"細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進するための、機能性ペプチド中の生物活性配列としてのアミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDの使用。前記機能性ペプチド部分が、GhRGD、YhRGD、YGhRGD、GGGGhRGD、βAla-hRGD、GABA-hRGD、6-アミノバレリックアミド-hRGD、hRGDS、hRGDY、hRGDF、hRGDK、hRGDV、hRGDT、hRGDWP、hRGDFK、hRGDYK、hRGDSP、hRGDSPK、hRGDSY、hRGDNP、hRGDTP、hRGDSP、GhRGDS、GhRGDY、GhRGDF、GhRGDSY、GhRGDSP、GhRGDSPK、YhRGDS、GhRGDTP、GhRGDSPK、GhRGDSP、GhRGDK、GGGGhRGDS、GhRGDNP及びそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも1つの配列、特にhRGDS、GhRGDS、GhRGDSY、βAla-hRGD、GABA-hRGD、6-アミノバレリックアミド-hRGD及びhRGDWP、より具体的にはβAla-hRGD、GABA-hRGD、6-アミノバレリックアミド-hRGD及びhRGDWP、もっとも具体的にはhRGDWPを含む、請求項1に記載の使用。前記機能性ペプチド部分が自己集合性ペプチド部分に共有結合している、請求項1又は2に記載の使用。前記自己集合性ペプチド部分が、βシート、コイルドコイルαらせん構造又はペプチド三重らせん構造に自己集合することができる、請求項3に記載の使用。前記機能性ペプチド部分が、ポリマー、特に生体適合性ポリマー、より具体的には熱応答性ポリマーに共有結合している、請求項1~4のいずれか一項に記載の使用。前記機能性ペプチド部分が、チオエーテル、アミノ、アミド、エステル及びエーテル結合からなる群から選択される結合を介して前記ポリマーに結合している、請求項5に記載の使用。ハイドロゲル、好ましくは細胞培養のためのハイドロゲルの調製における、請求項1~7のいずれか一項に記載の使用。Har-Gly-AsphRGD配列を含むハイドロゲル。前記hRGD配列がハイドロゲル足場の一部である、請求項9に記載のハイドロゲル。前記hRGD配列が細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進する、請求項9又は10に記載のハイドロゲル。自己集合性ペプチド部分及び/又はポリマー、特に自己集合性ペプチド部分及び/又は生体適合性ポリマー、より具体的には自己集合性ペプチド部分及び/又は熱応答性ポリマーをさらに含む、請求項9~11のいずれか一項に記載のハイドロゲル。前記hRGD配列が、場合によっては結合又はさらなるペプチド配列を介して前記ペプチド部分又はポリマーの少なくとも1つに共有結合している、請求項12に記載のハイドロゲル。したがって、本発明の目的は、細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進するのに特に有利な性質を有する生物活性アミノ酸配列を提供することである。したがって、本発明は、細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進するための、機能性ペプチド中の生物活性配列としてのアミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDの使用に関する。本発明者らは、実に驚くべきことに、このアミノ酸配列が主に改善された細胞接着及び細胞増殖を示すということを見いだした。特に、本アミノ酸配列は、特に酵素的分解に対するより強い抵抗力により、より長い半減期を示す。本アミノ酸配列はまた、特定の細胞系統に対してより高い親和力を示す。生物活性配列又は生物学的に活性な配列とは、特定の生物学的機能、ここでは細胞接着もしくは細胞付着、細胞増殖及び/又は細胞分化もしくは細胞表現型の誘発の促進を有するアミノ酸配列をいう。例示的な細胞分化は、多能性又は全能性細胞、たとえば幹細胞から専用の細胞タイプ、たとえば骨細胞、筋細胞、インスリン分泌細胞などへの転換である。本明細書において使用される語アミノ酸Xaaとは、少なくとも1つのNR1R2基、好ましくはNH2基及び少なくとも1つのカルボキシル基を含む任意の化合物をいう。本発明のアミノ酸は、天然のアミノ酸又は非天然のアミノ酸、天然由来又は合成であることができる。天然のアミノ酸は、グリシンを除き、キラルな炭素原子を含有する。別段指示されない限り、L配置の天然アミノ酸を含有する化合物が好ましい。アミノ酸は、たとえばβアラニンβAla、γアミノ酪酸GABA、5-アミノ吉草酸、グリシンGly又はG、フェニルグリシン、アルギニンArg又はR、ホモアルギニンHar又はhR、アラニンAla又はA、バリンVal又はV、ノルバリン、ロイシンLeu又はL、ノルロイシンNle、イソロイシンIle又はI、セリンSer又はS、イソセリン、ホモセリンHse、トレオニンThr又はT、アロトレオニン、メチオニンMet又はM、エチオニン、グルタミン酸Glu又はE、アスパラギン酸Asp又はD、アスパラギンAsn又はN、システインCys又はC、シスチン、フェニルアラニン、チロシンTyr又はY、トリプトファンTrp又はW、リジンLys又はK、ヒドロキシリジンHyl、ヒスチジンHis又はH、オルニチンOrn、グルタミンGln又はQ、シトルリン、プロリンPro又はP及び4-ヒドロキシプロリンHyp又はOから選択することができる。本明細書において使用される語ペプチドはペプチド及びペプチド類似物を含む。ペプチド類似物は天然のアミノ酸及び非天然のアミノ酸を含む。ペプチド類似物はまた、グリコシル化のような修飾を含むこともできる。すべてのアミノ酸はL又はD異性体であることができる。ペプチド又はペプチド類似物はまた、天然由来のアミノ酸と同様に機能するアミノ酸模倣体を含むこともできる。ペプチドはまた、修飾されたR基又は修飾されたペプチド主鎖を有するアミノ酸類似物から形成されることもできる。ペプチド類似物は通常、アミド結合とは異なる少なくとも1つの結合、たとえばウレタン、尿素、エステル又はチオエステル結合をペプチド配列中に含む。本発明のペプチド又はペプチド類似物は、直鎖状、環式又は分岐鎖状であることができ、好ましくは直鎖状である。機能性ペプチド部分とは、生物活性配列を含むペプチド部分、したがって、生物学的活性を示すペプチド部分をいう。本発明において、アミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDは、そのものが、細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進する、機能性ペプチド部分の生物活性配列に相当することができる。特定の実施形態において、アミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDはまた、細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進する、機能性ペプチド部分のより長い生物活性配列の一部であることもできる。この特定の実施形態の第1の態様において、hRGD配列は、そのN末端NH2に共有結合したさらなるアミノ酸を含んでもよい。生物活性配列は、たとえば、Xaan-hRGD配列式中、Xaaは、任意の天然又は非天然のアミノ酸であり、nは1~10であるから選択されてもよい。n個のXaaアミノ酸は同じであってもよいし異なってもよい。そのような配列の好適な例は、GhRGD、YhRGD、YGhRGD、GGGGhRGD、βAla-hRGD、GABA-hRGD及び6-アミノバレリックアミドaminovalericamide-hRGDである。この特定の実施形態の第2の態様において、hRGD配列は、そのC末端COOHに共有結合したさらなるアミノ酸を含んでもよい。生物活性配列は、たとえば、hRGD-Xaam配列式中、Xaaは、任意の天然又は非天然のアミノ酸であり、mは1~10であるから選択されてもよい。m個のXaaアミノ酸は同じであってもよいし異なってもよい。そのような配列の好適な例は、hRGDS、hRGDY、hRGDF、hRGDK、hRGDV、hRGDThRGDWP、hRGDYK、hRGDFK、hRGDSP、hRGDSPK、hRGDSY、hRGDNP、hRGDTP及びhRGDSP、特にhRGDWPである。この特定の実施形態の第3の態様においては、上記第1及び第2の態様を組み合わせてもよく、hRGD配列は、そのN及びC末端両方に共有結合したさらなるアミノ酸を含み、すなわちXaan-hRGD-Xaam式中、Xaaは、任意の天然又は非天然のアミノ酸であり、nは1~10であり、mは1~10であるである。そのような配列は、たとえば、GhRGDS、GhRGDY、GhRGDF、YGhRGD、GhRGDSY、GhRGDSP、GhRGDSPK、YhRGDS、GhRGDTP、GhRGDSPK、GhRGDSP、GhRGDK、GGGGhRGDS、GhRGDNP及びそれらの組み合わせ、特にGhRGDS、GhRGDSYからなる群から選択されてもよい。したがって、本発明はまた、細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進するための、機能性ペプチド中の、GhRGD、YhRGD、YGhRGD、GGGGhRGD、βAla-hRGD及びGABA-hRGD、6-アミノバレリックアミド-hRGD、hRGDS、hRGDY、hRGDF、hRGDK、hRGDV、hRGDT、hRGDWP、hRGDFK、hRGDYK、hRGDSP、hRGDSPK、hRGDSY、hRGDNP、hRGDTP及びhRGDSP、GhRGDS、GhRGDY、GhRGDF、GhRGDSY、GhRGDSP、GhRGDSPK、YhRGDS、GhRGDTP、GhRGDSPK、GhRGDSP、GhRGDK、GGGGhRGDS、GhRGDNP及びそれらの組み合わせからなる群から選択される生物活性配列、特にhRGDS、GhRGDS、GhRGDSY、βAla-hRGD、GABA-hRGD、6-アミノバレリックアミド-hRGD及びhRGDWP、より具体的にはβAla-hRGD、GABA-hRGD、6-アミノバレリックアミド-hRGD及びhRGDWP、もっとも好ましくはhRGDWPの使用に関する。さらなる特定の実施形態において、場合によってはさらなるアミノ酸をそのN及び/又はC末端に含むhRGD配列はまた、そのN末端においてメルカプトプロピオン酸Mprに結合していることもできる。そのようは配列は、Mpr-Xaan-hRGD-Xaam式中、Xaaは、互いに独立して選択される任意の天然又は非天然のアミノ酸であり、nは0~10であり、mは0~10であると読むことができる。なおさらなる実施形態において、2つのメルカプトプロピオン酸部分が、特にジ硫黄結合を介して共有結合していてもよい。そのようは配列は一般に、Xaam-DGhR-Xaan-Mpr-Mpr-Xaan-hRGD-Xaam式中、Xaaは、互いに独立して選択される任意の天然又は非天然のアミノ酸であり、n及びn’は、独立して、0~10の範囲であり、m及びm’は、独立して、0~10の範囲であると読める。本発明において、機能性ペプチド部分は、hRGD配列を含む生物活性配列に一致することができる。機能性ペプチド部分はまた、hRGD配列を含む生物活性配列に加えて、さらなるアミノ酸を含むこともできる。特に好ましい実施形態にしたがって、機能性ペプチド部分は、少なくとも1つ以上のhRGD配列、たとえば2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、9つ又は10のhRGD配列、好ましくは少なくとも1つ以上のhRGDWP配列、たとえば2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、9つ又は10のhRGDWP配列を含む。この特に好ましい実施形態において、機能性ペプチド部分は、先に定義した生物活性配列の前、後又は間にさらなるアミノ酸を含んでもよい。hRGDWP配列及びそれらの派生物は、細胞外マトリックス中で細胞接着タンパク質を模倣する利点を提供し、その後、細胞表面上のインテグリンタンパク質に結合することができる。本発明の第1の態様において、生物活性アミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDを含む機能性ペプチド部分は自己集合性ペプチド部分に共有結合している。自己集合性ペプチドとは、自己集合することができるペプチド、すなわち、多くのランダムな立体配座を有する非自己集合性ペプチドドメインとは対照的に、特異的に画定された立体配座へとフォールディングするドメインを画定するペプチドをいう。自己集合性アミノ酸配列は当技術分野において公知であり、本発明にしたがって、βシート、コイルドコイルαらせん構造、ペプチド三重らせん構造又はそれらの組み合わせへと集合することができるペプチド配列が好ましい。コイルドコイル構造へと自己集合することができるペプチド部分は、たとえば、αらせんコイルドコイル構造を提供するペプチドアミノ酸配列である。これは、ペプチド一次配列の両親媒性パターンに依存する三次構造である。この実施形態のペプチド部分は、多様な疎水性及び極性残基を含み、通常、少なくとも10のアミノ酸で構成されている。たとえば、らせんペプチド部分は、すべての極性残基をらせんの一面に有し、すべての疎水性残基をらせんの他方の側に有するように設計されている。このらせんが、2つ以上のらせん鎖の一部を形成し、コイルドコイル構造を形成することができる。らせんどうしは疎水性相互作用を介して会合し、コイルドコイルを形成する。ペプチド部分の配列は、たとえば、ロイシンジッパー配列であることができる。βシートへと自己集合することができるペプチド部分は、ペプチド鎖に対して垂直な分子間水素結合によって安定化されたβシートを提供する。自己集合は、β鎖の間の水素結合相互作用を通して起こる。β鎖は、ほぼ完全に伸長した立体配座にある主鎖を有する一定の長さのポリペプチド鎖である。βシート構造は、平行又は逆平行β鎖から形成されることができる。この実施形態のβシートの例は、アミロイド様構造へと自己集合することができるペプチド部分である。βシートへと自己集合することができるペプチド部分は一般に、少なくとも5つ又は6つのアミノ酸を含む。本発明のこの第1の態様の好ましい実施形態にしたがって、自己集合することができるペプチド部分は、ペプチドが好適な条件において提供されるとき、ハイドロゲルを形成することができる。ハイドロゲルとは、多量の水及び生物学的流体を吸収する能力を有する親水性化合物、通常はポリマーの三次元ネットワークである。ネットワークは、化学的架橋共有結合的、イオン的によって形成されることもできるし、物理的架橋絡み合い、結晶子、水素結合によって形成されることもできる。一般に、ハイドロゲルは、ゲルの質量に対して少なくとも20質量の水を含むことができる三次元構造である。ハイドロゲルによる水の吸収は、結果として、その寸法の有意な増大、すなわち有意な膨張を生じさせる。本発明のこの第1の態様のもう1つの好ましい実施形態にしたがって、βシートへと自己集合することができるペプチド部分は、疎水性アミノ酸と荷電アミノ酸とを交互に含むオクタペプチド部分である。疎水性アミノ酸は、多くの場合、フェニルアラニンPhe又はF、トリプトファンTrp又はW、チロシンTyr又はY、イソロイシンIle又はI、アラニンAla又はA、ロイシンLeu又はL、バリンVal又はV及びノルロイシンNleからなる群、特にフェニルアラニンPhe又はF、トリプトファンTrp又はW、チロシンTyr又はY、イソロイシンIle又はI及びノルロイシンNleからなる群から選択される。荷電アミノ酸は、通常、アルギニンArg又はR、アスパラギン酸Asp又はD、グルタミン酸Glu又はE、リジンLys又はK及びヒスチジンHis又はHからなる群、特にアルギニンArg又はR、アスパラギン酸Asp又はD、グルタミン酸Glu又はE及びリジンLys又はKからなる群から選択される。オクタペプチド部分は、たとえば、FEFKFEFK、FEFEFKFK、FDFKFDFK、FDFDFKFK、FEFRFEFR、FEFEFRFR、YDYKYDYK、YDYDYKYK、YEYRYEYR、YEYKYEYK、YEYEYKYK、WEWKWEWK、WEWEWKWK、WDWKWDWK、WDWDWKWKからなる群から選択されてもよい。もっとも好ましくは、アミノ酸配列はFEFKFEFK又はFEFEFKFKである。本発明の第2の態様において、生物活性アミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDを含む機能性ペプチド部分は、ポリマー、特に生体適合性ポリマー、より具体的には熱応答性ポリマーに共有結合している。生体適合性ポリマーとは、生体と適合性であるポリマーをいう。好適な例は、ポリエステル類、たとえばポリ乳酸PLA、ポリグリコール酸PGA、ポリ乳酸-co-グリコール酸PLGA、ポリヒドロキシアルカノエート類、たとえばポリヒドロキシブチレート-co-バレレートPHBV、ポリカプロラクトン類、ポリアクリルアミド類、たとえばポリヒドロキシアクリルアミドpHPMA、ポリ無水物、ポリイミド、ポリ無水物-co-イミド及び多糖類、たとえばキトサンである。熱応答性ポリマーとは、温度の上昇又は低下のような外部熱的刺激に暴露されると、立体配座変化のような物理的変化を受けるポリマーをいう。熱的刺激に応答して物理的変化を受ける熱応答性ポリマーの能力が、当技術分野において、これらのポリマーをスマート材料のカテゴリーに分類する。水溶液中での大部分のポリマーの行動とは反対に、熱応答性ポリマーは、高温でより水不溶性、すなわちより疎水性になる。可溶性から不溶性への上記相転移を提供する温度は、当技術分野において、一般に中性pHの脱イオン水中で測定される下限臨界共溶温度LCSTと指定されている。特に好適な熱応答性ポリマーは、LCSTが約32°Cであると測定されているポリN-イソプロピルアクリルアミド又はPNIPAAmである。他の特に好適な熱応答性ポリマーはPNIPAAmコポリマーである。PNIPAAmコポリマーは、NIPAAm及び親水性又は疎水性モノマーから選択される少なくとも1つの他のモノマーを含むコポリマーである。好適な親水性モノマーは、たとえば、N-メタクリロイル-トリスヒドロキシメチルメチルアミド、ヒドロキシエチルアクリルアミド、ヒドロキシプロピルメタクリルアミドHPMA、N-アクリルアミド-1-デオキシソルビトール、ヒドロキシルエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルアクリレート、ヒドロキシフェニルメタクリレート、2-ヒドロキシプロピルアクリレート、4-ヒドロキシブチルメタクリレート、2-メタクリルオキシエチルグルコシド、ポリエチレングリコールモノメチルエーテルモノメタクリレート、ビニル-4-ヒドロキシブチルエーテル及びそれらの誘導体ポリエチレングリコール含有モノマーが特に好適であるならびにヒドロキシプロピルメタクリルアミドHPMAである。好適な疎水性モノマーは、アミド基のアミン窒素が1つ以上のアルキル残基で置換されているアクリルアミドモノマー、たとえば、N-イソプロピルアクリルアミド、N,N-ジメチルアクリルアミド、N,N-ジエチルメタアクリルアミド、N-メチルメタクリルアミド、N-エチルメタクリルアミド、N-プロピルアクリルアミド、N-ブチルアクリルアミド、N-オクチルメタアクリルアミド、N-ドデシルメタアクリルアミド、N-オクタデシルアクリルアミド、プロピルメタアクリレート、デシルメタアクリレート、ステアリルメタアクリレート、オクチルトリフェニルメチルアクリルアミド、ブチルトリフェニルメチルアクリルアミド、オクタデシルトリフェニルメチルアクリルアミド、フェニルトリフェニルメチルアクリルアミド、ベンジルトリフェニルメチルアクリルアミド及びそれらの誘導体に由来する。熱応答性ポリマーは、ハイドロゲルの調製、より具体的にはスマートハイドロゲル、すなわち環境に敏感なハイドロゲルの調製に使用することができる。これらのスマートハイドロゲルは、圧力、pH、温度又はイオン強度のような環境刺激に応答して可逆性の体積変化を受けることができ、生物医学及び薬学分野、特に細胞及び組織培養の分野において使用されるのに特に適したものとなっている。本発明のこの第2の特定の態様において、生物活性アミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDを含む機能性ペプチド部分は、好ましくは、好ましくはチオエーテル、アミノ、アミド、エステル及びエーテル結合からなる群から選択される結合を介してポリマーに共有結合している。そのような結合は、直接的に、すなわち、ポリマーの原子と機能性ペプチドの原子との間の共有結合であることもできるし、間接的に、すなわち、結合基を介するものであることもできる。結合基の好適な例は、とりわけ、直鎖状又は分岐鎖状のアルカン類、特に炭素原子1~10個を含むポリメチレン基である。結合基の他の例は、たとえば、ポリエーテル基、たとえばポリエチレングリコールPEGである。本発明の第3の態様において、hRGD配列を含む機能性ペプチド部分は、自己集合性ペプチド及びポリマーの両方、特に自己集合性ペプチド及び生体適合性ポリマーの両方、より具体的には自己集合性ペプチド及び熱応答性ポリマーの両方に共有結合している。さらなる実施形態において、本発明はまた、ハイドロゲル、好ましくは細胞培養のためのハイドロゲルの調製において細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進するための、機能性ペプチド中の生物活性配列としてのアミノ酸配列Har-Gly-AsphRGDの使用に関する。本発明はまた、hRGD配列を含むハイドロゲル、特に、hRGD配列がハイドロゲル足場の一部であるハイドロゲルに関する。ハイドロゲル足場とは、ハイドロゲル構造に通じる物質、すなわち、ハイドロゲル構造を生じさせるポリマー又は自己集合性ペプチドを含む物理的実体をいう。前記ハイドロゲルにおいて、先に定義したhRGD配列は、好ましくは、細胞接着、細胞増殖及び/又は細胞分化を促進する。さらなる好ましい実施形態において、本発明のハイドロゲルはさらに、先に定義した自己集合性ペプチド部分及び/又はポリマーを含む。なおさらなる好ましい実施形態において、hRGD配列は、場合によっては結合及び/又はさらなるペプチド配列を介して、先に定義した自己集合性ペプチド部分又はポリマーの少なくとも1つに共有結合している。したがって、本発明は、hRGD配列ならびに自己集合性ペプチド部分及び/又はポリマー、特に自己集合性ペプチド部分及び/又は生体適合性ポリマー、より具体的には自己集合性ペプチド部分及び/又は熱応答性ポリマーを含むハイドロゲルに関する。本ハイドロゲルは、細胞及び組織培養に特に適しており、たとえば、改善された細胞接着及び細胞増殖を提供する。本ハイドロゲルは、たとえば、細胞、好ましくは繊維芽細胞、軟骨細胞もしくは幹細胞を培養するために、又は再生医学のために使用することができる。本ハイドロゲルは、二次元又は三次元細胞培養システムにおいて使用することもできる。参照により本明細書に組み込まれる特許、特許出願及び刊行物の開示が用語を不明瞭にし得る程度に本出願明細書の記載と矛盾する場合、本出願明細書の記載が優先するものとする。以下、本発明を、その範囲を限定することなくさらに説明する。実施例1以下、hRGDとは、RGD、hRGD又はそれらの混合物を使用することができることを意味する。1.1保護されたオクタペプチドの合成オクタペプチドPhe-Glu-Phe-Lys-Phe-Glu-Phe-LysFEFKFEFKは、A.Maslovskisetal.,Macromol.Symp.,296,248-2532010に開示されているようにして、ChemTechACT90ペプチド合成装置上、溶媒としてのN-メチル-2-ピロリドンNMP及び標準的な固相ペプチドプロトコルを使用して合成することができる。オクタペプチドはまた、液相法Z/Boc/OtBu又はFmoc/Boc/OtBu手法において合成することもできる。この特定の場合においては、N末端位置の保護基の脱保護中でさえ、側保護基が配列上に残り、それにより、Z-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OHが得られる。1.2保護されたオクタペプチドのエステル化このエステル化工程は、文献:P.Jouinetal.,J.Org.Chem.,54,3,617-626,1989にしたがって実施した。Z-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OH50g32mmol及び炭酸セシウム5.3gをN,N-ジメチルホルムアミドDMF500ml中に導入した。ヨードエタンEtI5.5mlを加え、溶液を48°Cで2時間加熱した。塩のろ過及びDMFの部分的蒸発ののち、濃縮物を2.5KHSO4500mlに注加し、ろ過し、水洗し、最後に温かいエタノール500mlで洗浄した。真空下45°C乾燥させたのち、Z-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OEtに相当する固体47gを得た。収率=84。1.3保護されたオクタペプチドエチルエステルの水素化分解Z-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OEt21.6g13.6mmolをN,N-ジメチルホルムアミドDMA215ml中に溶解した。溶液を窒素で数回フラッシュしたのち、Pd/Si14.5g2質量を加えた。水素の導入によって水素化分解を開始した。2時間の反応ののち、懸濁液を0.45μmフィルタに通し、Pd/SiをDMAによって洗浄した。H-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OEtに相当する集めたろ液を、さらに精製することなく次の工程に使用した。収率は定量的であった。実施例2:保護されたMpr-hRGDWPの合成S-トリチル又はトリフェニルメチルメルカプトプロピオニルホモアルギニルグリシンMprトリチル-Har-Gly-OH7.3g12.0mmolを、ピリジン1mlを含有するN,N-ジメチルホルムアミドDMF75ml中に溶解した。ひとたび溶液を-10±5°Cに冷却したならば、塩化ピバロイルPivCl1.6gを加えた。5~10分の活性化ののち、N-トリメチルシリルアセトアミドTMA6.1gを含有するDMF10ml中に可溶化したO-t-ブチルアスパラギルトリプトファニルプロリンAspOtBu-Trp-Pro6.3g12.7mmolを加えた。その後、反応混合物を室温に戻した。反応の完了のHPLC制御ののち、水16.4mlを加えた。部分的濃縮ののち、メタノール35mlによって希釈した濃縮物を2.5水性NaHCO3155mlに注加した。析出物を水で数回洗浄し、真空下に乾燥させた。MprTrt-Har-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OHに相当するオフホワイト色の生成物10.6gを得た。収率=87。実施例33.1保護されたMpr-hRGDWPとオクタペプチドとのカップリングMprTrt-Har-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OH13.9g13.2mmol、p-トルエンスルホン酸2.5g及びヒドロキシベンゾトリアゾールHOBt6.2gを、N,N-ジメチルホルムアミドDMA中H-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OEt12mmolの溶液に加えた。ひとたび溶液が得られたならば、1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩EDC2.7gを室温で加えた。少なくとも8時間かく拌したのち、反応混合物を2.5水性KHSO4300mlに注加した。ろ過ののち、析出物をエタノール270mlによって3回洗浄し、真空下45°Cで乾燥させた。配列MprTrt-Har-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OEtに相当するオフホワイト色の固体26.3gを得た。収率=72。3.2保護されたMpr-hRGDWP-オクタペプチドの最終的脱保護次いで、MprTrt-Har-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OEt5g1.9mmolを、TFA100ml、CH2Cl2100ml、トリイソプロピルシランiPr3SiH9ml、水2.2ml及びEtOH2.2mlを含有する溶液に導入した。約1時間の反応ののち、反応混合物を冷たいイソプロピルエーテルIPE200mlに注加した。ろ過し、IPEによって数回洗浄したのち、ペプチドを真空下45°C乾燥させた。Mpr-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Phe-Glu-Phe-Lys-Phe-Glu-Phe-Lys-OEtに相当するオフホワイト色のペプチド3gを得た。収率=88。この配列の純度を高めるために、分取HPLC、次いで凍結乾燥を使用することもできる。実施例4:保護されたMpr-RGDWPの合成4.1Z-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OHの合成Z-Arg-Gly-OH3.4g10.0mmolを、ピリジン0.86mlを含有するジクロロメタンCH2Cl2/N,N-ジメチルアセトアミドDMA1/1混合物80ml中に溶解した。ひとたび溶液を-10±5°Cに冷却したならば、塩化ピバロイルPivCl1.3gを加えた。5~10分の活性化ののち、N-トリメチルシリルアセトアミドTMA5.29gを含有するCH2Cl20.3ml中に可溶化したAspOtBu-Trp-Pro5.21g10.6mmolを加えた。その後、反応混合物を室温に戻した。反応の完了のHPLC制御ののち、水10mlを加えた。部分的濃縮ののち、メタノール30mlで希釈した濃縮物を2.5水性NaHCO3140mlに注加した。析出物を水で数回洗浄した。Z-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OHに相当する得られた湿潤な生成物9.1gをアセトニトリル/水/メタノール容量比79/20/1の沸騰混合物約200mlに加えた。固体を可溶化したのち、溶液を徐々に冷ました。この冷まし工程中、2.5水性NaHCO3340mlを注加した。白色固体の出現ののち、懸濁液をさらに0°Cで少なくとも10時間かく拌した。ろ過及びアセトニトリル/水1/2100mlによる数回の洗浄ののち、ペプチドを真空下45°C乾燥させた。Z-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OHに相当するオフホワイト色のペプチド含水率56gが得られた。収率=70。4.2H-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OHの合成Z-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OH20,0g22.2mmolを、37水性HCl1.85mlを含有するメタノール/水95/5混合物240ml中に溶解した。溶液を窒素で数回フラッシュしたのち、Pd/Si23.6g2質量を加えた。水素の導入によって水素化分解を開始した。2時間の反応ののち、懸濁液を0.45μmフィルタに通し、Pd/Siをメタノール/水95/5混合物によって洗浄した。集めたろ液を真空下に濃縮し、さらに共沸濃縮によって水をアセトニトリルによって置換した。析出物をろ過し、洗浄し、真空下に乾燥させた。H-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OH.HClに相当するオフホワイト色の粉末含水率1.813.1gを得た。収率=85。4.3MprTrt-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OHの合成H-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OH.HCl8.08g11mmolを、45°Cで、8.0~8.5の範囲のpHKHCO3バッファの水/ジオキサン1/2混合物150mlに加えた。5等分したMprTrtOSu5g10.4mmolを規則的間隔で上記溶液に加えた。HPLCによる反応の完了の制御ののち、反応混合物を水400mlに注加し、ジオキサン画分を真空下に蒸発させた。懸濁液のろ過ののち、実施例4.1に記載されたプロトコルにしたがって湿潤な固体を処理して、MprTrt-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OH保護されたMpr-RGDWPを得た。収率=74。実施例55.1保護されたMpr-RGDWPとオクタペプチドとのカップリング次いで、実施例3.2において使用されたプロトコルにしたがって、MprTrt-Arg-Gly-AspOtBu-Trp-Pro-OHをH-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-Phe-GluOtBu-Phe-LysBoc-OEtにカップリングした。収率=74。5.2保護されたMpr-RGDWP-オクタペプチドの最終的脱保護次いで、保護されたMpr-hRGDWP-オクタペプチドの脱保護のために実施例3.2において使用されたプロトコルにしたがって、保護されたMpr-RGDWP-オクタペプチドを脱保護した。収率=87。この配列の純度を高めるために、分取HPLC、次いで凍結乾燥を使用することもできる。実施例6:ハイドロゲル調製6.2プロトコルI6.2.12D細胞培養オクタペプチド16.3mg及びhRGD-オクタペプチド7.3mg又はRGD-オクタペプチドオクタペプチド/hRGD-オクタペプチドモル比80/206.6mgを90°Cの蒸留水1ml中に3時間かけて溶解した。冷ましたのち、試料を細胞培養ウェルプレートに移し、37°Cで12時間インキュベートした。その後、試料を、細胞培地DMEMGibco、Invitogenにより、その培地をゲル上で8回交換しながら10分間洗浄した。試料を37°Cのインキュベータに戻して一晩置き、翌日、洗浄を繰り返した。試料を再びインキュベータに入れて一晩置き、翌日、ゲルの表面に細胞を接種した。6.2.23D細胞培養オクタペプチド16.3mg及びhRGD-オクタペプチド7.3mg又はRGD-オクタペプチドオクタペプチド/hRGD-オクタペプチドモル比80/206.6mgを、蒸留水と1×ダルベッコリン酸緩衝食塩水との90°Cの混合物比70/301ml中に3時間かけて溶解した。冷ましたのち、試料500μlを、0.5MNaOH溶液40μlとともに各細胞培養ウェルプレートに入れ、かく拌した。その後、培地中に懸濁させた細胞100μlをウェルに加え、かく拌した。その後、細胞培地100μlをウェル中のゲルの上に加え、ウェルプレートをインキュベータに入れた。6.1プロトコルII2NNaOH125μlをダルベッコ修飾イーグル培地DMEM5.1mlに加えた。溶液を激しく振とうし、オクタペプチド/hRGDWP-オクタペプチド混合物質量比80/20を含有するジメチルスルホキシドDMSO溶液濃度ペプチド200mg/DMSO1ml715μlに素速く加えた。すぐに形成したゲルを3分間振とうした。得られたゲルを、5μm膜上、ダルベッコ修飾イーグル培地DMEM15mlによって4回洗浄した。洗浄したゲルを、2D細胞培養に直接使用するか、又は、その後、バイアルに移し入れ、DMEMゲル量の5~10によってわずかに希釈し、数分間振とうするかした。その後、懸濁したゲルを培養フラスコに移し入れ、3D細胞培養のための細胞を接種した。実施例7:細胞培養以下の実験においては、3つのハイドロゲル、すなわち、自己集合性オクタペプチドFEFKFEFKに基づくハイドロゲル、RGD修飾オクタペプチドMpr-RGDWP-FEFKFEFKに基づくハイドロゲル及びhRGD修飾オクタペプチドMpr-hRGDWP-FEFKFEFKに基づくハイドロゲルを比較した。光学顕微鏡を使用して細胞形態及び細胞付着を観察した。7.12D実験7.1.1細胞形態ゲル表面上のヒト皮膚繊維芽細胞HDFの細胞付着性を試験した。図1は、1、3及び7日後に撮られた、オクタペプチド、hRGD及びRGD修飾オクタペプチドに基づくハイドロゲルの光学顕微鏡写真を示す。これらの写真から、FEFKFEFKハイドロゲル表面に接種された細胞が培養1、3及び7日後に丸みのある形態を示したということが見てとれる。7日間の培養期間中、hRGD修飾ハイドロゲル表面には広範囲な細胞伸長が観察されたが、RGD修飾ハイドロゲル表面に接着した細胞は、1日目と3日目との間で相対的に伸長が小さい細胞形態を示した。これらの光学顕微鏡写真から、hRGDWP-FEFKFEFKハイドロゲル上の細胞伸長がRGDWP-FEFKFEFKハイドロゲル上の細胞伸長に比べて優れているということが見てとれる。7.1.2細胞生存度ハイドロゲル表面上のHDFの細胞生存度を、光学顕微鏡により、生死染色を使用して目視的に分析した。酵素的反応を介して達成される細胞内エステラーゼ活性により、カルセインAM非蛍光性をカルセイン強蛍光性に転換した。この強蛍光カルセインを生細胞内に保持して、緑色の蛍光を生成させた。死細胞の損傷した膜は、EthD-1溶液が核酸に結合して、それにより、死細胞中で赤色の蛍光を生成することを許した。図2は、1、3及び11日後に撮られた、オクタペプチド、hRGD及びRGD修飾オクタペプチドに基づくハイドロゲルの蛍光光学顕微鏡写真を示す。生細胞に対応する緑色の蛍光は写真中では淡いグレーに見える。赤色の蛍光は観察されなかった。蛍光顕微鏡写真は、FEFKFEFKハイドロゲル上の細胞の大部分が、培養7日目までに丸みのある形態を示すようになることを示す。非常に少数の死細胞しか記録されなかった。対照的に、画像は、培養1日目及び3日目ののち、hRGD修飾ハイドロゲル上に接種されたHDFが、RGD修飾ゲル上に接種されたものに比べて大きく伸長した形態を示すことを明らかにした。これらの結果は、実施例7.1.1において提示された光学顕微鏡画像と十分に相関したものである。1日置きの培地交換が、細胞増殖を促進するのに十分な栄養素を提供した。その結果、非常に少数の死細胞しか検出されなかった。7.23D実験2D実験と同様に、ヒト皮膚繊維芽細胞HDFの行動を分析した。7.2.1細胞形態実施例7.1.1と同様に、ゲル表面上のヒト皮膚繊維芽細胞HDFの細胞形態を試験した。図3は、1日後に撮られた、オクタペプチド、hRGD及びRGD修飾オクタペプチドに基づくハイドロゲルの光学顕微鏡写真を示す。FEFKFEFKハイドロゲル中に封入された細胞が培養1日後に丸みのある形態を示したということが明らかである。hRGD修飾ハイドロゲル内には広範囲な細胞伸長が観察されたが、RGD修飾ハイドロゲル中に埋め込まれた細胞は、1日目で、相対的に伸長が小さい細胞形態を示した。非修飾ハイドロゲルと修飾ハイドロゲルとの間で細胞形態の有意な差が認められた。これらの光学顕微鏡写真から、hRGDWP-FEFKFEFKハイドロゲル内の細胞伸長がRGDWP-FEFKFEFKハイドロゲル内の細胞伸長よりも優れているということが見てとれる。7.2.2細胞生存度実施例7.1.2と同様に、生死染色を使用して、ゲル内に封入されたHDFの細胞生存度を目視的に分析した。図4は、1及び3日後に撮られた、オクタペプチド、hRGD及びRGD修飾オクタペプチドに基づくハイドロゲルの蛍光光学顕微鏡写真を示す。生細胞に対応する緑色の蛍光は写真中では淡いグレーに見える。死細胞に対応する赤色の蛍光が、オクタペプチドに対応する写真中に見られる丸で囲んだ点。これらの蛍光顕微鏡写真は、FEFKFEFKハイドロゲル内に封入された細胞の大部分が、培養3日目までに丸みのある形態を示すようになることを示す。1日目、死細胞が観察された。3日目、細胞生存度は改善し、したがって、死細胞は少数しか検出されなかった。対照的に、1日目と3日目との間に、hRGD修飾ハイドロゲル内に埋められたHDFは、RGD修飾ハイドロゲル内に埋められたHDFに比べて非常に伸長した形態を示すということが見てとれる。7.2.3細胞増殖血球計を使用する細胞計数法を実施して、3D培養システム中のHDFの細胞増殖を定量化した。図5は、オクタペプチド、RGD及びhRGD修飾オクタペプチドに基づくハイドロゲル中、それぞれ0、1、2、3、5、7、10及び14日後の細胞数を示す。最高の細胞数及び生細胞の割合はhRGD修飾ハイドロゲル中で観察された。最低の細胞数は非修飾FEFKFEFKシステム中で観察された。RGD修飾ハイドロゲル中の細胞数は時間とともに着実に増加したが、生存の割合及び細胞増殖の程度は変動した。hRGDハイドロゲルとRGD修飾ハイドロゲルとの間の大きな差は、一部には、ゲル間の剛性の差に対する細胞応答によるものと考えられる。集められたレオロジーデータは、3つのハイドロゲルの強度及びβシート含量の明確な差を示す表1を参照。"