"少なくとも有核細胞,血小板,核酸を内包するマイクロベシクルおよびヌクレアーゼを含む溶液に、パルス電界を印加し、該有核細胞および該血小板を破砕し、該マイクロベシクルを残存させる工程を含むことを特徴とする、マイクロベシクルに内包された核酸の抽出方法。上記パルス電界を印加する条件として、パルス印加回数が、50~30,000回であり;印加電圧が、1k~100kVであり;印加時間が、1~600秒であり;および周波数が、0.1~1000Hzである請求項1に記載の核酸の抽出方法。上記核酸が、マイクロRNAである請求項1または2に記載の核酸の抽出方法。上記溶液が、血液に由来する請求項1~3のいずれかに記載の核酸の抽出方法。上記マイクロベシクルの直径が、30nm~1μmである請求項1~4のいずれかに記載の核酸の抽出方法。従来、血液中のマイクロベシクル内の核酸を選択的に抽出するには、血液試料の血球細胞を遠心操作により分離し、上清を分取してホモジネート処理していた。遠心操作は工程が煩雑で、上清分取の際に血球が混入する可能性があるなどの問題があった。血球細胞が混入すると、正確なマイクロベシクル由来核酸を定量することができない。本発明は、上記のような問題を排し、血液中のマイクロベシクルに内包されている核酸を簡易迅速に抽出する方法を提供することを目的とする。本発明者らは、血液由来試料に適切な条件でパルス電界を印加した場合、白血球や血小板等の大きな血球細胞は破砕するが、マイクロRNA等を内包するマイクロベシクルは破壊されず、また血液由来の酵素は失活しないことを見出した。さらに、パルス電界で破砕され、血球細胞から漏出した核酸は、血液由来試料に内在しているヌクレアーゼによって分解される一方、miRNAはマイクロベシクルに内包された状態のまま回収できることも見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の、マイクロベシクルに内包された核酸の抽出方法は、少なくとも有核細胞,血小板,核酸を内包するマイクロベシクルおよびヌクレアーゼを含む溶液に、パルス電界を印加し、該有核細胞および該血小板を破砕し、該マイクロベシクルを残存させる工程を含むことを特徴とする。本発明である核酸の抽出方法において、上記パルス電界発生装置は特に限定されないが、パルス電界を印加する条件として、パルス印加回数が、50~30,000回であり;印加電圧が、1k~100kVであり;印加時間が、1~600秒であり;および周波数が、0.1~1000Hzであることが好ましい。上記核酸は、マイクロRNAであることが好ましい。上記溶液は、血液に由来することが好ましい。上記マイクロベシクルの直径は、30nm~1μmであることが好ましい。本発明は、工程が煩雑な遠心分離操作、および血球が混入する可能性がある等問題のある上清分取の操作が不要であり、簡易迅速にマイクロベシクルに内包されている核酸を抽出して正確に定量することを可能とする核酸の抽出方法を提供することができる。次に、本発明である核酸の抽出方法について具体的に説明する。<核酸抽出方法>本発明の、マイクロベシクルに内包された核酸の抽出方法は、少なくとも有核細胞,血小板,核酸を内包するマイクロベシクルおよびヌクレアーゼを含む溶液に、パルス電界を印加し、該有核細胞および該血小板を破砕し、該マイクロベシクルを残存させる工程を含むことを特徴とする。本発明である核酸の抽出方法は、該工程の後、さらにホモジネートする工程を含むことが好ましい。ホモジネートは当該分野において公知の処理方法を用いることができ、このようなホモジネート処理を施すことによって、該マイクロベシクルに内包された核酸のみを抽出回収することができる。溶液本発明で用いる溶液は、少なくとも有核細胞,血小板,核酸を内包するマイクロベシクルおよびヌクレアーゼを含むものであり、より具体的には、例えば、血液,血漿血清などの血液に由来するものが挙げられる。有核細胞とは、赤血球や血小板のように核を持たない細胞は含まず、特に溶液が血液に由来する場合、例えば、白血球などが挙げられる。血小板は、成熟した巨核球巨大核細胞の細胞質が千切れて形成された無核細胞の一種であるが、活性化された血小板はPMP血小板マイクロパーティクルを放出することが知られている。このPMPはマイクロRNAを内包することから、エキソソームと同様の形態であると言える。よって、本発明において、PMPは下記マイクロベシクルに包含されるものと定義する。上記マイクロベシクルが内包する核酸としては、miRNA,miRNA以外のRNAmRNA等やDNAも含まれる。マイクロベシクルとは、血液中に存在する、脂質で覆われた膜小胞の総称であり、その直径は、好ましくは30nm~1μm程度であり、マイクロパーティクルやエキソソームと同義として使用することができる。また、マイクロベシクルの直径が上記範囲外であっても、パルス電界の印加条件を適切に調整することにより本発明の核酸抽出方法を適用することが可能である。なお、直径が通常6~22μmマクロファージの場合は、20~50μmである。である白血球はマイクロベシクルより大きいため、適切に調整された条件でパルス電界を印加すると、白血球等の有核細胞は破砕されるが、マイクロベシクルは破砕されずに残存する。ヌクレアーゼは、核酸を分解する酵素の総称であり、DNAを基質にするデオキシリボヌクレアーゼも、RNAを基質にするリボヌクレアーゼも含み、特に溶液が血液に由来する場合、内在性ヌクレアーゼに相当する。パルス電界本明細書において、パルス電界PEF;PulsedElectricFieldは、高電圧パルスと同義である。パルス電界を印加する諸条件は、上記溶液にパルス電界を印加した際、有核細胞および血小板の内外で電荷の分極が生じ、膜が破壊されて細胞内容物が外に漏出するのに対し、該溶液中のヌクレアーゼはパルス電界では失活せず、またマイクロベシクルは血球に比べて小さいので、パルス電界では破壊されないという本発明の作用効果を奏する範囲内で適宜調整することができる。パルス電界を印加する好ましい条件としては、パルス印加回数が、50~30,000回であり;印加電圧が、1k~100kVであり;印加時間が、1~600秒であり;および周波数が、0.1~1000Hzである。より好ましくは、パルス印加回数が、500~10,000回であり;印加電圧が、5k~50kVであり;印加時間が、10~300秒であり;および周波数が、1~100Hzである。パルス電界をこのような条件の範囲内で適宜調整しながら上記溶液に印加すると、効率的に有核細胞および血小板を破砕できる一方、マイクロベシクルを残存させ、ヌクレアーゼを失活させないようにすることができるため好適である。有核細胞および血小板は破砕されると、有核細胞由来の核酸および血小板に含まれることがある核酸が漏出し、溶液に含まれるヌクレアーゼによって速やかに分解される。パルス電界処理した溶液はそのまま、従来の遠心分離操作によって得られたマイクロベシクルを含む上清を用いる場合と同様にしてホモジネートすることができ、マイクロベシクル由来の核酸のみを抽出し回収することができる。また、高電圧パルスを印加する装置は、本発明の核酸抽出方法において、従来と同様のパルス電界発生装置例えば、特許文献1~3に記載されているものを用いることができ、特に限定されない。次に、本発明について実施例を示してさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。[実施例1]サンプル1の調製末梢血試料を静脈よりEDTA凝固防止剤含有試験管中に採取し、生理食塩水で10倍希釈した。この溶液を、図3に示す回路図に従うパルス電界発生装置の処理層TCに5mL充填し、パルス印加回数が6000回;印加電圧が10kVcm;印加時間が2分間;周波数が50Hzのパルス電界を印加した。得られた溶液をサンプル1の血液由来試料とした。該処理層TCとして、電極面積7cm2の円形ステンレス電極を間隔1cmで対向して配置しているものを用いた。マイクロベシクル由来miRNAの抽出,逆転写およびリアルタイムPCR上述のようにして得られたサンプル1について、mirVanamiRNAIsolationKitAmbion社製;商品名を用いてマイクロベシクル由来の全miRNAを抽出した。得られたmiRNAを、Megaplexprimerpoolsアプライドバイオシステムス社製;商品名を用いて逆転写した。得られたcDNAを、microRNATaqMan[R]Arrayアプライドバイオシステム社製;商品名にアプライし、リアルタイムPCRによりサイクル数thresholdcycle;Ct値を測定した。結果を図2に示す。[比較例1]従来の遠心法によるサンプル2の調製末梢血試料を静脈よりEDTA凝固防止剤含有試験管中に採取し、直ちに2000G、10分間の遠心分離にかけ、血球を分離した遠心法による血漿を調製した。この血漿を生理食塩水で10倍希釈し、サンプル2の血液由来試料とした。マイクロベシクル由来miRNAの抽出,逆転写およびリアルタイムPCR上述のようにして得られたサンプル2についても、実施例1と同様にしてCt値を測定した。結果を図2に示す。[結果および考察]図2から、実施例1および比較例1でそれぞれ検出されたmiRNAここではCt値が35サイクル未満のものをいう。のプロットはほとんど変わらず、傾きが1、R2が0.97を示した。これは、遠心法による血球分離後のマイクロベシクル由来miRNA比較例1とパルス電界を印加したことによる血球破壊とマイクロベシクル由来miRNA実施例1との数および量がほぼ一致していることを示している。したがって、パルス電界による血球破壊は、操作が簡便であるにもかかわらず、従来の遠心法による血球分離と同程度の精度でマイクロベシクル由来miRNAを検出できることを示している。"