ヒト上皮細胞成長因子受容体2HER2に結合し、かつ以下:aSEQIDNO:133、例えば、SEQIDNO:4の配列169;bSEQIDNO:11050、049、051、055;cSEQIDNO:130、例えば、SEQIDNO:18の配列084;dSEQIDNO:136、例えば、SEQIDNO:25の配列025;eSEQIDNO:139、例えば、SEQIDNO:31の配列091;fSEQIDNO:142、例えば、SEQIDNO:38の配列129;gSEQIDNO:148、例えば、SEQIDNO:48の配列127;hSEQIDNO:52159;iSEQIDNO:145、例えば、SEQIDNO:59の配列098;jSEQIDNO:154、例えば、SEQIDNO:66の配列153;およびkSEQIDNO:151、例えば、SEQIDNO:73の配列132からなる群より選択されるCDR3配列を含むVH領域を含む、モノクローナル抗体。以下からなる群より選択されるCDR1配列、CDR2配列、CDR3配列を含むVH領域を含む、請求項1記載の抗体:aそれぞれSEQIDNO:131、132、および133169、ここで任意で、該VH領域はIgHV1181生殖系列に由来する;bそれぞれSEQIDNO:9、127、および11050、ここで任意で、該VH領域はIgHV3231生殖系列に由来する;cそれぞれSEQIDNO:128、129、および130084、ここで任意で、該VH領域はIgHV16904生殖系列に由来する;dそれぞれSEQIDNO:134、135、および136025、ここで任意で、該VH領域はIgHV4341生殖系列に由来する;eそれぞれSEQIDNO:137、138、および139091、ここで任意で、該VH領域はIgHV43401生殖系列に由来する;fそれぞれSEQIDNO:140、141、および142129、ここで任意で、該VH領域はIgHV33001生殖系列に由来する;gそれぞれSEQIDNO:146、147、および148127、ここで任意で、該VH領域はIgHV55101生殖系列に由来する;hそれぞれSEQIDNO:149、51、および52159、ここで任意で、該VH領域はIgHV55101生殖系列に由来する;iそれぞれSEQIDNO:143、144、および145098、ここで任意で、該VH領域はIgHV32301生殖系列に由来する;jそれぞれSEQIDNO:152、153、および154153、ここで任意で、該VH領域はIgHV3300301生殖系列に由来する;ならびにkそれぞれSEQIDNO:71、150、および151132、ここで任意で、該VH領域はIgHV11801生殖系列に由来する。aそれぞれSEQIDNO:2、3、および4169;bそれぞれSEQIDNO:9、10、および11050;cそれぞれSEQIDNO:16、17、および18084;dそれぞれSEQIDNO:23、24、および25025;eそれぞれSEQIDNO:30、163、および31091;fそれぞれSEQIDNO:36、37、および38129:gそれぞれSEQIDNO:43、44、および45127;hそれぞれSEQIDNO:50、51、および52159;iそれぞれSEQIDNO:57、58、および59098;jそれぞれSEQIDNO:64、65、および66153;ならびにkそれぞれSEQIDNO:71、72、および73132からなる群より選択されるCDR1配列、CDR2配列、CDR3配列を含むVH領域を含む、請求項2記載の抗体。aそれぞれSEQIDNO:2、3、および4であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:6、DAS、およびSEQIDNO:7であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域169;bそれぞれSEQIDNO:9、10、および11であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:13、AAS、およびSEQIDNO:14であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域050;cそれぞれSEQIDNO:16、17、および18であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:20、VAS、およびSEQIDNO:21であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域084;dそれぞれSEQIDNO:23、24、および25であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:27、AAS、およびSEQIDNO:28であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域025;eそれぞれSEQIDNO:30、163、および31であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:33、AAS、およびSEQIDNO:34であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域091;fそれぞれSEQIDNO:36、37、および38であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:40、DAS、およびSEQIDNO:41であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域129;gそれぞれSEQIDNO:43、44、および45であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:47、AAS、およびSEQIDNO:48であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域127;hそれぞれSEQIDNO:50、51、および52であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:54、AAS、およびSEQIDNO:55であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域159;iそれぞれSEQIDNO:57、58、および59であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:60、AAS、およびSEQIDNO:61であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域098;jそれぞれSEQIDNO:64、65、および66であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:68、DAS、およびSEQIDNO:69であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域153;ならびにkそれぞれSEQIDNO:71、72、および73であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:75、DAS、およびSEQIDNO:76であるCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域132からなる群より選択されるVH領域ならびにVL領域を含む、請求項3記載の抗体。a169の特徴を含む、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。d025の特徴を含む、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。i098の特徴を含む、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。j153の特徴を含む、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む、モノクローナル抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:12の配列を含むVL領域050;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:19の配列を含むVL領域084;dSEQIDNO:77の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:78の配列を含むVL領域049;eSEQIDNO:79の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:80の配列を含むVL領域051;fSEQIDNO:81の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:82の配列を含むVL領域055;gSEQIDNO:83の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:84の配列を含むVL領域123;hSEQIDNO:85の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:86の配列を含むVL領域161;iSEQIDNO:87の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:88の配列を含むVL領域124;jSEQIDNO:22の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;kSEQIDNO:29の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091;lSEQIDNO:35の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:39の配列を含むVL領域129;mSEQIDNO:89の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:90の配列を含むVL領域001;nSEQIDNO:91の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:92の配列を含むVL領域143;oSEQIDNO:93の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:94の配列を含むVL領域019;pSEQIDNO:95の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:96の配列を含むVL領域021;qSEQIDNO:97の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:98の配列を含むVL領域027;rSEQIDNO:99の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:100の配列を含むVL領域032;sSEQIDNO:101の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:102の配列を含むVL領域035;tSEQIDNO:103の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:104の配列を含むVL領域036;uSEQIDNO:105の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:106の配列を含むVL領域054;vSEQIDNO:106の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:108の配列を含むVL領域094;wSEQIDNO:46の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:49の配列を含むVL領域127;xSEQIDNO:49の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:53の配列を含むVL領域159;ySEQIDNO:56の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:60の配列を含むVL領域098;zSEQIDNO:63の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:67の配列を含むVL領域153;aaSEQIDNO:70の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:74の配列を含むVL領域132;bbSEQIDNO:109の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:110の配列を含むVL領域105;ccSEQIDNO:111の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:112の配列を含むVL領域100;ddSEQIDNO:113の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:114の配列を含むVL領域125;eeSEQIDNO:115の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:116の配列を含むVL領域162;ffSEQIDNO:117の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:118の配列を含むVL領域033;ggSEQIDNO:119の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:120の配列を含むVL領域160;hhSEQIDNO:121の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:122の配列を含むVL領域166;iiSEQIDNO:123の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:124の配列を含むVL領域152;jjSEQIDNO:125の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:126の配列を含むVL領域167;ならびにkk好ましくは最大で1個、2個、もしくは3個のアミノ酸修飾、より好ましくはアミノ酸置換、例えば保存的アミノ酸置換、および新たなアミノ酸が図1または図2のアライメント配列中の同じ位置、特に対応するコンセンサス配列中のXによって示される位置にあるアミノ酸である置換などを有する、前記のいずれかの抗体の変種。a169、c084、j025、k091、w127、x159、y098、z153、またはaa132のVH領域配列およびVL領域配列を含む、請求項9記載の抗体。請求項10記載の抗体と同じHER2上のエピトープに特異的に結合する、モノクローナル抗体。実施例12に記載のように判定した場合に、HER2発現細胞に対する結合に関して、080μgml未満のEC50値、好ましくは050μgml未満のEC50値を有する、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。ADCCを誘導し、好ましくは実施例15に記載のように判定した場合に、少なくとも30、より好ましくは少なくとも40の51Cr放出を達成する、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。実施例16に記載のように判定した場合に、F5よりもHER2発現細胞のリガンド非依存性増殖を促進しない、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。実施例16に記載のように判定した場合に、HER2発現細胞のリガンド非依存性増殖を阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。実施例17に記載のように判定した場合に、HER2発現細胞のリガンド誘導性増殖を促進しない、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。実施例17に記載のように判定した場合に、HER2発現細胞のリガンド誘導性増殖を阻害する、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。治療部分、例えば切断型シュードモナス属エキソトキシンAに直接的または間接的に結合体化された時に、実施例18に記載のように判定した場合に、HER2発現細胞の少なくとも49、好ましくは少なくとも60を死滅させる、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。HER2発現腫瘍細胞株が細胞1個あたり平均約30000個未満のHER2分子を発現する、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。実施例18に従って判定した場合に、トラスツズマブより多量の抗体がHER2発現腫瘍細胞株によって内部に取り入れられる、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。前記請求項のいずれか一項記載の抗体の抗原結合領域と、ヒトエフェクター細胞、ヒトFc受容体、T細胞受容体、またはHER2の非ブロッキングエピトープに対する結合特異性といった異なる結合特異性を有する第2の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。i第1の抗体とii第2の抗体とを含む二重特異性抗体であって、第1の抗体が、請求項1~21のいずれか一項記載の抗体、SEQIDNO:168のCDR3配列を含むVH領域を含む抗体005からなる群より選択され、かつ第2の抗体が、第1の抗体とは異なるエピトープに結合する、二重特異性抗体。第2の抗体が、請求項1~20のいずれか一項記載の抗体、SEQIDNO:168のCDR3配列を含むVH領域を含む抗体005、CD3抗体からなる群より選択される、請求項22記載の二重特異性抗体。第1の抗体または第2の抗体が、それぞれSEQIDNO:166、167および168であるCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域を含む005、請求項22~23のいずれか一項記載の二重特異性抗体。第1の抗体または第2の抗体が、それぞれSEQIDNO:166、167および168であるCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域と、それぞれSEQIDNO:169、GAS、およびSEQIDNO:170であるCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVL領域とを含む005、請求項24記載の二重特異性抗体。第1の抗体または第2の抗体が、SEQIDNO:164の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:165の配列を含むVL領域を含む005、請求項25記載の二重特異性抗体。CD3抗体が、aSEQIDNO:171の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:172の配列を含むVL領域YTH125;またはbSEQIDNO:173の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:174の配列を含むVL領域huCLBT34Bを含む、請求項23~26のいずれか一項記載の二重特異性抗体。完全長抗体、好ましくはIgG1抗体、特にIgG1κ抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。別の部分、例えば細胞傷害性部分、放射性同位体、薬物、またはサイトカインと結合体化されている、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。細胞傷害性部分が、タキソール;サイトカラシンB;グラミシジンD;臭化エチジウム;エメチン;マイトマイシン;エトポシド;テニポシド;ビンクリスチン;ビンブラスチン;コルヒチン;ドキソルビシン;ダウノルビシン;ジヒドロキシアントラシンジオン;チューブリン阻害剤、例えばマイタンシンまたはその類似体もしくは誘導体;ミトキサントロン;ミトラマイシン;アクチノマイシンD;1デヒドロテストステロン;グルココルチコイド;プロカイン;テトラカイン;リドカイン;プロプラノロール;ピューロマイシン;カリチアマイシンまたはその類似体もしくは誘導体;代謝拮抗物質、例えばメトトレキサート、6メルカプトプリン、6チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、5フルオロウラシル、ダカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビンまたはクラドリビン;アルキル化剤、例えばメクロレタミン、チオテパ、クロランブシル、メルファラン、カルムスチンBSNU、ロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジンDTIC、プロカルバジン、マイトマイシンC、シスプラチン、カルボプラチン、デュオカルマイシンA、デュオカルマイシンSA、ラケルマイシンrachelmycinCC1065またはそれらの類似体もしくは誘導体;抗生物質、例えばダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、アントラマイシンAMC;有糸分裂阻害剤、例えばモノメチルアウリスタチンEもしくはFまたはそれらの類似体もしくは誘導体;ジフテリア毒素および関連分子、例えばジフテリアA鎖およびその活性断片、ならびにハイブリッド分子、リシン毒素、例えばリシンAまたは脱グリコシル化リシンA鎖毒素など、コレラ毒素、志賀毒素様毒素、例えばSLTI、SLTII、SLTIIVなど、LT毒素、C3毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ダイズBowmanBirkプロテアーゼインヒビター、シュードモナス属Pseudomonasエキソトキシン、アロリンalorin、サポリン、モデシンmodeccin、ゲラニンgelanin、アブリンA鎖、モデシンA鎖、αサルシン、シナアブラギリAleuritesfordiiタンパク質、ジアンチンタンパク質、アメリカヤマゴボウPhytolaccaamericanaタンパク質、例えばPAPI、PAPII、およびPAPSなど、ニガウリmomordicacharantiaインヒビター、クルシン、クロチン、サボンソウsapaonariaofficinalisインヒビター、ゲロニン、ミトゲリンmitogellin、レストリクトシンrestrictocin、フェノマイシンphenomycinおよびエノマイシンenomycin毒素など;リボヌクレアーゼRNアーゼ;DNアーゼI、ブドウ球菌StaphylococcalエンテロトキシンA;ヨウシュヤマゴボウpokeweed抗ウイルスタンパク質;ジフテリン毒素;ならびにシュードモナス属エンドトキシンからなる群より選択される、請求項29記載の抗体。マイタンシン、カリチアマイシン、デュオカルマイシン、ラケルマイシンCC1065、モノメチルアウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF、またはそのいずれかの類似体、誘導体、もしくはプロドラッグからなる群より選択される細胞傷害性部分と結合体化されている、請求項29記載の抗体。IL2、IL4、IL6、IL7、IL10、IL12、IL13、IL15、IL18、IL23、IL24、IL27、IL28a、IL28b、IL29、KGF、IFNα、IFNβ、IFNγ、GMCSF、CD40L、Flt3リガンド、幹細胞因子、アンセスチム、およびTNFαからなる群より選択されるサイトカインと結合体化されている、請求項29記載の抗体。放射性同位体、例えばα放射体と結合体化されている、請求項29記載の抗体。SEQIDNO:1、5、8、12、15、19、22、26、29、32、35、39、42、46、49、53、56、60、63、67、70、74、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、および126からなる群より選択されるアミノ酸配列の1つまたは複数をコードする、ヌクレオチド配列。請求項34記載のヌクレオチド配列を含む発現ベクターであって、抗体の機能的に連結された軽鎖定常領域、重鎖定常領域、または軽鎖および重鎖の両方をさらにコードする、発現ベクター。請求項1~28のいずれか一項において定義された抗体を産生する、組換え真核宿主細胞または組換え原核宿主細胞。請求項1~28のいずれか一項において定義された抗体および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。請求項29~33のいずれか一項において定義された抗体および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。医薬として使用するための、請求項1~28のいずれか一項記載の抗体。医薬として使用するための、請求項29~33のいずれか一項記載の抗体。癌の治療において使用するための、請求項1~28のいずれか一項記載の抗体。癌の治療において使用するための、請求項29~33のいずれか一項記載の抗体。癌が、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌、頭頚部の扁平上皮癌、子宮頚癌、膵臓癌、精巣癌、悪性黒色腫、および軟部組織癌からなる群より選択される、請求項41および42のいずれか一項記載の抗体。1種類または複数種のさらなる治療剤、例えば化学療法剤と組み合わせて癌を治療するためのものである、請求項41~43のいずれか一項記載の使用のための抗体。請求項43およびまたは44記載のさらなる特徴を任意で含む、癌を治療するための医薬を製造するための、請求項1~33のいずれか一項記載の抗体の使用。HER2を発現する1つまたは複数の腫瘍細胞の成長およびまたは増殖を阻害するための方法であって、それを必要とする個体への請求項1~33のいずれか一項記載の抗体の投与を含む、方法。前記抗体が請求項28~30のいずれか一項記載の特徴を含み、1つまたは複数の腫瘍細胞がHER2ならびにEGFRおよびまたはHER3を同時発現する、請求項46記載の方法。aHER2ならびにEGFRおよびまたはHER3を同時発現する腫瘍細胞を含む癌に罹患している対象を選択する段階、ならびにb請求項1~34のいずれか一項記載の抗体を対象に投与する段階を含む、癌を治療するための方法。癌が、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌子宮頚癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、軟部組織腫瘍、例えば滑膜肉腫など、および膀胱癌からなる群より選択される、請求項48記載の方法。a請求項35記載の宿主細胞を培養する段階、およびb培地から抗体を精製する段階を含む、請求項1~33のいずれか一項記載の抗体を産生するための方法。試料を請求項1~33のいずれか一項記載の抗体と、抗体とHER2の複合体の形成を可能にする条件下で接触させる段階、および複合体が形成されたかどうか分析する段階を含む、試料中のHER2の存在を検出するための方法。請求項1~33のいずれか一項記載の抗体、およびキットを使用するための説明書を含む、試料中のHER2の存在を検出するためのキット。発明の詳細な説明定義HER2ErbB2、NEU、HER2、およびCD340とも知られるという用語は、本明細書において用いられる時には、ヒト上皮細胞成長因子受容体2SwissProtP04626を指し、腫瘍細胞を含む細胞によって天然に発現されたHER2、またはHER2遺伝子でトランスフェクトされた細胞上に発現されたHER2の任意の変種、アイソフォーム、および種ホモログを含む。種ホモログには、アカゲザルHER2アカゲザルmacacamulatta;GenBankアクセッション番号GI:109114897が含まれる。免疫グロブリンという用語は、一対が低分子量の軽鎖L、一対が重鎖Hの二対のポリペプチド鎖からなり、4本全てがジスルフィド結合で相互接続されている構造的に関連する糖タンパク質のクラスをいう。免疫グロブリンの構造は詳細に特徴づけられている。例えば、FundamentalImmunologyCh7PaulWed2ndedRavenPressNY1989を参照されたい。簡単に述べると、それぞれの重鎖は、典型的には、重鎖可変領域本明細書ではVHまたはVHと省略するおよび重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、典型的には、3つのドメイン、CH1、CH2、およびCH3からなる。それぞれの軽鎖は、典型的には、軽鎖可変領域本明細書ではVLまたはVLと省略するおよび軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、典型的には、1つのドメインCLからなる。VH領域およびVL領域は、相補性決定領域CDRとも呼ばれる超可変性領域または配列が著しく変化し得る、およびもしくは構造が規定されたループの形をとり得る超可変領域にさらに細分することができ、超可変性領域は、フレームワーク領域FRと呼ばれる保存領域と共に散在している。それぞれのVHおよびVLは、典型的には、3つのCDRおよび4つのFRからなり、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で並べられているChothiaandLeskJMolBiol1969019171987も参照されたい。特に定めのない限り、または文脈によって明らかに否定されない限り、本明細書のCDR配列はIMGT規則に従って特定されるBrochetXNuclAcidsRes2008;36:W503508およびLefrancMPNucleicAcidsResearch1999;27:209212;インターネットhttpアドレスimgtcinesfrIMGTvquestvquestlivret0OptionhumanIgも参照されたい。しかしながら、抗体配列におけるアミノ酸残基のナンバリングは、KabatetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMD1991に記載の方法によって行うこともできる本明細書におけるKabatと同様の可変ドメイン残基ナンバリング、Kabat位置、またはKabatによるなどの句は、このナンバリングシステムをいう。特に、定常領域におけるアミノ酸のナンバリングの場合、Kabatら、前記によるEUインデックスナンバリングシステムを使用することができる。Kabat残基ナンバリングは、ある特定の抗体について、Kabatによってナンバリングされた標準配列と抗体配列との相同性領域でのアラインメントによって決定することができる。本発明の文脈において抗体Abという用語は、免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の断片、またはそのいずれかの誘導体を指し、これらは、代表的な生理学的条件下で、かなり長い半減期、例えば少なくとも約30分、少なくとも約45分、少なくとも約1時間、少なくとも約2時間、少なくとも約4時間、少なくとも約8時間、少なくとも約12時間、約24時間以上、約48時間以上、約3日、4日、5日、6日、7日以上など、あるいは他の任意の関連する、機能によって規定された期間例えば、抗体と抗原との結合に関連する生理学的応答を誘導する、促進する、増強する、および/もしくは調節するのに十分な時間、ならびに/または抗体がエフェクター活性を高めるのに十分な時間で抗原に特異的に結合する能力を有する。免疫グロブリン分子の重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体Abの定常領域は、免疫グロブリンと、免疫系の様々な細胞例えば、エフェクター細胞および補体系成分、例えば補体活性化の古典経路の第1の成分であるC1qを含む、宿主組織または宿主因子との結合を媒介することができる。HER2抗体はまた、二重特異性抗体、ダイアボディdiabody、または類似の分子でもよい例えば、ダイアボディの説明については、PNASUSA9014644481993を参照されたい。実際には、本発明によって提供される二重特異性抗体、ダイアボディなどは、HER2の一部に加えて、任意の適切な標的に結合することができる。前記のように、本明細書において抗体という用語は、特に定めのない限り、または文脈によって明らかに否定されない限り、抗原結合断片である抗体断片、すなわち抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体断片を含む。抗体の抗原結合機能は完全長抗体の断片によって果たし得ることも示されている。抗体という用語の中に含まれる抗原結合断片の例には、iFabまたはFab断片、VL、VH、CL、およびCH1ドメインからなる一価断片、またはWO2007059782Genmabに記載の一価抗体;iiFab2断片、2つのFab断片がヒンジ領域でのジスルフィド架橋によって連結された二価断片;iiiVHおよびCH1ドメインから本質的になるFd断片;iv抗体のシングルアームのVLおよびVHドメインから本質的になるFv断片、vVHドメインから本質的になり、ドメイン抗体Holtetal;TrendsBiotechnol2003Nov;2111:48490とも呼ばれる、dAb断片WardetalNature3415445461989;viキャメリドcamelidまたはナノボディnanobodyRevetsetal;ExpertOpinBiolTher2005Jan;51:11124、ならびにvii単離された相補性決定領域CDRが含まれる。さらに、Fv断片の2つのドメインであるVLおよびVHは別々の遺伝子によってコードされるが、VLおよびVH領域が対形成して一価分子単鎖抗体または単鎖FvscFvと知られる。例えば、BirdetalScience2424234261988およびHustonetalPNASUSA85587958831988を参照されたいを形成する1本のタンパク質鎖として作られるのを可能にする合成リンカーによって、組換え法を用いて接続されてもよい。このような単鎖抗体は、特に定めのない限り、または文脈によって明らかに示されない限り、抗体という用語の中に含まれる。このような断片は、一般的に、抗体の意味の中に含まれるが、ひとまとめにして、およびそれぞれ独立して、本発明の独特の特徴であり、異なる生物学的な特性よび有用性を示す。本発明の文脈における、これらの抗体断片および他の有用な抗体断片は、そのような断片の二重特異性抗体の形態と同様、本明細書においてさらに議論される。抗体という用語は、特に定めのない限り、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体mAb、抗体様ポリペプチド、例えばキメラ抗体およびヒト化抗体、ならびに任意の公知の技法、例えば酵素切断、ペプチド合成、および組換え技法によって提供される抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体断片抗原結合断片も含むことも理解すべきである。作製される抗体は任意のアイソタイプを有してよい。本明細書で使用するアイソタイプは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリンクラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE、またはIgMをいう。一価抗体という用語は、本発明の文脈では、抗体分子が1種類の抗原分子にしか結合できない、従って、抗原架橋できないことを意味する。エフェクター機能が欠損している抗体またはエフェクター機能欠損性抗体は、1つまたは複数のエフェクター機構、例えば補体活性化もしくはFc受容体結合を活性化する能力が大幅に低下しているかまたはその能力が無い抗体をいう。従って、エフェクター機能欠損性抗体は、抗体依存性細胞傷害ADCCおよび/もしくは補体依存性細胞傷害CDCを媒介する能力が大幅に低下しているかまたはその能力が無い。このような抗体の一例はIgG4である。HER2抗体または抗HER2抗体とは、抗原HER2に特異的に結合する前記の抗体である。本明細書で使用するヒト抗体という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によって、またはインビボで体細胞変異によって導入された変異を含んでもよい。しかしながら、本明細書で使用するヒト抗体という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するCDR配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことは意図されない。本明細書中で使用するヒト抗体は、その抗体がヒト免疫グロブリン配列を用いた系から、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを免疫することによって、またはヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって獲得される場合、特定の生殖系列配列に由来し、ここで、選択されたヒト抗体は、アミノ酸配列において、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも90、例えば少なくとも95、例えば少なくとも96、例えば少なくとも97、例えば少なくとも98、または例えば、少なくとも99同一である。典型的には、特定のヒト生殖系列配列由来のヒト抗体は、重鎖CDR3外では、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、20個以下のアミノ酸の違い、例えば10個以下のアミノ酸の違い、例えば9個以下、8個以下、7個以下、6個以下、または5個以下、例えば4個以下、3個以下、2個以下、または1個以下のアミノ酸の違いを示す。好ましい態様において、本発明の抗体は単離されている。本明細書で使用する単離された抗体は、抗原特異性の異なる他の抗体を実質的に含まない抗体をいうことが意図される例えば、HER2に特異的に結合する単離された抗体は、HER2以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。しかしながら、HER2のエピトープ、アイソフォーム、または変種に特異的に結合する単離された抗体は、他の関連抗原、例えば他の種に由来する抗原例えば、HER2の種ホモログとの交差反応性を有することがある。さらに、単離された抗体は、他の細胞の材料および/または化学物質を実質的に含まないことがある。本発明の1つの態様では、詳細に明らかにされた組成物において、抗原結合特異性の異なる、2種類以上の単離されたモノクローナル抗体が組み合わされる。2種類以上の抗体の文脈に関して本明細書において用いられる場合、と競合するまたはと交差競合するという用語は、2種類以上の抗体がHER2との結合において競合する、例えば、実施例14に記載のアッセイにおいてHER2との結合において競合することを示す。抗体は、好ましくは実施例14のアッセイを用いて判定した時に、1つまたは複数の他の抗体と25以上競合すれば、1つまたは複数の他の抗体とHER2との結合をブロックまたはクロスブロックし、25~74は部分ブロックに相当し、75~100は完全ブロックに相当する。一部の抗体対については、実施例のアッセイにおける競合またはブロッキングは一方の抗体がプレート上にコーティングされ、他方の抗体が競合に用いられた時のみに観察され、逆は同じではない。特に定めのない限り、または文脈によって明らかに否定されない限り、と競合する、と交差競合する、ブロックする、またはクロスブロックするという用語は、本明細書において用いられる場合、このような抗体対をカバーすることも意図される。エピトープという用語は、抗体に特異的結合することができるタンパク質決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の表面グループからなり、通常、特異的な三次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有する。コンホメーションエピトープおよび非コンホメーションエピトープは、変性溶媒の存在下では前者への結合が失われるが、後者への結合が失われないという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基エピトープ免疫優性成分とも呼ばれる、および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば特異的に抗原に結合するペプチドによって効果的にブロックされるまたは覆われるアミノ酸残基言い換えると、このアミノ酸残基は、特異的に抗原に結合するペプチドのフットプリントfootprintの中にあるを含むことがある。本明細書で使用するモノクローナル抗体という用語は、分子組成が1種類しかない抗体分子の調製物をいう。モノクローナル抗体組成物は、ある特定のエピトープに対して結合特異性および親和性を1つしか示さない。従って、ヒトモノクローナル抗体という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する、結合特異性を1つしか示さない抗体をいう。ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物またはトランスクロモソーム非ヒト動物、例えばヒト重鎖トランスジーンおよび軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニックマウスから得られたB細胞が不死化細胞と融合したハイブリドーマによって作製することができる。抗体と所定の抗原またはエピトープとの結合に関して本明細書で使用する結合という用語は、典型的には、例えば表面プラズモン共鳴SPR技術によって、BIAcore3000機器において、リガンドとして抗原、分析物として抗体を用いて判定した時に、約107M以下、例えば約108M以下、例えば約109M以下、約1010M以下、または約1011Mまたはさらにそれ未満のKDに対応する親和性での結合であり、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原例えば、BSA、カゼインとの結合の親和性の少なくとも1/10以下、例えば少なくとも1/100以下、例えば少なくとも1/1000以下、例えば少なくとも1/10000以下、例えば少なくとも1/100000以下のKDに対応する親和性で所定の抗原に結合する。親和性が小さくなる量は抗体のKDに依存し、その結果、抗体のKDが非常に低いすなわち、抗体が高特異性である場合、抗原に対する親和性が非特異的抗原に対する親和性よりも小さくなる量は少なくとも1/10000以下であり得る。本明細書で使用するkdsec1という用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離速度定数をいう。この値は、koff値とも呼ばれる。本明細書で使用するkaM1xsec1という用語は、特定の抗体抗原相互作用の会合速度定数をいう。本明細書で使用するKDMという用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離平衡定数をいう。本明細書で使用するKAM1という用語は、特定の抗体抗原相互作用の会合平衡定数をいい、kaをkdで割ることによって得られる。本明細書で使用する増殖を阻害する例えば、腫瘍細胞などの細胞を指している場合という用語は、例えば、実施例、例えば、実施例16におけるアッセイによって判定した時に、細胞とHER2抗体が接触した時に、HER2抗体と接触していない同じ細胞の増殖と比較して任意の実質的な細胞増殖減少、例えば、細胞培養増殖の少なくとも約10、少なくとも約20、もしくは少なくとも約30、またはトラスツズマブなどの参照抗体と少なくとも同程度の阻害を含むことが意図される。本明細書で使用する増殖を促進する例えば、腫瘍細胞などの細胞を指している場合という用語は、例えば、実施例におけるアッセイによって判定した時に、細胞とHER2抗体が接触した時に、HER2抗体と接触していない同じ細胞の増殖と比較して任意の実質的な細胞増殖増加、例えば、細胞培養増殖の少なくとも約10、少なくとも約20、もしくは少なくとも約30、またはF5などの参照抗体と少なくとも同程度の促進を含むことが意図される。本明細書で使用する内部移行という用語は、HER2抗体に関して用いられた時に、抗体が細胞表面およびまたは周囲媒体から、例えば、エンドサイトーシスを介してHER2発現細胞に内部移行される任意の機構を含む。抗体の内部移行は、内部移行された抗体の量を測定する直接アッセイ例えば、実施例18に記載のfabCypHer5Eアッセイ、または内部移行された抗体毒素結合体の作用が測定される間接アッセイ例えば、実施例17の抗κETAアッセイを用いて評価することができる。本発明はまた、実施例の抗体のVL領域、VH領域、または1つもしくは複数のCDRの機能的変種を含む抗体を提供する。HER2抗体に関して用いられるVL、VH、またはCDRの機能的変種は依然として、親抗体の親和性/アビディティおよび/または特異性/選択性の少なくともかなりの部分少なくとも約50、60、70、80、90、95以上を抗体が保持することを可能にする。場合によっては、このようなHER2抗体は、親抗体より高い親和性、選択性、および/または特異性に関連することがある。このような機能的変種は、典型的には、親抗体と大きな配列同一性を保持している。2つの配列間の同一性の割合は、2つの配列の最適アラインメントのために導入される必要のある、ギャップの数およびそれぞれのギャップの長さを考慮に入れた、これらの配列が共有する同一の位置の数の関数すなわち、相同性=同一の位置の数/位置の総数x100である。2つのヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間の同一性の割合は、ALIGNプログラムバージョン20の中に組み込まれている、EMeyersandWMillerComputApplBiosci411171988のアルゴリズムを使用し、PAM120ウエイト残基表、12のギャップレングスペナルティ、および4のギャップペナルティを用いて決定することができる。さらに、2つのアミノ酸配列間の同一性の割合は、NeedlemanandWunschJMolBiol484444531970アルゴリズムを用いて決定することができる。例示的な変種には、対応するコンセンサス配列中にXで示された1つまたは複数の変種アミノ酸位置において、図1および図2に示した親抗体VH配列およびまたはVL配列とは異なる変種が含まれる。好ましい変種は、新たなアミノ酸が、図1および図2のアライメント配列の1つの対応する位置にあるアミノ酸より選択される変種であるCDR配列変種に関する詳細については、表4を参照されたい。または、もしくはさらに、VH変種、VL変種、またはCDR変種の配列は、主に、保存的置換によって親抗体配列のVH、VL、またはCDRの配列と異なってもよい。例えば、変種における置換の少なくとも10個、例えば、少なくとも9個、8個、7個、6個、5個、4個、3個、2個、または1個は保存的アミノ酸残基交換である。本発明の文脈において、保存的置換は、以下の表に反映されるアミノ酸クラスの中の置換によって定義することができる。保存的置換のためのアミノ酸残基クラス本明細書で使用する組換え宿主細胞または単に宿主細胞という用語は、発現ベクター、例えば本発明の抗体をコードする発現ベクターが導入されている細胞をいうことが意図される。組換え宿主細胞には、例えばトランスフェクトーマtransfectoma、例えばCHO細胞、HEK293細胞、NS/0細胞、およびリンパ球細胞が含まれる。トランスジェニック非ヒト動物という用語は、1つまたは複数のヒト重鎖および/または軽鎖のトランスジーンまたはトランスクロモソームtranschromosomeを含む動物の天然ゲノムDNAに組み込まれた、または組み込まれていないゲノムを有し、完全なヒト抗体を発現することができる非ヒト動物をいう。例えば、トランスジェニックマウスは、HER2抗原および/またはHER2発現細胞で免疫した時にヒトHER2抗体を産生するように、ヒト軽鎖トランスジーンおよびヒト重鎖トランスジーンまたはヒト重鎖トランスクロモソームを有することができる。ヒト重鎖トランスジーンは、トランスジェニックマウス、例えばHuMAbマウス、例えばHCo7、HCo12、もしくはHCo17マウスのようにマウスの染色体DNAに組み込まれてもよく、または、ヒト重鎖トランスジーンは、WO02/43478に記載のトランスクロモソームKMマウスのように染色体外に維持されてもよい。さらに大きなヒトAb遺伝子レパートリーを有する類似のマウスにはHCo7およびHCo20が含まれる例えば、WO2009097006を参照されたい。このようなトランスジェニックマウスおよびトランスクロモソームマウス総称して本明細書においてトランスジェニックマウスと呼ばれるは、VDJ組換えおよびアイソタイプスイッチを受けることによって、ある特定の抗原に対して、複数のアイソタイプのヒトモノクローナル抗体例えば、IgG、IgA、IgM、IgD、および/またはIgEを産生することができる。トランスジェニック非ヒト動物はまた、このような特異的抗体をコードする遺伝子を導入することによって、例えばこれらの遺伝子と、動物の乳の中に発現される遺伝子とを機能的に連結することによって、ある特定の抗原に対する抗体を産生するのに使用することもできる。治療とは、症状または疾患状態を緩和する、寛解させる、抑止する、または根絶する治癒する目的で、治療活性のある有効量の本発明の化合物を投与するこという。有効量または治療的有効量とは、望ましい治療結果を得るために必要な投与および時間で効果を示す量をいう。HER2抗体の治療的有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体においてHER2抗体が望ましい応答を誘発する能力などの要因に応じて変わることがある。治療的有効量はまた、抗体または抗体部分の治療に有益な作用が毒性作用または有害作用を上回る量でもある。抗イディオタイプ抗体は、概して抗体の抗原結合部位に結合する独特の決定基を認識する抗体である。本発明のさらなる局面および態様前記のように、第1の局面において、本発明は、HER2に結合するモノクローナル抗体に関する。本発明のモノクローナル抗体は、例えばKohleretalNature2564951975によって初めて述べられたハイブリドーマ法によって産生されてもよく、組換えDNA方法によって産生されてもよい。モノクローナル抗体はまた、例えばClacksonetalNature3526246281991およびMarksetalJMolBiol2225815971991に記載の技法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。モノクローナル抗体は任意の適切な供給源から得ることができる。従って、例えばモノクローナル抗体は、関心対象の抗原、例えば表面上に抗原を発現する細胞、または関心対象の抗原をコードする核酸の形をした抗原で免疫したマウスから得られたマウス脾臓B細胞から調製されたハイブリドーマから得られてもよい。モノクローナル抗体はまた、免疫したヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えばラット、イヌ、霊長類などの抗体発現細胞に由来するハイブリドーマから得られてもよい。1つの態様において、本発明の抗体はヒト抗体である。HER2に対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を有するトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソームマウスを用いて作製することができる。このようなトランスジェニックマウスおよびトランスクロモソームマウスは、本明細書において、それぞれ、HuMAbマウスおよびKMマウスと呼ばれるマウスを含み、本明細書において総称してトランスジェニックマウスと呼ばれる。HuMAbマウスは、再編成されていないヒト重鎖μおよびγ免疫グロブリン配列ならびにκ軽鎖免疫グロブリン配列と、内因性μ鎖およびκ鎖遺伝子座を不活化する標的変異をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含有するLonbergNetalNature3688568591994。従って、このマウスはマウスIgMまたはκの低発現を示し、免疫に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖トランスジーンはクラススイッチおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトIgGκモノクローナル抗体を産生するLonbergNetal1994前出;LonbergNHandbookofExperimentalPharmacology113491011994、LonbergNandHuszarDInternRevImmunolVol1365931995、およびHardingFandLonbergNAnnNYAcadSci7645365461995に概説。HuMAbマウスの調製は、TaylorLetalNucleicAcidsResearch20628762951992、ChenJetalInternationalImmunology56476561993、TuaillonetalJImmunol152291229201994、TaylorLetalInternationalImmunology65795911994、FishwildDetalNatureBiotechnology148458511996に詳述されている。US5545806、US5569825、US5625126、US5633425、US5789650、US5877397、US5661016、US5814318、US5874299、US5770429、US5545807、WO9824884、WO9425585、WO931227、WO9222645、WO9203918、およびWO0109187も参照されたい。HCo7、HCo12、HCo17、およびHCo20マウスは、内因性軽鎖κ遺伝子におけるJKD破壊ChenetalEMBOJ128218301993に記載、内因性重鎖遺伝子におけるCMD破壊WO0114424の実施例1に記載、およびKCo5ヒトκ軽鎖トランスジーンFishwildetalNatureBiotechnology148458511996に記載を有する。さらに、Hco7マウスはHCo7ヒト重鎖トランスジーンUS5770429に記載を有し、HCo12マウスはHCo12ヒト重鎖トランスジーンWO0114424の実施例2に記載を有し、HCo17マウスはHCo17ヒト重鎖トランスジーンWO0109187の実施例2に記載を有し、HCo20マウスはHCo20ヒト重鎖トランスジーンを有する。結果として生じたマウスは、内因性マウス重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座がホモで破壊されたバックグラウンドでヒト免疫グロブリン重鎖トランスジーンおよびκ軽鎖トランスジーンを発現する。KMマウス系統では、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、ChenetalEMBOJ128118201993に記載のようにホモで破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、WO0109187の実施例1に記載のようにホモで破壊されている。このマウス系統は、FishwildetalNatureBiotechnology148458511996に記載のように、ヒトκ軽鎖トランスジーンであるKCo5を有する。このマウス系統はまた、WO0243478に記載のように、第14番染色体断片hCFSC20からなるヒト重鎖トランスクロモソームも有する。HCo12BalbCマウスは、WO2009097006に記載のように、HCo12をKCo5[JK]Balbと交雑することによって作製することができる。これらのトランスジェニックマウスに由来する脾細胞を用いると、周知の技法に従って、ヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製することができる。さらに、本発明のヒト抗体または他の種に由来する本発明の抗体は、当技術分野において周知の技法を用いた、ファージディスプレイ、レトロウイルスディスプレイ、リボソームディスプレイ、および他の技法を含むが、それに限定されるわけではないディスプレイ型技術によって特定することができ、得られた分子は、このような技法が当技術分野において周知のように親和性成熟などのさらなる成熟に供することができる例えば、HoogenboometalJMolBiol2273811991ファージディスプレイ、VaughanetalNatureBiotech143091996ファージディスプレイ、HanesandPlucthauPNASUSA94493749421997リボソームディスプレイ、ParmleyandSmithGene733053181988ファージディスプレイ、ScottTIBS172412451992、CwirlaetalPNASUSA87637863821990、RusseletalNuclAcidsResearch21108110851993、HogenboometalImmunolReviews13043681992、ChiswellandMcCaffertyTIBTECH1080841992、およびUS5733743を参照されたい。非ヒト抗体を作製するためにディスプレイ技術が用いられるのであれば、このような抗体をヒト化することができる。クロスブロックグループ1の抗体本発明の抗体の1つの局面において、抗体は、本明細書に記載のクロスブロックグループ1の新規のヒト抗体の1つまたは複数と同じHER2上のエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、実施例14に記載のように判定した時に、トラスツズマブと可溶性HER2との結合をクロスブロックする。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域を含む参照抗体169と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:12の配列を含むVL領域を含む参照抗体050と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:84の配列を含むVL領域を含む参照抗体084と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:77の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:78の配列を含むVL領域049;bSEQIDNO:79の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:80の配列を含むVL領域051;cSEQIDNO:81の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:82の配列を含むVL領域055;dSEQIDNO:83の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:84の配列を含むVL領域123;eSEQIDNO:85の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:86の配列を含むVL領域161;ならびにfSEQIDNO:87の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:88の配列を含むVL領域124。本発明の抗体の別のさらなる局面または代わりの局面において、抗体はHER2に結合し、かつ本明細書に記載の新規の抗体の配列に類似するかまたはそれと同一のVHCDR3配列、VH領域配列、およびまたはVL領域配列を含む。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択される配列を有するVHCDR3領域を含む:SEQIDNO:11050、049、051、055、ここで任意で、VH領域はIgHV3211生殖系列配列に由来する;SEQIDNO:130、例えばSEQIDNO:18の配列084、ここで任意で、VH領域はIgHV16904生殖系列配列に由来する;SEQIDNO:133169、123、161、124、例えばSEQIDNO:4の配列169、ここで任意で、VH領域はIgHV1181生殖系列配列に由来する。1つの態様において、前記抗体は、図1に示したように、抗体123、161、または124のうちの1つのVHCDR3領域を含み、任意でVH領域はIgHV1181生殖系列に由来する。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域を含む:aSEQIDNO:9のCDR1配列、SEQIDNO:127のCDR2配列、およびSEQIDNO:11のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:9のCDR1配列、SEQIDNO:10のCDR2配列、およびSEQIDNO:11のCDR3配列を含み050、任意でIgHV3231生殖系列に由来するVH領域;bSEQIDNO:128のCDR1配列、SEQIDNO:129のCDR2配列、およびSEQIDNO:130のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:16のCDR1配列、SEQIDNO:17のCDR2配列、およびSEQIDNO:18のCDR3配列を含み084、任意でIgHV16904生殖系列に由来するVH領域;ならびにcSEQIDNO:131のCDR1配列、SEQIDNO:132のCDR2配列、およびSEQIDNO:133のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:2のCDR1配列、SEQIDNO:3のCDR2配列、およびSEQIDNO:4のCDR3配列を含み169、任意でIgHV1181生殖系列に由来するVH領域。1つの態様において、前記抗体は、前記態様aまたはbより選択されるVH領域と、SEQIDNO:13のCDR1配列、XAS式中、XはAまたはVであるのCDR2配列、およびSEQIDNO:155のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:13または20より選択されるCDR1配列、AASまたはVASであるCDR2配列、ならびにSEQIDNO:14および21より選択されるCDR3配列を含み050、084、任意でIgKV11201生殖系列に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、前記態様cであるVH領域と、SEQIDNO:6のCDR1配列、DXS式中、X=AまたはTのCDR2配列、およびSEQIDNO:156のCDR3配列を含み169、任意でIgKV31101に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:2のCDR1配列、SEQIDNO:3のCDR2配列、およびSEQIDNO:4のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:6のCDR1配列、DASのCDR2配列、およびSEQIDNO:7のCDR3配列を含むVL領域を含む169。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:9のCDR1配列、SEQIDNO:10のCDR2配列、およびSEQIDNO:11のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:13のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:14のCDR3配列を含むVL領域を含む050。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:16のCDR1配列、SEQIDNO:17のCDR2配列、およびSEQIDNO:18のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:20のCDR1配列、VASのCDR2配列、およびSEQIDNO:21のCDR3配列を含むVL領域を含む084。別個の態様において前記抗体は、以下を含む:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:12の配列を含むVL領域050;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:19の配列を含むVL領域084;dSEQIDNO:77の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:78の配列を含むVL領域049;eSEQIDNO:79の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:80の配列を含むVL領域051;fSEQIDNO:81の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:82の配列を含むVL領域055;gSEQIDNO:83の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:84の配列を含むVL領域123;hSEQIDNO:85の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:86の配列を含むVL領域161;iSEQIDNO:87の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:88の配列を含むVL領域124;ならびにまたはj好ましくは最大で1個、2個、もしくは3個のアミノ酸修飾、より好ましくはアミノ酸置換、例えば保存的アミノ酸置換、および新たなアミノ酸が図1または図2のアライメント配列中の同じ位置、特に対応するコンセンサス配列中のXによって示される位置にあるアミノ酸である置換などを有する、前記のいずれかの抗体の変種。クロスブロックグループ2の抗体本発明の抗体の1つの局面において、抗体は、本明細書に記載のクロスブロックグループ2の新規のヒト抗体の1つまたは複数と同じHER2上のエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、実施例14に記載のように判定した時に、ペルツズマブと可溶性HER2との結合をクロスブロックする。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域を含む参照抗体025と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域を含む参照抗体091と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:35の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:39の配列を含むVL領域を含む参照抗体129と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:89の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:90の配列を含むVL領域001;bSEQIDNO:91の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:92の配列を含むVL領域143;cSEQIDNO:93の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:94の配列を含むVL領域019;dSEQIDNO:95の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:96の配列を含むVL領域021;eSEQIDNO:97の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:98の配列を含むVL領域027;fSEQIDNO:99の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:100の配列を含むVL領域032;gSEQIDNO:101の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:102の配列を含むVL領域035;hSEQIDNO:103の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:104の配列を含むVL領域036;iSEQIDNO:105の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:106の配列を含むVL領域054;ならびにjSEQIDNO:107の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:108の配列を含むVL領域094。本発明の抗体の別のさらなる局面または代わりの局面において、抗体はHER2に結合し、かつ本明細書に記載の新規の抗体の配列に類似するかまたはそれと同一のVHCDR3配列、VH領域配列、およびまたはVL領域配列を含む。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択される配列を有するVHCDR3領域を含む:SEQIDNO:136、例えばSEQIDNO:25の配列025、ここで任意でVH領域はIgHV4341生殖系列配列に由来する;SEQIDNO:139、例えばSEQIDNO:31の配列091、ここで任意でVH領域はIgHV43401生殖系列配列に由来する;およびSEQIDNO:142、例えばSEQIDNO:38の配列129、ここで任意でVH領域はIgHV33001生殖系列配列に由来する。1つの態様において、前記抗体は、図1に示した抗体001、143、019、021、027、032、035、036、054、または094のうちの1つのVHCDR3領域を含み、任意でVH領域はIgHV4341生殖系列に由来する。1つの態様において、前記抗体は以下からなる群より選択されるVH領域を含む:aSEQIDNO:134のCDR1配列、SEQIDNO:135のCDR2配列、およびSEQIDNO:136のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:23のCDR1配列、SEQIDNO:24のCDR2配列、およびSEQIDNO:25のCDR3配列を含み025、任意でIgHV4341生殖系列に由来するVH領域;bSEQIDNO:137のCDR1配列、SEQIDNO:138のCDR2配列、およびSEQIDNO:139のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:30のCDR1配列、SEQIDNO:163のCDR2配列、およびSEQIDNO:31のCDR3配列を含み091、任意でIgHV43401生殖系列に由来するVH領域;ならびにcSEQIDNO:140のCDR1配列、SEQIDNO:141のCDR2配列、およびSEQIDNO:142のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:36のCDR1配列、SEQIDNO:37のCDR2配列、およびSEQIDNO:38のCDR3配列を含み129、任意でIgHV33001生殖系列に由来するVH領域。1つの態様において、前記抗体は、前記態様aより選択されるVH領域と、SEQIDNO:157のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:164のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:27のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:28のCDR3配列を含み025、任意でIgKV1D1601生殖系列に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、前記態様bより選択されるVH領域と、SEQIDNO:33のCDR1配列、AX1X2式中、X1はAまたはT、好ましくはAであり;X2はSまたはF、好ましくはSであるのCDR2配列、およびSEQIDNO:158のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:33のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:34のCDR3配列を含み091、任意でIgKV1D1601生殖系列に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、前記態様cであるVH領域、ならびにSEQIDNO:40のCDR1配列、DASのCDR2配列、およびSEQIDNO:41のCDR3配列を含み129、任意で、IgKV31101に由来するVL領域を含む。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:23のCDR1配列、SEQIDNO:24のCDR2配列、およびSEQIDNO:25のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:27のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:28のCDR3配列を含むVL領域を含む025。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:30のCDR1配列、SEQIDNO:163のCDR2配列、およびSEQIDNO:31のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:33のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:34のCDR3配列を含むVL領域を含む091。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:36のCDR1配列、SEQIDNO:37のCDR2配列、およびSEQIDNO:38のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:40のCDR1配列、DASのCDR2配列、およびSEQIDNO:41のCDR3配列を含むVL領域を含む129。別個の態様において、前記抗体は、以下を含む:aSEQIDNO:22の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;bSEQIDNO:29の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:32の配列を含むVL領域091;cSEQIDNO:35の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:39の配列を含むVL領域129;dSEQIDNO:89の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:90の配列を含むVL領域001;eSEQIDNO:91の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:92の配列を含むVL領域143;fSEQIDNO:93の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:94の配列を含むVL領域019;gSEQIDNO:95の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:96の配列を含むVL領域021;hSEQIDNO:97の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:98の配列を含むVL領域027;iSEQIDNO:99の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:100の配列を含むVL領域032;jSEQIDNO:101の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:102の配列を含むVL領域035;kSEQIDNO:103の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:104の配列を含むVL領域036;lSEQIDNO:105の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:106の配列を含むVL領域054;mSEQIDNO:106の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:108の配列を含むVL領域094;ならびにまたはn好ましくは最大で1個、2個、もしくは3個のアミノ酸修飾、より好ましくはアミノ酸置換、例えば保存的アミノ酸置換、および新たなアミノ酸が図1または図2のアライメント配列中の同じ位置、特に対応するコンセンサス配列中のXによって示される位置にあるアミノ酸である置換などを有する、前記のいずれかの抗体の変種。クロスブロックグループ3の抗体本発明の抗体の1つの局面において、抗体は、本明細書に記載のクロスブロックグループ3の新規のヒト抗体の1つまたは複数と同じHER2上のエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、実施例14に記載のように判定した時に、F5およびまたはC5と可溶性HER2との結合をクロスブロックする。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:46の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:49の配列を含むVL領域を含む参照抗体127と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:49の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:53の配列を含むVL領域を含む参照抗体159と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域を含む参照抗体098と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:63の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:67の配列を含むVL領域を含む参照抗体153と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:70の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:74の配列を含むVL領域を含む参照抗体132と同じエピトープに結合する。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体と同じエピトープに結合する:kSEQIDNO:109の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:110の配列を含むVL領域105;lSEQIDNO:111の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:112の配列を含むVL領域100;mSEQIDNO:113の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:114の配列を含むVL領域125;nSEQIDNO:115の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:116の配列を含むVL領域162;oSEQIDNO:117の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:118の配列を含むVL領域033;pSEQIDNO:119の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:120の配列を含むVL領域160;qSEQIDNO:121の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:122の配列を含むVL領域166;rSEQIDNO:123の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:124の配列を含むVL領域152;ならびにsSEQIDNO:125の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:126の配列を含むVL領域167。本発明の抗体の別のさらなる局面または代わりの局面において、抗体はHER2に結合し、かつ本明細書に記載の新規の抗体の配列と類似するかまたはそれと同一のVHCDR3配列、VH領域配列、およびまたはVL領域配列を含む。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択される配列を有するVHCDR3領域を含む:SEQIDNO:148、例えばSEQIDNO:48の配列127、ここで任意でVH領域はIgHV55101生殖系列配列に由来する;SEQIDNO:52159、ここで任意でVH領域はIgHV55101生殖系列配列に由来する;SEQIDNO:145、例えばSEQIDNO:59の配列098、ここで任意でVH領域はIgHV32301生殖系列配列に由来する;SEQIDNO:154、例えばSEQIDNO:66の配列153、ここで任意でVH領域はIgHV3300301生殖系列配列に由来する;およびSEQIDNO:151、例えばSEQIDNO:73の配列132、ここで任意でVH領域はIgHV11801生殖系列配列に由来する。1つの態様において、前記抗体は、図1に示したように抗体105、100、125、または162のうちの1つのVHCDR3領域を含み、任意でVH領域はIgHV3231生殖系列に由来する。1つの態様において、前記抗体は、図1に示したように抗体033、160、166、152、または167のうちの1つのVHCDR3領域を含み、任意でVH領域はIgHV330301生殖系列に由来する。1つの態様において、前記抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域を含む:aSEQIDNO:146のCDR1配列、SEQIDNO:147のCDR2配列、およびSEQIDNO:148のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:43のCDR1配列、SEQIDNO:44のCDR2配列、およびSEQIDNO:45のCDR3配列を含み127、任意でIgHV55101生殖系列に由来するVH領域;bSEQIDNO:149のCDR1配列、SEQIDNO:51のCDR2配列、およびSEQIDNO:52のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:50のCDR1配列、SEQIDNO:51のCDR2配列、およびSEQIDNO:52のCDR3配列を含み159、任意でIgHV55101生殖系列に由来するVH領域;cSEQIDNO:143のCDR1配列、SEQIDNO:144のCDR2配列、およびSEQIDNO:145のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:57のCDR1配列、SEQIDNO:58のCDR2配列、およびSEQIDNO:59のCDR3配列を含み098、任意でIgHV32301生殖系列に由来するVH領域;dSEQIDNO:152のCDR1配列、SEQIDNO:153のCDR2配列、およびSEQIDNO:154のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:64のCDR1配列、SEQIDNO:65のCDR2配列、およびSEQIDNO:66のCDR3配列を含み153、任意でIgHV3300301生殖系列に由来するVH領域;ならびにeSEQIDNO:71のCDR1配列、SEQIDNO:150のCDR2配列、およびSEQIDNO:151のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:71のCDR1配列、SEQIDNO:72のCDR2配列、およびSEQIDNO:73のCDR3配列を含み132、任意でIgHV11801生殖系列に由来するVH領域。1つの態様において、前記抗体は、前記態様aより選択されるVH領域と、SEQIDNO:47のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:48のCDR3配列を含み127、任意でIgKV1D801生殖系列に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、前記態様bより選択されるVH領域と、SEQIDNO:54のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:55のCDR3配列を含み159、任意でIgKV1D1601生殖系列に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、前記態様cであるVH領域と、SEQIDNO:159のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:160のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:61のVLCDR1配列、AASのVLCDR2配列、およびSEQIDNO:62のVLCDR3配列を含み098、任意でIgKV1D1601に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、前記態様dであるVH領域と、SEQIDNO:161のCDR1配列、XAS式中、X=DまたはA、好ましくはDのCDR2配列、およびSEQIDNO:162のCDR3配列153、例えば、SEQIDNO:68、DAS、および69のVLCDR配列を含み、任意でIgKV1D1601に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、前記態様eであるVH領域と、SEQIDNO:75のCDR1配列、DASのCDR2配列、およびSEQIDNO:76のCDR3配列を含み132、任意でIgKV31101に由来するVL領域とを含む。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:43のCDR1配列、SEQIDNO:44のCDR2配列、およびSEQIDNO:45のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:47のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:48のCDR3配列を含むVL領域を含む127。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:50のCDR1配列、SEQIDNO:51のCDR2配列、およびSEQIDNO:52のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:54のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:55のCDR3配列を含むVL領域を含む159。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、SEQIDNO:58のCDR2配列、およびSEQIDNO:59のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:60のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:61のCDR3配列を含むVL領域を含む098。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:64のCDR1配列、SEQIDNO:65のCDR2配列、およびSEQIDNO:66のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:68のCDR1配列、DASのCDR2配列、およびSEQIDNO:69のCDR3配列を含むVL領域を含む153。1つの態様において、前記抗体は、SEQIDNO:71のCDR1配列、SEQIDNO:72のCDR2配列、およびSEQIDNO:73のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:75のCDR1配列、DASのCDR2配列、およびSEQIDNO:76のCDR3配列を含むVL領域を含む132。別個の態様において、前記抗体は、以下を含む:aSEQIDNO:46の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:49の配列を含むVL領域127;bSEQIDNO:49の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:53の配列を含むVL領域159;cSEQIDNO:56の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:60の配列を含むVL領域098;dSEQIDNO:63の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:67の配列を含むVL領域153;eSEQIDNO:70の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:74の配列を含むVL領域132;fSEQIDNO:109の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:110の配列を含むVL領域105;gSEQIDNO:111の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:112の配列を含むVL領域100;hSEQIDNO:113の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:114の配列を含むVL領域125;iSEQIDNO:115の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:116の配列を含むVL領域162;jSEQIDNO:117の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:118の配列を含むVL領域033;kSEQIDNO:119の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:120の配列を含むVL領域160;lSEQIDNO:121の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:122の配列を含むVL領域166;mSEQIDNO:123の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:124の配列を含むVL領域152;oSEQIDNO:125の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:126の配列を含むVL領域167;ならびにまたはp好ましくは最大で1個、2個、もしくは3個のアミノ酸修飾、より好ましくはアミノ酸置換、例えば保存的アミノ酸置換、および新たなアミノ酸が図1または図2のアライメント配列中の同じ位置、特に対応するコンセンサス配列中のXによって示される位置にあるアミノ酸である置換などを有する、前記のいずれかの抗体の変種。二重特異性抗体1つの態様において、前記抗体は、i本明細書において定義された抗体、例えばクロスブロック1、2、もしくは3の抗体の抗原結合領域、または005の配列を含むVH領域およびVL領域を含む第1の抗体と、iiCD3に結合する抗体の抗原結合領域を含む第2の抗体とを含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、i本明細書において定義された抗体の抗原結合領域、または005の配列を含むVH領域およびVL領域を含む第1の抗体と、ii本明細書において定義された抗体の抗原結合領域、または005の配列を含むVH領域およびVL領域を含む第2の抗体とを含み、二重特異性抗体であり、第1の抗原結合領域は第2の抗原結合領域とは異なるエピトープに結合する。1つの態様において、第1の抗体は、本明細書において定義されたクロスブロック1、2、または3の抗体のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:4、SEQIDNO:25、もしくはSEQIDNO:66169、025、もしくは153、またはSEQIDNO:168005のCDR3配列を含むVH領域を含む。1つの態様において、第1の抗体は、本明細書において定義されたクロスブロック1、2、または3の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列、例えば、SEQIDNO:2のCDR1配列、SEQIDNO:3のCDR2配列、およびSEQIDNO:4のCDR3配列169、またはSEQIDNO:23のCDR1配列、SEQIDNO:24のCDR2配列、およびSEQIDNO:25のCDR3配列025、またはSEQIDNO:64のCDR1配列、SEQIDNO:65のCDR2配列、およびSEQIDNO:66のCDR3配列153、またはSEQIDNO:166のCDR1配列、SEQIDNO:167のCDR2配列、およびSEQIDNO:168のCDR3配列005を含むVH領域を含む。さらなる態様または別の態様において、第1の抗体は、本明細書において定義されたクロスブロック1、2、または3の抗体のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:11050もしくはSEQIDNO:18084のクロスブロック1の抗体のCDR3配列;またはSEQIDNO:31091もしくはSEQIDNO:38129のクロスブロック2の抗体のCDR3配列;またはSEQIDNO:45127もしくはSEQIDNO:52159もしくはSEQIDNO:59098もしくはSEQIDNO:73132のクロスブロック3の抗体のCDR3配列を含むVH領域を含む。1つの態様において、第1の抗体は、本明細書において定義されたクロスブロック1、2、または3の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列、例えば、SEQIDNO:2のCDR1配列、SEQIDNO:3のCDR2配列、およびSEQIDNO:4のCDR3配列169、またはSEQIDNO:23のCDR1配列、SEQIDNO:24のCDR2配列、およびSEQIDNO:25のCDR3配列025、またはSEQIDNO:64のCDR1配列、SEQIDNO:65のCDR2配列、およびSEQIDNO:66のCDR3配列153、またはSEQIDNO:166のCDR1配列、SEQIDNO:167のCDR2配列、およびSEQIDNO:168のCDR3配列005を含むVH領域を含む。1つの態様において、第1の抗体は、本明細書において定義されたクロスブロック1、2、または3の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域、本明細書において定義されたクロスブロック1、2、または3の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVL領域を含む。さらなる態様または別の態様において、第1の抗体は、本明細書において定義されたクロスブロック1、2、または3の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列、例えば、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、およびSEQIDNO:11050もしくはSEQIDNO:16、SEQIDNO:17、およびSEQIDNO:18084のクロスブロック1の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列;またはSEQIDNO:30、SEQIDNO:163、およびSEQIDNO:31091、もしくはSEQIDNO:36、SEQIDNO:37、およびSEQIDNO:38129のクロスブロック2の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列、またはSEQIDNO:43、SEQIDNO:44、およびSEQIDNO:45127、もしくはSEQIDNO:50、SEQIDNO:51、およびSEQIDNO:52159、もしくはSEQIDNO:57、SEQIDNO:58、およびSEQIDNO:59098、もしくはSEQIDNO:71、SEQIDNO:72、およびSEQIDNO:73132のクロスブロック3の抗体のCDR1配列、CDR2配列、およびCDR3配列を含むVH領域を含む。1つの態様において、第1の抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む:aSEQIDNO:2のCDR1配列、SEQIDNO:3のCDR2配列、およびSEQIDNO:4のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQID:6のCDR1配列、GASのCDR2配列、およびSEQIDNO:7のCDR3配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:23のCDR1配列、SEQIDNO:24のCDR2配列、およびSEQIDNO:25のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:27のCDR1配列、AASのCDR2配列、およびSEQIDNO:28のCDR3配列を含むVL領域025;cSEQIDNO:64のCDR1配列、SEQIDNO:65のCDR2配列、およびSEQIDNO:66のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:68のCDR1配列、DASのCDR2配列、およびSEQIDNO:69のCDR3配列を含むVL領域153;ならびにdSEQIDNO:166のCDR1配列、SEQIDNO:167のCDR2配列、およびSEQIDNO:168のCDR3配列を含むVH領域;ならびにSEQIDNO:169のCDR1配列、GASのCDR2配列、およびSEQIDNO:170のCDR3配列を含むVL領域005。さらなる態様または別の態様において、第1の抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む:aSEQIDNO:9のCDR1配列、SEQIDNO:127のCDR2配列、およびSEQIDNO:11のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:9のCDR1配列、SEQIDNO:10のCDR2配列、およびSEQIDNO:11のCDR3配列を含み050、任意でIgHV3231生殖系列に由来するVH領域;bSEQIDNO:128のCDR1配列、SEQIDNO:129のCDR2配列、およびSEQIDNO:130のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:16のCDR1配列、SEQIDNO:17のCDR2配列、およびSEQIDNO:18のCDR3配列を含み084、任意でIgHV16904生殖系列に由来するVH領域;ならびにcSEQIDNO:137のCDR1配列、SEQIDNO:138のCDR2配列、およびSEQIDNO:139のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:30のCDR1配列、SEQIDNO:163のCDR2配列、およびSEQIDNO:31のCDR3配列を含み091、任意でIgHV43401生殖系列に由来するVH領域;ならびにdSEQIDNO:140のCDR1配列、SEQIDNO:141のCDR2配列、およびSEQIDNO:142のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:36のCDR1配列、SEQIDNO:37のCDR2配列、およびSEQIDNO:38のCDR3配列を含み129、任意でIgHV33001生殖系列に由来するVH領域;eSEQIDNO:146のCDR1配列、SEQIDNO:147のCDR2配列、およびSEQIDNO:148のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:43のCDR1配列、SEQIDNO:44のCDR2配列、およびSEQIDNO:45のCDR3配列を含み127、任意でIgHV55101生殖系列に由来するVH領域;fSEQIDNO:149のCDR1配列、SEQIDNO:51のCDR2配列、およびSEQIDNO:52のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:50のCDR1配列、SEQIDNO:51のCDR2配列、およびSEQIDNO:52のCDR3配列を含み159、任意でIgHV55101生殖系列に由来するVH領域;gSEQIDNO:143のCDR1配列、SEQIDNO:144のCDR2配列、およびSEQIDNO:145のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:57のCDR1配列、SEQIDNO:58のCDR2配列、およびSEQIDNO:59のCDR3配列を含み098、任意でIgHV32301生殖系列に由来するVH領域;hSEQIDNO:71のCDR1配列、SEQIDNO:150のCDR2配列、およびSEQIDNO:151のCDR3配列、例えば、SEQIDNO:71のCDR1配列SEQIDNO:72のCDR2配列、およびSEQIDNO:73のCDR3配列を含み132、任意で、IgHV11801生殖系列に由来するVH領域。1つの態様において、第2の抗体は、第1の抗体について述べられた前記態様の1つであるが、第1の抗体とは異なるエピトープに結合する。1つの態様において、第2の抗体はCD3抗体である。1つの態様において、CD3抗体は、SEQIDNO:171YTH125の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:172YTH125の配列を含むVL領域を含む抗体でもよい。CD3抗体の別の例は、SEQIDNO:173huCLBT34の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:174huCLBT34の配列を含むVL領域を含む抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、005、025、153、または169のVH領域配列およびVL領域配列を含み、IgG1野生型Fc領域を含む第1の抗体であって、CH3領域の位置350にIle、位置370にThr、および位置405にLeuがある、第1の抗体、ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、005、025、153、または169のVH領域配列およびVL領域配列を含み、IgG1野生型Fc領域を含む、第2の抗体であって、CH3領域の位置409にArgがある第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。特定の態様が実施例に開示される。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意でIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:164のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:165のアミノ酸配列を含み005、CH3領域の位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:1のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:5のアミノ酸配列を含む169、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意でIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:22のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:26のアミノ酸配列を含み025、CH3領域の位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:164のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:165のアミノ酸配列を含む005、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意でIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:22のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:26のアミノ酸配列を含み025、CH3領域の位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:63のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:37のアミノ酸配列を含む153、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意でIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:22のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:26のアミノ酸配列を含み025、CH3領域の位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:1のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:5のアミノ酸配列を含む169、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意でIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:63のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:67のアミノ酸配列を含み153、CH3領域の位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:164のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:165のアミノ酸配列を含む005、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意でIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:63のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:67のアミノ酸配列を含み153、CH3領域の位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:1のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:5のアミノ酸配列を含む169、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArg、または位置297にGln、または位置409にArgおよび位置297にGlnがあるIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:63のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:67のアミノ酸配列を含む153、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置297にGln、または位置405にLeu、または位置297にGlnおよび位置405にLeuがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:171のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:172のアミノ酸配列を含むYTH125、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgがあるIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:1のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:5のアミノ酸配列を含む169、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置297にGln、または位置405にLeu、または位置297にGlnおよび位置405にLeuを有するIgG1κFc領域を含む第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:171のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:172のアミノ酸配列を含むYTH125、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArg、または位置297にGln、または位置409にArgおよび位置297にGlnがあるIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:63のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:67のアミノ酸配列を含む153、第1の抗体;ならびにiiFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置297にGln、または位置405にLeu、または位置297にGlnおよび位置405にLeuがあるIgG1κFc領域を含む、第2の抗体であって、VH領域はSEQIDNO:173のアミノ酸配列を含み、VL領域はSEQIDNO:174のアミノ酸配列を含むhuCLBT34、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。1つの態様において、前記抗体は、iFc領域ならびにVH配列およびVL配列を有し、任意で位置409にArgを有するIgG1κFc領域を含む第1の抗体であって、VH領域がSEQIDNO:1のアミノ酸配列を含み、VL領域がSEQIDNO:5のアミノ酸配列を含む169、第1の抗体;ならびにiiFc領域およびVH配列およびVL配列を有し、任意で位置297にGln、または位置405にLeu、または位置297にGlnおよび位置405にLeuを有するIgG1κFc領域を含む第2の抗体であって、VH領域がSEQIDNO:173のアミノ酸配列を含み、VL領域がSEQIDNO:174のアミノ酸配列を含むhuCLBT34、第2の抗体を含む、二重特異性抗体である。CD3抗体は、SEQIDNO:171VHYTH125の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:172VLYTH125の配列を含むVL領域を有する抗体である。別の例は、SEQIDNO:173VHhuCLBT34の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:174VLhuCLBT34の配列を含むVL領域を有するCD3抗体である。1つの態様において、本発明の二重特異性抗体は、IgG1005ITLxIgG1169K409R、IgG1025ITLxIgG1005K409R、IgG1025ITLxIgG1153K409R、IgG1025ITLxIgG1169K409R、IgG1153ITLxIgG1005K409R;およびIgG1153ITLxIgG1169K409Rからなる群より選択されてもよい。IgG1005ITLは、位置350にIle、位置370にThr、および位置405にLeuを有する005IgG1κを意味する。IgG1005K409Rは、位置409にArgを有する005IgG1κを意味する。IgG1025ITLは、位置350にIle、位置370にThr、および位置405にLeuを有する025IgG1κを意味する。IgG1153ITLは、位置350にIle、位置370にThr、および位置405にLeuを有する153IgG1κを意味する。IgG1153K409Rは、位置409にArgを有する153IgG1κを意味する。IgG1169K409Rは、位置409にArgを有する169IgG1κを意味する。太字は、表1に記載の配列、005については実施例に21記載の配列、すなわち、SEQIDNO:164および165を含むVH領域およびVL領域を有する本明細書に記載の抗体を指す。1つの態様において、二重特異性抗体は、以下:からなる群より選択されてもよい。グループ1、グループ2、およびグループ3の抗体ならびに二重特異性抗体の機能特性本発明の抗体の別の局面において、抗体は、好ましくは、実施例14に記載のように判定した時に、本明細書に記載の新規のグループ1、グループ2、またはグループ3の抗体の1つまたは複数と同じHER2エピトープに結合し、実施例12、13、15、16、17、18、および19に記載のように判定した時に、1つまたは複数の特性によってさらに特徴付けられる。1つの態様において、A431細胞との結合におけるHER2抗体のEC50値半有効濃度はトラスツズマブより低く、好ましくは、EC50値は、実施例12に記載のように判定した時に080μgml、050μgml、または030μgmlより低く、HER2抗体は、好ましくは、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域084;cSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;dSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091;eSEQIDNO:46の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:49の配列を含むVL領域127;fSEQIDNO:49の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:53の配列を含むVL領域159;gSEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域098;hSEQIDNO:63の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:67の配列を含むVL領域153;ならびにiSEQIDNO:70の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:74の配列を含むVL領域132。さらなる態様または別の態様において、抗HER2抗体は、実施例13に記載のように判定した時に、HER2陽性アカゲザル上皮細胞に特異的に結合し、好ましくは、抗体169、050、084、025、091、129、127、159、098、153、および132のいずれかのVH領域およびVL領域からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する。さらなる態様または別の態様において、抗HER2抗体はADCC抗体依存性細胞傷害を効率的に誘導し、好ましくは、実施例15に記載のように判定した時に、少なくとも30、より好ましくは少なくとも40の特異的51Cr放出を達成し、好ましくは、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:12の配列を含むVL領域050;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域084;dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091;fSEQIDNO:35の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:39の配列を含むVL領域129;ならびにgSEQIDNO:63の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:67の配列を含むVL領域153。さらなる態様または別の態様において、HER2抗体はHER2発現AU565細胞に特異的に結合するが、実施例16に記載のように判定した時に、F5およびC1のいずれかより少なく前記細胞のリガンド非依存性増殖を促進し、好ましくは、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:12の配列を含むVL領域050;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域084;dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091;fSEQIDNO:35の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:39の配列を含むVL領域129;gSEQIDNO:46の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:49の配列を含むVL領域127;hSEQIDNO:49の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:53の配列を含むVL領域159;iSEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域098;jSEQIDNO:63の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:67の配列を含むVL領域153;ならびにkSEQIDNO:70の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:74の配列を含むVL領域132。さらなる態様または別の態様において、HER2抗体はHER2発現AU565細胞に特異的に結合し、実施例16に記載のように判定した時に、前記細胞のリガンド非依存性増殖を阻害し、好ましくは少なくとも20、より好ましくは少なくとも25増殖を阻害し、好ましくは、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;ならびにbSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:12の配列を含むVL領域050。さらなる態様または別の態様において、HER2抗体はHER2発現AU565細胞に特異的に結合するが、実施例17に記載のように判定した時に、前記細胞のリガンド誘導性増殖に対して有意な影響を及ぼさないか、前記細胞のリガンド誘導性増殖を促進せず、好ましくは25以下、より好ましくは15以下、増殖を阻害し、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:12の配列を含むVL領域050;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域084;ならびにdSEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域098。さらなる態様または別の態様において、HER2抗体はHER2発現MCF7細胞に特異的に結合し、リガンド誘導性増殖を阻害する。例えば、HER2抗体は、実施例17に記載のように判定した時に、リガンドによって誘導される作用を完全に阻害してもよく、前記細胞の全増殖を50、例えば60または70または80阻害してもよく、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;bSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091;cSEQIDNO:35の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:39の配列を含むVL領域129;ならびにdSEQIDNO:63の配列を含むVH領域、および好ましくは、SEQIDNO:67の配列を含むVL領域153。さらなる態様または別の態様において、前記抗体は切断型シュードモナス属エキソトキシンAなどの治療部分と直接的または間接的に結合体化された場合、実施例18に記載のように判定した時に、AU565細胞、A431細胞、またはAU565細胞およびA431細胞の両方の死滅に関してトラスツズマブより有効である。1つの態様において、結合体化された抗体のEC50値は、実施例18に記載のように判定した時に、AU565細胞およびまたはA431細胞の死滅に関して70ngml未満、50ngml未満、または30ngml未満であり、結合体化された抗体は、169、091、050、084、098、05、153、129、132、127、および159からなる群より選択される、好ましくは抗体153、129、098、091、および025より選択されるVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する。1つの態様において、結合体化された抗体は、実施例18に記載のように判定した時に、トラスツズマブおよびペルツズマブよりAU565死滅細胞の高い割合を有するかまたはそれをもたらし、好ましくはAU565細胞の少なくとも49、より好ましくは少なくとも60を死滅させ、169、091、050、084、098、025、153、129、132、127、および159からなる群より選択される、好ましくは抗体153、132、127、129、159、および025より選択される抗体のVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する。好ましい態様において、結合体化された抗体は、SEQIDNO:49の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:53の配列を含むVL領域を含む参照抗体159と同じエピトープに結合する。1つの態様において、結合体化された抗体は、実施例18に記載のように判定した時に、トラスツズマブおよびペルツズマブよりAU431死滅細胞の割合が高く、好ましくは少なくとも50、より好ましくは少なくとも70を死滅させ、025、084、091、098、129、および153からなる群より選択される、好ましくは抗体025、091、098、129、および153より選択される抗体のVH領域およびVL領域を含む少なくとも1つの参照抗体と同じエピトープに結合する。好ましい態様において、結合体化された抗体は、SEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域を含む参照抗体098と同じエピトープに結合する。さらなる態様または別の態様において、前記抗体は、好ましくは実施例18に従って判定した時に、トラスツズマブおよびペルツズマブより大きな程度で、好ましくは内部移行されたトラスツズマブの量の2倍または3倍を超えて、AU565細胞などのHER2発現腫瘍細胞によって内部移行され、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:46の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:49の配列を含むVL領域127;bSEQIDNO:49の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:53の配列を含むVL領域159;cSEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域098;dSEQIDNO:63の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:67の配列を含むVL領域153;ならびにeSEQIDNO:70の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:74の配列を含むVL領域132。好ましくは、前記抗体は、以下より選択されるVH領域およびVL領域を含む抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:46の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:49の配列を含むVL領域127ならびにbSEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域098。さらなる態様において、前記抗体は、HER2のドメインIIまたはIVに結合する。好ましくは前記抗体は、好ましくは実施例、例えば実施例16に記載のように判定した時に、HER2発現細胞の増殖を有意に促進せず、好ましくは実施例、例えば実施例19に記載のように判定した時に、より効率的にHER2発現腫瘍細胞に内部移行されるか、トラスツズマブまたはペルツズマブより大きな程度でHER2発現腫瘍細胞に内部移行される。さらなる態様において、前記抗体は、トラスツズマブ以上にHER2発現低下を増強した。例えば、前記抗体は、実施例22に記載のように判定した時に、HER2発現低下を30を超えて、例えば40を超えて、または50を超えて増強した。好ましくは、前記抗体は、本発明のクロスブロックグループ3の抗体と同じエピトープに結合し、例えば以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:56の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:60の配列を含むVL領域098;bSEQIDNO:63の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:67の配列を含むVL領域153。別の態様または代わりの態様において、前記抗体は、実施例29に記載のように判定した時に、トラスツズマブ以上に腫瘍成長を減少させ、インビボでの生存率を改善した。好ましくは、前記抗体は、本発明のクロスブロック1またはクロスブロック2の抗体と同じエピトープに結合し、例えば、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域169;bSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域084;ならびにcSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091。別の態様または代わりの態様において、前記抗体は、実施例30に記載のように判定した時に、トラスツズマブ以上に腫瘍成長を減少させ、インビボでの生存率を改善した。好ましくは、前記抗体は、本発明のクロスブロック2またはクロスブロック3の抗体と同じエピトープに結合し、例えば、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;bSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091;cSEQIDNO:35の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:39の配列を含むVL領域129;ならびにdSEQIDNO:63の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:67の配列を含むVL領域153。さらに具体的には、前記抗体は、以下からなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む抗体と同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域025;ならびにbSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:32の配列を含むVL領域091。1つの態様において、前記抗体は二重特異性抗体である。さらなる態様において、前記抗体は、特に単一特異性対応物以上にHER2発現低下が増強された二重特異性抗体であり、例えば実施例22に記載のように判定した時に、HER2発現低下が20を超えて、例えば30を超えて、または40を超えて増強された抗体であり、好ましくは、IgG1005ITLxIgG1169K409R、IgG1025ITLxIgG1005K409R、IgG1025ITLxIgG1153K409R、IgG1025ITLxIgG1169K409R、IgG1153ITLxIgG1005K409R、およびIgG1153ITLxIgG1169K409Rからなる群より選択される二重特異性抗体と同じエピトープに結合する。さらなる態様または別の態様において、二重特異性抗体はHER2発現AU565細胞に特異的に結合し、実施例24に記載のように判定した時に、前記細胞のリガンド誘導性増殖を阻害し、IgG1005ITLxIgG1169K409R、IgG1025ITLxIgG1005K409R、IgG1025ITLxIgG1153K409R、IgG1025ITLxIgG1169K409R、IgG1153ITLxIgG1005K409R、およびIgG1153ITLxIgG1169K409Rからなる群より選択される少なくとも1つの二重特異性抗体と同じエピトープに結合する。特に、前記二重特異性抗体は、これらの単一特異性対応物以上にAU565細胞の増殖を阻害し、IgG1005ITLxIgG1169K409RおよびIgG1025ITLxIgG1005K409Rからなる群より選択される。さらなる態様または別の態様において、二重特異性抗体はHer2×CD3二重特異性抗体であり、実施例25に記載のようにAU565のT細胞性細胞傷害を誘導し、DuohuCLBQ153Q、DuohuCLBQB12Q、DuoYTH125153Q、およびDuoYTH125B12QDuoは二重特異性抗体を示すからなる群より選択される二重特異性抗体の少なくとも1つと同じエピトープに結合する。抗体形式本発明は、典型的には、HER2発現腫瘍細胞のリガンド非依存性増殖を有意に促進することなく、HER2発現腫瘍細胞に効率的に結合し、HER2発現腫瘍細胞に内部移行するHER2抗体を提供する。下記のように、特定の用途の望ましい機能特性に応じて、本発明において提供される抗体セットから特定の抗体を選択することができる、およびまたはこれらの特性を変えるように、これらの形式を合わせることができる。本発明の抗体はいかなるアイソタイプでもよい。アイソタイプの選択は、典型的には、ADCC誘導などの望ましいエフェクター機能によって導かれる。例示的なアイソタイプは、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4である。ヒト軽鎖定常領域であるκまたはλのどちらか一方を使用することができる。所望であれば、本発明のHER2抗体のクラスを公知の方法によってスイッチすることができる。例えば、最初にIgMであった本発明の抗体を本発明のIgG抗体にクラススイッチすることができる。さらに、クラススイッチ法を用いて、あるIgGサブクラスを別のIgGサブクラスに、例えばIgG1からIgG2に変換することができる。従って、本発明の抗体のエフェクター機能は、様々な治療用途に合わせて、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE、またはIgM抗体へのアイソタイプスイッチによって変えることができる。1つの態様において、本発明の抗体は、IgG1抗体、例えばIgG1κである。さらなる態様において、本発明の抗体は、例えばUS2009317869に記載のように、もしくはvanBerkeletal2010BiotechnolBioeng105:350に記載のように、抗体産生中に培地に化合物を添加することによって、または、例えばYamaneOhnukietal2004BiotechnolBioeng87:614に記載のようにFUT8ノックアウト細胞を使用することによって、フコースを低減し、従ってADCCを強化するように糖が操作されている。代替としてADCCは、Umanaetal1999NatureBiotech17:176に記載の方法を用いて最適化されてもよい。さらなる態様において、本発明の抗体は、補体活性化を増強するように、例えばNatsumeetal2009CancerSci100:2411に記載のように操作されている。1つの態様において、本発明の抗体は、完全長抗体であり、好ましくはIgG1抗体、特にIgG1κ抗体である。別の態様において、本発明の抗体は抗体断片または単鎖抗体である。抗体断片は、例えば、従来の技法を用いた断片化によって得ることができ、この断片は、抗体全体について本明細書で説明されたものと同じやり方で有用性についてスクリーニングすることができる。例えば、Fab2断片は、抗体をペプシンで処理することによって作製することができる。ジスルフィド架橋が少なくなるように、得られたFab2断片をジチオスレイトールなどの還元剤で処理して、Fab断片を作製することができる。Fab断片は抗体をパパインで処理することによって得ることができる。Fab2断片はまた、チオエーテル結合またはジスルフィド結合を介してFab断片を結合させることによって作製することもできる。抗体断片はまた、組換え細胞において、このような断片をコードする核酸を発現させることによって作製することもできる例えば、EvansetalJImmunolMeth184123381995を参照されたい。このような切断型抗体断片分子を生じるために、Fab2断片の一部をコードするキメラ遺伝子は、H鎖のCH1ドメインおよびヒンジ領域をコードするDNA配列の後に翻訳停止コドンを含んでもよい。前記で説明したように、1つの態様において、本発明のHER2抗体は、二価抗体、すなわち2種類の抗原または同じ抗原にある2種類のエピトープに結合することができる抗体である。別の態様において、本発明のHER2抗体は一価抗体である。1つの態様において、本発明の抗体は、例えばUS20080063641Genentechに記載のFab断片もしくは1アーム抗体、または例えばWO2007048037Amgenに記載の一価抗体である。好ましい態様において、一価抗体は、ヒンジ領域が欠失されている、WO2007059782Genmab参照により本明細書に組み入れられるに記載の構造を有する。従って、1つの態様において、前記抗体は一価抗体であり、HER2抗体は、以下の段階を含む方法によって構築される:i前記一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物を準備する段階であって、前記構築物が、選択された抗原特異的HER2抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列とIgの定常CL領域をコードするヌクレオチド配列とを含み、前記選択された抗原特異的抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列および前記IgのCL領域をコードするヌクレオチド配列が一緒に機能的に連結され、IgG1サブタイプの場合、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、または動物もしくはヒトに投与された時に、CL領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとジスルフィド結合または共有結合を形成することができるいかなるアミノ酸もCL領域が含有しないように、CL領域をコードするヌクレオチド配列が修飾されている、段階;ii前記一価抗体の重鎖をコードする核酸構築物を準備する段階であって、前記構築物が、選択された抗原特異的抗体のVH領域をコードするヌクレオチド配列とヒトIgの定常CH領域をコードするヌクレオチド配列とを含み、ヒンジ領域に対応する領域、およびIgサブタイプにより必要とされる場合にはCH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、または動物もしくはヒトに投与された時に、ヒトIgのCH領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合、または共有結合もしくは安定した非共有結合による重鎖間結合の形成に関与するいかなるアミノ酸残基も含まないように、CH領域をコードするヌクレオチド配列が修飾されており、前記選択された抗原特異的抗体のVH領域をコードするヌクレオチド配列および前記IgのCH領域をコードするヌクレオチド配列が一緒に機能的に連結されている、段階;iii前記一価抗体を産生するための細胞発現系を準備する段階;iviiiの細胞発現系の細胞において、iおよびiiの核酸構築物を同時発現させることによって、前記一価抗体を産生する段階。同様に、1つの態様において、HER2抗体は、以下を含む一価抗体である:i本明細書に記載の本発明の抗体の可変領域または該領域の抗原結合部分、ならびにiiヒンジ領域に対応する領域、および免疫グロブリンがIgG4サブタイプでない場合はCH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で同一のCH領域とのジスルフィド結合または同一のCH領域との他の共有結合もしくは安定した非共有結合による重鎖間結合を形成することができるいかなるアミノ酸残基も含まないように修飾されている、免疫グロブリンのCH領域、またはCH2領域およびCH3領域を含むその断片。そのさらなる態様において、一価HER2抗体の重鎖は、ヒンジ全体が欠失されるように修飾されている。別のさらなる態様において、上記の段階iiで言及した免疫グロブリンはIgG4サブタイプのものである。別のさらなる態様において、前記一価抗体はIgG4サブタイプであるが、CH3領域は、以下のアミノ酸置換の1つまたは複数がなされるように修飾されている。CH3変異のナンバリングKABATは、KabatKabatetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMD1991に準拠するアミノ酸ナンバリングを示す。EUインデックスは、Kabatetal上記に概説されたEUインデックスに準拠するアミノ酸ナンバリングを示す。別のさらなる態様において、前記一価抗体の配列は、N結合型グリコシル化のアクセプター部位を含まないように修飾されている。本発明のHER2抗体はまた単鎖抗体を含む。単鎖抗体は、重鎖Fv領域および軽鎖Fv領域が接続されているペプチドである。1つの態様において、本発明は、1本のペプチド鎖において、本発明のHER2抗体のFvの重鎖および軽鎖が可動性ペプチドリンカー典型的には、約10個、12個、15個以上のアミノ酸残基からなるとつながっている単鎖FvscFvを提供する。このような抗体を作製する方法は、例えばUS4946778、PluckthuninThePharmacologyofMonoclonalAntibodiesvol113RosenburgandMooreedsSpringerVerlagNewYorkpp2693151994、BirdetalScience2424234261988、HustonetalPNASUSA85587958831988、およびMcCaffertyetalNature3485525541990に記載されている。単鎖抗体は、1種類のVHおよびVLしか用いられないのであれば一価であり得、2種類のVHおよびVLが用いられるのであれば二価であり得、3種類以上のVHおよびVLが用いられるのであれば多価であり得る。1つの態様において、本発明のHER2抗体はエフェクター機能欠損性抗体である。1つの態様において、エフェクター機能欠損性のHER2抗体は、Fabアーム交換を阻止するように修飾されている、安定化されたヒトIgG4抗体であるvanderNeutKolfschotenetal2007Science3175844:15547。適切な安定化されたヒトIgG4抗体の例は、KabatetalのようにEUインデックスで示されたヒトIgG4の重鎖定常領域の位置409にあるアルギニンが、リジン、スレオニン、メチオニン、もしくはロイシン、好ましくはリジンで置換されている抗体WO2006033386Kirinに記載、および/またはヒンジ領域がCysProProCys配列を含むように修飾されている抗体である。1つの態様において、安定化されたIgG4HER2抗体は、重鎖および軽鎖を含むIgG4抗体であり、前記重鎖は、409に対応する位置に、Lys、Ala、Thr、Met、およびLeuからなる群より選択される残基、ならびに/または405に対応する位置に、Ala、Val、Gly、Ile、およびLeuからなる群より選択される残基を有するヒトIgG4定常領域を含み、前記抗体は、任意で1つまたは複数のさらなる置換、欠失、および/または挿入を含むが、ヒンジ領域にCysProProCys配列を含まない。好ましくは、前記抗体は、409に対応する位置にLysもしくはAla残基を含むか、または抗体のCH3領域は、ヒトIgG1、ヒトIgG2、もしくはヒトIgG3のCH3領域で置換されている。WO2008145142Genmabも参照されたい。なおさらなる態様において、安定化されたIgG4HER2抗体は、重鎖および軽鎖を含むIgG4抗体であり、前記重鎖は、409に対応する位置に、Lys、Ala、Thr、Met、およびLeuからなる群より選択される残基、ならびに/または405に対応する位置に、Ala、Val、Gly、Ile、およびLeuからなる群より選択される残基を有するヒトIgG4定常領域を含み、前記抗体は、任意で1つまたは複数のさらなる置換、欠失、および/または挿入を含み、ヒンジ領域にCysProProCys配列を含む。好ましくは、前記抗体は、409に対応する位置にLysもしくはAla残基を含むか、または抗体のCH3領域は、ヒトIgG1、ヒトIgG2、もしくはヒトIgG3のCH3領域で置換されている。さらなる態様において、エフェクター機能欠損性のHER2抗体は、ADCCなどのエフェクター機能を媒介する能力が低下するように、さらにはエフェクター機能が無くなるように変異されている、非IgG4型、例えばIgG1、IgG2、またはIgG3の抗体である。このような変異は、例えばDallAcquaWFetalJImmunol1772:112911382006およびHezarehMJVirol;7524:12161121682001に記載されている。結合体さらなる態様において、本発明は、治療部分、例えば細胞毒、化学療法薬、サイトカイン、免疫抑制剤、または放射性同位体と連結または結合体化された、HER2抗体またはHER2二重特異性抗体を提供する。このような結合体は本明細書において免疫結合体と呼ばれる。1種類または複数種の細胞毒を含む免疫結合体は免疫毒素と呼ばれる。細胞毒または細胞傷害剤には、細胞に有害な例えば、細胞を死滅させる任意の薬剤が含まれる。本発明の免疫結合体を形成するための適切な治療剤には、タキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシドtenoposide、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイタンシンまたはそれらの類似体もしくは誘導体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン;カリチアマイシンまたはそれらの類似体もしくは誘導体;代謝拮抗物質例えば、メトトレキサート、6メルカプトプリン、6チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、5フルオロウラシル、デカルバジンdecarbazine、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、クラドリビン、アルキル化剤例えば、メクロレタミン、チオエパthioepa、クロランブシル、メルファラン、カルムスチンBSNU、ロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジンDTIC、プロカルバジン、マイトマイシンC、シスプラチンおよび他の白金誘導体、例えば、カルボプラチン;ならびにデュオカルマイシンA、デュオカルマイシンSA、CC1065akaラケルマイシンまたはCC1065の類似体もしくは誘導体、抗生物質例えば、ダクチノマイシン以前はアクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン以前はダウノマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、アントラマイシンAMC、有糸分裂阻害剤例えば、チューブリン阻害剤、例えば、モノメチルアウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF、またはドラスタチン10の他の類似体もしくは誘導体;ジフテリア毒素および関連分子例えば、ジフテリアA鎖およびその活性断片、ならびにハイブリッド分子、リシン毒素例えば、リシンAまたは脱グリコシル化リシンA鎖毒素、コレラ毒素、志賀毒素様毒素SLTI、SLTII、SLTIIV、LT毒素、C3毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ダイズBowmanBirkプロテアーゼインヒビター、シュードモナス属エキソトキシン、アロリンalorin、サポリン、モデシンmodeccin、ゲラニンgelanin、アブリンA鎖、モデシンA鎖、αサルシンsarcin、シナアブラギリAleuritesfordiiタンパク質、ジアンチンdianthinタンパク質、アメリカヤマゴボウPhytolaccaamericanaタンパク質PAPI、PAPII、およびPAPS、ニガウリmomordicacharantiaインヒビター、クルシン、クロチン、サボンソウsapaonariaofficinalisインヒビター、ゲロニン、ミトゲリンmitogellin、レストリクトシンrestrictocin、フェノマイシンphenomycin、およびエノマイシンenomycin毒素が含まれる。他の適切な結合体化分子には、抗菌性溶解性ペプチド、例えば、CLIP、マガイニン2、メリチン、セクロピン、およびP18;リボヌクレアーゼRNアーゼ、DNアーゼI、ブドウ球菌エンテロトキシンA、ヨウシュヤマゴボウpokeweed抗ウイルスタンパク質、ジフテリン毒素、およびシュードモナス属エンドトキシンが含まれる。例えば、PastanetalCell476411986およびGoldenbergCalifACancerJournalforClinicians44431994を参照されたい。本明細書の他の場所で説明されるように本発明のHER2抗体と組み合わせて投与され得る治療剤、例えば、抗癌サイトカインまたはケモカインは、本発明の抗体と結合体化するのに有用な治療部分の候補である。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、結合体化された核酸または核酸関連分子を含む。1つのこのような態様において、結合体化される核酸は、細胞傷害性リボヌクレアーゼ、アンチセンス核酸、抑制性RNA分子例えば、siRNA分子、または免疫賦活性核酸例えば、免疫賦活性CpGモチーフ含有DNA分子である。別の態様において、本発明のHER2抗体はアプタマーまたはリボザイムに結合体化される。1つの態様において、1つまたは複数の放射標識アミノ酸を含むHER2抗体が提供される。放射標識されたHER2抗体は診断目的および治療目的で使用することができる放射標識分子との結合体化は別の可能性のある特徴である。ポリペプチドの標識の非限定的な例には、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、および125I、131I、ならびに186Reが含まれる。1つの態様において、前記抗体は、放射性同位体または放射性同位体含有キレートと結合体化される。例えば、前記抗体は、キレート剤リンカー、例えばDOTA、DTPA、チウキセタンと結合体化することができる。キレート剤リンカーがあると、抗体と放射性同位体との複合体化が可能になる。前記抗体は同様にまたは代替として、1つまたは複数の放射標識アミノ酸または他の放射標識分子を含んでもよくまたはそれらと結合体化されてもよい。放射標識されたCD74Abは診断目的および治療目的で使用することができる。放射性同位体の非限定的な例には、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、125I、111In、131I、186Re、213Bs、225Ac、および227Thが含まれる。HER2抗体はまた、例えば、循環半減期を延ばすために、ポリマーと共有結合することによって化学修飾されてもよい。例示的なポリマーおよびポリマーをペプチドに取り付ける方法は、例えば、US4766106、US4179337、US4495285、およびUS4609546に例示されている。さらなるポリマーには、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコールPEG例えば、約1000~約40000、例えば、約2000~約20000の分子量を有するPEGが含まれる。HunteretalNature1449451962、DavidetalBiochemistry1310141974、PainetalJImmunolMeth402191981、およびNygrenJHistochemandCytochem304071982に記載の方法を含む、HER2抗体を結合体化分子、例えば前記の結合体化分子と結合体化するための、当技術分野において公知の任意の方法を使用することができる。このような抗体は、他の部分をHER2抗体またはその断片例えば、HER2抗体H鎖またはL鎖のN末端側またはC末端側を化学的に結合体化することによって作製することができる例えば、AntibodyEngineeringHandbook編集OsamuKanemitsu出版社ChijinShokan1994を参照されたい。このような結合体化された抗体誘導体はまた、適切な場所にある内部の残基または糖における結合体化によって作製することもできる。前記薬剤は、本発明のHER2抗体に直接的または間接的に結合されてもよい。第2の薬剤の間接的な結合の一例は、スペーサー部分を介した、抗体にあるシステイン残基またはリジン残基への結合である。1つの態様において、HER2抗体は、スペーサーまたはリンカーを介して、インビボで活性化されて治療用薬物になることができるプロドラッグ分子と結合体化される。投与後、スペーサーまたはリンカーは、腫瘍細胞関連酵素または他の腫瘍特異的状態によって切断され、これによって活性薬物が形成される。このようなプロドラッグ技術およびリンカーの例は、SyntargaBVらによるWO02083180、WO2004043493、WO2007018431、WO2007089149、およびWO2009017394に記載されている。適切な抗体プロドラッグ技術およびデュオカルマイシン類似体は米国特許第6989452号Medarexにおいても見られる。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、キレート剤リンカー、例えばチウキセタンに取り付けられる。キレート剤リンカーがあると、抗体と放射性同位体との結合体化が可能になる。二重特異性抗体さらなる局面において、本発明は、本明細書前記に記載の本発明のHER2抗体に由来する第1の抗原結合部位と、例えばヒトエフェクター細胞、ヒトFc受容体、T細胞受容体、B細胞受容体に対する結合特異性またはHER2の非重複エピトープに対する結合特異性といった異なる結合特異性を有する第2の抗原結合部位とを含む、二重特異性分子、すなわち例えば実施例14に記載のように試験された時に、第1の抗原結合部位および第2の抗原結合部位がHER2との結合において互いにクロスブロックしない二重特異性抗体に関する。本発明の例示的な二重特異性抗体分子は以下を含む:iHER2に対する特異性を有する抗体と、第2の標的に対する特異性を有するもう1つの抗体が結合体化されている2つの抗体;iiHER2に特異的な1本の鎖またはアームおよび第2の分子に特異的な第2の鎖またはアームを有する1つの抗体;iiiHER2および第2の分子に対する特異性を有する単鎖抗体、例えば、余分なペプチドリンカーによって直列に連結された2本のscFvを介した単鎖抗体;ivそれぞれの軽鎖および重鎖が短いペプチド結合を介して直列に2つの可変ドメインを含む、二重可変ドメイン抗体DVDIgWuetalGenerationandCharacterizationofaDualVariableDomainImmunoglobulinDVDIg商標MoleculeIn:AntibodyEngineeringSpringerBerlinHeidelberg2010;v化学的に連結された二重特異性Fab2断片;vi2つの単鎖ダイアボディが融合して、標的抗原のそれぞれに対して2つの結合部位を有する四価二重特異性抗体となった、Tandab;viiscFvとダイアボディdiabodyとが組み合わされて多価分子となった、フレキシボディflexibody;viiiプロテインキナーゼAにある二量体化ドッキングドメインに基づく、いわゆるドックロックdockandlock分子、これをFabに適用すると、2つ同一のFab断片が異なる1つのFab断片と連結した三価二重特異性結合タンパク質を得ることができる;ixいわゆる、スコーピオンScorpion分子、例えば、2つのscFvがヒトFc領域の両末端と融合しているスコーピオン分子;ならびにxダイアボディ。1つの態様において、本発明の二重特異性抗体は、本発明に記載のような、制御されたFabアーム交換によって得られたダイアボディ、クロスボディ、または二重特異性抗体である。二重特異性抗体の調製に有用なプラットフォームの例には、BiTEMicromet、DARTMacroGenics、FcabおよびMab2Fstar、Fcが操作されたIgG1Xencor、またはDuoBodyFabアーム交換、Genmab、本願に基づくが含まれるが、これに限定されない。異なるクラスの二重特異性抗体の例には、分子の一方の側が少なくとも1つの抗体のFab領域またはFab領域の一部を含み、分子の反対側が少なくとも1つの他の抗体のFab領域またはFab領域の一部を含む、非対称IgG様分子;このクラスでは、Fc領域における非対称性も存在してよく、分子の2つの部分を特異的に連結するのに用いられてもよい;分子の2つの側がそれぞれ、少なくとも2つの異なる抗体のFab領域またはFab領域の一部を含む、対称性IgG様分子;完全長IgG抗体が余分なFab領域またはFab領域の一部と融合している、IgG融合分子;単鎖Fv分子または安定化ダイアボディがFcγ領域またはその一部と融合している、Fc融合分子;異なるFab断片が融合して一緒になっている、Fab融合分子;異なる単鎖Fv分子または異なるダイアボディが互いに、または別のタンパク質もしくは担体分子と融合している、ScFvベース分子およびダイアボディベース分子が含まれるが、これに限定されない。非対称IgG様分子の例には、TriomabQuadromaTrionPharmaFreseniusBiotech、KnobsintoHolesGenentech、CrossMAbsRocheおよびelectrostaticallymatchedAmgen、LUZYGenentech、StrandExchangeEngineeredDomainbodyEMDSerono、BiclonicMerus、ならびにDuoBodyGenmabASが含まれるが、これに限定されない。対称性IgG様分子の例には、DualTargetingDTIgGSKDomantis、TwoinoneAntibodyGenentech、CrosslinkedMabsKarmanosCancerCenter、mAb2FStar、およびCovXbodyCovXPfizerが含まれるが、これに限定されない。IgG融合分子の例には、DualVariableDomainDVDIgAbbott、IgG様BispecificImCloneEliLilly、Ts2AbMedImmuneAZおよびBsAbZymogenetics、HERCULESBiogenIdec、ならびにTvAbRocheが含まれるが、これに限定されない。Fc融合分子の例には、ScFvFcFusionsAcademicInstitution、SCORPIONEmergentBioSolutionsTrubion、ZymogeneticsBMS、DualAffinityRetargetingTechnologyFcDARTMacroGenics、およびDualScFv2FabNationalResearchCenterforAntibodyMedicineChinaが含まれるが、これに限定されない。クラスV二重特異性抗体の例には、Fab2MedarexAMGEN、DualActionまたはBisFabGenentech、DockandLockDNLImmunoMedics、BivalentBispecificBiotecnol、およびFabFvUCBCelltechが含まれるが、これに限定されない。ScFvベース分子およびダイアボディベース分子の例には、BispecificTCellEngagerBiTEMicromet9TandemDiabodyTandabAffimed、DualAffinityRetargetingTechnologyDARTMacroGenics、SinglechainDiabodyAcademic、TCRlikeAntibodiesAITReceptorLogics、HumanSerumAlbuminScFvFusionMerrimack、およびCOMBODYEpigenBiotechが含まれるが、これに限定されない。1つの態様において、第2の分子は、癌抗原腫瘍関連抗原、例えば、癌胎児抗原CEA、前立腺特異的抗原PSA、RAGE腎臓抗原、αフェトプロテイン、CAMEL黒色腫においてCTLによって認識される抗原、CT抗原例えば、MAGEB5、B6、C2、C3、およびD;Mage12;CT10;NYESO1、SSX2、GAGE、BAGE、MAGE、およびSAGE、ムチン抗原例えば、MUC1、ムチンCA125など、ガングリオシド抗原、チロシナーゼ、gp75、cMet、Cmyc、Mart1、MelanA、MUM1、MUM2、MUM3、HLAB7、およびEpCAM、または癌関連インテグリン、例えばα5β3インテグリンである。別の態様において、第2の分子は、T細胞抗原およびまたはNK細胞抗原、例えば、CD3またはCD16である。別の態様において、第2の分子は、血管新生因子または他の癌関連増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子、上皮細胞成長因子、アンジオゲニンまたはこれらの任意の受容体、特に、癌進行に関連する受容体例えば、HER受容体の別の受容体;HER1、HER3、またはHER4である。1つの態様において、第2の抗原結合部位は、本発明の抗体が結合するHER2部位とは異なる部位、好ましくは、非ブロッキング部位に結合する。例えば、第2の分子は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、F5、もしくはC1に由来してもよく、またはトラスツズマブ、ペルツズマブ、F5、もしくはC1のHER2結合をクロスブロックしてもよい。二重特異性抗体を調製する方法は、WO2008119353Genmabに記載され、vanderNeutKolfschotenetalScience2007Sep14;3175844:15547において報告された方法を含み、例えば、本発明の実施例20に記載のように行われてもよい。核酸配列、ベクター、および宿主細胞さらなる局面において、本発明は、本発明の抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸配列、例えば、DNA配列に関する。1つの態様において、核酸配列は、SEQIDNO:1、5、8、12、15、19、22、26、29、32、35、39、42、46、49、53、56、60、63、67、70、74、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、および126からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードする。別の特定の態様において、核酸配列は、SEQIDNO:1、8、15、22、29、35、42、49、56、63、70、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、および125からなる群より選択されるVHアミノ酸配列をコードする。別の特定の態様において、核酸配列は、SEQIDNO:5、12、19、26、32、39、46、53、60、67、74、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、および126からなる群より選択されるVLアミノ酸配列をコードする。なおさらなる局面において、本発明は、本発明の抗体をコードする、発現ベクターまたは一組の発現ベクターに関する。抗体の重鎖および軽鎖は同じベクターによってコードされてもよく、異なるベクターによってコードされてもよい。このような発現ベクターは、本発明の抗体の組換え産生に使用することができる。1つの態様において、本発明の発現ベクターは、SEQIDNO:1、5、8、12、15、19、22、26、29、32、35、39、42、46、49、53、56、60、63、67、70、74、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、および126からなる群より選択されるアミノ酸配列の1つまたは複数をコードするヌクレオチド配列を含む。別の特定の態様において、本発明の発現ベクターは、SEQIDNO:1、8、15、22、29、35、42、49、56、63、70、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、および125からなる群より選択されるVHアミノ酸配列の1つまたは複数をコードするヌクレオチド配列を含む。別の特定の態様において、本発明の発現ベクターは、SEQIDNO:5、12、19、26、32、39、46、53、60、67、74、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、および126からなる群より選択されるVLアミノ酸配列の1つまたは複数をコードするヌクレオチド配列を含む。さらなる態様において、発現ベクターは、抗体、例えばヒト抗体の軽鎖、重鎖、または軽鎖および重鎖の両方の定常領域をコードするヌクレオチド配列をさらに含む。本発明の文脈において発現ベクターは、染色体核酸ベクター、非染色体核酸ベクター、および合成核酸ベクター適切な一組の発現制御エレメントを含む核酸配列を含む任意の適切なベクターでよい。このようなベクターの例には、SV40、細菌プラスミド、ファージDNA、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドおよびファージDNAの組み合わせに由来するベクター、ならびにウイルス核酸RNAまたはDNAベクターの誘導体が含まれる。1つの態様において、HER2抗体をコードする核酸は、例えば直鎖発現エレメントを含む、裸のDNAベクターもしくはRNAベクター例えば、SykesandJohnstonNatBiotech17355591997に記載、圧縮された核酸ベクター例えば、US6077835および/もしくはWO0070087に記載、プラスミドベクター、例えばpBR322、pUC1918、もしくはpUC118119、midge最小サイズ核酸ベクター例えば、SchakowskietalMolTher37938002001に記載、または沈殿された核酸ベクター構築物、例えばCaPO4によって沈殿された構築物例えば、WO0046147、BenvenistyandReshefPNASUSA839551551986、WigleretalCell147251978、およびCoraroandPearsonSomaticCellGenetics76031981に記載の中に含まれる。このような核酸ベクターおよびその利用は当技術分野において周知である例えば、US5589466およびUS5973972を参照されたい。本発明の抗体のための例示的な発現ベクターは、実施例2および3にも記載する。1つの態様において、ベクターは、細菌細胞におけるHER2抗体の発現に適している。このようなベクターの例には、発現ベクター、例えばBlueScriptStratagene、pINベクターVanHeekeSchusterJBiolChem264550355091989、pETベクターNovagenMadisonWIなどが含まれる。同様にまたは代替として、発現ベクターは、酵母系における発現に適したベクターでもよい。酵母系における発現に適した任意のベクターを使用することができる。適切なベクターには、例えば構成的プロモーターまたは誘導性プロモーター、例えばα因子、アルコールオキシダーゼ、およびPGHを含むベクターが含まれるFAusubeletaledCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenePublishingandWileyInterScienceNewYork1987、およびGrantetalMethodsinEnzymol1535165441987に概説。同様にまたは代替として、発現ベクターは、哺乳動物細胞における発現に適したベクター、例えば選択マーカーとしてグルタミン合成酵素を含むベクター、例えばBebbington1992BiotechnologyNY10:169175に記載のベクターでもよい。核酸および/またはベクターはまた、分泌配列/局在化配列をコードする核酸配列を含んでもよい。分泌配列/局在化配列は、ポリペプチド、例えば新生ポリペプチド鎖を細胞周辺腔にまたは細胞培地中に標的化することができる。このような配列は当技術分野において公知であり、分泌リーダーまたはシグナルペプチドを含む。本発明の発現ベクターでは、HER2抗体をコードする核酸は、任意の適切なプロモーター、エンハンサー、および他の発現促進エレメントを含んでもよく、これらと結合してもよい。このようなエレメントの例には、強発現プロモーター例えば、ヒトCMVIEプロモーター/エンハンサーならびにRSV、SV40、SL33、MMTV、およびHIVLTRプロモーター、有効なポリA終結配列、大腸菌におけるプラスミド産物用の複製起点、選択マーカーとしての抗生物質耐性遺伝子、ならびに/または便利なクローニングサイト例えば、ポリリンカーが含まれる。核酸はまた、構成的プロモーターと相対する誘導性プロモーター、例えばCMVIEを含んでもよい。1つの態様において、HER2抗体をコードする発現ベクターは、ウイルスベクターを介して、宿主細胞もしくは宿主動物の中に配置されてもよく、および/または宿主細胞もしくは宿主動物に送達されてもよい。なおさらなる局面において、本発明は、本明細書において定義される本発明の抗体を産生する、組換え真核宿主細胞または原核宿主細胞、例えばトランスフェクトーマに関する。宿主細胞の例には、酵母細胞、細菌細胞、および哺乳動物細胞、例えばCHO細胞またはHEK細胞が含まれる。例えば、1つの態様において、本発明は、本発明のHER2抗体の発現をコードする配列を含む核酸が細胞ゲノムに安定に組み込まれている細胞を提供する。別の態様において、本発明は、本発明のHER2抗体の発現をコードする配列を含む、非組み込み型核酸、例えばプラスミド、コスミド、ファージミド、または直鎖発現エレメントを含む細胞を提供する。さらなる局面において、本発明は、本明細書において定義される本発明の抗体を産生するハイブリドーマに関する。なおさらなる局面において、本発明は、ヒト重鎖およびヒト軽鎖をコードする核酸を含む、トランスジェニック非ヒト動物または植物に関し、ここで、このような動物または植物は本発明の抗体を産生する。さらなる局面において、本発明は、本発明のHER2抗体を産生するための方法に関し、本方法は、a本明細書において前述された本発明のハイブリドーマまたは宿主細胞を培養する段階、およびb培地から本発明の抗体を精製する段階を含む。組成物さらなる主な局面において、本発明は、本明細書において定義されたHER2抗体、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物に関する。本発明の薬学的組成物は、本発明の1種類の抗体または本発明の異なる抗体の組み合わせを含有してもよい。薬学的組成物は、従来の技法、例えばRemington:TheScienceandPracticeofPharmacy19thEditionGennaroEdMackPublishingCoEastonPA1995に開示される技法に従って処方することができる。本発明の薬学的組成物は、例えば希釈剤、増量剤、塩、緩衝液、界面活性剤例えば、非イオン性界面活性剤、例えばTween20もしくはTween80、安定剤例えば、糖もしくはタンパク質を含まないアミノ酸、防腐剤、組織固定液、可溶化剤、および/または薬学的組成物に含めるのに適した他の材料を含んでもよい。薬学的に許容される担体には、本発明の化合物と生理学的に適合する、任意のおよび全ての適切な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、酸化防止剤および吸収遅延剤などが含まれる。本発明の薬学的組成物において使用することができる適切な水性および非水性の担体の例には、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、エタノール、デキストロース、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど、および適切なその混合物、植物油、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、トラガカントゴムおよび注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチル、ならびに/または様々な緩衝液が含まれる。薬学的に許容される担体には、滅菌した水溶液または分散液、および滅菌した注射液または分散液を即時調製するための滅菌した散剤が含まれる。適切な流動性は、例えばコーティング材料、例えばレシチンを使用することによって、分散液の場合、必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。本発明の薬学的組成物はまた、薬学的に許容される酸化防止剤、例えば、1水溶性の酸化防止剤、例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど;2油溶性の酸化防止剤、例えばアスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロールなど;および3金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸EDTA、ソルビトール、酒石酸、リン酸などを含んでもよい。本発明の薬学的組成物はまた、組成物中に、等張剤、例えば糖、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、グリセロール、または塩化ナトリウムを含んでもよい。本発明の薬学的組成物はまた、薬学的組成物の貯蔵寿命または有効性を増強することができる、選択された投与経路に適した1種類または複数種の佐剤、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、防腐剤、または緩衝液を含んでもよい。本発明の化合物は、急速に放出されないように化合物を保護する担体、例えば移植片、経皮パッチ、およびマイクロカプセルに閉じ込めた送達系を含む徐放製剤を用いて調製されてもよい。このような担体は、ゼラチン、モノステアリン酸グリセリン、ジステアリン酸グリセリン、生分解性生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のみもしくはポリ乳酸とろう、または当技術分野において周知の他の材料を含んでもよい。このような製剤を調製するための方法は一般的に当業者に公知である。滅菌注射液は、必要とされる量の活性化合物を、必要に応じて、例えば前記で列挙された成分の1つまたは組み合わせと共に適切な溶媒中に組み込んだ後に、滅菌精密濾過を行うことによって調製することができる。一般的に、分散液は、活性化合物を、基本分散媒、および必要とされる他の成分、例えば前記で列挙されたものを含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射液を調製するための滅菌散剤の場合、調製方法の例は、活性成分任意のさらなる望ましい成分の散剤をそれらの予め濾過滅菌した溶液から生じさせる真空乾燥およびフリーズドライ凍結乾燥である。薬学的組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、患者への毒性無く、特定の患者、組成物、および投与方法について望ましい治療応答を実現するのに有効な活性成分量を得るように変えることができる。選択される投与量レベルは、使用される本発明の特定の組成物またはそのアミドの活性、投与経路、投与時間、使用されている特定の化合物の排出速度、治療期間、使用される特定の組成物と併用される他の薬物、化合物、および/または材料、治療されている患者の年齢、性別、体重、状態、身体全体の健康、および前病歴、ならびに医学分野において周知の同様の要因を含む様々な薬物動態要因に依存する。薬学的組成物は、任意の適切な経路および方法によって投与することができる。1つの態様において、本発明の薬学的組成物は非経口投与される。本明細書で使用する非経口投与されるとは、経腸投与および局所投与以外の投与方法、通常、注射による投与方法を意味し、表皮、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、腱内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、硬膜外、および胸骨内への注射および注入を含む。1つの態様において、薬学的組成物は、静脈内または皮下への注射または注入によって投与される。使用さらなる主な局面において、本発明は、医薬として使用するための本発明のHER2抗体に関する。本発明のHER2抗体は多くの目的に使用することができる。特に、本発明の抗体は、転移性癌および難治性癌を含む様々な形態の癌の治療に使用することができる。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、原発性乳癌、転移性乳癌、および難治性乳癌を含む乳癌の治療に用いられる。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌、頭頚部の扁平上皮癌、子宮頚癌、膵臓癌、精巣癌、悪性黒色腫、および軟部組織癌例えば、滑膜肉腫からなる群より選択される癌の一形態の治療に用いられる。同様に本発明は、それを必要とする個体に、有効量の本発明の抗体、例えば抗体薬物結合体ADCを投与する段階を含む、HER2発現腫瘍細胞を死滅させるための方法に関する。1つの態様において、前記腫瘍細胞は、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌および頭頚部の扁平上皮癌、子宮頚癌、膵臓癌、精巣癌、悪性黒色腫、ならびに軟部組織癌例えば、滑膜肉腫からなる群より選択される癌の一形態に関与する。1つの態様において、腫瘍細胞は、HER2およびEGFRファミリーの少なくとも1つの他のメンバー、好ましくは、EGFR、HER3、またはEGFRおよびHER3の両方を同時発現する腫瘍細胞であり、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌子宮頚癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、軟部組織腫瘍例えば、滑膜肉腫、または膀胱癌に関与する腫瘍細胞である。1つの局面において、本発明は、HER2ならびにEGFRおよびまたはHER3を同時発現する腫瘍細胞を含む癌に罹患している対象を選択する段階、ならびに本発明の抗体、任意で、細胞傷害剤または薬物と結合体化されている抗体の形をした本発明の抗体を対象に投与する段階を含む、対象において癌を治療するための方法に関する。1つの態様において、対象は、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌子宮頚癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、軟部組織腫瘍例えば、滑膜肉腫、または膀胱癌からなる群より選択される癌に罹患している。また、本発明は、癌、例えば、前述された特定の癌適応症の1つを治療するための医用薬剤を調製するための、ヒトHER2に結合するモノクローナル抗体の使用に関する。さらに、本発明は、癌、例えば、前述された特定の癌適応症の1つの治療において使用するためのモノクローナル抗体に関する。本発明の治療方法のさらなる態様において、治療の効力は、療法中に、例えば所定の時点で、関連腫瘍細胞における腫瘍量またはHER2発現レベルを確かめることによってモニタリングされる。前記の治療方法および使用における投与計画は、最適な望ましい応答例えば、治療応答をもたらすように調節される。例えば、単一ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割量を、ある期間にわたって投与してもよく、その用量は、治療状況の難局により示されるように比例して減少または増加してもよい。投与の容易さおよび投薬の均一性のために単位剤形で非経口組成物が処方されてもよい。HER2抗体の効率的な投与量および投与計画は、治療しようとする疾患または状態に左右され、当業者によって決定することができる。本発明の化合物の治療的有効量の例示的で非限定的な範囲は、約01~100mg/kg、例えば約01~50mg/kg、例えば約01~20mg/kg、例えば約01~10mg/kg、例えば約05mg/kg、例えば約03mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、または約8mg/kgである。当技術分野において通常の知識を有する医師または獣医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、薬学的組成物において用いられるHER2抗体の用量を、望ましい治療効果を達成するのに必要とされる用量より低いレベルで開始し、望ましい効果が達成されるまで投与量を段々と増やすことができる。一般的に、本発明の組成物の適切な一日量は、治療効果を生じるのに有効な最小用量である化合物量である。投与は、例えば非経口投与、例えば静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与でもよい。1つの態様において、HER2抗体は、10~500mg/m2、例えば200~400mg/m2の毎週投与量で注入されることによって投与されてもよい。このような投与は、例えば1~8回、例えば3~5回繰り返されてもよい。投与は、2~24時間、例えば2~12時間の期間にわたる連続注入によって行われてもよい。1つの態様において、毒性副作用を弱めるために、HER2抗体は、長期間にわたる、例えば24時間を超える、ゆっくりとした連続注入によって投与されてもよい。1つの態様において、HER2抗体は、250mg~2000mg、例えば300mg、500mg、700mg、1000mg、1500mg、または2000mgの毎週投与量で、8回まで、例えば週に一回与えられる場合4~6回、投与されてもよい。このようなレジメンは、例えば6ヶ月後または12ヶ月後に、必要に応じて1回または複数回、繰り返されてもよい。投与量は、投与の際の本発明の化合物の血中量を測定することによって、例えば、生物学的試料を採取し、本発明のHER2抗体の抗原結合領域を標的とする抗イディオタイプ抗体を使用することによって決定または調節されてもよい。二重特異性抗体の効率的な投与および投与計画は、治療しようとする疾患または状態に左右され、当業者によって決定することができる。本発明の二重特異性抗体の治療的有効量の例示的な非限定的な範囲は、約01~100mgkg、例えば、約01~50mgkg、例えば、約01~20mgkg、例えば、約01~10mgkg、例えば、約05mgkg、例えば、約03mgkg、約1mgkg、約3mgkg、約5mgkg、または約8mgkgである。1つの態様において、HER2抗体は、維持療法によって、例えば、6ヶ月以上にわたって1週間に1回、投与することができる。HER2抗体はまた、癌を発症するリスクを下げるために、癌進行における事象の発生の開始を遅延するために、および/または癌が軽快している時の再発のリスクを下げるために予防的に投与することもできる。HER2抗体はまた併用療法で投与することができる、すなわち、治療しようとする疾患または状態に関連する他の治療剤と組み合わせて投与することができる。従って、1つの態様において、抗体を含有する医薬は、1種類または複数種のさらなる治療剤、例えば細胞傷害剤、化学療法剤、または抗血管新生剤と併用するためのものである。このような併用投与は同時に行われてもよく、別々に行われてもよく、連続して行われてもよい。同時投与の場合、薬剤は、適宜、1つの組成物として投与されてもよく、別々の組成物として投与されてもよい。従って、本発明はまた、前記のHER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供し、本方法は、下記の1種類または複数種のさらなる治療剤と組み合わせて本発明のHER2抗体を投与する段階を含む。1つの態様において、本発明は、対象において、HER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供し、本方法は、治療的有効量の本発明のHER2抗体、および任意で少なくとも1種類のさらなる化学療法剤、またはHER2抗体とは異なるエピトープに結合する抗体を、障害の治療を必要とする対象に投与する段階を含む。1つの態様において、本発明は、癌を治療または予防するための方法を提供し、本方法は、治療的有効量の本発明のHER2抗体および少なくとも1種類のさらなる化学療法剤を、癌の治療または予防を必要とする対象に投与する段階を含む。1つの態様において、このようなさらなる治療剤は、代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、6メルカプトプリン、6チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、5フルオロウラシル、デカルバジンdecarbazine、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、またはクラドリビンにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、アルキル化剤、例えばメクロレタミン、チオエパthioepa、クロランブシル、メルファラン、カルムスチンBSNU、ロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジンDTIC、プロカルバジン、マイトマイシンC、シスプラチンおよび他の白金誘導体、例えばカルボプラチンにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、有糸分裂阻害剤、例えばタキサン、例えばドセタキセルおよびパクリタキセル、ならびにビンカアルカロイド、例えばビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびビノレルビンにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、例えばトポテカンもしくはイリノテカン、または細胞分裂停止薬、例えばエトポシドおよびテニポシドにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、増殖因子阻害剤、例えばErbB1EGFR阻害剤例えば、EGFR抗体、例えばザルツムマブ、セツキシマブ、パニツムマブもしくはニモツズマブnimotuzumab、または他のEGFR阻害剤、例えばゲフィチニブもしくはエルロチニブ、ErbB2HER2/neuの別の阻害剤例えば、HER2抗体、例えばトラスツズマブ、トラスツズマブDM1、またはペルツズマブ、あるいはEGFRおよびHER2両方の阻害剤、例えばラパチニブにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、例えばイマチニブGlivec、GleevecSTI571またはラパチニブ、PTK787/ZK222584により選択されてもよい。別の態様において、本発明は、対象において、HER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供し、本方法は、治療的有効量の本発明のHER2抗体、ならびに血管形成、新血管新生、および/または他の血管新生の少なくとも1種類の阻害剤を、障害の治療を必要とする対象に投与する段階を含む。このような血管形成阻害剤の例は、ウロキナーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤例えば、マリマスタット、ネオバスタットneovastat、BAY129566、AG3340、BMS275291、および類似の薬剤、内皮細胞の遊走および増殖の阻害剤例えば、TNP470、スクアラミン、2メトキシエストラジオール、コンブレタスタチン、エンドスタチン、アンギオスタチン、ペニシラミン、SCH66336ScheringPloughCorpMadisonNJ、R115777JanssenPharmaceuticaIncTitusvilleNJ、および類似の薬剤、血管新生増殖因子のアンタゴニスト例えば、ZD6474、SU6668、血管新生剤および/またはその受容体例えば、VEGF例えば、ベバシズマブ、bFGF、およびアンジオポエチン1に対する抗体、サリドマイド、サリドマイド類似体例えば、CC5013、Sugen5416、SU5402、抗血管新生リボザイム例えば、アンギオザイムangiozyme、インターフェロンα例えば、インターフェロンα2a、スラミン、および類似の薬剤、VEGFRキナーゼ阻害剤および他の抗血管新生性のチロシンキナーゼ阻害剤例えば、SUO11248、内皮特異的インテグリン/生存シグナル伝達の阻害剤例えば、ビタキシンvitaxinおよび類似の薬剤、銅アンタゴニスト/キレート剤例えば、テトラチオモリブデートtetrathiomolybdate、カプトプリル、および類似の薬剤、カルボキシアミドトリアゾールCAI、ABT627、CM101、インターロイキン12IL12、IM862、PNU145156E、ならびに血管形成を阻害するヌクレオチド分子例えば、アンチセンスVEGFcDNA、アンギオスタチンをコードするcDNA、p53をコードするcDNA、および欠損VEGF受容体2をコードするcDNAである。血管形成、新血管新生、および/または他の血管新生のこのような阻害剤の他の例は、抗血管新生性のヘパリン誘導体例えば、ヘペリナーゼheperinaseIII、テモゾロミド、NK4、マクロファージ遊走阻害因子、シクロオキシゲナーゼ2阻害剤、低酸素誘導性因子1の阻害剤、抗血管新生性のダイズイソフラボン、オルチプラズ、フマギリンおよびその類似体、ソマトスタチン類似体、多流酸ペントサン、テコガランナトリウム、ダルテパリン、タムスタチン、トロンボスポンジン、NM3、コンブレスタチンcombrestatin、カンスタチンcanstatin、アバスタチンavastatin、他の標的に対する抗体、例えば抗αv/β3インテグリンおよび抗キニノスタチン抗体である。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗癌免疫原、例えば癌抗原/腫瘍関連抗原例えば、上皮細胞接着分子EpCAM/TACSTD1、ムチン1MUC1、癌胎児抗原CEA、腫瘍関連糖タンパク質72タグ72、gp100、MelanA、MART1、KDR、RCAS1、MDA7、癌関連ウイルスワクチン例えば、ヒトパピローマウイルスワクチン、または腫瘍由来熱ショックタンパク質でもよい。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗癌性サイトカイン、ケモカイン、またはその組み合わせでもよい。適切なサイトカインおよび増殖因子の例には、IFNγ、IL2、IL4、IL6、IL7、IL10、IL12、IL13、IL15、IL18、IL23、IL24、IL27、IL28a、IL28b、IL29、KGF、IFNα例えば、INFα2b、IFNβ、GMCSF、CD40L、Flt3リガンド、幹細胞因子、アンセスチム、およびTNFαが含まれる。適切なケモカインは、GluLeuArgELRネガティブケモカイン、例えばヒトCXCおよびCCケモカインファミリーからのIP10、MCP3、MIG、およびSDF1αを含んでもよい。適切なサイトカインには、サイトカイン誘導体、サイトカイン変種、サイトカイン断片、およびサイトカイン融合タンパク質が含まれる。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、細胞周期制御/アポトーシス制御因子または制御剤でもよい。細胞周期制御/アポトーシス制御因子は、細胞周期制御/アポトーシス制御因子を標的とし、調節する分子、例えば、icdc25例えば、NSC663284、ii細胞周期を過度に刺激するサイクリン依存性キナーゼ例えば、フラボピリドールL868275、HMR1275、7ヒドロキシスタウロスポリンUCN01、KW2401、およびロスコビチンRロスコビチン、CYC202、ならびにiiiテロメラーゼモジュレーター例えば、BIBR1532、SOT095、GRN163、ならびに例えば、US6440735およびUS6713055に記載の組成物を含んでもよい。アポトーシス経路に干渉する分子の非限定的な例には、TNF関連アポトーシス誘発リガンドTRAIL/アポトーシス2リガンドApo2L、TRAIL受容体を活性化する抗体、IFN、およびアンチセンスBcl2が含まれる。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、ホルモン制御剤、例えば抗アンドロゲン療法および抗エストロゲン療法に有用な薬剤でもよい。このようなホルモン制御剤の例は、タモキシフェン、イドキシフェン、フルベストラント、ドロロキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ジエチルスチルベストロール、エチニルエストラジオール/エスチニルestinyl、抗アンドロゲン例えば、フルタミンドflutaminde/エルレキシンeulexin、プロゲスチン例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロキシプロゲステロン/プロベラ、酢酸メゲストロール/メゲース、副腎皮質ステロイド例えば、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、黄体形成ホルモン放出ホルモンおよびその類似体、ならびに他のLHRHアゴニスト、例えばブセレリンおよびゴセレリン、アロマターゼ阻害剤例えば、アナストラゾールanastrazole/アリミデックス、アミノグルテチミド/シトラデンcytraden、エキセメスタン、またはホルモン阻害剤例えば、オクトレオチド/サンドスタチンである。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗アネルギー剤、例えばCTLA4の活性をブロックする分子、例えばイピリムマブでもよい。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗癌性核酸または抗癌性抑制性RNA分子でもよい。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、分化誘導剤、レチノイン酸類似体例えば、オールトランスレチノイン酸、13cisレチノイン酸、および類似の薬剤、ビタミンD類似体例えば、セオカルシトールseocalcitolおよび類似の薬剤、ErbB3、ErbB4、IGFIR、インシュリン受容体、PDGFRa、PDGFRβ、Flk2、Flt4、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、TRKA、TRKC、RON例えば、抗RON抗体、Sea、Tie、Tie2、Eph、Ret、Ros、Alk、LTK、PTK7の阻害剤、および類似の薬剤である。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、エストラムスチンおよびエピルビシンである。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、HSP90阻害剤、例えば17アリルアミノゲルダナマイシン、腫瘍抗原、例えばPSA、CA125、KSAなどに対する抗体、インテグリン、例えばインテグリンβ1、またはVCAM阻害剤である。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、カルシニューリン阻害剤例えば、バルスポダールvalspodar、PSC833および他のMDR1またはp糖タンパク質阻害剤、TOR阻害剤例えば、シロリムス、エベロリムス、およびラパミンrapamcyin、ならびにリンパ球ホーミング機構の阻害剤例えば、FTY720、ならびに細胞シグナル伝達に作用する薬剤、例えば接着分子阻害剤例えば、抗LFAなどである。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、1種類または複数種の他の治療用抗体、例えば、オファツムマブ、ザノリムマブzanolimumab、ダラツムマブdaratumumab、ラニビズマブ、ニモツズマブnimotuzumab、パニツムマブ、hu806、ダクリズマブZenapax、バシリキシマブSimulect、インフリキシマブRemicade、アダリムマブHumira、ナタリズマブTysabri、オマリズマブXolair、エファリズマブRaptiva、およびまたはリツキシマブと併用するためのものである。別の態様において、本明細書に記載の2つ以上の異なる本発明の抗体は、疾患の治療のために併用される。特に興味深い組み合わせには2種類以上の非ブロッキング抗体が含まれる。このような併用療法によって、細胞1個あたり多数の抗体分子が結合することがあり、それによって、効力が増大する、例えば、補体媒介性溶解の活性化を介して効力が増大することがある。前記に加えて、本発明の併用療法の他の態様は、以下を含む:乳癌の治療の場合、HER2抗体またはその治療用結合体と、メトトレキセート、パクリタキセル、ドキソルビシン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ダウノルビシン、エピルビシン、5フルオロウラシル、ゲムシタビン、イクサベピロン、ムタマイシンmutamycin、ミトキサントロン、ビノレルビン、ドセタキセル、チオテパ、ビンクリスチン、カペシタビン、EGFR抗体例えば、ザルツムマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、もしくはニモツズマブnimotuzumab、または他のEGFR阻害剤例えば、ゲフィチニブまたはエルロチニブ、別のHER2抗体もしくはHER2結合体例えば、トラスツズマブ、例えば、トラスツズマブDM1もしくはペルツズマブ、EGFRおよびHER2両方の阻害剤例えば、ラパチニブとの併用、ならびにあるいはHER3阻害剤との併用;非小細胞肺癌の治療の場合、HER2抗体と、EGFR阻害剤、例えば、EGFR抗体、例えば、ザルツムマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、もしくはニモツズマブ、または他のEGFR阻害剤例えば、ゲフィチニブもしくはエルロチニブとの組み合わせ、あるいは別のHER2薬剤例えば、HER2抗体、例えば、トラスツズマブ、トラスツズマブDM1もしくはペルツズマブとの組み合わせ、あるいはEGFRおよびHER2両方の阻害剤、例えば、ラパチニブとの併用、あるいはHER3阻害剤との併用;結腸直腸癌の治療の場合、HER2抗体と、ゲムシタビン、ベバシズマブ、FOLFOX、FOLFIRI、XELOX、IFL、オキサリプラチン、イリノテカン、5FU/LV、カペシタビン、UFT、EGFR標的剤、例えばセツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ;VEGF阻害剤、またはチロシンキナーゼ阻害剤、例えばスニチニブより選択される1種類または複数種の化合物との併用;前立腺癌の治療の場合、HER2抗体と、ホルモン/抗ホルモン療法;例えば、抗アンドロゲン、黄体形成ホルモン放出ホルモンLHRHアゴニスト、および化学療法剤、例えばタキサン、ミトキサントロン、エストラムスチン、5FU、ビンブラスチン、およびイクサベピロンより選択される1種類または複数種の化合物との併用。放射線療法外科手術1つの態様において、本発明は、対象において、HER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供するものであり、この方法は、それを必要とする対象への、治療的有効量のHER2抗体、例えば本発明のHER2抗体および放射線療法の投与を含む。1つの態様において、本発明は、癌を治療または予防するための方法を提供するものであり、この方法は、それを必要とする対象への、治療的有効量のHER2抗体、例えば本発明のHER2抗体および放射線療法の投与を含む。1つの態様において、本発明は、放射線療法と組み合わせて投与される癌を治療するための薬学的組成物を調製するための、HER2抗体、例えば本発明のHER2抗体の使用を提供する。放射線療法は放射線を含む場合があり、または患者への放射性医薬品の関連する投与が提供される。放射線源は、治療を受けている患者の外部にあってもよく、内部にあってもよい放射線治療は、例えば外部ビーム放射線療法EBRTまたは近接照射療法BTの形をとってもよい。このような方法の実施において使用することができる放射性元素には、例えばラジウム、セシウム137、イリジウム192、アメリシウム241、金198、コバルト57、銅67、テクネチウム99、ヨウ素123、ヨウ素131、およびインジウム111が含まれる。さらなる態様において、本発明は、癌を治療または予防するための方法を提供し、本方法は、癌の治療または予防を必要とする対象に、治療的有効量のHER2抗体、例えば本発明のHER2抗体を外科手術と組み合わせて投与する段階を含む。診断用途本発明のHER2抗体は診断目的でも使用することができる。従って、さらなる局面において、本発明は、本明細書において定義されたHER2抗体を含む診断用組成物に関する。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、HER2を発現する活性化細胞が発病において積極的な役割を果たしている疾患を診断するために、HER2レベルまたは膜表面にHER2を含有する細胞のレベルを検出することによってインビボまたはインビトロで使用することができる。これは、例えば試験しようとする試料とHER2抗体とを、任意で対照試料と共に、抗体とHER2との複合体が形成する条件下で接触させることによって達成することができる。従って、さらなる局面において、本発明は、試料中のHER2抗原またはHER2を発現する細胞の存在を検出するための方法に関し、本方法は、試料と本発明のHER2抗体とを、抗体とHER2との複合体が形成する条件下で接触させる段階;および複合体が形成したかどうか分析する段階を含む。1つの態様において、前記方法はインビトロで行われる。さらに具体的には、本発明は、浸潤細胞および浸潤組織、ならびに本発明のHER2抗体によって標的化される他の細胞を特定および診断するための方法、ならびに治療処置の進行、治療後の状況、癌が発症するリスク、癌の進行などをモニタリングための方法を提供する。このような技法において用いられるHER2抗体および/または二次抗体に適した標識は当技術分野において周知である。さらなる局面において、本発明は、本発明のHER2抗体または本発明の二重特異性分子;およびキットを使用するための説明書を含む、試料中のHER2抗原またはHER2を発現する細胞の存在を検出するためのキットに関する。1つの態様において、本発明は、HER2抗体、およびHER2抗体とHER2との結合を検出するための1種類または複数種の試薬を含む容器を含む、癌を診断するためのキットを提供する。試薬は、例えば蛍光タグ、酵素タグ、または他の検出可能なタグを含んでもよい。試薬はまた、二次もしくは三次の抗体または酵素反応用試薬を含んでもよく、酵素反応によって、視覚化可能な産物が産生される。抗イディオタイプ抗体さらなる局面において、本発明は、本明細書に記載のように本発明のHER2抗体に結合する抗イディオタイプ抗体に関する。抗イディオタイプId抗体は、概して、抗体の抗原結合部位に関連する独特の決定基を認識する抗体である。Id抗体は、HER2mAbの供給源と同じ種および遺伝子型の動物を、抗Idの抗原となるmAbで免疫することによって調製することができる。免疫された動物は、典型的には、免疫用抗体のイディオタイプ決定基に対する抗体抗Id抗体を産生することによって、これらのイディオタイプ決定基を認識し、イディオタイプ決定基に応答することができる。抗Id抗体はまた、さらに別の動物において免疫応答を誘導するための免疫原として使用して、いわゆる抗抗Id抗体を産生することもできる。抗抗Idは、抗Idを誘導した最初のmAbとエピトープが同一である可能性がある。従って、mAbのイディオタイプ決定基に対する抗体を用いることによって、特異性が同一の抗体を発現する他のクローンを特定することができる。本発明は以下の実施例によってさらに例示される。実施例は、本発明の範囲を限定するものであると解釈してはならない。本発明は以下の実施例によってさらに例示される。実施例は、本発明の範囲を限定するものであると解釈してはならない。実施例1HER2およびHER2変種のための発現構築物完全長HER21255aa、SwissprotP04626、HER2細胞外ドメインECDHer2ECDHis、C末端His6タグを有するaa1~653、天然HER2スプライスバリアントHer2delex16、エキソン16欠失から生じ、aa633~648を欠く、および切断型HER2受容体Her2stumpy、aa648~1256を発現させるために、完全にコドン最適化された構築物を作製した。これらの構築物は、クローニングに適した制限部位および最適Kozak配列KozakMGene1999;2342:187208を含んだ。これらの構築物を、哺乳動物発現ベクターpEE134LonzaBiologics;BebbingtonCRetalBiotechnologyNY1992;102:16975にクローニングし、構築物が正しいことを確認するために全配列決定した。実施例2ペルツズマブ、C1、およびF5のための発現構築物HEK細胞においてIgG1抗体ペルツズマブ、C1、およびF5の重鎖HCおよび軽鎖LCを発現させるために、完全にコドン最適化された構築物を作製した。これらの構築物によってコードされる可変領域は、ペルツズマブ重鎖および軽鎖については米国特許第6949245号ならびにC1およびF5重鎖および軽鎖については米国特許第7244826号と同一である。C1およびF5については、ヒトIgG1重鎖アロタイプfの完全にコドン最適化された定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターp33G1f、ヒトκ軽鎖またはヒトλ軽鎖の完全にコドン最適化された定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターp33Kまたはp33LpcDNA33Invitrogenを使用した。ペルツズマブについては、ヒトIgG1重鎖アロタイプfの完全にコドン最適化された定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターpG1fpEE124LonzaBiologics、およびヒトκ軽鎖の完全にコドン最適化された定常領域を含有するpKappapEE64LonzaBiologicsを使用した。トラスツズマブHerceptin登録商標は、例えば、米国特許第7632924号に記載の重鎖配列および軽鎖配列を用いて同じやり方で生成することができる。実施例3HEK293細胞またはCHO細胞における一過性発現Freestyle商標293F懸濁増殖および既知組成のFreestyle培地に順応させたHEK293サブクローン、HEK293F細胞をInvitrogenから入手し、適切なプラスミドDNAと293fectinInvitrogenを用いて製造業者の説明書に従ってトランスフェクトした。抗体発現の場合、適切な重鎖発現ベクターおよび軽鎖発現ベクターを同時発現させた。pEE134Her2、pEE134Her2delex16、およびpEE134Her2stumpyを、Freestyle商標CHOSInvitrogen細胞株においてFreestyleMAXトランスフェクション試薬Invitrogenを用いて一過性にトランスフェクトした。HER2およびHer2delex16の発現を、下記のようにFACS分析によって試験した。実施例4NSOにおける安定ポリクローナルプール発現pEE134Her2、pEE134Her2delex16、およびpEE134Her2stumpyを、ヌクレオフェクションnucleofectionAmaxaによってNSO細胞に安定にトランスフェクトした。組み込まれたグルタミン合成酵素選択マーカーBarnesLMetalCytotechnology2000;322:109123に基づくグルタミン依存性増殖による選択後に、安定にトランスフェクトされた細胞のプールを樹立した。実施例5Hisタグ化HER2の精製Her2ECDHisをHEK293F細胞において発現させた。Her2ECDHisの中にあるHisタグは、固定化金属アフィニティクロマトグラフィーを用いた精製を可能にした。なぜなら、Hisタグ化タンパク質は樹脂ビーズに強く結合するが、培養上清中に存在する他のタンパク質は強く結合しないからである。このプロセスでは、クロマトグラフィー樹脂上に固定化されたキレート剤にCo2カチオンが充填されている。バッチモードですなわち、溶液中で、Her2ECDHisを含有する上清を樹脂とインキュベートした。インキュベーション後、ビーズを上清から取り出し、カラムに詰めた。弱く結合しているタンパク質を除去するためにカラムを洗浄した。次いで、強く結合しているHer2ECDHisタンパク質を、HisとCo2との結合において競合するイミダゾールを含有する緩衝液で溶出した。脱塩カラムにおける緩衝液交換によって溶出剤をタンパク質から除去した。実施例6トランスジェニックマウスの免疫手順抗体001、019、021、025、027、032、033、035、036、049、050、051、054、055、084、091、094、098、100、105、123、および124は以下の免疫から得られた。3匹の雌HCo12マウス、1匹の雄HCo12BalbCマウスおよび2匹の雌HCo12BalbCマウス、1匹の雄HCo17マウスおよび1匹の雄HCo20マウスMedarexSanJoseCAUSAに、Her2ECDを一過性にトランスフェクトした5x106個のNSO細胞を腹腔内IPに、20μgのハプテンキーホールリンペットヘモシアニンKLH結合Her2ECDHisタンパク質を尾の付け根の皮下SCに14日の間隔で交互に用いて免疫した。マウス1匹当たり最大8回の免疫4回のIP免疫および4回のSC免疫を行った。細胞を用いた初回免疫は、完全フロイントアジュバントCFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAに溶解して行った。他の全ての免疫については、細胞をPBSに溶解してIP注射した。KLH結合Her2ECDは、不完全フロイントアジュバントIFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAを用いてSC注射した。抗体125、127、129、132、152、153、および159は以下の免疫から得られた。1匹の雄HCo12BalbCマウスおよび2匹の雌HCo12BalbCマウス、1匹の雌HCo20マウス、ならびに1匹の雌HCo12マウスMedarexに、Her2delex16を一過性にトランスフェクトした5x106個のNSO細胞を腹腔内に、20μgのハプテンキーホールリンペットヘモシアニンKLH結合Her2ECDHisタンパク質を尾の付け根の皮下に14日の間隔で交互に用いて免疫した。マウス1匹当たり最大8回の免疫4回のIP免疫および4回のSC免疫を行った。細胞を用いた初回免疫は、完全フロイントアジュバントCFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAに溶解して行った。他の全ての免疫については、細胞をPBSに溶解してIP注射した。KLH結合Her2ECDは、不完全フロイントアジュバントIFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAを用いてSC注射した。抗体143、160、161、162、166、および169は以下の免疫から得られた。1匹の雌Hcol2マウスおよび1匹の雄Hcol2マウス、1匹の雌Hcol2BalbCマウス、1匹の雄HCo17マウスおよび1匹の雄HCo20マウスMedarexに、20μgのハプテンキーホールリンペットヘモシアニンKLH結合Her2ECDHisタンパク質を腹腔内および尾の付け根の皮下に14日の間隔で交互に用いて免疫した。マウス1匹当たり最大8回の免疫4回のIP免疫および4回のSC免疫を行った。初回免疫は、完全フロイントアジュバントCFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAに溶解して腹腔内に行った。他の免疫を、不完全フロイントアジュバントIFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAを用いて注射した。抗原特異的FMATスクリーニングアッセイ実施例7に記載においてTC1014Her2、TC1014Her2delex16、またはTC1014Her2stumpyに対する力価が少なくとも2回連続して認められたマウスを陽性とみなし、融合した。実施例7:均質抗原特異的スクリーニングアッセイ免疫マウスの血清中またはHuMabヒトモノクローナル抗体ハイブリドーマもしくはトランスフェクトーマの培養上清中にあるHER2抗体の存在を、均質抗原特異的スクリーニングアッセイ4クワドラントfourquadrantによってFluorometricMicrovolumeAssayTechnologyFMAT;AppliedBiosystemsFosterCityCAUSAを用いて確かめた。このために、4種類の細胞ベースのアッセイの組み合わせを使用した。TC1014Her2HER2受容体を一過性に発現するHEK293F細胞;前記のように作製された、TC1014Her2delex16Her2delexの細胞外ドメインを一過性に発現するHEK293F細胞HER2受容体の16アミノ酸欠失変異体;前記のように作製された、およびTC1014Her2stumpyHER2受容体の細胞外stumpyドメインを一過性に発現するHEK293F細胞;前記のように作製された、ならびにHEK293野生型細胞HER2を発現しない負の対照細胞との結合を確かめた。HER2と結合させるために、試料を細胞に添加した。その後に、蛍光結合体ヤギ抗ヒトIgGCy5;JacksonImmunoResearchを用いて、HuMabの結合を検出した。TH1014ペルツズマブHEK293F細胞において作製されたを正の対照として使用し、HuMabマウスプール血清およびHuMabKLHを負の対照として使用した。試料を、AppliedBiosystems8200CellularDetectionSystem8200CDSを用いてスキャンし、カウントx蛍光を読み取り値として使用した。カウントが50を超えた時に試料は陽性と示され、カウントx蛍光は、負の対照の少なくとも3倍であった。実施例8:HuMabハイブリドーマの作製十分な抗原特異的力価前記で定義したが発生したHuMabマウスを屠殺し、脾臓ならびに腹大動脈および大静脈に隣接するリンパ節を収集した。脾細胞およびリンパ節細胞とマウスミエローマ細胞株を、CEEF50ElectrofusionSystemCytoPulseSciencesGlenBurnieMDUSAを用いて、本質的に製造業者の説明書に従って融合した。次に、一次ウェルを、ClonePixシステムGenetixHampshireUKを用いてサブクローニングした。この目的のために、特異的な一次ウェルハイブリドーマを、40CloneMediaGenetixHampshireUKおよび60HyQ2x完全培地HycloneWalthamUSAから作られた半固体培地に播種した。実施例7に記載のように抗原特異的結合アッセイにおいてサブクローンを再試験した。さらに増殖させるために、OctetFortebioMenloParkUSAを用いてIgGレベルを測定して、一次ウェル1個につき最も特異的でかつ最も産生しているクローンを選択した。結果として生じたHuMabハイブリドーマのさらなる増殖および培養は、標準的なプロトコール例えば、ColiganJEBiererBEMarguliesDHShevachEMandStroberWedsCurrentProtocolsinImmunologyJohnWileySonsInc2006に記載のプロトコールに基づいて行った。このプロセスによって得られたクローンをPC1014と名付けた。実施例9精製された抗体の質量分析6ウェルまたはHyperflask段階からの抗体含有上清の小さな08mlアリコートを、ScicloneALH3000ワークステーションCaliperLifesciencesHopkintonUSAにおいてプロテインG樹脂PhyNexusIncSanJoseUSAを含有するPhyTipカラムを用いて精製した。PhyTipカラムを製造業者の説明書に従って使用したが、緩衝液を、BindingBufferPBSBBraunMedicalBVOssNetherlandsおよびElutionBuffer01MグリシンHClpH27FlukaRiedeldeHaenBuchsGermanyと交換した。精製後、試料を2MTrisHClpH90SigmaAldrichZwijndrechtNetherlandsによって中和した。または、場合によっては、さらに多量の培養上清を、MabSelectSuReを用いて精製した。精製後、試料を384ウェルプレートWaters100ul角型ウェルプレート部品番号186002631に入れた。NグリコシダーゼFRocheカタログ番号11365177001を用いて、試料を37°Cで一晩、脱グリコシルした。DTT15mgmLを添加し1μlウェル、37°Cで1時間インキュベートした。試料5μlまたは6μlを、AcquityUPLC商標WatersMilfordUSAにおいてBEH300C18、17μm、21x50mmカラムを用いて60°Cで脱塩した。01ギ酸Flukaカタログ番号56302BuchsGermanyを含むMQ水および01ギ酸Flukaカタログ番号56302BuchsGermanyを含むLCMS等級のアセトニトリルBiosolveカタログ番号01204101ValkenswaardTheNetherlandsを、それぞれ、溶出剤EluensAおよびBとして使用した。飛行時間型エレクトロスプレーイオン化質量スペクトルを、陽イオンモードで動いているmicrOTOF商標質量分析計BrukerBremenGermanyにおいてオンラインで記録した。分析の前に、900~3000mzスケールを、ESチューニングミックスtuningmixAgilentTechnologiesSantaClaraUSAを用いて較正した。DataAnalysis商標ソフトウェアv34Brukerと5~80kDaの分子量を探すMaximalEntropyアルゴリズムを用いて、質量スペクトルをデコンボリューションした。デコンボリューション後、重複する抗体を見つけるために、全ての試料について、得られた重鎖および軽鎖の質量を比較した。これは時として余分な軽鎖の存在によるものであったが、重鎖の比較では、C末端リジン変種が存在する可能性があることも考慮に入れた。これにより、重複しない抗体、すなわち、ある特定の重鎖および軽鎖の重複しない組み合わせのリストが得られた。重複する抗体が見つかった場合には、他の試験からの結果に基づいて、1つの重複しない抗体が選択された。実施例10HER2抗体可変ドメインの配列分析および発現ベクターへのクローニングHER2HuMabの全RNAを5x106個のハイブリドーマ細胞から調製し、SMARTRACEcDNAAmplificationキットClontechを用いて製造業者の説明書に従って、100ngの全RNAから5RACEComplementaryDNAcDNAを調製した。VHコード領域およびVLコード領域をPCR増幅し、連結非依存クローニングligationindependentcloningAslanidisCandPJdeJongNucleicAcidsRes1990;1820:606974によって、pG1f発現ベクターおよびpKappa発現ベクターにインフレームで直接クローニングした。このプロセスによって得られたクローンをTH1014と名付けた。それぞれの抗体について、16個のVLクローンおよび8個のVHクローンを配列決定した。さらなる研究および発現のために、重鎖質量および軽鎖質量の推定値が質量分析によって求められた同じ抗体のハイブリドーマ由来材料の質量と一致するクローンを選択した。結果として生じた配列を図1および図2ならびに配列表に示した。選択された配列を下記においてもさらに詳細に説明する。CDR配列を、IMGTLefrancMPetalNucleicAcidsResearch272092121999およびBrochetXNuclAcidsRes36W5035082008に従って定義した。表1、表2、および表3は抗体配列情報または生殖系列配列の概要を示す。表4はコンセンサス配列を示す。表1HuMab169、050、084、025、091、129、127、159、098、153、および132の重鎖可変領域VH、軽鎖可変領域VL、およびCDR配列表2選択されたHuMabのマウス起源ならびに重鎖配列相同性および軽鎖配列相同性表3HuMab049、051、055、123、161、124、001、143、019、021、027、032、035、036、054、094の重鎖可変領域VH配列、軽鎖可変領域VL配列。それぞれのCDRは、図1において下線が引かれたVH配列のCDRおよび図2において下線が引かれたVL配列のCDRに対応する。表4図1および図2に示す配列アライメントに基づくコンセンサスCDR実施例11抗体の精製培養上清を02μmデッドエンドフィルターで濾過し、5mlのMabSelectSuReカラムGEHealthCareにロードし、01Mクエン酸ナトリウムNaOHpH3を用いて溶出した。すぐに、溶出液を2MTrisHClpH9で中和し、126mMNaH2PO4、140mMNaClpH74BBraunに対して一晩、透析した。または、精製後、溶出液をHiPrepDesaltingカラムにロードし、抗体を126mMNaH2PO4、140mMNaClpH74BBraun緩衝液に交換した。透析後または緩衝液交換後、試料を02μmデッドエンドフィルターで滅菌濾過した。純度をSDSPAGEによって求め、濃度を比濁分析および280nmでの吸光度によって測定した。精製抗体を4°Cで保管した。実施例9に記載のように、ハイブリドーマによって発現された抗体重鎖および軽鎖の分子量を特定するために、質量分析を行った。実施例12FACS分析によって測定された、HER2クローンと膜結合型HER2発現腫瘍細胞との結合HER2抗体とAU565細胞ATCCで購入、CRL2351およびA431細胞ATCCで購入、CRL1555との結合を、フローサイトメトリーFACSCantoIIBDBiosciencesを用いて試験した。Qifi分析DakoGlostrupDenmarkから、AU565細胞は細胞1個あたり平均1000000コピーのHER2タンパク質を発現するのに対して、A431細胞は細胞1個あたり平均15000コピーを発現することが明らかになった。HER2抗体の結合を、フィコエリトリンPE結合ヤギ抗ヒトIgG抗体Jacksonを用いて検出した。トラスツズマブ医療グレードのハーセプチン登録商標を正の対照抗体として使用し、アイソタイプ対照抗体を負の対照抗体として使用した。EC50値を、GraphPadPrismV403ソフトウェアGraphPadSoftwareSanDiegoCAUSAを用いて非線形回帰によって求めた傾きが変わるS字形用量反応。図3に示したように、試験した全てのHER2抗体が、AU565細胞上に発現しているHER2およびA431細胞上に発現しているHER2の両方に用量依存的に結合した。結合のEC50値は、AU565細胞については0336~2290μgmL、A431細胞については0068~1135μgmLで変化した。特に、A431細胞上では、試験抗体間でEC50値の大きな差が観察された。しかしながら、どちらの細胞タイプでも抗体098のEC50値が最も良かったすなわち、最も低かった。AU565細胞上およびA431細胞上で、異なる抗体間での最大結合レベルのある程度の差も観察された。試験抗体のうち、AU565細胞上では抗体098の最大結合レベルが最も高かったのに対して、A431細胞上では抗体025の最大結合レベルが最も高かった。実施例13FACS分析によって測定された、HER2抗体と、アカゲザル上皮細胞上に発現している膜結合型HER2との結合アカゲザルHER2との交差反応性を確かめるために、フローサイトメトリーFACSCantoIIBDBiosciencesを用いて、HER2抗体とHER2陽性アカゲザル上皮細胞4MBr5、ATCCで購入との結合を試験した。フィコエリトリン結合ヤギ抗ヒトIgG抗体Jacksonを二次結合体として使用した。アイソタイプ対照抗体を負の対照抗体として使用した。図4に示したように、試験した全てのHER2抗体がアカゲザルHER2と交差反応した。どちらの試験濃度1μgmLおよび10μgmLでもHER2抗体はアカゲザルHER2に特異的に結合することができた。抗体127は1μgmL濃度で十分な結合を示さなかったが、10μgmL濃度で良好な結合を示した。どちらの抗体濃度でも抗体098の結合レベルが最も高かった。アイソタイプ対照抗体を用いた場合、結合は観察されなかった。実施例14サンドイッチELISAにおいて測定された、可溶性Her2ECDHisとの結合におけるHER2抗体の競合最適な試験HER2抗体コーティング濃度および最適なHer2ECDHis濃度を以下のように求めた。ELISAウェルを、PBSで連続希釈したHER2HuMab2倍希釈で0125~8μgmLで4°Cで一晩コーティングした。次に、ELISAウェルをPBST005Tween20[SigmaAldrichZwijndrechtTheNetherlands]を添加したPBSで洗浄し、PBSTC2[vv]ニワトリ血清[GibcoPaisleyScotland]を添加したPBSTで室温RTで1時間ブロックした。次いで、ELISAウェルをPBSTで洗浄し、PBSTCで連続希釈したHer2ECDHis2倍希釈で025~2μgmLとRTで1時間インキュベートした。結合しなかったHer2ECDHisをPBSTで洗い流し、結合したHer2ECDHisを、025μgmLビオチン化ウサギ抗6xhisbiotAbcamCambridgeUKとRTで1時間インキュベートした。その後に、プレートをPBSTで洗浄し、PBSTで希釈した01μgmLストレプトアビジンポリHRPSanquinAmsterdamTheNetherlandsと1時間インキュベートした。洗浄後、光から保護しながら、22アジノビス3エチルベンゾチアゾリン6スルホン酸ABTS:1個のABTS錠剤を50mLABTS緩衝液RocheDiagnosticsAlmereTheNetherlandsで希釈したとRTで15分間インキュベートすることによって、反応を視覚化した。等量のシュウ酸SigmaAldrichZwijndrechtTheNetherlandsを添加することによって発色を止めた。405nmでの蛍光をマイクロタイタープレートリーダーBiotekInstrumentsWinooskiUSAによって測定した。それぞれの抗体の最適以下の結合をもたらした抗体濃度を求め、以下のクロスブロック実験に使用した。それぞれのHER2抗体を、前記のように求められた最適以下の用量でELISAウェルにコーティングした。ELISAウェルをブロッキングした後に、ウェルを、過剰な第2の競合HER2抗体の存在下または非存在下で、予め決められた1μgmLの濃度のビオチン化Her2ECDHisとインキュベートした。次いで、ELISAを前記のように行った。Her2ECDHisと、コーティングされた抗体との残存結合を、競合抗体の非存在下で観察された結合に対する割合で表した。次いで、競合の割合を100阻害として求めた。75の競合を完全クロスブロックとみなしたのに対して、25~74の競合を部分クロスブロックとみなし、0~24の競合を非ブロッキングとみなした。表5に示したように、全てのHER2抗体がHer2ECDHisとの結合をブロックし、自身については少なくとも部分的にブロックできることが見出された。抗体を3つの主なクロスブロックグループに分けた後に、全ての抗体を、各グループの少なくとも1つの代表的な抗体との競合について試験した。第1のグループはトラスツズマブならびに抗体169、050、および084からなり、これらはHer2ECDHisとの結合において互いにブロックしたが、他のグループの抗体をクロスブロックしなかった。第2のグループはペルツズマブならびに抗体025、091、および129からなり、これらは、抗体129および091を除いてHer2ECDHisとの結合において互いにブロックした。抗体129および091はいずれもペルツズマブおよび025をクロスブロックしたが、互いにクロスブロックしなかった。グループ2の抗体はいずれも他のグループの抗体をブロックしなかった。第3のグループは抗体C1、F5、127、098、132、153、および159からなり、これらは他のグループのどの抗体もクロスブロックしなかった。このグループ3の中には、いくらかのばらつきが観察された。抗体127は、Her2ECDHisとの結合において、このグループ内の他の全ての抗体をクロスブロックすることができる唯一の抗体であった。抗体159は、132を除くこのグループ内の他の全ての抗体をクロスブロックした。クローン098は、132および153を除くグループ3の全ての抗体をクロスブロックした。抗体153は、Her2ECDHisとの結合において127、132、および159をクロスブロックしたが、098もC1もF5もクロスブロックしなかった。クローン132は127、132、および153をクロスブロックした。F5およびC1は競合抗体として添加された時には、互いにしかクロスブロックしなかった。しかしながら、逆の反応から、抗体127、098、および159と競合するが、153および132と競合しないことも明らかになった。おそらく、これらの違いは、Her2ECDHisに対する抗体C1およびF5の低親和性に起因したのかもしれない。100より高い値は、アビディティ効果および2つの非競合抗体を含む抗体Her2ECDHis複合体の形成によって説明することができる。表5Her2ECDHisとの結合におけるHER2抗体の競合およびクロスブロッキング示された値は、競合抗体の非存在下で観察された結合に対する、2回の独立した実験の結合の割合の平均である。HEKによって産生されたTH1014C1およびTH1014F5を用いた競合実験を1回行った。トラスツズマブ医療グレードのHerceptin登録商標およびHEKによって産生されたペルツズマブTH1014pertも試験した。実施例15抗体依存性細胞傷害ADCCSKBR3細胞ATCCで購入、HTB30を収集し5x106個の細胞、洗浄しPBSで1500rpm、5分間、2回、10コスミックcosmic仔ウシ血清CCSHyCloneLoganUTUSAを添加したRPMI1640培地1mLに収集した。これに、200μCi51Crクロム51;AmershamBiosciencesEuropeGmbHRoosendaalTheNetherlandsを添加した。振盪している水浴中で、混合物を37°Cで15時間インキュベートした。細胞をPBSで1500rpm、5分間、2回洗浄した後に、10CCSを添加したRPMI1640培地に再懸濁し、トリパンブルー排除によって計数し、1x105細胞mLの濃度まで希釈した。その間、末梢血単核球PBMCを、標準的なFicoll密度遠心分離を用いて製造業者の説明書リンパ球分離培地;LonzaVerviersFranceに従って、新鮮なバフィーコートSanquinAmsterdamTheNetherlandsから単離した。細胞を、10CCSを添加したRPMI1640培地に再懸濁した後に、トリパンブルー排除によって計数し、1x107細胞mLまで濃縮した。トラスツズマブはCHO細胞において産生され、124の高い非コアフコシル化グレードが得られたのに対して、他のHER2抗体はHEK細胞において産生され、平均4の非コアフコシル化が得られた。ADCC実験のために、96ウェルマイクロタイタープレートの中で、50μLの51Cr標識SKBR3細胞5000個の細胞を、総体積100μLの10CCS添加RPMI培地に溶解した15μgmLHER2抗体IgG1κとプレインキュベートした。RTで15分後に、50μLのPBMC500000個の細胞を添加して、100:1のエフェクター:標的比にした。細胞溶解の最大量は、50μLの51Cr標識SKBR3細胞5000個の細胞を100μLの5TritonX100とインキュベートすることによって判定した。自然溶解量は、抗体またはエフェクター細胞を含まない150μLの培地中で5000個の51Cr標識SKBR3細胞をインキュベートすることによって判定した。抗体非依存性細胞溶解のレベルは、抗体を使用せずに5000個のSKBR3細胞を500000個のPBMCとインキュベートすることによって判定した。その後に細胞を、37°C、5CO2で4時間インキュベートした。細胞溶解量を確かめるために、細胞を遠心分離1200rpm、3分し、75μLの上清をミクロニックチューブmicronictubeに移し、この後に、放出された51Crを、ガンマカウンターを用いてカウントした。測定されたカウント毎分cpmを用いて、以下のように抗体性溶解の割合を計算した:cpm試料cpmAb非依存性溶解cpm最大溶解cpm自然溶解x100。図5に示したように、クロスブロックグループ1および2のHER2抗体はADCCを介してSKBR3細胞の効率的な溶解を誘導した。グループ3の抗体153は効率的なADCCを誘導した唯一の抗体であり、抗体132は約10のADCCを誘導し、クローン098、159、および127はADCCを誘導しなかった。実施例16AU565細胞のリガンド非依存性増殖の阻害HER2抗体がインビトロでAU565細胞の増殖を阻害する能力を試験した。AU565細胞上でのHER2発現レベルが高いために実施例12に記載のように細胞1個あたり約1000000コピー、これらの細胞においてHER2は常時活性型であり、従って、リガンド誘導性ヘテロ二量体化に依存しない。96ウェル組織培養プレートGreinerbiooneFrickenhausenGermanyの中に、1ウェルにつき9000個のAU565細胞を、無血清細胞培地に溶解した10μgmLHER2抗体の存在下で播種した。対照として、細胞を、抗体を含まない無血清培地に播種した。3日後に、AlamarblueBioSourceInternationalSanFranciscoUSを用いて製造業者の説明書に従って、生細胞量を定量した。EnVision2101MultilabelリーダーPerkinElmerTurkuFinlandと標準的なAlamarblue設定を用いて、蛍光をモニタリングした。抗体処理細胞のAlamarblueシグナルを未処理細胞に対する割合でプロットした。統計解析にはダネット検定を適用した。結果を図6に示した。図6は、未処理細胞と比較したHER2抗体処理後のAU565細胞の増殖率を示す。未処理細胞を100に設定した。試験したグループ1抗体のうちトラスツズマブ、050、および169はAU565細胞増殖の有意な阻害P75を誘導することができた。抗体098は、最も高い細胞死滅の割合および最も低いEC50を示した。トラスツズマブおよびアイソタイプ対照抗体は抗κETAと結合体化された時に、A431細胞死滅を誘導しなかった。抗体169、084、およびペルツズマブは約50以下の細胞死滅の割合を誘導した。非結合HER2抗体によって細胞死滅は観察されなかった。表7示したデータは、1回の代表的な実験において測定された、抗κETA結合HER2抗体のEC50値および抗κETA結合HER2抗体で処理されたA431細胞の細胞死滅の最大の割合である。スタウロスポリンによって誘導された細胞死滅を100に設定し、未処理細胞のMFIを0に設定した。NDetは検出されなかったことを意味する。実施例19FMATベースのfabCypHer5Eアッセイを用いて測定されたHER2抗体の内部移行前実施例に記載のκ毒素ETAアッセイにおいて観察されたAU565細胞死滅の増大とHER2抗体内部移行の増大が相関関係にあったかどうか調べるために、fabCypHer5Eベースの内部移行アッセイを行った。CypHer5Eは、塩基性pH細胞外:培地では蛍光を発せず、酸性pH細胞内:リソソームでは蛍光を発し、酸性解離定数pKa73のpH感受性色素である。AU565細胞を、240ngmLのfabCypHer5Eヤギfab抗ヒトIgG[Jackson]とCypHer5E[GEHealthcareEindhovenTheNetherlands]との結合体化は製造業者の説明書に従って行ったを添加した正常細胞培地が入っている384ウェル組織培養プレートGreinerbiooneに3000細胞ウェルの密度で播種した。次に、HER2抗体を正常細胞培地で連続希釈し、細胞に添加し、室温で9時間、放置した。細胞内CypHer5Eの平均蛍光強度MFIを、8200FMATAppliedBiosystemsNieuwerkerkADIJsselTheNetherlandsを用いて測定し、カウントx蛍光を読み取り値として使用した。アイソタイプ対照抗体を負の対照抗体として使用した。EC50値および最大MFIを、GraphPadPrismV403ソフトウェアGraphPadSoftwareSanDiegoCAUSAを用いて非線形回帰によって求めた傾きが変わるS字形用量反応。結果を表8に示した。表8は、AU565細胞を用いたCypHer5E内部移行アッセイにおける全ての試験HER2抗体のEC50および最大MFI値を示す。最大MFI値は、抗体結合によって内部移行されたHER2受容体の数を示す。全てのHER2抗体がトラスツズマブ35000およびペルツズマブTH1014pert32366と比較して高い最大MFI値137904~38801を示した。このことから、試験HER2抗体は受容体内部移行の増大を誘導したことが分かる。特に、トラスツズマブまたはTH1014pertと競合しなかった抗体は、トラスツズマブおよびTH1014pertと競合した抗体と比較して多量の受容体内部移行を誘導した。最も高いMFIは抗体098および127によって達成された。理論に限定されるものではないが、これは、HER2ヘテロ二量体化を阻害できないことに固有のものであるかもしれない。表8HER2抗体のCypher5ベース内部移行アッセイ。示したデータは、fabCypHer5E標識HER2抗体で処理されたAU565細胞を用いた2回の実験のうちの1回の代表的な実験のMFIおよびEC50値である。いくつかのEC50値は計算することができなかったND。実施例20:2MEA誘導Fabアーム交換による二重特異性抗体の作製二重特異性抗体を作製するためのインビトロ法はWO2008119353Genmabに記載されており、vanderNeutKolfschotenetalScience2007Sep14;3175844:15547に報告されている。本明細書において、二重特異性抗体は、穏やかな還元条件下でインキュベートした時に起こる、2つの単一特異性IgG4抗体間またはIgG4様抗体間のFabアーム交換または半分子halfmolecule交換重鎖および結合している軽鎖の交換によって形成される。このFabアーム交換反応はジスルフィド結合異性化反応の結果である。この反応では、単一特異性抗体のヒンジ領域にある重鎖間ジスルフィド結合が還元され、結果として生じた遊離システインが、別の抗体分子のシステイン残基と新たな重鎖間ジスルフィド結合を形成し、異なる特異性が生じる。結果として生じた産物は、異なる配列を有する2本のFabアームをもつ二重特異性抗体である。新規の発明において、安定したIgG1ベースの二重特異性抗体を作製する方法を作り出すために、この天然IgG4Fabアーム交換の知識が適合された。以下で説明する、この方法によって作製された二重特異性抗体産物はもはやIgG4Fabアーム交換に関与しない。この方法の基盤は、特定のアッセイ条件下でヘテロ二量体の形成を促進する、相補的なCH3ドメインの使用である。この方法によって二重特異性抗体を作製するために、CH3ドメインに特定の変異があるIgG1分子、すなわち、親IgG1抗体の1つにT350I、K370T、およびF405L変異、他方の親IgG1抗体にK409R変異があるIgG1分子を作製した。二重特異性抗体を作製するために、総体積100μLのTE中で、それぞれの抗体の最終濃度が05mgmL等モル濃度である、これらの2種類の親抗体を、25mM2メルカプトエチルアミンHCl2MEAと37°Cで90分間インキュベートした。スピンカラムMicrocon遠心フィルター30kMilliporeを用いて製造業者の推奨に従って、還元剤2MEAを除去すると、還元反応が止まった。実施例21HER2×HER2二重特異性抗体をインビトロκ指向性ETA殺傷アッセイにおいて試験した本実施例は、κ指向性シュードモナス属エキソトキシンA抗κETAを用いた商標登録で保護されていないインビトロ細胞ベース殺傷アッセイにおいて、HER2×HER2二重特異性抗体が内部移行後に細胞傷害剤を腫瘍細胞に送達できることを示す。本アッセイでは、切断型シュードモナス属エキソトキシンAと結合体化された高親和性抗κドメイン抗体を使用する。抗体結合タンパク質連鎖球菌プロテインAまたはプロテインGに由来するIgG結合モチーフならびにジフテリア毒素またはシュードモナス属エキソトキシンAの類似の融合タンパク質が以前に報告されているMazorYetalJImmunolMethods2007;321:4159;KuoSRetal2009BioconjugateChem2009;20:19751982。これらの分子は抗κETAとは対照的に完全抗体のFc部分に結合した。内部移行およびエンドサイトーシス選別が起こると、抗κETAドメイン抗体はタンパク質分解され、ジスルフィド結合が還元されて、触媒ドメインと結合ドメインは分離される。次いで、触媒ドメインはKDEL保留モチーフを介してゴルジ体から小胞体に輸送され、その後に、サイトゾルに移動される。サイトゾルにおいて、触媒ドメインはタンパク質合成を阻害し、アポトーシスを誘導するKreitmanRJetalBioDrugs2009;23:113。本実施例において使用した抗HER2抗体は、025、153、および169である。さらに、以下の配列の完全ヒトモノクローナルIgG1κ抗体005を使用した。005:以下の抗体を出発物質として使用した:IgG1005ITL=位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある005IgG1κIgG1005K409R=位置409にArgがある005IgG1κIgG1025ITL=位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある025IgG1κIgG1153ITL=位置350にIle、位置370にThr、位置405にLeuがある153IgG1κIgG1153K409R=位置409にArgがある153IgG1κIgG1169K409R=位置409にArgがある169IgG1κ。以下の二重特異性抗体を、下記の手順と同様に作製した。二重特異性抗体を、実施例20に記載の手順に従って作製した。総体積100μLのTE中で、最終濃度05mgmLの各抗体を含有する抗体混合物を、25mM2メルカプトエチルアミンHCl2MEAと37°Cで90分間インキュベートした。還元反応を止めるために、スピンカラムMicrocon遠心フィルター、30k、Milliporeを用いて製造業者の推奨に従って試料を脱塩することによって、還元剤2MEAを除去した。HER2×HER2二重特異性抗体を抗κETAとプレインキュベートした後に、A431細胞とインキュベートした。A431細胞は、細胞1個あたり約15000個のHER2抗体を発現しQifi分析によって求めた、裸のHER2抗体による処理に対する感受性がない。最初に、それぞれの細胞株に最適な抗κETA濃度、すなわち、非特異的細胞死を誘導しない最大投与可能量を求めた。A431細胞2500細胞ウェルを、正常細胞培地が入っている96ウェル組織培養プレートGreinerbiooneに播種し、少なくとも4時間、付着させた。これらの細胞を、正常細胞培地で溶解した抗κETA希釈シリーズ、100μgmL、10μgmL、1μgmL、01μgmL、001μgmL、0001μgmL、および0μgmLとインキュベートした。3日後に、AlamarblueBioSourceInternationalSanFranciscoUSを用いて製造業者の説明書に従って、生細胞量を定量した。EnVision2101MultilabelリーダーPerkinElmerTurkuFinlandと標準的なAlamarblue設定を用いて、蛍光をモニタリングした。単独で細胞を死滅させなかった抗κETA最高濃度A431細胞の場合、1μgmLを以下の実験に使用した。次に、抗κETAとプレインキュベートしたHER2×HER2二重特異性抗体およびHER2単一特異性抗体の効果を、細胞死滅を誘導する能力について試験した。A431細胞を前記のように播種した。HER2特異的抗体単一特異性抗体および二重特異性抗体の希釈シリーズを作製し、所定の濃度の抗κETAと30分間プレインキュベートした後に、細胞に添加した。37°Cで3日間インキュベートした後に、生細胞量を前記のように定量した。抗体とプレインキュベートした抗κETAで処理した細胞のAlamarblueシグナルを、抗体処理なく処理した細胞と比較してプロットした。EC50値および最大細胞死を、GraphPadPrism5ソフトウェアを用いて計算した。細胞死滅については正の対照としてスタウロスポリン234μgmLを使用した。負の対照としてアイソタイプ対照抗体IgG1κ;IgG13G8QITLを使用した。図9および表9から、HER2二重特異性抗体とプレインキュベートした全ての抗κETAは用量依存的にA431細胞を死滅できたことが分かる。これらの結果から、試験したほとんどのHER2二重特異性抗体は、この抗κETAアッセイにおいて組み合わせの中にある単一特異性抗体より効果が高かったことが証明される。さらに、二重特異性抗体005X169、025X169、および153X169の効力から、このインビトロκ指向性ETA死滅において活性が無い単一特異性抗体であるHER2特異的抗体169の効力を、別のHER2特異的抗体と二重特異的に組み合わせることによって増大できることが分かった。表9抗κETA結合HER2×HER2二重特異性抗体のEC50値および抗κETA結合HER2×HER2二重特異性抗体で処理したAU565細胞の細胞死滅の最大の割合。Ndetは検出されなかったことを意味する。実施例22異なるHER2エピトープを標的とする二重特異性抗体とのインキュベーションによるHER2受容体発現低下HER2×HER2二重特異性抗体は、2つの空間的に異なるHER2受容体上の2つの異なるエピトープに結合し得る。これにより、他のHER2×HER2二重特異性抗体が、これらの受容体にある残りのエピトープに結合することが可能になるかもしれない。このため、一価抗体により誘導される二量体化と比較して多価受容体架橋結合が可能になり、その結果として、受容体発現低下が増強される可能性がある。HER2×HER2二重特異性抗体がHER2発現低下の増大を誘導するかどうか調べるために、AU565細胞を抗体および二重特異性抗体と3日間インキュベートした。全HER2レベルおよび抗体結合HER2レベルを求めた。AU565細胞を、正常細胞培地が入っている24ウェル組織培養プレート100000細胞ウェルに播種し、10μgmLのITLもしくはK409R変異のいずれかを有するHER2抗体またはHER2×HER2二重特異性抗体の存在下で37°Cで3日間培養した。対照として、IgG1バックボーンが改変されていない2種類の単一特異性HER2抗体の組み合わせ1:1も最終濃度10μgmLで試験した。PBSと洗浄した後に、細胞を25μLのSurefireLysis緩衝液PerkinElmerTurkuFinlandと室温で30分間インキュベートすることによって溶解した。総タンパク質レベルを、ビシンコニン酸BCAタンパク質アッセイ試薬Pierceを用いて製造業者のプロトコールに従って定量した。溶解産物中のHER2タンパク質レベルを、HER2特異的サンドイッチELISAを用いて分析した。ウサギ抗ヒトHER2細胞内ドメイン抗体CellSignalingを用いてHER2を捕獲し、ビオチン化ヤギ抗ヒトHER2ポリクローナル抗体RDsystemsMinneapolisUSAの後にストレプトアビジンポリHRPを用いて結合HER2を検出した。22アジノビス1個のABTS錠剤を50mLABTS緩衝液[RocheDiagnosticsAlmereTheNetherlands]で希釈したを用いて、反応を視覚化し、シュウ酸SigmaAldrichZwijndrechtTheNetherlandsで止めた。405nmでの蛍光をマイクロタイタープレートリーダーBiotekInstrumentsWinooskiUSAによって測定し、HER2量を未処理細胞に対する割合で表した。結果を図10および表10に示した。これらから、試験した全てのHER2×HER2二重特異性抗体は40のHER2発現低下を誘導したことが証明された。興味深いことに、全てのHER2×HER2二重特異性抗体が、これらの単一特異性対応物と比較してHER2発現低下を増大させた。表10未処理細胞と比較したHER2の割合として示した、HER2×HER2二重特異性によって誘導されたHER2発現低下実施例23共焦点顕微鏡観察によって分析された、HER2×HER2二重特異性抗体とリソソームマーカーLAMP1の共局在実施例22に記載のHER2発現低下アッセイから、HER2×HER2二重特異性抗体はHER2のリソソーム分解を増大できることが分かった。これらの知見を確認するために、共焦点顕微鏡観察技術を適用した。AU565細胞を、カバーガラス厚さ15ミクロン、ThermoFisherScientificBraunschweigGermanyに載せた標準的な組織培地中で37°Cで3日間、増殖させた。リソソーム活性をブロックするために、細胞を50μgmLのロイペプチンSigmaと1時間プレインキュベートした。この後に、10μgmLのHER2単一特異性抗体またはHER2×HER2二重特異性抗体を添加した。2種類の単一特異性IgG1抗体の組み合わせ1:1も最終濃度10μgmLで試験した。細胞を37°Cでさらに3時間または18時間インキュベートした。この後に、細胞をPBSで洗浄し、4ホルムアルデヒドKlinipathと室温で30分間インキュベートした。スライドをブロッキング緩衝液01サポニン[Roche]および2BSA[Roche]を添加したPBSで洗浄し、ホルムアルデヒドをクエンチするために、20mMNH4Clを含有するブロッキング緩衝液と20分間インキュベートした。スライドをブロッキング緩衝液で再洗浄し、マウス抗ヒトCD107aLAMP1BDPharmingenと室温で45分間インキュベートして、リソソームを染色特定した。ブロッキング緩衝液で洗浄した後に、スライドを、二次抗体;ヤギ抗マウスIgGCy5Jacksonおよびヤギ抗ヒトIgGFITCJacksonのカクテルと室温で30分間インキュベートした。スライドをブロッキング緩衝液で再洗浄し、顕微鏡スライドに載せて、20μLの封入剤6グラムのグリセロール[Sigma]および24グラムのMowiol488[Omnilabo]を6mL蒸留水に溶解し、これに12mLの02MTris[Sigma]pH85を添加した後、50~60°Cで10分間インキュベートした。封入剤を分注し、20°Cで保管したを用いて一晩マウントした。63x13206油浸対物レンズ付きのLeicaSPEII共焦点顕微鏡LeicaMicrosystemsおよびLASAFソフトウェアを用いてスライドを画像化した。重複する画素強度を定量するために、画素の飽和saturationは避けなければならない。従って、FITCレーザー強度を10まで下げ、スマートゲインsmartgainを830Vに設定し、スマートオフセットsmartoffsetを948に設定した。これらの設定を用いることによって、二重特異性抗体は画素の飽和なくはっきりと視覚化されたが、単一特異性抗体は検出しにくい時もあった。単一特異性抗体と二重特異性抗体との間でリソソーム共局在を比較するために、分析した全ての共焦点スライドについて、これらの設定を同一にした。12ビットグレイスケールTIFF画像を、MetaMorph登録商標ソフトウェアバージョンMetaSeries61MolecularDevicesIncSunnyvaleCaliforniaUSAを用いて、共局在に関して分析した。FITC画像およびCy5画像をスタックとしてインポートし、バックグラウンドを差し引いた。全てのFITC画像および全てのCy5画像に対して同一の閾値設定を使用した手作業で設定した。共局在を、重複領域ROIにおけるFITCの画素強度として表した。ROIは全てのCy5陽性領域からなる。数種類のHER2抗体、HER2×HER2二重特異性抗体、または2つの異なる単一特異性抗体の組み合わせによって染色された異なるスライドを比較するために、Cy5画素強度を用いて画像を基準化した。ヤギ抗マウスIgGCy5を用いて、リソソームマーカーLAMP1CD107aを染色した。LAMP1の画素強度は、試験した様々なHER2抗体またはHER2×HER2二重特異性抗体の間で異なってはならない細胞1個のCy5画素強度は約200000であった。FITCおよびCy5の共局在の基準化された値=[TPIFITC×FITCCy5共局在のパーセンテージ100]×[200000TPICy5]この式において、TPIは総画素強度を表す。図11および表11は、Cy5と重複する、様々な単一特異性HER2抗体およびHER2×HER2二重特異性抗体のFITC画素強度によって測定された時の生細胞の割合を表す。表された、それぞれの抗体または二重特異性分子について、約1個、3個、または5個の細胞を含む1枚のスライドから、3つの異なる画像を分析した。それぞれのスライドの中にある異なる画像間で有意なばらつきが観察された。しかしながら、全てのHER2×HER2二重特異性抗体は、単一特異性対応物と比較してリソソームマーカーLAMP1との共局在を増大させたことは明らかであった。これらの結果から、HER2×HER2二重特異性抗体は内部移行されると、リソソーム区画に効率的に選別され、そのため、二重特異性抗体薬物結合体アプローチに適していることが分かる。表11任意単位で表した、Cy5と重複するFITC画素強度の平均実施例24HER2単一特異性抗体またはHER2×HER2二重特異性抗体とインキュベートした時のAU565細胞の増殖阻害HER2×HER2二重特異性抗体がAU565細胞の増殖をインビトロで阻害する能力を試験した。AU565細胞上でのHER2発現レベルが高いためにQifiキットによって判定した時に、細胞1個あたり約1000000コピー、HER2はこれらの細胞において常時活性型であり、従って、リガンド誘導性ヘテロ二量体化に依存しない。96ウェル組織培養プレートGreinerbiooneFrickenhausenGermanyの中に、無血清細胞培地に溶解した10μgmLのHER2抗体またはHER2×HER2二重特異性抗体の存在下で、1ウェルあたり9000個のAU565細胞を播種した。対照として、抗体または二重特異性抗体を含まない無血清培地中に細胞を播種した。3日後に、AlamarblueBioSourceInternationalSanFranciscoUSを用いて製造業者の説明書に従って、生細胞量を定量した。EnVision2101MultilabelリーダーPerkinElmerTurkuFinlandと標準的なAlamarblue設定を用いて、蛍光をモニタリングした。抗体処理細胞のAlamarblueシグナルを未処理細胞に対する割合としてプロットした。図12および表12は、HER2抗体およびHER2×HER2二重特異性抗体とインキュベーションされた後のAU565細胞のAlamarblue蛍光強度を示す。Herceptin登録商標トラスツズマブは正の対照として含められ、JuntillaTTetalCancerCell2009;15:429440に記載のように増殖阻害を証明した。全てのHER2×HER2二重特異性抗体はAU565細胞の増殖を阻害することができた。このアッセイにおいて、二重特異性抗体:IgG1005ITLxIgG1169K409RおよびIgG1025ITLxIgG1005K409Rは、これらの単一特異性抗体対応物と比較して効果が高かった。表12HER2×HER2二重特異性抗体で処理した後のAU565生細胞の割合実施例25インビトロ細胞傷害アッセイにおいて試験されたHer2×CD3二重特異性抗体CD3は、成熟T細胞上で発現しているT細胞受容体複合体の中にある補助受容体である。二重特異性抗体においてCD3特異的抗体Fabアームと腫瘍抗原特異的抗体Fabアームを組み合わせると、T細胞は腫瘍細胞に特異的に標的化され、T細胞によって媒介される腫瘍細胞溶解が起こるだろう。同様に、CD3陽性T細胞を、体内の他の逸脱したderailed細胞に、感染細胞に、または病原体に直接標的化することができるだろう。Her2×CD3二重特異性抗体を作製した。HER2特異的Fabアームの重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列は、実施例21において抗体153および169について示された配列と同じであった。CD3特異的Fabアームについては、以下の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を使用した。YTH125RoutledgeetalEurJImmunol19912111:271725に記載の配列huCLBT34ParrenetalResImmunol19911429:74963に記載の配列。配列を最も近いヒト生殖系列に似せるために、ごくわずかなアミノ酸置換を導入した全ての抗体を、以下の通りにFc領域が改変されているIgG1κとして発現させた:IgG1HER2153K409RおよびIgG1HER2153N297QK409R、IgG1HER2169K409R、IgG1huCLBT34F405LおよびIgG1huCLBT34N297QF405L、IgG1YTH125F405LおよびIgG1YTH125N297QF405L。これらのHER2特異的抗体およびCD3特異的抗体に由来する二重特異性抗体を実施例20に記載のように作製し、AU565細胞を用いたインビトロ細胞傷害アッセイにおいて試験した。AU565細胞をほぼコンフルエンスの状態になるまで培養した。細胞をPBSで2回洗浄し、37°Cで5分間トリプシン処理した。トリプシンを不活性化するために12mLの培地を添加し、細胞を800rpmで5分間、遠心沈殿した。細胞を10mLの培地に再懸濁し、細胞をセルストレーナーに通すことによって単細胞懸濁液を作製した。5x105細胞mLの懸濁液100μLを96ウェル培養プレートの各ウェルに添加した。プレートに付着させるために、細胞を5CO2、37°Cで少なくとも3時間インキュベートした。Leucosep30mLチューブを用いて製造業者のプロトコールGreinerBiooneに従って、健常ボランティアの血液から末梢血単核球PBMCを単離した。UntouchedHumanTcellsDynabeadキットDynalを用いて、負の選択によってPBMC調製物からT細胞を単離した。単離された細胞を7x106細胞mLの最終濃度まで培地に再懸濁した。付着したAU565細胞から培地を除去し、50μLウェルの2x濃縮抗体希釈液および50μLウェルの7x106個のT細胞mLエフェクター:標的比=7:1と交換した。プレートを5CO2、37°Cで3日間インキュベートした。上清を除去し、プレートをPBSで2回洗浄した。各ウェルに150μLの培地および15μLのAlamarblueを添加した。プレートを5CO2、37°Cで4時間インキュベートし、吸光度を測定したEnvisionPerkinElmer。図13および表13から、対照抗体Her2単一特異性IgG1Herceptin登録商標、CD3単一特異性IgG1YTH125、および単一特異性IgG1huCLBT34、無関係の抗原単一特異性IgG1b12、およびCD3xb12二重特異性抗体はAU565細胞のT細胞性細胞傷害を誘導しなかったのに対して、二重特異性DuoHer2×CD3抗体huCLBHer2153、huCLBHer2169、YTH125Her2153、およびYTH125Her2169は用量依存性のT細胞性細胞傷害を誘導したことが分かる。Her2169を含む二重特異性抗体は、Her2153を含む二重特異性抗体より効力が高かった。グリコシル化部位を取り除くためにN297Q変異を含めたIgG1huCLBT34変異体、IgG1YTH125変異体、およびHer2153変異体を作製した。この部位でのグリコシル化は、IgGFcγ受容体相互作用BoltSetalEurJImmunol199323:403411に極めて重要である。図13から、Her2×CD3二重特異性抗体YTH125Her2153およびhuCLBHer2153のN297Q変異、従ってFcグリコシル化が無いことは、AU565細胞の用量依存性のT細胞性細胞傷害を誘導する能力に影響を及ぼさなかったことが分かる。表13Her2×CD3二重特異性抗体によって誘導された細胞死滅のEC50値。Ndetは検出されなかったことを意味する。実施例26HER2発現低下グループ3の抗体098および153によって誘導される多量のHER2内部移行が受容体発現低下も増大させるかどうか調べるために、AU565細胞をHER2抗体と3日間インキュベートし、HER2の存在について分析した。AU565細胞を、正常細胞培地が入っている24ウェル組織培養プレート100000細胞ウェルに播種し、10μgmLHER2抗体の存在下で37°Cで3日間、培養した。PBSで洗浄した後に、細胞を25μLのSurefireLysis緩衝液PerkinElmerTurkuFinlandと室温で30分間インキュベートすることによって溶解した。総タンパク質レベルを、ビシンコニン酸BCAタンパク質アッセイ試薬Pierceを用いて製造業者のプロトコールに従って定量した。溶解産物中のHER2タンパク質レベルを、HER2特異的サンドイッチELISAを用いて分析した。ウサギ抗ヒトHER2細胞内ドメイン抗体CellSignalingを用いてHER2を捕獲し、ビオチン化ヤギ抗ヒトHER2ポリクローナル抗体RDの後にストレプトアビジンポリHRPを用いて結合HER2を検出した。22アジノビスABTS:1個のABTS錠剤を50mLABTS緩衝液[RocheDiagnosticsAlmereTheNetherlands]で希釈したを用いて、反応を視覚化し、シュウ酸SigmaAldrichZwijndrechtTheNetherlandsで止めた。405nmでの蛍光をマイクロタイタープレートリーダーBiotekInstrumentsWinooskiUSAによって測定し、HER2量を未処理細胞に対する割合で表した。図14および表14に示した結果から、グループ3の抗体098および153はいずれも50を超えるHER2発現低下を誘導したことが証明された。対照的に、抗体025、169、およびハーセプチンは発現低下をほとんど誘導しなかった未処理細胞の約20。これは、抗体098および153によって観察された多量の内部移行と一致していた。表14未処理細胞と比較したHER2の割合で表した、抗体によって誘導されたHER2発現低下実施例27共焦点顕微鏡観察によって分析された、HER2抗体とリソソームマーカーLAMP1との共局在実施例26に記載のHER2発現低下アッセイおよび実施例19に記載のCypHer5Eベース内部移行アッセイから、グループ3のHER2抗体は、グループ1および2の抗体と比較して効率的に内部移行され、リソソームに標的化されることが分かった。しかしながら、これらの実験では、共焦点イメージングは、単一特異性抗体と二重特異性抗体とを識別するが、異なる単一特異性抗体を識別しない設定を用いて行われた。実際に、これらの設定では単一特異性抗体をほとんど検出することができなかった。異なる単一特異性抗体を比較できるようにするために、蛍光強度を高めるように高ゲイン設定で共焦点スライドを再測定した。他の全ての手順工程は、実施例23に記載のものと同じであった。結果を図15および表15に示した。結果から、FITC画素強度は様々な単一特異性HER2抗体のCy5と重複することが分かる。それぞれのスライドから、約1個、3個、または5個の細胞を含む3つの異なる画像を分析した。それぞれのスライドの中にある異なる画像間で有意なばらつきが観察された。それでもなお、抗体098および153は、025、ペルツズマブ、169、およびハーセプチンと比較して効率的にリソソーム区画に標的化されたことは明らかであった。これは、これらの抗体によって誘導される内部移行および受容体分解の増大と良好に相関していた。表15任意単位で表した、Cy5と重複するFITC画素強度の平均実施例28ヒトとニワトリとのHER2細胞外ドメインシャッフル4つの異なる交差競合グループに由来する抗体によって認識されるHER2結合領域をさらに規定するために、HER2細胞外ドメインシャッフル実験を行った。この目的のために、ヒトHER2細胞外ドメインのドメインI、II、III、またはIVの配列を、ニワトリHER2ニワトリGallusgallusアイソフォームBNCBI:NP0010381261の対応する配列と交換した5つの構築物を用いて小さな遺伝子合成ライブラリーを作製した:1完全ヒトHER2UniprotP04626、以下huHER2と呼ぶ、2ニワトリドメインIを有するhuHER2ヒトHer2のアミノ酸aa1~203を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIと呼ぶ、3ニワトリドメインIIを有するhuHER2ヒトHer2のアミノ酸aa204~330を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIIと呼ぶ、4ニワトリドメインIIIを有するhuHER2ヒトHer2のaa331~507を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIIIと呼ぶ、および5ニワトリドメインIVを有するhuHER2ヒトHer2のaa508~651を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIVと呼ぶ。ヒトHER2オルソログおよびニワトリHER2オルソログは細胞外ドメインでは67の相同性、ドメインIでは62の相同性、ドメインIIでは72の相同性、ドメインIIIでは63の相同性、ドメインIVでは68の相同性を示す。これらの構築物を、Freestyle商標CHOSInvitrogen細胞株において、FreestyleMAXトランスフェクション試薬Invitrogenを用いて製造業者の説明書に従って一過性にトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を20時間、培養した。トランスフェクトされた細胞に対するHER2抗体の結合をフローサイトメトリーによって分析した。トランスフェクトされたCHOS細胞を収集し、FACS緩衝液で洗浄し、10μgmLHER2抗体と氷上で30分間インキュベートした。HER2抗体の結合を、フィコエリトリンPE結合ヤギ抗ヒトIgG抗体Jacksonを用いて検出した。異なるバッチ間で発現が同一であるかどうか調べるために、細胞を固定し、CytofixCytoperm溶液BDを用いて製造業者の説明書に従って透過処理し、ウサギ抗ヒト細胞内HER2抗体DAKOと二次PE結合ヤギ抗ウサギ抗体Jacksonの組み合わせを用いて染色した。アイソタイプ対照抗体を負の対照として使用した。蛍光をFACSCantoIIBDによって測定し、GraphPadPrismV403ソフトウェアGraphPadSoftwareSanDiegoCAUSAを用いて、結合曲線を非線形回帰によって作成した傾きが変わるS字形用量反応。異なる抗体によって、どのHER2ドメインが認識されるのかを特定するために、結合の消失を読み取り値として使用した。抗体153の例示的な結合曲線を図16に示した。全ての結合結果を表16に示した。グループ1のHER2抗体である050、084、169、およびハーセプチンはHuHER2chIVとの結合の消失を示したが、残りのドメインの1つがシャッフルされたタンパク質との結合の消失を示さなかった。このことから、グループ1のmAbのエピトープはHER2ドメインIVに存在することが証明された。グループ2の抗体である025、091、129、およびペルツズマブはHuHER2chIIとの結合の消失のみを示した。このことから、エピトープはHER2ドメインIIに存在することが分かる。抗体098および153は両方とも交差競合アッセイにおいてグループ3まで限定されたが、シャッフル実験ではいくらかのばらつきを示した。抗体098はHuHER2chIとの結合の消失をはっきりと示し、HuHER2chIIとの結合をわずかに減少したのに対して、153はHuHER2chIIとの結合の消失しか示さなかった。これらのデータは、グループ3のmAb098および153も少なくとも部分的にHER2ドメインIIに結合することができ、098の場合のようにエピトープはHER2ドメインIまで及んでいる可能性があることを示唆している。表16異なるHER2ECD受容体構築物に対するHER2抗体結合の概要。FL;huHER2、I;huHER2chI、II;huHER2chII、III;huHER2chIII、IV;huHER2chIV。は正常結合を示す。は、EC50が低下したが、huHER2に対して観察された結合と比較して類似する最大結合があることを示す。は、EC50が低下し、huHER2に対して観察された結合と比較して最大結合の低下が検出されたことを示す。は結合しなかったことを示す。実施例29SCIDマウスの中のNCIN87ヒト胃癌異種移植片におけるHER2HuMab091、084、および169のインビボ効力雌CB17重症複合免疫不全症SCIDマウスの中のNCIN87ヒト胃癌異種移植片モデルにおける腫瘍成長および生存率に対するHER2HuMab091交差競合グループ2、084および169両方とも交差競合グループ1のインビボ効果を求めた。50マトリゲルに溶解した10x106個のNCIN87腫瘍細胞を雌SCIDマウスにsc注射した。1群につき10匹のマウス。腫瘍を接種して8日後に、HER2HuMab091、084、および169、または対照抗体HuMabHepCを用いた静脈内処置を開始した。図17Aには、これを処置開始日である1日目として示した。初回用量は40mgkgであり、処置開始後、4日目、8日目、11日目、15日目、18日目、22日目、および25日目には10mgkgにした。腫瘍体積を少なくとも週2回確かめた。体積mm3をカリパスPLEXX測定値から幅2x長さ2として計算した。結果を図17Aおよび図17Bに図示した。図17Aおよび図17Bから、HuMab084、169、および091が投与されたマウスは、負の対照抗体HuMabHepCが与えられたマウスより腫瘍成長が遅くなりA、生存率が良好になったBことが分かる。全ての処置の耐用性は良好であった。実施例30BalbCヌードマウスの中のBT474乳腺腫瘍異種移植片の治療的処置BalbCヌードマウスの中のヒト皮下BT474乳腺腫瘍異種移植片に対する5つの異なるHER2HuMabの治療的処置の効果を確かめた。γ線源18GyCo60、BioMepFranceを全身照射して24~72時間後に、BT474腫瘍細胞を注射した。マトリゲル50:50v:v;BDBiosciencesを含有するRPMI1640200μlに溶解した2x107個のBT474細胞を、雌BalbCヌードマウスの右側腹部に皮下注射した。週2回、マウスの体重および腫瘍体積を記録した。腫瘍体積mm3をカリパスPLEXX測定値から幅2x長さ2として計算した。腫瘍の平均体積が100~200mm3に達した時に、HER2HuMabを用いた処置を開始した。腫瘍を有するマウスを、8匹のマウスからなる群に無作為化した。1つの群には、対照mAbHuMabHepCを週2回、静脈内iv注射した。他の4つの群には、HER2HuMab025、129、153、および091を初回用量20mgkgおよびその後に9回、5mgkgの用量で週2回、iv注射した。結果を図18Aおよび図18Bに図示した。図18Aおよび図18Bから、BT474腫瘍成長はHuMab129およびHuMab153処置によって部分的に阻害されたことが分かるHuMabHepC対照処置と比較して約30および50の阻害。HuMab025およびHuMab091はBT474腫瘍成長を強く阻害し、これらの抗体によって、800mm3の腫瘍体積に到達する時間がかなり遅くなった。HER2HuMAbが与えられたマウスでは生存率も改善された。