被検化学物質を生体または細胞に所定期間曝露させた後の遺伝子発現レベルを測定することにより該被検化学物質の毒性を判別または予測する方法であって、A実験動物または肝臓由来の細胞試料を複数用意し、その一部について前記被検化学物質の曝露を所定期間だけ与えて検査試料とするとともに、残りを参照試料とするステップと、B前記検査試料について、配列番号1~147に示される塩基配列を有する遺伝子群としての生体応答遺伝子群のうちから選択される少なくとも1以上の選択生体応答遺伝子群に対する遺伝子の発現レベルを測定する第1の遺伝子発現レベル測定ステップと、B前記参照試料について、前記選択生体応答遺伝子群に対する遺伝子の発現レベルを測定する第2の遺伝子発現レベル測定ステップと、C前記第1の遺伝子発現レベル測定ステップ及び前記第2の遺伝子発現レベル測定ステップで測定した遺伝子発現レベルを対応する遺伝子ごとに比較し、前記遺伝子の発現レベルの差異に基づいて前記被験化学物質が有する肝毒性を評価するステップと、を含むことを特徴とする化学物質の毒性判別予測方法。前記遺伝子の発現レベルは、前記生体応答遺伝子群のうちのそれぞれの生体応答遺伝子におけるプロモーター配列に連結されたレポータータンパク質をコードする配列を含むレポーター遺伝子における発現レベルを指標として測定されることを特徴とする請求項1記載の化学物質の毒性判別予測方法。請求項2記載の方法に使用されるレポーター遺伝子を含む核酸構成物、これを含むベクター、又は、これらを宿主細胞に導入した形質転換細胞であって、前記生体応答遺伝子のプロモーター配列に連結されたレポータータンパク質をコードする配列を含むことを特徴とする核酸構成物、これを含むベクター、又は、これらを宿主細胞に導入した形質転換細胞。前記宿主細胞は、動物細胞、幹細胞、または胚性幹細胞であることを特徴とする請求項3記載の形質転換細胞。前記参照試料について、肝毒性を有することが公知である既知化学物質を含む複数の化学物質又は前記化学物質を溶解させた溶媒の曝露を前記所定期間だけ与えるステップを更に含むことを特徴とする請求項1記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記既知化学物質は、2ブタノンオキシムCAS登録番号96297、3シアノピリジンCAS登録番号100549、スルホランCAS登録番号126330、2イソプロポキシエタノールCAS登録番号109591、ヒドラジン一水和物CAS登録番号7803578、4エチルモルホリンCAS登録番号100743、3メトキシ3メチル1ブタノールCAS登録番号56539663、oジクロロベンゼンCAS登録番号95501、34キシリジンCAS登録番号95647、NメチルアニリンCAS登録番号100618、トリレンジイソシアナートCAS登録番号26471625、2ジブチルアミノエタノールCAS登録番号102818、pクミルフェノールCAS登録番号599644、mクレゾールCAS登録番号108394、23ジメチルアニリンCAS登録番号87592、NNジシクロヘキシルカルボジイミドCAS登録番号538750、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213、テトラブロモエタンCAS登録番号79276、PエチルフェノールCAS登録番号123079、24ジtertブチルフェノールCAS登録番号96764、35キシリジンCAS登録番号108690、13ジブロモプロパンCAS登録番号109648、1ブロモ3クロロプロパンCAS登録番号109706、ブソイドクメンCAS登録番号95636、14ジブロモベンゼンCAS登録番号106376から選択される少なくとも1以上の化学物質であることを特徴とする請求項5記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記遺伝子発現レベルの測定は、RTPCR法、RealTimePCR法、iAFLPintroducedAmplifiedFragmentLengthPolymorphism法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、nCounterAnalysissystem、ハイブリダイゼーション法のうちの1つの方法を用いることを特徴とする請求項1又は5に記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記ハイブリダイゼーション法は、マイクロアレイ法又はブロット法であることを特徴とする請求項7記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記マイクロアレイ法又はブロット法に用いられるプローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする請求項8記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項9記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする請求項9または10記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記遺伝子発現レベルの測定は、前記生体応答遺伝子に対応する核酸、又は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質について、存在するか、もしくは、量の測定によることを特徴とする請求項1又は5に記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記タンパク質は、免疫学的方法で測定されることを特徴とする請求項12記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記免疫学的方法は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質又はその断片に対する特異抗体と標的タンパク質との免疫学的複合体を検出する方法によることを特徴とする請求項13記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記特異抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、及び抗体フラグメントから選択されることを特徴とする請求項14記載の化学物質の毒性判別予測方法。化学物質が生体に与える影響を遺伝子発現レベルで検出することにより被検化学物質の毒性を判別するために用いられる照合データとしての遺伝子発現データベースを作成する方法であって、A2ブタノンオキシムCAS登録番号96297、3シアノピリジンCAS登録番号100549、2エタノールCAS登録番号111411、テトラヒドロフルフリルアルコールCAS登録番号97994、メタクリルアミドCAS登録番号79390、スルホランCAS登録番号126330、2イソプロポキシエタノールCAS登録番号109591、ヒドラジン一水和物CAS登録番号7803578、4エチルモルホリンCAS登録番号100743、メタクリル酸エチルトリメチルアンモニウムクロリドCAS登録番号5039781、塩化ベンジルトリメチルアンモニウムCAS登録番号56939、mニトロベンゼンスルホン酸ナトリウムCAS登録番号127684、1ナフチルアミン4スルホン酸ナトリウム四水和物CAS登録番号130132、3メトキシ3メチル1ブタノールCAS登録番号56539663、oジクロロベンゼンCAS登録番号95501、34キシリジンCAS登録番号95647、NメチルアニリンCAS登録番号100618、トリレンジイソシアナートCAS登録番号26471625、2ジブチルアミノエタノールCAS登録番号102818、pクミルフェノールCAS登録番号599644、mクレゾールCAS登録番号108394、23ジメチルアニリンCAS登録番号87592、NNジシクロヘキシルカルボジイミドCAS登録番号538750、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213、テトラブロモエタンCAS登録番号79276、アジピン酸ジブチルCAS登録番号105997、PエチルフェノールCAS登録番号123079、24ジtertブチルフェノールCAS登録番号96764、35キシリジンCAS登録番号108690、NNジメチルベンジルアミンCAS登録番号103833、13ジブロモプロパンCAS登録番号109648、nヘキサデカンCAS登録番号544763、1ブロモ3クロロプロパンCAS登録番号109706、ブソイドクメンCAS登録番号95636、ジシクロヘキシルアミンCAS登録番号101837、14ジブロモベンゼンCAS登録番号106376、及び2‐アミノ5メチルベンゼンスルホン酸CAS登録番号88448のそれぞれについて所定量を所定期間生体または肝臓由来の細胞試料に投与曝露するステップと、B前記生体の肝臓組織または前記肝臓由来の前記細胞試料からmRNAを単離して、配列番号1~147の塩基配列を有する遺伝子群生体応答遺伝子群のうちから選択される少なくとも1以上の生体応答遺伝子に対する遺伝子発現レベルを測定する測定ステップと、C前記遺伝子発現レベルを対応する前記化学物質、曝露量及び曝露期間とともに遺伝子発現データとしてデータベース化するステップと、を含むことを特徴とする照合用遺伝子発現データベース作成方法。前記測定ステップは、RTPCR法、RealTimePCR法、iAFLPintroducedAmplifiedFragmentLengthPolymorphism法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、nCounterAnalysissystem、ハイブリダイゼーション法のうちの1つを用いることを特徴とする、請求項16記載の照合用遺伝子発現データベース作成方法。前記ハイブリダイゼーション法は、マイクロアレイ法又はブロット法であることを特徴とする請求項17記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。前記マイクロアレイ法又はブロット法に用いられるプローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする請求項18記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項19記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする請求項19又は20に記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。前記測定ステップは、前記生体応答遺伝子に対応する核酸、又は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質について、存在するか、もしくは、量を測定によることを特徴とする請求項16記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。前記測定は、免疫学的方法によって行うことを特徴とする請求項22記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。前記免疫学的方法は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質又はその断片に対する特異抗体と標的タンパク質との免疫学的複合体を検出する方法であることを特徴とする請求項23記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。前記特異抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、及び抗体フラグメントから選択されることを特徴とする請求項24記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。化学物質が生体に与える影響を遺伝子発現レベルで検出することにより被検化学物質の毒性を判別予測する方法であって、A2ブタノンオキシムCAS登録番号96297、3シアノピリジンCAS登録番号100549、2エタノールCAS登録番号111411、テトラヒドロフルフリルアルコールCAS登録番号97994、メタクリルアミドCAS登録番号79390、スルホランCAS登録番号126330、2イソプロポキシエタノールCAS登録番号109591、ヒドラジン一水和物CAS登録番号7803578、4エチルモルホリンCAS登録番号100743、メタクリル酸エチルトリメチルアンモニウムクロリドCAS登録番号5039781、塩化ベンジルトリメチルアンモニウムCAS登録番号56939、mニトロベンゼンスルホン酸ナトリウムCAS登録番号127684、1ナフチルアミン4スルホン酸ナトリウム四水和物CAS登録番号130132、3メトキシ3メチル1ブタノールCAS登録番号56539663、oジクロロベンゼンCAS登録番号95501、34キシリジンCAS登録番号95647、NメチルアニリンCAS登録番号100618、トリレンジイソシアナートCAS登録番号26471625、2ジブチルアミノエタノールCAS登録番号102818、pクミルフェノールCAS登録番号599644、mクレゾールCAS登録番号108394、23ジメチルアニリンCAS登録番号87592、NNジシクロヘキシルカルボジイミドCAS登録番号538750、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213、テトラブロモエタンCAS登録番号79276、アジピン酸ジブチルCAS登録番号105997、PエチルフェノールCAS登録番号123079、24ジtertブチルフェノールCAS登録番号96764、35キシリジンCAS登録番号108690、NNジメチルベンジルアミンCAS登録番号103833、13ジブロモプロパンCAS登録番号109648、nヘキサデカンCAS登録番号544763、1ブロモ3クロロプロパンCAS登録番号109706、ブソイドクメンCAS登録番号95636、ジシクロヘキシルアミンCAS登録番号101837、14ジブロモベンゼンCAS登録番号106376、及び2‐アミノ5メチルベンゼンスルホン酸CAS登録番号88448のそれぞれについて所定量を所定期間生体または肝臓由来の細胞試料に投与曝露するステップと、B前記生体の肝臓組織または前記肝臓由来の前記細胞試料からmRNAを単離して、配列番号1~147の塩基配列を有する遺伝子群生体応答遺伝子群のうちから選択される少なくとも1以上の生体応答遺伝子に対する遺伝子発現レベルを測定する測定ステップと、C前記遺伝子発現レベルを対応する前記化学物質、曝露量、曝露期間とともに遺伝子発現データとして収集するステップと、D被検化学物質を適当な濃度で一定期間生体または肝臓由来の細胞試料に曝露させるステップと、E前記生体由来の前記肝臓組織または前記肝臓由来の細胞試料からmRNAを単離して、Bのステップで選択した生体応答遺伝子に対する遺伝子発現レベルを測定するステップと、FEで得られた前記遺伝子発現レベルを前記被検化学物質、曝露量及び曝露期間とともに遺伝子発現データとして収集するステップと、GFで収集された遺伝子発現データをCで収集された照合用の対応する遺伝子発現データと比較するステップと、を含むことを特徴とする化学物質の毒性判別予測方法。前記測定ステップは、RTPCR法、RealTimePCR法、iAFLPintroducedAmplifiedFragmentLengthPolymorphism法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、nCounterAnalysissystem、ハイブリダイゼーション法のうちの1つを用いることを特徴とする、請求項26記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記ハイブリダイゼーション法は、マイクロアレイ法又はブロット法であることを特徴とする請求項27記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記マイクロアレイ法又はブロット法に用いられるプローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする請求項28記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項29記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする請求項29又は30に記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記測定ステップは、前記生体応答遺伝子に対応する核酸、又は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質について、存在するか、もしくは量を測定によることを特徴とする請求項26記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記測定は、免疫学的方法によって行うことを特徴とする請求項32記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記免疫学的方法は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質又はその断片に対する特異抗体と標的タンパク質との免疫学的複合体を検出する方法であることを特徴とする請求項33記載の化学物質の毒性判別予測方法。前記特異抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、及び抗体フラグメントから選択されることを特徴とする請求項34記載の化学物質の毒性判別予測方法。請求項3及び4を除く、請求項1乃至35のうちのいずれか1つに記載の方法に用いられるプローブを含む化学物質の毒性判別キットであって、前記プローブは、前記生体応答遺伝子またはその転写産物に特異的にハイブリダイズする配列を有する分子を含むことを特徴とする化学物質の毒性判別キット。前記プローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする請求項36記載の化学物質の毒性判別キット。前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、又は合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項37記載の化学物質の毒性判別キット。前記ヌクレオチドは、前記生体応答遺伝子のセンス鎖又はアンチセンス鎖とハイブリダイズし、10~100塩基であることを特徴とする請求項38記載の化学物質の毒性判別キット。前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする請求項38または39記載の化学物質の毒性判別キット。前記プローブは、抗体及び/又はアプタマーであるタンパク質であることを特徴とする請求項36記載の化学物質の毒性判別キット。前記プローブは、少なくとも1つ以上を固体支持体に固定したDNAマイクロアレイ、DNAチップ、タンパクチップまたは抗体チップを含むことを特徴とする請求項36乃至41のうちのいずれか1つに記載の化学物質の毒性判別キット。前記固体支持体は、ガラス、シリコン、プラスチック又は生体膜であることを特徴とする請求項42記載の化学物質の毒性判別キット。従来の反復投与毒性試験は血液学的検査や病理組織学的検査を主体としており、それらの生物学的情報は限られている。さらに、病理組織学的検査での評価は、判断した者の主観に左右されやすく、同じ病態を見ているにもかかわらず別の表現を用いたり、異なる化学物質間の毒性を評価するための客観的な指標が乏しかった。また、複数の肝毒性を有する化学物質の曝露に対して大規模に遺伝子発現変動解析を行い、それらの化学物質の曝露により生体内で発現変動する遺伝子を特定した例も乏しく、必ずしも異なる複数の化学物質の肝毒性を評価できていなかった。本発明は化学物質の毒性を簡便かつ確実に検出するための客観的な指標の一つを提供することを課題とする。本発明者は、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213をラットに28日間反復投与したことにより、ラットの肝臓で統計的に有意に発現変動した遺伝子が147遺伝子存在していることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明は以下を提供する。1.被検化学物質を生体または細胞に所定期間曝露させた後の遺伝子発現レベルを測定することにより該被検化学物質の毒性を判別または予測する方法であって、A実験動物または肝臓由来の細胞試料を複数用意し、その一部について前記被検化学物質の曝露を所定期間だけ与えて検査試料とするとともに、残りを参照試料とするステップと、B前記検査試料について、配列番号1~147に示される塩基配列を有する遺伝子群としての生体応答遺伝子群のうちから選択される少なくとも1以上の選択生体応答遺伝子群に対する遺伝子の発現レベルを測定する第1の遺伝子発現レベル測定ステップと、B前記参照試料について、前記選択生体応答遺伝子群に対する遺伝子の発現レベルを測定する第2の遺伝子発現レベル測定ステップと、C前記第1の遺伝子発現レベル測定ステップ及び前記第2の遺伝子発現レベル測定ステップで測定した遺伝子発現レベルを対応する遺伝子ごとに比較し、前記遺伝子の発現レベルの差異に基づいて前記被験化学物質が有する肝毒性を評価するステップと、を含むことを特徴とする化学物質の毒性判別予測方法。2.前記遺伝子の発現レベルは、前記生体応答遺伝子群のうちのそれぞれの生体応答遺伝子におけるプロモーター配列に連結されたレポータータンパク質をコードする配列を含むレポーター遺伝子における発現レベルを指標として測定されることを特徴とする前記1記載の化学物質の毒性判別予測方法。3.前記2記載の方法に使用されるレポーター遺伝子を含む核酸構成物、これを含むベクター、又は、これらを宿主細胞に導入した形質転換細胞であって、前記生体応答遺伝子のプロモーター配列に連結されたレポータータンパク質をコードする配列を含むことを特徴とする核酸構成物、これを含むベクター、又は、これらを宿主細胞に導入した形質転換細胞。4.前記宿主細胞は、動物細胞、幹細胞、または胚性幹細胞であることを特徴とする前記3記載の形質転換細胞。5.前記参照試料について、肝毒性を有することが公知である既知化学物質を含む複数の化学物質又は前記化学物質を溶解させた溶媒の曝露を前記所定期間だけ与えるステップを更に含むことを特徴とする前記1記載の化学物質の毒性判別予測方法。6.前記既知化学物質は、2ブタノンオキシムCAS登録番号96297、3シアノピリジンCAS登録番号100549、スルホランCAS登録番号126330、2イソプロポキシエタノールCAS登録番号109591、ヒドラジン一水和物CAS登録番号7803578、4エチルモルホリンCAS登録番号100743、3メトキシ3メチル1ブタノールCAS登録番号56539663、oジクロロベンゼンCAS登録番号95501、34キシリジンCAS登録番号95647、NメチルアニリンCAS登録番号100618、トリレンジイソシアナートCAS登録番号26471625、2ジブチルアミノエタノールCAS登録番号102818、pクミルフェノールCAS登録番号599644、mクレゾールCAS登録番号108394、23ジメチルアニリンCAS登録番号87592、NNジシクロヘキシルカルボジイミドCAS登録番号538750、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213、テトラブロモエタンCAS登録番号79276、PエチルフェノールCAS登録番号123079、24ジtertブチルフェノールCAS登録番号96764、35キシリジンCAS登録番号108690、13ジブロモプロパンCAS登録番号109648、1ブロモ3クロロプロパンCAS登録番号109706、ブソイドクメンCAS登録番号95636、14ジブロモベンゼンCAS登録番号106376から選択される少なくとも1以上の化学物質であることを特徴とする前記5記載の化学物質の毒性判別予測方法。7.前記遺伝子発現レベルの測定は、RTPCR法、RealTimePCR法、iAFLPintroducedAmplifiedFragmentLengthPolymorphism法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、nCounterAnalysissystem、ハイブリダイゼーション法のうちの1つの方法を用いることを特徴とする前記1又は5に記載の化学物質の毒性判別予測方法。8.前記ハイブリダイゼーション法は、マイクロアレイ法又はブロット法であることを特徴とする前記7記載の化学物質の毒性判別予測方法。9.前記マイクロアレイ法又はブロット法に用いられるプローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする前記8記載の化学物質の毒性判別予測方法。10.前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする前記9記載の化学物質の毒性判別予測方法。11.前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする前記9または10記載の化学物質の毒性判別予測方法。12.前記遺伝子発現レベルの測定は、前記生体応答遺伝子に対応する核酸、又は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質について、存在するか、もしくは、量の測定によることを特徴とする前記1又は5に記載の化学物質の毒性判別予測方法。13.前記タンパク質は、免疫学的方法で測定されることを特徴とする前記12記載の化学物質の毒性判別予測方法。14.前記免疫学的方法は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質又はその断片に対する特異抗体と標的タンパク質との免疫学的複合体を検出する方法によることを特徴とする前記13記載の化学物質の毒性判別予測方法。15.前記特異抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、及び抗体フラグメントから選択されることを特徴とする前記14記載の化学物質の毒性判別予測方法。16.化学物質が生体に与える影響を遺伝子発現レベルで検出することにより被検化学物質の毒性を判別するために用いられる照合データとしての遺伝子発現データベースを作成する方法であって、A2ブタノンオキシムCAS登録番号96297、3シアノピリジンCAS登録番号100549、2エタノールCAS登録番号111411、テトラヒドロフルフリルアルコールCAS登録番号97994、メタクリルアミドCAS登録番号79390、スルホランCAS登録番号126330、2イソプロポキシエタノールCAS登録番号109591、ヒドラジン一水和物CAS登録番号7803578、4エチルモルホリンCAS登録番号100743、メタクリル酸エチルトリメチルアンモニウムクロリドCAS登録番号5039781、塩化ベンジルトリメチルアンモニウムCAS登録番号56939、mニトロベンゼンスルホン酸ナトリウムCAS登録番号127684、1ナフチルアミン4スルホン酸ナトリウム四水和物CAS登録番号130132、3メトキシ3メチル1ブタノールCAS登録番号56539663、oジクロロベンゼンCAS登録番号95501、34キシリジンCAS登録番号95647、NメチルアニリンCAS登録番号100618、トリレンジイソシアナートCAS登録番号26471625、2ジブチルアミノエタノールCAS登録番号102818、pクミルフェノールCAS登録番号599644、mクレゾールCAS登録番号108394、23ジメチルアニリンCAS登録番号87592、NNジシクロヘキシルカルボジイミドCAS登録番号538750、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213、テトラブロモエタンCAS登録番号79276、アジピン酸ジブチルCAS登録番号105997、PエチルフェノールCAS登録番号123079、24ジtertブチルフェノールCAS登録番号96764、35キシリジンCAS登録番号108690、NNジメチルベンジルアミンCAS登録番号103833、13ジブロモプロパンCAS登録番号109648、nヘキサデカンCAS登録番号544763、1ブロモ3クロロプロパンCAS登録番号109706、ブソイドクメンCAS登録番号95636、ジシクロヘキシルアミンCAS登録番号101837、14ジブロモベンゼンCAS登録番号106376、及び2‐アミノ5メチルベンゼンスルホン酸CAS登録番号88448のそれぞれについて所定量を所定期間生体または肝臓由来の細胞試料に投与曝露するステップと、B前記生体の肝臓組織または前記肝臓由来の前記細胞試料からmRNAを単離して、配列番号1~147の塩基配列を有する遺伝子群生体応答遺伝子群のうちから選択される少なくとも1以上の生体応答遺伝子に対する遺伝子発現レベルを測定する測定ステップと、C前記遺伝子発現レベルを対応する前記化学物質、曝露量及び曝露期間とともに遺伝子発現データとしてデータベース化するステップと、を含むことを特徴とする照合用遺伝子発現データベース作成方法。17.前記測定ステップは、RTPCR法、RealTimePCR法、iAFLPintroducedAmplifiedFragmentLengthPolymorphism法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、nCounterAnalysissystem、ハイブリダイゼーション法のうちの1つを用いることを特徴とする、前記16記載の照合用遺伝子発現データベース作成方法。18.前記ハイブリダイゼーション法は、マイクロアレイ法又はブロット法であることを特徴とする前記17記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。19.前記マイクロアレイ法又はブロット法に用いられるプローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする前記18記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。20.前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする前記19記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。21.前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする前記19又は20に記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。22.前記測定ステップは、前記生体応答遺伝子に対応する核酸、又は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質について、存在するか、もしくは、量を測定によることを特徴とする前記16記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。23.前記測定は、免疫学的方法によって行うことを特徴とする前記22記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。24.前記免疫学的方法は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質又はその断片に対する特異抗体と標的タンパク質との免疫学的複合体を検出する方法であることを特徴とする前記23記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。25.前記特異抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、及び抗体フラグメントから選択されることを特徴とする前記24記載の照合用遺伝子発現データベースの作成方法。26.化学物質が生体に与える影響を遺伝子発現レベルで検出することにより被検化学物質の毒性を判別予測する方法であって、A2ブタノンオキシムCAS登録番号96297、3シアノピリジンCAS登録番号100549、2エタノールCAS登録番号111411、テトラヒドロフルフリルアルコールCAS登録番号97994、メタクリルアミドCAS登録番号79390、スルホランCAS登録番号126330、2イソプロポキシエタノールCAS登録番号109591、ヒドラジン一水和物CAS登録番号7803578、4エチルモルホリンCAS登録番号100743、メタクリル酸エチルトリメチルアンモニウムクロリドCAS登録番号5039781、塩化ベンジルトリメチルアンモニウムCAS登録番号56939、mニトロベンゼンスルホン酸ナトリウムCAS登録番号127684、1ナフチルアミン4スルホン酸ナトリウム四水和物CAS登録番号130132、3メトキシ3メチル1ブタノールCAS登録番号56539663、oジクロロベンゼンCAS登録番号95501、34キシリジンCAS登録番号95647、NメチルアニリンCAS登録番号100618、トリレンジイソシアナートCAS登録番号26471625、2ジブチルアミノエタノールCAS登録番号102818、pクミルフェノールCAS登録番号599644、mクレゾールCAS登録番号108394、23ジメチルアニリンCAS登録番号87592、NNジシクロヘキシルカルボジイミドCAS登録番号538750、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213、テトラブロモエタンCAS登録番号79276、アジピン酸ジブチルCAS登録番号105997、PエチルフェノールCAS登録番号123079、24ジtertブチルフェノールCAS登録番号96764、35キシリジンCAS登録番号108690、NNジメチルベンジルアミンCAS登録番号103833、13ジブロモプロパンCAS登録番号109648、nヘキサデカンCAS登録番号544763、1ブロモ3クロロプロパンCAS登録番号109706、ブソイドクメンCAS登録番号95636、ジシクロヘキシルアミンCAS登録番号101837、14ジブロモベンゼンCAS登録番号106376、及び2‐アミノ5メチルベンゼンスルホン酸CAS登録番号88448のそれぞれについて所定量を所定期間生体または肝臓由来の細胞試料に投与曝露するステップと、B前記生体の肝臓組織または前記肝臓由来の前記細胞試料からmRNAを単離して、配列番号1~147の塩基配列を有する遺伝子群生体応答遺伝子群のうちから選択される少なくとも1以上の生体応答遺伝子に対する遺伝子発現レベルを測定する測定ステップと、C前記遺伝子発現レベルを対応する前記化学物質、曝露量、曝露期間とともに遺伝子発現データとして収集するステップと、D被検化学物質を適当な濃度で一定期間生体または肝臓由来の細胞試料に曝露させるステップと、E前記生体由来の前記肝臓組織または前記肝臓由来の細胞試料からmRNAを単離して、Bのステップで選択した生体応答遺伝子に対する遺伝子発現レベルを測定するステップと、FEで得られた前記遺伝子発現レベルを前記被検化学物質、曝露量及び曝露期間とともに遺伝子発現データとして収集するステップと、GFで収集された遺伝子発現データをCで収集された照合用の対応する遺伝子発現データと比較するステップと、を含むことを特徴とする化学物質の毒性判別予測方法。27.前記測定ステップは、RTPCR法、RealTimePCR法、iAFLPintroducedAmplifiedFragmentLengthPolymorphism法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、nCounterAnalysissystem、ハイブリダイゼーション法のうちの1つを用いることを特徴とする、前記26記載の化学物質の毒性判別予測方法。28.前記ハイブリダイゼーション法は、マイクロアレイ法又はブロット法であることを特徴とする前記27記載の化学物質の毒性判別予測方法。29.前記マイクロアレイ法又はブロット法に用いられるプローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする前記28記載の化学物質の毒性判別予測方法。30.前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする前記29記載の化学物質の毒性判別予測方法。31.前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする前記29又は30に記載の化学物質の毒性判別予測方法。32.前記測定ステップは、前記生体応答遺伝子に対応する核酸、又は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質について、存在するか、もしくは量を測定によることを特徴とする前記26記載の化学物質の毒性判別予測方法。33.前記測定は、免疫学的方法によって行うことを特徴とする前記32記載の化学物質の毒性判別予測方法。34.前記免疫学的方法は、前記生体応答遺伝子によってコードされるタンパク質又はその断片に対する特異抗体と標的タンパク質との免疫学的複合体を検出する方法であることを特徴とする前記33記載の化学物質の毒性判別予測方法。35.前記特異抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、及び抗体フラグメントから選択されることを特徴とする前記34記載の化学物質の毒性判別予測方法。36.前記3及び4を除く、前記1乃至35のうちのいずれか1つに記載の方法に用いられるプローブを含む化学物質の毒性判別キットであって、前記プローブは、前記生体応答遺伝子またはその転写産物に特異的にハイブリダイズする配列を有する分子を含むことを特徴とする化学物質の毒性判別キット。37.前記プローブは、ヌクレオチド又はタンパク質であることを特徴とする前記36記載の化学物質の毒性判別キット。38.前記ヌクレオチドは、mRNA、cDNA、又は合成オリゴヌクレオチドであることを特徴とする前記37記載の化学物質の毒性判別キット。39.前記ヌクレオチドは、前記生体応答遺伝子のセンス鎖又はアンチセンス鎖とハイブリダイズし、10~100塩基であることを特徴とする前記38記載の化学物質の毒性判別キット。40.前記ヌクレオチドは、標識化ヌクレオチドであることを特徴とする前記38または39記載の化学物質の毒性判別キット。41.前記プローブは、抗体及び/又はアプタマーであるタンパク質であることを特徴とする前記36記載の化学物質の毒性判別キット。42.前記プローブは、少なくとも1つ以上を固体支持体に固定したDNAマイクロアレイ、DNAチップ、タンパクチップまたは抗体チップを含むことを特徴とする前記36乃至41のうちのいずれか1つに記載の化学物質の毒性判別キット。43.前記固体支持体は、ガラス、シリコン、プラスチック又は生体膜であることを特徴とする前記42記載の化学物質の毒性判別キット。本発明によれば、化学物質を生体に投与した後の肝臓における遺伝子発現様式を比較することにより、化学物質が生体に対して毒性を有するか否かを簡便に判定あるいは予測できる。他に特に規定されない限り、明細書及び特許請求の範囲を含む本出願に使用される用語は、本発明が属する分野における通常の知識を有する者当業者によって、一般的に理解されるものと同一の意味を有する。当業者は、本明細書中に記載されるものと同等又は類似の多くの方法及び物質を認識する。ただし、本発明は本明細書に記載される方法及び物質に限定されない。被検化学物質の投与量は、被検化学物質を曝露された試験動物または細胞内の遺伝子発現レベルが適度に増加または減少する量であることが望ましい。例えば、試験動物又は細胞の致死量未満の最大用量が望ましく、被検化学物質の試験動物に対するLD50値を基準にして決定することも可能である。被検化学物質被検群またはその溶媒対照群の対象となる試験動物には、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、ウサギ、イヌ、サルなどの哺乳動物を使用することもできる。また、その対象となる細胞には、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、ウサギ、イヌ、サル、ヒトなどの哺乳動物由来の細胞を使用することができる。被検化学物質の投与期間は1~90日が望ましく、より好ましくは1~60日であり、さらに好ましくは1~28日であるが、より迅速に試験を行う観点から1~14日でも構わない。投与は1日数回が望ましく、より好ましくは1日1回が望ましい。被検化学物質の投与方法は特に制限されない。例えば、経口投与、腹腔内投与、静脈注射等の一般的な方法を使用できる。遺伝子発現レベルを測定するとは、該遺伝子の発現レベルを検出又は定量する限り特に制限されず、例えば、該遺伝子のmRNAやcDNAを検出又は定量してもよい。さらには、該遺伝子がコードするタンパク質を検出又は定量してもよい。これらの検出又は定量には、該遺伝子又はその遺伝子産物であるペプチド若しくはタンパク質に特異的に結合する分子を用いることが望ましい。遺伝子又はその遺伝子産物であるペプチド若しくはタンパク質に特異的に結合する分子とは、特に制限されないが、該遺伝子に特異的に結合するヌクレオチド、DNA、cDNA、RNA、ペプチド若しくはタンパク質に特異的に結合する抗体等を例示することができる。また、該遺伝子の発現レベルの検出又は定量には、該遺伝子のmRNAもしくはタンパク質の断片又はホモログを用いてもよい。配列番号1~147に示される塩基配列は、例えば、NationalCenterforBiotechnologyInformationのBLASTURLhttpblastncbinlmnihgovを利用したホモロジー検索により遺伝子を特定することが可能である。DNAマイクロアレイとは、オリゴヌクレオチドや一本鎖または二本鎖のDNAをガラス基板上などに高密度に配置したものをいい、DNAマイクロアレイ法とは、そのDNAマイクロアレイ上で蛍光標識したRNA分子などとハイブリッド形成を行わせて定性的且つ定量的にDNAと結合した核酸の種類や量を測定する手法をいう。オリゴヌクレオチドとは、ヌクレオチドが数個重合した分子の総称のことをいう。mRNAのホモログとは、該mRNAに実質的に類似したヌクレオチドに関連する。実質的に類似したとは、当業者によって十分理解され、具体的にはそれぞれの配列類似性が少なくとも80、好ましくは少なくとも85、より好ましくは少なくとも90、最も好ましくは少なくとも95を有することを意味する。また、タンパク質のホモログとは、該mRNAに実質的に類似したペプチドに関連する。実質的に類似したとは、当業者によって十分理解され、具体的にはそれぞれの配列類似性が少なくとも80、好ましくは少なくとも85、より好ましくは少なくとも90、最も好ましくは少なくとも95を有することを意味する。化学物質に曝露された臓器組織または細胞試料とは、組織もしくは細胞試料、または試料が由来した動物が、化学物質により処理されたことを意味する。幹細胞とは、自己複製能と分化した細胞をつくる能力を併せ持った未分化細胞のことを言い、胚性幹細胞ES細胞:Embryonicstemcell、組織幹細胞、人工多能性肝細胞iPS細胞:inducedpluripotentstemcellで例示できるが、これらに限られるものではない。プロモーターとは、転写開始反応の効率に関与するDNA領域をいう。レポーター遺伝子とは、目的の因子の機能を測定するために代用される遺伝子のことであり、産物の活性が簡単に定量化できるものが好まれる。本発明のレポーター遺伝子には、生体応答遺伝子のプロモーター配列と当該プロモーター配列に作動可能に接続されたレポータータンパク質をコードする配列とを含み、レポータータンパク質としては、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼCAT、ホタルルシフェラーゼ、ウミシイタケルシフェラーゼ、β‐ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質GFP、青色蛍光タンパク質CFP、黄色蛍光タンパク質YFPまたは赤色蛍光タンパク質dsRed等が挙げられるが、これらに限られるものではない。本発明において生体応答遺伝子のプロモーター配列に連結されるとは、対象の遺伝子の発現が該プロモーター配列の制御下に配置されることをいい、通常、対象となる遺伝子のすぐ上流にプロモーター配列が配置されるが、必ずしも隣接している必要はない。ベクターとは、組換えDNA技術において、外来性DNAを組み込み、宿主細胞中で増えることのできるDNAのことをいい、プラスミド、ファージ、ウイルス、酵母人工染色体などが挙げられるが、これらに限られるものではない。形質転換細胞とは、形質転換体、トランスフォーマントとも呼ばれ、ある形質を示す細胞供与細胞のDNAを、それを示さない細胞受容細胞へ導入して生じた供与細胞の形質を示す細胞をいう。供与細胞又は受容細胞としては、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞等が例示される。肝毒性とは、多くの疾病もしくは障害のプロセスにより誘発され得るところの急性もしくは慢性の肝臓の不全もしくは機能障害を意味する。毒性作用とは、化学物質の存在に起因する、生体、臓器系、各臓器、組織、細胞、又は細胞内単位に対する有害作用を指す。毒性作用は、生理的もしくは物理的な症状、又は細胞もしくは臓器の壊死のような撹乱であり得る。試料には、好ましくは肝臓の生検材料、並びに、例えば血液、血漿、血清、リンパ液、腹水、尿、便のような任意の体液が含まれるものとする。なお、これに限られるものではない。明細書及び特許請求の範囲を含む本出願で使用される際には、個体とは、ヒトの個体、動物又は個体の集団もしくはプールを意味するものとする。CAS登録番号とは米国化学会の一部門であるCASChemicalAbstractsServiceが運営管理する化学物質登録システムから付与される化学物質に固有の数値識別番号のことを意味する。本出願に係る特許請求の範囲及び明細書で使用する生体応答遺伝子とは、化学物質の曝露等の外的な刺激により生体内において発現レベルが変動する遺伝子を意味し、生体応答遺伝子群とは複数の生体応答遺伝子の組合せのことを意味する。遺伝子の発現レベルを検出、測定又は定量する具体的な方法としては、該遺伝子に特異的に結合するプローブ用の標識化ヌクレオチド、標識化cDNAまたは標識化RNAを用いたノーザンブロット法、ドットブロット法、iAFLPintroducedAmplifiedFragmentLengthPolymorphism法、LAMPLoopMediatedIsothermalAmplification法、PCR法、又はmRNA分子を直接測定する方法等を用いることができる。PCR法としては、RTPCR法、RealTimePCR法、競合PCR法を挙げることができる。前記RealTimePCR法としては、例えば、試料内の全RNAやmRNAから逆転写酵素を用いてcDNAを合成し、該cDNAを鋳型にして目的領域をPCR法により増幅し、該増幅産物の生産過程をリアルタイムにモニタリングする方法が挙げられる。リアルタイムにモニタリングする試薬としては、例えば、SYBR登録商標:MoleclarProbes社GreenIや、TaqMan登録商標:アプライドバイオシステムズ社プローブ等が挙げられる。前記競合PCR法としては、例えば、試料内の全RNAやmRNAから逆転写酵素を用いてcDNAを合成し、該cDNAと内部標準DNAを同一の反応チューブ内で反応させる方法や、さらに前記逆転写反応時にmRNAとともにRNA内部標準を加えて反応させる方法等が挙げられる。また、内部標準遺伝子の配列は、例えば、増幅目的遺伝子の配列と相同配列でもよく、非相同な配列でもよい。さらに、遺伝子の発現レベルを検出又は定量する具体的な方法としては、DNAマイクロアレイ、DNAチップ、又は抗体アレイ等を用いる方法が挙げられる。DNAマイクロアレイ又はDNAチップには該遺伝子のヌクレオチド又はcDNAが少なくとも1つ以上固定化されているものを用いる。なお、ヌクレオチド又はcDNAは、該遺伝子の一部に相当する部分でもよい。上記プローブの標識化に用いられる標識試薬は、例えば放射性同位元素である[125I]、[131I]、[3H]、[14C]、[32P]、[35S]、酵素であるβ‐ガラクトシダーゼ、β‐グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、また、蛍光物質であるシアニン蛍光色素蛍光色素例えば、Cy2、Cy3、Cy5、Cy55、Cy7、Cyanine3、Cyanine5などを用いることができる。また、上記RealTimePCR法としては、例えば、組織内又は細胞内の全RNAやmRNAから逆転写酵素により合成したcDNAを鋳型にして、PCRの増幅産物をリアルタイムでモニタリングする方法が挙げられる。リアルタイムPCR用モニタリング試薬としては、例えばSYBRGreenIやTaqManプローブ等が用いられる。通常、DNAマイクロアレイやDNAチップは、プローブが支持体の上に固定されているアレイ又はチップであり、DNAマイクロアレイ又はDNAチップの支持体としては、ハイブリダイゼーションに使用可能なものであればよく、例えばガラス、シリコン、プラスチックなどの基板や、ニトロセルロース膜、ナイロン膜等を用いることができる。なお、DNAマイクロアレイとは、生体応答遺伝子群に含まれる遺伝子全長、またはその部分配列と相補的なcDNA断片若しくはオリゴDNAを固定支持体に1つ以上固定したものをいう。ここでいう相補的なオリゴDNAは一般的には25~100塩基の長さのものが用いられるが、必ずしもこれに限定されない。DNAマイクロアレイやDNAチップの使用方法については特に制限されない。例えば、生体試料からmRNAを精製し、該mRNAを鋳型とした逆転写反応を行う際に、適切な標識を付したプライマーや標識ヌクレオチドを使用することにより、標識されたcDNAを得ることができる。この標識化cDNAとDNAマイクロアレイやDNAチップ表面上に固定された本発明におけるプローブとの間でハイブリダイゼーションを行わせ、被検試料とのハイブリダイゼーション及び対照試料とのハイブリダイゼーションのそれぞれの結果を比較し、該遺伝子の有無を検出したり、発現レベルを測定したりすることにより、臓器毒性の検出または予測を行うことができる。遺伝子に対応するポリペプチド又はタンパク質は上記生体応答遺伝子の発現産物であり、該ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列の配列情報は、NCBIの遺伝子データベースにおいて、それぞれのアクセッションナンバーによりアプローチすることもできる。上記ポリペプチド又はタンパク質を検出又は定量する方法としては、所定のポリペプチド又はタンパク質を検出又は定量する方法であれば特に制限されない。例えば、該ポリペプチド又はタンパク質に特異的に結合する抗体やアプタマー等を用いることができ、抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、2つのエピトープを同時に認識することができる二機能性抗体等を例示できる。これらの抗体は、慣用のプロトコルを用いて該ポリペプチド又はタンパク質又はそれらの断片を抗原として用いて作製することができる。また、アプタマーとは、タンパク質、アミノ酸等の分子に特異的に結合する核酸分子である。上記ポリペプチド又はタンパク質に特異的に結合する抗体を用いて、被検試料中に存在する該ポリペプチド又はタンパク質を検出又は定量する場合、免疫沈降法、電気化学発光法、RIARadioimmunoassay法、ELISAEnzymelikedimmunosorbentassay法、蛍光抗体法等の公知の免疫学的方法を用いることができる。上記判定の基準としては、被検試料中に存在する該遺伝子の発現レベル又は該遺伝子に対応するポリペプチド若しくはタンパク質の発現レベルが正常対照試料中に存在する、該遺伝子の発現レベル又は該遺伝子に対応するポリペプチド若しくはタンパク質の発現レベルよりも高い又は低いことを利用する。例えば、1群3検体以上の試料の発現レベルを測定した結果について、t検定を行った場合に、P<005、より好ましくはP<001、さらに好ましくはP<0001、さらにより好ましくはP<00001である場合が挙げられる。検定方法はt検定に限定されるものではなく、U検定、F検定、マンホイットニ検定やウィルコクサン符号付順位検定でもよい。また検定に限定されるものではなく、例えば各群の発現レベルの平均値の差を用いてもよい。基準値は、被検試料における発現レベルを測定する度に毎回測定する必要はなく、例えば、様々な種の生体試料における正常対照試料中に存在する遺伝子の発現レベルをあらかじめ測定しておき、その測定値を用いて比較することができる。遺伝子発現レベルの変化には特定の化学物質と生体組織との直接の反応のみならず、臓器に障害が生じた結果としての二次的反応も含まれる。生体応答遺伝子群に含まれる遺伝子は、ヒト、ラット、マウス、ウサギ、又はサルのような任意の哺乳動物において、マーカーとして用いられ得る。好ましくは、生体応答遺伝子群に含まれる遺伝子は、ラット又はマウスにおいてマーカーとして用いられる。動物の種類は特に限定されるものではなく、例えば、ラットの場合にはSpragueDawleyラット、Wistarラットなどでもよく、雄でも雌でも構わない。以下、実施例により本発明による化学物質の毒性判別予測方法、核酸構成物、ベクター、形質転換細胞、照合用遺伝子発現データベースの作成方法、及び、化学物質の毒性判別キットをより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。本発明の毒性作用を検出または予測するための方法に用いられる生体応答遺伝子群は、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213を雄のSpragueDawleyラット6週齢日本チャールスリバー社に28日間反復投与することにより肝臓で発現レベルが著しく変化した遺伝子群である。本発明で用いられる生体応答遺伝子群は以下の方法により得られる。なお、ここで、発現レベルとは絶対量である必要はなく相対量でよい。<遺伝子発現データベース>本発明による遺伝子発現データベースの作成は、1種々の化学物質について、ラットなどが死亡しない適当な投与量を決定し、2適当な濃度の化学物質を一定期間、ラットなどに繰り返し曝露し、3曝露した生体から各臓器を摘出し、4摘出した臓器からmRNAを単離し、5DNAマイクロアレイ法などにより特定遺伝子の発現レベルを測定し、6得られた遺伝子発現レベルを化学物質、その濃度、曝露時間とともに遺伝子発現データベースとしてまとめる、と以上6つの工程によりなされる。<動物試験>5週齢のCrlCDラット雄を準備し、ポリカーボネイトケージに入れ、エアーコンディショニングアニマルラック商品名内で飼育した。エアーコンディショニングアニマルラックは、温度22°C、湿度55に設定し、照明は明期700~1900、暗期1900~700の12時間サイクルに設定した。水は給水ビンを用いて、浄水器を通した水道水を不断給与し、飼料は固形飼料を不断給餌した。実験開始までに1週間の馴化検疫期間を設けた。国立医薬品食品衛生研究所の既存化学物質毒性データベースhttpdra4nihsgojpmhlwdatajspSearchPagejspに登録されている37種類の化学物質2-ブタノンオキシム、3シアノピリジン、2-2-アミノエチルアミノエタノール、テトラヒドロフルフリルアルコール、メタクリルアミド、スルホラン、2イソプロポキシエタノール、ヒドラジン一水和物、4エチルモルホリン、メタクリル酸エチルトリメチルアンモニウムクロリド、塩化ベンジルトリメチルアンモニウム、mニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム、1ナフチルアミン4スルホン酸ナトリウム四水和物、3メトキシ3メチル1ブタノール、oジクロロベンゼン、34キシリジン、Nメチルアニリン、トリレンジイソシアナート、2ジブチルアミノエタノール、pクミルフェノール、mクレゾール、23ジメチルアニリン、NNジシクロヘキシルカルボジイミド、フタル酸ジヘプチル、テトラブロモエタン、アジピン酸ジブチル、pエチルフェノール、24ジtertブチルフェノール、35キシリジン、NNジメチルベンジルアミン、13ジブロモプロパン、nヘキサデカン、1ブロモ3クロロプロパン、ブソイドクメン、ジシクロヘキシルアミン、14ジブロモベンゼン、又は2‐アミノ5メチルベンゼンスルホン酸を28日間反復してSpragueDawleyラット6週齢、雄に経口投与した。正常対照群として、オリーブ油、注射用水又はゴマ油を28日間反復してSpragueDawleyラット6週齢、雄に経口投与した。また、1群あたり3個体のラットを使用した。なお、動物試験は28日間に制限されることはなく、例えば数日間でもよい。実験のスケジュールとして、37種類の化学物質の反復投与試験を8回に分けて行った表1参照。表中、第1回~第8回は実験回を表しており、例えば、第1回目の実験では、2ブタノンオキシム、3シアノピリジン、2エタノール、テトラヒドロフルフリルアルコール、及び、それらの溶媒である注射用水を対照群として同時期に実験をしたことを示している。また、第1回目~第8回目はそれぞれ実験の時期が異なることを示している。さらに、表中の略号の欄には、本発明における出願書類中で使用している化学物質の略号を記載しており、CAS登録番号の欄には、それぞれの化学物質のCAS登録番号を記載している。化学物質の投与液は、化学物質を必要量秤量し、適当な溶媒注射用水、オリーブ油、ゴマ油などを用いて溶液又は均一な懸濁液を作製した。経口投与は25mL用または50mL用注射用シリンジにフレキシブル経口ゾンデ商品名を装着したものを用いたが、これに限定されるものではない。各化学物質の投与量はそれぞれ、2-ブタノンオキシムが100mgkgday、3シアノピリジンが180mgkgday、2-2-アミノエチルアミノエタノールが1000mgkgday、テトラヒドロフルフリルアルコールが600mgkgday、メタクリルアミドが150mgkgday、スルホランが700mgkgday、2イソプロポキシエタノールが500mgkgday、ヒドラジン一水和物が30mgkgday、4エチルモルホリンが500mgkgday、メタクリル酸エチルトリメチルアンモニウムクロリドが1000mgkgday、塩化ベンジルトリメチルアンモニウムが120mgkgday、mニトロベンゼンスルホン酸ナトリウムが1000mgkgday、1ナフチルアミン4スルホン酸ナトリウム四水和物が1000mgkgday、3メトキシ3メチル1ブタノールが1000mgkgday、oジクロロベンゼンが500mgkgday、34キシリジンが250mgkgday、Nメチルアニリンが125mgkgday、トリレンジイソシアナートが300mgkgday、2ジブチルアミノエタノールが250mgkgday、pクミルフェノールが700mgkgday、mクレゾールが1000mgkgday、23ジメチルアニリンが200mgkgday、NNジシクロヘキシルカルボジイミドが300mgkgday、フタル酸ジヘプチルが1000mgkgday、テトラブロモエタンが200mgkgday、アジピン酸ジブチルが1000mgkgday、pエチルフェノール1000mgkgday、24ジtertブチルフェノールが300mgkgday、35キシリジンが200mgkgday、NNジメチルベンジルアミンが200mgkgday、13ジブロモプロパンが250mgkgday、nヘキサデカンが1000mgkgday、1ブロモ3クロロプロパンが300mgkgday、ブソイドクメンが1000mgkgday、ジシクロヘキシルアミンが70mgkgday、14ジブロモベンゼンが300mgkgday、2‐アミノ5メチルベンゼンスルホン酸が1000mgkgdayとし、投与対象となるラットの体重の測定値から投与液量を計算して、ラットに投与した。臓器の採取は、化学物質の最終投与の約24時間後に行った。具体的には、ラットを麻酔下で腹部大動脈より放血全採血して安楽死させた後、肝臓を採取し、速やかに液体窒素で凍結させた。凍結させた肝臓組織はISOGENニッポンジーン社製溶液中でホモジナイズすることにより粉砕した。<全RNAの抽出>肝臓組織からの全RNAの抽出はISOGEN試薬ニッポンジーン社製を用いて推奨のプロトコルに従って行った。<核酸検体の調製>検体用mRNAの調製は、肝臓組織からISOGEN試薬ニッポンジーン社製を用いて抽出した全RNAから、PolyAPureキットAmbion社製を用い、各社推奨のプロトコルに従って行った。<マイクロアレイの作製>マイクロアレイ用合成DNAを用いてマイクロアレイを作製した。マイクロアレイの作製方法条件に限定はないが、例えばSchenaMetalScience270467470に記載の作製方法を用いることができる。ラット遺伝子断片ライブラリーマイクロダイアグノスティック社製を超微量分注装置マイクロダイアグノスティク社製によりスライドガラス松波硝子工業社製、HAコートスライドガラスにプリントしてマイクロアレイを作製した。該マイクロアレイを気相恒温器内にて80°Cで1時間静置し、さらにUVクロスリンカーHoefer社製、UVC500を用いて120mJの紫外線を照射した。<マイクロアレイの後処理>マイクロアレイの後処理については、特許公報特許第4190899号記載の方法により行った。<標識cDNAの合成>該mRNA15μgを核酸標識ハイブリダイゼーション試薬マイクロダイアグノスティック社製、逆転写酵素SuperScriptII登録商標:ライフテクノロジーズインビトロジェン社製、Cyanine5deoxyuridinetriphosphatePerkinElmer社製を用い、標識cDNAを作製した。一方、対照としてラット共通レファレンスマイクロダイアグノスティック社製を使用した。共通レファレンスに対しては核酸標識ハイブリダイゼーション試薬マイクロダイアグノスティック社製、逆転写酵素SuperScriptIIインビトロジェン社製、Cyanine3deoxyuridinetriphosphatePerkinElmer社製を用い、標識cDNAを作製した。作製方法は、各社推奨のプロトコルに従った。<標識プローブの作製>これらの標識cDNA、すなわち、Cyanine5dUTPで標識した検体及びCyanine3dUTPで標識した対照レファレンスを同一試験管内で混合した後、MicropureEZミリポア社製及びMicroconYM30登録商標:ミリポアミリポア社製により精製した。最終的には核酸標識ハイブリダイゼーション試薬に付属のハイブリダイゼーションバッファー及び純水を用いて15μlに調製した。<ハイブリダイゼーション>該溶液を99°Cで5分間加熱して熱変性させた後に、DNAマイクロアレイ上に滴下し、ハイブリダイゼーションカセットマイクロダイアグノスティック社製に格納した。該ハイブリダイゼーションカセットを気相恒温器三洋電機バイオメディカ社製に入れ、42°Cで約20時間、静置した状態で保温した。この操作によって、サンプル中に含まれる標識cDNAがDNAマイクロアレイ上の相補的なオリゴDNAと特異的に結合する。<洗浄>ハイブリダイゼーションカセットからスライドガラスを取り出し、核酸標識ハイブリダイゼーション試薬マイクロダイアグノスティック社製付属のハイブリダイゼーション洗浄溶液を用い、同社推奨のプロトコルに従ってスライドガラスを洗浄した。<蛍光強度の検出及び数値化>各遺伝子の発現レベルはDNAマイクロアレイ上に固定されたオリゴDNAと結合した標識cDNAの蛍光強度を測定することにより見積もることができる。洗浄したスライドガラスをスキャナGenePix4000BAxonInstrument社製を用いて蛍光を測定し、スキャナに付属の解析ソフトウェアGenePixProAxonInstrument社製を用いて光学的に評価し、蛍光強度の相対値Cyanine5Cyanine3数値化した。すなわち、DNAマイクロアレイ上に固定されたオリゴDNAのスポットの蛍光強度をそれぞれ別々に測定し、蛍光強度をヒト共通レファレンスとの相対比log2比で表した。また、スポット以外の場所の蛍光強度からバックグラウンドを算出してノイズとしてそれぞれのスポットの蛍光強度から差し引いた。さらに、サンプルにおける蛍光強度共通レファレンスの蛍光強度を算出するという解析を行った。すなわち、各サンプルの遺伝子発現レベルはすべて共通レファレンスに対する相対比として検出されるため、単純に複数サンプルを横並び比較できる状態となっている。このようにして取得された数値を集積してデータベース化した。<二次比の算出>次に、すべての対照群の平均値を算出し、それぞれのサンプルについてその平均値との相対値二次比と呼ぶ。を算出した。以下の計算はすべて二次比を用いて行った。<統計学的処理>化学物質が生体に与える影響を判別するために有用な遺伝子を選択するために、フタル酸ジヘプチルCAS登録番号3648213を28日間反復投与したラットの肝臓と注射用水を投与した対照群ラットの肝臓とを比較して、各遺伝子の対数変換相対的発現比に対するスチューデントのt検定を行ってP値を算出した。それぞれの化学物質投与群と対照群との間で発現レベルの平均値の差が2倍以上、かつ、P値が001未満である遺伝子群である147遺伝子を特定した。次に、残りの36種類の化学物質およびそれぞれの対照を投与したラットの肝臓から取得した遺伝子発現プロファイルから、該147遺伝子を抽出した表2~31。表中、配列番号の欄には特定した遺伝子の配列番号を記した。また、表中の略号は表1に記載のものを使用し、略号に付随の数字は個体の別を表している。<クラスタ分析>DNAマイクロアレイで取得した遺伝子発現データの分析手法として、例えばクラスタ分析が挙げられる。クラスタ分析とは、遺伝子発現変化パターンの類似した遺伝子同士をグルーピングする統計的手法である。データ間の類似度例えばユークリッド距離などを定義し、その類似度を用いることにより遺伝子発現パターンが類似した、すなわち、遺伝子発現に対して類似した影響を持つ化学物質同士がグループ化される。配列番号1~147に示される塩基配列を有する遺伝子の発現変動パターンに基づいて階層的クラスタ分析を行った。階層的クラスタ分析は解析用ソフトウェアExpressionViewProマイクロダイアグノスティック社製を用いて行った。また、階層的クラスタ分析はclusterやtreeviewなどのソフトウェアを用いても行うことができる。その結果、大きく6つのクラスタA~Fを形成した。クラスタAには、フタル酸ジヘプチルdhpで表す。が含まれており、クラスタBには、テトラブロモエタンtbeで表す。の3個体中1個体およびoジクロロベンゼンdcbで表す。が含まれており、クラスタCには、ヒドラジン一水和物hmhで表す。が含まれており、クラスタDには、34キシリジン34xで表す。、3シアノピリジン3cpで表す。および14ジブロモベンゼン14dで表す。が含まれており、クラスタEには、3メトキシ3メチル1ブタノールmmbで表す。、プソイドクメンtmbで表す。、テトラブロモエタンtbeで表す。の3個体中2個体、1ブロモ3クロロプロパンbcpで表す。および13ジブロモプロパン13dで表す。が含まれており、クラスタFには対照群を含む残りの化学物質が含まれていた図1。クラスタA~Fには該遺伝子147遺伝子を特定する際に用いた化学物質であるフタル酸ジヘプチル以外にも肝毒性を有することが知られている10種類の化学物質が含まれていた。これらの結果は、配列番号1~147に示される塩基配列を有する遺伝子セットの遺伝子発現変動パターンを比較することにより、高い確率で対照群とある特定の肝毒性または肝臓に何らかの影響を与える化学物質を判別することが可能であることを示唆している。