"タンパク質の精製方法であって、a.タンパク質を含有するサンプルを準備し、b.該サンプルを捕捉クロマトグラフィー樹脂でプロセス化して、該タンパク質を含む第1溶出液を得、c.第1溶出液中のウイルスを不活性化させて、該タンパク質を含む不活性化溶出液を得、d.該不活性化溶出液を少なくとも1つのデプスフィルターでプロセス化して、該タンパク質を含む濾過溶出液を得、およびe.該濾過溶出液を少なくとも1つのイオン交換膜でプロセス化して、該タンパク質を含む第2溶出液を得ることを含む、前記精製方法。デプス濾過工程およびイオン交換膜工程をフィルター列において行う、請求項1記載の方法。捕捉クロマトグラフィー樹脂が、アフィニティ樹脂、イオン交換樹脂、混合形態樹脂および疎水性相互作用樹脂からなる群から選択される、請求項1記載の方法。捕捉クロマトグラフィー樹脂が、プロテインA樹脂、プロテインG樹脂、プロテインA/G樹脂およびプロテインL樹脂からなる群から選択される、請求項1記載の方法。タンパク質が、タンパク質断片、抗体、モノクローナル抗体、免疫グロブリンおよび融合タンパク質からなる群から選択される、請求項1記載の方法。サンプルが、細胞培養である、請求項1記載の方法。捕捉クロマトグラフィー樹脂でプロセス化する前に、サンプルを清澄化する、請求項1記載の方法。遠心分離、精密濾過、限外濾過、デプス濾過、滅菌濾過および界面活性剤での処理からなる群から選択される清澄化方法により、サンプルを清澄化する、請求項7記載の方法。ウイルス不活性化が、酸、界面活性剤、化学物質、核酸架橋剤、紫外線、ガンマ照射線および熱での処理からなる群から選択される方法を含む、請求項1記載の方法。ウイルス不活性化が、第1溶出液のpHを約3~約4のpHに低下させることを含む、請求項9記載の方法。ウイルス不活性化中に、第1溶出液を約30~約90分間インキュベートする、請求項10記載の方法。デプス濾過工程の前に、不活性化溶出液をpH5~10に調節する、請求項1記載の方法。デプス濾過工程が、少なくとも1つのデプスフィルターでの濾過を含む、請求項1記載の方法。デプス濾過工程が、直列または並列に配置された少なくとも2つのデプスフィルターでの濾過を含む、請求項1記載の方法。デプス濾過工程の後、カプセル滅菌濾過工程を行う、請求項1記載の方法。イオン交換膜が、Q膜を含む、請求項1記載の方法。Q膜工程をフロースルー形態で行う、請求項16記載の方法。イオン交換膜工程の後、カプセル滅菌濾過工程を行う、請求項1記載の方法。不活性化溶出液を1つのデプスフィルターでプロセス化し、濾過溶出液を直列のイオン交換膜でプロセス化する、請求項1記載の方法。第2溶出液を更に、追加的クロマトグラフィー工程に付す、請求項1記載の方法。追加的クロマトグラフィー工程が、疎水性相互作用クロマトグラフィー、混合形態クロマトグラフィーおよび陽イオン交換クロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項20記載の方法。第2溶出液を更に、ナノ濾過工程に付す、請求項1記載の方法。第2溶出液を更に、限外濾過およびダイアフィルトレーション工程に付す、請求項1記載の方法。タンパク質の精製方法であって、a.タンパク質を含有するサンプルを準備し、b.該サンプルを清澄化して清澄化サンプルを得、c.該清澄化サンプルを捕捉クロマトグラフィー樹脂でプロセス化して、該タンパク質を含む第1溶出液を得、d.第1溶出液中のウイルスを不活性化させて、該タンパク質を含む不活性化溶出液を得、e.該不活性化溶出液を少なくとも1つのデプスフィルターでプロセス化して、該タンパク質を含む濾過溶出液を得、f.該濾過溶出液を少なくとも1つのイオン交換膜でプロセス化して、該タンパク質を含む第2溶出液を得、g.該第2溶出液を追加的クロマトグラフィー樹脂でプロセス化して、該タンパク質を含む第3溶出液を得、h.該第3溶出液をナノ濾過に付して、該タンパク質を含むナノ濾過溶出液を得、およびi.該ナノ濾過溶出液を限外濾過およびダイアフィルトレーションに付すことを含む、前記精製方法。追加的クロマトグラフィー樹脂が、混合形態クロマトグラフィー樹脂を含む、請求項24記載の方法。追加的混合形態クロマトグラフィー樹脂での第2溶出液のプロセス化が、陰イオン交換、陽イオン交換、疎水性相互作用、親水性相互作用、水素結合、π-π結合および金属アフィニテイからなる群から選択される1以上のクロマトグラフィー技術を含む、請求項25記載の方法。追加的混合形態クロマトグラフィー樹脂での第2溶出液のプロセス化が、陰イオン交換および疎水性相互作用クロマトグラフィー法の組合せを含む、請求項26記載の方法。混合形態クロマトグラフィーカラムが、フロースルーまたは結合-溶出形態で操作されうる、請求項26記載の方法。追加的クロマトグラフィー樹脂が、陽イオン交換樹脂を含む、請求項24記載の方法。追加的混合形態クロマトグラフィー樹脂での第2溶出液のプロセス化が、陰イオン交換、陽イオン交換、疎水性相互作用、親水性相互作用、水素結合、π-π結合および金属アフィニテイからなる群から選択される1以上のクロマトグラフィー技術を含む、請求項29記載の方法。追加的混合形態クロマトグラフィー樹脂での第2溶出液のプロセス化が、陰イオン交換および疎水性相互作用クロマトグラフィー法の組合せを含む、請求項30記載の方法。陽イオン交換クロマトグラフィーカラムが、結合-溶出形態で操作される、請求項29記載の方法。以下の実施例は本発明の種々の実施形態を記載している。本明細書または本明細書に開示されている本発明の実施を考慮することにより、本発明における特許請求の範囲内の他の実施形態が当業者に明らかであろう。本明細書は、該実施例と共に、専ら例示に過ぎないとみなされ、本発明の範囲および精神は、該実施例に続く特許請求の範囲により定められると意図される。[実施例1一般的に言えば、タンパク質サンプルMAbAを一連の回収、捕捉および精製工程により細胞培養上清から精製した。該初期回収工程は遠心分離およびデプス濾過を含むものであった。該捕捉工程はプロテインAクロマトグラフィーならびにそれに続くウイルス不活性化、デプス濾過およびMustang登録商標Q膜クロマトグラフィーを含むものであった。該精密精製工程は疎水性相互作用クロマトグラフィー、ナノ濾過および限外濾過/ダイアフィルトレーションを含むものであった。ついで最終産物を濾過し、瓶詰し、凍結させた。該回収および捕捉操作は、室温で行った。該精密精製工程は、特に示されていない限り、17±2°Cで行った。3つのバッチの3000Lの、MAbAのバイオリアクター回収物を、この方法により精製した。初期回収製造用バイオリアクタータンクから細胞および細胞残渣を除去するために、遠心分離およびデプス濾過による初期回収を用いた。Alfa-LavalBTUX510遠心機をこのプロセス工程に使用した。3000Lの製造用バイオリアクターを、連続的流動ディスクスタック遠心機への供給タンクとして使用した。該遠心機を、約5200rpmで28L/分の供給速度で運転した。遠心分離された回収物を次いで、10個の1.1m2Millipore登録商標X0HC媒体Pod単位からなるフィルター列に通過させた。該バイオリアクターの内容物をデプスフィルターに付した後、該フィルター列を次いで、200kgの25mMTris、100mM塩化ナトリウムpH7.2で洗浄し、次いで空気ブローに付して残存濾液を除去した。該回収物の遠心分離および濾過を単一単位の操作で行った。該濾液を3000Lの回収タンク内に集め、4~12°Cに冷却し、5日間まで維持した。1つの実施においては、該遠心機を使用せず、その代わりに一連のPodフィルターを使用して該物質をプロセス化した。合計15個のD0HCフィルターおよび10個のX0HCフィルターを使用して、約3000Lの回収物を清澄化した。この場合もまた、ついで該フィルター列を200kgの25mMTris、100mM塩化ナトリウムpH7.2で洗浄し、ついで空気ブローに付して残存濾液を除去した。該デプスフィルターのみを使用した場合の清澄化収率は、遠心機およびデプスフィルターの両方を使用した場合に類似していた。総合すると、平均回収工程収率は91であり、平均回収濃度は1.85g/Lであった。回収物の遠心分離および濾過操作の結果を表1に要約する。プロテインA捕捉クロマトグラフィー該清澄化回収物から該タンパク質を捕捉し、プロセス化関連不純物の量を減少させるために、プロテインAクロマトグラフィーを用いた。ProSep登録商標UltraPlus樹脂MilliporeおよびQuickscaleクロマトグラフィーカラムMilliporeをこのプロセス化工程に使用した。該プロテインA捕捉カラムは35cmの直径および20cmの標的高カラム床体積19.2Lを有していた。該カラムにおけるMAbAのローディング限界はプロテインA樹脂1リットル当たりサンプル42グラムであった。各バッチに関して7サイクルを完了した。該工程は室温で行い、36g/Lまでは720cm/時、39g/Lまでは480cm/時、そして42g/Lまでは240cm/時の3段階直線速度ローディングを用いた。該カラムを25mMTris、100mM塩化ナトリウムpH7.2で平衡化し、清澄化回収物をローディングした。ローディング後、該カラムをベースライン吸光度A280まで平衡化バッファーで洗浄した。プロセス化関連不純物の量を減少させるために、20mMクエン酸ナトリウム/クエン酸、0.5M塩化ナトリウムpH6.0の第2の洗浄を行った。平衡化バッファーの第3の洗浄を行うことにより、光学濃度OD、pHおよび伝導率がベースラインに戻った。該産物を0.1M酢酸pH3.5で該カラムから溶出した。1cmの光路長における280nmでの前部の1ODから尾部の1ODまで、該溶出液を集めた。各細胞培養バッチに関して、該カラムを更に6回循環サイクルさせて、予想される約5500gの粗タンパク質をプロセス化した。各サイクル間で、該カラムを0.2M酢酸で再生させた。該溶出液プールを5日間維持し、4~12°Cに冷却した後、低pHウイルス不活性化工程に進めた。プロテインA捕捉工程の実施データおよび収率を表2に示す。平均カラムローディング量は、各バッチの第7サイクルこれは、残存ロード容量を用いて部分的にローディングされた以外は、サイクル当たり樹脂1L当たりタンパク質約42gであった。プロテインA捕捉工程の平均収率は90であった。捕捉カラム操作は、溶出クロマトグラフィープロファイルに関して一貫していた。重ね合せを図5および図6に示す。ウイルス不活性化、デプス濾過およびQ膜クロマトグラフィー存在しうる外来性ウイルスを不活性化するために、プロテインA溶出液プールを低pHに付した。該工程は、室温で行った。該低pH不活性化工程は、該溶出液プールのpHを0.5Mリン酸で3.5±0.125°Cで測定に調節することにより行った。60~90分間の維持時間の後、該不活性化物質を、3.0Mトロラミンを使用してpH8.0±0.125°Cで測定に中和し、5.0±0.5mS/cmの伝導率になるまで精製水で希釈した。中和後、該pH不活性化物質をフィルター列に通過させて、保持タンクに入れた。該フィルター列は2つの成分からなるものであった。第1成分は6個の1.1m2Millipore登録商標X0HC媒体Pod単位からなり、第2成分は780mLPallMustang登録商標Qクロマトグラフィーカプセルであった。該Mustang登録商標Qカプセルへの平均ローディングはQカプセル1mL当たりタンパク質6.3gであった。デプス濾過後、そして再び、Q膜プロセス化の後、該サンプルをSartopore登録商標220インチ0.45μm0.2μmカプセルフィルターに通過流動させた。該供給タンクの内容物を濾過した後、該フィルター列を次いで、約100kgの25mMトロラミンおよび40mM塩化ナトリウムで洗浄した。該流出液を22°C以下で1日間まで維持した。他の場合には、該流出液を8°C以下に冷却し、3日間まで維持した後、PhenylSepharose登録商標HPクロマトグラフィー工程に進めた。該低pH不活性化および濾過操作の結果を表3に要約する。Mustang登録商標Qカプセルへの平均ローディングはQカプセル1mL当たりタンパク質6.3gQカプセル1mL当たりタンパク質409mLと等価であった。それらの3つの実施は96の平均工程収率を示した。疎水性相互作用クロマトグラフィー該Q膜流出液中に存在しうるプロセス化関連不純物および凝集した抗体の量を減少させるために、PhenylSepharose登録商標HPクロマトグラフィーを用いた。この純化工程の前に、該Q膜流出液を、1.0M硫酸アンモニウムおよび18mM硫酸ナトリウムの標的濃度を含むように2.2M硫酸アンモニウムおよび40mMリン酸ナトリウムpH7.0で希釈し、ついでSartopore登録商標210インチ0.45μm0.2μmカプセルフィルターで濾過した後、該カラム上にローディングした。PhenylSepharose登録商標HP疎水性相互作用樹脂GEHealthcareおよびChromaflow登録商標AcrylicクロマトグラフィーカラムGEHealthcareをこのプロセス化工程に使用した。該フェニルカラムは60cmの直径および15±1cmカラム床体積42.4Lの標的高を有していた。該カラムにおけるローディング限界はPhenylSepharose登録商標HP樹脂1リットル当たりサンプル40グラムであった。該工程は17±2°Cおよび75cm/時の流速で行った。第1サイクルの開始前に、必要に応じて、該ローディング物質を17±2°Cに加温した。該カラムを水で前洗浄し、1.0M硫酸アンモニウムおよび18mMリン酸ナトリウムpH7.0で平衡化した。平衡化後、該カラムに希釈したフェニルローディング物をローディングした。ローディング後、該カラムをベースライン吸光度A280まで、それぞれ、1.1M硫酸アンモニウムおよび20mMリン酸ナトリウムpH7.0、ならびにそれに続く0.95M硫酸アンモニウムおよび17mMリン酸ナトリウムpH7.0で洗浄した。該産物を、37.5cm/時の低下した流速で、0.55M硫酸アンモニウムおよび10mMリン酸ナトリウムpH7.0で、該カラムから可搬性タンク内に溶出した。1cmの光路長における280nmでの前部の5ODから尾部の1ODまで、溶出液を集めた。各細胞培養バッチに関して、該カラムを更に2回循環サイクルさせて、予想される約4700gのタンパク質サンプルをプロセス化した。各サイクル間で、該カラムを注射用水WFIで再生させた。該溶出液を22°C以下で1日間維持した。所望により、該溶出液を8°C以下に冷却し、ナノ濾過工程に進める前に10日間まで維持することが可能である。フェニルカラム操作は、溶出クロマトグラフィープロファイルに関して一貫していた。重ね合せを図7および図8に示す。PhenylSepharose登録商標HPクロマトグラフィーの実施データおよび収率を表4に詳細に示す。平均カラムローディング量はサイクル当たり樹脂1L当たりタンパク質約36gであった。PhenylSepharose登録商標工程の平均収率は89であった。ナノ濾過PhenylSepharose登録商標HP精製物質中に潜在的に存在しうる直径20nm以上の外来性ウイルスを除去するために、ナノ濾過を用いた。該ナノ濾過フィルター列は、並列の、2つの20インチSartoriusVirosart登録商標CPVフィルター合計2.8m2の公称フィルター面積または2つの20インチPallDV20フィルターのための保護フィルターとしての2つのPall0.15m20.1μmFluorodyne登録商標IIPVDFカプセルフィルター合計0.3m2の公称フィルター面積を含むものであった。該工程は10~14°Cで行った。該濾過をモニターするために、プレフィルターの上流および各ナノフィルターハウジングの上流に圧力計を設置した。該濾過中、圧力を32psig以下に維持した。Phenyl溶出液の全てが濾過された後、該フィルター列を25kgの15mMヒスチジンpH6.0で洗浄して、該フィルターハウジング内に保持されている可能性のあるタンパク質サンプルを回収した。各細胞培養バッチに関して、1つのナノ濾過を行った。該濾液を1日間まで22°C以下に維持し、または8°C以下に冷却し、製剤化工程に進める前に10日間まで維持した。該ナノ濾過操作の平均収率は99であった。Sartoriusフィルターの平均フィルターローディングは1実施当たり130L/m21実施当たり1413g/m2と等価であった。DV20ローディングは1実施当たり61L/m21実施当たり693g/m2と等価であった。濾液体積、濾液濃度および収量に基づけば、濾過操作は一貫していた。操作および収量を表5に詳細に示す。製剤化限外濾過およびダイアフィルトレーションウイルス濾液の各ロットを濃縮し、限外濾過およびダイアフィルトレーションにより製剤化した。30kDの分子量カットオフおよび2.5m2の表面積合計7.5m2の公称フィルター面積をそれぞれが有する3つのMilliporePellicon登録商標2BiomaxUFModuleを、該製剤化操作の最初の部分に使用した。該工程は10~14°Cで行った。該ウイルス濾液を、まず、限外濾過により70g/Lの目標値まで濃縮した。次に、少なくとも8容量の19mMヒスチジンpH5.6での連続的ダイアフィルトレーションを行った。ダイアフィルトレーション後、薬物を195g/Lの目標値まで更に濃縮した。ついで産物を該限外濾過系から排出させ、該濾過系を約8kgの19mMヒスチジンpH5.6で洗浄して、該系内に保持された産物を回収した。該濃縮物および洗液を合わせて、130~150g/Lの目標濃度を有するダイアフィルトレーションサンプルを得た。ついで該製剤化濃縮物をSartopore登録商標2,800無菌カプセルフィルターを介して保持タンク内に濾過した。該濾液を22°C以下で7日間まで維持した後、最終瓶詰工程に進めた。該製剤化操作の平均収率は99であった。最終濃縮液体積、濃度および収率に基づけば、製剤化操作は一貫していた表6を参照されたい。濾過、瓶詰および凍結瓶詰操作を2~8°Cの流動フード内で行った。該サンプルをMillipak登録商標2000.22μmフィルターを介して、予め滅菌された発熱物質非含有ポリエチレンテレフタラートグリコール容器内に送り出した。2Lボトル当たり約1.6Lが充填された。該瓶詰操作の終了から3時間以内に、ラベルが付された該充填ボトルを-80°Cで凍結させた。該最終瓶詰操作の平均収率は99であった。タンパク質濃度、タンパク質量および最終収率に基づけば、該瓶詰操作は一貫していた表7を参照されたい。収率の要約各プロセス化工程からの収率を表8に示す。リアクター最終量および瓶詰バルク薬物質量を、総収率を計算するために用いた。平均計算総収率は60であった。プロセス化間in-processサンプリングに関する補正を行った場合には、平均計算総収率は68であった。製品の質最終バルク薬物質を品質特性の全項目に関して試験した。総合すると、最終薬物のそれらの3つのバッチは、試験した全ての特性に関して一貫しており、仕様の範囲内であった表9を参照されたい。[実施例2]この実施例においては、実施例1に記載されているのに非常に類似したタンパク質精製方法を、MAbBを精製するために行った。それらの2つの方法における相違は本明細書に記載されている。該方法の態様が詳細に記載されていない場合、それは、実施例1に記載されているとおりである。初期回収遠心分離およびデプス濾過を初期回収工程として用いた。該遠心分離法は、実施例1に記載されているのと同じであった。ついで該遠心分離回収物を、10個の1.1m2Millipore登録商標X0HC媒体Pod単位からなるフィルター列に通過させた。ついで該サンプルを直列の3個の30インチSartopore登録商標20.45/0.2μmフィルターで濾過した。該サンプルを濾過した後、それを200kgの25mMTris、100mM塩化ナトリウムpH7.2で洗浄し、ついで空気ブローに付して残存濾液を除去した。該回収物の遠心分離および濾過は、単一単位操作として行った。該濾液を3000Lの回収タンク内に集め、4~12°Cに冷却し、5日間まで維持した。プロテインA捕捉クロマトグラフィー実施例2のプロテインA捕捉工程は、実施例1に記載されているものに実質的に類似していた。該カラムのローディング限界はプロテインA樹脂1リットル当たりMAbB43グラムであった。各バッチに関して8~9サイクルを完了した。該工程は室温で行い、30g/Lまでは600cm/時および43g/Lまでは400cm/時の2工程直線速度ローディングを用いた。各サイクルの再生のために0.15Mリン酸pH1.5を使用した。5サイクルごとに、および該方法の終了時に、洗浄のために6M尿素を使用した。50mMNa酢酸pH5、2ベンジルアルコールを殺菌および保存のために使用した。ウイルス不活性化、デプス濾過およびQ膜クロマトグラフィー該方法における次の工程は、ウイルス不活性化、デプス濾過およびクロマトグラフィーを含む組合せ工程である。この工程においては、実施例1に記載されているのと同様にして、低pH不活性化を行った。不活性化後、8.8m2X0HCPodおよびそれに続く2個の780mLMustang登録商標Q膜吸着材これらは並列に設置されていたに該サンプルを通過流動させた。該Q膜吸着材を通過する流速は10CV/分であった。デプス濾過後、そして再びQ膜プロセス化後、Sartopore登録商標230インチ0.45μm0.2μmカプセルフィルターに該サンプルを通過流動させた。疎水性相互作用クロマトグラフィーPhenylSepharose登録商標HP疎水性相互作用樹脂GEHealthcareおよびChromaflow登録商標AcrylicクロマトグラフィーカラムGEHealthcareをこのプロセス化工程に使用した。該フェニルカラムは80cmの直径および15±1cmの標的高を有していた。この純化工程の前に、該Q膜流出液を、1.1M硫酸アンモニウムおよび11mMリン酸ナトリウムの目標濃度を得るために2.2M硫酸アンモニウムおよび40mMリン酸ナトリウムpH7.0で希釈し、ついでSartopore登録商標20.45μm0.2μmカプセルフィルターで濾過した後、該カラム上にローディングした。該カラムを水で前洗浄し、20mMリン酸ナトリウムpH7.0溶液中の1.1M硫酸アンモニウムで平衡化した。平衡化後、該カラムに希釈したフェニルローディング物を75cm/時の流速でローディングした。ローディング後、該カラムをベースライン吸光度A280まで1.4M硫酸アンモニウムおよび25mMリン酸ナトリウムで洗浄した。該産物を、37.5cm/時の低下した流速で、0.625M硫酸アンモニウムおよび11mMリン酸ナトリウムpH7.0で、該カラムから溶出した。1cmの光路長における280nmでの前部の1ODから尾部の1ODまで、溶出液を集めた。該カラムで2サイクルにわたって該サンプルをプロセス化した。該カラムのローディング限界はPhenylSepharose登録商標HP樹脂の1リットル当たりサンプル64グラムであった。ナノ濾過該ナノ濾過フィルター列は、並列の2個の20インチSartoriusVirosart登録商標CPVフィルター合計2.8m2の公称フィルター面積のためのプレフィルターとしてSartorius0.1μmMaxicap登録商標フィルターを含むものであった。該濾過中、圧力を34psig以下に維持した。製剤化限外濾過およびダイアフィルトレーションウイルス濾液の各ロットを濃縮し、限外濾過およびダイアフィルトレーションにより製剤化した。30kDの分子量カットオフを有するMilliporePellicon登録商標2BiomaxUFModule合計膜面積10m2を、該製剤化操作の最初の部分に使用した。該ウイルス濾液を、まず、限外濾過により50g/Lの目標値まで濃縮した。次に、少なくとも8容量の23mMヒスチジンpH5.6での連続的ダイアフィルトレーションを行った。ダイアフィルトレーション後、薬物を180g/Lの目標値まで更に濃縮した。ついで産物を該限外濾過系から排出させ、該濾過系を約6~8kgの15mMヒスチジンpH5.6で洗浄して、該系内に保持された産物を回収した。該濃縮物および洗液を合わせて、120~160g/Lの目標濃度を有するダイアフィルトレーションサンプルを得た。濾過、瓶詰および凍結を、実施例1に記載されているとおりに行った。MAbBに関する精製収率および最終製品品質を表10および表11に要約する。69の平均総精製収率で4個のバッチが成功裏に実施された。全バッチの最終バルク薬物における不純物のレベルは比較しうるものであり、製品品質仕様を満たしていた。[実施例3]この実施例においては、実験室規模でMAbAを精製するために、もう1つのタンパク質精製方法を行った。実施例1に記載されている第3バッチ実施からのX0HC濾液を、1MTrispH9.5溶液を加えることによりpH8.1に調節し、1MNaClを加えることにより伝導率を9mS/cmに調節した。ついで約270mLの調節濾液を並列の3個の0.18mlAcrodisc登録商標Mustang登録商標Q膜吸着材装置に通過流動させた。該Q膜フロースループールの伝導率を、1MNaClを加えることにより9mS/cmに更に調節し、ついで0.22μmでの濾過を行った。ついでこの調節プールを5mLの前充填Capto登録商標付着カラムに3分の滞留時間流速で通過流動させた。Capto登録商標付着カラム上のローディングレベルは221mg/mlであり、供給ローディング後、20CVの平衡化バッファーでの洗浄を行った。UV280測定に基づいて、産物ローディング中の200mAUからバッファー洗浄中の200mAUまで、該産物プールを集めた。該実験は室温で行った。Capto登録商標付着産物プールの濃度および体積を測定して工程収率を計算し、SECを用いて凝集物/単量体に関して、そして社内ELISAアッセイを用いてHCPおよびプロテインAレベルに関して、該プールを分析した。該実験室規模Q膜フロースルーは93~97の工程収率を示し、Capto登録商標付着カラム純化工程は89の工程収率を与えた。したがって、最終純化のためにCapto登録商標付着を使用した総プロセス化収率は、実施例1に示したPhenylSepharose登録商標HPを使用した場合に類似している。また、表12に示すとおり、Capto登録商標付着精製後の産物プールの品質も製品仕様を満たした。[実施例4]この実施例においては、実験室規模でMAbBを精製するために、実施例3に記載されているものに類似したタンパク質精製方法を行った。実施例2に記載されている第2バッチ実施からのQ膜フロースループールを、1MTrispH9.5を加えることによりpH8.1に調節し、1MNaClを加えることにより伝導率を6mS/cmに調節した後、0.22μm膜での濾過を行った。ついでこの調節プールを5mLの前充填Capto登録商標付着カラムに3分の滞留時間流速で通過流動させた。Capto登録商標付着カラム上のローディングレベルは256mg/mlであり、供給ローディング後、20CVの平衡化バッファーでの洗浄を行った。UV280測定に基づいて、産物ローディング中の200mAUからバッファー洗浄中の200mAUまで、該産物プールを集めた。該実験は室温で行った。Capto登録商標付着産物プールの濃度および体積を測定して工程収率を計算し、SECを用いて凝集物/単量体に関して、そして社内ELISAアッセイを用いてHCPおよびプロテインAレベルに関して、該プールを分析した。該Capto登録商標付着カラム純化工程は91.6の工程収率を与え、これは、実施例2に示したPhenylSepharose登録商標HP結合-溶出工程に類似したものである。また、表13に要約するとおり、Capto登録商標付着精製後の産物プールの品質は製品仕様を満たした。[実施例5]この実施例においては、実験室規模でMAbBを精製するために、実施例4に記載されているものに類似したタンパク質精製方法を行った。実施例2に記載されている第2バッチ実施からのX0HC濾液を、1MTrispH9.5を加えることによりpH6.5に調節し、1MNaClを加えることにより伝導率を6mS/cmに調節した後、0.22μm膜での濾過を行った。ついでこの調節プールを5mLの前充填PPAHyperCel商標カラムに3分の滞留時間流速で通過流動させた。2回の実施を行った。該PPAHyperCel商標カラム上のローディングレベルはそれぞれ104および235mg/mlであり、各供給ローディング後、20CVの平衡化バッファーでの洗浄を行った。UV280測定に基づいて、産物ローディング中の200mAUからバッファー洗浄中の200mAUまで、該産物プールを集めた。該実験は室温で行った。該PPAHyperCel商標産物プールの濃度および体積を測定して工程収率を計算し、SECを用いて凝集物/単量体に関して、そして社内ELISAアッセイを用いてHCPおよびプロテインAレベルに関して、該プールを分析した。この実験の供給物は約98.1単量体1.7凝集物、7ng/mgHCPを含有し、23.6ng/mgプロテインAが添加された。該PPAHyperCel商標樹脂の性能を表14に要約する。より高いローディングレベル235mg/mlでの収率は92であり、これは、実施例2に示したPhenylSepharose登録商標HP純化工程の場合に匹敵するものであった。また、PPAHyperCel商標精製後の産物プールの品質は製品仕様を満たした。この実施のためのローディングはQ膜に付されなかったため、X0HC濾過とPPAハイパーセル純化工程との間にQ膜が使用されると製品品質は更に改良されると予想される。[実施例6この実施例においては、実験室規模でMAbBを精製するために、もう1つのタンパク質精製方法を行った。実施例2に記載されているプロテインA溶出液を、1MTrispH9.5溶液を加えることによりpH5に調節し、1MNaClを加えることにより伝導率を8mS/cmに調節した後、0.22μmでの濾過を行った。ついでこの調節プールを8mLのPorosXS登録商標LifeTechnologies陽イオン交換カラムに4分の滞留時間流速で通過流動させた。ローディング前に、該カラムを0.1MNaOHで洗浄し、50mM酢酸ナトリウム、35mMNaClpH5バッファーで平衡化した。72mg/mlMAbBをローディングした後、該カラムを平衡化バッファーで洗浄し、ついで50mM酢酸ナトリウム、220mMNaClpH5バッファーで溶出した。UV280測定に基づいて、200mAUから200mAUまで、該溶出液を集めた。該実験は室温で行った。該PorosXS登録商標産物プールの濃度および体積を測定して工程収率を計算し、SECを用いて凝集物/単量体に関して、そして社内ELISAアッセイを用いてHCPおよびプロテインAレベルに関して、該プールを分析した。表15はこの純化工程の精製性能を要約する。ほぼ100の工程収率が得られ、不純物のレベルの全ては製品仕様の範囲内である。この実施のためのローディングはX0HCPODおよびQ膜純化工程に付されなかったため、これらの工程が組込まれると製品品質は更に改良されると予想される。[実施例7]この実施例においては、実験室規模でMAbCを精製するために、もう1つのタンパク質精製方法を行った。実施例1に記載した低pHウイルス不活性化に付したMilliporePODデプス濾過物質を、該溶液に2M酢酸を加えることによりpH5に調節し、水で希釈することにより伝導率を5mS/cmに調節した後、0.22μmでの濾過を行った。ついで、これらのプロセス化不純物を除去するこのクロマトグラフィー樹脂の能力を調べるために、この調節物質に追加量のプロテインAおよび宿主細胞タンパク質を添加した。該添加物質を4.9mLのPorosXS登録商標LifeTechnologies陽イオン交換カラムに2.9分の滞留時間流速で通過流動させた。ローディング前に、該カラムを0.1MNaOHで洗浄し、100mM酢酸ナトリウムpH5バッファーで平衡化した。68mg/mlMAbCでローディングした後、該カラムを平衡化バッファーで洗浄し、ついで380mM酢酸ナトリウムpH5バッファーで溶出した。UV280測定に基づいて、200mAUから400mAUまで、該溶出液を集めた。該実験は室温で行った。該PorosXS登録商標産物プールの濃度および体積を測定して工程収率を計算し、SECを用いて凝集物/単量体に関して、そして社内ELISAアッセイを用いてHCPおよびプロテインAレベルに関して、該プールを分析した。表16は該精製性能を要約する。93の工程収率が得られ、不純物のレベルの全ては製品仕様の範囲内である。全ての論文、刊行物、特許、特許出願、発表、テキスト、報告、原稿、パンフレット、本、インターネット投稿、雑誌記事および/または定期刊行物これらに限定されるものではないを含む、本明細書中に引用されている全ての参考文献の全体を、参照により本明細書に組み入れることとする。本明細書における参考文献の考察は、それらの著者によりなされている主張を単に要約することを意図したものであり、いずれかの参考文献が先行技術を構成することを自認するものではない。本出願人は、引用参考文献の正確さ及び関連性に異議を申し立てる権利を保有する。添付の特許請求の範囲に、より厳密に記載されている、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明に対するこれらの及び他の修飾および変更が当業者により実施されうる。また、種々の実施形態の態様は全体的または部分的に交換されうると理解されるべきである。更に、前記の説明は単なる例示に過ぎず、添付の特許請求の範囲に更に詳細に記載されている本発明を限定するものではない、と当業者は理解するであろう。したがって、添付の特許請求の範囲の精神および範囲は、それに含まれる形態の説明に限定されるべきではない。"