"該モノクローナル抗体またはその誘導体若しくはフラグメントのFc領域若しくはFc領域等価物において二分化混成型N-グリコシル化パターンを有し、該抗体が少なくとも10倍増加したADCC活性と少なくとも10減少したCDC活性を有することを特徴とする、ルイスY抗原を認識する親モノクローナル抗体から誘導されるモノクローナル抗体またはその誘導体若しくはフラグメント。ADCC活性が少なくとも20倍増加したことを特徴とする、請求項1の抗体。ADCC活性が少なくとも25倍増加したことを特徴とする、請求項1の抗体。ADCC活性が少なくとも40倍増加したことを特徴とする、請求項1の抗体。ADCC活性が少なくとも60倍増加したことを特徴とする、請求項1の抗体。CDC活性が少なくとも20減少したことを特徴とする、請求項1の抗体。CDC活性が少なくとも40減少したことを特徴とする、請求項1の抗体。二分化Nアセチルグルコサミン基を有することを特徴とする、請求項1から7のいずれかの抗体。該抗体が核フコシル化を含まないことを特徴とする、請求項1から8のいずれかの抗体。ヒト型化抗体であることを特徴とする、請求項1から9のいずれかの抗体。IgGまたはそのフラグメント若しくは誘導体である、請求項1から10のいずれかの抗体。IgG1またはそのフラグメント若しくは誘導体である、請求項11の抗体。薬学的に許容される担体または希釈剤中に、請求項1から12のいずれかの抗体を含む薬学的製剤。請求項1から12のいずれかの抗体の薬物としての使用。患者の腫瘍細胞の成長をそれぞれ抑制しまたは阻止する、予防的およびまたは治療的処置のための薬剤の製造における、請求項1から12のいずれかの抗体に基づく調製物の使用。固形ガンの治療のための薬剤の製造における、請求項1から12のいずれかの使用。上皮起源の固形ガンの治療のための、請求項15の使用。微小残存病変の治療のための、請求項15の使用。受動的免疫療法のための、請求項14の使用。該抗体が少なくとも50mgdoseの用量で用いられることを特徴とする、請求項1から12のいずれかの使用。該抗体が少なくとも100mgdoseの用量で用いられることを特徴とする、請求項1から12のいずれかの使用。該抗体が少なくとも200mgdoseの用量で用いられることを特徴とする、請求項1から12のいずれかの使用。従って、これらの望まない副作用を回避する抗体療法の提供について大きな要求がある。本発明の目的は、その特性を改良した抗体を提供することである。本発明によれば、この目的は、請求項の主題によって達成される。本発明者等はルイスY抗原を認識する親のモノクローナル抗体に由来するモノクローナル抗体、またはその誘導体若しくはフラグメントを生成させた。そして、前記抗体、またはその誘導体若しくはフラグメントのFc領域に対するFc領域またはFc領域均等物が、二分化された複合型タイプN―グリコシル化パターンを有しそして、前記抗体がADCCを少なくとも10倍増加させ、そして、CDC活性を少なくとも10減らしたことを示すという点が特徴である。ルイスY抗原に向けられた親のモノクローナル抗体は、ヒト化軽鎖可変領域、ヒト軽鎖定常部、ヒト化重鎖可変領域およびヒト重鎖定常部からなる抗体である。ここでヒト化軽鎖可変領域は図1に示すアミノ酸配列を有し、そして、ヒト化重鎖可変領域は図2に示すアミノ酸配列を有する。この種の抗体は、欧州特許0528767号に記載されている。本発明による抗体は優先して、親の抗体の重鎖可変領域および重鎖定常領域のアミノ酸配列を少なくとも含む。最も好ましくは、本発明抗体のアミノ酸配列は親の抗体と同一である。好ましくは、本発明抗体はルイスY抗原に向けられている。親の抗体の臨床有効性はヒトIgG1分子のFc部分の生物活性に関連していて、それは抗体依存性細胞性細胞傷害作用ADCCおよび補体依存性細胞傷害作用CDCを誘発する際のその効率で決定される。特にADCC機能はFc部分のグリコシル化に依存し、そして、それは顆粒白血球および単球上のFcγRIIIと相互作用するライフリ等1995Glycobiology5813822。血清IgGのFc領域で通常見られるオリゴ糖は複合二分岐型で、末端のシアル酸および二分化N-アセチルグルコサミンが低次で末端のガラクトシル化と核のフコシル化の程度が多様であるルンドとタカハシ1996JImmunol15749639。FcγR結合には、保存されたFc領域のAsn297に共有結合したオリゴ糖の存在が必要であり、またオリゴ糖の構造について敏感である。ハムスターまたはマウス細胞株で発現しているIgG′は通常、非常に類似したグリコシル化構造を有するが、血清IgGで少量見られる二分化N-アセチルグルコサミンGlcNacを欠く。本発明による抗体のADCC活性は親抗体のADCC活性と比較して、少なくとも10倍、好ましくは少なくとも20倍、より好ましくは、少なくとも25倍のADCC活性であって、さらに好ましくは少なくとも40倍の増加したADCC活性、好ましくは少なくとも60倍の増加したADCC活性、最も好ましくは少なくとも100倍の増加したADCC活性である。本発明抗体のADCC細胞溶解活性は、6本のルイス―Y陽性標的ガン細胞株SKBR5、SKBR3、LoVo、MCF7、OVCAR3およびKatoIIIを使用して親抗体と比較して測定することができる。本発明によれば、抗体、またはその誘導体若しくはフラグメントは、親抗体のCDC活性に比較して少なくとも10減少、または少なくとも20減少、または少なくとも40減少したCDC活性を有している。本発明の抗体、またはその誘導体若しくはフラグメントは、核フコシル化を含むこともあれば含まないこともある。それはマウス抗体、キメラ抗体、ヒトまたはヒト型化抗体であり得るが、好ましくはヒト型化抗体である。より好ましい態様では、該抗体はIgG、またはそのフラグメント若しくは誘導体であり、好ましくはIgG1またはそのフラグメント若しくは誘導体である。さらなる態様においては、本発明の抗体は、ヒト免疫IgGのFc領域と等価な領域を含む融合タンパク質である。従ってある側面では、請求に係る発明は薬学的に許容される担体または希釈液中に本発明の抗体を含む薬学的製剤をも目的としている。さらにはこの抗体の薬剤としての使用も請求している。該薬剤は患者における腫瘍細胞、特に、固形ガン、例えば腫瘍または上皮起源の播種性腫瘍細胞の成長を低下させ若しくは阻害するための治療若しくは予防的薬物として用いることができる。さらに本発明の抗体は微小残存病変の治療にも用いることができる。ここで使用する術語は、特に定義のない限り当該分野で一般に使用されるのと同様に用いられる。抗体の語は、抗体、抗体の誘導体またはそのフラグメントを含む。抗体のフラグメント中には抗体の相同体や機能等価物があり、Fc領域またはFc領域との相同領域または少なくともその一部とともに、免疫グロブリンの結合領域またはこの結合領域を模倣したペプチドを含む任意のポリペプチドが包含される。免疫グロブリンの結合領域またはその等価物を含み、別のポリペプチドと融合したキメラ分子が包含される。例示的な抗体分子は無傷の免疫グロブリン分子であり、パラトープを含む免疫グロブリン分子の部分であって、Fab、Fab′、Fab′2、FcおよびFとして知られる部分が含まれる。ここでは、本発明の抗体は任意の細胞系をカバーし、該抗体を発現するように修飾できる宿主細胞中で発現することができる。発明の範囲内で、細胞の語は、個々の細胞、組織、器官、昆虫細胞、鳥類細胞、哺乳類細胞、混成細胞、初代細胞、連続細胞株、幹細胞および/または、例えば本発明のグリコシル化抗体を発現するリコンビナント細胞のような遺伝操作細胞、等の培養を意味する。好ましくはその細胞は動物細胞であり、より好ましくは哺乳類の細胞である。これらは例えば、BSC―1細胞、LLC―MK電池、CV―1細胞、CHO細胞、コス細胞、ネズミの細胞、ヒト細胞、HeLa細胞、293の細胞、VERO細胞、MDBK細胞、MDCK細胞、MDOK細胞、CRFK細胞、RAF細胞、TCMK細胞、LLC―PK細胞、PK15細胞、WI―38細胞、MRC―5細胞、T―FLY細胞、BHK細胞、SP2/0、NS0細胞またはその誘導体が可能である。発明に係る抗体の二分化混成型N-アセチルグルコサミンは糖タンパク質を修飾するグリコシルトランスフェラーゼ、例えば残基を追加するβNアセチルグルコサミルトランスフェラーゼにより産生される。そのGnt-IIIは既にクローン化されているミヨシ等1995JBiolChem2702831128315。これはFc部分に二分化N-アセチルグルコサミン基を有する抗体をもたらす。本発明抗体のFc部分のグリコシル化は、当業者によく知られた技術で改められる。例としてはスブラチ等1998BiotechnolProg14189192または米国特許6602684号に記載された方法がある。細胞は二分化N-アセチルグルコサミン基を有する複雑なN結合オリゴ糖を増加させるGnt-III活性を発現することができる。抗体産生に用いる多くの細胞株はGnt-III酵素を持たないが、例えば、YOミエローマ細胞やBリンパ球のようにGnt-III酵素を自然に有している細胞も存在する。例えばミスマッチ修復系変換のような突然変異技術を用いて宿主細胞のグリコシル化パターンを変化させることもできるWO0409782、WO0424871。また欧州特許1176195号には、発明抗体のFc部分のグリコシル化パターンを改めるさらなる技術が記述されている。ここで用いられる抗体依存性細胞性細胞傷害作用ADCCの語は、キラー細胞、天然キラー細胞、活性化マクロファージ等のエフェクター細胞表面に存在するFc受容体と抗体のFc領域との結合を介しエフェクター細胞を活性化して、腫瘍細胞等に損傷を与える任意の作用をいう。ADCC活性の増加した抗体は当業者に知られた任意の適切な方法で決定することができる。一般に認められた方法を実施例に記載している。増加したADCCは、標的細胞の最大量の半数を溶解するのに必要な抗体濃度を示すED50抗体濃度の減少として測定される、増加した溶解能力で測定することができる補体依存性細胞傷害作用CDCの語は、補体活性化と結合による直接の細胞傷害作用として定義される。抗体は細胞表面でその標的、例えば腫瘍細胞と結合し、補体カスケードとしても知られる補体系を起動させて、文字通り細胞膜に穴をあけて細胞の溶解と死をもたらす膜攻撃複合体を与える。CDC活性の低下した抗体は当業者に知られた任意の適切な方法で決定することができる。一般に認められた方法を実施例に記載している。低下したCDC活性は、標的細胞の最大量の半数を溶解することのできるED50抗体濃度の増加として定義される。N結合オリゴ糖の核フコシル化はGlcNac基に隣接するAsnにα16結合したフコースの存在を意味する。発明抗体のルイスy抗原に対する結合活性は親抗体と比べて少なくとも80、好ましくは少なくとも90、さらに好ましくは100である。発明のグリコシル化抗体の軽鎖定常部の構築は親抗体と同様である。驚くべきことに本発明のN-結合抗体グリコシル化パターンはまた、親抗体と比べて見られるオリゴ糖構造の量が減少したため、高い相同性も示した。このため、新たに産生された抗体はバッチ間のバリエーションが少なくなり、より安定で均一な抗体調製が入手されるというより好ましい効果がもたらされた。可能な処理目的は腫瘍細胞、即ち、腫瘍組織または転移、特に播種性腫瘍細胞との効果的な結合と低減である。血液、骨髄又は組織中で検出される腫瘍細胞または微小転移の数をそれぞれ有意に減少させる。転移形成を抑制し、少なくともその成長を遅らせる。こうして、特異的標的化免疫療法により、患者の無再発寿命、そして総生存期間が延長され得る。本発明の使用の範囲内において、特に患者の腫瘍細胞成長を抑制し、阻止する上で血液透析もまた可能である。腫瘍細胞のグリコシル化受容体全てに結合するためには、通常、患者一人当たり少なくとも50mgdose、好ましくは少なくとも100mgdose、最も好ましくは200mgdoseの高用量が投与される。最大用量は抗体、ヒト型化抗体、およびヒト抗体の各最大耐性の許容性に依存する。患者一人当たり最大用量1g、またはある例では最大2gの治療が極めて有効かもしれない。驚くべきことに本発明においては増加したADCC活性のため、治療および/または予防目的で適用される抗体量の軽減が可能で、少ない用量であってもなお有効な治療効果がもたらされることが示された。増加したADCC活性のため適用される抗体量は、親抗体の用量計画と比して、少なくとも10、好ましくは少なくとも20、より好ましくは少なくとも30、最も好ましくは少なくとも50軽減することができる。或いは、本発明の抗体は非常に高用量で適用することもできる。これは、本発明の抗体は個々に副作用を引き起こすことが知られているCDC活性が低下しているという事実に基づくものである。従って、能動的免疫療法の目的で抗体を適用した結果、既に副作用を患っている危険な患者においては特に、この驚くべき性質は非常に有利となり得る。用いられる抗体の半減期に従い、治療は好ましくは一定期間内で繰り返され、これは通常3日から30日の間である。抗体を特に修飾することでこの半減期を最大数ヶ月に増加させてそれによって治療期間を延長することが可能である。本発明で用いられる薬物は好ましくは適切に製剤化して提供される。好ましくは薬学的に許容される担体を用いた製剤である。後者は例えば補助的薬剤、緩衝液、塩および保存剤を含む。好ましくは、あらかじめ調製された注入液が提供される。抗体は比較的安定なので、抗体またはその誘導体に基づく薬剤は貯蔵に安定な溶液として、またはあらかじめ調製された形態の製剤として市場に出せるという実質上の利益がある。前者は好ましくは冷蔵庫温度から室温で安定に保存できる製剤である。しかしながら、本発明で使用される薬物はまた、必要時に解凍若しくはもどされる凍結若しくは凍結乾燥製剤として提供される。該薬剤の有効物質濃度はその耐性に依存する。ヒト型化抗体に基づく耐性の特に好ましい製剤はさらに希釈することなく高濃度で直接患者に投与することができる。01から10、好ましくは1から5の範囲における好ましい濃度で投与体積および相当する注入時間を短く保つことができる。通常、薬物は静脈内投与される。しかしながら、他の非経口または粘膜投与も選択できて、活性物質を全身的、または腫瘍若しくは転移部位に局所的に与えることができる。略号SEC-HPLC:サイズ排除クロマトグラフィーHPLCPBS:リン酸緩衝生理食塩水SDS-PAGE:ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動ADCC:抗体依存性細胞傷害CDC:補体依存性細胞性細胞傷害作用IGN311:ヒト化モノクローナル抗ルイスY抗体IGN312:糖操作ヒト化モノクローナル抗ルイスY抗体IGN311と同じ特異性を有するELISA:酵素結合免疫吸着検定法方法SDS-PAGE精製した発現生成物の完全性、サイズおよび潜在性分解産物をSDS-PAGEで分析した。試料を4xNuPAGESDS試料緩衝液で希釈して85°Cで10分間インキュベートした。ノーベックスの電気泳動ユニット50分間、200Vおよび125mVのノーベックスNuPAGE、412ビストリスゲルインビトロジェン上に10μlを負荷した。ゲルは製造元インビトロジェンのマニュアルに従って銀染色した。IEF等電点電気泳動アイソフォームの分布、分解および潜在的脱アミド化体をIEFで分析した。ノーベックスのIEF試料バファーインビトロジェンで希釈後、ノーベックスIEF、pH3-10のゲル上に負荷し、製造元のマニュアルに従って分離を行った。ゲルは銀染色を行った。IGN311に特異的な抗イディオタイプ抗体に基づくELISAモノクローナル抗イディオタイプ抗体MMA383で被覆したミクロチタープレート中で抗体試料の連続希釈をインキュベートすることにより、発現生成物の結合活性を特異的なサンドイッチELIZAで分析した。3FCSでブロッキングして洗浄した後に、ヤギの抗ヒトIgGAM/パーオキシダーゼコンジュゲートZymed社、カリフォルニア州とインキュベートし、oフェニレンジアミン/過酸化水素で展開して結合した発現生成物を決定した。測定は492nm620nmでELISAリ-ダーを用いて行った。光学密度の測定値を抗体濃度の対数についてプロットし、シグモイド型四パラメータ近似により解析した。EC50値を計算して定量化に用いた。CDC標的細胞として、ルイスY抗原陽性SKBR5乳ガン細胞株を使用し、51Cr放出アッセイで補体媒介溶解作用を試験した。標的細胞を100μCiの51Crと1時間インキュベートし培地で2回洗浄して、ボランティア提供者の補体血清と分析試料の連続希釈100ngmlから50μgmlとともに、ウェル当たり20x103個の細胞密度で96ウェルのミクロチタープレート上に播いた。試験プレートをCO2インキュベータ中37°Cで1時間インキュベートした。上澄を集めて放出された51Crをカウントした。培地のみおよび洗浄液SDSのみの代表的な試料をそれぞれインキュベートして自発的放出量Srおよび最大放出量Mrの値を測定した。補体介在細胞傷害作用を細胞溶解のパーセント100xCs―Sr/Mr―Srとして計算した。細胞溶解のパーセントを抗体濃度の対数についてプロットし、シグモイド型四パラメータ近似により解析した。EC50値を計算して定量化に用いた。ADCC標的細胞として異なるルイスY抗原陽性ガン細胞細胞株SKBR3、KatoIIIおよびOvcar3を使用し、51Cr放出アッセイで補体介在溶解作用を試験した。標的細胞を100μCiの51Crと1時間インキュベートし培地で2回洗浄して、ウェル当たり25X103個の細胞密度で96ウェルのミクロチタープレート上に播いた。分析抗体試料の連続希釈100pgmlから1μgmlとともに、エフェクター細胞を新しく調製してE:T=40:1の比で標的細胞に加えた。CO2インキュベータ中37°Cで18時間インキュベートした後、細胞上澄を集めて放出された51CrをカウントしたCs。培地のみおよび洗浄液SDSのみの代表的な試料をそれぞれインキュベートして自発的放出量Srおよび最大放出量Mrの値を測定した。細胞傷害作用を細胞溶解のパーセント100xCs―Sr/Mr―Srとして計算した。細胞溶解のパーセントを抗体濃度の対数についてプロットし、シグモイド型四パラメータ近似により解析した。EC50値を計算して定量化に用いた。グリコシルトランスフェラーゼGnt-IIIを発現させ、抗体の生物活性を増強するために抗体産生細胞株を遺伝子的に修飾した。その修飾はスブラチ等または米国特許6602684号に記載された技術に従った。最初にIGN311の重鎖および軽鎖遺伝子を単離し、発現ベクターにクローン化してEBNA細胞に一過性にトランスフェクトした。Gnt-IIIトランスフェラーゼ発現遺伝子をコトランスフェクトしてIGN312という新しい抗体を作製した。対照の野生型抗体IGN311wtは、Gnt-III発現遺伝子のコトランスフェクトなしで同一の発現ベクターおよびホストを用いて発現させた。両方の発現生成物は同じプロテインA依存下流プロセスを用いて精製した。発現生成物はSDS-PAGE、IEFおよび標的抗体特異的サンドイッチELISAで特徴付けした。分解生成物は検出されず、重鎖および軽鎖の組み立ての他、糖操作抗体の標的親和性もGnt-III発現により影響されなかった。結果グリコシル化抗体IGN312の分析SDS-PAGE分析を用いて糖操作発現生成物IGN312IGN312GlycoIをIGN311wtと比較した。非還元的条件下では両方のタンパク質は、非修飾のIgG分子量から予測される150kDa近辺の領域に全く同一のバンドを示した。還元的条件下ではIgGの重鎖および軽鎖にそれぞれ対応する、50kDaおよび25kDaの付近にタンパク質のバンドが染色された。発現生成物に相違点は認められなかった。分解生成物および凝集生成物は検出されなかった。IGN311の糖操作体は損傷のない、正しい集合IgGであった。IGN312とIGN311wtの比較等電点電気泳動分析は、pI7.8と8.3の間に全く同一のバンド分布を示した。異なるpIの四つのタンパク質バンドが異なる量で視覚化された。Figure3は、IGN311wt灰色の曲線と比較したIGN312GlycoI黒色の曲線の結合活性分析を示す。一連のデータはシグモイド型四パラメータ近似により解析した。糖操作体の抗体特異性を抗イディオタイプ結合ELISAにおける抗原結合活性により分析した。Figure4には、希釈曲線をグラフに示す。曲線はすべて同型で重ね合わせが可能であった。シグモイド型近似とED50の評価の比較により、同一の主張が可能である。一連のデータのシグモイド型四パラメータ近似結果を表1に示す。IGN311wtの標準化は非常に近似した値を示した。親和性の有意な変化は認められず、糖操作体の抗原結合は原体、即ち、非糖操作体の領域内で維持された。三つの異なるルイスY陽性腫瘍細胞株を標的細胞としてinvitroでエフェクター機能の分析を試験した。標的となるグリコシル化パターンLeYの発現はIGN311wtを検出抗体として用いるFACS分析により溶解実験前に調べた。SKBR3は最も強力なLeYの発現を示し、次いでOvcar3、最後にKatoIIIが続いた相乗平均蛍光、SKBR3:1803、Ovcar3:361,KatoIII:55。A421はそのLeY陽性を失って、我々の実験では陰性対照細胞株として用いた。細胞傷害作用と補体活性化を介して糖操作抗体の溶解可能性を分析した。Figure4にはSKBR5細胞を標的として用いるCDC分析結果を示す。一連のデータはシグモイド型四パラメータ近似Table2により解析した。ED50で評価を行い、溶解可能性はIGN311wtの活性を元に標準化した。補体の活性化を介したIGN312GlycoIの溶解可能性は約44減少と思われた。Figure4はSKBR5標的細胞上のCDC分析クロムの放出を示す。IGN312GlycoI黒色の曲線およびのIGN311wt灰色の曲線の補体依存性細胞傷害作用を比較した。一連のデータは近似させたシグモイド型四パラメータ近似。SKBR3、Ovcar3、KatoIII、およびA421細胞を用いて、抗体依存性細胞性細胞傷害作用ADCCを介するIGN312の溶解可能性分析を行った。結果をFigure4に示す。一連のデータはシグモイド型四パラメータモデルで近似した。IGN311wtの活性を元にする標準化とEC50の評価により、ADCCを介する溶解活性を計算した。結果をTable3に記載する。IGN311wtと比較して、IGN312GlycoIの溶解活性はすべての場合において6倍から14倍、有意に増強された。FACS分析相乗平均蛍光、SKBR3:1803、Ovcar3:361,KatoIII:55で測定されたルイスY抗原密度と、増強された細胞傷害作用の間には直接の相関は認められなかった。予想の通り、A421は全く溶解しなかった。Figure5は、SKBR3、Ovcar3、KatoIII、およびA421細胞を用い、IGN312GlycoIのADCC溶解実験結果を示す。議論および結論この試験で示されるデータは、IgG1抗体のADCC活性を増強させ、糖操作でCDC容量を低下させることが可能であることを示す。本試験は、産業上発現された細胞株のグリコシル化器の遺伝子操作が過剰発現した抗体のエフェクター機能を修飾し微妙に調節する上で極めて興味深い道具であることを示した。抗体依存性の細胞傷害作用はこの原理に基づいて少なくとも20倍有意に増加させ得る。マンノシル化混成オリゴサッカリド構造の量は減少した補体活性化と並行して増加した。Gnt-IIIトランスフェラーゼの均衡した安定な発現レベルは、従って、溶解活性を増強させた糖操作治療用抗体の発生に必須の要件である。安定なIGN312発現細胞株に基づく製造工程の確立は、最後にこの新世代抗体の効率を臨床的に比較するための次の重大な段階となろう。親抗体IGN311の播種性腫瘍細胞の溶解-臨床報告投与期間と用量これは多治療の用量増加試験である。患者すべてに1日目および15日目にIGN311を与えた。評価対象たり得る最初の被験者三人に50mgのIGN311を注入し、評価対象たり得る次の被験者三人に100mgのIGN311を注入し、そして評価対象たり得る最後の被験者三人に200mgのIGN311を注入した。IGN311は2時間かけて静脈内にゆっくりと注入した。被験者は治験中、ビスホスホネートおよびホルモン治療を除いてその他のガンの治療例えば、化学療法、放射線、免疫療法、その他IGN311以外の治験薬を全く受けなかった。末梢血中の播種性腫瘍細胞の評価試料採取注入開始前の1日目と15日目、そして43日目に血液試料を採取した。血液試料約28mlを単一の静脈穿刺前肘部血管またはその他実験者が判断した適切な部位よりにより抗凝血採血管Vacutainerチューブ、EDTAを含むに採取した。針を皮膚に貫通した際に集められた上皮細胞と血液試料との汚染を避けるために、最初の血液3mlは別のVacutainerに集めて廃棄した。腫瘍細胞富裕化手順は2時間以内に進行させた。腫瘍細胞の富裕化冷却した末梢血25mlを、多孔性障壁の下部にある分離媒体を乱さないようにOncoQuickの上区画に静かに満たし、4°C、1600xgで20分間遠心分離した。遠心分離の後、上部の血漿黄/褐色および下部の分離媒体青色の間にある、腫瘍細胞を含む中間相を集めて新たな50mlの遠心分離管に移して洗浄した。細胞ペレットを洗浄バファー4ml中に再懸濁し遠心分離して顕微鏡スライド上に載せた。結果IGN311を用いた治療により患者中に検出される腫瘍細胞の数が減少することが示された。"