ウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセート。成長因子TGF-β、IGF及びEGFを含有する請求項1記載のウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセート。PDGF-ABのレベルは、前記ライセートの10ng/mlより低く、より好ましくは前記ライセートの5ng/mlより低く、より好ましくは前記ライセートの3ng/mlより低い、及び/又は、VEGFのレベルは、前記ライセートの0.1ng/mlより低く、より好ましくは、前記ライセートの0.01ng/mlより低く、及び/又はTGF-のレベルは、前記ライセートの50ng/mlより高く、より好ましくは、前記ライセートの100ng/mlより高く、より好ましくは、前記ライセートの150ng/mlより高く、より好ましくは、前記ライセートの200ng/mlより高い、より好ましくは、前記ライセートの250ng/mlより高い。EGFのレベルは、前記ライセートの0.5ng/mlより高い、より好ましくは、前記ライセートの1ng/mlより高い、より好ましくは、前記ライセートの1.5ng/mlより高い、より好ましくは、前記ライセートの2ng/mlより高い、より好ましくは、前記ライセートの2.5ng/mlより高い、及び/又はIGFのレベルは、前記ライセートの20ng/mlより高い、より好ましくは、前記ライセートの50ng/mlより高い、より好ましくは、前記ライセートの100ng/mlより高い、請求項1又は2記載のウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセート。a出発血小板濃厚液を溶媒及び/又は界面活性剤と接触させるステップ、b前記出発血小板濃厚液を、前記溶媒及び/又は界面活性剤で培養するステップ、-期間が少なくとも5分から6時間で、-pHが約6.0~約9.0の範囲に維持され、-温度が2°C~50°Cの範囲内で、cオイル抽出によって前記溶媒及び/又は界面活性剤を選択的に除去し、水性タンパク質相を得るステップ、及びd炭を用いて、ステップbの前記溶媒及び/又は界面活性剤処理した血小板濃厚液を培養する、又はステップcの前記水性タンパク質相を培養するステップを含む、ウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセートを製造する方法。前記溶媒は、ジアルキルホスフェート又はトリアルキルホスフェート、異なるアルキル鎖を有するジアルキルホスフェート又はトリアルキルホスフェートからなる群から選択され、好ましくは、トリ-n-ブチルホスフェートTnBPである請求項4記載の方法。前記界面活性剤は、脂肪酸のポリオキシエチレン誘導体、ソルビトール無水物の部分エステル、非イオン性界面活性剤、デオキシコール酸ナトリウム及びスルホベタインからなる群から選択され、好ましくは、TritonX-45、TritonX-100、又はTween80である請求項4又は5記載の方法。ステップbにおける前記溶媒及び/又は前記界面活性剤のそれぞれの濃度は、前記出発血小板濃厚液の体積に対して、0.2~5体積である請求項4乃至6の何れか1つ記載の方法。得られたウイルス不活化成長因子血小板ライセートは請求項1乃至3の何れか1つ記載のウイルス不活化成長因子血小板ライセートである、請求項4乃至7の何れか1つ記載の方法。オイル抽出は医薬品グレードのオイルを用いて行われ、血小板濃厚液と溶媒及び/又は界面活性剤との混合物の重量に基づき、前記オイルを2~20重量、又は5~15重量、又は5~10重量の量で使用される、請求項4乃至8の何れか1つ記載の方法。ステップcの前記オイル抽出が行われる場合、ステップcの前記水性タンパク質相に対して炭抽出が行われ、炭が、前記水性タンパク質相の50~250g/l、好ましくは55~200g/l、又は60~150g/l、又は65~100g/lの量で使用され、及びオイル抽出が行わない場合、ステップbの前記溶媒及び/又は界面活性剤で処理した血小板濃厚液に抽出が行われ、炭が、前記水性タンパク質相の250~1250g/l、好ましくは275~1000g/l、又は300~750g/l、又は325~500g/lの量で使用される、請求項4乃至9の何れか1つ記載の方法。前記活性炭は、活性炭の100~550g/m2、好ましくは300~500g/m2、又は100~300g/m2の範囲内のメチレンブルーを吸着する請求項4乃至10の何れか1つ記載の方法。前記ステップcのオイル抽出後、及び/又はステップdの炭を用いる培養の後に、少なくとも一つの遠心分離ステップをさらに含む請求項4乃至11の何れか1つ記載の方法。クロマトグラフィー精製及び/又は限外濾過、及び/又はナノろ過のステップeをさらに含む請求項4乃至12の何れか1つ記載の方法。前記ステップaの前に、出発血小板濃厚液を製造する予備ステップをさらに含み、好ましくは全血からのアフェレーシス又はバフィーコート分離によって製造される請求項4乃至13の何れか1つ記載の方法。ステップaの前記出発血小板濃厚液は、プール血小板濃厚液から得られる請求項4乃至14の何れか1つ記載の方法。請求項4乃至15の何れか1つ記載の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセート、又は請求項1乃至3の何れか1つ記載のウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセートは、化粧品のための使用、骨再生又は再建を促進するための使用、又は骨折した骨を治療するための使用。請求項4乃至15の何れか1つ記載の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセート、又は請求項1乃至3の何れか1つ記載のウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセートは、invitro又はexvivoでの細胞培養のための使用、好ましくは、幹細胞の骨芽細胞系及び/又は軟骨細胞への分化を促進するための使用。EL-Ekiabyらによる出版物において非特許文献4、著者は、輸血用血漿のシングレット又はミニプ-ル及びクリオプレシピテ-トのウイルス不活化処理のために適用されるプロセスを開示し、主なステップとして、TnBP及びTritonX-45の混合物を用いて、新鮮凍結血漿FFP、又はクリオプア-血漿CPP、又はクリオプレシピテ-トに対するSD処理、SD処理した血漿材料のオイル抽出、及び活性炭を含むSD吸着フィルタ-を通して、オイル抽出した血漿材料のフィルタリングを含む。この出版物で議論されたように、開示された方法は、特に血漿タンパク質の機能活性例えば、凝固因子などを保持し、VWFマルチマ-の組成を変化させず、TnBP及びTritonX-45を許容レベルに下回って減少させ、重力によって得られた精製血漿の滅菌濾過を可能にする。この出版物は、それにもかかわらず、もっぱら血漿材料精製に向け、したがって、血小板濃厚液から成長因子を精製するために用いられる方法を開示又は示唆さえしていない。驚いたことに、本発明者らは、集中的な研究の後に、血小板濃厚液のSD処理、オイル抽出及び炭抽出、又は炭抽出のみを含むステップが、ウイルス不活化の成長因子を含む且つPDGF及びVEGFの両方に枯渇している血小板ライセ-トの簡単、迅速かつ効率的な準備を可能にすることを発見した。前記溶媒及び界面活性剤の濃度は、SD処理非経口の血液由来の治療用製品に関する規制当局によって承認された制限値を満たしている。特に、本発明の方法は、主要なタンパク質、例えばアルブミン及び免疫グロブリンの含有量を変更せず、且つ基本的に、例えばTGF-β1、EGF及びIGFなどのPDGF及びVEGF以外の成長因子の濃度に影響しない。さらに、本発明の方法は、脂質膜の溶解を可能にし、よって、脂質エンベロ-プウイルス、及び他の病原体、例えば、細菌及び寄生虫、例えば原生動物protozoaeを不活化するとともに、出発血小板濃厚液内に存在する血漿及び血小板脂質を除去する。従って、本発明の方法は、治療法、細胞治療又は細胞培養に使用するための効率的に標準化できるウイルス不活化血小板由来成長因子の混合物を提供することが示される。最後に、臨床的に数量的又は機能的な血小板減少症の矯正のために静脈内使用時に、一部は細菌汚染及び止血機能活性の喪失のリスクのために、血小板が通常、限られた5日又は7日の保存期限を持っている事実を考えると、通常、5日又は7日以上経過した大量の血小板は、毎年廃棄される。期限切れの血小板ストックを血小板由来濃縮物の製造のために使用できるようにすることで、本発明の方法は、最終的に非常に有望な経済的利害関係を示す。本発明の目的は、ウイルス不活化成長因子を含有する且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トを製造するための方法を提供する。該方法は、出発血小板濃厚液を溶媒及び又は界面活性剤と接触させるステップ、該出発血小板濃厚液を該溶媒及び又は界面活性剤で少なくとも5分間から6時間の期間に、約60~約90の範囲内に維持されているpHで、2°C~50°Cの範囲内の温度で、好ましくは25°C~40°Cの範囲で培養するステップ、水性タンパク質相を得るためにオイル抽出によって溶媒及び又は界面活性剤を除去するステップ、炭を用いて該水性タンパク質相を培養し、又は溶媒及び又は除去することにより、炭のみで溶媒及び又は界面活性剤で処理した血小板濃厚液を培養することによって溶媒及び又は界面活性剤を除去するステップを含む。好ましい実施形態において、本発明の方法で使用される溶媒は、異なるアルキル鎖を有するジアルキルホスフェ-ト又はトリアルキルホスフェ-トtrialkylphosphatesからなる群から選択され、好ましくは、トリ-n-ブチルホスフェ-トTnNBPである。好ましい実施形態において、本発明の方法で使用される界面活性剤は脂肪酸のポリオキシエチレン誘導体、ソルビト-ル無水物の部分エステル、非イオン性界面活性剤、デオキシコ-ル酸ナトリウム及びスルホベタインからなる群から選択され、より好ましくは、TritonX-45、TritonX-100、Tween80及びTween20により構成される群から選択される。好ましい実施形態では、溶媒界面活性剤を用いて血小板濃厚液を培養する培養ステップ間に該溶媒及び又は該界面活性剤のそれぞれの濃度は、前記出発血小板濃厚液の体積に対して、02~5体積であり、好ましくは02~2体積でである。本発明の方法の好ましい実施形態では、出発血小板濃厚液は、血小板濃厚液の体積に基づいて、2のTnBPのみ、又は1のTnBP及び1のTritonX-45に接触する。また、本発明の好ましい実施形態では、オイル抽出は医薬品グレ-ドのオイルを用いて行われ、溶媒及び又は界面活性剤と血小板濃厚液の混合物の重量に基づき、オイルを2~20重量、又は5~15重量、又は5~10重量の量で使用されている。好ましい実施形態では、オイル抽出が活性炭を用いる培養の前に行われる場合、活性炭は、オイル抽出後に回収された水性タンパク質相の50~250gl、好ましくは55~200gl、又は60~150gl、又は65~100glの量で使用されている。他の実施形態では、活性炭を用いる培養の前にオイル抽出が行われていない場合、活性炭を、一度溶媒及び又は界面活性剤で処理した血小板濃厚液の250~1250gl、好ましくは275~1000gl、又は300~750gl、又は325~500glの量で使用されている。好ましい実施形態において、本発明の方法は、オイル抽出後及び又は炭を用いて培養後の遠心分離の追加ステップを含む。本発明の方法は、得られた血小板ライセ-トを、クロマトグラフィ-処理するchromatographying、ナノろ過処理する病原体の除去のため、及び又は限外ろ過処理することで構成される追加ステップを更に含む。好ましい実施形態において、本発明の方法は、出発血小板濃厚液を製造する予備ステップを含む。該出発血小板濃厚液は、全血からのアフェレ-シスapheresis又はバフィ-コ-ト分離によって製造され、新鮮、期限切れの保存液体、又は期限切れの凍結保存状態である。本発明の別の目的は、ウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-ト、又は本発明の方法によって得られた、ウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トである。好ましい実施形態では、この血小板ライセ-トは、成長因子TGF-b、IGF及びEGFを含む。他の実施形態では、この血小板ライセ-トはさらにbFGFを含む。好ましい実施形態では、本発明のウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、以下のものを含む。PDGF-ABのレベルは上記ライセ-トの10ngmlより低い、より好ましくは上記ライセ-トの5ngmlより低い、より好ましくは上記ライセ-トの3ngmlより低い、及び又は、VEGFのレベルは上記ライセ-トの01ngmlより低い、より好ましくは、上記ライセ-トの001ngmlより低い、及び又はTGF-bのレベルは、上記ライセ-トの50ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの100ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの150ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの200ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの250ngmlより高い。EGFのレベルは、上記ライセ-トの05ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの1ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの15ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの2ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの25ngmlより高い、及び又はIGFのレベルは、上記ライセ-トの20ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの50ngmlより高い、より好ましくは、上記ライセ-トの100ngmlより高い。本発明の別の目的は、本発明の方法によって得られた、ウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トの使用、又はウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トを、骨再生又は再建を促進するための使用、又は骨折した骨を治療するための使用である。本発明の別の目的は、本発明の方法によって得られた、ウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トの使用、又は本発明のウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トをinvitro又はexvivoでの細胞培養のための使用、好ましくは、幹細胞の増殖及び又は分化を促進するための使用である。好ましい実施形態では、本発明の成長因子を含有する血小板ライセ-トを、幹細胞の骨芽細胞系及び又は軟骨細胞への分化を促進するために使用される。本発明の目的は、ウイルス不活化成長因子を含有する、且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トを製造するための方法であり、出発血小板濃厚液を溶媒及び又は界面活性剤と接触させるステップ、約60~約90の範囲に維持されているpHで、2°C~50°Cの範囲内の温度で、該溶媒及び又は界面活性剤を用いて、該出発血小板濃厚液を少なくとも5分から6時間の期間で培養するステップ、水性タンパク質相を得るために、オイル抽出によって該溶媒及び又は界面活性剤を除去するステップ、炭を用いて該水性タンパク質相を培養する、又は炭のみを用いて、溶媒及び又は界面活性剤で処理した血小板濃厚液を培養することによって溶媒及び又は界面活性剤を除去するステップを含む。本発明において、ウイルス不活性化とは、成長因子を含有する血小板ライセ-トは、感染性ウイルスを実質的に含まない、より具体的には、例えば、ヒト免疫不全ウイルスHIV、B型肝炎ウイルスHBV、C型肝炎ウイルスHCV、西ナイルウイルスWNV、TTウイルス、デング熱ウイルス、サイトメガロウイルスCMV、エプスタインバ-ウイルスEBV、ヒトヘルペスウイルス-8HHV-8、サル泡沫状ウイルスsimianfoamyvirus、重症急性呼吸器症候群ウイルスSARSコロナウイルス、H1NI及び他のインフルエンザウイルスなどの脂質エンベロ-プウイルスと共に、例えばレトロウイルス、肝炎ウイルス、サイトメガロウイルス、乳酸脱水素酵素ウイルス、ヘルペス群ウイルス、ラブドウイルス、白血病ウイルス、ミクソウイルス、アルファウイルス、アルボウイルス、パラミクソウイルス、アレナウイルス及びコロナウイルスなどのその他の脂質エンベロ-プを実質的に含まないことを意味する。実質的に含まないとは、血小板成長因子製剤は、少なくとも、ロバストなウイルスの除去ステップを特徴づけるために必要と規定されている、4log10欧州医薬品審査庁EMEAの欧州医薬品委員会CPMPにより、Noteforguidanceonvirusvalidationstudiesで規定される、基準PMPBWP26895より大きいウイルスの不活化程度を有することを意味し、好ましくは、5log10より大きい、より好ましくは、6log10より大きい。したがって、脂質エンベロ-プウイルスによる血液媒介性感染症の患者への輸血のために責任を負うことはほとんどない。本発明において、PDGF及びVEGF枯渇のとは、成長因子を含有する血小板ライセ-トは、PDGF血小板由来成長因子及びVEGF血管内皮成長因子を実質的に含まないことを意味する。具体的な実施形態では、本発明に係るウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおけるPDGF-ABの濃度は、ライセ-トの10ngmlより低い、好ましくはライセ-トの5ngmlより低い、より好ましくは、ライセ-トの3ngmlより低い。具体的な実施形態では、本発明に係るウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおけるVEGFの濃度は、ライセ-トの01ngmlより低い、好ましくは、ライセ-トの001ngmlより低い。本発明において、活性炭activatedcharcoal、活性炭素activatedcarbon又は炭は、非常に多孔質に加工された炭素の形態を意味する。よって、活性炭は、非常に大きな表面積を有しており、非常に重要な吸着能力を提供する。活性炭は、一般に、ナットシェル、泥炭、木材、コイア、亜炭、石炭及び石油ピッチなどの炭素質原料から製造される。それは物理的な再活性化ガスを使用して前駆体を活性炭にすると化学活性化炭化前に、原料は例えば、酸、強塩基、又は塩などのある種の化学物質で含浸されるを含む様々な処理によって得ることができる。活性炭はバルクとして使用することができ、又は市販のろ過カ-トリッジに充填することができる。好ましい実施形態では、本発明に用いられる活性炭は、蒸気及び又は化学的処理によって得られた粉末活性炭である。炭の多孔性は、ミクロ25nmの細孔径範囲、又はそれらの組み合わせであることができる。異なるソ-ス及び処理の種類は、最終的に得られる多孔性の種類に影響を与える可能性がある。好ましい実施形態では、活性炭のグレ-ド及び又は多孔性は、溶媒、界面活性剤、PDGF及びVEGFを保持するのに適している。本発明の方法に適する活性炭は、様々な供給元、例えば、プレパック炭ろ過カ-トリッジの場合に、3MCUNOCUNOからの活性炭及びポ-ル活性炭AKSに由来することができる。3MCUNOからの活性炭を使用する場合、多孔性グレ-ド5の活性炭が好ましい。また、溶媒、界面活性剤、PDGF及びVEGFの除去は、多孔性2、3、4よりもグレ-ド5の3MCUNO活性炭の多孔性5がより効率的である。同様に、ポ-ルからの活性炭を使用する場合、AKSグレ-ド6は、溶媒、界面活性剤、PDGF及びVEGFのより良い除去を提供するため、AKS7及びAKS4より好ましい。好ましい実施形態では、本発明の方法で用いる活性炭は、100~550gm2の範囲のメチレンブル-を吸着することが可能であり、一つの実施形態では、300~500gm2であり、又は別の実施形態では100~300gm2メチレンブル-が現在活性炭の吸着容量を測定するために標準物質を使用するである。炭は処理される流体の粘度に応じて選択することもできるが、低粘度の液体例えば20cp以下の粘度を有する用に設計される炭が好ましい。使用できる一つの特殊的な炭はCUNOR55であり、最初の5はろ過度粘度にリンクしている、二番目の5はカ-ボングレ-ドを示している。溶媒及び又は界面活性剤を除去するとは、ウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおける溶媒及び又は界面活性剤のレベルが極めて低い、好ましくは、検出不可能であることを意味している。溶媒及び又は界面活性剤の高濃度は長期毒性、特に神経学的疾患の発症に直接リンクされていることは、確かに当業者によく知られている例えば、JPRPelletier、STransue、ELSnyder、Pathogeninactivationtechniques、BestPracticeResearchClinicalHaematology、Vol19、No1、205~242頁、2006、を参照する。したがって、溶媒に関する非常に低いとは、本発明では、溶媒レベルが100ppm未満であり、好ましくは50ppm未満であり、好ましくは20ppm未満であり、より好ましくは10ppm未満であり、好ましくは5ppm未満であり、さらに好ましくは1ppm未満であることを意味する。さらに、界面活性剤に関する非常に低いとは、本発明では、界面活性剤のレベルが、500ppm未満であり、好ましくは250ppm未満であり、より好ましくは100ppm未満であり、より好ましくは50ppm未満であり、さらに好ましくは10ppm未満であることを意味する。本発明に係る又は本発明の方法によって得られたウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、少なくとも以下の機能成長因子、すなわち、特にTGF-β1及び又はTGF-β2を含むトランスフォ-ミング成長因子TGF-βス-パ-ファミリ-、インスリン様成長因子IGF及び上皮成長因子EGFを含む。好ましい実施形態では、本発明の成長因子を含有する血小板ライセ-トは、さらに塩基性線維芽細胞成長因子bFGFを含む。具体的な実施形態では、本発明に係るウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおけるTGF-β1の濃度は、少なくとも出発血小板濃厚液の濃度と類似しており、好ましくは、ライセ-トの50ngmlより高い、好ましくは、ライセ-トの100ngmlより高い、好ましくは、ライセ-トの150ngmlより高い、好ましくは、ライセ-トの200ngmlより高い、好ましくは、ライセ-トの250ngmlより高い。具体的な実施形態では、本発明に係るウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおけるIGFの濃度は、少なくとも出発血小板濃厚液の濃度と類似しており、好ましくはライセ-トの20ngmlより高い、好ましくは、ライセ-トの50ngmlより高い、好ましくは、ライセ-トの100ngmlより高い。具体的な実施形態では、本発明に係るウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおけるEGFの濃度は、ライセ-トの05ngmlより高い、好ましくはライセ-トの1ngmlより高い、好ましくはライセ-トの15ngmlより高い、好ましくはライセ-トの2ngmlより高い、好ましくは、ライセ-トの25ngmlより高い。具体的な実施形態では、本発明に係る又は本発明の方法によって得られたウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、血液細胞関連輸血反応につながるものではない。血液細胞関連輸血反応とは、このウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トが、インタクトな生細胞例えば、赤血球、血小板、白血球などを含有せず、そのため、患者における免疫学的な合併症例えば同種免疫など、及び溶血性合併症を含む様々な良く知られている輸血反応を回避することができるPlatelettransfusions、StronceketRebulla、TheLancet、August4、2007vol370427-438、を参照する。確かに、免疫応答性である受血者は、大抵、ドナ-の血液細胞の抗原に対する免疫応答を示しており、それ故に、関与する血液細胞及び特異抗原に応じる様々な臨床結果をもたらす。最も一般的に関与する抗原は、次のカテゴリに選択される。すなわち、1HLAsクラスI、血小板及び白血球によって共有される、2HLAsクラスII、一部の白血球に存在している、3顆粒球特異抗原、4血小板特異抗原例えば、ヒト血小板抗原HPAなど、5赤血球特異抗原である。具体的な実施形態では、本発明のウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、ABの血液型のドナ-から採取した血小板濃厚液から製造され、それによって抗A又は抗Bヘマグルチニンが含まれておらず、それによって特に受血者における潜在的な溶血反応を回避する。別の具体的な実施形態では、本発明のウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、ドナ-と同じ血液型の患者に使用されるisoグル-プ血液ドナ-例えばA型又はグル-プBドナ-から採取した型付き血小板濃厚液から製造される。より具体的には、本発明の製造方法に関しては、血液細胞赤血球、白血球、血小板が溶媒-界面活性剤処理によって破壊溶解され、それによって、患者を外来抗原と無傷の血液細胞にさらすリスクを低減、好ましくは、防止する。本発明の方法は、それ故に、治療される患者自身から得られた血小板又は同種血小板allogeneicplateletsのいずれかからウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トを準備することを可能にする。別の実施形態では、本発明の方法によって得られたウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、さらに、例えば、IgG、IgM及び又はIgAなどの免疫グロブリンを含む。具体的な実施形態では、本発明に係るウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおける免疫グロブリンIgGの濃度は、好ましくは、ライセ-トの5gLより高く、好ましくは、ライセ-トの8gL程度である。別の実施形態では、本発明の方法によって得られたウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、例えばIgG、IgM及び又はIgAなどの免疫グロブリンを除去するために、さらに、例えば、イオン交換クロマトグラフィ-などの追加の精製ステップに供することができる。別の実施形態では、本発明に係る又は本発明の方法によって得られたウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、アルブミン、フィブリノ-ゲン及びプロトロンビンの少なくとも一つを含む。具体的な実施形態では、本発明に係るウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トにおけるアルブミンの濃度は、好ましくは、ライセ-トの30gLより高い。別の実施形態では、本発明に係る又は本発明の方法によって得られたウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、a1-アンチトリプシン、a2-抗プラスミン、a2-マクログロブリン、トランスフェリン、フィブロネクチン及びC1-INHをさらに含む。好ましい実施形態では、本発明の方法で行われる、溶媒及び又は界面活性剤を用いる血小板濃厚液の培養は、2~4時間で、例えば、pHの範囲がpH70からpH75出発血小板は新鮮な血小板の場合、又はpHの範囲がpH68からpH82出発血小板は期限が切れており、及び又は凍結血小板の場合の生理的pHで行われる。有利には、培養温度は約31°Cである。本発明の方法に用いられる適切な溶媒しては、ジ-又はトリ-アルキルホスフェ-ト、例えば、トリ-n-ブチルホスフェ-ト、トリ-t-ブチルホスフェ-ト、トリ-n-ヘキシルホスフェ-ト、トリ-2-エチルヘキシルホスフェ-ト、トリ-n-デシルホスフェ-ト、ジ-n-ブチルホスフェ-ト、ジ-t-ブチルホスフェ-ト、ジ-n-ヘキシルホスフェ-ト、ジ-2-エチルヘキシルホスフェ-ト、ジ-n-デシルホスフェ-ト及び異なるアルキル鎖を有するジ-アルキルホスフェ-ト等である。特に好ましいトリ-アルキルホスフェ-トはトリ-n-ブチルホスフェ-トTnBPである。本発明の方法に用いられる適切な界面活性剤は、脂肪酸のポリオキシエチレン誘導体、ソルビト-ル無水物の部分エステル、例えば商品名Tween80であり、ポリソルベ-ト80polysorbate80、Tween20としても知られる製品、及び非イオン性界面活性剤、例えば、TritonX-100又はTritonX-45の商品名で販売されているオキシエチル化アルキルフェノ-ル等を含む。さらに考えられる界面活性剤は、例えば、N-ドデシル-N、N-ジメチル-2-アンモニオ-1-エタンスルホン酸塩等のデオキシコ-ル酸ナトリウム及びスルホベタインである。特に好ましい界面活性剤は、TritonX-45、TritonX-100、Tween80及びTween20である。本発明の具体的な実施形態では、出発血小板濃厚液は、溶媒及び界面活性剤、好ましくはTnBP及びTritonX-45で培養する。有利に、溶媒又は界面活性剤の終末濃度、又は溶媒及び界面活性剤のそれぞれの終末濃度は、血小板濃厚液の体積に対して、体積で02~5の範囲、好ましくは02~2の範囲である。好ましい実施形態では、出発血小板濃厚液を2TnBPで培養する。別の好ましい実施形態では、出発血小板濃厚液を1TnBPと1TritonX-45で培養する。溶媒及び又は界面活性剤は、医薬品グレ-ドのオイルでオイル抽出及び炭抽出、又は炭抽出のみによって、生体液から抽出できる。残りのライセ-トは溶媒及び又は界面活性剤に枯渇している。医薬品グレ-ドオイルは、例えば、植物又は動物から抽出された天然に存在する油、又は類似構造の合成化合物であることができる。適切な天然由来の油は、キャスタ-オイル別名ヒマシ油として知られている、大豆油、ひまわり油、綿実油を含む。好ましい合成化合物は合成トリグリセリドである。適切な合成トリグリセリドの例としては、トリオレイン、トリステアリン、トリパルミチン、トリミリスチン及びそれらの組み合わせを含む。医薬品グレ-ドオイルの量は、少なくとも80の脂溶性のプロセスケミカルの抽出を可能にする量であり、使用されるオイルの量が、血小板濃厚液の重量に基づいて、2~20重量であり、好ましくは5~15重量であり、より好ましくは5~10重量である。上述した炭が溶媒及び又は界面活性剤粒子の吸着及び保持可能であれば、炭抽出は上述の活性炭のいずれかで行うことができる。炭抽出は、バッチですなわち、炭はオイル抽出後に回収された水性タンパク質相と混合される又はカラムで水性タンパク質相はその後、前置沈降炭preablysedimentedcharcoalを通過する、又はプレパックコマ-シャルカ-トリッジを介して行うことができる。好ましい実施形態では、炭抽出はバッチで行われる。好ましい実施形態では、オイル抽出が活性炭を用いる培養の前に行われる場合、炭抽出は上記水性タンパク質相の50~250gl、好ましくは55~200gl、又は60~150gl、又は65~100glの量の活性炭を用いて行われる。さらに好ましい実施形態では、炭抽出は、オイル抽出後に回収された水性タンパク質相の75glの量の活性炭を用いて行われる。別の好ましい実施形態では、活性炭を用いる培養の前にオイル抽出が行われていない場合、炭抽出は、溶媒及び又は界面活性剤で処理した血小板濃厚液の250~1250gl、好ましくは275~1000gl、又は300~750gl、又は325~500glの量の活性炭を用いて行われる。好ましい実施形態では、オイル及び炭抽出後又は炭抽出のみの後の溶媒レベルは、100ppm未満であり、好ましくは50ppm未満であり、好ましくは20ppm未満であり、より好ましくは10ppm未満であり、5ppm未満であり、さらにより好ましくは1ppm未満である。好ましい実施形態では、オイル及び炭抽出後又は炭抽出のみの後の界面活性剤のレベルは、500ppm未満であり、好ましくは250未満であり、より好ましくは100ppm未満であり、より好ましくは50ppm未満であり、さらに好ましくは、10ppm未満である。好ましい実施形態では、本発明の方法は、オイル抽出後又は炭での培養後に、少なくとも遠心分離の一つのステップを含んでもよい。好ましくは、オイル及び炭抽出、又は炭抽出のみの後に行われる遠心分離ステップは、細胞の破片を除去することを可能にする。有利には、遠心分離ステップは、10から30分間、800~20000×gで、好ましくは15分間、10000×gで行われる。好ましい実施形態では、本発明の方法は、また、クロマトグラフィ-精製及び又は限外濾過、及び又はナノろ過、及び又は滅菌濾過から選択される少なくとも一つの付加的なステップを含むことができる。可能なクロマトグラフィ-精製は、その後、オイル及び炭抽出に続いて、又は炭抽出に続いて行われる。好ましくは、培養後、炭及びオイル抽出後に回収された水性タンパク質相の混合物、又は炭と、溶媒及び又は界面活性剤とで処理した血小板濃厚液の混合物を遠心分離する。上清は収集され、特に混合物の成分を分画する、又は一部の成分を除去するクロマトグラフィ-担体上に積まれる。使用できる適切なクロマトグラフィ-カラムは、逆相疎水性相互作用マトリックス、又は例えばイオン交換陰イオン及び陽イオンマトリックス及び親和性例えば、免疫親和性又は固定化ヘパリンマトリックスなどのタンパク質吸着マトリックス、又は分子篩マトリックスを含む。好ましい実施形態では、血小板ライセ-トに含まれる成長因子は、使用されるクロマトグラフィ-担体上に保持され、さらに適切な溶出緩衝液で溶出される。好ましくは、クロマトグラフ条件は、関心のある成長因子の安定性及び生理機能に適合するpHでクロマトグラフ分離精製を実行可能にするように選択され、例えば、成長因子の変性を避けることができる、実質的に中性のpHにする。ロ-ディング、洗浄及び溶出条件は、当業者の一般的な知識に基づいて決定される。オイル及び炭抽出、又は炭抽出のみによる溶媒及び又は界面活性剤の除去に続いて、例えば、ナノろ過、より具体的に75-nm、35-nm、20-nm、15-nm、又は10-nmの細孔径のフィルタ-膜を用いるナノろ過によって、例えばパルボウイルスB19、又は場合により、A型肝炎ウイルスHAVなどの非エンベロ-プ型ウイルスを不活性化又は除去する、さらなるステップを追加しても良い。具体的な実施形態では、本発明の方法において、出発物質として使用される血小板濃厚液は、単一又はプ-ル標準血小板濃厚液、例えば輸血のために製造された血小板濃厚液に対応する。血小板濃厚液は、全血バフィ-コ-ト分離に由来してもよい。バフィ-コ-ト由来の血小板濃厚液の1単位は、通常30~50mlに相当する。バフィ-コ-ト由来の血小板は、単一ユニットとして、又は例えば4~6の単一ユニットのプ-ルに対応する治療ユニットの形式の単一ユニットのプ-ルとして使用することができるtheGuidetothepreparationuseandqualityassuranceofbloodcomponents13theditioneditedbytheCouncilofEurope、を参照する。血小板濃厚液はアフェレ-シス、サイタフェレシス又は血小板フェレ-シス標準的な手法例えば、theGuidetothepreparationuseandqualityassuranceofbloodcomponents13theditioneditedbytheCouncilofEurope、を参照するにより得ることもでき、MCSHaemonetics、Trimaアクセル又はCOBEスペクトルGambro又はアミカスBaxterを使用して得ることができる。アフェレ-シス手法は、バフィ-コ-ト分離手法によって得られるものと比べ、一般的にドナ-ごとに大きな体積300mlの血小板濃厚液に相当を得る。好ましい実施形態では、本発明の方法は、出発血小板濃厚液を製造する予備ステップを含む。有利には、出発血小板濃厚液を製造する方法は、例えば、全血献血からアフェレ-シス又は血小板製剤などの標準的な血液銀行手法と、例えば血液細胞セ-バ-セパレ-タ又はテ-ブルトップデバイスなどを使用するそれらのポイントオブケア手法を含むが、これらに限定されない。本発明の方法において、出発物質として用いられる血小板濃厚液は、フレッシュ、すなわち採取後5又は7日間未満、期限切れ、すなわち採取後5又は7日間を超え、又は期限切れ且つ-20°C又はより低い温度に数週間凍結したもので良い。具体的な実施形態において、本発明の方法用の、出発物質としての血小板濃厚液は、さらに白血球及び又は赤血球を含んでもよい。出発血小板濃厚液は、よって、例えばリンパ球、好中球顆粒球、単球などのいくつかの分化した且つ非活性化の白血球を含んでもよい。好中球及び単球は、特に、次亜塩素酸と微生物及び菌類に対して毒性を持つ強力な殺菌酸化剤として作用する他の活性酸素誘導体とを生成するために塩化物の酸化を触媒するミエロペルオキシダ-ゼを含有する顆粒に富んでいる。したがって、出発血小板濃厚液がいくつかの分化した且つ非活性化の白血球を含む場合、本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、抗菌成分も、白血球由来の様々な成長因子もさらに含む。具体的な実施形態では、白血球に含まれるプロテア-ゼ及び酸加水分解酵素の炎症誘発効果を回避するように、白血球は出発物質として用いる血小板濃厚液から取り除かれ、好ましくは白血球除去により取り除かれる。白血球除去は可能なプリオン汚染のリスクを軽減することもできる。健常人の正常な血小板数は、一般的に血液の立方ミリメ-トルごとに15万から40万の血小板、すなわち150~400×109血小板Lである。この正常な血小板数は、健康な人の約95にみられ、残りの5は、統計的に異常な血小板数非常に低い、又は非常に高い、いずれか一方を持っている可能性がある。血小板はアフェレ-シスによって採取される場合、250mlのバッグの血小板数が一般的にミリリットルごとに12×109血小板より高くなっており、それによって、バッグユニットごとに約3×1011血小板より多い血小板数に対応する。好ましい実施形態では、出発血小板濃厚液の血小板数は、通常血液中に発見される血小板数よりも3~10倍高くなっている。本発明に係る又は本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、例えばコラ-ゲン、キトサン、セラミックなどで作られたそれらの人工的な足場と、又は血漿由来フィブリン接着剤あるいはフィブリンシ-ラントと、混合することができる。該血漿由来フィブリン接着剤あるいはフィブリンシ-ラントは、例えば治療目的に使用され、すなわち、ヒト及び又は動物の病気を治療するため、薬理学的、免疫学的又は代謝的効果により、その生理的機能を復元、矯正又は改善するために、治癒的治療又は予防的治療のために使用される。本発明に係る又は本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、溶媒及び又は界面活性剤の両方が除去され、且つウイルス安全であるため、ヒト及び又は動物の病気を治療するために、及び又はそれらの身体の浅部を接触させるために、特に適している。追加の化合物を、ウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トに加えてもよい。該化合物は、化学療法剤、抗生物質及び又はホルモンを含むが、これらに限定されない。本発明の別の目的は、本発明に係る又は本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トの治療への応用における使用と、invitro又はexvivoでの細胞培養のための使用である。invitro又はexvivoでの細胞培養に使用される場合、本発明に係る又は本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、培養基の体積に対して、1~30、好ましくは2~20、より好ましくは3~10の範囲内で培養基中に存在する。本発明の別の目的は、本発明に係る又は本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トを含む医薬及び又は化粧品である。医薬品とは、血小板ゲル、血小板接着剤、成長因子に富むフィブリン接着剤及び又は封止剤、人工的な足場を意味する。化粧品とは、外観を美化、保持、又は変更するため、又は皮膚、髪、爪、唇、目、あるいは歯のクレンジング、着色、コンディショニング、又は保護のために、人体に適用するいくつかの製剤のいずれかを意味する。本発明の別の目的は、本発明に係る又は本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トは、線維芽細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、ケラチノサイト、幹細胞及び又は移植細胞のinvitro又はexvivoでの培養に適している培養基における使用である。本発明の別の目的は、線維芽細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、ケラチノサイト、幹細胞及び又は移植細胞のinvitro又はexvivoでの培養に適し、且つ本発明に係る又は本発明の方法によって得られるウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トを含有する培養基である。好ましい実施形態では、本発明のウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トの使用は、幹細胞、特に間葉系幹細胞MSCの増殖及び又は分化を促進する。好ましい実施形態では、本発明のウイルス不活化成長因子を含有する血小板ライセ-トの使用は、幹細胞の骨芽細胞又は軟骨細胞系への分化を促進する。本発明の別の目的は、本発明のウイルス不活化成長因子を含有する且つPDGF及びVEGF枯渇の血小板ライセ-トが、骨再建、骨再生又は創傷治癒を促進するための使用、ならびに化粧品のための使用である。本発明の上記の及び他の目的、特徴及び利点は、添付の図面を参照し、以下の説明からより明らかになる。実施例I-材料及び方法1-アフェレ-シス血小板採取出発血小板濃厚液PCsは、MCS複数コンポ-ネントシステムHaemonetics、Braintree、USAを用いて、インフォ-ムドコンセントの後にボランティアドナ-から採取された。全血は、間欠流で、静脈カテ-テルを通して引き抜かれ、すぐにACD-AcitratedextrosesolutionFormulaAを用いて19の割合で抗凝固処理した。血小板は連続遠心分離により赤血球と他の血液成分から分離され、血漿中に懸濁し、滅菌容器中に集められる。収集したPCの全量は225~315mLの体積範囲に達するまで分離サイクルは数回行われ、所定の血小板収率タ-ゲットが30×1011と等しい、又はより大きい。PCは室温で低速混合下に保存され、採取の24~72時間以内に処理された。2-細胞数出発PCにおける赤血球、血小板、及び白血球の含有量は、セルカウンタ-ABCVetautomaticbloodcounter、ABXDiagnostics、Montpellier、Franceを用いて測定した。3-出発血小板濃厚液の処理a-研究デザイン出発血小板濃厚液は、図1の研究デザインに従って処理した。簡単に説明すると、PC300mLはビニ-ル袋に移され、EP1685852に記載されているように処理された。血漿濃縮物は、1終末濃度vvのトリ-n-ブチルホスフェ-トTnBP、MerckKGaA、Darmstadt、Germanyと、1終末濃度vvのTritonX-45Sigma、Missouri、USAとの組合せを用いて、室温RTで、穏やかに恒常的に攪拌70rpm、FINEPCR、Seoul、Koreaする条件で、1時間培養した。10vv、終末濃度の大豆油Sigma、Missouri、USAは、その後添加され、まず30秒間激しく混合され、その後室温で、SD処理されたPCSD-PCを用いて70rpmで、15分間混合される。次に、クリアな油性相上部、不透明な相中部及びクリアな水性タンパク質相下部を分離するために、オイルSD-PC混合物を45分間デカントした。任意の細胞破片又は不溶性の物質をペレットするため、水性タンパク質相約270mLを重力によってバッグの底部から回収し、20~25°Cで、6000×gで10分間遠心分離により清澄化した。遠心分離後、上清SD-PC-O、約265mLを、15g20mLのSD-PC-Oの比率に対応する活性炭3M、StPaul、MN、USA199gを用いて、70rpmで、RT室温で、30分間回収して混合した。炭をペレットし、且つクリアな上清SD-PC-OCを回収するため、その後、混合物を6000×gで、10分間、RTで遠心分離した。サンプルは、プロセスに送られ、分析まで-80°Cに凍結する。示されたデ-タは4又は5回の繰り返しによる平均数値である。4-炭比の影響予備小規模実験は、TnBP及びTritonX-45を除去するために使用される炭の最適量を決定すると共に、GFとタンパク質含有量への影響を評価するために行われた。増加した量の炭15~4gを、回転ミキサ-を用いて、RTで、70rpm、SD-PC-O20mLと30分間混合した。炭をペレットすると共に、評価まで-30°Cに凍結したクリアな上清を回収するために、次いで、混合物を6000×gで、10分間、RTで遠心分離した。5-成長因子測定手法の各段階で1mlのサンプルを採取した。血小板及び又は細胞破片をペレットし、血小板由来成長因子測定用の無細胞上清を得るために、これらは、15分間、10000×gでMicrofugeR22R、BeckmanCoulter、Fullerton、CA遠心分離した。上清はその後すぐに-80°Cに凍結した。サンプルを37°Cで解凍し、高感度で特別な市販のイムノ測定により1時間以内に測定した。スタンダ-ドとサンプルは、重複測定し、その平均値を算出した。結果は、サンプルに適用した希釈係数を掛けた。PDGF-AB、TGF-β1、EGF、VEGF及びIGF-1は、具体的に、QuantikineキットRDSystems、Minneapolis、MNを用いてELISA測定により測定された。a-PDGF-ABPDGF-ABはQuantikineELISAキットDHD00B、RDSystems、Minneapolis、MNを用いて測定した。サンプルはキャリブレ-タ希釈液RD6-11で100倍希釈した。プレ-トは、2時間培養して、洗浄し、室温でさらに3時間、酵素結合したPDGF-AB抗体を用いて培養した。洗浄バッファ-を用いてウェルを洗浄し、その後基質溶媒を室温で20~30分間添加した。ウェルは光から保護された。停止液を各ウェルに添加し、450nmにおける吸収はマイクロタイタ-プレ-トリ-ダ-を用いて測定した。最小検出量は17pgmlである。b-TGF-β1TGF-β1はQuantikineELISAキットDB100B、RDSystemsを用いて測定した。サンプルはキャリブレ-タ希釈液RD5-26で100倍希釈した。TGF-β1標準液890207の希釈シリ-ズは、TGF-B-受容体IIでコ-ティングした96-ウェルマイクロタイタ-プレ-ト内において100mlの体積で準備された。潜在型TGF-β1を免疫反応型に活性化するため、TGF-β1の分析の前に、酸活性化及び中和が行われた。この目的のため、05mlのサンプルを01mlの1NのHClと混合し、室温で10分間培養し、シグマH-7523からの、12NのNaOH05MのHEPESN-2-ヒドロキシエチルピペラジン-N02-エタンスルホン酸を01ml添加することにより中和し、遠心分離を行った。その後、総TGF-β1含有量について上清画分を測定した。アリコ-ト50mlをマイクロタイタ-プレ-トに重複して適用し、その次に該マイクロタイタ-プレ-トが覆われ、室温で2時間培養した。その後、ウェルを洗浄し、酵素結合したTGF-β1ポリクロ-ナル抗体を添加し、室温で15時間培養を続けた。上記のように測定を完了した。TGF-β1の検出限界は461pgmlであった。c-EGFEGFはQuantikineELISAキットDEG00、RDSystems、Minneapolis、MNを用いて測定した。サンプルはキャリブレ-タ希釈液RD6Nで20倍希釈した。200μlの標準液、コントロ-ル、又はサンプルをウェルに添加した。プレ-トを室温で2時間培養した。各ウェルを吸引し、洗浄バッファ-で充填することにより洗浄した。EGF複合体を各ウェルに加え、室温で2時間培養した。洗浄バッファ-を用いてウェルを洗浄し、基質溶媒200μlを各ウェルに添加した。混合物を室温で20分間培養し、且つ光から保護された。停止溶媒50μlを各ウェルに添加した。各ウェルの吸光度を450nmに設定したマイクロプレ-トリ-ダ-VersaMaxTMmicroplatereader、MolecularDevices、USAを用いて、30分以内に測定した。最小検出量は07pgmlである。d-VEGFVEGFはQuantikineELISAキットDVE00、RDSystems、Minneapolis、MNを用いて測定した。サンプルはキャリブレ-タ希釈液RD6Uで2倍に希釈した。最小検出量は、製造業者に報告されているように、一般的に90pgmlより低く、平均MDDは、50ngmlである。測定希釈液RD1W100μlを各ウェルに添加し、続いて標準液VEGF標準液100μlを各ウェルに添加した。プレ-トは接着剤ストリップで覆われ、室温で2時間培養した。ウェルを3回洗浄し、次いで酵素標識VEGFを用いて、室温で2時間培養した。e-IGF-1IGF-1はQuantikineELISAキットDG100、RDSystemsからを用いて定量した。サンプルはキャリブレ-タ希釈液RD5-22で100倍希釈した。最小検出量は、製造業者に報告されているように、0007~0056ngmlの範囲であり、平均MDDは0026ngmlである。測定希釈液RD1-53150μlを各ウェルに添加し、続いて標準液89077550μlを各ウェルに添加した。プレ-トは接着剤ストリップで覆われ、2~8°Cで2時間培養した。ウェルを3回洗浄し、次いで酵素標識IGF-1を用いて、2~8°Cで、1時間培養した。上記のように測定を完成した。6-P-セレクチン測定P-セレクチンはQuantikineキットRDSystemsを用いてELISA測定によって測定した。7-タンパク質及び脂質測定総蛋白、アルブミン、総コレステロ-ル、及びトリグリセリドTGは、オイル抽出後且つ炭吸着後、RocheP800分析器によって出発PCにおいて測定された。IgG、IgM及びIgAは、CobasIntegra800RocheCOBASINTEGRA800、RocheDiagnostics、Mannheim、Germanyで、全自動ラテックス増強免疫比濁分析を用いて測定した。8-ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGESDS-PAGEは、4~12勾配ゲル、試薬及びインビトロジェンInvitrogenCorporation、Carlsbad、California、USAからの電気泳動システムを用いて非還元及び還元条件下で行った。分子量の評価はNovexR鮮明な前染色タンパク質分子量スタンダ-ドNovexRSharpPre-StainedProteinMolecularWeightStandardInvitrogenを用いて行った。9-TnBP及びTritonX-45測定残留TnBP及びTritonX-45を測定するためのサンプルの抽出は、以前の説明に従って行われた19。TNBPの定量は、ガスクロマトグラフィ-GC-17A、SHIMADZU、Tokyo、Japanと水素炎イオン化検出器により行われ、TritonX-45の定量は、リクロスフェア100RP-18カラムID:4mm、長さ:250mm、PN:724964、MerckKGaA、Darmstadt、Germanyを用いる高速液体クロマトグラフィ-SHIMADZUにより行われた。10-細胞培養invitroでの細胞成長を刺激する及びFBSを代替するSD-PC-OCの可能性は、以下の細胞株を用いて評価した。つまり、aヒト骨芽細胞MG63ATCCCRL1427、BioresourceCollectionandResearchCenter、BCRC、Hsing-chu、Taiwanと、bStatensSeruminstituteウサギ角膜上皮細胞SIRCATCCCCL-60、BCRCを用いて評価した。細胞株のメンテナンスは、37°Cで、5CO2を含む制御された雰囲気中であった。これらは、平底96ウェルプレ-トGreinerbio-one、Tokyo、Japanに、ウェルごとに2×103個の細胞の密度で、22gのNaHCO3、01mM非必須アミノ酸、1mMピルビン酸ナトリウム、2mML-グルタミン、100Umlペニシリン、及び100μgmlストレプトマイシンを含む、且つ10vvFBSGibco、Invitrogenを添加した、最小必須培養基MEM、Gibco、Invitrogenを用いて培養した。実験では、細胞は、最初に18時間付着させ、その後、異なるGFサプリメントをテストする前に、無血清培養基で6時間飢餓状態にした。無血清培養基で2回洗浄した後、細胞を異なる濃度1~10のSD-PC-OCそれぞれ031~31ngmlのTGF-βの終末濃度範囲に対応するを添加した培養基で5日間まで培養した。コントロ-ルとしては、任意のタンパク質GF添加なし又は10FBSを添加した細胞培養はまた、実行ごとに行われた。11-MTS測定増殖中の生存細胞は、製造業者の説明書に従って、MTSテトラゾリウム3--5--2--2H-テトラゾ-ル-3-イウム3--5--2--2H-tetrazolium、innerを用いて、培養の5日目に測定した。この測定は、MTS及び電子カップリング試薬フェナジンメトサルフェ-トPMSの溶媒を用いる。MTS溶媒は、組織培養基に可溶であるホルマザン産物に細胞によって生体内還元される。ホルマザンにMTSの変換は、代謝的に活性な細胞内に存在する脱水素酵素によって誘導される。490nmにおけるホルマザンの吸光度を96ウェル測定プレ-トから測定され、培養物における生細胞の数に正比例する。製造後、溶媒は光保護のチュ-ブに-20°Cに保存される。細胞培養への添加の直前に、201MTSPMSの比率でMTSとPMSの検出試薬を混合し、細胞培養への添加の比率は15MTSPMS培養基である。12-統計分析デ-タは平均-標準偏差SDとして報告される。統計比較は、両側ペア-ドスチュ-デントテストtwo-tailedpairedStudenttestで行われた。005未満のp値は、平均テストパラメ-タの差異の有意性を評価するために用いられた。p005であれば差異が有意であるとみなされた。II-結果1-細胞数出発PCは1216-1886×106血小板ml範囲:896~1388×106mlの平均値を有する。平均白血球及び赤血球数は、それぞれ032-010範囲:020~-04x106mlと、004-001範囲:002~006x109mlであった。血液細胞は、SD処理後のすべての画分に検出不能であった。2-炭の最適な比率の確定予備実験は、テストされた様々な比率で、炭処理がSD剤を除去したが、PDGF-AB及びVEGFの含有量も著しく減少させたことを示した。よって、増加する量15、3、35又は4gの炭を20mLのSD-PC-Oに混合してテストを行った。評価したすべての比率において残留TnBPは2ppm未満であったが、残留TritonX-45は、それぞれ9、3、2、及び15ppmであった。図2は、PDGF-AB、TGF-β1、EGF、VEGF、及びIGF-1の含有量に対するSD-PC-O画分の炭処理の典型的な影響を示している。評価された全ての比率においてPDGF-AB及びVEGFの含有量が著しく減少した一方、TGF-β1、EGF及びIGF-1の濃度は、基本的には変わらなかった。TnBP及びTritonX-45を10ppm未満に減少させることができる、SD-PC-O20mLごとに炭15gの比率は、したがって、さらなる実験のために選択された。3-種々の画分の組成265mLのPD-PC-O抽出物に対して199gの炭選択された15g20mLの比率に相当するを用いる炭処理の、GF、P-セレクチン、タンパク質、コレステロ-ル、及びTGの含有量に対する影響4回の実験の平均値は、表1に示されている。TGF-β1、IGF、及びEGF濃度は、オイル抽出及び炭吸着後、基本的に一定のままであったそれぞれ約368、55、及び24ngmLである。SD-PC-O中に検出された含有量と比べて、SD-PC-OCにおけるGFの全体的な回収は、TGF-β1、EGF及びIGFに対し、それぞれ815、94及び838である。一方、PDGF及びVEGFの平均濃度は、活性炭処理それぞれ約231ngmL及び0009ngmLである中に著しく低下しp001、小規模実験中に行われた観測を確認した。P-セレクチン含有量が炭処理に大きく影響されず、わずかな減少に伴った。アルブミン、IgG、IgA、IgMの平均濃度は、基本的に変わらないままだったが、フィブリノ-ゲンの含有量の小さな有意な減少が観測されたp005。平均コレステロ-ル及びTG含有量は安定している。平均TnBPは約738ppmから87ppmに低下し、TritonX-45は2628ppmから88ppmに低下したp0001。表1オイル抽出SD-PC-O後、及び活性炭処理SD-PC-OCN4後のSD処理した血小板濃厚液の組成p005p001p00014-SDS-PAGEA非還元及びB還元の条件下でのSDS-PAGE分析図3は、出発PC1、SD-PC-O2、及びSD-PC-OC3において、非還元フィブリノ-ゲンa、非還元IgGb及びアルブミンcの分子量に対応する主要なタンパク質バンドを証する、タンパク質プロファイルの検出可能な変化を明確に示さなかった。5-細胞培養MTS分析N3の結果は図4AMG63とBSIRCに示されている。10vvFBSaを添加した培養基で2細胞株を培養した場合、細胞の成長は高かったが、FBSbを有さないコントロ-ルにおいて大いに減少したp005。両方の細胞株の培養基に1~10のSD-PC-OCを添加した場合、コントロ-ルにおける成長と比べ、成長も著しく高かったp005。1SD-PC-OCの存在下のMG63細胞のMTS値は、10FBSの存在下のMTS値より小さいが、3~10の間の濃度で同様である。1SD-PC-OC及び10FBSの存在下のSIRC細胞成長は有意な差異がないが、3~10の増加量のSD-PC-OCを用いる場合、SIRC細胞成長は著しく高かったp005。10FBS又は1~10SD-PC-OCの存在下で成長した場合、両方の細胞株の細胞形態は正常であった。