"幹細胞増殖を刺激するための組成物であって、以下の配列:Phe-Pro-His-Phe-Asp-Leu-Ser-His-Gly-Ser-Ala-Gln-Val配列番号1、およびCys-Phe-Pro-His-Phe-Asp-Leu-Ser-His-Gly-Ser-Ala-Gln-Val-Cys配列番号2ここで、2つのCys残基はジスルフィド結合を形成する、を有するペプチドからなる群から選択されるペプチドの幹細胞刺激量を含む、組成物。前記ペプチドは、Phe-Pro-His-Phe-Asp-Leu-Ser-His-Gly-Ser-Ala-Gln-Val配列番号1である、請求項1に記載の組成物。幹細胞に損傷を与えるかまたは破壊する薬剤に暴露された哺乳動物において幹細胞分裂を刺激するための組成物であって、以下の配列:Phe-Pro-His-Phe-Asp-Leu-Ser-His-Gly-Ser-Ala-Gln-Val配列番号1、およびCys-Phe-Pro-His-Phe-Asp-Leu-Ser-His-Gly-Ser-Ala-Gln-Val-Cys配列番号2ここで、2つのCys残基はジスルフィド結合を形成する、を有するペプチドからなる群から選択されるペプチドの幹細胞増殖刺激量を含む、組成物。前記ペプチドは、Phe-Pro-His-Phe-Asp-Leu-Ser-His-Gly-Ser-Ala-Gln-Val配列番号1である、請求項3に記載の組成物。前記薬剤が抗ウイルス剤または抗腫瘍剤である、請求項3または4に記載の組成物。レトロウイルスベクターまたは遺伝子導入の物理的技術のいずれかを用いて、遺伝子をヒト造血細胞に導入することにはいくつかの制限がある:1造血組織中の幹細胞の頻度の低さは、効率の高い遺伝子導入技術の開発を必要とする;および2より迅速に細胞周期の進行している幹細胞はベクターの感染をより受けやすくなることが証明されたが、成長因子による幹細胞増殖の刺激によって感染頻度が増加することは、導入遺伝子を含む細胞が不可逆的に分化させられ、そしてそれらの自己再生ができなくなるので、長期の遺伝子発現にネガティブな影響を与える。これらの問題は、分化および自己再生の損失を妨げるための幹細胞阻害剤、および幹細胞の細胞周期への進入を調節するための幹細胞刺激剤の使用によって改善され、それによってレトロウィルス媒介遺伝子導入を促進し得る。発明の要旨本発明は、幹細胞増殖阻害剤および/または刺激剤INPROLおよびオピエート化合物であるペプチドおよびポリペプチドを含む化合物、およびそれらの使用に関する。本発明は、以下の性質により特徴付けられる幹細胞増殖阻害剤を包含する:aマウスコロニー形成脾臓CFUSアッセイにおいて比活性IC50が20ngml以下である実施例4を参照のこと、b限外濾過により分子量が10,000ダルトンより大きく、かつ100,000ダルトンより小さい、c活性がトリプシンによる分解に対して感受性である、dMIP1αまたはTGFβよりも疎水性であり、そして逆相クロマトグラフィーにより両方から分離可能である実施例12を参照のこと、e水溶液中で37°C、55°Cまたは75°Cで1時間加熱した後でも生物学的活性が保持されている、およびf1塩酸のアセトン溶液を用いて沈澱させた後でも生物学的活性が保持されている。本発明はさらに、短時間のプレインキュベーションの後のインビトロアッセイにおける阻害の達成能力によって特徴付けられ、そして他の幹細胞阻害剤候補例えば、MIP1α、TGFβ、および種々のオリゴペプチドと区別される。本発明はまた、種々の疾患の処置のためのINPROLを含有する薬学的組成物を包含する。本発明は、幹細胞を死滅させるかまたは損傷し得る薬剤への曝露が予想される被験体に有効量の幹細胞阻害性組成物を投与することにより、その被験体を処置する方法を提供する。この方法によって保護された幹細胞は、通常は骨髄、臍帯血、胎児肝に存在し、分裂するか、または末梢血循環へ移動した造血幹細胞であり得る。蛍光活性化セルソーターFACS分析により、大部分の移動した幹細胞は静止状態であり、多分化能の幹細胞は細胞周期中であり、幹細胞阻害量のINPROLにより阻害され得ることが実証された。あるいは、幹細胞は上皮性例えば、腸管または頭皮または身体の他の領域に位置するであり得るか、あるいは生殖器官内に位置する生殖細胞であり得る。本発明の方法は、望ましくは、ヒトに用いられ得るが、動物の処置もまた、本方法に包含される。本明細書で用いられる用語被験体または患者は、動物例えば哺乳動物ヒトを含むを指す。本発明はまた、低増殖性の幹細胞を有する被験体を、有効量の幹細胞刺激性組成物をその被験体に投与することにより処置する方法を提供する。この方法により刺激された幹細胞は、通常は骨髄、臍帯血、胎児肝に存在するか、または末梢血循環へ移動した造血幹細胞であり得る;このような幹細胞は、以前に幹細胞阻害量のINPROLの使用により、静止状態へ置かれ得る。幹細胞刺激量のINPROLは、所望の場合、例えばエクスビボ拡大の間の使用のために幹細胞を収集後、またはその後のインビボでの幹細胞の移植transplantationおよび移植engraftment後に、幹細胞の細胞周期の刺激を可能にする。あるいは、幹細胞は;上皮性例えば小腸、もしくは頭皮または身体の他の領域であり得るか、あるいは生殖器官内に位置する生殖細胞であり得る。他の局面では、本発明は、化学療法を受けている患者の造血幹細胞系、免疫幹細胞系または他の幹細胞系を保護し、かつ回復させる方法を提供する。この方法は患者に有効な幹細胞阻害量のINPROLを投与する工程、および/または、有効な幹細胞刺激量のINPROLを投与することによって、化学療法または放射線照射後の回復を刺激する工程を含む。なおさらなる局面では、本発明は、ガンを有する患者に有効な幹細胞阻害量のINPROLを投与して、骨髄、胃腸管、または他の器官の幹細胞を、化学療法または放射線療法の有害な作用から保護することにより、および/または幹細胞刺激量のINPROLを投与することによって化学療法または放射線照射後の回復を刺激することにより、固形腫瘍例えば、乳、大腸、肺、精巣、卵巣、肝臓、腎臓、膵臓、脳、肉腫によって特徴付けられるガンを含む、任意のガンを補助的に処置する方法を包含する。本発明のさらに別の局面は、正常幹細胞の増殖を阻害するために、増殖性白血病細胞を内部に有する造血細胞を有効量のINPROLで処理する工程、および白血病細胞を破壊するために、細胞傷害性薬剤で骨髄を処理する工程を含む、白血病例えば、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、骨髄腫、ホジキン病の処置を包含する。この方法は、骨髄の増殖を刺激する他の薬剤例えば、コロニー刺激剤、および/または幹細胞刺激量でのINPROLで骨髄を継続処置することによって増強され得る。1つの実施態様において、この方法はインビボで行われる。あるいは、この方法はまた、移植のためにエクスビボで造血細胞をパージし拡大するのに有用である。なおさらなる別の局面では、この方法は、増殖性幹細胞によって引き起こされる任意の疾患を有する被験体を処置する工程を含む。乾癬、脊髄形成異常、いくつかのの自己免疫疾患、加齢における免疫低下、脊髄形成異常症候群、再生不良性貧血またはAIDSによる幹細胞の消耗のような疾患は、被験体に有効量のINPROLを投与して問題の幹細胞の増殖を阻害または刺激することにより処置される。本発明は、幹細胞を死滅させるかまたは損傷し得る細胞傷害性薬剤由来の損傷から幹細胞を可逆的に保護する方法を提供する。この方法は、そのような薬剤への暴露が予想される被験体に有効な幹細胞阻害量のINPROLを投与する工程を含む。本発明はまた、化学療法または放射線照射後の回復期の間に幹細胞の増殖を可逆的に刺激する方法を提供する。この方法は、このような薬剤への暴露が予想される被験体に、有効な幹細胞刺激量のINPROLを投与する工程を包含する。本発明はまた以下を提供する:以下の手順によってブタまたは他の骨髄から単離された幹細胞増殖阻害剤実施例12を参照のこと:a骨髄を抽出し、そして濾過によって粒子状物質を除去する;b56°Cで40分間熱処理した後、氷浴で冷却する;c4°Cで30分間10,000gで遠心分離することによって沈澱物を除去する;d10容量の撹拌された氷冷アセトン1容量の濃塩酸を含むに上清を添加し、そして4°Cで16時間インキュベーションすることにより酸沈澱させる;e4°Cで30分間20,000gで遠心分離することにより沈澱物を単離し、そして冷アセトンで洗浄した後、乾燥させる;f逆相クロマトグラフィーによって単離し、そして5フルオロウラシルで前処理し、マウスIL3存在下でインキュベートした骨髄細胞によるコロニー形成の阻害、ならびに280nmにおける吸光度およびSDSPAGEにより活性をモニターする。本発明はまた以下を提供する:実質的に他のタンパク性物質を含まない幹細胞増殖阻害剤を精製する方法であって、前記の工程を包含し、さらに以下により詳細に記載される方法。本発明はまた以下を提供する:幹細胞増殖阻害剤が、幹細胞の過剰増殖によって引き起こされる免疫抑制を改善するように作用する、ヒトまたは動物を処置する方法。本発明はまた以下を提供する:幹細胞刺激量のINPROLが、幹細胞の低増殖によって引き起こされる骨髄抑制を改善する、ヒトまたは動物を処置する方法。本発明はまた以下を提供する:前記幹細胞増殖阻害剤が、細胞傷害性薬物または放射線照射手順に曝されることによって幹細胞が増殖するように誘導された後、投与される、ヒトまたは動物を処置する方法。幹細胞は通常は休止しているが、化学療法後、細胞周期に入るように刺激される。これによって幹細胞は2回目の化学療法剤の投与に対してより感受性となる;本方法はこの処置から幹細胞を保護する。本発明はまた以下を提供する:幹細胞増殖の刺激剤例えば、幹細胞刺激量でのINPROLが、骨髄の再生を促進するために、幹細胞阻害量のINPROL前後に投与される、ヒトまたは動物を処置する方法。幹細胞阻害量のINPROLは、幹細胞の細胞周期への移行速度を遅らせ、そして化学療法や放射線照射から保護する;幹細胞刺激量のINPROLはこの阻害を逆転し、そして骨髄の回復を促進する。逆に、幹細胞刺激量のINPROLは骨髄の回復に使用され得るが、幹細胞阻害量のINPROLは一旦骨髄の回復が達成すると、次に幹細胞を静止状態に戻すために使用される。本発明はまた以下を提供する:前記幹細胞増殖阻害剤が、免疫応答を増大させるためにワクチン接種の前または同時にアジュバントとして投与される、ヒトまたは動物を処置する方法。本発明はまた以下を提供する:前記哺乳動物に免疫刺激的量のINPROLを投与する工程を含む、哺乳動物の免疫不全を処置する方法。本発明はまた以下を提供する:前記哺乳動物に鎮痛誘導量のINPROLを投与する工程を含む、哺乳動物の疼痛を処置する方法。本発明はまた以下を提供する:幹細胞を損傷から保護するために有効量の幹細胞増殖阻害剤を投与する工程を含む、細胞傷害性薬物または放射線処置を受けたヒトまたは動物を処置する方法。本発明はまた以下を提供する:処置後の回復を増強するために、有効な幹細胞刺激量のINPROLを投与する工程を含む、細胞傷害性薬物または放射線処置を受けたヒトまたは動物を処置する方法。本発明はまた、ヘモグロビンおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を含む。本発明はまた、aヘモグロビンのα鎖、ヘモグロビンのβ鎖、ヘモグロビンのγ鎖、ヘモグロビンのδ鎖、ヘモグロビンのε鎖、およびヘモグロビンのζ鎖からなる群から選択されるポリペプチドであって、ポリペプチドはヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197ペプチド197を含み、そしてポリペプチドはヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194ペプチド194を含む、ならびにb薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を包含する。このような薬学的組成物は、ヘムと共にまたはヘムを有さずに、上記群から選択される単一ポリペプチド、上記群から選択されるポリペプチドの混合物、または上記群から選択される二量体または多量体の形態のポリペプチドで構成され得る。本発明はまた、以下の配列を有するペプチドを包含する:ここで、2つのCys残基はジスルフィド結合を形成する環状ペプチド4355ここで、2つのCys残基は炭素架橋により結合されている、および図16Aに示すように、ヒトαヘモグロビンの最初の97N末端アミノ酸を含むペプチド。本発明はまた、幹細胞刺激および/または刺激特性を保持した、ヒトα鎖の修飾型からなるタンパク質およびペプチド配列を含む。そのような修飾は、C末端疎水性ドメインの除去または修飾改善された溶解特性を生じる、および/またはハプトグロビン結合ドメイン除去または修飾改善された薬物動態学的特性を生じるを含むが、これらに限定されない。ヒトαヘモグロビンのC末端疎水性ドメインは、アミノ酸98フェニルアラニンから141アルギニンまでの領域を含み、総数44のうち23の疎水性アミノ酸を含む。ドメイン全体または1つ以上のこれらの疎水性アミノ酸6つのアラニン、4つのバリン、8つのロイシン、2つのプロリンおよび3つのフェニルアラニンは、欠失deletionC末端疎水性ドメインの欠失によって除去され得る。あるいは、1つ以上のこれらのアミノ酸は、非極性アミノ酸例えば、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンまたはグルタミンで置換され得る置換C末端疎水性ドメイン。別の実施態様では、カルボキシメチル化のような、この領域の疎水的特性を減じ、溶解性を増加する化学的修飾が使用される。別の実施態様では、疎水性残基はヒトβヘモグロビン配列の対応する親水性の領域と置換される。例えば、ヒトβヘモグロビン配列では、アミノ酸107グリシンから117ヒスチジン間の領域またはアミノ酸130チロシンから139ヒスチジン間の領域はそれぞれ比較的親水性で、それぞれまたは共にヒトαヘモグロビン内の等価な疎水性の領域について置換され得る。ハプトグロビン結合ドメインはC末端疎水性領域に含まれ、アミノ酸121127からなる。この領域は全体的に欠失により除去され得るか、またはこの領域の1つ以上のアミノ酸が欠失され得る欠失C末端ハプトグロビン結合ドメイン。この領域またはこの領域の1つ以上のアミノ酸は、例えばポリアラニンもしくはポリグリシン、またはポリペプチドのハプトグロビンへの結合を無効にする効果を有するが、幹細胞阻害活性は維持するような他のアミノ酸に置換され得る置換C末端ハプトグロビン結合ドメイン。本発明の他の実施態様は、βヘモグロビン鎖C末端疎水性領域内および/または1つまたは両ハプトグロビン結合ドメインアミノ酸1125および136146に対する相当する修飾、ならびにδ、γ、ε、および/またはζヘモグロビン鎖に対する相当する修飾を包含する。上記の同定されたペプチドをコードするDNA配列、そのDNA配列を含むベクター、およびそのベクターを含む宿主細胞もまた、本発明に包含される。これらのペプチドは、標準的な化学技術例えば、固相合成を用いるか、または組換え技術融合システム例えば、グルタチオンSトランスフェラーゼDBSmithおよびKSJohnson、Gene673140,1988、チオレドキシンLaVallieら、Biotechnology11187193、1993、またはユビキチンButtら、PNAS8625404、1989;Cherneyら,Biochem.30104207,1991;Bakerら,JBC269253816,1994;米国特許第5,132,213号;第5,196,321号および第5,391,490号およびPCTWO9117245を用いる融合システムを含むを用いることにより合成され得る。これらの論文、適用、および特許のそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。さらに、本発明は、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞と、オピエートレセプター、好都合には、オピエートレセプターのμサブクラスに結合し得る化合物とを接触させる工程を含む方法を包含する。さらに、本発明は、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞とノシセプチンnociceptinレセプター例えば、ORL1に結合し得る化合物とを接触させる工程を含む方法を包含する。さらに、本発明は、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞と、オピエート様レセプター結合し得る化合物とを接触させる工程を含む方法を包含する。オピエート活性を示すペプチドヘモルフィンhemorphinと呼ばれるが、ヘモグロビンから単離されている例えば、Brantlら、Eur.J.Pharm、12530910、1986;Davisら、Peptides1074751、1989;Hoffmanら,PNAS87872125,1990;Hernanら,Biochem.31861928,1992;Karelinら、Bioch.Biophys.Res.Comm、2024105、1994;Zhaoら、Ann.NY.Acad.Science7504528、1995;Petrovら,BioscienceReports,15114,1995;Karelinら,16693697,1995。これらの論文のそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。他の異型のオピエートペプチドおよび小分子もまた存在するZioudrouら,JBC25424469,1979;QuirionおよびWeiss,Peptides4445,1983;Loukasら,Biochem.224657,1983;Brantl,Eur.J.Pharm.10621314,1984;Brantlら,Eur.J.Pharm.1112934,1985;BrantlおよびNeubert,TIPS767,1986;HurbyおよびGehrig,Med.Res.Rev.9343401,1989;Schiller,Prog.Med.Chem.28:30140,1991;Glamstaら,BBRC18410606,1992;Teschemacher,HandbookExp.Pharm.10449928,1993;HandbookofExperimentalPharmacology,A.Hertz編volumes104Iおよび104II,1993,SpringerVerlag,Berlin;Reedら,Neurosci.andBiobehav.Rev.1851925,1994;Karelinら,Peptides166937,1995。これらの論文のそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。本明細書中で使用されたように、オピエート様レセプターは、オピエート、INPROL、ヘモルフィンhemorphins、エキソルフィンexorphins、ノイセプチンnoiceptin、TyrMIF1ファミリーメンバー、アルカロイド、および/または適当量のナロキソンnaloxoneを含ませることにより拮抗されるように幹細胞増殖を阻害または刺激する他の化合物に結合するそれらの能力によって定義される実施例29および38を参照のこと。さらに、本発明は、レセプター単数または複数およびリガンドを同定する方法であって、結合アッセイにおいてINPROL好都合には、ペプチド194、197、4355または6482のようなペプチド形態を使用する工程を含む方法を包含する。さらに、本発明は、レセプター単数または複数およびリガンドを同定する方法であって、アデニル酸シクラーゼアッセイにおいてINPROLを使用する工程を含む方法を包含する。さらに、本発明は、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞とGTP結合タンパク質好都合には、これらのG阻害性サブタイプのタンパク質を活性化し得る化合物例えば、マストパランmastoparanとを接触させる工程を含む方法を包含する。本発明はまた、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞と、以下の配列を有するヘモルフィンペプチドの群から選択されるペプチドとを接触させる工程を含む方法を包含する:。上記ペプチドは、他の異型オピエートペプチド例えば、TyrMIF1ファミリー概説についてはReedら、Neurosci.Biobehav.Rev.1851925、1994を参照のこと、カゼイン由来カソモルフィンcasomorphinBrantlら、HoppeSeyler’sZ.Physiol.Chem.360121116、1979;Loukasら、Biochem.2245674573、1983;FiatおよびJolles、Mol.Cell.Biochem.87530、1989、シトクロームb由来のペプチドシトクロフィンcytochrophinと称されるBrantlら、Eur.J.Pharm.1112934、1985、ヒトおよびヒト以外の種由来の種々なエキソルフィンおよびオピエートペプチドZioudrouら,JBC25424469,1979;Brantl,Eur.J.Pharm.10621314,1984;Brantlら,Eur.J.Pharm.12530910,1986;BrantlおよびNeubert,TIPS767,1986;Glamstaら,BBRC18410606,1992;Teschemacher,HandbookExp.Pharm.10449928,1993;Karelinら,Peptides166937,1995、ならびにオピエートレセプターへの結合についてスクリーニングされたコンビナトリアルライブラリー由来ペプチド概説についてはDooleyら、PeptideResearch8124137、1995を参照のことに類似の配列類似性および/または生物学的活性を有する。これらの論文のそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。本発明はまた、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞と、TyrMIF1関連ペプチド、カソモルフィン、シトクロフィンおよびエキソルフィンからなる群から選択されるペプチドとを接触させる工程を含む方法を包含する。以下の配列を有するTyrMIF1ペプチドが特に含まれる:。本発明はまた、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞と、以下の群から選択されるオピエートペプチドとを接触させる工程を含む方法を包含する:。本発明はまた、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞と、モルヒネ、コデイン、メタドン、ヘロイン、メペリジンmeperidine、アルファプロジン、ジフェノキシラート、フェンタニール、スフェンタニル、アルフェンタニル、レボルファノール、ハイドロコドン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロモルフォン、プロポキシフェン、ブプレノルフィン、エトルフィン、オキシモルフォンデキストプロポキシフェンoxymorphonedextopropoxypheneおよびメプタジノールからなる群から選択されるオピエートアゴニスト化合物とを接触させる工程を含む方法を包含する。特に、107モル未満の阻害量のモルヒネが含まれる。本発明はまた、幹細胞増殖を阻害または刺激する方法であって、造血細胞と、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、ペンタゾシン、ナルブフィン、ブトルファノールからなる群から選択されるオピエートアンタゴニストまたは混合アゴニスト/アンタゴニストとを接触させる工程を含む方法を包含する。特に、108モル未満の阻害量のナロキソンが含まれる。本発明はまた、幹細胞増殖を刺激する方法であって、造血細胞と、INPROL、ミオグロビン、DAMGO、およびDALDAからなる群から選択されるタンパク質またはペプチドの幹細胞刺激量とを接触させる工程を含む方法を包含する。本発明はまた、哺乳動物において遺伝子療法を実施する方法を包含し、この方法は以下の工程を含む:a上記哺乳動物から造血細胞を取り出す工程、bエクスビボで上記造血細胞を幹細胞刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物で処理する工程、c予め決定された遺伝子で上記造血細胞をトランスフェクトまたは感染する工程、dエクスビボで上記トランスフェクト造血細胞と幹細胞阻害量のINPROLおよび/またはオピエート化合物とを接触させる工程、e上記哺乳動物に工程dの造血細胞を移植する工程、f必要に応じて、インビボで上記哺乳動物を幹細胞を阻害または刺激する量のINPROLおよび/またはオピエート化合物で処理する工程。本発明はまた、エクスビボで幹細胞拡大を実施する方法であって、この造血細胞を幹細胞阻害量のINPROLおよび少なくとも1つの刺激性サイトカインで処理する工程を含む方法を包含する。INPROLは、刺激性サイトカインと接触させる前、間、および/または後で、造血細胞と接触させられる。エクスビボでの幹細胞の拡大は、臍帯血、胎児肝、化学療法などの後または精製後例えば、CD34、CD38またはローダミンのようなマーカーを使用する蛍光活性化細胞選別によるの自家骨髄のような限られた供給源から十分量の幹細胞の産生が可能となる。特定の造血系列を選択的に増殖する能力はまた、臨床家が個々の患者の必要性に従って幹細胞移植を特別に設計することを可能とする。本発明はまた、エクスビボでの幹細胞の拡大を実施する方法であって、少なくとも1つさらなる刺激性サイトカインと共にまたはこれを伴わずに、造血細胞を幹細胞刺激量のINPROLで処理する工程を含む方法を包含する。INPROLは、刺激性サイトカイン単数または複数と接触させる前、間および/または後で、造血細胞と接触させられる。エクスビボで、幹細胞刺激剤は幹細胞および/または前駆細胞の拡大を可能にし、一方、幹細胞阻害剤は幹細胞の未分化状態に幹細胞を維持する。手順はまた、インビボで幹細胞阻害量でのINPROLの使用により、幹細胞を移植されるまで静止状態に維持することを最適化し得、後に幹細胞刺激量でのINPROLが、骨髄再生を刺激するために使用され得る。必要に応じて、造血細胞は2つの調製物に分割し得、そして幹細胞刺激量のINPROLで処置されたものは、幹細胞および/または前駆細胞の拡大を促進し、一方幹細胞阻害量のINPROLで処理された別のものは幹細胞をその未分化状態に維持する。次に、2つの調製物は組み合わされ得、そして患者に注入され得る。本発明はまた、aINPROLおよびb少なくとも1つの阻害性化合物MIP1α、TGFβ、TNFα、INFα、INFβ、INFγ、ペンタペプチドであるピロGluGluAspCysLys、テトラペプチドであるNアセチルSerAspLysPro、およびトリペプチドであるグルタチオンGlyCysγGluからなる群から選択されるを含む薬学的組成物を包含する。本発明はまた、aINPROLおよびb少なくとも1つの刺激性サイトカインIL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、IL11、IL13、IL14、IL15、GCSF、GMCSF、MCSF、エリスロポエチン、トロンボポエチン、幹細胞因子、δ様タンパクおよびflk2flt3リガンドからなる群から選択されるを含む薬学的組成物を包含する。本発明は、幹細胞阻害剤INPROLを記載する。この阻害剤は、MIP1α、TGFβ、Frindelおよびその共同研究者のテトラペプチド、またはPaukovitsおよびその共同研究者のペンタペプチドWrightおよびPragnell、1992前出参照のような当該分野で公知の阻害剤とは異なる。天然に存在するネイティブINPROLは、INPROLとテトラペプチドおよびペンタペプチドとを区別する限外濾過によれば、10,000ダルトンを超える分子量を有する。ネイティブINPROLは、逆相クロマトグラフィーシステムにおいてはMIP1αまたはTGFβよりも疎水性であり、これをそれらのサイトカインから区別する。さらに、その作用様式は、プレインキュベーションの期間でのみ用いられる場合に、インビトロアッセイで活性である点において、前記のいずれの阻害剤の作用様式とも異なる。例えば、MIP1αは、プレインキュベーションの期間でのみ用いられる場合、効果的ではない実施例5。さらに、天然に存在するINPROLは、高増殖性潜在細胞highproliferativepotentialcellsHPPPFCを測定するアッセイにおいて活性であるが、MIP1αは活性ではない実施例6。INPROLは、IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、IL10、IL11、IL12、IL13、IL14、IL15、IL16、GCSF、GMCSF、MCSF、エリスロポエチン、トロンボポエチン、幹細胞因子、およびflk2flt3リガンドのような当該分野では公知のこれらの刺激剤とは異なる。天然に存在するINPROLは、これらのサイトカインとはほとんどまたは全く配列類似性を示さない。本発明はまた、以下の項目を提供する:項目1.C末端疎水性ドメインが置換または欠失されているヘモグロビンα鎖を含むポリペプチド。項目2.C末端ハプトグロビン結合ドメインが置換または欠失されているヘモグロビンα鎖を含むポリペプチド。項目3.ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197を含むポリペプチド。項目4.a請求項1または2に記載のポリペプチドおよびb薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。項目5.ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197からなるポリペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。項目6.ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194からなるポリペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。項目7.単位投与量形態の請求項4から6に記載の薬学的組成物。項目8.01mgから6gの、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチドおよびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される1つまたは2つの化合物を含む、請求項7に記載の薬学的組成物。項目9.幹細胞増殖を阻害する方法であって、造血細胞と幹細胞増殖阻害量の請求項1または2に記載のポリペプチドとを接触させる工程を包含する、方法。項目10.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、および配列PheLeuGlyPheProThrを有するペプチドからなる群より選択される、請求項9に記載の方法。項目11.B細胞の増殖を刺激する方法であって、造血細胞と増殖刺激量の請求項1または2に記載のポリペプチドとを接触させる工程を包含する、方法。項目12.ガンに羅患している哺乳動物においてガンを処置する方法であって、該方法は以下の工程:a放射線療法または化学療法を投与する工程、およびb幹細胞増殖阻害量の請求項1または2に記載のポリペプチドを投与する工程、を包含する、方法。項目13.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチドおよびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項12に記載の方法。項目14.前記工程aおよびbが1回以上繰り返される、請求項12に記載の方法。項目15.前記工程aが前記工程bの後に行われる、請求項12に記載の方法。項目16.前記工程bが前記工程aの前または後の24時間以内に行われる、請求項12に記載の方法。項目17.哺乳動物においてガンを処置する方法であって、該方法は以下の工程:a該哺乳動物から造血細胞を取り出す工程、b該造血細胞を、請求項1または2に記載のポリペプチドでエクスビボで処理する工程、c該工程bの造血細胞を、化学療法または放射線で処理する工程、d該哺乳動物において骨髄切除処置を行う工程、およびe該工程cの造血細胞を該哺乳動物に移植する工程、を包含する、方法。項目18.前記工程bにおけるポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチドおよびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項17に記載の方法。項目19.幹細胞に損傷を与えるか、または破壊する薬剤に暴露された哺乳動物において幹細胞分裂を阻害する方法であって、幹細胞増殖阻害量の請求項1または2に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。項目20.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、および配列PheLeuGlyPheProThrを有するペプチドからなる群より選択される、請求項19に記載の方法。項目21.前記薬剤が抗ウイルス剤である、請求項19に記載の方法。項目22.哺乳動物造血幹細胞をエクスビボで維持する方法であって、造血細胞と幹細胞増殖阻害量の請求項1または2に記載のポリペプチドとを接触させる工程を包含する、方法。項目23.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、および配列PheLeuGlyPheProThrを有するペプチドからなる群より選択される、請求項22に記載の方法。項目24.前記造血細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、移動末梢血細胞、胎児肝臓、および臍帯血細胞からなる群より選択される、請求項22に記載の方法。項目25.骨髄増殖性疾患もしくは自己免疫疾患または上皮幹細胞過剰増殖を、それらに羅患している哺乳動物において処置する方法であって、過剰増殖減少量の請求項1または2に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。項目26.前記骨髄増殖性疾患が脊髄形成異常症候群である、請求項25に記載の方法。項目27.化学療法または放射線から哺乳動物における正常な幹細胞を区別して保護し、そしてガン細胞を保護しない方法であって、幹細胞保護量の請求項1または2に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。項目28.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、および配列PheLeuGlyPheProThrを有するペプチドからなる群より選択される、請求項27に記載の方法。項目29.前記正常な幹細胞が細胞傷害性薬物または放射線への暴露により増殖するように誘導された後に、前記ポリペプチドが投与される、請求項27に記載の方法。項目30.哺乳動物をワクチン接種する方法であって、ワクチン投与の前、間、または後に請求項1または2に記載のポリペプチドをアジュバントとして投与する工程を包含する、方法。項目31.幹細胞過剰増殖により引き起こされる免疫抑制を有する哺乳動物を処置する方法であって、該哺乳動物に過剰増殖後退量の請求項1または2に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。項目32.哺乳動物において遺伝子療法を行う方法であって、該方法は以下の工程:a造血細胞を該哺乳動物から取り出す工程、b該造血細胞を予め決定された遺伝子でトランスフェクトする工程、c該トランスフェクトされた造血細胞と請求項1または2に記載のポリペプチドとをエクスビボで接触させる工程、およびd該工程cの造血細胞を該哺乳動物に移植する工程、を包含する、方法。項目33.前記工程cにおけるポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチドおよびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項32に記載の方法。項目34.前記工程aの後に、幹細胞増殖を誘導するために、前記造血細胞を少なくとも1つの刺激性サイトカインで処理する工程をさらに包含する、請求項32に記載の方法。項目35.前記工程dの後に、前記哺乳動物を前記ポリペプチドでインビボで処置する工程をさらに包含する、請求項32に記載の方法。項目36.幹細胞拡大をエクスビボで行う方法であって、造血細胞と請求項1または2に記載のポリペプチドおよび少なくとも1つの刺激性サイトカインとを接触させる工程を包含する、方法。項目37.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、およびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項36に記載の方法。項目38.前記造血細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、移動末梢血細胞、胎児肝臓、および臍帯血細胞からなる群より選択される細胞である、請求項36に記載の方法。項目39.a請求項1または2に記載のポリペプチド、ならびにbMIP1α、TGFβ、TNFα、INFα、INFβ、INFγ、ペンタペプチドピロGluGluAspCysLys、テトラペプチドNアセチルSerAspLysPro、およびトリペプチドグルタチオンGlyCysγGluからなる群より選択される少なくとも1つの阻害性化合物を含む、薬学的組成物。項目40.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、およびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項39に記載の方法。項目41.a請求項1または2に記載のポリペプチド、ならびにbIL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、IL11、IL13、IL14、IL15、GCSF、GMCSF、MCSF、エリスロポエチン、トロンボポエチン、幹細胞因子、およびflk2flt3リガンドからなる群より選択される少なくとも1つの刺激性化合物を含む、薬学的組成物。項目42.前記ポリペプチドが、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、およびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項41に記載の方法。項目43.αヘモグロビンまたはその置換もしくは欠失アナログを発現させる方法であって、該αヘモグロビンまたは置換もしくは欠失アナログを、ユビキチン融合体として発現させる工程を包含する、方法。項目44.前記発現させる工程がEcoliにおいて行われる、請求項43に記載の方法。項目45.前記発現させる工程が、ユビキチン切断酵素を発現させる工程を包含する、請求項43に記載の方法。項目46.ビオチンPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、ヨードPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、PheProHisヨードPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、およびヨードPheProHisヨードPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnValからなる群より選択される配列を有するペプチド。項目47.幹細胞増殖を刺激する方法であって、造血細胞と幹細胞増殖刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物とを接触させる工程を包含する、方法。項目48.前記INPROLが、ヘモグロビンα鎖、ヘモグロビンβ鎖、ヘモグロビンγ鎖、ヘモグロビンδ鎖、ヘモグロビンε鎖、ヘモグロビンζ鎖、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、およびヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチドからなる群より選択される、請求項47に記載の方法。項目49.前記INPROLが、以下の配列:PheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、CysPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnValCysここで、2つのCys残基はジスルフィド結合を形成する、AspAlaLeuThrAsnAlaValAlaHisValAspAspMetProAsnAlaLeuSerAla、PheLeuGlyPheProThr、LeuValValTyrProTrpThrGlnArgPhe、LeuValValTyrProTrpThrGlnArg、LeuValValTyrProTrpThrGln、LeuValValTyrProTrpThr、LeuValValTyrProTrp、LeuValValTyrPro、ValValTyrProTrpThrGln、TyrProTrpThrGlnArgPhe、TyrProTrpThrGlnArg、TyrProTrpThrGln、およびTyrProTrpThr、からなる群より選択される、請求項47に記載の方法。項目50.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項47に記載の方法。項目51.幹細胞増殖を刺激する方法であって、造血細胞とオピエートレセプターに結合し得る化合物とを接触させる工程を包含する、方法。項目52.前記化合物がμサブクラスのオピエートレセプターに対する選択性を有する、請求項51に記載の方法。項目53.幹細胞増殖を刺激または阻害する方法であって、造血細胞とノシセプチンレセプターに結合し得る化合物とを接触させる工程を包含する、方法。項目54.幹細胞増殖を刺激または阻害する方法であって、造血細胞とG阻害性サブクラスのGTP結合タンパク質を活性化し得る化合物とを接触させる工程を包含する、方法。項目55.幹細胞増殖を刺激または阻害する方法であって、造血細胞と古典的μ、κ、もしくはδオピエートレセプターまたはORL1を含まないオピエート様レセプターに結合し得る化合物とを接触させる工程を包含し、ここで該レセプターはa幹細胞刺激および/または阻害特性を有し、そしてbナロキソンにより拮抗可能な該幹細胞刺激および/または阻害能力を有する、方法。項目56.前記オピエート様レセプターが、1μM未満またはそれに等しい解離定数Kdで、ペプチドPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnValに結合する能力を有する、請求項55に記載の方法。項目57.前記解離定数が10nM未満またはそれに等しい、請求項55に記載の方法。項目58.INPROLに対するレセプターを同定する方法であって、レセプター結合アッセイにおいて該レセプターを含む物質とINPROLとを接触させる工程を包含する、方法。項目59.前記INPROLが、ヘモグロビンα鎖、ヘモグロビンβ鎖、ヘモグロビンγ鎖、ヘモグロビンδ鎖、ヘモグロビンε鎖、ヘモグロビンζ鎖、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、PheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、ビオチンPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、ヨードPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、PheProHisヨードPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、ヨードPheProHisヨードPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、CysPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnValCys、およびAspAlaLeuThrAsnAlaValAlaHisValAspAspMetProAsnAlaLeuSerAla、からなる群より選択される、請求項58に記載の方法。項目60.INPROLに対するレセプターを同定する方法であって、アデニル酸シクラーゼアッセイにおいて該レセプターを含む物質とINPROLとを接触させる工程を包含する、方法。項目61.前記INPROLが、ヘモグロビンα鎖、ヘモグロビンβ鎖、ヘモグロビンγ鎖、ヘモグロビンδ鎖、ヘモグロビンε鎖、ヘモグロビンζ鎖、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、PheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、ビオチンPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、ヨードPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、PheProHisヨードPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、ヨードPheProHisヨードPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、CysPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnValCys、およびAspAlaLeuThrAsnAlaValAlaHisValAspAspMetProAsnAlaLeuSerAla、からなる群より選択される、請求項60に記載の方法。項目62.ガンを羅患している哺乳動物においてガンを処置する方法であって、該方法は以下の工程:a放射線療法および/または化学療法を投与する工程、およびb幹細胞増殖刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物を投与する工程、を包含する、方法。項目63.前記工程aおよびbが1回以上繰り返される、請求項62に記載の方法。項目64.前記工程aが前記工程bの前に行われる、請求項62に記載の方法。項目65.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項62に記載の化合物。項目66.幹細胞に損傷を与えるかまたは破壊する薬剤に暴露された哺乳動物において幹細胞分裂を刺激する方法であって、幹細胞増殖刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物を投与する工程を包含する、方法。項目67.前記薬剤が抗ウイルス剤または抗腫瘍剤である、請求項66に記載の方法。項目68.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項66に記載の方法。項目69.哺乳動物造血幹細胞をエクスビボで維持する方法であって、造血細胞と幹細胞増殖刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物とを接触させる工程を包含する、方法。項目70.前記造血細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、移動末梢血細胞、胎児肝臓、および臍帯血細胞からなる群より選択される、請求項69に記載の方法。項目71.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項69に記載の方法。項目72.骨髄増殖性疾患、造血幹細胞過剰増殖または上皮幹細胞過剰増殖を、それらを羅患している哺乳動物において処置する方法であって、刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物を投与する工程を包含する、方法。項目73.前記骨髄増殖性疾患が脊髄形成異常症候群または再生不良性貧血である、請求項72に記載の方法。項目74.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項72に記載の方法。項目75.幹細胞消耗を処置または予防する方法であって、幹細胞増殖阻害量のINPROLおよび/またはオピエート化合物を投与する工程を包含する、方法。項目76.前記幹細胞消耗が後天性免疫不全症候群によるものである、請求項75に記載の方法。項目77.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項75に記載の方法。項目78.化学療法または放射線から哺乳動物における正常な幹細胞を区別して保護する方法であって、幹細胞保護量のオピエート化合物を投与する工程を包含する、方法。項目79.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項78に記載の方法。項目80.哺乳動物において遺伝子療法を行う方法であって、該方法は以下の工程:a該哺乳動物から造血細胞を取り出す工程、b該造血細胞を、幹細胞刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物でエクスビボで処理する工程、c該造血細胞を予め決定された遺伝子でトランスフェクトまたは感染する工程、d該トランスフェクトされた造血細胞と、幹細胞阻害量のINPROLおよび/またはオピエート化合物とをエクスビボで接触させる工程、e該工程dの造血細胞を該哺乳動物に移植する工程、f必要に応じて、該哺乳動物を幹細胞阻害量または刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物でインビボで処置する工程、を包含する、方法。項目81.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項80に記載の方法。項目82.幹細胞拡大をエクスビボで行う方法であって、造血細胞と幹細胞刺激量のINPROLおよび/またはオピエート化合物とを接触させる工程を包含する、方法。項目83.前記造血細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、移動末梢血細胞、胎児肝臓、および臍帯血細胞からなる群より選択される細胞である、請求項80に記載の方法。項目84.前記オピエート化合物が、モルヒネ、エトルフィン、コデイン、ヘロイン、ヒドロモルフォン、オキシモルフォン、レボルファノール、レバロルファン、コデイン、ハイドロコドン、オキシコドン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブタノルファノール、ナルブフィン、メペリジン、アルファプロジン、ジフェノキシレート、フェンタニル、DAMGO、DALDA、およびノシセプチンからなる群より選択される、請求項80に記載の方法。項目85.aオピエート化合物、ならびにbMIP1α、TGFβ、TNFα、INFα、INFβ、INFγ、ペンタペプチドピロGluGluAspCysLys、テトラペプチドNアセチルSerAspLysPro、およびトリペプチドグルタチオンGlyCysγGluからなる群より選択される少なくとも1つの阻害性化合物を含む、薬学的組成物。項目86.aオピエート化合物、ならびにbIL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、IL11、IL13、IL14、IL15、GCSF、GMCSF、MCSF、エリスロポエチン、トロンボポエチン、幹細胞因子、およびflk2flt3リガンドからなる群より選択される少なくとも1つの刺激性化合物を含む、薬学的組成物。項目87.哺乳動物において疼痛を処置する方法であって、鎮痛誘導量のINPROLを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。項目88.前記INPROLが、ヘモグロビンα鎖、ヘモグロビンβ鎖、ヘモグロビンγ鎖、ヘモグロビンδ鎖、ヘモグロビンε鎖、ヘモグロビンζ鎖、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、PheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、CysPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAraGlnValCys、およびAspAlaLeuThrAsnAlaValAlaHisValAspAspMetProAsnAlaLeuSerAla、からなる群より選択される、請求項87に記載の方法。項目89.哺乳動物における免疫不全を処置する方法であって、免疫刺激量のINPROLを該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。項目90.前記INPROLが、ヘモグロビンα鎖、ヘモグロビンβ鎖、ヘモグロビンγ鎖、ヘモグロビンδ鎖、ヘモグロビンε鎖、ヘモグロビンζ鎖、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸197の配列を有するポリペプチド、ヒトαヘモグロビン鎖のアミノ酸194の配列を有するポリペプチド、PheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAlaGlnVal、CysPheProHisPheAspLeuSerHisGlySerAraGlnValCys、およびAspAlaLeuThrAsnAlaValAlaHisValAspAspMetProAsnAlaLeuSerAla、からなる群より選択される、請求項89に記載の方法。本明細書中に記載される本発明がより十分に理解され得るために、以下の詳細な説明を記載する。この説明は、本発明の例示であるが、本発明を特に限定すると解釈されるべきではなく、そして当業者の理解範囲であるような変化は本発明の範囲に入ると考えられるべきである。好適な実施態様の詳細な説明INPROLは、幹細胞の分裂を可逆的に阻害または刺激する。特定の理論に縛られることを望まないが、幹細胞阻害剤および刺激剤は、幹細胞が細胞周期を通って移行する割合に影響を与えることによってそれらの効果を発揮すると考えられる。特に、INPROLは、使用量に依存して造血幹細胞の細胞分裂を一時的に阻害または刺激することに効果的である。幹細胞増殖を阻害または刺激し得る化合物を臨床的に使用する能力は、例えば化学療法、幹細胞移植または遺伝子療法プロトコルの間の、造血幹細胞の細胞周期進行の精巧な制御を可能にする。従って、本発明の方法は、ガン細胞もしくはウイルスに感染した細胞を破壊するために用いられる化学療法剤もしくは放射線によって引き起こされる損傷から幹細胞を保護することによって、またはそのような損傷後の回復を刺激することによって、患者の造血系、骨髄系および免疫系に対する化学療法の望ましくない副作用を軽減することに用いられ得る。本発明の一つの実施態様では、INPROLは、化学療法剤が疾患細胞に作用している間の幹細胞分裂を阻害するのに十分な用量で患者に投与される。化学療法剤がその機能を発揮した後、INPROLによって阻害された幹細胞は、さらなる処置を受けずに分裂細胞に戻る。造血再生を高めることが所望されるならば、刺激性成長因子、サイトカインまたは幹細胞刺激量のINPROLがさらに用いられ得る。本明細書中で用いられる用語INPROLは、実施例におけるように精製された哺乳動物および非哺乳動物タンパク質、ヘモグロビン、ヘモグロビンのα鎖ヘム基を有するかまたは有しない、ヘモグロビンのβ鎖ヘム基を有するかまたは有しない、α鎖およびβ鎖の混合物ヘム基を有するかまたは有しない、およびこれらのタンパク質のフラグメントまたはアナログ例えば、α、β、γ、δ、ε、またはζ鎖、単独で、あるいは混合物、二量体、または多量体のいずれかとして、ヘム基を有するかまたは有しないを包含する。このようなフラグメントまたはアナログは、胚型、胎児型、または成体型を包含し、幹細胞増殖の阻害能および/または刺激能を有する。用語INPROLは、これらのタンパク質の天然に存在する形態ならびに天然に存在しない例えば、組換え的および/または合成的に生成された形態を包含する。用語INPROLポリペプチドは、40以上のアミノ酸からなるINPROLをいう。本明細書中で用いられる用語オピエート化合物は、オピエートレセプターまたは、オピエートレセプターに配列関連性のあるレセプター、例えばORL1に結合し、そしてアゴニスト、アンタゴニスト、または混合アゴニスト/アンタゴニストのいずれかの活性を発揮する、INPROLではないオピエートを含む化合物である。例えば、特異的アゴニストおよびアンタゴニストが、μレセプターこれは、DAMGOおよびDALDAによって選択的に活性化され、そしてCTOPおよびナロキソナジンnaloxonazineによって選択的に拮抗される、κレセプターこれは、GR89696フマル酸塩またはU69593によって選択的に活性化され、そしてnorビナルトルフィミンbinaltorphimine塩酸塩によって選択的に拮抗される、δレセプターこれは、DADLEおよびDPDPEによって選択的に活性化され、そしてナトリンドールnatrindole、によって選択的に拮抗されるについて存在する。さらに、3つのレセプターサブタイプの全てに作用する、広域スペクトルアンタゴニスト例えば、ナロキソンおよびアゴニスト例えば、エトルフィンが存在する。ノシセプチンnociceptinはORL1レセプターを特異的にアゴナイズする。幹細胞の刺激および/または阻害活性を有するオピエート化合物は、INPROLについて本明細書中に記載された適用のそれぞれに使用され得る。本明細書中で用いられる幹細胞刺激量は、幹細胞の増殖を誘導する量である。本明細書中で用いられる幹細胞阻害量は、幹細胞の増殖を阻害する量である。全ての場合において、インビボおよびエクスビボの両方で、選択される量は、選択された特定のINPROLまたはオピエート化合物および特定の条件または適用に依存する。とりわけ、INPROLのポリペプチドまたはフラグメントの等モル用量は、オピエートペプチドまたは小分子と等モルとして活性である。典型的な臨床状況においては、幹細胞の阻害を所望するのであれば、INPROLは、例えば、001~100mgkg、好都合には01~10mgkgのINPROLを、例えば幹細胞の細胞周期進行を阻害することが望ましい場合は、標準的化学療法または放射線照射処置の4~60時間前に投与することを用いて、投与量単位形態で静脈注射または点滴により日毎のレジメで患者に投与される。化学療法または放射線照射後の回復を促進するために、幹細胞の細胞周期進行の刺激が所望される状況では、幹細胞刺激量でINPROLが使用される。そのような用量は、典型的には1500mgkg、好都合には10mg~100mgkgである。幹細胞の細胞周期進行を阻害または刺激するためにオピエート化合物単数または複数を使用することが所望される場合では、オピエート化合物単数または複数は、INPROLについて記載した濃度の等モルで使用される。本発明の別の実施態様では、幹細胞阻害量のINPROLによる前処置により、患者が通常耐えられる用量を上回る量への化学療法剤用量または放射線量の増大が可能になる。同様に、幹細胞刺激量でのINPROLを用いた化学療法後または放射線後の処置はまた、化学療法または放射線照射の通常耐えられる用量の増大を可能にする。大部分の造血幹細胞は通常静止ゆっくり細胞周期を進行しているか、全く進行していないしている。しかし、化学療法誘導性造血損傷に対する代償応答として、多くの割合の幹細胞が化学療法後に細胞周期進行に入る。それにより、細胞は、特に、次の用量の細胞傷害性化学療法または治療的放射線照射に対して抵抗力のないものとなる。このような幹細胞の細胞周期進行を阻害することにより、INPROL処置によって、次の用量の細胞傷害性化学療法をより早くまたはより頻度を高くして投与すること従来用量または高用量のいずれかでが可能になる。いくつかの正常な個体は、自然にすばやく細胞周期に入る幹細胞を有する。幹細胞阻害量のINPROLは、たとえ初回の用量の放射線照射または化学療法の前に与えるとしてもそのような個体には有用である。本発明の1つの実施態様では、INPROL01mg~6g/kg体重-好都合には10~60mgkgは、化学療法の初回用量の投与から約24時間~10日後に投与される。さらに4~60時間後、好都合には24~48時間後、次回の用量の化学療法が投与される。この化学療法とINPROLとを交互に行うサイクルは、治療上の利点に従って続けられる。化学療法剤および投与プロトコルは、標準的な医療実施における特定の腫瘍タイプに対する適合性に従って選択される。必要に応じて、GCSF、幹細胞因子、または幹細胞刺激量のINPROLのような刺激性成長因子が、化学療法または放射線照射処置の後に用いられて、さらに造血再構築を改善する。エクスビボ適用のためには、幹細胞増殖の阻害が所望される場合では、106細胞ml当たり01ng~100ng、好都合には106細胞ml当たり2~50ngのINPROLが用いられる。幹細胞の刺激が所望される場合では、106細胞ml当たり10ng~100μg、好都合には106細胞ml当たり1~100μgのINPROLが用いられる。オピエート化合物を幹細胞の細胞周期進行の阻害または刺激のために使用することが所望される場合は、オピエート化合物単数または複数はINPROLについて記載された濃度と等モル濃度で用いられる。本発明の別の実施態様では、INPROLは、移植のための自家造血細胞を調製するための方法において用いられる。造血細胞は、有効量のINPROLでエクスビボで処理されて、幹細胞分裂を阻害し、次いで骨髄培養物に有効量の化学療法剤または放射線照射を投与することによってガン性細胞をパージする。細胞周期が進行している細胞に特異性を有する化学療法剤が好ましい。このように処理された骨髄は、自家ドナー内に再注射される。必要に応じて、患者は、幹細胞刺激量のINPROLおよび/または造血を刺激することが知られている別の薬剤で処置されて、患者の造血再構築を改善する。このような技術によって自家骨髄移植片の間の腫瘍細胞を効果的にパージするが、一方造血幹細胞を保護することが可能になる。このような保護は、エクスビボまたはインビボのいずれかのパージングのプロトコルを与え得る。一旦首尾良く移植されたら、幹細胞を迅速に増殖させて、正常な骨髄機能を再生させる必要がある。これは、幹細胞の細胞周期進行を刺激しそして骨髄機能の回復を増強する幹細胞刺激量でのINPROLの使用によって与えられ得る。本発明の別の実施態様では、INPROLは、遺伝子療法のための造血細胞を調製するための方法において用いられる。造血細胞はエクスビボで幹細胞刺激量のINPROLおよび/または他の刺激性サイトカイン単数または複数で処理されて幹細胞の分裂を刺激し、次に目的の遺伝子単数または複数でトランスフェクトする好都合には、例えばレトロウイルスベクターを用いて感染させる。トランスフェクションが達成された後、細胞を洗浄し、そして幹細胞阻害量のINPROLで処理して幹細胞を静止状態に戻す。このように処理された骨髄は、ドナーに再注入される。必要に応じて、患者は幹細胞阻害量のINPROLでインビボで処理されて、幹細胞がそれらの静止形態に維持され、そしてそれらの骨髄再生能が増大する。本発明の別の実施態様では、INPROLは、白血病処置の補助的な処置として用いられる。例えば、白血病細胞がINPROLに応答しない病態において、造血細胞はエクスビボで幹細胞阻害量のINPROLにより処理される。正常幹細胞の増殖はINPROLの投与により妨げられる。従って、増殖する白血病細胞が細胞周期に特異的な細胞傷害性薬剤により処理されている間は、正常幹細胞の集団は損傷から保護される。さらに、IL3、GMCSFのような刺激性サイトカインは、薬物処置または放射線照射処置の間に必要に応じて投与されて白血病細胞における細胞周期の進行を誘導するが、正常幹細胞はINPROLにより保護される。患者は、白血病細胞を破壊するために化学療法剤または放射線により処置され、次いでパージされた骨髄は、造血再構築を確立するために患者内に移植により戻される。同様に、血液細胞またはリンパ球に関与する重篤なウイルス感染例えば、HIV感染にかかった患者を処置するための本発明の別の実施態様においては、造血細胞はエクスビボまたはインビボでINPROLにより処理され、その後抗ウイルス剤、感染細胞を破壊する薬物、または感染細胞を排除するための抗体に基づく系により処理される。患者からウイルス性宿主細胞を根絶するための骨髄切除myeloablative抗ウイルスまたは骨髄切除化学療法の後、INPROL処理した骨髄は患者に戻される。本発明の別の実施態様では、INPROLは過剰増殖性幹細胞に関連した疾患を処置するために用いられる。例えば、乾癬は、皮膚の過剰増殖する上皮細胞によって引き起こされる障害であり、時には細胞傷害性薬物により処置される。幹細胞増殖を含む他の前新生物性病変はまた、幹細胞の増殖を阻害するために用いられる有効量のINPROLに影響されやすい。後天性免疫不全症候群の患者は、幹細胞の枯渇という結果となる異常に速い速度の幹細胞の細胞周期進行を有する。これらの患者はまた、幹細胞の細胞周期進行を阻害するのに有効な量のINPROLで処置することから恩恵を受ける。これらの使用のため、INPROLを含む局所的または経皮的な送達組成物例えば、軟膏、ローション剤、ゲル剤、またはパッチ剤は、非経口投与の代わりとして、適切な箇所で用いられる。ほとんどの白血病の場合、白血病前駆細胞は、INPROLにより影響を受けない分化細胞集団であり、従って上記のようなINPROLを用いる方法によって処理される分化細胞集団である。白血病前駆細胞が非常に原始期のものであり、INPROLによる阻害に対して直接的に感受性である場合には、白血病細胞の増殖は有効量のINPROLの投与によって弱められる。本発明の別の実施態様では、INPROLは、過剰増殖性幹細胞に関する障害を処置するために用いられる。例えば、骨髄形成異常症候群および再生不良性貧血は、骨髄の幹細胞の過剰増殖により引き起こされる障害である。幹細胞の過剰増殖に関与する他の症候群は、幹細胞刺激量のINPROLで処置可能である。モノクローナルまたはポリクローナルである抗体は、INPROLペプチドもしくはポリペプチドに対して標準的な技術によって生成される。これらの抗体またはINPROLペプチドもしくはポリペプチドは、当該分野で公知の多くのタイプの検出可能な標識により標識される。次いで、標識されたINPROLまたは抗INPROL抗体は、幹細胞マーカーとして用いられ、診断を目的として患者に直接それらを投与することによって幹細胞を同定および単離する。あるいは、これらの標識されたペプチド、ポリペプチドまたは抗体はエクスビボで用いられ、骨髄中の新生物形成細胞を除去する前にそれらを除き得るように造血細胞調製物中の幹細胞を同定する。同様の方法で、このような標識されたペプチド、ポリペプチドまたは抗体は、上皮性または他の幹細胞を単離および同定するために用いられる。さらに、標識されるかまたは標識されていないこのような抗体は、INPROL活性の中和によって治療的に、または循環しているINPROLレベルを検出することによって診断的に用いられる。INPROLは、標準的な技術を用いて、ヒト遺伝子または組換えヒトINPROLの発現用のcDNAライブラリーからクローニングされ得る。例えば、精製タンパク質から得られる配列情報を用いて、例えば32リンで標識され得るオリゴヌクレオチドプローブが構築され、そして適切なcDNAライブラリー例えば、骨髄由来をスクリーニングするために用いられる。あるいは、適切な供給源例えば、骨髄由来の発現ライブラリーは、抗体を用いて、または適切な機能的アッセイ例えば、実施例2に記載されるアッセイを用いて、INPROLをコードするcDNAについてスクリーニングされる。ヘモグロビン自体、ならびに個々のα鎖およびβ鎖は、当該分野において公知の方法を用いてクローニングおよび発現されているPagnierら、Rev.Fr.Transfus.Hemobiol.3540715,1992;Lookerら、Nature35625860,1992;MethodsinEnzymology231巻,1994。本発明は、以下を含むDNA配列を包含する:選択された非哺乳動物宿主による発現に好ましいコドンの取り込み;制限エンドヌクレアーゼ酵素による切断部位の供給;および付加的な開始、末端、または中間のDNA配列の供給、これらの配列は、容易に発現されるベクターの構築、あるいはヘモグロビンのα鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、および/またはζ鎖の生成または精製を容易にする。本発明はまた、ヘモグロビンα鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、および/またはζ鎖のポリペプチドアナログまたは誘導体をコードするDNA配列を提供する。これらアナログまたは誘導体は、1つ以上のアミノ酸残基の同一性または位置に関して天然に存在する形態と異なりすなわち、欠失アナログ、記載の全残基より少ない残基を含有する;置換アナログ、記載の1つ以上の残基が他の残基により置換される;および付加アナログ、1つ以上のアミノ酸残基がポリペプチドの末端または中間部分に付加される、かつ天然に存在する形態の一部または全ての特性を共有する。好都合な実施態様では、INPROLは、ゲノムクローニングもしくはcDNAクローニング、または遺伝子合成により得られた外因性DNA配列の原核生物または真核生物宿主発現例えば、細菌、酵母、高等植物、昆虫、および哺乳動物培養細胞によるの産物である。すなわち、好都合な実施態様では、INPROLは組換えINPROLである。代表的な酵母例えば、Saccharomycescerevisiaeまたは原核生物例えば、E.coli宿主細胞における発現産物は、いずれの哺乳動物タンパク質とも関連しない。脊椎動物例えば、ヒトではない哺乳動物例えば、COSまたはCHOおよび鳥類細胞における発現産物は、いずれのヒトタンパク質とも関連しない。用いられる宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリコシル化され得るか、またはグリコシル化され得ない。本発明のポリペプチドは、必要に応じて開始メチオニンアミノ酸残基-1位もまた含む。本発明は、ヘモグロビンのα鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、および/またはζ鎖のポリペプチドアナログのような他の産物もまた包含する。このようなアナログは、ヘモグロビンのα鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、および/またはζ鎖のフラグメントを包含する。周知の手順に従って、当業者は、本明細書中に記載の1つ以上の残基の同一性または位置に関して天然に存在する形態と異なる例えば、置換、末端および中間における付加、および欠失一次配列を有する微生物発現ポリペプチドをコードする遺伝子を容易に設計および製造し得る。あるいは、cDNA遺伝子およびゲノム遺伝子の改変は、周知の部位特異的変異誘発技術により容易に達成され得、そしてヘモグロビンのα鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、またはζ鎖のアナログおよび誘導体を生成するために用いられ得る。このような産物は、少なくとも1つのINPROLの生物学的特性を共有するが、他は異なり得る。例として、本発明の産物は、以下のようなα鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、またはζ鎖を包含する:例えば、欠失により短縮される;または加水分解に対してより安定である従って、天然に存在するよりもより顕著なまたはより長期間持続する効果を有し得る;あるいはOグリコシル化および/またはNグリコシル化のための1つ以上の潜在的な部位を欠失または付加するように改変されたか、あるいは欠失または置換例えば、アラニンまたはセリン残基によりされた1つ以上のシステイン残基を有しており、そして微生物系から活性形態でより容易に単離される;あるいはフェニルアラニンにより置換される1つ以上のチロシン残基を有し、そして標的タンパク質または標的細胞上のレセプターにある程度容易に結合する。α鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、またはζ鎖内の連続アミノ酸配列または二次コンフォメーションの一部のみを複製するペプチドフラグメントもしくはポリペプチドフラグメントもまた包含される。これらのフラグメントは、INPROLの1つの特性例えば、レセプター結合性を有し、そして他例えば、幹細胞阻害活性は有さない。本発明の産物のいずれか1つ以上が治療有用性Weilandら、Blut441735,1982を参照のことまたは他の情況例えば、阻害剤拮抗作用のアッセイにおける有用性を有するために、活性は必要でないことは注目すべきことである。競合的アンタゴニストは、幹細胞阻害剤またはそのレセプターの過剰生産の場合において有用である。さらに、生物学的活性を保持するタンパク質配列に由来するペプチドは、標準的な方法に従って化学的に合成され得る。本発明はまた、ヘモグロビンα鎖、β鎖、γ鎖、δ鎖、ε鎖、および/またはζ鎖のペプチドアナログまたは誘導体をコードする配列を提供する。これらアナログまたは誘導体は、1つ以上のアミノ酸残基の同一性または位置に関して天然に存在する形態と異なり例えば、欠失アナログ、記載の全残基より少ない残基を含有する;置換アナログ、記載の1つ以上の残基が他の残基、天然に存在するかまたは当該分野で公知の他のアナログ例えば、Dアミノ酸のいずれかにより置換される;および付加アナログ、1つ以上のアミノ酸残基が、安定性、溶解度、および/またはタンパク質分解に対する耐性を増大させるように化学修飾される、かつ天然に存在する形態の特性の一部または全ての特性を共有する。上記のようなペプチド配列は、種々の方法により同定され得る。アッセイにおいて活性な天然ヘモグロビン鎖例えば、α鎖の三次元構造と不活性な構造的に関連したタンパク質例えば、ミオグロビンとの比較は、三次元空間において異なるコンフォメーションを有し、従って活性ペプチドの候補領域である領域を同定し得る。別のアプローチは選択的タンパク質分解を用いる。このタンパク質分解では、タンパク質分解酵素は、ヘモグロビン鎖の限定消化において用いられる。この消化は、例えば逆相HPLCにより分離され、次いで幹細胞阻害についてアッセイされ得るペプチドを生じる。ペプチドはまた、化学合成例えば、固相合成によっても生成され得る;目的のヘモグロビン鎖例えば、α鎖の配列を含む一連の重複ペプチド例えば、15マーは、容易に生成され得、そして幹細胞アッセイにおいて試験され得る。コンビナトリアルライブラリーが生成され得、このライブラリーでは、複数の化学合成が実施され、かつ選択されたアミノ酸位置を変えることが可能であり、その結果、多くのスクリーニング用ペプチドアナログを生じる例えば、Dooleyら、PeptideResearch8124137,1995。あるいは、組換え法が用いられ得る。部位特異的変異誘発は、特定のヘモグロビン鎖の活性に必要な必須残基を同定するために用いられ得る。幹細胞阻害剤として活性であると知られる鎖例えば、α鎖の領域は、関連するが不活性なタンパク質例えば、ミオグロビンの領域と置換され得、そして幹細胞アッセイにおいて試験され得、これにより活性に必要な領域の同定が可能になる。このような同定された領域は、ペプチドとして発現され得、そして幹細胞周期アッセイにおいて活性について試験され得る。他の種に由来するINPROLの同種または類似のバージョンは、上記の本発明の治療的実施態様と同様に、種々の獣医学的使用に用いられる。幹細胞刺激量のINPROLは、細胞周期の進行している幹細胞を分裂しないかまたは緩徐にに分裂する休止期に可逆的に移行させることによって、それらに作用する。休止している幹細胞を刺激して分裂させることが望ましい場合例えば、ガンの化学療法剤または放射線により患者を処置した後、幹細胞刺激量のINPROLが用いられ得る。あるいは、またはさらに、コロニー刺激剤および他の造血刺激剤が被験体に投与される。このような因子の例としては以下のものが挙げられるが、それらに限定されない:MCSFCSF1、GMCSF、GCSF、巨核球CSF、トロンボポエチン、幹細胞因子、または他のサイトカイン例えば、IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、IL11、IL12、IL13、IL14、あるいはエリスロポエチン。INPROLポリペプチドまたは幹細胞阻害活性を有する活性フラグメントは、下記のプロトコルで例示されるように、精製されるか、または幹細胞阻害活性用の適切なバイオアッセイを組み合わせた従来の化学的プロセスによって合成される。本発明の1つの実施態様では、治療的に有効な量のINPROLタンパク質または治療的に有効なそれらのフラグメントは、薬学的に受容可能なキャリアと混合して用いられる。このINPROL組成物は、一般的に、非経口的注射または点滴によって投与される。皮下注射、静脈注射、または筋肉内注射の経路が、達成される治療的効果によって選択される。全身投与される場合、本発明における使用のための治療的組成物は、発熱物質非含有の非経口的に受容可能な水溶液の形態である。薬学的に受容可能な滅菌タンパク質溶液は、pH、等張性、安定性、キャリアタンパク質などに関する要件を有し、当該分野の技術に属する。INPROL療法において有用な適切な希釈剤、保存剤、安定化剤、乳化剤、アジュバント、および/またはキャリアと共に、治療的に有効な量の本発明のポリペプチド産物を含む薬学的組成物もまた、本発明により包含される。本明細書中で用いられる治療的に有効な量は、所定の条件および投与レジメで治療効果を提供する量を指す。このような組成物は、液剤、ゲル剤、軟膏、または凍結乾燥処方物もしくは他の乾燥処方物であり、そして種々の緩衝液内容物例えば、TrisHCl、酢酸、リン酸の希釈物、pHおよびイオン強度、表面吸着防止のための添加剤例えば、アルブミンまたはゼラチン、界面活性剤例えば、Tween20、Tween80、PluronicF68、胆汁酸塩、可溶化剤例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール、抗酸化剤例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、保存剤例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン、増量物または張度改変剤例えば、ラクトース、マンニトールを含み、ポリマー例えば、ポリエチレングリコールのタンパク質への共有結合、金属イオンとの複合体化、あるいは物質のポリマー性化合物例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、水性ゲルなどの粒状調製物中または上への取り込み、またはリポソーム、ニオソームniosome、マイクロエマルジョン、ミセル、単ラメラ小胞または多重ラメラ小胞、生分解性注入マイクロカプセルまたはマイクロスフェア、またはタンパク質マトリックス、赤血球影、スフェロプラスト、皮膚パッチ、または薬剤を放出またはパッケージングする他の公知の方法中への取り込みを含む。このような組成物は、INPROLの物理的状態、溶解度、安定度、インビボ放出速度、およびインビボ消失速度に影響を及ぼす。徐放性組成物または持続放出性組成物は、親油性デポ剤例えば、脂肪酸、ワックス、オイル中の処方物を包含する。ポリマー例えば、ポロキサマーまたはポロキサミンで被覆された粒状組成物および組織特異的レセプター、リガンド、または抗原に対する抗体に結合されたINPROL、あるいは組織特異的レセプターのリガンドに結合されたINPROLもまた、本発明により包含される。本発明の組成物の他の実施態様は、種々の投与経路のために、粒状形態の保護コーティング、プロテアーゼ阻害性因子、または浸透増強剤を取り込む。この投与経路としては、非経口投与、経肺投与、鼻内投与、局所皮膚または粘膜投与、および経口投与が挙げられる。別の実施態様では、INPROLを含有する組成物は、局所的にまたは経皮パッチを介して投与される。1つの実施態様では、本発明の組成物は、単位投与量形態で滅菌バイアルまたはアンプル中にパッケージされる。本発明は、1つ以上の付加因子例えば、化学療法剤例えば、5フルオロウラシル5FU、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、シスプラチン、カルボプラチン、ドキソルビシンdoxyrubicin、エトポシド、タキソール、アルキル化剤、抗ウイルス剤例えば、AZT、アシクロビル、TNF、サイトカイン例えば、インターロイキン、抗増殖薬、代謝拮抗物質、およびDNA代謝に干渉する薬物を含む組成物もまた包含する。そのような細胞傷害性薬剤に曝されることが予想される被験体を処置する方法または過剰増殖性幹細胞を処理する方法に含まれる投与量レジメは、担当の医師により、薬物の作用を改変する種々の要因例えば、症状、体重、性別、患者の規定食、感染の重篤度、投与時間、および他の臨床的要因を考慮して決定される。被験者が細胞傷害性薬剤または放射線に曝された後、本発明の治療方法は、1種以上のリンホカイン、コロニー刺激剤、または他のサイトカイン、造血素、インターロイキン、またはINPROLによる前処理により阻害される幹細胞およびそれらの派生物の成長および分裂を一般に刺激する成長因子を必要に応じて含む、幹細胞刺激量のINPROLを被験体に投与することを用いる。造血を促進するこのような治療剤としては、IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、MegCSF、MCSFCSF1、GMCSF、GCSF、またはエリスロポエチンが挙げられる。これらの薬剤の投与量は、化学療法または造血幹細胞移植後の造血再構築の促進における効能に対する臨床試験にそれらを用いたときに得られる知見によって選択される。これらの投与量は、患者の身体状態の変化および被験体が曝された化学療法剤または放射線の量およびタイプを補償するように調整される。処置を受けた患者へのINPROLの投与によって引き起こされる幹細胞の阻害の回復の進行は、従来の方法によってモニターされる。白血病の処置では、正常な幹細胞の細胞周期の進行を阻害するINPROLおよびIL3またはGMCSFのような白血病細胞の成長の刺激剤の両方を、細胞傷害性薬物処置または放射線照射の間に同時に投与することが有利である。このプロトコルにより、正常細胞および白血病細胞の細胞周期の進行状態と薬物感受性との間の最大の差違を達成し得る。実施例1:インビボ幹細胞増殖阻害アッセイ幹細胞増殖の検出のために、細胞周期のS期にあるCFUSの数を3Hチミジン自殺suicide法Beckerら、Blood26296308、1965により測定した。未成熟の造血前駆細胞脾コロニー形成単位CFUSは、致死量の放射線を照射したマウスの脾臓において肉眼で見えるコロニーを形成させることにより、インビボで、造血細胞の静脈注射の8~12日後に検出され得るTillMcCulloch、1961。標準的CFUS増殖アッセイに関しては、3Hチミジン自殺の方法が通常適用されるBeckerら、1965。この方法は、DNAの前駆体である放射標識したチミジン3HチミジンをDNA合成中の細胞内に取り込むことに基づいている。試験の時点で細胞周期のS期にあるこのCFUSは、高い放射活性により死滅しており、そのため脾臓ではコロニーを形成できない。従って、3Hチミジンなしでインキュベーションされた細胞サンプルと3Hチミジンとともにインキュベーションされた同じ細胞との間の、注射によって形成されるCFUSの数の違いは、元のサンプルにあった増殖性CFUSのパーセントを示す。阻害剤試験は、阻害剤が細胞周期が進行しているCFUS正常マウスの骨髄では全CFUS集団の7~10程の低さにのみ影響する限り、刺激を受けていない動物由来の骨髄幹細胞集団を用いて行うことはできない。CFUSの増殖を刺激するために、フェニルヒドラジンPHZ、または致死量以下sublethalの放射線照射を用いたLord、1976。本発明者らは、テストステロンプロピオネートTSPがCFUSの細胞周期の進行に刺激効果を及ぼすことByronら、Nature2281204、1970に基づいて、TSPを用いる方法を開発し、それによって試験は簡素化され、いかなる副作用も引き起こされなかった。TSPは、注射後20~24時間以内にCFUS増殖の刺激を誘導し、そしてその効果は少なくとも7日間見られ得た。阻害剤の精製の間に画分のスクリーニングに用いられた手順は以下の通りであった:マウス:全ての試験を通じてBDF1またはCBF1マウス種を用いた。30~35のCFUSをS期に誘導するために、ドナーマウスを、02mlマウスの腹腔内注射によって、10mg100gの用量のTSPで処理した。24時間後、細胞懸濁調製のため骨髄を大腿骨から取り出す。次いで、1ml当たり5×106から10×106個の細胞を異なるコントロールおよび試験画分と、37°Cで35時間水浴中でインキュベーションする各グループにつき試験管2本ずつ、1つはホット標識したもの用およびもう1つはコールド標識していないもの用。35時間後、3Hチミジン1mCiml、比活性18~25Cimmoleを、ホット用の各試験管に細胞懸濁液1ml当たり200μlずつの容量で添加し、コールド用の試験管には何も添加しない。37°Cでさらに30分間インキュベーションし続ける。30分間のインキュベーションの後、400μgmlの放射能活性のないチミジンを含む10mlの冷培地4°Cを添加することにより、死滅反応を停止させる。細胞を十分に洗浄する3回。細胞を再懸濁し、そして注射に望ましい濃度、通常マウス1匹当たり03~05ml中2~4×104個細胞、まで希釈する。1グループ当たり8~10匹のレシピエントマウスを注射の6時間以上前に放射線照射する。9~12日目にレシピエントの脾臓を集め、そしてTellesnitsky溶液中で固定して、コロニー数を目で数える。下式を用いてS期にある細胞のパーセントを計算する。ここで、a3Hチミジンを有さないCFUSの数ここで、b3Hチミジンを有するCFUSの数表1に示されるINPROLの試験データは、INPROLでの処理の後に細胞周期の進行している幹細胞が3Hチミジンの作用に対して耐性になることを示している。実施例1および以下の実施例の全てについて、用語pINPROLは、ブタ骨髄由来の精製タンパク質をいう。同じ保護が、S期特異的細胞障害性薬物であるシトシンアラビノシドおよびヒドロキシ尿素にも見られるデータは示していない。次いで、処理された幹細胞を放射能活性のないチミジンを含む冷培地で洗浄した場合、生き残った幹細胞はマウス脾臓内で増殖して、正常にコロニーを形成する。表1骨髄細胞との4時間のインキュベーションの間にpINPROLがCFUS増殖に及ぼす阻害活性2×104細胞当たりのCFUS。実施例2:インビトロ幹細胞増殖阻害アッセイ以下の試験系Lordら、TheInhibitorsofHematopoiesis227~239頁、1987を用いて、INPROLの直接的効果を示した。多系統multilineage因子IL3依存性幹細胞株であるFDCPmixA4A4を、コロニー刺激性IL3の供給源として、20ウマ血清および10WEHI3馴化培地を補充したIMDM培地中で維持した。トリチウム化チミジン取り込みアッセイを使用して増殖を測定した:A4細胞20ウマ血清および50WEHI3CMを有する100μlの培地中の5×104個を、5CO2中で37°C、16時間インキュベーションした。pINPROLまたは粗製のBME画分IVを開始時点で添加した。次いで、トリチウム化チミジン3HTdr50μl中の37KBq、740GBqmmoleを各グループに添加し、さらに3時間インキュベーションした。増殖レベルを集めた細胞によって測定し、そして阻害を下記の式を用いて計算した。。正常骨髄抽出物またはpINPROLを段階的な用量で存在させて増殖させたFDCPmixA4細胞によるトリチウム化チミジン3HTdr取り込みを図6に示す。pINPROLの精製組成物は出発物質より少なくとも1000倍活性が高いことがわかった。曝露時間16時間は、効果的な阻害についての重要な因子であり、そしてA4細胞株の幹細胞に、pINPROLの直接的な効果を及ぼしている証拠を示している。実施例3:インビボのINPROL注射によるCFUS増殖の阻害:用量および効果の持続期間インビボで注射されたINPROLの効果の研究は、INPROLがCFUSの細胞周期への加入を効果的にブロックし得、これによりそれらの細胞をさらなる処理の細胞障害効果から保護し、その臨床使用への可能性を示すことを示した。実験プロトコルには2つの目的がある:インビボで注射された場合にCFUSに対するINPROLの効果をチェックすること、および、細胞周期の進行している幹細胞に関してINPROL活性の有効持続期間を明確にすること。CFUSの増殖を刺激するために、上記の実施例1で述べた効果に基づいて、テストステロンプロピオネートの注射を用いた。マウスBDF1をTSP10mg100gと共に第0日に注射した;24時間後に、各実験グループのマウス各グループあたり4匹に0μg、5μg、10μg、および15μg/マウスの用量で腹腔内にpINPROL注射を1回行った。pINPROL注射の24時間後、マウスを屠殺し、そして細胞周期の進行しているCFUSのパーセントを実施例1に記載されたアッセイにより測定した。TSP注射は、約50のCFUSを細胞周期に誘導したが、未処理のマウスでは7であった。2μg/マウス程度に低い用量のpINPROLは、TSPで誘導される増殖を阻害して正常レベルまで下げ得た。効果評価の持続期間の間、一方のグループのマウス1グループ当たりマウス21匹にTSPのみを注射し、そして他方のグループにTSPとpINPROLTSPの24時間後の両方を注射した。CFUSの細胞周期の進行は、各グループから3匹ずつドナーを取り出して、記載した方法実施例1参照で骨髄のCFUSの細胞周期の状態を測定することにより、1週間、24時間毎に測定された。図7に示すデータは、TSPの有効持続期間は少なくとも7日間であるが、1回のINPROLの注射によりCFUSは休止期に入り、わずか48~72時間は細胞周期に入らないようにすることができることを示している。ガンおよび白血病の化学療法に用いられる化学療法剤の大多数はインビボでの半減期は比較的短い通常24時間より短いので、得られたデータによれば、INPROLの効果はシトシンアラビノシドまたはヒドロキシ尿素のような化学療法剤がインビボで活性である間は有効期間よりも長く維持される。さらに重要なことは、第1回目の処理幹細胞に損傷を与えないと第2回目の処理CFUSに損傷を与えるとの間により長い間隔24時間より長く96時間より短いを有する化学療法および放射線療法に対しては、化学療法剤または放射線照射の2回の適用の間の間隔にINPROLを1回注射すれば十分である。繰り返し行う数回の細胞傷害性治療または放射線照射に関しても、INPROL効果の持続期間に基づいて同じストラテジーを適用し得た。実施例4:5FUによる処理の後、迅速に周期に入るように刺激された最原始造血幹細胞は、INPROLにより第2回目の5FU被曝から保護される薬剤5フルオロウラシル5FUは、骨髄およびリンパ球の区画compartment中の細胞数を劇的に減少させる。それは通常、細胞周期特異的であり、細胞周期のS期の間または前にヌクレオチドアナログをDNA内に取り込むことは細胞死となるので、増殖細胞を迅速に標的とすると考えられている。マウスの骨髄の長期生存および免疫造血再構築は、5FUの1回の用量では影響を受けない;しかし、多能性造血幹細胞PHSCは最初の投薬後約3~5日間という短い期間に第2回目の5FUの投薬に対して攻撃されやすくなるということが示されたHarrisonら、Blood781237~1240、1991。PHSCは、通常、5FUの1回の投薬に対して細胞周期が遅すぎて効果的ではなく、そして第1回目の5FU処理の結果起こる刺激により刺激されて迅速に細胞周期に入ることが説明され得る。本発明者らは、PHSCは、INPROLにより遅い細胞周期状態に戻り得、これにより2回目の5FU処理から保護され得るということを提案した。これらの実験に用いられたマウスは、BDF1雄マウスであった。5FUSigmaの貯蔵液を生理食塩水中で10μgmlの濃度に調製した。各処理マウスは、実験0日目に尾部静脈を介して体重10g当たり2mgの5FUを受けた;24時間後、マウスにpINPROL10μg体重100gを腹腔内注射し、そして3日目に第2回目の5FUの用量を注射した。生存研究は、各々30匹のマウスからなる実験グループpINPROL処理およびコントロールグループにおいて、マウスの死亡をモニターすることにより行った。生存曲線を図8に示す。実施例5:骨髄細胞におけるINPROLでプレインキュベーションした場合とMIP1αでプレインキュベーションした場合の効果この実験の目的は、インビトロでのマウス骨髄細胞に対するpINPROLおよびMIP1αでプレインキュベーションした場合の阻害効果を比較することであった。以下の手順を用いた:インビボ:大腿骨から骨髄を採取する48時間前に、6~15週齢のBDF1マウスに200mgkgの5FUを腹腔内に注射する。インビトロ:単一の細胞をプールした懸濁液を計数し、そして5×106細胞を、pINPROLまたはMIP1αとともにまたはなしで、5ウマ血清、Lグルタミン添加IMDM培地とともに総容量2mlとして、37°Cおよび5CO2で4時間インキュベーションする。次いで、細胞を2回洗浄し、そして再計数した。それらを以下の最終条件下でメチルセルロースにプレートする:08メチルセルロース25ウマ血清20ngml組換え型マウスIL3Lグルタミン添加5×105細胞/mlIMDM培地プレートを11日間、37°Cおよび湿度100中5CO2で、インキュベーションした。50細胞より多いコロニーを計数した。。実施例6:INPROLはHPPCFC増殖を阻害するマウス再構築幹細胞および初期前駆体を評価するインビトロアッセイは、高増殖性潜在コロニーHPPPFCアッセイである;他の関連アッセイ、例えばCFUA、CFUGM、CFUEおよびCFUGEMMは、次第に制限された前駆細胞の集団を検出するMMoore、Blood17721222128、1991。この例は、pINPROLでの細胞の前処理が、それらの増殖を阻害するのに対し、MIP1αは、これらの実験条件下では阻害しないということを示す。BDF1マウスを、それらの骨髄をHPPCFC数に関してアッセイする前に、5フルオロウラシル200mgkg腹腔内で処置した。細胞を遠心分離により洗浄し、そして添加剤のない培地コントロール、pINPROL25ngmlまたはMIP1α200ngmlを含む培地のいずれかにおいて、106~5×106mlの密度で4時間インキュベーションした。インキュベーション後、細胞を洗浄し、そして30FCSならびに5637細胞株およびWEHI3B細胞株由来の組合せ馴化培地75の各馴化培地、Sharpら、1991の推奨によるを有する寒天03にプレートした。プレート濃度は、60mmの皿に5×104細胞/mlであった。14日目にコロニー数を計数し、そして結果を以下に示す。。これらの結果により、MIP1αは、プレインキュベーションの期間中にのみ存在した場合には、ほとんどの未成熟な前駆体の増殖を阻害しなかった。pINPROLは、これらの条件下で増殖を効果的に阻害し、生物学的活性という点から見るとpINPROLとMIP1αとの間には基本的な違いがあることを示している。実施例7:放射線誘導性骨髄形成不全からの回復に対するINPROL処理の効果骨髄形成不全は、放射線ガン療法の一次的制限毒性primarylimitingtoxicityである。いくつかの増殖因子例えば、GCSF、GMCSF、エリスロポエチンは、放射線誘導性骨髄形成不全からの回復を促進し得るということが示されてきた。幹細胞増殖の阻害剤の使用による保護という概念は、血液学的な損傷に上手く対処することにおける異なった補足的なアプローチである。初期に開発された処置手順実施例3、4に従い、致死量の放射線を照射されたマウスのモデルを確立した。9Gyのコバルト60を受けたマウスは10~14日後に死亡し始め;30日目までには死亡率は約50となる、ということは当該分野では公知である。この致死用量を、それを各45Gyずつの連続する2回の適用に分けて、投薬の間は3日間の間隔を置いて、本発明者らのモデルに用いた。予備データは、そのモデルの生存曲線が、9Gyによる1回の放射線照射で知られた生存曲線と非常に近いことを示した;さらに、CFUS増殖に関する試験は、第1回目の放射線照射の24時間後に35~50のCFUSが増殖するように誘導されることを示した。このような細胞は、第2回目の投薬の前に送達される幹細胞阻害剤により保護され得る。この可能性を試験するために、マウス50匹/グループに0日目に45Gyを照射し、その24時間後に、1つのグループにはpINPROL2μg/マウス、腹腔内を投与し、別のコントロールグループには生理食塩水を注射した。そして第2回目の放射線の照射用量45Gyを3日目に与えた。図9は、pINPROLの1回の用量を投与した後の増大した生存を示す。モデルの状態は、固形腫瘍により特徴付けられるガンを含むいかなるガンの処置にも臨床的に有意義であり、このような処置は、放射線照射の2回続けた投与の間に有効用量のINPROLを送達することによりガンを有する患者に投与し、それによってガンの処置に用いられる放射線の照射線量をより多くすることができる。この様式は化学療法剤にも広げることが可能なはずである。実施例8:自己骨髄移植へのINPROLの使用骨髄移植は、いくつかの白血病CML、AML、およびその他にとっては唯一知られた治療的な療法である。輸注のための自己BMTのエクスビボ調整により、白血病細胞の混入のない正常幹細胞の潜在的な自己供給源が提供され、そしてレシピエントの造血系を再生させてrepopulate、積極的で効果的な療法を可能にする。1.INPROL効果の研究用の長期骨髄培養物L1210白血病モデルはAraCによるパージの間、正常な造血を保持する長期骨髄培養物LTBMCをToksozらBlood55931936、1980に従って確立し、そして白血病細胞株L1210を2週間LTBMCと共培養した。正常前駆細胞および白血病前駆細胞の同時増殖は、これらのLTBMCL1210の混合培養物内で起こり、それは白血病患者の骨髄内と同様の状況である。正常なコロニー形成単位CFUと白血病CFUとの間の区別は、WEHI3マウスIL3産生細胞株由来の馴化培地の存在下または非存在下での寒天コロニーとしてそれらを増殖させることにより可能であった。正常細胞は、IL3非存在下で、アポトーシスを受けるのに対し、白血病細胞はIL3非存在下でコロニーを形成し得る。LTBMCL1210組成物由来の懸濁細胞は、プレートされた50,000細胞当たり、IL3存在下で約150個のコロニー正常造血クローンを生じ、IL3なしで増殖した場合は70コロニー白血病クローンを生じた。パージ手順は、以下の通りであった:0日目に、全ての懸濁細胞および培地10ml/フラスコをLTBMCL1210の入っているフラスコから取り出し、そして200μgのシトシンアラビノシドAraCを含む2mlの培地で置き換えたTsyrlovaら、Leukemia:AdvancesinBiologyandTherapy、第35巻、1988;20時間のインキュベーション後、フラスコを洗浄し、そして2mlの新鮮な培地のみコントロールグループまたは25ngmlのpINPROLを含む培地で4時間置き換えた。このプレインキュベーションの後、細胞を100μg/フラスコのAraCとともに、37°Cで3時間再びインキュベーションした。各グループは4本のフラスコを含んだ。LTBMCL1210培養物を3回洗浄し、そして新鮮なLTBC培地で置き換えた;それらを再生研究のため前述のように3~4週間維持した。データを図10に示す。AraCのみで処理されたコントロール培養物には細胞の増殖が見られなかったが、INPROLで保護されたフラスコ内では、接着層由来の前駆細胞の増殖のため、造血再生がさらにより急速に起こった。さらに、実験グループ由来の細胞は、寒天にプレートされた場合、IL3存在下では50,000細胞当たりわずか約100CFUしか増殖しなかった;少なくとも4週間の間には白血病細胞の増殖は観察されなかった。従って、エクスビボでINPROLと組み合わせて、有効量のAraCにより処理された骨髄は、ガン細胞はパージされ得るが、幹細胞は保護される。この様式は他の形態の化学療法または放射線処置に拡げることが可能なはずである。2.骨髄再生能MRAおよび30日間放射線防御は、インビトロのINPROL処理により増大するMRAは、致死量の放射線を照射されたマウスの骨髄を再生する細胞の能力であり、30日間の放射線防御を付与する能力を伴っていて、骨髄抑制動物を救う潜在能力の直接的なインビボ測定であるVisserら、BloodCells14369~384、1988。放射線防御研究に関して、BDF1マウスは95Gyで放射線照射され、テストステロンで刺激されたドナー由来の骨髄の移植により回復した。レシピエントの1グループは培地でコントロール-グループA、そして別のグループグループBは25ngmlのpINPROLで、4時間プレインキュベーションされた骨髄細胞により回復した。両グループの細胞を洗浄し、そしてマウス1匹当たり30,000個の細胞を放射線照射された動物に移植した。生存データを示す図11。3つの実験の合計を、コントロールを100に正規化して示す。30日目までに、pINPROLによるインキュベーションにより、マウスの生存をコントロールグループの365から618まで増加させた。INPROLによるプレインキュベーションによって誘導されるMRAの増加は、放射線防御を改善するメカニズムの1つであり得る。この仮説を試験するため、Visserら前出に従ってMRAを測定した。簡潔に記載すると、ドナーBDF1マウスをテストステロンで前処理し、それらの骨髄を培地またはpINPROLで4時間プレインキュベーションし、そして放射線照射された動物に注射した。13日目に、レシピエントの大腿骨由来の骨髄細胞を、20ウマ血清、および10WEHICMの存在下で、3つの異なる濃度001、005、01当量の大腿骨で寒天に接種した。7日目のコロニー数は、その時点のレシピエントの骨髄中のコロニー形成細胞がドナーの未成熟幹細胞の前駆細胞である限り、MRAを表す。図12に見られ得るように、INPROLでプレインキュベーションされた細胞集団のMRAは、コントロールグループBの場合より多い。実施例9:INPROLの幹細胞への抗過剰増殖効果は、それらの分化の異常を変化させ得るCFUSの過剰増殖は、細胞障害性薬物または放射線照射からの回復中に見られるだけでなく、正常な加齢の結果としても見られ、そして骨髄異形成症候群MDSの主要な特徴であると考えられている。それは、顆粒球経路に沿った分化が減少する一方で、赤血球分化が広まるような分化障害を伴う。骨髄細胞を25ngmlのpINPROLまたは培地コントロールとともに37°Cで4時間インキュベーションし、洗浄し、次いで20ウマ血清、2Umlエリスロポエチン、および10WEHICMを有する寒天にプレートした。BFUEおよびGMCFUコロニーの数を7日目に計数した。表4に示すデータは、3つの実験をまとめたものであり、各グループから各時点で4匹を取り出し;4枚の皿にプレートした。表4から明らかなように、無傷の幼動物8~12週齢のBDF1由来の正常骨髄NBMをINPROLとともにインキュベーションすることにより、異なるタイプのコロニーの数または比率は変化しなかった。テストステロンプロピオネートTSPで前処理されたBDF1ドナーは、以前に観察したように実施例1、3、4、CFUS増殖における同じ増加、赤血球前駆細胞数BFUEコロニーにおけるわずかな増加、およびGMCFUにおける減少を示し、それはINPROLとのインキュベーションにより完全に妨げられた。さらに、異常に高いレベルのCFUS増殖は、細胞周期のS期に10のCFUSに戻った。CFUSの過剰増殖は、例えばBalbcマウス表4のようにウイルス性白血病誘発を受けやすいある種のマウス系統の特徴であることが知られており、そしてより高齢の動物においても観察され得る表4。TSP処理したBDF1マウスに見られた分化方向の決定付けられたcommitted前駆細胞と同じ再分布が、Balbcおよびより高齢23~25ヶ月齢のBDF1において観察され、それは一般に異常に高いレベルのCFUSの増殖を有する。CFUSの増殖および分化の両方の修正は、INPROLとのインキュベーションによって誘導された。臨床的により関連したことに、研究によって、INPROLのインビボ注射2μg/マウスがCFUSの増殖ならびに赤血球BFUEとGMコロニーとの比率の両方に影響することが示された表4。表4分化方向の決定付けられた前駆細胞BFUEおよびCFUGMへのCFUSの分化に対するINPROLの効果。実施例10:INPROLの免疫刺激活性増殖CFUSを高い比率で含む骨髄細胞とINPROLとのインキュベーションは、CFUSの周期を変えるだけでなく、それらの分化を、優勢な赤血球の分化から顆粒球およびリンパ球の前駆細胞へと切り換える。INPROLのこの特性は、細胞障害性の化学療法または放射線療法の免疫抑制的な副作用および過剰増殖幹細胞障害および加齢に伴う免疫抑制のために重要である。本実施例は、WittlockWitteAnnRevImmun3213~35、1985によって確立されたリンパ球長期培養LLTC由来の未成熟前駆体の前B前駆細胞への分化に対するINPROLの直接的な効果を示し、これはIL7を含むメチルセルロース中のコロニー形成によって測定される。LLTCを、記載されたように確立し、そして新鮮なLLTC培地TerryFoxLabs,Vancouver,Canadaを1週間に2回与えた。非接着細胞を1週間に1度採取し、因子を洗い流し、そして25ngmlのpINPROL、またはコントロールとして培地のみと4時間インキュベーションした。インキュベーションの後、細胞を洗浄し、そして105細胞/mlの濃度で、30FCSおよび10ngmlのIL7を含むメチルセルロース中にプレートした。3週間のデータを図13に示す。大きなpreBコロニーの数はコントロール中で変化し、時間とともに増加したが、INPROLとのプレインキュベーションは、常にコロニーの増殖をコントロールレベルの4~8倍に刺激した。このことは、免疫不全状態を修正し、そして例えばワクチン投与に対して所望の免疫応答を増加させるために有用であるINPROLの免疫刺激特性を示す。実施例11:INPROLは幹細胞の再生能を改善するCMLの患者由来の長期培養開始細胞慢性骨髄性白血病CMLは、造血幹細胞の致死的な悪性疾患である。慢性期にあるCMLを単一薬剤による化学療法、組み合わせ化学療法、脾摘出、または脾臓への放射線照射を用いて処置することは、臨床的徴候および症状を制御し得るが、生存を有意に伸ばすことはない。CMLが慢性状態から促進状態に進むと、標準的な療法は効果的でない。現在では、骨髄移植BMTがCMLに対する唯一の既知の治療的療法である。血縁でないドナーのBMTを用いる治療は、組織不適合性の問題により困難である。適格なCML患者の40未満にしか適切に適合する血縁のドナーがいない;従って自己移植が好ましい。長期培養LTCにおいて増殖するPh陽性患者由来の非白血病Ph陰性骨髄前駆細胞を選択する能力とともに、輸注のための自己BMTのエクスビボ調整は、正常幹細胞の自己供給源がCMLの積極的で効果的な治療を行い得る可能性を示唆する。BMTの状況においては、造血幹細胞は、長期間にわたって成熟した血液細胞を生成する能力を有する細胞として定義され得る。本発明者らは、CEavesAEavesによって開発されたヒトLTC系を、幹細胞数の定量用およびそれらの治療的使用のための操作手段の両方で用いた。これは、予め確立され、放射線照射されたヒト骨髄接着層上に細胞を接種することを包含し;次いでこれらの培養物を5週間維持する。エンドポイントendpointは、この期間の終わりに採取された培養物の総クローン原性細胞内容物接着および非接着である。このような条件下で生じたクローン原性細胞は、最初に添加された前駆細胞長期培養開始細胞LTCICの数と直線関係にある;個々のヒトLTCICから生じた平均は、1個のLTCICにつき4クローン原性前駆細胞である。CMLの患者由来の骨髄が同様の条件下に置かれた場合、白血病性Ph陽性クローン原性細胞は迅速に衰退することが以前に示されていた。CML患者の残った正常LTCICの定量を用いることにより、培養自己移植片の移植により支持される集中治療から利益を得やすい細胞を選択することが可能であるPhillipsら、BoneMarrowTransplantation8477~487、1991。以下の手順を用いて、CMLの患者の末梢血から確立された骨髄移植細胞中のクローン原性細胞LTCICの数に対するINPROLの効果を試験した。予め放射線照射した間質上の長期培養と同様に培養を開始した。健常ドナーの末梢血をコントロールとして用いた。CML患者由来の末梢血細胞を、pINPROL25ngmlとともに、またはなしで4時間プレインキュベーションし、洗浄し、そしてLTCIC系に5週間置き、LTCICのコントロール数を測定した。実験のために、別の平行培養を10日間確立した。10日間増殖させた培養物からの接着細胞および非接着細胞の混合物を、pINPROLとともに、またはなしでプレインキュベーションし、そしてさらに8週間予め確立したフィーダー上に置いた。各実験培養物由来のLTCICの数は、接着細胞および非接着細胞の両方を適当な増殖因子TerryFoxLaboratories、Vancouver、Canadaを有するメチルセルロース中にプレートし、そして得られた全コロニー形成細胞の数を計数することにより概算した。この手順を用いて得られたLTCIC値は、下記の式を用いた全クローン原性細胞CFC内容物の評価に由来した:LTCIC=CFC4。図14に示したデータは、健常ドナーの骨髄から始めた最初の10日間の培養中ではLTCICに損失がなく、そして投入したLTCIC数の約30が5週間たってもなお培養中に存在していたことを示す。CML患者のLTCIC数は、10日間の間に約8にまで劇的に低減し、そしてさらなるインキュベーション中、元には戻らなかったが、INPROLとともに細胞をプレインキュベーションすると、最初の数の30までLTCICレベルが増加し、そしてそれは8週間維持された。これらの予備データによって予想されるINPROLの臨床関連の適用は、新鮮なまたは培養されたの骨髄移植物の正常幹細胞内容物を選択的に改善するためのストラテジー、インビボの残存正常幹細胞の補充を高めるためのストラテジー、さらに患者へのさらなる移植のために新しい遺伝物質をヒト骨髄幹細胞に転移させるためのプロトコルにおけるそれらの使用を包含する。実施例12A:骨髄調製物由来の幹細胞増殖の免疫活性阻害剤の単離方法骨髄はブタの肋骨から単離した。ブタの胴体から肋骨を分離して筋繊維および脂肪を除き、細片に刻んで骨髄をBiophyzpribor社製の水圧プレスによって抽出した。骨髄細胞を、遠心機K70中で2,000rpmで20分間遠心分離することにより分離する。次いで、引き続き抽出上清をAmiconUSAメンブレンXM100、PM30、PM50により連続的に限外濾過にかける。電気泳動による分析によると、この生成物の主要な成分はアルブミンである図1参照。生物化学的精製画分の骨髄抽出物およびタンパク質成分を、精製の各段階で、01ドデシル硫酸ナトリウムを含む10ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分析した。7までのドデシル硫酸ナトリウムおよび05~1までのメルカプトエタノールをサンプルに添加し、そしてそのサンプルをゲルにロードする前に70°Cで5分間インキュベーションした。電気泳動は20Ycmのゲルで5時間行った。次いで、ゲルを、エタノール:水:酢酸が5:5:1の混合物中の025クーマシーCBBC250で20°Cで1時間染色し、そして7酢酸を数回交換して洗浄した。生成物の活性を造血幹細胞CFUS増殖の阻害方法により評価した。この方法を以下に詳細に述べる。ステージ1.硫安沈澱による精製活性を、表5の結果に基づいて選択された飽和度40~80で25の硫安を用いて沈澱させることにより精製した。。精製の各工程の後の試験に用いられる調製物の量は、精製レベルによって決定し、始めの生成物の2×102mgの用量と同じであった。活性を下式により決定した:変化=Sa-Sbここで、Saは、コントロールのSであり、Sbは、試験画分とのインキュベーション後のSである。画分は、各活性試験の前、および次の各精製工程の前に硫安濃度を20倍低くするために脱塩した。ステージ2.ステージ1由来の不純物のある阻害剤を、脱塩後にイオン交換クロマトグラフィーこの場合DEAE23セルロースを利用して分画し、次いで酢酸ナトリウム緩衝液pH60の勾配を用いて溶出する。阻害剤の活性画分は3~5mMの間に溶出する。カラム容積は1mlであり、溶出速度は4ml/時間であった。検出はクロマトグラフMillicromeにより230および280nmで行った。最も高い活性を示した画分1図2参照を単離し、5mM酢酸ナトリウム緩衝液中に溶出した表6参照。。電気泳動のデータは、主なタンパク質混入物であるアルブミン図3参照がこの画分から除かれることを示し、さらに4回の精製に続く。ステージ3.ステージ2由来の部分精製された阻害剤を直接G75Sephadexカラムにかける。カラム体積は20ml20×1であり、溶出速度は2ml/時間である。溶出緩衝液は50mMNaCl、10mMTrisHCl、pH75である。検出はクロマトグラフMillichromeにより230および280nmで行った。最も高い活性を示した画分5を単離した。。ステージ4.ProRECカラムを利用した逆相クロマトグラフィーPharmaciaFPLCSystemをUltrasferamatrix上で行った。タンパク質は01トリフルオロ酢酸のアセトニトリル勾配を用いて溶出した。分子量16~17kDの生成物の均質度は、アクリルアミド/ドデシル硫酸ナトリウムゲルの分析において示されるように、90に等しい図6参照。この結果を図4に示す。画分5についての活性を測定する。生成物の最終回収率は5である。結果として、精製後の分子量16kDのタンパク質の総量は始めの生成物の650ngmlである。精製プロセスの間、生成物は70°Cの加熱インキュベーションを数分受けたが、生物学的活性の損失は検出されなかった。実施例12B:より大量のINPROLを単離するための代替方法最初の単離新鮮なブタの胴体から採取した肋骨から筋繊維および脂肪を除き、次いでこれを刻んで細かくし、リン酸緩化衝生理食塩水に11重量/容量の比率で浸漬する。得られた混合物を水圧プレスで粉砕し、固体骨物質から骨髄を分離する。骨髄細胞懸濁液を回収し、そして4層のチーズクロスcheeseclothを通して固形粒子を濾過する。濾液を56°Cで40分間インキュベーションし、次いで氷浴で4°Cまで冷却する。得られた沈澱物を10,000gで30分間4°Cで遠心分離することにより除去し、廃棄する。清澄化した上清を、1容量の濃塩酸を含む10容量の撹拌された氷冷アセトンに30分間滴下して添加する。得られた混合物を4°Cに16時間保存し、完全な沈澱物を形成させる。次いで、沈澱物を20,000gで30分間4°Cで遠心分離することによりペレット化する。このペレットを冷アセトンにより洗浄し、そして乾燥する。HPLC精製ペレットを、5アセトニトリルMeCNおよび01トリフルオロ酢酸TFAを含むHPLC溶出緩衝液Aに溶かし、最終タンパク質濃度を8~10mgmlとする。この溶液05~06mlを、PolisilODS30010mcmが充填され、そして同じ緩衝液Aにより平衡化された250×46mmのHPLCカラムにロードする。溶出は緩衝液A中の緩衝液B90MeCN、01TFAの勾配により、流速1ml/分で、以下のプログラムに従って行う。時間、分Bの00405252590。100の緩衝液Bを5分間流すさらなる工程を用いて再平衡化の前にカラムを洗浄する。次いで、カラムを開始時の状態に戻すため再び平衡化し、そして次の部分のタンパク質溶液をカラムにロードし得る。代表的なクロマトグラムを表5に示す。分離の間、カラム溶出物をタンパク質ピークの検出のため280nmでモニターする。タンパク質物質を含む画分を回収し、分離したピークをプールして、30°Cでロータリーエバポレーターにかけて乾燥させる。得られた残渣を蒸留水に溶解し、生物活性試験およびSDSPAGE14ゲル、還元条件によりアッセイする。活性物質を含むピークは、緩衝液Bが70と80との間に溶出され、SDSPAGEによってアッセイされたように、16kDの主要なタンパク質バンドおよび速く移動するタンパク質の痕跡を含む。第2の主要なHPLCピークのみを回収することにより得られた物質の分析を、図15AおよびCに示す。両方のピークを含む物質例えば、表5を、本明細書中ではpINPROL調製物1といい、そして第2のピークのみからなる物質をpINPROL調製物2という。500μgのこの活性な、精製pINPROL調製物2をC4逆相カラムVydacにロードし、そして01トリフルオロ酢酸中の5~95アセトニトリルの直線勾配を用いて溶出した。その物質は53アセトニトリルで単一ピークとして溶出した図15A。しかし、250μgのMIP1αRDSystemsを同じ条件で流した場合、それは439アセトニトリルで溶出した図15B-14アセトニトリルより前に溶出する初期のピークは人工的で検出器内の気泡によることを銘記されたい。従って、天然に存在するINPROLは、実質的には、これらのような条件下ではMIP1αより疎水性である。TGFβはこれらの条件下ではpINPROLで観察される濃度より低い濃度で溶出することが知られているMiyazonoら、JBiolChem.2636407~15、1988。溶出したpINPROL物質のゲルを図15Cに示す。レーン1は粗物質、レーン2は、分子量マーカー、そしてレーン3は精製物質である。2本の主要なバンドがあり、1本は約14kD、そしてもう1本は約35kDである。この35kDのバンドは14kDのバンドのマルチマー形態であると考えられる。実施例13A:活性INPROL調製物は、ヘモグロビンβ鎖を含むpINPROLを、図5に示すように調製したすなわち、pINPROL調製物1実施例12Bを参照のこと。物質をSDSPAGEにかけ、そして標準的な技法を用いてニトロセルロースに移した。物質を、標準的な技術を用いて120AオンラインPTHAA分析器を有するABI477Aタンパク質シーケンサーを使用して、N末端配列分析に供した。以下のN末端配列が得られた:VHLSAEEKEAVLGLWGKVNVDEVタンパク質データベースのコンピューターサーチは、この配列がブタヘモグロビンのβ鎖のN末端配列と同一性を有することを明らかにする図16Cを参照のこと。実施例13B:活性INPROL調製物はヘモグロビンα鎖を含む図15Cにおいて示されるように、図5に示される第2の主要なピークを回収することにより精製したタンパク質すなわち、pINPROL調製物2は、分子量約15Kおよび30Kに対応する2つの主要なバンド、ならびに幾つかのマイナーバンドを生じた。SDSPAGEゲルを、標準的な技術を用いてニトロセルロースに移し、そして個々のバンドを切り出して、実施例13Aに記載のように、N末端配列決定分析に供した。15kDのバンドについては以下のN末端配列が得られた:VLSAADKANVKAAWGKVGGQ30kDのバンドを、制限タンパク質分解消化に供し、そして以下の内部の配列を得た:FPHFNLSHGSDQVK。第1の配列は、ブタヘモグロビンα鎖のN末端配列と同一性を示し、一方第2の配列はブタヘモグロビンα鎖の残基43~56と同一性を示したヒト、マウス、およびブタのαヘモグロビン鎖およびβヘモグロビン鎖の配列比較については図16Cを参照のこと。これらのバンドおよびいくつかのマイナーバンドの反復配列決定により、一貫して、αグロビン配列の部分を得た。従って、図15Cにおいて観察された種々のバンドは、ブタヘモグロビンα鎖のフラグメントまたは凝集体のいずれかを示す。実施例13C:ブタINPROLのさらなる特徴付けpINPROLとブタヘモグロビンとをさらに比較するために、2回結晶化したブタヘモグロビンをSigmaChemicalCompanyから入手し、そして実施例12Bにおいて図15について記載したように、逆相HPLCに供した。図17において示され得るように、完全なヘモグロビンのHPLCクロマトグラムは、pINPROL調製物1について示されるクロマトグラムに類似する。さらに、直接比較において、図17Aにおいて示されるpINPROL調製物2すなわち、図5の第2のピークに由来するは、ブタヘモグロビンの第2の2つのピークの調製物図17Bに重複することが見られ、主要ピークについての保持時間はそれぞれ5251分および5225分であった。ヘムが、この場合、49153分で、ヘモグロビンにおける第1の主要ピークと共移動comigrateすることに注意すべきである;それゆえ、ヘムはpINPROL調製物1の成分であるが、調製物2の成分ではない。このことは、ヘムの存在について診断する波長575nmでのこのpINPROL調製物の吸光の欠失により確認される。ブタヘモグロビンα鎖およびβ鎖の推定分子量は、それぞれ、15038ダルトンおよび16034ダルトンである。図18のSDSPAGEクロマトグラムにおいて示され得るように、第1の2つのピークはより高い分子量鎖から構成され、および第2の2つのピークはより低い分子量鎖からなる。したがって、第1の2つのピークはヘモグロビンβ鎖を示すようであり、および第2の2つのピークはヘモグロビンα鎖を示すようであった。ブタヘモグロビンのさらなる分離を、ゆるやかな溶出勾配を用いて行った図21。これらのピークのN末端分析は、第1のピークがブタα鎖であり、および第2のピークがブタβ鎖であることを示した。バイオアッセイ結果により、単離されたヘモグロビン鎖の両方が生物学的に活性であることが確認される例えば、実施例14および15を参照のこと。pINPROL調製物2およびヘモグロビンβ鎖のさらなる比較のために、2次元電気泳動を行った図19。1次元について、等電点を、9600ボルト時間について2pH4~8アンホラインを用いて、ガラスチューブ中で行った。トロポミオシン分子量33kD、pI52を、内部標準として用いた;その位置を最終的な2Dゲル上で矢印で記した。チューブゲルを緩衝液中で平衡化させ、そして125アクリルアミドスラブゲルの上部のスタッキングゲルの上部にシールした。SDSスラブゲル電気泳動を4時間、125mAゲルで行った。ゲルを銀染色し、そして乾燥させた。2D電気泳動のパターンの比較により、HPLC精製ヘモグロビンβ鎖とpINPROL調製物2との間で異なるスポットは、1つまたは2つの少数のスポットのみであることを示した。抗ブタヘモグロビン抗体、および1Dまたは2D電気泳動のいずれかを用いたウエスタン分析により、調製物中にβヘモグロビンが存在することを確認する。したがって、活性pINPROL調製物2実施例12Bにしたがって調製されるは、実質的にブタヘモグロビンβ鎖である。実施例14:ヘモグロビンα鎖、ヘモグロビンβ鎖、または完全なヘモグロビンは、幹細胞阻害活性を示すヘモグロビンβ鎖がINPROL活性を有することを確認するために、実施例1に記載したテストステロン処理したマウス由来の骨髄を用いた自殺アッセイを、実施例12Bにおけるように精製した物質を使用して実施例1に記載の方法論を用いて行った。表8に示すように、正常なマウスの骨髄細胞の15が、テストステロン処理動物の36とは対照的に死滅された。予想されたように、このことはテストロン処理が、細胞周期における細胞のパーセントを増加させるしたがって、細胞がより死滅されやすくする、例えば、実施例1ことを示している。より際だった対照において、40ngmlでpINPROLまたは精製ヘモグロビンβ鎖のいずれかとともにインキュベーションしたテストステロン処理した動物由来の細胞は、細胞周期における細胞のパーセントが、36から0および7に、それぞれ、劇的に減少することを示した。200ngのより高い用量は、両方のタンパク質についてほとんど効果がなかった。ポジティブコントロールとして、以前に特徴付けられた幹細胞阻害剤MIP1αは、13に細胞周期の進行を減少させた。同様のアッセイを、CFUSの代わりにCFUMIXの細胞周期の進行状態を用いて、インビトロで行い得る。高用量のトリチウム化されたチミジンBILord、HaemopoiesisAPracticalApproach,NGTestaおよびGMolineux編、IRL出版、1993;Pragnellら、CultureofHematopoieticCells,RIFreshney,IB.PragnellおよびMGFreshney編、WileyLiss1994の代わりに、シトシンアラビノシドAraC,30mgmlを細胞周期特異的毒性薬剤として用いた以外は、CFUSアッセイについて上述したようにアッセイを行い、そして高い内在性細胞周期速度を有するマウス系統Balbcをテストステロンで処理したBDF1マウスの代わりに用いる。表9において示すように、高度に精製されたブタβ鎖、または高度に精製されたブタα鎖は、このアッセイにおいて両方とも活性であった。このアッセイにおいて注目すべき点は、pINPROLで処理した細胞についての細胞周期の進行レベルが、場合によってはネガティブな数を有し、このことは、非処理のプールよりもAraCで処理したプールにおいてより多くのコロニーが存在することを示している。実施例2に記載したように、pINPROLは、トリチウム化したチミジン取り込みアッセイにおいて、マウス幹細胞FDCPMIX株の増殖を阻害する。図20は精製ヘモグロビンα鎖およびβ鎖が、2ngml未満で示される阻害を伴いつつ、このアッセイにおいて両方とも活性であることを示している。前述は、ブタヘモグロビンのβ鎖がINPROL活性を示すという証拠を提供する。他のデータ例えば、表9、図20は、単離されたα鎖、ならびに完全なヘモグロビンがまた、幹細胞阻害剤として活性であることを示す。活性な調製物にはまた、α鎖およびβ鎖の混合物が含まれる例えば、図5。単離されたαグロビン鎖および/または単離されたβグロビン鎖が活性であるという観察は、本実施例で記載した活性が、完全な3次元ヘモグロビン構造を必要としないことを示している。α鎖およびβ鎖のフラグメントはまた、幹細胞阻害剤として活性である。1NBM=正常な骨髄2TPBM=テストステロン処理マウス由来の骨髄3Hbg=C4逆相精製ブタヘモグロビンβ鎖2回結晶化したブタヘモグロビン由来1コントロールBalbcマウス由来の骨髄2100ngml図21のように精製。実施例15:精製INPROL、精製ブタαヘモグロビン、または精製ブタβヘモグロビンは、インビボで活性である精製したブタヘモグロビン鎖のインビボでの作用能力を試験するために、BDF1マウスに実施例1に記載のようにテストステロンプロピオネートを用いて注射した。24時間後、マウスに、pINPROL、ブタヘモグロビンα鎖図21のように末梢血赤血球から精製した、ブタヘモグロビンβ鎖図21のように末梢赤血球から精製したのいずれか500ng、あるいは等容量のキャリアを静脈内投与した。48時間後、各マウス由来の骨髄を採取し、そしてCFUMIXアッセイを実施例14に記載のように行った。表10において示されるように、pINPROL、ブタα鎖およびブタβ鎖は、細胞周期におけるCFUMIXのパーセントを基底レベルまで減少させ、全てインビボで活性であった。1コントロールテストステロン処理BDF1マウス由来の骨髄2100ngml3基底未処理のBDF1マウス由来の骨髄。実施例16:精製ヒトヘモグロビンα鎖、ビオチン化ヒトヘモグロビンα鎖、ビオチン化ヒトヘモグロビンβ鎖、ヒトヘモグロビンγ鎖、およびヒトヘモグロビンδ鎖は、全てインビトロで幹細胞阻害活性を示すヒトヘモグロビンを、SigmaChemicalCorporationから入手するか、あるいは成人ヒト末梢血または臍帯血から標準的な手段により単離した。個々の鎖を、ブタα鎖およびβ鎖について上述したのと同様の様式で逆相HPLCにより単離したBMasalaおよびLManca,MethodsinEnzymology、第231巻、21~44頁、1994を参照のこと。精製α、β、γ、およびδ鎖を得た。ビオチン化したα鎖およびβ鎖について、1mgの成人ヒトヘモグロビンを、37μgのNHSLCビオチンPierceを用いて処理し、そして上記のように逆相クロマトグラフィーにより鎖を分離した。表11、12、および13において示すように、精製ヒトαヘモグロビン鎖、ビオチン化ヒトαヘモグロビン鎖、ビオチン化ヒトβヘモグロビン鎖、ヒトγ鎖ヘモグロビン鎖、およびヒトδヘモグロビン鎖は、全て、CFUMIX細胞周期の進行アッセイにおいて活性である。1コントロールBalbcマウス由来の骨髄2100ngml1コントロールBalbcマウス由来の骨髄2100ngml1コントロールBalbcマウス由来の骨髄2100ngml。実施例17:精製ヒトα鎖、αβダイマー、またはヘモグロビンは、インビボで活性である精製ヒトα鎖、αβダイマー、またはヘモグロビンを実施例15に記載のようにインビボアッセイで試験した。表14に示したように、これらのそれぞれは濃度500ngマウスで活性であった。1コントロールテストステロン処理BDF1マウス由来骨髄。実施例18:ブタINPROLは、インビトロでヒト単核細胞またはCD34臍帯血細胞において活性であるブタ骨髄由来の精製INPROLが、ヒト前駆細胞における細胞周期の進行に影響する能力を調べるために、臍帯血細胞を得た。Ficoll上で分離した後に得られた総単核細胞画分または抗CD34親和性カラムCellProInc上での分画後に得られたCD34画分のいずれかを使用した。初期の幹細胞が細胞周期にあることを確認するために細胞を、インターロイキン3IL3および幹細胞因子SCF各100ngmlの存在下でインビトロにおいて48時間インキュベーションした。このプレインキュベーション後、細胞周期の進行アッセイを、CFUGEMMCFUMIXの代わりにをプレート後18日目に計数した以外は、実施例14に記載のようにマウスについて行った。表15において示すように、ブタINPROLは、大多数の単核細胞またはCD34画分のいずれかにおいて、CFUGEMMの細胞周期の進行を阻害した。。実施例19:精製ヒトαヘモグロビンは、ヒトCFUGEMMにおいて活性であるヒト臍帯血単核細胞を得、そしてIL3およびSCF中でインキュベーションし、そして実施例18に記載のように細胞周期の進行アッセイに使用した。表16に示すように、骨髄から精製したブタINPROLおよび末梢血から精製したヒトαヘモグロビンは、このアッセイにおいて活性であった。。実施例20:ヒトαヘモグロビンおよびヒトβヘモグロビン配列から得られたペプチドは活性である活性なペプチド配列を同定するために、ミオグロビンの3次元構造本アッセイにおいて不活性であるを、コンピューターモデリングプログラムを用いて成人ヒトヘモグロビンに存在するα鎖のネイティブな3次元構造に重ね合わせた。2つのペプチドアミノ酸43~55および64~82で表される、これらは3次元空間においてミオグロビンと構造的に異なる領域であるを、CFUMIX細胞周期の進行アッセイにおいて活性を有するとして同定した。ネイティブなα鎖において見出されるループをより近接に近づけるために、ペプチド43~55の環状誘導体c43~55ジスルフィド結合を利用をまた合成し、そして活性であることが見出された。これらのペプチドの配列は以下のようである:2つのヘモルフィン配列、ヘモルフィン10β鎖配列のアミノ酸32~41およびヘモルフィン7アミノ酸33~40を試験し、そして活性であることを見出した。配列は以下のようである:。これらの配列の活性を試験するために、CFUMIX細胞周期の進行アッセイを実施例14に記載のように行った。表17~19に示すように、これらのペプチドは全てこのアッセイにおいて活性である。1全てのペプチドは100ngmlで試験された。1100ngmlで試験された。実施例21:蟻酸切断によりヒトαヘモグロビンから得られたペプチドフラグメントは活性であるヒトαヘモグロビン鎖は、アミノ酸94位と95位AspProとの間に蟻酸切断部位を有する。切断を、精製ヒトα鎖実施例16と同様を70蟻酸中1mgmlの濃度で37°Cで72時間インキュベートすることにより得た。194フラグメントを未切断α鎖から精製し、そして95141フラグメントを実施例16のような逆相HPLCにより精製した;その後、分画をSDSPAGEを用いて行った実施例22と同様。精製194タンパク質フラグメントの同一性を、エレクトロスプレーイオン化質量分析により確認した。このフラグメントの幹細胞阻害活性を評価するために、CFUMIX細胞周期進行アッセイを実施例14と同様に使用する:1Balbc骨髄2精製非組換えヒトαヘモグロビン実施例16と同様100ngml3精製蟻酸切断タンパク質本実施例と同様100ngml。実施例22:ユビキチン融合体としてのEcoliにおけるヘモグロビンα鎖、ポリペプチド1141、ポリペプチド197、ペプチド4355、およびペプチドc4355の発現ペプチド4355p13およびc4355p15実施例20と同様の遺伝子を、最適Ecoliコドン使用頻度AnderssenおよびKurland,MicroReviews54198210,1990に従って対応するオリゴヌクレオチドをアニールすることにより合成した。インタクトなヒトαヘモグロビン鎖p141の遺伝子を、1セットのオリゴを設計して、ヒト骨髄cDNAプールClontech,PaloAlto,CAからPCR増幅することにより得た。197フラグメントp197の遺伝子を、適切なサブクローニング後のp141遺伝子を含むプラスミドのPCR増幅により得た。上記の遺伝子を、ユビキチン融合タンパク質として発現した米国特許第5,132,213号;同第5,196,321号;および同第5,391,490号、ならびにPCTWO9117245を参照のこと。宿主株EcoliDH5αFIQLifeTechnologies,Inc,Gaithersburg,MDを、適切に合成した遺伝子上記を含むユビキチン発現ベクターpDSUbで形質転換した。pDSUbは、ヒトユビキチンを発現するpDS78RBSIIの誘導体である図22AHochuliら、Biotechnology613215,1988。LoetscherらJBC2661121311220,1991は、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼCAT配列をHochuliプラスミドから切り出し、そしてプラスミドを再連結することによりpDS78RBSIIを改変した図22B。合成ユビキチン遺伝子を、細菌発現に最適なコドン使用頻度を有するヒトユビキチンをコードするリン酸化合成オリゴヌクレオチドの対様アニーリングにより構築した。次いで、pDSUbを、組み立てたオリゴヌクレオチドからなる合成ユビキチン遺伝子を、誘導体化pDS78RBSIIのKlenow平滑化BamHIBglI消化物に挿入することにより構築した。得られたプラスミドpDSUb図22Cは、Ecoliにおいて高レベルでユビキチンを発現することが示された。p97を含むプラスミドおよびp141を含むプラスミドを、指向性クローニングにおいて、p97またはp141タンパク質および融合接合部をコードするAflIIPstI消化PCR産物を、AflIIおよびPstIで消化したpDSUbに挿入することにより構築した。同様に、p13を含むプラスミドおよびp15を含むプラスミドを、適切な付着末端を有し、そしてペプチドおよび融合接合部をコードする、リン酸化およびアニールされたオリゴヌクレオチドを、AflIIPstI消化pDSUbに挿入することにより構築した。形質転換体を、100μgmlアンピシリン、5μgmlネオマイシンで選択した。コロニーは30°Cで2日後に現れる。形質転換体を、挿入部位を横切るPCRによりスクリーニングした。次いで、正確なサイズの挿入物を含むコロニーを、SDSPAGEにより適切なサイズの融合タンパク質の発現についてスクリーニングした以下を参照のこと。ユビキチン融合体を、lacリプレッサーを滴定しtitrate、それをpDSUbのプロモーターから除去するIPTGの添加により過剰発現させたDH5αF’IQは、10μgmlネオマイシンで選択されるF’因子上にアップレギュレートされたlaqIq遺伝子を含む。過剰発現された誘導ユビキチン融合タンパク質を示したクローン由来のプラスミドDNAを調製し、そしてジデオキシ法によりSequenaseVersion20キットUnitedStatesBiochemicalを用いて配列決定した。次いで、ポジティブクローンを凍結し、そして80°Cでグリセロール中に保存した。ポジティブクローンを、アンピシリン100μgml、ネオマイシン10μgml、および1グルコースを含むLBプレート上で30°Cで維持した。それらを10継代まで一週間毎に画線培養しstreak、その後、新たな画線培養物を、連続培養のために凍結した種バイアルから採取して、株が本物であることを保証した。アッセイ用のタンパク質を得るために、250ml振盪フラスコ中の100ml接種菌培養物を、一晩のインキュベーション16~20時間により、アンピシリン100μgml、ネオマイシン10μgml、および1グルコースを有する2×YT培地中でシングルコロニーから増殖させた。振盪フラスコ培養物を、NewBrunswick環境振盪インキュベーターにおいて30°Cおよび250rpmで維持した。翌朝、培養物を、培地で1リットルに希釈した。細胞を、1mM最終希釈のIPTG添加によりOD60005で誘導し、そしてOD60008で遠心分離により採集した。採集細胞を低張溶解緩衝液100μlの50mMTrispH100に再懸濁した。細菌細胞を、その懸濁物を3サイクルの凍結解凍凍結のためのドライアイスエタノール浴および解凍のための60°Cに供することにより溶解した。次いで、懸濁物を10分間超音波処理し、そして12,000gで10分間遠心分離した。得られた上清をS1と呼ぶ。細胞ペレットを、50mMTrispH10および2×SDSトリシンローディング緩衝液Novex,SanDiego,CA11に再懸濁した。次いで、混合物を95°Cで15分間加熱し、そして12,000gで10分間遠心分離した。この方法で再可溶化され得る沈殿物の一部をP1と呼ぶ。残存するペレットから得られた沈殿物の一部をP2と呼ぶ。P2を、P1と同様にローディング緩衝液に再懸濁した。S1、P1、およびP2由来のサンプルを、SDSPAGEにより分析した。SDSPAGEゲルを、10~20トリシンゲルNovexと共に、ミニゲル装置における二緩衝液トリシン系を用いて泳動させた。陽極下部緩衝液は02MTrispH90であった。陰極上部緩衝液は、01MTris、01Mトリシン、01SDSpH825であった。市販の分子量マーカーMultiMarkNovexを使用した。標準として使用したウシユビキチンをSigmaから購入した。ゲルを、色素マーカーがゲルの下部に達するまで4mAの定電流で泳動させた。ゲルを、酢酸:メタノール10:40中の025のCoomassieBlueR250Sigmaで染色し、そして色素のない同じ溶液で脱染した。インタクトなp141ユビキチン融合タンパク質の大部分>70を、細菌溶解物の遠心分離後の沈殿物P1およびP2において見出した。はっきりと対照的に、p97ユビキチン融合タンパク質の大部分>70を、可溶性画分S1において見出した。これにより、C末端疎水性領域の除去は、改善された可溶性特性を有する産物を生じることが確認された。同様に、p13およびp15ペプチドもまた可溶性画分に含まれた。UCHL3ユビキナーゼubiquinase酵素Recksteiner,M編Ubiquitin,PlenumPressNY1988;Wilkinsonら、Science24667073,1989を、宿主株BL21DE3を形質転換するために使用されたpRSETInvitrogen,SanDiego,CAにおいて発現させた。UCHL3は、ユビキチンC末端伸長を切断するユビキチン特異的プロテアーゼである。これを、35wv硫酸アンモニウム沈殿により細菌溶解物から部分的に精製した。使用した硫酸アンモニウムの正確な割合を、255kDバンドの存在についてSDSPAGEによりモニターした。上清を50mMTrispH74に対して透析し、そしてユビキチンペプチド融合基質に対してアッセイした。活性な上清を等分し、そして20°Cで凍結した。代表的な反応混合物は、3μlの溶解物、1μlの1MDTT、1μlのUCHL3上記、および5μlの反応緩衝液50mMTrispH74を含む。反応を室温で20分間行った。大規模な化については、300μlの溶解物を、100μlの1MDTT、20μlUCHL3、および580μl反応緩衝液と混合した。可溶性S1画分に含まれるペプチドまたはタンパク質を、実施例16のように逆相HPLCによりさらに精製した;画分をSDSPAGEによりモニターし、そして同一性を、エレクトロスプレーイオン化質量分析により確認した以下を参照のこと。精製したペプチドまたはタンパク質を、上記のUCHL3によって酵素学的に消化し、非ユビキノン化最終生成物を得た。次いで、この切断物質を、逆相HPLCによって再精製した。精製を、SDSPAGEによって行い、そして最終生成物の同一性をエレクトロスプレーイオン化質量分析によって確認した。上記のようなUCHL3でのインビトロ切断に対する代替は、所望のユビキチン融合体と同じ細菌においてユビキチン切断酵素を同時発現させることである。この目的のために、ユビキナーゼUBP1TobiasおよびVarshavsky,JBC2661202112028,1991を発現するベクターpJT184を使用した。P97ユビキチン融合体およびUBP1を同時発現する細菌は、インビボで融合タンパク質の完全な消化を示した;p141ユビキチン融合体およびUBP1を同時発現する細菌は、融合タンパク質の部分的な約70消化を示した。インビボ消化したp97タンパク質を、硫酸アンモニウム沈殿、続いて上記のように逆相HPLCにより精製した。発現および精製されたポリペプチドの同一性を確認するために、エレクトロスプレーイオン化質量分析を、四重極分析器を有するVGBiotechBIOQ器械を用いて行った。この器械の較正をするために、ミオグロビンを使用した。精製p97で得られた主な成分は、分子量10,339ダルトンの単一のピークであった;これは、計算された分子量10,347にほぼ匹敵し、組換えp97フラグメントの同一性を確認した。実施例23:組換えp197は、幹細胞阻害活性を維持する組換えp197の生物活性を評価するために、GFUGEMM細胞周期進行アッセイを実施例18と同様に使用した:1ヒト骨髄単核細胞2精製非組換えヒトαヘモグロビン実施例16と同様100ngml3精製組換えp97実施例22と同様100ngml。実施例24:ヒトαヘモグロビンおよびペプチド4355は、テストステロンまたは5フルオロウラシル5FU処理マウスにおいて、インビボでCFUMIX細胞周期進行を阻害するペプチド4355のインビボでの幹細胞阻害活性を評価するために、B6D2F1マウスを、実施例1に記載のテストステロンプロピオネートまたは5FUで前処理した。詳細には、テストステロンプロピオネート100mgkg体重を、マウスに0日目にip注射した。あるいは、5FU200μgkg体重を、マウスに0日目に注射した。24時間後1日目、種々の用量のペプチド4355またはビヒクルを、iv注射した。骨髄を2日目に採集し、そしてCFUMIX細胞周期進行アッセイを、実施例14と同様に行った。詳細には、マウスを屠殺し、そして単一細胞骨髄懸濁物を大腿骨から調製した。細胞を1回洗浄し、そして濃度をFischer培地で5×106細胞mlに調節した。各試験条件のために、1ミリリットルの細胞を、2つのポリプロピレンチューブのそれぞれに添加した。チューブを、適切な濃度の試験基質を共なわずにコントロールまたは共に実験で37°Cで3時間インキュベートした。インキュベーションの終わりに、30μgmlのシトシンアラビノシドAraCSigmaを、チューブの半分まで添加し、そして同じ容量のFischer培地をもう1つのチューブに添加した。チューブをさらに1時間37°Cでインキュベートし、その後それらを氷上に置き、そして冷Fischer培地で2回洗浄した。細胞をFischer培地で5×104~106mlに再調節し、そして05mlの細胞懸濁物を、5mlのMethocultM3430メチルセルロース培地StemCellTechnologies,Vancouver,BritishColumbiaに添加した。混合物を、ボルテックスしながら力強く混合し、そして1mlを5つの35mmディッシュのそれぞれに分配した。35mmディッシュを、順に、滅菌水を含むふたのない35mmディッシュと共に、ふた付きの150mmディッシュに入れた。CFUMIXコロニーを、37°Cでのインキュベーションの7日後に倒立顕微鏡を用いて数えた。培地処理チューブとAraC処理チューブとの間のコロニー数の差異は、以下の式に従った条件下でのサイクルにおける細胞の割合を示す:ここで、a=培地単独でインキュベートしたチューブ由来のCFUMIXの数b=AraCでインキュベートしたチューブ由来のCFUMIXの数1テストステロン前処理動物220グラムマウスあたりのiv注射した量15FU前処理動物220グラムマウスあたりのiv注射した量。実施例25:ペプチド4355は、N末端PhePhe43でビオチン化またはPhe43もしくはPhe46でヨウ素化した場合、幹細胞阻害剤として活性であるペプチド4355を、固相ペプチド合成技術AmericanPeptideCo,Sunnyvale,CAにより合成した。ペプチドアナログを、Phe43またはPhe46のパラ位でヨウ素を用いて合成した。ビオチン化ペプチド4355を、C4炭素リンカーを有するビオチンのCOOHを、Phe43のN末端NH2に連結することにより合成した。。実施例26:モルヒネは、マウスCFUMIXの細胞周期進行をインビトロで阻害するモルヒネを、実施例24と同様にBalbcマウス由来の骨髄を用いてCFUMIX細胞周期進行アッセイにおいて試験した。。実施例27:オピエートペプチドDAMGOおよびDALDAは、マウスCFUMIXの細胞周期進行をインビトロで阻害するDAMGOおよびDALDAを、実施例24と同様にBalbcマウス由来の骨髄を用いてCFUMIX細胞周期進行アッセイにおいて試験した。。実施例28:ノシセプチンは、マウスCFUMIXの細胞周期進行をインビトロで阻害するノシセプチンを、実施例24と同様にBalbcマウス由来の骨髄を用いてCFUMIX細胞周期進行アッセイにおいて試験した。。実施例29:ナロキソンは、ヒトαおよびδヘモグロビン鎖、へモルフィン10、ならびにペプチド4355の阻害活性と拮抗するCFUMIX細胞周期進行アッセイを実施例24と同様に行う。試験基質を、それ自身でまたはナロキソン105、107Mの存在下でアッセイした。ナロキソン自身は、これらの濃度でアッセイに効果を生じなかった。1105M最終濃度で使用した。1107M最終濃度で使用した。実施例30:低濃度のナロキソンは、マウスCFUMIXの細胞周期進行を阻害するCFUMIXアッセイを実施例24と同様に行った。。実施例31:μオピエートレセプターアンタゴニストCTOPは、ヒトヘモグロビンα鎖、ペプチド4355、およびペプチド6482の阻害活性と拮抗するCTOPHDPheCysTyrDTrpOrnThrPenThrNH2、Cys2とPen7との間にジスルフィドを有するは、μオピエートレセプター特異的アンタゴニストであるソマトスタチンのアナログである。試験基質を、それ自身またはCTOP107Mの存在下でアッセイした。CTOP自身は、この濃度でアッセイでの影響を有さないが、αヘモグロビンまたはペプチド4355により引き起こされる細胞周期阻害と拮抗する。1107Mの最終濃度で使用した。実施例32:ヒトα鎖での前処理は、後期形成コブルストーンcobblestone形成細胞の数を増加させるコブルストーンアッセイを、Ploemacherおよびその同僚Ploemacherら、Blood74275563,1989;vanderSluijsら、ExpHematol188936,1990;Ploemacherら、Blood78252733,1991;Ploemacherら、J.Tiss.Cult.Meth136368,1991;DownおよびPloemacher,Exp.Hematol2121321,1993により記載されたように行った。コブルストーンアッセイは、ストロマ細胞の単層内に細胞群またはコブルストーンの出現を測定する。非常に初期の幹細胞は、軟寒天においてコロニーを形成しないが、ストロマ単層の存在下でコブルストーンを形成する。コブルストーンを形成する細胞は、コブルストーン領域形成細胞CAFCと呼ばれる。より分化した例えば、GMCFC前駆体は、培養の最初の数週間以内に出現し、そして消滅する一過的なコブルストーンを形成するが、より初期の幹細胞例えば、長期再増殖細胞は、4~5週間の培養後のみに出現するコブルストーンを形成する。従って、培養の7~14日目に形成するCAFCはCFUGMに富み、28~35日目に形成するCAFCはCFUMIXに富み、そして28~35日目に形成するCAFCは長期再増殖細胞に富む。B6D2F1マウスを、実施例24と同様にテストステロンプロピオネートで処理した。その翌日、骨髄を取り出し、そしてそれらをブレストーンアッセイでプレーティングした後に、ヒトαヘモグロビン鎖100ng106細胞と共にまたは共なわずに4時間インキュベートした。使用したアッセイは、96ウェルプレートにおける限界希釈長期骨髄培養LTBMCからなる。培養物を、FBMD1マウスストロマ細胞株Breemsら、Leukemia1114250,1997をコンフルエントになるまで増殖させることにより調製した;コンフルエントな単層を有する96ウェルプレートを、アッセイまで33°Cで保存した。マウス骨髄細胞を単細胞懸濁物として調製し、そして以下の細胞希釈物:27,000;9000;3000;1000;333を、02mlのLTBMC培地StemCellTechnologies,Vancouverにウェルあたりプレーティングした。20ウェルを、条件あたり各希釈についてプレーティングし、そして2プレート以上に分配した。コブルストーン領域形成細胞CAFCの頻度を、以前に記載されたようにPloemacherら、Blood78252733,1991;Ploemacherら、J.Tiss.Cult.Meth.1366368,1991;Breemsら、Leukemia81095104,1994計算した。結果を実施例23に示す。細胞周期進行幹細胞のヒトαヘモグロビン鎖とのプレインキュベーションは、約5倍まで後期形成CAFCの比を増大させた。非細胞周期進行細胞のα鎖での処理は効果がなかった。実施例33:ヒトαヘモグロビン、ならびにペプチド4355、環状4355および6482は、ヒト臍帯血CFUGEMMの細胞周期進行を阻害するヒト臍帯血CFUGEMM細胞周期進行アッセイを、実施例19と同様に行った。詳細には、単核細胞を、ヒト臍帯血細胞から単離し、そして10FBS、100ngmlキットリガンド、および100ngmlヒトIL3を補充したIMDM組織培養培地で2~4×104細胞mlに調節した。細胞を37°Cで48時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を洗浄し、そして106細胞mlの濃度で無血清IMDMに再懸濁した。1mlの細胞を、条件あたり2つのポリプロピレンチューブのそれぞれに添加し、そして細胞周期進行アッセイを、マウス骨髄について実施例24と同様に行った。AraCインキュベーション後、細胞を冷IMDMで洗浄し、そして05mlIMDMあたり10,000~20,000細胞に調節し、そして5mlのMethocultH4433StemCellTechnologiesと混合した。あるいは、細胞濃度を05mlIMDMあたり2500~5000細胞に調節する場合に、MethocultH4435メチルセルロース培地StemCellTechnologiesを使用した。細胞を実施例24と同様にプレーティングし、そしてCFUGEMMコロニーを14~18日目にスコア付けした。。実施例34:ヒトαヘモグロビンおよびペプチド4355は、成人骨髄CFUGEMMの細胞周期進行を阻害するCD34幹細胞を、CellProカラムの手段によるヒト骨髄からの精製の後、PoieticTechnologiesGaithersburg,MDから得た。細胞を、キットリガンドおよびIL3と48時間インキュベートし、そして実施例26におけるCFUGEMM細胞周期進行アッセイにおいて使用した。。実施例35移動したヒト末梢血におけるCFUGEMMは活発にサイクルし、そしてヒトαヘモグロビン、ペプチド4355、DAMGO、またはモルヒネにより阻害可能である末梢血を、標準的プロトコルに従ったシクロフォスファミドおよびGCSFでの末梢幹細胞移動を受けている乳ガン患者から得た。赤血球をFicollHypaqueで除去した細胞をIMDMで11に希釈し、そして20mlを16mlのFicollの上部に重層し、そして800gで30分間遠心分離した;単核細胞を中間層interphaseから取り出し、そしてIMDM中で2回洗浄した。1つの場合、単核細胞を、アッセイ前に液体窒素中で凍結保存した。単核細胞を、25~5×105細胞をディッシュあたりにプレーティングした以外は、実施例26と同様にCFUGEMM細胞周期進行アッセイのためにプレーティングした。。。1アッセイ前に凍結保存した細胞に由来する。実施例36:高用量のヒトαまたはβヘモグロビン、ミオグロビン、ペプチド197、ペプチド4355、ペプチド6482、ノシセプチン、あるいはDALDAは、静止マウス幹細胞の細胞周期進行を刺激する1μgml用量のヘモグロビン鎖、ミオグロビン、およびペプチドを、静止幹細胞の刺激についてアッセイした。骨髄を、実施例24と同様のCFUMIX細胞周期進行アッセイにおいて試験した未処理B6D2F1から得た。未処理B6D2F1マウスから単離した幹細胞は、例えば、テストステロンプロピオネート実施例1を参照のことまたは5FUのような化学療法実施例4を参照のことにより刺激されるまで、通常ゆっくりと細胞周期進行して、周期に入る。。。。。。。実施例37:高用量のヒトαヘモグロビンの静脈内投与は、静止マウス幹細胞の細胞周期進行を刺激するヒトαヘモグロビンを、未処理B6D2F1マウスにiv注射した。24時間後、マウスを屠殺し、骨髄を大腿骨から回収し、そしてCFUMIXアッセイを実施例24と同様に行った。。実施例38:ナロキソンは、高用量ヒトαヘモグロビン、ペプチド4355の幹細胞刺激活性と拮抗する1107M最終濃度で使用した。本発明は好ましい実施態様によって記載されたが、変化および改変は当業者に考えられることが理解される。従って、添付の請求の範囲は、請求される本発明の範囲内にある全てのこのような等価な変化を含むことが意図される。"