"i1種又は複数種の神経伝達物質輸送体に特異的に結合する少なくとも1種の選択的作用剤、及びii神経伝達物質輸送体と同じ細胞で発現している標的分子に特異的に結合することができる少なくとも1種の核酸を含んでなる、コンジュゲート。神経伝達物質輸送体と同じ細胞で発現している標的分子に特異的に結合することができる核酸配列が、2本鎖RNA干渉オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ギャップマー、PNA、LNA、リボザイム及びアプタマーからなる群から選択される、請求項1に記載のコンジュゲート。標的分子に対する核酸の結合が標的分子の活性の阻害を生ずる、請求項1又は2に記載のコンジュゲート。選択的作用剤がオリゴヌクレオチドの5’末端にコンジュゲーションしている、請求項1~3のいずれか1項に記載のコンジュゲート。選択的作用剤とオリゴヌクレオチドとが連結基により接続している、請求項1~4のいずれか1項に記載のコンジュゲート。第1のオリゴヌクレオチド配列に相補的な第2のオリゴヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項5に記載のコンジュゲート。干渉性RNAがsiRNAである、請求項8に記載のコンジュゲート。第2のオリゴヌクレオチドの5’末端に付いた保護基をさらに含んでなる、請求項7に記載のコンジュゲート。第2のオリゴヌクレオチドの5’末端に付いた保護基が、下記の構造物:式中、MがH又は脂質部分であり、A及びBは、単糖及びC2~C20アルキレングリコールからなる群から独立に選択されるモノマーユニットを表し;a及びbは0から50の範囲の整数であり;cは0から30の範囲の整数であり;L1、L2及びL3は、ホスホジエステル、ホスホロチオネート、カルバメート、メチルホスホネート、グアニジニウム、スルファメート、スルファミド、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、スルホン、アミド及びそれらの混合物からなる群から独立に選択される連結化合物であり;dは0又は1であるを有する、請求項8に記載のコンジュゲート。単糖が、フラノース、フルクトース、フラノース、グルコース、ガラクトース、マンノース、改変された単糖、シアル酸及びエリトロースからなる群から選択される、請求項9に記載のコンジュゲート。C2~C20アルキレングリコールがエチレングリコール、プロピレングリコール、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項9又は10に記載のコンジュゲート。MがHであり、Aがフラノースであり;BがC18エチレングリコールであり;a、b及びcが1であり、dが0であり、L2及びL3がホスホジエステル結合である、請求項11に記載のコンジュゲート。1種又は複数種の神経伝達物質輸送体に特異的に結合する選択的作用剤が、セロトニン再取り込み阻害剤SRI、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRI、ノルアドレナリン作動性で且つ特異的セロトニン作動性の抗鬱剤NASSA、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤NRI、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI、内在性カンナビノイド再取り込み阻害剤eCBRI、アデノシン再取り込み阻害剤AdoRI、興奮性アミノ酸再取り込み阻害剤EAARI、グルタメート再取り込み阻害剤GluRI、GABA再取り込み阻害剤GRI、グリシン再取り込み阻害剤GlyRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIからなる群から選択される、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。選択的作用剤が、セロトニン再取り込み阻害剤SRI、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRIからなる群から選択される、請求項13に記載のコンジュゲート。選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRIが、セルトラリン、セルトラリンの構造的アナログ、フルオキセチン、フルボキサミン、パロキセチン、インダプリン、ジメリジン、シタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム、及びそれらの混合物からなる群から選択され、且つオリゴヌクレオチドの配列がニューロンのアミノ酸輸送体と同じ細胞で発現している標的核酸に相補的である、請求項14に記載のコンジュゲート。I又はIIからなる群から選択される構造を有する請求項15に記載のコンジュゲート:式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbはC1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、ここでRc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;m、n及びpは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択され、ここでmnpの和は、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17及び18から選択される整数である。及び及びからなる群から選択される構造を有する、請求項16に記載のコンジュゲート。前記標的分子が、1A型セロトニン受容体5-HT1A、1A型セロトニン受容体5-HT1AをコードするmRNA、セロトニン輸送体タンパク質及びセロトニン輸送体をコードするmRNAからなる群から選択される、請求項14~17のいずれか1項に記載のコンジュゲート。核酸が、セロトニン受容体1A型5-HT1AをコードするmRNAに特異的に結合することができ、且つ配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3及び配列番号:4の群から選択される配列を含んでなる、請求項18に記載のコンジュゲート。選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤からなる群から選択され、且つ標的分子がα-シヌクレイン又はα-シヌクレインをコードするmRNAである、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。選択的作用剤がノルエピネフリン再取り込み阻害剤NRIであり、且つ標的分子がドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ又はドーパミン-β-ヒドロキシラーゼをコードするmRNAである、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤からなる群から選択され、且つ標的分子はBAX又はBAXをコードするmRNAである、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤からなる群から選択され、且つ標的分子はタウTau又はタウをコードするmRNAである、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤からなる群から選択され、且つ標的分子がハンチンチン又はハンチンチンをコードするmRNAである、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。構造:を有する、請求項20~24のいずれか1項に記載のコンジュゲート。構造:を有する、請求項25に記載のコンジュゲート。医薬に使用するための、請求項1~26のいずれか1項に記載のコンジュゲート。i選択的作用剤が、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRI及びセロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、セロトニン受容体1A型5-HT1AをコードするmRNA、セロトニン輸送体をコードするmRNA、セロトニン受容体1A型5-HT1A及びセロトニン輸送体の群から選択される標的分子に特異的に結合することができる、鬱病関連障害の治療又は予防に使用するための、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。鬱病関連障害が、大鬱病、強迫性障害OCD、広汎性発達障害PDD、心的外傷後ストレス障害PTSD、不安障害、双極性障害、摂食障害及び慢性疼痛からなる群から選択される、請求項28に記載のコンジュゲート。i選択的作用剤がドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドがα-シヌクレインをコードするmRNA又はα-シヌクレインポリペプチドである標的分子に特異的に結合することができる、レヴィー小体の堆積と関連する疾患の治療又は予防に使用するための、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。レヴィー小体の堆積と関連する疾患が、パーキンソン病、レヴィー小体型認知症及び多系統萎縮症の群から選択される、請求項30に記載のコンジュゲート。i選択的作用剤がノルエピネフリン再取り込み阻害剤NRIであり、及びii標的分子はドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ又はドーパミン-β-ヒドロキシラーゼをコードするmRNAである、ノルアドレナリン作動性突起中におけるドーパミン欠乏と関連する疾患の治療又は予防に使用するための、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。i選択的作用剤がノルエピネフリン再取り込み阻害剤NRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、ノルエピネフリン輸送体NETをコードするmRNA又はノルエピネフリン輸送体NETポリペプチドである標的分子に特異的に結合することができる、ノルアドレナリン作動性突起中におけるドーパミン欠乏と関連する疾患の治療又は予防に使用するための、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。ノルアドレナリン作動性突起中におけるドーパミン欠乏と関連する疾患が、認知症、鬱病及び神経変性性疾患と関連する記憶又は認識過程である、請求項33に記載のコンジュゲート。i選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤からなる群から選択され、及びii標的分子がBAX又はBAXをコードするmRNAである、ニューロンのアポトーシス及び細胞死と関連する疾患の治療に使用する、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。ニューロンのアポトーシス及び細胞死と関連する疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病及びハンチントン病、脳卒中/外傷、多発性及び筋萎縮性側索硬化症からなる群から選択される、請求項35に記載の使用のためのコンジュゲート。i選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤からなる群から選択され、及びii標的分子がタウ又はタウをコードするmRNAである、タウ関連疾患の治療又は予防に使用するための、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。タウ関連疾患が、タウにおける異常と関連する疾患及びタウ障害の群から選択される、請求項37に記載の使用のためのコンジュゲート。タウ関連疾患が、第17染色体遺伝子に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症FTDP-17を含む前頭側頭型認知症、進行性核上麻痺palsy、大脳皮質基底核変性症、ピック病、嗜銀性顆粒性疾患、並びにパーキンソン病、ダウン症候群、脳炎後パーキンソン症候群、筋緊張性ジストロフィー、ニーマンピックC病、ボクサー認知症、Blint疾患、プリオン疾患、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン症候群認知症複合、多発性硬化症、緑内障、糖尿病性網膜症、及び外傷性脳損傷;並びにハンチントン病、レヴィー小体型認知症、シャルコーマリートゥース病、遺伝性痙性対麻痺、及び多系統萎縮症からなる群から選択される、請求項38に記載のコンジュゲート。i選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤からなる群から選択され、及びii標的分子がハンチンチン又はハンチンチンをコードするmRNAである、ハンチントン疾患の治療に使用するための、請求項1~12のいずれか1項に記載のコンジュゲート。脳室内に又は鼻内に投与される、請求項40に記載の使用のためのコンジュゲート。i1種又は複数種の神経伝達物質輸送体に特異的に結合する少なくとも1種の選択的作用剤、及びii撮像剤を含んでなるコンジュゲート。撮像剤が磁気共鳴撮像造影剤である、請求項42に記載のコンジュゲート。磁気共鳴撮像造影剤がガドリニウム系化合物である、請求項42又は43に記載のコンジュゲート。選択的作用剤が、請求項13~26のいずれか1項に記載のものである、請求項42~44のいずれか1項に記載のコンジュゲート。神経伝達物質輸送体を発現している細胞を撮像する方法であって、前記細胞を請求項42~45のいずれか1項に記載のコンジュゲートと接触させることを含んでなり、コンジュゲートの一部を形成する選択的作用剤が前記細胞により発現される神経伝達物質輸送体に特異的に結合する、方法。診断剤として使用するための、請求項42~45のいずれか1項に記載のコンジュゲート。式IIの化合物:式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbはC1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;R6がカルボニル活性化基であり;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、ここでRc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;n及びpが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択されるを調製する方法であって、a式IIIの化合物:と式VIIのアシル化剤:式中、pは上で定義した通りであり、Zはハロゲン又はOHであり、及びPGはアミン保護基であるとを反応させて式IVの化合物:を得るステップと;b式IVの化合物中のアミノ保護基を脱保護して式Vの化合物:を得るステップと;c式Vの化合物と式VIII又はIXのアシル化剤とを反応させて式中、nは上で定義した通りであり、及びZはハロゲン又はOHである、式VIの化合物:を導くステップと;d式VIの化合物をカルボニル活性化基で処理するステップとを含んでなる、方法。式IIの化合物と式X:式中、R1~R5、X、Y、W、m、n及びpは請求項48で定義された通りであるのアミノ改変オリゴヌクレオチドとを反応させて、請求項25に記載の式Iのコンジュゲートを得ることをさらに含んでなる、請求項48に記載の方法。オリゴヌクレオチドが配列番号:5および12の群から選択される配列を含んでなる、請求項49に記載の方法。i式IIを有する化合物:式中、R1~R6、X、Y、W、n及びpは、請求項48で定義された通りである;ii式IVを有する化合物:式中、R1~R5、X、Y、W、p及びPGは請求項48で定義された通りである;iii式Vの化合物:式中、R1~R5、X、Y、W及びpは請求項48で定義された通りである;iv式VIの化合物:R1~R5、X、Y、W、p及びnは請求項48で定義された通りであるからなる群から選択される化合物。i構造:を有する化合物、ii構造:を有する化合物、iii構造:を有する化合物及びiv構造:を有する化合物の群から選択される、請求項51に記載の化合物。構造:式中、R1、R2、R3、R4及びR5が水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbは、C1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、ここでRc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは、水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;n及びpは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択されるを有するコンジュゲートの合成方法であって、a下式:の化合物と式Vのアシル化剤:式中、pは上で定義した通りであり、Zはハロゲン又はOHであり、及びPGはアミン保護基であるとを反応させて式VIの化合物:を得るステップと;b式VIの化合物中のアミノ保護基を脱保護して式VIIの化合物:を得るステップと;及びc式VIIの化合物と式XIVのカルボキシ改変オリゴヌクレオチド:とを反応させるステップとを含んでなる、方法。式XIVの化合物:式中、R1は、水素、低級アルキル基又はベンジル基であり;R2は、水素、メチル、塩素又はフッ素基であり;R2’は、水素、メチル、メトキシ、ヒドロキシル又はハロゲン原子であり;R3及びR4は、水素、低級アルキル基を表し;R5は、5-又は6-位における水素、塩素又はメトキシ基を表し;及びpは2~6であるを調製する方法であって、a式XVIの化合物:と式Vのアシル化剤:式中、R1、R2、R2’、R3、R4,R5及びpは上で定義した通りであり、Zはハロゲン又はOHであり、PGはアミン保護基であるとを反応させて、式XVIIの化合物:を得るステップと;b式XVIIの化合物中のアミノ保護基を脱保護して式XVIIIの化合物:を得るステップと;c上記の式XVIIIの化合物と式Xのアミノ改変オリゴヌクレオチド:とを反応させるステップとを含んでなる、方法。i式XVIIを有する化合物:及びii式XVIIIを有する化合物:からなる群から選択される化合物。i構造:を有する化合物及びii構造:を有する化合物の群から選択される、請求項55に記載の化合物。本発明者らは、予想外に、神経伝達物質輸送体を発現している関心のある細胞を特定して核酸の標的とすることが、前記神経伝達物質輸送体に、さらに特定すれば、前記輸送体の阻害剤に特異的に結合することができる分子に前記核酸を共有結合でカップリングすることにより、可能であることに気づいた。A.本発明のコンジュゲート第1の態様において、本発明は、i1種又は複数種の神経伝達物質輸送体に特異的に結合する少なくとも1種の選択的作用剤、ii神経伝達物質輸送体と同じ細胞中に発現している標的分子に特異的に結合することができる少なくとも1種のオリゴヌクレオチドを含むコンジュゲートに関する。本明細書中で使用するコンジュゲートという用語は、2種以上の個々の化合物の共有結合から生ずる任意の化合物を指す。本発明において、コンジュゲートは共有結合でカップリングした核酸と選択的作用剤とを含む分子を指し、前記カップリングは直接又は結合剤化合物を通して行われる。共有結合カップリング又は共有結合という用語は、核酸と選択的作用剤とが、直接共有結合で互いに連結するか、又はそうではなくて間接的に共有結合で、リンカー、又は架橋、又はスペーサーの部分単数又は複数などの介在する構造部分単数又は複数を通して互いに連結するかのいずれかであることを意味する。A.1.選択的作用剤本明細書中で使用する1種又は複数種の神経伝達物質輸送体に特異的に結合する選択的作用剤という表現は、神経伝達物質輸送体に結合する任意の物質を指す。この結合特異性は、前記選択的作用剤に結合した分子を前記神経伝達物質輸送体を含有する細胞、組織又は器官に送達することを可能にする。このようにして、前記選択的作用剤を担持するコンジュゲートは、動物に投与されたときに又はインビトロで異なったタイプの細胞の集団と接触したときに、前記細胞に特異的に向かうであろう。本明細書中で使用する、第1の分子の第2の分子への特異的結合は、第1の分子が前記第2の分子に非特異的相互作用とはっきり異なる方式で結合する能力を指す。本発明による選択的作用剤は、標的神経伝達物質輸送体に対して少なくとも約10-4M、あるいは少なくとも約10-5M、あるいは少なくとも約10-6M、あるいは少なくとも約10-7M、あるいは少なくとも約10-8M、あるいは少なくとも約10-9M、あるいは少なくとも約10-10M、あるいは少なくとも約10-11M、あるいは少なくとも約10-12M以上のKdを示すことができる。本明細書中で使用する用語神経伝達物質輸送体は、ニューロンの細胞膜の両側にまたがり、その主な機能はこれらの膜を越えて神経伝達物質を運び、それらの特定の細胞内の位置へのさらなる輸送を指示する膜輸送タンパク質のクラスに属するタンパク質を指す。本発明の選択的作用剤により標的とされ得る神経伝達物質輸送体として、ニューロンのプラズマ膜中に存在する取り込み担体及び神経伝達物質を細胞外空間から細胞中に送り込むグリア細胞が挙げられるが、これらに限定されない。この過程は、プラズマ膜を通してのNa勾配、特にNaの共輸送に依存する。タンパク質の2つのファミリーが同定されている。1つのファミリーは、GABA、ノルアドレナリン、ドーパミン、セロトニンなどのモノアミン、及びグリシン及びプロリンなどのアミノ酸のための輸送体を含む。共通の構造物成分としては、12個の推定されている膜貫通型α-ヘリカルドメイン、細胞質のN-及びC-末端、及び膜貫通ドメインを3と4に分離する大きいグリコシル化された細胞外ループが含まれる。相同性タンパク質のこのファミリーは、Na及びCl-イオンと神経伝達物質の細胞中への共輸送からそれらのエネルギーを引き出すNa/Cl-神経伝達物質輸送体。第2のファミリーとしては、グルタメートなどの興奮性アミノ酸のための輸送体が含まれる。共通構造成分としては、推定されている6~10個の膜貫通型ドメイン、細胞質のN-及びC-末端、及び細胞外ループ中のグリコシル化物が含まれる。興奮性アミノ酸輸送体は、Cl-に依存せず、及び且つ細胞内Kイオンを必要とし得るNa/K-神経伝達物質輸送体Liu,Y.etal.1999TrendsCellBiol.9:356-363。本発明の選択的作用剤の標的とされ得る神経伝達物質輸送体として、細胞内小胞膜中に存在する神経伝達物質輸送体、典型的には、主要な機能が、シナプス伝達中に小胞内容物のエキソサイトーシス前に神経伝達物質を細胞質から小胞中に濃縮することであるシナプス小胞も挙げられる。小胞の輸送には、H-ATPアーゼにより生ずる小胞の膜の両側間の電気化学的勾配が使用される。神経伝達物質の小胞への輸送にはタンパク質の2つのファミリーが関与する。1つのファミリーは、主としてプロトン交換を使用して分泌性小胞中への輸送を推進するもので、モノアミン及びアセチルコリンの輸送体が含まれる。例えば、モノアミン輸送体は細胞質伝達物質の各分子のために2つの管腔プロトンを交換する。第2のファミリーには、シナプス小胞内の正電荷に依存するGABA輸送体が含まれる。小胞の輸送体の2つのクラスは、互いに配列類似性を示さず、プラズマ膜担体の小胞とは異なった構造を有するSchloss,P.etal.1994Curr.Opin.CellBiol.6:595-599;Liu,Y.etal.1999TrendsCellBiol.9:356-363。本発明の選択的作用剤の標的にすることができる神経伝達物質輸送体の特定のタイプには、興奮性アミノ酸輸送体1EAAT1、興奮性アミノ酸輸送体2EAAT2、興奮性アミノ酸輸送体3EAAT3、興奮性アミノ酸輸送体4EAAT4、興奮性アミノ酸輸送体5EAAT5、小胞のグルタメート輸送体1VGLUT1、小胞のグルタメート輸送体2VGLUT2及び小胞のグルタメート輸送体3VGLUT3を含むグルタメート/アスパラテート輸送体;1型GABA輸送体GAT1、2型GABA輸送体GAT2、3型GABA輸送体GAT3、ベタイン輸送体BGT1及び小胞のGABA輸送体VGATを含むGABA輸送体;1型グリシン輸送体GlyT1、2型グリシン輸送体GlyT2を含むグリシン輸送体;ドーパミン輸送体DAT、ノルエピネフリン輸送体NET、セロトニン輸送体SERT、小胞のモノアミン輸送体1VMAT1、小胞のモノアミン輸送体2VMAT2を含むモノアミン輸送体;受動拡散型ヌクレオシド輸送体1ENT1、受動拡散型ヌクレオシド輸送体2ENT2、受動拡散型ヌクレオシド輸送体3ENT3及び受動拡散型ヌクレオシド輸送体4ENT4及び小胞のアセチルコリン輸送体VAChTを含むアデノシン輸送体が含まれる。好ましい実施形態において、選択的作用剤はペプチドではない。好ましい実施形態において、選択的作用剤は、セロトニン再取り込み阻害剤SRI、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRI、ノルアドレナリン作動性及び特異的セロトニン作動性の抗鬱剤NASSA、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤NRI、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI、内在性カンナビノイド再取り込み阻害剤eCBRI、アデノシン再取り込み阻害剤AdoRI、興奮性アミノ酸再取り込み阻害剤EAARI、グルタメート再取り込み阻害剤GluRI、GABA再取り込み阻害剤GRI、グリシン再取り込み阻害剤GlyRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択される。用語セロトニン再取り込み阻害剤又はSRIは、セロトニン取り込みを阻止することができて、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI他の神経伝達物質に実質的に影響せずに特異的にセロトニン取り込みを阻止するに加えて非選択的セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRI及びセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤SNDRIも含む分子を指す。用語セロトニン選択的再取り込み阻害剤又はSSRIは、他の神経伝達物質再取り込み又は輸送体系に実質的に影響しないセロトニン再取り込みの選択的阻害剤を指す。これらの化合物は、主としてシナプス前部のセロトニン作動性の細胞に作用して神経伝達物質セロトニンの細胞外レベルの上昇をもたらし、それによりシナプス後部の受容体に結合し得るセロトニンのレベルを上昇させて脳中のこのモノアミン作動性神経伝達物質系の活性の欠乏を回復させる。SSRIの例示となる例として、セルトラリンCAS79617-96-2、セルトラリンの構造的アナログ、フルオキセチンCAS54910-89-3、フルボキサミンCAS54739-18-3、パロキセチンCAS61869-08-7、インダプリンCAS63758-79-2、ジメルジンCAS56775-88-3、シタロプラムCAS59729-33-8及びエスシタロプラムCAS219861-08-2が挙げられるが、これらに限定されない。所与の化合物がSSRIとして作用しているかどうかを決定するためのアッセイは、例えば、体外でセロトニンの取り込みを減少させて、Koeetal.J.Pharmacol.Exp.Ther.,1983,226:686-700に本質的に記載されたように静脈内[3H]ノルエピネフリンのラット心臓取り込みに影響せずにセロトニンを消耗させるp-クロロアンフェタミンの作用に拮抗する能力である。好ましい実施形態において、SSRIはセルトラリン又は構造I式中、R1、R2、R3、R4、R5、及びR6は、独立に、水素又は場合により置換されているC1~C6アルキルであり;X及びYは水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、C1~C3アルコキシ、及びシアノからなる群から各々選択され;及びWは水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、トリフルオロメチル、ニトロ及びC1~C3アルコキシからなる群から選択されるを有するそれらの構造的アナログである。幾つかの実施形態において、セルトラリンアナログはシス異性体配置である。用語シス異性体のは、シクロヘキセン環上のNR1R2とフェニル部分との相対的配向を指す即ちそれらは両方とも環の同じに側にある。1-及び4-炭素は両方とも非対称的に置換されているので、各シス化合物は、1-炭素に関してシス1R及びシス1Sエナンチオマーと表示される2つの光学活性鏡像異性形を有する。ある有用なセルトラリンアナログは、1S-鏡像異性又は1S1Rラセミ体、及びそれらの薬学的に許容される塩のいずれかである以下の化合物である:cis-N-メチル-4-3,4-ジクロロフェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-lナフタレンアミン;cis-N-メチル-4-4-ブロモフェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-lナフタレンアミン;cis-N-メチル-4-4-クロロフェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-lナフタレンアミン;cis-N-メチル-4-3-トリフルオロメチル-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-l-ナフタレンアミン;cis-N-メチル-4-3-トリフルオロメチル-4-クロロフェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-1-ナフタレンアミン;cis-N,N-ジメチル-4-4-クロロフェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-l-ナフタレンアミン;cis-N,N-ジメチル-4-3-トリフルオロメチル-フェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-l-ナフタレンアミン及びcis-N-メチル-4-4-クロロフェニル-7-クロロ-l,2,3,4-テトラヒドロ-l-ナフタレンアミン。cis-N-メチル-4-3,4-ジクロロフェニル-1,2,3,4-テトラヒドロ-l-ナフタレンアミンの1R-エナンチオマーも興味がある。セルトラリンアナログは、米国特許第4,536,518号にも記載されている。他の関係ある化合物として、S,S-N-デスメチルセルトラリン、rac-cis-N-デスメチルセルトラリン、1S,4S-デスメチルセルトラリン、1-デスメチルアミン-1-オキソ-2-R,S-ヒドロキシセルトラリン、1R,4R-デスメチルセルトラリン、セルトラリン、スルホンアミド、セルトラリン反転メタンスルホンアミド、1R,4Rセルトラリン、エナンチオマー、N,N-ジメチルセルトラリン、ニトロセルトラリン、セルトラリンアニリン、セルトラリンヨウ化物、セルトラリンスルホンアミドNH2、セルトラリンスルホンアミドエタノール、セルトラリンニトリル、セルトラリン-CME、ジメチルセルトラリン反転スルホンアミド、セルトラリン反転スルホンアミドCH2リンカー、セルトラリンB-環オルトメトキシ、セルトラリンA-環メチルエステル、セルトラリンA-環エタノール、セルトラリンN,N-ジメチルスルホンアミド、セルトラリンA環カルボン酸、セルトラリンB-環パラフェノキシ、セルトラリンB-環パラ-トリフルオロメタン、N,N-ジメチルセルトラリンB-環及びパラ-トリフルオロメタン、及びUK-416244が含まれる。これらのアナログの構造を下に示す。用語セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤又はSNRIは、セロトニン輸送体を遮断することによりセロトニンの再取り込み、及びノルエピネフリン輸送体を遮断することによりノルエピネフリンの再取り込みを阻害することができる化合物のファミリーを指す。このファミリーには、ベンラファキシンCAS93413-69-5、デスベンラファキシンCAS93413-62-8、デュロキセチンCAS116539-59-4、ミルナシプランCAS92623-85-3、シブトラミン106650-56-0、トラマドールCAS27203-92-5及びビシファジンCAS71195-57-8などの化合物が含まれる。所与の化合物が、SNRIとして作用するかどうかを決定するためのアッセイは、例えば、Bolden-WatsonC,RichelsonE.LifeSci.1993;5212:1023-9に本質的に記載された脳シナプトソームによるセロトニン及びノルエピネフリンの取り込みを減少させる能力である。SNRIの特定のタイプは3環を含む一般的分子構造を有するSNRIである三環式抗鬱剤である。抗鬱剤の中でも突出しているのは、線状三環式、例えば、イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、ノルトリプチリン、プロトプチリン、ドキセピン、ケチプラミン、ミアンセリン、ドチエピン、アモキサピン、ジベンゼピン、メリトラセン、マプロチリン、フルペンチキソール、アザフェン、チアネピン及び同様な活性を示す関連化合物である。角形三環式には、インドリリン、クロダゾン、ノミフェンシン、及び関連化合物が含まれる。種々の他の構造的に多様な抗鬱剤、例えば、イプリンドール、ウェルバトリン、ニアラミド、ミルナシプラン、フェネルジン及びトラニルシプロミンが同様な活性を生ずることが示されている。それらは機能的に三環式抗鬱剤と同等であり、それ故本発明の範囲内に含まれる。したがって、三環式抗鬱剤という用語は、上記の広範なクラスの抗鬱剤を、アミトリプチリン、アミトリプチリンオキシド、カルバマゼピン、ブトリプチリン、クロミプラミン、デメキシプチリン、デシプラミン、ジベンゼピン、ジメタクリン、ドスレピン/ドチエピン、ドキセピン、イミプラミン、イミプラミンオキシド、イプリンドール、ロフェプラミン、メリトラセン、メタプラミン、ニトロキサゼピン、ノルトリプチリン、ノキシプチリン、プレガバリン、プロピゼピン、プロトリプチリン、キヌプラミン及びトリミプラミンなどの化合物を含むがこれらに限定されない全て抗鬱剤活性を有し共通の性質を有する関連化合物と一緒に包含することが本発明者により意図される。用語ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、NRI、NERI、アドレナリン作用性の再取り込み阻害剤又はARIは、ノルエピネフリン輸送体NETの作用を阻害することによりノルアドレナリン及びアドレナリンの再取り込みを阻止することができる化合物のファミリーを指す。このファミリーの化合物には、他のモノアミン輸送体に影響せずにもっぱらNETを遮断する選択的NRI並びにノルエピネフリン輸送体及びセロトニン輸送体上を参照されたいを遮断するSNRI、ノルエピネフリン及びドーパミン輸送体下を参照されたいを遮断するノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI、三環式抗鬱剤及び四環式抗鬱剤上を参照されたいなどの非選択的NRIが含まれる。本発明に適した選択的NRIとして、アトモキセチン/トモキセチンストラッテラ又はCAS83015-26-3、マジンドールマザノール、サノレックス又はCAS22232-71-9、レボキセチンエドロナックス、ベストラ又はCAS98819-76-2及びビロキサジンビバラン又はCAS46817-91-8が挙げられるが、これらに限定されない。用語ドーパミン再取り込み阻害剤又はDRIは、ドーパミン輸送体DATの作用を遮断することにより神経伝達物質ドーパミンの再取り込み阻害剤として作用する。これは、順送りで、ドーパミンの上昇した細胞外濃度を、それ故ドーパミン作動性神経伝達の増強をもたらす。適当なDRIには、アミネプチン、ベンザトロピン/ベンズトロピン、ブプロピオン、デクスメチルフェニデート、エスケタミン、エチベンザトロピン/エチベEthybe、ポナリド、フェンカムファミン、フェンカミン、ケタミン、レフェタミン、メジホキサミン、メソカルブ、メチルフェニデート、ネホパム、ノミフェンシン、ピプラドロール、プロリンタン、ピロバレロン、チレタミン及びトリペレンアミンなどの医薬;アルトロパン、アンホネリン酸、ベノシクリジン、ブラソフェンシン、ブロマンタン、DBL-583、ジクロロパン、ジクロフェンシン、ジエチシクリジン、ジフルオロピン、ガシクリジン、GBR-12,935、インダトラリン、イオフルパン、イオメトパン、マニファクシン、ラダファクシン、タメトラリン、テソフェンシン、トロパリル及びバノキセリンなどの研究用化学物質が含まれるが、これらに限定されない。適当なDRIは、KulaらLifeSciences34:2567-2575,1984により発表された方法を使用して記載されたように実施して、ラット死体の線条体から調製されたシナプトソーム製剤によるドーパミンの高親和性取り込みを阻害する、推定されているDRIの能力の定量などの当業者に知られたアッセイを使用して同定することができる。本明細書中で使用する用語内在性カンナビノイド再取り込み阻害剤又はeCBRIは、内在性カンナビノイド輸送体の作用を遮断することにより内在性カンナビノイドの再取り込み阻害剤として作用する任意の化合物を指す。この活性を有する化合物は、Beltramo,M.etal.Science,1997,277:1094-1097に記載された方法を使用して、ラットのニューロン及び星状細胞によるアナンダミドの取り込みを阻止する推定されている内在性カンナビノイド再取り込み阻害剤の能力に基づいて同定することができ、AM404、アルバニル及びオルバニルを含むが、これらに限定されない。用語アデノシン再取り込み阻害剤又はAdoRIは、1種又は複数種の受動拡散型ヌクレオシド輸送体ENTの作用を遮断することにより、プリンヌクレオシド及び神経伝達物質アデノシンの再取り込み阻害剤として作用する化合物を指す。これは、順送りで、アデノシンの増大した細胞外濃度、それ故アデノシン作動性神経伝達の増強をもたらす。AdoRI活性を有する化合物は、赤血球によるアデノシン取り込みの阻害における推定されているAdoRIの能力に基づくインビトロアッセイ並びにアデノシンの血管拡張剤効果を阻害する推定されているAdoRIの能力並びにアデノシンに媒介される側副血管の成長の促進を妨げる能力に基づくインビボアッセイを使用して同定することができ、それらの全ては米国特許第6984642号に本質的に記載されたようにして実施することができる。適当なAdoRIとして、アカデシン、アセテート、バルビツール酸、ベンゾジアゼピン、カルシウムチャンネル遮断剤、カルバマゼピン、カリソプロドール、シロスタゾール、シクロベンザプリン、ジラゼプ、ジピリダモル、エストラジオール、エタノールアルコール、フルマゼニル、ヘキソベンジン、ヒドロキシジン、インドメタシン、イノシン、KF24345、メプロバメート、ニトロベンジルチオグアノシン、ニトロベンジルチオイノシン、パパベリン、ペントキシフィリン、フェノチアジン、フェニトイン、プロゲステロン、プロペントフィリン、プロポフォール、ピューロマイシン、R75231、RE102BS、ソフルフラジン、トヨカマイシン、トラカゾレート、三環式抗鬱剤が挙げられるが、これらに限定されない。用語興奮性アミノ酸再取り込み阻害剤又はEAARIは、興奮性アミノ酸輸送体又はEEATを遮断することにより興奮性アミノ酸の再取り込みを阻害する化合物を指す。多くの化合物が、EAATに結合すること及び輸送体機能を阻害することが知られている。EAATの阻害剤は、それらの作用様式が異なる2つの主要なクラス:即ち非輸送性遮断剤及び競合性基質に入る。適当なEAARIとして、DL-トレオ-β-ベンジルオキシアスパラテート、カイナイト、ジヒドロカイネート、2S4R4MG、トレオ-β-ヒドロキシアスパラテート、L-トランス-ピロリジン-2,4-ジカルボン酸t-2,4-PDCが挙げられるがこれらに限定されない。適当なEEARIは、例えば、Shimamototetal.MolecularPharmacology,1998,53:195-201により記載されたアッセイを使用して、ヒト興奮性アミノ酸輸送体-1EAAT1又はヒト興奮性アミノ酸輸送体-2EEAT2が発現しているCos-1細胞による放射性標識グルタメートの取り込みを阻害する推定されているEEARIの能力に基づいて同定することができる。用語グルタメート再取り込み阻害剤又はGluRIは、1種又は複数種のグルタメート輸送体の作用を遮断することによりグルタメートの再取り込み阻害剤として作用する化合物を指す。グルタメート再取り込みの適当な阻害剤は、実例として、トレオ-3ヒドロキシ-DL-アスパラギン酸THA、2S-トランス-ピロリジン-2,4-ジカルボン酸PDC、アミノカプロン酸、及び2S,3S-3-{3-[4-トリフルオロメチルベンゾイルアミノ]ベンジルオキシ}アスパラテートを含む当技術分野において既知の阻害剤の任意のものを包含する。GluRI活性を有する化合物は、例えばShimamototetal.MolecularPharmacology,1998,53:195-201により記載されたアッセイを使用して、放射性標識グルタメートのヒト興奮性アミノ酸輸送体-1EAAT1又はヒト興奮性アミノ酸輸送体-2EEAT2を発現しているCos-1細胞中への取り込みを阻害する推定されているGluRIの能力に基づいて同定することができる。用語GABA再取り込み阻害剤又はGRIは、γ-アミノ酪酸輸送体GATの作用を遮断することにより神経伝達物質γ-アミノ酪酸GABAの再取り込み阻害剤として作用する化合物を指す。これは、順送りでGABAの上昇した細胞外濃度及びそれ故GABA作動性神経伝達の増強をもたらす。GABA再取り込みの適当な阻害剤として、アドハイパフォリンHypericumperforatumセイヨウオトギリソウに見出される、CI-966、デラムシクランEGIS-3886、GuvacineC10149、ハイパフォリンHypericumperforatumセイヨウオトギリソウに見出される、ニペコチン酸、NNC05-2090、NNC-711、SKF-89976A、SNAP-5114、スチリペントール及びBoRdenLAetal.EurJPharmacol.1994,269:219-224に記載されたチアガビンガビトリルが含まれるがこれらに限定されない。所与の化合物がGABA再取り込み阻害剤であるかどうかを検知する方法は、当技術分野において知られており、例えば、米国特許第6906177号;米国特許第6225115号;米国特許第4383999号及びAIi,F.E.,etal.J.Med.Chem.1985,28,653-660に記載されている。これらの方法は、通常細胞を放射性標識GABAと接触させること及び候補化合物の存在及び不在下においてGABAの取り込みを検出することを含む。用語グリシン再取り込み阻害剤又はGlyRIは、シナプス間隙からグリシンを除去することに関与するグリシン輸送体1型GlyT1並びにグリシンのシナプス小胞への再取り込み及び再装入に必要とされるGlyT2を遮断する化合物を含むグリシン輸送体GlyTの作用を遮断することにより、神経伝達物質グリシンの再取り込み阻害剤として作用する化合物を指すGomezaetal.,2003;CurrOpinDrugDiscovDevel65:675-82。本発明において使用する適当なグリシン再取り込み阻害剤として、N-メチル-N-[[1R,2S-1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-フェニル-2-ナフタレニル]メチルグリシンMTHMPNMグリシンの遊離塩基、国際公開第0007978号及び国際公開第0136423号に記載されている4-[3-フルオロ-4-プロポキシフェニル]-スピロ[2H-1-ベンゾピラン-2,4’-ピペリジン]-1’-酢酸FPPSBPAAの遊離塩基、ALX5407、ザルコシン、5,5-ジアリール-2-アミノ-4-ペンタノエート又は国際公開第0208216号に記載された化合物などのGlyT1特異的阻害剤並びにその内容をそれら全体で引用により組み込む国際公開第05044810号Aに記載されたものなどのGlyT2特異的阻害剤が含まれる。GlyT1特異的又はGlyT2特異的再取り込み阻害剤を検出する方法は当技術分野において知られており、例えば、関連のある受容体GlyT1又はGlyT2を発現している細胞と放射性標識グリシンとを再取り込み阻害活性を試験すべき化合物及び細胞内に見出されるグリシンの量の存在下に接触させ、所与の時間後に測定する、国際公開第05018676号A又は国際公開第05044810号に記載された方法が挙げられる。本明細書中で使用する用語ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤又はNDRIは、ノルエピネフリン輸送体NET及びドーパミン輸送体DATの作用を遮断することにより、それぞれ神経伝達物質ノルエピネフリン及びドーパミンの再取り込み阻害剤として作用する化合物を指す。これは順送りで、ノルエピネフリン及びドーパミン両方の増大した細胞外濃度及びそれ故アドレナリン作用性の及びドーパミン作動性神経伝達の増強をもたらす。本発明のコンジュゲートに使用するために適当なNDRIとして、アミネプチンサーベクター、マレオン、ジレクチン、ブプロピオンウェルブトリン、ザイバン、デクスメチルフェニデートフォカリン、フェンカムファミングルコエネルガン、レアクチバン、フェンカミンアルチミナ、シコクロール、レフェタミンサンテノール、メチルフェニデートリタリン、コンサータ、ノミフェンシンメリタール、ピプラドロールメレトラン、プロリンタンプロモチル、コトビット、ピロバレロンセントロトン、チメルギックス、ネホパムアキュパン、アドハイパフォリンHypericumperforatumセイヨウオトギリソウに見出される、ハイパフォリンHypericumperforatumセイヨウオトギリソウに見出される、コカイン、デソキシピプラドロール2-DPMP、ジフェニルプロリノールD2PM、メチレンジオキシピロベレロンMDPV、シロバミン、マニファクシンGW-320,659、ラダファクシンGW-353,162、タメトラリンCP-24,441が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートは、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRIである選択的作用剤を含有する。さらにより好ましい実施形態において、SSRIはセルトラリン又は上で定義したそれらの構造的アナログである。A.2.本発明のコンジュゲートの核酸本発明によるコンジュゲートの第2の成分は、神経伝達物質輸送体と同じ細胞で発現している標的分子に特異的に結合することができる核酸である。典型的には、本発明の核酸は、標的分子の機能を阻害することができる。したがって、標的分子がmRNAであれば、その場合該核酸典型的にはsiRNA、shRNA又はアンチセンス核酸はmRNAの翻訳を阻害することにより作用し、mRNAによりコードされたタンパク質のレベルの低下をもたらす。標的分子がタンパク質であれば、その場合核酸典型的にはアプタマーはタンパク質の活性を阻害することにより作用する。本明細書中で使用する用語核酸は、2つ以上デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド又はヌクレオチドアナログ分子並びに天然核酸と構造的に類似であるが、核酸骨格例えば、天然核酸中のリン酸エステル、核酸の糖例えば、天然DNAのデオキシリボース及び天然RNA中のリボース、及び核酸塩基例えば、天然核酸中のアデノシン、シトシン、グアニン又はチミジンの1箇所又は複数の箇所で天然核酸とは異なる分子例えば、化学的改変によりを有するポリマーを指す。オリゴヌクレオチドは、小さい干渉RNAsiRNA、小さいヘアピンRNAshRNA、マイクロRNAmiRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムを含む2本鎖又は一本鎖オリゴヌクレオチドであってよいが、これらに限定されない。2本鎖核酸が使用される場合、これらは標的核酸に対して相補的な第1のセンス鎖と該センス鎖に対して相補的な第2のアンチセンス鎖とを含み、それが第1鎖と第2鎖との間における塩基対形成による2本鎖DNAの形成を可能にする。用語アンチセンス鎖は、2本鎖核酸のうち標的配列に実質的に相補的な領域を含む鎖のことである。相補的な領域が標的配列に完全に相補的でない場合、ミスマッチはアンチセンス鎖の5’末端のヌクレオチド2~7の外側なら大抵許容される。本明細書中で使用する用語センス鎖は、dsRNAのうちアンチセンス鎖の領域に実質的に相補的な領域を含む鎖を指す。低分子干渉RNAsiRNAという用語は、RNA干渉経路を誘発する小さい阻害RNA二重鎖のことである。これらの分子は、長さが変化してもよく一般的に18~30塩基対、アンチセンス鎖中のそれらの標的mRNAに対する相補性の程度はさまざまである。全てではないが幾つかのsiRNAは、センス鎖及び/又はアンチセンス鎖の5’又は3’末端に不対の塩基が突出している。用語siRNAは、2本の別の鎖の二重鎖を含む。本明細書中で使用するsiRNA分子はRNA分子に限定されず、さらにモルホリノなど1つ又は複数の化学的に改変されたヌクレオチドを含む核酸を含む。本明細書中で使用する用語shRNA又はショートヘアピンRNAは、2つの鎖が一方の鎖の3’末端とそれぞれの他方の鎖の5’末端との連続したヌクレオチドの鎖により接続されて二重構造物を形成しているdsRNAのことである。用語マイクロRNA又はmiRNAは、典型的には、遺伝子発現を調節することができる長さ約21~23ヌクレオチドの短い一本鎖のRNA分子を指す。miRNAは合成即ち、組み替えでも天然でもよい。天然miRNAはDNAから転写された遺伝子によりコードされ、最初の転写物pri-miRNAから短い幹ループ構造物pre-miRNAに加工されて、最後に成熟miRNAになる。成熟miRNA分子は1つ又は複数のmRNA分子に部分的に相補的であり、RNA干渉と同様な過程により、又はmRNAの翻訳を阻害することにより遺伝子発現を下方制御する。本明細書中で使用するアンチセンス配列は、標的mRNAセンス又はDNAアンチセンスの配列に結合することができる一本鎖の核酸配列RNA又はDNAのいずれかを含むアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを含む。所与のタンパク質をコードするcDNA配列に基づいてアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを誘導できることが、例えば、SteinandCohen,CancerRes.48:2659,1988及びvanderKroletal.,BioTechniques6:958,1988に記載されている。本明細書中で使用する、用語リボザイム又はRNA酵素又は触媒的RNAは、化学的反応の触媒になるRNA分子を指す。多くの天然リボザイムは、それら自体のホスホジエステル結合の1つの加水分解、又は他のRNAの結合の加水分解のいずれかを触媒するが、それらは、リボソームのアミノトランスフェラーゼ活性、DNAリガーゼのリガーゼ活性、及び従来のタンパク質酵素により実施される多数の他の化学的反応を触媒することも見出されている。本明細書中で使用するアプタマーは、結合が相補的でなくて即ち、核酸リガンドと標的核酸配列との間の塩基対形成に基づかずに、標的分子の2つ以上の部位に結合する核酸リガンドを指す。ポリペプチドを含む任意の構想し得る標的に結合するアプタマーを設計することができる。アプタマーはそれらが一般的に使用される生体分子、抗体に匹敵する分子認識の性質を提供するので、バイオテクノロジー及び治療用途のための効用を提供する。それらの選択的認識に加えて、アプタマーは、それらは完全に試験管中で操作することができて、化学的合成により容易に製造され、望ましい貯蔵性を有し、治療に応用して免疫原性をほとんど又は全く誘発しないので、抗体に勝る利点を提供する。アプタマーはインビトロで分配、選択及び増幅の繰り返しという、SELEXSystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichmentShamahetal,Acc.Chem.Res.2008,41pp.130-8として当技術の段階で知られている方法により合成することができる。あるいは、それらは、例えば、逐次固相法により合成することができる。本発明の核酸は、核酸塩基、糖類及び/又はヌクレオチド間の連結中に1つ又は複数の改変を含むことができる。核酸の1つ又は複数の骨格残基に対する改変は、以下の1つ又は複数を含むことができる:2’-O-メチル2’-OMe、2’-O-メトキシエチル2’-MOE、2’-O-メトキシエトキシ、2’-フルオロ2’-F、2’-アリル、2’-O-[2-メチルアミノ-2-オキソエチル]、2’-O-N-メチルカルバメートなどの2’糖改変;4’-チオ、4’-CH2-O-2’-架橋、4-CH22-O-2’-架橋を含む4’糖改変;ロックド核酸LNA;ペプチド核酸PNA;インターカレーティング核酸INA;捻りインターカレーティング核酸TINA;ヘキシトール核酸HNA;アラビノ核酸ANA;シクロヘキサン核酸CNA;シクロヘキセニル核酸CeNA;トレオシル核酸TNA;モルホリノオリゴヌクレオチド;ギャップマー;ミックスマー;組み込みアルギニンリッチペプチド;合成RNAに5’-ホスフェートの付加;RNAアプタマーQue-GewirthNS,GeneTher.2007Feb;144:283-91.;特異的RNAアプタマーを対象に対する解毒剤で調節したRNAアプタマーOneyS,Oligonucleotides.2007Fall;173:265-74.を参照されたい又は任意のそれらの組合せである。核酸の1つ又は複数ヌクレオシド間連結に対する改変は、以下の1つ又は複数を含むことができる:ホスホロチオネート、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロジチオネート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオネート及びホスホロアニリデート、又は任意のそれらの組合せである。しばしば隔離RNAと称されるロックド核酸LNAは、改変されたRNAヌクレオチドである。LNAヌクレオチドのリボース部分は2’炭素と4’炭素とを接続するエキストラ架橋O2’,C4’-メチレン架橋で改変されている。架橋はDNA又はRNAでしばしば見出される3’エンド構造配座でリボースをロックする。LNAヌクレオチドは、望めばいつでも核酸中のDNA又はRNA塩基と混合することができる。そのようなオリゴマーは市販されている。ロックドリボースの配座は塩基のスタッキング及び骨格の前組織化を強化する。これは、LNA-改変核酸の熱的安定性溶融温度及びハイブリッド形成親和性だけでなく改善されたミスマッチ識別能力を大きく向上させる。これらの性質によりそれらはアンチセンスに基づく技法にとって非常に有用になる。さらに、LNA抗miRオリゴヌクレオチドは、霊長類で試験して有望な結果及び低毒性が得られている。ペプチド核酸PNAはDNA又はRNAと同様な人工的に合成されたポリマーであり、生物学の研究及び医学的治療において使用される。PNAが天然に生ずることは知られていない。DNA及びRNAはそれぞれデオキシリボース及びリボース糖骨格を有するのに対して、PNAの骨格はペプチド結合によって連結した反復するN-2-アミノエチル-グリシンユニットで構成されている。種々のプリン及びピリミジン塩基は、メチレンカルボニル結合により骨格に連結している。PNAは、N末端が第1の左位置にあり、C末端が右にあるペプチドのように描かれる。PNAの骨格は無荷電のホスフェート基を含有するので、PNA/DNA鎖間の結合は静電的反発の欠如によりDNA/DNA鎖より強い。混合塩基PNA分子は塩基対認識に関してDNA分子の真の模倣体である。PNA/PNA結合はPNA/DNA結合より強い。インターカレーティング核酸INAは、疎水性挿入部に共有結合で連結した正常デオキシリボヌクレオチドを含む改変された核酸類似体である。INAは、各改変について相補的DNAに対する11度まで安定化した高い親和性を有する。INAは、ミスマッチした標的を超えて完全に合致した標的に対して正常DNAより高い特異性を有する。INAがDNAに対して高い親和性を有することを利用してより短いプローブを使用することが可能となり、それによりさらになお特異性が増強される。さらに、INAはDNAとRNAとの間を識別する独特の能力を有するDNA選択的オリゴヌクレオチド類似体である。INAは相補的DNAに対して高い親和性を有するのに、相補的INAの相補的配列に対する親和性はより低い。捻りインターカレーティング核酸はTINAと表示される。ヘキシトール核酸HNAは、天然核酸塩基及びリン酸化された1,5-アンヒドロヘキシトール骨格から構築されたオリゴヌクレオチドである。HNAとRNAの間の分子の会合はHNAとDNAとの間及び天然核酸間dsDNA、dsRNA、DNA/RNAより安定である。他の合成的に改変されたオリゴヌクレオチドは、ANAアラビノ核酸、CNAシクロヘキサン核酸、CeNAシクロヘキセニル核酸及びTNAトレオシル核酸を含む。モルホリノは、天然核酸構造物の再設計の産物である合成分子である。構造的に、モルホリノとDNA又はRNAとの相違は、モルホリノは標準的核酸塩基を有するが、これらの塩基がデオキシリボース/リボース環ではなくて6員モルホリン環に結合しており且つ非イオン性ホスホロジアミデートのサブユニット間連結がアニオン性ホスホジエステル連結を置き換えていることである。モルホリノはPMOホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチドと称される場合もある。6員モルホリン環の化学式はO-CH2-CH22-NHである。ギャップマー又はギャップ付きオリゴマー化合物は、DNAの窓又はギャップがさもなければ正常な又はウィングWingとして知られる改変されたRNAオリゴヌクレオチド中に挿入されたRNA-DNA-RNAキメラオリゴヌクレオチドプローブである。この改変は、インビボにおけるオリゴヌクレオチド安定性及びプローブと標的との相互作用の結合力を向上させ、その結果、より短いプローブを効果的に使用することができる。好ましくは、ウィングは、ヌクレアーゼ分解から内部の単位を保護する、2’-O-メチルOMe又は2’-O-メトキシエチルMOEで改変されたリボヌクレオチドである。さらに、ギャップ又はウィングを形成するヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により又はホスホロチオネート結合により接続することができ、したがってRNアーゼ分解に抵抗性になる。それに加えて、ウィングを形成するヌクレオチドは3’メチルホスホネート連結により接続された塩基を組み込むことにより改変することもできる。本発明のコンジュゲートの核酸は、神経伝達物質輸送体と同じ細胞中で発現している標的分子に特異的に結合することができる。核酸の標的分子への結合は、標的分子が核酸の配列に相補的である配列を含有する核酸である場合に、ワトソン-クリック相互作用により起こり得る。あるいは、標的分子がポリペプチドである場合に、本発明のコンジュゲートの核酸は、前記分子と相互作用することもでき、その場合核酸はアプタマーとして作用する。本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸が、標的mRNAの核酸配列に相補的である場合、最も適切な核酸を選択するために異なった基準が当業者に利用可能である。例として、コンジュゲートの一部を形成する核酸がsiRNAである場合、これは、AAジヌクレオチドに対する標的のmRNA配列を走査して、AAの直ぐ下流の19個のヌクレオチドを記録することにより選択することができる。他の方法も核酸標的を選択するために使用することができる。1例において、siRNA標的配列の選択は、標的配列がGGで開始して、BLASTサーチにより解析された他の遺伝子と有意の配列相同性を共有しない限り、純粋に経験的に決定される例えば、SuiGetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA99:5515-202002を参照されたい。他の例において、より精巧な方法がsiRNA標的配列を選択するために使用される。この手順は、内在mRNA中の接近可能な任意の部位が合成オリゴデオキシリボヌクレオチド/RNアーゼH法により分解するために標的となり得る例えば、LeeNSetal.,NatureBiotechnol.20:500-052002を参照されたいという観察を活用する。あるいは、ヘアピンsiRNA発現カセットは、標的のセンス鎖に続いて短いスペーサー、標的のアンチセンス鎖、及び転写ターミネーターとして5~6個のTを含むように構築される。siRNA発現構築物中におけるセンス鎖及びアンチセンス鎖の順は、ヘアピンsiRNAの遺伝子サイレンシング活性に悪影響を及ぼさずに変更することができる。ある場合には、順序の逆転は遺伝子サイレンシング活性の部分的低下の原因となり得る。siRNA発現カセットの幹として使用されるヌクレオチド配列の長さは、例えば、19から29の範囲にすることができる。ループサイズは3から23ヌクレオチドの範囲にすることができる。他の長さ及び/又はループサイズも使用することができる。さらに他の実施形態において、ヘアピンsiRNAが遺伝子サイレンシングにおいて機能する限り、ヘアピンsiRNA構築物中の5’突出を使用することができる。特定の1例において、5’突出は約6ヌクレオチド残基を含む。さらなる他の実施形態において、RNAiに対する標的配列は21塩基長の配列フラグメントである。標的配列の5’末端はジヌクレオチドNAを有し、Nは任意の塩基であってよくAはアデニンを表す。残余の19塩基長の配列は35と55の間のGC含有率を有する。それに加えて、残余の19塩基長配列には、いかなる4つ連続したA又はT即ち、AAAA又はTTTTも、3つ連続したG又はC即ち、GGG又はCCCも、又は連続して7つのGCもない。追加の基準もRNAiの標的配列を選択するために使用することができる。例えば、残余の19塩基長配列のGC含有率は45と55の間に制限することができる。さらに、3つ連続した同一の塩基即ち、GGG、CCC、TTT、又はAAA又は5個以上の塩基の回文配列を有するいかなる19塩基長配列も排除される。さらに、残余の19塩基長配列は、他の遺伝子に対する相同性の低い配列でも選択することができる。1つの特定の例において、可能性がある標的配列をNCBIのヒトUniGenecluster配列データベースに対するBLASTNにより検索することができる。ヒトUniGeneデータベースには遺伝子指向の集団の余剰のないセットが含まれる。各UniGeneclusterには一意的な遺伝子を表す配列が含まれる。BLASTN検索で他のヒト遺伝子にヒットしない19塩基長配列を選択することができる。検索中に、e-値を厳密な値1などに設定することができる。siRNA配列、並びに本発明にしたがって誘導された任意の他のRNAi配列の、標的遺伝子のサイレンシング発現における有効性は、当技術分野において知られている種々の方法を使用して評価することができる。用語サイレンス及びの発現を阻害するの発現の下方制御の発現を抑制する等は、それらが標的遺伝子を指す限りにおいて、本明細書においては、標的遺伝子が転写されて標的遺伝子の発現が阻害されるように処理された第1の細胞又は細胞群から単離することができる標的mRNAの量が、第1の細胞又は細胞群と実質的に同一であるがそのように処理されていない第2の細胞又は細胞群対照細胞と比較して減少することにより証明されるような、標的遺伝子の発現の少なくとも部分的抑制を指す。阻害の程度は通常以下のことに関して表す:対照細胞中のmRNA-処理された細胞中のmRNA100パーセント対照細胞中のmRNAあるいは、阻害の程度は、標的遺伝子発現に機能的に関連するパラメーター、例えば、標的遺伝子によりコードされるタンパク質の量又はある表現型を示す細胞の数の減少によって示すこともできる。原則として、標的ゲノムサイレンシングは、標的を発現する任意の細胞において、構成要素により又はゲノムの操作により、及び任意の適当なアッセイによりのいずれかで測定することができる。しかしながら、所与の核酸がある程度標的遺伝子の発現を阻害するか、それ故本発明に含まれるかを決定するために参照が必要な場合に、下の例で提供するアッセイ及び当技術分野において知られているアッセイがそのような参照として役立つであろう。例えば、ある例では、二重螺旋オリゴヌクレオチドの投与により、標的遺伝子の発現は、少なくとも約5パーセント、10パーセント、15パーセント、20パーセント、25パーセント、30パーセント、35パーセント、40パーセント、45パーセント、又は50パーセント抑制される。幾つかの実施形態において、二重鎖オリゴヌクレオチドの投与により、標的遺伝子は、少なくとも約60パーセント、70パーセント、又は80パーセント抑制される。幾つかの実施形態において、二重螺旋オリゴヌクレオチドの投与により、標的遺伝子は、少なくとも約85パーセント、90パーセント、又は95パーセント抑制される。例えば、本発明による核酸配列は、標的遺伝子を発現している細胞中に導入することができる。細胞中における標的遺伝子のmRNAレベルは、RT-PCR、ノーザンブロット又は任意の他の標準的方法を使用することにより検出することができる。あるいは、標的mRNAによりコードされたポリペプチドのレベルを、ウェスタンブロット、ELISA又は任意の他の免疫学的又は非免疫学的方法を使用して測定することができる。siRNA配列の導入後の、遺伝子によりコードされたmRNA又は標的タンパク質の発現レベルにおける実質的変化は、標的遺伝子の発現の抑制におけるsiRNA配列の有効性を示す。1つの特定の例においては、他の遺伝子の発現レベルもsiRNA配列導入の前及び後にモニターする。標的遺伝子発現の対する阻害効果を有するが他の遺伝子の発現には有意に影響しないsiRNA配列を選択することができる。他の特異的例において、複数のsiRNA又は他のRNAi配列を同じ標的細胞中に導入することができる。これらのsiRNA又はRNAi配列は、標的遺伝子発現を特異的に阻害するが、他の遺伝子の発現は阻害しない。さらに他の特定の例においては、標的遺伝子及び他の遺伝子単数又は複数の発現を阻害することができるsiRNA又は他のRNAi配列を使用することができる。当業者は、本発明のコンジュゲート中に組み込まれる核酸分子の特異的選択がコンジュゲートに存在する選択的作用剤のタイプに依存するであろうということを理解するであろう。したがって、核酸は、選択的作用剤が特異的に結合する神経伝達物質輸送体を発現する細胞中で発現している標的分子に対して特異的であろう。好ましい実施形態において、核酸は、セロトニン受容体1A型5-HT1Aに対して特異的である。核酸がアンチセンス、siRNA、shRNA又はリボザイムである場合で、標的分子がセロトニン受容体1A型5-HT1AをコードするmRNAである場合には、核酸は標的分子と塩基対を形成することにより作用する。核酸がアプタマーであれば、標的分子はセロトニン受容体1A型5-HT1Aポリペプチドである。本明細書中で使用する用語1A型セロトニン受容体又は5-HT1ARは、セロトニン作動性のニューロンのシナプス前部で主に見出されるセロトニン受容体のタイプを指す。これらの受容体は、細胞外セロトニンにより活性化して細胞発火活性を減少させ、順送りで、主要な前脳領域におけるセロトニン放出を減少させる。この負のフィードバックによって、抗鬱剤により急性の誘発を起こすことができるシナプスセロトニンの増加は制限される。時が経つにつれて、細胞体樹状突起の自己受容体は感度が下がり、SSRIの最大限の効果が前脳部で発揮されることが可能になる。この期間が抗鬱活性の発症までの潜伏期に相当することが見出されている[Perez,V.,etal.,TheLancet,1997,349:1594-1597]。したがって、セロトニン1A型受容体が不活性化された細胞においては、セロトニン輸送体における遮断の結果として細胞外セロトニンの増加は細胞発火活性の減少に結びつかず、したがって、セロトニン再取り込みの阻害剤による処理と関連する負のフィードバックを防止する。本発明のコンジュゲートの核酸により標的とされ得る1A型セロトニン受容体は、配列がSwissProtデータベースにおいて受入番号P08908を与えられているヒト5-HT1AR、配列がSwissProtデータベースにおいて受入番号Q64264を与えられているマウス5-HT1AR、配列がSwissProtデータベースにおいて受入番号P19327を与えられているラット5-HT1AR、配列がSwissProtデータベースにおいて受入番号Q6XXX9を与えられているイヌ5-HT1ARを含むが、これらに限定されない任意の1A型セロトニン受容体であってよい。当業者は、5-HT1ARをコードするmRNAに対して特異的な本発明の核酸は、上記の方法のいずれかを使用して選択することができ、且つ対応するmRNAのレベルの実質的低下を誘発する能力を試験することができることを理解するであろう。本発明者らは、本発明の核酸により優先的に標的とされ得る5-HT1ARmRNAの配列内の領域を同定した。これらの領域は、コード領域内の翻訳コンプレックスとの可能な干渉を避けるための、異なった種の間で高度に保存されている領域又は最初の転写物の非コード領域に対応する領域に相当する。したがって、好ましい実施形態において、核酸配列は、マウス5-HT1ARmRNANCBIデータベースにおける受入番号NM_008308の配列内のヌクレオチドの621から1640に又はヌクレオチドの1880から2400に又は他の種の5-HT1ARのcDNAにおける対応する領域に対応する領域に相補的である。前記の対応する領域は、前記cDNAのマウス5-HT1ARのcDNAとの対における配列比較により又は異なった5-HT1ARのcDNAの複数の配列比較及びマウス5-HT1ARのcDNA中の選択された領域と重なる前記の他のcDNA中の領域の同定により決定することができる。2つの所与の核酸配列を対で配列比較する方法は、当業者に広く知られており、BLASTNタイプの標準的アルゴリズム[BLASTManual,Altschul,S.,etal.,NCBINLMNIHBethesda,Md.20894,Altschul,S.,etal.,J.Mol.Biol.215:403-4101990]により初期パラメーターを使用して実施することができる。複数の核酸配列を配列比較する方法は、CLUSTALWタイプの標準的アルゴリズムThompsonJDetal,NucleicAcidsRes,1994,22:4673-4680を使用し、初期パラメーターを使用して実施することができる。異なった種における5-HT1ARのcDNAの領域が同定されたら、本発明のコンジュゲートコンジュゲートの核酸中に組み込むことができる適当な核酸配列を同定することが可能である。好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートは、5-HT1ARmRNA中の配列番号:1マウス5-HT1ARmRNAのヌクレオチド1841から1910、配列番号:2マウス5-HT1ARmRNAのヌクレオチド591から700、配列番号:3マウス5-HT1ARmRNAのヌクレオチド831から940及び配列番号:4マウス5-HT1ARmRNAのヌクレオチド2120から4441の群から選択された領域を標的とする配列を含む核酸配列を含む。さらにより好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートの核酸は、配列番号5、配列番号7、配列番号:9、及び配列番号:11表2参照の群から選択される配列を含む。核酸が二重螺旋核酸として例えばsiRNAとして提供される場合には、オリゴヌクレオチドを、配列番号6、配列番号8、配列番号:10、及び配列番号:12表2参照で提供される対応するアンチセンス鎖と一致させる。他の実施形態において、本発明の核酸は、セロトニン輸送体をコードするmRNAこの場合、核酸は標的と塩基対形成により作用するを、又はセロトニン輸送体自体この場合、直接結合してポリペプチド活性を阻害することによりアプタマーとして作用するを指向する。本明細書中で使用する用語セロトニン輸送体又はSERTは、神経伝達物質セロトニンをシナプス空間からシナプス前部のニューロン中に輸送する内在性膜タンパク質であるポリペプチドを指す。ヒト、ラット、マウス及びウシの配列SERTは、SwissProtデータベースにおいてそれぞれ受入番号P31645、P31652、Q60857及びQ9XT49で提供される。5-HT1ARのcDNAを標的とする核酸によるのと同様に、SERTのcDNA中の任意の領域は、それが対応するmRNA又は前記mRNAによりコードされるタンパク質のレベルで実質的阻害を生ずる限り、標的とすることができる。したがって、適当なSERT特異的核酸は、上記のように試験すべき核酸と接触した後SERTを発現している細胞中のSERTmRNA又はSERTタンパク質のレベルを測定することにより同定することができる。例として、Mol.Psychiatry.2005Aug;108:782-9,714及びJ.Recept.SignalTransduct.Res.2006;26:527-47に記載されたSERT特異的siRNAを使用することができる。さらにより好ましい実施形態において、SERT特異的siRNAは、配列を含有する。さらに他の実施形態において、SERT特異的siRNAは、表X中に記載した配列を含む。シナプス前部の5-HT1Aの他に、TREK-1又はGIRKなど5-HT1A作用の下流の幾つかのイオンチャンネルを調節することにより、5-HT1A作用を調節することも可能である。これらのチャンネルはカリウムの大きい内向き流速を生じさせることによって膜を過分極させることによりニューロン活性を調節する。膜電位におけるこの変化は、ニューロン発火を阻害する。TREK-1又はGIRKの受容体活性化作用はニューロン活性を増強することが提案されている。これは末端において高レベルのセロトニンの存在でシナプス前部の5-HT1A阻害効果を乱すであろう。他の実施形態において、本発明の核酸は、5-HT1A作用の下流で作用するイオンチャンネルをコードするmRNAこの場合核酸は標的と塩基対を形成することにより作用する又は5-HT1A自体の下流で作用するイオンチャンネルこの場合核酸は、直接結合してポリペプチドの活性を阻害することによりアプタマーとして作用するを指向する。これらのチャンネルは、カリウムの大きい内向き流速を生じさせることによって膜を過分極させることによりニューロン活性を調節する。膜電位における変化はニューロン発火を阻害する。これは末端において高レベルのセロトニンの存在でシナプス前部の5-HT1Aの阻害効果を乱すであろう。好ましい実施形態において、5-HT1Aの下流で作用するイオンチャンネルはTREK-1又はGIRKである。本明細書中で使用する用語TREK-1は、KCNK2、TREK、TPKC1、K2p2.1、TREK1、hTREK-1c、hTREK-1e、MGC126742、MGC126744及びKCNK2としても知られるポリペプチドを指し、2孔ドメインであるKCNK2は、細胞からカリウムを漏らして静止膜電位を制御するチャンネルを創り出す2つのホモダイマーにより形成されるカリウムチャンネルの背景となる。しかしながら該チャンネルは、ある種の麻酔剤、膜の伸張、細胞内アシドーシス、及び熱により開くことができる。ヒトにおいては、TREK遺伝子の代替的スプライシングから生ずるもので、NCBIデータベースにおいて受入番号NP_001017424.1、NP_001017425.2及びNP_055032.1で提供される3種のイソ型がある。TREK-1のイヌCanisfamiliaris、チンパンジーPantroglodytes、ウシBostaurus、ラットRattusnorvegicus及びマウスMusmusculusオルソログが、NCBIタンパク質データベースにおいて、それぞれ受入番号XP_849278、XP_001171677、NP_777111、NP_742038及びNP_034737で提供される。5-HT1ARのcDNAを標的とする核酸についてと同様に、TREK-1のcDNA中の任意の領域は、対応するmRNA又は前記mRNAによりコードされるタンパク質のレベルにおいて実質的阻害を生ずる限り、標的とすることができる。したがって、適当なTREK-1特異的核酸は、上記のように前記細胞を試験すべき核酸と接触させた後にTREK-1を発現している細胞中のTREK-1mRNA又はTREK-1タンパク質のレベルを測定することにより同定することができる。本発明のコンジュゲートにおいて使用することができるTREK-1特異的siRNAとして、SantaCruzBiotechnologyにより提供されるsc-37180siRNA、及び米国特許出願第2009317811号に記載されたアンチセンス分子が含まれるが、これらに限定されない。本明細書中で使用するGタンパク質のカップリングした内向き整流カリウムチャンネル、GIRK又はKir3.xという用語は、リガンドで刺激されたGタンパク質結合受容体GPCRで開始するシグナル伝達カスケードにより活性化される開口する内向き整流カリウムイオンチャンネルのファミリーの任意のメンバーを指す。GPCRは、順送りで不活性なヘテロトリマーのGタンパク質コンプレックスGαβγから活性化したG-タンパク質βγサブユニットGβγを放出する。最後にGβγダイマーのタンパク質はGIRKチャンネルと相互作用してそれらを開口させ、その結果それらはカリウムイオンに透過性となり、細胞の過分極を生ずる。Gタンパク質のサブユニットによりGIRKチャンネルがこのように直接活性化されるので、Gタンパク質がカップリングした内向き整流カリウムチャンネルは、1種のGタンパク質ゲート制御イオンチャンネルである。適当なGIRKとして、例えば、NCBI遺伝子データベースにおいて受入番号U39196で同定されている核酸に対応するヒトGIRK1又はGIRKdとして知られるそれらの脳変種などのメンバー3GIRK1又はKir3.1としても知られる、例えば、NCBI遺伝子データベースにおいて受入番号U24660で同定されている核酸に対応するヒトGIRK2などのメンバー6GIRK2又はKir3.2としても知られる、例えば、NCBI遺伝子データベースにおいて受入番号U52152で同定される核酸に対応するヒトGIRK3などのメンバー9GIRK3又はKir3.3としても知られる、例えばNCBI遺伝子データベースにおいて受入番号U39195で同定される核酸に対応するヒトGIRK4などのメンバー5GIRK4又はKir3.4としても知られる、例えばNCBI遺伝子データベースにおいて受入番号U24055で同定される核酸に対応するヒトIRK1などのメンバー2IRK1又はKir2.1としても知られる及び例えばNCBI遺伝子データベースにおいて受入番号U07364で同定される核酸に対応するヒトIRK3などのメンバー4IRK3又はKir2.3としても知られるを含むJサブファミリーの全てのメンバーが挙げられるが、これらに限定されない。GIRKを標的とすることができる適当な核酸として、例えば、国際公開第2005054848号に記載されたリボザイム、アンチセンス分子が挙げられる。5-HT1ARmRNA若しくは5-HT1ARタンパク質、SERTmRNA若しくはタンパク質、TREK-1mRNA若しくはタンパク質又はGIRKmRNA若しくはタンパク質を標的とするこれらの核酸は、5-HT1AR、SERT、TREK-1又はGIRKが発現している細胞、即ち、ドーパミン作動性ニューロン中に存在する神経伝達物質輸送体と結合することができる選択的作用剤とカップリングすることが好ましい。したがって、本発明のコンジュゲートとして、非選択的セロトニン輸送体SRI又はSNRIなど又は、より好ましくは選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRIであってよいセロトニン輸送体と結合することができる選択的作用剤とカップリングした5-HT1AR特異的核酸、SERT特異的核酸、TREK-1特異的核酸又はGIRK特異的核酸が挙げられる。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸はシヌクレインを指向する。本明細書中で使用する用語シヌクレインは、ある種の神経疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病及びレヴィー小体病などで現れるレヴィー小体として知られる細胞内凝集物を形成し得る交換可能なアポリポタンパク質のクラスA2脂質に結合したドメインと類似性のある高度に保存されたα-ヘリカル脂質結合モチーフを含むシヌクレインメンバーファミリーのポリペプチドを指す。用語シヌクレインは、α-シヌクレイン、β-シヌクレイン又はγ-シヌクレインを指す。好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸はα-シヌクレインに特異的である。ヒト、ラット、マウス及びウシのα-シヌクレインの配列は、SwissProtデータベースにおいてそれぞれ受入番号P37840、P37377、O55042及びQ3T0G8で提供される。5-HT1ARのcDNAを標的とする核酸でと同様に、α-シヌクレイン特異的核酸は、上記の任意の方法を使用して、同定し又は選択することができ、対応するmRNA又は前記mRNAによりコードされるタンパク質のレベルで実質的阻害を誘発するそれらの能力について試験することができる。したがって、適当なα-シヌクレイン特異的核酸は、上記のように、前記細胞を試験すべき核酸と接触させた後でα-シヌクレインを発現している細胞中のα-シヌクレインmRNA又はα-シヌクレインタンパク質のレベルを測定することにより同定することができる。好ましい実施形態において、α-シヌクレイン特異的核酸はヒトα-シヌクレインのcDNAの領域に対して指向する。他の実施形態において、本発明の核酸は、5-HT1A作用の下流で作用するイオンチャンネルをコードするmRNAを指向するかこの場合核酸は標的と塩基対形成することにより作用する又は5-HT1A自体の下流で作用するイオンチャンネルを指向するこの場合、核酸は、直接結合してポリペプチドの活性を阻害することによりアプタマーとして作用する。これらのチャンネルは、カリウムの大きい内向き流速を生ずることにより膜を過分極することによってニューロン活性を調節する。膜電位におけるこの変化はニューロン発火を阻害する。これは、高レベルのセロトニンの存在において末端でシナプス前部の5-HT1A阻害効果を乱すであろう。好ましい実施形態において、5-HT1Aの下流で作用するイオンチャンネルはTREK-1である。α-シヌクレインmRNA内の適当な標的領域として、国際公開第07135426号に記載されたもの例えば核酸、及び特に、国際公開第2006039253号に記載されたsiRNAの群から選択された配列、例えば、などを含むsiRNA又は配列番号:21及び22にそれぞれ対応する配列を有するヘアピンオリゴヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されない。他のシヌクレイン特異的siRNA配列は、米国特許出願第2008139799号に記載されたもの内容を引用により本明細書に組み込む実施例XVIIに描かれた配列及び国際公開第2009079399号に記載され、表中はホスホロチオエート連結基を示し、下線を引いたヌクレオチドは2’-O-Me改変を示すの群から選択されたsiRNA配列である。これらは、シヌクレインが発現している細胞中に存在する神経伝達物質輸送体に結合する選択的作用剤とカップリングしていることが好ましい。したがって、本発明のコンジュゲートは、モノアミン作動性ニューロン中への内部移行を媒介することができる選択的作用剤とカップリングしているシヌクレイン特異的核酸を含む。したがって、シヌクレインmRNA又はタンパク質を標的とする核酸は、前記核酸のセロトニン作動性でノルアドレナリン作動性で且つ/又はドーパミン作動性のニューロン中への内部移行を促進することができる作用剤とカップリングされる。したがって、好ましい実施形態において、シヌクレイン特異的核酸は、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI、ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRISNDRI又はトリプルブロッカーの群から選択される、セロトニン作動性でノルアドレナリン作動性で且つドーパミン作動性のニューロンに対する選択的作用剤とカップリングされる。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸は一酸化窒素合成酵素NOSを指向する。本明細書中で使用する一酸化窒素合成酵素又はNOSは、インビボで一酸化窒素の合成を触媒する天然に生ずる酵素を意味する。一酸化窒素NOは、一酸化窒素合成酵素NOSと称する酵素のファミリーによりL-アルギニンのグアニジノ基から合成される。該用語は生体系に見出される一酸化窒素合成酵素NOSの全てのイソ型に適用され、NOSの常在型、内皮の一酸化窒素合成酵素eNOS、ニューロンの一酸化窒素合成酵素nNOS、及び誘導性一酸化窒素合成酵素iNOSを含むが、これらに限定されない。ヒト、ラット、マウス、イヌ及びウシのiNOSの配列は、SwissProtデータベースにおいてそれぞれ受入番号P35228、Q06518、P29477、O62699及びQ27995で提供される。ヒト、ラット、マウス及びウシのeNOSの配列は、SwissProtデータベースにおいてそれぞれ受入番号P29474、Q62600、P70313及びP29473で提供される。ヒト、ラット、マウス及びウシのnNOSの配列は、SwissProtデータベースにおいてそれぞれ受入番号P29475、P29476、Q9Z0J4及びP29473で提供される。NOSのcDNA中の任意の領域は、それが対応するmRNA又は前記mRNAによりコードされるタンパク質のレベルで実質的阻害を生ずる限り標的とすることができる。したがって、適当なNOS特異的核酸は、上記のように、NOSを発現している細胞中のNOSmRNA又はタンパク質のレベルを、前記細胞を試験すべき核酸と接触させた後で測定することにより、又は処理された細胞中のNOSの活性を定量することにより同定することができる。NOS活性は、場合によっては、iNOS、eNOS及びnNOS活性を定量するために当技術分野において知られた任意の方法により測定することができる。例えば、NOS活性は、[3H]-アルギニンの[3H]L-シトルリンへの変換を放射測定法により又はGriessアッセイを使用して一酸化窒素の形成で測定することにより定量することができる。適当なNOS特異的サイレンシング作用剤として、国際公開第08100591号に記載され、以下のポリヌクレオチド対により得られるnNOS特異的siRNAが挙げられるが、これらに限定されない:の配列を有するiNOS特異的siRNA;オリゴ同定番号HSS107326、HSS107327及びHSS107328を有するInvitrogenCarlsbad、CAから入手可能なeNOS特異的siRNA;Fangetal.RNA、2010、16:1429-1435の表2に記載されたiNOS特異的siRNA;の配列を有するiNOS特異的siRNA。本発明における使用に適した実例になるNOS特異的アンチセンスとして:Grassoetal.Exp.Biol.Med.,2003,228:491-8に記載されたの配列を有するiNOS特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド。HemmRichetal.Am.J.Physiol.CellPhysiol.,2003,285:C489-C498により記載されたの配列を有するiNOS特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド。国際公開第0152902号中の表1及び2に記載されたiNOS特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド。Fangetal.RNA,2010,16:1429-1435の表1中に記載されたiNOS特異的アンチセンス分子が挙げられるが、これらに限定されない。NOS特異的サイレンシング作用剤は、NOSが発現している細胞中に存在する神経伝達物質輸送体と結合することができる選択的作用剤とカップリングしていることが好ましい。したがって、本発明のコンジュゲートは、モノアミン作動性ニューロン中への内部移行を媒介することができる選択的作用剤とカップリングしているNOS特異的核酸を含む。したがって、シヌクレインmRNA又はタンパク質を標的とする核酸は、セロトニン作動性でノルアドレナリン作動性及び/又はドーパミン作動性のニューロン中への前記核酸の内部移行を促進することができる作用剤とカップリングされる。したがって、好ましい実施形態において、シヌクレイン特異的核酸は、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI、ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRISNDRI又はトリプルブロッカーの群から選択されるセロトニン作動性でノルアドレナリン作動性で且つドーパミン作動性のニューロンに対する選択的作用剤とカップリングされる。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸はノルアドレナリン輸送体を指向する。用語ノルアドレナリン輸送体、NAT、ノルエピネフリン輸送体又はNETは、本明細書においては、神経伝達物質ノルエピネフリンノルアドレナリン及びドーパミンをシナプスからその小胞に後で使用するまで貯蔵するために輸送して戻すモノアミン輸送体を区別せずに指して使用される。NETは長さが617アミノ酸であり、SLC6A2遺伝子によりコードされる12の膜貫通型ドメインを含む。ヒト、イヌCanisfamiliaris、チンパンジーPantroglodytes、ウシBostaurus、ラットRattusnorvegicus及びマウスMusmusculusのノルエピネフリン輸送体の配列は、NCBIデータベースにおいてそれぞれ受入番号P23975、XM_544398.2、XM_001167680.1、NM_174608.2、NM_031343.1及びNM_009209.2で提供される。NETcDNA中の任意の領域は、それが前記mRNAによりコードされる対応するmRNA又はタンパク質のレベルで実質的阻害を生ずる限り標的とすることができる。したがって、適当なNET特異的核酸は、上記のように、NETを発現している細胞中のNETmRNA又はタンパク質のレベルを、前記細胞を試験すべき核酸と接触させた後で測定することにより同定することができる。適当なNET特異的核酸として、インビトロジェンから受入番号HSS109852、HSS109853及びHSS185858で入手できるRNAなど任意のSLC6A2特異的RNAiが挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸はドーパミン-β-ヒドロキシラーゼを指向する。本明細書中で使用する用語ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼは、ドーパミンをノルエピネフリンに変換することができるポリペプチドを指す。ヒト、ラット、マウス及びウシのドーパミン-β-ヒドロキシラーゼの配列は、NCBIタンパク質データベースにおいてそれぞれ受入番号NP_000778、NP_037290、NP_620392及びNP_851338で提供される。本発明による他の核酸を標的とする核酸についてと同様に、ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼのcDNA中の任意の領域は、それが対応するmRNA又は前記mRNAによりコードされるタンパク質のレベルで実質的阻害を生ずる限り標的とすることができる。したがって、適当なドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ特異的核酸は、上記のようにドーパミン-β-ヒドロキシラーゼを発現している細胞中のドーパミン-β-ヒドロキシラーゼmRNA又はタンパク質のレベルを、前記細胞を試験すべき核酸と接触させた後で測定することにより同定することができる。適当なドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ特異的核酸として、の配列を有する国際公開第2008019159号に記載された核酸並びにサンタクルーズバイオテクノロジーからカタログ番号sc-35180、インビトロジェンからカタログ番号HSS175953、HSS175954及びHSS175955、アブノバからカタログ番号H00001621-R01、アプライドバイオシステムズからsiRNAidss3946、s3947及びs3945入手できる市販のドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ特異的siRNAなどのドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ特異的核酸が挙げられるが、これに限定されない。ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼmRNA又はタンパク質を標的とするこれらの核酸は、ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼが発現しており、所与の病態を引き起こしている神経伝達物質不足を補うためにドーパミン-β-ヒドロキシラーゼの減少が必要な細胞中に存在する神経伝達物質輸送体と結合することができる選択的作用剤とカップリングされることが好ましい。したがって、本発明のコンジュゲートは、ノルエピネフリン再取り込み阻害剤NRIと結合することができる選択的作用剤とカップリングしているドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ特異的核酸を含む。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸はBAXに特異的である。本明細書中で使用する用語BAX又はBCL2会合Xタンパク質は、その活性化が細胞レベル下の転座及び2量化に関与するプロアポトーシスのBCL-2ファミリーメンバーを指す。生存可能な細胞において、BCL2会合Xタンパク質の実質的部分はモノマー状であり、細胞基質中か又は膜と緩く会合しているかのいずれかで見出される。死の刺激に続いて、細胞質のモノマー状BCL2会合Xタンパク質はミトコンドリアに転座して、そこで架橋可能な内在性膜タンパク質になる。BCL2会合Xタンパク質に特徴的なイオン伝導性膜の孔を形成する能力は、細胞死に至るミトコンドリアの機能不全の原因の一部であり得るKorsmeyeretal.,ColdSpringHarb.Symp.Quant.Biol.,1999,64,343-350;Korsmeyeretal.,CellDeathDiffer.2000,7,1166-1173。用語BAXは、BAX-αGenBank受入番号L22473、BAX-βGenBank受入番号NM004324、BAX-γOltvaietal.,Cell,1993,74,609-619、BAX-δGenBank受入番号AI382305Apteetal.,Genomics,1995,26,592-594、BAX-ωGenBank受入番号AF008196Zhouetal.,J.Biol.Chem.,1998,273,11930-11936及びBAX-εGenBank受入番号AF007826Shietal.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,1999,254,779-785を含むそれらのスプライス変種のいずれかを指す。BAX-α、BAX-β及びBAX-γをコードするヌクレオチド配列は、米国特許第5,691,179及び第5,955,595号で開示及び特許請求されている。BAX-ωをコードするヌクレオチド配列は米国特許第6,140,484号及び対応するPCT国際公開第97/01635号で開示及び特許請求されている。ヒトBAX-ωのエクソン5/イントロン5接合部に対して指向する22塩基長アンチセンスオリゴヌクレオチドも米国特許第6,140,484号で開示されている。本発明によるコンジュゲートにおいて使用する適当なBAX特異的核酸として、の配列中国特許第101255422号に記載、Manfredinietal.,AntisenseNucleicAcidDrugDev.,1998,8,341-350に記載されたヒトBAXの塩基83~102及び103~122並びに好中球Dibbertetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1999,96,13330-13335を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、内容を引用により本明細書に組み込む米国特許出願第20040077583号表1及び3に開示された任意の配列が挙げられる。BAXのmRNA又はタンパク質を標的とするこれらの核酸は、BAXが発現している細胞中に存在する神経伝達物質輸送体と結合することができる選択的作用剤とカップリングしていることが好ましい。したがって、本発明のコンジュゲートは、セロトニン作動性でノルアドレナリン作動性且つドーパミン作動性のニューロン中への内部移行を媒介することができる選択的作用剤とカップリングされているBAX特異的核酸を含む。したがって、好ましい実施形態において、選択的作用剤は、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI又はノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI又はセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤SNDRI又はトリプルブロッカーの群から選択される。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートの核酸は、微小管会合タンパク質タウのmRNA又はタンパク質を標的とする。用語タウは、天然タウタンパク質モノマー、前駆体タウタンパク質、タウペプチド、タウ中間体、代謝物及びヒトP10636、イヌXM_844939、チンパンジーNM_001009068.1、マウスZ12133、ゼブラフィッシュBI981282.1及び線虫CelegansNM_001027407.2を含む任意の起源のタウ誘導体を含むタウタンパク質ファミリーの任意のタンパク質を指すが、これらに限定されず、それらは過リン酸化を受けてアルツハイマー病及び他のタウ病理の病原性に関与する対を形成するヘリカルフィラメント及び直線状フィラメントの縺れの自己集合体を生じ得る。適当なタウ特異的核酸として、国際公開第2005118858号に記載された下記配列を有するsiRNA米国特許第2004241854号に記載された下記配列を有するsiRNACaceresetal.J.Neuroscience,1991,11:1515-l523により記載された下記配列を有するタウ特異的アンチセンス核酸:が挙げられるが、これらに限定されない。これらのタウのmRNA又はタンパク質を標的とする核酸は、好ましくは、タウが発現している細胞中に存在する神経伝達物質輸送体と結合することができる選択的作用剤とカップリングされている。したがって、本発明のコンジュゲートは、モノアミン作動性ニューロン、特に、セロトニン作動性でノルアドレナリン作動性且つドーパミン作動性のニューロン中への内部移行を媒介することができる選択的作用剤とカップリングされたタウ特異的核酸を含む。したがって、好ましい実施形態において、選択的作用剤は、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI又はノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI又はセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤SNDRI又はトリプルブロッカーの群から選択される。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートの核酸は、ハンチンチンmRNA又はタンパク質を標的とする。用語ハンチンチンは、UniPortKBデータバンク受入番号P42858の機能未知の350kDaタンパク質並びに受入番号L12392で預託された核酸配列によりコードされるタンパク質及びイヌNCBI受入番号XP_536221.2、チンパンジーNCBI受入番号XP_517080.2、ウシNCBI受入番号XP_871851.2、ラットNCBI受入番号XP_573634.1又はマウスNCBI受入番号NP_034544.11に見出されるそれらのオルソログ並びにCAG反復の拡大から生ずるそれらの変種野生型タンパク質中のCAG6-37から変異体タンパク質中のCAG35-121反復へを指す。CAG拡大はハンチンチンタンパク質中のポリグルタミン束の拡大を含む変異体タンパク質の産生を生ずる。適当なハンチンチン特異的核酸として、米国特許出願第2008039418号A中の表4及び5並びに米国特許第7320965号中の表1、2、7、8、9及び10に記載されたアンチセンスオリゴヌクレオチド、米国特許出願第2005042646号Aに記載された。の配列を有するsiRNAが挙げられるが、これらに限定されない。ハンチンチンmRNA又はタンパク質を標的とするこれらの核酸は、ハンチンチンが発現している細胞中に存在する神経伝達物質輸送体と結合することができる選択的作用剤とカップリングしていることが好ましい。したがって、本発明のコンジュゲートは、モノアミン作動性ニューロン、特にセロトニン作動性でノルアドレナリン作動性且つドーパミン作動性のニューロン中への内部移行を媒介することができる選択的作用剤とカップリングしているハンチンチン特異的核酸を含む。したがって、好ましい実施形態において、選択的作用剤は、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI又はノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRI又はセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤SNDRI又はトリプルブロッカーの群から選択される。本発明による選択的作用剤及び核酸の適当な組合せを表Iにまとめる。A3.本発明のコンジュゲートのリンカー領域核酸と選択的作用剤とは直接カップリングすることができる。しかしながら、両部分を接続基により連結することが好ましい。本明細書において使用する用語接続基及びリンカー及びそれらと等価の用語は化合物の2つの部分を接続する有機部分を指して使用される。選択的作用剤は、核酸内の任意のセンス又はアンチセンスヌクレオチドに付くことができるが、3’末端ヌクレオチド及び/又は5’末端ヌクレオチドを通してカップリングできることが好ましい。内部コンジュゲートでは、リンカーを通してヌクレオチドにリボース基の2’位で、又は他の適当な位置に直接又は間接的に付けることができる。核酸が二重螺旋核酸である場合には、コンジュゲートはセンスの3’末端ヌクレオチド、センスの5’末端ヌクレオチド、アンチセンスの3’末端ヌクレオチド、及び/又はアンチセンスの5’末端ヌクレオチドに付いていてよい。定義又は慣例に制限されることは望まないが、本出願においてリンカーの長さは、コンジュゲート部分をリンカーに結びつける原子とオリゴヌクレオチドに結合してそれを通してリンカーがオリゴヌクレオチドに付く末端ホスフェート部分の酸素原子との間の最短距離を表す原子数を数えることにより記述する。リンカーが1つ又は複数の環構造物を含む場合には、最短経路で環を通る原子を数えることが好ましい。本発明において使用する適当なリンカー基として、改変された又は改変されていないヌクレオチド、ヌクレオシド、ポリマー、糖類、炭水化物、ポリアルキレン、例えばポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールなど、ポリアルコール、ポリプロピレン、エチレングリコールとプロピレングリコールの混合物、ポリアルキルアミン、ポリアミン、例えばポリリシン及びスペルミジンなど、ポリエステル、例えばポリエチルアクリレート、ポリホスホジエステルなど、脂肪族化合物、及びアルキレンが挙げられるがこれらに限定されない。さらに、ω-アミノ-1,3-ジオール、ω-アミノ-l,2-ジオール、ヒドロキシプロリノール、ω-アミノ-アルカノール、ジエタノールアミン、ω-ヒドロキシ-l,3-ジオール、ω-ヒドロキシ-l,2-ジオール、ω-チオ-l,3-ジオール、ω-チオ-1,2-ジオール、ω-カルボキシ-l,3-ジオール、ω-カルボキシ-1,2-ジオール、コヒドロキシ-アルカノール、ω-チオ-アルカノール、ω-カルボキシ-アルカノール、官能化オリゴエチレングリコール、アリルアミン、アクリル酸、アリルアルコール、プロパルギルアミン、プロパルギルアルコール等に基づくリンカー/リンカー化合物は、適当な長さのリンカーを生成するこの関係で適用することができる。リンカーは、改善された水溶性、コンジュゲート部分とオリゴヌクレオチドとの間の最適の分離距離、柔軟性又はその欠如、特定の配向、分岐など他の望ましい性質をオリゴヌクレオチドコンジュゲートに付与することもできる。好ましくは、前記接続基は以下の構造を有する:式中、m、n及びpは0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択され、その際mnpの和は、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17及び18から選択される整数であり、及びkは0又は1である。好ましい実施形態において、pが5であり、nが2であり、kが1であり、及びmが6であり、構造:を有するリンカーを与える。他の好ましい実施形態において、pが5であり、n及びkが0であり、及びmが6であり、構造:を有するリンカーを与える。特定の実施形態において、リンカーは、選択的作用剤のために2つ以上のカップリングを含む。好ましい実施形態において、リンカーは2価又は3価のリンカーであり、即ち選択的作用剤の2又は3個の分子がそれぞれカップリングすることができる。選択的作用剤の2つ以上の分子がリンカーを通して核酸にカップリングしている場合、前記分子は同じ選択的作用剤でも異なった選択的作用剤でもよい。特定の実施形態において、2価又は3価のリンカーは以下の式を有する:又は式中、m、m’、m’’、n、n’、n’’、p、p’、p’’、r、r’、r’’、s、s’、s’’、t及びuは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から独立に選択され;k、k’、k’’及びvは、0及び1から独立に選択され;及びX1、X2及びX3は、CH2、O、S、NH、CO、COO及びCONHから独立に選択される。上記の基の価数に依存して、分岐リンカーは対称的であることも非対称的であることもある。特定の実施形態において、p及びp’が5であり、n及びn’が2であり、k及びk’が1であり、並びにm及びm’が6であるリンカーは、上に示した2価のリンカーである。特定の実施形態において、p及びp’が5であり、n,n’、k及びk’が0であり、並びにm及びm’が6であるリンカーは2価のリンカーである。特定の実施形態において、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり、並びにX1及びX2がCONHを表すリンカーは上に示した2価リンカーである。他の実施形態において、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり、並びにX1及びX2がCH2を表すリンカーは2価リンカーである。特定の実施形態において、p及びp’が5であり、n及びn’が2であり、k及びk’が1であり、m及びm’が6であり、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり、並びにX1及びX2がCONHを表すリンカーは2価のリンカーである。他の実施形態において、p及びp’が5であり、n及びn’が2であり、k及びk’が1であり、m及びm’が6であり、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり、並びにX1及びX2がCH2を表すリンカーは2価のリンカーである。他の実施形態において、p及びp’が5であり、n、n’、k及びk’が0であり、m及びm’が6であり、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり、並びにX1及びX2がCONHを表すリンカーは2価のリンカーである。他の実施形態において、p及びp’が5であり、n、n’、k及びk’が0であり及びm及びm’が6であり、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり、並びにX1及びX2がCH2を表すリンカーは2価のリンカーである。特定の実施形態において、p、p’及びp’’が5であり、n、n’及びn’’が2であり、k、k’及びk’’が1であり、m、m’及びm’’が6であるリンカーは、上で示したように3価リンカーである。特定の実施形態において、p、p’及びp’’が5であり、n、n’、n’’、k、k’及びk’’が0であり及びm、m’及びm’’が6であるリンカーは3価リンカーである。特定の実施形態において、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり、並びにX1、X2及びX3がOを表すリンカーは上で示したように3価リンカーである。他の実施形態において、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり、並びにX1、X2及びX3がOを表すリンカーは3価リンカーである。特定の実施形態において、p、p’及びp’’が5であり、n、n’及びn’’が2であり、k、k’及びk’’が1であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり並びにX1、X2及びX3がOを表すリンカーは3価リンカーである。他の実施形態において、p、p’及びp’’が5であり、n、n’及びn’’が2であり、k、k’及びk’’が1であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり並びにX1、X2及びX3がOを表すリンカーは3価リンカーである。他の実施形態において、p、p’及びp’’が5であり、n、n’、n’’、k、k’及びk’’が0であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり、並びにX1、X2及びX3がOを表すリンカーは3価リンカーである。他の実施形態において、p、p’及びp’’が5であり、n、n’、n’’、k、k’及びk’’が0であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり、並びにX1、X2及びX3がOを表すリンカーは3価リンカーである。A4.本発明のコンジュゲートのターゲティング部分本発明のコンジュゲートの他の改変は、核酸の活性、細胞分配又は細胞取り込みを増強する1つ又は複数の部分又はコンジュゲートを、核酸又は保護基に化学的に連結することを含む。そのような部分は、コレステロール部分Letsingeretal,Proc.Natl.Acid.Sci.USA,199,86,6553-6556、コール酸Manoharanetal,Biorg.Med.Chem.Let.,199441053-1060などの脂質部分、チオエーテル、例えば、ベリル-S-トリチルチオールManoharanetal,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1992,660,306-309;Manoharanetal,Biorg.Med.Chem.Let.,1993,3,2765-2770、チオコレステロールOberhauseretal,Nucl.AcidsRes.,1992,20,533-538、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオール又はウンデシル残基Saison-Behmoarasetal,EMBOJ,1991,10,1111-1118;Kabanovetal,FEBSLett.,1990,259,327-330;Svinarchuketal.,Biochimie,1993,75,49-54、リン脂質、例えば、ジ-ヘキサデシル-rac-グリセリン又はトリエチル-アンモニウムl,2-ジ-O-ヘキサデシル-rac-グリセロ-3-HホスホネートManoharanetal,TetrahedronLett.,1995,36,3651-3654;Sheaetal,Nucl.AcidsRes.,1990,18,3777-3783、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖Manoharanetal.,NucleosidesandNucleotides,1995,14,969-973、又はアダマンタン酢酸Manoharanetal.,TetrahedronLett.,1995,36,3651-3654、パルミチル部分Mishraetal,Biochim.Biophys.Acta,1995,1264,229-237、又はオクタデシルアミン又はヘキシルアミノ-カルボニルオキシコレステロール部分Crookeetal.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277,923-937を含むが、これらに限定されない。あるいは、細胞分配を増大させ得る部分は、前記生物学的障壁中に存在する特異的輸送体を使用して受容体に媒介されるエンドサイトーシスの使用により生物学的障壁を越えて特異的に移動することができる低分子量化合物又はポリペプチドであり得る。取り込み受容体及び担体の広いアレイとそれに伴うさらに多数の受容体特異的リガンドは、当技術分野において知られている。本発明により使用する、エンドサイトーシス及び/又はトランスサイトーシスを媒介する受容体に対する好ましいリガンドとして、例えば、チアミン輸送体、フォレート受容体、ビタミンB12受容体、アシアロ糖タンパク質受容体、α2,3-シアロ糖タンパク質受容体例えば、受容体特異的リガンドとしてのラマ単一ドメイン抗体sdAbからなるFC5及びFC44ナノボディを伴う、トランスフェリン-1及び-2受容体、捕捉剤受容体クラスA又はB、タイプI、II又はIII、又はCD36又はCD163、低密度リポタンパク質LDL受容体、LDL関連タンパク質1受容体LRPl、タイプB、LRP2受容体メガリン又は糖タンパク質330としても知られる、ジフテリア毒素受容体DTR、これはヘパリン-結合上皮性成長因子様成長因子HB-EGFの膜結合前駆体である、インスリン受容体、インスリン様成長因子IGF受容体、レプチン受容体、サブスタンスP受容体、グルタチオン受容体、グルタメート受容体及びマンノース6-ホスフェート受容体に対する、又はそれらに特異的に結合するリガンドが挙げられる。本発明にしたがって使用するこれらの受容体と結合する好ましいリガンドとして、例えば、リポタンパク質リパーゼLPL、α-2-マクログロブリンα2M、受容体関連タンパク質RAP、ラクトフェリン、デスモテプラーゼ、組織-及びウロキナーゼ-型プラスミノーゲンアクチベーターtPA/uPA、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤PAI-I、tPA/uPA:PAI-l複合体、メラノトランスフェリン又はP97、トロンボスポンジン1及び2、肝リパーゼ、第Vlla因子/組織因子経路阻害剤TFPI、第VIIIa因子、第IXa因子、アベタール-40、アミロイド-β前駆体タンパク質APP、Cl阻害剤、補体C3、アポリポタンパク質EapoE、シュードモナス外毒素A、CRM66、HIV-ITatタンパク質、ライノウイルス、マトリックスメタロプロテアーゼ9MMP-9、MMP-13コラゲナーゼ-3、スピンゴリピド活性化タンパク質SAP、妊娠帯タンパク質、アンチトロンビンIII、ヘパリン補助因子II、αl-アンチトリプシン、熱ショックタンパク質96HSP-96、血小板由来成長因子PDGF、アポリポタンパク質JapoJ、又はクラステリン、apoJ及びapoEに結合したABETA、アプロチニン、angio-pepl、超低密度リポタンパク質VLDL、トランスフェリン、インスリン、レプチン、インスリン様成長因子、上皮性成長因子、レクチン、ペプチド模倣体及び/又はヒト化モノクローナル抗体又は前記受容体に特異的なペプチド例えば、ヒトトランスフェリン受容体と結合する配列HAIYPRH及びTHRPPMWSPVWP、又は抗ヒトトランスフェリン受容体TfRモノクローナル抗体A24、ヘモグロビン、ジフテリア毒素ポリペプチド鎖の無毒性部分、ジフテリア毒素B鎖の全体又は一部DTB-Hisを含むSpilsbergetal.,2005,Toxicon.,468:900-6により記載されたもの、ジフテリア毒素CRM197の無毒性変異体の全体又は一部、アポリポタンパク質B、アポリポタンパク質E例えば、ナノ粒子上のポリソーブ-80コーティングに結合後、ビタミンD-結合タンパク質、ビタミンA/レチノール結合タンパク質、ビタミンB12/コバラミンプラズマ担体タンパク質、グルタチオン及びトランスコバラミン-B12からなる群から選択されたリガンドが挙げられる。A.5保護基本発明のコンジュゲートの核酸形成部分は、生体の異なった体液及び区画を通じたそれらの輸送中に、ヌクレアーゼエンド/エキソヌクレアーゼなどの分解因子から保護されなければならない。この目的で、オリゴヌクレオチドは、酵素的消化に抵抗して、オリゴヌクレオチドのインビボ安定性及びバイオアベイラビリティを改善するように設計される。核酸は、ヌクレアーゼに媒介される分解を防止する基の存在により化学的に改変されることが好ましい。本発明の目的のために、キャップ構造又は保護基は、オリゴヌクレオチドのいずれかの末端に組み込まれた化学的改変を意味すると理解すべきである。5’-キャップの例として、反転した塩基脱落残基部分、4’,5’-メチレンヌクレオチド;1-β-D-エリスロフラノシルヌクレオチド、4’-チオヌクレオチド、炭素環状ヌクレオチド;1,5-アンヒドロヘキシトールヌクレオチド;L-ヌクレオチド;α-ヌクレオチド;改変塩基ヌクレオチド;ホスホロジチオネート連結基;トレオ-ペントフラノシルヌクレオチド;非環式3’,4’-secoヌクレオチド;非環式3,4-ジヒドロキシブチルヌクレオチド;非環式3,5-ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、3’-3’-反転ヌクレオチド部分;3’-3’-反転塩基脱落部分;3’-2’-反転ヌクレオチド部分;3’-2’-反転塩基脱落部分;1,4-ブタンジオールホスフェート;3’-ホスホロアミデート;ヘキシルホスフェート;アミノヘキシルホスフェート;3’-ホスフェート;3’-ホスホロチオネート;ホスホロジチオネート;又は架橋又は非架橋メチルホスホネート部分が挙げられるが、これらに限定されない。詳細は引用により本明細書に組み込まれる国際公開第97/26270号に記載されている。3’-キャップとしては、例えば、4’,5’-メチレンヌクレオチド;l-β-D-エリスロフラノシルヌクレオチド:4’-チオヌクレオチド、炭素環ヌクレオチド;5’-アミノ-アルキルホスフェート;l,3-ジアミノ-2-プロピルホスフェート、3-アミノプロピルホスフェート;6-アミノヘキシルホスフェート;1,2-アミノドデシルホスフェート;ヒドロキシプロピルホスフェート;1,5-アンヒドロヘキシトールヌクレオチド;L-ヌクレオチド;α-ヌクレオチド;改変塩基ヌクレオチド;ホスホロジチオネート;トレオ-ペントフラノシルヌクレオチド;非環式3’,4’-secoヌクレオチド;3,4-ジヒドロキシブチルヌクレオチド;3,5-ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、5’-5’-反転ヌクレオチド部分;5’-5’-反転塩基脱落部分;5’-ホスホロアミデート;5’-ホスホロチオネート;1,4-ブタンジオールホスフェート;5‘-アミノ;架橋及び/又は非架橋5’-ホスホロアミデート、ホスホロチオネート及び/又はホスホロジチオネート、架橋又は非架橋メチルホスホネート及び5’-メルカプト部分が挙げられる。引用により内容を本明細書組み込まれるBeaucageandIyer,1993,Tetrahedron49,1925を参照されたい。好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートの核酸配列に付けられたキャップ構造は、以下の一般的構造を有する:式中、Mは、H、脂質部分又は上で定義したターゲティング基であり;A及びBは、単糖及びC2-C20アルキレングリコールからなる群から独立に選択されるモノマーユニットを表し;L1、L2及びL3は、ホスホジエステル、ホスホロチオネート、カルバメート、メチルホスホネート、グアニジニウム、スルファメート、スルファミド、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、スルホン、アミド及びそれらの混合物からなる群から独立に選択される連結化合物であり;a及びbは0から50の範囲の整数であり;cは0及び30の範囲の整数であり;dは少なくとも1の整数である。本明細書中で使用する脂質部分は、脂肪、油脂、精油、ワックス、ステロイド、ステロール、リン脂質、糖脂質、スルホリピド、アミノリピド、クロモリピドリポクローム、及び脂肪酸を含むが、これらに限定されない親油性又は両親媒性の性質を有する有機化合物を指す。用語脂質は、天然の脂質及び合成で生成した脂質の両方を包含する。脂質部分は、通常、オリゴヌクレオチドの親油性を増大させてインビボにおけるオリゴヌクレオチド構造の細胞内取り込みを助長する。使用され得る適当な脂質として、脂肪酸;脂肪;油;ワックス;コレステロール;ステロール;ビタミンA、D、E及びKなどの脂溶性ビタミン;モノグリセリド;ジグリセリド、及びリン脂質が挙げられる。好ましい脂肪酸は、ラウリン酸C12、ミリスチン酸C14、パルミチン酸C16、ステアリン酸C18、ドコサン酸C22、及びリトコール酸とオレイルアミンとのハイブリッドリトコール-オレイルアミン、C43からなる群から選択されるものである。脂質は、標的組織、標的細胞、投与経路、オリゴヌクレオチドがたどると予想される経路等を考慮に入れることによって状況により当業者が選択できる。本明細書中で使用する用語単糖は、当技術分野において周知であり、ブロック又は部分を構成するより小さい糖にさらに分解することのできない単糖ユニットからなる糖の単純形態を指す。この接合基として好ましい糖部分は、フラノース、フルクトース、グルコース、ガラクトース、マンノース、改変された単糖、シアル酸及びエリトロース及びそれらの混合物からなる群から選択される。単糖は、その線状又は環状形態ヘミアセタール環状異性体にあることができる。フラノースは、D-リボース又はフルクトース残基D---フルクトフラノースなどの5員フラン系環を含む任意の単糖である。単糖の組合せで、複数の糖構造物を得ることができる。フルクトオリゴサッカライドFOS及びガラクトオリゴサッカライドGOSは、二糖類のサッカロース又はラクトース、又は多糖類のイヌリン、デキストリン、デンプン若しくはグリコーゲンと同様に特に興味ある組合せである。本明細書中で使用する用語アルキレングリコール、ポリアルキレングリコールアルキレンオキシドは、一般式-O-[CH2m-O-]n-式中、mは各アルキレングリコールユニット中に存在するメチレン基の数を表し、及びnは反復ユニットの数を表し、それ故ポリマーのサイズ又は長さを表すを共有するポリエーテルポリマーのファミリーを包含する。該用語は、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジアルキレングリコール例えば、ジエチレングリコール、トリアルキレングリコール例えば、トリエチレングリコール、及び上記のグリコールの対応するモノ及びジ-アルキルエーテルなどのグリコール、アルキルエーテルは1から6個の炭素原子例えば、メチル、エチル、プロピルエーテル等を有する低級アルキルエーテルであるを含むが、これらに限定されない。他の実施形態において、式Iの基は、炭素原子が2から20個の任意の線状又は分岐分子であってよいC2-C20アルキレングリコールモノマーユニット、又はa及びbの価に依存して、数個のC2-C20アルキレングリコールモノマーユニットを有するポリアルキレングリコールポリマーを有する。好ましくは、アルキレングリコール基は、C16-C20アルキレングリコールから選択される。さらにより好ましくは、アルキレングリコール基はC18アルキレングリコールである。本発明のコンジュゲートに適切な保護基として、において、上の式式中、MはHであり、dが0であり、AはPEGであり、Bは糖であり、a及びbは各々1でありL1及びL2はホスホジエステル結合であるに対応するPEG糖;上の式式中、AはPEGであり、Bは糖であり、aが1であり、bが2であり、MはHであり及びdが0であり及びL1及びL2はホスホジエステル結合であるに対応するPEG糖2;上の式式中、AはPEGであり、Bは糖であり、aが2であり、bが1であり、MはHであり及びdが0であり及びL1及びL2はホスホジエステル結合であるに対応するPEG2糖;上の式式中、AはPEGであり、Bは糖であり、aが3であり、bが1であり、MはHであり及びdが0であり及びL1及びL2はホスホジエステル結合であるに対応するPEG3糖;上の式式中、AはPEGであり、Bは糖であり、aが5であり、bが1であり、MはHであり及びdが0であり及びL1及びL2はホスホジエステル結合であるに対応するPEG5糖が挙げられるが、これらに限定されない。用語PEG及び糖は、本質的に上記のように使用され、糖としてフラノース及びC3、C9及びC18のスペーサーの群から選択されたPEGを含む。B.本発明のコンジュゲートの構造物本発明によるコンジュゲートの異なった要素は異なった様式で配列することができる。したがって、選択的作用剤は核酸の5’末端及び/又は3’末端にカップリングすることができる。さらに、核酸と選択的作用剤とは、直接連結することができ又はリンカーにより接続することができる。同様に、リンカーを核酸の5’末端及び/又は3’末端にカップリングすることができる。したがって、本発明の核酸が単一の核酸鎖を含有する場合、可能な配列は:5’末端に付けた選択的作用剤を含む核酸、3’末端に付けた選択的作用剤を含む核酸、5’末端に付けた選択的作用剤を含む核酸及び3’末端に付けた保護基、及び5’末端に付けた保護基及び3’末端に付けた選択的作用剤を含む核酸、第1の及び第2の選択的作用剤を含む改変された核酸であって、前記第1の及び第2の選択的作用剤は同じであるか又は異なり、両方の選択的作用剤が、核酸の5’末端に接続されている二官能性リンカーの2つの末端に接続されている核酸、第1の及び第2の選択的作用剤を含む改変された核酸であって、前記第1の及び第2の選択的作用剤は同じである又は異なり、両方の選択的作用剤が、核酸の3’末端に接続されている二官能性リンカーの2つの末端に接続されている核酸、4つの選択的作用剤を含む改変された核酸であって、前記選択的作用剤は同じである又は異なり、選択的作用剤の2つは核酸の5’末端に接続されている第1の二官能性リンカーの両末端に接続され、選択的作用剤の2つは核酸の3’末端に接続されている第2の二官能性リンカーの両末端に接続されている核酸である。それに加えて、本発明のコンジュゲートは、標的分子の発現を調節する2つ以上の核酸鎖を含むことができる。例えば、本発明の構造物は、所与の標的分子の異なった領域を標的としたホスホジエステルを通して直列に結びつけた5個までの異なった核酸を含むことができる。さらに、核酸が2本鎖核酸であるこれらの場合には、選択的作用剤はセンス鎖及び/又はアンチセンス鎖とカップリングすることができ、直接カップリングするか又はリンカー基により接続することができる。本発明のコンジュゲートの一部を形成する核酸は、それらが生体の種々の体液及び区画を通る輸送中にヌクレアーゼエンド/エキソヌクレアーゼなどの分解因子から保護されなければならない。この目的で、オリゴヌクレオチドは、酵素による消化に抵抗し、且つオリゴヌクレオチドのインビボ安定性及びバイオアベイラビリティを改善するように設計しなければならない。細胞のエキソヌクレアーゼは遊離の5’末端を標的として使用する。したがって、一本鎖核酸の場合には、選択的作用剤は、核酸の5’にカップリングしたときに安定化部分として作用することができる。しかしながら、2本鎖核酸を含むコンジュゲート又は選択的作用剤が3’末端に連結している一本鎖核酸の場合に、コンジュゲートは、通常エキソヌクレアーゼの活性による核酸の分解を防止する基である安定化部分又はキャップ構造をさらに含むことができる。2本鎖核酸の場合、以下の可能な配列が存在する:[1]選択的作用剤が鎖の一方の5’末端に付き、その場合キャップ構造を反対の鎖の5’末端に付けることが有用である。それに加えて、キャップ構造は1つ又は2つの3’末端に存在することもできる。[2]選択的作用剤が鎖の一方の3’末端に付き、その場合キャップ構造をセンス鎖及びアンチセンス鎖の5’末端に付けることが有用である。それに加えて、キャップ構造は遊離3’末端に存在することもできる。[3]同じであっても異なっていてもよい2つ以上の選択的作用剤を含むコンジュゲートであって、その場合、選択的作用剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖の5’末端にカップリングしている。場合により、キャップ構造が1つ又は2つの遊離3’末端にカップリングしていてもよい。好ましい実施形態において、核酸は、選択的作用剤がアンチセンス鎖の5’末端に連結し、且つ保護基がセンス鎖の5’末端に連結している2本鎖RNAである。さらにより好ましい実施形態において、保護基は、構造式中、MはHであり、dが0であり、AはポリエチレングリコールのC18スペーサーであり、Bはフラノースであり、aが2であり、b及びcが1であり並びにL2及びL3はホスホジエステル結合であるを有する。好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートは、i1種又は複数種の神経伝達物質輸送体に特異的に結合する少なくとも1種の選択的作用剤であって、セロトニン再取り込み阻害剤SRI、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRIからなる群から選択される選択的作用剤、及びii標的分子に特異的に結合することができる核酸であって、標的分子が、セロトニン受容体1A型5-HT1A、セロトニン受容体1A型5-HT1AをコードするmRNA、セロトニン輸送体タンパク質及びセロトニン輸送体をコードするmRNAからなる群から選択される核酸を含む。より好ましい実施形態において、セロトニン受容体1A型5-HT1AをコードするmRNAと特異的に結合することができる核酸は、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3及び配列番号:4の群からなる配列を含む。さらにより好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートは、構造I式中、R1、R2、R3、R4及びR5は水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbはC1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、ここでRc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは、水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;m、n及びpは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択され、ここでmnpの和は、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17及び18から選択される整数であり、並びにオリゴヌクレオチドは、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3及び配列番号:4の群から選択された配列を含むを有する。他の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、構造:式中、オリゴヌクレオチドは、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3及び配列番号:4の群から選択された配列を含むを有する。さらにより好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートは、構造XIV式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbはC1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、ここでRc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは、水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;m及びpは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択され、ここでmpの和は、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17及び18から選択される整数であり、並びにオリゴヌクレオチドは、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3及び配列番号:4の群から選択された配列を含むを有する。特定の実施形態において、コンジュゲートは、構造式中、オリゴヌクレオチドは、配列番号:1、配列番号:2、配列番号:3及び配列番号:4の群から選択された配列を含むを有する。さらに他の好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートは、センス鎖の5’末端が保護基とカップリングし、アンチセンス鎖の5’末端が選択的作用剤とカップリングしている2本鎖核酸を含む。保護基が、構造:式中、MはHであり、dが0であり、AはポリエチレングリコールのC18スペーサーであり、Bはフラノースであり、aが2であり、b及びcが1であり並びにL2及びL3はホスホジエステル結合であるを有する場合及び保護基がセルトラリンである場合、本発明の化合物は、構造:を有する。さらにより好ましい実施形態において、本発明の化合物は、構造:を有する。さらにより好ましい実施形態において、本発明の化合物は、構造:を有する。他の実施形態において、コンジュゲートは、以下の構造:式中、R1は水素、低級アルキル基又はベンジル基を表し、R2は水素、メチル、塩素又はフッ素基を表し、R2’は水素、メチル、メトキシ、ヒドロキシル又はハロゲン原子を表し、R3及びR4は水素、低級アルキル基を表し、R5は5-又は6-位における水素、塩素又はメトキシ基を表し、且つpは2~6であるを有する。さらにより好ましい実施形態において、コンジュゲートは、以下の構造を有する。さらにより好ましい実施形態において、上で定義したコンジュゲートの一部を形成するオリゴヌクレオチドは:ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼ、ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼをコードするmRNA、BAX、BAXをコードするmRNA、タウ、タウをコードするmRNA、ハンチンチン及びハンチンチンをコードするmRNAからなる群から選択された標的分子に特異的に結合することができる。本発明の趣旨において、式の保護基は、連結化合物式Iの基中でLとして参照されるによりオリゴヌクレオチドの5’-OH又は3’-OH基に連結することができ、したがってコンジュゲート-オリゴヌクレオチドを得ることができる。オリゴヌクレオチド及び式Iの基の化学的性質により、数通りの実施形態が可能になる。例えば、単一のオリゴヌクレオチド分子中に、該オリゴヌクレオチドが二重螺旋か又は一本鎖かに依存して可変の、典型的には2から4個の式Iの基を連結することが可能であるが、ただし、連結は5’-OH及び/又は3’-OHを通して行われる。数個の式Iの基の鎖をオリゴヌクレオチドに連結することも可能であり、前記式Iの基は、分子及び/又はオリゴヌクレオチドの間にホスホジエステル結合を生成させるホスホルアミダイト誘導体などの連結化合物により互いに連結される。オリゴヌクレオチド構造は、オリゴヌクレオチドの1つの末端に連結した数個の式Iの基の鎖及びオリゴヌクレオチドの他の末端に連結した式Iの他の基も含むことができる。本発明のヌクレオチド構造は、オリゴヌクレオチドの2つの鎖の5’-OH及び3’-OH末端の中で可能な全ての組合せで分布した又は式Iの基に結びついた2つ以上のターゲティング作用剤を含むことができる。さらに、2種以上ターゲティング作用剤があれば、これらを、式Iの基及び/又はオリゴヌクレオチドに直列に連結することができる。オリゴヌクレオチド構造が2種以上ターゲティング作用剤を含めば、異なった組合せが可能である。例えば、保護基を、オリゴヌクレオチド鎖の1つの5’-OH又は3’-OH末端基に連結することができる。他の可能な組合せは、1方のオリゴヌクレオチド鎖の5’-OH基に連結した薬剤化合物及び他方のオリゴヌクレオチド鎖に結合した式Iの基の末端ユニットに結びついたひと続きのアプタマーを含む。C.本発明の医薬組成物本発明者らは、本発明のコンジュゲートがコンジュゲートの核酸配列により標的とされた核酸の発現を調節する能力を有することを見出した。例えば、シナプス前部の5-HT1ARに特異的な核酸を含むコンジュゲートの場合、該構造物が対象者に投与されると、それは対象者の中脳縫線核即ちセロトニン作動性ニューロンの集まりが位置する脳中の領域中の5-HT1ARの特異的ノックダウンを効果的に誘発することができる。したがって、当業者は、本発明のコンジュゲートが、本発明のコンジュゲート中に存在する核酸により標的とされる遺伝子の発現レベルの低下から利益を得る疾患の治療のために適していることを理解するであろう。したがって、他の態様において本発明は医薬で使用する本発明によるコンジュゲートに関する。それに加えて、本発明は、本発明によるコンジュゲート及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物にも関する。適当な量の本発明のオリゴヌクレオチド構造物は、薬学的に許容される賦形剤及び/又は担体とともに剤形化して医薬組成物にすることができる。本発明によるコンジュゲートを含む組成物は、種々の経路により対象者に送達することができる。典型的経路は、線条体内、脳室内、髄腔内、実質内例えば、線条体内、鼻内、及び眼内送達を含む。組成物は、全身的に、例えば、静脈内、皮下又は筋肉注射により送達することもでき、それはコンジュゲートを末梢ニューロンに送達するために特に有用である。それに加えて、本発明のコンジュゲートを鼻内に投与することも可能で、それにより非侵襲的投与様式による全身性投与が可能になる。心室内投与も適切なことがある。好ましい送達経路は脳へ直接、例えば、脳室又は脳の視床下部中へ、又は脳の側方又は背側の領域中へである。本発明の医薬組成物は、複数の異なったコンジュゲートを含むことができて、その場合、異なったコンジュゲートは、同じ標的分子の異なった領域を標的とする核酸を含む。したがって、医薬組成物は、各々異なった核酸を含む少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6種以上の異なったコンジュゲートを含むことができる。当業者は、いずれも参照により本明細書に組み込まれるRemington’sPharmaceuticalScience17thEd.,MackPublishingCo.,Easton,Pa.,1985並びにGoodman及びGilmanのThePharmaceuticalBasisofTherapeutics8thEd.,PergamonPress,Elmsford,N.Y.,1990などの広く知られ利用可能な資料で論じられている原理及び手順を熟知している。好ましい実施形態において、コンジュゲートは、標準的手順にしたがってヒト及び他の哺乳動物に送達される投与に適合した医薬組成物として剤形化される。通常、静脈内又は心室内投与用の組成物は滅菌等張緩衝水溶液である。必要な場合、組成物は、注射部位における何らかの疼痛を緩和するために可溶化作用剤及び局所麻酔薬も含むことができる。一般的に、含有成分は、アンプル又は活性作用剤の量を示す薬袋などの気密の密封容器中で、例えば、凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として、別々に又は単位剤形中に一緒に混合してのいずれかで供給される。組成物を点滴により投与すべき場合、薬学的規格の滅菌水又は食塩水を含む点滴瓶で投薬することができる。組成物が注射により投与される場合、含有成分を投与前に混合することができるように、注射用滅菌水又は食塩水のアンプルを提供することができる。静脈内投与以外の場合、組成物は少量の加湿剤又は乳化剤、又はpH緩衝剤を含有することができる。組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、ゲル、ポリマー、又は徐放化剤形にすることができる。組成物は、当技術分野において知られている伝統的結合剤及び担体を用いて剤形化することができる。剤形は、薬学グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、糖ナトリウム、セルロース、酸化マグネシウムなどの標準的担体、医薬の製造における機能性が十分確立されている不活性担体を含むことができる。リポソーム、微粒子、マイクロカプセル等中へのカプセル化を含む種々の送達システムが知られており、本発明の治療剤を投与するために使用することができる。さらに他の好ましい実施形態において、本発明のコンジュゲートを含む治療剤は、中性又は塩形として剤形化することができる。薬学的に許容される塩として、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導されたものなど遊離アミノ基で形成されたもの、及び水酸化ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等から誘導されたものなど遊離カルボキシル基で形成されたものが挙げられる。組成物が血液脳関門を越えて送達される実施形態について、組成物は、例えば、例えば、米国特許第6,372,250Pardridgeに記載されたリポソーム、及び薬学的に許容される担体を含む。本明細書中に記載するリポソームは、生物学的に活性な作用剤を血液脳関門を越えて送達することができ、続いて脳中で発現する。リポソーム及びナノ粒子は、薬剤カプセル化のために一般的に使用されるナノ容器の典型的形態である。リポソームの直径は、好ましくは200ナノメートル未満である。リポソームの直径は50ナノメートルと150ナノメートルの間が好ましい。特に好ましいのは、外径が約80ナノメートルのリポソーム又は他のナノ容器である。適当なタイプのリポソームは、リポソーム内のDNAを安定化するために、1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロール-3-ホスホコリンPOPC、ジホシファチジルホスホコリン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンDSPEなどの中性リン脂質を、又は少量1パーセントの臭化ジドデシルジメチルアンモニウムDDABなどのカチオン性脂質と一緒にコレステロールを用いて作製される。リポソームは、DNAをカプセル化して、剤形が未だ血液中にある間又は血液から標的細胞の細胞内区画に移るときに核酸をヌクレアーゼからから保護することができるナノ粒子又は直径が200nm未満の任意の他の分子のナノ容器で置き換えることができる。PEG鎖などの接合剤を使用する代わりに、スフィンゴミエリンなどの1種又は複数種の他のポリマー状物質も、リポソーム又はナノ容器の表面に付けて、輸送可能なペプチドをコンジュゲーションするための足場を提供すること及び剤形の血液からの除去を遅らせて血漿薬物動態を最適化することの二重の目的に役立てることができる。さらに、本発明は、特異的標的受容体を有する細胞又は器官の任意の群にDNAを送達することを意図する。リポソームはDNAを肝臓、肺及び脾臓などの器官に送達するために使用することができる。本発明のコンジュゲートを送達するための他の適当な容器として、デンドリマーが挙げられる。用語デンドリマーは、コア及びコアから放射状に出る分岐構造の複数の骨組みを有する巨大分子を指す。デンドリマー担体の形状及びサイズは様々であり得る。幾つかの例において、デンドリマー担体は、形状がおよそ球形又は球状であり得る。さらに、デンドリマー担体は、対応する分子量範囲、例えば、約500ダルトンから約2百万ダルトンで、約15オングストロームAから約250Aの範囲内の直径を有することができる。デンドリマーは、種々の供給源例えば、Dendritech、Midland、Michiganから市販品として得るか又は当業者に知られた方法により合成することができる。デンドリマー分子は、低分子量種と高分子量種とに大まかに分けることができる。第1のカテゴリーは、デンドリマー及びデンドロンを含むが、それに対して第2のカテゴリーはデンドロン化したポリマー、超分岐ポリマー、及びブラッシポリマーボトルブラッシとも呼ばれるを包含する。デンドリマー及びデンドロンは、繰り返し分岐し、単分散で、及び通常高度に対称性の化合物である。デンドリマーとデンドロンの定義で明確な相違はない。デンドロンは、通常焦点があると言われる単一の化学的に指定可能な基を含む。モル質量分布がないので、高いモル質量のデンドリマー及びデンドロンは巨大分子であるがポリマーではない。デンドリマーの性質は、分子の表面の官能基により支配される。機能的分子のデンドリマーカプセル化は、デンドリマーの足場が内部的機能と外部的機能とを分離するので、活性な部位、生体材料中の活性な部位の構造を模倣する構造物の単離を可能にする。例えば、デンドリマーは、その末端基がカルボキシル基のような親水性基である場合、水溶性であることができる。デンドリマーは、以下の特徴により一般的に特徴づけることができる:i1つ又は複数の反応部位を有し、点様であるか又は有意のサイズがあり、デンドリマーの最終的立体配置に影響する開始剤コアI;ii開始剤コアに付いた分岐した反復ユニットの1つ又は複数の層;iii場合により連結基を通してデンドリマー表面に付いたアニオン性又はカチオン性基などの機能的末端基。本明細書において考慮するデンドリマーは、ユニットを構築するリシン、又はリシン類似体を含むことができる。用語リシン類似体は、構築ユニットの前の層に付くための単一の尖端カルボキシル基、及び構築ユニット、遮断基、リンカー又はアリール酸基がさらに付くことができる2つ又は3つの第一級アミン基を有する分子を指す。本明細書において考慮するリシン類似体の例は、PCT/AU2007/000352に記載され、例えばグリシル-リシンである。幾つかの特定の例において、デンドリマーは、構築ユニットとしてリシンのみ又はリシン類似体の1つのタイプを含む。本明細書において考慮する他のデンドリマーとして、ポリアミドアミンPAMAM、ポリエーテルヒドロキシルアミンPEHAM又はポリプロピレンイミン構築ユニットを含むものが挙げられる。特定のそれらの例においては、デンドリマーは、構築ユニットとして、ポリアミドアミンPAMAM、ポリエーテルヒドロキシルアミンPEHAM又はポリプロピレンイミンのみを有する。コア部分は、構築ユニットへの付加点を1つのみを含むことができるか又は構築ユニットが付くためにさらに利用できるか又はできない2若しくは3個以上の点を含むことができる。典型的には、付加点は遊離アミノ基である。コア部分は、構築ユニットからなるか、それを含むか又はそれから誘導することができ、構築ユニットと異なった分子であってよい。典型的コア部分は、本明細書中で例示し、及びPCT/AU2007/000352に記載されている。リポソーム及びデンドリマーは、静脈内投与のために、任意の適当な薬学的担体と組み合わせることができる。組成物の静脈内投与は、その侵襲性が最小なので好ましい経路である。他の投与経路は、所望であれば可能である。適当な薬学的に許容される担体として、食塩水、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、又は任意の他の水溶液が挙げられる。適当な用量は、当業者に周知の手順により確立することができる。D.本発明のコンジュゲートの治療的使用本発明のコンジュゲートで治療することができる臨床状態はコンジュゲートの一部を形成する核酸の特異性に依存するであろうということは理解されるであろう。したがって、本発明のコンジュゲートは、神経伝達物質輸送体を発現する細胞中の関心のある遺伝子をノックダウンすることにより改善することができる任意の疾患の治療のために使用することができる。当業者は、コンジュゲートが、細胞中におけるタンパク質の異常な発現例えば、レヴィー小体中におけるα-シヌクレインの蓄積により特徴づけられる疾患又は標的タンパク質が正常レベルで発現しているが前記標的タンパク質の発現を減少させることにより改善することができる疾患の治療のために有用であることを理解するであろう。D.1.セロトニン作動性ニューロン中に位置する5-HT1A受容体、セロトニン輸送体又はイオンチャンネルを標的とする核酸を含むコンジュゲート上記のように、SSRIがそれを必要とする対象者に投与される場合、セロトニン作動性ニューロン中に位置する5-HT1A受容体シナプス前部の5-HT1ARの活性化の結果として生ずる負のフィードバック機構がある。SSRIの作用は、セロトニン作動性ニューロン中に位置するセロトニン再取り込み輸送体SERTにより媒介されるセロトニン再取り込みの遮断により誘発される高いセロトニンレベルをもたらす。このことはシナプス後部のセロトニン受容体だけでなく、細胞のためのフィードバックセンサとして役立つシナプス前部の5-HT1ARも活性化するであろう。これらの5-HT1ARの活性化は、細胞発火の抑制及びインパルス依存性セロトニン放出の故にセロトニンレベルの低下を引き起こし、それ故投与されたSSRIの効果を制限する。この効果は、例えば本発明の実施例2及び3に示し、そこで、セルトラリン及び5-HT1AR特異的siRNAを含むコンジュゲートの注入が、選択的5-HT1ARアゴニストにより誘発される体温低下応答を防止することができることが示される。この効果により、コンジュゲートの一部を形成する核酸に相補的な遺伝子の発現をノックダウンするとこが望ましい場合に、これら全ての臨床状態における本発明のコンジュゲートの使用を可能になる。これは、本発明のオリゴヌクレオチドが市販のSSRIの上記の好ましくない作用、即ち、作用の遅い発現及び有効性の限定を打ち消すために役立ち得るので、抗鬱療法分野における重要な発見である。それに加えて、本発明の高度に選択的なオリゴヌクレオチド構造を使用することにより、低用量の治療用オリゴヌクレオチドが、所望の効果を得るために投与される必要があるにすぎない。結果として、本発明の構造物は、シナプス領域に存在する異常な濃度のセロトニンと関連する疾患、特にセロトニンの不十分な伝達即ちシナプスにおけるセロトニン濃度の低下したレベルと関連する疾患、例えば鬱病関連障害などの治療に有用である。したがって、核酸がシナプス前部のセロトニン作動性のニューロンの成分を標的としていれば、コンジュゲートは、シナプス前部のセロトニン作動性のニューロンの活性低下が必要な疾患の治療に適するであろう。したがって、他の態様において、本発明は、i選択的作用剤が、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRI又はノルアドレナリン作動性及び特異的セロトニン作動性の抗鬱剤NASSAの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、セロトニン受容体1A型5-HT1AmRNA、セロトニン輸送体mRNA、TREK-1mRNA、セロトニン受容体1A型5-HT1Aポリペプチド、セロトニン輸送体ポリペプチド及びTREK-1ポリペプチドの群から選択される標的分子に特異的に結合することができる、鬱病関連障害の治療又は予防において使用するための本発明のコンジュゲートに関する。あるいは、本発明は、本発明のコンジュゲートをそれを必要とする対象者に投与することを含む鬱病関連障害の治療又は予防のための方法であって、i選択的作用剤が、選択的セロトニン再取り込み阻害剤SSRI、セロトニン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SNRI又はノルアドレナリン作動性及び特異的セロトニン作動性の抗鬱剤NASSAの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、セロトニン受容体1A型5-HT1AをコードするmRNA、セロトニン輸送体mRNA、TREK-1mRNA、セロトニン受容体1A型5-HT1Aポリペプチド、セロトニン輸送体ポリペプチド及びTREK-1ポリペプチドの群から選択される標的分子に特異的に結合することができる方法に関する。本明細書中で使用する発現鬱病関連障害とは、シナプス中の異常に低レベルのセロトニンを特徴として、AmericanPsychiatricAssociation,WashingtonDCにより出版されたDiagnosticandStatisticalManualofMentalDisorders--第4版DSM-IVにおいて定義された状態のことであり、限定されないが、大鬱病、長期の鬱病、難治性鬱病、気分変調症;絶望、落胆、ブルー、憂鬱症、自尊心喪失、罪悪間及び自責の念、対人接触からの逃避、及び食事及び睡眠の乱れなどの肉体症状により特徴づけられる抑鬱した気分の精神状態を含むが、これらに限定されない。好ましくは、鬱病関連障害は、:大鬱病、妄想-強迫性障害OCD、広汎性発達障害PDD、心的外傷後ストレス障害PTSD、不安障害、双極性障害、食餌障害及び慢性疼痛を含む群から選択される。それに加えて、作動性ニューロンに特異的な選択性試薬及び5-HT1A受容体を下方制御するオリゴヌクレオチドを含む本発明のコンジュゲートにより、前頭前野の皮質におけるセロトニン放出が、抗鬱剤単独により生じた50増加と比較してベースライン値の約150~200増加した図8参照。前に言及したように、伝統的抗鬱剤はセロトニンの伝達を改善するように設計されているが、シナプス前部の5-HT1A受容体の活性化に基づく効果は限られている。したがって、本発明の構造のオリゴヌクレオチドを用いれば、前記抗鬱剤の主な限界作用の遅い発現及び限られた有効性が克服される。その結果、抗鬱治療に対する正の応答を短期間内に得ることができ、市販の抗鬱剤即ちSSRIのみ用いる治療と比較して治療に応答する患者の数を改善することができる。したがって、他の態様において、本発明は、本発明によるコンジュゲートと抗鬱剤との投与を含む鬱病関連障害の治療方法に関する。本発明のオリゴヌクレオチド構造物は、現行の抗鬱剤SSRI、NARIs、MAOI、TCA等.とともに同時に投与することができる。5-HT1A自己受容体の発現を遮断するオリゴヌクレオチド配列の投与は、再取り込み遮断により生じた細胞外5-HTの増加の減弱を阻止することにより、これらの抗鬱剤の効果を改善することを可能にする。D.2.シヌクレインを標的とする核酸を含むコンジュゲート他の態様において本発明は、i選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤DRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、α-シヌクレインをコードするmRNA又はα-シヌクレインポリペプチドである標的分子に特異的に結合することができる、レヴィー小体の堆積と関連する疾患の治療又は予防のための本発明のコンジュゲートに関する。用語レヴィー小体の堆積と関連する疾患は、異常なニューロンのα-シヌクレイン封入体の形成を生じさせるα-シヌクレイン代謝の障害により特徴づけられる状態を指す。より特定のレヴィー小体障害には、パーキンソン病PD、レヴィー小体DLB型認知症、認知症を伴うPDPDD及び多系統萎縮症が含まれる。好ましくは、本発明のコンジュゲートは、鬱病及び/又は鬱病関連障害の治療のためにSSRIなどの市販の抗鬱剤と一緒に投与することができる。D.3.ノルエピネフリン輸送体を標的とする核酸を含むコンジュゲート背景技術の節で説明したように、中脳皮質DA伝達の増大は統合失調症の治療に有用である。NA輸送体NATは、NA及びDAに対して同様な親和性を示すので、NAT阻害剤は内側PFCmPFCの細胞外DA濃度を、尾状核及び核側坐核NAcと比較して優先的に増大させる。それ故、遺伝子座位青斑核LCニューロンからのNA軸索は、PFC中の細胞外DA濃度を、DAを取り込むか又は共放出するかのいずれかにより調節することに寄与し得る。他の態様において本発明は、i選択的作用剤が、ドーパミン再取り込み阻害剤、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、セロトニン-ノルアドレナリン再取り込み阻害剤及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドがノルエピネフリン輸送体又はノルエピネフリンポリペプチドをコードするmRNAである標的分子に特異的に結合することができる、ノルエピネフリン再取り込み阻害により媒介されるか又はそれに応答する疾患の治療又は予防のための本発明のコンジュゲートに関する。そのような病態の例として、神経障害性疼痛及び慢性疼痛などの疼痛障害、大鬱病などの抑鬱性障害、不安障害などの情緒障害、注意欠陥機能亢進障害、認知症などの認識障害、及びストレス尿失禁が挙げられる。D.4.ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼを標的とする核酸を含むコンジュゲート背景技術の節で説明したように、中脳皮質DA伝達の増強は、統合失調症の治療に有用であり得る。この増強はノルアドレナリン輸送体の阻害剤の使用により又は、別法として、ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼを阻害することにより達成することができる。この酵素は、ドーパミンからノルアドレナリンへの変換の原因となり、したがって、ノックダウンされると、その結果として、NAニューロン中のドーパミンレベルが増大するであろう。これは順送りでNAを含むノルアドレナリン作動性小胞を生じさせ、且つDAレベルが高くなるであろう。これは、脳中の認識及び記憶に関する機能を改善するNA保護帯におけるDAレベルを増大させる。したがって、他の態様において本発明は、ノルアドレナリン作動性突起中におけるドーパミン欠乏と関連する疾患の治療又は予防のための、i選択的作用剤が、ノルエピネフリン輸送体阻害剤SDNRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、ドーパミン-β-ヒドロキシラーゼをコードするmRNA又はドーパミン-β-ヒドロキシラーゼポリペプチドである標的分子に特異的に結合することができる、本発明のコンジュゲートに関する。本明細書中で使用するノルアドレナリン作動性突起中におけるドーパミン欠乏と関連する疾患という表現は、認知症、鬱病及び神経変性性疾患と関連する記憶及び認識過程と関連する。D.5.BAXを標的とする核酸を含むコンジュゲート他の態様において本発明は、ニューロンのアポトーシス及び細胞死と関連する疾患の治療又は予防のための、i選択的作用剤が、セロトニン-ドーパミン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SDNRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、BAXをコードするmRNA又はBAXポリペプチドである標的分子に特異的に結合することができる、本発明のコンジュゲートに関する。本明細書中で使用する用語ニューロンのアポトーシス及び細胞死と関連する疾患は、多くのヒトの神経障害のエンドポイントを指し、アルツハイマー病、パーキンソン病及びハンチントン病、脳卒中/外傷、多発性及び筋萎縮性側索硬化症を含むが、こられに限定されない。海馬及び皮質のニューロンのアポトーシス性の死はアルツハイマー病の症状の原因であり;神経伝達物質ドーパミンを使用する中脳ニューロンの死はパーキンソン病の根元であり;ハンチントン病は身体の運動を制御する線条体中のニューロンの死を伴い;及び下位運動ニューロンの死は筋萎縮性側索硬化症として顕在化する。それに加えて、脳虚血及び外傷は脳の小領域の壊死を誘発し、それは次に、壊死細胞によって放出された神経毒物質によるアポトーシスにより、ニューロンの細胞の損耗を脳のより広い領域に伝播する。アポトーシス性のニューロン細胞の損耗は、生理学的過程として加齢する脳においても観察される。D.6.タウを標的とする核酸を含むコンジュゲート他の態様において、本発明は、タウ関連疾患の治療又は予防における使用のための、i選択的作用剤が、セロトニン-ドーパミン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SDNRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、タウをコードするmRNA又はタウポリペプチドである標的分子に特異的に結合することができる、本発明のコンジュゲートに関する。本明細書中で使用する用語タウ関連疾患は、タウにおける異常と関連する疾患並びにタウ障害である疾患を指す。タウ関連疾患として、第17染色体遺伝子に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症FTDP-17、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、嗜銀性顆粒性疾患、並びにパーキンソン病、ダウン症候群、脳炎後パーキンソン症候群、筋緊張性ジストロフィー、ニーマンピックC病、ボクサー認知症、ブリントBlint病、プリオン疾患、筋萎縮性側索硬化症、グアムのパーキンソン症候群認知症複合、多発性硬化症、緑内障、糖尿病性網膜症、及び外傷性脳損傷;並びにハンチントン病、レヴィー小体型認知症、シャルコーマリートゥース病、遺伝性痙性対麻痺、及び多系統萎縮症が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において定義するタウ障害は、脳におけるタウタンパク質の繊維形態縺れと関連する神経変性性疾患を意味する。これらの疾患はADを含むが、しかしながら、他のタウ障害として、第17染色体遺伝子に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症FTDP-17、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、及び嗜銀性顆粒性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。D.7.ハンチンチンを標的とする核酸を含むコンジュゲート他の態様において本発明は、ハンチンチン関連疾患の治療又は予防のための、i選択的作用剤が、セロトニン-ドーパミン-ノルエピネフリン再取り込み阻害剤SDNRI及びノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤NDRIの群から選択され、及びiiオリゴヌクレオチドが、ハンチンチンをコードするmRNA又はハンチンチンポリペプチドである標的分子に特異的に結合することができる、本発明のコンジュゲートに関する。本明細書中で使用する用語ハンチンチン関連疾患は、変異ハンチンチンタンパク質により惹起された異常な配座又は凝集又は発現を指し、ハンチントン疾患及びそれらの変種を含む疾患を含むが、これらに限定されない。特定の障害又は状態の治療に有効と思われる本発明の治療剤の量は、障害又は状態の性質に依存するであろうが、治療剤の投与が十分確立された標準的臨床技法により決定することができる。剤形に使用すべき厳密な用量は、投与経路、及び疾患又は障害の重症度にも依存依存すると思われ、医師の判断及び患者の必要性により決定すべきである。脳内投与のための適当な用量範囲は、一般的に1から3000マイクロリットルの1回の注射容量で送達されるマイクロリットル当たり約103から1015感染性ユニットのウイルスベクターである。マイクロリットル当たりのベクター感染ユニットの添加量は、一般的に約10、50、100、200、500、1000、又は2000マイクロリットルで送達されるウイルスベクターの約104、105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013、1014感染性ユニットを含む。効果的な用量は、インビトロ又はインビボ試験システムから導かれる用量-応答曲線から外挿することができる。根治療法のために本発明のコンジュゲートを脳室内に投与する目的で、接続口を有する複数のカテーテルを所与の患者に埋め込むことができる。好ましい実施形態においては、脳又は脳半球当たり1つの入り口と多分数本のカテーテルのシステムがある。神経外科医により埋め込みが実施されたら、患者の神経内科医は、数週間又は数ヶ月にわたって繰り返されるコンジュゲートのボーラス注射からなる療法コースを、経時的治療効果をモニターしながら実施することができる。フルコースの療法のためには、デバイスを数ヶ月又は数年間埋め込んだままにしておくことができる。治療の有効性の確認後、接続口を場合により取り出してもよく、またカテーテルを封じて廃棄することができ、又は同様に取り出すこともできる。デバイス材料は、磁気共鳴撮像に干渉するべきでなく、また、いうまでもなく、低分子干渉RNA製剤は、接続口及びカテーテル材料及び任意の表面コーティングと適合性でなければならない。E.本発明のコンジュゲートの合成本発明のコンジュゲートは、典型的には有機合成における標準的手順を使用して合成される。当業者は、合成の厳密なステップは、合成しなければならないコンジュゲートの厳密な構造物に依存することを理解するであろう。例えば、コンジュゲートが選択的作用剤にその5’末端を通してコンジュゲート化された単一の核酸鎖を含むならば、その場合、合成は、通常下で説明するようにアミノ活性化オリゴヌクレオチドと反応性の活性化された選択性試薬とを接触させることにより実施される。コンジュゲートが2本鎖核酸を含むと、その場合、センス鎖及びアンチセンス鎖は標準的分子の生物学の手順を使用してインビトロで別々に合成され、アニールされる。典型的なコンジュゲートにおいては、第1の核酸鎖が選択的作用剤を担持して第2の核酸鎖は保護基を担持する。さらにより好ましい実施形態においては、選択的作用剤は第1の核酸鎖の5’末端とカップリングし及び/又は保護基は第2の核酸鎖の5’末端に付くが、選択的作用剤又は保護基の付加は核酸鎖の3’末端で実施することもできる。コンジュゲートの合成は、以下のように実施することができる:[1]選択的作用剤-[オリゴヌクレオチド]-3’という構造を有するコンジュゲートが、典型的には以下のステップを使用して合成される:i選択的作用剤を活性化するステップ。好ましくは、選択的作用剤中の活性基はスクシンイミド基又はアミノ基である;iiオリゴヌクレオチドをその5’末端で活性化するステップ。好ましくは、オリゴヌクレオチド中の活性基はアミノ基この場合、選択的作用剤はスクシンイミド基により活性化されている又はカルボキシル基この場合、選択的作用剤はアミン基により活性化されているである、及びiii活性化された選択的作用剤と活性化されたオリゴヌクレオチドとを2つの活性基間の反応に適した条件下で接触させるステップ。[2]保護基-[センス鎖]-3’3’-[アンチセンス鎖]-選択的作用剤という構造を有するコンジュゲートは、典型的には、以下のステップを使用して合成される:i選択的作用剤を活性化するステップ。好ましくは、選択的作用剤中の活性基はスクシンイミド又はアミノ基である;iiオリゴヌクレオチドをその5’末端で活性化するステップ。好ましくは、オリゴヌクレオチド中の活性基はアミノ基この場合、選択的作用剤はスクシンイミド基により活性化されている又はカルボキシル基この場合、選択的作用剤はアミン基により活性化されている;iii活性化された選択的作用剤と活性化されたオリゴヌクレオチドとを2つの活性基間の反応に適した条件下で接触させるステップ;iv固定化したアンチセンス鎖に保護基を付加するステップ。このステップは好ましくは反応性基がアセチル化又はベンジル化フラノース基、2-シアノエチル化ホスホジエステル連結及びFMOC環外アミノ基により封鎖されているオリゴヌクレオチドを使用して実施される。vセンス鎖及びアンチセンス鎖をアニーリングするステップ。E.1.核酸と5’末端に付けたSSRIとを含むコンジュゲートの合成本発明のコンジュゲートは、当業者により知られた技法を使用して調製することができる。コンジュゲートの合成は、官能基の選択的保護及び脱保護を含むことがある。適当な保護基は当業者にとって周知のことである。例えば、有機化学における保護基の総説は、Wuts,P.G.M.及びGreeneT.W.によりProtectingGroupsinOrganicSynthesis4thEd.Wiley-Interscienceで、及びKocienskiP.J.によりProtectingGroups3rdEd.GeorgThiemeVerlagで提供されている。本発明の関係においては、以下の用語は下で詳細に説明する意味を有する:用語C1~C6アルキルは、不飽和を含まず、単結合により該分子の他の部分に結びついた1から6個の、好ましくは1から3個のC1~C3アルキル炭素原子を有する炭素原子と水素原子とからなる線状又は分岐炭化水素基を指す。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、t-ブチル、ペンチル及びヘキシルなどのアルキル基が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくはアルキルはメチルを指す。用語ハロゲンは、ブロモ、クロロ、ヨード又はフルオロを指す。用語ハロアルキルは、少なくとも1個の水素原子がハロゲンにより置き換えられた上で定義したアルキル基を指す。ハロアルキル基の例として、CF3、CCl3、CHF2、CF2CF3が挙げられるがこれらに限定されない。好ましくはハロアルキルはCF3を指す。用語C6~C10アリールは、例えばフェニル、ナフチル及びジフェニルを含む炭素-炭素結合により結合したか又は融合した1個又は2個の芳香族核を含む6から10個の間の炭素原子を有する芳香族基を指す。好ましくはアリールはフェニルを指す。用語ヘテロシクリルは、炭素原子と窒素、酸素、及びイオウからなる群から選択される1から5個のヘテロ原子とからなり、部分的に又は完全に飽和していても芳香族ヘテロアリールであってもよい安定な3員~10員の環基、好ましくは5又は6員環を指す。本発明の目的に対して、複素環は、縮合環系を含んでもよい単環式、二環式又は三環式環系であることができる。特定の実施形態において、ヘテロシクリル基はスクシンイミドである。上記の式Iにより表される本発明の化合物は、キラル中心の存在に依存する立体異性体を含むことができる。単一異性体、エナンチオマー又はジアステレオ異性体及びそれらの混合物は本発明の範囲内に入る。特に断らない限り、本発明において使用する化合物は、1つ又は複数の同位体に富む原子存在のみが異なる化合物を含むことを意図される。例えば、水素の重水素又はトリチウムによる置換、又は炭素の13C又は14Cに富む炭素による置換又は15Nに富む窒素による置換を除く本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。i.アミノ誘導体化された核酸及び活性化されたセルトラリン誘導体を使用する合成第1の実施形態において、本発明によるコンジュゲートは、アミノ誘導体化された核酸を活性化されたセルトラリンの誘導体形又はそれらのアナログにカップリングすることにより得ることができ、その場合、選択的作用剤の活性化された該誘導体は、式IIの化合物である:式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbは、C1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;R6はカルボニル活性化基であり;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、Rc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは、水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;n及びpは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択される。用語カルボニル活性化基は、カルボニルを求核付加し易くするカルボニルの置換基を指す。特定の実施形態において、それは、カルボニル基と一緒になって、酸無水物、酸ハロゲン化物又はエステル基を形成する。好ましい実施形態において、カルボニル活性化基は、ハロゲン、-OCOR、-OR’、-SR’’から選択され;R、R’及びR’’はC1~C6アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールから独立に選択される。特定の実施形態において、R6はスクシンイミドオキシ基である。それ故、他の実施形態において、本発明によるコンジュゲートは、アミノ誘導体化された核酸をセルトラリンの活性化された誘導体形又はそれらのアナログにカップリングすることにより得ることができ、該選択的作用剤の活性化された誘導体は、式IIIの化合物である:式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbは、C1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、ここでRc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは、水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;n及びpは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択される。特定の実施形態によれば、式IIIの活性化された化合物は化合物1である:一実施形態によれば、式Iの化合物は、aないしdを含む一連のステップにより調製することができる:a式IVの化合物と式Vのアシル化剤式中、pは上で定義した通りであり、Zはハロゲン又はOHであり、及びPGはアミン保護基であるとを反応させて、式VIの化合物を得るステップ;アミンのために一般的に使用される保護基として、tert-ブチル、ベンジル、2,2,2-トリクロロエチル、2-トリメチルシリルエチル、9H-フルオレニルメチルFmoc、アリル又はニトロフェニルカルバメートなどのカルバメート;ホルムアミド、アセトアミド、トリフルオロアセトアミド、スルホンアミド、トリフルオロメタンスルホニルアミド又はtert-ブチルスルホニルアミドなどのアミド;及びp-メトキシフェニル、ベンジル、p-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、ジメトキシトリチル又はモノメトキシトリチルアミンなどのアリール又はアリールアルキルアミンが挙げられる。特定の実施形態において、式Vのアシル化剤は9H-フルオレニルメトキシカルボニル-6-アミノヘキサン酸である。順送りで式IVの化合物は、例えば米国特許第6455736号に記載されたようにして調製することができる。特に、式IVの化合物がセルトラリンであれば、それは、対応するクロロハイドレート市販で入手可能から、アルカリ又はアルカリ土類炭酸塩又は水酸化物、アンモニア又はアミン、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、ピペリジン、モルホリンなどの有機又は無機塩基を含む適当な塩基で処理することにより得ることができるb式IVの化合物中のアミノ保護基を脱保護して式VIIの化合物を得るステップ:適当な脱保護条件は、例えば、ProtectingGroupsinOrganicSynthesisWuts,P.G.M.andGreeneT.W.,4thEd.Wiley-Interscience及びProtectingGroupsKocienskiP.J.,3rdEd.GeorgThiemeVerlagで当業者に知られている。特定の実施形態において、保護基は、ピペリジン、モルホリン、ジシクロヘキシルアミン、ジイソプロピルエチルアミン又はジメチルアミノピリジンなどのアミンの存在下で、好ましくはピペリジンの存在下で除去されるc式VIIの化合物を式VIII又はIXのアシル化剤と反応させて、式中、nは上で定義した通りであり、Zはハロゲン又はOHである、式Xの化合物を得るステップ:特定の実施形態において、式VIIのアシル化剤はコハク酸酸無水物であるd式Xの化合物をカルボニル活性化基で処理するステップ。用語カルボニル活性化基は、カルボン酸基のカルボニルを例えば酸無水物、カルボン酸ハロゲン化物、カルボジイミド、ハロゲン化剤、ジスルフィドなど求核付加をより受け易いものに変換する化合物を指す。特定の実施形態において、カルボニル活性化基は、ハロゲン化剤、ROCOCOR、RCOハロゲン、R’OH、R’’SH、R’’SSR’’から選択され;R、R’及びR’’はC1~C6アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールから独立に選択される。特定の実施形態において、カルボニル活性化基はN-ヒドロキシ-スクシンイミドである。この場合、反応は、好ましくはさらなるカルボニル活性化基の存在下で実施される。それ故、特定の実施形態において、ステップdは、さらなるカルボニル活性化基の存在下で式Xの化合物をN-ヒドロキシスクシンイミドで処理することを含む。この過程に適したカルボニル活性化基として、ジシクロヘキシルカルボジイミドDCC及びジイソプロピルカルボジイミドDICなどのカルボジイミド、並びに1-ヒドロキシ-ベンゾトリアゾールHOBt及び1-ヒドロキシ-7-アザ-ベンゾトリアゾールHOAtなどのトリアゾールが挙げられる。好ましい実施形態において、式VIの化合物は、ジイソプロピルカルボジイミドの存在下でN-ヒドロキシスクシンイミドと反応して式IIの活性化された誘導体を生ずる。他の態様によれば、本発明は、式VIの中間体を指向する:式中、R1~R5、X、Y、W、p及びPGは上で定義した通りである。好ましい実施形態において、R1はメチルであり、R2~R5は水素であり、X及びYは塩化物であり、Wは水素であり、pが5であり、及びPGは9H-フルオレニルメトキシカルボニルである。より好ましくは、式VIの化合物は化合物2である。他の態様によれば、本発明は、式VIIの中間体を指向する。式中、R1~R5、X、Y、W及びpは上で定義した通りである。好ましい実施形態において、R1はメチルであり、R2~R5は水素であり、X及びYは塩化物であり、Wは水素であり及びpは5である。より好ましくは、式Vの化合物は化合物3である。他の態様によれば、本発明は式Xの中間体を指向する。式中、R1~R5、X、Y、W、p及びnは、上で定義した通りである。好ましい実施形態において、R1はメチルであり、R2~R5水素であり、X及びYは塩化物であり、Wは水素であり、pが5であり及びnは2である。より好ましくは、式VIIIの化合物は化合物4である。他の態様によれば、本発明は式IIの中間体を指向する。式中、R1~R6、X、Y、W、p及びnは上で定義した通りである。他の態様によれば、本発明は式IIIの中間体を指向する。式中、R1~R5、X、Y、W、p及びnは上で定義した通りである。好ましい実施形態において、R1はメチルであり、R2~R5は水素であり、X及びYは塩化物であり、Wは水素であり、pが5であり及びnは2である。より好ましくは、式IIの化合物は化合物1である。選択的作用剤に付けようとするsiRNA鎖は、M.J.Gait編集のOligonucleotidesynthesis,apracticalapproach.IRLPress1985に開示された方法にしたがって、固体支持体上で段階的固相合成により形成することができる。選択性リガンドをコンジュゲート化するためには、オリゴヌクレオチドをアミノ誘導体にする必要がある。これは、5’又は3’末端で行うことができる。好ましい実施形態において、選択性リガンドは5’末端に付けられる。一実施形態によれば、式Iのコンジュゲートは、上記の式II又はIIIの化合物と式XIIのアミノ改変オリゴヌクレオチドとを反応させることにより調製することができる。アミノリンカー改変剤を使用してオリゴヌクレオチドを活性化する一般的手順は下記のスキームによるであろう。式XIIの化合物は、オリゴヌクレオチドの5’-OH基を式XIIIのアミノ改変剤と反応させることにより調製することができる:式中、mは上で定義した通りであり、PGはアミン保護基である。アミンのために普通使用される保護基として、tert-ブチル、ベンジル、2,2,2-トリクロロエチル、2-トリメチルシリルエチル、9H-フルオレニルメチルFmoc;アリル又はニトロフェニルカルバメートなどのカルバメート;ホルムアミド、アセトアミド、トリフルオロアセトアミド、スルホンアミド、トリフルオロメタンスルホニルアミド又はtert-ブチルスルホニルアミドなどのアミド;及びp-メトキシフェニル、ベンジル、p-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、ジメトキシトリチル又はモノメトキシトリチルアミンなどのアリール又はアリールアルキルアミンが挙げられる。特定の実施形態において、式XIIIのアミノリンカーは、6-トリフルオロアセチルアミノヘキシル-[2-シアノエチル-N,N-ジイソプロピル]-ホスホルアミダイト5’-TFA-C6-アミノ改変剤-CEP又は6-4-モノメトキシトリチルアミノヘキシル-[2-シアノエチル-N,N-ジイソプロピル]-ホスホルアミダイト5’-MMT-C6-アミノ改変剤-CEPである。オリゴヌクレオチドの5’-OH基をアミノリンカーにカップリング後、アミン保護基が知られた条件下で除去される。例えば、TFA保護アミノ誘導体は、アンモニア処理により脱保護することができるが、それに対してMMT保護アミノ誘導体は、酢酸、クロロ酢酸、ジクロロ酢酸又はトリフルオロ酢酸で処理することにより脱保護することができる。アミノ改変オリゴヌクレオチド合成の一般的方法:i無水アセトニトリル中のリンカー/改変剤分子真空乾燥の溶液市販のアミダイトの大部分で0.1M溶液が使用されるを調製して合成装置中の追加の貯蔵器に入れるY;ii必要とされるオリゴヌクレオチド配列の合成開始時に、Yの塩基を5’末端に付加する。これがYの貯蔵器からのリンカー/改変剤分子がオリゴヌクレオチド配列の末端にカップリングすることを可能にするであろう。iii適当なカップリングサイクルを使用する合成を開始する。同じカップリングサイクルが、リンカー/改変剤分子カップリングを実施するために使用されるであろう。ivオリゴヌクレオチド合成終了時に、支持体を洗浄して最後に支持体をガスで乾燥する。v固体支持体をカラムから取り出してスクリューキャップ付きバイアル中に移し、2ステップの脱保護を完了する。アミノ改変オリゴヌクレオチドは、さらに選択的作用剤と接合するために脱保護しなければならない。この目的のために、オリゴヌクレオチド中の全ての残余の保護基を以下のようにして除去する。20v/vのメチルアミン水溶液40w/v及び80v/vの飽和アンモニア溶液30~32w/vのNH3を含有するを含有する500μlの混合物をオリゴヌクレオチド200nmol規模の入ったエッペンドルフチューブに加える。該チューブを密閉して45分間65°Cの温度に加熱した。この手順によりヌクレオチドのリン原子における保護基フラノースのアセチル化又はベンゾイル化及びホスホジエステル連結の2-シアノエチル化及び環外アミノ基の保護基Bz、Ac、IBuが除去される。次に混合物を冷却して濾過し、上清を乾燥した。残留ペレットを1Mトリエチルアミン-HFと3時間65°Cで反応させて保護基をヌクレオチド2’-t-ブチルジメチルシリル-TBDMSの2’で切断した。最後に、生じた溶液をセファデックスカラムで脱塩すると、アミノ改変-5’-オリゴヌクレオチドが残った。アミノ改変剤リンカーを3’OH末端に組み込む場合;対応するポリマー支持体CPGボールを使用すべきで、合成スキームは以下の流れ図に対応するであろう。加水分解は水酸化アンモニウム又はベックマン試薬を使用することにより行うことができるメチルアミン:水酸化アンモニウム。両方の場合とも、脱保護ステップは同一で、そのような場合における接合手法も同じであるが有効性の程度は異なるであろう。大抵の場合、5’-アミノ誘導体化を用いる方がよい結果が得られる。好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドは、配列番号:5~12の群から選択される配列を含むことができる。アミノ基が活性化されたオリゴヌクレオチドは、次に式II又はIIIの選択的作用剤の上で定義した活性化された誘導体と反応させられる。構造式中、R1~R5、X、Y、W、p及びnは上で定義した通りであり、mは2から10であるを有するコンジュゲートが得られる。好ましい実施形態において、コンジュゲートは、構造を有する。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、2価又は3価のホスホルアミドと予め反応させてある。このように、2つ又は3つのカップリング位置を有する化合物を得ることができて、その結果、選択的作用剤の2つの又は3つの分子がオリゴヌクレオチドとカップリングすることができる。選択的作用剤の前記2つの又は3つの分子は、同じであっても異なっていてもよい。特定の実施形態において、同じ選択的作用剤の2つ又は3つの分子がオリゴヌクレオチドにカップリングされる。他の実施形態においては、2つ又は3つの異なった選択的作用剤がオリゴヌクレオチドにカップリングされる。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは2価又は3価のホスホルアミダイトと反応して式XX又はXXIの化合物を生ずる:式中、PG、PG’’及びPG’’’は、H及びヒドロキシ保護基から独立に選択され;r、r’、r’’、s、s’、s’’、t及びuは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から独立に選択され;vは0及び1から独立に選択され;及びX1、X2及びX3は、CH2、O、S、NH、CO、COO及びCONHから独立に選択される。ヒドロキシ保護基、並びに適当な保護及び脱保護条件は、当業者には、例えばProtectingGroupsinOrganicSynthesisWuts,P.G.M.andGreeneT.W.,4thEd.Wiley-Interscience及びProtectingGroupsKocienskiP.J.,3rdEd.GeorgThiemeVerlagで知られている。特定の実施形態において、ヒドロキシ保護基は、エーテル、シリルエーテル、エステル、スルホネート、スルフェネート、スルフィネート、カーボネート及びカルバメートから選択される。好ましい実施形態においては、ヒドロキシル保護基は、アセチル,ベンゾイル、ベンジル、メトキシエトキシメチルエーテルMEM、ジメトキシトリチルDMT、メトキシメチルエーテルMOM、メトキシトリチルMMT、p-メトキシベンジルエーテルPMB、メチルチオメチルエーテル、ピバロイルPiv、テトラヒドロピラニルTHP、トリチルTr、9H-フルオレニルメチルFmoc、トリメチルシリルTMS、tert-ブチルジメチルシリルTBDMS、tert-ブチルジメチルシリルオキシメチルTOM、及びトリイソプロピルシリルTIPSエーテルから選択される。好ましくは、PG、PG’及びPG’’は、H、DMT及びFmocから独立に選択される。特定の実施形態において、式XX又はXXIの化合物中のヒドロキシル保護基は異なり、その結果それらは、選択的に脱保護されて、所望であれば、異なった分子とカップリングされ得る。特定の実施形態は、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり、X1及びX2がCONHを表し、及びPG1及びPG2が、H、DMT及びFmocから独立に選択される式XXの化合物を指向している。他の実施形態においては、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり、X1及びX2はCH2を表し、PG1及びPG2はH及びDMTから独立に選択される式XXの化合物に関係する。ある実施形態は、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり、X1、X2及びX3がOを表し、及びPG1、PG2及びPG3がH及びDMTから独立に選択される式XXIの化合物を指向する。他の実施形態は、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり、X1、X2及びX3がOを表し、PG1、PG2及びPG3がH及びDMTから独立に選択される式XXIの化合物に関係する。式XX及びXXIの化合物は次に脱保護され、必要ならば、式XIIIのアミノ改変剤と反応して:式中、m及びPGは上で定義した通りであるそれぞれ式XXII又はXXIIIの化合物を生ずる:式中、m、m’、m’’、r、r’、r’’、s、s’、s’’、t、u、v、X1、X2及びX3は前に定義した通りである。式XXII及びXXIIIの化合物は、式IIの化合物と、好ましくは式IIIの化合物とさらに反応することができて、それぞれコンジュゲートXXIV及びXXVを生ずる:式中、m、m’、m’’、n、n’、n’’、p、p’、p’’、r、r’、r’’、s、s’、s’’、t、u、v、X1、X2、X3、R1~R5、W、X、Y及びZは、前に記載した通りである。ある特定の実施形態は上で定義した式XXIVの化合物を指向する。他の実施形態は、式XXIVの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p及びp’が5であり、n及びn’が2であり、m及びm’が6であり、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり並びにX及びX’がCONHを表すを指向する。他の実施形態は、式XXIVの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p及びp’が5であり、n及びn’が2であり、m及びm’が6であり、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり、並びにX及びX’がCH2を表すを指向する。ある特定の実施形態は上で定義した式XXVの化合物を指向する。ある特定の実施形態は、式XXVの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p、p’及びp’’が5であり、n、n’及びn’’が2であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。他の実施形態は、式XXVの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p、p’及びp’’が5であり、n、n’及びn’’が2であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。ii.カルボキシル誘導体化された核酸及びアミノ誘導体化されたセルトラリンを使用しする合成他の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、アミノ誘導体化された選択的作用剤とカルボキシル誘導体化されたオリゴヌクレオチドとの接合により得られる。特定の実施形態において、選択的作用剤の活性化された誘導体は式VIIの化合物である:式中、R1、R2、R3、R4及びR5は、水素及びC1~C6アルキルから独立に選択され;X及びYは、水素、ハロゲン、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、ORa及びSRbから独立に選択され、ここでRa及びRbは、C1~C3アルキル及びC6~C10アリールから独立に選択され;Wは、水素、ハロゲン、CN,NO2、C1~C3アルキル、C1~C3ハロアルキル、NRcRd、SO2NReRf、NRgSO2Rh、CO2Riから選択され、ここでRc、Rd、Re、Rf、Rg、Rh及びRiは、水素及びC1~C3アルキルから独立に選択され;pは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12及び13から選択される。ある特定の実施形態によれば、活性化された式IIの化合物は上記の化合物3である。式VIIの化合物は、i式IVの化合物と式Vのアシル化剤:式中、pは上で定義した通りであり、Zはハロゲン又はOHであり、及びPGはアミン保護基であるとを反応させて式VIの化合物を得るステップアミンのために通常使用される保護基として、tert-ブチル、ベンジル、2,2,2-トリクロロエチル、2-トリメチルシリルエチル、9H-フルオレニルメチルFmoc、アリル又はニトロフェニルカルバメートなどのカルバメート;ホルムアミド、アセトアミド、トリフルオロアセトアミド、スルホンアミド、トリフルオロメタンスルホニルアミド又はtert-ブチルスルホニルアミドなどのアミド;及び、p-メトキシフェニル、ベンジル、p-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、ジメトキシトリチル又はモノメトキシトリチルアミンなどのアリール又はアリールアルキルアミンが挙げられる。特定の実施形態において、式VIIのアシル化剤は9H-フルオレニルメトキシカルボニル-6-アミノヘキサン酸である。順送りで式IIIの化合物は例えば上記のようにして調製することができると;ii式VIの化合物中のアミノ保護基を脱保護して式VIIの化合物を得るステップ適当な脱保護条件は、例えばProtectingGroupsinOrganicSynthesisWuts,P.G.M.andGreeneT.W.,4thEd.Wiley-Interscience及びProtectingGroupsKocienskiP.J.,3rdEd.GeorgThiemeVerlagで当業者に知られている。特定の実施形態において、保護基は、ピペリジン、モルホリン、ジシクロヘキシルアミン、ジイソプロピルエチルアミン又はジメチルアミノピリジンなどのアミンの存在下で、好ましくはピペリジンの存在下で除去されると:を含む一連のステップにより上記のようにして調製することができる。好ましい実施形態において、アミノ改変選択的作用剤は化合物3に対応する。選択的作用剤に付けようとするsiRNA鎖は、M.J.Gait.編集のOligonucleotidesynthesis,apracticalapproachIRLPress-1985に開示された方法にしたがって固体支持体上の段階的固相合成により形成される。選択性リガンドをコンジュゲート化するために、オリゴヌクレオチドをカルボキシ誘導体にする必要がある。これは5’又は3’末端で行うことができる。好ましい実施形態において、選択性リガンドは5’末端に付けられる。一実施形態によれば、式XIVのコンジュゲートは、上記の式VIIの化合物と式XV:のカルボキシ改変オリゴヌクレオチドとを反応させることにより調製することができる。カルボキシルリンカー改変剤を使用してオリゴヌクレオチドを活性化する一般的手順は、典型的には下記のスキームにしたがうであろう。カルボキシ改変オリゴヌクレオチドを合成する一般的方法:i無水アセトニトリル中で改変剤分子溶液を調製して、それを追加の貯蔵器に入れるY。ii必要とされるオリゴヌクレオチド配列の合成開始時に、Y塩基を5’末端に付加する。これがY貯蔵器からのリンカー/改変剤分子がオリゴヌクレオチド配列の末端にカップリングすることを可能にするであろう。iii適当なカップリングサイクルを使用する合成を開始する。同じカップリングサイクルが、リンカー/改変剤分子カップリングを実施するために使用されるであろう。ivオリゴヌクレオチド合成終了時に、支持体を洗浄して最後に支持体をガスで乾燥する。v固体支持体をカラムから取り出してスクリューキャップ付きバイアル中に移し、2ステップの脱保護を完了する。カルボキシ改変オリゴヌクレオチドは、選択的作用剤とさらにコンジュゲーションさせるために脱保護すべきである。この目的のために、オリゴヌクレオチド中の全ての残余の保護基を以下のようにして除去する。20v/vのメチルアミン水溶液40w/v及び80v/vの飽和アンモニア溶液、30~32w/vのNH3を含有するを含有する500μlの混合物をオリゴヌクレオチド200nmol規模の入ったエッペンドルフチューブに加える。該チューブを密閉して45分間65°Cの温度に加熱した。この手順によりヌクレオチドのリン原子における保護基フラノースのアセチル化又はベンゾイル化及びホスホジエステル連結の2-シアノエチル化及び環外アミノ基の保護基Bz、Ac、IBuが排除される。次に混合物を冷却して濾過し、上清を乾燥した。残留ペレットを1Mトリエチルアミン-HFと3時間65°Cで反応させて保護基をヌクレオチド2’-t-ブチルジメチルシリル-TBDMSの2’で切断した。最後に、生じた溶液をセファデックスカラムで脱塩すると、カルボキシ改変-5’-オリゴヌクレオチドが残った。好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドは、配列番号:5~12の群からから選択される配列を含むことができる。次にカルボキシル活性化オリゴヌクレオチドを、上で定義した式VIIの選択的作用剤の活性化された誘導体と反応させる。一般式:を有する化合物が得られる。特定の実施形態において、該コンジュゲートは、構造を有する。他の特定の実施形態において、コンジュゲートは構造を有する。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは最初に2価又は3価のホスホルアミダイトと反応して前に定義した式XX又はXXIの化合物を生ずる。式XX及びXXIの化合物は、次に必要があれば脱保護し、カルボキシ改変剤と反応させて、それぞれ式XXVI又はXXVIIの化合物を得る:式中、m、m’、m’’、r、r’、r’’、s、s’、s’’、t、u、v、X1、X2及びX3は前に定義した通りである。式XXVI及びXXVIIの化合物は、式VIIの化合物とさらに反応させて、それぞれコンジュゲートXXVIII及びXXIXを得ることができる:XXIX式中、m、m’、m’’、p、p’、p’’、r、r’、r’’、s、s’、s’’、t、u、v、X1、X2、X3、R1~R5、W、X、Y及びZは前に記載した通りである。ある特定の実施形態は上で定義した式XXVIIIの化合物を指向する。ある特定の実施形態は、式XXVIIIの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が6であり、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり、並びにX及びX’がCONHを表すを指向する。他の実施形態は、式XXVIIIの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が6であり、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり並びにX及びX’がCH2を表すを指向する。ある特定の実施形態は、式XXVIIIの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が9であり、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり並びにX及びX’がCONHを表すを指向する。他の実施形態は、式XXVIIIの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が9であり、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり並びにX及びX’がCH2を表すを指向する。ある特定の実施形態は、上で定義した式XXIXの化合物を指向する。ある特定の実施形態は、式XXIXの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。他の実施形態は、式XXIXの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり、X、X’及びX’’がOを表すを指向する。ある特定の実施形態は、式XXIXの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が9であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。他の実施形態は、式XXIXの化合物式中、選択的作用剤がセルトラリンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が9であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり、X、X’及びX’’がOを表すを指向する。iii.カルボキシル誘導体化された核酸及びアミノ誘導体化されたノミフェンシンを使用する合成ノミフェンシン及びそれらのアナログは、カルボキシ改変オリゴヌクレオチドに対するカップリングに原理的に使用され得るアミノ基を含有する。しかしながら、アミノ基が芳香環に直接にカップリングされている結果、反応性が減少して立体障害が生ずる。そのようなわけで、式XVI式中、R1は、水素、アルキルC1~C6基又はベンジル基を表し、R2は、水素、メチル、塩素又はフッ素基を表し、R2’は、水素、メチル、メトキシ、ヒドロキシル又はハロゲン原子を表し、R3及びR4は、水素、アルキルC1~C6基を表し、R5は、5-又は6-位における水素、塩素又はメトキシ基を表し、及びPは2~6であるを有するアミノ改変ノミフェンシン又はそれらの変種が調製される。特定の実施形態において、選択的作用剤の活性化された誘導体は、R1、R2、R2’、R3、及びR5がHであり、R4がメチルである化合物5である。一実施形態によれば、式XVIの化合物は:a式XVIIの化合物と式V式中、pは上で定義した通りであり、Zはハロゲン又はOHであり、及びPGはアミン保護基であるのアシル化剤とを反応させて、:式XVIIIの化合物を得るステップアミンのために通常使用される保護基として、tert-ブチル、ベンジル、2,2,2-トリクロロエチル、2-トリメチルシリルエチル、9H-フルオレニルメチルFmoc、アリル又はニトロフェニルカルバメートなどのカルバメート;ホルムアミド、アセトアミド、トリフルオロアセトアミド、スルホンアミド、トリフルオロメタンスルホニルアミド又はtert-ブチルスルホニルアミドなどのアミド;及びp-メトキシフェニル、ベンジル、p-メトキシベンジル、3,4-ジメトキシベンジル、ジメトキシトリチル又はモノメトキシトリチルアミンなどのアリール又はアリールアルキルアミンが挙げられる。特定の実施形態において、式Vのアシル化剤は9H-フルオレニルメトキシカルボニル-6-アミノヘキサン酸である。式XVIIの化合物は、順送りで例えば米国特許第4185105号に記載されたようにして調製することができる。特に、式IIIの化合物がノミフェンシンである場合、それは、対応するクロロハイドレート市販で入手可能から、アルカリ又はアルカリ土類の炭酸塩又は水酸化物、アンモニア又は、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、ピペリジン、モルホリンなどのアミンなどの有機又は無機塩基を含む適当な塩基で処理することにより得ることができると;b式XVIIIの化合物中のアミノ保護基を脱保護して式XIX:適当な脱保護条件は、例えばProtectingGroupsinOrganicSynthesisWuts,P.G.M.andGreeneT.W.,4thEd.Wiley-Interscience及びProtectingGroupsKocienskiP.J.,第3Ed.GeorgThiemeVerlagで当業者に知られている。特定の実施形態において、保護基は、ピペリジン、モルホリン、ジシクロヘキシルアミン、ジイソプロピルエチルアミン又はジメチルアミノピリジンなどのアミンの存在下で、好ましくはピペリジンの存在下で除去されるの化合物を得るステップと;を含む一連のステップにより調製することができる。他の態様によれば、本発明は式XVIIIの中間体式中、R1~R5、X、Y、W、p及びPGは上で定義した通りである。好ましい実施形態において、R1はメチルであり、R2~R5は水素であり、X及びYは塩化物であり、Wは水素であり、pが5であり、PGは9H-フルオレニルメトキシカルボニルであるを指向する。より好ましくは、式XVIIIの化合物は化合物8である。選択的作用剤に結合すべき核酸は、M.J.Gait編集のOligonucleotidesynthesis,apracticalapproach.IRLPress-1985に開示された方法にしたがって固体支持体上で段階的固相合成により形成することができる。選択性リガンドをコンジュゲート化するためには、オリゴヌクレオチドをカルボキシ誘導体にする必要がある。このことは、5’又は3’末端で行うことができる。好ましい実施形態において、選択性リガンドは5’末端に付けられる。一実施形態により、式XVIのコンジュゲートは、上記の式XIXの化合物と式XVのアミノ改変オリゴヌクレオチド:式中、mは2から6であるとを反応させることにより調製することができる。カルボキシ基を使用するオリゴヌクレオチドの活性化は、上で説明したようにして行うことができる。好ましい実施形態において、ノミフェンシン又はその誘導体にカップリングされたオリゴヌクレオチドは:iα-シヌクレインに相補的な核酸、好ましくは、配列番号:16~36のいずれかから選択された配列を含む核酸、iiBAXに相補的な核酸、好ましくは配列番号:38の配列を含む核酸、iiiタウに相補的な核酸、ivNETに相補的な核酸、及びvハンチンチンに相補的な核酸、好ましくは配列番号:39~55のいずれかから選択される配列を含む核酸からなる群から選択される。次にカルボキシル活性化オリゴヌクレオチドを上で定義した式XVIの選択的作用剤の活性化された誘導体と反応させて、一般的構造:の化合物を得る。好ましい実施形態において、コンジュゲートは、構造を有する。他の好ましい実施形態において、コンジュゲートは、構造を有する。特定の実施形態において、式XVIの化合物を、式XXVI又はXXVIIの化合物と反応させて、それぞれコンジュゲートXXX及びXXXIを得る:式中、m、m’、m’’、p、p’、p’’、r、r’、r’’、s、s’、s’’、t、u、v、X1、X2、X3及びR1~R5は前に記載した通りである。ある特定の実施形態は、上で定義した式XXXの化合物を指向する。ある特定の実施形態は、式XXXの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が6であり、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり並びにX及びX’がCONHを表すを指向する。他の実施形態は、式XXVIIIの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が6であり、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり並びにX及びX’がCH2を表すを指向する。ある特定の実施形態は、式XXXの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が9であり、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり、並びにX及びX’がCONHを表すを指向する。他の実施形態は、式XXVIIIの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p及びp’が5であり、m及びm’が9であり、rが2であり、r’が0であり、sが1であり、s’が0であり、t及びvが0であり、並びにX及びX’がCH2を表すを指向する。ある特定の実施形態は、上で定義した式XXXIの化合物を指向する。ある特定の実施形態は、式XXXIの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり、並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。他の実施形態は、式XXXIの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が6であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり、並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。ある特定の実施形態は、式XXXIの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が9であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、vが0であり、並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。他の実施形態は、式XXXIの化合物式中、選択的作用剤がノミフェンシンであり、p、p’及びp’’が5であり、m、m’及びm’’が9であり、r、r’及びr’’が3であり、s、s’及びs’’が1であり、tが1であり、uが3であり、vが1であり、並びにX、X’及びX’’がOを表すを指向する。iv.カルボキシル誘導体化された核酸、二官能性リンカー、アミノ誘導体化されたノミフェンシン及びアミノ誘導体化されたセルトラリンを使用して二重に誘導体化されたオリゴヌクレオチドの合成式XX及びXXIの化合物中のヒドロキシ保護基PG、PG’及びPG’’は、同じであっても異なっていてもよい。特定の実施形態において、式XXの化合物中のPG及びPG’は異なり、その結果それらは独立に脱保護することができて、式XXの化合物は所望であれば2つの異なった活性化選択的作用剤とカップリングすることができる。特定の実施形態において、PG及びPG’が異なる式XXの化合物は、カルボキシ改変剤と、次に式VIIの化合物と順に反応させ、一方他のカップリング位置はカルボキシ改変剤と、次に式XVIの化合物と反応させて、式XXXIIのコンジュゲート:式中、m、m’、p、p’、r、r’、s、s’、t、u、v、X1、X2並びにR1~R5、X、Y及びZは、前に記載した通りであるを得る。好ましい実施形態においては、PGとPG’とが異なる式XXの化合物を、カルボキシ改変剤及び次に式10の化合物と順次反応させ、一方他のカップリング位置はカルボキシ改変剤及び次に式11の化合物と反応させて、式XXXIIaのコンジュゲート:式中、r、r’、s、s’、t、u、v、X1及びX2は前に記載した通りであるを得る。特定の実施形態においては、式XXXII又はXXXIIaの化合物中で、r及びr’が4であり、s及びs’が1であり、t及びvが0であり、並びにX及びX’がCONHを表す。本発明の特定の実施形態において、PGとPG’とが異なる式XXの化合物は式XXaの化合物:である。好ましい実施形態において、式XXXIIaの化合物は下記の式:を有する。特定の実施形態において、本発明は、式XXXII及びXXXIIaの化合物式中、m、m’、p、p’、r、r’、s、s’、t、u、v、X1、X2並びにR1~R5、X、Y及びZは前に記載した通りであるを指向する。好ましい実施形態において、本発明は、上で定義した化合物12を指向する。E.2.核酸及び5’末端に付いた保護基を含むコンジュゲートの合成合成は第1鎖に保護基を付加することにより開始する。保護基が複数の部分により形成される場合、保護基の一部を形成する異なった部分は、ヌクレオチドを既に存在している核酸に付加するときに使用されるものと同様な手法を使用して核酸に付加される。即ち、遊離ヒドロキシ基の反応性を強化するために付加すべき基が最初に活性化される。適当な活性化試薬として、ホスホロチオネート化合物、カルバメート化合物、メチルホスホネート化合物、グアニジニウム化合物、スルファメート化合物、スルファミド化合物、ホルムアセタール化合物、チオホルムアセタール化合物、スルホン化合物、ホスホロアミデート化合物が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、保護基の群はホスホルアミダイト化合物及びそれらの混合物で活性化される。遊離OH基を活性化するのに適した典型的なホスホロアミデートは、例えば式:の2-シアノエチルN,N,N’,N’-テトラジイソプロピルホスホロジアミダイト及び式:式中、nは6から12であるの2-シアノエチルN-ジイソプロピル,N’-アルキルアミンホスホルアミダイトである。典型的な反応は以下のステップを含む:Aフラノースユニット適当な化学量論は当業者には明らかであろうと4,4’-ジメトキシトリチル塩化物DMTr-Clとを第一級ヒドロキシル基の位置においてのみ反応が起き易い条件で反応させる。次に、残余のヒドロキシル基をアセチル化又はベンゾイル化保護基と反応させる。活性化されたフラノースは、典型的には、構造:を有する。B目的のsiRNAセンスs鎖又はアンチセンスa鎖であってよいの一方の鎖を固体支持体上で段階的固相合成により形成し、そこで、通常はジメトキシトリチルDMTにより保護されている成長鎖中の末端サブユニットの5’-OH基を、5’-OHDMT保護基を除去するために酸性条件下に置き、一方プリン及びピリミジン塩基はフルオレン-9-イルメトキシカルボニルFMOCで保護されたままで残す。他の適当な保護基は、ホスホロアミデート化合物、ホスホロチオネート化合物及びO-メチルオキソメチル及びO-エチルオキソエチル基に結合した6員モルホリン環を有する化合物である。CsiRNA鎖の脱保護された5’-OH基をステップAの反応性フラノースと反応させ、このようにして1次コンジュゲート化オリゴヌクレオチドを得る。最後に、酸性条件下でフラノースの第一級ヒドロキシルのDMT保護基を除去して5’-OH基は残す。DC18員の反応性リンカー以後C18である、エチレングリコールの6モノマーを有するアルキレングリコールモノマー12炭素原子及び6酸素原子は、ホスフィチル化条件下で、末端OH基に上記の2-シアノエチルN,N’-ジイソプロピルホスホルアミダイトなどのホスホルアミダイト化合物を付加することにより形成する。ホスホルアミダイト化合物は、ポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド骨格中に存在するようなホスホジエステル連結の生成に特に有用である。ポリエチレングリコールを反応性にする他の適当な化合物は、ホスホロアミデート化合物、ホスホロチオネート化合物及びO-メチルオキソメチル及びO-エチルオキソエチル基に結合した6員モルホリン環を有する化合物である。典型的には、6モノマーのエチレングリコールを有する反応性C18アルキレングリコールモノマーは、構造を有する。Eフラノース-siRNA鎖の脱保護され5’-OH基をステップDの反応性C18アルキレングリコールモノマーと反応させ、このようにして式:DMT-C18アルキレングリコール-ホスホジエステル-フラノース-ホスホジエステル-RNA鎖を有する2次コンジュゲート化オリゴヌクレオチドを得る。FC18アルキレングリコールの第一級ヒドロキシルのDMT保護基を酸性条件下で除去して5’-OH基を残す。GC18アルキレングリコール-ホスホジエステル-フラノース-ホスホジエステル-RNA鎖の脱保護された5’-OH基をステップDのものような第2の反応性C18アルキレングリコールモノマーと反応させて、式:DMT-C18アルキレングリコール-ホスホジエステル-C18アルキレングリコール-ホスホジエステル-フラノース-ホスホジエステル-RNA鎖を有する3次コンジュゲート化オリゴヌクレオチドを得る。HC18アルキレングリコール末端の第一級ヒドロキシルのDMT保護基を酸性条件下で除去してさらなる操作のために5’-OH基を残す。保護基が脂質部分を含む場合、本発明によるオリゴヌクレオチド構造物を得るための方法は、ステップHとIとの間に追加されるステップ、好ましくは脂肪酸の活性なエステル、アミン、チオール又は酸の形態にある脂質部分を末端基場合によりフラノース又はC18アルキレングリコールに結合するステップを含む。当業者は、前記ステップを実施するのに適当な条件や試薬等を、脂質及び前記基の性質に応じて選択することができる。好ましい条件は、ホスホルアミダイト化学により脂肪酸を誘導体化して、ホスホジエステル連結基を通してオリゴヌクレオチド構造に遊離末端5’-OH又は3’OHで縮合することができる活性化された分子を作ることにある。E.3.第1の核酸及び5’末端に付いた保護基を含むコンジュゲートと核酸に相補的な鎖及び5’に付いたSSRIを含むコンジュゲートとをアニーリングすることによるsiRNAの合成上記のようにE.1.で得たSSRIにコンジュゲート化したsiRNAの相補鎖を、E.2.で定義し、得られた改変siRNA鎖とアニールする。この目的のために、RNA鎖中の全ての残余の保護基は予め以下のようにして除去する。20v/vのメチルアミン水溶液40w/v及び80v/vの飽和したアンモニア溶液3030~32v/vのNH3を含有を含有する500μlの混合物をsiRNA200nmolスケールを入れたエッペンドルフチューブに加えた。チューブを密閉して45分間65°Cの温度に加熱した。この手順によりヌクレオチドのリン原子における保護基フラノースのアセチル化又はベンジル化及びホスホジエステル連結の2-シアノエチル化、及び環外アミノ基の保護基FMOCが除去される。混合物を次に冷却して濾過し、上清を乾燥した。残留したペレットを1Mトリエチルアミン-HFと3時間65°Cで反応させて、保護基をヌクレオチド2’-t-ブチルジメチルシリル-TBDMSの2’で切断した。最後に、生じた溶液をセファデックスカラムで脱塩した。そのような2本鎖構造物を形成するのに適した核酸アニーリングの条件は、JosephSambrook,etal.,MolecularCloning,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,2001及びHaymes,B.D.,etal.NucleicAcidHybridization,APracticalApproach,IRLPress,Washington,D.C.,1985により開示されている。本発明の構造物のオリゴヌクレオチドの有効性の実例を下に示す。実施例2はsiRNAの一方の鎖に連結したフラノース及び2つのC18アルキレングリコール、及び他方の鎖にリンカーを通して連結したセルトラリン分子の付いた本発明のsiRNAオリゴヌクレオチド配列は、裸出形態nakedformの対応するsiRNAよりも標的シナプス前部の5-HT1ARの発現をより大きく遮断したことを示す。F.診断用のコンジュゲート及びそれらの使用神経伝達物質輸送体に高い親和性で結合することができる選択的作用剤を使用することにより治療用の化合物を標的細胞に特異的に送達する可能性は、診断目的に使用することができる化合物の送達に応用することもできる。したがって、他の実施形態において、本発明は、i1種又は複数種の神経伝達物質輸送体に特異的に結合する少なくとも1種の選択的作用剤、及びii撮像剤を含むコンジュゲートを提供する。用語選択的作用剤及び神経伝達物質輸送体は、上で詳細に説明してあり、診断用の本発明のコンジュゲートについても同様に理解してよい。用語撮像剤及び造影剤は、本明細書において互換的に使用され、使用するとこれらの像の異なった領域間のコントラストを強化することにより像の異なった部分の区別が容易になる生体適合性化合物を指す。したがって用語造影剤は、そのような作用剤がなくても発生させることができる像例えば、MRIの場合のようにの品質を向上するために使用される作用剤、並びに像の発生に欠くことのできない作用剤例えば、核撮像の場合のようにを包含する。適当な造影剤として、放射性核種撮像、コンピューター断層撮影、ラマン分光法、磁気共鳴撮像MRI及び光学的撮像のための造影剤が挙げられるが、これらに限定されない。放射性核種撮像用の造影剤として、通常11C、13N、15O、18F、82Rb、62Cu及び68Gaなどの陽電子エミッターで標識された放射性薬剤が挙げられる。SPECT放射性薬剤は、通常94mTc、201Tl及び67Gaなどの陽電子エミッターで標識される。放射性核種撮像様式陽電子断層撮影PET;シングルフォトンエミッションCTSPECTは、放射性核種標識の放射性トレーサーの位置及び濃度をマッピングする診断用断面撮像技法である。PET及びSPECTは、代謝活性を測定することにより放射性核種を局在化させて特徴づけることに使用することができる。PET及びSPECTは細胞の生存率などの細胞のレベルにおける情報に属する情報を提供する。PETにおいて、患者は、陽電子を放出する微弱な放射性物質を摂取するか又は注射され、該物質は身体中を移動するのでモニターすることができる。1つの一般的な適用では、例えば、患者は陽電子エミッター付きのグルコースを与えられ、種々の課題を遂行させながら彼らの脳がモニターされる。脳はそれがはたらくときにグルコースを使用するので、PET像はどこで脳活性が高いかを示す。本発明のある実施形態においては、細胞をインビボのPET又はSPECT撮像のために体外で標識する。PETと密接に関係するのはシングルフォトンエミッションCT、又はSPECTである。2つの間の主要な相違は、SPECTは、陽電子放出物質の代わりに低エネルギー光子を放出する放射性トレーサーを使用することである。CT撮像用の造影剤は、例えば、ヨウ素化又は臭素化造影媒体を含む。これらの作用剤の例として、イオタラメート、イオヘキシル、ジアトリゾエート、イオパミドール、エチオド-ル及びイオパノエートが挙げられる。ガドリニウム剤もCT造影剤として使用されることが報告されている例えば、Hensonetal.,2004参照。例えば、ガドペンテート剤がCT造影剤として使用されているStrunkandSchild,2004で論じられた。コンピューター断層撮影CTは本発明の関係では撮像様式として考慮されている。一連のX線を種々の角度から時には千回を超えて取り、次にそれらをコンピューターと組み合わせることにより、CTは身体の任意の部分の3次元像を構築することを可能にする。コンピューターは2次元断面を任意の角度から及び任意の深さで表示するようにプログラムされている。CTにおいて、最初のCTスキャンで診断がつかないときには、本明細書に記載したものなどの放射線不透過性造影剤の静脈注射が、軟組織体の同定及び描写の助けになり得る。光学的撮像用の造影剤としては、例えば、フルオレセイン、フルオレセイン誘導体、インドシアニングリーン、オレゴングリーン、オレゴングリーン誘導体誘導体、ローダミングリーン、ローダミングリーン誘導体、エオシン、エリスロシン、テキサスレッド、テキサスレッド誘導体、マラカイトグリーン,ナノゴールドスルホスクシンイミジルエステル、カスケードブルー、クマリン誘導体、ナフタレン、ピリジルオキサゾール誘導体、カスケードイエロー色素、ダポキシルdapoxyl色素及び本明細書において開示した種々の他の蛍光性化合物が挙げられる。好ましい実施形態において、造影剤は、磁気共鳴撮像装置により撮像され得る化合物である。磁気共鳴撮像装置により撮像できる造影剤は他の撮像技法で使用されるものと異なる。それらの目的は、同一のシグナル特性が同じ組織成分間を識別するのに役立つこと及び緩和時間を短かくすることTl強調スピンエコーMR像により強いシグナル及びT2強調像に強度のより小さいシグナルを生ずるであろうである。MRI造影剤の例として、ガドリニウムキレート、マンガンキレート、クロムキレート、及び鉄粒子が挙げられる。特定の1実施形態において、MRI造影剤は、19Fである。CT及びMRIは両方とも組織の境界を識別するのに役立つ解剖学的情報を提供する。CTに比較したMRIの不利点として、より低い患者耐性、ペースメーカー及びある種の他の金属のインプラントデバイスにおける禁忌、及び複数の原因それらの少なからずが運動であるが関係するアーチファクトが挙げられる。他方、CTは迅速で、十分耐えられ、また容易に利用できるが、MRIよりコントラスト解像度が低く、ヨウ素化した造影剤及びイオン化性放射線が必要になる。CT及びMRIの両方の不利点は、いずれの撮像様式も細胞レベルにおける機能的情報を提供しないことである。例えば、いずれの様式も細胞の生存率に関する情報を提供しない。磁気共鳴撮像MRIは、CTより新しく、高強度磁石及びラジオ波周波数シグナルを使用して像を生ずる撮像様式である。生物組織中に最も豊富な分子の種は水である。撮像検査で究極的にシグナルを生じさせるのは水のプロトン核の量子力学的スピンである。MRIにおいては、撮像されるべき試料が強い静的磁場1~12テスラに置かれ、スピンがラジオ波周波数Rfの放射線のパルスで励起されて試料における正味の磁化を生じさせる。次に種々の磁場勾配及び他のRfパルスがスピンに作用して空間的情報を記録されるシグナル中に信号化する。これらのシグナルを集めて解析することにより、CT画像のように、通常2次元断面で表示される3次元画像を計算することが可能である。MRI造影剤として、クロムIII、マンガンII、鉄III、鉄II、コバルトII、ニッケルII、銅II、ネオジムIII、サマリウムIII、イッテルビウムIII、ガドリニウムIII、バナジウムII、テルビウムIII、ジスプロシウムIII、ホルミウムIII及びエルビウムIIIからなる群から選択される金属の錯体が挙げられる。好ましい実施形態において、磁気共鳴撮像装置により撮像することができる化合物は、ガドリニウム系化合物である。本明細書中で使用する用語ガドリニウム系化合物は、撮像に関して使用される場合、対象者に投与可能で静脈内増強が生ずる任意のガドリニウム含有物質を意味することとする。他の実施形態において、ガドリニウム含有造影剤は、ガドリニウム、ガドリニウムペンテート、及びガドジアミドからなる群から選択される。投与すべきガドリニウム含有造影剤の量は、体重1kg当たり約10mgの量で変化する。他の実施形態においては、第2の磁気共鳴像がガドリニウム含有造影剤を投与した約45分後に取得される。本発明は、ステップc又はステップdのいずれかに続いて対象者の腹腔内に食塩水溶液例えばリンゲル溶液を投与するステップをさらに含む上記の方法も提供する。本発明は、診断剤として上で定義したコンジュゲートの使用及び神経伝達物質輸送体をそれらの表面上に発現する細胞の検出方法も提供する。撮像されるべき細胞のタイプに応じて、コンジュゲートは1種又は複数種の選択的作用剤を組み込む。以下の表に、撮像しなければならない細胞のタイプに応じて使用することができる選択的作用剤を記載する。本発明は多モードの撮像方法も提供する。本発明のある実施形態は、複数のシグナルを測定することを含む複数の撮像様式を使用して対象者又は対象者内の部位を撮像する方法に関係する。ある実施形態においては、細胞上又は細胞中の単一の標識から複数のシグナルが生ずる。上で説明したように、当業者に知られた任意の撮像様式を、本発明の撮像方法のこれらの実施形態で適用することができる。撮像様式は、標識された組成物、例えば、標識された細胞の投与中又は投与の後任意の時間に実施される。例えば、撮像試験は、本発明の標識された細胞の投与中に、又はその後の任意の時間に、即ち、特定の位置への送達を導くのに役立つように実施することができる。第1の撮像様式と同時に、又は第1の撮像様式後の任意の時間に追加の撮像様式を実施することができる。例えば、追加の撮像様式は、第1の撮像様式の完了の約1秒、約1時間、約1日、又はそれより長い任意の時間後に、又は任意のこれらの述べた時の間の任意の時に実施することができる。本発明のある実施形態においては、複数の撮像様式が並行して実施され、それらは標識された細胞又は作用剤の投与に続いて同時に開始される。当業者は、本発明により考慮される種々の撮像様式の実行に精通しているであろう。本発明の撮像方法の幾つかの実施形態においては、同じ撮像デバイスが第1の撮像様式及び第2の撮像様式を実施するために使用される。他の実施形態においては、異なった撮像デバイスが異なった撮像様式を実施するために使用される。当業者は、本明細書に記載した撮像様式を実行するために利用し得る撮像デバイスに精通しているであろう。本発明は、1つ又は複数撮像様式を使用して細胞を撮像する方法を提供する。幾つかの実施形態において、細胞が複数種の撮像剤で、及び細胞が単一の標識剤で標識される他の態様で標識される。ある実施形態においては、単一の標識剤が多モード検出可能な作用剤である。以下の実施例及び図面は例示として提供され、本発明を限定することは意図しない。実施例1セルトラリン及びオリゴヌクレオチドを含む本発明のコンジュゲートの合成。活性化されたセルトラリン4の合成活性化されたセルトラリンを以下のスキームに示したようにして調製した。A.1.化合物1の合成セルトラリン塩酸塩市販で入手可能、34mg、9H-フルオレニルメトキシカルボニル-6-アミノヘキサン酸Fmoc-ACA、49mg、DMF2ml、N-メチル-モルホリン22μl及びO-ベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートTBTU、68mgの混合物を室温で終夜攪拌した。反応に続いてTLC10CH3OH/CHCl3を行った。混合物を蒸発させると濃い油状物が生じ、それをさらに3×5mlの石油エーテルで洗浄した。2mlの水を油性化合物に加えて、生じた沈殿を2×10mlの水で再び洗浄した。沈殿を20mlの塩化メチレンDCMで溶解して20mlのNaCl溶液で後処理し、次にNa2SO4で乾燥した。溶液を蒸発させて乾燥し、次に機械的ポンプで乾燥すると固体129mg粗生成物が生じた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、1、2、次に5メタノール/DCMで溶出した。分画を合わせて蒸発乾固した。生成物を真空で6時間乾燥して90mgの純粋化合物1を得た。A.2.化合物2の合成化合物190mgをDCM中20ピペリジン3mlに1時間かけて溶解した。反応に続いてTLC10メタノール/CHCl3を行った。混合物を蒸発させると油状物が生じ、それを3×10mlの石油エーテルで洗浄した。生じた粗製化合物54mgはさらに精製しなくても次の反応に十分な純度であった。A.3.化合物3の合成化合物254mg、ピリジン3ml、コハク酸酸無水物16mg及びN,N-ジメチルアミノピリジンDMAP、18mgの混合物を室温で終夜攪拌した。反応に続いてTLC85:10:5=DCM:メタノール:酢酸を行った。10mlの水を反応混合物に加えた。反応混合物を濃縮するとガム状になり、次に10mlのDCM中に懸濁した。有機相を2×10mlの5NaHCO3溶液、10mlの5クエン酸溶液及び10mlの塩水溶液で洗浄した。該溶液を硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させ、化合物3を白色発泡体46mgとして得た。A.4.化合物4の合成化合物346mg、ヒドロキシスクシンイミド13mg、N,N’-ジイソプロピルカルボジイミドDIC、60μl及びDCM4mlの混合物を室温で終夜攪拌し、続いてTLC10メタノール/CHCl3を行った。溶液を蒸発乾固すると150mgの粗固体が生じた。粗製化合物を分取TLC2mm厚さ、20×20cmで精製し、TLCを1酢酸を含有する7メタノール/CHCl3により展開した。適当なバンドを切り出してフィルタ-漏斗中に入れた。15メタノール/CHCl3で溶出した後、溶液を蒸発乾固して35mgの化合物4HPLC純度98を得た。B.アミノ改変オリゴヌクレオチド5及び6の合成合成は、自動合成装置で、市販のアミノリンカーである6-4-モノメトキシトリチルアミノヘキシル-[2-シアノエチル-N,N-ジイソプロピル]-ホスホルアミダイト5’-MMT-C6-アミノ改変剤-CEP及び6-トリフルオロアセチルアミノヘキシル-[2-シアノエチル-N,N-ジイソプロピル]-ホスホルアミダイト5’-TFA-C6-アミノ改変剤-CEPをそれぞれ使用して実施した。次のステップを続けた。1.アミノ-リンカー-CEPを不活性雰囲気アルゴン又は窒素下で無水アセトニトリルに溶解した1ml中に100μM。該溶液を清浄な追加の貯蔵器Expedite8900合成装置の位置5~9又は任意の他の合成装置の予備のポートに入れた。ラインに手作業で2~3秒予備送液するか又はプライミングプログラムを使用して送達チューブをこの試薬で満たした。2.所望の配列を書いた;予備の塩基位置5~9を有する5’末端、そして改変試薬を機器による合成の最終ステップに組み込んだ。3.オリゴヌクレオチドがHPLC精製を必要とするので、DMTオプションを有する配列を、合成プログラムについて確認した。4.適当なスケール0.2~1.0μMのカップリングプログラムを使用して機器で合成を開始した。5.合成が終了したら、カラムを機器から取り外し、注射器を使用して支持体をエタノールで洗浄し3×1ml、残留する酸脱トリチル化ステップからの及びヨウ素酸化ステップからのを除去した。C.オリゴヌクレオチドの支持体からの脱保護及び除去以下のステップを実施した。1.前のステップで乾燥した支持体をスクリューキャップ付きバイアル1.5~2ml中に移した。2.500μL0.2μMスケールの濃NH4OH30溶液を加えた。3.キャップをきつく締めて懸濁液を55°Cで少なくとも8時間から終夜インキュベートしたGに富む配列のためにはより長い時間が与えられるべきであった。4.上清を0°Cに冷却して他の微量遠心管に移した。5.支持体を同量の蒸留水ですすぎ、この洗液をアンモニア上清に加えた。その結果アンモニア溶液は、オリゴヌクレオチドに連結した、5’末端に遊離アミノヘキシル基N-TFA-アミノヘキシルホスホルアミダイトが組み込まれた場合又は保護されたアミノヘキシルのいずれかを有する全長オリゴヌクレオチドをヌクレオシドでない物質及び短い配列と一緒に含有した。遊離アミノヘキシルリンカーの付いたオリゴヌクレオチドの精製は、アニオン交換HPLC、エタノール沈殿又はポリアクリルアミドゲル電気泳動PAGEにより達成することができた。D.活性化されたセルトラリンの遊離第一級アミンへの結合。ステップB及びCで得られた5’末端アミノ連結オリゴヌクレオチドのステップAで得られたN-ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体による標識を、以下の手順により溶液相で実施した:A.マーカーの結合1.前のステップで得た部分的に又は完全に精製されたアミノ連結オリゴヌクレオチド20~25ODUA260約700μgを250μLの1.0MNaHCO3/Na2CO3pH9.0混合物中に溶解した。生じた溶液のpHをチェックして塩基性であることを確認した。2.ステージAで得た活性化された誘導体5~6mgの溶液500μLを1.0MNaHCO3/Na2CO3緩衝液pH=9.0:DMF:水5:2:3v/vの混合物に加えた。3.混合物をボルテックスにかけ、露光を防止するためにエッペンドルフチューブをアルミニウム箔で覆った。4.室温で20時間インキュベーションした後、混合物に1MTEAA溶液を添加して反応を停止させた。B.セファデックスG-25カラムを使用する過剰なマーカーの除去1.活性化された誘導体試料をカラム上に載せた。2.カラムを水で溶出して、1.0mlの分画でエッペンドルフチューブ中に集めた。所望の生成物は溶媒容積の後で溶出を開始し、所望の生成物の大部分は分画3~9に溶出した。3.大部分の材料を含有する分画をプールして濃縮した。4.通常12~15ODUA26070が得られ、それは過剰な染料/マーカー分子を含まない。必要であれば、生成物を逆相HPLCの電気泳動20PAGEによりさらに精製することができる。実施例2セルトラリンとコンジュゲート化したセンスオリゴヌクレオチド及び式C18-L3-C18-L2-フラノース-L1-[オリゴヌクレオチド]-3’L1、L2及びL3はホスホジエステル連結であるの保護基を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むsiRNAの合成合成は以下のステップ実施した:aRNAオリゴヌクレオチドは固体支持体上で段階的固相合成により形成し、そこで成長鎖中の末端サブユニットの通常はジメトキシトリチルDMTにより保護されている5’-OH基を酸性条件下に置いて5’-OHのDMT保護基を除去するが、一方プリン及びピリミジン塩基はフルオレン-9-イルメトキシカルボニルFMOCで保護されたままで残す。bD-リボース又はD---フルクトフラノースなどのフラノースユニットを、第一級ヒドロキシル基の位置における反応にだけ有利な条件下に4,4’-ジメトキシトリチルクロライドDMTr-CIと反応させる。次に、残余のヒドロキシル基をアセチル化又はベンジル化保護基と反応させる。最後に、酸性条件下で第一級ヒドロキシルのDMT保護基を除去する。フラノースの前記脱保護されたヒドロキシル基はステップaで得られたsiRNA鎖の脱保護された5’-OH基と反応させ、このようにして第1のコンジュゲート化オリゴヌクレオチドを得る。c共有結合結合ユニットC18スペーサー18個のスペーサーを与えるポリエチレングリコールPEGのモノマー6個を有する反応性ポリエチレングリコールは、末端OH基にホスフィチル化条件下で、式IIの2-シアノエチルN,N’-ジイソプロピルホスホルアミダイトなどのホスホロアミデート化合物を付加することにより形成した。dフラノースの脱保護された5’-OH基をステップcの反応性ポリエチレングリコールと反応させ、そのようにして構造:OH-C18-L2-フラノース-L1-[オリゴヌクレオチド]-3’L1及びL2はホスホジエステル結合であるを有するsiRNA鎖を得た。e18共有結合ユニットのスペーサーC18スペーサーを与えるポリエチレングリコールPEGのモノマー6個を有する第2の反応性ポリエチレングリコールは、末端OH基にホスフィチル化条件下で、式II2-シアノエチルN,N’-ジイソプロピルホスホルアミダイトなどのホスホロアミデート化合物を付加することにより形成した。fC18の脱保護された5’-OH基をステップeからの第2の反応性C18ポリエチレングリコールと反応させ、そのようにして構造:C18-L3-C18-L2-フラノース-L1-[オリゴヌクレオチド]-3’L1、L2及びL3はホスホジエステル結合であるを有するsiRNA鎖を得た。g実施例1に記載したセルトラリンとコンジュゲート化したsiRNAの相補鎖を、ステップfの改変されたsiRNA鎖とアニールした。この目的でRNA鎖中の全ての残余の保護基は予め以下のようにして除去しておく。20v/vのメチルアミン水溶液40w/v及び80v/vの飽和アンモニア溶液3030~32v/vのNH3を含有を含む500μLの混合物を、siRNA200nmol規模を入れたエッペンドルフチューブに加えた。チューブを密閉して45分間65°Cの温度に加熱した。この手順で、ヌクレオチドのリン原子における保護基フラノースのアセチル化又はベンジル化及びホスホジエステル連結の2-シアノエチル化、及びヌクレオチドの保護基FMOCが除去される。該混合物を次に冷却して濾過し、上清を乾燥した。残留ペレットを1Mトリエチルアミン-HFと3時間65°Cで反応させてヌクレオチド2’-t-ブチルジメチルシリル-TBDMSの2’の保護基を切断した。最後に、生じた溶液をセファデックスカラムで脱塩した。実施例3マウスの背側の縫線核DRN中にインビボ局所注射することによる、5-HT1ARを標的とするsiRNAと式Iの基とのコンジュゲート及び1種のターゲティング作用剤以後NLF-siRNA及び5-HT1ARを標的とする裸出siRNA以後裸出siRNAの有効性アッセイ本実施例はNLF-siRNA及び裸出siRNAがシナプス前部の5-HT1ARのノックダウンに対して同様な有効性を呈することを示し、それは、セロトニン作動性ニューロンの本体が位置する背側の縫線核中に局所的に適用されたときに、そのタンパク質レベルの低下及びその機能により測定される。このことは式Iの基及び本発明の構造物で使用されるターゲティング作用剤が干渉性オリゴヌクレオチドの有効性に干渉しないことを示す。実施例1及び2の構造を有する一組の化合物が上で開示したようにして合成され、以下の構造を有した。siRNAは以下のMusmusculusマウス、GenBank受入番号:NM_008308のセロトニン受容体5-HT1A型5-HT1AR配列:633-651、852-870,1889-1907及び2167-2185の領域を標的とするように設計した。各siRNAのアンチセンス及びセンス鎖は化学的に合成し配列番号5~10、表1、等張RNAアニーリング緩衝液100mM酢酸カリウム、30mMHEPES-KOHpH:7.4、2mM酢酸マグネシウム中で、各鎖の50μM溶液を組み合わせることによりアニールした。該溶液を次に1分間90°Cでインキュベートし、15秒遠心して次に37°Cで1時間インキュベートした。アニールした溶液はHPLCで精製してsiRNAの選択された分画を凍結乾燥した。凍結乾燥した生成物をRNAアーゼを含まない水中に再懸濁することによりsiRNAの貯蔵溶液を調製して、使用するまで-20°Cで貯蔵した。使用に先立って全てのsiRNA貯蔵溶液は、脳に適用するために適当なビヒクルi.c.v.局所適用であるCSF125mMNaCl、2.5mMKCl,1.26mMCaCl2、1.18mMMgCl2及び5グルコース中で最終濃度に希釈した。全てのこれらのsiRNA配列はHT1A受容体のmRNAに相補的なアンチセンス配列を含み、したがって前記mRNAを阻止してその発現を妨げることができる。これらの配列の等モルカクテルを全ての実験に使用した。対照として、ナンセンスsiRNA配列nssiRNAを注入した。このnssiRNAは、Blast配列比較アルゴリズムでマウスの全トランスクリプトームと比較したときに如何なるマウス遺伝子とも相補的でない。該nssiRNAは以下の配列を有した:全ての配列は、細胞中の正常過程のmRNAを調節するタンパク質との干渉を避けるために、少なくとも1つのチミンTを含むヌクレオチド末端DNAダイマーを有する示していない。この技法は当業者によく知られている。これらの末端ダイマーとともに、該オリゴヌクレオチドは、効率的なRNAi機構を可能にする21~23塩基対を有する。表1の式Iの基とコンジュゲート化したsiRNA配列、及び上記の1種のターゲティング作用剤NLF-siRNA、式Iの基とコンジュゲート化したナンセンスsiRNA及び1種のターゲティング作用剤nsNLF-siRNA及び改変のない裸出オリゴヌクレオチド表1の裸出siRNA又はns裸出siRNAを実験に使用した。siRNAを注入するために、マイクロカニューレシステムを当技術分野において前に記載された標準的定位法を使用して埋め込んだ。25ゲージ配管により通した流入マイクロカニューレは、110μmOD及び40μmIDの溶融シリカ毛細管の配管からなる。マイクロカニューレの所定の長さは標的とすべき脳領域の深さ即ち、背側の縫線核に対して1mmに基づいて決定される。雄C57BL/6Jマウス21~29g、9~12週齢雄の背側の縫線核DRNに1本のマイクロカニューレを埋め込んだ。定位座標mmは、Franklin及びPaxinos1997にしたがって十字縫合及び頭蓋の頂点から、AP:-4.5、L:-1.0、DV:-4.4であり、横からの角度は20度であった。マイクロカニューレは歯科用セメント及び2本の長さ2mm、直径0.95mmのスクリューで頭蓋に固定した。マイクロ注入実験は、覚醒マウスで手術後20~24時間に実施した。精密ポンプにより0.5μL/分の速度で作動する注射器に注射マイクロカニューレをポリエチレン配管を通して接続した。シナプス前部の5-HT1AR活性の機能測定試験のために、本発明者らは、R--8-ヒドロキシ-2-ジ-n-プロピルアミノテトラリン臭化水素酸塩8-OH-DPAT、選択的5-HT1ARアゴニストにより誘発される低体温応答を、裸出siRNA又はNLF-siRNAのプールを背側の縫線核中に注入DRN、0.3μg0.02nmol/1μl/2日して24時間後に評価した。対照群には、同じ量のビヒクルCSF:125mMNaCl、2.5mMKCl,1.26mMCaCl2、1.18mMMgCl2及び5グルコース、ns裸出siRNA及びnsNLF-siRNAを注入した。マウスは、実験前の1時間、実験室内の個別のケージに22°Cの安定した温度で保管した。全ての実験は10:00a.m.と14:00p.m.の間に実施した。体温は、マウスを自由に運動させながら温度の読み取りの5分前に、潤滑したプローブを直腸中に挿入することにより測定した。表示値はディジタル温度計を使用して得た。基礎値は8-OH-DPAT投与の5分前及び15、30、60及び120分後に測定した。8-OH-DPATは食塩水溶液に溶解して、腹腔内にi.p.1mg/kg、体積では5ml/kgで注射した。低体温を誘発するために選択した8-OH-DPATの用量は以前の研究に基づく。マウスの異なった群及びそれらのそれぞれの対照において、5-HT1Aを標的とするsiRNAをDRN中に最後に適用した24時間後に体温を測定した。体温を直腸で測定する追加の実験を5-HT1ARKOマウス5-HT1ARのないマウスで実施して8-OH-DPAT誘発低体温のないことを評価した。図1で見ることができるように、siRNAの局所注射による5-HT1ARのノックダウンは、5-HT1ARKOマウスと同様な8-OH-DPATにより誘発される低体温応答の欠如を示す。このアッセイの後、マウスを斬首により殺害して脳を迅速に取り出し、ドライアイスで凍結して-20°Cで貯蔵した。ミクロトームクリオスタットを使用して厚さ14μmの組織切片を切り、APTS3-アミノプロピルトリエトキシシランコートスライド上に解凍固定して、使用するまで-20°Cに保った。5-HT1ARタンパク質の密度を測定する目的で、本発明者らは、5-HT1A受容体部位のオートラジオグラフィーによる可視化のために[3H]8-OH-DPATを使用した。[3H]8-OH-DPATのための実験におけるインキュベーション条件は、当技術の状況において以前に記載されている。簡単に述べれば、凍結した組織切片を解凍して乾燥し、pH7.6の170mMTris-HCl、4mMCaCl2及び0.01アスコルビン酸中で30分間室温で予備インキュベートして、次に1nM[3H]-OH-DPAT234.0Ci/mmol及び10-5Mパルギリンを含む同じ緩衝液中で60分間室温でインキュベートした。非特異的結合は、10-5Mの5-HTの存在下で残るものと定義した。インキュベーション及び洗浄後、組織切片を蒸留氷冷水中に浸漬して、冷空気流下で急速に乾燥した。組織をトリチウム感応性フィルムにプラスチックの3H-標準と一緒に60日間4°Cで暴露した。マウス中脳縫線核における十字縫合から3つの異なった前後方向AP座標約AP-4.84、-4.60及び-4.24mm;Franklin及びPaxinos,1997の組織DRN切片を受容体部位の定量のために使用して、それらを同じ実験条件で同時に処理した。オートラジオグラムの定量分析はAISRコンピューター画像解析システムで行った。図2で見ることができるように、裸出siRNA及びNLF-siRNA群における5-HT1ARタンパク質密度は、対照群ビヒクル、ns裸出siRNA及びnsNLF-siRNAの約40~50に低下した。この変化は図1に記載した低体温応答の抑制に対応する。これらの実験は、両方の鎖におけるNLF-siRNAの化学的改変が、裸出siRNAと比較してsiRNAの標的遺伝子をノックダウンする能力を低下させないことを示す。さらに、5-HT1A受容体特異的siRNAのDRNに対する注入による局所適用は、siRNAが裸出であるか又はターゲティング部分とカップリングしているかに関わらず、標的mRNAをノックダウンした。これは、該投与法が適用中にはたらく物理的圧力によるsiRNAのニューロンの本体への直接移動を生じさせて、その結果、ニューロン膜を越える移動は必要とされないからと説明することができる。以下の実施例において、裸出5-HT1A受容体に特異的なsiRNAは脳室内i.c.v又は鼻内いずれの適用によっても標的mRNAをノックダウンできないこと及びsiRNAに付けたターゲティング分子の存在が標的mRNAの有効なノックダウンを可能にすることが示されるであろう。実施例4中脳縫線核中のセロトニン作動性ニューロンに対する差別的選択性及びマウスの背側の第3脳室D3V内へのインビボ脳室内i.c.v.注入による裸出siRNAに対する本発明のNLF-siRNA構造物の有効性アッセイ本実施例は、NLF-siRNA構造物及び裸出siRNAは、それらが背側の第3脳室D3V中に適用されて脳脊髄液CSFを通して脳全体及ぶときに、セロトニン作動性ニューロンに対する選択性及び5-HT1ARをノックダウンする効力が異なることを示すことを示す。このことは、そのmRNA発現レベルの低下、タンパク質レベルの低下、機能的変化及び抗鬱剤薬理学的増強作用の測定により評価した。実施例3に記載した一組の分子ビヒクル、ns裸出siRNA、nsNLF-siRNA、裸出siRNA及びNLF-siRNA群を、30μg/2.5μl/1日2.3nmolで背側の第3脳室D3V中に以下の定位座標でmmで:AP:-2.0、L:0、DV:-2.1同様な系統のマウス及び実施例2の注入システムを使用して注入した。5-HT1ARmRNA発現レベルを決定するために本発明者らは、5-HT1ARに対する、塩基82~122、123~171、885~933及び1341~1389に相補的な4種のオリゴデオキシリボヌクレオチドプローブを同時に使用して、insituハイブリッド形成アッセイを実施した。各5-HT1A受容体オリゴヌクレオチドは、QIAquickヌクレオチド除去キットを使用して遠心により精製した[33P]-dATP>2500Ci/mmolを用いて末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを使用してその3’末端に個別に標識した2pmol。insituハイブリッド形成における単一標識のためのプロトコルは以前に記載された手順に基づく。簡単に述べると、実施例2に記載した凍結組織切片を先ず室温に戻し、リン酸緩衝食塩水1×PBS:8mMNa2HPO4、1.4mMKH2PO4、136mMNaCl、2.6mMKCl中の4パラホルムアルデヒド中で20分間4°Cで固定して、室温で3×PBSで5分間、1×PBSで2回各5分間洗浄し、50mMトリス-HClpH7.5、5mMEDTA中24U/mlの最終濃度で予め消化したプロナーゼの溶液中において21°Cで2分間インキュベートする。酵素的活性は、1×PBS中2mg/mlのグリシン中に30秒間浸漬することにより停止した。組織は最後に1×PBS中ですすいで等級づけされたエタノールにより脱水した。ハイブリッド形成のために、放射性標識されたプローブを、50ホルムアミド、4×SSC1×SSC150mMNaCl、15mMクエン酸ナトリウム、1×デンハルト溶液0.02フィコール、0.02ポリビニルピロリドン、0.02ウシ血清アルブミン、10デキストラン硫酸、1サルコシル、20mMリン酸緩衝液pH7.0、250μg/ml酵母tRNA及び500μg/mlサケ精子DNAを含有する溶液中に希釈した。ハイブリッド形成緩衝液中の放射性プローブの最終濃度は、同じ範囲1.5nMであった。組織切片を標識されたプローブを含有するハイブリッド形成溶液で覆い、その上にNescofilmカバーガラスを重ねて加湿箱中42°Cで終夜インキュベートした。次に切片を60°Cで1×SSCにより4回各15分及び室温で1×SSCで1回30分間洗浄し、脱水してフィルムに3~4週間触れさせた。フィルムの光学密度をAISRコンピューター画像解析システムで半定量した。insituハイブリッド形成で使用したのと同じ群のマウスについて、本発明者らは、実施例2に記載した5-HT1A受容体部位のオートラジオグラフィーによる可視化のための[3H]8-OH-DPATを使用して5-HT1ARタンパク質の密度を測定した。5-HT1ARタンパク質は、シナプス前部でセロトニンニューロン中脳縫線核上で及び5-HT神経末端に位置するシナプス後部でニューロン上に、主として皮質辺縁系領域即ち海馬において強く発現する。図3A及びBで見ることができるように、NLF-siRNA分子だけが、セロトニン作動性ニューロンが位置するマウス中脳縫線核中の3つの異なった前後座標で、5-HT1ARのmRNAレベルの特異的ノックダウンを誘発する。図3Cで見ることができるように、背側の縫線核における5-HT1ARmRNA陽性グレインのフィルムにおける測定のデンシトメトリーによる定量は、NLF-siRNAの群における発現レベルで、他のアッセイされた群と比較して50の低下を示した。5-HT1ARmRNAの発現における相違は、主としてDRN領域において認められる。図4で見るとができるように、[3H]8-OH-DPATを使用する5-HT1A受容体部位に対する結合アッセイにより定量して、NLF-siRNA分子だけが5-HT1ARタンパク質レベルの特異的低下約50をシナプス前部の背側の縫線核において誘発したが、シナプス後部の海馬又は前頭前野の皮質脳領域では誘発しなかった。5-HT1ARのmRNA及びタンパク質発現における相違は、主としてDRN領域において認められる。これらの結果は、NLF-siRNAが、背側の縫線核に局在化している特異的セロトニン作動性ニューロンに対してmRNAの干渉を実行するオリゴヌクレオチドに選択的に向かい、その結果標的とされたニューロンの受容体の発現に対する前記RNA干渉の効率を増強することを示した。5-HT1A受容体の特異的ノックダウンがセロトニン輸送体5-HTT又はSERT又は5-HT1B受容体のような関係する5-HTタンパク質の発現に影響し得るか否かを調べるために、セロトニン輸送体タンパク質及び5-HT1B受容体の密度をDRNで定量した。セロトニン輸送体タンパク質の密度をアッセイする目的で、本発明者らは、5-HTT部位のオートラジオグラフィーによる可視化のために[3H]シタロプラムを使用した。簡単に述べると、凍結組織切片を解凍して乾燥し、120mMNaCl及び5mMKClを含有する50mMTris-HCl緩衝液25°CでpH7.4中室温で15分間プレインキュベートした。次に1.5nM[3H]シタロプラム70.0Ci/mmolを含有する同じ緩衝液中で60分間室温でインキュベートした。非特異的結合は、1μMフルオキセチンの存在下で残留するものと定義した。インキュベーション及び洗浄後、組織切片を蒸留氷冷水中に漬けて冷空気流下で急速乾燥した。組織をトリチウム感応性フィルムに、プラスチックの3H-標準と一緒に4°Cで40日間触れさせた。マウス中脳縫線核中において十字縫合からの3つの異なった前後方向AP座標約AP-4.84/-4.96、-4.60/-4.36及び-4.24mm十字縫合;Franklin及びPaxinos、1997のDRN組織切片を5-HTT部位の定量に使用して、それらを同じ実験条件で同時に処理した。オートラジオグラムの定量的分析をAISRコンピューター画像解析システムを用いて行った。図5Aで見ることができるように、ビヒクル、裸出siRNA及びNLF-siRNA群は背側の縫線核におけるタンパク質レベルで5-HTTセロトニン輸送体、SERTに如何なる低下も変化も示さない。5-HT1B受容体5-HT1BRタンパク質の密度をアッセイする目的で、本発明者らは5-HT1BR部位をオートラジオグラフィーで可視化するために[125I]ヨードシアノピンドロールを使用した。切片を150mMNaClを含有する170mMTris-HCl緩衝液pH7.4中室温で10分間プレインキュベートし、次に100pM[125I]ヨードシアノピンドロール[125I]CYP、2000Ci/mmol及び100nM8-OH-DPATで補完した同じ緩衝液中で2時間インキュベートして、5-HT1AR部位を遮断し、30μMイソプレナリンでβ-アドレナリン作用性部位を遮断した。非特異的結合は10μM5-HTの存在以外は同条件下でインキュベートした隣接切片で定量した。切片を同じ緩衝液で2回すすぎ、素早く4°Cで蒸留水に漬け、冷い空気で乾燥し、感光性フィルムハイパーフィルムHyperfilm-3Hに4°Cで1日の間暴露した。フィルムの光学密度をAISRコンピューター画像解析システムで半定量した。図5Bで見ることができるように、ビヒクル、裸出siRNA及びNLF-siRNA群は、背側の縫線核における5-HT1B受容体においてタンパク質レベルのいかなる低下も変化も示さない。5-HT1ARの機能的特徴に対するNLF-siRNAの効果を評価するために、本発明者らは8-OH-DPATにより誘発される低体温応答及び内側前頭前皮質mPFCにおける5-HT放出をアッセイした。本発明者らは、裸出siRNA又はNLF-siRNAのプール実施例2で記載したを背側の第3脳室中に注入してD3V、30μg/2.5μl/1日24時間後に8-OH-DPATにより誘発される低体温応答を評価した。図6で見ることができるように、注入されたNLF-siRNAによる5-HT1ARのノックダウンのみが、5-HT1ARKOマウスと同様に、8-OH-DPATにより誘発される低体温応答のないことを示した。他の裸出siRNA及び対照ビヒクル、ns裸出siRNA及びnsNLF-siRNA群は、5-HT1ARに対するノックダウン効果を示さず図4及び5で見られたように、8-OH-DPATにより誘発される低体温応答の典型的な曲線と類似であった。上記のように、内在性アゴニスト5-HT神経伝達物質セロトニン又は選択的アゴニスト即ち8-OH-DPATによるセロトニン作動性ニューロン中に位置する5-HT1ARの活性化は、内側前頭前野の皮質、海馬などの末端突起脳領域中の中脳縫線核における細胞発火及びインパルス依存性5-HT放出を抑制し、5-HTレベルを低下させる8-OH-DPAT効果。5-HT放出を評価するために、当技術の現状で記載されている脳内微小透析手順を使用した。簡単に述べると、プローブのシャフトは長さ15mm、25ゲージ501μmOD、300μmIDのステンレス-鋼配管で作製した。流入及び流出チューブは、110μmOD及び40μmIDの溶融シリカ毛細管配管からなる25ゲージ配管を通った。シリカ配管の上部露出端を長さ7mm、27ゲージ410μmOD、220mIDのステンレス鋼配管中に挿入した。マウスをナトリウムペントバルビタール40mg/kg、i.p.で麻酔して、定位枠で位置決めした。各マウスには、キュプロファン膜を備えた1つの透析プローブ長さ2mm;カットオフ分子量5000Daを、内側前頭前野の皮質mPFCmmで:Franklin及びPaxinos,1997の図解により十字縫合からAP2.2、L-0.2、DV-3.4に埋め込んた。微小透析実験は、手術の48~72時間後に自由に運動するマウスで、上から吊した液体回転台に取り付けたWPIモデルsp220i注射器ポンプを用いてaCSF125mMNaCl、2.5mMKCl,1.26mMCaCl2、1.18mMMgCl2を2.0μl/分の速度で連続的に灌流するプローブにより実施した。60μlの透析液試料を30分毎にマイクロ遠心バイアル中に集めた。初期60分の安定化期の後、4つのベースライン試料を集めてから8-OH-DPATを全身投与して0.5mg/kgi.p.、次に後続の透析液試料を集めた。透析実験終了時に、マウスを犠牲死させて直ちに脳を取り出し-70°Cで凍結した。その後脳の冠状切片50μmをクリオスタット上で切り、灌流部位を局在化するために標準的手順によりクレジルバイオレットで染色した。組織学的に正しいプローブ配置で動物から得られたデータのみ次の統計分析のために使用した。透析液試料中の5-HT濃度は、3μmオクタデシルシリカODSカラム7.5cm×0.46cmを使用するHPLCにより、検出酸化電位を0.6Vに設定したヒューレットパッカード1049検出器で電流測定により検出して定量した。移動相は0.15MNaH2PO4H2O、1.8mMオクチル硫酸ナトリウム、0.2mMEDTAリン酸でpH2.8に調節及び30メタノールからなり、0.7ml/分でポンプ送液した。5-HTに対する保持時間は3.5~4分であり、検出限界は2fmol/試料であった。図7で見ることができるように、NLF-siRNA処理されたマウス群のマウスでは、nsNLF-siRNA群マウスと比較して前頭前野のセロトニン放出に対する8-OH-DPATの効果がなかった。これは、セロトニン作動性ニューロン中の5-HT1ARのノックダウンを、末端脳領域における5-HT量に対するアゴニストである8-OH-DPATの効果の減少により機能的に評価することができることを証拠づける。実施例5リガンドで急激に前処理し、続いてNLF-siRNAをインビボ脳室内i.c.v.注入されたマウスにおけるセロトニン作動性ニューロンの機能的パラメーターを測定することによる遊離の選択性リガンドセルトラリンと本発明によるNLF-siRNA構造物との競争的アッセイNLF-siRNA中のsiRNAとコンジュゲート化された選択性リガンドが、背側の縫線核細胞主としてセロトニン作動性ニューロンへの送達の最重要成分であるかどうかを決定するために、幾つかの競争的アッセイを実施した。マウスには、D3V30μg/2.5μl/1日、i.c.v.にsiRNAを注入する3時間前に選択的遊離リガンド5-HTT阻害剤であるセルトラリン20mg/kgi.p.の急性注射をした。それに加えて、マウスの1群ではビヒクルを腹腔内及びD3V内に投与した。微小透析実験は、i.c.v.ビヒクル又はsiRNA投与の24時間後に実施した。図8Aで見ることができるように、急性セルトラリン注射20mg/kgi.p.によりコンジュゲート化5-HT1AR-NLF-siRNAによる5-HT1A自己受容体のサイレンシングが回避され、急性8-OHDPAT投与選択的5-HT1ARアゴニスト、0.5mg/kgi.p.により内側前頭前野の皮質中の5-HTレベルは対照群のように低下した。選択的5-HTT阻害剤であるセルトラリンで前に処理された20mg/kgi.p.NLF-siRNAマウスの体温に対する8-OH-DPAT投与1mg/kgi.p.の効果も、図8Aで使用したものと同様なマウスで評価した。図8Bは、セルトラリンが5-HT1AR-NLF-siRNAと有効に競合し、したがって対照群と同様な低体温応答が生じて、5-HT1ARmRNAのトランスフェクション及びノックダウンのないことを示す。これらの結果により、遊離の選択性リガンドセルトラリンの急性投与は、標的のニューロン即ち5-HTT、セロトニン輸送体に同時に与えられて、セルトラリンコンジュゲート化siRNANLF-siRNAを遮断するか又はそれと競合することが示される。第1の、セルトラリンは、5-HT輸送体による高い特異性及び親和性ナノモルの範囲でを有し、siRNAとコンジュゲートすることによりNLF-siRNAとなり、この新しいコンジュゲートはこの5-HT輸送体による親和性を維持する。それに対して、5-HT輸送体は5-HTニューロン中でのみを発現し、輸送体による高い親和性のこの組合せ及び細胞タイプに特異的な発現が、コンジュゲート化したセルトラリン又はSSRIリガンドを有するNLF-siRNAの選択性を決定する。実施例6対照群と比較した、マウスの背側第3脳室D3V中へのNLF-siRNAのインビボ脳室内i.c.v.注入における、急性抗鬱剤即ちフルオキセチン適用後の前頭前野の皮質における5-HTレベルの増大の相乗的増強生理的条件において、SSRI即ちフルオキセチンは、中脳縫線核及び前脳部におけるセロトニンの細胞外濃度の顕著な増大を惹起する。セロトニン輸送体SERTの再取り込み遮断により生ずる細胞外5-HTの増大は、中脳縫線核中の5-HT1A自己受容体を活性化して、細胞発火及び末端放出を抑制し、再取り込み遮断により生ずる細胞外5-HTの増大を弱める効果がある。その結果として、治療効果に寄与するシナプス後部のセロトニン受容体の活性化が期待より低い。5-HT1A受容体アンタゴニスト即ちピンドロールによるこれらの負のフィードバック機構の遮断は、SSRIにより生ずる5-HTの増大を強化して、それ故、SSRIの臨床的効果を助長することに役立つ可能性があることが知られている。図9で見ることができるように、内側前頭前野の皮質における透析物のセロトニン濃度は、5-HT1A受容体が前に示したように十分機能的であると期待されたナンセンスNLF-siRNAnsNLF-siRNAマウス群におけるフルオキセチンの全身投与後にベースラインより約50高かった。NLF-siRNAマウス群においては、シナプス前部の5-HT1A受容体のノックダウンがフルオキセチンの全身投与の効果を、内側前頭前野の皮質における末端5-HTレベルのベースラインの150にまでを相乗的に増強する。これらの結果は、セルトラリン分子にカップリングしたの本発明のオリゴヌクレオチド配列NLF-siRNAが、5-HT1A受容体の発現を、翻訳されるはずであった対応するmRNA転写物をノックダウンすることにより遮断したことを明確に示す。本発明のオリゴヌクレオチド配列NLF-siRNAは、前記発現を、裸出形にある対応するsiRNA裸出siRNAよりも主要な指数でノックダウンした。それ故、本発明のオリゴヌクレオチドは、改変されていない同じ配列のsiRNA裸出siRNAの等量より有効である。これらの観察は、式Iの基が受容体の発現のノックダウンに干渉しないと推定することを可能にする。さらに、追加のコンジュゲートの存在は、RNAi機構により実施される阻害の効力を増強する。実施例7NLF-siRNAのインビボ脳室内i.c.v.注入に対する応答及び5-HT1ARノックアウトKOマウスとの比較における抗鬱剤及び抗不安薬の作用の検討シナプス前部の5-HT1A受容体のノックダウンの有望な抗抑鬱剤の効果をアッセイするために、9から12週齢の成長したマウスで挙動分析を実施した。それらには試験の間に少なくとも1日の間隔をおいて、高架式十字迷路試験及び尾懸垂試験をこの順で実施した。高架式十字迷路試験は、薄暗い照明50ルクスの室内で地面から31cm上がった長さ30cm及び幅5cmの枝道を有する十字迷路を使用して実施した。動物は開放枝道に面した迷路の中央部分に導入して5分間自由に探索することを許した。開放及び閉鎖枝道内で費やした時間及び移動した距離をビデオ追跡システムにより測定した。装置を70エタノールで拭いて次のマウスとの間に乾燥した。全ての試験は11:00AMと4:00PMの間に実施した。試験日に、動物を薄暗い照明の挙動実験室に運び入れて試験前に少なくとも1時間邪魔をせずに放置した。尾懸垂試験法においては、マウスを尾で懸垂し、本発明者らはテープを使用して彼らを水平な棒に固定した。動物を6分間懸垂して、この期間内の無動状態を自動ビデオ追跡ソフトウェアパッケージを使用して測定した。図10で見ることができるように、不安様挙動に変化は観察されなかったが、5-HT1A自己受容体ノックダウンマウスにおいてストレス/鬱病関連試験に変化した応答があった。NLF-siRNAの有望な抗鬱剤の可能性がKOマウスと野生型の対照マウスとの間にあった。それは、5-HT1A受容体が鬱病治療のための新しい目標になり得ることを示唆する。抑鬱性患者の約40が従来のSSRI治療に応答せず、彼らは該疾患に対する新しい治療の取組みにとって第1の候補者になり得る。実施例8マウスにおけるインビボ鼻内i.n適用による機能的セロトニン作動性の測定によるナンセンスNLF-siRNAに対する5-HT1ARNLF-siRNAによるノックダウンの相違した有効性有望な治療剤の投与として鼻内法の適用を検証するために、ビヒクル及びNLF-siRNAを、低体温応答、背側の縫線核におけるmRNAレベル及び前頭前野の皮質における5-HT透析物をチェックするためにアッセイした。マウスをペントバルビタール40mg/kgi.pで麻酔して仰向けにした。PBS又はNLF-siRNAを5μlに分けてマイクロピペットの尖端で交互に鼻孔内にゆっくりと穏やかに滴下した。図11で見ることができるように、NLF-siRNA又はビヒクルの鼻内適用の結果は、insituハイブリッド形成により測定した5-HT1A受容体のmRNAの減少及びリガンド結合アッセイにより測定した5-HT1A受容体の減少であり、それらは、i.c.v適用後に観察された結果と同様である。特に、シナプス前部のノックダウンは、30であったNLF-siRNAが脳室内に適用された場合の50ノックダウンと比較した場合図11参照。さらに、NLF-siRNAの鼻内適用の結果は、8-OH-DPAT投与後の低体温応答の減少図12A参照及び、8-OH-DPATの急性適用後の前頭前野皮質の透析物の5-HTレベルの低下における減少であった図12B。さらに、5-HT1AR-NLF-siRNAの有望な抗鬱効果を実施例7で記載した尾懸垂試験法を使用して評価した。不安様挙動もやはり高架式十字迷路法により評価した。図13で見ることができるように、実験は、不安様挙動に変化は観察されなかったが図13A、無動状態時間の減少が5-HT1A自己受容体ノックダウンマウスにおけるストレス/鬱病関連試験で誘起され図13B及び強制水泳試験における無動状態時間の減少図13Cが観察されたことを示した。実施例9式Iの基及び1つのターゲティング作用剤とコンジュゲート化した5-HTTを標的とするsiRNAセロトニン輸送siRNA以後5-HTT-NLF-siRNA並びに対照群としてのビヒクルの10又は30μg/マウスの用量における、マウスにおけるインビボ鼻内適用による効力のアッセイ実施例1及び2の構造物を有する一組の化合物を上記のようにして合成した。siRNAは、Musmusculus由来のセロトニン輸送体5-HTT配列の以下の領域マウス、GenBank受入番号:NM_010484:1230-1250を標的とするように設計した。siRNAのアンチセンス及びセンス鎖は化学的に合成して配列番号1~2、表2、等張のRNAアニーリング緩衝液100mM酢酸カリウム、30mMHEPES-KOHpH:7.4、2mM酢酸マグネシウム中で、各鎖の50μM溶液を組み合わせることによりアニールした。次に該溶液を90°Cで1分インキュベートして、15秒遠心し、次に37°Cで1時間インキュベートする。アニールした溶液をHPLCで精製して選択したsiRNA分画を凍結乾燥する。siRNAの貯蔵溶液は、凍結乾燥した生成物をRNAアーゼを含まない水に再懸濁することにより調製して使用するまで-20°Cで貯蔵した。使用に先立って、全てのsiRNA貯蔵溶液は、PBS緩衝の適当なビヒクル中で鼻内適用の最終濃度に希釈した。該siRNA配列は、5-HT輸送体5-HTTのmRNAに相補的なアンチセンス配列を含み、したがって前記mRNAを抑止し、且つその発現を遮断することができる。全ての配列は、細胞中で正常過程のmRNAを調節するタンパク質との干渉を避けるために、少なくとも1つチミンTを含むヌクレオチドの末端DNAダイマーを有する示していない。この技法は当業者に周知である。これらの末端ダイマーでオリゴヌクレオチドは有効なRNAi機構を可能にする21~23塩基対を有する。表2の式Iの基とコンジュゲート化したsiRNA配列及び上記の1つのターゲティング作用剤5-HTT-NLF-siRNAを実験に使用した。実施例102通りの用量10及び30μg/マウスでのマウスにおけるインビボ鼻内i.n適用による5-HTT-NLF-siRNAの機能測定アッセイによる相違したノックダウンの有効性雄C57BL/6Jマウス21~29g、9~12週齢雄をペントバルビタール40mg/kgi.pを用いて麻酔し仰向けにした。PBS又は5-HTT-NLF-siRNAをマイクロピペット尖端から5μlに小分けして交互に鼻孔内にゆっくりと穏やか滴下した。5-HTT-NLF-siRNAの評価した用量は:各鼻孔に5μg/5μl及び15μg/5μlNLF-siRNAの合計用量:1日当たり10及び30μg/マウスであった。処置の24時間後に、マウスを頭部切断により殺害して脳を迅速に取り出し、ドライアイスで凍結して-20°Cで貯蔵した。ミクロトーム-クリオスタットを使用して厚さ14μmの組織切片を切り、APTS3-アミノプロピルトリエトキシシランコートスライド上に解凍して載せ、使用するまで-20°Cに保った。5-HTTmRNAの発現レベルを決定するために、insituハイブリッド形成アッセイを、塩基820~863マウス、GenBank受入番号:NM_010484に相補的で5-HTTに特異的なオリゴデオキシリボヌクレオチドプローブを使用して実施した。該5-HTTオリゴヌクレオチドは、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを使用して、その3’末端で[33P]-dATP>2500Ci/mmolにより個別に標識し2pmol、QIAquickヌクレオチド除去キットを使用して遠心により精製した。単一標識insituハイブリッド形成のためのプロトコルは、前に記載された手順に基づいた。簡単に述べると、実施例2で記載した凍結した組織切片を、最初室温に戻して、リン酸緩衝食塩水1×PBS:8mMNa2HPO4、1.4mMKH2PO4、136mMNaCl、2.6mMKCl中4のパラホルムアルデヒド中において4°Cで20分間固定し、3×PBS中室温で5分間、1×PBS中で2回各5分間洗浄して、予備消化したプロナーゼの溶液中で2分間21°Cでインキュベートし、最終濃度は50mMTris-HClpH7.5、5mMEDTA中で24U/mlであった。酵素活性は、1×PBS中2mg/mlのグリシンに30秒間浸漬することにより停止させた。最後に組織を1×PBS中ですすいで、等級付きのエタノールにより脱水した。ハイブリッド形成のために、放射性標識されたプローブを50ホルムアミド、4×SSC1×SSC:50mMNaCl、15mMクエン酸ナトリウム、1×デンハルトの溶液0.02フィコール、0.02ポリビニルピロリドン、0.02ウシ血清アルブミン、10デキストラン硫酸、1サルコシル、20mMリン酸緩衝液pH7.0、250μg/ml酵母tRNA及び500μg/mlサケ精子DNAを含有する溶液で希釈した。ハイブリッド形成緩衝液中の放射性プローブの最終濃度は、同じ範囲であった1.5nM。組織切片を標識されたプローブを含むハイブリッド形成溶液で覆い、ネスコフィルムNescofilmカバーガラスを上に重ねて加湿箱中で終夜42°Cでインキュベートした。次に切片を1×SSC中60°Cで4回各15分及び1×SSC中室温で30分間1回洗浄し、脱水してフィルムに1~3日間触れさせた。フィルムの光学密度をAISRコンピューター画像解析システムで半定量した。図14Aで見ることができるように、5-HTT-NLF-siRNA分子の両方の用量が背側の縫線核中の3つの異なった前後方向座標で5-HTTmRNAの特異的ノックダウンを誘発した。図14Bで見ることができるように、フィルムで測定された中脳縫線核における5-HTTmRNA陽性グレインのデンシトメトリーによる定量は、NLF-siRNAの群における発現レベルがビヒクル群と比較して30の低下したことを示した。これらの結果は、NLF-siRNAが中脳縫線核中に局在化する特異的セロトニン作動性ニューロンに対するmRNAの干渉を実行するオリゴヌクレオチドを選択的に直接指向することを示した。セロトニン輸送体タンパク質の密度を実施例4で記載したように5-HTT部位をオートラジオグラフィーで可視化するために[3H]シタロプラムを使用して測定した。NLF-siRNAの鼻内投与後24~48時間で、マウスを殺害してそれらの脳を取り出し、厚さ14μmのひと続きの冠状切片を十字縫合に対してFranklin及びPaxinos、1997以下のAP座標mmでで得た:2.2前頭前野の皮質-PFC、1.1~0.6尾状核-CPu、側方及び内側中隔核-Sep、腹側淡蒼球-VP、-1.5~-1.8海馬-HPC、視床下部-Hip及び-4.24~-4.96背側の縫線核-DR及び中央値縫線核-MnR。簡単に述べると、凍結組織切片を解凍して乾燥し、120mMNaCl及び5mMKClを含有する50mMTris-HCl緩衝液25°CでpH7.4中で15分間室温でプレインキュベートした。次に1.5nM[3H]シタロプラム70.0Ci/mmolを含有する同じ緩衝液中で60分間室温でインキュベートした。非特異的結合は、1μMフルオキセチンの存在下で残留するものと定義した。インキュベーション及び洗浄後、組織切片を蒸留氷冷水中に漬けて、冷空気流下で急速乾燥した。組織をプラスチックの3H-標準と一緒にトリチウム感応性フィルムに40日間4°Cで触れさせた。オートラジオグラムの定量分析はAISコンピューター画像解析システムで行った。共暴露した放射性標準による組織-較正データを使用することにより、オートラジオグラムのOD値を組織切片中の特定の脳領域に結合した放射活性nCi/mg組織タンパク質のレベルに変換した。図15で見ることができるように、ビヒクル又はNLF-ナンセンス-siRNAの鼻内投与と比較して、5-HTT-NLF-siRNAの鼻内適用は、オートグラフィー結合アッセイにより定量して異なった脳領域におけるセロトニン輸送体レベルの低下を誘発した。実施例1110及び30μg/マウスの用量の5-HTT-NLF-siRNAのインビボ鼻内適用i.n.により処理されたマウスにおける前頭前野の皮質中の5-HTレベルの対照群と比較した増大。5-HTTの機能的性質に対するNLF-siRNAの効果を評価するために、選択的5-HT輸送体阻害剤の5-HTTNLF-siRNAに応答における背側の線条体中の5-HTレベルに対する神経化学的効果を測定した。この目的で、雄C57BL/6Jマウス21~29g、9から12週齢雄をペントバルビタール40mg/kgi.pで麻酔して定位枠に固定した。各マウスにキュプロファン膜を備えた1本の透析プローブ長さ1.5mm;分子量カットオフ5000Daを背側の線条体mPFCFranklin及びPaxinos,1997の図解によりmmで:十字縫合からAP0.5、L-1.7、DV-4.5、に埋め込んだ。微小透析実験は、手術の24~72時間後に自由に運動するマウスで、上から吊した液体回転台に取り付けたWPIモデルsp220i注射器ポンプを用いてaCSF125mMNaCl、2.5mMKCl,1.26mMCaCl2、1.18mMMgCl2を2.0μl/分の速度で連続的に灌流するプローブにより実施した。60μlの透析液試料を30分毎にマイクロ遠心バイアル中に集めた。初期60分の安定化期の後、4~6個のベースライン試料を集めてから、シタロプラム1~10~50μMを局所投与又はフルオキセチン20mg/kgi.p.を全身投与して次に逐次透析液試料を集めた。透析実験終了時に、マウスを犠牲死させて直ちに脳を取り出し-70°Cで凍結した。その後脳の冠状切片50μmをクリオスタット上で切り、灌流部位を局在化するために標準的手順によりクレジルバイオレットで染色した。組織学的に正しいプローブ配置で動物から得られたデータのみ次の統計分析のために使用した。透析液試料中の5-HT濃度は、3μmオクタデシルシリカODSカラム7.5cm×0.46cmを使用するHPLCにより、検出酸化電位を0.6Vに設定したヒューレットパッカード1049検出器により電流測定で検出して定量した。移動相は0.15MNaH2PO4H2O、1.8mMオクチル硫酸ナトリウム、0.2mMEDTAリン酸でpH2.8に調節及び30メタノールからなり、0.7ml/分でポンプ送液した。5-HTに対する保持時間は3.5~4分であり、検出限界は2fmol/試料であった。図16で見ることができるように、ビヒクル群と比較して、5-HTT-NLF-siRNA処理されたマウス群の背側の線条体において、セロトニンレベルのフルオキセチン及びシタロプラムを含む選択的5-HTT阻害剤に対する5-HTT応答の不在又は減少があった。これは、セロトニン作動性ニューロンにおける5-HTTのノックダウンを、末端脳領域における選択的輸送体阻害剤の5-HT量に対する効果の減少により機能的に評価することができることを証明する。これらの結果は、セルトラリンコンジュゲート化siRNANLF-siRNAの投与が、核酸成分siRNAの配列に加えて5-HTTと選択的に相互作用することによりセロトニン作動性ニューロンを標的とすることを示す。実施例3から8は、5-HT1ARを指向するNLF-siRNAは、背側の縫線核に位置する5-HTニューロン中で標的遺伝子を特異的にノックダウンすることができることを示す。この効果は、脳室内適用後並びに鼻内適用後の両方で観察される。実施例10及び11は、5-HTTに対して特異的なNLF-siRNAも標的遺伝子、この場合5-HTTmRNAをノックダウンすることができることを示す。本発明のNLF-siRNA構造物のターゲティング能力は、0.3から1mg/kgマウスによるsiRNA分子の10から30μgの用量で、第3脳室3DV内への脳室内適用並びに鼻内適用の両方の後で観察されている。これは、siRNA療法として普通許容される治療の範囲であり、ヒトの治療へグレードアップする可能性がある。非侵襲的な鼻内適用もNLF-siRNA分子が治療剤として発展する可能性を増大させる。実施例12右側脳室中へのインビボ脳室内注入によるノミフェンシンとコンジュゲート化したsiRNANLF-NS-siRNAの標的指向の検証本実施例は、脳室内に注入されたNLF-NS-siRNAが黒質及び青斑核に位置する脳内特異的ニューロンに達することができることを示す。これらの細胞は、チロシンヒドロキシラーゼ染色に陽性であり、即ち、それらはドーパミン作動性又はノルアドレナリン作動性ニューロンである。使用される配列は、任意のヒト、マウス又はラット遺伝子のいずれとも相同性のないナンセンスnssiRNAである:配列は、細胞中の正常過程のmRNAを調節するタンパク質との干渉を避けるために、少なくとも1つのチミンTを含むヌクレオチドの末端DNAダイマーを有する示していない。この技法は当業者により周知である。これらの末端ダイマーとともに該オリゴヌクレオチドは、効率のよいRNAi機構を可能にする21塩基対を有する。アンチセンスa配列はCy3分子も有し、共焦点の顕微鏡におけるその目視が可能になる。siRNAを注入するために、C57BL/6Ncrl雄マウスをイソフルオランで深く麻酔して、ディジタル表示読み取りの付いた定位枠に取り付けたマウスアダプターStoelting参照番号:51625DavidKopfInstruments、940型中に置いた。21G×1.5インチの滅菌針で頭蓋に穴を開けた後、注射器10μlハミルトンにより、2μlのsiRNANLF-NS-siRNA-Cy3の蒸留水溶液合計用量100μg又はビヒクルを、右側脳室中に十字縫合からAP0.26;L-0.75;DV-2.5注射器ポンプKDScientific、KDS310により一定の流速0.5μl/分で各時点についてn=2送達した。siRNA溶液が上方に流れるのを避けるために3分間その場に残しておいた。マウスは、siRNAの投与後の2つの異なった時点、1及び3時間に4PFAで灌流した。脳を切開して4PFAの溶液中で24時間4°Cで後固定した。次に脳を30スクロース溶液中に4°Cで48時間置いた。脳を2-メチルブタン中で-30から-40°Cで凍結して-80°Cで貯蔵した。脳をクリオスタットLeicaCM3050S30mmで薄片に切った。遊離して浮く切片を洗浄して4°Cで0.1MPBS及び0.001ナトリウムアジド中に貯蔵した。切片をPBSで洗浄し、2ヤギ血清及び0.1トリトンで封鎖して、抗TH抗体1:800マウスとともに4°Cで終夜インキュベートした。洗浄後、切片をAlexaFluor647抗マウス二次抗体インビトロジェンとともに室温で1時間インキュベートした。最後に切片をDakoの蛍光性固定剤で固定して共焦点分光顕微鏡FV1000オリンパスを使用して分析した。像はFV10-ASW1.7Viewerを使用して描いた。図17及び18で見ることができるように、icv注入の1時間後、黒質緻密部及び青斑核中の一部のTH陽性細胞はCy3に対しても陽性であった。全てのTH陽性細胞がCy3に対して陽性であったわけではないが、それらの多くの比率が内側にCy3蛍光を有し、NLF-NS-siRNA-Cy3分子が一部のTH陽性ニューロン中に組み込まれたことを示した。実施例13心室内投与によるセルトラリンとコンジュゲート化したCy3標識ナンセンス2-O’-メチル-改変ギャップマーのセロトニン作動性ニューロンへの標的指向性検証。2-O’-メチルと10ヌクレオチド長のナンセンスギャップ領域とを非特異的ナンセンス配列とともに各々含有する3個のヌクレオチドのRNAウィングを含むギャップマーを含むコンジュゲートを合成した。該ギャップマーは、セルトラリンにその5’末端で及びCy3にその3’末端でコンジュゲート化されている。マウスには、Cy3を脳室内に単回注入し30μg、コンジュゲートを背側の第3脳室中に注入して、注入後24時間で殺害したn=2匹のマウス。次に標識されたCy3の局在化をレーザ共焦点顕微鏡により決定した。実験は、ギャップマーが特異的にセロトニン作動性のニューロンに局在化したことを示す図19。"