Lactobacillusgasseriの菌体画分を有効成分とする遅延型過敏症を軽減するための薬剤。前記菌体画分がRNA画分であることを特徴とする請求項1記載の薬剤。前記Lactobacillusgasseriが、LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542であることを特徴とする請求項1または2記載の薬剤。遅延型過敏症の軽減作用がCD4T細胞増殖の抑制作用を介するものである請求項1~3のいずれか1項に記載の薬剤。請求項1~4のいずれか1項に記載の薬剤の有効量を含有せしめた遅延型過敏症を軽減するための食品組成物。乳児用調製粉乳、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、保健機能食品、病者用食品、または乳製品である請求項5記載の食品組成物。遅延型過敏症を軽減するための組成物の製造におけるLactobacillusgasseriの菌体画分の使用。組成物が、乳児用調製粉乳、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、保健機能食品、病者用食品、または乳製品に配合されたものである請求項7記載の使用。Lactobacillusgasseriの菌体画分の有効量を対象に投与する工程を含む、遅延型過敏症を軽減するための方法。本発明は、食経験があり長期間摂取における安全性が明確な、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む、遅延型過敏症の軽減用の薬剤を提供することを課題とする。また本発明は、これを含有する遅延型過敏症を軽減するための食品組成物を提供することを課題とする。本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意研究を行った。その結果、本発明者らは、乳酸菌の一種であるLactobacillusgasseriの菌体画分にCD4T細胞に対する増殖抑制効果があることを明らかにした。また本発明者らは、LactobacillusgasseriOLL2809菌株のRNA画分が、MyD88依存性シグナル伝達経路を介し、用量依存的にCD4T細胞の増殖を抑制することを明らかにした。さらに本発明者らは、invivoにおいてもLactobacillusgasseriOLL2809菌株が遅延型過敏性反応を抑制することを明らかにした。微生物の菌体画分がCD4T細胞の増殖抑制に関与し、遅延型過敏性反応を抑制することを明らかにしたのは、本発明が初めてである。本発明はこのような知見に基づくものであり、以下の遅延型過敏症の軽減剤、および遅延型過敏症を軽減するための食品組成物などに関する。1Lactobacillusgasseriの菌体画分を有効成分とする遅延型過敏症を軽減するための薬剤。2前記菌体画分がRNA画分であることを特徴とする1記載の薬剤。3前記Lactobacillusgasseriが、LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542であることを特徴とする1または2記載の薬剤。4遅延型過敏症の軽減作用がCD4T細胞増殖の抑制作用を介するものである1~3のいずれかに記載の薬剤。51~4のいずれかに記載の薬剤の有効量を含有せしめた遅延型過敏症を軽減するための食品組成物または飲食品。6乳児用調製粉乳、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、保健機能食品、病者用食品、または乳製品である5記載の食品組成物または飲食品。7遅延型過敏症を軽減するための組成物の製造におけるLactobacillusgasseriの菌体画分の使用。8前記菌体画分がRNA画分であることを特徴とする7記載の使用。9前記Lactobacillusgasseriが、LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542であることを特徴とする7または8記載の使用。10遅延型過敏症の軽減作用がCD4T細胞増殖の抑制作用を介するものである7~9のいずれかに記載の使用。11組成物が飲食品に配合されたものである、7~10のいずれかに記載の使用。12飲食品が、乳児用調製粉乳、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、保健機能食品、病者用食品、または乳製品である11に記載の使用。13Lactobacillusgasseriの菌体画分の有効量を対象に投与する工程を含む、遅延型過敏症を軽減するための方法。14前記菌体画分がRNA画分であることを特徴とする13記載の方法。15前記Lactobacillusgasseriが、LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542であることを特徴とする13または14記載の方法。16遅延型過敏症の軽減作用がCD4T細胞増殖の抑制作用を介するものである13~15のいずれかに記載の方法。17遅延型過敏症の軽減に使用するためのLactobacillusgasseriの菌体画分。18前記菌体画分がRNA画分であることを特徴とする17記載の菌体画分。19前記Lactobacillusgasseriが、LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542であることを特徴とする17または18記載の菌体画分。20遅延型過敏症の軽減作用がCD4T細胞増殖の抑制作用を介するものである17~19のいずれかに記載の菌体画分。21飲食品に配合されたものである、17~20のいずれかに記載の菌体画分。22飲食品が、乳児用調製粉乳、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、保健機能食品、病者用食品、または乳製品である21に記載の菌体画分。本発明者らは後述する実施例において確認されたとおり、Lactobacillusgasseriの菌体画分が遅延型過敏症反応を抑制することを見出した。また、特に、LactobacillusgasseriOLL2809菌株のRNA画分にその効果が高いことを見出した。Lactobacillusgasseriは食経験のある、安全性の高い乳酸菌である。従って、本発明の遅延型過敏症軽減剤、およびこれを含有する遅延型過敏症軽減用の食品組成物によって、遅延型過敏症を安全に軽減することが可能である。本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む遅延型過敏症を軽減するための薬剤を提供する。また本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む遅延型過敏性反応を抑制するための薬剤を提供する。さらに本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含むCD4T細胞の増殖抑制剤を提供する。本明細書においては特に断りのない限り、これら軽減剤、遅延型過敏性反応の抑制剤およびCD4T細胞の増殖抑制剤を本発明の薬剤と総称する。また本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む遅延型過敏症軽減用組成物を提供する。また本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む遅延型過敏性反応の抑制用組成物を提供する。さらに本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含むCD4T細胞の増殖抑制用組成物を提供する。本明細書においては特に断りのない限り、これら軽減用組成物、遅延型過敏性反応の抑制用組成物およびCD4T細胞の増殖抑制用組成物を本発明の組成物と総称する。組成物としては医薬組成物、食品組成物が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書において軽減は、改善、抑制、治療と表現することもできる。従って本発明の軽減には、軽減改善抑制治療が含まれる。本発明の薬剤及び組成物は、その有効成分としてLactobacillusgasseriの菌体画分を含む。本発明の薬剤及び組成物は、医薬品または食品添加剤としても用いることができる。また、本発明の薬剤及び組成物は、Lactobacillusgasseriの菌体画分に加え、Lactobacillusgasseriの菌体画分以外の画分やLactobacillusgasseriそのもの生菌、Lactobacillusgasseriの死菌体を含んでもよい。あるいは生菌体を含まないことも可能である。つまり本発明の薬剤及び組成物は死菌体のみからなっていてもよい。Lactobacillusgasseriの菌体画分は、菌体破砕液上清画分、菌体破砕液上清除タンパク質画分、RNA画分などがあげられるが、遅延型過敏性の軽減作用、遅延型過敏性反応の抑制作用、あるいはCD4T細胞の増殖抑制作用を有する限りこれらに限定されない。本発明のLactobacillusgasseriの菌体画分として、好ましくは菌体破砕液上清画分、より好ましくはRNA画分が挙げられる。菌体破砕液上清画分、菌体破砕液上清除タンパク質画分、RNA画分は、実施例に記載の方法のほか、当業者に周知のRNA抽出方法や市販のRNA抽出キットを用いることによって調製することができる。本発明のRNA画分は、RNAを含む限りRNA以外の核酸やタンパク質、細胞成分を含むものであってもよい。あるいはデオキシリボヌクレアーゼやプロテイナーゼなどの酵素処理を受けたものであってもよい。本発明のRNA画分の態様として、リボヌクレアーゼの作用を受けていないRNA抽出物を挙げることができるがこれに限定されない。本発明の薬剤及び組成物は、その有効成分であるLactobacillusgasseriの菌体画分の他に、Lactobacillusgasseri以外の微生物を含んでいても良い。例えば、Lactobacillus属の乳酸菌であれば、Lactobacillusdelbrueckiisubspburgalicus、Lactobacillusdelbrueckiisubsplactis、Lactobacillusparacaseisubspparacasei、Lactobacillusacidophilus、Lactobacillushelveticus、Lactobacillushelveticussubspjugurti、Lactobacillusacidophilus、Lactobacilluscrispatus、Lactobacillusamylovorus、Lactobacillusgallinarum、Lactobacillusoris、Lactobacilluscaseisubsprhamnosus、Lactobacillusjohnsonii、Lactobacillusfermentum、Lactobacillusbrevisなどを挙げることができるが、これらに限定されない。本発明の薬剤及び組成物は、このようなLactobacillus属の乳酸菌や他の微生物を1種または2種以上を含んでもよい。本発明のLactobacillusgasseriとして、特に好ましくはLactobacillusgasseriOLL2809本菌株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託されているが挙げられるが、これに限定されない。本発明者らは、ヒト成人の糞便より独自に分離したLacgtobacillusgasseriから、マウス由来CD4T細胞ヘルパーT細胞の増殖を阻害し、さらに、Lactobacillusgasseriの菌体画分が遅延型過敏性反応を抑制することを見出した。またさらに、ヒト成人の糞便より独自に分離したLacgtobacillusgasseriの中でも、LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542を選抜した。したがって本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を有効成分とする遅延型過敏症の軽減剤、またはこれらを含有する遅延型過敏症軽減用の食品組成物又は飲食品を提供する。本発明者らは、LactobacillusgasseriOLL2809菌株を独立行政法人産業技術総合研究所に寄託した。以下に、寄託を特定する内容を記載する。1寄託機関名:独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター2連絡先:日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6郵便番号3058566電話番号029861602960793識別のための表示:LactobacillusgasseriOLL2809受託番号:FERMBP105424寄託日:平成18年3月1日LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542は、グラム陽性桿菌であり、LactobacilliMRSAgarDifco上でのコロニー形態は円形、淡黄色、扁平状である。生理学的特徴としては、ホモ乳酸発酵形式、45°Cでの発育性、グルコース、マンノース、フルクトース、ガラクトース、シュクロース、セロビオース、ラクトース、トレハロースに対する発酵性を有する。LactobacillusgasseriOLL2809菌株受託番号:FERMBP10542を培養するための培地としては、乳酸菌の培地に通常用いられる培地が使用される。すなわち主炭素源のほか窒素源、無機物その他の栄養素を程良く含有する培地ならば、いずれの培地も使用可能である。炭素源としては、ラクトース、グルコース、スクロース、フラクトース、澱粉加水分解物、廃糖蜜などが、使用菌の資化性に応じて使用できる。窒素源としては、カゼインの加水分解物、ホエータンパク質加水分解物、大豆タンパク質加水分解物等の有機窒素含有物が使用できる。ほかに、増殖促進剤として、肉エキス、魚肉エキス、酵母エキス等が用いられる。培養は嫌気条件下で行うことが望ましいが、通常用いられる液体静置培養などによる微好気条件下でもよい。嫌気培養には炭素ガス気層下で培養する方法などの公知の手法を適用することができるが、他の方法でもかまわない。培養温度は一般に30~40°Cが好ましいが、菌が生育する温度であれば他の温度条件でもよい。培養中の培地のpHは60~70に維持することが好ましいが、菌が生育する温度であれば他のpH条件でもよい。また、バッチ培養条件下で培養することもできる。培養時間は通常10~24時間が好ましいが、菌が生育することができる時間であれば、他の培養時間であってもよい。本発明に使用可能なLactobacillusgasseriも、グラム陽性桿菌である点や、その他の生理学的特徴について、LactobacillusgasseriOLL2809と同様の特徴を示す。このようなLactobacillusgasseriは、当業者であればヒト糞便等から生理学的特徴に基づいて分離することができる。培養も、LactobacillusgasseriOLL2809について上述したのと同様の方法によって可能である。本発明の薬剤及び組成物は、Lactobacillusgasseriに何らかの処理を施した乳酸菌処理物としてのLactobacillusgasseriの菌体画分を含んでも良い。あるいは、Lactobacillusgasseriの菌体画分とLactobacillusgasseriの菌体画分を内包した乳酸菌そのものや、Lactobacillusgasseriを培養した培地を含んでもよい。例えばLactobacillusgasseriを乳酸菌懸濁液、乳酸菌培養物菌体、培養上清液培地成分を含む、乳酸菌発酵物乳酸菌飲料、酸乳、ヨーグルト等等として使用することができる。本発明に用いられるLactobacillusgasseriに何らかの処理を施した乳酸菌処理物としては、例えばLactobacillusgasseriの菌体画分含有物、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含有した発酵乳の濃縮物、Lactobacillusgasseriの菌体画分のペースト化物、Lactobacillusgasseriの菌体画分の乾燥物噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物から選ばれる少なくともひとつ、Lactobacillusgasseriの菌体画分の液状物、Lactobacillusgasseriの菌体画分の希釈物、Lactobacillusgasseriの菌体画分の破砕物等が挙げられる。また、Lactobacillusgasseriの菌体画分を調製する際のLactobacillusgasseriとしては生菌体、湿潤菌、乾燥菌等が適宜使用可能である。あるいは、殺菌すなわち加熱殺菌処理、放射線殺菌処理、または破砕処理等を施した死菌体であってもよい。これらの処理工程は単独であっても複数を併用してもかまわない。このような乳酸菌処理物を、粉ミルクなど生物学的規格を有する医薬品および/または飲食品においても添加することも可能であり、医薬品および/または飲食品の形態などによらず様々な医薬品および/または飲食品に応用できる。本発明の薬剤及び組成物は、単独、または複数の混合物として経口投与したり、他の遅延型過敏症の軽減効果、予防効果、治療効果を有する化合物や微生物等と併用したりすることにより、ヒトおよび動物における遅延型過敏症の軽減に有効である。遅延型過敏症の種類は特に限定されないが、例えば、遅延型アトピー性皮膚炎、ツベルクリン反応、接触性皮膚炎、シェーグレン症候群、ギランバレー症候群、薬剤性肺炎等を挙げることができる。遅延型過敏症とは、これら遅延型過敏性反応を引き起こす疾患を包含し、遅延型過敏性反応に起因するアレルギー疾患と表現することもできる。遅延型過敏症の軽減効果、遅延型過敏性反応の抑制効果は、遅延型過敏症に特有の、当業者に周知の様々な症状の変化を観察することにより確認することができる。例えば身体の各組織や器官における腫脹や炎症、かゆみ、かぶれ等の変化を観察することにより、遅延型過敏症の改善効果、遅延型過敏性反応の抑制効果を確認することができるがこれらに限定されない。またCD4T細胞の増殖抑制の効果も、例えば実施例に記載されている3Hチミジンの取り込み量を測定する方法、MTTアッセイなど当業者に周知の方法により確認することができる。本発明の薬剤や組成物を医薬品または飲食品へ配合する配合量は、形態、剤型、症状、体重、用途などによって異なるため、特に限定されないが、あえて挙げるなら、0001~100の含量で配合することができ、好ましくは001~100、さらに好ましくは01~100の含量で配合することができる。本発明の薬剤や組成物の医薬品または飲食品としての一日当たりの摂取量は年齢、症状、体重、用途などによって異なるため特に限定されないが、あえて挙げるなら01~1000mgkgを摂取することができ、好ましくは01~100mgkgを摂取することができる。また本発明の薬剤は、経口投与又は非経口投与筋肉内、皮下、静脈内、坐薬等のいずれでも投与できる。本発明の薬剤や組成物は、医薬品または飲食品のいずれの形態でも利用することができる。例えば、医薬品として直接投与することにより、または特定保健用食品等の特別用途食品や栄養機能食品として直接摂取することにより、各種の遅延型過敏症を軽減することが期待される。また、各種飲食品乳製品、牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳特に乳児用調製粉乳、流動食、病者用食品、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、栄養食品、保健機能食品等に本発明の薬剤や組成物、これらを構成する乳酸菌を添加し、これを摂取してもよい。Lactobacillusgasseriの菌体画分をそのまま使用し、あるいは、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む乳酸菌や、他の食品ないし食品成分と混合するなど、通常の飲食品組成物における常法にしたがって使用できる。また、その性状についても、通常用いられる飲食品の状態、例えば、固体状粉末、顆粒状その他、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよい。本発明の薬剤や組成物を含有する飲食品には、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を主成分として使用することができる。タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエー粉、ホエータンパク質、ホエータンパク質濃縮物、ホエータンパク質分離物、α―カゼイン、β―カゼイン、κ-カゼイン、β―ラクトグロブリン、α―ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これら加水分解物;バター、乳性ミネラル、クリーム、ホエー、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分などが挙げられる。糖質としては、糖類、加工澱粉テキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂;パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンA、カロチン類、ビタミンB群、ビタミンC、ビタミンD群、ビタミンE、ビタミンK群、ビタミンP、ビタミンQ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。これらの成分は、2種以上を組み合わせて使用することができ、合成品および/またはこれらを多く含む食品を用いてもよい。本発明の薬剤や組成物を医薬品として使用する場合には、種々の形態で投与することができる。その形態として、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、被覆錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、注射剤、坐剤、浸剤、煎剤、チンキ剤等を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主剤に対して必要に応じて賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤、充填剤、増量剤、保湿剤、界面活性剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて製剤化することができる。また、この医薬製剤中に着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有させてもよい。本発明の薬剤または組成物を構成するLactobacillusgasseriの菌体画分の量は、その目的、用途薬剤、飲食品組成物に応じて任意に定めることができる。本発明はこれに限定されないがその含量としては、全体量に対して通常、0001~100ww、特に001~100wwが好ましい。Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む組成物や薬剤を飲食品や医薬品の製造に使用する場合、製造方法は当業者に周知の方法によって行うことができる。当業者であれば、Lactobacillusgasseriの菌体画分を他の成分と混合する工程、成形工程、殺菌工程、発酵工程、焼成工程、乾燥工程、冷却工程、造粒工程、包装工程等を適宜組み合わせ、所望の飲食品や医薬品を作ることが可能である。またLactobacillusgasseriの菌体画分を各種乳製品の製造に使用する場合も、当業者に周知の方法で所望の乳製品を製造できる。ヨーグルトの場合の一例を示せば、Lactobacillusgasseriを用いてスターターを調製する工程、該スターターを前処理した牛乳に加えて培養する工程、冷却工程、フレーバーリング工程、充填工程等を経てヨーグルトを製造できる。チーズであれば、例えば、殺菌等の前処理をした牛乳に本発明の乳酸菌をスターターとして添加して乳酸発酵させる工程、レンネットを添加してチーズカードを生成する工程、カード切断工程、ホエー排出工程、加塩工程、熟成工程などを経て製造可能である。あるいは、前記各種乳製品の製造において、他の乳酸菌をスターターとして用い、製造工程中にLactobacillusgasseriまたはLactobacillusgasseriの菌体画分を添加してもよい。また本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を動物に経口投与する工程を含む、遅延型過敏症の軽減方法に関する。Lactobacillusgasseriの菌体画分が投与される対象としては哺乳動物が挙げられる。哺乳動物としてはヒト及びヒト以外の哺乳動物が挙げられ、好ましくはヒトやサルが挙げられ、より好ましくはヒトが挙げられる。また本発明は、遅延型過敏症の軽減に使用するためのLactobacillusgasseriの菌体画分に関する。あるいは本発明は遅延型過敏症の軽減剤や軽減用組成物の製造におけるLactobacillusgasseriの菌体画分の使用に関する。また本発明は、遅延型過敏症の軽減のためのLactobacillusgasseriの菌体画分の使用に関する。また本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分と薬学的に許容される担体を配合する工程を含む、遅延型過敏症の軽減剤や軽減用組成物の製造方法に関する。あるいは本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含む遅延型過敏性反応の抑制剤を提供する。また本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を動物に投与する工程を含む遅延型過敏性反応の抑制方法を提供する。さらに本発明は、遅延型過敏性反応の抑制に使用するためのLactobacillusgasseriの菌体画分に関する。あるいは本発明は、遅延型過敏性反応の抑制剤や抑制用組成物の製造におけるLactobacillusgasseriの菌体画分の使用に関する。あるいは本発明は、遅延型過敏性反応を抑制するためのLactobacillusgasseriの菌体画分の使用に関する。あるいは本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分と薬学的に許容される担体を配合する工程を含む、遅延型過敏性反応の抑制剤や抑制用組成物の製造方法に関する。さらに本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を含むCD4T細胞の増殖抑制剤を提供する。また本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分を動物に投与する工程を含むCD4T細胞の増殖を抑制する方法を提供する。さらに本発明は、CD4T細胞の増殖の抑制に使用するためのLactobacillusgasseriの菌体画分に関する。あるいは本発明は、CD4T細胞の増殖抑制剤や増殖抑制用組成物の製造におけるLactobacillusgasseriの菌体画分の使用に関する。あるいは本発明は、CD4T細胞の増殖を抑制するためのLactobacillusgasseriの菌体画分の使用に関する。あるいは本発明は、Lactobacillusgasseriの菌体画分と薬学的に許容される担体を配合する工程を含む、CD4T細胞の増殖抑制剤や増殖抑制用組成物の製造方法に関する。本発明の薬剤や組成物は、経口投与に好適な担体を配合することができる。本発明の薬剤や組成物は、遅延型過敏症の軽減を目的として、食品を兼ねて投与することができる。以下に本発明を実施例に基づいてさらに説明するが、かかる実施例は本発明の例示であり、本発明を限定するものではない。なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。脾臓CD4T細胞の増殖応答の抑制効果1.材料と方法動物8~10週齢の雌性BALBcマウスは日本クレアから購入した。8~10週齢の雌性のDO1110TCRトランスジェニックマウスは、卵白アルブミンOVAの323339位に特異的な、IAd拘束性T細胞受容体αβ鎖BALBcマウス由来を発現するものを用いた。加熱処理細菌懸濁物およびその画分の調製加熱処理菌体乾燥菌体重量で3mgは遠心分離によって集菌し、生理食塩水に5mgmlの濃度で懸濁した。菌体懸濁液に05gのガラスビーズ直径01mmSigmaAldrichStLouisMOを加え、マルチビーズショッカー安井機械で破砕し、菌体破砕液を得た。破砕液を4°C、300×gで10分間遠心分離し、上清と沈殿画分に分画した。乳酸菌株のうち、菌株名にMEPと記載された菌株は株式会社明治の保有菌株である。また、MEP225101は、Lactobacillusgasseri種であり、MEP225102は、Lactobacilluscasei種である。また、LactobacillusgasseriOLL2809をLG2809と略して記載することがある。菌体破砕液上清の酵素処理菌体破砕液の上清は以下の様に処理した。37°Cで4時間放置、37°Cで4時間放置し、その後96°Cで10分間加熱処理、100μgmlのDNaseISigmaAldrichを加えて37°Cで4時間放置し、その後96°Cで10分間加熱処理してDNaseIを不活性化、100μgmlのプロテイナーゼKSigmaAldrichを加えて37°Cで4時間放置し、その後96°Cで10分間加熱処理して酵素を不活性化、100μgmlのRNaseASigmaAldrichを加えて37°Cで4時間放置し、その後ProteinaseK処理で酵素を不活性化した。細菌からのRNAの抽出細菌からのRNA抽出はRNeasyMiniKitを用いて行った。培養終了後の菌体乾燥菌体重量で3mgを遠心分離し、ペレットを生理食塩水に懸濁した。ペレットに05gのガラスビーズ01mmを加えてマルチビーズショッカーで破砕した。破砕液にBufferRLTを加え、10秒間激しく混合した。遠心分離後、上清を新しいチューブに移し、等量の70エタノールを加えてピペッティングした。破砕液をRNeasyspincolumに移し、8000×gで15秒間遠心分離した。BufferRW1をRNeasyspincolumに加えて再度遠心分離し、洗浄した。BufferRPEをRNeasyspincolumに添加し、8000×gで2分間遠心分離し、洗浄した。30μlの水をRNeasyspincolumに加え、8000×gで1分間遠心分離し、RNAを溶出した。抽出したRNAは使用時まで80°Cで保存した。マウス細胞株マウス由来の細胞は10のFCS牛胎児血清、GibcoGrandIslandNY、2gLのNaHCO3、100Umlのペニシリン、100μgmlのストレプトマイシン、50μM2メルカプトエタノール、300mgLLグルタミンを含むRPMI1640培地日水製薬で、37°Cで5のCO2インキュベーターで培養した。CD4T細胞増殖アッセイBALBcマウスからの脾細胞の調製は既出の方法で行った。T細胞不含脾細胞は、脾細胞からMACS磁気細胞分離装置を用いて、Thy12マイクロビーズMiltenyiBiotecBergishGladbachGermanyによるネガティブセレクションを行って調製した。抗原提示細胞として調製したこれらの細胞は1×105cellsウェルの濃度で、菌体懸濁液3株、LG2809菌体破砕液、LG2809由来RNA、マウス脾臓RNAAmbionAustinTXの存在下で、96ウェル平底プレートで、37°Cで4時間、5濃度のCO2インキュベーターで培養した。DO1110マウス由来CD4T細胞は脾細胞からMACSを用いて、既出の方法によってCD4マイクロビーズMiltenyiBiotecによるポジティブセレクションを行って調製した。分離したCD4T細胞5×104cellsウェルおよびOVA323339を、抗原提示細胞に各被験物質を加えた培養液に添加した。培養3日後、1ウェルに37kBqの3Hチミジンを添加し、さらに24時間培養した。MarchIIIharvesterを用いて細胞を回収し、細胞に取り込まれなかった3HチミジンをTrilux1450MicrobetacounterおよびMicrobeta270004ソフトウェアを用いて解析した。抗原提示細胞非存在下でのT細胞の活性化には、96ウェル平底プレートを10μgmlの抗CD3εモノクローナル抗体BDBiosciencesSanJoseCAで、37°Cで2時間コーティングした。BALBcマウスまたはMyD88欠損マウスBALBcマウス由来の脾細胞から単離したCD4T細胞を5×104cellsウェルの濃度で、抗CD3εモノクローナル抗体でコーティングしたプレートに加え、2μgmlの抗CD28モノクローナル抗体BDBiosciencesと共に、LG2809またはRNALG2809由来またはマウス脾臓由来の存在下で72時間培養した。また別の試験では、NアセチルシステインNACを25mMの濃度で添加して培養した。細胞の増殖応答測定は上述の方法と同様に行った。LG2809によるDO1110由来脾臓CD4T細胞の増殖応答の抑制の検討方法BALBcマウス脾臓細胞からからT細胞を除去した細胞に、加熱処理をしたLactobacillus属あるいは、LG2809を濃度依存的に添加して、4時間培養した。DO1110マウス由来脾臓CD4T細胞とOVAペプチドを添加して96時間培養後の増殖応答を、3Hチミジン取り込み量を測定することで検討した図1A。各実験で対照は無添加区とした。グラフは平均値標準偏差を示す。群間の有意差は、Tukey法を用いて多重検定したac異符号間で有意差あり、P005。増殖応答抑制に関与する菌体成分の探索方法試験方法は上記のLG2809によるDO1110由来脾臓CD4T細胞の増殖応答の抑制の検討方法図1Aと同様に行った。加熱処理をしたLG2809、LG2809の破砕液破砕液の上清、破砕液の沈殿をAPCに添加した図2A。LG2809の破砕上清を、5パターンで処理をした。破砕上清は、DNaseI、ProteinaseK、そしてRNaseAで処理した。DNaseIおよびProteinaseKは96°Cで10分間加熱することで不活化し、RNaseAはProteinaseK処理で不活化した。破砕上清は37°Cで4時間放置、または37°Cで4時間放置し、その後96°Cで10分間加熱処理をすることで対照とした図2B。01、1および10μgmlのLG2809RNAを培養系に添加した図2C。1、10μgmlのマウス脾臓からのRNAを培養系に添加した図2D。各実験で対照は無添加区とした。グラフは平均値標準偏差を示す。群間の有意差は、Tukey法を用いて多重検定したac異符号間で有意差あり、P005。LG2809およびそのRNAによるCD4T細胞直接的な増殖応答の抑制の検討方法あらかじめ、抗CD3εモノクローナル抗体10μgmlをコーティングしたプレートに、BALBcマウスから調製したCD4T細胞1×105cells/ウェルと、抗CD28モノクローナル抗体2μgml、加熱処理をしたLG2809図3B、または加熱処理をしたLG2809のRNA図3C、またはマウス脾臓由来のRNA図3Dを、終濃度01~10μgmlになるように添加して96時間培養した。96時間培養の24時間前に、3Hチミジンをプレートに添加し、その取り込み量を測定することで検討した図3A。各実験で対照は無添加区とした。グラフは平均値標準偏差を示す。群間の有意差は、Tukey法を用いて多重検定したac異符号間で有意差あり、P005。LG2809とそのRNAによる増殖応答の抑制効果におけるMyD88経路の関与の検討方法あらかじめ、抗CD3εモノクローナル抗体10μgmlをコーティングしたプレートに、図4BBALBcマウスWildtype、または図4CMyD88欠損BALBcマウスMyD88から調製したCD4T細胞1×105cells/ウェルと、抗CD28モノクローナル抗体2μgml、加熱処理をしたLG2809とそのRNAを、終濃度10μgmlになるように添加し、96時間培養した。96時間培養の24時間前に、3Hチミジンをプレートに添加し、その取り込み量を測定することで検討した図4A。各実験で対照は無添加区とした。グラフは平均値標準偏差を示す。群間の有意差は、Tukey法を用いて多重検定したab異符号間で有意差あり、P005。LG2809による増殖応答の抑制効果における酸化ストレスの関与の検討方法あらかじめ、抗CD3εモノクローナル抗体10μgmlをコーティングしたプレートに、BALBcマウスWildtypeから調製したCD4T細胞1×105cells/ウェル、NアセチルシステインNAC、25mM、抗CD28モノクローナル抗体2μgml、加熱処理をしたLG2809とそのRNA終濃度10μgmlを添加し、96時間培養した。96時間培養の24時間前に、3Hチミジンをプレートに添加し、その取り込み量を測定することで検討した図5AB。対照はLG2809またはLG2809由来RNAを加えない無添加区とした。グラフは平均値標準偏差を示す。群間の有意差は、Studentのt検定を用いた:P001。LG2809のRNAによる遅延型過敏性DTH反応の測定方法DO1110マウスにフロイント完全アジュバントCFAに懸濁した100μgのOVAを、尾部から静脈注射して感作させた。14日後に、対照として50μlの生理食塩水を右足せきに注射し、5μgのOVAまたはOVAと被験物の混合物を含む50μlの生理食塩水を左足せきに注射した。試験群各群ともn4は以下の通りである。1OVAを含む生理食塩水を注射する群、OVAおよびLG2809由来RNAを含む生理食塩水を注射する群、OVA、LG2809由来RNAおよびNACを注射する群、OVAおよびNACを注射する群。遅延型過敏反応は注射後24時間後に測定し、左足せきの腫脹肥厚-右足せきの腫脹肥厚から算出した図6A、B、C。グラフは平均値標準偏差を示す。群間の有意差は、Tukey法を用いて多重検定したac:異符号間で有意差あり、P005。統計解析試験データは平均値標準偏差で示した。統計学的有意差はTukey法による多重検定、またはStudentのt検定で解析した。P005で有意と判断した。2.結果LG2809および2株MEP225101、MEP225102のLactobacillus属乳酸菌のCD4T細胞の活性化について検討するため、加熱処理をしたこれらの乳酸菌株の存在下で抗原刺激した際のDO1110マウス由来CD4T細胞の増殖応答を測定した図1A。試験を行ったLactobacillus属乳酸菌株は全てCD4T細胞の増殖を抑制したが、中でもLG2809が最も強い抑制効果を示した図1BLG2809についてその抑制効果を検討したところ、用量依存的であることが確認された図1C。そこで、以降の試験ではLG2809を使用した。LG2809のCD4T細胞増殖抑制効果の有効成分を同定するため、LG2809破砕物の各種画分の効果を検討した。その抑制効果はLG2809の破砕液上清に認められ、沈殿には認められなかった図2A。次に、LG2809破砕液上清画分の酵素処理の影響を検討した。その結果図2Bに示すとおり、対照と比較して未処置の菌体破砕液上清画分では有意な抑制効果が認められた。未処置の菌体破砕液上清画分iと比較すると、加熱処理、DNaseI処理、プロテイナーゼK処理では有意な影響は認められなかったが、RNaseA処理vによってその抑制効果は消失した。さらに、LG2809から抽出したRNAは用量依存的にDO1110マウス由来脾細胞CD4T細胞の増殖抑制効果を示した図2C。マウス脾臓由来のRNAは増殖抑制効果を示さなかった図2D。LG2809およびそのRNAは、抗原刺激および抗原提示細胞によって活性化されたCD4T細胞の増殖抑制効果を示したので、これらがCD4T細胞に直接的に作用を及ぼしているのかを検討した。BALBcマウスの脾細胞からCD4T細胞を単離し、抗CD3モノクローナル抗体および抗CD28モノクローナル抗体の刺激下で、LG2809図3BおよびそのRNA図3Cを添加して培養した。その結果、LG2809およびそのRNAは用量依存的にCD4T細胞の増殖を抑制したが、マウス由来のRNAでは効果は認められなかった図3D。これらの結果はLG2809およびそのRNAが、CD4T細胞に直接作用して増殖抑制応答を呈することを示すものであった。本効果にMyD88依存的なシグナル伝達経路が関与しているかを検討した結果を図4に示した。LG2809およびそのRNAはMyD88欠損マウス由来のCD4T細胞では増殖抑制効果を示さなかった。この結果は、LG2809およびそのRNAが、MyD88依存性シグナル伝達経路を介してCD4T細胞の増殖を抑制したことを示す。LG2809およびそのRNAの抑制効果における活性酸素の関与を検討するために、酸化剤としてNACの作用を検討した。その結果、NACのみを添加した場合は対照と比較して試験に影響を与えなかったが、NACによりLG2809およびそのRNAの抑制効果は解除された図5。以上の結果から、LG2809およびそのRNAによるCD4T細胞増殖抑制効果は抗酸化剤により減弱した。つまり、酸素シグナルを必要とする事が明らかになった。LG2809由来RNAについて、抗原刺激したCD4T細胞の増殖抑制効果をinvivoの遅延型過敏反応で評価した図6。生理食塩水を注射したマウスの足せきでは腫脹が認められたが、LG2809由来RNAを投与したマウスでは腫脹の程度が低く、遅延型過敏応答が抑制されていることが確認された。さらに、NAC処置によってLG2809由来RNAによる遅延型過敏反応抑制効果が解除された。つまり、LG2809由来RNAは遅延型過敏反応を抑制した。この結果から、invivoにおいてもLG2909由来RNAは活性酸素シグナルを介して遅延型過敏反応を抑制することが確認された。3.考察本発明で、LG2809およびそのRNAがマウスCD4T細胞の増殖を直接的に抑制する効果を有することを明らかにした。また、この抑制効果はMyD88依存性シグナル伝達経路を介しており、抗酸化剤処理によって解除された。さらに、invivoにおいてLG2809由来RNAが遅延型過敏反応を抑制する事も明らかにした。これらの結果は、RNAによるT細胞増殖抑制効果が、プロバイオティクスが炎症性疾患に対して有益な効果をもたらす機序になっていることを示すものである。本発明で使用した3株のLactobacillus属乳酸菌の中で、LG2809が最も強い抑制効果を示した。本発明では、LG2809は、APC共培養実験モデルによりAPCと抗原の共刺激を誘導した場合だけでなく、抗CD3εCD28刺激で誘導した場合にもCD4T細胞の増殖を抑制した。また、LG2809およびそのRNAはアポトーシスを誘導しないことを確認している。従って、LG2809は樹状細胞に関与しないメカニズムで、またアポトーシスを誘導せずにCD4T細胞の増殖を抑制している。本発明でLG2809のRNAがその関与成分であることを明らかにした。細菌のRNAがT細胞増殖抑制効果の関与成分であることを明らかにしたのは本発明が初めてである。RNAの増殖阻害活性の特異性を検討するため、ヒトおよびEscherichiacoliから調製したRNAについてもその効果を検討した。興味深いことに、Ecoli由来RNAはCD4T細胞増殖抑制効果を示したが、ヒト由来RNAは影響しなかった。RNAの調製方法による抑制効果の違いを検討するために、細菌からのRNA調製法によって抽出したBALBcマウスの脾細胞RNAも評価したが、効果は認められなかった。これらの結果は細菌のRNAがCD4T細胞増殖抑制効果を有していることを示すものである。ヒトの細胞には細菌のRNAに対して、TLR3とTLR7の膜結合型受容体および細胞質受容体であるNALP3NACHTLRRprotein3の2種類の受容体がある。TLR3が二本鎖RNAを認識するのに対して、TLR7とNALP3は一本鎖RNAを認識する。これらの受容体の中で、TLR7のみがそのシグナル伝達経路にMyD88を要することが知られている。本発明では、LG2809およびそのRNAは、MyD88欠損マウス由来CD4T細胞には抑制効果を示さなかった。TLR7の発現はCD4T細胞でも認められ、TLR7のリガンドであるImiquimodもCD4T細胞増殖を強く抑制することも確認している。これらの知見はLG2809由来RNAはTLR7を介してその増殖抑制効果を示すものである。遅延型過敏性反応は、細胞性免疫応答の典型的なinvivoの症状であり、その反応はT細胞の活性化と優先的な集積により特徴づけられる。遅延型過敏性反応はI型ヘルパーT細胞Th1細胞を介して起こることは一般的に知られている。LG2809由来RNAは、invitroで脾細胞CD4T細胞の増殖を抑制したのと同様に、Th1細胞の増殖を阻害し、遅延型過敏性反応を抑制したといえる。抑制効果はinvivoでも認められているので、LG2809由来RNAは免疫抑制剤として炎症疾患への治療に有用と考えられる。さらに、LG2809由来RNAの抑制効果はNAC処理により消失したことから、LG2809由来RNAによるT細胞を介したinvivoでの免疫応答において、活性酸素種が影響を及ぼしたことが示される。結論として、LG2809およびそのRNAはCD4T細胞の増殖を、MyD88依存性シグナル伝達経路を介して抑制し、その抑制効果は抗酸化剤により減弱した。これらの結果は、RNAによるT細胞増殖抑制効果は、プロバイオティクスによる炎症性疾患改善効果の機序であることを示すものである。LG2809およびそのRNAはCD4T細胞の過敏反応に起因する疾患をもつ患者の治療に有用であると考えられる。