"植物をトランスフェクトする方法であって、懸濁液中に懸濁されたアグロバクテリウム株の細胞及び少なくとも一つの研磨剤を含有する水性懸濁液を該植物の地上部に吹き付けることを含み、該アグロバクテリウム株は、植物の細胞内にトランスフェクトされるべき目的のDNA配列を含有する核酸コンストラクトを含むDNA分子を含む、前記方法。植物における形質を発生又は変化させる方法であって、i該植物を所望の生育状態まで生育させ;ii懸濁液中に懸濁されたアグロバクテリウム株の細胞及び少なくとも一つの研磨剤を含有する水性懸濁液を該植物の地上部に吹き付けることを含み、該形質を発生又は変化させることの可能なタンパク質又はRNAを該植物内で発現させる、該アグロバクテリウム株は、目的のDNA配列を含有する核酸コンストラクトを含むDNA分子を含み、該目的のDNA配列は該タンパク質又は該RNAをコードする、ことを含む、前記方法。植物において目的のタンパク質を製造する方法であって、i該植物を所望の生育状態まで生育させ;ii懸濁液中に懸濁されたアグロバクテリウム株の細胞及び少なくとも一つの研磨剤を含有する水性懸濁液を該植物の地上部に吹き付けることを含み、目的の該タンパク質を該植物内で発現させる、該アグロバクテリウム株は、目的のDNA配列を含有する核酸コンストラクトを含むDNA分子を含み、該目的のDNA配列は該目的のタンパク質をコードする、ことを含む、前記方法。圃場における作物を害虫から保護する方法であって、i該圃場の土壌で該植物を生育させ;ii該植物の所望の生育状態において、害虫による該植物の少なくとも一つの侵入を決定し;iii懸濁液中に懸濁されたアグロバクテリウム株の細胞及び少なくとも一つの研磨剤を含有する水性懸濁液を該植物の地上部に吹き付けることを含み、前工程で決定された害虫に対して有害なタンパク質又はRNAを該植物内で発現させる、該アグロバクテリウム株は、プロモーターに作動可能に結合された目的のDNA配列を含有する核酸コンストラクトを含むDNA分子を含み、該目的のDNA配列は該タンパク質又は該RNAをコードする、ことを含む、前記方法。該水性懸濁液が、該懸濁液の最大22×107cfuml、好ましくは最大11×107cfuml、より好ましくは最大44×106cfuml、さらに好ましくは最大11×106cfumlの濃度で該アグロバクテリウム株の細胞を含有する、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。該研磨剤が、シリカ又はカーボランダム等の水和剤用の特定の無機担体である、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。該水性懸濁液が、該懸濁液の002~2重量の間、好ましくは005~1重量の間、そしてより好ましくは01~05重量の間の量で該研磨剤を含有する、請求項6に記載の方法。懸濁液に添加される研磨剤の平均粒子径が01~30μmの間、好ましくは01~10μmの間、より好ましくは05~10μmの間、そして最も好ましくは05~5μmの間である、請求項6又は7に記載の方法。研磨剤が最大40μm、好ましくは最大30μmのD90値を有し;そして研磨剤が45μmを超える、好ましくは40μmを超える大きさを有する粒子を含有しない、請求項6~8のいずれか1項に記載の方法。該懸濁液が、農業用吹き付け補助剤、好ましくは非イオン性界面活性剤又は湿潤剤をさらに含む、請求項1~9のいずれか1項に記載の方法。吹き付け補助剤が、オルガノシリコン湿潤剤、例えばSilwetL77である、請求項10に記載の方法。該核酸コンストラクトがTDNAボーダー配列の少なくとも一つの側の横に配置しており、該植物の細胞内に該核酸コンストラクトを送達させることができる、請求項1~11のいずれか1項に記載の方法。該核酸コンストラクトが、該目的のタンパク質をコードする複製ウイルスベクターをコードし、該ウイルスベクターが該植物において全身移行することができない、請求項1~12のいずれか1項に記載の方法。該目的のDNA配列が、植物細胞において活性的なプロモーターに作動可能に結合されている、請求項1~12のいずれか1項に記載の方法。懸濁液中に懸濁されたアグロバクテリウム株の細胞及び少なくとも一つの研磨剤を含有する水性懸濁液であって、該水性懸濁液が、該懸濁液の最大44×107cfuml、好ましくは最大11×107cfuml、好ましくは最大44×106cfuml、より好ましくは最大11×106cfumlの濃度で該アグロバクテリウム株の細胞を含有し;該アグロバクテリウム株は、プロモーターに作動可能に連結されていてもよい異種の目的のDNA配列を含有する核酸コンストラクトを含む異種DNA分子を含み;該懸濁液は、好ましくは、オルガノシリコン界面活性剤等の非イオン性湿潤剤を場合によりさらに含む、前記懸濁液。発明の詳細な説明本発明において、アグロバクテリウムは、アグロバクテリウム株の細胞を含有する水性懸濁液を吹き付けることにより目的の配列又はコンストラクトで植物をトランスフェクトするために用いられる。アグロバクテリウム株は、一般的に植物の形質転換及びトランスフェクションに用いられ、且つ一般的知識から当業者に公知であるアグロバクテリウムツメファシエンス及びアグロバクテリウムリゾゲネスの種に属するものでもよい。アグロバクテリウム株は、目的のDNA配列を含有する核酸コンストラクトを含むDNA分子を含む。目的のDNA配列は、植物において発現されるべきタンパク質又はRNAをコードする。核酸コンストラクトは、アグロバクテリウム株の分泌系により植物細胞の中に核酸コンストラクトを導入するために、典型的にTiプラスミドのTDNAに存在している。該目的のDNA配列での該植物のトランスフェクション及び該植物の細胞の導入を可能とするために、核酸コンストラクトは、少なくとも一方の側又は両側において、TDNAボーダー配列の横に配置されている。核酸コンストラクトにおいて、目的のDNA配列は、例えば植物細胞内で発現可能であるように存在している。このため、目的のDNA配列は、該核酸コンストラクトにおいて、典型的に植物細胞で活動的なプロモーターの制御下にある。目的のDNA配列の例としては、DNAウイルスレプリコン又はRNAウイルスレプリコン又は発現されるべき遺伝子をコードするDNA配列である。遺伝子は、植物の細胞内で発現されるべき目的のRNA又は目的のタンパク質をコードしていてもよい。ウイルスレプリコンもまた、典型的に、植物において発現されるべきRNA又は目的のタンパク質をコードする。DNAコンストラクトは、目的のDNA配列に加えて、目的のDNA配列の発現のための調節配列等の他の配列を含んでいてもよい。アグロバクテリウムを媒介とした遺伝子送達及びそのためのベクターは、例えば、序論で引用された参考文献から、又は、SlaterScottandFowlerPlantBiotechnologysecondeditionOxfordUniversityPress2008等の植物バイオテクノロジーに関する教科書から、当業者に公知である。タンパク質又はRNAの強力な発現が望まれる態様、又は、植物細胞内での多量のウイルス核酸の凝集及び植物の健康状態に対する潜在的な負の効果が懸念されない態様においては、核酸コンストラクトは、植物細胞において複製することができる複製ウイルスベクターをコードしていてもよい。複製する状態とするためには、ウイルスベクターは、植物細胞に存在する核酸ポリメラーゼ、例えばレプリコンから発現されるウイルスポリメラーゼ等によって認識可能な複製起点を含有する。RNAウイルスベクターの場合、ウイルスレプリコンは、植物プロモーターの制御下で、植物細胞の核内に導入された後にDNAコンストラクトから転写されることによって形成されてもよい。DNAウイルスレプリコンの場合、ウイルスレプリコンは、例えばWO0017365及びWO9922003に記載されているように、DNAコンストラクトにおいてウイルスレプリコンをコードする配列のそばに位置する2つの組み換え部位の間での相同組み換えによって形成されてもよい。ウイルスレプリコンがDNAコンストラクトによってコードされている場合は、RNAウイルスレプリコンが好ましい。DNAウイルスレプリコン及びRNAウイルスレプリコンの使用は、少なくとも過去15年間にわたって広く文献に記載されている。いくつかの例として、IconGeneticsによる以下の特許公報が挙げられる:WO2008028661、WO2007137788、WO2006003018、WO2005071090、WO2005049839、WO02097080、WO02088369、WO02068664。DNAウイルスベクターの例としては、ジェムニウイルスに基づくそれらである。本発明については、植物RNAウイルスに基づく、特にプラスセンス1本鎖RNAウイルスに基づくウイルスベクター又はレプリコンが好ましい。このようなウイルスベクターの例としては、実施例において使用されているタバコモザイクウイルスtobaccomosaicvirusTMV及びポテックスウイルスXpotexvirusXPVXである。ポテックスウイルスに基づくウイルスベクター及び発現系は、EP2061890に記載されている。多くの他の植物ウイルスレプリコンは、上述した特許公報に記載されている。本発明の方法における吹き付けのために用いられる水性懸濁液は、最大11×109cfumlのアグロバクテリウム細胞の濃度であってもよく、それは、LB培地における600nmでの光学密度が1のアグロバクテリウム培養物におおよそ対応している。しかしながら、本発明において達成される高いトランスフェクション効率のために、もっと低い濃度が使用されてもよく、それは、アグロバクテリウム製造用の巨大な培養槽を必要とすることなく、圃場全体等の多くの植物の処理を可能とする。従って、濃度は好ましくは最大22×107cfumlであり、より好ましくは最大11×107cfumlであり、さらに好ましくは最大44×106cfumlである。一つの態様において、濃度は、最大で懸濁液の11×106cfumlである。cfumlを単位として細胞濃度を決定することを回避するため、アグロバクテリウム懸濁液の濃度は、多くの場合、分光光度計を用いて600nmでの明確な光学密度を測定することによって決定されている。この点で、11×107cfumlの濃度は、600nmでの計算光学密度が001に対応しており、その計算光学密度は、600nmで10の光学密度を有する懸濁液を水又は緩衝液で100倍希釈することによって定義される。同様に、44×106cfuml及び11×106cfumlの濃度は、600nmでの計算光学密度がそれぞれ0004及び0001に対応しており、その計算光学密度は、600nmで10の光学密度を有する懸濁液を水又は緩衝液でそれぞれ250倍又は1000倍に希釈することによって定義される。本発明において使用されてもよい研磨剤は、アグロバクテリウム細胞の水性懸濁液において本質的に不溶である粒子の物質である。研磨剤は、特に湿潤剤と共に使用された場合、葉等の植物組織の表面を衰弱させると考えられており、それにより、植物組織の細胞内空間へのアグロバクテリウム細胞の浸透を促進している。結果として、トランスフェクション効率が向上する。本発明の研磨剤として使用されるべき粒子の物質は、殺虫製剤の水和剤wettablepowderWPにおいてキャリアーをして一般的に使用されるようなキャリアー物質であってもよい。水和剤に関して、これらのキャリアーは殺虫製剤の分野において充填剤又は不活性充填剤とも称されている。水和剤製剤は、植物保護の分野における一般的知識の一部である。世界保健機関WorldHealthOrganisationWHO及び国際連合食糧農業機関theFOODandAgricultureOrganizationoftheUnitedStatesによって編集された、ハンドブックPESTICIDESPECIFICATIONSManualforDevelopmentandUseofFAOandWHOSpecificationsforpesticidesRome2002ISBN9251048576が参照とされる。植物保護のための水和剤製剤は、例えば、EP1810569、EP1488697、EP1908348及びEP0789510に記載されている。研磨剤は、鉱物の物質、典型的に無機物質であってもよい。そのようなキャリアー物質の例としては、珪藻土、タルク、クレー、炭酸カルシウム、ベントナイト、酸クレー、アタパルジャイト、ゼオライト、絹雲母、セピオライト、又はケイ酸カルシウムである。WO02087324に記載されている高純度石英粉末等の石英粉末も使用することができる。好ましい例としては、シリカ、例えば沈降シリカ及びヒュームド親水性シリカfumedhydrophilicsilica、並びにカーボランダムである。水和剤において用いられるシリカ等のような、希釈剤又は充填剤の研磨剤性能が公知であるGAMatthewsによるpesticideApplicationMethodsthirdeditionBlackwellScience2000、その52ページを参照。本発明において研磨剤として使用される粒子無機物質の市販製品として、EvonicDegussaによって製造されている水和性シリカSipernatTM22S及びSipernatTM50Sが挙げられてもよい。他の製品は、PPGIndustriesTaiwanLtdにより製造されている合成非晶質水和性シリカであるHiSilTM257、またはHuberCorporationにより製造されている合成ケイ酸カルシウムであるHubersorb600TMである。市販されているサブミクロンの大きさのシリカは、約002μmの平均粒径を有するHiSilTM233PPGIndustriesである。研磨剤は、001~40μmの間、好ましくは0015~30μmの間、より好ましくは005~30μmの間、さらに好ましくは01~30μmの間、さらにより好ましくは01~20μmの間、さらにより好ましくは05~20μmの間、最も好ましくは10~16μmの間の中央粒径を有していてもよい。一つの態様において、中央粒径は0015~1μmの間又は002~05μmの間である。中央粒径は、MalvernInstrumentsLtdからのMastersizerTMを用いてレーザー回折により測定することができる堆積中位径volumemedianparticlesizeである。スプレーノズルの詰まりを回避するため、研磨剤を含有する最も大きい粒子の最大粒径は最大45μm、好ましくは最大40μmとすべきであり、それは篩によって決定されてもよい。篩残分がISO326219を受けて15重量である場合、この条件は十分であると考えられる。研磨剤は、上記のようなレーザー回折により測定される、最大40μm、好ましくは最大30μmのD90値を有していてもよい。典型的に、上記の粒径は、主要な粒径に関する。本発明の水性懸濁液における研磨剤の含有量は、該懸濁液の001~3重量の間、好ましくは002~2重量の間、より好ましくは005~1重量の間、及びさらにより好ましくは01~05重量の間である。本発明の水性懸濁液は、農業用吹き付け補助剤を含有する。吹き付け補助剤は、界面活性剤又は湿潤剤であってもよい。界面活性剤及び湿潤剤は、本発明において多くの利点を有する。それは、水性懸濁液の水の表面張力を低減し、植物の葉のロウ質の表面をアグロバクテリウムがより浸透可能なものとする。それはさらに、懸濁液の安定性を改善し、懸濁液中の研磨剤の沈殿物を減少させる。本発明において用いられる界面活性剤は特に限定されず、界面活性剤の例としては以下のA、B、及びCが含まれる。これらは単独で使用してよく、或いは組み合わせて使用してもよい。A非イオン性界面活性剤:界面活性剤を説明するために頻繁に用いられる測定は、HLB親水/新油バランスである。HLBは、親水性化合物及び親油性化合物に親和する界面活性剤の能力を表す。高いHLBバランスを有する界面活性剤は、親油性化合物よりも水溶性化合物とよく親和する。この点で、HLB値は12又はそれよりも大きくあるべきであり、好ましくは少なくとも13である。非イオン性界面活性剤としては、ポリアルキレンオキシド修飾ヘプタメチルトリシロキサン等のオルガノシリコン界面活性剤が本発明において最も好ましい。市販製品は、GEAdvancedMaterialsからのSilwetL77TM吹き付け補助剤である。A1ポリエチレングリコール型界面活性剤:ポリエチレングリコール型界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンアルキルC1218エーテル、アルキルナフトールのエチレンオキシド付加物、ポリオキシエチレンモノ又はジアルキルC812フェニルエーテル、ポリオキシエチレンモノ又はジアルキルC812フェニルエーテルのホルムアルデヒド縮合物、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリフェニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリベンジルフェニルエーテル、ポリオキシプロピレンモノ、ジ、又はトリベンジルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリスチリルフェニルエーテル、ポリオキシプロピレンモノ、ジ又はトリスチリルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリスチリルフェニルエーテルのポリマー、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー、アルキルC1218ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマーエーテル、アルキルC812フェニルポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマーエーテル、ポリオキシエチレンビスフェニルエーテル、ポリオキシエチレン樹脂酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸C1218モノエステル、ポリオキシエチレン脂肪酸C1218ジエステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸C1218エステル、グリセロール脂肪酸エステルのエチレンオキシド付加物、ヒマシ油のエチレンオキシド付加物、硬化ヒマシ油のエチレンオキシド付加物、アルキルC128アミンのエチレンオキシド付加物及び脂肪酸C1218アミドのエチレンオキシド付加物が含まれる;A2多価アルコール型界面活性剤:多価アルコール型界面活性剤の例としては、グリセロール脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル、ソルビトール脂肪酸C1218エステル、ソルビタン脂肪酸C128エステル、ショ糖脂肪酸エステル、多価アルコールアルキルエーテル、及び脂肪酸アルカノールアミドが含まれる。A3アセチレン型界面活性剤:アセチレン型界面活性剤の例としては、アセチレングリコール、アセチレンアルコール、アセチレングリコールのエチレンオキシド付加物及びアセチレンアルコールのエチレンオキシド付加物が含まれる。B陰イオン性界面活性剤B1カルボン酸型界面活性剤:カルボン酸型界面活性剤の例としては、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリマレイン酸、マレイン酸及びオレフィン例えば、イソブチレン及びジイソブチレンのコポリマー、アクリル酸及びイタコン酸のコポリマー、メタクリル酸及びイタコン酸のコポリマー、マレイン酸及びスチレンのコポリマー、アクリル酸及びメタクリル酸のコポリマー、アクリル酸及びアクリル酸メチルのコポリマー、アクリル酸及び酢酸ビニルのコポリマー、アクリル酸及びマレイン酸のコポリマー、Nメチル脂肪酸C1218サルコシネート、樹脂酸及び脂肪酸C1218等のカルボン酸等、並びにこれらのカルボン酸の塩が含まれる。B2硫酸エステル型界面活性剤:硫酸エステル型界面活性剤の例としては、アルキルC1218硫酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルC1218エーテル硫酸エステル、ポリオキシエチレンモノ又はジアルキルC812フェニルエーテル硫酸エステル、ポリオキシエチレンモノ又はジアルキルC812フェニルエーテルポリマーの硫酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリフェニルフェニルエーテル硫酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリベンジルフェニルエーテル硫酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリスチリルフェニルエーテル硫酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリスチリルフェニルエーテルポリマーの硫酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマーの硫酸エステル、硫酸化油、硫酸化脂肪酸エステル、硫酸化脂肪酸、硫酸化オレフィンの硫酸エステル等、及びこれらの硫酸エステルの塩が含まれるB3スルホン酸型界面活性剤:スルホン酸型界面活性剤の例としては、パラフィンC1222スルホン酸、アルキルC812ベンゼンスルホン酸、アルキルC812ベンゼンスルホン酸のホルムアルデヒド凝集物、クレゾールスルホン酸のホルムアルデヒド凝集物、オレフィンC1416スルホン酸、ジアルキルC812スルホコハク酸、リグニンスルホン酸、ポリオキシエチレンモノ又はジアルキルC812フェニルエーテルスルホン酸、ポリオキシエチレンアルキルC1218エーテルスルホコハク酸ハーフエステル、ナフタレンスルホン酸、モノ、又はジアルキルC16ナフタレンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸のホルムアルデヒド凝集物、モノ、又はジアルキルC16ナフタレンスルホン酸のホルムアルデヒド凝集物、クレソオート油スルホン酸のホルムアルデヒド凝集物、アルキルC812ジフェニルエーテルジスルホン酸、イゲポンT商品名、ポリスチレンスルホン酸、スチレンスルホン酸-メタクリル酸コポリマーのスルホン酸等、及びこれらのスルホン酸の塩が含まれる。B4リン酸エステル型界面活性剤:リン酸エステル型界面活性剤の例としては、アルキルC812リン酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルC1218エーテルリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノ又はジアルキルC812フェニルエーテルリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリアルキルC812フェニルエーテルポリマーのリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリフェニルフェニルエーテルリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリベンジルフェニルエーテルリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリスチリルフェニルエーテルリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノ、ジ、又はトリスチリルフェニルエーテルポリマーのリン酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマーのリン酸エステル、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンのリン酸エステル及び縮合リン酸例えば、トリポリリン酸等等、並びにこれらのリン酸エステルの塩が含まれる。上記B1からB4の塩には、アルカリ金属リチウム、ナトリウム及びカリウム等、アルカリ土類金属カルシウム及びマグネシウム等、アンモニウム及びアミンの様々なタイプアルキルアミン、シクロアルキルアミン、及びアルカノールアミン等が含まれる。C両性界面活性剤:両性界面活性剤の例としては、ベタイン型界面活性剤及びアミノ酸型界面活性剤が含まれる。上記界面活性剤は単独で用いてもよく、或いは2以上の界面活性剤を組み合わせて用いてもよい。特に、好適なオルガノシリコン界面活性剤は他の界面活性剤と組み合わせてもよい。本発明の水性懸濁液における界面活性剤の総濃度は、実施例で行われているのと同様に、比較吹き付け実験の実施により容易に試験を行ってもよい。しかしながら、一般的に、界面活性剤の総濃度は、該懸濁液の0005~2体積volumeの間、好ましくは001~05体積の間、より好ましくは0025~02体積の間としてよい。界面活性剤の密度は一般的にほぼ10gmlであることから、界面活性剤の総濃度は、該懸濁液の1リットル当たり005~20gの間、好ましくは該懸濁液研磨剤を含むの1リットル当たり01~50gの間、より好ましくは025~20gの間として定義してもよい。ポリアルキレンオキシド変性ヘプタメチルトリシロキサン等の上記オルガノシリコン界面活性剤が用いられる場合、吹き付けのために使用されるアグロバクテリウム懸濁液中のオルガノシリコン界面活性剤の総濃度は、001~05体積の間、好ましくは005~02体積の間としてよい。或いは、吹き付けのために使用されるアグロバクテリウム懸濁液中のオルガノシリコン界面活性剤の濃度は、該懸濁液の1リットル当たり01~50gの間、好ましくは05~20gの間として定義してもよい。水性懸濁液の物理的性質を改善するために、高度に分散されたサブミクロンサイズのケイ酸シリカ、又は尿素/ホルムアルデヒド縮合物PergopakTM等の多孔性ポリマーを添加することができる。特に、研磨剤の中央粒径が01~30μmの間、又は上記のこの範囲の好ましい部分的範囲の一つであるところでは、高度に分散されたサブミクロンサイズのシリカを懸濁液に添加することができる。ここにおいて、サブミクロンサイズのシリカは、001~05μmの間、好ましくは002~05μmの間、より好ましくは002~01μmの間の中央粒径を有するシリカである。HiSilTM233PPGIndustries等の高度に分散されたケイ酸は水性懸濁液の研磨性能に寄与することができるJensenetalBullOrgmondSanteBullWldHlthOrg41937940を参照のこと。これらの剤は、本発明の懸濁液の1リットル当たり1から10gまでの量で含有させてもよい。アグロバクテリウム懸濁液に対する更なる可能な添加剤は、吹き付けのために使用される懸濁液のpHを、所望のpH、典型的に70~75の間で維持する緩衝剤物質である。さらに、塩化ナトリウム等の無機溶解性塩を懸濁液のイオン強度を調節するために添加してもよい。LB培地等の栄養素溶液もまた、懸濁液に含有させてもよい。水性懸濁液は、以下の通り製造してもよい。一つの方法において、本発明の方法で使用されるべきアグロバクテリウム株を培養培地内に接種して、高細胞濃度まで増殖させる。大量の培養培地を得るために、高濃度化された少量の培養培地でより大きな培地を接種してもよい。アグロバクテリウムは、一般的に、600nmでODが少なくとも1、典型的に約15に対応する細胞濃度まで増殖させる。その後、そのような高濃度化されたアグロバクテリウム懸濁液を希釈して所望の細胞濃度を得る。高濃度化アグロバクテリウム懸濁液の希釈については、水を使用する。水は緩衝剤を含有していてもよい。水は、本発明の界面活性剤をさらに含有していてもよい。或いは、高濃度化アグロバクテリウム懸濁液を水で希釈し、界面活性剤及び任意の緩衝剤物質等のあらゆる添加剤を希釈過程の後又はその間に添加してもよい。研磨剤は、希釈の前、間、又は後に添加してもよい。しかしながら、研磨剤を添加している間に懸濁液を撹拌して、アグロバクテリウム懸濁液中に研磨剤を均一に分散させることが好ましい。高濃度化されたアグロバクテリウム懸濁液を希釈する工程は、希釈された懸濁液を吹き付けるために使用される噴霧器の圧縮空気タンク内で実施してもよい。本発明の方法において用いられる噴霧器は、植物の数又は吹き付けが行われるべき領域に主に依存する。吹き付けが行われるべき植物が一つ又は少数である場合については、家庭及び園芸で広く用いられているポンプ噴霧器pumpsprayerを使用することができる。これらは、05~2リットルの間の圧縮空気タンクの量を有していてもよい。中規模での適用については、レバー操作型ナップサック噴霧器等の手動操作型水圧噴霧器、又は手動操作型圧縮噴霧器を使用してもよい。しかしながら、本発明において達成される高いトランスフェクション効率は、圃場又は温室で生育する植物等の多くの植物のトランスフェクションにおいてその十分な可能性を有している。この目的のために、スプレーブームを備えているトラクターマウント水圧噴霧器等の電動式の水圧噴霧器を使用することができる。ヘリコプター又は飛行機を用いた空中適用技術もまた、巨大な圃場のために可能である。これらの型の噴霧器はいずれも当該技術において公知であり、例えばGAMatthewsによるPesticideApplicationMethodsthirdeditionBlackwellScience2000の書籍に記載されている。噴霧器の圧縮空気タンクにおいて均質な懸濁液を確実なものとするために、小型又は中型の大きさの噴霧器を、吹き付けを行う間に一定の間隔で又は継続的に振り動かしてもよい。トラクターマウント噴霧器等の大型の噴霧器は、圧縮空気タンク内に撹拌器を備えておくべきである。吹き付けられるべき懸濁液中にアグロバクテリウム細胞及び研磨剤が存在することを考慮すれば、本発明において用いられる噴霧器は、少なくとも微細な噴霧の液滴直径の噴出を生じさせるべきである。また、上述したGAMatthewsによる書籍の74頁に使用されている噴霧の分類の中で、中粒スプレーmediumspray又は粗粒スプレーcoarsesprayを使用してもよい。本発明における吹き付けの主な目的は、懸濁液で植物組織を湿潤させることである。従って、正確な液滴直径は重要ではない。しかし、植物表面に圧力を増大して吹き付けを行うことによってトランスフェクション効率をさらに改善してもよい。本発明の方法においては、植物の少なくとも一部が吹き付けられる。重要な態様においては、圃場の土壌で生育している植物、即ち、移動可能なポット又は容器の中で生育していない植物が吹き付けられる。そのような植物は、減圧浸潤のために上下逆さにすることやアグロバクテリウム懸濁液の中に浸漬させることができない。葉等の植物の少なくとも一部が吹き付けられる。好ましくは、多数の葉又は植物全体が吹き付けられる。本発明は、目的のDNA配列での植物の一過性トランスフェクションのために主に使用される。用語一過性は、例えば、選択薬剤及び選択薬剤を無害化できる選択マーカー遺伝子を用いて、トランスフェクトされていない細胞又は植物の背景で目的のDNA配列でトランスフェクトされた細胞又は植物を選択するための選択方法が使用されないことを意味する。結果として、トランスフェクトされたDNAは一般的に植物染色体DNAの中に安定的に導入されない。その代り、一過性の方法は、まさしくそのトランスフェクトされた植物においてトランスフェクションの効果を活用する。本発明は、一般的に、多細胞植物、特に高等植物をトランスフェクトするために用いられる。単子葉植物及び双子葉植物の両方をトランスフェクトすることができ、好ましくは双子葉植物である。本発明における使用のための植物には、農業においても園芸においても重要な作物種を優先して、あらゆる植物種が含まれる。本発明における使用のための一般的な作物としては、アルファルファ、オオムギ、豆類、キャノーラ、ササゲ、ワタ、トウモロコシ、クローバー、ハス、レンティル、ハウチワマメ、キビ、オーツ麦、エンドウ、落花生、イネ、ライ麦、スイートクローバー、ヒマワリ、スイートピー、ダイズ、ソルガム、ライ小麦、ヤムビーン、ハッショウマメ、ベッチ、コムギ、フジ、及びナッツ植物が含まれる。本発明を実施するために好ましい植物種としては、限定されないが、イネ科、キク科Compositeae、ナス科、及びバラ科の代表種である。本発明における使用のためのさらに好ましい種は、以下の属からの植物である:シロイヌナズナ属、ヌカボ属、アリウム属、キンギョソウ属、オランダミツバ属、ラッカセイ属、アスパラガス属、ベラドンナ属、カラスムギ属、ホウライチク属、アブラナ属、スズメノチャヒキ属、ブロワリア属Browaalia、ツバキ属、アサ属、トウガラシ属、ヒヨコマメ属、アカザ属、キクニガナ属Chichorium、ミカン属、コーヒー属、ジュズダマ属、キュウリ属、カボチャ属Curcubita、ギョウギシバ属、カモガヤ属、チョウセンアサガオ属、ニンジン属、ジギタリス属、ヤマノイモ属、アブラヤシ属、オヒシバ属、ウシノケグサ属、フラガリア属、フウロソウ属、ダイズ属、ヒマワリ属、ワスレグサ属Heterocallis、パラゴムノキ属、オオムギ属、ヒヨス属、サツマイモ属、アキノノゲシ属、ヒラマメ属、ユリ属、アマ属、ドクムギ属、ミヤコグサ属、トマト属、マヨラナ属、リンゴ属、マンゴー属、キャッサバ属、ウマゴヤシ属、ネメシア属、タバコ属、オノブリキス属Onobrychis、イネ属、キビ属、ペラルゴニウム属、チカラシバ属、ペチュニア属、エンドウ属、インゲンマメ属、アワガエリ属、イチゴツナギ属、サクラ属、キンポウゲ属、ダイコン属、スグリ属、トウゴマ属、キイチゴ属、サトウキビ属、サルピグロシス属、ライムギ属、キオン属、セタリア属、シロガラシ属、ナス属、モロコシ属、ステノタフルム属、カカオ属、シャジクソウ属、レイリョウコウ属、コムギ属、ソラマメ属、ササゲ属、ブドウ属、トウモロコシ属、及びオリレアエtheOlyreae、ファロイデアエthePharoideae及びその他。一つの態様において、本発明の方法は、植物において又は圃場で生育している多数の植物において目的のタンパク質を製造するために使用することができる。この目的のために、植物の所望の生育状態においてアグロバクテリウム懸濁液を植物に吹き付けてもよい。主な目的が、最高の可能性のある発現レベルを達成し、続いて大量のタンパク質を含有する植物材料を得るための植物を収穫することである場合は、一般的に最も高い発現レベルを与えることからウイルスベクターを使用してもよい。別の態様において、本発明の方法は、入力形質等の植物における形質を発生又は変化させるために使用される。この態様においては、目的のタンパク質又はRNAの過剰な発現は、植物の健康に対する有害な影響を回避するために望まれないかもしれない。そのような態様については、非複製性ベクター本明細書では転写ベクターとしても称される、即ち、植物細胞内に存在している核酸ポリメラーゼによって認識される機能的な複製起点を欠如するベクターが好ましい。そのような態様の例としては、植物細胞における二次メッセンジャーとしてのホルモン分子の発現である。図29の事例において、我々は、35Sプロモーターの制御下でiptコーディング配列を含有する転写ベクターを有している希釈されたアグロバクテリウムを吹き付けることによって、サイトカイニン生合成の重要な酵素であるイソペンテニルトランスフェラーゼをベンサミアナタバコの細胞内に送達することを実証する。サイトカイニンの過剰酸性により引き起こされたトランスフェクト植物の形態学的な変化が観察された図29。本発明の別の適用は、RNA発現であり、例えばRNA干渉について、その中では、干渉シグナルを、シグナルが発現されている細胞から他の細胞まで植物の中で拡張することができる。一つの例は、PooggininNatBiotech21131によって説明されているような植物内の望ましくないウイルスDNAの標的化である。一過性の系に適応可能な腫瘍遺伝子サイレンシングの例は、EscobaretalProcNatlAcadSciUSA981343713442により説明されている。図37は、ベンサミアナタバコの葉におけるフィトエンデサチュラーゼPDSの遺伝子サイレンシングによる光退色を示す。更なる例は、dsRNAをコード及び発現する目的DNAで害虫被害植物を一過的にトランスフェクトすることによって本発明の一過性方法に適応可能なBaumetalNatBiotech2513221326による記載と同様のRNA干渉を通じての甲虫類の害虫の制御である。本発明の一過性方法に適用できる更なる方法は、HuangetalProcNatlAcadSciUSA1031430214306;ChuangetalProcNatlAcadSciUSA9749854990により記載されているものである。図38に示されるものの実験結果において、フラジェリン発現は、シュードモナスシリンゲにより引き起こされる病徴から植物を保護する。さらに、本発明の方法は、所望の時点で、ジャガイモでの塊茎形成MartinezGarciaetalProcNatlAcadSciUSA991521115216等の開花期若しくは果実形成の調節に関する形質、又は転写因子を用いたフラボノイド経路の調節DelucetalPlantPhysiol14720412053に関する形質を変化させることができる。開花は、移行可能なフロリゲンタンパク質FTの一過性発現により引き起こしてもよいZeevaartCurrentOpinioninPlantBiology11541547CorbesieretalScience31610301033。トマトでの単為結果性果実は、本発明及びPandolfinietalBMCBiotechnology2により記載された方法を用いて大規模に作製してもよい。本発明の更なる適用は、LeeetalAnnalsofBotany10013911401により記載されているようなMYB転写因子の方法による綿花の発生、又は植物防御遺伝子の活性化BergeyetalProcNatlAcadSciUSA931205312058を変化させることに関連している。我々は、ベンサミアナタバコの葉におけるディフェンシンMsrA2の一過性発現がシュードモナス感染症状を著しく低減することを実証した図31。本発明はまた、圃場での作物を害虫から保護する方法も提供する。そのような方法では、多数の状態で又は圃場で生育している大部分の植物からの少なくとも一つの植物の侵入が決められてもよい。本発明の方法が急速であるために、害虫に有害なタンパク質又はRNAの発現は、害虫による侵入が決められた場合にのみ引き起こされる必要がある。従って、侵入の危険性がなくても、害虫毒素又はRNAiのためのdsRNAの強力で構成的な発現は必要ない。対応するPVXに基づく発現ベクターを有する希釈されたアグロバクテリウム培養物を吹き付けた後のバチルスチューリンゲンシスエンドトキシンの一過性発現は、タバコスズメガの幼虫による食害からベンサミアナタバコ植物を保護する図30。本発明を、以下に実施例としてさらに説明する。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されない。参考例1:コロニー形成単位cfuを単位とする液体培養物におけるアグロバクテリウム細胞濃度の決定ml当たりのコロニー形成単位cfumlを単位とする懸濁液中のアグロバクテリウム細胞の濃度は、以下のプロトコールを用いて決定することができる。コンストラクトpNMD620で形質転換されたアグロバクテリウムツメファシエンスICF320株の細胞を、25mgLカナマイシンAppliChem、A1493及び50mgLリファンピシンCarlRoth、41632を含有する75mlの液体LBS培地の中で増殖させた。細菌培養物を、継続的に振盪しながら28°Cでインキュベートした。吸光度単位absorbanceunitAUで表される細菌培養物の吸光度又は光学密度を、培養物の1ml一定分量において分光光度計を用いて600nm波長OD600で観測した。多くの液体培養物のミリリットル当たりのコロニー形成単位cfumlとして見積もられた細胞濃度は、OD600値1;13;15;17及び18で分析することができる。このため、250μl一定分量の液体培養物をLBS培地で希釈して、25mlの最終量を得た1:100希釈物。そのような1:100希釈物の25mlを225mlのLBSと混合して、1:1000希釈物を得た。1:100;1:1000;1:10000;1:100000;1:1000000;1:10000000及び1:100000000希釈の液体培養物を同様に調製した。最後の3つの希釈物の一定分量を、25mgLカナマイシン及び50mgLリファンピシンが添加されたアガーで固化したLBS培地の上に塗布した90mm直径のプレート当たり250μlの細菌培養物。各希釈物についての一定分量の塗布は三重に実施した。28°Cでの2日間のインキュベーションの後、細菌コロニーを各プレートについて計測した。1:1000000及び1:10000000希釈物の塗布は、プレート当たりそれぞれ数百個及び数十個のコロニーという結果であった。1:100000000希釈物がプレート当たり数個のコロニーを提供する限り、この希釈は細胞濃度の計算について使用しなかった。細胞濃度は、式:cfuml=4×プレート当たりのコロニー数×希釈係数、に従って見積もった。600nmでの吸光度測定により測定された細胞濃度の変換と細胞形成単位とについては、以下の関係を本明細書において使用する:10のOD600は11×109cfumlに対応する。LBS培地液体1大豆ペプトン大豆ミールのパパイン加水分解物;Duchefa、S133005酵母抽出物Duchefa、Y13331塩化ナトリウムCarlRoth、92652水に溶解させ、1MNaOHCarlRoth、67712でpH75に調整する。固体LBS培地を調製するために、液体LBS培地に15アガーCarlRoth、22662を添加した。培地は121°Cで20分間オートクレーブした。実施例1:以下の実施例で使用されるベクター本研究において、我々は、35SCaMVプロモーターに基づく標準的な転写ベクター、並びに細胞間移行能力を有する又は有さないTMV及びPVXに基づくウイルスレプリコンを使用した。転写ベクターはいずれも、pBIN19由来バイナリーベクターであるpICBV10に基づいて作製したMarillonnetetal20042006。それらは、同一のTDNA領域の右ボーダー及び左ボーダーの中に挿入された2つの発現カセットを含有した図1。pNMD293発現ベクターのクローニングのために、2つの中間コンストラクトpNMD280及びpNMD033を作製した。pNMD280は、TDNAの右ボーダーと左ボーダーとの間に、カリフラワーモザイクウイルスCAMV35Sプロモーター、タバコモザイクウイルス由来のオメガ翻訳エンハンサー、トマトブッシースタントウイルスTomatoBushyStuntVirusTBSV由来のP19サイレンシング抑制因子のコーディング配列GenBankアクセッション番号CAB564831、及びアグロバクテリウムツメファシエンスのオクトピンシンターゼ遺伝子由来のターミネーターをこの順序で含む発現カセットを含有した。次のクローニング工程を可能にするため、2つの制限酵素認識部位、EcoRI及びSphI、をTDNA右ボーダーと35Sプロモーター配列との間に導入した。pNMD033コンストラクトは、TDNAの右ボーダーと左ボーダーとの間においてEcoRI及びSpHI制限酵素認識部位のそばに位置する発現カセットを含有し、そして35Sプロモーター、オメガ翻訳エンハンサー、クラゲ緑色蛍光タンパク質のコーディング配列、及びアグロバクテリウムツメファシエンスのオクトピンシンターゼ遺伝子由来のターミネーターで、この順序で示されるよう構成された。pNMD293コンストラクトのクローニングのために、pNMD033コンストラクトからEcoRI及びSphI制限酵素を用いてGFP発現カセットを切り出し、同一の制限酵素で線状化されたpNMD280ベクターの中に移送した。得られたpNMD293コンストラクトは、TDNAの右ボーダーと左ボーダーとの間に挿入された2つの発現カセットを含有した。右ボーダーのそばに位置する発現カセットは、CAMV35Sプロモーター、オメガ翻訳エンハンサー、緑色蛍光タンパク質のコーディング配列、及びnosターミネーターこの順序で示されるを含んだ。左ボーダーのそばに位置する発現カセットは、35Sプロモーターに続いてオメガ翻訳エンハンサー、P19サイレンシング抑制因子、及びocsターミネーターを含有した。他のコンストラクトはいずれも、クローニングのためにNcoI及びBamHI制限酵素認識部位を用いてGFPコーディング配列を別の目的遺伝子のPCR増幅されたコーディング配列で置換することによって、pNMD293ベクターに基づいて作製した。転写ベクターコンストラクト内に導入された目的の遺伝子は、sGFP、オワンクラゲAequoreavictoria由来の修飾緑色蛍光タンパク質GFPGeneBankアクセッション番号EF030489pNMD293;DsRED、造礁サンゴDiscosomasp由来の赤色蛍光タンパク質GeneBankアクセッション番号AF1684192pNMD1380;トマト由来のSP3D開花因子GeneBankアクセッション番号AY186735pNMD421;シロイヌナズナ由来の開花遺伝子座FloweringLocusTFTGeneBankアクセッション番号BAA77839pNMD655;シロイヌナズナ由来のブラシノステロイド調節因子DWARF4NM114926pNMD440;イソペンテニルトランスフェラーゼIPT、アグロバクテリウムツメファシエンスC58ATCC33970株由来のサイトカイニン生合成の重要な酵素GeneBankアクセッション番号AE0078712pNMD460をコードした。細胞間移行能力を有するTMVに基づくベクター図2を、Marillonnetetalに記載されたベクターに基づいて作製した。BsaIクローニング部位を用いて目的の遺伝子のコーディング配列を結果的に挿入するために、pNMD035コンストラクトをクローニングベクターとして採用した。結果として得られたコンストラクトは、シロイヌナズナアクチン2ACT2プロモーター由来のフラグメントGenBankアクセッション番号AB026654;TVCVの5’末端GenBankアクセッション番号BRU03387、塩基対1~5455及びcrTMVのフラグメント[GenBankアクセッション番号Z29370、塩基対5457~5677、両方とも16個のイントロン挿入を含有する];目的の遺伝子;crTMV3’非翻訳領域3’NTR;GenBankアクセッション番号Z29370、及びノパリンシンターゼNosターミネーターを、この順序で含有した。全体のフラグメントを、バイナリーベクターのTDNA左ボーダーと右ボーダーとの間にクローニングした。これらのコンストラクトにおいて用いられる目的遺伝子は、GFPpNMD560、dsREDpNMD580、イネアミラーゼアポプラスト標的シグナルを有するヒトインターフェロンαapNMD38、イネアミラーゼアポプラスト標的シグナルを有するKlip27-ミニインスリンpNMD330、ソーマトコッカスダニエリTaumatococcusdanielii由来のタウマチン2pNMD700、フミコーラグリセア由来のβ-グルコシダーゼBGL4pNMD1200、サーモビフィダフスカ由来のエキソ型セルラーゼE3pNMD1160、トリコデルマリーゼイ由来のエキソグルカナーゼ1CBHIpNMD1180、ダイコンRafanussativus由来のディフェンシンRsAFP2pNMD1061、ディフェンシンMsrA2フタイロネコメガエルPhyllomedusabicolor由来のデルマセプチンB1の合成誘導体pNMD1071、ディフェンシンMB39アカスジシンジュサン,セクロピアサンCecropiaMothHyalophoracecropia由来の修飾セクロピンpNMD1280、真菌クロチャワンタケPseudoplectanianigrella由来のディフェンシンプレクタシンplectasinpNMDxxxxをコードした。細胞間移行能力を欠損するTMVに基づくベクターは、MP翻訳を歪めるオープンリーディングフレームシフトを引き起こすMPコーディング配列内の点変異を除き、細胞間移行が可能である対応するTMVに基づくベクターと同一であった図3。これらのコンストラクトのクローニングは、pNMD661をクローニングベクターとして用いて実施した。細胞間移行能力及び全身移行能力を有するPVXに基づくベクターの多くをクローニングするため、pNMD670クローニングベクターを使用した。結果として得られたコンストラクトは、35SCaMVプロモーター、RNA依存性RNAポリメラーゼのコーディング配列、コートタンパク質、25kDa、12kDa及び8kDaのタンパク質を含むトリプルジーンブロックモジュール、目的の遺伝子、並びに3’非翻訳領域を、この順序で含有した。全体のフラグメントを、バイナリーベクターのTDNA左ボーダーと右ボーダーとの間にクローニングした図4。PVXに基づくコンストラクトの別の群は、PVXポリメラーゼとトリプルジーンブロックとの間に挿入されたCP位置の違いを伴い、類似した構造を有した例えば、pNMD600。コートタンパク質コーディング配列を欠失するPVXに基づくベクターは、全身移行及び細胞間移行の両方とも不可能であった。これらのコンストラクトのクローニングは、pNMD694をクローニングベクターとして用いて実施した。この型のベクターは、バイナリーベクターのTDNA左ボーダーと右ボーダーとの間に挿入された、35SCaMVプロモーター、RNA依存性RNAポリメラーゼのコーディング配列、トリプルジーンブロックモジュール、目的の遺伝子、及び3’非翻訳領域を、この順序で含有した図5。実施例2:希釈されたアグロバクテリウムは、界面活性剤を使用した吹き付けによりベンサミアナタバコに送達することができる我々は、界面活性剤を含有する希釈されたアグロバクテリム培養物を植物に吹き付けることによって、ベンサミアナタバコ植物をトランスフェクトできることを示した図6。トランスフェクションに影響を及ぼすパラメーターを評価するため、そしてトランスフェクション効率を最適化するために、我々は、アグロバクテリウム懸濁液中にベンサミアナタバコの葉を浸漬することを利用した。このアプローチは、正確な測定と、複合的な実験バージョンを簡便に試験することとを可能にする。アグロバクテリウム一晩培養物OD60015を、10mM硫酸マグネシウムを含有し、界面活性剤SilwetL77が添加された10mMMESバッファーpH55において1:100及び1:1000希釈したそれぞれ、希釈係数102及び102。GFP発現を提供する3つの型のコンストラクトを試験した:1転写ベクター、2TMVに基づくウイルスレプリコン、及び3PVXに基づくウイルスレプリコン図6。これらの実験において使用されたウイルスベクターは、全身移行及び細胞間移行の両方とも不可能であった。それらは、TDNAでトランスフェクトされた細胞においてのみレポーター遺伝子の発現を提供した。GFP発現細胞の百分率を、葉のプロトプラストを単離した後で計測した図7。アグロバクテリウム懸濁液濃度が依存し、そしてベクターの型に関わらず、体積当たり01のSilwetL77及び1分間の浸漬時間が使用された場合、合計の葉の細胞の2~8が、アグロバクテリウムを媒介したTDNA送達の結果としてトランスフェクトされた。最適な界面活性剤濃度を見出すため、我々は、浸漬実験において01及び005のSilwetL77を試験した。3つの型のベクター全てについて、005濃度と比較した場合、01Silwetの使用により提供されたトランスフェクション効率の方が著しく高かった図8~10。01SilwetL77が添加された希釈されたアグロバクテリウム懸濁液中にベンサミアナタバコの葉を10秒間浸漬させることは、同一の懸濁液を吹き付けることの効率に近似したトランスフェクション率を提供した図11。いずれの場合も、トランスフェクション効率はより成長した葉の方が高かった。トランスフェクション率は、アグロバクテリウム培養物の1:100希釈では、浸漬について14から37まで変動し、吹き付けについて11から17まで変動した。1:1000希釈では、その変動は、浸漬について02~11であり、そして吹き付けについて01~06であった。全ての実施例において使用されたSilwetL77は、KurtObermeierGmbHCoKGバートベルレブルク、ドイツより購入した。供給業者はGESiliconesInc、アメリカ合衆国である。使用されたSilwetL77は、840のポリアルキレンオキシド変性ヘプタメチルトリシロキサンCAS番号27306781及び16のアリルオキシポリエチレングリコールメチルエーテルCAS番号27252808からなるオルガノシリコン製品である。実施例又は図面において与えられたSilwetL77内容物の濃度はいずれも、この市販製品に関連している。実施例3:希釈されたアグロバクテリウムは、界面活性剤及び研磨剤を使用した吹き付けにより他の種に送達することができる我々は、吹き付け及び界面活性剤を伴うアグロバクテリウムのトランスフェクションを用いた植物の数を試験した。まず、我々は、最適な発現ベクターのためにそれぞれの種をスクリーニングした。このため、植物の葉を、GFP発現転写ベクター:1転写ベクター35SGFPP19pNMD293、2細胞間移行が可能なTMVに基づくウイルスベクターTMVGFPpNMD560、3細胞間移行が不可能なTMVに基づくウイルスベクターTMVGFPpNMD570、4全身移行及び細胞間移行の両方とも可能なPXVに基づくウイルスベクターPVXGFPpNMD630及び5全身移行及び細胞間移行の両方とも不可能なPVXに基づくウイルスベクターPVXGFPpNMD620、を有する5つのアグロバクテリウム培養物のOD15の1:100希釈物で無針シリンジを用いて浸潤させた。いくつかの事例では減圧浸潤を実施した。我々は、ベンサミアナタバコ5つのベクター全て、タバコNicotianatabacum5つのベクター全て、トマトLycopersiconesculentumPVXに基づくベクター及び転写ベクター、トウガラシCapsicumannuum、インカベリーPhysalisperuviana、ナスSolanummelongena、ジャガイモSolanumtuberosumいずれもPVXに基づくベクターを含むいくつかのナス科Solanaceaeの種について、アグロバクテリウムを媒介とした効率的なトランスフェクションを実証した図13。アグロバクテリウムを媒介としたトランスフェクションを、キク科ファミリーからのレタスLactucasativa転写ベクター、アカザ科ファミリーからのビートBetavulgaris5つのベクター全て、ウリ科ファミリーからのズッキーニCucurbitapepo転写ベクター、及びアオイ科ファミリーからのワタGossypiumhirsutum5つのベクター全てについて実証した図14。アセトシリンゴン200μM、2時間でのアグロバクテリウム細胞の処理は、トマト、ナス及びズッキーニを含むいくつかの植物種についてトランスフェクション効率を著しく増加させた図15。浸潤データに基づき、希釈されたアグロバクテリウム懸濁液の吹き付けを植物種の数について試験した。01Silwetを含有する懸濁液の吹き付けによる希釈されたアグロバクテリウム103の効率的な送達が、図16において細胞間移行能力及び全身移行能力を有するPVXを用いて示されているように、いくつかのタバコ種ベンサミアナタバコ、ニコチアナデブネイNicotianadebne、ニコチアナエクセルシオールNicotianaexcelsior、ニコチアナエキシグアNicotianaexigua、ニコチアナマリチマNicotianamaritima及びニコチアナシムランスNicotianasimulansについて実証された。ナス科ファミリー、アカザ科ファミリー、ヒユ科Amarantaceaeファミリー及びハマミズナ科Aizoaceaeファミリーを含む他の種へのアグロバクテリウムの送達が、アグロバクテリウム懸濁液中に浸漬することと、転写ベクター並びに細胞間移行能力を有する及び有さないTMVベクター及びPVXベクターを使用し、研磨剤を伴って及び伴わずに吹き付けることとの両方によって実証された図17~21。トランスフェクションが成功した種のリストには、ヒユ科AmaranthaceaeファミリーからのホウレンソウSpinaceaoleracea転写ベクター及びPVXに基づくベクター、アカザ科ファミリーからのビートBetavulgaris亜種TMVに基づくウイルスベクター及びPVXに基づくウイルスベクター図17、ナス科ファミリーからのトマトLycopersiconesculentumPVXに基づくベクター図18、インカベリーPhysalisperuviana及びジャガイモSolanumtuberosum図34PVXに基づくベクター図19、アオイ科ファミリーからのワタGossypiumhirsutumTMVに基づくベクター図20が含まれる。アグロバクテリウムトランスフェクション後のワタ組織におけるGFPの発現を、GFP特異的抗体でプローブされたウェスタンブロットを用いて確認した図21。GUS遺伝子をレポーターとして用いて、アグロバクテリウム懸濁液の吹き付けによるトランスフェクションをアブラナ科BrassicaceaeファミリーからのナタネBrassicanapusについて成功させた図35。pNMD293プラスミドに基づいて、GFPコーディング配列を、ペチュニアPetuniahybridaPSK7遺伝子AJ224165由来の7番目イントロンを含有している大腸菌EscherichiacoliP05804由来のベータ-グルクロニダーゼGUSの配列に置換することによってpNMD1971コンストラクトを作製した。希釈されたアグロバクテリウム懸濁液の吹き付けを利用した植物の効率的なトランスフェクションが、単子葉植物種についても実証された。図36は、01SilwetL77が添加されたアグロバクテリウム懸濁液を吹き付けた後のタマネギAlliumcepa植物のトランスフェクションを示す。pNMD2210コンストラクトを、pNMD1971に基づき、GUS発現カセット内の35SプロモーターをイネOryzasativa由来のアクチン2Act2プロモーターEU155408に置換することによって作製した。本明細書に記載された全ての実施例において、吹き付けは、手動で直接噴出させる通常量又は500若しくは1000mlのポンプ型噴霧フラスコpumpsprayflaskCarlRoth、04991及び05001又は噴出のために高圧力を利用する125L量の圧縮噴霧器Gardena、0086420を用いて実施した。植物は、葉が完全に濡れるように吹き付けた。噴霧器は、吹き付けられるべき懸濁液の均質性を確保するため、特に懸濁液が研磨剤を含有した場合は、時々振り動かした。実施例4:研磨剤を含有するアグロバクテリウム懸濁液を用いた植物のトランスフェクションこれらの実験で使用するカーボランダムを、MineraliengrosshandelHausenGmbH、テルフス、オーストリアからのカーボランダム炭化ケイ素F800、F1000及びF1200粒子の混合物とした。供給業者によると、F800、F1000及びF1200は、それぞれ65、45及び3μmの表面中位径surfacemediandiameterを有する。F800、F1000及びF1200の粒子の97質量は、それぞれ14、10及び7μmよりも小さい表面直径surfacediameterを有する。粒子の94質量は、それぞれ2、1、及び1μmよりも大きい表面直径を有する。F800、F1000及びF1200を等量の重量で混合した。03wvの混合カーボランダムを01SilwetL77が添加されたアグロバクテリウム懸濁液に加え、実施例3に記載された噴霧器を用いた植物の吹き付けのために使用した。図32、22及び33に示される結果は、研磨剤の使用がトランスフェクション効率を著しく増加させることを実証した。03のカーボランダム炭化ケイ素SiCを含有するアグロバクテリウム懸濁液のナスSolanummelongena植物への吹き付けは、トランスフェクション効率を2倍増加させた図32。レッドビートの場合では、同一の研磨剤処理が15倍のトランスフェクション効率の増加をもたらした図22。注目すべきことに、研磨剤の使用は、アグロバクテリウム懸濁液の吹き付けによるトウガラシ植物のトランスフェクションを可能とする決定的な要素であった;研磨剤処理とアグロバクテリウム細胞のアセトシリンゴン活性化との組み合わせは、トランスフェクション効率をさらに増加させた図32。界面活性剤及び研磨剤での吹き付けを利用してトランスフェクトされた種のリストには、飼料ビート、テンサイの別の亜種、ハマミズナ科ファミリーからのツルナTetragoniaexpansa、トウガラシCapsicumannuum及びナス科からのナスSolanummelongenaも含まれる図23。実施例5:アグロバクテリウムでの処理は繰り返すことができる:複合的な連続処理我々は、希釈されたアグロバクテリウムを用いたベンサミアナタバコ植物の複合的な連続処理を実施した。この目的のために、以下のコンストラクトを有するアグロバクテリウムの希釈懸濁液の中に葉を浸漬させた:pNMD570細胞間移行能力を持たないTMVGFP、pNMD560細胞間移行能力を持つTMVGFP、pNMD580細胞間移行能力を持つTMVDsRED、pNMD620細胞間移行能力を持たないPVXGFP、pNMD600細胞間移行能力及び全身移行能力を持つPVXGFP及びpNMD610細胞間移行能力及び全身移行能力を持つPVXdsRED。トランスフェクション後、これらのベクターは、色及び大きさの異なる蛍光スポットを形成する図24。我々は、各試験葉の浸漬トランスフェクションを、3つの異なる培養物で、そしてトランスフェクションの間は7日間間隔で実施した。8通りの試験ベクターの組み合わせのそれぞれについてアグロバクテリウムでのトランスフェクションはいずれも成功し、特定のサイレンシング効果は観察されなかった図24。実施例6:アグロバクテリウムの吹き付けは、細胞間移行が可能なウイルスレプリコンを送達することができる我々は、アグロバクテリウム懸濁液の1:100及び1:1000希釈物のベンサミアナタバコ植物への吹き付けが、細胞間移行が可能なウイルスレプリコンの効果的な送達を提供し、それはアグロバクテリウムの浸潤を利用して達成された発現と比較して、目的の遺伝子の高発現を結果としてもたらすことを実証した。このことは、GFP図25、ヒトアルファ-aインターフェロン及びklip27-ミニインスリン図26、並びにサーモビフィダフスカ由来のエキソ型セルラーゼE3、トリコデルマリーゼイ由来のエキソグルカナーゼ1CBHI、フミコーラグリセア由来のβ-グルコシダーゼBGL4及びサーモビフィダフスカ由来のエキソ型セルラーゼE3を含むいくつかのセルラーゼ図27について実証された。実施例7:アグロバクテリウムは、二次メッセンジャーとして転写因子を送達するために使用することができる我々は、トマト由来のMYB転写因子アントシアニン1ANT1の発現を提供するPVXに基づくウイルスベクターを有するアグロバクテリウム懸濁液で浸潤されたタバコ葉におけるアントシアニン生合成の誘導を実証した図28。実施例8:アグロバクテリウムは、二次メッセンジャーとしてRNAiを送達するために使用することができる我々は、アンチセンス方向でのPDSコーディング配列のフラグメントを含有するPVXに基づくウイルスベクターを有するアグロバクテリウム懸濁液を葉に吹き付けた後の、フィトエンデサチュラーゼPDS遺伝子のサイレンシングにより引き起こされるベンサミアナタバコ葉の光退色を実証した図37。このコンストラクトpNMD050を作製するため、ベンサミアナタバコフィトエンデサチュラーゼPDScDNAEU165355を、pNMD640クローニングベクターの中にBsaI部位を用いてアンチセンス方向において挿入した。実施例9:アグロバクテリウムは、二次メッセンジャーとしてMAMPs病原微生物由来分子パターンMicrobeAssociatedMolecularPatternsを送達するために使用することができる我々は、シュードモナス由来のフラジェリン遺伝子の発現を提供するPVXに基づくベクターpNMD1953を有するアグロバクテリウム懸濁液を植物に予備的に吹き付けた後の、ベンサミアナタバコ葉におけるシュードモナスシリンゲ感染により引き起こされる壊死病斑の数の減少を実証した図38。pNMD1953プラスミドを作製するため、pNMD630コンストラクトの中で、GFPコーディング配列を、シュードモナスシリンゲ由来のフラジェリンをコードする配列YP236536がインフレームで融合されたオオムギHordeumvulgareアルファ-アミラーゼAMY3遺伝子FN179391由来のアポプラストシグナルペプチドをコードするフラグメントを含む配列に置換した。4つのベンサミアナタバコ植物を、吹き付けによりアグロバクテリウム培養物OD60013の1:1000希釈物で接種した。アグロバクテリウム培養物の6dpiで、吹き付けにより1×105cfumlのシュードモナスシリンゲB728で全ての植物を接種した。シュードモナスの7dpiで、各植物の2枚の葉の上の壊死スポットを計測することにより病徴を点数付した。葉1枚当たりのシュードモナス感染により引き起こされる壊死スポットの数を、4つの植物の各2枚の葉の平均として与えた。下記の配列表は、後に続くヌクレオチド配列を含有する。配列番号1:pNMD280のTDNA領域のTNA領域配列番号2:pNMD033のTDNA領域のTNA領域配列番号3:pNMD035のTDNA領域のTNA領域配列番号4:pNMD661のTDNA領域のTNA領域配列番号5:pNMD670のTDNA領域のTNA領域配列番号6:pNMD694のTDNA領域のTNA領域配列番号7:pNMD1971のTDNA領域のTNA領域配列番号8:pNMD2210のTDNA領域のTNA領域配列番号9:pNMD050のTDNA領域のTNA領域配列番号10:pNMD1953のTDNA領域のTNA領域参考文献"