"水溶性エラスチンの分子中に含まれる第1アミン及び第2アミンの少なくとも一部をN-アシル化すると共に、該分子中に含まれるカルボキシル基の少なくとも一部をアミノ酸のアルキルエステルとカップリングさせて得られる化学修飾した水溶性エラスチンを含むことを特徴とする温度応答性シート。第1アミン及び第2アミンの少なくとも一部をN-アセチル化すると共に、カルボキシル基の少なくとも一部をグリシンのメチルエステルとカップリングさせて得られる、請求項1に記載の温度応答性シート。式1により規定される修飾率が80モル以上となるようにN-アセチル化された、請求項2に記載の温度応答性シート。修飾率モル=1-B/A×1001ここで、Aは、水溶性エラスチンの吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いた値を表し、Bは、N-アセチル化水溶性エラスチンの吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いた値を表す。カルボキシル基の90モル以上がグリシンのメチルエステルとカップリングした、請求項2又は3に記載の温度応答性シート。化学修飾した水溶性エラスチンが、pH7.4、温度37°Cでコアセルベートを形成し、温度を15°Cに低下させると、該コアセルベートが溶解する性質を持つ、請求項1~4いずれか1つに記載の温度応答性シート。水溶性エラスチンが低分子量フラクションを透析により除去した高分子量水溶性エラスチンである、請求項1~5いずれか1つに記載の温度応答性シート。細胞培養用である、請求項1~6いずれか1つに記載の温度応答性シート。請求項1~7いずれか1つに記載の温度応答性シートを支持体上に形成する工程、前記温度応答性シート上に細胞の足場となる膜を作製する工程、前記足場となる膜上で特定の細胞を培養して細胞シートを作製する工程、次いで、該細胞の培養温度以下の1~20°Cにおいて、前記温度応答性シートと前記細胞シートとを分離する工程を含むことを特徴とする細胞シートの製造方法。前記足場となる膜が、細胞外マトリックスよりなる群から選ばれたゲル膜である、請求項8に記載の細胞シートの製造方法。前記足場となる膜が、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ポリリシン、及び、ゼラチンよりなる群から選ばれたゲル膜である請求項8又は9に記載の細胞シートの製造方法。エラスチン中のペプチド配列を化学合成したポリペプチド。請求項11に記載のポリペプチドを主成分として含む温度応答性シート。本発明の課題は、生体由来で毒性が極めて低く、可逆的な性質を示す温度応答性のシートを作製し、その性質を利用して、シート状の培養細胞を、そのままの形態で回収する方法を提供することにある。本発明者らは、PIPAAmの代わりに、毒性が極めて低い生体由来の材料である水溶性エラスチンに着目し、水溶性エラスチンの有するコアセルベーション形成能を利用し、水溶性エラスチンの荷電を低減して高い分子集合能を持つ化学修飾水溶性エラスチンを含む可逆的な温度応答性のシートを作製し、これを細胞シートの製造に利用することを試みた。また毒性が極めて低く、且つコアセルベーションを示し、高い分子集合能を有するエラスチン中のペプチド配列を有するポリペプチドを可逆的な温度応答性シートに用いるために、その製造を試みた。本発明者らは、上記課題は、具体的には、下記のような本発明の各態様によって達成されることを見いだした。本発明の一態様は、水溶性エラスチンの分子中に含まれる第1アミン及び第2アミンの少なくとも一部をN-アシル化すると共に、該分子中に含まれるカルボキシル基の少なくとも一部をアミノ酸のアルキルエステルとカップリングさせて得られる化学修飾した水溶性エラスチンを含む温度応答性シートである。本発明の温度応答性シートについて以下に好ましい実施態様を列記する。温度応答性シートは、第1アミン及び第2アミンの少なくとも一部をN-アセチル化すると共に、カルボキシル基の少なくとも一部をグリシンのメチルエステルとカップリングさせることが好ましい。上記のN-アセチル化は、式1により規定される修飾率が80モル以上であることが好ましい。修飾率モル=1-B/A×1001ここで、Aは、水溶性エラスチンの吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いた値を表し、Bは、N-アセチル化水溶性エラスチンの吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いた値を表す。カルボキシル基の保護は、カルボキシル基の90モル以上がグリシンのメチルエステルにより保護されることが好ましい。本発明の温度応答性シートは、化学修飾した水溶性エラスチンが、pH7.4、温度37°Cでコアセルベートを形成し、温度を20°C以下、好ましくは1~20°C、より好ましくは1~15°Cに低下させると、該コアセルベートが溶解する性質を持つ。また、水溶性エラスチンが低分子量フラクションを透析により除去した高分子量水溶性エラスチンであることが好ましい。本発明の温度応答性シートは、細胞シート作製用に好ましく使用される。上記の好ましい実施態様の組み合わせはさらに好ましい。本発明の他の態様は、前記の化学修飾した水溶性エラスチンを含む、温度応答性シート上で特定の細胞を培養して細胞シートを作製する工程、次いで、該細胞の培養温度以下の条件で、前記温度応答性シートと前記細胞シートとを分離する工程を含む、細胞シートの製造方法である。上記の製造方法は、温度応答性シートを形成する工程に引き続いて、前記温度応答性シート上に、細胞の足場となるゲル膜を形成する工程、を含むことが好ましい。足場となる膜は、いわゆる細胞外マトリックスよりなる群から選ばれたゲル膜であることが好ましい。足場となる膜は、具体的には、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ポリリシン、及び、ゼラチン群から選ばれたゲル膜であることが好ましく、コラーゲン、ポリリシン、及び、ゼラチンよりなる群から選ばれたゲル膜がより好ましく、コラーゲンのゲル膜であることが特に好ましい。上記の細胞の足場となるゲル膜は、コラーゲン等の細胞外マトリックスの主成分に、細胞接着細胞増殖を促進する、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、テネイシン、トロンボスポンジン、エンタクチン、オステオポンチン、フォンビルブランド因子、フィブリノーゲン、コンドロイチン-6硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ヒアルロン酸等の異種の細胞外マトリックスを任意成分として少量含有していてもよい。本発明の更なる他の態様は、前記の化学修飾水溶性エラスチンと同様にコアセルベーションを示すエラスチン中のペプチド配列を有するポリペプチドを化学合成すること、及びこのポリペプチドを主成分として含むシートを可逆的な温度応答性シートに用いることである。主成分として含むとは、90重量以上を意味し、ポリペプチドのみからなるシートであることが好ましい。このポリペプチドについては後に詳述する。本発明によると、化学修飾した水溶性エラスチンの可逆的な温度応答性を利用して、細胞シートを傷つけることなくそのままの形態で作製することができる。従来のPIPAAmを用いた温度応答性培養皿では、毒性のあるアクリルアミドモノマーが残留するという危険性があったが、本発明においては、生体由来の安全な蛋白質やポリペプチドを用いて、同様に温度を下げるだけで、培養細胞をシート状に回収することができる。以下に本発明の態様を順に説明する。図1及び図2を参照しながら、水溶性エラスチン、その誘導体である本発明の化学修飾した水溶性エラスチン本発明において化学修飾水溶性エラスチンともいう。、又はエラスチン中のペプチド配列を有するポリペプチドのコアセルベーションについて説明する。図1は、化学修飾水溶性エラスチン及び上記ポリペプチドのコアセルベーションを示す図である。図1中、Aに示すように、化学修飾水溶性エラスチン又はポリペプチドは15°C以下では透明な均一溶液である。同じく、Bに示すように、20°C以上に加熱すると、相転移を起こして平衡溶液とコアセルベート液滴からなる白濁状態になる。この白濁状態は冷却すると元の透明な均一溶液に戻る。Cに示すように、20°C以上でそのまま放置すると、コアセルベート液滴は互いに融合して大きな液滴になり、淡黄色の高粘性のコアセルベートとして沈層して、平衡溶液とコアセルベートの2層に分離する。この2層分離状態を冷却すると、コアセルベートは溶解して元の透明な均一溶液に戻る。図2は、化学修飾水溶性エラスチン又はポリペプチドのコアセルベーションを模式的に示した図である。図2中、Cの下層のコアセルベートは冷却すると溶解し、元の透明な均一溶液に戻るため、このコアセルベートは細胞や細胞シートを傷つけずに回収するための温度応答性材料に用いられる。例えば、化学修飾水溶性エラスチン又はポリペプチドの水溶液は、低温では透明な均一溶液であるが、加熱すると白濁し、そのまま放置すると、透明な平衡溶液上層と淡黄色の高粘性のコアセルベート下層の2層に分離する。この過程は可逆的で、冷却すると再び元の均一溶液に戻る。本発明は、かかる可逆的な性質を利用して、細胞及び細胞外マトリックスを傷つけないで、細胞シートを製造し回収するものである。本発明における化学修飾水溶性エラスチンは、水溶性エラスチンの分子中に含まれる第1アミン及び第2アミンの少なくとも一部をN-アシル化すると共に、該分子中に含まれるカルボキシル基の少なくとも一部をアミノ酸のアルキルエステルとカップリングすることにより得られるものである。N-アシル化にはN-ホルミル化、N-アセチル化、N-ベンゾイル化などがあるが、N-アセチル化が好ましい。また、N-アシル化にはウレタン型やアルキル型を用いてもよい。カップリングに用いられるアミノ酸は、タンパク質を構成するグリシン、バリン、フェニルアラニンなどの約20種類の中から選ばれる。本発明において高分子量の水溶性エラスチンを使用することが好ましい、高分子量とは、水溶性エラスチンから比較的低分子約5,000以下の成分を除去したものを言う。区画分子量が、6,000~8,000の透析膜を用いた透析により、低分子量成分を除去することが好ましい。高分子量の水溶性エラスチンの主たる分子量は約1万以上であることが好ましく、約3~30万であることがより好ましい。本発明において、水溶性エラスチンとは、水不溶性エラスチンを部分加水分解して得られるものであり、具体的には、動物の大動脈や項靱帯、魚の動脈球など動物性生体組織を、酸性可溶化液又はアルカリ性可溶化液により処理して得られる。水溶性エラスチンには、熱シュウ酸処理して得られるα-エラスチン若しくはβ-エラスチン、エラスチンをアルカリエタノール処理して得られるκ-エラスチンが代表的である。この他に、エラスターゼ等により酵素処理したエラスチン消化物及びエラスチン生合成経路における前駆体であるトロポエラスチンなどが含まれる。水溶性エラスチンの水への溶解度は、5°Cにおいて約0.001mg/ml以上約600mg/ml以下であることを意味し、1mg/ml以上600mg/ml以下であることが好ましい。水不溶性エラスチンの部分加水分解に先立って、エラスチンを含む生体組織の細断処理、熱水、熱稀アルカリ水溶液処理、アセトン抽出等による脱脂処理、塩化ナトリウム可溶の不要タンパク質の抽出除去等を行うことが好ましい。前記の化学修飾水溶性エラスチンの製造に際しては、水溶性エラスチンのN末端及びリジンlysine、アルギニン等のアミノ酸残基側鎖のアミノ基等をN-アシル化し、引き続き、C末端及びアスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸残基側鎖のカルボキシル基等とアミノ酸アルキルエステルのアミノ基をカップリングさせて化学修飾水溶性エラスチンが得られる。化学修飾によってアミノ基等とカルボキシル基等が修飾されることにより、エラスチンの荷電が低減又は消失し、その結果、エラスチン分子間の疎水的相互作用が増し、得られた化学修飾水溶性エラスチンは、未修飾エラスチンに比べて高い自己集合性を有するようになるものと考えられる。以下、水溶性エラスチンの製造方法、水溶性エラスチンの化学修飾方法、及び本発明の化学修飾水溶性エラスチンを含む温度応答性シートを作製する方法、そして、得られた温度応答性シートを用いて、該シート上で特定の細胞を培養して細胞シートを作製し、次いで、該細胞の培養温度以下の条件で、前記温度応答性シートと前記細胞シートとを分離し、該細胞シートを無傷で回収する方法について詳細に説明する。水溶性エラスチンの製造方法は色々と提案されている。好ましいのは、本発明者が提案した下記の方法である特開2007-45722号公報参照。第1の方法は、動物性生体組織からコラーゲンやその他の不要タンパク質の除去処理を行って不溶性エラスチンを得、次いでこの不溶性エラスチンをシュウ酸等を含む酸性可溶化液、又は水酸化ナトリウム等を含むアルカリ性可溶化液に浸漬溶解させ、水溶性エラスチンを製造する。コラーゲンやその他の不要タンパク質の除去処理は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化バリウムの少なくともいずれか一つを含むアルカリ性溶液であって、このアルカリ性溶液中に添加した水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化バリウムの総量を、1Lあたり0.03~0.5mol、好ましくは0.05~0.3molとしたアルカリ性溶液中に、動物性生体組織を、90~105°Cにおいて、5~60分間浸漬して行うのが好ましい。また、コラーゲンやその他の不要タンパク質の除去処理に際しては、アルカリ性溶液による処理の前に、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、又は、塩化バリウムのいずれか一つを含む塩溶液に、動物性生体組織を浸漬させる浸漬処理前処理を行うのも好ましい。動物性生体組織としては、特に制限はないが、エラスチンの含量が多い点で、豚、馬、牛、羊などの哺乳動物から得られた項靱帯や大動脈血管を使用することが好ましい。またエラスチン含量の多い魚類の動脈球などを使用しても良い。動物性生体組織は、先ず、ホモジナイザーを用いてホモジナイズするのが良い。ホモジナイズはミキサー、ミートチョッパーなど動物性生体組織を細断できれば良く、好ましくは3ミリメートル角以下、さらに好ましくはペースト状に細断できる器具を用いると良い。細断した動物性生体組織の粒が小さいほど、コラーゲンやその他の不要なタンパク質の除去効率を上げることができるので好ましい。ホモジナイズした動物性生体組織は、例えば、熱水又は熱希薄アルカリ水溶液で煮沸するか、もしくは有機溶媒で処理することによって脱脂処理を行っても良い。前記可溶化液としては、シュウ酸、蟻酸、酢酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ベタイン、ジフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸、リン酸、スルファミン酸、過塩素酸、トリクロロ酢酸の少なくともいずれか一つを含む酸性溶液が用いられる。そして、この酸性溶液の酸の総量は、1Lあたり0.05~5mol、好ましくは0.1~2molとし、かつ、液温を90~105°Cとするのが好ましい。前記可溶化液は、また、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化バリウムの少なくともいずれか一つを含むアルカリ性溶液であっても良い。このアルカリ性溶液中に添加した水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化バリウムの総量を、1Lあたり0.05~5mol、好ましくは0.05~2molとし、かつ、液温が90~105°Cのアルカリ性溶液とするのが好ましい。第2の方法は、動物性生体組織の不要部分の除去処理、動物性生体組織の脱脂処理、動物性生体組織の細断処理の少なくともいずれか一つを含む前処理工程と、前処理された動物性生体組織をアルカリ性溶液に浸漬してコラーゲンやその他の不要タンパク質を濾別するアルカリ抽出工程と、アルカリ抽出工程後の残渣をアルカリで溶解するアルカリ溶解工程を所定回数繰り返し、濾別により水溶性エラスチンを含む濾液を得る濾液回収工程と、濾液から水溶性エラスチンを生成する水溶性エラスチン生成工程とを順次行って水溶性エラスチンを製造する方法である。前記アルカリ溶解工程で用いるアルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化バリウムのいずれか一つ又は混合物が好ましい。この操作は、前記の、組織からコラーゲンやその他の不要タンパク質を除去して不溶性エラスチンを得て、次いで、この不溶性エラスチンを可溶化して水溶性エラスチンを得る第1の方法とは異なり、組織から不溶性エラスチンを得ることなく、直接水溶性エラスチンを得る方法である。即ち、1Lあたり0.03~0.5mol、好ましくは0.05~0.3molで90~105°Cとしたアルカリ性溶液中に、脱脂、細断、塩処理した動物性生体組織を5~60分間浸漬し、エラスチン以外のコラーゲンや不要タンパク質を除去した処理組織を得て、次いで、この処理組織を1Lあたり0.05~5mol、好ましくは0.05~2molアルカリ液の濃度がより高濃度で90~105°Cのアルカリ性溶液中に5~420分間、好ましくは10~240分間時間がより長い浸漬して溶解し、水溶性エラスチンを得る方法である。前記のごとく第1又は第2の方法で得られた水溶性エラスチンは、次いで、それを、例えば、透析処理することによって低分子量のフラクションを除去して、本発明で好ましく用いられる高分子量水溶性エラスチンが得られる。低分子量のフラクションを除去することにより、より高いコアセルベーション能を有する水溶性エラスチンである利点が得られる。本発明の化学修飾水溶性エラスチンの製造においては、先ず、水溶性エラスチンの分子中に含まれる第1アミン及び第2アミンの少なくとも一部をN-アシル化、好ましくは、N-アセチル化してN-アシル化水溶性エラスチンを得る。エラスチンを構成するアミノ酸残基の中で、反応性の第1アミン又は第2アミンを有するアミノ酸塩基性アミノ酸としては、リジン、アルギニン及びヒスチジンが挙げられるが、水溶性エラスチンの分子中に含まれる第1アミンとしては、末端アミノ基も含まれる。本発明においては、高分子量水溶性エラスチンの分子中に含まれる第1アミン及び第2アミンの少なくとも一部がN-アセチル化される。好ましくは、無水酢酸等のアセチル化試薬によってN-アセチル化されるが、N-アセチル化の程度は、下記の式1で表される修飾率で、80モル以上であることが好ましく、90モルであることがより好ましく、95モル以上であるものが特に好ましい。修飾率モル=1-B/A×1001式中、Aは、水溶性エラスチンの吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いた値を表す。Bは、N-アセチル化水溶性エラスチンの吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いた値を表す。N-アセチル化以外のN-アシル化も同様の条件で光学的に定量することができる。水溶性エラスチン中に含まれる第1アミン及び第2アミンが、90モル以上N-アセチル化されるためには、水溶性エラスチン1g当たり無水酢酸を0.5~5mmol使用することが好ましい。本発明においては、得られたN-アシル化、好ましくは、N-アセチル化水溶性エラスチン分子中に含まれるカルボキシル基の少なくとも一部をアミノ酸のアルキルエステルとカップリングさせて得られる化学修飾水溶性エラスチンが得られる。本発明においては炭素数1~4の低級アルキルエステルが好ましいが、特にメチルエステルが好ましい。またベンジルエステルなどのようなものを用いてもよい。エラスチンを構成するアミノ酸残基の中で、カルボキシル基を有するアミノ酸酸性アミノ酸としては、アスパラギン酸とグルタミン酸があるが、水溶性エラスチンの分子中に含まれるカルボキシル基としては、末端カルボキシル基も含まれる。本発明においては、N-アシル化、好ましくは、N-アセチル化水溶性エラスチン分子中に含まれるカルボキシル基のほぼ全部が、アミノ酸のアルキルエステルとのカップリングにより修飾されているものが好ましい。ここで、ほぼ全部とは、反応率が90モル以上であることをいう。反応率は95モル以上であることが好ましい。カップリング反応に際しては、水溶性エラスチンの1モル当量に対して、カルボジイミド等のカップリング剤又は縮合剤を過剰に使用することが好ましく、60~200モル当量用いるのが好ましく、80~120モル当量用いることがより好ましい。高活性のカップリング剤を60~200モル当量用いる場合、90モル以上の反応率が得られる。水溶性エラスチン中に含まれるカルボキシ基を、90モル以上エステル化するためには、原料水溶性エラスチン1g当たり、カルボジイミド等のカップリング剤を0.3~1mmol使用することが好ましい。図5に示すように、pHを5~9の範囲において変化させても濁度曲線が変化しないことから、カルボキシル基のほぼ全部が修飾されていると解釈される。水溶性エラスチンのアミノ基をN-アシル化した後にカルボキシ基をエステル化する代わりに、水溶性エラスチンのカルボキシ基をエステル化した後にアミノ基をN-アシル化してもよい。本発明において、化学修飾水溶性エラスチンを含む組成物は温度応答性シートとして使用される。化学修飾水溶性エラスチンの他に、温度応答性の機能を阻害しない限り、他の成分を併用しうるが、温度応答性シートには化学修飾水溶性エラスチンのみ又はエラスチン中のペプチド配列を有するポリペプチドのみを使用することが好ましい。図3は、試験管中でコラーゲンのゲル化を示す図である。図3のAに示すように、10°C以下ではコラーゲン溶液はゾル状態にある。図3のBに示すように、15°C以上に加熱するとコラーゲン溶液は白濁してゲル化し、コラーゲンゲルになる。このコラーゲンゲルは冷却しても元のゾル状態には戻らない。図4は、コラーゲンのゲル化を模式的に示した図である。コラーゲンゲルは細胞シート作製のための細胞の足場に用いられる。足場は、細胞シートの形状を保持するために使用される。細胞の足場は、当業者によく知られているように、正常な動物細胞上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、平滑筋細胞などが生きて行くために必要な細胞外マトリックスを意味する。細胞外マトリックスの種類は、コラーゲン群、非コラーゲン性糖タンパク質群、エラスチン群、及び、プロテオグリカン群に大別され、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ポリリシン、及び、ゼラチンが好ましい具体例として例示される。本発明の細胞シートの製造で用いられるコラーゲンは、医療用途として知られているどのようなものでも用いることができる。通常、医療用途に適したコラーゲンは、主として原料である動物から、酸、アルカリ、中性等の条件下で酵素などにより抽出し、粘調なコラーゲン溶液又はこの溶液を乾燥させた固体の状態として得る方法が一般的に用いられている。また、更に、ペプシン処理を施すことによって抗原性発現部位を除去し、体内又は体表面に移植した際に抗原性が無い、より医療基材に好適なコラーゲンアテロコラーゲンを得ることもできる。本発明で用いられる代表的なコラーゲンとしては、酸可溶化コラーゲン、アルカリ可溶化コラーゲン、酵素可溶化コラーゲン、中性可溶化コラーゲン等の可溶化コラーゲンが挙げられ、特に、可溶化処理と同時にコラーゲンの抗原決定基であるテロペプタイドの除去処理が施されている、アテロコラーゲンが好適である。コラーゲン溶液は、低温下ではゾル状態にあるが、加熱するとゲル化してコラーゲンゲルになる。図10及び13に示すように、このコラーゲンゲルは冷却しても元のゾル状態に戻らないので、細胞シートの製造において細胞の足場に用いることができる。本発明の細胞シートの製造方法は、化学修飾水溶性エラスチンを含む温度応答性シートを支持体上に形成する工程、前記温度応答性シート上で、特定の細胞を培養して細胞シートを作製する工程、次いで、該細胞の培養温度以下の1~20°C、好ましくは5~15°Cの条件で、前記温度応答性シートと前記細胞シートを分離する工程を含むことを特徴とする。細胞シートを作製する工程の前に、温度応答性シート上に細胞外マトリックスである足場としてコラーゲンゲル等の層を設ける工程を加入して、このコラーゲンゲル等の層の上で特定の細胞を培養することが好ましい。以下に上記の各工程を説明する。化学修飾水溶性エラスチンを含む温度応答性シートを支持体上に形成する工程について説明する。温度応答性シートを作製するための基材である支持体は、特に限定されず、細胞培養に悪影響のない、不活性な支持体が使用される。このような支持体として、通常の培養容器を構成するガラス、ポリスチレンPS等の樹脂が例示できる。化学修飾水溶性エラスチンを含む温度応答性シートは、化学修飾水溶性エラスチンを主成分90重量以上として含むことが好ましく、化学修飾水溶性エラスチンのみからなることがより好ましい。このシートの厚さは、nm~μmのオーダーであることが好ましく、50nm~500μmであることがより好ましい。言い換えると、0.01~100g/m2の乾燥塗設量とすることが好ましい。コアセルベートを形成させるためのインキュベート温度は40°C~80°Cであることが好ましく、50°C~70°Cであることがより好ましい。乾燥条件は35°C~40°Cで5分~20分間乾燥させるのが好ましい。温度応答性シート上にコラーゲンゲル層を設ける工程について説明する。コラーゲンゲル層の厚さは、約1~1,000μmであることが好ましく、約10~500μmであることがより好ましい。膜形成のためのインキュベート温度は30°C~40°Cであることが好ましく、37°C付近であることがより好ましい。溶液の濃度は0.1mg/ml~10mg/mlであることが好ましく、0.5mg/ml~2mg/mlであることがより好ましい。前記温度応答性シート上で、特定の細胞を培養して細胞シートを作製する工程について説明する。特定の細胞には、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、平滑筋細胞などが例示できる。細胞培養の方法は定法に従う。細胞シートは単層でも複層にしてもよい。複層の場合には、同一細胞でも、異種の細胞であってもよい。細胞シートの作製を促進するために、細胞の培養を促進する血管内皮細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子、上皮成長因子、インスリン様成長因子、トランスフォーミング成長因子、血小板由来成長因子等の成長因子を培地に加えて培養することができる。温度応答性シートと前記細胞シートとを分離する工程について説明する。この工程は、前記細胞の培養温度以下の条件で、前記温度応答性シートと前記細胞シートとを分離する工程である。培養温度以下とは、培養温度が37°Cの場合、好ましくは、1~20°C、より好ましくは、10~15°Cをいう。図10は、化学修飾水溶性エラスチンNAcElaOGlyOMeのコアセルベート上に、線維芽細胞を播種したコラーゲンゲルの状態を模式的に示した図である。図10において、1はコラーゲンゲルを表し、2はNAcElaOGlyOMeのコアセルベート温度応答性シートを表し、3は線維芽細胞を表す。線維芽細胞を培養して細胞シートを作製する工程に続いて、該線維芽細胞の培養温度以下に温度を下げて、前記化学修飾水溶性エラスチンからなる温度応答性シート2と前記細胞シート3とを分離する工程を実施する。図11は、コラーゲンゲル上に播種した直後0時間の線維芽細胞の球状の状態の一例を表す光学顕微鏡写真であり、3は線維芽細胞を表す。図12は、コラーゲンゲル上に播種後、24時間培養した線維芽細胞の紡錘状の状態を表す光学顕微鏡写真であり、3は線維芽細胞を表す。図13は、化学修飾水溶性エラスチンNAcElaOGlyOMeのコアセルベートが溶解し、コラーゲンゲル及び線維芽細胞からなる細胞シートが剥離している状態を模式的に例示した図である。1はコラーゲンゲル、3は線維芽細胞、4は剥離している細胞シート、5はNAcElaOGlyOMeのコアセルベート温度応答性シートが溶解している状態を表す。本発明において、化学修飾水溶性エラスチンを使用する代わりに、エラスチン中のペプチド配列を化学合成したポリペプチドを使用することができる。エラスチン中のペプチド配列にはpoly及びpolyが例示できる。これらのポリペプチドはヒト、ブタ、ウシ等の哺乳動物のエラスチンに共通して存在するペプチドであり、毒性や免疫学的等の面で極めて問題が少ないポリペプチドである。またpolyの順列入れ替えポリペプチドであるpoly、poly、poly及びpoly、polyの順列入れ替えポリペプチドであるpoly、poly及びpolyもエラスチン由来ポリペプチドに含まれる。さらにpolyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpoly、polyの置換体であるpolyも本発明のポリペプチドに含まれる。本発明においてポリペプチドとは、分子量が約3,000以上、好ましくは5,000~100,000のものを意味する。またX1、X2、X3、X4はタンパク質を構成する約20種類のアミノ酸のいずれでもよい。図14は、polyの4種類の製造ポリマー化方法を示すフロー図である。ONpはp-ニトロフェニルエステル、TFAはトリフルオロ酢酸、DMSOはジメチルスルホキシド、NMMはN-メチルモルホリン、WSCIは水溶性カルボジイミド、HOBtH2Oは1ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物、SulfoNHSはスルホスクシンイミド、DWは蒸留水、BisPNPCは炭酸ビス4-ニトロフェノールを表す。以下、実施例により本発明を具体的に説明する。各種測定法は以下のとおりである。-N-アセチル化の修飾率-N-アセチル化の修飾率は、TNBS2,4,6-トリニトロベンゼンスルホン酸法より以下のようにして測定し計算される。1mg/mlのN-アセチル化水溶性エラスチンNAcEla水溶液に、4の炭酸水素ナトリウム溶液、0.1のTNBS水溶液を、それぞれ1ml加えた。4の炭酸水素ナトリウム溶液、0.1のTNBS水溶液をそれぞれ1ml加えただけのものを、ブランクとしたn=3。作製した溶液をアルミホイルで遮光し、40°Cで2時間反応させた。反応終了後、作製した溶液0.17mlに10SDSドデシル硫酸ナトリウム1ml、1NHClを0.5ml加え、345nmにおける吸光度をそれぞれ測定した。また、修飾率は以下の式より求めた。修飾率モル=1-B/A×100式中、Aは、エラスチン水溶液の吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いたものを表し、Bは、NAcEla水溶液の吸光度波長345nmの平均値からブランクの吸光度の平均値を引いたものを表す。-濁度測定-化学修飾水溶性エラスチン、エラスチン由来のポリペプチド、及びI型コラーゲンをそれぞれ生理的条件下を考慮してリン酸緩衝液生理食塩水phosphatebufferedsaline;PBS溶液に5°Cにおいて溶解し、その溶液を、波長400nm、温度変化0.5°C/分、窒素気流下の条件で濁度測定を行った。測定機器はペルチェ式温度コントローラー付分光光度計を用いた。-ブタ由来水溶性エラスチンの作製-1ブタ由来不溶性エラスチンの単離以下の手順に従ってブタ大動脈脱脂組織からNaCl可溶及びNaOH可溶なエラスチン以外の不要タンパク質やコラーゲンを抽出により除去した。ブタ大動脈組織生体組織を用い、前処理として付着している脂肪や筋肉などエラスチン含量の低い部分を、刃物などを用いて削ぎ落とすことで不要部分の除去処理を行い、次いで、生体組織をホモジナイザーを用いてホモジナイズすることで細断処理を行った。ホモジナイズした生体組織を熱水、熱希薄アルカリ水溶液又はアセトン等の有機溶媒で処理して脱脂処理を行った後に乾燥させた。ついで脱脂乾燥組織重量の約10倍容量の1M塩化ナトリウムを加え、室温で1時間攪拌してNaCl可溶の不要タンパク質を抽出、除去した。この操作を5回繰り返し、その後蒸留水で洗浄し、遠心分離3,000rpm、5分により水切りした。上記のようにして脱脂及び塩処理した生体組織の重量に対して約10倍容量重量1g当たり10mlの0.1N水酸化ナトリウム水溶液を加え、100°Cで15分間撹拌し、エラスチン以外のコラーゲンや不要タンパク質を除去する工程を行った。そして、生体組織とアルカリ性溶液とを分離した。分離したアルカリ性溶液を、例えば、ビューレット法にて総タンパク質の定量を行い、アルカリ性溶液中に含まれる総タンパク質量が0.1mg/mL以下になるまで、この操作を繰返した。その後、冷却して遠心分離5,000rpm、20分により洗浄し、残渣を乾燥して不溶性エラスチンを得た。2ブタ由来高分子量水溶性エラスチンの作製ブタ由来不溶性エラスチンに、その乾燥重量の10倍容量の0.5N-NaOHを加え、100°Cの油浴中で30分撹拌した。反応後、溶液を速やかに氷冷し、酢酸、塩酸又はクエン酸で中和した。その後、分画分子量6,000~8,000の透析膜を用いて1週間透析し、透析膜内の溶液を凍結乾燥して、主たる分子量が約3~30万であるブタ由来の高分子量水溶性エラスチンを得た。-化学修飾したブタ由来高分子量水溶性エラスチンの作製-下記の手順に従って、ブタ由来の高分子量水溶性エラスチンのN-アセチル化を行い、次いで、アミノ酸グリシンメチルエステルを用いてカップリングを行い、化学修飾したブタ由来の高分子量水溶性エラスチンNAcElaOGlyOMeを作製した。1ブタ由来高分子量水溶性エラスチンのN-アセチル化前記で得られたブタ由来高分子量水溶性エラスチンを少量のトリフルオロエタノールに溶解したものに、ピリジン100当量と無水酢酸100当量を加え、室温で撹拌した。ニンヒドリン試験でアセチル化が定量的に進行したことを確認した後、ロータリーエバポレーターで減圧濃縮した。このN-アセチル化は、TNBS法よりアミノ基等の修飾率が95モル以上になるまで、数回繰り返し行った。その後、この溶液を1週間透析して溶媒や未反応試薬等を除去し、凍結乾燥してN-アセチル水溶性エラスチンを得た。TNBS法による修飾率は97モルであった。2化学修飾水溶性エラスチンNAcElaOGlyOMeの作製前記で得られたN-アセチル水溶性エラスチンNAcElaを少量のジメチルホルムアミドに溶解し、水溶性カルボジイミド100当量を加えて室温で15分間撹拌した。その後、HGlyOMeHCl100当量及びトリエチルアミン100当量を溶かした少量のジメチルホルムアミドを加え、一昼夜室温で撹拌した。次いで真空ポンプで減圧濃縮し、1週間透析して溶媒や未反応試薬等を除去し、凍結乾燥して、化学修飾水溶性エラスチンNAcElaOGlyOMeを得た。3NAcElaOGlyOMeを用いた濁度測定前記で得られたNAcElaOGlyOMeの1.0mgをpH5.0、pH7.4、pH9.0のPBS溶液にそれぞれに5°C下で溶解して、5~60°Cの温度範囲、0.5°C/分の温度上昇で、波長400nmでの濁度を測定した。その結果を図5に示した。図5より、NAcElaOGlyOMe1.0mg/mlのpH5.0、pH7.4、pH9.0での濁度曲線は、酸性、中性、アルカリ性のどの条件でもほとんど同じ曲線を与える結果であった。この結果から、N-アセチル化によるアミノ基の保護に加えて、HGlyOMeとのカップリングによるカルボキシル基の修飾によって、水溶性エラスチンの荷電がなくなったことがわかり、ほぼ定量的にNAcElaOGlyOMeが合成できたことが確認された。-NAcElaOGlyOMeの可逆的な濁度曲線の測定-NAcElaOGlyOMeを、5°C下でPBS溶液pH7.4に溶解して30mg/mlの溶液を作製し、5~25°Cの温度範囲、窒素気流下で0.5°C/分の温度変化で、温度上昇及び温度下降における濁度測定を行った。その結果を図6に示した。図6よりNAcElaOGlyOMeの濁度曲線は、温度上昇に伴う濁度曲線と温度下降に伴う濁度曲線がほぼ一致し、可逆的であることがわかった。この図6の結果と図1及び2より、NAcElaOGlyOMeはコアセルベーションにより、加熱すると白濁し、細胞培養条件下の37°C、pH7.4でコアセルベートを形成し、20°C以下で元の透明な溶液状態に戻ることが示唆された。-NAcElaOGlyOMeのコアセルベートに対する押し込み試験-NAcElaOGlyOMeを5°CにおいてPBS溶液pH7.4に溶解させて、バイアル瓶の中で200mg/mlに調製した。次いで、50°Cに加熱すると白濁し、その温度で24時間静置すると2層に分離した。上層の平衡溶液を取り除き、下層のコアセルベートの表面を約10分間乾燥させた後、25°Cと37°Cに温度を保持したままRHEONERIICREEPMETERRE23305BYAMADENを用いて押し込み試験を行った。コアセルベートの硬さは押し込みに対する荷重MPaで表した。その結果を図7に示した。図7より、NAcElaOGlyOMeのコアセルベートは、25°Cに比べて高い温度の37°Cでは硬くなることが確認された。即ち、コアセルベートは、細胞培養条件下の37°Cでは硬い状態を保持しているが、25°Cにすると柔らかくなり、溶けやすい状態になることが分かった。また15°Cではコアセルベートが溶解し、測定できなかった。-コラーゲンの不可逆的な濁度曲線-I型コラーゲンの1mg/mlのPBS溶液pH7.4を5°C下で作製し、5°C~40°Cの温度範囲において、窒素気流下で0.5°C/分の温度変化で温度上昇及び温度下降における濁度測定を行った。その結果を図8に示した。図8より、I型コラーゲンの濁度曲線は、温度上昇に伴う濁度曲線と温度下降に伴う濁度曲線が一致しないで、不可逆的であることが分かった。この図8の結果と図3及び4より、I型コラーゲンは、温度上昇に伴ってゾルからゲルに変化し、細胞培養条件下の37°C、pH7.4ではゲルを形成し、冷却しても元のゾル状態に戻らないで、ゲル化したままであることが示された。-コラーゲンゲル上での細胞増殖実験-I型コラーゲンの0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/mlのPBS溶液pH7.4の50μlずつを、96ウェル培養皿に加え、1時間インキュベート37°C、5炭酸ガス中して作製したコラーゲンゲル上に、0.5ウシ胎児血清を添加したDulbeccosModifiedEagleMediumDMEM培地に懸濁した、ヒト皮膚線維芽細胞2.0×104cells/mlの100μlを各々のウェルに播種した。2日間培養37°C、5炭酸ガス中した後、培地交換を行い、さらに2日間培養を続けて細胞数をカウントした×400、3視野。その結果を図9に示した。図9より、コラーゲンゲル量が多くなるにつれて、細胞数が増加することが分かった。-細胞シートの作製-NAcElaOGlyOMeをPBS溶液pH7.4に溶解させ30mg/mlに調製し、FilterUnit0.22μmの滅菌用フィルターを通して滅菌し、100μlずつ96ウェル培養皿に分注し、24時間インキュベート60°C、5炭酸ガス中して2層に分離させた。その後、上層の平衡溶液を取り除き、下層のコアセルベートの表面を約10分間、37°Cで乾燥させた。次いで、I型コラーゲンの1mg/mlのPBS溶液を作製し滅菌済み、100μlずつコアセルベート上に加え、1時間インキュベート37°C、5炭酸ガス中することでコラーゲンゲルの膜を作製した。10.0ウシ胎児血清を添加したDMEM培地で懸濁した、ヒト皮膚線維芽細胞2.0×104cells/mlを各ウェルのコラーゲンゲル膜上に100μlずつ播種し、5炭酸ガスインキュベーター中で37°C、24時間培養を行った。そのときの細胞の状態を光学顕微鏡で観察した結果を図11~図12に示した。NAcElaOGlyOMeのコアセルベート上に、線維芽細胞を播種したコラーゲンゲルが存在していることは、肉眼観察によって確認できた。図10に、NAcElaOGlyOMeのコアセルベート上にコラーゲンゲルを作製し、そのゲル上に線維芽細胞を播種した状態を模式的に示した。この状態では細胞は接着する前のゲル上に付着した状態である。図10において、1はコラーゲンゲル、2はNAcElaOGlyOMeのコアセルベート、3は接着する前の線維芽細胞を表している。図11は、播種した直後0時間の細胞が、接着前の付着した状態球状でコラーゲンゲル上に存在していることを示す光学顕微鏡写真である。図11において、3は接着する前の線維芽細胞である。図12は、24時間培養後の線維芽細胞が、コラーゲンゲル上に紡錘状の状態で存在し、接着、伸展、増殖していることを示す光学顕微鏡写真である。図12において、3は接着、伸展、増殖している線維芽細胞である。-細胞シートの剥離-NAcElaOGlyOMeのコアセルベート上にコラーゲンゲルを作製し、その上に線維芽細胞を播種し、24時間培養して細胞シートを作製した後に、15°Cに冷却して30分間インキュベートすることでNAcElaOGlyOMeのコアセルベートが溶解し、線維芽細胞コラーゲンゲルからなる細胞シートを剥離した。コラゲーンゲル上で接着、伸展、増殖した細胞シートが剥離している状態は肉眼で観察できた。図13は、NAcElaOGlyOMeのコアセルベートが溶解し、コラーゲンゲル及び線維芽細胞からなる細胞シートが剥離している状態を模式的に示した図である。図13において、1はコラーゲンゲル、3は接着、伸展、増殖している線維芽細胞、4は細胞シート、5はNAcElaOGlyOMeのコアセルベートが溶解して消失している状態を表している。このように温度を下げることにより、NAcElaOGlyOMeのコアセルベートが溶解し、線維芽細胞コラーゲンゲルからなる細胞シートが、無傷の状態で容易に製造回収された。NAcElaOGlyOMeをPBS溶液pH7.4に溶解させて、30mg/mlの溶液を10ml調製し、FilterUnit0.22μmの滅菌用フィルターを通して滅菌し、3.6mlずつ直径6cm培養皿に分注し塗布量は38g/m2、24時間インキュベート60°C、5炭酸ガス中して2層に分離させた。その後、上層の平衡溶液を取り除き、下層のコアセルベート膜100~200μmの厚さの表面を約10分間、37°Cで乾燥させた。次いで、I型コラーゲンの1mg/mlのPBS溶液を10ml作製し滅菌済み、3.6mlずつコアセルベート上に加え塗布量は1.3g/m2、1時間インキュベート37°C、5炭酸ガス中することでコラーゲンゲルの膜200~300μmの厚さを作製した。10.0ウシ胎児血清を添加したDMEM培地で懸濁した、ヒト皮膚線維芽細胞2.0×104cells/mlの細胞懸濁液を10ml作製し、3.6mlずつをコラーゲンゲル膜上に播種し、5炭酸ガスインキュベーター中で37°C、24時間培養を行って細胞シートを作製した。24時間後の細胞の状態を光学顕微鏡で観察した結果は図12と同様であった。-エラスチン中のペプチド配列を有するポリペプチドの化学合成-化学修飾水溶性エラスチンと同様に温度応答性シートに用いることができるエラスチン由来のポリペプチドの製造について、ポリペプチドの一つであるpolyの製造ポリマー化例を説明する。-活性エステル法によるpolyの製造-HVPGVGONpTFA0.23mmolをDMSO0.5mlに溶解し、NMMでpHを9にし、7日間撹拌してポリマー化した。分画分子量3,500の透析膜を用いて透析し、凍結乾燥した。収率は37、平均分子量は約17,000であった。なお、平均分子量は、定法により電気泳動法を用いて、分子量マーカーに基づく標準曲線から求めた。-有機溶媒中のカルボジイミド法によるpolyの製造-HVPGVGOHTFA0.37mmolをDMSO0.5mlに溶解し、HOBtH2O0.37mmolを加え、10分後に水溶性カルボジイミド0.74mmolを加え、NMMでpHを9にし、7日間撹拌してポリマー化した。分画分子量3,500の透析膜を用いて透析し、凍結乾燥した。収率は61、平均分子量は約20,000であった。-水溶媒中のカルボジイミド法によるpolyの製造-HVPGVGOHTFA0.37mmolを蒸留水0.5mlに溶解し、SulfoNHS0.37mmolを加え、ついで水溶性カルボジイミド0.37mmolを加え、NMMでpHを9にし、7日間撹拌してポリマー化した。分画分子量3,500の透析膜を用いて透析し、凍結乾燥した。収率は6.3、平均分子量は約22,000であった。[炭酸ビス4-ニトロフェニル法によるpolyの製造]HVPGVGOHTFA0.37mmolをピリジン0.5mlに溶解し、BisPNPC0.11mmolを加え、NMMでpHを9にし、7日間撹拌してポリマー化した。分画分子量3,500の透析膜を用いて透析し、凍結乾燥した。収率は16、平均分子量は約14,000であった。-polyの可逆的な濁度曲線の測定-前記の活性エステル法によって製造したpolyを、5°C下でPBS溶液pH7.4に溶解して30mg/mlの溶液を作製し、5~65°Cの温度範囲、窒素気流下で0.5°C/分の温度変化で、温度上昇及び温度下降における濁度測定を行った。その結果を図15に示した。図15よりpolyの濁度曲線は、温度上昇に伴う濁度曲線と温度下降に伴う濁度曲線がほぼ一致し、可逆的であることがわかった。この図15の結果と図1及び2より、polyはコアセルベーションにより、加熱すると白濁し、細胞培養条件下の37°C、pH7.4でコアセルベートを形成し、20°C以下で元の透明な溶液状態に戻ることが示唆された。-polyのコアセルベートを用いた細胞シートの作製-前記の活性エステル法によって製造したpolyをPBS溶液pH7.4に溶解させ30mg/mlに調製し、FilterUnit0.22μmの滅菌用フィルターを通して滅菌し、100μlずつ96ウェル培養皿に分注し、24時間インキュベート60°C、5炭酸ガス中して2層に分離させた。その後、上層の平衡溶液を取り除き、下層のコアセルベートの表面を約10分間、37°Cで乾燥させた。次いで、I型コラーゲンの1mg/mlのPBS溶液を作製し滅菌済み、100μlずつコアセルベート上に加え、1時間インキュベート37°C、5炭酸ガス中することでコラーゲンゲル膜を作製した。10.0ウシ胎児血清を添加したDMEM培地で懸濁した、ヒト皮膚線維芽細胞2.0×104cells/mlを各ウェルのコラーゲンゲル膜上に100μlずつ播種し、5炭酸ガスインキュベータ―中で37°C、24時間培養を行った。図16は24時間培養後の線維芽細胞が、コラーゲンゲル上に紡錘状の状態で存在し、接着、伸展、増殖していることを示す光学顕微鏡写真である。図16において、3は接着、伸展、増殖している線維芽細胞である。-polyのコアセルベートの溶解による細胞シートの剥離-前記に示すように細胞シートを作製した後に、15°Cに冷却して30分間インキュベートすることでpolyのコアセルベートが溶解し、線維芽細胞コラーゲンゲルからなる細胞シートを剥離した。コラゲーンゲル上で接着、伸展、増殖した細胞シートが剥離している状態は肉眼で観察できた。その結果は図13に示した結果と同様の結果であった。このように温度を下げることにより、polyのコアセルベートが溶解し、線維芽細胞コラーゲンゲルからなる細胞シートが、無傷の状態で容易に製造回収された。上記のポリペプチはいずれも温度応答性シートとして使用することができる。"