患者から得た生体サンプル中のMDSC集団中の1つ以上の骨髄由来免疫抑制細胞MDSCレベルを、1つ以上のMDSC表現型マーカーに基づき決定することから成る、がんの診断およびまたは予測のための検査方法において、前記マーカーは、CD15、IL4Ra、CD14、CD11b、HLADR、CD33、Lin、FSC、SSC、および選択的に、CD45、CD18、CD80、CD83、CD86、HLAI、生死判別子から成るグループから選択され、非がん患者サンプルと比較した前記MDSC表現型レベルの増加は、がんを示すか、およびまたは前記がん治療の予後指標となる、がんの診断およびまたは予測のための検査方法。請求項1に記載の方法において、前記がんは、腎細胞癌RCC、大腸癌CRC、胃癌GC、メラノーマ、および腺癌から選択されるものである方法。請求項1または2に記載の方法において、前記MDSC表現型は、マーカーIL4RaおよびCD14に基づくMDSC1、マーカーIL4RaおよびCD15に基づくMDSC2、マーカーIL4Raに基づくMDSC1または2、マーカーLin、HLADR、およびCD33に基づき、選択的にCD18およびHLAIを併用するMDSC3、マーカーCD14、HLADR、FSChi、およびSSCimに基づくMDSC4マーカーCD11b、CD14、CD15に基づき、選択的にFSChi、SSCim、CD80、CD83、CD86およびHLADRを併用するMDSC5、およびマーカーCD15、FSClo、およびSSChiに基づくMDSC6から選択されるものである方法。請求項1~3のいずれか一に記載の方法において、前記方法は1つの多色染色ステップを含むフローサイトメトリを有するものである方法。さらに治療の予測を含む請求項1~4のいずれかに記載の方法において、前記サンプル中の治療前MDSCレベルに比べた、前記MDSC表現型レベルの増加が、全生存率の短縮、腫瘍の増殖、または無増悪生存率に関係する方法。請求項5に記載の方法において、前記MDSC表現型はMDSC2、3、4、5および6から選択されるものである方法。請求項1~6のいずれか一に記載の方法において、前記MDSC表現型はRCCあるいはCRC患者のMDSC1およびまたはMDSC2から、病期III~IVRCC患者のMDSC3から、病期IVメラノーマ患者のMDSC4から、転移性RCC患者のMDSC1~MDSC6および好ましくはMDSC5から、転移性腺癌患者のMDSC5から選択されるものである方法。請求項1~7に記載の方法において、前記生体サンプルは、末梢血単核細胞PBMC、例えば、全血、末梢血、またはその分画であるバッフィーコート、腫瘍組織、および骨髄を含むサンプルから選択されるものである方法。がん治療中の患者から得た生体サンプル中で請求項1~8のいずれか一に記載の方法に従って、1つ以上の骨髄由来免疫抑制細胞MDSC表現型レベルを決定することを有し、患者のがん治療の効果を検出する方法において、非治療患者サンプルに比べた前記MDSC表現型レベルの減少が、前記患者の前記がんの有効な治療法を暗示する方法。請求項9記載の方法において、前記患者はサイトカイン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロホスファミド、およびチロシンキナーゼ阻害薬TKIから選ばれる抗がん剤で治療または前治療されるものである方法。さらに患者へのがん治療効果の予測を含む請求項10に記載の方法において、前記患者はシクロホスファミドによる治療または前治療を受け、また、非治療または前治療済み患者のサンプルと比べたMDSC5表現型レベルの減少が、前記患者の前記がん治療法は有効であることを暗示する方法。さらに、前記がん治療の効果をモニタリングすること、1回以上前記測定ステップを繰り返すことを含む請求項9~11のいずれか一に記載の方法。請求項9~12のいずれか一に記載の方法において、前記がん治療は、好ましくは抗がんワクチンの使用を含み、選択的にGMCSFを併用する、化学療法およびまたは免疫療法から選択されるものである方法。請求項13に記載の方法において、前記抗がんワクチンは、配列ID番号1~10、配列ID番号11~19と1、5、8、および9、配列ID番号20~29、さらに配列ID番号30~37から選択される配列を有する免疫原性ペプチド混合物からなる抗がんワクチンから選ばれるものである方法。選択的に前記方法を実施するための説明書が添付され、CD15、IL4Ra、CD14、CD11b、HLADR、CD33、Lin、およびCD45に、さらに選択的にCD18、CD80、CD83、CD86、HLADR、およびHLAIに特異的な1つ以上の抗体を含み、1つまたは別々の容器で請求項1~14のいずれか一に記載の方法を実施する材料を有する診断キット。請求項15に記載の診断キットにおいて、前記抗体はQ605、V450、AF700、APCH7、Cy7およびFITCから選択されるサイトメトリマカーで標識されるものである診断キット。CD45Q605、CD15V450、CD124PE、CD11bAF700、CD14APCH7、CD33PECy7、CD3FITC、CD19FITC、CD56FITCおよびCD14FITCから選択される1つ以上の抗体を含む、請求項15または16に記載の診断キット。がん患者の免疫応答を誘発する方法であって、a前記がん患者への抗がんワクチンの投与、bがん治療中の前記患者から得た生体サンプルで請求項1~8のいずれか一に記載の方法を実施し、治療前の患者サンプルに比べた前記MDSC表現型レベルの減少が、がん患者の免疫応答の誘発を暗示する方法の実施、c選択的にステップbで得た結果に基づきステップaを繰り返すことを含む方法。がん治療中の前記患者の生体サンプルから請求項1~8のいずれか一に記載の方法により決定した、1つ以上の前記MDSC表現型レベルを前記治療前の患者サンプルに比べ減少させる、前記がんに最適な抗がん薬を投与することから成る、必要とするがん患者の治療を改善する方法。それを必要とするがん患者のがんを治療する改善された方法であって、a前記がん患者への抗がんワクチンの投与、bがん治療中の前記患者から得た生体サンプルで請求項1~8のいずれか一に記載の方法を実施し、治療前の患者サンプルに比べた前記MDSC表現型レベルの減少が、前記がん患者の前記がんの治療を暗示する方法の実施、c選択的にステップbで得た結果に基づきステップaを繰り返すことを含む方法。さらに前記がん患者の免疫応答およびまたは免疫治療のモニタリングを含み、ステップbおよび選択的にステップcを1回以上繰り返すことから成る、請求項18~20のいずれか一に記載の方法。請求項18~21のいずれか一に記載の方法において、前記患者はさらに抗がん剤、サイトカイン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロホスファミド、チロシンキナーゼ阻害薬TKIを用いた化学療法から選ばれる抗がん剤により治療または前治療されるものである方法。請求項18~22のいずれか一に記載の方法において、前記がんは、腎細胞癌RCC、大腸癌CRC、胃癌GC、メラノーマ、および腺癌から選択されるものである方法。腎細胞癌RCCおよび大腸癌CRCの診断と管理に関する上述の最新の進展にもかかわらず、診断の改善、特に鑑別診断、予後、作用のモニタリング、および腎細胞癌および/または大腸癌のベストな治療コースの理解を達成し、生存率をさらに改善し、必要としている人々の治療にうまく調整するために使用できるバイオマーカーが今もなお必要とされている。さらに、マーカーは、腎細胞癌または大腸癌の前記治療法の結果の予後も考慮に入れる必要がある。そのため、本発明の目的は、それぞれの生物学的マーカー、さらに診断、予後、および予測方法を提供することにある。本発明の第1の態様において、前記目的は、患者から得た末梢血単核細胞PBMCを含むサンプル中のMDSC集団内の1つ以上の骨髄由来免疫抑制細胞MDSCレベルを、1つ以上のMDSC表現型マーカーに基づき決定することを含む、がんの診断方法およびまたは予後方法を提供することにより解決され、ここで、前記マーカーは、CD15IL4RaCD14CD11bHLADRCD33LinFSCSSCおよび選択的に、CD45CD18CD80CD83CD86HLAI生死判別子からなるグループから選択され、ここで、非がん患者サンプルと比較した前記MDSC表現型レベルの増加は、がんを示すか、およびまたは前記がん治療予後指標となる。上述したようなマーカーすべてが最先端の技術として知られている。生死判別子については、生細胞は完全な細胞膜を有しており、障害の起きた膜を有する細胞にのみ漏れるヨウ化プロピジウムPIのような色素を透過しない。チアゾールオレンジTOは透過性色素であり、生死を問わず様々な割合ですべての細胞に入り込む。グラム陰性菌と共に、EDTAによるリポ多糖類層を枯渇させると、TOの取り込みを大きく促進させる。そのため、これらの2つの色素の組み合わせは、生死細胞を識別する迅速で信頼性のある方法を提供している。バクテリア計数が重要ならば、フローサイトメトリビーズ標準法であるBDLiquidCountingBeadsを使って、サンプル中の生死および総バクテリア数を正確に定量できる。他の生死判別子は本明細書に記述されているか最新技術として知られており、例えば、Perfettoらによる文献PerfettoSPChattopadhyayPKLamoreauxLNguyenRAmbrozakDKoupRARoedererMAminereactivedyesaneffectivetooltodiscriminateliveanddeadcellsinpolychromaticflowcytometryJImmunolMethods2006Jun30313199208Epub2006May19に記載されている。Peranzoniらの論文MyeloidderivedsuppressorcellheterogeneityandsubsetdefinitionCurrentOpinioninImmunologyVol22No2epubFeb2010pages238244では、CD15CD11BCD14集団が腎細胞癌患者で観察されると言及している。健常ドナーではこれらの集団は観察されず、異なる集団CD14CD11bHLADrlonegが言及されている。さらに、異なる集団CD11bCD33CD15に対するワクチンプログラムのモニタリングが示されている。病期IからIVへの増悪傾向を示す患者では、異なる集団LinHLADRCD33CD11bが有意に増加することが示されている。SKusmartsevらの論文SKusmartsevetalExpansionofCD1lbCD33CD15immunosuppressivemyeloidcellpopulationinpatientswithbladdercarcinomaProceedingsoftheAmericanAssociationforCancerResearchAnnualMeetingVol51Apr2010pages12911292で、健常ドナーに比べがん患者では異なる集団CD11bCD15hiCD33loの上昇があることを明らかにした。それに加え、免疫抑制へはinvitroのみで寄与することが示されている。WO2010055340A1では、CD11CD15集団が健常ドナーに比べ、がん患者で増加していると報告されている。Koらの論文KoetalSunitinibmediatesreversalofmyeloidderivedsuppressorcellaccumulationinrenalcellcarcinomapatientsClinicalCancerResearchVol15No6Mar2009page21482157では、2つのMDSC集団CD14CD15およびCD33HLADRが健常対照ドナーに比べ増加していることが示された。これらの公表論文すべてが、全般的にMDSC集団の診断価値を暗示しているだけであり、予後または予測価値は暗示していない。LiuChienYingらの論文LiuChienYingetalPopulationalterationsoflarginaseandinduciblenitricoxidesynthaseexpressedCD11bCD14CD15CD33myeloidderivedsuppressorcellsandCD8TlymphocytesinpatientswithadvancedstagenonsmallcelllungcancerJournalofCancerResearchandClinicalOncologyVol136NolJan2010pages3545では、NSCLC患者のCD11bCD14MDSCレベルは健常対照被験者に比べ増加していたことを公表している。NSCLC患者のCD11bCD14MDSCレベルは、以前の化学療法が患者に有益であった場合は、低かったPRSD対PD:図5A。しかし、この分析は臨床的進行後に行われたので、予後的価値は推測することができない。さらに、この細胞集団でのCD15とCD33の発現はこの分析では使用されなかった。MDiazMonteroらの論文MDiazMonteroetalIncreasedcirculatingmyeloidderivedsuppressorcellscorrelatewithclinicalcancerstagemetastatictumorburdenanddoxorubicincyclophosphamidechemotherapyCancerImmunologyImmunotherapyVol58No1Jan2009pages4959では、新たに診断された各種がん患者のMDSCレベルが健常ドナーに比べ増加していたことを示している。高いMDSCレベルは、高い腫瘍病期と相関していた図2BC。病期IV患者内で、より腫瘍負荷の高い患者は高いMDSCレベルを示した図3。図5はMDSCレベルが異なるタイプの化学療法に影響されることを示している。しかし、治療への奏功の予測価値はそのデータから推測することはできない。SMandruzzatoらの論文SMandruzzatoetalIL4RalphaMyeloidDerivedSuppressorCellExpansioninCancerPatientsJournalofImmunologyVol182No10May2009pages65626568では、CD14、CD15、IL4RaCD14の集団が、健常ドナーに比べ患者のPBMC中で増加していることを示している。腫瘍との関連性は、大腸癌およびメラノーマ組織中のCD14細胞について示されている図5CD。これらのデータは、全般的にMDSC集団の診断価値を暗示しているだけであり、予後または予測価値は暗示していない。最後に、SKusmartsevらの論文SKusmartsevetalReversalofmyeloidcellmediatedimmunosuppressioninpatientswithmetastaticrenalcellcarcinomaClinicalCancerResearchVol14No24Dec2008pages82708278では、腎細胞癌患者PBMC中のLinHLADR細胞集団が健常ドナーより増加することを示している図1B。さらにその論文では、1つのLinHLADRサンプルでのCD33の発現を示している。これらのデータも、全般的にMDSC集団の診断価値を暗示しているだけであり、予後または予測価値は暗示していない。全般的に、本発明は特定のがんまたはがん病期に限定されない。それにもかかわらず、本発明に従う方法は好ましく、ここで前記がんは、免疫治療法によって治療されうるがんであり、好ましい選択肢は、腎臓細胞癌RCC、大腸癌CRC、胃癌GC、メラノーマ、および腺癌である。本発明の内容で分析されるサンプルは、被験者がん患者または非がん患者または健常個人などから得た時点でMDSCを含んだ生体サンプルとすることも可能である。好ましくは、前記サンプルは、全血、凍結全血、末梢血またはその分画、好ましくは末梢血単核細胞PBMCを含むバフィーコートのような血液サンプルである。RNAもこれらのいずれのサンプルから得ることも可能である。さらに、骨髄細胞は腫瘍組織または骨髄から単離することも可能である。本発明は、治療前のMDSCレベルが、IMA901202例えば、2007年6月2日から5日まで米国シカゴ市で開催された米国臨床腫瘍学会の年会で発表されたまたは本明細書で記載している他のIMAワクチンのような、抗がんワクチンで治療した免疫療法患者などを例とする、がん治療患者における免疫応答およびまたは臨床的奏功に関連するバイオマーカーであるという驚くべき発見に基づいている。さらに本発明は、がん患者、特に腎細胞癌では、治療前MDSCレベルが、健常ドナーおよび異なるサブグループの腎細胞癌患者全患者、CyCy、サイトカイン予備療法、TKI、ソラフェニブ、スニチニブと異なることを開示している。本発明はしたがって、がん、特に腎細胞癌および大腸癌に対する診断、予後、および予測マーカー、さらに前記マ-カーを測定する多色パネルに関する。骨髄細胞は骨髄幹細胞に由来し、赤血球、血小板、好中球、単球およびマクロファージ、好酸球、好塩基球、およびマスト細胞を含む。本発明の状況において、表1に示すように、PBMC分析後6種類のヒトMDSC表現型MDSC16が同定され、確認された。表1:PBMC中に発見され、主な文献で報告されたヒトMDSC表現型本発明に照らして、診断におけるMDSC表現型の迅速で有効な同定および特徴付けを提供するために、MDSC表現型マーカーパネルまたはセットが確立された。これについて、異なる表現型について最も情報を与えるマーカーが下表2に示すように選択された。表2:優先順位順のヒトMDSCマーカーの選択括弧内のマーカーは任意選択そのため、好ましくは本発明に従う方法であり、ここで前記MDSC表現型は以下から選ばれる。aMDSC1、マーカーIL4RaおよびCD14に基づき同定可能bMDSC2、マカーIL4RaとCD15に基づき同定可能cマーカーIL4Raに基づき同定可能、およびまたはマーカーIL4Raに基づきその他のMDSC2~6または1と3~6を識別可能であるMDSC1または2のグループdMDSC3、マーカーLin、HLADR、およびCD33に基づき、選択的にCD18およびHLAIも一緒に、同定可能eMDSC4、マーカーCD14、HLADR、FSChiおよびSSCimに基づき同定可能fMDSC5、マーカーCD11b、CD14およびCD15に基づき、選択的にFSChi、SSCim、CD80、CD83、CD86およびHLADRと一緒に同定可能gCD15、FSCloおよびSSChiに基づくMDSC6本発明に照らして、同定とは、MDSC表現型の同定または6つのMDSC表現型間の区別を意味する。当業者は、本明細書で提示したようなマ-カーに基づき、本明細書で述べるような6つのMDSC表現型のたった1つ、または2つ以上6つ未満が選択的に同定されると思われる場合に、有効なマ-カーパネルを作成できる。好ましい例は、MDSC5表現型であり、それを個別に同定することは、転帰に関する予後診断表3参照に、およびまたは以下に述べるようにシクロホスファミド投与前患者に有用である。本明細書に記載したような細胞マーカーは、最新技術の方法に従って同定可能である。好ましい例は、エピゲノミクスすなわち、本明細書で記載したようなマーカー遺伝子、好ましくは、そのイントロン、エキソン、イントロンエキソン境界配列、プロモータ、および5または3位UTRのメチル化解析、トランスクリプトミクス、またはプロテオミクスである。さらに好ましくは、免疫染色、すなわちサンプル中の特異的マ-カーを検出する抗体に基づく方法である。免疫染色法の例は、フローサイトメトリ、ウェスタンブロッテイング、酵素免疫測定法ELISA、および免疫電子電子顕微鏡であり、好ましくはフローサイトメトリである。さらに好ましくは、本発明に従う方法であり、ここで前記方法は1段階多色染色からなるフローサイトメトリを有する。多色とは、下述のように異なる色素特に蛍光色素を使用することである。本発明の別の重要な態様では、本発明に従う方法はさらに予後も有し、ここで、サンプル中の治療前MDSCレベルに比べた前記MDSC表現型レベルの増加は、全生存率の短縮、腫瘍増殖または無増悪生存率に、好ましくは全生存率に関連する。表3は、本発明の基本となる試験群における、治療前MDSCレベルと全生存率との相関を示す。表3:治療前MDSCレベルと全生存率との相関試験群サブグループMDSCレベルが評価可能な治験実施計画書に適合した対象集団について、リンパ球ので表した治療前MDSCレベルと全生存率解析のハザード比の推定値Cox比例ハザードモデル、推定ハザード比およびp値尤度比検定を示す。太字は傾向p1:高い値を有する患者はイベント発症までの時間が短い。Cyシクロホスファミドによる前治療さらに好ましくは、本発明に従う好ましくは予後的方法であり、ここで前記MDSC表現型はMDSC2、3、4、5、および6から選択される。MDSC1レベルには患者と健常ドナー間には有意な差がなかったが、MDSC2、3、4、5、および6レベルは図2からわかるように健常ドナーに比べ患者ではかなり有意に増加することが分かり、ここでIMA901202患者点で示すと年齢がマッチした健常ドナーの比較が、MDSC評価可能なで年齢70歳未満のITT集団の個別患者N52、および健常ドナーN22の治療前MDSCレベルに基づいて示されている。棒線は中央値を示し、p値はMannWhitney両側検定によって計算された。本明細書で引用した文献に基づき、がんおよびその診断と治療に関する本発明の広範囲な応用を示し、ある種のがん患者グループ、特に腎細胞癌RCC、大腸癌CRC、胃癌GC、メラノーマ、および腺癌において、本明細書で記載のいくつかのMDSC表現型が同定された。そのため、好ましくは本発明に従う方法であり、ここで前記MDSC表現型はRCCあるいはCRC患者のMDSC1およびまたはMDSC2から、病期III~IVRCC患者のMDSC3から、病期IVメラノーマ患者のMDSC4から、転移性RCC患者のMDSC5から、および転移性腺癌患者のMDSC5から選択される。本発明の別の重要な態様において、本発明に従う方法は、本発明に従う方法によって、がん治療を受けている患者から得た生体サンプルにおける、1つ以上の骨髄由来免疫抑制細胞MDSC表現型のレベルを測定することを含み、ここで、前記MDSC表現型レベルの減少が、前記患者の前記がんの有効な治療法であることを示している。前記減少は対照群と比較して検出され、対照群は実際の診断シナリオに従って選択される。一例は非がん患者を考慮した対照であり、しかしながら、患者群内または群間で、他のがんおよびまたは異なる遺伝的背景とを比較することも可能である。本発明のこの態様は、患者で発見された1つ以上の骨髄由来免疫抑制細胞MDSC表現型レベルに対する、適切ながん治療法の効果に基づいている。一般的に、前記MDSC表現型レベルの減少が、前記患者の前記がんの有効な治療法であることを示している。最も好ましくは、数種のMDSC表現型レベルの減少1つ以上の骨髄由来免疫抑制細胞MDSC表現型の量およびまたは割合が有効ながん治療法であることを示す。治療には予防的治療と急性治療があり、治療したがん疾患の寛解により評価できる。がん治療法は、各がんに適したいずれかの治療法から選択でき、例えば、抗がん剤による化学療法から、およびまたはサイトカイン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロホスファミド、およびチロシンキナーゼ阻害薬およびまたは免疫療法から選択するか、好ましくは抗がんワクチンの使用、例えば本明細書で記載のように選択的なGMCSFの併用も有する。本発明の別の態様において、本発明に従う方法はさらに、1回以上前記測定ステップを繰り返すことからなる、前記がん治療法の前記がん患者への作用をモニタリングすることを含む。通常、モニタリングは治療中、毎週、隔週、またはさらに毎月など定期的間隔で実施される。本発明の別の重要な態様は、本発明に従う方法に関し、ここで、前記方法を実施時の前記患者は、サイトカイン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロホスファミド、およびチロシンキナーゼ阻害薬TKIから選択した抗がん剤で前治療された。この例では、その好ましい実施形態において、本発明に従う方法はさらに患者へのがん治療効果の予後を含み、ここで、前記患者はシクロホスファミドによる前治療を受け、またここで、MDSC5表現型レベルが非治療または前治療済み患者のサンプルに比べて減少していることが、前記患者の前記がん治療法は有効であることを示している。本態様で、前記がん治療は、上述の化学療法から選択でき、好ましくは免疫療法であり、好ましくは抗がんワクチンの使用、選択的にGMCSFの併用も有する。本発明に照らして、がん治療法は好ましくは抗がんワクチンの使用から成る免疫療法である。免疫療法およびそれぞれのワクチンは最新技術として説明され、がん患者の免疫療法は、腫瘍細胞に対抗し、免疫系の細胞、特にいわゆる細胞傷害性T細胞CTL、キラー細胞、CD8陽性T細胞としても知られるを特異的に活性化することを目的としているが、正常組織は標的としない。腫瘍細胞は腫瘍関連タンパク質が発現しているという点で、正常細胞とは異なる。細胞表面のHLA分子は外側に向かって細胞内容物を提示するため、細胞傷害性T細胞は正常細胞と腫瘍細胞を区別することができる。この事実は、細胞内の全てのタンパク質を短いペプチドに分解したことで理解され、この短いペプチドは、その後HLA分子に接着し、細胞表面に提示されるRammenseeetal1993。腫瘍細胞に提示されるが、正常な体細胞には提示されないか、提示されたとしてもはるかに少ないペプチドは、腫瘍関連ペプチドTUMAPと呼ばれる。腫瘍特異的Tリンパ球、つまりそのエピトープによって認識された抗原は、酵素、受容体、転写因子など、あらゆるタンパク質クラスに由来する分子である可能性がある。しかし、1種類のCTLをプライミングしても、通常は全ての腫瘍細胞を除去するには不十分である。腫瘍は非常に変異原性が高いため、タンパク質パターンを変化させ、CTLによる認識を逃れることで、CTLの攻撃に急速に反応することができる。腫瘍の回避メカニズムに抵抗するため、様々な特異的ペプチドがワクチンに使用されている。このようにして、いくつかのCTLクローンを同時に用い、腫瘍に対して広範囲に同時攻撃を開始することができる。これにより、腫瘍が免疫応答を逃れる可能性を低下させる。この仮説は、最近、末期メラノーマ患者を治療した臨床試験で確認された。わずかに例外はあるものの、少なくとも3回明確なT細胞応答が示された患者は、客観的な臨床的奏功または病態安定Banchereauetal2001を示し、生存年数が長くなるがJBanchereauとの私信、T細胞応答が3回未満の患者は、大部分が進行性疾患と診断された。本発明法に照らして使用される好ましい薬剤は、腫瘍ワクチンである。他の好ましい薬剤は、DNAまたはRNA系ワクチンであり、例えばWeideらが述べたようなものであるWeideBGarbeCRammenseeHGPascoloSPlasmidDNAandmessengerRNAbasedanticancervaccinationImmunolLett2008Jan151153342Epub2007Oct26。前記薬剤は患者、患部の器官、または全身に直接id、im、sc、ipおよびiv投与するか、または、その後患者に投与される患者またはヒト細胞株に由来の細胞にexvivoで適用するか、あるいはinvivoで使用して、その後患者に再投与される患者由来の免疫細胞の亜集団を選択する。ペプチドは実質的に純粋であるか、免疫刺激アジュバント以下参照と併用されるか、または免疫刺激的サイトカインと併用される、あるいはリポソームなど適当な送達システムとして投与される。ペプチドはまた、キーホールリンペットヘモシアニンHLHまたはマンナンなどの適切なキャリアに接合させることもできるWO9518145およびLongeneckeretal参照。ペプチドはまた標識化され、あるいは融合タンパク質であるか、ハイブリッド分子である。その配列が本発明で与えられるペプチドは、CD4またはCD8T細胞を刺激することが期待される。しかしながら、CD4Tヘルパー細胞により提供される助けがあると、CD8CTLの刺激はより効率的になる。したがって、CD8CTLを刺激するMHCクラスIエピトープに対し、融合パートナーまたはハイブリッド分子のセクションは、CD4陽性T細胞を刺激するエピトープを適切に提供する。そのため、ハイブリッド分子の融合パートナーまたはセクションは、CD4T細胞を刺激するエピトープを適切に提供する。CD4刺激エピトープは、該分野でよく知られており、破傷風トキソイドで確認されたものを含む。さらに好ましい実施形態では、ペプチドは融合タンパク質であり、特にHLADR抗原関連不変異体鎖IiのN末端アミノ酸からなる。1つの実施形態では、本発明のペプチドは、短縮型ヒトタンパク質またはタンパク質フラグメントの融合タンパク質であり、ヒトの一部に1つ以上の本発明アのミノ酸配列を含むならば、別のポリペプチドの一部である。ワクチンを使用するため、1個または複数のアジュバントを含む。好ましいアジュバンドはイミキモド、レシキモド、GMCSF、シクロホスファミド、スニチニブ、ベバシズマブ、インターフェロンα、CpGオリゴヌクレオチドと誘導体、polyおよび誘導体、RNA、シルデナフィル、およびPLGまたはビロソームの粒子製剤である。述べたように、この薬剤は、皮下、皮内、筋肉内、腹腔内などの非経口投与、または経口投与に用いられる。このため、ペプチドおよび任意選択の他の分子は、薬剤的に認容可能な、好ましくは水性担体に溶解または懸濁される。更に、前記組成物は緩衝剤、結合剤、爆破剤、希釈剤、香料、潤滑剤などの賦形剤を含むこともできる。前記ペプチドは、サイトカインなどの免疫刺激物質と併用投与することもできる。そのような組成物に使用できる賦形剤の広範なリストは、例えばAKibbeの文献AKibbeHandbookofPharmaceuticalExcipients3rdEd2000AmericanPharmaceuticalAssociationandpharmaceuticalpressなどから引用することができる。前記組成物は、例えば腎細胞癌や大腸癌のような、がん疾患の予防、阻止およびまたは治療に利用することができる。本発明に照らして使用されるワクチンの典型的なペプチド組み合わせを、下表4Aから4Dにリストし、本明細書ではそれぞれIMA901、IMA910、IMA941、IMA950と指定する。表4AIMA901表4BIMA910表4CIMA941表4DIMA950そのため、本発明に従う方法の好ましい別の態様において、前記抗がんワクチンは、配列ID番号1~10、配列ID番号11~19と1、5、8、および9、配列ID番号20~29、さらに配列ID番号30~37から選択される配列を有する免疫原性ペプチド混合物から成る抗がんワクチンから選ばれる。上述したように、前記ワクチンは好ましくはGMCSFのようなワクチンを含み、選択的に追加バッファーおよびコントロールペプチド例、ウィルス性ペプチドを含む。本発明のさらに別の好ましい態様は、1つまたは別々の容器内で、本明細書で記載の本発明に従う方法を実施するための材料から成り、CD15、IL4Ra、CD14、CD11b、HLADR、CD33、Lin、およびCD45に特異的な、さらに選択的にCD18、CD80、CD83、CD86、HLADR、HLAIに特異的な1つ以上の抗体から成り、選択的に前記方法を実施するための指示も添付された、診断キットに関する。本発明はキットも含み、a上述の免疫原性TAAペプチドおよびまたは抗体の組成物溶液または凍結乾燥物を含む容器と、b選択的に、凍結乾燥調製物の希釈剤あるいは再溶解溶液を含む第2容器と、d選択的に、i溶液の使用、またはii凍結乾燥調製物の再溶解およびまたは使用の説明とを有するキットを含む。前記キットはさらに、i緩衝液、ii希釈剤、iiiフィルタ、iv針もしくはv注射器を1つまたは複数を含んでもよい。前記容器は好ましくはボトル、バイアル、シリンジ、または試験管、さらに多目的容器であってもよい。薬剤組成物は、好ましくは凍結乾燥される。容器はガラスもしくはプラスチックのような様々な材料から形成される。好ましくは、前記キットおよび/または容器は、再溶解および/または使用の方法を示す容器に関する説明書、あるいはその容器に関連する説明書を含む。例えば、凍結乾燥調製物が、診断およびサイトメトリのような上記方法に最適な、ある種の抗体またはペプチド濃度に再構成されていることを、ラベルで示してもよい。好ましくは、本発明に従う診断キットであり、ここで、抗体はQ605、V450、AF700、APCH7、PECy7、FITCおよびAquadyeから選択した蛍光色素で標識される。さらに好ましくは、CD15、IL4Ra、CD14、CD11b、HLADR、CD33、Lin、および選択的に、CD45、CD18、CD80、CD83、CD86、HLAIおよび生死判別子の各マーカーに特異的な1つ以上の抗体から成るキットである。もっとも好ましくは、CD15V450、CD124PE、CD11bAF700、CD14APCH7、CD33PECy7、CD3FITC、CD19FITC、CD56FITC、CD14FITC、および選択的にLiveDeadAquadyeおよびCD45Q605から選択した1つ以上の抗体から成るキットである。本発明のさらに別の好ましい態様は、a前記がん患者への抗がんワクチンの投与、bがん治療中の前記患者から得た生体サンプルでの本発明に従う実施、ここで、治療前の患者サンプルに比べた前記MDSC表現型レベルの減少は、がん患者の免疫応答の誘発を示す、c選択的にステップbで得た結果に基づくステップaの繰り返しから成る、がん患者の免疫応答を誘発する方法に関する。発明者の知識によれば、腎細胞癌のようながんにおいて、広範囲な骨髄由来免疫抑制細胞MDSC表現型が初めて系統的に分析可能となる。6つの異なるMDSC集団があらかじめ定義された。全集団が相関しており、56MDSC集団はがん患者において健常ドナーに比べかなり有意に増加していた。興味深いことに、低レベルのMDSCはシクロホスファミドの治療後、複数の免疫応答に関連していた。さらに、MDSCレベルと全生存率に有意性の高い逆の相関が認められた。したがって、MDSCは腎細胞癌および大腸癌の診断、予後、および予測マーカーである。本発明のさらに別の好ましい態様は、がん治療中の前記患者の生体サンプルから本発明に従う方法により決定した、1つ以上の前記MDSC表現型レベルを前記治療前の患者サンプルに比べ減少させる、前記がん患者に最適な抗がん薬を投与することから成る、必要とするがん患者を治療する改善された方法に関する。前記治療は免疫療法または第一選択療法、または必要に応じてアジュバント療法を行う前の前治療とすることが可能である。MDSCの数およびまたは集団を変更する最適な方法、およびMDSC経路に影響する他の方法も、Ugelら47081Epub2009Jul16によって説明されており、さらに本発明に照らして当業者が使用可能である。がん治療法は、それぞれのがんに適したいずれかの治療法から選択でき、例えば、抗がん剤による化学療法から、およびまたはサイトカイン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロホスファミド、およびチロシンキナーゼ阻害薬から選択するか、およびまたは好ましくは抗がんワクチンを使用し、例えば本明細書で記載のように選択的にGMCSFを併用する免疫療法から選択される。本発明のさらに別の好ましい態様は、a前記がん患者への抗がんワクチンの投与、bがん治療中の前記患者から得た生体サンプルでの本発明に従う方法において、治療前の患者サンプルに比べた前記MDSC表現型レベルの減少が、前記がん患者の前記がん治療法およびまたは治療改善法を暗示する方法の実施、c選択的にステップbで得た結果に基づくステップaの繰り返しから成る、それを必要とするがん患者のがんを治療する改善方法に関する。本発明のこれらの治療法の態様において、本発明に従う方法は、がんの治療法、特にがんの免疫療法の改善された治療オプションを提供するために使用される。本発明に従う方法は、がんの免疫学的治療法の必要性と効果に関する、追加の初期情報を提供し、よって前記がんのさらなる治療に関するより詳細な決定を可能にする。したがって、ステップbおよび選択的にステップcを1回以上繰り返すことから成り、さらに前記がん患者の免疫応答およびまたは免疫治療のモニタリングを有する、好ましくは上述の方法である。本発明に従う方法はまた、現在の治療法のさらなる転帰に関する予後の改善を可能にし、ここで、サンプル中の治療前MDSCレベルに比べた、前記MDSC表現型レベルの増加は、全生存率の短縮、腫瘍の増殖、または無増悪生存率に関係する。さらに、このことは前記がんのさらなる治療法に関するより詳細な決定を可能にする。上述したように、上述の免疫療法ワクチンに加え、好ましい治療または前治療は、サイトカイン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロホスファミド、およびチロシンキナーゼ阻害薬TKIから選択する抗がん剤から選ぶ。治療されるがんは、免疫療法に奏功するすべてのがんであり、好ましくは、腎細胞癌RCC、大腸癌CRC、胃癌GC、メラノーマ、および腺癌から選ぶ。本明細書で公表および報告された本発明の特徴は、明示された各々の組み合わせで使用されるだけでなく、本発明で意図する範囲から逸脱せずに、単一の方法で使用することもできる。本発明では、配列リストに関してはここに示す例でその詳細を説明する。以下の例は説明の目的のみで提供され、本発明を限定する意図はない。フローサイトメトリのパネルは、1回の多色染色によって6種類のすべてのMDSC集団が同定可能になるように確立された。このアッセイは、検査したIMA901202ITT集団の利用可能な治療前患者サンプルのすべて利用可能N67、評価可能N61、マッチする健常ドナーサンプル利用可能N22、評価可能N22について実施された。試験患者および年齢のマッチした健常ドナーの比較治療前レベルの健常ドナーとの比較では、70歳未満のintentiontotreat患者のみを選択し、最年長健常対照ドナーとマッチさせた。得られた患者N52と健常ドナーN22群の年齢、性別、およびCMV血清反応陽性を合わせた。MDSC1レベルは患者と健常ドナー間で異なる一方、MDSC2、3、4、5および6は、健常ドナーと比較し、患者において大きく有意に増加することが分かった。ベースラインパラメータとMDSCレベルの相関MDSC評価可能なITT集団N61内で、両試験群またはCyのMDSC1~6レベルを合わせたため、有意な差を示さなかったことが分かった。ソラフェニブの治療前投与は、治療前MDSC2レベルの有意な低下と関連していたp00278MannWhitney検定;MDSC1レベルと同じ傾向。これらのデータは、ソラフェニブが骨髄成熟過程に影響を与える可能性があるという仮説と一致している。関連があると考えられる事前の所見は、ソラフェニブが、PI3とMAPキナーゼ、およびNFκBシグナル伝達の阻害により、invitroでヒトDCの成熟を阻害することを示したことである。治療前MDSCレベルと免疫応答の相関治療前MDSCレベルと免疫応答の相関は、PerProtocolPP患者集団において、評価可能な治療前MDSCレベルと評価可能な全免疫応答N54を利用して解析した。サブグループ解析は、CYの前治療の有無に関して実施した。免疫応答の増加と治療前MDSC16レベルの低下との全体的な関連性は、全PP患者集団で認められなかった。興味深いことに、CYサブグループのみで、複数のTUMAPに対する免疫応答がMDSC5レベルの低下に関連する強い傾向があったp00524;両側MannWhitney検定。表5:治療前MDSCレベルと全生存率との相関試験群サブグループMDSCレベルが評価可能な治験実施計画書に適合した対象集団中で、リンパ球のとしての治療前MDSCレベルと全生存率の解析のHR推定値Cox比例ハザードモデル、推定ハザード比およびp値尤度比検定を示す。イタリック数字は傾向を示すp1を示す。高い値の患者ではイベント発生までの時間が短い。治療前MDSCレベルと臨床的奏功の相関全PP患者集団の治療前MDSCレベルを全生存率と比較すると評価可能N57、いくつかの有意な相関MDSC4、5と傾向MDSC3、6が認められた。仮説通り、治療前MDSCレベルの増加は常に全生存率の短縮に関連していた。そのため、MDSCの明確なバイオマーカーの役割が、疾患の予後徴候となるか、またはIMA901治療への応答を予測する、IMA901202で確認された。いくつかのMDSC表現型について、予後的vs予測的マーカーを区別する傾向は、IMA901への免疫応答を呈した患者およびCYで前治療した患者においてより顕著であり、このことは、おそらく、この例ではIMA901により誘発されるT細胞応答の機能性を阻害することより、IMA901誘発T細胞応答の有効性に影響を与える、予測バイオマーカーとしての役割を示している。アッセイ治療前の一時点で試験可能な全IMA901202患者から得たPBMC、つまりマッチした健常ドナーPBMCおよび内部標準PBMC治療前データセットを使用し、IMA901202サンプルについて、予め定義したようにアッセイを実施した。本アッセイでは、冷凍保存したPBMCを解凍し、凝集を防ぐためヌクレアーゼでインキュベートした。細胞は最初に生死判別色素で染色した。次いで後続のFcを介した結合を低減させるためにhIgGで細胞を遮断した。細胞は続いて、蛍光色素で標識した抗CD15、CD11b、CD124、CD14、CD33、CD3、CD19、CD56およびCD45抗体で表面を染色した。赤血球溶解後、細胞をホルムアルデヒドで固定した。青、紫、赤および緑レーザー、最適二色性ミラーと全色素用バンドパスフィルタを備えたBDLSRIISORP装置で測定を実施した。装置の最適設定値が使用され、装置の自動較正は各実験前に実施し、アッセイ間の比較可能性を確保した。主なデータ解析はFlowJo886で実施した。同一ゲートがすべてのサンプルおよび両アッセイ間の解析に使われた。サンプルは、75000個以上の生CD45リンパ球が計測された場合に評価可能とした。得られたデータの統計学的解析は、GraphPadPrism4およびStatgraphicsCenturionXVを使って実施した。材料と方法末梢血単核細胞PBMCは、標準のFicoll勾配分離によってヘパリン添加血液サンプルから8時間以内に得て、バッチ分析前に冷凍保存した。PBMCのMDSCレベルを定量するために、サンプルを解凍し、PBSで2回洗浄し、4°C30分間PBSで希釈した死亡細胞色素LiveDeadAquaで染色した。それ以降のステップではすべて染色バッファーはPBEAであり、これはPBSで、05BSA2mMEDTAおよび10mgmlアジ化ナトリウムが添加された。細胞はさらに洗浄した。Fc受容体の遮断は、室温で15分間029mgmlhIgGでインキュベートして行った。細胞は次いで029mgmlhIgG共存下4°C30分間、抗体CD45Q605、CD15V450、CD124PE、CD11bAF700、CD14APCH7、CD33PECy7、CD3FITC、CD19FITC、CD56FITC、CD14FITCで染色した。