド、p-クロロ水銀ベンゾエート、2-クロロ水銀-4-ニトロフェノール、またはクロロ-7-ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾールとの反応によって誘導体化される。ヒスチジル残基はpH5.5~7.0でのジエチルピロカルボネートとの反応によって誘導体化される。なぜならば、この因子はヒスチジル側鎖に比較的特異的であるからである。パラ-ブロモフェナシルブロミドもまた有用であり、反応は典型的には、pH6.0において0.1Mカコジル酸ナトリウム中で行われる。リシニルおよびアミノ-末端残基をコハク酸もしくは他のカルボン酸無水物と反応させる。これらの因子での誘導体化は、リシニル残基の電荷を逆にする効果を有する。α-アミノ-含有残基を誘導体化するための他の適当な試薬はメチルピコリンイミデート、ピリドキサールホスフェート、ピリドキサール、クロロボロハイドライド、トリニトロベンゼンスルホン酸、O-メチルイソ尿素、2,4-ペンタンジオン、およびグリオキシレートとのトランスアミナーゼ-触媒反応のようなイミドエステルを含む。アルギニル残基は、1または数個の慣用的試薬、とりわけ、フェニルグリオキサール、2,3-ブタンジオン、1,2-シクロヘキサンジオン、およびニンヒドリンとの反応によって修飾される。アルギニン残基の誘導体化は、反応がグアニジン官能基の高いpKaのためアルカリ性条件で行われることを必要とする。さらに、これらの試薬はリシンの基ならびにアルギニンのイプシロン-アミノ基と反応させることができる。チロシル残基の特定の修飾は、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によってスペクトル標識をチロシル残基に導入することができ、特に興味深い。最も一般的にはN-アセチルイミジゾールおよびテトラニトロメタンを用いて、各々、O-アセチルチロシル種および3-ニトロ誘導体を形成する。チロシル残基を、125Iまたは131Iを用いてヨウ素化して、ラジオイムノアッセイで用いられる標識されたタンパク質を調製する。カルボキシル側鎖基アスパルチルまたはグルタミルは、1-シクロヘキシル-3-2-モルホリニル-4-エチルカルボジイミドまたは1-エチル-3-4-アゾニア-4,4-ジメチルペンチルカルボジイミドのような、RおよびR′が異なるアルキル基であるカルボジイミドR-N=C=N-R’との反応によって選択的に修飾される。さらに、アスパルチルおよびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によってアスパラギニルおよびグルタミニル残基に変換される。グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、しばしば、各々対応するグルタミルおよびアスパルチル残基に脱アミド化される。これらの残基は、中性または塩基性条件下で脱アミド化される。これらの残基の脱アミド化形態は、本発明の範囲内に入る。他の修飾は、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖のα-アミノ基のメチル化T.E.Creighton,Proteins:StructureandMolecularProperties,W.H.FreemanCo.,SanFrancisco,pp.79-861983、N-末端アミンのアセチル化、およびいずれかのC末端カルボキシル基のアミド化を含む。もう1つのタイプの共有結合修飾は、本発明のポリペプチドへグリコシドを化学的にまたは酵素的にカップリングさせることを含む。これらの手法は、それらが、N-またはO-結合グリコシル化のためのグリコシル化能力を有する宿主細胞でのポリペプチドの生産を必要としない点で有利である。用いるカップリング態様に応じて、糖はaアルギニンおよびヒスチジン、b遊離カルボキシル基、cシステインのそれのような遊離スルフヒドリル基、dセリン、スレオニン、またはヒドロキシプロリンのそれのような遊離ヒドロキシル基、eフェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンのそれのような芳香族残基、またはfグルタミンのアミド基に結合させることができる。これらの方法は1987年9月11日に公開されたWO87/05330、およびAplinandWriston,CRCCrit.Rev.Biochem.,pp.259-3061981に記載されている。本発明のポリペプチド上に存在するいずれの炭水化物部分の除去も、化学的または酵素的に達成することができる。化学的脱グリコシル化は、化合物トリフルオロメタンスルホン酸、または同等な化合物へのポリペプチドの曝露を必要とする。この処理の結果、ポリペプチドをインタクトにしつつ、連結糖N-アセチルグルコサミンまたはN-アセチルガラクトサミンを除いてほとんどのまたは全ての糖が切断される。化学的脱グリコシル化はHakimuddinら、Arch.Biochem.Biophys.259:521987およびEdgeら、Anal.Biochem.,118:1311981によって記載されている。例えば、抗体上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakuraら、Meth.Enzymol.138:3501987によって記載された種々のエンド-およびエキソ-グリコシダーゼを用いることによって達成することができる。本発明のポリペプチドの共有結合修飾のもう1つのタイプは、種々の非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンの1つに、米国特許第4,640,835号;第4,496,689号;第4,301,144号;第4,670,417号;第4,791,192号;または第4,179,337号に記載されたようにポリペプチドを連結することを含む。医薬組成物本発明に従って用いる、本発明の分子、ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストの治療処方物は、凍結乾燥処方物または水溶液の形態で、所望により医薬上許容される担体、賦形剤または安定化剤の所望の程度の純度を有する分子、例えば、ポリペプチドを混合することによって貯蔵のために調製されるRemington’sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol,A.Ed.1980。許容される担体、賦形剤または安定化剤は、使用される用量および濃度において受容者に対して非毒性であり、これは、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸のような緩衝剤;アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤;塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール;メチルまたはプロピルパラベンのようなアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;およびm-クレゾールのような保存剤;低分子量約10残基未満ポリペプチド;血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのようなタンパク質;ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー;グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリシンのようなアミノ酸;グルコース、マンノースまたはデキストリンを含めた、単糖、二糖、および他の炭水化物;EDTAのようなキレート剤;スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールのような糖;ナトリウムのような塩-形成性対イオン;金属錯体例えば、Zn-タンパク質錯体;および/またはTWEEN登録商標、PLURONICS登録商標またはポリエチレングリコールPEGのような非イオン性界面活性剤を含む。有効成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、あるいは界面重合、例えば、各々、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン-マイクロカプセルおよびポリ-メチルメタクリレートマイクロカプセルによって調製されるマイクロカプセル、コロイド状薬物送達系例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ-粒子およびナノカプセル、あるいはマクロエマルジョンに捕捉することもできる。そのような技術は、Remington’sPharmaceuticalSciences,16thedition,Osol,A.Ed.1980に記載されている。また、Johnsonら、Nat.Med.,2:795-7991996;Yasuda,Biomed.Ther.,27:1221-12231993;Horaら、Bio/Technology,8:755-7581990;Cleland,DesignandProductionofSingleImmunizationVaccinesUsingPolylactidePolyglycoliteMicrosphereSystems,inVaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach,PowellandNewman,eds,PlenumPress:NewYork,1995,pp.439-462;WO97/03692,WO96/40072,WO96/07399;および米国特許第5,654,010号も参照。ある実施形態において、インビボ投与で用いられる処方物は滅菌されている。これは、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成される。徐放性調製物を調製することもできる。徐放性調製物の適当な例は本発明のポリペプチドを含有する固体体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリクスは、成形製品の形態、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルである。徐放マトリクスの例はポリエステル、ヒドロゲル例えば、ポリ2-ヒドロエチル-メタクリレート、またはポリビニルアルコール、ポリラクチド米国特許第3,773,919号、L-グルタミン酸およびγエチル-L-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRONDEPOT登録商標乳酸-グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドよりなる注射可能なマイクロスフェアのような、ポリ-乳酸-コグリコール酸PLGAポリマー、およびポリ-D---3-ヒドロキシ酪酸のような分解性乳酸-グリコール酸コポリマーを含む。エチレン-酢酸ビニルおよび乳酸-グリコール酸のようなポリマーは100日にわたっての分子の放出を可能とするが、あるヒドロゲルはより短い時間の間タンパク質を放出する。カプセル化抗体は身体中で長時間留まる場合、それらは37°Cにおける水分への曝露の結果として変性または凝集し得、その結果、生物学的活性を喪失し、免疫原性の変化が起こる可能性がある。関係する機構に応じて、安定化のために合理的戦略を工夫することができる。例えば、もし凝集機構が、チオ-ジスルフィド交換を介する分子間S-S結合形成であると発見されれば、安定化は、スルフヒドリル残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥し、適当な添加剤を用いて水分含有量を制御し、次いで、特定のポリマーマトリクス組成物を生じることによって達成することができる。例えば、ポリ電解質被覆を有するカプセルを記載する米国特許第6,699,501号も参照。さらに、本発明の治療タンパク質剤ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストは遺伝子治療によって被験体に導入し得ることも意図される。遺伝子治療とは、核酸を被験体へ投与することによって行われる療法をいう。遺伝子治療適用においては、遺伝子を細胞に導入して、その結果、例えば、欠陥遺伝子の置き換えのために、治療上有効な遺伝子産物のインビボ合成を達成する。遺伝子治療は、持続する効果が単一の処置によって達成される慣用的な遺伝子療法、および治療上有効なDNAまたはmRNAの1回または反復投与を含む遺伝子治療剤の投与を共に含む。アンチセンスRNAおよびDNAは、インビボでのある遺伝子の発現をブロックするための治療剤として用いることができる。例えば、本明細書中に記載されたAd-ANGPTL4-SiRNA参照。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞膜による制限された摂取に起因する低い細胞内濃度にも拘らず、それらが阻害剤として作用する細胞に移入することができることは既に示されているZamecnikら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA83:4143-42461986。例えば、それらの負に荷電したホスホジエステル基を非荷電基によって置き換えることによって、オリゴヌクレオチドを改変して、それらの摂取を増強することができる。遺伝子療法の方法の一般的な概説については、例えば、Goldspielら、ClinicalPharmacy12:488-5051993;WuandWuBiotherapy3:87-951991;TolstoshevAnn.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-5961993;MulliganScience260:926-9321993;MorganandAndersonAnn.Rev.Biochem.62:191-2171993;およびMayTIBTECH11:155-2151993参照。用いることができる組換えDNA技術の当該分野で通常知られている方法は、Ausubelら編1993CurrentProtocolsinMorecularBiology,JohnWileySons,NY;およびKriegler1990GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NYに記載されている。核酸を生きた細胞に導入するために利用できる種々の技術がある。該技術は、核酸がインビトロにて培養細胞に導入されるか、あるいはインビボにて意図した宿主の細胞に導入されるかに応じて変化する。インビトロでの核酸の哺乳動物細胞への導入に適した技術は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、DEAE-デキストラン、リン酸カルシウム沈殿方法等の使用を含む。例えば、インビボ遺伝子導入技術は、限定されるものではないが、例えば、ウイルス典型的にはレトロウイルスベクターでのトランスフェクション、およびウィルスコートタンパク質-リポソーム媒介性トランスフェクションを含むDzauら、TrendsinBiotechnology11:205-2101993。例えば、インビボ核酸導入技術は、アデノウイルス、単純疱疹Iウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、またはアデノ関連ウイルスのようなウイルスベクター、および脂質-ベースの系でのトランスフェクションを含む例えば、遺伝子の脂質-媒介性導入のための有用な脂質はDOTMA、DOPEおよびDC-Cholである。遺伝子療法においてウイルスベクターを用いる例は、Clowesら、J.Clin.Invest.93:644-6511994;Kiemら、Blood83:1467-14731994;SalmonsandGunzbergHumanGeneTherapy4:129-1411993;GrossmanandWilsonCurr.Opin.inGeneticsandDevel.3:110-1141993;Boutら、HumanGeneTherapy5:3-101994;Rosenfeldら、Science252:431-4341991;Rosenfeldら、Cell68:143-1551992;Mastrangeliら、J.Clin.Invest.91:225-2341993;およびWalshら、Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204:289-3001993に見出すことができる。いくつかの状況においては、核酸源に、細胞表面膜タンパク質または標的細胞に対して特異的な抗体、標的細胞上の受容体に対するリガンド等のような、標的細胞を標的とする因子を供するのが望ましい。リポソームを使用する場合、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質は、例えば、特定の細胞型に対して向性であるキャプシドタンパク質またはそのフラグメント、サイクリングにおいて内部移行を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局所化を標的とし、細胞内半減期を高めるタンパク質を、標的化するため、および/または摂取を容易とするために用いることができる。受容体-媒介性エンドサイトーシスの技術は、例えば、Wuら、J.Biol.Chem.262,4429-44321987;およびWagnerら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA87,3410-34141990によって記載されている。遺伝子マーキングおよび遺伝子療法プロトコルの概説については、Andersonら、Science256,808-8131992参照。用量および投与本発明の医薬組成物の用量および所望の薬物濃度は、考えられる特定の使用に応じて変化し得る。適当な用量または投与の経路の決定は、十分に、通常の医師の技量内である。動物実験は、ヒト療法についての有効用量の決定のための信頼性があるガイドラインを提供する。有効用量の種間スケーリングは、Mordenti,J.andChappell,W.TheuseofinterspeciesscalingintoxicokineticsInToxicokineticsandNewDrugDevelopment,Yacobiら、Eds.,PergamonPress,NewYork1989,pp.42-96によって公開された原理に従って行うことができる。疾患のタイプおよび重症度に応じて、ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストの約1μg/kg~50mg/kg例えば、0.1~20mg/kgは、例えば、1以上の別々の投与によるか、または連続的注入によるかを問わず、患者への投与のための最初の候補用量である。ANGPTL4または、そのアゴニストまたはアンタゴニストのインビボ投与を使用する場合、通常の用量は、投与の経路に応じて、1日あたり、哺乳動物の体重1kgあたり約10ng~100mgまで、好ましくは約1μg/kg/日~10mg/kg/日まで変化し得る。送達の特定の用量および方法に関するガイドラインは、文献において提供されている。例えば、米国特許第4,657,760号;第5,206,344号;または第5,225,212号参照。異なる処方物は、異なる治療化合物および異なる障害で有効であり、1つの器官または組織を標的とする投与は、例えば、もう1つの器官または組織に対するものとは異なる様式の送達を必要とするであろうと予測される。数日以上にわたる反復投与については、条件に依存して、疾患症状の所望の抑制が起こるまで、治療を維持する。しかしながら、他の用量レジメンが有用であり得る。典型的には、臨床家は、必要な生物学的効果を供する用量に到達するまで、本発明の分子を投与するであろう。本発明の療法の進行は、慣用的な技術およびアッセイによって容易にモニターされる。本発明の治療組成物は、限定されるものではないが、非経口、皮下、腹腔内、肺内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、クモ膜下腔内、経口、局所および鼻腔内投与を含めたいずれかの適当な手段によって投与することができる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内または皮下投与を含む。加えて、治療組成物は、適当には、特に減らした用量の抗体でのパルス注入によって投与される。ある実施形態において、治療組成物は、部分的には、投与が短期または長期であるかに応じて、注射、例えば、静脈内または皮下注射によって与えられる。本明細書中で記載するように、ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストは、1以上の治療剤と組み合わせることができる。組み合わせた投与は、別々の処方物、または単一の医薬処方物を用いる同時投与、およびいずれかの順序での連続的投与を含む。複数の薬剤の使用もまた本発明に含まれる。例えば、ANGPTL4またはANGPTL4アゴニストはさらなる治療剤の投与に先立つか、それに続くか、それと交互とするか、あるいはそれと同時に与えることができる。1つの実施形態において、双方または全ての活性な薬剤が同時にそれらの生物学的活性を発揮する期間が存在する。ある実施形態において、本発明の治療は、ANGPTL4アンタゴニスト、および1以上の治療剤の組み合わせ投与を含む。本発明では、複数の阻害剤の投与が考えられる。組み合わせた投与は、別々の処方物、または単一の医薬処方物を用いる同時投与、およびいずれかの順序での連続的投与を含む。例えば、ANGPTL4アンタゴニストはさらなる治療剤の投与に先立つか、それに続くか、それと交互とするか、あるいはそれと同時に与えることができる。1つの実施形態において、双方または全ての活性な薬剤がそれらの生物学的活性を同時に発揮する期間が存在する。疾患の予防または治療のためには、ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストの適当な用量は、前記定義の、治療すべき疾患のタイプ、疾患の重症度および経過、該薬剤が予防的目的で投与されるのかあるいは治療的目的で投与されるのか、従前の療法、患者の臨床的履歴、および薬剤への応答、および主治医の裁量に依存するであろう。薬剤は、適当には、一度に、または一連の治療にわたって患者に投与される。組み合わせ療法レジメンにおいては、本発明の組成物は、治療有効量にて、または治療上相乗的な量にて投与される。本明細書中に用いるように、治療有効量は、ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニスト、および1以上の他の治療剤の同時投与、あるいは本発明の組成物の投与の結果、標的化疾患または状態の低下または阻害がもたらされるような量である。治療上相乗的な量は、特定の疾患に関連する状態または症状を相乗的に、または有意に低下または排除するのに必要な、例えば、本明細書中に記載された、ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニスト、および1以上の他の治療剤の量である。製品本発明のもう1つの実施形態において、前記した方法および障害の治療で有用な物質を含有する製品が提供される。該製品は容器、ラベルおよび添付文書を含む。適当な容器は、例えば、ビン、バイアル、シリンジ等を含む。容器は、ガラスまたはプラスチックのような種々の材料から形成することができる。容器は状態を治療するのに有効な組成物を保有し、滅菌アクセスポートを有することができる例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有する静脈内溶液のバッグまたはバイアルであってよい。組成物中の少なくとも1つの活性な薬剤はANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストである。容器上の、または容器に付随するラベルは、組成物が選択された状態を治療するのに用いることを示す。製品は、さらに、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液のような医薬上許容される緩衝液を含む第二の容器を含むことができる。それは、さらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針およびシリンジを含めた、商業的およびユーザーの見地から望ましい他の物質を含むことができる。所望により、説明書、一般には書面による説明書の組が含まれ、それは、本明細書中に記載された障害のためのANGPTL4、アゴニストまたはアンタゴニストの使用および用量に関する。キットに含まれる説明書は、一般には、障害の治療のための、用量、投与スケジュール、および投与の経路に関する情報を含む。ANGPTL4、ANGPTL4アゴニストまたはANGPTL4アンタゴニストの容器は、単位用量、バルクパッケージ例えば、複数用量パッケージ、またはサブユニット用量であってよい。材料の寄託以下の材料は、AmericanTypeCultureCollection,10801UniversityBoulevard,Manassas,VA.20110-2209,USAATCCに寄託されている。寄託は、特許手続きの目的のための微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約、およびその下の規則ブダペスト条約の規定の下でなされた。これは、寄託日から30年の間、寄託の生きた培養の維持を確実とする。寄託は、ブダペスト条約の条項下で、かつ、関連米国特許の発行に際して、またはいずれかの米国または外国特許出願の公衆への公開に際してのいずれか早いときに、公衆への寄託の培養の子孫の永久的かつ制限のない利用可能性を保障し、かつ886OG638に特に言及する37CFR§1.14を含めた35USC§122およびそれに従う米国特許および商標局長官の規則に従って権利がある該長官によって決定されるものに対する子孫の利用可能性を保証する、Genentech,Inc.およびATCCの間の合意に従って利用可能とされるであろう。本出願の譲受人は、もし寄託された材料の培養が適当な条件下で培養された場合に死滅し、または失われ、または破壊されれば、該材料は通知によりそのもう1つの材料で迅速に置き換えられることに合意した。寄託された材料の利用可能性は、その特許法に従ういずれの政府の当局の下で許可された権利に違反して本発明を実施するライセンスと解釈されるべきではない。実施例1:ANGPTL4はヒト肝細胞の細胞-接着および増殖を誘導するアデノウイルスベクターの創製および形質導入:アデノウイルス構築体は、実質的に製造業者によって記載されたように、StratageneLaJolla,CAからのAd-easyベクター構築キットのポリリンカー部位にNot1-Not1cDNAインサートをクローン化することによって構築した。例えば、Hesserら、Blood,1041:149-1582004参照。hAngptl423-406PUR9384、mAngptl4184-410-IgGPUR9388およびmAngptl423-410PUR9452単一のflagタグ付きタンパク質の創製:回収された細胞培養液を抗flagM2樹脂SigmaA-2220に一晩通した。カラムをPBSでベースラインまで洗浄し、次いで、50mMクエン酸ナトリウムpH3.0で溶出させた。この容量をAmicon-1510,000MWCOMilliporeUFC901024で濃縮した。この最後の工程は1mMHCl/SuperQ水への透析、および0.2um濾過であった。4~20トリス/グリシンInvitrogenEC6028boxSDSpageゲル/-10mMDTTを用いて、純度を測定した。正しいタンパク質は、MassSpecまたはエドマンn-末端配列決定いずれかによって同定された。n-末端huFcタグが直列で続くhAngptl4184-406-IgGPUR9441n-末端flagタグの創製:回収された細胞培養液をProSepAAmersham113111835に一晩通した。カラムをPBSでベースラインまで洗浄した。続いて、4カラム容量0.5MTMAC/PBSpH7.5洗浄工程に続いて、ベースラインまでPBS洗浄を行った。溶出工程は50mMクエン酸ナトリウムpH3.0bumpであった。この容量をAmicon-1510,000MWCOMilliporeUFC901024で濃縮した。最終工程は、1mMHCl/SuperQ水への透析、および0.2um濾過であった。4~20トリス/グリシンInvitrogenEC6028boxSDSpageゲル/-10mMDTTを用いて、純度を測定する。正しいタンパク質はMassSpecまたはエドマンn-末端配列決定いずれかによって同定した。当該分野で知られた標準的技術を用い、組換えタンパク質も作製することもできる。Ad-ANGPTL4-SiRNAの創製:4つの潜在的ANGPTL4-SiRNA分子Qiagenを全長hANGPTL4配列に基づいて創製した。hANGPTL4発現を阻害するSiRNAの能力に基づいて、1つのANGPTL4-SiRNAを選択した。それは、ANGPTL4の以下のDNA標的配列、すなわち、GTGGCCAAGCCTGCCCGAAGA配列番号3、例えば、rGGCCAAGCCUGCCCGAAGAUU配列番号4および/またはrUCUUCGGGCAGGCUUGGCCAC配列番号5を標的化する。SiRNAは、RNAプロモーター、例えば、H1プロモーターGenScriptを有するCMVpShuttle-H1.1導入ベクターにクローン化した。次いで、SiRNA発現カセットをクローン化して、アデノウイルスAdhANGPTL4-SiRNA構築体を創製した。アデノウイルス構築体は、実質的に製造業者によって記載されているように、StratageneLaJolla,CAからのAd-easyベクター構築キットのポリリンカー部位へ、Not1-Not1cDNAインサートをクローン化することによって構築されたものである。例えば、Hesserら、Blood,1041:149-1582004参照。ANGPTL4の発現は、抗FLAG抗体を用いるウェスタンブロッティング分析によって確認した。強力に発現する1クローンを選択し、製造業者の指示に従って力価を増幅した。ウイルス調製物は、CsCl遠心分離によって精製し、PCRによって復帰変異体についてテストした。ウイルス力価は、製造業者の指示に従って、96ウェル細胞溶解実験によって決定した。これらのベクターは、供給されたpShuttleCMV-lacZと共に、E1およびE3領域が欠失されたAd5ゲノムを含有するAdEasyベクターを有するBJ5183エレクトロコンピテントelectrocompetent細菌中で組み換えた。初代ウイルスストックは、組み換えられたAdEasyプラスミドを宿主HEK293細胞に一過的にトランスフェクトすることによって調製した。アデノウイルスストックをHEK293細胞においてさらに増幅し、製造業者によって記載されたCsClグラジエント精製方法を用いて精製した。アデノウイルス作動力価は、Elisaアッセイによって得られた。mANGPTL4の創製:293細胞を、全長mANGPTL41-410をコードする核酸を含有する構築体で一過的にトランスフェクトした。mANGPTL4を上清から精製し、実験で用いた。肝細胞の細胞接着:初代肝細胞の細胞接着を誘導するANGPTL4の能力を、96-ウェルプレートにおいて評価した。プレートは、種々の濃度,例えば、コーティング無し、60μl中の0.3μg/ml、3.0μg/mlまたは30μg/mlの、マウスAngptl4サブ配列23-410、フィブロネクチンまたは対照タンパク質NL4で4°Cにて一晩被覆した。過剰のタンパク質を除去し、被覆したウェルを、PBS中の3BSAの200μlで37°Cにて1時間30分間ブロックした。インキュベーションの後、上清を吸引し、PBSで1回洗浄した。初代ヒト肝細胞を調製し、通常の増殖培地Cambrex中で増殖させた。細胞をPBSで3回洗浄した。細胞をトリプシン処理し、続いてトリプシン中和溶液Cloneticsで処理した。次いで、細胞を通常の増殖培地Cambrexに再懸濁させた。細胞を1.5×104細胞/200μl総容量のウェルにて撒いた。投与の24時間前に、細胞を5血清中に分けた。細胞をウェル中で37°Cにて2時間インキュベートした。上清を除去した。クリスタルバイオレットアッセイを用い、細胞の付着を測定した。50μlの10ホルマリン溶液をウェルに加え、10分間固定した。細胞をPBSで1回注意深く洗浄した。使用前に濾過した50μlの0.5クリスタルバイオレット溶液を加えた。溶液を室温にてウェル中で30分以上インキュベートした。ウェルをPBSで3~5回洗浄した。PBSをウェルから除き、乾燥した。96ウェルプレートをOD550で読み取った。図4参照。LandegrenのPNAG方法を用いることができる。Landegren,U.1984J.Immunol.Methods67:379-388参照。図4で見られるように、組換えmAngptl423-410は、インビトロにて初代肝細胞の細胞-接着を誘導する。肝細胞の増殖:初代ヒト肝細胞に対するAngptl4の増殖効果を調べた。Ad-ヒトhAngptl4、Ad-LacZおよびAd-Angptl3のアデノウイルス構築体を調製した。例えば、Hesserら、Blood1041:149-1582004参照。初代ヒト肝細胞を、アデノウイルス-Angptl4構築体Ad-Angptl4、対照としてのアデノウイルス-LacZ構築体Ad-LacZ、またはアデノウイルス-Angptl3構築体Ad-Angptl3を含む構築のいずれかで、10、100および1000の感染多重度MOIで形質導入した。通常の肝細胞培養培地Cambrex中で肝細胞を増殖させて5日後に、細胞をカウントした。図5に示すように、Ad-Angptl4は10のMOIにてインビトロで肝細胞増殖を誘導する。実施例2:ANGPTL4はプレ脂肪細胞の増殖を誘導するプレ脂肪細胞増殖:プレ脂肪細胞増殖を誘導するANGPTL4の能力を評価した。血清を含有する3ml容量の増殖培地プレ脂肪細胞増殖培地Cambrex中で30,000細胞/ウェルの密度にて細胞を分けることによって、ヒトプレ脂肪細胞内臓または皮下を6ウェルディッシュFalcon,Primaria上で増殖させた。以下の濃度rmAngptl423-4105μg/ml;IgG-mAngptl45μg/mlにて、アデノウイルス構築体、例えば、Ad-LacZ4、Ad-ヒトhAngptl423-4065またはAd-ヒトhAngptl3全長タンパク質6、または組換えタンパク質組換えマウスAngptl423-4102;IgG-mAngptl4184-4103または無添加1で形質導入されたCOS細胞からの500μlのCOS細胞馴化培地を、細胞に撒いた後に直接的に加えた。細胞を、5CO2インキュベーター中で37°Cにて5日間増殖させた。細胞を、500μlの1×トリプシンで3~5分間トリプシン処理した。細胞混合物0.5mlをピペットで9.5mlの等張緩衝液に入れ、希釈係数20を考慮して細胞カウンターバイアル中でカウントした。図6、パネルAで示されるように、組換えマウスAngptl423-4102およびhAngptl1423-4065を含有する馴化COS細胞培地は、共に、初代ヒト内臓プレ脂肪細胞の増殖を誘導する。図6、パネルBは、組換えマウスAngptl423-4102、およびhAngptl423-4065を含有する馴化COS細胞培地が、共に、初代ヒト皮下プレ脂肪細胞増殖を誘導することを示す。ヒト初代脂肪細胞へのAngptl4結合のFACS分析:ヒト初代脂肪細胞へのANGPTL4の結合を、FACS分析によって調べた。初代ヒト皮下脂肪細胞を、500,000~1×106細胞/試料ウェルにて10cm培養ディッシュに入れた。FACSの前日に細胞を分けた。細胞をPBSで1回洗浄し、次に、PBS中の20mMEDTAを10ml加え、10~20分間インキュベートした。20分後、細胞をプレートから剥がした。PBS中の5FCSを10ml加え、細胞を50mlのFalconチューブに移した。細胞を1.8Krpmにて4°C、5分間回転沈降させた。上清を除去し、細胞をPBS中の1mlの5FCSに再懸濁させた。100μlの細胞懸濁液を、1μgのタンパク質を含有する5mlのFACSチューブに分配し、氷上で30分以上インキュベートした。以下のタンパク質を用いた:mAngptl423-410、PUR9452、0.428mg/ml2μl/試料;hAngptl423-406、PUR9384、/-90μg/ml10μl/試料;mAngptl4184-410-IgG、PUR9388、8.5mg/ml0.2μl/試料;hAngptl4184-406-IgG、PUR9441、1.5mg/ml1μl/試料;および対照FLAG-BAPSigma0.1mg/ml2μl/試料。インキュベーションの後に、氷上で、チューブを、5mlのPBS中5FCSで満たした。細胞を2Krpmにて5分間回転沈降させた。上清を除去した。抗FLAG-FITC抗体Sigmaを加え2μlの抗体100μg/mlストック、氷上で5分間以上インキュベートした。最終抗体濃度は1μg/mlであった。PBS中の5FCSの5mlを加え、細胞を1.8krpmにて4°Cにて5分間回転沈降させた。上清を除去し、細胞を、氷上の5FCSを含む0.25mlのPBSに再懸濁させた。0.05アジ化ナトリウムを存在させて、受容体の内部移行を防止することもできる。1試料あたり、1μlのヨウ化プロビジウムPIの1:50希釈ストックを加えた。次いで、細胞をFACSに供した。図7に示すように、これらの条件下でヒトAngptl4形態、rhAngptl423-406、およびrhIgG-hAngptl4184-406は、共に、マウスオルソログと比較してより効果的に皮下脂肪細胞に結合する。実施例3:Angptl4は初代ヒト皮下プレ脂肪細胞の移動を誘導するAngptl4は細胞移動を誘導する:本発明者らは、初代ヒト皮下プレ脂肪細胞の細胞移動を誘導するAngptl4の能力を調べた。細胞移動度は、3μmのポアサイズを有するHTSマルチウェル組織培養インサートBectonDickinson,NJを用いて、記載されているように測定した例えば、Camenishら、J.Biol.Chem.,27719:17281-172902002参照。hANGPTL41-406を50/50/0.1BSA中で5、1および0.2μg/mlに希釈した。陽性対照として、膜を、10胎児ウシ血清FCS含有培地または0.1μg/mlの組換えヒトPDGF-BBRDsystemsいずれかと共にインキュベートした。PBM/0.1BSAを陰性対照として用いた。初代ヒト脂肪細胞をPBSで3回洗浄し、回収し、約2~5×105細胞/mlにてPBM/0.1BSAに懸濁させた。以下の細胞調製物をテストし、ANGPTL4をNL2として示す。調製物は底部チャンバーに加え、調製物を37°Cにて19時間インキュベートした。細胞懸濁液250μlを上部チャンバーに加え、5CO2湿潤化インキュベーター中で細胞を37°Cにて一晩移動させた。インキュベーションの後、培地を頂部および底部チャンバーから吸引し、膜の下方表面に移動した細胞をメタノールで固定し400μlのMeOH、4°Cにて30分、MeOHを除去し、40分間風乾、ヨウ化YO-PRO-1MolecularProbes,OR10μmにおいて、400μlのヨウ化YO-PRO-11mMストックからの1:100で染色した。OpenlabソフトウェアImprovision,MAを用い、移動の結果は、20倍倍率での細胞の平均数/顕微鏡視野について定量する。図8、パネルAで見られるように、初代ヒト皮下プレ脂肪細胞に加えられたhAngptl4はそれらを移動するように誘導する。図8、パネルBは7時間における移動を示す。図8、パネルCは、血清無し110胎児ウシ血清FCS2、PDGF-BB3、mANGPTL44、いずれかでの処理の7時間後における脂肪細胞の移動を図で示す。実施例4:Angptl4の改変体改変体ANGPTL4は、製造業者のプロトコルに従い、標準突然変異誘発キット例えば、QuickChangeXL部位特異的突然変異誘発キットInvitrogen,Carlsbad,Californiaを用いて作製した。2つのアミノ酸置換を、ヒトANGPTL4配列において行った例えば、図2参照。置換は位置162および164におけるものでありR162GおよびR164E、その結果、RKRからGKEへの変化がもたらされた。ANGPTL4タンパク質L280プラスミド、aa1-406または改変体ANGPTL4は、一過的にトランスフェクトされたCOS-7細胞の上清から単離した。精製のために、上清をニッケルカラムにロードした。タンパク質は抗FLAG-HRP抗体でのウエスタンブロットによって検出した。図3、パネルB参照。置換を行い、改変体ANGPTL4を天然または野生型ANGPTL4タンパク質と比較した場合、改変体ANGPTL4は、ウェスタンブロッティングによって、天然ANGPTL4よりも高い分子量を有することが判明した。天然タンパク質の位置162および164におけるRKRからGKEへの置換は、ANGPTL4のタンパク質分解を妨げた。実施例5:Angptl4はインテグリンαvβ5に結合するアンジオポエチンは、それらのフィブリノーゲンFBN様ドメインを介して、内皮細胞特異的チロシンキナーゼ受容体Tie2へ結合することによって脈管形成を調節する分泌因子である。分泌リガンドのファミリーに存在するコイルドコイルドメインは、リガンドのオリゴマー化に必要であることが判明した例えば、Procopioら、J.Biol.Chem.,274:30196-2011999参照。アンジオポエチンと同様に、ANGPTL3およびANGPTL4は分泌タンパク質であり、各々は、N-末端シグナルペプチド、それに続いて、コイルドコイルドメイン/およびC末端FBN様ドメインよりなる。ANGPTL3はFBN様ドメインインを介してαvβ3に結合すると判断された。本発明者らは、ANGPTL4がαvβ5に結合すると判断した。αvβ5インテグリンで安定にトランスフェクトされる293-1953細胞株を、ANGPTL4被覆プレートに結合または接着する能力についてテストした。細胞を回収し、PBS、1BSA、1mMCaCl2および1mMMgCl2を含有する無血清培地中に105細胞/mlに希釈した。細胞を抗インテグリンαvβ5抗体MAB1961Chemicon,Temecula,CAまたはペプチドによってか、またはそれら無しで、37°Cにて15分間プレインキュベートした。組換えmANGPTL4、BSAまたはビトロネクチン1μg、3μg、10μgまたは30μg/mlを、NuncMaxisorp96-ウェル平底マイクロタイタープレート上に4°Cにて一晩被覆し、リン酸緩衝化生理食塩水PBS、pH7.4中の3BSAの200μlで37°Cにて1.5時間ブロックした。細胞懸濁液5×104細胞/100μl/ウェル5×105/mlを被覆されたウェルに加え、プレートを37°Cにて5.5時間インキュベートした。非接着性細胞をPBS洗浄によって除去し、200μlのCyQuantGD染料MolecularProbesInvitrogendetectionTechnologiesCarlsbad,California1:400/細胞溶解緩衝液を加えることによって、細胞付着を測定し、2~5分間インキュベートした。480nm励起および520nm発光最大を用い、試料の蛍光を測定した。LandegrenのPNAG方法を用いることができる例えば、Landegren,J.Immunol.Methods,67:379-3881984参照。αvβ5を発現する細胞は、BSA、陰性対照と比較して、ANGPTL4およびビトロネクチンUSBiological,Swampscott,Massachusetts、陽性対照に対する付着を呈した。図9、パネルA参照。αvβ5インテグリンがANGPTL4細胞接着を媒介するのに十分か否かを判断するために、ブロッキング抗体を、細胞接着アッセイにおいて接着を阻害する能力についてテストした。機能的ブロッキング抗体抗αvβ5抗体MAB1961Chemicon,Temecula,CAまたは抗hANGPTL4抗体を、タンパク質被覆BSA1、ビトロネクチン2またはANGPTL43ウェルでのインキュベーションに先立って293-1953細胞に加えた。図9、パネルB参照。抗αvβ5および抗ANGPTL4抗体はANGPTL4細胞接着活性をなくした。さらなる実験を行って、ANGPTL4がαvβ5に結合することを確認した。ELISA実験を行って、mANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端1-183および/またはIgG-hANGPTL4-C末端184-406がαvβ5USBiological,37K,Swampscott,Massachusetts被覆プレートに結合するかどうかを検出した。コーティング緩衝液を含む100μl/ウェルのインテグリンαvβ5希釈液1μg/mlコーティング緩衝液50mM炭酸塩/炭酸水素塩,pH9.6を、4°Cにて一晩インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液PBS、pH7.4、0.05Tween-20で3回洗浄し、100μl/ウェルのブロッキング緩衝液PBS、pH7.4、0.5BSAを、温和に攪拌しつつ、室温にて1時間で加えた。種々の量0、0.070μg、0.22μg、0.66μg、2μg、または6μgの試料、mANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端1-183および/またはIgG-hANGPTL4-C末端184-406を試料緩衝液0.5BSA、50mMトリス、pH7.4、0.05Tween20、1mMMnCl2、50μMCaCl2、50μMMgCl2、100mMNaCl中で調製し、30分間インキュベートした。試料をプレートに加え前記でインキュベートした量にて100μl/ウェル、温和に攪拌しつつ室温にて2時間インキュベートした。プレートを緩衝液で洗浄し、アッセイ緩衝液PBS、pH7.4、0.5BSA、0.05Tween20中の100μl/ウェルの抗Flag-ホースラディッシュペルオキシダーゼHRP100ng/mlJackson,109-036-098を加え、温和に攪拌しつつ、室温にて1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、100μl/ウェルのテトラメチルベンジジンTMBMoss,Inc.を加え、良好な色が室温にて発色するまで、プレート中でインキュベートした。100μl/ウェルの停止溶液1MH3PO4を加えて、反応を停止させた。プレートを630nmで読み取った。mANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端およびIgG-hANGPTL4-C末端はαvβ5被覆プレートに結合したが、わずかにより多くのIgG-hANGPTL4-C末端がプレートに結合した。図9、パネルC参照。抗ANGPTL4抗体は、ANGPTL4のαvβ5被覆プレートへの結合を阻害する。ELISA実験を行った。コーティング緩衝液を含む100μl/ウェルのインテグリンαvβ5希釈液1μl/mlコーティング緩衝液50mM炭酸塩/炭酸水素塩、pH9.6を4°Cにて一晩インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液PBS、pH7.4、0.05Tween-20で3回洗浄し、温和に攪拌しつつ、100μl/ウェルのブロッキング緩衝液PBS、pH7.4、0.5BSAを室温にて1時間で加えた。試料緩衝液0.5BSA、50mMトリス、pH7.4、0.05Tween-20、1mMMnCl2、50μMCaCl2、50μMMgCl2、100mMNaCl中の0.6μg~6.0μgの試料、mANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端1-183および/またはIgG-hANGPTL4-C末端183-406を、抗ANGPTL4抗体1.5μgまたは抗Dscr1.5μgと共に30分間インキュベートした。インキュベーションの後、温和に攪拌しつつ、100μl/ウェルの試料/-抗体をプレートと共に室温にて2時間インキュベートした。プレートを緩衝液で洗浄し、アッセイ緩衝液PBS、pH7.4、0.5BSA、0.05Tween20中の100μl/ウェルの抗Flag-HRP100ng/mlを加え、温和に攪拌しつつ、室温にて1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、100μl/ウェルのTMBを加え、良好な色が室温で発色するまで、プレート中でインキュベートした。100μl/ウェルの停止溶液1MH3PO4を加えて、反応を停止させた。プレートを630nmにおいて読み取った。抗ANGPTL4抗体は、抗Dscr抗体、5G7モノクローナル抗体または培地と比較して、αvβ5被覆プレートへmANGPTL4、IgG-hANGPTL4-N末端およびIgG-hANGPTL4-C末端が結合する量を低下させた。図9、パネルD参照。もう1つの実験において、ANGPTL4およびインテグリンαvβ5の結合はELISAによって示された。この実験において、80μl/ウェルのhANGPTL4-C末端、ビトロネクチンまたはBSA5μg/mlを、コーティング緩衝液50mM炭酸塩/炭酸水素塩、pH9.6にてプレートに加え、4°Cにて一晩インキュベートした。プレートを洗浄し洗浄緩衝液:PBS、pH7.4、0.05Tween-20、培地、抗hANGPTL4抗体15μg/100μlまたは抗Dscr抗体15μg/100μlのいずれかを含む100μl/ウェルのブロッキング緩衝液PBS、pH7.4、0.5BSAを加え、温和に攪拌しつつ、室温にて1時間インキュベートした。プレートを洗浄し、100μl3~9μg/mlのαvβ5を加え、温和に攪拌しつつ、室温にて2時間インキュベートした。プレートを洗浄し、1μg/ml1:1000の抗αvβ5抗体Chemicon5μg/100μlをアッセイ緩衝液PBS、pH7.4、0.5BSA、0.05Tween20に加え、温和に攪拌しつつ、室温にて1時間インキュベートした。インキュベーションの後、プレートを洗浄し、100μl/ウェルのホースラディッシュペルオキシダーゼHRP抗マウス1:5000をアッセイ緩衝液に加えた。プレートを洗浄し、100μl/ウェルのテトラメチルベンジジンTMBを加え、良好な発色があるまで室温にてインキュベートした。反応を100μl/ウェルの1MH3PO4で停止させ、プレートを630nmで読み取った。αvβ5はANGPTL4レーン1、およびビトロネクチンレーン4被覆プレートに結合する。結合は、対照抗体である抗Dscrを用いた場合レーン3または対照タンパク質をプレートに被覆した場合レーン5を除いて、抗ANGPTL4抗体レーン2でブロックされる。図9、パネルE参照。よって、これらの知見は、組換えANGPTL4がαvβ5インテグリンに特異的に結合することを示す。実施例6:Angptl4は、静脈内注射した場合に、マウスにおいてトリグリセリドを増加させるトリグリセリドレベルを、ANGPTL4を含む種々のアデノウイルス構築体を注射したC57B1-6マウスにおいて測定した。C57B1-6マウスに、1アデノウイルスGFP構築体、2アデノウイルスGd構築体、3アデノウイルスANGPTL41-406構築体、4アデノウイルスANGPTL41-183構築体、5アデノウイルスANGPTL4184-406構築体、6アデノウイルスANGPTL4改変体構築体;7アデノウイルスANGPTL41-408構築体および8アデノウイルス対照構築体のいずれかを尾に静脈内注射した。mg/dlで表したトリグリセリドレベルは、注射から7日後に、マウス由来の血液試料から測定した。図10に見られるように、ANGPTL4のN-末端構築体1-183は、全長ANGPTL4構築体およびANGPTL4改変体構築体と共にトリグリセリドレベルに対して最も顕著な影響を有する。実施例7:ANGPTL4遺伝子破壊を含むマウスの創製および分析ANGPTL4の役割を調べるために、ANGPTL4遺伝子における破壊を相同組換えによって生じさせた。具体的には、ANGPTL4遺伝子に破壊を含むトランスジェニックマウスすなわち、ノックアウトマウスを、遺伝子標的化または遺伝子トラッピングいずれかによって創製した。突然変異は、5’および3’双方の末端での正しい標的化を確認するためのサザーンブロット分析によって確認した。ゲノムPCRによって遺伝子-特異的ジェノタイピングも行って、挿入の部位に近接するエクソンにアニールするプライマーを用いるRT-PCRによって示されたように、内因性天然転写物の喪失を確認した。標的化ベクターを129株ES細胞にエレクトロポレーションし、標的化クローンを同定した。標的化クローンを宿主胚盤胞にマイクロインジェクションして、キメラを得た。キメラをC57動物と交雑させて、F1へテロ接合体を得た。ヘテロ接合体を異種交配させて、F2野生型、ヘテロ接合体およびホモ接合体コホートを作製し、これを表現型分析で用いた。例外的に、もし十分なF1ヘテロ接合体が作製されなければ、F1hetを野生型C57マウスに交配させて、十分なヘテロ接合体を作製して、表現型について分析すべきコホートのために育種した。全ての表現型分析は誕生から12~16週に行った。結果ANGPTL4遺伝子破壊を含むマウスの創製および分析:これらのノックアウト実験において、ANGPTL4DNA22780-107と命名されるPRO197ポリペプチド;UNQ171をコードする遺伝子を破壊した。これらの実験についての遺伝子の具体的な情報は以下の通りである:突然変異したマウス遺伝子はヌクレオチド参照:NM020581に対応する。登録:NM020581NID:10181163;またはMus筋アンジオポエチン様4Angptl4;タンパク質参照:Q9Z1P8。登録:Q9SZ1P9NID;またはMus筋マウス。NG27肝臓アンジオポエチン関連タンパク質仮定タンパク質425O18-1フィブリノーゲン/アンジオポエチン関連タンパク質アンジオポエチン様タンパク質アンジオポエチン様4。MOUSESTRNRDB;ヒト遺伝子配列参照:NM139314。登録:NM139314NID:21536397ヒトアンジオポエチン様4ANGPTL4;ヒトタンパク質配列は参照:Q9BY76に対応する。登録:Q9BY78NID:またはホモサピエンスヒト。アンジオポエチン関連タンパク質3前駆体アンジオポエチン様4肝臓フィブリノーゲン/アンジオポエチン関連タンパク質HFARPアンジオポエチン様タンパク質PP1158。HUMANSTRNRDB。破壊されたマウス遺伝子はAngptl4アンジオポエチン様4であり、これはヒトANGPTL4のオルソログである。アリアーゼは本明細書中に記載されたもの、ならびにBK89、Bk89、FIAF、NG27、Ng27、HFARP、Farp-pending、フィブリノーゲン/アンジオポエチン関連タンパク質、主要組織適合複合体領域NG27、ARP4、PGAR、PPARG、PP1158、ANGPTL2、空腹時-誘導脂肪因子、PPARGアンジオポエチン関連タンパク質、肝臓アンジオポエチン関連タンパク質、および肝臓フィブリノーゲン/アンジオポエチン関連タンパク質を含む。標的化または遺伝子トラップ突然変異を、株129SvEVBrd-由来胚性幹細胞ES細胞において生じさせた。キメラマウスをC57BL/6Jアルビノマウスに交配させて、F1ヘテロ接合性動物を創製した。これらの子孫を異種交配させて、F2野生型、ヘテロ接合性、およびホモ接合性突然変異体子孫を創製した。例外的な場合例えば、非常に少数のF1マウスしかキメラから得られない場合には、F1へテロ接合性マウスを129SvEVBrd/C57ハイブリッドマウスに交配させて、F2マウスを生じさせるための異種交配用のさらなるヘテロ接合性動物を得た。表現型分析を、以下に記載したように、この世代からのマウスで行った。Chi-Sq.=2.76有意性=0.26294ホモ/n=0.16平均同腹仔サイズ=7レトロウイルス挿入OSTが起こり、コードエクソン2および3の間の遺伝子を破壊したNCBI登録NM020581.1。標的遺伝子の野生型発現は、胚性幹ES細胞において、およびRT-PCRによってテストされた全ての成体組織試料で、尾を除いて検出された。RT-PCR分析は、転写物が分析した-/-マウスで存在しないことを明らかとした。1.表現型分析総じての表現型のまとめ:ヒトアンジオポエチン様4ANGPTL4のオルソログをコードする遺伝子の突然変異の結果、-/-マウスにおいてコレステロールおよびトリグリセリドレベルが低下した。加えて、雄-/-マウスはグルコース耐性テストにおいてグルコース耐性の増強を呈した。突然変異体-/-マウスは、それらの/同腹仔と比較した場合に、増大した平均血清中IgMレベルおよび平均絶対好中球カウントを含めた免疫学的異常も呈した。転写物はRT-PCRによって存在しなかった。心血管表現型分析/代謝血液化学:心血管生物学の分野においては、表現型テストを行って、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈病のような心血管、内皮または脈管形成障害、高コレステロール高コレステロール血症および増大した血清トリグリセリド高トリグリセリド血症のような異脂肪血症、癌および/または肥満の治療のための潜在的標的を同定した。表現型テストは、血清コレステロールおよびトリグリセリドの測定を含む。加えて、血液化学表現型分析は、インスリン感受性、およびグルコース代謝の変化を測定するためのグルコース耐性テストも含んだ。異常グルコース耐性テストの結果は、限定され得るものではないが、1型および2型糖尿病、症候群Xなどの障害または状態を示す。この場合における表現型テストは、血清コレステロールおよびトリグリセリドの測定を含んだ。血液脂質手法:4の野生型および8のホモ接合体雄のコホートをこれらのアッセイで用いた。平均血清コレステロールおよびトリグリセリドレベルを測定し、性が一致する/同腹仔と比較した。グルコース耐性の同時テストを行った。というのは、このテストは、哺乳動物においてグルコースホメオスタシス障害を規定するための標準だからである。グルコース耐性テストは、Lifescanグルコメーターを用いて行った。動物に送達されるD-グルコースを2g/kgにて20溶液として腹腔内注射し、注射から0、30、60および90分後、血中グルコースレベルを測定した。COBASIntegra400Rocheを、マウスに対して血液化学テストを実行するために用いた。結果:性が一致する野生型同腹仔および過去の平均と比較した場合に、雄および雌ホモ接合性突然変異体マウスは顕著に減少した平均トリグリセリドレベルを呈した。また、これらの突然変異体は、それらの野生型同腹仔と比較した場合に、平均血清中コレステロールレベルの減少を示した。同時に、雄-/-マウスは、それらの性に合致した/同腹仔および過去の平均と比較した場合に、テストした全ての3つの間隔において正常な空腹時グルコースの存在下でグルコース耐性の増強を呈し、他方、雌-/-マウスは平均血清中グルコースレベルの減少を示した。まとめると、これらのノックアウトマウスは、脂質および/またはグルコース代謝に関して陽性表現型を呈した。かくして、ANGPTL4遺伝子が欠損した突然変異体マウスは、心血管疾患の治療のためのモデルとして役立ち得る。ANGPTL4のアンタゴニスト、またはそれをコードする遺伝子は、血液中脂質を調節するのに、特に、正常なコレステロールおよびトリグリセリド代謝を維持するのに重要な役割を演じるであろう。ANGPTL4のそのような阻害剤またはアンタゴニストは、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心不全、発作、種々の冠動脈病、肥満および/または糖尿病のような異脂肪血症に関連した心血管疾患の治療で有用であろう。免疫学表現型分析:免疫関連疾患および炎症疾患は、通常の生理学においては、傷害insultまたは傷害injuryに応答し、傷害または傷害からの修復を開始し、および外来性生物からの先天性および後天性防御を設置するのに非常に重要である、かなり複雑で、しばしば多数の相互に関係する生物学的経路の発現または結果である。これらの正常な生理学的経路が、応答の強度に直接的に関連してか、異常な調節または過剰な刺激の結果としてか、自己に対する反応としてか、またはそれらの組み合わせとしてのいずれかでさらなる傷害または傷害を引き起こす場合に、疾患または病理が起こる。これらの疾患の発生は、しばしば、複数工程の経路、しばしば、複数の異なる生物系/経路に関連したが、これらの経路の1以上における重要な地点での介入は、緩和または治療効果を有することができる。治療的介入は、有害なプロセス/経路の拮抗作用、または有益なプロセス/経路の刺激のいずれかによって起こり得る。Tリンパ球T細胞は、哺乳動物免疫応答の重要な成分である。T細胞は、主要組織適合性複合体MHC内の遺伝子によってコードされた自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染細胞、癌細胞、移植片等の表面にあるMHC分子と共に提示され得る。T細胞系は、宿主動物に健康の脅威を与えるこれらの変化した細胞を排除する。T細胞は、ヘルパーT細胞および細胞傷害性T細胞を含む。ヘルパーT細胞は、抗原提示細胞上の抗原-MHC複合体の認識後、広範に増殖する。ヘルパーT細胞は種々のサイトカイン、例えば、リンホカインも分泌し、これは、B細胞、細胞傷害性T細胞、および免疫応答に参画する種々の他の細胞の活性化において中枢的な役割を演じる。多くの免疫応答において、炎症細胞は傷害または感染の部位に浸潤する。移動する細胞は、影響された組織の組織学的調査によって判断できるように、好中性、好酸性、単球性またはリンパ球性であり得る。例えば、CurrentProtocolsinImmunology,ed.JohnE.Coligan,1994,JohnWileySons,Inc.参照。多くの免疫関連疾患が知られており、広範に研究されてきた。そのような疾患は免疫-媒介性炎症疾患例えば、慢性関節リウマチ、免疫媒介性腎臓病、肝胆嚢病、炎症性腸疾患IBD、乾癬、および喘息、非免疫媒介性炎症疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、新形成および移植片拒絶等を含む。免疫学の領域においては、炎症および炎症性障害の治療のために標的が同定された。免疫学の領域においては、本明細書では、炎症および炎症性障害の治療のために標的が同定されてきた。免疫関連疾患は、1つの例においては、免疫応答を抑制することによって治療できる。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体の使用は、免疫媒介性および炎症疾患の治療で有益であろう。免疫応答を阻害する分子を利用してタンパク質を直接的にか、または抗体アゴニストの使用を介して、免疫応答を阻害し、かくして、免疫関連疾患を緩和することができる。以下のテストを行った。血清免疫グロブリンイソタイピングisotypingアッセイ:血清免疫グロブリンイソタイピングアッセイは、サイトメトリビーズアレイCBAキットを用いて行った。このアッセイを用いて、単一試料において、マウスモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖イソタイプを迅速に同定した。値は相対的蛍光単位であり、カッパ軽鎖の検出に基づくものである。6より小さいいずれの値も有意ではない。結果:血清免疫グロブリンイソタイピングアッセイは、突然変異体-/-マウスが、それらの性が一致する/同腹仔と比較して、IgM血清免疫グロブリンの増大を呈したことを明らかとした。IgM免疫グロブリンは、細菌毒素の中和に対する液性免疫応答においてまず産生され、補体系を活性化するのに特に重要である。同様に、IgG免疫グロブリンは中和効果を有し、程度は低いが、補体系についての活性化で重要である。加えて、-/-マウスは、それらの/同腹仔、および過去の平均と比較した場合に、増大した平均絶対好中性カウントを呈した。観察された表現型は、ANGPTL4が炎症応答の負の調節因子であることを示唆する。これらの免疫学的異常は、ANGPTL4の阻害剤アンタゴニストが、T細胞増殖のような免疫系を刺激でき、この効果が、白血病の場合、他のタイプの癌の場合、およびAIDSに罹ったもののような免疫無防備状態の患者において個体に対して有益であろう場合に利用性を見出す重要な因子であり得ることを示唆する。従って、ANGPTL4またはそのアンタゴニストは、免疫応答を阻害する際に役割を果たし得、例えば、移植片拒絶または移植片対宿主病の場合に、有害な免疫応答を抑制するための有用な候補であろう。実施例8:Angptl4に結合する抗体の調製ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を生産するための技術は、当該分野で知られており、かつ本明細書中に記載される。使用できる抗原または免疫原は、本発明の精製されたタンパク質、タンパク質フラグメント、そのようなタンパク質を含有する融合タンパク質、および細胞表面で組換えタンパク質および/またはタンパク質フラグメントを発現する細胞を含む。抗原の選択は、過度な実験無くして、当業者が為すことができる。Balb/cのようなマウスは、完全フロイントアジュバント中に乳化させた抗原で免疫化し、1~100マイクログラムの量で皮下または腹腔内注射される。別法として、抗原はMPL-TDMアジュバントRibiImmunochemicalResearch,Hamilton,Mont.中に乳化され、動物の後足パッドに注射される。次いで、10~12日後に、選択されたアジュバント中に乳化されたさらなる抗原を免疫化マウスにブースター注射する。その後、数週間の間、マウスにさらなる免疫化注射をブースター注射することができよう。血清試料は、ELISAアッセイをテストするために眼窩後採血して、抗体を検出することによって、マウスから周期的に得ることができる。適当な抗体力価が検出された後に、抗体に陽性である動物に、与えられたリガンドの最終的な動脈内注射を注射することができる。3日または4日後に、マウスを屠殺し、脾臓細胞を回収した。次いで、35ポリエチレングリコールを用いて脾臓細胞を、ATCC、No.CRL1597から入手可能なP3X63AgU.1のような選択されたマウス骨髄腫細胞株に融合させる。融合により、ハイブリドーマ細胞が生じ、次いで、これを、HATヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン培地を含有する96ウェル組織培養プレート中で平板培養して、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害することができる。ハイブリドーマ細胞は、抗原に対する反応性についてELISAでスクリーニングされる。本明細書において、ANGPTL4に対する所望のモノクローナル抗体を分泌する陽性ハイブリドーマ細胞の決定は、十分に当業者内の技量内のものである。陽性ハイブリドーマ細胞を同系Balb/cマウスに腹腔内注射して、抗ANGPTL4モノクローナル抗体を含有する腹水を生じさせることができる。別法として、ハイブリドーマ細胞は組織培養フラスコまたはローラーボトル中で増殖させることができる。腹水中で生じたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈殿、続いてのゲル排除クロマトグラフィーを用いて達成することができる。別法として、プロテインAまたはプロテインGへの抗体の結合に基づくアフィニティークロマトグラフィーを使用することができる。例えば、1、40および70日に、E.coliで生じた500μgの組換えヒトANGPTL4タンパク質23-406でウサギを免疫化することによって、ポリクローナルウサギ抗体を生じさせた。免疫化から80および120日後に血清を回収し、プロテイン-Aセファデックスカラムによって抗体を精製した。実施例9:ブロッキングまたは中和抗体本明細書中で記載された抗原、例えば、ANGPTL4に対する抗体は、当該分野で公知の種々の技術、例えば、ELISAによって同定することができる。例えば、プレートを目的のポリペプチド、例えば、ANGPTL4またはそのフラグメントで被覆し、そのポリペプチド、例えば、ANGPTL4に対して生じた抗体と共にインキュベートすることができる。例えば、米国特許第6,348,350号、第6,372,491号および第6,455,496号参照。結合した抗体は種々の方法によって検出することができる。アンタゴニスト例えば、ブロッキングまたは中和抗体は、競合アッセイおよび/または活性アッセイによって同定することができる。例えば、ANGPTL4の発現は細胞肝細胞またはプレ脂肪細胞の増殖、脂肪細胞の移動を刺激するか、トリグリセリドの量を調節するか、またはαvβ5インテグリンに結合する。ANGPTL4に対するブロッキングまたは中和抗体の決定は、例えば、これらの活性をブロックする抗体の能力によって示すことができる例えば、図9、パネルB、DおよびE。例えば、肝細胞またはプレ脂肪細胞を平板培養し、抗ANGPTL4抗体または対照抗体またはPBSと共にAd-hAngptl4で形質導入されたCOS7細胞からの上清と共にインキュベートすることができる。数日後、細胞をトリプシン処理し、カウントすることができる。細胞の数を低下させる抗体は、ブロッキングまたは中和抗体として同定される。また、ANGPTL4は肝細胞接着およびプレー脂肪細胞移動を誘導することが示されており、かくして、ANGPTL4に対するブロッキングまたは中和抗体の決定は、肝細胞接着および/またはプレ脂肪細胞移動をブロックする抗体の能力によって示すことができる。また、ANGPTL4は脈管形成促進因子であることが示されている。例えば、LeJanら、AmericanJournalofPathology,1645:1521-15282003参照。かくして、ANGPTL4に対するブロッキングまたは中和抗体を、脈管形成アッセイ、例えばCAMアッセイにおいてANGPTL4と組み合わせた抗体を用いることによって同定することができる。明細書は、当業者が本発明を実施できるのに十分であると考えられる。本明細書中に記載された実施例および実施形態は説明目的のためのみのものであると理解される。本発明は寄託された構築体によって範囲が限定されるものではない。というのは、寄託された実施形態は本発明のある態様の単一の説明を意図するものであり、機能的に同等ないずれの構築体も本発明の範囲内にあるからである。本明細書の材料の寄託は、書面による記載が、その最良のものを含めた本発明のいずれの態様の実施を可能とするのに不十分なものであるという自認を構成するものではなく、また、特許請求の範囲をそれが表す特定の説明に限定するものと解釈されるべきではない。事実、本明細書中で示され、記載されたものに加えて本発明の種々の改変はこれまでの記載から当業者に明らかになり、それは添付の請求の範囲内に入る。本明細書中で引用した全ての刊行物、特許、および特許出願は、参考として、全ての目的でその全体を援用する。"