"少なくとも1種のコネキシン抑制因子と少なくとも1種のTGFβシグナリング抑制因子を細胞に作用させることを特徴とするiPS細胞を作製する方法。コネキシン抑制因子がコネキシン43抑制因子である請求項1に記載の方法。前記コネキシン抑制因子が、コネキシンに対するsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ペプチド、抗体もしくはリボザイム、又は細胞内でこれらのRNA分子を放出できる発現ベクターであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。前記TGFβシグナリング抑制因子がTGFβレセプターI阻害剤である請求項1に記載の方法。前記TGFβレセプター阻害剤がSB431542、A8301またはALK5Inhibitorである請求項1に記載の方法。少なくとも1種のコネキシン抑制因子を含むiPS細胞。コネキシン抑制因子がコネキシン43抑制因子である請求項6に記載のiPS細胞。前記コネキシン抑制因子が、コネキシンに対するsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ペプチド、抗体もしくはリボザイム、又は細胞内でこれらのRNA分子を放出できる発現ベクターであることを特徴とする、請求項6に記載のiPS細胞。コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子を含むiPS細胞誘導剤。コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子を含むiPS細胞誘導用培地。コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子を含むiPS細胞誘導用キット。本発明は、癌化のおそれがなく、安全なiPS細胞を提供することを目的とする。本発明者らは、上記課題に鑑み、研究を行ったところ、驚くべきことにコネキシン抑制因子とTGFβシグナリング抑制因子を細胞に作用させることで、遺伝子の導入を行うことなくiPS細胞が樹立できることを見出した。本発明は、以下のiPS細胞およびその製造方法、iPS細胞誘導剤、iPS細胞誘導用培地、iPS細胞誘導用キットを提供するものである。項1.少なくとも1種のコネキシン抑制因子と少なくとも1種のTGFβシグナリング抑制因子を細胞に作用させることを特徴とするiPS細胞を作製する方法。項2.コネキシン抑制因子がコネキシン43抑制因子である項1に記載の方法。項3.前記コネキシン抑制因子が、コネキシンに対するsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ペプチド、抗体もしくはリボザイム、又は細胞内でこれらのRNA分子を放出できる発現ベクターであることを特徴とする、項1または2に記載の方法。項4.前記TGFβシグナリング抑制因子がTGFβレセプターI阻害剤である項1~3のいずれかに記載の方法。項5.前記TGFβレセプター阻害剤がSB431542、A8301またはALK5Inhibitorである項1~4のいずれかに記載の方法。項6.少なくとも1種のコネキシン抑制因子を含むiPS細胞。項7.コネキシン抑制因子がコネキシン43抑制因子である項6に記載のiPS細胞。項8.前記コネキシン抑制因子が、コネキシンに対するsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ペプチド、抗体もしくはリボザイム、又は細胞内でこれらのRNA分子を放出できる発現ベクターであることを特徴とする、項6または7に記載のiPS細胞。項9.コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子を含むiPS細胞誘導剤。項10.コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子を含むiPS細胞誘導用培地。項11.コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子を含むiPS細胞誘導用キット。本発明の方法によれば、外来遺伝子の導入の必要がなく、ウイルスを使わないのでiPS細胞以外の形質を改変せず、癌化や感染の恐れが極めて低く安全であり、ヒトへの実用化にとって非常に大きな利点を持つiPS細胞を作製することができる。本発明によるiPS細胞は、以下の4点を確認している。1.多能性細胞マーカー因子の発現が遺伝子レベル、タンパク質レベルで保たれている。2.マウス皮下へ移植することにより、テラトーマが形成され、腺管、軟骨、神経など三胚葉全ての細胞が分化誘導できる。3.胚葉体を形成し、分化誘導条件により、内皮細胞、神経細胞、心筋細胞へとそれぞれ分化可能で、分化誘導できた心筋細胞が生理的に機能する。4.キメラマウスの作製が可能であるまた、本発明のiPS細胞は、GermLineの作製が可能である。従って、本発明により提供されるiPS細胞は、再生医療などに使用する生体材料を作製するために非常に優れたものである。本明細書において、iPS細胞とは、人工多能性幹細胞若しくは誘導多能性幹細胞とも称される分化多能性を獲得した細胞のことである。本発明で得られたiPS細胞は、内胚葉、外胚葉、中胚葉の全てに分化することができ、キメラマウス図3及びGermLineを作製可能である。コネキシンCxは、ギャップ結合に関与するタンパク質の総称であり、分子量によりCx4343kDaなどと命名されている。コネキシンの具体例としては、Cx26、Cx30、Cx31、Cx32、Cx36、Cx37、Cx40、Cx43、Cx45、Cx50などが挙げられる。現在20種を超えるコネキシンが知られており、今後発見されるコネキシン類も本発明で抑制対象のコネキシンに含まれる。コネキシンの種類と発現に関しては、総説OyamadaらBBA20051719623に詳述されており、その記載は本明細書に参考として援用される。コネキシンの種類と発現部位を以下の表にまとめる。上記表は、各組織で主に発現されるコネキシンであり、本発明では、対象細胞で主に発現されるコネキシンを抑制することが好ましい。例えば心室筋では、Cx43が多量に発現されており、Cx43を抑制するのが好ましい。一方、心室筋ではCx45も発現されており、Cx45を抑制してもよく、Cx43とCx45を同時に抑制してもよい。好ましい抑制対象のコネキシンは、多くの細胞タイプで発現されているコネキシン26,32、43、45などであり、特にコネキシン43が好ましい。コネキシン43のアミノ酸配列は公知であり、以下に例示される。iPS細胞の動物種によって、対応するコネキシン抑制因子を使用することができる。コネキシンの抑制因子としては、細胞内でのコネキシン遺伝子の発現抑制、細胞内のコネキシンとの複合体形成による機能抑制などが挙げられ、具体的にはコネキシンに対するsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ペプチド、抗体、もしくはリボザイム、又は細胞内でこれらのRNA分子を放出できる発現ベクターが挙げられ、siRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、もしくはリボザイムが好ましく、siRNA、shRNA、miRNAがより好ましい。これらは、コネキシンの種類、細胞の由来などにより配列が相違するので、適切な配列を選択する。適切な配列のsiRNA、shRNA、miRNA、アンチセンスRNA、ペプチドもしくはリボザイム、又は細胞内でこれらのRNA分子を放出できる発現ベクターは、当業者により容易に設計もしくは選択できる。例えばヒトに対するコネキシン43の好ましいsiRNAは、以下のものである。センス:5’CAAUUCUUCUUGCCGCAATT3’アンチセンス:5’UUGCGGCAAGAAGAAUUGTT3’コネキシンの抑制因子としては、硫酸基を有するグリコサミノグリカン特開2003119146、その記載は本明細書に参考として援用するを使用することもできる。1つの実施形態において、コネキシンの抑制因子は、コネキシン、コネキシンヘミチャネルコネクソン、またはコネキシンの細胞増殖活性に影響を及ぼすか調整する化合物である。コネキシンの抑制因子には、アンチセンス化合物例えば、アンチセンスポリヌクレオチド、RNAiおよびsiRNA化合物、抗体およびその結合フラグメント、ならびにペプチドおよびポリペプチドペプチド模倣物およびペプチドアナログが含まれるが含まれるが、これらに限定されない。好ましいコネキシンの抑制因子はコネキシン43の抑制因子である。例示的コネキシンの抑制因子を、本明細書中でさらに説明する。1つの実施形態において、本発明のコネキシンの抑制因子は、細胞内および細胞外への分子の輸送を調整するか影響を及ぼすことができる例えば、遮断、阻害、または下方制御。一部のコネキシンの抑制因子は、例えば、mRNAの転写または翻訳の下方制御によってコネキシン発現を下方制御するか、コネキシンタンパク質、コネキシンヘミチャネル、または細胞増殖活性を減少または阻害することができるAsazumaNakamuraらExpCellRes200931511901199NakanoらInvestOphthalmolVisSci20074993104ZhangらOncogene20012041384149。コネキシンの抑制因子の例には、コネキシンmRNAおよび/またはタンパク質の発現または機能を減少または阻害するか、コネキシン、コネキシンヘミチャネル、または細胞増殖活性を減少させる薬剤が含まれる。コネキシンの抑制因子には、抗コネキシンポリヌクレオチドアンチセンスポリヌクレオチドおよび他のポリヌクレオチドsiRNAまたはリボザイム機能性を有するポリヌクレオチドなどなど、抗体およびその結合フラグメント、ならびにペプチドおよびポリペプチドヘミチャネルまたは細胞増殖活性を調整するペプチド模倣物およびペプチドアナログが含まれるが含まれる。抗コネキシンポリヌクレオチド抗コネキシンポリヌクレオチドには、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドおよびコネキシン発現を下方制御させることができる機能を有するポリヌクレオチドが含まれる。他の適切な抗コネキシンポリヌクレオチドには、RNAiポリヌクレオチドおよびsiRNAポリヌクレオチド、shRNAポリヌクレオチドが含まれる。アンチセンスポリヌクレオチドおよび他の抗コネキシンポリヌクレオチドの合成RNAi、siRNA、およびリボザイムポリヌクレオチドならびに修飾骨格および混合骨格を有するポリヌクレオチドなどは、当業者に公知である。例えば、SteinC.A.およびKriegA.M.編,AppliedAntisenseOligonucleotideTechnology,1998Wiley-Lissを参照のこと。抗体および結合部位ならびにペプチドおよびポリペプチドペプチド模倣物およびペプチドアナログが含まれるの合成方法は、当業者に公知である。例えば、LihuYangら,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1;9518:10836-10841Sept11998;HarlowおよびLane1988Antibodies:ALaboratoryManuelColdSpringHarborPublications,NewYork;HarlowおよびLane1999UsingAntibodiesALaboratoryManuel,ColdSpringHarborPublications,NewYorkを参照のこと。1つの態様によれば、コネキシン発現の下方制御は、一般に、アンチセンスポリヌクレオチドDNAまたはRNAポリヌクレオチドなど、より詳細には、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドODNの使用に基づく。これらのポリヌクレオチド例えば、ODNは、下方制御すべきコネキシンタンパク質をターゲティングする。典型的には、ポリヌクレオチドは一本鎖であるが、二本鎖でもよい。アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンの転写および/または翻訳を阻害することができる。好ましくは、ポリヌクレオチドは、コネキシン遺伝子またはmRNA由来の転写および/または翻訳の特異的インヒビターであり、他の遺伝子またはmRNA由来の転写および/または翻訳を阻害しない。本産物は、iコーディング配列に対して5’側および/またはiiコーディング領域、および/またはiiiコーディング配列に対して3’側のいずれかで、コネキシン遺伝子またはmRNAに結合することができる。アンチセンスポリヌクレオチドは、一般に、コネキシンmRNAに対してアンチセンスである。かかるポリヌクレオチドは、コネキシンmRNAとハイブリッド形成することができ、それにより、コネキシンmRNA代謝の1つまたは複数の態様転写、mRNAプロセシング、核からのmRNA輸送、翻訳、またはmRNA分解が含まれるの干渉によってコネキシン発現を阻害することができる。アンチセンスポリヌクレオチドは、典型的には、コネキシンmRNAとハイブリッド形成して二重鎖を形成し、それにより、mRNAの翻訳の直接的阻害および/または不安定化を生じ得る。かかる二重鎖は、ヌクレアーゼによる分解に感受性を示し得る。アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンmRNAの全部または一部とハイブリッド形成することができる。典型的には、アンチセンスポリヌクレオチドは、コネキシンmRNAのリボゾーム結合領域またはコーディング領域とハイブリッド形成する。ポリヌクレオチドは、コネキシンmRNAの全部またはある領域と相補的であり得る。例えば、ポリヌクレオチドは、コネキシンmRNAの全部または一部の正確な相補物であり得る。しかし、絶対的に相補的である必要はなく、生理学的条件下で約20°C、30°C、または40°Cを超える融点を有する二重鎖を形成するのに十分に相補的であるポリヌクレオチドは、本発明で用いるのに特に有用である。したがって、ポリヌクレオチドは、典型的には、mRNAと配列が相補的なホモログである。ポリヌクレオチドは、中~高ストリンジェンシー条件下約50°C~約60°Cで0.03M塩化ナトリウムおよび0.03Mクエン酸ナトリウムなどでコネキシンmRNAとハイブリッド形成するポリヌクレオチドであり得る。一定の態様のために、適切なポリヌクレオチドは、典型的には、約6~40ヌクレオチド長である。好ましくは、ポリヌクレオチドは、約12~約35ヌクレオチド長、より好ましくは、約18~約32ヌクレオチド長であり得る。別の態様によれば、ポリヌクレオチドは、少なくとも約40、例えば、少なくとも約60または少なくとも約80ヌクレオチド長、約100、約200、約300、約400、約500、約1000、約2000、または約3000までまたはそれを超えるヌクレオチド長であり得る。ポリヌクレオチドによってターゲティングされるコネキシンタンパク質は、下方制御されるべき部位に依存するであろう。コネキシンは、ある局面ではヒトまたは動物中に天然に存在するか、コネキシンの発現または活性が減少されるべき組織中に天然に存在するコネキシンである。コネキシン遺伝子コーディング配列が含まれるは、一般に、1つまたは複数の本明細書中に記載の特定のコネキシンのコーディング配列と相同性コネキシン43コーディング配列との相同性などを有する。コネキシンは、典型的には、αまたはβコネキシンである。好ましくは、コネキシンはαコネキシンであり、iPSの原料となる細胞中で発現する。しかし、いくつかのコネキシンタンパク質は、組織中の分布に関して、他よりも遍在する。最も広範囲なものの1つは、コネキシン43である。コネキシン43をターゲティングするポリヌクレオチドは、特に、本発明での使用に適切である。他の態様では、他のコネキシンをターゲティングする。抗コネキシンポリヌクレオチドには、コネキシンアンチセンスポリヌクレオチドおよびコネキシン発現を下方制御させることができる機能を有するポリヌクレオチドが含まれる。他の適切な抗コネキシンポリヌクレオチドには、RNAiポリヌクレオチド、shRNAポリヌクレオチドおよびsiRNAポリヌクレオチドが含まれる。1つの好ましい態様では、アンチセンスポリヌクレオチドは、1つのコネキシンタンパク質のみのmRNAをターゲティングする。最も好ましくは、このコネキシンタンパク質はコネキシン43である。別の態様では、コネキシンタンパク質は、コネキシン26、30、31.1、32、36、37、40、または45である。他の態様では、コネキシンタンパク質は、コネキシン30.3、31、40.1、47である。これらはヒトのコネキシンタンパク質の例示であるが、他の動物種の場合には、対応するコネキシンのmRNAをターゲティングする。個別のコネキシンタンパク質をターゲティングするポリヌクレオチドを組み合わせて使用することも意図される例えば、1、2、3、4、またはそれを超える異なるコネキシンをターゲティングすることができる。例えば、コネキシン43および1つまたは複数のコネキシンファミリーの他のメンバーコネキシン26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、45、47をターゲティングするポリヌクレオチドを、組み合わせて使用することができる。あるいは、アンチセンスポリヌクレオチドは、1つを超えるコネキシンタンパク質に対するポリヌクレオチドを含むことができる組成物の一部であり得る。好ましくは、ポリヌクレオチドが指向されるコネキシンタンパク質の1つはコネキシン43である。オリゴデオキシヌクレオチドが指向される他のコネキシンタンパク質には、例えば、コネキシン26、30、30.3、31.1、32、36、37、40、40.1、45、および47が含まれ得る。種々のコネキシンに指向する適切な例示的ポリヌクレオチドおよびODNを、配列番号3~14に示す。各アンチセンスポリヌクレオチド特定のコネキシンに特異的あり得るか、1、2、3、またはそれを超える異なるコネキシンをターゲティングすることができる。特異的ポリヌクレオチドは、一般に、コネキシン間で保存されないコネキシン遺伝子またはmRNA中の配列をターゲティングするのに対して、非特異的ヌクレオチドは種々のコネキシンの保存配列をターゲティングするであろう。本発明で用いるポリヌクレオチドは、適切には、非修飾ホスホジエステルオリゴマーであり得る。かかるオリゴデオキシヌクレオチドは、長さが変化し得る。30量体のポリヌクレオチドが特に適切であることが見出されている。本発明の多数の態様は、オリゴデオキシヌクレオチドを参照して記載されている。しかし、他の適切なポリヌクレオチドRNAポリヌクレオチドなどをこれらの態様で使用することができることが理解される。アンチセンスポリヌクレオチドを、化学修飾することができる。これにより、ヌクレアーゼ耐性を増強することができ、その細胞侵入能力を増強することができる。例えば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを使用することができる。他のデオキシヌクレオチドアナログには、メチルホスホナート、ホスホルアミデート、ホスホロジチオエート、N3’P5’-ホスホルアミデート、およびオリゴリボヌクレオチドホスホロチオエート、ならびにその2’-O-アルキルアナログおよび2’-O-メチルリボヌクレオチドメチルホスホネートが含まれる。あるいは、混合骨格オリゴヌクレオチドMBOを使用することができる。MBOは、ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドのセグメントおよび修飾オリゴデオキシ-またはオリゴリボヌクレオチドの適切に配置されたセグメントを含む。MBOは、ホスホロチオアート結合のセグメントおよび他の修飾オリゴヌクレオチドのセグメント非イオン性で、ヌクレアーゼまたは2’-O-アルキルオリゴリボヌクレオチドに非常に高い耐性を示すメチルホスホネートなどを有する。修飾骨格および混合骨格オリゴヌクレオチドの調製方法は、当該分野で公知である。本発明で使用されるアンチセンスポリヌクレオチドの正確な配列は、標的コネキシンタンパク質に依存するであろう。1つの実施形態では、適切なコネキシンアンチセンスポリヌクレオチドには、ポリヌクレオチド配列番号3~14が含まれ得る。本明細書中に記載の組み合わせポリヌクレオチドの調製に適切なポリヌクレオチドには、例えば、コネキシンCx43に対するポリヌクレオチドならびにコネキシン26、30、31.1、32、および37のポリヌクレオチドが含まれる。本発明で使用されるアンチセンスポリヌクレオチドの正確な配列は標的コネキシンタンパク質に依存するにもかかわらず、コネキシン43について、以下の配列を有するアンチセンスポリヌクレオチドが特に適切であることが見出された:GTAATTGCGGCAAGAAGAATTGTTTCTGTCGTAATTGCGGCAGGAGGAATTGTTTCTGTCGGCAAGAGACACCAAAGACACTACCAGCAT例えば、コネキシン26、31.1、および32の適切なアンチセンスポリヌクレオチドは、以下の配列を有する。5TCCTGAGCAATACCTAACGAACAAATA5CGTCCGAGCCCAGAAAGATGAGGTC5TTTCTTTTCTATGTGCTGTTGGTGA本発明の方法で有用な他のコネキシンアンチセンスポリヌクレオチド配列には、以下が含まれる。5CATCTCCTTGGTGCTCAACC35CTGAAGTCGACTTGGCTTGG35CTCAGATAGTGGCCAGAATGC35TTGTCCAGGTGACTCCAAGG35AGAGGCGCACGTGAGACAC35TGAAGACAATGAAGATGTT3コネキシンタンパク質に対するポリヌクレオチドODNが含まれるを、任意の都合のよい従来のアプローチによって、そのヌクレオチド配列に関して選択することができる。例えば、コンピュータプログラムMacVectorおよびOligoTechOligosetc.Eugene,Oregon,USAを使用することができる。一旦選択されると、ODNを、DNA合成機を使用して合成することができる。ポリヌクレオチドホモログ例えば、ポリヌクレオチドは、コネキシンmRNA中の配列の相補物のホモログであり得る。かかるポリヌクレオチドは、典型的には、相同配列の例えば少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約40、少なくとも約100を超える連続ヌクレオチドの領域にわたって、関連配列と少なくとも約70相同、好ましくは少なくとも約80、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、少なくとも約98、または少なくとも約99相同である。当該分野の任意の方法に基づいて相同性を計算することができる。例えば、UWGCGパッケージは、相同性を計算するために使用することができるBESTFITプログラムを提供する例えば、そのデフォルト設定で使用されるDevereuxら1984NucleicAcidsResearch12,p387-395。例えば、AltschulS.F.1993JMolEvol36:290-300;Altschul,S,Fら1990JMolBiol215:403-10に記載のように、PILEUPおよびBLASTアルゴリズムを使用して、相同性を計算するか、配列を整列させることができる典型的には、そのデフォルト設定に関して。BLAST分析を実施するためのソフトウェアは、NationalCenterforBiotechnologyInformationhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/から公的に利用可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同一の長さのワードと整列させた場合にいくつかの正の数の閾値スコアTに適合するか満たすクエリー配列中の長さWの短いワードの同定によって高スコアリング配列対HSPを最初に同定する工程を含む。Tは、隣接ワードスコア閾値neighbourhoodwordscorethresholdと呼ばれるAltschulら,上記参照。これらの最初の隣接ワードヒットは、これらを含むHSPを見出すための検索開始のシードseedとして作用する。ワードヒットを、累積アラインメントスコアを増加させることができる限り、各配列に沿って両方の方向に伸長する。各方向でのワードヒットの伸長を、以下の場合に停止する:累積アラインメントスコアが、量Xによってその達成された最大値から低下した場合、1つまたは複数の負のスコアの残基アラインメントの累積によって累積スコアが0以下になる場合、またはいずれかの配列の末端に到達する場合。BLASTアルゴリズムパラメータW、T、およびXは、アラインメントの感度および速度を決定づける。BLASTプログラムは、デフォルトとして、ワードレングスW,BLOSUM62スコアリング行列HenikoffおよびHenikoff1992Proc.Natl.Acad.SciUSA89:10915-10919、50のアラインメントB、10の期待値E、M=5、N=4、および両鎖の比較を使用する。BLASTアルゴリズムは、2配列間の類似性の統計分析を行う。例えば、KarlinおよびAltschul1993Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873-5787を参照のこと。BLASTアルゴリズムによって得られる類似性の1つの基準は、最小和確率smallestsumprobabilityPNである。これにより、2つのヌクレオチド間またはアミノ酸配列間の適合が偶然に起こる確率の指標が得られる。例えば、第1の配列と第2の配列と比較した最小和確率が約1未満、好ましくは約0.1未満、より好ましくは約0.01未満、最も好ましくは約0.001未満である場合、一方の配列は別の配列に類似すると見なされる。相同配列は、典型的には、少なくとも約2、5、10、15、20、またはそれを超える変異置換、欠失、または挿入であり得るによって関連配列と異なる。これらの変異を、相同性計算に関する上記のいずれかの領域にわたって測定することができる。相同配列は、典型的には、バックグラウンドを有意に超えるレベルで元の配列と選択的にハイブリッド形成する。選択的ハイブリッド形成を、典型的には、中~高ストリンジェンシー条件例えば、約50°C~約60°Cで0.03M塩化ナトリウムおよび0.03Mクエン酸ナトリウムを使用して行う。しかし、かかるハイブリッド形成を、当該分野で公知の任意の適切な条件下で行うことができるSambrookら1989,MolecularCloning:ALaboratoryManualを参照のこと。例えば、高ストリンジェンシーが必要である場合、適切な条件には、60°Cで0.2×SSCが含まれる。より低いストリンジェンシーが必要である場合、適切な条件には、60°Cで2×SSCが含まれる。ペプチドおよびポリペプチドコネキシンの抑制因子結合タンパク質ペプチド、ペプチド模倣物、抗体、および抗体フラグメントなどが含まれるはまた、適切な抑制因子である。結合タンパク質には、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント例えば、Fab、Fab’2、およびFvフラグメントが含まれる;単鎖抗体;単鎖Fvs;および単鎖結合分子例えば、結合ドメイン、ヒンジ、CH2ドメイン、およびCH3ドメインを含むもの、特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基すなわち、一般にエピトープと呼ばれる分子の一部に結合することができる組換え抗体および抗体フラグメントが含まれる。これらの結合タンパク質抗体および抗体フラグメントなどが含まれるは、キメラまたはヒト化することができるか、投与される被験体で免疫原性が低くなるように作製することができるか、合成することができるか、組換え的に産生することができるか、発現ライブラリー中で産生することができる。当該分野で公知であるか後に発見される任意の結合分子本明細書中で参照され、そして/または当該分野でより詳細に記載される結合分子などが想定される。例えば、結合タンパク質には、抗体などだけでなく、標的例えば、コネキシンまたは関連分子に結合するリガンド、受容体、ペプチド模倣物、または他の結合フラグメントもしくは分子例えば、ファージディスプレイによって産生されるが含まれる。結合分子は、一般に、所望の特異性結合特異性が含まれるが、これに限定されないおよび所望の親和性を有するであろう。親和性は、例えば、約104M-1以上、約106M-1以上、約107M-1以上、約108M-1以上のKaであり得る。さらに約108M-1を超える親和性約109M-1以上、約1010M-1、約1011M-1、および約1012M-1の親和性などが適切である。本発明の結合タンパク質の親和性を、従来技術例えば、Scatchardら,1949Ann.NY.Acad.Sci.51:660に記載の技術を使用して容易に決定することができる。ハイドロパシープロットから得たデータの使用により、コネキシンが4つの膜貫通領域および2つの短い細胞外ループを含むことが提案されている。コネキシンの第1および第2の細胞外領域の配置を、スプリットギャップ結合上の対応するエピトープの免疫局在性のために使用される抗ペプチド抗体産生の報告によってさらに特徴づけた。GoodenoughD.A.JCellBiol107:1817-18241988;MeyerR.A.,JCellBiol119:179-1891992。コネキシンの抑制因子には、コネキシン例えば、コネキシン45、43、26、30、31.1、および37の膜貫通領域例えば、第1~第4に対応するアミノ酸配列を含むペプチドが含まれる。コネキシンの抑制因子は、コネキシン45の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含むことができる。コネキシンの抑制因子には、アクセッション番号:AAA60458の約5~20個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、アクセッション番号:AAA60458の約8~15個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、またはアクセッション番号:AAA60458の約11~13個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドが含まれる。他の実施形態は、アクセッション番号:AAA60458の少なくとも約5、少なくとも約6、少なくとも約7、少なくとも約8、少なくとも約9、少なくとも約10、少なくとも約11、少なくとも約12、少なくとも約13、少なくとも約14、少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25、または少なくとも約30個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドであるコネキシンの抑制因子に関する。本明細書中に提供した一部のコネキシンの抑制因子では、アクセッション番号:AAA60458の46~75位および199~228位のアミノ酸に対応するコネキシン45の細胞外ドメインを使用して、特定のペプチド配列を構築することができる。本明細書中に記載の一部のペプチドは、アクセッション番号:AAA60458の46~75位および199~228位の領域に対応するアミノ酸配列を有する。ペプチドは、アクセッション番号:AAA60458の一部と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するように保存的にアミノ酸を変化させることができる。あるいは、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質領域例えば、46~75位および199~228位に対応しないアクセッション番号:AAA60458の一部をターゲティングすることができる。また、適切なコネキシンの抑制因子は、コネキシン43の膜貫通領域の一部に対応するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。コネキシンの抑制因子には、アクセッション番号:NP034418の約5~20個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、アクセッション番号:NP034418の約8~15個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチド、またはアクセッション番号:NP034418の約11~13個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドが含まれる。他のコネキシンの抑制因子には、アクセッション番号:NP034418の少なくとも約5、少なくとも約6、少なくとも約7、少なくとも約8、少なくとも約9、少なくとも約10、少なくとも約11、少なくとも約12、少なくとも約13、少なくとも約14、少なくとも約15、少なくとも約20、少なくとも約25、または少なくとも約30個の連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するペプチドが含まれる。他のコネキシンの抑制因子は、アクセッション番号:NP034418の37~76位および178~208位のアミノ酸に対応するコネキシン43の細胞外ドメインを含む。コネキシンの抑制因子には、アクセッション番号:NP034418の37~76位および178~208位の領域に対応するアミノ酸配列を有する本明細書中に記載のペプチドが含まれる。ペプチドは、アクセッション番号:NP034418の一部と同一のアミノ酸配列を有する必要はなく、ペプチドが結合活性または機能活性を保持するように保存的にアミノ酸を変化させることができる。あるいは、ペプチドは、細胞外ドメイン以外のコネキシンタンパク質領域例えば、37~76位および178~208位に対応しないアクセッション番号:NP034418の一部をターゲティングすることができる。抗コネキシンペプチドは、ペプチドが機能的に活性なコネキシンの抑制因子であるような保存的アミノ酸置換を有するコネキシン細胞外ドメインの一部に対応する配列を含むことができる。例示的な保存的アミノ酸置換には、例えば、非極性アミノ酸の別の非極性アミノ酸との置換、芳香族アミノ酸の別の芳香族アミノ酸との置換、脂肪族アミノ酸の別の脂肪族アミノ酸との置換、極性アミノ酸の別の極性アミノ酸との置換、酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸との置換、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸との置換、イオン性アミノ酸の別のイオン性アミノ酸との置換が含まれる。コネキシン43にターゲティングされるペプチドの例を、以下の配列番号15~23に示す。FEVAFLLIQWILLIQWYIGFSLSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKTSRPTEKTIFIILGTAVESAWGDEQQSAFRCNTQQPGQQPGCENVCYDKVCYDKSFPISHVRCx32、Cx40、Cx43にターゲティングされるペプチドの例を、以下の配列番号24~37に示す。Cx32にターゲティングされるペプチドESVWGDEKSSFIICNTLQPGCNSVSVCYDHFFPISHRLVKCEAFPCPNTVDCFVSRPTEKTVKCEAFPCPNTVVDCFVSRPTEKTVCYDHFFPISHVRVWGDEKSSFICNTLQPGYDEKSSFICNTLQPGYSRPTEKTVFTVSRPTEKTICNTLQPGCNSVCx40にターゲティングされるペプチドFLDTLHVCRRSPCPHPCx43にターゲティングされるペプチドKRDPCHQVDCFLSRPTEK配列番号38~65は、本明細書中に記載の使用のためのヒトコネキシン263030331132363740401434546466に対する抑制因子を示す。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配列番号57huCx36LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKThuCx37LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKThuCx401GALHYFLFGFLAPKKFPCTRPPCTGVVDCYVSRPTSKShuCx43LLIQWYIYGFSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKThuCx46IAGQYFLYGFELKPLYRCDRWPCPNTVDCFISRPTEKThuCx466LVGQYLLYGFEVRPFFPCSRQPCPHVVDCFVSRPTEKThuCx40IVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYVSRPTEKNhuCx45LIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKT配列番号18~19、66~79は、コネキシン抑制因子を構成するコネキシンファミリーメンバーヒトコネキシン263030331132363740401434546466の細胞外ドメインを提供する。かかるコネキシン抑制因子は、この配列番号18~19、66~79中のペプチド配列の約8~約15または約11~約13アミノ個の連続アミノ酸を含むことができる。ペプチドまたはそのフラグメントに対して保存的にアミノ酸を変化させることができる。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配列番号79下記の配列番号80~92とその部分ペプチドは、コネキシン40の細胞外ループE1およびE2に関して示したコネキシン40のペプチドインヒビターを提供する。E1LGTAAESSWGDEQADFRCDTIQPGCQNVCTDQAFPISHIRFWVLQLGTAAESSWGDEQADEQADFRCDTIQPTIQPGCQNVCTDQVCTDQAFPISHIRAFPISHIRFWVLQE2MEVGFIVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYVSRPTEKNVFIVMEVGFIVGQYFIVGQYFIYGIFLGIFLTTLHVCRRSPRRSPCPHPVNCYVNCYVSRPTEKNSRPTEKNVFIV配列番号93~105は、コネキシン45の細胞外ループE1およびE2に関して示したコネキシン45のペプチドインヒビターを提供する。ElLTAVGGESIYYDEQSKFVCNTEQPGCENVCYDAFAPLSHVRFWVFQLTAVGGESIYYDEQSDEQSKFVCNTEQPTEQPGCENVCYDAVCYDAFAPLSHVRAPLSHVRFWVFQE2FEVGFLIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKTIFLLFEVGFLIGQYFLIGQYFLYGFQVGFQVHPFYVCSRLPSRLPCHPKIDCFIDCFISRPTEKTSRPTEKTIFLLコネキシン45の抑制因子の例は以下である:YVCSRLPCHPQVHPFYVCSRLFEVGFLIGQYFLYGQYFLYGFQVHPGFQVHPFYVCSRAVGGESIYYDEQYDEQSKFVCNTENTEQPGCENVCYCYDAFAPLSHVRFAPLSHVRFWVFLIGQYQVHPFYVCSRSRLPCLPCHPGESIYYDEQSKSKFVCNTEQPGCENVCYDAFAPLSHVRFWVFQコネキシン抑制因子としての抗体、ペプチドは市販品を用いることができる。例えばCx43抗体としては、CatNo:SigmaC6219Zymed138300SantaCruzsc6560が挙げられ、Cx43を抑制するペプチドとしては、CatNo:SantaCruzsc6560PBDTransductionLaboratories610063Abcamab56616が挙げられる。TGFβシグナリング抑制因子は、当該分野で知られているTGF-βアンタゴニストを含め、TGF-βシグナル伝達を阻害する薬剤として定義される。例えば、TGF-βreceptorIに結合して、TGF-βがTGF-β受容体に結合するのを防ぐ薬剤は、TGF-βシグナリング抑制因子として作用する。他の非限定的な例には、DaschらJImmunol1421536およびLucasらJImmunol1451415により記載されたものといったような、ヒトTGF-βに特異的な遮断中和抗体NAb、可溶性TGF-β受容体、膜結合性TGF-β受容体、前駆体TGF-βを成熟TGF-βへと活性化することを担うプロテアーゼを不活性化するプロテアーゼ阻害剤、TGF-β受容体I型、II型またはIII型に特異的であって、その受容体へのTGF-β結合を予防する抗体、およびそれらの組み合わせが含まれる。TGFβシグナリングの伝達を図4を参照して説明する。リガンドTGFβがTGFβリセプターIITβRIIに結合することにより、TβRIIが活性化される。活性化されたTβRIIがTGFβリセプターITβRIと重合し、2つのTβRIと2つのTβRIIからなる四量体を形成し、TβRIのC末端のリン酸化が起こる。リン酸化されたTβRIが活性型となり、そのC末端にTGFβシグナリングのメディエターであるSmad2及びSmad3が供給されリン酸化される。リン酸化されたSmad2及びSmad3が細胞質に局在するSmad4と結合し、核内移行が起こり、標的遺伝子に結合し、標的遺伝子の発現を制御する。本発明のTGFβシグナリング抑制因子は、このシグナル伝達のいずれかを抑制するものである。従って、TGFβシグナリング抑制因子は、TGFβの発現抑制、TβRI若しくはTβRIIの発現抑制、TGFβのTβRIIへの結合阻害、2つのTβRIと2つのTβRIIからなる四量体の形成抑制、TβRIのC末端のリン酸化阻害、TβRIのC末端の脱リン酸化、TβRIのユビキチン化、Smad2及びSmad3のリン酸化阻害、Smad2及びSmad3の発現抑制、Smad2及びSmad3のユビキチン化、リン酸化されたSmad2及びSmad3の脱リン酸化、リン酸化されたSmad2及びSmad3とSmad4との結合阻害などの機能を有する物質は本発明において、TGFβシグナリング抑制因子として機能し得る。TGFβシグナリング抑制因子は、市販品を使用することができる。市販品は、1レセプターの抑制と2レセプター以降のsignaltransductionの抑制に分けられる。1ReceptorIinhibitorSB425342A8301ALK5inhibitor2SignaltransductioninhibitorInhibitorSmadSmad7がTβRIに結合し、Smad2及びSmad3のTβRIへの結合を妨害する。SignalingmediatorinhibitionsiRNAかantisenseoligoDNAによって、Smad2Smad3及びSmad4の発現を抑制する。TGFβシグナリング抑制因子は、市販のReceptorIinhibitorSB425342、A8301、ALK5inhibitorなど、Signaltransductioninhibitorの機能を模倣する物質を広く包含する。TGFβシグナリング抑制因子は、TGFβ、TβRI、TβRIIに対する抗体を包含する。抗体は、コネキシン抑制因子について説明したように、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント例えば、Fab、Fab’2、およびFvフラグメントが含まれる;単鎖抗体;単鎖Fvs;および単鎖結合分子例えば、結合ドメイン、ヒンジ、CH2ドメイン、およびCH3ドメインを含むもの、特定の抗体または他の結合分子と接触する抗原決定基すなわち、一般にエピトープと呼ばれる分子の一部に結合することができる組換え抗体および抗体フラグメントが含まれる。TGFβシグナリング抑制因子は、TGF-β前駆体の成熟型TGF-βへの変換を抑制する物質、可溶型のTGF-β受容体を包含する。TGF-βは、一般的には、潜伏関連タンパク質と呼ばれるタンパク質と非共有結合したTGF-βから成る潜伏前駆体として分泌されるLAP;Harpelら1992ProgGrowthFactorRes4321。この潜伏複合体は、活性サイトカインを放出するために、炭水化物基の酵素的切断および一時的酸性化を必要とする。精製LAPはそれ自体で、活性TGF-βを高親和性で結合して、潜伏複合体を形成する。プレ-プロ-TGF-βに対応し、成熟型のTGF-βの直前で終わって、Ser33置換のためのCys33を含む、278のアミノ酸ペプチドをコードするDNAが述べられておりDerynckら1985Nature316701、またTGF-βを結合して、それを潜伏した状態にすることが見い出されている。可溶型のTGF-β受容体もまたTGF-βを結合して、膜結合性TGF-β受容体への結合を防ぐ。TGF-β受容体は、WangらCell67797およびLinらCell68775により記載されている。可溶型のTGF-β受容体は、当業界で知られている方法により調製され得る。例えば、TGF-β受容体の膜貫通ドメインを欠く欠失突然変異体を調製することができ、これは、可溶性TGF-β結合タンパク質を発現するであろうMiyazonoらAdvImmunol55181。TGFβシグナリング抑制因子として機能する他の型のTGF-βアンタゴニストもまた当業界で知られている。例えば、YamaguchiらNature346281は、TGF-βを結合して、この増殖因子の活性を調整する、小さなコンドロイチン-デルマタン硫酸プロテオグリカンであるデコリンを論じている。OhtsukiおよびMassagueMolCellBiol122612651992は、TGF-βの幾つかの生物活性を遮断するプロテインキナーゼ阻害剤を開示している。プロテアーゼ阻害剤の薬物としての設計および使用は、当業界で十分知られているDesignofEnzymeInhibitorsasDrugsSandlerおよびSmith編1989OxfordUniversityPressProteinaseInhibitorsMedicalandBiologicalAspectsKatunumaUmezawaおよびHolzer編1983SpringerVerlag;このように、クルザインヴァンの阻害剤を製造すると、TGF-βアンタゴニストとして有用である。またさらなる他のTGF-βアンタゴニストおよびそれらの製造方法は、現在開発中のより多くのものと共に、当該分野で十分知られている。有効なTGF-βアンタゴニストはいずれも、本発明において有用であり得ることから、使用する特異的TGF-βアンタゴニストは、限定的なものではない。そのようなアンタゴニストの例には、1つまたはそれ以上のイソ型のTGF-βに対するモノクローナルおよびポリクローナル抗体米国特許第5571714号およびWO97/13844、TGF-β受容体、そのフラグメント、その誘導体、およびTGF-β受容体に対する抗体米国特許第5693607号、同第6008011号、同第6001969号および同第6010872号、並びにWO92/00330、WO93/09228、WO95/10610およびWO98/48024;潜伏関連ペプチドWO91/08291、大きな潜伏TGF-βWO94/09812、フェチュイン米国特許第5821227号、デコリン、並びにバイグリカン、フィブロモジュリン、ルミカンおよびエンドグリンといったような他のプロテオグリカン米国特許第5583103号、同第5654270号、同第5705609号、同第5726149号、同第5824655号、同第5830847号、同第6015693号、並びにWO91/04748、WO91/10727、WO93/09800およびWO94/10187が含まれる。そのようなアンタゴニストのさらなる例には、ソマトスタチンWO98/08529、マンノース-6-リン酸またはマンノース-1-リン酸米国特許第5520926号、プロラクチンWO97/40848、インスリン様増殖因子IIWO98/17304、IP-10WO97/00691、アルギニングリシンアスパラギン酸含有ペプチド米国特許第5958411号およびWO93/10808、植物、真菌類および細菌類の抽出物欧州特許出願第813875号、特開平8-119984号および米国特許第5693610号、アンチセンスオレゴヌクレオチド米国特許第5683988号、同第5772995号、同第5821234号および同第5869462号、並びにWO94/25588、並びにSMADおよびMAD欧州特許出願EP874046、WO97/31020、WO97/38729、WO98/03663、WO98/07735、WO98/07849、WO98/45467、WO98/53068、WO98/55512、WO98/56913、WO98/53830およびWO99/50296、並びに米国特許第5834248号、同第5807708号および同第5948639号、並びにSkiおよびSnoGVogelScience286665およびStroscheinらScience28677174、並びにTGF-βの活性を阻害する能力を保持する上記分子のいずれかのフラグメントおよび誘導体を含め、TGF-βシグナル伝達に関与する他のタンパク質が含まれる。TGF-β受容体およびTGF-β受容体のTGF-β結合フラグメント、とりわけ、可溶性フラグメントは、本発明の方法において有用なTGF-βアンタゴニストである。TGF-β受容体およびそれらをコードする核酸は、当業界で十分知られている。TGF-β1型受容体をコードする核酸配列は、GenBankのアクセス番号L15436およびDonahoeらの米国特許第5538892号に開示されている。TGF-β2型受容体の核酸配列は、GenBankのアクセス番号AW236001;AI35790;AI279872;AI074706;およびAA808255の下、公的に入手可能である。TGF-β3型受容体の核酸配列もまた、GenBankのアクセス番号NM003243;AI887852;AI817295;およびAI681599の下、公的に入手可能である。好ましい態様において、TGF-βアンタゴニストは、その受容体、またはF2フラグメント、Fvフラグメント、一本鎖抗体、およびTGF-βに結合する能力を保持する他の抗体型といったようなそのフラグメントへのTGF-β結合を遮断する抗体である。その抗体は、キメラ化またはヒト化され得る。さらに、TGFβ1レセプターII型に対するRNAiとして作用するRNA配列特開2005253344、TGFβII型受容体発現のサイレンシングのためのsiRNA特表2007502284、TGF-βインヒビターとしてのピリミジニルイミダゾール特表2008511631およびピリミジニルピラゾール特表2008511630などが挙げられる。好ましいTGFβシグナリング抑制因子は、SB431542、A8301、ALK5Inhibitorである。TGFβシグナリング抑制因子は、細胞の培養液中に添加することができる。濃度としてはTGFβシグナリング抑制因子の有効量が例示され、例えばSB431542の場合には、1~100μM、好ましくは10μM程度である。コネキシン抑制因子は、有効量以上を培養液中に添加することにより細胞に取り込ませることができる。例えばsiRNAの場合、10~1000nM、好ましくは100nM程度を培養液中に添加することができる。上記以外のTGFβシグナリング抑制因子、コネキシン抑制因子の使用量は、当業者であれば容易に決定できる。iPS細胞の原料となる細胞としては、全ての体細胞が挙げられ、例えば心筋細胞、繊維芽細胞、皮膚細胞、筋肉細胞、脂肪細胞などが挙げられる。この体細胞はコネキシンを発現している細胞がよく、コネキシンを高発現している細胞がさらに好ましい。iPS細胞は、哺乳動物細胞ヒト、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ブタ、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、サル、イヌ、ネコあるいはトリ、アヒル、アフリカツメガエルなどの動物細胞から得ることができる。コネキシン抑制因子とTGFβシグナリング抑制因子は、同時に作用させてもよく、逐次的に作用させてもよい。好ましくはこれらは同時に作用させる。コネキシン抑制因子とTGFβシグナリング抑制因子を作用させて得られたiPS細胞は、常法に従い非iPS細胞を除去することで、iPS細胞の集団を分離精製することができる。本発明のiPS細胞は、コネキシン抑制因子とTGFβシグナリング抑制因子を作用させて誘導された時点ではコネキシン抑制因子とTGFβシグナリング抑制因子の一方又は両方が細胞内に存在すると考えられる。特に、これらの抑制因子が細胞内での遺伝子発現を抑制する分子である場合には、iPSになった瞬間には細胞内に存在するものと考えられる。特に、コネキシン抑制因子は、従来iPSの作製及び培養時に用いられていなかったものであり、コネキシン抑制因子を細胞内に含むiPS細胞は新規な細胞である。コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子は、いずれもiPS細胞に誘導するために使用することができ、これらはiPS細胞誘導剤として有用である。コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子を含む培地は、iPS細胞を誘導することができるため、iPS細胞誘導用培地として有用である。さらに、コネキシン抑制因子及びTGFβシグナリング抑制因子からなる群から選ばれる少なくとも1種の抑制因子は、iPS細胞を誘導することができるので、これらはiPS細胞誘導用キットとして有用である。以下、本発明を実施例に従いより詳細に説明する。実施例1:新生仔マウスの心室に由来する心筋細胞の初期化対象と方法1心筋細胞の単離生後二日後マウス胎仔C57BL6及びC57BL6Tgから従来法により心室部分を残した心臓を約2mm×2mmの大きさに解剖用ハサミで細切した。それらを02コラゲナーゼにて、心筋細胞を解離した。解離した心筋細胞を遠心分離し、10FBSを添加したDMEM培養液で、37°C、5CO2の条件で45分間インキュベートした後、上清を再度、同条件でインキュベートしこれを4回行い、線維芽細胞を除去し、心筋細胞を分離した。2心筋細胞の初期化6cmdishに2×105心筋細胞を撒き、上述したDMEM培地で一週間培養した後、10μMTGFβレセプター阻害剤であるSB431542か100nMsiRNACx43またはその両方を含んだ15FBS、マウスES培地でそれぞれ心筋細胞の初期化選択を行った。使用したマウスCx43siRNA配列は、次の通りである。sense5’CAAUUCCUCCUGCCGCAATT3’antisense5’UUGCGGCAGGAGGAAUUGTT3’3多能性の評価.ES細胞初期マーカーの細胞免疫染色10μMSB431542と100nMsiRNACx43両方添加したES培地条件で選択培養した心筋細胞から約2週間で2個のiPS細胞コロニーが得られた。フィーダー細胞上でマウスES細胞培養条件と同様の条件で培養して増殖したiPS様細胞を免疫染色など及びTeratoma形成確認に用いた。Alkalinephosphataseの測定はAlkalinePhosphataseDetectionKitにより行った。細胞免疫染色で使用した抗体は、次の通りである。ウサギ抗Nanog抗体、ウサギ抗Oct4抗体、ヤギ抗Sox2抗体、マウス抗SSEA1抗体。.Teratoma作製2×105のiPS様細胞をSCIDマウスの皮下に移植し、5週間後、腫瘍を摘出し、HE染色により、奇形腫を形成するかを組織学的に確認した。.キメラマウスの作成iPS様細胞をICRマウス由来の8細胞期の受精卵に移植した後、ICRマウスに戻し、キメラマウスができるかを確認した。結果1.ES初期マーカー遺伝子の発現本発明で作製したマウス心筋細胞由来の2個のiPS細胞、siPSCsが形態的にマウスES細胞コロニーに類似し図1a、ALP活性が確認でき図1b、多能性マーカー因子、NanogOct4Sox2SSEA1の発現がタンパク質レベルで確認できた図1c。また、各種多能性マーカー遺伝子の発現が遺伝子レベルでも確認できた図1d。更にEGFPマウス心筋細胞からのiPS様細胞の誘導も確認できた図2。2.siPSCsの分化能検証iPSCsをSCIDマウスの皮下に移植すると5週間後、外胚葉である上皮と神経、中胚葉である筋肉と軟骨、内胚葉である腺管などの三胚葉系の様々な組織からなるTeratomaを形成した図1e。なお、データは示さないが、siPSCsが胚葉体を形成し、分化誘導条件により神経細胞、心筋細胞、内皮細胞へとそれぞれ分化可能なことが確認できた。心筋細胞では拍動と伝導も認められた。また、免疫抗体法、RTPCRにより、分化誘導を行った細胞では三胚葉マーカー遺伝子に発現がタンパク質レベルと遺伝子レベルで共に確認できた。3.キメラマウスの作製本発明で作製したマウス心筋細胞由来の2個のiPS細胞を胚盤胞への注入により、iPS細胞由来の細胞が混在した成体キメラマウスを得ることができたことから、ES細胞と同様の分化万能性を持つと言える図3。本明細書に記載された特許文献および論文は、その全体が本明細書に参考として援用される。"