以下からなる群より選択される、実質的に純粋なポリペプチド:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;ならびにc配列番号:2、4、または6のいずれか1つのアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。請求項1記載のポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。請求項2記載のポリヌクレオチドを含むベクター。請求項2記載のポリヌクレオチドまたは請求項3記載のベクターを保有する宿主細胞。以下の段階を含む、請求項1記載のポリペプチドを産生するための方法:a請求項4記載の宿主細胞を培養する段階;b宿主細胞にポリペプチドを発現させる段階;およびc発現したポリペプチドを収集する段階。請求項1記載のポリペプチドと結合する抗体。請求項2記載のポリヌクレオチドまたはその相補鎖に対して相補的であって、少なくとも15ヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。請求項2記載のポリヌクレオチドに対するアンチセンスポリヌクレオチドまたは低分子干渉RNA。配列番号:23、25、27、29、または31のヌクレオチド配列を含むヌクレオチドからなる群より選択される、請求項8記載のアンチセンスポリヌクレオチド。そのセンス鎖が、配列番号:112、113、および114のヌクレオチド配列を含むヌクレオチドからなる群より選択される、請求項8記載の低分子干渉RNA。以下の段階を含む、細胞増殖性疾患の診断のための方法:a標本の生物試料における、配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列をコードする遺伝子の発現レベルを検出する段階;およびbその発現レベルの上昇を疾患と関連づける段階。発現レベルが、以下の段階からなる群より選択される方法のいずれか1つによって検出される、請求項11記載の方法:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列をコードするmRNAを検出する段階;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むタンパク質を検出する段階;およびc配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むタンパク質の生物学的活性を検出する段階。以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法:a被験化合物を、1配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、2配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および3配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、からなる群より選択されるポリペプチドと接触させる段階;bポリペプチドと被験化合物との結合活性を検出する段階;ならびにcポリペプチドと結合する化合物を選択する段階。以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法:a候補化合物を、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列を含む1つまたは複数のポリヌクレオチドを発現する細胞と接触させる段階;およびb配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列を含む1つまたは複数のポリヌクレオチドの発現レベルを、被験化合物の非存在下で検出される発現レベルと比較して低下させる化合物を選択する段階。以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法:a被験化合物を、1配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、2配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、および3配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、からなる群より選択されるポリペプチドと接触させる段階;b段階aのポリペプチドの生物学的活性を検出する段階;ならびにc被験化合物の非存在下で検出される生物学的活性と比較してポリペプチドの生物学的活性を抑制する化合物を選択する段階。生物学的活性が細胞増殖活性である、請求項15記載の方法。以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法:a被験化合物の存在下で1配列番号:2のアミノ酸配列を含むポリペプチド、2配列番号:2のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2のアミノ酸配列を含むポリペプチド、3配列番号:2のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、からなる群より選択されるポリペプチドを、AIP1と接触させる段階;bポリペプチドとAIP1との結合を検出する段階;ならびにcポリペプチドとAIP1との結合を阻害する被験化合物を選択する段階。以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法:a被験化合物の存在下で1配列番号:6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、2配列番号:6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、3配列番号:6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、からなる群より選択されるポリペプチドを、NOTCH2またはSTRINと接触させる段階;bポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を検出する段階;ならびにcポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を阻害する被験化合物を選択する段階。以下の段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法:a候補化合物を、1つまたは複数のマーカー遺伝子の転写調節領域および転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子を含むベクターが導入された細胞と接触させる段階、この際、1つまたは複数のマーカー遺伝子は配列番号:1、3、および5からなる群より選択されるヌクレオチド配列のいずれか1つを含む;b該レポーター遺伝子の活性を測定する段階;ならびにc該レポーター遺伝子の発現レベルを対照と比較して低下させる化合物を選択する段階。細胞増殖性疾患が癌である、請求項11~19のいずれか一項記載の方法。以下からなる群より選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンスポリヌクレオチドまたは低分子干渉RNAの薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、細胞増殖性疾患を治療するための組成物:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;ならびにc配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。以下からなる群より選択されるポリペプチドに対する抗体の薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、細胞増殖性疾患を治療するための組成物:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;ならびにc配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。請求項13~19のいずれか一項記載の方法によって選択された化合物の薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、細胞増殖性疾患を治療するための組成物。細胞増殖性疾患が癌である、請求項21~23のいずれか一項記載の組成物。以下からなる群より選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対するアンチセンスポリヌクレオチドまたは低分子干渉RNAの薬学的有効量を投与する段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための方法:1配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;2配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;ならびに3配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。以下からなる群より選択されるポリペプチドに対する抗体の薬学的有効量を投与する段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための方法:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド;ならびにc配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。請求項13~19のいずれか一項記載の方法によって選択された化合物の薬学的有効量を投与する段階を含む、細胞増殖性疾患を治療するための方法。細胞増殖性疾患が癌である、請求項25~27のいずれか一項記載の方法。a~cからなる群より選択されるポリペプチド、またはそのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの薬学的有効量を投与する段階を含む、癌の治療または予防のための方法:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはその断片;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片;ならびにc配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、またはその断片。ポリペプチドが、配列番号:80、97、108、124、および164のアミノ酸配列を含むポリペプチドの群より選択される、請求項29記載の癌の治療または予防のための方法。a~cからなる群より選択されるポリペプチドを抗原提示細胞と接触させる段階、またはそのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはそのポリヌクレオチドを含むベクターを抗原提示細胞に導入する段階を含む、抗腫瘍免疫を誘導するための方法:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片;ならびにc配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、またはその断片。ポリペプチドが、配列番号:80、97、108、124、および164のアミノ酸配列を含むポリペプチドの群より選択される、請求項31記載の抗腫瘍免疫を誘導するための方法。対象に対して抗原提示細胞を投与する段階をさらに含む、請求項31記載の抗腫瘍免疫を誘導するための方法。a~cの群より選択されるポリペプチド、またはそのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの薬学的有効量を有効成分として含み、かつ薬学的に許容される担体を含む、癌の治療または予防のための薬学的組成物:a配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片;b配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるタンパク質と同等な生物学的活性を有する、1つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、およびまたは付加された配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその断片;ならびにc配列番号:2、4、または6のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な生物学的活性を有する、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、またはその断片。配列番号:80、97、108、124、および164の群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの薬学的有効量を含む、請求項34記載の薬学的組成物。ポリヌクレオチドが発現ベクター中に組み入れられている、請求項34記載の薬学的組成物。発明の詳細な説明本明細書で用いる1つのa1つのanおよびそのtheという用語は、別に特記する場合を除き、少なくとも1つのを意味する。本出願は、対応する非癌組織と比較して胃癌でその発現が顕著に上昇している新規ヒト遺伝子CXADRL1およびGCUD1を同定する。CXADRL1cDNAは、配列番号:1に示すように1296ヌクレオチドのオープンリーディングフレームを含む3423ヌクレオチドからなる。このオープンリーディングフレームは、推定431アミノ酸のタンパク質をコードする。CXADRL1はAIP1と会合する。AIP1atrophininteractingprotein1は、遺伝病の一つである歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症の原因となる遺伝子atrophin1と会合するタンパク質である。AIP1は、グアニル酸キナーゼ様ドメイン、2つのWWドメイン、および5つのPDZドメインを含む推定1455アミノ酸のタンパク質をコードする。AIP1のマウス相同体はアクチビンIIA型と相互作用することが示された。しかし、AIP1の機能はまだ解明されていない。予想されるアミノ酸配列は、CXADRcoxsackieandadenovirusreceptorに対して約37の同一性を示した。このため、このタンパク質はCXADRL1coxsackieandadenovirusreceptorlike1と命名された。一方、GCUD1cDNAは、配列番号:3に示すように1245ヌクレオチドのオープンリーディングフレームを含む4987ヌクレオチドからなる。このオープンリーディングフレームは推定414アミノ酸のタンパク質をコードする。このタンパク質の発現は胃癌において上方制御されるため、このタンパク質はGCUD1upregulatedingastriccancerと命名された。さらに、本発明は、対応する非癌組織と比較して結腸直腸癌でその発現が顕著に上昇している新規ヒト遺伝子RNF43も含む。RNF43cDNAは、配列番号:5に示すように2352ヌクレオチドのオープンリーディングフレームを含む5345ヌクレオチドからなる。このオープンリーディングフレームは推定783アミノ酸のタンパク質をコードする。RNF43はNOTCH2およびSTRINと会合する。NOTCH2は、進化的に保存された細胞間シグナル伝達機構の構成要素である大型の膜貫通受容体タンパク質であると報告されている。NOTCH2はNotchシグナル伝達経路のタンパク質要素であり、腎臓における糸球体形成ならびに心臓および眼の血管構造の発達に関与することが報告されている。さらに、3種類のDeltaSerrateLag2DSLタンパク質、Delta1、Jaggaed1およびJaggaed2は、NOTCH2に対する機能性リガンドであることが報告されている。STRINは、マウスTrifとの同一性が79であるタンパク質をコードすると推定される。STRINまたはTrifの機能はまだ明らかでない。細胞におけるCXADRL1、GCUD1、またはRNF43の外因性発現は常に細胞増殖の亢進をもたらし、一方、アンチセンスSオリゴヌクレオチドまたは低分子干渉RNAsiRNAによるその発現の抑制は癌細胞の顕著な増殖阻害をもたらした。これらの所見は、CXADRL1、GCUD1、およびRNF43が癌細胞に発癌活性を与えること、およびこれらのタンパク質の活性の阻害が癌の治療のための有望な戦略となりうることを示唆する。本発明は、配列番号:1に記載されたポリヌクレオチド配列を含む新規ヒト遺伝子CXADRL1のほか、その縮重物および変異体も、それらが配列番号:2に示されたアミノ酸配列を含むCXADRL1タンパク質またはその機能的同等物をコードする範囲で含む。CXADRL1と機能的に同等なポリペプチドの例には、例えば、ヒトCXADRL1タンパク質に対応する他の生物の相同タンパク質のほか、ヒトCXADRL1タンパク質の変異体が含まれる。本発明はまた、配列番号:3に記載されたポリヌクレオチド配列を含む新規ヒト遺伝子GCUD1のほか、その縮重物および変異体も、それらが配列番号:4に示されたアミノ酸配列を含むGCUD1タンパク質またはその機能的同等物をコードする範囲で含む。GCUD1と機能的に同等なポリペプチドの例には、例えば、ヒトGCUD1タンパク質に対応する他の生物の相同タンパク質のほか、ヒトGCUD1タンパク質の変異体が含まれる。さらに、本発明は、配列番号:5に記載されたポリヌクレオチド配列を含む新規ヒト遺伝子RNF43のほか、その縮重物および変異体も、それらが配列番号:6に示されたアミノ酸配列を含むRNF43タンパク質またはその機能的同等物をコードする範囲で含む。RNF43と機能的に同等なポリペプチドの例には、例えば、ヒトRNF43タンパク質に対応する他の生物の相同タンパク質のほか、ヒトRNF43タンパク質の変異体が含まれる。本発明において、機能的に同等なという用語は、対象ポリペプチドが、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質のように細胞増殖を促進するとともに癌細胞に発癌活性を付与する活性を有することを意味する。対象ポリペプチドが細胞増殖活性を有するか否かは、対象ポリペプチドをコードするDNAをそれぞれのポリペプチドを発現する細胞に導入し、細胞の増殖の促進またはコロニー形成活性の上昇を検出することによって判定される。このような細胞には、例えば、CXADRL1およびGCUD1に対してはNIH3T3細胞;ならびに、RNF43に対してはNIH3T3細胞、SW480細胞、およびCOS7細胞が含まれる。または、対象ポリペプチドが、CXADRL1と機能的に同等であるか否かを、そのAIP1との結合能を検出することによって判定することもできる。さらに、対象ポリペプチドがRNF43と機能的に同等であるか否かを、そのNOTCH2またはSTRINとの結合能を検出することによって判定することもできる。所定のタンパク質と機能的に同等なポリペプチドを作製するための方法は当業者に周知であり、これにはタンパク質に変異を導入する既知の方法が含まれる。例えば、当業者は、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等なポリペプチドを、これらのタンパク質のいずれかのアミノ酸配列に部位特異的突然変異誘発法によって適切な変異を導入することによって作製することができるHashimotoGotohら、Gene1522715;ZollerおよびSmith、MethodsEnzymol100468500;Kramerら、NucleicAcidsRes1294419456;KramerおよびFritz、MethodsEnzymol15435067;Kunkel、ProcNatlAcadSciUSA8248892;Kunkel、MethodsEnzymol8527636。アミノ酸変異は自然下でも起こりうる。その結果生じる変異ポリペプチドがヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等であるという前提で、1つまたは複数のアミノ酸が変異したヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質のアミノ酸配列を有するタンパク質が本発明のポリペプチドに含まれる。このような変異体において変異させるアミノ酸の数は一般に10アミノ酸またはそれ未満、好ましくは6アミノ酸またはそれ未満、より好ましくは3アミノ酸またはそれ未満である。変異タンパク質、またはある特定のアミノ酸配列の1つもしくは複数のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、およびもしくは付加によって改変されたアミノ酸配列を有するタンパク質である改変タンパク質は、元の生物学的活性を保つことが知られているMarkら、ProcNatlAcadSciUSA8156626;ZollerおよびSmith、NucleicAcidsRes106487500;DalbadieMcFarlandら、ProcNatlAcadSciUSA79640913。変異させるアミノ酸残基は、アミノ酸側鎖の特性が保存される別のアミノ酸に変異させることが好ましい保存的アミノ酸置換として知られる方法。アミノ酸側鎖の特性の例には、疎水性アミノ酸A、I、L、M、F、P、W、Y、V、親水性アミノ酸R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T、および、以下の官能基または特徴を共通して有する側鎖がある:脂肪族側鎖G、A、V、L、I、P;水酸基含有側鎖S、T、Y;硫黄原子含有側鎖C、M;カルボン酸およびアミド含有側鎖D、N、E、Q;塩基含有側鎖R、K、H;および芳香族含有側鎖H、F、Y、W。括弧内の文字はアミノ酸の一文字略号を示すことに注意されたい。ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質のアミノ酸配列に1つまたは複数のアミノ酸残基が付加されたポリペプチドの一例は、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質を含む融合タンパク質である。融合タンパク質とは、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と他のペプチドまたはタンパク質との融合物のことであり、これは本発明に含まれる。融合タンパク質は、本発明のヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質をコードするDNAを他のペプチドまたはタンパク質をコードするDNAとフレームが合致するように連結し、この融合DNAを発現ベクターに挿入して、それを宿主において発現させるといった当業者に周知の技法によって作製しうる。本発明のタンパク質と融合させるペプチドまたはタンパク質には制限はない。本発明のタンパク質と融合させるペプチドとして用いうる既知のペプチドには、例えば、FLAGHoppら、Biotechnology6120410、6個のHisヒスチジン残基を含む6xHis、10xHis、インフルエンザ凝集素HA、ヒトcmyc断片、VSPGP断片、p18HIV断片、T7タグ、HSVタグ、Eタグ、SV40T抗原断片、lckタグ、αチューブリン断片、Bタグ、プロテインC断片などが含まれる。本発明のタンパク質と融合させうるタンパク質の例には、GSTグルタチオンSトランスフェラーゼ、インフルエンザ凝集素HA、免疫グロブリン定常領域、βガラクトシダーゼ、MBPマルトース結合タンパク質などが含まれる。融合タンパク質は、上に考察したように融合ペプチドまたはタンパク質をコードする市販のDNAと、本発明のポリペプチドをコードするDNAとを融合させ、作製された融合DNAを発現させることによって作製しうる。機能的に同等なポリペプチドを単離するための当技術分野で知られた代替的な方法には、例えば、ハイブリダイゼーション法を用いる方法があるSambrookら、MolecularCloning第2版、947958、ColdSpringHarborLabPress。当業者は、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質をコードするDNA配列すなわち、配列番号:1、3、または5の全体または部分に対して高い相同性を有するDNAを容易に単離して、単離されたDNAからヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等なポリペプチドを単離することができる。本発明のポリペプチドには、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質をコードするDNA配列の全体または部分とハイブリダイズするDNAによってコードされ、そしてヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等なポリペプチドが含まれる。これらのポリペプチドには、ヒト由来のタンパク質に対応する哺乳動物相同体例えば、サル、ラット、ウサギ、およびウシの遺伝子によってコードされるポリペプチドが含まれる。ヒトCXADRL1タンパク質をコードするDNAに対して高度に相同なcDNAを動物から単離する際には、精巣または卵巣からの組織を用いることが特に好ましい。また、ヒトGCUD1をコードするDNAに対して高度に相同なcDNAを動物から単離する際には、精巣、卵巣、または脳からの組織を用いることが特に好ましい。さらに、ヒトRNF43タンパク質をコードするDNAに対して高度に相同なcDNAを単離する際には、胎児肺または胎児腎臓からの組織を用いることが特に好ましい。ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等なポリペプチドをコードするDNAを単離するためのハイブリダイゼーションの条件は、当業者によって慣行的に選択されうる。例えば、30分間またはそれ以上にわたる68°CでのプレハイブリダイゼーションをRapidhyb緩衝液アマシャムライフサイエンスAmershamLIFESCIENCEを用いて行い、標識したプローブを添加した上で、1時間またはそれ以上にわたって68°Cで加温することによって、ハイブリダイゼーションを行ってもよい。それに続く洗浄段階は、例えば、低ストリンジェント条件下で行いうる。低ストリンジェント条件とは、例えば、42°C、2XSSC、01SDS、または好ましくは50°C、2XSSC、01SDSのことである。より好ましくは、高ストリンジェント条件を用いる。高ストリンジェント条件とは、例えば、室温の2XSSC、001SDS中での20分間の洗浄を3回行った後に、37°Cの1xSSC、01SDS中での20分間の洗浄を3回行い、50°Cの1xSSC、01SDS中での20分間の洗浄を2回行うことである。しかし、温度および塩濃度などのいくつかの要因はハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響を及ぼすと考えられ、当業者は必要なストリンジェンシーを得るためにこれらの要因を適切に選択することができる。ハイブリダイゼーションの代わりに、遺伝子増幅法、例えばポリメラーゼ連鎖反応PCR法を、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等なポリペプチドをコードするDNAを、タンパク質をコードするDNAの配列情報配列番号:1、3、または5に基づいて合成したプライマーを用いて単離するために用いることもできる。以上のハイブリダイゼーション法または遺伝子増幅法によって単離されたDNAによってコードされる、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等なポリペプチドは、通常、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質のアミノ酸配列に対して高い相同性を有する。高い相同性とは一般に、40またはそれ以上、好ましくは60またはそれ以上、より好ましくは80またはそれ以上、さらにより好ましくは95またはそれ以上の相同性を指す。ポリペプチドの相同性は、WilburおよびLipman、ProcNatlAcadSciUSA8072630中のアルゴリズムに従って決定することができる。本発明のポリペプチドは、その産生のために用いる細胞もしくは宿主または用いる精製方法に応じて、アミノ酸配列、分子量、等電点、糖鎖の有無、または形態に関して差異があってもよい。しかし、それが本発明のヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質のポリペプチドと同等な機能を有する限り、それは本発明の範囲に含まれる。本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法により、組換えタンパク質として調製することもでき、または天然タンパク質として調製することもできる。組換えタンパク質は、本発明のポリペプチドをコードするDNA例えば、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列を含むDNAを適切な発現ベクターに挿入し、そのベクターを適切な宿主細胞に導入して抽出物を入手した上で、抽出物をクロマトグラフィー、例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲル濾過、もしくは本発明のタンパク質に対する抗体を固定したカラムを用いるアフィニティークロマトグラフィーにかけることによって、または上述のカラムの複数を組み合わせることによってポリペプチドを精製することにより、調製することができる。同様に、本発明のポリペプチドを宿主細胞例えば、動物細胞および大腸菌の内部でグルタチオンSトランスフェラーゼタンパク質との融合タンパク質として、または多数のヒスチジンを追加した組換えタンパク質として発現させる場合には、発現した組換えタンパク質をグルタチオンカラムまたはニッケルカラムを用いて精製することができる。また、本発明のポリペプチドをcmyc、多数のヒスチジン、またはFLAGで標識したタンパク質として発現させる場合には、それぞれcmyc、His、またはFLAGに対する抗体を用いてそれを検出して精製することができる。融合タンパク質を精製した後に、必要に応じてトロンビンまたは第Xa因子で切断することにより、目的のポリペプチド以外の領域を除外することも可能である。天然のタンパク質は、当業者に知られた方法によって、例えば、下記のCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と結合する抗体を結合させたアフィニティーカラムを、本発明のポリペプチドを発現する組織または細胞の抽出物と接触させることによって単離することができる。抗体はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよい。本発明はまた、本発明のポリペプチドの部分partialペプチドも含む。部分ペプチドは、本発明のポリペプチドに対して特異的なアミノ酸配列を有し、少なくとも7アミノ酸、好ましくは8アミノ酸またはそれ以上、より好ましくは9アミノ酸またはそれ以上からなる。部分ペプチドは、例えば、本発明のポリペプチドに対する抗体を作製するために、本発明のポリペプチドと結合する化合物をスクリーニングするために、および本発明のポリペプチドの阻害物質をスクリーニングするために、用いることができる。本発明の部分ペプチドは、遺伝子操作により、既知のペプチド合成方法により、または本発明のポリペプチドを適切なペプチダーゼで消化することにより、作製可能である。ペプチド合成のためには、例えば、固相合成または液相合成を用いうる。さらに、本発明は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも提供する。本発明のポリヌクレオチドは、上記のように本発明のポリペプチドのインビボもしくはインビトロでの産生のために用いることができ、または本発明のタンパク質をコードする遺伝子の遺伝的異常に起因する疾患に対する遺伝子治療のために用いることもできる。mRNA、RNA、cDNA、ゲノムDNA、化学合成されたポリヌクレオチドを含む、本発明のポリヌクレオチドのいかなる形態を、それが本発明のポリペプチドをコードする限りは、用いることができる。本発明のポリヌクレオチドには、所定のヌクレオチド配列を含むDNAのほかに、その縮重配列も、結果として生じるDNAが本発明のポリペプチドをコードする限りは、含まれる。本発明のポリヌクレオチドは、当業者に知られた方法によって作製することができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドを発現する細胞からcDNAライブラリーを作製し、本発明のDNA例えば、配列番号:1、3、または5の部分配列をプローブとして用いてハイブリダイゼーションを行うことによって作製することができる。cDNAライブラリーは、例えば、Sambrookら、MolecularCloning、ColdSpringHarborLaboratoryPressに記載された方法によって作製しうる;または、市販のcDNAライブラリーを用いてもよい。cDNAライブラリーは、本発明のポリペプチドを発現する細胞からRNAを抽出し、本発明のDNA例えば、配列番号:1、3、または5の配列に基づいてオリゴDNAを合成し、オリゴDNAをプライマーとして用いてPCRを行い、そして本発明のタンパク質をコードするcDNAを増幅することによって作製することもできる。さらに、得られたcDNAのヌクレオチドのシークエンシングを行うことにより、cDNAによりコードされる翻訳領域を慣行的に決定し、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列を容易に得ることができる。その上、得られたcDNAまたはその部分を用いてゲノムDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、ゲノムDNAを単離することができる。より具体的に述べると、mRNAをまず、本発明の対象ポリペプチドが発現される細胞、組織、または臓器例えば、CXADRL1の場合は精巣または卵巣;GCUD1の場合は精巣、卵巣、または脳;RNF43の場合は胎児肺または胎児腎臓から調製する。mRNAの単離には既知の方法を用いうる;例えば、全RNAはグアニジン超遠心Chirgwinら、Biochemistry1852949またはAGPC法ChomczynskiおよびSacchi、AnalBiochem1621569によって調製しうる。さらに、mRNAをmRNA精製キットファルマシアPharmaciaなどを用いて全RNAから精製してもよく、または、mRNAをQuickPrepmRNA精製キットファルマシアによって直接精製してもよい。得られたmRNAは、逆転写酵素を用いてcDNAを合成するために用いられる。cDNAは、AMV逆転写酵素第一鎖cDNA合成キット生化学工業SeikagakuKogyoなどの市販のキットを用いて精製しうる。または、本明細書に記載のプライマー等、5AmpliFINDERRACEキットクロンテックClontech、およびポリメラーゼ連鎖反応PCRを用いる5RACE法Frohmanら、ProcNatlAcadSciUSA8589989002;Belyavskyら、NucleicAcidsRes17291932に従って、cDNAの合成および増幅を行うこともできる。所望のDNA断片をPCR産物から調製し、ベクターDNAと連結する。この組換えベクターを大腸菌などの形質転換に用い、選択したコロニーから所望の組換えベクターを調製する。所望のDNAのヌクレオチド配列を、ジデオキシヌクレオチド鎖終結法dideoxynucleotidechainterminationなどの従来の方法によって検証する。本発明のポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を、発現のために用いる宿主におけるコドン使用頻度を考慮に入れることにより、より効率的に発現されるように設計することもできるGranthamら、NucleicAcidsRes94374。本発明のポリヌクレオチドの配列を、市販のキットまたは従来の方法によって改変することもできる。例えば、制限酵素による消化、合成オリゴヌクレオチドもしくは適切なポリヌクレオチド断片の挿入、リンカーの付加、または開始コドンATGおよびもしくは終止コドンTAA、TGAまたはTAGの挿入によって配列を改変することができる。具体的には、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列を含むDNAを含む。さらに、本発明は、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ上記の本発明のCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質と機能的に同等なポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチドを提供する。当業者はストリンジェントな条件を適切に選択してよい。例えば、低ストリンジェント条件を用いることができる。より好ましくは、高ストリンジェント条件を用いる。これらの条件は上記のものと同じである。上記のハイブリダイズさせるDNAはcDNAまたは染色体DNAであることが好ましい。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドが内部に挿入されたベクターも提供する。本発明のベクターは、宿主細胞において本発明のポリヌクレオチド、特にDNAに本発明のポリペプチドを発現させるために有用である。大腸菌が宿主細胞であって、ベクターを大腸菌例えば、JM109、DH5α、HB101、またはXL1Blueの内部で大量に増幅および産生させる場合には、ベクターは、大腸菌内で増幅させるためのori、および、形質転換された大腸菌を選択するためのマーカー遺伝子例えば、アンピシリン、テトラサイクリン、カナマイシン、クロラムフェニコールなどの薬剤によって選択される薬剤抵抗性遺伝子を有する必要がある。例えば、M13シリーズのベクター、pUCシリーズのベクター、pBR322、pBluescript、pCRScriptなどを用いることができる。さらに、上記のベクター同様、pGEMT、pDIRECT、およびpT7も、cDNAのサブクローニングおよび抽出のために用いることができる。本発明のタンパク質の産生のためにベクターを用いる場合には、発現ベクターが特に有用である。例えば、大腸菌内で発現させようとする発現ベクターは、大腸菌内で増幅させるための上記の特徴を有する必要がある。JM109、DH5α、HB101、またはXL1Blueなどの大腸菌を宿主細胞として用いる場合には、ベクターは、大腸菌内で所望の遺伝子を効率的に発現しうるプロモーター、例えば、lacZプロモーターWardら、Nature3415446;FASEBJ624227、araBプロモーターBetterら、Science24010413、またはT7プロモーターなどを有する必要がある。その点に関しては、例えば、pGEX5X1ファルマシア、QIAexpressシステムキアゲンQiagen、pEGFPおよびpETこの場合、宿主はT7RNAポリメラーゼを発現するBL21であることが好ましいを上記のベクターの代わりに用いてもよい。さらに、ベクターは、ポリペプチド分泌のためのシグナル配列をも含みうる。大腸菌の周辺質periplasmへのポリペプチド分泌を指令するシグナル配列の一例は、pelBシグナル配列Leiら、JBacteriol1694379である。ベクターを標的宿主細胞に導入するための手段には、例えば、塩化カルシウム法および電気穿孔法が含まれる。大腸菌以外に、例えば、哺乳動物由来の発現ベクター例えば、pcDNA3インビトロジェンInvitrogenおよびpEGFBOSNucleicAcidsRes185322、pEF、pCDM8、昆虫細胞由来の発現ベクター例えば、BactoBACバキュロウイルス発現系ギブコBRLGIBCOBRL、pBacPAK8、植物由来の発現ベクター例えば、pMH1、pMH2、動物ウイルス由来の発現ベクター例えば、pHSV、pMV、pAdexLcw、レトロウイルス由来の発現ベクター例えば、pZIpneo、酵母由来の発現ベクター例えば、Pichia発現キットインビトロジェン、pNV11、SPQ01、および枯草菌Bacillussubtilis由来の発現ベクター例えば、pPL608、pKTH50を、本発明のポリペプチドの産生のために用いることもできる。ベクターをCHO細胞、COS細胞またはNIH3T3細胞などの動物細胞内で発現させるためには、ベクターは、この種の細胞における発現のために必要なプロモーター、例えば、SV40プロモーターMulliganら、Nature277108、MMLVLTRプロモーター、EF1αプロモーターMizushimaら、NucleicAcidsRes185322、CMVプロモーターなどを有する必要があるほか、形質転換体を選択するためのマーカー遺伝子例えば、薬剤例えば、ネオマイシン、G418によって選択される薬剤抵抗性遺伝子を有することが好ましい。これらの特徴を備えた既知のベクターの例には、例えば、pMAM、pDR2、pBKRSV、pBKCMV、pOPRSV、およびpOP13が含まれる。さらに、本方法を、遺伝子を安定的に発現させるため、およびそれと同時に、細胞内の遺伝子のコピー数を増幅するために用いることもできる。例えば、相補的DHFR遺伝子を含むベクター例えば、pCHOIを、核酸合成経路が欠失したCHO細胞に導入した後に、メトトレキサートMTXによって増幅することができる。さらに、遺伝子の一過性発現の場合には、SV40の複製起点を含むベクターpcDなどを、SV40T抗原を発現する遺伝子を染色体上に含むCOS細胞に形質転換導入する方法を用いることができる。以上のようにして得られた本発明のポリペプチドは、宿主細胞の内部または外部培地などから単離して、実質的に純粋な均一なポリペプチドとして精製することができる。所定のポリペプチドに言及して本明細書で用いられる実質的に純粋なとは、そのポリペプチドが他の生体高分子から実質的に遊離していることを意味する。実質的に純粋なポリペプチドは、乾燥重量にして純度が少なくとも75例えば、少なくとも80、85、95または99である。純度は任意の適切な標準的方法により、例えばカラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはHPLC分析によって測定しうる。ポリペプチドの単離および精製のための方法は何らかの特定の方法には限定されない;実際には任意の標準的な方法を用いうる。例えば、カラムクロマトグラフィー、フィルター、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析、および再結晶化を適切に選択し、組み合わせて、ポリペプチドの単離および精製を行ってもよい。クロマトグラフィーの例には、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィーなどが含まれるStrategiesforProteinPurificationandCharacterizationALaboratoryCourseManual、DanielRMarshakら編、ColdSpringHarborLaboratoryPress。これらのクロマトグラフィーを、HPLCおよびFPLCなどの液体クロマトグラフィーによって行ってもよい。したがって、本発明は、以上の方法によって調製された高純度のポリペプチドを提供する。本発明のポリペプチドを、精製の前または後に適切なタンパク質修飾酵素でそれを処理することにより、随意に改変すること、または部分的に欠失させることも可能である。有用なタンパク質修飾酵素には、トリプシン、キモトリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、タンパク質キナーゼ、グルコシダーゼなどが非制限的に含まれる。本発明は、本発明のポリペプチドと結合する抗体を提供する。本発明の抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体などの任意の形態で用いることができ、これにはウサギなどの動物を本発明のポリペプチドで免疫することによって得られる抗血清、すべてのクラスのポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、ヒト抗体、ならびに遺伝子組換えによって作製されたヒト化抗体が含まれる。抗体を得るための抗原として用いられる本発明のポリペプチドは、任意の動物種に由来するものでよいが、好ましくはヒト、マウス、またはラットなどの哺乳動物、より好ましくはヒトに由来する。ヒト由来のポリペプチドは、本明細書に開示するヌクレオチドまたはアミノ酸配列から入手しうる。本発明によれば、免疫化抗原として用いるポリペプチドは、完全タンパク質でもよく、またはタンパク質の部分ペプチドでもよい。部分ペプチドは、例えば、本発明のポリペプチドのアミノN末端またはカルボキシC末端断片を含みうる。より具体的には、CXADRL1のコドン、235位から276位まで、493位から537位まで、または70位から111位までを含むポリペプチドを、本発明のCXADRL1に対する抗体を作製するための部分ペプチドとして用いることができる。または、本発明のポリペプチドに対する抗体の作製のために、以下のアミノ酸配列のいずれか1つを含むペプチドを用いてもよい。‐RNF43;配列番号:80、97、または108‐CXADRL1;配列番号:124‐GCUD1;配列番号:164本明細書において、抗体は、本発明のポリペプチドの完全長または断片のいずれかと反応するタンパク質として定義される。本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする遺伝子を既知の発現ベクターに挿入し、その後に本明細書に記載したような宿主細胞の形質転換に用いてもよい。所望のポリペプチドまたはその断片を、任意の標準的な方法によって宿主細胞の内部または外部から回収し、後に抗原として用いることができる。または、ポリペプチドを発現する細胞全体もしくはその可溶化物、または化学合成したポリペプチドを抗原として用いてもよい。いかなる哺乳動物も抗原で免疫することができるが、細胞融合に用いる親細胞との適合性を考慮に入れることが好ましい。一般に、齧歯類Rodentia、ウサギ目Lagomorpha、または霊長類Primateの動物が用いられる。齧歯類の動物には、例えば、マウス、ラット、およびハムスターが含まれる。ウサギ目の動物には、例えばウサギが含まれる。霊長類の動物には、例えば、狭鼻猿類Catarrhini旧世界サルのサル、カニクイザルMacacafascicularis、アカゲザル、マントヒヒsacredbaboonおよびチンパンジーが含まれる。動物を抗原で免疫するための方法は当技術分野で周知である。抗原の腹腔内注射または皮下注射は、哺乳動物の免疫化のための標準的な方法である。より具体的に述べると、抗原を希釈して適切な量のリン酸緩衝食塩水PBS、生理食塩水などの中に懸濁させる。必要に応じて、抗原懸濁液を、フロイント完全アジュバントなどの適切な量の標準的アジュバントと混合して乳濁液とした上で哺乳動物に対して投与してもよい。その後に、適切な量のフロイント不完全アジュバントと混合した抗原の投与を4~21日毎に数回行うことが好ましい。適切な担体を免疫化のために用いてもよい。上記のような免疫化の後に、血清を、所望の抗体の量の増加に関して標準的方法によって検討する。本発明のポリペプチドに対するポリクローナル抗体を、血清中の所望の抗体の増加に関して検討した免疫後の哺乳動物から血液を採取し、従来の任意の方法によって血液から血清を分離することによって調製することもできる。ポリクローナル抗体にはポリクローナル抗体を含む血清が含まれ、ポリクローナル抗体を含む画分を血清から単離することもできる。免疫グロブリンGまたはMは、本発明のポリペプチドのみを認識する画分から、例えば、本発明のポリペプチドを結合させたアフィニティーカラムを用いた上で、この画分をプロテインAカラムまたはプロテインGカラムを用いてさらに精製して、調製することができる。モノクローナル抗体を調製するためには、抗原で免疫した哺乳動物から免疫細胞を収集し、上記の通りに血清中の所望の抗体のレベル上昇について確かめた上で、細胞融合に供する。細胞融合に用いる免疫細胞は脾臓から入手することが好ましい。上記の免疫細胞と融合させるためのその他の好ましい親細胞には、例えば、哺乳動物の骨髄腫細胞、より好ましくは、薬剤による融合細胞の選択のための獲得特性を有する骨髄腫細胞が含まれる。上記の免疫細胞および骨髄腫細胞は、既知の方法、例えば、MilsteinらGalfreおよびMilstein、MethodsEnzymol73346の方法に従って融合させることができる。細胞融合によって結果として得られたハイブリドーマは、それらをHAT培地ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含む培地などの標準的な選択培地中で培養することによって選択しうる。細胞培養は通常、HAT培地中で、所望のハイブリドーマを除く他のすべての細胞非融合細胞が死滅するのに十分な期間である、数日間から数週間にわたって続けられる。その後に、所望の抗体を産生するハイブリドーマ細胞のスクリーニングおよびクローニングのために標準的な限界希釈を行う。ハイブリドーマ調製用に非ヒト動物を抗原で免疫する上記の方法に加えて、EBウイルスに感染したリンパ球などのヒトリンパ球を、ポリペプチド、ポリペプチド発現細胞、またはそれらの可溶化物によりインビトロで免疫することもできる。続いて、免疫後のリンパ球を、無限に分裂しうるU266などのヒト由来の骨髄腫細胞と融合させ、ポリペプチドと結合しうる所望のヒト抗体を産生するハイブリドーマを得ることができる特開昭6317688号。得られたハイブリドーマを続いてマウスの腹腔内に移植し、腹水を抽出する。得られたモノクローナル抗体は、例えば、硫酸アンモニウム沈殿、プロテインAもしくはプロテインGカラム、DEAEイオン交換クロマトグラフィー、または本発明のポリペプチドを結合させたアフィニティーカラムによって精製しうる。本発明の抗体は、本発明のポリペプチドの精製および検出のためだけでなく、本発明のポリペプチドのアンタゴニストの候補としても用いることができる。さらに、この抗体を、本発明のポリペプチドと関連のある疾患に対する抗体療法に適用することもできる。得られた抗体を人体に対して投与する場合には抗体療法、免疫原性を抑えるためにヒト抗体またはヒト化抗体が好ましい。例えば、ヒト抗体遺伝子のレパートリーを有するトランスジェニック動物は、ポリペプチド、ポリペプチド発現細胞、またはそれらの可溶化物から選択される抗原で免疫することができる。続いて、抗体産生細胞を動物から採取し、骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを得、そのハイブリドーマからポリペプチドに対するヒト抗体を調製することができる国際公開公報第9203918号、国際公開公報第932227号、国際公開公報第9402602号、国際公開公報第9425585号、国際公開公報第9633735号、および国際公開公報第9634096号を参照のこと。または、免疫したリンパ球のような、抗体を産生する免疫細胞を、癌遺伝子によって不死化させ、モノクローナル抗体の調製に用いることもできる。このようにして得られるモノクローナル抗体は、遺伝子操作技術を用いて組換えにより調製してもよい例えば、BorrebaeckおよびLarrick、TherapeuticMonoclonalAntibodies、MacMillanPublishersLTD英国より刊行、を参照。例えば、抗体をコードするDNAを、抗体を産生するハイブリドーマまたは免疫リンパ球などの免疫細胞からクローニングして適切なベクターに挿入した上で、宿主細胞に導入し、組換え抗体を調製することができる。本発明はまた、上記のようにして調製した組換え抗体も提供する。さらに、本発明の抗体は、本発明のポリペプチドの1つまたは複数と結合する限り、抗体の断片または修飾抗体であってもよい。例えば、抗体断片は、Fab、F2、Fv、またはH鎖およびL鎖由来のFv断片を適切なリンカーによって連結した一本鎖FvscFvであってもよいHustonら、ProcNatlAcadSciUSA85587983。より具体的に述べると、パパインまたはペプシンなどの酵素で抗体を処理することによって抗体断片を作製することもできる。または、抗体断片をコードする遺伝子を構築して発現ベクターに挿入した上で、適切な宿主細胞において発現させてもよい例えば、Coら、JImmunol152296876;BetterおよびHorwitz、MethodsEnzymol17847696;PluckthunおよびSkerra、MethodsEnzymol178497515;Lamoyi、MethodsEnzymol12165263;Rousseauxら、MethodsEnzymol1216639;BirdおよびWalker、TrendsBiotechnol91327を参照されたい。抗体を、ポリエチレングリコールPEGなどの種々の分子と結合させることによって修飾することもできる。本発明は、このような修飾抗体を提供する。修飾抗体は抗体を化学的に修飾することによって得ることができる。これらの修飾方法は当技術分野で慣例的である。または、本発明の抗体を、非ヒト抗体由来の可変領域とヒト抗体の定常領域とのキメラ抗体として、または、非ヒト抗体由来の相補性決定領域CDR、ヒト抗体由来のフレームワーク領域FRおよび定常領域を含むヒト化抗体として入手することもできる。このような抗体は、既知の技術を用いて調製可能である。以上のようにして得られた抗体を均一になるまで精製してもよい。例えば、抗体を、一般的なタンパク質に対して用いられる分離法および精製法に従って分離および精製することができる。例えば、アフィニティークロマトグラフィーなどのカラムクロマトグラフィー、フィルター、限外濾過、塩析、透析、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動などしかし、これらには限定されないを適切に選択組み合わせることにより、抗体を分離および単離することができるALaboratoryManual、HarlowおよびDavidLane編、ColdSpringHarborLaboratory。プロテインAカラムおよびプロテインGカラムはアフィニティーカラムとして用いうる。用いられるプロテインAカラムの例には、例えば、ハイパーD、POROSおよびセファロースFFファルマシアが含まれる。クロマトグラフィーの例には、アフィニティークロマトグラフィーを除いて、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィーなどが含まれるStrategiesforProteinPurificationandCharacterizationALaboratoryCourseManual、DanielRMarshakら編、ColdSpringHarborLaboratoryPress。クロマトグラフィーの手順を、HPLCおよびFPLCなどの液相クロマトグラフィーによって行うこともできる。本発明の抗体の抗原結合活性を測定するには、例えば、吸光度、酵素結合免疫吸着アッセイ法ELISA、酵素免疫アッセイ法EIA、放射免疫アッセイ法RIAおよびまたは免疫蛍光検査法を用いうる。ELISAの場合には、本発明の抗体をプレート上に固定化し、本発明のポリペプチドをプレートに対して添加した後に、抗体産生細胞の培養上清または精製抗体といった所望の抗体を含む試料を添加する。続いて、一次抗体を認識し、アルカリホスファターゼなどの酵素で標識された二次抗体を添加し、プレートをインキュベートする。次に、洗浄の後に、pニトロフェニルリン酸などの酵素基質をプレートに添加して、試料の抗原結合活性を評価するために吸光度を測定する。C末端断片またはN末端断片といったポリペプチドの断片を、抗体の結合活性を評価するための抗原として用いてもよい。BIAcoreファルマシアを、本発明による抗体の活性の評価に用いてもよい。以上の方法は、本発明の抗体を本発明のポリペプチドを含むと想定される試料に対して曝露させ、抗体およびポリペプチドによって形成された免疫複合体を検出または測定することにより、本発明のポリペプチドの検出または測定を可能にする。本発明によるポリペプチドの検出または測定の方法はポリペプチドを特異的に検出または測定することが可能であるため、本方法はポリペプチドが用いられる種々の実験に有用と思われる。本発明はまた、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列番号:1、3、または5またはその相補鎖とハイブリダイズし、少なくとも15ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドも提供する。本発明のポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドをコードするDNAと特異的にハイブリダイズするポリヌクレオチドであることが好ましい。本明細書で用いる特異的にハイブリダイズするという用語は、他のタンパク質のコードするDNAとのクロスハイブリダイゼーションが、通常のハイブリダイゼーション条件下、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、顕著には起こらないことを意味する。このようなポリヌクレオチドには、本発明のポリペプチドをコードするDNAまたはその相補鎖と特異的にハイブリダイズする、プローブ、プライマー、ヌクレオチド、およびヌクレオチド誘導体例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイムが含まれる。さらに、このようなポリヌクレオチドをDNAチップの調製のために利用することもできる。本発明は、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列の内部のいずれかの部位とハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列のうち少なくとも15個の連続したヌクレオチドに対するものであることが好ましい。上記の少なくとも15個の連続したヌクレオチド中に1つの開始コドンを含む、上記のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、さらに好ましい。より具体的に述べると、このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドには、CXADRL1の発現を抑制する目的で配列番号:23または25のヌクレオチド配列を;GCUD1の場合には配列番号:27または29のヌクレオチド配列を;RNF43の場合には配列番号:31のヌクレオチド配列を含むものが含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体または修飾産物をアンチセンスオリゴヌクレオチドとして用いることもできる。このような修飾産物の例には、メチルホスホネート型またはエチルホスホネート型などの低級アルキルホスホネート修飾物、ホスホロチオエート修飾物、およびホスホロアミデート修飾物が含まれる。本明細書で用いるアンチセンスオリゴヌクレオチドという用語は、DNAまたはmRNAの特定領域を構成するものに対応するヌクレオチドが完全に相補的であるものだけでなく、1つまたは複数のヌクレオチドにミスマッチがあるものも、そのDNAまたはmRNAおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズしうる限りは含まれる。このようなポリヌクレオチドは、少なくとも15個の連続したヌクレオチド配列の領域内に、少なくとも70またはそれ以上、好ましくは80またはそれ以上、より好ましくは90またはそれ以上、さらにより好ましくは95またはそれ以上の相同性を有するものとして含まれる。相同性の決定には本明細書に述べるアルゴリズムを用いうる。このようなポリヌクレオチドは、以下の実施例の項で述べるように、本発明のポリペプチドをコードするDNAの単離もしくは検出のためのプローブとして、または増幅用のプライマーとして有用である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体は、ポリペプチドをコードするDNAまたはmRNAと結合し、その転写または翻訳を阻害して、mRNAの分解を促進し、本発明のポリペプチドの発現を阻害して、それによってポリペプチドの機能を阻害することにより、本発明のポリペプチドを産生する細胞に対して作用する。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体は、誘導体に対して活性のない適した基材と混合することにより、リニメント剤または湿布剤などの外用製剤の形にすることができる。同様に、必要に応じて、誘導体を、賦形剤、等張剤、溶解補助剤、安定剤、保存料、鎮痛薬などを添加することにより、錠剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、リポソームカプセル剤、注射剤、液剤、点鼻薬および凍結乾燥製剤として製剤化することもできる。これらは通常の方法に従って調製可能である。アンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体は、罹患部位に対して直接外用することにより、またはそれが罹患部位に到達するように血管内に注入することにより、患者に対して投与される。持続性および膜透過性を高めるためにアンチセンス用マウント培地を用いることもできる。その例には、リポソーム、ポリLリジン、脂質、コレステロール、リポフェクチンまたはこれらの誘導体がある。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体の投与量は、患者の状態に従って適切に調整した上で、望ましい量を用いることができる。例えば、01~100mgkg、好ましくは01~50mgkgの範囲の用量を投与することができる。本発明はまた、配列番号:1、3、または5のヌクレオチド配列のセンス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸の組み合わせを含む、低分子干渉RNAsiRNAも含む。より具体的に述べると、RNF43の発現を抑制するためのこの種のsiRNAには、センス鎖に配列番号:40、41、42、または43のヌクレオチド配列を含むものが含まれる。また、CXADRL1の発現を抑制するためのsiRNAには、センス鎖に配列番号:62または63のヌクレオチド配列を含むものが含まれる。siRNAという用語は、標的mRNAの翻訳を妨げる二本鎖RNA分子を指す。siRNAを細胞に導入するためには、RNAを転写するための鋳型としてDNAを用いることを含む、標準的な技法が用いられる。siRNAは、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列番号:1、3、または5のセンス核酸配列およびアンチセンス核酸配列を含む。siRNAは、例えばヘアピンのように、単一の転写物二本鎖RNAが標的遺伝子由来のセンス配列および相補的アンチセンス配列の両方を有するように構築される。本方法は、細胞の遺伝子発現、すなわち、例えば細胞の悪性トランスフォーメーションの結果として、上方制御されているCXADRL1、GCUD1、またはRNF43の発現を変化させるために用いられる。標的細胞におけるsiRNAとCXADRL1、GCUD1、またはRNF43転写物との結合は、細胞によるタンパク質産生の減少を引き起こす。オリゴヌクレオチドの長さは少なくとも10ヌクレオチドであり、天然の転写物程度の長さであってもよい。オリゴヌクレオチドが19~25ヌクレオチド長であることが好ましい。最も好ましくは、オリゴヌクレオチドは75、50、25ヌクレオチド長である。哺乳動物細胞における発現を阻害するCXADRL1、GCUD1、またはRNF43siRNAオリゴヌクレオチドの例には、配列番号:112~114のいずれかを含むオリゴヌクレオチドが含まれる。これらの配列はそれぞれ、以下のsiRNA配列の標的配列である:配列番号:112、配列番号:40、41RNF43;配列番号:113、配列番号:42、43RNF43;および配列番号:114、配列番号:62、63CXADRL1。siRNAのヌクレオチド配列は、アンビオン社AmbionのウェブサイトhttpwwwambioncomtechlibmiscsiRNAfinderhtmlから入手しうるsiRNA設計用のコンピュータプログラムを用いて設計することができる。siRNAに関するヌクレオチド配列は、コンピュータプログラムにより、以下のプロトコールに基づいて選択される。siRNA標的部位の選択:1.目的の転写物のAUG開始コドンから開始して、AAジヌクレオチド配列に関して下流へとスキャンする。各AAおよび3側に隣接した19ヌクレオチドの出現率をsiRNA標的の可能性がある部位として記録する。Tuschlらは、siRNAを5および3非翻訳領域UTRならびに開始コドン付近75塩基内の領域に対しては設計しないように推奨しており、これは、これらの領域には調節タンパク質の結合部位が多く含まれる可能性があるためである。UTR結合タンパク質およびまたは翻訳開始複合体は、siRNAエンドヌクレアーゼ複合体の結合を妨げる可能性がある。2.標的の可能性がある部位をヒトゲノムデータベースと比較し、他のコード配列と明らかな相同性を有するどの標的領域も検討から除外する。相同性検索はBLASTを用いて行うことができ、これはNCBIのサーバー:wwwncbinlmnihgovBLAST上にある。3.合成用の適格な標的配列を選択する。アンビオン社では、遺伝子の全長に沿っていくつかの標的配列を評価用に選択することができる。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはsiRNAは本発明のポリペプチドの発現を阻害し、そのため、本発明のポリペプチドの生物学的活性を抑制するのに有用である。同様に、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはsiRNAを含む発現阻害物質も、それらが本発明のポリペプチドの生物学的活性を阻害しうるという点で有用である。このため、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはsiRNAを含む組成物は癌などの細胞増殖性疾患の治療に有用である。さらに、本発明は、本発明のポリペプチドの発現レベルを診断マーカーとして利用して、細胞増殖性疾患を診断するための方法も提供する。この診断方法は、a本発明のCXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子の発現レベルを検出する段階、およびb発現レベルの上昇を癌などの細胞増殖性疾患と関連づける段階を含む。個々の標本におけるCXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子の発現レベルは、CXADRL1、GCUD1もしくはRNF43遺伝子に対応するmRNA、またはCXADRL1、GCUD1もしくはRNF43遺伝子によってコードされるタンパク質を定量することによって評価することができる。mRNAの定量法は当業者に周知である。例えば、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子に対応するmRNAのレベルは、ノーザンブロット分析またはRTPCRによって評価しうる。CXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子の完全長ヌクレオチド配列は配列番号:1、3、または5に示されているため、当業者はいずれも、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子を定量するためのプローブまたはプライマーのヌクレオチド配列を設計することができる。CXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子の発現レベルも、遺伝子によってコードされるタンパク質の活性または量に基づいて分析することができる。CXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質の量を決定するための方法は以下に示されている。例えば、免疫アッセイ法は、生物材料におけるタンパク質の決定に有用である。いかなる生物材料も、タンパク質またはその活性の決定に有用な可能性がある。例えば、血液試料は、血清マーカーによってコードされるタンパク質の評価を目的として分析される。一方、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子によってコードされるタンパク質の活性を決定するためには、分析しようとする各タンパク質の活性に応じて適した方法が選択されうる。標本被験試料におけるCXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子の発現レベルを評価し、正常試料における発現レベルと比較する。このような比較によって標的遺伝子の発現レベルが正常試料における発現レベルよりも高いことが示された場合には、その対象は細胞増殖性疾患に罹患していると判断される。正常試料由来および対象由来の標本におけるCXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子の発現レベルは同時に決定してもよい。または、あらかじめ対照群から採取しておいた標本の遺伝子発現レベルを分析することで得た結果に基づく統計学的方法によって、発現レベルの正常範囲を決定することもできる。対象の試料を比較して得た結果をその正常範囲と比較する;その結果が正常範囲内に収まらない場合には、対象は細胞増殖性疾患に罹患していると判断される。本発明において、診断しようとする細胞増殖性疾患は、好ましくは癌である。より好ましくは、CXADRL1またはGCUD1遺伝子の発現レベルを評価し、正常試料におけるものと比較する場合、診断しようとする細胞増殖性疾患は胃癌、結腸直腸癌、または肝臓癌である;ならびに、RNF43遺伝子をその発現レベルに関して評価する場合には、診断しようとする疾患は結腸直腸癌、肺癌、胃癌、または肝臓癌である。本発明においては、胃癌、結腸直腸癌、肺癌および肝臓癌を含む癌などの細胞増殖性疾患を診断するための診断薬も提供される。本発明の診断薬は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと結合する化合物を含む。本発明のポリヌクレオチドとハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、または本発明のポリペプチドと結合する抗体をこのような化合物として用いることが好ましい。さらに、本発明は、本発明のポリペプチドを用いる、細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法を提供する。このスクリーニング方法の1つの態様には、a被験化合物を本発明のポリペプチドと接触させる段階、b本発明のポリペプチドと被験化合物との結合活性を検出する段階、およびc本発明のポリペプチドと結合する化合物を選択する段階が含まれる。スクリーニングに用いる本発明のポリペプチドは、組換えポリペプチドでも天然のタンパク質でもよく、またはそれらの部分ペプチドでもよい。任意の被験化合物、例えば、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵性微生物の産物、海洋生物からの抽出物、植物抽出物、精製タンパク質または粗タンパク質、ペプチド、非ペプチド化合物、合成ミクロ分子化合物syntheticmicromolecularcompound、および天然化合物を用いることができる。被験化合物と接触させる本発明のポリペプチドは、例えば、精製ポリペプチド、可溶性タンパク質、担体と結合した形態、または他のポリペプチドと融合した融合タンパク質でありうる。本発明のポリペプチドを用いて、タンパク質、例えば本発明のポリペプチドと結合するタンパク質をスクリーニングする方法としては、当業者に周知の多くの方法を用いることができる。このようなスクリーニングは、例えば、免疫沈降方法により、具体的には以下の様式で行うことができる。pSV2neo、pcDNAIおよびpCD8といった外来遺伝子用の発現ベクターに対して遺伝子を挿入することにより、本発明のポリペプチドをコードする遺伝子を動物細胞などで発現させる。発現のために用いるプロモーターは一般に用いうる任意のプロモーターでよく、これには例えば、SV40初期プロモーターRigby、Williamson編、GeneticEngineering第3巻、AcademicPress、London、83141、EF1αプロモーターKimら、Gene9121723、CAGプロモーターNiwaら、Gene108193200、RSVLTRプロモーターCullen、MethodsinEnzymology152684704、SRαプロモーターTakebeら、MolCellBiol8466、CMV最初期プロモーターSeedおよびAruffo、ProcNatlAcadSciUSA8433659、SV40後期プロモーターGheysenおよびFiers、JMolApplGenet138594、アデノウイルス後期プロモーターKaufmanら、MolCellBiol9946、HSVTKプロモーターなどが含まれる。外来遺伝子を発現させるための動物細胞への遺伝子の導入は任意の方法に従って行うことができ、これには例えば、電気穿孔法Chuら、NucleicAcidsRes15131126、リン酸カルシウム法ChenおよびOkayama、MolCellBiol7274552、DEAEデキストラン法Lopataら、NucleicAcidsRes12570717;SussmanおよびMilman、MolCellBiol416423、リポフェクチン法Derijard、BCell7102537;Lambら、NatureGenetics52230:Rabindranら、Science2592304などがある。本発明のポリペプチドは、本発明のポリペプチドのN末端またはC末端に対する特異性が判明しているモノクローナル抗体のエピトープを導入することにより、モノクローナル抗体の認識部位エピトープを含む融合タンパク質として発現させることができる。市販のエピトープ抗体系を用いることもできるExperimentalMedicine138590。例えばβガラクトシダーゼ、マルトース結合タンパク質、グルタチオンSトランスフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質GFPなどとの融合タンパク質を、マルチクローニングサイトを用いることによって発現させうるベクターが市販されている。融合によって本発明のポリペプチドの性質を変えないように数個~十数個のアミノ酸からなる小さなエピトープのみを導入することによって作製された融合タンパク質も報告されている。ポリヒスチジンHisタグ、インフルエンザ凝集素HA、ヒトcmyc、FLAG、水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質VSVGP、T7遺伝子10タンパク質T7タグ、ヒト単純ヘルペスウイルス糖タンパク質HSVタグ、Eタグモノクローナルファージ上のエピトープなどのエピトープ、およびそれらを認識するモノクローナル抗体を、本発明のポリペプチドと結合するタンパク質のスクリーニングのためのエピトープ抗体系として用いることができるExperimentalMedicine138590。免疫沈降の場合には、適切な界面活性剤を用いて調製した細胞可溶化物にこれらの抗体を添加することにより、免疫複合体を形成させる。免疫複合体は、本発明のポリペプチド、そのポリペプチドとの結合能があるポリペプチド、および抗体からなる。以上のエピトープに対する抗体を用いることに加えて、免疫沈降を本発明のポリペプチドに対する抗体を用いて行うこともでき、これらの抗体は上記の通りに調製することができる。免疫複合体は、抗体がマウスIgG抗体であれば、例えばプロテインAセファロースまたはプロテインGセファロースによって沈降させることができる。本発明のポリペプチドをGSTなどのエピトープとの融合蛋白質として作製する場合には、これらのエピトープと特異的に結合する基質、例えばグルタチオンセファロース4Bを用いて、本発明のポリペプチドに対する抗体を用いる時と同じ様式で免疫複合体を形成させることができる。免疫沈降は、例えば、文献中に記載された方法に倣ってまたは従って行うことができるHarlowおよびLane、Antibodies、51152、ColdSpringHarborLaboratorypublications、NewYork。SDSPAGEは免疫沈降したタンパク質の分析に一般に用いられており、結合したタンパク質はゲルを適切な濃度で用いてタンパク質の分子量によって分析することができる。本発明のポリペプチドと結合したタンパク質をクーマシー染色または銀染色などの一般的な染色法によって検出することは困難であるため、タンパク質に関する検出感度は、放射性同位体である35Sメチオニンまたは35Sシステインを含む培養液中で細胞を培養し、細胞内のタンパク質を標識した上でタンパク質を検出することによって改善することができる。タンパク質の分子量がわかっている場合には、標的タンパク質をSDSポリアクリルアミドゲルから直接精製して、その配列を決定することができる。ポリペプチドを用いる、本発明のポリペプチドと結合するタンパク質のスクリーニングのための方法として、例えば、ウエストウエスタンブロット分析Skolnikら、Cell658390を用いることができる。具体的には、本発明のポリペプチドと結合するタンパク質は、細胞、組織、臓器例えば、CXADRL1にと結合するタンパク質のスクリーニングのためには精巣および卵巣;GCUD1と結合するタンパク質のスクリーニングのためには精巣、卵巣、および脳;ならびに、RNF43と結合するタンパク質のスクリーニングのためには胎児肺および胎児腎臓などの組織、または本発明のポリペプチドと結合するタンパク質を発現すると予想される培養細胞から、ファージベクター例えば、ZAPを用いてcDNAライブラリーを作製し、タンパク質をLBアガロース上で発現させ、発現したタンパク質をフィルター上に固定し、精製および標識がなされた本発明のポリペプチドを上記のフィルターと反応させ、かつ本発明のポリペプチドと結合したタンパク質を発現するプラークを標識によって検出することによって得ることができる。本発明のポリペプチドは、ビオチンとアビジンとの結合を利用することにより、または本発明のポリペプチドと特異的に結合する抗体、もしくは本発明のポリペプチドと融合したペプチドもしくはポリペプチド例えば、GSTを利用することにより、標識しうる。放射性同位体または蛍光などを用いる方法を用いてもよい。または、本発明のスクリーニング方法のもう1つの態様において、細胞を利用する2ハイブリッド系を用いることもできるMATCHMAKER2ハイブリッド系MATCHMAKERTwoHybridsystem哺乳動物MATCHMAKER2ハイブリッドアッセイキットMammalianMATCHMAKERTwoHybridAssayKitMATCHMAKER1ハイブリッド系MATCHMAKERoneHybridsystemクロンテック;HybriZAP2ハイブリッドベクター系HybriZAPTwoHybridVectorSystemストラタジーンStratagene;参考文献DaltonおよびTreisman、Cell68597612FieldsおよびSternglanz、TrendsGenet1028692。2ハイブリッド系では、本発明のポリペプチドをSRF結合領域またはGAL4結合領域と融合させて、酵母細胞で発現させる。本発明のポリペプチドと結合するタンパク質を発現すると予想される細胞から、ライブラリーが発現した場合にVP16またはGAL4転写活性化領域と融合させるように、cDNAライブラリーを作成する。続いてcDNAライブラリーを上記の酵母細胞に導入し、検出された陽性クローンからライブラリーに由来するcDNAを単離する本発明のポリペプチドと結合するタンパク質を酵母細胞で発現させる場合には、この2つの結合によってレポーター遺伝子が活性化され、陽性クローンが検出されるようになる。cDNAによってコードされるタンパク質は、以上のようにして単離したcDNAを大腸菌に導入してタンパク質を発現させることによって調製しうる。レポーター遺伝子としては、HIS3遺伝子のほかに、例えば、Ade2遺伝子、lacZ遺伝子、CAT遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子などを用いることができる。本発明のポリペプチドと結合する化合物を、アフィニティークロマトグラフィーを用いてスクリーニングすることもできる。例えば、本発明のポリペプチドをアフィニティーカラムの担体上に固定化し、本発明のポリペプチドと結合しうるタンパク質を含む被験化合物をカラムに対して適用してもよい。本明細書における被験化合物は、例えば、細胞抽出物、細胞可溶化物などであってよい。被験化合物のローディング後に、カラムを洗浄し、本発明のポリペプチドと結合した化合物を調製することができる。被験化合物がタンパク質である場合には、得られたタンパク質のアミノ酸配列を分析して、その配列に基づいてオリゴDNAを合成し、そのオリゴDNAを、タンパク質をコードするDNAを得るためのプローブとして用いて、cDNAライブラリーをスクリーニングする。表面プラスモン共鳴現象を利用するバイオセンサーを、結合した化合物の検出または定量のための手段として本発明に用いることもできる。このようなバイオセンサーを用いると、ごく微量のポリペプチドのみを用いて、標識を行わずに、本発明のポリペプチドと被験化合物との相互作用を表面プラスモン共鳴シグナルとしてリアルタイムに観察することができる例えば、BIAcore、ファルマシア。このため、BIAcoreなどのバイオセンサーを用いて、本発明のポリペプチドと被験化合物との結合を評価することが可能である。本発明の固定化されたポリペプチドを合成化合物、または天然物バンク、またはランダムなファージペプチドディスプレイライブラリーに対して曝露させた場合に結合する分子をスクリーニングする方法、および、本発明のタンパク質と結合するタンパク質だけでなく化合物アンタゴニストを含むも単離するための、コンビナトリアル化学に基づくハイスループット技法を用いたスクリーニング方法Wrightonら、Science27345864;Verdine、Nature3841113;Hogan、Nature384179は当業者に周知である。または、本発明のスクリーニング方法は、a候補化合物を、1つまたは複数のマーカー遺伝子の転写調節領域および転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子を含むベクターが導入された細胞と接触させる段階この際、1つまたは複数のマーカー遺伝子はCXADRL1、GCUD1、およびRNF43からなる群より選択される;b前記レポーター遺伝子の活性を測定する段階;およびc前記レポーター遺伝子の発現レベルを対照と比較して低下させる化合物を選択する段階を含みうる。適したレポーター遺伝子および宿主細胞は当技術分野で周知である。スクリーニングのために必要なレポーター構築物は、マーカー遺伝子の転写調節領域を用いることによって作製しうる。マーカー遺伝子の転写調節領域が当業者に知られている場合には、事前の配列情報を用いることによってレポーター構築物を作製することができる。マーカー遺伝子の転写調節領域がまだ同定されていない場合には、転写調節領域を含むヌクレオチドセグメントを、マーカー遺伝子のヌクレオチド配列情報に基づいてゲノムライブラリーから単離することができる。このスクリーニングによって単離される化合物は、例えば、癌などの細胞増殖性疾患に起因する疾患の治療または予防を目的として、本発明のポリペプチドの活性を阻害する薬剤の候補である。本発明のポリペプチドに対する結合活性を有する、本スクリーニング方法によって得られた化合物の構造の一部が、付加、欠失、およびまたは置換によって変換された化合物は、本発明のスクリーニング方法によって得られる化合物に含まれる。さらにもう1つの態様において、本発明は、細胞増殖性疾患の治療において標的となる可能性のある候補物質をスクリーニングするための方法を提供する。以上に詳細に考察したように、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43の発現レベルを制御することにより、胃癌、または結腸直腸癌、肺癌、胃癌、もしくは肝臓癌のいずれかの発症または進行を制御することが可能である。このため、細胞増殖性疾患の治療における標的の可能性がある候補物質を、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43の発現レベルおよび活性を指標として用いるスクリーニングによって同定することができる。本発明の状況において、このようなスクリーニングには、例えば、a候補化合物を、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43を発現する細胞と接触させる段階;およびbCXADRL1、GCUD1、またはRNF43の発現レベルを、被験化合物の非存在下で検出される発現レベルと比較して低下させる化合物を選択する段階が含まれていてもよい。CXADRL1、GCUD1、またはRNF43のうち少なくとも1つを発現する細胞には、例えば、胃癌、結腸直腸癌、肺癌、または肝臓癌から樹立された細胞株が含まれる;このような細胞は本発明の上記のスクリーニングのために用いることができる。発現レベルは当業者に周知の方法によって評価しうる。このスクリーニング方法では、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43のうち少なくとも1つの発現レベルを低下させる化合物を候補薬剤として選択することができる。本発明の細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法のもう1つの態様において、本方法は、本発明のポリペプチドの生物学的活性を指標として用いる。本発明のCXADRL1、GCUD1、およびRNF43タンパク質は細胞増殖を促進する活性を有するため、本発明のこれらのタンパク質のいずれかのこの活性を阻害する化合物を、この活性を指標として用いてスクリーニングすることができる。このスクリーニング方法は、a被験化合物を本発明のポリペプチドと接触させる段階、b段階aのポリペプチドの生物学的活性を検出する段階、およびc被験化合物の非存在下で検出される生物学的活性と比較してポリペプチドの生物学的活性を抑制する化合物を選択する段階を含む。いかなるポリペプチドも、それらがCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質の生物学的活性を有する限り、スクリーニングに用いることができる。このような生物学的活性には、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質の細胞増殖活性、RNF43のNOTCH2またはSTRINと結合する活性が含まれる。例えば、ヒトCXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質を用いることができ、これらのタンパク質と機能的に同等なポリペプチドを用いることもできる。このようなポリペプチドは細胞によって内因性に発現させても外因性に発現させてもよい。任意の被験化合物、例えば、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵性微生物の産物、海洋生物の抽出物、植物抽出物、精製タンパク質または粗タンパク質、ペプチド、非ペプチド化合物、合成ミクロ分子化合物、天然化合物を用いることができる。このスクリーニングによって単離される化合物は、本発明のポリペプチドのアンタゴニストの候補である。アンタゴニストという用語は、本発明のポリペプチドとの結合によってそのポリペプチドの機能を阻害する分子を指す。さらに、このスクリーニングによって単離された化合物は、本発明のポリペプチドと分子DNAおよびタンパク質を含むとのインビボ相互作用を阻害する化合物の候補でもある。本方法において検出しようとする生物学的活性が細胞増殖である場合には、実施例の項に記載したように、例えば、本発明のポリペプチドを発現する細胞を作製し、細胞を被験化合物の存在下で培養して、細胞増殖の速度を評価し、細胞周期などを測定することにより、さらにはコロニー形成活性を測定することにより、生物学的活性を検出することができる。上記のスクリーニングによって単離される化合物は、本発明のポリペプチドの活性を阻害する薬剤の候補であり、本発明のポリペプチドと関連のある疾患、例えば、癌を含む細胞増殖性疾患の治療に応用することができる。より具体的に述べると、CXADRL1またはGCUD1タンパク質の生物学的活性を指標として用いる場合には、本方法によってスクリーニングされた化合物は胃癌、結腸直腸癌または肝臓癌の治療のための薬剤の候補としての役を果たす。一方、RNF43タンパク質の生物学的活性を指標として用いる場合には、本方法によってスクリーニングされた化合物は結腸直腸癌、肺癌、胃癌、または肝臓癌の治療のための薬剤の候補としての役を果たす。さらに、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質の活性を阻害する化合物の構造の一部が、付加、欠失、およびまたは置換によって変換された化合物も、本発明のスクリーニング方法によって得られる化合物に含まれる。本発明の細胞増殖性疾患を治療するための化合物のスクリーニング方法のさらにもう1つの態様において、本方法は、RNF43のNOTCH2またはSTRINとの結合能を利用する。本発明のRNF43タンパク質はNOTCH2およびSTRINと会合することが判明した。これらの所見は、本発明のRNF43タンパク質がNOTCH2およびSTRINなどの分子との結合を介して細胞増殖の機能を発揮することを示唆する。このため、RNF43タンパク質とNOTCH2またはSTRINとの結合を阻害することによって細胞増殖の阻害がもたらされ、この結合を阻害する化合物は癌などの細胞増殖性疾患を治療するための調合薬として役立つことが予想される。本方法によってスクリーニングされた化合物によって治療される細胞増殖性疾患は、好ましくは結腸直腸癌、肺癌、胃癌、または肝臓癌である。このスクリーニング方法は、a被験化合物の存在下で本発明のポリペプチドをNOTCH2またはSTRINと接触させる段階、bポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を検出する段階、およびcポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を阻害する化合物を選択する段階を含む。このスクリーニングに用いられる本発明のRNF43ポリペプチド、およびNOTCH2またはSTRINは、組換えポリペプチドでも天然のタンパク質でもよく、または、相互の結合能を保っている限り、それらの部分ペプチドでもよい。スクリーニングに用いられるRNF43ポリペプチド、NOTCH2またはSTRINは、例えば、精製ポリペプチド、可溶性タンパク質、担体と結合した形態、または他のポリペプチドと融合した融合タンパク質でありうる。任意の被験化合物、例えば、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵性微生物の産物、海洋生物からの抽出物、植物抽出物、精製タンパク質または粗タンパク質、ペプチド、非ペプチド化合物、合成ミクロ分子化合物および天然化合物を用いることができる。RNF43タンパク質とNOTCH2またはSTRINとの結合を阻害する化合物のスクリーニング方法としては、当業者に周知の多くの方法を用いることができる。このようなスクリーニングは、インビトロアッセイ系、例えば細胞系において行うことができる。より具体的に述べると、まず、RNF43ポリペプチドまたはNOTCH2もしくはSTRINのいずれかを支持体に対して結合させ、それに対してもう一方のタンパク質を被験試料とともに添加する。次に、混合物をインキュベートし、洗浄した上で、支持体と結合したもう一方のタンパク質を検出およびまたは測定する。同じようにして、CXADRL1とAIP1との会合を妨げる化合物を本発明によって単離することができる。CXADRL1とAIP1との結合を阻害すると細胞増殖の抑制が生じることが予想され、この結合を阻害する化合物は、癌などの細胞増殖性疾患を治療するための調合薬として役立つ。タンパク質を結合させるために用いうる支持体の例には、アガロース、セルロース、およびデキストランなどの不溶性多糖類、ならびにポリアクリルアミド、ポリスチレン、およびシリコンなどの合成樹脂が含まれる;以上の材料から作製された市販のビーズおよびプレート例えば、マルチウェルプレート、バイオセンサーチップなどを用いることが好ましい。ビーズを用いる場合には、それらをカラムに充填してもよい。タンパク質は、化学的結合および物理的吸着などの慣行の方法に従って支持体に結合させることができる。または、タンパク質は、タンパク質を特異的に認識する抗体を介して支持体に結合させてもよい。さらに、アビジンとビオチンの結合を利用して、タンパク質を支持体に結合させることもできる。タンパク質同士の結合は、緩衝液がタンパク質同士の結合を阻害しない限りは、例えばこれらに限定されないがリン酸緩衝液およびTris緩衝液の緩衝液中で行われる。本発明において、表面プラスモン共鳴現象を利用するバイオセンサーを、結合したタンパク質の検出または定量のための手段として用いることもできる。このようなバイオセンサーを用いると、ごく微量のポリペプチドのみを用いて、標識を行わずに、タンパク質同士の相互作用を表面プラスモン共鳴シグナルとしてリアルタイムに観察することができる例えば、BIAcore、ファルマシア。このため、BIAcoreなどのバイオセンサーを用いて、RNF43ポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を評価することが可能である。または、RNF43ポリペプチドまたはNOTCH2もしくはSTRINのいずれかを標識し、結合したタンパク質の標識を、結合したタンパク質の検出または測定に用いることもできる。具体的には、タンパク質の一方をあらかじめ標識した後に、標識したタンパク質を被験化合物の存在下でもう一方のタンパク質と接触させ、洗浄後、結合したタンパク質を標識によって検出または測定する。本方法におけるタンパク質の標識のためには、放射性同位体例えば、3H、14C、32P、33P、35S、125I、131I、酵素例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、βグルコシダーゼ、蛍光物質例えば、フルオレセインイソチオシアネートFITC、ローダミンおよびビオチンアビジンなどの標識物質を用いることができる。タンパク質を放射性同位体で標識する場合には、検出または測定を液体シンチレーションによって行うことができる。または、酵素で標識したタンパク質は、呈色などの基質の酵素的変化を検出するために、酵素基質を添加して吸光光度計で検出または測定することもできる。さらに、蛍光物質を標識として用いる場合には、結合したタンパク質を蛍光光度計を用いて検出または測定することができる。さらに、RNF43ポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を、RNF43ポリペプチドおよびNOTCH2またはSTRINに対する抗体を用いて検出または測定することもできる。例えば、支持体上に固定させたRNF43ポリペプチドを被験化合物およびNOTCH2またはSTRINと接触させた後に、混合物をインキュベートし、洗浄した上で、NOTCH2またはSTRINに対する抗体を用いて検出または測定を行うことができる。または、NOTCH2またはSTRINを支持体上に固定化し、RNF43に対する抗体を抗体として用いてもよい。抗体を本スクリーニングに用いる場合には、抗体を上記の標識物質のいずれかで標識し、標識物質に基づいて検出または測定を行うことが好ましい。または、標識物質で標識した二次抗体によって検出されるように、RNF43ポリペプチド、NOTCH2またはSTRINに対する抗体を一次抗体として用いてもよい。さらに、本発明のスクリーニングにおいてタンパク質と結合した抗体は、プロテインGまたはプロテインAカラムを用いて検出または測定することもできる。または、本発明のスクリーニング方法のもう1つの態様において、細胞を利用する2ハイブリッド系を用いることもできるMATCHMAKER2ハイブリッド系哺乳動物MATCHMAKER2ハイブリッドアッセイキットMATCHMAKER1ハイブリッド系クロンテック;HybriZAP2ハイブリッドベクター系ストラタジーン;参考文献DaltonおよびTreisman、Cell68597612FieldsおよびSternglanz、TrendsGenet1028692。2ハイブリッド系では、本発明のRNF43ポリペプチドをSRF結合領域またはGAL4結合領域と融合させて、酵母細胞において発現させる。本発明のRNF43ポリペプチドと結合するNOTCH2またはSTRINをVP16またはGAL4転写活性化領域と融合させ、被験化合物の存在下で酵母細胞において同様に発現させる。被験化合物がRNF43ポリペプチドとNOTCH2またはSTRINとの結合を阻害しなければ、この2つの結合によってレポーター遺伝子が活性化され、陽性クローンが検出されるようになる。レポーター遺伝子としては、HIS3遺伝子のほかに、例えば、Ade2遺伝子、lacZ遺伝子、CAT遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子などを用いることができる。本スクリーニングによって単離される化合物は、本発明のRNF43タンパク質の活性を阻害する薬剤の候補であり、RNF43タンパク質と関連のある疾患、例えば、癌などの細胞増殖性疾患、より具体的には結腸直腸癌、肺癌、胃癌、または肝臓癌の治療に応用することができる。さらに、RNF43タンパク質とNOTCH2またはSTRINとの結合を阻害する化合物の構造の一部が、付加、欠失、およびまたは置換によって変換された化合物も、本発明のスクリーニング方法によって得られる化合物に含まれる。本発明の方法によって単離された化合物を、細胞増殖性疾患例えば、癌を治療するために、ヒトおよび他の哺乳動物、例えばマウス、ラット、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ヒツジ、ブタ、ウシ、サル、ヒヒ、チンパンジーに対して調合薬として投与する場合には、単離された化合物を直接投与してもよく、または既知の薬剤調製法を用いて剤形に製剤化してもよい。例えば、必要に応じて、薬剤を糖衣錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、およびマイクロカプセルとして経口投与することもでき、または水もしくは他の任意の薬学的に許容される液体との滅菌溶液もしくは懸濁液である注射剤の形態として非経口的に投与することもできる。例えば、化合物を、一般に認められる薬剤の実現のために必要な単位用量の形で、薬理学的に許容される担体または媒体、具体的には滅菌水、生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、媒質、保存料、結合剤などと混合することができる。これらの製剤における有効成分の量により、指定された範囲内にある適した投与量が得られる。錠剤およびカプセル剤に混合しうる添加剤の例には、ゼラチン、コーンスターチ、トラガカントゴムおよびアラビアゴムなどの結合剤;結晶セルロースなどの媒質;コーンスターチ、ゼラチンおよびアルギン酸などの膨潤剤;ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤;スクロース、ラクトースまたはサッカリンなどの甘味料;ペパーミント、冬緑油およびチェリーなどの香味剤がある。単位投与剤形がカプセル剤である場合には、油などの液体担体も上記の成分にさらに含めることができる。注射用の滅菌混合物は、通常の薬剤の実現に倣って、注射用の蒸留水などの媒体を用いて製剤化することができる。生理食塩水、グルコース、ならびにDソルビトール、Dマンノース、Dマンニトールおよび塩化ナトリウムなどの佐剤を含むその他の等張液を、注射用の水溶液として用いることができる。これらは適した可溶化剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールなどの多価アルコール、Polysorbate80およびHCO50などの非イオン性界面活性剤などと組み合わせて用いることができる。ゴマ油またはダイズ油は油脂性液体として用いることができ、これらを可溶化剤としての安息香酸ベンジルまたはベンジルアルコールと組み合わせて用いることもでき、さらにこれらをリン酸緩衝液および酢酸ナトリウム緩衝液などの緩衝液;塩酸プロカインなどの鎮痛薬;ベンジルアルコール、フェノールなどの安定剤;および抗酸化剤とともに製剤化することもできる。調製された注射剤は適したアンプルに充填することができる。本発明の医薬化合物を、例えば動脈内注射、静脈内注射、皮下注射として、および同じく鼻腔内投与、経気管支投与、筋肉内投与または経口投与として患者に対して投与するためには、当業者によく知られた方法を用いることができる。投与量および投与方法は患者の体重および年齢ならびに投与方法に応じて異なる;しかし、当業者は慣行的にそれらを選択しうる。前記化合物がDNAによってコードされうる場合には、DNAを遺伝子治療用のベクターに挿入し、治療を行うためにそのベクターを投与することができる。投与量および投与方法は患者の体重、年齢および症状に応じて異なるが、当業者はそれらを適切に選択しうる。例えば、症状によって若干の違いはあるものの、本発明のポリペプチドと結合してその活性を調節する化合物の投与量は、標準的な成人体重60kgに対して経口投与する場合、約01mg~約100mg日、好ましくは約10mg~約50mg日、より好ましくは約10mg~約20mg日である。標準的な成人体重60kgに対して注射剤の形態として非経口的に投与する場合には、患者、標的臓器、症状および投与方法に応じて若干の違いはあるものの、約001mg~約30mg日、好ましくは約01~約20mg日、より好ましくは約01~約10mg日の用量を静脈注射することが好都合である。同じく、他の動物の場合にも、体重60kgに換算した量を投与することが可能である。さらに、本発明は、本発明のポリペプチドに対する抗体を用いる、癌などの細胞増殖性疾患の治療または予防のための方法を提供する。本方法によれば、本発明のポリペプチドに対する抗体の薬学的有効量を投与する。CXADRL1、GCUD1、およびRNF43タンパク質の発現は癌細胞で上方制御されている上に、これらのタンパク質の発現の抑制は細胞増殖活性の低下をもたらすため、抗体とこれらのタンパク質との結合により、細胞増殖性疾患の治療または予防が可能であると考えられる。このため、本発明のポリペプチドに対する抗体は、本発明のタンパク質の活性を低下させるのに十分な投与量これは01~約250mgkg日の範囲にあるで投与される。成人に対する用量の範囲は一般に約5mg~約175g日であり、好ましくは約5mg~約10g日、最も好ましくは約100mg~約3g日である。または、腫瘍細胞に特異的な細胞表面マーカーと結合する抗体を薬物送達のためのツールとして用いることもできる。例えば、細胞障害物質と結合させた抗体を、腫瘍細胞を損傷させるのに十分な用量として投与する。本発明はまた、抗腫瘍免疫を誘導する方法であって、CXADRL1、GCUD1もしくはRNF43タンパク質もしくはその免疫活性断片、またはタンパク質をコードするポリヌクレオチドもしくはその断片を投与する段階を含む方法にも関する。CXADRL1、GCUD1、またはRNF43タンパク質またはその免疫活性断片は、細胞増殖性疾患に対するワクチンとして有用である。場合によっては、タンパク質またはその断片を、T細胞受容体TCRと結合した形態、またはマクロファージ、樹状細胞DCもしくはB細胞などの抗原提示細胞APCによって提示された形態として投与することもできる。DCの抗原提示能力が高いことから、APCの中でDCを用いることが最も好ましい。本発明において、細胞増殖性疾患に対するワクチンとは、動物に接種した時に抗腫瘍免疫を誘導する機能を有する物質を指す。本発明によれば、配列番号:80、97または108のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、RNF43を発現する結腸直腸癌細胞、肺癌細胞、胃癌細胞、または肝臓癌細胞に対して強力かつ特異的な免疫応答を誘導しうるHLAA24またはHLAA0201拘束的なエピトープペプチドであることが示唆された。本発明によれば、配列番号:124のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、CXADRL1を発現する結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、または肝臓癌細胞に対して強力かつ特異的な免疫応答を誘導しうるHLAA0201拘束的なエピトープペプチドであることが示唆された。本発明によれば、配列番号:164のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、GCUD1を発現する結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、または肝臓癌細胞に対して強力かつ特異的な免疫応答を誘導しうるHLAA0201拘束的なエピトープペプチドであることが示唆された。したがって、本発明は、配列番号:80、97、108、124、または164のアミノ酸配列を含むポリペプチドを用いて抗腫瘍免疫を誘導する方法も含む。一般に、抗腫瘍免疫には以下のような免疫応答が含まれる:‐腫瘍に対する細胞障害性リンパ球の誘導‐腫瘍を認識する抗体の誘導、および‐抗腫瘍サイトカイン産生の誘導。このため、ある特定のタンパク質が、動物に接種した時にこれらの免疫応答を誘導する場合には、そのタンパク質は抗腫瘍免疫誘導作用を有すると判定される。タンパク質による抗腫瘍免疫の誘導は、宿主におけるタンパク質に対する免疫系の応答をインビボまたはインビトロで観察することによって検出しうる。例えば、細胞障害性Tリンパ球の誘導を検出するための方法はよく知られている。生体の内部に進入する外来物質は、抗原提示細胞APCの作用によってT細胞およびB細胞に対して提示される。APCにより提示された抗原に対して抗原特異的な様式で応答したT細胞は、抗原による刺激のために細胞障害性T細胞または細胞障害性Tリンパ球;CTLに分化した後に増殖するこれはT細胞の活性化と呼ばれる。したがって、特定のペプチドによるCTL誘導は、そのペプチドをAPCによりT細胞に対して提示させ、CTLの誘導を検出することによって評価することができる。さらに、APCにはCD4T細胞、CD8T細胞、マクロファージ、好酸球およびNK細胞を活性化する作用もある。CD4T細胞およびCD8T細胞も抗腫瘍免疫において重要であるため、これらの細胞の活性化作用を指標として用いてペプチドの抗腫瘍免疫誘導作用を評価することができる。樹状細胞DCをAPCとして用いてCTLの誘導作用を評価するための方法は当技術分野で周知である。DCはAPCの中でも最も強いCTL誘導作用を有する代表的なAPCである。この方法では、まず被験ポリペプチドをDCと接触させ、続いてこのDCをT細胞と接触させる。DCとの接触後に目的の細胞に対する細胞障害作用を有するT細胞が検出されれば、被験ポリペプチドが細胞障害性T細胞を誘導する活性を持つことが示される。腫瘍に対するCTLの活性は、例えば、51Cr標識した腫瘍細胞の溶解を指標として用いて検出することができる。または、3Hチミジン取り込み活性またはLDHラクトースデヒドロゲナーゼ放出を指標として用いて腫瘍細胞の損傷の程度を評価する方法もよく知られている。DC以外に、末梢血単核細胞PBMCをAPCとして用いてもよい。CTLの誘導は、PBMCをGMCSFおよびIL4の存在下で培養することによって増強されうることが報告されている。同様に、CTLは、PBMCをキーホールリンペットヘモシアニンKLHおよびIL7の存在下で培養することによっても誘導されることが示されている。これらの方法によってCTL誘導活性を有することが確認された被験ポリペプチドは、DC活性化作用とそれに続くCTL誘導活性とを有するポリペプチドである。このため、腫瘍細胞に対するCTLを誘導するポリペプチドは腫瘍に対するワクチンとして有用である。さらに、ポリペプチドとの接触によって腫瘍に対するCTLを誘導する能力を獲得したAPCも腫瘍に対するワクチンとして有用である。さらに、APCによるポリペプチド抗原の提示によって細胞障害性を獲得したCTLを腫瘍に対するワクチンとして用いることもできる。APCおよびCTLに起因する抗腫瘍免疫を用いた、腫瘍に対するこのような治療方法は、細胞免疫療法と呼ばれる。一般に、細胞免疫療法のためにポリペプチドを用いる場合には、構造の異なる複数のポリペプチドを併用し、それらをDCと接触させることによってCTL誘導の効率が高まることが知られている。このため、DCをタンパク質断片で刺激する場合には、多くの種類の断片の混合物を用いることが有利である。または、ポリペプチドによる抗腫瘍免疫の誘導を、腫瘍に対する抗体産生の誘導を観察することによって確認することもできる。例えば、ポリペプチドに対する抗体が、ポリペプチドで免疫した実験動物において誘導された場合、および腫瘍細胞の増殖がこのような抗体によって抑制された場合には、そのポリペプチドは抗腫瘍免疫を誘導する能力があると判定することができる。抗腫瘍免疫は本発明のワクチンを投与することによって誘導され、抗腫瘍免疫の誘導により、胃癌、結腸直腸癌、肺癌、および肝臓癌などの細胞増殖性疾患の治療および予防が可能になる。癌に対する治療法または癌の発症の予防は、癌細胞の増殖の阻害、癌の退縮、および癌の発症の抑制といった段階のいずれかを含む。癌を有する個体の死亡率の低下、血液中の腫瘍マーカーの減少、癌に付随する検出可能な症状の緩和なども癌の治療または予防に含まれる。このような治療効果および予防効果は統計学的に有意であることが好ましい。例えば、観測値で、細胞増殖性疾患に対するワクチンの治療効果または予防効果をワクチン投与を行わない対照と比較して、5またはそれ未満は有意水準である。統計分析には、例えば、スチューデントのt検定、マンホイットニーのU検定またはANOVAを用いうる。免疫学的活性を有する上記のタンパク質、またはタンパク質をコードするベクターを、アジュバントと併用してもよい。アジュバントとは、免疫学的活性を有するタンパク質と同時にまたは連続して投与した場合に、そのタンパク質に対する免疫応答を増強する化合物を指す。アジュバントの例には、コレラ毒素、サルモネラ毒素、ミョウバンなどが含まれるが、これらには限定されない。さらに、本発明のワクチンを薬学的に許容される担体と適宜配合してもよい。このような担体の例には、滅菌水、生理食塩水、リン酸緩衝液、培養液などが含まれる。さらに、ワクチンが必要に応じて、安定剤、懸濁剤、保存料、界面活性剤などを含んでもよい。ワクチンは全身的または局所的に投与される。ワクチン投与は単回投与によって行ってもよく、または多回投与による追加刺激を行ってもよい。APCまたはCTLを本発明のワクチンとして用いる場合に、腫瘍を、例えばエクスビボの方法によって治療または予防することができる。より具体的に述べると、治療または予防を受ける対象のPBMCを採取し、細胞をエクスビボでポリペプチドと接触させ、APCまたはCTLの誘導後に、細胞を対象に対して投与することができる。ポリペプチドをコードするベクターをPBMC中にエクスビボで導入することによってAPCを誘導することもできる。インビトロで誘導されたAPCまたはCTLは投与前にクローニングすることができる。標的細胞を損傷させる活性の高い細胞のクローニングおよび増殖を行うことにより、細胞免疫療法をさらに効率的に行うことができる。さらに、このようにして単離されたAPCおよびCTLは、細胞が由来する個体における細胞免疫療法のみならず、他の個体の同様の種類の腫瘍にも用いうる。さらに、本発明のポリペプチドの薬学的有効量を含む、癌などの細胞増殖性疾患の治療または予防のための薬学的組成物も提供する。本薬学的組成物は抗腫瘍免疫を生じさせるために用いうる。CXADRL1の通常の発現は精巣および卵巣に限局している;GCUD1の通常の発現は精巣、卵巣、および脳に限局している;ならびに、RNF43の通常の発現は胎児、より具体的には胎児の肺および腎臓に限局している。このため、これらの遺伝子の抑制は他の臓器には有害な影響を及ぼさないと考えられる。したがって、CXADRL1およびGCUD1ポリペプチドは細胞増殖性疾患、特に胃癌、結腸直腸癌、または肝臓癌を治療するのに好ましい;RNF43ポリペプチドは細胞増殖性疾患、特に結腸直腸癌、肺癌、胃癌、および肝臓癌を治療するのに好ましい。さらに、配列番号:80、97および108のアミノ酸配列を含むRNF43のペプチド断片はそれぞれ、RNF43に対する免疫応答を誘導することが判明しているため、配列番号:80、97または108のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、細胞増殖性疾患、特に結腸直腸癌、肺癌、胃癌、および肝臓癌の治療または予防を目的とする薬学的組成物中に用いうるポリペプチドの好ましい例である。さらに、配列番号:124のアミノ酸配列を含むCXADRL1のペプチド断片はそれぞれ、CXADRL1に対する免疫応答を誘導することが判明しているため、配列番号:124のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、細胞増殖性疾患、特に結腸直腸癌、肺癌、胃癌、および肝臓癌の治療または予防を目的とする薬学的組成物中に用いうるポリペプチドの好ましい例である。さらに、配列番号:164のアミノ酸配列を含むGCUD1のペプチド断片はそれぞれ、GCUD1に対する免疫応答を誘導することが判明しているため、配列番号:164のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、細胞増殖性疾患、特に結腸直腸癌、肺癌、胃癌、および肝臓癌の治療または予防を目的とする薬学的組成物中に用いうるポリペプチドの好ましい例である。本発明において、ポリペプチドまたはその断片は抗腫瘍免疫を誘導するのに十分な投与量で投与され、これは01mg~10mg、好ましくは03mg~5mg、より好ましくは08mg~15mgの範囲である。投与は反復される。抗腫瘍免疫を誘導するには、例えば、1mgのペプチドまたはその断片を2週間毎に4回投与するとよい。以下の実施例は、本発明を例示するとともに、当業者によるその作成および使用を補助する目的で提示される。実施例はいかなる形でも本発明の範囲を限定することは意図していない。別に定義する場合を除き、本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者が一般的に理解しているものと同じ意味を持つ。本発明の実施または検討においては本明細書に記載したものと同様または同等の方法および材料を用いることができるが、好ましい方法および材料は以下に説明するものである。本明細書中に引用するいかなる特許、特許出願および刊行物も参照として本明細書に組み入れられる。発明を実施するための最良の態様本発明は以下の実施例によって詳細に例示されるが、これらの実施例には限定されない。1材料および方法1患者および組織標本すべての胃癌および結腸直腸癌組織、さらには対応する非癌組織は、外科手術を受けた患者の手術標本からインフォームドコンセントを得た上で入手した。2ゲノム全域にわたるcDNAマイクロアレイこの検討には、23040種の遺伝子を含む、ゲノム全域にわたるcDNAマイクロアレイ施設内で作製したを用いた。顕微解剖した組織から抽出した、DNaseI処理した全RNAをAmpliscribeT7転写キットEpicentreTechnologiesを用いて増幅し、逆転写時にCydyeアマシャムで非癌組織由来のRNAはCy5により、腫瘍由来のRNAはCy3により標識した。ハイブリダイゼーション、洗浄および検出を以前の記載の通りに行いOnoら、CancerRes60500711、各標的に関するCy5およびCy3の蛍光強度をArrayVisionソフトウエアアマシャムファルマシアAmershamPharmaciaを用いて測定した。バックグラウンドシグナルを差し引いた後に、各スポットについて2回ずつの値を平均した。続いて、各スライドについて、52種のハウスキーピング遺伝子の平均Cy5強度および平均Cy3強度が調整されるように、スライド上のすべての蛍光強度を標準化した。Cy3およびCy5の両方に関して強度が25000蛍光単位未満であった遺伝子は以降の検討から除外し、Cy3Cy5シグナル比が>20であったものをさらなる評価のために選択した。3細胞株ヒト胚腎臓293HEK293はタカラTaKaRaから入手した。COS7細胞、NIH3T3細胞、ヒト子宮頸癌細胞株HeLa、ヒト胃癌細胞株MKN1およびMKN28、ヒト肝臓癌細胞株Alexander、ならびにヒト結腸癌coloncancer細胞株LoVo、HCT116、DLD1およびSW480は、アメリカンタイプカルチャーコレクションATCC、Rockville、MDから入手した。ヒト肝臓癌細胞株SNU475ならびにヒト結腸癌細胞株SNUC4およびSNUC5は、韓国細胞バンクKoreanCellLineBankから入手した。細胞はすべて適切な培地中で単層として増殖させた:COS7、NIH3T3、HEK293、およびAlexanderにはダルベッコ変法イーグル培地;MKN1、MKN28、SNU475、SNUC4、DLD1、およびSNUC5にはRPMI1640;HCT116にはマッコイ5A培地;SW480にはライボビッツL15;LoVoにはハムF12;ならびにHeLaにはイーグル最小必須培地ライフテクノロジーズLifeTechnologies、GrandIsland、NY。いずれの培地にも10ウシ胎仔血清および1抗生物質抗真菌剤溶液シグマSigmaを加えた。ヒト胃癌細胞株St4は癌研究所日本の鶴尾博士DrTsuruoに寄贈いただいた。St4細胞は、10ウシ胎仔血清および1抗生物質抗真菌剤溶液シグマを加えたRPMI1640中で単層として増殖させた。ヒトBリンパ芽球細胞株であるT2細胞HLAA0201およびEHMHLAA33は珠玖教授ProfShiku三重大学に寄贈いただいた。HT29結腸癌細胞株;HLAA2401、WiDR結腸癌細胞株;HLAA2401、およびHCT116結腸癌細胞株;HLAA0201、DLD1結腸癌細胞株;HLAA2401、SNU475肝細胞癌細胞株;HLAA0201、MKN45胃癌細胞株;HLAA2陰性、MKN74胃癌細胞株;HLAA2陰性はATCCから購入した。TISI細胞HLAA2424は宝酒造TakaraShuzoCoLtd大津、日本より寄贈いただいた。RTPCR検査により、SNU475およびMKN74における強いCXADRL1発現が明らかになった。RTPCR検査により、SNU475およびMKN45における強いGCUD1発現が明らかになった。4RNA調製およびRTPCR全RNAはキアゲンRNeasyキットキアゲンまたはTrizol試薬ライフテクノロジーズを製造者のプロトコールに従って用いて抽出した。ポリdT1218プライマーアマシャムファルマシアバイオテックAmershamPharmaciaBiotechとともにSuperscriptII逆転写酵素ライフテクノロジーズを用いて、全RNAの10μgアリコートを逆転写して一本鎖cDNAとした。それぞれの一本鎖cDNA調製物を、容積20μlのPCR緩衝液タカラ中で行う標準的なRTPCR実験による次のPCR増幅のために希釈した。増幅は以下の条件下で行った:GeneAmpPCRシステム9700パーキンエルマーPerkinElmer、FosterCity、CAにおいて、94°C4分間の変性の後に、94°C30秒間、56°C30秒間および72°C45秒間を20サイクルGAPDHの場合、35サイクルCXADRL1の場合、30サイクルGCUD1の場合、30サイクルRNF43の場合。プライマー配列は以下の通りとした:GAPDHの場合、フォワード:5ACAACAGCCTCAAGATCATCAG配列番号:7およびリバース:5GGTCCACCACTGACACGTTG配列番号:8;CXADRL1の場合、フォワード:5AGCTGAGACATTTGTTCTCTTG配列番号:9およびリバース:5TATAAACCAGCTGAGTCCAGAG配列番号:10;GCUD1の場合、フォワード:5TTCCCGATATCAACATCTACCAG配列番号:11、リバース:5AGTGTGTGACCTCAATAAGGCAT配列番号:12、RNF43の場合、フォワード:5CAGGCTTTGGACGCACAGGACTGGTAC3配列番号:13およびリバース:5CTTTGTGATCATCCTGGCTTCGGTGCT3配列番号:14。5ノーザンブロット分析ヒト多組織ブロットクロンテック、PaloAlto、CAを、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43の32P標識PCR産物とハイブリダイズさせた。プレハイブリダイゼーション、ハイブリダイゼーションおよび洗浄は供給元の推奨に従って行った。ブロットのオートラジオグラフィーは増感スクリーンを80°Cで24~72時間用いて行った。6cDNA末端の5迅速増幅5RACE5RACE実験はMarathoncDNA増幅キットクロンテックを製造者の指示に従って用いて行った。CXADRL1の5部分の増幅のためには、遺伝子特異的リバースプライマー5GGTTGAGATTTAAGTTCTCAAA3配列番号:15およびキットとともに供給されているAP1プライマーを用いた。cDNA鋳型はヒト精巣mRNAクロンテックから合成した。PCR産物をTAクローニングキットインビトロジェンを用いてクローニングし、その配列をABIPRISM3700DNAシークエンサーアプライドバイオシステムズAppliedBiosystemsを用いて決定した。7CXADRL1、GCUD1およびFLJ20315を発現するプラスミドの構築CXADRL1、GCUD1、およびRNF43の全コード領域を、遺伝子特異的プライマーのセットを用いて行うRTPCRによって増幅した。CXADRL1に関しては、5AGTTAAGCTTGCCGGGATGACTTCTCAGCGTTCCCCTCTGG3配列番号:16および5ATCTCGAGTACCAAGGACCCGGCCCGACTCTG3配列番号:17、GCUD1に関しては、5GCGGATCCAGGATGGCTGCTGCAGCTCCTCCAAG3配列番号:18および5TAGAATTCTTAAAGAACTTAATCTCCGTGTCAACAC3配列番号:19、RNF43に関しては、5TGCAGATCTGCAGCTGGTAGCATGAGTGGTG3配列番号:20および5GAGGAGCTGTGTGAACAGGCTGTGTGAGATGT3配列番号:21。PCR産物はpcDNA31インビトロジェンまたはpcDNA31mycHisインビトロジェンベクターの適切なクローニングサイトにクローニングした。8イムノブロットpcDNA31mycHisCXADRL1、pcDNA31mycHisGCUD1、pcDNA31mycHisRNF43、またはpcDNA31mycHisLacZをトランスフェクトした細胞をPBSで2回洗浄し、可溶化緩衝液150mMNaCl、1TritonX100、50mMTrisHClpH74、1mMDTT、および1XcompleteProteaseInhibitorCocktailべーリンガーBoehringerで回収した。ホモジナイゼーション後に細胞を10000×gで30分間遠心し、BradfordアッセイBioRadによって上清をタンパク質濃度に関して標準化した。タンパク質を10SDSPAGEによって分離し、マウス抗mycサンタクルズSANTACRUZ抗体を用いてイムノブロットを行った。HRPを結合させたヤギ抗マウスIgGアマシャムをECL検出システムアマシャム用の二次抗体として用いた。9免疫組織化学染色pcDNA31mycHisCXADRL1、pcDNA31mycHisGCUD1、pcDNA31mycHisRNF43、またはpcDNA31mycHisLacZをトランスフェクトした細胞を、4パラホルムアルデヒドを含むPBSで15分間固定した後に、01TritonX100を含むPBSにより室温で25分間の透過化処理を行った。その後に、非特異的なハイブリダイゼーションをブロックするために細胞を2BSAPBS中で覆い、4°Cで24時間おいた。マウス抗mycモノクローナル抗体シグマを1:1000希釈で一次抗体として用い、ローダミン結合抗マウス二次抗体LeincoおよびICNとのインキュベーション後に反応を可視化した。核は46ジアミジン2フェニルインドール二塩酸DAPIで対比染色した。蛍光画像はECLIPSEE800顕微鏡によって得た。10コロニー形成アッセイ各遺伝子を発現するプラスミドまたは対照プラスミドをトランスフェクトした細胞を、適切な濃度のジェネティシンとともに10~21日インキュベートした。細胞を100メタノールで固定し、ギムザ溶液により染色した。実験はすべて2回ずつ行った。11CXADRL1またはRNF43を過剰発現する細胞の樹立pcDNA31mycHisCXADRL1、pcDNA31mycHisRNF43、pcDNA31mycHisLacZ、または対照プラスミドをそれぞれトランスフェクトしたNIH3T3細胞、COS7細胞およびLoVo細胞を、適切な濃度のジェネティシンを含む培地中で維持した。トランスフェクションから2週後に、生存している単一のコロニーを選択し、各遺伝子の発現を半定量的RTPCRによって調べた。12細胞増殖に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの影響の検討10cm培養皿2×105個枚にプレーティングした細胞に対して、LIPOFECTIN試薬ギブコBRLを用いて、CXADRL1、GCUD1もしくはRNF43の合成Sオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。続いて、適切な濃度のジェネティシンを添加した上で細胞を6~12日培養した。続いて細胞を100メタノールで固定し、ギムザ溶液により染色した。Sオリゴヌクレオチドの配列は以下の通りとした:CXADRL1S4、5TCTGCACGGTGAGTAG3配列番号:22;CXADRL1AS4、5CTACTCACCGTGCAGA3配列番号:23;CXADRL1S5、5TTCTGTAGGTGTTGCA3配列番号:24;CXADRL1AS5、5TGCAACACCTACAGAA3配列番号:25;GCUD1S5、5CTTTTCAGGATGGCTG3配列番号:26;GCUD1AS5、5CAGCCATCCTGAAAAG3配列番号:27;GCUD1S8、5AGGTTGAGGTAAGCCG3配列番号:28;GCUD1AS8、5CGGCTTACCTCAACCT3配列番号:29;RNF43S1、5TGGTAGCATGAGTGGT3配列番号:30;およびRNF43AS1、5ACCACTCATGCTACCA3配列番号:31。13臭化325ジフェニルテトラゾリウムMTTアッセイ5×105個100mm培養皿の密度でプレーティングした細胞に対して、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43の発現を抑制するように指定されたセンスまたはアンチセンスSオリゴヌクレオチドによるトランスフェクションを3連ずつ行った。トランスフェクションから72時間後に、培地を500μgmlのMTT臭化325ジフェニルテトラゾリウムシグマを含む新たな培地と交換し、プレートを37°Cで4時間インキュベートした。その後に、1mlの001NHCl10SDSの添加によって細胞を可溶化し、ELISAプレートリーダーを検査波長570nm基準630nmで用いて可溶化物の吸光度を測定した。細胞生存度は吸光度を対照細胞と比較して表した。14psiH1BX30の構築H1RNA遺伝子はRNAポリメラーゼIIIによって転写され、ウリジンが3末端にある短い転写物を生じることが報告されているため、そのプロモーター領域を含むH1RNA遺伝子のゲノム断片を、プライマーのセット[5TGGTAGCCAAGTGCAGGTTATA3配列番号:32、および5CCAAAGGGTTTCTGCAGTTTCA3配列番号:33]および鋳型としてヒト胎盤DNAを用いて行うPCRにより増幅した。その産物を精製し、TAクローニングキットインビトロジェンを供給元のプロトコールに従って用い、pCR20プラスミドベクター中にクローニングした。pcDNA31プラスミドをプライマーのセット、5TGCGGATCCAGAGCAGATTGTACTGAGAGT3配列番号:34、および5CTCTATCTCGAGTGAGGCGGAAAGAACCA3配列番号:35を用いて行うPCRによって増幅した後、BamHIおよびXhoIで消化処理を行い、この増幅消化処理を行った断片の中のpcDNA31プラスミドのヌクレオチド位置1257~56にH1RNA遺伝子を含むBamHIおよびXhoI断片を精製してクローニングした。連結されたDNAは、プライマー5TTTAAGCTTGAAGACCATTTTTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAC3配列番号:36および5TTTAAGCTTGAAGACATGGGAAAGAGTGGTCTCA3配列番号:37を用いて行うPCRにおいて、鋳型として用いた。その産物をHindIIIで消化した後に自己連結させてpsiH1BX30ベクタープラスミドを得た。対照として、5CACCGAAGCAGCACGACTTCTTCTTCAAGAGAGAAGAAGTCGTGCTGCTTC3配列番号:38および5AAAAGAAGCAGCACGACTTCTTCTCTCTTGAAGAAGAAGTCGTGCTGCTTC3配列番号:39の二本鎖オリゴヌクレオチドをpsiH1BXベクターのBbsI部位にクローニングすることにより、psiH1BXEGFPを調製した。15RNF43siRNAまたはCXADRL1siRNAの遺伝子サイレンシング作用の検討RNF43siRNAまたはCXADRL1siRNAのいずれかを発現するプラスミドは、二本鎖オリゴヌクレオチドをpsiH1BX30ベクター中にクローニングすることによって調製した。RNF43siRNAとして用いたオリゴヌクレオチドは以下の通りである:siRNA164として5TCCCGTCACCGGATCCAACTCAGTTCAAGAGACTGAGTTGGATCCGGTGAC3配列番号:40および5AAAAGTCACCGGATCCAACTCAGTCTCTTGAACTGAGTTGGATCCGGTGAC3配列番号:41;siRNA1834として5TCCCGCTATTGCACAGAACGCAGTTCAAGAGACTGCGTTCTGTGCAATAGC3配列番号:42および5AAAAGCTATTGCACAGAACGCAGTCTCTTGAACTGCGTTCTGTGCAATAGC3配列番号:43;siRNA1として5TCCCCAGAAAGCTGTTATCAGAGTTCAAGAGACTCTGATAACAGCTTTCTG3配列番号:44および5AAAACAGAAAGCTGTTATCAGAGTCTCTTGAACTCTGATAACAGCTTTCTG3配列番号:45;siRNA14として5TCCCTGAGCCACCTCCAATCCACTTCAAGAGAGTGGATTGGAGGTGGCTCA3配列番号:46および5AAAATGAGCCACCTCCAATCCACTCTCTTGAAGTGGATTGGAGGTGGCTCA3配列番号:47;siRNA15として5TCCCCTGCACGGACATCAGCCTATTCAAGAGATAGGCTGATGTCCGTGCAG3配列番号:48および5AAAACTGCACGGACATCAGCCTATCTCTTGAATAGGCTGATGTCCGTGCAG3配列番号:49。CXADRL1siRNAとして用いたオリゴヌクレオチドは以下の通りである:siRNA1として5TCCCGTGTCAGAGAGCCCTGGGATTCAAGAGATCCCAGGGCTCTCTGACAC3配列番号:50および5AAAAGTGTCAGAGAGCCCTGGGATCTCTTGAATCCCAGGGCTCTCTGACAC3配列番号:51;siRNA2として5TCCCCCTCAATGTCATTTGGATGTTCAAGAGACATCCAAATGCAATTGAGG3配列番号:52および5AAAACCTCAATGTCATTTGGATGTCTCTTGAACATCCAAATGCAATTGAGG3配列番号:53;siRNA3として5TCCCTGTCATTTGGATGGTCACTTTCAAGAGAAGTGACCATCCAAATGACA3配列番号:54および5AAAATGTCATTTGGATGGTCACTTCTCTTGAAAGTGACCATCCAAATGACA3配列番号:55;siRNA4として5TCCCTGCCAACCAACCTGAACAGTTCAAGAGACTGTTCAGGTTGGTTGGCA3配列番号:56および5AAAATGCCAACCAACCTGAACAGTCTCTTGAACTGTTCAGGTTGGTTGGCA3配列番号:57;siRNA5として5TCCCCCAACCTGAACAGGTCATCTTCAAGAGAGATGACCTGTTCAGGTTGG3配列番号:58および5AAAACCAACCTGAACAGGTCATCTCTCTTGAAGATGACCTGTTCAGGTTGG3配列番号:59;siRNA6として5TCCCCCTGAACAGGTCATCCTGTTTCAAGAGAACAGGATGACCTGTTCAGG3配列番号:60および5AAAACCTGAACAGGTCATCCTGTTCTCTTGAAACAGGATGACCTGTTCAGG3配列番号:61;ならびにCXADRLsiRNA7として5TCCCCAGGTCATCCTGTATCAGGTTCAAGAGACCTGATACAGGATGACCTG3配列番号:62および5AAAACAGGTCATCCTGTATCAGGTCTCTTGAACCTGATACAGGATGACCTG3配列番号:63。FuGENE6試薬ロシュRocheを供給元の推奨に従って用いて、psiH1BXRNF43、psiH1BXCXADRL1、またはpsiH1BX擬似プラスミドを、SNUC4細胞またはSt4細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションから48時間後に全RNAを細胞から抽出した。16RNF43タンパク質の組換えアミノ末端領域およびカルボキシル末端領域の構築RNF43のアミノ末端領域およびカルボキシル末端領域を、以下のプライマーのセットを用いて行うRTPCRによって増幅した:アミノ末端領域に関しては、5GAAGATCTGCAGCGGTGGAGTCTGAAAG3配列番号:64および5GGAATTCGGACTGGGAAAATGAATCTCCCTC3配列番号:65;ならびにカルボキシル末端領域に関しては、5GGAGATCTCCTGATCAGCAAGTCACC3配列番号:66および5GGAATTCCACAGCCTGTTCACACAGCTCCTC3配列番号:67。その産物をBamHIEcoRIで消化し、pET431aベクターノバジェンNovagenのBamHIEcoRI部位にクローニングした。このプラスミドを大腸菌BL21trxBDE3pLysS細胞ストラタジーンに対してトランスフェクトした。組換えRNF43タンパク質を、02mMIPTGを添加して25°Cで培養した細胞から16時間後に抽出した。17酵母2ハイブリッド実験酵母2ハイブリッドアッセイは、MATCHMAKERGAL42ハイブリッド系3MATCHMAKERGAL4TwoHybridSystem3クロンテックを製造者のプロトコールに従って用いて行った。RNF43の全コード配列を、ヒト精巣cDNAライブラリークロンテックのスクリーニングのためのベイトbaitとしてpAS21ベクターのEcoRIBamHI部位にクローニングした。酵母における相互作用を確認するために、pAS2RNF43をベイトベクターとして用い、pACT2NOTCH2およびpACT2STRINをプレイpreyベクターとして用いた。本発明者らは、CXADRL1の細胞質領域を、ヒト精巣cDNAライブラリークロンテックのスクリーニングのためのベイトとしてpAS21ベクターのEcoRI部位にクローニングした。酵母における相互作用を確認するために、本発明者らはベイトベクターにpAS2CXADRL1を用い、プレイベクターにpACT2AIP1を用いた。18CXADRL特異的抗体の調製抗CXADRL抗血清は、Ab1に関してはコドン235~276、Ab2に関してはコドン493~537、またはAb3に関してはコドン70~111を含む、CXADRL1の合成ポリペプチドを用いて免疫し、調製した。pETCXADRLプラスミドをトランスフェクトした大腸菌にて組換えHis標識CXADRL1タンパク質を調製し、それを用いて血清を精製した。Flag標識CXADRL1を発現する細胞から抽出したタンパク質を、さらに10SDSPAGEによって分離し、抗CXADRL1血清または抗Flag抗体のいずれかを用いてイムノブロットを行った。HRP結合ヤギ抗ウサギIgG抗体またはHRP結合ヒツジ抗マウスIgG抗体をそれぞれ、ECL検出システムアマシャムファルマシアバイオテック、Piscataway、NJ用の二次抗体として用いた。FLAG標識されたCXADRL1の50kDバンドが、抗CXADRL抗血清を用いたイムノブロットにより示され、このパターンは抗FLAG抗体を用いて検出されたものと同一であった。19組換えGCUD1タンパク質の調製GCUD1に対して特異的な抗体を作製するために、組換えGCUD1タンパク質を調製した。GCUD1の全コード領域を、プライマーのセット5GCGGATCCAGGATGGCTGCAGCTCCTCCAAG3配列番号:68および5CTGAATTCACTTAAAGAACTTAATCTCCGTGTCAACAC3配列番号:69を用いて行うRTPCRによって増幅した。その産物を精製し、BamH1およびEcoR1で消化した上で、pGEX6P2の適切なクローニングサイトにクローニングした。その結果生じたプラスミドをpGEXGCUD1と命名した。pGEXGCUD1プラスミドを大腸菌DH10Bに形質転換導入した。組換えタンパク質の産生をIPTGの添加によって誘導し、グルタチオンSepharose4Bアマシャムファルマシアを製造者のプロトコールに従って用いてタンパク質を精製した。20GCUD1特異的抗体の調製GCUD1に対するポリクローナル抗体を血清から精製した。Flag標識GCUD1を発現するプラスミドを細胞にトランスフェクトし、得たタンパク質を10SDSPAGEによって分離し、抗GCUD1または抗Flag抗体によってイムノブロットを行った。HRP結合ヤギ抗ウサギIgGSantaCruzBiotechnology、SantaCruz、CAまたはHRP結合抗Flag抗体をそれぞれ、ECL検出システムアマシャムファルマシアバイオテック、Piscataway、NJ用の二次抗体として用いた。FLAG標識GCUD1の47kDバンドが、抗GCUD1抗体を用いたイムノブロットにより示され、このパターンは抗FLAG抗体を用いて検出されたものと同一であった。21統計分析データに対しては分散分析ANOVAおよびシェフェのF検定を行った。22ペプチドの調製HLAA24分子またはHLAA0201分子と結合する、RNF43、CXADRL1またはGCUD1の9アミノ酸長ペプチドおよび10アミノ酸長ペプチドを、結合予測ソフトを利用して予想したhttpbimasdcrtnihgovcgibinmolbiokenparkercomboform。ミモトープMimotopes、SanDiego、LAが標準的固相合成法に従って合成したこれらのペプチドを、逆相HPLCによって精製した。ペプチドの純度>90および同定は、それぞれ分析用HPLCおよびマススペクトロメトリー分析によって決定した。ペプチドはジメチルスルホキシドDMSO中に20mgmlとなるように溶解し、80°Cで保存した。23インビトロCTL誘導単球由来の樹状細胞DCを、HLA上に提示されたペプチドに対するCTL応答を誘導するための抗原提示細胞APCとして用いた。DCは別の文献に記載された通りにインビトロで作製したNukayaら、IntJCancer80927;Tsaiら、JImmunol1581796802。具体的には、末梢血単核細胞PBMCをHLAA0201またはHLAA24の健常志願者からFicollPlaqueファルマシア溶液を用いて単離し、PBMCの単球画分をプラスチック製組織培養フラスコベクトンディッキンソンBecktonDickinsonに対する付着性によって分離した。この単球画分を、2熱非働化自己血清AS、1000UmlのGMCSFキリンビール株式会社KirinBreweryCompanyにより供与および1000UmlのIL4ジェンザイムGenzymeを含むAIMV培地インビトロジェン中で7日間培養して、DC画分を得た。DCを多く含むこの細胞集団に対して、20°CのAIMV中にて4時間にわたり、3μgmlのβ2ミクログロブリンの存在下、20μgmlの候補ペプチドで標識した。ペプチドで標識したこれらの抗原提示細胞に放射線を照射し5500ラド、これをDynabeadsM450CD8ダイナルDynalおよびDetachabeadダイナルによる陽性選択によって入手した自己CD8T細胞と1:20の比で混合した。これらの培養物を48ウェルプレートコーニングCorningに入れた;各ウェルは、15×104個のペプチドで標識した抗原提示細胞、3×105個のCD8T細胞、および10ngmlのIL7ジェンザイムを、2ASを加えた05mlのAIMV中に含む。3日後に、これらの培養物に対してIL2CHIRONを最終濃度20IUmlとなるように添加した。さらに7日目および14日目に、各時点においてその都度、上記と同じ様式で自己ペプチドで標識して抗原提示細胞を調製し、その抗原提示細胞でT細胞を再刺激した。培養下にあるリンパ系細胞を21日目の時点で回収し、ペプチドで標識したTISIまたはT2細胞に対する細胞障害性に関する試験を行った。24CTLの増殖ペプチドで標識したTISIまたはT2に対して明らかな細胞障害性を有することが実証された培養リンパ系細胞を、Riddellらによって記載されたものと類似した方法を用いて培養下でさらに増殖させたWalterら、NEnglJMed33310381044、1995;Riddelら、NatureMed2216223、1996。5×104個のリンパ系細胞は、25×106個の放射線照射3300ラドPBMC、5×106個の放射線照射8000ラドEHM細胞、および40ngmlの抗CD3モノクローナル抗体ファーミンジェンPharmingenを含む、5ASを加えた25mlのAIMV中に再懸濁した。培養を開始して1日後に120IUmlのIL2を培養物に添加した。この培養物に、5ASおよび30IUmlのIL2を加えた新たなAIMVを5日目、8日目、および11日目に与えた。25CTLクローンの樹立CTLクローンを得るために、強力な細胞障害性を有するリンパ系細胞を用いた。細胞浮遊液を、96ウェル丸底マイクロタイタープレートナルジェヌンクインターナショナルNalgeNuncInternational中の各ウェルにつき03、1、および3CTLリンパ系細胞の密度となるように希釈した。これらの細胞を、7×104個ウェルの同種PBMC、1×104個ウェルのEHM、30ngmlの抗CD3抗体、および125UmlのIL2を含む、5ASを加えた150μlウェルのAIMV中で培養した。10日後に、50μlウェルのIL2を最終濃度125Umlとなるように培地に添加した。培養CTLの細胞障害活性を14日目に調べ、CTLクローンを上記と同じ方法を用いて増殖させた。26細胞障害性アッセイ標的細胞を、CO2インキュベーター内で100μCiのNa251CrO4パーキンエルマーライフサイエンシズPerkinElmerLifeSciencesにより37°Cで1時間にわたり標識した。ペプチドで標識した標的を用いる場合には、Na251CrO4による標識の前に、標的細胞を20μgmlのペプチドを添加した上で37°Cで16時間インキュベートした。標的細胞をすすぎ、最終容積02mlとなるように丸底マイクロタイタープレート内でエフェクター細胞と混合した。細胞間の接触を増加させるためにプレートを遠心し4分間、800×g、37°CのCO2インキュベーターに入れた。4時間のインキュベーション後に、01mlの上清を各ウェルから回収し、放射能をγカウンターを用いて測定した。RNF43またはCXADRL1またはGCUD1を内因性に発現する標的細胞に対する細胞障害性を評価する場合には、NK様エフェクター細胞による非特異的溶解を減らすために、30倍過剰量の非標識K562細胞の存在下で細胞溶解活性を調べた。51Cr標識したHT29細胞またはSNU475細胞の認識について競合させるために、ペプチドによる標識20μgml、37°Cで16時間を行った非標識TISI細胞またはT2細胞を用いて非放射性標的阻害アッセイを行い、抗原特異性を確認した。MHC拘束に関しては、阻止アッセイにおいて、抗HLAクラスIW632抗体および抗HLAクラスII抗体、抗CD4抗体および抗CD8抗体DAKOによる細胞障害性の阻害を測定し検討した。特異的細胞障害性の比率は、特異的51Cr放出の比率を以下の式で算出することにより求めた:被験試料放出のcpm‐自然放出のcpm最大放出のcpm‐自然放出のcpm×100。自然放出は標的細胞のみをエフェクター細胞の非存在下でインキュベートすることによって測定し、最大放出は標的を1NHClとともにインキュベートすることによって測定した。すべての測定は2回ずつ行ったが、平均の標準誤差は常に平均値の10未満であった。2.結果1胃癌において高頻度に上方制御される2種類の新規ヒト遺伝子、CXADRL1およびGCUD1の同定23040種の遺伝子を含むゲノム全域にわたるcDNAマイクロアレイを用いて、胃癌の発現プロファイル20例を、対応する非癌粘膜と比較した。マイクロアレイ解析で検出された高頻度に上方制御される遺伝子のうち、UniGeneクラスターhttpwwwncbinlmnihgovUniGeneのEST、Hs6658に対応する施設内アクセッション番号A5928の遺伝子が、409~4860の範囲で過剰発現することが判明した図1a。この遺伝子のオープンリーディングフレームは、CXADRcoxsackieandadenovirusreceptorのものと約37同一なタンパク質をコードするため、この遺伝子はCXADRL1coxsackieandadenovirusreceptorlike1と命名された。CXADRL1は6例の結腸直腸癌症例のうち6例、20例のHCC症例のうち12例で上方制御されていた。さらに、UniGeneクラスターのKIAA0913遺伝子産物Hs75137に対応する施設内アクセッション番号C8121の遺伝子も、マイクロアレイによる対応する非癌胃粘膜との比較で、12例の胃癌組織のうち9例で発現が有意に増強していたために注目された図1b。施設内アクセッション番号がC8121であるこの遺伝子はGCUD1upregulatedingastriccancerと命名された。GCUD1は、6例の結腸直腸癌症例のうち5例、6例のHCC症例のうち1例、14例の肺癌扁平細胞癌症例のうち1例、13例の精巣腫瘍症例のうち1例でも上方制御されていた。cDNAマイクロアレイの結果を明らかにするために、胃癌におけるこれらの転写物の発現を半定量的RTPCRによって調べたところ、10例の腫瘍のすべてでCXADRL1の発現が上昇しており図1c9例の癌のうち7例でGCUD1の発現が上昇していることが確かめられた図1d。2新規遺伝子CXADRL1の単離および構造CXADRL1のPCR産物をプローブとして用いる多組織ノーザンブロット分析により、精巣および卵巣における35kb転写物の発現が判明した図2a。A5928はノーザンブロット上に検出された遺伝子よりも小さかったため、CXADRL1遺伝子の全コード配列を決定するために5RACE実験を行った。推定される完全長cDNAは3423ヌクレオチドからなり、オープンリーディングフレームは431アミノ酸のタンパク質配列番号:2をコードする1296ヌクレオチド配列番号:1であるGenBankアクセッション番号:AB071618。最初のATGは、真核生物における翻訳開始のためのコンセンサス配列と一致する配列CCCGGGATGA配列番号:70に隣接しており、インフレームの終止コドンが上流にある。NCBItheNationalCenterforBiotechnologyInformationデータベースにおける相同性の検索のためにBLASTプログラムを用いたところ、染色体バンド3q13に指定されている配列であるGenBankアクセッション番号AC068984のゲノム配列が同定された。cDNAとゲノム配列と比較することにより、CXADRL1が7つのエクソンからなることが判明した図2b。SimpleModularArchitectureResearchToolSMART、httpsmartemblheidelbergdeを用いたタンパク質モチーフに関する検索により、予想されるタンパク質が2つの免疫グロブリンドメインコドン29~124および158~232および1つの膜貫通ドメインコドン246~268を含むことが判明し、このことから、CXADRL1が免疫グロブリンスーパーファミリーに属する可能性が示唆された。3細胞増殖に対するCXADRL1の効果CXADRL1を発現するプラスミドpcDNA31mycHisCXADRL1をNIH3T3細胞にトランスフェクトすることにより、コロニー形成アッセイを行った。pcDNA31mycHisCXADRL1をトランスフェクトした細胞は、擬似トランスフェクト細胞よりも著しく多くのコロニーを生じた図3a。さらに、CXADRL1のこの増殖促進作用をさらに検討するために、外因性CXADRL1を安定的に発現するNIH3T3細胞を樹立した図3b。10FBSを含む培養液中でのNIH3T3CXADRL1細胞の増殖速度は元のNIH3T3細胞のものよりも有意に大きかった図3c。4アンチセンスSオリゴヌクレオチドによる、ヒト胃癌細胞におけるCXADRL1発現の抑制6対の対照SオリゴヌクレオチドおよびCXADRL1に対応するアンチセンスSオリゴヌクレオチドを、検討した6種の胃癌細胞株の中でCXADRL1の発現レベルが最も高かったMKN1胃癌細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションから6日後に、トランスフェクト細胞の生存度をMTTアッセイによって計測した。アンチセンスSオリゴヌクレオチドCXADRL1AS4またはCXADRL1AS5をトランスフェクトした生細胞は、対照SオリゴヌクレオチドCXADRL1S4またはCXADRL1S5をトランスフェクトしたものよりも顕著に少なかった図4。3回の独立した実験で一致する結果が得られた。5CXADRL1siRNAを発現するプラスミドの構築、および胃癌細胞の増殖に対するその効果様々なCXADRL1siRNAを発現するプラスミドを構築し、CXADRL1の発現に対する効果について検討した。構築したsiRNAのうち、psiH1BXCXADRL7はSt4細胞におけるCXADRL1の発現を有意に抑制した図5A。CXADRL1の抑制が結腸癌細胞の増殖抑制をもたらすか否かを検証するために、St4細胞にpsiH1BXCXADRL7または擬似ベクターをトランスフェクトした。psiH1BXCXADRL7をトランスフェクトした生細胞の数は対照生細胞の数よりも少なかった図5Bおよび5C。6抗CXADRL1抗体の調製CXADRL1の発現について検討し、その機能を解明するために、CXADRL1に対する抗血清を調製した。抗CXADRL1を用いたイムノブロットにより、FLAG標識CXADRL1の50kDバンドが検出され、これは抗FLAG抗体を用いて検出されたものとサイズの点でほぼ同一であった図6。7酵母2ハイブリッドスクリーニング系によるCXADRL1相互作用性タンパク質の同定CXADRL1の機能を明らかにするために、本発明者らは酵母2ハイブリッドスクリーニング系を用いてCXADRL1相互作用性タンパク質を検索した。同定された陽性クローンのうち、核内AIP1atrophininteractingprotein1のC末端領域は、酵母細胞でpAS21CXADRL1およびpACT2AIP1図7を用いた同時形質転換により、CXADRL1と相互作用した。陽性クローンはコドン808~1008を含んでおり、このことはAIP1の相互作用に関与する領域がこの領域内にあることを示している。8CXADRL1由来の候補ペプチドの予測表1は、候補ペプチド配列番号:115~154を結合親和性の高い順に示している。合計40種のペプチドを下記の通りに選択して検討した。表1CXADRL1由来の候補ペプチドの予測9候補ペプチドを用いたT細胞の刺激およびCTLクローンの樹立材料および方法の項に記載した様式で、CXADRL1由来のこれらの候補ペプチドを用いてリンパ系細胞を培養した。その結果得られた、検出可能な細胞障害活性を示すリンパ系細胞を増やしてCTLクローンを樹立した。CTLクローンを上記のCTL系列から限界希釈法を用いて増殖させた。CXADRL1207ALSSGLYQC配列番号:124によって誘導されたCTLクローンは、ペプチドで標識しなかった標的に対する細胞障害活性と比較して、ペプチドで標識した標的に対する細胞障害活性を、より高度に示した。このCTLクローンの細胞障害活性を図8に示した。このCTLクローンは、ペプチドで標識した標的に対して極めて強力な細胞障害活性を示したが、ペプチドで標識しなかった標的に対してはいかなる細胞障害活性も示さなかった。10CXADRL1を標的として内因性に発現する腫瘍細胞株に対する細胞障害活性予測されたペプチドに対して生成させたCTLクローンについて、CXADRL1を内因性に発現する腫瘍細胞を認識して死滅させる、その能力を検討した。図9はCXADRL1207ALSSGLYQC配列番号:124に対して生成させたCTLクローン75の結果を示している。CTLクローン75は、CXADRL1およびHLAA0201を発現するSNU475に対しては強力な細胞障害活性を示したが、CXADRL1を発現するがHLAA0201は発現しないMKN74に対しては示さず、HLAA0201を発現するがCXADRL1は発現しないSNUC4に対しても示さなかった。11樹立されたCTLの特異性CXADRL1207CTLクローンの特異性を確かめるために、非標識標的阻害アッセイも行った。51Crによって標識したSNU475細胞を放射性標的として用い、51Cr標識を行わずにCXADRL1207配列番号:124で標識したT2細胞を非放射性標的として用いた。CXADRL1207配列番号:124で標識したT2をアッセイ系に様々な比で添加すると、SNU475細胞に対する特異的細胞溶解は有意に阻害された図10。これらの結果は、ET比を20とした場合の特異的溶解の比率として示されている。CXADRL1207CTLクローンに関して、これらのCTLクローンの特徴を検討するために、HLAクラスI、HLAクラスII、CD4およびCD8に対する抗体について、細胞障害活性を阻害する能力を調べた。SNU475細胞に対するCTLクローンの細胞障害性は、抗HLAクラスI抗体および抗CD8抗体を用いた場合に有意に低下し図11、このことからこのCTLクローンがCXADRL1由来のペプチドをHLAクラスIおよびCD8様式で認識することが示された。12新規ヒト遺伝子GCUD1の発現および特徴分析GCUD1cDNAをプローブとして用いる多組織ノーザンブロット分析により、50kb転写物が精巣、卵巣および脳で特異的に発現されることが示された図12。GCUD1に対応するKIAA0913GenBankアクセッション番号:XM014766のヌクレオチド配列は4987ヌクレオチドからなるが、精巣、卵巣、および癌組織を用いたRTPCR実験から、1245ヌクレオチドのオープンリーディングフレームを含む4987ヌクレオチド配列番号:3GenBankアクセッション番号:AB071705の転写物が明らかになった。さらに、GCUD1に対応するゲノム配列に関してゲノムデータベースを検索し、染色体バンド7p14に指定されたドラフト配列を見いだしたGenBankアクセッション番号:NT007819。cDNA配列とゲノム配列との比較により、GCUD1遺伝子が8つのエクソンからなることが判明した。13GCUD1の細胞内局在GCUD1に対応する全コード領域をpCDNA31mycHisベクター中にクローニングし、この構築物をCOS7細胞に一過性にトランスフェクトした。COS7細胞を免疫細胞化学染色し、標識GCUD1タンパク質が細胞質中に存在することを明らかにした図13。14細胞増殖に対するGCUD1の効果細胞増殖に対するGCUD1の効果を分析するために、GCUD1を発現するプラスミドpcDNA31mycHisGCUD1をNIH3T3細胞にトランスフェクトすることにより、コロニー形成アッセイを行った。NIH3T3細胞において、pcDNA31mycHisGCUD1は対照プラスミドpcDNA31mycHisLacZと比較して著しく多くのコロニーを誘導した図14。この結果は3回の独立した実験によって裏づけられた。15GCUD1の発現を低下させるように指定されたアンチセンスSオリゴヌクレオチドによる胃癌細胞の増殖抑制GCUD1の抑制が胃癌細胞の細胞死をもたらすか否かを検証するために、GCUD1の発現を抑制するために設計された様々なアンチセンスSオリゴヌクレオチドを合成した。各アンチセンスSオリゴヌクレオチドのトランスフェクションから6日後に、トランスフェクト細胞の生存度をMTTアッセイによって計測した。MKN28細胞において、アンチセンスSオリゴヌクレオチドGCUD1AS5またはGCUD1AS8をトランスフェクトした生細胞は、対照SオリゴヌクレオチドGCUD1S5またはGCUD1S8をトランスフェクトした生細胞の数よりも著しく少なかった図15。この結果は3回の独立した実験によって裏づけられた。同様の結果はMKN1細胞でも観察された。16抗GCUD1抗体の調製GCUD1の発現について検討し、その機能を解明するために、GCUD1に対する抗血清を調製した。GSTGCUD1融合タンパク質を発現する細菌細胞からGCUD1の組換えタンパク質を抽出して精製した図16。この組換えタンパク質をウサギ3匹の免疫処置に用いた。抗GCDU1血清を用いたイムノブロットではFLAG標識GCUD1の47kDバンドが示され免疫前血清では示されなかった、これは抗FLAG抗体を用いて検出されたバンドとサイズの点でほぼ同一であった図17。17GCUD1由来の候補ペプチドの予測表2GCUD1は、候補ペプチド配列番号:155~194を結合親和性の高い順に示している。合計40種のペプチドを下記の通りに選択して検討した。表2GCUD1由来の候補ペプチドの予測18候補ペプチドを用いたT細胞の刺激およびCTLクローンの樹立材料および方法の項に記載した様式で、GCUD1由来のこれらの候補ペプチドを用いてリンパ系細胞を培養した。その結果得られた、検出可能な細胞障害活性を示すリンパ系細胞を増やしてCTLクローンを樹立した。CTLクローンを上記のCTL系列から限界希釈法を用いて増殖させた。GCUD1196KMDAEHPEL配列番号:164およびGCUD1272FLTTASGVSV配列番号:177によって誘導されたCTLクローンは、ペプチドで標識しなかった標的に対する細胞障害活性と比較して、ペプチドで標識した標的に対する細胞障害活性を、より高度に示した。これらのCTLクローンの細胞障害活性を図18に示した。それぞれのCTLクローンは、ペプチドで標識した標的に対して極めて強力な細胞障害活性を示したが、ペプチドで標識しなかった標的に対しては細胞障害活性を示さなかった。19GCUD1を標的として内因性に発現する腫瘍細胞株に対する細胞障害活性予測されたペプチドに対して生成させたCTLクローンについて、GCUD1を内因性に発現する腫瘍細胞を認識して死滅させる、その能力を検討した。図19は、GCUD1196配列番号:164に対して生成させたCTLクローン23の結果を示している。CTLクローン23は、GCUD1およびHLAA0201を発現するSNU475に対しては強力な細胞障害活性を示したが、GCUD1を発現するがHLAA0201は発現しないMKN45に対しては示さなかった。20樹立されたCTLの特異性GCUD1196CTLクローンの特異性を確かめるために、非標識標的阻害アッセイも行った。51Crによって標識したSNU475細胞を放射性標的として用い、51Cr標識を行わずにGCUD1196で標識したT2細胞を非放射性標的として用いた。GCUD1196配列番号:164で標識したT2をアッセイ系に様々な比で添加すると、SNU475細胞に対する特異的細胞溶解は有意に阻害された図20。これらの結果は、ET比を20とした場合の特異的溶解の比率として示されている。GCUD1196配列番号:164CTLクローンに関して、これらのCTLクローンの特徴を検討するために、HLAクラスI、HLAクラスII、CD4およびCD8に対する抗体について、細胞障害活性を阻害する能力を調べた。SNU475細胞に対するCTLクローンの細胞障害性は、抗HLAクラスI抗体および抗CD8抗体を用いた場合に有意に低下し図21、このことからCTLクローンがGCUD1由来のペプチドをHLAクラスIおよびCD8様式で認識することが示された。21ヒト結腸癌coloncancerにおいて高頻度に上方制御される遺伝子FLJ20315の同定23040種の遺伝子を含むcDNAマイクロアレイを用いて、11例の結腸癌組織の発現プロファイルを対応する結腸非癌粘膜組織と比較した。この分析によれば、多数の遺伝子の発現レベルが、対応する非癌組織と比較して癌組織で高頻度に上昇していた。そのうち、UniGeneクラスターhttpwwwncbinlmnihgovUniGeneのESTFLJ20315、Hs18457に対応する施設内アクセッション番号B4469の遺伝子が、対応する非癌粘膜と比較して癌組織において144~1122倍の範囲で上方制御されていた図22a。FLJ20315は18例の胃癌症例のうち6例、20例のHCC症例のうち12例、22例の肺癌腺癌症例のうち11例、2例の精巣腫瘍症例のうち2例、および9例の前立腺癌症例のうち3例でも上方制御されていた。このマイクロアレイの結果を明らかにするために、そのほかの結腸癌試料におけるこれらの転写物の発現を半定量的RTPCRによって検討したところ、18例の腫瘍のうち15例でFLJ20315発現の上昇が確かめられた図22b。22RNF43の発現および構造BLASTプログラムを用いて、米国国立バイオテクノロジー情報センターNationalCenterforBiotechnologyInformationの公開データベースにおけるFLJ20315配列のさらなる相同性検索を行ったところ、XM097063、BF817142を含むEST、および染色体バンド17pterp131に指定されているGenBankアクセッション番号NT010651のゲノム配列が同定された。その結果、783アミノ酸のタンパク質配列番号:6をコードする2352ヌクレオチドのオープンリーディングフレームを含む5345ヌクレオチドのアセンブルされた配列配列番号:5GenBankアクセッション番号:AB081837が得られた。この遺伝子はRNF43Ringfingerprotein43と命名された。最初のATGは、真核生物における翻訳開始のためのコンセンサス配列と一致する配列AGCATGC、および上流にあるインフレームの終止コドンに隣接していた。cDNAとゲノム配列との比較により、この遺伝子が11個のエクソンからなることが判明した。RNF43のPCR産物をプローブとして成人多組織ノーザンブロットを用いたノーザンブロット分析では、バンドは検出されなかったデータは示していない。しかし、52kbの転写物が胎児肺および胎児腎臓で発現されることが、同じPCR産物をプローブとして用いるヒト胎児組織ノーザンブロットを用いて明らかになった図23a。SimpleModularArchitectureResearchToolSMART、httpsmartemblheidelbergdeを用いたタンパク質モチーフに関する検索により、予想されるタンパク質がリングフィンガーモチーフを1つ含むことが判明したコドン272~312図23b。23myc標識RNF43タンパク質の細胞内局在RNF43タンパク質の細胞内局在を調べるために、myc標識RNF43タンパク質を発現するプラスミドpDNAmycHisRNF43をCOS7細胞に一過性にトランスフェクトした。この細胞からの抽出物および抗myc抗体を用いたウエスタンブロット分析により、標識されたタンパク質に対応する855KDaのバンドが示された図24a。続いて、同じ抗体を用いて細胞の免疫組織化学染色を行ったところ、このタンパク質が主として核内に存在することが示された図24b。SW480ヒト結腸癌細胞でもRNF43タンパク質の同様の細胞内局在が観察された。24細胞増殖に対するRNF43の効果RNF43を発現するプラスミドpcDNARNF43をNIH3T3細胞にトランスフェクトすることにより、コロニー形成アッセイを行った。pcDNARNF43をトランスフェクトした細胞は、対照細胞よりも有意に多数のコロニーを形成した図25a。RNF43によるコロニー形成活性の上昇は、RNF43の内因性発現が極めて少ないSW480細胞でも示されたデータは示していない。この増殖促進作用をさらに検討するために、外因性RNF43を安定的に発現するCOS7細胞COS7RNF43を樹立した図25b。10FBSを含む培養液中でのCOS7RNF43細胞の増殖速度はCOS7擬似細胞の増殖速度よりも有意に大きかった図25c。25RNF43の発現を低下させるように指定されたアンチセンスSオリゴヌクレオチドによる、結腸癌細胞の増殖抑制RNF43の発現抑制が結腸癌細胞の増殖遅延およびまたは細胞死をもたらすか否かを検証するために、対照SオリゴヌクレオチドおよびRNF43に対応するアンチセンスSオリゴヌクレオチドを5組合成し、検討した11種の結腸癌細胞株の中でRNF43の発現レベルが最も高かったLoVo結腸癌細胞にトランスフェクトした。5種類のアンチセンスSオリゴヌクレオチドのうち、RNF43AS1は、トランスフェクションから12時間後の時点で、対照SオリゴヌクレオチドRNF43S1と比較してRNF43の発現を有意に抑制した図26a。トランスフェクションから6日後の時点で、RNF43AS1をトランスフェクトした生細胞の数はRNF43S1をトランスフェクトした生細胞の数よりも有意に少なく、このことからRNF43の発現抑制がトランスフェクト細胞の増殖およびまたは生存性を低下させることが示唆された図26b。3回の独立した実験で一致する結果が得られた。26RNF43siRNAを発現するプラスミドの構築、および結腸癌細胞の増殖に対するその効果哺乳動物細胞において、19個の相補的ヌクレオチドおよび3末端のチミジンまたはウリジンの相補的二量体を有する20塩基長または21塩基長の二本鎖RNAdsRNAから構成される低分子干渉RNAsiRNAは、遺伝子発現の全体的な変化を伴わずに、遺伝子特異的な遺伝子サイレンシング作用を有することが最近示されている。このため、RNF43発現に対する効果について検討するために、様々なRNF43siRNAを発現するプラスミドを構築した。種々のRNF43siRNAのうち、psiH1BXRNF164およびpsiH1BXRNF1834は、SNUC4細胞におけるRNF43の発現を有意に抑制した図27A。RNF43の抑制が結腸癌細胞の増殖抑制をもたらすか否かを検証するために、SNUC4細胞にpsiH1BXRNF164、psiH1BXRNF1834、または擬似ベクターをトランスフェクトした。アンチセンスSオリゴヌクレオチドのデータと一致して、psiH1BXRNF164またはpsiH1BXRNF1834をトランスフェクトした生細胞の数は対照生細胞の数よりも少なかった図27B、27C。27外因性Flag標識RNF43タンパク質による、COS7細胞の培養液中へのFlag標識RNF43タンパク質の分泌RNF43のアミノ酸配列を有するタンパク質モチーフに関するSimpleModularArchitectureResearchToolSMART、httpsmartemblheidelbergdeを用いた検索によって、1つのシグナルペプチドおよび1つのリングフィンガードメインが予想されたことから、RNF43タンパク質の分泌について検討した。Flag標識RNF43を発現するプラスミドpFLAGRNF43またはMyc標識RNF43を発現するプラスミドpcDNA31MycHisRNF43または擬似ベクターをCOS7細胞にトランスフェクトし、05ウシ胎仔血清を添加した培地中で細胞を48時間培養した。抗Flag抗体または抗Myc抗体を用いたウエスタンブロット分析により、分泌されたFlag標識RNF43またはMyc標識タンパク質が、それぞれpFLAGRNF43またはpcDNA31MycHisRNF43をトランスフェクトした細胞を含む培地中には検出されたが、擬似ベクターを有する細胞を含む培地中には検出されなかった図28Aおよび28B。28NIH3T3細胞に対する、pFLAGRNF43をトランスフェクトした細胞の培養液の効果RNF43の外因性発現はNIH3T3細胞に対する増殖促進作用をもたらしたため、分泌されたFlag標識RNF43にもNIH3T3細胞に対する増殖作用があるか否かを検討した。NIH3T3細胞を培地を変更せずに培養するか、擬似トランスフェクト細胞またはpFlagRNF43をトランスフェクトした細胞の馴化培地を用いて培養した。予想された通り、pFlagRNF43またはpcDNA31MycHisRNF43をトランスフェクトされた細胞の馴化培地中で培養した細胞は、非処理細胞または擬似ベクターをトランスフェクトされた細胞の馴化培地中で培養した細胞と比較して有意に高い増殖速度を示した図29Aおよび29B。これらのデータは、RNF43がその増殖促進作用を自己分泌的な様式で発揮することを示唆する。29組換えアミノ末端およびカルボキシル末端RNF43タンパク質の調製RNF43に対する特異的抗体を作製するために、Nus標識RNF43タンパク質を発現するプラスミドを構築した図30A。このプラスミドを大腸菌BL21trxBDE3pLysS細胞に形質転換導入したところ、細菌抽出物における予想されるサイズの組換えタンパク質の産生がSDSPAGEにより観察された図30Bおよび30C。30酵母2ハイブリッドスクリーニング系によるRNF43相互作用性タンパク質の同定RNF43の発癌機構を明らかにするために、酵母2ハイブリッドスクリーニング系を用いてRNF43相互作用性タンパク質を検索した。同定された陽性クローンのうち、NOTCH2またはSTRINは、酵母細胞でpAS21RNF43およびpACT2NOTCH2図31B、またはpAS21RNF43およびpACT2STRIN図32Bを用いた同時形質転換により、RNF43と相互作用した。NOTCH2およびSTRINにおける相互作用の原因となる領域はそれぞれ図31Aおよび図32Aに示されている。31RNF43由来のHLAA24結合ペプチドの予測RNF43のアミノ酸配列を、HLAA24と結合するペプチドである9アミノ酸長または10アミノ酸長のペプチドに関して、結合予測ソフトhttpbimasdcrtnihgovcgibinmolbiokenparkercomboformを用いてスキャンした。表3は、予測されたペプチド配列番号71~90を結合親和性の高い順に示している。合計20種のペプチドを下記の通りに選択して検討した。表3HLAA24との結合が予測されるRNF43ペプチドこの表において、開始位置はRNF43のN末端からのアミノ酸の位置を表す。32予測されたペプチドを用いたT細胞の刺激RNF43由来のこれらのペプチドに対するCTLを、材料および方法の項に記載の方法に従って作製した。その結果得られた、検出可能な細胞障害活性を示すリンパ系細胞を増やしてCTL系列を樹立した。9アミノ酸長ペプチド配列番号:71~80刺激によって誘導されたCTL系列の細胞障害活性を表4に示した。表4CTL系列の細胞障害性9アミノ酸長NE:CTLクローンが樹立されずRNF43350HYHLPAAYL配列番号:72、RNF43639LFNLQKSSL配列番号:73、およびRNF43721NSQPVWLCL配列番号:80によって刺激されたCTL系列は、ペプチドで標識しなかった標的に対する細胞障害活性と比較して、ペプチドで標識した標的に対する細胞障害活性を、より高度に示した。これらのCTLクローンから出発して、RNF43639について1つのCTLクローンが樹立され、RNF43721について13種のCTLクローンが樹立された。RNF43721によって刺激されたCTL系列は、ペプチドで標識した標的に対して強力な細胞障害活性を示したが、ペプチドで標識しなかった標的に対してはいかなる細胞障害活性も示さなかった図33。10アミノ酸長ペプチド配列番号:81~90で刺激したCTL系列の細胞障害活性を検討することによって得られた結果を表5に示した。表5CTL系列の細胞障害性10アミノ酸長NE:CTLクローンが樹立されずRNF4381KLMQSHPLYL配列番号:87またはRNF4354KMDPTGKLNL配列番号:88によって刺激されたCTL系列は、ペプチドで標識しなかった標的に対する細胞障害活性と比較して、ペプチドで標識した標的に対して若干の細胞障害活性を示した。33CTLクローンの樹立上記の通りに、限界希釈法を用いてCTLクローンをCTL系列から増殖させた。RNF43721に対する13種のCTLクローン、およびRNF43639に対する1つのCTLクローンが樹立された表4、前記を参照。RNF43721CTLクローンの細胞障害活性は図34に示されている。それぞれのCTLクローンは、ペプチドで標識した標的に対して強力な細胞障害活性を示したが、ペプチドで標識しなかった標的に対してはいかなる細胞障害活性も示さなかった。34RNF43を標的として内因性に発現する結腸直腸癌細胞株に対する細胞障害活性予測されたペプチドに対して生成させたCTLクローンについて、RNF43を内因性に発現する腫瘍細胞を認識して死滅させる、その能力を検討した。図35は、RNF43721に対して生成させたCTLクローン45の結果を示している。CTLクローン45は、RNF43およびHLAA24の両方を発現するHT29およびWiDRに対して強力な細胞障害活性を示した。一方、CTLクローン45は、HCT116RNF43を発現するがHLAA24は発現しないまたはTISIHLAA24を発現するがRNF43は発現しないに対しては細胞障害活性を示さなかった。さらにCTLクローン45は、無関係なペプチドで標識したTISI、およびRNF43を発現するがHLAA24はほとんど発現しないSNUC4に対しては細胞障害活性を示さなかったデータは示していない。35樹立されたCTLの特徴分析RNF43721CTLクローンの特異性を確かめるために、非放射性標的阻害アッセイを行った。51Crによって標識したHT29細胞を放射性標的として用い、51Cr標識を行わずにRNF43721で標識したTISI細胞を非放射性標的として用いた。RNF43721で標識したTISIをアッセイ系に様々な比で添加したところ、HT29細胞に対する特異的細胞溶解は有意に阻害された図36。この結果は、ET比を20とした場合の特異的溶解の比率として示されている。RNF43ペプチドに対して生成させたCTLクローンの特徴を検討するために、HLAクラスI、HLAクラスII、CD3、CD4、およびCD8に対する抗体について、CTLクローン細胞障害活性を阻害する能力を調べた。WiDR細胞標的に対するCTLクローンの細胞障害性は、抗HLAクラスI抗体、抗CD3抗体および抗CD8抗体を用いた場合に有意に低下した図37。この結果は、CTLクローンがRNF43由来のペプチドをHLAクラスI、CD3およびCD8を介して認識することを示している。36RNF43721ペプチドの相同性解析RNF43721に対して樹立されたCTLクローンは極めて強力な細胞障害活性を示した。この結果は、RNF43721の配列が、ヒト免疫系を感作させることが知られた他の分子に由来するペプチドと相同であることを示す可能性がある。この可能性を否定するために、BLASThttpwwwncbinlmnihgovblastblastcgiを用いてRNF43721の相同性解析を行った。BLASTに収められた分子の中には、RNF43721と完全に一致する配列も相同性の高い配列も認められなかった表6。表6RNF43721の相同性解析BLASThttpwwwncbinlmnihgovblastblastcgi同一性990同一性890同一性790同一性692これらの結果は、RNF43721の配列が特有であり、RNF43721を用いて樹立されたCTLクローンが他の分子に対する免疫応答を誘発する可能性は低いことを示している。37エピトープ提示効率を向上させるためのRNF43721の改変ペプチド提示の効率を向上させるため、RNF43721ペプチドをアンカー部位でのアミノ酸変更によって改変した。この改変により、ペプチドのHLAクラスI分子に対する結合親和性が向上すると考えられる。表7は、アミノ酸の2位が変化したRNF43721においてHLAA24分子に対する結合親和性が向上したことを示している配列番号:91および92。表7RNF43721の元のペプチドから改変されたペプチドにおいて予想される結合能力HLAA24拘束的な9アミノ酸長ペプチド38RNF43由来の候補ペプチドの予測表8は、候補ペプチド配列番号:87および93~111を結合親和性の高い順に示している。表8RNF43:エピトープペプチドの予測HLAA0201合計20種のペプチドを下記の通りに選択して検討した。39候補ペプチドを用いたT細胞の刺激材料および方法の項に記載した方法に従い、RNF43由来の候補ペプチドを用いてリンパ系細胞を培養した。その結果得られた、検出可能な細胞障害活性を示すリンパ系細胞を増やしてCTLクローンを樹立した。9アミノ酸長ペプチド配列番号:93~102を用いて刺激することで誘導されたCTL系列の細胞障害活性を表9に示した。表9CTL系列の細胞障害性HLAA02019アミノ酸長NE:CTLクローンが樹立されずRNF43119ALWPWLLMA配列番号:97によって誘導されたCTL系列は、ペプチドで標識しなかった標的に対する細胞障害性活性と比較して、ペプチドで標識した標的に対する細胞障害性活性を、より高度に示した。これらのCTLクローンから出発して、4種のCTLクローンがRNF43119を用いて樹立された。RNF43119によって刺激されたCTL系列は、ペプチドで標識した標的に対して強力な細胞障害活性を示したが、ペプチドで標識しなかった標的に対してはいかなる明らかな細胞障害活性も示さなかった図38A。10アミノ酸長ペプチド配列番号:87および103~111によって刺激したCTL系列の細胞障害活性の検討の結果を表10に示した。表10CTL系列の細胞障害性HLAA020110アミノ酸長NE:CTLクローンが樹立されずRNF431110ALWPWLLMAT配列番号:108によって誘導されたCTL系列は、ペプチドで標識しなかった標的に対する細胞障害活性と比較して、ペプチドで標識した標的に対する細胞障害活性を、より高度に示した。図38B。40CTLクローンの樹立CTLクローンを上記のCTL系列から限界希釈法を用いて増殖させた。RNF43119に対する4種のCTLクローンが樹立された表9、前記参照。RNF43ペプチド由来のCTLクローンの細胞障害活性は図39Aおよび39Bに示されている。それぞれのCTLクローンは、ペプチドで標識しなかった標的に対してはいかなる細胞障害活性も示さなかったが、ペプチドで標識した標的に対しては極めて強力な細胞障害活性を示した。41RNF43を標的として内因性に発現する結腸直腸癌細胞株に対する細胞障害活性予測されたペプチドに対して生成させたCTLクローンについて、RNF43を内因性に発現する腫瘍細胞を認識して死滅させる、その能力を検討した。図40Aおよび40Bは、RNF43由来のペプチドに対して生成させたCTLクローンについて得られた結果を示している。これらのCTLクローンは、RNF43およびHLAA0201の両方を発現するDLD1に対しては強力な細胞障害活性を示したが、RNF43を発現するがHLAA0201を発現しないHT29に対しては細胞障害活性を示さなかった。42CTLクローンの特異性RNF43119アミノ酸長CTLクローンの特異性を確かめるために、非放射性標的阻害アッセイを行った。51Crで標識したHCT116細胞を放射性標的として用い、51Cr標識を行わずにRNF4311で標識したT2細胞を非放射性標的として用いた。HCT116細胞標的の特異的細胞溶解は、RNF4311で標識したT2をアッセイ系に様々な比で添加すると有意に阻害された図41。産業上の利用可能性新規ヒト遺伝子CXADRL1およびGCUD1の発現は、癌でない胃組織と比較して胃癌において顕著に上昇している。一方、新規ヒト遺伝子RNF43の発現は癌でない粘膜組織と比較して結腸直腸癌において顕著に上昇している。したがって、これらの遺伝子は癌の診断マーカーとして役立つ可能性があり、それらの遺伝子によってコードされるタンパク質は癌の診断アッセイに用られる可能性がある。本発明者らは、新規タンパク質CXADRL1、GCUD1、またはRNF43の発現が細胞増殖を促進し、一方、CXADRL1、GCUD1、またはRNF43遺伝子に対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは低分子干渉RNAによって細胞増殖が抑制されることも示した。これらの所見は、CXADRL1、GCUD1、およびRNF43タンパク質のそれぞれが発癌活性を誘発することを示唆する。このため、これらの新規腫瘍性タンパク質は抗癌薬の開発にとって有用な標的となる。例えば、CXADRL1、GCUD1、もしくはRNF43の発現を阻止する作用物質、またはその活性を妨げる作用物質には、抗癌剤、特に胃癌および結腸直腸癌の治療用の抗癌剤として治療上の有用性があると考えられる。このような作用物質の例には、アンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉RNA、およびCXADRL1、GCUD1、またはRNF43を認識する抗体が含まれる。さらに、本発明者らは、CXADRL1がAIP1と相互作用することを示した。CXADRL1の細胞増殖活性はCXADRL1とAIP1との結合によって調節されると考えられる。このため、CXADRL1とAIP1から構成される複合体の形成活性を阻害する作用物質も、癌、特に結腸直腸癌、肺癌、胃癌、および肝臓癌の治療および予防に有用な可能性がある。また、本発明者らはRNF43がNOTCH2またはSTRINと相互作用することも示した。RNF43の細胞増殖活性はRNF43とNOTCH2またはSTRINとの結合によって調節されると考えられる。このため、RNF43とNOTCH2またはSTRINから構成される複合体の形成活性を阻害する作用物質も、癌、特に結腸直腸癌、肺癌、胃癌、および肝臓癌の治療および予防に有用な可能性がある。本発明を、その特定の態様に言及しながら詳細に説明してきたが、発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更および修正を行うことができることは当業者には明らかであると考えられる。