CysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlySEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、LysValTrpGlySerIleLysGlyLeuThrGluSEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、ArgLeuAlaCysGlyValIleGlyIleSEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドと結合する抗体。SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドが、変異型SOD1タンパク質である、請求項1に記載の抗体。SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドが、SEQIDNO2のアミノ酸配列のうち、アミノ酸番号3、4、5、6、8、10、12、14、16、19、20、22、29、37、38、40、41、43、45、46、47、48、49、57、59、65、66、72、76、80、84、85、86、87、89、90、93、95、97、99、100、101、104、105、106、108、111、112、113、114、115、116、117、118、124、125、126、127、132、133、134、139、140、141、144、145、146、147、148、149、および151からなる群から選択されるいずれか1つのアミノ酸残基に、1アミノ酸の置換、欠失または付加を有するものである、請求項1または2に記載の抗体。SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドが、筋萎縮性側索硬化症ALSと関連する、請求項1~3のいずれか1項に記載の抗体。SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質には結合しない、請求項1~4のいずれか1項に記載の抗体。モノクローナル抗体である、請求項1~5のいずれか1項に記載の抗体。NITEP941、NITEBP942、NITEBP943、およびNITEBP1100のハイブリドーマのいずれかにより産生される、請求項6に記載の抗体。被検体から採取された細胞含有サンプルについて、請求項1~7のいずれか1項に記載の抗体を用いてスクリーニングし、そしてその抗体に結合するタンパク質を検出することを含む、SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質以外の、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドの検出方法。SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質以外の、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドが、SEQIDNO2のアミノ酸配列のうち、アミノ酸番号3、4、5、6、8、10、12、14、16、19、20、22、29、37、38、40、41、43、45、46、47、48、49、57、59、65、66、72、76、80、84、85、86、87、89、90、93、95、97、99、100、101、104、105、106、108、111、112、113、114、115、116、117、118、124、125、126、127、132、133、134、139、140、141、144、145、146、147、148、149、および151からなる群から選択されるいずれか1つのアミノ酸残基に、1アミノ酸の置換、欠失または付加を有する物である、請求項8に記載の検出方法。SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質以外の、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドの存在が、筋萎縮性側索硬化症ALSのリスクと関連する、請求項8または9に記載の検出方法。本発明は、筋萎縮性側索硬化症ALSの発症の分子機構の一端を解明し、また、解明されたALS発症の分子機構を利用して、ALSのリスクを検出することを課題とする。本発明は、変異型SOD1タンパク質を検出することにより、ALSのリスクを検出する方法を提供することにより、上記課題を解決した。すなわち、変異型SOD1タンパク質を検出するために、本発明においては、野生型すなわち正常なSOD1タンパク質は結合しないが、変異型SOD1タンパク質には結合する抗体を提供することにより、上記課題を解決した。本発明は、SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質と比較して、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチド領域の立体構造変化が、筋萎縮性側索硬化症ALSのリスクと関連することが示されたことに基づいて完成されるに至ったものである。従って、具体的には、本発明の一態様において、上記の事実に基づいて、被検体から採取された細胞含有サンプルについて、変異型SOD1タンパク質に対して結合する抗体を用いてスクリーニングし、そしてその抗体に結合するタンパク質を検出することにより、SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質以外の、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドを検出することを通じて、ALSのリスクを検出する方法を提供する。上記の態様において、変異型SOD1タンパク質の検出は、野生型すなわち正常なSOD1タンパク質には結合しないが、変異型SOD1タンパク質には結合する抗体を用いて、変異型SOD1タンパク質のみを検出することによって実現することができる。そのような抗体の例として、CysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlySEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、LysValTrpGlySerIleLysGlyLeuThrGluSEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、ArgLeuAlaCysGlyValIleGlyIleSEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドと結合する抗体を挙げることができる。この検出方法により、SEQIDNO2のアミノ酸配列からなる野生型SOD1タンパク質は検出されないが、変異型SOD1タンパク質におけるSEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチド領域の立体構造変化が検出される場合、そのサンプルの起源である個体は、ALSの発病リスクを有していると判断される。本発明の別の一態様において、CysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlySEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、LysValTrpGlySerIleLysGlyLeuThrGluSEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、ArgLeuAlaCysGlyValIleGlyIleSEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドと結合する抗体自体を提供する。これらの態様において、上記抗体が結合する物質は、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチド領域の立体構造変化を伴う変異型SOD1タンパク質であり、すなわち、本願発明の抗体は、変異型SOD1タンパク質を検出することができる。具体的には本願発明の抗体は、SEQIDNO2のアミノ酸配列のうち、アミノ酸番号3、4、5、6、8、10、12、14、16、19、20、22、29、37、38、40、41、43、45、46、47、48、49、57、59、65、66、72、76、80、84、85、86、87、89、90、93、95、97、99、100、101、104、105、106、108、111、112、113、114、115、116、117、118、124、125、126、127、132、133、134、139、140、141、144、145、146、147、148、149、および151からなる群から選択されるいずれか1つのアミノ酸残基に、1アミノ酸の置換、欠失または付加を有するものを検出することができる。また、未だ発見されていないSOD1遺伝子変異についても、その変異により産生される変異型SOD1タンパク質が、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチド領域の立体構造変化を伴うものであるか否かを検出することが出来る。上記抗体が結合するSEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチド領域の立体構造変化は、筋萎縮性側索硬化症ALSと関連する、という特徴を有していることが示された。本発明において作製され、そして使用される抗体は、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体であることが好ましく、本発明においては、406、659、または785それぞれ、寄託番号NITEP941、NITEBP942、およびNITEBP943受託日はいずれも2010年5月12日または27寄託番号NITEBP1100受託日は2011年5月12日のハイブリドーマのいずれかにより産生される上記抗体を提供することができる。本明細書において、特定の配列においてアミノ酸が変異されたという場合、アミノ酸が欠失されたもの、アミノ酸が置換されたもの、またはアミノ酸が付加されたもの、のいずれかであることを意味する。本発明において、抗体には、変異型SOD1タンパク質に対して結合性の抗体フラグメントまたは修飾抗体もまた含まれる。この様な抗体フラグメントには、例えば、上述したモノクローナル抗体のFab、Fab2、Fv、または上述した抗体に由来する一本鎖FvH鎖FvおよびL鎖Fvがリンカーで結合したもの、scFv、が含まれる。また、このような抗体フラグメントは、例えばパパイン、ペプシン等の酵素により処理することにより、または抗体フラグメントをコードする遺伝子を構築し、それを発現ベクター中に組み込み、そして適切な宿主細胞中でこのベクターを発現することにより組換え的に、調製することもできる。修飾抗体としては、ポリエチレングリコールPEGなどの様々な分子に結合させた抗体などを使用することができる。本発明により、変異型SOD1タンパク質を検出することにより、ALSのリスクを検出する方法を新たに提供することができた。本発明においてはさらに、上記の方法において変異型SOD1タンパク質を検出するために使用することができる、野生型すなわち正常なSOD1タンパク質は結合しないが、変異型SOD1タンパク質に結合する抗体を提供することもできる。これらの効果により、これまでは臨床的に鑑別が難しかったALSまたはALSのリスクを、確実に検出することができる。筋萎縮性側索硬化症ALSは、コンフォメーション病の一つとして知られており、この疾患のうち家族性ALSの原因タンパク質は、SOD1タンパク質である。野生型のヒトSOD1スーパーオキシドジスムターゼ1タンパク質のアミノ酸配列およびそれをコードする遺伝子のヌクレオチド配列は、GenBankAccessionNoNM000454として、入手可能なものであり、本件明細書中においては、そのタンパク質のアミノ酸配列をSEQIDNO2として、そしてそれをコードするヌクレオチド配列をSEQIDNO1として、それぞれ記載する。このSEQIDNO2のアミノ酸配列に関して、当該技術分野においては、SOD1タンパク質のアミノ酸番号をカウントする際、野生型SOD1タンパク質の第1メチオニンを除くことが一般的であり、従って、本件明細書中のSEQIDNO2のアミノ酸配列は、GenBankAccessionNoNM000454において開示されるアミノ酸配列のうち第1メチオニンを除いたものとして記載している。SOD1タンパク質には、現在までに122種類もの点変異が報告されており、これらのうち、現段階において100種以上の変異型SOD1タンパク質が実際に家族性ALSに関与することが知られている家族性ALSに関与することが知られている具体的なSOD1タンパク質の変異については、図1を参照。図1において、WTで示した行が野生型SOD1タンパク質のアミノ酸配列を示し、その上側に記載したアミノ酸はそれぞれの変異型SOD1タンパク質の変異アミノ酸を示す。変異アミノ酸の表示のうち、Δは欠失を示し、は挿入を示し、は停止コドンを示す。これまでの研究より、これらの家族性ALSに関与することが知られている変異型SOD1タンパク質のうち4種類の変異型SOD1タンパク質SEQIDNO2のアミノ酸配列の番号に基づいて、A4V、G85R、G93A、およびL126stopに関して、Derlin1のC末端12アミノ酸であるDerlin1CT4PheLeuTyrArgTrpLeuProSerArgArgGlyGlySEQIDNO7と特異的に結合することが明らかにされているNishitohetalGenesDev2008。家族性ALSに関与する様々な変異型SOD1タンパク質とDerlin1CT4との結合から、変異型SOD1タンパク質のDerlin1との結合様式は、それぞれの変異型SOD1タンパク質が、各変異アミノ酸部位近傍でDerlin1結合部位を形成していることによるとは考えにくく、野生型SOD1タンパク質のアミノ酸配列中にDerlin1結合領域がもともと存在すると考えられた。そこで、次に、SOD1タンパク質側のDerlin1との相互作用部位を検討したところ、SEQIDNO2第1メチオニンを除いたアミノ酸配列から構成されるものにより示されるアミノ酸配列で規定される野生型SOD1タンパク質のうち、N末端側5~18番アミノ酸からなるペプチド領域ValCysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlyIleIleSEQIDNO3がDerlin1との結合部位であることが明らかになった図1の一重下線部分。この結果から、野生型では、立体構造上隠されている5~18番目アミノ酸配列からなるペプチド領域SEQIDNO3が、家族性ALSに関与する変異型SOD1タンパク質では立体構造的に露出し、その結果Derlin1と結合することを通じて、家族性ALSの発症の原因となっていることが予想された。そこで、本発明においては、変異型SOD1タンパク質のアミノ酸配列SEQIDNO2のうちの、5~18番目アミノ酸からなるペプチド領域SEQIDNO3と結合することができる抗体を作製することとした。SEQIDNO3のアミノ酸配列のうち、N末端のValとC末端の2つのIleが疎水性であり、免疫原の水溶性を低下させる可能性が考えられたため、実際には、6~16番目アミノ酸配列からなるペプチド領域CysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlySEQIDNO4を免疫原として使用した。得られた抗体について、実際に細胞内で産生された変異型SOD1タンパク質例えば、G85RおよびG93Aに対して結合するが、野生型SOD1タンパク質SEQIDNO2に対しては結合しないことを指標にして、スクリーニングを行い、候補抗体を選択した。その際、上述したように、Derlin1と変異型SOD1タンパク質との結合が、SOD1タンパク質での変異に基づく立体構造の変化の結果生じる可能性があることが示唆されたことから、非変性条件下においてすなわち、SOD1タンパク質の立体構造を破壊することなくスクリーニングを行った。その結果、目的とする特徴を有する抗体を産生する3種類のハイブリドーマ細胞株、406、659、および785それぞれ、千葉県木更津市かずさ鎌足258、独立行政法人製品評価技術基盤機構NationalInstituteofTechnologyandEvaluation:NITE、特許微生物寄託センターNITEPatentMicroorganismsDepositary:NPMDにおいて、NITEP941、NITEBP942、およびNITEBP943として寄託;受託日はいずれも2010年5月12日を得ることができた。このような知見に基づいて、本発明の一態様において、CysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlySEQIDNO4のアミノ酸配列またはSEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドと結合する抗体を提供する。本発明の一態様においてさらに、変異型SOD1タンパク質例えば、G85RおよびG93Aに対して結合するが、野生型SOD1タンパク質SEQIDNO2に対しては結合しないという特徴を有する抗体を検索した。野生型SOD1タンパク質の立体構造を解析したところ、野生型SOD1タンパク質SEQIDNO2の5~18番目アミノ酸配列SEQIDNO3はβストランド構造を形成しており、このβストランド構造に対して、N末端側30~40番アミノ酸からなるペプチド領域LysValTrpGlySerIleLysGlyLeuThrGluSEQIDNO5により形成されるβストランド構造またはC末端側143~151番アミノ酸からなるペプチド領域ArgLeuAlaCysGlyValIleGlyIleSEQIDNO6により形成されるβストランド構造とが、相対するように近接して配置されていることが明らかになった。そして、その様な構造を有することにより、上述する3つのβストランド構造は、いずれも、野生型SOD1タンパク質では立体構造上隠されているが、変異型SOD1タンパク質では立体構造的に露出されて、抗体により検出可能になることが予想された。そこで、野生型SOD1タンパク質では立体構造上隠されているが、変異型SOD1タンパク質では立体構造的に露出されているポリペプチド領域の候補として、野生型SOD1タンパク質SEQIDNO2のうち、変異によって構造変化する5~18番目アミノ酸配列部分に立体構造的に近接した2つのペプチド領域、N末端側30~40番アミノ酸からなるペプチド領域LysValTrpGlySerIleLysGlyLeuThrGluSEQIDNO5またはC末端側143~151番アミノ酸からなるペプチド領域ArgLeuAlaCysGlyValIleGlyIleSEQIDNO6を選択し、免疫原として使用することとした図1の二重下線部分。得られた抗体について、実際に細胞内で産生された変異型SOD1タンパク質例えば、G85RおよびG93Aに対して結合するが、野生型SOD1タンパク質SEQIDNO2に対しては結合しないことを指標にして、非変性条件下においてすなわち、SOD1タンパク質の立体構造を破壊することなくスクリーニングを行い、候補抗体を選択した。その結果、目的とする特徴を有する抗体を産生する1種類のハイブリドーマ細胞株、27NITEBP1100;受託日は2011年5月12日を得ることができた。このような知見に基づいて、本発明の一態様において、LysValTrpGlySerIleLysGlyLeuThrGluSEQIDNO5のアミノ酸配列またはArgLeuAlaCysGlyValIleGlyIleSEQIDNO6を含むポリペプチドと結合する抗体を提供する。実際に家族性ALSとの関連性が知られている上述した122種の変異型SOD1タンパク質の一部を選択し、これらの抗体と結合することができるか否かを検出したところ、これらの抗体はいずれも、非変性条件下にて、試験した全ての変異型SOD1タンパク質と結合することが示された。従って、本発明の抗体は、SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質すなわち、野生型SOD1タンパク質には結合しないが、それ以外のSEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドに対しては結合することができる。ここで、これらの抗体が結合する対象であるSEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドには、変異型SOD1タンパク質が含まれ、より具体的にはSEQIDNO2のアミノ酸配列のうち、例えばアミノ酸番号3、4、5、6、8、10、12、14、16、19、20、22、29、37、38、40、41、43、45、46、47、48、49、57、59、65、66、72、76、80、84、85、86、87、89、90、93、95、97、99、100、101、104、105、106、108、111、112、113、114、115、116、117、118、124、125、126、127、132、133、134、139、140、141、144、145、146、147、148、149、または151のいずれか1つのアミノ酸残基に、1アミノ酸の置換、欠失または付加を有するものなどが含まれる。これらの結果から、SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質以外の、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチド領域の立体構造変化の存在が、筋萎縮性側索硬化症ALSの発症と関連するリスク因子であることが示された。このような知見に基づいて、本発明の別の一態様においてはさらに、変異型SOD1タンパク質限定的ではない例として、例えば、G85RおよびG93Aに対しては結合するが、野生型SOD1タンパク質SEQIDNO2に対しては結合しない抗体を使用して、被検体から採取された細胞含有サンプルについてスクリーニングし、そしてその抗体に結合するタンパク質を検出することにより、SEQIDNO2のアミノ酸配列からなるタンパク質以外の、SEQIDNO4のアミノ酸配列、SEQIDNO4において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO5のアミノ酸配列、SEQIDNO5において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列、SEQIDNO6のアミノ酸配列、またはSEQIDNO6において1アミノ酸が変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドを検出する方法、そしてその方法を通じて、家族性ALSの発症に関連するリスクを検出する方法を提供する。実施例1:変異型SOD1タンパク質に対する抗体の作製1この実施例においては、野生型SOD1タンパク質に対しては結合しないが、変異型SOD1タンパク質に対して結合することができる抗体を産生することを目的にして行った。1ラットの免疫SOD15~18aaValCysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlyIleIleSEQIDNO3のうち、N末端およびC末端に存在する疎水性アミノ酸VおよびIが水溶性を低下させる可能性が考えられたため、SOD1タンパク質の6~16番アミノ酸からなるペプチドCysValLeuLysGlyAspGlyProValGlnGlySEQIDNO4のペプチドを免疫原として作製した。このSOD1タンパク質の6~16番アミノ酸からなるペプチドを、キーホールリンペットヘモシアニンKLH;Operon社と複合化した後、1mgmLに調製した。SOD1タンパク質の6~16番アミノ酸からなるペプチドのペプチド溶液400μLとFreundの完全アジュバントSigma800μLとを、ルアー式注射筒で攪拌してエマルジョン化し、抗原とした。調製した抗原は一匹当たり200μLをラットWKYIzmメス、免疫時8週齢;日本クレア3匹に後肢肉球より片足100μLずつ皮内注射した。2ミエローマ細胞の調製、リンパ節細胞の調製、細胞融合マウスミエローマ細胞株SP20Ag14SP2DSファーマメディカルを、10ウシ胎児血清biowestを含むGIT培地和光純薬中で37°C、5CO2の条件下で培養した。このマウスミエローマ細胞株は、免疫したマウスから採取する細胞との融合予定日から数えて4日前にストックより起こし、細胞融合の当日にはラット1匹当たり10cmディッシュ6枚がミエローマ細胞によりコンフルエントになるように播いた。細胞融合の当日、GIT培地を吸引除去し、ディッシュ一枚あたりDMEM高グルコースこの培養液を以下において単にDMEMという;シグマアルドリッチ4mLを加えてSP2を剥がした。浮遊液を50mLファルコンチューブに集め、1000rpm、3分間遠心して上清を吸引除去した。さらにDMEM20mLで細胞を浮遊させ、再度1000rpm、3分間遠心し上清を吸引除去した。最後に5mLDMEMで細胞を浮遊させ融合に用いるSP2細胞液とした。1において免疫されたラットを、エーテルで深麻酔し、心臓より採血を行った。その後、頸椎脱臼させて確実に致死させた後、開腹し腸骨リンパ節を摘出した。セルストレイナーBectonDickinsonandCompanyを用いて、リンパ節から抗体産生B細胞を含むリンパ節組織細胞をDMEM2mL中に回収した。リンパ節細胞液をSP2細胞液中に加え、DMEMで全量40mLとして懸濁後、1200rpm、10分間遠心した。上清を吸引除去し沈殿をタッピングでほぐした後、手で握って体温にて2分間インキュベートした。そこに予め調製しておいたポリエチレングリコールPEG1mLを、ファルコンチューブを振りながら1分間かけてゆっくり滴下した。ファルコンチューブを震盪、回転させ2分間細胞融合反応を行った。反応終了後、まずファルコンチューブを震盪させながら、DMEM45mLを3分間かけて滴下した。続けてDMEM45mLを同様に2分間かけて滴下し、900rpm、5分間遠心した。上清を吸引除去し、BMCondimedH1Roche4mLとHAT培地36mLを加えて細胞を浮遊させた。HAT培地は、チミジン和光純薬、ヒポキサンチン和光純薬溶液6mlを60°Cで溶解し、アミノプテリン和光純薬06mlと撹拌し、022μmのフィルターミリポアで濾過し、このうち6mlを10FBS含有GIT培地和光純薬555mlに溶解することにより調製する。上述したリンパ節組織細胞の細胞液を96ウェルプレート4枚に100μLwellで播き、HAT培地中で約7~10日間培養を行い、ハイブリドーマ細胞を得た。3ELISAによる一次スクリーニング一次スクリーニングとしてSOD1タンパク質の6~16番アミノ酸からなるペプチドSEQIDNO4によるELISAを行った。96ウェルMaxisorpELISAプレートNuncに、3μgmLのKLH複合化されたSOD1タンパク質の6~16番アミノ酸からなるペプチドもしくはKLHを含むPBSを100μLウェルで分注し、4°Cで一晩インキュベートして、プレートウェル表面に対して抗原を吸着させた。抗原液を捨て、1ウシ血清アルブミンを含むPBSを100μLウェルで分注して37°Cで1時間インキュベートしてブロッキングした後、ハイブリドーマ培養上清を40μLウェルで分注し37°Cで1時間インキュベートした。培養上清を捨ててPBSでウェルを2回洗い、HRP標識抗ラットIgG抗体GEHealthcare原液を1000倍希釈した01ウシ血清アルブミンを含むPBSを100μLウェルで分注し、37°Cで1時間インキュベートした。二次抗体液を捨ててウェルをPBSで3回洗い、04mgmLoフェニレンジアミンOPDを含むPBSに発色直前に30H2O2を04μLmLの割合で加えて作った発色基質液を100μLウェルで分注して室温で1時間放置し発色させた。その結果、266個の陽性クローンを得たデータは示さず。4限界希釈24ウェルプレートで培養していたハイブリドーマをピペッティングで浮遊させ、適当量の培養液HAT培地に細胞を希釈して細胞数をカウントした。この細胞液を10BMcondimedH1を加えたHAT培地30mL中に05細胞150μLウェルと15細胞150μLウェルとなるように加え、96ウェルプレート2枚に200μLウェルで播いた。このようにして限界希釈を行った後、得られたハイブリドーマのそれぞれを、さらに培養液HAT培地中で増殖させ、コロニーが形成されたウェルの培養上清を用いて、さらにスクリーニングを行った。5免疫沈降による二次スクリーニング二次スクリーニングとして、非変性状態でSOD1タンパク質を認識するか否かを評価するため、免疫沈降法IPによりハイブリドーマ上清を評価した。まず、10ウシ胎児血清、100unitmLペニシリンGを含むDMEM高グルコース中で37°C、5CO2の条件下で培養したHEK293A細胞に対して、変異型SOD1を過剰発現させるため、FlagSOD1G93Aをコードする遺伝子を、pcDNA3FlagSOD1G93Aベクターを用いて、導入した。FlagSOD1G93Aをコードする遺伝子のヌクレオチド配列は、以下の様にしてpcDNA3FlagSOD1G93Aベクター中に形成した。まず、FlagAspTyrLysAspAspAspAspLys;SEQIDNO9をコードするヌクレオチド配列ggatccaccgccatggactacaaggacgatgatgacaagggcgaattc;SEQIDNO8を、BamHIEcoRI制限酵素処理した環状ベクターpcDNA30ベクターInvitrogenのマルチクローニングサイトに導入したpcDNA3Flagベクター。次に、プライマーgaattcgcgacgaaggccgSEQIDNO14およびggatccttgggcgatcccaattSEQIDNO15を用いてPCRを行うことにより、SOD1G93ASEQIDNO11をコードするヌクレオチド配列SEQIDNO10を、両端にEcoRI制限酵素部位およびXhoI制限酵素部位を導入しつつ増幅した。このPCR産物をEcoRIXhoIで処理した後、EcoRIXhoIで処理したpcDNA3Flagベクターのクローニングサイトに導入することにより、Flagをコードするヌクレオチド配列SEQIDNO8とSOD1G93Aをコードするヌクレオチド配列SEQIDNO10とを融合したFlagSOD1G93Aを含む、pcDNA3FlagSOD1G93Aベクターを調製した。このヌクレオチド配列を有するpcDNA3FlagSOD1G93Aベクターを、FuGENE6Rocheを用いてHEK293A細胞に対して導入した。6ウェルプレートに播種したFlagSOD1G93A遺伝子導入細胞を、10FBS含有DMEM中で48時間培養した後、1ウェル当たり1mLのIP溶解バッファー20mMTrisHClpH75、150mMNaCl、10mMEDTApH80、1デオキシコール酸ナトリウム、1TritonX100、1mMフッ化フェニルメチルスルホニル、5μgmLロイペプチンで4°Cにて30分間細胞をインキュベートすることにより細胞を溶解し、4°C、15000rpm、10分間遠心して上清を回収した。次いで、上述したように調製した細胞溶解液を、ハイブリドーマ培養上清により免疫沈降した。免疫沈降を行う1~4において調製した本発明の抗体を含む培養上清500μL、そして対照抗体として野生型SOD1タンパク質を認識する抗SOD1抗体Stressgenまたは抗Flag抗体Sigma;M2抗体をそれぞれ1μg500μLのIP溶解バッファー上述したものを細胞溶解液500μLに加え、4°Cにて一晩転倒混和し反応させた。反応後、プロテインGセファロースおよびM2アフィニティーアガロースゲルSigmaを液量で20μL加え、さらに2時間4°Cにて転倒混和し反応させた。反応後、上清を除去し1mLのIP溶解バッファーで4回洗浄して、最後に20mMのジチオスレイトールを含む50μLの2×SDSサンプルバッファーを加えて98°Cで3分間ボイルし、SDSPAGEへと供した。電気泳動後、ゲルから2フッ化ポリビニリデンメンブレン045μm、Pallにタンパク質を転写し、1スキムミルクを含むTBST150mMNaCl、50mMTrisHClpH80、005Tween20で室温にて2時間ブロッキングした後、5ウシ血清アルブミンと01NaN3を含むTBSTで希釈した一次抗体で4°Cにて一晩反応させた。TBSTで2回洗浄した後、1スキムミルクを含むTBSTで希釈した二次抗体で室温にて1時間反応、TBSTで2時間洗浄した。検出は高感度ケミルミネッセンス法enhancedchemiluminescence;ECLGEHealthcareにて行った。ウェスタンブロッティングにおいては、一次抗体として、抗Flag抗体M2;Sigma、抗SOD1抗体SOD100;Stressgen、二次抗体として抗マウスIgG抗体GEHealthcare、抗ラットIgG抗体Cellsignaling、抗ウサギIgG抗体Cellsignaling、いずれもHRP標識したものを用いた。その結果、242、406、659、785、1175のハイブリドーマ上清で、FlagSOD1G93Aを検出することができた図2。6抗体のさらなる検討さらに、他の変異型SOD1タンパク質も検出可能か否かを評価するために、FlagSOD1G85R遺伝子導入細胞も同様に培養して、FlagSOD1G85Rを過剰発現させ、細胞溶解液を上記5種類のハイブリドーマ上清により免疫沈降し、免疫沈降したFlagSOD1G85Rをウェスタンブロッティングよりさらに検討した。FlagSOD1G85Rをコードする遺伝子のヌクレオチド配列は、5で調製したpcDNA3Flagベクターに対して導入して、以下の様にしてpcDNA3FlagSOD1G85Rベクター中に形成した。プライマーgaattcgcgacgaaggccgSEQIDNO14およびggatccttgggcgatcccaattSEQIDNO15を用いてPCRを行うことにより、SOD1G85RSEQIDNO13をコードするヌクレオチド配列SEQIDNO12を、両端にEcoRI制限酵素部位およびXhoI制限酵素部位を導入しつつ増幅した。このPCR産物をEcoRIXhoIで処理した後、EcoRIXhoIで処理したpcDNA3Flagベクターのクローニングサイトにを導入することにより、Flagをコードするヌクレオチド配列SEQIDNO8とSOD1G85Rをコードするヌクレオチド配列SEQIDNO12とを融合したFlagSOD1G85Rを含む、pcDNA3FlagSOD1G85Rベクターを調製した。このヌクレオチド配列を有するpcDNA3FlagSOD1G85Rベクターを、5の場合と同様にしてFuGENE6Rocheを用いてHEK293A細胞に対して導入した。また、検討のための免疫沈降およびウェスタンブロッティングも、5において上述したように行った。その結果、406、659、785のハイブリドーマ上清でFlagSOD1G85Rを検出することができた図3。これらの結果から、本発明において、SOD1G93AおよびSOD1G85Rの両方ともと結合することができた、406、659、785の3種のハイブリドーマを好ましいものとして選択し、これらの細胞株を独立行政法人製品評価技術基盤機構NITE、特許微生物寄託センターNPMDに寄託した406、659、および785の寄託番号はそれぞれ、NITEP941、NITEBP942、およびNITEBP943;受託日はいずれも2010年5月12日。実施例2:抗体の抗原認識性の検討実施例1において得られた406、659、785の3種のハイブリドーマ細胞の培養上清が、野生型SOD1タンパク質を認識せず、SOD1G85RとSOD1G93Aを認識したことから、本実施例においては、他の様々な変異型SOD1タンパク質をも共通に認識するか否かを検討した。実験は、785ハイブリドーマから得られた細胞上清を用いて、実施例15および6と同様に様々な変異型SOD1タンパク質を発現する細胞を調製し、それぞれの細胞溶解液と785ハイブリドーマから得られた細胞上清とを混合することにより免疫沈降を行い、さらに得られたそれぞれのFlag変異SOD1タンパク質を、一次抗体として、抗Flag抗体M2;Sigma、二次抗体としてはいずれもHRP標識した抗マウスIgG抗体GEHealthcare、抗ラットIgG抗体Cellsignaling、抗ウサギIgG抗体Cellsignalingを用いた。その結果、今回検討を行ったSOD1K3E、SOD1A4S、SOD1A4T、SOD1A4V、SOD1V5L、SOD1C6F、SOD1C6G、SOD1C6Y、SOD1G16A、SOD1G16S、SOD1F20C、SOD1V29A、SOD1G37R、SOD1L38R、SOD1L38V、SOD1E40G、SOD1G41D、SOD1G41S、SOD1H43R、SOD1F45C、SOD1H46R、SOD1V47A、SOD1V47F、SOD1H48Q、SOD1H48R、SOD1C57R、SOD1S59I、SOD1N65S、SOD1P66A、SOD1G72C、SOD1G72S、SOD1D76V、SOD1D76Y、SOD1H80R、SOD1L84F、SOD1L84V、SOD1G85R、SOD1G85S、SOD1N86D、SOD1N86I、SOD1N86K、SOD1N86S、SOD1V87A、SOD1V87M、SOD1T88ΔT88、A89およびD90の3アミノ酸の欠損を意味する、SOD1A89T、SOD1A89V、SOD1D90A、SOD1D90V、SOD1G93A、SOD1G93C、SOD1G93D、SOD1G93R、SOD1G93S、SOD1G93V、SOD1A95T、SOD1A95V、SOD1V97L、SOD1V97M、SOD1I99V、SOD1E100G、SOD1E100K、SOD1D101G、SOD1D101H、SOD1D101N、SOD1D101Y、SOD1I104F、SOD1S105L、SOD1S105Δ、SOD1L106V、SOD1G108V、SOD1C111Y、SOD1I112M、SOD1I112T、SOD1I113F、SOD1I113T、SOD1G114A、SOD1R115G、SOD1T116R、SOD1L117V、SOD1V118L、SOD1V118、SOD1D124G、SOD1D124V、SOD1D125H、SOD1L126S、SOD1L126、SOD1L126Δ、SOD1E132、SOD1E133V、SOD1E133Δ、SOD1S134N、SOD1N139D、SOD1N139H、SOD1N139K、SOD1A140G、SOD1G141E、SOD1G141、SOD1L144F1、SOD1L144F2、SOD1L144S、SOD1A145G、SOD1A145T、SOD1C146R、SOD1C146、SOD1G147D、SOD1G147R、SOD1V148G、SOD1I149T、SOD1I151S、およびSOD1I151Tの、107種類全てについて、本発明の抗体により免疫沈降可能であること、すなわち程度の差はあるものの、本発明の抗体が、変異型SOD1タンパク質の変異の部位に関わらず、変異型SOD1タンパク質を認識できることが明らかとなった図4a~i。図4において、欠失を示すために図1における表記Δに代えてdelと記載され、挿入を示しために図1における表記に代えてinsと記載され、そして停止コドンを示すために図1における表記に代えてZまたはstopと記載される場合がある。実施例3:変異型SOD1タンパク質に対する抗体の作製2この実施例においては、野生型SOD1タンパク質に対しては結合しないが、変異型SOD1タンパク質に対して結合することができるさらなる抗体を産生することを目的にして行った。この様な特徴を有する抗体を作製することを目的として、野生型SOD1タンパク質の30~40番アミノ酸からなるペプチドLysValTrpGlySerIleLysGlyLeuThrGluSEQIDNO5のペプチドを、免疫原として使用して、抗体を作製した。野生型SOD1タンパク質の30~40番アミノ酸からなるペプチドを、1mgmLに調製し、ペプチド溶液400μLとFreundの完全アジュバントSigma800μLとを、ルアー式注射筒で攪拌してエマルジョン化し、抗原とした。調製した抗原は一匹当たり200μLをラットWKYIzmメス、免疫時8週齢;日本クレア3匹に後肢肉球より片足100μLずつ皮内注射した。この後の抗体を産生する工程ならびに抗体をスクリーニングする工程は、いずれも実施例1に記載される様に行った。その結果、27のハイブリドーマ上清により、野生型SOD1タンパク質は検出されなかったが、FlagSOD1A4V、FlagSOD1G85RおよびFlagSOD1G93Aの変異型SOD1タンパク質を検出することができた図5A。そして、得られた27のハイブリドーマを好ましいものとして、この細胞株を独立行政法人製品評価技術基盤機構NITE、特許微生物寄託センターNPMDに寄託した27の寄託番号は、NITEBP1100;受託日は2011年5月12日。本実施例においてはさらに、得られた27のハイブリドーマ細胞の培養上清が、SOD1A4V、SOD1G85R、およびSODG93A以外の他の様々な変異型SOD1タンパク質、特にSEQIDNO2のアミノ酸配列のうちSEQIDNO4に対応する部分に変異を有する変異型SOD1タンパク質を認識するか否かを、27のハイブリドーマから得られた抗体を使用して、実施例2に記載される様に検討した。その結果、27のハイブリドーマから得られた抗体は、今回検討を行ったSOD1A4V、SOD1L8Q、SOD1L8V、SOD1G10R、SOD1G10V、SOD1G12R、SOD1V14G、SOD1V14M、SOD1G85R、およびSOD1G93Aの10種類の変異SOD1タンパク質全てを免疫沈降可能であること、すなわち、27のハイブリドーマから得られた抗体が、免疫源として使用した野生型SOD1タンパク質の30~40番アミノ酸からなるペプチド領域以外の変異型SOD1タンパク質の変異部位に関わらず、変異型SOD1タンパク質を認識できることが明らかとなった図5B。実施例4:変異型SOD1抗体による細胞免疫染色本実施例においては、本発明の変異型SOD1抗体が、細胞免疫染色においても変異型SOD1タンパク質を検出可能か否かを検討した。コラーゲンコートしたφ12mmカバーグラスを1枚入れた24ウェルプレートにHEK293A細胞を04×105細胞ウェルで播種12~16時間後に、FlagSOD1WTFlagをコードするヌクレオチド配列SEQIDNO8と野生型SOD1タンパク質をコードするヌクレオチド配列SEQIDNO1とを連結させたものまたはFlagSOD1G93Aをコードするヌクレオチド配列SEQIDNO10を、05μgウェルで遺伝子導入し、FlagSOD1WTとFlagSOD1G93Aを過剰発現させた。遺伝子導入後24時間後にカバーグラスをPBS約5mLに3回浸して洗い、4パラフォルムアルデヒドにて細胞を固定した。固定後、カバーグラスをPBS約5mLで3回行い、02TritonX100にて細胞膜透過処理を行った。TritonX100処理後、カバーグラスをPBS約5mLで3回行い、水素化ホウ素ナトリウム500μL上にカバーグラスをかぶせて1分間室温でインキュベートして退色防止処理を行った。その後、カバーグラスをPBS約5mLで3回洗い、5FBSにてブロッキング後、一次抗体として406ハイブリドーマ培養上清を用いて細胞免疫染色を行った後、抗Flag抗体M2抗体でFlagを認識した。二次抗体としてAlexa488抗ラットIgG、Alexa633抗マウスIgGでインキュベートした。抗Flag抗体の蛍光強度がほぼ同じ細胞で、変異型SOD1抗体の蛍光強度を比較したところ、FlagSOD1G93AにおいてFlagSOD1WTよりも蛍光強度が強かった図5。これより406は、SOD1タンパク質の変異型特異的な立体構造変化Derlin1結合部位が露出するを細胞免疫染色においても検出できると考えられる。実施例5:変異型SOD1抗体によるヒト血液由来B細胞の細胞質中に存在する変異型SOD1タンパク質の検出本実施例においては、本発明の抗体により、ヒト筋萎縮性側索硬化症ALSの個体の血液中B細胞の細胞質中に存在する変異型SOD1タンパク質を検出可能か否かを検討した。この実施例は、東京大学大学院医学系研究科のヒトゲノム遺伝子解析研究倫理審査委員会、および東京大学大学院薬学系研究科薬学部のヒトを対象とする研究倫理審査委員会における承認に基づいて行った。ALSのヒトの患者から、静脈血10mlを採血し、SRL社においてエプスタインバーウィルス感染により不死化されたB細胞を使用して、各サンプルB細胞を、1チューブ当たり2×107個ずつに分注し、そして1チューブ当たり500μLのIP溶解バッファー20mMTrisHClpH75、150mMNaCl、10mMEDTApH80、1デオキシコール酸ナトリウム、1TritonX100、1mMフッ化フェニルメチルスルホニル、5μgmLロイペプチンで4°Cにて30分間、細胞をインキュベートすることにより細胞を溶解し、4°C、15000rpm、10分間遠心して上清を回収した。次いで、上述したように調製した細胞溶解液を、785のハイブリドーマから得られる培養上清により、下記のように免疫沈降した後、免疫沈降した抗体SOD1複合体を、抗SOD1抗体を用いて免疫ブロッティングした。免疫沈降を行う785のハイブリドーマから得られる抗体を含む培養上清500μLを、1μg500μLのIP溶解バッファー上述したものを細胞溶解液500μLに加え、4°Cにて一晩転倒混和し反応させた。反応後、プロテインGセファロースアガロースゲルSigmaを液量で20μL加え、さらに2時間4°Cにて転倒混和し反応させた。反応後、上清を除去し1mLのIP溶解バッファーで4回洗浄して、最後に20mMのジチオスレイトールを含む50μLの2×SDSサンプルバッファーを加えて98°Cで3分間ボイルし、SDSPAGEへと供した。電気泳動後、ゲルから2フッ化ポリビニリデンメンブレン045μm、Pallにタンパク質を転写し、1スキムミルクを含むTBST150mMNaCl、50mMTrisHClpH80、005Tween20で室温にて2時間ブロッキングした後、5ウシ血清アルブミンと01NaN3を含むTBSTで希釈した一次抗体で4°Cにて一晩反応させた。TBSTで2回洗浄した後、1スキムミルクを含むTBSTで希釈した二次抗体で室温にて1時間反応、TBSTで2時間洗浄した。検出は高感度ケミルミネッセンス法enhancedchemiluminescence;ECLGEHealthcareにて行った。ウェスタンブロッティングにおいては、一次抗体として、抗SOD1抗体SOD100;Stressgen、二次抗体としてHRP標識抗ウサギIgG抗体Cellsignalingを用いた。その結果、本発明の抗体例えば、785のハイブリドーマから得られた抗体を使用することにより、ヒトALS患者から採取された種々のSOD1変異を検出可能であることが示された図7。