"別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子を哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入してなる免疫毒性評価用哺乳類細胞。活性評価対象プロモーターの制御下にある第3のレポーター遺伝子をさらに有する、請求項1に記載の哺乳類細胞。哺乳類細胞がJurkat細胞、U937細胞、またはTHP1細胞である、請求項1又は2に記載の哺乳類細胞。レポーター遺伝子がルシフェラーゼである請求項1~3のいずれかに記載の哺乳類細胞。2以上のレポーター遺伝子の最大発光波長が、相互に20nm以上相違する、請求項1~4のいずれかに記載の哺乳類細胞。哺乳類細胞がJurkat細胞であり、免疫毒性評価用プロモーターがIL4、IL2、IFNγ遺伝子からなる群より選択される遺伝子のプロモーターである、請求項3に記載の哺乳類細胞。哺乳類細胞がU937細胞であり、免疫毒性評価用プロモーターがIL1β及び/又はIL8遺伝子のプロモーターである、請求項1に記載の哺乳類細胞。哺乳類細胞がTHP1細胞であり、免疫毒性評価用プロモーターがIL1β及び/又はIL8遺伝子のプロモーターである、請求項1に記載の哺乳類細胞。哺乳類に対する化学物質の免疫毒性を評価する方法であって、以下の工程:工程1:請求項1~5のいずれかに記載の免疫毒性評価用哺乳類細胞に前記化学物質を接触させる工程ここで、前記哺乳類細胞は、別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子は哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入されている工程2:前記化学物質の存在下、非存在下での、第2のレポーター遺伝子の発現の増減を評価する工程、を含むことを特徴とする、方法。哺乳類に対する化学物質の免疫毒性と活性を同時に評価する方法であって、以下の工程:工程1:免疫毒性及び活性の同時評価用哺乳類細胞に前記化学物質を接触させる工程ここで、前記哺乳類細胞は、別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、第3のレポーター遺伝子が活性評価対象プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子は哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入されている工程2:前記化学物質の存在下、非存在下での、第2のレポーター遺伝子及び第3のレポーター遺伝子の発現の増減を評価する工程、を含むことを特徴とする、方法。前記化学物質が薬物候補化合物である、請求項10に記載の方法。免疫毒性のない薬物のスクリーニング方法であって、以下の工程:工程1:免疫毒性評価用哺乳類細胞に薬物候補化合物を接触させる工程ここで、前記哺乳類細胞は、別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子は哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入されている工程2:前記薬物候補化合物の存在下、非存在下での、第2のレポーター遺伝子の発現の増減を評価する工程、工程3:第2のレポーター遺伝子の発現が変化しない化合物を選択する工程、を含むことを特徴とする、方法。前記哺乳類細胞が活性評価対象プロモーターの制御下にある第3のレポーター遺伝子をさらに有し、免疫毒性がなく活性を有する薬物を選択する工程を含む、請求項12に記載の方法。請求項1~5のいずれかに記載の哺乳類細胞の培養液中に薬物候補化合物を存在させて該哺乳類細胞を培養する工程、該候補化合物の存在下及び非存在下で前記第1,第2,必要に応じてさらに第3のレポーター遺伝子の発現産物を定量する工程を含む、免疫毒性のない薬物のスクリーニング方法。請求項1~5のいずれかに記載の哺乳類細胞の培養液中に薬物候補化合物を存在させて該哺乳類細胞を培養する工程、該候補化合物の存在下及び非存在下で前記レポーター遺伝子の発現産物であるレポーター蛋白量を定量する工程、少なくとも一つのレポーター遺伝子に連結された少なくとも1つの免疫毒性評価用プロモーター、必要に応じてさらに少なくとも1つの評価対象プロモーターに対する該候補化合物の影響を評価する工程を包含する薬物のスクリーニング方法。該候補化合物による処理後又は処理と同時に、細胞活性化剤で活性化処理する工程を含む、請求項15に記載のスクリーニング方法。該候補化合物による処理の際に活性酸素阻害剤を加える工程を含む、請求項15に記載のスクリーニング方法。本発明の目的は、従来行われてきた実験動物を用いた免疫毒性評価手法に代わり、化学物質の免疫毒性発現機序の分子レベルの知見に基づいた培養細胞評価系によってハイスループットに解析する技術を提供することである。本発明者らは、T細胞系のJurkat細胞においては、免疫毒性は種々の化学物質刺激後にAP1、NFAT、NFκB転写因子活性が影響を受け、例えばそれらにより転写が調節されているIL2遺伝子が、また、STAT1、STAT4、Tbet、Runx3、Hlx、Smad34転写因子活性が影響を受け、例えばそれらにより転写が調節されているIFNγ遺伝子が指標となる可能性がある点を明らかにした。また、樹状細胞系のU937細胞においてはpurinergicreceptorやmitogenactivatedproteinkinaseの関与する刺激伝達系およびAP1、NFκB転写因子活性が影響を受け、例えばそれらにより転写が調節されているIL8遺伝子が、また、NFκBAP1NFIL6CREATF転写因子活性が影響を受け、例えばそれらにより転写が調節されているIL1β遺伝子が指標となる可能性がある点を明らかにした。一方、免疫毒性を評価するためには複数の遺伝子を同時に解析することが重要であることから多色発光ルシフェラーゼによるマルチ遺伝子発現解析特許文献1を用いて、それぞれ遺伝子プロモーター下流に対象となるプロモーター配列を挿入したベクター群を構築、これをT細胞や単球細胞に導入した安定株を作成、免疫毒性の評価を行った。そこで化学物質処理単独刺激後、あるいは化学物質処理と共にphorbolmyristateacetatePMAとカルシウムイオノフォアの一種であるIonomycinによる細胞活性化処理や、lipopolysaccharideLPSによる細胞活性化処理を加え各ルシフェラーゼの活性を定量、併せて、各種化学物質評価した結果、デキサメサゾン、シクロスポリンなどの免疫抑制薬剤、ディーゼルエンジン排気微粒子、ホルマリンなどの環境汚染物質、dinitrochlorobenzen、ニッケルなど感作性物質の免疫毒性をハイスループットに評価できることを明らかにし本発明に至った。本発明は、以下の哺乳類細胞、スクリーニング方法、免疫毒性評価システムを提供するものである項1.別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子を哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入してなる免疫毒性評価用哺乳類細胞。項2.活性評価対象プロモーターの制御下にある第3のレポーター遺伝子をさらに有する、項1に記載の哺乳類細胞。項3.哺乳類細胞がJurkat細胞、U937細胞、またはTHP1細胞である、項1又は2に記載の哺乳類細胞。項4.レポーター遺伝子がルシフェラーゼである項1~3のいずれかに記載の哺乳類細胞。項5.2以上のレポーター遺伝子の最大発光波長が、相互に20nm以上相違する、項1~4のいずれかに記載の哺乳類細胞。項6.哺乳類細胞がJurkat細胞であり、免疫毒性評価用プロモーターがIL4、IL2、IFNγ遺伝子からなる群より選択される遺伝子のプロモーターである、項3に記載の哺乳類細胞。項7.哺乳類細胞がU937細胞であり、免疫毒性評価用プロモーターがIL1β及び/又はIL8遺伝子のプロモーターである、項1に記載の哺乳類細胞。項8.哺乳類細胞がTHP1細胞であり、免疫毒性評価用プロモーターがIL1β及び/又はIL8遺伝子のプロモーターである、項1に記載の哺乳類細胞。項9.哺乳類に対する化学物質の免疫毒性を評価する方法であって、以下の工程:工程1:項1~5のいずれかに記載の免疫毒性評価用哺乳類細胞に前記化学物質を接触させる工程ここで、前記哺乳類細胞は、別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子は哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入されている工程2:前記化学物質の存在下、非存在下での、第2のレポーター遺伝子の発現の増減を評価する工程、を含むことを特徴とする、方法。項10.哺乳類に対する化学物質の免疫毒性と活性を同時に評価する方法であって、以下の工程:工程1:免疫毒性及び活性の同時評価用哺乳類細胞に前記化学物質を接触させる工程ここで、前記哺乳類細胞は、別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、第3のレポーター遺伝子が活性評価対象プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子は哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入されている工程2:前記化学物質の存在下、非存在下での、第2のレポーター遺伝子及び第3のレポーター遺伝子の発現の増減を評価する工程、を含むことを特徴とする、方法。項11.前記化学物質が薬物候補化合物である、項10に記載の方法。項12.免疫毒性のない薬物のスクリーニング方法であって、以下の工程:工程1:免疫毒性評価用哺乳類細胞に薬物候補化合物を接触させる工程ここで、前記哺乳類細胞は、別個のプロモーターの制御下にある2以上のレポーター遺伝子を有し、第1のレポーター遺伝子が定常発現プロモーターの制御下にあり、第2のレポーター遺伝子が免疫毒性評価用プロモーターの制御下にあり、前記レポーター遺伝子は哺乳類細胞で一過性または安定発現可能に導入されている工程2:前記薬物候補化合物の存在下、非存在下での、第2のレポーター遺伝子の発現の増減を評価する工程、工程3:第2のレポーター遺伝子の発現が変化しない化合物を選択する工程を含むことを特徴とする、方法。項13.前記哺乳類細胞が活性評価対象プロモーターの制御下にある第3のレポーター遺伝子をさらに有し、免疫毒性がなく活性を有する薬物を選択する工程を含む、項12に記載の方法。項14.項1~5のいずれかに記載の哺乳類細胞の培養液中に薬物候補化合物を存在させて該哺乳類細胞を培養する工程、該候補化合物の存在下及び非存在下で前記第1,第2,必要に応じてさらに第3のレポーター遺伝子の発現産物を定量する工程を含む、免疫毒性のない薬物のスクリーニング方法。項15.項1~5のいずれかに記載の哺乳類細胞の培養液中に薬物候補化合物を存在させて該哺乳類細胞を培養する工程、該候補化合物の存在下及び非存在下で前記レポーター遺伝子の発現産物であるレポーター蛋白量を定量する工程、少なくとも一つのレポーター遺伝子に連結された少なくとも1つの免疫毒性評価用プロモーター、必要に応じてさらに少なくとも1つの評価対象プロモーターに対する該候補化合物の影響を評価する工程を包含する薬物のスクリーニング方法。項16.該候補化合物による処理後又は処理と同時に、細胞活性化剤で活性化処理する工程を含む、項15に記載のスクリーニング方法。項17.該候補化合物による処理の際に活性酸素阻害剤を加える工程を含む、項15に記載のスクリーニング方法。近年社会的な問題になっている、身の回りに存在する化学物質による接触皮膚炎、ディーゼルエンジン排気微粒子やホルマリンなどによるアトピー性皮膚炎、喘息などの有病率の増加などは、免疫毒性の代表的な例である。本発明の細胞を用いると、T細胞における、IFNγ遺伝子発現に関与するSTAT1、STAT4、Tbet、Runx3、Hlx、Smad34などの転写因子、IL2遺伝子発現に関与するAP1、NFAT、NFκBなどの転写因子活性に影響を及ぼす化学物質の免疫毒性を評価することが可能となる。また、マクロファージ、樹状細胞におけるIL8遺伝子発現に関与するAP1、NFκBなどの転写因子、IL1β遺伝子発現に関与するNFκB、AP1、NFIL6、CREATFなどの転写因子活性に影響を及ぼす化学物質の免疫毒性を評価することも可能となる。実際、この評価法により、デキサメサゾン、シクロスポリンなどの免疫抑制薬剤、ディーゼルエンジン排気微粒子、ホルマリンなどの環境汚染物質、dinitrochlorobenzen、ニッケルなど感作性物質の免疫毒性をハイスループットに既存の結果と矛盾なく評価することができる。さらに、マクロファージ細胞株THP1細胞やU937細胞におけるIL8遺伝子発現に関与する化学物質の感作能を評価、及び活性酸素ReactiveOxygenSpecies産生阻害剤であるNacetylcysteineNACを加えることで、化学物質が接触アレルゲンもしくは一次刺激性物質であるか評価することができる。これまでは、化学物質による免疫毒性の評価は、医薬品、化粧品などの開発分野以外では、ほとんど顧みられてこなかった。また、評価方法も一部の例外を除き、動物実験に依存したもので、現時点では、数万とも言われる化学物質のハザードを免疫毒性の観点から適切に評価できるスクリーニング法は存在しなかった。本発明は、これまで主として行われてきた実験動物を用いた免疫毒性評価手法に変わり、近年の化学物質の免疫毒性発現機序の分子レベルの知見に基づいた、培養細胞を用いた、高機能かつハイスループットな新規評価法を提供するものである。本明細書において、免疫毒性とは、皮膚、腸管、気道などから生体内に取り込まれた化学物質により免疫系のホメオスタシスに異常を生じ、その結果、人体に何らかの障害が生じることと定義される。免疫毒性は、免疫賦活、免疫抑制、Thバランスなどにより評価することができる。免疫毒性評価用の哺乳類細胞としては、Jurkat細胞、U937細胞、またはTHP1細胞などが挙げられ、Jurkat細胞、U937細胞が好ましい。免疫評価の対象となるプロモーターとしては、IL4、IL2、IL8、IL22、IL12p40、HO1、IL1β及び/又はIFNγなどの遺伝子のプロモーターが挙げられる。これらの少なくとも1種の遺伝子のプロモーター活性を定常発現プロモーターの発現を内部標準として評価し、それにより化学物質の毒性評価を行うことができる。免疫毒性評価用の哺乳類細胞と化学物質を接触させたときに、化学物質非接触時と比べ、IL4、IL2、IL8、IL22、IL12p40、HO1、IL1β及びIFNγのmRNAもしくはタンパク質の発現量が増加した場合、該化学物質は免疫を賦活化したと判断する。一方、IL4、IL2、IL8、IL22、IL12p40、HO1、IL1β及びIFNγの発現量が低下した場合には、化学物質は免疫を抑制したと判定される。活性評価に関しては、化学物質が、活性評価対象プロモーターの活性を増加もしくは減少させた場合に、活性が高いもしくは低いと評価する。免疫評価の対象となるプロモーターは、哺乳類細胞の種類によっても異なる。Jurkat細胞についてはIL2、IL4、IL22、IFNγが好ましく例示され、IL2、IL4、IFNγが好ましく、これらは1つ又は2つ以上のプロモーターを組み合わせて使用することができる。好ましいJurkat細胞用のプロモーターの組合せとしては、IL4とIFNγの組合せ、IL2とIFNγの組合せが挙げられる。U937細胞についてはIL1β、IL8が好ましく例示され、これらは1つ又は2つ以上のプロモーターを組み合わせて使用することができる。好ましい組合せはIL1βとIL8の組合せである。またTHP1細胞についてはIL8が好ましく例示され、これらは1つ又は2つ以上のプロモーターを組み合わせて使用することができる。一方プロモーター配列は免疫毒性評価に最適化された転写開始点付近から上流に1kb以上の配列が例示される。より詳しくは、IL2遺伝子プロモーターとして配列番号22推定転写開始点3003位、IL4遺伝子として配列番号19推定転写開始点4996位、IFNγ遺伝子プロモーターとして配列番号15推定転写開始点4986位、IL1β遺伝子プロモーターとして配列番号25推定転写開始点5007位、IL8推定転写開始点5060位として配列番号28が例示され、免疫毒性評価に最適化されたプロモーター配列としては、それぞれ転写開始点から上流1kbから転写開始点までの配列を含むことが望ましい。前記推定転写開始点とは、それぞれの遺伝子のmRNAのReferenceSequenceの5’末端の塩基とした。本発明の哺乳類細胞は、定常発現プロモーターを有するものである。定常発現プロモーターとしては、G3PDH、TK、βactinなどが挙げられ、G3PDHが好ましい。定常発現プロモーターは通常1つが哺乳類細胞内に導入されるが、2以上の定常発現プロモーターを細胞に導入してもよい。本発明の哺乳類細胞は、免疫毒性の評価を行うための細胞であるので、生理活性物質、薬物候補化合物などの化学物質の活性評価対象遺伝子のプロモーターにレポーター遺伝子を連結した遺伝子構築物を細胞内に導入する必要は必ずしもないが、評価対象遺伝子のプロモーターを導入した細胞に薬物候補物質を作用させれば、薬物候補化合物の免疫毒性と活性評価を同時に行うことができる。レポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、蛍光タンパク質、着色タンパク質などが挙げられるが、2種以上、好ましくは3種以上のレポーター遺伝子のシグナルを区別して検出することが必要であるので、ルシフェラーゼ遺伝子が好ましい。以下、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼ遺伝子の場合を例に挙げて説明する。ルシフェラーゼ遺伝子は、2つ以上のルシフェラーゼ由来の発光量を測定し、それらの相対比率を算出することが重要であるので、2つ以上、好ましくは3つ以上のルシフェラーゼについて発光波長が測定条件例えばpHに実質的に依存しない光を発光することが必要である。また、ルシフェラーゼが測定条件に依存しない光を発し、それらをカラーフィルター等で相互の光の発光量の比率を測定可能であるなら、フィルター前後での各発光の透過率より各発光は定量できるので、相互に分別可能な光を発光する2以上のルシフェラーゼが必要である。本明細書において、発光波長が測定条件に実質的に依存しないとは、pH、温度、濃度などが変化しても、最大発光波長の変動が3nm以下、好ましくは2nm以下、さらに好ましくは1nm以下、特に好ましくは0.5nm以下である。最大発光波長の変化量がこの範囲内であれば、複数のルシフェラーゼ質の発現量をフィルター等で分離して定量する場合、相互のルシフェラーゼ質の比率がほとんど変化しないため好ましい。2つ以上のルシフェラーゼが同じルシフェリンにより発光する場合、発光波長が測定条件に実質的に依存しない条件に当てはまる。2つ以上のルシフェラーゼについてルシフェリンが異なる場合、全てのルシフェラーゼについて、発光波長が測定条件に実質的に依存しないことが望ましい。本明細書において、相互に分別可能な光を発光する2以上のルシフェラーゼとは、例えばフィルターカラーフィルター、バンドパスフィルターなどを用いて相互の光の発光量の比率を測定可能であることを意味する。例えば、鉄道虫由来の赤色、緑色ルシフェラーゼ、イリオモテボタル由来の橙色、緑色ルシフェラーゼなどは、フィルターを使用することにより、緑色同士を除き、相互の光の発光量の比率を測定可能である。相互の光の発光量の比率を測定可能であるためには、フィルターの性能や各発光スペクトルのピーク形状にもよるが、最大発光波長が通常20nm以上、好ましくは30nm以上、より好ましくは40nm以上、特に好ましくは50nm以上離れているのが好ましい。この程度の最大発光波長の分離があれば、例えば各最大波長間のフィルターを使用し、フィルターの前後での各発光の透過率を測定して換算することで、各発光の発光量を同時に定量することができる。本発明で使用される好ましいルシフェラーゼは、鉄道虫由来の緑~赤その変異体を含む、最大発光波長:535~635nm、例えば540~630nmのルシフェラーゼ、ヒカリコメツキムシのオレンジ~緑その変異体を含む、最大発光波長:530~600nmのルシフェラーゼ、イリオモテホタルのオレンジ~緑その変異体を含む、最大発光波長:550~590nmのルシフェラーゼなどが挙げられる。例えば鉄道虫の場合、赤色最大発光波長622nmと緑色最大発光波長545nmのルシフェラーゼが知られているがUS2002/0119542-A1、この2種以外にも540~635nmの間の光を発光する多数のルシフェラーゼが存在していることを本発明者は確認しており、これらのルシフェラーゼは、全て使用可能である。例えば、鉄道虫由来の最大発光波長622nm昆虫または大腸菌で発現の赤色ルシフェラーゼは、哺乳類細胞中で発現すると最大発光波長が630nmにシフトすることを本発明者は確認した。特に、最大発光波長がある程度離れている複数のルシフェラーゼを有する鉄道虫、イリオモテボタルなどに由来するルシフェラーゼを使用する場合、1つの発光基質例えば鉄道虫、イリオモテボタル、ヒカリコメツキムシ由来のルシフェラーゼではホタルルシフェリンを使用できるを使用して、共発現させた複数のルシフェラーゼに由来する発光量の同時定量が可能であり、各プロモーターの発現量の比を正確に測定することができる。また、発光波長が測定条件例えばpHに依存しない光を発光するルシフェラーゼとして、青色に発光するウミシイタケルシフェラーゼ、渦鞭毛藻の各種ルシフェラーゼ全配列或いはドメイン1,ドメイン2,ドメイン3などの発光ドメインを含む;特開2002-335961;LiL.,HongR.,HastingJW.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA199794,8954、ウミボタルルシフェラーゼ、ガウシアルシフェラーゼをさらに組み合わせて使用することができる。鉄道虫、イリオモテボタル、ヒカリコメツキムシ由来のルシフェラーゼを使用すると、ホタルルシフェリンを使用できるので、バックグラウンドを低くすることが可能である。また、渦鞭毛藻のルシフェラーゼとルシフェリンの組み合わせについても、バックグラウンドが低く好ましい。さらには、細胞外にルシフェラーゼが分泌するウミボタルやガウシアルシフェラーゼの組み合わせも、培養液の一部で細胞の活性を測定することからバックグラウンドに影響しないことから好ましい。本発明の好ましい組み合わせとしては、定常発現プロモーターを鉄道虫赤色ルシフェラーゼ、毒性評価プロモーター1をイリオモテボタル橙色又は緑色ルシフェラーゼでモニターする方法である。さらに好ましくは、毒性評価プロモーター2または活性評価プロモーターとしてイリオモテボタル緑色又は橙色ルシフェラーゼでモニターすることによって、3つもプロモーター活性を同時に測定することが可能である。赤色、橙色、緑色ルシフェラーゼについては、互いに入れ替えることも可能である。さらに好ましい例として、定常発現プロモーターを鉄道虫赤色ルシフェラーゼ、毒性評価プロモーター1、2をイリオモテボタル緑色、橙色ルシフェラーゼで、活性評価プロモーターをウミボタル/渦鞭毛藻/ガウシア青色ルシフェラーゼで、モニターすることによって、4つのプロモーター活性を同時に測定する方法である。本発明の好ましい実施形態の1つにおいて、鉄道虫、イリオモテボタルのルシフェラーゼを使うことで1種類のルシフェリンでも少なくとも3つのプロモーターの発現量の定量が可能である例えば鉄道虫の赤色ルシフェラーゼと、イリオモテボタルの橙色及び緑色ルシフェラーゼVR.Viviani,A.Uchida,N.Suenaga,M.RyufukuY.Ohmiya:Thr-226isakey-residueforbioluminescencespectradeterminationinbeetleluciferases2001Biochem.Biophys.Res.Communi.280,1286-1291。また、青色ルシフェラーゼウミシイタケ、渦鞭毛藻またはウミボタルの各ルシフェラーゼを合わせて4種以上は可能である。上手なフィルター設定により540-635nm緑から赤色、好ましくは540-630nmの中で複数の発現解析は可能であり、さらに基質の違う青色のルシフェラーゼにより1種類を加えることができる。よって、ルシフェラーゼの同時測定としては、同じルシフェリンで3つ以上、違うルシフェリンも用いて4つ以上の同時定量が可能である。本発明の好ましい実施形態としては、例えばレポーター遺伝子のmRNAのコピー数を増やすことであるので、例えばcDNAの配列を、昆虫のコドンユーセージコドンの使用頻度の偏りを哺乳類用に変えること、さらには、余分な転写因子が結合しないように、cDNAの配列を変えること、さらに使用上、制限酵素部位が多いことで応用が限定されることからそのcDNAを変えることが挙げられる。このような手法も、鉄道虫ルシフェラーゼ、イリオモテボタルルシフェラーゼの哺乳類細胞内での発現に有効であった。特にコドンユーセージコドンの使用頻度の偏りを哺乳類用に変えること、さらには、余分な転写因子が結合しないように、cDNAの配列を変えることは有効である。cDNAの配列の変更は、以下の点を1~4の順に考慮して行うことができる:1ルシフェラーゼのアミノ酸配列はできるだけ変更しないのがよい好ましくは全く変更しない;2次に、余分な転写因子が結合しないように、cDNAの配列を変更する;3さらに、cDNAの配列において、昆虫のコドンユーセージを哺乳類用に変更する;4必要に応じてさらに、制限酵素部位をなくすようにcDNA配列を変更する。上記は、鉄道虫由来のルシフェラーゼ、イリオモテボタルルシフェラーゼの発現について記載したが、ヒカリコメツキムシなどの他の生物由来のルシフェラーゼについても同様に当てはまる。本明細書において、ルシフェラーゼは、ルシフェラーゼなど、ルシフェリン光化学反応を触媒する発光酵素群を包含し、ルシフェラーゼにはエクオリンのようなものも含まれる。また、ルシフェリンの構造を変化させることにより発光作用を有するような、触媒作用ルシフェリンを酸化して発光物質に変換する作用の弱いタンパク質も、発光波長が測定条件例えばpHに実質的に依存しない限り本発明のルシフェラーゼに含まれ得る。ルシフェラーゼとしては、同一の発光基質で発光する2以上のルシフェラーゼの組み合わせが望ましい。測定条件により発光波長が実質的に変化せず、且つ、同一の発光基質で発光する好ましいルシフェラーゼとしては、鉄道虫由来の赤色ルシフェラーゼおよび鉄道虫由来の緑色ルシフェラーゼ、或いは540~635nm程度、好ましくは540~630nm程度の範囲の発光波長を有する鉄道虫由来の他のルシフェラーゼ、さらにはイリオモテボタル由来の緑色ルシフェラーゼおよびイリオモテボタル由来の橙色ルシフェラーゼが好ましく例示され、これ以外にも、ヒカリコメツキムシ由来の530~600nm程度ルシフェラーゼ、が例示される。特に、鉄道虫由来の赤色/緑色ルシフェラーゼ、イリオモテボタル由来の橙色/緑色ルシフェラーゼは、ルシフェラーゼ量が同一であれば発光強度も同程度であるので、プロモーターの転写活性をマルチに定量するのに好都合である。本発明において、哺乳類としては、ヒト、ウシ、ウマ、ヒツジ、サル、ブタ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、イヌが挙げられ、好ましくはヒトである。少なくとも2つのルシフェラーゼ遺伝子は、同一の発光基質で異なる色を発光し、細胞内寿命が同程度であるのがよく、この点でも鉄道虫由来の赤色/緑色ルシフェラーゼ、イリオモテボタル由来の橙色/緑色ルシフェラーゼは好ましく、特に鉄道虫由来の赤色ルシフェラーゼ、イリオモテボタル由来の橙色/緑色ルシフェラーゼは好ましい。さらに、本発明で使用する発光波長が測定条件例えばpHにより変化しない少なくとも1つ、好ましくは少なくとも2つのルシフェラーゼ及びこの標準化のための他のルシフェラーゼの各々異なる発光色は、フィルターで分離可能であることが、各発光色の簡単な装置での定量のために好ましい。本発明のルシフェラーゼ遺伝子としては、野生型又は変異型ルシフェラーゼ遺伝子をそのまま使用することもでき、該ルシフェラーゼ遺伝子とストリンジェントな条件下にハイブリダイズし得るDNA、該ルシフェラーゼの1又は複数のアミノ酸が置換、付加、欠失または挿入され、且つルシフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを該ルシフェラーゼ遺伝子として使用することが可能である。1つの好ましい実施形態において、本発明者は様々な発現系を検討することにより、ルシフェラーゼの哺乳類細胞での安定発現のためには、翻訳を効率化するエレメント及び/又はmRNAの安定化エレメントを遺伝子構築物に導入することが重要であることを見出した。翻訳を効率化するエレメントとしては、kozak配列Koなどが例示され、mRNAの安定化エレメントとしては、β-globinintronIIなどが例示される。また、cDNAの配列を、昆虫のコドンユーセージコドンの使用頻度の偏りを哺乳類用に変えること、さらには、余分な転写因子が結合しないように、cDNAの配列を変えることもルシフェラーゼの哺乳類細胞での安定発現のために好ましいことを確認した。一つの好ましい実施形態において、本発明の遺伝子構築物にはルシフェラーゼ遺伝子、該遺伝子の上流側にプロモーター、翻訳を効率化するエレメント及び/又はmRNAの安定化エレメントを含み、さらにエンハンサ、IRES、SV40pA、薬剤耐性遺伝子Neorなどを含み得る。本発明の好ましい遺伝子構築物の例を以下に示す。1毒性評価もしくは活性評価対象のプロモーター-コザック配列-赤、緑又は橙色ルシフェラーゼ-SV40ポリA配列2毒性評価もしくは活性評価対象のプロモーター-コザック配列-赤、緑又は橙色ルシフェラーゼ-IRES-Neor遺伝子などの薬剤耐性遺伝子-SV40ポリA配列本発明の遺伝子構築物は、そのままで哺乳類細胞に導入してもよいが、ベクター例えばプラスミドやウイルスベクターを含むに組み込んで哺乳類細胞に導入するのが好ましい。遺伝子構築物に複数のルシフェラーゼを発現可能に組み込んだ場合には、1つの遺伝子構築物または発現ベクターを哺乳類細胞に導入すればよいが、1つの遺伝子構築物に1つのルシフェラーゼを組み込んだ場合には、複数の遺伝子構築物または発現ベクターを同時にまたは逐次的に哺乳類細胞に常法に従って導入すればよい。好ましい実施形態において、免疫毒性の評価法は、Jurkat細胞、U937細胞、THP1細胞に、以下に述べる遺伝子プロモーター下流に多色発光ルシフェラーゼを含む遺伝子を導入した長期安定培養細胞から構築される。具体的には、東洋紡製赤色発光ルシフェラーゼベクターpSLR、橙色発光ルシフェラーゼベクターpSLO、緑色発光ルシフェラーゼベクターpSLGを好ましく用いることができる。Jurkat細胞においては、種々の化学物質刺激後に変動が予想される細胞数を補正するための内部標準としてG3PDH遺伝子プロモーターをpSLRに、T細胞におけるAP1、NFAT、NFκB転写因子活性化の指標としてIL2遺伝子プロモーターをpSLGに、また、T細胞におけるSTAT1、STAT4、Tbet、Runx3、Hlx、Smad34転写因子活性化の指標としてIFNγ遺伝子プロモーターをpSLOに挿入したプラスミド群を用い、それらを導入した安定細胞株Jurkat2H4を作成した。IL2遺伝子及びIFNγ遺伝子のプロモータ配列は、転写開始点上流1kb、さらに好ましくは3kb以上を含むものである。より詳しくは、IL2遺伝子プロモーターとしては、上流3kbの配列が配列番号22に記載され、転写開始点が3003位付近と推測されることから、上流1kbとは配列番号22の2003位付近から下流の配列、上流3kbとは配列番号22の3位付近から下流の配列を意味する。一方、IFNγ遺伝子プロモーターとしては、上流5kbの配列が配列番号14に記載され、転写開始点が4986位付近と推測されることから、上流1kbとは3986付近から下流の配列、上流3kbとは1986位付近から下流の配列を意味する。また、U937においては、G3PDH遺伝子プロモーターをpSLR、purinergicreceptorやmitogenactivatedproteinkinaseの関与する刺激伝達系およびAP1、NFκB転写因子活性化の指標としたIL8遺伝子プロモーターをpSLGに、また、NFκB、AP1、NFIL6、CREATF転写因子活性化の指標としてIL1β遺伝子プロモーターをpSLOに挿入したプラスミド群を用い、それらを導入した安定細胞株U9376C12を作成した。IL8遺伝子及びIL1β遺伝子のプロモーター配列は転写開始点上流1kb、さらに好ましくは3kb以上を含むものである。より詳しくは、IL8遺伝子プロモーターとしては、上流5kbの配列が配列番号28に記載され、転写開始点が配列番号28の5060位付近と推定されることから、上流1kbとは4060位付近から下流の配列、上流3kbとは2060位付近から下流の配列を意味する。一方、IL1β遺伝子プロモーターとしては、上流5kbの配列が配列番号25に記載され、転写開始点が5007位付近と推定されることから、上流1kbとは4007位付近から下流の配列、上流3kbとは2007位付近から下流の配列を意味する。さらにTHP1においてはG3PDH遺伝子をpSLR、purinergicreceptorやmitogenactivatedproteinkinaseの関与する刺激伝達系およびAP1、NFκB転写因子活性化の指標としたIL8遺伝子をpSLGに挿入したプラスミド群を用い、それらを導入した安定細胞THPG8株を作成した。化学物質の評価に際しては、Jurkat2H4株に関しては、必要に応じて、化学物質処理後にPMAとIonomycinによる刺激を加え、SLO、SLR、SLG3色のルシフェラーゼ活性を定量した。U9376C12株に関しては、必要に応じて、化学物質処理後にLPSによる刺激を加えルシフェラーゼ活性を定量した。またTHPG8株に関しては必要に応じて、化学物質処理後にLPSによる刺激を加えルシフェラーゼ活性を定量した。さらにTHPG8株では活性酸素ReactiveOxygenSpecies産生阻害剤であるNacetylcysteineNACを処理してルシフェラーゼ活性を定量した。いずれの場合も化学物質処理後、24時間培養後に、望ましくは12時間培養後に、さらに望ましくは6時間培養後に測定することでルシフェラーゼ活性を定量した。その結果、この評価法により、デキサメサゾン、シクロスポリンなどの免疫抑制薬剤、ディーゼルエンジン排気微粒子、ホルマリンなどの環境汚染物質、dinitrochlorobenzen、ニッケルなど感作性物質の免疫毒性をハイスループットに既存の知識と矛盾なく評価できた。以下、本発明を実施例に従いより詳細に説明するが、本発明が実施例に限定されないことは言うまでもない。実施例1ルシフェラーゼ安定導入用発現プラスミドの構築多色発光細胞の構築にさきがけ、赤、橙、緑の3色の発光ルシフェラーゼSLR、SLO、SLGを発現するスタンダードタイプのベクターpSLRtest、pSLOtest、pSLGtest東洋紡績のルシフェラーゼ遺伝子及びそれにつながるpolyA付加シグナルの下流に、ピューロマイシン、ネオマイシンG418、ハイグロマイシンBに対する薬剤耐性遺伝子コーディング配列StreptomycespuromycinNacethyltransferase、aminoglycoside3’transferase遺伝子、Ecoliハイグロマイシン耐性遺伝子を、哺乳類細胞において安定発現可能なようにSV40プロモーター配列及びHSVtkpolyA付加配列とともにそれぞれ挿入し、安定導入用のベクターを構築した。まず、図1に示すように、まず、SV40プロモーターについては、5’末端に制限酵素SacIの認識配列、3’末端に制限酵素SwaIの認識配列を付加するように設計したオリゴヌクレオチド配列番号1、2をプライマーとして、プラスミドpPurを鋳型にPCR酵素KODPlus東洋紡績社製を用いたPCRで増幅した。この際、SwaI配列を含むオリゴヌクレオチドは、あらかじめT4PolynucleotideKinase東洋紡績を用いて5’末端をリン酸化した。一方、HSVtkpolyA付加配列については、5’末端に制限酵素PacIの認識配列、3’末端に制限酵素BamHIの認識配列を付加するように設計したオリゴヌクレオチド配列番号3、4をプライマーとして、プラスミドpTKhygクロンテックを鋳型にPCRで増幅した。この際、PacI配列を含むオリゴヌクレオチドは、あらかじめT4PolynucleotideKinaseを用いて5’末端をリン酸化した。その後、SV40プロモーター断片をSacI、HSVtkpolyA断片をBamHI、赤色発光プローブ遺伝子のスタンダードベクターpSLRtestとSacIとBamHIでそれぞれ消化し、ライゲーション、形質転換を実施し、SV40プロモーター、HSVtkpolyA付加配列が挿入されたpSLRtestを取得した。続いて、pSLRtestの制限酵素SwaI、PacIサイトの間に、薬剤耐性遺伝子のORFを挿入した。詳しくは、図2に示すように、各薬剤遺伝子の5’末端にSwaI、3’末端にPacIの認識配列を付加するように設計したオリゴヌクレオチドプライマーハイグロマイシン耐性遺伝子については配列番号5、6、ネオマイシン耐性遺伝子については配列番号7、8、ピューロマイシン耐性遺伝子については配列番号9、10を用いて、プラスミドpTKhyg、pOPI3CATストラタジーン、またはpPurを鋳型に、各薬剤耐性遺伝子断片をPCRで増幅し、これら断片とpSLRtestをSwaISmiI、PacIで消化後、ライゲーション、形質転換を実施し、pSLRtest、pSLRtest、pSLRtestを取得した。挿入された薬剤耐性遺伝子には、タンパク質への翻訳効率を高めるため、薬剤耐性遺伝子ORFの開始メチオニンに相当するコドン配列のすぐ上流にKozak配列を導入している。最後に、赤色発光ベクターから、ハイグロマイシン、ネオマイシン薬剤耐性遺伝子の発現カセットを緑色、橙色発光ベクターへ移した。具体的には、図3に示すように、pSLRtest、pSLRtestをSacI、BamHIで消化して、-Hygromycin耐性遺伝子-HSVtkpolyA、またはSV40プロモーター-Neomycin耐性遺伝子-HSVtkpAの各カセットを切り出し、同じくSacI、BamHIで消化したスタンダードタイプのpSLGtest、pSLOtestとそれぞれライゲーション反応を行い、pSLGtest、pSLOtestを構築した。実施例2G3PDH遺伝子発現制御領域のクローニング転写開始点データベースDBTSS非特許文献1よりG3PDH遺伝子のmRNAのReferenceSequenceNoNM002046の5’末端を転写開始点として想定し、上流1373b、下流128bの配列を抽出した配列番号11。当該領域をクローニングすべく、オリゴヌクレオチドプライマー配列番号12、13を設計し、ヒトゲノムDNAを鋳型としてPCRによって核酸断片を増幅し、制限酵素MluI、EcoRIで当該断片とpSLRtestPurを消化した後、ライゲーション反応を行い、pG3PDHSLRPurを構築した。非特許文献1SuzukiYetalNucleicAcidsRes30328331実施例3IFNγ遺伝子発現制御領域のクローニング転写開始点データベースDBTSSよりIFNγ遺伝子のmRNAのReferenceSequenceNoNM000619の5’末端を転写開始点として想定し、上流4985b、下流91bの配列を抽出した配列番号14。この配列をもとに、上流5kbp、1kbpまたは05kbpから下流01kbをクローニングすべく、上流側のオリゴヌクレオチドプライマー配列番号15、16、17及び下流側のプライマー配列番号18を設計し、ヒトゲノムDNAを鋳型として高正確性PCR酵素KODPlus東洋紡績を用いたPCRによって4985位~91位、965位~91位、480位~91位の核酸断片を増幅した。図4に、PCRに用いたプライマーの塩基配列と配列番号14の塩基配列の位置関係を示した。また、このプライマーには、上流側5’末端に制限酵素SalI、下流側5’末端に制限酵素NheIの認識配列を付加しておき、前記核酸断片及び発光プローブベクターpSLGtest、pSLOtestを制限酵素SalI、NheIで消化した後、ライゲーション反応を行い、pIFNγ5kSLGHyg,pIFNγ1kSLGHyg,pIFNγ05kSLGHyg,pIFNγ5kSLONeo,pIFNγ1kSLONeoIFNγ05kSLONeoを各々構築した。実施例4一過的発現によるIFNγ遺伝子構築物の反応性の確認JurkathumanacuteTlymphoblasticleukemiacellline以下、Jurkat細胞を10非動化済みFetalbovineserumを添加したRPMI1640で培養し、トランスフェクションの直前に、24ウェルプレートに1×106cells播種した。1ウェル当たり、IFNγ発光プローブ発現プラスミドpIFNγ5kSLGHyg、pIFNγ1kSLGHyg、またはpIFNγ05kSLGHygをそれぞれ、インターナルコントロールとなるpG3PDHSLRと1:1で1μgとなるように混合し、SuperFectTransfectionReagent8μlとインキュベートし、Jurkat細胞にトランスフェクションした。翌日、いったん細胞を回収し、1ウェルあたり1mlのPRMI164010FBS培地に細胞を懸濁し、1μMIonomycin、25nMPMAで3、5、7、24時間処理し、100μlを分取し、同量の発光試薬MultiReporterAssaySystemTriplucAssayReagent登録商標、東洋紡績を加えて、AB-2250ルミネッセンサーMCAアトーで発光量を測定した。IFNγの転写活性を示すSLG発光値をインターナルコントロールであるSLRの発光値でそれぞれ正規化し、この正規化された相対発光量をプロットしたものが図5である。さらに、PMAIonomycinで処理したサンプルと処理していないサンプルの相対発光量の比を算出しプロットしたものが図6である。この結果、IFNγの上流5kbを含む遺伝子構築物について、PMAIonomycinによる活性化処理に対し、特に顕著な発現誘導が認められ、マーカーとして有用であると考えられた。実施例5IL4、IL2遺伝子発現制御領域のクローニングIL4遺伝子について、転写開始点データベースDBTSSより、mRNAのReferenceSequenceNoNM000589の5’末端を転写開始点として想定し、上流4995b、下流166bの配列を抽出した配列番号19。この配列をもとに、上流5kbpから下流02kbをクローニングすべく、上流側のオリゴヌクレオチドプライマー配列番号20及び下流側のプライマー配列番号21を設計し、ヒトゲノムDNAを鋳型としてKODPlusを用いたPCRによって当該領域の核酸断片を増幅した。また、IL2遺伝子については、同様に、転写開始点データベースDBTSSより、mRNAのReferenceSequenceNoNM000586の5’末端を転写開始点として想定し、上流3002b、下流280bの配列を抽出した配列番号22。この配列をもとに、上流3kbpから下流03kbをクローニングすべく、上流側のオリゴヌクレオチドプライマー配列番号23及び下流側のプライマー配列番号24を設計し、当該領域の核酸断片をPCRで増幅した。この際、IL4遺伝子については、オリゴヌクレオチドの上流側5’末端に制限酵素SalI、下流側5’末端に制限酵素NheIの認識配列を、IL2遺伝子については、オリゴヌクレオチドの上流側5’末端に制限酵素XhoI、下流側5’末端に制限酵素MluIの認識配列を付加しておき、前記核酸断片及び発光ベクターpSLGtestを制限酵素SalI、NheI、またはXhoI、MluIで消化した後、ライゲーション反応を行い、pIL4SLGHyg及びpIL2SLGHygを構築した。実施例62色細胞JurkatIFNγSLOG3PDHSLRの樹立24ウェルプレートに15×106cellsmlで350μlwellずつ4ウェルにJurkat細胞を播種し、1μgwellずつpG3PDHSLRPurのトランスフェクションし、翌日、細胞を4ウェル分まとめて回収し、01μgmlPuromycinInvivogenを含むRPMI164010FBS培地5mlに置換して60mmディッシュで一週間選択培養を実施した。続いて、96ウェルプレートに1cellwell、または200cellswellになるように細胞を播種した後、2週間、二次選択培養を行った。ここで得られた細胞のうち、シグナルが良いクローンについて、Puromycin濃度を015μgmlに上げて1cellwellでリクローニングを実施した。この際、フィーダー細胞として未導入Jurkat細胞を200cellswell添加した。ここで増殖が認められたクローンについて、2×105cellsの細胞を用いてルシフェラーゼアッセイを行い、G3PDHSLRの発光シグナルの高い安定導入株JurkatG3PDHSLR14D1を樹立した。続いて、前記クローン14D1に、前記と同じ要領でpIFNγ5kSLONeoをトランスフェクションし、翌日、015μgmlPuromycin及び300μgmlG418ナカライテスクを含むRPMI164010FBS培地に置換して一週間選択培養を実施した。さらに、1cellwell、または100cellswellで96ウェルプレートに播種して2週間の二次選択培養を行い、ここで増殖が認められたクローンについては、白色96ウェルプレート上で2×105cellsの細胞をPMAIonomycinで処理してルシフェラーゼアッセイを実施し、ARVOmxパーキンエルマー社製を用いて発光量を測定し、各色のシグナル強度及び2色のバランスから、JurkatIFNγSLOG3PDHSLR導入株としてクローン2B12を樹立した。実施例73色細胞JurkatIL4SLGIFNγSLOG3PDHSLRの樹立続いて、前記JurkatIFNγSLOG3PDHSLR2B12株に、前記と同じ要領でpIL4SLGHygをトランスフェクションし、翌日、015μgmlPuromycin、300μgmlG418、200μgmlHygromycinInvivogenを含むRPMI164010FBS培地5mlに置換して60mmディッシュで選択培養を実施した。さらに、1cellwell、または100cellswellで96ウェルプレートに播種してクローニングを行い、ここで増殖が認められたクローンについては、白色96ウェルプレート上で2×105cellsの細胞をPMAIonomycinで処理してルシフェラーゼアッセイを実施し、ARVOmxパーキンエルマー社製を用いて発光量を測定し、3色のバランスを評価し、3クローンを取得した。図7は、取得したJurkatIL4SLGIFNγSLOG3PDHSLR導入株としてクローン8A2、8G10、10C6について、PMAIonomycinによる細胞活性化処理の有無に対する各ルシフェラーゼの発光量をプロットしている。図8は、インターナルコントロールであるSLRの発光値でそれぞれ正規化されたIL4転写活性を示すSLG発光正規化値、IFNγの転写活性を示すSLO発光正規化値、及び、PMAIonomycin処理に対する変動比をプロットしている。この結果、いずれのクローンも細胞活性化処理に対して応答性を示すことを確認した。IL4については、2倍前後の応答性に対し、IFNγは5~7倍の大きな応答性を示すことが確認された。実施例83色細胞JurkatIL2SLGIFNγSLOG3PDHSLRの樹立続いて、pIL4SLGHygの代わりに、pIL2SLGHygを、前記JurkatIFNγSLOG3PDHSLR2B12株に、前記と同じ要領でpIL2SLGHygをトランスフェクションし、翌日、015μgmlPuromycin、300μgmlG418、200μgmlHygromycinを含むRPMI164010FBS培地5mlに置換して60mmディッシュで選択培養を実施した。さらに、200cellswellで96ウェルプレートに播種してクローニングを行い、ここで増殖が認められたクローンについては、白色96ウェルプレート上で2×105cellsの細胞をPMAIonomycinで処理してルシフェラーゼアッセイを実施し、ARVOmxパーキンエルマー社製を用いて発光量を測定し、3色のバランスを評価した。図9は、取得したJurkatIL2SLGIFNγSLOG3PDHSLR4クローン2F12、2H4、2A5、7C12について、PMAIonomycinによる細胞活性化処理の有無に対する各ルシフェラーゼの発光量をプロットしている。図10は、インターナルコントロールであるSLRの発光値でそれぞれ正規化されたIL2の転写活性を示すSLG発光補正値、IFNγの転写活性を示すSLO発光正規化値SLOSLR、及び、PMAIonomycin細胞活性化処理に対する変動比をプロットしている。IL2については、PMAIonomycinによる細胞活性化処理なし時のシグナルがほとんどゼロであったことから、変動比を省略した。この結果、いずれのクローンも細胞活性化処理に対して非常に高い応答性を示すことを確認した。特に、IFNγについても5~9倍程度の応答性が認められ、良好なマーカーであるが、さらにIL2では細胞活性化処理なしではほとんど転写活性が認められず、細胞活性化処理で高いシグナルが認められるようになることから、感度の高いマーカーであることが分かる。以後の解析にはJurkatIL2SLGIFNγSLOG3PDHSLR2H4株Jurkat2H4を用いた。実施例9IL1β遺伝子、IL8遺伝子発現制御領域のクローニングIL1β遺伝子について、転写開始点データベースDBTSSより、mRNAのReferenceSequenceNoNM000576の5’末端を転写開始点として想定し、上流5006b、下流56bの配列を抽出した配列番号25。この配列をもとに、上流5kbpから下流02kbをクローニングすべく、上流側のオリゴヌクレオチドプライマー配列番号26及び下流側のプライマー配列番号27を設計し、ヒトゲノムDNAを鋳型としてKODPlusを用いたPCRによって当該領域の核酸断片を増幅した。また、IL8遺伝子については、同様に、転写開始点データベースDBTSSより、mRNAのReferenceSequenceNoNM000584の5’末端を転写開始点として想定し、上流5059b、下流144bの配列を抽出した配列番号28。この配列をもとに、上流5kbpから下流01kbをクローニングすべく、上流側のオリゴヌクレオチドプライマー配列番号29及び下流側のプライマー配列番号30を設計し、当該領域の核酸断片をPCRで増幅した。この際、IL1β遺伝子については、オリゴヌクレオチドの上流側5’末端に制限酵素ClaI、下流側5’末端に制限酵素MluIの認識配列を、IL8遺伝子については、オリゴヌクレオチドの上流側5’末端に制限酵素SalI、下流側5’末端に制限酵素MluIの認識配列を付加しておき、前記核酸断片及び発光プローブベクターpSLGtestを制限酵素ClaI、MluI、またはSalI、MluIで消化した後、ライゲーション反応を行い、pIL1βSLGHyg及びpIL8SLONeoを構築した。実施例103色細胞U937IL1βSLGIL8SLOG3PDHSLRの構築マクロファージ細胞株U937細胞に対して、24ウェルプレートに1×106cellsmlで500μlwellずつ4ウェルに細胞を播種し、LipofectamineLTXインビトロジェンを用いて、25μgwellずつpG3PDHSLRPurのトランスフェクションし、翌日、細胞を4ウェル分まとめて回収し、015μgmlPuromycinを含むRPMI164010FBS培地5mlに置換して60mmディッシュで一週間選択培養を実施した。続いて、96ウェルプレートを用いて、1cellwellで播種し、フィーダー細胞として未導入U937細胞を200cellswell追加する方法で二次選択を行った。増殖が認められたクローンについて、発光シグナル、細胞の増殖性、pIL1βSLGのトランスフェクションによる一過的発現を評価し、U937G3PDHSLR9A6を取得した。次に、前記9A6株に、同様の要領で、pIL1βSLGHygをトランスフェクションし、一次選択、二次選択を実施した。事前のHygromycin濃度検討を行った結果から、80μgml及び120μgmlで薬剤選択を実施した。しかしながら、2週間の一次選択の結果、生細胞が極めて少なかったことから、12日間、抗生物質を抜いて培養し、生存増殖が確認された後、再度、015mgmlPuromycin、及び80μgmlまたは120μgmlHygromycinを添加した培地に戻し、二次選択を実施した。この結果、120μgmlHygromycinによる選択から、良好な2色細胞を獲得した。各色のシグナル強度、バランス、IL1βの誘導率から7クローンに絞り込み、さらに、細胞増殖性を重視し、2色細胞U937IL1βSLGG3PDHSLRとして6C12を選定した。続いて、前記6C12株に、同様の要領で、pIL8SLONeoをトランスフェクションし、その後、一次選択、二次選択を実施した。選択薬剤は015μgmlPuromycin、300μgmlG418、Hygromycinについては120μgmlまたは200μgmlで選択を開始し、それぞれの選択で生細胞を確認後、二次選択を行った。その結果、U937IL1βSLGG3PDHSLR6C12を親細胞とした系列で、Hygromycin120μgmlの条件で68クローン、200μgmlの条件での選択で17クローンに成功した。取得したクローンについて、1×105cellsを10μgmlLPSで6時間処理し、ルシフェラーゼアッセイを行い、シグナル強度、応答性を評価した。図11には、そのうち代表的な6クローンについてのインターナルコントロールであるG3PDHの転写活性を示すSLR、IL1βの転写活性を示すSLG、IL8の転写活性を示すSLOの発光値をプロットしている。さらに、インターナルコントロールSLRでそれぞれ正規化されたIL1β転写活性を示すSLG発光正規化値、IL8の転写活性を示すSLO発光正規化値を算出し、未処理に対するLPS細胞活性化処理後の変動比をプロットしている。この結果、細胞活性化処理によって、IL1βについては5~10倍、IL8については11~21倍という高い応答を示したことから、マーカーとして良好な転写調節領域を取得できたと考えられる。以後の解析にはU937IL1βSLGIL8SLOG3PDHSLR6C12株U9376C12を用いた。実施例11Jurakt2H4細胞における細胞活性化処理時間の検討Jurkat2H4細胞における化学物質免疫毒性を高感度に再現性良く評価するためにPMAIonomycinによる細胞活性化処理時間を検討した。Jurkat2H4細胞を4×105cellwellで黒色プレートに播種した後、1μMPMA25nMIonomycinを加えて、一定時間保持後に、540nm及び590nmのロングパスフィルターを組み込んだMithrasLB960ベルトールドテクノロジーにおいて、ルシフェリン溶液を加えて、2秒間発光値を測定した。図12は6時間後、24時間後に測定した結果であり、内部標準であるG3PDHの転写活性を示すSLR、IL2の転写活性を示すSLG、IFNγの転写活性を示すSLOの発光値をプロットしている。さらに、インターナルコントロールSLRでそれぞれ正規化されたIL2転写活性を示すSLG発光正規化値、IFNγの転写活性を示すSLO発光正規化値を算出し、未処理に対するPMAIonomycin活性化処理後の変動比をプロットしている。その結果、6時間、24時間後のどちらにおいてもPMAIonomycinの添加により、IL2SLG及びIFNγSLOの強度は増強、各標的遺伝子のプロモーター領域は活性化された。しかしながら、内部標準であるG3PDHSLRの強度は6時間ではほとんど変化がなかったのに対し24時間において非常に低下することが示された。加えてIL2及びIFNγの強度も、24時間では低下していることが示されたことから、24時間後のアッセイでは適さないことが示された。処理後6時間では、内部標準が動かないことに加え、PMAIonomycin細胞活性化処理により各標的遺伝子の誘導が十分見られた。よって、以後Jurkat2H4細胞では化学物質処理時間を6時間としてアッセイすることにした。実施例12U9376C12細胞における細胞活性化処理時間の検討U9376C12細胞における化学物質免疫毒性を高感度に再現性良く評価するためLPSによる細胞活性化処理時間を検討した。U937細胞を5×105cellwellで黒色プレートに播種した後、100ngmlLPSを加えて、一定時間保持後に、Pheliosアトーにおいて、ルシフェリン溶液を加えて、5秒間発光値を測定した。図13で明らかなように、時間が経つに従い、LPSの添加によりIL1βSLG及びIL8SLOの強度は増強、各標的遺伝子のプロモーターが活性化されていることを確認した。処理時間と共に活性化を示すシグナル強度は増加したが9時間を経過すると、シグナル強度は低下することが示されたことから、それ以降の測定では、十分な強度が得られなかった。さらに6時間と8時間のLPSに対するシグナル強度の変化がほとんど変わりなかった。よって、以後U9376C12細胞では化学物質処理時間を6時間としてアッセイすることにした。実施例13Jurkat2H4細胞、U9376C12細胞における化学物質評価Jurkat2H4細胞安定株に関しては、サイトカイン、医薬品例としてデキサメサゾン、シクロスポリン、マイトマイシンC、ビタミンD、環境化学物質、感作性物質、dinitrochlolobenzeneを評価した。また、U9376C12に関しては、医薬品例としてデキサメサゾン、シクロスポリン、環境化学物質を評価した。Jurkat2H4細胞については、試験前々日もしくは前日に継代及び培地交換した細胞を、greiner社製の96ウェル黒プレートに4×105cellswellで播種した。次いでサイトカインIL4、IL10、IFNγ、IP101030100ngml、デキサメサゾンDex01110μM、シクロスポリンCyA001011μM、マイトマイシンC0080421050μgml、ビタミンD01110μMニッケル1003001000μM、ホルマリン100150200250300μMディーゼルエンジン排気微粒子DieselexhaustparticlesDEP1030100μgmlで処理を行い、37°C5CO2でインキュベートした。次いで、化学物質処理して1時間後にPMA及びIonomycinによる細胞活性化処理を行い、さらに37°C、5CO2でインキュベートした。PMAIonomycin処理して6時間後にTriplucAssayReagentを添加し、540nm及び590nmのロングパスフィルターを組み込んだMithrasLB960を用いて発光量を測定したのち、G3PDHでデータの正規化をした。化学物質未処理のサンプルのPMAIonomycin活性化処理による誘導率を基準に、図14に示す判定チャートをもとに、抑制率値ないし、賦活化率値を算出し、免疫賦活もしくは免疫抑制効果を判定した。U9376C12細胞については、試験前々日もしくは前日に継代及び培地交換した細胞を、greiner社製の96ウェル黒プレートに5×104cellswellで播種した。次いで、デキサメサゾンDex107106105M、シクロスポリンCyA108107106M、ホルマリン30100300μM、ディーゼル排気微粒子DieselexhaustparticlesDEP1030100μgmlで前処理し、1時間後、LPS100μgmlによる細胞活性化処理を行った。6時間後、TriplucAssayReagentを使用し、Pheliosを用い発光量を測定した。化学物質未処理のサンプルをLPSで刺激したときのIL1βIL8レポーター活性を100とし、図14に示す判定チャートをもとに、各化学物質存在時のIL1βIL8レポーター活性の抑制率値ないし、賦活化率値を算出し、免疫賦活もしくは免疫抑制効果を判定した。なお判定チャートでは化学物質非存在下におけるPMAIonomycin、またはLPSでの細胞活性化処理による誘導を100とした場合の化学物質存在下における同処理に対する相対発現量を指標としており、上の数値は免疫抑制/賦活化指数を表し、一方、下の数値はPMAIonomycinまたはLPSでの細胞活性化処理に対するマーカー遺伝子の相対発現量を表している。結果1.Jurkat2H4細胞株に関してJurkat2H4細胞安定株は、ルシフェラーゼ遺伝子上流にIL2ないしはIFNγのプロモーター領域を含んでいる。そこで、IL2遺伝子の転写に関連するNFAT、NFκB、AP1およびIFNγ遺伝子の転写に関連するSTAT1、STAT4、Tbet、Runx3、Hlx、Smad34などの活性化に影響を及ぼす化学物質を評価できる。実際に、Jurkat2H4細胞安定株を用いて上記化学物質を評価したところ以下の表1に示す結果が得られた。※免疫抑制賦活化効果この結果は、このレポーター細胞を用いることにより、化学物質をIL2あるいはIFNγレポーター活性の抑制を指標にしてT細胞の転写因子の活性化に影響を及ぼす種々の化学物質の影響を評価できることを示す。さらに具体的には、この細胞を用いることで、免疫増強作用、抑制作用を推測できること、また、IL2レポーターのIL2あるいはIFNγレポーター活性の抑制賦活化指数を指標に化学物質のT細胞に対する免疫抑制作用あるいは免疫賦活作用を、また、IL2とIFNγレポーター活性の抑制率の比を指標に化学物質のThバランスに及ぼす影響を推測できることを示している。2.U9376C12細胞安定株に関して一方、U9376C12細胞安定株は、ルシフェラーゼ遺伝子上流にIL1βないしはIL8のプロモーター領域を含んでいる。そこで、IL1β遺伝子の転写に関連するNFκB、AP1、NFIL6、CREATFおよびIL8遺伝子の転写に関連するmitogenactivatedproteinkinaseの活性化、およびAP1、NFκBの活性化に影響を及ぼす化学物質を評価できる。実際に、U9376C12細胞安定株を用いて上記化学物質を評価したところ以下の表2に示す結果が得られた。※免疫抑制賦活化効果この結果は、このレポーター細胞を用いることにより、化学物質をIL1βあるいはIL8レポーター活性の抑制賦活化指数を指標にしてマクロファージ、樹状細胞の転写因子の活性化に影響を及ぼす種々の化学物質の影響を評価できることを示す。さらに具体的には、この細胞を用いることで、免疫賦活作用、抑制作用を推測できることを示している。実施例142色免疫毒性評価THP1細胞IL8SLOG3PDHSLRの樹立免疫毒性評価THP1細胞株を作製するため、内部標準としてG3PDHプロモーター転写開始点上流13kbを含む下流にSLRを導入したプラスミド、IL8プロモーター転写開始点上流5kbpを含む下流にSLOを導入したプラスミドを作成した実施例9。なお、これらのプラスミドはSLR、SLOの下流にはそれぞれピューロマイシン、ネオマイシンの各耐性遺伝子を含む。ホストであるTHP1細胞へのトランスフェクションには、前日に2×105cellsmlで継代したものを使用した。トランスフェクション後の薬剤選択条件は、一次選択では薬剤存在下で1週間し、二次選択培養では一次選択培養で生き残った細胞を96ウェルプレートに1cellwellまたは100cellswellで播種し、同じ薬剤条件で2週間培養した。二次選択培養後の細胞についてはシグナル強度および薬剤処理によるシグナルの誘導の2点からクローン選択を行った。マクロファージ細胞株THP1細胞のトランスフェクションでは、1×106cellsに対し、1μgのプラスミドをnucleofectorLonsaを使用して導入した。まずG3PDHプロモーターSLRを導入し、選択薬剤015μgmlピューロマイシンを用いてシグナルの良い1色安定株TGC17を樹立した。それを親株として、続いてIL8プロモーターSLOを導入し、選択薬剤015μgmlピューロマイシン、300μgmlネオマイシンを用いて2色安定株THPG8細胞を樹立し、シグナルバランスも良好であったことから、以後の解析にはTHP1IL8SLOG3PDHSLRTHPG8株THPG8を用いた。THPG8細胞については、試験前々日もしくは前日に継代及び培地交換した細胞を、greiner社製の96ウェル黒プレートに5×104cellswellで播種した。LPSDNCB等のハプテンまたはlacticacid等のイリタントで刺激した。6時間後、TriplucAssayReagentで処理した後、Pheliosを用いて発光量を測定した。データ取得後、内部標準であるG3PDHプロモーター活性でデータの正規化をした。次いで、溶媒のみで刺激したときのIL8レポーター活性を1とし化学物質で刺激した時のIL8誘導率を算出した。図15は各種化合物質を対象として賦活化を評価した結果である。THPG8安定細胞株は、他の実施例における安定細胞株と同様、ルシフェラーゼ遺伝子上流にIL8のプロモーター領域を含んでおり、これらの結果はIL8遺伝子の転写に関連するmitogenactivatedproteinkinaseの活性化、およびAP1、NFκBの活性化に影響を及ぼす化学物質を評価できることを示している。これらの結果は、IL8レポーター活性の上昇もしくは抑制を指標にして、単球や樹状細胞における転写因子の活性化に影響を及ぼすような種々の化学物質の影響を評価できることを示す。さらに具体的には、この細胞を用いることで、免疫増強作用、抑制作用を推測できることを示している。実施例15THPG8細胞における化学物質評価及び化学物質感作能の評価THPG8細胞については、試験前々日もしくは前日に継代及び培地交換した細胞を、greiner社製の96ウェル黒プレートに5×104cellswellで播種した。NAcetylcysteineNAC25mM存在下または非存在下に1時間培養したのち、LPSDNCB等のハプテンまたはlacticacid等のイリタントで刺激した。6時間後、TriplucAssayReagentで処理した後、Pheliosを用いて発光量を測定した。図16はデータ取得後、内標であるG3PDHプロモーター活性でデータの正規化をした結果である。次いで、溶媒のみで刺激したときのIL8レポーター活性を1とし化学物質で刺激した時のIL8誘導率を算出した。また、NAC存在下のIL8誘導率をNAC非存在下のIL8誘導率で除することによりNACによるIL8誘導の抑制率を算出した。その結果、活性酸素ReactiveOxygenSpecies産生阻害剤であるNacetylcysteineNACを併用することにより、化学物質の感作能を推測できることに加え、化学物質が接触アレルゲンもしくは一次刺激性物質であるかについても、簡便に評価できることを示している。"