対象における眼疾患を処置する為の方法において使用する為の、エコー造影剤マイクロバブル及び関心のある治療用核酸を処方された医薬組成物であって、該方法が、i該医薬組成物を該対象の毛様体筋内に送達すること、及び、ii該医薬組成物が送達された領域を超音波に曝して、該毛様体筋内への該関心のある治療用核酸のトランスフェクションを誘発することからなる工程を含む、前記医薬組成物。該関心のある治療用核酸が、デオキシリボ核酸DNA分子又はリボ核酸RNA分子である、請求項1に記載の医薬組成物。該関心のある治療用核酸が、ベクター、例えばプラスミド、に挿入されている、請求項1又は2に記載の医薬組成物。該関心のある核酸が、酵素、血液派生物、ホルモン、リンホカイン、サイトカイン、ケモカイン、抗炎症性因子、成長因子、栄養因子、神経栄養因子、造血因子、血管新生因子、抗血管新生因子、メタロプロテイナーゼのインヒビター、アポトーシスのレギュレーター、凝固因子、それらのレセプター、特には可溶性レセプター、レセプター若しくは接着タンパク質のアゴニスト若しくはアンタゴニストであるペプチド、抗原、抗体、それらの断片又は誘導体、及び細胞の他の必須成分から成る群から選ばれるポリペプチドをコードする、請求項1~3のいずれか1項に記載の医薬組成物。該マイクロバブルのシェルが、ポリマー又は、リン脂質及びフッ素化脂質を包含する脂質からなる群から選ばれる界面活性剤を含む、請求項1~4のいずれか1項に記載の医薬組成物。該マイクロバブル中に入れられるガスが、フッ化炭素化合物、好ましくは、パーフルオロアルカン、例えばパーフルオロメタン、パーフルオロエタン、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタンパーフルオロペンタンパーフルオロヘキサン又はパーフルオロヘプタンなどパーフルオロアルケン、例えばパーフルオロプロペンパーフルオロブテンパーフルオロブタジエンパーフルオロペンテン又はパーフルオロ4メチルペント2エンなどパーフルオロアルキン、例えばパーフルオロブト2インなど及び、パーフルオロシクロアルカン、例えばパーフルオロシクロブタンパーフルオロメチルシクロブタンパーフルオロジメチルシクロブタンパーフルオロトリメチルシクロブタンパーフルオロシクロペンタンパーフルオロメチルシクロペンタンパーフルオロジメチルシクロペンタンパーフルオロシクロヘキサンパーフルオロメチルシクロヘキサン又はパーフルオロシクロヘプタンなど、から選ばれるパーフルオロカーボンである、請求項1~5のいずれか1項に記載の医薬組成物。超音波が、05Wcm2~5Wcm2の出力強度Isataを有する800kHz~3MHzの超音波シグナルを与える超音波装置によって送達される、請求項1~6のいずれか1項に記載の医薬組成物。該眼疾患が、眼増殖性疾患、眼神経変性疾患、緑内障、眼感染疾患、眼炎症性疾患、例えば結膜炎、角膜炎、内皮炎、ぶどう膜炎、脈絡膜炎、網膜炎、脈絡網膜炎、前部ぶどう膜炎、及び炎症性視神経症など、網膜変性、特には網膜色素変性、周辺部網膜変性、黄斑変性、例えば乾燥加齢黄斑変性など、虚血性網膜症、特には未熟児網膜症及び糖尿病性網膜症など、網膜血管疾患、眼虚血症候群及び他の血管異常、脈絡膜の異常及び腫瘍、硝子体異常、グリア増殖、例えば増殖性硝子体網膜症及び糖尿病性網膜前血管新生を伴うグリア細胞増殖など、からなる群から選ばれるものである、請求項1~7のいずれか1項に記載の医薬組成物。毛様体筋へのエレクトロトランスファーは遺伝子導入の有効な物理的方法であるけれども、それは、電気パルスを送達する為に標的組織への侵襲性針電極配置を要求する。従って、より侵襲性でない方法についてのニーズが当技術分野においてある。商用的なマイクロバブルと組み合わされた低強度超音波曝露が、レポーター遺伝子の筋内送達後に、毛様体平滑筋への遺伝子導入を増加することができるかどうかの研究は以前にない。本発明は、対象における眼疾患を処置するための方法であって、iエコー造影剤マイクロバブルと関心のある治療用核酸とを処方された医薬組成物を該対象の毛様体筋へ送達すること、及びii該医薬組成物が送達された領域を超音波にさらして、該関心のある治療用核酸の該毛様体筋へのトランスフェクションを誘発することからなる工程を含む前記方法に関する。本発明者らの目的は、透光体ocularmedia中への治療用タンパク質の分泌についての可能性を有すると以前に示された毛様体筋に特異的に形質移入する為に、市販入手可能なエコー造影剤マイクロバブルMBと組み合わされた低強度超音波USを用いることの実行可能性を評価することであった。それ故に、Gaussiaルシフェラーゼをコードし且つLacZ遺伝子を有するレポータープラスミドDNA単独又は50エコー造影マイクロバブルと混合された当該レポータープラスミドDNAが、ラットの眼の毛様体筋に、超音波曝露有り又は無しで、注入された。形質移入の7日後に、透光体中のルシフェラーゼ活性は、US単独で処置された眼又は該プラスミド注入だけを受けた眼と比較したときに、プラスミドを注入され且つMB及びUSにより処理された眼において、有意により高かった。マイクロバブルを加えたUSは、対照のUS処理されていない眼と比べて、発光の26倍の増加を示した。形質移入の30日後、ルシフェラーゼ活性の有意な減少が、各実験群において観察された。組織化学的染色は、毛様体領域におけるβガラクトシダーゼ発現を示したが、プラスミド注入部位に限定されなかった。従って、本発明者らははじめて、透光体内における分泌されるタンパク質の眼内産生の為の、眼組織における超音波及びマイクロバブルにより媒介された遺伝子導入のインビボでの実行可能性を示す。これらの結果は、USと組み合わされたマイクロバブルが、毛様体筋細胞を形質移入する為に効率的に用いられうること、及び、それ故に、眼疾患の処置の為に用いられうることを示す。すなわち、本発明は、対象における眼疾患の処置の為のそのような方法の使用に関する。より特には、本発明は、対象における眼疾患を処置するための方法であって、iエコー造影剤マイクロバブル及び関心のある治療用核酸を処方された医薬組成物を該対象の毛様体筋内に送達すること、及びii該医薬組成物が送達された領域を超音波にさらして、該関心のある治療用核酸の該毛様体筋への形質移入を誘発することからなる工程を含む、前記方法に関する。本発明において用いられるべき核酸は、生物学的特性を示す関心のある任意の核酸であってよい。より特には、該核酸は、生物学的活性を示す天然の、切り取られた、人工の、キメラの、又は組み換えの産物例えば、関心のあるポリペプチドタンパク質又はペプチドを包含する、RNA等をコードする任意の核酸でありうる。該核酸は、好ましくは、デオキシリボ核酸DNA分子cDNA、gDNA、合成DNA、人工DNA、組み換えDNA等又はリボ核酸RNA分子mRNA、tRNA、RNAi、RNAsi、触媒的RNA、アンチセンスRNA、ウィルスRNA等である。該核酸は、一本鎖又は複数鎖の核酸、好ましくは二本鎖核酸であってよく、又は複合体化されうる。該核酸は、ハイブリッド配列又は合成の若しくは半合成の配列を含みうる。それは、当技術分野の当業者に既知の任意の技術により得られてよく、及び、特には、スクリーニングライブラリーにより、化学的合成により、又は代替的にはスクリーニングライブラリーにより得られた配列の化学的若しくは酵素的修飾を含む混合方法により得られうる。特定の実施態様において、該治療用核酸は、合成由来又は生合成由来のものであり、又は、ウィルスから抽出されたもの、又は単細胞の若しくは多細胞の真核生物若しくは原核生物から抽出されたものである。本発明において用いられる該治療用核酸は、該毛様体筋に投与されるときに、裸のものであってよく、任意の化学的、生化学的若しくは生物学的剤に複合体化されていてよく、ベクターに挿入されていてよい。本明細書内において用いられるときに、語裸のDNAは、該DNAの送達又は形質移入を改善し又は該細胞へのその侵入を促進する合成的、生合成的、化学的、生化学的、又は生物学的な剤に組み合わされていない任意の核酸分子をいう。本明細書内において用いられるときに、語ベクターは、結合されている他の核酸を輸送することができる核酸分子をいう。この語はまた、本願において、任意の送達キャリア、例えばその細胞送達を増すために治療的又は予防的核酸に関連付けられた組成物、をいう。好ましいベクターは、それらが連結された核酸の自律的な複製及び/又は発現が可能であるものである。ベクターが動作可能に連結された遺伝子の発現を指図することが可能であるベクターは、本明細書内において発現ベクターと呼ばれる。一般に、組み換えDNA技術において有用な発現ベクターはしばしばプラスミドの形にあり、これは、それらのベクター形態において、染色体に結合されていない環状二本鎖DNAループをいう。本発明において、該プラスミドが、最も一般的に用いられるベクター形態である。該プラスミドは、本発明に従う裸のDNAの好ましい形である。ベクターは、また、エピソームDNA、酵母人工染色体、ミニ染色体、又はウィルスベクターであってよく、ここで該ウィルスベクターは、レンチウィルス、アデノウィルス、アデノ随伴ウィルス、及びウィルス様ベクターからなる群から選ばれる。該ベクターはまた、脂質小胞、例えばリポソーム、でありうる。リポソームでない、脂質に基づく化合物がさらに、用いられうる。例えば、リポフェクチン及びサイトフェクチンcytofectinは、負に荷電した核酸に結合し及び細胞膜を横切ってDNAを運ぶことができる複合体を形成する、脂質に基づく陽イオンである。本発明は、同等の機能に従事し及び当技術分野で知られている本明細書以下の発現ベクターの他の形のものを包含することが意図される。加えて、本発明に従う核酸は、1又はそれより多くの追加の領域、例えば当業者に利用可能である小さい又は大きいサイズの制御エレメント、例えばプロモーター領域構成的なもの、制御されたもの、誘発可能なもの、組織特異的なものなど、例えば毛様体筋における発現を許し及び/又は促進する配列、転写終結シグナル、分泌配列、複製起点、及び/又は核局在シグナルnls配列これはさらに細胞核へのポリヌクレオチド移行を増す、を含みうる。そのようなnls配列は、先行文献に記載されており、SV40largeT抗原配列を含む。追加的に、該核酸はさらに、核酸移転結果どの組織への移転か、発現の期間等を選択し、測定し、及びモニターすることにおいて有用な選択可能マーカーを含みうる。使用されうる又は使用の為に適合されうる発現系及びレポーター遺伝子の種類は当技術分野でよく知られている。例えば、ルシフェラーゼ活性、アルカリホスファターゼ活性、又は緑色蛍光タンパク質活性をコードする遺伝子が一般に用いられる。本発明に従う核酸は、任意のサイズの任意のヌクレオチド配列を含みうる。該核酸はすなわち、簡単なオリゴヌクレオチドからより大きな分子まで、サイズにおいて変化してよく、例えば任意のサイズ小さい又は大きいのエキソン及び/又はイントロン及び/又は制御エレメント、任意のサイズ、例えば大きなサイズ、の遺伝子、又は、例えば染色体を含むヌクレオチド配列であってよく、及び、プラスミド、エピソーム、ウィルスゲノム、ファージ、酵母人工染色体、ミニ染色体、アンチセンス分子でありうる。特に好ましい実施態様において、該ポリヌクレオチドは、生物学的活性を有する産物をコードする二本鎖環状DNA、例えばプラスミド、である。該核酸は、慣用の組み換えDNA技術、例えば増幅、原核の又は真核の宿主細胞における培養、精製、に従い調製され及び産生されうる。組み換えDNAテクノロジーの技術は、当技術分野の当業者に知られている。特定の実施態様において、関心のある該核酸は、眼の細胞に対する有益な効果を発揮することができる。内因性物質の欠乏を補い又は内因性物質の過剰を減少しうる。代替的に、それは、該細胞に新たな特性を与えうる。それは例えばアンチセンス配列又は、ポリペプチドをコードする核酸であってよく、これは眼の細胞の機能、形態学、活性及び/又は代謝に影響しうる。アンチセンス核酸を用いる遺伝子発現下方制御は、翻訳レベル又は転写レベルで達成されうる。本発明のアンチセンス核酸は好ましくは、眼の内因性活性物質をコードする核酸又は対応するメッセンジャーRNAと特異的にハイブリダイズすることができる核酸断片である。これらのアンチセンス核酸は、任意的にそれらの安定性及び選択性を改善する為に任意的に修飾された、合成オリゴヌクレオチドでありうる。また、それらは、DNA配列であってよく、その該細胞内での発現が、内因性の眼の活性物質をコードするmRNAの全部または一部と相補的なRNAを産生する。アンチセンス核酸は、内因性の眼の活性物質を、逆向きでコードする核酸の全部又は一部の発現により調製されうる。アンチセンス配列が該眼の内因性活性物質の発現を下方制御する又はブロックすることができる限り、アンチセンス配列のいずれの長さも本発明の実施に適している。好ましくは、該アンチセンス配列は、少なくとも20ヌクレオチド長である。アンチセンス核酸、アンチセンスRNAをコードするDNAの調製及び使用並びにオリゴ及び遺伝子的アンチセンスの使用は、国際公開第9215680号パンフレットにおいて開示されており、その内容は引用することにより本明細書に組み込まれる。上記で記載されたとおりの核酸により任意的に発現される、又は、生物学的に活性な剤として使用可能であり及び本発明の実施に適切な該生物学的に活性なポリペプチド又はタンパク質は、酵素、血液派生物、ホルモン、リンホカイン、サイトカイン、ケモカイン、抗炎症性因子、成長因子、栄養因子、神経栄養因子、造血因子、血管新生因子、抗血管新生因子、メタロプロテイナーゼのインヒビター、アポトーシスのレギュレーター、凝固因子、それらのレセプター、特には可溶性レセプター、レセプター若しくは接着タンパク質のアゴニスト若しくはアンタゴニストであるペプチド、抗原、抗体、それらの断片又は誘導体、及び該細胞の他の必須成分を包含する。種々の網膜由来神経栄養因子が、変性する光受容細胞を救う能力を有し、及び、本発明に従う方法により送達されうる。好ましい生物学的に活性な剤は、VEGFアンジオゲニンアンジオポエチン-1DeM酸性又は塩基性線維芽細胞成長因子FGF2フォリスタチン顆粒球コロニー刺激因子肝細胞増殖因子分散因子レプチンミッドカイン胎盤増殖因子血小板由来内皮細胞増殖因子血小板由来増殖因子-BBプレイオトロフィンRdCVFプログラニュリンプロリフェリン形質転換成長因子-α形質転換成長因子-β腫瘍壊死因子-α血管内皮成長因子血管透過性因子CNTFBDNFGDNFPEDFNT3BFGFアンジオポエチンエフリンEPONGFIGFGMFaFGFNT5Gax成長ホルモンα-1-アンチトリプシンカルシトニンレプチンアポリポタンパク質ビタミン、ホルモン又はニューロメディエーターneuromediatorの生合成の為の酵素ケモカインサイトカイン、例えばIL1IL8IL10IL12IL13それらのレセプター該レセプターのいずれかをブロックする抗体TIMP、例えばTIMP1TIMP2TIMP3TIMP4アンジオアレスチンangioarrestinエンドスタチン、例えばエンドスタチンXVIII及びエンドスタチンXVATFアンジオスタチンエンドスタチン及びアンジオスタチンの融合タンパク質マトリックスメタロプロテイナーゼ-2のC末端ヘモペキシンドメインヒトプラスミノーゲンのクリングル5ドメインエンドスタチンとヒトプラスミノーゲンのクリングル5ドメインとの融合タンパク質胎盤リボヌクレアーゼインヒビタープラスミノーゲンアクチベーターインヒビター血小板因子-4プロラクチン断片プロリフェリン関連タンパク質抗血管新生アンチトロンビンIII軟骨由来インヒビターCartilageDerivedInhibitorCD59補体断片バスキュロスタチンvasculostatinバソスタチントロンボスポンジンフィブロネクチン特にはフィブロネクチン断片gro-βヘパリナーゼヒト絨毛性ゴナドトロピンインターフェロンα/β/γインターフェロン誘発性タンパク質インターフェロンにより誘発されたモノカインインターフェロンα誘発性タンパク質10MigとIP10との融合タンパク質可溶性Fms様チロシンキナーゼ1レセプターキナーゼ挿入ドメインレセプターアポトーシスの制御因子、例えばBcl2BadBakBaxBikBclXショートアイソフォーム及びGaxそれらの断片又は誘導体及び同様物から選択されうる。特定の実施態様において、該核酸は、TNFαレセプターTGFβ2レセプターVEGFR1VEGFR2VEGFR3CCR2、又はMIP1の可溶性断片をコードする。該核酸はまた、他の好ましい実施態様において、抗体、一本鎖抗体の可変断片ScFv、又は、免疫治療の目的の為の認識能力を有する任意の他の抗体断片をコードする。本発明の特定の実施態様において、該生物学的に活性な核酸は、本発明において使用可能な治療タンパク質、例えば上記で記載されたもの、の前駆体をコードする。さらに、本発明の他の実施態様において、異なる生物学的に活性な複数の産物類をコードする複数の核酸の混合物が用いられうる。この変異体は、該眼細胞における種々の産物の共発現を許す。本発明の医薬組成物は、ガスコアを閉じこんだシェルから構成されるエコー造影剤マイクロバブルを含む。典型的には、該マイクロバブルは、01~10ミクロンの直径を有するが、この特徴は、限定するものとして考えられるべきでなく、そしてそれ故に、l0ミクロン超の直径又は01ミクロン未満の直径を有するマイクロバブルも本発明に包含される。本明細書内において用いられるときにエコー造影剤マイクロバブルは、気体を有する内部空間を囲む、略球形の形を有するシェルを有するミクロスフィアをいう。本明細書内において言及されるマイクロバブルシェルは、マイクロバブルの該内部空間を囲む膜をいい、及び、語ガスは、本明細書内において用いられるときに、室温及び標準大気圧気相にあり又は約70°C若しくはそれより低い遷移温度で気相への相変化を受けうる、低毒性の物質を示す。超音波造影剤としてのマイクロバブルを形成するための組成物及び方法は、当技術分野でよく確立されている。それ故に、当技術分野の当業者は、本発明において用いられるマイクロバブルを形成するための材料及び方法を知っている。マイクロバブルの調製の為の手順の例が、米国特許第4446442号明細書米国特許第4684479号明細書米国特許第4718433号明細書米国特許第5088499号明細書米国特許第5123414号明細書米国特許第5271928号明細書米国特許第5413774号明細書米国特許第5445813号明細書米国特許第5556610号明細書米国特許第5597549号明細書米国特許第5686060号明細書米国特許第5773527号明細書米国特許第5798091号明細書米国特許第5827504号明細書米国特許第6217850号明細書米国特許第6416740号明細書米国特許第6443898号明細書及び欧州特許第0458745号明細書に記載されており、これらの全体の開示が引用することにより本明細書に組み込まれる。マイクロバブルシェルは、マイクロバブルの該内部空隙を囲む膜である。マイクロバブルシェルは典型的には、約10~約200nmの厚さであり、及び、該ガスコアの破壊及び拡散を防ぐことに役立つ。該マイクロバブルシェルは典型的には、界面活性剤又はポリマーを含む。マイクロバブル調製における使用の為に適した界面活性剤は、該ガスと、該マイクロバブルを含む該媒体、通常は水性媒体、との間の界面で層を形成することによってマイクロバブルの形成及び維持を助ける任意の化合物又は組成物を包含する。該界面活性剤は、一つの化合物を含んでよく、又は、化合物の組み合わせを含んでもよい。該マイクロバブルの形成を促進することができる広い範囲の化合物が本発明において用いられうることが、当技術分野の当業者によって理解される。最適な界面活性剤は、過度の実験を要求しない実証研究により決定されうる。本発明の技術分野の当業者は、生体適合性などの特性に基づいて、適切な界面活性剤を選択するであろう。好ましい界面活性剤は、リン脂質及びフッ素化脂質を包含する脂質を包含する。使用されうる脂質は、脂肪酸リゾ脂質ホスファチジルコリンジオレオイルホスファチジルコリンジミリストイルホスファチジルコリンジペンタデカノイルホスファチジルコリンジラウロイルホスファチジルコリンジオレオイルホスファチジルコリンジパルミトイルホスファチジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンを含むホスファチジルエタノールアミンジオレオイルホスファチジルエタノールアミンを含むホスファチジルセリンホスファチジルグリセロールホスファチジルイノシトールスフィンゴ脂質スフィンゴミエリン糖脂質ガングリオシドGM1ガングオシドGM2グルコリピドスルファチドグリコスフィンゴリピドホスファチジン酸パルミチン酸ステアリン酸アラキドン酸オレイン酸ポリマー含有脂質、例えばポリエチレングリコール、キチン、ヒアルロン酸、又はポリビニルピロリドンスルホン化モノ-、ジ-、オリゴ-、又はポリサッカリド含有脂質コレステロールコレステロールサルフェートコレステロールヘミサクシネートcholesterolhemisuccinateトコフェロールヘミサクシネートエーテル及びエステル-結合脂肪酸を有する脂質重合化脂質ジアセチルホスフェートステアリルアミンカルジオリピン6~8炭素長の短鎖脂肪酸を有するホスホリピド非対称アシル鎖を有する合成ホスホリピド6lチオヘキシル6アミノ6デオキシlチオヘキシル6アミノ6デオキシルlチオaDマンノピラノシド12カルボニルメチルアミノオクタデカン酸N12カルボニルメチルアミノオクタデカノイル2アミノパルミチン酸コレステリルブタノエートNサクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールアミン12ジオレオイルsnグリセロールl2ジパルミトイルsn3サクシニルグリセロール13ジパルミトイル2サクシニルグリセロール1ヘキサデシル2パルミトイルグリセロホスホエタノールアミンパルミトイルホモシステイン及びそれらの組み合わせラウリルトリメチルアンモニウムブロミドセチルトリメチルアンモニウムブロミドミリスチルトリメチルアンモニウムブロミドアルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリドベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミドベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムブロミドベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムブロミドセチルジメチルエチルアンモニウムブロミドセチルピリジニウムブロミドペンタフルオロオクタデシルヨージドパーフルオロオクチルブロミドパーフルオロデカリンパーフルオロドデカリンパーフルオロオクチルヨージドパーフルオロトリプロピルアミン及びパーフルオロトリブチルアミンを包含する。本発明における使用の為に有用なポリマーは、タンパク質、特にはアルブミン、特にはヒト血清アルブミン、及び他の生体適合性ポリマーポリシアノアクリレート及びポリグルタメートを包含するを包含する。該マイクロバブルシェルの性質は、該マイクロバブルの柔軟性、超音波の効果、及び特異的な細胞タイプへの結合特性を決定する。マイクロバブルに所望の特徴を与える為に、追加的な成分が任意的に該マイクロバブルシェルに含まれうる。該マイクロバブルは、該マイクロバブル膜に含まれる又は該マイクロバブル膜に結合されたリガンド又はターゲティング分子を含んでよく、ここで該リガンド又はターゲティング分子は、標的表面又は組織に結合する。例えば米国特許第6245318号明細書米国特許第6264917号明細書PADaytonetalTargetedimagingusingultrasoundJofMagnResonImaging20021636277SHBlochetalTargetedimagingusingultrasoundcontrastagentsIEEEEngineeringinMedicineandBiologyMagazine2004231829AKlibanovetal米国特許出願公開第20050260189号明細書を参照されたい。これらの全体の開示が引用することにより本明細書内に組み込まれる。そのようなターゲティング物質をそれらのシェル内に入れているマイクロバブルは、本発明の範囲内に包含される。包含されうるそのようなターゲティング分子の例は、抗体及び抗体断片、細胞接着分子、それらの受容体、サイトカイン、増殖因子、ペプチドホルモン、ペプチド模倣物、及びそれらの断片細胞接着分子、サイトカイン、成長因子、及びペプチドホルモンについての受容体の非ペプチドアゴニスト/アンタゴニスト又は非生物活性バインダーオリゴヌクレオチド及び修飾されたオリゴヌクレオチドプロテアーゼ基質又はインヒビター生物学的レセプターの小分子リガンド不活化プロテアーゼを包含する。該リガンド又はターゲティング分子がバイオポリマーである場合、及び本発明の方法及び組成物がヒトにおいて用いられる場合、該分子は、好ましくは、免疫原性の可能性を減少する為にヒトに由来するものである。該マイクロバブル中の封入の為のガスの代表的なクラスは、すなわち、一般的なガス、例えば空気窒素酸素二酸化炭素水素不活性ガス、例えばヘリウムアルゴンキセノン又はクリプトンフッ化硫黄例えば六フッ化硫黄十フッ化二硫黄又は五フッ化トリフルオロメチル硫黄trifluoromethylsulphurpentafluoride六フッ化セレン任意的にハロゲン化されたシラン、例えばメチルシラン又はジメチルシラン低分子量炭化水素例えばアルカン、例えばメタン、エタン、プロパン、ブタン又はペンタン、シクロアルカン、例えばシクロプロパン、シクロブタン又はシクロペンタン、アルケン、例えばエチレン、プロペン、プロパジエン又はブテン、及びアルキン、例えばアセチレン又はプロピンエーテル、例えばジメチルエーテルケトンエステルハロゲン化低分子量炭化水素及びそれらの混合物を包含する。有利には、ハロゲン化気体中のハロゲン原子の少なくともいくつかがフッ素であり例えばブロモクロロジフルオロメタンクロロジフルオロメタンジクロロジフルオロメタンブロモトリフルオロメタンクロロトリフルオロメタンクロロペンタフルオロエタンジクロロテトラフルオロエタンクロロトリフルオロエチレンフルオロエチレンフッ化エチル11ジフルオロエタン及びパーフルオロ炭素である。他のハロゲン化ガスは、塩化メチル、フッ素化例えば過フッ素化ケトン、例えばパーフルオロアセトン、及びフッ素化例えば過フッ素化エーテル、例えばパーフルオロジエチルエーテル、及びチオエーテル、例えばトリフルオロメチルサルファイドを包含する。本発明において用いられうるガスの特定の例は空気アレンアルゴンブロモクロロフルオロメタンブロモクロロジフルオロメタンブロモジフルオロメタンブロモフルオロメタン3ブロモlペンテンブロモトリフルオロメタン12ブタジエン13ブタジエン1ブテン2ブテン1ブチン2ブチン二酸化炭素硫化カルボニル1クロロ11ジフルオロエタン2クロロllジフルオロエタンlクロロ1122テトラフルオロエタンクロロシクロペンテンクロロジフルオロメタンクロロジフルオロニトロメタンクロロエタンクロロフルオロメタン2クロロll1444ヘキサフルオロブチン1クロロ11222ペンタフルオロエタン1クロロl222テトラフルオロエタンクロロトリフルオロメタンシクロブタンシクロプロパン1112234555デカフルオロペンタンジブロモジフルオロメタンl2ジブロモll22テトラフルオロメタン11ジクロロジアセチレン11ジクロロ22ジフルオロエチレン12ジクロロl2ジフルオロエチレンジクロロジフルオロメタン11ジクロロエタン11ジクロロエチレンジクロロフルオロメタン11ジクロロlフルオロエタン11ジクロロl222テトラフルオロエタン22ジクロロl11トリフルオロエタン11ジフルオロエタン12ジフルオロエタン12ジフルオロエチレンジフルオロメタン22ジフルオロプロパン11ジメチルシクロプロパン12ジメチルシクロプロパンジメチルエチルアミン23ジメチル2ノルボルナン22ジメチルプロパンエタンエチルシクロプロパン3エチル3メチルジアジリジンエチルビニルエーテルフルオロエタン1フルオロブタンヘリウム1112333ヘプタフルオロプロパンヘキサフルオロ13ブタジエン111233ヘキサフルオロ23ジクロロプロパン111333ヘキサフルオロプロパンヘキサフルオロ2メチルlブテン111223ヘキサフルオロプロパンヘキサフルオロプロピレンヨードトリフルオロメタンクリプトン3メチルlブテン2メチルlブテン3イン3メチル1ブチンメチルシクロブタンメチルシクロプロパンイソプロピルアセチレンメタン2メチルl3ブタジエン2メチルブタンメチルエーテルメチルイソプロピルエーテルメチルラクテート亜硝酸メチル硫化メチルメチルビニルエーテルネオン窒素亜酸化窒素lノネン3インオクタフルオロ2ブテンオクタフルオロシクロブタンオクタフルオロシクロペンテン酸素14ペンタジエンnペンタン11133ペンタフルオロブタンペンタフルオロエタン11133ペンタフルオロプロパン1ペンテンE2ペンテンZ2ペンテンパーフルオロブタンパーフルオロ1ブテンパーフルオロ2ブテンパーフルオロ2ブチンパーフルオロシクロブテンパーフルオロジメチルアミンパーフルオロエタンパーフルオロメタンパーフルオロヘキサンパーフルオロペンタンパーフルオロ1ペンテンパーフルオロプロパンパーフルオロプロピレンプロパンプロペンプロピン六フッ化セレン六フッ化硫黄テトラフルオロアレン1112テトラフルオロエタン1122テトラフルオロエタンテトラフルオロメタントリクロロフルオロメタントリフルオロメチル五フッ化硫黄trifluoromethylsulfurpentafluoridell2トリクロロl22トリフルオロエタン111トリフルオロエタントリフルオロメタンビニルアセチレンビニルエーテル及びキセノン、及びそれらの混合物を包含する。本発明の好ましいガスは、フッ化炭素化合物であり、以下の化合物を包含する:パーフルオロカーボン、パーフルオロアルカンを含むハイドロフルオロカーボン、ハイドロフルオロアルカンを含むクロロフルオロカーボン、クロロフルオロアルカンを含むハイドロクロロフルオロカーボン、ハイドロクロロフルオロアルカンを含む及びハロン。パーフルオロカーボン、特にはパーフルオロアルカンが特に好ましい。代表的なパーフルオロカーボンは、パーフルオロアルカン、例えばパーフルオロメタン、パーフルオロエタン、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン例えばパーフルオロnブタン任意的に他のアイソマー、例えばパーフルオロisoブタン、との混合物であるパーフルオロペンタンパーフルオロヘキサン又はパーフルオロヘプタンパーフルオロアルケン、例えばパーフルオロプロペンパーフルオロブテンパーフルオロブタジエンパーフルオロペンテン又はパーフルオロ4メチルペント2エンパーフルオロアルキン、例えばパーフルオロブト2イン及び、パーフルオロシクロアルカン、例えばパーフルオロシクロブタンパーフルオロメチルシクロブタンパーフルオロジメチルシクロブタンパーフルオロトリメチルシクロブタンパーフルオロシクロペンタンパーフルオロメチルシクロペンタンパーフルオロジメチルシクロペンタンパーフルオロシクロヘキサンパーフルオロメチルシクロヘキサン又はパーフルオロシクロヘプタンを包含する。また、6フッ化硫黄も好ましい。これらのガスのうち、パーフルオロプロパン及びパーフルオロブタンが特に好ましく、というのもそれらのヒトにおける眼内注入にとって示された安全性の故である。それらは、網膜剥離を安定化するための眼内注入の為のヒト研究において用いられている。他の不活性ガス、例えば6フッ化硫黄、もまた本発明において有用である。該ガスは好ましくは、該マイクロバブルシェル内の空間の少なくとも50を満たし、いくつかの実施態様において、該空間の少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、又は少なくとも90を満たす。いくつかの実施態様において、該ガスは、該マイクロバブルシェル内の空間を実質的に満たす。該界面活性剤に加えて、マイクロバブルの形成の為に又はインビボ使用の為のマイクロバブルの調製の為に、該水性相内に他の剤を入れることが望ましくありうる。そのような剤は、有利には、慣用の粘度調整剤、バッファー、例えばホスフェートバッファー又は他の慣用の生体適合的バッファー、又はpH調整剤、例えば酸又は塩基、及び浸透圧剤等張性、高浸透圧性、又は低浸透圧性を与えるためを包含しうる。好ましい溶液は、約7のpHを有し及び等張性である。そのような剤の例は、塩化ナトリウム及びスクロースを包含する。例えば、炭水化物及びそれらのリン酸化誘導体及びスルホン化誘導体ポリエーテル、好ましくは400~8000の分子量を有するものジ及びトリヒドロキシアルカン及びそれらのポリマー、好ましくは800~8000の分子量を有するものを含むがこれらの限定されない種々の粘度調整剤の添加により、マイクロバブル溶液は安定化されうる。グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、及びポリビニルアルコールもまた、本発明における安定化剤として有用でありうる。任意的に、本発明のマイクロバブルはさらに、1又はそれより多くの物質を封入しうる。非限定的な例は、治療分子又は造影剤を包含する。造影剤は、常磁性ガス、例えば大気ガス、これは微量の酸素17又は常磁性イオン、例えばMn2Gd2及びFe3、並びに超常磁性粒子を含み及びすなわち磁気共鳴画像法の為の感受性造影剤susceptibilitycontrastagentsとして用いられうる、放射線不透過性金属イオン、例えばヨウ素、バリウム、臭素、又はタングステン、X線造影剤としての使用の為、及び四極子核からのガス、これは磁気共鳴造影剤としての使用の為の可能性を有しうる、を包含するがこれらに限定されない。例となる治療用分子は、抗新生物剤、例えばプラチナ化合物例えばスピロプラチン、シスプラチン、及びカルボプラチン、メトトレキセート、フルオロウラシル、アドリアマイシン、マイトマイシン、アンサマイトシン、ブレオマイシン、シトシンアラビノシド、アラビノシルアデニン、メルカプトポリリジン、ビンクリスチン、ブスルファン、クロラムブシル、メルファラン例えば、PAM、LPAM又はフェニルアラニンマスタード、メルカプトプリン、ミトタン、プロカルバジンヒドロクロリドダクチノマイシン、ダウノルビシンヒドロクロリド、ドキソルビシンヒドロクロリド、タキソール、マイトマイシン、プリカマイシンミトラマイシン、アミノグルテチミド、エストラムスチンホスフェートナトリウム、フルタミド、リュープロリドアセテート、メゲストロールアセテート、タモキシフェンシトレート、テストラクトン、トリロスタン、アムサクリン、アスパラギナーゼErwinaアスパラギナーゼ、エトポシド、インターフェロンa-2a、インターフェロンa-2b、テニポシド、ビンブラスチンサルフェート、ビンクリスチンサルフェート、ブレオマイシン、ブレオマイシンサルフェート、メトトレキセート、アドリアマイシン、アラビノシル、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、及びダカルバジン有糸分裂阻害剤、例えばエトポシド及びビンカアルカロイド放射性医薬、例えば放射性ヨウ素及びリン製品ホルモン、例えばプロゲスチン、エストロゲン、アンチエストロゲン、成長ホルモン、メラニン細胞刺激性ホルモン、エストラジオール、ベクロメタゾンジプロピオネート、ベタメタゾン、ベタメタゾンアセテート及びベタメタゾンナトリウムホスフェート、ベタメタゾン二ナトリウムホスフェート、ベタメタゾンナトリウムホスフェート、コルチゾンアセテート、デキサメタゾン、デキサメタゾンアセテート、デキサメタゾンナトリウムホスフェート、フルニソリド、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセテート、ヒドロコルチゾンシピオネート、ヒドロコルチゾンナトリウムホスフェート、ヒドロコルチゾンナトリウムスクシネート、メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセテート、メチルプレドニゾロンナトリウムスクシネート、パラメタゾンアセテート、プレドニゾロン、プレドニゾロンアセテート、プレドニゾロンナトリウムホスフェート、プレドニゾロンテブテート、プレドニゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンジアセテート、トリアムシノロンヘキサセトニド、フルドロコルチゾンアセテート、オキシトシン、バソプレシン、及びそれらの誘導体抗寄生虫剤、ビタミン、例えばシアノコバラミンレチノイン酸、レチノイド及び誘導体、例えばレチノールパルミテート、及びa-トコフェロール酵素を包含するペプチド、例えばマンガンスーパーオキシドジスムターゼ及びアルカリホスファターゼ抗アレルギー剤、例えばアンレキサノクスamelexanox抗凝固剤、例えばフェンプロクモン及びヘパリン循環器系作用薬、例えばプロプラノロール代謝増強剤metabolicpotentiators、例えばグルタチオン抗結核剤、例えばパラ-アミノサリチル酸、イソニアジド、カプレオマイシンサルフェートサイクロセリン、エタンブトールヒドロクロリドエチオナミド、ピラジンアミド、リファムピン、及びストレプトマイシンサルフェート抗ウィルス剤、例えばアシクロビル、アマンタジンアジドチミジン、、リバビリン、及びビダラビンモノハイドレート抗狭心症剤、例えばジルチアゼム、ニフェジピン、ベラパミル、エリトリトールテトラナイトレート、イソソルビドジナイトレート、ニトログリセリン、及びペンタエリトリトールテトラナイトレート抗生物質、例えばダプソン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、セファクロル、セファドロキシル、セファリキシン、セフラジンエリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、アモキシシリン、アンピシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、シクラシリン、ピクロキサシリンpicloxacillin、ヘタシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンG及びペニシリンVを包含するペニシリン、チカルシリンリファムピン、及びテトラサイクリン抗炎症剤、例えばジフルニサル、イブブロフェン、インドメタシン、メクロフェナメート、メフェナム酸、ナプロキセン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アスピリン、及びサリチレート抗原虫剤、例えばクロロキン、ヒドロキシクロロキン、メトロニダゾール、キニーネ及びアンチモン酸メグルミン抗リウマチ剤、例えばペニシラミン麻酔剤、例えばプレゴリックオピエート、例えばコデイン、ヘロイン、メタドン、モルヒネ及びアヘン強心性配糖体、例えばデスラノシド、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギタリン、及びジギタリス神経筋遮断剤、例えばアトラクリウムメシレート、ガラミントリエチオダイド、臭化ヘキサフルオレニウム、ヨウ化メトクリン、臭化パンクロニウム、塩化サクシニルコリン、塩化ツボクラリン、及び臭化ベクロニウム鎮静剤、例えばアモバルビタール、アモバルビタールナトリウム、アプロバルビタール、ブタバルビタールナトリウム、抱水クロラール、エトクロルビノール、エチナメート、フルラゼパムヒドロクロリド、グルテチミド、メトトリメプラジンヒドロクロリド、メチプリロン、ミダゾラムヒドロクロリド、パラアルデヒド、ペントバルビタール、ペントバルビタールナトリウム、フェノバルビタールナトリウム、セコバルビタールナトリウム、タルブタール、テマゼパム、及びトリアゾラム局所麻酔剤、例えばブピバカインヒドロクロリド、クロロプロカインヒドロクロリド、エチドカインヒドロクロリド、リドカインヒドロクロリド、メピバカインヒドロクロリド、プロカインヒドロクロリド、及びテトラカインヒドロクロリド全身麻酔剤、例えばドロペリドール、エトミデート、ドロペリノールと一緒のクエン酸フェンタニル、ケタミンヒドロクロリド、メトヘキシタールナトリウム、及びチオペンタールナトリウム放射性粒子又はイオン、例えばストロンチウム、ヨウ化レニウム及びイットリウム及びプロドラッグ、例えば米国特許第6443898号明細書に開示されたものこの開示は、引用することによりそっくりそのまま本明細書内に組み込まれるを包含するが、これらに限定されない。典型的には、約10~約60のマイクロバブルの量が、関心のある該核酸を含む該溶液に添加される。本発明の医薬組成物はまた、適合的であり又は生理学的に許容できるキャリア、添加物、又は希釈剤を含みうる。語医薬的に又は医薬的に許容できるは、必要に応じて哺乳動物、特にはヒト、に投与されたときに、薬害反応、アレルギー反応、又は他の有害反応を生成しない分子実体及び組成物をいう。医薬的に許容できるキャリア又は添加物は、任意の種類の、非毒性の固形の、半固形の、又は液状のフィラー、希釈剤、封入物質、又は製剤補助物をいう。医薬的に適合性の又は生理学的に許容できるキャリア、添加物、又は希釈剤は、本発明の方法にとって医薬的に許容でき、殺菌したものであり、及び、及び、中性~弱酸性の、等張性の、緩衝食塩水ホスフェート、塩化物等を含む、水性の又は油性の溶液又は懸濁物から、より好ましくはスクロース、トレハロース、界面活性剤、タンパク質及びアミノ酸から選ばれうる希釈剤及びフィラーを包含する。該医薬的に適合性の又は生理学的に許容できるキャリア、添加物、又は希釈剤は、好ましくは、適した分散性、湿潤性、懸濁性の、鎮静性のsoothing、等張性の、又は粘性の構築剤、安定化剤、保存料、及び、等張性溶液を形成する為に適切なバッファーを用いて製剤化される。該特定の医薬的に許容できるキャリア及び活性化合物対キャリアの比は、該組成物の溶解性及び化学的特性、特定の投与様式、及び標準的な医薬的プラクティスによって決定される。当技術分野の当業者は、既知の技術によってそのようなビヒクルをどのように処方するかを理解するであろう。安定化剤の例は、エデト酸二ナトリウム又は同様物である。等張剤の例は、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ソルビトール、及びマンニトール、又は同様物である。バッファーの例は、クエン酸、リン酸水素ナトリウム、氷酢酸、及びトロメタモール、又は同様物である。pH調整剤の例は、塩化水素酸、クエン酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウム、又は同様物である。鎮静性剤soothingagentの例は、ベンジルアルコール又は同様物である。保存料の例は、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、p-ヒドロキシベンゾエートエステル、安息香酸ナトリウム、及びクロロブタノール、又は同様物である。簡単な水性溶液のものよりも大きい粘度が、該活性化合物の眼吸収を増加する為に、該処方物を分注する際の変動を減少する為に、処方物の懸濁物又はエマルジョンの成分の物理的な分離を減少する為に、及び/又は、それら以外に、眼処方物を改善する為に望ましい。そのような粘度構築性剤は例えば、ポリニビルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、又は当技術分野の当業者に既知の他の剤を包含する。そのような剤は典型的には、約001~約2重量のレベルで採用される。対象の毛様筋又は細胞への投与の為の医薬組成物の調製物形態は好ましくは液状調製物である。該液状調製物は、例えば、該生物学的に活性な剤を、BSSBalancedSaltSolution:平衡塩類溶液、グリセリン溶液、ヒアルロン酸溶液、及び同様物に溶解することによって調製されうる。特定の組成物は例えば、BBS及びヒアルロン酸を含む。安定化剤、等張剤、バッファー、pH調整剤、鎮静剤soothingagent、保存料、電解質、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及び/又は塩素、又は同様物が、任意的に、該液状調製物に適切な量で添加されうる。該医薬組成物は、任意の追加的な活性成分又はアジュバントを含んでよく、又は、該生物学的に活性な剤が、任意の追加的な活性成分又はアジュバントと本発明に従う使用において組み合わされてよい。該アジュバントは、該予防剤又は治療剤の生物学的活性を促進し又は増加する任意の物質、混合物、溶質、又は組成物、例えば、該剤の送達又は移動を改善する任意の生物学的、合成的、又は生合成的な剤、から選択されてよく、及び、本発明に従う送達キャリアとしてのベクターに組み込まれうる。該アジュバントは、該予防剤若しくは治療剤含有組成物と別に又は逐次的に、及び/又は、異なる注入部位で、調整され及び投与されてよい。本発明に従う複数の剤及び/又はアジュバントによる処置は、剤及び/又はアジュンバントの混合物を用いて行われる必要は無いが、別個の医薬調製物を用いて行われてよい。該調製物は、同時に送達される必要は無いが、調和されて、同じ処置期間内に、すなわち1週間以内又は1か月以内又は次々に、患者に送達されうる。任意の適切な治療剤は、本発明の組成物と調和されうる。本発明に従う方法を通じて上記生物学的に活性な予防的又は治療的剤に加えて投与されうる治療剤の非限定的な例はまた、透過性剤、例えばウィルス、脂質小胞、ヒアルロン酸、脂質に基づく陽イオン、ポリカチオン性のエマルジョン、カチオン性ペプチド、ポリプレックス等抗生物質及び抗微生物剤、例えばテトラサイクリンヒドロクロリド、ロイコマイシン、ペニシリン、ペニシリン誘導体、エリスロマイシン、スルファチアゾール及びニトロフラゾン局所麻酔剤、例えばベンゾカイン血管収縮剤、例えばフェニレフリンヒドロクロリド、テトラヒドロゾリンヒドロクロリド、ナファゾリンナイトレート、オキシメタゾリンヒドロクロリド、及びトラマゾリンヒドロクロリド強心剤、例えばジギタリス及びジゴキシン血管拡張剤、例えばニトログリセリン及びパパベリンヒドロクロリド防腐剤、例えばクロルヘキシジンヒドロクロリド、ヘキシルレゾルシノール、デカリニウム塩化物、及びエタクリジン酵素、例えば塩化リゾチーム及びデキストラナーゼ降圧剤鎮静剤抗腫瘍剤ステロイド系抗炎症剤、例えばヒドロコルチゾン、プレドニゾン、フルチカゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、アセトニド、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ベクロメタゾン、及びベクロメタゾンジプロピオネート非ステロイド系抗炎症剤、例えばアセトアミノフェン、アスピリン、アミノピリン、フェニルブタゾン、メフェナム酸、イブプロフェン、ジクロフェナクナトリウム、インドメタシン、コルヒチン、及びプロベネシドprobenocid酵素的抗炎症剤、例えばキモトリプシン及びブロメラインセラチオペプチダーゼ抗ヒスタミン剤、例えばジフェンヒドラミンヒドロクロリド、クロロフェニラミンマレエート及びクレマスチン抗アレルギー剤及び、鎮痛性化合物を包含する。本発明の組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、所望の生物学的活性を得るために有効である活性成分量を得るように適合されうる。しかしながら、任意の特定の患者に特異的な投与量レベルは、体重、一般健康状態、性、食生活、時間、吸収及び排出の速度、他の薬剤との併用、及び処置されている特定の疾患の重症度を含む種々の因子に依存するであろうことが理解されるべきである。本発明の医薬組成物は、複数の注入部位で毛様体筋中に送達されうる。また、該送達は、時間にわたって繰り返されうる。超音波は、約10kHz又はそれより大きい周波数を有する高周波数音である。本発明における使用にとって好ましい周波数は、人間の聴覚範囲を超えるものであり、約800kHz~約3MHzの周波数範囲にあるものである。用いられる超音波の周波数及び強度は、送達部位でのマイクロバブル選択的破壊を達成するための要件により決定される。マイクロバブル破壊を最適化するための要件パラメータは研究されており、当技術分野の当業者に知られている。一般に、約700kPa~200kPaのピーク負圧の範囲内の超音波強度が、送達部位で選択的にマイクロバブルを破壊する為に有効であろうことが予測される。該超音波は、当技術分野で周知の任意の超音波装置により適用されうる。例えば、該装置は、ゲルの間置後に眼表面に適用される集束プローブfocusedprobe又は非集束プローブunfocusedprobeから構成されうる。該プローブは、1mm直径~15mm直径である。典型的には、該装置は、05Wcm2~5Wcm2の出力強度Isataspatialaveragetemporalaverageintensityを有する800kHz~3MHzの超音波シグナルを提供する。該シグナルは、20秒~5分の期間送達される。該超音波装置は、パルス-エコーモードで又は連続的モードで送達されうる。リアルタイム超音波生体顕微鏡検査法UBMイメージングシステムと該超音波装置との組み合わせは、毛様体領域の可視化を許す為に、及び、局所的遺伝子送達の為により正確に針注入をガイドする為に、特に適切でありうる。該マイクロバブルは、超音波処理領域において破壊され、それらの含有物を放出する。キャビテーションcavitationはまた、関心のある治療用核酸の送達を可能にする細胞透過性を増大する小さな衝撃波を形成する。マイクロバブルの使用はまた、炎症応答の量を限定しえ、及び、繰り返し注入を許しうる。気体により満たされたミクロスフィアは、非熱的キャビテーションについてのエネルギー閾値を有効に低くする。本発明の方法により処置されうる眼疾患の非限定的な例は、眼増殖性疾患、眼神経変性疾患、緑内障、眼感染疾患、眼炎症性疾患例えば、結膜炎、角膜炎、内皮炎、ぶどう膜炎、脈絡膜炎、網膜炎、脈絡網膜炎、前部ぶどう膜炎、及び炎症性視神経症、網膜変性、虚血性網膜症、網膜血管疾患、眼虚血症候群及び他の血管異常、脈絡膜の異常及び腫瘍、硝子体異常、グリア増殖、例えば増殖性硝子体網膜症及び糖尿病性網膜前血管新生を伴うグリア細胞増殖等、を包含する。本発明により予防され又は処置されうる主な疾患が以下に記載される。眼内炎症は、眼内組織、主にはぶどう膜及び網膜、の炎症の全ての種類を再編成する。眼内炎症は、免疫学的原因、感染性の原因、医原性の原因からのもの、又は未知の病因のものでありうる。それらは、急性、再発性、又は慢性のものでありうる。眼内炎症は、治療可能な盲目の最大の原因である。後部眼内炎症は、血管炎、視神経炎、硝子体炎、及びコレア網膜炎chorearetinitisを伴いうる。遺伝性網膜ジストロフィー又は網膜色素変性は、視覚サイクルに関与する遺伝子における変異又は欠失に起因する遺伝性の失明に至る疾患である。それらは若い年齢において始まり、そして、全盲までゆっくりと進行する。光受容体の喪失は、網膜色素細胞の喪失に、及び、後期の脈管及び視神経の萎縮に関連している。これらの遺伝性変性のいくつかは、ミトコンドリアDNAにおける変異に起因する。緑内障の2つの主要な種類がある:慢性緑内障又は原発性開放隅角緑内障POAG及び急性閉塞隅角緑内障。他のバリエーションは、先天性緑内障、色素性緑内障、血管新生緑内障、及び続発性緑内障を包含する。緑内障は、高眼圧と類似するが、付随する視神経損傷及び視力喪失を伴う。緑内障は通常は、点眼剤、レーザー、又は慣用の眼の手術により処置される。もし処置されないならば、緑内障は失明を引き起こすであろう。血管新生は、新血管形成をもたらす新毛細血管の形成である。血管新生は、脈管基底膜及び間質マトリックスの内皮細胞媒介分解、内皮細胞の遊走、内皮細胞の増殖、及び内皮細胞による毛細血管ループcapillaryloopsの形成を含む一連の逐次的工程を含む複雑なプロセスである。血管新生は、脈管構造の発達及び維持の為の正常なプロセスであるけれども、病理学的状態すなわち血管新生依存性疾患が起こり、そこでは血管成長は実際には有害である。血管新生は、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障、及び角膜瘢痕を含む眼組織重要疾患に顕著に関連付けられる。眼における血管の或る異常増殖は、入射光を、網膜に到達する前に、散乱し及びブロックしうる。新脈管形成は、眼のほとんどすべての組織で起こり、及び、眼組織機能を顕著に変えうる。最も脅威的な眼新生血管疾患のいくつかは、網膜に影響を及ぼすものである。例えば、多くの糖尿病性患者は、網膜の前面及び硝子体内で漏出性新血管を形成し、増殖性硝子体網膜症を引き起こすことにより特徴づけられる網膜症を発症する。加齢性黄斑変性を有する患者のサブセットは、網膜下新血管形成を発症し、これは最終的に失明をもたらす。糖尿病性網膜症は、眼の内側の網膜血管が周囲組織中に血液及び流体を漏らす場合に起こる。糖尿病を有する患者の約80が糖尿病性網膜症を発症する。この疾患は一般に、レーザーを用いて処置される。しかしながら、レーザー治療は、網膜静脈閉塞、視力喪失、硝子体出血を含む合併症を伴い、及び、ときどき失敗する。もし処置されないままならば、糖尿病性網膜症は失明を引き起こしうる。未熟児網膜症ROPは、未熟児で生まれた赤ちゃんに発症する。それは、網膜及び硝子体内の血管の異常増殖からなる。ROPの後期への進行は、網膜上の瘢痕組織の形成、硝子体出血及び網膜剥離をもたらしうる。その処置は通常、レーザー又は凍結治療冷凍により行われる。虚血性網膜症は、神経網膜の苦痛、細胞死、及び新血管新生をもたらす血管閉塞毛細血管又は大血管に関連付けられる網膜症である。黄斑変性は、中心視を冒す疾患であり、及び、視力の喪失をもたらす。若い人々を襲う黄斑変性の形があるけれども、症状は、最も一般的には60歳超の人々に起こる。すなわち、この疾患は、加齢性黄斑変性AMDと呼ばれる。ヒトの視覚の中心だけが通常は冒されるので、該疾患からの失明はまれに起こる。しかしながら、網膜の中心における黄斑への損傷は、まっすぐ前を明らかに見る能力を破壊しうる。萎縮型dryformは、神経網膜、RPE細胞、及び脈絡膜の変性を付随する。滲出型wetformは、上記の現象及び、脈絡毛細管及び/又は網膜血管からの新血管の成長、網膜下の剥離及び出血、上皮下の出血及び裂孔等を付随する。黄斑変性は通常は、60歳の後に発生する。中心視が減少される一方で、多くの患者は、ある程度の視力を維持し、そして、完全に失明することはない。角膜炎は角膜の炎症である。角膜炎は、バクテリア、ウィルス、又は真菌の感染により、眼瞼の異常又は涙を形成する能力の減少から結果するドライアイにより、非常に明るい光への曝露により、傷付ける又は眼にとどまる異物により、眼のメークアップ、ホコリ、花粉、汚染、若しくは他の刺激物への敏感性又はアレルギー反応により、及びビタミンA欠乏により引き起こされうる。黄斑ひだ網膜上膜、網膜しわ、黄斑前線維症、及びセロファン黄斑症とも呼ばれるは、網膜から離れる硝子体の加齢に伴う収縮に最もしばしば起因し、網膜が瘢痕形成し及びしわ形成することを引き起こす。黄斑ひだの他の原因は、手術又は眼の傷からの外傷、網膜剥離、炎症、及び網膜血管の問題を包含する。唯一の処置は、瘢痕組織をはがすことを組み合わされた硝子体切除術硝子体の除去からなる手術である。硝子体切除術の最も一般的な合併症は、白内障発達の速度の増大である。処置される眼の疾患は、強膜炎、結膜炎、角膜炎、内皮炎、ぶどう膜炎、脈絡膜炎、網膜炎、網脈絡膜炎、前部ぶどう膜炎、未熟児網膜症、糖尿病性網膜症、増殖性硝子体網膜症、遺伝性網膜ジストロフィー、加齢性黄斑変性、開放隅角緑内障、新生血管緑内障、虚血性網膜症などから選ばれうる。本発明の特定の局面は、慢性ぶどう膜炎を処置する方法であって、それを患う対象の毛様体筋に、TNFαについての可溶性レセプターをコードする核酸を送達することを含む前記方法である。本発明の他の特定の局面は、眼内新生血管又は黄斑浮腫を処置する方法であって、それを患う対象の毛様体筋に、抗VEGF、抗VEGFレセプター、又は抗PLGFをコードする核酸を送達することを含む前記方法である。本発明のさらなる特定の局面は、網膜色素変性を処置し又は遅らせる方法であって、それを患う対象の毛様体筋に、上記で記載されたとおりの神経栄養因子をコードする核酸を送達することを含む前記方法である。本発明の他の特定の局面は、糖尿病性網膜症を処置する方法であって、それを患う対象の毛様体筋に、抗IRS1又はIGF1をコードする核酸をコードする核酸を送達することを含む前記方法である。本発明はまた、エコー造影剤マイクロバブルと、対象における眼疾患を処置するための方法において使用する為の関心のある治療用核酸とを処方された医薬組成物に関し、ここで該方法は、i該医薬組成物を該対象の毛様体筋に送達すること、及び、ii該医薬組成物が送達された領域を超音波に曝して、関心のある該治療用核酸の該毛様体筋内へのトランスフェクションを誘発することを含む。本発明の方法に従い、眼疾患を予防し又は処置する為のキットが想定される。装置及び本発明に従う医薬組成物が、キット中に一緒に提供されうる。該キット内に、構成要素は別個に包装されてよく又は含まれていてよい。他の構成要素、例えば添加物、キャリア、他の薬剤又はアジュバント、該活性物質又は組成物の投与の為の説明物、及び投与又は注入装置が、同様に該キットに供給されうる。説明物は、書面の形、ビデオの形、又はオーディオの形にあってよく、紙、電子媒体、に収容されてよく、又は他の源、例えばウェブサイト又は参照マニュアル、への参照として収容されてよい。本発明は、以下の図面及び実施例によりさらに説明される。しかしながら、これらの実施例及び図面は、いかなる様式においても、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきでない。材料及び方法動物:150~200gの重さのメスのLewisラットが、7週齢でJanvierから購入され、そして、我々の施設で1週間、本研究に含める前に、飼われた。実験は、theUseofAnimalsinOphthalmicandVisionResearchについてのtheAssociationforResearchinVisionandOphthalmology声明書に従い実施された。実験の為に、ラットは、Ketamine1000及びLargactilの混合物の筋肉内注入により麻酔された。実験の終わりで、ラットは二酸化炭素吸入により犠牲にされた。プラスミド:2つの市販入手可能なプラスミドが、投与の為に及び毛様体筋におけるレポーター遺伝子発現を確認する為に用いられた:pCMVGluc1サイトメガロウィルスプロモーターの制御下で分泌されるGaussiaルシフェラーゼをコードする、Clontechから購入された及びpVAXlLacZCMVプロモーターの制御下のLacZ遺伝子を含む。EscherichiacoliDH5alpha中での増幅後、プラスミドはNucleobondAX1000キットによって、製造者の指示に従い精製され、そして次に、10μL生理食塩水中の15μgプラスミド、すなわちMB無しの15μgμL又は50MBと一緒の3μgμL、を注入する為に、適切な濃度で調製された。マイクロバブルMB:我々は、すべての我々の実験について、市販入手可能な、使用準備のできた、ArtisonCorpにより提供された第二世代マイクロバブルを用いた。該ArtisonMBは、パーフルオロカーボンガスで満たされており且つ約24μmの直径を有する脂質シェルUS造影剤である。該MB溶液は、1ミリメートル当たり約13xl08のマイクロスフィアから構成される。MBは、製造者の指示に従い調製された。ArtisonMBは最初に、10秒間そのバイアルを穏やかに振とうすることにより、均一な乳状の白い懸濁物を得るまで再分散され、その後該懸濁物の所望の量が、該バイアルから引き抜かれた。次に、該バブルが、該プラスミド溶液に添加され、そして、10秒間穏やかに混合されて、それらの注入直前にそれらの組み合わせを許した。超音波装置:超音波US処理は、研究の為に設計されたソノポレーションsonoporationシステムSonitron2000、Artisonから、1MHz又は3MHzのいずれかで動作するプレーンの非集束型トランスデューサplaneunfocusedtransducerを有するを用いて実施された。3mm直径プローブが、ラット実験の為に小領域に音響エネルギーを送達する為に選択された。該トランスデューサは、0~5Wcm2の出力強度Isataを有し、01Wcm2の増加で調節可能であり、5~100で変わるデューティーサイクル1つのパルス期間にわたるon時間の百分率及び可変のパルス繰り返し周波数を有した。US適用のパルスモードの利点は、不都合な熱的効果が減少されうることである。処理時間は、0~20分で調節可能であった。ラット毛様体筋へのインビトロソノポレーション:治療実験の為に、眼が、外科用シートを用いて位置を保たれた。15μgのプラスミドDNA単独又はMBと混合された15μgのプラスミドDNAが、次に、外科用顕微鏡下で、両方のラットの眼の毛様体筋に、100μlマイクロシリンジの30ゲージディスポーザブル針を用いて注入された。縁透明角膜が白い不透明の角膜に接合する接合点の後の強膜直下の毛様体筋に到達する為に、該注入は、該縁の側頭上側において実施された。該注入の直後に、超音波チップが、透明カップリングゲルGelaserAlconRueilMalmaisonフランスの介在後に眼表面上に直接に適用され、そして、注入された領域がUSに曝された。USプローブは、処置の間、動かされなかった。両方の眼が、同じ手順を用いて、同じ作業者により処理された。全ての実験において、以下のUS設定が適用された:1MHz2分間の2Wcm2Isata5msのパルス幅及び5msのパルス間隔を有する50のデューティーサイクル、並びに100Hzのパルス繰返し周波数。実験計画:2セットの実験が、合計で36のLewisラットに対して実施された。同じ動物からの両方の眼が、同一の様式で処理された。実験の第一のセットは、ソノポレーション後7日目及び30日目で、毛様体筋中のルシフェラーゼレポーター遺伝子発現のキネティクスを評価することを目的とした。この目的のために、15μgのpCMVGluc1が、すべての動物の両方の眼の毛様体筋に注入された。プラスミド注入後、4つの実験群が、該7日目評価の為に形成された。第一の群において、対照として従事する為に、追加の処置は実施されなかった対照群、n10の眼。第二の群において、該プラスミド注入の直後に、US暴露が行われたUS群、n10の眼。あとの2つの群において、マイクロバブルと混合されたプラスミドDNAが、該毛様体筋に一緒に注入され、次にUS処理が行われ、又は、US暴露されなかった。同様の群:対照群、US群及びUSMB群が、該30日目評価の為に設定された。マイクロバブル単独の効果が、この時点で評価されなかった。1つの追加の未処理ラットが、各時点でのルシフェラーゼ発現についての陰性対照として用いられた。全ての動物は、処置後7日目又は30日目で犠牲にされた。眼が、眼球除去され、次に、眼液房水及び硝子体液が、ルミノメトリーによるルシフェラーゼ活性の評価の為に除去された。実験の第二セットにおいて、ラットの眼が、LacZ遺伝子を有するプラスミドの毛様体筋へのソノポレーション後に、β-ガラクトシダーゼ活性の局在化を分析する為に用いられた。15μgのpVAXlLacZが、6つの眼の毛様体筋中に注入された。次に、眼が、超音波とマイクロバブルn=2の眼、US又はマイクロバブル単独に曝された。残りのラットは、注入又はUSへの曝露を受けず、対照として従事した。トランスフェクション後7日目で、眼が眼球除去され、そして、組織化学的分析の為に調製された。眼が、それぞれの実験の直後に、そして次に遺伝子導入の7日後及び30日後に、裸眼観察により調べられた。ルシフェラーゼ活性の測定:処置後7日目又は30日目で、US及び/又はMBと一緒の又はこれら無しの、15μgのpCMVGluc1の筋肉内注入により処置された眼が、眼球除去された。眼の流体房水及び硝子体液が除去され、そして、4°Cでの5分間の5000gでの遠心後、上清が、使用まで-20°Cで維持された。ルシフェラーゼ活性が、RenillaLuciferaseAssaySystemにより、製造者のプロトコルに従い、白い96ウェルプレート中に置かれた各サンプルからの10μlに対して評価された。検出器は、ルミノメーターWallacVictor21420MultilabelCounterであった。これは、50μlのルシフェラーゼアッセイ基質Promegaを該試料に添加し、2秒の遅れとともに、10秒にわたって該試料により産生された光を積分する。データ分析は、Wallac1420ワークステーションソフトウェアを用いて実施された。結果が、各試料について、秒当たりのカウントcpsで与えられる。背景発光は120cps未満であった。毛様体筋領域におけるβガラクトシダーゼ発現の局在化:インシチュ組織化学分析:処理の7日後、眼が眼球除去され、ホスフェート緩衝生理食塩水PBS中の2パラホルムアルデヒド及び0.2グルタルアルデヒド中に1時間4°Cで固定され、次にPBS中で3回リンスされた。眼全体が、次に、一晩、暗所中で室温37°Cで、色素産生性Xgal試薬1mgmlの5ブロモ4クロロ3インドリルdガラクトピラノシドSigmaSaintQuentinFallavierフランスの存在下において、5mMのK3Fe65mMのK4Fe62mMのMgCl2及び002NP40を有するPBS中で、β-ガラクトシダーゼ活性の測色検出のためにインキュベートされた。次に、眼が、パラフィン中に埋められ、そして次に、MicromHM340Eミクロトームを用いてスライスされた。縦に10μm厚さの切片が、光軸に平行に切られた。各試料からのパラフィン切片の半分が、グリセロールPBS中に標本にされ、及び、他方の半分が、ヘマトキシリンミョウバン溶液-エオシンにより対比染色されて、核及び細胞質をそれぞれ染めた。LeitzAristoplan顕微鏡写真機下での検査の間、画像が、10x又は25xの対物レンズ及び255ミリ秒及び149ミリ秒でそれぞれ維持された露光時間によりLeicaDFC480デジタルカメラを用いて撮られた。統計的分析:データの分析の為に用いられたプログラムは、GraphPadPrismであった。結果が、平均±該平均の標準誤差として表される。データ分析は、ノンパラメトリック一元配置分散分析ANOVAKruskalWallisテストを用いて実施され、続いてDunns多重比較検定が行われた。ANOVAの前に、極端な異常値が、Grubbs検定により同定され、そして、データセットから除外された群当たり1つの点。統計的有意性は、p005で設定された。結果:処理直後及び処理後7日及び30日での処理された眼の臨床検査は、炎症又は著しい眼の損傷の不在を示した。眼流体中のルシフェラーゼ活性のキネティクス:Gaussiaルシフェラーゼ発光が、4つの異なる処置群における、毛様体筋中へのpCMVGluc1プラスミドの注入の7日後に、ラット眼液中において示された。眼液中のルシフェラーゼ活性の平均レベルは、対照群DNA注入単独と比較して、MB有り又はMB無しのUS暴露により処理された群の両方において増加された。プラスミド及びMBの一緒の投与後にUS適用を受けた眼においてn=11、毛様体筋におけるルシフェラーゼ活性は、対照群と比較してn9p005又はMB群と比較してn7p0005、約26倍だけ有意により高かった。対照的に、US単独は、発光レベルのより少ない増加対照群と比較して15倍、統計的に有意でない差を誘発した。MB群による差だけが、統計的に有意であったp0005。ルシフェラーゼ活性は、プラスミド単独の注入又はMBと混合されたプラスミドの注入の後にUS暴露無しで、ほとんど検出されなかった。我々の結果は、特にはUS処理された群について、ルシフェラーゼ活性の高い分散を示す。30日目で、ルシフェラーゼ遺伝子発現は、処置後7日目及び30日目の間で約50だけ、各実験群において低下した。ANOVA統計分析は、因子時間が非常に有意な影響を有し及び全分散の1416を占めること、及び、因子群が有意な影響を有し及び全分散の1084を占めることを示した。両方の因子の交互作用は、有意でないと考えられる。Bonferronipostテストは、発光が、USMB群においてだけ、7日目及び30日目の間で有意に減少することを決定した。毛様体筋領域におけるβ-ガラクトシダーゼ発現の局在化:LacZレポーター遺伝子を有するプラスミドの、毛様体筋を標的としたソノポレーションの7日後、組織化学的染色が、β-ガラクトシダーゼ発現青い細胞が、毛様体筋領域細胞中のUS適用の領域内において検出されることを明らかにした。この方法は、USMB適用及びUS適用の場合において毛様体筋領域において有効な発現をもたらす一方で、検出可能なβ-ガラクトシダーゼ活性は、US適用無し対照の眼の毛様体筋領域において観察されなかった。考察:本研究の主な目的は、ソノポレーションによる毛様体筋への遺伝子導入の実行可能性を調査することであった。我々の知る限り、我々の研究は、US及びMBにより媒介された、毛様体筋を標的としたインビボプラスミドDNA導入についての最初の研究である。眼において、毛様体平滑筋は、2つの主な利点を提供する。第一に、それは、硝子体腔内の侵入無しで、容易に接近可能な組織である。第二に、この筋肉は、眼球の全部及び後部の間に位置されており、房水並びに硝子体及び網膜に向かってタンパク質分泌を許す。マイクロバブル及びプラスミドDNAの一緒の投与を含む我々の本実験は、遺伝子治療技術の効率を評価するためのマーカーとして広く用いられているレポーター遺伝子を用いて実施された。我々は、レポーター遺伝子及びMBを有するプラスミド混合物の筋肉内単回投与に続く、毛様体領域に対する外部超音波暴露が、ラット毛様体筋へのインビボ遺伝子導入を促進する簡単且つ有効な方法であることを示した。毛様体筋へ送達された15μgプラスミドレポーターのソノポレーション後7日目での眼液房水及び硝子体液におけるタンパク質分泌の観察は、この方法の実行可能性を確認する。該筋肉組織中へのルシフェラーゼ取り込みは、ルシフェラーゼ注入単独により処理された対照と比較して、USMB群において約26倍より高かった。DNA注入後にUSが届けられない場合、遺伝子発現は低かった。超音波及びマイクロバブルの組み合わせ使用の利益に加えて、我々のアプローチは、ソノポレーションによる眼の遺伝子導入に特異的ないくつかの利点を提供する。第一に、それは、DNA注入の為の筋肉内注射針及び外部US暴露だけを要求し、これは、臨床実践において広く受け入れられている。その安全性は、よく確立されている。USは、毛様体筋のような小さいサイズさえの標的部位内に正確に集束されることができて、局所的な遺伝子送達を引き起こし、及び、臨床的な検査及び治療のために広く用いられる。要約すると、この研究は、眼の毛様体筋が、DNAソノポレーションにより標的とされることができ、眼球内へのタンパク質分泌を許すことを示す。毛様体筋を標的としたソノポレーションは、種々の眼疾患の処置の為の非ウィルス的で、最小に侵襲的で、安全な、且つ効率的な遺伝子送達手順としての可能性を有する。参考文献:この出願を通じて、種々の文献が、この発明に関する技術分野の状況を説明する。これらの文献の開示はここに、引用することにより本開示内に組み込まれる。