膿毒症及び自己免疫疾患を予防と治療する薬物を製造するためのクコアミンA及びクコアミンBの用途。前記クコアミンA及びクコアミンBが生薬の地骨皮から抽出されることを特徴とする請求項1に記載の用途。前記地骨皮はナス科の植物における枸杞または寧夏枸杞の乾燥根皮であることを特徴とする請求項2に記載の用途。前記薬物が膿毒症及び自己免疫疾患を予防と治療する薬物を製造することに用いられることを特徴とする請求項1に記載の用途。前記薬物が、膿毒症及び自己免疫疾患を引き起こす肝心な要素である細菌内毒素LPS及び非メチル化CpGを含むDNACpGDNAを拮抗することに用いられることを特徴とする請求項1に記載の用途。本発明では、従来の生薬における成分及び抽出物に物質基礎及び作用メカニズムが不明との主な欠陥を克服し、安全と、有効と、品質をコントロールできることとの膿毒症及び自己免疫疾患を有効的に治療する新規薬物を開発することより、現在に、臨床で応用できる有効的な薬物を欠乏するとの課題を解決する。本発明の課題を解決する手段は下記である。膿毒症及び自己免疫疾患を予防と治療する薬物を製造するためのクコアミンA及びクコアミンBの用途。前記クコアミンA及びクコアミンBが生薬の地骨皮から抽出されるものである。前記薬物が膿毒症及び自己免疫疾患を予防と治療する薬物を製造することに用いられる。前記薬物が、膿毒症及び自己免疫疾患を引き起こす肝心な要素である細菌内毒素LPS及び細菌CpGDNAを拮抗することに用いられる。前記地骨皮はナス科の植物における枸杞LyciumchinenseMillまたは寧夏枸杞LyciumbarbarumLの乾燥根皮である。出願人は長年以来、LPS及びCpGDNAをターゲットとし、病原体分子を拮抗する薬物研究を行った。バイオセンサーの追跡と選別とのプラットフォームを構築することにより、熱邪や熱毒を解除する生薬からLPS及びCpGDNAを結合と拮抗する作用を有する活性単体を選別と指向分離する。本発明は生薬の地骨皮を原料とし、lipidA及びCpGDNAをターゲットとして薬物を選別と指向分離するプラットフォームを構築する。生薬抽出物がlipidA及びCpGDNAを結合する活性を選別指標と指向分離との根拠とし、水煮、マクロ多孔性吸着樹脂、陽イオン交換、逆相高速液体クロマトグラフィ等の方法で抽出と分離と純化させ、且、体外LPS中和実験と、LPS及びCpGDNAが細胞と結合させる抑制実験と、LPS及びCpGDNAを刺激することより引き起こされる炎症反応を抑制する実験と、膿毒症モデル動物を保護する実験などのインビトロおよびインビボの薬理実験評判方法で、LPS及びCpGDNAを拮抗する有効な作用を有する二種類とするクコアミンAKukoamineAKA及びクコアミンBKukoamineBKBを最終に選別した。本発明は活性を有効的に追跡する方法で支持され、薬草から分離されたLPS及びCpGDNAを拮抗する活性物質、その作用メカニズムを明確させ、膿毒症及び自己免疫疾患を予防と治療するための、安全と、有効と、信頼されることとの新規薬物を提供する。上記クコアミンA及びクコアミンBは地骨皮から抽出と分離することより得られたスペルミン類アルカロイドである。両方は異性体であり、その分子式はC28H42N4O6であり、化学構造は下記である:クコアミンAクコアミンB本発明のクコアミンA及びクコアミンBは膿毒症及び自己免疫疾患を有効に治療する薬物になる製薬前景を有する。具体的に、出願人よりインビトロ実験で、クコアミンA及びクコアミンBがLPS及びCpGDNAとの高親和活性を有し、LPS及びCpGDNAを顕著に中和でき、両者とRAW2647細胞マウスマクロファージ細胞株との結合を遮断し、さらに、LPS及びCpGDNAがRAW2647細胞の発現を誘導すること及び炎症性メディエーターTNFαとIL6等を放出することを抑制し、細胞の炎症性活性化を根元的に遮断し、免疫反応の混乱を避ける。インビボ実験により、出願人は、クコアミンA及びクコアミンBが加熱殺大腸菌LPS及びCpGDNAの体内注射を模擬するをマウスの体内に注射するLPSとTNFαとのレベルを低減し、マウスの生存率を高め、LPS及びCpGDNAを拮抗することを発揮することも発現する。図1はlipidAとCpGDNAとの固定反応曲線、及び6類の生薬の水煎液がlipidAとCpGDNAとを結合する反応曲線である。その中に、図1aはlipidAの固定反応曲線であり、図1bはCpGDNAの固定反応曲線であり、図1cは地骨皮などの6類の生薬とlipidAを結合する作用であり、図1dは地骨皮などの6類の生薬とCpGDNAを結合する作用である。図1cと図1dにおける数値それぞれ、下記を表す:1地骨皮、2牡丹皮、3山茱萸、4大黄、5黄ゴン、6肉桂。図2はCL1~5成分の分離と、それがlipidAとCpGDNAとを結合する作用である。その中に、図2aはCL1~5成分の分離のクロマトグラムであり、図2bはCL1~5成分がlipidAを結合する作用であり、図2cはCL1~5成分がCpGDNAを結合する作用である。図3はCL4a~c成分の分離と、それがlipidAとCpGDNAとを結合する作用である。その中に、図3aはCL4a~c成分の分離のクロマトグラムであり、図3bはCL4の各成分がlipidAを結合する作用であり、図3cはCL4各成分がCpGDNAを結合する作用である。図4はCL4b成分が体外でLPSを中和する作用であり、図中の:p005。これは、当該濃度のKAとKBはRAW2647細胞がTNFαを放出する抑制作用が、その細胞毒性より導くことではない。その結果を図12に示す。実施例8:KAとKBが体内でLPS及びCpGDNAを拮抗する作用。81実験方法:実施例2の233の実験方法を参照して、加熱殺Ecoil懸濁液を調製する。波長600nmで懸濁液の吸光度を測定するOD600値10≒10×1010CFUml。昆明産マウス84匹は雄雌各半分であり、ランダムで、加熱殺Ecoil対照群、KA40mgkgEcoil群、KB40mgkgEcoil群と3つの群に分け、毎群は28匹を有する。動物の重さを量った後、加熱殺Ecoil対照群へ加熱殺Ecoil11×1010CFUKgを投与し、KA治療群とKB治療群とへ加熱殺Ecoil11×1011CFUKgを投与し、そして10分後、それぞれに40mgKgのKAとKBを注射する。動物ごとに投与総量は200ml20gであり、注射した0、2、4、8、12、24、48、72時間後それぞれに眼窩から静脈血を取出し、キネティック濁度リムルス反応よりLPSレベルを測定し、ELISA方法よりTNFαレベルを測定する。82実験結果:加熱殺Ecoil細胞自身は増殖能力を有しないが、その中に大量のLPSとCpGDNAを含有するため、体内でLPSとCpGDNAとの刺激作用をよく模擬できる。加熱殺Ecoil対照群のマウスは4時間後、そのLPSとTNFαを迅速に上げ、24~48時間内に初期状態へ戻る。加熱殺大腸菌対照群と比べて、KA治療群とKB治療群は各時点でマウス血のLPSとTNFαレベルp005、KBの濃度が25μM以上である場合、LPSとCpGDNAとはRAW2647細胞がTNFαを放出することを誘導することに対して、抑制活性が著しく強める。KBがLPSとCpGDNAに対する拮抗作用は明らかな用量-効果関係を示す。その結果を図21aに示す。2時間-効果の関係を観察する:RAW2647細胞に対して何か処理を行い場合、0、2、4、8、12、24hにただ基礎レベルのTNFαを検出し、且、各の時点の間に、TNFαレベルは有意差がない。単にLPSの刺激を与えた後、細胞上清のTNFαレベルは2hで急激に上昇し、4h後次第に緩やかになり、同時にKB200μMを投与したら、全部な各の時点で細胞上清のTNFαレベルを低減できる。単にCpGDNAの刺激を与えた後、細胞上清のTNFαレベル上昇時間はLPS組と大体同じ、12hでピーク値に達し、同時にKB200μMを投与したら、全部な各の時点でCpGDNA刺激より起こられた細胞上清のTNFαレベルを顕著に抑制でき、且、その抑制作用はLPSに対する拮抗作用より強い。その結果を図21bと図21cに示す。その中に、図21bはKBがLPSがRAW2647細胞がTNFαを放出することを誘導することを抑制する時間-効果作用を観察することであり、図21cはKBがCpGDNAがRAW2647細胞がTNFαを放出することを誘導することを抑制する時間-効果作用を観察することである。実施例18:異なる加入試料方法でKBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞がTNFαを放出することを誘導することを抑制するに対する影響。181実験方法:10NCSvvを含有するDMEM培養液を細胞培養液とし、RAW2647細胞の濃度を1×106mlまで希釈し、96ウェルプレート200μlウェルに入れ、37°C、5CO2で4時間培養する。1KBがLPS又はCpGDNAとプレインキュベーションされた後加入:10NCSvvを含有するDMEM培養液で調製されたKB400μM又はPBSがLPS200ngml又はCpGDNA20μgmlと500μlずつ混合し、37°Cで20分間、40分間培養した後、それぞれに96ウェルプレートの細胞培養液を置換し、12時間続いて培養した後、上清溶液を取り、ELISAキットの取り扱い説明書により操作を行い、TNFαの濃度を測定し、その結果は平準値±標準偏差値で表示され。2異なる時点でKB加入:LPS100ngmlまたはCpGDNA10μgmlを加入する時点を零時点とし、前の40min、前の20min、同時点、並びにその20、40、60、120min後でそれぞれにKB200μMを加え、12時間続いて培養した後、上清溶液を取り、ELISAキットの取り扱い説明書により操作を行い、TNFαの濃度を測定し、その結果は平準値±標準偏差値で表示され。3無血清加入試料で細胞を刺激する:RAW2647細胞培養液の代わりにDMEM培養液を用いる。その同時に、KBと、LPS又はCpGDNAを加入し、12時間続いて培養した後、上清溶液を取り、ELISAキットの取り扱い説明書により操作を行い、TNFαの濃度を測定し、その結果は平準値±標準偏差値で表示され。182実験結果:LPS又はCpGDNAそれぞれにPBS又はKBと20分間又は40分間プレインキュベーションした、加入試料で細胞を刺激し、KBがLPS又はCpGDNAがTNFαの放出を誘導することに対して抑制する効果は著しく強める。その次、LPS又はCpGDNAを加入する時点を零時点とし、繰り上げ40、20分間、同時0分間、又は延長20、40、60、120分間、KB介入を与える。結果から分かるのは、LPSとCpGDNAの刺激前に、KBを与え細胞を処理する場合、該処理組のTNFαレベルは同時にKBを与える組と比べて、有意差がない。KBを与えることを延長するのは60分間内に、LPS又はCpGDNAがTNFαの放出を刺激することに対して抑制作用がまだ有する。しかしながら、120分を超えたら、KBを与えることは抑制活性が有しない。尚、無血清との条件で、KBはまだ用量依存の方式でLPS又はCpGDNAがRAW2647細胞がTNFαを放出することを誘導することを抑制する。KBは血清タンパクを介して間接的にLPS又はCpGDNAに対する抑制効力を発揮する。その結果を図22に示す。その中に、図22aはKBがLPS又はCpGDNAとプレインキュベーションされた加入試料がLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞がTNFαを放出することを誘導することを抑制する作用であり、図22bはKBが異なる時点で加入試料されることがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞がTNFαを放出することを刺激することを抑制することであり、図22cはKBが血清なし条件でLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞がTNFαを放出することを刺激することを抑制することである。実施例19:KBが複数の病原体分子がRAW2647細胞がTNFαとIL6とを放出することに対して抑制する活性を測定する。191実験方法:LPS100ngml、CpGDNACpG、10μgml、Pam3CSK4Pam3、10μgml、PolyICIC、20μgml、TNFα50ngml、IL1β50ngmlとの六つ病原体分子それぞれを用いてRAW2647細胞を刺激する。その同時に、KB終濃度は200μMを加入する。実施例6の実験方法より、上清溶液を取り、ELISAキットの取り扱い説明書により操作を行い、TNFαの濃度を測定し、その結果は平準値±標準偏差値で表示され。192実験結果:KB200μMの介入はただLPSとCpGDNAとの刺激で起こられるTNFαとIL6との放出に対して、顕著な抑制作用を有し、ほかの刺激物に対して拮抗効力が有しない。これから分かるのは、KBの作用ターゲットはただLPSとCpGDNAを目指す。その結果を図23に示す。その中に、図23aはKBが複数の病原体分子がRAW2647細胞がTNFαを放出することを誘導することを抑制する効果であり、図23bはKBが複数の病原体分子がRAW2647細胞がIL6を放出することを誘導することを抑制する効果である。実施例20:フローサイトメトリーでKBがLPSとCpGDNAがRAW2647細胞を結合することを影響することを測定することである。201実験方法:10NCSvvを含有するDMEM培養液でRAW2647細胞の濃度を1×106mlまで希釈し、2mlを取り24ウェル細胞培養用プレートに入れ、37°C、5CO2で培養器に4時間培養する。実験は対照組mediumと、刺激物組と、KB介入組とを設ける。対照組に何か試薬又は刺激物を加えない、刺激物組にただFITCLPS200ngmlと5FAMCpGDNAを加え、KB介入組にLPS又はCpGDNAを加えるとともに、終濃度が50、100、200μMであるKBを投入して30分間続いて培養し、PBSで細胞を二回洗い、結合されないLPSとCpGDNAをを取り除き、細胞を集め、4パラホルムアルデヒドを用いて10分間固定した後、PBSで細胞を三回洗い、フローサイトメトリーで細胞膜表面の蛍光強度を測定する前に、遮光放置する。202実験結果:処理されないRAW2647細胞を陰性対照とし、FITCLPSと5FAMCpGDNAを加えて細胞を処理した後、曲線が右に移し、細胞膜MFI値よりプロッティングして、そのレベルは顕著に増加する。これから分かるのは、LPS又はCpGDNAは細胞膜受容体と結合し、FITCLPSと5FAMCpGDNAを与える同時に、異なる濃度のKBを加入することで介入を行うことより、用量依存の方式で細胞膜表面のMFI値を低減し、曲線が右に移すことを抑制する可能であり、該抑制作用は統計的有意性がある。その結果を図24に示す。その中に、図24aはKBがRAW2647細胞表面のLPS平均蛍光強度を影響することであり、図24bはKBがRAW2647細胞表面のCpGDNA平均蛍光強度を影響することである。実施例21:共焦点レーザー顕微鏡でKBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞に結合と内在化に影響することを観察する。211実験方法:共焦点レーザーための細胞培養用ディッシュを予め用意してRAW2647細胞を培養する。10NCSvvを含有するDMEM培養液で細胞懸濁液の濃度を5×105mlまで調整し、その懸濁液1mlを取り、細胞培養用ディッシュに入れ、37°C、5CO2インキュベータで4時間培養する。実験は対照組mediumと、刺激物組と、KB介入組とを設ける。各組濃度及び加入試料方法は実施例12と同じ、30分間培養した後4パラホルムアルデヒドを用いて10分間固定した後、PBSで細胞を三回洗い、DAPIを加入して核を2分間染色し、PBSで細胞を三回洗う。50グリセロールPBSの溶液で封入し、共焦点レーザー顕微鏡でRAW2647細胞にLPSとCpGDNAの蛍光の強度及び分布状況を測定する前に、遮光放置する。212実験結果:処理されないRAW2647細胞がFITC又は5FAMの緑色蛍光を測定されることはできない、ただ細胞をDAPIで染色するより青い蛍光を見える。FITCLPS又は5FAMCpGDNAを加入する場合、RAW2647細胞表面及び細胞内にドット状分布された緑色蛍光は顕著に増加する。これは、LPS又はCpGDNAが細胞の受容体と結合し細胞に侵入する。濃度が50、100、200μMであるKBより介入を行った後、FITCLPSと5FAMCpGDNAはRAW2647細胞表面及または細胞内に分布する緑色蛍光強度が顕著に弱くなり、且、KBの抑制作用は用量依存を明らかに示す。その結果を図25に示す。その中に、図25aはKBがLPSがRAW2647細胞に結合と内在化に影響することであり、図25bはKBがRAW2647細胞表面の5FAMCpGDNAの平均蛍光強度に影響することである。実施例22:KBがLPSとCpGDNAとがTLR4とTLR9との発現の向上を誘導することに対して抑制する作用を測定する。211実験方法:KB、LPS、CpGDNAとの用量、具体的なステップ、結果の計算及び表示は実施例15の実験方法と同じ、TLR4とTLR9とのmRNA発現を測定する。TLR4とTLR9とのプライマー配列は下記である。222実験結果:RTPCRの測定結果から分かるのは、処理されないRAW2647細胞TLR4とTLR9の発現を対照とし、LPSとCpGDNAとの刺激はTLR4とTLR9との発現を顕著に向上でき、100と200μMのKBを加入することで介入を行った後、TLR4とTLR9との向上が顕著に抑制されることは、KBがTLR4とTLR9との発現の向上を遮断でき、一層刺激反応を抑制する。その結果を図26に示す。その中に、図26aはKBがLPS又はCpGDNAがRAW2647細胞TLR4のmRNA発現を高めることを抑制することであり、図26bはKBがLPS又はCpGDNAがRAW2647細胞TLR9のmRNA発現を高めることを抑制することである。実施例23:KBがLPSと、CpGDNAと、TNFαと、IL1βとがRAW2647細胞シグナリング分子IκBαとp38とのリン酸化レベルを刺激することを抑制する作用である。231実験方法:細胞質タンパク質を抽出すること:10NCSvvを含有するDMEM培養液でRAW2647細胞懸濁液の濃度を1×106mlまで調整し、その懸濁液5mlを取り、60mm細胞培養容器に入れ、37°C、5CO2インキュベータで4時間培養する。まず、予備実験を行う:LPS、CpGDNA、TNFα50ngml又はIL1β50ngmlを用いてRAW2647細胞を刺激し、刺激時間はそれぞれに15、30、45、60分間である。本実験は対照組mediumと、KB対照組と、刺激組と、KB介入組LPSKB組、CpGDNAKB組、TNFαKB組、IL1βKB組とを設ける。対照組に何か試薬を加えない、KB組にただKB200μMを加え、刺激組にただLPS、CpGDNA、TNFα50ngml又はIL1β50ngmlを加え、KB介入組に、LPS、CpGDNA、TNFα又はIL1βを加えるとともに、KBを投入する。予備実験の時間より培養時間を確定する30分間。PBSで一回洗い、遠心によって細胞を集める、上清溶液を取り尽し、細胞沈澱を用意する。20μl細胞沈澱ごとにPMSFを添加された細胞質タンパク質抽出試薬200μlを加え、5秒激しく振り動かして細胞沈澱を完全に浮遊と分離させ、10~15分間氷浴中で放置、4°C、12000g、5分間で遠心分離させ、すぐに上清を取ってあらかじめ冷やされたプラスチックチューブへ移す。抽出された細胞質タンパク質を得る。SDSPAGEゲル電気泳動:濃縮ゲルと分離ゲルを調製するのは、下記である。ゲル鋳込:分離ゲルを前板トップから約15cmまでに鋳込み、分離ゲルを鋳込んだ後、溢れ出すようにddH2Oを注ぎ込む。室温で水平な所に30分間静かに放置する。ゲル化した後、水を出し、余分のddH2Oをろ紙で吸い取り、濃縮ゲルを前板トップまでに加入し、10ウェルの垂直挿入した30分後、垂直方向にコームを軽く抜き出し、ddH2Oでゲルウェルを二回洗い、余分のゲルを取り除く。試料調製:41の割合によってタンパク質サンプルを5×濃縮されたゲルローディングバッファーに加え、100°C、5分変性させる。プレパラティブ電気泳動:不純物を除去するため、120Vで無負荷5分間泳動する。ローディング:各サンプルのタンパク質は20μgになるため、タンパク質の濃度に基づきサンプルの体積を調整する。マイクロシリンジによりサンプルを注入する5μlタンパク質分子量マーカーをロードする。電気泳動:80Vで30分間泳動し濃縮、100Vで60分間泳動し分離、ブロモフェノールブルーのフロントラインが下パネルから1cmに達するまでに泳動が停止する。移動膜:湿式移動法を行い、実験条件は200mA、60分である。ブロックと交配:電気泳動槽から膜を取出し、005PBSTで洗い、水平シェーカーで200rpm、1時間ブロックする。ブロッキングバッファーを用いて1次抗体濃縮溶液を希釈し11000、ボルンろう板にタンパクバンドを置き、バンド全体を覆うように抗体を滴下し、4°Cで夜通し培養する。PBSTを用いてバンドを五回洗い、毎回に水平シェーカーで200rpm、5分間振動する。一次抗体の供給源により酵素標識二次抗体のタイプを確定し、15000で希釈し、培養皿に加え、37°Cで30分間培養する。PBSTを用いてバンドを五回洗い、毎回に水平シェーカーで200rpm、5分間振動する。化学発光の検証:化学発光基質AとBを同体積ずつ混合して、得られた作動液を膜に滴下し、ゲル撮影装置より化学発光法で測定し、イメージが収集と記憶される。232実験結果:LPSとCpGDNAは受容体と結合した後、細胞内のシグナルトランスダクション経路が発動され、炎症に関するシグナリング分子が活性化された。westernblotによりIκBαとp38との総蛋白及びリン酸化蛋白レベルを測定する。p38の測定結果から分かるのは、内部リファレンスタンパクとするtubulinとp38に対して各組みに発現レベルが大体同じ、pp38タンパクに対して、medium組とKB組にpp38発現がほとんどない、LPS組とCpGDNA組にpp38タンパク発現を顕著的に上げる。KB100、200μMの介入を与えた後、pp38発現を顕著的に抑える。IκBαの測定結果から分かるのは、内部リファレンスタンパクとするtubulinとp38に対して各組みに発現レベルが大体同じ、medium組を参照とし、ただKBを投与することは、IκBαとpIκBαの発現に影響しない。LPSとCpGDNAで刺激した後、IκBαの分解LPSとCpGDNAがRAW2647細胞を45分間刺激した後、IκBαの分解を測定できないため本実験の時間は30分間を選択すると、pIκBα発現を上げることとを起こすことができる。上記と同じ濃度のKBの介入を与えた後、IκBα分解とpIκBα発現とを顕著的に抑える。これはKBがLPSとCpGDNAとを中和し、両方から起これた細胞内のシグナリング分子の活性化を抑える。その結果を図27に示す。その中に、図27aはLPS、CpGDNA、TNFα又はIL1βが異なる時間15、30、45、60minでRAW2647細胞を刺激した後のIκBαの分解であり、図27bはKBがLPSと、CpGDNAと、TNFαと、IL1βとがRAW2647細胞シグナリング分子p38のリン酸化レベルを高めるすること、IκBαの分解及びリン酸化とを抑制する作用である。実施例24:KBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞NFκBを活性化することに対して抑制する作用である。241実験方法:細胞核タンパク質を抽出すること:10NCSvvを含有するDMEM培養液でRAW2647細胞懸濁液の濃度を1×106mlまで調整し、その懸濁液5mlを取り、60mm細胞培養容器に入れ、37°C、5CO2で4時間培養する。実験は対照組mediumと、KB対照組と、刺激組と、KB介入組LPSKB組、CpGDNAKB組とを設ける。対照組に何か試薬を加えない、KB組にただKB200μMを加え、刺激組にただLPS又はCpGDNAを加え、KB介入組に、LPS又はCpGDNAを加えるとともに、KBを投入する。2時間培養する。PBSで一回洗い、遠心によって細胞を集める、上清溶液を取り尽し、細胞沈澱を用意する。20μl細胞沈澱ごとにPMSFを添加された細胞質タンパク質抽出試薬A200μlを加え、5秒激しく振り動かして細胞沈澱を完全に浮遊と分離させ、10~15分間氷浴中で放置、10μl細胞質タンパク質抽出試薬Bを加入し、すぐに5秒激しく振り動かし、1分間氷浴中で放置、5秒激しく振り動かし、4°C、12000~16000g、5分間で遠心分離させ、余計な上清を取り尽し、沈澱にPMSFを添加された細胞核タンパク抽出試薬50μlを加え、20秒激しく振り動かして細胞沈澱を完全に浮遊と分離させ、また氷浴中で放置、1~2分ごとに20秒高速激しく振り動かし、そのまま30分間続き、4°C、12000g、10分間で遠心分離させ、上清を予冷されたEP管へ移して、抽出された細胞核タンパク質を得る。それを70°C冷凍保管して、測定を行う。ELISA方法よりNFκBの活性を測定する:毎ウェルに結合液30μl16ml結合液に、32μlDTTと162μlHerringspermDNAを溶解するを加入し、サンプルウェルに20μlサンプル10μg抽出されたタンパクを含有するを加入し、陽性対照ウェルにp5020μlを加え、空白対照ウェルに20μl溶解液1773μl溶解液AM2に09μl1MDTTと18μlプロテアーゼ阻害剤を溶解するを加え、30秒振り動かして完全に均一に混合させる。室温で1時間培養し、1×洗浄液450μl10×洗浄液を405mlddH2Oに溶解するで三回洗い、毎回に200μl溶液を加えて5分間穏やかに振とうする。毎ウェルに100μlNFκB抗体11000を加え、室温で1時間培養し、1×洗浄液で三回洗い、毎回に200μl溶液を加えて5分間穏やかに振とうする。毎ウェルに100μlHRP抗体11000を加え、室温で1時間培養し、1×洗浄液で四回洗い、毎回に200μl溶液を加えて5分間穏やかに振とうする。毎ウェルに100μl発光試薬を加え、5分間遮光培養する。100μl停止液を加え、波長600nmで各ウェルの吸収値を測定する。2ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイで測定する:InvitrogenLipofectamine2000reagentの取り扱い説明書より、pGLluc2PNFκBREとpGLhRlucプラスミドを同時にRAW2647細胞へ導入した、48時間後、LPS100ngml又はCpGDNA10μgmlからの刺激と、KB200μMからの介入を与え、6時間培養し、DualGloルシフェラーゼアッセイキットの取り扱い説明書より測定を行う。242実験結果:LPSとCpGDNAはシグナリング分子を活性化させた後、NFκB等の転写因子を活性化することを引き起こす。ELISA方法より、核タンパク質におけるNFκBのp50とp65サブユニットを測定する。その結果から分かるのは、刺激を受けないRAW2647細胞に比べて、ただKBよりp50とp65との発現に影響しない、LPSとCpGDNAからの刺激はp50とp65とのレベルが顕著に増加することを誘導でき、200μMKBからの介入を与えた後、LPSとCpGDNAからの刺激に起こられた核タンパク質におけるp50とp65とのレベルが増加することが顕著に抑制される。尚、ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイで測定結果も、KBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞NFκBを活性化することに対して抑制作用を有すること、を示す。その結果を図28に示す。その中に、図28aはKBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞核の中にNFκBp50サブユニットを高めることを抑制する作用であり、図28bはKBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞核の中にNFκBp65サブユニットを高めることを抑制する作用であり、図28cはルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイでKBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞NFκBを活性化することを抑制する作用を測定することである。実施例25:KBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞TLR4と、TLR9と、MyD88と、NFκBp65との発現の向上することを刺激することを抑制する作用である。251実験方法:1KBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞TLR4と、TLR9と、MyD88とのmRNA発現を高めることを抑制する作用半定量的RTPCR法である:10NCSvvを含有するDMEM培養液でRAW2647細胞懸濁液の濃度を1×106mlまで調製する。実験は、LPS又はCpGDNA刺激組と、薬投与組と、空白組とを設ける。LPS又はCpGDNA対照組それぞれにLPS100ngml又はCpGDNA10μgmlを加え、KB薬投与組にLPS100ngml又はCpGDNA10μgmlを加えるとともに、KBを加入し、空白対照組Mediumに何か試薬を加えない。試料加入終了、1時間続けて培養する。トータルRNA抽出及び逆転写が実施例15のステップにより行われる。PCR法を用いてTLR4と、TLR9と、MyD88とのmRNA発現を増幅する。配列は下記である。反応混合物を02mlPCR管に入れ、反応混合物にて1μlcDNAと、100μl2×TaqMasterMixと、1μl上流プライマーと、1μl下流プライマーと、7μlRNasefreeH2Oとを含有する。増幅プログラムは下記である。最後に、アガロースゲル電気泳動より産物を測定し、1アガロースゲルを調製してキャスト成形する。各管の増幅産物5μlを取出して、装置に注入する。100Vで30分間電気泳動する。ゲルを取出し、スキャニングを行い、QuantityOneソフトウェアを用いてイメージを分析する。2KBがLPSとCpGDNAとがRAW2647細胞のNFκBp65活性化を刺激することに対する抑制作用westernblot法である。実験方法は上記と同じ、試料加入終了、1時間続けて培養し、核タンパク質を抽出し、westernblot法よりそのNFκBp65を測定する。細胞核タンパク質抽出及びwesternblot操作ステップは実施例23と同じ。252実験結果:1半定量的RTPCR測定結果から分かるのは、KB200μMはLPS100ngml又はCpGDNA10μgmlから刺激で起こられるRAW2647細胞TLR4と、TLR9と、MyD88との発現の向上を抑制できる。その結果を図29aとbに示す。その中に、図29aはKBがLPS及びCpGDNAがRAW2647細胞TLR4とTLR9とのmRNA発現を高めることを抑制する作用であり、図29bはKBがLPS及びCpGDNACpGがRAW2647細胞MyD88のmRNA発現を高めることを抑制する作用である。2westernblot測定結果から分かるのは、KB200μMはLPS100ngml又はCpGDNA10μgmlがRAW2647細胞核のNFκBp65サブユニットを向上することに対して抑制作用を有する。これは、KBがLPSとCpGDNAとから刺激で起こられるRAW2647細胞NFκBを活性化することをに対して抑制作用を有する。その結果を図29cに示す。実施例26:KBがLPS又はCpGDNAを結合して、RAW2647細胞とマウス腹腔マクロファージ細胞の生存率に対する影響であるMTT法。261実験方法:1RAW2647細胞生存率に対する影響:実施例7と同じ、実験は対照組mediumと、KB組50、100、200、400、800μMと、LPS100ngmlKB0、100、200、400μM組と、CpGDNA10μgmlKB0、100、200、400μM組とを設ける。PBSでMTTを5mgmlと調製し、溶解させ、濾過した後、原液とし、20°Cで保管する。RAW2647細胞懸濁液の濃度を1×106mlまで調製し、96ウェル細胞培養用プレート200μlウェルに入れ、37°C、5CO2で4時間培養した後、実験の組みに応じて、それぞれに所定濃度のLPS、CpGDNA、KBを加え、37°C、5CO2で24時間培養した後、1000rpmmin、5分の遠心分離を行ない、細胞培養上清を取り捨て、毎ウェルに180ml培養液と20mlMTT原液を加入し、37°C、5CO2で4時間培養した後、1000rpmmin、10分の遠心分離を行ない、細胞培養上清を取り捨て、毎ウェルに150mlジメチルスルホキシドDMSOを加入し、10分間振とうし結晶を十分に溶解させ、すぐにマイクロプレートリーダーより波長550nmで各ウェルの吸光度を測定して、RAW2647細胞の相対生存率を示す。2マウス腹腔マクロファージ細胞の生存率に対する影響:実験方法は上記と同じ、KBがLPS又はCpGDNACpGを結合して、マウス腹腔マクロファージ細胞の生存率に対する影響を測定する。262実験結果:KB又は、KBとLPS又はCpGDNAと共同でRAW2647細胞を処理した後、各組みは対照組Mediumに比べて、吸光度は統計的に有意差がない。これから分かるのは、KBよりRAW2647細胞がTNFαとIL6を放出することに対して抑制作用はその細胞毒性から起こされない。マウス腹腔マクロファージ細胞の生存率を観察する結果も同じ、KBは初代細胞にLPSとCpGDNAに対する拮抗活性もマウス腹腔マクロファージ細胞の生存率を影響することから起こされない。その結果を図30に示す。その中に、図30aはKBがRAW2647細胞の生存率に対する影響であり、図30bはKBがLPS又はCpGDNAを結合して、RAW2647細胞の生存率に対する影響であり、図30cはKBがマウス腹腔マクロファージ細胞の生存率に対する影響であり、図30dはKBがLPS又はCpGDNAを結合して、マウス腹腔マクロファージ細胞の生存率に対する影響である。実施例27:KBが致死量の加熱殺大腸菌がマウスを攻撃することを保護する作用用量-効果関係を観察する。271実験方法:1単回投与実験:実験1:昆明産マウス40匹18~20gは雄雌各半分であり、ランダムで加熱殺大腸菌対照群と、KB30mgkg処理群に分け、毎群に20匹を有する。動物の重さを量った後、加熱殺大腸菌対照群へ加熱殺大腸菌体重当たり200ml20gと生理食塩水体重当たり200ml20gを注射し、KB処理群へ加熱殺大腸菌を注射した5分後、KB体重当たり200ml20gを注射する。その加熱殺大腸菌の注射量は10×1011CFUkgであり、KBの注射量は30mgkgである。注射終了、各群のマウスはそれぞれ個別のケージに移し飼育し、充分な同量の飼料及び水を与え、7日間内に各群のマウスの一般状態精神状態、食欲、運動、刺激に対する反応、死亡率、死期を観察する。実験2:生理食塩水でKBをそれぞれに15、30和60mgmlまで希釈し、加熱殺大腸菌懸濁液を生理食塩水で10×1010CFUmlまで希釈する。昆明産マウスは80匹は雄雌各半分であり、ランダムで加熱殺大腸菌対照群と、KB15mgkg、KB30mgkg、KB60mgkg処理群に分け、毎群に16匹を有する。動物の重さを量った後、加熱殺大腸菌対照群へ加熱殺大腸菌体重当たり200ml20gと生理食塩水体重当たり200ml20gを注射し、KB処理群へ加熱殺大腸菌を注射した5分後、それぞれに15、30、60mgmlとのKB体重当たり200ml20gを注射する。注射終了、各群のマウスはそれぞれ個別のケージに移し飼育し、充分な同量の飼料及び水を投与して、7日間内に各群のマウスの一般状態精神状態、食欲、運動、刺激に対する反応、死亡率、死期を観察する。2反復投与実験:生理食塩水でKBをそれぞれに0125、025、05mgmlまで希釈し、加熱殺大腸菌懸濁液に対する処理は上記と同じ、実験群を分けるのは上記と同じ。KB分量は125、25、5mgkgであり、投与時間は三日間内に8時間毎に一回投与する。各群のマウスの一般状態、死亡率、死期を観察する。272実験結果:1単回投与実験:KMマウスが加熱殺大腸菌を注射された後、寄り集まり、振戦、飲食停止、6時間後病状が悪くなり、目を閉じ、外部からの刺激に対して反応が大きく低下し、体表温度を下げる。深刻なものは死亡が現れ、症状が重いものは次第に死亡が現れることを始め、死亡数のピークは主に12~24時間に分布する。24時間後、個別マウスが死亡し、72時間以降マウスが死亡することは起こらない。7日間に、KB注射量の増加によるマウスの死亡率は下がる。その結果を図31aとbに示す。その中に、図31aはKB30mgkgの単回投与で致命的な用量の加熱殺大腸菌がマウスを攻撃することを保護する作用であり、図31bはKB125、25、5mgkgの単回投与で致命的な用量の加熱殺大腸菌がマウスを攻撃することを保護する作用である。2反復投与実験:反復投与実験三日間内に8時間毎に一回投与するにて、その結果もKBがモデル動物の生存率を高めることを示す。その結果を図31cに示す。実施例28:KBが亜致死量の加熱殺大腸菌がマウスを攻撃することに対して治療作用を観察する。281実験方法:昆明産マウスはランダムで二つ群に分られ、毎群に56匹を有する。10×109CFUml大腸菌液を調製し、生理食塩水でKBを6mgmlと調製する。尾静脈注射方法を用いて対照群へ加熱殺大腸菌液体重当たり02ml20gと生理食塩水体重当たり02ml20gを注射し、KB治療群へ加熱殺大腸菌液S体重当たり02ml20gとKB体重当たり02ml20gを注射し、対照群及びKB治療群それぞれに薬物を注射した0、4、8、12、24、48、72時間でランダムでマウスを選択して眼窩から静脈血を取出す。具体的な方法は下記である:マウスを頚椎脱臼法で殺し、75アルコールで皮膚を消毒する。眼球を摘出して、自然に出す血を15mlEP管へ移す。それに10μlを取出して非発熱性水に加入し、自然に5~10分間沈澱させ、1000rpm10分間の遠心分離を行い、上清を取って新たな遠心管へ移す。測定する前に20°Cで保管する。ほかのものを静かに放置して凝集になり、血清が析出した後、3000rpm10分間の遠心分離を行い、上清を取って新たな遠心管へ移す。測定する前に20°Cで保管する。1血漿中のLPSレベルを測定する:血漿試料10μlを190μl生理食塩水に溶解して、よく混ぜ合わせる。EDS99細菌内毒素測定システムの操作ステップよりLPS測定を行う。その結果は平準値±標準偏差値で表示され。2血清サイトカインレベルを測定する:マウスの血量が少ないから、実験中、血清を希釈液で2倍希釈した後、測定する。ELISAキットの取り扱い説明書により操作を行い、TNFαを測定し、その結果は平準値±標準偏差値で表示される。282実験結果:正常なKMマウスの血漿中のLPSのレベルは検出限界値以下00015EUml以下である。亜致死量の加熱殺大腸菌10×1010CFUmlを注射した後、KMマウスの血漿中のLPSのレベルは急激に上昇し、8時間でピーク値81942±15902EUmlに達し、その後、次第に下がる。72時間で大体に正常レベルに接近する。KB治療群にマウスの血漿中のLPSのレベルは時間に応する変化傾向は細菌対照群と類似、なお、4、8、12、24、48時間などの複数時点で対照群より、著しくて低いp005またはp001。その同時に、正常なKMマウスの血清はただ基本レベルTNFα100pgml以下を有し、亜致死量の加熱殺大腸菌10×1010CFUmlを注射した後、KMマウスの血清中のLPSのレベルは急激に上昇し、4時間でピーク値406840±96249pgmlに達し、その後、次第に下がる。72時間で大体に正常レベルに接近する。KB治療群にマウスの血清中のTNFαのレベルは時間に応する変化傾向は細菌対照群と類似、4、8、12、24時間で対照群より、著しくて低いp001。その結果を図32に示す。その中に、図32aはKBが亜致死量の加熱殺大腸菌がマウスの血漿中のLPSのレベルを攻撃することに影響することであり、図32bはKBが亜致死量の加熱殺大腸菌がマウスの血清中のTNFαのレベルを攻撃することに影響することである。実施例29:KBが致死量の加熱殺大腸菌がマウスを攻撃することを保護する作用時間-効果関係を観察する。291実験方法:生理食塩水でKBを6mgmlと調製する。加熱殺大腸菌懸濁液を生理食塩水で10×1010CFUmlまで希釈する。昆明産マウス96匹は雄雌各半分であり、ランダムで加熱殺大腸菌対照群と、0時間薬物投与群と、2時間薬物投与群と、4時間薬物投与群と、6時間薬物投与群と、8時間薬物投与群に分け、毎群に16匹を有する。動物の重さを量った後、加熱殺大腸菌対照群へ加熱殺大腸菌体重当たり200ml20gと生理食塩水体重当たり200ml20gを注射し、KB薬物投与群へ加熱殺大腸菌を注射した0、2、4、6、8時間後それぞれに60mgmlのKB体重当たり200ml20gを注射する。注射終了、各群のマウスはそれぞれ個別のケージに移し飼育し、充分な同量の飼料及び水を与え、7日間内に各群のマウスの一般状態精神状態、食欲、運動、刺激に対する反応、死亡率、死期を観察する。292実験結果:加熱殺大腸菌10×1011CFUkgを注射した後、2時間でKB60mgkgを単回投与することで介入を行い、まだモデル動物の生存率を高める。しかし、2時間後4、6、8時間、薬物を投与することは明らかな保護作用を有しない。その結果を図33に示す。実施例30:KBがマウスの主要臓器の病理形態に影響する。301実験方法:昆明産マウス16匹はランダムで四つの群に分けられ、毎群に4匹を有し、雄雌各半分である。実験は正常対照群とKB60mgkg注射群に分け、正常群は頚椎脱臼法で殺し、KB注射群は注射した24、48、72h時間でそれぞれに殺し、胸腔と腹腔を開け、マウスの心臓、肝、肺、腎、腸などの臓器を取出し、生理食塩水で洗浄した後、ホルムアルデヒド溶液に固定し、常軌で脱水、パラフィン包埋、HE染色、封止する。光学顕微鏡で組織病理学的変化を観察する。302実験結果:正常群のマウスに比べて、肺組織にて、KB群はより顕著な充血及び細胞浸潤がない、肝組織にて、KB群は各の肝細胞組織が中央静脈を中心とし、構造がはっきり、細胞膨張、壊死などの病理変化がない、腎組織にて、KB群は各時点で糸球体、ボーマン嚢の形態が正常で、顕著な変化がない、心筋組織にて、KB群の心筋細胞の配列ははっきり規則であり、壊死及び炎性細胞浸潤がない。上記の結果から分かるのは、KBは各時点24、48、72時間でマウスの心臓、肺、肝、腎組織に対して、光学顕微鏡で顕著な変化を発見しない。その結果を図34に示す。その中に、図34aはKBを注射されたマウスの肺組織の形態学的な構造であり、図34bはKBを注射されたマウスの肝組織の形態学的な構造であり、図34cはKBを注射されたマウスの腎組織の形態学的な構造であり、図34dはKBを注射されたマウスの心筋組織の形態学的な構造である。