"動物供給源由来のスクアレンを含む組成物からスクアレンを調製するための方法であって、該方法は、a温度T1で行う精製蒸留の工程;b温度T2で行う変性蒸留の工程を含み、ここで、工程aおよび工程bは、いずれの順序においても実施され得、T1およびT2は、スクアレンを沸騰させるために十分であり、T2>T1およびT2≧200°Cである、方法。スクアレンを含む組成物からスクアレンを調製するための方法であって、該方法は、a温度T1で行う精製蒸留の工程;b温度T2で行う変性蒸留の工程を含み、ここで、工程aおよび工程bは、いずれの順序においても実施され得、T1およびT2は、スクアレンを沸騰させるために十分であり、T1<140°CおよびT2≧200°Cである、方法。前記組成物が、1つまたはそれより多いタンパク質を含む、請求項1または請求項2に記載の方法。前記組成物が、パルブアルブミンを含む、請求項3に記載の方法。前記変性蒸留が、0.5mmHgから5.0mmHgの圧力で行われる、前述の請求項のいずれか一項に記載の方法。前記精製蒸留が、70°Cから100°Cの温度で行われる、前述の請求項のいずれか一項に記載の方法。前記精製蒸留が、0.5μmHgから5μmHgの圧力で行われる、前述の請求項のいずれか一項に記載の方法。前記精製蒸留が、前記変性蒸留の前に行われる、前述の請求項のいずれか一項に記載の方法。スクアレンを含む前記組成物が、けん化に供される、前述の請求項のいずれか一項に記載の方法。けん化が、スクアレンを含む前記組成物へのNaOHまたはKOHの添加を含む、請求項9に記載の方法。99またはそれを超えるスクアレンを含む組成物の再蒸留のための方法であって、該再蒸留は、温度T2で行う変性蒸留であり、ここで、T2≧200°Cである、方法。水中油型エマルジョンの製造のための方法であって、請求項1から11のいずれか一項に従って調製されたスクアレンを用いてエマルジョンを調製する工程を含む、方法。ワクチン組成物を調製するための方法であって、請求項12に従ってエマルジョンを調製する工程、および該エマルジョンを抗原と組み合わせる工程を含む、方法。ワクチンキットを調製するための方法であって、請求項12に従ってエマルジョンを調製する工程、および該エマルジョンを、キット成分として、抗原成分と共にキットにパッケージングする工程を含む、方法。前記キット成分が、別個のバイアル中に存在する、請求項14に記載の方法。前記バイアルが、ホウケイ酸ガラスから作製されている、請求項15に記載の方法。前記抗原が、インフルエンザウイルス抗原である、請求項13から16のいずれか一項に記載の方法。前記エマルジョンおよび前記抗原の組み合わせが、ワクチン組成物を形成し、該ワクチン組成物が、インフルエンザウイルス1株あたり約15μg、約10μg、約7.5μg、約5μg、約3.8μg、約3.75μg、約1.9μg、または約1.5μgの赤血球凝集素を含む、請求項17に記載の方法。前記エマルジョンおよび前記抗原の組み合わせが、ワクチン組成物を形成し、該ワクチン組成物が、チオメルサールまたは2-フェノキシエタノール保存剤を含む、請求項17または請求項18に記載の方法。請求項1から11のいずれか一項に記載の方法に従って調製された、スクアレン。請求項20に記載のスクアレンを含む、水中油型エマルジョン。請求項20に記載のスクアレンを含む、ワクチン。アジュバントおよび/またはワクチンにおける請求項20に記載のスクアレンの使用。薬学的使用のために適当なスクアレン、すなわち規制基準を満たし、かつ夾雑物、病原体、ウイルス、ヒト毒素またはヒトに有害であり得るタンパク質を含まない産物を調製するための、さらなる改善された方法を見出すことが有用である。本発明のプロセスは、サメ肝油から得られたスクアレンの精製のために特に有用である。本発明は、動物供給源由来のスクアレンを含む組成物からスクアレンを調製する方法を提供し、当該方法は、以下の工程を含む:a温度T1で行う精製蒸留purificationdistillation;b温度T2で行う変性蒸留denaturingdistillation。ここで、工程aおよびbは、いずれの順序でも行うことができる。T1およびT2は、スクアレンを沸騰させるために十分である。T2>T1およびT2≧200°Cである。その動物供給源は、典型的にはサメ肝油またはその抽出物のような魚類供給源である。すなわち本発明は、サメ肝油またはサメ肝油抽出物からスクアレンを調製する方法を提供する。本発明はさらに、a温度T1で行う精製蒸留の工程;b温度T2で行う変性蒸留の工程を含む、スクアレンを含む組成物からスクアレンを調製する方法を提供し、ここで工程aおよびbは、いずれの順序でも行うことができる;T1およびT2は、スクアレンを沸騰させるために十分である。T1<140°CおよびT2≧200°Cである。そのスクアレンを含む組成物は、通常サメ肝油またはその抽出物であり得る。本発明はさらに、少なくとも99のスクアレンを含む組成物の再蒸留の方法を提供し、当該再蒸留は、温度T2で行う変性蒸留であり、ここでT2≧200°Cである。この再蒸留は、組成物の水分含有量を、例えば≦0.01まで減少させ得る。本発明の方法を使用して、薬学的適用のために適当である産物を産生し得る。特に、本発明の方法を使用して、夾雑物、病原体、ウイルス、ヒト毒素、またはタンパク質、特にヒトに対して有害であり得るタンパク質パルブアルブミンを含まない、精製スクアレンを産生し得る。本発明はさらに、上記で記載した方法によって調製したスクアレンを用いてエマルジョンを調製することを含む、水中油型エマルジョンの製造方法を提供する。本発明はさらに、上記で記載したようにエマルジョンを調製すること、およびそのエマルジョンを抗原と組み合わせることを含む、ワクチン組成物を調製する方法を提供する。本発明はさらに、上記で記載したようにエマルジョンを調製すること、およびそのエマルジョンを、抗原成分と共に、キット成分としてキットにパッケージングすることを含む、ワクチンキットを調製する方法を提供する。本発明はさらに、本発明の方法によって調製したスクアレンを提供する。本発明はさらに、本発明の方法によって調製したスクアレンを含む水中油型エマルジョンを提供する。本発明はさらに、本発明の方法によって調製したスクアレンを含むワクチンを提供する。本発明はさらに、ワクチンにおける、本発明の方法によって調製したスクアレンの使用を提供する。精製蒸留スクアレンを含む組成物を、任意の適当な供給源、例えば黒液石鹸スキミング;トール油石鹸;粗トール油;トール油ピッチ;サトウキビ油;油および脂肪の抽出、脱ガム、および清澄化からの残渣;脂肪酸およびエステルの蒸留残渣;植物油の脱臭蒸留物;オリーブ油;ダイズ油;米ぬか油;サメ肝油;牛脂;コーヒー油;魚油;タラ肝油;コムギ胚芽油;トウモロコシ胚芽油;パーム油;アンディローバ油;およびトマト残渣からの油から得ることができる。特に、スクアレンを含む組成物を、サメ肝油から得ることができる。精製蒸留は、スクアレンを含む組成物から不純物を除去して、精製組成物を産生する。そのスクアレンを含む組成物は、一般的に液体である。精製蒸留の前に、そのスクアレンを含む組成物は、スクアラミン;アルキルグリセロール;脂肪酸例えばオメガ-3-脂肪酸;ビタミンAおよびD;プリスチンpristine;トリグリセリド;グリセロールエーテルおよび脂肪アルコールのような不純物を含み得る。その精製蒸留を、温度T1で行い、ここでT1はスクアレンが沸騰するのに十分であり得、すなわちT1はスクアレンの沸点以上であり得る。スクアレンの沸点は、760mmHgすなわち1気圧で429~430°Cである。液体の沸点は、化合物の液相の蒸気圧が、その液体の表面に作用する外圧と同じである温度である。従って、スクアレンの沸点、および従ってT1の下限は、そのスクアレンを含む組成物の表面に作用する外圧に依存する。この現象は当該分野において周知であり、そして当業者は、使用する所定の蒸留圧におけるスクアレンの観察される沸点を計算し得る。あるいは、当業者は、望ましいスクアレンの観察される沸点に基づいて、必要な蒸留圧を計算し得る。そのような計算を、ノモグラフを用いて行い得る。1つの実施態様において、その精製蒸留を、少なくとも70°C、例えば少なくとも75°C、または少なくとも80°Cの温度で行い得る。別の実施態様において、その精製蒸留を、140°C未満、例えば130°C未満、120°C未満、110°C未満、100°C未満、95°C未満、90°C未満、または85°C未満の温度で行い得る。1つの実施態様において、その精製蒸留を、ほぼ真空で行い得る。特に、その精製蒸留を、少なくとも0.5μmHg、例えば少なくとも0.75μmHg、または少なくとも1μmHgの圧力で行い得る。その精製蒸留を、5μmHg未満、例えば2.5μmHg未満、または2μmHg未満の圧力で行い得る。本発明のさらなる実施態様は、上記で述べた最低および最高温度ならびに最低および最高圧力の組み合わせを含む。その精製蒸留は、少なくとも95のスクアレン、例えば少なくとも96のスクアレン、少なくとも97のスクアレン、少なくとも98のスクアレン、少なくとも99のスクアレン、少なくとも99.5のスクアレン、少なくとも99.8のスクアレン、少なくとも99.9のスクアレン、またはさらに100のスクアレン含む組成物を生じ得る。本明細書中で示された全てのパーセンテージは、重量によるパーセンテージであり、そしてガスクロマトグラフィーGCを用いて測定し得る。GC技術を、ヘキサン中のスクアレンのサンプルを、水素炎イオン化検出器FIDを備えたガスクロマトグラフに注入することによって行い得る。その分析を、30m×0.32mm×0.50mmのキャピラリーカラムで行うことができ、それは、200°Cで2分間維持され、そして次いで1分あたり12°Cの勾配で310°Cまで上昇し、そこで9分間維持される。その注入ポートおよびFIDを、それぞれ300°Cおよび320°Cに維持する。スクアレンピークのアイデンティティーidentityを、GC/MS質量選択検出器を用いたガスクロマトグラフィーを用いて確立する。純度を、クロマトグラム中の全てのピークの面積の合計のパーセンテージとしてのスクアレンピークの面積として報告する。その精製蒸留を、変性蒸留の前に行うことができ、精製組成物を生じる。あるいは、その精製蒸留を、変性蒸留の後に行うことができ、変性、精製組成物を生じる。変性蒸留サメ、および従ってサメ肝油由来のスクアレンは、ヒトにとってアレルギー性であるタンパク質を含み得る。ヒトにとってアレルギー性であり得るありふれた魚類タンパク質は、パルブアルブミンであり、それはサメにおいて見出される。それに加えて、夾雑物タンパク質または材料が、例えば精製蒸留後に、またはスクアレンの分解産物として、スクアレン組成物に導入され得る。考えられる夾雑物タンパク質または材料は、アセトン、アセトアルデヒド、ホルムアルデヒド、および水を含む。有利なことに、その変性蒸留工程は、タンパク質、特にパルブアルブミンおよび任意の夾雑物タンパク質を、変性および/またはスクアレンを含む組成物から除去し、従って変性組成物を提供する。本発明の方法のさらなる利点は、その変性蒸留が、スクアレンを含む組成物に存在する任意の考えられるウイルスを、不活性化および/または精製組成物から除去することを保証し得ることである。従って変性組成物は、非変性組成物よりヒト使用のために安全である。理論に拘束されることを望まないが、スクアレンの沸点は、スクアレンを含む組成物の表面に作用する外圧に依存する。しかし、スクアレンを含む組成物中に存在する任意のタンパク質が変性する温度は、一般的に、スクアレンを含む組成物の表面に作用する外圧に依存しない。従って、その変性蒸留を、その蒸留を行う圧力に関係なく、特定の温度で行い得る。特に、その変性蒸留を、温度T2で行い得、ここでT2は、200°C以上、例えば205°C以上、210°C以上、215°C以上、220°C以上、230°C以上、240°C以上、250°C以上、または260°C以上であり得る。その変性蒸留を、500°C未満、例えば480°C未満、450°C未満、420°C未満、400°C未満、350°C未満、または300°C未満の温度で行い得る。その変性蒸留を、ほぼ真空で行い得る。特に、その変性蒸留を、少なくとも0.5mmHg、例えば少なくとも0.6mmHg、少なくとも0.7mmHg、または少なくとも0.8mmHgの圧力で行い得る。その変性蒸留を、5mmHg未満、例えば4mmHg未満、3mmHg未満、2mmHg未満、1.5mmHg未満、1mmHg未満、0.9mmHg未満の圧力で行い得る。本発明のさらなる実施態様は、上記で述べた最低および最高温度ならびに最低および最高圧力の組み合わせを含む。そのような高温で変性蒸留を行うために、スクアレンを含む組成物を熱い表面に接触させる装置を使用することが有利であり得る。その熱い表面を、上記で定義したような温度T2に維持し得、そしてその熱い表面の周囲の圧力は、変性蒸留のために上記で定義した圧力であり得る。その熱い表面の周囲の圧力を、スクアレンの観察される沸点がT2またはそれ未満であることを保証するように選択し得る。スクアレンを含む組成物がその熱い表面と接触すると、スクアレンを含む組成物の成分熱い表面の周囲の圧力でその沸点がT2より下であるが揮発する。不揮発性の成分、例えばタンパク質は熱い表面に残り、そして変性し、スクアレンから分離し得る。変性蒸留の前に、スクアレンを含む組成物は、85から99.9のスクアレン、例えば90から99.5のスクアレン、95から99.5のスクアレン、または97から99.5のスクアレンを含み得る。その変性蒸留は、より高いパーセンテージのスクアレンを有するスクアレン組成物を産生し得る。特に、その変性蒸留は、少なくとも95のスクアレン、例えば少なくとも99のスクアレン、少なくとも99.5のスクアレン、少なくとも99.9のスクアレン、またはさらに100のスクアレンを含む、変性組成物を生じ得る。その変性蒸留は、0.5未満のタンパク質、例えば、0.1未満のタンパク質、0.01未満のタンパク質、または0のタンパク質を含む、変性組成物を生じ得る。従って、本発明は、0.5未満のタンパク質、例えば、0.1未満のタンパク質、0.01未満のタンパク質、または0のタンパク質を含むスクアレンを提供する。1つの実施態様において、その変性蒸留を、精製蒸留の後に行い、結果として、精製、変性組成物を生じ得る。T2は、T1より高い場合がある。特に、T2-T1は10°Cから300°C、例えば30°Cから250°C、50°Cから200°C、または80°Cから150°Cであり得る。溶媒スクアレンを含む組成物中に不純物が導入されることを避けるためにこれは、スクアレン組成物をワクチンにおいて使用することを意図する場合に特に重要である、その精製蒸留および変性蒸留を、溶媒を添加せずに行い得る。けん化スクアレンを含む組成物を、けん化に供し得る。けん化を、通常、上記で議論した蒸留工程aおよびbの前に行う。あるいは、けん化を、蒸留工程aと蒸留工程bとの間どちらの順序においても行うに行い得る。あるいは、通常ではないが、けん化を蒸留工程aおよびbの後に行い得る。けん化は、スクアレンを含む組成物中に存在するタンパク質を破壊し得る。しかし、けん化は、存在する全てのタンパク質を除去するわけではない。けん化の後にスクアレンを含む組成物中に残る任意の残留タンパク質を、変性蒸留工程によって除去し得る。けん化および変性蒸留の組み合わせは、スクアレンが任意のタンパク質を含まない可能性を改善するので、有用である。けん化は、アルコールおよびカルボン酸の塩を形成する、塩基性条件下でのエステルの加水分解である。スクアレンを含む組成物のけん化の間、塩基例えばNaOHまたはKOHを組成物に加え、それは脂肪酸エステル例えばトリグリセリドを、石鹸に変換し得る。けん化は、けん化産物の沸点と非けん化産物の沸点との間の差異を増加させ、蒸留、例えば精製蒸留および/または変性蒸留による分離をより効率的にし得るので、有用であり得る。あるいは、そのけん化産物を、別の手段、例えば遠心分離によって除去し得る。けん化による脂肪酸エステルの除去は、スクアレンを含むけん化組成物を生じ得、それはスクアレンを含む非けん化組成物と比較して改善された純度すなわちより高いのスクアレンであり得る。スクアレンの特徴付け本発明の方法によって産生されたスクアレンは、4mg/ml未満、例えば3mg/ml未満、2mg/ml未満、または1mg/ml未満のけん化値を有し得る。この測定値は、スクアレン中に存在するけん化可能な種の量を示す。けん化値を、米国薬局方USP<401>において記載されたように、水酸化ナトリウムの加水分解および中和化当量として決定し得る。NaOHを用いて得られたけん化値を、KOHおよびNaOHの分子量の比1.403をかけることによって、KOHの値に変換し得る。本発明の方法によって産生されたスクアレンは、1mgKOH/g以下、例えば0.8mgKOH/g以下、0.6mgKOH/g以下、0.5mgKOH/g以下、0.4mgKOH/g以下、0.2mgKOH/g以下、0.1mgKOH/g以下、0.05mgKOH/g以下、0.03mgKOH/g以下、0.02mgKOH/g以下、または0.01mgKOH/g以下の酸価を有し得る。その酸価を、USP<401>において記載されたように、スクアレンによって消費される水酸化カリウムの中和化当量として決定し得る。水中油型エマルジョンスクアレンを含む組成物を、上記で記載したように調製したら、それを下流の産物、例えば薬学的、水中油型エマルジョンアジュバント等の調製のために使用し得る。汚染を回避するために、スクアレンを蒸留処理後、および下流の産物の調製前に無菌を維持することが好ましい。例えば、下流の産物がエマルジョンである場合、エマルジョンの形成前のスクアレンの汚染を回避するために、蒸留およびエマルジョン装置は閉鎖システムを形成し得る。あるいは、またはそれに加えて、そのスクアレンを、下流の産物の調製前に、不活性雰囲気下、例えば窒素下に維持し得る。水中油型エマルジョンは、ワクチンの補助で使用するために特に適当であることが見出された。本発明によって調製されたエマルジョンは、水性成分に加えて、スクアレンおよび少なくとも1つの界面活性剤を含む。そのエマルジョンは、さらなる油を含み得る。理想的には、その油および界面活性剤は、生物分解性代謝性および生体適合性である。スクアレンおよびトコフェロールの油の組み合わせを使用し得る。組成物がトコフェロールを含む場合、α、β、γ、δ、ε、またはζトコフェロールのいずれもを使用し得るが、α-トコフェロールが好ましい。D-α-トコフェロールおよびDL-α-トコフェロールをどちらも使用し得る。好ましいα-トコフェロールは、DL-α-トコフェロールである。トコフェロールは、いくつかの形態、例えば様々な塩および/または異性体をとり得る。塩は、コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩等のような、有機塩を含む。トコフェロールの塩を使用する場合、好ましい塩はコハク酸塩である。スクアレンおよびトコフェロール例えばDL-α-トコフェロールを含む油の組み合わせは有用である。2~20容積での範囲の油含有量が典型的である。水性成分は、混ぜ物の無い水例えばw.f.i.であり得、またはさらなる成分、例えば溶質を含み得る。例えば、それは緩衝液を形成する塩、例えばナトリウム塩のようなクエン酸塩またはリン酸塩を含み得る。典型的な緩衝液は、リン酸緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、またはクエン酸緩衝液を含む。緩衝液を、典型的には5~20mMの範囲で含む。界面活性剤は、好ましくは生物分解性代謝性および生体適合性である。界面活性剤を、そのHLB親水性/親油性バランスによって分類し得、ここで1~10の範囲のHLBは、一般的にその界面活性剤が水よりも油に可溶であることを意味し、そして10~20の範囲のHLBは、油よりも水に可溶である。エマルジョンは、好ましくは少なくとも10、例えば少なくとも15、または好ましくは少なくとも16のHLBを有する、少なくとも1つの界面活性剤を含む。本発明を、以下のものを含むがこれに限らない界面活性剤と共に使用し得る:ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤通常Tweenと呼ばれる、特にポリソルベート20およびポリソルベート80;直鎖状EO/POブロックコポリマーのような、商品名DOWFAXTMで販売されている、エチレンオキシドEO、プロピレンオキシドPO、および/またはブチレンオキシドBOのコポリマー;エトキシオキシ-1,2-エタンジイル基の反復数が変動し得るオクトキシノール、オクトキシノール-9TritonX-100、またはt-オクチルフェノキシポリエトキシエタノールは特に重要である;オクチルフェノキシポリエトキシエタノールIGEPALCA-630/NP-40;ホスファチジルコリンレシチンのようなリン脂質;トリエチレングリコールモノラウリルエーテルBrij30のような、ラウリル、セチル、ステアリル、およびオレイルアルコール由来のポリオキシエチレン脂肪エーテルBrij界面活性剤として公知である;ポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテル;ならびにソルビタントリオレアートSpan85およびソルビタンモノラウラートのような、ソルビタンエステル通常SPANとして公知である。エマルジョンに含まれる好ましい界面活性剤は、ポリソルベート80Tween80;ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、Span85ソルビタントリオレアート、レシチン、およびTritonX-100である。界面活性剤の混合物、例えばTween80/Span85混合物、またはTween80/Triton-X100混合物を、エマルジョン中に含み得る。ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートTween80のようなポリオキシエチレンソルビタンエステル、およびt-オクチルフェノキシ-ポリエトキシエタノールTritonX-100のようなオクトキシノールの組み合わせも適当である。別の有用な組み合わせは、ラウレス9とポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび/またはオクトキシノールを含む。有用な混合物は、10~20の範囲のHLB値を有する界面活性剤例えばTween80、15.0のHLB、および1~10の範囲のHLB値を有する界面活性剤例えばSpan85、1.8のHLBを含み得る。界面活性剤の好ましい量重量は:ポリオキシエチレンソルビタンエステルTween80のような0.01から2;オクチルまたはノニルフェノキシポリオキシエタノールTritonX-100または他のTritonシリーズの洗浄剤のような0.001から0.1;ポリオキシエチレンエーテルラウレス9のような0.1から20である。ポリソルベート80界面活性剤を含む、スクアレンを含む水中油型エマルジョンが好ましい。水中油型エマルジョンを、以下の工程を含む方法を用いて製造し得る:i予備的エマルジョン、またはプレエマルジョンとしても公知である、第1の平均油滴サイズを有する第1のエマルジョンの調製;ii第1の平均油滴サイズよりも小さい、第2の平均油滴サイズを有する第2のエマルジョンを形成するための、第1のエマルジョンのマイクロフルイダイゼーション;およびiii第2のエマルジョンのろ過。第1のエマルジョンを、ホモジナイゼーションによって調製し得る。エマルジョン中の油滴は、一般的に直径5μm未満であり、そしてサブミクロンの直径さえ有し得、これらの小さいサイズは、マイクロフルイダイザーによって好都合に達成され、安定なエマルジョンを提供する。ろ過滅菌に供し得るので、220nm未満のサイズを有する液滴が好ましい。本発明によって調製したスクアレンを用いて作製し得る、特定の水中油型エマルジョンアジュバントは、以下のものを含むがこれに限らない。スクアレン、ポリソルベート80Tween80、およびソルビタントリオレアートSpan85のエマルジョン。容積によるエマルジョンの組成は、約5のスクアレン、約0.5のポリソルベート80、および約0.5のSpan85であり得る。重量では、これらの比は4.3のスクアレン、0.5のポリソルベート80、および0.48のSpan85になる。このアジュバントは、MF59として公知であり[4~6]、参考文献7の第10章、および参考文献8の第12章でより詳細に記載されている。MF59エマルジョンは、クエン酸イオン、例えば10mMのクエン酸ナトリウム緩衝液を有利に含む。スクアレン、トコフェロール理想的にはDL-α-トコフェロール、およびポリソルベート80のエマルジョン。これらのエマルジョンは、重量で2から10のスクアレン、2から10のトコフェロール、および0.3から3のポリソルベート80、例えば4.3のスクアレン、4.7のトコフェロール、および1.9のポリソルベート80を有し得る。スクアレン:トコフェロールの重量比は、より安定なエマルジョンを生じ得るので、好ましくは≦1例えば0.90である。スクアレンおよびポリソルベート80は、約5:2の容積比、または約11:5の重量比で存在し得る。1つのそのようなエマルジョンを、ポリソルベート80をPBS中に溶解して2の溶液を生じ、次いで90mlのこの溶液を、5gのDL-α-トコフェロールおよび5mlのスクアレンの混合物と混合し、次いでその混合物をマイクロフルイダイズすることによって産生し得る。できたエマルジョンは、サブミクロン、例えば100~250nm、好ましくは約180nmの平均直径を有する油滴を有する。そのエマルジョンはまた、3-de-O-アシル化モノホスホリルリピドA3d-MPLも含み得る。別の有用なこの型のエマルジョンは、ヒトの1用量あたり、0.5~10mgのスクアレン、0.5~11mgのトコフェロール、および0.1~4mgのポリソルベート80を含み得る[9]。スクアレン、トコフェロール、およびTriton洗浄剤例えばTritonX-100のエマルジョン。そのエマルジョンはまた、3d-MPLも含み得る。そのエマルジョンは、リン酸緩衝液を含み得る。スクアレン、ポリソルベート例えばポリソルベート80、Triton洗浄剤例えばTritonX-100およびトコフェロール例えばα-トコフェロールスクシネートを含むエマルジョン。そのエマルジョンは、これらの3つの成分を、約75:11:10の質量比で含み得例えば750μg/mlのポリソルベート80、110μg/mlのTritonX-100、および100μg/mlのα-トコフェロールスクシネート、そしてこれらの濃度は、抗原からのこれらの成分の任意の寄与も含むものとする。そのエマルジョンはまた、3d-MPLも含み得る。そのエマルジョンはまた、QS21のようなサポニンも含み得る。その水相は、リン酸緩衝液を含み得る。スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤例えばポリオキシエチレン12セトステアリルエーテルおよび疎水性非イオン性界面活性剤例えばソルビタンモノオレアートまたはSpan80のようなソルビタンエステルまたはマンニドエステルを含むエマルジョン。そのエマルジョンは、好ましくは熱可逆的であり、および/または少なくとも90の油滴が容積で200nm未満のサイズである[10]。そのエマルジョンはまた、1つまたはそれ以上の:アルジトール;凍結保護剤例えば、ドデシルマルトシドおよび/またはショ糖のような糖;および/またはアルキルポリグリコシドを含み得る。そのエマルジョンは、TLR4アゴニストを含み得る[11]。そのようなエマルジョンを凍結乾燥し得る。スクアレン、ポロクサマー105およびAbil-Careのエマルジョン[12]。アジュバントワクチンにおけるこれらの成分の最終的な濃度重量は、5のスクアレン、4のポロクサマー105プルロニックポリオールおよび2のAbil-Care85Bis-PEG/PPG-16/16PEG/PPG-16/16ジメチコン;トリカプリル酸/カプリン酸グリセリルである。上記でパーセンテージで表されたこれらのエマルジョンの組成を、希釈または濃縮によって改変し得例えば2または3のような整数によって、または2/3または3/4のような分数によって、ここでその比は同じままである。例えば、2倍濃縮MF59は、約10のスクアレン、約1のポリソルベート80、および約1のソルビタントリオレアートを有する。濃縮された形態を希釈して例えば抗原溶液によって、望ましい最終的な濃度のエマルジョンを生じ得る。本発明のエマルジョンを、理想的には2°C~8°Cで保管する。それらを凍結するべきではない。それらを、理想的には直接光を避けて維持するべきである。特に、本発明のスクアレンを含むエマルジョンおよびワクチンは、スクアレンの光化学的分解を避けるようにに保護するべきである。本発明のエマルジョンを保管する場合、好ましくは不活性雰囲気下、例えばN2またはアルゴン下で保管する。ワクチン水中油型エマルジョンアジュバントを、例えば患者に別に投与された抗原にアジュバント効果を提供するためにそれ自体で患者に投与することが可能であるが、投与の前にそのアジュバントを抗原と混合して、免疫原性組成物、例えばワクチンを形成することがより通常である。エマルジョンおよび抗原の混合を、使用時にその場で行うことができ、またはワクチン製造中に、充填の前に行うこともできる。本発明の方法を、両方の状況に適用し得る。従って、本発明の方法は、本発明によって調製したスクアレンを含むエマルジョンを、抗原成分と混合するさらなるプロセスの工程を含み得る。代替として、アジュバントを、抗原成分と共にキット成分として、キットへパッケージングするさらなる工程を含み得る。従って、全体として、混合ワクチンを調製する場合に、または混合する準備ができた抗原およびアジュバントを含むキットを調製する場合に、本発明を使用し得る。混合を製造中に行う場合、混合するバルク抗原およびエマルジョンの容積は、典型的には1リットル超、例えば≧5リットル、≧10リットル、≧20リットル、≧50リットル等である。混合を使用時に行う場合、混合する容積は、典型的には1ミリリットル未満、例えば≦0.6ml、≦0.5ml、≦0.4ml、≦0.3ml、≦0.2ml等である。両方の場合において、実質的に同じ容積、すなわち実質的に1:1例えば1.1:1~1:1.1、好ましくは1.05:1~1:1.05、およびより好ましくは1.025:1~1:1.025のエマルジョンおよび抗原溶液を混合することが通常である。しかし、いくつかの実施態様において、過剰のエマルジョンまたは過剰の抗原を使用し得る[13]。過剰な量の1つの成分を使用する場合、その過剰さは、一般的に少なくとも1.5:1、例えば≧2:1、≧2.5:1、≧3:1、≧4:1、≧5:1等である。抗原およびアジュバントがキット内で別個の成分として存在する場合、それらはキット内で物理的にお互いから離れており、そしてこの分離を様々な方法で達成し得る。例えば、その成分は、バイアルのような別個の容器内に存在し得る。2つのバイアルの内容物を、必要な場合に、例えば1つのバイアルの内容物を取り出し、そしてそれらを他方のバイアルに加えることによって、または両方のバイアルの内容物を別々に取り出し、それらを3番目の容器中で混合することによって混合し得る。別の構成において、キット成分の1つはシリンジ中にあり、そして他方はバイアルのような容器内にある。そのシリンジを、その内容物を混合のためにバイアル内へ入れるために使用し得例えば針によって、そして次いでその混合物をシリンジ内へ回収し得る。シリンジの混合した内容物を、次いで典型的には新しい滅菌針によって患者に投与し得る。1つの成分をシリンジ内に詰めることは、患者への投与のために別のシリンジを使用する必要性を排除する。別の好ましい構成において、2つのキット成分を、同じシリンジ、例えば参考文献14~21等で開示されたもののような、デュアルチャンバーシリンジ内で一緒に、しかし別々に保持する。シリンジを作動させる場合に例えば患者への投与中、2つのチャンバーの内容物が混合される。この構成は、使用時の別個の混合工程の必要性を回避する。様々なキット成分の内容物は、一般的に全て液体形態である。いくつかの構成において、成分典型的にはエマルジョン成分ではなく抗原成分は乾燥形態であり例えば凍結乾燥形態、他の成分は液体形態である。乾燥成分を再活性化し、そして患者へ投与するための液体組成物をもたらすために、2つの成分を混合し得る。凍結乾燥成分は典型的にはシリンジではなくバイアル内にある。乾燥成分は、ラクトース、ショ糖、またはマンニトールおよびその混合物、例えばラクトース/ショ糖混合物、ショ糖/マンニトール混合物等のような安定剤を含み得る。1つの考えられる構成は、充填済みのシリンジ中の液体エマルジョン成分およびバイアル中の凍結乾燥抗原成分を使用する。ワクチンが、エマルジョンおよび抗原に加えて成分を含む場合、これらのさらなる成分は、これら2つのキット成分のうちの1つに含まれることがあり、または3番目のキット成分の一部であり得る。本発明の混合ワクチンのために、または個々のキット成分のために適当な容器は、バイアルおよび使い捨てシリンジを含む。これらの容器は無菌でなければならない。組成物/成分がバイアル中にある場合、そのバイアルは、好ましくはガラスまたはプラスチック材料でできている。そのバイアルを、好ましくは組成物を加える前に滅菌する。ラテックス感受性の患者に関する問題を回避するために、バイアルを好ましくはラテックスフリーのストッパーで密封し、そして全てのパッケージング材料においてラテックスが存在しないことが好ましい。1つの実施態様において、バイアルはブチルゴムストッパーを有する。そのバイアルは、単一用量のワクチン/成分を含み得、またはそれは、1を超える用量複数用量バイアル、例えば10用量を含み得る。1つの実施態様において、バイアルは10×0.25mlの用量のエマルジョンを含む。好ましいバイアルは、無色のガラスでできている。バイアルは、キャップであって、充填済みのシリンジをキャップ内に挿入し得、シリンジの内容物をバイアル内に放出し得例えばその中の凍結乾燥物質を再構成するために、そしてバイアルの内容物をシリンジへ戻し得るように適合させた、キャップ例えばLuerlockを有し得る。シリンジをバイアルから除去した後、次いで針をつけて、そしてその組成物を患者に投与し得る。そのキャップは、好ましくはシールまたはカバーの内側にあり、そのため、キャップにアクセスし得る前にそのシールまたはカバーを除去しなければならない。組成物/成分をシリンジ中にパッケージングする場合、そのシリンジは通常それに取り付けられた針を有さないが、組み立ておよび使用のために、別個の針を、シリンジと共に供給し得る。安全針が好ましい。1インチ23ゲージ、1インチ25ゲージ、および5/8インチ25ゲージ針が典型的である。シリンジを、記録の保持を容易にするために、ロット番号、インフルエンザシーズンおよび内容物の有効期限を印刷し得る剥離ラベルと共に提供し得る。シリンジ中のプランジャーは、好ましくは吸引中にプランジャーが偶発的に取れてしまうことを予防するためのストッパーを有する。そのシリンジは、ラテックスゴムのキャップおよび/またはプランジャーを有し得る。使い捨てシリンジは、単一用量のワクチンを含む。そのシリンジは、一般的に針を取り付ける前には、先端を密封する先端キャップを有し、そしてその先端キャップは好ましくはブチルゴムでできている。そのシリンジおよび針を別々にパッケージングする場合、その針には好ましくはブチルゴムシールドが備え付けられている。そのエマルジョンを、バイアルまたはシリンジへパッケージングする前に、緩衝液で希釈し得る。典型的な緩衝液は:リン酸緩衝液;Tris緩衝液;ホウ酸緩衝液;コハク酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、またはクエン酸緩衝液を含む。希釈は、その相対的な割合を保持しながら、アジュバント成分の濃度を低下させて、例えば半分の強度のアジュバントを提供し得る。例えば小児への送達を容易にするために、容器に半分の用量容積を示す印を付け得る。例えば、0.5mlの用量を含むシリンジは、0.25mlの容積を示す印を有し得る。ガラス容器例えばシリンジまたはバイアルを使用する場合、ソーダ石灰ガラスではなく、ホウケイ酸ガラスから作製された容器を使用することが好ましい。以下のものを含むがこれに限らない様々な抗原を、水中油型エマルジョンと共に使用し得る:ウイルス表面タンパク質のようなウイルス抗原;タンパク質および/または糖類抗原のような細菌抗原;真菌抗原;寄生虫抗原;および腫瘍抗原。本発明は、インフルエンザウイルス、HIV、鉤虫、B型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、狂犬病、RSウイルス、サイトメガロウイルス、Staphylococcusaureus、クラミジア、SARS、コロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Streptococcuspneumoniae、Neisseriameningitidis、Mycobacteriumtuberculosis、Bacillusanthracis、エプスタインバーウイルス、ヒトパピローマウイルス等に対するワクチンのために特に有用である。例えば:インフルエンザウイルス抗原。これらは、生のウイルスまたは不活化ウイルスの形態をとり得る。不活化ウイルスを使用する場合、そのワクチンは、ビリオン全体、分割ビリオン、または精製表面抗原赤血球凝集素を含む、および通常ノイラミニダーゼも含むを含み得る。インフルエンザ抗原をまた、ビロソームの形態で提示し得る。その抗原は、H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、および/またはH16から選択される、任意の赤血球凝集素のサブタイプを有し得る。ワクチンは、インフルエンザAウイルスおよび/またはインフルエンザBウイルスを含む、1つまたはそれ以上例えば1、2、3、4、またはそれ以上のインフルエンザウイルス株由来の抗原を含み得る例えば一価のA/H5N1またはA/H1N1ワクチン、または三価のA/HIN1A/H3N2Bワクチン。そのインフルエンザウイルスは、再集合体reassortant株であり得、そして逆遺伝学的技術によって得ることができた[例えば22~26]。従って、そのウイルスは、A/PR/8/34ウイルス由来の、1つまたはそれ以上のRNAセグメントを含み得る典型的にはA/PR/8/34から6個のセグメント、HAおよびNセグメントはワクチン株由来、すなわち6:2再集合体。抗原の供給源として使用するウイルスを、卵例えば孵化鶏卵または細胞培養のいずれかで増殖させ得る。細胞培養を用いる場合、その細胞培養基は、典型的にはMDCK;CHO;293T;BHK;Vero;MRC-5;PER.C6;WI-38等のような、哺乳動物細胞系統である。インフルエンザウイルスを増殖させるために好ましい哺乳動物細胞系統は:MadinDarbyイヌ腎臓由来のMDCK細胞[27~30];アフリカミドリザル腎臓由来のVero細胞[31~33];またはヒト胚性網膜芽細胞由来のPER.C6細胞[34]を含む。ウイルスを哺乳動物細胞系統で増殖させた場合、その組成物は有利なことに卵タンパク質例えば卵白アルブミンおよびオボムコイドおよびニワトリDNAを含まず、それによってアレルゲン性を抑制する。典型的には、ワクチンの単位用量を、典型的にはSRIDによって測定される赤血球凝集素HA含有量に関して標準化する。既存のワクチンは、典型的には1株あたり約15μgのHAを含むが、特にアジュバントを使用する場合には、より低い用量を使用し得る。1/2すなわち株あたり7.5μgのHA、1/4および1/8のような分数の用量も、より高い用量も例えば3×または9×用量[37、38]使用した[35、36]。従って、ワクチンは、インフルエンザ1株あたり0.1~150μgのHA、好ましくは0.1~50μg、例えば0.1~20μg、0.1~15μg、0.1~10μg、0.1~7.5μg、0.5~5μg等のHAを含み得る。特定の用量は、例えば1株あたり約15、約10、約7.5、約5、約3.8、約3.75、約1.9、約1.5等を含む。HIV-1およびHIV-2を含むヒト免疫不全ウイルス。その抗原は、典型的にはエンベロープ抗原である。B型肝炎ウイルス表面抗原。この抗原を、好ましくは、組換えDNA法によって得る例えば、Saccharomycescerevisiae酵母における発現後。天然ウイルスHBsAgとは異なり、その組換え酵母発現抗原は、糖鎖付加されていない。それは、リン脂質を含む脂質マトリックスを含む、実質的に球形の粒子の形態約20nmの平均直径であり得る。天然HBsAg粒子とは異なり、酵母で発現した粒子は、ホスファチジルイノシトールを含み得る。そのHBsAgは、サブタイプayw1、ayw2、ayw3、ayw4、ayr、adw2、adw4、adrq-およびadrqのいずれかに由来し得る。特にイヌにおいて見られる鉤虫Ancylostomacaninum。この抗原は、組換えAc-MTP-1アスタシン様メタロプロテアーゼおよび/またはアスパラギン酸ヘモグロビナーゼAc-APR-1であり得、それを分泌タンパク質としてバキュロウイルス/昆虫細胞システムにおいて発現し得る[39、40]。単純ヘルペスウイルス抗原HSV。本発明で使用するための好ましいHSV抗原は、膜糖タンパク質gDである。HSV-2株由来のgDを使用することが好ましいgD2抗原。その組成物は、C末端膜アンカー領域が欠失したgDの形態、例えばC末端にアスパラギンおよびグルタミンを付加した、天然タンパク質のアミノ酸1~306を含む短縮gDを使用し得る[41]。この形態のタンパク質は、シグナルペプチドを含み、それは切断されて成熟283アミノ酸タンパク質を生じる。アンカーの欠失は、そのタンパク質を可溶性形態で調製することを可能にする。ヒトパピローマウイルス抗原HPV。本発明で使用するために好ましいHPV抗原は、L1カプシドタンパク質であり、それは集合してウイルス様粒子VLPとして公知の構造を形成し得る。VLPを、酵母細胞における例えばS.cerevisiaeにおけるまたは昆虫細胞における例えばS.frugiperdaのようなSpodoptera細胞における、またはDrosophila細胞におけるL1の組換え発現によって産生し得る。酵母細胞に関して、プラスミドベクターがL1遺伝子を有し得る;昆虫細胞に関して、バキュロウイルスベクターがL1遺伝子を有し得る。より好ましくは、その組成物は、HPV-16株およびHPV-18株両方に由来するL1VLPを含む。この二価の組み合わせは、非常に有効であることが示された[42]。HPV-16株およびHPV-18株に加えて、HPV-6株およびHPV-11株由来のL1VLPを含むことも可能である。腫瘍形成性HPV株の使用も可能である。ワクチンは、HPV株あたり20~60μg/ml例えば約40μg/mlのL1を含み得る。炭疽抗原。炭疽は、Bacillusanthracisによって引き起こされる。適当なB.anthracis抗原は、A成分致死因子LFおよび浮腫因子EFを含み、それらはどちらも保護抗原PAとして公知である共通のB成分を有し得る。その抗原を任意で無毒化し得る。さらなる詳細を、参考文献[43から45]において見出し得る。S.aureus抗原。様々なS.aureus抗原が公知である。適当な抗原は、莢膜糖類例えば5型および/または8型株由来およびタンパク質例えばIsdB、Hla等を含む。莢膜糖類抗原は、理想的にはキャリアタンパク質に結合体化する。S.pneumoniae抗原。様々なS.pneumoniae抗原が公知である。適当な抗原は、莢膜糖類例えば1つまたはそれ以上の血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、および/または23F由来およびタンパク質例えばニューモリシン、無毒化ニューモリシン、ポリヒスチジン三つ組triadタンパク質DPhtD等を含む。莢膜糖類抗原は、理想的にはキャリアタンパク質に結合体化する。がん抗原。様々な腫瘍特異的抗原が公知である。本発明を、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん等に対する免疫療法的反応を誘発する抗原と共に使用し得る。抗原の溶液を、通常、スクアレンを含むエマルジョンと、例えば1:1の容積比で混合する。この混合を、ワクチン製造者が充填の前に実施することができ、または医療従事者が使用時に実施することもできる。薬学的組成物本発明の方法を用いて作製した組成物は、薬学的に許容可能である。それらは、スクアレンを含むエマルジョンおよび任意の抗原に加えて、成分を含み得る。その組成物は、チオメルサールまたは2-フェノキシエタノールのような保存剤を含み得る。しかし、ワクチンは、実質的に水銀材料を含むべきではなくすなわち5μg/ml未満、例えばチオメルサールを含まないことが好ましい[46、47]。水銀を含まないワクチンおよび成分がより好ましい。組成物のpHは、一般的に5.0~8.1、およびより典型的には6.0~8.0、例えば6.5~7.5である。従って、本発明のプロセスは、パッケージングの前に、ワクチンのpHを調整する工程を含み得る。その組成物は、好ましくは無菌である。その組成物は、好ましくは非発熱性であり、例えば用量あたり<1EUエンドトキシンユニット、標準尺度、および好ましくは用量あたり<0.1EUを含む。その組成物は、好ましくはグルテンを含まない。その組成物は、単回免疫化のための材料を含み得、または複数回免疫化のための材料を含み得るすなわち、複数用量キット。複数用量の構成では、保存剤を含むことが好ましい。ワクチンを、典型的には約0.5mlの投与容積で投与するが、半分の用量すなわち約0.25mlを小児に投与し得る。処置方法、およびワクチンの投与本発明は、本発明の方法を用いて調製したキットおよび組成物を提供する。本発明の方法によって調製した組成物は、ヒト患者への投与に適当であり、そして本発明は、そのような組成物を患者へ投与する工程を含む、患者において免疫反応を起こす方法を提供する。本発明はまた、薬物として使用するためのこれらのキットおよび組成物を提供する。本発明はまた、患者において免疫反応を起こすための薬物の製造における、i抗原の水性調製物;およびii本発明によって調製したスクアレンを含む水中油型エマルジョンの使用を提供する。これらの方法および使用によって起こされた免疫反応は、一般的に、抗体反応、好ましくは保護的抗体反応を含む。その組成物を、様々な方法で投与し得る。最も好ましい免疫化経路は、筋肉内注射例えば腕または脚へのであるが、他の利用可能な経路は、皮下注射、鼻腔内[48~50]、経口[51]、皮内[52、53]、経皮transcutaneous、経真皮transdermal[54]等を含む。本発明によって調製したワクチンを、小児および成人の両方を処置するために使用し得る。その患者は、1歳未満、1~5歳、5~15歳、15~55歳、または少なくとも55歳であり得る。その患者は、高齢者例えば≧50歳、好ましくは≧65歳、若年者例えば≦5歳、入院患者、医療従事者、軍隊および軍人、妊娠中の女性、慢性的な病気、免疫不全患者、および海外旅行者であり得る。しかし、そのワクチンはこれらのグループだけに適当であるのではなく、より一般的に個体群の中で使用し得る。本発明のワクチンを、他のワクチンと実質的に同時に例えば同じ診察中または医療専門家への訪問中に患者へ投与し得る。一般含むcomprisingという用語は、含むincludingおよびからなるconsistingを含み、例えばXを含むcomprising組成物は、Xのみからなり得、またはさらに何か、例えばXYを含みinclude得る。数値xに関して、約という用語は、任意であり、そして例えばx±10を意味する。実質的にという用語は、完全にを排除しない。例えばYを実質的に含まない組成物は、完全にYを含まない場合もある。必要な場合には、実質的にという用語を、本発明の定義から省略し得る。明確に述べなければ、2つまたはそれ以上の成分を混合する工程を含むプロセスは、いかなる特定の混合の順序も必要としない。したがって、成分を任意の順序で混合し得る。3つの成分が存在する場合、2つの成分をお互いに組み合わせることができ、そして次いでその組み合わせを3番目の成分と組み合わせることができる、等。本方法の様々な工程を、同じかまたは異なるときに、同じかまたは異なる地理的位置、例えば国において、同じかまたは異なる人々または実体が行い得る。発明を実施するための様式実施例1図1は、本発明の方法の精製蒸留工程および/または変性蒸留工程のために使用し得る蒸留装置の概略図を示す。図1に関連して記載したプロセスを、スクアレンを含む組成物にいかなる溶媒も添加せずに行い得る。図1に示す実施態様において、スクアレンを含む組成物を、供給容器feedvessel1に入れ、窒素を加えた。注入ライン3の1つの端は、ポリプロピレンのプレフィルターを有し、そして供給容器内にあり、一方注入ラインのもう1つの端は、ステンレススチールの針19-ga.を有し、それを蒸留装置5の上部に挿入する。その蒸留装置は、中央に突き出した円柱状のホットフィンガー9を有するチューブのような形のチャンバー7を含む。212°Cの沸点を有する安息香酸エチルを、そのフィンガーの下で加熱して、そのホットフィンガーの壁に熱を供給する。本実施態様において安息香酸エチルを使用するが、ホットフィンガーの温度を上げるために、より高い沸点を有する溶媒を使用し得ることが明らかである。蒸留の間、その蒸留装置を排気し得る。スクアレンを含む組成物が、例えば蒸留装置内の低圧の使用によって、ステンレススチール針を通って蒸留装置に引き込まれ、そしてホットフィンガーの加熱した壁へ滴下し得る11。スクアレンを含む組成物を加熱すると、蒸留装置内の圧力において沸点が212°Cより低い成分は揮発する。図1のシステムを用いてスクアレンを揮発させるために、蒸留装置内の圧力を、スクアレンの沸点を212°C以下に下げるように選択するべきである例えば約1.5mmHgまたはそれ以下。揮発した成分は、チャンバー7の外壁で凝縮し、それは周囲の空気によって冷却され、そして壁をつたって収集フラスコ13に入り、それも減圧下であり得る。不揮発性の成分、例えばタンパク質は、ホットフィンガーの壁に残り、そして残渣フラスコ15に流れ落ちる。非常に揮発性の成分は、減圧ラインを通って出て、スクアレン凝縮物中のそのレベルを低下させ得る。既に精製蒸留に供したスクアレンを、この装置を用いて蒸留した。供給源に関わらず、最終的なスクアレンは、通常≧99.9の純度、<0.03mgKOH/gの酸価、および<2mg/gのけん化価を有していた。変性蒸留は、スクアレンの水分含有量を、例えば0.022から0.010、0.006から0.005、または0.010から0.006に低下させた。実施例2-けん化値の測定けん化値は、1.0gの物質に含まれる、遊離の酸を中和し、そしてエステルをけん化するために必要な水酸化カリウムのmg数である。手順USP<401>:1.5gから2gの物質を、250mLのフラスコフラスコの重さを引いておくtaredに入れ、正確に秤量し、そしてそれを25.0mLの0.5Nアルコール性水酸化カリウムに加える。フラスコを適当なコンデンサー下で、蒸気浴で加熱して、30分間還流を維持し、頻繁に内容物を回転させる。次いで1mLのフェノールフタレインTSを加え、そして0.5Nの塩酸VSで過剰な水酸化カリウムを滴定する。同じ条件下でブランクの決定を実施する。実際の試験およびブランク試験で消費された0.5N塩酸の、容積mLにおけるの間の差に、56.1および0.5N塩酸VSの正確な規定度をかけ、そして取った試料の重量gで割ったものが、けん化値である。スクアレンの供給源に依存して、<1.4mg/gのけん化値を得ることができる。実施例3-酸価の測定脂肪および固定油の酸性度を、10.0gの物質中の遊離の酸を中和するために必要な、0.1NのアルカリのmL数として表し得る。酸価は、1.0gの物質中の遊離の酸を中和するために必要なアルカリのmg数である。手順USP<401>:約10.0gの物質を、正確に秤量し、フラスコに入れた等量のアルコールおよびエーテルの混合物0.1Nの水酸化ナトリウムでフェノールフタレインに対して中和した50mL中に溶解する。試験試料が冷たい溶媒に溶解しない場合、フラスコを適当なコンデンサーに連結し、頻繁に振とうしながら、試料が溶解するまでゆっくりと加熱する。1mLのフェノールフタレインTSを加え、そして30秒間振とうした後、溶液がわずかにピンク色のままになるまで、0.1Nの水酸化ナトリウムVSで滴定する。どちらかの酸価を計算する。滴定に必要な0.1NのアルカリVSの容積が2mL未満であるなら、より希釈した滴定剤を使用し得、またはサンプルサイズを適宜調整し得る。その結果を、滴定剤の容積に関して、または等量の0.1Nの水酸化ナトリウムに関して表し得る。スクアレンの供給源に依存して、0.03mgKOH/gの酸価を得ることができる。実施例4-スパイク試験多くのスパイク試験を行って、変性蒸留の効果を示した。変性蒸留によって除去された不純物のレベルを決定するために、スクアレン組成物に、特定の量の夾雑物例えば水およびスクアレンの考えられる分解産物例えばホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、およびアセトンを加えたspike。加えた溶液に、本発明による変性蒸留を行い、そして加えた種に関して分析した。4kgのスクアレン組成物に、例えば0.3mL0.2gのアセトアルデヒド>99.5純度、0.3mL0.2gのアセトン>99.9純度、0.55mLの37wt水性溶液のホルムアルデヒド0.2gおよび3.65gの水を、実施例1で記載した変性蒸留の前に加えた。蒸留物を、3つの画分に収集し、そして加えた開始材料と共に、加えた種に関して分析した。結果を下記の表1に示す。表1の結果は、アセトン、アセトアルデヒドおよびホルムアルデヒド濃度が全て、変性蒸留後に減少したことを示す。本発明は、単なる例によって説明され、そして本発明の範囲および精神の範囲内に留まりながら修飾を行い得ることが理解される。"