同じ属に属するn種類nは2以上の菌またはウイルスに由来する特定核酸のそれぞれ一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成可能なn種類のオリゴヌクレオチドプローブを用いて、同じ属に属するn種類の菌またはウイルスを同定する方法であって、前記特定核酸の塩基配列は、同定する菌またはウイルス間で相同性の高い配列であり、前記オリゴヌクレオチドプローブは、前記特定核酸の一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成すると、形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブであり、前記オリゴヌクレオチドプローブによる蛍光特性の変化量は、前記オリゴヌクレオチドプローブで同定する菌またはウイルスにより異なる、前記方法。マイコバクテリウムMycobacterium属に属するn種類nは2以上の菌に由来する特定核酸のそれぞれ一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成可能なn種類のオリゴヌクレオチドプローブを用いて、マイコバクテリウムMycobacterium属に属するn種類の菌を同定する方法であって、前記特定核酸はリボソームRNAまたはリボソームDNAであり、前記オリゴヌクレオチドプローブは、前記リボソームRNAの一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成すると、形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブであり、前記オリゴヌクレオチドプローブによる蛍光特性の変化量は、前記オリゴヌクレオチドプローブで同定する菌により異なる、前記方法。マイコバクテリウムMycobacterium属に属するn種類の菌が、結核菌Mycobacteriumtuberculosis、マイコバクテリウムアビウムMycobacteriumaviumおよびマイコバクテリウムイントラセルラーMycobacteriumintracellulareから選ばれるn種類の菌である、請求項2に記載の方法。n種類のオリゴヌクレオチドプローブが、共通のインターカレーター性蛍光色素で標識され、かつ特定核酸の一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成すると、形成した相補的2本鎖部分に前記蛍光色素がインターカレートすることで、形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブである、請求項1から3のいずれかに記載の方法。特定核酸がRNAであり、前記RNAは、1RNAを鋳型とする、RNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素による特定核酸の塩基配列に相補的なcDNAを合成する工程、2リボヌクレアーゼHRNaseH活性を有する酵素によるRNA-DNA2本鎖のRNAを分解する工程1本鎖DNAの生成、31本鎖DNAを鋳型とする、DNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素による、特定核酸の塩基配列、または特定核酸の塩基配列に相補的な配列のRNAを転写可能なプロモーター配列を有する2本鎖DNAを生成する工程、4RNAポリメラーゼ活性を有する酵素による前記2本鎖DNAを鋳型とするRNA転写産物を生成する工程、および、5当該RNA転写産物が、前記RNA-DNA2本鎖を生成する工程におけるcDNA合成の鋳型となることで、連鎖的にRNA転写産物を生成する工程、により増幅されたRNAである、請求項1から4のいずれかに記載の方法。前述したように、抗酸菌の検査では、感染した抗酸菌の菌種により治療法が異なるため、菌種を迅速に同定することが不可欠である。抗酸菌の検査において、ヒトに結核を引き起こすMycobacteriumtuberculosis結核菌の同定が重要なのはいうまでもないが、非結核性抗酸菌の中でも、出現頻度の高いMycobacteriumavium、Mycobacteriumintracellulare、Mycobacteriumkansasiiの同定は重要であり、特に出現頻度の高いMycobacteriumaviumとMycobacteriumintracellulareの同定が重要である。感染した抗酸菌の菌種を同定する際、臨床症状から同定するのは極めて困難である。また一般に抗酸菌は発育が遅く、培養を用いた検査法ではかなりの時間を要する。したがって抗酸菌の菌種を迅速に同定するには、抗酸菌に由来する特定領域の核酸特定核酸を増幅させて検出する方法が有効である。本出願人は以前、試料に含まれる特定領域の核酸特定核酸を、核酸と反応することにより蛍光特性が変化する蛍光色素の存在下で、PCR法による増幅を行ない、前記蛍光特性の変化を測定することで、試料中の核酸を検出する方法を発明している特許文献1。また本出願人は以前、標的RNAに対して、プライマーセットそのうちの一方はプロモーター配列を含む、逆転写酵素および必要に応じてリボヌクレアーゼHRNaseHにより、プロモーター配列を含む2本鎖DNAを合成し、RNAポリメラーゼによって標的となるRNAの特定塩基配列を含むRNAを合成し、当該RNAを引き続きプロモーター配列を含む2本鎖DNA合成の鋳型とする連鎖反応により、簡便にRNAを増幅する方法を発明している特許文献2および非特許文献1。さらに、特許文献2および非特許文献1では、前述の方法で増幅したRNAの検出に、インターカレーター性蛍光色素で標識され、かつ標的RNAと相補的2本鎖を形成すると、当該相補的2本鎖部分に前記蛍光色素がインターカレートして蛍光特性が変化蛍光強度が増加するよう設計されたオリゴヌクレオチドプローブ以下、INAFプローブとするを用いており、前述したRNA増幅方法および前記プローブにより、簡便、一定温度、かつ一段階でのRNA増幅および検出を可能にしている。特許文献2および非特許文献1で開示のRNA増幅検出法のうち、増幅したRNAの検出に用いるINAFプローブは、標識するインターカレーター性蛍光色素が同じであっても、標的RNAが異なると、その蛍光特性蛍光強度の増加率は異なる特許文献3。したがって、特許文献2および非特許文献1で開示のRNA増幅検出法を用いて菌またはウイルスの同定を行なおうとした場合、同定対象の菌またはウイルス由来の標的RNAがそれぞれ異なる例えば、一方がrRNAで他方がmRNAのであれば、前記プローブの蛍光特性の違いから同定が可能といえる。しかしながら、リボソームRNArRNAまたはリボソームDNArDNAを用いたマイコバクテリウムMycobacterium属菌間の同定、rRNAまたはrDNAを用いたレジオネラLegionella属菌間の同定、構造蛋白領域のRNAを用いたノロウイルスNorovirus各遺伝子型間の同定等のように、同じ属に属する菌間またはウイルス間で塩基配列の相同性が極めて高い標的RNAまたは標的DNAを用いた、菌またはウイルスの同定の場合、標的RNAまたは標的DNAの検出に用いるオリゴヌクレオチドプローブの塩基配列も互いに極めて近い配列となるため、前記プローブの蛍光特性の違いによる菌またはウイルスの同定が可能か、不明であった。そこで本発明の目的は、菌またはウイルスの同定に用いる標的核酸の塩基配列が、同定する菌またはウイルス間で相同性が極めて高い場合でも、菌またはウイルスの同定が可能な方法を提供することにある。本発明者らは、上記目的に鑑みて鋭意検討した結果、本発明を完成するに至った。すなわち本発明の第一の態様は、同じ属に属するn種類nは2以上の菌またはウイルスに由来する特定核酸のそれぞれ一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成可能なn種類のオリゴヌクレオチドプローブを用いて、同じ属に属するn種類の菌またはウイルスを同定する方法であって、前記特定核酸の塩基配列は、同定する菌またはウイルス間で相同性の高い配列であり、前記オリゴヌクレオチドプローブは、前記特定核酸の一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成すると、形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブであり、前記オリゴヌクレオチドプローブによる蛍光特性の変化量は、前記オリゴヌクレオチドプローブで同定する菌またはウイルスにより異なる、前記方法である。また本発明の第二の態様は、マイコバクテリウムMycobacterium属に属するn種類nは2以上の菌に由来する特定核酸のそれぞれ一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成可能なn種類のオリゴヌクレオチドプローブを用いて、マイコバクテリウムMycobacterium属に属するn種類の菌を同定する方法であって、前記特定核酸はリボソームRNAまたはリボソームDNAであり、前記オリゴヌクレオチドプローブは、前記リボソームRNAまたはリボソームDNAの一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成すると、形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブであり、前記オリゴヌクレオチドプローブによる蛍光特性の変化量は、前記オリゴヌクレオチドプローブで同定する菌により異なる、前記方法である。また本発明の第三の態様は、マイコバクテリウムMycobacterium属に属するn種類の菌が、結核菌Mycobacteriumtuberculosis、マイコバクテリウムアビウムMycobacteriumaviumおよびマイコバクテリウムイントラセルラーMycobacteriumintracellulareから選ばれるn種類の菌である、前記第二の態様に記載の方法である。また本発明の第四の態様は、n種類のオリゴヌクレオチドプローブが、共通のインターカレーター性蛍光色素で標識され、かつ特定核酸の一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成すると、形成した相補的2本鎖部分に前記蛍光色素がインターカレートすることで、形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブである、前記第一から第三の態様のいずれかに記載の方法である。また本発明の第五の態様は、特定核酸がRNAであり、前記RNAは、1RNAを鋳型とする、RNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素による特定核酸の塩基配列に相補的なcDNAを合成する工程、2リボヌクレアーゼHRNaseH活性を有する酵素によるRNA-DNA2本鎖のRNAを分解する工程1本鎖DNAの生成、31本鎖DNAを鋳型とする、DNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素による、特定核酸の塩基配列、または特定核酸の塩基配列に相補的な配列のRNAを転写可能なプロモーター配列を有する2本鎖DNAを生成する工程、4RNAポリメラーゼ活性を有する酵素による前記2本鎖DNAを鋳型とするRNA転写産物を生成する工程、および、5当該RNA転写産物が、前記RNA-DNA2本鎖を生成する工程におけるcDNA合成の鋳型となることで、連鎖的にRNA転写産物を生成する工程、により増幅されたRNAである、前記第一から第四の態様のいずれかに記載の方法である。以下、本発明を詳細に説明する。本発明の同定方法で同定するn種類nは2以上の菌またはウイルスは、同じ属に属していればよく、一例として、マイコバクテリウムMycobacterium属に属するn種類の菌、レジオネラLegionella属に属するn種類の菌、ノロウイルスNorovirus属に属する遺伝子群/遺伝子型の異なるn種類のウイルス、サポウイルスSapovirus属に属する遺伝子群/遺伝子型の異なるn種類のウイルス、ロタウイルスRotavirus属に属する遺伝子型の異なるn種類のウイルス、パピローマウイルスPapillomavirus属に属する遺伝子型の異なるn種類のウイルスがあげられる。本発明の同定方法において、オリゴヌクレオチドプローブを用いて検出同定する特定核酸は、その塩基配列の相同性が、同定するn種類の菌またはウイルス間で高いことを特徴としている。本発明において相同性が高いとは、同定するn種類の菌またはウイルス間における特定核酸の塩基配列の相同性が80以上のことをいい、好ましくは85以上、さらに好ましくは90以上である。なお、同定するn種類の菌またはウイルス間における特定核酸の塩基配列の相同性が100、すなわち完全一致の場合は、オリゴヌクレオチドプローブによる蛍光特性の変化量が各菌またはウイルス間で同等となることが予想されるため、好ましくないといえる。同定対象が同じ属に属する菌の場合における好ましい特定核酸の一例として、同定する菌間で相同性が高い、リボソームRNA5SrRNA、5.8SrRNA、16SrRNA、18SrRNA、23SrRNA、28SrRNAまたはその遺伝子リボソームDNAの全領域または部分領域があげられる。なおリボソームRNAは1菌あたりの発現コピー数も多いことから、高感度に菌を同定する点でも、好ましいといえる。同定対象がノロウイルス属に属するウイルスの場合の一例として、ORF1のRNAポリメラーゼ領域の全領域または部分領域、ORF2である構造蛋白capsid領域の全領域または部分領域、RNAポリメラーゼ領域と構造蛋白領域とのジャンクションjunction領域があげられる。同定対象がサポウイルス属に属するウイルスの場合の特定核酸の一例として、構造蛋白領域の全領域または部分領域があげられる。同定対象がロタウイルス属に属するウイルスの場合の特定核酸の一例として、Pprotease-cleavedprotein領域の全領域または一部領域があげられる。同定対象がパピローマウイルス属に属するウイルスの場合の特定核酸の一例として、L1遺伝子領域の全領域または一部領域があげられる。本発明の同定方法で用いるオリゴヌクレオチドプローブは、同定する菌またはウイルスに由来する特定核酸の一部の配列と相補的2本鎖を形成可能なプローブであり、同定する菌またはウイルスにそれぞれ対応したプローブを用意すればよい。なお、本発明の同定方法で使用するオリゴヌクレオチドプローブは、ストリンジェントな条件で相補的2本鎖を形成可能なプローブであると好ましい。ストリンジェントな条件の具体例としては、42°Cにおいて、50v/vホルムアミド、0.1ウシ血清アルブミン、0.1フィコール、0.1ポリビニルピロリドン、50mMリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5、150mMの塩化ナトリウムまたは75mMクエン酸ナトリウムが共存する条件があげられる。本発明の同定方法で使用するオリゴヌクレオチドプローブの具体例として、同定する菌が、マイコバクテリウムMycobacterium属に属する主要な菌である、Mycobacteriumtuberculosis結核菌、MycobacteriumaviumおよびMycobacteriumintracellulareから選ばれるn種類nは2以上の菌である場合、配列番号1から7に記載の塩基配列からなるオリゴヌクレオチドプローブから選ばれるn種類のプローブがあげられる。本発明の同定方法で使用するオリゴヌクレオチドプローブは、同定する菌またはウイルスに由来する特定核酸の一部の配列と相補的2本鎖を形成すると、形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブである。蛍光特性が変化するプローブの一例として、モレキュラービーコンMolecularbeaconプローブ特許文献4および5、TaqManプローブ特許文献6および7、Q-Probe特許文献8、サイクリングプローブ特許文献9および10、インターカレーター性蛍光色素で標識されたプローブINAFプローブ、特許文献2および非特許文献1があげられる。特にINAFプローブは、特定核酸を増幅して菌またはウイルスの同定を行なう場合、当該特定核酸の増幅反応と同時並行で同定が行なえるため、好ましい。本発明の好ましい同定方法で使用するINAFプローブで標識するインターカレーター性蛍光色素は特に限定はなく、オキサゾールイエロー、チアゾールオレンジ、エチジウムブロマイドまたはこれらの誘導体を例示できる。一例として、オキサゾールイエローは、2本鎖核酸にインターカレートすることで510nmの蛍光励起波長470nmが顕著に増加する色素である。前記蛍光色素は、同定対象の菌またはウイルスに由来する特定核酸の一部の配列と相補的2本鎖を形成可能なオリゴヌクレオチドの5’末端側、3’末端側、リン酸ジエステル部分、塩基部分のいずれかに、適当なリンカーを介して導入すればよい。なお、特定核酸の増幅反応と同時並行でINAFプローブによる同定を行なう場合は、前記プローブの3’末端側水酸基に修飾処理を施すことで、3’末端側水酸基からの伸長を防止するのが好ましい。また、n種類のオリゴヌクレオチドプローブに導入したインターカレーター性蛍光色素を共通にすると、同一の励起/蛍光波長でn種類の菌またはウイルスを同時に同定でき、蛍光検出装置の装置構成も簡素化できるため好ましい。本発明の同定方法は、n種類のオリゴヌクレオチドプローブによる蛍光特性の変化量の違いを検出することにより、菌またはウイルスを同定する方法である。蛍光特性の変化量の検出は、蛍光強度の絶対値で行なってもよいし、陰性試料での蛍光強度値に対する相対値蛍光強度比で行なってもよいし、特定核酸を増幅して菌またはウイルスの同定を行なう場合は特定核酸増幅前の試料での蛍光強度値に対する相対値蛍光強度比で行なってもよい。本発明の同定方法では、喀痰、胃液、血液、尿、便、体腔液、組織、気管支洗浄液、気管支肺胞洗浄液等の生体由来の試料をそのまま特定核酸を含む試料として同定に用いてもよいし、前記生体由来の試料から公知の方法または公知の試薬を用いて核酸を抽出して得られた試料を、特定核酸を含む試料として同定に用いてもよい。なお、いずれの試料を用いた場合でも、特定核酸を適切な方法で増幅させると同時に、または増幅させてから、オリゴヌクレオチドプローブを用いて検出させると、菌またウイルスの同定をより高感度に行なえるため、好ましい。特定核酸を増幅させる方法としては、PCR法、LAMPLoop-mediatedisothermalAMPlification法、TRC法TranscriptionReversetranscriptionConcertedReaction、特許文献2、NASBANucleicAcidSequence-BasedAmplification法、TMATranscripitionMediatedAmplification法等の公知の方法を例示できるが、一定温度比較的低温で簡便かつ迅速に特定核酸の増幅が可能なTRC法、NASBA法、TMA法が好ましい。また、特定核酸を増幅させる際は、増幅のための酵素の活性を妨害する物質等を、あらかじめ除去または不活化させると好ましい。前述した好ましい特定核酸の増幅方法は、RNAを増幅する方法であり、下記の1から5に示す工程により特定核酸RNAの増幅を行なう。1RNAを鋳型とする、RNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素による特定核酸の塩基配列に相補的なcDNAを合成する工程、2リボヌクレアーゼHRNaseH活性を有する酵素によるRNA-DNA2本鎖のRNAを分解する工程1本鎖DNAの生成、31本鎖DNAを鋳型とする、DNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素による、特定核酸の塩基配列、または特定核酸の塩基配列に相補的な配列のRNAを転写可能なプロモーター配列を有する2本鎖DNAを生成する工程、4RNAポリメラーゼ活性を有する酵素による前記2本鎖DNAを鋳型とするRNA転写産物を生成する工程、および、5当該RNA転写産物が、前記RNA-DNA2本鎖を生成する工程におけるcDNA合成の鋳型となることで、連鎖的にRNA転写産物を生成する工程。前記増幅において、RNAを鋳型とするRNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素逆転写酵素、RNaseH活性を有する酵素、1本鎖DNAを鋳型とするDNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素およびRNAポリメラーゼ活性を有する酵素により進行する。これらの酵素は、いくつかの活性を合わせ持つ酵素を使用してもよく、それぞれの活性を持つ複数の酵素を使用してもよい。一例として、RNAを鋳型とするRNA依存性DNAポリメラーゼ活性、RNaseH活性および1本鎖DNAを鋳型とするDNA依存性DNAポリメラーゼ活性の三つの活性を有する逆転写酵素と、RNAポリメラーゼ活性を有する酵素と、を組み合わせて使用することがあげられる。もっとも、前記逆転写酵素とRNAポリメラーゼ活性を有する酵素に、RNaseH活性を有する酵素を必要に応じてさらに添加してもよい。前記逆転写酵素の一例として、AMV逆転写酵素、MMLV逆転写酵素、HIV逆転写酵素およびこれらの誘導体があげられ、中でもAMV逆転写酵素およびその誘導体が好ましい。RNAポリメラーゼ活性を有する酵素としては、分子生物学実験などで汎用されているバクテリオファージ由来のT7RNAポリメラーゼ、SP6RNAポリメラーゼ、T3RNAポリメラーゼおよびこれらの誘導体を例示できる。前記増幅では試料および前記酵素に加え、さらに、緩衝剤、マグネシウム塩、カリウム塩、ヌクレオシド三リン酸NTPおよびデオキシリボヌクレオシド三リン酸dNTPを添加し、反応効率を調節するために必要に応じ、ジメチルスルホキシドDMSO、ジチオスレイトールDTT、ウシ血清アルブミンBSAおよび糖等を添加し、適切な温度条件下で前記酵素による反応を進行させる。適切な温度条件の一例として、AMV逆転写酵素とT7RNAポリメラーゼとを用いた場合は、35°Cから65°Cまでの範囲で行なえばよく、好ましくは40°Cから50°Cまでの範囲である。前記増幅では、特定核酸の一部の塩基配列と相同的な配列を有する第一のプライマーと、特定核酸の一部の塩基配列と相補的な配列を有する第二のプライマーを使用するここで前記第一または第二のプライマーのいずれか一方はその5’末端にRNAポリメラーゼのプロモーター配列が付加されている。第一のプライマーにプロモーター配列が付加されている場合は、特定核酸の塩基配列と相同のRNA転写産物が生成され、第二のプライマーにプロモーター配列が付加されている場合は、特定核酸の塩基配列と相補的なRNA転写産物が生成される。プライマーに付加するプロモーター配列は、前記増幅で使用するRNAポリメラーゼ活性を有する酵素に応じた公知のプロモーター配列を使用すればよく、RNAポリメラーゼ活性を有する酵素がT7RNAポリメラーゼである場合はT7プロモーターを、RNAポリメラーゼ活性を有する酵素がSP6RNAポリメラーゼである場合はSP6プロモーターを、RNAポリメラーゼ活性を有する酵素がT3RNAポリメラーゼである場合はT3プロモーターを、それぞれ使用すればよい。なお前記プロモーター配列に加え、さらにエンハンサー配列等の転写効率に関わる付加配列を含んでいてもよい。前述したプロモーター配列を付加した第一のプライマーと、第二のプライマーを使用して前記増幅を行なう場合は、RNAを鋳型とする、RNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する酵素による特定塩基配列に相補的なcDNAを合成する工程前記1の工程に先立ち、または前記1の工程と同時に、第一のプライマーの塩基配列と相同な領域のうち、その5’末端周辺で特定核酸RNAを切断するのが好ましい。当該切断により、cDNA合成後に、cDNAにハイブリダイズした第一のプライマーのプロモーター配列に相補的なDNA鎖を、cDNAの3’末端を伸長させることで効率的に合成でき、結果として機能的な2本鎖DNAプロモーター構造を効率的に形成することができるからである。特定核酸RNAの切断方法は、第一のプライマーの塩基配列と相同な領域のうち、その5’末端周辺を特異的に切断できる方法であれば特に限定されない。特定核酸RNAの切断方法の一例として、特定核酸RNAのうち第一のプライマーの塩基配列と相同な領域の5’末端に重複し、かつ特定核酸RNAの5’末端方向に隣接した領域の特定核酸RNAと相補的2本鎖を形成可能なオリゴヌクレオチド以下、切断用オリゴヌクレオチドとするを添加することで、RNA-DNA2本鎖を形成させ、当該2本鎖中のRNA部分をリボヌクレアーゼHRNaseH活性を有する酵素等により切断する方法があげられ、当該切断方法は簡便に切断でき、かつ切断位置も特異性を有していることから好ましい方法といえる。ちなみに、前記切断用オリゴヌクレオチドの3’末端側水酸基は、伸長反応を防止するために、例えばアミノ化等、適当な修飾を行なうとよい。本発明の同定方法の一例である、特定核酸の増幅反応と同時並行でINAFプローブによる検出を行なうことで菌またはウイルスの同定を行なう方法の場合、INAFプローブ、プライマーセット、酵素および酵素基質等を含む試薬類を投入した容器に、特定核酸を含む試料を分注し、適切な温度で反応させることで、特定核酸の増幅反応とINAFプローブによる検出同定を同時に行なうことができる。さらに、前記容器の少なくとも一部を透明な材料とし、INAFプローブに導入したインターカレーター性蛍光色素が発する蛍光を外部から検出できるようにすると、特定核酸を含む試料を分注した後は、容器を密閉した状態で特定核酸の増幅反応とINAFプローブによる検出同定とが行なえるため、試料間のコンタミネーションを防止することができる。本発明は、同じ属に属するn種類nは2以上の菌またはウイルスに由来する特定核酸のそれぞれ一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成可能なn種類のオリゴヌクレオチドプローブを用いて、同じ属に属するn種類の菌またはウイルスを同定する方法において、前記特定核酸の塩基配列が同定する菌またはウイルス間で相同性の高い配列であり、前記オリゴヌクレオチドプローブが前記特定核酸の一部の塩基配列と相補的2本鎖を形成すると形成前と比較し蛍光特性が変化するプローブであり、前記オリゴヌクレオチドプローブによる蛍光特性の変化量が前記オリゴヌクレオチドプローブで同定する菌またはウイルスにより異なる、ことを特徴としている。本発明の同定方法は、例えばリボソームRNArRNAといった同じ属に属する菌間で相同性が高い特定核酸を用いても、同じ属に属する菌間の同定が可能となる。そのため、同定の必要性は高いものの、これまで迅速簡便な同定方法がなかった、マイコバクテリウムMycobacterium属に属する菌間の同定、特にrRNA塩基配列の相同性が極めて高いマイコバクテリウムアビウムMycobacteriumaviumとマイコバクテリウムイントラセルラーMycobacteriumintracellulareとの間の同定も、本発明の同定方法により迅速簡便に行なうことができる。以下、特定核酸をリボソームRNArRNAとし、同じ属に属する菌をマイコバクテリウムMycobacterium属に属する菌とした場合の例を用いて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例により限定されるものではない。実施例1インターカレーター性蛍光色素で標識されたオリゴヌクレオチドの調製下記AからGに示す、インターカレーター性蛍光色素で標識されたオリゴヌクレオチドプローブ以下、INAFプローブとするを非特許文献1に記載の方法を参照して作製した。A配列番号1に記載の塩基配列のうち、5’末端から5番目のグアニンと6番目のアデニンとの間のリン酸ジエステル部分に、リンカーを介してオキサゾールイエローを標識して得られた、オリゴヌクレオチドプローブ。B配列番号2に記載の塩基配列のうち、5’末端から14番目のチミンと15番目のアデニンとの間のリン酸ジエステル部分に、リンカーを介してオキサゾールイエローを標識して得られた、オリゴヌクレオチドプローブ。なお、配列番号2の5’末端から12番目のnは5-ニトロインドールヌクレオチドである。C配列番号3に記載の配列のうち、5’末端から7番目のグアニンと8番目のシトシンとの間のリン酸ジエステル部分に、リンカーを介してオキサゾールイエローを標識して得られた、オリゴヌクレオチドプローブ。D配列番号4に記載の配列のうち、5’末端から12番目のアデニンの位置に、市販の試薬Label-ONReagents、Clontech製を用いてアミノ基を導入後、当該アミノ基にオキサゾールイエローを標識し、さらに3’末端をビオチンで修飾して得られた、オリゴヌクレオチドプローブ。E配列番号5に記載の配列のうち、5’末端から13番目のアデニンの位置に、市販の試薬Label-ONReagents、Clontech製を用いてアミノ基を導入後、当該アミノ基にオキサゾールイエローを標識し、さらに3’末端をビオチンで修飾して得られた、オリゴヌクレオチドプローブ。F配列番号6に記載の配列のうち、5’末端から7番目のグアニンの位置に、市販の試薬Label-ONReagents、Clontech製を用いてアミノ基を導入後、当該アミノ基にオキサゾールイエローを標識し、さらに3’末端をビオチンで修飾して得られた、オリゴヌクレオチドプローブ。G配列番号7に記載の配列のうち、5’末端から7番目のアデニンの位置に、市販の試薬Label-ONReagents、Clontech製を用いてアミノ基を導入後、当該アミノ基にオキサゾールイエローを標識し、さらに3’末端をビオチンで修飾して得られた、オリゴヌクレオチドプローブ。実施例2MycobacteriumaviumとMycobacteriumintracellulareとの同時同定その1実施例1で作製したINAFプローブのうち、AおよびBのプローブを用いて、Mycobacterium属に属する菌に由来するrRNAの検出を行ない、検出性能と特異性について評価した。1評価に用いるRNA試料を以下の方法で調製した。1-1M.tuberculosis16SrRNA、M.avium16SrRNA、M.intracellulare16SrRNAおよびM.kansasii16SrRNA各16SrRNA遺伝子16SrDNAをクローニングし、インビトロ転写後、精製することで標準RNAを調製し、当該標準RNAをRNA希釈液10mMTris-HCl緩衝液pH8.0、1mMEDTA、0.25U/μLリボヌクレアーゼインヒビター、5.0mMDTTを用いて一定の濃度に希釈することで、RNA試料を調製した。1-2M.florentinumRNAOD600nmが0.1のM.florentinum培養液を市販の抽出試薬EXTRAGENMB、東ソー製で抽出することで、RNA試料を調製した。2下記に示す組成の反応液20μLを市販の0.5mL容量PCR用チューブIndividualDomeCapPCRTube、SSI製に分注し、これに前記RNA試料5μLRNA試料が1種類のときまたは各2.5μLRNA試料が2種類混合のときを添加した。反応液の組成:濃度は酵素液添加後30μL中の最終濃度60mMTris-HCl緩衝液pH8.617mM塩化マグネシウム100mM塩化カリウム1mMDTT各0.25mMdATP、dCTP、dGTP、dTTP各3mMATP、CTP、UTP、GTP3.6mMITP0.16μM切断用オリゴヌクレオチドDNA3’末端の水酸基をアミノ基で修飾1μM第一のプライマー5’末端にT7プロモータ配列を付加1μM第二のプライマー5nMAのINAFプローブ21nMBのINAFプローブ10から13DMSO4前記反応液を43°Cで5分間保温後、予め43°Cで2分間保温した酵素液組成は下記参照5μLを添加した。酵素液の組成:反応時30μL中の最終濃度2.0ソルビトール0.21U/μLAMV逆転写酵素ライフサイエンス製2.37または4.73U/μLT7RNAポリメラーゼ0.12mg/mL牛血清アルブミン5引き続きPCRチューブを直接検出可能な温調機能付き蛍光分光光度計に供し、43°Cから46°Cの一定温度でRNA増幅反応させると同時に、反応溶液の蛍光強度励起波長470nm、蛍光波長520nmを30分間経時的に検出した。表1に、M.aviumとM.intracellulareに対する検出性能評価およびM.florentinumに対する特異性評価の結果を示す。なお、本実施例で使用したRNA試料はiM.avium16SrRNA50コピー/テストiiM.avium16SrRNA5×107コピー/テストiiiM.intracellulare16SrRNA100コピー/テストivM.intracellulare16SrRNA5×107コピー/テストvM.avium16SrRNA50コピー/テストとM.intracellulare16SrRNA100コピー/テストとの混合試料viM.avium16SrRNA5×107コピー/テストとM.intracellulare16SrRNA5×107コピー/テストとの混合試料viiM.florentinum培養液核酸抽出物のいずれかであり、蛍光強度比は酵素添加30分後における反応液の蛍光強度値を、酵素添加直後0分における蛍光強度値バックグラウンドで割った値である。AおよびBのINAFプローブを用いて、増幅したRNAの検出を行なった結果、M.avium16SrRNA試料iおよびiiはその量にかかわらず30分後の蛍光強度比が約1.9であり、M.intracellulare16SrRNA試料iiiおよびivはその量にかかわらず30分後の蛍光強度比が約2.8であり、M.avium16SrRNAとM.intracellulare16SrRNAとの混合試料vおよびviはその量にかかわらず30分後の蛍光強度比が約3.3以上であった。一方、M.avium16SrRNAやM.intracellulare16SrRNAと塩基配列の相同性が非常に高いM.florentinum試料viiは蛍光強度の増加はほとんどなく、AおよびBのINAFプローブはM.avium16SrRNAおよびM.intracellulare16SrRNAを特異的に検出することがわかる。また表1の結果をまとめると、例えば、I30分後の蛍光強度比が1.2以下の試料をM.aviumおよびM.intracellulare陰性、II30分後の蛍光強度比が1.8から2.3の試料をM.avium陽性、III30分後の蛍光強度比が2.7から3.0の試料をM.intracellulare陽性、IV30分後の蛍光強度比が3.3以上の試料をM.aviumおよびM.intracellulare陽性、という判定基準を設けることで、AおよびBのINAFプローブにより、M.aviumとM.intracellulareとを同時に同定することができることがわかる。また、AおよびBのINAFプローブを用いたRNA増幅検出法は、反応開始30分で結果が分かることから迅速性があり、RNA量50から100コピー/テストという低濃度であっても増幅検出可能であることから高感度であり、同属内の非常に相同性の高い菌に対しても蛍光強度がほとんど増加しないことから特異性が非常に高い方法といえる。実施例3MycobacteriumaviumとMycobacteriumintracellulareの同時同定その2実施例2に記載のRNA増幅検出法条件[1]のうち、INAFプローブおよびその濃度を、CのINAFプローブ12.5nMおよびDのINAFプローブ12.5nM条件[2]、DのINAFプローブ12.5nMおよびEのINAFプローブ12.5nM条件[3]、CのINAFプローブ12.5nMのみ条件[4]、またはDのINAFプローブ12.5nMのみ条件[5]、とした他は、実施例2と同様にRNA増幅検出反応を実施した。なお、CのINAFプローブはM.aviumおよびM.intracellulareを特異的に検出するプローブであり、DのINAFプローブはM.intracellulareを特異的に検出するプローブである。表2に、M.aviumとM.intracellulareに対する検出性能評価およびM.tuberculosisに対する特異性評価の結果を示す。なお、本実施例で使用したRNA試料はviiiM.avium16SrRNA104コピー/テストixM.intracellulare16SrRNA104コピー/テストxM.tuberculosis108コピー/テストのいずれかであり、蛍光強度比は酵素添加30分後における反応液の蛍光強度値を、酵素添加直後0分における蛍光強度値バックグラウンドで割った値である。M.avium16SrRNAやM.intracellulare16SrRNAと塩基配列の相同性が非常に高いM.tuberculosis16SrRNA試料xは蛍光強度の増加がほとんどなく、条件[2]および[3]は、M.avium16SrRNAおよびM.intracellulare16SrRNAを特異的に検出することがわかる。一方、M.avium16SrRNAとM.intracellulare16SrRNAとの同定については、条件[2]では前記IからIIIの判定基準で同時に同定できるものの、条件[3]ではM.avium16SrRNA試料viiiを測定したときの蛍光強度比とM.intracellulare16SrRNA試料ixを測定したときの蛍光強度比がともに1.66であるため同時同定は困難なことがわかる。なお、条件[2]で使用したINAFプローブをそれぞれ単独で使用すると条件[4]および[5]、M.avium16SrRNA試料viiiを測定したときの蛍光強度比とM.intracellulare16SrRNA試料ixを測定したときの蛍光強度比とにほとんど差が生じないことから、条件[2]はCのINAFプローブとDのINAFプローブとを組み合わせることで、はじめてM.avium16SrRNAとM.intracellulare16SrRNAとの同時同定を可能にしていることがわかる。実施例4MycobacteriumtuberculosisとMycobacteriumintracellulareの同時同定実施例2に記載のRNA増幅検出法条件[1]のうち、INAFプローブおよびその濃度を、DのINAFプローブ25nMおよびFのINAFプローブ50nM条件[6]、とした他は、実施例2と同様にRNA増幅検出反応を実施した。表3に、M.tuberculosisとM.intracellulareに対する検出性能評価およびM.aviumとに対する特異性評価の結果を示す。なお、本実施例で使用したRNA試料はxiM.tuberculosis16SrRNA104コピー/テストixM.intracellulare16SrRNA104コピー/テストxiiM.avium16SrRNA108コピー/テストxiiiM.kansasii16SrRNA108コピー/テストのいずれかであり、蛍光強度比は酵素添加30分後における反応液の蛍光強度値を、酵素添加直後0分における蛍光強度値バックグラウンドで割った値である。DおよびFのINAFプローブを用いて、増幅したRNAの検出を行なった結果、M.tuberculosis16SrRNA試料xiは30分後の蛍光強度比が約2.4であり、M.intracellulare16SrRNA試料ixは30分後の蛍光強度比が約1.9である一方、M.tuberculosis16SrRNAやM.intracellulare16SrRNAと塩基配列の相同性が非常に高いM.avium16SrRNA試料xiiおよびM.kansasii16SrRNA試料xiiiは蛍光強度の増加がほとんどないことから、DおよびFのINAFプローブはM.tuberculosis16SrRNAおよびM.intracellulare16SrRNAを特異的に検出することがわかる。また表3の結果をまとめると、例えば、V30分後の蛍光強度比が1.2以下の試料をM.tuberculosisおよびM.intracellulare陰性、VI30分後の蛍光強度比が1.9前後の試料をM.intracellulare陽性、VII30分後の蛍光強度比が2.4前後の試料をM.tuberculosis陽性、という判定基準を設けることで、DおよびFのINAFプローブにより、M.tuberculosisとM.intracellulareとを同時に同定することができることがわかる。実施例5MycobacteriumtuberculosisとMycobacteriumaviumの同時同定実施例2に記載のRNA増幅検出法条件[1]のうち、INAFプローブおよびその濃度を、EのINAFプローブ25nMおよびGのINAFプローブ10nM条件[7]EのINAFプローブ25nMのみ条件[8]、またはGのINAFプローブ10nMのみ条件[9]、とした他は、実施例2と同様にRNA増幅検出反応を実施した。なお、EのINAFプローブはM.tuberculosisを特異的に検出するプローブであり、GのINAFプローブはM.aviumを特異的に検出するプローブである。表4に、M.tuberculosisとM.aviumに対する検出性能評価およびM.intracellulareとに対する特異性評価の結果を示す。なお、本実施例で使用したRNA試料はxiM.tuberculosis16SrRNA104コピー/テストviiiM.avium16SrRNA104コピー/テストxivM.intracellulare16SrRNA108コピー/テストxiiiM.kansasii16SrRNA108コピー/テストxvM.tuberculosis16SrRNA103コピー/テストのいずれかであり、蛍光強度比は酵素添加30分後における反応液の蛍光強度値を、酵素添加直後0分における蛍光強度値バックグラウンドで割った値である。EおよびGのINAFプローブ条件[7]を用いて、増幅したRNAの検出を行なった結果、M.tuberculosis16SrRNA試料xiは30分後の蛍光強度比が約1.6であり、M.avium16SrRNA試料viiiは30分後の蛍光強度比が約2.0である一方、M.tuberculosis16SrRNAやM.avium16SrRNAと塩基配列の相同性が非常に高いM.intracellulare16SrRNA試料xivおよびM.kansasii16SrRNA試料xiiiは蛍光強度の増加がほとんどないことから、EおよびGのINAFプローブはM.tuberculosis16SrRNAおよびM.avium16SrRNAを特異的に検出することがわかる。また表4の結果をまとめると、例えば、VIII30分後の蛍光強度比が1.2以下の試料をM.tuberculosisおよびM.avium陰性、IX30分後の蛍光強度比が1.6前後の試料をM.tuberculosis陽性、X30分後の蛍光強度比が2.0前後の試料をM.avium陽性、という判定基準を設けることで、EおよびGのINAFプローブにより、M.tuberculosisとM.aviumとを同時同定することができることがわかる。なお、条件[7]で使用したINAFプローブをそれぞれ単独で使用すると条件[8]および[9]、M.tuberculosis16SrRNA試料xvを測定したときの蛍光強度比とM.avium16SrRNA試料viiiを測定したときの蛍光強度比とにほとんど差が生じないことから、条件[7]はEのINAFプローブとGのINAFプローブとを組み合わせることで、はじめてM.tuberculosis16SrRNAとM.avium16SrRNAとの同時同定を可能にしていることがわかる。以上、実施例2から5の結果より、AからGのINAFプローブの中から2種類以上組み合わせてRNA増幅検出反応を行なうことで、マイコバクテリウムMycobacterium属菌間の同時同定が可能なことがわかる。