下記~のプライマーを用いて、PCRにより標的ポリヌクレオチドを増幅する際の、該標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節する方法であって、下記~のプライマーの量比を調節することにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することを含む、方法、標的ポリヌクレオチドに対合する第1のプライマー、標的ポリヌクレオチドに、第1のプライマーと競合的に対合するが、第1のプライマーよりPCRによる伸長反応が起こりにくい第2のプライマー、第1のプライマーと対になって、標的ポリヌクレオチドを増幅可能に設計された第3のプライマー。第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量を調節することにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することを含む、請求項1に記載の方法。標的ポリヌクレオチドは、SNP部位を含み、第1のプライマー及び第2のプライマーは前記SNP部位を含む領域にハイブリダイズし、第1のプライマーは、前記SNP部位の第1のアレル特異的ヌクレオチドに対応するヌクレオチドを3’末端から数えて1~5番目の何れかに有し、第2のプライマーは、前記SNP部位の第2のアレル特異的ヌクレオチドに対応するヌクレオチドを3’末端から数えて1~5番目の何れかに有する、請求項1又は2に記載の方法。第1のプライマーのTm値は、第2のプライマーのTm値より高い、請求項1~3の何れか一項に記載の方法。第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量を大きくすることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることを含む、請求項4に記載の方法。第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量を小さくすることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を下げることを含む、請求項4に記載の方法。第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で1倍より大きくすることにより、第1のアレル特異的ヌクレオチドを含む標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることを含む、請求項5に記載の方法。第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で2倍より大きくすることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることを含む、請求項7に記載の方法。第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量を大きくすることにより、前記標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることを含む、請求項1~8の何れか一項に記載の方法。前記~のプライマーを用いて、PCRにより標的ポリヌクレオチドを増幅し、得られた増幅産物を用いて該標的ポリヌクレオチドを検出する際の、該標的ポリヌクレオチドの検出効率を調節する方法であって、請求項1~9の何れか一項に記載の方法を用いて標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することにより、該標的ポリヌクレオチドの検出効率を調節することを含む、方法。請求項10に記載の方法で標的ポリヌクレオチドの検出効率を調節し、調節された検出効率を実現する量比の前記~のプライマーを用いてPCRを行い、得られたPCR増幅産物中の前記標的ポリヌクレオチドを検出することを含む、標的ポリヌクレオチドの検出方法。請求項11に記載の検出方法を用いて、被験者に由来する遺伝子における変異の存在又は非存在を検出し、得られた検出結果を、該変異が検出された場合には前記被験者が該変異の存在により起こる疾患を有する可能性があるという基準と比較することにより、前記変異の存在により起こる疾患の可能性を試験することを含む、試験方法。請求項11に記載の検出方法を用いて、被験者に由来する遺伝子における変異の存在又は非存在を検出し、得られた検出結果と、該変異の有無及び特定の医薬の効果の関係と、を比較することにより、前記被験者に対する前記特定の医薬の効果を予測することを含む、薬効の予測方法。請求項1~9の何れか一項に記載の方法を用いて標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節し、調節された増幅効率を実現する量比の前記~のプライマーを組み合わせることを含む、プライマーセットの製造方法。下記~のプライマーを含み、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量が、モル比で1倍より大きい、プライマーセット、標的ポリヌクレオチドに対合する第1のプライマー標的ポリヌクレオチドに、第1のプライマーと競合的に対合するが、第1のプライマーよりPCRによる伸長反応が起こりにくい第2のプライマー第1のプライマーと対になって、標的ポリヌクレオチドを増幅可能に設計された第3のプライマー。ところで、遺伝子における変異の存在又は非存在を検出することにより、該変異が関連する疾患の可能性を測定する場合には、疾患の診断に利用できる意義ある検出結果を得る目的から、種々の検出感度での前記変異の検出結果と、該変異が関連する疾患に関する臨床的知見との関係を分析し、診断に利用できる検出を行うための検出感度の基準を定めることが必要である。検出感度を調節するためのアプローチとして、検出の目的とする変異に応じてプライマーの設計を工夫することで、変異アレルを含む標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することが、通常考えられる。しかしながら、このようなアプローチでは、プライマーの設計、プライマーの作製、増幅効率の確認の作業を繰り返すことが必要であり、多大な労力を要する場合が多い。そこで、本発明は、標的ポリヌクレオチドを増幅する技術において、簡便に標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節する技術を提供することを課題とする。本発明は、前記課題を解決する手段として、下記~のプライマーを用いて、PCRにより標的ポリヌクレオチドを増幅する際の、該標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節する方法であって、下記~のプライマーの量比を調節することにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することを含む、方法を提供する。各プライマーは以下の通りである。標的ポリヌクレオチドに対合する第1のプライマー標的ポリヌクレオチドに、第1のプライマーと競合的に対合するが、第1のプライマーよりPCRによる伸長反応が起こりにくい第2のプライマー第1のプライマーと対になって、標的ポリヌクレオチドを増幅可能に設計された第3のプライマー上記方法により、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を簡便に調節することができる。前記プライマーの量比として、第1のプライマーと第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量が挙げられる。このようにプライマーの量比を調節することにより、簡便に標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することができる。また、本発明は、前記~のプライマーを用いて、PCRにより標的ポリヌクレオチドを増幅し、得られた増幅産物を用いて該標的ポリヌクレオチドを検出する際の、該標的ポリヌクレオチドの検出効率検出感度を調節する方法であって、本発明の増幅効率の調節方法を用いることにより、該標的ポリヌクレオチドの検出効率検出感度を調節する方法を提供する。上記方法により、標的ポリヌクレオチドの検出効率を簡便に調節することができる。また、本発明は、上記方法で標的ポリヌクレオチドの検出効率を調節し、調節された検出効率を実現する量比の前記~のプライマーを用いてPCRを行い、得られたPCR増幅産物中の標的ポリヌクレオチドを検出することを含む、標的ポリヌクレオチドの検出方法を提供する。上記検出方法により、適切な検出感度で簡便に、標的ポリヌクレオチドの検出を行うことができる。また、本発明は、上記検出方法を用いて、被験者に由来する遺伝子における変異の存在又は非存在を検出し、得られた検出結果を、該変異が検出された場合には前記被験者が該変異の存在により起こる疾患を有する可能性があるという基準と比較することにより、前記変異の存在により起こる疾患の可能性を試験することを含む、試験方法を提供する。上記試験方法により、臨床上意義の小さい試験結果が得られる可能性を低減させることができる。また、本発明は、上記検出方法を用いて、被験者に由来する遺伝子における変異の存在又は非存在を検出し、得られた検出結果と、該変異の有無及び特定の医薬の効果の関係と、を比較することにより、前記被験者に対する前記特定の医薬の効果を予測することを含む、薬効の予測方法を提供する。上記薬効の予測方法により、投薬に際し薬効を予測することができ、効果的な投薬を可能にすることが期待される。さらに、本発明は、上記試験方法により得られた試験結果に基づいて、疾患を診断することを含む、疾患の診断方法を提供する。上記診断方法により、不適切な診断結果が得られる可能性を低減させることができる。また、本発明は、標的ポリヌクレオチドをPCRにより増幅又は検出するためのプライマーセットの製造方法を提供する。該製造方法は、上記方法を用いて標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節し、調節された増幅効率を実現する量比の前記~のプライマーを組み合わせることを含む。上記製造方法により、標的ポリヌクレオチドの任意の増幅効率、検出効率を実現するプライマーセットを簡便に製造することができる。また、本発明は、標的ポリヌクレオチドを、PCRを用いて検出するための検出キットの製造方法を提供する。該製造方法は、上記方法を用いて標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節し、調節された増幅効率を実現する量比の前記~のプライマーと、標的ポリヌクレオチドに相補的な配列からなり、末端が蛍光色素で標識されハイブリダイゼーションしたときに蛍光が増加又は減少するプローブと、を組み合わせることを含む。上記製造方法により、標的ポリヌクレオチドの任意の検出効率を実現する検出キットを簡便に製造することができる。また、本発明は、前記~のプライマーを含み、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量が、モル比で1倍より大きい、プライマーセットを提供する。また、本発明は、前記~のプライマーを含み、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量が、モル比で1倍より小さい、プライマーセットを提供する。本発明は、簡便に標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することを可能にする。また、本発明は、標的ポリヌクレオチドの検出効率検出感度を簡便に調節することを可能にする。標的ポリヌクレオチドの検出感度を適切に設定することにより、標的ポリヌクレオチドが関連する疾患の可能性の測定、疾患の診断を、より的確なものとすることができることが期待される。本発明について、好ましい形態を例示しながら説明する。第一の本発明は、下記~のプライマーを用いて、PCRにより標的ポリヌクレオチドを増幅する際の、該標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節する方法に関する。本発明の特徴は、下記~のプライマーの量比を調節することにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節する点にある。各プライマーは以下の通りである。標的ポリヌクレオチドに対合する第1のプライマー標的ポリヌクレオチドに、第1のプライマーと競合的に対合するが、第1のプライマーよりPCRによる伸長反応が起こりにくい第2のプライマー第1のプライマーと対になって、標的ポリヌクレオチドを増幅可能に設計された第3のプライマー標的ポリヌクレオチドは、例えば、変異を含むポリヌクレオチドである。この場合の変異は、置換、欠失、挿入の何れをも含む。変異としては、例えば一塩基置換が挙げられる。本発明は、SNP部位を含むポリヌクレオチドにおける、変異アレルを含む標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節するのに好適である。第1のプライマーについて、標的ポリヌクレオチドに対合しの用語は、PCRにおいて、伸長反応が起こるように、PCRのアニーリング条件において標的ポリヌクレオチドにハイブリダイズすることを意味する。但し、当業者に明らかであるように、標的ポリヌクレオチドの部分領域の配列に完全に相補的である必要はない。第1のプライマーは、標的ポリヌクレオチドのセンス鎖に対合するものであっても、標的ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖に対合するものであってもよい。第1のプライマーの設計は、標的ポリヌクレオチドの配列に応じて設計する。第1のプライマーは、通常、プライマーの3’末端側、例えば、3’末端から数えて1~5番目程度の領域以下、3’末端領域という場合がある。に、標的ポリヌクレオチドに対合するヌクレオチドを配置することが挙げられる。なお、本明細書において、3’末端から数えて1~5番目という場合は、3’末端を1番目として数える。このようなプライマーの設計は、当業者であれば適宜行うことができる。例えば、標的ポリヌクレオチドが、ヌクレオチドの置換を有する変異型ポリヌクレオチドである場合には、第1のプライマーは、置換したヌクレオチドを上記3’末端の領域に配置すればよい。標的ポリヌクレオチドがSNP部位を含む場合には、第1のプライマーは、前記SNP部位の第1のアレル特異的ヌクレオチドに対応するヌクレオチドを3’末端から数えて1~5番目の何れか、好ましくは1~3番目の何れか、更に好ましくは1又は2番目の何れか、最も好ましくは、3’末端に有し、前記SNP部位を含む領域にハイブリダイズする。ここで、第1のアレル特異的ヌクレオチドに対応するヌクレオチドの用語は、第1のプライマーがセンス鎖にハイブリダイズするものである場合には、第1のアレル特異的ヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを意味し、第1のプライマーがアンチセンス鎖にハイブリダイズするものである場合には、第1のアレル特異的ヌクレオチドと同一のヌクレオチドを意味する。なお、第1のアレル特異的ヌクレオチドは、後述する第2のアレル特異的ヌクレオチドとの組み合わせによって規定されるものであり、例えば、第1のアレル特異的ヌクレオチドが変異ヌクレオチドであって第2のアレル特異的ヌクレオチドが野生ヌクレオチドである組み合わせ、又はその逆の組み合わせの他、第1のアレル特異的ヌクレオチドが第1の変異ヌクレオチドであって、第2のアレル特異的ヌクレオチドが第2の変異ヌクレオチドである組み合わせが挙げられる。また、標的ポリヌクレオチドが、ヌクレオチドの挿入を有する変異型ポリヌクレオチドである場合も、上記置換の場合と同様に設計することができ、挿入されたヌクレオチドに対合するヌクレオチドを上記3’末端の領域に配置すればよい。また、標的ポリヌクレオチドが、ヌクレオチドの欠失を有する変異型ポリヌクレオチドである場合は、欠失部位の前後を含む領域に対合するヌクレオチドを上記3’末端の領域に配置すればよい。第2のプライマーについて、標的ポリヌクレオチドに第1のプライマーと競合的に対合するとは、PCRのアニーリング条件において、第1のプライマーが対合する標的ポリヌクレオチドの領域に、第1のプライマーと競合しながら対合することを意味する。従って、第2のプライマーは、第1のプライマーに対して、通常60~95程度の相同性を有する。ここで、第2のプライマーは、第1のプライマーよりPCRによる伸長反応が起こりにくい。このような第2のプライマーの設計は、標的ポリヌクレオチドの配列、及び第1のプライマーの配列を考慮して行うことができる。一般的には、PCRの伸長方向3’末端側に、標的ポリヌクレオチドに対合しないヌクレオチドを配置することが挙げられる。また、第2のプライマーのTm値が第1のプライマーのTm値より小さくなるように配列を設計することが挙げられる。このようなプライマーの設計は、当業者であれば適宜行うことができる。通常、プライマーの3’末端側、例えば、3’末端から数えて1~5番目程度の領域以下3’末端領域という場合がある。に、標的ポリヌクレオチドに対合しないヌクレオチドを配置する。例えば、標的ポリヌクレオチドが、変異を含むポリヌクレオチドである場合には、第2のプライマーは、上記3’末端領域に変異部分の配列に対合するヌクレオチドでなく、野生型の配列に対合するヌクレオチドを配置することが挙げられる。標的ポリヌクレオチドがSNP部位を含む場合には、第2のプライマーは、前記SNP部位の第2のアレル特異的ヌクレオチドに対応するヌクレオチドを3’末端から数えて1~5番目の何れか、好ましくは1~3番目の何れか、更に好ましくは1又は2番目の何れか、最も好ましくは、3’末端に有し、前記SNP部位を含む領域にハイブリダイズする。第3のプライマーは、第1のプライマーと対になって、標的ポリヌクレオチドを増幅可能に設計されるものである。すなわち、第1のプライマーによる伸長方向の下流の領域の、第1のプライマーが対合するポリヌクレオチド鎖の相補鎖に対合するように設計されたものである。各々のプライマーの長さ及びTm値は、標的ポリヌクレオチドの配列に応じて適宜設計することができる。通常は10~40merで40~70°C、好ましくは15~30merで50~60°Cである。なお、Tm値は最近接塩基対NearestNeighbor法により算出した値である。本発明の一形態では、第1のプライマーのTm値が、第2のプライマーのTm値より高い。なお、Tm値は最近接塩基対NearestNeighbor法により算出した値である。この場合、第1のプライマーのTm値と、第2のプライマーのTm値の差は、好ましくは01~10°C、更に好ましくは05~5°Cである。第1のプライマーのTm値が、第2のプライマーのTm値より高い場合には、本発明の方法により、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることが容易になる。Tm値は、CG含有量及びヌクレオチド数から求めることができる。第1のプライマーのTm値を、第2のプライマーのTm値より高く設計する最も簡便な方法としては、第1のプライマーの長さを第2のプライマーの長さより長くする。例えば、第1のプライマーの長さを第2のプライマーの長さより1~10塩基程度、好ましくは2~5塩基程度長くする方法が挙げられる。また、第1のプライマー5’末端と第2のプライマーの5’末端に、それぞれ、数塩基からなる異なる配列のオリゴヌクレオチドを付加することが好ましい。この付加配列は、通常1~20塩基程度、好ましくは3~10塩基程度の長さを有する。これは、第1のプライマーが標的ポリヌクレオチドとは異なるポリヌクレオチドにハイブリダイズし、標的ポリヌクレオチド以外のヌクレオチドを鋳型として増幅する可能性を低くし、標的ポリヌクレオチドの増幅効率の調節をより確実に行うためである。第一の本発明の一形態では、第1のプライマーのTm値が、第2のプライマーのTm値より高い場合に、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量を大きくすることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。反対に、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量を小さくすることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を下げることができる。すなわち、プライマー量比を前記の方法で変えることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げたり下げたりすることができる。該形態において、具体的には、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で1倍より大きくすることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。従来の、本発明と同様の系を持つPCR法例えば特許文献2では、フォワードプライマーとリバースプライマーの量比は、モル比で約1:1であったので、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で1倍より大きくすることにより、従来のPCR法での標的ポリヌクレオチドの増幅効率に比して、該標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。また、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で2倍より大きくすることにより、更に標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。また、実施例からも明らかなように、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で4倍より大きく、更にはモル比で8倍より大きくすることにより、更に標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。また、具体的には、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で1倍より小さくすることにより、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を下げることができる。従来の、本発明と同様の系を持つPCR法例えば特許文献2では、フォワードプライマーとリバースプライマーの量比は、モル比で約1:1であったので、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で1倍より小さくすることにより、従来のPCR法での標的ポリヌクレオチドの増幅効率に比して、該標的ポリヌクレオチドの増幅効率を下げることができる。また、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で0.5倍より小さくすることにより、更に標的ポリヌクレオチドの増幅効率を下げることができる。また、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量をモル比で0.25倍より小さく、更にはモル比で0.125倍より小さくすることにより、更に標的ポリヌクレオチドの増幅効率を下げることができる。第一の本発明の他の形態では、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量を大きくすることにより、前記標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。反対に、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量を小さくすることにより、前記標的ポリヌクレオチドの増幅効率を下げることができる。すなわち、プライマーの量比を前記の方法で変えることにより、前記標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げたり下げたりすることができる。該形態において、具体的には、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量を、モル比で1倍より大きくすることにより、前記標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。なお、従来の、本発明と同様の系を持つPCR法例えば特許文献2では、第1のプライマーと第2のプライマーの量比は、モル比で約1:1であるので、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量を、モル比で1倍より大きくすることにより、従来のPCR法での標的ポリヌクレオチドの増幅効率に比して、該標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。また、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量を、モル比で2倍より大きくすることにより、更に前記標的ポリヌクレオチドの増幅効率を上げることができる。第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量の上限は、好ましくはモル比で4倍である。また、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量を調節する形態に、上述した第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する前記第3のプライマーの量を調節する形態を組み合わせる形態も好ましい。上記の方法により、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することにより、当該標的ポリヌクレオチドの増幅の目的に応じた増幅効率を実現するプライマー量比を決定することができる。すなわち、本発明は、上記~のプライマーを用いたPCRにより標的ポリヌクレオチドを増幅する際の、プライマー量比を決定する方法をも提供する。このようにして決定した量比のプライマーを用いてPCRを行うことにより、標的ポリヌクレオチドの目的に応じた増幅効率を実現することができる。すなわち、本発明は、上記方法で標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節し、調節された増幅効率を実現する量比の前記~のプライマーを用いてPCRを行うことを含む、標的ポリヌクレオチドの増幅方法を提供する。上述した第一の本発明により、PCRにおける標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することができる。そして、第一の本発明を用いて、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節することにより、該標的ポリヌクレオチドの検出効率検出感度を調節することができる。すなわち、第二の本発明は、前記~のプライマーを用いて、PCRにより標的ポリヌクレオチドを増幅し、得られた増幅産物を用いて該標的ポリヌクレオチドを検出する際の、該標的ポリヌクレオチドの検出効率検出感度を調節する方法であって、本発明の増幅効率の調節方法を用いることにより、該標的ポリヌクレオチドの検出効率検出感度を調節する方法である。プライマーの量比の調節方法の形態については、第一の本発明について説明したとおりである。すなわち、上述したプライマーの量比の調節により、標的ポリヌクレオチドの増幅効率を高めるほど、該標的ポリヌクレオチドの検出感度が高くなるという関係にある。上記の方法により、標的ポリヌクレオチドの検出効率検出感度を調節することにより、当該標的ポリヌクレオチドの検出の目的に応じた検出効率を実現するプライマー量比を決定することができる。すなわち、本発明は、上記~のプライマーを用いたPCRにより標的ポリヌクレオチドを検出する際の、プライマー量比を決定する方法をも提供する。このようにして決定した量比のプライマーを用いてPCRを行い、得られたPCR増幅産物中の標的ポリヌクレオチドを検出することにより、目的に応じた検出効率を実現することができる。すなわち、本発明は、上記方法で標的ポリヌクレオチドの検出効率を調節し、調節された検出効率を実現する量比の前記~のプライマーを用いてPCRを行い、得られたPCR増幅産物中の標的ポリヌクレオチドを検出することを含む、標的ポリヌクレオチドの検出方法を提供する。標的ポリヌクレオチドを検出する方法としては、公知の方法を用いることができ、例えば、融解曲線分析Tm解析、シーケンシング、電気泳動などを用いることができる。中でも、融解曲線分析Tm解析による検出が好ましい。これは、Tm解析を行う場合には、標的ポリヌクレオチドの増幅産物を特に処理を施すことなく、増幅産物を含む反応液をそのまま解析に付すことができるためである。また、増幅とTm解析を連続的に行う機器実施例を参照も実用化されているので、簡便である。Tm解析には標的ポリヌクレオチドに相補的な配列からなり、末端が蛍光色素で標識され標的ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションし、二本鎖になったときに蛍光が増加又は減少するプローブProbeや二本鎖DNAにインターカレートするSYBRGreenや2種類の近接するプローブで蛍光共鳴エネルギー転移FRETを起こすHybProbeを用いることができる。末端が蛍光色素で標識され標的ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションし、二本鎖になったときに蛍光が減少するプローブとしては、DNAのグアニン塩基が近づくと蛍光が消光する蛍光色素を用いた蛍光DNAプローブ、いわゆるQProbe登録商標を用いる方法httpunitaistgojpbrfciresearchresultaisttodayvol0802p18p19pdf、WO2008117782が挙げられる。このようなプローブに用いられる蛍光色素は公知であり、このようなプローブを作製する方法も公知である。ここで、標的ポリヌクレオチドに相補的な配列とは、上記検出方法における通常の条件において、標的ポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる程度に相補的であれば足り、完全に相補的である必要はない。また、二本鎖になったときに蛍光が減少するプローブに用いられる蛍光色素としては、Invitrogen社製のPacificBlue、TAMRA、BODIPYFL等が挙げられる。プローブの長さは、検出の標的となるポリヌクレオチドに応じて適宜設計することができるが、通常は10~40mer程度である。Tm解析は、反応液を段階的に昇温していく際に検出される蛍光強度を測定することで行うことができる。蛍光強度の測定は、用いる蛍光色素に応じた波長の励起光を用い発光波長の光を測定することにより行う。Tm解析における昇温は、通常01~1°C/5秒のスピードである。Tm解析を行うときの反応液の組成は、プローブとその塩基配列に相補的な配列を有するポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションが可能であれば特に制限されないが、通常は、一価の陽イオン濃度が15~50mM、pHが7~9である。PCR等のDNAポリメラーゼを用いた増幅方法の反応液は、通常、この条件を満たすので、増幅に用いた反応液をそのままTm解析に用いることができる。続いて、Tm解析の結果に基づいて、標的ポリヌクレオチドを検出する。Tm解析の結果に基づく標的ポリヌクレオチドの検出は、通常の方法により行うことができる。本発明において検出とは、標的ポリヌクレオチドの有無の検出の他、サンプルにおける標的ポリヌクレオチドの定量、サンプルにおける標的ポリヌクレオチドとその他のポリヌクレオチドの比率の測定を含む概念である。また、前記検出方法を用いることで、被験者に由来する遺伝子における変異の存在又は非存在を検出することが可能となる。すなわち、第三の本発明は、前記検出方法により得られた検出結果を、該変異が検出された場合には前記被験者が該変異の存在により起こる疾患を有する可能性があるという基準と比較することにより、前記変異の存在により起こる疾患の可能性を試験することを含む、試験方法である。また、本発明は、上記の試験結果に基づいて、疾患を診断する方法も提供する。第四の本発明は、前記検出方法により得られた検出結果と、該変異の有無及び特定の医薬の効果の関係と、を比較することにより、前記被験者に対する前記特定の医薬の効果を予測することを含む、薬効の予測方法である。すなわち、特定の変異と特定の医薬の効果との関係が知られている場合に、特定の変異の有無を検出することにより、前記関係を参照することにより、特定の医薬の効果を予測することが可能となる。例えば、分子標的薬ゲフィチニブはEGFR遺伝子に特定の変異exon21のL858Rの変異等があると奏効率が高くなることが知られている。また、分子標的薬セツキシマブはkras遺伝子のcodon12又は13の変異やbraf遺伝子のV600E変異があると薬が効かなくなることが知られている。すなわち、本発明の検出方法を用いて、EGFR遺伝子の上記変異を検出することにより、被験者に対するゲフィチニブの薬効を予測することができる。また、本発明の検出方法を用いて、kras遺伝子またはbraf遺伝子の上記変異を検出することにより、被験者に対するセツキシマブの薬効を予測することができる。また、本発明は、上述した~のプライマーを用いて標的ポリヌクレオチドを増幅する方法に用いるプライマーセットの製造方法を提供する。すなわち、第五の本発明は、上述した第一の本発明を用いて標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節し、調節された増幅効率を実現する量比の前記プライマーを組み合わせることを含む、プライマーセットの製造方法である。このような製造方法によれば、標的ポリヌクレオチドの増幅や検出に適したプライマーセットを提供することが可能になる。ここで、組み合わせるには、前記プライマーを混合する形態のほか、使用時に混合できるように別個に含める形態などがある。また、本発明は、上述した~のプライマーを用いて標的ポリヌクレオチドを増幅する方法に用いるプライマーセットの設計方法を提供する。すなわち、本発明の他の形態は、上述した第一の本発明を用いて標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節し、調節された増幅効率を実現するプライマー量比を決定し、プライマーセットを設計する方法である。このような設計方法によれば、標的ポリヌクレオチドの増幅や検出に適したプライマーセットを簡便に設計することが可能になる。第六の本発明であるプライマーセットは、例えば、以下のような構成を取ることができる。該プライマーセットは、標的ポリヌクレオチドの増幅や検出に用いられる。下記~のプライマーを含み、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量が、モル比で1倍より大きい、プライマーセット、標的ポリヌクレオチドに対合する第1のプライマー標的ポリヌクレオチドに、第1のプライマーと競合的に対合するが、第1のプライマーよりPCRによる伸長反応が起こりにくい第2のプライマー第1のプライマーと対になって、標的ポリヌクレオチドを増幅可能に設計された第3のプライマー。上記プライマーセットは、例えば、SNP部位を含む標的ポリヌクレオチドの増幅や検出に用いられる。この場合、第1のプライマーは、前記SNP部位の第1のアレル特異的ヌクレオチドに対応するヌクレオチドを3’末端から数えて1~5番目の何れかに有し、第2のプライマーは、前記SNP部位の第2のアレル特異的ヌクレオチドに対応するヌクレオチドを3’末端から数えて1~5番目の何れかに有する。その他、各プライマーの好ましい形態については、第一の本発明について説明したとおりである。一形態では、第1のプライマーのTm値は、第2のプライマーのTm値より高い。第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量は、モル比で、好ましくは2倍より大きく、更に好ましくは4倍より大きく、より好ましくは8倍より大きい。また、本発明は、上記~のプライマーを含み、第1のプライマー及び第2のプライマーの総量に対する第3のプライマーの量が、モル比で1倍より小さいプライマーセット、モル比で0.5倍より小さいプライマーセット、モル比で0.25倍より小さいプライマーセット、モル比で0.125倍より小さいプライマーセット等も提供する。第六の本発明であるプライマーセットの他の形態としては、例えば、以下のようなものが挙げられる。下記及びのプライマーを含み、第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量が、モル比で1倍より大きい、プライマーセット、前記標的ポリヌクレオチドに対合する第1のプライマー前記標的ポリヌクレオチドに、第1のプライマーと競合的に対合するが、第1のプライマーよりPCRによる伸長反応が起こりにくい第2のプライマー第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量は、好ましくはモル比で2倍より大きい。第2のプライマーの量に対する第1のプライマーの量の上限は、好ましくはモル比で4倍である。さらに、本発明は、上述した~のプライマーを用いて標的ポリヌクレオチドを増幅し、増幅産物中の標的ポリヌクレオチドを検出する方法に用いる検出キットの製造方法を提供する。該検出キットの製造方法は、上述した第一の本発明を用いて標的ポリヌクレオチドの増幅効率を調節し、調節された増幅効率を実現する量比の前記プライマーと、標的ポリヌクレオチドに相補的な配列からなり、末端が蛍光色素で標識されハイブリダイゼーションしたときに蛍光が増加又は減少するプローブとを組み合わせることを含む。このようなプローブについては、第一の本発明について説明したとおりである。また、本発明は、第六の発明のプライマーセットと上記プローブを組み合わせた検出キットをも提供する。<実施例1>配列番号1はJAK2遺伝子配列の部分配列である。配列番号1は、GenBankのAccessionNoNG009904の88381~88680番目の配列に相当する。配列番号1に示す塩基配列のうち、18番目~237番目からなるDNA断片をpT7BlueTvectorのEcoRVサイトにTAクローニングで挿入し、EcoRIで線状化した。これを、野生型プラスミドJAK2Wtプラスミドとした。また、配列番号1に示す塩基配列における147番目のグアニンGがチミンTに置換した配列からなるDNA断片を同様に処理し、変異型プラスミドJAK2V617Fプラスミドとした。サンプルは上記JAK2WtプラスミドとJAK2V617Fプラスミドを991で混合したものとした。上記サンプル104コピーを含み、表1に示すPCR反応液の各成分を、下記の濃度となるように混合したPCR反応液50μLを、全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。プライマーは、野生型JAK2プライマーFwt3’末端が野生型ヌクレオチド、配列番号2、変異型JAK2プライマーFmt3’末端が変異型ヌクレオチド、配列番号3、及びこれらと対になるJAK2プライマーR配列番号4を用いた。また、プローブは、3’末端が蛍光色素TAMRA、で標識された、二本鎖になると蛍光が減少するプローブ配列番号5を用いた。プライマー及びプローブの配列及び長さを表2に示す。表中、JAK2プライマーFwtとJAK2プライマーFmtの5’末端側の大文字で表すヌクレオチドからなる配列は、擬陽性を抑制するための付加配列である。JAK2プライマーRの濃度を表3に示すように変えることで、JAK2プライマーFwtとJAK2プライマーFmtの総量とJAK2プライマーRの量比を変え、当該量比が変異型プラスミドの検出感度に与える影響を試験した。PCR及びTm解析の条件は表4に示す通りである。また、Tm解析における励起波長及び検出波長は、それぞれ520~555nm、585~700nmであった。PCR及びTm解析の結果を図1に示す。図1の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。51°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、59°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図1から判るように、JAK2プライマーFwtとJAK2プライマーFmtの総量に対するJAK2プライマーRの量Rが、2モル倍、4モル倍、8モル倍と大きくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。これより、Rが大きくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性が明らかとなった。<実施例2>配列番号6はabl遺伝子配列の部分配列である。配列番号6は、GenBankのAccessionNoNG012034の158941~159060番目の配列に相当する。配列番号6に示す塩基配列のうち、少なくとも19番目~100番目の配列を含むDNA断片をpT7BlueTvectorのEcoRVサイトにTAクローニングで挿入し、KpnIで線状化した。これを、野生型プラスミドablWtプラスミドとした。また、配列番号6に示す塩基配列における77番目のシトシンCがチミンTに置換した配列からなるDNA断片を同様に処理し、変異型プラスミドablC944Tプラスミドとした。サンプルは上記ablWtプラスミドとablC944Tプラスミドを991で混合したものとした。上記サンプル104コピーを含み、表5に示すPCR反応液の各成分を、下記の濃度となるように混合したPCR反応液50μLを全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。プライマーは、野生型ablプライマーRwt3’末端が野生型ヌクレオチド、配列番号8、変異型ablプライマーRmt3’末端が変異型ヌクレオチド、配列番号9、及びこれらと対になるablプライマーF配列番号7を用いた。また、プローブは、5’末端が蛍光色素BODIPYFLで標識され、3’末端がリン酸化された表6中、Pで示す。、二本鎖になると蛍光が減少するプローブ配列番号10を用いた。プライマー及びプローブの配列及び長さを表6に示す。ablプライマーFの濃度を表7に示すように変えることで、ablプライマーRwtとablプライマーRmtの総量とablプライマーFの量比を変え、当該量比が変異型プラスミドの検出感度に与える影響を試験した。PCR及びTm解析の条件は表8に示す通りである。また、Tm解析における励起波長及び検出波長は、それぞれ420~485nm、520~555nmであった。PCR及びTm解析の結果を図2に示す。図2の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。47°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、54°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図2から判るように、ablプライマーRwtとablプライマーRmtの総量に対するablプライマーFの量Fが、4モル倍、8モル倍と大きくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。これより、Fが大きくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性が明らかとなった。実施例1と実施例2で得られた結果から、アレル特異的な塩基を有するプライマーと、アレル非特異的なプライマーとの量比を調節することで、特定のアレル特異的な塩基を有するDNAの増幅効率を上げることができることが判った。<実施例3>配列番号11はkit遺伝子配列の部分配列である。配列番号11は、GenBankのAccessionNoNG007456の75001~75360番目の配列に相当する。配列番号11に示す塩基配列のうち、59番目~358番目からなるDNA断片をpT7BlueTvectorのEcoRVサイトにTAクローニングで挿入し、EcoRIで線状化した。これを、野生型プラスミドkitWtプラスミドとした。また、配列番号11に示す塩基配列における228番目のアデニンAがチミンTに置換した配列からなるDNA断片を同様に処理し、変異型プラスミドkitD617Vプラスミドとした。サンプルは上記kitWtプラスミドとkitD617Vプラスミドを991で混合したものとした。上記サンプル104コピーを含み、表9に示すPCR反応液の各成分を、下記の濃度となるように混合したPCR反応液50μLを全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。プライマーは、野生型kitプライマーFwt3’末端が野生型ヌクレオチド、配列番号12、変異型kitプライマーFmt3’末端が変異型ヌクレオチド、配列番号13、及びこれらと対になるkitプライマーR配列番号14を用いた。また、プローブは、5’末端が蛍光色素TAMRAで標識され、3末端がリン酸化された、二本鎖になると蛍光が減少するプローブ配列番号15を用いた。プライマー及びプローブの配列及び長さを表10に示す。kitプライマーFwtの濃度を表11に示すように変えることで、kitプライマーFwtとkitプライマーFmtの量比を変え、当該量比が変異型プラスミドの検出感度に与える影響を試験した。PCR及びTm解析の条件は表12に示す通りである。また、Tm解析における励起波長及び検出波長は、それぞれ520~555nm、585~700nmであった。PCR及びTm解析の結果を図3に示す。図3の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。48°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、56°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図3から判るように、kitプライマーFmtの量に対するkitプライマーFwtの量FwtFmtが、2モル倍から1モル倍へと小さくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。これより、FwtFmtが小さくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性が明らかとなった。<実施例4>実施例1で作製したJAK2WtプラスミドとJAK2V617Fプラスミドを991で混合したものをサンプルとし、表2に示す各種プライマー及びプローブを用いて、以下の試験を行った。上記サンプル104コピーを含み、表13に示すPCR反応液の各成分を、下記の濃度となるように混合したPCR反応液50μLを全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。JAK2プライマーFmtの濃度を表14に示すように変えることで、JAK2プライマーFwtとJAK2プライマーFmtの量比を変え、当該量比が変異型プラスミドの検出感度に与える影響を試験した。PCR及びTm解析の条件は表15に示す通りである。また、Tm解析における励起波長及び検出波長は、それぞれ520~555nm、585~700nmであった。PCR及びTm解析の結果を図4に示す。図4の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。51°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、59°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図4から判るように、JAK2プライマーFmtの量に対するJAK2プライマーFwtの量FwtFmtが、2モル倍から0.5モル倍へと小さくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。これより、FwtFmtが小さくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性が明らかとなった。実施例3と実施例4で得られた結果から、アレル特異的な塩基を有する複数のプライマー第1のプライマーと第2のプライマーの量比を調節することで、特定のアレル特異的な塩基を有するDNAの増幅効率を上げることができることが判った。<実施例5>実施例3で作成したkitWtプラスミドとkitD617Vプラスミドを1:0、99:1、97:3、9:1で混合したサンプルをそれぞれWt、Mt1、Mt3、Mt10のサンプルとした。本サンプルを104コピー含み、下表に示すPCR反応液の各成分を、下表の濃度となるように混合した50μLを全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。50μLのPCR反応液において:1×反応バッファー125UTaqポリメラーゼ15mmolLMgCl202mmolLdNTP025μmolLkitプライマーFwt表10025μmolLkitプライマーFmt表1002μmolLkitmtプローブ表10kitプライマーR表10の濃度は下表参照その他の反応条件は実施例3と同じとした。PCR及びTm解析の結果を図5に示す。図5の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。48°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、56°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図5A~Eから判るように、kitプライマーFwtとkitプライマーFmtの総量に対するkitプライマーRの量RFwtFmtが、1モル倍図5A、2モル倍図5B、4モル倍図5C、8モル倍図5D、16モル倍図5Eと大きくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。しかし、16モル倍の場合、野生型由来のピークがほとんど見られなくなった。これより、Rが大きくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性は明らかになったものの、16モル倍になると野生型由来のピークがほとんど見られなくなるため、反応不良との区別がつきにくくなるということが判った。<実施例6>実施例1で作成したJAK2WtプラスミドとJAK2V617Fプラスミドを1:0、99:1、97:3、9:1で混合したサンプルをそれぞれWt、Mt1、Mt3、Mt10のサンプルとした。本サンプルを104コピー含み、下表に示すPCR反応液の各成分を、下表の濃度となるように混合した50μLを全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。50μLのPCR反応液において:1×反応バッファー125UTaqポリメラーゼ15mmolLMgCl202mmolLdNTP025μmolLJAK2プライマーFwt表2025μmolLJAK2プライマーFmt表202μmolLJAK2mtプローブ表2JAK2プライマーR表2の濃度は下表参照その他の反応条件は実施例1と同じとした。PCR及びTm解析の結果を図6に示す。図6の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。51°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、59°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図6A~Eから判るように、JAK2プライマーFwtとJAK2プライマーFmtの総量に対するJAK2プライマーRの量Rが、1モル倍図6A、2モル倍図6B、4モル倍図6C、8モル倍図6D、16モル倍図6Eと大きくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。これより、Rが大きくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性が明らかとなった。<実施例7>実施例5で作成したWt、Mt1、Mt3、Mt10のサンプルを104コピー含み、下表に示すPCR反応液の各成分を、下表の濃度となるように混合した50μLを全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。50μLのPCR反応液において:1×反応バッファー125UTaqポリメラーゼ15mmolLMgCl202mmolLdNTP1μmolLkitプライマーR表1002μmolLkitmtプローブ表10kitプライマーFwt表10とkitプライマーFmt表10の濃度は下表参照その他の反応条件は実施例3と同じとした。PCR及びTm解析の結果を図7に示す。図7の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。48°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、56°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図7A~Eから判るように、kitプライマーFmtの量に対するkitプライマーFwtの量FwtFmtが、3モル倍図7E、2モル倍図7D、1モル倍図7C、1/2モル倍図7B、1/3モル倍図7Aへと小さくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。これより、FwtFmtが小さくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性が明らかとなった。また、3モル倍の場合は野生型のピークがすべてのサンプルにおいてほとんど見られなくなることが明らかとなった。<実施例8>実施例6で作成したWt、Mt1、Mt3、Mt10のサンプルを104コピー含み、下表に示すPCR反応液の各成分を、下表の濃度となるように混合した50μLを全自動SNPs検査装置商品名:idensy商標、アークレイ社製を用いて、PCR及びTm解析を行った。50μLのPCR反応液において:1×反応バッファー125UTaqポリメラーゼ15mmolLMgCl202mmolLdNTP1μmolLJAK2プライマーR表202μmolLJAk2mtプローブ表2JAK2プライマーFwt表2とJAK2プライマーFmt表2の濃度は下表参照その他の反応条件は実施例1と同じとした。PCR及びTm解析の結果を図8に示す。図8の縦軸は蛍光強度RelativeFluorescenceUnitsの微分値、横軸は温度°Cである。51°C付近に見られるピークは、野生型プラスミドの存在に由来するピーク、59°C付近に見られるピークが、変異型プラスミドの存在に由来するピークである。図8A~Eから判るように、JAK2プライマーFmtの量に対するJAK2プライマーFwtの量FwtFmtが、3モル倍図8E、2モル倍図8D、1モル倍図8C、1/2モル倍図8B、1/4モル倍図8Aへと小さくなるに従い、変異型プラスミドの存在に由来するピークが大きくなった。これより、FwtFmtが小さくなるほど変異型プラスミドの増幅効率が上がるという規則性が明らかとなった。また、3モル倍の場合は野生型のピークがすべてのサンプルにおいてほとんど見られなくなることが明らかとなった。