"高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記酸素キャリア含有医薬組成物はヘモグロビンを含み、該ヘモグロビンは本質的に非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなり、前記方法は、a少なくとも赤血球および血漿を含む哺乳類全血を準備することと;b前記哺乳類全血において、前記赤血球を前記血漿から分離することと;c前記血漿から分離された赤血球を濾過して、濾過された赤血球画分を得ることと;d前記濾過された赤血球画分を洗浄して、血漿タンパク質不純物を除去し、洗浄された赤血球を得ることと;e50~1000L/時の流量の細胞溶解装置において、2~30秒または赤血球を溶解するのに充分な時間の正確かつ制御された低張溶解により前記洗浄された赤血球を破壊して、破壊された赤血球の溶解物を含んでなる溶液を作製することと;f濾過を行って、前記溶解物から老廃物濃縮物の少なくとも一部を除去することと;g前記溶解物から第一のヘモグロビン溶液を抽出することと;hヘモグロビンよりも高分子量を有する不純物を除去するように構成された限外濾過フィルタを使用して第一の限外濾過を行い、何れかのウイルスおよび残留老廃物濃縮物を更に前記第一ヘモグロビン溶液から除去して、第二のヘモグロビン溶液を得ることと;i前記精製されたヘモグロビン溶液にフロースルーカラムクロマトグラフィーを行って、タンパク質不純物を除去することと;j不純物を除去するように構成された限外フィルタを使用して第二の限外濾過プロセスを行い、前記精製されたヘモグロビン溶液を濃縮することと;k脱酸素環境において、フマル酸ビス-3,5-ジブロモサリチルによりヘモグロビンの少なくともα-αサブユニットを架橋して架橋されたヘモグロビンを形成し、前記架橋されたヘモグロビンが非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンであることと;l前記架橋四量体ヘモグロビンのために適切な生理学的緩衝液を交換することと;m接線流濾過により何らかの残留化学薬品を除去することと;n前記架橋ヘモグロビンを脱酸素環境で熱処理して、得られる熱安定性架橋四量体ヘモグロビンが検出不能な濃度の二量体を有し、且つ実質的に非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなるように、何らかの残留未反応ヘモグロビン、非安定化ヘモグロビン二量体および何れか他のタンパク質不純物を変性および沈殿させることと;o前記架橋四量体ヘモグロビンを熱処理した後に直ちにN-アセチルシステインを加えて、メトヘモグロビンの低レベルを維持することと;p遠心分離または濾過装置により沈殿を除去して、透明な溶液を形成することと;q精製された熱安定性架橋四量体ヘモグロビンを医薬的に許容可能なキャリアに加えることを含んでなる方法。請求項1に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記熱処理は70°C~95°Cで30秒~3時間行われ、その直後に冷却される高温短時間プロセスであり、また前記冷却の直後に0.2~0.4の量のN-アセチルシステインが添加される方法。請求項1に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記全血はヒト、ウシ、豚、イヌまたはウマの全血である方法。請求項1に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記カラムクロマトグラフィーは1以上の陽イオン交換カラムまたは陰イオン交換カラムを含んでなる方法。請求項4に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記クロマトグラフィーカラムは1以上のDEAEカラム、CMカラムおよび/またはヒドロキシアパタイトカラムである方法。請求項1に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記医薬的に許容可能なキャリアは生理学的緩衝液または水である方法。ヘモグロビンを含んでなる高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物であって、前記ヘモグロビンは実質的に、請求項1の方法により形成された非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなる組成物。高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記酸素キャリア含有医薬組成物はヘモグロビンを含み、該ヘモグロビンは本質的に非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなり、前記方法は、a少なくとも赤血球および血漿を含む哺乳類全血を準備することと;b前記哺乳類全血において、前記赤血球を前記血漿から分離することと;c前記血漿から分離された赤血球を濾過して、濾過された赤血球画分を得ることと;d前記濾過された赤血球画分を洗浄して、血漿タンパク質不純物を除去し、洗浄された赤血球を得ることと;e50~1000L/時の流量の細胞溶解装置において、2~30秒または赤血球を溶解するのに充分な時間の正確かつ制御された低張溶解により前記洗浄された赤血球を破壊して、破壊された赤血球の溶解物を含んでなる溶液を作製することと;f濾過を行って、前記溶解物から老廃物濃縮物の少なくとも一部を除去することと;g前記溶解物から第一のヘモグロビン溶液を抽出することと;hヘモグロビンよりも高分子量を有する不純物を除去するように構成された限外濾過フィルタを使用して第一の限外濾過を行い、何れかのウイルスおよび残留老廃物濃縮物を更に前記第一ヘモグロビン溶液から除去して、第二のヘモグロビン溶液を得ることと;i前記精製されたヘモグロビン溶液にフロースルーカラムクロマトグラフィーを行って、タンパク質不純物を除去することと;j不純物を除去するように構成された限外フィルタを使用して第二の限外濾過プロセスを行い、前記精製されたヘモグロビン溶液を濃縮することと;k脱酸素環境において、フマル酸ビス-3,5-ジブロモサリチルによりヘモグロビンの少なくともα-αサブユニットを架橋して架橋されたヘモグロビンを形成し、前記ヘモグロビンが非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンであることと;l前記架橋四量体ヘモグロビンのために適切な生理学的緩衝液を交換することと;m接線流濾過により何らかの残留化学薬品を除去することと;n前記架橋ヘモグロビンを約90°C~95°Cの温度で熱処理して、得られる熱安定性架橋四量体ヘモグロビンが検出不能な濃度の二量体を有し、且つ実質的に非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなるように、何らかの残留未反応ヘモグロビン、非安定化ヘモグロビン二量体および何れか他のタンパク質不純物を変性および沈殿させ、且つ直ちに約25°Cに冷却することと;o前記架橋四量体ヘモグロビンを熱処理した後に直ちにN-アセチルシステインを加えて、メトヘモグロビンの低レベルを維持することと;p遠心分離または濾過装置により沈殿を除去して、透明な溶液を形成することと;q精製された熱安定性架橋四量体ヘモグロビンを医薬的に許容可能なキャリアに加えることを含んでなる方法。請求項8に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記熱処理は脱酸素環境において行われる方法。請求項8に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記熱処理は30秒~3分間行われ、続いて直ちに冷却され、また該冷却の直後に0.2~0.4のN-アセチルシステインが添加される方法。請求項8に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記全血はヒト、ウシ、豚、イヌまたはウマの全血である方法。請求項8に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記カラムクロマトグラフィーは1以上の陽イオン交換カラムまたは陰イオン交換カラムを含んでなる方法。請求項12に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記クロマトグラフィーカラムは1以上のDEAEカラム、CMカラムおよび/またはヒドロキシアパタイトカラムである方法。ヘモグロビンを含んでなる高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物であって、前記ヘモグロビンは実質的に、請求項8の方法により形成された非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなる組成物。高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記酸素キャリア含有医薬組成物はヘモグロビンを含み、該ヘモグロビンは本質的に非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなり、前記方法は、a少なくとも赤血球および血漿を含む哺乳類全血を準備することと;b前記哺乳類全血において、前記赤血球を前記血漿から分離することと;c前記血漿から分離された赤血球を濾過して、濾過された赤血球画分を得ることと;d前記濾過された赤血球画分を洗浄して、血漿タンパク質不純物を除去し、洗浄された赤血球を得ることと;e50~1000L/時の流量の細胞溶解装置において、2~30秒または赤血球を溶解するのに充分な時間の正確かつ制御された低張溶解により前記洗浄された赤血球を破壊して、破壊された赤血球の溶解物を含んでなる溶液を作製することと;f濾過を行って、前記溶解物から老廃物濃縮物の少なくとも一部を除去することと;g前記溶解物から第一のヘモグロビン溶液を抽出することと;hヘモグロビンよりも高分子量を有する不純物を除去するように構成された限外濾過フィルタを使用して第一の限外濾過を行い、何れかのウイルスおよび残留老廃物濃縮物を更に前記第一ヘモグロビン溶液から除去して、第二のヘモグロビン溶液を得ることと;i前記精製されたヘモグロビン溶液にフロースルーカラムクロマトグラフィーを行って、タンパク質不純物を除去することと;j不純物を除去するように構成された限外フィルタを使用して第二の限外濾過プロセスを行い、前記精製されたヘモグロビン溶液を濃縮することと;k脱酸素環境において、フマル酸ビス-3,5-ジブロモサリチルによりヘモグロビンの少なくともα-αサブユニットを架橋して架橋されたヘモグロビンを形成し、前記架橋されたヘモグロビンが非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンであることと;l前記架橋四量体ヘモグロビンのために適切な生理学的緩衝液を交換することと;m接線流濾過により何らかの残留化学薬品を除去することと;n前記架橋四量体ヘモグロビンにN-アセチルシステインを添加し、また前記架橋ヘモグロビンを脱酸素環境において約90°C~95°Cの温度で熱処理して、得られる熱安定性架橋四量体ヘモグロビンが検出不能な濃度の二量体を有し、且つ実質的に非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなるように、何らかの残留未反応ヘモグロビン、非安定化ヘモグロビン二量体および何れか他のタンパク質不純物を変性および沈殿させることと;o前記架橋四量体ヘモグロビンを熱処理した後に直ちにN-アセチルシステインを加えて、メトヘモグロビンの低レベルを維持することと;p遠心分離または濾過装置により沈殿を除去して、透明な溶液を形成することと;q精製された熱安定性架橋四量体ヘモグロビンを医薬的に許容可能なキャリアに加えることを含んでなる方法。請求項15に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記熱処理は30秒~3時間行われ、その直後に25°Cに冷却され、また該冷却の直後に約0.2~0.4の量のN-アセチルシステインが添加される方法。請求項15に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、加熱処理に先立つ前記N-アセチルシステインの添加は約0.2である方法。請求項15に記載の高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物を調製する方法であって、前記全血はヒト、ウシ、豚、イヌまたはウマの全血である方法。ヘモグロビンを含んでなる高純度の熱安定性酸素キャリア含有医薬組成物であって、前記ヘモグロビンは実質的に、請求項15の方法により形成された非ポリマー性架橋四量体ヘモグロビンからなる組成物。以下、如何なる意味でも本発明の範囲を限定することを意図することなく、本発明の特定の実施形態を説明することにより、本発明の実施例を記載する。実施例1プロセスの概観図2に、本発明の方法の概略フロー図が示されている。ウシ全血を、抗凝固剤として3.8w/vのクエン酸三ナトリウム溶液を含む閉じた滅菌容器/バッグの中に採取する。次いで、血液を直ちにクエン酸三ナトリウム溶液と充分に撹拌し、血液の凝固を阻止する。アフェレーシス機構により、血漿および他の小さい血液細胞から赤血球RBCを単離および回収する。この方法のために、ガンマ線滅菌された使い捨ての遠心分離ボールと共に、細胞洗浄機を使用する。RBCを等容量の0.9w/v塩化ナトリウム食塩水で洗浄する。RBC細胞膜に対して低張性ショックを処置することにより、洗浄されたRBCを溶解してヘモグロビン内容物を放出させる。RBC溶解装置のために特殊化された図3に示す瞬間細胞溶解装置が、この目的のために使用される。RBC溶解に続き、100kDaの膜を使用した接線流限外濾過により、ヘモグロビン分子を他のタンパク質から単離する。濾液中のヘモグロビンをフロースルーカラムクロマトグラフィーのために採取し、30kDa膜によって更に12~14g/dLまで濃縮する。カラムクロマトグラフィーを行って、タンパク質不純物を除去する。最初に、濃縮ヘモグロビン溶液を脱酸素条件下でDBSFと反応させて、熱安定性架橋四量体ヘモグロビン分子を形成する。次いで、最終的な製剤化および包装の前に、90°Cで30秒~3分間、脱酸素条件下で熱処理工程を行う。実施例2時間制御された低張溶解および濾過ウシ全血を新たに採取し、冷却条件下2~10°Cで輸送する。細胞洗浄機およびこれに続く0.65μmの濾過を介して、赤血球を血漿から分離する。赤血球RBC濾液を0.9食塩水で洗浄した後、濾液を低張溶解により破壊する。該低張溶解は、図3に示した瞬間細胞溶解装置を使用して行う。この細胞溶解装置は、細胞溶解を補助するための静電ミキサーを含んでいる。ヘモグロビン濃度が制御された12~14g/dLRBC懸濁液を4容量の精製水と混合して、RBC細胞膜に対して低張ショックを発生させる。低張ショックの時間は、白血球および血小板の望ましくない溶解を回避するように制御される。この低張溶液は、瞬間細胞溶解装置の静電ミキサー部分を2~30秒または赤血球を溶解するのに充分な時間、好ましくは30秒の間に通過する。このショックは、30秒後に溶解液が静電ミキサーを出るときに、該溶解液に1/10容量の高張緩衝液を混合することによって停止される。使用した高張溶液は、0.1Mリン酸緩衝液、7.5NaCl、pH7.4である。図3の瞬間細胞溶解装置は、連続運転で50~1000L/時、好ましくは少なくとも300L/時の溶解物を処理することができる。RBC溶解の後、赤血球溶解物を0.22μmのフィルタにより濾過してヘモグロビン溶液を得る。白血球からの核酸およびリン脂質不純物は、それぞれポリメラーゼ連鎖反応検出限界=64pgおよびHPLC法検出限界=1μ/mLによっては、ヘモグロビン溶液中において検出されない。ヘモグロビンよりも高い分子量を有する不純物を除去するために、最初の100kDa限外濾過が行われる。ヘモグロビン溶液を更に精製するために、フロースルーカラムクロマトグラフィーが続いて行われる。次いで、ヘモグロビンよりも低分子量の不純物を除去し、また濃縮するために、第二の30kDa限外濾過が行われる。実施例3ストローマを含まないヘモグロビン溶液に対するウイルスクリアランスの研究本発明の生成物の安全性を示すために、10.65μmダイアフィルトレーション工程および2100kDa限外濾過工程のウイルス除去能力が、ウイルス確証研究によって示される。これは、異なるモデルウイルス脳心筋炎ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、およびウシパルボウイルスを用いたこれら二つの処理の縮小規模バージョンの慎重なスパイキングによって行われた。この研究においては、四つのタイプのウイルスが使用された表3参照。これらのウイルスは、それらの生物物理学的および構造的特徴が変化し、また物理的および化学的な薬剤または治療に対する抵抗における変化を示す。確証スキームを、以下の表4に簡単に示す。10.65μmダイアフィルトレーションおよび2100kDa限外濾過における4種類のウイルスの対数減少結果の要約を、下記の表5に示す。注:≧残留感染性は決定されず実施例4フロースルーカラムクロマトグラフィー何れかのタンパク質不純物を更に除去するために、CMカラムGEヘルスケア社から商業的に入手可能を使用する。出発緩衝液は20mMの酢酸ナトリウムpH8.0であり、溶出緩衝液は20mMの酢酸ナトリウム、2MのNaClpH8.0である。出発緩衝液でCMカラムを平衡化した後、タンパク質サンプルを該カラムに載せる。未結合のタンパク質不純物を、少なくとも5カラム容量の出発緩衝液で洗浄する。8カラム容量の25溶出緩衝液0~0.5MのNaClを使用して溶出を行う。溶出プロファイルを図11に示す;ヘモグロビン溶液はフロースルー画分の中にある。フロースルー画分の純度を、ELIZAにより分析する。その結果を下記の表6に示す。ヘモグロビン溶液は、pH8のCMカラムクロマトグラフィーからのフロースルーの中にある溶出液中ではないので、連続的な工業的規模の操作にとっては良好なアプローチである。工業的規模の操作のために、第一の限界濾過設備をフロースルーCMカラムクロマトグラフィーシステムに直接接続し、またフロースルー配管を第二の限外濾過設備に接続することができる。工業的プロセスの概略的構成を図12に示す。実施例5熱安定性架橋四量体ヘモグロビンの調製<5a>:DBSFを用いた架橋反応この架橋反応は脱酸素条件において行う。DBSFをヘモグロビン溶液に加えて、ポリマーヘモグロビンの形成を伴うことなく、架橋された四量体ヘモグロビンを形成する。DBSF安定化法はヘモグロビンの四量体形態65kDaを安定化させて、腎臓を通して排泄される二量体32kDaへの解離を防止する。この実施形態においては、ヘモグロビンのDBSFに対する1:2.5のモル比が使用され、pHは8.6である。このプロセスは、ヘモグロビンの酸化により生理学的に不活性な第一鉄メトヘモグロビンが形成されることを防止するために、窒素の不活性雰囲気中において、3~16時間、周囲温度15~25°Cで行われる溶存酸素レベルは少なくとも0.1ppm未満に維持される。DBSF反応の完了は、HPLCを使用して残留DBSFを測定することによりモニターされる。DBSF反応の収率は高く、>99である。<5b>:HTST熱処理工程高温短時間HTST処理装置が図13に示されている。HTST処理装置を使用した熱処理を、架橋四量体ヘモグロビンに対して行う。この例において、熱処理の条件は90°Cで30秒~3分、好ましくは45~60秒であるが、上記で述べたような他の条件を選択することもでき、それに従って装置を改変することもできる。任意に0.2のN-アセチルシステインを添加した架橋ヘモグロビンを含有する溶液は、1.0L/分の流量でHTST処理装置の中にポンプ輸送されHTST熱交換器の第一の区画は90°Cに予熱および維持される、また、該装置の第一区画の滞留時間は45~60秒であり、次いで該溶液は同じ流量で、25°Cに維持される熱交換器のもう一つの区画の中へと通される。冷却のために必要な時間は15~30秒である。25°Cまで冷却した後、0.2~0.4、好ましくは0.4の濃度のN-アセチルシステインが直ちに添加される。HTST加熱プロセスの後のこの化学薬品の添加は、メトヘモグロビン不活性ヘモグロビンを低レベルに維持するために非常に重要である。該処理装置の構成は、工業的操作のために容易に制御される。二量体含量と共に温度プロファイルを図14に示す。ヘモグロビンが架橋されていなければ、それは熱的に安定ではなく、加熱工程の後に沈殿を形成する。この沈殿は、その後に透明な溶液を形成するために遠心分離または濾過装置により除去される。90°CでのHTST加熱プロセスの間に、メトヘモグロビン不活性ヘモグロビンが増大する図15に示す。N-アセチルシステインを直ちに添加した後には、約3未満の低レベルのメトヘモグロビンを維持することができる。下記の表7は、免疫グロブリンG、アルブミン、炭酸脱水素酵素および望ましくない非安定化型の四量体または二量体等の不純物が、熱処理工程の後に除去されることを示している。免疫グロブリンG、アルブミンおよび炭酸脱水素酵素の量をELISA法を用いて測定する一方、二量体の量はHPLC法により決定される。HTST加熱処理工程の後の熱安定性架橋四量体ヘモグロビンの純度は極めて高く、98.0~99.9の範囲である。p50値、即ち、ヘモックス分析器HemoxAnalyzerにより測定された酸素分圧その分圧ではヘモグロビン溶液が半分50飽和しているは、HTST加熱処理工程の全体を通して約30~40mmHgに維持され、従って、熱処理された架橋四量体ヘモグロビンは90°Cで安定である。実施例6包装本発明の製品は脱酸素条件下において安定なので、ガス透過性を最小化するために該製品の包装は重要である。静脈適用のために、0.006~0.132cm3/100平方インチ/24時間/室温気圧の酸素透過性を有する厚さ0.4mmの5層のEVA/EVOH積層材料から、注文設計された100mLの注入バッグを作製した。この特別な材料はクラスVIプラスチックUSP<88>に定義されているであり、これはインビボ生物学的反応性試験および物理化学的試験に適合し、また静脈注入目的の注入バッグを製造するために適しているなお、望ましい用途に応じて、他の形態の包装も同様にこの材料から製造できる。二次包装のアルミニウム上包装パウチもまた、この一次包装注入バッグに適用されて追加のバリアを提供し、光露出および酸素拡散を最小化する。該パウチの層は次のものを含んでいる:即ち、0.012mmのポリエチレンテレフタレートTE、0.007mmのアルミニウムAl、0.015mmのナイロンNY、および0.1mmのポリエチレンPEである。上包装フィルムは0.14mmの厚さ、および0.006cm3/100平方インチ/24時間/室温気圧の酸素透過速度を有している。該注入バッグの概略的描写が図16に描かれている。本発明による各注入バッグについての全体の酸素透過性は、0.0025cm3/24時間/室温気圧である。実施例7酸素付加の改善<7a>:正常組織における酸素付加の改善熱安定性架橋四量体ヘモグロビンによる正常組織の酸素付加についての幾つかの研究がおこなわれる図7に示した。比較薬物動態学および薬力学の研究を、バッファローラットにおいて行なう。雄の純系バッファローラットに対して、ラットの陰茎静脈を通して、個別に大量瞬時投与の注射により、0.2g/kgの熱安定性架橋四量体ヘモグロビン溶液または酢酸リンゲル緩衝液対照群を投与する。血漿ヘモグロビンの濃度-時間プロファイルを、1、6,24、48時間にヘモキューHemocue;商標名フォトメータによって決定し、基底ラインの読みと比較する。この方法はヘモグロビンの光測定に基づいており、ここではヘモグロビンの濃度がg/dLとして直接読み出される。酸素分圧pO2は、バッファローラットの後脚筋肉において、オキシラボOxylab;商標組織酸素付加および温度モニターOxfordOptronixLimitedにより直接測定する。ラットを30~50mg/kgのペントバルビトン溶液の腹腔内注射によって麻酔し、続いて酸素センサを筋肉内に挿入する。全てのpO2の読みを、データトラックス2Datatrax2データ取得システムWorldPrecisionInstrumentによりリアルタイムで記録する。結果は、0.2g/kgの熱安定性架橋四量体ヘモグロビンの静脈注射の後に、平均pO2値が基底ラインから15分以内の平均酸素分圧の約2倍に上昇し、6時間にまで達することを示している。最後に、注射後の24~48時間でも、平均の酸素レベルは基底ラインより25~30高く維持される図7B。<7b>:極度に低酸素状態の腫瘍領域における酸素付加の顕著な改善極度に低酸素状態の腫瘍領域における酸素付加の改善を、ヒトの頭部および頸部の扁平上皮細胞癌HNSCC異種移植片モデルによって評価する。下咽頭扁平上皮細胞癌FaDu細胞株を、アメリカンタイプカルチャーコレクションから入手する。約1×106個の癌細胞を4~6週齢の4匹の純系BALB/cAnN-nuヌードマウスに皮下注射する。この腫瘍異種移植片の直径が8~10mmに達したときに、腫瘍塊内の酸素分圧pO2をオキシラボOxylab;商標組織酸素付加および温度モニターOxfordOptronixLimitedにより直接測定する。全てのpO2の読みを、データトラックス2Datatrax2データ取得システムWorldPrecisionInstrumentによりリアルタイムで記録する。pO2の読みが安定化したときに、0.2g/kgの熱安定性架橋四量体ヘモグロビン溶液をマウスの尾静脈を通して静脈注射し、組織の酸素付加を測定する。結果は、0.2g/kgの前記熱安定性架橋四量体ヘモグロビンの静脈注射の後に、6.5倍および5倍以上の平均pO2の増大が、それぞれ3時間および6時間で観察される図8。実施例8癌治療研究:上咽頭癌における顕著な腫瘍縮小X線照射と組み合わせて熱安定性架橋四量体ヘモグロビン溶液を投与した後に、顕著な腫瘍縮小が観察される図9A。ヒト上咽頭癌異種移植片モデルを用いる。約1×106個の癌細胞CNE2細胞株を、4~6週齢の4匹の純系BALB/cAnN-nuヌードマウスに皮下注射する。この腫瘍異種移植片の直径が8~10mmに達したときに、腫瘍をもったマウスをランダムに次の三つのグループに分ける。グループ1:酢酸リンゲル緩衝液Ctrlグループ2:酢酸リンゲル緩衝液X線照射2Gyグループ3:熱安定性架橋四量体ヘモグロビンX線照射2GyHbCNE2異種移植片をもつヌードマウスにX線照射を単独でグループ2、または熱安定性架橋四量体ヘモグロビンとの組合せでグループ3行った。X線照射グループ2および3については、50mg/kgのペントバルビトン溶液の腹腔内注射によってマウスを麻酔する。2GrayのX線を、腫瘍を持ったマウスの異種移植片に対して線形加速器システムVarianMedicalSystemsにより与える。グループ3については、X線治療の前に、1.2g/kgの熱安定性架橋四量体ヘモグロビンを、尾静脈を通してマウスに注射する。腫瘍の寸法および体重を、治療の初日から始めて2日ごとに記録する。式1/2LW2を使用して腫瘍の重量を計算する。ここでのLおよびWは、デジタル測径器MitutoyoCoTokyoJapanにより各測定時に計測された腫瘍塊の長さおよび幅である。グループ1は、非治療対照群である。結果図9に示すは、X線照射と組み合わせて熱安定性架橋四量体ヘモグロビン溶液で治療されたマウスにおいて、CNE2異種移植片の顕著な縮小が観察されることを示しているグループ3、図9A。実施例9癌治療研究:肝臓腫瘍の顕著な収縮更に、シスプラチンと組み合わせて熱安定性架橋四量体ヘモグロビン溶液を投与した後に、顕著な腫瘍縮小が観察される図9B。ラットの正所性肝臓癌モデルを用いる。ルシフェラーゼ遺伝子CRL1601-Lucで標識された約2×106個のラット肝臓腫瘍細胞を、バッファローラットにおける肝臓の左葉に注入する。腫瘍増殖をゼノーゲンXenogenインビボ撮像システムによってモニターする。注入の2~3週後に、腫瘍組織を回収し、小片に切断して、第2グループのラットの左葉肝臓の同所に移植する。腫瘍をもつラットを、以下のように三つのグループにランダムに分ける。グループ1:酢酸リンゲル緩衝液対照グループ2:酢酸リンゲル緩衝液シスプラチンシスプラチングループ3:熱安定性架橋四量体ヘモグロビンシスプラチンシスプラチンHb肝臓腫瘍組織を移植したラットを、3mg/kgのシスプラチンを単独でグループ2、または熱安定性架橋四量体ヘモグロビンとの組合せでグループ3用いて治療した。グループ2および3については、30~50mg/kgのペントバルビトン溶液の腹腔内注射によってラットを麻酔し、左門脈を通してシスプラチンを投与する。グループ3については、0.4g/kgの熱安定性架橋四量体ヘモグロビンを、シスプラチン治療の前にラットの陰茎静脈を通して静脈注射する。グループ1は、非治療対照群である。重要なこととして、治療の3週後に肝臓腫瘍の顕著な縮小が観察される図9B。実施例10ラットにおける急性の重篤な出血性ショックの治療熱安定性架橋四量体ヘモグロビンを、ラットの急性の重篤な出血性ショックのモデルでの蘇生剤としても使用する。50匹のスプラグ-ドーリー系ラットを、蘇生剤に従ってランダムに三つのグループに分ける。各グループには16~18匹のラットが含まれる。グループ1:乳酸リンゲル緩衝液負の対照、16匹のラットグループ2:動物の自家血液正の対象、16匹のラットグループ3:熱安定性架橋四量体ヘモグロビン治療群0.5gHb/kg体重、18匹のラット。急性の重篤な出血性ショックは、動物の全血の50体重の7.4と見積もられるを抜き取ることにより樹立する。出血性ショックが10分間樹立された後に、乳酸リンゲル溶液、動物の自家血液、または0.5gHb/kgの熱安定性架橋四量体ヘモグロビンを動物に注入する。熱安定性架橋四量体ヘモグロビンの注入速度は5mL/時に設定し、その後、全ての実験動物を24時間観察する。研究期間に亘って、生存、血行動態、心筋機構、心臓出力、心機能、血液ガス、組織酸素供給消費、組織灌流酸素張力肝臓、腎臓および脳、肝機能腎機能、血液レオロジー血液粘度、およびミトコンドリア呼吸制御速度肝臓、腎臓および脳を含むパラメータのパネルを観察および分析する。特に、生存は主要な終点である。24時間の観察の後、熱安定性架橋四量体ヘモグロビン治療群は、乳酸リンゲル溶液または負の対照群および自家血液群と比較して、遙かに高い生存率を有する下記の表8に示す。上記のように種々の実施形態に関して本発明を説明したが、このような実施形態は限定的なものではない。当業者は多くの変形例および修飾を理解するであろう。このような変形および修飾は、特許請求の範囲の範囲内に含まれるものと看做される。"