ヒトDR5に特異的に結合するNB剤の単一可変ドメインの単量体を少なくとも1つは含む単離されたポリペプチド。該単一可変ドメインが、a配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;b配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して90の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;およびc配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して少なくとも95の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン、からなる群より選択される、請求項1に記載のポリペプチド。該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;およびb配列番号1~5、26、30および87を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメインからなる群より選択される、請求項1に記載のポリペプチド。ヒトDR5に特異的に結合する単一可変ドメインの単量体型サブユニットを少なくとも3つ、少なくとも4つ、または少なくとも5つは含み、該サブユニットがポリペプチドリンカーによって連結されていてもよい、単離されたポリペプチド。該ポリペプチドが単一可変ドメインの同一単量体を含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;b配列番号1~5、26、30および87を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン、ならびにc配列番号1~5、26、30および87を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択される、請求項4に記載のポリペプチド。a配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有するアミノ酸配列;およびb配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群の1つ以上のサブユニットから選択されるアミノ配列を含む、請求項4に記載のポリペプチド。Colo205、Jurkat、Molt4、H2122、H226およびH2052からなる群より選択される少なくとも2つの腫瘍細胞株のパネルに対して、100nM以下のインビトロ力価IC50を有する、ヒトDR5に特異的に結合する請求項4に記載のポリペプチド。10nM以下、1nM以下、または100pM以下のインビトロ力価を有する、請求項7に記載のポリペプチド。配列番号1~22、26~33、87および88の1つ以上のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。配列番号41~44CDR1;配列番号51~55CDR2;配列番号63~68CDR3、より好ましくは配列番号51~55および配列番号63~68のいずれかに示すCDR領域の少なくとも1つに対して少なくとも60、70、80、90、95または100パーセントの配列同一性を有する相補性決定領域CDRを少なくとも1つは含む、請求項1に記載の単離されたポリペプチド。ヒト化免疫グロブリン、ラクダ化免疫グロブリン、もしくは親和性最適化技法によって得ることができる免疫グロブリン、またはそれらのフラグメントである、前記請求項のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド。軽鎖可変ドメイン配列例えばVL配列から本質的になるか、重鎖可変ドメイン配列例えばVH配列から本質的になるか、またはドメイン抗体、単一ドメイン抗体、dAbおよびラクダ科抗体もしくはフラグメントVHH配列を含むが、これに限るわけではないである、前記請求項のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド。a配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列または配列番号96~99の少なくとも1つによってコードされるアミノ酸配列の少なくとも1つに対して少なくとも90のアミノ酸同一性ここで、アミノ酸同一性の程度を決定する目的には、CDR配列を形成するアミノ酸残基を無視するを有し、b場合によっては、Kabatのナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108の1つ以上がヒューマニア化されている、VHH配列から本質的になる、前記請求項のいずれか一項に記載の単離されたポリペプチド。前記請求項のいずれか一項に記載の1つ以上のポリペプチドを含むか、または前記請求項のいずれか一項に記載の1つ以上のポリペプチドから本質的になり、さらに1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットを含んでもよい化合物であって、細胞アポトーシスを強化する能力を有する化合物。該少なくとも3つ、4つ、5つ以上の一価結合ポリペプチドが全て、ヒトDR5の同じ結合領域に向けられている、請求項14のいずれかに記載の化合物。該少なくとも1つの一価結合ポリペプチドがDR5の一結合領域に向けられており、少なくとも1つの他の一価結合ポリペプチドがDR5のもう一つの異なる結合領域または別のDR5の結合領域に向けられている、請求項14のいずれかに記載の化合物。薬物として使用するための、請求項1のいずれかに記載のポリペプチド。抗がん治療薬として使用するための、請求項17に記載のポリペプチド。請求項18に記載のポリペプチドおよび少なくとも1つの医薬上許容される担体、希釈剤もしくは賦形剤およびまたは佐剤。細胞アポトーシスの強化によって処置することができる障害を防止およびまたは処置するための方法であって、その必要がある対象に、前記請求項のいずれか一項に記載の少なくとも1つのポリペプチドの医薬有効量を投与することを含む方法。該障害がDR5活性のアゴニズムに応答する増殖性疾患である、請求項20に記載の方法。該増殖性疾患が、a原発性がんおよび転移がん、例えば腎細胞癌、肺のがん例えば小細胞肺がんSCLCおよび非小細胞肺がんNSCLC、膵臓のがん、造血器悪性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、中皮腫、直腸結腸がん、前立腺がん、骨肉腫、黒色腫、リンパ腫バーキットリンパ腫を含むが、これに限るわけではない、乳がん、子宮内膜がん、肝がん、胃がん、皮膚がん、卵巣がんおよび任意の起源を持つ扁平上皮細胞がん肺、頭頸部、乳房、甲状腺、子宮頸部、皮膚、およびまたは食道の扁平上皮細胞がんを含むが、これらに限るわけではないから選択される1つ以上の固形がん;bとりわけ急性T細胞白血病TALLなどのT細胞白血病、急性B細胞白血病BALL、慢性骨髄性白血病CML、急性骨髄性白血病AML、形質細胞骨髄腫および多発性骨髄腫MMを含む白血病から選択される1つ以上の液状がん;およびc炎症性疾患および自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス、橋本病、関節リウマチ、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、悪性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、クローン病、自己免疫性溶血性貧血、不妊症、重症筋無力症、多発性硬化症、バセドー病、血栓性血小板減少症、血小板減少性紫斑病、インスリン依存性真性糖尿病、アレルギー;喘息、アトピー性疾患;動脈硬化;心筋炎;心筋症;糸球体腎炎;および低形成性貧血の1つ以上を含む、1つ以上の非がん適応症から選択される、請求項21に記載の方法。増殖性疾患が膵がんである、請求項22に記載の方法。増殖性疾患がTALLである、請求項22に記載の方法。増殖性疾患が中皮腫である、請求項22に記載の方法。増殖性疾患が任意の組織に由来する扁平上皮細胞癌である、請求項22に記載の方法。増殖性疾患がAMLである、請求項22に記載の方法。増殖性疾患が黒色腫である、請求項22に記載の方法。増殖性疾患が骨髄腫である、請求項22に記載の方法。CDRがKabatおよびまたはChothiaの規則に従って算定される前記請求項のいずれか一項以上に記載の単離されたポリペプチド。表29Aに記載のDR5エピトープに結合するか、表30Aに記載のDR5エピトープに結合する、前記請求項のいずれか一項以上に記載のNBコンストラクト。さまざまなDR5特異的抗体が臨床での使用のために開発されているが、いずれもまだ承認されていない。DR5が活性化されるには複数の架橋抗体が必要であると考えられ、再現性のある治療効果を達成するには、作用部位へのこれらの抗体の十分な送達に関する問題が残っている。したがって、関連する疾患を処置するには、改良されたDR5特異的アゴニストが必要とされている。[発明の概要]本発明は、ここに提供する細胞死受容体5本明細書ではDR5というに向けられたアミノ酸配列を含む1つ以上のNB剤NBagent、ならびに1つ以上の前記アミノ酸配列を含む、または1つ以上の前記アミノ酸配列から本質的になる、特異的化合物またはコンストラクト、特にタンパク質およびポリペプチドそれぞれ化合物およびポリペプチドともいうならびにそのフラグメント、そしてまた、それらコンストラクトをコードする核酸に関する。本発明のDR5特異的コンストラクトの単量体型および多量体型変異体が、ここに提供される。NB剤のヒト化humanizedおよびヒューマニア化humanieered変異体が提供される。ある実施形態において、本発明の医薬関連NB剤は、TRAIL受容体DR5のアゴニストとして作用する。本発明は、前記アミノ酸配列およびポリペプチドをコードする核酸;前記アミノ酸配列およびポリペプチドを製造するための方法;前記アミノ酸配列またはポリペプチドを発現するまたは発現する能力を有する宿主細胞;前記アミノ酸配列、ポリペプチド、核酸およびまたは宿主細胞を含む組成物、特に医薬組成物;ならびに前記アミノ酸配列またはポリペプチド、核酸、宿主細胞およびまたは組成物の、特に予防、治療または診断目的での、例えば本明細書において言及する目的での使用にも関係する。NB剤として本明細書に記載するTRAIL受容体DR5のアゴニストは、DR5と関連する広範囲にわたる疾患に対する治療に使用できる可能性を有する。それゆえに、これら本発明のNB剤は、がん、例えば固形腫瘍、原発性がんおよび転移がん、例えば腎細胞癌、および肺のがん例えば小細胞肺がんSCLCおよび非小細胞肺がんNSCLC、膵臓のがん、造血器悪性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、中皮腫、直腸結腸がん、前立腺がん、骨肉腫、黒色腫、リンパ腫バーキットリンパ腫を含むが、これに限るわけではない、乳がん、子宮内膜がん、肝がん、胃がん、皮膚がん、卵巣がん、および任意の起源例えば肺、頭頸部、乳房、甲状腺、子宮頸部、皮膚、食道などを持つ扁平上皮細胞がん、ならびに例えば白血病例えばUnoらNatureMedicine12693698参照とりわけ、急性T細胞白血病TALLなどのT細胞白血病、急性B細胞白血病BALL、慢性骨髄性白血病CML、急性骨髄性白血病AML、形質細胞骨髄腫および多発性骨髄腫MMを含むなどの液状がんを含む増殖性疾患の処置に有用である。これら本発明のNB剤は、炎症性疾患および自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス、橋本病、関節リウマチ、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、悪性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、クローン病、自己免疫性溶血性貧血;不妊症、重症筋無力症、多発性硬化症、バセドー病;血栓性血小板減少症thromboticthrobocytopenia、血小板減少性紫斑病thrombopeniapurpurea、インスリン依存性真性糖尿病、アレルギー;喘息;アトピー性疾患;動脈硬化;心筋炎;心筋症;糸球体腎炎globerulanephritis;および低形成性貧血を含む非がん適応症の処置にも有用である。本明細書に記載するアミノ酸配列およびポリペプチドは、任意のDR5に向けられたものであることができ、あるいは任意のDR5に特異的であることができる。非限定的一態様によれば、本明細書に記載するアミノ酸配列およびポリペプチドはDR5に向けられる。ある実施形態では、NB剤がDR5細胞外ドメインに特異的に結合する。本発明のポリペプチドおよび組成物は、DR5を調整するために、広く使用することができる。ある実施形態では、NB剤が、DR5によって媒介されるシグナリングをトリガー、活性化およびまたは増加もしくは強化するであろう。ある実施形態では、NB剤によるDR5のアゴニズムが、DR5と関連する生物学的機序、応答および効果、それらのシグナリングおよびまたはDR5が関与する経路を、調整特にトリガーまたは増加するであろう。ある実施形態では、本明細書に記載する化合物、ポリペプチドおよび組成物が、一定の細胞または組織におけるアポトーシスを誘導、トリガー、増加または強化する。ある実施形態では、本明細書に記載する化合物、ポリペプチドおよび組成物が、細胞表面上のDR5に結合する能力、特に、DR5によって媒介されるシグナリングが誘導、トリガー、増加または強化されるような形で、DR5に結合する能力を有する。ある実施形態において、本明細書に記載するポリペプチドおよび組成物は、細胞上にDR5が存在する細胞においてアポトーシスがトリガーまたは誘導されるような形でDR5に結合する能力を有するものであることができる。ある実施形態において、本明細書に記載するNB化合物、一価または多価ポリペプチドおよび組成物は、DR5上のTRAILの結合部位に結合することができる。ある実施形態では、NB剤が、DR5への結合に関してTRAILと競合する。ある実施形態では、DR5への前記化合物およびポリペプチドの結合が、DR5によって媒介されるシグナリングを誘導、トリガー、増加または強化し、特に細胞上にDR5が存在する細胞におけるアポトーシスをトリガーまたは誘導する。本発明の他の態様、実施形態、利点および応用は、本明細書におけるさらなる説明から、明らかになるであろう。[発明の詳細な説明]本明細書に記載するNB剤、すなわち化合物、ポリペプチド一価または多価および組成物は、細胞死受容体5DR5に結合する。ある実施形態では、ここに開示する化合物およびポリペプチドのDR5への結合が、DR5によって媒介されるシグナリングを誘導、トリガー、増加または強化し、特に、細胞上にDR5が存在する細胞におけるアポトーシスをトリガーまたは誘導する。本明細書において、本発明のNB剤とは、DR5ポリペプチドに特異的に結合する少なくとも1つのCDR3配列を含有するポリペプチドであって、その結合がDR5活性に対してアゴニスト効果を生じるもの、またはそのようなポリペプチドをコードするヌクレオチドと定義される。ある実施形態では、本発明のNB剤が、VHドメインの一般構造を有するポリペプチドである。ある実施形態では、本発明のNB剤が、VHHドメインの一般構造を有するポリペプチドである。ある実施形態では、本発明のNB剤が、VLドメインの一般構造を有するポリペプチドである。ある実施形態では、本発明のNB剤が、CDR3配列に加えて、少なくとも1つのCDR1配列および少なくとも1つのCDR2配列を含有する。ある実施形態では、本発明のNB剤が、式1について以下に定義するとおり、FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4構成を有する少なくとも1つの一価ポリペプチドを含む。ある実施形態では、本発明のNB剤が単量体型組成物である。ある実施形態では、NB剤が多量体型組成物である。ある実施形態では、本発明のNB剤が一価組成物である。ある実施形態では、NB剤が多価組成物である。ある実施形態では、フレームワーク領域が、ヒトにおける使用に最適化された配列である残基を含有する。本発明のNB剤の他の態様を以下に説明する。NB剤という用語が、本発明の組成物の全範囲を包含することを意図した一般用語として使用されるのに対し、NB配列あるいはNBコンストラクトという用語は、本明細書においては、配列番号1~72、87~88および103~104として本明細書に開示する特異的ポリペプチド変異体、およびそれらをコードするヌクレオチド、例えば配列番号96~99として本明細書に具体的に開示するもの、および配列番号96~99と同じポリペプチド配列をコードするが縮重コードによって異なっている配列を指すために使用される。本発明のNB剤ある実施形態では、NB剤が、11D1、11H6、10F1、7A12、および4E6、またはその変異体の群から選択される。ある実施形態では、NB剤が、ヒトにおける使用に最適化された例えばヒト化された配列を持つ変異体である。ある実施形態において、ヒト化NB剤には、4E6huおよび11H6huの群が含まれるが、これらに限るわけではない。ある実施形態では、NB剤が、列挙した群の単量体型変異体、またはその変異体である。ある実施形態では、NB剤が、列挙した群の多量体型変異体、またはその変異体である。ある実施形態では、列挙した群の多量体型変異体が単一特異性、またはその変異体である。ある実施形態では、列挙した群の多量体型変異体が多重特異性、またはその変異体である。ある実施形態では、多重特異性NB剤によって認識される複数のエピトープが、DR5ターゲットのさまざまなエピトープ、またはその変異体である。ある実施形態では、多重特異性NB剤によって認識される複数のエピトープが、DR5ターゲットの少なくとも1つのエピトープと、DR5ポリペプチド以外のターゲット上の少なくとも1つのエピトープ、またはその変異体である。ある実施形態では、NB剤が、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104、または配列番号96~99、またはそれらの変異体の1つ以上から選択される。NB剤の具体的実施形態11D1、11H6、10F1、7A12、および4E6、またはその変異体は、以下に記載し表1~4に示すとおりである。例示的な本発明のNB剤には、以下に挙げるNBポリペプチドコンストラクトおよびその変異体が含まれる。4E6ファミリーある実施形態では、NB剤が4E6、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、配列番号1の単量体、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、配列番号26の単量体、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号1の単量体を含む多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号26の単量体を含む多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号1と配列番号26の両方の単量体を含む多量体、またはその変異体であり、ここで単量体は任意の順序であることができる。ある実施形態では、4E6多量体型コンストラクトが、配列番号1の三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6多量体型コンストラクトが、配列番号26の三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6多量体型コンストラクトが、配列番号1と配列番号26の両方の組み合わせの三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体であり、ここで単量体は任意の順序であることができる。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、配列番号6~8および27~29の任意の1つ以上に記載する多量体、またはその変異体である。より高次の多量体、例えば6~10個のサブユニットから構成される多量体も考えられる。ある実施形態では、4E6コンストラクトが配列番号64、またはその変異体を含む。ある実施形態では、4E6コンストラクトが配列番号65、またはその変異体を含む。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、配列番号42のCDR1配列、配列番号52のCDR2配列ならびに配列番号64およびまたは配列番号65の任意の1つ以上のCDR3配列、またはその変異体を含む。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、ヒト化配列もしくはヒューマニア化配列、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、配列番号28に記載のとおりであるか、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、配列番号29に記載のとおりであるか、またはその変異体である。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、それぞれ配列番号35、42、46、52、57、64および70、またはその変異体を含む。ある実施形態では、4E6コンストラクトが、それぞれ配列番号36、42、47、52、58、65および71、またはその変異体を含む。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号1の4E6ポリペプチド、またはその変異体、多量体もしくはフラグメントをコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号26の4E6Huポリペプチドまたはその変異体、多量体もしくはフラグメントをコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、4E6HuポリペプチドのCDR領域、すなわち配列番号42、52および64、またはその変異体の1つ以上をコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、4E6ポリペプチドのCDR領域、すなわち配列番号42、52および65、またはその変異体の1つ以上をコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号64のCDR3領域またはその変異体をコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号65のCDR3領域またはその変異体をコードする核酸である。7A12ファミリーある実施形態では、NB剤が7A12、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、配列番号2の単量体、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号2の単量体を含む多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12多量体型コンストラクトが、配列番号2の三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、配列番号9~11の任意の1つ以上に記載する多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12コンストラクトが配列番号63を含む。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、配列番号41のCDR1配列、配列番号51のCDR2配列および配列番号63のCDR3配列、またはその変異体を含む。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、ヒト化配列もしくはヒューマニア化配列、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、配列番号10に記載のとおりであるか、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、配列番号11に記載のとおりであるか、またはその変異体である。ある実施形態では、7A12コンストラクトが、それぞれ配列番号34、41、45、51、56、63および69、またはその変異体を含む。より高次の多量体、例えば6~10個のサブユニットから構成される多量体も考えられる。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号2の7A12ポリペプチドまたはその変異体、多量体もしくはフラグメントをコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号41、51および63のCDR領域、またはその変異体の1つ以上をコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号63のCDR3領域またはその変異体をコードする核酸である。10F1ファミリーある実施形態では、NB剤が10F1、またはその変異体である。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、配列番号3の単量体、またはその変異体である。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号3の単量体を含む多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、10F1多量体型コンストラクトが、配列番号3の三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体である。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、配列番号12~16の任意の1つ以上に記載する多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、配列番号68、またはその変異体を含む。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、配列番号44のCDR1配列、配列番号55のCDR2配列および配列番号68のCDR3配列、またはその変異体を含む。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、ヒト化配列もしくはヒューマニア化配列、またはその変異体である。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、配列番号15、またはその変異体を含む。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、配列番号16、またはその変異体を含む。ある実施形態では、10F1コンストラクトが、それぞれ配列番号40、44、50、55、62、68および72、またはその変異体を含む。より高次の多量体、例えば6~10個のサブユニットから構成される多量体も考えられる。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号3の10F1ポリペプチドまたはその変異体、多量体もしくはフラグメントをコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号44、55および68のCDR領域、またはその変異体の1つ以上をコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号68のCDR3領域またはその変異体をコードする核酸である。11D1ファミリーある実施形態では、NB剤が11D1、またはその変異体である。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、配列番号4の単量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号4の単量体を含む多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11D1多量体型コンストラクトが、配列番号4の三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、配列番号17~19の任意の1つ以上に記載する多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、配列番号67、またはその変異体を含む。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、配列番号43のCDR1配列、配列番号54のCDR2配列および配列番号67のCDR3配列、またはその変異体を含む。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、ヒト化配列もしくはヒューマニア化配列、またはその変異体である。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、配列番号18、またはその変異体を含む。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、配列番号19、またはその変異体を含む。ある実施形態では、11D1コンストラクトが、それぞれ配列番号39、43、49、54、61、67および71、またはその変異体を含む。より高次の多量体、例えば6~10個のサブユニットから構成される多量体も考えられる。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号4の11D1ポリペプチドまたはその変異体、多量体もしくはフラグメントをコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号43、54および67のCDR領域、またはその変異体の1つ以上をコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号67のCDR3領域またはその変異体をコードする核酸である。11H6ファミリーある実施形態では、NB剤が11H6、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが配列番号5の単量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、配列番号30の単量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号5の単量体を含む多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号30の単量体を含む多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、作動可能に連結された2つ以上の配列番号5と配列番号30の両方の単量体を含む多量体、またはその変異体例えば配列番号88であり、ここで単量体は任意の順序であることができる。より高次の多量体、例えば6~10個のサブユニットから構成される多量体も考えられる。ある実施形態では、11H6多量体型コンストラクトが、配列番号5の三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6多量体型コンストラクトが、配列番号30の三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6多量体型コンストラクトが、配列番号5と配列番号30の両方の組み合わせの三量体、四量体もしくは五量体、またはその変異体であり、ここで単量体は任意の順序であることができる。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、配列番号20~22および31~33の任意の1つ以上に記載する多量体、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、配列番号66もしくは83、またはその変異体を含む。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、配列番号43のCDR1配列、配列番号53のCDR2配列、配列番号66の任意の1つ以上のCDR3配列、またはその変異体を含む。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、ヒト化配列もしくはヒューマニア化配列、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、配列番号31に記載のとおりであるか、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、配列番号32に記載のとおりであるか、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、配列番号33に記載のとおりであるか、またはその変異体である。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、それぞれ配列番号37、43、48、53、59、66および70、またはその変異体を含む。ある実施形態では、11H6コンストラクトが、それぞれ配列番号38、43、48、53、60、66および71、またはその変異体を含む。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号5の11H6ポリペプチドまたはその変異体、多量体もしくはフラグメントをコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号30の11H6Huポリペプチドまたはその変異体、多量体もしくはフラグメントをコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号43、53および66のCDR領域の1つ以上、またはその変異体をコードする核酸である。ある実施形態では、NBコンストラクトが、配列番号66のCDR3領域またはその変異体をコードする核酸である。NB剤の他の考えられる変異体ある実施形態では、本発明のNB剤が、11D1、11H6、10F1、7A12、および4E6の群から選択される少なくとも2つの異なるサブユニットを含む多量体型コンストラクト、またはその変異体である。そのような実施形態の一つでは、多量体型コンストラクトの特定順序が、交互サブユニットを含む。例示的コンストラクトを配列番号84に記載する。多量体型NBコンストラクト内のサブユニットの配置は他にも考えられる。当業者は一般に、本明細書の開示に基づいて、また場合によっては、わずかな日常的実験これは、例えば、限られた数の考えうる置換を導入し、それらの置換が、その結果得られるNBコンストラクトの性質に及ぼす影響を決定することなどを伴いうるにより、適切な置換、欠失もしくは挿入またはそれらの適切な組み合わせを決定し、選択することができるであろう。ここに開示する本明細書に記載の例示的NBポリペプチドコンストラクトだけでなく、本発明は、本発明の開示に包含される任意のNB剤をコードするヌクレオチド、例えば限定するわけではないが、単離された、または組換えベクター中の、およびまたはコード領域もしくはフラグメントとりわけ、ここに開示するNBコンストラクトのCDR3領域をコードするフラグメントを含むとしての、DNAおよびRNA配列またはその変異体も包含する。ある実施形態では、NB剤が、表1~4に記載する配列の任意の1つのNBコンストラクトをコードする核酸である。ある実施形態では、NB剤が、配列番号1~5、2、3、4、5、26、30および87の任意の1つの4E6コンストラクトをコードする核酸である。ある実施形態では、NB剤が、配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つをコードする核酸である。ある実施形態では、NB剤が、配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つをコードする核酸である。例示的な本発明の配列を、下記表1~4に記載する。見出しの用語IDは付与された配列番号を指す。各NBコンストラクトについてのFR配列とCDR配列の好ましい組み合わせは本願全体を通して交換可能に使用される。[表1]初期スクリーニングで得られた一価単量体型DR5結合コンポーネントのポリペプチド配列とその配列番号[表2]随意のリンカー配列を持つ多価抗CDR5NBコンストラクトのポリペプチド配列とその配列番号[表3]ヒト最適化ヌクレオチドNTおよびポリペプチドAA配列[表4]CDRおよびフレームワークの配列、および式I、すなわちFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4で表される好ましい組み合わせ[表4続き][表4続き]本発明のNB剤のさらなる態様を以下に記載する。本明細書に記載する化合物、一価または多価ポリペプチドおよび組成物は、DR5に結合するが、DR5上のTRAILの結合部位には結合しないようなものであることができ、かつまたはDR5への結合に関してTRAILと競合しないようなものであることができる。前記化合物およびポリペプチドは、DR5へのそれらの結合が、DR5によって媒介されるシグナリングを誘導、トリガー、増加または強化するもの、特に、細胞上にDR5が存在する細胞におけるアポトーシスをトリガーまたは誘導するようなものであることができる。前記化合物およびポリペプチドは、TRAILがその受容体に結合した時に、TRAILおよびDR5によって媒介されるシグナリングを増加または強化するようなものであることもできる。この態様によれば、TRAILと本明細書に記載する化合物ポリペプチドとの両方が同じ受容体に結合することが、前記シグナリングに対する相乗効果につながりうる。ある具体的一態様では、本明細書に記載する化合物およびポリペプチドが、DR5に向けられる多量体型の化合物およびポリペプチド本明細書に記載するものである。特に、本明細書に記載する化合物およびポリペプチドは、細胞膜上でDR5を多量体化する能力を有し、したがって、DR5によって媒介されるシグナリングを誘導、トリガー、増加または強化する能力を有する、特に、細胞上にDR5が存在する細胞におけるアポトーシスをトリガーまたは誘導する能力を有する、多量体型ポリペプチドであることができる。ある実施形態において、本明細書に開示する前記単量体型または多量体型の化合物またはポリペプチドは、DR5上のTRAILの結合部位またはその近傍で、DR5に結合することができ、かつまたはDR5への結合に関してTRAILと競合することができる。ある実施形態において、それらは、DR5上のTRAILの結合部位には結合せず、本質的にDR5へのTRAILの結合を妨害または防止せず、かつまたはDR5への結合に関してTRAILと競合せず、TRAILがその受容体に結合した時にTRAILおよびDR5によって媒介されるシグナリングを増加または強化するこれは、ここでも、DR5によって媒介されるシグナリングに対する相乗効果をもたらしうるようなものでさえある。ある実施形態では、アミノ酸配列が、天然に存在するTRAILリガンドに由来する部分を含有し、すなわちそれは、天然TRAILリガンドポリペプチドまたは前記TRAILリガンドの任意のTRAIL受容体結合フラグメントで構成されたセグメントを含む。本発明のポリペプチドおよび組成物は、DR5と関連する疾患および障害の防止および処置に使用することができる。具体的に述べると、DR5と関連する疾患および障害とは、そのような防止または処置を必要とする対象すなわち、疾患もしくは障害またはその少なくとも1つの症状を有し、かつまたは疾患もしくは障害を引き寄せるもしくは発症するリスクがある対象に、DR5を介したシグナリングの調整すなわちアゴニズムまたはアンタゴニズムをもたらす本発明のポリペプチドまたは組成物特にその医薬活性量およびまたはDR5もしくはDR5が関与する生物学的経路もしくは機序に対して活性な既知の活性成分特にその医薬活性量を適切に投与することによって、それぞれ防止およびまたは処置することができるものと定義される。以下に列挙するとおり、疾患時に標的とされる細胞または組織におけるアポトーシスの誘導によって処置することができる疾患および障害は、特に、DR5と関連するものとして、ここに包含される。DR5と関連する疾患および障害は、特に、DR5が関与するシグナリング、機序、応答および効果をトリガー、開始、増加または強化することによって言い換えれば、DR5またはDR5を介したシグナリングに対するアゴニスト効果を達成することによって処置することができる疾患および障害であることができる。特に、DR5と関連する疾患および障害は、処置されるべき対象中の1つ以上の細胞または組織における細胞アポトーシスをトリガー、開始、増加または強化することによって処置することができる疾患および障害であることができる。ある実施形態では、本発明のNB剤が、DR5と関連する広範囲にわたる疾患に対する治療に使用できる可能性を有する、TRAIL受容体DR5のアゴニストである。DR5と関連する疾患および障害の例は、本明細書における開示に基づけば、当業者には明らかであるだろう。ある実施形態では、本発明のNB剤が、例えばがん、例えば固形腫瘍、原発性がんおよび転移がん、例えば腎細胞癌、および肺のがん例えば小細胞肺がんSCLCおよび非小細胞肺がんNSCLC、膵臓のがん、造血器悪性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、中皮腫、直腸結腸がん、前立腺がん、骨肉腫、黒色腫、リンパ腫バーキットリンパ腫を含むが、これに限るわけではない、乳がん、子宮内膜がん、肝がん、胃がん、皮膚がん、卵巣がんおよび任意の起源例えば肺、頭頸部、乳房、甲状腺、子宮頸部、皮膚、食道などを持つ扁平上皮細胞がんなど、ならびに例えば白血病とりわけ、急性T細胞白血病TALLなどのT細胞白血病、急性B細胞白血病BALL、慢性骨髄性白血病CML、急性骨髄性白血病AML、形質細胞骨髄腫および多発性骨髄腫MMを含むなどの液状がんを含む、増殖性疾患の処置に有用である。ある実施形態では、本発明のNB剤が、例えば限定するわけではないが、炎症性疾患および自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス、橋本病、関節リウマチ、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、悪性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、クローン病、自己免疫性溶血性貧血、不妊症、重症筋無力症、多発性硬化症、バセドー病、血栓性血小板減少症、血小板減少性紫斑病、インスリン依存性真性糖尿病、アレルギー;喘息、アトピー性疾患;動脈硬化;心筋炎;心筋症;糸球体腎炎;および低形成性貧血を含む非がん適応症の処置にも有用である。したがって、限定するわけではないが、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、DR5を介したシグナリングを調整することができる活性成分を使って現在防止または処置されている全ての疾患および障害、例えば本明細書において言及するものおよび引用する技術文献において言及されているものを防止およびまたは処置するために使用することができる。ある実施形態では、前記活性成分による処置が現在開発されているか、提案されたことがあるか、または将来、提案もしくは開発されるであろう全ての疾患および障害を防止およびまたは処置するために、本発明のポリペプチドを使用することができる。ある実施形態では、本明細書のポリペプチドが、本明細書においてさらに詳しく説明するその好ましい性質ゆえに、これらの既知活性成分が使用されているか、その使用が提案または開発されるであろう疾患および障害以外の他の疾患および障害の防止および処置にも使用しうること;およびまたは本発明のポリペプチドが、本明細書に記載する疾患および障害を処置するための新しい方法およびレジメンを提供しうることが予見される。本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドの他の応用および使用は、本明細書におけるさらなる開示から、当業者には明らかになるであろう。ある実施形態において、本発明は、DR5と関連する疾患および障害ならびに本明細書において言及するさらなる疾患および障害の診断、防止およびまたは処置に使用することができる、薬理活性剤ならびにそれを含む組成物本明細書に記載する完全なポリペプチド、およびまたはフラグメント、およびまたは前記ポリペプチドもしくはフラグメントの多量体型変異体のいずれであれ、これらは全て、本明細書においては、広く本発明の組成物というを提供すると共に、前記薬剤および組成物の投与およびまたは使用を伴う、前記疾患および障害を診断、予防およびまたは処置するための方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、当技術分野において現在使用されかつまたは知られている薬剤、組成物およびまたは方法と比較して一定の利点を有する前記薬理活性剤、組成物およびまたは方法を提供する。これらの利点は、以下のさらなる説明から明らかになるであろう。ある実施形態において、本発明は、DR5に向けられた、特に温血動物由来のDR5に向けられた、より具体的には哺乳動物由来のDR5に向けられた、とりわけヒトDR5に向けられた、アミノ酸配列を提供すると共に、少なくとも1つの前記アミノ酸配列を含む、または少なくとも1つの前記アミノ酸配列から本質的になる、タンパク質およびポリペプチドを提供する。ある実施形態において、本発明は、温血動物、特に哺乳動物、とりわけヒトにおける予防的、治療的およびまたは診断的使用に適した、前記アミノ酸配列ならびに前記タンパク質およびまたはポリペプチドを提供する。ある実施形態において、本発明は、温血動物、特に哺乳動物、より具体的にはヒトにおいて、DR5と関連しかつまたはDR5によって媒介される1つ以上の疾患、障害または状態例えば本明細書において言及する疾患、障害および状態の防止、処置、軽減およびまたは診断に使用することができる、前記アミノ酸配列ならびに前記タンパク質およびまたはポリペプチドを提供する。ある実施形態において、本発明は、温血動物、特に哺乳動物、より具体的にはヒトにおいて、DR5と関連しかつまたはDR5によって媒介される1つ以上の疾患、障害または状態例えば本明細書において言及する疾患、障害および状態を防止およびまたは処置するための医薬組成物または獣医学用組成物の製造に使用するための前記本発明の組成物を提供する。ある実施形態において、本発明は、DR5に向けられかつまたはDR5に特異的に結合することができる本発明組成物、ならびに少なくとも1つの前記アミノ酸配列を含む化合物およびコンストラクト、特にタンパク質およびポリペプチドを提供する。より具体的には、本発明は、例えばNCBIタンパク質データベースに見いだされるアクセッション番号BAA33723で定義されるようなDR5細胞表面受容体に特異的に結合することができるアミノ酸配列を提供する。特に本発明は、例えばNCBIタンパク質データベースに見いだされるアクセッション番号BAA33723で定義されるようなDR5細胞表面受容体に特異的に結合することができ、かつ少なくとももう一つのTRAIL受容体、例えばTRAILR3およびTRAILR4には結合しない、アミノ酸配列を提供する。ヒトDR5の短鎖型スプライス変異体も知られているGenBankエントリNP671716。ある実施形態において、本発明は、本明細書に記載する医薬上許容される範囲のアフィニティKD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定され、かつまたは表現されたもので、DR5に結合することができるアミノ酸配列;ならびに少なくとも1つの前記アミノ酸配列を含む化合物およびコンストラクト、特にタンパク質およびポリペプチドを提供する。ある実施形態において、本発明の組成物は、a105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDすなわち105~1012リットルモル以上、好ましくは107~1012リットルモル以上、より好ましくは108~1012リットルモルの会合定数KAで、DR5に結合し、かつまたはb102M1s1~約107M1s1、好ましくは103M1s1~107M1s1、より好ましくは104M1s1~107M1s1、例えば105M1s1~107M1s1のkon速度で、DR5に結合し、かつまたはc1s1t12=069sおよび106s1複数日のt12を持つほぼ不可逆的な複合体を与える、好ましくは102s1~106s1、より好ましくは103s1~106s1、例えば104s1および106s1のkoff速度で、DR5に結合するようなものである。ある実施形態において、本発明の組成物は、一価であれ多価であれ、100nM未満、かつまたは10nM未満、かつまたは1nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで、DR5に結合する。ある実施形態において、本発明の組成物は四価組成物である。ある実施形態において、本発明の組成物は五価組成物である。ある実施形態において、本発明の組成物は、一価であれ多価であれ、さまざまながん細胞タイプ例えば少なくとも1つの細胞タイプにおけるアポトーシスを、100nM未満、好ましくは10nM未満、より好ましくは1nM未満、例えば500pM未満のIC50で、特異的に誘導するであろう。ある実施形態において、本発明の多価アミノ酸配列は、腫瘍細胞株では、例えば実験項において言及する非腫瘍細胞株、例えばHuvec、IMR90およびARPE19などにおいて測定される正常非腫瘍細胞株における力価よりも、少なくとも10倍強力であるか、正常非腫瘍細胞株における力価よりも、少なくとも100倍強力である。実施例および表13を参照されたい。DR5に結合するために、通常、本発明の組成物は、1つ以上のアミノ酸残基または1つ以上のアミノ酸残基のストレッチすなわち各ストレッチは、アミノ酸配列の一次リニアまたは三次コンフォメーション構造において、互いに隣接しているか互いに近接している2つ以上のアミノ酸残基を含むであって、それを介することで、本発明のアミノ酸配列がDR5に結合できるものを、そのアミノ酸配列内に含有し、したがって、これらのアミノ酸残基またはアミノ酸残基のストレッチは、DR5に結合するための部位本明細書では抗原結合部位またはエピトープともいうを形成する。エピトープマッピング実験を本明細書の実施例に記載する。ある実施形態において、ここに記載する本発明の組成物は、本質的に単離された形態にあるか、あるいは、本明細書に開示する1つ以上のアミノ酸配列を含む、または本明細書に開示する1つ以上のアミノ酸配列から本質的になる、本発明のタンパク質またはポリペプチドの一部を形成する。ある実施形態において、本発明の組成物は、さらに1つ以上の追加アミノ酸配列を含みうる。ある実施形態では、そのような追加配列が、1つ以上の適切なリンカーを介して連結される。限定するわけではないが、本発明の組成物は、そのようなタンパク質またはポリペプチドの結合ユニットとして使用することができる。そのような本発明の組成物は、それぞれ、本発明の一価、多価または多重特異性ポリペプチドが得られるように、追加結合ユニットとして機能することができる1つ以上のさらなるアミノ酸配列すなわち、DR5以外の1つ以上のターゲットに対するものを含有してもよい。そのようなタンパク質またはポリペプチドは、本質的に単離された形態にあってもよい。ある実施形態において、本発明の組成物は、他のどのアミノ酸配列もしくはアミノ酸鎖または医薬関連組成物にもジスルフィド橋によって連結されていない、単一のアミノ酸鎖ただし1つ以上の分子内ジスルフィド橋は含有してもよいし含有しなくてもよいから本質的になる。分子内ジスルフィド橋の例として、ラクダ科VHHコンストラクトは、CDR3とCDR1またはFR2との間にジスルフィド橋を含有する場合がありうることが知られている。ある実施形態において、本発明の組成物は、互いにおよびまたは他のアミノ酸配列に例えばジスルフィド橋を介して連結されて、代替的なペプチドコンストラクト例えばFabフラグメント、F2フラグメント、ScFvコンストラクト、ダイアボディdiabodyならびに他の多価およびまたは多重特異性コンストラクト;HolligerおよびHudsonNatBiotechnol2005Sep23112636による総説を参照されたいを与えてもよい。医薬関連組成物の例には、ある疾患を処置する薬物、または半減期を増加させ、特異的組織をターゲットとし、かつまたはターゲット細胞を殺す組成物が含まれる。ある実施形態において、本発明の組成物は、他の任意のアミノ酸配列もしくはアミノ酸鎖これらはどちらも1つ以上の分子内ジスルフィド橋を含有してもよいし含有しなくてもよいまたは医薬関連組成物に少なくとも1つの分子間ジスルフィド橋を介して連結された単一のアミノ酸鎖から本質的になる。ある実施形態において、本発明の組成物は、それを例えば本明細書に記載する治療目的およびまたは診断目的のために対象に投与することが意図されている場合、前記対象中に天然には存在しないアミノ酸配列であるか、またはそれが前記対照中に天然に存在する場合には、本質的に単離された形態にある。ある実施形態では、医薬的使用に関して、ここに開示する本発明のアミノ酸配列ならびにそれを含む化合物、コンストラクトおよびポリペプチドは、ヒトDR5に向けられる。ある実施形態では、獣医学的目的のために、ここに開示する前記組成物は、処置されるべき種に由来するDR5に向けられる。ある実施形態では、獣医学的目的のために、ここに開示する前記組成物は、処置されるべき種に由来するDR5と交差反応する。ある実施形態において、本発明のアミノ酸配列は、DR5に対して結合するための結合部位を少なくとも1つは有し、他のエピトープ、抗原、タンパク質またはターゲットに対して結合するためのさらなる結合部位を1つ以上含有してもよい。本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドならびにそれを含む組成物の効力は、関与する具体的疾患または障害に応じて、任意の適切な、自体公知のインビトロアッセイ、細胞ベースのアッセイ、インビボアッセイおよびまたは動物モデル、あるいはそれらの任意の組み合わせを使って、試験することができる。これらは、例えば、腫瘍細胞のアポトーシス、増殖およびまたはそのような腫瘍に関する動物モデルにおける腫瘍の成長に対する、本明細書に記載するアミノ酸配列または化合物の影響を測定するためのアッセイまたはモデルであることができる。適切なアッセイおよび動物モデルは当業者には明らかであり、例えば下記の実験項および本明細書において言及する技術文献において使用されているアッセイおよび動物モデルが含まれるであろう。ELISA、FACSまたは表面プラズモン共鳴法などの結合アッセイ;インビトロ機能アッセイ、例えば腫瘍細胞株および正常細胞株のパネルを使ったインビトロ細胞生存アッセイ、Jurkat細胞生存検出によるインビトロ効力アッセイ;インビボ機能アッセイ、例えばカスパーゼ37活性化リードアウトと組み合わされてさまざまな効力、PKおよびPDデータを与える単回投与インビボ試験などが、その例である。本発明のある実施形態では、第1の温血動物種に由来するDR5に向けられたアミノ酸配列およびポリペプチドが、1つ以上の他の温血動物種に由来するDR5との交差反応性を示してもよいし、示さなくてもよい。例えば、ヒトDR5に向けられたアミノ酸配列およびポリペプチドは、1つ以上の他の霊長類種例えば、限定するわけではないが、マカクMacaca属のサル例えば、特に、カニクイザルcynomologusmonkeyMacacafascicularis;別名シノcynoおよびまたはアカゲザルMacacamulattaおよびヒヒチャクマヒヒPapioursinusに由来するDR5との交差反応性、およびまたは疾患に関する動物モデルによく使用される1つ以上の動物種例えばマウス、ラット、ウサギ、ブタまたはイヌ、特にDR5と関連する疾患および障害に関する動物モデルによく使用される1つ以上の動物種例えば本明細書において言及する種および動物モデルに由来するDR5との交差反応性を、示してもよいし、示さなくてもよい。この点に関して、そのような交差反応性が存在する場合、それが、薬剤開発の観点からは利点になりうることは、当業者には明らかであるだろう。というのも、ヒトDR5に対するアミノ酸配列およびポリペプチドを、そのような疾患モデルにおいて試験することが可能になるからである。ここに提供するさまざまな本発明のコンストラクトは、シノDR5と特異的交差反応性を示す。ある実施形態において、複数の哺乳動物種に由来するDR5と交差反応する本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、通常は、獣医学的応用における使用にとって有利であるだろう。というのも、同じアミノ酸配列またはポリペプチドを複数の種にわたって使用することができるだろうからである。したがって、ある実施形態において、ある動物種に由来するDR5に向けられたアミノ酸配列およびポリペプチド例えばヒトDR5に対するアミノ酸配列およびポリペプチドは、そのアミノ酸配列およびまたはポリペプチドの使用が処置されるべき種において所望の効果を与えるのであれば、別の動物種の処置に使用することができる。本発明は、その最も広い意味において、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドが向けられるDR5の特定の抗原性決定基、エピトープ、パーツ、ドメイン、サブユニットまたはコンフォメーションconfirmation適用可能な場合に特に限定されたり、それらによって定義づけられたりすることもない。しかし、ある実施形態では、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、DR5の細胞外ドメインに向けられる。非限定的一態様において、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、DR5のDR5結合ドメインに向けられ、本明細書においてさらに詳しく定義するとおりである。ある実施形態では、本発明の一価または多価アミノ酸配列およびポリペプチドが、実験項で説明する競合結合アッセイにおいて、DR5の天然リガンドと競合する。ある実施形態では、本発明の一価または多価アミノ酸配列およびポリペプチドが、競合結合アッセイにおいて、DR5の天然リガンドと相乗的に結合する。本発明の一実施形態において、適用可能な場合に、本発明のアミノ酸配列は、DR5の2つ以上の抗原性決定基、エピトープ、パーツ、ドメイン、サブユニットまたはコンフォメーションconfirmationに結合することができる。そのような場合、本発明のアミノ酸配列およびまたはポリペプチドが結合するDR5の抗原性決定基、エピトープ、パーツ、ドメインまたはサブユニットは、本質的に同じであってもよいし例えばDR5が反復構造モチーフを含有するか、多量体型で存在する場合、異なっていてもよい後者の場合、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、DR5のそれら異なる抗原性決定基、エピトープ、パーツ、ドメイン、サブユニットに、同じであってもよく異なってもよいアフィニティおよびまたは特異性で結合することができる。また、例えばDR5が活性型コンフォメーションおよび不活性型コンフォメーションで存在する場合、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、これらのコンフォメーションconfirmationのどちらか一方に結合してもよいし、これらのコンフォメーションconfirmationの両方に結合すなわち、同じであってもよく異なってもよいアフィニティおよびまたは特異性で結合してもよい。また、例えば、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、DR5が関連リガンドに結合している時のDR5のコンフォメーションに結合してもよいし、DR5が関連リガンドに結合していない時のDR5のコンフォメーションに結合してもよく、また、そのようなコンフォメーションの両方にここでも、同じであってもよく異なってもよいアフィニティおよびまたは特異性で結合してもよい。また、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、DR5の天然に存在するまたは合成の類似体、変異体、変種mutant、対立遺伝子、パーツおよびフラグメントの全てに広く結合するか、少なくとも、DR5の類似体、変異体、変種、対立遺伝子、パーツおよびフラグメントのうち、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドが結合するDR5中例えば野生型DR5中の抗原性決定基またはエピトープと本質的に同じ抗原性決定基またはエピトープを1つ以上含有するものに、広く結合するであろうと予想される。ここでも、そのような場合、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、そのような類似体、変異体、変種、対立遺伝子、パーツおよびフラグメントに、本発明のアミノ酸配列が野生型DR5に結合する際のアフィニティおよび特異性と同じまたはそれとは異なるすなわちそれより高いまたは低いアフィニティおよびまたは特異性で、結合することができる。また、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドが、DR5の一部の類似体、変異体、変種、対立遺伝子、パーツおよびフラグメントには結合するが、他の類似体、変異体、変種、対立遺伝子、パーツおよびフラグメントには結合しないことも、本発明の範囲に包含される。一般に、DR5が単量体型および1つ以上の多量体型で存在する場合に、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドが単量体型のDR5にのみ結合すること、多量体型のDR5にのみ結合すること、または単量体型と多量体型の両方に結合することは、本発明の範囲内である。ここでも、そのような場合、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、本発明のアミノ酸配列が多量体型に結合する際のアフィニティおよび特異性と同じまたはそれとは異なるすなわちそれより高いまたは低いアフィニティおよびまたは特異性で、単量体型に結合することができる。また、DR5が他のタンパク質またはポリペプチドと会合してタンパク質複合体例えば複数のサブユニットを持つものを形成することができる場合、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドが、非会合状態にあるDR5に結合すること、会合状態にあるDR5に結合すること、またはその両方に結合することも、本発明の範囲内である。これらのいずれの場合も、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドが単量体型の非会合状態にあるDR5に結合する際のアフィニティおよびまたは特異性と同じまたはそれとは異なるすなわちそれより高いまたは低いアフィニティおよびまたは特異性で、そのような多量体または会合タンパク質複合体に結合することができる。ある実施形態において、DR5に向けられたアミノ酸配列を2つ以上含有する本発明の組成物は、当業者には明らかであるだろうとおり、対応する単量体型アミノ酸配列よりも高いアビディティでDR5に結合しうる。例えば、限定するわけではないが、2、3、4、5、6、8、10個またはそれ以上の作動可能に連結された、DR5の同じまたは異なるエピトープに向けられたアミノ酸配列の単量体ユニットを含有するタンパク質またはポリペプチドは、異なる単量体のそれぞれよりも高いアビディティで結合する可能性がありそしてまた通常はそうなるであろう、また、DR5に向けられたアミノ酸配列を2、3、4個またはそれ以上含有するタンパク質またはポリペプチドは、DR5の多量体にも、より高いアビディティで結合する可能性がありそしてまた通常はそうなるであろう。ある実施形態において、本発明の組成物は、アミノ酸リンカーによってつながれた4つの、DR5に向けられた単量体でできている単一ポリペプチド鎖である。ある実施形態において、本発明の組成物は、アミノ酸リンカーによってつながれた5つの、DR5に向けられた単量体でできている単一ポリペプチド鎖である。一般に、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、当業者には明らかであるだろうとおり、少なくとも、生物学的およびまたは治療的観点から見て最も関連の深いDR5の形態単量体型、多量体型および会合型を含むに結合するであろう。本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドのパーツ、フラグメント、類似体、変種、変異体、対立遺伝子およびまたは誘導体を含む組成物を使用すること、およびまたはそのような組成物の1つ以上を含む、またはそのような組成物の1つ以上から本質的になる、タンパク質またはポリペプチドを使用することは、それらがここで予見される使用にとって適切である限り、本発明の範囲内である。ある実施形態において、そのような組成物は、DR5に対する結合のための機能的な抗原結合部位の少なくとも一部を含有するであろう。ある実施形態において、そのような組成物は、DR5に特異的に結合する能力を有するであろう。ある実施形態において、そのような組成物は、本明細書に記載するとおりのアフィニティ本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、KD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定されかつまたは表現されたもので、DR5に結合する能力を有するであろう。そのような組成物の非限定的な一部の例は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。本明細書に記載するとおり、1つ以上のより小さな組成物を適切に組み合わせることによってすなわち連結または遺伝子融合によって、本発明のさらなるフラグメントまたはポリペプチドを提供することもできる。本発明の非限定的一態様において、本発明のポリペプチドの類似体、変種、変異体、対立遺伝子、およびまたは誘導体は、それらの元となったアミノ酸配列と比較して、増加した血清中半減期本明細書においてさらに詳しく説明するものを有する。例えば、増加した半減期を有する本発明のアミノ酸配列の誘導体が得られるように、本発明のアミノ酸配列を、半減期を延ばす1つ以上の基または部分例えばPEGに化学的にまたは他の方法で連結することができる。ある具体的な、ただし非限定的な態様において、本発明のアミノ酸配列は、免疫グロブリンフォールドを含むアミノ酸配列であるか、適切な条件下例えば生理的条件下で免疫グロブリンフォールドを形成するすなわちフォールディングによって形成する能力を有するアミノ酸配列であることができる。特にHalabyらJProteinEng1256371による総説を参照されたい。ある実施形態において、免疫グロブリンフォールドが形成されるように適正にフォールディングされた場合、そのようなアミノ酸配列は、DR5に特異的に結合する能力を有する。さらにもう一つの実施形態において、そのようなコンストラクトは、本明細書に記載するとおりのアフィニティ本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、KD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定されかつまたは表現されたもので、DR5に結合する能力を有する。ある実施形態において、そのようなアミノ酸配列のパーツ、フラグメント、類似体、変種、変異体、対立遺伝子およびまたは誘導体は、免疫グロブリンフォールドを含むか、適切な条件下で免疫グロブリンフォールドを形成する能力を有するようなものである。特に、ただし限定するわけではないが、本発明のアミノ酸配列は、4つのフレームワーク領域それぞれFR1、FR2、FR3およびFR4と3つの散在する相補性決定領域それぞれCDR1、CDR2およびCDR3とから本質的になるアミノ酸配列、またはそのようなアミノ酸配列の任意の適切なフラグメントその場合、これは、本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、通常、それらCDRのうちの少なくとも1つを形成するアミノ酸残基の少なくとも一部を含有するであろうであることができる。ある実施形態では、これらの領域が、式I:FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4式Iに示すように配置される。本発明のアミノ酸配列は、特に、免疫グロブリン配列またはその適切なフラグメントであることができ、より具体的には、免疫グロブリン可変ドメイン配列またはその適切なフラグメント、例えば軽鎖可変ドメイン配列例えばVL配列もしくはその適切なフラグメント、または重鎖可変ドメイン配列例えばVH配列もしくはその適切なフラグメントであることができる。本発明のアミノ酸配列が重鎖可変ドメイン配列である場合、それは、通常の4本鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列例えば、限定するわけではないが、ヒト抗体に由来するVH配列であるか、いわゆる重鎖抗体に由来するいわゆるVHH配列であることができる。本発明は、本発明のアミノ酸配列またはそれを発現するために使用される本発明のヌクレオチド配列の起源に関して限定されないし、本発明のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を作製または取得するあるいは作製または取得した方法に関しても限定されないことに留意すべきである。したがって本発明のアミノ酸配列は、天然に存在するアミノ酸配列任意の適切な種に由来するものまたは合成もしくは半合成アミノ酸配列を含有しうる。本発明の具体的な、ただし非限定的な一態様では、アミノ酸配列が、天然に存在する免疫グロブリン配列任意の適切な種に由来するものまたは合成もしくは半合成免疫グロブリン配列であり、限定するわけではないが、これには、ヒト化免疫グロブリン配列例えば部分的または完全にヒト化されたマウス、ウサギまたはサル免疫グロブリン配列または当業者が考える他の任意の哺乳動物種の免疫グロブリン配列、そして特に、部分的または完全にヒト化されたラクダ科VHH配列またはそのフラグメント、ラクダ化免疫グロブリン配列、ならびに親和性成熟例えば、合成免疫グロブリン配列、ランダム免疫グロブリン配列または天然に存在する免疫グロブリン配列から出発するもの、CDR移植、ベニアリングveneering、異なる免疫グロブリン配列に由来するフラグメントの組み合わせ、オーバーラッププライマーを使ったPCRアセンブリ、および免疫グロブリン配列を操作するための当業者によく知られている類似の技法などといった技法によって得られた免疫グロブリン配列、または上記のいずれかの任意の適切な組み合わせが含まれる。例えば標準的参考書、ならびに本明細書におけるさらなる説明および本明細書において言及する技術文献を参照されたい。同様に、本発明のヌクレオチド配列は、天然に存在するヌクレオチド配列または合成若しくは半合成配列であることができ、例えば、天然に存在する適切なテンプレート例えば細胞から単離されたDNAまたはRNAからPCRによって単離される配列、ライブラリー特に発現ライブラリーから単離されたヌクレオチド配列、天然に存在するヌクレオチド配列中に自体公知の任意の適切な技法、例えばミスマッチPCRなどを使って変異を導入することによって製造されたヌクレオチド配列、オーバーラッププライマーを使ったPCRによって製造されたヌクレオチド配列、または自体公知のDNA合成技法を使って製造されたヌクレオチド配列であることができる。本発明のアミノ酸配列は、特にドメイン抗体またはドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、単一ドメイン抗体または単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、dAbまたはdAbとしての使用に適したアミノ酸配列、またはラクダ科抗体VHH配列またはその変異体を含むが、これらに限るわけではない;他の単一可変ドメイン、またはそれらのいずれか一つの任意の適切なフラグメントであることができる。単一ドメイン抗体の一般的な説明については、上述の技術文献ならびにEP0368684も参照されたい。dAbという用語については、例えばWardらNature1989Oct12;3415446、HoltらTrendsBiotechnol200321484490、ならびに例えばWO06030220、WO06003388およびDomantisLtdの他の公表特許出願を参照されたい。本発明のある実施形態において、単一ドメイン抗体または単一可変ドメインは、サメの一定の種に由来することができる例えば、いわゆるIgNARドメイン、例えばWO0518629参照。特に、本発明のアミノ酸配列は、ラクダ科重鎖可変ドメインコンストラクト例えばVHHまたはその可変部variables、例えばWO2008020079に定義されているようなヒト治療薬としての使用に最適化された可変部を含むまたはその適切なフラグメントもしくは変異体であることができる。ある実施形態では、アミノ酸配列が、NANOBODY登録商標またはそのコンストラクトである。NANOBODY商標、NANOBODIES商標およびNANOCLONE商標は、AblynxNVの登録商標であることに留意されたい。DR5に向けられた特異的重鎖可変ドメインコンストラクトを、ヒト化または他の改変もしくは最適化が施されているかどうかに関わらず、本明細書では、本発明のNB配列という。本明細書において使用する最適化された配列という表現、あるいは改変または最適化された配列とは、それを投与される対象によるNB剤に対する免疫原応答の発生を減少させるための、NB剤の残基とりわけフレームワーク領域中の残基の置き換えを指すと定義される。対象がヒトである場合、この表現は、配列をヒト化するための、当技術分野において知られている任意の技法を包含する。ある実施形態では、NB剤が、いわゆるVH3クラスすなわち、DP47、DP51またはDP29などのVH3クラスのヒト生殖細胞系配列に対して高度の配列ホモロジーを有するNBコンストラクトである。ある実施形態では、このVH3クラスのNBコンストラクトが、本発明のフレームワーク領域を含む。ただし本発明は、その最も広い意味において、DR5に向けられた任意のタイプのNB剤を広く包含する。例えば、ある実施形態において、本発明は、いわゆるVH4クラスに属するNBコンストラクトも包含するすなわち、DP78などのVH4クラスのヒト生殖細胞系配列に対して高度の配列相同性を有するNBコンストラクト。例えばWO07118670を参照されたい。ある実施形態において、NBコンストラクト特に完全にヒト化されたコンストラクトおよび部分的にヒト化されたコンストラクトは、フレームワーク配列の1つ以上に1つ以上のホールマークHallmark残基が存在することを特徴とする。ある実施形態において、本発明のNBコンストラクト中に存在するフレームワーク配列は、そのアミノ酸配列がラクダ科VHHコンストラクトの変異体であるようなものであることができる。そのようなフレームワーク配列および代替ホールマーク残基の適切な組合せの非限定的な例は、例えばWO2008020079の65~98頁に、いくつか掲載されており、これらのページは引用によりそのまま本明細書に組み込まれる。当技術分野において知られる他のヒト化された残基または部分的にヒト化された残基も、本発明に包含されると考えられる。一般に、VHまたはVHHコンストラクトは、式Iの一般構造を有するアミノ酸配列であると定義することができ、式中、FR1~FR4はそれぞれフレームワーク領域1~4を指し、CDR1~CDR3はそれぞれ相補性決定領域1~3を指す。ある実施形態において、本発明の組成物は、式Iの一般構造を持つアミノ酸配列を有するNBコンストラクトであって、Kabatのナンバリングで位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108にあるアミノ酸残基の1つ以上が、WO2008020079の表A3で言及されているホールマーク残基から選択され、かつ前記アミノ酸配列が、WO2008020079における配列番号1~22のフレームワークアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、少なくとも80、85、90、95、98、99または100のアミノ酸同一性ここで、アミノ酸同一性の程度を決定する目的には、CDR配列を形成するアミノ酸残基配列中のXで示すものを無視するを有するものであることができる。本発明のNB剤限定するわけではないが、種々のフォーマットまたはスキャフォールドを含むにおいて、CDR配列は、一般に、表1~3に記載するとおりであり、とりわけ表4に配列番号で具体的に指定するとおりである。特に、CDR1は、配列番号41~44のいずれか一つであることができ、CDR2は配列番号51~55のいずれか一つであることができ、CDR3は配列番号63~68のいずれか一つであることができる。したがって、ある実施形態において、本発明は、DR5に結合することができかつまたはDR5に向けられた前記VHコンストラクト、その適切なフラグメント、ならびに前記VHコンストラクトおよびまたは適切なフラグメントの1つ以上を含む、または前記VHコンストラクトおよびまたは適切なフラグメントの1つ以上から本質的になる、ポリペプチドに関する。一般に、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104は、DR5に対して生じさせたいくつかのNB剤のアミノ酸配列を与える表1~4参照。配列番号96~99は、本明細書に記載する具体的NB剤をコードする具体的核酸配列を与える。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、DR5に結合することができかつまたはDR5に向けられ、しかも配列番号1~22、26~40、87~88および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つと、少なくとも90のアミノ酸同一性ここで、アミノ酸同一性の程度を決定する目的には、CDR配列を形成するアミノ酸残基を無視するを有し、しかもKabatのナンバリングで位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108にあるアミノ酸残基の1つ以上がホールマーク残基である、例えば表1~4に示す、NB剤である。さまざまな実施形態において、表4に記載するとおり、NBコンストラクトは、配列番号34~40のフレームワーク1配列、配列番号45~50のフレームワーク2配列、配列番号56~62のフレームワーク3配列および配列番号69~72のフレームワーク4配列を含む。ある実施形態では、アミノ酸同一性の程度を決定するために、配列番号1~22、26~40、87~88および103~104のNBコンストラクトのフレームワーク1配列の位置1~4および27~30にあるアミノ酸残基を無視する。ある実施形態において、本発明のNB剤および組成物は、任意の適切な方法で、任意の適切な供給源から、誘導することができ、例えば天然に存在するVHH配列すなわちラクダ科の適切な種に由来するものまたは合成もしくは半合成アミノ酸配列であることができ、限定するわけではないが、これには、ヒト化NB剤、ラクダ化免疫グロブリン配列特にラクダ化重鎖可変ドメイン配列、ならびに、親和性成熟例えば、合成免疫グロブリン配列、ランダム免疫グロブリン配列または天然に存在する免疫グロブリン配列から出発するもの、CDR移植、ベニアリング、異なる免疫グロブリン配列に由来するフラグメントの組み合わせ、オーバーラッププライマーを使ったPCRアセンブリ、および免疫グロブリン配列を操作するための当業者によく知られている類似の技法などといった技法によって得られたNB剤、または本明細書においてさらに詳しく説明する上記のいずれかの任意の適切な組み合わせが含まれる。また、本発明の組成物がVHH配列を含む場合は、1つ以上のさらなる部分的にまたは完全にヒト化された本発明の組成物が得られるように、前記組成物を本明細書に記載するとおり適切にヒト化することができる。ある実施形態において、本発明の組成物が合成または半合成配列例えば部分的にヒト化された配列を含む場合、前記組成物は、場合によっては、さらに適切にヒト化ここでも、部分的にまたは完全にヒト化してもよい。ある実施形態において、ヒト化組成物は、ヒト化置換でありかつまたはヒト化置換に対応するアミノ酸残基が少なくとも1つは存在している特に、フレームワーク残基の少なくとも1つに存在しているアミノ酸配列である。そのような実施形態の限定でない一例において、ヒト化置換およびその適切な組み合わせは、本明細書における開示に基づいて、当業者には明らかになるであろう。ある実施形態では、天然に存在するVHH配列のフレームワーク領域を1つ以上の密接に関連するヒトVH配列の対応するフレームワーク配列と比較することによって潜在的に有用なヒト化置換を確認することができ、その後、そうして決定された潜在的に有用なヒト化置換の1つ以上またはそれらの組み合わせを、自体公知の任意の方法で、前記VHH配列中に導入することができる。ある実施形態では、その結果得られたヒト化VHH配列を、ターゲットに対するアフィニティ、安定性、発現の容易さおよびレベル、およびまたは他の所望の性質について試験する。当業者は、本明細書における開示に基づいて、この方法で、限られた試行錯誤により、他の適切なヒト化置換またはそれらの適切な組み合わせを決定することができる。また、前記に基づいて、本発明の組成物のフレームワーク領域を、部分的にヒト化するか、または完全にヒト化することができる。ある実施形態では、ここでのヒト化組成物が、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104ならびに配列番号96~99の組成物のヒト化変異体である。ある実施形態では、ヒト化NBコンストラクトが、表3に記載するとおりである。したがって、本発明の他のいくつかの好ましい組成物は、DR5に本明細書においてさらに詳しく定義するとおり結合する組成物であって、a配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の1つのヒト化変異体であり、かつまたはb配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つと、少なくとも90のアミノ酸同一性を有するものである。ある実施形態において、アミノ酸同一性の程度を決定する目的には、CDR配列を形成するアミノ酸残基を無視する。ある実施形態では、Kabatのナンバリングで位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108にあるアミノ酸残基の1つ以上が、WO2008020079の表A3において言及されているホールマーク残基から選択される。ある実施形態において、本発明は、DR5への結合に特に適したアミノ酸残基のいくつかのストレッチすなわち小ペプチドを提供する。アミノ酸残基のこれらのストレッチは、特に本発明のアミノ酸配列の抗原結合部位またはその一部を形成するような形で、本発明のアミノ酸配列中に存在しかつまたは本発明のアミノ酸配列中に組み込むことができる。アミノ酸残基のこれらのストレッチは、DR5に対して生じさせた重鎖抗体またはVHH配列のCDR配列として最初に作製されるまたはアミノ酸残基のこれらのストレッチは、本明細書にさらに詳しく説明するようなCDR配列に基づくか、かつまたはそのようなCDR配列から誘導することができるので、それらを本明細書では広くCDR配列すなわち、それぞれCDR1配列、CDR2配列およびCDR3配列とも呼ぶことにする。ただし、本発明は、その最も広い意味において、アミノ酸残基のこれらのストレッチにより本発明のアミノ酸残基がDR5に結合することが可能になる限り、アミノ酸残基のこれらのストレッチが本発明のアミノ酸配列において持ちうる特定の構造上の役割または機能に限定されないことに留意すべきである。したがって一般に、本発明は、その最も広い意味において、DR5に結合する能力を有し、かつ本明細書に記載する1つ以上のCDR配列、特に、1つ以上のさらなるアミノ酸配列によって互いに適切に連結された2つ以上のそのようなCDR配列の適切な組み合わせを、そのアミノ酸配列全体がDR5に結合する能力を有する結合ドメインおよびまたは結合ユニットを形成するような形で含む、任意のアミノ酸配列を含む。ただし、本発明のアミノ酸配列にそのようなCDR配列が1つだけ存在すれば、それだけで既に、DR5に結合する能力を有する本発明のアミノ酸配列を与えるには十分であることにも留意すべきである;例えば、再び、WO03050531に記載のいわゆるエクスペダイトExpediteフラグメントを参照されたい。ある実施形態では、本発明のアミノ酸配列は、本明細書に記載するCDR1配列、CDR2配列およびCDR3配列またはそれらの任意の適切な組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸配列を少なくとも1つは含むアミノ酸配列であることができる。特に、本発明のアミノ酸配列は、少なくとも1つの抗原結合部位を含み、前記抗原結合部位が、本明細書に記載するCDR1配列、CDR2配列およびCDR3配列またはそれらの任意の適切な組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸配列を少なくとも1つは含む、アミノ酸配列であることができる。ある実施形態において、本発明のアミノ酸配列は、アミノ酸残基のストレッチを少なくとも1つは含み、前記アミノ酸残基のストレッチが本明細書に記載するCDR配列の少なくとも1つの配列に対応するアミノ酸配列を有する、任意のアミノ酸配列であることができる。そのようなアミノ酸配列は、免疫グロブリンフォールドを含んでもよいし、含まなくてもよい。例えば、限定するわけではないが、そのようなアミノ酸配列は、少なくとも1つの前記CDR配列を含むが、完全な免疫グロブリンフォールドを形成するほどには大きくない、免疫グロブリン配列の適切なフラグメントであることができる例えば、ここでも、WO03050531に記載のエクスペダイトフラグメントを参照されたい。あるいは、そのようなアミノ酸配列は、前記CDR配列に対応するアミノ酸残基のストレッチを少なくとも1つは含むすなわちその抗原結合部位の一部として含む適切なタンパク質スキャフォールドであることもできる。アミノ酸配列を提示するための適切なスキャフォールドは、当業者には明らかであり、限定するわけではないが、例えば免疫グロブリンすなわち本明細書に既に記載している免疫グロブリン配列以外のものに基づくまたはそこから誘導される結合スキャフォールド、プロテインAドメインから誘導されるタンパク質スキャフォールド例えばAFFIBODIES商標、テンダミスタット、フィブロネクチンフィブロネクチンIII型ドメインを含む、リポカリン、CTLA4、T細胞受容体、設計されたアンキリンリピート、アビマーおよびPDZドメインBinzらNatBiotech2005Vol231257、ならびにDNAまたはRNAに基づく結合部分DNAまたはRNAアプタマーを含むが、これらに限るわけではないUlrichらCombChemHighTroughputScreen2006961932を含むであろう。ある実施形態において、これらのCDR配列の1つ以上を含む本発明の任意のアミノ酸配列は、DR5に特異的に結合することができる。ある実施形態において、それは、本明細書に記載するようなアフィニティKD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定され、かつまたは表現されたもので、DR5に結合することができる。ある実施形態において、本明細書の組成物は、少なくとも1つの抗原結合部位を含み、前記抗原結合部位が、本明細書に記載するCDR1配列、本明細書に記載するCDR2配列および本明細書に記載するCDR3配列からなる群より選択される少なくとも2つのアミノ酸配列を、1第1アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR1配列から選択される場合は、第2アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR2配列または本明細書に記載するCDR3配列から選択され;2第1アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR2配列から選択される場合は、第2アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR1配列または本明細書に記載するCDR3配列から選択され;または3第1アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR3配列から選択される場合は、第2アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR1配列または本明細書に記載するCDR3配列から選択されるような形で含む、任意のアミノ酸配列であることができる。ある実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも1つの抗原結合部位を含み、前記抗原結合部位が、本明細書に記載するCDR1配列、本明細書に記載するCDR2配列および本明細書に記載するCDR3配列からなる群より選択される少なくとも3つのアミノ酸配列を、第1アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR1配列から選択され、第2アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR2配列から選択され、かつ第3アミノ酸配列が本明細書に記載するCDR3配列から選択されるような形で含む、アミノ酸配列であることができる。CDR1、CDR2およびCDR3配列の好ましい組み合わせは、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。当業者には明らかであるだろうとおり、そのようなアミノ酸配列は、好ましくは、免疫グロブリン配列本明細書においてさらに詳しく説明するであるが、それは、例えば前記CDR配列を提示するための適切なスキャフォールドを含む他の任意のアミノ酸配列であってもよい。ある実施形態において、本発明の組成物は、DR5に向けられたアミノ酸配列、特に、公共データベースに登録されているDR5、例えばNCBIタンパク質データベースのアクセッション番号BAA33723などに向けられたアミノ酸配列であって、a配列番号41~44のアミノ酸配列;b配列番号41~44のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;c配列番号41~44のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列;d配列番号51~55のアミノ酸配列;e配列番号51~55のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;f配列番号51~55のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列;g配列番号63~68のアミノ酸配列;h配列番号63~68のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、少なくとも90のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列;i配列番号63~68のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列;からなる群より選択されるアミノ酸残基のストレッチの1つ以上またはそれらの任意の適切な組み合わせを含むアミノ酸配列に関する。本発明のアミノ酸配列が、bおよびまたはcに記載のアミノ酸配列を1つ以上含有する場合、1bおよびまたはcに記載のそれらアミノ酸配列中の任意のアミノ酸置換は、好ましくは、aに記載の対応するアミノ酸配列と比較して、保存的アミノ酸置換であり;かつまたは2bおよびまたはcに記載のアミノ酸配列は、aに記載の対応するアミノ酸配列と比較して、好ましくは、アミノ酸置換だけを含有し、アミノ酸欠失またはアミノ酸挿入を含有せず;かつまたは3bおよびまたはcに記載のアミノ酸配列は、自体公知である1つ以上の親和性成熟技法を使った親和性成熟によって、aに記載のアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であることができる。同様に、本発明のアミノ酸配列が、eおよびまたはfに記載のアミノ酸配列を1つ以上含有する場合、1eおよびまたはfに記載のそれらアミノ酸配列中の任意のアミノ酸置換は、好ましくは、dに記載の対応するアミノ酸配列と比較して、保存的アミノ酸置換であり;かつまたは2eおよびまたはfに記載のアミノ酸配列は、dに記載の対応するアミノ酸配列と比較して、好ましくは、アミノ酸置換だけを含有し、アミノ酸欠失またはアミノ酸挿入を含有せず;かつまたは3eおよびまたはfに記載のアミノ酸配列は、自体公知である1つ以上の親和性成熟技法を使った親和性成熟によって、dに記載のアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であることができる。また同様に、本発明のアミノ酸配列が、hおよびまたはiに記載のアミノ酸配列を1つ以上含有する場合、1hおよびまたはiに記載のそれらアミノ酸配列中の任意のアミノ酸置換は、好ましくは、gに記載の対応するアミノ酸配列と比較して、保存的アミノ酸置換であり;かつまたは2hおよびまたはiに記載のアミノ酸配列は、gに記載の対応するアミノ酸配列と比較して、好ましくは、アミノ酸置換だけを含有し、アミノ酸欠失またはアミノ酸挿入を含有せず;かつまたは3hおよびまたはiに記載のアミノ酸配列は、自体公知である1つ以上の親和性成熟技法を使った親和性成熟によって、gに記載のアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列であることができる。上記最後の段落群は、それぞれa、b、c、d、e、f、g、hまたはiに記載の1つ以上のアミノ酸配列を含む本発明の任意のアミノ酸配列にも、広く適用されることを理解すべきである。この具体的態様において、アミノ酸配列は、好ましくは、i配列番号41~44のアミノ酸配列;ii配列番号51~55のアミノ酸配列;およびiii配列番号63~68のアミノ酸配列;からなる群より選択されるアミノ酸残基のストレッチの1つ以上またはそれらの任意の適切な組み合わせを含む。また、好ましくは、そのようなアミノ酸配列において、前記アミノ酸残基のストレッチの少なくとも1つは、DR5に対する結合のための抗原結合部位の一部を形成する。非限定的一態様において、本発明は、a配列番号41~44のアミノ酸配列;b配列番号41~44のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;c配列番号41~44のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列;d配列番号51~55のアミノ酸配列;e配列番号51~55のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;f配列番号51~55のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列;g配列番号63~68のアミノ酸配列;h配列番号63~68のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;i配列番号63~68のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列;からなる群より選択されるアミノ酸残基のストレッチの2つ以上を、1第1のアミノ酸残基のストレッチが、a、bまたはcに記載のアミノ酸配列の1つに対応する場合は、第2のアミノ酸残基のストレッチが、d、e、f、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列の1つに対応し;2第1のアミノ酸残基のストレッチが、d、eまたはfに記載のアミノ酸配列の1つに対応する場合は、第2のアミノ酸残基のストレッチが、a、b、c、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列の1つに対応し;または3第1のアミノ酸残基のストレッチが、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列の1つに対応する場合は、第2のアミノ酸残基のストレッチが、a、b、c、d、eまたはfに記載のアミノ酸配列の1つに対応するような形で含む、DR5に向けられたアミノ酸配列に関する。この具体的態様において、アミノ酸配列は、好ましくは、i配列番号41~44のアミノ酸配列;ii配列番号51~55のアミノ酸配列;およびiii配列番号63~68のアミノ酸配列;からなる群より選択されるアミノ酸残基のストレッチの2つ以上を、1第1のアミノ酸残基のストレッチが配列番号41~44のアミノ酸配列の1つに対応する場合は、第2のアミノ酸残基のストレッチが、配列番号51~55または配列番号63~68のアミノ酸配列の1つに対応し;2第1のアミノ酸残基のストレッチが配列番号51~55のアミノ酸配列の1つに対応する場合は、第2のアミノ酸残基のストレッチが、配列番号41~44または配列番号63~68のアミノ酸配列の1つに対応し;または3第1のアミノ酸残基のストレッチが配列番号63~68のアミノ酸配列に対応する場合は、第2のアミノ酸残基のストレッチが、配列番号41~44または配列番号51~55のアミノ酸配列の1つに対応するような形で含む。また、そのようなアミノ酸配列において、前記少なくとも2つの、アミノ酸残基のストレッチは、ここでもやはり、好ましくは、DR5に対する結合のための抗原結合部位の一部を形成する。ある実施形態において、本発明は、特に上記の段落群に関する場合に、それぞれa、b、c、d、e、f、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列を2つ以上含むアミノ酸に関する。ある実施形態において、アミノ酸配列は、NB剤の二量体型変異体である。ある実施形態では、二量体を構成する単量体が、単一の読み枠内で、作動可能に連結される。ある実施形態では、単量体を接合するリンカー配列が、配列GGGGS配列番号81またはGGGS配列番号82の多量体であるか、両者の組み合わせであるか、配列番号44、45または46として本明細書に記載するまたは当技術分野において知られているリンカー配列から選択される。ある実施形態において、本発明は、特に上記の段落群に関する場合に、それぞれa、b、c、d、e、f、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列を3つ以上含むアミノ酸に関する。ある実施形態において、アミノ酸配列は、NB剤の三量体型変異体である。ある実施形態では、三量体を構成する単量体が、単一の読み枠内で、作動可能に連結される。ある実施形態では、単量体を接合するリンカー配列が、配列GGGGS配列番号81またはGGGS配列番号82の多量体であるか、両者の組み合わせであるか、配列番号44、45または46として本明細書に記載するまたは当技術分野において知られているリンカー配列から選択される。ある実施形態において、本発明は、特に上記の段落群に関する場合に、それぞれa、b、c、d、e、f、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列を4つ以上含むアミノ酸に関する。ある実施形態において、アミノ酸配列は、NB剤の四量体型変異体である。ある実施形態では、四量体を構成する単量体が、単一の読み枠内で、作動可能に連結される。ある実施形態では、単量体を接合するリンカー配列が、配列GGGGS配列番号81またはGGGS配列番号82の多量体であるか、両者の組み合わせであるか、配列番号44、45または46として本明細書に記載するまたは当技術分野において知られているリンカー配列から選択される。ある実施形態において、本発明は、特に上記の段落群に関する場合に、それぞれa、b、c、d、e、f、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列を5つ以上含むアミノ酸に関する。ある実施形態において、アミノ酸配列は、NB剤の五量体型変異体である。ある実施形態では、五量体を構成する単量体が、単一の読み枠内で、作動可能に連結される。ある実施形態では、単量体を接合するリンカー配列が、配列GGGGS配列番号81またはGGGS配列番号82の多量体であるか、両者の組み合わせであるか、配列番号44、45または46として本明細書に記載するまたは当技術分野において知られているリンカー配列から選択される。ある実施形態において、本発明は、特に上記の段落群に関する場合に、それぞれa、b、c、d、e、f、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列を6つ以上含むアミノ酸に関する。ある実施形態において、アミノ酸配列は、NB剤の六量体型変異体である。ある実施形態では、六量体を構成する単量体が、単一の読み枠内で、作動可能に連結される。ある実施形態では、単量体を接合するリンカー配列が、配列GGGGS配列番号81またはGGGS配列番号82の多量体であるか、両者の組み合わせであるか、配列番号44、45または46として本明細書に記載するまたは当技術分野において知られているリンカー配列から選択される。ある実施形態において、本発明は、特に上記の段落群に関する場合に、それぞれa、b、c、d、e、f、g、hまたはiに記載のアミノ酸配列を2、3、4、5、6、7、8、9、10個またはそれ以上含むアミノ酸に関する。ある実施形態において、アミノ酸配列は、NB剤の多量体型変異体である。ある実施形態では、多量体を構成する単量体が、単一の読み枠内で、作動可能に連結される。ある実施形態では、単量体を接合するリンカー配列が、配列GGGGS配列番号81もしくはGGGS配列番号82の少なくとも1つ、または両者の組み合わせから選択されるか、配列番号44、45または46として本明細書に記載するまたは当技術分野において知られているリンカー配列から選択される。好ましくは、前記アミノ酸配列において、CDR配列は、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つのCDR配列に対して、少なくとも70のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも90のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも90のアミノ酸同一性、例えば少なくとも95またはそれ以上のアミノ酸同一性、さらには本質的に100のアミノ酸同一性を有する。このアミノ酸同一性の程度は、例えば、前記アミノ酸配列と配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104の配列の1つ以上との間のアミノ酸同一性の程度を、フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視して、本明細書に記載する方法で決定することによって、決定することができる。また、そのようなアミノ酸配列は、本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、ヒト化または修飾することもできる。また、前記アミノ酸配列は、好ましくは、DR5に特異的に結合することができ、より具体的には、本明細書に記載するとおりのアフィニティ本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、KD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定されかつまたは表現されたもので、DR5に結合することができるようなものである。非限定的一態様において、本発明は、4つのフレームワーク領域それぞれFR1~FR4と3つの相補性決定領域それぞれCDR1~CDR3とから本質的になるアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列のCDR配列が、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つのCDR配列に対して、少なくとも70のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも90のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも90のアミノ酸同一性、例えば少なくとも95またはそれ以上のアミノ酸同一性、少なくとも98またはそれ以上のアミノ酸同一性、少なくとも99またはそれ以上のアミノ酸同一性、さらには本質的に100のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列に関する。このアミノ酸同一性の程度は、例えば、前記アミノ酸配列と配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104の配列の1つ以上との間のアミノ酸同一性の程度を、フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視して、本明細書に記載する方法で決定することによって、決定することができる。そのようなアミノ酸配列は、本明細書において説明するとおり、さらに修飾することができる。そのような本発明のアミノ酸配列において、フレームワーク配列は、任意の適切なフレームワーク配列であってよく、適切なフレームワーク配列の例は、例えば標準的参考書ならびに本明細書におけるさらなる開示および本明細書において言及する技術文献に基づいて、当業者には明らかになるであろう。フレームワーク配列は、好ましくは、免疫グロブリンフレームワーク配列の適切な組み合わせであるか、免疫グロブリンフレームワーク配列から例えばヒト化またはラクダ化によって誘導されたフレームワーク配列である。例えば、フレームワーク配列は、軽鎖可変ドメイン例えばVL配列およびまたは重鎖可変ドメイン例えばVH配列から誘導されたフレームワーク配列であることができる。特に好ましい一態様では、フレームワーク配列が、VHH配列から誘導されたフレームワーク配列この場合、前記フレームワーク配列は場合によっては部分的にまたは完全にヒト化されていてもよいであるか、ラクダ化された通常のVH配列である。フレームワーク配列は、好ましくは、本発明のアミノ酸配列が、ドメイン抗体またはドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列になるか、単一ドメイン抗体または単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列になるか、dAbまたはdAbとしての使用に適したアミノ酸配列になるか、またはNB剤VHおよびまたはVHH配列を含むが、これらに限るわけではないになるようなものである。ここでも、適切なフレームワーク配列は、例えば標準的参考書ならびに本明細書におけるさらなる開示および本明細書において言及する技術文献に基づけば、当業者にとって明らかであるだろう。ある実施形態では、本発明のアミノ酸配列について本明細書に広く記述するように、上述したもののいずれかの適切なフラグメントまたはフラグメントの組み合わせ、例えば1つ以上のフレームワーク配列が適切に隣接しかつまたは1つ以上のフレームワーク配列によって連結された1つ以上のCDR配列を例えば、そのフラグメントの元となった完全なサイズの免疫グロブリン配列中でそれらのCDRとフレームワーク配列が存在しうる順序と同じ順序で含有するフラグメントを、使用することができる。そのようなフラグメントは、ここでもやはり、免疫グロブリンフォールドを含むか形成することができるようなものであってもよいし、あるいは、免疫グロブリンフォールドを含まず、形成することもできないようなものであってもよい。ある態様において、そのようなフラグメントは、両側面にフレームワーク配列の一部特に、そのフラグメントが由来する免疫グロブリン配列において前記CDR配列に隣接しているフレームワーク配列の一部。例えば、CDR3配列の前にはFR3配列の一部が存在し、後ろにはFR4配列の一部が存在しうるが隣接している、本明細書に記載する単一のCDR配列特にCDR3配列を含む。そのようなフラグメントはジスルフィド橋、特にCDR配列の前と後にそれぞれ位置する2つのフレームワークを連結するジスルフィド橋も含有しうるそのようなジスルフィド橋を形成させるためには、前記フレームワーク領域中に天然に存在するシステインを使用するか、あるいはシステイン残基を前記フレームワーク領域中に合成的に付加または導入することができる。ある実施形態では、そのようなコンストラクトがエクスペダイトフラグメントである。これらのエクスペダイトフラグメントに関するさらなる説明については、やはり、WO03050531、ならびに2006年12月5日に出願されたPeptidescapableofbindingtoserumproteinsと題するAblynxNVの米国仮特許出願発明者:Revetsらを参照されたい。ある態様において、本発明は、NB剤に関し、特に、1つ以上の本発明のアミノ酸配列またはその適切なフラグメントを含むか、1つ以上の本発明のアミノ酸配列またはその適切なフラグメントから本質的になり、場合によっては1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットをさらに含んでもよい、タンパク質またはポリペプチドに関する。本明細書におけるさらなる開示から当業者には明らかになるであろうように、そのようなさらなる基、残基、部分、結合ユニットまたはアミノ酸配列は、本発明のアミノ酸配列およびまたは本発明のアミノ酸配列がその中に存在する化合物またはコンストラクトにさらなる機能性を与えてもよいし与えなくてもよく、本発明のアミノ酸配列の性質を修飾しても修飾しなくてもよい。例えば、そのようなさらなる基、残基、部分または結合ユニットは、化合物またはコンストラクトが融合タンパク質または融合ポリペプチドになるような1つ以上の追加アミノ酸配列であることができる。ある好ましい、ただし非限定的な態様では、前記1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットが免疫グロブリン配列である。さらにより好ましくは、前記1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットが、ドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、dAb、dAbとしての使用に適したアミノ酸配列、またはラクダ科VHHコンストラクトからなる群より選択される。ある実施形態において、そのような基、残基、部分または結合ユニットは、例えば化学的な基、残基、部分であることができ、それ自体は生物学的およびまたは薬理学的に活性であっても活性でなくてもよい。例えば、限定するわけではないが、本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、本発明のアミノ酸配列またはポリペプチドの誘導体が得られるように、そのような基を、1つ以上の本発明のアミノ酸配列に連結することができる。本明細書に記載する1つ以上の誘導体を含むか、または本明細書に記載する1つ以上の誘導体から本質的になり、場合によっては1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットを含んでもよく、それらが場合によっては1つ以上のリンカーによって連結されていてもよい、化合物またはコンストラクトも、本発明の範囲内である。好ましくは、前記1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットは、アミノ酸配列である。上述の化合物またはコンストラクトにおいて、1つ以上の本発明のアミノ酸配列および1つ以上の基、残基、部分または結合ユニットは、互いに直接的に、かつまたは1つ以上の適切なリンカーもしくはスペーサーを介して、連結することができる。例えば、1つ以上の基、残基、部分または結合ユニットがアミノ酸配列である場合は、結果として得られる化合物またはコンストラクトが融合タンパク質または融合ポリペプチドになるように、リンカーもアミノ酸配列であることができる。そのようなリンカーのアミノ酸配列は本明細書に記載するとおりであってもよいし、当業者に知られているものであってもよい。本発明の化合物またはポリペプチドは、一般に、1つ以上の本発明のアミノ酸配列を1つ以上のさらなる基、残基、部分または結合ユニットに、場合によっては1つ以上の適切なリンカーを介して、本発明の化合物またはポリペプチドが得られるように、適切に連結するステップを少なくとも1つは含む方法によって、製造することができる。本発明のポリペプチドは、一般に少なくとも、本発明のポリペプチドをコードする核酸を用意し、前記核酸を適切な方法で発現し、発現した本発明のポリペプチドを回収するステップを含む方法によって、製造することもできる。そのような方法は、自体公知の方法で行うことができ、それは、例えば本明細書においてさらに詳しく説明する方法および技法に基づけば、当業者には明らかであるだろう。本発明のアミノ酸配列から出発して本発明の化合物またはポリペプチドを設計選択しかつまたは製造するプロセスを、本明細書においては、前記本発明のアミノ酸配列をフォーマットするformattingともいい、本発明の化合物またはポリペプチドの一部を為す本発明のアミノ酸を、フォーマットされたformattedまたは前記本発明の化合物またはポリペプチドのフォーマットにあるintheformatofという。本発明のアミノ酸配列をフォーマットすることができる方法の例およびそのようなフォーマットの例は、本明細書における開示に基づけば当業者には明らかであり、そのようなフォーマットされたアミノ酸配列は、本発明のさらなる態様を形成する。ある好ましい態様によれば、本発明の化合物は、場合によっては1つ以上の適切なリンカーこれは本明細書においてさらに詳しく説明するとおりであることができるによって、または架橋技法によって、もしくは当業者に知られている方法で作られた共有結合によって連結されていてもよい、DR5に向けられた2つ以上好ましくは3つ以上、4つ以上、5つ以上、6つ以上、8つ以上、およびまたは10個以上のアミノ酸配列例えば本明細書に記載するアミノ酸配列を含有する多価ポリペプチドである。これに代わる1つ以上の実施形態では、多価ポリペプチドが、DR5以外のターゲットに結合する随意のサブユニットを含有する。特に本発明の化合物は、DR5によって媒介されるシグナリングを誘導、トリガー、増加または強化する能力、より具体的には細胞上にDR5が存在する細胞におけるアポトーシスをトリガーまたは誘導する能力を有するような、多価ポリペプチドであることができる。ある実施形態では、多価ポリペプチドが、作動可能に連結されて三量体型ポリペプチドを生成している3つの単量体型DR5結合ユニットからなる。ある実施形態では、多価ポリペプチドが、作動可能に連結されて四量体型ポリペプチドを生成している4つの単量体型DR5結合ユニットからなる。ある実施形態では、多価ポリペプチドが、作動可能に連結されて五量体型ポリペプチドを生成している5つの単量体型DR5結合ユニットからなる。ある実施形態では、多価ポリペプチドが、作動可能に連結されて六量体型ポリペプチドを生成している6つの単量体型DR5結合ユニットからなる。ある実施形態では、多価ポリペプチドが、作動可能に連結されて多量体型タンパク質のさらなる変異体を生成している7、8、9、10個またはそれ以上の単量体型DR5結合ユニットからなる。本明細書において既に述べたように、そのような多量体型ポリペプチドは、さらに、DR5上のTRAIL結合部位に結合することができるようなもの、およびまたはDR5への結合に関してTRAILと競合することができるようなものであることができる。多価ポリペプチドは、DR5上のTRAIL結合部位に結合せず、かつまたはDR5へのTRAILの結合を本質的に防止または阻害せず、かつまたはDR5への結合に関してTRAILと競合しないようなものであることができ、かつまたはTRAILがその受容体に結合した時にTRAILおよびDR5によって媒介されるシグナリングを増加または強化するようなものであることもできるこれもまた、DR5によって媒介されるシグナリングに対する相乗効果をもたらしうる。ある実施形態では、前記多価ポリペプチドが、一価組成物よりも高いアフィニティでDR5に結合する。本発明の多価ポリペプチドにおいて、結合ユニットを形成する本発明のアミノ酸配列は、それぞれ、DR5受容体の同じエピトープ、例えばDR5の1つのエピトープに向けられたものであってもよいし、DR5上の異なるエピトープに向けられたものであってもよい。本発明の具体的一態様では、本発明の化合物または本発明のポリペプチドが、対応する本発明のアミノ酸配列と比較して、増加した半減期を有しうる。そのような化合物およびポリペプチドの非限定的な例のいくつかは、本明細書におけるさらなる開示に基づいて当業者には明らかになるであろう。これには、例えば、その半減期が増加するように例えばPEG化によって化学修飾された本発明のアミノ酸配列またはポリペプチド;血清タンパク質血清アルブミンなどに結合するための少なくとも1つの追加結合部位を含む本発明のアミノ酸配列;または本発明のアミノ酸配列の半減期を増加させる少なくとも1つの部分特に少なくとも1つのアミノ酸配列に連結された少なくとも1つの本発明のアミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドが含まれる。そのような半減期延長部分または半減期延長アミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドの例は、本明細書におけるさらなる開示に基づけば、当業者には明らかになるであろう。限定するわけではないが、これには、例えば、1つ以上の本発明のアミノ酸配列が1つ以上の血清タンパク質もしくはそのフラグメント例えばヒト血清アルブミンまたはその適切なフラグメントまたは血清タンパク質に結合することができる1つ以上の結合ユニット例えば、血清アルブミンヒト血清アルブミンなど、IgGなどの血清免疫グロブリン、またはトランスフェリンなどの血清タンパク質に結合することができる、ドメイン抗体、ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、単一ドメイン抗体、単一ドメイン抗体としての使用に適したアミノ酸配列、11051116のHoogenboomによる総説も参照されたい。もう一つの態様において、アミノ酸配列を作製するための方法は、少なくとも、aアミノ酸配列を発現する細胞のコレクションまたはサンプルを用意するステップ;bDR5に結合することができかつまたはDR5に対してアフィニティを有することができるアミノ酸配列を発現する細胞を求めて、前記細胞のコレクションまたはサンプルをスクリーニングするステップ;およびc1前記アミノ酸配列を単離するか、2前記細胞から前記アミノ酸配列をコードする核酸配列を単離した後、前記アミノ酸配列を発現させるステップを含む。例えば、所望のアミノ酸配列が免疫グロブリン配列である場合、細胞のコレクションまたはサンプルは、例えばB細胞のコレクションまたはサンプルであることができる。また、この方法において、細胞のサンプルは、DR5またはそれに基づくもしくはそこから誘導された適切な抗原性決定基、例えばその抗原性パーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで、適切に免疫された哺乳動物に由来するものであることができる。ある特定の態様では、前記抗原性決定基が、細胞外のパーツ、領域、ドメイン、ループまたは他の細胞外エピトープであることができる。上記の方法は、当業者には明らかであるだろうとおり、任意の適切な方法で行うことができる。例えばEP0542810、WO0519824、WO04051268およびWO04106377を参照されたい。ステップbのスクリーニングは、好ましくは、FACSなどのフローサイトメトリー技法を使って行われる。これについては、例えばLiebyらBlood973820を参照されたい。もう一つの態様において、DR5に向けられるアミノ酸配列を作製するための方法は、少なくともaアミノ酸配列をコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;bDR5に結合することができかつまたはDR5に対してアフィニティを有することができるアミノ酸配列をコードする核酸配列を求めて、前記核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ;およびc前記核酸配列を単離した後、前記アミノ酸配列を発現させるステップを含みうる。そのような方法において、アミノ酸配列をコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、例えば、免疫グロブリン配列のナイーブセット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリー;免疫グロブリン配列の合成または半合成セット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリー;およびまたは親和性成熟に付された免疫グロブリン配列のセット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーであることができる。また、そのような方法において、核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、重鎖可変ドメイン例えばVHドメインまたはVHHドメインの、または軽鎖可変ドメインの、セット、コレクションまたはライブラリーをコードしうる。ある例では、核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーが、ドメイン抗体または単一ドメイン抗体のセット、コレクションまたはライブラリーをコードするか、ドメイン抗体または単一ドメイン抗体として機能する能力を有するアミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーをコードする。この方法の一態様において、アミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、核酸配列の免疫セット、コレクションまたはライブラリー、例えばDR5またはそれに基づくもしくはそこから誘導された適切な抗原性決定基、例えばその抗原性パーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで、適切に免疫された哺乳動物から誘導されたものであることができる。ある特定の態様において、前記抗原性決定基は、細胞外のパーツ、領域、ドメイン、ループまたは他の細胞外エピトープであることができる。核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、例えば、重鎖可変ドメインの、または軽鎖可変ドメインの、免疫セット、コレクションまたはライブラリーをコードしうる。ある具体的態様において、ヌクレオチド配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、VHH配列のセット、コレクションまたはライブラリーをコードしうる。上記の方法では、スクリーニングが容易になるように、ヌクレオチド配列のセット、コレクションまたはライブラリーを、ファージ、ファージミド、リボソームまたは適切な微生物例えば酵母上にディスプレイすることができる。アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列のセット、コレクションまたはライブラリーをディスプレイしスクリーニングするための適切な方法、技法および宿主生物は、例えば本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者には明らかであるだろう。NatureBiotechnology2311051116のHoogenboomによる総説も参照されたい。本発明は、上記の方法によって得られるアミノ酸配列、あるいは上記の方法の1つと、さらに少なくとも、前記免疫グロブリン配列のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を決定するステップおよび前記アミノ酸配列を既知の方法で、例えば適切な宿主細胞もしくは宿主生物における発現によって、または化学合成によって、発現させまたは合成するステップとを含む方法によって得られるアミノ酸配列にも関係する。また、上記のステップに続いて、本発明の1つ以上のアミノ酸配列を適切にヒト化あるいはラクダ化することができ、かつまたは、そのようにして得たアミノ酸配列を、本発明のポリペプチドが得られるように、互いに、または1つ以上の他の適切なアミノ酸配列に場合によっては、1つ以上の適切なリンカーを介して連結することができる。また、本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列を適切にヒト化あるいはラクダ化し、適切に発現させることができ、かつまたは本発明のアミノ酸配列をコードする1つ以上の核酸配列を、互いに、または他の適切なアミノ酸配列をコードする1つ以上の核酸配列に場合によっては、1つ以上の適切なリンカーをコードするヌクレオチド配列を介して連結することができ、その後、そのようにして得たヌクレオチド配列を、本発明のポリペプチドが得られるように、適切に発現させることができる。さらに本発明は、本明細書に記載するアミノ酸配列、化合物、コンストラクト、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、製品および組成物の応用および使用、ならびにDR5と関連する疾患および障害を防止およびまたは処置するための方法に関する。好ましい、ただし非限定的な応用および使用のいくつかは、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。ある実施形態において、本発明は、疾患または障害の治療に使用するための本明細書に記載するアミノ酸配列、化合物、コンストラクト、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、製品および組成物に関する。ある実施形態において、本発明は、NB剤またはNBコンストラクトとして本明細書に記載するアミノ酸配列、化合物、コンストラクトまたはポリペプチドの医薬有効量を、その必要がある対象に投与することによって防止または処置することができる疾患または障害のリスクがあるまたはそのような疾患または障害を患っている対象の治療に使用するための、本明細書に記載するアミノ酸配列、化合物、コンストラクト、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、製品および組成物の1つ以上に関する。ある実施形態において、本発明は、DR5と関連する疾患および障害の治療に使用するための、本明細書に記載するアミノ酸配列、化合物、コンストラクト、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、製品および組成物に関する。本発明の他の態様、実施形態、利点および応用は、本発明をさらに詳しく説明し論じる本明細書におけるさらなる説明から、明らかになるであろう。一定の実施形態において、本発明のNB剤のVHH変異体には、一般に、dAbまたは類似の単一ドメイン抗体または免疫グロブリン配列と比較して、一定の利点本明細書に概説するものがあり、その利点は、本発明の組成物によっても提供される。しかし、以下に教示する、より一般的な態様を、本発明の他のアミノ酸配列にもそのまま、または類似的に応用できることは、当業者には明らかであるだろう。定義本明細書、実施例および特許請求の範囲では、別段の表示がない限り、以下の定義が一般に適用される。以下の説明において、また本書の全体を通して、単数形の用語または表現の使用は、別段の注記がない限り、または文脈から明白でない限り、複数の意味を包含するものとし、その逆も同様である。別段の表示または定義がない限り、使用される用語は全て、当技術分野におけるそれらの通常の意味を有し、それらは当業者には明らかであるだろう。例えば、SambrookらMolecularCloningALaboratoryManual第2版第1~3巻、ColdSpringHarborLaboratoryPress1989;FAusubelら編CurrentprotocolsinmolecularbiologyGreenPublishingandWileyInterscience、ニューヨーク1987;LewinGenesIIJohnWileySons、ニューヨーク州ニューヨーク1985;OldらPrinciplesofGeneManipulationAnIntroductiontoGeneticEngineering第2版、UniversityofCaliforniaPress、カリフォルニア州バークレー1981;RoittらImmunology第6版MosbyElsevier、エジンバラ2001;RoittらRoittsEssentialImmunology第10版、BlackwellPublishing、英国2001;およびJanewayらImmunobiology第6版、GarlandSciencePublishingChurchillLivingstone、ニューヨーク2005などの標準的参考書、ならびに本明細書において言及する一般的背景技術を参照されたい。さらなる参考文献には、例えば次の総説が含まれる:PrestaAdvDrugDelivRev20065864056;LevinおよびWeissMolBiosyst200624957;IrvingらJImmunolMethods20012483145;SchmitzらPlacenta200021SupplAS10612、GonzalesらTumourBiol2005263143これらには、親和性成熟などのタンパク質工学のための技法や、免疫グロブリンなどのタンパク質の特異性および他の望ましい性質を改良するための他の技法が記述されている。別段の表示がない限り、具体的に詳しく説明されない方法、ステップ、技法および操作は全て、自体公知の方法で行うことができ、また自体公知の方法で行われたのであり、それらは当業者にとっては明らかであるだろうと考えられる。ここでも、例えば標準的参考書および本明細書において言及する一般的背景技術ならびにそこで言及されているさらなる参考文献を参照されたい。アミノ酸残基は、IUPACコード表に掲載されている標準的な三文字または一文字アミノ酸コードに従って示すことにする。別段の表示がない限り、免疫グロブリン配列という用語は、本明細書において重鎖抗体を指すために使用されているか、従来の4本鎖抗体を指すために使用されているかにかかわらず、フルサイズの抗体、その個々の鎖、ならびにその全てのパーツ、ドメインまたはフラグメントそれぞれVHHドメインまたはVHVLドメインなどの抗原結合ドメインまたはフラグメントを含むが、これらに限るわけではないをどちらも包含するための一般用語として使用される。本明細書において例えば免疫グロブリン配列、抗体配列、可変ドメイン配列、sdAb配列、VH配列、VHH配列またはタンパク質配列のような用語において使用される配列という用語は、文脈上、より限定的な解釈が要求されない限り、一般に、関連アミノ酸配列と、それをコードする核酸配列またはヌクレオチド配列の両方を包含するために使用される。別段の表示がない限り、ヌクレオチド配列および核酸という用語は、文脈上、より限定的な解釈が要求されない限り、一般に、デオキシリボ核酸DNAまたはリボ核酸RNAのポリマーを指すために、可換的に使用される。2つ以上のヌクレオチド配列を比較するために、第1ヌクレオチド配列と第2ヌクレオチド配列の間の配列同一性のパーセンテージは、例えば第2ヌクレオチド配列中の対応する位置にあるヌクレオチドと一致している第1ヌクレオチド配列中のヌクレオチドの数を数え、その数を第1ヌクレオチド配列中のヌクレオチドの総数で割り、次に100をかけることによって、算出または決定することができる。第1ヌクレオチド配列と比較した時の第2ヌクレオチド配列中の各欠失、挿入、置換または付加は、単一ヌクレオチド位置における相違とみなされる。当業者は、例えばNCBIBlastv20などの適切なコンピュータアルゴリズムまたは技法を、標準的な設定を使って使用してもよい。フレームワーク1FR1に関して、アミノ酸同一性の程度を決定するために、位置1~4および27~30にあるアミノ酸残基が、好ましくは、無視されることは、当業者には明らかなはずである。ある実施形態では、2つのアミノ酸配列の間の配列同一性の程度を決定する際に、当業者は、いわゆる保存的アミノ酸置換を考慮することができる。保存的置換は、当技術分野では知られており、あるアミノ酸が共通する性質を有する同じ群内のもう一つのアミノ酸残基で置換されている置換である。保存的アミノ酸群とそれらの共通の性質は次のとおりである:aAla、Ser、Thr、ProおよびGlyを含む、小さい脂肪族非極性または低極性残基;bAsp、Asn、GluおよびGlnを含む、極性陰性荷電残基およびそれらの非荷電アミド;cHis、ArgおよびLysを含む、極性陽性荷電残基;dMet、Leu、He、ValおよびCysを含む、大きい脂肪族非極性残基;およびePhe、TyrおよびTrpを含む、芳香族残基。特に好ましい保存的置換は次のとおりである:AlaのGlyまたはSerへの置換;ArgのLysへの置換;AsnのGlnまたはHisへの置換;AspのGluへの置換;CysのSerへの置換;GlnのAsnへの置換;GluのAspへの置換;GlyのAlaまたはProへの置換;HisのAsnまたはGlnへの置換;IleのLeuまたはValへの置換;LeuのIleまたはValへの置換;LysのArg、GlnまたはGluへの置換;MetのLeu、TyrまたはIleへの置換;PheのMet、LeuまたはTyrへの置換;SerのThrへの置換;ThrのSerへの置換;TrpのTyrへの置換;TyrのTrpへの置換;およびまたはPheのVal、IleまたはLeuへの置換。本明細書に記載するポリペプチドに適用される任意のアミノ酸置換は、SchulzらPrinciplesofProteinStructureSpringerVerlag1978によって開発された異なる種の相同タンパク質間のアミノ酸変異の頻度の分析、ChouおよびFasmanBiochemistry132111974およびAdvEnzymol47451491978によって開発された構造形成能の分析、ならびにEisenbergらProcNatlAcadSciUSA811401441984;KyteおよびDoolittle;JMolecBiol1571051321981およびGoldmanらAnnRevBiophysChem153213531986によって開発されたタンパク質における疎水性パターンの分析に基づくこともできる。ラクダ科VHHコンストラクトの一次構造、二次構造および三次構造に関する情報は、上に挙げた一般的背景技術に与えられており、ラマ由来のそのようなVHHコンストラクトの結晶構造が、例えばDesmyterらNatureStructuralBiologyVol39803;SpinelliらNaturalStructuralBiology;3752757;およびDecanniereらStructureVol74361によって与えられている。通常のVHドメインにおいてVHVL境界面を形成するアミノ酸残基のいくつかおよびこれらの位置におけるラクダ科置換候補に関するさらなる情報は、上述の技術に見いだすことができる。アミノ酸配列および核酸配列は、それらがその全長にわたって100の配列同一性を有するのであれば、厳密に同じであるといわれる。2つのアミノ酸配列を比較する場合、アミノ酸相違という用語は、第2配列と比較した第1配列のある位置における単一アミノ酸残基の挿入、欠失または置換を指し;2つのアミノ酸配列は、1つ、2つまたはそれ以上のそのようなアミノ酸相違を含有することができると理解される。ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が、それぞれもう一つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を含むという場合、またはもう一つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列から本質的になるという場合、これは、一般に、最初に言及したヌクレオチド配列またはアミノ酸配列が、その配列内に、それぞれ後者の配列と同じヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を有するそれぞれヌクレオチドまたはアミノ酸残基のストレッチを有していることを意味し、最初に言及した配列が実際に作製または取得された方法これは、例えば本明細書に記載する任意の適切な方法によることができるを問わない。核酸またはアミノ酸配列に関して本質的に単離された形態にあるという用語は、それが、それを取得する元となったその天然の生物学的供給源およびまたは反応媒体もしくは培養培地と比較して、供給源または培地中で通常はそれに付随している少なくとも1つの他の構成要素から分離されていることを意味する。少なくとも1つの他の構成要素は、別の核酸、別のタンパク質ポリペプチド、別の生物学的構成要素もしくは高分子、または少なくとも1つの夾雑物、不純物または微量構成要素であることができる。ある実施形態において、核酸配列またはアミノ酸配列は、それが少なくとも2倍、特に少なくとも10倍、さらに少なくとも100倍、最大1000倍またはそれ以上にまで精製されている場合に、本質的に単離されているとみなされる。本質的に単離された形態にある核酸配列またはアミノ酸配列は、適切な技法、例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動などの適切なクロマトグラフィー技法を使って決定した場合に、好ましくは、本質的に均一である。本明細書において使用するドメインまたは結合ドメインという用語は、一般に、抗体鎖の球状領域、特に重鎖抗体の球状領域、またはそのような球状領域から本質的になるポリペプチドを指す。通常、そのようなドメインは、例えばシートとして安定化された、またはジスルフィド結合によって安定化された、ペプチドループ例えば3~4つのペプチドループを含むであろう。抗原性決定基およびエピトープという用語は、本明細書において可換的に使用することもでき、抗原結合分子例えば本発明のNBコンストラクトによって認識される、特に前記分子の抗原結合部位によって認識される、抗原上のエピトープを指す。特定の抗原性決定基、エピトープ、抗原またはタンパク質またはその少なくとも1つのパーツ、フラグメントもしくはエピトープに対して特異的に結合することができ、それに対してアフィニティを有し、かつまたはそれに対して特異性を有するアミノ酸配列例えば本発明のNBコンストラクト、VHHまたはVHコンストラクト、抗体、または一般に、抗原結合タンパク質もしくはポリペプチドまたはそのフラグメントを、前記抗原性決定基、エピトープ、抗原またはタンパク質に対するまたはに向けられるという。そこで言及される特異性という用語は、特定の抗原結合分子または抗原結合タンパク質例えば本発明のNBコンストラクト分子が結合することのできる抗原または抗原性決定基の異なるタイプの数を指す。抗原結合タンパク質の特異性は、アフィニティおよびまたはアビディティに基づいて決定することができる。典型的には、抗原結合タンパク質例えば本発明のNBコンストラクトは、それらの抗原に、105~1012モルリットル未満、好ましくは107~1012モルリットル未満、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDですなわち、105~1012リットルモル以上、好ましくは107~1012リットルモル以上、より好ましくは108~1012リットルモルの会合定数KAで結合するであろう。104モルリットルより大きい任意のKD値または104M1より低い任意のKA値リットルモルは、一般に非特異的結合を示すとみなされる。好ましくは、本発明のNBコンストラクトは、その望ましい抗原に、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで結合するであろう。抗原または抗原性決定基への抗原結合タンパク質の特異的結合は、自体公知の任意の適切な方法、例えばスキャッチャード分析およびまたは競合結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイRIA、酵素イムノアッセイEIAおよびサンドイッチ競合アッセイ、ならびに自体公知のその変法;ならびに本明細書において言及する他の技法で決定することができる。抗原と抗原結合タンパク質との解離に関する平衡定数KDによって表されるアフィニティは、抗原性決定基と抗原結合タンパク質上の抗原結合部位との間の結合強度の尺度であり、KDの値が低いほど、抗原性決定基と抗原結合分子との間の結合強度が強いあるいは、アフィニティは、1KDであるアフィニティ定数KAとして表すこともできる。当業者には明らかであるだろうとおり、アフィニティは、目的の特異的抗原に応じて、自体公知の方法で決定することができる。アビディティは、抗原結合分子例えば本発明のNBコンストラクトと関連抗原の間の結合の強さの尺度である。アビディティは、抗原性決定基と抗原結合分子上のその抗原結合部位との間のアフィニティと、抗原結合分子上に存在する関連結合部位の数との両方に関係する。解離定数は、真の解離定数または見掛けの解離定数であることができる。解離定数を決定するための方法は当技術分野では知られている。抗原例えばタンパク質と、NBコンストラクトまたはその機能的フラグメント、例えばここに開示するCDRを抗体のフレームワーク中に有するもの、抗体フラグメント、または抗体由来の結合剤との間の相互作用を説明する文脈において使用する場合、特異的に結合または選択的に結合という表現は、タンパク質および他の生物製剤の不均一な集団、例えば生物学的サンプル、例えば血液、血清、血漿または組織サンプルにおける、抗原の存在を決定づける結合反応を指す。したがって、一定の指定されたイムノアッセイ条件下で、特定の結合特異性を持つNBコンストラクト、抗体または結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも2倍は結合し、サンプル中に存在する他の抗原には有意な量では実質的に結合しない。ある実施形態では、指定されたイムノアッセイ条件下で、特定の結合特異性を持つNBコンストラクト、抗体または結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも10倍は結合し、サンプル中に存在する他の抗原には有意な量では実質的に結合しない。そのような条件下でのNBコンストラクト、抗体または結合剤への特異的結合は、そのNBコンストラクト、抗体または結合剤が、特定のタンパク質に対するその特異性ゆえに選択されていることを必要としうる。所望により、または適宜、この選択は、例えば他の種例えばマウスまたはラットに由来するDR5分子または細胞死受容体ファミリーのメンバーもしくはサブタイプである他のポリペプチドと交差反応するNBコンストラクトまたは抗体を取り去ることによって達成することができる。あるいは、いくつかの実施形態では、一定の所望の分子と交差反応するNBコンストラクト、抗体または抗体フラグメントが選択される。さまざまなイムノアッセイフォーマットを使って、特定のタンパク質と特異的に免疫反応するNBコンストラクトを選択することができる。例えば、固相ELISAイムノアッセイは、あるタンパク質と特異的に免疫反応する抗体を選択するために、日常的に使用されており特異的免疫反応性を決定するために使用することができるイムノアッセイフォーマットおよび条件の説明については、例えばHarlowおよびLaneUsingAntibodiesALaboratoryManual1998を参照されたい、NBコンストラクト結合分析にも同様に使用することができる。典型的には、特異的または選択的結合反応は、バックグラウンドシグナルより少なくとも2倍大きいシグナルを生じ、より典型的にはバックグラウンドより少なくとも10~100倍大きいシグナルを生じるであろう。本明細書に記載するアフィニティ定数KAの他にも、本発明のDR5結合性NBコンストラクトは、典型的には、5×102M未満、102M未満、5×103M未満、103M未満、5×104M未満、104M未満、5×105M未満、105M未満、5×106M未満、106M未満、5×107M未満、107M未満、5×108M未満、108M未満、5×109M未満、109M未満、5×1010M未満、1010M未満、5×1011M未満、1011M未満、5×1012M未満、1012M未満、5×1013M未満、1013M未満、5×1014M未満、1014M未満、5×1015M、もしくは1015M未満またはそれ以下の解離速度定数KDkoffkonを有し、DR5には、非特異的抗原例えばヒト血清アルブミンHSAへの結合に関するそのアフィニティよりも少なくとも2倍は大きいアフィニティで結合する。本発明のアミノ酸配列、化合物またはポリペプチドの半減期は、一般に、コンストラクトの血清中濃度が、例えばその配列または化合物の分解およびまたは自然の機序によるその配列または化合物のクリアランスまたは隔離などによって、インビボで50減少するのに要する時間を指す。本発明のアミノ酸配列、化合物またはポリペプチドのインビボ半減期は、自体公知の任意の方法で、例えば薬物動態分析によって、決定することができる。適切な技法は当業者には明らかであるだろう。半減期は、t12α、t12βおよび曲線下面積AUCなどのパラメータを使って表現することができる。下記の実験部分と、Kennethら著ChemicalStabilityofPharmaceuticalsAHandbookforPharmacistsおよびPetersら著PharamacokineticanalysisAPracticalApproach1996;GibaldiおよびPerronPharmacokineticsMarcelDekker刊、第2改訂版1982などの標準的参考書とを参照されたい。半減期の増加または増加した半減期という用語は、t12βの増加を指し、t12αおよびまたはAUCの増加またはその両者の増加を伴う場合も、伴わない場合もある。DR5と関連する疾患および障害は、上に、そしてまた本明細書の全体を通して、例えば段落[0051]に、定義するとおりである。理論に束縛されるわけではないが、そのような疾患およびまたは障害におけるDR5の作用機序は、例えば段落[0052]などに記載のとおりであると考えられる。考えられるDR5と関連する疾患および障害の非限定的な例は、本明細書の全体を通して、例えば段落[0053]に記載されているとおりであり、他の例は、本明細書において教示する内容に基づいて当業者には明らかになりうる。本発明に関して、調整modulatingtomodulateとは、一般に、適切なインビトロアッセイ、細胞アッセイまたはインビボアッセイを使って測定されるターゲットまたは抗原の活性を、低減または阻害すること、あるいは増加させることを意味する。特に調整は、適切なインビトロアッセイ、細胞アッセイまたはインビボアッセイこれは通常、関与するターゲットまたは抗原に依存するであろうを使って測定されるターゲットまたは抗原の関連するまたは意図する生物学的活性を、本発明のコンストラクトが存在しないこと以外は同じ条件下での同じアッセイにおけるターゲットまたは抗原の活性と比較して、少なくとも1、好ましくは少なくとも5、例えば少なくとも10または少なくとも25、例えば少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、もしくは少なくとも90またはそれ以上、低減または阻害すること、あるいは増加させることを意味しうる。当業者には明らかであるだろうとおり、調整は、本発明のコンストラクトが存在しない点以外は同じ条件と比較して、ターゲットまたは抗原の、そのリガンド、結合パートナー、ホモ多量体またはヘテロ多量体型へと会合するためのパートナー、または基質に対するアフィニティ、アビディティ、特異性およびまたは選択性に変化これは増加であっても減少であってもよいをもたらすこと、およびまたはターゲットまたは抗原が存在する培地または環境における1つ以上の条件例えばpH、イオン強度、コファクターの存在などに対するターゲットまたは抗原の感受性に変化これは増加であっても減少であってもよいをもたらすことも伴いうる。当業者には明らかであるだろうとおり、これもまた、関与するターゲットまたは抗原に応じて、任意の適切な方法で、かつまたは任意の適切な自体公知のアッセイを使って、決定することができる。ある実施形態では、調整が、ターゲットまたは抗原が関与するまたはその基質、リガンドまたは経路、例えばそのシグナリング経路または代謝経路およびそれらの関連する生物学的または生理学的効果が関与する1つ以上の生物学的または生理学的な機序、効果、応答、機能、経路または活性に関して、変化をもたらすことすなわち、ターゲットまたは抗原および所望の生物学的または生理学的効果に応じて、それぞれ中和剤、アゴニスト、アンタゴニスト、またはリバースアゴニストとしての活性も意味しうる。当業者には明らかであるだろうとおり、そのような中和剤、アゴニストまたはアンタゴニストとしての作用は、関与するターゲットまたは抗原に応じて、任意の適切な方法で、かつまたは任意の適切な自体公知のインビトロおよび通常は細胞またはインビボアッセイを使って、決定することができる。特に、アゴニストまたはアンタゴニストとしての作用は、意図した生物学的または生理学的活性が、本発明のコンストラクトが存在しない点以外は同じ条件下での同じアッセイにおける生物学的または生理学的活性と比較して、少なくとも1、好ましくは少なくとも5、例えば少なくとも10または少なくとも25、例えば少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、もしくは少なくとも90またはそれ以上、それぞれ増加または減少するような作用であることができる。調整は、例えば、ターゲットまたは抗原のアロステリック調整;およびまたはターゲットまたは抗原の、その基質またはリガンドの1つへの結合を低減または阻害すること、およびまたはターゲットもしくは抗原への結合に関して天然のリガンド、基質と競合することを伴いうる。調整は、ターゲットもしくは抗原またはそれが関与する機序もしくは経路を活性化することも伴いうる。調整は、例えば、ターゲットまたは抗原のフォールディングまたはコンフォメーションconfirmationに関して変化をもたらすこと、またはターゲットもしくは抗原の、フォールディングする能力、そのコンフォメーションconfirmationを例えばリガンドの結合時に変化させる能力、他のサブユニットと会合する能力、または解離する能力に関して変化をもたらすことも伴いうる。調整は、例えばターゲットまたは抗原の、他の化合物を輸送する能力または他の化合物例えばイオンにとってのチャネルとして機能する能力に変化をもたらすことも伴いうる。調整は可逆的であっても不可逆的であってもよいが、医薬および薬理学的目的の場合には、通常は、可逆的であるだろう。ターゲットまたは抗原に関して、ターゲットまたは抗原上の相互作用部位という用語は、リガンド、受容体または他の結合パートナーに結合するための部位、触媒部位、切断部位、アロステリック相互作用のための部位、ターゲットまたは抗原の多量体化ホモマー化またはヘテロマー化などに関与する部位である、ターゲットまたは抗原上の部位、エピトープ、抗原性決定基、パーツ、ドメインまたはアミノ酸残基のストレッチ、あるいはターゲットまたは抗原の生物学的作用または機序に関与する、ターゲットまたは抗原上の他の任意の部位、エピトープ、抗原性決定基、パーツ、ドメインまたはアミノ酸残基のストレッチを意味する。より一般的には、相互作用部位は、ターゲットまたは抗原およびまたはそのターゲットまたは抗原が関与する任意の経路、相互作用、シグナリング、生物学的機序または生物学的効果が調整されるような形で本発明のアミノ酸配列またはポリペプチドが結合することのできる、ターゲットまたは抗原上の任意の部位、エピトープ、抗原性決定基、パーツ、ドメインまたはアミノ酸残基のストレッチであることができる。アミノ酸配列またはポリペプチドは、それが第1の抗原に、前記アミノ酸配列またはポリペプチドが第2のターゲットまたはポリペプチドに結合する時のアフィニティよりも少なくとも10倍、例えば少なくとも100倍、好ましくは少なくとも1000倍、最高で10000倍またはそれ以上良いアフィニティ上述したもの、そしてKD値、KA値、Koff速度およびまたはKon速度として適切に表現されたもので結合する場合に、第2のターゲットまたは抗原と比較して第1のターゲットまたは抗原に対して特異的であるという。例えば、第1の抗原は、前記アミノ酸配列またはポリペプチドが第2のターゲットまたはポリペプチドに結合する際のKDよりも少なくとも10倍、例えば少なくとも100倍、好ましくは少なくとも1000倍、例えば10000倍、さらにはそれ以上の倍率差で小さいKD値で、ターゲットまたは抗原に結合しうる。ある実施形態において、アミノ酸配列またはポリペプチドが、第2のターゲットまたは抗原と比較して第1のターゲットまたは抗原に対して特異的である場合、それは、前記第1のターゲットまたは抗原には向けられているが、前記第2のターゲットまたは抗原には向けられていない。交差ブロックcrossblock、crossblockedおよびcrossblockingという用語は、本明細書においては可換的に使用され、あるアミノ酸配列または他の結合剤例えば本発明のポリペプチドの、所与のターゲットに対する本発明の他のアミノ酸配列または結合剤の結合を妨害する能力を意味する。本発明のアミノ酸配列または他の結合剤が、DR5に対する他のアミノ酸配列または結合剤の結合を妨害できる程度、そしてそれゆえに、それが本発明に従って交差ブロックすると言えるかどうかは、競合結合アッセイを使って決定することができる。特に適切な定量的アッセイの一つでは、表面プラズモン共鳴技術を使って相互作用の程度を測定することができるBiacore機器を使用する。もう一つの適切な定量的交差ブロックアッセイでは、ELISAに基づくアプローチを使って、ターゲットへの結合に関するアミノ酸配列または他の結合剤間の競合を測定する。アミノ酸配列または他の結合剤が、本発明に従って交差ブロックするかどうか、または交差ブロックする能力を有するかどうかを決定するための適切なアッセイは、例示的Biacoreアッセイまたは例示的ELISAアッセイである。アミノ酸配列は、2つの異なる抗原または抗原性決定基例えば2つの異なる哺乳動物種に由来する血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミンとシノ血清アルブミンに関して、それが、これらの異なる抗原または抗原性決定基の両方に特異的である場合に、交差反応性であるという。本質的にpHに依存しない結合とは、本明細書においては一般に、動物または人体の細胞内に見いだされるpH値本明細書においてさらに詳しく説明するにおける血清タンパク質例えば血清アルブミンに関するアミノ酸配列の会合定数KAが、前記細胞の外側に見いだされるpHにおける同じ血清タンパク質に関するアミノ酸配列の会合定数KAの少なくとも5、例えば少なくとも10、好ましくは少なくとも25、より好ましくは少なくとも50、さらに好ましくは少なくとも60、例えばさらに好ましくは少なくとも70、例えば少なくとも80もしくは少なくとも90またはそれ以上または、さらには100以上、例えば110以上、120以上、もしくは130またはそれ以上、さらには150以上、さらには200以上であることを意味する。あるいは、本質的にpHに依存しない結合とは、本明細書においては一般に、動物または人体の細胞内に見いだされるpH値例えば本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、例えば55前後のpH、例えば53~57における血清タンパク質例えば血清アルブミンに関するアミノ酸配列のkoff速度Biacoreによって測定されるもの-例えば実験例2参照が、前記細胞の外側に見いだされるpH値、例えばpH72~74における同じ血清タンパク質に関するアミノ酸配列のkoff速度の少なくとも5、例えば少なくとも10、好ましくは少なくとも25、より好ましくは少なくとも50、さらに好ましくは少なくとも60、例えばさらに好ましくは少なくとも70、例えば少なくとも80もしくは少なくとも90またはそれ以上または、さらには100以上、例えば110以上、120以上、さらには130もしくはそれ以上、さらには150以上、または200以上であることを意味する。動物または人体の細胞内に見いだされるpH値とは、細胞の内部に見いだされうるpH値、特に血清タンパク質の再利用に関与する細胞の内部で見いだされうるpH値を意味する。特に動物または人体の細胞内に見いだされるpH値とは、例えば飲作用、エンドサイトーシス、トランスサイトーシス、エキソサイトーシスおよび食作用または前記細胞内への取り込みまたは内在化の類似する機序の結果として血清タンパク質の再利用に関与する細胞内コンパートメントまたは小胞、例えばエンドソーム、リソソームまたはピノソームなどの内部に見いだされうるpH値を意味する。本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、NBコンストラクト中のアミノ酸残基の総数は、110~120の範囲にあることができ、好ましくは112~115であり、最も好ましくは113である。しかし、NBコンストラクトのパーツ、フラグメント、類似体または誘導体本明細書においてさらに詳しく説明するものは、そのパーツ、フラグメント、類似体または誘導体が本明細書において概説するさらなる要件を満たし、場合によってはここでの目的に適している限りにおいて、その長さおよびまたはサイズに関して、特に限定されないことに注意すべきである。本明細書にいう好ましいまたはより好ましい、さらに好ましいなどは、特定のNB化合物もしくはその変異体に対し、またはそれらの使用に対し、本明細書に記載するさまざまな実施形態に関して、またはそのように記載されている場合には特定の実施形態に関して、適用される。NBコンストラクトのアミノ酸残基は、RiechmannおよびMuyldermansの論文、JImmunolMethods2000Jun23;240185195においてラクダ科由来のVHHドメインに適用されているように例えばこの刊行物の図2を参照されたい、KabatらSequenceofproteinsofimmunologicalinterest米国公衆衛生局、NIH、メリーランド州ベセスダ、刊行物番号91に記載されている、VHドメインの一般的ナンバリングに従ってナンバリングされる。したがって、一般的には、NBコンストラクトのFR1は位置1~30のアミノ酸残基を含み、NBコンストラクトのCDR1は位置31~35のアミノ酸残基を含み、NBコンストラクトのFR2は位置36~49のアミノ酸を含み、NBコンストラクトのCDR2は位置50~65のアミノ酸残基を含み、NBコンストラクトのFR3は位置66~94のアミノ酸残基を含み、NBコンストラクトのCDR3は位置95~102のアミノ酸残基を含み、NBコンストラクトのFR4は位置103~113のアミノ酸残基を含む。しかし、VHドメインおよびVHHドメインに関して、CDRのそれぞれにおけるアミノ酸残基の総数が変動しうること、そしてそれゆえに、それがKabatのナンバリングによって示されるアミノ酸残基の総数とは一致しない場合がありうることは、当技術分野ではよく知られている。例えば、本明細書に記載する本発明のNBコンストラクトの場合、NBコンストラクトにおけるアミノ酸残基およびそれらの位置は、それらの特定のFR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3およびFR4に関して、表4に記載するとおりである。KabatおよびChothiaなどの他の方法を使って、特定のCDRの代替的バージョンを定義することもでき、接触点および相互作用部位の結晶学的決定は、各特定CDRおよびまたはFR領域の範囲に関してさらなる情報を当業者に与えうる。本発明をさらに例示するために図面、配列表および実験項実施例を提示するが、それらは、本明細書において別段の明示がなされていない限り、決して、本発明の範囲およびまたは本願の特許請求の範囲を限定するものであると理解または解釈してはならない。重鎖抗体およびその可変ドメインの一般的説明については、とりわけ本明細書において言及する技術文献を参照されたい。当技術分野において使用されている専門用語に従って、天然に存在する重鎖抗体中に存在する可変ドメインを、通常の4本鎖抗体中に存在する重鎖可変ドメインこれは本明細書ではVHドメインと呼ぶことにするおよび通常の4本鎖抗体中に存在する軽鎖可変ドメインこれは本明細書ではVLドメインと呼ぶことにすると区別するために、VHHドメインとも呼ぶことにする。一般に、VHHドメインは、軽鎖可変ドメインが存在しなくても、そして軽鎖可変ドメインとの相互作用がなくても、抗原に機能的に結合するように、本質的に設計されている。上に挙げた技術文献において言及されているように、VHHドメインは、ユニークな構造的特徴と機能的性質をいくつか持っている。これらの特徴および性質ゆえに、単離されたVHHドメインと、それらに基づく、これらの構造的特徴および機能的性質を天然に存在するVHHドメインと共有する本発明の組成物およびそれを含有するタンパク質は、機能的抗原結合ドメインまたはタンパク質としての使用にとって、非常に有利である。特に、限定するわけではないが、VHHドメインおよび本発明の組成物は、単一の比較的小さい機能的抗原結合構造ユニット、ドメインまたはタンパク質として機能することができる。これにより、VHHドメインは、通常の4本鎖抗体のVHドメインおよびVLドメインこれらは、単独では単一抗原結合タンパク質またはドメインとしては一般に実用的応用には適しておらず、機能的抗原結合ユニットを与えるには、例えば、Fabフラグメントなどの通常の抗体フラグメントのように;VLドメインに共有結合で連結されたVHドメインからなるScFvフラグメントのように何らかの形で組み合わせる必要があるとは区別される。これらのユニークな性質ゆえに、単一抗原結合タンパク質としての、または抗原結合ドメインとしてのすなわち、より大きなタンパク質またはポリペプチドの一部としての、VHHドメインならびにそれに基づく本発明のNB剤および組成物の使用は、通常のVHおよびVLドメイン、ScFvまたは通常の抗体フラグメントFabフラグメントまたはF2フラグメントなどの使用と比較して、いくつかの重要な利点をもたらす。NBコンストラクトのラクダ科VHH変異体の利点は、例えば抗原を高いアフィニティかつ高い選択性で結合するのに、単一のドメインしか必要でなく、したがって複数の別々のドメインを製造しまたは組み合わせる必要がなく、これら2つのドメインが正しい空間的コンフォメーションおよびコンフィギュレーションで存在することを保証する必要もないこと;VHHドメインは単一の転写産物から発現することができ、翻訳後フォールディングまたは翻訳後修飾が必要ないこと;VHHドメインは多価および多重特異性フォーマット本明細書においてさらに詳しく議論するものへと容易に操作できること;VHHドメインは溶解度が高く、凝集する傾向を有さないこと;熱、pH、プロテアーゼおよび他の変性剤または条件に対して、VHHドメインが高度に安定であること;VHHドメインは、製造と、生産のためのスケールアップとが容易であり、比較的安価であること;VHHドメインは、通常の4本鎖抗体およびその抗原結合フラグメントと比較して比較的小さく単量体は約15kDa、あるいは通常のIgGの10分の1である、それゆえに、組織限定するわけではないが、例えば固形腫瘍および他の密な組織への浸透性が、そのような通常の4本鎖抗体およびその抗原結合フラグメントよりも高いこと;VHHドメインはなかんずく、通常のVHドメインと比較して、それらの伸びたCDR3ループゆえにいわゆるキャビティ結合cavitybinding性を示し、それゆえに、通常の4本鎖抗体およびその抗原結合フラグメントではアクセスできないターゲットおよびエピトープにもアクセスできることである。DR5に対するNBコンストラクト具体的な好ましい一態様において、本発明は、DR5に対するNB剤、特に温血動物由来のDR5に対するNB剤、より具体的には哺乳動物由来のDR5に対するNB剤、とりわけヒトDR5、例えば公共データベースに記載されているもの、例えばNCBIタンパク質データベースのアクセッション番号BAA33723に記載されているもの配列番号89に対するNB剤、ならびにそのようなNB剤を少なくとも1つは含むタンパク質およびまたはポリペプチドを提供する。特に本発明は、DR5に対する通常の抗体またはそのフラグメントと比較して、そのような通常の抗体または抗体フラグメントに基づきうるコンストラクト例えばFabフラグメント、F2フラグメント、ScFvコンストラクト、ダイアボディdiabodyおよび他の多重特異性コンストラクト例えばHolligerおよびHudsonによる総説、NatBiotechnol2005Sep;23112636を参照されたいなどと比較して、そしてまた、通常の抗体の可変ドメインから誘導されうるいわゆるdAbもしくは類似の単一ドメイン抗体と比較して、改善された治療的およびまたは薬理学的性質およびまたは他の有利な性質例えば製造の容易さの向上およびまたは製品原価の低下などを有する、DR5に対するNB剤ならびにそれを含むタンパク質およびまたはポリペプチドを提供する。ある実施形態では、そして本発明の治療的に有用なアミノ酸配列に関して本明細書において広く説明するとおり、本発明のNB剤およびその変異体は、本質的に単離された形態にあるか、あるいは1つ以上の本発明のNB剤を含みうるまたは1つ以上の本発明のNB剤から本質的になりうるタンパク質またはポリペプチドの一部を形成する。ある実施形態では、NB剤変異体が、さらに、1つ以上の追加アミノ酸配列を含みうる。ある実施形態では、その1つ以上の追加アミノ酸配列が1つ以上の適切なリンカーを介して連結される。限定するわけではないが、ある実施形態では、本発明の前記1つ以上のアミノ酸配列は、そのようなタンパク質またはポリペプチドにおける結合ユニットとして使用することができ、これは、場合によっては、結合ユニットすなわちDR5以外の1つ以上の他のターゲットに対する結合ユニットとして機能することができる1つ以上のさらなるアミノ酸配列を含有して、それぞれ本発明の一価、多価または多重特異性ポリペプチドを与えてもよい。ある実施形態では、そのようなタンパク質またはポリペプチドが、1つ以上の本発明のNB剤と、場合によっては1つ以上の他のポリペプチドドメインまたはエピトープ結合組成物すなわちDR以外の他のターゲットに向けられたものとを含むか、それらから本質的になり、それらはいずれも、場合によっては1つ以上の適切なリンカーで連結されて、それぞれ一価、多価または多重特異性NB剤を与えることができる。ある実施形態では、DR5に対する結合のための結合部位が、CDR配列によって形成される。ある実施形態では、本発明の組成物は、DR5に対する結合のための前記少なくとも1つの結合部位に加えて、他の抗原、タンパク質またはターゲットに対する結合のための1つ以上のさらなる結合部位を含有しうる。そのような第2の結合部位を導入するための方法および位置については、例えばKeckおよびHustonBiophysicalJournal71October199620022011;EP0640130;WO0607260およびAblynxNVによる米国仮特許出願発明の名称Immunoglobulindomainswithmultiplebindingsites;出願日2006年11月27日を参照されたい。ある実施形態において、本発明のアミノ酸配列またはそれを含む本発明のポリペプチドが例えば本明細書に記載する治療的およびまたは診断的目的のために対象への投与を意図されている場合、それは、ヒトDR5に向けられる。ある実施形態では、獣医学的目的のために、本発明の組成物は、処置される種に由来するDR5に向けられる。本発明の組成物は交差反応性すなわち、2つ以上の哺乳動物種に由来するDR5に対して活性、例えばヒトDR5と本明細書において言及する哺乳動物種の少なくとも1つに由来するDR5に対して活性であってもよいし、交差反応性でなくてもよい。ある実施形態において、本発明のNBコンストラクトは、DR5には特異的に結合することができるが、DR4、TRAILR3またはTRAILR4には結合しない。ある実施形態において、本発明の組成物は、一般に、DR5の任意の抗原性決定基、エピトープ、パーツ、ドメイン、サブユニットまたはコンフォメーションconfirmation適用可能な場合に向けられる。ある実施形態において、本発明のNB剤は、DR5の細胞外ドメイン部分に向けられる。具体的一実施形態では、本発明の組成物が、競合結合アッセイにおいて、DR5の天然リガンドと競合する。ある実施形態では、本発明のNB剤が、DR5への結合に関して、TRAILと競合する。ある実施形態では、本発明の組成物が、DR5への結合に関して、TRAILと競合しない。ある実施形態では、本発明のNB剤が、DR5への結合に関して、TRAILと協同する。非限定的一実施形態では、本発明の組成物のアミノ酸配列および構造が、4つのフレームワーク領域、すなわちFRFWと呼ぶ場合もあるこれらは、当技術分野において、そして本明細書において、フレームワーク領域1またはFR1;フレームワーク領域2またはFR2;フレームワーク領域3またはFR3;およびフレームワーク領域4またはFR4とそれぞれ呼ばれているから構成され、これらのフレームワーク領域は、当技術分野においてそれぞれ相補性決定領域1またはCDR1、相補性決定領域2またはCDR2および相補性決定領域3またはCDR3と呼ばれている3つの相補性決定領域、すなわちCDRによって分断されている。ある実施形態では、フレームワーク配列およびCDRおよびその組合せが、本明細書に記載する、特に表4に記載する、本発明のNBコンストラクト中に存在するものである。他の適切なCDR配列は本明細書に記載する方法によって得ることができる。非限定的一実施形態では、本発明のCDR配列が、次に示すようなものである:aNBコンストラクトは、DR5に、105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDですなわち、105~1012リットルモル以上、好ましくは107~1012リットルモル以上、より好ましくは108~1012リットルモルの会合定数KAで結合することができ;bNBコンストラクトは、DR5に、102M1s1~約107M1s1、好ましくは103M1s1~107M1s1、より好ましくは104M1s1~107M1s1、例えば105M1s1~107M1s1のkon速度で結合することができ;かつまたはcNBコンストラクトは、DR5に、1s1t12=069s~106s1複数日のt12を持つほぼ不可逆的な複合体を与える、好ましくは102s1~106s1、より好ましくは103s1~106s1、例えば104s1~106s1のkoff速度で結合することができる。ある実施形態において、ここでのCDR配列は、本発明の一価組成物または本発明のNBコンストラクトを1つだけ含有するポリペプチドが、DR5に、100nM未満、好ましくは10nM未満、より好ましくは1nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで結合することになるようなものである。DR5に対する本発明のNB剤のアフィニティは、自体公知の方法で、例えば本明細書に記載するKD、KA、koffまたはkonを測定するための一般的技法ならびに本明細書に記載する具体的アッセイのいくつかを使って、決定することができる。非限定的一態様において、本発明は、4つのフレームワーク領域それぞれFR1~FR4と3つの相補性決定領域それぞれCDR1~CDR3とからなるDR5に対するNB剤に関する。ある実施形態において、NB剤は、CDR1がa配列番号41~44のアミノ酸配列;b配列番号41~44のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;c配列番号41~44のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列からなる群より選択され、かつまたはCDR2がa配列番号51~55のアミノ酸配列;b配列番号51~55のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;c配列番号51~55のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列からなる群より選択され、かつまたはCDR3がa配列番号63~68のアミノ酸配列;b配列番号63~68のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、少なくとも90のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列;c配列番号63~68のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、3、2、または1個のアミノ酸相違を有するアミノ酸配列からなる群より選択されている、NBコンストラクト、またはそのようなアミノ酸配列の任意の適切なフラグメントである。本発明のNB剤のうち、上に明示的に列挙したCDRを1つ以上含むNBコンストラクトはとりわけ好ましく、上に明示的に列挙したCDRを2つ以上含むNBコンストラクトはより好ましく、上に明示的に列挙したCDRを3つ含むNBコンストラクトは最も好ましい。とりわけ好ましい、ただし非限定的なCDR配列の組合せを、CDR配列およびフレームワーク配列の好ましい組合せと共に、下記表4この表は、いくつかのただし非限定的な本発明のNBコンストラクト中に存在するCDR配列およびフレームワーク配列を列挙しているに、いくつか挙げる。当業者には明らかであるだろうとおり、同じクローン中に存在するCDR1、CDR2およびCDR3配列の組合せすなわち、表4中で同じ行に記載されているCDR1、CDR2およびCDR3配列、とりわけ配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104に示されているものが、通常は好ましいであろうただし本発明は、その最も広い意味において、それらに限定されず、表4に挙げるCDR配列の他の任意の適切な組合せを含みうる。また、同じクローン中に存在するCDR配列およびフレームワーク配列の組合せすなわち、表4中で同じ行に記載されているCDR配列およびフレームワーク配列、とりわけ配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104に関連して記載されているものが、通常は好ましいであろうただし本発明は、その最も広い意味において、それらに限定されず、表4に挙げるCDR配列とフレームワーク配列の他の任意の適切な組合せ、ならびにそのようなCDR配列と他の適切なフレームワーク配列との組合せを含みうる。ある実施形態では、表4において言及したCDRの組合せを含むNBコンストラクトにおいて、各CDRを、言及したCDRに対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、さらに好ましくは少なくとも99の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるCDRで置き換えることができる。したがって本発明のNBコンストラクトでは、存在するCDR1、CDR2およびCDR3配列の少なくとも1つが、表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列からなる群より適切に選択されるか;表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列の少なくとも一つに対して、少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、さらに好ましくは少なくとも99の配列同一性を有するCDR1、CDR2およびCDR3配列の群から選択され;かつまたは表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列の少なくとも1つに対して、アミノ酸相違を3つ、2つまたは1つだけ有する、それぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列からなる群より選択される。これに関連して、適切に選択されるとは、それぞれ、適宜、CDR1配列が適切なCDR1配列すなわち本明細書において定義するものから選択され、CDR2配列が適切なCDR2配列すなわち本明細書において定義するものから選択され、CDR3配列が適切なCDR3配列すなわち本明細書において定義するものから選択されることを意味する。ある実施形態では、本発明のNBコンストラクトが、本明細書に記載するアフィニティKD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定され、かつまたは表現されたものでDR5に結合するように、CDR配列が選択される。本発明のNBコンストラクトの一実施形態では、少なくとも、存在するCDR3配列が、表4に列挙したCDR3配列からなる群、または表4に列挙したCDR3配列の少なくとも1つに対して、少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、さらに好ましくは少なくとも99の配列同一性を有するCDR3配列の群、およびまたは表4に列挙したCDR3配列の少なくとも1つに対して、3つのアミノ酸相違を有する、または2つのアミノ酸相違を有する、またはアミノ酸相違を1つだけ有するCDR3配列からなる群より、適切に選択される。本発明のNBコンストラクトの一実施形態では、存在するCDR1、CDR2およびCDR3配列のうち少なくとも2つが、表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列からなる群、または表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列の少なくとも1つに対して、少なくとも80、およびまたは少なくとも90、およびまたは少なくとも95、およびまたは少なくとも99の配列同一性を有する、それぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列からなる群、およびまたは表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列の少なくとも1つに対して、3つ、2つまたは1つだけのアミノ酸相違を有するそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列からなる群より、適切に選択される。本発明のNBコンストラクトの一実施形態では、少なくとも、存在するCDR3配列が、表4に列挙したCDR3配列からなる群、または表4に列挙したCDR3配列の少なくとも1つに対して、少なくとも80、およびまたは少なくとも90、およびまたは少なくとも95、およびまたは少なくとも99の配列同一性を有するCDR3配列の群より、適切に選択され;かつ存在するCDR1およびCDR2配列の少なくとも1つが、表4に列挙したそれぞれCDR1およびCDR2配列からなる群、または表4に列挙したそれぞれCDR1およびCDR2配列の少なくとも1つに対して、少なくとも80、およびまたは少なくとも90、およびまたは少なくとも95、およびまたは少なくとも99の配列同一性を有するそれぞれCDR1およびCDR2配列の群、およびまたは表4に列挙したそれぞれCDR1およびCDR2配列の少なくとも1つに対して、3つ、2つ、または1つだけのアミノ酸相違を有するそれぞれCDR1およびCDR2配列からなる群より、適切に選択される。本発明のNBコンストラクトの一実施形態では、存在するCDR1、CDR2およびCDR3配列の3つ全てが、表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列からなる群より、適切に選択される。ある実施形態では、表4に列挙したCDRの組合せすなわち表4において同じコンストラクトについて言及したものが好ましい。したがって、ある態様では、本発明のNBコンストラクト中のあるCDRが、表4において言及したCDR配列であるか、または表4に列挙したCDR配列に対して、少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、さらに好ましくは少なくとも99の配列同一性を有するCDR配列の群、およびまたは表4に列挙したCDR配列に対して、3つ、2つまたは1つだけのアミノ酸相違を有するCDR配列からなる群より適切に選択される場合に、他のCDRの少なくとも一方、好ましくは両方は、表4において同じ組合せに属するすなわち表4において同じ行に挙げられているCDR配列から適切に選択されるか、同じ組合せに属するCDR配列に対して、少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、さらに好ましくは少なくとも99の配列同一性を有するCDR配列の群およびまたは同じ組合せに属するCDR配列に対して、3つ、2つまたは1つだけのアミノ酸相違を有するCDR配列からなる群より、適切に選択される。上記の段落群に示した他の好ましい選択肢は、表4において言及したCDRの組合せにも当てはまる。本発明のNBコンストラクトの一実施形態では、存在するCDR1、CDR2およびCDR3配列が、表4に列挙したそれぞれCDR1、CDR2およびCDR3配列の組合せの1つから、適切に選択される。本発明のNBコンストラクトの非限定的一態様によれば、aCDR1は、1~12アミノ酸残基、通常は2~9アミノ酸残基、例えば5、6または7アミノ酸残基の長さを有し;かつまたはbCDR2は、13~24アミノ酸残基、通常は15~21アミノ酸残基、例えば16および17アミノ酸残基の長さを有し;かつまたはcCDR3は、2~35アミノ酸残基、通常は3~30アミノ酸残基、例えば6~23アミノ酸残基の長さを有する。非限定的一態様において、本発明は、CDR配列が、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つのCDR配列に対して、80を上回る、好ましくは90を上回る、より好ましくは95を上回る、例えば少なくとも99以上の配列同一性を有する、NBコンストラクトに関する。一般に、上記のCDR配列を持つNB剤は、本明細書においてさらに詳しく説明するとおりでありうる。ある実施形態では、NB剤が、やはり本明細書においてさらに詳しく説明するとおりのフレームワーク配列を有する。したがって例えば、本明細書において言及するとおり、そのようなNB剤は、天然に存在する単一ドメイン抗体任意の適切な種に由来するもの、天然に存在するVHH配列すなわちラクダ科の適切な種に由来するものまたは合成もしくは半合成アミノ酸配列またはNB剤、例えば限定するわけではないが、部分ヒト化NBコンストラクトまたはVHH配列、完全ヒト化NBコンストラクトまたはVHH配列、ラクダ化重鎖可変ドメイン配列、ならびに本明細書において言及する技法によって得られたNB剤であることができる。したがって、非限定的一態様において、本発明は、4つのフレームワーク領域それぞれFR1~FR4と3つの相補性決定領域それぞれCDR1~CDR3とからなるヒト化NB剤であって、CDR1~CDR3は本明細書に規定するとおりであり、前記ヒト化NB剤が少なくとも1つのヒト化置換、特にそのフレームワーク配列の少なくとも1つにおける少なくとも1つのヒト化置換を含むものに関する。もう一つの好ましい非限定的な態様において、本発明は、CDR配列が、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つのCDR配列に対して、少なくとも70のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも80のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも90のアミノ酸同一性、例えば95以上のアミノ酸同一性、さらには本質的に100のアミノ酸同一性を有する、NB剤に関する。このアミノ酸同一性の程度は、例えば前記NB剤と配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104の配列の1つ以上との間のアミノ酸同一性の程度を、フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基を無視して、本明細書において説明するように決定することによって、決定することができる。そのようなNB剤は、本明細書においてさらに詳しく説明するとおりであることができる。非限定的一態様において、本発明は、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104からなる群または配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、80を上回る、好ましくは90を上回る、より好ましくは95を上回る、例えば少なくとも99以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を持つNBコンストラクトを含むただしこれに限るわけではないNB剤に関する。本発明のもう一つの非限定的態様は、対応するネイティブ配列と比較して少なくとも1つのヒト化置換、特にそのフレームワーク配列の少なくとも1つにおける少なくとも1つのヒト化置換を含む、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のNBコンストラクトのヒト化またはさらなるヒト化変異体に関する。一価および多価結合ポリペプチド本発明はさらに、DR5に対する、より具体的にはヒトDR5に対する、1つ以上の本発明のポリペプチドを含むか、またはそれらから本質的になり、場合によっては、1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットを含む化合物であって、アポトーシスを強化する能力を有する化合物に関する。ある実施形態において、本発明のいくつかのNB剤は、DR5受容体に対する一価結合ポリペプチド、例えばDR5に向けられる本発明のNB剤を、少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上含むタンパク質である。本明細書において述べるとおり、そのような本発明の多価ポリペプチドでは、各一価結合ポリペプチド、例えばNBコンストラクトは、DR5の同じエピトープに向けられていてもよいし、DR5上の異なるエピトープに向けられていてもよい。そのような本発明のNBポリペプチドの非限定的な例の一部を、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104に示す。一般に、単一結合ポリペプチド例えば本発明のNB剤の単一DR5結合サブユニットを含む、または単一結合ポリペプチドから本質的になる、結合タンパク質またはポリペプチドを、本明細書では、一価タンパク質もしくはポリペプチドまたは一価コンストラクトと呼ぶことにする。2つ以上の結合ポリペプチド例えば少なくとも2つの接合された本発明のNB剤または少なくとも1つの本発明のNB剤と少なくとも1つの他のNB剤またはポリペプチドコンストラクトを含む、またはそれらから本質的になる、タンパク質およびポリペプチドを、本明細書では、多価タンパク質もしくはポリペプチドまたは多価コンストラクトと呼ぶこととし、これらは、対応する本発明の一価結合ポリペプチドと比較して、一定の利点をもたらしうる。そのような多価コンストラクトの特定の非限定的例は、本明細書に記載するとおりである。多価NB剤の具体例には、2つのポリペプチドサブユニットを含む二量体または二価コンストラクト、3つのポリペプチドサブユニットを含む三量体または三価NB剤、4つのポリペプチドサブユニットを含む四量体または四価NB剤、5つのポリペプチドサブユニットを含む五量体または五価NB剤、6つのポリペプチドサブユニットを含む六量体または六価NB剤、またはそのさらなる多量体型変異体が含まれる。非限定的一態様において、本発明の三量体型NB剤は、3つの本発明の一価ポリペプチドサブユニットを含むか、それらから本質的になる。ある実施形態において、三量体型NB剤は、3つの同一の本発明のDR5結合一価ポリペプチドサブユニットを含み、この場合、NB剤は、多価ではあるが単一特異性の三量体である。ある実施形態では、三量体型NB剤が、第1およびまたは第2のDR5結合サブユニットと、場合によってはDR5上または別のターゲット上の異なるエピトープに特異的に結合するサブユニットであるそれぞれ第2または第3のサブユニットとを含むか、それらから本質的になり、例えばこの場合、NB剤は、多価かつ多重特異性の三量体である。非限定的一実施形態では、NB剤が、少なくとも4つの本発明の一価DR5結合ポリペプチドサブユニットを含むか、またはそれらから本質的になる。そのような本発明の四量体型NB剤は、単一特異性であってもよいし、場合により第1のものと同じまたは異なるDR5エピトープおよびまたはDR5以外のターゲットに特異的に結合する追加のサブユニットを接合することによって、多重特異性コンストラクトに変換してもよい。非限定的一実施形態において、NB剤は、少なくとも5つの本発明の一価DR5結合ポリペプチドサブユニットを含むか、またはそれらから本質的になる。そのような本発明の五量体型NB剤は単一特異性であってもよいし、場合により第1のものとは異なるDR5エピトープおよびまたはDR5以外のターゲットに特異的に結合する追加のサブユニットを接合することによって、多重特異性コンストラクトに変換してもよい。非限定的一実施形態において、NB剤は、少なくとも6、8または10個の本発明の一価DR5結合ポリペプチドサブユニットを含むか、またはそれらから本質的になる。そのような本発明の多量体型NB剤は単一特異性であってもよいし、場合により第1のものとは異なるDR5エピトープおよびまたはDR5以外のターゲットに特異的に結合する追加のサブユニットを接合することによって、多重特異性コンストラクトに変換してもよい。ある実施形態において、そのような多量体型NB剤は、単一特異性であるか多重特異性であるかを問わず、本発明の単量体型NB剤を含む、または本発明の単量体型NBから本質的になる、タンパク質またはポリペプチドと比較して、一定の利点をもたらす。ある実施形態において、利点には、DR5、例えばヒトDR5に対するアビディティの大きな改善が含まれるが、これらに限るわけではない。多量体型NB剤のいくつかの具体的な、ただし非限定的な例は、配列番号6~22、27~29、31~33および88のNBコンストラクトである。非限定的一態様において、本発明のポリペプチドは、少なくとも1つの本発明のNB剤と、場合によっては1つ以上のさらなるNB剤と、少なくとも1つの望ましい性質を本発明のNB剤およびまたは結果として生じる融合タンパク質に付与する少なくとも1つの他のアミノ酸配列例えばタンパク質またはポリペプチドとを含むか、またはそれらから本質的になる。ここでも、そのような融合タンパク質は、対応する本発明の一価NB剤と比較して、一定の利点をもたらしうる。そのようなアミノ酸配列およびそのような融合コンストラクトの非限定的な例は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。ある実施形態では、上記の態様の2つ以上を組み合わせて、例えば、2つの本発明のNB剤と2つの他のNB剤とを含み、場合によっては1つ以上の他のアミノ酸配列を含む、三価二重特異性コンストラクトを得ることができる。そのようなコンストラクトのさらなる非限定的な例、ならびに本明細書との関連で特に好ましいいくつかのコンストラクトは、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。上記のコンストラクトにおいて、1つ以上の、DR5に対する結合ポリペプチドおよびまたは他のアミノ酸配列は、1つ以上のリンカー配列を介して、互いに作動可能に連結され、かつまたは互いに適切に連結されうる。そのようなリンカーの適切な、ただし非限定的ないくつかの例は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。ある具体的一態様において、本発明の多価化合物は、少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上の一価結合ポリペプチドすなわちサブユニットを含み、例えばColo205またはJurkat細胞生存アッセイなどにおける測定で100nM未満、好ましくは10nM未満、より好ましくは1nM未満、さらに好ましくは100pM未満、例えば10pM未満のIC50を有する。IC50の決定には、実施例で言及するような他のがん細胞株を使用することもできる。さらにまた、細胞生存アッセイにおいて使用することができる、考えうるがん細胞株には、例えばJurkat、Molt4、Colo205、BxPC3、T24、Panc1、M30、H226、H2122、H2052、およびMiaPaCa2が含まれるが、これらに限るわけではない。ある実施形態では、本発明の多価化合物が、腫瘍細胞株において、非腫瘍細胞株より、少なくとも10倍、好ましくは少なくとも100倍強力であり、Colo205またはJurkat細胞生存アッセイなどの細胞生存アッセイにおいて測定される。本発明の具体的一態様において、本発明のNB剤、または少なくとも1つの本発明のNB剤を含む本発明の化合物、コンストラクトもしくはポリペプチドは、対応する本発明のアミノ酸配列と比較して、増加した半減期を持ちうる。そのようなNB剤、化合物およびポリペプチドのいくつかの非限定的な例は、本明細書におけるさらなる開示に基づいて当業者には明らかになるであろうが、例えば、その半減期が増加するように例えばPEG化によって化学修飾された本発明のNB剤配列またはポリペプチド;血清タンパク質例えば血清アルブミンに結合するための少なくとも1つの追加結合部位を含む本発明のアミノ酸配列;または本発明のNB剤の半減期を増加させる少なくとも1つの部分特に少なくとも1つのアミノ酸配列に連結された少なくとも1つの本発明のNB剤を含む本発明のポリペプチドを含む。そのような半減期延長部分またはアミノ酸配列を含む本発明のポリペプチドの例は、本明細書におけるさらなる開示に基づいて当業者には明らかになるであろうが、例えば、限定するわけではないが、1つ以上の本発明のNB剤が、1つ以上の血清タンパク質もしくはそのフラグメント例えば血清アルブミンまたはその適切なフラグメントまたは血清タンパク質に結合することができる1つ以上の結合ユニット例えば、血清タンパク質、例えば血清アルブミン、IgGなどの血清免疫グロブリン、またはトランスフェリンに結合することができるNB剤、ラクダ科VHHコンストラクトまたは単一ドメイン抗体などに適切に連結されている、ポリペプチド;本発明のNB剤が、Fc部分例えばヒトFcまたはその適切なパーツもしくはフラグメントに連結されている、ポリペプチド;または1つ以上の本発明のNB剤が、血清タンパク質に結合することができる1つ以上の小さいタンパク質またはペプチド例えば限定するわけではないが、WO9101743、WO0145746、WO02076489ならびにAblynxNVによって出願されたWO2006122787、WO2008028977、WO2008043821、WO2008068280およびWO2009127691に記載されているタンパク質およびペプチドに適切に連結されている、ポリペプチドが含まれる。ここでも、当業者には明らかであるだろうとおり、そのようなNB剤は、二重、三重またはそれ以上の多重特異性NB剤コンストラクトが得られるように、1つ以上の追加の基、残基、部分または結合ユニット、例えば1つ以上のさらなるアミノ酸配列、特に1つ以上の追加NB剤すなわちDR5に向けられていないものを含有しうる。一般に、増加した半減期を持つ本発明のNB剤またはそれを含む化合物、コンストラクトまたはポリペプチドは、好ましくは、対応する本発明のアミノ酸配列そのものの半減期よりも、少なくとも15倍、好ましくは少なくとも2倍、例えば少なくとも5倍、例えば少なくとも10倍または20倍以上大きい半減期を有する。例えば、増加した半減期を持つ本発明のNB剤、化合物、コンストラクトまたはポリペプチドは、対応する本発明のアミノ酸配列そのものと比較して、1時間以上、好ましくは2時間以上、より好ましくは6時間以上、例えば12時間以上、さらには24時間、48時間または72時間以上増加した半減期を有しうる。好ましい、ただし非限定的な一態様では、そのような本発明のNB剤、化合物、コンストラクトまたはポリペプチドが、ヒトにおいて、少なくとも約12時間、好ましくは少なくとも24時間、より好ましくは少なくとも48時間、さらに好ましくは少なくとも72時間以上の血清中半減期を示す。例えば、本発明の化合物またはポリペプチドは、少なくとも5日例えば約5~10日、好ましくは少なくとも9日例えば約9~14日、より好ましくは少なくとも約10日例えば約10~15日、または少なくとも約11日例えば約11~16日、より好ましくは少なくとも約12日例えば約12~18日またはそれ以上、または14日以上例えば約14~19日の半減期を有しうる。本発明のもう一つの態様において、本発明のポリペプチドは、結果として生じる本発明のポリペプチドが血液脳関門を横切ることを可能にする1つ以上の例えば2つまたは好ましくは1つのアミノ酸配列に場合によっては1つ以上の適切なリンカー配列によって連結された1つ以上の例えば2つまたは好ましくは1つの本発明のNB剤を含む。特に、結果として生じる本発明のポリペプチドが血液脳関門を横切ることを可能にする前記1つ以上のアミノ酸配列は、1つ以上の例えば2つまたは好ましくは1つのNANOBODY商標、例えばWO02057445に記載されているNANOBODY商標であることができ、それらのうち、FC44WO06040153の配列番号189およびFC5WO06040154の配列番号190は特定例である。ある実施形態では、1つ以上の本発明のNB剤を含むポリペプチドが、次に挙げるようなポリペプチドである:aDR5に、105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDですなわち、105~1012リットルモル以上、好ましくは107~1012リットルモル以上、より好ましくは108~1012リットルモルの会合定数KAで結合し;かつまたはbDR5に、102M1s1~約107M1s1、好ましくは103M1s1~107M1s1、より好ましくは104M1s1~107M1s1、例えば105M1s1~107M1s1のkon速度で結合し;かつまたはcDR5に、1s1t12=069s~106s1複数日のt12を持つほぼ不可逆的な複合体を与える、好ましくは102s1~106s1、より好ましくは103s1~106s1、例えば104s1~106s1のkoff速度で結合する。ある実施形態において、本発明のアミノ酸配列を1つだけ含有するポリペプチドは、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで、DR5に結合するようなポリペプチドである。これに関して、本発明のNB剤を2つ以上含有するポリペプチドが、本発明のアミノ酸配列を1つしか含有しないポリペプチドと比較して、増加したアビディティでDR5に結合しうることは、当業者には明らかであるだろう。本発明のこの好ましい態様による他のポリペプチドは、例えば、配列番号1~22、26~40および87~88のアミノ酸配列の1つ以上に対して、80を上回る、好ましくは90を上回る、より好ましくは95を上回る、例えば少なくとも99またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選択することができ、この場合、前記アミノ酸配列内に含まれるNB剤は、好ましくは、本明細書にさらに規定するとおりである。本発明のNBコンストラクトを作製するための核酸、宿主細胞および方法本発明のもう一つの態様は、本発明のNB剤またはそれを含む本発明のポリペプチドをコードする核酸に関する。ここでも、本発明の核酸に関して本明細書に概説するとおり、そのような核酸は、本明細書に記載するように、遺伝子コンストラクトの形態をとりうる。もう一つの態様において、本発明は、本発明のNB剤およびまたはそれを含む本発明のポリペプチドを発現するまたは発現する能力を有する宿主または宿主細胞、およびまたは本発明の核酸を含有する宿主または宿主細胞に関する。そのような宿主または宿主細胞の好ましい、ただし非限定的ないくつかの例は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。本発明のもう一つの態様は、少なくとも1つの本発明のNB剤、少なくとも1つの本発明のポリペプチドおよびまたは少なくとも1つの本発明の核酸と、場合によってはすなわちその組成物の意図する用途に応じて1つ以上の、そのような組成物の自体公知のさらなる構成要素とを含有する、または含む、製品または組成物に関する。そのような製品または組成物は、例えば医薬組成物本明細書に記載するもの、獣医学用組成物、または診断用の製品もしくは組成物やはり本明細書に記載するものであることができる。そのような製品または組成物の好ましい、ただし非限定的ないくつかの例は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。本発明はさらに、本明細書に記載するNB剤、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、製品および組成物を製造または作製するための方法に関する。そのような方法の好ましい、ただし非限定的ないくつかの例は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。本発明はさらに、本明細書に記載するNB剤、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、製品および組成物の応用および使用、ならびにDR5と関連する疾患および障害を防止およびまたは処置するための方法に関する。特定の非限定的応用および使用は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。本発明の他の態様、実施形態、利点および応用も、本明細書において以下に述べるさらなる説明から明らかになるであろう。一般に、本明細書において使用する用語NB剤は、その最も広い意味において、特別な生物学的供給源または特別な製造方法に限定されない。例えば、以下にさらに詳しく論じるように、本発明のNB剤は一般に、WO08020079の61頁および62頁に言及されている技法1~8のいずれかによって、または他の任意の適切な自体公知の技法によって、得ることができる。NB剤の好ましい一クラスは、DR5に向けられた天然に存在する重鎖抗体のVHHまたはVHドメインに対応する。本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、VHH配列は、一般に、自体公知の任意の適切な技法を使って、ラクダ科の種をDR5で適切にすなわちDR5に向けられた免疫応答およびまたは重鎖抗体が生じるように免疫し、前記ラクダ科動物から適切な生物学的サンプル例えば血液サンプル、血清サンプルまたはB細胞のサンプルを取得し、前記サンプルから出発してDR5に向けられたVHH配列を作製することによって、作製または取得することができる。そのような技法は当業者には明らかであるだろうし、かつまたは本明細書でも、さらに説明する。あるいは、そのようなDR5に対する天然に存在するVHHドメインは、ラクダ科VHH配列のナイーブライブラリーから、例えば自体公知の1つ以上のスクリーニング技法を使用し、DR5またはその少なくとも1つのパーツ、フラグメント、抗原性決定基もしくはエピトープを使ってそのようなライブラリーをスクリーニングすることによって得ることもできる。そのようなライブラリーおよび技法は、例えばWO9937681、WO0190190、WO03025020およびWO03035694に記述されている。あるいは、ナイーブVHHライブラリーに由来する改良された合成または半合成ライブラリー、例えばWO0043507に記載されているようにランダム変異導入およびまたはCDRシャフリングなどの技法によってナイーブVHHライブラリーから得られるVHHライブラリーなどを使用することもできる。したがって、もう一つの態様において、本発明は、DR5に向けられたNB剤を作製するための方法に関する。ある態様において、前記方法は、少なくとも、aNB剤配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;bDR5に結合することができかつまたはDR5に対してアフィニティを有することができるNB剤配列を求めて、前記NB剤配列のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ;およびcDR5に結合することができかつまたはDR5に対してアフィニティを有することができるアミノ酸配列を単離するステップを含む。そのような方法において、NB剤配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、例えば、NB剤配列のナイーブセット、コレクションまたはライブラリー;NB剤配列の合成または半合成セット、コレクションまたはライブラリー;およびまたは親和性成熟に付されたNB剤配列のセット、コレクションまたはライブラリーであることができる。この方法の特定の一態様において、NB剤配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、DR5またはそれに基づくもしくはそこから誘導された適切な抗原性決定基、例えばその抗原性パーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで、適切に免疫されたラクダ科の種に由来する、NB剤配列の免疫セット、コレクションまたはライブラリー、特にVHH配列の免疫セット、コレクションまたはライブラリーであることができる。ある特定の態様において、該抗原性決定基は、細胞外のパーツ、領域、ドメイン、ループまたは他の細胞外エピトープであることができる。上記の方法では、スクリーニングが容易になるように、VHH配列のセット、コレクションまたはライブラリーを、ファージ、ファージミド、リボソームまたは適切な微生物例えば酵母上にディスプレイすることができる。配列のセット、コレクションまたはライブラリーをディスプレイしスクリーニングするための適切な方法、技法および宿主生物は、例えば本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者には明らかであるだろう。WO03054016およびNatureBiotechnology2311051116のHoogenboomによる総説も参照されたい。ある実施形態において、VHH配列を作製するための方法は、少なくとも、a免疫グロブリン配列を発現するラクダ科の種に由来する細胞のコレクションまたはサンプルを用意するステップ;b1DR5に結合することができかつまたはDR5に対してアフィニティを有することができる免疫グロブリン配列を発現する細胞と2重鎖抗体を発現する細胞とを求めて、前記細胞のコレクションまたはサンプルをスクリーニングするステップ、ここで、サブステップ1および2は、DR5に結合することができかつまたはDR5に対してアフィニティを有することができる重鎖抗体を発現する細胞が少なくとも1つは得られるように、本質的に単一のスクリーニングステップとして行うか、2つの別々のスクリーニングステップとして任意の適切な順序で行うことができる;およびc1前記細胞から前記重鎖抗対中に存在するVHH配列を単離するか、または2前記細胞から、前記重鎖抗体中に存在するVHH配列をコードする核酸配列を単離した後、前記VHHドメインを発現させるステップを含む。この態様による方法において、細胞のコレクションまたはサンプルは、例えばB細胞のコレクションまたはサンプルであることができる。また、この方法において、細胞のサンプルは、DR5またはそれに基づくもしくはそこから誘導された適切な抗原性決定基、例えばその抗原性パーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで、適切に免疫されたラクダ科動物に由来するものであることができる。ある特定の態様では、前記抗原性決定基が、細胞外のパーツ、領域、ドメイン、ループまたは他の細胞外エピトープであることができる。上記の方法は、当業者には明らかであるだろうとおり、任意の適切な方法で行うことができる。例えばEP0542810、WO0519824、WO04051268およびWO04106377を参照されたい。ステップbのスクリーニングは、好ましくは、FACSなどのフローサイトメトリー技法を使って行われる。これについては、例えばLiebyらBloodVol97No123820を参照されたい。例えば、AblynxNVによる国際出願WO06079372に記載されている、いわゆるNanoclone商標技法を参照されたい。もう一つの態様において、DR5に向けられたアミノ酸配列を作製するための方法は、少なくとも、a重鎖抗体またはVHH配列をコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーを用意するステップ;bDR5に結合することができかつまたはDR5に対してアフィニティを有することができる重鎖抗体またはVHH配列をコードする核酸配列を求めて、前記核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーをスクリーニングするステップ;およびc前記核酸配列を単離した後、それぞれ前記重鎖抗体中に存在するVHH配列を発現させるか、前記NBコンストラクト配列を発現させるステップを含みうる。そのような方法において、重鎖抗体またはVHH配列をコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、例えば、重鎖抗体またはVHH配列のナイーブセット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリー;VHH配列の合成または半合成セット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリー;およびまたは親和性成熟に付されたVHH配列のセット、コレクションまたはライブラリーをコードする核酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーであることができる。この方法の一実施形態において、アミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、DR5またはそれに基づくもしくはそこから誘導された適切な抗原性決定基、例えばその抗原性パーツ、フラグメント、領域、ドメイン、ループまたは他のエピトープで適切に免疫されたラクダ科動物に由来する重鎖抗体またはVHH配列をコードする核酸配列の免疫セット、コレクションまたはライブラリーであることができる。ある態様において、前記抗原性決定基は、細胞外のパーツ、領域、ドメイン、ループまたは他の細胞外エピトープであることができる。上記の方法では、スクリーニングが容易になるように、ヌクレオチド配列のセット、コレクションまたはライブラリーを、ファージ、ファージミド、リボソームまたは適切な微生物例えば酵母上にディスプレイすることができる。アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列のセット、コレクションまたはライブラリーをディスプレイしスクリーニングするための適切な方法、技法および宿主生物は、例えば本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者には明らかであるだろう。WO03054016およびNatureBiotechnology2311051116のHoogenboomによる総説も参照されたい。ある実施形態では、本明細書に記載する方法のスクリーニングステップを、選択ステップとして行うこともできる。したがって、本明細書において使用されるスクリーニングという用語は、選択、スクリーニング、または選択およびもしくはスクリーニング技法の任意の適切な組合せを含むことができる。また、配列のセット、コレクションまたはライブラリーを使用する場合、それは、任意の適切な数の配列、例えば1、2、3または約5、10、50、100、500、1000、5000、104、105、106、107、108個またはそれ以上の配列を含有しうる。ある実施形態では、上記アミノ酸配列のセット、コレクションまたはライブラリー中の配列の1つ以上または全部を、コンピュータモデリング技法または生物静力学biostaticsもしくはデータマイニング技法などの合理的または半実験的アプローチによって取得または規定することができる。さらにまた、そのようなセット、コレクションまたはライブラリーは、互いに変異体例えば設計された点変異またはランダム化された位置を持つものである1つ、2つまたはそれ以上の配列を含むことができ、天然に多様化された配列の多様なセット例えば免疫ライブラリーまたは多様な配列の他の任意の供給源例えばHoogenboomらNatBiotechnol2311052005およびBinzらNatBiotechnol2005231247に記載されているものに由来する複数の配列を含むことができる。そのような配列のセット、コレクションまたはライブラリーは、ファージ粒子、リボソーム、細菌、酵母細胞、哺乳動物細胞の表面にディスプレイすることができ、これらの担体内でアミノ酸配列をコードするヌクレオチドに連結することができる。これにより、そのようなセット、コレクションまたはライブラリーは、本発明の所望のアミノ酸配列を単離するための選択操作を受けられるようになる。より一般的には、配列が適切な宿主または宿主細胞上にディスプレイされる場合は、まず最初に、前記宿主または宿主細胞から所望の配列をコードするヌクレオチド配列を単離し、次に、前記ヌクレオチド配列を適切な宿主生物中で適切に発現させることによって、所望の配列を得ることも可能であるまたそうすることが通例である。ここでも、これは、当業者には明らかであるだろうとおり、自体公知の任意の適切な方法で行うことができる。DR5に向けられたNB剤配列のVHH配列、VH配列、または他の何らかの変異体を得るためのさらにもう一つの技法では、重鎖抗体を発現する能力を有するトランスジェニック哺乳動物を適切にすなわち、DR5に向けられた免疫応答およびまたは重鎖抗体が生じるように免疫し、前記トランスジェニック哺乳動物から、前記配列をコードする核酸配列を含有する適切な生物学的サンプル例えば血液サンプル、血清サンプルまたはB細胞のサンプルを採取し、次に、自体公知の任意の適切な方法例えば本明細書に記載する方法のいずれか、またはハイブリドーマ技法を使って、前記サンプルから出発してDR5に向けられたNB剤配列を作製する。例えば、この目的には、WO02085945、WO04049794およびWO06008548ならびにJanssensらProcNatlAcadSciUSA2006Oct10103151305に記載の重鎖抗体発現マウスとさらなる方法とを使用することができる。例えば、そのような重鎖抗体発現マウスは、任意の適切な単一可変ドメイン、例えば天然供給源由来の単一可変ドメイン例えばヒト単一可変ドメイン、ラクダ科単一可変ドメインまたはサメ単一可変ドメイン、ならびに合成または半合成単一可変ドメインを持つ重鎖抗体を発現することができる。ある実施形態において、本発明は、上記の方法によって得られるNB剤配列、あるいは上記の方法の一つと、少なくとも、前記NB剤配列のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を決定するステップ、および前記NB剤配列を自体公知の方法で例えば適切な細胞または宿主生物における発現によって、または化学合成によって発現させまたは合成するステップとを含む方法によって得られるNB剤配列に関する。ある実施形態において、本発明は、天然に存在するラマVHHドメインのアミノ酸配列に対応するが、例えば上述のように、また例えばWO08020079の63頁にさらに詳しく説明されているように、そしてまたそこに言及されている技法を使って、ヒト化されている、すなわち、前記天然に存在するVHH配列のアミノ酸配列中の特にフレームワーク配列中の、ただし場合によっては1つ以上のCDR中にあってもよい1つ以上のアミノ酸残基を、ヒトから得られる通常の4本鎖抗体のVHドメイン中の対応する位置に存在するアミノ酸残基の1つ以上で置き換えることによってヒト化されているアミノ酸配列を持つラクダ科VHHコンストラクトを含む、NB剤のクラスを提供する。ある実施形態において、本発明は、天然に存在するVHドメインのアミノ酸配列に対応するが、例えばWO08020079の63頁にさらに詳しく説明されているように、そしてまたそこに言及されている技法を使って、ラクダ化されている、すなわち、通常の4本鎖抗体からの天然に存在するVHドメインのアミノ酸配列中の1つ以上のアミノ酸残基を、重鎖抗体のVHHドメイン中の対応する位置に存在するアミノ酸残基の1つ以上で置き換えることによってラクダ化されているアミノ酸配列を含む、NB剤のクラスを提供する。天然に存在するVH配列またはVHH配列から出発して本発明のNB剤ポリペプチドおよびまたはそれをコードする核酸を含むを得るための他の適切な方法および技法は、当業者には明らかであり、これには、例えばWO08020079の64頁に言及されている技法を含めることができる。本明細書において述べるように、NB剤は、特に、1つ以上のホールマーク残基WO2008020079の65~98頁に記載されているものが、フレームワーク配列の1つ以上に存在することを特徴としうる。ある実施形態において、NB剤は、例えばVHH配列であるか、ヒト化されたまたはさらにヒト化されたNBコンストラクトであることができる。NB剤配列がVHH配列である場合、それらは、適切にヒト化することができる。NB剤が部分的にヒト化されたNBコンストラクトである場合、それらは、場合により、さらに適切にヒト化することができる。上記のNB剤において、さらなるホールマーク残基の1つ以上は、好ましくは、記載するとおりである例えば、それらがVHH配列または部分的もしくは完全にヒト化されたNBコンストラクトである場合。ここでのNB剤は、例えばVHH配列であるか、ヒト化またはヒューマニア化されていてもよい。上記のNB剤配列がVHH配列である場合、それらは、本明細書において述べるように、適切にヒト化することができる。NB剤が部分的にヒト化されている場合、それらは、本明細書で述べるように、場合により、さらに適切にヒト化することができる。ヒト化の非限定的な例示的方法の一つを、実施例に記載するが、当技術分野において知られている他の方法も考えることができる。上記NB剤の一実施形態では、さらなるホールマーク残基の1つ以上が、本明細書に記載するとおりである例えば、それらがラクダ科VHH配列または部分ヒト化もしくは完全ヒト化VHHコンストラクトである場合。非限定的一態様において、本発明は、CDR配列が、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つのCDR配列に対して、少なくとも70のアミノ酸同一性、好ましくは少なくとも80のアミノ酸同一性、より好ましくは少なくとも90のアミノ酸同一性、例えば少なくとも95またはそれ以上のアミノ酸同一性、さらには本質的に100のアミノ酸同一性を有する、上述のNB剤に関する。このアミノ酸同一性の程度は、例えば、前記NB剤と配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104の配列の1つ以上との間のアミノ酸同一性の程度を、フレームワーク領域を形成するアミノ酸残基は無視して、本明細書に記載する方法で決定することによって、決定することができる。そのようなNB剤は、本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、修飾することができる。本明細書において既に述べたように、もう一つの好ましい、ただし非限定的な本発明の態様は、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104からなる群、または配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、80を上回る、好ましくは90を上回る、より好ましくは95を上回る、例えば少なくとも99またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を持つNB剤に関する。上記NB剤の一定の実施形態では、iアミノ酸置換それが本明細書に定義するヒト化置換でない場合はいずれも、好ましくは、配列番号1~22、26~40および87~88の対応するアミノ酸配列と比較して、保存的アミノ酸置換であり;かつまたはiiそのアミノ酸配列は、配列番号1~22、26~40および87~88の対応するアミノ酸配列と比較して、好ましくは、アミノ酸置換だけを含有するか、さもなければ、好ましくは5個以下、好ましくは3個以下、より好ましくは1個または2個だけのアミノ酸欠失または挿入を含有し;かつまたはiiiCDRは、例えば配列番号1~22、26~40および87~88の対応するアミノ酸配列のCDRから出発して、親和性成熟によって誘導されるCDRであることができる。好ましくは、本発明のNB剤中のCDR配列およびFR配列は、本発明のNB剤およびそれを含むポリペプチドが、aDR5、例えばヒトDR5に、105~1012モルリットル以下、好ましくは107~1012モルリットル以下、より好ましくは108~1012モルリットルの解離定数KDですなわち、105~1012リットルモル以上、好ましくは107~1012リットルモル以上、より好ましくは108~1012リットルモルの会合定数KAで結合し;かつまたはbDR5、例えばヒトDR5に、102M1s1~約107M1s1、好ましくは103M1s1~107M1s1、より好ましくは104M1s1~107M1s1、例えば105M1s1~107M1s1のkon速度で結合し;かつまたはcDR5、例えばヒトDR5に、1s1t12=069s~106s1複数日のt12を持つほぼ不可逆的な複合体を与える、好ましくは102s1~106s1、より好ましくは103s1~106s1、例えば104s1~106s1のkoff速度で結合するようなものである。ある実施形態において、本発明のNB剤中に存在するCDR配列およびFR配列は、本発明のNB剤がDR5、例えばヒトDR5に、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のアフィニティで結合するようなものである。本発明の非限定的一態様において、NB剤は、本明細書に記載するとおりでありうるが、天然に存在するヒトVHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、特にDP47の対応するフレームワーク領域と比較して、フレームワーク領域の少なくとも1つに少なくとも1つのアミノ酸相違を有するものとする。より具体的には、本発明の非限定的一態様によれば、NB剤は、本明細書に記載するとおりでありうるが、天然に存在するヒトVHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、特にDP47の対応するフレームワーク領域と比較して、ホールマーク残基位置108、103およびまたは45にあるものを含むの少なくとも1つに少なくとも1つのアミノ酸相違を有するものとする。通常、NB剤は、天然に存在するVHドメインとの少なくとも1つの上記アミノ酸相違を、FR2およびまたはFR4の少なくとも1つに、そして特にFR2およびまたはFR4中のホールマーク残基ここでも位置108、103およびまたは45にあるものを含むの少なくとも1つに、有するであろう。ある実施形態において、本発明のヒト化NB剤は、本明細書に記載するとおりでありうるが、天然に存在するVHHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、フレームワーク領域の少なくとも1つに少なくとも1つのアミノ酸相違を有するものとする。より具体的に述べると、本発明の非限定的一態様によれば、ヒト化NB剤は本明細書に記載するとおりでありうるが、天然に存在するVHHドメインの対応するフレームワーク領域と比較して、ホールマーク残基位置108、103およびまたは45にあるものを含むの少なくとも1つに、少なくとも1つのアミノ酸相違を有するものとする。通常、ヒト化NB剤は、天然に存在するVHHドメインとの少なくとも1つのそのようなアミノ酸相違を、FR2およびまたはFR4の少なくとも1つに、そして特にFR2およびまたはFR4中のホールマーク残基ここでも、位置108、103およびまたは45にあるものを含む少なくとも1つに、有するであろう。本明細書の開示から明らかであるだろうとおり、本明細書に記載する本発明のNB剤の天然または合成類似体、変種、変異体、対立遺伝子、ホモログおよびオルソログ本明細書では類似体と総称する、特に配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104ならびに配列番号96~99のNBコンストラクトの類似体は、本発明の範囲に含まれる。したがって、本発明の一態様によれば、用語本発明のNB剤および用語本発明のNBコンストラクトは、その最も広い意味において、そのような類似体をも包含する。一般に、そのような類似体では、本明細書に記載する本発明のNB剤と比較して、1つ以上のアミノ酸残基が、置き換えられ、削除され、かつまたは付加されていてもよい。そのような置換、挿入または欠失は、フレームワーク領域の1つ以上およびまたはCDRの1つ以上において行うことができる。そのような置換、挿入または欠失がフレームワーク領域の1つ以上において行われる場合、それらは、ホールマーク残基の1つ以上およびまたはフレームワーク残基中の他の位置の1つ以上において行うことができるが、ホールマーク残基における置換、挿入または欠失は、一般的には、それらが本明細書に記載する適切なヒト化置換でない限りあまり好ましくない。非限定的な例として、置換は例えば保存的置換本明細書において記載するものであることができ、かつまたはアミノ酸残基を、別のVHHドメイン中の同じ位置に天然に存在する別のアミノ酸残基で置き換えてもよいそのような置換の非限定的な例については、例えばWO2008020079を参照されたいが、本発明は一般にそれらに限定されるわけではない。したがって、本発明のNB剤の性質を改良するか、本発明のNB剤の望ましい性質または望ましい性質のバランスまたは組合せを損ないすぎないすなわちNB剤がもはやその意図する用途に適さなくなるほどには損なわないような任意の1つ以上の置換、欠失もしくは挿入、またはそれらの任意の組合せが、本発明の範囲に包含される。当業者は一般に、本明細書の開示に基づいて、また場合によっては、わずかな日常的実験これは、例えば、限られた数の考えうる置換を導入し、それらが、その結果得られるNB剤の性質に及ぼす影響を決定することなどを伴いうるにより、適切な置換、欠失もしくは挿入、またはそれらの適切な組合せを決定し、選択することができるであろう。ある態様では、当業者であれば可能であるだろうように、NB剤すなわち本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを発現させるために使用する宿主生物に応じて、そのような欠失およびまたは置換を、翻訳後修飾のための1つ以上の部位例えば1つ以上のグリコシル化部位が除去されるように設計することができる。あるいは、置換または挿入は、官能基本明細書において記載するものを、例えば部位特異的PEG化やはり本明細書において記載するものが可能になるように、取り付けるための部位が一つ以上導入されるように設計することもできる。考えうるアミノ酸置換に関してWO2008020079に記載されているとおり、また上述のとおり、フレームワーク領域内のいくつかのアミノ酸残基は、他の残基より保存されている。ある態様において、置換、欠失または挿入はいずれも、好ましくは、保存度の低い位置で行われるが、本発明は、その最も広い意味では、それらに限定されるわけではない。非限定的一態様では、アミノ酸置換は、アミノ酸の欠失または挿入よりも好ましい。非限定的一態様において、類似体は、本発明のNB剤について本明細書に記載するようなアフィニティ本明細書においてさらに詳しく説明するように、KD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定され、かつまたは表現されたもので、DR5に結合することができるようなものである。非限定的一態様において、類似体は、本明細書に記載するNB剤の好ましい性質を維持しているようなものである。ある実施形態において、類似体は、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のNBコンストラクトの1つに対して、少なくとも70、好ましくは少なくとも80、より好ましくは少なくとも90、例えば少なくとも95もしくは99またはそれ以上の配列同一性度を有し、かつまたは、好ましくは、多くて20個、好ましくは多くて10個、さらに好ましくは多くて5個、例えば4、3、2または1個だけのアミノ酸相違を有する。非限定的一態様において、類似体のフレームワーク配列およびCDRは、a位置108にQを有し;かつまたはb位置45に荷電アミノ酸またはシステイン残基を有し、そして好ましくは位置44にEを有し、より好ましくは位置44にEと位置45にRとを有し;かつまたはc位置103にP、RまたはSを有するであろう。非限定的一態様において、本発明のNB剤の類似体の一クラスは、ヒト化されたすなわち、天然に存在する本発明のNB剤の配列と比較してヒト化されたNB剤を含む。本明細書において言及する背景技術において述べられているように、そのようなヒト化は、一般に、天然に存在するVHHの配列中の1つ以上のアミノ酸残基を、ヒトVHドメイン例えばヒトVH3ドメイン中の同じ位置に見いだされるアミノ酸残基で置き換えることを伴う。考えうるヒト化置換またはヒト化置換の組合せの例は、例えば本明細書の表から、本明細書において言及する背景技術において述べられている考えうるヒト化置換から、およびまたはNB剤の配列と天然に存在するヒトVHドメインの配列との比較から、当業者には明らかであるだろう。非限定的一態様において、ヒト化置換は、結果として得られるヒト化NB剤が本明細書に記載するNB剤の好ましい性質を依然として保っているように、そしてさらに、それらが上記の段落群において類似体について説明したとおりであるように、選択される。当業者は一般に、本明細書の開示に基づいて、また場合によっては、わずかな日常的実験これは、例えば、限られた数の考えうるヒト化置換を導入し、それらが、その結果得られるNB剤の性質に及ぼす影響を決定することなどを伴いうるにより、適切なヒト化置換またはヒト化置換の適切な組み合わせを決定し、選択することができるであろう。非限定的一態様において、ヒト化の結果として、本発明のNB剤は、本明細書に記載する本発明のNB剤の好ましい性質は依然として保ったまま、より一層ヒト様になりうる。結果として、そのようなヒト化NB剤は、対応する天然に存在するVHHドメインと比較して、免疫原性の低下などといったいくつかの利点を有しうる。ここでも、本明細書の開示に基づいて、また場合によっては、わずかな日常的実験の後に、当業者は、一方ではヒト化置換によって得られる好ましい性質と、他方では天然に存在するVHHドメインの好ましい性質との間の、望ましいまたは適切なバランスを最適化し、または達成するような、ヒト化置換またはヒト化置換の適切な組合せを選択することができるであろう。本発明のNB剤は、任意のフレームワーク残基において、例えば1つ以上のホールマーク残基において、もしくは1つ以上の他のフレームワーク残基すなわち非ホールマーク残基において、またはそれらの任意の適切な組合せにおいて、適切にヒト化することができる。PRS103グループまたはKEREグループのNB剤の好ましいヒト化置換の一つは、Q108からL108への置換である。GLEWクラスのNB剤も、他のホールマーク残基の少なくとも1つがラクダ科ラクダ化置換を含有するのであれば、Q108からL108への置換によってヒト化することができる。例えば、本明細書において述べるように、ヒト化NB剤の特に好ましい一クラスは、位置44~47にGLEWまたはGLEW様配列、位置103にP、RまたはS特にR、そして位置108にLを有する。ヒト化および他の類似体、ならびにそれをコードする核酸配列は、例えばWO08020079の103頁および104頁に挙げられている技法の1つ以上を使うなどして、自体公知の任意の方法で提供することができる。非限定的一態様において、本発明のNB剤の類似体の一クラスは、ヒト化されたすなわち天然に存在する本発明のNB剤の配列と比較してヒト化されたNB剤を含む。本明細書において言及する背景技術において述べられているように、そのようなヒト化は、一般に、天然に存在するVHHの配列中の1つ以上のアミノ酸残基を、ヒトVHドメイン例えばヒトVH3ドメイン中の同じ位置に見いだされるアミノ酸残基で置き換えることを伴う。考えうるヒト化置換またはヒト化置換の組合せの例は、例えば本明細書の表から、本明細書において言及する背景技術において述べられている考えうるヒト化置換から、およびまたはNB剤の配列と天然に存在するヒトVHドメインの配列との比較から、当業者には明らかであるだろう。非限定的一態様において、ヒト化置換は、結果として得られるヒト化NB剤が本明細書に記載するNB剤の好ましい性質を依然として保っているように、より好ましくは、それらが上記の段落群において類似体について説明したとおりであるように、選択される。当業者は一般に、本明細書の開示に基づいて、また場合によっては、わずかな日常的実験これは、例えば、限られた数の考えうるヒト化置換を導入し、それらが、その結果得られるNB剤の性質に及ぼす影響を決定することなどを伴いうるにより、適切なヒト化置換またはヒト化置換の適切な組み合わせを決定し、選択することができるであろう。一般的には、ヒト化の結果として、本発明のNB剤は、本明細書に記載する本発明のNB剤の好ましい性質は依然として保ったまま、より一層ヒト様になりうる。結果として、そのようなヒト化NB剤は、対応する天然に存在するVHHドメインと比較して、免疫原性の低下などといったいくつかの利点を有しうる。ここでも、本明細書の開示に基づいて、また場合によっては、わずかな日常的実験の後に、当業者は、一方ではヒト化置換によって得られる好ましい性質と、他方では天然に存在するVHHドメインの好ましい性質との間の、望ましいまたは適切なバランスを最適化し、または達成するような、ヒト化置換またはヒト化置換の適切な組合せを選択することができるであろう。本発明のNB剤は、任意のフレームワーク残基において、例えば1つ以上のホールマーク残基WO2008020079に定義されているものにおいて、もしくは1つ以上の他のフレームワーク残基すなわち非ホールマーク残基において、またはそれらの任意の適切な組合せにおいて、適切にヒト化することができる。ヒト化および他の類似体、ならびにそれをコードする核酸配列は、自体公知の任意の方法で提供することができる。例えば類似体は、天然に存在するVHHドメインをコードする核酸を用意し、置換しようとする1つ以上のアミノ酸残基のコドンを、対応する所望のアミノ酸残基のコドンに例えば部位特異的変異誘発によって、または適切なミスマッチプライマーを使ったPCRによって変化させ、そのようにして得られた核酸ヌクレオチド配列を適切な宿主または発現系で発現させ、場合によっては、例えば本明細書においてさらに詳しく説明するとおり本質的に単離された形態にある前記類似体を得るために、そのようにして得られた類似体を単離しかつ/または精製することによって得ることができる。これは、一般的には、自体公知の方法および技法を使って行うことができ、それらは、例えば本明細書において言及する参考書および参考文献、本明細書において言及する背景技術、および/または本明細書におけるさらなる説明から、当業者には明らかであるだろう。あるいは、所望の類似体をコードする核酸を、自体公知の方法で例えば所定のアミノ酸配列を持つ核酸配列を合成するための自動装置を使うなどして合成することもでき、次にそれを本明細書に記載するように発現させることもできる。さらにもう一つの技法は、それぞれが所望の類似体のパーツをコードする1つ以上の天然に存在する配列および/または合成核酸配列を組合せ、次にその組み合わされた核酸配列を本明細書において説明するように発現させることをも伴いうる。また、自体公知であるペプチド合成のための技法、例えば本明細書において言及する技法などを用いる関連アミノ酸配列の化学合成を使って、類似体を得ることもできる。これに関連して、ヒトVH配列すなわち、アミノ酸配列または対応するヌクレオチド配列から出発して、例えばDP47、DP51またはDP29などのヒトVH3配列から出発して、すなわち、本発明のNB剤の配列が得られるように、かつ/またはそのようにして得られる配列にNB剤の好ましい性質が付与されるように、1つ以上のラクダ化置換を導入することによってすなわち、前記ヒトVHドメイン中のアミノ酸配列における1つ以上のアミノ酸残基を、VHHドメイン中の対応する位置に見いだされるアミノ酸残基に変化させることによって、本発明のNB剤その類似体を含むを設計し、かつ/または製造できることも、当業者には明らかであるだろう。ここでも、これは、一般に、ヒトVHドメインのアミノ酸配列およびまたはヌクレオチド配列を出発点として使用し、前記段落で言及したさまざまな方法および技法を使って行うことができる。上述のとおり、ヒトVH配列すなわち、アミノ酸配列または対応するヌクレオチド配列から出発して、例えばDP47、DP51またはDP29などのヒトVH3配列から出発して、すなわち、本発明のNB剤の配列が得られるように、かつ/またはそのようにして得られる配列にNB剤の好ましい性質が付与されるように、1つ以上のラクダ化置換を導入することによってすなわち、前記ヒトVHドメイン中のアミノ酸配列における1つ以上のアミノ酸残基を、VHHドメイン中の対応する位置に見いだされるアミノ酸残基に変化させることによって、本発明のNB剤その類似体を含むを設計し、かつ/または製造できることは、当業者には明らかであるだろう。ここでも、これは、一般に、ヒトVHドメインのアミノ酸配列およびまたはヌクレオチド配列を出発点として使用し、前記段落で言及したさまざまな方法および技法を使って行うことができる。いくつかの非限定的ラクダ化置換はWO2008020079に由来することができる。ホールマーク残基の1つ以上におけるラクダ化置換が、一般的には、他のアミノ酸位置の1つ以上における置換よりも、望ましい性質に対して大きな影響を有するであろうことは、明らかであるだろうが、それらはどちらも、そしてまたそれらの任意の適切な組合せも、本発明の範囲に包含される。例えば、望ましい性質の少なくとも一部を前もって付与する1つ以上のラクダ化置換を導入し、次に前記性質をさらに改善し、かつまたはさらなる好ましい性質を付与するさらなるラクダ化置換を導入することができる。ここでも、当業者は一般に、本明細書の開示に基づいて、また場合によっては、わずかな日常的実験これは、例えば、限られた数の考えうるラクダ化置換を導入し、NB剤の好ましい性質が得られるか、または改善されるかすなわち、元のVHドメインと比較して改善されるかを決定することなどを伴いうるにより、適切なラクダ化置換、またはラクダ化置換の適切な組合せを決定し、選択することができるであろう。非限定的一態様において、そのようなラクダ化置換は、結果として生じるアミノ酸配列が、少なくともa位置108にQを含有し;かつまたはb位置45に荷電アミノ酸またはシステイン残基、そして好ましくは位置44にEも含有し、より好ましくは位置44にEと位置45にRとを含有し;かつまたはc位置103にP、RまたはSを含有し、場合によっては、1つ以上のさらなるラクダ化置換を含有するようなものである。非限定的一態様において、ラクダ化置換は、本発明のNB剤およびまたはその類似体、例えばヒト化類似体、およびまたは好ましくは前記段落群に記載した類似体をもたらすようなものである。本明細書における開示からも明らかであるだろうとおり、本明細書に記載する本発明のNB剤のパーツもしくはフラグメントまたは2つ以上のパーツもしくはフラグメントの組合せ、特に配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104ならびに配列番号96~99のNB剤のパーツもしくはフラグメントを使用することも、本発明の範囲に包含される。したがって、本発明の一態様によれば、本発明のNB剤という用語は、その最も広い意味において、そのようなパーツまたはフラグメントも包含する。一般に、本発明のNB剤その類似体を含むのそのようなパーツまたはフラグメントは、本発明の対応する完全長NB剤またはその類似体と比較して、N末端にあるアミノ酸残基の1つ以上、C末端にある1つ以上のアミノ酸残基、1つ以上の連続する内部アミノ酸残基、またはそれらの任意の組合せが欠失およびまたは除去されているアミノ酸配列を有する。パーツまたはフラグメントは、好ましくは、DR5、例えばヒトDR5に、本発明のNB剤について本明細書に記載するようなアフィニティ本明細書においてさらに詳しく説明するとおり、KD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定されかつまたは表現されたもので結合することができるようなものである。任意のパーツまたはフラグメントは、好ましくは、本発明の対応する完全長NB剤のアミノ酸配列のうち、少なくとも10個の連続するアミノ酸残基、好ましくは少なくとも20個の連続するアミノ酸残基、より好ましくは少なくとも30個の連続するアミノ酸残基、例えば少なくとも40個の連続するアミノ酸残基を含むようなものである。また、任意のパーツまたはフラグメントは、好ましくは、CDR1、CDR2およびまたはCDR3の少なくとも1つ、または少なくともその一部特に少なくともCDR3または少なくともその一部を含むようなものである。より好ましくは、任意のパーツまたはフラグメントは、CDRの少なくとも1つ好ましくは少なくともCDR3またはその一部と、少なくとも1つの他のCDRすなわちCDR1またはCDR2または少なくともその一部とを、好ましくは適切なフレームワーク配列または少なくともその一部でつながれた状態で含むようなものである。より好ましくは、任意のパーツまたはフラグメントは、CDRの少なくとも1つ好ましくは少なくともCDR3またはその一部と、残り2つのCDRの少なくとも一部とを、ここでも好ましくは、適切なフレームワーク配列または少なくともその一部でつながれた状態で含むようなものである。もう一つの特に好ましい、ただし非限定的な態様によれば、そのようなパーツまたはフラグメントは、本発明の対応する完全長NB剤の少なくともCDR3、例えばFR3、CDR3およびFR4を含み、すなわち、例えば国際出願WO03050531Lastersらに記載されているようなものである。本明細書において既に述べたように、2つ以上のそのようなパーツまたはフラグメントすなわち、同じまたは異なる本発明のNB剤に由来するものを組み合わせて、本発明のNB剤の類似体を得るか、かつまたは本発明のNB剤のさらなるパーツまたはフラグメントを得ることも可能である。例えば、本発明のNB剤の1つ以上のパーツまたはフラグメントを、ヒトVHドメインの1つ以上のパーツまたはフラグメントと組み合わせることもできる。ある態様によれば、パーツまたはフラグメントは、配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のNB剤に対して、また配列番号96~99に対して、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、およびまたは少なくとも90、95もしくは99またはそれ以上の配列同一性度を有する。パーツおよびフラグメント、ならびにそれをコードする核酸配列は、自体公知の任意の方法で提供し、場合によっては組み合わせることができる。例えば、そのようなパーツまたはフラグメントは、本発明の完全長NB剤をコードする核酸に停止コドンを挿入し、次にそのようにして得た核酸を自体公知の方法で例えば本明細書において説明するように発現させることによって得ることができる。あるいは、そのようなパーツまたはフラグメントをコードする核酸は、本発明の完全長NB剤をコードする核酸を適切に制限切断するか、そのような核酸を自体公知の方法で合成することによって得ることもできる。パーツまたはフラグメントは、自体公知であるペプチド合成のための技法を使って提供することもできる。本発明は、その最も広い意味において、本発明のNB剤の誘導体も含む。そのような誘導体は、一般に、本発明のNB剤の、およびまたは本発明のNB剤を形成するアミノ酸残基の1つ以上の、修飾によって、特に化学的およびまたは生物学的例えば酵素的修飾によって、得ることができる。そのような修飾の例、ならびにそのような方法で修飾することができるNB剤配列内のすなわち、ポリペプチド主鎖上の、ただし好ましくは側鎖上のアミノ酸残基、そのような修飾を導入するために使用することができる方法および技法、ならびにそのような修飾の潜在的用途および利点は、当業者には明らかであるだろう。非限定的一態様において、そのような修飾は、本発明のNB剤中および本発明のNB剤上への1つ以上の官能基、残基または部分の、特に、本発明のNB剤に1つ以上の望ましい性質または機能性を付与する1つ以上の官能基、残基または部分の、例えば共有結合的連結または他の適切な方法での導入を伴う。そのような官能基の例は当業者には明らかであるだろう。非限定的一態様において、そのような修飾は、本発明のNB剤の半減期、溶解度およびまたは吸収を増加させる1つ以上の官能基、本発明のNB剤の免疫原性およびまたは毒性を減少する1つ以上の官能基、本発明のNB剤の何らかの望ましくない副作用を排除または減弱する1つ以上の官能基、およびまたは本発明のNB剤およびまたはポリペプチドに他の有利な性質を付与しかつまたは本発明のNB剤およびまたはポリペプチドの望ましくない性質を減少させる1つ以上の官能基;または前記の2つ以上の任意の組合せの例えば共有結合または他の適切な方法による導入を含む。そのような官能基の例およびそれらを導入するための技法の例は当業者には明らかであり、一般に、上で言及した背景技術において述べられている官能基および技法、ならびに医薬タンパク質を修飾するための、特に抗体または抗体フラグメントScFvおよび単一ドメイン抗体を含むを修飾するための自体公知の官能基および技法これらについては、例えばRemingtonsPharmaceuticalSciences第16版、MackPublishingCo、ペンシルバニア州イーストン1980を参照されたいを、全て含むことができる。そのような官能基は、やはり当業者には明らかであるだろうとおり、本発明のNB剤に、例えば直接的例えば共有結合的に連結するか、適切なリンカーまたはスペーサーを介して連結することができる。医薬タンパク質の半減期を増加させかつまたは免疫原性を減少させるために最も広く用いられている技法の一つには、適切な薬理学的に許容できるポリマー、例えばポリPEGまたはその誘導体例えばメトキシポリ、すなわちmPEGの取り付けが含まれる。一般に、当技術分野において抗体および抗体フラグメント限定するわけではないが単一ドメイン抗体およびScFvを含むに使用されているPEG化など、任意の適切な形態のPEG化を使用することができる。例えばChapmanNatBiotechnol54531545;VeroneseおよびHarrisAdvDrugDelivRev54453456、HarrisおよびChessNatRevDrugDiscov2ならびにWO04060965を参照されたい。タンパク質をPEG化するためのさまざまな試薬も、例えば米国NektarTherapeuticsなどから市販されている。ある実施形態では、部位特異的PEG化を、特にシステイン残基を介して使用する例えばYangらProteinEngineering1610761770を参照されたい。さまざまな実施形態において、この目的には、本発明のNB剤中に見いだされるシステイン残基にPEGを取り付ける。本発明のNB剤は、PEGを取り付けるための1つ以上のシステイン残基が安定に導入されるように修飾するか、またはPEGを取り付けるための1つ以上のシステイン残基を含むアミノ酸配列を、本発明のNB剤のNおよびまたはC末端に融合することができ、これらは全て、当業者にとっては自体公知のタンパク質工学の技法を使って行われる。ある実施形態において、本発明のNB剤およびタンパク質には、5000以上、例えば10000以上、200000未満、例えば100000未満、例えば20000~80000の範囲内の分子量を持つPEGが使用される。ある実施形態において、修飾は、本発明のNB剤またはポリペプチドを発現させるために使用する宿主細胞に依存して、通常は翻訳時およびまたは翻訳後修飾の一部として、N結合型またはO結合型グリコシル化を含む。ある実施形態では、修飾が、標識NB剤の意図する用途に応じて、1つ以上の検出可能なラベルまたは他のシグナル生成基もしくは部分の導入を含みうる。適切なラベルおよびそれらを取り付け、使用し、検出するための技法は、当業者には明らかであり、例えば限定するわけではないが、蛍光ラベル、リン光ラベル、化学発光ラベル、生物発光ラベル、放射性同位体、金属、金属キレート、金属カチオン、発色団および酵素、例えばWO08020079の109頁に言及されているものなどを含むであろう。他の適切なラベルは当業者には明らかであり、例えばNMRまたはESR分光法を使って検出することができる部分を含むであろう。そのような本発明の標識NB剤およびポリペプチドは、具体的なラベルの選択に応じて、例えばインビトロ、インビボまたはインサイチューアッセイELISA、RIA、EIAおよび他のサンドイッチアッセイなどといった自体公知のイムノアッセイを含むならびにインビボ診断目的およびイメージング目的に使用することができる。ある実施形態では、修飾が、例えば上述の金属または金属カチオンの一つをキレートするためのキレート基の導入を伴いうる。適切なキレート基には、例えば限定するわけではないが、ジエチレントリアミン五酢酸DTPAまたはエチレンジアミン四酢酸EDTAなどが含まれる。ある実施形態では、修飾が、ビオチンストレプトアビジン結合対などの特異的結合対の一方のパーツである官能基の導入を含みうる。そのような官能基は、本発明のNB剤を、結合対の他方に結合している別のタンパク質、ポリペプチドまたは化学化合物に連結すなわち結合対の形成を介して連結するために使用することができる。例えば本発明のNB剤をビオチンにコンジュゲートし、アビジンまたはストレプトアビジンにコンジュゲートされた別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体に連結することができる。例えば、そのようなコンジュゲートNB剤は、例えば検出可能なシグナル生成剤がアビジンまたはストレプトアビジンにコンジュゲートされている診断系において、レポーターとして使用することができる。そのような結合対は、例えば、本発明のNB剤を担体医薬目的に適した担体を含むに結合するために使用することもできる。非限定的な一例は、CaoおよびSureshJournalofDrugTargeting84257に記載されているリポソーム製剤である。そのような結合対は、治療活性剤を本発明のNB剤に連結するためにも使用することができる。いくつかの応用については、特に例えばがんの処置において本発明のNB剤が対象とするターゲットを発現する細胞を殺すこと、またはそのような細胞の成長およびまたは増殖を減少させまたは遅らせることを意図した応用については、本発明のNB剤を、毒素または細胞毒性残基または部分に連結することもできる。例えば細胞毒性化合物を提供するために本発明のNB剤に連結することができる毒性部分、化合物または残基の例は、当業者には明らかであるだろうし、例えば上で言及した技術文献およびまたは本明細書におけるさらなる説明に見いだすことができる。一例は、WO03055527に記載されているいわゆるADEPT商標技術である。他の考えうる化学的および酵素的修飾は当業者には明らかであるだろうし、本発明の範囲に包含される。そのような修飾は、研究目的のために例えば機能活性相関を研究するために導入することもできる。例えばLundbladおよびBradshawBiotechnolApplBiochem26143151を参照されたい。非限定的一態様において、誘導体は、DR5、例えばヒトDR5に、本発明のNB剤について本明細書に記載するようなアフィニティ本明細書にさらに詳しく説明するように、KD値真の値または見掛けの値、KA値真の値または見掛けの値、kon速度およびまたはkoff速度として、あるいはIC50値として、適切に測定され、かつまたは表現されたもので、結合するようなものである。本明細書において述べるとおり、本発明は、少なくとも1つの本発明のNB剤から本質的になるか、少なくとも1つの本発明のNB剤を含む、タンパク質またはポリペプチドにも関係する。から本質的になるessentiallyconsistofとは、本発明のポリペプチドのアミノ酸配列が、本発明のNB剤のアミノ酸配列と厳密に同じであるか、またはNB剤のアミノ酸配列のアミノ末端、カルボキシ末端、またはアミノ末端とカルボキシ末端の両方に付加された限られた数のアミノ酸残基、例えば1~20個のアミノ酸残基、例えば1~10個のアミノ酸残基、好ましくは1~6個のアミノ酸残基、例えば1、2、3、4、5または6個のアミノ酸残基を有する本発明のNB剤のアミノ酸配列に対応することを意味する。前記アミノ酸残基は、NB剤の生物学的性質を変化させ、改変させ、または感知可能な他の影響を及ぼしてもよいし、そうでなくてもよく、NB剤にさらなる機能性を付加してもよいし、付加しなくてもよい。例えばそのようなアミノ酸残基はa例えば異種宿主細胞または宿主生物における発現の結果として、N末端Met残基を含むことができる;またはb合成後に宿主細胞からのNB剤の分泌を指示するシグナル配列またはリーダー配列を形成することができる。適切な分泌リーダーペプチドは当業者には明らかであるだろうし、本明細書においてさらに詳しく説明するとおりであってよい。通常、そのようなリーダー配列はNB剤のN末端に連結されるであろうが、本発明は、その最も広い意味において、それに限定されるわけではない;またはcNB剤が特定の器官、組織、細胞または細胞の部分もしくはコンパートメントに向かい、かつまたは浸透もしくは侵入することを可能にし、かつまたはNB剤が、生物学的障壁、例えば細胞膜、上皮細胞の層などの細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、または血液脳関門に浸透しまたはそれらを横切ることを可能にする、配列またはシグナルを形成することができる。そのようなアミノ酸配列の例は、当業者には明らかであり、WO08020079の112頁のパラグラフcにおいて言及されているものが含まれるだろう;またはdタグ、例えば、アミノ酸配列または残基であってその配列または残基に向けられたアフィニティ技法を使用することなどによってNB剤の精製を可能または容易にするものを形成することができる。前記配列または残基は、その後、NB剤配列を提供するために、例えば化学的または酵素的切断によって除去することができるそのために、タグは、場合により、切断可能なリンカー配列によってNB剤配列に連結されるか、切断可能なモチーフを含有しうる。そのような残基のいくつかの非限定的例は、cMycタグ配列番号91、複数のヒスチジン残基、例えばHisx6タグ配列番号92、またはcMycタグとHisx6タグとの組合せ配列番号93または配列番号94、PEG化基質タグ配列番号95、グルタチオン残基および他のmycタグ例えばWO0612282の配列番号31参照のそれぞれの1つ以上である;またはe官能化されていて、かつまたは官能基を取り付けるための部位として役立つことができる、1つ以上のアミノ酸残基であることができる。適切なアミノ酸残基および官能基は当業者には明らかであり、限定するわけではないが、本発明のNB剤の誘導体に関して本明細書において述べるアミノ酸残基および官能基が含まれるであろう。ある態様によれば、本発明のポリペプチドは、そのアミノ末端、そのカルボキシ末端、またはそのアミノ末端とそのカルボキシ末端との両方で、少なくとも1つのさらなるアミノ酸配列に融合されたすなわち、前記本発明のNB剤と1つ以上のさらなるアミノ酸配列とを含む融合タンパク質が得られるように融合された本発明のNB剤を含む。そのような融合物を本明細書ではNB剤融合物という。1つ以上のさらなるアミノ酸配列は、任意の適切なかつまたは所望のアミノ酸配列であることができる。さらなるアミノ酸配列は、NB剤の生物学的性質を変化させ、改変し、または他の影響を及ぼしてもよいし、そうでなくてもよく、本発明のNB剤またはポリペプチドにさらなる機能性を付加してもよいし、付加しなくてもよい。好ましくは、さらなるアミノ酸配列は、1つ以上の望ましい性質または機能性を本発明のNB剤またはポリペプチドに付与するようなものである。例えば、さらなるアミノ酸配列は、第2の結合部位を提供することもでき、その結合部位は、任意の所望するタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原性決定基またはエピトープ例えば本発明のNB剤が向けられるものと同じタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原性決定基もしくはエピトープまたは異なるタンパク質、ポリペプチド、抗原、抗原性決定基もしくはエピトープを含むが、これらに限るわけではないに向けられた結合部位であることができる。そのようなアミノ酸配列の例は当業者には明らかであるだろうし、一般的には、通常の抗体およびそのフラグメントScFvおよび単一ドメイン抗体を含むが、これらに限るわけではないに基づくペプチド融合物に使用される全てのアミノ酸配列を含みうる。例えばHolligerおよびHudsonNatureBiotechnology239、11261136による総説を参照されたい。非限定的一態様において、そのようなアミノ酸配列は、本発明のNB剤そのものと比較して、本発明のポリペプチドの半減期、溶解度または吸収を増加させ、免疫原性または毒性を減少させ、望ましくない副作用を排除または減弱し、かつまたは本発明のポリペプチドに他の有利な性質を付与しかつまたは本発明のポリペプチドの望ましくない性質を減少させるアミノ酸配列である。そのようなアミノ酸配列のいくつかの非限定的例は、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン例えばWO0027435参照またはハプテン分子例えば循環抗体によって認識されるハプテン、例えばWO9822141参照である。特に、免疫グロブリンのフラグメント例えばVHドメインを血清アルブミンまたはそのフラグメントに連結することを、半減期を増加させるために使用できることは、当技術分野において記載されている。例えばWO0027435およびWO01077137を参照されたい。本発明によれば、本発明のNB剤は、好ましくは、血清アルブミンまたはその適切なフラグメントに直接連結されるか、または適切なリンカーを介して、特に、本発明のポリペプチドを遺伝子融合物タンパク質として発現させることができるように連結された適切なペプチドを介して、連結される。具体的一態様によれば、本発明のNB剤は、少なくとも血清アルブミンのドメインIIIまたはその一部を含む、血清アルブミンのフラグメントに連結することができる。例えばAblynxNVのWO07112940を参照されたい。あるいは、増加した血清中半減期が得られるように、さらなるアミノ酸配列が、血清タンパク質例えばヒト血清アルブミンまたは他の血清タンパク質、例えばIgGなどに向けられた第2の結合部位または結合ユニットを提供してもよい。そのようなアミノ酸配列は、例えば、後述のNB剤、ならびにWO9101743、WO0145746およびWO02076489に記載の小ペプチドおよび結合タンパク質、ならびにWO03002609およびWO04003019に記載のdAbが含まれる。HarmsenらVaccine23;4926422005、ならびにEP0368684、ならびにAblynxNVによるWO2006122787、WO2008028977、WO2008043821、WO2008068280およびWO2009127691も参照されたい。そのようなアミノ酸配列は、特に、血清アルブミンより具体的にはヒト血清アルブミンおよびまたはIgGより具体的にはヒトIgGに向けられたものであることができる。例えばそのようなアミノ酸配列は、ヒト血清アルブミンに向けられたアミノ酸配列、およびFcRnへの血清アルブミンの結合に関与しないヒト血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合することができるアミノ酸配列WO060122787参照、およびまたは血清アルブミンのドメインIIIの一部を形成しない血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合する能力を有するアミノ酸配列ここでも例えばWO060122787を参照されたい;増加した半減期を有するまたは増加した半減期を与えることができるアミノ酸配列例えばAblynxNVによるWO08028977参照;少なくとも1つの哺乳動物種、特に少なくとも1つの霊長類種例えば限定するわけではないが、マカク属のサル例えば、特に、カニクイザルcynomologusmonkeyMacacafascicularis;別名シノcynoおよびまたはアカゲザルMacacamulattaおよびヒヒチャクマヒヒPapioursinus;ここでも米国仮特許出願第60843349号を参照されたいに由来する血清アルブミンと交差反応性であるヒト血清アルブミンに対するアミノ酸配列;pH非依存的に血清アルブミンに結合することができるアミノ酸配列例えば2006年10月11日に出願されたAminoacidsequencesthatbindtoserumproteinsinamannerthatisessentiallyindependentofthepHcompoundscomprisingthesameandusesthereofと題するAblynxNVによる米国仮特許出願第60850774号を参照されたいおよびまたは条件的結合剤であるアミノ酸配列例えば、2006年10月11日に出願されたAminoacidsequencesthatbindtoadesiredmoleculeinaconditionalmannerと題するAblynxNVによる米国仮特許出願第60850775号、ならびにWO2006122787、WO2008028977、WO2008043821、WO2008068280およびWO2009127691を参照されたいであることができる。もう一つの態様によれば、前記1つ以上のさらなるアミノ酸配列は、通常の4本鎖抗体特にヒト抗体およびまたは重鎖抗体のパーツ、フラグメントまたはドメインを1つ以上含みうる。例えば、通常はそれほど好ましくはないが、本発明のNB剤は、通常の好ましくはヒトVHもしくはVLドメインに、またはVHもしくはVLドメインの天然もしくは合成類似体Wardらが記述したdAbなどの他の単一ドメイン抗体を含むが、これらに限るわけではないに、ここでも場合によってはリンカー配列を介して、連結することができる。少なくとも1つのNB剤は、1つ以上の好ましくはヒトCH1、CH2およびまたはCH3ドメインに、場合によってはリンカー配列を介して連結することができる。例えば、通常のFabフラグメントまたはF2フラグメントに似ているが、通常のVHドメインの1つまたはF2フラグメントの場合は1つもしくは両方が本発明のNB剤で置き換えられている、抗体フラグメント構造を作製するために、適切なCH1ドメインに連結されたNB剤を、適切な軽鎖と共に、使用することができるだろう。また、インビボで増加した半減期を持つコンストラクトを提供するために、2つのNB剤をCH3ドメインに場合によってはリンカーを介して連結することもできるだろう。本発明の一態様では、本発明のポリペプチドに1つ以上のエフェクター機能を付与しかつまたは1つ以上のFc受容体に結合する能力を付与することができる1つ以上の抗体パーツ、フラグメントまたはドメインに、1つ以上の本発明のNB剤が連結される。例えば、限定するわけではないが、この目的のために、1つ以上のさらなるアミノ酸配列は、抗体のCH2およびまたはCH3ドメイン、例えば重鎖抗体本明細書において記載するものに由来するもの、より好ましくは通常のヒト4本鎖抗体に由来するものを、1つ以上含むことができ;かつまたはFc領域、例えばIgG、IgE、または他のヒトIgに由来するものの一部を形成することができる。例えばWO9404678には、それぞれにVHHならびにヒトCH2およびCH3ドメインを含むただしCH1ドメインは含まない2つの重鎖からなる免疫グロブリンであって、CH2およびCH3ドメインによって与えられるエフェクター機能を有し、かつ軽鎖が存在しなくても機能することができる免疫グロブリンが得られるように、ラクダ科CH2およびまたはCH3ドメインがヒトCH2およびCH3ドメインに置き換えられている、ラクダ科VHHドメインまたはそのヒト化誘導体を含む重鎖抗体が記述されている。エフェクター機能を与えられるように本発明のNB剤に適切に連結することができる他のアミノ酸配列には、当業者には明らかであるだろうし、所望するエフェクター機能に基づいて選択することができる。例えばWO04058820、WO9942077およびWO05017148、ならびに前掲のHolligerおよびHudsonによる総説を参照されたい。Fc部分への本発明のNB剤のカップリングは、対応する本発明のNB剤と比較して増加した半減期にもつがなりうる。いくつかの応用では、生物学的に意味のあるエフェクター機能を何ら伴わずに増加した半減期を付与するFc部分およびまたは定常ドメインすなわちCH2およびまたはCH3ドメインの使用も適切であることや、さらにはそれが好ましいこともありうる。1つ以上のNB剤と1つ以上の定常ドメインとを含み、増加した半減期を持つ、他の適切なコンストラクトは、当業者には明らかであり、例えば、CH3ドメインに場合によってはリンカー配列を介して連結された、2つのNB剤を含みうる。一般に、増加した半減期を持つ融合タンパク質または誘導体はいずれも、好ましくは、腎臓吸収のカットオフ値である50kDを上回る分子量を有するであろう。さらなるアミノ酸配列は、例えば、本発明のポリペプチドを発現させるために使用する宿主細胞に応じて、プレ型、プロ型またはプレプロ型の本発明のポリペプチドを提供するために合成後に宿主細胞からの本発明のNB剤またはポリペプチドの分泌を指示するシグナル配列またはリーダー配列を形成してもよい。ある態様では、さらなるアミノ酸配列が、本発明のNB剤またはポリペプチドが特定の器官、組織、細胞または細胞の部分もしくはコンパートメントに向かい、かつまたは浸透もしくは侵入することを可能にし、かつまたは本発明のNB剤またはポリペプチドが、生物学的障壁、例えば細胞膜、上皮細胞の層などの細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、または血液脳関門に浸透しまたはそれらを横切ることを可能にする、配列またはシグナルを形成する。そのようなアミノ酸配列の適切な例は当業者には明らかであり、限定するわけではないが、例えばWO08020079の118頁において言及されているものが含まれる。いくつかの応用については、特に例えばがんの処置において本発明のNB剤が対象とするターゲットを発現する細胞を殺すこと、またはそのような細胞の成長およびまたは増殖を減少させまたは遅らせることを意図した応用については、本発明のNB剤を、細胞毒性タンパク質またはポリペプチドに連結することもできる。例えば本発明の細胞毒性ポリペプチドなどを提供するために本発明のNB剤に連結することができるそのような毒性タンパク質およびポリペプチドの例は当業者には明らかであるだろうし、例えば上に言及した技術文献およびまたは本明細書におけるさらなる説明に見いだすことができる。一例は、WO03055527に記載されているいわゆるADEPT商標技術である。非限定的一態様において、前記1つ以上のさらなるアミノ酸配列は、少なくとも2つ、例えば3つ、4つ、5つまたはそれ以上のNB剤を含む本発明のポリペプチドが得られるように、少なくとも1つのさらなるNB剤を含み、前記NB剤は場合によっては1つ以上のリンカー配列を介して連結されていてもよい。例えばWO08020079の119頁および120頁に記載されているような1つ、2つまたはそれ以上のVHHコンストラクトと、少なくとも1つの本発明のNB剤とを含む本発明のポリペプチドは、本明細書においては、本発明の多価ポリペプチドともいい、そのようなポリペプチド中に存在するNB剤を、本明細書においては、多価フォーマットにあるともいう。少なくとも2つのNB剤を含有し、少なくとも1つのNB剤が第1の抗原すなわちDR5に向けられ、少なくとも1つのNB剤が第2の抗原すなわちDR5とは異なるものに向けられているポリペプチドは、本発明の多重特異性ポリペプチドとも呼ばれ、そのようなポリペプチド中に存在するNB剤は、本明細書においては、多重特異性フォーマットにあるともいう。したがって、例えば本発明の二重特異性ポリペプチドは、第1の抗原すなわちDR5に向けられた少なくとも1つのNB剤、より好ましくは、DR5に向けられた3つ、4つ、5つまたはそれ以上のNB剤と、第2の抗原すなわちDR5とは異なるものに向けられた少なくとも1つのさらなるNB剤とを含むポリペプチドであり、一方、本発明の三重特異性ポリペプチドは、第1の抗原すなわちDR5のエピトープの1つに向けられた少なくとも1つのNB剤と、第2の抗原すなわちDR5由来の異なるエピトープまたはTRAIIL受容体とは異なる抗原に向けられた少なくとも1つのさらなるNB剤と、第3の抗原すなわちDR5とも第2の抗原とも異なるものに向けられた少なくとも1つのさらなるNB剤とを含むポリペプチドである。したがって、本発明の二重特異性ポリペプチドは、その最も簡単な形態において、DR5に向けられた第1のNB剤と第2の抗原に向けられた第2のNB剤とを含み、前記第1および第2のNB剤が場合によってはリンカー配列によって連結されていてもよい、本発明の二価ポリペプチドであり、一方、本発明の三重特異性ポリペプチドは、その最も簡単な形態において、DR5に向けられた第1のNB剤と、第2の抗原に向けられた第2のNB剤と、第3の抗原に向けられた第3のNB剤とを含み、前記第1、第2および第3のNB剤が、場合によっては、1つ以上の、特に1つおよびそれ以上の、特に2つのリンカー配列を介して連結されていてもよい、本発明の三価ポリペプチドである。本明細書における説明から明らかであるだろうように、本発明の多重特異性ポリペプチドが、DR5に対する少なくとも1つまたはそれ以上のNB剤と、DR5とは異なる1つ以上の抗原に向けられた任意の数のNB剤とを含みうるという意味で、本発明は、上記に限るわけではない。本発明の具体的な多価または多重特異性ポリペプチドに言及する場合、別段の明示がない限り、これは、関連するNB剤の任意の順序または配置を包含することに注意すべきである。さらにまた、本発明のポリペプチドが2つ以上のNB剤と1つ以上のさらなるアミノ酸配列本明細書において言及するものとを含有することも、本発明の範囲内である。1つ以上のVHHドメインを含有する多価および多重特異性ポリペプチドとそれらの製造については、ConrathらJBiolChemVol27610734673502001;MuyldermansReviewsinMolecularBiotechnology74277302;ならびに例えばWO9634103およびWO9923221も参照されたい。いくつかの具体的な本発明の多重特異性およびまたは多価ポリペプチドの他のいくつかの例は、本発明において言及するAblynxNVによる出願に見いだすことができる。本発明の多重特異性ポリペプチドの非限定的な一例は、少なくとも1つの本発明のNB剤と、増加した半減期をもたらす少なくとも1つのNB剤とを含む。そのようなNB剤は、血清タンパク質、特にヒト血清アルブミンなどのヒト血清タンパク質、チロキシン結合タンパク質、ヒトトランスフェリン、フィブリノゲン、IgG、IgEまたはIgMなどの免疫グロブリン、またはWO04003019に列挙されている血清タンパク質の一つにに向けられたNB剤であることができる。これらのうち、血清アルブミン特にヒト血清アルブミンまたはIgG特にヒトIgG、例えば前掲のMuyldermansによる総説に記載されているNANOBODY商標VH1参照に結合することができるNB剤は、とりわけ好ましいただし、例えばマウスまたは霊長類における実験には、それぞれマウス血清アルブミンMSAまたは前記霊長類に由来する血清アルブミンに対するまたはそれらと交差反応するNB剤を使用することができる。しかし医薬的使用には、ヒト血清アルブミンまたはヒトIgGに対するNB剤が通常は好ましいであろう。増加した半減期をもたらし、本発明のポリペプチドに使用することができるNB剤には、WO04041865、WO06122787およびAblynxNVによるさらなる特許出願例えば本明細書において言及するものに記載されている血清アルブミンに向けられたNB剤が含まれる。例えば、本発明において使用するための、増加した半減期をもたらすいくつかの好ましいNB剤には、FcRnへの血清アルブミンの結合には関与しないヒト血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合することができるNANOBODY登録商標例えばWO060122787参照;血清アルブミンのドメインIIIの一部を形成しない血清アルブミン上のアミノ酸残基に結合する能力を有するNANOBODY商標例えばWO060122787を参照されたい;増加した半減期を有するまたは増加した半減期を与えることができるNANOBODY商標本明細書において言及するAblynxNVによる米国仮特許出願第60843349号を参照されたい;少なくとも1つの哺乳動物種、特に少なくとも1つの霊長類種例えば限定するわけではないが、マカク属のサル例えば、特に、カニクイザルcynomologusmonkeyMacacafascicularisおよびまたはアカゲザルMacacamulattaおよびヒヒチャクマヒヒPapioursinusに由来する血清アルブミンと交差反応性であるヒト血清アルブミンに対するNANOBODY商標例えばAblynxNVによる米国仮特許出願第60843349号を参照されたい;pH非依存的に血清アルブミンに結合することができるNANOBODY商標例えば本明細書において言及するAblynxNVによる米国仮特許出願第60850774号を参照されたいおよびまたは条件的結合剤であるNANOBODY商標例えばAblynxNVによる米国仮特許出願第60850775号を参照されたいが含まれる。増加した半減期をもたらし、本発明のポリペプチド中に使用することができる、いくつかの特に好ましいNANOBODY商標には、WO06122787その表IIおよびIIIを参照されたいに開示されているNANOBODY商標ALB1~ALB10が含まれ、なかでもALB8WO06122787の配列番号62はとりわけ好ましい。本発明の具体的な、ただし非限定的な態様によれば、本発明のポリペプチドは、1つ以上の本発明のNB剤の他にも、ヒト血清アルブミンに対するNB剤を少なくとも1つは含有する。ある実施形態では、1つ以上の本発明のNB剤を含有する増加した半減期を持つ本発明のポリペプチド、ならびに増加した半減期を有する本発明のNB剤または前記ポリペプチドの誘導体がいずれも、対応する本発明のNB剤そのものの半減期よりも少なくとも15倍、およびまたは少なくとも2倍、およびまたは少なくとも5倍、例えば少なくとも10倍または20倍以上大きい半減期を有する。例えば、増加した半減期を持つそのような誘導体またはポリペプチドは、対応する本発明のNB剤そのものと比較して、1時間以上、およびまたは2時間以上、およびまたは6時間以上、例えば12時間以上、さらには24、48または72時間以上増加した半減期を有しうる。本発明の非限定的一態様では、そのような誘導体またはポリペプチドが、ヒトにおいて、少なくとも約12時間、およびまたは少なくとも24時間、およびまたは少なくとも48時間、およびまたは少なくとも72時間またはそれ以上の血清中半減期を示す。例えば、そのような誘導体またはポリペプチドは、少なくとも5日例えば約5~10日、およびまたは少なくとも9日例えば約9~14日、およびまたは少なくとも約10日例えば約10~15日、およびまたは少なくとも約11日例えば約11~16日、およびまたは少なくとも約12日例えば約12~18日またはそれ以上、およびまたは14日以上例えば約14~19日の半減期を有しうる。本発明の一態様によれば、そのようなポリペプチドは、インビボでのポリペプチドの半減期を増加させることができる1つ以上の分子に結合する能力を有する。そのような本発明のポリペプチドは、分解およびまたはクリアランスもしくは隔離に抵抗する分子に結合することによって、インビボで安定化され、その半減期が増加する。典型的には、そのような分子は、それ自体がインビボで長い半減期を有する天然に存在するタンパク質である。本発明の多重特異性ポリペプチドのもう一つの非限定的な例は、少なくとも1つの本発明のNB剤と、本発明のポリペプチドを特定の器官、組織、細胞または細胞の部分もしくはコンパートメントに向かわせ、かつまたは本発明のポリペプチドが特定の器官、組織、細胞または細胞の部分もしくはコンパートメントに浸透または侵入することを可能にし、かつまたはNB剤が、生物学的障壁、例えば細胞膜、上皮細胞の層などの細胞層、固形腫瘍を含む腫瘍、または血液脳関門に浸透しまたはそれらを横切ることを可能にする、少なくとも1つのNB剤とを含む。そのようなNB剤の例には、所望する器官、組織または細胞の特異的細胞表面タンパク質、マーカーまたはエピトープ例えば腫瘍細胞に関連する細胞表面マーカーに向けられたNB剤、およびWO02057445およびWO06040153に記載の単一ドメイン脳ターゲティング抗体フラグメントが含まれ、このうち、FC44WO06040153の配列番号189およびFC5WO06040154の配列番号190は好ましい例である。リンカー本発明のポリペプチドまたは化合物において、前記DR5に対する1つ以上の結合ポリペプチド、例えばNB剤と、前記1つ以上のポリペプチドは、例えばWO9923221に記載されているように互いに直接連結することができ、かつまたは1つ以上の適切なスペーサーまたはリンカーを介して互いに連結することができ、またはそれらの任意の組合せであることができる。多価および多重特異性ポリペプチドにおける使用に適したスペーサーまたはリンカーは、当業者には明らかであり、一般に、当技術分野においてアミノ酸配列を連結するために使用されている任意のリンカーまたはスペーサーであることができる。好ましくは、前記リンカーまたはスペーサーは、医薬的使用が意図されたタンパク質またはポリペプチドの構築に使用するのに適したものである。特に好ましいスペーサーのいくつかには、抗体フラグメントまたは抗体ドメインを連結するために当技術分野において使用されているスペーサーおよびリンカーが含まれる。これらには、上に挙げた一般的背景技術で言及されているリンカー、ならびに例えばダイアボディまたはScFvフラグメントを構築するために当技術分野において使用されているリンカーが含まれるただし、これに関して、ダイアボディやScFvフラグメントでは、使用されるリンカー配列が、関連VHおよびVLドメインが全体として完全な抗原結合部位を形成することを可能にするような長さ、可撓性の程度および他の性質を持つべきであるが、各NB剤は単独で完全な抗原結合部位を形成するので、本発明のポリペプチドに使用されるリンカーの長さまたは可撓性には特に制約がないことに注意すべきである。例えば、リンカーは、適切なアミノ酸配列、特に1~50、例えば5~50、好ましくは1~35、例えば1~10アミノ酸残基のアミノ酸配列であることができる。そのようなアミノ酸の好ましい例のいくつかには、glyserリンカー、例えばzタイプのもの、例えばWO9942077に記載されている3または3、本明細書において言及するAblynxによる出願に記載されているGS30、GS15、GS9およびGS7リンカー例えばWO06040153およびWO06122825参照、ならびにヒンジ様領域、例えば天然に存在する重鎖抗体または類似配列のヒンジ領域例えばWO9404678に記載されているものが含まれる。他の特に好ましいリンカーのいくつかは、ポリアラニンAAAなど、ならびにリンカーGS30WO06122825の配列番号85およびGS9WO06122825の配列番号84である。他の適切なリンカーは、一般に、有機化合物またはポリマー、特に、医薬用のタンパク質に使用するのに適したものを含む。非限定的な例には、例えばポリ部分、例えば抗体ドメインを連結するのに使用されるものが含まれる。例えばWO04081026を参照されたい。使用するリンカーの長さ、可撓性の程度およびまたは他の性質がScFvフラグメントにおいて使用されるリンカーについて通常そうであるようには決定的な問題ではないものの最終的な本発明のポリペプチドの性質、例えば限定するわけではないが、DR5に対する、または他の抗原の1つ以上に対する、アフィニティ、特異性またはアビディティに、ある程度の影響を持ちうることは、本発明の範囲内で考えられる。本明細書における開示に基づいて、当業者は、特定の本発明のポリペプチドにおける使用に最適なリンカーを、場合によってはいくつかの限られた日常的な実験の後に、決定することができるであろう。ある実施形態において、例えば多量体型抗原例えば多量体型の受容体または他のタンパク質に向けられたNB剤を含む本発明の多価ポリペプチドにおいて、リンカーの長さおよび可撓性は、ポリペプチド中に存在する本発明の各NB剤が、多量体のサブユニットのそれぞれの上にある抗原性決定基に結合することを可能にするようなものであることができる。同様に、同じ抗原上の2つ以上の異なる抗原性決定基例えば、ある抗原の異なるエピトープおよびまたはある多量体型受容体、チャネルまたはタンパク質の異なるサブユニットに向けられたNB剤を含む本発明の多重特異性ポリペプチドにおいて、リンカーの長さおよび可撓性は、各NB剤が、その意図した抗原性決定基に結合することを可能にするようなものであることができる。ここでも、本明細書における開示に基づいて、当業者は、特定の本発明のポリペプチドにおける使用に最適なリンカーを、場合によってはいくつかの限られた日常的な実験の後に、決定することができるであろう。使用されるリンカーが、1つ以上の他の好ましい性質または機能性を本発明のポリペプチドに付与し、かつまたは誘導体を形成するためおよびまたは官能基を取り付けるための部位を1つ以上提供することは例えば本発明のNB剤の誘導体について本明細書に記載するように本発明の範囲内である。例えば、1つ以上の荷電アミノ酸残基を含有するリンカーは改善された親水性を提供することができ、一方、小さなエピトープまたはタグを形成または含有するリンカーは、検出、同定およびまたは精製の目的に使用することができる。ここでも、本明細書における開示に基づいて、当業者は、特定の本発明のポリペプチドにおける使用に最適なリンカーを、場合によってはいくつかの限られた日常的な実験の後に、決定することができるであろう。最後に、本発明のポリペプチド中に2つ以上のリンカーを使用する場合、それらのリンカーは同じであっても、異なってもよい。ここでも、本明細書における開示に基づいて、当業者は、特定の本発明のポリペプチドにおける使用に最適なリンカーを、場合によってはいくつかの限られた日常的な実験の後に、決定することができるであろう。通常、発現および生産が容易であるように、本発明のポリペプチドは線状ポリペプチドであるだろう。しかし本発明は、その最も広い意味において、それに限定されるわけではない。例えば、本発明のポリペプチドが3つ以上のNB剤を含む場合、3つ以上のアームを持つリンカーを使ってそれらを連結することにより、星状コンストラクトを与えるように、それぞれのアームをNB剤に連結することが可能である。また、通常はそれほど好ましくはないものの、環状コンストラクトを使用することも可能である。本発明はさらに、本発明のポリペプチドの誘導体を含み、それは、本発明のNB剤の誘導体すなわち本明細書に記載するものに本質的に類似しうる。本発明は、本発明のポリペプチドから本質的になるタンパク質またはポリペプチドも含むここでから本質的になるという表現は、上に示したものと本質的に同じ意味を有する。本発明の一態様によれば、本発明のポリペプチドは、本明細書に定義するところの、本質的に単離された形態にある。本発明のNB剤を製造するための方法本発明のアミノ酸配列、NB剤、ポリペプチド、化合物および核酸は、本明細書におけるさらなる説明から当業者には明らかであるだろうとおり、自体公知の方法で製造することができる。例えば、本発明のNB剤およびポリペプチドは、抗体を製造するための、特に抗体フラグメント限定するわけではないが、単一ドメイン抗体およびScFvフラグメントを含むを製造するための、自体公知の任意の方法で製造することができる。アミノ酸配列、NB剤、ポリペプチドおよび核酸を製造するためのいくつかの好ましい、ただし非限定的な方法には、本明細書に記載する方法および技法が含まれる。当業者には明らかであるだろうとおり、本発明のアミノ酸配列、NB剤およびまたはポリペプチドを製造するためのとりわけ有用な方法の一つは、一般に、a前記本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドをコードする核酸本明細書においては本発明の核酸ともいうを、適切な宿主細胞または宿主生物本明細書においては本発明の宿主というまたは他の適切な発現系において発現させるステップと、場合によっては、それに続くbそのようにして得られた本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドを単離およびまたは精製するステップとを含む。特に、そのような方法は、a本発明の宿主を、前記本発明の宿主が、少なくとも1つの本発明のアミノ酸配列、NB剤およびまたはポリペプチドを発現およびまたは生産するような条件下で、培養およびまたは維持するステップと;場合によっては、それに続く、bそのようにして得られた本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドを単離およびまたは精製するステップとを含みうる。本発明の核酸は、一本鎖または二本鎖のDNAまたはRNAの形態をとることができる。ある実施形態では、ポリヌクレオチドNB剤が二本鎖DNAの形態をとる。例えば、本発明のヌクレオチドNB配列は、ゲノムDNA、cDNAまたは合成DNA例えば意図する宿主細胞または宿主生物における発現に特に適合させたコドン使用を持つDNAであることができる。本発明の一態様によれば、本発明の核酸は、本明細書に定義するところの、本質的に単離された形態にある。本発明の核酸は、やはり本質的に単離された形態にあることができるベクター、例えばプラスミド、コスミドまたはYACなどの形態をとるか、それらの中に存在するか、かつまたはそれらの一部であることができる。本発明の核酸は、本明細書に記載する本発明のポリペプチドのアミノ酸配列に関する情報に基づいて、自体公知の方法で製造または取得することができ、かつまたは適切な天然源から単離することができる。類似体を得るには、天然に存在するVHHドメインをコードするヌクレオチド配列を、例えば、前記類似体をコードする本発明の核酸が得られるように、部位特異的変異誘発に付すことができる。当業者には明らかであるだろうとおり、いくつかのヌクレオチド配列、例えばNB剤をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、例えば1つ以上のリンカー配列をコードする核酸とを含む本発明の核酸を製造するには、そのような配列を適切な方法で一つに連結することができる。本発明の核酸を作製するための技法は当業者には明らかであり、例えば限定するわけではないが、自動DNA合成;部位特異的変異誘発;2つ以上の天然に存在するおよびまたは合成配列または2つ以上のその一部を組合せること、切断型発現産物の発現につながる変異の導入;1つ以上の制限部位の導入例えば適切な制限酵素を使って容易に消化およびまたはライゲーションすることができるカセットおよびまたは領域を生成させるため、およびまたは1つ以上のミスマッチプライマーを使用し、天然に存在する形態のDR5の配列をテンプレートとして使用する、PCR反応を利用した変異の導入が含まれる。これらの技法および他の技法は、当業者には明らかであるだろう。ここでも、例えば本明細書において言及するSambrookらおよびAusubelらなどの標準的参考書、ならびに下記の実施例を参照されたい。本発明の核酸は、当業者には明らかであるだろうとおり、そして例えばWO08020079の131~134頁に記載されているとおり、遺伝子コンストラクトの形態をとるか、その中に存在するか、かつまたはその一部であることができる。そのような遺伝子コンストラクトは一般に、1つ以上の自体公知の遺伝子コンストラクトの要素、例えば1つ以上の適切な調節要素例えば適切なプロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどに連結されていてもよい少なくとも1つの本発明の核酸と、本明細書において言及する遺伝子コンストラクトのさらなる要素とを含む。少なくとも1つの本発明の核酸を含むそのような遺伝子コンストラクトを、本明細書においては、本発明の遺伝子コンストラクトともいう。本発明の遺伝子コンストラクトはDNAまたはRNAであることができる。本発明の遺伝子コンストラクトは、意図した宿主細胞または宿主生物の形質転換に適した形態、意図した宿主細胞のゲノムDNAへの組込みに適した形態、または意図した宿主生物における独立した複製、維持およびまたは遺伝に適した形態をとりうる。例えば本発明の遺伝子コンストラクトは、ベクター、例えばプラスミド、コスミド、YAC、ウイルスベクターまたはトランスポゾンの形態をとることができる。特にベクターは、発現ベクター、すなわち例えば適切な宿主細胞、宿主生物およびまたは発現系におけるインビトロおよびまたはインビボでの発現をもたらすことができるベクターであることができる。本発明の核酸は、遺伝子コンストラクトの形態をとるか、その中に存在するか、かつまたはその一部であることができる。そのような遺伝子コンストラクトは一般に、1つ以上の自体公知の遺伝子コンストラクトの要素、例えば1つ以上の適切な調節要素例えば適切なプロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどに連結されていてもよい少なくとも1つの本発明の核酸と、本明細書において言及する遺伝子コンストラクトのさらなる要素とを含む。当技術分野において知られている他の適切な遺伝子コンストラクトも、例えばWO08020079の131~134頁に記載されているものを含めて、本発明の範囲内にあると考えられる。少なくとも1つの本発明の核酸を含むそのような遺伝子コンストラクトを、本明細書においては、本発明の遺伝子コンストラクトともいうことにする。非限定的一実施形態において、本発明の遺伝子コンストラクトは、a少なくとも1つの本発明の核酸を含み、ここで、前記ポリヌクレオチドNB剤は、b1つ以上の調節要素、例えばプロモーターおよび場合によっては適切なターミネーターに作動可能につながれ、場合によってはc自体公知である遺伝子コンストラクトのさらなる要素を1つ以上含む。ある実施形態では、本発明の遺伝子コンストラクトにおいて、前記少なくとも1つの本発明の核酸および前記調節要素ならびに場合によっては前記1つ以上のさらなる要素は、互いに作動可能に連結され、これは一般に、それらが互いに機能的な関係にあることを意味する。例えば、プロモーターは、そのプロモーターがコード配列の転写およびまたは発現を開始しまたは他の方法で制御調節することができるのであれば、コード配列に作動可能に連結されていると見なされるこの場合、前記コード配列は前記プロモーターの制御下にあると理解すべきである。一般に、2つのヌクレオチド配列が作動可能に連結されている場合、それらは向きが同じであり、通常は読み枠も同じであるだろう。それらは通常は本質的に連続しているであろうが、その必要がない場合もある。作動可能につながれたおよび作動可能に連結されたという表現は互いに代替的に使用される。調節要素、プロモーター、ターミネーターおよび作動可能につながれるという用語は、当技術分野におけるそれらの通常の意味を有する。遺伝子コンストラクト中に存在するさらなる要素は、例えば3または5UTR配列、リーダー配列、選択マーカー、発現マーカーレポーター遺伝子、およびまたは形質転換または組込みの効率を容易にしまたは増加させうる要素であることができる。そのような遺伝子コンストラクトのためのこれらのおよび他の適切な要素は当業者には明らかであり、例えば使用するコンストラクトのタイプ、意図する宿主細胞または宿主生物、目的の本発明のヌクレオチド配列を発現させる方法例えば構成的、一過性または誘導性発現によるもの、およびまたは使用する形質転換技法に依存しうる。例えば、抗体および抗体フラグメント限定するわけではないが単一ドメイン抗体およびScFvフラグメントを含むを発現および生産するための自体公知の調節配列、プロモーターおよびターミネーターを、本質的に類似する方法で使用することができる。ある実施形態において、本発明の遺伝子コンストラクトの調節要素およびさらなる要素は、それらが、意図した宿主細胞または宿主生物において、意図されたその生物学的機能を与える能力を持つようなものである。例えば、プロモーター、エンハンサーまたはターミネーターは、意図した宿主細胞または宿主生物において作動可能であるべきであり、これは、例えば前記プロモーターが、それが本明細書に定義するところの作動可能に連結されているヌクレオチド配列例えばコード配列の転写およびまたは発現を開始しまたは他の方法で制御調節する能力を有するべきであることを意味する。いくつかの特に好ましいプロモーターには、本明細書において言及する宿主細胞における発現のための自体公知のプロモーター、そして特に、細菌細胞における発現のためのプロモーターが含まれるが、これらに限るわけではない。本発明の核酸およびまたは本発明の遺伝子コンストラクトは、宿主細胞または宿主生物を形質転換するために、すなわち、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドを発現およびまたは生産するために、使用することができる。適切な宿主または宿主細胞は当業者には明らかであり、例えば任意の適切な真菌、原核もしくは真核細胞もしくは細胞株または任意の適切な真菌、原核もしくは真核生物、例えばWO08020079の134頁および135頁に記載されているもの;ならびに抗体および抗体フラグメント限定するわけではないが単一ドメイン抗体およびScFvフラグメントを含むの発現および生産のための自体公知の他のあらゆる宿主または宿主細胞であることができ、それらは当業者には明らかであるだろう。上で言及した一般的背景技術、ならびに例えばWO9429457;WO9634103;WO9942077;Frenkenら、前掲書;RiechmannおよびMuyldermans、前掲書;vanderLinden、前掲書;Thomassenら、前掲書;Joostenら、前掲書;Joostenら、前掲書;ならびに本明細書において言及するさらなる文献を参照されたい。本発明のNBアミノ酸配列およびポリペプチドは、WO08020079の135頁および136頁とWO08020079において言及されているさらなる文献に、さらに詳しく説明されているように、予防的およびまたは治療的目的のために例えば遺伝子治療として、多細胞生物の1つ以上の細胞、組織または器官に導入し、そこで発現させることができる。NB剤を細胞中で発現させるには、それらを、例えばWO9402610、WO9522618およびUSA7004940;WO03014960;CattaneoAおよびBioccaSIntracellularAntibodiesDevelopmentandApplicationsLandesandSpringerVerlag;KontermannMethods34163170に記載されているように、いわゆるイントラボディとして発現させることができる。本発明のアミノNB酸配列aminoNBacidsequenceおよびポリペプチドは、例えばトランスジェニック哺乳動物において、例えばウサギ、ウシ、ヤギまたはヒツジの乳汁中に哺乳動物にトランスジーンを導入するための一般技法については、例えばUS6741957、US6304489およびUS6849992を参照されたい、植物または植物の一部限定するわけではないが、その葉、花、果実、種子、根また塊茎を含むにおいて例えばタバコ、トウモロコシ、ダイズまたはアルファルファにおいて、または例えばカイコBombixmoriの蛹において、生産させることもできる。さらにまた、本発明のNBアミノ酸配列およびポリペプチドは、無細胞発現系で発現およびまたは生産することもでき、そのような系の適切な例は当業者には明らかであるだろう。いくつかの非限定的な例には、小麦胚芽系における発現、ウサギ網状赤血球溶解物における発現、または大腸菌Zubay系における発現が含まれる。本明細書において言及するとおり、プラスミドまたはベクターから発現したNB剤を使用することの利点の一つは、それに基づくポリペプチドを適切な細菌系における発現によって製造できることであり、適切な細菌発現系、ベクター、宿主細胞、調節要素などは、例えば上に言及した参考文献などから、当業者には明らかであるだろう。しかし、本発明は、その最も広い意味において、細菌系における発現に限定されないことに注意すべきである。ある実施形態では、本発明のポリヌクレオチド配列のコドン使用が、特定の宿主細胞宿主生物のコドン使用の頻度を参照することによって、最適化される。その結果得られるヌクレオチド配列が、コドン最適化NBヌクレオチド配列である。コドン最適化NB配列は、原核または真核宿主細胞宿主生物における発現のために製作することができる。具体例には本明細書に記載する発現系が含まれる。本発明の一実施形態では、本発明のポリペプチドを医薬的使用に適した形態で与える発現系インビボまたはインビトロ、例えば細菌発現系が使用され、そのような発現系は、当業者には明らかであるだろう。当業者には明らかであるだろうとおり、医薬的使用に適した本発明のポリペプチドは、ペプチド合成の技法を使って製造することができる。工業的規模での生産の場合、NB剤またはNB剤含有タンパク質治療薬の工業的生産のための好ましい異種宿主には、大規模発現生産発酵に適した、特に大規模医薬すなわちGMPグレード発現生産発酵に適した、大腸菌、ピキアパストリスPichiapastoris、サッカロミセスセレビシエScerevisiaeの株が含まれる。そのような株の適切な例は、当業者には明らかであるだろう。そのような株および生産発現系は、Biovitrumスウェーデン、ウプサラなどの会社からも入手可能である。あるいは、大規模発現生産発酵には、特に大規模医薬発現生産発酵には、哺乳動物細胞株、特にチャイニーズハムスター卵巣CHO細胞を使用することもできる。ここでも、そのような発現生産系は、本明細書において言及する会社のいくつかからも入手することができる。具体的発現系の選択は、一つには、一定の翻訳後修飾、より具体的にはグリコシル化の必要性に依存するだろう。グリコシル化が望ましいまたは必要なNB剤含有組換えタンパク質の生産は、発現したタンパク質をグリコシル化する能力を有する哺乳類発現宿主の使用を必要とするであろう。これに関して、得られるグリコシル化パターンすなわち、取り付けられる残基の種類、数および位置が、発現に使用される細胞または細胞株に依存することは、当業者には明らかであるだろう。好ましくは、ヒト細胞またはヒト細胞株を使用するかすなわち、本質的にヒトグリコシル化パターンを有するタンパク質につながる、またはヒトグリコシル化と本質的およびまたは機能的に同じグリコシル化パターンを与えるか少なくともヒトグリコシル化を模倣することができる他の哺乳動物細胞株を使用する。一般に、大腸菌などの原核宿主は、タンパク質をグリコシル化する能力を持たず、酵母などの下等真核生物の使用は、通常、ヒトグリコシル化とは異なるグリコシル化パターンをもたらす。それでもなお、得られるべき望ましいアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドに応じて、本発明では上述の宿主細胞および発現系の全てを使用することができると理解すべきである。したがって、本発明の非限定的一態様によれば、発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドはグリコシル化されている。本発明のもう一つの非限定的態様によれば、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは非グリコシル化体である。本発明の好ましい、ただし非限定的な一態様によれば、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは、細菌細胞、特に大規模医薬生産に適した細菌細胞、例えば本明細書において言及する株の細胞などにおいて生産される。本発明のもう一つの好ましい、ただし非限定的な態様によれば、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは、酵母細胞、特に大規模医薬生産に適した酵母細胞、例えば本明細書において言及する種の細胞において産生される。本発明のさらにもう一つの好ましい、ただし非限定的な態様によれば、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは、哺乳動物細胞、特にヒト細胞またはヒト細胞株の細胞、より具体的には大規模医薬生産に適したヒト細胞またはヒト細胞株の細胞、例えば上記の細胞株において生産される。本発明のアミノ酸配列、NB剤およびポリペプチドを生産するために宿主細胞における発現を使用する場合は、本発明のNBアミノ酸配列およびポリペプチドを、細胞内で例えばサイトゾル、ペリプラズム、または封入体において生産させた後、次に宿主細胞から単離し、場合によってはさらに精製することもできるし、細胞外に例えば宿主細胞を培養する培地中に生産させた後、培養培地から単離し、場合によってはさらに精製することもできる。したがって、本発明の非限定的一態様によれば、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは、細胞内で生産され、かつ宿主細胞から、特に細菌細胞から、または細菌細胞中の封入体から単離されたアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドである。本発明のもう一つの非限定的態様によれば、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは、細胞外に生産され、かつ宿主細胞を培養する培地から単離されたアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドである。発現系についてのさらに詳しい解説は、例えばWO08020079の138頁および139頁に記載されている。これらの宿主細胞と共に使用するためのプロモーターの非限定的リストも含まれる例えばWO08020079の139頁および140頁に挙げられているものを含む。これらの宿主細胞と共に使用するための分泌配列の非限定的リストも含まれる例えばWO08020079の140頁に挙げられているものを含む。本発明の宿主または宿主細胞を形質転換するための適切な技法は、当業者には明らかであり、意図した宿主細胞宿主生物および使用する遺伝子コンストラクトに依存しうる。ここでも、本明細書において言及する参考書および特許出願を参照されたい。本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドがまず最初に本明細書においていうところの未成熟型で生成され、次にそれが使用する宿主細胞宿主生物に依存して翻訳後修飾に付される場合があることも、当業者には明らかであるだろう。また、本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは、ここでもやはり使用する宿主細胞宿主生物に依存して、グリコシル化されていてもよい。本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドは、次に、宿主細胞宿主生物から、およびまたは前記宿主細胞または宿主生物を培養した培地から、自体公知のタンパク質単離およびまたは精製技法、例えば分取用クロマトグラフィーおよびまたは電気泳動技法、分別沈殿技法、アフィニティ技法例えば本発明のアミノ酸配列、NB剤またはポリペプチドと融合された特異的切断可能アミノ酸配列を使用するものおよびまたは分取用免疫技法例えば単離しようとするアミノ酸配列に対する抗体を使用するものなどを使って、単離することができる。医薬製造または医薬組成物一般に、医薬的使用には、本発明のポリペプチドを、少なくとも1つの本発明のポリペプチドと、少なくとも1つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤およびまたは佐剤と、場合によっては1つ以上のさらなる医薬活性ポリペプチドおよびまたは化合物とを含む医薬調製物または医薬組成物として製剤化することができる。非限定的な例として、そのような製剤は、経口投与、非経口投与例えば静脈内、筋肉内もしくは皮下注射または静脈内注入によるもの、局所投与topicaladministration、吸入による投与、皮膚貼付剤による投与、インプラントによる投与、坐剤による投与などに適した形態をとりうる。そのような適切な投与形態これは、投与の方法に依存して固形、半固形、または液状であることができるならびにその製造に使用するための方法および担体は、当業者には明らかであるだろうし、本明細書においてもさらに説明する。そのような医薬調製物または医薬組成物を、本明細書においては一般に、医薬組成物と呼ぶことにする。ヒト以外の生物に使用するための医薬調製物または医薬組成物は、一般に、獣医学用組成物と呼ぶことにする。したがって、さらなる一態様において、本発明は、少なくとも1つの本発明のアミノ酸、少なくとも1つの本発明のNB剤または少なくとも1つの本発明のポリペプチドと、少なくとも1つの適切な担体、希釈剤または賦形剤すなわち医薬的使用に適したものと、場合によっては1つ以上のさらなる活性物質とを含有する医薬組成物に関する。一般に、本発明のアミノ酸配列およびポリペプチドは、自体公知の任意の適切な方法で製剤化し、投与することができる。例えば上に挙げた一般的背景技術特にWO04041862、WO04041863、WO04041865、WO04041867およびWO08020079ならびに標準的参考書、例えばRemingtonsPharmaceuticalSciences第18版、MackPublishingCompany、米国1990、RemingtontheScienceandPracticeofPharmacy第21版、LippincottWilliamsandWilkins2005;またはHandbookofTherapeuticAntibodies6タグをコードしていた。このファージミドベクターは、個々のDR5NBコンストラクトをgene3産物との融合タンパク質として発現するファージ粒子の産生を可能にする。[表5]プライマーおよびリンカー配列とその配列番号14.選択0~1マイクログラムmlの異なる濃度の短い182アミノ酸ヒトDR5Fc融合タンパク質RDSystems、ミネソタ州ミネアポリス、カタログ番号631T2CF、全外部ドメインヒトDR5Fc融合タンパク質ヒトIgG1Fcに融合されたヒトDR5アミノ酸56~213およびビオチン化された短い133残基組換えヒトDR5Peprotech、ニュージャージー州ロッキーヒル、カタログ番号31019を、それぞれプレートおよびストレプトアビジン被覆プレート上に固定化する。ブロッキングは、1カゼインを補足したPBSを使って行う。上述の3つのpAX50ライブラリーから調製されたファージを加え、30分間インキュベートする01カゼインおよび01ツイーン20を補足したPBS中。結合していないファージを洗い流し005ツイーン20を補足したPBSを使用;トリプシンPBS中1mgmlを添加して37°Cで30分間インキュベートすることにより、結合しているファージを溶離させる。溶離したファージを、指数増殖期のTG1細胞に感染させ、次にそれをアンピシリン含有LB寒天プレート上にプレーティングする。選ばれたアウトプットから調製したファージを、上述のように、完全長ヒトDR5Fc融合タンパク質ヒトIgG1Fc融合されたヒトDR5アミノ酸56~213およびビオチン化された短い133残基組換えヒトDR5Peprotech、ニュージャージー州ロッキーヒル、カタログ番号31019での2ラウンド目の選択におけるインプットとして使用する。1ラウンド目および2ラウンド目の選択のアウトプットのプラスミドDNAを調製し、SfiIおよびBstEIIで消化し、抗DR5NBコンストラクトをコードするDNAフラグメントを、pAX51ベクター中にライゲーションし、TG1コンピテント細胞に形質転換する。pAX50は、LacZプロモーター、アンピシリンまたはカルベニシリンに対する耐性遺伝子、マルチクローニング部位およびgen3リーダー配列を含有するpUC119由来の発現ベクターである。このベクターは、NBコンストラクトコード配列とインフレームに、C末端cmycタグおよび6タグをコードしていた。カルベニシリン耐性クローンをインサートの存在について分析し、陽性クローンの配列を検証した。目的のDR5NBコンストラクトを含有するTG1細胞を、カルベニシリンを補足したTB培地中で成長させ、IPTGの添加によって発現を誘導する。発現を37°Cで4時間継続させる。遠心分離後に、細胞ペレットを一晩凍結してから、PBS培養体積の10分の1に4°Cで1時間再懸濁し、再び遠心分離する。その結果得られる上清をペリプラズム抽出物として使用する。15.スクリーニングペリプラズム抽出物上述のものを、ELISAにより、DR5結合について分析する。ペリプラズム抽出物の10倍希釈液を、短い133残基組換えヒトDR5Peprotech、ニュージャージー州ロッキーヒル、カタログ番号31019またはカニクイザルDR5Fc融合タンパク質ヒトIgG1Fcに融合されたシノDR5アミノ酸56~213アミノ酸56~213IgG1NVTSでコーティングしたプレートに加え、2時間インキュベートする01カゼインおよび01ツイーン20を補足したPBS中。結合していないペリプラズム抽出物を洗い流し005ツイーン20を補足したPBSを使用、マウス抗mycRoche、スイスバーゼル、カタログ番号11667149001と、それに続いてウサギ抗マウスアルカリホスファターゼSigma、ミズーリ州セントルイス、カタログ番号A1902とを使用することにより、結合しているNBコンストラクトを検出する。もう一組の実験では、ヒトDR5を発現する細胞株Colo205またはカニクイザルDR5を発現する細胞株CMVプロモーターの下流に完全長シノDR5遺伝子を保因する発現ベクターでトランスフェクトされたCHOK1細胞を、ペリプラズム抽出物10ウシ胎仔血清を補足したPBSに再懸濁したものに暴露する。細胞結合型DR5へのNBコンストラクトの結合は、マウス抗mycモノクローナル抗体、クローン9E10、ATCC英国テディントン番号CRL1729は、マウスにおいて腹水として生産され、標準的アフィニティクロマトグラフィーを使って社内で精製すると、それに続く抗マウスIgGフィトエリスリンphytoerythrinJacksonImmunoResearchLaboratories、ペンシルバニア州ウェストグローブ、カタログ番号115115164とを使って検出する。死細胞をTOPRO3MolecularProbes、カリフォルニア州カールズバッド、カタログ番号T3605で対比染色する。結果を表6に示す。[表6]ELISAABS405nmによるDR5への単量体型NBコンストラクトの結合DR5へのNBコンストラクトの結合を、表面プラズモン共鳴により、Biacore3000測定器で評価する。270RUの短い133残基組換えヒトDR5Peprotech、ニュージャージー州ロッキーヒル、カタログ番号31019でコーティングしたCM5センサーチップ上にペリプラズム抽出物の希釈液を流すことによって、結合の特異性を分析する。解離相を分析し、対応する脱離速度koffを表7および表8に記載する。表7は、FACSによる細胞結合型DR5への単量体型NBコンストラクトの結合に関する結果平均蛍光カウント数を示す。表8は、表面プラズモン共鳴によって決定された脱離速度に関する結果を示す。配列は表1~4に記載する。[表7]FACSによる細胞結合型DR5への単量体型NBコンストラクトの結合[表8]表面プラズモン共鳴によって決定された脱離速度1s2.実施例II21.三量体化抗DR5NBコンストラクトをコードするDNAフラグメントをMfeIおよびBstEIIで消化し、pAX73、pAX74およびpAX75ベクター中に、リンカー配列とインフレームにクローニングする。これらをTG1コンピテント細胞に形質転換し、カナマイシン耐性クローンをインサートの存在について分析し、配列を検証する。その結果得られたコンストラクトをSfiI、BpuAIおよびNotIで消化し、次に、NBコンストラクト含有フラグメントを4点fourpointライゲーションにより、SfiINotI消化pAX51ベクター中にクローニングする。陽性カルベニシリン耐性クローン、すなわち三価CMYCHIS6タグ付きNBコンストラクトコンストラクトをコードするもの各NBコンストラクトビルディングブロックはリンカー配列によって次のブロックに融合されているの配列を検証する。pAX73、pAX74、pAX75およびpAX83は、カナマイシンまたはネオマイシンに対する耐性遺伝子、マルチクローニング部位を含有するpUC由来のクローニングベクターであり、これらのベクターは、NBコンストラクトコード配列とインフレームに、GlySerリンカー配列をコードする。22.四量体化M13Rev配列番号78およびRev30GlySer配列番号79またはForGlySer35配列番号80およびM13Fwd配列番号77をそれぞれ使用するPCRによって、抗DR5NBコンストラクトをコードするDNAフラグメントを増幅する。Rev30GlySerとForGlySer35はどちらもリンカー配列をコードする表5のプライマー配列。PCR産物をMfeI、BamHIおよびBstEIIで消化し、両フラグメントを、ベクターがコードするリンカー配列とインフレームに、3点ライゲーションによってpAX75およびpAX83に一緒にクローニングする。これらをTG1コンピテント細胞に形質転換し、カナマイシン耐性クローンを二価NBコンストラクトインサートの存在について分析し、配列を検証する。次に、陽性二価クローンをSfiI、BpuAIおよびNotIで消化してから、NBコンストラクト含有フラグメントをSfiINotI消化pAX51ベクター中にクローニングする。各NBコンストラクトビルディングブロックがリンカー配列によって次のブロックに融合されている四価NBコンストラクトコンストラクトをコードしている陽性カルベニシリン耐性クローンの配列を再び検証する。23.五量体化4つ目のGlySerリンカー配列と5つ目のNBビルディングブロックをコードする合成遺伝子を、GeneArtAGドイツレーゲンスブルクに注文する。次に、これらのフラグメントをHgaIおよびNotIで消化し、BstEIINotI消化四価NBコンストラクト中にライゲーションする。24.小規模発現目的の多価抗DR5NBコンストラクトを含有するTG1細胞を、TB培地100mgmlカルベニシリンが入っているバッフル付き振とうフラスコで成長させ、1mMIPTGの添加によって発現を誘導する。発現を37°Cで4時間継続させる。細胞を収集した後、ペリプラズム抽出物を調製し、HIS6タグ付きNBコンストラクトを固定化金属アフィニティクロマトグラフィーHisTrapFFCrude、GEHealthcareで精製した後、PBS中でのゲル濾過クロマトグラフィーSuperdex75HR1610、GEHealthcareによって精製する。3.実施例III31.Biacoreでの結合BiacoreCM5センサーチップを短い182アミノ酸ヒトDR5Fc融合タンパク質RDSystems、ミネソタ州ミネアポリス、カタログ番号631T2CFまたはカニクイザルDR5Fc融合タンパク質アミノ酸56~213IgG1NVTSでコーティングする。次に、異なる濃度1~100nMの一価および多価抗DR5NBコンストラクトで、結合相互作用の速度論的解析のために、チップ上を覆う。全ての多価抗DR5NBコンストラクトがヒトおよびカニクイザルDR5に結合する表9。[表9]表面プラズモン共鳴によって決定された抗DR5NBコンストラクトのアフィニティMND:未決定;BDL;検出限界未満32.FACSでの結合もう一組の実験では、ヒトDR5を発現する細胞株Colo205またはカニクイザルDR5を発現する細胞株CMVプロモーターの下流に完全長シノDR5遺伝子を保因する発現ベクターでトランスフェクトされたCHOK1細胞を、1nMの多価抗DR5NBコンストラクト10ウシ胎仔血清を補足したPBSに再懸濁したものに暴露する。細胞結合型DR5へのNBコンストラクトの結合を、マウス抗mycモノクローナル抗体、クローン9E10、ATCC英国テディントン番号CRL1729は、マウスにおいて腹水として生産され、標準的アフィニティクロマトグラフィーを使って社内で精製すると、それに続く抗マウスIgGフィトエリスリンphytoerythrinJacksonImmunoResearchLaboratories、ペンシルバニア州ウェストグローブ、カタログ番号115115164とを使って検出する。死細胞をTOPRO3MolecularProbes、カリフォルニア州カールズバッド、カタログ番号T3605で対比染色する。全ての多価NBコンストラクトが細胞結合型ヒトおよびカニクイザルDR5に特異的に結合する。短鎖型DR5および長鎖型DR5のそれぞれに対するNB剤の結合は、それぞれについてほぼ等価であることから、全てのエピトープはこれら2つの形態の間に共通して保持されていることが示唆される。もう一つの実験では、見掛けの結合定数を、細胞結合型ヒトおよびカニクイザルDR5への10~0005nMの四価抗DR5NBコンストラクトのFACSでの飽和結合実験上述したものから推定する。見掛けの結合定数はGraphPadPrism5GrafPadSoftware、カリフォルニア州サンディエゴを使って算出する。33.DR5特異性DR5特異性を試験するために一群のTNF受容体スーパーファミリーメンバーを選択する表10。TNF受容体スーパーファミリーのメンバーの細胞外ドメインをpBadThioTopo中にクローニングし、大腸菌株TOP10InvitrogenC404003に形質転換する。製造者のプロトコールに従ってタンパク質を発現させる。ELISAスクリーニングのために細胞溶解物を収集する。溶解物10mLにつき25μLの20BSAを加える。His捕捉プレートSigmaS5688を100μLの溶解物でコーティングし、室温で1時間インキュベートする。残っている溶液を吸引し、ウェルをPBS005ツイーンPBSTで3回洗浄する。一次抗体を、ブロッキングバッファー10FBSを含有するPBSに、次のように希釈する:LBY135陽性対照、抗DR5抗体、NovartisAGは024mgmLに希釈し、ウサギ抗V5AbcamAb9116100は1:5000希釈する。1ウェルにつき100μLの希釈一次抗体を加える。アッセイプレートを室温で1時間インキュベートしてから、PBSTで3回洗浄する。V5と共にインキュベートしたウェル用の二次抗体ヤギ抗ウサギIgGHRPJacksonImmunoresearchLaboratories111035046と、ヤギ抗ヒトIgGHRPJacksonImmunoresearchLaboratories109035098LBY135と共にインキュベートしたウェル用を、5FBSおよび0025ツイーンを含有するPBSに15000希釈する。適当なウェルに100μLの二次抗体を加える。室温で1時間のインキュベーション後に、プレートをPBSTで3回洗浄する。100μLのSureBlueKPL520003を加え、発色し終えたら、プレートを650nmの吸光度で読み取る。[表10]TNF受容体スーパーファミリーメンバー全てのNBコンストラクトがDR5に特異的に結合するが、他のTRAILおよびTNF受容体ファミリーメンバーには結合しない。例えば図1参照。34.Biacoreエピトープマッピング短い133残基組換えヒトDR5Peprotech、ニュージャージー州ロッキーヒル、カタログ番号31019でのBiacore脱離速度スクリーニング表8により、全ての抗DR5NBコンストラクトはDR5の細胞外ドメインに結合するが、選択的にスプライスされる29残基の領域アミノ酸残基185~231には結合しないことが明らかになった。もう一つの実験では、BiacoreCM5センサーチップを一価抗DR5NBコンストラクト230~520RUでコーティングする。次に、500nMの短い133残基組換えヒトDR5Peprotech、ニュージャージー州ロッキーヒル、カタログ番号31019で、飽和に達するまで、チップ上を覆う。この時点で、50nMヒトTRAILRDSystems、ミネソタ州ミネアポリス、カタログ番号375TECCFでチップ上を覆い、結合シグナルの増加を使って、TRAILエピトープとの比較で、NBコンストラクトを異なるエピトープクラスに分類する表11。[表11]TRAILと比較した抗DR5NBコンストラクトのエピトープマッピング35.インビトロ細胞生存実験に先だって細胞を対数増殖相に維持する。アッセイの日に、細胞を、96ウェルプレートCorningInc、マサチューセッツ州ローウェル、カタログ番号3917に、1ウェルあたり5000~20000細胞の密度で移し、次に、段階希釈した抗DR5NBコンストラクトを50μlウェルの量で加える。24~72時間インキュベートした後、生き残った細胞の相対数を、ルシフェラーゼに基づくATP定量キットCellTiterGlo、Promega、ウィスコンシン州マディソン、カタログ番号G7571を使って定量し、ルミネセンスプレートリーダーFluoroskanAscentFL、ThermoElectron、マサチューセッツ州ウォルサムで読み取る。Colo205細胞を使った生存アッセイにおいて、三価抗DR5NBコンストラクトのパネルをスクリーニングする。このアッセイにおいて生物学的に活性でないそれぞれの一価対応物とは対照的にデータ未掲載、全ての三価コンストラクトはColo205に対してアポトーシスを誘導した表12参照。無関係な非DR5結合性NBコンストラクトの四価コンストラクトはアポトーシスを誘導しなかった。[表12]Colo205に対する三価抗DR5NBコンストラクトのインビトロ力価IC50Mもう一つの実験表13では、選ばれた三価抗DR5NBコンストラクトを、腫瘍および成長細胞株のパネルに対して、細胞生存アッセイでスクリーニングする。[表13]三価抗DR5NBコンストラクトのインビトロ力価IC50M20:IC5020nMもう一つの実験表14では、選ばれた四価抗DR5NBコンストラクトを、腫瘍および成長細胞株のパネルに対して、細胞生存アッセイでスクリーニングする。[表14]四価抗DR5NBコンストラクトのインビトロ力価IC50M20:IC5020nM多量体の階層hierarchyを増加させると効力および力価の増加が起こることを示すグラフ表示を図6A、6Bおよび6Cに示すが、ここで、三量体型、四量体型および五量体型の11H6および4E6NBコンストラクトは、処理されたColo205およびH226腫瘍細胞に対する力価が、インビボで、それぞれ増加している。多価抗DR5NBコンストラクトは、腫瘍細胞株に対してアポトーシス誘導活性を示すが、正常健常細胞株に対しては示さない。多量体型NB組成物におけるサブユニット数が増加すると共にアポトーシス誘導活性の増加が見られるというのが、一般的傾向である。NBの四量体型から五量体型への増加は、細胞株に依存してIC50の低下または最大細胞死の増加によって例証されるとおり、細胞死アッセイにおける力価のさらなる増加の証拠を与える。36.架橋もう一つの実験では、cMYCタグを含有する多価NBコンストラクト10マイクログラムを、そのCMYCタグにより、15μgから最大150マイクログラムまでのマウス抗mycモノクローナル抗体、クローン9E10、ATCC英国テディントン番号CRL1729は、マウスにおいて腹水として生産され、標準的アフィニティクロマトグラフィーを使って社内で精製するで、室温における30分間のインキュベーション中に架橋させる。次に、その架橋NBコンストラクトをインビトロ細胞生存アッセイにおいて評価する。架橋の増加は、改善された力価および効力と相関した表15~16参照。表15には、Jurkat細胞に対する、異なる量の抗体で架橋された三価抗DR5NBコンストラクトのインビトロ力価IC50Mを記載する。表16には、Jurkat細胞に対する、異なる量の抗体と架橋された四価抗DR5NBコンストラクトのインビトロ効力死細胞を記載する。タグ付きNB多量体の架橋の量が増えると共に、より多くの細胞が殺されるというのが、一般的傾向である。[表15]架橋三価抗DR5NBコンストラクトのインビトロ力価IC50M比:架橋抗体四価抗DR5NBコンストラクトの重量比[表16]架橋四価抗DR5NBコンストラクトのインビトロ効力死細胞比:架橋抗体四価抗DR5NBコンストラクトの重量比37.血清安定性371.ELISAにおけるNBコンストラクトとDR5の結合NBコンストラクトを100新鮮ヒト血清と共に37°Cで24時間プレインキュベートする。平底96ウェルELISAプレートCostar、マサチューセッツ州ケンブリッジ、カタログ番号3590を、PBS中1μgmlのDR5Fc融合タンパク質DR5アミノ酸56~21350μlにより、4°Cで一晩コーティングする。次に、プレートを、PBS中の2BSAGibco、ニューヨーク州グランドアイランド、カタログ番号11018025300μlで、1時間ブロッキングし、3回洗浄する。10ヒト血清を含有するPBSバッファーにNBコンストラクトサンプルを段階希釈してから、ELISAプレートに加え、室温で1時間インキュベートした。洗浄後に、1:5000HRPコンジュゲート抗mycポリクローナル抗体Invitrogen:460709または1:7000ウサギ抗VHH抗体とそれに続く1:15000HRPコンジュゲート抗ウサギIgGJacksonImmunoResearchLaboratoriesInc、ペンシルバニア州ウェストグローブ、カタログ番号115035072とをプレートに加える。最後の一組の洗浄後に、100μlウェルのTMBMicrowellペルオキシダーゼ基質BioFX、メリーランド州オーイングスミルズ、カタログ番号TBNP100001を加え、室温で10分間インキュベートする。反応を100μlの停止試薬StopReagentBioFX、メリーランド州オーイングスミルズ、カタログ番号LSTP010001で停止する。生成物の比色法による検出を、SpectraMaxM5マイクロプレートリーダーMolecularDevices、カリフォルニア州サニーベールにおいて、450nmで行う。データは、SoftMaxProソフトウェアMolecularDevices、カリフォルニア州サニーベールで、そのユーザーマニュアルに従って解析する。ヒト血清は、抗Mycまたは抗NBコンストラクト抗体によって検出されるDR5へのNBコンストラクト三量体または四量体の結合の妨害を、ほとんど示さない。372.細胞生存アッセイにおけるNBコンストラクトの機能細胞生存アッセイを約10~15ヒト血清アルブミンの存在下および非存在下でも行う。四価抗DR5NBコンストラクトは、10ウシ胎児血清の存在下での対照アッセイと比較して、そのインビトロ力価を維持する。4.実施例IV41.単回投与インビボ三価抗DR5NBコンストラクト非近交系無胸腺nunu雌マウスHarlanSpragueDawley、インディアナ州インディアナポリスを麻酔し、各動物の右腋窩外側領域に、1×106個のColo205細胞を皮下移植する。腫瘍をサイズが200mm3になるまで成長させてから、投薬を開始する。NBコンストラクトをPBS中の溶液として調剤し、ボーラス静脈内注射により、200μgマウスの単回用量を投与する。1時間、2時間、4時間および8時間の時点で、腫瘍サンプルを動物群1時点につき1群、1群3匹から収集する。組織サンプルの一部をカスパーゼ3の免疫組織化学IHC染色に使用する。組織を直ちに10中性緩衝ホルマリンNBF、FisherScientific、ペンシルバニア州ピッツバーグ、カタログ番号SF10020に入れ、加工し、パラフィンブロックに包埋する。40μmの切片をSuperFrostPlus帯電スライドchargedslideFisherScientific、カタログ番号1255015上に切り出す。切片をキシレン中で脱パラフィンし5分×2、段階的アルコール系列100アルコールで5分、95アルコールで2分、70アルコールで2分、および脱イオン水で5分で水和する。水和した切片を、スライドをクエン酸バッファー001M、pH60、BioGenex、カリフォルニア州サンラモン、カタログ番号HK0809K中で10分間マイクロ波処理することによって行われる抗原回復に付した。スライドを、脱イオン水で5分間洗浄してから、自動染色装置DakoCytomationの染色ラックにのせる。以後のステップはDako自動システムを使って室温で行う。各ステップ間に、スライドをすすぎバッファーOptiMaxWashBuffer、Biogenex、カタログ番号HK5835Kで3回すすぐ。スライドを過酸化水素Dako、カタログ番号S2001と共に10分間インキュベートすることにより、内在性ペルオキシダーゼをブロッキングする。非特異的抗原反応をBlockSerumDako、カタログ番号X0909により10分間ブロッキングする。スライドを、切断型カスパーゼ3ウサギポリクローナル抗体CellSignalingTechnology、マサチューセッツ州ベバリー、カタログ番号9661と共に60分間インキュベートした後、ペルオキシダーゼコンジュゲート抗体DAKOEnvisionSystem、カタログ番号K4003に30分間暴露する。検出のために、DAB33ジアミノベンジジン溶液DakoCytomation、カタログ番号K3468を2分間適用する。免疫染色したスライドを、ハリスヘマトキシリンSurgiPath、カタログ番号01560で軽く対比染色し、一連の増加するアルコール濃度70、95および100アルコール、各1分によって脱水し、カバースリッパーLeicaで封入する。AperioシステムAperioTechnologiesInc、カリフォルニア州ビスタを使ってスライドをデジタル化スライドデータベースにスキャンし、Aperioの最適化されたポジティブピクセルカウンティングアルゴリズムPositivePixelCountingAlgorithmを使って画像解析を行う。イメージングシステムに付属のツールを使って区画markoutされた壊死領域および宿主組織部分を除く切片全体を画像解析に使用する。全ての多価抗DR5NBコンストラクトはカスパーゼ3活性を誘導する。組織サンプルの一部をTperバッファーPierce、イリノイ州ロックフォード、カタログ番号78510と混合した後、直ちに組織破砕機tissuelyserQiagen、カタログ番号85210でホモジナイズする。組織溶解物の上清を集め、そのタンパク質濃度を、標準的BCAアッセイPierce、カタログ番号1856210を使って決定する。NBコンストラクト濃度、抗体濃度および腫瘍におけるカスパーゼ3活性を調べるために、組織溶解物を、以下のアッセイで使用する。NBコンストラクト濃度はELISAで決定する。ELISAプレートNunc、ニューヨーク州ロチェスター、カタログ番号439454を、PBS中1μgmlのヒトDR5Fc融合タンパク質DR5アミノ酸56~213100μlにより、4°Cで一晩コーティングし、次にPBS中の1BSAGibco、カタログ番号11018025により、室温で1時間ブロッキングした後、3回洗浄する。段階希釈した血清または組織溶解物サンプルもELISAプレートに移し、室温で15時間インキュベートする。3回洗浄した後、122500希釈した抗VHHをELISAプレートに加え、室温で1時間インキュベートする。プレートをさらに3回洗浄してから、100μlウェルの120000希釈HRPヤギ抗ウサギPierce、カタログ番号31462と共に1時間インキュベートする。最後の一組の洗浄後に、100μlウェルのTMBMicrowellペルオキシダーゼ基質BioFX、メリーランド州オーイングスミルズ、カタログ番号TMBW010001を10分間加え、次に100μlの停止液BioFX、カタログ番号LSTP100001で反応を停止する。生成物の比色法による検出は、SpectraMaxM5マイクロプレートリーダーMolecularDevices、カリフォルニア州サニーベールにおいて450nmで行う。SoftMaxProソフトウェアMolecularDevices、カリフォルニア州サニーベールを使用し、そのユーザーマニュアルに従って、4パラメータモデルでデータを解析する。全てのNBコンストラクトは、血清および腫瘍組織における迅速なクリアランスと、素速い組織浸透を示す。腫瘍組織溶解物におけるカスパーゼ37活性は、CaspaseGloアッセイPromegaカタログ番号G8092により、そのユーザーマニュアルに従って評価する。SpectraMaxM5マイクロプレートリーダーMolecularDevices、カリフォルニア州サニーベールを使ってルミネセンスを読み取る。IHCの結果と合致して、全てのNBコンストラクトは、8時間以内にカスパーゼ3を活性化する。42.単回投与インビボ四価抗DR5NBコンストラクト非近交系無胸腺nunu雌マウスHarlanSpragueDawley、インディアナ州インディアナポリスを麻酔し、各動物の右腋窩外側領域に、1×106個のColo205細胞を皮下移植する。腫瘍をサイズが200mm3になるまで成長させてから、投薬を開始する。NBコンストラクトをPBS中の溶液として調剤し、ボーラス静脈内注射により、200μgマウスの単回用量を投与する。次に挙げる時点において、血清および腫瘍組織を動物群1時点につき1群、1群3匹から収集する:025時間、05時間、1時間、2時間、4時間、8時間、24時間、および48時間。腫瘍組織サンプルをTperバッファーPierce、イリノイ州ロックフォード、カタログ番号78510と混合した後、直ちに組織破砕機Qiagen、カタログ番号85210でホモジナイズする。組織溶解物の上清を集め、そのタンパク質濃度を、標準的BCAアッセイPierce、カタログ番号1856210を使って決定する。血清および組織溶解物におけるNBコンストラクト濃度は上述のようにELISAで決定する。平均血清中濃度時間プロファイルを、WinNonlinProfessionalSoftwareバージョン51内のモデルmodel7PharsightCorporation、米国仮フォルアに州マウンテンビューを使って、2コンパートメント薬物動態解析に付す。各NBコンストラクトについて、反復再重み付けiterativereweighting1yyここでyは濃度予測値であるを使って、濃度時間プロファイルをフィッティングする。さまざまなNBコンストラクトの平均滞留時間MRT、表17は26~135時間の範囲にあった。さまざまなNBコンストラクトの分布容積Vssは、20gマウスの血漿体積およそ15mlより2~35倍大きく、血管スペース外への大規模な分布を示している。さまざまなNBコンストラクトの総クリアランス率は、マウス糸球体濾過値およそ15ml時間の15以下であり、したがって全ての四価コンストラクトは、腎臓のレベルにおける尿濾過とそれに続く排泄を有意に減少させるのに著しく有用である。[表17]四価抗DR5NBコンストラクトのPKパラメータ腫瘍組織溶解物におけるカスパーゼ37活性は、CaspaseGloアッセイPromegaカタログ番号G8092により、そのユーザーマニュアルに従って、上述のように評価する。全ての四量体は類似するPDプロファイルを有する図2。さまざまなNBコンストラクトの薬理学的効果の力価EC50、効力Emaxおよび経時変化を記述するために、間接反応モデルを開発する。このモデルは、DR5受容体結合すなわち細胞カスパーゼの増強の刺激後に産生速度が高まった結果として生じる細胞カスパーゼレベルの変化を記述する。細胞カスパーゼの速度反応、Rは、次の等式によって記述される。等式1[式中、kinは零次合成速度であり、Rはカスパーゼレベルであり、Emaxは最大刺激であり、Cは腫瘍におけるNBコンストラクト濃度であり、nは反応形状因子であり、koutはカスパーゼ一次除去速度定数である]。腫瘍濃度時間プロファイルをまず、濃度時間データの合理的な特徴づけを与えるのに最小限必要な薬物動態関数にフィッティングするWinNonlinSoftwareバージョン51内の2コンパートメントモデル3またはモデル11。次に、各NBコンストラクトについて得られた薬物動態関数を、式1に入力関数として使用する。得られた薬力学パラメータを表18に列挙する。[表18]PKPDパラメータ単回投与四価抗DR5NBコンストラクト43.異種移植モデルを使ったインビボ試験非近交系無胸腺nunu雌マウスHarlanSpragueDawley、インディアナ州インディアナポリスの右腋窩外側領域に、総体積100mlの100ハンクス平衡塩類溶液HBSSに懸濁した約1~2×106個のCOLO205腫瘍細胞を皮下移植する。腫瘍をサイズが200mm3になるまで成長させてから、投薬を開始する。NBコンストラクトをPBS中の溶液として調剤し、週に1回投与するか、週に3回、月曜日、水曜日および金曜日に投与する。どちらの処置も、4週間にわたって静脈内投与する。週に1回または2回、腫瘍を測定し、個々の動物の体重を記録する。最初の投薬から7週間後に実験を終了する。抗腫瘍活性をTCとして表す処置群と媒体対照群との腫瘍体積の変化を比較。退縮は、式:×100を使って算出される式中、Tは実験終了時点における処置群の平均腫瘍体積であり、T0は実験開始時の平均腫瘍体積である。結果の統計的有意性は、一律に、一元配置ANOVA検定事後テューキー分析を使って行う。図3に示すように、NBコンストラクトは、Colo205腫瘍モデルにおいて、腫瘍の静止または退縮を誘導する。五量体型のNBコンストラクトは、四量体型より効力が強い傾向を示す。5.実施例V51.4E6のヒト化511.4E6ヒト化変異体の特徴づけ親4E6のタンパク質配列をヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系と整列させる表19。ヒト生殖細胞系配列に対するアミノ酸相違を文字で表し、同一アミノ酸を点で表す。下線を付したフレームワーク領域内のアミノ酸相違を、ヒト対応物への変換のために選択し、他の残基は手をつけずにおいておく。[表19]4E6親およびヒト化Nグリコシル化ノックアウト変異体のアラインメントVH3~23JH5=配列番号904E6=配列番号14E6Hu=配列番号26精製一価体を4E6、4E6Huおよび変異体4E6hxここで4E6hxは4E6Huと同じヒト化FR領域を持つが、4E6のCDR3を持つから作製する。次に、これらのコンストラクトを、ヒトおよびカニクイザルDR5への結合に関するいくつかのアッセイ、すなわちFACS飽和結合見掛けのKdおよびSPR速度論的解析において、特徴づける表20参照。また、変異体をサーマルシフトアッセイでも分析する表20。5μlの各精製一価抗DR5NBコンストラクト80μgmlを、10μlのバッファー100mMリン酸塩、100mMホウ酸塩、100mMクエン酸塩、115mMNaCl、35~9の範囲のさまざまなpHに緩衝化中で、5μlの蛍光プローブSyproOrangeInvitrogen、カリフォルニア州カールズバッド、カタログ番号S6551最終濃度10×と共にインキュベートする。次に、サンプルを、LightCycler480II装置Roche、スイスバーゼルで、37°Cから90°Cまで、44°C秒の速度で加熱し、その後、37°Cまで22°C秒の速度で冷却する。熱誘導アンフォールディング時に、タンパク質の疎水性パッチが露出して、そこにSyproOrangeが結合し、その結果、蛍光強度の増加が起こる。蛍光強度曲線の一次導関数の変曲点は、融解温度Tmの尺度として役立つ。さらなる詳細については、Ericssonら2006AnnalsofBiochemistry357289298を参照されたい。結局、4E6hx変異体は、4E6親と類似するアフィニティを示す。また、この変異体は4E6親と比較してTmが7増加している。[表20A]一価4E6ヒト化およびNグリコシル化ノックアウト変異体[表20B]一価4E6ヒト化およびNグリコシル化ノックアウト変異体512.ヒト化4E6のNグリコシル化ノックアウト変異体大腸菌が発現宿主である場合の唯一の16kDa産物に対して、Ppastorisにおける4E6hxの発現と、それに続くSDSPAGEおよび抗VHHポリクローナル抗Nanobody登録商標ウェスタンでは、2つの産物16kDaおよび21kDaの存在が明らかになる。PNGaseFによる処理と、コンカナバリンによる染色は、21kDa産物が16kDa産物のNグリコシル化型であることを明らかにする。PNGaseFを使ったタンパク質からのNグリコシル化部分の切断は、製造者の推奨に従って行うNewEnglandBiolabs、マサチューセッツ州イプスウィッチ、カタログ番号P0704S。PNGaseFは、N結合型糖タンパク質の高マンノース、ハイブリッド、および複合型オリゴ糖の最内側のGlcNAcとアスパラギン残基との間を切断するアミダーゼである。タンパク質Nグリコシル化の検出は、ウェスタンアッセイにおいて、αDマンノース、αDグルコースを含有する糖タンパク質を認識するレクチンであるコンカナバリンAを使って行う。ブロットされたタンパク質をブロッキングバッファーPBS、005ツイーン20、1mMCaCl2、1mMMnCl2で2時間ブロッキングした後、5μgmlのコンカナバリンAビオチンコンジュゲートSigma、ミズーリ州セントルイス、カタログ番号C2272と共に、ブロッキング緩衝液中、4°Cで終夜ONインキュベートする。検出は、ブロッキングバッファー中のExtrAvidinHRPコンジュゲートの12000希釈液および基質としてのDABSigma、ミズーリ州セントルイス、カタログ番号E2886およびD6815を使って行われる。クーマシー染色ゲルで目に見える36kDaバンドは、PNGaseF酵素である。ヒトDR5での脱離速度分析により、Ppastorisが産生した物質と大腸菌が産生した物質とでは、>8倍の増加が明らかになったことから、Nグリコシル化はDR5への4E6huの結合を妨害することが示唆される。潜在的Nグリコシル化モチーフが4E6および4E6hxのCDR3中に存在するアミノ酸nrs-表19においてボールド体かつイタリック体で示すもの。4E6Hu変異体ボールド体の大文字で示す置換A残基を持つCDR3-表19を作製し、大腸菌中で生産、精製し、FACS飽和結合アッセイおよびSPR速度論的解析を使って、ヒトおよびカニクイザルDR5への結合についてアッセイする表20。4E6Huは、4E6hxと比較して、ヒトDR5にもカニクイザルDR5にも、等しい結合特徴を有する。Ppastorisで発現した場合、4E6Hu変異体は、16kDa産物だけを与える。これにより、グリコシル化モチーフの機能的ノックアウトが確認される。513.4E6Huのインビトロ特徴づけ精製四価体を、野生型4E6およびそのヒト化変異体4E6Huから作製する。次にこれらを、Colo205およびJurkatでの細胞生存アッセイにおいてアッセイする表21。ヒト化変異体の力価および効力は、親4E6コンストラクトと比較的同等である。[表21]四価野生型4E6および4E6Huのインビトロ力価および効力52.11H6ヒト化521.11H6ヒト化変異体の特徴づけ野生型11H6のタンパク質配列をヒトVH323DP47およびJH5生殖細胞系と整列させる表22。ヒト生殖細胞系配列に対するアミノ酸相違を文字で表し、同一アミノ酸を点で表す。下線を付したフレームワーク領域内のアミノ酸相違を、ヒト対応物への変換のために選択し、他の残基は手をつけずにおいておく。[表22]11H6親およびヒト化変異体のアラインメントVH323JH5=配列番号9011H6=配列番号511H6hu=配列番号3011H6および11H6Huについて精製一価体を作製し、次にそれらを、ヒトおよびカニクイザルDR5への結合に関するいくつかのアッセイ、すなわちFACS飽和結合見掛けのKdおよびSPR速度論的解析において、特徴づける表23。また、変異体をサーマルシフトアッセイでも分析する表23。11H6hu変異体は親11H6の結合特徴を保っている。また、これは親11H6と比較して融解温度が8増加している。TmはpH7において決定する。[表23]一価11H6親およびヒト化変異体の特徴づけ522.11H6Huのインビトロ特徴づけ精製四価体を親クローン11H6およびそのヒト化変異体11H6Huから作製する。次に、これらを、Colo205およびJurkatに対して、細胞生存アッセイにおいてアッセイする表24。ヒト化変異体の力価および効力は親と同等である。効力は観察される死細胞のパーセンテージを表す。[表24]四価野生型11H6および11H6humのインビトロ力価および効力53.11H6Huおよび4E6Hu四量体および五量体のインビトロ特徴づけ細胞を96ウェルプレートCostar3903白透明底に、約75コンフルエントにする意図を持って、プレーティングする。アッセイの前日に100μlの培地中に、細胞を7500~15000細胞ウェルの範囲細胞株に依存でプレーティングする。アッセイ当日、培地を除去し、新鮮な培地を加える。次に、段階希釈したNB剤を加える出発濃度は細胞株に依存してさまざまでありうる。通常、出発濃度は1~20nMであり、これを一般に10回にわたって3~4倍希釈し、最終体積は150μlとする。次に細胞を、CO2供給培養器中、37°Cで24~72時間インキュベートする。インキュベーション後に、プレーティングした細胞とCellTiterGloPromegaG7571試薬とを室温にする約30分。次に、50μLの再構成CellTiterGlo試薬を各ウェルに加える。プレートを2~3分間振とうした後、暗所で10分間放置して平衡化してから、Spectromaxでルミネセンスを読み取った。具体例を表25に掲載する。[表25]11H6huおよび4E6hu四量体および五量体のインビトロ特徴づけ6.実施例VI61.白血病患者に関するエクスビボアッセイどの患者がNBコンストラクトによる処置に応答するかを予測するための方法として、白血病患者に関するエクスビボアッセイを記載する。処置に先だって血液サンプルを患者から取得し、それを使って潜在的処置応答をアッセイする。応答の程度および方向を処置の選択基準として使用する。T細胞白血病TALLはDR5刺激に対して一般に感受性であると考えられている。TALLサンプルを本発明のNBコンストラクトで処理し、白血病細胞の数が処置によって減少するかどうかまたはアポトーシスを起こすかどうかを決定するために評価した。アッセイ薬範囲は、本発明のNBコンストラクトによるエクスビボ処置については、約20nm~約00001nMである。他の適応症と診断された患者からの細胞サンプルも取得し、同様に試験してもよい。62.一般的エクスビボ感受性アッセイどの患者が1つ以上のNB剤に応答しうるかの予測を助けるための方法として、腫瘍サンプルを、実験室環境下、患者の体外で試験する。血液または組織からの初代患者腫瘍材料を、腫瘍タイプに応じて、上記のアッセイと同様に処理する。腫瘍を全血採血または組織生検によって取り出し、適当な組織培養プレートに0~24時間プレーティングする。次に、腫瘍標本を、ある希釈系列例えば出発濃度を20nMとし、3~4倍ずつ10回希釈することができるにおけるさまざまな濃度のNB剤で処理する。次に、組織培養プレートを、CO2供給培養器中、37°Cにおいて、NB剤で24~72時間または数時間1~24処理する。インキュベーション後に、プレーティングした標本を、処理に対する標本の応答を検出するための方法を使って分析する。上記の実施例と同様に、細胞生存に関するCellTiterGloPromegaG7571、またはカスパーゼ37活性化、またはアネキシンV染色、または細胞カウンティング、またはFACS分析、または成長、死、もしくはNB剤処理に対する応答を決定するための他の方法が提供される。NB剤感受性細胞株例えばJurkatもしくはNB剤非感受性細胞株BE13のどちらか一方、またはPBMC末梢血単核球、例えば健常ボランティアの血液から新たに調製されたもの、またはPBMCにスパイクした細胞培養細胞株の組合せを、CO2供給培養器中、37°Cにおいて35時間、さまざまな濃度のNB剤で処理した後、カスパーゼ37活性化を、製造者によって提供された指示に従って評価するPromegaG7790。7.実施例VII71.RAFMEKERK経路およびDR5活性の分析細胞死受容体5DR5は、その活性化により、多くの正常細胞を残したまま、がん細胞におけるアポトーシスが選択的に誘導されるので、がん創薬では特に興味深い。DR5特異的アゴニストコンストラクトは、リガンドの制約、すなわちDcR1、DcR2およびOPGなどのデコイ受容体への結合を回避しうる。DR5アゴニスト抗体の臨床開発にとって大きな障害は、患者のサブグループにおける効力を予測するバイオマーカーを同定することの難しさであった。200のがん細胞株からのデータの解析により、RASやRAF中のものを含めて明白な遺伝的変異はいずれも、DR5アゴニスト抗体であるLBY135NovartisAGに対する感受性と相関関係にないことが示された。プールされたshRNAをDR5増感sensitizationレスキューrescueに基づいてスクリーニングする戦略を使って、遺伝子摂動後にDR5を介したアポトーシスを調整する遺伝子または経路を同定する。このスクリーニングは、さまざまな系譜にわたる7つのがん細胞株で行われ、組み込まれたヘアピンのSolexaベースのディープシーケンシングを使って、shRNA組成物をデコンボリュートdeconvoluteする。カスパーゼ8、カスパーゼ3およびDR5そのものをターゲットとするshRNAが、トップレスキュアーtoprescuerになり、BCLxlをターゲットとするものがトップセンシタイザーtopsensitizerになるように、一組の共通するセンシタイザーsensitizerとレスキュアーrescuerを、既知経路構成要素として同定する。興味深いことに、これらの共通遺伝子のセットに加えて、BRAFMEKERKの阻害も、DR5を介したアポトーシスに対して、相反する細胞環境依存的cellcontextdependent表現型を示す。具体的には、BRAFMEKERK経路の阻害は、DR5を介したアポトーシスに対するMiapaca2細胞の感受性を増加させるが、DR5を介したアポトーシスからColo205細胞をレスキューする。これら相反する表現型は、カスパーゼ8およびカスパーゼ9活性の異なる動態とよく相関するが、DR5発現レベルには依存しないようである。経路分析pathwaydissectionにより、2つの内在性アポトーシス阻害因子cFLIPおよびcIAP1は、DR5を介したアポトーシスとBRAFMEKERK経路との間のクロストークを媒介することが明らかになる。Miapaca2細胞では、U0126MEK阻害剤とDR5抗体の組合せがcFLIPおよびcIAP1タンパク質の分解を加速するのに対し、colo205ではcFLIPおよびcIAP1mRNAがアップレギュレートされる。これに合致して、shRNAまたは化学的阻害によるcFLIPまたはcIAP1の阻害は、Colo205細胞におけるレスキュー表現型を排除し、DR5を介したアポトーシスに対するMiapaca2の感受性をさらに増大させる。MEK阻害剤で処理したMiapaca2およびColo205細胞のマイクロアレイ解析により、両細胞株でダウンレギュレートされる遺伝子が、ERKの規準的下流ターゲットであるDUSP6、ETV5およびERG1を含めて明らかになる。72.DR5を介したアポトーシスの細胞環境依存的調節因子としてのBclxL、cIAP1およびBRAFMEKERK多くのタンパク質は、広く定義すれば細胞環境依存的調節因子として働く。例えばBclxL阻害剤であるABT737は、LBY135誘導アポトーシスに対して、ある範囲の表現型を示した。これは、調べられた35の細胞株のうち7つの細胞株で、LBY135の効果を強く増感し、9つの細胞株を穏やかに増感するが、他の19の細胞株に対しては効果がなかった。考えうる理由の一つは、一部の細胞株には、BclxLの阻害を補償する並行経路が存在するというものである。例えば、本発明者らのスクリーニングを解析することにより、BclxLに対するshRNAは、Miapaca2細胞これは実際にはMCL1をターゲットとするshRNAによって増感されるを除く、全ての細胞株を増感することが明らかになる。そのような種類の調節因子は、併用療法の開発を妨害しないであろう。この点において、cIAP1に対する阻害剤は、多数の細胞株においてDR5アゴニスト抗体を増感する、類似の調節因子である表26および未掲載データ。興味深いことに、cIAP1は、DR5およびBRAFMEKERK経路間のクロストークに特異的に関与するが、xIAPはそうではない。BRAFMEKERK経路は細胞環境依存的調節因子のカテゴリーに属する。その細胞環境依存的効果はセンシタイザーからアンタゴナイザーantagonizerにまで及んだ。そのような劇的な相違は、DR5を介したアポトーシスを調節するシグナリングネットワークへの洞察を得る機会を提供する。しかし、バイオマーカーを同定するべきであり、そうでなければ、たとえ増感効果が強くて望ましくても、そのような組合せを開発することは困難であるだろう。実際、ES2やA375などのDR5耐性細胞株の場合、BRAFMEK阻害剤は、下記の表において強い増感効果を示す唯一のパートナーであり、BclxLに対する阻害剤はそうではない。cIAP1のダウンレギュレーションは複数の細胞株における増感効果と関連し、これが、そのような併用療法のPDバイオマーカーであることが示唆される。本発明者らの結果は、DR5アゴニスト抗体とc1およびBRAFMEKに対する阻害剤との三元組合せが解決策になるかもしれないことを示唆している。表26はDR5アゴニスト抗体とcIAP1またはBclxLに対する阻害剤との間の相乗効果を示す。35の細胞株を、LBY135DR5アゴニスト抗体、NovartisAGのみで、またはLBW242cIAP1阻害剤またはABT737BclxL阻害剤と組み合わせてLBY135で処理する。5nMのLBY135において生存率が70より高い場合は、細胞を非感受性と記す。併用効果については、その組合せが細胞生存率を30を越えて低下させる場合にと記し、その組合せが細胞生存率を10~30低下させる場合にと記す。併用処置で相乗作用が観察されない場合はなしと記す。[表26]DR5アゴニストとcIAP1阻害剤またはBclxL阻害剤との間の相乗効果:増感;:強く増感;また、180の遺伝子も、MEK阻害によって2つの細胞株の間で差異的に調節されることが同定される。これらの遺伝子の調節を担っているであろう一組の転写因子をGSEAgenesetenrichmentanalysisによって予測し、続いて、shRNAを使って個別に調べることにより、それらの関与を確認する。多くの転写因子のうち、FOXO1とSP1だけが、Colo205細胞におけるmRNAレベルでのcFLIPまたはcIAP1の調節に果たすそれらの役割によって示されるとおり、2つの経路間のクロストークに直接関与することが見いだされる。しかし、Miapcaca2細胞では、cFLIPまたはcIAP1が、プロテアソームおよびカスパーゼ8依存的に、タンパク質レベルで調節される。最後に、低下したcIAP1タンパク質レベルはさらなる細胞株における、増感効果と関連する。これらの結果により、DR5アゴニスト抗体LBY135について、複数の強力な組合せ戦略が同定され、BRAFMEKERK経路によるDR5を介したアポトーシスの細胞環境依存的調節が判明する。shRNA結果を検証するために、BRAFおよびMEKに特異的な化学的阻害剤を使って、BRAFMEKERK経路を破壊する。すなわち、RAF265およびU0126はそれぞれBRAFおよびMEKの阻害剤である。どちらかの化合物によるBRAFMEKERK経路の阻害はLBY135処理に対してMiapaca2細胞を増感したが、LBY135処理からColo205細胞をレスキューした。他のBRAFおよびMEK特異的阻害剤も同様の表現型を与えた。Miapaca2細胞が活性化KRAS変異G12Cを持つのに対して、Colo205細胞は活性BRAF変異V600Eを持つ。したがってこれらの変異が異なる表現型の原因である可能性はある。しかし、Miapaca2細胞と同じKRAS変異を有するH2122は、Miapaca2のような増感効果を何も示さなかった。さらにまた、いずれもBRAF変異を有する7つのさらなる細胞株をスクリーニングすることにより、本発明者らは、MEK阻害剤が一部の細胞株には効果がなく、他の細胞株はMiapaca2細胞の場合と同じように増感されることを見いだした。総合すると、本発明者らの結果は、BRAF変異もKRAS変異も、DR5を介したアポトーシスに対するBRAFMEKERK経路の細胞環境依存的役割の説明にはならないことを示している。総合すると、BRAFMEKERKの阻害は諸刃の剣であり、DR5アゴニストと組み合わせて使用した場合に増感効果または拮抗効果をもたらしうる。DR5アゴニストと組み合わされたcIAP1またはXIAPの阻害剤、BclxLの阻害剤、またはcFLIPの阻害剤は、増感にとって十分である。しかし、BRAF阻害剤とMEK阻害剤またはERK阻害剤との組合せは、LBY135による前処理の効果を拮抗するようである。これは臨床において両経路をターゲットとする併用療法に関して懸念を生じさせるが、データは、cIAP阻害剤との三元組合せがこの拮抗作用の解決策になりうることを示唆している。すなわち、DR5アゴニスト、cIAP阻害剤cIAP1に対するものまたはXIAPに対するものおよび選ばれたMEK阻害剤またはBRAF阻害剤の三元組合せも、細胞死の相乗的誘導をもたらすはずである。73.実験プロトコールshRNAライブラリースクリーニングのために、キノムkinomeをターゲットとするプールされたshRNAライブラリーおよびアポトームapotomeshRNAに、ターゲット細胞を感染させ、ピューロマイシンで選択してから、架橋LBY135またはPBS対照で処理する。0、7および14日目に収集したサンプルをDNA抽出、組み込まれたshRNAのPCR増幅および精製に付した後、Solexaシーケンシングに付す。同時点における処理間の比較により、DR5を介したアポトーシスを調整するshRNAが明らかになる。PBS対照における時点間の比較により、細胞成長に対するshRNAの効果が明らかになる。次に、これらのヒットを個別の検証に付す。LBY135誘導アポトーシスに対するLIMK2増感Miapaca2およびColo205のノックダウンを分析するために、細胞をLIMK2に対するshRNAまたは対照ヘアピンに感染させ、5日間ピューロマイシンで選択してから、96ウェルプレートに播種して、その翌日に、架橋LBY135の段階希釈液で36時間処理する。細胞生存性をCelltiterglow試薬で測定し、LBY135で処理していないサンプルに標準化する。細胞生存率を濃度の関数としてプロットすることにより、用量反応曲線を作成する。データは、少なくとも2つの独立した実験のうちの代表的な実験の三つ一組の測定値の平均±SDを含む。MEKおよびBRAFの化学的阻害剤を使って、このスクリーニングにおけるshRNAの表現型を検証する。Miapaca2およびColo205をDMSO、MEK阻害剤U012610μMまたはBRAF阻害剤RAF2651μMと共に終夜プレインキュベートした後、架橋LBY135の段階希釈液で36時間処理した。細胞生存性をCelltiterglow試薬で測定し、LBY135で処理していないサンプルに標準化する。細胞生存率を濃度の関数としてプロットすることにより、用量反応曲線を作成する。データは、少なくとも2つの独立した実験のうちの代表的な実験の三つ一組の測定値の平均±SDである。DR5によるERKの活性化がどちらの細胞株でも無傷なままであることを示すために、Miapaca2細胞とColo205細胞をDMSOまたはU012610μMと共に終夜プレインキュベートし、架橋LBY135025nMで処理し、0時間、1時間、3時間および6時間の時点で、ERKおよびpERKに関するウェスタンブロット分析のために収集した。MEK阻害は、Colo205細胞では、DR5によって誘導されるカスパーゼ8、カスパーゼ9およびカスパーゼ37の活性を減少させるのに対し、Miapaca2細胞ではそれらを増加させる。Colo205およびMiapaca2を、0nM、025nMまたは1nMの架橋LBY135で7時間処理する。カスパーゼ8、カスパーゼ9およびカスパーゼ37の活性を分析するために細胞を溶解する。カスパーゼ活性をLBY135濃度の関数としてプロットする。データは少なくとも2つの独立した実験のうちの代表的実験である。MEKによって調節される遺伝子のうち、Colo205細胞とMiapaca2細胞の間で有意な相関関係を持つ遺伝子を明らかにするために、マイクロアレイ解析を使用する。5つの独立した実験において、Colo205細胞およびMiapaca2細胞を、DMSOまたはU0126と共に終夜プレインキュベートする。マイクロアレイ解析のためにRNAを抽出する。U0126処理細胞とDMSO処理細胞とを比較した各遺伝子の相対発現レベルを、Y軸上にColo205細胞の、そしてX軸上にMiapaca2の関数として、プロットする。74.DR5とRAFMEKERKの間のクロストークに関する作業モデル作業モデルは、DR5アゴニストによる処理がカスパーゼ8とERKの両方を活性化することを提唱する。これら2つの経路の間のクロストークは、DR5アゴニストによって誘導されるアポトーシスを制御するカスパーゼ8およびカスパーゼ9の活性化を負に調節するcFLIPおよびcIAP1によって媒介される。cFLIPおよびcIAP1は細胞環境依存的な方法で異なるレベルで調節される。Colo205細胞では、それらは、転写因子FOXO3およびSP1を介して、そのRNAレベルで調節され、それらの転写因子自体は、BRAFMEKERK経路によって調節される。Miapaca2細胞では、cFLIPおよびcIAP1が、プロテアソームおよびカスパーゼ8依存的に、タンパク質レベルで、BRAFMEKERK経路によって調節される。8.実施例VIII81.例示的Biacoreアッセイあるアミノ酸配列または他の結合剤が交差ブロックするかどうかまたは交差ブロックする能力を有するかどうかを決定するのに適切なアッセイはBiacoreアッセイである。このアッセイが、本明細書に記載するアミノ酸配列または他の結合剤、例えば本発明のポリペプチドのどれにでも使用できることは、理解されるであろう。Biacore機器例えばBiacore3000は製造者の推奨に従って操作する。ある例示的交差ブロッキングアッセイでは、ターゲットタンパク質をCM5Biacoreチップに、標準的なアミンカップリング化学を使ってカップリングすることにより、ターゲットでコーティングされた表面を作製する。典型的には200~800レゾナンスユニットのターゲットがチップにカップリングされるであろうすなわち、容易に測定可能な結合レベルを与えるが、使用される試験試薬の濃度によって容易に飽和可能である量。互いに交差ブロックする能力について評価しようとする2つの試験アミノ酸配列AおよびBと名付けるを結合部位のモル比が1対1になるように、適切なバッファー中で混合することで、試験混合物を生成させる。結合部位ベースで濃度を計算する際には、アミノ酸配列の分子量を、そのアミノ酸配列上のターゲット結合部位の数で割ったアミノ酸配列の総分子量と仮定する。試験混合物中の各アミノ酸配列の濃度は、Biacoreチップ上に捕捉されたターゲット分子上の、そのアミノ酸配列に対する結合部位が、容易に飽和するほど高くなければならない。混合物中のアミノ酸配列は結合ベースで同じモル濃度であり、その濃度は典型的には結合部位ベースで100~15マイクロモル濃度であるだろう。AのみおよびBのみを含有する別個の溶液も調製する。これらの溶液中のAおよびBは、試験混合物の場合と同じバッファー中に同じ濃度である。試験混合物をターゲット被覆Biacoreチップの上に通し、結合の総量を記録する。次にチップを、チップに結合しているターゲットを損傷することなく、結合したアミノ酸配列が除去されるような方法で処理する。典型的には、これは、チップを30mMHClで60秒間処理することによって行われる。次にAのみの溶液をターゲット被覆表面上に通し、結合量を記録する。チップを再び処理して、チップに結合しているターゲットを損傷することなく、結合したアミノ酸配列を全て除去する。次にBのみの溶液をターゲット被覆表面上に通し、結合量を記録する。次にAとBの混合物の最大理論結合を計算するが、これは、ターゲット表面上に単独で通した場合の各アミノ酸配列の結合の和である。実際に記録された混合物の結合がこの理論最大値よりも少ない場合、これら2つのアミノ酸配列は互いに交差ブロック性である。したがって、一般に、本発明の交差ブロック性アミノ酸配列その他の結合剤は、上記Biacore交差ブロッキングアッセイにおいて、アッセイ中に第2の本発明のアミノ酸配列その他の結合剤の存在下で記録される結合が、組み合わされた2つのアミノ酸配列または結合剤の最大理論結合すぐ上に定義したものの80~01例えば80~4、具体的には最大理論結合の75~01例えば75~4、より具体的には最大理論結合の70~01例えば70~4になるような形で、ターゲットに結合するであろうものである。上述のBiacoreアッセイは、アミノ酸配列その他の結合剤が本発明に従って互いに交差ブロックするかどうかを決定するために使用される一次アッセイである。ごくまれに、特定のアミノ酸配列その他の結合剤が、CM5Biacoreチップにアミン化学によってカップリングされたターゲットには結合しないこともありうるこれは通常、ターゲット上の問題の結合部位がチップへのカップリングによって遮蔽または破壊される場合に起こる。そのような場合は、タグ付き型のターゲット、例えばN末端Hisタグ付き型RDSystems米国ミネソタ州ミネアポリス;2005カタログ番号1406ST025を使って、交差ブロッキングを決定することができる。この特定フォーマットでは、抗Hisアミノ酸配列をBiacoreチップにカップリングした後に、Hisタグ付きターゲットをチップの表面上に通すと、抗Hisアミノ酸配列によって捕捉されるであろう。各チップ再生サイクル後に、新しいHisタグ付きターゲットが抗Hisアミノ酸配列被覆表面上に負荷し直される点を除けば、交差ブロッキング分析は、本質的に上述のように行われるだろう。N末端Hisタグ付きDR5を使用する上記の例の他に、これに代えて、C末端Hisタグ付きターゲットも使用することができるだろう。さらにまた、当技術分野において知られているさまざまな他のタグとタグ結合タンパク質の組合せも、上述の交差ブロッキング分析に使用できるだろう例えばHAタグと抗HA抗体;FLAGタグと抗FLAG抗体;ビオチンタグとストレプトアビジン。9.実施例IX91.例示的ELISAアッセイ以下に、あるターゲットに向けられたアミノ酸配列その他の結合剤が、本明細書に定義する交差ブロックをするかどうか、または交差ブロックをする能力を有するかどうかを決定するためのELISAアッセイを概説する。このアッセイは、本明細書に記載のアミノ酸配列または他の結合剤、例えば本発明のポリペプチドのどれにでも使用することができる。アッセイの一般原理は、ターゲットに向けられたアミノ酸配列または結合剤を、ELISAプレートのウェル上にコーティングされた状態にすることである。過剰量の第2の、交差ブロックする可能性がある、抗ターゲットアミノ酸配列を、溶液に加えるすなわち、ELISAプレートには結合させない。次に、限られた量のターゲットをウェルに加える。被覆アミノ酸配列と溶液中のアミノ酸配列とは、限られた数のターゲット分子の結合に関して競合する。プレートを洗浄して、被覆アミノ酸配列によって結合されていない過剰のターゲットを除去すると共に、第2の溶液相アミノ酸配列ならびに第2の溶液相アミノ酸配列とターゲットの間に形成された複合体も除去する。次に、結合したターゲットの量を、ターゲットを検出するのに適当な試薬を使って測定する。被覆アミノ酸配列を交差ブロックすることができる溶液中のアミノ酸配列は、第2の溶液相アミノ酸配列の非存在下で被覆アミノ酸配列が結合することのできるターゲット分子の数と比較して、被覆アミノ酸配列が結合することのできるターゲットの分子の数の減少を、引き起こすことができるであろう。第1のアミノ酸配列、例えばAbXが、固定化アミノ酸配列として選択される場合は、それをELISAプレートのウェル上にコーティングした後、その後に加えられる試薬の非特異的結合を最小限に抑えるために、そのプレートを適切なブロッキング溶液でブロッキングする。次に、過剰量の第2のアミノ酸配列、すなわちAbYを、1ウェルあたりのAbY[ターゲット]結合部位のモル数が、ELISAプレートのコーティング時に使用されるAbX[ターゲット]結合部位の1ウェルあたりのモル数よりも、少なくとも10倍は高くなるように、ELISAプレートに加える。次に[ターゲット]を、加えられる[ターゲット]の1ウェルあたりのモル数が、各ウェルをコーティングするために使用されるAbX[ターゲット]結合部位のモル数の25分の1以下になるように加える。適切なインキュベーション期間に続いて、ELISAプレートを洗浄し、ターゲットを検出するための試薬を加えて、被覆抗[ターゲット]アミノ酸配列この場合はAbXによって特異的に結合されたターゲットの量を測定する。このアッセイのバックグラウンドシグナルは、被覆アミノ酸配列この場合はAbX、第2の溶液相アミノ酸配列この場合はAbY、[ターゲット]バッファーのみすなわちターゲットなしおよびターゲット検出試薬を含むウェルで得られるシグナルと定義される。このアッセイの陽性対照シグナルは、被覆アミノ酸配列この場合はAbX、第2の溶液相アミノ酸配列バッファーのみすなわち第2の溶液相アミノ酸配列なし、ターゲットおよびターゲット検出試薬を含むウェルで得られるシグナルと定義される。ELISAアッセイは、陽性対照シグナルがバックグラウンドシグナルの少なくとも6倍になるような形で実施することができる。どちらのアミノ酸配列をコーティングアミノ酸配列として使用し、どちらのアミノ酸配列を第2の競合アミノ酸配列として使用するかの選択に起因するアーチファクト例えば[ターゲット]に対するAbXとAbYの有意に異なるアフィニティを避けるために、交差ブロッキングアッセイは、次の2つのフォーマットで行うことができる:1フォーマット1は、AbXをELISAプレート上にコーティングされるアミノ酸配列とし、AbYを溶液中の競合アミノ酸配列とするフォーマットであり、2フォーマット2は、AbYをELISAプレート上にコーティングされるアミノ酸配列とし、AbXを溶液中の競合アミノ酸配列とするフォーマットである。AbXおよびAbYは、フォーマット1またはフォーマット2のどちらか一方において、溶液相の抗ターゲットアミノ酸配列が、溶液相抗ターゲットアミノ酸配列の非存在下すなわち陽性対照ウェルで得られるターゲット検出シグナルと比較して、ターゲット検出シグナルすなわち被覆アミノ酸配列によって結合されるターゲットの量の60~100、具体的には70~100、より具体的には80~100の減少を引き起こすことができるのであれば、交差ブロック性であると定義される。10.実施例X101.マクロファージ枯渇実験現在のところ臨床開発中の抗DR5抗体は全て、インビトロおよびインビボで最適な力価を達成するために架橋を必要とする。インビボでは、この架橋が、抗DR5抗体のFc部分がFc受容体を発現する免疫細胞に結合することによって媒介されると考えられる。抗DR5抗体LCR211のインビボでの架橋効果を、この架橋を必要としないと予想されるNBコンストラクトと比較して調べるために、NODLtSzscidIL2Rgammanull雌マウスNSGマウスバックグラウンドにおいて、MiaPaCa2異種移植モデルにおける腫瘍関連マクロファージTAM枯渇条件下で、マウスIgG1抗DR5抗体LCR211の活性を、11H6四量体と比較する。NSGNODSCIDgammaマウスはT細胞、B細胞が欠損しており、IL2Rγ鎖の欠失の結果として破壊されたサイトカインシグナリングにより、NK細胞細胞傷害活性をほとんどまたは全く持たないShultzJofImmunology2005。TAMの枯渇は、CSF1受容体を介したシグナリングを阻害する小分子を使って達成される。1日1回200mgkgの投薬を3回行うと、先に示されているとおり、マクロファージが80まで枯渇する。毎日の投薬を試験中はずっと継続する。MiaPaCa細胞を指数成長期に収穫する。マトリゲルと5050に混合した500万個の細胞を、ヌードマウスの右上脇腹に皮下移植する。細胞移植のために、統合マルチチャンバ麻酔センターintegratedmultichambersanesthesiacenterIMCACおよび誘導チャンバVetequipInc、カリフォルニア州プレザントンを使って、マウスを2~4イソフルラン酸素混合物の連続流で麻酔する。腫瘍生着率tumortakerateは>90であり、細胞移植後14日前後で腫瘍は約150~350mm3に達する。動物を腫瘍体積に従って、平均腫瘍体積および範囲が処置群間でスチューデントのt検定で決定して統計的に類似するように、ランダム化する。投薬の開始時に、腫瘍を週に2回、デジタルキャリパーで測定する。楕円式:2を使って腫瘍体積を計算する。CSF1R阻害剤CSF1Riを250mgkgで1日1回qd経口投与して、またはCSF1R阻害剤の投与を行わずに、LCR211を10mgkgで週3回3qw静脈内投与し、11H6四量体を10mgkgおよび40mgkgで週1回qw静脈内投与する。パーセント処置対照TC値を次式を使って計算する:TC=100×ΔTΔCΔT>0の場合退縮=100×ΔTTinitialΔT<0の場合[式中、T=試験の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積;ΔT=試験の最終日における薬物処置群の平均腫瘍体積-投薬初日における薬物処置群の平均腫瘍体積;Tinitial=投薬初日における薬物処置群の平均腫瘍体積;C=試験の最終日における対照群の平均腫瘍体積;およびΔC=試験の最終日における対照群の平均腫瘍体積-投薬初日における対照群の平均腫瘍体積]。TCの計算は試験の最後に行う。表27および図4Aおよび4Bに見られるように、11H6四量体はNSGマウスバックグラウンドにおけるTAM枯渇条件下でもMiaPaCa2異種移植片において強力な単一薬剤活性を保っているが、同じ条件下でマウス抗DR5抗体LCR211は効力を失う。[表27]TAM枯渇条件下での11H6四量体効力の要約102.LCR211非感受性患者由来の腫瘍モデルにおけるDR5剤の抗腫瘍活性患者由来の膵腫瘍TPAN1IFAXentechを80雌ヌードマウスHarlan、移植時に約8週齢に皮下sc移植する。処置の開始時に動物を9つの群にランダム化する。出発腫瘍体積は99mm363~196mm3の範囲である。処置群は1媒体、週に1回qw、静脈内iv、2LCR211、10mgkg、週に3回3qw、iv、311H6四量体、10mgkg、qw、iv、411H6、40mgkg、qw、iv、5ゲムシタビン、60mgkg、週に2回2qw、ivである。静脈内投与体積は5mlkgである。マウスを週に2回計量する。腫瘍を週に2回キャリパーで計測し、式:TVmm3=長さmm×幅mm22を使って計算した腫瘍体積TVを使用するここで、長さおよび幅は、それぞれ、各腫瘍の最長および最短の直径である。図5に示すように、4週間の投薬後に、LCR211は単一薬剤活性を示さず、対照に対する処置群の腫瘍体積の平均変化TC=109である。対照的に、毎週10mgkgおよび毎週40mgkgの用量で投与される11H6は、それぞれ1および86の退縮をもたらす対照に対してp<005。ゲムシタビン処置は、25のTCをもたらす媒体に対してp<005。LCR211処置および11H6処置は認容性が高く、体重の有意な減少は観察されない。このように、DR5の従来の抗体ターゲティングに対して非感受性である患者由来がんにおいて、NBコンストラクトは強力な腫瘍退縮を示す。この例において、NBコンストラクトは、この経路について、従来のターゲティングアプローチに対して不応性でありうる、より大きな患者クラスを処置する潜在能力を有する。11.実施例XI111.ヒトDR5NBコンストラクト複合体のX線結晶構造決定単量体型コンストラクト11H6配列番号103および4E6配列番号104に結合したヒトDR5ECDフラグメントの結晶構造を決定する。以下に詳述するように、個々のDR5タンパク質フラグメントを発現させ、精製し、混合して、複合体を形成させる。タンパク質結晶構造解析を利用して、上記2つの実施例に結合したDR5タンパク質についての原子分解データを作成する。結晶構造解析用にDR5タンパク質の2つの変異体、すなわちDR554およびDR561を製造する。ヒトDR5、GenBankアクセッション番号BAA337231配列番号89の配列ナンバリングに従うと、これらのDR5配列は、それぞれ、残基54~183および61~183に相当する。表28に示すように、小文字の配列は製造中に除去される。DR554配列番号100およびDR561配列番号101について、ヒトDR5配列に下線を付す。表28においてIDは配列番号を表す。[表28]結晶構造決定に使用したタンパク質上記のタンパク質を、バキュロウイルス発現系とGP67シグナルペプチドを含有する発現ベクターとを使って、SF9細胞で発現させる。25日間の感染後に細胞成長培地からDR5タンパク質を精製する。5mMCaCl2、1mMNiCl2、50mMトリスpH80、および1μMPMSFを添加して、培地を清澄化する。重力流カラムを使って、50mMトリスpH80、300mMNaCl中で平衡化したNiNTA樹脂Qiagen上に、タンパク質を捕捉する。カラムを50mMトリスpH80、300mMNaCl、30mMイミダゾールで洗浄した後、50mMトリスpH80、300mMNaCl、300mMイミダゾールで溶出させる。Niカラムから溶出したDR5を、PreScissionプロテアーゼGEHealthcareで切断した後、50mMHEPESpH76、150mMNaCl中で平衡化したSuperdex75カラムGEHealthcareを用いるゲル濾過クロマトグラフィーに付す。DR5を、MonoQカラムGEHealthcareを使ったイオン交換により、pH75で、003-1MNaClの20カラム体積勾配を使って、さらに精製する。ピークフラクションをSDSPAGEおよびLCMSによって分析してからプールする。112.4E6および11H6のDR5との結晶化4E6pAX1114E6、配列番号103と11H6pAX10011H6、配列番号102はどちらも、それぞれBL21pLysS細胞およびBL21Star細胞を使った大腸菌での発現のために、単量体型NBコンストラクトとしてクローニングされ、どちらも、上記表28に記載するとおり、ペリプラスム局在用のシグナル配列を含有する。IPTGと共に37°Cで3時間インキュベートした後、細胞を収穫し、溶解する。タンパク質を、50mMトリスpH80、300mMNaCl中で事前に平衡化しておいたNiNTAカラム上に捕捉する。カラムを50mMトリスpH80、300mMNaCl、50mMイミダゾールで洗浄した後、50mMトリスpH80、300mMNaCl、300mMイミダゾールで溶出させる。そのNi溶出物を、Superdex75カラムGEHealthcareを用いるゲル濾過クロマトグラフィーによって、さらに精製する。11H6についてはこれが最終精製ステップであるが、4E6はMonoSカチオン交換カラムGEHealthcareによる追加の精製ステップに付した。DR5614E6の複合体は、DR561と4E6とを1:1のモル比濃度はLCUVで測定で混合し、氷上で1時間インキュベートし、20mMHEPESpH75、150mMNaCl中で平衡化したSuperdex75カラムGEHealthcareで複合体を精製することによって調製する。ピークフラクションをSDSPAGEおよびLCMSによって分析する。DR5614E6を含有するフラクションを、結晶化のために、約10mgmlまで濃縮する。DR55411H6の複合体は、DR554と11H6とを1:13のモル比濃度はLCUVで測定で混合し、氷上で1時間インキュベートし、25mMHEPESpH75、150mMNaCl中で平衡化したSuperdex75カラムGEHealthcareで複合体を精製することによって調製する。DR55411H6二量体を含有するピークフラクションをプールし、約127mgmlまで濃縮する。次にその二量体を次のようにトリプシン処理する:200μlの二量体約25mgを使って、20μgの凍結乾燥トリプシンを再懸濁し、次にそれを室温で15分間インキュベートする。DR55411H6トリプシン混合物を遠心分離してから、結晶化スクリーンをセットアップする。結晶は、等体積のタンパク質とリザーバー溶液とを含有する液滴からシッティングドロップ蒸気拡散法によって成長させる。DR5614E6複合体の場合は、22PEG3350、150mM酢酸カルシウム、100mMHEPESpH75のリザーバー溶液が、20°Cでのインキュベーション時に、結晶を生じた。トリプシン処理したDR55411H6複合体の場合は、02M硫酸アンモニウム、01MトリスpH85、25PEG3350のリザーバー溶液が、20°Cでのインキュベーション時に、結晶を生じた。DR5614E6結晶は、25PEG3350、50mMHEPESpH75、150mM酢酸カルシウム、15グリセロール、10エチレングリコールを含有するクライオ溶液に移して、液体窒素中で瞬間冷却する。DR5a5411H6結晶は、追加の22グリセロールを含有するリザーバー溶液に移し、液体窒素中で瞬間冷却する。DR5614E6複合体については、SwissLightSourcePaulScherrerInstitut、スイスフィリゲンにおいて、ステーションPXIX06SAで、回折データを収集する。データを、空間群C121において、格子定数a=9850Å、b=8465Å、c=6491Å、α=90°、β=9938°、γ=90°で、autoPROCGlobalPhasingLTDを使って、19Åで、処理し、スケーリングする。DR5614E6構造を、DR5構造2H9Gおよびラクダ化ヒトVH構造1OL0を検索モデルとして、PhaserMcCoyらJApplCryst40658674を使って、分子置換法で解く。非対称単位あたり2分子のDR5614E6複合体を含有する最終モデルを、COOTEmsleyCowtanActaCryst6021262132で構築し、PHENIXAdamsらActaCrystD66213221を使って、それぞれ222および241のRおよびRfree値ならびに結合距離および結合角についてそれぞれ0003Åおよび068°のrmsdまで精密化する。DR55411H6複合体については、AdvancedPhotonSourceArgonneNationalLaboratory、米国において、ビームライン17IDで、回折データを収集する。データを、空間群P65において、格子定数a=9961Å、b=9961Å、c=10773Å、α=90°、β=90°、γ=120°で、autoPROCGlobalPhasingLTDを使って、22Åで、処理し、スケーリングする。DR55411H6構造を、DR5構造2H9GおよびNBコンストラクト4E6を検索モデルとして、PhaserJApplCryst40658674を使って、分子置換法で解く。非対称単位あたり2分子のDR55411H6複合体を含有する最終モデルを、COOTEmsleyCowtanActaCryst6021262132で構築し、PHENIXAdamsらActaCrystD66213221を使って、それぞれ195および220のRおよびRfree値ならびに結合距離および結合角についてそれぞれ0002Åおよび064°のrmsdまで精密化する。113.4E6および11H6はDR5上のユニークエピトープを認識する4E6DR561複合体の結晶構造を使って4E6コンストラクトに対するDR5のエピトープを同定した。DR5上の相互作用表面は、表29Aに詳述するように、3つの断続的すなわち不連続な配列、すなわち残基77~80、残基87~91、および残基105~114によって形成される。これらの残基はNBコンストラクトによって認識される三次元表面を形成する。相互作用には、バックボーン相互作用、溶媒を介した相互作用、および直接的側鎖相互作用が含まれる。相互作用に直接寄与する側鎖を持つアミノ酸を表29Aに注記した。4E6NBコンストラクトからの相互作用表面への寄与は、そのN末端残基2、および3つのループ領域、すなわち残基28~33、残基53~59、および残基99~115によって形成される。接触残基を表29Bに列挙する。表29Aには、NBコンストラクト4E6と接触している原子を含有するDR5残基を列挙する。接触は、潜在的な水を介した相互作用を考慮して、NBコンストラクトの5オングストローム以内と定義する。相互作用表面に直接寄与する側鎖を有するアミノ酸にで印をつけている。[表29A]4E6に対するDR5のコンフォメーショナルエピトープ表29Bには、DR5と接触しているNBコンストラクト4E6中の残基を列挙する。接触は、潜在的な水を介した相互作用を考慮して、NBコンストラクトの5オングストローム以内と定義する。相互作用表面に直接寄与する側鎖を有するアミノ酸にで印をつけている。[表29B]DR5と接触している4E6のアミノ酸11H6DR554複合体の結晶構造を使って、11H6コンストラクトに対するDR5のエピトープを同定する。DR5上の相互作用表面は、表30Aに詳述するように、2つの断続的配列、残基86~102および残基111~118と、2つのさらなる残基74および125によって形成される。これらの残基はNBコンストラクトによって認識される三次元表面を形成する。相互作用には、バックボーン相互作用、溶媒を介した相互作用、および直接的側鎖相互作用が含まれる。相互作用に直接寄与する側鎖を持つアミノ酸を表30Aに注記した。11H6コンストラクトからの相互作用表面への寄与は、4E6コンストラクトで観察されたループ領域を越えて拡がっている。表30Bに詳述するとおり、残基30~37、残基44~61および残基96~112が、11H6コンストラクトの結合表面に寄与する。残基98から110までの11H6コンストラクトのループは、4E6コンストラクトの対応するループとは極めて異なるコンフォメーションをとっている。この代替的ループ位置が、DR5結合のためのユニークな相互作用表面を与える。表30Aには、NBコンストラクト11H6と接触している原子を含有するDR5残基を列挙する。接触は、潜在的な水を介した相互作用を考慮して、NBコンストラクトの5オングストローム以内と定義する。相互作用表面に直接寄与する側鎖を有するアミノ酸にで印をつけている。埋没表面積をパーセンテージとして決定する。[表30A]11H6に対するDR5のコンフォメーショナルエピトープ表30Bには、DR5と接触しているN11H6中の残基を列挙する。接触は、潜在的な水を介した相互作用を考慮して、NBコンストラクトの5オングストローム以内と定義する。相互作用表面に直接寄与する側鎖を有するアミノ酸にで印をつけている。[表30B]DR5と接触している11H6のアミノ酸均等物ある実施形態は、ヒトDR5に特異的に結合するNB剤の単一可変ドメインの単量体を少なくとも1つは含む、単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、段落[0612]のポリペプチドであって、該単一可変ドメインが、a配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;b配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して90の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;およびc配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して少なくとも95の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0612]のポリペプチドであって、該単一可変ドメインが、a配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つ以上から選択される1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;b配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つ以上から選択される1つ以上のCDR3配列に対して少なくとも90の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;およびc配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して少なくとも95の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0612]のポリペプチドであって、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;およびb配列番号1~5、26、30および87を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、ヒトDR5に特異的に結合する単一可変ドメインの単量体を少なくとも3つは含む、単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、段落[0616]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが3つの同一な単一可変ドメインの単量体を含み、該単一可変ドメインが、a配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;b配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して少なくとも90の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;およびc配列番号63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して少なくとも95の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0616]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが3つの同一な単一可変ドメインの単量体を含み、該単一可変ドメインが、a配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つ以上から選択される1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;b配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して少なくとも90の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン;およびc配列番号41~44、51~55および63~68の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのCDR3に対して少なくとも95の同一性を有する1つ以上の相補性決定領域3CDR3配列を含む単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0616]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが3つの同一な単一可変ドメインの単量体を含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;b配列番号1~5、26、30および87を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメインおよびc配列番号1~5、26、30および87を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、a配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有するアミノ酸配列;およびb配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ配列を含む、段落[0616]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、a配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有するアミノ酸配列;およびb配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ配列を含む、段落[0616]のポリペプチドを提供する。a配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有するアミノ酸配列;およびb配列番号6、9、12~14、17、20、27および31を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、段落5のポリペプチド。ある実施形態は、ヒトDR5に特異的に結合する単一可変ドメインの単量体を少なくとも4つは含む単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、段落[0623]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが4つの単一可変ドメインを含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;b配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン;およびc配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群からの1つ、2つ、3つまたは4つの単量体から選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0623]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが4つの同一な単一可変ドメインを含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;b配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン;およびc配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0623]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが4つの同一な単一可変ドメインを含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;およびb配列番号1~5、26、30および87を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、a配列番号88のアミノ酸配列;b配列番号88を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列;およびc配列番号88を有する該アミノ酸配列に対して95の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ配列を含む、段落[0623]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、a配列番号7、10、15、18、21、28および32を有するアミノ酸配列;b配列番号7、10、15、18、21、28および32を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列;およびc配列番号7、10、15、18、21、28および32を有する該アミノ酸配列に対して95の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ配列を含む、段落[0623]のポリペプチドを提供する。a配列番号28を有するアミノ酸配列;b配列番号32を有するアミノ酸配列;およびb配列番号28および32を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるヒト化アミノ配列を含む、段落[0623]のポリペプチド。ある実施形態は、ヒトDR5に特異的に結合する単一可変ドメインの単量体を少なくとも5つは含む単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、段落[0630]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが5つの単一可変ドメインを含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;b配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン;およびc配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群の1つ、2つ、3つ、4つまたは5つの単量体から選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0630]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが5つの同一な単一可変ドメインを含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;b配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン;およびb配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、段落[0630]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが5つの単一可変ドメインを含み、該単一可変ドメインがヒト化されており、該ヒト化ドメインが、a配列番号26および30を有する単一可変ドメイン;b配列番号26および30を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン;およびb配列番号26および30を有する少なくとも1つの単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。ある実施形態は、a配列番号8、11、16、19、22、29および33を有するアミノ酸配列;b配列番号8、11、16、19、22、29および33を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列;およびc配列番号8、11、16、19、22、29および33を有する該アミノ酸配列に対して95の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む段落[0630]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、a配列番号29のアミノ酸配列;b配列番号29を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列;およびb配列番号29を有する該アミノ酸配列に対して95の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む段落[0630]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、a配列番号33を有するアミノ酸配列;b配列番号33を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも90の同一性を有するアミノ酸配列;およびb配列番号33を有する該アミノ酸配列に対して少なくとも95の同一性を有するアミノ酸配列、からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む段落[0630]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、ヒトDR5に特異的に結合する単一可変ドメインの単量体を3つまたは4つまたは5つ含む単離されたポリペプチドであって、Colo205、Jurkat、Molt4、H2122、H226およびH2052から選択される少なくとも2つの腫瘍細胞株のパネルに対して、100nM以下のインビトロ力価IC50を有するものを提供する。ある実施形態は、10nM以下のインビトロ力価を有する段落[0637]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、1nM以下のインビトロ力価を有する段落[0637]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、100pM以下のインビトロ力価を有する段落[0637]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、Malme3、WI38、ARPE19、184A1、Huvec、HAAE1からなる群より選択される少なくとも3つの非腫瘍細胞株のパネルに対して20nM以上のインビトロ力価IC50を有する段落[0637]~[0640]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、Malme3、WI38、ARPE19、184A1、Huvec、HAAE1からなる群より選択される少なくとも3つの非腫瘍細胞株のパネルに対して100nM以上のインビトロ力価IC50を有する段落[0637]~[0640]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、段落[0637]~[0642]のポリペプチドであって、該ポリペプチドが単一可変ドメインの単量体を3つまたは4つまたは5つ含み、該単一可変ドメインが、a配列番号1~5、26、30および87を有する単一可変ドメイン;およびb配列番号1~5、26、30および87を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択されるものを提供する。該ポリペプチドが単一可変ドメインの単量体を3つまたは4つまたは5つ含み、該単一可変ドメインがヒト化されていて、a配列番号26および30を有する単一可変ドメイン;b配列番号26および30を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも90の同一性を有する単一可変ドメイン;およびb配列番号26および30を有する該単一可変ドメインに対して少なくとも95の同一性を有する単一可変ドメイン、からなる群より選択される、段落[0637]~[0642]のポリペプチド。ある実施形態は、a配列番号27、28および29の任意の1つ以上から選択されるポリペプチド;b配列番号27、28および29の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのポリペプチドに対して少なくとも95の同一性を有するポリペプチド;c配列番号31、32および33の任意の1つ以上から選択されるポリペプチド;およびd配列番号31、32および33の任意の1つ以上から選択される少なくとも1つのポリペプチドに対して少なくとも95の同一性を有するポリペプチド、からなる群より選択される段落[0637]~[0642]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、配列番号1~22、26~33、87および88の1つ以上のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、競合結合アッセイにおいてDR5の天然リガンドと完全にまたは部分的に競合することがない、前記[0612]からここまでの段落のいずれかに記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、競合結合アッセイにおいてDR5の天然リガンドと完全にまたは部分的に競合する、前記[0612]からここまでの段落のいずれかに記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、配列番号41~44CDR1;配列番号51~55CDR2;配列番号63~68CDR3、より好ましくは配列番号51~55および配列番号63~68のいずれかに記載のCDR領域の少なくとも1つに対して、少なくとも60、70、80、90、95または100パーセントの配列同一性を有する少なくとも1つの相補性決定領域CDRを含む、段落[0612]、[0616]、[0623]、[0630]、[0637]または[0648]に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、配列番号41~44CDR1;配列番号51~55CDR2;配列番号63~68CDR3のいずれかに記載のCDR領域に対して、それぞれ少なくとも90、95または100パーセントの配列同一性を有するCDR1~CDR3領域を含む、段落[0612]、[0616]、[0623]、[0630]、[0637]または[0648]に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、配列番号26~33に記載の配列のいずれかに対して少なくとも90、95または100パーセントの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、またはそのようなアミノ酸配列から本質的になる、段落[0612]、[0616]、[0623]、[0630]、[0637]または[0648]のいずれかに記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、配列番号64または配列番号66に記載のCDR3領域を含む、段落[0612]、[0616]、[0623]、[0630]、[0637]または[0648]のいずれかに記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、配列番号41~44CDR1;配列番号51~55CDR2;配列番号63~68CDR3に記載のCDR領域またはそこに記載されている元のCDR領域と比較した場合に1、2、3、4もしくは5つのアミノ酸が置換、除去もしくは挿入されている変異体CDR領域とそれぞれ同一なCDR1、CDR2およびCDR3領域を含む、段落[0612]、[0616]、[0623]、[0630]、[0637]または[0648]のいずれかに記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、ヒト化免疫グロブリン、ラクダ化免疫グロブリンもしくは親和性最適化技法によって得ることができる免疫グロブリン、またはそのフラグメントである、[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、軽鎖可変ドメイン配列、例えばVL配列;または重鎖可変ドメイン配列、例えばVH配列から本質的になる、[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、通常の4本鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列から本質的になる、または重鎖抗体に由来する重鎖可変ドメイン配列から本質的になる、[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体、dAbおよびラクダ科抗体またはフラグメントVHH配列を含むが、これに限るわけではないから本質的になる、[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、VHH配列から本質的になる、[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、a配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して少なくとも90のアミノ酸同一性を有しここで、アミノ酸同一性の程度を決定する目的には、CDR配列を形成するアミノ酸残基を無視する;b場合によっては、Kabatのナンバリングでアミノ酸位置11、37、44、45、47、83、84、103、104および108の1つ以上がヒューマニア化humanieeredされている、VHH配列から本質的になる、[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、a配列番号1~22、26~40、87~88、および103~104のアミノ酸配列の少なくとも1つに対して、少なくとも90のアミノ酸同一性を有しここで、アミノ酸同一性の程度を決定する目的には、CDR配列を形成するアミノ酸残基を無視する;b場合によっては、DR5とVHH配列の間の接触部分が、i表29Aの残基を含むDR5コンフォメーショナルエピトープ;ii表30Aの残基を含むDR5コンフォメーショナルエピトープ;iii表29Bに列挙したVHHアミノ酸の相互作用表面;およびiv表30Bに列挙したVHHアミノ酸の相互作用表面から選択される、VHH配列から本質的になる、前記[0612]からここまでの段落の任意の1つ以上に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、ヒト化VHH配列から本質的になる、前記[0612]からここまでの任意の段落に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、前記0612]からここまでの任意の段落のいずれかに記載の1つ以上のポリペプチドを含むか、またはそれらから本質的になり、場合によっては1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットをさらに含む化合物であって、細胞アポトーシスを強化する能力を有する化合物を提供する。ある実施形態は、例えばColo205細胞生存アッセイで測定して、100nM未満、好ましくは10nM未満、より好ましくは1nM未満、さらに好ましくは100pM未満、例えば10pM未満のIC50を有する、段落[0663]の化合物を提供する。ある実施形態は、例えばColo205細胞に基づく生存アッセイで測定して、対応する一価結合ポリペプチドが多価ポリペプチドほど強力ではない、段落[0663]または[0664]の化合物を提供する。ある実施形態は、該少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上の一価結合ポリペプチドが、それぞれ一価フォーマットでヒトDR5に結合することができる、段落[0663]または[0665]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、該少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上の一価結合ポリペプチドが、それぞれ、一価フォーマットでヒトDR5に結合することができるが、TRAILR3およびまたはTRAILR4受容体には結合しない、段落[0663]または[0665]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、該少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上の一価結合ポリペプチドが、それぞれ、一価フォーマットでDR5に結合することができ、結合アッセイにおいて天然TRAILリガンドと競合する、段落[0663]または[0665]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、該少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上の一価結合ポリペプチドが、すべて、ヒトDR5の同じ結合領域に向けられる、段落[0663]または[0665]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、該少なくとも1つの一価結合ポリペプチドがDR5の1つの結合領域に向けられ、少なくとも1つの他の一価結合ポリペプチドが、DR5のもう一つの異なる結合領域または他のDR5の結合領域に向けられる、段落[0663]または[0664]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、該少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上の一価結合ポリペプチドが実質的に同一のアミノ酸配列を有する、段落[0663]または[0664]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、単鎖ポリペプチドから本質的になり、該少なくとも3つ、4つ、5つまたはそれ以上の一価結合単一可変ドメインがペプチドリンカーによって一つに連結されている、段落[0663]または[0664]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、該リンカーが、5~50個のアミノ酸残基を含むペプチドから本質的になる、段落[0672]の化合物を提供する。ある実施形態は、該1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットが、1つ以上のリンカーによって連結されていてもよいポリペプチドである、段落[0663]または[0665]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、該1つ以上のリンカーがペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーである、段落[0612]~[0674]の任意の1つの化合物を提供する。ある実施形態は、該1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットが、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体、dAbおよびラクダ科抗体またはそのフラグメントVHH配列を含むがこれに限るわけではないからなる群より選択される、段落[0675]の化合物を提供する。ある実施形態は、該1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットが、哺乳類生物に投与された場合に該1つ以上の他の基、残基、部分または結合ユニットを伴わない同じ化合物と比較して、増加した半減期を、化合物に与える段落[0663]~[0677]のいずれかの化合物を提供する。ある実施形態は、1段落[0612]~[0662]のいずれかに定義したポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは2段落[0663]~[0677]のいずれかに記載の化合物のいずれかをコードする単離された核酸を提供する。ある実施形態は、段落[0678]の核酸を発現する、または適切な状況下で段落[0678]の核酸を発現する能力を有する、宿主細胞を提供する。ある実施形態は、段落[0612]~[0662]のいずれかのDR5結合ポリペプチドまたは段落[0663]~[0677]のいずれかの化合物を製造するための方法であって、a適切な宿主細胞または非ヒト宿主生物において、段落[0678]の核酸を発現させること;およびb該DR5結合ポリペプチドまたは化合物を単離およびまたは精製することを含む方法を提供する。ある実施形態は、薬物として使用するための、段落[0612]~[0662]のいずれかに記載のポリペプチドまたは段落[0663]~[0677]のいずれかに記載の化合物を提供する。ある実施形態は、抗がん治療薬として使用するための段落[0681]のポリペプチドを提供する。ある実施形態は、少なくとも、段落[0612]~[0662]のいずれかのポリペプチド、または段落[0663]~[0677]のいずれかの化合物と、少なくとも1つの医薬上許容される担体、希釈剤または賦形剤およびまたは佐剤とを含む組成物を提供する。ある実施形態は、細胞アポトーシスの強化によって処置することができる障害を防止およびまたは処置するための方法であって、その必要がある対象に、段落[0612]~[0662]のいずれかに記載の少なくとも1つのポリペプチドまたは段落[0663]~[0677]のいずれかに記載の少なくとも1つの化合物の医薬有効量を投与することを含む方法を提供する。ある実施形態は、該障害が増殖性疾患である、段落[0684]の方法を提供する。ある実施形態は、該増殖性疾患がa原発性がんおよび転移がん、例えば腎細胞癌、肺のがん例えば小細胞肺がんSCLCおよび非小細胞肺がんNSCLC、膵臓のがん、造血器悪性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、中皮腫、直腸結腸がん、前立腺がん、骨肉腫、黒色腫、リンパ腫リンパ腫バーキットリンパ腫を含むが、これに限るわけではない、乳がん、子宮内膜がん、肝がん、胃がん、皮膚がん、卵巣がんおよび任意の起源を持つ扁平上皮細胞がん肺、頭頸部、乳房、甲状腺、子宮頸部、皮膚、およびまたは食道の扁平上皮細胞がんを含むが、これらに限るわけではないから選択される1つ以上の固形がん;およびbとりわけ急性T細胞白血病TALLなどのT細胞白血病、急性B細胞白血病BALL、慢性骨髄性白血病CML、急性骨髄性白血病AML、形質細胞骨髄腫および多発性骨髄腫MMを含む白血病から選択される1つ以上の液状がんから選択される、段落[0685]の方法を提供する。ある実施形態は、該増殖性疾患が1つ以上の非がん適応症であり、該適応症が、炎症性疾患および自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス、橋本病、関節リウマチ、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、悪性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、クローン病、自己免疫性溶血性貧血、不妊症、重症筋無力症、多発性硬化症、バセドー病、血栓性血小板減少症、血小板減少性紫斑病、インスリン依存性真性糖尿病、アレルギー;喘息、アトピー性疾患;動脈硬化;心筋炎;心筋症;糸球体腎炎;および低形成性貧血の1つ以上を含む、段落[0685]の方法を提供する。ある実施形態は、増殖性疾患が膵がんである、段落[0686]の方法を提供する。ある実施形態は、増殖性疾患がTALLである、段落[0686]の方法を提供する。ある実施形態は、増殖性疾患が中皮腫である、段落[0686]の方法を提供する。ある実施形態は、増殖性疾患が任意の組織に由来する扁平上皮細胞癌である、段落[0686]の方法を提供する。ある実施形態は、増殖性疾患がAMLである、段落[0686]の方法を提供する。ある実施形態は、増殖性疾患が黒色腫である、段落[0686]の方法を提供する。ある実施形態は、増殖性疾患が骨髄腫である、段落[0686]の方法を提供する。ある実施形態は、cIAP1、cIAP2、XIAP、cFLIPおよびBclxLから選択される任意の1つ以上の遺伝子の少なくとも1つの阻害剤と組み合わされた、段落[0612]~[0662]のいずれかに記載のポリペプチドまたは段落[0663]~[0677]のいずれかに記載の少なくとも1つの化合物を含む組成物を提供する。ある実施形態は、阻害剤がcIAP1の阻害剤である、段落[0695]の組成物を提供する。ある実施形態は、MEKの阻害剤をさらに含む、段落[0696]の組成物を提供する。ある実施形態は、BRAFの阻害剤をさらに含む、段落[0696]の組成物を提供する。ある実施形態は、阻害剤がXIAPの阻害剤である、段落[0695]の組成物を提供する。ある実施形態は、阻害剤がcFLIPの阻害剤である、段落[0695]の組成物を提供する。ある実施形態は、阻害剤がLCL161およびABT263から選択される低分子量化合物である、段落[0695]の組成物を提供する。ある実施形態は、阻害剤がshRNAである、段落[0695]の組成物を提供する。ある実施形態は、段落[0683]の組成物の任意の1つ以上を使用する方法であって、それを必要とする対象に、DR5関連疾患を処置するための医薬有効量の該組成物またはその組合せを投与することを含む方法を提供する。ある実施形態は、DR5関連疾患が、以下に挙げる疾患の1つ以上から選択される、段落[0703]の方法を提供する:a固形がんおよび液状がんから選択される1つ以上の増殖性疾患、iここで、固形腫瘍には、原発性がんおよび転移がん、例えば腎細胞癌、および肺のがん例えば小細胞肺がんSCLCおよび非小細胞肺がんNSCLC、膵臓のがん、造血器悪性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、中皮腫、直腸結腸がん、前立腺がん、骨肉腫、黒色腫、リンパ腫バーキットリンパ腫を含むが、これに限るわけではない、乳がん、子宮内膜がん、肝がん、胃がん、皮膚がん、卵巣がん、および任意の起源を持つ扁平上皮細胞がん例えば限定するわけではないが、肺、頭頸部、乳房、甲状腺、子宮頸部、皮膚およびまたは食道の扁平上皮細胞がんが含まれ;ii液状がんには、とりわけ急性T細胞白血病TALLなどのT細胞白血病、急性B細胞白血病BALL、慢性骨髄性白血病CML、急性骨髄性白血病AML、形質細胞骨髄腫および多発性骨髄腫MMを含む白血病が含まれる;およびb炎症性疾患および自己免疫疾患、例えば全身性エリテマトーデス、橋本病、関節リウマチ、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、悪性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、クローン病、自己免疫性溶血性貧血;不妊症、重症筋無力症、多発性硬化症、バセドー病、血栓生血小板減少症、血小板減少性紫斑病、インスリン依存性真性糖尿病、アレルギー;喘息、アトピー性疾患;動脈硬化;心筋炎;心筋症;糸球体腎炎;および低形成性貧血の1つ以上を含む、非がん適応症。ある実施形態は、CDRがKabatおよびまたはChothiaの規則のいずれかに従って算定される、前記[0612]からここまでの段落の任意の1つ以上に記載の単離されたポリペプチドを提供する。ある実施形態は、前記[0612]からここまでの段落の任意の1つ以上に記載の単離されたポリペプチドであって、表29Aおよびまたは30Aに記載の1つ以上のエピトープに結合し、かつまたは表29Bおよびまたは30Bに記載の相互作用表面残基を含むポリペプチドを提供する。本発明の下記の請求項は非限定的である。限定するわけではないが製剤、送達、ヒト化、発現系などの改変を含む、当業者の能力の範囲で可能な本発明への一定の変更を考えることができる。そのような変更は本発明の範囲内にあると見なされる。