"ポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域であり、nは0または1である。を含む、TNFおよびTWEAKのうちの1つまたはその両方を含む抗原の対に結合することが可能である、結合タンパク質。VD1およびVD2が、独立して、配列番号28、30または32を含む、請求項1に記載の結合タンパク質。ポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まず、nは0または1である。を含む、TNFおよびTWEAKのうちの1つまたは両方を含む抗原の対に結合することが可能である、結合タンパク質。VD1およびVD2が、配列番号29、31または33を独立して含む、請求項3に記載の結合タンパク質。nが0である、請求項1または3に記載の結合タンパク質。第一および第二のポリペプチド鎖を含み、前記第一のポリペプチド鎖は第一のVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域である。を含み、前記第二のポリペプチド鎖は第二のVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まず、nは0または1である。を含む、TNFおよびTWEAKのうちの1つまたはその両方を含む抗原の対に結合することが可能である、結合タンパク質。VD1およびVD2重鎖可変ドメインが、独立して、配列番号28、30または32を含み、VD1およびVD2軽鎖可変ドメインが、独立して、配列番号29、31または33を含む、請求項6に記載の結合タンパク質。X1が、配列番号1-26のいずれか1つである、請求項1、3または6に記載の結合タンパク質。結合タンパク質が2つの第一のポリペプチド鎖および2つの第二のポリペプチド鎖を含む、請求項6に記載の結合タンパク質。Fc領域が、バリアント配列のFc領域である、請求項1、3または6に記載の結合タンパク質。Fc領域が、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgEおよびIgDから得られるFc領域である、請求項1、3または6に記載の結合タンパク質。前記第一のポリペプチド鎖のVD1および前記第二のポリペプチド鎖のVD1が、それぞれ同じ第一および第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られる、請求項6に記載の結合タンパク質。前記第一のポリペプチド鎖のVD1および前記第二のポリペプチド鎖のVD1が、それぞれ異なる第一および第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られる、請求項6に記載の結合タンパク質。前記第一のポリペプチド鎖のVD2および前記第二のポリペプチド鎖のVD2が、それぞれ同じ第一および第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られる、請求項6に記載の結合タンパク質。前記第一のポリペプチド鎖のVD2および前記第二のポリペプチド鎖のVD2が、それぞれ異なる第一および第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られる、請求項6に記載の結合タンパク質。前記第一および前記第二の親抗体が前記抗原上の異なるエピトープに結合する、請求項12から15のいずれか一項に記載の結合タンパク質。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分が、前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が前記第二の抗原に結合する効力と異なる効力で前記第一の抗原に結合する、請求項12から15のいずれか一項に記載の結合タンパク質。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分が、前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が前記第二の抗原に結合する親和性と異なる親和性で前記第一の抗原に結合する、請求項12から15のいずれか一項に記載の結合タンパク質。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分および前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が、ヒト抗体、CDR移植された抗体またはヒト化抗体である、請求項1、3または6のいずれか一項に記載の結合タンパク質。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分および前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が、Fab断片、Fab’2断片、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された2つのFab断片を含む二価断片、VHおよびCH1ドメインからなるFd断片、抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、dAb断片、単離された相補性決定領域CDR、一本鎖抗体またはダイアボディである、請求項1、3または6のいずれか一項に記載の結合タンパク質。前記第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または前記第二の親抗体もしくはその抗原結合部分によって示される少なくとも1つの所望の特性を有する、請求項1、3または6に記載の結合タンパク質。前記所望の特性が、1つまたは複数の抗体パラメーターである、請求項21に記載の結合タンパク質。前記抗体パラメーターが、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である、請求項22に記載の結合タンパク質。4つのポリペプチド鎖を含み、2つのポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域である。を含み、2つのポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まず、nは0または1である。を含み、VD1およびVD2重鎖可変ドメインは、独立して、配列番号28、30または32を含み、VD1およびVD2軽鎖可変ドメインは、独立して、配列番号29、31または33を含む、2つの抗原に結合することが可能な結合タンパク質。4つのポリペプチド鎖を含み、2つのポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域であり、nは0または1である。を含み、2つのポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まず、nは0または1である。を含み、DVD-Igは、TNFまたはTWEAKのうちの少なくとも1つに結合する、2つの抗原に結合することが可能な結合タンパク質。前記結合タンパク質が、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約102M-1s-1;少なくとも約103M-1s-1;少なくとも約104M-1s-1;少なくとも約105M-1s-1;または少なくとも約106M-1s-1の前記1つまたは複数の標的への結合速度定数Konを有する、請求項1、3、6、24または25に記載の結合タンパク質。前記結合タンパク質が、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約10-3s-1;最大約10-4s-1;最大約10-5s-1;または最大約10-6s-1の前記1つまたは複数の標的への解離速度定数Koffを有する、請求項1、3、6、24または25に記載の結合タンパク質。前記結合タンパク質が、最大約10-7M;最大約10-8M;最大約10-9M;最大約10-10M;最大約10-11M;最大約10-12Mまたは最大10-13Mの前記1つまたは複数の標的への解離定数KDを有する、請求項1、3、6、24または25に記載の結合タンパク質。請求項1、3、6、24または25のいずれか一項に記載の結合タンパク質を含み、前記結合タンパク質は、免疫接着分子、造影剤、治療剤または細胞毒性剤である作用物質をさらに含む、結合タンパク質連結体。前記造影剤が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識またはビオチンである、請求項29に記載の結合タンパク質連結体。前記放射性標識が、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Hoまたは153Smである、請求項30に記載の結合タンパク質連結体。前記治療剤または細胞毒性剤が、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシンまたはアポトーシス剤である、請求項29に記載の結合タンパク質連結体。前記結合タンパク質が結晶化された結合タンパク質である、請求項1、3、6、24または25に記載の結合タンパク質。前記結晶が担体を含まない医薬徐放結晶である、請求項33に記載の結合タンパク質。前記結合タンパク質が、インビボにおいて、前記結合タンパク質の可溶性対応物より長い半減期を有する、請求項33に記載の結合タンパク質。前記結合タンパク質が生物学的活性を保持している、請求項33に記載の結合タンパク質。請求項1、3、6、24または25のいずれか一項に記載の結合タンパク質をコードする単離された核酸。請求項37に記載の単離された核酸を含むベクター。前記ベクターが、pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV、pcDNA3.1TOPO、pEF6TOPOまたはpBJである、請求項38に記載のベクター。請求項38に記載のベクターを含む宿主細胞。前記宿主細胞が原核細胞である、請求項40に記載の宿主細胞。前記宿主細胞がエシェリキアコリEscherichiacoliである、請求項41に記載の宿主細胞。前記宿主細胞が真核細胞である、請求項40に記載の宿主細胞。前記真核細胞が、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞および真菌細胞である、請求項43に記載の宿主細胞。前記動物細胞が、哺乳動物細胞、鳥類細胞または昆虫細胞である、請求項44に記載の宿主細胞。前記哺乳動物細胞がCHO細胞である、請求項45に記載の宿主細胞。前記哺乳動物細胞がCOS細胞である、請求項45に記載の宿主細胞。前記真菌細胞が酵母細胞である、請求項43に記載の宿主細胞。前記酵母細胞がサッカロミセスセレビシアエSaccharomycescerevisiaeである、請求項48に記載の宿主細胞。前記昆虫細胞がSf9細胞である、請求項45に記載の宿主細胞。結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、請求項40から50のいずれか一項に記載の宿主細胞を培地中において培養することを含む、結合タンパク質を生産する方法。生産された結合タンパク質の50-75が、二重特異的四価結合タンパク質である、請求項51に記載の方法。生産された結合タンパク質の75-90が、二重特異的四価結合タンパク質である、請求項51に記載の方法。生産された結合タンパク質の90-95が、二重特異的四価結合タンパク質である、請求項51に記載の方法。請求項51に記載の方法に従って生産されたタンパク質。請求項1から36および55のいずれか一項に記載の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。少なくとも1つの追加の治療剤をさらに含む、請求項56に記載の医薬組成物。前記追加の治療剤が、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤;キナーゼ阻害剤;共刺激分子遮断剤;接着分子遮断剤;抗サイトカイン抗体またはその機能的断片;メトトレキサート;シクロスポリン;ラパマイシン;FK506;検出可能な標識またはレポーター;TNFアンタゴニスト;抗リウマチ薬;筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬NSAID、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである、請求項57に記載の医薬組成物。治療が達成されるように、請求項1から36および55のいずれか一項に記載の結合タンパク質を対象に投与することによって、対象の疾病または疾患を治療する方法。前記疾患が、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホシェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群I型および多内分泌腺機能低下症候群II型、シュミット症候群、成人急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患/アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状IgA病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎/ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、B型肝炎、C型肝炎、分類不能型免疫不全症分類不能型原発性低γグロブリン血症、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎/多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患vasculiticdiffuselungdisease、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、1型自己免疫性肝炎古典的自己免疫性またはルポイド肝炎、2型自己免疫性肝炎抗LKM抗体肝炎、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うB型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、1型乾癬、2型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病NOS、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはNOS、精子自己免疫、多発性硬化症すべてのサブタイプ、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病/動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症橋本病、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫primarymyxoedema、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞choleosatatis、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、B群連鎖球菌GBS感染、精神障害例えば、うつ病および統合失調症、Th2型およびTh1型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛疼痛の様々な形態、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および腎臓癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病ALL、急性骨髄性白血病AML、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房aerial異所性拍動、AIDS認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α-1-アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗cd3治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応anti-receptorhypersensitivityreactions、大動脈aordicおよび動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動持続的または発作性、心房粗動、房室ブロック、B細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植BMT拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群cardiacstunsyndrome、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病CML、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病CLL、慢性閉塞性肺疾患COPD、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト-ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン-バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症familialhematophagocyticlymphohistiocytosis、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデンスパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群/血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、A型肝炎、ヒス束不整脈、HIV感染/HIV神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部-下垂体-副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、A型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎/ブドウ膜炎/視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症lipedema、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫lymphederma、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症meningococcemia、代謝性/特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患mitochondrialmulti.systemdisorder、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性メンセルデジェリーヌ-トーマスシャイ-ドレーガーおよびマシャド-ジョセフ、重症筋無力症、マイコバクテリウムアビウムイントラセルラーレ、マイコバクテリウムチュバキュロシス、骨髄形成異常、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性I筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、okt3療法、精巣炎/精巣上体炎、精巣炎/精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群/悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチスカリニ肺炎、肺炎、POEMS症候群多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群skinchangessyndrome、灌流後症候群postperfusionsyndrome、ポンプ後症候群postpumpsyndrome、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なQRS幅の狭い頻脈症regularnarrowQRStachycardia、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈specificarrythmias、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、T細胞またはFABALL、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷/出血、III型過敏症反応、IV型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎vitalencephalitis/無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ-コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群ALPS、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群cis、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群GBS、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、IgE媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、IPF/UIP、虹彩炎、角結膜炎、乾性角結膜炎keratojuntivitissicca、クスマウル病またはクスマウル-マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブスベヒテレフmorbusbechterev、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非A非B型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性JRA、末梢動脈閉塞疾患PAOD、末梢血管疾患PVD、末梢動脈疾患PAD、静脈炎、結節性多発性動脈炎または結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性JRA、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、sapho滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン-ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンスジョンソン症候群SJS、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、TRAPS腫瘍壊死因子受容体、1型アレルギー反応、II型糖尿病、通常型間質性肺炎UIP、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト小柳原田症候群VKH症候群、滲出型黄斑変性または創傷治癒である、請求項59に記載の方法。対象への前記投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内intracavity、腔内intracelial、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮である、請求項60に記載の方法。a前記第一の抗原に結合することが可能な第一の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程、b前記第二の抗原に結合することが可能な第二の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程、ciVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域であり、nは0または1である。を含むポリペプチド鎖、iiVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まず、nは0または1である。を含むポリペプチド鎖、iii第一および第二のポリペプチド鎖前記第一のポリペプチド鎖は、第一のVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域である。を含み、前記第二のポリペプチド鎖は、第二のVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まず;nは0または1である。を含む。;またはiv4つのポリペプチド鎖2つのポリペプチド鎖は、VD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域である。を含み、2つのポリペプチド鎖は、VD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合断片から得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まず;nは0または1である。を含む。を構築する工程ならびにd前記ポリペプチド鎖を発現させる工程を含み、第一および第二の抗原に結合することが可能な結合タンパク質を生成し、前記第一および第二の抗原はTNFおよびTWEAKのうちの1つまたはその両方を含む、2つの抗原に結合することが可能な結合タンパク質を生成する方法。前記VD1およびVD2重鎖可変ドメインが、独立して、配列番号28、30または32を含み、前記VD1およびVD2軽鎖可変ドメインが、独立して、配列番号29、31または33を含む、請求項62に記載の方法。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分および前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が、ヒト抗体、CDR移植された抗体またはヒト化抗体である、請求項62に記載の方法。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分および前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が、Fab断片、Fab’2断片、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された2つのFab断片を含む二価断片、VHおよびCH1ドメインからなるFd断片、抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、dAb断片、単離された相補性決定領域CDR、一本鎖抗体またはダイアボディである、請求項62に記載の方法。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分が、結合タンパク質によって示される少なくとも1つの所望の特性を有する、請求項62に記載の方法。前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が、結合タンパク質によって示される少なくとも1つの所望の特性を有する、請求項62に記載の方法。Fc領域が、バリアント配列のFc領域である、請求項62に記載の方法。Fc領域が、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgEまたはIgDから得られるFc領域である、請求項62に記載の方法。前記所望の特性が、1つまたは複数の抗体パラメーターである、請求項66に記載の方法。前記所望の特性が、1つまたは複数の抗体パラメーターである、請求項67に記載の方法。前記抗体パラメーターが、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である、請求項70に記載の方法。前記抗体パラメーターが、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である、請求項71に記載の方法。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分が、前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が前記第二の抗原に結合する親和性と異なる親和性で前記第一の抗原に結合する、請求項62に記載の方法。前記第一の親抗体またはその抗原結合部分が、前記第二の親抗体またはその抗原結合部分が前記第二の抗原に結合する効力と異なる効力で前記第一の抗原に結合する、請求項62に記載の方法。イムノアッセイによって試験試料中の少なくとも1つの抗原またはその断片の存在を決定する方法であって、前記イムノアッセイは、前記試験試料と少なくとも1つの結合タンパク質および少なくとも1つの検出可能な標識とを接触させることを含み、前記少なくとも1つの結合タンパク質は、請求項1、3、6、24、25または55に記載の結合タンパク質を含む方法。i前記試験試料を前記少なくとも1つの結合タンパク質と接触させ、ここで、前記結合タンパク質は、抗原またはその断片上のエピトープに結合して、第一の複合体を形成し;ii前記複合体を前記少なくとも1つの検出可能な標識と接触させ、ここで、前記検出可能な標識は、前記結合タンパク質に結合し、または前記結合タンパク質が結合しない抗原もしくはその断片上のエピトープに結合して、第二の複合体を形成し;iii前記第二の複合体における前記検出可能な標識によって発生したシグナルに基づいて、前記試験試料中の抗原またはその断片の存在を検出し、ここで、前記抗原またはその断片の存在は、前記検出可能な標識によって発生したシグナルに直接的に相関することをさらに含む、請求項76に記載の方法。i前記試験試料を前記少なくとも1つの結合タンパク質と接触させ、ここで、前記結合タンパク質は、抗原またはその断片上のエピトープに結合して、第一の複合体を形成し;ii前記複合体を前記少本分野において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な改善された多価結合タンパク質に対する要求が存在する。米国特許第7,612,181号は、二重可変ドメイン免疫グロブリンDVD-Ig商標と呼ばれる、高い親和性で2つまたはそれ以上の抗原に結合することが可能な結合タンパク質の新規ファミリーを提供する。本発明は、TNFおよびTWEAKに結合することが可能なさらなる新規結合タンパク質を提供する。発明の要旨本発明はTNFおよびTWEAKに結合することが可能な多価結合タンパク質に関する。一実施形態において、本発明は、高い親和性で、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質の新規ファミリーを提供する。一実施形態において、本発明は、ポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の可変ドメインであり、VD2は第二の可変ドメインであり、Cは定常ドメインであり、X1はアミノ酸またはポリペプチドを表し、X2はFc領域を表し、nは0または1である。を含む、結合タンパク質を提供する。一実施形態において、結合タンパク質中のVD1およびVD2は、重鎖可変ドメインである。別の実施形態において、重鎖可変ドメインは、マウス重鎖可変ドメイン、ヒト重鎖可変ドメイン、CDR移植された重鎖可変ドメインまたはヒト化重鎖可変ドメインである。さらに別の実施形態において、VD1およびVD2は、同一の抗原例えば、TNFまたはTWEAKに結合することができる。別の実施形態において、VD1およびVD2は、異なる抗原例えば、TNFおよびTWEAKに結合することができる。さらに別の実施形態において、Cは、重鎖定常ドメインである。例えば、X1はリンカーである但し、X1はCH1ではない。。例えば、X1は、AKTTPKLEEGEFSEAR配列番号1;AKTTPKLEEGEFSEARV配列番号2;AKTTPKLGG配列番号3;SAKTTPKLGG配列番号4;SAKTTP配列番号5;RADAAP配列番号6;RADAAPTVS配列番号7;RADAAAAGGPGS配列番号8;RADAAAAG4S4配列番号9;SAKTTPKLEEGEFSEARV配列番号10;ADAAP配列番号11;ADAAPTVSIFPP配列番号12;TVAAP配列番号13;TVAAPSVFIFPP配列番号14;QPKAAP配列番号15;QPKAAPSVTLFPP配列番号16;AKTTPP配列番号17;AKTTPPSVTPLAP配列番号18;AKTTAP配列番号19;AKTTAPSVYPLAP配列番号20;ASTKGP配列番号21;ASTKGPSVFPLAP配列番号22;GGGGSGGGGSGGGGS配列番号23;GENKVEYAPALMALS配列番号24;GPAKELTPLKEAKVS配列番号25;またはGHEAAAVMQVQYPAS配列番号26を含むリンカーである。一実施形態において、X2は、Fc領域である。別の実施形態において、X2は、バリアントFc領域である。一実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域である。を含む。一実施形態において、結合タンパク質中のVD1およびVD2は、軽鎖可変ドメインである。一実施形態において、軽鎖可変ドメインは、マウス軽鎖可変ドメイン、ヒト軽鎖可変ドメイン、CDR移植された軽鎖可変ドメインまたはヒト化軽鎖可変ドメインである。一実施形態において、VD1およびVD2は、同一の抗原例えば、TNFまたはTWEAKに結合することができる。別の実施形態において、VD1およびVD2は、異なる抗原例えば、TNFおよびTWEAKに結合することができる。一実施形態において、Cは、軽鎖定常ドメインである。別の実施形態において、X1はリンカーである但し、X1はCL1ではない。。一実施形態において、X1は、AKTTPKLEEGEFSEAR配列番号1;AKTTPKLEEGEFSEARV配列番号2;AKTTPKLGG配列番号3;SAKTTPKLGG配列番号4;SAKTTP配列番号5;RADAAP配列番号6;RADAAPTVS配列番号7;RADAAAAGGPGS配列番号8;RADAAAAG4S4配列番号9;SAKTTPKLEEGEFSEARV配列番号10;ADAAP配列番号11;ADAAPTVSIFPP配列番号12;TVAAP配列番号13;TVAAPSVFIFPP配列番号14;QPKAAP配列番号15;QPKAAPSVTLFPP配列番号16;AKTTPP配列番号17;AKTTPPSVTPLAP配列番号18;AKTTAP配列番号19;AKTTAPSVYPLAP配列番号20;ASTKGP配列番号21;ASTKGPSVFPLAP配列番号22;GGGGSGGGGSGGGGS配列番号23;GENKVEYAPALMALS配列番号24;GPAKELTPLKEAKVS配列番号25;またはGHEAAAVMQVQYPAS配列番号26を含むリンカーである。一実施形態において、結合タンパク質は、X2を含まない。一実施形態において、可変重鎖および可変軽鎖はどちらも同じリンカーを含む。別の実施形態において、可変重鎖および可変軽鎖は異なるリンカーを含む。別の実施形態において、可変重鎖および可変軽鎖はどちらも短い約6アミノ酸のリンカーを含む。別の実施形態において、可変重鎖および可変軽鎖はどちらも長い6アミノ酸を超えるリンカーを含む。別の実施形態において、可変重鎖は短いリンカーを含み、可変軽鎖は長いリンカーを含む。別の実施形態において、可変重鎖は長いリンカーを含み、可変軽鎖は短いリンカーを含む。一実施形態において、本明細書において開示されている結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まない。を含む。別の実施形態において、本発明は、2つのポリペプチド鎖を含み、前記第一のポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域である。を含み、前記第二のポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まない。を含む、結合タンパク質を提供する。特定の実施形態において、二重可変ドメインDVD結合タンパク質は4つのポリペプチド鎖を含み、第一の2つのポリペプチド鎖は、それぞれ、VD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域である。を含み;ならびに第二の2つのポリペプチド鎖は、それぞれ、VD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1はリンカーであり但し、CH1ではない。、X2はFc領域を含まない。を含む。このような二重可変ドメインDVDタンパク質は、4つの抗原結合部位を有する。別の実施形態において、本明細書に開示されている結合タンパク質は、1つまたは複数の標的例えば、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能である。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の結合タンパク質は、少なくとも2つの異なる標的に結合することが可能な少なくとも2つの可変ドメイン配列例えば、VD1およびVD2を含む。いくつかの実施形態において、VD1およびVD2は、独立して選択される。したがって、いくつかの実施形態において、VD1およびVD2は同じ配列番号を含み、他の実施形態において、VD1およびVD2は異なる配列番号を含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、TNFおよび/またはTWEAKの生物学的機能を調節することができる。別の実施形態において、結合タンパク質は、TNFおよび/またはTWEAKを中和することができる。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号38または配列番号40を含むDVD重鎖アミノ酸配列;および配列番号39または配列番号41を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号38のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号39のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、逆配向を有し、配列番号40のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号41のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。第2の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号42または配列番号44を含むDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号43または配列番号45を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号42のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号43のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、逆配向を有し、配列番号44のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号45のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。第3の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号46または配列番号48を含むDVD重鎖アミノ酸配列;および配列番号47または配列番号49を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号46のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号47のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、逆配向を有し、配列番号48のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号49のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。第4の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号50または配列番号52を含むDVD重鎖アミノ酸配列;および配列番号51または配列番号53を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、配列番号50のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号51のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.1は、逆配向を有し、配列番号52のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号53のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号54または配列番号56を含むDVD重鎖アミノ酸配列;および配列番号55または配列番号57を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号54のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号55のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、逆配向を有し、配列番号56のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号57のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。第2の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号58または配列番号60を含むDVD重鎖アミノ酸配列;および配列番号59または配列番号61を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号58のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号59のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、逆配向を有し、配列番号60のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号61のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。第3の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号62または配列番号64を含むDVD重鎖アミノ酸配列;および配列番号63または配列番号65を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号62のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号63のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、逆配向を有し、配列番号64のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号65のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。第4の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号66または配列番号68を含むDVD重鎖アミノ酸配列;および配列番号67または配列番号69を含むDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。一実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、配列番号66のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号67のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、TNFおよびTWEAKに結合することが可能な結合タンパク質seq.2は、逆配向を有し、配列番号68のDVD重鎖アミノ酸配列、および配列番号69のDVD軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、本発明は、ポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域であり、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含む、結合タンパク質を提供する。一実施形態において、Fc領域は結合タンパク質に存在しない。別の実施形態において、本発明は、ポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域を含まず、X2nは存在するまたは存在しない。を含む、結合タンパク質を提供する。一実施形態において、前記X2nは結合タンパク質に存在しない。別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は第一および第二のポリペプチド鎖を含み、前記第一のポリペプチド鎖は第一のVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域であり、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含み、前記第二のポリペプチド鎖は第二のVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域を含まず、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含む。別の実施形態において、結合タンパク質は2つの第一のポリペプチド鎖および2つの第二のポリペプチド鎖を含む。さらに別の実施形態において、X2nは第二のポリペプチド鎖に存在しない。さらに別の実施形態において、Fc領域は、第一のポリペプチドに存在する場合、固有配列のFc領域またはバリアント配列のFc領域である。さらに別の実施形態において、Fc領域は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgEまたはIgDから得られるFc領域である。別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、4つのポリペプチド鎖を含み、第一および第三のポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域であり、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含み、第二および第四のポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域を含まず、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含む、2つの抗原に結合することが可能なDVD-Igである。本発明は、親抗体を予め選択することによってDVD-Ig結合タンパク質を作製する方法を提供する。一実施形態において、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能な二重可変ドメイン免疫グロブリンを作製する方法は、第一および第二の抗原に結合することが可能な二重可変ドメイン免疫グロブリンが生成されるように、a前記第一の抗原例えば、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能な第一の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程、b前記第二の抗原例えば、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能な第二の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程、cVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域であり、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含む第一および第三のポリペプチド鎖を構築する工程、dVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合部分例えば、抗TNFおよび/または抗TWEAKから得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合部分例えば、抗TNFおよび/または抗TWEAKから得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域を含まず、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含む第二および第四のポリペプチド鎖を構築する工程ならびにe第一、第二、第三および第四のポリペプチド鎖を発現させる工程を含む。さらに別の実施形態において、本発明は、第一および第二の抗原例えば、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能であり所望の特性を有する二重可変ドメイン免疫グロブリンが生成されるように、a前記第一の抗原例えば、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能であり二重可変ドメイン免疫グロブリンによって示される少なくとも1つの所望の特性を有する第一の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程、b前記第二の抗原例えば、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能であり二重可変ドメイン免疫グロブリンによって示される少なくとも1つの所望の特性を有する第二の親抗体またはその抗原結合部分を得る工程、cVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の重鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の重鎖可変ドメインであり、Cは重鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域であり、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含む第一および第三のポリペプチド鎖を構築する工程、dVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は前記第一の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第一の軽鎖可変ドメインであり、VD2は前記第二の親抗体またはその抗原結合部分から得られた第二の軽鎖可変ドメインであり、Cは軽鎖定常ドメインであり、X1nはリンカーであり但し、CH1ではない。、前記X1nは存在しまたは存在せず、X2nはFc領域を含まず、前記X2nは存在するまたは存在しない。を含む第二および第四のポリペプチド鎖を構築する工程ならびにe前記第一、第二、第三および第四のポリペプチド鎖を発現させる工程を含む、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能であり所望の特性を有する二重可変ドメイン免疫グロブリンを作製する方法を提供する。一実施形態において、本明細書において開示されている第一および第二のポリペプチド鎖のVDIは、同じ親抗体またはその抗原結合部分から得られる。別の実施形態において、本明細書において開示されている第一および第二のポリペプチド鎖のVDIは、異なる親抗体またはその抗原結合部分から得られる。別の実施形態において、本明細書において開示されている第一および第二のポリペプチド鎖のVD2は、同じ親抗体またはその抗原結合部分から得られる。別の実施形態において、本明細書において開示されている第一および第二のポリペプチド鎖のVD2は、異なる親抗体またはその抗原結合部分から得られる。一実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分および第二の親抗体またはその抗原結合部分は同じ抗体である。別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分および第二の親抗体またはその抗原結合部分は異なる抗体である。一実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は第一の抗原に結合し、第二の親抗体またはその抗原結合部分は第二の抗原に結合する。特定の実施形態において、第一および第二の抗原は同じ抗原である。別の実施形態において、親抗体は同じ抗原上の異なるエピトープに結合する。別の実施形態において、第一および第二の抗原は異なる抗原である。別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する効力と異なる効力で第一の抗原に結合する。さらに別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分は、第二の親抗体またはその抗原結合部分が第二の抗原に結合する親和性と異なる親和性で第一の抗原に結合する。別の実施形態において、第一の親抗体またはその抗原結合部分および第二の親抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体、CDR移植された抗体またはヒト化抗体である。一実施形態において、抗原結合部分は、Fab断片、Fab’2断片、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された2つのFab断片を含む二価断片、VHおよびCH1ドメインからなるFd断片、抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、dAb断片、単離された相補性決定領域CDR、一本鎖抗体またはダイアボディである。別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分によって示される少なくとも1つの所望の特性を有する。あるいは、第一の親抗体もしくはその抗原結合部分または第二の親抗体もしくはその抗原結合部分は、二重可変ドメイン免疫グロブリンによって示される少なくとも1つの所望の特性を有する。一実施形態において、所望の特性は、1つまたは複数の抗体パラメーターである。別の実施形態において、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である。一実施形態において、結合タンパク質は多価である。別の実施形態において、結合タンパク質は多重特異的である。本明細書に記載されている多価および/または多重特異的結合タンパク質は、特に治療的見地から望ましい特性を有する。例えば、多価および/または多重特異的結合タンパク質は、1抗体が結合する抗原を発現している細胞によって、二価抗体より速く内部に取り込まれるおよび/または異化される;2アゴニスト抗体であり;および/または3多価抗体が結合することができる抗原を発現している細胞の細胞死および/またはアポトーシスを誘導し得る。多価および/または多重特異的結合タンパク質の少なくとも1つの抗原結合特異性を提供する親抗体は、抗体が結合する抗原を発現している細胞によって内部に取り込まれおよび/または異化される抗体であり得、および/またはアゴニスト、細胞死誘導および/またはアポトーシス誘導抗体であり得、本明細書に記載されている多価および/または多重特異的結合タンパク質は、これらの特性の1つまたは複数の改善を示し得る。さらに、本明細書に記載されているように、多価結合タンパク質として構築された場合、親抗体は、これらの特性のいずれか1つまたは複数を欠如し得るが、ここに述べられているようにして構築されたとき、これらの特性は付与され得る。別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも102M-1s-1;少なくとも103M-1s-1;少なくとも104M-1s-1;少なくとも105M-1s-1;または少なくとも106M-1s-1の1つまたは複数の標的への結合速度定数Konを有する。一実施形態において、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、102M-1s-1と103M-1s-1の間、103M-1s-1と104M-1s-1の間、104M-1s-1と105M-1s-1の間、または105M-1s-1と106M-1s-1の間の、1つまたは複数の標的に対する結合速度定数Konを有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約10-3s-1;最大約10-4s-1;最大約10-5s-1;または最大約10-6s-1の1つまたは複数の標的への解離速度定数Koffを有する。一実施形態において、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、10-3s-1から10-4s-1の、10-4s-1から10-5s-1の、または10-5s-1から10-6s-1の間の、1つまたは複数の標的に対する解離速度定数Koffを有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、最大約10-7M;最大約10-8M;最大約10-9M;最大約10-10M;最大約10-11M;最大約10-12Mまたは最大10-13Mの1つまたは複数の標的への解離定数KDを有する。一実施形態において、本発明の結合タンパク質は、10-7Mから10-8Mの;10-8Mから10-9Mの;10-9Mから10-10Mの;10-10Mから10-11Mの;10-11Mから10-12Mの;または10-12Mから10-13Mのその標的に対する解離定数KDを有する。別の実施形態において、上記結合タンパク質は、作用物質をさらに含む連結体である。なお別の実施形態において、薬剤は、免疫接着分子、造影剤、治療薬、または細胞毒性薬である。一実施形態において、造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、またはビオチンである。別の実施形態において、放射性標識は、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、l77Lu、166Ho、または153Smである。なお別の実施形態において、治療薬または細胞毒性薬は、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、血管新生阻害剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素、またはアポトーシス剤である。別の実施形態において、本明細書に記載されている結合タンパク質は結晶化された結合タンパク質であり、結晶として存在する。一実施形態において、この結晶は、無担体医薬徐放結晶である。さらに別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、前記結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。さらに別の実施形態において、結晶化された結合タンパク質は生物学的活性を保持する。別の実施形態において、本明細書に記載されている結合タンパク質はグリコシル化される。例えば、グリコシル化は、ヒトグリコシル化パターンである。本発明の一態様は、本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか1つをコードする単離された核酸に関する。さらなる実施形態は、本明細書に開示されている単離された核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターは、pcDNA;pTTDurocheretal.2002NucleicAcidsRes.302、pTT3さらなる多重クローニング部位を有するpTT;pEFBOSMizushima,S.andS.Nagata,S.,1990NucleicAcidsRes.1817、pBV、pJV;pcDNA3.1TOPO、pEF6TOPOまたはpBJである。一実施形態において、ベクターは、米国特許公開第20090239259号に開示されているベクターである。別の態様において、宿主細胞は、本明細書に開示されたベクターで形質転換される。一実施形態において、宿主細胞は原核細胞である。別の実施形態において、宿主細胞はE.コリE.coliである。関連する実施形態において、宿主細胞は真核細胞である。別の実施形態において、真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞または真菌細胞である。さらに別の実施形態において、宿主細胞は、これらに限定されないが、CHO、COS;NS0、SP2、PER.C6を含む哺乳動物細胞;またはサッカロミセスセレビシアエSaccharomycescerevisiaeなどの真菌細胞;またはSf9などの昆虫細胞である。一実施形態において、異なる特異性を有する2つまたはそれ以上のDVD-Igは、単一の組み換え宿主細胞中で生産される。例えば、抗体の混合物の発現は、Oligoclonics商標MerusB.V.,TheNetherlands;米国特許第7,262,028号;第7,429,486号と呼ばれている。本発明の別の態様は、結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、同じく本明細書に開示されている宿主細胞のいずれか1つを培地中において培養することを含む、本明細書に開示されている結合タンパク質を生産する方法を提供する。一実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の50から75が、二重特異的四価結合タンパク質である。特定の実施形態において、この方法によって生産された結合タンパク質の75から90が、二重特異的四価結合タンパク質である。特定の実施形態において、生産された結合タンパク質の90から95が、二重特異的四価結合タンパク質である。一実施形態は、結合タンパク質の放出のための組成物を提供し、この組成物は製剤を含み、該製剤は、本明細書に開示されている結晶化された結合タンパク質および成分ならびに少なくとも1つのポリマー性担体を含む。例えば、いくつかの実施形態において、ポリマー担体は、:ポリアクリル酸、ポリシアノアクリラート、ポリアミノ酸、ポリ無水物、ポリデプシペプチド、ポリエステル、ポリ乳酸、ポリ乳酸グリコール酸共重合体またはPLGA、ポリb-ヒドロキシブチラート、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン;ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリ[オルガノホスファゼン]、ポリオルトエステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸-アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロースおよびセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化された多糖、またはこれらの混合物および共重合体である。例えば、いくつかの実施形態において、成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコールである。別の実施形態は、本明細書に開示された組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む哺乳動物を治療する方法を提供する。本発明は、本明細書に開示された結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物も提供する。さらなる実施形態において、この医薬組成物は、疾患を治療するための少なくとも1つの追加の治療剤を含む。例えば、追加の薬剤は、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤抗VEGF抗体またはVEGF-トラップが含まれるが、これらに限定されない。、キナーゼ阻害剤KDRおよびTIE-2阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。、共刺激分子遮断剤抗B7.1、抗B7.2、CTLA4-Ig、抗CD20が含まれるが、これらに限定されない。、接着分子遮断剤抗LFA-1抗体、抗E/Lセレクチン抗体、小分子阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。、抗サイトカイン抗体またはその機能的断片抗IL-18、抗TNFおよび抗IL-6/サイトカイン受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない。、メトトレキサート、シクロスポリン、ラパマイシン、FK506;検出可能な標識またはレポーター、TNFアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬NSAID、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性薬剤、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸引用ステロイド、エピネフリンまたは類似体、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストである。別の態様において、本発明は、本明細書に開示されている結合タンパク質によって結合されることができる標的または複数の標的が有害である疾患に罹患しているヒト対象を治療する方法であり、ヒト対象中の標的または複数の標的の活性が阻害され、1つまたは複数の症状が緩和され、または治療が達成されるように、本明細書に開示されている結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む、前記方法を提供する。例えば、疾患は、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホシェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群I型および多内分泌腺機能低下症候群II型、シュミット症候群、成人急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患/アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状IgA病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎/ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、B型肝炎、C型肝炎、分類不能型免疫不全症分類不能型原発性低γグロブリン血症、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎/多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患vasculiticdiffuselungdisease、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、1型自己免疫性肝炎古典的自己免疫性またはルポイド肝炎、2型自己免疫性肝炎抗LKM抗体肝炎、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うB型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、1型乾癬、2型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病NOS、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはNOS、精子自己免疫、多発性硬化症すべてのサブタイプ、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病/動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症橋本病、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫primarymyxoedema、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞choleosatatis、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、B群連鎖球菌GBS感染、精神障害例えば、うつ病および統合失調症、Th2型およびTh1型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛疼痛の様々な形態、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および腎臓癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病ALL、急性骨髄性白血病AML、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房aerial異所性拍動、AIDS認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α-1-アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗cd3治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応anti-receptorhypersensitivityreactions、大動脈aordicおよび動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動持続的または発作性、心房粗動、房室ブロック、B細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植BMT拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群cardiacstunsyndrome、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病CML、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病CLL、慢性閉塞性肺疾患COPD、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト-ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン-バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症familialhematophagocyticlymphohistiocytosis、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデンスパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群/血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、A型肝炎、ヒス束不整脈、HIV感染/HIV神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部-下垂体-副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、A型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎/ブドウ膜炎/視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症lipedema、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫lymphederma、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症meningococcemia、代謝性/特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患mitochondrialmulti.systemdisorder、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性メンセルデジェリーヌ-トーマスシャイ-ドレーガーおよびマシャド-ジョセフ、重症筋無力症、マイコバクテリウムアビウムイントラセルラーレ、マイコバクテリウムチュバキュロシス、骨髄形成異常、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性I筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、okt3療法、精巣炎/精巣上体炎、精巣炎/精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群/悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチスカリニ肺炎、肺炎、POEMS症候群多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群skinchangessyndrome、灌流後症候群postperfusionsyndrome、ポンプ後症候群postpumpsyndrome、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なQRS幅の狭い頻脈症regularnarrowQRStachycardia、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈specificarrythmias、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、T細胞またはFABALL、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷/出血、III型過敏症反応、IV型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎vitalencephalitis/無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ-コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群ALPS、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群cis、小児発症精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群GBS、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、IgE媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、IPF/UIP、虹彩炎、角結膜炎、乾性角結膜炎keratojuntivitissicca、クスマウル病またはクスマウル-マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブスベヒテレフmorbusbechterev、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非A非B型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性JRA、末梢動脈閉塞疾患PAOD、末梢血管疾患PVD、末梢動脈疾患PAD、静脈炎、結節性多発性動脈炎または結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性JRA、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、sapho滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、坐骨神経痛、シリコーン関連結合組織病、スネドン-ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンスジョンソン症候群SJS、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、TRAPS腫瘍壊死因子受容体、1型アレルギー反応、II型糖尿病、通常型間質性肺炎UIP、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト小柳原田症候群VKH症候群、滲出型黄斑変性または創傷治癒である。一実施形態において、本発明の組成物および方法で治療または診断され得る疾患には、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路腎臓、膀胱および尿路上皮を含む、女性生殖路子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む、男性生殖路前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む、内分泌腺甲状腺、副腎および下垂体を含むおよび皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫の両方を含む原発性および転移性の癌が含まれるが、これらに限定されない。本発明のDVD-Igは、以下の疾患:急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アテローム性動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群ALPS、自己免疫性心筋炎、自己免疫性血小板減少AITP、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群CIS、結膜炎、小児発症精神障害、慢性閉塞性肺疾患COPD、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群GBS、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、IgE媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、IPF/UIP、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎keratojuntivitissicca、クスマウル病またはクスマウル-マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、悪性病変、顕微鏡的多発性血管炎、モルブスベヒテレフmorbusbechterev、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非A非B型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性JRA、末梢動脈閉塞疾患PAOD、末梢血管疾患PVD、末梢動脈疾患PAD、静脈炎、結節性多発性動脈炎または結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性JRA、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛PMR、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、SAPHO滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、坐骨神経痛、シリコーン関連結合組織病、スネドン-ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンスジョンソン症候群SJS、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、TRAPS腫瘍壊死因子受容体、1型アレルギー反応、II型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎UIP、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト小柳原田症候群VKH症候群、滲出型黄斑変性ならびに創傷治癒の1つまたは複数を治療することもできる。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療法および/もしくは他の化学療法剤と組み合わせて使用される場合、癌を治療するためにまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防において使用される。別の態様において、本発明は、本明細書に論述されているような第二の作用物質の投与前、投与と同時または投与後に、本明細書に開示されている結合タンパク質のいずれか1つを投与する工程を含む、疾患に罹患している患者を治療する方法を提供する。特定の実施形態において、第二の作用物質は、ブデノシド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、6-メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、IL-1受容体アンタゴニスト、抗IL-1βmAb、抗IL-6またはIL-6受容体mAb、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル-イミダゾール化合物、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-23、EMAP-II、GM-CSF、FGFおよびPDGFの抗体またはアゴニスト、CD2、CD3、CD4、CD8、CD-19、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90またはこれらのリガンドの抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、NSAID、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、IRAK、NIK、IKK、p38、MAPキナーゼ阻害剤、IL-1β変換酵素阻害剤、TNFα変換酵素阻害剤、T細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性p55TNF受容体、可溶性p75TNF受容体、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、抗炎症性サイトカイン、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13またはTGFβである。特定の実施形態において、本明細書に開示されている医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内intracavity、腔内intracelial、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内または経皮投与によって、患者に投与される。本発明の一態様は、本発明の少なくとも1つの結合タンパク質に対する少なくとも1つの抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体には、本発明の結合タンパク質中に取り込まれることができる、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の少なくとも1つの相補性決定領域CDR、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域またはそのいずれかの一部などこれらに限定されない。、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含むいずれかのタンパク質またはペプチド含有分子が含まれる。本発明は、TNFおよび/またはTWEAKに結合することが可能な多価および/または多重特異的結合タンパク質に関する。具体的には、本発明は、二重可変ドメイン免疫グロブリンDVD-Igおよびその医薬組成物ならびにこのようなDVD-Igを作製するための核酸、組み換え発現ベクターおよび宿主細胞に関する。インビトロまたはインビボのいずれかで、特異的なTNFおよび/またはTWEAKに関連する抗原を検出するために本発明のDVD-Igを使用する方法も、本発明によって包含される。本明細書に別段の定義がなければ、本発明に関連して使用される科学および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。しかしながら、何らかの曖昧さが伏在している場合には、用語の意味および範囲は明確であるべきであり、本明細書中に付与されている定義は、すべての辞書または本明細書外の定義に優越する。さらに、文脈上別段の必要がなければ、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。本願において、またはの使用は、別段の記載がなければ、および/またはを意味する。さらに、含んでいるという用語ならびに含むおよび含まれたなどのその他の形式の使用は、限定的なものではない。また、要素または成分などの用語は、別段の記載がなければ、1つのユニットを含む要素および成分ならびに1より多いサブユニットを含む要素および成分をともに包含する。一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリッド形成に関連して使用される命名法およびこれらの技術は、周知のものであり、本分野において一般的に使用されている。一般に、本発明の方法および技術は、別段の記載がなければ、本分野において周知の慣用方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学に関して使用される命名法、ならびに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医薬品化学および薬化学の実験室操作および技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、調合、および送達、および患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。本発明をさらに容易に理解し得るように、いくつかの用語を以下に定義する。本明細書において使用されるポリペプチドという用語は、アミノ酸のあらゆるポリマー鎖を表す。ペプチドおよびタンパク質という用語は、ポリペプチドという用語と互換的に使用され、同じく、アミノ酸のポリマー鎖を表す。ポリペプチドという用語は、固有または人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは、単量体または多量体であり得る。本明細書におけるポリペプチドの使用は、別段文脈上矛盾しない限り、ポリペプチドならびにその断片およびバリアントバリアントの断片を含むを包含するものとする。抗原性ポリペプチドでは、ポリペプチドの断片は、ポリペプチドの少なくとも1つの連続したまたは非線形エピトープを場合によって含有する。少なくとも1つのエピトープ断片の正確な境界は、本分野における通常の技術を使用して確認され得る。断片は、少なくとも約5個の連続したアミノ酸少なくとも約10個の連続したアミノ酸、少なくとも約15個の連続したアミノ酸または少なくとも約20個の連続したアミノ酸などを含む。ポリペプチドのバリアントは、本明細書に記載されている通りである。単離されたタンパク質または単離されたポリペプチドという用語は、その由来起源または由来源のために、その固有の状態において当該タンパク質またはポリペプチドとともに存在する天然に随伴される成分を伴わないタンパク質またはポリペプチドであり、同じ種に由来する他のタンパク質を実質的に含まず、異なる種から得られた細胞によって発現され、または天然には存在しない。したがって、化学的に合成されたポリペプチド、またはポリペプチドが本来由来する細胞とは異なる細胞系の中で合成されたポリペプチドは、それに本来付随している成分から単離されている。タンパク質は、本分野で周知のタンパク質精製技術を使用し、単離によって、本来付随している成分が実質的に存在しないようにすることもできる。本明細書において使用される回収するという用語は、例えば、本分野で周知のタンパク質精製技術を使用して、単離によって、ポリペプチドなどの化学種を、本来付随する成分を実質的に含まないようにする方法を表す。本明細書において使用される生物学的活性とは、分子の1つまたは複数の固有の生物学的特性インビボで見られるように天然に存在するものであっても、組み換え手段によって提供される、または可能にされるものであってもを表す。生物学的特性には、受容体に結合すること;細胞増殖の誘導、細胞増殖を阻害すること、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導および酵素活性が含まれるが、これらに限定されない。生物学的活性は、Ig分子の活性も含む。第二の化学種との抗体、タンパク質またはペプチドの相互作用に関して、本明細書において使用される特異的結合または特異的に結合するという用語は、相互作用が、化学種、例えば、抗体上の特定の構造例えば、抗原決定基またはエピトープの存在に依存し、例えば、抗体がタンパク質一般ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、結合することを意味する。抗体がエピトープAに対して特異的であれば、標識されたAおよび抗体を含有する反応中での、エピトープAを含有する分子すなわち、標識されていない遊離のAの存在は、抗体に結合した、標識されたAの量を減少させる。本明細書において使用される抗体という用語は、4つのポリペプチド鎖2つの重H鎖および2つの軽L鎖から構成されるあらゆる免疫グロブリンIg分子またはIg分子の本質的なエピトープ結合特性を保持したすべての機能的断片、変異体、バリアントまたはこれらの誘導体を広く表すものとする。このような変異体、バリアントまたは誘導体抗体のフォーマットは、本分野において公知である。これらの非限定的な実施形態は、以下に論述されている。完全長の抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域本明細書において、HCVRまたはVHと略称される。および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、3つのドメインCH1、CH2およびCH3から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域本明細書において、LCVRまたはVLと略称される。および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、1つのドメインCLから構成される。VHおよびVL領域は、より保存された領域フレームワーク領域FRと称される。が散在された超可変領域相補性決定領域CDRと称される。へ、さらに細分割することが可能である。各VHおよびVLは、FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された3つのCDRおよび4つのFRから構成される。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY、クラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2またはサブクラスであり得る。Fc領域という用語は、無傷の抗体のパパイン消化によって生成され得る、免疫グロブリン重鎖のC末端領域を定義するために使用される。Fc領域は、固有配列のFc領域またはバリアントFc領域であり得る。免疫グロブリンのFc領域は、一般に、2つの定常ドメインCH2ドメインおよびCH3ドメインを含み、場合によって、CH4ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるために、Fc部分中のアミノ酸残基を置換することが、本分野において周知である米国特許第5,648,260号および第5,624,821号。抗体のFc部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ADCC、食作用、補体依存性細胞傷害CDCおよび抗体の半減期/排除速度および抗原-抗体複合体を媒介する。いくつかの事例において、これらのエフェクター機能は、治療用抗体のために望ましいが、別の事例では、治療目的に応じて、必要でない場合があり得、または有害である場合さえあり得る。ある種のヒトIgGアイソタイプ、特に、IgG1およびIgG3は、それぞれ、FcγRおよび補体C1qへの結合を介して、ADCCおよびCDCを媒介する。新生児Fc受容体FcRnは、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の実施形態において、少なくとも1つのアミノ酸残基は、抗体のエフェクター機能が変化されるように、抗体の定常領域、例えば、抗体のFc領域において置換されている。免疫グロブリンの2つの同一の重鎖の二量体化は、CH3ドメインの二量体化によって媒介され、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって安定化されるHuberetal.1976Nature;264:415-20;Thiesetal.1999JMoIBiol;293:67-79.。重鎖-重鎖ジスルフィド結合を防止するための、ヒンジ領域内のシステイン残基の変異は、CH3ドメインの二量体化を不安定化させる。CH3二量体化にとって必要とされる残基が同定されているDall’Acqua1998Biochemistry37:9266-73.。したがって、一価の半Igを生成することが可能である。興味深いことに、これらの一価の半Ig分子は、IgGおよびIgA両サブクラスに対して、天然に見出されているSeligman1978AnnImmunol129:855-70;Biewengaetal1983ClinExpImmunol51:395-400。FcRn:IgFc領域の化学量論は、2:1であることが決定されておりWestetal.2000Biochemistry39:9698-708、半Fcは、FcRn結合を媒介するのに十分であるKimetal1994Eur.J.Immunol;24:542-548.。CH3二量体化にとって重要な残基がCH3bシート構造の内部界面上に位置しているのに対して、FcRn結合に必要とされる領域は、CH2-CH3ドメインの外側界面に位置しているので、CH3ドメインの二量体化を崩壊させるための変異は、そのFcRN結合に対して、より大きな悪影響を有さない可能性がある。しかしながら、半Ig分子は、通常の抗体よりサイズが小さいので、組織透過においてある種の利点を有し得る。一実施形態において、少なくとも1つのアミノ酸残基は、重鎖の二量体化が破壊されて、半DVDIg分子をもたらすように、本発明の結合タンパク質の定常領域、例えば、Fc領域において置換されている。IgGの抗炎症活性は、IgGFc断片のN結合グリカンのシアリル化に完全に依存する。抗炎症活性での正確なグリカンの必要性が決定されており、その結果適当なIgG1Fc断片が作製され得、それによって効力が大いに増強された完全な組み換えシアリル化IgG1Fcが得られるAnthony,R.M.,etal.2008Science320:373-376。本明細書において使用される抗体の抗原結合部分または単に抗体部分という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体の1つまたは複数の断片を表す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実行可能であることは示されている。このような抗体の実施形態は、二特異的、二重特異的または多重特異的フォーマットでもあり得、2つまたはそれ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の抗原結合部分という用語に包含される結合断片の例には、iFab断片VL、VH、CLおよびCH1ドメインからなる一価断片、iiFab’2断片ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された2つのFab断片を含む二価断片、iiiVHおよびCH1ドメインからなるFd断片、iv抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、v単一の可変ドメインを含むdAb断片Wardetal.1989Nature341:544-546、PCT公開WO90/05144A1およびvi単離された相補性決定領域CDRが含まれる。さらに、Fv断片の2つのドメインであるVLおよびVHは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、VLおよびVH領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として、これらの作製を可能とする合成リンカーによって、組み換え法を用いて連結することが可能である一本鎖FvscFvとして知られている。例えば、Birdetal.1988Science242:423-426;およびHustonetal.1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883を参照。このような一本鎖抗体も、抗体の抗原結合部分という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。ダイアボディは、VHおよびVLドメインが一本鎖ポリペプチド鎖上に発現されているが、同一鎖上にある2つのドメイン間での対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、両ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合するように強制し、2つの抗原結合部位を作出する二価の二特異的抗体である例えば、Holliger,P.,etal.1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak,R.J.,etal.1994Structure2:1121-1123を参照。このような抗体結合部分は、本分野において公知であるKontermannandDubeleds.,AntibodyEngineering2001Springer-Verlag.NewYork.790pp.ISBN3-540-41354-5。さらに、一本鎖抗体も、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に、抗原結合領域の対を形成する直列Fvセグメントの対を含む直鎖抗体VH-CH1-VH-CH1に含まれるZapataetal.1995ProteinEng.810:1057-1062;および米国特許第5,641,870号。本明細書を通じて、多価結合タンパク質という用語は、2つまたはそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を表すために使用される。一実施形態において、多価結合タンパク質は、3つまたはそれ以上の抗原結合部位を有するように工学的に作製され、一般に、天然に存在しない抗体である。多重特異的結合タンパク質という用語は、2つまたはそれ以上の関連する標的または無関係な標的に結合することが可能な結合タンパク質を表す。本発明の二重可変ドメインDVD結合タンパク質は、2つまたはそれ以上の抗原結合部位を含み、四価または多価結合タンパク質である。DVDは、単一特異的であり得すなわち、1つの抗原に結合することができる。、または多重特異的すなわち、2つまたはそれ以上の抗原に結合することができる。であり得る。2つの重鎖DVDポリペプチドおよび2つの軽鎖DVDポリペプチドを含むDVD結合タンパク質は、DVD-Igと表される。DVD-Igの各半分は、重鎖DVDポリペプチドおよび軽鎖DVDポリペプチドおよび2つの抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含み、計6CDRが抗原結合部位当たりの抗原結合に関与する。本明細書に使用される二特異的抗体という用語は、クアドローマ技術Milstein,C.andA.C.Cuello1983Nature3055934:p.537-40参照によって、2つの異なるモノクローナル抗体の化学的連結によってStaerz,U.D.,etal.1985Nature3146012:628-31参照、またはノブイントゥホールもしくはFc領域中に変異を導入する類似のアプローチによってHolliger,etal.1993ProcNatlAcadSciUSA9014:6444-8.18参照作製され、そのうち1つのみが機能的な二特異的抗体である複数の異なる免疫グロブリン種をもたらす、完全長抗体を表す。分子機能によって、二特異的抗体は、その2つの結合アームHC/LCの1つの対の1つの上に存在する1つの抗原またはエピトープに結合し、その第二のアームHC/LCの異なる対の上に存在する異なる抗原またはエピトープに結合する。この定義によって、二特異的抗体は、特異性およびCDR配列の両者において2つの異なる抗原結合アームを有し、それが結合する各抗原に対して一価である。本明細書において使用される二重特異的抗体という用語は、その2つの結合アームHC/LCの対の各々の中に存在する2つの異なる抗原またはエピトープに結合することが可能な完全長抗体を表すPCT公開WO02/02773参照。したがって、二重特異的結合タンパク質は、同一の特異性と同一のCDR配列を有する2つの同一の抗原結合アームを有し、これが結合する各抗原に対して二価である。結合タンパク質の機能的抗原結合部位とは、標的抗原に結合することが可能な部位である。抗原結合部位の抗原結合親和性は、必ずしも、当該抗原結合部位が由来する親抗体と同程度に強力であるとは限らないが、抗原に結合する能力は、抗原への抗体結合を評価するための公知の様々な方法のいずれか1つを用いて測定可能でなければならない。さらに、本明細書において、多価抗体の抗原結合部位の各々の抗原結合親和性は、定量的に同一である必要はない。サイトカインという用語は、1つの細胞集団によって放出され、細胞間媒介物質として別の細胞集団に対して作用するタンパク質に対する包括的用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、ヒト成長ホルモン、Nメチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン;副甲状腺ホルモン;チロキシン;インシュリン;プロインシュリン;リラキシン;プロリラキシン;卵胞刺激ホルモンFSH、甲状腺刺激ホルモンTSHおよび黄体形成ホルモンLHなどの糖タンパク質ホルモン;肝細胞増殖因子;繊維芽細胞増殖因子;プロラクチン;胎盤性ラクトゲン;腫瘍壊死因子-αおよび-β;ミュラー管抑制物質;マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド;インヒビン;アクチビン;血管内皮細胞増殖因子;インテグリン;トロンボポエチンTPO;NGF-αなどの神経細胞増殖因子;血小板増殖因子;胎盤増殖因子、TGF-αおよびTGF-βなどのトランスフォーミング増殖因子TGF;インシュリン様増殖因子-1および-11;エリスロポエチンEPO;骨誘導因子;インターフェロン-α、-βおよび-γなどのインターフェロン;マクロファージ-CSFM-CSFなどのコロニー刺激因子CSF;顆粒球マクロファージ-CSFGM-CSF;および顆粒球-CSFG-CSF;IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-21、IL-22、IL-23、IL-33などのインターロイキンIL;TNF-αまたはTNF-βなどの腫瘍壊死因子;ならびにLIFおよびキットリガンドKLを含む他のポリペプチド因子である。本明細書において使用される、サイトカインという用語には、天然源からまたは組み換え細胞培養から得られるタンパク質および固有配列のサイトカインの生物学的に活性な均等物が含まれる。リンカーという用語は、ペプチド結合によって連結された2つまたはそれ以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを表し、1つまたは複数の抗原結合部分を連結するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは、本分野において周知である例えば、Holliger,P.,etal.1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448;Poljak,RJ.,etal.1994Structure2:1121-1123参照。典型的なリンカーには、AKTTPKLEEGEFSEAR配列番号1;AKTTPKLEEGEFSEARV配列番号2;AKTTPKLGG配列番号3;SAKTTPKLGG配列番号4;SAKTTP配列番号5;RADAAP配列番号6;RADAAPTVS配列番号7;RADAAAAGGPGS配列番号8;RADAAAAG4S4配列番号9;SAKTTPKLEEGEFSEARV配列番号10;ADAAP配列番号11;ADAAPTVSIFPP配列番号12;TVAAP配列番号13;TVAAPSVFIFPP配列番号14;QPKAAP配列番号15;QPKAAPSVTLFPP配列番号16;AKTTPP配列番号17;AKTTPPSVTPLAP配列番号18;AKTTAP配列番号19;AKTTAPSVYPLAP配列番号20;ASTKGP配列番号21;ASTKGPSVFPLAP配列番号22;GGGGSGGGGSGGGGS配列番号23;GENKVEYAPALMALS配列番号24;GPAKELTPLKEAKVS配列番号25;およびGHEAAAVMQVQYPAS配列番号26が含まれるが、これらに限定されない。免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖または軽鎖定常ドメインを表す。ヒトIgG重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、本分野において公知である。本明細書において使用されるモノクローナル抗体またはmAbという用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を表す。すなわち、該集団を構成する各抗体は、僅かな量で存在する可能性がある天然に存在する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原に対して誘導される。さらに、異なる決定基エピトープに対して誘導された異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物と異なり、各mAb抗体は、抗原上の単一の決定基に対して誘導される。モノクローナルという修飾語は、いずれかの特定の方法によって、抗体を産生することを要求するものと解釈すべきではない。本明細書において使用されるヒト抗体という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体は、例えば、CDR、特にCDE3中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基例えば、インビトロでのランダムな突然変異導入もしくは部位特異的突然変異導入によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入された変異を含み得る。しかしながら、本明細書において使用されるヒト抗体という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するCDR配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含まないものとする。本明細書において使用される組み換えヒト抗体という用語は、宿主細胞中に形質移入された組み換え発現ベクターを用いて発現された抗体以下のII節Cでさらに記載されている。、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体HoogenboomH.R.,1997TIBTech.15:62-70;AzzazyH.,andW.E.Highsmith2002Clin.Biochem.35:425-445;GavilondoJ.V.,andJ.W.Larrick2002BioTechniques29:128-145;HoogenboomH.,andChamesP.2000ImmunologyToday21:371-378、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して遺伝子導入されている動物例えば、マウスから単離された抗体Taylor,L.D.,etal.1992Nucl.AcidsRes.20:6287-6295;KellermannS-A.,andL.L.Green2002Curr.Opin.Biotech.13:593-597;LittleM.etal2000Immunol.Today21:364-370参照またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の、他のDNA配列へのスプライシングを含む他のいずれかの手段によって調製され、発現され、作製され、もしくは単離された抗体など、組み換え手段によって調製され、発現され、作製され、もしくは単離されたすべてのヒト抗体を含むものとする。このような組み換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかしながら、ある種の実施形態において、このような組み換えヒト抗体は、インビトロ突然変異導入または、ヒトIg配列に対して遺伝子導入された動物が使用される場合には、インビボ体細胞突然変異導入に供され、したがって、組み換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列VHおよびVL配列に由来し、これらの配列に関連しつつも、インビボで、ヒト抗体生殖系列レパートリー内には、天然に存在しない場合があり得る配列である。親和性成熟された抗体とは、変化を有しない親抗体と比べて、抗体の1つまたは複数のCDR中に、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす1つまたは複数の変化を有する抗体である。典型的な親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してnMの親和性を有し、またはpMの親和性さえ有する。親和性成熟された抗体は、本分野において公知の操作によって産生される。Marksetal.1992BidlTechnology10:779-783は、VHおよびVLドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載している。CDRおよび/またはフレームワーク残基の無作為な突然変異導入は、Barbasetal.1994ProcNat.Acad.Sci,USA91:3809-3813;Schieretal.1995Gene169:147-155;Yeltonetal.1995J.Immunol.155:1994-2004;Jacksonetal.1995J.Immunol.1547:3310-9;およびHawkinsetal1992J.MoI.Biol.226:889-896によって記載されており、活性増強アミノ酸残基による選択的突然変異導入位置、接触または過剰変異位置での選択的突然変異は、米国特許第6914128号に記載されている。キメラ抗体という用語は、ヒト定常領域に連結されたマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列ならびに別の種に由来する定常領域配列を含む抗体を表す。CDR移植された抗体という用語は、マウスCDRの1つまたは複数例えば、CDR3がヒトCDR配列で置換されているマウス重鎖および軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、VHおよび/またはVLのCDR領域の1つまたは複数の配列が、別の種のCDR配列と置換されている抗体を表す。ヒト化抗体という用語は、ヒト以外の種例えば、マウス由来の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、VHおよび/またはVL配列の少なくとも一部が、よりヒト類似に、すなわち、ヒト生殖系列可変配列により類似するように改変された抗体を表す。ヒト化抗体の1つの種類は、ヒトCDR配列がヒト以外のVHおよびVL配列中に導入されて、対応する非ヒトCDR配列が置換されているCDR移植された抗体である。ヒト化抗体も、目的の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワークFR領域および非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補的決定領域CDRを含む抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくは断片である。CDRに関して、本明細書において使用される実質的にという用語は、非ヒト抗体CDRのアミノ酸配列に対して、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも98または少なくとも99同一のアミノ酸配列を有するCDRを表す。ヒト化抗体は、少なくとも1つの、典型的には2つの可変ドメインFab、Fab’、Fab’2、FabC、Fvのすべてを実質的に含み、CDR領域のすべてまたは実質的にすべては非ヒト免疫グロブリンすなわち、ドナー抗体のものに対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一実施形態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域Fcの少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。この抗体は、重鎖のCH1、ヒンジ、CH2、CH3およびCH4領域も含み得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび/またはヒト化重鎖のみを含有する。Kabat番号、Kabat定義およびKabat標識という用語は、本明細書において、互換的に使用される。本分野において認められているこれらの用語は、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基に比べて、より可変的なすなわち、超可変的なアミノ酸残基に付番するシステムを表すKabatetal.1971Ann.NYAcad,Sci.190:382-391およびKabat,E.A.,etal.1991SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNO.91-3242。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、CDR1に対するアミノ酸位置31から35、CDR2に対するアミノ酸位置50から65およびCDR3に対するアミノ酸位置95から102にわたる。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、CDR1に対するアミノ酸位置24から34、CDR2に対するアミノ酸位置50から56およびCDR3に対するアミノ酸位置89から97にわたる。本明細書で使用されるCDRという用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を表す。重鎖および軽鎖の各可変領域中には3つのCDRが存在し、これらは、各可変領域に対して、CDR1、CDR2およびCDR3と表記される。本明細書において使用されるCDRセットという用語は、抗原に結合することが可能な単一の可変領域中に存在する3つのCDRの群を表す。これらのCDRの正確な境界は、異なる系に従って、異なって定義されてきた。Kabatによって記載された系Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterestNationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.1987and1991は、抗体のいずれの可変領域に対しても適用可能な明瞭な残基付番系を提供するのみならず、3つのCDRを定義する正確な残基境界を提供する。これらのCDRは、KabatCDRと称され得る。Chothiaおよび共同研究者ChothiaLesk1987J.Mol.Biol.196:901-917およびChothiaetal.1989Nature342:877-883は、KabatCDR内のある種の亜部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらの亜部分は、L1、L2およびL3またはH1、H2およびH3LおよびHは、それぞれ、軽鎖および重鎖領域を表記する。と表記される。これらの領域は、ChothiaCDRと称される場合があり、これは、KabatCDRと重複する境界を有する。KabatCDRと重複するCDRを定義する他の境界が、Padlan1995FASEBJ.9:133-139およびMacCallum1996JMolBiol2625:732-45によって記載されている。さらに別のCDR境界定義が、上記系の1つに厳格に従わない場合があり得るが、それにも関わらず、KabatCDRと重複するが、これらは、特定の残基または残基の群またはさらにはCDR全体が、抗原結合に著しい影響を与えないという予測または実験的な発見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書に使用されている方法は、これらの系のいずれかに従って定義されたCDRを使用し得るが、ある種の実施形態は、KabatまたはChothiaによって定義されたCDRを使用する。本明細書で使用されるフレームワークまたはフレームワーク配列という用語は、CDRを差し引いた可変領域の残りの配列を表す。CDR配列の正確な定義は、異なる系によって決定され得るので、フレームワーク配列の意義は、これに対応して、異なる解釈に供せられる。6つのCDR軽鎖のCDR-L1、-L2および-L3ならびに重鎖のCDR-H1、-H2および-H3は、軽鎖および重鎖上のフレームワーク領域も、各鎖上の4つの亜領域FR1、FR2、FR3およびFR4に分割し、CDR1はFR1とFR2の間に位置し、CDR2はFR2とFR3の間に、CDR3はFR3とFR4の間に位置する。他者によって表記されるように、FR1、FR2、FR3またはFR4として特定の亜領域を特定せずに、フレームワーク領域は、天然に存在する単一の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされたFRを表す。本明細書において使用される、1つのFRは、4つの亜領域の1つを表し、複数のFRは、フレームワーク領域を構成する4つの亜領域の2つまたはそれ以上を表す。本明細書において使用される生殖系列抗体遺伝子または遺伝子断片という用語は、特定の免疫グロブリンの発現のために遺伝的再編成および変異をもたらす成熟プロセスを経ていない非リンパ系細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を表す。例えば、Shapiroetal.2002Crit.Rev.Immunol.223:183-200;Marchalonisetal.2001AdvExpMedBiol.484:13-30参照。本発明の様々な実施形態によって提供される利点の1つは、生殖系列抗体遺伝子は、成熟した抗体遺伝子より、種内の個体に特徴的な必須のアミノ酸配列構造を保存する傾向がより大きく、このため、その種において治療的に使用された場合に、外来源に由来するものと認識される可能性がより低いという認識から生じる。本明細書において使用される中和という用語は、結合タンパク質が抗原に特異的に結合すると、抗原の生物学的活性を相殺することを表す。一実施形態において、中和結合タンパク質はサイトカインに結合し、少なくとも約20、40、60、80、85またはそれ以上、その生物学的活性を低下させる。活性という用語は、2つまたはそれ以上の抗原に対するDVD-Igの結合特異性および親和性などの活性を含む。エピトープという用語には、免疫グロブリンまたはT細胞受容体に特異的に結合することができる、あらゆるポリペプチド決定基が含まれる。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホリルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある種の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴および/または特異的な電荷特徴を有し得る。エピトープとは、抗体によって結合される抗原の領域である。ある種の実施形態において、抗体が、タンパク質および/または高分子の複雑な混合物中で、その標的抗原を認識する場合に、抗体は抗原を特異的に結合するといわれる。抗体が交差競合する一方が他方の結合または調節作用を妨げる場合、抗体は同じエピトープに結合するといわれる。さらに、エピトープの構造上の定義重複、類似、同一は有益であるが、機能上の定義は、構造上結合および機能上調節、競合のパラメーターを包含するので、しばしばより重要である。本明細書において使用される表面プラズモン共鳴という用語は、例えば、BIAcore登録商標システムBIAcoreInternationalABGEHealthcareの会社、Uppsala、SwedenおよびPiscataway、NJを用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を表す。さらなる記載については、Jonsson,U.,etal.1993Ann.Biol.Clin.51:19-26;Jonsson,U.,etal.1991Biotechniques11:620-627;Johnsson,B.,etal.1995J.Mol.Recognit.8:125-131;およびJohnnson,B.,etal.1991Anal.Biochem.198:268-277を参照されたい。本明細書において使用されるKonという用語は、例えば、本分野で知られている抗体/抗原複合体を形成する、結合タンパク質例えば、抗体と抗原の結合についての結合速度onrate定数を表すものとする。Konは、結合速度associationrate定数またはkaという用語によっても知られ、これらは本明細書において互換的に使用される。抗体とその標的抗原の結合速度または抗体と抗原間での複合体形成の速度を示しているこの値は、以下の方程式によっても示される:抗体Ab抗原Ag’Ab-Ag本明細書において使用されるKoffという用語は、結合タンパク質例えば、抗体の、例えば、本分野で知られている抗体/抗原複合体からの解離についての解離速度offrate定数または解離速度dissociationrate定数を表すものとする。この値は、抗体のその標的抗原からの解離速度またはAb-Ag複合体の遊離抗体および抗原への経時的な分離を示し、以下の方程式によって示される:AbAg→Ab-Ag。本明細書において使用されるKDという用語は、平衡解離定数を表すものとし、平衡状態での滴定測定においてまたは解離速度定数koffを結合速度定数konで割ることによって得られた値を表す。結合速度定数、解離速度定数および平衡解離定数は、抗体と抗原の結合親和性を表すために使用される。結合および解離速度定数を決定する方法は本分野において周知である。蛍光を基礎とする技術の使用は、高い感度を提供し、平衡状態で生理的緩衝液中の試料を調べることができる。BIAcore登録商標生体分子相互作用分析アッセイなどの他の実験的アプローチおよび機器を使用することが可能である例えば、BIAcoreInternationalAB,GEHealthcare社,Uppsala,Swedenから入手可能な機器。さらに、SapidyneInstrumentsBoise,Idahoから入手可能なKinExA登録商標動態排除アッセイアッセイも使用することが可能である。標識および検出可能な標識は、例えば、抗体および分析物などの特異的結合対のメンバー間での反応を検出可能にするために、抗体または分析物などの特異的結合パートナーに結合した部分を意味し、そのように標識された特異的結合パートナー、例えば抗体および分析物は検出可能に標識されたと呼ばれる。したがって、本明細書において使用される標識された結合タンパク質という用語は、結合タンパク質の同定を与える標識が取り込まれたタンパク質を表す。一実施形態において、標識は、視覚または計測手段によって検出可能な信号を生成することができる、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込み、または印を付けたアビジン例えば、光学的方法または比色分析法によって検出することができる、蛍光マーカーまたは酵素活性を含有するストレプトアビジンによって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチド用の標識の例には、以下の放射性同位体または放射性核種例えば、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Hoまたは153Sm;色原体、蛍光標識例えば、FITC、ローダミン、ランタニドリン光体;酵素的標識例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ;化学発光マーカー;ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ;およびガドリニウムキレートなどの磁気作用物質が含まれるが、これらに限定されない。イムノアッセイに一般に使用される標識の代表例には、光を生じる部分、例えばアクリジニウム化合物および蛍光を生じる部分、例えばフルオレセインが含まれる。他の標識は本明細書に記載されている。この関連で、部分自体が検出可能に標識され得るが、さらに別の部分との反応後に検出可能にされ得る。検出可能に標識されたの使用は、後者のタイプの検出可能な標識化を包含するものとする。連結体という用語は、第二の化学部分治療剤または細胞毒性剤などに化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を表す。本明細書において、作用物質という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子または生物由来物質から作製された抽出物を表記するために使用される。一実施形態において、治療剤または細胞毒性剤には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1-デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにこれらの類似体または相同体が含まれるが、これらに限定されるものではない。イムノアッセイとの関連において使用される場合、連結抗体は、検出抗体として使用される検出可能に標識された抗体であってよい。本明細書において使用される結晶および結晶化されたという用語は、結晶の形態で存在する結合タンパク質例えば、抗体またはその抗原結合部分を表す。結晶は、物質の固体状態の一形態であり、これは、非晶質の固体状態または液体の結晶状態などの他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子例えば、抗体などのタンパク質または分子集合体例えば、抗原/抗体複合体の規則的な反復する三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、本分野においてよく理解されている特異的な数学的関係に従って整列されている。結晶中で反復されている基礎的単位または構築ブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に整えられた結晶的対称性に合致する配置での非対称単位の反復は、結晶の単位格子を与える。すべての三次元中での規則的な転換による単位格子の反復は、結晶を与える。Giege,R.andDucruix,A.Barrett,CrystallizationofNucleicAcidsandProteins,aPracticalApproach,2ndea.,pp.201-16,OxfordUniversityPress,NewYork,NewYork,1999を参照されたい。ポリヌクレオチドという用語は、2つまたはそれ以上のヌクレオチドリボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかまたはヌクレオチドのいずれかのタイプの修飾された形態のポリマー形態を意味する。本用語は、DNAの一本鎖および二本鎖形態を含む。単離されたポリペプチドという用語は、例えば、ゲノム、cDNAもしくは合成起源またはこれらのいくつかの組合せのポリヌクレオチドを意味するものとし、その起源のために、単離されたポリヌクレオチドは、単離されたポリヌクレオチドが本来その中でともに見出されるポリヌクレオチドの全部または一部と会合していない、本来連結されていないポリヌクレオチドに作用可能に連結されている、またはより大きな配列の一部として本来存在しない、ことを意味する。ベクターという用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することができる該核酸分子を表すものとする。ベクターの1つの種類はプラスミドであり、これは、その中にさらなるDNAセグメントを連結し得る環状二本鎖DNAループを表す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ここで、追加のDNAセグメントはウイルスゲノム中に連結され得る。ある種のベクターは、当該ベクターがその中に導入された宿主細胞中で自律的複製を行うことができる例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター。他のベクター例えば、非エピソーム哺乳動物ベクターは、宿主細胞中へ導入されて、宿主細胞のゲノム中に組み込まれることが可能であり、これにより、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが作用可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、組み換え発現ベクターまたは単に、発現ベクターと称される。一般に、組み換えDNA技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書において、プラスミドおよびベクターは互換的に使用され得る。しかしながら、本発明は、均等な機能を果たす、ウイルスベクターなどの例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス発現ベクターのような他の形態を含むものとする。作用可能に連結されたという用語は、記載された成分をそれらを所期の様式で機能させることができる関係にある併置状態を表す。コード配列に対して作用可能に連結された制御配列は、制御配列と適合的な条件下で、コード配列の発現が達成されるように連結されている。作用可能に連結された配列は、目的の遺伝子と連続する発現調節配列および目的の遺伝子を調節するように、トランスにてまたは離れて作用する発現調節配列の両方を含む。本明細書において使用される発現調節配列という用語は、連結されているコード配列の発現およびプロセッシングに影響を与えるために必要であるポリヌクレオチド配列を表す。発現調節配列には、適切な転写開始、終結、プロモーターおよびエンハンサー配列;スプライシングおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なRNAプロセッシングシグナル;細胞質mRNAを安定化させる配列;翻訳効率を増強する配列すなわち、Kozakコンセンサス配列;タンパク質の安定性を増強する配列;および所望であれば、タンパク質分泌を増強させる配列が含まれる。このような調節配列の性質は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、このような調節配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列を含む。真核生物では、一般に、このような調節配列には、プロモーターおよび転写終結配列が含まれ得る。調節配列という用語は、その存在が発現およびプロセッシングに不可欠である成分を含むものとし、その存在が有利である追加の成分、例えば、リーダー配列および融合対配列も含むことが可能である。形質転換とは、外来DNAが宿主細胞に入るすべてのプロセスを表す。形質転換は、本分野で周知の様々な方法を用いて、自然の条件または人工の条件下で起こり得る。形質転換は、原核または真核宿主細胞中へ外来核酸配列を挿入するためのいずれかの公知の方法に依拠し得る。本方法は、形質転換されている宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、電気穿孔、リポフェションおよび粒子照射を含み得るが、これらに限定されない。このような形質転換された細胞には、挿入されたDNAが、自律的に複製するプラスミドとして、または宿主染色体の一部として、その中で複製することできる安定に形質転換された細胞が含まれる。これらには、挿入されたDNAまたはRNAを、限られた時間にわたって一過性に発現する細胞も含まれる。組み換え宿主細胞または単に、宿主細胞という用語は、外来DNAがその中に導入されている細胞を表すものとする。一実施形態において、宿主細胞は、例えば米国特許第7,262,028号に記載されている宿主細胞のように、2つまたはそれ以上の例えば、複数の、抗体をコードする核酸を含む。このような用語は、当該細胞を表すのみならず、このような細胞の子孫も表す。突然変異または環境的な影響のために、後続の世代中にある種の修飾が生じ得るので、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書において使用される宿主細胞という用語の範囲になお含まれる。一実施形態において、宿主細胞には、生物のいずれかの界からの原核および真核細胞が含まれる。別の実施形態において、真核細胞には、原生生物、真菌、植物および動物細胞が含まれる。別の実施形態において、宿主細胞には、原核細胞株E.コリ;哺乳動物細胞株CHO、HEK293、COS、NS0、SP2およびPER.C6;昆虫細胞株Sf9および真菌細胞サッカロミセスセレビシアエが含まれるが、これらに限定されるものではない。組み換えDNA、オリゴヌクレオチド合成および組織培養および形質転換例えば、電気穿孔、リポフェクションに対しては標準的な技術が使用され得る。酵素反応および精製技術は、製造業者の説明書に従って、または本分野で一般的に遂行されているように、または本明細書に記載されているように、実施され得る。一般に、先述の技術および手順は、本分野で周知の慣用的な方法に従い、ならびに本明細書を通じて引用および論述されている様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されているように、実施し得る。例えば、Sambrooketal.MolecularCloning:ALaboratoryManual2ded.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.1989を参照されたい。本分野において公知であるトランスジェニック生物とは、導入遺伝子を含有する細胞を有する生物を表し、生物中に導入された導入遺伝子または生物の子孫は、生物中に自然に発現されていないポリペプチドを発現する。導入遺伝子とは、細胞のゲノム中に安定におよび作用可能に組み込まれているDNA構築物であり、この細胞からトランスジェニック生物が発達し、トランスジェニック生物の1つまたは複数の細胞種または組織中で、コードされた遺伝子産物の発現を誘導する。制御するまたは調節するという用語は互換的に使用され、本明細書において使用される場合、目的の分子の活性例えば、サイトカインの生物学的活性の変化または変更を表す。調節は、目的の分子の一定の活性または機能の規模の増加または減少であり得る。分子の典型的な活性および機能には、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化およびシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されない。これに対応して、調節物質という用語は、目的の分子の活性または機能例えば、サイトカインの生物学的活性を変化または変更させることが可能な化合物である。例えば、調節物質は、調節物質の不存在下で観察される活性または機能の規模と比べて、分子のある種の活性または機能の規模の増加または減少を引き起こし得る。ある種の実施形態において、調節物質は、分子の少なくとも1つの活性または機能の規模を減少させる阻害剤である。典型的な阻害剤には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチバディ、炭水化物または小有機分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。ペプチバディは、例えば、PCT公開WO01/83525に記載されている。アゴニストという用語は、目的分子と接触したときに、アゴニストの不存在下で観察される活性または機能の規模と比べて、分子のある種の活性または機能の規模の増加を引き起こす調節物質を表す。興味深い特定のアゴニストには、ポリペプチド、核酸、炭水化物または抗原に結合する他のすべての分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。アンタゴニストまたは阻害剤という用語は、目的分子と接触したときに、アンタゴニストの不存在下で観察される活性または機能の規模と比べて、分子のある種の活性または機能の規模の減少を引き起こす調節物質を表す。興味深い具体的なアンタゴニストには、抗原の生物学的または免疫学的活性を遮断または調節するアンタゴニストが含まれる。抗原のアンタゴニストおよび阻害剤には、タンパク質、核酸、炭水化物または抗原に結合する他のすべての分子が含まれ得るが、これらに限定されるものではない。本明細書において使用される有効量という用語は、疾患もしくはその1つもしくはそれ以上の症候の重度および/または持続時間を低下もしくは軽減し、疾患の進行を抑制し、疾患の退行を引き起こし、疾患に伴う1つもしくはそれ以上の症候の再発、発達、発症もしくは進行を予防し、疾患を検出し、または別の療法例えば、予防的または治療的剤の予防的または治療的効果を増強もしくは改善するのに十分である療法の量を表す。患者および対象は、霊長類例えば、ヒト、サルおよびチンパンジー、非霊長類例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウス、クジラを含む哺乳動物、鳥例えば、アヒルまたはガチョウおよびサメなどの動物を表すために本明細書において互換的に使用され得る。好ましくは、患者または対象は、疾患、障害もしくは状態について治療もしくは評価されているヒト、疾患、障害もしくは状態のリスクがあるヒト、疾患、障害もしくは状態を有するヒトおよび/または疾患、障害もしくは状態について治療されているヒトなどのヒトである。本明細書で使用される試料という用語は、最も広義で使用される。本明細書において使用される生物学的試料は、生物または生物であったものから得られた物質のいずれかの量を含むが、これらに限定されない。このような生物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギおよびその他の動物が含まれるが、これらに限定されない。このような物質には、血液例えば、全血、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節および脾臓が含まれるが、これらに限定されない。成分component、複数の成分componentsおよび少なくとも1つの成分は、本明細書に記載されている方法または本分野において知られている他の方法による、患者の尿、血清または血漿試料などの試験試料のアッセイ用のキット中に含めることが可能である捕捉抗体、検出または連結抗体、対照、較正物質、一連の較正物質、感受性パネル、容器、緩衝液、希釈液、塩、酵素、酵素の補因子、検出試薬、前処理試薬/溶液、基質例えば、溶液として、停止溶液などを一般に表す。従って、本開示との関連で、少なくとも1つの成分、成分componentおよび複数の成分componentsは、抗分析物例えば、抗ポリペプチド抗体との結合などにより固体支持体上に場合によって固定化されたポリペプチドなどの分析物を含む組成物などの上記のポリペプチドまたは他の分析物を含み得る。いくつかの成分は、溶液中に存在するまたはアッセイで使用するための再構成用に凍結乾燥させることが可能である。対照は、分析物でない陰性対照または分析物を含む陽性対照ことが知られている組成物を表す。陽性対照は、既知の濃度の分析物を含み得る。対照、陽性対照および較正物質は、既知の濃度の分析物を含む組成物を表すために本明細書において互換的に使用され得る。陽性対照は、アッセイ性能特性を確立するために使用することが可能であり、試薬例えば、分析物の完全性の有用な指標である。所定のカットオフおよび所定のレベルは、所定のカットオフ/レベルに対してアッセイの結果を比較することにより診断/予後診断/治療的効力の結果を評価するために使用されるアッセイのカットオフ値を一般に表し、所定のカットオフ/レベルは様々な臨床的パラメーター例えば、疾患の重症度、進行/非進行/改善などにすでにつながっておりまたは関連している。本開示は例示的な所定のレベルを提供し得るが、カットオフ値はイムノアッセイの性質例えば、使用される抗体などに応じて様々となり得ることが周知である。さらに、本明細書における開示を他のイムノアッセイに適合させて、本開示を基礎とする他のイムノアッセイについてのイムノアッセイ特異的なカットオフ値を得ることは、当業者の通常の技術の範囲内に十分にある。所定のカットオフ/レベルの正確な値はアッセイ間で様々となり得るが、もしあれば本明細書に記載されている相関は一般に適用可能であるはずである。本明細書に記載されている診断アッセイにおいて使用される前処理試薬、例えば、溶解、沈殿および/または可溶化試薬は、あらゆる細胞を溶解するものおよび/または試験試料中に存在するあらゆる分析物を可溶化するものである。前処理は、本明細書でさらに記載されるように、すべての試料に必要というわけでない。とりわけ、分析物例えば、目的のポリペプチドの可溶化は、試料中に存在するあらゆる内在性結合タンパク質からの分析物の放出を伴い得る。前処理試薬は均一分離工程を必要としないまたは不均一分離工程を必要とするであり得る。不均一前処理試薬を使用すると、アッセイの次の工程に進行する前に任意の沈殿した分析物結合タンパク質は試験試料から除去される。本明細書に記載されているイムノアッセイおよびキットとの関連で品質管理試薬には、較正物質、対照および感受性パネルが含まれるが、これらに限定されない。較正物質または標準物質は、抗体または分析物などの分析物の濃度を内挿するための較正標準曲線を確立するために典型的に例えば複数など、1つまたは複数使用される。あるいは、所定の陽性/陰性カットオフ近くにある単一の較正物質を使用することが可能である。感受性パネルを含むように、複数の較正物質すなわち、2つ以上の較正物質または様々な量の複数の較正物質を組み合わせて使用することが可能である。リスクは、現在または将来のある時点で特定の事象が起こる可能性または確率を表す。リスク層別は、医師が、特定の疾患、障害または状態を発症する低度、中程度、高度または最も高度のリスクに患者を分類することを可能にする一連の既知の臨床的リスク因子を表す。特異的結合対例えば、抗原またはその断片および抗体またはその抗原反応性断片のメンバー間の相互作用との関連で特異的なおよび特異性は、相互作用の選択的な反応性を表す。に特異的に結合するという語句および類縁の語句は、分析物またはその断片に特異的に結合し、他の実体に特異的に結合しない抗体またはその抗原反応性断片の能力を表す。特異的結合パートナーは、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学的または物理的な手段を介して互いに特異的に結合する2つの異なる分子を含む。したがって、一般的なイムノアッセイの抗原および抗体の特異的結合対に加えて、他の特異的結合対は、ビオチンおよびアビジンまたはストレプトアビジン、炭水化物およびレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクターおよび受容体分子、補因子および酵素、酵素阻害剤および酵素などを含み得る。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、分析物類似体であるメンバーを含み得る。免疫反応性特異的結合メンバーには、単離または組み換えで産生された抗原、抗原断片およびモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体ならびにその複合体、断片およびバリアントバリアントの断片を含むが含まれる。本明細書において使用されるバリアントは、アミノ酸の付加例えば、挿入、欠失または保存的置換によってアミノ酸配列が所与のポリペプチド例えば、IL-18、BNP、NGALもしくはHIVポリペプチドまたは抗ポリペプチド抗体と異なるが、所与のポリペプチドの生物活性を保持するポリペプチドを意味する例えば、バリアントIL-18はIL-18との結合について抗IL-18抗体と競合することができる。アミノ酸の保存的置換、すなわち特性が類似する例えば、親水性ならびに荷電領域の程度および分布異なるアミノ酸とのアミノ酸の置き換えは、微小変化が典型的に関与すると本分野で認識されている。これらの微小変化は、本分野で理解されているように、アミノ酸のヒドロパシーインデックスを考慮することにより部分的に特定することが可能である例えば、Kyteetal.1982J.Mol.Biol.157:105-132参照。アミノ酸のヒドロパシーインデックスは、この疎水性および荷電の考慮を基礎とする。ヒドロパシーインデックスの類似したアミノ酸を置換することが可能であり、これらのアミノ酸はタンパク質の機能を依然として保持することが本分野において知られている。一態様において、±2のヒドロパシーインデックスを有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質となる置換を明らかにするために使用することも可能である。ペプチドとの関連でアミノ酸の親水性を考慮することにより、抗原性および免疫原性とよく相関することが報告されている有用な尺度である、そのペプチドの最大の局所平均親水性の計算が可能となる例えば、米国特許第4,554,101号参照。本分野で理解されているように、類似した親水性値を有するアミノ酸の置換は、生物活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。一態様において、互いに±2以内の親水性値を有するアミノ酸を用いて置換が行われる。アミノ酸のヒドロパシーインデックスと疎水性値はどちらもそのアミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。この観察と一致して、生物学的機能と適合するアミノ酸置換は、アミノ酸、特に、疎水性、親水性、荷電、サイズおよび他の特性によって明らかにされるこれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存することが理解されている。バリアントは、タンパク質分解、リン酸化または他の翻訳後修飾などによって異なる形でプロセシングされているが、その生物活性または抗原反応性、例えばIL-18に結合する能力を保持するポリペプチドまたはその断片を示すために使用することも可能である。本明細書におけるバリアントの使用は、別段文脈上矛盾しない限り、バリアントの断片を包含するものとする。I.DVD結合タンパク質の作製本発明は、1つまたは複数の標的に結合することが可能な二重可変ドメイン結合タンパク質およびこれを作製する方法に関する。一実施形態において、結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はVD1-X1n-VD2-C-X2nVD1は第一の可変ドメインであり、VD2は第二の可変ドメインであり、Cは定常ドメインであり、X1はアミノ酸またはポリペプチドを表し、X2はFc領域を表し、nは0または1である。を含む。本発明の結合タンパク質は、様々な技術を用いて作製することが可能である。本発明は、発現ベクター、宿主細胞および結合タンパク質を作製する方法を提供する。A.親モノクローナル抗体の作製DVD結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合することができるポリクローナルおよびmAbなど、親抗体から取得することが可能である。これらの抗体は、天然に存在し得、または組み換え技術によって作製され得る。mAbは、ハイブリッドーマ、組み換えおよびファージディスプレイ技術またはこれらの組合せの使用など、本分野で公知の多様な技術を用いて調製することが可能である。例えば、mAbは、本分野において公知であり、例えば、Harlowetal.,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.1988;Hammerling,etal.,in:MonoclonalAntibodiesandT-CeIlHybridomas563-681Elsevier,N.Y.,1981に教示されているものなど、ハイブリッドーマ技術を用いて作製することが可能である。本明細書において使用されるモノクローナル抗体という用語は、ハイブリドーマ技術を通じて産生された抗体に限定されない。モノクローナル抗体という用語は、あらゆる真核、原核またはファージクローンなど、単一のクローンに由来する抗体を表し、それが産生される方法ではない。ハイブリドーマは、実施例1において、以下に記載されているように、選択され、クローニングされ、頑強なハイブリドーマ増殖、高い抗体産生および所望の抗体特性など、所望の特性についてさらにスクリーニングされる。ハイブリドーマは、培養され、同系の動物中で、免疫系を欠く動物例えば、ヌードマウス中で、インビボで、または細胞培養中で、インビトロで増殖され得る。ハイブリドーマを選択し、クローニングし、増殖させる方法は、当業者に周知である。特定の実施形態において、ハイブリドーマはマウスハイブリドーマである。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシまたはウマなど、非ヒト非マウス種の中で産生される。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫が、特異的抗原に結合することが可能な抗体を発現するヒト細胞と融合されているヒトハイブリドーマである。また、組み換えmAbは、米国特許第5,627,052号、PCT公開WO92/02551およびBabcock,J.S.etal.1996Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-7848に記載されているように、選択リンパ球抗体法SLAM;selectedlymphocyteantibodymethodとして本分野で呼ばれている手法を用いて、単一の単離されたリンパ球から作製される。この方法では、目的の抗体を分泌する単一細胞、例えば、免疫された動物に由来するリンパ球が同定され、重鎖および軽鎖可変領域cDNAが、逆転写酵素-PCRによって細胞から救出され、これらの可変領域は、次いで、COSまたはCHO細胞などの哺乳動物宿主細胞中で、適切な免疫グロブリン定常領域例えば、ヒト定常領域に関連して発現することが可能である。増幅された免疫グロブリン配列で形質移入され、インビボで選択されたリンパ球に由来する宿主細胞は、次いで、例えば、目的の抗原に対する抗体を発現する細胞を単離するために、形質移入された細胞をパニングすることによって、インビトロで、さらに分析および選択を行うことが可能である。増幅された免疫グロブリン配列は、さらに、PCT公開WO97/29131およびPCT公開WO00/56772に記載されているものなど、インビトロでのアフィニティー成熟方法によるなど、インビトロで操作することが可能である。モノクローナル抗体は、目的の抗原を有するヒト免疫グロブリン遺伝子座のいくつかまたはすべてを含む非ヒト動物を免疫することによっても産生される。一実施形態において、非ヒト動物は、XENOMOUSEトランスジェニックマウスヒト免疫グロブリン遺伝子座の巨大断片を含み、マウス抗体産生を欠失している改変されたマウス系統である。例えば、Greenetal.1994NatureGenetics7:13-21ならびに米国特許第5,916,771号、第5,939,598号、第5,985,615号、第5,998,209号、第6,075,181号、第6,091,001号、第6,114,598号および第6,130,364号を参照されたい。PCT公開WO91/10741、PCT公開WO94/02602、PCT公開WO96/34096;PCT公開WO96/33735、PCT公開WO98/16654、PCT公開WO98/24893、PCT公開WO98/50433、PCT公開WO99/45031、PCT公開WO99/53049、PCT公開WO0009560;およびPCT公開WO00/037504も参照されたい。XENOMOUSEトランスジェニックマウスは、完全なヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を生成する。XENOMOUSEトランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座およびx軽鎖遺伝子座のメガ塩基サイズの生殖系列配置YAC断片の導入を通じて、ヒト抗体レパートリーの約80を含有する。Mendezetal.1997NatureGenetics15:146-156;GreenandJakobovits1998J.Exp.Med.188:483-495を参照されたい。親抗体を作製するために、インビトロ法も使用することが可能であり、抗体ライブラリーは、所望の結合特異性を有する抗体を同定するためにスクリーニングされる。組み換え抗体ライブラリーのこのようなスクリーニングの方法は、本分野において周知であり、例えば、米国特許第5,223,409号;PCT公開WO92/18619;PCT公開WO91/17271;PCT公開WO92/20791;PCT公開WO92/15679;PCT公開WO93/01288;PCT公開WO92/01047;PCT公開WO92/09690;Fuchsetal.1991Bio/Technology9:1370-1372;Hayetal.1992HumAntibodHybridomas3:81-85;Huseetal.1989Science246:1275-1281;McCaffertyetal.,Nature1990348:552-554;Griffithsetal.1993EMBOJ12:725-734;Hawkinsetal.1992JMolBiol226:889-896;Clacksonetal.1991Nature352:624-628;Grametal.1992PNAS89:3576-3580;Garradetal.1991Bio/Technology9:1373-1377;Hoogenboometal.1991NucAcidRes19:4133-4137;およびBarbasetal1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:7978-7982、米国特許公開第20030186374号およびPCT公開WO97/29131に記載されている方法が含まれる。本発明の親抗体は、本分野で公知の様々なファージディスプレイ法を用いて作製することも可能である。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、これらをコードしているポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上にディスプレイされる。特に、このようなファージは、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー例えば、ヒトまたはマウスから発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために使用することが可能である。目的の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を用いて、選択または同定することが可能である。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ファージ遺伝子IIIまたは遺伝子VIIIタンパク質のいずれかに組み換え的に融合されたFab、Fvまたはジスルフィドで安定化されたFv抗体ドメインとともにファージから発現されたfdおよびM13結合ドメインを含む糸状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用することが可能なファージディスプレイ法の例には、Brinkmanetal.1995J.Immunol.Methods182:41-50;Amesetal.1995J.Immunol.Methods184:177-186;Kettleboroughetal.1994Eur.J.Immunol.24:952-958;Persicetal.1997Gene1879-18;Burtonetal.1994Adv.Immunol.57:191-280;PCT出願PCT/GB91/01134;PCT公開WO90/02809;WO91/10737;WO92/01047;WO92/18619;WO93/11236;WO95/15982;WO95/20401;ならびに米国特許第5,698,426号;第5,223,409号;第5,403,484号;第5,580,717号;第5,427,908号;第5,750,753号;第5,821,047号;第5,571,698号;第5,427,908号;第5,516,637号;第5,780,225号;第5,658,727号;第5,733,743号および第5,969,108号に開示されているものが含まれる。本明細書中の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ヒト抗体または他の所望されるすべての抗原結合断片を含む完全な抗体を作製するために、ファージから得た抗体コード領域を単離および使用し、例えば、以下に詳述されているように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌など、あらゆる所望の宿主中で発現させることが可能である。例えば、PCT公開WO92/22324;Mullinaxetal.1992BioTechniques126:864-869;およびSawaietal.1995AJRI34:26-34;およびBetteretal.1988Science240:1041-1043に開示されている方法などの本分野で公知の方法を用いて、Fab、Fab’およびFab’2断片を組み換え的に産生するための技術も使用することが可能である。一本鎖Fvおよび抗体を作製するために使用することが可能な技術の例には、米国特許第4,946,778号および第5,258,498号;Hustonetal.1991MethodsinEnzymol.203:46-88;Shuetal.1993PNAS90:7995-7999;ならびにSkerraetal.1988Science240:1038-1040に記載されているものが含まれる。ファージディスプレイによる組み換え抗体ライブラリーのスクリーニングに代えて、巨大なコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための本分野で公知の他の方法を、親抗体の同定のために適用することが可能である。代替的発現系の1つの種類は、PCT公開WO98/31700ならびにRoberts,R.W.andJ.W.Szostak1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA94,12297-12302に記載されているような、組み換え抗体ライブラリーがRNA-タンパク質融合物として発現されるものである。この系において、ピューロマイシン、ペプチジルアクセプター抗生物質をそれらの3’末端に担持する合成mRNAのインビトロ翻訳によって、mRNAおよびこれがコードするペプチドまたはタンパク質の間に共有結合的融合物が作製される。したがって、特異的なmRNAは、コードされているペプチドまたはタンパク質、例えば抗体またはその一部の特性抗体またはその一部の、二重特異性抗原への結合などに基づいて、mRNAの複雑な混合物例えば、コンビナトリアルライブラリーから濃縮することが可能である。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された、抗体またはその一部をコードする核酸配列は、本明細書に記載されているような組み換え手段によって例えば、哺乳動物宿主細胞中で発現されることが可能であり、さらに、最初に選択された配列中に変異が導入されているmRNA-ペプチド融合物のスクリーニングのさらなるラウンドによって、または本明細書に記載されているように、組み換え抗体のインビトロでの親和性成熟のためのその他の方法によって、さらなる親和性成熟に供することが可能である。別のアプローチにおいて、親抗体は、本分野で公知の酵母ディスプレイ法を用いて作製することも可能である。酵母ディスプレイ法では、抗体ドメインを酵母細胞壁に繋留し、これらを酵母の表面上にディスプレイするために、遺伝学的な方法が使用される。特に、このような酵母は、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー例えば、ヒトまたはマウスから発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために使用することが可能である。親抗体を作製するために使用することが可能な酵母ディスプレイ法の例には、Wittrup,etal.米国特許第6,699,658号に開示されているものが含まれる。本明細書に記載されている抗体は、CDR移植されたおよびヒト化された親抗体を作製するために、さらに修飾を施すことが可能である。CDR移植された親抗体は、ヒト抗体由来の重鎖および軽鎖可変領域配列を含み、VHおよび/またはVLのCDR領域の1つまたは複数が、目的の抗原に結合することが可能なマウス抗体のCDR配列と置換される。あらゆるヒト抗体から得られるフレームワーク配列が、CDR移植のためのテンプレートとしての役割を果たし得る。しかしながら、このようなフレームワーク上への直鎖の置換は、しばしば、抗原への結合親和性を若干喪失させる。元のマウス抗体に対して、ヒト抗体がより相同であるほど、ヒトフレームワークとマウスCDRの組合せは、親和性を低下させ得るCDR中の歪みを導入する可能性がより低くなる。したがって、一実施形態において、CDR以外のマウス可変フレームワークを置換するために選択されたヒト可変フレームワークは、マウス抗体可変領域フレームワークと少なくとも65の配列同一性を有する。一実施形態において、CDRを除くヒトおよびマウス可変領域は、少なくとも70の配列同一性を有する。特定の実施形態において、CDRを除くヒトおよびマウス可変領域は、少なくとも75の配列同一性を有する。別の実施形態において、CDRを除くヒトおよびマウス可変領域は、少なくとも80の配列同一性を有する。このような抗体を作製する方法は、本分野において公知であるEP239,400;PCT公開WO91/09967;米国特許第5,225,539号;米国特許第5,530,101号;および第5,585,089号参照、ベニアリングveneeringまたはリサーフェシングresurfacingEP592,106;EP519,596;Padlan1991Mol.Immunol.284/5:489-498;Studnickaetal.1994ProteinEngineering76:805-814;Roguskaetal.1994Proc.Natl.Acad.Sci.91:969-973,およびチェーンシャッフリング米国特許第5,565,352号;および抗イディオタイプ抗体。ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する1つまたは複数の相補性決定領域CDRと、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する所望の抗原に結合する非ヒト種抗体から得られる抗体分子である。公知のヒトIg配列は、開示されている。例えば、www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi;www.atcc.org/phage/hdb.html;www.sciquest.com/;www.abcam.com/;www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html;www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html;www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm;www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html;www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html;www.antibodyresource.com/;mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html.www.immunologylink.com/;pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.-html;www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/;www.pebio.com/pa/340913/340913.html-;www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/;www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html;www.biodesign.com/table.asp;www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html;www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html;www.isac-net.org/sites_geo.html;aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html;baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html;www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/;www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu-blic/INTRO.html;www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html;imgt.cnusc.fr:8104/;www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html;antibody.bath.ac.uk/;abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html;www.unizh.ch/.about.honegger/AHOseminar/Slide01.html;www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/;www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm;www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/humanisation/TAHHP.html;www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html;www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html;www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html;www.jerini.de/frroducts.htm;www.patents.ibm.com/ibna.html。Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.Dept.Health1983。このような導入された配列は、免疫原性を低下させるために、または結合、親和性、結合速度、解離速度、結合力、特異性、半減期もしくは本分野で公知の他のいずれかの適切な特性を減少、増強もしくは修飾するために使用することが可能である。ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させるために、例えば抗原結合を改善させるために、CDRドナー抗体由来の対応する残基で置換され得る。これらのフレームワーク置換は、本分野で周知の方法によって、例えば、抗原結合にとって重要なフレームワーク残基を同定するために、CDRとフレームワーク残基の相互作用をモデリングすることによって、および特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される。例えば、米国特許第5,585,089号;Riechmannetal.1988Nature332:323を参照されたい。。三次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列が採り得る三次元立体構造を図式および表示するコンピュータプログラムを利用可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の推定される役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を可能とする。このようにして、FR残基は、所望される抗体特性標的抗原に対して増加された親和性などが達成されるように、コンセンサスおよび輸入配列から選択され、組み合わせることが可能である。一般に、CDR残基は、抗原結合に影響を与えることに直接、および最も実質的に関与する。抗体は、Jonesetal.1986Nature321:522;Verhoeyenetal.1988Science239:1534、Simsetal.1993J.Immunol.151:2296;ChothiaandLesk1987J.Mol.Biol.196:901、Carteretal.1992Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:4285;Prestaetal.1993J.Immunol.151:2623、Padlan1991MolecularImmunology284/5:489-498;Studnickaetal.1994ProteinEngineering76:805-814;Roguska.etal.1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:969-973;PCT公開WO91/09967,PCT/:US98/16280、US96/18978、US91/09630、US91/05939、US94/01234、GB89/01334、GB91/01134、GB92/01755;WO90/14443、WO90/14424、WO90/14430、EP229246、EP592,106;EP519,596、EP239,400、米国特許第5,565,332号、第5,723.323号、第5,976,862号、第5,824,514号、第5,817,483号、第5814476号、第5763192号、第5723323号、第5,766886号、第5,714,352号、第6,204,023号、第6,180,370号、第5,693,762号、第5,530,101号、第5,585,089号、第5,225,539号;第4,816,567号に記載されているものなどの但し、これらに限定されない。、本分野で公知の様々な技術を用いてヒト化することが可能である。B.親モノクローナル抗体を選択するための基準本発明の実施形態は、DVD-Ig分子において所望される少なくとも1つまたは複数の特性を有する親抗体を選択することに関する。一実施形態において、所望の特性は、1つまたは複数の抗体パラメーターである。別の実施形態において、抗体パラメーターは、抗原特異性、抗原に対する親和性、効力、生物学的機能、エピトープ認識、安定性、可溶性、生産効率、免疫原性、薬物動態、生物学的利用率、組織交差反応性またはオルソロガス抗原結合性である。B1.抗原に対する親和性治療用mAbの所望の親和性は、抗原の性質および所望の治療的エンドポイントに依存し得る。一実施形態において、サイトカイン-サイトカイン受容体相互作用を遮断するとモノクローナル抗体は高い親和性を有しKd=0.01-0.50pM、したがって相互作用は通常高い親和性の相互作用である例えば、<pM-<nMの範囲。このような場合、その標的に対するmAbの親和性は、その受容体に対するサイトカインリガンドの親和性と等しくまたはこれより良好であるはずである。その一方で、親和性が低い>nMの範囲mAbは、例えば、循環中の潜在的に病原性のあるタンパク質を排除する際に治療的に有効であり得、例えば、A-βアミロイドの循環中の種に結合し、これを隔離し排除するモノクローナル抗体である。他の場合において、部位特異的突然変異導入によって既存の高親和性mAbの親和性を低減することまたはその標的に対する親和性が低いmAbを使用することは、潜在的な副作用、例えば高親和性mAbがその意図する標的をすべて隔離/中和する可能性があることを回避するために使用することが可能であり、それによって、標的とされたタンパク質の複数の機能を完全に除去/排除する。この筋書において、低親和性mAbは、疾患の症状病的または過剰産生レベルに関与する可能性がある標的の一部を隔離/中和し得、それによって、標的の一部がその正常な複数の生理的機能を果たし続けることを可能にする。したがって、Kdを低減して用量を調整することおよび/または副作用を低減することが可能であり得る。親mAbの親和性は、細胞表面分子を適切に標的として所望の治療結果を達成することに役割を果たし得る。例えば、標的が、高密度で癌細胞上に、低密度で正常細胞上に発現している場合、低親和性mAbは、正常細胞より腫瘍細胞上で多数の標的に結合し、この結果ADCCまたはCDCを介して腫瘍細胞が排除され、したがって低親和性mAbは治療的に望ましい効果を有し得る。したがって、所望の親和性を有するmAbを選択することは、可溶性標的と表面標的の両方で重要であり得る。そのリガンドとの相互作用後の受容体を通じたシグナル伝達は、受容体-リガンド相互作用の親和性に依存し得る。同様に、表面受容体に対するmAbの親和性は、細胞内シグナル伝達の性質およびmAbがアゴニストまたはアンタゴニストシグナルを送達し得るかどうかを決定できることが考えられる。mAbによって媒介されるシグナル伝達の、親和性を基礎とする性質は、その副作用プロファイルの影響を有し得る。したがって、治療用モノクローナル抗体の所望の親和性および所望の機能は、インビトロおよびインビボ実験によって注意深く決定される必要がある。結合タンパク質例えば、抗体の所望のKdは、所望の治療結果に応じて実験的に決定され得る。一実施形態において、特定の抗原に対する親和性Kdが、同じ抗原に対するDVD-Igの所望の親和性と等しくまたはこれより良好である親抗体が選択される。抗原結合親和性および動態は、BIAcoreまたは別の類似の技術によって評価される。一実施形態において、各親抗体は、最大約10-7M;最大約10-8M;最大約10-9M;最大約10-10M;最大約10-11M;最大約10-12M;または最大10-13Mのその抗原に対する解離定数Kdを有する。VD1が得られる第一の親抗体およびVD2が得られる第二の親抗体は、それぞれの抗原に対する類似したまたは異なる親和性KDを有し得る。各親抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約102M-1s-1;少なくとも約103M-1s-1;少なくとも約104M-1s-1;少なくとも約105M-1s-1;または少なくとも約106M-1s-1のその抗原に対する結合速度定数Konを有する。VD1が得られる第一の親抗体およびVD2が得られる第二の親抗体は、それぞれの抗原に対する類似したまたは異なる結合速度定数Konを有し得る。一実施形態において、各親抗体は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約10-3s-1;最大約10-4s-1;最大約10-5s-1;または最大約10-6s-1のその抗原に対する解離速度定数Koffを有する。VD1が得られる第一の親抗体およびVD2が得られる第二の親抗体は、それぞれの抗原に対する類似したまたは異なる解離速度定数Koffを有し得る。B2.効力親モノクローナル抗体の所望の親和性/効力は、所望の治療結果に依存する。例えば、受容体-リガンドR-L相互作用では、親和性kdは、R-Lkdと等しくまたはこれより良好であるpMの範囲。循環中の病的なタンパク質の単純な排除では、kdは低いnMの範囲であり得、例えば、循環中のA-βペプチドの様々な種の排除である。さらに、kdは、標的が同じエピトープを複数コピー発現するかどうかにも依存し、例えば、Aβオリゴマー中の立体構造エピトープを標的とするmAbである。VDIおよびVD2が同じ抗原であるが別個のエピトープに結合する場合、DVD-Igは、同じ抗原について4つの結合部位を含有し、したがって、DVD-Igの結合力が増加し、それにより見かけのkdが増加している。一実施形態において、DVD-Igにおいて所望されるものと等しくまたはこれより低いKdを有する親抗体が選択される。親mAbの親和性の考慮は、DVD-Igが4つまたはそれ以上の同一の抗原結合部位を含有するかどうかにも依存し得るすなわち、単一のmAb由来のDVD-Ig。この場合、見かけのkdは、結合力により、mAbより大きくなる。このようなDVD-Igは、表面受容体の架橋に使用され、中和効力を増加させ、病的なタンパク質の排除を増強することなどが可能である。一実施形態において、特定の抗原に対する中和効力が、同じ抗原に対するDVD-Igの所望の中和潜在力と等しくまたはこれより良好である親抗体が選択される。中和効力は、標的依存的バイオアッセイによって評価することが可能であり、このバイオアッセイにおいて、適当なタイプの細胞が標的刺激に反応して測定可能なシグナルすなわち、増殖またはサイトカイン産生を生じさせ、mAbによる標的中和が用量依存的な形でシグナルを低減し得る。B3.生物学的機能モノクローナル抗体は、潜在的にいくつかの機能を果たすことができる。これらの機能のいくつかが表1に列挙されている。これらの機能は、インビトロアッセイ例えば、細胞を基礎とするアッセイおよび生化学的アッセイとインビボ動物モデルの両方によって評価することが可能である。表1中で本明細書の実施例において記載されている別個の機能を有するmAbは、所望の治療結果を達成するように選択することが可能である。2つまたはそれ以上の選択された親モノクローナル抗体は、次いで、単一のDVD-Ig分子中で2つの別個の機能を果たすためにDVD-Igフォーマットにおいて使用することが可能である。例えば、DVD-Igは、特定のサイトカインの機能を中和する親mAbを選択し、病的なタンパク質の排除を増強する親mAbを選択することによって生成され得る。同様に、2つの異なる細胞表面受容体を認識する2つの親モノクローナル抗体一方のmAbは1つの受容体に対してアゴニスト機能を有し、他方のmAbは異なる受容体に対してアンタゴニスト機能を有するを選択することができる。各々別個の機能を有するこれら2つの選択されたモノクローナル抗体は、単一分子中で、選択されたモノクローナル抗体の2つの別個の機能アゴニストおよびアンタゴニストを有する単一のDVD-Ig分子を構築するために使用することが可能である。同様に、それぞれの受容体リガンド例えば、EGFおよびIGFの結合を各々遮断する細胞表面受容体に対する2つのアンタゴニストモノクローナル抗体は、DVD-Igフォーマットにおいて使用することが可能である。逆に言うと、アンタゴニスト抗受容体mAb例えば、抗EGFRおよび中和性抗可溶性媒介物質例えば、抗IGF1/2mAbは、DVD-Igを作製するために選択することが可能である。B4.エピトープ認識:タンパク質の異なる領域は、異なる機能を果たし得る。例えば、サイトカインの特定の領域は、サイトカイン受容体と相互作用して受容体活性化を引き起こすが、タンパク質の他の領域は、サイトカインの安定化に必要であり得る。この場合において、サイトカイン上の複数の受容体相互作用領域に特異的に結合するmAbを選択し、それによってサイトカイン-受容体相互作用を遮断することができる。いくつかの場合、例えば複数のリガンドに結合する特定のケモカイン受容体において、1つのリガンドのみと相互作用するエピトープケモカイン受容体上の領域に結合するmAbが選択され得る。他の場合において、モノクローナル抗体は、タンパク質の生理機能に直接関与しない標的上のエピトープに結合し得るが、mAbとこれらの領域の結合は、生理機能に干渉し立体障害またはタンパク質が機能できないようにタンパク質の立体構造を変化させ得るリガンドが結合しないように受容体の立体構造を変化させる複数のリガンドを有する受容体に対するmAb。サイトカインとその受容体の結合を遮断しないがシグナル伝達を遮断する抗サイトカインモノクローナル抗体も同定されている例えば、抗IL-18mAbである125-2H。エピトープおよびmAb機能の例には、受容体-リガンドR-L相互作用の遮断R-相互作用部位に結合する中和性mAb、R-結合が減少しまたはなくなる立体障害が含まれるが、これらに限定されない。Abは、受容体結合部位以外の部位で標的に結合することができるが、立体構造変化を誘導し機能を消失させ例えば、Xolair、Rに結合するがシグナル伝達を遮断することにより、依然として受容体結合および標的の機能に干渉する。一実施形態において、親mAbは、最大限の効力で適当なエピトープを標的とすることが必要である。このようなエピトープはDVD-Ig中に保存されているべきである。mAbの結合エピトープは、共結晶構造分析、mAb-抗原複合体の限定的タンパク質溶解プラス質量分析ペプチドマッピングLegrosV.etal2000ProteinSci.9:1002-10、ファージディスプレイペプチドライブラリーO’ConnorKHetal2005JImmunolMethods.299:21-35ならびに突然変異導入WuC.etal.2003JImmunol170:5571-7を含むいくつかのアプローチによって決定することが可能である。B5.物理化学的特性および医薬的特性抗体を用いた治療的処置は、典型的に大きい分子量の結果として質量ベースの効力が低いことによりしばしば数mg/kgの高用量の投与をしばしば必要とする。患者の服用遵守を図り、十分な慢性疾患療法および外来患者治療を行うためには、治療用mAbの皮下s.c.または筋内i.m.投与が望ましい。例えば、s.c.投与に最大限望ましい容量は約1.0mLであり、したがって、>100mg/mLの濃度が、用量当たりの注射の数を制限するために望ましい。一実施形態において、治療用抗体は一用量で投与される。しかし、このような製剤の開発は、タンパク質間相互作用例えば、免疫原性リスクを潜在的に増加させる凝集ならびにプロセシングおよび送達の間の制限例えば、粘性によって拘束される。結果として、臨床効力に必要である大きな量および関連する開発の拘束が、抗体製剤の潜在性の完全な利用および高用量の投与計画におけるs.c.投与を制限している。タンパク質分子およびタンパク質溶液の物理化学的特性および医薬的特性、例えば、安定性、可溶性および粘性の特徴が最も重要であることが明らかである。B5.1.安定性:安定な抗体製剤は、この中の抗体が、保存時にこの物理的安定性および/または化学的安定性および/または生物活性を本質的に保持しているものである。安定性は、選択された期間で、選択された温度において測定することが可能である。一実施形態において、製剤中の抗体は、室温約30°Cもしくは40°Cで少なくとも1カ月間、および/または約2-8°Cで少なくとも1年間、少なくとも2年間安定である。さらに、一実施形態において、製剤は、製剤の凍結例えば、-70°Cにおよび融解後に安定であり、これは以下で凍結/融解サイクルと呼ばれる。別の例において、安定な製剤は、タンパク質の約10未満および約5未満が製剤中の凝集物として存在するものであり得る。インビトロで様々な温度において長い期間安定なDVD-Igが望ましい。インビトロで高い温度、例えば40°Cにおいて2-4週間安定な親mAbを迅速にスクリーニングし、次いで安定性を評価することによって、これを達成することができる。2-8°Cで保存する間、タンパク質は、少なくとも12カ月間、例えば少なくとも24カ月間の安定性を示す。安定性単量体完全分子のは、陽イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、SDS-PAGE、ならびに生物活性試験などの様々な技術を使用して評価することが可能である。共有結合および立体構造的修飾を分析するために使用され得る分析技術のより包括的なリストについて、Jones,A.J.S.1993Analyticalmethodsfortheassessmentofproteinformulationsanddeliverysystems.In:Cleland,J.L.;Langer,R.,editors.Formulationanddeliveryofpeptidesandproteins,1stedition,Washington,ACS,pg.22-45;およびPearlman,R.;Nguyen,T.H.1990Analysisofproteindrugs.In:Lee,V.H.,editor.Peptideandproteindrugdelivery,1stedition,NewYork,MarcelDekker,Inc.,pg.247-301を参照されたい。不均一性および凝集形成:抗体の安定性は、製剤が、凝集物として存在するGMP抗体材料において約10未満、一実施形態において約5未満、別の実施形態において約2未満または一実施形態において0.5から1.5以下の範囲内を示し得るようなものであり得る。サイズ排除クロマトグラフィーは、タンパク質凝集物の検出において感度がよく、再現性があり非常に頑強な方法である。低い凝集レベルに加えて、抗体は、一実施形態において、化学的に安定でなければならない。化学的安定性は、イオン交換クロマトグラフィー例えば、陽イオンまたは陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーまたは等電点電気泳動もしくはキャピラリー電気泳動などの他の方法によって決定され得る。例えば、抗体の化学的安定性は、2-8°Cで少なくとも12カ月の保存後に、保存試験前の抗体溶液と比較した場合に、陽イオン交換クロマトグラフィーにおいて非修飾抗体を表しているピークが、20以下、一実施形態において10以下または別の実施形態において5以下増加し得るようなものであり得る。一実施形態において、親抗体は、構造的な完全性;正確なジスルフィド結合形成および正確なフォールディングを示す:抗体の二次または三次構造の変化による化学的不安定性は、抗体活性に影響し得る。例えば、抗体の活性によって示される安定性は、2-8°Cで少なくとも12カ月の保存後に、保存試験前の抗体溶液と比較した場合に、抗体の活性が、50以下、一実施形態において30以下もしくは10以下もまたは一実施形態において5もしくは1以下低下し得るようなものであり得る。適切な抗原結合アッセイは、抗体活性を決定するために使用することが可能である。B5.2.可溶性:mAbの可溶性は、正確にフォールディングされた単量体IgGの生産に相関する。したがって、IgGの可溶性は、HPLCによって評価され得る。例えば、可溶性単量体IgGは、HPLCクロマトグラフで単一ピークを生じるが、不溶性のもの例えば、多量体および凝集したものは、複数のピークを生じる。当業者は、したがって、通常のHPLC技術を使用してIgGの可溶性の増大または低下を検出することができる。可溶性を分析するために使用され得る分析技術のより包括的なリストについて、Jones,A.G.Dep.Chem.Biochem.Eng.,Univ.Coll.London,London,UK.Editors:Shamlou,P.Ayazi.Process.Solid-Liq.Suspensions1993,93-117.Publisher:Butterworth-Heinemann,Oxford,UKandPearlman,Rodney;Nguyen,TueH,AdvancesinParenteralSciences1990,4Pept.ProteinDrugDelivery,247-301を参照されたい。治療用mAbの可溶性は、十分な投与にしばしば必要とされる高濃度への製剤化にとって重要である。本明細書において概略を述べるように、>100mg/mLの可溶性が、効率的な抗体投与に適応させるために必要とされ得る。例えば、抗体の可溶性は、研究の初期段階において約5mg/mL以上、一実施形態において進行したプロセス科学段階で約25mg/mL以上または一実施形態において約100mg/mL以上または一実施形態において約150mg/mL以上であり得る。タンパク質分子の固有の特性がタンパク質溶液の物理化学的特性、例えば安定性、可溶性、粘性に重要であることは、当業者に明らかである。しかし、当業者は、幅広い様々な賦形剤が、最終的なタンパク質製剤の特徴に有益な影響を及ぼす添加剤として使用され得ることを理解する。これらの賦形剤は、i液体溶媒、共溶媒例えば、エタノールなどのアルコール;ii緩衝剤例えば、リン酸、酢酸、クエン酸、アミノ酸緩衝液;iii糖および糖アルコール例えば、スクロース、トレハロース、フルクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、デキストラン;iv界面活性剤例えば、ポリソルベート20、40、60、80、ポロキサマー;v等張性修飾物質例えば、NaClなどの塩、糖、糖アルコール;ならびにvi他例えば、保存剤、キレート化剤、抗酸化剤、キレート化物質例えば、EDTA、生分解性ポリマー、担体分子例えば、HSA、PEGを含み得る。粘性は、抗体製造および抗体プロセシング例えば、ダイアフィルトレーション/限外濾過、充填-仕上げプロセスポンピング局面、濾過局面ならびに送達局面注入可能性、洗練された装置送達に関して非常に重要なパラメーターである。低粘性は、高濃度を有する抗体の液体溶液を可能とする。このことは、同じ用量が小容量で投与され得ることを可能とする。小注射容量は、注射の感覚において痛みが少ない利点を備え、溶液は、患者における注射時に痛みを減らすために必ずしも等張性である必要はない。抗体溶液の粘性は、1001/s抗体溶液の剪断速度において粘性が、200mPas未満であり、一実施形態において125mPas未満であり、別の実施形態において70mPas未満であり、さらに別の実施形態において25mPas未満でありまたはさらに10mPas未満であるようなものであり得る。B5.3.生産効率チャイニーズハムスター卵巣細胞CHOなどの哺乳動物細胞中で効率的に発現されるDVD-Igの生成は、一実施形態において、哺乳動物細胞中でそれ自体効率的に発現される2つの親モノクローナル抗体を必要とする。安定哺乳動物系統すなわち、CHOからの生産収率は、約0.5g/Lを上回り、一実施形態において約1g/Lを上回り、別の実施形態において約2から約5g/Lまたはそれ以上の範囲であるべきであるKipriyanovSM,LittleM.1999MolBiotechnol.12:173-201;CarrollS,Al-RubeaiM.2004ExpertOpinBiolTher.4:1821-9。哺乳動物細胞中における抗体およびIg融合タンパク質の生産は、いくつかの因子によって影響を受ける。強力なプロモーター、エンハンサーおよび選択マーカーの取り込みによる発現ベクターの工学的作製は、組み込まれたベクターコピーからの目的の遺伝子の転写を最大にすることができる。高レベルの遺伝子転写を許容するベクター組み込み部位の同定は、ベクターからのタンパク質発現を増大させることができるWurmetal,2004,NatureBiotechnology,2004,Vol/Iss/Pg.22/111393-1398。さらに、生産のレベルは、抗体の重鎖および軽鎖の比率ならびにタンパク質集合および分泌のプロセスにおける様々な工程によって影響されるJiangetal.2006,BiotechnologyProgress,Jan-Feb2006,vol.22,no.1,p.313-8。B6.免疫原性治療用mAbの投与は、免疫応答の特定の発生すなわち、治療用mAbに対する内在性抗体の形成をもたらし得る。免疫原性を誘発する可能性がある潜在的な要素は、親モノクローナル抗体の選択の間に分析すべきであり、DVD-Ig構築前に親モノクローナル抗体を最適化するために、このようなリスクを低減するステップをとることが可能である。マウス由来の抗体は、患者において高度に免疫原性であることが分かっている。マウス可変領域およびヒト定常領域からなるキメラ抗体の生成は、治療用抗体の免疫原性を低減する論理的な次の工程を提示するMorrison,S.L.andJ.Schlom1990ImportantAdv.Oncol.3-18。あるいは、免疫原性は、Riechmannetal.,1988により治療用抗体について記載されているように、マウスCDR配列をヒト抗体フレームワークに移すこと再成形/CDR移植/ヒト化によって低減することが可能である。別の方法は、再表面化またはベニヤ化と呼ばれ、げっ歯類可変軽および重ドメインから開始し、表面到達可能なフレームワークアミノ酸のみがヒトのものに変化しているが、CDRおよび埋まっているアミノ酸は親げっ歯類抗体由来のままであるRoguskaetal.,1996。別のタイプのヒト化において、CDR全体を移植する代わりに、1つの技術は、抗体とその標的の結合に関与するCDR残基のサブセットとして定義される特異性決定領域SDRのみを移植するKashmirietal.,2005。これは、抗体-標的複合体の入手可能な三次元構造の分析またはどれが標的と相互作用するかを決定するための抗体CDR残基の突然変異分析によるSDRの同定を必要とする。あるいは、完全なヒト抗体は、マウス、キメラまたはヒト化抗体と比較して低減された免疫原性を有し得る。治療用抗体の免疫原性を低減する別のアプローチは、免疫原性であることが予測されているある特定の配列の除去である。1つのアプローチにおいて、最初の生成物をヒトにおいて生物学的に試験し、受け入れられないほど免疫原性であることが分かった後に、B細胞エピトープがマッピングされ、次いで免疫検出を回避するために変化され得る。別のアプローチは、潜在的なT細胞エピトープを予測し除去する方法を使用する。MHCタンパク質に結合する潜在性を有する生物学的治療薬のペプチド配列をスキャンおよび同定する計算方法が開発されているDesmetetal.,2005。あるいは、ヒト樹状細胞を基礎とする方法は、潜在的なタンパク質アレルゲン中のCD4T細胞エピトープを同定するために使用することが可能であるStickleretal.2005;Morrison,S.L.andJ.Schlom1990ImportantAdv.Oncol.3-18;Riechmann,L.etal.1988Nature332:323-327;Roguska-M-A,etal.19969:895-904;Kashmiri-Syed-V-S,etal.2005Methods361:25-34;Desmet-Johan,etal.2005Proteins58:53-69;Stickler-M-M,etal.2000J.immunother.23:654-60。B7.インビボ効力所望のインビボ効力を有するDVD-Ig分子を生成するために、組み合わせて得られた場合に同様に所望のインビボ効力を有するmAbを生成および選択することが重要である。しかし、いくつかの場合において、DVD-Igは、2つの別々のmAbを組み合わせて達成することができないインビボ効力を示し得る。例えば、DVD-Igは、2つの標的を近接させることができ、このことは、2つの別々のmAbを組み合わせて達成することができない活性につながる。さらなる望ましい生物学的機能は、B3節において本明細書に記載されている。DVD-Ig分子において望ましい特徴を有する親抗体は、薬物動態t1/2;組織分布;可溶性対細胞表面標的;および標的濃度-可溶性/密度-表面などの因子に基づいて選択することが可能である。B8.インビボ組織分布所望のインビボ組織分布を有するDVD-Ig分子を生成するために、一実施形態において、類似の所望のインビボ組織分布プロファイルを有する親mAbが選択されなければならない。あるいは、二重特異的標的化戦略の機構に基づいて、ある時には、組み合わせて得られた場合に同様に所望されるインビボ組織分布を有する親mAbを選択することが必要とされないことがある。例えば、DVD-Igの場合において、1つの結合成分は、特定の部位へとDVD-Igを標的化し、それによって第二の結合成分が同じ標的部位へと移動する。例えば、DVD-Igの一方の結合特異性は膵臓島細胞を標的とすることができ、他方の特異性は、GLP1を膵臓へと移動させてインシュリンを誘導することができる。B9.アイソタイプアイソタイプ、エフェクター機能および循環半減期を含むがこれらに限定されない所望の特性を有するDVD-Ig分子を生成するために、一実施形態において、治療有用性および所望の治療的エンドポイントに応じて適当なFcエフェクター機能を有する親mAbが選択される。5つの主要な重鎖のクラスまたはアイソタイプが存在し、これらのいくつかは複数のサブタイプを有し、これらは抗体分子のエフェクター機能を決定する。これらのエフェクター機能は抗体分子のヒンジ領域、CH2およびCH3ドメインにある。しかし、抗体分子の他の部分中の残基も同様にエフェクター機能に対する作用を有し得る。ヒンジ領域Fcエフェクター機能には、i抗体依存性細胞傷害、ii補体Clq結合、活性化および補体依存性細胞傷害CDC、iii食作用/抗原-抗体複合体の排除ならびにivいくつかの場合におけるサイトカイン放出が含まれる。抗体分子のこれらのFcエフェクター機能は、Fc領域と1組のクラス特異的細胞表面受容体との相互作用を通じて媒介される。IgG1アイソタイプの抗体は最も活性であるが、IgG2およびIgG4は、最小限のエフェクター機能を有するまたはエフェクター機能を有さない。IgG抗体のエフェクター機能は、構造的に相同な細胞Fc受容体のタイプおよびサブタイプFcgR1、FcgRIIおよびFcgRIIIとの相互作用を通じて媒介される。IgG1のこれらのエフェクター機能は、FcgRおよびClq結合に必要とされる下方のヒンジ領域例えば、L234A、L235A中の特定のアミノ酸残基を変異させることによって除去することが可能である。Fc領域、特にCH2-CH3ドメイン中のアミノ酸残基も、抗体分子の循環半減期を決定する。このFc機能は、Fc領域と酸性リソソームから一般循環へと戻る抗体分子の再循環に関与する新生児Fc受容体FcRnの結合を通じて媒介される。mAbが活性または不活性アイソタイプを有するべきかどうかは、抗体について所望される治療的エンドポイントに依存する。アイソタイプの用法および所望の治療結果のいくつかの例が以下に列挙されている:a所望のエンドポイントが可溶性サイトカインの機能的中和である場合、不活性アイソタイプが使用され得る;b所望の結果が病的なタンパク質の排除である場合、活性アイソタイプが使用され得る;c所望の結果がタンパク質凝集物の排除である場合、活性アイソタイプが使用され得る;d所望の結果が表面受容体をアンタゴナイズすることである場合、不活性アイソタイプが使用されるTysabri、IgG4;OKT3、変異IgGl;e所望の結果が標的細胞を除去することである場合、活性アイソタイプが使用されるHerceptin,IgG1および増強されたエフェクター機能を有する;およびf所望の結果が、CNSに入ることなく循環からタンパク質を排除することである場合、IgMアイソタイプが使用され得る例えば、循環中のAbペプチド種の排除。親mAbのFcエフェクター機能は、本分野において周知である様々なインビトロ方法によって決定することが可能である。論じられているように、アイソタイプの選択およびそれによるエフェクター機能は、所望の治療的エンドポイントに依存する。循環中の標的の単純な中和、例えば受容体-リガンド相互作用の遮断が所望される場合において、エフェクター機能は必要とされないことがある。このような場合において、エフェクター機能を消失させる抗体のFc領域におけるアイソタイプまたは変異が望ましい。標的細胞の消失、例えば腫瘍細胞の消失が治療的エンドポイントである他の場合において、エフェクター機能を増強するFc領域におけるアイソタイプまたは変異または脱フコシル化が望ましいPresta,GL.2006Adv.DrugDeliv.Rev.58:640-656;Satoh,M.2006ExpertOpin.Biol.Ther.6:1161-1173。同様に、治療有用性に応じて、抗体分子の循環半減期は、Fc領域中に特定の変異を導入することにより抗体-FcRn相互作用を調節することによって短縮/延長することが可能であるDall’AcquaWF,etal.2006J.Biol.Chem.281:23514-23524;PetkovaS.B.etal.2006Internat.Immunol.18:1759-1769;VaccaroC.,etal.2007Proc.Natl.Acad.Sci.103:18709-18714。正常な治療用mAbの異なるエフェクター機能に影響する様々な残基について公開されている情報は、DVD-Igについて確認する必要があり得る。DVD-Igフォーマットにおいて、モノクローナル抗体エフェクター機能の調節について同定されているもの以外の追加の異なるFc領域残基が重要である可能性があり得る。全体的に、どのFcエフェクター機能アイソタイプが最終的なDVD-Igフォーマットにおいて重要となるかに関する決定は、疾患兆候、治療標的、所望の治療的エンドポイントおよび安全性の考慮に依存する。以下のものを含むが、これらに限定されない例示の適当な重鎖および軽鎖定常領域が以下に列挙されている:IgG1-アロタイプ:G1mzIgG1変異体-A234、A235IgG2-アロタイプ:G2mn-κ-Km3λFc受容体およびC1q試験:細胞膜上にある任意の過剰産生された標的との抗体の複合体化による望ましくない抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCおよび補体依存性細胞傷害CDCの可能性は、例えば、L234A、L235Aヒンジ領域変異によって阻止することが可能である。FcgR結合が、IgG1ヒンジ領域上の重複部位内で起こると考えられるので、mAbのIgG1ヒンジ領域に存在するこれらの置換されたアミノ酸は、mAbとヒトFc受容体FcRnではないの結合の減弱をもたらすことが予想される。mAbのこの特徴は、野生型IgGを含有する抗体より改善された安全性プロファイルにつながり得る。mAbとヒトFc受容体の結合は、細胞株例えば、THP-1、K562およびFcgRIIbまたは他のFcgRを発現する工学的に作製されたCHO細胞株を使用したフローサイトメトリー実験によって決定することが可能である。IgG1対照モノクローナル抗体に比較して、mAbはFcgRIおよびFcgRIIaへの結合の低下を示すが、FcgRIIbへの結合は影響を受けない。抗原/IgG免疫複合体によるC1qの結合および活性化は、続いての炎症および/または免疫制御応答を伴う古典的補体カスケードを誘発する。IgG上のC1q結合部位は、IgGヒンジ領域内の残基に局在している。増加している濃度のmAbとC1qの結合は、C1qELISAによって評価された。この結果は、野生型対照IgG1の結合に比較して予想されるように、mAbがC1qに結合できないことを示している。全体的に、L234A、L235Aヒンジ領域変異は、mAbとFcgRI、FcgRIIaおよびC1qの結合を阻止するが、mAbとFcgRIIbの相互作用に影響しない。このデータは、インビボにおいて、変異体Fcを有するmAbが、阻害型のFcgRIIbと正常に相互作用するが、活性化型のFcgRIおよびFcgRIIa受容体またはC1qと相互作用しそうにないことを示唆している。ヒトFcRn結合:新生児受容体FcRnは、胎盤を横切るIgGの輸送に関与し、IgG分子の異化半減期を調節する。効力を改善するため、投与量もしくは頻度を低減するためまたは標的への局在化を改善するために抗体の最終的な半減期を増加させることが望ましい可能性がある。あるいは、この逆を行う、すなわち、全身曝露を低減するためまたは標的対非標的結合率を改善するために抗体の最終的な半減期を低下させることが有利である可能性がある。IgGとこのサルベージ受容体であるFcRnとの相互作用を調整することは、IgGの最終的な半減期を増加または低下させる方法を提供する。IgGを含む循環中のタンパク質は、流体相においてミクロピノサイトーシスmicropinocytosisを通じて血管内皮の細胞などの特定の細胞により採取される。IgGは、エンドソームにおいて僅かに酸性の条件下pH6.0-6.5でFcRnに結合することができ、細胞表面へと再循環することができ、この細胞表面においてほぼ中性の条件下pH7.0-7.4で放出される。FcRn80、16、17上のFc領域結合部位のマッピングは、種にわたって保存されている2つのヒスチジン残基His310およびHis435が、この相互作用のpH依存性に関与することを示した。ファージディスプレイ技術を使用して、FcRnへの結合を増加させ、マウスIgGの半減期を延長するマウスFc領域変異が同定されたVictor,G.etal.1997NatureBiotechnol.157,637-640を参照。pH7.4ではなくpH6.0においてFcRnに対するヒトIgGの結合親和性を増加させるFc領域変異も同定されているDall’AcquaW.F.,etal.,2002J.Immunol.1699,5171-80を参照。さらに、1つの場合において、類似した結合のpH依存的増加最大で27倍もアカゲザルFcRnで観察され、これは、親IgGと比較してアカゲザルにおける血清半減期の2倍の増加をもたらしたHinton,P.R.,etal.2004J.Biol.Chem.2798,6213-6216を参照。これらの知見は、Fc領域とFcRnの相互作用を調整することによって、抗体治療薬の血漿半減期の延長が実現可能であることを示す。逆に言うと、FcRnとの相互作用を弱めるFc領域変異は、抗体半減期を低減することができる。B.10薬物動態PK所望の薬物動態プロファイルを有するDVD-Ig分子を生成するために、一実施形態において、同様に所望の薬物動態プロファイルを有する親mAbが選択される。1つの考慮事項は、モノクローナル抗体に対する免疫原性応答すなわち、HAHA、ヒト抗ヒト抗体応答;HACA、ヒト抗キメラ抗体応答がこれらの治療剤の薬物動態をさらに複雑にしていることである。一実施形態において、最小限の免疫原性を有するまたは免疫原性を有さないモノクローナル抗体がDVD-Ig分子の構築に使用され、この結果得られたDVD-Igも最小限の免疫原性を有するまたは免疫原性を有さない。mAbのPKを決定するいくつかの因子には、mAbの固有の特性VHアミノ酸配列;免疫原性;FcRn結合およびFc機能が含まれるがこれらに限定されない。げっ歯類におけるPKプロファイルは、カニクイザルおよびヒトにおけるモノクローナル抗体のPKプロファイルとよく相関するまたはこれを近似的に予測するので、選択された親モノクローナル抗体のPKプロファイルは、げっ歯類において容易に決定することが可能である。PKプロファイルは、実施例1.2.2.3.A節に記載されているように決定される。所望のPK特徴および本明細書において論じられている他の所望の機能特性を有する親モノクローナル抗体が選択された後、DVD-Igが構築される。DVD-Ig分子は2つの親モノクローナル抗体由来の2つの抗原結合ドメインを含有するので、DVD-IgのPK特性は同様に評価される。したがって、DVD-IgのPK特性を決定しつつ、2つの親モノクローナル抗体に由来する両方の抗原結合ドメインの機能性を基礎としてPKプロファイルを決定するPKアッセイを使用することが可能である。DVD-IgのPKプロファイルは、実施例1.2.2.3.A節に記載されているように決定することが可能である。DVD-IgのPKプロファイルに影響し得る追加の因子には、抗原結合ドメインCDR配向;リンカーのサイズ;およびFc/FcRn相互作用が含まれる。親抗体のPK特徴は、以下のパラメーター:吸収、分布、代謝および排泄の評価によって評価することが可能である。吸収:今日まで、治療用モノクローナル抗体の投与は、非経口経路を介するものである例えば、静脈内[IV、皮下[SCまたは筋内[IM。間質腔からのSCまたはIM投与後の全身循環へのmAbの吸収は主としてリンパ経路を介している。飽和可能な前全身的タンパク質分解は、血管外投与後の変化しやすい絶対的生物学的利用率をもたらし得る。通常、モノクローナル抗体の用量の増加に伴う絶対的生物学的利用率の増加が、高い用量での飽和したタンパク質分解能力に起因して観察され得る。リンパ液が血管系にゆっくりと排出されるためmAbの吸収プロセスは通常非常に遅く、吸収の持続時間は数時間から数日にかけて行われ得る。SC投与後のモノクローナル抗体の絶対的生物学的利用率は一般に50から100の範囲である。DVD-IG構築物によって標的化される血液脳関門での輸送を媒介とした構造の場合において、胎盤における循環時間は、CNSコンパートメントへの血液脳関門BBBでの細胞間輸送の増大により減少され得て、この場合、DVD-Igは、その第二の抗原認識部位を介した相互作用を可能にするように遊離される。分布:IV投与後、モノクローナル抗体は急速な分布相から開始し、この後遅い排除相となる二相の血清または血漿濃度-時間プロファイルに通常従う。一般に、二重指数関数的薬物動態モデルは、この種の薬物動態プロファイルを最もよく表す。mAbについての中心区画Vcにおける分布の容量は、血漿容量2-3リットルと通常等しくまたはこれより僅かに大きい。血清血漿濃度-時間曲線の分布相は長い吸収部分によってマスクされるので、血清血漿濃度対時間プロファイルにおける明確な二相パターンは、IMまたはSCなどの他の非経口投与経路で明らかでない可能性がある。物理化学的特性、部位特異的および標的配向性受容体によって媒介される取り込み、組織の結合能力およびmAb用量を含む多数の因子がmAbの生体分布に影響を及ぼす可能性がある。これらの因子のいくつかは、mAbの生体分布における非線形性に寄与し得る。代謝および排泄:分子サイズのために、完全なモノクローナル抗体は、腎臓を介して尿中に排泄されない。これらは代謝例えば、異化によって主として不活性化される。IgGを基礎とする治療用モノクローナル抗体の場合、半減期は通常数時間または1-2日から20日を超える範囲である。mAbの排除は、FcRn受容体に対する親和性、mAbの免疫原性、mAbのグリコシル化の程度、タンパク質分解に対するmAbの感受性および受容体によって媒介される排除を含むがこれらに限定されない多数の因子によって影響され得る。B.11ヒトおよびtox種に対する組織交差反応性パターン:同一の染色パターンは、潜在的なヒト毒性をtox種において評価することが可能であることを示唆している。tox種は、非関連毒性が試験される動物である。個々の抗体は、2つの基準を満たすように選択される。1抗体標的の知られている発現に適した組織染色。2同じ臓器由来のヒトとtox種の組織間での類似した染色パターン。基準1:免疫化および/または抗体選択は、組み換えまたは合成された抗原タンパク質、炭水化物または他の分子を典型的に使用する。非関連抗原に対する天然の対応物およびカウンタースクリーンへの結合はしばしば治療用抗体のスクリーニング漏斗の一部である。しかし、数多くの抗原に対するスクリーニングはしばしば実際的でない。したがって、すべての主要臓器由来のヒト組織を用いた組織交差反応性試験は、あらゆる非関連抗原に対する抗体の望ましくない結合を除外するのに役立つ。基準2:ヒトおよびtox種の組織を用いた比較組織交差反応性試験カニクイザル、イヌ、場合によるとげっ歯類など、同じ36または37種の組織がヒト試験と同様に試験されるは、tox種の選択を検証する助けとなる。凍結組織切片における典型的な組織交差反応性試験において、治療用抗体は、低レベルの相互作用非特異的結合、類似した抗原への低レベルの結合、低レベルの電荷を基礎とする相互作用などのいずれかを基礎とする、公知の抗原への予測された結合および/またはより低度の組織への結合を示し得る。いずれの場合においても、最適な毒性学的動物種は、ヒトおよび動物組織に対する最も高度の同時の結合を示すものである。組織交差反応性試験は、ECCPMPGuidelineIII/5271/94ProductionandqualitycontrolofmAbsおよび1997USFDA/CBERPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsforHumanUseを含む適切な規制ガイドラインに従っている。剖検または生検において得られたヒト組織の凍結切片5μmはオブジェクトグラス上で固定し乾燥させた。アビジン-ビオチン系を使用して組織切片のペルオキシダーゼ染色が行われた。FDA’sGuidancePointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsforHumanUse。関連する参考文献には、Clarke,J.2004、Boon,L.2002a、Boon,L.2002b、Ryan,A.1999が含まれる。組織交差反応性試験は2つの段階でしばしば行われ、第一段階は、1名のヒトドナーから得られた32種の組織典型的に、副腎、胃腸管、前立腺、膀胱、心臓、骨格筋、血液細胞、腎臓、皮膚、骨髄、肝臓、脊髄、乳房、肺、脾臓、小脳、リンパ節、精巣、大脳皮質、卵巣、胸腺、結腸、膵臓、甲状腺、内皮、副甲状腺、尿管、眼、下垂体、子宮、ファロピウス管および胎盤の凍結切片を含む。第二段階において、完全な交差反応性試験が、3名の無関係な成人から得られた副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、子宮頚部、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳房乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、精巣、胸腺、甲状腺、扁桃、尿管、膀胱および子宮を含む最大38種の組織を用いて行われる。試験は、典型的に最小限で2つの用量レベルにおいて行われる。治療用抗体すなわち、試験品およびアイソタイプ適合対照抗体は、アビジン-ビオチン複合体ABC検出のためにビオチン化することが可能である;他の検出方法は、FITCでまたは別の方法で標識された試験品の三次抗体検出または未標識の試験品を標識された抗ヒトIgGで予め複合体化することを含み得る。簡潔に述べると、剖検または生検において得られたヒト組織の凍結切片約5μmはオブジェクトグラス上で固定し乾燥させる。アビジン-ビオチン系を使用して組織切片のペルオキシダーゼ染色が行われる。最初に予め複合体化する検出系の場合において、試験品は、二次ビオチン化抗ヒトIgGとともにインキュベートされ、免疫複合体となる。試験品の最終濃度が2および10μg/mLの免疫複合体はオブジェクトグラス上の組織切片に添加され、次いで組織切片はアビジン-ビオチン-ペルオキシダーゼキットを用いて30分間反応させた。その後、ペルオキシダーゼ反応の基質であるDAB3,3’-ジアミノベンジジンが組織染色のために4分間適用された。抗原-セファロースビーズは、陽性対照組織切片として使用される。あらゆる特異的染色が、問題の標的抗原の公知の発現を基礎として、予想される例えば、抗原発現と一致するまたは予想されない反応性であると判定される。特異的と判定されたあらゆる染色が、強度および頻度についてスコア化される。抗原または血清競合または遮断試験は、観察された染色が特異的であるか非特異的であるかを決定することにおいてさらに補助することができる。2つの選択された抗体が選択基準-適当な組織染色、ヒトと毒性学的動物の特定の組織間での染色の適合を満たすことが分かった場合、これらをDVD-Ig生成に選択することが可能である。組織交差反応性試験は最終的なDVD-Ig構築物を用いて繰り返さなければならず、しかしこれらの試験は本明細書において概略を述べる同じプロトコールに従うが、あらゆる結合が2つの親抗体のいずれにも由来し得、あらゆる説明されない結合が複雑な抗原競合試験を用いて確認される必要があるため、これらは評価がより複雑である。2つの親抗体が1予想されない組織交差反応性の知見の欠如および2対応するヒトと毒性学的動物の組織間の組織交差反応性の知見の適当な類似性について選択される場合、DVD-Igのような多重特異的分子を用いた組織交差反応性試験の複雑な企てが大いに単純化されることは容易に明らかである。B.12特異性および選択性:所望の特異性および選択性を有するDVD-Ig分子を生成するために、同様に所望の特異性および選択性プロファイルを有する親mAbを生成および選択する必要がある。各抗原について各々2つの4つまたはそれ以上の結合部位のため、DVD-Igを用いた特異性および選択性についての結合試験は複雑であり得る。簡潔に述べると、DVD-Igを用いたELISA、BIAcore、KinExAまたは他の相互作用試験を使用する結合試験は、1つ、2つまたはそれ以上の抗原とDVD-Ig分子の結合をモニタリングする必要がある。BIAcore技術は、複数の抗原の順次的な独立した結合を分解することが可能であるが、ELISAを含むより伝統的な方法またはKinExAのようなより現代的な技術は可能でない。したがって、各親抗体の注意深い特徴付けは重要である。個々の各抗体が特異性について特徴付けられた後、DVD-Ig分子における個々の結合部位の特異性保持の確認は大いに単純化される。組み合わせてDVD-Igにする前に2つの親抗体が特異性について選択された場合、DVD-Igの特異性の決定の複雑な企てが大いに単純化されることは容易に明らかである。抗原-抗体相互作用試験は、ELISA酵素結合免疫吸着検定法、質量分析、化学的架橋、光散乱を用いたSEC、平衡透析、ゲル浸透、限外濾過、ゲルクロマトグラフィー、大帯域分析的SEC、微小分離超遠心沈降平衡、分光法、滴定微小熱量測定、分析的超遠心機における沈降平衡、分析的超遠心機における沈降速度、BIAcoreを含む表面プラズモン共鳴を含む多数の古典的なタンパク質間相互作用試験を含めて、多数の形態をとり得る。関連する参考文献には、JohnWileySonsInc.によって出版されたCurrentProtocolsinProteinScience,JohnE.Coligan,BenM.Dunn,DavidW.Speicher,PaulT,Wingfieldeds.Volume3,chapters19and20およびこれらの中に含まれる参考文献ならびにJohnWileySonsInc.によって出版されたCurrentProtocolsinImmunology,JohnE.Coligan,BarbaraE.Bierer,DavidH.Margulies,EthanM.Shevach,WarrenStrobereds.およびこの中に含まれる参考文献が含まれる。全血におけるサイトカイン放出:mAbとヒト血液細胞の相互作用は、サイトカイン放出アッセイによって調べることが可能であるWing,M.G.TherapeuticImmunology1995,24,183-190;JohnWileySonsInc.によって出版されたCurrentProtocolsinPharmacology,S.J.Enna,MichaelWilliams,JohnW.Ferkany,TerryKenakin,PaulMoser,eds.;Madhusudan,S.Research2004Clin.Cancer1019,6528-6534;Cox,J.2006Methods384,274-282;Choi,I.2001Eur.J.Immunol.311,94-106。簡潔に述べると、様々な濃度のmAbが、ヒト全血とともに24時間インキュベートされる。試験される濃度は、患者における典型的な血液レベル100ng/ml-100μg/mlを含むがこれらに限定されないを模倣している最終濃度を含む広い範囲をカバーしているべきである。インキュベーション後、上清および細胞溶解物がIL-1Rα、TNF-α、IL-1b、IL-6およびIL-8の存在について分析された。mAbについて生成されたサイトカイン濃度プロファイルは、陰性ヒトIgG対照および陽性LPSまたはPHA対照によって産生されたプロファイルと比較された。細胞上清と細胞溶解物の両方から得られたmAbによって示されるサイトカインプロファイルは、対照ヒトIgGと同等であった。一実施形態において、モノクローナル抗体は、ヒト血液細胞と相互作用して炎症性サイトカインを自発的に放出しない。各抗原について各々2つの4つまたはそれ以上の結合部位のため、DVD-Igについてのサイトカイン放出試験は複雑である。簡潔に述べると、本明細書に記載されているサイトカイン放出試験は、全血または他の細胞系に対するDVD-Ig分子全体の効果を測定するが、分子のどの部分がサイトカイン放出を引き起こすかを分解することができる。いくつかの共精製細胞成分がそれ自体サイトカイン放出を引き起こす可能性があるため、サイトカイン放出が検出された後、DVD-Ig調製物の純度が確認されなければならない。純度が問題点とならない場合、Fc部分の除去、結合部位の分離などを含むがこれらに限定されないDVD-Igの断片化、結合部位突然変異導入または他の方法が、あらゆる観察結果を逆重畳積分するために使用される必要があり得る。組み合わせてDVD-Igにする前に2つの親抗体がサイトカイン放出の欠如について選択された場合、この複雑な企てが大いに単純化されることは容易に明らかである。B.13毒性学的試験のための他の種との交差反応性:一実施形態において、適当なtox種、例えばカニクイザルに対する十分な交差反応性を有する個々の抗体が選択される。親抗体は、オルソロガス種標的すなわち、カニクイザルに結合し、適当な応答調節、中和、活性化を惹起することが必要である。一実施形態において、オルソロガス種標的に対する交差反応性親和性/効力は、ヒト標的の10倍以内であるべきである。実際に、親抗体は、マウス、ラット、イヌ、サルおよび他の非ヒト霊長類ならびに疾患モデル種すなわち、喘息モデルのヒツジを含む複数の種について評価される。親モノクローナル抗体のtox種に対する許容可能な交差反応性は、同じ種におけるDVD-Ig-Igの将来の毒性学的試験を可能にする。この理由で、2つの親モノクローナル抗体は、通常のtox種について許容可能な交差反応性を有するべきであり、それによって同じ種におけるDVD-Igの毒性学的試験が可能になる。親mAbは、特異的な標的に結合することができる、本分野において周知の様々なmAbから選択され得る。これらには、抗TNF抗体米国特許第6,258,562号および抗TWEAK抗体PCT公開WO2006130374Presta2005J.AllergyClin.Immunol.116:731-6およびhttp://www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/antibodies.html参照が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、親mAbは、臨床試験における使用、または臨床用途の開発における使用のために承認された様々な治療抗体から選択されてもよい。このような治療抗体には、限定されないが、Centocorによって開発された抗TNFアルファ抗体、アダリムマブHumira登録商標、Abbottによって開発された抗TNFアルファ抗体、Humicade登録商標、Celltechによって開発された抗TNFアルファ抗体、ゴリムマブCNTO-148、Centocorによって開発された完全ヒトTNF抗体、エタネルセプトEnbrel登録商標、Immunex/Amgenによって開発されたp75TNF受容体Fc融合体、レネルセプ、以前Rocheによって開発されたp55TNF受容体Fc融合体、およびBiogenによって開発された抗TWEAK抗体BIIB023が挙げられる。B.DVD分子の構築:二重可変ドメイン免疫グロブリンDVD-Ig商標分子は、2つの異なる親モノクローナル抗体由来の2つの異なる軽鎖可変ドメインVLが、組み換えDNA技術によって、直接または短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインが続くように設計される。同様に、重鎖は、直列に連結された2つの異なる重鎖可変ドメインVHの後に、定常ドメインCH1およびFc領域を含む。可変ドメインは、本明細書に記載されている方法のいずれか1つによって作製された親抗体から得られた組み換えDNA技術を用いて取得することが可能である。一実施形態において、可変ドメインは、マウス重鎖または軽鎖可変ドメインである。別の実施形態において、可変ドメインは、CDR移植されたまたはヒト化された可変重鎖または軽鎖ドメインである。一実施形態において、可変ドメインは、ヒト重鎖または軽鎖可変ドメインである。一実施形態において、第一および第二の可変ドメインは、組み換えDNA技術を用いて、互いに直接連結されている。別の実施形態において、可変ドメインは、リンカー配列を介して連結されている。一実施形態において、2つの可変ドメインが連結されている。3つまたはそれ以上の可変ドメインも、直接またはリンカー配列を介して連結され得る。可変ドメインは、同じ抗原に結合し得、または異なる抗原に結合し得る。本発明のDVD分子は、1つの免疫グロブリン可変ドメインおよび受容体のリガンド結合ドメイン、酵素の活性ドメインなどの1つの非免疫グロブリン可変ドメインを含み得る。DVD分子は、2つまたはそれ以上の非Igドメインも含み得る。リンカー配列は、単一のアミノ酸またはポリペプチド配列であり得る。一実施形態において、リンカー配列は、AKTTPKLEEGEFSEAR配列番号1;AKTTPKLEEGEFSEARV配列番号2;AKTTPKLGG配列番号3;SAKTTPKLGG配列番号4;SAKTTP配列番号5;RADAAP配列番号6;RADAAPTVS配列番号7;RADAAAAGGPGS配列番号8;RADAAAAG4S4配列番号9;SAKTTPKLEEGEFSEARV配列番号10;ADAAP配列番号11;ADAAPTVSIFPP配列番号12;TVAAP配列番号13;TVAAPSVFIFPP配列番号14;QPKAAP配列番号15;QPKAAPSVTLFPP配列番号16;AKTTPP配列番号17;AKTTPPSVTPLAP配列番号18;AKTTAP配列番号19;AKTTAPSVYPLAP配列番号20;ASTKGP配列番号21;ASTKGPSVFPLAP配列番号22;GGGGSGGGGSGGGGS配列番号23;GENKVEYAPALMALS配列番号24;GPAKELTPLKEAKVS配列番号25;またはGHEAAAVMQVQYPAS配列番号26である。リンカー配列の選択は、いくつかのFab分子の結晶構造分析に基づいている。Fabまたは抗体分子構造中の可変ドメインとCH1/CL定常ドメインの間には、天然の柔軟な連結が存在する。この天然の連結は、VドメインのC末端由来の4-6残基およびCL/CH1ドメインのN末端由来の4-6残基によって構成される約10から12個のアミノ酸残基を含む。本発明のDVDIgは、それぞれ、DVD-Igの軽鎖および重鎖中のリンカーとしてCLまたはCH1のN末端の5から6アミノ酸残基、または11から12アミノ酸残基を用いて作製された。CLまたはCH1ドメインのN末端残基、特に最初の5から6個のアミノ酸残基は、強い二次構造なしにループ立体構造を採り、したがって、2つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーとして作用することが可能である。CLまたはCH1ドメインのN末端残基は、Ig配列の一部であるので、可変ドメインの天然の伸長であり、したがって、リンカーおよび連結から生じ得るいずれの免疫原性を、大きな程度まで最小限に抑える。他のリンカー配列は、CL/CH1ドメインのあらゆる長さのあらゆる配列を含み得るが、CL/CH1ドメインのすべての残基は含まない。例えば、CL/CH1ドメインの最初の5から12個のアミノ酸残基;軽鎖リンカーは、CκまたはCλに由来することが可能であり;ならびに重鎖リンカーは、Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cα1、Cα2、Cδ、CεおよびCμを含む、いずれかのアイソタイプのCH1に由来することが可能である。リンカー配列は、Ig様タンパク質例えば、TCR、FcR、KIR、G/Sを基礎とする配列例えば、G4Sリピート;配列番号27;ヒンジ領域に由来する配列および他のタンパク質から得られる他の天然配列などの他のタンパク質からも由来し得る。一実施形態において、定常ドメインは、組み換えDNA技術を用いて、2つの連結された可変ドメインに連結されている。一実施形態において、連結された重鎖可変ドメインを含む配列は、重鎖定常ドメインに連結され、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は、軽鎖定常ドメインに連結される。一実施形態において、定常ドメインは、それぞれ、ヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインである。一実施形態において、DVD重鎖は、Fc領域にさらに連結されている。Fc領域は、固有配列のFc領域またはバリアントFc領域であり得る。別の実施形態において、Fc領域は、ヒトFc領域である。別の実施形態において、Fc領域には、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgEまたはIgDから得られるFc領域が含まれる。別の実施形態において、2つの重鎖DVDポリペプチドおよび2つの軽鎖DVDポリペプチドを組み合わせて、DVD-Ig分子を形成する。表2は、例えば、癌を治療するための、標的疾患に有用な標的のための例示的な抗体のVH領域およびVL領域のアミノ酸配列を列挙する。一実施形態において、本発明は、表2に列挙されているVH領域および/またはVL領域の少なくとも2つを任意の配向で含むDVDを提供するCDRを太字で示す。いくつかの実施形態において、VD1およびVD2は、独立して選択される。したがって、いくつかの実施形態において、VD1およびVD2は同じ配列番号を含み、他の実施形態において、VD1およびVD2は異なる配列番号を含む。特異的な標的に結合することができる特異的DVD-Ig分子の詳細な説明およびこれを作製する方法は、以下の実施例の部に記載されている。C.DVDタンパク質の作製本発明の結合タンパク質は、本分野で公知の多数のいずれかによって作製され得る。例えば、宿主細胞からの発現において、DVD重鎖およびDVD軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって、宿主細胞中に形質移入される。形質移入という用語の様々な形態は、原核または真核宿主細胞中への外来DNAの導入のために一般に使用される多様な技術、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、DEAE-デキストラン形質移入などを包含するものとする。原核または真核宿主細胞のいずれの中でも、本発明のDVDタンパク質を発現することは可能であるが、真核細胞特に、哺乳動物細胞は、原核細胞に比べて、適切に折り畳まれ、免疫学的に活性なDVDタンパク質を集合および分泌する傾向がより大きいので、DVDタンパク質は真核細胞、例えば哺乳動物宿主細胞中で発現される。本発明の組み換え抗体を発現するための典型的な哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞UrlaubandChasin,1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-4220に記載されており、例えばKaufmanandSharp1982Mol.Biol.159:601-621に記載されているようにDHFR選択可能マーカーとともに使用されるdhfr-CHO細胞を含む。、NS0骨髄腫細胞、COS細胞、SP2細胞およびPER.C6細胞が含まれる。DVDタンパク質をコードする組み換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中に導入されると、宿主細胞中でDVDタンパク質の発現を可能とするのに十分な期間にわたってまたは、宿主細胞がその中で増殖されている培地中へのDVDタンパク質の分泌を可能とするのに十分な期間にわたって宿主細胞を培養することによって、DVDタンパク質が産生される。DVDタンパク質は、標準的なタンパク質精製方法を用いて、培地から回収することが可能である。本発明のDVDタンパク質の組み換え発現用の典型的なシステムにおいて、リン酸カルシウムによって媒介された形質移入によって、DVD重鎖およびDVD軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターが、dhfr-CHO細胞中に導入される。組み換え発現ベクター内で、DVD重鎖および軽鎖遺伝子は、遺伝子の転写の高いレベルを誘導するために、各々、CMVエンハンサー/AdMPLプロモーター制御要素へ作用可能に連結されている。組み換え発現ベクターは、メトトレキサート選択/増幅を用いて、ベクターで形質移入されたCHO細胞の選択を可能とするDHFR遺伝子も担持する。選択された形質転換体宿主細胞は、DVD重鎖および軽鎖の発現を可能とするために培養され、完全な状態のDVDタンパク質が培地から回収される。組み換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からDVDタンパク質を回収するために、標準的な分子生物学的技術が使用される。さらに、本発明は、本発明のDVDタンパク質が合成されるまで、適切な培地中で、本発明の宿主細胞を培養することによって、本発明のDVDタンパク質を合成する方法を提供する。本方法は、培地からDVDタンパク質を単離することをさらに含むことが可能である。DVD-Igの重要な特徴は、DVD-Igが、慣用の抗体として、類似の様式で産生および精製され得ることである。DVD-Igの産生は、定常領域のいずれの配列修飾もなく、またはいずれの種類の化学的修飾もなく、所望される二重特異的活性を有する均一な単一の主産物をもたらす。二特異的、多重特異的および多重特異的多価完全長結合タンパク質を作製するための他の以前に記載された方法は、単一の主要産物をもたらさず、代わりに、集合した不活性な単一特異的、多重特異的、多価の完全長結合タンパク質と、異なる結合部位の組合せを有する多価完全長結合タンパク質との混合物の細胞内産生または分泌された産生をもたらす。例として、MillerandPrestaPCT公開WO2001/077342に記載されている設計に基づいて、重鎖および軽鎖の16の可能な組合せが存在する。その結果、タンパク質の僅か6.25が、所望の活性形態であり、他の15の可能な組合せと比較して単一の主産物または単一の主要産物としてではないと思われる。典型的には、大規模な製造において使用される標準的クロマトグラフィー技術を用いて、タンパク質の所望の完全に活性な形態を、タンパク質の不活性なおよび部分的に活性な形態から分離することは、未だ実証されていない。驚くべきことに、本発明の二重特異的多価完全長結合タンパク質の設計は、主として、所望される二重特異的多価完全長結合タンパク質へ集合する二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖をもたらす。集合され、発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくとも50、少なくとも75および少なくとも90が、所望される二重特異的四価タンパク質である。本発明の本態様は、特に、本発明の市販の利用を強化する。したがって、本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、二重特異的四価完全長結合タンパク質の単一の主要産物をもたらす方法を含む。本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、二重特異的四価完全長結合タンパク質の主要産物をもたらす好ましい方法を提供し、ここで、主要産物は、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての集合されたタンパク質の50を上回る。本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、二重特異的四価完全長結合タンパク質の単一の主要産物をもたらすより好ましい方法を提供し、ここで、主要産物は、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての集合されたタンパク質の75を上回る。本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を発現し、二重特異的四価完全長結合タンパク質の単一の主要産物をもたらす最も好ましい方法を提供し、ここで、主要産物は、二重可変ドメイン軽鎖および二重可変ドメイン重鎖を含むすべての集合されたタンパク質の90を上回る。II.誘導体化されたDVD結合タンパク質:一実施形態は、標識された結合タンパク質を提供し、ここで、本発明の結合タンパク質は、別の機能的分子例えば、別のペプチドまたはタンパク質へ誘導体化され、または連結される。例えば、本発明の標識された結合タンパク質は、別の抗体例えば、二特異的抗体またはダイアボティ、検出可能作用物質、細胞毒性剤、薬剤および/または別の分子ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなどとの、結合タンパク質の会合を媒介可能なタンパク質もしくはペプチドなどの1つまたは複数の他の分子実体へ、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有会合またはその他によって本発明の結合タンパク質を機能的に連結することによって誘導することが可能である。本発明の結合タンパク質を誘導体化し得る有用な検出可能作用物質には、蛍光化合物が含まれる。典型的な蛍光検出可能作用物質には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、5-ジメチルアミン-1-ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリンなどが含まれる。結合タンパク質は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素でも誘導体化され得る。結合タンパク質が検出可能な酵素で誘導体化される場合には、検出可能な反応産物を生成させるために、本酵素が使用するさらなる試薬を添加することによって抗体が検出される。例えば、検出可能作用物質西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合には、過酸化水素およびジアミノベンジジンの添加は、検出可能な発色した反応産物をもたらす。結合タンパク質は、ビオチンを用いて誘導体化し、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的な測定を通じても検出され得る。本発明の別の実施形態は、結晶化された結合タンパク質ならびにこのような結晶を含む製剤および組成物を提供する。一実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、結晶化後の生物活性を保持する。本発明の結晶化された結合タンパク質は、本分野で公知の方法に従って、およびPCT公開WO02072636に開示されているように産生され得る。本発明の別の実施形態は、抗体またはその抗原結合部分が1つまたは複数の炭水化物残基を含む、グリコシル化された結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質産生は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセッシングを経ることがあり得る。特に、糖グリコシル残基は、酵素的に付加され得るグリコシル化として知られる方法。共有結合されたオリゴ糖側鎖を有する得られたタンパク質は、グリコシル化されたタンパク質または糖タンパク質として知られる。抗体は、Fcドメイン中、および可変ドメイン中に1つまたは複数の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Fcドメイン中の炭水化物残基は、抗体の抗原結合または半減期に対する効果を最小限に抑えながら、Fcドメインのエフェクター機能に対して重要な効果を有するJefferis,R.2005Biotechnol.Prog.21:11-16。これに対して、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に対して影響を及ぼし得る。可変ドメイン中のグリコシル化は、おそらくは、立体的な妨害のために、抗体結合親和性に対して負の影響を有し得Co,M.S.,etal.1993Mol.Immunol.30:1361-1367または抗原に対する増加した親和性をもたらし得るWallick,S.C.,etal.1988Exp.Med.168:1099-1109;Wright,A.,etal.1991EMBOJ.10:27172723。本発明の一態様は、結合タンパク質のO結合型またはN結合型グリコシル化部位が変異されているグリコシル化部位変異体を作製することに関する。当業者は、標準的な周知の技術を用いて、このような変異体を作製することが可能である。生物学的活性を保持するが、増加または減少した結合活性を有するグリコシル化部位変異体が、本発明の別の目的である。さらに別の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合部分のグリコシル化は修飾される。例えば、無グリコシル化抗体を作製することが可能であるすなわち、抗体は、グリコシル化を欠如する。。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるために改変することが可能である。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の1つまたは複数の部位を変化させることによって達成することが可能である。例えば、それによって、当該部位のグリコシル化を除去するために、1つまたは複数の可変領域グリコシル化部位の除去をもたらす1つまたは複数のアミノ酸置換を施すことが可能である。このような無グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。このようなアプローチは、PCT公開WO2003016466ならびに米国特許第5,714,350号および第6,350,861号に、さらに詳しく記載されている。これに加えてまたはこれに代えて、フコシル残基の減少した量を有する低フコシル化抗体Kanda,Y.etal.2007J.Biotechnol.1303:300-310参照。または増加した二分岐GlcNAc構造を有する抗体など、グリコシル化の変化した種類を有する本発明の修飾された結合タンパク質を作製することが可能である。このような変化されたグリコシル化パターンは、抗体のADCC能力を増加させることが示されている。このような炭水化物修飾は、例えば、変化したグリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成することが可能である。変化したグリコシル化機構を有する細胞は本分野において記載されており、その中で、本発明の組み換え抗体を発現させることによって、変化したグリコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば、Shields,R.L.etal.2002J.Biol.Chem.277:26733-26740;Umanaetal.1999Nat.Biotech.17:176-1ならびに欧州特許EP1,176,195;およびPCT公開WO03/035835;WO99/5434280を参照されたい。タンパク質グリコシル化は、対象のタンパク質のアミノ酸配列およびその中でタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素例えば、グリコシル転移酵素およびグリコシダーゼを産生し得、利用可能な異なる基質ヌクレオチド糖を有し得る。このような要因のために、タンパク質グリコシル化パターンおよびグリコシル残基の組成は、タンパク質がその中で発現されている宿主系に応じて異なり得る。本発明において有用なグリコシル残基には、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、n-アセチルグルコサミンおよびシアル酸が含まれ得るが、これらに限定されない。一実施形態において、グリコシル化された結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるように、グリコシル残基を含む。異なるタンパク質グリコシル化は異なるタンパク質特性をもたらし得ることが、当業者に公知である。例えば、酵母などの微生物宿主中で産生され、酵母内在経路を用いてグリコシル化された治療用タンパク質の効力は、CHO細胞株などの哺乳動物細胞中で発現された同じタンパク質の効力と比べて低下され得る。また、このような糖タンパク質は、ヒトにおいて免疫原性であり得、投与後に、減少したインビボ半減期を示し得る。ヒトおよび他の動物中の特異的な受容体は、特異的なグリコシル残基を認識し得、血流からのタンパク質の迅速な除去を促進し得る。他の有害な効果は、タンパク質の折り畳み、溶解度、プロテアーゼに対する感受性、運搬、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質または因子による認識、抗原性またはアレルゲン性の変化が含まれ得る。したがって、当業者は、グリコシル化の特異的な組成およびパターン、例えば、ヒト細胞中または意図される対象動物の種特異的細胞中で産生されるものと同一または少なくとも類似のグリコシル化組成およびパターンを有する治療タンパク質を選択し得る。宿主細胞のものとは異なるグリコシル化されたタンパク質を発現することは、異種グリコシル化酵素を発現するために宿主細胞を遺伝的に修飾することによって達成され得る。本分野で公知の技術を使用して、当業者は、ヒトタンパク質グリコシル化を呈する抗体またはその抗原結合部分を作製し得る。例えば、酵母株中で産生されたグリコシル化されたタンパク質糖タンパク質が、動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を呈するように米国特許第7,449,308号および第7,029,872号ならびにPCT公開WO2005100584、酵母株は、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するように遺伝的に修飾されている。結合タンパク質に加えて、本発明は、本発明のこのような結合タンパク質に対して特異的な抗イディオタイプ抗Id抗体にも関する。抗Id抗体は、別の抗体の抗原結合領域と一般的に付随する固有の決定基を認識する抗体である。抗Idは、結合タンパク質またはそのCDR含有領域で動物を免疫化することによって調製することが可能である。免疫された動物は、免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識し、これに応答し、抗Id抗体を産生する。DVD-Ig分子に取り込まれる2つまたはそれ以上の親抗体に対する抗イディオタイプ抗体を生成し、各親抗体のイディオタイプに特異的な抗イディオタイプ抗体がDVD-Igの状況でイディオタイプ例えば、抗原結合部位をやはり認識することを実証するために、本分野で十分認識されている方法例えば、BIAcore、ELISAによって結合試験を確認することが易しい可能性があることは容易に明らかである。DVD-Igの2つまたはそれ以上の抗原結合部位の各々に特異的な抗イディオタイプ抗体は、患者血清中のヒトDVD-IgのDVD-Ig濃度を測定するための理想的な試薬を提供する;DVD-Ig濃度アッセイは、固相例えば、BIAcoreチップ、ELISAプレートなどに被覆された第一の抗原結合領域に対する抗体を用いる濯ぎ用緩衝液で濯ぎ、血清試料とともにインキュベートし、もう一度すすぎ工程を行い、最終的に結合反応の定量化のための酵素でこれ自体標識されている別の抗原結合部位に対する別の抗イディオタイプ抗体とともにインキュベートするサンドイッチアッセイELISAフォーマットを使用して確立することが可能である。一実施形態において、2つを超える異なる結合部位を有するDVD-Igの場合、2つの最も外側の結合部位定常領域から最も遠位および近位に対する抗イディオタイプ抗体は、ヒト血清中のDVD-Ig濃度を決定する助けとなるだけでなく、インビボでの分子の完全性も示す。各抗Id抗体は、さらに別の動物における免疫応答を誘導して、いわゆる抗抗Id抗体を産生する免疫原として使用することも可能である。さらに、ライブラリーのメンバー宿主細胞がバリアントグリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を産生するように、様々なグリコシル化酵素を発現するように遺伝学的に改変された宿主細胞のライブラリーを用いて、目的のタンパク質を発現させ得ることが、当業者によって理解されている。次いで、当業者は、特定の新規グリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を選択および単離し得る。一実施形態において、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善または改変された生物学的特性を示す。III.DVD-Igの使用本発明の結合タンパク質は2つまたはそれ以上の抗原に結合することができるので、本発明の結合タンパク質は、酵素結合免疫吸着検定法ELISA、ラジオイムノアッセイRIAまたは組織免疫組織化学など慣用のイムノアッセイを用いて、例えば、血清または血漿などの生物学的試料中で抗原を検出するために使用することが可能である。DVD-Igは、結合したまたは結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン/ビオチンおよびアビジン/ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例には、ルミノールが含まれる;および適切な放射性材料の例には、3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Hoまたは153Smが含まれる。一実施形態において、本発明の結合タンパク質は、インビトロおよびインビボの両者で、抗原の活性を中和することが可能である。したがって、このようなDVD-Igは、例えば、抗原を含有する細胞培地中で、ヒト対象中で、本発明の結合タンパク質が交差反応する抗原を有するその他の哺乳動物対象中で、抗原活性を阻害するために使用することが可能である。別の実施形態において、本発明は、抗原活性が有害である疾病または疾患に罹患している対象中の抗原活性を低下させる方法を提供する。本発明の結合タンパク質は、治療目的のために、ヒト対象に投与することができる。本明細書において使用される抗原活性が有害である疾患という用語は、本疾患に罹患している対象中での抗原の存在が、疾患の病態生理の原因であることがまたは疾患の悪化に寄与している因子であることが示されており、または疑われている疾病およびその他の疾患を含むものとする。したがって、抗原活性が有害である疾患は、抗原活性の低下が疾患の症候および/または進行を緩和することが予測される疾患である。このような疾患は、例えば、本疾患に罹患している患者の生物学的液体中の抗原濃度の増加例えば、対象の血清、血漿、滑液中などの抗原の濃度の増加によって明らかとされ得る。本発明の結合タンパク質で治療することが可能な疾患の非限定的な例には、以下に、および本発明の抗体の医薬組成物に関するセクションに論述されている疾患が含まれる。本発明のDVD-Igは、1つの抗原または複数の抗原に結合し得る。このような抗原には、参照により本明細書に組み込まれる以下のデータベースに列記されている標的が含まれるが、これらに限定されるものではない。これらの標的データベースには、以下のものが含まれる。治療の標的http://xin.cz3.nus.edu.sg/group/cjttd/ttd.asp;サイトカインおよびサイトカイン受容体http://www.cytokinewebfacts.com/、http://www.copewithcytokines.de/cope.cgiおよびhttp://cmbi.bjmu.edu.cn/cmbidata/cgf/CGF_Database/cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/indexR.html;ケモカインhttp://cytokine.medic.kumamoto-u.ac.jp/CFC/CK/Chemokine.html;ケモカイン受容体およびGPCRhttp://csp.medic.kumamoto-u.ac.jp/CSP/Receptor.html、http://www.gpcr.org/7tm/;嗅覚受容体http://senselab.med.yale.edu/senselab/ORDB/default.asp;受容体http://www.iuphar-db.org/iuphar-rd/list/index.htm;癌標的http://cged.hgc.jp/cgi-bin/input.cgi;潜在的な抗体標的として分泌されるタンパク質http://spd.cbi.pku.edu.cn/;タンパク質キナーゼhttp://spd.cbi.pku.edu.cn/ならびにヒトCDマーカーhttp://content.labvelocity.com/tools/6/1226/CD_table_final_locked.pdfおよびZola,H.2005Blood106:3123-6。DVD-Igは、効力/安全を増強し、および/または患者の対象範囲を増加させるために、2つの異なる標的を同時に遮断するための治療剤として有用である。このような標的は、可溶性標的TNFおよび細胞表面受容体標的VEGFRおよびEGFRが含まれ得る。このような標的は、癌療法のために腫瘍細胞とT細胞Her2とCD3との間に、または自己免疫疾患または移植のために自己反応性細胞およびエフェクター細胞の間に、またはある所定の疾病において疾病を引き起こす細胞を除去するためにいずれかの標的細胞とエフェクター細胞の間に、再誘導された細胞障害を誘導するために使用することも可能である。さらに、本発明のDVD-Igは、細胞内送達内部移行受容体および細胞内分子を標的化すること、脳内への送達血液脳関門を横切るために、トランスフェリン受容体および中枢神経系疾患媒介物質を標的化することなど、組織特異的な送達増強された局所PKにより、より高い効力および/またはより低い毒性を得るために、組織マーカーおよび疾病媒介物質を標的とすることのために使用することが可能である。DVD-Igは、その抗原の非中和エピトープへの結合を介して特異的な位置へ抗原を送達するための担体タンパク質としての役割も果たすことができ、抗原の半減期を増加させることが可能である。さらに、DVD-Igは、患者中に植え込まれた医療用具に物理的に連結され、またはこれらの医療用具を標的とするように設計することが可能であるBurke,S.E.,etal.Adv.DrugDeliv.Rev.583:437-446;Hildebrand,H.F.,etal.2006SurfaceandCoatingsTechnol.20022-23:6318-6324;Wu,P.,andD.W.Grainger,2006Biomaterials2711:2450-2467;Marques,A.P.,etal.2005Biodegrad.Syst.TissueEngin.andRegen.Med.377-397参照。要約すれば、医療用インプラントの部位へ、細胞の適切な種類を誘導することは、正常な組織機能の治癒および回復を促進し得る。あるいは、用具に連結されたDVD、または用具を標的とするDVDによって、装置の植え込み時に放出される媒介物質サイトカインが含まれるが、これに限定されない。の阻害も提供される。例えば、封鎖された動脈をきれいにし、心筋への血流を改善するために、介入的心臓病学において、長年にわたってステントが使用されている。しかしながら、伝統的な地金ステントは、一部の患者に、再狭窄治療された領域中の動脈が再び狭くなることを引き起こすことが知られており、血液凝固を引き起こし得る。最近、抗CD34抗体によって被覆されたステントが記載されており、これは、再狭窄を軽減し、血液全体を循環している内皮前駆細胞EPCを捕捉することによって、血液凝固の発生を予防する。内皮細胞は、血管に整列している細胞であり、血液が滑らかに流れるようにしている。EPCは、ステントの硬い表面に付着して滑らかな層を形成し、この層は、治癒を促進するのみならず、従来ステントの使用に付随してきた合併症である再狭窄および血液凝固を予防するAoji,etal.2005J.Am.Coll.Cardiol.4510:1574-9。ステントを必要としている患者に対する結果を改善させることに加えて、心血管バイパス手術を必要としている患者に対しても改善が示唆されている。例えば、抗EPC抗体で被覆された人工血管導管人工動脈は、バイパス手術移植のために、患者の足または腕からの動脈を使用する必要性をなくする。これは、手術および麻酔時間を短縮し、それにより、冠動脈手術死を低下させる。DVD-Igは、細胞動員を促進するために、植え込まれた装置上に被覆された、細胞表面マーカーCD34などおよびタンパク質または、タンパク質、脂質および多糖を含む但し、これらに限定されない。あらゆる種類のエピトープに結合するように設計されている。このようなアプローチは、一般的に、他の医療用インプラントに対しても適用することが可能である。あるいは、DVD-Igは、医療用具上に被覆することも可能であり、植え込まれた時に、またはすでに充填されたDVD-Igの老朽化および変性など、さらなる新鮮なDVD-Igを必要とし得るすべての他の要請に応じて用具からすべてのDVDを放出し、装置は、新鮮なDVD-Igを患者に全身投与することによって、最充填することが可能であり、この場合、DVD-Igは、結合部位の1セットで目的標的サイトカイン、細胞表面マーカーCD34などなどに結合し、結合部位の他のセットで装置上に被覆された標的タンパク質、あらゆる種類のエピトープ脂質、多糖およびポリマーを含むが、これらに限定されない。に結合するように設計されている。この技術は、被覆されたインプラントの有用性を拡張するという利点を有している。A.様々な疾病におけるDVD-Igの使用本発明のDVD-Ig分子は、様々な疾病を治療するための治療分子としても有用である。このようなDVD分子は、特定の疾病に関与する1つまたは複数の標的に結合し得る。様々な疾病におけるこのような標的の例が、以下に記載されている。3.関節リウマチ全身性疾患である関節リウマチRAは、関節の滑液中の慢性的炎症反応によって特徴付けられ、軟骨の変性と隣接する関節骨を伴う。TNF、ケモカインおよび成長因子など、多くの炎症促進性サイトカインが、罹患した関節中に発現されている。抗TNF抗体またはsTNFR融合タンパク質の、RAのマウスモデルへの全身投与は、抗炎症性および関節保護的であることが示された。RA患者中のTNFの活性が、静脈内に投与されたインフリキシマブキメラ抗TNFmABで遮断された臨床的調査Harriman,G.,etal.1999Ann.Rheum.Dis.58Suppl1:161-4は、TNFがIL-6、IL-8、MCP-1およびVEGF産生、免疫および炎症性細胞の関節中への動員、血管新生ならびにマトリックスメタロプロテイナーゼ-1および-3の血液レベルの低下を制御するという証拠を提供した。関節リウマチにおける炎症性経路をより深く理解することによって、関節リウマチに関与する他の治療標的の同定に結びついた。過去、インターロイキン-6アンタゴニストChugai、Rocheによって開発されたIL-6受容体抗体MRA、Nishimoto,N.,etal.2004Arthrit.Rheum.506:1761-1769参照、CTLA4Igアダタセプト、GenoveseMcetal2005Abataceptforrheumatoidarthritisrefractorytotumornecrosisfactoralphainhibition.N.Engl.JMed.353:1114-23.、および抗B細胞療法リツキシマブ、OkamotoH,andN.Kamatani2004N.Engl.J.Med.351:1909などの有望な治療が、無作為化された対照臨床試験においてすでに検査されてきた。インターロイキン-15治療用抗体HuMax-IL_15、AMG714、Baslund,B.,etal.,2005Arthrit.Rheum.529:2686-2692、インターロイキン-17およびインターロイキン-18など、他のサイトカインが同定され、動物モデルにおいて有益であることが示されており、これらの作用物質の臨床試験が現在進行中である。抗TNFおよび別の媒介物質を組み合わせた二重特異的抗体療法は、臨床的効力および/または患者の対象範囲を増大させる上で大きな可能性を秘めている。例えば、TNFとTWEAKの両方を遮断することは、RAの病態生理学に関与している炎症を根絶することができる可能性を秘めている。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得るLusteretal.1994Toxicol.921-3,229-43;Descotes,etal.1992Devel.Biol.Stand.77:99-102;Hartetal.2001J.AllergyandClin.Immunol.1082:250-257参照。DVDIg分子が関節リウマチの治療に対して有用であるかどうかは、コラーゲンによって誘導された関節炎マウスモデルなど、前臨床動物RAモデルを用いて評価することが可能である。他の有用なモデルも本分野において周知であるBrand,D.D.2005Comp.Med.52:114-22参照。ヒトおよびマウスオルソログに対する親抗体の交差反応性例えば、ヒトおよびマウスTNF、ヒトおよびマウスTWEAKなどに対する反応性を基礎として、適合代理抗体由来DVD-Ig分子を用いてマウスCIAモデルにおける妥当性確認試験を行うことが可能である;簡潔に述べると、2つまたはそれ以上のマウス標的特異的抗体を基礎とするDVD-Igは、ヒトDVD-Ig構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など。4.多発性硬化症多発性硬化症MSは、主に病因が不明である複雑なヒト自己免疫型疾病である。神経系を通じたミエリン塩基性タンパク質MBPの免疫学的破壊が、多発性硬化症の主要な病因である。MSは、CD4およびCD8T細胞による浸潤を伴う複雑な病変の疾病であり、中枢神経系内の応答の疾病である。サイトカイン、反応性窒素種および同時刺激分子の中枢神経系中での発現はすべて、MSにおいて記載されている。主に検討すべきであるのは、自己免疫の発達に寄与する免疫学的機序である。特に、Th1およびTh2細胞などの他のT細胞のバランス/調節を補助する、抗原発現、サイトカインおよび白血病相互作用ならびに調節性T細胞は、治療標的の同定のための重要な領域である。TWEAKは、中枢神経系CNS中で恒常的に発現されるTNFファミリーのメンバーであり、細胞の種類に応じて炎症促進性、増殖性またはアポトーシス効果を有する。その受容体Fn14は、内皮細胞、反応性星状膠細胞および神経細胞によって、中枢神経系中で発現されている。TWEAKおよびFN14mRNA発現は、実験的自己免疫脳脊髄炎EAEの間に、脊髄中で増加した。ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質MOGによってC57BL/6マウス中に誘導されたEAEにおける抗TWEAK抗体治療は、マウスが初回刺激相後に治療された場合に、疾病の重度および白血球の浸潤の低下をもたらした。本発明の一態様は、1つまたは複数、例えば2つの標的に結合することができるDVDIg分子に関する。別の態様において、1つまたは複数の標的は、IL-12、TWEAK、IL-23、CXCL13、CD40、CD40L、IL-18、VEGF、VLA-4、TNF、他のTNFファミリーメンバー、CD45RB、CD200、IFNγ、GM-CSF、FGF、C5、CD52またはCCR2である。一実施形態には、MSの治療に対して有益な治療剤としての二重特異的抗TNF/TWEAKDVDIgが含まれる。MSを治療するためのDVD分子の有用性を評価するためのいくつかの動物モデルが、本分野において公知であるSteinmanL,etal.,2005TrendsImmunol.2611:565-71;LublinFD.,etal.,1985SpringerSeminImmunopathol.83:197-208;GenainCP,etal.,1997JMolMed.753:187-97;TuohyVK,etal.,1999JExpMed.1897:1033-42;OwensT,etal.,1995NeurolClin.131:51-73;およびHartBA,etal.,2005JImmunol1757:4761-8参照。ヒトおよび動物種オルソログに対する親抗体の交差反応性例えば、ヒトおよびマウスTWEAKに対する反応性を基礎として、適合代理抗体由来DVD-Ig分子を用いてマウスEAEモデルにおける妥当性確認試験を行うことが可能である;簡潔に述べると、2つまたはそれ以上のマウス標的特異的抗体を基礎とするDVD-Igは、ヒトDVD-Ig構築に使用される親ヒトまたはヒト化抗体の特徴に可能な限り適合し得る類似した親和性、類似した中和効力、類似した半減期など。同じ概念は他の非げっ歯類種の動物モデルに当てはまり、適合代理抗体由来DVD-Igは予期される薬理学および場合によると安全性試験のために選択される。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得るLuster,etal.1994Toxicol.921-3,229-43;Descotes,etal.1992Dev.Biol.Stand.77:99-102;Jones,R.2000RovelizumabICOSCorp.IDrugs.34:442-6参照。5.敗血症敗血症の病態生理は、グラム陰性生物リポ多糖[LPS]、リピドA、エンドトキシンおよびグラム陽性生物リポテイコ酸、ペプチドグリカンの両方の外膜成分によって開始される。これらの外膜成分は、単球の表面上のCD14受容体に結合することが可能である。最近記載されたトール様受容体によって、シグナルは、その後、細胞へと伝達され、炎症促進性サイトカインである腫瘍壊死因子αTNF-αおよびインターロイキン-1IL-1の最終的な産生をもたらす。圧倒的な炎症性応答および免疫応答は、敗血症性ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全および死亡の病因において中心的な役割を果たす。サイトカイン、特に、腫瘍壊死因子TNFおよびインターロイキンIL-1は、敗血症性ショックの極めて重要な媒介物質であることが示されている。これらのサイトカインは、組織に対して直接的な毒性効果を有しており、ホスホリパーゼA2も活性化させる。これらの効果および他の効果は、血小板活性化因子、酸化窒素合成酵素活性の促進、好中球による組織浸潤の促進および好中球活性の促進の増加した濃度をもたらす。敗血症および敗血症性ショックの治療は、なお臨床的な難問であり、炎症性応答を標的とした生物学的応答修飾物質すなわち、抗TNF、抗MIFを用いた最近の前向き臨床試験は、若干の臨床的有益性を示したに過ぎなかった。最近、免疫抑制の付随期間を逆転させることを目指した治療法に関心が移っている。実験動物および重病の患者における試験は、リンパ系臓器およびいくつかの実質組織の増加したアポトーシスが、この免疫抑制、アネルギーおよび臓器系機能不全に寄与することを示している。敗血症症候群の間、リンパ球アポトーシスは、IL-2の不存在によってまたはグルココルチコイド、グランザイムもしくはいわゆる死亡deathサイトカイン:腫瘍壊死因子αまたはFasリガンドの放出によって引き金を引かれ得る。アポトーシスは、Bcl-2ファミリーのアポトーシス促進性のメンバーおよびアポトーシス抑制性のメンバーによって影響を受け得る、細胞質および/またはミトコンドリアのカスパーゼの自己活性化を介して進行する。実験動物では、アポトーシスの阻害剤を用いた治療はリンパ系細胞のアポトーシスを抑制することができるのみならず、予後も改善し得る。抗アポトーシス作用物質を用いた臨床試験は、主にそれらの投与および組織標的化に伴う技術的困難さが原因で、実現性が低いままであるが、リンパ球アポトーシスの阻害は、敗血症患者に対する魅力的な治療の標的である。同様に、炎症性媒介物質およびアポトーシス媒介物質の両方を標的とする二重特異的作用物質は、さらなる有益性を有し得る。本発明の一態様は、敗血症に関与する1つまたは複数の標的に結合することが可能なDVDIgに関する。一実施形態では、DVDIgは2つの標的に結合することが可能である。別の実施形態では、標的は、TNF、他のTNFファミリーメンバー、例えば、TWEAK、IL-1、MIF、IL-6、IL-8、IL-18、IL-12、IL-23、FasL、LPS、トール様受容体、TLR-4、組織因子、MIP-2、ADORA2A、CASP1、CASP4、IL-10、IL-1B、NFKB1、PROC、TNFRSF1A、CSF3、CCR3、IL1RN、MIF、NFKB1、PTAFR、TLR2、TLR4、GPR44、HMOX1、ミッドカイン、IRAK1、NFKB2、SERPINA1、SERPINE1またはTREM1である。敗血症に対するこのようなDVDIgの効力は、本分野において公知の前臨床動物モデルにおいて評価することが可能であるBurasJA,etal.,2005NatRevDrugDiscov.410:854-65およびCalandraT,etal,2000NatMed.62:164-70参照。6.神経疾患6.1神経変性疾患神経変性疾患は、通常、年齢に依存している場合には慢性であり、または急性例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷などのいずれかである。神経変性疾患は、通常、神経細胞機能の進行性の喪失神経細胞死、脱ミエリン化、運動性の喪失および記憶の喪失によって特徴付けられる年齢依存性疾患である。慢性神経変性疾患例えば、アルツハイマー病の基礎を成す機序として明らかになりつつある知見は、複雑な病因を示しており、それらの発達および進行に、様々な要因、例えば、年齢、血糖状態、アミロイド産生および多量体化、RAGEAGEに対する受容体に結合する後天的糖化終末産物AGEの蓄積、増加した脳の酸化的ストレス、減少した脳の血流、炎症性サイトカインおよびケモカインの放出を含む神経炎症、神経細胞の機能不全およびミクログリアの活性化が寄与していることが認められている。したがって、これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞種および媒介物質の間で複雑な相互作用を示す。このような疾病に対する治療戦略は限られており、非特異的な抗炎症剤例えば、コルチコステロイド、COX阻害剤または神経細胞の喪失および/またはシナプス機能を抑制するための作用物質で炎症プロセスを遮断することが大部分を占める。これらの治療は、疾病の進行を停止させることができない。最近の試験は、可溶性A-bペプチドA-bオリゴマー形態に対する抗体などのより標的化された療法が、疾病の進行を停止させるのに役立つことができるのみならず、記憶を維持するのにも役立ち得ることを示唆している。これらの予備的な観察は、2以上の疾病媒介物質を標的とする特異的な療法例えば、A-bおよび炎症促進性サイトカインTNFなどが、単一の疾病機序を標的化する場合に観察されたものより、慢性神経変性疾患に対して、ずっと優れた治療的効果を提供し得ることを示唆している例えば、可溶性A-バロンShepherd,C.E.etal2005Neurobiol.AgingOct24;Nelson,R.B.2005Curr.Pharm.Des.11:3335;Klein,W.L.2002Neurochem.Int.41:345;Janelsins,M.C.etal.2005JNeuroinflammation2:23;Soloman,B.2004Curr.AlzheimerRes.1:149;Klyubin,I.etal.2005NatMed.11:556-61;Arancio,O.etal.2004,EMBOJ.1-10;Bornemann,KD.etal.2001Am.J.Pathol.158:63;Deane,R.etal.2003Nat.Med.9:907-13;およびMasliah,E.etal.2005Neuron46:857参照。本発明のDVD-Ig分子は、アルツハイマーなどの慢性神経変性疾患に関与する1または複数の標的に結合することが可能である。このような標的には、限定されないが、AD発症に関わるすべての媒介物質可溶性または細胞表面、例えば、AGES100A、アムホテリン、炎症反応を促進するサイトカイン例えば、IL-1、ケモカイン例えば、MCP1、神経再生を阻害する分子例えば、Nogo、RGMA、神経突起の成長を増強する分子ニューロトロフィン、および血液脳関門での輸送を媒介することができる分子例えば、トランスフェリン受容体、インスリン受容体またはRAGEが挙げられる。DVD-Ig分子の効力は、アミロイド前駆体タンパク質またはRAGEを過剰発現し、アルツハイマー病様の症候を発症するトランスジェニックマウスなどの前臨床動物モデルで妥当性を確認することが可能である。さらに、DVD-Ig分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的DVD-Igを選択することができる。DVD-Ig分子は、パーキンソン病などの他の神経変性疾患の治療のためにも使用することが可能である。α-シニュクレインが、パーキンソン病に関与している。α-シヌクレインおよび炎症性媒介物質TNF、TNFファミリーメンバー、例えば、TWEAK、IL-1、MCP-1などを標的とすることができるDVD-Igは、パーキンソン病または他の神経変性疾患に対する有効な治療であることを証明することが可能であり、本発明において想定される。6.2神経細胞の再生および脊髄損傷病的機序の知見の増大にかかわらず、脊髄損傷SCIは、なお、多大な損害を与える症状であり、高い医学的な要求を特徴とする医学的な適応症である。多くの脊髄損傷は、挫傷または圧迫傷害であり、通常、一次損傷に続いて、最初の損傷を悪化させ、病変部位の著しい拡大特には、10倍超をもたらす二次的な損傷機序炎症媒介物質、例えば、サイトカインおよびケモカインが起こる。SCIにおけるこれらの原発および続発性の機序は、他の手段、例えば発作によって引き起こされた脳損傷における機序と極めて類似している。満足する治療は存在せず、メチルプレドニゾロンMPの高用量ボーラス注射は、損傷から8時間後という狭い時間枠内で使用される唯一の療法である。しかしながら、この治療は、顕著な機能的回復が全くなしに、続発性損傷を予防することのみを目的としている。明瞭な効果の欠如ならびにその後の感染症を伴う免疫抑制および重い組織病理学的な筋肉の変化などの重い副作用に対して大きな批判が為されている。内在性の再生能を刺激する他の薬物、生物学または小分子は認可されていないが、有望な治療原理および薬物候補が、近年、SCIの動物モデルにおいて有効性を示している。多くの場合、ヒトSCIにおける機能的回復の欠如は、病変部位における、瘢痕組織中、ミエリン中および損傷を伴う細胞上における神経突起の増殖を阻害する因子によって引き起こされる。このような因子は、ミエリン随伴タンパク質NogoA、OMgpおよびMAG、RGMA、瘢痕随伴CSPGコンドロイチン硫酸プロテオグリカンおよび反応性星状膠細胞に対する阻害因子一部のセマホリンおよびエフリンである。しかしながら、病変部位では、増殖阻害分子が見出されるのみならず、ニューロトロフィン、ラミニンL1およびその他のような神経突起成長刺激因子も見出される。阻害的な影響の低下が、バランスを、増殖阻害から増殖促進へとシフトさせ得るので、神経突起成長阻害分子および神経突起成長促進分子のこの協調は、NogoAまたはRGMAのような単一の因子を遮断することが、げっ歯類SCIモデルにおいて著しい機能回復をもたらしたことを説明し得る。しかしながら、単一の神経突起成長阻害分子を遮断することによって観察された回復は完全ではなかった。より速く、より顕著な回復を達成するためには、2つの神経突起成長阻害分子例えば、NogoおよびRGMAを遮断するまたは神経突起成長阻害分子を遮断し、神経突起成長増強分子の機能を増強するか例えば、Nogoおよびニューロトロフィン、または神経突起成長阻害分子例えば、Nogoおよび炎症促進性分子例えば、TNFを遮断することが、望ましい場合があり得るMcGee,A.W.etal.2003TrendsNeurosci.26:193;Domeniconi,M.etal.2005J.Neurol.Sci.233:43;Makwanal,M.etal.2005FEBSJ.272:2628;Dickson,B.J.2002Science298:1959;Teng,F.Y.H.etal.2005J.Neurosci.Res.79:273;Karnezis,T.etal.2004NatureNeuroscience7:736;Xu,G.etal.2004J.Neurochem.91;1018参照。一態様において、NgRおよびRGMA;NogoAおよびRGMA;MAGおよびRGMA;OMGpおよびRGMA;RGMAおよびRGMB;CSPGおよびRGMA;アグレカン、ミッドカイン、ニューロカン、ベルシカン、ホスファカン、Te38およびTNF-α;樹状突起および軸索の出芽を促進する抗体と組み合わされたAβ球状体globulomer特異的抗体などの標的対に結合することが可能なDVD-Igが提供される。樹状突起の病変は、ADの極めて早期の兆候であり、NOGOAが樹状突起の成長を制限することが知られている。abのこのような種類を、SCI候補ミエリンタンパク質Abのいずれかと組み合わせることが可能である。他のDVD-Ig標的は、NgR-p75、NgR-Troy、NgR-Nogo66Nogo、NgR-Lingo、Lingo-Troy、Lingo-p75、MAGまたはOmgpのあらゆる組合せを含み得る。さらに、標的には、神経突起の阻害に関与すると推定されているすべての媒介物質可溶性または細胞表面、例えば、Nogo、Ompg、MAG、RGMA、セマフォリン、エフリン、可溶性A-b、炎症促進性サイトカイン例えば、IL-1、ケモカイン例えば、MIP1a、神経再生を阻害する分子も含まれ得る。抗nogo/抗RGMAまたは類似のDVD-Ig分子の効力は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて、妥当性を確認することが可能である。さらに、これらのDVD-Ig分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的DVD-Igを選択することができる。さらに、単一の受容体、例えば3つのリガンドNogo、OmpgおよびMAGに結合するNogo受容体ならびにA-bおよびS100Aに結合するRAGE上の2つの異なるリガンド結合部位を標的とするDVD-Ig分子を構築することが可能である。さらに、神経突起成長阻害剤、例えば、nogoおよびnogo受容体は、多発性硬化症のような免疫学的疾患において神経再生を抑制する上でも役割を果たす。nogo-nogo受容体の相互作用の阻害は、多発性硬化症の動物モデルの回復を増強させることが示されている。したがって、1つの免疫媒介物質、例えば、IL-12のようなサイトカイン、および神経突起成長阻害分子、例えば、nogoまたはRGMの機能を遮断することができるDVD-Ig分子は、免疫または神経突起成長阻害剤分子のみを遮断するより、より速く、より大きな効力を与え得る。一実施形態において、本発明は、神経再生および脊髄障害を治療するための、TNFおよび他のTNFファミリーメンバー、例えばTWEAKに結合するDVD-Igに関する。一般に、抗体は、効果的に関連した方法で血液脳関門BBBを通過しない。しかしながら、ある種の神経学的疾患、例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、多発性硬化症などにおいて、BBBは危険に晒され、DVD-Igおよび抗体の脳への浸透の増加を許容することがある。他の神経学的状態において、BBB漏出が起こっていない場合、内因性輸送システムの標的化を用いてもよく、これには、担体を媒介とした輸送、例えば、グルコースおよびアミノ酸担体、ならびにBBBの血管内皮での受容体を媒介としたトランスサイトーシスを介する細胞構造/受容体が含まれ、このようにしてDVD-IgのトランスBBB輸送を可能にする。このような輸送を可能にするBBBでの構造には、限定されないが、インスリン受容体、トランスフェリン受容体、LRPおよびRAGEが挙げられる。さらに、戦略は、低分子量薬物、ナノ粒子および核酸を含むCNSへの潜在的な薬物を輸送するためのシャトルとしてのDVD-Igの使用も可能にするColoma,MJ,etal.2000PharmRes.173:266-74;Boado,RJ,etal.2007Bioconjug.Chem.182:447-55。7.腫瘍疾患モノクローナル抗体療法が、癌に対する重要な治療法として登場しているvonMehren,M.,etal.2003Annu.Rev.Med.54:343-69。抗体は、アポトーシス、再誘導された細胞毒性、リガンド-受容体相互作用の妨害を誘導し、または新生物表現型にとって重大なタンパク質の発現を抑制することによって、抗腫瘍効果を発揮し得る。さらに、抗体は、腫瘍微小環境の成分を標的とすることが可能であり、腫瘍に付随する脈管構造の形成など不可欠な構造を擾乱する。抗体は、そのリガンドが増殖因子である受容体上皮増殖因子受容体などを標的とすることも可能である。したがって、抗体は、細胞増殖を刺激する天然のリガンドが標的とされる腫瘍細胞へ結合することを阻害する。あるいは、抗体は、抗イディオタイプネットワーク、補体媒介性細胞傷害または抗体依存性細胞傷害ADCCを誘導し得る。2つの別個の腫瘍媒介物質を標的とする二重特異的抗体の使用は、単一特異的療法に比べて、さらなる有利さを与えるものと思われる。別の実施形態において、本発明のDVDは、1または複数のTNFファミリーメンバー、例えばTNFアルファTNFSF1;同様にTNFベータ;リンホトキシンアルファTNFSF2;同様にカケクチン;リンホトキシンベータTNFSF3;同様にTNFC;TAG7TNFSF3L;同様にPGRP;P23;OX40LTNFSF4;同様にGP34;CD134L;CD40LTNFSF5;同様にCD154;TRAP;FasLTNFSF6;同様にCD95L;CD178;CD27LTNFSF7;同様にCD70;CD30LTNFSF8;同様にCD153;4-1BB-LTNFSF9;AP02-LTNFSF10;同様にTRAIL;RANK1TNFSFl1;同様にオステオプロテゲリンリガンド;TRANCE;TWEAKTNFSFl2;APRILTNFSF13;同様にTALL2;BAFFTNFSF13B;同様にTALL1;THANK;LIGHTTNFSF14;同様にHVEML;TL1TNFSF15;同様にVEGI;およびAITRLTNFSF18;同様にGITRLに結合することが可能である。IV.医薬組成物本発明は、本発明の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む医薬組成物も提供する。本発明の結合タンパク質を含む医薬組成物は、疾患を診断し、検出し、もしくはモニタリングし、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、もしくは軽減する上で、および/または研究において使用されるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、1つまたは複数の本発明のタンパク質を含む。別の実施形態において、医薬組成物は、1つまたは複数の本発明の結合タンパク質、および疾患を治療するための、本発明の結合タンパク質以外の1つまたは複数の予防または治療剤を含む。一実施形態において、予防剤または治療剤は、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候の予防、治療、管理または軽減に有用であることが知られており、または疾患または1つもしくはそれ以上のその症候の予防、治療、管理または軽減においてこれまで使用されており、もしくは現在使用されている。これらの実施形態に従えば、組成物は、担体、希釈剤または賦形剤をさらに含み得る。本発明の結合タンパク質は、対象に投与するのに適した医薬組成物中に取り込ませることが可能である。典型的には、医薬組成物は、本発明の結合タンパク質および医薬として許容される担体を含む。本明細書において使用される医薬として許容される担体には、生理的に適合性がある、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。医薬として許容される担体の例には、水、生理的食塩水、リン酸緩衝化された生理的食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの1つまたは複数およびこれらの組合せが含まれる。いくつかの実施形態において、等張剤、例えば、糖、マニトール、ソルビトールなどの多価アルコールまたは塩化ナトリウムが組成物中に含まれる。医薬として許容される担体は、抗体または抗体部分の保存期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、防腐剤または緩衝剤などの補助物質の微量をさらに含み得る。様々な送達系が公知であり、例えば、リポソーム、微粒子、ミクロカプセル、抗体または抗体断片を発現することができる組み換え細胞、受容体によって媒介されるエンドサイトーシス例えば、WuandWu1987J.Biol.Chem.262:4429-4432参照、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築物などに封入して、本発明の1つもしくはそれ以上の抗体または本発明の1つもしくはそれ以上の抗体および疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を予防し、管理し、治療し、もしくは軽減するのに有用な予防剤または治療剤の組合せを投与するために使用することが可能である。本発明の予防剤または治療剤を投与する方法には、非経口投与例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下、硬膜外投与、腫瘍内投与および粘膜投与例えば、鼻内および経口経路が含まれるが、これらに限定されない。さらに、例えば、吸入装置または噴霧器およびエアロゾル化剤を加えた製剤の使用によって、経肺投与を使用することが可能である。例えば、米国特許第6,019,968号;第5,985,320号;第5,985,309号;第5,934,272号;第5,874,064号;第5,855,913号;第5,290,540号;および第4,880,078号;ならびにPCT公開WO92/19244;WO97/32572;WO97/44013;WO98/31346;およびWO99/66903を参照されたい。一実施形態において、本発明の結合タンパク質、組合せ療法または本発明の組成物は、AlkermesAIR登録商標経肺薬物送達技術Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass.を用いて投与される。特定の実施形態において、本発明の予防剤または治療剤は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻内、経肺または皮下投与される。予防剤または治療剤は、あらゆる都合のよい経路によって、例えば、注入もしくはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮下の裏打ち例えば、口粘膜、直腸および腸粘膜などを通じた吸収によって投与され得、生物学的に活性な他の作用物質と一緒に投与され得る。投与は、全身または局所であり得る。一実施形態において、インビトロにおける抗体と連結したカーボンナノチューブCNTと腫瘍細胞の特異的結合、その後の近赤外NIR光を用いたこれらの高度に特異的な除去は、腫瘍細胞を標的にするために使用することが可能である。例えば、ビオチン化極性脂質は、安定した生体適合性非細胞毒性CNT分散物を調製するために使用することが可能であり、次いでこの分散物は、1つまたは複数の腫瘍抗原例えば、CD22に対する1つまたは2つの異なるneutraliteアビジン誘導体化DVD-Igに付着されるChakravarty,P.etal.2008Proc.Natl.Acad.Sci.USA105:8697-8702。特定の実施形態において、治療を必要としている部位へ局所的に、本発明の予防剤または治療剤を投与することが望ましい場合があり得る。これは、例えば、局所的注入によって、注射によって、またはインプラントの手段によって達成され得るが、これらに限定されるものではなく、前記インプラントは、シアラスチックsialastic膜、ポリマー、繊維性マトリックス例えば、Tissuel登録商標またはコラーゲンマトリックスなどの、膜およびマトリックスを含む多孔性または非多孔性材料である。一実施形態において、本発明の1つまたは複数の抗体アンタゴニストの有効量は、疾患またはその症候を予防し、治療し、管理し、および/または軽減するために、対象の罹患した部位へ局所的に投与される。別の実施形態において、本発明の1つまたは複数の抗体の有効量は、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、および/または軽減するために、本発明の結合タンパク質以外の1つまたは複数の治療薬例えば、1つまたは複数の予防剤または治療剤の有効量と組み合わせて、対象の罹患した部位へ局所的に投与される。別の実施形態において、予防剤または治療剤は、調節された放出系または徐放系に入れて送達することが可能である。一実施形態において、調節された放出または徐放を達成するためにポンプを使用し得るLanger,上記;Sefton1987CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:20;Buchwaldetal.1980Surgery88:507;Saudeketal.1989N.Engl.J.Med.321:574参照。別の実施形態において、本発明の治療薬の調節された放出または徐放を達成するために、ポリマー材料を使用することが可能である。例えば、MedicalApplicationsofControlledRelease,LangerandWiseeds.,CRCPres.,BocaRaton,Fla.1974;ControlledDrugBioavailability,DrugProductDesignandPerformance,SmolenandBalleds.,Wiley,NY1984;RangerandPeppas1983J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61を参照されたい。Levyetal.,1985,Science228:190;Duringetal.,1989,Ann.Neurol.25:351;Howardetal.,1989,J.Neurosurg.71:105;米国特許第5,679,377号;第5,916,597号;第5,912,015号;第5,989,463号;および第5,128,326号;PCT公開WO99/15154;およびWO99/20253も参照されたい。徐放製剤中で使用されるポリマーの例には、ポリ2-ヒドロキシエチルメタクリラート、ポリメチルメタクリラート、ポリアクリル酸、ポリエチレン-コビニルアセタート、ポリメタクリル酸、ポリグリコリドPLG、ポリ無水物、ポリN-ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、ポリラクチドPLA、ポリラクチド-コ-グリコリドPLGAおよびポリオルトエステルが含まれるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、徐放製剤中で使用されるポリマーは、不活性であり、溶脱可能な不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、生物分解性である。さらに別の実施形態において、調節された放出系または徐放系は、予防剤または治療剤の近くに配置されて、全身投薬量の一部のみを必要とするようにすることができる例えば、Goodson,inMedicalApplicationsofControlledRelease,supra,vol.2,pp.115-1381984参照。徐放系は、Langer1990Science249:1527-1533による概説中に論述されている。本発明の1つまたは複数の治療剤を含む徐放製剤を作製するために、当業者に公知のあらゆる技術を使用することが可能である。例えば、米国特許第4,526,938号、PCT公開WO91/05548;およびWO96/20698;Ningetal.1996RadiotherapyOncology39:179-189,Songetal.1995PDAJ.Pharmaceut.Sci.Technol.50:372-397;Cleeketal.1997Pro.Lnt’l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854およびLametal.1997Proc.lnt’l.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.24:759-760を参照されたい。本発明の組成物が予防剤または治療剤をコードする核酸である特定の実施形態において、適切な核酸発現ベクターの一部として、核酸を構築し、例えば、レトロウイルスベクター米国特許第4,980,286号の使用によって、または直接の注射によって、または微粒子照射例えば、遺伝子銃;Biolistic,Duponの使用によって、核酸が細胞内となるように核酸を投与し、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくは形質移入剤でコーティングし、または核内に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに連結して核酸を投与することによって例えば、Joliotetal.1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:1864-1868参照、核酸がコードしている予防剤または治療剤の発現を促進するために、核酸をインビボで投与することが可能である。あるいは、相同的組み換えによる発現のために、核酸を細胞内に導入し、宿主細胞DNA内に取り込むことが可能である。本発明の医薬組成物は、その予定された投与経路と適合的であるように製剤化される。投与の経路の例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻内例えば、吸入、経皮例えば、局所、経粘膜および直腸投与が含まれるが、これらに限定されない。特異的な実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻内または局所投与に適合された医薬組成物として、定型的な手法に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合には、組成物は、可溶化剤および注射の部位における痛みを和らげるための局所麻酔剤リグノカムンlignocamneなども含み得る。本発明の組成物が局所的に投与されるべき場合には、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、エマルジョンの形態でまたは当業者に周知の他の形態で製剤化することが可能である。例えば、Remington’sPharmaceuticalSciencesandIntroductiontoPharmaceuticalDosageForms,19thed.,MackPub.Co.,Easton,Pa.1995を参照されたい。一実施形態において、噴霧不能な局所剤形の場合には、局所適用に適合性のある担体または1つもしくはそれ以上の賦形剤を含み、水より大きな動粘性係数を有する粘性ないし半固体または固体の形態が使用される。適切な製剤は、所望であれば、滅菌され、または、例えば、浸透圧などの様々な特性に影響を及ぼすための補助剤例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、緩衝剤または塩と混合された、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏ointment、粉末、リニメント剤、軟膏salveなどこれらに限定されないを含む。他の適切な局所剤形には、一実施形態において、固体または液体不活性担体と組み合わされた活性成分が、加圧された揮発性物質例えば、フレオンなどの気体状噴射剤との混合物中または搾り出し瓶中に梱包されている噴霧可能なエアロゾル調製物が含まれる。所望であれば、医薬組成物および剤形に、加湿剤または湿潤剤も添加することが可能である。このような追加の成分の例は、本分野において周知である。本発明の方法が組成物の鼻内投与を含む場合には、組成物は、エアロゾル形態、スプレー、ミスト中に、または点鼻薬の形態で製剤化することが可能である。特に、本発明に従って使用するための予防剤または治療剤は、適切な噴射剤例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適切な気体を用いて、加圧されたパックまたは噴霧器からエアロゾルスプレー提示の形態で都合よく送達することが可能である。加圧されたエアロゾルの場合には、投薬単位は、定量された量を送達するためのバルブを付与することによって決定され得る。化合物とラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物を含有する、吸入装置またはガス注入装置で使用するためのカプセルおよびカートリッジ例えば、ゼラチンから構成される。を製剤化し得る。本発明の方法が経口投与を含む場合、錠剤、カプセル、カシェ剤、ゲルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で、組成物を経口的に製剤化することが可能である。錠剤またはカプセルは、従来の手段によって、結合剤例えば、予めゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース;充填剤例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム;潤滑剤例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ;崩壊剤例えば、イモデンプンまたはグリコール酸デンプンナトリウム;または湿潤剤例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなどの、医薬として許容される賦形剤とともに調製することが可能である。錠剤は、本分野において周知な方法によって被覆され得る。経口投与用の液体調製物は、溶液、シロップもしくは懸濁液の形態これらに限定されない。を採り得、または、使用前に、水もしくは他の適切なビヒクルを用いて構成するための乾燥製品として与えられ得る。このような液体調製物は、慣用の手段によって、懸濁剤例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用脂肪;乳化剤例えば、レシチンまたはアカシア;非水性ビヒクル例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコールまたは分画された植物油;および防腐剤例えば、p-ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピルまたはソルビン酸などの医薬として許容される添加物とともに調製され得る。調製物は、適宜、緩衝液塩、着香剤、着色剤および甘味剤も含有し得る。経口投与用調製物は、予防剤または治療剤の遅い放出、調節された放出または徐放のために、適切に製剤化され得る。本発明の方法は、例えば、吸入装置または噴霧器の使用、エアロゾル化剤とともに製剤化された組成物の使用によって、経肺投与を含み得る。例えば、米国特許第6,019,968号;第5,985,320号;第5,985,309号;第5,934,272号;第5,874,064号;第5,855,913号;第5,290,540号;および第4,880,078号;ならびにPCT公開WO92/19244;WO97/32572;WO97/44013;WO98/31346;およびWO99/66903を参照されたい。特定の実施形態において、本発明の結合タンパク質、組合せ療法および/または本発明の組成物は、AlkermesAIR登録商標経肺薬物送達技術Alkermes,Inc.Cambridge,Mas.を用いて投与される。本発明の方法は、注射による例えば、ボーラス注射または連続的注入による非経口投与のために製剤化された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、添加された防腐剤とともに、単位剤形で例えば、アンプルまたは複数投薬容器に入れて与え得る。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態を採り得、懸濁剤、安定化剤および/または分散剤などの処方剤を含有し得る。あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル例えば、発熱物質を含まない無菌水で構成するための粉末形態であり得る。本発明の方法は、さらに、デポ調製物として製剤化された組成物の投与を含み得る。このような長期作用製剤は、例えば、皮下または筋肉内への植え込みによって、または筋肉内注射によって投与され得る。したがって、例えば、組成物は、適切なポリマー材料もしくは疎水性材料例えば、許容される油中のエマルジョンとしてまたはイオン交換樹脂とともに、または難溶性誘導体として例えば、難溶性塩として調合され得る。本発明の方法は、中性または塩形態として製剤化された組成物の投与を包含する。医薬として許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどの陰イオンとともに形成された塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなど、陽イオンとともに形成された塩が含まれる。一般的には、組成物の成分は、別個に、または単位剤形中に例えば、活性剤の量を示した注射器またはにおい袋など、密閉された容器中の凍結乾燥された乾燥粉末または無水濃縮物として一緒に混合されて供給される。投与の様式が注入である場合には、組成物は、医薬等級の無菌水または生理的食塩水を含有する注入瓶を用いて分配することが可能である。投与の様式が注射による場合には、注射用の無菌水または生理的食塩水の注射器は、投与前に成分が混合され得るように提供することが可能である。特に、本発明は、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または本発明の医薬組成物が、薬剤の量を示した注射器またはにおい袋など、密閉された容器中に梱包されることも提供する。一実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または医薬組成物は、密閉された容器中の凍結乾燥された乾燥無菌粉末または無水濃縮物として供給され、対象に投与するための適切な濃度になるように例えば、水または生理的食塩水で再構成することができる。一実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または医薬組成物は、少なくとも5mg、少なくとも10mg、少なくとも15mg、少なくとも25mg、少なくとも35mg、少なくとも45mg、少なくとも50mg、少なくとも75mgまたは少なくとも100mgの単位投薬量で、密封された容器中の凍結乾燥された乾燥無菌粉末として供給される。本発明の凍結乾燥された予防もしくは治療剤または医薬組成物は、その元の容器中で、2°Cと8°Cの間で保存されるべきであり、本発明の予防剤もしくは治療剤または医薬組成物は、再構成後、1週以内、例えば5日以内、72時間以内、48時間以内に、24時間以内に、12時間以内に、6時間以内に、5時間以内に、3時間以内に、または1時間以内に投与されるべきである。別の実施形態において、本発明の予防剤もしくは治療剤の1つもしくはそれ以上または本発明の医薬組成物は、薬剤の量および濃度を示す密閉された容器中に、液体形態で供給される。一実施形態において、投与された組成物の液体形態は、少なくとも0.25mg/ml、少なくとも0.5mg/ml、少なくとも1mg/ml、少なくとも2.5mg/ml、少なくとも5mg/ml、少なくとも8mg/ml、少なくとも10mg/ml、少なくとも15mg/kg、少なくとも25mg/ml、少なくとも50mg/ml、少なくとも75mg/mlまたは少なくとも100mg/mlで、密封された容器中に供給される。液体形態は、その元の容器中で、2°Cと8°Cの間で保存されるべきである。本発明の結合タンパク質は、非経口投与に適した医薬組成物中に取り込ませることが可能である。一実施形態において、抗体または抗体部分は、0.1-250mg/mLの結合タンパク質を含有する注射可能溶液として調製される。注射可能溶液は、フリント容器または琥珀色の容器、注射器または予め充填されたシリンジ中の液体または凍結乾燥された剤形から構成され得る。緩衝液は、pH5.0から7.0最適にはpH6.0のL-ヒスチジン1-50mM、最適には5-10mMであり得る。他の適切な緩衝液には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。0-300mMの濃度に最適には、液体剤形に対して150mMの溶液の毒性を修飾するために、塩化ナトリウムを使用することが可能である。凍結乾燥された剤形に対して、凍結保護剤、主に、0-10のスクロース最適には、0.5-1.0を含めることが可能である。他の適切な凍結保護剤には、トレハロースおよびラクトースが含まれる。凍結乾燥された剤形に対して、充填剤、主に、1-10のマニトール最適には、2-4を含めることが可能である。液体および凍結乾燥された両剤形において、安定化剤、主に1-50mMのL-メチオニン最適には、5-10mMを使用することが可能である。他の適切な充填剤には、グリシン、アルギニンが含まれ、0-0.05のポリソルベート-80最適には、0.005-0.01として含めることが可能である。さらなる界面活性剤には、ポリソルベート20およびBRIJ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。非経口投与用の注射可能な溶液として調製された本発明の結合タンパク質を含む医薬組成物は、治療用タンパク質例えば、抗体の吸収または分散を増加させるために使用されるものなど、アジュバントとして有用な作用物質をさらに含むことが可能である。特に有用なアジュバントは、Hylenex登録商標組み換えヒトヒアルロニダーゼなどのヒアルロニダーゼである。注射可能な溶液中へのヒアルロニダーゼの添加は、非経口投与、特に皮下投与後に、ヒト生物学的利用可能性を改善する。痛みおよび不快感がより小さく、注射部位反応の発生を最小限に抑えながら、より大きな注射部位容量すなわち、1mLより大きいも可能であるWO2004078140およびUS2006104968を参照。本発明の組成物は、様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体溶液例えば、注射可能な溶液および注入可能な溶液など、分散液または懸濁液、錠剤、丸薬、粉末、リポソームおよび坐薬などの、液体、半固体および固体剤形が含まれる。選択された形態は、予定される投与の様式および治療用途に依存する。典型的な組成物は、他の抗体を用いたヒトの受動免疫に対して使用される組成物と同様の組成物など、注射可能溶液または注入可能溶液の形態である。投与の選択された様式は、非経口例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内である。一実施形態において、抗体は、静脈内注入または注射によって投与される。別の実施形態において、抗体は、筋肉内注入または皮下注射によって投与される。治療組成物は、典型的には、製造および保存の条件下で、無菌および安定でなければならない。組成物は、溶液、ミクロエマルジョン、分散液、リポソームまたは高薬物濃度に適したその他の秩序化された構造として製剤化することが可能である。無菌注射可能溶液は、本明細書に列記されている成分の1つまたは組合せを加えた適切な溶媒中に、必要な量で活性な化合物すなわち、抗体、抗体部分を取り込ませた後、必要に応じて、濾過滅菌を行うことによって調製することが可能である。一般的に、分散液は、塩基性分散溶媒および本明細書に列記されたものから得られる必要なその他の成分を含有する無菌ビヒクル中に活性化合物を取り込ませることによって調製される。無菌注射可能溶液の調製のための凍結乾燥された無菌粉末の場合には、調製の方法は、予め滅菌濾過されたその溶液から、あらゆる追加の所望される成分を加えた活性成分の粉末を与える真空乾燥および粉末乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、分散液の場合に必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射可能組成物の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによって実現することができる。本発明の結合タンパク質は、本分野で公知の様々な方法によって投与することが可能であるが、多くの治療用途において、一実施形態では、投与経路/様式は皮下注射、静脈内注射または注入である。当業者によって理解されるように、投与の経路および/または様式は、所望される結果に応じて変動する。ある種の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよび微小封入された送達系を含む徐放製剤など、迅速な放出に対して化合物を保護する担体とともに調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸など、生物分解可能な生物適合性ポリマーを使用することが可能である。このような製剤の多くの調製方法は、特許が付与されているまたは一般的に当業者に公知である。例えば、J.R.Robinsoned.SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,MarcelDekker,Inc.,NY1978を参照されたい。ある種の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用担体とともに経口投与され得る。また、化合物および、所望であれば、その他の成分は、硬いもしくは軟い殻のゼラチンカプセル中に封入され、錠剤へと圧縮され、または患者の食事中に直接取り込ませ得る。経口治療投与の場合、化合物は、賦形剤とともに取り込まれ、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハースなどの形態で使用され得る。非経口投与以外によって本発明の化合物を投与するために、その不活化を妨げるための物質で化合物を被覆し、またはその不活化を妨げるための物質とともに化合物を同時投与することが必要であり得る。補助的活性化合物も、組成物中に取り込ませることが可能である。ある種の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、本発明の結合タンパク質を用いて疾患を治療するのに有用な、1つまたは複数のさらなる治療剤とともに共製剤化され、および/または同時投与される。例えば、本発明の結合タンパク質は、他の錠剤に結合する1つまたは複数のさらなる抗体例えば、他のサイトカインに結合する抗体または細胞表面分子に結合する抗体とともに共製剤化され、および/または同時投与され得る。さらに、本発明の1つまたは複数の抗体は、先述の治療剤の2つまたはそれ以上と組み合わせて使用され得る。このような組合せ療法は、投与される治療剤のより低い投薬量を有利に使用し得るので、様々な単独療法に伴って生じ得る毒性または合併症が回避される。ある種の実施形態において、結合タンパク質は、本分野で公知の半減期延長ビヒクルに連結される。このようなビヒクルには、Fcドメイン、ポリエチレングリコールおよびデキストランが含まれるが、これらに限定されない。このようなビヒクルは、例えば、米国特許第6,660,843号および公開されたPCT出願WO99/25044に記載されている。特定の実施形態において、本発明の結合タンパク質または本発明の別の予防剤もしくは治療剤をコードする核酸配列は、遺伝子治療によって、疾患または1つもしくはそれ以上のその症候を治療し、予防し、管理し、または軽減するために投与される。遺伝子治療は、発現された核酸または発現可能な核酸の、対象への投与によって実行される治療を表す。本発明の本実施形態において、核酸は、予防的効果または治療的効果を媒介する、本発明のコードされたそれらの抗体または予防剤もしくは治療剤を産生する。本発明に従って、本分野で利用可能な遺伝子治療のためのあらゆる方法を使用することが可能である。遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Goldspieletal.1993Clin.Pharm.12:488-505;WuandWu1991Biotherapy3:87-95;Tolstoshev1993Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596;Mulligan1993Science260:926-932;およびMorganandAnderson1993Ann.Rev.Biochem.62:191-217;May1993TIBTECH115:155-215を参照されたい。使用可能な組み換えDNA技術の分野で一般的に知られた方法は、Ausubeletal.eds.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons,NY1993;およびKriegler,GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY1990に記載されている。遺伝子治療の様々な方法の詳細な記述は、US20050042664A1に開示されている。本発明の結合タンパク質は、結合タンパク質によって認識される標的が有害である様々な疾病を治療する上で有用である。このような疾病には、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホシェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群I型および多内分泌腺機能低下症候群II型、シュミット症候群、成人急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患/アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状IgA病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎/ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、B型肝炎、C型肝炎、分類不能型免疫不全症分類不能型原発性低γグロブリン血症、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎/多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患vasculiticdiffuselungdisease、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、1型自己免疫性肝炎古典的自己免疫性またはルポイド肝炎、2型自己免疫性肝炎抗LKM抗体肝炎、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うB型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、1型乾癬、2型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病NOS、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性またはNOS、精子自己免疫、多発性硬化症すべてのサブタイプ、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病/動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症橋本病、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫primarymyxoedema、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞choleosatatis、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、B群連鎖球菌GBS感染、精神障害例えば、うつ病および統合失調症、Th2型およびTh1型によって媒介される疾病、急性および慢性疼痛疼痛の様々な形態、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および腎臓癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性寄生性または感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病ALL、急性骨髄性白血病AML、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房aerial異所性拍動、AIDS認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α-1-アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗cd3治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応anti-receptorhypersensitivityreactions、大動脈aordicおよび動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動持続的または発作性、心房粗動、房室ブロック、B細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植BMT拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群cardiacstunsyndrome、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序なまたは多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病CML、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病CLL、慢性閉塞性肺疾患COPD、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト-ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン-バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路および小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症familialhematophagocyticlymphohistiocytosis、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器または組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデンスパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群/血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎A型、ヒス束不整脈、HIV感染/HIV神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部-下垂体-副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、A型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎/ブドウ膜炎/視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症lipedema、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫lymphederma、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症meningococcemia、代謝性/特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患mitochondrialmulti.systemdisorder、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性メンセルデジェリーヌ-トーマスシャイ-ドレーガーおよびマシャド-ジョセフ、重症筋無力症、マイコバクテリウムアビウムイントラセルラーレ、マイコバクテリウムチュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性I筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈およびその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、okt3療法、精巣炎/精巣上体炎、精巣炎/精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群/悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチスカリニ肺炎、肺炎、POEMS症候群多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症および皮膚変化症候群skinchangessyndrome、灌流後症候群postperfusionsyndrome、ポンプ後症候群postpumpsyndrome、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象および病、レイノー病、レフサム病、規則的なQRS幅の狭い頻脈症regularnarrowQRStachycardia、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈specificarrythmias、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、T細胞またはFABALL、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷/出血、III型過敏症反応、IV型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス性脳炎vitalencephalitis/無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ-コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器または組織の異種移植拒絶が含まれるが、これらに限定されないPCT公開WO2002097048A2;WO9524918A1;およびWO00/56772A1参照。本発明のDVD-Igは、以下の疾患:急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アテローム性動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫異常、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群ALPS、自己免疫性心筋炎、自己免疫性血小板減少AITP、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群CIS、結膜炎、小児発症精神障害、慢性閉塞性肺疾患COPD、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギランバレー症候群GBS、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、IgE媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、IPF/UIP、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎keratojuntivitissicca、クスマウル病またはクスマウル-マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、悪性病変、顕微鏡的多発性血管炎、モルブスベヒテレフmorbusbechterev、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非A非B型肝炎、視神経炎、骨溶解、卵巣癌、小関節性JRA、末梢動脈閉塞疾患PAOD、末梢血管疾患PVD、末梢動脈疾患PAD、静脈炎、結節性多発性動脈炎または結節性動脈周囲炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性JRA、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛PMR、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌および直腸癌および造血性悪性病変白血病およびリンパ腫、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、SAPHO滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成および骨髄炎、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン-ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンスジョンソン症候群SJS、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、中毒性表皮剥離症、横断性脊髄炎、TRAPS腫瘍壊死因子受容体、1型アレルギー反応、II型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎UIP、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト小柳原田症候群VKH症候群、滲出型黄斑変性、ならびに創傷治癒の1つまたは複数を治療することもできる。本発明の結合タンパク質は、自己免疫疾患、特に、関節リウマチ、脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎など、炎症を伴う自己免疫疾患に罹患しているヒトを治療するために使用することが可能である。一実施形態において、本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インシュリン依存性糖尿病および乾癬を治療するために使用される。一実施形態において、本発明の組成物および方法で治療または診断され得る疾患には、乳房、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管、小腸、尿路腎臓、膀胱および尿路上皮を含む、女性生殖路子宮頚部、子宮および卵巣ならびに絨毛癌および妊娠性絨毛性疾患を含む、男性生殖路前立腺、精嚢、精巣および生殖細胞腫瘍を含む、内分泌腺甲状腺、副腎および下垂体を含むおよび皮膚の癌腫ならびに血管腫、悪性黒色腫、肉腫骨および軟部組織から生じるものならびにカポジ肉腫を含む、脳、神経、眼および髄膜の腫瘍星状膠細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、シュワン細胞腫および髄膜腫を含む、白血病などの造血性悪性病変から生じる固形腫瘍およびリンパ腫ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫の両方を含む原発性および転移性の癌が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独でまたは放射線療法および/もしくは他の化学療法剤と組み合わせて使用される場合、癌を治療するためにまたは本明細書に記載されている腫瘍からの転移の予防において使用される。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、抗腫瘍剤、放射線療法、化学療法DNAアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、抗チューブリン剤、パクリタキセル、ドセタキセル、タキソール、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ジェムザール、アントラサイクリン、アドリアマイシン、トポイソメラーゼI阻害剤、トポイソメラーゼII阻害剤、5-フルオロウラシル5-FU、ロイコボリン、イリノテカン、受容体チロシンキナーゼ阻害剤例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、COX-2阻害剤例えば、セレコキシブ、キナーゼ阻害剤およびsiRNAなどを含むがこれらに限定されない作用因子と組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質は、様々な疾病の治療において有用な1つまたは複数の追加の治療剤とともに投与することも可能である。本発明の結合タンパク質は、このような疾病を治療するために、単独で、または組み合わせて使用することが可能である。結合タンパク質は、単独で、または追加の作用物質、例えば治療剤と組み合わせて使用することが可能であり、前記追加の作用物質は、その意図される目的に対して、当業者によって選択されることを理解すべきである。例えば、追加の作用物質は、本発明の抗体によって治療されている疾病または症状を治療するのに有用であると本分野で認識されている治療剤とすることが可能である。追加の作用物質は、治療組成物に有益な属性を付与する作用物質、例えば、組成物の粘性に影響を与える作用物質とすることも可能である。本発明に含まれるべき組合せは、それらの意図される目的に対して有用な組合せであることをさらに理解すべきである。以下に記されている作用物質は、例示を目的とするものであって、限定を意図するものではない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体および少なくとも1つの追加の作用物質であり得る。当該組合せにおいて、形成された組成物がその意図される機能を実行することが可能であれば、組合せは、2以上の追加の作用物質、例えば、2または3個の追加の作用物質を含むこともできる。自己免疫疾患および炎症性疾患を治療するための組合せは、NSAIDとも称される非ステロイド性抗炎症薬イブプロフェンのような薬物が含まれる。である。他の組合せは、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドである。ステロイド使用の周知の副作用は、本発明のDVDIgと組み合わせて患者を治療するときに必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能であり、または除去することさえ可能である。本発明の抗体または抗体部分とともに組み合わせることが可能な関節リウマチに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの:サイトカイン抑制性抗炎症薬CSAID;その他のヒトサイトカインまたは成長因子例えば、TNF、他のTNFファミリーメンバー、例えば、TWEAK、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、IL-23、インターフェロン、EMAP-II、GM-CSF、FGFおよびPDGFに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80B7.1、CD86B7.2、CD90、CTLAまたはCD154を含むこれらのリガンドgp39またはCD40Lなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。治療剤の組合せは、異なる点で、自己免疫およびこれに続く炎症カスケードを干渉し得る。例には、キメラ、ヒト化またはヒトTNF抗体、アダリムマブPCT公開WO97/29131、CA2Remicade商標、CDP571、および可溶性p55またはp75TNF受容体、これらの誘導体、p75TNFRIgGEnbrel商標またはp55TNFR1gGLenerceptおよびTNFα変換酵素TACE阻害剤などのようなTNFアンタゴニスト;キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒトTWEAK抗体のようなTWEAKアンタゴニストBIIB023,PCT出願公開WO2006130374;が含まれる。同様にIL-1阻害剤インターロイキン-1変換酵素阻害剤、IL-1RAなどは、同じ理由のために有効であり得る。他の組合せには、インターロイキン11が含まれる。さらに別の組合せには、IL-12機能と平行して、IL-12機能に依存して、またはIL-12と協調して作用し得る自己免疫応答の中心的プレーヤーが含まれる。特には、IL-18抗体または可溶性IL-18受容体またはIL-18結合タンパク質などのIL-18アンタゴニストである。IL-12およびIL-18は、重複しているが、異なる機能を有しており、両者に対するアンタゴニストの組合せは、最も有効であり得ることが示されている。さらに別の組合せは、非枯渇性抗CD4阻害剤である。さらに別の組合せには、抗体、可溶性受容体または拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路CD80B7.1またはCD86B7.2のアンタゴニストが含まれる。本発明の結合タンパク質は、メトトレキサート、6-MP、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン/ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、金チオリンゴ酸塩筋肉内および経口、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド経口、吸入および局所注射、β-2アドレナリン作動性受容体アゴニストサルブタモール、テルブタリン、サルメテラール、キサンチンテオフィリン、アミノフィリン、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、NSAID、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、TNFαまたはIL-1などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質例えば、IRAK、NIK、IKK、p38またはMAPキナーゼ阻害剤、IL-1β変換酵素阻害剤、TNFα変換酵素TACE阻害剤、キナーゼ阻害剤などのT細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体例えば、可溶性p55またはp75TNF受容体および誘導体p75TNFRIgGEnbrel商標およびp55TNFRIgGLenercept、sIL-IR1、sIL-1RII、sIL-6R、炎症抑制性サイトカイン例えば、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13およびTGFβ、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリムシノロンアセトニド、プロポキシフェンナプシラート/apap、フォラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩/apap、ジクロフェナクナトリウム/ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組み換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン/fa/ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン/コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン/アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、IL-1TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18BP、抗IL-18、抗IL15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702,AMG-548、VX740、ロフルミラスト、IC-485、CDC-801およびメソプラムなどの作用物質とも組み合わされ得る。組合せには、メトトレキサートまたはレフルノミドが含まれ、中度または重度の関節リウマチの症例では、シクロスポリンが含まれる。関節リウマチを治療するために、結合タンパク質と組み合わせて使用することも可能な非限定的な追加の作用物質には、以下の非ステロイド性抗炎症薬NSAIDs;サイトカイン抑制性抗炎症薬CSAIDs;CDP-571/BAY-10-3356ヒト化された抗TNFα抗体;Celltech/Bayer;cA2/インフリキシマブキメラ抗TNFα抗体;Centocor;75kdTNFR-IgG/エタネルセプト75kDTNF受容体-IgG融合タンパク質;イムネックス;例えば、ArthritisRheumatism199437:S295;J.Invest.Med.199644:235Aを参照;55kdTNF-IgG55kDTNF受容体-IgG融合タンパク質;Hoffmann-LaRoche;IDEC-CE9.1/SB210396抗原刺激されたprimatized非枯渇性抗CD4抗体;IDEC/SmithKline;例えば、ArthritisRheumatism199538:S185を参照;DAB486-IL-2および/またはDAB389-IL-2IL-2融合タンパク質;Seragen;例えば、ArthritisRheumatism199336:1223参照;抗Tacヒト化抗IL-2Rα;ProteinDesignLabs/Roche;IL-4抗炎症性サイトカイン;DNAX/Schering;IL-10SCH52000;組み換えIL-10、抗炎症性サイトカイン;DNAX/Schering;IL-4;IL-10および/またはIL-4アゴニスト例えば、アゴニスト抗体;IL-1RAIL-1受容体アンタゴニスト;Synergen/Amgen;アナキンラKineret登録商標/Amgen;TNF-bp/s-TNF可溶性TNF結合タンパク質;例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S284参照;Amer.J.Physiol.-HeartandCirculatoryPhysiology1995268:37-42;R973401ホスホジエステラーゼIV型阻害剤;例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S282参照;MK-966COX-2阻害剤;例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S81参照;Iloprost例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S82参照;メトトレキサート;サリドマイド例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S282参照およびサリドマイド関連薬例えば、Celgen;レフノミド抗炎症性およびサイトカイン阻害剤;例えば、ArthritisRheumatism19969補遺:S131;InflammationResearch199645:103-107参照;トラネキサム酸プラスミノーゲン活性化の阻害剤;例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S284参照;T-614サイトカイン阻害剤;例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S282参照;プロスタグランジンE1例えば、ArthritisRheumatism1996Vol.39,No.9補遺,S282参照;Tenidap非ステロイド性抗炎症薬;例えば、ArthritisRheumatism1996Vol.39,No.9補遺,S280参照;ナプロキセン非ステロイド性抗炎症薬;例えば、NeuroReport1996Vol.7,pp.1209-1213参照;メロキシカム非ステロイド性抗炎症薬;イブプロフェン非ステロイド性抗炎症薬;ピロキシカム非ステロイド性抗炎症薬;ジクロフェナク非ステロイド性抗炎症薬;インドメタシン非ステロイド性抗炎症薬;スルファサラジン例えば、ArthritisRheumatism1996Vol.39,No.9補遺,S281参照;アザチオプリン例えば、ArthritisRheumatism1996Vol.39,No.9補遺,S281参照;ICE阻害剤酵素インターロイキン1β変換酵素の阻害剤;zap-70および/またはlck阻害剤チロシンキナーゼzap-70またはlckの阻害剤;VEGF阻害剤および/またはVEGF-R阻害剤血管内皮細胞増殖因子または血管内皮細胞増殖因子受容体の阻害剤;血管新生の阻害剤;コルチコステロイド抗炎症薬例えば、SB203580;TNF-コンベルターゼ阻害剤;抗IL-12抗体;抗IL-18抗体;インターロイキン-11例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S296参照;インターロイキン-13例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S308参照;インターロイキン-17阻害剤例えば、ArthritisRheumatism1996399補遺:S120参照;金;ペニシラミン;クロロキン;クロラムブシル;ヒドロキシクロロキン;シクロスポリン;シクロホスファミド;全リンパ系照射;抗胸腺細胞グロブリン;抗体CD4抗体;CD5トキシン;経口投与されたペプチドおよびコラーゲン;ロベンザリト二ナトリウム;サイトカイン制御作用物質CRAHP228およびHP466HoughtenPharmaceuticals,Inc.;ICAM-IアンチセンスホスホロチオアートオリゴデオキシヌクレオチドISIS2302;IsisPharmaceuticals,Inc.;可溶性補体受容体1TP10;TCellSciences,Inc.;プレドニゾン;オルゴテイン;グリコサミノグリカンポリサルファート;ミノサイクリン;抗IL2R抗体;マウスおよび植物脂質魚および植物種子脂肪酸;例えば、DeLucaetal.1995Rheum.Dis.Clin.NorthAm.J,:759-777参照;アウラノフィン;フェニルブタゾン;メクロフェナミン酸;フルフェナミン酸;静脈内免疫グロブリン;ジレウトン;アザリビジン;ミコフェノール酸RS-61443;タクロリムスFK-506;シロリムスラパマイシン;アミプリローステラフェクチン;クラドリビン2-クロロデオキシアデノシン;メトトレキサート;bcl-2阻害剤Bruncko,M.etal.2007J.Med.Chem.504:641-662;抗ウイルス剤および免疫調節剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。一実施形態において、結合タンパク質またはその抗原結合部分は、関節リウマチの治療用の以下の作用物質の1つと組み合わせて投与される。KDRの小分子阻害剤、Tie-2の小分子阻害剤;メトトレキサート;プレドニゾン;セレコキシブ;葉酸;硫酸ヒドロキシクロロキン;ロフェコキシブ;エタネルセプト;インフリキシマブ;レフルノミド;ナプロキセン;バルデコキシブ;スルファサラジン;メチルプレドニゾロン;イブプロフェン;メロキシカム;酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム;アスピリン;アザチオプリン;トリアムシノロンアセトニド;プロプキシフェンナプシラート/apap;フォラート;ナブメトン;ジクロフェナク;ピロキシカム;エトドラク;ジクロフェナクナトリウム;オキサプロジン、塩酸オキシコドン、重酒石酸ヒドロコドン/apap;ジクロフェナクナトリウム/ミソプロストール;フェンタニル;アナキンラ、ヒト組み換え;塩酸トラマドール;サルサラート;スリンダク;シアノコバラミン/fa/ピリドキシン;アセトアミノェン;アレンドロナートナトリウム;プレドニゾロン;硫酸モルヒネ;塩酸リドカイン;インドメタシン;硫酸グルコサミン/コンドロイチン;シクロスポリン;塩酸アミトリプチリン;スルファジアジン;塩酸オキシコドン/アセトアミノフェン;塩酸オロパタジン;ミソプロストール;ナプロキセンナトリウム;オメプラゾール;ミコフェノラートモフェチル;シクロホスファミド;リツキシマブ、IL-1TRAP;MRA;CTLA4-IG;IL-18BP;IL-12/23;抗IL-18;抗IL-15;BIRB-796;SCIO-469;VX-702;AMG-548;VX740;ロフルミラスト;IC-485;CDC-801およびメソプラム。本発明の結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な炎症性腸疾患に対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの:ブデノシド;上皮成長因子;コルチコステロイド;シクロスポリン;スルファサラジン;アミノサリチラート;6-メルカプトプリン;アザチオプリン;メトロニダゾール;リポキシゲナーゼ阻害剤;メサラミン;オルサラジン;バルサラジド;抗酸化剤;トロンボキサン阻害剤;IL-1受容体アンタゴニスト;抗IL-1βmAb;抗IL-6mAb;成長因子;エラスターゼ阻害剤;ピリジニル-イミダゾール化合物;他のヒトサイトカインまたは成長因子例えば、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGFおよびPDGFに対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90これらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、NSAID、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、TNFαまたはIL-1などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質例えば、IRAK、NIK、IKK、p38またはMAPキナーゼ阻害剤、IL-1β変換酵素阻害剤、TNFα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのT細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体例えば、可溶性p55またはp75TNF受容体、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6Rおよび炎症抑制性サイトカイン例えば、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13およびTGFβおよびbcl-2阻害剤などの作用物質とも組み合わされ得る。結合タンパク質を組み合わせることが可能な、クローン病に対する治療剤の例には、以下のもの:TNFアンタゴニスト、例えば、抗TNF抗体、アダリムマブPCT公開第97/29131号;HUMIRA、CA2REMICADE、CDP571、TNFR-Ig構築物、p75TNFRIgGENBRELおよびp55TNFRIgGLENERCEPT阻害剤およびPDE4阻害剤が含まれる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質またはこれらの抗原結合部分は、スルファサラジン、5-アミノサリチル酸およびオルサラジンなどの作用物質、ならびにIL-1などの炎症促進性サイトカインの合成または作用を妨害する作用物質例えば、IL-1β変換酵素阻害剤およびIL-1raとも組み合わされ得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、T細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤6-メルカプトプリンとともに使用され得る。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、IL-11と組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質またはその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシラート/硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォラート、シプロフロキサシン/デキストロース-水、重酒石酸ヒドロコドン/apap、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール/ホウ酸、コレスチラミン/スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン/アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール/トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン/アセトアミノフェンapap、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニソロン、ナタリズマブおよびインターフェロンγと組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、多発性硬化症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:コルチコステロイド;プレドニゾロン;メチルプレドニゾロン;アザチオプリン;シクロホスファミド;シクロスポリン;メトトレキサート;4-アミノピリジン;チザニジン;インターフェロン-β1aAVONEX;Biogen;インターフェロン-β1bBETASERON;Chiron/Berlex;インターフェロンα-n3InterferonSciences/Fujimoto、インターフェロン-αAlfaWassermann/JJ、インターフェロン-β1A-IFSerono/InhaleTherapeutics、PEGインターフェロンα2bEnzon/Schering-Plough、コポリマー1Cop-1;COPAXONE;TevaPharmaceuticalIndustries,Inc.;高圧酸素;静脈内免疫グロブリン;クラブリビン;他のヒトサイトカインまたは成長因子例えば、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-23、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGFおよびPDGFおよびそれらの受容体に対する抗体またはこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の結合タンパク質は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90またはこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質は、メトトレキサート、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノラートモフェチル、レフルノミド、NSAID、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、TNFαまたはIL-1などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する作用物質例えば、IRAK、NIK、IKK、p38またはMAPキナーゼ阻害剤、IL-1β変換酵素阻害剤、TACE阻害剤、キナーゼ阻害剤などのT細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体およびそれらの誘導体例えば、可溶性p55またはp75TNF受容体、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、炎症抑制性サイトカイン例えば、IL-4、IL-10、IL-13およびTGFβおよびbcl-2阻害剤などの作用物質とも組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質を組み合わせることが可能な、多発性硬化症のための治療剤の例には、インターフェロン-β、例えば、IFNβ1aおよびIFNβ1b;コパキソンcopaxone、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ-1の阻害剤、IL-1阻害剤、TNF阻害剤ならびにCD40リガンドおよびCD80に対する抗体が含まれる。本発明の結合タンパク質は、アレムツズマブ、ドロナビノール、ユニメド、ダクリズマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンナビドール、a-イムノカインNNSO3、ABR-215062、AnergiX.MS、ケモカイン受容体アンタゴニスト、BBR-2778、カラグアリン、CPI-1189、LEMリポソーム封入されたミトキサントロン、THC.CBDカンナビノイドアゴニストMBP-8298、メソプラムPDE4阻害剤、MNA-715、抗IL-6受容体抗体、ニューロバックス、ピルフェニドンアロトラップ1258RDP-1258、sTNF-R1、タラムパネル、テリフルノミド、TGF-β2、チプリモチド、VLA-4アンタゴニスト例えば、TR-14035、VLA4Ultrahaler、Antegran-ELAN/Biogen、インターフェロンγアンタゴニスト、IL-4アゴニストなどの作用物質とも組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、狭心症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:アスピリン、ニトログリセリン、イソソルバイドモノニトラート、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトロバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、塩酸ベラパミル、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル/ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル、フマル酸ビソプロロールが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、強直性脊椎炎のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:イブプロフェン、ジクロフェナクおよびミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、喘息のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:アルブテロール、サルメテロール/フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール/イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウム臭化物、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アミノキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド/メントール、アモキシシリン/クラブラナート、レボフロキサシン、吸入補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、塩酸マキシフロキサシン、ドキシサイクリン水和物hyclate、グアイフェネシン/d-メトルファン、p-エフェドリン/cod/クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、pe/ヒドロコドン/クロルフェニル、塩酸セチリジン/シュードエフェドリン、フェニレフリン/cod/プロメタジン、コデイン/プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン/シュードエフェドリン、クロルフェニラミン/ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、COPDに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの:硫酸アルブテロール/イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール/フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アミノキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン/クラブラナート、フルニソリド/メントール、クロルフェニラミン/ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、p-エフェドリン/cod/クロロフェニル、酢酸ピルブテロール、p-エフェドリン/ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、R,R-フォルモテロール、TgAAT、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、HCVに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの:インターフェロン-α-2a、インターフェロン-α-2b、インターフェロン-αcon1、インターフェロン-α-n1、PEG化されたインターフェロン-α-2a、PEG化されたインターフェロン-α-2b、リバビリン、Pegインターフェロンα-2bリバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリシルリジン酸、チマルファシン、マキサミン、VX-497および以下の標的:HCVポリメラーゼ、HCVプロテアーゼ、HCVヘリカーゼ、HCVIRES配列内リボソーム進入部位への介入を通じて、HCVを治療するために使用されるあらゆる化合物が含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、特発性肺繊維症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γインターフェロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、イプラトロピウムブロミド、アクチノマイシンd、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、塩酸オキシコドン、塩化カリウム、トリアムシノロンアセトニド、タクロリムス無水物、カルシウム、インターフェロン-α、メトトレキサート、ミコフェノラートモフェチル、インターフェロン-γ-1βが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、心筋梗塞のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ、ロサルタンカリウム、塩酸キナプリル/magcarb、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、塩酸チロフィバンm-水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドキュセートナトリウム、塩酸ドブタミン、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトロバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、二硝酸イソソルビド、エピネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ/シンバスタチン、アバシミブ、カリポリドが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、乾癬のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:KDRの小分子阻害剤、Tie-2の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強されたaugmented二プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロンアセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、パラモキシン/フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール/皮膚軟化剤emoll、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿処方、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、hc/次没食子酸ビスマスbismuthsubgal/酸化亜鉛znox/resor、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール/サリチル酸、コールタール/サリチル酸/硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化剤、フルオシノニド/皮膚軟化剤、鉱物油/ひまし油/nalact、鉱物油/落花生油、石油/ミリスチン酸イソプロピル、ソラーレン、サリチル酸、石鹸/トリブロムサラン、チメロサール/ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、PUVA、UVB、スルファサラジンが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、乾癬性関節炎のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒロドキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、増強された二プロピオン酸ベタメタゾン、インフリキシマブ、メトトレキサート、フォラート、トリアムシノロンアセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム/ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、二酒石酸ヒドロコドン/アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリズマブおよびbcl-2阻害剤が含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、再狭窄のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ゾタロリムス、アセトアミノフェンが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、坐骨神経痛のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの:二酒石酸ヒドロコドン/アセトアミノフェン、ロフェコキシブ、塩酸シクロベンザプリン、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、塩酸オキシコドン/アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸コデイン/アセトアミノフェン、塩酸トラマドール/アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ギャバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラクトロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメタオン、塩酸オキシコドン、塩酸チザニジン、ジクロフェナクナトリウム/ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン/アセトアミノフェン、asa/oxycod/コキシコドンter、イブプロフェン/重酒石酸ヒドロコドン、塩酸トラマドール、エトドラク、塩酸プロポキシフェン、塩酸アミトリプチリン、カリソプロドール/リン酸コデイン/asa、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、テマゼパムが含まれる。本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、SLE狼瘡のための治療剤の例には、以下のもの:NSAID、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン;COX2阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ;抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン;ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン;細胞障害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノラートモフェチル、メトトレキサート;PDE4の阻害剤またはプリン合成阻害剤、例えば、Cellceptが含まれる。本発明の結合タンパク質は、スルファサラジン、5-アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランなどの作用物質、ならびにIL-1などの炎症促進性サイトカインの合成、産生または作用を妨害する作用物質、例えば、IL-1β変換酵素阻害剤およびIL-1raのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質は、また、T細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤;またはT細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、CTLA-4-IgGまたは抗B7抗体ファミリー抗体、抗PD-1ファミリー抗体とともに使用され得る。本発明の結合タンパク質は、IL-11または抗サイトカイン抗体、例えば、ホノトリズマブ抗IFNg抗体、または抗受容体受容体抗体、例えば、抗IL-6受容体抗体およびB細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、また、LJP394アベチムスabetimusB細胞を枯渇させ、または不活化する作用物質、例えば、リツキシマブ抗CD20抗体、リンホスタット-B抗BlyS抗体、TNFアンタゴニスト、例えば、抗TNF抗体、アダリムマブPCT公開WO97/29131;HUMIRA、CA2REMICADE、CDP571、TNFR-Ig構築物p75TNFRIgGENBRELおよびp55TNFRIgGLENERCEPTおよびbcl-2阻害剤トランスジェニックマウスにおけるbcl-2過剰発現が狼瘡様表現型をもたらすことが実証されておりMarquina,R.etal.2004J.Immunol.17211,7177-7185参照、したがって阻害が治療効果を有すると予想されるのでとともに使用され得る。本発明の医薬組成物は、本発明の結合タンパク質の治療的有効量または予防的有効量を含み得る。治療的有効量は、所望の治療的結果を達成するための投薬量で、および所望の治療的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。結合タンパク質の治療的有効量は、当業者によって決定され得、病状、年齢、性別および個体の体重ならびに結合タンパク質が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体または抗体部分のあらゆる毒性効果または有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。予防的有効量は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量で、および所望の予防的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。典型的には、疾病のより初期段階の前にまたは疾病のより初期段階において、予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量より少ない。投薬計画は、最適な所望の応答例えば、治療的応答または予防的応答を与えるように調整され得る。例えば、単一のボーラスを投与することができ、複数の分割された用量を経時的に投与することができ、または、治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例的に減少もしくは増加させ得る。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書において使用される投薬単位形態は、治療されるべき哺乳動物患者に対する統一された投薬として適した、物理的に分離された単位を表し、各単位は、必要とされる医薬担体とともに、所望される治療効果を生じるように計算された活性化合物の所定量を含有する。本発明の投薬単位形態に対する規格は、a活性化合物の特有の特徴および達成されるべき具体的な治療効果または予防効果ならびにb個体における過敏症の治療用のこのような活性化合物を配合する分野に固有の制約によって規定され、これらに直接依存する。本発明の結合タンパク質の治療的または予防的有効量に対する典型的な非限定的範囲は、0.1-20mg/kg、例えば1-10mg/kgである。緩和されるべき症状の種類および重度に応じて、投薬量の値が変化し得ることに注意すべきである。いずれかの具体的な患者に対して、個体の要求に従って、組成物の投与を行いまたは監督している者の専門的判断に従って、特異的投薬計画を経時的に調整すべきこと、および、本明細書に記載されている投薬量の範囲は典型的なものに過ぎず、特許請求の範囲に記載されている組成物の範囲または実施に限定することを意図したものではないことをさらに理解すべきである。本明細書に記載されている本発明の方法の他の適切な改変および適合が明白であり、本発明の範囲または本明細書に開示されている実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いてこれらを行い得ることが当業者に自明である。ここに、本発明を詳しく記載してきたが、例示のみを目的とし、本発明を限定することを意図したものではない以下の実施例を参照することによって、本発明がより明確に理解される。V.診断本明細書における開示は、診断の適用例も提供する。これは、以下でさらに明らかにされる。I.アッセイの方法本開示は、本明細書に記載されている少なくとも1つのDVD-Igを使用して試験試料中の分析物またはその断片の存在、量または濃度を決定する方法も提供する。本分野において知られているあらゆる適切なアッセイは、この方法において使用することが可能である。例として、サンドイッチイムノアッセイ例えば、放射性同位体検出ラジオイムノアッセイRIAおよび酵素検出エンザイムイムノアッセイEIAまたは酵素結合免疫吸着検定法ELISA例えば、QuantikineELISAアッセイ、RDSystems,Minneapolis,MNを含むモノクローナル、ポリクローナルおよび/もしくはDVD-Igサンドイッチイムノアッセイまたはそのあらゆるバリエーション例えば、モノクローナル/DVD-Ig、DVD-Ig/ポリクローナルなど、競合阻害イムノアッセイ例えば、順向および逆向、蛍光偏光イムノアッセイFPIA、酵素増幅イムノアッセイ技術EMIT、生物発光共鳴エネルギー移動BRETおよび均一系化学発光アッセイなどのイムノアッセイが含まれるが、これらに限定されない。予め活性化されたプロテインチップアレイなど、SELDIを基礎とするイムノアッセイにおいて、目的の分析物またはその断片に特異的に結合する捕捉試薬は、質量分析プローブの表面に付着している。分析物またはその断片は、次いで、バイオチップ上で特異的に捕捉され、捕捉された分析物またはその断片は、質量分析によって検出される。あるいは、分析物またはその断片は、捕捉試薬から溶出させ、伝統的なMALDIマトリックス支援レーザー脱離/イオン化またはSELDIによって検出することが可能である。化学発光微粒子イムノアッセイ、特にARCHITECT登録商標自動分析器AbbottLaboratories,AbbottPark,ILを使用するものは、好ましいイムノアッセイの例である。尿、血液、血清および血漿および他の体液を収集し、取り扱い、処理する本分野において周知である方法は、例えば、本明細書に記載されているDVD-Igが免疫診断試薬としておよび/または分析物イムノアッセイキットにおいて使用される場合、本開示の実施において使用される。試験試料は、抗体、抗原、ハプテン、ホルモン、薬物、酵素、受容体、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、オリゴヌクレオチドおよび/またはポリヌクレオチドなど、目的の分析物に加えてさらなる部分を含み得る。例えば、試料は、対象から得られた全血試料であり得る。試験試料、特に全血は、本明細書に記載されているイムノアッセイの前に、例えば前処理試薬を用いて処理されることが必要でありまたは所望され得る。前処理が必要でない場合例えば、ほとんどの尿試料においても、前処理は場合によって例えば、商業的プラットホームでのレジメンの一部として行うことが可能である。前処理試薬は、本発明のイムノアッセイおよびキットとの使用に適したあらゆる試薬であり得る。前処理は、a1つまたは複数の溶媒例えば、メタノールおよびエチレングリコールおよび場合によって塩、b1つまたは複数の溶媒および塩および場合によって洗浄剤、c洗浄剤またはd洗浄剤および塩を場合によって含む。前処理試薬は本分野において公知であり、このような前処理は、例えば、AbbottTDx、AxSYM登録商標およびARCHITECT登録商標分析器AbbottLaboratories,AbbottPark,ILでのアッセイに使用されるように、文献中に記載されているように例えば、Yatscoffetal.1990Clin.Chem.36:1969-1973およびWallemacqetal.1999Clin.Chem.45:432-435を参照および/または市販されているものを使用することが可能である。さらに、前処理は、Abbottの米国特許第5,135,875号;欧州特許公開第0471293号、米国仮出願第60/878,017号;および米国特許公開第2008/0020401号に記載されているように行うことが可能である。前処理試薬は、不均一剤または均一剤であり得る。不均一前処理試薬を使用する場合、前処理試薬は、試料中に存在する分析物結合タンパク質例えば、分析物またはその断片に結合することができるタンパク質を沈殿させる。このような前処理工程は、沈殿した分析物結合タンパク質から、前処理剤を試料に添加することによって形成された混合物の上清を分離することによって、あらゆる分析物結合タンパク質を除去することを含む。このようなアッセイにおいて、あらゆる結合タンパク質が存在しない混合物の上清はアッセイにおいて使用され、抗体捕捉工程へと直接進行する。均一前処理試薬を使用する場合、このような分離工程は存在しない。試験試料の混合物および前処理試薬全体は、分析物またはその断片の標識された特異的結合パートナー標識された抗分析物抗体またはその抗原反応性断片などと接触させる。このようなアッセイに使用される前処理試薬は、第一の特異的結合パートナーによる捕捉前または捕捉の間に、前処理された試験試料混合物中で典型的に希釈される。このような希釈にも関わらず、特定の量の前処理試薬は、捕捉の間、試験試料混合物中に依然として存在するまたは残存する。本発明に従って、標識された特異的結合パートナーは、DVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片であり得る。不均一フォーマットにおいて、試験試料が対象から得られた後、第一の混合物が調製される。混合物は、分析物またはその断片および第一の特異的結合パートナーについて評価されている試験試料を含有し、第一の特異的結合パートナーおよび試験試料中に含有されているあらゆる分析物は、第一特異的結合パートナー-分析物複合体を形成する。好ましくは、第一の特異的結合パートナーは、抗分析物抗体またはその断片である。第一の特異的結合パートナーは、本明細書に記載されているDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片であり得る。混合物を形成するために試験試料および第一の特異的結合パートナーが添加される順序は重要でない。好ましくは、第一の特異的結合パートナーは、固相上に固定化されている。第一の特異的結合パートナー、場合によって第二の特異的結合パートナーについてイムノアッセイにおいて使用される固相は、磁気粒子、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスクおよびチップなど但し、これらに限定されない、本分野において知られているあらゆる固相であり得る。第一特異的結合パートナー-分析物複合体を含有する混合物が形成された後、本分野において知られているあらゆる技術を使用して、あらゆる非結合分析物が複合体から除去される。例えば、非結合分析物は、洗浄によって除去することが可能である。しかし、望ましくは、第一の特異的結合パートナーは、試験試料中に存在するすべての分析物が第一の特異的結合パートナーによって結合されるように、試験試料中に存在するあらゆる分析物を上回って存在する。あらゆる非結合分析物が除去された後、第二の特異的結合パートナーが混合物に添加されて、第一特異的結合パートナー-分析物-第二特異的結合パートナー複合体を形成する。第二の特異的結合パートナーは、好ましくは、第一の特異的結合パートナーによって結合される分析物上のエピトープと異なる分析物上のエピトープに結合する抗分析物抗体である。さらに、また好ましくは、第二の特異的結合パートナーは、上記に記載されている検出可能な標識で標識されまたはこの標識を含有する。第二の特異的結合パートナーは、本明細書に記載されているDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片であり得る。本分野において公知であるあらゆる適切な検出可能な標識が使用され得る。例えば、検出可能な標識は、放射性標識3H、125I、35S、14C、32Pおよび33Pなど、酵素標識西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ペルオキシダーゼ、グルコース6-リン酸デヒドロゲナーゼなど、化学発光標識アクリジニウムエステル、チオエステルまたはスルホンアミド;ルミノール、イソルミノール、フェナンスリジニウムエステルなど、蛍光標識フルオレセインなど例えば、5-フルオレセイン、6-カルボキシフルオレセイン、3’6-カルボキシフルオレセイン、56-カルボキシフルオレセイン、6-ヘキサクロロ-フルオレセイン、6-テトラクロロフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネートなど、ローダミン、フィコビリンタンパク質、R-フィコエリトリン、量子ドット例えば、硫化亜鉛キャップ付加セレン化カドミウム、温度測定標識または免疫ポリメラーゼ連鎖反応標識であり得る。標識の導入、標識化手順および標識の検出は、PolakandVanNoorden,IntroductiontoImmunocytochemistry,2nded.,SpringerVerlag,N.Y.1997およびMolecularProbes,Inc.,Eugene,Oregonによって出版されたハンドブックとカタログの組合せであるHaugland,HandbookofFluorescentProbesandResearchChemicals1996に見出される。蛍光標識は、FPIAにおいて使用することが可能である例えば、米国特許第5,593,896号、第5,573,904号、第5,496,925号、第5,359,093号および第5,352,803号を参照。アクリジニウム化合物は、均一系または不均一系化学発光アッセイにおいて検出可能な標識として使用することが可能である例えば、Adamczyketal.2006Bioorg.Med.Chem.Lett.16:1324-1328;Adamczyketal.2004Bioorg.Med.Chem.Lett.4:2313-2317;Adamczyketal.2004Biorg.Med.Chem.Lett.14:3917-3921;およびAdamczyketal.2003Org.Lett.5:3779-3782を参照。好ましいアクリジニウム化合物は、アクリジニウム-9-カルボキサミドである。アクリジニウム9-カルボキサミドを調製する方法は、Mattingly1991J.Biolumin.Chemilumin.6:107-114;Adamczyketal.1998J.Org.Chem.63:5636-5639;Adamczyketal.,1999Tetrahedron55:10899-10914;Adamczyketal.1999Org.Lett.1:779-781;Adamczyketal.2000BioconjugateChem.11:714-724;Mattinglyetal.,InLuminescenceBiotechnology:InstrumentsandApplications;Dyke,K.V.Ed.,CRCPress:BocaRaton,2002pp.77-105;Adamczyketal.2003Org.Lett.5:3779-3782;ならびに米国特許第5,468,646号、第5,543,524号および第5,783,699号に記載されている。別の好ましいアクリジニウム化合物は、アクリジニウム-9-カルボキシレートアリールエステルである。アクリジニウム-9-カルボキシレートアリールエステルの例は、10-メチル-9-フェノキシカルボニルアクリジニウムフルオロスルホネートCaymanChemical,AnnArbor,MIから入手可能である。アクリジニウム-9-カルボキシレートアリールエステルを調製する方法は、McCapraetal.1965Photochem.Photobiol.4:1111-21;Razavietal.2000Luminescence15:245-249;Razavietal.2000Luminescence15:239-244;および米国特許第5,241,070号に記載されている。アクリジニウム-9-カルボキシレートアリールエステルおよびその使用に関するさらなる詳細は、US2008-0248493に示されている。例えば、上記に記載されているアクリジニウムまたは他の化学発光剤を使用する化学発光アッセイは、Adamczyketal.2006Anal.Chim.Acta5791:61-67に記載されている方法に従って行うことが可能である。あらゆる適切なアッセイフォーマットが使用され得るが、マイクロプレートケミルミノメーターMithrasLB-940,BertholdTechnologiesU.S.A.,LLC,OakRidge,TNは、小容量の複数試料のアッセイを迅速に行うことを可能とする。化学発光アッセイ用の混合物を形成するために試験試料および複数の特異的結合パートナーが添加される順序は重要でない。第一の特異的結合パートナーがアクリジニウム化合物などの化学発光剤で検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第一の特異的結合パートナー-分析物複合体が形成する。あるいは、第二の特異的結合パートナーが使用され、第二の特異的結合パートナーがアクリジニウム化合物などの化学発光剤で検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第一の特異的結合パートナー-分析物-第二の特異的結合パートナー複合体が形成する。標識されていても標識されていなくても、あらゆる非結合の特異的結合パートナーは、洗浄などの本分野において知られているあらゆる技術を使用して、混合物から除去することが可能である。過酸化水素は、上記に記載されているアクリジニウム化合物の添加前、添加と同時または添加後に、混合物中においてその場で生成され、または混合物に提供もしくは供給され得る例えば、過酸化水素を含有することが知られている1つまたは複数の緩衝液または他の溶液である過酸化水素の供給源。過酸化水素は、当業者に明らかであるようないくつかの方法においてその場で生成され得る。少なくとも1つの塩基溶液を試料に同時にまたはその後添加すると、分析物の存在の指標となる検出可能なシグナル、すなわち、化学発光シグナルが発生する。塩基溶液は、少なくとも1つの塩基を含有し、10以上、好ましくは12以上のpHを有する。塩基溶液の例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウムおよび炭酸水素カルシウムが含まれるが、これらに限定されない。試料に添加される塩基溶液の量は、塩基溶液の濃度に依存する。使用される塩基溶液の濃度を基礎として、当業者は、試料に添加する塩基溶液の量を容易に決定することができる。発生した化学発光シグナルは、当業者に知られている通常の技術を使用して検出することが可能である。発生したシグナルの強度を基礎として、試料中の分析物の量を定量することが可能である。具体的には、試料中の分析物の量は、発生したシグナルの強度に比例する。存在する分析物の量は、発生した光の量を分析物の標準曲線と比較するまたは基準標準物質と比較することによって定量することが可能である。標準曲線は、既知の濃度の分析物の段階希釈物または溶液を使用して、質量分析、重量測定法および本分野において公知である他の技術によって生成することが可能である。化学発光剤としてのアクリジニウム化合物の使用を強調して上記に記載したが、当業者は、この記載を他の化学発光剤の使用に容易に適合させることができる。分析物イムノアッセイは、サンドイッチフォーマットなど但し、これらに限定されない。、本分野において知られているあらゆるフォーマットを使用して一般に行うことが可能である。具体的には、1つのイムノアッセイフォーマットにおいて、少なくとも2つの抗体が、試料中のヒト分析物などの分析物またはその断片を分離および定量するために使用される。より具体的には、少なくとも2つの抗体は、分析物またはその断片上の異なるエピトープに結合して、サンドイッチと呼ばれる免疫複合体を形成する。一般に、イムノアッセイにおいて、1つまたは複数の抗体は、試験試料中の分析物またはその断片を捕捉するために使用することが可能でありこれらの抗体は1つまたは複数の捕捉抗体と頻繁に呼ばれる。、1つまたは複数の抗体は、検出可能なすなわち、定量可能な標識をサンドイッチに結合させるために使用することが可能であるこれらの抗体は、1つまたは複数の検出抗体、1つまたは複数の連結体と頻繁に呼ばれる。。したがって、サンドイッチイムノアッセイフォーマットの状況において、本明細書に記載されているDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片は、捕捉抗体、検出抗体または両方として使用することが可能である。例えば、分析物またはその断片上の第一のエピトープに結合することができるドメインを有する1つのDVD-Igは、捕捉抗体として使用することが可能であり、および/または分析物またはその断片上の第二のエピトープに結合することができるドメインを有する別のDVD-Igは、検出抗体として使用することが可能である。この関連で、分析物またはその断片上の第一のエピトープに結合することができる第一のドメインおよび分析物またはその断片上の第二のエピトープに結合することができる第二のドメインを有するDVD-Igは、検出抗体および/または捕捉抗体として使用することが可能である。あるいは、第一の分析物またはその断片上のエピトープに結合することができる第一のドメインおよび第二の分析物またはその断片上のエピトープに結合することができる第二のドメインを有する1つのDVD-Igは、捕捉抗体および/または2つまたはそれ以上の分析物を検出し、場合によって定量する検出抗体として使用することが可能である。単量体の形態およびホモマーまたはヘテロマ-であり得る二量体/多量体の形態など、分析物が2つ以上の形態で試料中に存在する可能性がある場合、単量体の形態でのみ曝露されるエピトープに結合することができるドメインを有する1つのDVD-Igおよび二量体/多量体の形態の異なる部分でエピトープに結合することができるドメインを有する別のDVD-Igは、捕捉抗体および/または検出抗体として使用することが可能であり、それによって、異なる形態の所与の分析物の検出および場合による定量化を可能にする。さらに、単一のDVD-Ig内でおよび/またはDVD-Ig間で親和性に相違があるDVD-Igを使用することは、結合力の利点をもたらし得る。本明細書に記載されているイムノアッセイの状況において、DVD-Igの構造内に1つまたは複数のリンカーを組み込むことが一般に助けになりまたは所望され得る。存在する場合、最適には、リンカーは、内部ドメインによるエピトープの結合ならびに外部ドメインによる別のエピトープの結合を可能にするために十分な長さおよび構造的柔軟性を有するべきである。この関連で、DVD-Igが2つの異なる分析物と結合することができ、一方の分析物が他方より大きい場合、大きい方の分析物が外部ドメインによって結合されることが望ましい。一般的に言うと、分析物またはその断片について試験される例えば、含有することが疑われる試料は、少なくとも1つの捕捉抗体または複数の抗体および少なくとも1つの検出抗体例えば、捕捉および/または検出抗体が複数の抗体を含む場合のように、第二の検出抗体または第三の検出抗体またはさらに連続した番号の抗体であり得ると、同時にまたは順次あらゆる順序で接触させることが可能である。例えば、試験試料は、第一に少なくとも1つの捕捉抗体と接触させ、次いで順次少なくとも1つの検出抗体と接触させることが可能である。あるいは、試験試料は、第一に少なくとも1つの検出抗体と接触させ、次いで順次少なくとも1つの捕捉抗体と接触させることが可能である。さらに別の代替法において、試験試料は、捕捉抗体および検出抗体と同時に接触させることが可能である。サンドイッチアッセイフォーマットにおいて、分析物またはその断片を含有することが疑われる試料は、第一の抗体/分析物複合体の形成を可能にする条件下で、少なくとも1つの第一の捕捉抗体と第一に接触させる。2つ以上の捕捉抗体が使用される場合、2つまたはそれ以上の捕捉抗体を含む第一の捕捉抗体/分析物複合体が形成される。サンドイッチアッセイにおいて、抗体、すなわち、好ましくは、少なくとも1つの捕捉抗体は、試験試料中で予想される分析物またはその断片の最大量より過剰なモル量で使用される。例えば、緩衝液例えば微粒子コーティング緩衝液mL当たり約5μgから約1mgの抗体が使用され得る。1つだけの抗体による結合が必要とされるため、小さな分析物を測定するためにしばしば使用される競合阻害イムノアッセイは、順次的および古典的フォーマットを含む。順次的競合阻害イムノアッセイにおいて、目的の分析物に対する捕捉抗体は、マイクロタイタープレートのウェルまたは他の固体支持体上に被覆される。目的の分析物を含有する試料がウェルに添加される場合、目的の分析物は捕捉抗体に結合する。洗浄後、既知の量の標識された例えば、ビオチンまたは西洋ワサビペルオキシダーゼHRP分析物がウェルに添加される。酵素標識の基質は、シグナルを発生させることが必要である。HRPに適した基質の例は、3,3’,5,5’-テトラメチルベンジジンTMBである。洗浄後、標識された分析物によって発生したシグナルは測定され、試料中の分析物の量に逆比例する。古典的競合阻害イムノアッセイにおいて、目的の分析物に対する抗体は、固体支持体例えば、マイクロタイタープレートのウェル上に被覆される。しかし、順次的競合阻害イムノアッセイと異なり、試料および標識された分析物はウェルに同時に添加される。試料中のあらゆる分析物が、捕捉抗体への結合について、標識された分析物と競合する。洗浄後、標識された分析物によって発生したシグナルは測定され、試料中の分析物の量に逆比例する。場合によって、試験試料を少なくとも1つの捕捉抗体例えば、第一の捕捉抗体と接触させる前に、少なくとも1つの捕捉抗体は、試験試料からの第一の抗体/分析物またはその断片複合体の分離を促進する固体支持体に結合することが可能である。捕捉抗体が結合する基質は、試料からの捕捉抗体-分析物複合体の分離を促進するあらゆる適切な固体支持体または固相であり得る。例として、マイクロタイタープレートなどのプレートのウェル、試験管、多孔性ゲル例えば、シリカゲル、アガロース、デキストランまたはゼラチン、ポリマーフィルム例えば、ポリアクリルアミド、ビーズ例えば、ポリスチレンビーズまたは磁気ビーズ、フィルター/膜のストリップ例えば、ニトロセルロースまたはナイロン、微粒子例えば、ラテックス粒子、磁化可能な微粒子例えば、酸化第二鉄または酸化クロムコアおよびホモまたはヘテロポリマーコートおよび約1-10ミクロンの半径を有する微粒子が含まれる。基質は、抗原に結合するための適切な表面親和性および検出抗体による到達を可能にするために十分な多孔性を有する適切な多孔性材料を含み得る。水和状態のゼラチン性材料が使用され得るが、微小多孔性材料が一般的に好ましい。好ましくは、このような多孔性基質は、厚さが約0.01から約0.5mm、好ましくは約0.1mmのシートの形態である。孔サイズはかなり様々であり得るが、好ましくは孔サイズは約0.025から約15ミクロン、より好ましくは約0.15から約15ミクロンである。このような基質の表面は、抗体と基質の共有結合を引き起こす化学的プロセスによって活性化することが可能である。一般に疎水性の力を介する吸着による、抗原または抗体と基質の不可逆的結合が生じ、あるいは、抗体を基質に共有結合させるために、このような結合が分析物に結合する抗体の能力を干渉しないという条件で、化学的カップリング剤または他の手段を使用することが可能である。あるいは、抗体は、ストレプトアビジン例えば、DYNAL登録商標MagneticBeads,Invitrogen,Carlsbad,CAまたはビオチン例えば、Power-Bind商標-SA-MPストレプトアビジンコーティング微粒子Seradyn,Indianapolis,INを使用するまたは抗種特異的モノクローナル抗体で予めコーティングされている微粒子と結合することが可能である。必要な場合、基質は、抗体上の様々な官能基との反応性を可能にするために誘導体化し得る。このような誘導体化は特定のカップリング剤の使用を必要とし、このカップリング剤の例には、無水マレイン酸、N-ヒドロキシスクシンイミドおよび1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミドが含まれるが、これらに限定されない。所望される場合、各々が複数の分析物に特異的である抗体またはその断片などの1つまたは複数の捕捉試薬は、様々な物理的またはアドレス可能な場所において例えば、バイオチップの配置などにおいて固相に付着させることが可能である例えば、米国特許第6,225,047号;第6,329,209号;および米国特許第5,242,828号;ならびにPCT公開WO99/51773およびWO00/56934を参照。捕捉試薬が固体支持体としての質量分析プローブに付着している場合、プローブに結合した分析物の量は、レーザー脱離イオン化質量分析によって検出することが可能である。あるいは、単一のカラムは、1つまたは複数の捕捉試薬で誘導体化された様々なビーズで充填することが可能であり、それによって単一の場所において分析物を捕捉する抗体誘導体化、ビーズベースの技術、例えばLuminexAustin,TXのxMAP技術を参照。分析物またはその断片についてアッセイされている試験試料が少なくとも1つの捕捉抗体例えば、第一の捕捉抗体と接触した後、第一の抗体または複数の抗体-分析物またはその断片複合体の形成を可能にするために、混合物はインキュベートされる。インキュベーションは、約4.5から約10.0のpH、約2°Cから約45°Cの温度で、少なくとも約1分から約18時間、好ましくは約1から約24分、最も好ましくは約4から約18分間実施することが可能である。本明細書に記載されているイムノアッセイは、1つの工程試験試料、少なくとも1つの捕捉抗体および少なくとも1つの検出抗体がすべて、反応容器に順次または同時に添加されることを意味する。または2つの工程、3つの工程など2つ以上の工程で行うことが可能である。第一のまたは複数の捕捉抗体/分析物またはその断片複合体の形成後、次いで、この複合体は、第一のまたは複数の捕捉抗体/分析物またはその断片/第二の検出抗体複合体の形成を可能にする条件下で、少なくとも1つの検出抗体と接触させる。明瞭にするために第二の抗体例えば、第二の検出抗体と見出しをつけているが、実際、複数の抗体が捕捉および/または検出に使用される場合、少なくとも1つの検出抗体は、イムノアッセイにおいて使用される第二、第三、第四などの抗体であり得る。捕捉抗体/分析物またはその断片複合体が2つ以上の検出抗体と接触する場合、第一のまたは複数の捕捉抗体/分析物またはその断片/複数の検出抗体複合体が形成される。捕捉抗体例えば、第一の捕捉抗体と同様に、少なくとも1つの例えば第二およびあらゆるその後の検出抗体が捕捉抗体/分析物またはその断片複合体と接触する場合、上記に記載されているものと同様の条件下でのインキュベーションの時間が、第一のまたは複数の捕捉抗体/分析物またはその断片/第二のまたは複数の検出抗体複合体の形成に必要である。好ましくは、少なくとも1つの検出抗体は、検出可能な標識を含有する。検出可能な標識は、第一のまたは複数の捕捉抗体/分析物またはその断片/第二のまたは複数の検出抗体複合体の形成前に、形成と同時にまたは形成後に、少なくとも1つの検出抗体例えば、第二の検出抗体に結合することが可能である。本分野において知られているあらゆる検出可能な標識が使用され得るPolakandVanNoorden1997およびHaugland1996の参考文献の論述を含めて上記の論述を参照。検出可能な標識は、直接またはカップリング剤を介して抗体に結合することが可能である。使用することが可能であるカップリング剤の例は、Sigma-Aldrich,St.Louis,MOから市販されているEDAC1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド、塩酸塩である。使用することが可能である他のカップリング剤は、本分野において公知である。検出可能な標識を抗体に結合させる方法は、本分野において公知である。さらに、CPSP-アクリジニウムエステルすなわち、9-[N-トシル-N-3-カルボキシプロピル]-10-3-スルホプロピルアクリジニウムカルボキサミドまたはSPSP-アクリジニウムエステルすなわち、N10-3-スルホプロピル-N-3-スルホプロピル-アクリジニウム-9-カルボキサミドなど、抗体への検出可能な標識のカップリングを促進する末端基をすでに含有する多数の検出可能な標識を購入または合成することが可能である。第一のまたは複数の捕捉抗体/分析物/第二のまたは複数の検出抗体複合体は、標識の定量前に試験試料の残りから分離することが可能であるが、分離する必要はない。例えば、少なくとも1つの捕捉抗体例えば、第一の捕捉抗体は、ウェルまたはビーズなどの固体支持体に結合しており、分離は、固体支持体との接触から試験試料の流体を除去することによって達成することが可能である。あるいは、少なくとも第一の捕捉抗体が固体支持体に結合している場合、これは、第一の複数の抗体/分析物/第二の複数の抗体複合体を形成するために、分析物含有試料および少なくとも1つの第二の検出抗体と同時に接触させることが可能であり、その後、固体支持体との接触から流体試験試料を除去する。少なくとも1つの第一の捕捉抗体が固体支持体に結合していない場合、第一のまたは複数の捕捉抗体/分析物/第二のまたは複数の検出抗体複合体は、標識の量の定量のために試験試料から取り出す必要はない。標識された捕捉抗体/分析物/検出抗体複合体例えば、第一の捕捉抗体/分析物/第二の検出抗体複合体の形成後、本分野において知られている技術を使用して複合体中の標識の量が定量される。例えば、酵素標識が使用される場合、標識された複合体は、色の発生などの定量可能な反応を与える標識の基質と反応する。標識が放射性標識である場合、標識は、シンチレーションカウンターなどの適当な手段を使用して定量される。標識が蛍光標識である場合、標識は、励起波長として知られている1つの色の光で標識を刺激し、刺激に反応して標識によって放出される放出波長として知られている別の光を検出することによって定量される。標識が化学発光標識である場合、標識は、放出された光を視覚的にまたはルミノメーター、X線フィルム、高速写真フィルム、CCDカメラなどを使用することにより検出することによって定量される。複合体中の標識の量が定量化された後、試験試料中の分析物またはその断片の濃度が、既知の濃度の分析物またはその断片の段階希釈物を使用して生成された標準曲線の使用などの適当な手段によって決定される。分析物またはその断片の段階希釈物を使用する以外に、標準曲線は、重量測定法、質量分析および本分野において公知である他の技術によって生成することが可能である。ARCHITECT登録商標分析器を使用する化学発光微粒子アッセイにおいて、連結体希釈物のpHは約6.0/-0.2であるべきであり、微粒子コーティング緩衝液はおよそ室温ですなわち、約17から約27°Cで維持されるべきであり、微粒子コーティング緩衝液のpHは約6.5/-0.2であるべきであり、微粒子希釈物のpHは約7.8/-0.2であるべきである。固体は、好ましくは、約0.15未満、約0.14未満、約0.13未満、約0.12未満または約0.10未満などの約0.11未満などの約0.2未満である。FPIAは、競合的結合イムノアッセイの原理を基礎としている。蛍光標識された化合物は、直線偏光によって励起されると、回転速度と逆比例する偏向の程度を有する蛍光を放出する。蛍光標識されたトレーサー-抗体複合体が直線偏光によって励起されると、蛍光体は光が吸収される時間と光が放出される時間との間の回転が制約されるので、放出された光は高度に偏向したままとなる。遊離トレーサー化合物すなわち、抗体に結合していない化合物が直線偏光によって励起されると、その回転は、競合的結合イムノアッセイにおいて産生される対応するトレーサー-抗体連結体よりはるかに速い。FPIAは、特別な取り扱いおよび廃棄を必要とする放射性物質が存在しないため、RIAより有利である。さらに、FPIAは、容易および迅速に行うことが可能である均一系アッセイである。上記を考慮して、試験試料における分析物またはその断片の存在、量または濃度を決定する方法が提供される。この方法は、ii’抗体、分析物に結合することができる抗体の断片、分析物に結合することができる抗体のバリアント、分析物に結合することができる抗体のバリアントの断片および分析物に結合することができるDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片の少なくとも1つならびにii’少なくとも1つの検出可能な標識を使用し、ii試験試料において分析物またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的な指標として検出可能な標識によって発生したシグナルを、対照または較正物質において分析物またはその断片の存在、量または濃度の直接的または間接的な指標として発生したシグナルと比較することを含むアッセイによって、分析物またはその断片について試験試料をアッセイする工程を含む。較正物質は、場合によって一連の較正物質の一部であり、較正物質の各々は、分析物の濃度によって他の較正物質と異なる。この方法は、i第一の特異的結合パートナー/分析物またはその断片複合体を形成するように、抗体、分析物に結合することができる抗体の断片、分析物に結合することができる抗体のバリアント、分析物に結合することができる抗体のバリアントの断片または分析物に結合することができるDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片を含む分析物またはその断片の少なくとも1つの第一の特異的結合パートナーと試験試料を接触させる工程、ii第一の特異的結合パートナー/分析物またはその断片/第二の特異的結合パートナー複合体を形成するように、検出可能に標識された抗分析物抗体、分析物に結合することができる抗分析物抗体の検出可能に標識された断片、分析物に結合することができる抗分析物抗体の検出可能に標識されたバリアント、分析物に結合することができる抗分析物抗体のバリアントの検出可能に標識された断片または検出可能に標識されたDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片を含む分析物またはその断片の少なくとも1つの第二の特異的結合パートナーと第一の特異的結合パートナー/分析物またはその断片複合体を接触させる工程ならびにiiiiiにおいて形成された第一の特異的結合パートナー/分析物またはその断片/第二の特異的結合パートナー複合体において、検出可能な標識によって発生したシグナルを検出または測定することにより、試験試料における分析物の存在、量または濃度を決定する工程を含み得る。分析物またはその断片の少なくとも1つの第一の特異的結合パートナーおよび/または分析物またはその断片の少なくとも1つの第二の特異的結合パートナーが、本明細書に記載されているDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片である方法が好まれ得る。あるいは、この方法は、抗体、分析物に結合することができる抗体の断片、分析物に結合することができる抗体のバリアント、分析物に結合することができる抗体のバリアントの断片またはDVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片を含む分析物またはその断片の少なくとも1つの第一の特異的結合パートナーと試験試料を接触させる工程ならびに少なくとも1つの第一の特異的結合パートナーへの結合について分析物またはその断片と競合することができ、検出可能に標識された分析物、第一の特異的結合パートナーに結合することができる分析物の検出可能に標識された断片、第一の特異的結合パートナーに結合することができる分析物の検出可能に標識されたバリアント、または第一の特異的結合パートナーに結合することができる分析物のバリアントの検出可能に標識された断片を含む少なくとも1つの第二の特異的結合パートナーと試験試料を同時にまたは順次どちらかの順序で接触させる工程を含み得る。試験試料中に存在するあらゆる分析物またはその断片および少なくとも1つの第二の特異的結合パートナーは、第一の特異的結合パートナー/分析物またはその断片複合体および第一の特異的結合パートナー/第二の特異的結合パートナー複合体をそれぞれ形成するために互いに競合する。この方法は、iiにおいて形成された第一の特異的結合パートナー/第二の特異的結合パートナー複合体において、検出可能な標識によって発生したシグナルを検出または測定することにより、試験試料における分析物の存在、量または濃度を決定する工程をさらに含み、第一の特異的結合パートナー/第二の特異的結合パートナー複合体において、検出可能な標識によって発生したシグナルは、試験試料における分析物の量または濃度に逆比例する。上記の方法は、試験試料が得られた患者の治療的/予防的処置の効力を診断、予後診断または評価する工程をさらに含み得る。この方法が、試験試料が得られた患者の治療的/予防的処置の効力を評価する工程をさらに含む場合、この方法は、効力を改善するために必要な、患者の治療的/予防的処置の改変を加える工程を場合によってさらに含む。この方法は、自動化システムまたは半自動化システムにおける使用に適合させることが可能である。アッセイの方法およびそのためのキットに関して、市販されている抗分析物抗体または文献に記載されている抗分析物を産生する方法を使用することが可能であり得る。様々な抗体の商業的供給者には、SantaCruzBiotechnologyInc.SantaCruz,CA、GenWayBiotech,Inc.SanDiego,CAおよびRDSystemsRDS;Minneapolis,MNが含まれるが、これらに限定されない。一般に、例えば、疾患または疾患のリスクを検出するために、分析物またはその断片について試験試料をアッセイした後に得られた結果をどちらに評価するかに対するベンチマークとして、所定のレベルが使用され得る。一般に、このような比較を行う際に、分析物の存在、量または濃度が疾患、障害もしくは状態の特定の段階もしくはエンドポイントまたは特定の臨床徴候とつながり得るまたは関連し得るように、適当な条件下で十分な回数特定のアッセイを実行することによって、所定のレベルが得られる。典型的に、所定のレベルは、基準対象または対象の集団のアッセイを用いて得られる。測定された分析物は、その断片、その分解産物および/またはその酵素的切断産物を含み得る。特に、疾患の進行および/または治療をモニタリングするために使用される所定のレベルに対して、分析物またはその断片の量または濃度は、変化していない、好ましいまたは好ましいように変化しているまたは好ましくないまたは好ましくないように変化している可能性がある。上昇しているまたは増加しているは、典型的なもしくは正常なレベルもしくは範囲例えば、所定のレベルより高いまたは別の基準レベルもしくは範囲例えば、初期のまたはベースライン試料より高い、試験試料における量または濃度を表す。低下しているまたは低減しているという用語は、典型的なもしくは正常なレベルもしくは範囲例えば、所定のレベルより低いまたは別の基準レベルもしくは範囲例えば、初期のまたはベースライン試料より低い、試験試料における量または濃度を表す。変化しているという用語は、典型的なもしくは正常なレベルもしくは範囲例えば、所定のレベルを超えてまたは別の基準レベルもしくは範囲例えば、初期のまたはベースライン試料を超えて変化している増加しているまたは減少している、試料における量または濃度を表す。分析物の典型的なまたは正常なレベルまたは範囲は、標準的な慣習に従って定義される。分析物のレベルはある場合において非常に低いので、いわゆる変化したレベルまたは変化は、典型的なもしくは正常なレベルもしくは範囲または基準レベルもしくは範囲と比較して実験エラーまたは試料の変動によって説明することが不可能である任意の正味の変化が存在する場合に起こったと見なされ得る。したがって、特定の試料において測定されるレベルは、いわゆる正常な対象から得られた類似の試料において決定されたレベルまたはレベルの範囲と比較される。この文脈において、正常な対象は、例えば検出可能な疾患を有さない個体であり、正常な対照と称されることもある患者または集団は、例えばそれぞれ検出可能な疾患を示さないものである。さらに、分析物がヒト集団の大部分において通常高レベルで見出されない場合を考慮すると、正常な対象は、実質的に検出可能な分析物の量または濃度の増加または上昇を有さない個体と見なすことが可能であり、正常な対照と称されることもある患者または集団は、実質的に検出可能な分析物の量または濃度の増加または上昇を示さないものである。見かけ上正常な対象は、分析物が未だ評価されておらずまたは現在のところ評価中であるものである。分析物のレベルは、分析物が正常で検出不能である例えば、正常レベルが0または正常集団の約25から75パーセンタイルの範囲内であるが、試験試料において検出されるときならびに分析物が試験試料中に正常レベルより高く存在するときに上昇していると言われる。したがって、とりわけ、本開示は、特定の疾患、障害または状態を有するまたは有するリスクがある対象をスクリーニングする方法を提供する。アッセイの方法は、他のマーカーのアッセイなどをも含み得る。したがって、本明細書に記載されている方法は、対象が所与の疾患、障害または状態を有するまたはこれらを発症するリスクがあるか否かを決定するために使用することも可能である。具体的には、このような方法は、a対象から得られた試験試料における分析物またはその断片の濃度または量を例えば、本明細書に記載されている方法または本分野において知られている方法を使用して決定する工程およびb工程aにおいて決定された分析物またはその断片の濃度または量を所定のレベルと比較する工程を含み得、工程aにおいて決定された分析物の濃度または量が所定のレベルに対して好ましい場合、対象は、所与の疾患、障害または状態を有さずまたはこれらのリスクがないと決定される。しかし、工程aにおいて決定された分析物の濃度または量が所定のレベルに対して好ましくない場合、対象は、所与の疾患、障害または状態を有するまたはこれらのリスクがあると決定される。さらに、対象における疾患の進行をモニタリングする方法が本明細書において提供される。最適には、この方法は、a対象から得られた試験試料における分析物の濃度または量を決定する工程、b対象から得られた後の試験試料における分析物の濃度または量を決定する工程およびc工程bにおいて決定された分析物の濃度または量を工程aにおいて決定された分析物の濃度または量と比較する工程を含み、工程bにおいて決定された濃度または量が、工程aにおいて決定された分析物の濃度または量と比較して変化していないまたは好ましくない場合、対象における疾患は継続、進行または悪化していると決定される。比較すると、工程bにおいて決定された分析物の濃度または量が、工程aにおいて決定された分析物の濃度または量と比較して好ましい場合、対象における疾患は消失、退行または改善していると決定される。場合によって、この方法は、工程bにおいて決定された分析物の濃度または量を、例えば、所定のレベルと比較する工程をさらに含む。さらに、場合によって、この方法は、比較が、工程bにおいて決定された分析物の濃度または量が、例えば、所定のレベルに対して好ましくないように変化していることを示す場合、1つまたは複数の医薬組成物で対象をしばらくの間治療する工程を含む。またさらに、この方法は、1つまたは複数の医薬組成物で治療を受けている対象において治療をモニタリングするために使用することが可能である。具体的には、このような方法は、対象が1つまたは複数の医薬組成物を投与される前に対象から得られた第一の試験試料を提供することを含む。次に、対象から得られた第一の試験試料における分析物の濃度または量が例えば、本明細書に記載されている方法または本分野において知られている方法を使用して決定される。分析物の濃度または量が決定された後、場合によって、分析物の濃度または量は、次いで所定のレベルと比較される。第一の試験試料において決定された分析物の濃度または量が所定のレベルより低い場合、対象は1つまたは複数の医薬組成物で治療されない。しかし、第一の試験試料において決定された分析物の濃度または量が所定のレベルより高い場合、対象は1つまたは複数の医薬組成物でしばらくの間治療される。対象が1つまたは複数の医薬組成物で治療される期間は、当業者によって決定され得る例えば、期間は約7日から約2年、好ましくは約14日から約1年であり得る。。1つまたは複数の医薬組成物での治療の経過の間、次いで第二およびその後の試験試料が対象から得られる。試験試料の番号および前記試験試料が対象から得られる時期は重要でない。例えば、第二の試験試料は、対象が1つまたは複数の医薬組成物を最初に投与された7日後に得ることが可能であり、第三の試験試料は、対象が1つまたは複数の医薬組成物を最初に投与された2週間後に得ることが可能であり、第四の試験試料は、対象が1つまたは複数の医薬組成物を最初に投与された3週間後に得ることが可能であり、第五の試験試料は、対象が1つまたは複数の医薬組成物を最初に投与された4週間後に得ることが可能である、などとなる。第二またはその後の試験試料の各々が対象から得られた後、第二およびその後の試験試料において決定される分析物の濃度または量が例えば、本明細書に記載されている方法または本分野において知られている方法を使用して決定される。第二およびその後の試験試料の各々において決定される分析物の濃度または量は、次いで第一の試験試料例えば、所定のレベルと元々場合によって比較された試験試料において決定される分析物の濃度または量と比較される。工程cにおいて決定された分析物の濃度または量が、工程aにおいて決定された分析物の濃度または量と比較して好ましい場合、対象における疾患は消失、退行または改善していると決定され、対象は工程bの1つまたは複数の医薬組成物を投与され続けるべきである。しかし、工程cにおいて決定された濃度または量が、工程aにおいて決定された分析物の濃度または量と比較して変化していないまたは好ましくない場合、対象における疾患は継続、進行または悪化していると決定され、対象は工程bにおいて対象に投与されたより高い濃度の1つもしくはそれ以上の医薬組成物で治療されるべきでありまたは対象は工程bにおいて対象に投与された1つもしくはそれ以上の医薬組成物と異なる1つもしくはそれ以上の医薬組成物で治療されるべきである。具体的には、対象は、対象が前記対象の分析物レベルを減少または低下させるために以前に受けていた1つまたは複数の医薬組成物と異なる1つまたは複数の医薬組成物で治療することが可能である。一般に、反復試験が行われ得るアッセイ例えば、疾患進行および/または治療に対する応答のモニタリングの場合、第二およびその後の試験試料は、第一の試験試料が対象から得られた後のある時期に得られる。具体的には、対象の第二の試験試料は、第一の試験試料が対象から得られた数分、数時間、数日、数週間または数年後に得ることが可能である。例えば、第二の試験試料は、対象から第一の試験試料が得られた約1分、約5分、約10分、約15分、約30分、約45分、約60分、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、約12時間、約13時間、約14時間、約15時間、約16時間、約17時間、約18時間、約19時間、約20時間、約21時間、約22時間、約23時間、約24時間、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、約7日、約2週間、約3週間、約4週間、約5週間、約6週間、約7週間、約8週間、約9週間、約10週間、約11週間、約12週間、約13週間、約14週間、約15週間、約16週間、約17週間、約18週間、約19週間、約20週間、約21週間、約22週間、約23週間、約24週間、約25週間、約26週間、約27週間、約28週間、約29週間、約30週間、約31週間、約32週間、約33週間、約34週間、約35週間、約36週間、約37週間、約38週間、約39週間、約40週間、約41週間、約42週間、約43週間、約44週間、約45週間、約46週間、約47週間、約48週間、約49週間、約50週間、約51週間、約52週間、約1.5年、約2年、約2.5年、約3.0年、約3.5年、約4.0年、約4.5年、約5.0年、約5.5年、約6.0年、約6.5年、約7.0年、約7.5年、約8.0年、約8.5年、約9.0年、約9.5年または約10.0年後の時期に対象から得ることが可能である。疾患の進行をモニタリングするために使用するとき、上記のアッセイは、急性状態に罹患している対象における疾患の進行をモニタリングするために使用することが可能である。救急状態としても知られている急性状態は、例えば心血管系または排泄系が関与する、生命を脅かす急性の疾患または他の救急医学状態を表す。典型的に、救急状態は、病院を基礎とする設備救急処置室、集中治療室、外傷センターまたは他の緊急医療設備が含まれるが、これらに限定されない。における急性の医学的介入または医療補助者もしくは他の分野を基礎とする医療関係者による管理を必要とする状態を表す。救急状態の場合、反復モニタリングが、短い時間枠内で、すなわち、数分、数時間または数日例えば、約1分、約5分、約10分、約15分、約30分、約45分、約60分、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、約12時間、約13時間、約14時間、約15時間、約16時間、約17時間、約18時間、約19時間、約20時間、約21時間、約22時間、約23時間、約24時間、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日または約7日で一般に行われ、同様に最初のアッセイは、短い時間枠内に、例えば、疾患または状態の発症の約数分、数時間または数日以内に一般に行われる。アッセイは、慢性または非急性状態に罹患している対象における疾患の進行をモニタリングするために使用することも可能である。非救急または非急性状態は、例えば心血管系および/または排泄系が関与する、生命を脅かす急性の疾患または他の救急医学状態以外の状態を表す。典型的に、非急性状態は、長期または慢性の持続期間の状態を含む。非救急状態の場合、反復モニタリングが、長い時間枠内で、例えば、数時間、数日、数週間、数カ月または数年例えば、約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、約12時間、約13時間、約14時間、約15時間、約16時間、約17時間、約18時間、約19時間、約20時間、約21時間、約22時間、約23時間、約24時間、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、約7日、約2週間、約3週間、約4週間、約5週間、約6週間、約7週間、約8週間、約9週間、約10週間、約11週間、約12週間、約13週間、約14週間、約15週間、約16週間、約17週間、約18週間、約19週間、約20週間、約21週間、約22週間、約23週間、約24週間、約25週間、約26週間、約27週間、約28週間、約29週間、約30週間、約31週間、約32週間、約33週間、約34週間、約35週間、約36週間、約37週間、約38週間、約39週間、約40週間、約41週間、約42週間、約43週間、約44週間、約45週間、約46週間、約47週間、約48週間、約49週間、約50週間、約51週間、約52週間、約1.5年、約2年、約2.5年、約3.0年、約3.5年、約4.0年、約4.5年、約5.0年、約5.5年、約6.0年、約6.5年、約7.0年、約7.5年、約8.0年、約8.5年、約9.0年、約9.5年または約10.0年で一般に行われ、同様に最初のアッセイは、長い時間枠内に、例えば、疾患または状態の発症の約数時間、数日、数週間、数カ月または数年以内に一般に行われる。さらに、上記のアッセイは、対象から得られた第一の試験試料を使用して行うことが可能であり、第一の試験試料は、尿、血清または血漿などの1つの供給源から得られる。場合によって、上記アッセイは、次いで、対象から得られた第二の試験試料を使用して反復することが可能であり、第二の試験試料は、別の供給源から得られる。例えば、第一の試験試料が尿から得られた場合、第二の試験試料は、血清または血漿から得ることが可能である。第一の試験試料および第二の試験試料を使用してアッセイから得られた結果は、比較することが可能である。この比較は、対象における疾患または状態の状況を評価するために使用することが可能である。さらに、本開示は、所与の疾患、障害または状態に罹患しやすいまたは罹患している対象が治療から利益を得るかどうかを決定する方法にも関する。特に、本開示は、分析物に伴う診断方法および製品に関する。したがって、本明細書に記載されている対象における疾患の治療のモニタリングの方法は、さらに最適には治療の候補を選択または同定することも包含し得る。したがって、特定の実施形態において、本開示は、所与の疾患、障害または状態を有するまたはこれらのリスクがある対象が治療の候補であるかどうかを決定する方法も提供する。一般に、対象は、所与の疾患、障害もしくは状態のいくつかの症状を経験している者または所与の疾患、障害もしくは状態を有するもしくはこれらのリスクがあると現実に診断されている者および/または本明細書に記載されている分析物もしくはその断片の好ましくない濃度もしくは量を示す者である。この方法は、本明細書に記載されているアッセイを場合によって含み、このアッセイにおいて、分析物は、1つもしくはそれ以上の医薬組成物での例えば、特に分析物が関与する作用機序に関連する医薬品での、免疫抑制療法でのもしくは免疫吸収療法による対象の治療の前後で評価され、または分析物はこのような治療後に評価され、分析物の濃度もしくは量が所定のレベルに対して比較される。治療後に観察される分析物の好ましくない濃度または量は、対象が、さらにまたは続けて治療を受けることから利益を得ないことを確認するが、治療後に観察される分析物の好ましい濃度または量は、対象が、さらにまたは続けて治療を受けることから利益を得ることを確認する。この確認は、臨床試験の管理および改善された患者ケアの提供を補助する。本明細書において論じられている所与の疾患、障害または状態を評価するために使用されるときに本明細書における特定の実施形態は有利であるが、このアッセイおよびキットは、他の疾患、障害または状態において分析物を評価するために使用することが可能であることは言うまでもない。アッセイの方法は、他のマーカーのアッセイなどをも含み得る。アッセイの方法は、所与の疾患、障害または状態を軽減する化合物を同定するために使用することも可能である。例えば、分析物を発現する細胞は、候補化合物と接触させることが可能である。化合物と接触した細胞における分析物の発現のレベルは、本明細書に記載されているアッセイの方法を使用して、対照細胞におけるレベルと比較することが可能である。II.キット試験試料における分析物またはその断片の存在、量または濃度について試験試料をアッセイするためのキットも提供される。キットは、分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも1つの成分および分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための説明書を含む。分析物またはその断片について試験試料をアッセイするための少なくとも1つの成分は、場合によって固相に固定化されている抗分析物DVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片を含む組成物を含み得る。キットは、イムノアッセイ、例えば化学発光微粒子イムノアッセイにより分析物について試験試料をアッセイするための少なくとも1つの成分およびイムノアッセイ、例えば化学発光微粒子イムノアッセイにより分析物について試験試料をアッセイするための説明書を含み得る。例えば、キットは、抗分析物モノクローナル/ポリクローナル抗体または分析物に結合することができるその断片、分析物に結合することができるそのバリアントもしくは分析物に結合することができるバリアントの断片または抗分析物DVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片これらのどちらかが検出可能に標識され得る。など、分析物の少なくとも1つの特異的結合パートナーを含み得る。この代わりにまたはこれに加えて、キットは、抗分析物モノクローナル/ポリクローナル抗体または分析物に結合することができるその断片、分析物に結合することができるそのバリアントもしくは分析物に結合することができるバリアントの断片または抗分析物DVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片これらのどちらかが固体支持体上に固定化され得る。への結合について試験試料中のあらゆる分析物と競合することができる、検出可能に標識された分析物または抗分析物モノクローナル/ポリクローナル抗体もしくは抗分析物DVD-Igまたはその断片、バリアントもしくはバリアントの断片に結合することができるその断片を含み得る。キットは、較正物質または対照、例えば単離または精製された分析物を含み得る。キットは、アッセイを行うための少なくとも1つの容器例えば、管、マイクロタイタープレートまたはストリップこれらは、例えば、第一の特異的結合パートナーですでに被覆され得る。および/またはアッセイ緩衝液もしくは洗浄緩衝液などの緩衝液これらのどちらか1つは濃縮溶液として提供することが可能である。、検出可能な標識例えば、酵素標識用の基質溶液または停止溶液を含み得る。好ましくは、キットは、アッセイを行うために必要なすべての成分、すなわち、試薬、標準物質、緩衝液、希釈液などを含む。説明書は、紙の形態またはディスク、CD、DVDなどのコンピュータ可読形態であり得る。抗分析物抗体もしくは抗分析物DVD-Igなどのあらゆる抗体またはトレーサーは、蛍光体、放射性部分、酵素、ビオチン/アビジン標識、発色団、化学発光標識など、本明細書に記載されている検出可能な標識を取り込むことができ、またはキットは検出可能な標識化を実施するための試薬を含み得る。抗体、較正物質および/または対照は、別々の容器に入れて提供することまたは適当なアッセイフォーマットに、例えば、マイクロタイタープレートに予め分注することが可能である。場合によって、キットは品質管理成分例えば、感受性パネル、較正物質および陽性対照を含む。品質管理試薬の調製は本分野において周知であり、様々な免疫診断製品のインサートシートに記載されている。感受性パネルのメンバーは、場合によって、アッセイの性能特性を確立するために使用され、さらに場合によって、イムノアッセイキットの試薬の完全性およびアッセイの標準化の有用な指標となる。キットは、緩衝液、塩、酵素、酵素の補因子、酵素の基質、検出試薬など、診断アッセイを行うまたは品質管理の評価を促進するために必要な他の試薬も場合によって含み得る。試験試料の単離および/または処理用の緩衝液および溶液例えば、前処理試薬などの他の成分もキットに含まれ得る。キットは1つまたは複数の他の対照をさらに含み得る。キットの1つまたは複数の成分は凍結乾燥させることが可能であり、この場合キットは凍結乾燥された成分の再構成に適した試薬をさらに含み得る。場合によって、キットの様々な成分は必要に応じて適切な容器、例えばマイクロタイタープレートに入れて提供される。キットは試料を保持または保存するための容器例えば、尿試料用の容器またはカートリッジをさらに含み得る。適当である場合、キットは、場合によって、反応ベッセル、混合ベッセルおよび試薬または試験試料の調製を促進する他の成分も含有し得る。キットは、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーンなど、試験試料を得ることを補助するための1つまたは複数の器具も含み得る。検出可能な標識が少なくとも1つのアクリジニウム化合物である場合、キットは、少なくとも1つのアクリジニウム-9-カルボキサミド、少なくとも1つのアクリジニウム-9-カルボキシレートアリールエステルまたはこれらのあらゆる組合せを含み得る。検出可能な標識が少なくとも1つのアクリジニウム化合物である場合、キットは、過酸化水素の供給源、例えば緩衝液、溶液および/または少なくとも1つの塩基溶液も含み得る。所望される場合、キットは、磁気粒子、ビーズ、試験管、マイクロタイタープレート、キュベット、膜、足場分子、フィルム、濾紙、ディスクまたはチップなどの固相を含有し得る。III.キットおよび方法の適合本明細書に記載されているイムノアッセイなどのアッセイによって試験試料における分析物の存在、量または濃度を決定するキットまたはその成分ならびに方法は、例えば、米国特許第5,089,424号および第5,006,309号に記載され、例えば、AbbottLaboratoriesAbbottPark,ILによってARCHITECT登録商標として商業的に販売されている固相が微粒子を含むものを含めて様々な自動化システムおよび半自動化システムにおける使用に適合させることが可能である。非自動化システム例えば、ELISAと比較した自動化または半自動化システム間のいくつかの相違には、第一の特異的結合パートナー例えば、抗分析物モノクローナル/ポリクローナル抗体またはその断片、そのバリアントもしくはそのバリアントの断片または抗分析物DVD-Igまたはその断片、そのバリアントもしくはそのバリアントの断片が付着しているどちらにしても、サンドイッチ形成および分析物の反応性が影響され得る基質ならびに捕捉、検出および/または場合によるあらゆる洗浄工程の長さおよびタイミングが含まれる。ELISAなどの非自動化フォーマットは、試料および捕捉試薬との比較的長いインキュベーション時間例えば、約2時間を必要とし得るが、自動化または半自動化フォーマット例えば、ARCHITECT登録商標、AbbottLaboratoriesは、比較的短いインキュベーション時間例えば、ARCHITECT登録商標で約18分を有し得る。同様に、ELISAなどの非自動化フォーマットは、比較的長いインキュベーション時間例えば、約2時間、連結試薬などの検出抗体をインキュベートし得るが、自動化または半自動化フォーマット例えば、ARCHITECT登録商標は、比較的短いインキュベーション時間例えば、ARCHITECT登録商標で約4分を有し得る。AbbottLaboratoriesから入手可能な他のプラットホームには、AxSYM登録商標、IMx登録商標例えば、米国特許第5,294,404号を参照、PRISM登録商標、EIAビーズおよびQuantum商標IIならびに他のプラットホームが含まれるが、これらに限定されない。さらに、アッセイ、キットおよびキットの成分は、他のフォーマットにおいて、例えば、電気化学的または他の携帯もしくはポイントオブケアアッセイシステムで使用することが可能である。本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを行う商業的AbbottPointofCarei-STAT登録商標、AbbottLaboratories電気化学的イムノアッセイシステムに適用可能である。免疫センサーならびに単回使用試験装置におけるこれらの製造および操作方法は、例えば、米国特許第5,063,081号、第7,419,821号、第7,682,833号、第7,723,099号および米国特許公開第2004/0018577号に記載されている。特に、I-STAT登録商標システムへの分析物アッセイの適合に関して、以下の構成が好ましい。金の電流測定用作用電極の対および銀-塩化銀基準電極を有する微細加工シリコンチップが製造される。作用電極の1つで、抗分析物モノクローナル/ポリクローナル抗体またはその断片、そのバリアントもしくはそのバリアントの断片または抗分析物DVD-Igまたはその断片、そのバリアントもしくはそのバリアントの断片が固定化されたポリスチレンビーズ直径0.2mmが、電極上のパターン化されたポリビニルアルコールのポリマーコーティングに付着している。このチップは集まって、イムノアッセイに適した流体工学フォーマットを有するI-STAT登録商標カートリッジになる。カートリッジの試料保持チャンバーの壁の一部に、抗分析物モノクローナル/ポリクローナル抗体または分析物に結合することができるその断片、そのバリアントもしくはそのバリアントの断片または抗分析物DVD-Igまたは分析物に結合することができるその断片、そのバリアントもしくはそのバリアントの断片これらのどちらかが検出可能に標識され得る。など、分析物の特異的結合パートナーを含む層が存在する。p-アミノフェノールリン酸を含む水性試薬がカートリッジの流体ポーチ内にある。操作の際に、分析物を含有することが疑われる試料が試験カートリッジの保持チャンバーに添加され、カートリッジはI-STAT登録商標リーダーに挿入される。分析物の特異的結合パートナーが試料中に溶解した後、カートリッジ内のポンプエレメントが、チップを含有する導管に試料を押し入れる。ここで、これは振動してサンドイッチの形成を促進する。アッセイの最後から2番目の工程において、流体がポーチから押し出され、導管に入ってチップの試料を洗浄し、廃棄チャンバーに入る。アッセイの最後の工程において、アルカリホスファターゼ標識は、p-アミノフェノールリン酸と反応してリン酸基を切断し、遊離したp-アミノフェノールを作用電極において電気化学的に酸化させる。測定された電流を基礎として、リーダーは、埋め込まれたアルゴリズムおよび工場で決定された較正曲線によって、試料における分析物の量を計算することができる。本明細書に記載されている方法およびキットは、イムノアッセイを実施するための他の試薬および方法を必然的に包含することはさらに言うまでもない。例えば、本分野において知られているような様々な緩衝液ならびに/または例えば洗浄に、連結体希釈液、微粒子希釈液および/もしくは較正物質希釈液として使用されるように容易に調製されもしくは最適化され得るような様々な緩衝液が包含される。例示的な連結体希釈液は、特定のキットAbbottLaboratories,AbbottPark,ILにおいて使用され、2-N-モルホリノエタンスルホン酸MES、塩、タンパク質遮断剤、抗微生物剤および洗浄剤を含有するARCHITECT登録商標連結体希釈液である。例示的な較正物質希釈液は、特定のキットAbbottLaboratories,AbbottPark,ILにおいて使用され、MES、他の塩、タンパク質遮断剤および抗微生物剤を含有する緩衝液を含むARCHITECT登録商標ヒト較正物質希釈液である。さらに、2008年12月31日に出願された米国特許出願第61/142,048号に記載されているように、改善されたシグナルの発生は、例えばI-Statカートリッジフォーマットにおいて、シグナル増幅物質としてシグナル抗体に連結された核酸配列を使用して得ることが可能である。実施例1:DVD-Igの設計、構築、および分析実施例1.1:親抗体およびDVD-Igを特定し、特徴付けるために使用させるアッセイ以下のアッセイは、別段の記載がない限り、親抗体およびDVD-Igを特定し、特徴付けるために、実施例全体で使用される。実施例1.1.1:親抗体およびDVD-Igのそれらの複数の標的抗原の結合および親和性を決定するために使用されるアッセイ実施例1.1.1.A:直接結合ELISA所望の標的抗原に結合する抗体をスクリーニングするための酵素免疫吸着法を以下のように行う。高結合ELISAプレートCorningCostar3369,Acton,MAをリン酸緩衝生理食塩水10×PBS,AbbottBioresearchCenter,MediaPrepMPS-073,Worcester,MA中の100μL/ウェルの10μg/mlの所望の標的抗原RDSystems,Minneapolis,MNまたは所望の標的抗原細胞外ドメイン/FC融合タンパク質RDSystems,Minneapolis,MNまたはモノクローナルマウス抗ポリヒスチジン抗体RDSystemsMAB050,Minneapolis,MNとともに一晩4°Cにて被覆する。0.02Tween20を含むPBSを用いてプレートを4回洗浄する。30分間室温にて、300μL/ウェルのブロッキング溶液脱脂粉乳粉末、種々の小売供給業者、PBS中で2に希釈の添加によってプレートをブロックする。ブロッキング後、0.02Tween20を含むPBSを用いてプレートを4回洗浄する。あるいは、ウェルあたり100μLの10μg/mlのヒスチジンHisタグ化された所望の標的抗原RDSystems,Minneapolis,MNが、上記されるようにモノクローナルマウス抗ポリヒスチジン抗体を用いて被覆されたELISAプレートに添加され、1時間室温にてインキュベートされる。0.02Tween20を含むPBSを用いてウェルを4回洗浄する。上記されるブロッキング溶液に希釈された100μLの抗体またはDVD-Ig調製物は、上記されるように調製された所望の標的抗原プレートまたは所望の標的抗原/FC融合プレートまたは抗ポリヒスチジン抗体/Hisタグ化された所望の標的抗原プレートに添加され、1時間室温にてインキュベートされる。0.02Tween20を含むPBSを用いてウェルを4回洗浄する。100μLの10ng/mLのヤギ抗ヒトIgG-FC特異的HRPコンジュゲートされた抗体SouthernBiotech2040-05,Birmingham,ALは、所望の標的抗原プレートまたは抗ポリヒスチジン抗体/ヒスチジンタグ化された所望の標的抗原プレートの各ウェルに添加される。あるいは、100μLの10ng/mLのヤギ抗ヒトIgG-カッパ軽鎖特異的HRPコンジュゲートされた抗体SouthernBiotech2060-05,Birmingham,ALは、所望の標的抗原/FC融合プレートの各ウェルに添加され、1時間室温にてインキュベートされる。0.02Tween20を含むPBSを用いてプレートを4回洗浄する。100μLの改良されたTMB溶液Neogen,Corp.308177,KBlue,Lexington,KYを各ウェルに添加し、10分間室温にてインキュベートする。50μLの1N硫酸の添加により反応を停止する。450nmの波長にて分光光度法的にプレートを読む。実施例1.1.1.B:捕捉ELISA抗ヒトFc抗体PBS中5μg/ml、JacksonImmunoresearch,WestGrove,PAを用いて、一晩4°CにてELISAプレートNunc,MaxiSorp,Rochester,NYをインキュベートする。洗浄緩衝液0.05Tween20を含むPBSにおいてプレートを3回洗浄し、ブロッキング緩衝液1BSAを含むPBS中で1時間25°Cにてブロッキングする。ウェルを3回洗浄し、0.1BSAを含むPBS中の連続希釈した各抗体またはDVD-Igをウェルに添加し、25°Cにて1時間インキュベートする。ウェルを3回洗浄し、ビオチン化抗原2nMをプレートに添加し、1時間25°Cにてインキュベートする。ウェルを3回洗浄し、ストレプトアビジン-HRPKPL474-3000,Gaithersburg,MDとともに1時間25°Cにてインキュベートする。ウェルを3回洗浄し、ウェルあたり100μlのULTRA-TMBELISAPierce,Rockford,ILを添加する。発色後、1NのHClを用いて反応を停止させ、450nMの吸光度を測定する。実施例1.1.1.C:BIACORE技術を用いた親和性測定BIACORE法:BIACOREアッセイBiacore,Inc,Piscataway,NJは、結合on-rate定数および解離off-rate定数の反応速度測定を用いて抗体またはDVD-Igの親和性を測定する。標的抗原例えば、精製された組み換え標的抗原への抗体またはDVD-Igの結合は、BIAcore登録商標T-100、T-200、または3000装置GE,NewJerseyにより、25°Cで稼働しているHBS-EP10mMのHEPES[pH7.4]、150mMのNaCl、3mMのEDTA、および0.005界面活性剤P20を用いた表面プラズモン共鳴に基づく測定によって決定される。すべての化学物質は、GENewJerseyから入手し、または他には本明細書に記載される別の供給元から入手した。例えば、10mM酢酸ナトリウムpH4.5中に希釈された、約5000RUのヤギ抗ヒトIgG、Fcγ、断片特異的なポリクローナル抗体PierceBiotechnologyInc,Rockford,ILは、製造業者の説明書に従って標準的なアミンカップリングキットおよび25μg/mlでの操作を用いてCM5試験等級のバイオセンサーチップ全体に直接固定化された。バイオセンサー表面上の未反応部分をエタノールアミンを用いてブロックした。フローセル2、3、および4において修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として使用した。フローセル1におけるヤギ抗ヒトIgGを用いて修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を参照表面として使用した。反応速度分析のために、Biaevaluation4.0.1ソフトウェアを用いて、8個すべての注入物の結合および解離相に対して、1:1ラングミュアLangmuir結合モデルから誘導された速度方程式を同時にフィッティングさせたグローバルフィット分析を使用。ヤギ抗ヒトIgG特異的反応表面の全体で捕捉するために、HEPES緩衝生理食塩水中に、精製された抗体またはDVD-Igを希釈した。リガンドとして捕捉されるべき抗体またはDVD-Ig1μg/mlを50μl/分の流速で反応マトリックス全体に注入した。結合速度定数および解離結合定数のkonM-1s-1およびkoffs-1は、50μl/分の連続的流速下で決定された。2-200nMの範囲の異なる抗原濃度にて速度論結合測定を行うことによって速度定数を導いた。マウス抗FLAGバイオセンサーチップ上で捕捉されたFLAGタグ化されたTWEAKへの抗体/DVD-Igの結合によって、抗TWEAK抗体およびDVD-Igを評価した。試験されたDVD-Ig/抗体の濃度は、100-0.01nMの間であった。次に、以下の式:KD=koff/konによって、速度論的速度定数から抗体またはDVD-Igおよび標的抗原間の反応の平衡解離定数Mを計算した。結合を時間の関数として記録し、速度論的速度定数を計算した。このアッセイでは、106M-1s-1程度の速い速度定数、および10-6s-1程度の遅い解離定数を測定することができる。Biacore技術によって特徴付けられたすべてのDVD-Ig構築物の結合は維持され、それは親抗体の結合に匹敵していた。N末端可変ドメインは、親抗体と同じ高親和性で結合した。実施例1.1.2:親抗体およびDVD-Igの機能的活性を決定するために使用されるアッセイ実施例1.1.2.A:サイトカインバイオアッセイ標的サイトカインまたは増殖因子生物活性を阻害または中和する抗サイトカインまたは増殖抑制因子親抗体または抗サイトカインまたは増殖抑制因子配列を含むDVD-Igの能力は、抗体またはDVD-Igの阻害可能性を決定することにより分析される。例えば、IL-4を媒介したIgE産生を阻害する抗IL-4抗体の能力を用いることができる。例えば、ヒト未感作B細胞をそれぞれ末梢血から単離し、フィコール-パック密度遠心分離によって軟膜を単離し、その後、ヒトsIgDFITC標識されたヤギFab2抗体に特異的なMACSビーズMiltenyiBiotec、BergischGladbach、Germany、続く抗FITCMACSビーズを用いた磁気分離により単離した。磁気的に分類された未感作B細胞は、XV15中に3×105個の細胞/mlに調整され、プレートの中心に6×6アレイの96ウェルプレートのウェルあたり100μlを播種し、37°Cにて10日間の培養中、5CO2の存在下、ウェルを満たしたPBSによって取り囲まれた。試験されるべき抗体ごとに1プレートを各々調製し、誘導していない対照および誘導される対照、ならびに7μg/mlから開始し、50μlの4倍濃縮の前希釈に添加された29ng/mlの最終濃度まで3倍希釈して行う抗体力価の5点測定の繰り返しの各3ウェルからなっている。IgE産生を誘導するために、各50μlの20ng/mlのrhIL-4最終濃度0.5μg/mlの抗CD40モノクローナル抗体Novartis、Base、Switzerlandを各ウェルに添加し、標準のサンドイッチELISA法によって培養期間の終わりにIgE濃度を決定した。実施例1.1.2.B:サイトカイン放出アッセイサイトカイン放出を引き起こす親抗体またはDVD-Igの能力を分析する。3人の健常ドナーから静脈穿刺によってバキュテナー管に末梢血を採取する。全血をRPMI-1640培地を用いて1:5に希釈し、24ウェル組織培養プレートに0.5mL/ウェルで播種する。抗サイトカイン抗体例えば、抗IL-4をRPMI-1640中に希釈し、0.5mL/ウェルでプレートに入れ、最終濃度を200、100、50、10、および1μg/mLにする。培養プレート中の全血の最終希釈は1:10である。LPSおよびPHAを添加し、サイトカイン放出の正の対照として、2μg/mLおよび5μg/mLの最終濃度にてウェルを分ける。ポリクローナルヒトIgGを負の対照抗体として用いる。実験は2点測定で行う。37°C、5CO2にてプレートをインキュベートする。24時間後、ウェルの内容物を試験管に移し、5分間、1200rpmにて遠心する。細胞不含の上清を回収し、サイトカインアッセイ用に凍結する。プレートおよびこれらの管に残った細胞を0.5mLの溶解液で溶解し、-20°Cに置き、融解する。0.5mLの培地を加え体積を細胞不含の上清試料と同じレベルにするため、細胞調製物を回収し、サイトカインアッセイ用に凍結する。細胞不含の上清および細胞溶解物は、ELISAによって、サイトカインレベルについて、例えば、IL-8、IL-6、IL-1β、IL-1RA、またはTNF-αのレベルについてアッセイされる。実施例1.1.2.C:サイトカイン交差反応性試験他のサイトカインと交差反応する、目的複数のサイトカインに対する抗サイトカイン親抗体またはDVD-Igの能力を分析する。親抗体またはDVD-IgをBIAcoreバイオセンサーマトリックスに固定化する。抗ヒトFcmAbは、最初に、デキストランマトリックス上のカルボキシル基を100mMのN-ヒドロキシスクシンイミドNHSおよび400mMのN-エチル-N’-3-ジメチルアミノプロピル-カルボジイミド塩酸塩EDCを用いて活性化することによって、デキストランマトリックスに遊離アミン基を介して共有結合される。酢酸ナトリウムpH4.5に希釈された、25μg/mLの濃度の各抗体またはDVD-Ig調製物の約50μLを、活性化されたバイオセンサーの全体に注入し、タンパク質の遊離アミンを、活性化されたカルボキシル基に直接結合させる。典型的には、5000共鳴単位RUを固定化する。未反応のマトリックスEDC-エステルは、1Mエタノールアミンの注入により不活性化される。第二のフローセルは、標準のアミンカップリングキットを用いて、ヒトIgG1/Kを固定化することによって、基準標準物質として調製される。SPR測定はCMバイオセンサーチップを用いて行われる。バイオセンサー表面上で分析されるべきすべての抗原は、0.01のP20を含むHBS-EP泳動緩衝液中に希釈される。サイトカイン結合特異性を調べるために、目的の過剰のサイトカイン100nM、例えば、可溶性組み換えヒトは、抗サイトカイン親抗体またはDVD-Igを固定化したバイオセンサー表面の全体に注入される5分の接触時間。目的のサイトカインの注入前および直後に、HBS-EP緩衝液を単独で各フローセルに流す。基準と、サイトカイン注入の完了後の約30秒に対応する時点との間のシグナルの正味の差異は、最終の結合値を表すために採用される。再度、共鳴を共鳴単位で測定する。結合事象が観察される場合には、次の試料の注入前に10mMのHClを用いてバイオセンサーマトリックスを再生し、それ以外は、泳動緩衝液をマトリックスの全体に注入した。また、ヒトサイトカイン例えば、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-22、IL-23、IL-27、TNF-α、TNF-βおよびIFN-γは、任意の非特異的な結合バックグラウンドを記録するために、固定化されたマウスIgG1/K基準表面の全体に同時に注入される。基準および反応表面を調製することによって、BIAcoreは、屈折率変化および注入ノイズの大部分を取り除くために、反応表面データから基準表面データを自動的に差し引くことができる。このようにして、抗サイトカイン抗体またはDVD-Igの結合反応に起因する真の結合応答を解明することができる。固定化された抗サイトカイン抗体の全体に目的のサイトカインを注入した場合、有意な結合が観察される。10mMのHClによる再生は、すべての非共有的に結合したタンパク質を完全に除去する。センサーグラムの試験は、可溶性サイトカインに結合する、固定化された抗サイトカイン抗体またはDVD-Igが強力であり、強固であることを示す。目的のサイトカインを用いた場合に予想される結果を確認した後、残りの組み換えヒトサイトカイン集団は、各抗体またはDVD-Igについて別々に試験される。各注入サイクルについてサイトカインに結合または未結合の抗サイトカイン抗体またはDVD-Igの量を記録する。3つの独立した実験からの結果を用いて、各抗体またはDVD-Igの特異性プロファイルを決定する。目的のサイトカインに結合することが予想される抗体またはDVD-Ig、および任意の他のサイトカインに結合しない抗体またはDVD-Igを選択する。実施例1.1.2.D:組織交差反応性組織交差反応性試験は3段階で行い、第一段階においては32組織の連結切片が含まれ、第二段階においては最大38組織が含まれ、第三段階においては以下に記載される3名の無関係な成人由来の追加組織が含まれる。試験は、典型的には、2つの投薬レベルにて行われる。段階1:ヒト組織剖検または生検で得られた1名のヒトドナー由来の32組織典型的には:副腎、消化管、前立腺、膀胱、心臓、骨格筋、血球、腎臓、皮膚、骨髄、肝臓、脊髄、乳房、肺、脾臓、小脳、リンパ節、睾丸、大脳皮質、卵巣、胸腺、結腸、膵臓、甲状腺、内皮、副甲状腺、尿管、眼、下垂体、子宮、卵管および胎盤の連結切片約5μmを固定し、オブジェクトグラス上で乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色は、アビジンビオチン系を用いて行われる。段階2:ヒト組織剖検または生検で得られた3人の無関係な成人由来の38組織副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、頸部、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳房乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、睾丸、胸腺、甲状腺、扁桃腺、尿管、膀胱、および子宮を含むの連結切片約5μmを固定し、オブジェクトグラス上で乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色は、アビジン-ビオチン系を用いて行われる。段階3:カニクイザル組織剖検または生検で得られた3匹の無関係な成熟サル由来の38組織副腎、血液、血管、骨髄、小脳、大脳、頸部、食道、眼、心臓、腎臓、大腸、肝臓、肺、リンパ節、乳房乳腺、卵巣、卵管、膵臓、副甲状腺、末梢神経、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、横紋筋、睾丸、胸腺、甲状腺、扁桃腺、尿管、膀胱、および子宮を含むの連結切片約5μmを固定し、オブジェクトグラス上で乾燥させる。組織切片のペルオキシダーゼ染色は、アビジン-ビオチン系を用いて行われる。抗体またはDVD-Igを二次ビオチン化抗ヒトIgGとともにインキュベートし、免疫複合体となる。最終濃度が2および10μg/mLの抗体またはDVD-Igである免疫複合体は、オブジェクトグラス上の組織切片に添加され、次に、組織切片を30分間、アビジン-ビオチンペルオキシダーゼキットを用いて反応させる。その後、ペルオキシダーゼ反応の基質であるDAB3,3’-ジアミノベンジジンを4分間、組織染色に適用する。抗原-セファロースビーズを正の対照組織切片として使用する。標的抗原およびヒト血清ブロッキング試験は追加対照としての役割を果たす。最終濃度が2および10μg/mLの抗体またはDVD-Igである免疫複合体は、標的抗原最終濃度100μg/mlまたはヒト血清最終濃度10とともに30分間プレインキュベートされ、次に、オブジェクトグラス上の組織切片に添加され、その後、組織切片は、30分間、アビジン-ビオチン-ペルオキシダーゼキットを用いて反応させる。その後、ペルオキシダーゼ反応の基質であるDAB3,3’-ジアミノベンジジンを4分間、組織染色に適用する。任意の特異的染色は、問題となっている標的抗原の既知の発現に基づいて、予想される反応性例えば、抗原発現と一致するまたは予想されない反応性のいずれかであると判断される。特異的であると判断された任意の染色は、強度および頻度について記録される。段階2ヒト組織と段階3カニクイザル組織との間の組織染色は、類似であるまたは異なっていると判断される。実施例1.1.2.E:muTNFαの中和L929細胞を半コンフルエントな密度まで増殖させ、0.25トリプシンGibco25300を用いて回収した。PBSを用いて細胞を洗浄し、カウントし、2μg/mLアクチノマイシンDを含むアッセイ培地中で0.5E6細胞/mLで再懸濁した。100μLの体積および5E4細胞/ウェルで、96ウェルプレートCostar3599に細胞を播種した。アッセイ培地中でDVD-Ig商標および対照IgGを4倍濃度に希釈し、連続的な1:4希釈物を調製した。muTNFαをアッセイ培地中で400pg/mLに希釈した。1:2希釈スキームにおいて、抗体試料200μLをmuTNFα200μLに添加し、0.5時間室温にてインキュベートした。100pg/mLのmuTNFαおよび25nM-0.00014nMのDVD-Ig商標の最終濃度に対して、DVD-Ig商標/muTNFα溶液を100μLで播種細胞に添加した。20時間37°C、5CO2にてプレートをインキュベートした。生存率を定量するため、ウェルから100μLを取り除き、10μLのWST-1試薬Rocheカタログ11644807001を添加した。アッセイ条件下で3.5時間、プレートをインキュベートした。Spectromax190ELISAプレートリーダー上でOD420-600nmにてプレートを読んだ。いくつかのアッセイからの平均EC50を表5に含める。L929アッセイによって特徴付けられたすべてのDVD-Ig構築物の中和は維持され、それは親抗体の中和に匹敵していた。N末端可変ドメインは中和され、親抗体と同じ潜在力を有していた。実施例1.1.2.F:huTWEAKの中和A375細胞を半コンフルエントな密度まで増殖させ、0.05トリプシンGibco25300を用いて回収した。PBSを用いて細胞を洗浄し、カウントし、アッセイ培地中で500E5細胞/mLで再懸濁した。100μLの体積および5E4細胞/ウェルで、96ウェルプレートCostar3599に細胞を播種した。アッセイ培地中で抗体、DVD-Ig商標および対照IgGを6倍濃度に希釈し、連続的な1:3希釈物を調製した。huTWEAKをアッセイ培地中で600ng/mLに希釈した。1:2希釈スキームにおいて、抗体試料75μLをhuTNFα75μLに添加し、0.5時間室温にてインキュベートした。100ng/mLのhuTWEAKの最終濃度に対して、抗体またはDVD-Ig商標/huTWEAK溶液を50μLで播種細胞に添加した。20時間37°C、5CO2にてプレートをインキュベートした。培地上清を回収した。TWEAK中和レベルは、市販のMesoScaleDiscoveryキットを用いて、製造業者の説明書に従って、上清中のIL-8量を決定することによって測定された。IC50値は、抗体またはDVD-Ig商標濃度の対数対IL-8量の可変勾配フィットを用いて得られた。TWEAKアッセイによって特徴付けられたすべてのDVD-Ig構築物の中和は維持され、それは親抗体の中和に匹敵していた。N末端可変ドメインは中和され、親抗体と同じ潜在力を有していた。実施例1.1.2.G:インビトロにおける親またはDVD-Ig抗体の殺腫瘍効果殺腫瘍活性について、腫瘍細胞上の標的抗原に結合する親抗体またはDVD-Igを分析することができる。要約すると、親抗体またはDVD-IgをD-PBS-BSA0.1BSAを含むダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水に希釈し、最終濃度を0.01μg/mL-100μg/mL200μLにしてヒト腫瘍細胞に添加する。37°Cにて、加湿された5CO2雰囲気において3日間、プレートをインキュベートする。各ウェル中の生細胞数は、製造業者の使用説明書Promega,Madison,WIに従って、MTS試薬を用いて定量され、腫瘍増殖阻害の割合を決定する。抗体処理していないウェルは0阻害の対照として用いられ、細胞を含まないウェルは100阻害を示すものと考えられる。アポトーシスの評価について、カスパーゼ-3の活性化が以下のプロトコールによって決定される:96ウェルプレート中の抗体処理された細胞を20分間撹拌しながら室温にて、120μlの1×溶解緩衝液1.67mMのHepes、pH7.4、7mMのKCl、0.83mMのMgCl2、0.11mMのEDTA、0.11mMのEGTA、0.57のCHAPS、1mMのDTT、1×プロテアーゼインヒビターカクテルタブレット;EDTA不含;RochePharmaceuticals,Nutley,NJに溶解させる。細胞溶解後、80μlのカスパーゼ-3の反応緩衝液48mMのHepes、pH7.5、252mMスクロース、0.1CHAPS、4mMのDTT、および20μMのAc-DEVD-AMC基質;BiomolResearchLabs,Inc.,PlymouthMeeting,PAを添加し、プレートを2時間37°Cでインキュベートする。以下の設定:励起=360/40、発光=460/40を用いて、1420VICTORMultilabelCounterPerkinElmerLifeSciences,DownersGrove,IL上でプレートを読む。アイソタイプ抗体の対照を用いて処理された細胞と比較した、抗体を用いて処理された細胞の蛍光ユニットの増加は、アポトーシスを示す。実施例1.1.2.H:フローサイトメトリーによって評価されるヒト腫瘍細胞株の表面への親受容体抗体およびDVD-Ig構築物の結合細胞表面受容体を過剰発現している安定な細胞株またはヒト腫瘍細胞株を組織培養フラスコから回収し、1ウシ胎児血清を含むダルベッコリン酸緩衝生理食塩水DPBSDPBS/FCSに再懸濁させる。1-5×105個の細胞は、DPBS/FCS中の100μLの抗体またはDVD-Ig10μg/mLとともに30-60分間、氷上でインキュベートされる。細胞を2回洗浄し、50μlのヤギ抗ヒトIgG-フィコエリトリンDPBS/BSA中に1:50に希釈SouthernBiotechAssociates,Birmingham,Alcat2040-09を添加する。氷上で30-45分のインキュベーション後、細胞を2回洗浄し、DPBS/FCS中の1ホルムアルデヒド125μL/ウェル中に再懸濁する。BectonDickinsonLSRIIBectonDickinson,SanJose,CAを用いて蛍光を測定した。実施例1.2:目的のヒト抗原に対する親モノクローナル抗体の生成目的のヒト抗原およびそのバリアントに結合し、中和することができる親マウスmAbを次のように得る。実施例1.2.A:目的のヒト抗原を用いたマウスの免疫化完全フロイントアジュバントまたはImmunoeasyアジュバントQiagen,Valencia,CAと混合された組み換え精製ヒト抗原例えば、TWEAKの20μgを5匹の6-8週齢のBalb/C、5匹のC57B/6マウス、および5匹のAJマウスに1日目に皮下注射する。24日目、38日目、および49日目に、不完全フロイントアジュバントまたはImmunoeasyアジュバントと混合された組み換え精製ヒト抗原バリアントの20μgを同じマウスに皮下注射する。84日目または112日目または144日目に、目的の組み換え精製ヒト抗原の1μgをマウスに静脈内注射する。実施例1.2.B:ハイブリドーマの生成実施例1.2.Aに記載された免疫されたマウスから得た脾細胞は、ハイブリドーマを生成するために、Kohler,G.andMilstein1975Nature,256:495に記載の確立された方法に従って、SP2/O-Ag-14細胞と5:1の比で融合される。融合生成物は、ウェルあたり2.5×106個の脾細胞の密度で96ウェルプレート内のアザセリンおよびヒポキサンチンを含む選択培地に置かれる。融合の7-10日後、肉眼で見られるハイブリドーマのコロニーを観察する。ハイブリドーマのコロニーを含む各ウェルからの上清は、目的の抗原に対する抗体実施例1.1.1.Aに記載されるの存在について、ELISAによって試験される。次に、抗原特異的活性を示す上清は、活性実施例1.1.2のアッセイに記載される、例えば、実施例1.1.2.Iに記載されるバイオアッセイなどのバイオアッセイにおいて目的の抗原を中和する能力について試験される。実施例1.2.C:目的のヒト標的抗原に対する親モノクローナル抗体の同定および特徴付け実施例1.2.C.1:活性を中和する親モノクローナル抗体の分析ハイブリドーマ上清は、実施例1.2.Aおよび1.2.Bに従って生成された、目的の抗原に結合し、さらに、目的の抗原のバリアント抗原バリアントに結合することができる親抗体の存在についてアッセイされる。次に、両方のアッセイに陽性である抗体を含む上清は、それらの抗原中和効力について、例えば、実施例1.1.2.Iのサイトカインバイオアッセイにおいて試験される。1000pM未満、ある実施形態では100pM未満のバイオアッセイにおけるIC50値を有する抗体を生成するハイブリドーマをスケールアップし、限界希釈によってクローニングする。ハイブリドーマ細胞は、10の低IgGウシ胎児血清HycloneSH30151,Logan,UTを含む培地に増殖させる。平均して250mLの各ハイブリドーマ上清クローン集団由来を回収し、Harlow,E.andLane,D.1988Antibodies:ALaboratoryManualに記載されるようにプロテインAアフィニティークロマトグラフィーによって濃縮および精製する。mAbの標的抗原の活性を阻害する、精製されたmAbの能力は、例えば、実施例1.1.2.Iに記載されるサイトカインバイオアッセイを用いて決定される。実施例1.2.C.2:目的のカニクイザル標的抗原に対する親モノクローナル抗体交差反応性の分析本明細書に記載されている選択されたmAbが目的のカニクイザル抗原を認識するかどうかを決定するために、組み換えカニクイザル標的抗原を用いて、BIACORE分析を本明細書に記載される実施例1.1.1.Gように実施する。さらにまた、サイトカインバイオアッセイ実施例1.1.2.Iにおいて、目的の組み換えカニクイザル抗原に対するmAbの中和効力を測定することができる。良好なサル交差反応性を有するmAbある実施形態では、ヒト抗原に対する5倍以内の反応性が将来の特徴付けのために選択される。実施例1.2.D:各マウス抗ヒトモノクローナル抗体についての可変領域のアミノ酸配列の決定組み換え抗ヒトマウスmAbのcDNAの単離、発現および特徴付けは以下のように行われる。各アミノ酸配列の決定について、約1×106個のハイブリドーマ細胞を遠心分離によって単離し、製造業者の使用説明書に従って処理し、トリゾールTrizolGibcoBRL/Invitrogen,Carlsbad,CAを用いて総RNAを単離する。総RNAは、製造業者の使用説明書を通じて、SuperScriptFirst-StrandSynthesisSystemInvitrogen,Carlsbad,CAを用いて第一鎖DNA合成に供される。オリゴdTを用いて、ポリARNAについて選択するために第一鎖合成をプライムする。次に、第一鎖cDNA産物は、マウスの免疫グロブリン可変領域の増幅用に設計されたプライマーIg-プライマーセット、Novagen,Madison,WIを用いたPCRによって増幅される。PCR産物をアガロースゲル上で分離し、切り出し、精製し、次に、TOPOクローニングキットを用いてpCR2.1-TOPOベクターインビトロゲンInvitrogen、カリフォルニア州カールスバッドにサブクローニングし、およびTOP10の化学的にコンピテントな大腸菌E.coliInvitrogen,Carlsbad,CAに形質転換される。コロニーPCRは、挿入物を含むクローンを特定するために形質転換体に対して実施される。プラスミドDNAは、QIAprepミニプレップキットQiagen,Valencia,CAを用いて挿入物を含むクローンから単離される。プラスミド中の挿入物は、両鎖について配列決定され、M13フォワードおよびM13リバースプライマーFermentasLifeSciences,HanoverMDを用いて、可変重鎖または可変軽鎖のDNA配列を決定する。mAbの可変重鎖および可変軽鎖の配列を特定する。ある実施形態では、次の工程の進行ヒト化のためのリードmAb集団についての選択基準は以下を含む:抗体は、いずれのN結合のグリコシル化部位NXSも含有しないが、CH2における標準のものを除く。抗体は、すべての抗体における通常のシステインに加えて、いずれの追加のシステインを含有しない。抗体配列は、VHおよびVLについて最も近いヒト生殖細胞系配列と整列され、いずれの通常でないアミノ酸は、他の天然のヒト抗体における出現について照合される。N末端のグルタミンQは、抗体の活性に影響を及ぼさなければ、グルタミン酸Eに変更される。これは、Qの環化による異質性heterogeneityを減少させることになる。効果的なシグナル配列の切断は質量分析によって確認される。これは、COS細胞または293細胞材料とともに行うことができる。タンパク質配列は、活性の喪失を導き得るAsnの脱アミド化の危険性について確認される。抗体は低レベルの凝集を有する。抗体の可溶性は、>5-10mg/ml研究段階において;>25mg/ml。抗体は、動的光散乱DLSによる通常のサイズ5-6nmを有する。抗体は、低電荷異質性を有する。抗体は、サイトカイン放出を欠如する実施例1.1.2.B参照。抗体は、意図されるサイトカインに対する特異性を有する実施例1.1.2.C参照。抗体は、予期せぬ組織交差反応性を欠如する実施例1.1.2.D参照。抗体は、ヒトとカニクイザルの組織交差反応性との間に類似性を有する実施例1.1.2.D参照。実施例1.2.2:組み換えヒト化親抗体実施例1.2.2.1:組み換えキメラ抗ヒト親抗体の構築および発現マウス抗ヒト親mAbの重鎖定常領域をコードするDNAは、細菌における相同組み換えによる2つのヒンジ領域のアミノ酸変異を含むヒトIgG1定常領域をコードするcDNA断片によって置換される。これらの変異は、234位EU番号付けのロイシンからアラニンの変更であり、235位のロイシンからアラニンの変更であるLundetal.1991J.Immunol.,147:2657。これらの抗体の各々の軽鎖定常領域は、ヒトκ定常領域によって置換される。全長のキメラ抗体は、pBOS発現プラスミドにキメラ重鎖および軽鎖のcDNAリガンドの同時の形質移入によってCOS細胞において一時的に発現されるMizushimaandNagata1990NucleicAcidsRes.18:5322。組み換えキメラ抗体を含む細胞上清は、プロテインAセファロースクロマトグラフィーによって精製され、結合した抗体は酸性緩衝液の添加によって溶出される。抗体は中和され、PBS中で透析される。キメラmAbをコードする重鎖cDNAは、そのキメラ軽鎖cDNAとともに両者はpBOSベクテーにおいて連結されているCOS細胞内に同時に形質移入される。組み換えキメラ抗体を含む細胞上清は、プロテインAセファロースクロマトグラフィーによって精製され、結合した抗体は酸性緩衝液の添加によって溶出される。抗体は中和され、PBS中で透析される。次に、精製されたキメラ抗ヒト親mAbは、例えば、実施例1.1.1.Gおよび1.1.2.Bに記載されるIgEのサイトカイン誘導によるIgEの生成を阻害するために、それらの結合する能力BIAcoreによるおよび機能的活性について試験される。親ハイブリドーマmAbの活性を維持するキメラmAbは、将来の進行のために選択される。実施例1.2.2.2:ヒト化抗ヒト親抗体の構築および発現実施例1.2.2.2.A:ヒト抗体フレームワークの選択各マウスの可変重鎖および可変軽鎖の遺伝子配列は、ベクターNTIソフトウェアを用いて、44個のヒト免疫グロブリン生殖細胞系列の可変重鎖または46個の生殖細胞系列の可変軽鎖配列http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/retrieveig.html.にてNCBIIgBlastウェブサイトから導かれるに対して別々に整列される。ヒト化は、アミノ酸配列ホモロジー、CDRクラスター分析、発現されたヒト抗体のうちの使用頻度、およびヒト抗体の結晶構造に関する入手可能な情報に基づいている。抗体結合、VH-VL対、および他の因子に対する可能な効果を考慮すると、マウス残基はヒト残基に変異され、この場合、若干の例外はあるが、マウスおよびヒトのフレームワーク残基は異なっている。さらなるヒト化戦略は、ヒト生殖細胞系列の抗体配列またはそれらのサブグループの分析に基づいて設計され、それは、マウス抗体の可変領域の実際のアミノ酸配列に対して高い程度のホモロジー、すなわち、配列類似性を有していた。ホモロジーモデリングは、抗体結合部位の構造、CDRに不可欠であることが予測されるマウス抗体の配列に特有の残基を特定するために用いられる。ホモロジーモデリングは計算法であり、それにより、近似の三次元座標がタンパク質のために作製される。初期座標およびそれらのさらなる修正のための誘導の情報源は、三次元座標が知られている第二のタンパク質、基準タンパク質、第一のタンパク質の配列に関連している配列である。2つのタンパク質の配列間の関係は、基準タンパク質と座標が所望されているタンパク質、標的タンパク質の間の対応を生じさせるために使用される。基準タンパク質および標的タンパク質の一次配列は、基準タンパク質から標的タンパク質に直接移される2つのタンパク質の初期部分の座標とともに整列される。例えば、残基変異、挿入または欠失に基づく、2つのタンパク質のミスマッチ部分についての座標は、すでに移動されたモデル座標との一貫性を確かめるために精緻化された包括的構造の鋳型およびエネルギーから構築される。この計算されたタンパク質構造は、さらに精緻化されてもよくまたはモデリング試験に直接使用されてもよい。モデル構造の質は、基準および標的タンパク質が関連するコンテンションの精度、および配列アラインメントが構築される正確さによって決定される。マウスmAbについて、BLAST検索および目視検査の組合せを用いて、適切な基準構造を特定する。基準と標的アミノ酸配列との間の25の配列同一性は、ホモロジーモデリング実行を試みるために必要最小限であると考えられる。配列アラインメントは手動で構築され、モデル座標はジャッカルJackalプログラムを用いて作り出されるPetrey,D.etal.2003Proteins53Suppl.6:430-435参照。選択された抗体のマウスおよびヒトフレームワーク領域の一次配列は、有意な同一性を有する。異なっている残基位置は、マウス抗体の観察された結合有効性を保持するために、ヒト化配列におけるマウス残基を包含する候補対象である。ヒト配列とマウス配列との間で異なるフレームワーク残基のリストを手動で構築する。表7は、この試験のために選ばれたフレームワーク配列を示す。所定のフレームワーク残基が抗体の結合特性に影響を及ぼす可能性は、CDR残基へのその残基の近接に依存する。したがって、モデル構造を用いると、マウス配列とヒト配列との間で異なる残基は、CDR中の任意の原子からのそれらの残基の距離に従って位置付けられる。任意のCDR原子の4.5Åの範囲に入るそれらの残基が最重要なものとして特定され、ヒト化抗体へのマウス残基の保持すなわち、復帰突然変異についての候補対象に推奨される。インシリコで構築されたヒト化抗体は、オリゴヌクレオチドを用いて構築される。各可変領域のcDNAについて、各々60-80ヌクレオチドのうちの6オリゴヌクレオチドは、各オリゴヌクレオチドの5’末端および/または3’末端で20ヌクレオチドまで互いに重複するように設計される。アニーリング反応では、すべての6オリゴヌクレオチドを組合せ、ボイルし、dNTPの存在下でアニーリングする。DNAポリメラーゼI、ラージクレノウ断片NewEnglandBiolabsM0210,Beverley,MAを添加して、重複しているオリゴヌクレオチド間の約40bpギャップを埋める。修飾されたpBOSベクターMizushima,S.andNagata,S.1990NucleicAcidsRes.18:17のマルチクローニングサイトに相補的な突出している配列を含む2つの最外部プライマーを用いて、完全な可変領域遺伝子を増幅するためにPCRを行う。各cDNAアセンブリ由来のPCR産物をアガロースゲル上で分離し、予測される可変領域cDNAサイズに対応するバンドを切り出し、精製する。可変重領域は、細菌において相同組み換えによって、2つのヒンジ領域のアミノ酸変異を含むヒトIgG1定常領域をコードするcDNA断片にフレームを合わせて挿入される。これらの変異は、234位EU番号付けのロイシンからアラニンへの変更、235位のロイシンからアラニンへの変更であるLundetal.1991J.Immunol.147:2657。可変軽鎖領域は、相同組み換えによってヒトκ定常領域とともにフレームを合わせて挿入される。細菌コロニーを単離し、プラスミドDNAを抽出する。cDNA挿入物を全体として配列決定する。各抗体に対応する正しいヒト化重鎖および軽鎖をCOS細胞に同時に形質移入し、全長ヒト化抗ヒト抗体を一時的に生成する。組み換えキメラ抗体を含む細胞上清をプロテインAセファロースクロマトグラフィーによって精製し、結合した抗体を酸性緩衝液の添加によって溶出する。抗体を中和し、PBS中で透析する。実施例1.2.2.3:ヒト化抗体の特徴付け機能的活性を阻害するための精製されたヒト化抗体の能力は、例えば、実施例1.1.2.Aに記載されるようにサイトカインバイオアッセイを用いて決定される。組み換えヒト抗原に対するヒト化抗体の結合親和性は、実施例1.1.1.Bに記載されるように表面プラズモン共鳴BIAcore登録商標測定を用いて決定される。ヒト化抗体のバイオアッセイからのIC50値および親和性を位置付ける。親ハイブリドーマmAbの活性を完全に維持するヒト化mAbは、将来の進行のための候補対象として選択される。上位2-3の最も有益なヒト化mAbをさらに特徴付ける。実施例1.2.2.3.A:ヒト化抗体の薬物動態分析薬物動態試験は、Sprague-Dawleyラットおよびカニクイザルにおいて行われる。雄性および雌性のラットならびにカニクイザルは、4mg/kgのmAbの単回投薬で静脈内または皮下に投薬され、抗原捕捉ELISAを用いて試料を分析し、薬物動態パラメーターを非コンパートメント分析によって決定する。要約すると、ヤギ抗ビオチン抗体5mg/ml、4°C、一晩を用いてELISAプレートを被覆し、SuperblockPierceを用いてブロックし、10SuperblockのTTBS中の50ng/mlのビオチン化ヒト抗原とともに室温で2時間インキュベートする。血清試料を連続的に希釈しTTBS中の0.5血清、10Superblockおよびプレート上で30分間、室温にてインキュベートする。HRP標識されたヤギ抗ヒト抗体を用いて検出を行い、4パラメーターのロジスティックフィットを用いて、標準曲線の助けにより濃度を決定する。薬物動態パラメーターに関する値は、WinNonlinソフトウェアPharsightCorporation,MountainView,CAを用いて、非コンパートメントモデルによって決定される。良好な薬物動態プロファイルを有するヒト化mAbT1/2は8-13日またはそれより良好であり、低クリアランスおよび優れた生物学的利用率は50-100であるを選択する。実施例1.2.2.3.B:ヒト化モノクローナル抗体の物理化学的およびインビトロでの安定性分析サイズ排除クロマトグラフィー水を用いて抗体を2.5mg/mLに希釈し、20mLをTSKゲルG3000SWXLカラムTosohBioscience、カタログk5539-05kを用いてShimadzuHPLCシステム上で分析する。211mM硫酸ナトリウム、92mMリン酸ナトリウム、pH7.0を用いて、流速0.3mL/分にて試料をカラムから溶出する。HPLCシステムの操作条件は以下の通りである:移動相:211mMのNa2SO4、92mMのNa2HPO47H20、pH7.0勾配:アイソクラチック流速:0.3mL/分検出波長:280nmオートサンプラー冷却装置温度:4°Cカラムオーブン温度:周囲実行時間:50分表8は、上記プロトコールによって決定される、モノマー率として、発現された親抗体およびDVD-Ig構築物予期された分子量の未凝集タンパク質の純度データを含む。SDS-PAGE還元条件下および非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGEによって抗体を分析する。AdalimumabロットAFP04Cを対照として用いる。還元条件について、100mMのDTTを含む2×トリスグリシンSDS-PAGE試料緩衝液Invitrogen、カタログLC2676、ロット1323208と1:1で試料を混合し、60°Cで30分間加熱する。非還元条件について、試料緩衝液と1:1で試料を混合し、100°Cで5分間加熱する。還元試料10mg/レーンを12プレキャストのトリス-グリシンゲルInvitrogen、カタログEC6005box、ロット6111021上に装填し、非還元試料10mg/レーンを8-16プレキャストのトリス-グリシンゲルInvitrogen、カタログEC6045box、ロット6111021上に装填する。SeeBluePlus2Invitrogen、カタログLC5925、ロット1351542を分子量マーカーとして用いる。ゲルをXCellSureLockミニセルゲルボックスInvitrogen、カタログEI0001に入れ、最初に、ゲル内の試料を積層するために電圧75を加え、次にダイフロントdyefrontがゲルの底に到達するまで定電圧125にしてタンパク質を分離する。使用される泳動緩衝液は1×トリスグリシンSDS緩衝液であり、10×トリスグリシンSDS緩衝液ABC、MPS-79-080106から調製される。コロイド状青色染色Invitrogen、カタログ46-7015、46-7016を用いてゲルを一晩染色し、バックグラウンドを除くためにMilli-Q水で脱染する。次に、EpsonExpressionスキャナーモデル1680、S/NDASX003641を用いて、染色されたゲルをスキャンする。沈降速度分析3つの標準的な2セクターのカーボンエポンセンターピースの各々の試料チャンバー内に抗体を装填する。これらのセンターピースは1.2cmの光路長を有し、サファイアウィンドウで構築される。基準緩衝液に関してはPBSを使用し、各チャンバーは140μLを含む。BeckmanProteomeLabXL-I分析用超遠心分離機シリアルPL106C01の4ホールAN-60Tiローターを用いて、すべての試料を同時に試験する。実行条件をプログラムし、ProteomeLabv5.6を用いて遠心分離制御を行う。試料およびローターは、分析前の1時間20.0±0.1°C熱平衡化させる。適切なセル装填の確認を3000rpmで行い、1回のスキャンを各ウェルについて記録する。沈降速度条件は以下の通りである:試料細胞体積:420mL基準細胞体積:420mL温度:20°Cローター速度:35,000rpm時間:8:00時間UV波長:280nm半径刻み幅:0.003cmデータ回収:信号加算平均なしの1工程あたり1データポイントスキャン総数:100完全な抗体のLC-MS分子量測定完全な抗体の分子量をLC-MSによって分析する。水を用いて各抗体を約1mg/mLに希釈する。タンパク質マイクロトラップMichromBioresources,Inc、カタログ004/25109/03を備えた1100HPLCAgilentシステムを用いて、脱塩し、試料の5mgをAPIQstarパルサーi質量分析計AppliedBiosystemsに導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相AHPLC水中の0.08TFA、0.02TFAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.08FAおよび0.02TFAを用いて、50mL/分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は2000から3500の質量対電荷比である。抗体軽鎖および重鎖のLC-MS分子量測定抗体軽鎖LC、重鎖HCおよび脱グリコシル化されたHCの分子量測定をLC-MSによって分析する。水を用いて抗体を1mg/mLに希釈し、試料は、最終濃度が10mMのDTTを用いて、30分間、37°CでLCおよびHCに還元される。抗体を脱グリコシル化するために、100mgの抗体は、100mLの全体積中の2mLのPNGaseF、5mLの10N-オクチルグルコシドとともに、一晩37°Cにてインキュベートされる。脱グリコシル化後、最終濃度が10mMのDTTを用いて、試料を30分間、37°Cにて還元する。C4カラムVydac、カタログ214TP5115、S/N060206537204069を備えたAgilent1100HPLCシステムを用いて脱塩し、試料5mgをAPIQstarパルサーi質量分析計AppliedBiosystemsに導入する。短い勾配を用いて試料を溶出する。勾配は、移動相AHPLC水中の0.08FA、0.02TFAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.08FAおよび0.02TFAを用いて、50mL/分の流速にて勾配を実行する。質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧で操作され、スキャン範囲は800から3500の質量対電荷比である。ペプチドマッピング75mM重炭酸アンモニウム中の最終濃度が6Mの塩酸グアニジンを用いて抗体を15分間、室温にて変性させる。変性試料は、最終濃度が10mMのDTTを用いて、37°C、60分間還元させ、次に、暗所にて37°C、30分間、50mMヨード酢酸IAAを用いてアルキル化される。アルキル化後、4リットルの10mM重炭酸アンモニウムに対して、一晩4°Cで試料を透析する。透析された試料は、10mM重炭酸アンモニウム、pH7.8を用いて1mg/mLに希釈され、100mgの抗体は、1:20w/wトリプシン/Lys-C:抗体の比でトリプシンPromega、カタログV5111またはLys-CRoche、カタログ11047825001を用いて37°Cで4時間消化される。消化物は、1NのHClを1mL用いてクエンチされる。質量分析計検出を用いたペプチドマッピングについて、40mLの消化物は、Agilent1100HPLCシステムを備えた、C18カラムVydac、カタログ218TP51、S/NNE960610.3.5上で逆相高速液体クロマトグラフィーRPHPLCによって分離される。ペプチドの分離は、移動相AHPLC等級の水中の0.02TFAおよび0.08FAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.02TFAおよび0.08FAを使用する勾配を用いて、50mL/分の流速にて実行する。APIQSTARPulsari質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は800から2500の質量対電荷比である。ジスルフィド結合マッピング抗体を変性するために、100mLの抗体は、100mM重炭酸アンモニウム中の8MグアニジンHClの300mLと混合される。pHをチェックして、pHが7から8の間であることを確認し、最終濃度が6MのグアニジンHCl中で15分間、室温にて試料を変性させる。一部の変性試料100mLをMilli-Q水で600mLに希釈し、最終のグアニジン-HCl濃度を1Mとする。試料220mgは、1:50のトリプシン:抗体または1:50のLys-C:抗体w/wの比4.4mg酵素:220mg試料でトリプシンPromega、カタログV5111、ロット22265901またはLys-CRoche、カタログ11047825001、ロット12808000を用いて37°Cで約16時間消化される。さらに5mgのトリプシンまたはLys-Cを試料に添加し、消化をさらに2時間、37°Cで進行させる。各試料に1mLのTFAを添加することによって消化を停止させる。消化された試料は、AgilentHPLCシステム上のC18カラムVydac、カタログ218TP51、S/NNE020630-4-1Aを用いてRPHPLCによって分離される。分離は、移動相AHPLC等級の水中の0.02TFAおよび0.08FAおよび移動相Bアセトニトリル中の0.02TFAおよび0.08FAを用いて、ペプチドマッピングについて使用されたものと同じ勾配で50mL/分の流速にて実行する。HPLCの操作条件は、ペプチドマッピングについて使用された条件と同じである。APIQSTARPulsari質量分析計は、4.5キロボルトの噴霧電圧のポジティブモードで操作され、スキャン範囲は800から2500の質量対電荷比である。ジスルフィド結合は、ペプチドの実測されたMWと、ジスルフィド結合によって連結されたトリプシンまたはLys-Cペプチドの予測されたMWとを合致させることによって割り当てられる。遊離スルフヒドリル決定抗体中の遊離システインを定量するために使用される方法は、特徴的な発色生成物である5-チオ-2-ニトロ安息香酸TNBを生じさせる、エルマン試薬である5,5¢-ジチオ-ビス2-ニトロ安息香酸DTNBとスルフヒドリル基SHの反応に基づいている。反応は、式:DTNBRSH登録商標RS-TNBTNB-Hにおいて説明される。TNB-の吸光度は、Cary50分光光度計を用いて、412nmで測定される。吸光度曲線は、遊離SH標準として2メルカプトエタノールb-MEの希釈を用いてプロットし、タンパク質中の遊離スルフヒドリル基の濃度は、試料の412nmでの吸光度から決定される。b-ME標準ストックは、最終濃度が0.142mMになるように、HPLC等級の水を用いて14.2Mのb-MEを連続希釈することによって調製される。次に、各濃度について3点測定の標準を調製する。アミコンウルトラ10,000MWCO遠心フィルターMillipore、カタログUFC801096、ロットL3KN5251を用いて抗体を10mg/mLに濃縮し、緩衝液をアダリムマブについて使用した処方緩衝液5.57mMリン酸一水素ナトリウム、8.69mMリン酸二水素ナトリウム、106.69mMのNaCl、1.07mMクエン酸ナトリウム、6.45mMクエン酸、66.68mMマンニトール、pH5.2、0.1w/vTweenに交換する。試料をシェーカー上で室温にて20分間混合する。次に、180mLの100mMのTris緩衝液、pH8.1を各試料に添加し、標準は、10mMリン酸緩衝液、pH8.1中の2mMのDTNBを300mL添加する。完全に混合した後、Cary50分光光度計上で412nmの吸光度について試料および標準を測定する。遊離SHの量とb-ME標準のOD412nmをプロットすることによって、標準曲線を得る。試料の遊離SH含有量は、ブランクを差し引いた後、この曲線に基づいて計算される。弱い陽イオン交換クロマトグラフィー10mMリン酸ナトリウム、pH6.0を用いて抗体を1mg/mLに希釈する。電荷異質性は、WCX-10ProPac分析用カラムDionex、カタログ054993、S/N02722を備えたShimadzuHPLCシステムを用いて分析される。試料を80移動相A10mMリン酸ナトリウム、pH6.0および20移動相B10mMリン酸ナトリウム、500mMのNaCl、pH6.0においてカラムに充填し、1.0mL/分の流速で溶出する。オリゴ糖プロファイリング抗体のPNGaseF処理後に放出されるオリゴ糖は、2-アミノベンズアミド2-AB標識試薬を用いて誘導される。蛍光標識されたオリゴ糖は、順相の高速液体クロマトグラフィーNPHPLCによって分離され、異なる形態のオリゴ糖は、保持時間に基づいて、既知の標準と比較して特徴付けられる。抗体を最初にPNGaseFを用いて消化し、重鎖のFc部分からN結合のオリゴ糖を切断する。2mLのPNGaseFおよび3mLの10N-オクチルグルコシドとともに500mLエッペンドルフチューブに抗体200mgを入れる。リン酸緩衝生理食塩水を添加し、最終体積を60mLにする。700RPMに設定したエッペンドルフのサーモミキサー中で一晩37°Cにて試料をインキュベートする。また、AdalimumabロットAFP04Cを対照としてPNGaseFを用いて消化する。PNGaseF処理後、750RPMに設定されたエッペンドルフのサーモミキサー中で95°C、5分間、試料をインキュベートしてタンパク質を沈殿させ、次に、2分間、10,000RPMでエッペンドルフの遠心分離機に試料を置き、沈殿したタンパク質を沈降させる。オリゴ糖を含む上清を500mLのエッペンドルフチューブに移し、スピード-vac中、65°Cで乾燥させる。Prozymeから購入される2AB標識キットカタログGKK-404、ロット132026を用いて、オリゴ糖を2ABで標識する。製造業者の使用説明書に従って標識試薬を調製する。酢酸150mL、キットにおいて提供されるをDMSOバイアルキットにおいて提供されるに添加し、溶液を数回、上下にピペッティングすることによって混合する。酢酸/DMSO混合物100mLを2-AB色素のバイアル使用直前に移し、色素が完全に溶解するまで混合する。次に、色素溶液を還元剤キットにおいて提供されるのバイアルに添加し、十分に混合に混合する標識試薬。標識試薬5mLを各々乾燥させたオリゴ糖試料バイアルに添加し、完全に混合する。65°Cで700-800RPMに設定されたエッペンドルフのサーモミキサーに反応バイアルを置き、2時間反応させる。標識反応後、Prozymeから入手されるGlycoCleansカートリッジカタログGKI-4726を用いて過剰の蛍光色素を取り除く。試料を添加前、カートリッジを1mLのmilli-Q水で洗浄し、その後、1mLの30酢酸溶液で5回洗浄する。試料を添加直前に、1mLのアセトニトリルBurdickandJackson、カタログAH015-4をカートリッジに添加する。すべてのアセトニトリルがカートリッジを通過した後、新たに洗浄したディスクの中心に試料をスポット状に置き、ディスク上に10分間吸着させる。1mLのアセトニトリルを用いてディスクを洗浄し、続いて、1mLの96アセトニトリルで5回洗浄する。カートリッジを1.5mLのエッペンドルフチューブ上に置き、2-AB標識されたオリゴ糖をmilliQ水の3回の洗浄各洗浄あたり400mLにより溶出させる。ShimadzuHPLCシステムに連結させたGlycosepNHPLCカタログGKI-4728カラムを用いてオリゴ糖を分離する。ShimadzuHPLCシステムは、システムコントローラー、脱気装置、二重ポンプ、試料冷却器を備えたオートサンプラーおよび蛍光検出器からなっていた。高温での安定性抗体の緩衝液は、5.57mMリン酸一水素ナトリウム、8.69mMリン酸二水素ナトリウム、106.69mMのNaCl、1.07mMクエン酸ナトリウム、6.45mMクエン酸、66.68mMマンニトール、0.1w/vTween、pH5.2;または10mMヒスチジン、10mMメチオニン、4マンニトール、pH5.9のいずれかであり、Amicon超遠心フィルターを用いる。適切な緩衝液を用いて、抗体の最終濃度を2mg/mLに調整する。次に、抗体溶液を濾過滅菌し、0.25mLのアリコートを無菌条件下で調製する。アリコートを-80°C、5°C、25°Cまたは40°Cで1、2または3週間放置する。インキュベーション期間の終わりに、サイズ排除クロマトグラフィーおよびSDS-PAGEによって試料を分析する。安定性試料は、還元条件下および非還元条件下でSDS-PAGEによって分析される。使用される手法は、本明細書に記載されたものと同じである。コロイド状青色染色Invitrogen、カタログ46-7015、46-7016を用いてゲルを一晩染色させ、バックグラウンドが透明になるまでMilli-Q水で脱染される。次に、EpsonExpressionスキャナーモデル1680、S/NDASX003641を用いて、染色されたゲルをスキャンする。高い感度を得るために、銀染色キットOwlScientificを用いて同じゲルを銀染色し、製造業者によって提供される推奨の手順を用いる。実施例1.2.2.3.C:ヒト癌腫異種移植の増殖におけるヒト化モノクローナル抗体それ自体または化学療法の併用の効果ヒト癌細胞は、インビトロにおいて、組織培養フラスコ中で99の生存性であって、85コンフルエントになるまで増殖させる。19-25グラムのSCID雌性または雄性マウスCharlesRiversLabsに耳標を付し、毛を剃る。次に、マウスは、試験0日に、0.2mlの2×106個のヒト腫瘍細胞1:1マトリゲルを右脇腹の皮下に接種される。別々のマウス用ケージ内で、マウスが約150-200mm3の平均腫瘍体積を有するようにサイズ適合された後、ビヒクルPBS、ヒト化抗体の投与IP、Q3D/週、および/または化学療法が開始される。接種の約10日後に開始し、週に2回、一対のキャリパーにより腫瘍を測定し、式V=L×W2/2V:体積、mm3;L:長さ、mm、W:幅、mmに従って腫瘍体積を計算する。腫瘍体積の減少は、ビヒクル単独またはアイソタイプ対照のmAbを受けた動物の腫瘍と比較して、mAb単独または化学療法の併用により処置された動物において観察される。実施例1.3:DVD-Igの生成2つの抗原に結合することができるDVD-Ig分子は、2つの親モノクローナル抗体を用いて構築され、1つはヒト抗原Aに対し、他方はヒト抗原Bに対し、本明細書に記載されるように選択される。実施例1.3.1:2つのリンカー長を有するDVD-Igの生成ADCC/CDCエフェクター機能を排除するために、234および235に変異を有するγ1Fcを含む定常領域を用いる。4種の抗A/BDVD-Ig構築物を生成する:2つは短いリンカーを有し、2つは長いリンカーを有し、各々は2つの異なるドメイン配向にある:VA-VB-CおよびVB-VA-C表9を参照。リンカー配列は、ヒトC1/CkまたはCH1ドメインのN末端配列から誘導され、以下の通りである:DVDAB構築物について:軽鎖抗Aがλを有する場合:短いリンカー:QPKAAP配列番号15;長いリンカー:QPKAAPSVTLFPP配列番号16。軽鎖抗Aがκを有する場合:短いリンカー:TVAAP配列番号13;長いリンカー:TVAAPSVFIFPP配列番号14。重鎖γ1:短いリンカー:ASTKGP配列番号21;長いリンカー:ASTKGPSVFPLAP配列番号22。DVDBA構築物について:軽鎖抗Bがλである場合:短いリンカー:QPKAAP配列番号15;長いリンカー:QPKAAPSVTLFPP配列番号16。軽鎖抗Bがkである場合:短いリンカー:TVAAP配列番号13;長いリンカー:TVAAPSVFIFPP配列番号14。重鎖γ1:短いリンカー:ASTKGP配列番号21;長いリンカー:ASTKGPSVFPLAP配列番号22。重鎖および軽鎖構築物をpBOS発現ベクターにサブクローニングし、COS細胞において発現させ、その後、プロテインAクロマトグラフィーによって精製する。精製された物質は、SDS-PAGEおよびSEC分析に供される。表9は、各抗A/BDVD-Igタンパク質を発現するために使用された重鎖および軽鎖の構築物を記載する。実施例1.3.2:DVDABSLおよびDVDABLLのためのDNA構築物の分子クローニング重鎖構築物DVDABHC-LLおよびDVDABHC-SLを生成するために、A抗体のVHドメインは、特異的プライマー3’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いてPCR増幅される;一方、B抗体のVHドメインは、特異的プライマー5’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いて増幅される。両方のPCR反応は、標準的なPCR技術および手法に従って行われる。2つのPCR産物をゲルで精製し、その後の重複PCR反応のための重複鋳型としてともに使用する。重複PCR産物は、標準的な相同組み換えアプローチを用いることによって、SrfIおよびSalIによって二重消化されたpBOS-hCγ1,z非a-哺乳類用発現ベクターAbbottにサブクローニングされる。軽鎖構築物DVDABLC-LLおよびDVDABLC-SLを生成するために、A抗体のVLドメインは、特異的プライマー3’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いてPCR増幅される;一方、B抗体のVLドメインは、特異的プライマー5’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いて増幅される。両方のPCR反応は、標準的なPCR技術および手法に従って行われる。2つのPCR産物をゲルで精製し、標準的なPCR条件を用いて、その後の重複PCR反応のための重複鋳型としてともに使用する。重複PCR産物は、標準的な相同組み換えアプローチを用いることによって、SrfIおよびNotIによって二重消化されたpBOS-hCk哺乳類用発現ベクターAbbottにサブクローニングされる。類似のアプローチを用いて、以下に説明されるDVDBASLおよびDVDBALLを生成させた。実施例1.3.3:DVDBASLおよびDVDBALLのためのDNA構築物の分子クローニング重鎖構築物DVDBAHC-LLおよびDVDBAHC-SLを生成するために、抗体BのVHドメインは、特異的プライマー3’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いてPCR増幅される;一方、抗体AのVHドメインは、特異的プライマー5’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いて増幅される。両方のPCR反応は、標準的なPCR技術および手法に従って行われる。2つのPCR産物をゲルで精製し、標準的なPCR条件を用いて、その後の重複PCR反応のために重複鋳型としてともに使用する。重複PCR産物は、標準的な相同組み換えアプローチを用いることによって、SrfIおよびSalIによって二重消化されたpBOS-hCγ1,z非a-哺乳類用発現ベクターAbbottにサブクローニングされる。軽鎖構築物DVDBALC-LLおよびDVDBALC-SLを生成するために、抗体BのVLドメインは、特異的プライマー3’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いてPCR増幅される;一方、抗体AのVLドメインは、特異的プライマー5’プライマーはそれぞれSL/LL構築物に対する短い/長い線状配列を含むを用いて増幅される。両方のPCR反応は、標準的なPCR技術および手法に従って行われる。2つのPCR産物をゲルで精製し、標準的なPCR条件を用いて、その後の重複PCR反応のために重複鋳型としてともに使用する。重複PCR産物は、標準的な相同組み換えアプローチを用いることによって、SrfIおよびNotIによって二重消化されたpBOS-hCk哺乳類用発現ベクターAbbottにサブクローニングされる。実施例1.3.4:追加のDVD-Igの構築および発現実施例1.3.4.1:DVD-Igベクター構築物の調製DVD-Igに取り込むために、特異的な抗原またはそれらのエピトープを認識する特異的抗体についての親抗体アミノ酸配列が、上述したハイブリドーマの調製によって得ることができ、または既知の抗体タンパク質もしくは核酸を配列決定することによって得ることができる。さらに、既知の配列は文献から得ることができる。これらの配列は、標準的なDNA合成または増幅技術を用いて核酸を合成するために使用することができ、標準的な組み換えDNA技術を用いて、細胞において発現させるために、発現ベクターに所望の抗体断片を組み入れることができる。例えば、核酸コドンは、アミノ酸配列から決定され、オリゴヌクレオチドDNAは、BlueHeronBiotechnology,Inc.www.blueheronbio.comBothell,WAUSAで合成された。オリゴヌクレオチドは、300-2,000塩基対の二本鎖DNA断片に組み入れられ、プラスミドベクターにクローニングされ、配列が確認された。クローニングされた断片は、酵素処理を用いて組み入れられ、完全な遺伝子を得て、発現ベクターにサブクローニングされた。米国特許第7,306,914号;第7,297,541号;第7,279,159号;第7,150,969号;および米国特許公開第20080115243号;第20080102475号;第20080081379号;第20080075690号;第20080063780号;第20080050506号;第20080038777号;第20080022422号;第20070289033号;第20070287170号;第20070254338号;第20070243194号;第20070225227号;第20070207171号;第20070150976号;第20070135620号;第20070128190号;第20070104722号;第20070092484号;第20070037196号;第20070028321号;第20060172404号;第20060162026号;第20060153791号;第20030215458号;第20030157643号を参照。親抗体およびDVD-Igクローニングのために一群のpHybEベクター米国特許出願第61/021,282号を用いた。pJP183由来のV1;pHybE-hCg1,z,非aV2は、野生型の定常領域を有する抗体およびDVD重鎖をクローニングするために使用された。pJP191由来のV2;pHybE-hCkV2は、κ定常領域を有する抗体およびDVD軽鎖をクローニングするために使用された。pJP192由来のV3;pHybE-hC1V2は、λ定常領域を有する抗体およびDVD軽鎖をクローニングするために使用された。λシグナルペプチドおよびκ定常領域とともに構築されたV4は、λ-κハイブリッドVドメインを有するDVD軽鎖をクローニングするために使用された。κシグナルペプチドおよびλ定常領域とともに構築されたV5は、κ-λハイブリッドVドメインを有するDVD軽鎖をクローニングするために使用された。pJP183由来のV7;pHybE-hCg1,z,非aV2は、234、235AA変異定常領域を有する抗体およびDVD重鎖をクローニングするために使用された。表10に関して、親抗体ならびにDVD-IgVHおよびVL鎖のクローニングに多数のベクターを用いた。実施例1.3.4.2:293細胞における形質移入および発現基準抗体およびDVD-Igの発現は、対応する軽鎖LC核酸および重鎖HC核酸を含むプラスミドを用いてHEK293EBNA細胞に一時的に同時に形質移入することによって達成された。HEK293EBNA細胞は、CO2インキュベーター8CO2、125RPM、37°C中で振とうしているフラスコ2LCorning、カタログ431198の0.5L規模にて新鮮な293培地Invitrogen,CarlsbadCAにおいて増殖させた。培養物が1×106個の細胞/mlの密度に到達したとき、形質移入複合体を用いて細胞に形質移入した。形質移入複合体は、最初に150ugのLC-プラスミドおよび100ugのHC-プラスミドを一緒に25mlの新鮮な培地中で混合し、次に500ulのPEI保存溶液[保存溶液:1mg/mlpH7.0直鎖状25kDaのPEI、Polysciences、カタログ23966]の添加によって調製された。形質移入複合体は反転によって混合され、細胞培養物に添加される前に室温にて10分間インキュベートさせた。形質移入後、CO2インキュベーター8CO2、125RPM、37°C中で継続して細胞を増殖させた。形質移入の24時間後、25mlの10トリプトンN1溶液OrganoTechnie,LaCourneuveFrance、カタログ19553を培養物に補足した。形質移入の9日後、遠心分離16,000g、10分によって培養物から細胞を取り除き、残った上清を滅菌濾過MilliporeHVDuraporeStericup,0.45umし、精製工程の開始まで4°Cに置いた。各抗体またはDVD-Igは、MabSelectSuRe樹脂GEHealthcareを含む使い捨ての1ml充填カラムOrochemTechnologiesによってパックされたを用いて個別に精製された。カラムをPBS中で予め平衡化し、次に、回収した0.55Lの試料を一晩15時間、1ml/分にてローディングし、フロースルーを供給溶液に戻して再循環させた。ローディング工程後、20mlのPBSを用いてカラムを洗浄し、タンパク質は、溶出緩衝液[50mMクエン酸、pH3.5]を4ml/分にて供給し、0.2mlの1.5MのTris、pH8.2最終pHを約6.0にするをすでに含む管に画分1mlを回収することによって溶出された。抗体を含む画分は、クロマトグラムに基づいて集め、最終保存緩衝液[10mMクエン酸、10mMのNa2HPO4、pH6.0]に透析された。透析後、試料を0.22umのSteriflipMilliporeに通して濾過し、タンパク質の濃度を吸光度[HewlettPackard8453ダイオードアレイ分光光度計]によって決定した。SDS-PAGE分析は、最終純度を評価し、適切なサイズの重鎖および軽鎖バンドの存在を確認し、有意量の遊離すなわち、複合化されていない軽鎖非還元試料におけるがないことを確かめるために分析試料還元および非還元の両方について行われた。表11は、293細胞における1リットルあたりのミリグラムで表される親抗体またはDVD-Ig構築物についての収率データを含む。実施例1.3.5:A/BDVD-Igの特徴付けおよび誘導選択抗A/BDVD-Igの結合親和性は、タンパク質Aおよびタンパク質Bに対して、Biacoreで分析される。BIAcoreによる多重結合試験によってDVD-Igの四価特性を調べる。一方、タンパク質Aおよびタンパク質Bに対するDVD-Igの中和効力は、それぞれ、本明細書中に記載されるバイオアッセイによって評価される。元の親mAbの親和性および効力を最も保持しているDVD-Ig分子は、各mAbについて、本明細書に記載された詳細な物理化学的および生物分析的ラットPK特徴付けに関して選択される。分析の収集に基づいて、最終の誘導DVD-Igは、安定なCHO細胞株の開発に進められ、CHO誘導材料は、安定性、カニクイザルにける薬物動態および有効性試験、ならびにプレフォーミュレーション活性において採用される。実施例2:二重可変ドメイン免疫グロブリンDVD-Igの生成および特徴付け既知のアミノ酸配列を有する親抗体を用いた二重可変ドメイン免疫グロブリンDVD-Igは、DVD-Ig可変重鎖配列およびDVD-Ig可変軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド断片を合成し、実施例1.4.4.1に従ってpHybC-D2ベクターにその断片をクローニングすることによって生成された。DVD-Ig構築体をクローニングし、実施例1.4.4.2に記載される293細胞において発現させた。標準的な方法に従ってDVD-Igタンパク質を精製した。機能的特徴付けは、指示された実施例1.1.1および1.1.2に記載された方法に従って決定された。本発明のDVD-IgについてのDVD-IgのVH鎖およびVL鎖を以下に提供する。実施例2.1:リンカーセット1を用いたTNFおよびTWEAKseq.1DVD-Igの生成実施例2.2:リンカーセット2を用いたTNFおよびTWEAKseq.1DVD-Igの生成実施例2.3:リンカーセット3を用いたTNFおよびTWEAKseq.1DVD-Igの生成実施例2.4:リンカーセット4を用いたTNFおよびTWEAKseq.1DVD-Igの生成実施例2.5:リンカーセット1を用いたTNFおよびTWEAKseq.2DVD-Igの生成実施例2.6:リンカーセット2を用いたTNFおよびTWEAKseq.2DVD-Igの生成実施例2.7:リンカーセット3を用いたTNFおよびTWEAKseq.2DVD-Igの生成実施例2.8:リンカーセット4を用いたTNFおよびTWEAKseq.2DVD-Igの生成実施例2.41:親抗体およびDVD-Ig配列をクローニングするために使用されるクローニングベクター配列本発明は、分子生物学および薬物送達の分野で周知の技術全体を、参照により組み込む。これらの技術には、以下の公報に記載されている技術が含まれるが、これに限定されるものではない。Ausubeletal.eds.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileySons,NY1993Ausubeletal.eds.,ShortProtocolsInMolecularBiology,JohnWileySons,NY4thEd.1999SmolenandBalleds.,ControlledDrugBioavailability,DrugProductDesignandPerformance,Wiley,NY1984Giegeetal.eds.,CrystallizationofNucleicAcidsandProteins,aPracticalApproach,OxfordUniversityPress,NY2ndEd.1999,pp.201-16Goodson,inMedicalApplicationsofControlledRelease,1984,2:115-138Hammerlingetal.,inMonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas,Elsevier,NY1981,pp.563-681Harlowetal.,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress2ndEd.1988Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD1987and1991Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.Dept.ofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-32425thEd.1991KontermannandDubeleds.,AntibodyEngineering,Springer-Verlag,NY2001pp.790Kriegler,GeneTransferandExpression,ALaboratoryManual,StocktonPress,NY1990LuandWeinereds.,CloningandExpressionVectorsforGeneFunctionAnalysisBioTechniquesPress,MA2001pp.298LangerandWiseeds.,MedicalApplicationsofControlledRelease,CRCPress,FL1974OldPrimrose,PrinciplesofGeneManipulation:AnIntroductionToGeneticEngineeringBlackwellScientificPublications,MA3rdEd.1985StudiesinMicrobiology2:409Sambrooketal.eds.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY2dEd.1989v.1-3Robinsoned.,SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,MarcelDekker,Inc.,NY1978Winnacker,FromGenesToClones:IntroductionToGeneTechnology,VCHPublishers,NYtranslatedbyHorstIbelgaufts1987pp.634.参照による援用本出願を通して引用されてもよい、すべての引用される参考資料参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含むの内容は、これによって、これらの参考資料がそこに記載されているかのように、いずれかの目的で参考資料の全体を参照することにより明確に援用される。本発明の実施は、別段の記載がない限り、当該技術分野において周知である免疫学、分子生物学および細胞生物学の従来技術を使用する。均等本発明は、その精神または本質的な特徴から逸脱せずに他の具体的な形態において体現されもよい。したがって、前述の実施形態は、本明細書に記載されている本発明を限定するというよりはむしろ、すべての点において例示していると考えるべきである。よって、本発明の範囲は、前述の記載によるというよりはむしろ、添付される特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内にあるすべての変更は本明細書に包含されることが意図される。"