"式I、IIまたはIII、式中、FOLATEは、細胞表面葉酸受容体と結合する、葉酸、またはメトトレキサート、テトラヒドロ葉酸thretrahydrofolate、およびジヒドロ葉酸dihydrofolateをはじめとする葉酸類似体であり、GSHは、グルタチオン、または遊離スルフヒドリルと遊離アミノ基の双方を含んでなる化合物、またはシステアミンまたはシステインであり、IgGは、免疫グロブリンG、またはIgG重鎖のモノマー、またはIgGの還元に由来するそのFc断片、動物IgG、AヒトIgG、または組換えヒト化IgGであり、R1は、であり、R2は、であり、R3は、である。のコンジュゲート。前記IgGが、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4である、請求項1に記載のコンジュゲート。式1~10、からなる群から選択される、請求項1又は2に記載のコンジュゲート。1葉酸をN-ヒドロキシスクシンイミドと共役させて、活性NHS-葉酸を得るステップと;2NHS-葉酸をGSHと共役させて、アミド結合を通じて葉酸-GSHを得るステップと;3IgGを活性化して、式VIまたは式VIIの活性化誘導体、または式IX、を有するスルフヒドリル反応性誘導体を生成するステップと、4活性産物を葉酸-GSHと共役させるステップとを含んでなる、請求項1~3のいずれか1項に記載のコンジュゲートを合成する方法。前記葉酸が、葉酸、またはメトトレキサート、テトラヒドロ葉酸およびジヒドロ葉酸からなる群から選択される、葉酸類似体である、請求項4に記載の方法。前記ステップ1の反応条件が、ジメチルスルホキシドDMSOに溶解された葉酸または葉酸類似体が、0.5~2倍のN、N-ジシクロヘキシルカルボジイミドおよびN-ヒドロキシスクシンイミドと2~5時間反応されて、不溶性副産物が濾過または遠心分離を通じて廃棄され、NHS-活性化葉酸NHS-FOLATEが溶液中にあり、反応方程式が、である、請求項4に又は5記載の方法。前記ステップ2において、NSH-FOLATEが暗所においてアルゴン下で、等モル量のequamolarGSHと一晩反応され、の構造のFOLATE-GSHが得られる、請求項4~6のいずれか1項に記載の方法。前記IgGのN末端アミノ基が、式中、RaCORbは架橋剤であり、その中でRaは離脱基であり、RbはGSH中で遊離スルフヒドリルと反応する基を含有する。の反応に従って活性化され、前記架橋剤が、スルホ-LC-SPDPスルホスクシンイミジル6-[32-ピリジルジチオ-プロピオンアミド]ヘキサノエート、LC-SPDPスクシンイミジル6-[32-ピリジルジチオ-プロピオンアミド]ヘキサノエート、SPDPN-スクシンイミジル3-2-ピリジルジチオプロピオネート、SMPT4-スクシンイミジルオキシカルボニル-メチル-A-[2-ピリジルジチオ]トルエン、スルホ-LC-SMPT4-スルホスクシンイミジル-6-メチル-A-2-ピリジルジチオトルアミドヘキサノエート、スルホ-SMCCスルホスクシンイミジル4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレート、SMPEGn、NHS-PEG-マレイミド架橋剤、SMCCスクシンイミジル4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレート、LC-SMCCスクシンイミジル-4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシ-[6-アミドカプロレート]、スルホ-EMCS[N-ε-マレイミドカプロイルオキシ]スルホスクシンイミドエステル、EMCS[N-ε-マレイミドカプロイルオキシ]スクシンイミドエステル、スルホ-GMBSN-[γ-マレイミドブチリルオキシ]スルホスクシンイミドエステル、GMBSN-[γ-マレイミドブチリルオキシ]スクシンイミドエステル、スルホ-KMUSN-[κ-マレイミドウンデカノイルオキシ]スルホスクシンイミドエステル、スルホ-MBSm-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、MBSm-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホ-SMPBスルホスクシンイミジル4-[p-マレイミドフェニル]ブチレート、SMPBスクシンイミジル4-[p-マレイミドフェニル]ブチレート、AMASN-α-マレイミドアセトキシスクシンイミドエステル、BMPSN-[β-マレイミドプロピルオキシ]スクシンイミドエステル、またはSMPHスクシンイミジル-6-[β-マレイミドプロピオンアミド]ヘキサノエートであり、または遊離-SH基と反応して、式VIまたはVII、式中、R1はであり、R2は、である。で示されるような活性化アミノ基があるIgGを生じ得る群である、請求項4~7のいずれか1項に記載の方法。前記ステップ3において、IgGが還元剤で処理されて、half-IgGまたは重鎖が生成し、それがスルフヒドリルリンカーによって活性化され、前記スルフヒドリルリンカーが、1,8-ビス-マレイミドジエチレングリコールBMPEG2、BMPEGnPEG架橋剤、1,4-ビス-マレイミドブタンBMB、1,4ビスマレイミジル-2,3-ジヒドロキシブタンBMDB、ビスマレイミドヘキサンBMH、ビス-マレイミドエタンBMOE、1,4-ジ-[3-2-ピリジルジチオ-プロピオンアミド]ブタンDPDPB、ジチオ-ビスマレイミドエタンDTME、トリス[2-マレイミドエチル]アミンTMEA、およびその類似体であり、式IX、のコンジュゲートを生成する、請求項4~8のいずれか1項に記載の方法。IgGが、の反応に従って、2-メルカプトエチルアミンHCl2-MEAによりhalf-IgGに活性化される、請求項9に記載の方法。前記ステップ3において、IgGが、の反応に従って、1,4-ジチオスレイトールDTTによりIgG重鎖に還元される、請求項9又は10に記載の方法。前記ステップ3で、濃度が0.05~1mmol/LのIgG溶液が得られ、それが10~30倍の活性化架橋剤と室温で0.5~1時間、または4°Cで1~3時間反応されて活性化IgGが得られる、請求項8~11のいずれか一項に記載の方法。前記活性化IgGが、分子ふるいクロマトグラフィーによって比較的高純度に精製される、請求項12に記載の方法。前記IgG溶液が、10~30mmol/LのPBS-EDTApH6.5~9.0、超純水、DMSOまたはDMFから選択される溶媒である、請求項12又は13に記載の方法。前記ステップ4で、FOLATE-GSHが1~10倍の活性化IgGと、室温で2~5時間または4°Cで15~20時間反応されて、式I~IIIのFOLATE-GSH-IgGコンジュゲートが得られる、請求項4~14のいずれか1項に記載の方法。精製コンジュゲートが、分子ふるいクロマトグラフィーを通じて収集される、請求項15に記載の方法。前記ステップ3が、前記ステップ1および2に先だって、またはそれと同時に実施される、請求項4~16のいずれか1項に記載の方法。請求項1~3のいずれか1項に記載の葉酸-GSH-IgGコンジュゲートの有効量と、薬学的に許容できるキャリアまたは賦形剤とを含んでなる医薬組成物。がんまたは自己免疫疾患を治療するための請求項1~3のいずれか1項に記載の葉酸-GSH-IgGコンジュゲートの使用。前記がんが、葉酸受容体の高度発現レベルを有するがん細胞によって特徴付けられる、請求項19に記載の使用。前記がんが、白血病、または卵巣癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、乳癌、結腸癌、肺癌、肝臓癌、および脈絡膜癌、または上衣細胞腫である、請求項20に記載の使用。前記自己免疫疾患が、葉酸受容体の高度発現レベルを有する罹患細胞によって特徴付けられる、請求項19~21のいずれか1項に記載の使用。前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、炎症性腸疾患、乾癬、紅斑性狼瘡、肺線維症またはサルコイドーシスである、請求項23に記載の使用。FOLATE-GSH-IgGコンジュゲートが、注射によって投与される、請求項19~23のいずれか1項に記載の使用。FOLATE-GSH-IgGが、注射によって皮膚、筋肉または静脈に投与される、請求項24に記載の使用。ヒトにおけるFOLATE-GSH-IgGコンジュゲートの有効用量が、0.1~4g/kg体重である、請求項19~25のいずれか1項に記載の使用。ヒトにおけるFOLATE-GSH-IgGコンジュゲートの有効用量が、0.1~1.0g/kg体重である、請求項26に記載の使用。現在のがん治療法としては、外科手術、化学療法、放射線療法、および免疫療法が挙げられる。これらの治療は、併用されることが多い。化学療法薬に不可避な副作用のために、新しい薬剤の開発が必要である。最近、Herceptin商標、Avastin商標、およびRituxan商標などのモノクローナル抗体ベースの薬剤が、がん患者によって支持されている。従来の化学療法薬と比較して、これらの薬剤の最大の利点は、高い効果と低い毒性であるAdamsetal.,2005.NatureBiotechnology239:1147-1157;Reichertetal.,2007.NatureReviewsDrugDiscovery65:349-356.。現在の抗体薬剤市場は、年間120億米ドルと見積もられるが、それらの開発経費もまた非常に高い。それらにはまた、高い品質管理要件、免疫原性、および非特異的効果などの多くの不都合もあるKuus-Reicheletal.1994,ClinicalandVaccineImmunology14:365;Itoetal.1992,CancerResearch527:1961。現在の自己免疫疾患治療法自己免疫疾患は、免疫系が健康な組織を誤って攻撃し、破壊する場合に起きる病状である。臨床的に、自己免疫疾患は、血清γグロブリン、IgG含量>1.5;罹患臓器中の自己免疫抗体の存在;糸球体中の変性γグロブリンまたは対応する抗原の沈着;病変中の多数のリンパ球および血漿細胞の浸潤によって特徴付けられることが多い。副腎皮質ホルモンの施用によって、一時的または継続的緩和を獲得し得る。自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス、紅斑性狼蒼、関節リウマチ、炎症性腸疾患、および乾癬が挙げられる。多年の研究にもかかわらず、これらの疾患は根治され得ない。自己免疫疾患のために通常使用される薬剤としては、期初の軽症疾患のためのアミノサリチル酸、インドメタシン、プロピオン酸誘導体、および制酸薬などの非ステロイド系抗炎症薬NSAIDが挙げられる。作用機序は、COX酵素阻害およびプロスタグランジン生成による、消炎鎮痛効果の達成である。しかしそれらは、関節リウマチの進行を阻止し得ない。これに加えて、代謝経路が重なるために、これらの薬剤間で相互作用が発生することもあり、併用は推奨されない。金チオリンゴ酸ナトリウムなどの金塩もまた、使用される。ペニシラミン、クロロキン、レバミゾール、免疫抑制剤、および副腎皮質ホルモンをはじめとする、その他の薬剤は、それぞれ独自の欠点がある。先にも言及されたように、葉酸受容体αは、多種のがん細胞中で高度に発現され、葉酸受容体βは、骨髄性白血病の白血球細胞中、または関節リウマチなどのいくつかの自己免疫疾患の活性化マクロファージ中で高度に発現されるが、葉酸受容体の発現は、正常組織中ではほぼ皆無である。したがって、葉酸と125I、67Ga、および111Inのコンジュゲートなどの放射性標識葉酸コンジュゲートが使用されて、葉酸受容体を高度に発現する腫瘍組織が検出される。また抗がん剤として、葉酸-タンパク質毒素、葉酸-小分子化学療法薬、葉酸-リポソームリポソーム含有化学療法薬または遺伝子ベースの薬剤、および葉酸-免疫療法薬が開発されている。例えば、Hilgenbrinketal.2005.J.PharmaceuticalSciences9410:2135-2146;Panetal.2002.BioconjugateChem133:435-442;Lietal.BioconjugateChemistry,2010,215:961-968;Hassan,R.,W.Ebel,etal.2007,CancerImmun7:20を参照されたい。既存の技術の欠陥の観点から、本発明は、高効能の葉酸-コンジュゲート抗体葉酸-GSH-IgG、その調製方法、そしてがんおよび自己免疫疾患の治療における使用を提供する。本発明の第1の目的は、GSHを通じた、活性化IgGと葉酸との共役によって特徴付けられる、高効能の葉酸-GSH-IgGコンジュゲートを提供することである。GSHの分子式は、C10H17N3O6Sである。このコンジュゲートの構造は、式I、II、およびIII、で示され、式中、FOLATEは、葉酸、または構造式、のメトトレキサート、テトラヒドロ葉酸、ジヒドロ葉酸などの葉酸誘導体を表し、GSHは、分子式C10H17N3O6Sのグルタチオン、または構造式、のシステアミンやシステインなどの遊離スルフヒドリルおよび遊離アミノ基がある化合物を表す。IgGは、動物IgG、ヒトIgG、組換えヒト化IgG、half-IgG、Fc断片、または還元反応から得られるその重鎖であってもよい。式IIIでは、IgGは、活性スルフヒドリルがある上記のIgGを表す。IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4の4つのIgGのサブタイプのいずれか1つを使用し得る。IgGは、2-メルカプトエチルアミンHClなどの弱還元剤によって、half-IgGに還元されてもよく、また1,4-ジチオスレイトールDTTなどの強力な還元剤によって、IgG重鎖に還元される。式Iでは、R1は、表1の基から選択される。式IIでは、R2は、表2の基から選択される。式IIIでは、R3は、表3の基から選択される。DCCおよびNHSによる活性化後、葉酸はアミド結合を通じてGSHに連結されて葉酸-GSHが形成する。次に、IgGのリジン残基のアミノ末端N末端またはεアミノ基が活性化されて、IgGの活性型が生じる。IgGはまた、half-IgGまたは重鎖に還元してもよい。これらの2種類のIgGは、どちらも葉酸-GSHと共役し得る。第1の方法では、IgGアミノ基が活性化される。言及される活性化剤は、RaCORbの構造を有してもよく、式中、Raは、N-ヒドロキシスクシンイミドなどのアミン反応性官能基の一部としての離脱基であり、その式は、式IVで示される。Rbは、式Vで示されるように、GSH中の遊離スルフヒドリルに対して反応性の、好ましくはマレイミドである官能基を含有する。活性化剤は、スルホ-LC-SPDPスルホスクシンイミジル6-[32-ピリジルジチオ-プロピオンアミド]ヘキサノエート、LC-SPDPスクシンイミジル6-[32-ピリジルジチオ-プロピオンアミド]ヘキサノエート、SPDPN-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオプロピオネート、SMPT4-スクシンイミジルオキシカルボニル-メチル-α-[2-ピリジルジチオ]トルエン、スルホ-LC-SMPT4-スルホスクシンイミジル-6-メチル-α-2-ピリジルジチオトルアミド]ヘキサノエート、スルホ-SMCCスルホスクシンイミジル4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレート、SMPEGnNHS-PEG-マレイミド架橋剤、SMCCスクシンイミジル-4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレート、LC-SMCCスクシンイミジル-4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシ-[6-アミドカプロレート]、スルホ-EMCS[N-e-マレイミドカプロイルオキシ]スルホスクシンイミドエステル、EMCS[N-e-マレイミドカプロイルオキシ]スクシンイミドエステル、スルホ-GMBSN-[γ-マレイミドブチリルオキシ]スルホスクシンイミドエステル、GMBSN-[γ-マレイミドブチリルオキシ]スクシンイミドエステル、スルホ-KMUSN-[k-マレイミドウンデカノイルオキシ]スルホスクシンイミドエステル、スルホ-MBSm-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、MBSm-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホ-SMPBスルホスクシンイミジル4-[p-マレイミドフェニル]ブチレート、SMPBスクシンイミジル-4-[p-マレイミドフェニル]ブチレート、AMASN-α-マレイミドアセトキシスクシンイミドエステルBMPSN-[β-マレイミドプロピルオキシ]スクシンイミドエステルSMPHスクシンイミジル-6-[β-マレイミドプロピオンアミド]ヘキサノエートから、または遊離スルフヒドリルと反応し得るその他の基から選択される。IgGが、スルホ-SMCC、SMPEGnNHS-PEG-マレイミド架橋剤、SMCC、LC-SMCC、スルホ-EMCS、EMCS、スルホ-GMBS、GMBS、スルホ-KMUS、スルホ-MBS、MBS、スルホ-SMPB、SMPB、AMAS、BMPSandSMPHと反応した後、生成物は、式VI、式中、R1は、表1に列挙される基を表す。の共通構造を有する。葉酸-GSHと式VIの活性化IgGを反応させた後に、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートが形成される。このコンジュゲートは、式Iで示される構造を有する。IgGが、スルホ-LC-SPDP、LC-SPDP、SPDP、SMPT、およびスルホ-LC-SMPTと反応した後、生成物は式VII、式中、R2は表2に列挙される群を表す。の共通構造を有する。葉酸-GSHと式VIの活性化IgGを反応させた後に、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートが形成される。このコンジュゲートは、式IIで示される構造を有する。上述のIgGが、反応性スルフヒドリルのあるhalf-IgGまたは重鎖である場合、それはまた、1,8-ビス-マレイミドジエチレングリコールBMPEG2、BMPEGnPEG架橋剤、1,4-ビスマレイミドブタンBMB、1,4ビスマレイミジル-2,3-ジヒドロキシブタンBMDB、ビスマレイミドヘキサンBMH、ビス-マレイミドエタンBMOE、1,4-ジ-[3-2-ピリジルジチオ-プロピオンアミド]ブタンDPDPB、ジチオ-ビスマレイミドエタンDTME、およびトリス[2-マレイミドエチル]アミンTMEAまたはそれらの誘導体などのスルフヒドリル-反応性リンカーを通じて活性化され得る。これらの化合物は、式VIII、に示される共通構造を有する。R3は、表3に列挙される基を表す。葉酸-GSH-IgGの形成中に、葉酸は、DCCおよびNHSによる活性化後、アミド結合を通じてGSHと連結する。half-IgGまたは重鎖中の遊離スルフヒドリルは、式VIIIの生成物と反応して、式IX、の構造の化合物を生じる。この化合物は、葉酸-GSHと反応して、式IIIのコンジュゲートを生じる。理解を助けるために、異なる構造のコンジュゲートの一覧を下に示す。1.SPDPを通じた、葉酸-GSHとIgGの共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートこれは、次のように簡略化される。2.SMPBを通じた、葉酸-GSHとIgGの共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート3.SMCCを通じた、葉酸-GSHとIgGの共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート4.BMBを通じた、葉酸-GSHと還元形態IgG弱還元剤の共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート5.DTMEを通じた、葉酸-GSHと還元型IgG強力な還元剤の共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート6.EMCSを通じた、葉酸-GSHと還元型IgG弱い還元剤の共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート7.LC-SPDPを通じた、葉酸-GSHと還元型IgG強力な還元剤の共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート8.スルホ-GMBSを通じた、葉酸-GSHとIgG1との共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート9.スルホ-KMUSを通じた、葉酸-GSHとIgG1の共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートおよび10.スルホ-KMUSを通じた、メトトレキサート-GSHとIgG1の共役によって生じる、葉酸-GSH-IgGコンジュゲート式中、式1~9のFOLATEは葉酸であり、式10中ではメトトレキサートである。本発明で提供される葉酸-GSH-IgGコンジュゲートは、葉酸受容体の発現がより高い、標的細胞の受容体を特異的に認識して結合する。これらの結合は、IgGによって媒介される、エフェクター細胞または補体系の活性化を通じて、細胞毒性効果を誘発し、IL-2など生物反応修飾物質の機能を高める。葉酸受容体発現がより低い正常細胞は、影響を受けない。したがって、本発明は、従来の薬剤が、体内で正常細胞を損傷する問題を回避する。本発明者らは、がんおよび自己免疫疾患の治療において、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートを使用し得ることを認識し、コンジュゲートが良好な治療効果を有することを実験的に示した。さらに、コンジュゲート中にはいかなる外来性タンパク質配列もないので、生体内における抗体中和反応がない。その一方で、IgGはコンジュゲートの効果を向上させ得る。化合物は、細胞内部に移行する必要なしに、細胞表面に結合して下流反応を活性化することで、効果がある。さらなる研究は、コンジュゲートのGSH構成要素が、葉酸リガンドの遊離カルボキシル含量と親水性の増大をもたらし、葉酸とIgGの間隔を広げて、葉酸受容体の標的化と治療効果に顕著な改善をもたらすことを示した。別の実施形態では、本発明は、1.葉酸をN-ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、NHS-葉酸を形成するステップと;2.アミド結合を通じて、NHS-葉酸をGSHと反応させて、葉酸-GSHを形成するステップと;3.IgGをそのアミノ基において活性化して、それぞれ式VI~VIIまたは式IX、式中、R1、R2、およびR3は上で定義される。の構造を有する、スルフヒドリル反応型を形成するステップとを含んでなる、この安定コンジュゲートを合成する方法を提供する。これらのステップに伴うパラメータと条件は、さらに次のように説明される。1.葉酸をN-ヒドロキシスクシンイミドと反応させて、NHS-葉酸を形成する。Folateは、葉酸、またはメトトレキサート、テトラヒドロ葉酸、ジヒドロ葉酸などの葉酸誘導体を表し、葉酸が好ましい選択である。好ましくは、葉酸または葉酸誘導体はDMSOに溶解されて、N、N-ジシクロヘキシルカルボジイミドおよびN-ヒドロキシスクシンイミドと2~5時間反応される。不溶性副産物は、遠心分離または濾過を通じて廃棄される。可溶性構成物は、活性化NHS-葉酸を含有する。葉酸を例として、下に反応方程式を示す。2.葉酸-GSHは、NHS-葉酸とGSHの反応後に生成され、それはアミド結合を通じて連結する。好ましくは、NHS-葉酸は、アルゴン下において暗所で等量のGSHと一晩反応される。最終生成物は、式、の構造を有する。3.活性化IgGの調製IgGアミノ基は、アミド結合を通じて活性化されてもよく、あるいはIgGはhalf-IgGまたは重鎖に還元されてもよい。i.IgGアミノ基の活性化式中、IgG-NH2は、IgGのアミノ基を表す。IgGは、ヒトIgG、マウスIgG、組換えIgG、これらのIgGのFc断片、および還元を通じたhalf-IgGまたは重鎖から選択される。本発明では、IgGは、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4の4種類のIgGの内のいずれか1つである。RaCORbは、離脱基Raを持つIgG活性化剤である。式IVのスクシンイミドが好ましい。Rbは、GSHの遊離スルフヒドリルとの反応に関与する基である。式Vのマレイミドが好ましい。活性化剤が、スルホ-SMCC、SMPEGnNHS-PEG-マレイミド架橋剤、SMCC、LC-SMCC、スルホ-EMCS、EMCS、スルホ-GMBS、GMBS、スルホ-KMUS、スルホ-MBS、MBS、スルホ-SMPB、SMPB、AMAS、BMPS、およびSMPHである場合、生成化合物は、IgGとの反応後に、式VI、式中、R1は上で定義される。の共通構造を有する。活性化剤が、スルホ-LC-SPDP、LC-SPDP、SPDP、SMPT、およびスルホ-LC-SMPTであれば、生成化合物は、IgGとの反応後に、式VII、式中、R2は、表2に示される基を表す。の共通構造を有する。好ましくは、IgGは、0.05~1mmol/Lの濃度で適切な溶媒に溶解される。この溶液を10~30倍の上述の活性化剤と、室温で0.5~1時間、または4°Cで1~3時間反応させる。この活性化IgGは、PD-10AmershamBiosciencesなどの分子ふるいカラムを通して、精製される。適切な溶媒は、10~30mmol/LのPBS-EDTApH6.5~9.0、超純水、DMSOまたはDMFであり得る。10~30mmol/LのPBS-EDTAが、好ましい選択である。ii.IgGの還元還元剤での治処理後、重鎖中の、または重鎖と軽鎖間の、ジスルフィド結合が分離されて、活性スルフヒドリルが曝露される。IgGは、2-メルカプトエチルアミンHCl2-MEAなどの弱い還元剤によって、half-IgGに還元される。1mlの2~20mg/mlのIgG-PBS-EDTA緩衝液20~100mMのNa3PO4、150mMのNaCl、1~10mMのEDTA、pH6.0~8.0を、6mgの2-MEAまたはその他の弱い還元剤と共に、37°Cで1~3時間、均質に混合するIgG溶液の体積が1ml未満の場合は、6mgの2-MEAをPBS-EDTA中に溶解し、1000~400:1の比率でIgG溶液と迅速に混合し得る。室温に冷却後、PD-10などの脱塩カラムを通して、反応混合物を精製する。反応方程式は、次のとおりである。IgGは、1、4-ジチオスレイトールDTTなどの強力な還元剤によって、重鎖に還元される。DTTを0.1~20Mmの最終濃度で、溶液pH6.5~9.0に溶解させる。DTT溶液をIgG溶液と室温で1~4時間反応させ、混合物を即座に脱塩カラムに装入してIgG重鎖を得る。反応方程式は、次のとおりである。IgGはまた、共通構造が、式VIII式中、R3は表3に列挙される基を表す。である、1,8-ビス-マレイミドジエチレングリコールBMPEG2、BMPEGnPEG架橋剤、1,4-ビスマレイミドブタンBMB、1,4ビスマレイミジル-2,3-ジヒドロキシブタンBMDB、ビスマレイミドヘキサンBMH、ビス-マレイミドエタンBMOE、1,4-ジ-[3-2-ピリジルジチオ-プロピオンアミド]ブタンDPDPB、ジチオ-ビスマレイミドエタンDTME、トリス[2-マレイミドエチル]アミンTMEA、およびそれらの類似体などのスルフヒドリル反応性リンカーによって活性化され得る。以下のコンジュゲートが生じる。4.葉酸-GSHはIgGと共役されて、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートを生じる。上述したように、活性化IgGは葉酸-GSHと共役されて、式IおよびIIの構造の葉酸-GSH-IgGコンジュゲートを形成する。スルフヒドリル反応性リンカーによって活性化されたhalf-IgGまたは重鎖は、葉酸-GSHと共役されて、式IIIの構造の葉酸-GSH-IgGコンジュゲートを形成する。好ましい実施形態では、葉酸-GSHは、1~10倍の活性化IgGと室温で2~5時間、または4°Cで15~20時間反応される。生成物は、分子ふるいクロマトグラフィーによって精製され収集される。ステップ3は、ステップ1および2と同時に、またはそれに先だって実施し得る。別の実施形態では、本発明は、有効量の葉酸-GSH-IgGコンジュゲートと、薬学的に許容できるキャリアまたは賦形剤とを含んでなる、医薬組成物を提供する。適切な投与形態は、凍結乾燥粉末または注射液であってもよい。下の表は、本発明の組成物の具体例を列挙する。本発明はまた、抗腫瘍薬の調製における、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートの使用も提供する。上述したように、がんまたは自己免疫疾患のある患者では、本明細書で提供される葉酸-GSH-IgGコンジュゲートは、がん細胞上、または活性化マクロファージ上の葉酸受容体と特異的に結合する。この結合は、IgGを通じて、抗体または補体系を活性化させ、および/またはIL-2などの生物反応修飾物質の機能を高める。がん細胞は、結果として生じる細胞毒性によって死滅する。しかし葉酸受容体発現がより低い、正常細胞に対する影響は皆無である。機序解析に基づいて、がん細胞が高レベルの葉酸受容体を発現しさえすれば、葉酸-GSH-IgGは適切な投与量で効果的である。本発明の組成物による治療に適するがんタイプとしては、白血病、子宮頸癌、子宮頸癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、肺癌、肝臓癌、脈絡膜癌、および上衣細胞腫が挙げられる。コンジュゲートは、i.v.、i.m.またはs.c.注射などの注射を通じて、送達し得る。ヒトにおける適切な投与量範囲は1mg~4g/kgであり、5mg~100mg/kgが好ましい。本発明は、自己免疫疾患を治療する薬剤調製における、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートの使用をさらに提供する。複雑な病理学的特徴、再発、および治癒の困難さのために、自己免疫疾患は、患者を非常に苦しめる。病理過程において多数の免疫細胞が活性化され、サイトカインが放出される。そしてマクロファージが、疾患の進行において重要な役割を果たす。本明細書で提供される葉酸-GSH-IgGコンジュゲートは、活性化マクロファージ中の葉酸受容体と選択的に結合する。これに加えて、葉酸受容体標的化と協調して作用する、以下の機構がある。第一に、コンジュゲートは、マクロファージ上のIgGFc受容体と競合的に結合して、食作用と炎症性因子分泌を低下させる。第二に、葉酸-GSH-IgGは、マクロファージの抗原提示を効果的に阻害し、それによってTリンパ球活性化、炎症性因子分泌、および細胞毒性T-細胞の致死効果を阻害する。最後に、葉酸-GSH-IgGは、マクロファージ上のFc受容体をブロックし、それによって、自己抗体例えば抗血小板抗体と既に結合した自己組織の食作用を妨げる。本発明で言及される自己免疫疾患は、自己組織を損傷し得る、自己抗原に対する免疫応答によって引き起こされる疾患である。したがって疾患が、高レベルの葉酸受容体発現によって特徴付けられさえすれば、葉酸-GSH-IgGは適切な投与量で効果的である。これらの自己免疫疾患としては、関節リウマチ、炎症性腸疾患、乾癬、紅斑性狼瘡、肺線維症、およびサルコイドーシスが挙げられる。コンジュゲートは、静脈、筋肉を通じた注射、または皮下注射を通じて送達され得る。処方される用量は、1mg~4g/kg体重の範囲であり、5mg~100mg/kgが好ましい。以下の実施例によって、更に詳しい説明を提供する。動物実験では、葉酸-GSH-IgGのIgGは、マウスに由来するものであったことに留意されたい。これによってマウスにおける、Fc受容体ミスマッチと、ヒト化IgGの免疫原性を回避する。将来、コンジュゲートがヒトに適用される場合は、ヒトIgGが使用される。材料:BMB、DCC、DTT、DTME、EMCS、FITC、葉酸、GSH、LC-SPDP、2-MEA、メトトレキサート、NHS、SMCCSMPBSPDP、スルホ-GMBS、およびスルホ-KMUSは、Sigmaから購入される。組換えIgGは、LeincoTechnologiesから得られる。Fc部分は、SinoBiologicalから得られる。ヒトIgG1は、AXXORAから得られる。ウシ胎仔血清およびMEM培地は、Hycloneによって提供される。MCF-7乳癌細胞系は、武漢大学の中国典型培養物保蔵中心から得られる。実施例1葉酸-GSH-IgGコンジュゲートは、葉酸、GSH、およびIgGを含んでなる。IgGは組換えIgGである。0.1mmolの葉酸、0.1mmolのDCC、および0.1mmolのNHSの混合物をDMSO中に室温で2時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、0.1mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。IgGを10倍のSPDP20mM原液からと、室温で0.5時間混合する。混合物を分子ふるいカラムPD-10に装入して、活性化IgGを得る。葉酸-GSHを0.1当量の活性化IgGと、室温で15時間反応させる。分子ふるいカラムを通して、生成物葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例2IgGは、ヒトIgGのFc部分である。30ミクロモルの葉酸、40ミクロモルのDCC、および30ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で5時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、30mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。IgGを30倍のSMPB20mM原液からと、室温で1時間混合する。反応物を分子ふるいカラムPD-10に装入して、活性化IgGを得る。葉酸-GSHを重量で20倍の活性化IgGと、4°Cで20時間反応させる。次に、分子ふるいカラムPD-10を通して、生成物、葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例3IgGはヒトIgG1である。10ミクロモルの葉酸、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。IgGを20倍のSMCC20mM原液からと、室温で1時間混合する。反応物を分子ふるいカラムPD-10に装入して、活性化IgGを得る。葉酸-GSHを重量で10倍の活性化IgGと、室温で20時間反応させる。次に、分子ふるいPD-10を通して、生成物葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例4IgGはヒトIgG1である。2~20mg/mlのIgGを含有する1mlのPBS-EDTA緩衝液20~100mMのNa3PO4、150mMのNaCl、1~10mMのEDTA、pH6.0~8.0に、6mgの2-MEAを37°Cで1時間溶解する。室温に冷却した生成物をPD-10などの脱塩カラムに装入して、half-IgG還元IgGを得る。10ミクロモルの葉酸、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。PBSpH7.5中で、スルフヒドリル架橋剤BMBをDMFに溶解し、1倍の還元IgGと室温で2時間反応させる。次に、脱塩カラムPD-10を通して、生成物、葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例5IgGはヒトIgG1である。DTTを5mMでPBS-EDTApH7.5に溶解する。IgG溶液とDTTの混合物を室温に2時間保つ。生成物を即座にPD-10などの脱塩カラムに装入して、IgG重鎖を得る。10ミクロモルの葉酸、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。PBSpH7.5中で、スルフヒドリル架橋剤DTMEをDMFに溶解し、1倍の還元IgGと室温で2時間反応させる。次に、得られた生成物を葉酸-GSHと反応させる。次に脱塩カラムPD-10を通して、生成物、葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例6IgGはヒトIgG1である。2~20mg/mlのIgGを含有する1mlのPBS-EDTA緩衝液20~100mMのNa3PO4、150mMのNaCl、1~10mMのEDTA、pH6.0~8.0に、6mgの2-MEAを37°Cで1時間溶解する。室温に冷却した生成物をPD-10などの脱塩カラムに装入して、half-IgGを得る。10ミクロモルの葉酸、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。室温で、LC-SPDP20mM原液を使用して、IgGを1時間還元する。次に、葉酸-GSHを重量で10倍の還元IgGに室温で20時間添加する。分子ふるいカラムPD-10を通して、生成物、葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例7IgGはヒトIgG1である。DTTを5mMでPBS-EDTApH7.5に溶解する。IgG溶液とDTTの混合物を室温に2時間保つ。生成物をPD-10などの脱塩カラムに装入して、IgG重鎖を得る。10ミクロモルの葉酸、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。IgG重鎖を20倍のLC-SPDP20mM原液と室温で1時間反応させ、PD-10カラムでで分離する。次に、葉酸-GSHを重量で10倍の活性化IgGと、室温で20時間反応させる。PD-10カラムを通して、生成物、葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例8IgGはヒトIgG1である。10ミクロモルの葉酸、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。IgGを20倍のスルホ-GMBS20mM原液からによって室温で1時間活性化し、PD-10カラムで分離する。次に、葉酸-GSHを重量で10倍の活性化IgGと、室温で20時間反応させる。PD-10カラムを通して、生成物、葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例9IgGはヒトIgG1である。10ミクロモルの葉酸、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。葉酸-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。IgGを20倍のスルホ-KMUS20mM原液からによって室温で1時間活性化し、PD-10カラムで分離する。次に、葉酸-GSHを重量で10倍の活性化IgGと、室温で20時間反応させる。PD-10カラムを通して、生成物、葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例10葉酸類似体-GSH-IgGコンジュゲートは、メトトレキサート、GSH、およびIgGを含んでなる。メトトレキサートの分子式は、C20H22N8O5である。IgGは、ヒトIgG1である。10ミクロモルのメトトレキサート、20ミクロモルのDCC、および10ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続く。メトトレキサート-GSHを得るために、10mmolのGSHを上清に添加して、アルゴン環境下、暗所で一晩反応させる。IgGを20倍のスルホ-SMCC20mM原液からと室温で1時間反応させ、PD-10カラムで分離する。メトトレキサート-GSHを10倍の活性化IgGと室温で20時間反応させる。PD-10カラムを通して、生成物葉酸-GSH-IgGを収集する。実施例112つの方法によって調製された葉酸-GSH-IgGの安定性の比較実験材料1.実施形態3に従って、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートを調製する。ウシ胎仔血清およびMEM培地は、Hycloneによって提供される。2.MCF-7乳癌細胞系は、武漢大学の中国典型培養物保蔵中心から得られる。方法:葉酸-IgGコンジュゲートの調製:30ミクロモルの葉酸、40ミクロモルのDCC、および30ミクロモルのNHSの混合物をDMSO中で室温で3時間保ち、遠心分離がそれに続いた。上清を重量で20倍の組換えIgGと室温で5時間反応させた。分子ふるいPD-10を通して、生成物を精製し収集した。葉酸-IgGおよび葉酸-GSH-IgGをそれぞれ5倍のFITCと共に、室温で2時間インキュベートした。FIG-FITCおよびFGIG-FITCと称されるFITC標識コンジュゲートをPD-10カラムに装入して収集した。これらの半分を4°Cで3ヶ月間、暗所に保った。細胞蛍光強度は、次のように検出した。対数増殖期にあるMCF-7細胞葉酸受容体による安定形質移入を10ウシ胎仔血清を含有するMEMに再懸濁した。96ウェル培養プレート5×104/ml内において、200μl/ウェルで単細胞懸濁液を培養した。細胞をいくつかの群に分けた。陰性対照、FIG-FITC、FGIG-FITC、FIG-FITC-3、FGIG-FITC-3FIGおよびGIGは、4°Cで3ヶ月間、暗所に保った、および葉酸干渉群葉酸FIG-FITC、葉酸FGIG-FITC。各群は、3連であった。20μlのFIGまたはFGIG-FITCを各ウェルに添加した。葉酸干渉群では、葉酸-PBSをウェルに入れた葉酸最終濃度は20μmol/L。5CO2、37°Cで3時間の培養後、サンプルを200μlPBSで3回洗浄した。パンクレアチンによる消化後、倒立蛍光顕微鏡下で細胞を観察した。細胞に吸収される蛍光はまた、細胞溶解と、1000rpmで20b分間の遠心分離後に、蛍光光度計によって検出され得た。結果:FITC標識葉酸-IgGおよび葉酸-GSH-IgGは、葉酸受容体と効率的に結合し得て、腫瘍細胞を緑色にした。しかし葉酸の干渉は、蛍光強度を顕著に低下させた。これは、腫瘍細胞と葉酸-IgGまたは葉酸-GSH-IgGとの結合特異性を示唆する。その一方で、葉酸-IgGと比較して、葉酸-GSH-IgGは、細胞の取り込みを効果的に改善した約45.2。これに加えて、結合実験は、コンジュゲートを4°Cで3ヶ月保った後の有意差もまた示した。表4では、葉酸-IgG基の蛍光強度は、葉酸-GSH-IgG群よりも低く、葉酸-IgG群の取り込みは、葉酸-GSH-IgG群のわずか69.8であった。これらの結果は、改善された調製方法が、葉酸-GSH-IgGの標的化と安定性を強化することを示唆する。FIG-FITC群のオンライン結果と比較してP<0.01;▲▲4°Cで3ヶ月間保ったFIG-FITC群と比較してP<0.01。実施例12乳癌治療のための葉酸-GSH-IgGの使用実験材料1.それぞれ実施形態1および11に従って、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートFGIGおよび葉酸-IgGFIGコンジュゲートを調製する。IgGは、SigmaからのマウスIgGである。2.動物:体重18~22gの50匹の健康な成熟メスヌードマウスは、南京大学モデル動物研究所によって提供される。動物のグループ分けおよび処置体重によって、マウスを無作為に、正常対照群、モデル群、エピルビシン陽性対照群、FIG5mg/kg群および40mg/kg群、FGIG5mg/kg群および40mg/kg群に分けた。実験開始前の7日間に、マウスに葉酸の入っていない飼料を与えた。0日目から、モデル群、エピルビシン陽性対照群、FIG5mg/kg群または40mg/kg群、およびFGIG5mg/kg群または40mg/kg群に、それぞれ葉酸受容体形質移入MCF-7細胞1×106を皮下注射した。5日目から、FIG5mg/kg群およびFIG40mg/kg群には、FIGそれぞれ5mg/kgおよび40mg/kgを腹腔内注射した。FGIG5mg/kg群およびFGIG40mg/kg群には、FGIGそれぞれ5mg/kgおよび40mg/kgを腹腔内注射した。エピルビシン陽性対照群には、エピルビシン200mg/kgを腹腔内注射した。正常対照群およびモデル群には、等量の生理食塩水を腹腔内注射した。注射は、4日ごとに1回実施した。注射の15日後、マウスを絶食させた。処置の翌日、腫瘍体積をノギスで測定し、平均生存期間もまた計算した。体積:次式を使用して、固形腫瘍体積を計算した。V=0.5×L×W×H結果1.DBA/2マウスにおけるMCF-7細胞増殖のFGIGによる阻害表2に示されるように、5mg/kgおよび40mg/kgのFGIGの注射は、DBA/2マウスにおけるMCF-7増殖を効果的に阻害した。16日後、これらの2群中の固形腫瘍の体積は、50.8および63.3低下してFIG群よりも小さく、MCF-7増殖に対する葉酸-GSH-IgGによる阻害が、葉酸-IgGを上回ることが示唆された。2.FGIGは、DBA/2マウスの平均生存期間を増大させた。5mg/kgおよび40mg/kgのFGIGの注射は、マウスの平均生存期間を2.0または3.0倍増大させたが、葉酸-GSH-IgG群と葉酸-IgG群の間に有意差はなかった。正常対照群と比較してP<0.01;▲▲モデル群と比較してP<0.01。実施例13抗がん剤としてのFOLATE-GSH-IgGの生体外試験抗がん剤としてFOLATE-GSH-IgGを選択した。MTT比色分析アッセイを使用して、ヒト白血病細胞K562、子宮頸癌細胞Hela、乳癌細胞MCF-7、結腸癌細胞Caco-2、および肝臓癌細胞HepG2に対する増殖阻害効果を試験した。50阻害濃度IC50もまた測定した。実験材料1.薬剤および試薬:それぞれ実施形態1および11に従って、FOLATE-GSH-IgGコンジュゲートFGIGおよびFOLATE-IgGFIGコンジュゲートを調製する。2.ヒト白血病細胞系K562、子宮頸癌細胞系Hela、乳癌細胞系MCF-7、結腸癌細胞系Caco-2、および肝臓癌細胞系統HepG2は、武漢大学菌株保存機関から得られる。がん細胞阻害CI:CI=OD対照群-OD試験群/OD対照群100阻害濃度50IC50:がん細胞増殖率を異なる濃度の同一サンプルでプロットして、用量応答曲線を得てIC50を計算した。結果FOLATE-GSH-IgGは、恐らくはFOLATE-GSH-IgG結合によって誘発されるがん細胞アポトーシスのために、K562、Hela、MCF-7、Caco-2、およびHepG2細胞の増殖を用量依存性に顕著に阻害した。FOLATE-GSH-IgGは、FOLATE-IgGよりも細胞毒性が高かった。実施例14炎症性腸疾患治療のための葉酸-GSH-IgG動物モデルを使用して、炎症性腸疾患治療のための葉酸-GSH-IgGの効果および機構を研究した。実験材料1.それぞれ実施形態1および11に従って、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートFGIGおよび葉酸-IgGFIGコンジュゲートを調製する。IgGは、SigmaからのマウスIgGである。メサラジンSR顆粒MesalazineSRGranulesは、EthypharmFranceから得られる。MPO検出キットは、南京建成生物工程研究所から得られる。2.動物:体重18~22gの50匹の健康な成熟オス昆明マウスは、南京大学モデル動物研究所によって提供される。動物のグループ分けおよび処置マウスを無作為に、対照群、モデル群、メサラジン陽性対照群、FIG5mg/kg群および40mg/kg群、FGIG5mg/kg群および40mg/kg群に分けた。その内、FIG5mg/kg群およびFIG40mg/kg群には、FIGそれぞれ5mg/kgおよび40mg/kgを腹腔内注射した。FGIG5mg/kg群およびFGIG40mg/kg群には、FGIGそれぞれ5mg/kgおよび40mg/kgを腹腔内注射した。メサラジン陽性対照群には、600mg/kgのメサラジンを経口投与した。対照群およびモデル群には、等量の生理食塩水を腹腔内注射した。注射は、毎日1回実施した。酢酸刺激を使用して、結腸炎を誘発した。マウスを9日目および10日目の空腹時に、エーテル吸入によって麻酔した。注射前に、肛門内に約1.5cm挿入した、0.1mlの6酢酸を含有するポリエチレンパイプで、腸管を清浄にした。試験基準1.結腸粘膜損傷指数colonmucosadamageindex;CMDI:結腸全体を摘出し、腸間膜に沿ってはさみで切開した。表7に従って、癒着、潰瘍、および鬱血を裸眼観察で点数化した。2.ミエロペルオキシダーゼMPO:組織を秤量し、トリス緩衝液内で均質化した1:19、重量/体積。均質化と、凍結および解凍の反復後、組織を5ホモジネートにした。キット製造会社の使用説明書に従ってMPO検出を実施し、Lowry法を使用してタンパク質レベルを検出した。結腸係数は、上の2スコアの合計である。結果表8は、葉酸-GSH-IgGが、炎症性腸疾患のあるマウスにおいて、結腸炎症を顕著に緩和したことを示す。5mg/kgおよび40mg/kgの葉酸-GSH-IgG注射後、結腸係数は、それぞれ42.0および64.8低下した。炎症スコアの低下は、1.44および4.93倍であった。MPO活性低下は、58.3および71.3であった。これらの結果は、葉酸-IgGよりも優れていた。低用量または高用量の葉酸-GSH-IgGは、酢酸によって誘発される結腸損傷からマウスを明らかに保護する。マウス結腸評点レベルは、それぞれ3.4および1.4であった。モデル群では、重篤な癒着と2つ以上の潰瘍があった。マウス結腸評点レベルは、8.3であった。なおも軽度の発赤と癒着があった。FIG群では、軽度の炎症がなおも存在したが、明白な潰瘍および癒着はなく、結腸評点レベルは1.9であった。標準対照群と比較してP<0.01;▲▲モデル群と比較してP<0.01。実施例15関節リウマチ治療のための葉酸-GSH-IgGの使用関節リウマチ動物モデルを通じて、関節リウマチの治療における葉酸-GSH-IgGの効果および機構を試験した。実験材料1.それぞれ実施形態1および11に従って、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートFGIGおよび葉酸-IgGFIGコンジュゲートを調製する。ラットIgGおよび完全フロイントアジュバントは、Sigmaから得られる。ジクロフェナクナトリウム腸溶コーティング錠剤は、北京諾華製薬有限公司から得られる。RF検出キットは、南京建成生物工程研究所から得られる。2.動物:オスおよびメスの双方の体重150~200gの50匹の健康な成熟ウィスター系ラットは、武漢大学実験動物センターによって提供される。方法動物のグループ分けおよび処置ラットを無作為に、正常対照群、モデル群、ジクロフェナクナトリウム陽性対照群、FIG2mg/kg群および8mg/kg群、FGIG2mg/kg群および8mg/kg群に分けた。その内、FIG2mg/kg群およびFIG8mg/kg群には、FIGそれぞれ2mg/kgおよび8mg/kgを腹腔内注射した。FGIG2mg/kg群およびFGIG8mg/kg群には、FGIGそれぞれ2mg/kgおよび8mg/kgを腹腔内注射した。ジクロフェナクナトリウム陽性対照群には、10mg/kgのジクロフェナクナトリウムを経口投与した。正常対照群およびモデル群には、等量の生理食塩水を腹腔内注射した。注射は、毎日1回実施した。0日目の右足体積体積測定後、0.1mlの完全フロイントアジュバントを右足関節に皮下注射した。21日目に、右足体積を最後の注射後に測定した。血液サンプル採取後、エーテル吸入によりラットを殺処分した。血液サンプルを遠心分離して、リウマチ因子RF検出のために血清を得た。試験基準1.関節損傷指数スコア:表9.2.リウマチ因子RF:RF検出キットと共に100μlの血清を使用した。結果表10では、葉酸-GSH-IgGは、関節リウマチがあるラットの足指発赤を顕著に緩和し得た。2mg/kgおよび8mg/kgの葉酸-GSH-IgGの注射後、指または足指体積差は、それぞれ70.9および78.8低下した。関節損傷スコアレベルは、1.58および5.20倍低下した。リウマチ因子の含有量は、それぞれ19.1および25.8低下した。これらの結果は、葉酸-IgGよりも優れていた。8mg/kgの葉酸-IgG群と比較して、8mg/kgの葉酸-GSH-IgG群のラットの関節損傷スコアレベルおよび足指体積差は、54.5および36.9低下した。これらは、葉酸-GSH-IgGの腹腔内注射が、関節リウマチからラットを効果的に保護することを示す。正常対照群と比較してP<0.05、P<0.01;モデル群と比較して▲P<0.05、▲▲P<0.01。実施例16紅斑性狼瘡を治療するための葉酸-GSH-IgGの使用実験材料:1.薬剤および試薬:それぞれ実施形態1および11に従って、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートFGIGおよび葉酸-IgGFIGコンジュゲートを調製する。マウスIgGおよび完全フロイントアジュバントは、Sigmaから得られる。HRP-ヤギ抗マウスIgGは、衛生部北京生物製品研究所から得られる。IL-1およびRF検出キットは、南京建成生物工程研究所から得られる。2.動物:体重18~22gの50匹の健康な成熟メス昆明マウスは、武漢大学実験動物センターによって提供される。生産ライセンス:SCXK湖北省2003-2004。マウス飼料は、武漢大学実験動物センターから購入される。方法動物のグループ分けおよび処置マウスを無作為に、正常対照群、モデル群、ライコウトウTripterygiumwilfordii陽性対照群、FIG1mg/kg群および10mg/kg群、FGIG1mg/kg群および10mg/kg群に分けた。FIG1mg/kg群およびFIG10mg/kg群には、FIGそれぞれ1mg/kgおよび10mg/kgを腹腔内注射した。FGIG1mg/kg群およびFGIG10mg/kg群には、FGIGそれぞれ1mg/kgおよび10mg/kgを腹腔内注射した。ライコウトウTripterygiumwilfordii陽性対照群に、10mg/kgのライコウトウTripterygiumwilfordiiを経口を投与した。正常対照群およびモデル群には、等量の生理食塩水を腹腔内注射した。注射は、毎日1回実施した。カンピロバクタージェジュニCampylobacterjejuni3×1012CFU/Lのホルムアルデヒド懸濁液を完全フロイントアジュバントと等量混合した。完全に乳化した後、50μlの懸濁液を中足に注射した。3週間後、10μlの懸濁液を静脈内注射によって再度注射した。感作の28日後に、血清中のヒストンの自己抗体を検出した。試験基準ヒストンの自己抗体:1:100希釈の血清を被覆96ウェルプレートに入れた。サンプルを37°Cで2時間インキュベートした。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼ共役ヤギ抗マウスIgG1:100を添加して、37°Cで2時間インキュベートした。基質を添加して、37°Cで20分間インキュベートした。2mol/LのH2SO4によって反応を停止した。490nmにおける吸光度スコアを記録し、これを酵素指数EIと共に示した。結果表11では、葉酸-GSH-IgGは、紅斑性狼瘡があるマウスのヒストン自己抗体の産生を顕著に低減し得た。1mg/kgおよび10mg/kgの葉酸-GSH-IgG注射後、自己抗体の産生は、それぞれ38.7および47.1低下した。高用量群は、陽性対照群と比較して顕著な効果を有した。10mg/kg群では、ヒストン自己抗体産生は、葉酸-IgGよりも12.5低下した。これらは、葉酸-GSH-IgGが、葉酸-IgGに優って、ヒストン自己抗体の産生を効率的に低下させることを示す。正常対照群と比較してP<0.01;モデル群と比較して▲P<0.05、▲▲P<0.01。実施例17乾癬の治療のための葉酸-GSH-IgG動物モデルを通じて、乾癬の治療における葉酸-GSH-IgGの効果および機構を試験した。実験材料1.薬剤および試薬:それぞれ実施形態1および11に従って、葉酸-GSH-IgGコンジュゲートFGIGおよび葉酸-IgGFIGコンジュゲートを調製する。マウスIgGはSigmaから得られる。トリアムシノロンアセトニドクリームは、天津藥業公司から得られる。2.動物:オスおよびメス同数の体重18~22gの40匹の健康な成熟昆明マウスは、武漢大学実験動物センターによって提供される。生産ライセンス:SCXK湖北省2003-2004。マウス飼料は、武漢大学実験動物センターから購入される。方法動物のグループ分けおよび処置マウスを無作為に、正常対照群、モデル群、トリアムシノロンアセトニドクリーム陽性対照群、FIG1mg/kg群および10mg/kg群、FGIG1mg/kg群および10mg/kg群に分けた。その内、FIG1mg/kg群およびFIG10mg/kg群には、FIGそれぞれ1mg/kgおよび10mg/kgを腹腔内注射した。FGIG1mg/kg群およびFGIG10mg/kg群には、FGIGそれぞれ1mg/kgおよび10mg/kgを腹腔内注射した。トリアムシノロンアセトニドクリーム陽性対照群には、0.05gのトリアムシノロンアセトニドクリームを尾の付け根に塗布した。正常対照群およびモデル群には、等量の生理食塩水を腹腔内注射した。注射は、毎日1回実施した。15日間の継続的投与の後、マウスを殺処分した。尾の付け根から1.8cm離れた尾の皮膚の一片を採取して、ホルムアルデヒド溶液100ml/Lで固定した。パラフィン包埋とHE染色後、マウスの尾表皮の鱗片を光学的顕微鏡下で観察した。試験基準顆粒層があるマウス尾表皮の鱗片数:2つの毛嚢の間が顆粒層で覆われた鱗片は、顆粒層のある鱗片に分類される。異なる群間で、100個の鱗片あたりの顆粒層のある鱗片数を測定して比較する。結果表12では、葉酸-GSH-IgGは、顆粒層のある鱗片の産生を顕著に増大させ得る。1mg/kgおよび10mg/kgの葉酸-GSH-IgGの注射後には、顆粒層のある鱗片数は、それぞれ1.64および2.21倍増大した。表12乾癬があるマウスの尾表皮中の顆粒層のある鱗片に対する、葉酸-GSH-IgGの効果X±SD、n=10正常対照群と比較してP<0.01。"