"-少なくとも1種のヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤、および-少なくとも1種のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤、を含む組成物の、皮膚老化、早期皮膚老化、筋肉脂肪皮膚老化、早老症、リポジストロフィーおよび/または拘束性皮膚障害の治療のための使用。HMG-CoA還元酵素阻害剤がスタチンファミリーの1分子またはその生理学的に許容される塩の1種である、請求項1に記載の使用。HMG-CoA還元酵素阻害剤が水溶性スタチンである、請求項2に記載の使用。HMG-CoA還元酵素阻害剤が、アトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、リバスタチン、メバスタチンまたはコンパクチン、フルインドスタチン、ベロスタチン、フラバスタチン、ダルバスタチン、セリバスタチン、ペントスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチンまたはそれらの生理学的に許容される塩からなる群から選択される、請求項2または3に記載の使用。ファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤がアミノビホスホネートNBPファミリーの1分子またはその生理学的に許容される塩の1種を含む群から選択される、請求項1から4のいずれか一項に記載の使用。アミノビホスホネートが、-アレンドロ酸またはそのイオン型、アレンドロネート、-クロドロン酸またはそのイオン型、クロドロネート、-エチドロン酸またはそのイオン型、エチドロネート、-イバンドロン酸またはそのイオン型、イバンドロネート、-メドロン酸またはそのイオン型、メドロネート、-ネリドロン酸またはそのイオン型、ネリドロネート、-オルパドロン酸またはそのイオン型、オルパドロネート、-パミドロン酸またはそのイオン型、パミドロネート、-リセドロン酸またはそのイオン型、リセドロネート、-チルドロン酸またはそのイオン型、チルドロネート、-ゾレドロン酸またはそのイオン型、ゾレドロネート、-4-N、N-ジメチルアミノメタンジホスホン酸またはそのイオン型、ジメチルアミノメタンジホスホネート、-α-アミノ-4-ヒドロキシベンジリデンジホスホネートから選択することができる、請求項5に記載の使用。ファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤が、ゾレドロン酸またはそのイオン型、ゾレドロネートである請求項1から6のいずれか一項に記載の使用。組成物が、局所的、経皮性または経皮的用途のための組成物または経口投与のための組成物である請求項1から7のいずれか一項に記載の使用。長い研究の末、本発明者らは、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムA還元酵素阻害剤スタチンファミリーおよびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤アミノビホスホネートファミリー、NBPまたはそれらの生理学的に許容される塩の1種の組み合わせは、C15およびC20、または特徴付けられていない形態によるタンパク質プレニル化経路全体に対して作用するという意味で、細胞内におけるプレニル化タンパク質の蓄積および/または残存に関連する病理学的または非病理学的状態の有効な治療であることを示した。本発明者らはまた、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤の組み合わせが早老症の患者の線維芽細胞における正常な表現型の回復において相加的効果を有することを確認した。組み合わせの効果は、1つまたはもう1つの阻害剤を個々に使用した効果よりも明らかに優れているVarelaら、200854再出。早老症の患者の細胞に対して組み合わせを用いると、タンパク質プレニル化が阻害され、したがって、ファルネシル化されていないプレラミンAが出現し、核の徴候が改善され、DNA再分配の異常が部分的に改善される。プレニル化阻害はまた、拘束性皮膚障害のマウスモデルにおいて認められ、マウスの寿命は一部回復するVarelaら、200854再出。抗レトロウイルス治療は、複数の代謝経路および複数の細胞区画、細胞基質、核質およびミトコンドリアを標的とする。これらの治療の副作用は、LMNA遺伝子またはZMPSTE24遺伝子の突然変異によって引き起こされる遺伝的ラミノパシーの患者で認められる臨床的および生物学的徴候のいくつかを再度生じさせる。これらの突然変異に共通な点は、それらがラミンAまたはプレラミンAに結合したファルネシル基を保持していることである。このファルネシル基は、ラミンAをラミナレベルで核膜の核質側に固定し、一方、核質の残部は可溶性ラミンAを含まない。ラミンA分布のこれら2つの異常は、いくつかの核代謝経路DNA複製および修復、遺伝子転写、テロメア短小化などのレベルの有害な結果を引き起こし、ミトコンドリアを含むその他の細胞区画にも有害な影響を与える。細胞の一般的な機能不全は、老化を加速させ、細胞寿命を短縮させる。レトロウイルス治療の1ファミリー、プロテアーゼ阻害剤は、ZMPSTE24を阻害し、プレラミンAの成熟を遮断し、ファルネシル化プレラミンAの細胞内の残存を引き起こす。添付の図9は、本発明者らによって開発され、プレラミンの成熟異常およびそれらの機能的結果に基づく老化理論を概略的に示している。さらに、ウイルスプロテアーゼ阻害剤である、抗レトロウイルス薬の第2のファミリーのウイルスヌクレオチド逆転写酵素阻害剤のミトコンドリアに対する間接的効果は、その機能異常が老化に関係することが知られている小器官ミトコンドリアを直接破壊する。したがって、これら2種類の抗レトロウイルス治療がAIDSウイルスに感染した患者において老化の加速を引き起こす機構を分析し、これらの機構が遺伝的ラミノパシーの患者において老化の加速を引き起こす機構と同等であることを確かめるのが目的である。本発明者らは、抗レトロウイルス治療の前述の副作用を、-少なくとも1種のヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤またはその生理学的に許容される塩の1種、および-少なくとも1種のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤またはその生理学的に許容される塩の1種を含む組成物、またはそれらを組み合わせた治療によって最小限に抑えることができることを推定した。したがって、本発明は、少なくとも1種のヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤、少なくとも1種のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤またはその生理学的に許容される塩の1種を含む組成物に関する。この組成物は、例えば、細胞内におけるプレニル化タンパク質の蓄積および/または残存に関連する病理学的または非病理学的状態を治療するために企図することができる。特に、本発明によれば、この組成物はHIV感染患者の治療に有用である。本発明はまた、抗HIV薬が抗レトロウイルス薬または抗レトロウイルス薬の混合物である本発明の組成物に関する。本発明はまた、抗HIV薬がプロテアーゼ阻害剤または逆転写酵素阻害剤である本発明の組成物に関する。本発明はまた、抗HIV薬がホスアンプレナビル、ロピナビル、リトナビル、アンプレナビル、アタザナビルおよびインジナビルを含む群から選択されたプロテアーゼ阻害剤である本発明の組成物に関する。本発明はまた、抗HIV薬がジドブジン、ラミブジン、ジダノシンおよびエプジコムを含む群から選択された逆転写酵素阻害剤である本発明の組成物に関する。本発明の組成物では、抗HIV薬はまた、ウイルスの1種または複数の抗プロテアーゼおよび/またはウイルスの1種または複数の逆転写酵素阻害剤および/またはウイルスの細胞侵入の1種または複数の阻害剤および/または1種または複数のインテグラーゼ阻害剤および/または抗ウイルス効果を有するその他の任意の治療薬、特に国内および/または国際規制委員会および科学団体によって認識されている任意の治療薬を組み合わせたものであってもよい。本発明はまた、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤の両方である化合物を使用した本発明の組成物の使用に関する。非常に具体的には、本発明による組成物は、プロゲリンの細胞内での蓄積および/または残存に関連した副作用を発症しているHIV感染患者の治療を企図しており、さらにより具体的には、切断型もしくは修飾型、または非切断型もしくは非修飾型のファルネシル化プレラミンAの細胞内での蓄積および/または残存に関連した状態の治療を企図している。本発明によれば、任意のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤またはその生理学的に許容される塩の1種を本発明による組成物の調製に使用することができる。生理学的に許容される塩は、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸またはリン酸、カルボン酸、例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸など、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸などのアルカンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸もしくはパラトルエン酸などのアルカンアリールスルホン酸で形成される塩であってもよい。特に、ファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤は、ポリホスホネートファミリーの構成要素の1つ、特にアミノビホスホネートNBP、またはその生理学的に許容される塩の1種であってもよい。ポリホスホネートは、骨粗鬆症および骨再生の治療に通常使用される合成分子である。ホスホネートという用語は、ホスフェートと非常に類似した分子に適用する。ビホスホネートBPの核は、例えば、ATPのようにP-O-P結合と同等であるが、酸素が炭素によって置換されている。これはこれらの分子に非常に特異的な安定性をもたらしている。単純なビホスホネートは、ADPと同等で、2個のリン酸基O3P-がビビホスホネート基によって置換されている。中心の炭素は、リン酸の酸素とは異なり、2つの結合にまた関与することができ、これはビホスホネートの特異性を構成するこの炭素に付加した基の性質である。側鎖R1およびR2がアミン官能基NH、またはより一般的には1個または複数の窒素原子を含むとき、アミノビホスホネートまたはNBPと称する。もちろん、その他の置換基を酸素に結合させることができる。ピロリン酸または溶液中のピロリン酸塩PPiは、基質輸送体として数多くの代謝反応で使用され、反応の終了時に回復する。ピロリン酸塩に結合した分子を使用する代謝経路の1つは、タンパク質プレニル化の代謝経路である。イソペンテニル-PPC5をベースにした単位をゲラニル-PPC10に付加してファルネシルPPとする、ファルネシルピロリン酸合成酵素FPSによって触媒される反応は、PPiを遊離する。NBPによって特異的に阻害されるのはこの段階である。この点に関して、一例として、アミノビホスホネートファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤は、-アレンドロ酸またはそのイオン型、アレンドロネート-クロドロン酸またはそのイオン型、クロドロネート、-エチドロン酸またはそのイオン型、エチドロネート、-イバンドロン酸またはそのイオン型、イバンドロネート、-メドロン酸またはそのイオン型、メドロネート、-ネリドロン酸またはそのイオン型、ネリドロネート、-オルパドロン酸またはそのイオン型、オルパドロネート、-パミドロン酸またはそのイオン型、パミンドロネート、-リセドロン酸またはそのイオン型、リセドロネート、-チルドロン酸またはそのイオン型、チルドロネート、-ゾレドロン酸またはそのイオン型、ゾレドロネート、-4-N,N-ジメチルアミノメタンジホスホン酸またはそのイオン型、ジメチルアミノメタンジホスホネート、-α-アミノ-4-ヒドロキシベンジリデンジホスホネートから選択することができる。好ましくは、本発明によれば、ゾレドロン酸ゾレンドロン酸とも呼ぶまたはそのイオン型、ゾレドロネートゾレンドロネートとも呼ぶを使用することが好ましい。本発明によれば、任意のHMG-CoA還元酵素阻害剤またはその生理学的に許容される塩の1種を組成物の調製に使用することができる。特に、HMG-CoA還元酵素阻害剤は、脂溶性もしくは水溶性のスタチンファミリーの1分子、またはその生理学的に許容される塩の1種であることができる。スタチンは、真菌で同定された。スタチンは、コレステロールおよびステロイドの生合成における重要な酵素で、メバロン酸溶液中ではメバロネートにおけるコエンザイムAに結合したヒドロキシメチルグルタレートの還元を触媒するHMG-CoA還元酵素に対して阻害活性を有する。この阻害は、それらの構造がヒドロキシメチルグルタレート骨格と類似していることによって保証される。関与した代謝経路は、コレステロール生合成の代謝経路であることは明らかであるが、プレニル基、細胞中の約300種のタンパク質を修飾し、親脂質性の尾部を結合させ、特に膜への固定を可能にするために使用される5個のイソプレン炭素をベースにした単位の重合体の合成経路でもある。いずれもピルビン酸およびHMG-CoAから得られる主要なポリプレンは、ゲラニルC10、ファルネシルC15およびゲラニル-ゲラニルC20である。スタチンは全て全面的に肝臓選択的であるが、どのスタチンも細胞に侵入する様式は同じではない。実際に、プラバスタチンおよびロスバスタチンはいずれも親水性で、したがって、親脂質性であるその他のいずれのものとも異なり水溶性であり、したがって、原形質膜脂質二重層から自由に拡散することができ、それによって高い毒性が確実に説明される。水溶性スタチンは、細胞に侵入するために特異的な輸送体、有機アニオン輸送体3、またはOAT3、またはSLC22A8を必要とするTakedaaら、200446。スタチンは通常高コレステロール血症を治療するために使用され、それらの副作用は稀であるが、詳細に特徴付けられている。これらは特に、横紋筋融解症の症例で使用した分子によって症例の1から7、Evansら、200212、その早期徴候、治療患者の筋肉痛は、治療の即時中断の原因となる。この点に関して、および一例として、スタチンはアトルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、リバスタチン、メバスタチンまたはコンパクチン、フルインドスタチン、ベロスタチン、フラバスタチン、ダルバスタチン、セリバスタチン、ペントスタチン、ロスバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチンまたはそれらの生理学的に許容される塩の1種から選択することができる。ロバスタチン、プラバスタチンおよびシンバスタチンは、真菌代謝から得られる分子であり、一方、その他アトルバスタチン、セリバスタチン、フラバスタチン、ピタバスタチンおよびロスバスタチンは、完全に合成されている。好ましくは、本発明によれば、半天然の水溶性スタチンであるプラバスタチンを使用する。もちろん、本発明によれば、1種、2種以上のHMG-CoA還元酵素阻害剤と関連して1種、2種以上のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤を使用することが可能である。本発明の特定の形態によれば、この組成物は、HIV感染患者の治療および抗HIV治療の副作用の治療の両方を企図することができ、例えば、皮膚老化、体毛もしくは毛髪の脱毛、骨粗鬆症および脂肪萎縮症の治療を企図することができる。本発明によれば、ファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤およびHMG-CoA還元酵素阻害剤は、生理学的有効量で組成物中に存在することが有利である。一般的に、投与する量は、患者、病変、投与様式などにしたがって適合させることができる。所望によりその他の活性成分または任意の担体と組み合わせて反復使用することもできると考えられる。一般的に、阻害剤の1日用量は、所望する効果を得るために必要な最小限の用量である。本発明によれば、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤、ファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤および抗HIV薬は組成物中で、1種または複数の不活性な、すなわち、生理学的に不活性で毒性のない賦形剤もしくは担体と混合して使用することができる。例えば、HIV感染患者の治療を企図した薬剤および付随する抗HIV薬で通常使用される成分を挙げることができる。本発明の組成物はまた、少なくとも1種のその他の活性成分、特に、例えば、同時もしくは別々に使用するため、または使用するガレノス製剤にしたがって徐々に拡散使用するための別の治療活性成分を含めることができる。このその他の成分は、例えば、HIV感染患者で発症し得る日和見疾患の治療で使用される活性成分であってもよい。本発明の組成物は、HIV感染患者の治療ならびに抗HIV薬の使用によって引き起こされる皮膚障害の予防および/または治療の両方に使用することができる組成物である。この組成物は、HIV感染患者の多重療法の一部として使用することができる。抗HIV薬は、単一剤または多剤複数の抗HIV薬の混合物であってもよい。多重療法例えば、2重、3重もしくは4重療法の場合、阻害剤の混合物は1種または複数の抗HIV薬を伴うことができる。抗HIV薬はまた、ウイルスの1種または複数の抗プロテアーゼおよび/またはウイルスの1種または複数の逆転写酵素阻害剤および/またはウイルスの細胞侵入の1種または複数の阻害剤および/または1種または複数のインテグラーゼ阻害剤および/または抗ウイルス効果を有するその他の任意の治療薬、特に国内および/または国際規制委員会および科学団体によって承認された任意の治療薬を組み合わせたものであってもよい。したがって、本発明はまた、本発明による組成物の投与を含む、HIV感染患者の治療プロセスに関する。本発明の組成物は前記に定義された通りである。本発明によれば、投与は、抗HIV組成物の投与について当業者に公知の経路のいずれかによって実施することができる。例えば、経口投与または注射であってもよい。前記で示したように、本発明の組成物の投与用量は、患者の必要性に左右され、何が患者によって生理学的に許容されるかを考慮することによっても決定される。本発明の組成物における阻害剤の量は、一例として、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤0.01から2mg/kg体重の用量およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤0.01から40mg/kg体重の用量の投与を可能にするようなものであってもよい。本発明によれば、一例として、本発明の組成物中のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤とヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムA還元酵素阻害剤またはそれらの生理学的に許容される塩の1つとの比は、0.01から0.2の間、好ましくは0.05から0.35であることができる。本発明の組成物中の抗HIV薬の量は、HIV感染患者の治療における当業者の現在の知識に応じて通常決定される。例えば、HIV感染患者において通常使用されるものから選択することができる。この文書で記載した抗HIV薬例のそれぞれおよびこの文書で記載した抗HIV薬の混合物または組み合わせのそれぞれについての抗HIV薬濃度の例は、VIDALDictionary商標登録されている、例えば、2007年版に挙げられている。この辞書に示された濃度はまた、ヒト用に認可されたものである。本発明はまた、抗HIV治療を受けている患者において引き起こされる早期老化および/または脂肪萎縮症の副作用を治療する方法であって、少なくとも1種のヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤および少なくとも1種のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤を含む混合物を投与することを含む方法に関する。投与の条件、量および経路は、この文書で記載した通り、例えば前記の通りであることができる。抗HIV薬は、例えば、抗HIV薬または前記で定義した通りの組み合わせである。本発明は一般的に、例えば、早期老化に医原性効果を有する治療のための補助剤として前述した阻害剤の混合物を適用することに関し、例えば、特にこの医原性効果を引き起こす少なくとも1種の抗プロテアーゼを含む抗HIV療法の補助剤を適用することを含む。したがって、この文書で引用した副作用を引き起こす任意の治療は、本発明が関与する。本発明はまた、任意の順番で、-少なくとも1種のヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤および少なくとも1種のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤を含む混合物を投与するステップ、-抗HIV薬を投与するステップを含み、該投与が同時、連続または交互である、HIV感染患者の治療方法に関する。本発明によれば、前記混合物および前記抗HIV薬は、共投与することができる。これには、前記で定義した本発明の方法が関与する。本発明によれば、抗HIV薬は前記で定義した通りであることができる。本発明によれば、投与の少なくとも1つは、経口または注射によって実施することができる。2つの投与は、同様の方法または異なる方法で実施することができる。言い換えると、この記載において、一組成物について述べている場合でも、該組成物の各化合物は、その他の化合物と同時に投与してもよく例えば、単一の組成物中で、または2種類の組成物中または3種類の組成物中で、これらの組成物はそれぞれ前述の化合物の1つまたはいくつかを含み、各化合物または組成物複数可の投与様式は同一であるか、または異なっていてもよい、あるいは互いに独立して、例えば、連続的であってもよく、例えば、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤の独立した投与、少なくとも1種のファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤の独立した投与および抗HIV薬の独立した投与であってもよく、これらの投与は同じ患者に前述の順番または別の順番で同時に、または連続的に、または交互に実施する。これらの様々な投与は、互いに独立して、または一緒の様式で組成物または共投与、同一または異なる投与様式注射、経口経皮摂取、局所塗布などによって、1日1回または数回で、1日または数日連続して、または連続しないで実施することができる。本発明によれば、阻害剤の前記混合物の投与は、例えば、ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤0.01から2mg/kg体重の用量およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤0.01から40mg/kg体重の用量で実施することができる。抗HIV薬の投与は、前記で指示したように実施することができる。単なる一例として、前記で定義した本発明の方法の1つまたはその他の実施のための投薬量を以下の表に記載する。本発明による組成物中の阻害剤および抗HIV薬の量の例は、この表から得ることができる。本発明によれば、本発明を実施するために使用できる抗HIV薬に関する投薬量は、当業者には公知であり得る。例えば、VIDALDictionary商標登録されている、例えば、2007年版に記載された投薬量であってもよい。前述した抗HIV薬の例のそれぞれおよび前述した抗HIV薬の混合物もしくは会合物のそれぞれについてまた、本発明を実施するために使用できる投薬量はVIDALDictionary商標登録されている、例えば、2007年版に見出されるだろう。その他の利点はまた、例示目的であり、添付の図面に示された以下の実施例から当業者には明らかになり得る。水溶性ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤水溶性スタチン:プラバスタチンおよびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤アミノビホスホネート:ゾレドロネートの組み合わせの正常細胞培養および早老症細胞培養に対する相加的効果A.方法A.1.細胞および細胞培養細胞系は、CorinellInstituteの対照線維芽細胞AG16409か、または拘束性皮膚障害の患者の生検が得られた線維芽細胞である。それらを、P2培養室内で5CO2の下で37°Cで培養する。通常の完全培養培地は、-牛胎児血清20Invitrogen-L-グルタミン200mMInvitrogen-ペニシリン/ストレプトマイシン/ファンギゾン1X保存液100X、Cambrexの混合物を補給した、-RPMIInvitrogenである。A.2.細胞収集細胞の収集は、以下のように大フラスコ、75cm2、BDFalcon用プロトコールトリプシン処理することによって実施する。-培地を超音波処理し、-細胞をPBS1XInvitrogen10mlで洗浄し、-トリプシン/EDTA1XCambrexの溶液5mlを添加し、-フラスコを37°Cで約6分間インキュベートし、この時間は細胞を脱離するためにかかる時間であり、-トリプシンは完全培地15mlで希釈することによって阻害し、-細胞を16°Cで1000rpmで10分間遠心分離することによってペレットにして、-外ペレットをPBS1X2mlに再懸濁し、同一条件下で再び遠心分離する。得られた細胞は、後で使用するために凍結させるか、またはこの洗浄ペレットから継代培養する。A.3.処理使用したプラバスタチン水溶性スタチン溶液は以下のように調製する。プラバスタチンSigmaAldrich、P449840mgを滅菌水に入れ、10mM保存溶液を作製する。試験した最終濃度は、完全培地で保存溶液を希釈することによって得られた500nM、1、5、50および100μMであった。使用したゾレンドロネート溶液NBPは以下のように調製する。1-ヒドロキシ-2-イミダゾール-1-イル-1-ホスホノ-エチルホスホン酸保存溶液0.8mg/ml、Novartisは、濃度2mMに調節する。試験した最終濃度は、完全培地で保存溶液を希釈することによって得られた500nM、1、5、50および100μMであった。A.4.ウェスタンブロットA.4.1細胞の調製ウェスタンブロット実験用に、細胞は以下のように処理する。約7.5×105細胞を大フラスコに接種し、集密に近づくまで4日間前記の条件下で培養する。4日後、細胞をPBS1Xで洗浄し、処置物で置換した完全培地に入れる。細胞は37°Cのインキュベータ内で処理時間6から72時間、連続的に、または同時にインキュベートする。処理後、細胞をトリプシン処理し前記プロトコール、得られたペレットはタンパク質抽出を行うまで-80°Cで保存する。A.4.2ウェスタンブロット用のタンパク質抽出細胞ペレットを溶解緩衝液300μlに入れる。TritonX1001SDS0.1デオキシコール酸ナトリウム0.5NaCl50mMEDTA1mMTrisHClpH7.420mMプロテアーゼ阻害剤50ml当たり1錠Roche11697498001即時調合して、以下を添加する。バナジン酸ナトリウム1mMPMSF1mM細胞を30秒間2回超音波処理に曝露するBrandsonSonifierCellDisruptorB15。細胞残渣は、4°Cで10000rpmで10分間遠心分離する。タンパク質上清は、使用するまで-80°Cで保存する。タンパク質アッセイは、解凍時に実施する。4.3ウェスタンブロット-ゲルラミンA/Cの様々な形態を検出するため、通常8アクリルアミドゲルを使用する。アクリルアミド/ビスアクリルアミド37/18TrisHClpH8.8375mMSDS0.1APS0.1TEMED0.01濃縮ゲルを分離ゲル上に注ぐ。アクリルアミド/ビスアクリルアミド37.5/13TrisHClpH6.8375mMSDS0.1APS0.1TEMED0.01試料のタンパク質濃度をアッセイし、画分をqsf15μlの溶解緩衝液で管当たり50μgに調節する。添加緩衝液5μlを各試料に添加する。SDS4TrisHClpH6.8100mMグリセロール20β-メルカプトエタノール20ブロモフェノールブルー微量試料は、95°Cで5分間加熱することによって変性させ、ウェル中に沈着させる。移動は、緩衝液、Tris塩基0.3グリシン1.44SDS0.1において50、次いで100ボルトで行う。-転写転写膜HybonP、AmershamBiosciencesは、エタノール、その後滅菌水浴に5分間、転写緩衝液Tris塩基12mMグリシン96mMエタノール20に10分間浸漬することによって調製する。ゲルは、転写緩衝液中で20分間湿らせ、次いでサンドイッチを組み立てるMiniproteansystem、Biorad。転写は一般的に、冷却した容器内で、10ボルトで一晩行う。該膜をPBS1Xで濯ぎ、加湿した環境で保存し、検出時に使用する。-検出該膜は、室温で、飽和溶液、カゼイン10Tween200.1PBS1Xでインキュベートする。洗浄緩衝液Tween200.1/PBS1Xで10分間2回濯ぐ。一次抗体を飽和緩衝液詳細および希釈は以下の免疫標識を参照のことで希釈する。該膜は、撹拌しながら室温で1時間、一次抗体でインキュベートする。その後、洗浄緩衝液で3回濯ぎ、同緩衝液で15分間3回洗浄する。2次抗体ペルオキシダーゼに結合した系、JacksonImmunoresearchは、飽和緩衝液で1/10000に希釈する。該膜は、撹拌しながら室温で30から45分間、この溶液でインキュベートする。その後、洗浄緩衝液で3回濯ぎ、次に同緩衝液で15分間3回洗浄する。検出は、AmershamBioscienceのECLPlusウェスタンブロッティングシステムキットを使用して、製造者の指示に従って実施する。検出後、該膜をBiomaxMRフィルムKodakに、十分なシグナルを得るのに必要な時間量曝露する。A.5免疫標識A.5.1細胞の調製細胞培養物をトリプシン処理し、細胞をNeubauer血球計数器で計数する。Labtech培養ウェルNunc、参考番号177399に、ウェル当たり5×104細胞の量で接種する。完全培養培地に処置複数可スタチン、NBP、両方を補給し、細胞を臨機応変な時間で培養する。その後、培養培地を吸引し、ウェルを解体する。スライドは、PBS1Xで洗浄する。細胞は、パラホルムアルデヒド4溶液PBSに溶かすで、室温で10分間固定する。PBS1Xで10分間洗浄を実施する。細胞は、エタノールの割合を高めた溶液中で3分間ずつ入れて70、90、100、最後の浸漬は反復する脱水する。乾燥後、スライドは使用するまで-80°Cで保存する。A.5.2標識解凍後、細胞を加湿した容器内で、透過溶液、PBS1XTritonX1000.5RNSウサギの正常血清、VectorS50005プロテアーゼ阻害剤50mlに1錠Roche11697498001の50μl中で5分間室温でインキュベートする。15分ずつ3回の予備インキュベーション浴は、インキュベーション溶液PBS1XRNS5プロテアーゼ阻害剤50mlに1錠Roche1169749800150μlで実施する。一次抗体は、インキュベーション溶液50μlで1/100に希釈し、加湿した容器内で室温で1時間細胞と接触させる。使用した1次抗体は2種類で、-マウス抗ラミンA/CN末端側、クローン4A7、G.MorrisOswastry、UKより恵与、-ヤギ抗プレラミンAC末端15aa、製品SC6214、SantaCruzBiotchnology、Inc.である。PBS1X50μlによる3回の洗浄は、それぞれ15分間実施する。2次抗体とのインキュベーションは、加湿した容器内で室温でインキュベーション溶液50mlで1時間行う。第2抗体は、2種類で、-ロバ抗マウス、JachsonImmunoresearch、1/100に希釈、-ロバ抗ヤギ、JachsonImmunoresearch、1/200に希釈である。PBS1X50μlによる3回の洗浄は、それぞれ15分間実施する。DAPI50ng/ml溶液SERVA、参照番号18860100μlとのインキュベーションは、加湿した容器内で室温で15分間実施する。PBS1Xによる3回の洗浄は、スライドホルダータンク内でそれぞれ5分間実施する。最終洗浄は、PBSに溶かしたTween20の0.1溶液中で5分間実施する。A.5.3表示細胞を1滴のVectaShieldVectorに浸し、対物カバーガラスで覆い、coolSNAPカメラPrincetonを備えた蛍光顕微鏡LeicaDMR、LeicaMicrosystemsで観察する。B.結果B.1.ウェスタンブロット図1正常な対照線維芽細胞は、水溶性スタチンプラバスタチンP、20から100μMおよびアミノビホスホネートNBP、ゾレドロネートZ、20から100μMで一緒に処理したAからIの列はそれぞれP20/Z20、P20/Z60、P20/Z100、P60/Z20、P60/Z60、P60/Z100、P100/Z20、P100/Z60、P100/Z100である。ウェスタンブロットによって、2種類の分子の濃度の増加に応じて成熟していないプレラミンA切断されていないの大きさに対応するバンドの出現が示され、ファルネシル化がラミンAの成熟に不可欠であることは確かである。この結果は、プレラミンAのファルネシル化の阻害において、少なくとも生体外では、代謝経路の2箇所におけるファルネシル-PP合成の遮断が、1箇所だけの遮断よりも効果的であることを示している。B.2免疫組織化学における応答用量および時間図2応答用量および応答時間曲線によって、健康な対照細胞、次いでHGPS患者細胞について2種類のパラメータを測定することによって最大効果を測定することが可能である。プラバスタチン水溶性/ゾレドロネートNBPの最も効果的な組み合わせは、健康な細胞にプラバスタチン1μMを24時間投与し、ゾレンドロネートを12時間投与すると得られた。毒性は認められなかった。HPGS細胞では核の異常な細胞同じ投与プロトコールを使用すると、変形した核の数は、75から40に減少した。健康な細胞で得られたプレラミンAレベルを測定した。この測定値は最大レベルを示した。B.3免疫組織化学処理の効果図3プラバスタチンおよびゾレドロネートを一緒にした作用:処理した健康な細胞におけるプレラミンAの生成レベル35と推定が、組み合わせの方が分子を単独で添加していたときよりも高いのでそれぞれ25および15、プラバスタチン100μMを12時間、ゾレンドロネート20μMを6時間がより有効であることが示唆される。さらに、変形した核正常細胞への毒性の徴候の発生率は最小限であり10未満、プラバスタチンのみで処理された細胞におけるもの約12よりも少ない。B.4免疫組織化学による老化細胞に対する作用図4継代の数細胞継代培養の回数、したがって、細胞の年齢に応じて、異常な核の割合は増加する。この特性は、処理していないHGPS細胞に特徴的である。HGPS細胞をプラバスタチン1μMで24時間、ゾレンドロネート1μMで12時間処理すると、この割合は維持されるか、むしろ少し減少するプラセボで処理した細胞が80を上回るのに比較して、40未満である。B.5結論プラバスタチン/ゾレンドロネートの組み合わせは、該分子を別々に投与してもほとんど影響が認められない用量で有効である。したがって、プレニル化経路遮断の生理学的効果は、細胞培養について出版された文献における単独処理で使用されたものKusuyamaら、200627、血管前駆細胞に対するプラバスタチン単独10μM、Flintら、199713、新生仔ラットに対するプラバスタチン単独25μMよりもずっと少ない用量で得られる。水溶性ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤を含む本発明の組成物の老化したヒト線維芽細胞および若いヒト線維芽細胞の分裂に対する効果A.実施例の目的この実施例では、水溶性ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤を含む本発明の組成物の線維芽細胞の細胞分裂速度有糸分裂指数に対するインビトロ効果の評価を測定した。若いヒト線維芽細胞に対して老化したヒト線維芽細胞への組成物の効果の比較も実施した。この実験で使用した活性剤の数は4種で、生成物は組み合わせて使用した。使用した活性剤は、A1:ゾレンドロネートA2:アレンドロネートB1:プラバスタチンB2:シンバスタチンである。この実施例で使用した特定の組み合わせは、A1B1、A1B2、A2B1、A2B2である。B.プロトコールこの実施例では、2種の線維芽細胞バッチ、老化した線維芽細胞バッチ番号9052および若い線維芽細胞バッチ番号7080は、提供された皿からトリプシン処理した後、牛胎児血清10を含有し、抗生物質を含まないRPMIInvitrogen培地で24時間培養した。様々な活性剤を最終濃度1μMで、それぞれ24時間添加した化合物A1、A2およびB1については水で、化合物B2については100エタノールでストック溶液の1000倍希釈を作製した。有糸分裂指数は、細胞を活性剤組み合わせの1種と24時間インキュベーションした後、ブロモデオキシウリジンBrdUを45分間取り込ませることによって評価した。免疫組織化学検出は、DNA合成相分裂前細胞における細胞を示した。核遺伝物質の染色は、ジアミノ-フェニルインドールDAPIの取り込みによって実施した。6つの顕微鏡視野OLYMPUSIX70が得られ、有糸分裂指数の画像分析による測定OLYMPUSAnalySISを可能にした。有糸分裂指数は、取り込まれたDAPIを有する核の数に対する取り込まれたBrdUを有する核の数の比に対応する。平均指数は、標準偏差0.005と0.061の間で統計学的に計算する。両側スチューデント検定によって、得られた結果の統計学的有意性を測定することが可能になった。C.結果C.1細胞の一般的目視観察これらの結果は、研究前に、いかなる処理も受けていない老化した線維芽細胞では分裂能は非常に低いことを示している。若い線維芽細胞は、老化した線維芽細胞よりも優れた分裂能を示した。老化した線維芽細胞の分裂能は5未満で、一方、若い線維芽細胞の分裂能は15.6であった。したがって、老化した未処理線維芽細胞と若い未処理線維芽細胞との間の分裂能の違いは3であった。この実施例では、線維芽細胞を試験した活性剤の組み合わせと24時間インキュベートした後では、いかなる毒性も視覚的に認められなかった。この実施例では、エタノール最終的に0.1には24時間インキュベーションした後いかなる毒性効果も認められなかった。D.有糸分裂指数の評価図5一般的に、DNA合成相においていかなる処理もしていない老化した線維芽細胞の数は極めて低く、5未満であった図5、列1参照。有糸分裂指数はまた、若い線維芽細胞でも余り高くなく、15程度であった図5、列6参照。いかなる処理もしていない老化した対照線維芽細胞と比較すると、エタノールに曝露した0.1-24時間対照線維芽細胞の有糸分裂指数に有意差は認められなかったp=0.11、n=6。そこで値を一緒にした対照、n=12。老化した線維芽細胞の有糸分裂指数に対して、図5、列2で示された結果は、A1B1ゾレンドロネート-プラバスタチンが対照に対して活性化効果を有することを示している2倍の最大刺激p<0.001、n≧6。したがって、この実施例は、ゾレンドロネート-プラバスタチンの組み合わせの適用が老化した対象の線維芽細胞の細胞分裂に活性化効果を有することを示している。水溶性ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤の組み合わせの早老性症候群のマウスモデルに対する効果本明細書で使用したZmpste24-/-KOマウスは、Varelaら、200549の引用文献に記載されているものである。2種類の分子プラバスタチンおよびゾレンドロネートの組み合わせの有効性の証拠は、スペインの研究室C.Lopez-Otinと協力して報告した。この有効性は、生成物を別々に使用しても効果がない用量を一緒にして得られ、相加的効果であることを示している。2種類の分子ゾレンドロ酸Zometa登録商標100μg/kg/日およびプラバスタチン100mg/kg/日は、PBS1Xで希釈し、1月齢のマウスに死ぬまで毎日腹腔内注射した。対照は、PBS1X単独で処理した同範囲の野生マウスである。処理したマウスの生存率は有意に改善され、雌では最大であり、寿命延長の平均は約80であった。疾患の臨床症状全ては、PBS単独で処理した個体よりもかなり軽減された。特に、広範な脱毛領域を示すPBSで処理したマウスと比較して、これらのマウスでは皮膚の処理および毛皮の再生長の効果が認められた。水溶性ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤の組み合わせの生体外ヒト皮膚抽出物に対する効果A.プロトコールこの実施例では、試験は約60歳のドナーの皮膚について実施する。ヒト皮膚外植片の調製物21個を作製し、BEM培地中で生存を維持させるBIO-ECのExplantsMedium。外植片を、以下のように3個のバッチに6個ずつ、バッチC01個には3個分配する。-C0-対照移植片:外植片3個-C-未処理対照:外植片6個-R-陽性対照:外植片6個-P-本発明の組成物によって処理した外植片、外植片6個A.1処理処理は、異なる日、第1日目D0、外植片調製後2時間、次いでD1日、D2日、D4日、D6日、D8日およびD10日に実施する。生成物は、以下の通り外植片に適用する:-C-いかなる処理も受けていない外植片、-R-それぞれ、D0、D2およびD4に陽性対照レチノールクリーム1mgを受けた外植片、-P1-それぞれ、各処理時間に、生成物P2mgを受けた外植片。処理は、本発明の組成物の局所適用によって実施する。次に、組成物は、スパチュラを使用して外植片の表面全体に分配する。培養培地の半分を2日毎に新しいものと入れ替え、外植片は5CO2を補給した湿潤な雰囲気で37°Cで生存を維持させる。A.2.組織学のためのサンプリングD0に、バッチC0の3個の外植片を得る。D6日およびD11日に、各バッチの3個の外植片を得る。試料を2つに切断し、半分をホルムアルデヒドで固定し、他方の半分はBIO-EC手法P006-PPEHにしたがって-80°Cで凍結する。B.組織学的研究ホルムアルデヒドで固定して24時間後、試料を脱水し、パラフィンを浸透させ、コーティングする。形態学的観察のために、5μmの横断切片を作製する。B.1.第1ステップ:形態学的研究上皮および皮膚構造の形態学的研究は、横断切片についてMassonトリクローム染色、すなわちGoldnerの変法によって実施する。B.2.第2ステップ:B.2.1KI67の免疫標識有糸分裂中の細胞の免疫標識は、DABで検出される抗KI67ポリクローナル抗体NovoCastraによって凍結横断切片について実施する。陽性細胞は上皮全体の長さについて計数し、平均はcm当たりの標識された細胞数について返した。B.2.2コラーゲンIの免疫標識:コラーゲンIの免疫標識は、FITCで検出される抗コラーゲンIポリクローナル抗体によって凍結横断切片について実施する。核は、ヨウ化プロピジウムで対比染色する。B.2.3コラーゲンIIIの免疫標識:コラーゲンIIIの免疫標識は、DABで検出される抗コラーゲンIIIポリクローナル抗体によって凍結横断切片について実施する。核は、Massonのヘマルンで対比染色する。B.2.4コラーゲンIVの免疫標識コラーゲンIVの免疫標識は、FITCで検出される抗コラーゲンIVポリクローナル抗体Cliniscienceによって凍結横断切片について実施する。核は、ヨウ化プロピジウムで対比染色する。B.2.5コラーゲンVIIの免疫標識コラーゲンVIIの免疫標識は、FICTで検出される抗コラーゲンVIIモノクローナル抗体によって凍結横断切片について実施する。核は、ヨウ化プロピジウムで対比染色する。B.2.6PECAM1の免疫標識Fast-redで検出される抗PECAM-1モノクローナル抗体によって凍結横断切片について実施されるPECAM-1の免疫標識によって、内皮細胞を視覚化することができる。水溶性ヒドロキシメチルグルタリルコエンザイムAHMG-CoA還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤の組み合わせのインビトロにおける皮膚形成細胞培養物に対する効果この実施例は、前記の実施例2で使用した活性剤と同じ組み合わせを使用する。これらの活性剤の様々な組み合わせは、皮膚老化に関与する生理学的パラメータに対する効果を評価するため、インビトロで使用する。この実施例で使用した組み合わせはそれぞれ、A1B1、A1B2、A2B1、A2B2である。これら4種の組み合わせは、複数の濃度で試験し、実験は3連で実施する少なくとも36個の実験点を表す。4種類の組み合わせの濃度は、出願人によって提案され、したがって、単純な試験でなければ、インビトロにおける細胞傷害性は研究のこの段階で考慮される。実験は、実施例1で示したように線維芽細胞系の細胞培養物に対して実施する。この試験はまた、表皮細胞培養物に適用する。以下の変数は、指示した濃度の活性薬剤の4種類の組み合わせについて調べる。-有糸分裂指数の測定、-コラーゲン格子の収縮による細胞外マトリクス再構築の測定、-UVB照射日光浴条件と類似した光誘導ストレス後のDNAゲノム修復の測定。有糸分裂指数の測定は、細胞を活性剤に1回曝露した後実施する。該指数は、核全数について、蛍光にしたチミジン類似体を取り込んだ細胞核を画像分析で計数することによって評価する。複数の視野を分析する。写真は、イコノグラフィーのために実施する。活性剤に曝露した線維芽細胞によって誘導された細胞外マトリクスの再構築は、これらの細胞をコラーゲン格子に組み込み、これらの格子を収縮する能力を定量することによって評価する。収縮した表面評価は、再構築係数である。写真は、イコノグラフィーのために実施する。DNAゲノム修復の測定は、日光曝露状態を模倣したUV-B線量で細胞を照射した後、実施する。目的はまず、3回にわたってモニターしたDNA修復における活性剤の効果を評価することである。定量は、シクロブタン型ピリミジンダイマー検出および免疫組織化学技術を用いたUVB照射による分析によって実施する。写真は、イコノグラフィーのために記録する。主な目的:細胞老化の核、ミトコンドリアおよび細胞基質マーカーに対するHIVウイルスおよび抗レトロウイルス療法の影響の測定第2の目的-HIV感染患者における核、ミトコンドリアおよび細胞基質機能の変化の普及を分析すること。-これらの異常の出現率を測定すること。-抗レトロウイルスに対する曝露期間に応じてこれらの異常の種類および頻度を、全体的に、型および分子によって分析すること累積曝露時間。-細胞内HIVウイルス負荷に応じてこれらの異常の種類および頻度を分析すること。-HIV感染追跡期間によってこれらの異常の種類および頻度を分析すること。A.実験計画実験計画の選択この観察研究には、3つの患者群が含まれる。-A群:いかなる抗レトロウイルス治療も受けていないHIV1感染患者。-B群:少なくとも12ヵ月抗レトロウイルス治療を受けたHIV1感染患者。-C群:年齢および性別を一致させたHIV陰性対照。B.適性基準試験対象基準:-年齢>18歳および<65歳:-インフォームドコンセント用紙に署名している;-少なくとも5年間ElisaおよびウェスタンブロットでHIV1陽性であることが確認されている;-HIV2陰性;-抗レトロウイルス治療を全く受けていないか、または少なくとも12ヵ月間治療の第1選択として受けていない。●試験対象外基準:-年齢<18歳および>65歳:-インフォームドコンセント用紙に署名していない;-HIV2陽性-スタチンまたはアミノビホスホネートで治療を受けた患者-許可されていない併用治療:テストステロン、インシュリン依存性糖尿病治療。C.試験方法評価した患者数:-A群:n=50-B群:n=100-C群:n=50を含む200人の患者。追跡中、抗ウイルス治療を開始する必要のあるA群の患者は、治療開始時にさらに評価を行い、その日からB群の患者と一緒に分析を開始した。A群に含まれた期間中に測定されたデータによって、HIVウイルスの核およびミトコンドリア機能に対する可能性のある直接的役割を測定することができる。試験中抗レトロウイルス治療変更を必要とするB群の患者は、治療に変化のあるとき、追跡の場合に行ったのと同一の臨床的および臨床関連的評価を行う。これらの患者の追跡データは、抗レトロウイルス薬に曝露した患者で認められた核およびミトコンドリア機能の破壊の発生率を計算するために考慮する。試験期間:試験期間は36ヵ月である。A群およびB群の患者についてHIV感染の病歴:-HIV感染と診断された日-汚染の形態-CDC分類-C分類について:AIDSと定義される状態の診断-進行中の抗レトロウイルス治療開始日、投与された分子臨床検査:-体重、身長、肥満度指数-胴囲、腰囲、胴囲対腰囲の比率血液検査:-負荷されたHIVウイルスの測定検出閾値40コピー/ml-CD4およびCD8リンパ球レベルの測定-糖血症、インシュリン血症、HOMA計算-総コレステロール、LDL、HDLコレステロール-トリグリセリド-核およびミトコンドリア機能の分析、HIVプロウイルスDNAおよび細胞ライブラリーの測定のために7.5mlのEDTA試験管3本をサンプリングする抗レトロウイルス薬が標的とする核、ミトコンドリアおよび細胞基質のタンパク質の分析。-ウェスタンブロットおよび免疫標識:-プロテアソーム活性の対象としてNFBおよびIBの産生;-ラミンAおよびBの成熟、核タンパク質モデル;-SREBPアイソフォームの産生およびそれらの核輸送;-精製し、脱グリコシル化したCD36±糖の30kDaAbcamのN-およびO-グリコシル化;-ミトコンドリアプロテアーゼ活性Abcamで測定した、切断された移行シグナルを有するHsp70のミトコンドリアへの輸送;-ミトコンドリア呼吸機能、ROS産生、シトクロム酸化酵素のサブユニットIIおよびIVの試験MolecularProbe抗レトロウイルス治療に感受性である可能性の調査は、PIに対するウイルスプロテアーゼの感受性で示されたようにBaxterら、2006、特定の標的の遺伝子型同定によって実施する:-プレラミンAおよびB1/B2の成熟に関与するZMPSTE24およびRce1分子遺伝学研究室では日常的である;-脂質代謝遺伝子転写に対して活性を有するSREBPドメインの産生を可能にするS1-PおよびS2-Pプロテアーゼ;-ミトコンドリアデオキシヌクレオシド輸送体。対照群Cについて:臨床試験:-体重、身長、肥満度指数-胴囲、腰囲、胴囲対腰囲の比率-核およびミトコンドリアおよび細胞基質機能の分析、DNAおよびライブラリーにおける配置の分析のために7.5mlのEDTA試験管3本をサンプリングする再診評価には以下を含める。臨床試験:-体重、身長、肥満度指数-胴囲、腰囲、胴囲対腰囲の比率血液検査:-負荷されたHIVウイルスの測定検出閾値40コピー/ml-CD4およびCD8リンパ球レベルの測定-糖血症、インシュリン血症、HOMA計算-総コレステロール、LDL、HDLコレステロール-トリグリセリド-核およびミトコンドリアおよび細胞基質機能の分析、HIVプロウイルスDNAの測定ならびにDNAおよび細胞ライブラリーにおける配置の分析のために7.5mlのEDTA試験管3本をサンプリングする。抗レトロウイルス薬が標的とする核、ミトコンドリアおよび細胞基質タンパク質の分析前記参照。A群の患者について抗レトロウイルス治療の開始を必要とするA群の患者は、治療を開始したとき、追跡の場合に行ったのと同一の臨床的および臨床関連的評価を行う。これらの患者の追跡データは、治療した患者群B群ではこの日から分析する。B群の患者について試験中に抗レトロウイルス治療を変更する場合、治療に変化のあるとき、追跡の場合に行ったのと同一の臨床的および臨床関連的評価を行う。これらの患者の追跡データは、抗レトロウイルス薬に曝露した患者で認められた核およびミトコンドリアの機能の破壊の発生率を計算するために考慮する。D.予測結果、全体像AIDSウイルスに感染し、抗レトロウイルス治療を受けている患者におけるインビボの結果、細胞培養におけるインビトロの結果から裏付けられるように、これらの処理、特にプロテアーゼ阻害剤が、遺伝的ラミノパシーファルネシル化プレラミンAおよびプロゲリンの産生を伴うまたは生理学的老化プロゲリンの産生を伴うと同様の機構による加速された老化を誘導する。早老症で使用した薬剤スタチンおよびアミノビホスホネートの組み合わせがAIDSウイルスに感染し、抗レトロウイルス治療を受け、治療試験の確立が可能な患者における老化の加速に対抗するために使用できるという仮説が裏付けられる。スタチンおよびアミノビホスホネートに関連した処理は、早期老化のヒト徴候を再生したマウスモデルの寿命を延長させる。この実施例はまた、Varelaら、NatureMedicine2008、7、76754再出において出版されている。器具および方法マウスZmpste24-/-およびLmna-/-マウスの作製は記載されているPendasら、200238;Sullivanら、1999285。マウスのコンピュータ処理骨マイクロ断層撮影法は、マイクロ-CTSkyScan1172システムSkyScan-商標を使用して実施した。マウスに関する実験は全て、Oviedo大学スペインの動物実験委員会が規定した規則によって管理される。PBSで希釈したプラバスタチン100mg/kg/日およびゾレンドロネート100mg/kg/日を毎日マウスに投与する。プラバスタチン-ゾレンドロネート処理を受けているマウスまたはPBSのみを受けている対照マウスは、いかなる見かけ上の損傷もストレスも示さない。細胞培養対照被験者GM0038および早老症に罹患した患者および変異G608GAG11498およびAG01972の保有者の皮膚線維芽細胞はコーリエル細胞集積所から入手した。HeLa細胞は、アメリカ培養細胞系統保存機関から得た。細胞は10FBSGibcoおよび1抗生物質-抗真菌剤Gibcoを補給したDMEMGibcoで培養する。線維芽細胞は、12日齢マウスの尾由来であるVarelaら、2005。スタチンおよびアミノビホスホネートによる処理の濃度および期間は、図の説明に示す。ファルネソールおよび/またはゲラニルゲラニオールの存在下でのスタチンアミノビホスホネートで一緒に処理している間、プラバスタチン1mMおよびゾレンドロネート1mMを、ファルネソールおよび/またはゲラニルゲラニオールの濃度を増加させた培養培地に添加した。異常な核の割合は、処理を開始して48時間後に測定する。免疫組織化学線維芽細胞は、LabTek容器NalgenNuncInternationalで培養し、PBSで洗浄し、その後4パラホルムアルデヒドで15分間固定する。細胞は、濃度を高めたエタノール浴で脱水し、TritonX-1000.5、5血清ヤギまたはウサギを含有するPBSで25°Cで5分間透過させる。スライドをPBS中で25°Cで5分間予めインキュベートする。1次抗体の希釈は、ヤギ抗プレラミンAポリクローナル抗体Sc-6214、SantaCruzBiotechnologiesでは1/100、抗ラミンA/C抗体G.Morrisによって恵与された4A7では1/40、ウサギ抗カルレティキュリン抗体Stressgenでは1/200およびB1抗ラミン抗体Abcamでは1/100である。PBSで洗浄した後、スライドをインキュベーション溶液で希釈した2次抗体で25°Cで1時間インキュベートする。2次抗体の希釈は以下の通りである。FITCを結合したロバ抗マウスIgGJacksonImmunoResearchでは1/100、Alexa488を結合したロバ抗ヤギIgGでは1/400、Alexa568を結合したロバ抗ヤギIgGMolecularProbesでは1/800およびテトラメチルローダミンイソチオシアネートSigmaを結合したロバ抗ウサギIgGでは1/100である。その後、細胞を洗浄し、核はDAPI100ng/ml、Sigma-Aldrichで25°Cで15分間着色し、最後に0.5Tween20を含有するPBSで3回洗浄する。スライドはVectashieldVectorに載せる。デジタル画像は、CoolSnapカメラを備えたLeicaDMR顕微鏡またはLeicaTCSSP5共焦点顕微鏡で記録する。核は、ラミンA/Cに印を付けた後、細胞内で観察する。処理それぞれについて、100個を上回る核を対照線維芽細胞中で分析した。分析した早老症を罹患した患者の細胞の核の数は250個継代8、198個継代13および150継代20である。X線照射およびH2AXリン酸化ヒストンの研究早老症患者の細胞および1BR3対照細胞をPhilipsX装置で照射する。X線は、強度20mAで電圧200kVを印可したタングステン陽極によって、直径0.1mmの銅フィルタを装着して発生させる。線量率は1.243Gy/分である。H2AXリン酸化ヒストンは、1/800に希釈したリン酸化セリン139を特に認識する抗体UpstateBiotechnology-Euromedex、Mundolsheim、FranceおよびFITCを結合した抗マウス抗体1/100、Sigma-Aldrichで検出する。修復期間に応じて2本鎖切断DSBの数は式Nt=N01/1βtα式中、αおよびβは調節可能なパラメータであり、NtおよびN0は時間tおよび時間0におけるDSBの数であるで調節する。ウェスタンブロット細胞は以下の溶媒、Tris50mMpH7.4、NaCl150mM、1NP-40、NaF50mM、ジチオスレイトール1mM、ペプスタチンA2mg/mlで、プロテアーゼ阻害剤完全阻害剤カクテル、Rocheおよびホスファターゼ阻害剤ホスファターゼ阻害剤カクテルIおよびII、Sigmaの存在下でホモゲナイズする。電気泳動後、タンパク質をニトロセルロース膜に移し、TBS-T緩衝液Tris20mM、pH7.4、NaCl150mMおよび0.05Tween-20を使用して5脱脂粉乳でブロックし、特異的抗ラミンA/C抗体4A7、1/500または特異的抗ラミンAC20、SantaCruzBiotechnology、1/250または抗ベータアクチンA5441、Sigma、1/5000のいずれかと共に1時間インキュベートする。抗体は、3脱脂粉乳を含有するTBS-Tで希釈する。次いで、ブロットは、1.5脱脂粉乳を含有するTBS-Tに溶かしたペルオキシダーゼ結合抗体ヤギ抗マウスまたは抗ウサギ、JacksonImmunoResearchでインキュベートし、その後洗浄し、最後に化学ルミネセンスImmobilonWestern化学ルミネセンスHRP基質、Millipore-商標によって明示する。質量分析による解析対照およびZmpste24-/-マウスの線維芽細胞ならびに早老症患者のリンパ芽球状細胞をホモゲナイズし、超遠心分離によって核を単離し、BlobelおよびPotter,V.R.Nucleifromratliver:isolationmethodthatcombinespuritywithhighyield、Science154、1662~1665、1966で記載されたように核タンパク質を得た。核ラミナのタンパク質は、SDS-PAGE電気泳動によって分離し、ラミンA、プレラミンAおよびプロゲリンを含有する切片を切り取った。ゲルの断片を炭酸水素アンモニウム/アセトニトリル混合物70/30、25mM180mlで2回洗浄し、乾燥させ15分、90°C、炭酸水素アンモニウム25mMに溶かしたトリプシン12ng/ml、Promegaで消化した1時間、60°C。一般的実験では、CHCAa-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸、Waters1mlをMALDI-ToF分光計に入れる。乾燥したら、ペプチド溶液1mlおよびマトリクスCHCA1mlを、レーザー源Voyager-DESTR商標、AppliedBiosystemsを備えた分光計に入れる。200回のレーザー発射を使用して収集したデータからDataExplorerプログラムバージョン4.0.0.0、AppliedBiosystemsで分析したスペクトルを得る。リアルタイムの定量的PCRp53の標的遺伝子Atf3、Gadd45gおよびCdkn1a、p21をコードするの発現率は、装置ABIPRISM7900HT配列検出システムAppliedBiosystemsを使用して測定した。統計学的分析異なるマウス群と、処理した、または処理していない細胞の間の違いは、スチューデント検定中に分析した。計算は、プログラムMicrosoftExcelを使用して実施した。データは、平均数±平均の標準偏差として表す。結果HeLa細胞は、指示した濃度のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤FTI-277、Sigma-Aldrichおよび/またはゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤I型GGTI-2147の存在下で培養した。2種類の阻害剤を組み合わせた場合のみ、各阻害剤を単独で使用した効果と比較して、細胞内で非プレニル化プレラミンAが十分に形成される。これらの結果は、得られたウェスタンブロットの写真であり、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤および/またはI型ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼによって処理したHeLa細胞におけるA/Cラミンの検出を表している図10に示す。LA=ラミンA、LC=ラミンC、Pre=プレラミンA。これらの結果によって、本発明によれば、プレラミンAのプレニル化阻害には、同時にファルネシルトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルトランスフェラーゼI型を阻害することが必要であることが裏付けられる。ファルネシルトランスフェラーゼFTI阻害剤は、プロゲリン早老症に罹患した患者の細胞におけるおよびZmpste24-/-マウス線維芽細胞の代償性ゲラニル化を誘導する。質量分析によって、予測通り、Zmpste24マウスの細胞ではファルネシル化およびカルボキシメチル化されたトリプシン処理ペプチドの存在が示されるが、対照マウス細胞では示されない。これらの結果は、図13aに示されている。ファルネシル化ペプチドは3SIM残基を欠如しており、このことはZmpste24はプレラミンAの成熟中の第1の切断に必ずしも必要ではないことを示している。FTI処理マウスの細胞において、ファルネシル化プレラミンAの量の減少が認められた。ゲラニルゲラニル化ペプチドのスペクトルの一部の観察中、未処理Zmpste24-/-マウスの細胞では検出可能なプレラミンA由来のペプチドは存在しなかった。しかし、FTI処理後、プレラミンAのゲラニルゲラニル化断片と質量が適合しているペプチドが検出された。これらの結果は、図13bに示す。早老症患者の細胞では、図11aで示したように、いかなる処理もしないとファルネシル化およびカルボキシメチル化されたプロゲリンに対応するペプチドが検出される。FTI-127で細胞を処理すると、図11bに示したように、プロゲリンのゲラニルゲラニルペプチドに対応する質量のペプチドの出現が促進される。このデータは全体として、プロゲリンおよびプレラミンAがFTIの影響下で選択的方法でゲラニルゲラニル化されていることを示しており、早老性症候群のマウスモデルではFTI処理の効果が不十分であることを説明している。早老症患者およびZmpste24-/-マウスの細胞は、プレラミンAおよびプロゲリンの交差プレニル化の防御を企図する療法計画を評価するために使用した。ラミンAの異常変種のファルネシル化は、ファルネシルピロリン酸、すなわちファルネシルトランスフェラーゼの基質およびゲラニルゲラニルピロリン酸前駆体、すなわちI型ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの基質の生合成経路に対して影響を有する薬剤によって阻害できるという仮説を確立した。したがって、この代謝経路の2つのステップで早老症患者の細胞に影響を及ぼすことが知られている2種類の薬剤、スタチンおよびアミノビホスホネートの効果を試験した。質量分析によって、図11cで示したように、プラバスタチンスタチンゾレンドロネートアミノビホスホネートの組み合わせは、プロゲリンのプレニル化されていないC末端に対応するペプチド、すなわち、FTI処理細胞で検出できないペプチドの出現を誘発するが、ファルネシル化ペプチドもゲラニルゲラニル化ペプチドもそれ以上検出されないことが示される。スタチンアミノビホスホネート処理は、プロゲリンのプレニル化を阻害する。図12に示したように、同様のことがプレラミンAでも認められた。プレニル化されていないそのC末端ペプチドは、スタチンおよびアミノビホスホネートの混合物で処理した細胞では検出されたが、未処理細胞では検出されず、すなわち、ファルネシル化およびカルボキシメチル化されたペプチドが検出された。最後に、プラバスタチンゾレンドロネート処理は、ゲラニルゲラニル化プレラミンAには作用せず、これはFTIとは異なる。図13の説明:ラミンA対照細胞およびプレラミンAZmpste24-/-マウス細胞は、質量分析MALDI-ToFによって解析した。a、b:ファルネシル化トリプシン処理ペプチドaおよびゲラニルゲラニル化ペプチドbに対応するスペクトルの一部。各ピークはラミンAまたはプレラミンAのトリプシン処理によるペプチドの理論的質量括弧内によって示される。残基の数は、青で示している。ペプチドの配列およびそれらの質量は赤で示している。Farn=ファルネシル処理、CM=カルボキシメチル処理、Ger=ゲラニルゲラニル処理。図11の説明:未処理細胞a、FTI2.5μM、bまたはプラバスタチンゾレドロネート各1μM、cの混合物で治療した早老症患者の細胞の核膜から抽出したタンパク質の質量分析。未修飾タンパク質、ファルネシル化タンパク質およびゲラニルゲラニル化タンパク質に対応するスペクトルの一部は、図の上、中央および下に示している。各ピークは、プロゲリンのトリプシン処理ペプチドに対応し、実験による測定されたモノアイソトピック質量および理論的質量括弧内によって示される。アミノ酸残基の数は、青で示している。ペプチドの配列およびそれらの質量は赤で示している。プロゲリンは、罹患していない細胞では主にファルネシル化Fされ、カルボキシメチル化Cmされているがa、中央のパネル、一方、FTIの影響によって、このピークはかなり低下し、プロゲリンはゲラニルゲラニル化され、ホスホリル化b、下のパネルされるようである。プラバスタチンおよびゾレンドロネートで治療したのち、未修飾のプロゲリンが優勢な形態である。図12の説明:未処理線維芽細胞aまたはZmpste24-/-マウス由来のプラバスタチンゾレドロネート各1μM、bの混合物で処理した線維芽細胞の核膜から抽出したタンパク質の質量分析を示した図である。未修飾タンパク質、ファルネシル化タンパク質およびゲラニルゲラニル化タンパク質に対応するスペクトルの一部は、図の上、中央および下に示している。各ピークは、プロゲリンのトリプシン処理ペプチドに対応し、実験で測定されたモノアイソトピック質量および理論的質量括弧内によって示される。アミノ酸残基の数は、青で示している。ペプチドの配列およびそれらの質量は赤で示している。この図では、プレラミンAは、未処理細胞ではa、中央のパネル主にファルネシル化Fされ、カルボキシメチル化Cmされているが、一方、未修飾またはゲラニルゲラニル化形態は検出されないことを確認することができる。プラバスタチンおよびゾレンドロネートによる処理後、プレニル化ペプチドはもはや検出することはできず、プレラミンAの未修飾形態が優勢であるb、上のパネル。プラバスタチンゾレンドロネートによる処理によって、早老症患者細胞および培養しているZmpste24-/-マウス細胞の核異常が修正され、X線によって誘導されたDNA損傷修復機構が部分的に回復する図14、15、16および17。プラバスタチンゾレンドロネート処理は、早老症患者細胞の細胞核におけるように、対照細胞の核にプレラミンAが出現する原因となるが図14a、後者の細胞では核形態を著しく改善する図14b。定量的分析によって、早老症患者の細胞では流路数の増加として核異常の増加が示され、この異常の数は、プラバスタチンゾレンドロネート処理の影響下では減少する図14c。共焦点顕微鏡下で観察すると、早老症患者の細胞はラミンA/Cの凝集を含有しており、核質核網中の核膜の核質表面には深い陥入があり、抗カルレティキュリンによって示されている図15a~f。これらのラミンA/C凝集は、対照被験者の細胞にはなく図14j~l、プラバスタチンゾレンドロネート治療の影響下にある早老症患者の細胞からは消失している図14g~i。ラミンB1、すなわち核ラミナのファルネシル化成分の位置は、治療の効果によって変化し、治療がラミンのプレニル化を阻害することが裏付けられる。プラバスタチンゾレンドロネート処理による核形状の改善がプロゲリンのプレニル化の事実と本当に関係があることを、細胞をファルネソールおよび/またはゲラニルゲラニオールとインキュベートすることによって調べた。細胞にファルネソールおよびゲラニルゲラニオールを補給すると、細胞がファルネシルピロリン酸およびゲラニルゲラニルピロリン酸を合成することができ、したがって、プラバスタチンおよびゾレンドロネートが存在するときでも、プロゲリンをプレニル化できる図14d。ファルネソールは、プラバスタチンゾレンドロネート処理の効果を無効にし、このことは治療効果がファルネシルピロリン酸合成の阻害によって引き起こされることをさらに証明している。ゲラニルゲラニオールはまた、処理の効果を遮断し、このことはプロゲリンのゲラニルゲラニル化形態はまた、細胞に毒性であることを立証する図14d。同様の効果がZmpste24-/-細胞でも認められ図16a、プロゲリンに関するデータはプレラミンA、Zmpste24-/-細胞に蓄積するタンパク質に適用できることを示唆している。ファルネソールもゲラニルゲラニオールも対照線維芽細胞に対していかなる効果も有さず、これらの分子が人工産物を誘導する可能性は排除される図16b。最後に、プラバスタチンゾレンドロネート処理が、ホスホリル化ヒストンH2AX斑点の数の減少を引き起こし、これらの斑点は、未修復DNA2本鎖切断の数に比例している図17。結論として、集めたインビトロデータによって、プラバスタチンゾレンドロネートの組み合わせはファルネシル化およびゲラニルゲラニル化を部分的に阻害し、Zmpste24-/-細胞および早老症患者におけるプレニル化されていないプレラミンAおよびプロゲリンのラミナ内の位置の予測される変化および核質内再分布を引き起こすことが示唆される。同様に、ラミナ内のファルネシル化プロゲリン量の減少および核質への再配置によって、早老症患者の細胞に対する処理が有益な効果を有することが説明される。図14の説明:早老症患者の対照細胞におけるプレラミンAの蓄積に対するプラバスタチンゾレドロネートの組み合わせの共同効果。aプラバスタチン60μM、12hおよび/またはゾレンドロネート60μM、6hで、単独で、または組み合わせて処理した後の正常な未処理ヒト線維芽細胞におけるラミンA/CおよびプレラミンAの免疫組織化学的検出。bプラバスタチンゾレンドロネート各1μMの組み合わせで24時間処理した正常なヒト線維芽細胞および早老症患者の線維芽細胞におけるラミンA/CおよびプレラミンAの免疫組織化学的検出。c早老症患者の細胞の核形態に対するプラバスタチンゾレドロネート処理各1μMの効果の定量的分析。処理および未処理細胞は、継代8p8、13p13および20p20で抗ラミンA/C抗体で免疫的に標識した。白い矢印は、異常な核を示す。dファルネソール、ゲラニルゲラニオールまたは両化合物の存在下での早老症患者の細胞の核形態に対するプラバスタチンゾレドロネート処理各1μMの効果の定量的分析。エラーバー=平均±平均の標準誤差。スケールバー=10μm。図15の説明:早老症患者の細胞において、プラバスタチンゾレドロネート治療は、核形態を修正し、核ラミナから核質内へのラミンA/CおよびラミンB1アイソフォームの部分的再配置の誘導を導く。Aこれらの早老症細胞では、処理未処理にかかわらず、ラミンA/Cおよびカルレティキュリンは共存する。免疫蛍光法および共焦点顕微鏡LeicaTCSSP5、2048×2048ピクセル画像の3Dスタック、0.2μm間隔、平均3列、3枚の画像の蓄積、1.7×ズームを使用して検討する。各パネルのaからcの画像は、重ねた27枚の画像の平均強度を投射したもので、PBSでインキュベートした早老症細胞ではカルレティキュリンによって印を付けた核網の細管が示されている。画像dからl:厚さ0.2μmで単離された共焦点切片。プラバスタチンゾレンドロネート処理は、早老症細胞の核の形態を修正し、核網の細管の数を減少させg、核ラミナの厚さを薄くするh。BラミンB1およびカルレティキュリンの共存。プラバスタチンゾレンドロネート処理は、ラミンB1核質標識シグナルを増加させ、このタンパク質のファルネシル化が部分的に阻害されることを示している。スケールバー=5μm。図16の説明:ファルネシル化ピロリン酸およびゲラニルゲラニルピロリン酸前駆体は、培養したZmpste24-/-マウス細胞におけるプラバスタチンゾレンドロネート処理の効果を無効にする。ファルネソール、ゲラニルゲラニオールまたは両分子の存在下で培養したZmpste24-/-マウスaおよび対照マウス細胞bの核形態に対する、単独または組み合わせたプラバスタチン1μMおよびゾレンドロネート1μMの効果の定量化。単独または組み合わせたファルネソール、ゲラニルゲラニオールは、Zmpste24-/-細胞の核形態に対するプラバスタチンゾレンドロネートの効果を無効にする。図17の説明:プラバスタチンゾレドロネート処理は、早老症患者の細胞におけるDNA2本鎖切断の修復DSBの異常を部分的に修正する。対照線維芽細胞および早老症患者の線維芽細胞をプラバスタチンゾレンドロネート混合物各1μMまたはPBSでインキュベートして、X線を照射した2gy。照射して24時間後に検出されたホスホリル化ヒストンH2AXの斑点の免疫検出したもので、斑点は未修復の2本鎖切断に対応する上の画像。核はDAPIで染める下の画像。下の図:PBSでインキュベートするか、またはプラバスタチンゾレドロネートで処理した対照細胞黒四角および早老症細胞白丸における照射後の時間によるホスホリル化ヒストンH2AX斑点数の変化。各曲線は、少なくとも3回の実験の平均±平均の標準偏差を示す。プラバスタチンゾレンドロネートの組み合わせによる処理は、Zmpste24-/-マウスの早老性表現型を改善する図18、19および20:Zmpste24-/-マウスおよび対照マウスは、毎日プラバスタチンおよびゾレンドロネートまたは両薬剤の組み合わせで、マウスにおいて非毒性であることが既に示された用量で処理した。既に早老症患者の細胞で観察されたように、プラバスタチンまたはゾレンドロネートのいずれの薬剤も単独ではZmpste24-/-マウスの寿命を延長させない図19。しかし、両薬剤を組み合わせると、Zmpste24-/-マウスの早老性表現型を著しく改善し、すなわち、この処理は体重増加の改善をもたらし、皮下脂肪の量を増加させ、脊柱後弯症および脱毛症の規模を軽減し、寿命を延長させる。生存時間は、101日から179日に延長し、最高生存時間は151日から222日に延長したp<0.001、図18c。マウスにおける処理によって修正された全表現型徴候はまた、ヒトにおける早老症に特徴的であることに注意されたい。併用処理は、Zmpste24-/-マウスおよび早老症もしくは関連する早老性症候群の患者の特徴の1つである骨密度の減少を修正する。コンピュータ処理骨マイクロ断層法は、骨のミネラル化の増加および処理したマウスの脛骨皮質の厚さの増加を示唆している図18d。同様に、Zmpste24/、Zmpste24-/-および処理したZmpste24-/-マウスの肝臓の核形態の定量化によって、プラバスタチンゾレンドロネート処理がZmpste24-/-細胞核の形状を正常化することが示される図18e。処理はまた、Zmpste24-/-マウスを正常化するVarelaら、200554再出図18f。最後に、処理がプレラミンAを蓄積できないLmna-/-マウスに対して効果を有し得るかどうかを確認した。プラバスタチンゾレンドロネート処理は、これらのマウスの寿命に何ら影響を及ぼさず図20、この処理が核膜内にファルネシル化プレラミンAを蓄積するマウスにのみ作用できることをさらに裏付けている。図18の説明:プラバスタチンゾレンドロネート処理は、Zmpste24-/-マウスの早老性表現型を改善する。a3月齢のZmpste24/マウス、Zmpste24-/-マウスならびにプラバスタチン1日当たり100mg/kgおよびゾレンドロネート1日当たり100mg/kgで処理したZmpste24-/-マウスを示す写真。スケールバー=1cm。b3月齢Zmpste24/マウスn=12、Zmpste24-/-マウスn=13および処理したZmpste24-/-マウスn=15の体重。c未処理マウスn=13と比較して処理したZmpste24-/-マウスn=15の寿命の著しい延長を示すカプラン-マイヤー曲線。d処理した、および未処理のZmpste24-/-マウスの脛骨の3Dコンピュータ処理マイクロ断層法による表示上の図。下のパネルは、未処理n=6および処理n=5Zmpste24-/-マウスの相対的骨量骨組織量/脛骨の量および骨梁の数を示す。eZmpste24/、Zmpste24-/-および処理したZmpste24-/-マウスの肝細胞における核異常の定量化。白い矢印は、異常な核を示す。スケールバー=10μm。f定量的RT-PCRによって分析した、Zmpste24/、Zmpste24-/-および治療したZmpste24-/-マウスの肝臓および心臓におけるp53の標的遺伝子の相対的発現。P<0.05;P<0.01;P<0.001。エラーバーは、平均±平均の標準誤差を表す。図19の説明:プラバスタチン単独、またはゾレンドロネート単独では、Zmpste24-/-マウスの寿命を延長させない。Kaplan-Meier曲線は、プラバスタチン単独n=5aおよびゾレンドロネート単独n=5bは処理したZmpste24-/-マウス白い菱形および未処理黒丸、n=11マウスの寿命を修正しないことを示している。図20の説明:プラバスタチンゾレンドロネート処理は、Lmna-/-マウスの寿命を修正しない。Kaplan-Meier曲線は、プラバスタチンゾレンドロネートで処理したLmna-/-マウスn=12、白い菱形の寿命は、未処理マウス黒丸、n=11と同等であることを示している。プラバスタチンゾレンドロネート処理はラミンA/Cを欠如したマウスに対しては影響を及ぼさない。概略/結論/展望ハッチンソンギルフォード早老症を含むいくつかのヒト早老性症候群は、核膜上における欠失したプレラミンAプロゲリンまたは欠失していないプレラミンAのファルネシル化形態の蓄積によって引き起こされる。プロゲリンはまた、生理学的老化の間に産生される。早老症に罹患した患者の細胞で実施した最近の研究によって、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤FTIが核の形態を改善することが示され、これらの阻害剤はこれらの破壊的な症候群の治療となり得ることを示唆している。本発明者らは、プレラミンAおよびプロゲリンは、ファルネシルトランスフェラーゼが阻害されているとき、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼによって選択的プレニル化を受けることを本明細書で示し、これによってこれらのの早老性症候群のマウスモデルの表現型改善においてはFTI効果の程度が低いことを説明することができる。スタチンおよびアミノビホスホネートの組み合わせがプレラミンAおよびプロゲリンのファルネシル化ならびにゲラニルゲラニル化を効果的に阻害し、プレラミンAの成熟に関与するメタロプロテアーゼZmpste24をコードする遺伝子を不活性化したマウスの老化の表現型を著しく改善することを示した。表現型の改善には、成長曲線、体重、脂肪萎縮症、脱毛および骨の異常の改善が含まれる。さらに、これらのマウスの寿命は、実質的に延長する。このデータは、核膜におけるプレニル化タンパク質の蓄積を伴うヒト早老性症候群に対する新たな治療的取り組みを切り開く。プラバスタチンアミノビホスホネート処理は、マルセイユにおいて、NicolasLevyの監督下にあり、厚生省PHRC2008およびFrenchAssociationagainstMyopathyAFMが資金提供し、AFSSAPSおよびSouthMediterraneanCCPから許可を受けているヨーロッパ治療試験子供15人の枠組みの中で、早老症に罹患した子供に3年間適用する予定である。同様の処理は、GiuseppeNovelliの監督下で、ファルネシル化プレラミンAの蓄積によるもう1つの早老性症候群である下顎末端異形成症に罹患した患者に対してまもなくローマでも行われる。"