以下の段階を含む、液体の細胞学用保存液中に保存された生物学的サンプルから標的分子を抽出するための方法A生物学的サンプルと、少なくとも一つの末端ヒドラジン基を含む捕捉剤を含む捕捉溶液とを接触させる段階B生物学的サンプルから核酸またはタンパク質を放出するのに十分な条件の下で生物学的サンプルを処理する段階およびC標的分子を単離する段階。捕捉剤が、a式Iに記載の化合物およびb式IIに記載の化合物からなる群より選択され、式中、R1C1~C12アルキルC1~C12アルケニルC3~C6シクロアルキルC3~C6シクロアルケニルC6~C10アリールおよびC6~C10ヘテロアリール、ここでR1は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように置換されていてもよくR2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、かつからなる群より選択され、かつmが0および1からなる群より選択される整数でありかつnが1および2からなる群より選択される整数であり、該捕捉剤は、水中での溶解性を高めるように改変されていてもよい、請求項1記載の方法。捕捉剤が式Iの化合物であり、式中、R1がC1~C12アルキルであり、かつmが1である、請求項2記載の方法。R1がC1~C6アルキルである、請求項3記載の方法。R1がC2~C4アルキルである、請求項3または請求項4記載の方法。捕捉剤が式IIの化合物であり、式中、R1がC1~C12アルキルであり、R2がであり、かつnが2である、請求項2記載の方法。R1がC1~C6アルキルである、請求項6記載の方法。R1がC2~C4アルキルである、請求項6または請求項7記載の方法。捕捉剤が、セミカルバジドチオセミカルバジドカルバジドチオカルバジドNアミノグアニジンおよびその塩NNジアミノグアニジンおよびその塩アセチルヒドラジドアジピン酸ジヒドラジドコハク酸ジヒドラジドギ酸ヒドラジドマレイン酸ジヒドラジドマロン酸ジヒドラジドベンゼンスルホニルヒドラジドトシルヒドラジドメチルスルホニルヒドラジドからなる群より選択される、請求項1記載の方法。捕捉溶液が約01M~約10Mの捕捉剤を含む、請求項1~9のいずれか一項記載の方法。捕捉溶液が約01M~約05Mの捕捉剤を含む、請求項1~10のいずれか一項記載の方法。捕捉溶液が約02M~約04Mの捕捉剤を含む、請求項1~11のいずれか一項記載の方法。捕捉溶液が約03Mのアジピン酸ジヒドラジドまたは約03Mのコハク酸ジヒドラジドを含む、請求項1~12のいずれか一項記載の方法。捕捉溶液が液体の細胞学用保存液に直接添加される、請求項1~13のいずれか一項記載の方法。捕捉溶液がタンパク質消化酵素をさらに含む、請求項1~14のいずれか一項記載の方法。生物学的サンプルが、該生物学的サンプルから標的分子が放出される前に捕捉溶液と接触される、請求項1~15のいずれか一項記載の方法。標的分子が、溶解溶液の存在下において生物学的サンプルを溶解させることにより生物学的サンプルから放出される、請求項1~16のいずれか一項記載の方法。捕捉溶液が溶解溶液である、請求項17記載の方法。捕捉溶液が、生物学的サンプルへの溶解溶液の添加の前、添加の後、または添加と同時に、生物学的サンプルに添加される、請求項17記載の方法。標的分子が標的核酸であり、かつC該標的核酸が、核酸プローブを、第2の核酸を有する標的核酸とハイブリダイズさせて核酸ハイブリッドを形成させる段階核酸ハイブリッドを固相に結合させる段階固相を単離する段階および標的核酸を固相から溶出させる段階を含む方法によって、単離される、請求項1~19のいずれか一項記載の方法。核酸ハイブリッドがDNARNAハイブリッドであり、かつ該DNARNAハイブリッドが、核酸ハイブリッドと、核酸ハイブリッドに結合できる抗体であって、固相に結合されているかまたは固相に結合されるように適合されている該抗体とを接触させる段階を含む方法によって、固相に結合される、請求項20記載の方法。標的分子が標的核酸であり、かつC該標的核酸が、標的核酸を陰イオン交換マトリックスに結合させる段階および標的核酸を陰イオン交換マトリックスから溶出させる段階を含む方法によって、単離される、請求項1~19のいずれか一項記載の方法。標的核酸が約20°C~約70°Cの溶出温度で陰イオン交換マトリックスから溶出される、請求項22記載の方法。標的核酸が約50°C~約60°Cの溶出温度で陰イオン交換マトリックスから溶出される、請求項22または請求項23記載の方法。以下を含む、溶解溶液緩衝液界面活性剤少なくとも一つの末端ヒドラジン基を含む捕捉剤および任意で、タンパク質消化酵素。捕捉剤が、a式Iに記載の化合物およびb式IIに記載の化合物からなる群より選択され、式中、R1がC1~C12アルキルC1~C12アルケニルC3~C6シクロアルキルC3~C6シクロアルケニルC6~C10アリールおよびC6~C10ヘテロアリールからなる群より選択され、ここでR1は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように置換されていてもよくR2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、かつからなる群より選択され、かつmが0および1からなる群より選択される整数でありかつnが1および2からなる群より選択される整数であり、該捕捉剤は、水中での溶解性を高めるように改変されていてもよい、請求項25記載の溶解溶液。捕捉剤が、セミカルバジドチオセミカルバジドカルバジドチオカルバジドNアミノグアニジンおよびその塩NNジアミノグアニジンおよびその塩アセチルヒドラジドアジピン酸ジヒドラジドコハク酸ジヒドラジドギ酸ヒドラジドマレイン酸ジヒドラジドマロン酸ジヒドラジドベンゼンスルホニルヒドラジドトシルヒドラジドメチルスルホニルヒドラジドからなる群より選択される、請求項25または請求項26記載の溶解溶液。約01M~約10Mの捕捉剤を含む、請求項25~27のいずれか一項記載の溶解溶液。約01M~約05Mのアジピン酸ジヒドラジドまたは約01M~約05Mのコハク酸ジヒドラジドを含む、請求項25~28のいずれか一項記載の溶解溶液。液体の細胞学用保存液中に保存された生物学的サンプルから標的分子を回収するためのキットであって、請求項25~29のいずれか一項記載の溶解溶液を含み、かつ任意で、タンパク質消化酵素、固相、標的核酸とハイブリダイズできる核酸プローブ、および抗体からなる群より選択される少なくとも一つのさらなる成分を含む、前記キット。詳細な説明本出願は概して、液体の細胞学用媒質中に保存された生物学的サンプルからの標的分子の回収率を高めるための捕捉化合物の使用に関する。一つの態様において、a捕捉剤を媒質に添加する段階bサンプル中の保存剤を捕捉剤が捕捉するのに十分な温度かつ時間でインキュベーションを行う段階およびc核酸またはタンパク質を回収する段階を含む、液体の細胞学的保存媒質中の生物学的サンプルから核酸またはタンパク質を回収するための方法が提供される。本明細書において用いられる場合、捕捉剤は、固定剤と反応でき、それによって固定剤を溶液から除去できる任意の化合物である。本開示の材料および方法との関連で、これらの化合物は理想的には、以下の特性の一つまたは複数を示す水中で高溶解性化学的に中性無毒性および容易に利用可能かつ安価。別の態様において、これらの化合物は上記の特性のそれぞれを示す。液体の細胞学的保存媒質は架橋性およびまたは沈殿性保存剤を含みうる。架橋性保存剤は非限定的に、アルデヒド、四酸化オスミウム、重クロム酸カリウム、クロム酸、および過マンガン酸カリウムを含む。沈殿性保存剤は非限定的に、アルコールおよび酢酸を含む。一つの態様において、液体の細胞学的保存媒質は、ホルムアルデヒドなどのカルボニルベースの保存剤を含む。ホルムアルデヒドは、メチレン橋によってアミノ基を架橋結合させることにより細胞を固定する交差反応性分子である。これは細胞学の目的には有用であるが、それによって固定サンプルからの核酸およびまたはタンパク質の効率的な単離が阻害されることもある。一つの態様において、液体の細胞学用保存媒質はアルデヒドを含む。液体の細胞学用保存媒質によく用いられる例示的なアルデヒドは、ホルムアルデヒド、グリオキサル、グルタルアルデヒド、グリセルアルデヒド、アクロレインもしくは他の脂肪族アルデヒドまたは未知の性質のアルデヒドを含むが、これらに限定されることはない。そのような液体の細胞学的保存媒質の一つが、臨床の現場で最もよく用いられている保存媒質の一つ、SUREPATHである。SUREPATH媒質は、37近くのホルムアルデヒド含量を有し、メタノール、エタノールおよびイソプロパノールも含有する。高いホルムアルデヒド含量は、これを有用な固定剤とするが、しかし固定サンプルからの標的分子の抽出ならびにその後の分子解析のためのそれらの使用に対して難題をもたらす。この態様において同様に含まれるのは、クアテルニウム15メテナミン3クロロアリロクロライド、トリスニトロトリスヒドロキシメチルニトロメタン、グライダント13ジメチロール55ジメチルヒダントインまたはDMDMヒダントイン、ジェルマール115イミダゾリジニル尿素、ジェルマールIIジアゾリジニル尿素、ブロノポール2ブロモ2ニトロプロパン13ジオール、ブロニドックス5ブロモ5ニトロ13ジオキサン、ブロモタロニルメチルジブロモグルタロニトリル、12ジブロモ24ジシアノブタン、スットシドAヒドロキシメチルグリシネート、およびパラホルムアルデヒドを含むが、これらに限定されない、ホルムアルデヒド遊離剤を含有することが公知の保存媒質である。この態様において同様に含まれるのは、起源不明のアルデヒドを含有する媒質であり、これはプルパルド4アミノ3ヒドラジノ5メルカプト124トリアゾールなどの、アルデヒド特異的な試薬の使用によって検出することができる。一つの態様において、捕捉剤はアルデヒドなどのカルボニル化合物と反応することができる。例示的なカルボニル捕捉剤は非限定的にヒドラジンを含む。本明細書において用いられる場合、ヒドラジンは、末端ヒドラジン官能基を含む任意の化合物である。本明細書において用いられる場合、ヒドラジン官能基は、下記式に記載の化学基であり、式中、波状の結合が化学構造の場合には残部への付着を示す。ヒドラジンはカルボニルと容易に反応して、ヒドラゾン結合を形成する。これらの結合はカルボニルの酸素を、他の因子と結合するアルデヒドの能力を制限する窒素官能基と置き換える。例示的な反応スキームは図1に記載されている。ヒドラジンは単一官能性または多官能性ヒドラジンでありうる。単一官能性ヒドラジンは、単一の末端ヒドラジン官能基を含むヒドラジンである。多官能性ヒドラジンは、二つ以上の末端ヒドラジン官能基を含むヒドラジンである。一つの態様において、捕捉剤は式Iに記載のヒドラジンである式中、R1C1~C12アルキルC1~C12アルケニルC3~C6シクロアルキルC3~C6シクロアルケニルC6~C10アリールおよびC6~C10ヘテロアリールならびにmが0および1からなる群より選択される整数である。一つの例示的な態様において、捕捉剤はアミノグアニジンであり、これは、mが0である式Iに記載のヒドラジンである。他の例示的な態様において、捕捉剤は式Iに記載のヒドラジンであり、式中、mが1であり、かつR1がC1~C12アルキル、C1~C6アルキル、およびC2~C4アルキルからなる群より選択される。別の態様において、捕捉剤はヒドラジドとして公知のヒドラジンのクラスから選択される。ヒドラジドは同様に、カルボニルと反応して、ヒドラゾン結合を形成させることができる。本明細書において用いられる場合、ヒドラジドは、末端ヒドラジド官能基を含む化合物であり、式中、波状の結合が中心化学構造への付着を示し、かつR2がからなる群より選択される。一つの態様において、捕捉剤は式IIに記載のヒドラジドである式中、R1C1~C12アルキルC1~C12アルケニルC3~C6シクロアルキルC3~C6シクロアルケニルC6~C10アリールおよびC6~C10ヘテロアリールここでR1は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように置換されていてもよく、R2が、それぞれの場合で同じであってもまたは異なっていてもよく、からなる群より選択され、かつmが1および2からなる群より選択される整数である。一つの例示的な態様において、捕捉剤は式IIに記載のヒドラジドであり、式中、R1がC1~C12アルキル、C1~C6アルキル、およびC2~C4アルキルからなる群より選択される。別の例示的な態様において、捕捉剤は式IIに記載の二官能性ヒドラジドであり、式中、nが2であり、ならびにR1がC1~C12アルキル、C1~C6アルキル、およびC2~C4アルキルからなる群より選択される。別の態様において、捕捉剤は、セミカルバジドNHNH2チオセミカルバジドNHNH2カルバジドNHNH2チオカルバジドNHNH2Nアミノグアニジンおよび塩酸塩を含むその塩、ならびにNNジアミノグアニジンNHNH2および二塩酸塩を含むその塩を含むが、これらに限定されない、炭酸誘導体およびチオ炭酸誘導体から選択されるヒドラジンである。他の例示的な態様において、捕捉剤は、アセチルヒドラジドNHNH2、アジピン酸ジヒドラジド4CNHNH2、コハク酸ジヒドラジド、ギ酸ヒドラジドH、マレイン酸ジヒドラジド、およびマロン酸ジヒドラジドからなる群より選択されるヒドラジンである。他の例示的な態様において、捕捉剤は、ベンゼンスルホニルヒドラジド2C6H5、トシルヒドラジド2C6H5CH3およびメチルスルホニルヒドラジド2CH3を含むが、これらに限定されない、スルホン酸誘導体から選択されるヒドラジンである。ある態様において、捕捉剤は、水中での該捕捉剤の溶解性を高めるように当技術分野において公知の方法により改変することができる。例えば、式Iまたは式II中のR1は、R1構成要素の親水性を高める構成要素で置換されてもよい。一つの態様において、本方法は生物学的サンプルを捕捉溶液と接触させる段階を含む。本明細書において用いられる場合、捕捉溶液という用語は、捕捉剤を含む水溶液を指す。例示的な態様において、生物学的サンプルは液体の細胞学用保存媒質から分離され、その後、捕捉溶液と接触されうる。そのような場合に、生物学的サンプルは単一アリコットの捕捉溶液中でインキュベートされてもよく、または捕捉溶液中で連続的に洗浄されてもよい。別の例示的な態様において、捕捉溶液は液体の細胞学用保存媒質に直接添加されうる。別の例示的な態様において、添加される捕捉溶液の量はサンプル中の固定剤の量の推定に基づくことができる。捕捉剤の量はサンプル中の固定剤の量と同じであってもよく、サンプル中の固定剤の量より少なくてもよく、またはサンプル中の固定剤を超えていてもよい。一つの態様において、捕捉剤の量はサンプル中の固定剤の量と比べてわずかに過剰である。例示的な態様において、捕捉溶液は約01M~約10M、約01M~約05M、約02M~約04M、または約03Mの捕捉剤を含む。別の態様において、約03Mのアジピン酸ジヒドラジドまたはコハク酸ジヒドラジドが用いられる。本明細書において用いられる、約という用語は、濃度との関連で用いられる場合、示した濃度に切り上げまたは切り捨てできる全ての濃度を明示的に含む。別の態様において、標的分子は、とりわけ、溶解を含む方法によって生物学的サンプルから抽出することができる。本明細書において用いられる場合、溶解および溶解させることという用語は、細胞壁細胞膜または小胞体、ゴルジ装置、リソソーム、ミトコンドリア、核、液胞および小胞を含むが、これらに限定されない、脂質膜によって規定される細胞小器官もしくは他の構造の完全性を破壊する作用を指す。例示的な溶解の方法は、超音波処理もしくは細胞溶解によるなどの、機械的溶解ならびにポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、3ジメチルアンモニオ1プロパンスルホネート、NonidetP40、デオキシコール酸塩、TritonX100、ドデシル硫酸ナトリウム、およびまたはポリソルベート界面活性剤などの界面活性剤の使用を含む、化学的溶解を含む。標的分子が溶解によって抽出される場合、生物学的サンプルは溶解溶液と接触されなければならない。本明細書において用いられる場合、溶解溶液は、細胞を溶解するのに有用な任意の溶液を指す。例示的な溶解溶液は非限定的に、ポリオキシエチレンセチルエーテル、3ジメチルアンモニオ1プロパンスルホネート、NonidetP40エタノール、デオキシコール酸塩、TritonX100、ドデシル硫酸ナトリウム、およびまたはポリソルベート界面活性剤を含む溶解溶液を含むが、これらに限定されない、低張溶解溶液および界面活性剤ベースの溶解溶液を含む。別の態様において、溶解溶液は、任意で緩衝剤を含む。例示的な緩衝剤は非限定的に、トリスアミノメタンおよびその誘導体、例えばNトリスメチル3アミノプロパンスルホン酸、3Nトリスメチルアミノ2ヒドロキシプロパンスルホン酸Nトリスメチル2アミノエタンスルホン酸Nトリスメチルグリシンビスイミノトリスメタン13ビストリスメチルアミノプロパン炭酸塩‐重炭酸塩グリシンリン酸塩41ピペラジンエタンスルホン酸NNビスグリシン3プロパンスルホン酸ならびに他のGood緩衝液を含む。溶解溶液の数多くの他の構成要素が同様に含まれてもよい。サンプルの種類、溶解の方法、関心対象の被分析物、および用いられる分析の方法にしたがって当業者は、溶解溶液の的確な種類および組成を容易に判定することができる。一つの態様において、捕捉溶液は溶解溶液として機能することもできる。あるいは、捕捉溶液と溶解溶液とを、別個の溶液として生物学的サンプルに連続的にまたは同時に添加してもよい。一つの態様において、生物学的サンプルは、溶解溶液が添加される前に、捕捉溶液とともにインキュベートされる。別の態様において、捕捉溶液は、溶解溶液が添加される前に除去される。別の態様において、溶解溶液は、捕捉溶液が添加される前に生物学的サンプルに添加される。別の態様において、生物学的サンプルは、捕捉溶液が添加される前に、生物学的サンプルから標的分子を部分的にまたは完全に放出するのに十分な条件の下で溶解溶液とともにインキュベートされうる。一つの態様において、標的分子は核酸である。任意の方法を用いて、生物学的サンプルから核酸を回収することができる。例として、標的核酸を回収する方法は非限定的に、シリカまたはガラス吸着、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー精製、スピンカラムクロマトグラフィーおよびゲルろ過を含むが、これらに限定されない、クロマトグラフィー溶媒抽出および沈殿ならびに遠心分離を含む。核酸の回収方法は非限定的に、硫酸アンモニウム沈殿、示差的可溶化、スクロース勾配遠心分離およびクロマトグラフィーを含む。限定ではなく例として、核酸は、核酸に特異的に結合するように改変された磁気ビーズを用いることによって単離することができる。別の態様において、特定の配列を含む核酸は、これを、特定の配列に相補的な核酸プローブとハイブリダイズさせることにより単離することができる。一つの態様において、核酸プローブは固相に結合されるか、または固相に結合されるように適合される。別の態様において、核酸分子と核酸プローブとのハイブリダイゼーションは、プローブと核酸分子との間でDNARNAハイブリッドを生ずる。得られたハイブリッドを次いで、DNARNAハイブリッドに特異的に結合することが公知の抗体により結合させることができ、これを次に、固相に結合させるか、または固相に結合させるように適合させることができる。どちらの場合にも、核酸とプローブとのハイブリダイゼーションは、固相と結合した核酸を生じ、これを次いで、機械的手段により溶解物から分離することができる。限定ではなく例として、そのような方法は米国特許第6228578号および米国特許出願第12695071号に記述されており、それらの内容は、参照によりその全体が組み入れられる。例示的なDNARNA結合抗体は、米国特許第4732847号および同第4865980号に開示されているものを含むが、これらに限定されることはなく、それらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。限定ではなく例として、適切な固相は以下を含むが、これらに限定されることはない:シリカ、ホウケイ酸塩、ケイ酸塩、無機ガラス、有機重合体、例えばポリクリレート、ポリウレタン、ポリスチレン、アガロース、多糖類、例えばセルロース、金属酸化物、例えば酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化チタンおよび酸化ジルコニウム、金属、例えば金もしくは白金、アガロース、セファデックス、セファロース、ポリアクリルアミド、ジビニルベンゼン重合体、スチレンジビニルベンゼン重合体、デキストランおよびその誘導体、ならびにまたはシリカゲル、ビーズ、膜および樹脂ガラスまたはシリカ表面、例えばビーズ、プレートおよびキャピラリー管磁性材料を組み入れているかもしくは磁性材料と結合しているポリスチレン、アガロース、ポリアクリルアミド、デキストランおよびまたはシリカ材料を含むがこれらに限定されない磁化可能または磁性粒子。いくつかの例示的な態様において、核酸プローブまたは抗体は、マイクロチューブ、マイクロプレートのウェル、またはキャピラリーなどの加工容器の表面に結合させることができ、これらの表面を用いて、核酸をマイクロスケールで単離することができる。ビオチン化された核酸プローブまたは抗体が提供される場合、固相は、例えば、アビジン、ストレプトアビジンおよびまたはニュートラアビジンなどの、ビオチン部分に結合できる物質でコーティングされてもよい。別の態様において、固相は、DNARNAハイブリッドに特異的な抗体でコーティングされてもよく、またはDNARNAハイブリッドでコーティングされるように適合されてもよい。開示される方法および組成物を用いて得られる核酸は、非限定的にゲル電気泳動法、逆転写酵素PCRおよびリアルタイムPCRを含むPCR関連技法、配列決定法、サブクローニング手順、サザンブロッティング法、ノザンブロッティング法、蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法を含む後続の分子分析法、ならびにハイブリッド捕獲および多重分析を含むさまざまな突然変異分析において用いることができる。一つの態様において、捕捉溶液は、標的核酸を生物学的サンプルから放出させ、標的分子を単離するのに必要な全ての成分を含む。限定ではなく例として、そのような捕捉溶液は、とりわけ、界面活性剤、緩衝液、標的核酸に特異的な核酸プローブ、および固相を含むことができ、ここで核酸と核酸プローブとのハイブリダイゼーションによって標的核酸が固相に捕獲される。限定ではなく例として、これは、固相の構成要素に結合できるリガンドを含むように核酸プローブを改変することによって達成することができる。例えば、ビオチン部分を含むようにプローブを改変することができ、例えば、アビジン、ストレプトアビジンおよびもしくはニュートラアビジンなどの、ビオチン部分に結合できる物質、またはその断片で固相をコーティングすることができる。別の例では、標的核酸と核酸プローブとのハイブリダイゼーションによってDNARNAハイブリッドを形成させることができ、これを次いで、参照により内容の全体が組み入れられる米国特許第6228578号および米国特許出願第12695071号に記述されている方法によるなどで、DNARNAハイブリッドに特異的な抗体によって固相に捕獲することができる。一つの態様において、標的分子はポリペプチドである。本明細書において用いられる場合、ポリペプチドという用語は、ペプチド結合によって連結された少なくとも二つのアミノ酸を含む任意の分子を指し、オリゴペプチドおよびタンパク質を明示的に含む。ポリペプチドの回収方法は非限定的に、硫酸アンモニウム沈殿、示差的可溶化、スクロース勾配遠心分離およびクロマトグラフィーを含む。クロマトグラフィーによるポリペプチド単離方法は、非限定的にサイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、免疫アフィニティークロマトグラフィー、および金属結合クロマトグラフィーを含む。開示される方法および組成物によって得られるポリペプチドは、非限定的に配列決定法、免疫沈降法、ウエスタンブロット法、ELISAアッセイ法、ドットブロット法および酵素アッセイ法を含む後続の分子分析法において用いることができる。記述される方法は、非限定的に細菌、真菌、酵母、原生動物、プリオンおよびウイルスを含む、全病原体を単離するために用いることもできる。本明細書において記述される方法および組成物は、架橋性または沈殿性固定剤のいずれかの中で保存された標本に対して容易かつ迅速に最適化される。本明細書において記述される方法および組成物は同様に、全ての生物学的流体に対して適合可能であり、例えば、標本の脱キャッピングおよびキャッピングならびに人間工学的な移動が皆無であることを含む、完全な自動化を可能にする、抽出および分析用の自動サンプル処理装置QIAensembleNextGenSampleProcessorを含めて、高速大量処理自動化に適合することが証明されている簡単なプロトコルを提供する。したがって、それらは、投入量の変更、無害な材料廃液、少ない固形廃棄物、および試薬の室温での貯蔵を可能にすることによって、超高速大量処理かつ環境に配慮したサンプル処理をもたらす。材料および方法A細胞およびサンプルヒトパピローマウイルス16核酸を含む生物学的サンプルを用いて本開示による材料および方法を試験した。いくつかの例では、SiHa細胞株を用い、これはヒト子宮頸がんに由来する。SiHa細胞は、組み込まれたHPV16ゲノムを含むことが公知である。他の例では、HPV16に感染しているものと判定された臨床サンプルを用いた。HPV16アッセイ法の陰性対照として、HPV陰性であるものと判定された臨床サンプルまたはJurkat細胞を用いた。他に指定のない限り、本実施例において用いられた全てのサンプルは、示した液体の細胞学用保存媒質中で少なくとも一晩固定された。B一般プロトコルHandyLabs抽出いくつかの例では、陰イオン交換材料で処理された常磁性ビーズを使った、陰イオン交換クロマトグラフィーに基づく市販のDNA抽出技術であるHandyLabs抽出技術を用いて抽出を行った。以下の一般プロトコルを、本実施例において用いた。サンプルをSurePath液体細胞学的媒質500μL中にスパイクし、5mLの試験管の中に入れた。捕捉剤の水溶液100μLおよびプロテイナーゼK錠剤を試験管に添加した。溶解溶液12mLおよびHLビーズ60μLを次いで添加し、試験管を60°Cで10分間インキュベートした。次に磁石を2分間添加してビーズをペレット化し、上清を除去した。次いでビーズを緩衝液1400μLに再懸濁し、混合物を振盪し、ビーズをペレット化し、上清を除去した。次いで、ビーズを緩衝液230μLに再懸濁し、核酸を658°Cで9分間溶出させた。ビーズを再度、ペレット化し、溶出液を96ウェルプレートに移し入れた。緩衝液312μLおよびDigeneCollectionMedium8μLを各ウェルに添加した。NexGenまたはHC2アッセイ法のいずれかを用いて、HPV16の存在を検出した。C一般プロトコルQiaAmp抽出いくつかの例では、カラム形式でのシリカゲル吸収に基づく市販のDNA抽出技術であるQiaAmpDNA抽出キットを用いて、核酸抽出を行った。SurePathサンプル250μLおよび捕捉剤の水溶液50μLを2mLの試験管に添加し、混合するために手短くボルテックスで攪拌した。緩衝液ATL80μLおよびプロテイナーゼK溶液20μLを試験管に添加し、試験管を10回パルスボルテックスで攪拌し、その後、振盪水浴中にて15分間70°Cでインキュベートした。100エタノール360μLを添加し、試験管を15回パルスボルテックスで攪拌し、混合物を5分間室温でインキュベートした。次いで溶解物を、QiaVac真空マニホールド上に置いたQiaAmpカラムに移し入れた。次いで真空の適用によりカラムを通じて溶解物を吸引した。次いでカラムを2回、最初は緩衝液AW2750μLで、その後、100エタノールで洗浄した。次いでカラムをマニホールドから取り出し、2mLの試験管の中に入れ、14000rpmで3分間遠心分離した。次いでカラムを溶出用試験管の中に入れ、3分間56°Cで乾燥する。次いで緩衝液AVE70μLを膜に添加し、5分間室温でインキュベートし、1分間14000rpmで遠心分離した。溶出液を96ウェルプレートに移し入れ、NexGenまたはHC2アッセイ法のいずれかを用いて、HPV16の存在を検出した。実施例1本実施例では、10000個のSiHa細胞をスパイクしたSUREPATH陰性臨床例を用いて、ヒドラジン化合物の使用に関する最初の実現可能性を調査する。陰性臨床例だけを含むサンプルを、各条件に対する陰性対照として用いる。各サンプルをアジピン酸で処理し、溶解し、上記のHandyLabsプロトコルによる核酸単離のために加工処理した。他に指定のない限り、各サンプルはプロテイナーゼKを含有する。表Iに記載されているように、CVは変動係数を指し、SNはシグナル対ノイズ比を指し、RLUCOは相対発光量カットオフ比を指し、およびPKはプロテイナーゼKを指す。全HPV16ゲノムを含むプラスミド1pgを、NexGenアッセイ法の陽性対照として用いた。回収率のベースラインは、液体の細胞学用保存媒質なしでJurkat細胞中にスパイクされたSiHa細胞を用いて定める。回収Aはベースラインと比較して、プロテイナーゼKなし、03Mアジピン酸ジヒドラジドを用いて得られたデータを表す。回収Bはベースラインと比較して、プロテイナーゼKあり、03Mアジピン酸ジヒドラジドを用いて得られたデータを表す。回収Cはベースラインと比較して、プロテイナーゼKあり、016Mアジピン酸ジヒドラジドを用いて得られたデータを表す。回収Dはベースラインと比較して、プロテイナーゼKなし、03Mアジピン酸ジヒドラジドを用いて得られたデータを表す。実施例2塩酸アミノグアニジンがSUREPATH媒質中の捕捉剤として、10分間のプレインキュベーション時間で用いられる場合、95~100のDNA回収率が得られる。塩酸アミノグアニジンが添加される場合、溶液は徹底的に混合されうる。SUREPATH標本は、塩酸アミノグアニジンと混合される前に室温でありうる。塩酸アミノグアニジンおよそ300μL~400μLが、本明細書において記述されるアッセイ法において用いられるSUREPATH媒質およそ500μLに添加されうる。作業容量を減らすことが有益であれば、さらに高濃度の塩酸アミノグアニジンが使用されうる。塩酸アミノグアニジンは高溶解性であるため、濃縮溶液が調製されうる。一つの態様において、1M、2M、3Mまたは4Mの塩酸アミノグアニジンを含むストック捕捉溶液が使用されうる。表2に記載されているように、CVは変動係数を指し、NCは陰性較正を指し、PKはプロテイナーゼKを指し、DCMはDIGENE収集媒質を指し、DCMIPGは、陽性較正物質1pgを含むDIGENE収集媒質を指し、SPはSUREPATH媒質を指し、NPSPは陰性プールのSUREPATH媒質を指し、およびSpSPはスパイク済のSUREPATH媒質を指す。実施例3アミノグアニジン、アジピン酸ジヒドラジドおよびコハク酸ジヒドラジドを、HandyLabsプロトコルにおいて相互に比較した。20000個のSiHa細胞をSurePath媒質またはDigene収集媒質のいずれかにスパイクし、上記のHandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。各条件に対して二つ組の実験を行った。SurePath媒質での各ヒドラジンに対する結果は、図2にて例証されている。いずれの場合でも分かるように、捕捉剤の添加は核酸の回収率を改善した。Digene収集媒質におけるサンプルと比べた場合、捕捉剤の非存在下での回収率は40~60で変化したのに対し、捕捉剤の添加は回収率を85~100にまで改善した。実施例4さまざまな濃度のコハク酸ジヒドラジドおよびアジピン酸ジヒドラジドを同様に、HandyLabsプロトコルにおいて試験した。一つの実験では、20000個のSiHa細胞をSurePath媒質中にスパイクし、016M、03Mもしくは05Mのコハク酸ジヒドラジドまたは等量の水を用い、上記のHandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。結果は図3にて実証されている。別の実験では、20000個のSiHa細胞をSurePath媒質中にスパイクし、016M、03Mもしくは05Mのアジピン酸ジヒドラジドまたは等量の水を用い、上記のHandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。結果は図4にて実証されている。実施例5細胞数を変化させることの効果についても試験した。SurePath500μLあたり20000、10000、5000、2500および0個のSiHa細胞のストックを作出し、03Mのアジピン酸ジヒドラジドまたは等量の水のいずれかを用い、HandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。結果は図5にて示されている。実施例6捕捉剤による前処理が回収率を改善するかどうかについても試験した。一部のサンプルを、プロテイナーゼKおよび溶解緩衝液の添加前に10分間03Mアジピン酸ジヒドラジドもしくは05Mアミノグアニジンのいずれかとともにインキュベートしたことを除いては、20000個のSiHa細胞をSurePath媒質またはDigene収集媒質のいずれかの中にスパイクし、上記のHandyLabsプロトコルにしたがって加工処理した。03Mアジピン酸ジヒドラジド、03Mコハク酸ジヒドラジド、または05Mアミノグアニジンとの10分間または一晩のいずれかのプレインキュベーションを用いて、これを繰り返した。結果は図6および図7にて実証されている。さらに、前処理にプロテイナーゼKを含めることには効果があるかどうかについて試験した。1サンプルを、プロテイナーゼKを含む捕捉溶液で10分間前処理したことを除いては、捕捉剤として03Mのコハク酸ジヒドラジドを用いて上記のようにサンプルを試験した。結果は図8にて示されている。実施例7QiaAmpプロトコルはHandyLabsプロトコルよりもSurePath媒質との適合性が低いことが認められた。それゆえ、陰イオン交換カラムから核酸を溶出する温度を高くすることによって回収率が改善されうるかどうか調べた。20000個のSiHa細胞をSurePath媒質500μL中にスパイクし、捕捉剤として03Mコハク酸ジヒドラジドまたは03Mアジピン酸ジヒドラジドのいずれかを用い上記のHandyLabsプロトコルまたはQiaAmpプロトコルのいずれかにしたがって加工処理した。QiaAmpプロトコルの場合、溶出は室温または56°Cのいずれかで行った。結果は図9にて示されている。