人工多能性幹細胞の樹立効率の改善方法であって、体細胞の核初期化工程においてp38の機能を阻害することを含む、方法。p38の化学的阻害物質を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、請求項1記載の方法。前記阻害物質がSB202190、SB239063およびSB203580からなる群から選択される少なくとも一つの物質である、請求項2記載の方法。p38のドミナントネガティブ変異体またはそれをコードする核酸を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、請求項1記載の方法。p38に対するsiRNA、shRNAおよびそれらをコードするDNAからなる群より選択される核酸を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、請求項1記載の方法。p38経路阻害物質を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、請求項1記載の方法。p38の機能阻害物質を含有してなる、人工多能性幹細胞の樹立効率改善剤。前記阻害物質がp38の化学的阻害物質である、請求項7記載の剤。前記阻害物質がSB202190、SB239063およびSB203580からなる群から選択される少なくとも一つの物質である、請求項8記載の剤。前記阻害物質がp38のドミナントネガティブ変異体またはそれをコードする核酸である、請求項7記載の剤。前記阻害物質がp38に対するsiRNA、shRNAおよびそれらをコードするDNAからなる群より選択される核酸である、請求項7記載の剤。前記阻害物質がp38経路阻害物質である、請求項7記載の剤。体細胞に核初期化物質およびp38の機能阻害物質を接触させることを含む、人工多能性幹細胞の製造方法。前記阻害物質が化学的阻害物質である、請求項13記載の方法。前記阻害物質がSB202190、SB239063およびSB203580からなる群から選択される少なくとも一つの物質である、請求項14記載の剤。前記阻害物質がp38のドミナントネガティブ変異体またはそれをコードする核酸である、請求項13記載の方法。前記阻害物質がp38に対するsiRNA、shRNAおよびそれらをコードするDNAからなる群より選択される核酸である、請求項13記載の方法。前記阻害物質がp38経路阻害物質である、請求項13記載の方法。核初期化物質がOct34Klf4およびSox2、またはそれらをコードする核酸である、請求項13記載の方法。核初期化物質がOct34Klf4Sox2およびcMyc、またはそれらをコードする核酸である、請求項13記載の方法。発明の要約本発明の目的は、iPS細胞の樹立効率を改善する手段を提供することであり、それを用いた効率的なiPS細胞の製造方法を提供することである。本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、体細胞の核初期化工程においてp38の機能を阻害することにより、iPS細胞の樹立効率を顕著に増大させ得ることを明らかにした。また、その効果はヒト細胞においても顕著であることを明らかにし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の通りのものである。1人工多能性幹細胞の樹立効率の改善方法であって、体細胞の核初期化工程においてp38の機能を阻害することを含む、方法。2p38の化学的阻害物質を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、上記1記載の方法。3前記阻害物質がSB202190、SB239063およびSB203580からなる群から選択される少なくとも一つの物質である、上記2記載の方法。4p38のドミナントネガティブ変異体またはそれをコードする核酸を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、上記1記載の方法。5p38に対するsiRNA、shRNAおよびそれらをコードするDNAからなる群より選択される核酸を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、上記1記載の方法。6p38経路阻害物質を体細胞に接触させることによりp38の機能を阻害する、上記1記載の方法。7p38の機能阻害物質を含有してなる、人工多能性幹細胞の樹立効率改善剤。8前記阻害物質がp38の化学的阻害物質である、上記7記載の剤。9前記阻害物質がSB202190、SB239063およびSB203580からなる群から選択される少なくとも一つの物質である、上記8記載の剤。10前記阻害物質がp38のドミナントネガティブ変異体またはそれをコードする核酸である、上記7記載の剤。11前記阻害物質がp38に対するsiRNA、shRNAおよびそれらをコードするDNAからなる群より選択される核酸である、上記7記載の剤。12前記阻害物質がp38経路阻害物質である、上記7記載の剤。13体細胞に核初期化物質およびp38の機能阻害物質を接触させることを含む、人工多能性幹細胞の製造方法。14前記阻害物質が化学的阻害物質である、上記13記載の方法。15前記阻害物質がSB202190、SB239063およびSB203580からなる群から選択される少なくとも一つの物質である、上記14記載の方法。16前記阻害物質がp38のドミナントネガティブ変異体またはそれをコードする核酸である、上記13記載の方法。17前記阻害物質がp38に対するsiRNA、shRNAおよびそれらをコードするDNAからなる群より選択される核酸である、上記13記載の方法。18前記阻害物質がp38経路阻害物質である、上記13記載の方法。19核初期化物質がOct34Klf4およびSox2、またはそれらをコードする核酸である、上記13記載の方法。20核初期化物質がOct34Klf4Sox2、ならびにcMycもしくはLMycNanogLin28もしくはLin28BおよびGlis1からなる群から選択される少なくとも一つ、またはそれらをコードする核酸である、上記13記載の方法。21核初期化物質およびp38の機能阻害物質を含有してなる、人口多能性幹細胞の誘導剤。22前記阻害物質が化学的阻害物質である、上記21記載の誘導剤。23前記阻害物質がSB202190、SB239063およびSB203580からなる群から選択される少なくとも一つの物質である、上記22記載の誘導剤。24前記阻害物質がp38のドミナントネガティブ変異体またはそれをコードする核酸である、上記21記載の誘導剤。25前記阻害物質がp38に対するsiRNA、shRNAおよびそれらをコードするDNAからなる群より選択される核酸である、上記21記載の誘導剤。26前記阻害物質がp38経路阻害物質である、上記21記載の誘導剤。27核初期化物質がOct34Klf4およびSox2、またはそれらをコードする核酸である、上記21記載の誘導剤。28核初期化物質がOct34Klf4Sox2、ならびにcMycもしくはLMycNanogLin28もしくはLin28BおよびGlis1からなる群から選択される少なくとも一つ、またはそれらをコードする核酸である、上記21記載の誘導剤。p38の機能阻害物質はiPS細胞の樹立効率を顕著に増大させることができるので、従来きわめて樹立効率の低かったcMycを除く3因子によるiPS細胞誘導に特に有用である。cMycは再活性化による腫瘍発生が危惧されることから、3因子によるiPS樹立効率の改善を実現したことは、iPS細胞の再生医療への応用において極めて有用である。実施例1:p38阻害剤を用いた検討iPS細胞の樹立効率に対するp38阻害剤の効果を調べた。1p38阻害剤のマウスiPS細胞コロニーに及ぼす効果の比較4遺伝子導入NanogGFPIRESPurorを有するNanogレポーターマウスOkitaKetalNature448313317から得られたマウス胎仔線維芽細胞MEFに対して、レトロウイルスによる4遺伝子導入を行うことで、iPS細胞を樹立した。初期化に使用するレトロウイルスは、前日に6well培養プレートの1well当り06x106で播種したPlatE細胞にレトロウイルス発現ベクターを個々に導入して作製した。培養液はDMEM10FCSにウシ胎仔血清を10加えたものを使用し、37°C、5CO2で培養した。ベクターの導入のためにFuGene6transfectionreagent45μLをOptiMEMIReducedSerumMedium100μLに入れ、室温で5分間静置した。その後、各発現ベクターを15μg加え、さらに室温で15分静置してからPlatEの培養液に加えた。2日目にPlatEの上清を新しい培地に換え、3日目に培養上清を回収して045μmsterilefilterで濾過し、polybreneを4μgmLとなるように加えてウイルス液とした。マウス胎仔線維芽細胞MEFはNanogレポーターマウスの胎仔受精後135日から単離した。MEFはNanog遺伝子を発現しないため、EGFPを発現せず、緑色蛍光を示さない。また、ピューロマイシン耐性遺伝子も発現しないため、抗生物質であるピューロマイシンに感受性である。このMEFを01ゼラチンでコートした6well培養プレートの1well当り10x105で播種した。培養液はDMEM10FCSを使用し、37°C、5CO2で培養した。翌日、レトロウイルス液を加え、一晩感染させて遺伝子を導入した。ウイルス感染後1日目にMEFの培地を除き、PBS1mLを加えて細胞を洗浄した。PBSを除いた後、025Trypsin1mMEDTAを加えて、37°Cで5分間程度反応させた。細胞が浮き上がったらES細胞用培地を加えて懸濁し、2500個の細胞をマイトマイシンC処理したSTOフィーダー細胞を蒔いておいた100mmディッシュに蒔いた。以後、コロニーが観察できるようになるまで2日ごとにES細胞用培地の交換を行った。p38阻害剤のマウス4遺伝子導入におけるiPS細胞樹立への効果を検討するため、以下のスケジュールで培地にp38阻害剤として、SB202190、SB239063、またはSB20358010μMを添加し、培養を続けた。阻害剤は全てDMSOに溶解して使用した。1マウス由来のOct34Sox2Klf4cMyc生理食塩水2マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycDMSO3マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20219010μMDay1~44マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20219010μMDay1~85マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20219010μMDay9~166マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20219010μMDay1~167マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB23906310μMDay1~48マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB23906310μMDay1~89マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB23906310μMDay9~1610マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB23906310μMDay1~1611マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20358010μMDay1~412マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20358010μMDay1~813マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20358010μMDay9~1614マウス由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20358010μMDay1~16感染後14日目からピューロマイシンで選択を行った。コロニーは8日目ごろから徐々にみえはじめ、GFP陽性となった。感染後21日目および28日目にGFP陽性コロニーを数え、対照として生理的食塩水、DMSO群と比較した結果を図1に示す。生理的食塩水、DMSOで処理した細胞と比較して、SB239063、またはSB203580を感染1日から4日の初期に処理した細胞では、コロニー数に増大傾向が見られ、感染28日目に測定した場合、その効果は顕著であった。また、NanogGFP陽性コロニー数を測定した結果、感染1日から感染4日の初期にSB202190またはSB239063を添加した場合、生理食塩水またはDMSOで処理した細胞と比較して陽性コロニー数が増大した。以上の結果より、p38の機能を阻害することによりiPS細胞の樹立効率が上昇することが明らかとなった。2p38阻害剤のマウスiPS細胞コロニーに及ぼす効果の比較3遺伝子導入上記と同様の実験方法で、3遺伝子をレトロウイルスにより導入し、以下のスケジュールで培地にSB202190、SB239063、またはSB20358010μMを添加し、細胞密度を2x104個10cmdishとして培養を行い、樹立効率の比較検討を行った。1マウス由来のOct34Sox2Klf4生理食塩水2マウス由来のOct34Sox2Klf4DMSO3マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20219010μMDay1~44マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20219010μMDay1~85マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20219010μMDay9~166マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20219010μMDay1~167マウス由来のOct34Sox2Klf4SB23906310μMDay1~48マウス由来のOct34Sox2Klf4SB23906310μMDay1~89マウス由来のOct34Sox2Klf4SB23906310μMDay9~1610マウス由来のOct34Sox2Klf4SB23906310μMDay1~1611マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20358010μMDay1~412マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20358010μMDay1~813マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20358010μMDay9~1614マウス由来のOct34Sox2Klf4SB20358010μMDay1~16結果を図2に示す。生理食塩水またはDMSOで処理した細胞に比較して、SB239063で処理した細胞ではコロニー数およびNanogGFP陽性コロニー数が増大した。また、SB203580を感染初期に添加した場合、DMSOで処理した細胞に比較して陽性細胞数が増大した。以上の結果より、3遺伝子導入についても、p38の機能を阻害することによりiPS細胞の樹立効率が上昇することが明らかとなった。3p38阻害剤のヒトiPS細胞コロニーに及ぼす効果の比較4遺伝子導入ヒトの皮膚由来線維芽細胞HDF1616株に対して、TakahashiKらCell131861872に記載の方法に従い、レンチウイルスを用いて、マウスエコトロピックウイルスレセプターSlc7a1遺伝子を発現させた。この細胞を01ゼラチンでコートした6well培養プレートの1well当り10x105で播種した。翌日、TakahashiKらCell131861872に記載の方法に従い、ヒト由来の4遺伝子をレトロウイルスで導入し、感染4日目に、あらかじめフィーダー細胞を播いておいた100mmディッシュに20x105で播種した。p38阻害剤の作用効果を検討するため、感染と同時にSB202190を添加Day0、または感染5日目にSB202190を添加し、iPS細胞の樹立効率の比較検討を行った。感染16日目にiPS細胞コロニー数を測定した結果を図3上段に示す。4遺伝子Oct34Sox2Klf4CMyc導入において、SB202190を感染初期に加えることにより、DMSO対照群や感染5日目SB202190添加群と比較してヒトiPS細胞コロニー数が増大することがわかった。同様に、細胞密度を変えて3x104個10cmdish、4遺伝子をレトロウイルスで導入し、同時にSB202190を添加したDay0。また、感染5日目にSB202190を添加し、iPS細胞の樹立効率の比較検討を行った。感染16日目にコロニーのサイズを測定した結果を図3下段に示す。細胞密度を変えても、4因子Oct34Sox2Klf4CMycにSB202190を加えることにより、DMSO添加群と比較してiPS細胞コロニー数が増大することがわかった。また、細胞密度が低い場合、感染5日目にSB202190を添加した場合のほうが、感染同時に添加するよりiPS細胞樹立効率が高いことがわかった。以上のように、p38阻害剤にはコロニーの成長を促進し、iPS細胞における樹立効率増大作用が高いことが確認された。4各種p38阻害剤のヒトiPS細胞コロニーに及ぼす効果の比較4遺伝子導入、3遺伝子導入ヒトの皮膚由来線維芽細胞Tig109株に対して、TakahashiKらCell131861872に記載の方法に従い、レンチウイルスを用いて、マウスエコトロピックウイルスレセプターSlc7a1遺伝子を発現させた。この細胞2x105個10cmdishに対して、TakahashiKらCell131861872に記載の方法に従い、4遺伝子をレトロウイルスで導入し、以下のスケジュールで化合物を添加した。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMyc生理食塩水2ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycDMSODay5~353ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20219010μMDay5~204ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSB23906310μMDay5~205ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20219010μMDay21~356ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSB23906310μMDay21~357ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSB20219010μMDay5~358ヒト由来のOct34Sox2Klf4cMycSB23906310μMDay5~35感染24、32、および40日目にiPS細胞コロニー数を測定した結果を図4に示す。4因子Oct34Sox2Klf4CMycにSB239063を感染5日から20日に加えることにより、感染24日にヒトiPS細胞コロニー数が増大することがわかった。また、感染32日では、SB202190添加群が、iPS細胞コロニー数増大能があり、その観察前の感染21日から35日に添加した群が、顕著であることがわかった。感染40日目では、対照群ではいずれもiPS細胞コロニーが観察されなかったが、SB239063添加群で、iPS細胞コロニーが2つ認められ、さらに、SB202190添加群は、iPSコロニー数を顕著に増大させることがわかった。次に、同様の方法で3遺伝子Oct34Sox2Klf4をレトロウイルスで導入し、iPS細胞の樹立効率の比較検討を行った。1ヒト由来のOct34Sox2Klf4生理食塩水2ヒト由来のOct34Sox2Klf4DMSODay5~353ヒト由来のOct34Sox2Klf4SB20219010μMDay5~204ヒト由来のOct34Sox2Klf4SB23906310μMDay5~205ヒト由来のOct34Sox2Klf4SB20219010μMDay21~356ヒト由来のOct34Sox2Klf4SB23906310μMDay21~357ヒト由来のOct34Sox2Klf4SB20219010μMDay5~358ヒト由来のOct34Sox2Klf4SB23906310μMDay5~35結果を図5に示す。感染32日目に観察した結果、SB202190を加えることにより、生理的食塩水またはDMSO対照群に比べ、陽性コロニー数増大効果がみられた。また、感染40日目では、生理的食塩水、DMSO対照群と比較してSB202190添加群では顕著にiPS細胞コロニー数が増大することがわかった。以上のように、p38阻害剤にはコロニー数を増大させることにより、iPS細胞における樹立効率を改善する効果があることが確認された。ここで述べられた特許および特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、ここに引用されたことによって、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。本願は、米国仮特許出願第61/382707号を基礎としており、その内容は、ここで参照したことにより本明細書に組み込まれる。