"明細書に記載の発明。3.発明の概要本発明は、脊椎動物のDelta遺伝子ニワトリとマウスのDelta遺伝子、および他の種の関連遺伝子のヌクレオチド配列、およびそれらがコードするタンパク質のアミノ酸配列、並びにその誘導体例えば、断片と類似体に関する。前述のヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能な核酸またはこれと相補的な核酸もまた提供される。特別な実施態様においては、デルタタンパク質は哺乳類のタンパク質であり、好ましくはヒトのタンパク質である。本発明は、脊椎動物のDelta誘導体および類似体に関し、これらは機能的に活性、すなわち、全長野生型のデルタタンパク質に関連する1以上の公知の機能活性を表示することができる。このような機能活性には、抗原性抗デルタ抗体に結合するまたは結合についてデルタと拮抗する能力、免疫原性デルタに結合する抗体を産生する能力、Notchもしくは他のトポリズミックタンパク質またはそれらの断片への結合能または結合についてデルタと拮抗する能力付着性、デルタの受容体への結合能または結合についてデルタと拮抗する能力などが含まれるが、これらに限定されるものではない。ここで使用するトポリズミックタンパク質は、Notch遺伝子、Delta遺伝子、Serrate遺伝子、Enhancerofsplit遺伝子、およびDeltex、並びにこの相互作用する遺伝子のセットの他のメンバーのタンパク質産物をいい、他のメンバーは、それらの遺伝子配列が、例えば、Delta遺伝子、Serrate遺伝子もしくはNotch遺伝子にハイブリダイズする能力、またはそれらとの相同性、または表現型の相互作用を表示する能力もしくは生化学的に相互作用するそれらのタンパク質産物の能力によって同定されてもよい。本発明はさらに、脊椎動物のDelta遺伝子の断片およびその誘導体ならびに類似体に関し、これらは、細胞内ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、DSLドメイン、DSLドメインに対するドメインのアミノ末端を含む1以上のデルタタンパク質のドメイン、または1以上のデルタタンパク質のEGF様相同反復配列、または前述のものの組合わせを含むが、これらに限定されるものではない。脊椎動物のデルタタンパク質に対する抗体、その誘導体および類似体が、さらに提供される。脊椎動物のデルタタンパク質、誘導体および類似体の産生方法、例えば、組換え手段による産生方法もまた提供される。本発明はまた、治療方法、検査方法、およびデルタタンパク質と核酸をベースとする組成物に関する。本発明は、本発明の組成物を投与することによる細胞の予定運命または分化の障害の治療を提供する。このような治療用組成物本明細書中では治療剤というは、デルタタンパク質とその類似体および誘導体断片を含む;それらに対する抗体;デルタタンパク質、類似体、もしくは誘導体をコードする核酸;並びにデルタアンチセンス核酸を含む。好適な実施態様においては、本発明の治療剤を投与してガン状態を治療し、または前新生物状態または非腫瘍状態から新生物発生または腫瘍状態への進行を妨げる。他の特別の実施態様においては、本発明の治療剤を投与して神経系の障害を治療し、または組織の再生および回復を促進させる。ある実施態様においては、ノッチおよび/またはデルタの機能と拮抗するかまたは阻害する治療剤以下拮抗治療剤というを治療効果のために投与する。別の実施態様においては、ノッチおよび/またはデルタの機能を促進させる治療剤以下アゴニスト治療剤というを治療効果のために投与する。細胞の予定運命の障害、特に、ノッチおよび/またはデルタタンパク質の異常型もしくは望ましくないレベルの発現もしくは活性または局在化を含む、過剰増殖障害例えば、ガンまたは低増殖障害は、このようなレベルの検出によって診断することができ、以下にさらに詳細に説明する。好適な特徴としては、本発明の治療剤は、少なくとも、ノッチタンパク質またはその断片への結合を仲介するデルタの断片以下付着性断片というからなるタンパク質である。3.1.定義本明細書中で使用するように、下線をつけてあるかまたは斜体にしてある遺伝子名は遺伝子を示し、対照的に、それがコードするタンパク質産物は遺伝子名に下線を付していない。例えば、DeltaはDelta遺伝子を意味し、DeltaはDelta遺伝子のタンパク質産物を表す。5.発明の詳細な説明本発明は、脊椎動物Delta遺伝子のヌクレオチド配列およびそれらのコード化タンパク質のアミノ酸配列に関する。本発明はさらに、脊椎動物デルタタンパク質の断片、並びに他の誘導体および類似体に関する。このような断片または誘導体をコードする核酸も本発明の範囲内である。本発明は多くの異なる脊椎動物種のDelta遺伝子とそれらのコード化タンパク質を提供する。本発明のDelta遺伝子にはニワトリ、マウス、ヒトのDelta、および他の脊椎動物種の関連遺伝子相同体が含まれる。特定の実施態様において、Delta遺伝子およびタンパク質は脊椎動物、特に哺乳動物に由来するものである。本発明の好ましい実施態様では、デルタタンパク質がヒトタンパク質である。前記タンパク質および誘導体の、例えば組換え法による、産生も提供される。本発明は、機能的に活性な本発明のデルタ誘導体および類似体に関し、すなわち、それらは全長野生型タンパク質と関連した既知の機能的活性を1以上示すことができるものである。このような機能的活性として、抗原性抗デルタ抗体と結合するまたは該結合に関してデルタと競合する能力、免疫原性デルタと結合する抗体を誘導する能力、ノッチまたは他のトポリズミックタンパク質もしくはその断片と結合するまたは該結合に関してデルタと競合する能力接着性、デルタの受容体と結合するまたは該結合に関してデルタと競合する能力、細胞の運命または分化に影響を与える能力、および治療活性が挙げられるが、これらに限らない。本明細書中で用いるトポリズミックタンパク質とは、Notch、Delta、Serrate、Enhancerofsplit、およびDeltex、並びにこの相互作用遺伝子ファミリーの他のメンバー例えば、Delta、SerrateまたはNotchとハイブリダイズするその遺伝子配列の能力、またはDelta、SerrateまたはNotchに対するその相同性、または表現型相互作用を示すその遺伝子の能力によって同定しうるのタンパク質産物を指す。本発明はさらに、デルタタンパク質の細胞内ドメイン、細胞外ドメイン、DSLドメイン、DSLドメインのアミノ末端側の領域、膜貫通領域、膜結合領域、もしくは1以上のEGF様相同反復ドメイン、またはこれらの任意の組合せを含むがこれらに限らない、デルタタンパク質の1以上のドメインを含むデルタの断片並びにその誘導体および類似体に関する。さらに、脊椎動物デルタ、その誘導体および類似体に対する抗体も提供される。以下で実証するように、デルタは細胞の運命分化の決定に関与する発生および他の生理学的プロセスにおいて、特にノッチのリガンドとして、重要な役割を果たしている。とりわけ、デルタは中枢神経系の細胞の運命を決定づける上で主要な役割を担っていると考えられる。本発明の核酸およびアミノ酸配列並びに抗体は、ヒトと他の生物種のデルタmRNAおよびタンパク質の検出定量に、その発現の研究に、デルタとその断片、他の誘導体および類似体の産生に、分化および他の生理学的プロセスの研究操作に用いることができる。本発明はまた、デルタタンパク質および核酸に基づく治療および診断法、並びに医薬組成物に関する。本発明は、本発明の治療用化合物を投与することによる細胞運命または分化の障害の治療を提供する。このような治療用化合物本明細書中では治療薬というとしては、デルタタンパク質、その類似体および誘導体断片を含む、それらに対する抗体、デルタタンパク質、類似体または誘導体をコードする核酸、およびデルタアンチセンス核酸が挙げられる。好ましい実施態様では、本発明の治療薬は癌状態を治療するために、あるいは前新生物または非悪性状態から新生物または悪性状態への進行を防ぐために投与される。他の特定の実施態様では、本発明の治療薬は神経系の障害を治療するために、または組織の再生および修復を促進するために投与される。一実施態様において、ノッチおよび/またはデルタ機能と拮抗するまたはそれらを阻害する治療薬以後アンタゴニスト治療薬というが治療効果のために投与される。他の実施態様において、ノッチおよび/またはデルタ機能を促進する治療薬以後アゴニスト治療薬というが治療効果のために投与される。細胞運命の疾患、特にノッチおよび/またはデルタタンパク質の発現、活性または局在化の異常なもしくは望ましくないレベルを伴う過増殖性例えば、癌または低増殖性疾患は、以下で詳述するように、このようなレベルを検出することにより診断することができる。好ましい態様において、本発明の治療薬は、ノッチタンパク質またはその断片への結合を媒介するデルタの少なくとも断片本明細書中では接着性断片というからなるタンパク質である。本発明は、特に、ニワトリDelta相同体のクローニング第6節、マウスDelta相同体のクローニング第7節、およびヒトDelta相同体のクローニング第8節を開示する以下の実施例により例示される。制限ではなく、開示を明瞭にするために、本発明の詳細な説明を以下の分節に大別する。5.1.Delta遺伝子の単離本発明は、脊椎動物のDelta核酸のヌクレオチド配列に関する。特定の態様では、ヒトのDelta核酸は、図10配列番号14もしくは図12A配列番号33に示すcDNA配列、またはそのコード領域、または脊椎動物のデルタタンパク質をコードする核酸例えば、配列番号1、3、11、14または33の配列を有するを含む。本発明は、脊椎動物のDelta配列の少なくとも8個のヌクレオチドすなわち、ハイブリダイズ可能な部分から成る核酸を提供し、他の態様では、核酸が、Delta配列の少なくとも25個の連続ヌクレオチド、50個のヌクレオチド、100個のヌクレオチド、150個のヌクレオチド、もしくは200個のヌクレオチド、またはDeltaの全長をコードする配列から成る。本発明はまた、前記配列もしくはその相補体にハイブリダイズ可能な、または相補的な核酸にも関する。特定の発明では、脊椎動物のDelta遺伝子の少なくとも10、25、50、100もしくは200ヌクレオチド、または全体をコードする領域に相補的な配列を含む核酸が提供される。特定の態様では、ストリンジェンシーの低い条件下で、脊椎動物例えば、哺乳類のDelta核酸例えば、配列番号14もしくは配列番号33またはそれらの少なくとも10、25、50、100もしくは200個のヌクレオチド部分を有する、またはデルタ誘導体をコードする核酸にハイブリダイズ可能な核酸が提供される。例としては、それに限定されないが、そのようなストリンジェンシーの低い条件を使用する手法は、次の通りであるShiloおよびWeinberg,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA7867896792も参照。すなわち、DNAを含むフィルターを、40°Cで6時間、35のホルムアミド、5XSSC、50mMのトリス-HClpH75、5mMのEDTA、01のPVP、01のフィコール、1のBSAおよび500μgmlの変性サケ精子DNAを含む溶液で前処理する。ハイブリダイゼーションを同じ溶液で行うが、次の変更を伴う。すなわち、002のPVP、002のフィコール、02のBSA、100μgmlのサケ精子DNA、10wtvolの硫酸デキストランおよび5~20x106cpmの32P-標識プローブを使用する。フィルターを40°Cで18~20時間、ハイブリダイゼーション混合物中でインキュベートした後、55°Cで15時間、2XSSC、25mMのトリス-HClpH74、5mMのEDTAおよび01のSDSを含む溶液で洗浄する。洗浄溶液を新しい溶液と入れ換え、60°Cでさらに15時間インキュベートする。フィルターを吸い取って乾かし、オートラジオグラフィー用に露光する。必要であれば、フィルターを65~68°Cで3回目の洗浄にかけ、フィルムに再露光する。使用できるストリンジェンシーの低い他の条件は、当技術分野で周知である例えば、種の交差したハイブリダイゼーションに対して使用されるもの。別の特定の態様では、ストリンジェンシーの高い条件下で脊椎動物例えば、哺乳類のDelta核酸にハイブリダイズ可能な核酸が提供される。例えば、それに限定されないが、そのようなストリンジェンシーの高い条件を使用する手法は次の通りである。すなわち、DNAを含むフィルターの前ハイブリダイゼーションを、65°Cで8時間~一夜、6XSSC、50mMのトリス-HClpH75、1mMのEDTA、002のPVP、002のフィコール、002のBSAおよび500μgmlの変性サケ精子DNAで構成される緩衝液中で行う。フィルターを65°Cで48時間、100μgmlの変性サケ精子DNAおよび5~20x106cpmの32P-標識したプローブを含む前ハイブリダイゼーション混合物中でハイブリダイズする。フィルターの洗浄を、37°Cで1時間、2XSSC、001のPVP、001のフィコールおよび001のBSAを含む溶液中で行う。この後、50°Cで45分間、01XSSCで洗浄して、オートラジオグラフィーにかける。使用できるストリンジェンシーの高い他の条件は、当技術分野で周知である。脊椎動物のDeltaタンパク質の断片および誘導体をコードする核酸第5.6節参照ならびにDeltaアンチセンス核酸第5.11節参照がさらに提供される。すでに明らかなように、本明細書で使用するデルタタンパク質の断片または一部をコードする核酸は、デルタタンパク質の列挙した断片または一部のみをコードする核酸を意味するものとし、デルタタンパク質の連続配列としての他の隣接した部分は意味しない。他のトポリズミックタンパク質と相同性のある領域を含む脊椎動物のDelta核酸の断片も提供される。他の種のデルタタンパク質のDSL領域DrosophilaSerrateおよびDeltaと相同性のある領域も提供される。図3および8に示すようなDeltaとSerrateとの間の保存領域をコードする核酸も提供される。脊椎動物のDelta遺伝子のクローニングに対する特定の態様を特定の例として以下に示すが、それに限定されるものではない。発現クローニング一般に当技術分野で公知の技術に対しては、当技術分野で公知の方法により、発現ライブラリーを作製する。例えば、mRNA例えば、ヒトを単離し、cDNAを作製して発現ベクター例えば、バクテリオファージ誘導体に連結し、後にその中に導入される宿主細胞によって発現できるようにする。次いで、種々のスクリーニングアッセイを使用して、発現したデルタ産物を選択することができる。一つの態様では、選択のために抗-デルタ抗体を使用することができる。別の好ましい発明では、選択の前に、PCRを使用してゲノムまたはcDNAライブラリーの所望の配列を増幅する。公知Delta配列好ましくは、脊椎動物の配列を表すオリゴヌクレオチドプライマーがPCRのプライマーとして使用できる。好ましい発明では、オリゴヌクレオチドプライマーが、SerrateとDeltaとの間の相同性が強いDelta保存セグメントの少なくとも一部を表す。合成オリゴヌクレオチドをプライマーとして使用して、潜在的に興味の対象となる源RNAまたはDNA、好ましくはcDNAライブラリー由来の配列をPCRにより増幅してもよい。PCRは、例えば、PerkinElmerCetusサーマルサイクラーおよびTaqポリメラーゼGeneAmpを使用して行うことができる。増幅されるDNAとしては、真核細胞種由来のmRNAまたはcDNAまたはゲノムDNAが挙げられる。PCR反応で使用するために、いくつかの異なる縮重プライマーの合成を選択することができる。また、公知のDeltaヌクレオチド配列と単離される核酸相同体との間のヌクレオチド配列の類似性の多少を考慮するために、PCR反応のプライミングに使用するハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーを変えることもできる。種の交差したハイブリダイゼーションの場合は、ストリンジェンシーの低い条件が好ましい。同じ種のハイブリダイゼーションの場合は、ストリンジェンシーが中位の条件が好ましい。Delta相同体のセグメントの増幅の成功の後、そのセグメントは、分子的にクローン化して配列決定し、完全なcDNAまたはゲノムクローンを単離するためのプローブとして利用できる。これにより、次いで、以下に記載するように、遺伝子の完全なヌクレオチド配列の決定、その発現の分析、および機能的分析のためのそのタンパク質産物の産生が可能になる。このようにして、デルタタンパク質をコードするさらに別の遺伝子が同定できる。そのような手法を、以下の種々の実施例の節で例として示す。上記方法は、Deltaのクローンを得ることができる方法の下記の一般的記載を限定するものではない。どの脊椎動物細胞も、潜在的に、Delta遺伝子の分子クローニングに対する核酸源として役立つと考えられる。Deltaをコードする核酸配列は、哺乳類、ヒト、ブタ、ウシ、ネコ、トリ、ウマ、イヌおよびそれ以外の霊長類源から単離できる。例えば、DeltaプライマーとともにcDNAライブラリーを使用したPCRによって、マウス、ニワトリおよびヒトのDelta遺伝子の断片を増幅した。DNAは、クローン化したDNA例えばDNAライブラリーから当技術分野で公知の標準的手法により、化学合成により、cDNAクローニングにより、または所望の細胞から精製したゲノムDNAもしくはその断片のクローニングにより、得ることができる例えば、Sambrookら、1989,MolecularCloning,AlaboratoryManual,第2版、ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSprigHarbor,NewYorkGlover,DM.編、1995,DNACloningAPracticalApproach,MRLPress,Itd,Oxford,UK.Vol.I,IIを参照。ゲノムDNAから誘導されるクローンは、コード領域以外に、調節およびイントロンDNA領域を含み得る。cDNA由来のクローンは、エキソン配列のみを含む。源が何であっても、遺伝子は、遺伝子の増殖に適するベクターに入れて分子的にクローン化すべきである。ゲノムDNA由来の遺伝子の分子クローニングでは、DNA断片が生じ、そのいくつかは、所望の遺伝子をコードする。DNAは、種々の制限酵素を使用して特定の部位で切断できる。あるいは、マンガンの存在下でDNAseを使用してDNAを断片化することができ、または、DNAを例えば超音波処理などによって物理的に切断することができる。次いで、直鎖状DNA断片は、それらに限定されないが、アガロースおよびポリアクリルアミドゲル電気泳動ならびにカラムクロマトグラフィーなどの標準的技術によって、サイズに従って分離することができる。DNA断片がいったん生じると、所望の遺伝子を含む特定のDNA断片の同定は、多くの方法で行うことができる。例えば、いずれかの種のDelta遺伝子もしくはその特異的RNAの一部またはそれらの断片、例えば細胞外ドメイン第5.6節参照のある量が入手でき、精製標識することができるならば、生じたDNA断片は、標識したプローブへの核酸ハイブリダイゼーションによってスクリーニングできる。プローブと実質的に相同であるDNA断片はハイブリダイズする。また、制限酵素による消化、および既知制限地図が利用できるならばそれに従って予想されるものとの断片の大きさの比較によって、適切な断片を同定することもできる。遺伝子の性質に基づいて、さらに選択を行うことができる。あるいは、遺伝子の有無は、その発現産物の物理的、化学的または免疫学的性質に基づくアッセイによって検出できる。例えば、cDNAクローン、または適切なmRNAをハイブリッド-選択するDNAクローンは、電気泳動の移動、等電点挙動、タンパク質分解消化地図、結合活性、invitro集合活性接着性または抗原性がDeltaに対して公知のものと同様または同一であるものが選択され得る。Deltaに対する抗体が利用できるならば、デルタタンパク質は、標識した抗体を推定上のDeltaを合成するクローンに結合させることにより、ELISA固相酵素免疫検定法型手法で同定できる。Delta遺伝子はまた、核酸ハイブリダイゼーションによるmRNA選択、続くinvitro翻訳によって同定することもできる。この手法では、断片を使用して、相補的mRNAをハイブリダイゼーションにより単離する。そのようなDNA断片は、別の種例えば、Drosophilaの利用可能な精製DeltaDNAを表す可能性がある。単離したmRNAの単離産物のinvitro翻訳産物の免疫沈降分析または機能的分析例えば、invitroでの集合力;受容体への結合;下記を参照によりmRNA、従って、所望配列を含む相補的DNA断片が同定される。さらに、特異的mRNAは、細胞から単離したポリソームの、デルタタンパク質に対して特異的な固定化抗体への吸着によって選択できる。放射線標識したDeltacDNAは、吸着したポリソームから選択したmRNAを鋳型として使用して合成できる。次いで、放射線標識したmRNAまたはcDNAをプローブとして使用して、他のゲノムDNA断片からDeltaDNAを同定することができる。DeltaゲノムDNAを単離する別の方法としては、それらに限定されないが、既知配列からの遺伝子配列自体の化学的合成またはデルタタンパク質をコードするmRNAに対するcDNAの作製が挙げられる。例えば、Delta遺伝子をcDNAクローニングするためのRNAは、Deltaを発現する細胞から単離できる。他の方法も可能であり、本発明の範囲内である。同定単離した遺伝子は、次いで、適切なクローニングベクターに挿入することができる。当技術分野で公知の多数のベクター-宿主系が使用できる。可能なベクターとしては、それらに限定されないが、プラスミドまたは変性ウイルスが挙げられる。しかし、ベクター系は、使用する宿主細胞と相溶性でなければならない。そのようなベクターとしては、それらに限定されないが、λ誘導体などのバクテリオファージ、またはPBR322もしくはpUCプラスミド誘導体などのプラスミドが挙げられる。クローニングベクターへの挿入は、例えば、DNA断片を、相補的付着末端を有するクローニングベクターに連結することによって行うことができる。しかし、DNAの断片化に使用する相補的制限部位がクローニングベクターに存在しないならば、DNA分子の両端を酵素的に改変することができる。あるいは、所望するいずれかの部位を、ヌクレオチド配列リンカーをDNA末端に連結することにより作り出すことができる。これらの連結したリンカーは、制限エンドヌクレアーゼ認識配列をコードする、化学的に合成した特定のオリゴヌクレオチドを含み得る。別の方法では、切断したベクターおよびDelta遺伝子を、ホモポリマー末端付着により改変することができる。組換え分子は、形質転換、トランスフェクション、感染、電気穿孔法などによって宿主細胞に導入することができ、その結果、遺伝子配列の多くのコピーが生じる。別の方法では、適切なクローニングベクターに挿入した後、所望の遺伝子を、ショットガン法で同定単離することができる。所望遺伝子の濃縮は、例えばサイズ分画によって、クローニングベクターへの挿入前に行うことができる。特定の態様では、単離したDelta遺伝子、cDNAまたは合成したDNA配列を挿入した組換えDNA分子で宿主細胞を形質転換することにより、多コピーの遺伝子を生じることができる。すなわち、遺伝子は、形質転換体を増殖し、その形質転換体から組換えDNA分子を単離し、必要であれば、挿入した遺伝子を単離した組換えDNAから回収することにより、大量に得ることができる。本発明によって提供されるDelta配列としては、天然の脊椎動物デルタタンパク質に見られるものと実質的に同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列および機能的に同等のアミノ酸を有するコードされたアミノ酸配列が挙げられ、それらは全て、デルタ誘導体に対する下記の第5.6節に記載されている。5.2.Delta遺伝子の発現脊椎動物のデルタタンパク質をコードするヌクレオチド配列またはその機能的に活性な断片もしくは他の誘導体第5.6節参照は、適切な発現ベクター、すなわち、挿入されたタンパク質をコードする配列の転写および翻訳に必要な要素を含むベクターに挿入できる。また、必要な転写および翻訳シグナルは、天然のDelta遺伝子および/またはそのフランキング領域によって供給され得る。種々の宿主-ベクター系を使用して、タンパク質をコードする配列を発現することができる。これらには、それらに限定されないが、ウイルス例えば、ワクシニアウイルス、アデノウイルスなど感染した哺乳類細胞系;ウイルス例えば、バキュロウイルス感染した昆虫細胞系;酵母ベクターを含む酵母またはバクテリオファージ、DNA、プラスミドDNAもしくはコスミドDNAで形質転換した細菌などの微生物が含まれる。ベクターの発現要素は、その強さおよび特異性が変わる。使用する宿主-ベクター系によって、多数の適する転写翻訳要素のいずれか一つを使用することができる。特定の態様では、Delta遺伝子の付着部分を発現させる。他の特定の態様では、ヒトDelta遺伝子、またはヒトデルタの機能的に活性な部分をコードする配列を発現させる。さらに別の態様では、細胞外ドメインを含むデルタの断片、または他の誘導体、またはデルタの類似体を発現させる。DNA断片のベクターへの挿入に対して先に記載した方法のいずれかを使用して、適切な転写/翻訳制御シグナルおよびタンパク質をコードする配列から成るキメラ遺伝子を含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、invitro組換えDNAおよび合成法ならびにinvivo組換え法遺伝子組換えが挙げられる。デルタタンパク質またはペプチド断片をコードする核酸配列の発現は、デルタタンパク質またはペプチドが組換えDNA分子で形質転換された宿主で発現されるように、第二の核酸配列によって調節することができる。例えば、デルタタンパク質の発現は、当技術分野で公知のプロモーター/エンハンサー要素によって制御できる。Delta遺伝子発現の制御に使用できるプロモーターとしては、それらに限定されないが、SV40初期プロモーター領域、ラウス肉腫ウイルスの3’の長い末端反復配列に含まれるプロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター、メタロチオネイン遺伝子の調節配列β-ラクタマーゼプロモーターまたはtacプロモーターなどの原核生物発現ベクターScientificAmerican,19802427494の組換え細菌由来の有用なタンパク質も参照ノパリンシンテターゼプロモーター領域を含む植物発現ベクターまたはカリフラワーモザイクウイルス35SRNAプロモーター、および光合成酵素リブロースビスリン酸カルボキシラーゼのプロモーター酵素または他の真菌類由来のプロモーター要素、例えばGal4プロモーター、ADCアルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、PGKホスホグリセロールキナーゼプロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター、および組織特異性を示し、トランスジェニック動物に利用されている下記の動物転写制御領域など膵小胞細胞において活性なエラスターゼI遺伝子制御領域膵臓β細胞において活性なインスリン遺伝子制御領域、リンパ系細胞において活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域、精巣、乳房、リンパ系およびマスト細胞において活性なマウス乳癌ウイルス制御領域、肝臓において活性なアルブミン遺伝子制御領域、肝臓において活性なα-フェトプロテイン遺伝子制御領域、肝臓において活性なα1-抗トリプシン遺伝子制御領域、骨髄性細胞において活性なβ-グロビン遺伝子制御領域脳のオリゴデンドロサイト細胞において活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域骨格筋において活性なミオシン軽鎖-2遺伝子制御領域、および視床下部において活性な性腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域が挙げられる。Delta遺伝子挿入物を含む発現ベクターは、一般的な3つの方法によって同定できる。すなわち、a核酸ハイブリダイゼーション、bマーカー遺伝子機能の有無、およびc挿入配列の発現である。最初の方法では、発現ベクターに挿入した外来遺伝子の存在を、挿入したトポリズミック遺伝子に相同な配列を含むプローブを使用した核酸ハイブリダイゼーションにより検出することができる。第二の方法では、組換えベクター/宿主系を、外来遺伝子のベクターへの挿入によって引き起こされるある種のマーカー遺伝子機能例えば、チミジンキナーゼ活性、抗生物質に対する耐性、形質転換表現型、バキュロウイルスにおける閉鎖体の形成などの有無に基づいて同定し、選択することができる。例えば、Delta遺伝子をベクターのマーカー遺伝子配列内に挿入する場合、Delta挿入物を含む組換え体は、マーカー遺伝子機能の不在によって同定できる。第三の方法では、組換え発現ベクターを、組換え体によって発現される外来遺伝子産物をアッセイすることにより同定することができる。そのようなアッセイは、例えば、Delta遺伝子産物invitroアッセイ系の物理的または機能的特性、例えば、ノッチとの集合結合、受容体への結合、抗体との結合に基づくことができる。特定の組換えDNA分子がいったん同定され、単離されると、当技術分野で公知のいくつかの方法を使用してそれを増殖することができる。適切な宿主系および増殖条件がいったん確立されると、組換え発現ベクターをたくさん増殖し、作製することができる。先に説明したように、使用できる発現ベクターとしては、それらに限定されないが、次のベクターまたはそれらの誘導体が挙げられる。すなわち、ほんの少し挙げると、ワクシニアウイルスまたはアデノウイルスなどのヒトまたは動物ウイルス;バキュロウイルスなどの昆虫ウイルス;酵母ベクター;バクテリオファージベクター例えば、ラムダ、ならびにプラスミドおよびコスミドベクターである。さらに、宿主細胞菌株は、挿入配列の発現を調節し、または遺伝子産物を所望の特定の様式で改変し、処理するものを選択することができる。ある種のプロモーターからの発現は、ある種の誘発剤の存在下で高めることかできる。すなわち、遺伝子操作したデルタタンパク質の発現は、制御することができる。さらに、種々の宿主細胞は、タンパク質の翻訳および翻訳後プロセシングならびに改変例えば、例えば、シグナル配列のグリコシル化、切断に対して特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞系または宿主系は、発現された外来タンパク質の所望の改変およびプロセシングが確実に行われるように選択できる。例えば、細菌系での発現を使用すると、グリコシル化されていないコアタンパク質産物を産生することができる。酵母での発現は、グリコシル化タンパク質を産生する。哺乳類細胞での発現は、異質哺乳類デルタタンパク質の天然のグリコシル化を確実に行うことができる。さらに、種々のベクター/宿主発現系により、タンパク質分解などの処理反応を種々の程度に行うことができる。他の特定の態様では、デルタタンパク質、断片、類似体または誘導体を、融合またはキメラタンパク質産物種々のタンパク質の異質タンパク質配列にペプチド結合によって結合したタンパク質、断片、類似体または誘導体を含むとして発現させることができる。そのようなキメラ産物は、所望のアミノ酸配列をコードする適切な核酸配列を、適切なコードフレームにおいて、当技術分野で公知の方法によって互いに連結し、キメラ産物を当技術分野で一般に公知の方法によって発現することにより作ることができる。あるいは、そのようなキメラ産物は、タンパク質合成技術、例えばペプチド合成機を使用することにより、作ることができる。cDNAおよびゲノム配列は共に、クローン化し、発現させることができる。5.3.Delta遺伝子産物の同定および精製特定の発明では、本発明は、脊椎動物のデルタ、好ましくはヒトのデルタおよび抗原決定基を含むすなわち、抗体によって認識できる、または、そうでなければ機能的に活性なそれらの断片および誘導体のアミノ酸配列、ならびにそれらをコードする核酸配列を提供する。本明細書で使用する機能的に活性な物質とは、全長野生型のデルタタンパク質に関連する1個以上の公知の機能活性、例えば、ノッチまたはその一部への結合、他のデルタリガンドへの結合、抗原性抗-Delta抗体への結合などを示す物質を意味する。特定の態様では、本発明は、少なくとも6個のアミノ酸、10個のアミノ酸、25個のアミノ酸、50個のアミノ酸または少なくとも75個のアミノ酸から成るデルタタンパク質の断片を提供する。該断片を含む分子も提供する。他の態様では、タンパク質は、脊椎動物のデルタタンパク質の細胞外ドメイン、DSLドメイン、上皮増殖因子様反復ELRドメイン、ELRのいずれかの組み合わせ、膜貫通ドメイン、もしくは細胞内細胞質ドメイン、もしくはノッチに結合する部分、またはそれらの組み合わせを含み、あるいは、本質的にそれらから成る。デルタタンパク質の前記領域のいくつか若しくは全部が欠けた断片、または断片を含むタンパク質も提供する。前記をコードする核酸を提供する。Delta遺伝子配列を発現する組換え体がいったん同定されると、遺伝子産物を分析することができる。これは、産物の物理的または機能的特性に基づくアッセイ、例えば、産物の放射能標識および続くゲル電気泳動、イムノアッセイなどによる分析により達成される。デルタタンパク質がいったん同定されると、クロマトグラフィー例えば、イオン交換、アフィニティーおよびサイジングカラムクロマトグラフィー、遠心分離、示差溶解度などの標準的方法、またはタンパク質を精製するための他の標準的方法により、単離精製することができる。機能的特性は、適切なアッセイを使用して評価できる第5.7節参照。あるいは、組換え体によって産生されるデルタタンパク質がいったん同定されると、そのタンパク質のアミノ酸配列は、組換え体に含まれるキメラ遺伝子のヌクレオチド配列から推定できる。その結果、タンパク質は、当技術分野で公知の標準的化学方法によって合成できる例えば、Hunkapiller,M.ら、1984,Nature310105111。本発明の特定の態様では、該デルタタンパク質としては、組換えDNA法または化学合成法のいずれで産生するにしても、それらに限定されないが、基本アミノ酸配列として、実質的に図2、8、11または14配列番号2、10、16および39~65に示すアミノ酸配列の全部または一部を含むもの、ならびに断片および他の誘導体、ならびにそれらの類似体が挙げられる。5.4.Delta遺伝子およびタンパク質の構造脊椎動物のDelta遺伝子およびタンパク質の構造は、当技術分野で公知の種々の方法によって分析できる。5.4.1.遺伝子分析Delta遺伝子に対応するクローン化したDNAまたはcDNAは、それらに限定されないが、サザンハイブリダイゼーション、ノーザンハイブリダイゼーション例えば、Freemanら、1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.8040944098を参照、制限エンドヌクレアーゼマッピングおよびDNA配列決定分析などの方法によって分析できる。ポリメラーゼ連鎖反応、およびそれに続くDelta-特異的プローブを用いたサザンハイブリダイゼーションにより、種々の細胞型のDNAにおけるDelta遺伝子の検出が可能である。PCR以外の増幅法は一般に公知であり、それらも使用できる。一つの態様では、サザンハイブリダイゼーションを使用してDeltaの遺伝子結合を調べることができる。ノーザンハイブリダイゼーション分析を使用すると、Delta遺伝子の発現を調べることができる。発生または活性の種々の状態にある種々の細胞型のDelta発現を試験することができる。そのような技法の例およびそれらの結果を、下記第6節に記載する。サザンおよびノーザンハイブリダイゼーションのハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーは、使用する特定のDeltaプローブに対して所望の相関度を有する核酸の検出が確実に行われるように操作することができる。制限エンドヌクレアーゼマッピングを使用すると、Delta遺伝子の大体の遺伝子構造を決定することができる。制限エンドヌクレアーゼ切断によって誘導される制限地図は、DNA配列決定分析によって確認できる。DNA配列決定分析は、それらに限定されないが、マキサムギルバート法、サンガーのジデオキシ法、T7DNAポリメラーゼの使用または自動DNA配列決定装置の使用などの当技術分野で公知の任意の技術によっても行うことができる。5.4.2.タンパク質の分析デルタタンパク質のアミノ酸配列は、DNA配列からの推定、あるいは、例えば自動アミノ酸配列決定装置を使用する、タンパク質の直接の配列決定により誘導できる。代表的なデルタタンパク質のアミノ酸配列は、実質的に図2に示し、下記第6節で詳述する配列を含み、代表的な成熟タンパク質は、アミノ酸番号1~728によって示される。デルタタンパク質の配列は、親水性分析によってさらに解析することができる。親水性の特徴は、デルタタンパク質の疎水性および親水性領域ならびに該領域をコードする遺伝子配列の対応する領域の同定に使用できる。恐らく、親水性領域が免疫原性であると思われる。二次構造分析も、デルタの特異的二次構造と考えられる領域の同定のために行うことができる。操作、翻訳および二次構造の推定、ならびにオープンリーディングフレームの推定およびプロッティングは、当技術分野で利用できるコンピューターソフトウェアプログラムを使用して行うこともできる。構造分析の他の方法も使用できる。これらには、それらに限定されないが、X-線結晶学およびコンピューターによる模型作成が含まれる。5.5.デルタタンパク質およびその誘導体に対する抗体の生成本発明に従って、脊椎動物のデルタタンパク質、その断片、その他の誘導体、またはそれらのアナログを免疫原として使用してそのような免疫原を認識する抗体を生成することができる。そのような抗体としては、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単鎖、Fab断片およびFab発現ライブラリーが包含されるがこれらに限られるわけではない。特定の態様においてはヒトデルタに対する抗体を産生する。別の態様においてはデルタの細胞外ドメインに対する抗体を産生する。また別の態様においてはデルタの細胞内ドメインに対する抗体を産生する。デルタタンパク質または誘導体またはアナログに対するポリクローナル抗体を産生するには業界で公知の各種手法を用いることができる。特定の態様においては、図1a、1b、7または11に示す配列またはそのサブ配列によってコードされているデルタタンパク質のエピトープに対するウサギのポリクローナル抗体を得ることができる。抗体の産生には、天然のデルタタンパク質、または合成物、またはそれらの誘導体たとえば断片を注射することによって各種宿主動物、たとえばウサギ、マウス、ラットなどこれらに限られるわけではないを免疫することができる。免疫応答を高めるために、宿主の種に応じて各種のアジュバントを用いることができる。たとえば、フロイント完全および不完全、鉱物質ゲルたとえば水酸化アルミニウム、表面活性物質たとえばリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、アオガイヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびに、効力増強に有用なヒトアジュバントたとえばBCGおよびコリネバクテリウムパルブムがあるがこれらに限られるわけではない。デルタタンパク質配列またはそのアナログに対するモノクローナル抗体を調製するには、連続細胞系を培養して抗体分子を産生する技術が使用できる。たとえば、最初KohlerとMilsteinによって開発されたハイブリドーマ法、ならびにトリオーマ法、ヒトB細胞ハイブリドーマ法、およびヒトモノクローナル抗体を産生するEBV‐ハイブリドーマ法。本発明の別の態様においては、最近の技術を利用して無菌動物でモノクローナル抗体を産生することができる。本発明によると、ヒトハイブリドーマを使用することによって、またはヒトB細胞をinvitroでEBVウイルスにより形質転換することによって、ヒト抗体を使用してもよいし、また得ることができる。実際、本発明に従って、適当な生物活性をもつヒト抗体分子由来の遺伝子と共にデルタに特異的なマウス抗体分子由来の遺伝子をスプライスすることによってキメラ抗体を産生するように開発された技術を使用することができる。このような抗体は本発明の範囲内に入る。本発明によると、単鎖抗体の産生について記載された技術米国特許第4946778号を、デルタ特異的単鎖抗体の産生に適合させることができる。本発明の別の態様では、Fab発現ライブラリーの構築に関して記載された技術を利用して、デルタタンパク質、誘導体またはアナログに対する所望の特異性をもつモノクローナルFab断片の迅速で容易な同定が可能になる。分子のイディオタイプを含有する抗体断片は公知の技術によって生成することができる。そのような断片としては、たとえば、抗体分子のペプシン消化によって生成させることができるFab′2断片、このFab′2断片のジスルフィドブリッジを還元することによって生成させることができるFab′断片、およびパパインと還元剤によって抗体分子を処理することによって生成させることができるFab断片があるがこれらに限られるわけではない。抗体の産生において、所望の抗体のスクリーニングは業界で公知の技術、たとえばELISA固相酵素免疫検定法によって達成することができる。たとえば、脊椎動物のデルタタンパク質の特異的ドメインを認識する抗体を選択するためには、そのようなドメインを含有するデルタ断片に結合する生成物に対して生成したハイブリドーマを検定すればよい。ヒトデルタに対して免疫特異的な抗体を選択するには、ヒトデルタに対する陽性の結合およびキイロショウジョウバエデルタに対する結合欠如を基にして選択することができる。以上の抗体は、本発明のタンパク質配列の位置決定と活性に関して業界で公知の方法に、たとえば、これらのタンパク質のイメージング、適当な生理学的サンプル中でのそのレベルの測定、診断法、などに使用することができるたとえば、後記5.7節参照。デルタタンパク質の或るドメインに対して特異的な抗体も提供される。特定の態様ではデルタのノッチ結合性断片に結合する抗体が提供される。本発明の別の態様では後記参照、抗‐デルタ抗体およびその結合性ドメインを含有する断片が治療薬である。5.6.デルタタンパク質、誘導体およびアナログ本発明はさらに、脊椎動物たとえば哺乳動物のデルタタンパク質、ならびに脊椎動物のデルタタンパク質の誘導体たとえば断片が包含されるがこれに限定はされないおよびアナログに係る。デルタタンパク質誘導体およびタンパク質アナログをコードする核酸も提供される。ひとつの態様では、デルタタンパク質は上記5.1節に記載したデルタ核酸によってコードされている。特定の態様では、タンパク質、誘導体またはアナログはマウス、ニワトリ、ラット、ブタ、ウシ、イヌ、サルまたはヒトのデルタタンパク質のものである。特定の態様では脊椎動物の完全長成熟デルタタンパク質が提供される。ひとつの態様では、シグナル配列アミノ末端の最初の約17個のアミノ酸のみを欠く脊椎動物のデルタタンパク質が提供される。Deltaに関連する誘導体とアナログの産生と用途は本発明の範囲内である。特定の態様の場合、誘導体またはアナログは機能的に活性である。すなわち、野生型の完全長デルタタンパク質に関連する機能活性を1つ以上示すことができる。一例を挙げると、所望の免疫原性または抗原性を有するそのような誘導体やアナログは、たとえば免疫検定、免疫、デルタ活性の抑制、などに使用することができる。所望のデルタ特性、たとえばノッチその他のトポリズミックタンパク質との結合、細胞表面受容体との結合を保持または逆に抑制するそのような分子はそれぞれそのような特性およびその相関物のインデューサーまたはインヒビターとして使用することができる。ひとつの特定の態様は、抗‐デルタ抗体と結合することができるがノッチタンパク質またはその他のトポリズミックタンパク質とは結合することができないデルタ断片に関する。デルタの誘導体またはアナログの所望の活性は、限定されることはないが5.7節に記載する検定を始めとする業界で公知の手法によって試験することができる。特に、デルタ誘導体は、機能的に等価な分子を提供する置換、付加または欠失によりDelta配列を変更することによって作成することができる。ヌクレオチドコード配列の縮重のため、Delta遺伝子と実質的に同じアミノ酸配列をコードする他のDNA配列を本発明の実施の際に使用してもよい。これらの中には、配列内のアミノ酸残基と機能的に等価なアミノ酸残基をコードする異なるコドンの置換によって変更されてサイレント変異を生じているDelta遺伝子の全部または一部からなるヌクレオチド配列が包含されるがこれらに限定されることはない。同様に、本発明のデルタ誘導体には、一次アミノ酸配列として、配列内の残基が機能的に等価なアミノ酸残基で置換されてサイレント変異を生じている変更配列を含むデルタタンパク質のアミノ酸配列の全部または一部を含有するものが包含されるがこれらに限られることはない。たとえば、配列内のアミノ酸残基の1つ以上を、機能的に等価な作用をする類似の極性をもった別のアミノ酸で置換してサイレント変異を生じさせることができる。配列内のアミノ酸の置換はそのアミノ酸が属するクラスの他の一員の中から選択すればよい。たとえば、非極性疎水性アミノ酸にはアラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが含まれる。極性の中性アミノ酸にはグリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンが含まれる。正に帯電した塩基性アミノ酸にはアルギニン、リシンおよびヒスチジンが含まれる。負に帯電した酸性アミノ酸にはアスパラギン酸とグルタミン酸が含まれる。本発明の特定の態様では、デルタタンパク質の少なくとも10個の連続するアミノ酸で構成される脊椎動物デルタタンパク質の断片で構成されるかまたはこれを含むタンパク質が提供される。他の態様では、デルタタンパク質の少なくとも20個または50個のアミノ酸で構成される断片が提供される。特定の態様ではそのような断片が35個、100個または200個までのアミノ酸である。デルタの誘導体またはアナログとしては、脊椎動物のデルタタンパク質またはその断片と実質的に相同であるペプチドたとえば、同じサイズのアミノ酸配列と比べてその少なくとも30、50、70または90が同一のもの、たとえば、あるドメインを含むもの、またはDeltaコード配列とハイブリダイズすることができるコード核酸をもつペプチドが包含されるがこれらに限定されることはない。本発明のデルタ誘導体およびアナログは業界で公知のさまざまな方法によって生成することができる。その生成に至る操作は遺伝子レベルまたはタンパク質レベルで実施することができる。たとえば、クローン化したDelta遺伝子配列は、業界で公知の多くの方法のいずれかによって修飾することができる。前記配列は、適当な部位で1種以上の制限エンドヌクレアーゼによって開裂した後所望の場合にはさらに酵素修飾し、単離し、invitroで連結することができる。デルタの誘導体またはアナログをコードする遺伝子を生成する際には、そのようにして修飾された遺伝子がデルタと同じ翻訳リーディングフレーム内にあり、所望のデルタ活性がコードされている遺伝子領域内で翻訳終結シグナルによって中断されないように注意しなければならない。さらに、デルタをコードしている核酸配列をinvitroまたはinvivoで突然変異させて、翻訳配列、開始配列および/または終結配列を創製および/または破壊したり、またはコード領域において変異を起こさせたり、および/または新たな制限エンドヌクレアーゼ部位を形成するかもしくはすでに存在していたものを破壊したりして、さらなるinvitro修飾を容易にすることができる。限定するわけではないがinvitro位置指定突然変異誘発、TAB登録商標リンカーの利用、などを始めとして業界で公知のいかなる突然変異誘発法も用いることができる。変化した配列を含有するPCRプライマーをPCRに用いて、増幅される断片中にそのような変化を導入することができる。デルタ配列の操作はまたタンパク質レベルで行なうこともできる。本発明の範囲内に包含されるものとして、翻訳中またはその後、たとえばグリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基/ブロック基による誘導体化タンパク質分解酵素による開裂、抗体分子その他の細胞性リガンドとの結合、などによって、さまざまに修飾されたデルタタンパク質断片またはその他の誘導体もしくはアナログがある。限定するわけではないが臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、V8プロテアーゼ、NaBH4による特異的化学開裂、アセチル化、ホルミル化、酸化、還元、ツニカマイシンの存在下での代謝合成、などを始めとする多くの化学修飾のいずれも公知の技術によって実施することができる。さらに、デルタのアナログおよび誘導体は化学的に合成することができる。たとえば、所望のドメインを含む5.6.1節参照か、またはinvitroにおける所望の凝集活性もしくは受容体との結合を媒介するデルタタンパク質の一部に相当するペプチドを、ペプチドシンセサイザーを使用して合成することができる。さらに、所望であれば、非古典的なアミノ酸または化学的アミノ酸アナログを置換または付加としてデルタ配列中に導入することができる。非古典的なアミノ酸としては、通常のアミノ酸のD‐異性体、α‐アミノイソ酪酸、4‐アミノ酪酸、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、t‐ブチルグリシン、t‐ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β‐アラニン、設計用アミノ酸、たとえばβ‐メチルアミノ酸、Cα‐メチルアミノ酸、およびNα‐メチルアミノ酸が包含されるがこれらに限定されるわけではない。特定の態様の場合、デルタ誘導体は、脊椎動物のデルタタンパク質またはその断片好ましくは、デルタタンパク質の少なくともひとつのあるドメインもしくは一部、またはデルタタンパク質の少なくとも10個のアミノ酸が、そのアミノまたはカルボキシ末端においてペプチド結合を介して別のタンパク質のアミノ酸配列と結合したキメラタンパク質すなわち融合タンパク質である。ひとつの態様の場合、そのようなキメラタンパク質は、そのタンパク質をコードする別のタンパク質のコード配列と同じフレーム内で結合したデルタコード配列からなる核酸の組換え発現によって産生される。そのようなキメラ生成物は、業界で公知の方法によって所望のアミノ酸配列をコードする適当な核酸配列を適正なコードフレームで互いに連結し、業界で周知の方法によってそのキメラ生成物を発現させることにより作成できる。あるいはまた、そのようなキメラ生成物はタンパク質合成技術によって、たとえばペプチドシンセサイザーを用いて作成できる。特定の態様では、異種シグナル配列と共に成熟デルタタンパク質をコードするキメラ核酸を発現させて、そのキメラタンパク質が細胞によって発現され成熟デルタタンパク質にプロセッシングされるようにする。限定するわけではないが別の一例では、Delta遺伝子と別のトポリズミック遺伝子との両方のコード部分を含む組換え分子を本発明に従って構築することができる。そのような組換え分子にコードされているタンパク質はセレートとデルタの両方に関連する特性を発揮し、アゴニストとアンタゴニストを含めて新規なプロフィールの生物学的活性を示すことができるであろう。またデルタとセレートの一次配列を用いて、コンピューターシミュレーションによってその分子の三次構造を予想することもでき、DeltaSerrateキメラ組換え遺伝子は三次構造と生物学的機能との相関を考慮に入れて設計することができよう。同様に、任意の異種タンパク質コード配列と融合したDeltaの部分を含むキメラ遺伝子を構築することができる。ひとつの特定の態様はデルタの少なくとも6個のアミノ酸の断片を含むキメラタンパク質に関する。別の特定の態様の場合、デルタ誘導体は、別のトポリズミックタンパク質と相同の領域を含む脊椎動物のデルタの断片である。本明細書で使用する場合、第一のタンパク質の領域は、その領域内に含まれるアミノ酸の数と等しい数のアミノ酸をもつ第二のタンパク質内の任意の配列と比較した場合、その領域のアミノ酸配列が少なくとも30同一であるかまたは少なくとも70が同一であるかもしくは保存性の変化を含んでいるとき、第二のタンパク質と相同であると考えることとする。たとえば、そのようなデルタ断片は、限定するわけではないがDSLドメインまたはその一部を含めて、セレートと相同な領域を1つ以上含んでいることができる。誘導体およびアナログの他の特定の具体例は以下の小節および後記実施例で記載する。5.6.1.本タンパク質の1以上のドメインを含有するデルタ誘導体ひとつの特定の態様において、本発明は、限定することはないがたとえば細胞外ドメイン、シグナル配列、DSLドメインのアミノ末端領域、DSLドメイン、ELRドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメイン、およびデルタタンパク質の1以上のEGF様反復ドメインELRたとえば、ELR1~9、またはこれらの任意の組合せを始めとするデルタタンパク質の1以上のドメインを含むかあるいはそれで構成される脊椎動物のデルタ誘導体およびアナログ、特にデルタの断片およびそのような断片の誘導体に係る。ニワトリおよびマウスのデルタタンパク質に関する特定の例の場合、そのようなドメインはそれぞれ後記実施例6および7ならびに図3および9で同定する。すなわち、例として、脊椎動物デルタの細胞外ドメインアミノ酸約1~545、シグナル配列アミノ酸約1~17、DSLドメインのアミノ末端領域アミノ酸約1~178、DSLドメインアミノ酸約179~223、EGF1アミノ酸約229~260、EGF2アミノ酸約261~292、EGF3アミノ酸約293~332、EGF4アミノ酸約333~370、EGF5アミノ酸約371~409、EGF6アミノ酸約410~447、EGF7アミノ酸約448~485、EGF8アミノ酸約486~523、膜貫通ドメインおよび細胞内細胞質ドメインアミノ酸約555~728からなる分子が提供される。特定の態様の場合、脊椎動物のデルタの特定の断片を含む分子は、それぞれのデルタタンパク質の中でキイロショウジョウバエまたはニワトリのデルタタンパク質の特定の断片と最も相同である断片を含むものである。特定の具体例の場合そのような分子は配列番号2または16のアミノ酸配列を含むかまたはその配列で構成される。あるいはまた、デルタ相同体のドメインを含む断片は5.3.2節に記載したタンパク質解析法によって同定することができる。5.6.2.トポリズミックタンパク質ドメインとの結合を媒介するデルタの誘導体本発明はまた、トポリズミックタンパク質との結合を媒介するしたがって本明細書では接着性と名付ける脊椎動物のデルタ断片およびそのような断片のアナログまたは誘導体ならびにそれをコードする核酸配列も提供する。ひとつの特定の態様の場合デルタタンパク質の接着性断片はDSLドメインまたはその一部からなる。DSLドメイン内で、ノッチとの結合を媒介するサブ断片は欠失突然変異体を発現する構築物の解析によって同定することができる。トポリズミックタンパク質好ましくはノッチと結合する能力は、そのようなトポリズミックタンパク質を発現する細胞およびデルタまたはデルタ誘導体を発現する細胞を用いるinvitro凝集検定によって立証することができる5.7節参照。すなわち、デルタ断片がノッチタンパク質と結合する能力は、第一の細胞の表面上で発現した場合のデルタ断片が、第二の細胞の表面上で発現したノッチタンパク質と結合する能力を検出することによって立証することができる。そのような検定に使用する、局所周期性タンパク質またはその接着性ドメインをコードする核酸配列は、ヒト、ブタ、ウシ、ネコ、トリ、ウマ、イヌまたは昆虫ならびに霊長類および公知のトポリズミック遺伝子のホモログが同定され得るその他の任意の種から単離することができる。5.7.デルタタンパク質、誘導体およびアナログの検定脊椎動物のデルタタンパク質、誘導体およびアナログの機能活性は各種方法によって検定することができる。たとえば、ひとつの態様において、抗‐デルタ抗体に結合する能力またはその抗体との結合に関して野生型デルタと競合する能力を検定する場合、業界で公知の各種免疫検定法を使用することができる。たとえば、放射線免疫検定法、ELISA固相酵素免疫検定法、サンドイッチ免疫検定法、イムノラジオメトリックアッセイ、ゲル核酸沈降反応、免疫核酸検定法、たとえば金コロイド、酵素または放射性同位体標識を用いるinsitu免疫検定法、ウェスタンブロット、沈降反応、凝集検定法たとえばゲル凝集検定法、赤血球凝集検定法、補体結合検定法、免疫蛍光検定法、プロテインAアッセイ、および免疫電気泳動検定法、などのような技術を用いる競合および非競合検定系があるがこれらに限定されることはない。ひとつの態様では、一次抗体の標識を検出することによって抗体結合を検出する。別の態様では、二次抗体または試薬と一次抗体の結合を検出することによって一次抗体を検出する。さらに別の態様では二次抗体を標識する。免疫検定法で結合を検出するための多くの方法が業界で知られており、本発明の範囲内である。別の態様において、トポリズミックタンパク質たとえばノッチとの結合を媒介する能力を検定しようとする場合、invitro凝集検定法を実施することができる。デルタに対する受容体を同定する別の態様では、たとえば業界で周知の手段によって受容体の結合を検定することができる。別の態様では、デルタの結合とデルタ受容体を発現する細胞との生理学的相関シグナル伝達を検定することができる。別の態様では、昆虫やその他のモデル系において、遺伝子研究によって、野生型Deltaの誘導体またはアナログであるデルタ突然変異の表現型上の効果を研究することができる。その他の方法も当業者には知られており、本発明の範囲内である。5.8.治療用途本発明は、本発明の治療用化合物を投与することによって細胞の運命または分化の障害を処置する方法を提供する。このような治療用化合物本明細書中では治療薬とするとしては、デルタタンパク質ならびにそのアナログおよび誘導体たとえば断片たとえば、上記したようなもの、それに対する抗体上記したようなもの、デルタタンパク質、アナログまたは誘導体たとえば上記したようなものをコードする核酸、ならびにDeltaアンチセンス核酸がある。上に述べたように、本発明のアンタゴニスト治療薬は、デルタ機能および/またはデルタはノッチリガンドであるのでノッチ機能と拮抗するかまたはこれを抑制する治療薬である。そのようなアンタゴニスト治療薬は、たとえばデルタと別のタンパク質たとえばノッチタンパク質との結合を抑制する当該薬の能力または好ましくはinvitroでもしくは細胞培養で検定されるように公知のノッチまたはデルタ機能を抑制する当該薬の能力に基づいた公知の簡便なinvitro検定法を用いて同定するのが最も好ましい。もっとも、遺伝子検定法たとえば、キイロショウジョウバエの場合も使用することができる。好ましい態様の場合、アンタゴニスト治療薬は、ノッチとの結合を媒介するデルタの断片のような機能的に活性な断片を含むタンパク質もしくはその誘導体またはそれに対する抗体である。他の特定の態様では、そのようなアンタゴニスト治療薬がノッチに結合するデルタの断片を含む分子を発現することができる核酸またはDeltaアンチセンス核酸である5.11節参照。好ましくは、特定の治療薬の効果を測定し、かつその投与が冒された組織の処置にとって必要であるかどうかを決定するには、後述する適切なinvitroまたはinvivo検定法を用いるべきであることに留意されたい。その理由は、冒された組織の発生履歴はあるアンタゴニストまたはアゴニスト治療薬が望まれるかどうかを決定し得るからである。また、デルタタンパク質または誘導体の投与様式、たとえば、可溶性形態で投与するのか、または細胞内組換え発現用にそれをコードしている核酸を介して投与するのかは、それがアゴニストとして作用するのかまたはアンタゴニストとして作用するのかに影響し得る。本発明の別の態様においては、Delta遺伝子の一部を含有する核酸をアンタゴニスト治療薬として用いて相同組換えによるDelta不活化を促進する。本発明のアゴニスト治療薬は上記したようにデルタ機能を促進する。そのようなアゴニスト治療薬としては、デルタとの結合を媒介するノッチの一部を含むタンパク質および誘導体ならびにそれをコードする核酸これはそれがコードしている産物をinvivoで発現するように投与することができるが包含されるがこれらに限られるわけではない。本発明の治療薬の詳細な説明と起源は本明細書中の5.1~5.7節に記載した。所望のデルタ特性、たとえばノッチとの結合、細胞内リガンドとの結合を保持するかまたは抑制する分子は、それぞれそのような特性およびその生理学的関連物のインデューサーまたはインヒビターとして治療上使用することができる。特定の態様においては、デルタのノッチと結合する部分の配列を含有するペプチドたとえば、6~50または15~25アミノ酸の範囲、特に約10、15、20または25のアミノ酸を用いてノッチ機能に拮抗させる。ひとつの特定の態様の場合、そのようなアンタゴニスト治療薬を用いて、ノッチ発現の増大に関連するヒトまたはその他の悪性腫瘍たとえば、頸管癌、結腸癌、乳癌、扁平腺癌後述を処置または予防する。デルタの誘導体またはアナログの望ましい活性は、限定されることはないが後述の実施例に記載する検定法を始めとする業界で公知の手法によって試験することができる。たとえば、ノッチEGF‐反復ドメインELR11および12に結合しDSLドメインより小さいデルタ断片を含む分子は、欠失突然変異体を発現させその発現産物とノッチとの結合をいくつかの方法たとえばinvitro細胞凝集検定法、相互作用捕獲系。これらのうちのいくつかは後述の実施例で記載するのいずれかで検定することによって取得し選択することができる。ひとつの特定の態様においては、ペプチドライブラリーをスクリーニングして所望の活性をもつペプチドを選択することができる。そのようなスクリーニングは、たとえばノッチまたはノッチのELR11および12反復ドメインを含有する分子との結合に関して検定することによって実施することができる。他の治療薬としては脊椎動物のデルタタンパク質と結合する分子がある。したがって、本発明はそのような分子を同定する方法も提供する。そのような分子は、複数の分子たとえば、ペプチドライブラリー、または組合せ化学ライブラリーのものを、結合を促進する条件下でデルタタンパク質と接触させ、デルタタンパク質と結合する分子を回収することからなる方法によって同定することができる。本発明のアゴニストおよびアンタゴニスト治療薬は細胞宿命の障害に対して治療上有用である。アゴニスト治療薬は、1ノッチまたはデルタ機能の欠如またはレベル低下正常または望ましいレベルとの比較が関与する疾患または障害において、たとえば、ノッチまたはデルタタンパク質が欠如しているか、遺伝的に欠損しているか、生物学的に不活性もしくは活性不全であるか、または発現不足である患者に、また2invitroまたはinvivo検定後述によりデルタアゴニストの投与が有用であることが示された疾患または障害において、治療的予防を含むに投与する。このノッチまたはデルタ機能の欠如またはレベル低下は、たとえば、患者の組織サンプルたとえば生検組織由来を得、その発現したノッチまたはデルタタンパク質のタンパク質レベル、構造および/または活性をinvitroで検定することによって容易に検出することができる。すなわち、業界で標準的な多くの方法を使用することができる。たとえば、免疫検定法によりノッチまたはデルタタンパク質を検出および/または可視化するたとえば、ウェスタンブロット、免疫沈降とそれに続くドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動、免疫組織化学、などか、かつ/またはハイブリダイゼーションアッセイによりノッチまたはデルタのmRNAを検出および/または可視化することによってそれぞれノッチまたはデルタの発現を検出するたとえば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、insituハイブリダイゼーション、などことができるが、これらに限定されることはない。特定のアゴニスト治療薬またはアンタゴニスト治療薬の投与が指示されるかどうかを決定するのに使用することができるinvitro検定法としては、患者の組織サンプルを培養して増殖させ、治療薬に暴露するかまたは他の方法でこれを投与し、そのような治療薬の組織サンプルに対する効果を観察するというinvitro細胞培養検定法がある。患者が悪性腫瘍であるひとつの態様の場合、そのような悪性腫瘍からの細胞のサンプルを平板培養または培養増殖した後その細胞を治療薬に暴露する。たとえば、末端分化を促進することによって悪性細胞の生存または増殖を抑制する治療薬をinvivoの治療用として選択する。そのような生存および/または増殖を評価するには業界で標準的な多くの検定法を使用することができる。たとえば、細胞増殖は3H‐チミジンの取込みを測定することによって、直接の細胞計数によって、原癌遺伝子たとえばfos、mycのような公知の遺伝子または細胞周期マーカーの転写活性の変化を検出することによって検定することができる。また、細胞生存度はトリパンブルー染色によって評価することができ、分化は細胞形態の変化に基づいて目視により評価することができる。特定の局面においては、悪性培養細胞を1アゴニスト治療薬および2アンタゴニスト治療薬に別々に暴露する。検定結果により、どちらの治療薬が治療効果をもっているかどうか指示することができる。別の態様の場合、増殖過多または増殖過少障害を有しているかまたは有すると疑われる組織から得た患者の細胞サンプルに対して所望の効果、すなわちそれぞれ細胞増殖の抑制または促進効果を示す治療薬を使用することが指示される。そのような増殖過多または増殖過少障害としては後記5.8.1~5.8.3節に記載するものがあるがこれらに限られることはない。別の特定の態様の場合、冒された患者タイプの神経細胞からの神経再生/軸索伸長のinvitro促進を示す治療薬を、神経損傷または神経系変性障害5.8.2節参照の処置に使用することが指示される。さらに、本発明のアンタゴニスト治療薬はまた、ノッチまたはデルタ優性活性化表現型機能の獲得突然変異が関与することが決定されているかまたは知られている疾患または障害にも投与することが指示される。ノッチまたはデルタ優性陰性表現型機能の損失突然変異が関与することが決定されているかまたは知られている疾患または障害にアゴニスト治療薬を投与することが指示される。ノッチタンパク質の各種構造ドメインの機能は、hsp70熱ショックプロモーターならびに眼に特異的なプロモーターの下で一連のキイロショウジョウバエNotch欠失突然変異を異所発現させることによってinvivoで検討されているRebayetal,1993,Cell74319329参照。2種類の優性表現型が観察された。1つはNotch機能損失突然変異を示唆しており、他の1つはNotch機能獲得突然変異を示唆している。優性活性化表現型はほとんどの細胞外配列を欠くタンパク質の発現過多の結果であり、優性陰性表現型はほとんどの細胞内配列を欠くタンパク質の発現過多の結果であった。これらの結果は、ノッチが受容体この受容体の細胞外ドメインはリガンド結合を媒介するとして機能し、細胞質ドメインによって発生シグナルが伝達されることを示している。各種の特定具体例において、患者の障害に関与する細胞型の代表的な細胞を用いてinvitro検定を実施して、ある治療薬がそのような細胞型に対して所望の効果を有するのか否か決定することができる。別の態様においては、新生物発生前であることが疑われる患者の組織サンプルの細胞を同様に平板培養またはinvitroで増殖させ、治療薬に暴露する。より正常なすなわち、新生物発生の状態、腫瘍状態、悪性状態、または形質転換表現型の典型ではない細胞表現型を生じる治療薬を治療用に選択する。新生物発生前状態、腫瘍状態、または形質転換もしくは悪性表現型が存在するかどうか評価するには業界で標準的な多くの検定法を使用することができる。たとえば、形質転換表現型に関連する特性invivo腫瘍形成能力と関連した一組のinvitro特性としては、より丸くなった細胞形態、より緩い基層付着、接触阻害の損失、足場依存性の損失、プラスミノーゲンアクチベーターのようなプロテアーゼの放出、糖輸送の増大、血清要求性の低下、胎児抗原の発現、250000ダルトンの表面タンパク質の消失、などがあるLuriaetal,1978,GeneralVirology,3dEd,JohnWileySons,NewYorkpp.436446参照。他の特定の態様においては、本発明に従って、処置すべき特定の患者に由来する細胞サンプルではなく、処置または予防するのが望まれる悪性、腫瘍または腫瘍発現前の障害に由来する細胞系またはそのような障害に関連する1つ以上の特性を示す細胞系、または効果が望まれる神経その他の細胞型に由来する細胞系を用いて上記したinvitro検定を実施することができる。アンタゴニスト治療薬は、1正常または望ましいレベルと比較して増大したレベルのノッチまたはデルタ機能が関与する疾患または障害において、たとえば、ノッチまたはデルタタンパク質が発現過多であるかまたは活性過多である場合に、また2invitroまたはinvivo検定によりデルタアンタゴニストの投与が有用であることが示された疾患または障害において、治療的予防を含むに投与する。このノッチまたはデルタ機能の増大したレベルは、上記したような方法によって、タンパク質および/またはRNAを定量することによって、容易に検出することができる。治療の有用性を決定するために患者の組織サンプルの細胞または適当な細胞系もしくは細胞型を用いてするinvitro検定は上記したように実施することができる。5.8.1.悪性腫瘍上記したようにアンタゴニストまたはアゴニスト治療薬の効力を試験することができ、またそのようにして治療の有用性が観察されたら処置することができる悪性および前新生物状態としては、5.8.1および5.9.1節において下記するものが包含されるがこれらに限定されることはない。その細胞をinvitroおよび/またはinvivoで試験することができ、適当な検定結果を観察したら本発明に従って処置することができる悪性腫瘍および関連する障害には、表1に掲げるものがあるがこれらに限られることはないそのような障害の概論としては、Fishmanetal,1985,Medicine,2dEd,JB.LippincottCo,Philadelphiaを参照されたい。特定の態様においては、頸、食道および肺の上皮組織のような上皮組織の悪性腫瘍または悪性増殖変化化生および異形成などを処置または予防する。結腸および頸部の悪性腫瘍ではヒトノッチの発現がこれらの悪性でない組織と比べて増大している1994年4月14日に公開されたPCT公開第WO9407474号引用によりその全体が本明細書に含まれているものとする参照。したがって、特定の態様においては、ノッチ機能と拮抗するアンタゴニスト治療薬たとえばデルタ誘導体を有効量投与することによって結腸または頸部の悪性腫瘍または前悪性変化を処置または予防する。結腸癌や頸管癌でノッチの発現が増大していることは、もっとたくさんの癌性および増殖過多状態がアップレギュレートされたノッチを示すことを示唆している。したがって、特定の態様では、各種癌、たとえば、乳癌、扁平腺癌、セミノーム精上皮腫、黒色腫メラノーマおよび肺癌、ならびにそれらの前悪性変化、さらには他の増殖過多障害を、ノッチ機能と拮抗するアンタゴニスト治療薬の投与によって処置または予防することができる。5.8.2.神経系障害上記したようにアンタゴニストまたはアゴニスト治療薬の効力を試験することができ、またそのようにして治療の有用性が観察されたら処置することができる細胞型を含む神経系の障害としては、神経系の損傷、ならびに軸索の遮断、ニューロンの減退もしくは退化、または脱髄に至る疾患または障害が包含されるがこれらに限定されることはない。本発明に従ってヒトおよびヒト以外の哺乳類の患者を含めて患者において処置できる神経系の損傷としては、中枢神経系脊髄、脳を含むまたは抹消神経系の以下の損傷が包含されるがこれらに限定されることはない。i物理的損傷によって生じるかまたは外科に伴なう損傷を始めとする外傷、たとえば、神経系の一部を切断する損傷、または圧迫損傷、ii神経系の一部における酸素の欠乏によってニューロンの損傷または壊死に至る虚血性損傷、たとえば、脳の梗塞もしくは虚血、または脊髄の梗塞もしくは虚血、iii神経系に関連した悪性または神経系組織以外に由来する悪性である悪性組織によって神経系の一部が破壊または損傷される悪性損傷、iv感染の結果、たとえば、膿瘍によって、またはヒト免疫不全ウィルス、帯状ヘルペスもしくは単純ヘルペスウィルスによる感染に伴なって、またはライム病、結核、梅毒に伴なって、神経系の一部が破壊または損傷される感染性損傷、vパーキンソン病、アルツハイマー症、ハンチントン舞踏病または筋萎縮性側索硬化症に伴なう退化を始めとする以上のものに限定されるわけではない退化性過程の結果として神経系の一部が破壊または損傷される退化性損傷、viビタミンB12欠乏症、葉酸欠乏症、ヴェルニッケ病、たばこ‐アルコール性弱視、マルキャファーバビギャミ病脳梁の一次退化、およびアルコール性小脳変性を始めとするただし、これらに限定されることはない代謝の栄養的障害または障害によって神経系の一部が破壊または損傷される栄養上の疾患または障害に伴なう損傷、vii糖尿病糖尿病性神経障害、ベル麻痺、全身性エリテマトーデス、癌腫またはサルコイド症を始めとするただし限定されない全身病に伴なう神経損傷、viiiアルコール、鉛、または特定の神経毒を始めとする毒性物質によって引き起こされる損傷、ix多発性硬化症、ヒト免疫不全ウィルス関連脊髄障害、横断性脊髄症または各種の病因、進行性多病巣性白質エンセファロパシー、および中心性橋脱髄症を始めとするただし限定はされない脱髄性の疾患によって神経系の一部が破壊または損傷される脱髄性損傷。本発明に従って神経系の障害を処置するのに有用な治療薬はニューロンの生存または分化を促進する生物活性を試験することによって選択できる5.8節も参照のこと。たとえば、限定するわけではないが、次のような効果を有する治療薬が本発明で有用であろう。i培養におけるニューロンの生存時間の延長、ii培養またはinvivoにおけるニューロンの発芽の増大、iii培養またはinvivoにおけるニューロン関連分子、たとえば運動ニューロンに関するコリンアセチルトランスフェラーゼまたはアセチルコリンエステラーゼの産生の増大、またはivinvivoにおけるニューロンの機能不全の症状の低減。このような効果は業界で公知のいかなる方法でも測定できる。好ましい非限定具体例の場合、ニューロンの生存増大はArakawaらにより記載された方法で測定することができ、ニューロンの発芽の増大はPestronkらにより、またはBrownらにより記載された方法で検出でき、ニューロン関連分子の産生増大は測定すべき分子に応じて生物検定、酵素検定、抗体結合、ノーザンブロットアッセイなどによって測定でき、そして運動ニューロンの機能不全は運動ニューロンの障害の物理的表示、たとえば弱さ、運動ニューロンの伝達速度、または機能欠損を評価することによって測定することができる。特定の態様の場合、本発明に従って処置できる運動ニューロンの障害としては、運動ニューロンおよび神経系の他の成分に影響を与え得る梗塞、感染、毒素に対する暴露、外傷、外科的損傷、退化症または悪性のような障害ならびにニューロンに選択的に影響を与える筋萎縮性側索硬化症のような障害が包含されるがこれに限定されることはない。たとえば、進行性脊髄性筋萎縮症、進行性球麻痺、一次側索硬化症、乳児性および若年性筋萎縮症、小児の進行性球麻痺FazioLonde症候群、ポリオおよびポリオ後症候群、ならびに遺伝性運動感覚性神経障害シャルコーマリーツース病があるがこれらに限られることはない。5.8.3.組織の修復と再生本発明の別の態様においては、本発明の治療薬を組織の再生と修復の促進に使用する。たとえば、良性の異常増殖障害の処置が挙げられるがこれに限られることはない。特定の態様は、肝臓の硬変瘢痕形成が正常な肝臓再生過程を追越した状態の処置、ケロイド肥大性の瘢痕形成瘢痕形成過程が正常な再生を妨げている皮膚の醜悪化、乾癬皮膚の過剰増殖と適正な細胞宿命決定の遅延を特徴とする通常の皮膚の状態、および禿頭最終的に分化した毛包ノッチに富む組織が適切に機能していない状態の処置に関する。別の態様では、本発明の治療薬を内耳の感覚上皮の退化性または外傷性の障害を処置するのに使用する。5.9.予防用途5.9.1.悪性腫瘍本発明の治療薬を投与することにより、表1に掲げた障害を始めとするしかし限定されることはない新生物または悪性状態への進行を予防することができる。そのような投与は、その治療薬が上記した検定において前記のような障害の処置または予防に有用であることが示された場合に指示される。このような予防用途は、新生物または癌に進行することが知られているかまたは疑われる条件で、特に、過形成、化生、または最も特定的には異形成から成る非新生物細胞増殖が起こっている場合に指示されるものであるこのような異常増殖条件の概論についてはRobbinsandAngell,1976,BasicPathology,2dEd,WB.SaundersCo,Philadelphia,pp.6879を参照されたい。過形成は、構造または機能を大きく変えることなく、ある組織または器官において細胞数を増大させる調節された細胞増殖のひとつの形態である。一例として、子宮内膜過形成は子宮内膜癌に先行することが多い。化生異形成は、あるタイプの成体または充分に分化した細胞が別のタイプの成体細胞の替わりとなる調節された細胞増殖のひとつの形態である。化生異形成は上皮または結合組織細胞で起こり得る。典型的でない化生異形成には多少乱れた化生上皮が関与する。異形成はしばしば癌の前兆であり、主に上皮で見られる。異形成は、個々の細胞一様性および細胞の構成的配向に損失がある非新生物細胞増殖の最も乱れた形態である。異形成細胞は異常に大きく深く染色した核をもっていることが多く、多形性を示す。異形成は、慢性過敏状態または炎症が存在する場合に特徴的に起こり、頸管、呼吸路、口腔および胆嚢で見られることが多い。あるいは、または、過形成、化生もしくは異形成として特徴付けられる異常な細胞増殖の存在に加えて、患者から得た細胞サンプルがinvivoで示すかまたはinvitroで示す形質転換表現型または悪性表現型の1つ異常な特徴が存在することは、本発明の治療薬の予防的/治療的投与の望ましさを示し得る。上記したように、形質転換表現型のそのような特徴としては、形態変化、より緩い基層付着、接触阻害の損失、足場依存性の損失、プロテアーゼの放出、糖輸送の増大、血清要求性の低下、胎児抗原の発現、250000ダルトンの細胞表面タンパク質の消失、などがある形質転換または悪性表現型に伴なう特性に関しては前記文献の84~90頁も参照されたい。特定の態様において、白斑症、上皮の良性に出現する過形成もしくは異形成損傷、またはボウエン病、insitu癌腫は予防的介入の望ましいことを示す腫瘍発現前の損傷である。別の態様においては、線維嚢胞症嚢胞性過形成、乳房異形成、特に腺疾患良性上皮過形成が予防的介入の望ましいことを示す。他の態様においては、悪性に対する以下の素質的要因の1つ以上を示す患者を有効量の治療薬の投与によって処置する。悪性に伴なう染色体転座たとえば、慢性骨髄性白血病に対するフィラデルフィア染色体、毛包性リンパ腫に対するt14;18、など、家族性ポリープ症もしくはガードナー症候群結腸癌の可能な前兆、良性のモノクローナルγグロブリン異常多発性骨髄腫の可能な前兆、ならびにメンデルの遺伝遺伝パターンを示す癌または前癌疾患たとえば、結腸の家族性ポリープ症、ガードナー症候群、遺伝性外骨症、多内分泌腺腫症、アミロイドを産生する髄様甲状腺癌および褐色細胞腫、ポッツ‐ジェガース症候群、フォンレックリングハウゼンの神経線維腫症、網膜芽腫、頸動脈小体腫瘍、皮膚黒色癌、眼内黒色癌、色素性乾皮症、毛細管拡張性運動失調、チェディアック‐東症候群、白子症、ファンコニ無形成貧血、およびブルーム症候群。RobinsandAngell,1976,BasicPathology,2dEd,WB.SaundersCo,Philadelphia,pp.112113参照などをもつ人との第一級の血族関係。別の特定の態様においては、本発明のアンタゴニスト治療薬をヒトの患者に投与して乳癌、結腸癌または頸管癌への進行を予防する。5.9.2.他の障害他の態様においては、本発明の治療薬を投与して、5.8.2節に記載した神経系の障害または5.8.3節に記載した他の障害たとえば、肝硬変、乾癬、ケロイド、禿頭を予防することができる。5.10.治療または予防上の有用性の立証本発明の治療薬の所望の治療または予防活性はinvivoで試験することができる。たとえば、そのような化合物は、ヒトに試験する前に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなどを始めとするただしこれらに限られるわけではない適切な動物モデル系で試験することができる。ヒトに投与する前のinvivoの試験には業界で公知のいかなる動物モデル系も使用できる。5.11.Delta発現のアンチセンス調節本発明は、デルタまたはその一部をコードする遺伝子またはcDNAに対してアンチセンスである少なくとも6個のヌクレオチドの核酸の治療または予防上の用途を提供する。本明細書中でアンチセンスとは、なんらかの配列相補性によってDeltaRNA好ましくはmRNAの一部とハイブリダイズすることができる核酸を指す。そのようなアンチセンス核酸は本発明のアンタゴニスト治療薬として有用であり、前記5.8節およびそれに続く小節に記載したような障害の処置または予防に使用することができる。本発明のアンチセンス核酸は二本鎖または一本鎖のオリゴヌクレオチド、RNAもしくはDNAまたはこれらの修飾体もしくは誘導体であることができ、これらは直接細胞に投与することができるし、あるいは外来の導入された配列の転写によって細胞内で産生することができる。ひとつの特定の態様の場合、本発明によって提供されるDeltaアンチセンス核酸は、その細胞がDelta遺伝子またはNotch遺伝子を発現することをinvitroまたはinvivoで立証することができる腫瘍その他の障害の処置に使用することができる。そのような立証はRNAまたはタンパク質の検出で行なうことができる。本発明はさらに、5.12節で後述するように製剤上許容可能な担体中に有効量の本発明のDeltaアンチセンス核酸を含む薬剤組成物を提供する。また、本発明の薬剤組成物を投与することからなる、5.8および5.9節に記載したような障害を処置および予防する方法も提供される。別の態様において、本発明は原核生物または真核生物の細胞中におけるDelta核酸配列の発現を抑制する方法に関しており、この方法は本発明のアンチセンスDelta核酸を含む組成物を有効量細胞に与えることからなる。Deltaアンチセンス核酸とその用途は以下に詳細に記載する。5.11.1.Deltaアンチセンス核酸Deltaアンチセンス核酸はヌクレオチドが少なくとも6個のものであり、オリゴヌクレオチド6~約50個の範囲のオリゴヌクレオチドであるのが好ましい。特定の態様の場合、オリゴヌクレオチドは少なくとも10個のヌクレオチド、少なくとも15個のヌクレオチド、少なくとも100個のヌクレオチド、または少なくとも200個のヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドはDNAもしくはRNAまたはそれらのキメラ混合物もしくは誘導体もしくは修飾体であり得り、一本鎖または二本鎖であり得る。このオリゴヌクレオチドはその塩基部分、糖部分またはリン酸基骨格で修飾することができる。またこのオリゴヌクレオチドはペプチド、または細胞膜を通過する輸送を容易にするものたとえば、Letsingeretal,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.8665536556Lemaitreetal,1987,Proc.Natl.Acad.Sci.846486521988年12月15日に公開されたPCT公開第8809810号参照、または血液脳関門たとえば、1988年4月25日に公開されたPCT公開第8910134号参照、ハイブリダイゼーションで誘発される開裂剤たとえば、Kroletal,1988,BioTechniques6958976参照、またはインターカレート剤たとえば、Zon,1988,Pharm.Res.5539549参照のような他の付随する基を含んでいてもよい。本発明の好ましい態様では、好ましくは一本鎖DNAからなるDeltaアンチセンスオリゴヌクレオチドが提供される。最も好ましい態様の場合、そのようなオリゴヌクレオチドは、デルタ、最も好ましくはヒトデルタのSH3結合ドメインまたはノッチ結合ドメインをコードする配列とアンチセンスの配列からなる。このオリゴヌクレオチドはその構造上の任意の位置において業界で一般に知られている置換基により修飾されていてもよい。デルタアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5‐フルオロウラシル、5‐ブロモウラシル、5‐クロロウラシル、5‐ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、4‐アセチルシトシン、5‐カルボキシヒドロキシルメチルウラシル、5‐カルボキシメチルアミノメチル‐2‐チオウリジン、5‐カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β‐D‐ガラクトシルキューオシン、イノシン、N6‐イソペンテニルアデニン、1‐メチルグアニン、1‐メチルイノシン、2,2‐ジメチルグアニン、2‐メチルアデニン、2‐メチルグアニン、3‐メチルシトシン、5‐メチルシトシン、N6‐アデニン、7‐メチルグアニン、5‐メチルアミノメチルウラシル、5‐メトキシアミノメチル‐2‐チオウラシル、β‐D‐マンノシルキューオシン、5′‐メトキシカルボキシメチルウラシル、5‐メトキシウラシル、2‐メチルチオ‐N6‐イソペンテニルアデニン、ウラシル‐5‐オキシ酢酸v、ワイブトキソシン、シュードウラシル、キューオシン、2‐チオシトシン、5‐メチル‐2‐チオウラシル、2‐チオウラシル、4‐チオウラシル、5‐メチルウラシル、ウラシル‐5‐オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル‐5‐オキシ酢酸v、5‐メチル‐2‐チオウラシル、3‐3‐アミノ‐3‐N‐2‐カルボキシプロピルウラシル、acp3w、および2,6‐ジアミノプリンを包含するしかし限定されることはない群の中から選択される少なくとも1つの修飾された塩基部分を含んでいてもよい。別の態様の場合、オリゴヌクレオチドは、アラビノース、2‐フルオロアラビノース、キシルロースおよびヘキソースを包含するしかしこれらに限定されない群の中から選択される少なくとも1つの修飾された糖部分を含んでいる。さらに別の態様の場合、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホルアミドチオエート、ホスホルアミデート、ホスホルジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステルおよびホルムアセタールまたはこれらのアナログから成る群の中から選択される少なくとも1つの修飾されたリン酸基骨格を含んでいる。さらに別の態様ではオリゴヌクレオチドがα‐アノマーオリゴヌクレオチドである。α‐アノマーオリゴヌクレオチドは相補的RNAと共に特定の二本鎖ハイブリッドを形成する。この場合、通常のβ‐単位とは対照的に、ストランドは互いに平行になっている。オリゴヌクレオチドは別の分子、たとえばペプチド、ハイブリダイゼーションで誘発される架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーションで誘発される開裂剤などと結合していてもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは業界で公知の標準的な方法によって、たとえば自動DNAシンセサイザーたとえば、Biosearch,AppliedBiosystemsなどから市販されているものなどを使用することによって合成できる。例として、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドはSteinらの方法によって合成でき、メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは調節された多孔ガラスポリマー支持体等を使用することによって調製することができる。特定の態様の場合、Deltaアンチセンスオリゴヌクレオチドは触媒RNAすなわちリボザイムを含んでいるたとえば、1990年10月4日に公開されたPCT公開第9011364号、Sarveretal,1990,Science24712221225参照。別の態様ではオリゴヌクレオチドが2′‐O‐メチルリボヌクレオチドまたはキメラRNA-DNAアナログである。他の態様の場合、本発明のDeltaアンチセンス核酸は外来配列からの転写によって細胞内で産生される。たとえば、あるベクターをinvivoで導入して、そのベクターを細胞に取込ませ、その細胞の中でそのベクターまたはその一部が転写されて本発明のアンチセンス核酸RNAを産生するようにすることができる。そのようなベクターはDeltaアンチセンス核酸をコードする配列を含有しているであろう。そのようなベクターは、転写されて所望のアンチセンスRNAを産生することができる限りにおいて、エピソームのままでいることもできるし、あるいは染色体に組込まれるようになってもよい。そのようなベクターは業界で標準的な組換えDNA技術によって構築することができる。ベクターは哺乳動物細胞で複製および発現に使われているプラスミド、ウィルスその他業界で公知のものでよい。デルタアンチセンスRNAをコードしている配列の発現は哺乳動物、好ましくはヒトの細胞で作用することが業界で知られている任意のプロモーターによって行なうことができる。そのようなプロモーターは誘導的または構成的のいずれであることもできる。そのようなプロモーターとしては、SV40の初期プロモーター領域、ラウス肉腫ウィルスの3′の長い末端反復配列に含まれているプロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター、メタロチオネイン遺伝子の調節配列、などがあるがこれらに限定されることはない。本発明のアンチセンス核酸はDelta遺伝子、好ましくはヒトDelta遺伝子のRNA転写物の少なくとも一部に相補的な配列を含んでいる。しかし、好ましいとはいっても完全な相補性は必要とされない。本明細書でRNAの少なくとも一部に相補的な配列とは、そのRNAとハイブリダイズして安定な二重鎖を形成することができるほどに充分な相補性をもっている配列を意味している。二本鎖のデルタアンチセンス核酸の場合にはその二重鎖DNAの単一のストランドをそのように試験してもよいし、あるいは三重鎖の形成を検定してもよい。ハイブリダイズする能力は相補性の程度とアンチセンス核酸の長さの双方に依存する。一般に、ハイブリダイズする核酸が長くなればなるほど、それが含有し得るDeltaRNAとの塩基のミスマッチが多くなるがそれでも安定な二重鎖または場合によって三重鎖を形成する可能性が高くなる。当業者は、標準的な手法を使用して、ハイブリダイズした複合体の融点を決定するミスマッチの許容できる程度を確認することができる。5.11.2.Deltaアンチセンス核酸の治療上の有用性Deltaアンチセンス核酸を使用して、DeltaまたはNotchを発現することがわかっている細胞型の悪性腫瘍またはその他の障害を処置または予防することができる。特定の態様の場合悪性は頸管癌、乳癌もしくは結腸癌または扁平腺癌である。そのような発現を試験することができる悪性の、腫瘍新生物および前新生物細胞としては前記5.8.1および5.9.1節に記載したものがあるがこれらに限定されることはない。好ましい態様においては一本鎖のDNAアンチセンスデルタオリゴヌクレオチドを使用する。DeltaまたはNotchRNAを発現する悪性特に腫瘍細胞型は業界で公知の各種方法で同定することができる。そのような方法としては、DeltaまたはNotch特異的核酸とのハイブリダイゼーションたとえばノーザンハイブリダイゼーション、ドットブロットハイブリダイゼーション、insituハイブリダイゼーション、その細胞型由来のRNAがinvitroでノッチまたはデルタに翻訳され得る能力を観察すること、免疫検定、などがあるがこれらに限られるわけではない。好ましい態様においては、処置前に、患者から得た一次腫瘍組織のノッチまたはデルタの発現を、たとえば免疫細胞化学またはinsituハイブリダイゼーションによって検定することができる。NotchもしくはDeltaRNAまたはタンパク質を発現するタイプの悪性を有する患者に、薬剤として許容可能な担体中に有効量のDeltaアンチセンス核酸を含む本発明の薬剤組成物5.12節参照を投与することができる。特定の障害または状態の処置に有効であるDeltaアンチセンス核酸の量はその障害または状態の性質に依存しており、標準的な臨床技術によって決定することができる。可能な場合、ヒトで試験して使用する前に、処置すべき腫瘍タイプのアンチセンス細胞傷害性を、invitroで、その後、有用な動物モデル系で、決定するのが望ましい。特定の態様においては、Deltaアンチセンス核酸を含む薬剤組成物をリポソーム、微粒子、またはマイクロカプセルを介して投与する。本発明のさまざまな態様においては、そのような組成物を用いてDeltaアンチセンス核酸の持続放出を達成するのが有用であり得る。特定の態様の場合、特定の同定可能な腫瘍抗原に対する抗体を介して標的に向かわしめるリポソームを利用するのが望ましいかもしれない。5.12.治療/予防用投与および組成物本発明は、本発明の治療薬を有効量で被検体に投与することによる処置および予防の方法を提供する。好ましい局面においては、この治療薬は実質的に精製されている。被検体は、牛、豚、鶏などのような動物をはじめとするしかしこれらに限定されない動物が好ましく、哺乳類が好ましく、ヒトが最も好ましい。各種の送達系が知られており、本発明の治療薬を投与するために使用することができる。たとえば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルに封入する、組換え細胞によって発現させる、受容体に媒介されるエンドサイトーシスたとえば、WuandWu,1987,J.Biol.Chem.26244294432参照、レトロウィルスまたはその他のベクターの一部として治療薬の核酸を構築する、などである。導入方法としては、皮内、筋肉内、腹膣内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜、および経口経路があるがこれらに限定されない。化合物は便利な任意の経路、たとえば、注入または濃縮塊注射により、上皮もしくは粘膜皮膚ライニングを通る吸収により投与可能で、他の生物活性剤と共に投与してもよい。投与は全身的または局所的に行うことができる。また、本発明の薬剤組成物を適切な経路、たとえば心室内および鞘内注射によって中枢神経系に導入することが望ましいことがある。心室内注射は、心室内カテーテル、たとえばOmmayaリザーバーのようなリザーバーに接続した心室内カテーテルによって容易にすることができる。また、たとえば吸入器や噴霧器およびエアゾール剤を用いた製剤を使用することによって、肺投与も使用できる。特定の態様では、処置が必要とされる部分に本発明の薬剤組成物を局所的に投与するのが望ましいことがある。これは、たとえば限定ではないが、手術中の局所注入、たとえば手術後の創傷包帯と共にする局所適用、注射、カテーテル、座薬、インプラントこれは多孔質、非多孔質またはゼラチン状の材料、たとえばsialastic膜のような膜、または線維であるを用いて達成できる。ひとつの態様では、悪性腫瘍または腫瘍もしくは腫瘍発現前の組織の部位または前の部位に直接注射することによって投与することができる。別の態様では、治療薬を小胞、特にリポソームに入れて送達することができるLanger,Science24915271533Treatら,inLiposomesintheTherapyofInfectiousDiseaseandCancer,LopezBeresteinおよびFidler,Liss,NewYork,pp.353365LopezBerestein,ibid,pp.317327参照。概論としてはibid.参照。さらに別の態様の場合治療薬は制御放出系で送達することができる。ひとつの態様ではポンプが使用できるLanger,上掲Sefton,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14201Buchwaldら,Surgery88507Saudekら,N.Engl.J.Med.3215741989参照。別の態様ではポリマー性の材料を使用することができるMedicalApplicationsofControlledRelease,LangerおよびWise,CRCPres,BocaRaton,FloridaControlledDrugBioavailability,DrugProductDesignおよびPerformance,SmolenandBall,Wiley,NewYorkRangerおよびPeppas,J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.2361参照。またLevyら,Science228190Duringら,Ann.Neurol.25351Howardら,J.Neurosurg.711051989も参照のこと。さらに別の態様においては、制御放出系を治療標的、すなわち脳の近くに配置することができ、従って全身投与量の一部しか必要としないたとえば、Goodson,inMedicalApplicationsofControlledRelease,上掲,vol.2,pp.115138参照。他の制御放出系がLangerの文献によって議論されている。治療薬がタンパク質の治療薬をコードしている核酸である特定の態様の場合、その核酸をinvivoで投与してそれがコードしているタンパク質の発現を促進することができる。たとえば、レトロウィルスベクター米国特許第4980286号参照を使用することにより、その核酸を適当な核酸発現ベクターの一部として構築し、それを細胞内に組込まれるようにして投与する。または直接注射したり、微粒子衝撃たとえば遺伝子銃、Biolistic,Dupontを使用したり、または脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤で被覆したり、または核の中に入って行くことが知られているホメオボックス様ペプチドに結合させて投与したりするたとえば、Joliotら,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA8818641868。あるいはまた、核酸治療薬を細胞内に導入し、相同組換えによって発現のために宿主細胞DNA内部に組込ませることができる。特定の障害の処置または予防に関する特定の態様の場合、次の投与形態を使用するのが好ましい。本発明はまた薬剤組成物も提供する。そのような組成物は、治療上有効な量の治療薬と、薬剤として許容される担体とを含んでいる。特定の態様の場合、薬剤として許容されるという用語は、動物、特にヒトに使用するものとして、米国の連邦政府もしくは州政府の規制機関によって認可されているかまたは米国薬局方もしくは他の一般に容認されている薬局方に収載されていることを意味する。担体という用語は、治療薬を投与するときに一緒に用いる希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。そのような薬剤担体は、水および石油、動物、植物もしくは合成起源のものを始めとする油、たとえばピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ごま油などのような無菌の液体でありうる。薬剤組成物を静脈内に投与するときには水が好ましい担体である。生理食塩水ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液もまた、特に注射用溶液の液体担体として使用することができる。適切な薬剤賦形剤としては、澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどがある。所望により、該組成物はまた、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはpH緩衝剤も含有することができる。これらの組成物は溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、ピル、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態をとることができる。組成物は通常のバインダーおよびトリグリセリドのような担体と共に座薬として調合することができる。経口製剤は薬剤グレードのマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準的な担体を含むことができる。適した薬剤担体の例はEW.MartinによってRemington ́sPharmaceuticalSciencesに記載されている。このような組成物は患者に適切な投与形態とするのに適した量の担体と共に治療上有効量の治療薬、好ましくは精製形態の治療薬を含有している。この製剤は投与形態に適していなければならない。好ましい態様の場合、組成物は、通常の手法に従って、人間に静脈内投与するのに適した薬剤組成物として調合する。通常静脈内投与用の組成物は無菌の等張水性緩衝液の溶液である。必要であれば組成物は、可溶化剤および注射部位の痛みを和らげるリグノカインのような局所麻酔薬とを含んでいてもよい。一般に、成分は別々に、または単位投与形態として、たとえば活性剤の量を指示したアンプルまたはサシェットのような気密に密閉した容器に入れた凍結乾燥粉末または無水の濃縮物として一緒に供給される。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌の薬剤グレードの水または生理食塩水を含有する注入瓶として分配することができる。組成物を注射によって投与する場合、成分が投与前に混合されるように注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。本発明の治療薬は中性形態または塩形態として調合することができる。薬剤として許容できる塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されるもののように遊離のアミノ基との間で形成されるもの、および水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2‐エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導されるもののように遊離のカルボキシル基との間に形成されるものがある。特定の障害または症状の処置に有効な本発明の治療薬の量はその障害または症状の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定することができる。また、場合によって、invitro検定を利用して最適の投与範囲を同定するのに役立てることができる。本製剤中に使用するべき正確な量もまた投与経路およびその疾患または障害の重さに依存し、医者の判断および各患者の状況に応じて決定するべきである。しかし、静脈内投与に適した投与範囲は一般に体重1kgあたり活性化合物約20~500μgである。鼻腔内投与に適した投与範囲は一般に体重1kgあたり約0.01pg~1mgである。有効な投与量はinvitroまたは動物モデル試験系から得られる用量-反応曲線から推定すればよい。座薬は一般に0.5~10重量の範囲で活性成分を含有し、経口製剤は活性成分を10~95含有するのが好ましい。本発明はまた、本発明の薬剤組成物の成分を1以上充填した1以上の容器を含む薬剤パックまたはキットも提供する。場合によって、そのような容器には、薬剤または生物学的生成物の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形の注意書きを付けることができる。そのような注意書きは人間への投与に対する製造、使用または販売の認可を示すものである。5.13.診断用途デルタタンパク質、類似体、誘導体、およびこれらのサブ配列、Delta核酸およびそれに相補的な配列、抗デルタ抗体には診断用途がある。このような分子は、免疫検定のような検定法で使用して、デルタ発現に影響する各種症状、疾患および障害を検出、予知、診断、もしくは追跡し、またはその処置を追跡することができる。特に、そのような免疫検定は、患者から得たサンプルを免疫特異的な結合が起こり得るような条件下で抗デルタ抗体と接触させ、その抗体による任意の免疫特異的結合の量を測定することからなる方法によって実施する。特定の局面においては、組織切片における、抗体のそのような結合を、好ましくは抗ノッチ抗体の結合と組合せて用いて、ある疾患状態における異常なノッチおよび/またはデルタ局在化または異常なレベルのノッチ-デルタの同時局在化を検出することができる。ある特定の態様においては、デルタに対する抗体を用いて、患者の組織または血清サンプルで、デルタの存在を検定することができ、ここで異常なレベルのデルタは疾患状態の指標となる。内因性のノッチタンパク質におけるデルタ結合能力の異常なレベル、または内因性のデルタタンパク質におけるノッチまたは他のデルタリガンドに対して結合する能力の異常なレベルは、細胞運命の障害たとえば癌などの指標となり得る。異常なレベルとは、その身体の一部から、またはその障害をもたない被検者から得た類似のサンプル中に存在するレベルまたはこのレベルを表わす標準レベルと比べて増大したかもしくは低下したレベルを意味する。使用することができる免疫検定には、ウェスタンブロット、放射線免疫検定、ELISA固相酵素免疫検定、サンドイッチ免疫検定、免疫沈降検定、沈降反応、ゲル核酸沈降反応、免疫核酸検定、凝集検定、補体結合検定、イムノラジオメトリックアッセイ、免疫蛍光検定、プロテインA免疫検定、などのような技術を用いる競合検定系および非競合検定系があるがこれらに限定されるわけではない。Delta遺伝子および関連する核酸配列およびサブ配列、たとえば相補的配列、ならびにその他の局所周期性遺伝子配列もまたハイブリダイゼーションアッセイに使用することができる。Delta核酸配列、または少なくとも約8個のヌクレオチドを含むそのサブ配列はハイブリダイゼーションプローブとして使用することができる。ハイブリダイゼーションアッセイは前記したようにデルタの発現および/または活性の異常な変化を伴なう症状、障害または疾患状態を検出、予知、診断または追跡するのに使用することができる。特に、そのようなハイブリダイゼーションアッセイは、核酸を含有するサンプルを、ハイブリダイゼーションが起こり得る条件下で、DeltaDNAまたはRNAとハイブリダイズすることができる核酸プローブと接触させ、その結果生じるハイブリダイゼーションを検出または測定することからなる方法によって実施する。さらに、デルタはノッチと結合するので、デルタまたはその結合部分は、サンプル中のノッチの存否および/またはその量を検定するのに、たとえば、結腸癌や子宮頸癌のような増大したノッチ発現を示す悪性腫瘍をスクリーニングするのに、使用することができる。6.ヒヨコのDeltaホモログは予定ニューロンで発現する本明細書に記載したように、本発明者らはヒヨコのDeltaホモログ、CDelta1を単離し特性決定をした。本発明者らは、CDelta1が、神経組織発生の間に新しい細胞が生まれ、その運命が決定されるときに予定ニューロンで発現されることを示す。ヒヨコにおける本発明者らのデータは、デルタ/ノッチシグナリングメカニズムと神経組織発生におけるその役割とは両方とも脊椎動物で保存されていることを示唆している。6.1.CDelta1のクローニング本発明者らは、ポリメラーゼ連鎖反応PCRと縮重したオリゴヌクレオチドプライマー図1a、1bおよび2、配列番号1、2、3および4を用いてヒヨコのDeltaホモログCDelta1を同定した。それぞれハエデルタタンパク質配列FGFTWPGT配列番号21およびNGGTCID配列番号22に相当する縮重したオリゴヌクレオチドプライマーTTCGGITTACITGGCCIGGIAC配列番号19およびTCIATGCAIGTICCICCTT配列番号20を用いたPCRによってCDelta1をクローン化した。最初の反応では、50μlの供給緩衝液中で、4~6胚期に由来する第一鎖オリゴ‐dTでプライムしたcDNA50ng、各プライマー1μg、0.2mMdNTP、2UのTaqポリメラーゼを使用した。94°C/30秒、50°C/2分、72°C/2分で40サイクルの増幅を行なった。増幅したDNA断片をアガロースゲルで分離し、BluescriptpKSでクローン化し、配列決定した。2つのDeltaホモログが同定された。そのうちのひとつCDelta1は神経系で発現される。神経系で発現されるホモログで、CDelta1遺伝子の3′端における交互スプライシング事象のために、コードされているタンパク質のカルボキシ末端が異なる2つの変異体が同定された。コードされているタンパク質のひとつは、他方のコードされているタンパク質と比べて、カルボキシ末端に12個の余分なアミノ酸を有する。このコードされている短い方の変異体の配列を配列番号2に示す。配列番号3によりコードされており、かつ配列番号4のアミノ酸配列で同定される長い方の変異体は配列番号2のアミノ酸配列と3′端にある12個の余分なアミノ酸から成っている。この長い方の変異体を以下に記載する実験に用いた。RNAをアフリカツメガエルに注入して生物活性を試験した場合変異体のいずれも同じ生物活性をもっていた。CDelta1に対応するDNA断片を用いて、17期の脊髄cDNAライブラリーをスクリーニングし、いくつかの完全長クローンを得、配列決定した。類似の方法によりヒヨコのCNotch1遺伝子に由来するDNA断片を増幅したデータは示さない。部分配列データと発現パターンは齧歯類のノッチ-1遺伝子との密接な類似性を示している。配列はWisconsinGCGセットプログラムを用いて解析した。ヒヨコデルタ1mRNAのGenBank受託番号はU26590である。CDelta1のDNA配列はショウジョウバエデルタと構造的に同族である図3、4がデルタ関連Serrateタンパク質これも本発明者らがクローン化したものであるがデータは示さないの脊椎動物ホモログとは明らかに異なる722個のアミノ酸のタンパク質に相当している。Cデルタ1はその細胞外領域に推定膜貫通ドメイン、シグナル配列および8つのEGF様反復配列を含有しているショウジョウバエデルタより反復配列が1つ少ない。Cデルタ1のアミノ末端ドメインはノッチに対するinvitro結合に必要かつ充分であると記載されているハエのデルタタンパク質中の類似のドメインと密接に関連している。この保持された領域は、ノッチ様タンパク質の推定リガンドのファミリーの公知のすべてのメンバーにより共有されているいわゆるDSLモチーフ図4Hendersonら,1994,Development12029132924Taxら,1994,Nature368150154を含んでいる。二番目のシステインに富むN末端領域はハエとヒヨコのタンパク質で保存されているが、関連するC.elegansタンパク質にはない図4。Cデルタ1と81同一であり上記の構造モチーフのすべてを示す図3タンパク質をコードしているアフリカツメガエルDelta1ホモログXDelta1もクローン化した。ノッチ結合に重要であると同定されたドメインを含めてヒヨコとハエのデルタタンパク質間の保存構造は、Cデルタ1がヒヨコのノッチタンパク質に対するリガンドとして機能すること、および外側抑制のデルタ/ノッチに媒介されるメカニズムがヒヨコで働き得ることを示唆している。6.2.CDelta1とCNotch1の発現は神経組織発生開始と相関しているショウジョウバエの神経組織発生の間にDeltaは神経前駆体で一時的に発現され、隣接するNotch発現細胞が同様に神経になるのを抑制する。CDelta1がヒヨコの神経組織発生の間に同様に働くとすると、ニューロン前駆体細胞が決定されるようになるにつれてCDelta1が同様にニューロン前駆体細胞でも一時的に発現されるはずである。発生するCNSにおけるCDelta1の発現の解析は、これが実際に起こっていることを示している。要約すると、ホールマウントinsituハイブリダイゼーションを実施した。ホルムアルデヒドで固定した胚をプロテアーゼで処理し、4ホルムアルデヒド/0.1グルタルアルデヒドで再固定した。DIGで標識したRNAプローブとのハイブリダイゼーションを、0.2Tween20と0.5CHAPSを含有する緩衝液中で、ストリンジェントな条件1.5×SSC、50ホルムアミド、65°C、pH5下で実施した。洗浄した胚をBoehringerBlockingReagentベーリンガーブロッキング試薬で処理し、アルカリホスファターゼと結合した抗‐DIG抗体中で一晩インキュベートした。充分に洗浄した後胚を30分~一晩染色した。図5eの胚はハイブリダイゼーション後ワックスで切開した。神経板におけるCDelta1の発現は6~7期31時間、0/1体節に体節形成前の中胚葉の直前の散乱細胞で最初に検出される図5b、5c。この領域は中/後部後脳になり、そこでは、最も初期に分化したCNSニューロンが、最初のCDelta1発現の6時間後の9期31時間、7~9体節に、神経繊維抗体により始めて検出される表2SechristBronnerFraser,1991,Neuron7947963。神経組織発生が進むにつれて、CDelta1の発現がニューロン分化の時空パターンを予示し続け表2、脊髄に沿って後に、また中脳および前脳に向かって前方に拡大する図5d、5e。たとえば、8期の脊髄における最も後に発現する細胞は将来の6番目の体節のレベルにあり、これはそのレベルにある最初のニューロンが神経繊維抗原を発現する6~8時間前である表2。表2に示されているように、CDelta1の発現の出現は、最初のニューロン前駆体が分裂サイクルから離脱したすぐ後で、得られる分化性ニューロンで神経繊維NF抗原が出現する前である。中部後脳は耳の原基のレベルである菱脳の神経小片4~6を含んでおり、後部後脳は菱脳の神経小片7および8ならびに体節1~4を含んでいる。細胞分裂からの離脱のタイミングのデータと神経繊維の発現のデータはSechristら,1991,Neuron7947963からとった。いずれの場合も、CDelta1は散乱細胞で一様なCNotch1発現のドメイン内で発現する図5a。6.3.CDelta1の局在化と経時発現CDelta1の局在化と経時変化は、この遺伝子が神経組織発生の初期の段階で切り替えられること、およびCDelta1を発現する細胞がまだ分化マーカーを示し始めていない将来のニューロンであることを示している。この仮説を試験するために、本発明者らは、将来のニューロンが、初期神経管における非サイクル細胞のみであるというSechristとBronnerFraserの観察結果を用いた。それらの細胞は神経繊維抗原を発現する11~15時間前にその最終S相を終了し表2、その核は、最後の有糸分裂の完了後、他の細胞核すべてがS相にある神経上皮の基底表面付近に特徴的な位置をとる図6a。本発明者らは7~9期の胚をブロモデオキシウリジンBrdUで標識し、BrdU取込みとCDelta1発現に関して二重に染色した。CDelta1を発現する細胞の95は未標識であった。それらの核は主として基底表面付近に位置していたが、そこではほとんどの他の核がBrdUで標識された図6b、6c。PBS中の0.1mMのBrdU75μlを、insituハイブリダイゼーション用に固定する前に38°Cで2~4時間インキュベートした7~9期の胚上に滴下した。、15μmのクリオスタット切片を、ほぼStrahleらの方法に従って、DIGで標識したRNAプローブとハイブリダイズした。染色後スライドをPBS中で洗浄し、BrdU免疫検出用に処理した。FITCと結合したヤギ抗‐マウス二次抗体を用いて抗BrdU1:1000、Sigmaを検出した。CDelta1の発現をDIC顕微鏡法、および慣用の共焦点蛍光顕微鏡法によるBrdU標識化で検査した。これらの結果は、CDelta1が細胞サイクルから離脱しており、実際に将来のニューロンであるに違いない細胞で発現されることを示している。二、三のBrdU/CDelta1細胞は基底ゾーン外にその核を有する。これらは、BrdUに暴露された後すぐに最終S相を終了し、先端に移動してその最終有糸分裂を完了し、CDelta1発現に切り替わる細胞であり得る。CDelta1はまた、後期の神経管および末消神経系でも発現する。ここでも、発現のタイミングと発現細胞の位置は、これらの細胞がまだ分化し始めていないニューロン前駆体であることを示唆しているデータは示さない。このように、CDelta1の発現は将来のニューロンに対する最も早く知られたマーカーであるように思われる。また、Cデルタ1とCSerrate1の転写パターンは胚の多くの領域におけるCノッチ1の転写パターンとオーバーラップしておりデータは示さない、これはCノッチ1がショウジョウバエ内のノッチと同様に両者のタンパク質に対する受容体であることを示唆している。特に、3つのすべての遺伝子が発生する中枢神経系の神経原性の領域で発現され、ここにおいて驚くべき関係が見られる。すなわち、CSerrate1とCデルタ1の両方の発現はCノッチ1発現のドメインに限定されるが、このドメイン内でCSerrate1とCデルタ1の領域は正確に相補的である。オーバーラップする発現パターンは、それらとノッチとの機能的相関関係の保存を示唆しており、ヒヨコ、特にその中枢神経系の発生がいろいろな位置におけるCノッチ1といろいろなリガンドとの相互作用を含んでいることを暗示している。6.4.考察Cデルタ1のアフリカツメガエルホモログを同様な方法でクローン化した。簡単にいうと、Xデルタ1のPCR断片を単離して配列決定した。次にこの断片を用いてXデルタ1の完全長クローンを同定した。Xデルタ1の発現パターンを検討した。Xデルタ1は散乱細胞において、一次ニューロン前駆体が生成している神経板のドメイン内で発現することが示された。これは、Xデルタ1を発現する細胞が将来の一次ニューロンであることを示唆している。さらに、Xデルタ1はまた、神経組織発生の他の部位および時期、たとえば前部神経板および神経原性板ならびに二次ニューロンが生成した場合の神経管発生の後の段階でも発現する。異所性のXDelta1活性は一次ニューロンの産生を抑制し、内因性のXDelta1活性との干渉の結果一次ニューロンの過剰産生が生じた。これらの結果は、Xデルタ1が将来のニューロンによって隣接細胞に送達される側方抑制を媒介していることを示している。アフリカツメガエル卵におけるXデルタ1の異所性発現は一次神経組織発生を抑制すること、また、細胞質ドメインのアミノ酸を2つだけ保持している末端を切断したXデルタ1タンパク質の異所性発現が内因性のシグナリングに干渉し、余分な細胞をニューロン前駆体として発生させることが示された。予備的な証拠は、CDelta1がアフリカツメガエルの胚で発現されると類似の抑制作用をもつことを示しているデータは示さない。本発明者らは、CDelta1がショウジョウバエとアフリカツメガエルの対応するタンパク質と同様に神経組織発生の間を通して側方抑制を媒介して、任意の時に神経宿命になり得る細胞の割合を制限するということを提案する。Cデルタ1は通常神経組織発生中CNSでもPNSでも多くの他の部位で、たとえば発生する耳でも発現される。CNSにおいては、CノッチはE5ヒヨコ後脳の脳室ゾーンにおいて神経管の内腔に隣接する分裂細胞で発現されることが示されている。Cデルタ1は、分裂を止めてしまっておりニューロン前駆体細胞となろうとしている細胞の隣接層で発現する。したがって、デルタ/ノッチシグナリングはここにおいて他の神経組織におけると同様に作用して未決のサイクルニューロン幹細胞の集団を維持することができよう。7.マウスDeltaホモログの単離し特性決定MDelta1と名付けたマウスDeltaホモログを以下のようにして単離した。マウスDelta1遺伝子由来組織:8.5日および9.5日齢のマウス胚RNA単離法:aランダムにプライムした、上記RNAに対するcDNAb上記cDNAのPCRには以下のものを使用した。PCRプライマー1:GGITTCACITGGCCIGGIACNTT配列番号23[デルタ様であるがSerrate様ではないタンパク質に対して特異的な領域であるGFTWPGTF配列番号24をコードしている]PCRプライマー2:GTICCICCTTTTCAIGGTT配列番号25[EGF様反復配列の多くの中に存在する配列であるNPCKNGGT配列番号26をコードしている]増幅条件:50ngのcDNA、1μgの各プライマー、0.2mMのdNTP、1.8UのTaq、50μlの供給緩衝液中。94°C/30秒、45°C/2分、72°C/1分の40サイクル各サイクル2秒ずつ延長。増幅された断片は約650塩基対の断片であり、これを部分的に配列決定してCDelta1との相関関係を決定した。cマウスの11.5日のcDNAライブラリーをスクリーニングした。いくつかの陽性クローンのうち、ひとつpMDL2、インサートのサイズは約4kbが完全なタンパク質コード領域を含んでいた。このDNA配列を完全に決定した。図7配列番号11はMDelta1DNAを含有する単離されたクローンのヌクレオチド配列を示す。図8配列番号12はMデルタ1の予想されるアミノ酸配列を示す。図9はMデルタ1とCデルタ1に対して予想されるアミノ酸配列を並べて示す。同一のアミノ酸を四角で囲って示す。広範囲の配列相同性を示している。コンセンサス配列を下に示す配列番号13。発現パターン:発現パターンは、Cデルタ1に対して、特に体節形成前の中胚葉、中枢神経系、末消神経系および腎臓で観察されたものとほぼ同じであることが確認された。8.ヒトデルタホモログの単離と特性決定Hデルタ1HD1と名付けたヒトデルタ1ホモログを以下のようにして単離した。インサートのサイズが100~150kbの範囲であるヒトゲノムライブラリーをマウスデルタ1遺伝子のEcoRI断片で探索した。このライブラリーから、EcoRI断片とハイブリダイズしたゲノムヒトPACクローンを単離した。次に、2つの縮重しているオリゴヌクレオチドを用いて、ゲノムヒトPACクローンの断片をPCRにより増幅した。縮重オリゴは次の通り。5′ACIATGAAAACTIGCIAATG配列番号27[TMNNLANC配列番号28をコード]および3′ACTAIACIGATGTATTIGT配列番号29[TKYQSVYV配列番号30をコード]または3′GCATIACCATCTCTTTC配列番号31[EKDECVIA配列番号32をコード]。ニワトリとマウスのデルタ1に対するcDNA配列に基づいて、5′オリゴと2つの異なる3′オリゴを用いて、約354塩基対および387塩基対の断片がそれぞれ単離されると予想された。しかし、実際には、525塩基対と予想通りそれより30塩基対小さい単一の単離物が2つ得られた。大きい方の単離物をジデオキシシークエンシングで配列決定した。そのヌクレオチド配列を図10に示す配列番号14。また、図10には、増幅したDNA断片の3つの異なるリーディングフレームに対して予想されたアミノ酸配列配列番号15、16、17も示す。シークエンシングエラーのため、両方のプライマー間で中断されてない充分な配列は同定されなかった。その結果、この得られたDNA配列から直接アミノ酸配列を予想することはできない。しかし、図11に、ヒトデルタ1上配列番号18とヒヨコのデルタ1下との間の肉眼で決定したアミノ酸配列相同性を示す。シークエンシングエラーのため、この相同性は、相同領域を同定するために3つの異なるリーディングフレームの間で切り替えることによって得た。完全長のHデルタ1HD1遺伝子を単離する目的で、大きい方の単離物配列番号14をプローブとして用い、ヒト胎児脳プラスミドライブラリーをスクリーニングした。この結果4つの陽性プラークが得られた。これらの陽性プラークのうちの2つHD13およびHD124が再度のスクリーニングで生き残り、これをサザンブロットで大きいヒトゲノム断片と陽性反応させた。これらの陽性クローンをEcoRIで消化し、断片をBluescriptKSベクターに連結することによってサブクローン化した。T3およびT7プライマーを用いたジデオキシシークエンスによりインサートのヌクレオチド配列を得た。結果は、HD124がその両端でニワトリのデルタ1と相同であるが、HD13の一端は相同性を示さないことを示していた。一連の酵素による制限消化は2つのクローンで非常に類似したパターンを示した。これらはいずれもインサートが約2kbであったがHD13の3′端が異なっていた。HD13とHD124をBstXI、XbaI、HindIIIおよびXhoIで消化し、制限断片をBluescriptKSに挿入した後上記のようにして配列決定して内部配列を得た。得られた配列は3′にHD1の約2000塩基をもっており、3′非コード領域に伸びていた。HD13はHD124の中に含まれているが、HD13の5′端に付加された配列はクローニングの際に人工的に入ったものであろう。こうして得られた配列はHD1の5′端を含有していなかったので、T細胞ライブラリーおよび他の胎児脳ライブラリーでのハイブリダイゼーションにHD124をプローブとして使用した。T細胞ライブラリーのスクリーニングでは陽性のものが得られなかった。しかし、LambdaZapライブラリーのスクリーニングでは2つの陽性クローンHD113とHD118が得られた。これらのクローンを、上記のようにEcoRIを用いてBluescriptKSベクターに挿入した。HD13およびHD124と比較するためにインサートを一連の制限酵素で消化し、T3およびT7プライマーを用いて5′端と3′端を配列決定した。HD113は、配列決定したときに公知のデルタと相同性を示さないcDNAの小片のみであることが決定された。しかし、HD118は長さが3kbであり、HD124の全体配列とさらに5′端の追加の配列を含んでいた。重なり欠失を用いて一組のクローンをHD118から単離し、これらのクローンを自動シークエンサーを用いてジデオキシシークエンスにかけた。図12Aは、クローンHD118から得たヒトDeltaの部分ヌクレオチドコンティグ配列配列番号33を示す。シークエンシングエラーのため、ヒトDeltaの中断されてない充分なヌクレオチド配列は決定されなかった。図12Bに、ヒトDeltaの部分ヌクレオチドコンティグ配列配列番号33を一番上に、また、その下に3つの異なるリーディングフレームで予想されるアミノ酸配列を示す。2番目はリーディングフレーム1配列番号34、3番目はリーディングフレーム2配列番号35、4番目はリーディングフレーム3配列番号36である。配列の相同性はマウスデルタ1アミノ酸配列を用いて肉眼で決定した。マウスアミノ酸配列と最も相同性の高い配列は図12Bで四角で囲って示し、ヒトデルタ1の予想されたアミノ酸配列を示す。得られた複合のアミノ酸配列を図14に示す。図14では、ヒトデルタ配列の中断されてないさまざまな部分をそれぞれ配列番号39~65として表示してある。シークエンシングエラーのため最高の相同性をもつリーディングフレームは配列全体を通して同じではなく、配列中にエラーがある位置でシフトされていることに注意されたい。また、ニワトリとマウスのデルタに対して肉眼で決定した相同性は、決定されたヒトDeltaヌクレオチド配列から推定したアミノ酸配列が、ヒトデルタ1のN末端の100~150アミノ酸のほぼすべてを含有していることを示している。図13に、マウスDelta1のヌクレオチド配列一番上、配列番号37、図12Aおよび12Bに示したヒトDelta1のコーディングヌクレオチド配列2番目、配列番号33、そしてマウスとヒトのDeltaの間のヌクレオチドコンセンサス配列3番目、配列番号38を示す。図12Aに示したヒトデルタ5′ヌクレオチド配列を含有するプローブを用いて、cDNAライブラリーを探索してヒトデルタ遺伝子の5′端を単離する。一次陽性クローンを得た後二次陽性物として確認する。二次陽性物を精製しさらに増殖させる。その後DNAを単離し配列決定のためにサブクローン化する。本発明の範囲は本明細書に記載した特定の態様に限定されるものではない。実際、以上の説明と添付した図面から、本明細書に記載したものに加えて本発明のさまざまな修正が当業者には明らかであろう。そのような修正は添付の請求の範囲内に入るものと考えられる。本明細書でさまざまな引用をしたがその開示内容は引用したことによってその全体が本明細書に含まれているものとする。"