"配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼ又は当該アミノ酸配列と90以上の配列同一性を有するアルカリプロテアーゼにおいて、下記6、8~11、13~16から選ばれる1種類以上のアミノ酸残基の置換及び/又は挿入がなされ、且つ配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼより高い比活性及び/又は洗浄性を有するアルカリプロテアーゼ。但し、下記6、8~11、13~16におけるa~eは、各々a133位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換b133位と134位又はこれらに相当する位置のアミノ酸残基の間への他のアミノ酸残基の挿入c挿入前の134位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換d挿入前の135位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換e132位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換を示す6aで示されるアミノ酸残基の置換であって、他のアミノ酸残基が、リジンである8aで示されるアミノ酸残基の置換とbで示されるアミノ酸残基の挿入の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aロイシン/bセリン又はaロイシン/bグリシンである9aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びcで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aセリン/bセリン/cセリン又はアラニンである10aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入、cで示されるアミノ酸残基の置換及びdで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aセリン/bセリン/cセリン/dアルギニン又はaセリン/bセリン/cセリン/dメチオニンである11aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aセリン/bセリン/eメチオニンである13aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aイソロイシン/bアラニン/eセリンである14aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aプロリン/bアラニン/eアスパラギンである15bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、bアラニン/eメチオニンである16aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aリジン/bセリン/eイソロイシンである配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼと90以上の配列同一性を有するアルカリプロテアーゼが、配列番号1において132位、133位、134位若しくは135位又はこれらに相当する位置以外のアミノ酸残基が1~数個欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるものである請求項1記載のアルカリプロテアーゼ。請求項1又は2記載のアルカリプロテアーゼをコードする遺伝子。請求項3記載の遺伝子を含有する組換えベクター。宿主が微生物である請求項4記載のベクターを導入した形質転換体。請求項1又は2記載のアルカリプロテアーゼを含有する洗浄剤組成物。本発明は、複合汚れに対して有効なアルカリプロテアーゼの洗浄性能を更に向上させ、酵素の比活性を高めることにより、高い洗浄性と生産性を併せ持つアルカリプロテアーゼを提供することを目的とする。本発明者らは、新しいズブチリシンサブファミリーに分類することが提唱されている分子量約43,000のアルカリプロテアーゼについて、これらのアミノ酸配列の適切なアライメントをとることにより、改変候補となるアミノ酸の選抜を試み、任意のアミノ酸への置換、挿入、欠失等の部位特異的変異導入を行なった。その結果、ある種のアルカリプロテアーゼにおいて、比活性を向上させるには当該アミノ酸配列中の特定位置に特定のアミノ酸残基が必要であることを見出した。更に洗浄性能を向上させるには当該アミノ酸配列中の特定位置に特定のアミノ酸残基の挿入が必要であることを見出した。すなわち本発明は、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼ又はこれと機能的に等価なアルカリプロテアーゼにおいて、下記a~eから選ばれる1種類以上のアミノ酸残基の置換及び/又は挿入がなされ、且つ配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼより高い比活性及び/又は洗浄性を有するアルカリプロテアーゼを提供するものである。a133位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換、b133位と134位又はこれらに相当する位置のアミノ酸残基の間への他のアミノ酸残基の挿入、c挿入前の134位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換、d挿入前の135位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換及びe132位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換また本発明は、該アルカリプロテアーゼをコードする遺伝子、該遺伝子を含有するベクター、該ベクターを含有する形質転換体を提供するものである。さらに、本発明は、該アルカリプロテアーゼを含有する洗浄剤組成物を提供するものである。本発明によれば、複合汚れに対しても優れた洗浄性を有するアルカリプロテアーゼの洗浄性能及び、酵素の比活性を高めることにより、洗浄剤に配合するのに適したアルカリプロテアーゼを提供できる。本発明のアルカリプロテアーゼは、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼ又はこれと機能的に等価なアルカリプロテアーゼにおいて、下記a~eから選ばれる1種類以上のアミノ酸残基の置換及び/又は挿入がなされたもので、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼより比活性又は洗浄性が向上していることが好ましく、さらに比活性及び洗浄性の向上していることが好ましい。a133位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換b133位と134位又はこれらに相当する位置のアミノ酸残基の間への他のアミノ酸残基の挿入c挿入前の134位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換d挿入前の135位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換e132位又はこれに相当する位置のアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換斯かるアルカリプロテアーゼは、野生型、野生型の変異体或いは人為的に変異を施した変異体であってもよい。また、上記a~eから選ばれる2種類以上のアミノ酸残基の置換及び/又は挿入の好適な組み合わせとしては、例えば、以下の1~5が挙げられる。1aで示されるアミノ酸残基の置換とbで示されるアミノ酸残基の挿入の組み合わせ2aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びcで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせ3aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入、cで示されるアミノ酸残基の置換及びdで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせ4aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせ5bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせさらに、本発明のアルカリプロテアーゼの好適な具体例として、以下の6~16で示されるものが挙げられる。6aで示されるアミノ酸残基の置換であって、他のアミノ酸残基が、リジン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、ロイシン又はイソロイシンである7bで示されるアミノ酸残基の挿入であって、他のアミノ酸残基が、リジン、ロイシン、セリン、メチオニン、グリシン、スレオニン、チロシン又はアルギニンである8aで示されるアミノ酸残基の置換とbで示されるアミノ酸残基の挿入の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aプロリン/bイソロイシン、aロイシン/bセリン、aロイシン/bグリシン、aロイシン/bスレオニン、aセリン/bアラニン、aセリン/bアスパラギン、aセリン/bグルタミン、aセリン/bトリプトファン、aセリン/bヒスチジン、aセリン/bグリシン、aリジン/bセリン、aスレオニン/bセリン、aイソロイシン/bセリン、aメチオニン/bセリン、aグリシン/bセリン、aアルギニン/bセリン、aグルタミン酸/bセリン、aアスパラギン/bセリン、aフェニルアラニン/bセリン、aトリプトファン/bセリン、aリジン/bアラニン、aアルギニン/bアラニン、aリジン/bグリシン又はaセリン/bセリンである9aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びcで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aセリン/bセリン/cスレオニン、セリン、グリシン又はアラニンである10aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入、cで示されるアミノ酸残基の置換及びdで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aセリン/bセリン/cセリン/dアラニン、aセリン/bセリン/cセリン/dアルギニン又はaセリン/bセリン/cセリン/dメチオニンである11aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aセリン/bセリン/eセリン、aセリン/bセリン/eグルタミン又はaセリン/bセリン/eメチオニンである12bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、bアラニン、アルギニン、グリシン又はロイシン/eセリンである13aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aイソロイシン/bアラニン/eセリン、aヒスチジン/bアラニン/eセリン、aセリン/bアラニン/eセリン、aロイシン/bアラニン/eセリン、aアルギニン/bアラニン/eセリン、aリジン/bアラニン/eセリン又はaリジン/bセリン/eセリンである14aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aイソロイシン/bアラニン/eアルパラギン、aプロリン/bアラニン/eアルパラギンである15bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、bアラニン/eメチオニン又はスレオニンである16aで示されるアミノ酸残基の置換、bで示されるアミノ酸残基の挿入及びeで示されるアミノ酸残基の置換の組み合わせであって、置換及び挿入される他のアミノ酸残基がそれぞれ、aリジン/bセリン/eアルパラギン酸又はイソロイシンである配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼとしては、例えばプロテアーゼKP43バチルスエスピーKSM-KP43FERMBP-6532由来、WO99/18218、GenBankaccessionno.AB051423が挙げられる。配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼと機能的に等価なアルカリプロテアーゼとしては、野生型又は野生型の変異体であってもよい。例えば、配列番号1において132位、133位、134位若しくは135位又はこれらに相当する位置以外のアミノ酸残基が1~数個欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるアルカリプロテアーゼ、或いは配列番号1で示されるアミノ酸配列と80以上、好ましくは87以上、より好ましくは90以上、特に好ましくは95以上の同一性を有するアルカリプロテアーゼであり、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼと同様の性質を有するものが挙げられる。特に、pH8以上のアルカリ性領域で作用する、酸化剤耐性を有する、50°C、pH10で10分間処理したとき80以上の残存活性を示す、ジイソプロピルフルオルリン酸DFP及びフェニルメタンスルホニルフルオライドPMSFで阻害され、SDS-PAGEによる分子量が43,000±2,000であるものが好ましい。ここで、酸化剤耐性を有することとしては、当該アルカリプロテアーゼを50mM過酸化水素、5mM塩化カルシウムを含む20mMブリットンロビンソン緩衝液pH10中で、30°C、20分間の放置後の残存活性が少なくとも50以上を保持していることが挙げられる。配列番号1で示されるアミノ酸配列と80以上の同一性をもつアミノ酸配列を有するアルカリプロテアーゼとしては、例えばプロテアーゼKP9860バチルスエスピーKSM―KP9860FERMBP-6534由来、WO99/18218、GenBankaccessionno.AB046403、プロテアーゼE-1バチルスNo.D-6FERMP-1592由来、特開昭49-71191、GenBankaccessionno.AB046402、プロテアーゼYaバチルスエスピーYFERMBP-1029由来、特開昭61-280268、GenBankaccessionno.AB046404、プロテアーゼSD521バチルスSD521FERMP-11162由来、特開平3-191781、GenBankaccessionno.AB046405、プロテアーゼA-1NCIB12289由来、WO88/01293、GenBankaccessionno.AB046406、プロテアーゼA-2NCIB12513由来、WO98/56927、プロテアーゼ9865バチルスエスピーKSM-9865FERMP-18566由来、GenBankaccessionno.AB084155や、特開2002-218989、特開2002-306176、特開2003-125783、特開2004-000122、特開2004-057195に記載の変異プロテアーゼ、配列番号1のアミノ酸配列の63位をセリンに置換した変異体、89位をヒスチジンに置換した変異体、120位をアルギニンに置換した変異体、63位及び187位をセリンに置換した変異体、226位をチロシンに置換した変異体、296位をバリンに置換した変異体、304位をセリンに置換した変異体特開2004305175、配列番号1のアミノ酸配列の15位をヒスチジンに置換した変異体、16位をスレオニン又はグルタミンに置換した変異体、166位をグリシンに置換した変異体、167位をバリンに置換した変異体、346位をアルギニンに置換した変異体、405位をアスパラギン酸に置換した変異体特開2004305176、などが挙げられる。なお、アミノ酸配列の同一性は、LipmanPearson法によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアGenetyxWinVer5.1.1;ソフトウェア開発のホモロジー解析Searchhomologyプログラムを用いて、Unitsizetocomparektupを1として解析を行なうことにより算出される。また、本発明おいて、相当する位置のアミノ酸残基を特定する方法としては、例えばリップマン-パーソン法等の公知のアルゴリズムを用いてアミノ酸配列を比較し、各アルカリプロテアーゼのアミノ酸配列中に存在する保存アミノ酸残基に最大の相同性を与えることにより行なうことができる。プロテアーゼのアミノ酸配列をこのような方法で整列させることにより、アミノ酸配列中にある挿入、欠失にかかわらず、相同アミノ酸残基の各プロテアーゼにおける配列中の位置を決めることが可能である。相同位置は、三次元構造中で同位置に存在すると考えられ、対象のプロテアーゼの特異的機能に関して類似した効果を有することが推定できる。すなわち、上記方法でアミノ酸配列を整列させた図1より、1配列番号1の132位のアミノ酸残基はアラニン残基であるが、その位置に相当する位置のアミノ酸残基は、上記の方法を用いることにより、例えばプロテアーゼE-1においては131位のアラニン残基というように特定することができる。2配列番号1の133位のアミノ酸残基はアラニン残基であるが、その位置に相当する位置のアミノ酸残基は、上記の方法を用いることにより、例えばプロテアーゼYaにおいては132位のプロリン残基というように特定することができる。3配列番号1の134位のアミノ酸残基はバリン残基であるが、その位置に相当する位置のアミノ酸残基は、上記の方法を用いることにより、例えばプロテアーゼKP9860においては134位のバリン残基というように特定することができる。4配列番号1の135位のアミノ酸残基はアスパラギン残基であるが、その位置に相当する位置のアミノ酸残基は、上記の方法を用いることにより、例えばプロテアーゼSD521においては134位のアスパラギン残基というように特定することができる。プロテアーゼKP43のアミノ酸配列の1132位、2133位3134位、4135位に相当する位置及びアミノ酸残基の具体例を、上記で例示したプロテアーゼKP9860、プロテアーゼE-1、プロテアーゼYa、プロテアーゼSD521、プロテアーゼA-1、プロテアーゼA-2、プロテアーゼ9865について示す表1。本発明のアルカリプロテアーゼが変異体である場合、変異を施す前のアルカリプロテアーゼ親アルカリプロテアーゼということがあるとしては、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するプロテアーゼ又は上述したこれと機能的に等価なアルカリプロテアーゼとして示したものが該当し、これに目的部位の変異を施すことにより本発明のアルカリプロテアーゼが得られる。例えば、プロテアーゼKP43の配列番号1で示されるアミノ酸配列に対し、前記6~16で示されるアミノ酸残基の置換又は/及び挿入を行なう、又はこれと機能的に等価なアルカリプロテアーゼのアミノ酸配列において当該位置に相当する位置のアミノ酸残基に対して同様の置換又は/及び挿入を行なうことで得ることができる。本発明アルカリプロテアーゼは、例えば以下の方法により得ることができる。すなわち、クローニングされた親アルカリプロテアーゼをコードする遺伝子配列番号2に対して変異を施し、得られた変異遺伝子を用いて適当な宿主を形質転換し、当該組換え宿主を培養し、培養物から採取することにより得られる。親アルカリプロテアーゼをコードする遺伝子のクローニングは、一般的な遺伝子組換え技術を用いればよく、例えばWO99/18218、WO98/56927記載の方法に従って行なえばよい。親アルカリプロテアーゼをコードする遺伝子の変異手段としては、一般的に行われている部異特異的変異の方法がいずれも採用できる。より具体的には、例えばSiteDirectedMutagenesisSystemMutanSuperExpressKmキット等を用いて行なうことができる。また、リコンビナントPCRpolymerasechainreaction法PCRprotocolsAcademicPressNewYork1990を用いることによって、遺伝子の任意の配列を、他の遺伝子の該任意の配列に相当する配列と置換することが可能である。得られた変異遺伝子を用いた本発明プロテアーゼの生産方法としては、例えば当該変異遺伝子を安定に増幅できるDNAベクターに連結させ宿主菌を形質転換する、或いは当該変異遺伝子を安定に維持できる宿主菌の染色体DNA上に導入させる、等の方法が採用できる。この条件を満たす宿主としては例えばバチルス属細菌、大腸菌、カビ、酵母、放線菌などが挙げられ、これらの菌株を用い、資化性の炭素源、窒素源その他必須栄養素を含む培地に接種し、常法に従い培養すればよい。かくして得られる本発明のアルカリプロテアーゼは、酸化剤耐性を有し、高濃度の脂肪酸によるカゼイン分解活性の阻害を受けず、SDS-PAGEにより認められる分子量が43,000±2,000であり、アルカリ性域で活性を有すると共に、親アルカリプロテアーゼに比べ、比活性の向上、及び/又は洗浄力の向上が認められるという性質を新に獲得したものである。従って、本発明のアルカリプロテアーゼは、各種洗剤組成物配合用酵素として有用である。洗浄剤組成物中への本発明品プロテアーゼの配合量は、アルカリプロテアーゼが活性を示す量であれば特に制限されないが、洗浄剤組成物1kg当たり0.1~5000PUが配合できるが、経済性等を考慮し、500PU以下が好ましい。本発明の洗浄剤組成物は、本発明品プロテアーゼ以外に様々な酵素を併用することもできる。例えば、加水分解酵素、酸化酵素、還元酵素、トランスフェラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ、シンテターゼ等である。このうち、本発明以外のプロテアーゼ、セルラーゼ、ケラチナーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、プルラナーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、グルコシダーゼ、グルカナーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ等が好ましく、特にプロテアーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、リパーゼが好ましい。プロテアーゼとしては市販のアルカラーゼ、エスペラーゼ、サビナーゼ、エバラーゼ、カンナーゼ登録商標;ノボザイムズ社、プロペラーゼ、プラフェクト登録商標;ジェネンコア社、またKAP花王、等が挙げられる。セルラーゼとしてはセルザイム、ケアザイム登録商標;ノボザイムズ社、またKAC、特開平10-313859号公報記載のバチルスエスピーKSM-S237株が生産するアルカリセルラーゼ、特開2003313592の号公報記載の変異アルカリセルラーゼ以上、花王等が挙げられる。アミラーゼとしてはターマミル、デュラミル、ステインザイム登録商標;ノボザイムズ社、プラスター登録商標;ジェネンコア社、またKAM花王、等が挙げられる。リパーゼとしてはリポラーゼ、リポラーゼウルトラ、ライペックス登録商標;ノボザイムズ社が挙げられる。洗浄剤組成物中で本発明品プロテアーゼ以外のプロテアーゼを併用する場合の配合量は、洗浄剤組成物1kg当たり0.1~500PUが好ましい。セルラーゼを併用する場合は、特開平10-313859号公報の段落0020に記載の酵素活性測定方法より決定される単位KUに基づき、洗浄剤組成物1kg当たり300~3000000KUが好ましい。またアミラーゼを併用する場合は、特開平11-43690号公報の段落0040記載のアミラーゼ活性測定方法より決定される単位IUに基づき、洗浄剤組成物1kg当たり50~500000IUが好ましい。さらにリパーゼを併用する場合は、特表平8-500013号公報の実施例1記載のリパーゼ活性測定方法より決定される単位LUづき、洗浄剤組成物1kg当たり10000~1000000LUが好ましい。本発明の洗浄剤組成物には公知の洗浄剤成分を配合することができ、当該公知の洗浄剤成分としては、例えば次のものが挙げられる。1界面活性剤界面活性剤は洗浄剤組成物中0.5~60質量配合され、特に粉末状洗浄剤組成物については10~45質量、液体洗浄剤組成物については20~50質量配合することが好ましい。また本発明洗浄剤組成物が漂白剤、または自動食器洗浄機用洗剤である場合、界面活性剤は一般に1~10質量、好ましくは1~5質量配合される。本発明洗浄剤組成物に用いられる界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤の1種または組み合わせを挙げることが出来るが、好ましくは陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤である。陰イオン性界面活性剤としては、炭素数10~18のアルコールの硫酸エステル塩、炭素数8~20のアルコールのアルコキシル化物の硫酸エステル塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、パラフィンスルホン酸塩、α-オレフィンスルホン酸塩、α-スルホ脂肪酸塩、α-スルホ脂肪酸アルキルエステル塩又は脂肪酸塩が好ましい。本発明では特に、アルキル鎖の炭素数が10~14の、より好ましくは12~14の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩が好ましく、対イオンとしては、アルカリ金属塩やアミン類が好ましく、特にナトリウム及び/又はカリウム、モノエタノールアミン、ジエタノールアミンが好ましい。非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシアルキレンアルキル炭素数8~20エーテル、アルキルポリグリコシド、ポリオキシアルキレンアルキル炭素数8~20フェニルエーテル、ポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸炭素数8~22エステル、ポリオキシアルキレングリコール脂肪酸炭素数8~22エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマーが好ましい。特に、非イオン性界面活性剤としては、炭素数10~18のアルコールにエチレンオキシドやプロピレンオキシド等のアルキレンオキシドを4~20モル付加したHLB値グリフィン法で算出が10.5~15.0、好ましくは11.0~14.5であるようなポリオキシアルキレンアルキルエーテルが好ましい。2二価金属イオン捕捉剤二価金属イオン捕捉剤は0.01~50質量、好ましくは5~40質量配合される。本発明洗浄剤組成物に用いられる二価金属イオン捕捉剤としては、トリポリリン酸塩、ピロリン酸塩、オルソリン酸塩などの縮合リン酸塩、ゼオライトなどのアルミノケイ酸塩、合成層状結晶性ケイ酸塩、ニトリロ三酢酸塩、エチレンジアミン四酢酸塩、クエン酸塩、イソクエン酸塩、ポリアセタールカルボン酸塩などが挙げられる。このうち結晶性アルミノケイ酸塩合成ゼオライトが特に好ましく、A型、X型、P型ゼオライトのうち、A型が特に好ましい。合成ゼオライトは、平均一次粒径0.1~10μm、特に0.1~5μmのものが好適に使用される。3アルカリ剤アルカリ剤は0.01~80質量、好ましくは1~40質量配合される。粉末洗剤の場合、デンス灰や軽灰と総称される炭酸ナトリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、並びにJIS1号、2号、3号などの非晶質のアルカリ金属珪酸塩が挙げられる。これら無機性のアルカリ剤は洗剤乾燥時に、粒子の骨格形成において効果的であり、比較的硬く、流動性に優れた洗剤を得ることができる。これら以外のアルカリとしてはセスキ炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどが挙げられ、またトリポリリン酸塩などのリン酸塩もアルカリ剤としての作用を有する。また、液体洗剤に使用されるアルカリ剤としては、上記アルカリ剤の他に水酸化ナトリウム、並びにモノ、ジ又はトリエタノールアミンを使用することができ、活性剤の対イオンとしても使用できる。4再汚染防止剤再汚染防止剤は0.001~10質量、好ましくは1~5質量配合される。本発明洗浄剤組成物に用いられる再汚染防止剤としてはポリエチレングリコール、カルボン酸系ポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。このうちカルボン酸系ポリマーは再汚染防止能の他、金属イオンを捕捉する機能、固体粒子汚れを衣料から洗濯浴中へ分散させる作用がある。カルボン酸系ポリマーはアクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸などのホモポリマーないしコポリマーであり、コポリマーとしては上記モノマーとマレイン酸の共重合したものが好適であり、分子量が数千~10万のものが好ましい。上記カルボン酸系ポリマー以外に、ポリグリシジル酸塩などのポリマー、カルボキシメチルセルロースなどのセルロース誘導体、並びにポリアスパラギン酸などのアミノカルボン酸系のポリマーも金属イオン捕捉剤、分散剤及び再汚染防止能を有するので好ましい。5漂白剤例えば過酸化水素、過炭酸塩などの漂白剤は1~10質量配合するのが好ましい。漂白剤を使用するときは、テトラアセチルエチレンジアミンTAEDや特開平6-316700号公報記載などの漂白活性化剤アクチベーターを0.01~10質量配合することができる。6蛍光剤本発明洗浄剤組成物に用いられる蛍光剤としてはビフェニル型蛍光剤例えばチノパールCBS-Xなどやスチルベン型蛍光剤例えばDM型蛍光染料などが挙げられる。蛍光剤は0.001~2質量配合するのが好ましい。7その他の成分本発明品洗浄剤組成物には、衣料用洗剤の分野で公知のビルダー、柔軟化剤、還元剤亜硫酸塩など、抑泡剤シリコーンなど、香料、その他の添加剤を含有させることができる。本発明の洗浄剤組成物は、上記方法で得られた本発明品プロテアーゼ及び上記公知の洗浄成分を組み合わせて常法に従い製造することができる。洗剤の形態は用途に応じて選択することができ、例えば液体、粉体、顆粒、ペースト、固形などにすることができる。斯くして得られる本洗浄剤組成物は、衣料洗浄剤、漂白剤、硬質表面洗浄用洗浄剤、排水管洗浄剤、義歯洗浄剤、医療器具用の殺菌洗浄剤などとして使用することができる。実施例1アミノ酸配列のアライメントの結果図1から、バチルスエスピーKSM-KP43株由来のアルカリプロテアーゼ構造遺伝子の終止コドンまでを含む約2.0kb配列番号2に対して部位特異的変異を導入するアミノ酸残基を63位、101位、133位に特定し、任意のアミノ酸を導入するようにプライマーをデザインした。63位の変異導入にはプライマー1配列番号3とプライマー2配列番号4及びプライマー3配列番号5とプライマー4配列番号6を、101位の変異導入にはプライマー1とプライマー5配列番号7及びプライマー6配列番号8とプライマー4を、133位の変異導入にはプライマー1とプライマー7配列番号9及びプライマー8配列番号10とプライマー4を用いPCRを行った。プライマー1にはセンス鎖の5’末端側にBamHIリンカーを、プライマー4にはアンチセンス鎖の5’末端側にXbaIリンカーを付与し、プライマー2とプライマー3、プライマー5とプライマー6、プライマー7とプライマー8は、それぞれの5’末端から10~15bpの長さで互いに相補するようにデザインした。PCRのDNAポリメラーゼとして、Pyrobestを用い、PCRの条件は94°Cで2分間鋳型DNAを変性させた後、94°Cで1分間、55°Cで1分間、72°Cで1分間を1サイクルとし30サイクル反応させた。増幅したDNA断片をPCRproductpurificationkitロッシュにて精製後、それぞれ対応する増幅断片のみで、94°Cで2分間DNAを変性させた後、94°Cで1分間、55°Cで1分間、72°Cで1分間を1サイクルとし30サイクル反応させ、リコンビナントPCRを行なった。得られた増幅断片に対し、プライマー1とプライマー4によりPCRを行なった。94°Cで2分間鋳型DNAを変性させた後、94°Cで1分間、55°Cで1分間、72°Cで2分間を1サイクルとし30サイクル反応させ、変異が導入された全長遺伝子を得た。増幅断片を精製後、末端に付与されている制限酵素リンカーを、BamHI、XbaIロッシュにより切断した。増幅DNA断片を予めBamHI、XbaIで処理したプラスミドpHA64特許第349293号:プロモーター64の下流にBamHI、XbaI切断部位を有すると混合した後、LigationHigh東洋紡により、リガーゼ反応を行った。反応液からエタノール沈殿により回収したプラスミドを用い宿主菌であるバチルスエスピーKSM9865株FERMP-18566を形質転換した。9865株の形質転換体をスキムミルク含有アルカリ寒天培地スキムミルクディフコ1w/v、バクトトリプトンディフコ1、酵母エキスディフコ0.5、塩化ナトリウム1、寒天1.5、炭酸ナトリウム0.05、テトラサイクリン15ppmに生育させ、ハローの形成状況により、変異プロテアーゼ遺伝子導入の有無を判定した。形質転換体は、5mLの種母培地6.0w/vポリペプトンS、0.05酵母エキス、1.0マルトース、0.02硫酸マグネシウム7水和物、0.1リン酸2水素カリウム、0.25炭酸ナトリウム、30ppmテトラサイクリンに植菌し、30°Cで16時間振盪培養を行った。次いで30mLの主培地8ポリペプトンS、0.3酵母エキス、10マルトース、0.04硫酸マグネシウム7水和物、0.2リン酸2水素カリウム、1.5無水炭酸ナトリウム、30ppmテトラサイクリンに種母培養液を1v/v植菌し、30°Cで3日間振盪培養を行った。得られた培養液を遠心分離し、培養上清中のプロテアーゼ活性を測定した。プロテアーゼ活性はSuc-Ala―Ala―Pro-Phe-pNA以下、AAPF:シグマを基質とした活性測定法により、タンパク質量はプロテインアッセイキット和光純薬を用いて測定した。野生型酵素遺伝子を有する形質転換体を同条件で培養した場合の培養上清の値と比較することにより、プロテアーゼ活性の向上が認められた変異プロテアーゼ遺伝子を選抜した。選抜された形質転換体からHighpureplasmidisolationkitロッシュを用いプラスミドを回収し、塩基配列を決定した。プラスミドDNA300ngを鋳型として、適宜合成したプライマーとBigDyeDNAsequencingkitアプライドバイオシステムを用いて20μLの反応系でPCRを行い、DNASequencer377型アプライドバイオシステムズを用いた解析に供した。その結果、プロテアーゼ活性が向上した変異体は133位のアラニンがグルタミン、アスパラギン、スレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、リジンであった。これらの培養液の一部を希釈し、2mM塩化カルシウムを含む10mMトリス塩酸緩衝液pH7.5で平衡化したDEAE-トヨパール東ソーカラムにかけ、非吸着画分を回収することにより、ほぼ均一なプロテアーゼを得た。精製酵素のタンパク質量、AAPF分解活性を測定した結果、上記変異の導入によりそれぞれ比活性が1.2倍~2倍に向上したことを確認した表2。アミノ酸はアルファベット1文字で表し、アミノ酸を置換した部位を数値で表記している。置換前のアミノ酸を数値の前に、置換後のアミノ酸を数値の後に示した。例えばA133Qの場合、133位のアラニンをグルタミンに置換した変異体を表している。以下、表3、図2-1~2-6においても同様に表現した。次に133位の変異により多様性を与えるために以下の変異を導入した。1133位と134位の間に任意の1アミノ酸を挿入2133位を任意のアミノ酸に置換し、更に任意の1アミノ酸の挿入3133位を任意のアミノ酸に置換し、更に任意の1アミノ酸を挿入し、134位を任意のアミノ酸に置換4133位を任意のアミノ酸に置換し、更に任意の1アミノ酸を挿入し、134位及び135位を任意のアミノ酸に置換5132位を任意のアミノ酸に置換し更に、133位と134位の間に任意の1アミノ酸の挿入6132位及び133位を任意のアミノ酸に置換し、更に任意の1アミノ酸の挿入1の変異導入にはプライマー1とプライマー7及びプライマー9配列番号11とプライマー4を、2の変異導入にはプライマー1とプライマー7及びプライマー10配列番号12とプライマー4を、3の変異導入にはプライマー1とプライマー7及びプライマー11配列番号13とプライマー4を、4の変異導入にはプライマー1とプライマー7及びプライマー12配列番号14とプライマー4を、5の変異導入にはプライマー1とプライマー13配列番号15及びプライマー14配列番号16とプライマー4を、6の変異導入にはプライマー1とプライマー7及びプライマー15配列番号17とプライマー4を用い、前述の通りリコンビナントPCRにより変異導入がなされた遺伝子を得た。前記pHA64に結合後、9865株を形質転換し、培養を行なうことにより変異体の評価を行なった。その結果、以下の変異体において野生型を上回るプロテアーゼ活性の向上が認められた。1の変異導入から133位と134位の間の挿入アミノ酸残基;リジン、チロシン2の変異導入から133位挿入アミノ酸残基;プロリンイソロイシン、ロイシンセリン、ロイシングリシン、ロイシンスレオニン、セリンセリン、リジンセリン、イソロイシンセリン、アルギニンセリン、リジンアラニン、リジングリシン3の変異導入から133位挿入アミノ酸残基/134位;セリンセリン/スレオニン、セリンセリン/セリン、セリンセリン/グリシン、セリンセリン/アラニン4の変異導入から133位挿入アミノ酸残基/134位/135位;セリンセリン/セリン/アラニン、セリンセリン/セリン/アルギニン、セリンセリン/セリン/メチオニン5の変異導入から132位/133位と134位の間の挿入アミノ酸残基;セリン/アラニン、セリン/グリシン、メチオニン/アラニン、スレオニン/アラニン6の変異導入から132位/133位挿入アミノ酸残基;セリン/セリンセリン、グルタミン/セリンセリン、メチオニン/セリンセリン、セリン/イソロイシンアラニン、セリン/リジンアラニン、セリン/リジンセリン、アスパラギン/プロリンアラニン、アスパラギン酸/リジンセリン、イソロイシン/リジンセリン上述の方法にて比活性を求めた結果、これらの変異体において野生型の1.2倍~4.8倍の比活性向上を確認した表3。133位と134位との間の挿入アミノ酸をで示した。例えばA133PIの場合、133位をプロリンに置換し、更にイソロイシンを挿入した変異体を表し、Kの場合、133位と134位との間にリジンの挿入がある変異体を表している。図2-1~2-6においても同様に表現した。変異体の洗浄力を評価した結果、例えば以下の変異体において野生型を上回る洗浄性能が認められた図2-1~2-6。1133位;イソロイシン、バリン2133位と134位の間の挿入アミノ酸残基;リジン、ロイシン、セリン、メチオニン、グリシン、スレオニン、チロシン、アルギニン3133位挿入アミノ酸残基;セリンセリン、セリンアラニン、セリンアスパラギン、セリングルタミン、セリントリプトファン、セリンヒスチジン、セリングリシン、ロイシンセリン、リジンセリン、スレオニンセリン、イソロイシンセリン、メチオニンセリン、グリシンセリン、アルギニンセリン、グルタミン酸セリン、アスパラギンセリン、フェニルアラニンセリン、トリプトファンセリン、リジンアラニン、アルギニンアラニン、リジングリシン4133位挿入アミノ酸残基/134位;セリンセリン/セリン、セリンセリン/スレオニン5133位挿入アミノ酸残基/134位/135位;セリンセリン/セリン/メチオニン6132位/133位と134位の間の挿入アミノ酸残基;セリン/アラニン、セリン/アルギニン、セリン/グリシン、セリン/ロイシン、スレオニン/アラニン7132位/133位挿入アミノ酸残基;セリン/ヒスチジンアラニン、セリン/セリンアラニン、セリン/ロイシンアラニン、セリン/アルギニンアラニン、セリン/リジンアラニン、セリン/リジンセリン、アスパラギン/イソロイシンアラニン、アスパラギン/プロリンアラニン、アスパラギン酸/リジンセリンまた、2mM塩化カルシウム水溶液中で75°C、10分間熱処理した後のAAPF分解活性を測定し、未処理の酵素サンプルを100とした場合の残存活性を算出し、耐熱性を検討した。その結果、野生型の残存活性が50であるのに対し、133位挿入アミノ酸残基の組み合わせがセリンセリンの変異体では76と、約15倍の残存活性の向上が認められた。上記の本発明アルカリプロテアーゼ変異体はAAPFに対する分解活性を向上させる、洗浄力を向上させる、133位挿入アミノ酸残基の組み合わせがセリンセリンの変異体については、さらに耐熱性を向上させること以外は親アルカリプロテアーゼの特性、すなわち、酸化剤耐性を有し、高濃度の脂肪酸によるカゼイン分解活性の阻害を受けず、SDS-PAGEにより認められる分子量が43,000±2,000であり、アルカリ性域で活性を有する性質を保持していることを確認した。試験例1プロテアーゼ活性測定法合成基質法100mMAAPFDMSOに溶解;終濃度3mM、02Mホウ酸緩衝液pH105;終濃度50mM及び適宜希釈した培養上清50μLを加え、100μLに調製後、マイクロプレートリーダーiEMSReaderMF;Labsystems社製にて30°C、15分間振盪しながら414nmの吸光度を経時的に測定し、単位時間当たりの吸光度の変化OD414/minを求めた。得られた傾きに酵素の希釈率を乗じた値をプロテアーゼの力価とし、変異体の相対評価を行なった。試験例2プロテアーゼ活性測定法カゼイン法カゼインハンマーステイン氏法:メルク1w/vを含む50mMホウ酸緩衝液pH10.51mLを30°C、5分間恒温した後、0.1mLの酵素液を添加し反応を開始した。15分間反応させた後、2mLの反応停止液0.11Mトリクロロ酢酸/0.22M酢酸ナトリウム/0.33M酢酸を加えた。室温で30分間放置し、沈殿物をワットマンNo1濾紙を用いて濾過した。分解産物はLowryらの方法により定量した。即ち、0.5mLの濾液に2.5mLのアルカリ性銅溶液1ロッシェル塩:1硫酸銅5水和物:2炭酸ナトリウム/0.1N水酸化ナトリウム溶液=1:1:100を加え、30°Cで10分間恒温した後、0.25mLのフェノール試薬[市販のフェノール試薬関東化学を脱イオン水にて2倍に希釈した溶液]を添加、よく攪拌し、30°Cで30分間放置した。その後、660nmにおける吸光度を測定した。プロテアーゼ1単位1PUは、上記反応条件下において1分間に1mmolのチロシンに相当する酸可溶性タンパク質を生成するのに必要な酵素量とした。試験例3相対洗浄率変異酵素の洗浄力評価は、ターゴトメーター上島製作所製を用いて行った。市販の衣料用洗剤アタック;花王、2002年10月製造から配合されている酵素造粒物を除いたものを所定の使用濃度になるように調製した溶液に、酵素を最終濃度で40mPU/Lになるように添加した。次いで、汚染布EMPA117EMPA社製、血液/ミルク/カーボンを6×6cm画に裁断したものを添加し、特に断りのない限り20°Cで洗浄80rpmを行った。水道水によるすすぎを行った後、色彩色差計MINOLTA、CM3500dを用いて明度を測定し、洗浄前後における明度の変化から洗浄率を算出した下式。洗浄率=L2-L1/L0-L1×100L0:汚染布の原布の明度L1:洗浄前の汚染布の明度L2:洗浄後の汚染布の明度相対洗浄率は野生型酵素の洗浄率を100とした場合の変異体の洗浄率とした。"