"アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを製造する方法であって、アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントを用意し、ここでXは第一の保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントを用意し、ここでYは第二の保護基であり;第一のペプチドフラグメントから第一の保護基を除去し;そしてN末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる、の各段階を含む上記方法。第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントが固相ペプチド合成により製造され、第二のペプチドフラグメントが固相合成により製造される場合、第二のペプチドフラグメントを担体から切り出してから、N末端が脱保護された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせるか、及びまたは、第一のペプチドフラグメントが固相ペプチド合成により製造される場合、第二のペプチドフラグメントにカップリングされた第一のペプチドフラグメントを担体から切り出す、請求項1に記載の方法。第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、C末端アミノ酸残基を担体に連結し、続いてC末端が担体と連結された残基のN末端に適切に保護されたアミノ酸を加えることにより提供される、請求項2に記載の方法。C末端が担体に連結された残基のN末端に続いて加えるべき第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのアミノ酸は、Boc及びFmocからなる群から選択される保護基でそれぞれ保護される、請求項3に記載の方法。第一の保護基はFmocである、請求項1~4のいずれかに記載の方法。第二の保護基は、Boc及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される酸に不安定な保護基である、請求項1~5のいずれかに記載の方法。第二のペプチドフラグメントのヒスチジン残基は、トリチル、Boc、Bom及びBumからなる群から選択される保護基で側鎖において保護される、請求項1~6のいずれかに記載の方法。第二のペプチドフラグメントのアスパラギン酸酸残基は、tertブチルエステル保護基を用いて側鎖で保護される、請求項1~7のいずれかに記載の方法。アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントをペプチド合成により固相合成により用意し、ここでXはFmoc保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントをペプチド合成により固相合成により用意し、ここでYは、Boc及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される酸に不安定な保護基であり、第二のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;担体から第二のペプチドフラグメントを切り出し;そして任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーにより、及びまたは結晶化などによって、切り出された第二のペプチドフラグメントを精製し;任意にピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びジシクロヘキシルアミンからなる群から選択される二級アミンを加えるることによって、第一のペプチドフラグメントからFmoc保護基を除去し;N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに精製した第二のペプチドフラグメントを加えることによって、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせ;第二のペプチドフラグメントにカップリングした担体に連結された第一のペプチドフラグメントを担体から切り出し;そして任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーなどによって、第二のペプチドフラグメントに結合した、切り出された第一のペプチドフラグメントを精製し、担体は任意に官能基化ポリマー、たとえばポリスチレン、ポリジメチルアクリルアミド及びポリエチレングリコールからなる群から選択されるポリマーである、の各段階を含む、請求項1~8のいずれかに記載の方法。第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのC末端アミノ酸は、リンカー、任意に4ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸によって官能基化ポリマーに結合している、請求項9に記載の方法。アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを含む医薬組成物を製造する方法であって、請求項1~10のいずれかに記載の方法に従ってペプチドを製造し;そして段階で製造したペプチドを含む医薬組成物を製造する、の各段階を含む上記方法。医薬組成物は、組成物のpHを生理学的に許容可能なレベルに調整するのに十分な量のリン酸塩緩衝液をさらに含む、請求項11に記載の方法。医薬組成物はさらにLヒスチジンを含む、請求項11または12の方法。医薬組成物はさらに、マンニトール及びショ糖からなる群から選択される増量剤をさらに含む、請求項11~13のいずれかに記載の方法。医薬組成物は注射可能な剤形として提供される、請求項11~14のいずれかに記載の方法。本発明の目的は、アスパルチミド形成を低減し、さらには回避し得る、テヅグルチドの製造法を提供することである。従って本発明のさらなる目的は、容易に実施可能であり且つ安価なテヅグルチドの製造法を提供することである。さらにテヅグルチドのかかる製造法は工業用スケールに適合しなければならない。本発明のさらなる目的は、テヅグルチド組成物の商業的に許容可能な製造方法を提供することである。本発明の態様に従えば、アセンブリを二つのフラグメントに分けることを特徴とする、テヅグルチドの製造方法が提供される。本発明に従う方法は、公知の合成法と比較して一連の利点を提供しうることが見出された。特に、フラグメントに基づくアセンブリによりペプチドを製造することによって、34位のAspGlyにおける転位のレベルを低減しうることが見出された。このことは、ペプチドは固相アセンブリによって5位までアセンブリしうることを意味する。テヅグルチドの14位に相当するテトラペプチドを別にアセンブリして、次いで任意に精製してβAsp類似体を除去してから、固相上で533フラグメントとカップリングさせることができる。従って、ペプチドはこのテトラペプチドフラグメントのカップリングの後、ピペリジンなどに暴露されない。驚くべきことに、本発明に従う方法はペプチドの純度を高めるだけでなく、全体の収量も高める。これらの目的並びに次の記載から明らかになる他の目的は、独立請求項に記載の主題により達成される。本発明の態様の幾つかは、従属項の主題によって定義される。一態様において、本発明は、アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを製造する方法であって、アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントを用意し、ここでXは第一の保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントを用意し、ここでYは第二の保護基であり;第一のペプチドフラグメントから第一の保護基を除去し;そしてN末端が脱保護された、担体に担持された第一のペプチドフラグメントに、第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる、の各段階を含む上記方法に関する。一態様において、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、固相ペプチド合成により製造される。たとえば、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、担体にC末端アミノ酸残基を連結し、続いてC末端が担体に連結された残基のN末端に、適切に保護したアミノ酸を加えることにより提供される。特に第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのC末端が担体に連結された残基のN末端に続いて加えるべきアミノ酸は、Boc及びFmocからなる群から選択される保護基で保護することができる。本発明の別の態様では、第一の保護基はFmocである。本発明の別の態様では、第二の保護基は、Boc及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される、酸に不安定な保護基である。通常、第二のペプチドフラグメントのヒスチジン残基は、トリチル、Boc及びBumからなる群から選択されるような保護基を用いて側鎖で保護することができる。また、第二のペプチドフラグメントのアスパラギン酸残基は、tertブチルエステル保護基を用いて側鎖で保護することができる。別の態様では、N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングする前に、第二のペプチドフラグメントを担体から切り出す。ある態様では、N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングする前に、切り出した第二のペプチドフラグメントを任意にクロマトグラフィー及びまたは結晶化によって精製する。一態様に従えば、Fmoc保護基は、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びジシクロヘキシルアミンからなる群から選択される二級アミンを加えることにより、第一のペプチドフラグメントから除去することができる。さらなる態様に従えば、本発明はさらに第二のペプチドフラグメントにカップリングした第一のペプチドフラグメントを担体から切り出すことを含む。別の態様では、本発明に従う方法はさらに、切り出した第二のペプチドフラグメントにカップリングした第一のペプチドフラグメントを、クロマトグラフィーにより精製することを含む。特定の態様では、本発明は、アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを製造する方法であって、アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントをペプチド合成により用意し、ここでXはFmoc保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントをペプチド合成により用意し、ここでYは、Boc及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される、酸に不安定な保護基であり、第二のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;担体から第二のペプチドフラグメントを切り出し;そして任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーなどにより、切り出した第二のペプチドフラグメントを精製し;任意にピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びジシクロヘキシルアミンからなる群から選択される二級アミンを加えることにより、第一のペプチドフラグメントからFmoc保護基を除去し;N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに、精製した第二のペプチドフラグメントを加えることにより、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせ;第二のペプチドフラグメントにカップリングした、担体に連結された第一のペプチドフラグメントを担体から切り出し;そして任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーなどによって、第二のペプチドフラグメントにカップリングした、切り出した、第一のペプチドフラグメントを精製する、の各段階を含む上記方法に関する。一態様に従えば、担体は、ポリスチレン、ポリジメチルアクリルアミド及びポリエチレングリコールからなる群から任意に選択される、官能基化ポリマーである。通常、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのC末端アミノ酸は、リンカー、任意に4ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸により官能基化ポリマーに結合されている。ある態様では、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、臭化水素、塩化水素及びフッ化水素からなる群から選択される酸によって、または塩基、任意に水酸化物によって、担体から切り出される。別の側面では、本発明は、アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを含む医薬組成物を製造する方法であって、上述のように本発明の方法に従ってペプチドを製造し;そして段階で製造したペプチドを含む医薬組成物を製造する、の各段階を含む上記方法に関する。一態様において、本発明の医薬組成物は任意に、組成物のpHを生理学的に許容可能なレベル、たとえば約6~約9、または約65~約8、または約7~約75の間のpHに調整するのに十分な量のリン酸塩緩衝液をさらに含む。別の態様では、医薬組成物はさらにLヒスチジンを含む。さらに医薬組成物は、マンニトール及びショ糖からなる群から任意に選択される増量剤を含むことができる。特定の態様に従えば、医薬組成物は注射可能な剤形として提供される。さらなる態様では、本発明は、アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドに関し、該ペプチドは、上述の本発明の方法により得ることが可能である。本発明は、フラグメントに基づくアセンブリによってペプチドを合成することにより、テヅグルチドの合成の間にアスパルチミド副生成物が形成する可能性を低減できるか、さらには回避することができるという知見に基づく。本発明に従う方法により、テヅグルチドを高収率及びまたは高純度で提供することができる。さらには本発明に従う方法を使用して、工業的プロセススケールで高収率及びまたは高純度でテヅグルチドを製造することができる。さらに、本発明の方法に従ってテヅグルチドを製造することにより、少なくとも80の未精製品純度が達成できることが見出された。純度及び収率は、ペプチド合成の全ての経路で重要な観点である。純度は、薬理学的に活性な関連す純物の存在の程度により表される。ペプチド合成において、それぞれの段階で精製を繰り返すと、最終ペプチドの収率はより低くなる。本発明は、既知の固相合成法と比較して、固相方法論により、目的とするペプチドであるテヅグルチドの改善された収率と共に高い純度を達成する方法を提供する。本発明の方法を特定の態様及び図面を参照して記載するが、本発明はこれらに限定されない。本明細書及び請求の範囲で~を含むなる用語を使用する場合、これは他の要素または段階を除外しない。本発明の目的に関して、~からなるなる用語は、~を含むの用語の任意選択の態様であると考えられる。以後、ある群が少なくとも幾つかの態様を含むと定義される場合、このことは場合によりこれらの態様のみからなる群を開示するとも理解される。単数名詞、たとえばaまたはan、theを参照する際に不定冠詞または定冠詞を使用する場合、特に記載しない限り、これは複数の名詞を包含する。本発明の文脈で約なる用語は、当業者が当該特徴の技術的効果が確実であると理解するであろう区間精度を示す。この用語は通常、表示数値の±10の偏差を示し、ある態様では±5の偏差を示す。さらに本明細書の記載及び請求の範囲における第一、第二、第三などの用語は、類似の要素を区別するために使用され、必ずしも逐次順や時系列で記載するとは限らない。このように使用される用語は、適切な状況下では交換可能であり、本明細書に記載の本発明の態様は、本明細書に記載または示されたものと異なる順番で操作可能であることが理解される。用語のさらなる定義は、当該用語を使用する文脈中で与えられる。一態様において、本発明は、アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを製造する方法であって、アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントを用意し、ここでXは第一の保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントを用意し、ここでYは第二の保護基であり;第一のペプチドフラグメントから第一の保護基を除去し;そしてN末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに、第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる、の各段階を含む上記方法に関する。すなわち、本発明は、以下の配列:His1Gly2Asp3Gly4Ser5Phe6Ser7Asp8Glu9Met10Asn11Thr12Ile13Leu14Asp15Asn16Leu17Ala18Ala19Arg20Asp21Phe22Ile23Asn24Trp25Leu26Ile27Gln28Thr29Lys30Ile31Thr32Asp33を有する、一本鎖の非グリコシル化33アミノ酸ペプチドである、テヅグルチドの製造方法に関する。GLP2のこの類似体は、天然GLP2と1個のアミノ酸が異なる。すなわち2位のアラニンがグリシンで置き換えられている。ポリペプチド、ペプチド、オリゴペプチド及びタンパク質なる用語は、連続するアミノ酸残基のポリマーまたはオリゴマーを表すものとして互換的に使用される。そのようなポリマー中のアミノ酸は、隣接するアミノ酸残基のカルボキシル基とアミノ基との間のペプチド結合によって一緒に連結している。本明細書中に記載するように、アミノ酸なる用語は、アミノ酸分子またはアミノ酸残基自体をさすだけでなく、アミノ酸残基、たとえばペプチドの一部であるアミノ酸残基を表す省略形、文字,記号または用語のリストをさす。。アミノ酸は、一般的に知られる三文字記号により、またはIUPACIUBBiochemicalNomenclatureCommissionにより推奨される1文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及される。他に記載しない限り、ペプチドのN末端は、Hであるか、ペプチド結合であることができる。他に記載しない限り、ペプチドのC末端はOHまたはペプチド結合であることができる。他に記載しない限り、すべてのアミノ酸の位置の番号は、配列番号1により表されるテヅグルチドの塩基配列に従う位置番号である。本発明の文脈において、ペプチドフラグメントなる用語は、テヅグルチドの特定のフラグメント、特にアミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントここでXは第一の保護基である、およびアミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントここでYは第二の保護基であるを含む。本発明の一態様において、テヅグルチドは、一つのアミノ酸またはペプチドフラグメントのカルボキシル基またはC末端を、別のアミノ酸またはペプチドフラグメントのアミノ基またはN末端にカップリングすることにより合成する。化学的ペプチド合成は通常、ペプチドのC末端で開始し、N末端で停止する。これは、N末端で開始するタンパク質生合成の方向とは逆方向である。それぞれの合成段階の間で完全なカップリングを確実にするために、アミノ酸は典型的には過剰量使用されるため、それぞれのアミノ酸が保護されない反応ではアミノ酸の重合がよくみられる。この重合を抑えるために、本発明に従う方法では通常、保護基を使用する。好適な保護基は当業者によく知られている。ペプチドフラグメントからの保護基の除去は、適切な脱保護試薬を加えることにより行うことができ、この脱保護試薬は使用される保護基によって異なる。カップリングしたアミノ酸のαアミノ官能基の典型的な標準的保護基は、強酸との処理により除去することができるBoc、または塩基で除去できるFmocである。本明細書中で使用する略語Fmoc及びBocは、それぞれ9Hフルオレン9イルメトキシカルボニル及びtブチルオキシカルボニルを意味する。tBoc基は、通常、ペプチドの末端アミンを保護するために使用され、直交戦略で側鎖を保護するために、より酸に安定な基を使用しなければならない。Boc基は、Boc無水物と適切な塩基を用いてアミノ酸に付加することができる。Fmocは現在広く使用されている保護基である。Fmocは非常に温和な塩基性条件下で切断される。これにより、塩基性条件下で安定であり温和な酸に不安定な保護基、たとえばBoc及びtブチル基を、目的とするペプチドのアミノ酸残基の側鎖で使用することができる。本発明の方法に従えば、第一のペプチドフラグメントは第一の保護基を含み、第二のペプチドフラグメントは第二の保護基を含む。ある態様では、第一の保護基は第二の保護基とは異なる。あるいは、第一及び第二の保護基は同一であってもよい。さらに、ペプチドのプレ配列中の側鎖の官能基は通常、カップリング段階の間に保護されている。ペプチドで通常みられるアミノ酸の半分以上が、反応性基を含む側鎖をもつ。ペプチド合成では、特に固相合成では、使用されるやや厳しい条件及び、すべての化学反応で最高レベルの効率を達成する必要性により、これらすべての潜在的に反応性の基をマスクするのが通常である。日常的な合成に関しては、トリフルオロ酢酸で除去される保護基が通常使用される。これによって担体からペプチドを切断または脱離させると同時に、ペプチドを全体的に脱保護できるためである。さらに、合成の間に選択的に除去することができる広範囲の基も利用可能であるため、ペプチド鎖中の個々の残基の側鎖を選択的に修飾することができる。たとえば、Boc基はアミノ官能基で使用することができ、tertブチルエステルは酸性基で使用することができ、tertブチルエステルはヒドロキシル基で使用することができる。側鎖保護に適したさらに別の保護基は容易に入手可能であり、当業者によく知られている。一態様において、第二のペプチドフラグメントを、N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントにカップリングする。アミド結合形成の殆どの方法では、カルボキシ成分を化学的に活性化する。有機合成で一般的に使用される方法は、ペプチド合成で使用するには過酷すぎると通常みなされており、過度に活性化された中間体の形成につながる。これらの中間体は反応において非選択的であり、結果として副反応を起こす傾向がある。従って、ペプチド化学者は、主として、予め形成されたかまたはインサイチュで生成する活性エステルの形成に基づく、より温和な活性化方法を求めてきた。保護化フラグメントと樹脂に結合したNフラグメントとの縮合速度は、通常、フラグメントの濃度と共に増加する。通常、できるだけ高い濃度のフラグメント溶液を適用する。フラグメント縮合に適切なカップリング試薬は容易に入手可能であり、当業者によく知られている。DMSOは溶媒として使用することができる。さらに、DCCHOBtまたはDICHOBtを縮合剤として使用することができる。ある態様では、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントを固相ペプチド合成により製造する。たとえば、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、C末端アミノ酸残基を担体に連結させ、続いてC末端が担体に連結された残基のN末端に、適切に保護したアミノ酸を順番に付加することにより製造することができる。固相ペプチド合成は、溶液ペプチド合成に伴う中間精製問題の多くを克服する目的で導入された。固相合成の間、鎖の一端を不溶性担体に固定しながら、アミノ酸を任意の所望の配列のペプチドに組み込む。所望の配列が担体上に一緒に結合されたら、ペプチドを担体から脱ブロックする。SPPSは、完全自動化または半自動化鎖アセンブリ化学に適しているという利点を一般的にもつ。固相合成の原理は、当業者にはよく知られている。特に、目的とするぺプチドのC末端アミノ酸残基を、そのカルボキシル基を介して不溶性担体に結合させる。アミノ酸残基鎖中の任意の官能基は、ペプチドアセンブリの間に使用される反応条件によって影響を受けない不変の保護基でマスクすることができる。初期の樹脂負荷の間にαアミノ基をマスクしている一時的な保護基を除去する。通常、過剰量の第二のアミノ酸を導入する。このアミノ酸のカルボキシ基は、活性化エステルの生成によって、またはカップリング剤との反応によって、アミド結合形成のために活性化されている。適切なカップリング剤は容易に入手可能であり、当業者によく知られている。カップリング後、過剰量の試薬を洗浄により除去することができ、ジペプチドのN末端から保護基を除去してから、第三のアミノ酸残基を付加することができる。このプロセスを、所望のペプチド配列がアセンブリされるまで繰り返す。最終段階では、ペプチドを担体から脱離させ、側鎖保護基を除去する。通常、側鎖保護基及び担体結合は、同一条件下で保護基が除去され、アセンブリされたペプチドが脱離するように選択される。上述のαアミノ保護スキームか、当業界で知られる任意の他の保護スキームのいずれかを使用する固相法によりペプチド合成を設計する際、構成成分であるアミノ酸の任意の反応性側基は、鎖アセンブリの間じゅう不都合な化学反応から保護することが通常望ましい。また、種々の側基を保護するために選択される化学基は、αアミノ保護基を除去するのに使用される試薬による除去に対して耐性であることが望ましい。さらに、成長しつつあるペプチド鎖と担体との結合は、鎖アセンブリの間にいずれかのタイプのαアミノ保護基を除去するために使用される試薬に対して安定でなければならない。一態様において、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのC末端の担体に連結された残基のN末端に順に加えられるアミノ酸は、Boc及びFmocからなる群から選択される保護基によってそれぞれ保護される。Fmocαアミノ保護スキームの場合には、側基保護用の官能基は通常、Fmocを除去するのに使用される塩基性試薬に対して耐性であるように選択される。実際、これらの側鎖保護基は通常、ペプチド鎖がアセンブリされた後、温和な酸性試薬によって除去することができる。Bocαアミノ保護スキームを使用する場合、側鎖保護基は通常、各サイクルでBoc基を脱保護するのに使用される温和な酸試薬による除去に対して耐性であるように選択する。実際、Bocαアミノ保護スキームのためのこれらの側鎖保護基は通常、ペプチド鎖がアセンブリされた後に無水HFにより除去することができる。従って、ある態様では、Fmocαアミノ保護で通常使用される側鎖保護基はBocαアミノ脱保護で使用される条件下では安定ではなく、αアミノ保護スキームのこの二つのタイプは、固相ペプチド合成によるペプチド鎖のアセンブリでは混用されない。メリーフィールドSPPS及びまたはを使用するFmoctBuSPPSは当業者によく知られている。詳細には、メリーフィールド法に従って、通常実施されているように、C末端アミノ酸は、ヒドロキシメチルフェニルアセトアミドメチルポリスチレンでベンジルエステルを形成することによって担体に結合させることができる。Boc基は、αアミノ基の一時的な保護のために使用することができる。この基の除去は、純粋なトリフルオロ酢酸で、またはジクロロメタン中のTFAで実施することができる。得られたトリフルオロアセテートは、たとえばカップリングさせる前にDCM中のジイソプロピルエチルアミンで中和することができるか、またはカップリング反応の間にインサイチュで中和することができる。カップリングは、加えられるアミノ酸をDCM中ジシクロヘキシルカルボジイミドで活性化することにより、またはDMF若しくはNメチルピロリドン中で予備形成したアミノ酸対称無水物若しくはベンゾトリアゾールエステルを使用することにより実施することができる。樹脂からのペプチドの脱離及び側鎖保護基の除去は、無水フッ化水素で実施することができる。保護の除去の際に選択性を実現するために段階的酸分解の方法を使用するメリーフィールドアプローチとは異なり、FmoctBu法は、αアミノ基の保護のための塩基不安定性Fmoc基と酸不安定性側鎖保護基を使用する、直交保護基戦略に基づく。保護の除去は全く異なる化学的機構により行うことができるので、メリーフィールドアプローチで使用されるものよりもかなり温和な条件下で除去される側鎖保護基及び結合試薬を使用することができる。たとえば、tブチル及びトリチル系の側鎖保護及びアルコキシベンジル系のリンカーは、これらがTFAで除去できるので使用することができる。一時的なFmoc保護基は、DMF中、20ピペリジンで除去することができる。カップリングは、DMF若しくはNMP中、予備形成した活性エステルか、インサイチュでベンゾトリアゾイルエステルを生成する活性化試薬を使用して実施することができる。樹脂からのペプチド切り出し及び広範囲の側鎖脱保護は、95TFAを用いて行うことができる。本発明の一態様において、第一の保護基はFmocである。別の態様では、第二の保護基は、tブトキシカルボニル及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される酸不安定性保護基である。本発明の文脈において、酸不安定性保護基なる用語は通常、Boc及びベンジル基などの塩基性条件下で安定である保護基を表す。上述のように、構成成分のアミノ酸の任意の反応性側基は通常、鎖アセンブリの間を通して、不都合な化学反応から保護される。一態様において、第二のペプチドフラグメントのヒスチジン残基は、トリチル、tブトキシカルボニル、ベンジルオキシメチル及びtブトキシメチルからなる群から選択される保護基を用いて側鎖を保護する。さらに第二のペプチドフラグメントのアスパラギン酸残基は、tertブチルエステル保護基を用いて側鎖を保護することができる。本発明の別の態様では、N末端を脱保護した、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる前に、第二のペプチドフラグメントを担体から切り出す。保護化フラグメントの担体からの切り出しは当業者によく知られている。特定の態様では、N末端で脱保護した、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる前に、切り出した第二のペプチドフラグメントを、任意にクロマトグラフィー及びまたは結晶化により精製する。本明細書中で使用する場合、精製なる用語は、不純物からペプチドを分離するのに適した当業界で知られる任意の分離法を含み、クロマトグラフィー分離、限外濾過、等電点沈殿または任意の他の好適な分離法が含まれる。本発明の文脈において、クロマトグラフィーなる用語は、混合物を分離するための一連の実験室技術を含む。通常、移動相に溶解した混合物を固定相に沿って通過させ、これにより移動相と固定相との間の分配差に基づいて、目的とするペプチドを混合物中の副生成物から分離する。本発明の文脈において、液体クロマトグラフィーは分取用でも分析用でもよい。分取用クロマトグラフィーの目的は通常、さらに使用するために混合物の成分を分離することであり、したがって精製の一形態である。分析用クロマトグラフィーは、通常、より少量の物質で実施し、混合物中の分析物の相対的な割合を測定するためのものである。この二つの方法は相互排他的ではない。本明細書中で使用するとき、結晶化なる用語は、液相若しくは供給流を冷却することにより、または結晶を形成するように所望の生成物の溶解度を低下させる沈殿剤を添加することにより、液相若しくは供給流からペプチド生成物を非常に純粋な形態で分離することを含む。特定の態様では、N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングする前に、切り出した第二のペプチドフラグメントを逆相HPLCで精製する。別の態様に従えば、Fmoc保護基は、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びジシクロヘキシルアミンからなる群から選択される二級アミンを加えることにより、第一のペプチドフラグメントから除去する。別の態様に従えば、本発明の方法は、さらに第二のペプチドフラグメントにカップリングした第一のペプチドフラグメントを担体から切り出すことを含む。特に、本発明の方法はさらに、任意にたとえば逆相HPLCなどのクロマトグラフィーにより、第二のペプチドフラグメントにカップリングした切り出した第一のペプチドフラグメントを精製することを含む。特定の態様では、本発明は、アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを製造する方法に関し、該方法は、たとえば固相ペプチド合成により、アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントをペプチド合成により用意し、ここでXはFmoc保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;たとえば固相ペプチド合成により、アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントをペプチド合成により用意し、ここでYは、Boc及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される、酸に不安定な保護基であり、第二のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;担体から第二のペプチドフラグメントを切り出す;及び任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーにより、及びまたは結晶化によって、切り出した第二のペプチドフラグメントを精製し;任意にピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びジシクロヘキシルアミンからなる群から選択される二級アミンを加えることによって、第一のペプチドフラグメントからFmoc保護基を除去し;N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに精製した第二のペプチドフラグメントを加えることによって、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせ;第二のペプチドフラグメントにカップリングした、担体に連結された第一のペプチドフラグメントを担体から切り出し;そして任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー及びまたは結晶化によって、第二のペプチドフラグメントにカップリングした切り出した第一のペプチドフラグメントを精製する、の各段階を含む。原理上は、固相ペプチド合成に有用であることが知られている担体はいずれも、本発明に従う方法で使用することができる。一態様に従えば、担体は、官能基化ポリマーまたは樹脂であり、任意にポリスチレン、ポリジメチルアクリルアミド及びポリエチレングリコールからなる群から選択される。バッチ式及び連続流として知られる二つの実用的な手順が通常使用される。これらは主として合成の各段階の間で樹脂を洗浄するために使用される方法が異なる。バッチ式プロセスでは、ぺプチジル樹脂はフリット反応容器内に含まれ、試薬は容器上部を通して少しずつ添加され、窒素の陽圧または真空を好適に適用することによって除去する。連続流合成では、樹脂はカラムに充填されており、洗浄は、ポンプで溶媒を樹脂床に通すことによって行う。任意に、本発明の方法はバッチ式プロセスである。第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのC末端アミノ酸は、リンカーによって官能基化ポリマーに結合させることができ、リンカーは任意に4ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸であってもよい。しかしながら、原理上、固相ペプチド合成で有用であることが知られるリンカーはいずれも本発明の方法で使用することができる。好適なリンカーは容易に入手可能であり、当業者によく知られている。ある態様では、第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、任意にトリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、臭化水素、塩化水素及びフッ化水素からなる群から選択される酸によって、または塩基、任意に水酸化物によって、担体から切り出される。さらなる側面において、本発明は、アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを含む医薬組成物を製造する方法であって、上述のように本発明の方法に従ってペプチドを製造し;そして段階で製造したペプチドを含む医薬組成物を製造する、の各段階を含む上記方法に関する。すなわち、本発明はまた、配列番号1のアミノ酸配列を含むペプチドの商業的に好適な医薬組成物を提供し、この組成物は商業的に許容可能なプロセスを使用して製造することができる。本明細書中で使用する場合、製造、製剤及び組成物なる用語は、本明細書中で互換的に使用することができ、二種以上の成分、または物質の組み合わせをさす。本明細書中で使用する場合、医薬組成物とは、有意な量または有効量で被験者に投与した時に、測定可能な特定のまたは選択された生理学的活性をもつ組成物を指すために使用される。本発明の組成物は、医学的に有効量、すなわち治療的または診断的に有用な量のテヅグルチドを含む。そのような量は、組成物の目的の最終用途に応じて決定することができる。テヅグルチドの治療的有用量は、当業者には一般に知られている。本明細書中で使用する場合、有効量及び十分量は互換的に使用することができ、組成物中に配合される場合には、目的の組成物の効果または生理学的効果を達成するのに十分な量のテヅグルチドを指す。従って、治療的有効量とは、薬学的に活性なペプチドが有効であることが知られている病気の治療において、非毒性であり且つ、治療的、予防的または診断的結果を達成するのに十分量の薬学的活性ペプチドをさす。様々な生物学的因子は、ある物質がその目的とする機能を果たす能力に影響を与えうることが認識されている。従って、有効量または治療的有効量は、場合によりかかる生物学的因子に依存することがある。さらに治療的効果の達成は、当業界で知られる評価を使用して医師または他の有資格医療関係者により測定することができるが、治療に対する個人差及び応答により、治療効果の達成は主観的な判断であることが認識されている。有効量の決定は、薬学及び医学の当業者の能力の範囲内である。一態様において、薬学的組成物はさらに、組成物のpHを生理学的に許容可能なレベルに調整するのに十分な量のリン酸塩緩衝液を含む。本明細書中で使用する緩衝液なる用語は、使用しない場合には起きてしまうであろう、クロマトグラフィー溶液などの溶液のpHが継時で変化する傾向を低減させる化学化合物を指す。好適な緩衝液としては、限定されないが、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩、グリシルグリシン、グリシン、ヒスチジン、リジン、リン酸塩、ホウ酸塩、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、エタノールアミン及びこれらの混合物が挙げられる。通常、組成物のpHは約55より高く、たとえば約6より高く、たとえば約69~約79、または約73~約74である。特に、緩衝剤はリン酸塩系のものであることができ、ある態様では35mMリン酸塩緩衝液を使用する。別の態様では、医薬組成物はさらに、マンニトール及びショ糖からなる群から選択される増量剤を含む。組成物中に含まれる増量剤は、非結晶質アモルファスケーキを生成することができる。さらに別の態様に従えば、医薬組成物はさらに、薬学的に許容可能な賦形剤を含む。たとえば、本組成物はさらに等張剤、たとえば生理学的に許容性の無機塩、たとえば塩化ナトリウム若しくは塩化カリウム、または生理学的に許容性の糖若しくは糖アルコール、たとえばソルビトール、または生理学的に許容性のアミノ酸を含むことができる。特に、医薬組成物はさらにLヒスチジンを含むことができる。別の態様に従えば、医薬組成物は注射可能な剤形として提供される。別の態様に従えば、医薬組成物は非経口剤形として提供される。一つの適用において、本発明の組成物は、消化器疾患、たとえば腸の疾患、疾病または症状の治療のために開発することができる。本明細書中で使用する場合、投与及び投与するとは、テヅグルチドまたはこれを含む組成物を被験者に与える方法をさす。本明細書中で使用する場合、被験者とは、本明細書中に記載される組成物または方法の適用から恩恵を受けることができる哺乳類をさす。ほとんどの場合、被験者はヒトであるが、他の動物であってもよい。本発明の特定の態様に従えば、本組成物は、上述の本発明の方法に従って製造した医薬的有用量のテヅグルチド;製剤のpHを薬学的に許容可能なレベル、特に約60~約90、たとえば約65~約80または約70~約75に調節するのに十分なリン酸塩緩衝液;安定化量のアミノ酸Lヒスチジン;及びショ糖及びマンニトールから選択される増量剤を含む。特に、本組成物は、ペプチド約01~約50mgml、たとえば約5~約40mgml、または約7~約30mgml、または約10~約20mgml、または約20mgmlを含む、上述の本発明の方法に従って製造した医学的有用量のテヅグルチド;pHを生理学的に許容しうるレベル、たとえば約55または6を超え、特に約60~約90、例えば約65~約80、または約70~約75で保持するためのリン酸塩緩衝液;安定化アミノ酸、特にLヒスチジン;及び増量剤、特にマンニトールを含むことができる。特に、本組成物は再構成された製品中に、以下のもの:再構成された製品を約69~79のpHに保持するのに必要な量、たとえばpH約73~約74に保持する量のリン酸塩緩衝液;約05~約1のLヒスチジン;約2~約5のマンニトール、たとえば約25~約35のマンニトール、または約3のマンニトール;及び上述の本発明の方法に従って製造したテヅグルチドを約01~約50mgml、たとえば約5~約40mgml、または約7~約30mgml、または約10~約20mgml、または約20mgmlを含む凍結乾燥製剤であってもよい。本発明の特定の態様では、本組成物は、再構成された製品中に、上述の本発明の方法に従って製造したテヅグルチド約7~約30mgml、たとえば約10~約20mgml、または約20mgml;pHを約73~約74に保持するのに十分なリン酸塩緩衝液;約05~約1Lヒスチジン;及び約3マンニトールを含む凍結乾燥組成物であってもよい。本発明の文脈において、凍結乾燥または低温乾燥としても知られるとしては、ペプチドを保存するか、ペプチドを輸送するのにより好都合にするために通常使用される脱水プロセスを包含する。凍結乾燥は通常、ペプチドを含む液体組成物を凍結し、次いで周囲圧力を下げ、組成物中の凍結水分が固相から気相に直接昇華できるようにするために十分な熱を加えることにより実施する。従って、本組成物は凍結乾燥状態で、たとえば注射可能な液体組成物として再構築及び続く投与に好適な凍結乾燥粉末として提供することもできる。再構築するためには、滅菌水をシリンジに吸い込み、次いでこれを凍結乾燥組成物を含むバイアルに移すことができる。本発明の凍結乾燥組成物は通常、約5重量以下の水、たとえば2重量以下の水、さらには約1重量以下の水を含む粉末形で提供する。本発明の別の側面では、配列番号1のアミノ酸配列を含むペプチドの凍結乾燥組成物を製造する方法を提供する。かかるプロセスは以下の段階を含む:本発明の方法に従ってペプチドを製造し;本発明の方法に従って組成物を製造し;組成物を約-40°Cに凍結し;第一の乾燥段階を約-20°Cで実施し;そして第二の乾燥段階を20°Cで実施する。別の態様では、凍結乾燥プロセスに供するための組成物は、上述の本発明の方法に従って製造したテヅグルチド;再構築した生成物を約69~約79のpH、たとえば約73~約74のpHに保持するための35mMリン酸塩緩衝液;約05~約1のLヒスチジン;及び約3のマンニトールを含む。さらなる側面では、本発明はアミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドに関し、このペプチドは上述の本発明の方法により得ることが可能である。ある態様では、本発明の方法はハイスループットフォーマットで実施される。さらなる態様では、本発明は配列番号1のアミノ酸配列を含むペプチドを製造するための、本発明に記載の方法の使用に関する。本発明をその態様の幾つかに関して記載してきたが、これは本発明の範囲を限定するものではない。当業者には明らかなように、先に記載の態様に対するさらなる態様及び変更も本発明の範囲内である。実施例1:ペプチドポリマー担体アセンブリHHisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspOH1.FmocAspOH及びジイソプロピルカルボジイミドを、NNジメチルホルムアミド中の4ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸ジメチルアクリルアミドポリマー担体に加え、続いて4ジメチルアミノピリジンを加えた。このエステル化を1時間進行させた。ポリマー担体をDMFで洗浄し、反応を繰り返した。ポリマー担体を再びDMFで洗浄した。2.ピペリジンDMFを固体担体に加えた。3分間反応させた。ピペリジンDMFとの第二の処理を7分間実施し、ポリマー担体をDMFで洗浄した。3.FmocThrOH及び2NNNNテトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートをDMFに溶解した。4メチルモルホリンを加え、混合物を2~3分間予備活性化してから、ポリマー担体に加えた。ニンヒドリンアッセイにより、カップリング反応が完了するまでモニターした。次いでポリマー担体をDMFで洗浄した。4.ピペリジンDMFを固体担体に加えた。3分間反応させた。ピペリジンDMFとの第二の処理を7分間実施し、ポリマー担体をDMFで洗浄した。次いで、上述の3~4で設定した手順を使用して、ただしFmocIleOHをFmocThrOHの代わりに使用して、FmocIleOHをピペリジンDMFでカップリング及び処置した。全ペプチド配列のアセンブリは、上述の段階3~4に記載のように段階的な方式で行った。必要により、ニンヒドリンアッセイが陰性になるまで繰り返しカップリングを実施した。ペプチドは好適な容器中で側鎖官能基に適した一般的な保護基を用いてバッチ式で合成した。使用したすべての試薬は市販されている。5位でFmocを除去した後、ポリマー担体の半分を、延長したピペリジン処理のために取り出し、四分の一をフラグメントカップリングのために取り出した。ポリマー担体の半分については、上述のようにアセンブリを続けたが、ただしペプチドポリマー担体は、Fmoc除去の間にDMF中ピペリジンでさらに20分間処理して、工業スケールで合成を実施する際に観察されるかもしれない長時間の反応時間を再現した。ペプチドポリマー担体の四分の一については、上述の標準的プロトコルを使用して、アセンブリを続けた。保護化テトラペプチドフラグメントBocHisGlyAspGlyOHは、上述のものと類似した標準的プロトコルを使用して、1mmolスケールでHGly2クロロトリチルポリスチレンポリマー担体上で製造した。実施例2:テヅグルチドの切り出し二つの完全にアセンブリされたテヅグルチドポリマー担体サンプルは、それぞれジクロロメタンで十分に洗浄し、トリイソプロピルシランを含むトリフルオロ酢酸を加えて切り出しを実施した。TFA及びTIPSを留去し、ペプチドをジエチルエーテルですりつぶしてすべての残存TIPSを除去した。実施例3:BocHisGlyAspGlyOHの切り出し保護化テトラペプチドは、ジクロロメタン中のTFAを使用してクロロトリチルポリスチレンポリマー担体から切り出した。TFAジクロロメタンの各部分は、メタノール中のピリジンに加えて酸を中和した。溶媒をロータリーエバポレーター処理により除去してから精製した。実施例4:BocHisGlyAspGlyOHの精製BocHisGlyAspGlyOHは、以下の条件を使用して、LunaC18逆相カラムで精製した。緩衝液A=水。緩衝液B=MeCN。勾配:20~40Bを60分で、続いて40~90Bを60分で。波長:230nm。実施例5:フラグメントのカップリング精製したBocHisGlyAspGlyOHは、Fmocアミノ酸カップリングに関して上述したTBTUを使用する標準的カップリング手順を適用して、55μmolスケールで、5位で切り取られたペプチドポリマー担体にカップリングさせた。ペプチドは、縮小スケールで実施例2に記載のようにポリマー担体から切り出した。実施例6:粗ペプチドの分析粗ペプチドの三バッチ分を、以下の条件を使用してVydacC18カラムの逆相HPLCにより分析した。緩衝液A=01vvTFA水。緩衝液B=01vvTFAMeCN。勾配液:1~99B、20分で。波長:230nm。実施例7:HPLCの結果全テヅグルチド分子は、上述のFmoc固相プロトコルを使用してアセンブリした。アセンブリした粗ペプチドの純度は、HPLCにより52であり、24のβAsp類似体を含んでいた。また、全テヅグルチド分子は、大規模スケールで観察されるかもしれない塩基との接触時間の増加効果を示すために、最後の4つのアミノ酸に関して延長したピペリジン処理を使用してアセンブリした。この粗ペプチドは39の純度であり、45のβAsp類似体を含んでいた。さらに5~33フラグメントは、上述のFmoc固相プロトコルを使用して固相上でアセンブリした。保護化テトラペプチドBocHisGlyAspGlyOHをアセンブリし、精製してから、固相上の5~33フラグメントにカップリングさせた。テトラペプチドを担体から切り出し、精製し、固体担体に結合している5~33フラグメントにカップリングさせた。このアセンブリの粗ペプチドは59の純度であり、17のβAsp類似体を含んでいた。まとめると、標準的アセンブリにおける線形分子対分岐分子の比は218であった。延長ピペリジン処理を行ったアセンブリでの比は088であった。2フラグメントアセンブリにおける線形ペプチド対分岐βAsp類似体の比は352であった。従ってこのデータは明らかに、本発明に従う2フラグメントアセンブリではβAsp類似体のレベルが顕著に低下したことを示している。特定の理論に縛られることを望むものではないが、簡便なテトラペプチド精製段階を上記実施例で実施し、及び上記段階のさらなる最適化は当業者に知られているので、80以上の未精製品純度が達成可能であると考えられる。本方法により精製段階での負荷を同時に軽減するとともに費用と製造スケールをかなり低減できるだろう。本発明の幾つかの態様は以下のものに関連する。1.アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを製造する方法であって、アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントを用意し、ここでXは第一の保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントを用意し、ここでYは第二の保護基であり;第一のペプチドフラグメントから第一の保護基を除去し;そしてN末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる、の各段階を含む上記方法。2.第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントが固相ペプチド合成により製造される、1に記載の方法。3.第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、C末端アミノ酸残基を担体に連結させ、続いてC末端が担体に連結された残基のN末端に、適切に保護されたアミノ酸を加えることにより提供される、2に記載の方法。4.C末端が担体に連結された残基のN末端に続いて加えるべき第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのアミノ酸は、Boc及びFmocからなる群から選択される保護基でそれぞれ保護される、3に記載の方法。5.第一の保護基はFmocである、1~4のいずれかに記載の方法。6.第二の保護基は、Boc及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される酸に不安定な保護基である、1~5のいずれかに記載の方法。7.第二のペプチドフラグメントのヒスチジン残基は、トリチル、Boc、Bom及びBumからなる群から選択される保護基を用いて側鎖で保護される、1~6のいずれかに記載の方法。8.第二のペプチドフラグメントのアスパラギン酸酸残基は、tertブチル、エステル保護基を用いて側鎖で保護される、1~7のいずれかに記載の方法。9.第二のペプチドフラグメントを担体から切り出してから、N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる、3~8のいずれかに記載の方法。10.切り出された第二のペプチドフラグメントを、任意にクロマトグラフィー及びまたは結晶化により精製してから、N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせる、9に記載の方法。11.Fmoc保護基は、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びジシクロヘキシルアミンからなる群から選択される二級アミンを加えることにより、第一のペプチドフラグメントから除去される、5~10のいずれかの方法。12.第二のペプチドフラグメントにカップリングされた第一のペプチドフラグメントを担体から切り出すことをさらに含む、1~11のいずれかの方法。13.第二のペプチドフラグメントにカップリングされた切り出された第一のペプチドフラグメントを、任意にクロマトグラフィーにより精製することをさらに含む、12に記載の方法。14.アミノ酸配列:XSerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含む第一のペプチドフラグメントをペプチド合成により用意し、ここでXはFmoc保護基であり、第一のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;アミノ酸配列:YHisGlyAspGlyを含む第二のペプチドフラグメントをペプチド合成により用意し、ここでYは、Boc及びベンジルオキシカルボニルからなる群から任意に選択される酸に不安定な保護基であり、第二のペプチドフラグメントのC末端残基は担体に連結されており;担体から第二のペプチドフラグメントを切り出し;そして任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーにより、切り出した第二のペプチドフラグメントを精製し;任意にピペリジン、ピペラジン、モルホリン及びジシクロヘキシルアミンからなる群から選択される二級アミンを加えることによって、第一のペプチドフラグメントからFmoc保護基を除去し;N末端が脱保護された、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに精製した第二のペプチドフラグメントを加えることによって、担体に連結された第一のペプチドフラグメントに第二のペプチドフラグメントをカップリングさせ;第二のペプチドフラグメントにカップリングした担体に連結された第一のペプチドフラグメントを担体から切り出し;そして任意に逆相高圧液体クロマトグラフィーによって、第二のペプチドフラグメントに結合した、切り出した第一のペプチドフラグメントを精製する、の各段階を含む、1~13のいずれかの方法。15.担体は、任意にポリスチレン、ポリジメチルアクリルアミド及びポリエチレングリコールからなる群から選択される官能基化ポリマーである、1~14のいずれかの方法。16.第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントのC末端アミノ酸は、任意に4ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸により官能基化ポリマーに結合している、15の方法。17.第一のペプチドフラグメント及びまたは第二のペプチドフラグメントは、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、臭化水素、塩化水素及びフッ化水素からなる群から選択される酸によって、または塩基、任意にり水酸化物によって、担体から切り出される、1~16のいずれかの方法。18.アミノ酸配列:HisGlyAspGlySerPheSerAspGluMetAsnThrIleLeuAspAsnLeuAlaAlaArgAspPheIleAsnTrpLeuIleGlnThrLysIleThrAspを含むペプチドを含む医薬組成物を製造する方法であって、1~17のいずれかに記載の方法に従ってペプチドを製造し;そして段階で製造したペプチドを含む医薬組成物を製造する、の各段階を含む上記方法。19.医薬組成物は、組成物のpHを生理学的に許容可能なレベルに調整するのに十分な量のリン酸塩緩衝液をさらに含む、18に記載の方法。20.医薬組成物はさらにLヒスチジンを含む、18または19の方法。21.医薬組成物はさらに、マンニトール及びショ糖からなる群から選択される増量剤をさらに含む、18~20のいずれかに記載の方法。22.医薬組成物は注射可能な剤形として提供される、18~21のいずれかの方法。"