"式Ac-AA1-AA10-NH2式中、AA1はD-2Nalであり、AA2はD-4Cpaであり、AA3はD-3Palであり、AA4はSerであり、AA5は4AphL-Horであり、AA6はD-AphCbmであり、AA7はLeuであり、AA8はLysiPrであり、AA9はProであり、AA10はD-Alaであるを有するデガレリクスまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製する液相法であって、式IIのデガレリクス前駆体:式中、P1はアミノ保護基または好ましくはアセチルであり;P4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基であり;P6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基であり;P8はアミノ保護基であるまたはその塩もしくは溶媒和物を切断試薬による処理に供するステップを含む、液相法。P1がアセチルであり、P4がヒドロキシル保護基であり、P6が水素またはアミノ保護基であり、P8がアミノ保護基である、請求項1に記載の方法。P1がアセチルであり、P4がtBuであり、P6が水素またはtBuであり、P8がBocである、請求項2に記載の方法。式II:P1AA1-AA2-AA3-P4AA4P4-AA5-P6AA6P6-AA7-P8AA8P8-AA9-AA10-NH2II式中、AA1はD-2Nalであり、AA2はD-4Cpaであり、AA3はD-3Palであり、AA4はSerであり、AA5は4AphL-Horであり、AA6はD-AphCbmであり、AA7はLeuであり、AA8はLysiPrであり、AA9はProであり、AA10はD-Alaであり;P1はアミノ保護基またはアセチルであり;P4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基であり;P6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基であり;P8はアミノ保護基であるにより表されるデカペプチドまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を液相製造する方法であって、ペプチドカップリング試薬の存在下で、液体試薬媒体中、式III:P1AA1-AA2-AA3IIIにより表される第1のポリペプチドまたはその塩を、式IV:AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2IVにより表される第2のポリペプチドまたはその塩とカップリングするステップを含む、方法。P1がアセチルであり、P4がヒドロキシル保護基であり、P6が水素またはアミノ保護基であり、P8がアミノ保護基である、請求項4に記載の方法。請求項1から3のいずれか一項に記載の方法が引き続いて行われる、請求項4または5に記載の方法。式IV:P4AA4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2IV式中、P4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基であり;P6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基であり;P8はアミノ保護基であるにより表されるポリペプチドを調製する方法であって、式V:PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7Vにより表されるポリペプチドまたはその塩もしくは溶媒和物を、式VI:AA8P8-AA9-AA10-NH2VIにより表されるポリペプチドまたはその塩もしくは溶媒和物とカップリングし、次いで、脱保護基PNを除去する式中、AA4~AA10、P4、P6およびP8は請求項1と同じであり、PNは水素付加により除去することができる保護基であることにより調製する、方法。PNが、Pd/C触媒の存在下で、化合物PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2に水素付加することにより除去されるベンジルオキシカルボニルである、請求項7に記載の方法。請求項4から6のいずれか一項に記載の方法が引き続いて行われる、請求項7または8に記載の方法。PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7式中、AA4~AA7、P4およびP6は請求項1と同じであり、PNは水素付加により除去することができる保護基であるの化合物を製造する方法であって、以下のステップ:aPN2AA5-AA6P6-AA7PC式中、P6は請求項1と同じであり、PN2はN末端アミノ保護基または水素であり、PCは水素付加により切断することができるC末端カルボニル保護基であるを用意するステップ;bアミノ保護基PN2が存在する場合、そのアミノ保護基PN2を除去するステップ;cH-AA5-AA6P6-AA7PCに水素付加してH-AA5-AA6P6-AA7を得るステップ;およびdH-AA5-AA6P6-AA7にPNAA4P4の活性化エステルを反応させて、PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7式中、AA4は請求項1と同じであり、P4はヒドロキシル保護基または水素であり、PNは好ましくは水素付加により除去することができる保護基であるを得るステップ;を含む、方法。デガレリクス溶液が請求項1から3のいずれか一項に記載の方法により得られる、請求項10に記載の方法。pHが9未満、好ましくは8未満に保たれる、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。以下の式:P1AA1-AA2-AA3、AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2、PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2、PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7、AA8P8-AA9-AA10-NH2、P1AA1-AA2-AA3-AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2により表されるポリペプチド化合物式中、AA1はD-2Nalであり、AA2はD-4Cpaであり、AA3はD-3Palであり、AA4はSerであり、AA5は4AphL-Horであり、AA6はD-AphCbmであり、AA7はLeuであり、AA8はLysiPrであり、AA9はProであり、AA10はD-Alaであり;P1はアミノ保護基またはアセチルであり;P4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基であり;P6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基であり;P8はアミノ保護基であり、PNは保護基であるまたは塩もしくは溶媒和物。WO97/34923およびWO99/26964に記載されているようなデガレリクスを調製するためのSSPS法の課題およびLLPS法の欠点は今克服され、それらが本発明の主題である。概して、本発明はデカペプチドであるデガレリクスの液相合成に関する。一態様では、本発明は、式Ac-AA1-AA10-NH2を有するデガレリクスまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製する液相法であって、以下の式IIのデガレリクス前駆体:またはその塩もしくは溶媒和物を切断試薬による処理に供するステップを含む、液相法に関する。したがって、式IIの化合物は、P1AA1-AA2-AA3-AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2II式中、AA1~AA10は式Iと同じであり、P1はアミノ保護基またはアセチルであり;P4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基であり;P6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基であり;P8はアミノ保護基であるに相当する。好ましくは、保護基P1は、存在する場合、P8に直交する、すなわち、両保護基を独立に切断することができる。好ましい実施形態では、P1はアセチルであり、P4およびP8の各々は単一のステップで切断することができる保護基であり、P6は水素または保護基P4およびP8と共に切断することができる保護基である。保護基の切断は、好ましくは式IIの前駆体をトリフルオロ酢酸TFAで処理することにより行う。P4、P6およびP8が、tert-ブチルtBuおよびt-ブチルオキシカルボニルBocから選択される保護基であることが特に好ましく、P4がtBuであり、P6が水素またはtBuであり、P8がBocである式IIの前駆体が最も好ましい。本発明はまた、式IIにより表される中間体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を液相製造する方法であって、任意選択で有機アミン塩基と共に、ペプチドカップリング試薬の存在下で、液体試薬媒体中、式IIIP1AA1-AA2-AA3IIIにより表される第1のポリペプチドまたはその塩を、式IVAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2IVにより表される第2のポリペプチドまたはその塩とカップリングして、式IIにより表されるデカペプチドを形成するステップを含む、方法に関する。この場合、AA1~AA10、P4、P6およびP8は、式IIと同じである。塩には、塩酸塩などの酸性塩、ならびにアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩およびアンモニウム塩などの塩基性塩が含まれる。本発明によると、式IVにより表される第2のポリペプチドは、以下の化合物IVa:PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2IVaから保護基PNを除去することにより調製することができる。PNは、好ましくはN末端アミノ保護基、より好ましくはベンジルオキシカルボニルなどの水素付加により除去することができる保護基である。式IVaの化合物は、式Vにより表されるポリペプチドを、式VIにより表されるポリペプチドとカップリングすることにより得ることができ、PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7VAA8P8-AA9-AA10-NH2VIまたはこれらの化合物は塩であってもよい式中、AA4~AA10、PN、P4、P6およびP8は式IVaと同じである。本発明はまた、本発明の液相製造法に有用な式II~VIにより表されるポリペプチドに関する。以下、本発明についてより詳細に説明する。脱保護ステップ第1の態様では、本発明は、式Ac-AA1-AA10-NH2を有するデガレリクスまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製するための液相法に関する。この方法は、式IIP1AA1-AA2-AA3-AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2のデガレリクス前駆体またはその塩もしくは溶媒和物から、保護基P4、P6およびP8が存在する場合にはこれらの保護基を、溶解している前記前駆体および切断試薬を含む有機溶液中で切断するステップを含む。式IIのAA1~AA10は式Iと同じ意味を有し、P1はアミノ保護基またはアセチル、好ましくはアセチルである。P8はアミノ保護基である。好ましくは、P8はE.GrossJ.Meienhofer、ThePeptides:Analysis,Structure,Biology、第3巻:ProtectionofFunctionalGroupsinPeptideSynthesisAcademicPress、N.Y.、1981に記載されているものなどの当技術分野で既知の任意の側鎖保護基である。適当な例としては、9-フルオレニルメチルオキシカルボニルFmoc、ベンジルオキシカルボニルCbzもしくはZおよび置換Cbz、例えば、2-ブロモ-ベンジルオキシカルボニル2-Br-Z、2-クロロ-ベンジルオキシカルボニル2-Cl-Z、p-クロロベンジルオキシカルボニル、p-6-ニトロベンジルオキシカルボニル、p-ブロモベンジルオキシカルボニルおよびp-メトキシベンジルオキシカルボニル、o-クロロベンジルオキシカルボニル、2,4-ジクロロベンジルオキシカルボニル、2,6-ジクロロベンジルオキシカルボニルなど;脂肪族ウレタン型保護基、例えば、t-ブチルオキシカルボニルBoc、t-アミルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、2-p-ビフェニリル-イソプロピルオキシカルボニルなど;シクロアルキルウレタン型保護基、例えば、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニルおよびシクロヘキシルオキシカルボニル;アリルオキシカルボニルAllocアセチルAc、ベンゾイルBz、トリフルオロアセチルTfa、トルエンスルホニルTos、ベンジルBn、トリフェニルメチルTrt、o-ニトロフェニル-スルフェニルNps、t-ブチル-ジメチルシリルオキシカルボニル、[2-3,5-ジメトキシフェニル-プロピル-2-オキシカルボニル]Ddz、2,2,2-トリクロロエチルオキシカルボニルTroc、ビフェニリルイソプロピルオキシカルボニルBpocおよびo-ニトロベンジルオキシカルボニルが挙げられる。好ましい保護基は、Fmoc、BocおよびAllocであり、Bocが最も好ましい。P4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基である。Serのヒドロキシル基P4は、好ましくはC4~C6アルキル例えば、t-ブチル、シクロヘキシル、アセチルAc、トリチル、ベンジル、ベンジルエーテル、例えばp-メトキシベンジル、または他の置換ベンジル、例えば、p-ニトロベンジル、p-クロロベンジル、o-クロロベンジルおよび2,6-ジクロロベンジル、テトラヒドロピラニル、トリC1~C6アルキルシリル、2-メトキシエトキシメチルMEM、4-ジメチルカルバモイルベンジル、およびO-フェノキシアセチルエーテルである。t-ブチル、ベンジルおよび9-フルオレニルメチルエーテルが特に好ましく、t-ブチルが最も好ましい。P6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基である。好ましい保護基には、C4~C6アルキル例えば、t-ブチル、シクロヘキシル、アセチルAc、トリチル、ベンジル、ベンジルエーテル、例えばp-メトキシベンジル、または他の置換ベンジル、例えば、p-ニトロベンジル、p-クロロベンジル、o-クロロベンジルおよび2,6-ジクロロベンジル、テトラヒドロピラニル、トリC1~C6アルキルシリル、2-メトキシエトキシメチルMEM、4-ジメチルカルバモイルベンジルおよびO-フェノキシアセチルエーテルが含まれる。t-ブチル、ベンジルおよび9-フルオレニルメチルエーテルが特に好ましく、t-ブチルが最も好ましい。保護基を除去するために使用する切断試薬は、保護基の性質に依存し、当技術分野で周知である。Serヒドロキシル保護基P4のための好ましい切断試薬は、特に保護基としてのt-ブチルエーテルのためには、トリフルオロ酢酸TFA、HClまたはメタンスルホン酸であり、特に保護基としてのベンジルエーテルのためには、H2/Pd-C、HFまたはトリフルオロメタン-スルホン酸であり、特に保護基としての2-メチルスルフィニルベンジルエーテルのためには、SiCl4/アニソールである。アミノ保護基P8のための好ましい切断試薬は、特に保護基としてのt-ブチルカルバメートのためには、トリフルオロ酢酸TFA、HClまたはメタンスルホン酸であり、特に保護基としてのベンジルカルバメートのためには、H2/Pd-C、HFまたはトリフルオロメタン-スルホン酸であり、特に保護基としてのFmocのためには、ピペリジン、DBUおよびDEAである。好ましい溶媒としては、DCM、DMF、NMP、ジオキサン、EtOH、ニートHFおよびTFAが挙げられる。以下の表1に示す種々の切断条件が特に好ましい。典型的には、式IIの前駆体を、室温20~25°Cで、追加の溶媒を用いてまたは用いずに、20~30時間、好ましくは24時間、切断試薬、好ましくはTFAに溶解する。保護基を除去したら好ましくは、転換が収率95超、最も好ましくは99超である、粗製デガレリクスを、好ましくは緩衝水-エタノール混合液に注いで、その後の精製に供する粗製デガレリクスの緩衝溶液を得る。好ましいpHは、好ましくは2~4の範囲、より好ましくは2.5~3.5の範囲、最も好ましくはおよそ3である。脱保護ステップの特定の実施形態を、図12および実施例4ステップ12参照に示す。精製および凍結乾燥粗製デガレリクスの溶液を、好ましくは分取逆相クロマトグラフィーRPCなどのクロマトグラフィー技術を使用して精製する。次いで、得られた生成物を好ましくは凍結乾燥する。37カップリングさらなる態様では、本発明はまた、ペプチドカップリング試薬および任意選択で有機アミン塩基の存在下で、液体試薬媒体中、式IIIP1AA1-AA2-AA3IIIにより表される第1のポリペプチドまたはその塩を、式IVAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2IVにより表される第2のポリペプチドまたはその塩とカップリングして、式IIにより表されるデカペプチドを形成するステップを含む、式IIにより表される中間体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を液相製造する方法に関する。この場合、AA1~AA10、P1、P4、P6およびP8は、式IIと同じである。塩には、塩酸塩などの酸性塩、ならびにアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩およびアンモニウム塩などの塩基性塩が含まれる。カップリング反応は、2個のペプチドおよびペプチドカップリング試薬ならびに任意選択で有機アミン塩基が溶解した有機溶液中で行う。ペプチドカップリング添加剤および/または有機アミンも存在してよい。有機溶媒、ペプチドカップリング試薬、ペプチドカップリング添加剤および有機アミン塩基は、LPPSの技術分野で既知のもののいずれであってもよい。典型的な有機溶媒は、THF、NMPN-メチルピロリドン、DCM、DMF、DMSOおよびこれらの混合物である。最も好ましい溶媒はDMSOである。典型的なペプチドカップリング試薬は、o-7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩HATU、o-ベンゾトリアゾール-1-イル-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩HBTU、o-ベンゾトリアゾール-1-イル-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩TBTU、ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩BOP、ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス-ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩PyBOP、N,N-ビス-2-オキソ-3-オキサゾリジニルホスホン酸ジクロリドBOP-Cl、ブロモ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩PyBroP、イソ-ブチルクロロギ酸塩IBCF、1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミドDCC、1,3-ジイソプロピル-カルボジイミドDIC、1-ジメチルアミノプロピル-3-エチルカルボジイミド塩酸塩WSCDI、N-エトキシカルボニル-2-エトキシ-1,2-ジヒドロキノリンEEDQ、クロロギ酸イソプロピルIPCF、2-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩TNTU、プロパンホスホン酸無水物PPAAおよび2-サクシニミド-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩TSTUの1つまたは複数である。好ましいカップリング試薬はDCCである。DCCを好ましくは有機アミンなしで使用する。特に好ましい実施形態では、DCCをDMSOと組み合わせて使用する。DCCを、トリペプチドに対して、好ましくは1.3~2、最も好ましくは1.4~1.6当量の量で使用する。別の好ましいカップリング試薬はDICであり、これは、好ましくは6-クロロ-HOBtと組み合わせて、任意選択により銅塩と共に使用する。典型的なペプチドカップリング添加剤は、1-ヒドロキシ-1H-ベンゾトリアゾールHOBt、6-クロロ-HOBtおよび1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾールHOAtである。典型的な有機アミン塩基はNMM、DIPEA、TEAおよびコリジンである。溶媒としてDMSOおよびカップリング試薬としてDCCを使用してカップリング反応を行うことが特に好ましい。カップリングステップの特定の実施形態を図11および実施例4ステップ11参照に示す。ヘプタペプチドの合成式IV、すなわち、AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2の化合物は、好ましくは以下の化合物IVa:PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2IVaの保護基PNを除去することにより得られる。AA4~AA10、P4、P6およびP8は上記と同じ意味を有するが、PNはN末端アミノ保護基である。好ましい実施形態では、PNは、例えば、水素およびパラジウム触媒Pd/Cなどを使用して、水素付加により除去することができる保護基である。最も好ましい保護基PNは、ベンジルオキシカルボニルZである。PNの除去ステップの特定の実施形態を図11および実施例4ステップ11参照に示す。式IVaの化合物は、式Vにより表されるポリペプチドを、式VIにより表されるポリペプチドとカップリングすることにより得ることができ、PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7VAA8P8-AA9-AA10-NH2VIまたはこれらの化合物の一方もしくは両方は塩であってもよい式中、AA4~AA10、P4、P6およびP8は式IVaと同じである。カップリング反応は、2個のペプチドおよびペプチドカップリング試薬が溶解した有機溶液中で行われる。ペプチドカップリング添加剤および/または有機アミンも存在してよい。上記と同じペプチドカップリング試薬、有機溶媒、ペプチドカップリング添加剤および有機アミンを使用することができる。好ましい実施形態では、任意選択の溶媒としての酢酸エチルと共に、DCCをカップリング試薬として使用する。式Vのテトラペプチドの合成好ましい実施形態では、式V、すなわち、PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7のテトラペプチドは、以下のステップ:aPN2AA5-AA6P6-AA7PC式中、P6は上述の式IVa中でと同じ意味を有し、PN2はN末端アミノ保護基または水素であり、PCは水素付加により切断することができるC末端カルボキシル保護基であるを用意するステップ;bアミノ保護基PN2が存在する場合、アミノ保護基PN2を除去するステップ;cH-AA5-AA6P6-AA7PCに水素付加してH-AA5-AA6P6-AA7を得るステップ;およびdH-AA5-AA6P6-AA7にPNAA4P4の活性化エステルを反応させてPNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7式中、P4はヒドロキシル保護基または水素であり、P6は水素またはアミノ保護基であり、PNは、好ましくは、例えば水素およびパラジウム触媒Pd/Cなどを使用して、水素付加により除去することができる保護基であるを得るステップ、を含む方法により調製される。最も好ましい保護基PNはベンジルオキシカルボニルZである。PNAA4P4の好ましい活性化エステルは4-ニトロフェニルエステルONpである。したがって、好ましくは、AA5-AA7中間体においてベンジルエステルを除去して、N-およびC-無保護AA5-AA7の両方を得る。次いで、このトリペプチドをプレ活性化preactivatedセリン例えば、Z-SertBu-ONpと反応させる。デガレリクス製造このように、本発明はデガレリクスの製造に関し、上で論じた脱保護ステップがこの製造の必須のステップである。好ましい実施形態では、この脱保護ステップは上で論じた37カップリングの後に行われる。さらにより好ましい実施形態では、37カップリングは上で論じたヘプタペプチドの合成の後に行われる、すなわち、本方法は以下のステップ:aAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2またはその塩もしくは溶媒和物を合成するステップ;bAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2とP1AA1-AA2-AA3のカップリングによりP1AA1-AA2-AA3-AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2またはその塩もしくは溶媒和物を得るステップ;cP1AA1-AA2-AA3-AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2またはその塩もしくは溶媒和物を脱保護してデガレリクスまたはその溶媒和物もしくは塩を得るステップを含む。AA1~AA10およびP1、P4、P6およびP8は上に定義したのと同じ意味を有する。特に好ましい実施形態では、P1はアセチルであり;P4はTFAにより切断可能な保護基、好ましくはtBuであり;P6は水素またはTFAにより切断可能な保護基、好ましくはtBuであり;P8はTFAにより切断可能な保護基、好ましくはBocである。最も好ましい実施形態では、ヘプタペプチドを、上記ヘプタペプチド合成を使用して製造する。さらに、脱保護ステップの後に、好ましくは上記精製方法および凍結乾燥方法が続いて行われる。デガレリクスまたはその前駆体の合成、特にヒドロオロチル部分を有するペプチドを含む全ステップでは、pHを9より下、好ましくは8.5より下、さらに好ましくは8より下に保つことが好ましい。pH調整のためにNaHCO3などの弱塩基を使用することが好ましい。カップリングステップ後の全ての抽出はpH2~9、好ましくはpH2.5~8実験の部のステップ6、7、10および11参照の範囲内で行うことが特に好ましい。抽出または洗浄ステップの前にn-ブタノールまたは2-ブタノールなどのC4~5脂肪族アルコールを添加することがさらに好ましい。中間体本発明はまた、本発明の液相製造法に有用な式II~VIにより表されるポリペプチドに関する。式IIの好ましい実施形態P1AA1-AA2-AA3-AA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2II好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。式IIIの好ましい実施形態PNAA1-AA2-AA3III好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。式IV/IVAの好ましい実施形態PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7-AA8P8-AA9-AA10-NH2IV好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。式Vの好ましい実施形態PNAA4P4-AA5-AA6P6-AA7V好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩および溶媒和物が含まれる。式VIの好ましい実施形態AA8P8-AA9-AA10-NH2VI保護基が存在しない場合、官能基は脱保護された基例えば、>NHである。好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。実験の部実験の部で使用する物質実験の部で使用する物質を以下に列挙する。化学薬品:アンモニア水NH3aqアセトニトリルC2H3Nn-ブタノールC4H10O2-ブタノールC4H10OイソプロパノールイソプロパノールC3H8O酢酸ブチルC5H12O2エタノール、99.9C2H6OメタノールCH4OヘプタンC7H16精製水H2O酢酸エチルC3H8O2酢酸C2H4O2酢酸アンモニウムC2H7NO2アセチルイミダゾールC5H6N2OトリエチルアミンC6H15NN-メチルモルホリンC5H11NON-メチルピロリドンC5H9NON,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドC13H22N2ジシクロヘキシルアミンC12H23NN,N’-ジイソプロピルカルボジイミドC7H14N2N,N-ジメチルエチレンジアミンC4H12NN,N-ジメチルホルムアミドC3H7NOジメチルスルホキシドC2H6OS1-ヒドロキシベンゾトリアゾールC6H5N3Op-ニトロフェノールC6H5NO3N-ヒドロキシサクシニミドC4H5NO3クロロギ酸イソブチルC5H9ClO2塩化ナトリウムNaCl水酸化ナトリウム、NaOH水溶液aq塩酸、HCl水溶液aqリン酸H3PO4硫酸水素ナトリウムNaHSO4炭酸水素ナトリウムNaHCO3メタンスルホン酸CH4SO3トリフルオロ酢酸C2HF3O2パラジウム炭素、5Pd-C水素H2トルエンC7H8出発物質:N-t-ブチルオキシカルボニル-D-4-クロロフェニルアラニンBoc-D-4Cpa-OHC14H18NO4N-t-ブチルオキシカルボニル-D-2-ナフチルアラニンBoc-D-2Nal-OHC18H21NO4D-3-ピリジルアラニン塩酸塩H-D-3Pal-OH×2HClC8H12Cl2N2O2N-α-t-ブチルオキシカルボニル-N-4-t-ブチルカルバモイル-D-4-アミノフェニルアラニンBoc-D-4AphtBuCbm-OHC19H29N3O5N-α-t-ブチルオキシカルボニル-N-4-L-ヒドロオロチル-4-アミノフェニルアラニンBoc-4AphL-Hor-OHC19H24N4O7p-トシル酸ロイシンベンジルエステルH-Leu-OBzl×TOSC20H27NO5N-ベンジルオキシカルボニル-O-t-ブチル-セリンZ-SertBu-OHC8H15NO5N-t-ブチルオキシカルボニル-プロリンBoc-Pro-OHC10H17NO4D-アラニンアミド塩酸塩H-D-Ala-NH2×HClC3H8ClNO2N-α-ベンジルオキシカルボニル-N-ε-t-ブチルオキシカルボニル-N-ε-イソプロピル-リジン、ジシクロヘキシルアミン塩Z-LysiPr、Boc-OH×DCHAC34H57N3O6中間体Ac1-3ONa:Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa[7]の合成Boc-D-4Cpa-OHの活性化および単離ステップ1反応ステップBoc-D-4Cpa-OH299.75gをiPrOH3.53kgに溶解し、混合物を攪拌し、HOSu0.184kgおよびDIC0.164kgを添加し、0°Cで1時間攪拌する。沈殿を濾過して、iPrOHで洗浄する。固体を減圧下で乾燥させてBoc-D-4Cpa-OSu[1]を得る。Boc-D-2Nal-OHの活性化および単離ステップ2反応ステップBoc-D-2Nal-OH315.38gをiPrOH5.35kgに溶解し、IBC157.07gおよびNMM116.7gを添加する。追加のNMM10.11gと共に-10°Cに冷却した後、水42mL、iPrOH1.1kgおよびHOSu230.14gの混合物を添加し、混合物を30分間攪拌する。水0.82Lを添加し、沈殿を濾過し、iPrOHで洗浄し、減圧下で乾燥させてBoc-D-2Nal-OSu[2]を得る。Boc2-3OH:Boc-D-4Cpa-D-3Pal-OHの合成ステップ3反応ステップH-D-3Pal-OH×2HCl0.251kgおよびステップ1からのBoc-D-4Cpa-OSu[1]0.397kgをDMSO3.33Lに溶解し、NMM318.8gを添加する。混合物を20°Cで6時間攪拌する。水17Lを添加し、HClを添加することによりpHをpH4.25に調整する。沈殿を濾過し、水に分散させる。次いで、得られたスラリーを濾過し、水で洗浄する。固体を減圧下で乾燥させてBoc-D-4Cpa-D-3Pal-OH[3]を得る。中間体Ac1-3ONa:Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa[7]式IIIaの化合物の合成ステップ4反応ステップステップ3からのBoc-D-4Cpa-D-3Pal-OH[3]447.93gをAcOEt3.4LおよびAcOH675mLの混合物に溶解し、混合物を5°Cに冷却し、その後MSA672.77gを添加する。反応を10°Cで2時間継続し、この溶液にTFA1214.28gを添加してH-D-4Cpa-D-3Pal-OH[4]を得る。ステップ2からのBoc-D-2Nal-OSu[2]412.44gをH-D-4Cpa-D-3Pal-OH[4]に添加し、20°Cで24時間攪拌する。25NH3水0.154Lおよびn-ブタノール4.5Lを添加し、混合物を45°Cで1時間攪拌する。溶液を、水pH9.5の水NaOH水溶液を用い攪拌しながらpHを調整する水で洗浄する。AcOH4.5Lを有機相に添加し、溶液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をAcOH4.5Lに再溶解し、減圧下で再濃縮して油状のBoc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH[5]を得る。Boc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH[5]を水0.09LおよびAcOH1.8Lに溶解する。MSA672.77gを添加し、混合物を35°C未満で2時間攪拌する。溶液をTEA779.16gで中和する。溶液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をトルエン2.5Lに再溶解し、減圧下で油状に再濃縮する。最後のステップを繰り返してH-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH[6]を得る。H-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-OH[6]をトルエン2.0Lに溶解し、アセチルイミダゾール132.14gをトルエン0.25Lに溶解した溶液を添加する。溶液を20°Cで2時間攪拌し、水0.1Lを添加する。n-ブタノール4.5Lを添加し、有機混合物を35°Cにて5NaCl水溶液酸性pH5.5のメタノールおよび水NaOH水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するpH11のメタノールおよび水NaOH水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するメタノールおよび10NaCl水溶液で洗浄する。抽出した有機相を攪拌しながら、そこへヘプタン15Lを20°Cで1時間添加し、得られた懸濁液を20°Cで1時間攪拌しながら放置する。沈殿を濾過により単離し、ヘプタン3.5Lに懸濁する。懸濁液を再度濾過する。ヘプタンによる最後の洗浄ステップおよび濾過を繰り返す。次いで、固体を減圧下で乾燥させてAc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa[7]を得る。重要な中間体の特定ステップ4中間体Ac1-3ONa[7]品質管理許容基準性状白色からわずかに黄色の粉末目視検査同定1587.2±0.4DaMS同定22Nal0.9~1.1、4Cpa0.9~1.1、3Pal0.9~1.1AAAキラル純度L-2Nal≦1.3、L-4Cpa≦0.7、L-3Pal≦2.0GC-MS純度≧90HPLC、面積中間体Z4-7OH×DCHA:Z-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OH×DCHA[15]の合成中間体Boc6-7OBzl:Boc-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzlの合成ステップ5反応ステップBoc-D-4AphtBuCbm-OH379.45gをNMP0.76LおよびAcOEt4.4kgに溶解する。-4°Cで冷却した後、IBC150.2gおよびNMM101.1gを添加し、溶液を-7°Cで0.5時間攪拌してBoc-D-4AphtBuCbm-OAct[8]を得る。H-Leu-OBzl×TOS491.88gをNMP1.5Lに溶解し、AcOEt2.7kgを添加し、引き続いてNMM126.4gを添加する。その後この溶液をBoc-D-4AphtBuCbm-OAct[8]に移し、-10°Cで1時間攪拌する。次いで、水0.5Lを添加する。反応混合物を20°CにてpH8.5の水NaOH水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するpH2.0の水HCl水溶液を用い攪拌しながらpHを調整する水で洗浄する。有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をAcOEt0.6kgに再溶解し、減圧下で油状に再濃縮する。残存している油状物質をAcOEt0.6kgに溶解する。20°Cで攪拌しながらヘプタン15.5Lを添加する。沈殿を濾過により単離し、ヘプタンで洗浄し、その後減圧下で乾燥させてBoc-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzl[9]を得る。Boc-5-7-OBzl:Boc-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzlの合成ステップ6反応ステップステップ5からのBoc-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzl[9]582.7gをAcOEt3.15kgに溶解する。MSA481gを添加し、15°C未満で5時間攪拌し、TEA406gを添加する。DMF0.333kgを添加し、引き続いてTEA101gおよびNMM51gを添加してH-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzl[10]を得る。Boc-4AphL-Hor-OH462.46gをDMF2.09kgおよびAcOEt1.44kgに溶解する。IBC150.24gおよびNMM111.27gを添加し、-10°Cで0.5時間攪拌してBoc-4AphL-Hor-OAct[11]を得る。H-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzl[10]をBoc-4AphL-Hor-OAct[11]に添加し、-10°Cで1.5時間攪拌する。次いで、AcOEt5.4kgおよびn-ブタノール6.0Lを添加する。有機相を20°Cで約pH8の5NaHCO3水溶液NaHCO3水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するpH2.5の10NaCl水溶液H3PO4水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するで洗浄する。DMF0.9Lを有機相に添加し、次いで、これを減圧下で油状に濃縮する。溶液を攪拌しながら水14Lに注ぐ。沈殿をフィルター上で単離し、水で洗浄する。固体を減圧下で乾燥させてBoc-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzl[12]を得る。中間体Z4-7OH×DCHA:Z-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OH×DCHA式Vaの化合物の合成ステップ7反応ステップステップ6からのBoc-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OBzl[12]885.02gをMSA961.1gおよびAcOEt7.2kgの混合物に添加し、2-ブタノール2Lを添加し、得られた混合物を0°Cで6時間攪拌する。次いで、MSAをTEA909.0gで中和する。2-ブタノール1Lに分散した5Pd/C88.5gを添加し、混合物に減圧下20°Cで3時間水素付加する。次いで、Pd/Cを濾過し、2-ブタノールで洗浄してH-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OH[13]を含む溶液を得る。Z-SertBu-OH413.5gをMeCN2.5Lに溶解し、溶液を-5°Cに冷却する。HONp195gを添加し、引き続いてDCC278.5gを添加し、混合物を20°Cで24時間攪拌する。次いで、混合物を濾過し、MeCNで洗浄してZ-SertBu-ONp[14]を得る。NMM354.2g、DMF4.75kgおよびZ-SertBu-ONp[14]をH-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OH[13]の溶液に添加し、混合物を20°Cで3日間攪拌しながら放置する。得られた混合物をpH2.5の10NaCl水溶液HCl水溶液を用い攪拌しながらpHを調整する酸性pHpH2.5の水HCl水溶液を用い攪拌しながらpHを調整する7.5NaHCO3水溶液pH2.5の5NaCl水溶液HCl水溶液を用い攪拌しながらpHを調整する10NaCl水溶液で洗浄する。最終有機相にDCHA181gを添加し、有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をiPrOH3.14kgに再溶解し、減圧下で油状に再濃縮する。残存している油状物質をiPrOH3.14kgに再溶解し、攪拌しながら溶液をAcOEt31.5kgに注ぐ。沈殿するまで攪拌を20°Cで1時間継続し、次いで、沈殿を濾過により単離し、AcOEtで洗浄する。固体を減圧下30°Cで30時間乾燥させてZ-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OH×DCHA[15]を得る。中間体Z4-7OH×DCHA[15]の純度は80以上であるHPLC。ステップ7中間体Z4-7OH[15]品質管理許容基準性状白色から黄色の粉末目視検査同定1972.5±0.4DaMS同定2Ser0.9~1.1、4Aph1.8~2.2、Leu0.9~1.1AAAキラル純度D-Ser≦2.0、D-4Aph47~53、D-Leu≦0.7GC-MS純度1[4Aph5ヒダントインアセチル]Z4-7OHDCHA≦0.5HPLC、面積純度2≧80HPLC、面積中間体H8-10NH2:H-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[21]の合成Boc9-10NH2:Boc-Pro-D-Ala-NH2の合成ステップ8反応ステップBoc-Pro-OH226.02gをiPrOH1.73kgに溶解する。反応混合物を-5°Cに冷却する。IBC143.4gおよびNMM106.2gを添加し、混合物を5°Cで0.5時間攪拌してBoc-Pro-OAct[16]を得る。H-D-Ala-NH2×HCl124.57gをiPrOH1.57kgおよびNMM106.2gの混合物に懸濁する。懸濁液をBoc-Pro-OAct[16]に添加する。反応混合物を10°Cで3時間攪拌しながら放置する。次いで、DMEDA10.6mlを添加する。混合物を濾過し、濾液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をAcOEt1.125kgで再溶解および再濃縮する。残留油をAcOEt1.8kgおよびn-ブタノール0.6Lの混合物に溶解する。有機相をpH2.5の15NaCl水溶液HCl水溶液を用いて攪拌しながらpHを調整するpH9.5の15NaCl水溶液NaOH水溶液を用いて攪拌しながらpHを調整するで洗浄する。有機相を減圧下で濃縮し、AcOEt1.08kgに再溶解し、油状に再濃縮する。AcOEt0.33kgおよびヘプタン0.75Lの混合物を20°Cで添加し、16時間攪拌する。得られた沈殿を濾過し、フィルター上にてAcOEtおよびヘプタンの混合物で洗浄する。次いで、固体を減圧下で乾燥させてBoc-Pro-D-Ala-NH2[17]を得る。中間体H8-10NH2:H-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2式VIaの化合物の合成ステップ9反応ステップステップ8からのBoc-Pro-D-Ala-NH2[17]313.89gをMSA528.61gおよびiPrOH0.785kgの混合物に溶解し、溶液を45°Cで1時間攪拌する。次いで、混合物をTEA607.14gで中和してH-Pro-D-Ala-NH2[18]を得る。Z-LysiPr、Boc-OH×DCHA603.83gをAcOEt1.17kgに懸濁し、12NaHSO4水溶液水15NaCl水溶液で洗浄する。抽出したZ-LysiPr、Boc-OH[19]の有機相をH-Pro-D-Ala-NH2[18]に添加する。AcOEt0.135kgに溶解したHOBt183.79gおよびDCC227.0gを添加し、混合物を20°Cで0.5時間攪拌する。次いで、水0.2Lを添加する。混合物を濾過し、AcOEtで洗浄する。合わせた濾液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をAcOEt0.9kgに溶解し、濾過し、溶液をpH2.5の水HCl水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するpH9の水NaOH水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するpH7の10NaCl水溶液HCl水溶液またはNaOH水溶液を用い攪拌しながらpHを調整するで洗浄する。有機相を減圧下で濃縮してZ-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[20]を得る。Z-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[20]をエタノール0.04kgおよび水0.5Lに溶解し、5Pd/C50gを添加する。6MのHClを添加することによりスラリーをpH2.5に酸性化し、20°Cで水素付加する。反応完了後、触媒を濾過により除去し、32NaOHを添加することによりpHをpH7.0に上げる。その後、エタノールを減圧下で蒸発により除去する。n-ブタノール1Lを得られた水相に添加し、NaOH水溶液でpHをアルカリ性pH9に調整し、抽出を開始する。このステップを繰り返す。合わせた有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をAcOBu0.5Lに溶解し、減圧下20°Cで濃縮し、AcOBu0.5Lに再溶解する。次いで、ヘプタン2Lを50°Cで1時間かけて添加する。懸濁液を0°Cで16時間攪拌しながら放置する。沈殿を濾過により単離し、ヘプタンで洗浄する。最後に、固体を減圧下で乾燥させてH-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[21]を得る。中間体H8-10NH2[21]の純度は95以上であるHPLC。ステップ9中間体H8-10NH2[21]品質管理許容基準性状白色からわずかに黄色の粉末目視検査同定1456.3±0.4DaMS同定2LysiPr0.9~1.1、Pro0.9~1.1、Ala0.9~1.1AAAキラル純度D-LysiPr≦0.3、D-Pro≦0.3、L-Ala≦0.5GC-MS純度≧95HPLC、面積最終中間体式IIの化合物へのセグメント縮合中間体Z4-10NH2:Z-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[22]式IVgの化合物ステップ10反応ステップステップ7からのZ-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OH×DCHA[15]1153.41gをDMF2.1kgに溶解する。次いで、HOBt153.2gをAcOEt6.9kgおよびステップ9からのH-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[21]569.5gと共に添加する。全固体が溶解したら、MSA96.1gを添加する。溶液を5°C未満に冷却し、AcOEt0.810kgに溶解したDCC309.5gを添加する。温度を20°Cに上げ、反応を24時間継続する。Z-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-OH×DCHA[15]の転換は96以上であるHPLC。AcOEt4.95kgおよび水5.5Lを添加し、混合物を攪拌し、濾過する。攪拌しながら、7.5NaHCO3aq35Lを濾液に添加する。相を分離し、有機層を7.5NaHCO3pH3の水HCl水溶液を用い攪拌しながらpHを調整する水でさらに洗浄する。最終有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をEtOH0.405kg、その後AcOEt0.45kgで再濃縮する。残存している油状物質をEtOH0.405kgに溶解し、AcOEt0.45kgおよびAcOBu4.6Lを添加する。溶液を20°Cで1時間かけてヘプタン27.6Lに添加する。次いで、沈殿を濾過し、ヘプタンで洗浄する。固体を減圧下で最大限に乾燥させてZ-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[22]を得る。Z-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[22]の純度は70以上であるHPLC。最終中間体Ac1-10NH2:Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[24]ステップ11反応ステップステップ10からのZ-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[22]1409.67gをEtOH10.98kgおよび水3.2Lの混合物に添加し、溶液が均質になるまで攪拌する。5Pd/C211gを添加する。HCl水溶液によりpH2.5にpH制御しながら20°Cで混合物に水素付加する。触媒を濾過により除去し、NaOH水溶液によりpHをpH3.8に調整する。濾液を減圧下で油状に濃縮する。EtOH4.7kgを油状物質に添加し、再濃縮する。次いで、AcOEt5.4kgを油状物質に添加し、再濃縮し、この工程を再度繰り返してH-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[23]を得る。H-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[23]をAcOEt1.125kgに分散させ、次いで、HOBt153.16gを添加し、混合物を0°Cに冷却する。ステップ4からのAc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-ONa[7]609.05gをDMSO2.5Lに溶解し、この溶液をH-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[23]を含むスラリーと混合し、AcOEt0.45kgに溶解したDCC309.5gを添加する。混合物を5°Cで24時間攪拌する。[23]の転換は96以上であるHPLC。水150mLおよびDMSO0.5Lを添加し、攪拌を20°Cで3時間より長く継続する。沈殿を濾過し、AcOEtおよびDMSOの混合物で洗浄する。濾液を合わせて、n-ブタノール17Lを添加する。有機溶液をpH2.5の水HCl水溶液を用い攪拌しながらpHを調整する7NaHCO3aq10NaCl水溶液必要に応じて、HCl水溶液を用い攪拌しながら混合物のpHをpH7.0に中和するで洗浄する。DMF4.75kgを添加し、有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質を激しい攪拌下、20°Cで1時間かけて、水50Lにゆっくり添加する。沈殿をフィルター上で単離し、水で2回洗浄する。その後、固体を減圧下で乾燥させてAc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[24][最終中間体]を得る。[24]の純度は70以上であるHPLC。最終中間体Ac1-10NH2の粗製デガレリクス[25]への脱保護ステップ12反応ステップステップ11からのAc-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-SertBu-4AphL-Hor-D-4AphtBuCbm-Leu-LysiPr、Boc-Pro-D-Ala-NH2[24]式IIbの化合物1844.59gを20°CでTFA28.3kgに溶解する。溶液を20°Cで24時間攪拌する3個の保護基の除去。[24]の転換は99以上であるHPLC。次いで、反応混合物を水74L、AcONH419.1kg、AcOH18.4LおよびEtOH14.52kgの冷溶液10°C未満と混合する。2つの溶液の混合中、温度を25°C未満に保つ。必要に応じてTFAまたはAcONH4により最終溶液のpHをpH3に調整して、Ac-D-2Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-4AphL-Hor-D-4AphCbm-Leu-LysiPr-Pro-D-Ala-NH2[25][粗製デガレリクス]の溶液を得る。ステップ13精製および凍結乾燥粗製デガレリクスの溶液を、逆相カラムを通して吸い上げる。デガレリクスをEtOH/水中0.12TFAの勾配によりカラムから溶離する。純度95以上の分画をEtOH/水中1AcOHの勾配を使用して逆相カラムで再精製する。高純度の分画を凍結乾燥する。"