"RNAウイルスを含む試料から前記RNAウイルスのRNAを抽出し、前記抽出されたRNAをPCR法により増幅させて前記RNAを検出するために前記試料に添加されるRNA検出用試薬であって、下記一般式1で表される多糖類を含むことを特徴とするRNA検出用試薬。1前記RNAウイルスがインフルエンザウイルス、ネコカリシウイルス、ノロウイルス及びデングウイルスからなる群から選択される一種または二種以上である請求項1に記載のRNA検出用試薬。RNAウイルスを含む試料からRNAウイルスのRNAを抽出する抽出工程と、前記抽出工程で抽出されたRNAをPCR法によって増幅するPCR反応工程とを備えるRNA検出方法において、前記試料に下記一般式2で表される多糖類を含む試薬を添加することを特徴とするRNA検出方法。2前記抽出工程の前に、前記試料に前記試薬を添加する請求項3に記載のRNA検出方法。前記抽出工程では、前記試料にフェノールを含む液を接触させることで試料からRNAを抽出することを実施する請求項3または4に記載のRNA検出方法。前記RNAウイルスがインフルエンザウイルス、ネコカリシウイルス、ノロウイルス及びデングウイルスからなる群から選択される一種または二種以上である請求項3乃至5のいずれか一項に記載のRNA検出方法。そこで、本発明は、上記のような従来の問題を鑑みて、RNAの検出感度を向上させることのできるRNA検出用試薬、およびRNA検出方法を提供することを課題とする。前記課題を解決するための手段として、本発明のRNA検出用試薬は、RNAウイルスを含む試料から前記RNAウイルスのRNAを抽出し、前記抽出されたRNAをPCR法により増幅させて前記RNAを検出するために前記試料に添加されるRNA検出用試薬であって、下記一般式1で表される多糖類を含むことを特徴としている。1また、本発明のRNA検出方法は、RNAウイルスを含む試料からRNAウイルスのRNAを抽出する抽出工程と、前記抽出工程で抽出されたRNAをPCR法によって増幅するPCR反応工程とを備えるRNA検出方法において、前記試料に下記一般式2で表される多糖類を含む試薬を添加することを特徴としている。2前記のようにRNAウイルスを含む試料に前記一般式1で表される多糖類を含むRNA検出用試薬を添加して、ウイルスのRNAの抽出を行い、さらにPCR法によってRNAを増幅させることによって、PCR法におけるRNAの検出感度が向上し、微量なRNAでも検出することが可能になる。また、本発明のRNA検出方法では、前記抽出工程の前に、前記試料に前記試薬を添加することが好ましい。前記抽出工程の前に前記試薬を添加することによって、よりRNA検出感度を向上させることができる。本発明において、前記抽出工程では、前記試料にフェノールを含む液を接触させることで試料からRNAを抽出することを実施することが好ましい。試料とフェノールを含む液を接触させる抽出を行なう方法において、試料に前記多糖類を含む試薬を添加することで、効果的にRNAの検出感度が向上する。また、本発明においては、RNAウイルスがインフルエンザウイルス、ネコカリシウイルス、ノロウイルス、デングウイルスからなる群から選択される一種または二種以上であることが好ましい。前記RNAウイルスを含む試料からのRNA検出を行なう場合には、本発明のRNA検出用試薬、またはRNA検出方法によれば、特に高い検出感度が得られる。本発明によれば、RNAの検出感度を向上させることができ、従って、試料中に含まれるRNAウイルスが微量あっても、精度よくRNAウイルスのRNAを検出することができる。以下に、本実施形態のRNA検出用試薬およびこれらの試薬を用いたRNA検出方法について具体的に説明する。本実施形態のRNA検出用試薬は、下記一般式1で表される多糖類を含むものである。1前記多糖類は、一般式に示すように、グルコース3分子が、α-1,4グリコシド結合したマルトトリオースが、α-1,6グリコシド結合によって連結している多糖類である。かかる多糖類の具体例としては、食品添加物として広く用いられているプルランが挙げられる。本実施形態で用いられる前記多糖類としてのプルランは、重量平均分子量Mwが約10000~250万程度好ましくは約10万~約100万程度のものが好ましく使用できる。前記プルランとしては、例えば、昭和電工株式会社製商品名プルランP-5、プルランP-10、プルランP-20、プルランP-50、プルランP-100、プルランP-200、プルランP-400、プルランP-800等の市販の各種プルランを好適に使用することができる。前記プルラン重量平均分子量は、GPCゲル浸透クロマトグラフィー法により、例えば、下記装置および条件で求められる。分析装置恒温槽:昭和電工株式会社製SHODEXOVENA0-30送液ポンプ:昭和電工株式会社製SHODEXDS-4検出器:昭和電工株式会社製SHODEXRI-101デガッサー:昭和電工株式会社製SHODEXERC-3115α解析ソフト:システムインスルツメンツ社製SIC480IIデータステーションカラム:昭和電工株式会社製SB-806MHQSB-804HQ直列分析条件溶離液:0.1MNaNO3水溶液恒温槽温度:40°C流量:1ml/分GPCカラム用標準試料:昭和電工株式会社製プルランP-5、P-10、P-20、P-50、P-100、P-200、P-400、P-800、試料注入量:前記試料の1質量水溶液を50μl注入前記標準試料のピーク時間から検量線を作成し、試料のクロマトグラムを、前記解析ソフトを用いて解析し、分子量を算出する。本実施形態のRNA検出用試薬は、前記多糖類を水その他の溶媒に溶解させて、試薬として調製することができる。前記RNA検出用試薬における多糖類の濃度は、10~2000μg/ml、好ましくは20~1000μg/mlである。前記多糖類を試薬として調製する調製方法としては、例えば、溶媒の温度2°C~10°C、好ましくは4°C~8°Cで、1時間~30時間、好ましくは、6時間~24時間程度攪拌することで調製することができる。本実施形態のRNA検出用試薬には、さらに抗生物質などが添加されていてもよい。使用可能な抗生物質としては、例えば、ペニシリンやストレプトマイシンなどが挙げられる。さらに本実施形態のRNA検出用試薬には、抽出性を高めるために界面活性剤などが添加されていてもよい。あるいは、本実施形態のRNA検出用試薬は、RNA検出に使用される他の試薬、例えば、タンパク質変性剤、RNA分解酵素阻害剤などと共に混合した混合液として調製してもよい。このように他の試薬と混合しておくことで、試薬をその都度添加する手間が省略できる。次に前記のようなRNA検出用試薬を用いて試料中のRNAを検出する方法について説明する。1試料の準備血液などの検査用試料を準備する。通常の検出方法と同様に必要に応じて適当な倍率に希釈してもよい。また、検査用試料としては血液の他、咽頭ぬぐい液や気管吸引液例インフルエンザウイルス、血清例:C型肝炎ウイルス、組織、細胞の他に、尿便例ノロウイルス等の排泄物、環境試料下水、河川水等などを検査用試料として用いることが可能である。本発明では、種々のRNAウイルスから抽出されるRNAの検出に適用可能であるが、例えば、エンベロープを有するA型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、デングウイルス、エンベローブを有しないノロウイルスの実験室での代替ウイルスとして用いられることが多いネコカリシウイルスなどのウイルスRNAの検出に用いることができる。これらのウイルスの中でも、特に、エンベロープを有するウイルスには検出感度向上効果が高い。2RNAの抽出工程前記試料からRNAを抽出する。まず、前記試料に前記のRNA検出用試薬を添加する。試料に対するRNA検出用試薬の添加量は、試料の濃度や、ウイルスの種類などによって適宜調整可能である。例えば、前記多糖類が、10~2000μg/ml、好ましくは20~1000μg/mlとなるようにRNA検出用試薬を試料に添加することが好ましい。前記RNA検出用試薬を添加した試料から、公知の手法、例えばフェノールクロロフォルム抽出法によってRNAを抽出する。RNA抽出には市販のRNA抽出用試薬キット、例えば、TRIZOL試薬インビトロジェン社製等を添付のプロトコールに従って使用することができる。例えば、下記のような手順でRNA抽出を行なう。まず、試料をTRIZOL試薬に溶解させる。試料が血液などの液体の場合には、適宜希釈した液を、試料が培養細胞などの固体の場合には予めホモジェナイズしておいたものを、TRIZOL試薬に混合して溶解させる。TRIZOL試薬に試料を溶解させた液を15分間静置して、クロロホルムを添加し、チューブに入れ遠心分離12000×g、15分間、4°Cする。遠心分離後、RNAを含む上澄みと、その他の成分タンパク質、炭水化物などを含む沈殿に分離し、上澄みを取り出すことでRNA成分を含む水溶液が抽出できる。さらに、上澄みを別のチューブにいれて、イソプロパノールを添加し、10分間静置した後、遠心分離12000×g、15分間、4°Cした上澄みを除去するとRNAの沈殿が生成する。その沈殿にエタノール75を添加しさらに遠心分離7500×g、5分間、4°CするとRNAが洗浄できる。沈殿洗浄したRNA沈殿を乾燥後、DNaseWaterに再溶解させることで、RNAが回収できる。3逆転写工程前記のように試料から抽出されたRNAを用いて、逆転写によって相補的DNAcDNAを合成する。逆転写は、市販の逆転写酵素用試薬キット、例えば、HighCapacitycDNA逆転写キットアプライドバイオシステムズ社製等を、添付のプロトコールに従って使用することができる。例えば、逆転写酵素、ランダムプライマー、デオキシヌクレオチド三リン酸dNTP、RNA分解酵素阻害剤RNaseinhibitor、付属のバッファーおよびRNase-free水をプロトコールに従って調製し1試料あたり全量で10μlとなるように調製、前記回収されたRNAを調製した試薬に同量の10μl添加してピペッティングで混合する。混合後、10分間室温で静置し、37°Cで2時間逆転写を行い、cDNAを合成する。逆転写反応後のcDNAは、85°Cで10秒保温させることで、酵素を不活化させておく。4PCR反応工程次に、前記逆転写によって生成されたcDNAをPCR反応によって増幅させて検出を行う。PCR反応によるcDNAの検出は、公知のPCR法を用いたPCR装置を適宜用いて行うことができる。PCR装置で検出されるデータはcDNAの量であるため、これを元の試料中に含まれるRNA量に換算することで、試料中に含まれていたRNA量およびRNAウイルスの検出が可能となる。尚、RNA量とcDNA量は同量であるが、生データとして得られるcDNA量は、最終的にPCR反応させたcDNA量であるため、元の試料中に含まれるRNA量に換算する場合には、希釈を考慮して換算する。前記のようなPCR反応工程において試料中に含まれるウイルスRNAを検出する場合、血液などの試料に含まれている不純物が残存物質として各工程における酵素反応などを阻害している可能性があり、これらの残存物質が、最終的なウイルスRNAの検出感度に悪影響を及ぼしていると考えられる。本発明のRNA検出用試薬が実際にどのような作用でRNA検出の感度を向上させているのか、その詳細な原理は不明だが、おそらく、前記RNAの抽出工程において、RNAの抽出効率を向上させていると考えられる。また、本発明のRNA検出用試薬は前記のようにRNAの抽出前の試料に添加し、その後試料を抽出工程、逆転写工程、PCR反応工程において各処理を実施するため、各工程における残存物質の阻害作用を低下させて、RNA検出感度を向上させているとも考えられる。以下、実施例および比較例を用いて本発明を更に具体的に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。[実施例1]RNA検出用試薬RNA検出用試薬として、下記に記載の各多糖類プルランA~H、単糖類のグルコース、2糖類のマルトース、多糖類のデンプン、エチルセルロースおよびメチルセルロースを試薬成分として、各試薬成分の濃度が1000μg/mlとなるように水超純水に溶解させたものを準備した。尚、プルランGについては、100mg/mlとなるように水超純水に溶解させたものも準備した。各多糖類、グルコース、マルトース、およびデンプンは下記のものを使用した。また、下記の分子量は、前記装置および条件でGPCゲル浸透クロマトグラフィー法により測定した重量平均分子量であって、測定値の有効数値を2桁または1桁で示した。プルランA:商品名:プルランP-10昭和電工株式会社製、分子量10000プルランB:商品名:プルランP-20昭和電工株式会社製、分子量20000プルランC:商品名:プルランP-50昭和電工株式会社製、分子量50000プルランD:商品名:プルランP-100昭和電工株式会社製分子量100000プルランE:商品名:プルランP-200昭和電工株式会社製分子量200000プルランF:商品名:プルランP-400昭和電工株式会社製分子量400000プルランG:商品名:プルランP-800昭和電工株式会社製分子量800000プルランH:商品名:プルランP-2500昭和電工株式会社製、分子量2500000グルコース:和光純薬工業社製試薬特級マルトース:マルトース1水和物和光純薬工業社製和光1級デンプン:でんぷんとうもろこし由来和光純薬工業社製試薬特級メチルセルロース和光純薬工業社製エチルセルロース和光純薬工業社製試料ウイルスとしてA型インフルエンザウイルス株:A/PR/8/34を用い、ウイルス液の濃度が250μl中に1×104PFUとなるように調整した。培養液として、MEM培地、L-グリタミン、非必須アミノ酸、炭酸水素ナトリウムpH調整用からなる培養液を用いた。表1に示すように、前記RNA検出用試薬を5~245μlと前記培養液を合わせ各250μlになるように調製した試験例、および、RNA検出用試薬を添加せずにウイルス液5μlと培養液245μlからなる標準液を準備した。尚、試験例25については、プルランGを使用したRNA検出用試薬であって1000μg/mlとなるように調製したものをさらに1000倍希釈したものを用い、試験例26については同試薬を100倍希釈したものを用いた。また、試験例31~33については、プルランGを使用したRNA検出用試薬であって100mgmlの濃度に調整したRNA検出用試薬を用いて、表1の含有量になるように調整して用いた。RNA抽出工程抽出用の試薬としては、TRIZOL商品名、invitrogen社製を用いた。各液250μlに対し、前記TRIZOLを750μl添加した。この溶液をよく混和し、15分間室温で静置した後、200μlのクロロホルムを添加して、遠心分離12000×g、15分間、4°Cする。その後、水層を回収した。回収した水層約700μlあたり500μlのイソプロパノールを添加して、10分間室温で静置し、遠心分離12000×g、15分間、4°Cして、RNA成分を沈殿させ、上澄みを除去する。残ったRNA沈殿物に、75エタノールを1ml添加し、ボルテックス後、5分間室温で静置し、さらに遠心分離9000×g、5分間、4°CすることによってRNA沈殿を洗浄した。一度、上清を除去した後、さらに遠心分離9000×g、2分間、4°Cし、残存している上清を除去した。上清除去後のRNA沈殿物を、15分間風乾させ、エタノールを除去した。風乾後のRNA沈殿物に、DEPC処理水を15μl加え、ピペッティングし、RNA溶解液を得た。逆転写工程およびPCR反応工程前記抽出されたRNAを、DEPC処理水15μlで溶解し、そのうちの10μlのRNAを用いて、20μlのcDNAを合成した逆転写工程。合成したcDNAのうち5μlを使用し、下記のPCR装置を用いてRNA量を測定した。PCR反応工程前記逆転写工程および、PCR反応の手順は、以下の試薬またはキットの方法に準拠した。尚、ウイルスのプライマーおよびプローブは、ウイルス株の遺伝子配列を基に、遺伝子解析ソフトウエアPrimerExpress3.0を用いて設計した。本実施例のウイルスのプライマーおよびプローブは、A型インフルエンザウイルス株を141株抽出し、その中で相同性の高い共通プライマー、プローブとなるプライマーおよびプローブを選定した。逆転写キット:HighCapacitycDNA逆転写キットアプライドバイオシステムズ社製PCR反応キット:イーグルタックマスターミックスROXロシュダイアグノスティックス社製PCR装置リアルタイムPCR:アプライドバイオシステムズ7300リアルタイムPCRシステムアプライドバイオシステムズ社製各試験例および標準液においてPCR装置で測定した生データと、この生データから換算した250μl中のRNA量copyを表1に記載した。尚、換算値は、生データを0.167で除した数値である。その理由は、前記抽出したRNA15μlのうち、10μlをcDNA合成に使い、合成したcDNA20μlのうち、5μlをPCR装置にかけてPCR反応させたため、生データcDNA数を0.167で除した値が250μlの検査用試料に含まれるRNA量となるためである。すなわち、換算値が検出されたRNA量となる。尚、今回のPCR測定条件において、使用したPCR装置の検出限界値は、10copyであった。RNA検出用試薬を添加しない標準液では、検出されたRNA量換算値が1.7×102copyであった。この標準液に対して、各プルランを添加した試験例1~37では、前記標準液と同等以上のRNA量copy数が検出された。特に、プルランの分子量が高くなると、プルランの含有量が少なくても、前記標準液よりも、多くのRNA量copy数が検出された。一方、試験例38~57では、特に標準液と比べても有意な差は見られなかった。[実施例2]実施例2では、前記実施例1のRNA検出用試薬の中から、プルランGを用いたRNA検出用試薬を準備し、ウイルスとして、ネコカリシウイルス株:FCV-2280を用いた。前記実施例1と同様に、濃度が1.0×104PFU/250μlとなるように調整したウイルス液を各5μlずつ準備し、これに対して前記RNA検出用試薬を50μl、培養液を195μl準備した。比較として、培養液242.5μlのみのものを準備した。前記以外の条件は実施例1と同様に、RNA抽出工程、逆転写工程およびPCR反応工程を実施し、RNA検出量を測定した250μl中のウイルス量換算値copy。結果を表2に示す。尚、逆転写に必要な各ウイルスのプライマーおよびプローブは、前記ネコシリカウイルス株の遺伝子配列を基に、遺伝子解析ソフトウエアPrimerExpress3.0を用いて、アプライド社の設計ガイドラインに最も近くなる、PrimerExpress3.0で示されるペナルティスコアが最も低くなるものを選定して用いた。実施例1と同様に、RNA検出用試薬を添加した試験例58では標準液よりも100倍程度多いRNA量copy数が検出された。[実施例3]実施例3では、前記実施例1のRNA検出用試薬の中から、プルランGを用いたRNA検出用試薬を準備し、ウイルスとして、デングウイルス株:NEWGuineaCを用い、前記実施例1と同様に、濃度が1.0×104PFU/250μlとなるように調整したウイルス液を各5μlずつ準備し、これに対して前記RNA検出用試薬を50μl、培養液を195μl準備した。比較として、培養液242.5μlのみのものを準備した。前記以外の条件は実施例1と同様に、RNA抽出工程、逆転写工程およびPCR反応工程を実施し、RNA検出量を測定した250μl中のウイルス量換算値copy。結果を表3に示す。実施例1と同様に、RNA検出用試薬を添加した試験例59では標準液よりも100倍程度多いRNA量copy数が検出された。"