"オリゴヌクレオチドであって:aGTCAAGGCACTCTTGCCTAAGT配列番号1のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;bGGCCTGCTGAAAATGACTGA配列番号2のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;c6FAM-CAACTACCACAAGTTT配列番号3のヌクレオチド配列からなる標識オリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;dAGGCACTCTTGCCTCCGT配列番号4のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;eGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT配列番号5のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;f6FAM-CTCCAACTACCACAAGTT配列番号6のヌクレオチド配列からなる標識オリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;gCTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTAA配列番号7のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;hAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTTT配列番号8のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;iGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTAT配列番号9のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;jTATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTGT配列番号10のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;kTGAAGATGTACCTATGGTCCTAGTAGGA配列番号11のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;lGTCCTGAGCCTGTTTTGTGTCTA配列番号12のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;m6FAM-TAGAAGGCAAATCACA配列番号13のヌクレオチド配列からなる標識オリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;nTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGATA配列番号14のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;oAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTC配列番号15のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;pTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGTTT配列番号16のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;qAAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGA配列番号17のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;rAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGC配列番号18のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;sCACAAAATGATTCTGAATTAGCTGTATC配列番号19のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびt6FAM-TCAAGGCACTCTTGCCT配列番号20からなる標識オリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される、オリゴヌクレオチド。請求項1に記載のオリゴヌクレオチドであって、GTCAAGGCACTCTTGCCTAAGT配列番号1のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;GGCCTGCTGAAAATGACTGA配列番号2のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AGGCACTCTTGCCTCCGT配列番号4のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;GCCTGCTGAAAATGACTGAATAT配列番号5のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;CTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTAA配列番号7のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTTT配列番号8のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;GAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTAT配列番号9のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;TATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTGT配列番号10のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;TGAAGATGTACCTATGGTCCTAGTAGGA配列番号11のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;GTCCTGAGCCTGTTTTGTGTCTA配列番号12のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;TGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGATA配列番号14のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTC配列番号15のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;TGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGTTT配列番号16のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGA配列番号17のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AACTTGTGGTAGTTGGAGCAGC配列番号18のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびCACAAAATGATTCTGAATTAGCTGTATC配列番号19のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される、オリゴヌクレオチド。請求項2に記載のオリゴヌクレオチドであって、GTCAAGGCACTCTTGCCTAAGT配列番号1のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AGGCACTCTTGCCTCCGT配列番号4のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびCTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTAA配列番号7のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される、オリゴヌクレオチド。請求項2に記載のオリゴヌクレオチドであって、GGCCTGCTGAAAATGACTGA配列番号2のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT配列番号5のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される、オリゴヌクレオチド。請求項2に記載のオリゴヌクレオチドであって、AATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTTT配列番号8のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;TGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGATA配列番号14のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTC配列番号15のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;TGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGTTT配列番号16のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGA配列番号17のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;AACTTGTGGTAGTTGGAGCAGC配列番号18のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびCACAAAATGATTCTGAATTAGCTGTATC配列番号19のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される、オリゴヌクレオチド。請求項2に記載のオリゴヌクレオチドであって、GAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTAT配列番号9のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびTATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTGT配列番号10のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される、オリゴヌクレオチド。請求項2に記載のオリゴヌクレオチドであって、TGAAGATGTACCTATGGTCCTAGTAGGA配列番号11のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびGTCCTGAGCCTGTTTTGTGTCTA配列番号12のヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される、オリゴヌクレオチド。請求項1に記載のオリゴヌクレオチドa~tの少なくとも1つを含むキット。オリゴヌクレオチドa、b、d、e、g、h、i、j、k、l、n、o、p、q、rおよびsの少なくとも1つ、ならびにオリゴヌクレオチドc、f、mおよびtの少なくとも1つを含む、請求項8に記載のキット。DNAにおけるKRAS変異を検出する方法であって、前記方法は:13’エキソヌクレアーゼ活性を欠く耐熱性DNAポリメラーゼ、ならびにI対照アッセイのための対照オリゴヌクレオチドプライマーの対、およびII変異アッセイのための変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対を使用するPCRを用いてDNAを増幅すること、2工程1Iの産物が、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対によって増幅されたエキソン4のDNA領域の増幅産物を含むことを決定すること;ならびに3工程1IIの産物が、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの対によって増幅されたエキソン2のDNA領域の増幅産物を含むことを決定することを含み、Iにおいて、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対は、KRAS遺伝子のエキソン4におけるDNA領域の増幅のためであり、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対は、請求項1に記載の配列番号11によって表されるヌクレオチド配列からなるKrasEx4対照フォワードプライマーまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、および請求項1に記載の配列番号12によって表されるヌクレオチド配列からなるKrasEx4対照リバースプライマーまたはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドであり、IIにおいて、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対は、KRAS遺伝子のエキソン2に位置するコドン12における変異および/またはコドン13における変異を有するDNA領域の増幅のためであり、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対は、Aコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対であって、ia請求項1に記載される、配列番号1によって表されるヌクレオチド配列からなる13ASPリバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、またはb請求項1に記載される、配列番号4によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras38A_3TG-Rもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択されるリバースプライマー、およびiia請求項1に記載される、配列番号2によって表されるヌクレオチド配列からなるC13フォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、またはb請求項1に記載される、配列番号5によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasC13-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択されるフォワードプライマーを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対、Bコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対であって、i請求項1に記載される、配列番号7によって表されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマー13ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびii請求項1に記載される、配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対;またはCコドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対であって、ia請求項1に記載される、配列番号8によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12VALフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;b請求項1に記載される、配列番号14によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12SERフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;c請求項1に記載される、配列番号15によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ARGフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;d請求項1に記載される、配列番号16によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12CYSフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;e請求項1に記載される、配列番号17によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;f請求項1に記載される、配列番号18によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ALAフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;g請求項1に記載される、配列番号9によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasM35T_1GA-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;またはh請求項1に記載される、配列番号10によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras35T_3CG-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される少なくとも1つのフォワードプライマー;およびii請求項1に記載される、配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを含む、コドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対から選択され、2において、増幅産物の検出が、DNAにおけるKRAS遺伝子の存在を示し;ならびに3において、a工程1IIにおいてコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対が使用されるときの増幅産物の検出が、DNAにおけるKRAS遺伝子のエキソン2におけるコドン13の変異の存在を示し;および/またはb工程1IIにおいてコドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対が使用されるときの増幅産物の検出が、DNAにおけるKRAS遺伝子のエキソン2におけるコドン12の変異の存在を示す、方法。請求項10に記載の方法であって、工程1IIにおいて、工程1IIにおいて使用される変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対がKRAS遺伝子のエキソン2に位置するコドン12の変異を有するDNA領域の増幅のためであり、コドン12のための変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対は、ia請求項1に記載される、配列番号8によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12VALフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;b請求項1に記載される、配列番号14によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12SERフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;c請求項1に記載される、配列番号15によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ARGフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;d請求項1に記載される、配列番号16によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12CYSフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;e請求項1に記載される、配列番号17によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;f請求項1に記載される、配列番号18によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ALAフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;g請求項1に記載される、配列番号9によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasM35T_1GA-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;またはh請求項1に記載される、配列番号10によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras35T_3CG-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択される少なくとも1つのフォワードプライマー;およびii請求項1に記載される、配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを含む、方法。請求項10に記載の方法であって、工程1IIにおいて、工程1IIにおいて使用される変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対がKRAS遺伝子のエキソン2に位置するコドン13の変異を有するDNA領域の増幅のためであり、コドン13のための変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対は、Aコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対であって、ia請求項1に記載される、配列番号1によって表されるヌクレオチド配列からなる13ASPリバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、またはb配列番号4によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras38A_3TG-Rもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択されるリバースプライマー、およびiia請求項1に記載される、配列番号2によって表されるヌクレオチド配列からなるC13フォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、またはb配列番号5によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasC13-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択されるフォワードプライマーを含む、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対;ならびにBコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対であって、i配列番号7によって表されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマー13ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、およびii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを含む、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対から選択される、方法。請求項12に記載の方法であって、工程1IIにおいて、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対が、ia請求項1に記載される、配列番号1によって表されるヌクレオチド配列からなる13ASPリバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、またはb配列番号4によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras38A_3TG-Rもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択されるリバースプライマー、およびiia請求項1に記載される、配列番号2によって表されるヌクレオチド配列からなるC13フォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、またはb配列番号5によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasC13-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドから選択されるフォワードプライマーを含む、方法。請求項13に記載の方法であって、工程1IIにおいて使用される変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対が、i配列番号1によって表されるヌクレオチド配列からなる13ASPリバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、およびii配列番号2によって表されるヌクレオチド配列からなるC13フォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを含む、方法。請求項13に記載の方法であって、工程1IIにおいて使用される変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対が、i配列番号4によって表されるヌクレオチド配列からなるリバースプライマーオリゴヌクレオチドKras38A_3TG-Rもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、およびii配列番号5によって表されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーオリゴヌクレオチドKrasC13-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを含む、方法。請求項11に記載の方法であって、工程1IIにおいて、コドン13のための変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対が、i配列番号7によって表されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマー13ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、およびii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを含む、方法。請求項10に記載の方法であって、工程2において、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対によって増幅されたエキソン4のDNA領域の増幅産物が、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の1つのメンバーから、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他のメンバーまでに及ぶか、または対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の1つのメンバーに対して相補的な領域から、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他のメンバーに対して相補的な領域までに及ぶDNA領域からなる、方法。請求項10に記載の方法であって、工程3において、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの対によって増幅されたエキソン2のDNA領域の増幅産物が、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の1つのメンバーから、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他のメンバーまでに及ぶか、または変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の1つのメンバーに対して相補的な領域から、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他のメンバーに対して相補的な領域までに及ぶDNA領域からなる、方法。請求項10に記載の方法であって、工程1において使用される、3’エキソヌクレアーゼ活性を欠いている耐熱性DNAポリメラーゼが、Bacillusstearothermophilusから単離された耐熱性BstDNAポリメラーゼI、IsoThermDNAポリメラーゼ、エキソヌクレアーゼ活性のために必須のアミノ酸残基の酸化を介して3’→5’エキソヌクレアーゼ活性が除去されているかSequenaseVertion1または3’→5’エキソヌクレアーゼ活性のために必須である28アミノ酸を遺伝的に欠失させることによるSequenaseVersion2T7DNAポリメラーゼ、VentRexoDNAポリメラーゼ、およびTaqポリメラーゼから選択される、方法。3’エキソヌクレアーゼ活性を欠いている耐熱性DNAポリメラーゼがTaqポリメラーゼである、請求項19に記載の方法。工程2において、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対によって増幅されたエキソン4のDNA領域の増幅産物が、配列番号13によって表されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一である標識オリゴヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドプローブを用いて決定される、請求項17に記載の方法。工程2において、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対によって増幅されたエキソン2のDNA領域の増幅産物が、配列番号3または6によって表されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一である標識オリゴヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドプローブを用いて決定される、請求項18に記載の方法。工程2において、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対によって増幅されたエキソン2のDNA領域の増幅産物が、配列番号3によって表されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一である標識オリゴヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドプローブを用いて決定される、請求項22に記載の方法。工程2において、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対によって増幅されたエキソン2のDNA領域の増幅産物が、配列番号6によって表されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一である標識オリゴヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドプローブを用いて決定される、請求項22に記載の方法。工程2において、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対によって増幅されたエキソン2のDNA領域の増幅産物が、配列番号3によって表されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一である標識オリゴヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドプローブを用いて決定される、請求項14に記載の方法。工程2において、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対によって増幅されたエキソン2のDNA領域の増幅産物が、配列番号6によって表されるヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一である標識オリゴヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドプローブを用いて決定される、請求項15に記載の方法。工程1において使用されるDNAが、組織から得られたゲノムDNAまたはcDNAである、請求項1に記載の方法。工程1において使用されるDNAが、組織から得られたcDNAである、請求項27に記載の方法。上皮成長因子受容体を指向する化学療法に対する、患者における腫瘍の感受性を予測する方法であって、1腫瘍からDNAを入手すること;および2DNAにおけるKRAS変異を検出するために請求項10~28のいずれか1項に記載の方法を使用して、DNAにおけるKRAS遺伝子のエキソン2中のコドン12の変異および/またはコドン13の変異の存在を決定することを含み、コドン12の変異および/またはコドン13の変異の検出は、腫瘍が、コドン12およびコドン13において変異を有さない同じ型の腫瘍と比較して、上皮成長因子受容体を指向する化学療法に対する感受性を減少したことを予測する、方法。工程2がKRAS遺伝子のエキソン2のコドン12における変異を決定する、請求項29に記載の方法。工程2がKRAS遺伝子のエキソン2のコドン13における変異を決定する、請求項29に記載の方法。工程2がKRAS遺伝子のエキソン2のコドン12における変異およびコドン13における変異を決定する、請求項29に記載の方法。発明の詳細な説明KRAS遺伝子における変異の存在は、EGFRを指向する化学療法、例えば、セツキシマブおよびパニツムマブなどのEGFR阻害剤を用いる腫瘍治療に対する腫瘍患者の非応答性を高度に予測する。本発明は、DNAにおけるKRAS変異を正確かつ高い信頼性で検出するために、PCRにおけるプライマーまたはプローブとして使用できるオリゴヌクレオチドを提供する。本発明はまた、これらのオリゴヌクレオチドをプライマーまたはプローブとして使用して、DNAにおけるKRAS変異を検出する方法も提供する。本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、化学合成を含む、当該分野において公知である方法によって作製できる。本明細書で使用される場合、KRASという用語は、他に特定されない限り、ヒトのKirstenras癌遺伝子をいう。KRASのヌクレオチド配列は周知である。KRASの2つのアイソフォームが存在しており、その2つのアイソフォームのヌクレオチド配列は、NM_033360およびNM_004985の下でGenBankにおいて見い出すことができ、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドという用語は、一連の連結されたヌクレオチド残基をいい、このオリゴヌクレオチドは、PCRにおけるプライマーまたはプローブとして使用されるために十分な数のヌクレオチド残基を有する。本発明のオリゴヌクレオチドは、標識、例えば、蛍光標識を含むように修飾されてもよい。本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドは、配列番号113ASPリバースプライマー、2C13フォワードプライマー、4Kras38A_3TC-R、5KrasC13-F、713ASPフォワードプライマー、812VALフォワードプライマー、9KrasM35T_1GA-F、10Kras35G_3CG-F、11KrasEx4対照フォワードプライマー、12KrasEx4対照リバースプライマー、1412SERフォワードプライマー、1512ARGフォワードプライマー、1612CYSフォワードプライマー、1712ASPフォワードプライマー、1812ALAフォワードプライマーまたは19C12共通リバースプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であり、実質的に同一のオリゴヌクレオチドは、対象ヌクレオチドと、少なくとも85、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、および最も好ましくは少なくとも98の配列同一性を有し、3’末端の5個のヌクレオチドにおいてはミスマッチが存在しない。配列番号113ASPリバースプライマー、2C13フォワードプライマー、4Kras38A_3TC-R、5KrasC13-F、713ASPフォワードプライマー、812VALフォワードプライマー、9KrasM35T_1GA-F、10Kras35G_3CG-F、11KrasEx4対照フォワードプライマー、12KrasEx4対照リバースプライマー、1412SERフォワードプライマー、1512ARGフォワードプライマー、1612CYSフォワードプライマー、1712ASPフォワードプライマー、1812ALAフォワードプライマーまたは19C12共通リバースプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象ヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドには、対象ヌクレオチドの5’末端から1個、2個、または3個のヌクレオチドが除去されているオリゴヌクレオチドが含まれる。配列番号113ASPリバースプライマー、2C13フォワードプライマー、4Kras38A_3TC-R、5KrasC13-F、713ASPフォワードプライマー、812VALフォワードプライマー、9KrasM35T_1GA-F、10Kras35G_3CG-F、11KrasEx4対照フォワードプライマー、12KrasEx4対照リバースプライマー、1412SERフォワードプライマー、1512ARGフォワードプライマー、1612CYSフォワードプライマー、1712ASPフォワードプライマー、1812ALAフォワードプライマーまたは19C12共通リバースプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドには、対象オリゴヌクレオチドの5’末端に1個、2個、または3個のヌクレオチドが付加されているオリゴヌクレオチドが含まれる。配列番号113ASPリバースプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、CGTCAAGGCACTCTTGCCTAAGT配列番号21、TCGTCAAGGCACTCTTGCCTAAGT配列番号22およびATCGTCAAGGCACTCTTGCCTAAGT配列番号23であり得る。配列番号2C13フォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、AGGCCTGCTGAAAATGACTGA配列番号24、AAGGCCTGCTGAAAATGACTGA配列番号25およびTAAGGCCTGCTGAAAATGACTGA配列番号26であり得る。配列番号4Kras38A_3TG-Rによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、AAGGCACTCTTGCCTCCGT配列番号27、CAAGGCACTCTTGCCTCCGT配列番号28およびTCAAGGCACTCTTGCCTCCGT配列番号29であり得る。配列番号5KrasC13-Fによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、GGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT配列番号30、AGGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT配列番号31およびAAGGCCTGCTGAAAATGACTGAATAT配列番号32であり得る。配列番号713ASPフォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、ACTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTAA配列番号33、AACTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTAA配列番号34およびAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTGGTAA配列番号35であり得る。配列番号812VALフォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、GAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTTT配列番号36、TGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTTT配列番号37およびCTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTTT配列番号38であり得る。配列番号9KrasM35T_1GA-Fによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、TGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTAT配列番号39、CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTAT配列番号40およびACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTAT配列番号41であり得る。配列番号10Kras35T_3CG-Fによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、ATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTGT配列番号42、AATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTGT配列番号43およびGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTGT配列番号44であり得る。配列番号1412SERフォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGATA配列番号45、ACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGATA配列番号46およびGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGATA配列番号47であり得る。配列番号1512ARGフォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、GAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTC配列番号48、TGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTC配列番号49およびCTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGGTC配列番号50であり得る。配列番号1612CYSフォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGTTT配列番号51、ACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGTTT配列番号52およびGACTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGTTT配列番号53であり得る。配列番号1712ASPフォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、TAAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGA配列番号54、ATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGA配列番号55およびTATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGA配列番号56であり得る。配列番号1812ALAフォワードプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、AAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGC配列番号57、TAAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGC配列番号58およびATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCAGC配列番号59であり得る。配列番号19C12共通リバースプライマーによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドの例は、CCACAAAATGATTCTGAATTAGCTGTATC配列番号60、TCCACAAAATGATTCTGAATTAGCTGTATC配列番号61およびGTCCACAAAATGATTCTGAATTAGCTGTATC配列番号62であり得る。本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドは、配列番号3C13プローブ、6KrasC13_Mcまたは13KrasEx4対照プローブによって表されるヌクレオチド配列からなる対象オリゴヌクレオチドと実質的に同一であり、実質的に同一であるオリゴヌクレオチドは、対象オリゴヌクレオチドと、少なくとも85、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95の配列同一性を有する。本明細書で使用される場合、配列同一性は、ヌクレオチドの挿入および欠失のための適切な考慮を伴って、それぞれのオリゴヌクレオチドセグメント、またはそれらの相補鎖を適切に整列させることによって決定される。比較される配列が同じ長さを有さないとき、配列同一性とは、より長い配列中のヌクレオチド残基の総数で比較される、配列間の同一のヌクレオチド残基の数のパーセンテージをいう。本明細書で使用される場合、プローブという用語は、標的DNA配列と結合し、サンプル中の標的配列の存在および/または量を示す、様々な長さのオリゴヌクレオチドをいう。例えば、プローブは、標的DNA配列の存在および/または量を示すための適切な条件下で、蛍光標識を含んでもよく、かつ蛍光を放出してもよい。本明細書で使用される場合、6FAMとは、6-カルボキシフルオレセインをいう。本明細書で使用される場合、PCRとは、一般的に、熱安定性ポリメラーゼ、および一方のプライマーが増幅される配列の一方の末端において鎖に相補的であり、他方のプライマーが、他方の末端において-鎖に相補的である2つのオリゴヌクレオチドプライマーを使用してDNA配列を増幅するための方法である、ポリメラーゼ連鎖反応をいう。新たに合成されるDNA鎖がさらなる鋳型として引き続き役立つことができるので、プライマーアニーリング、鎖伸長、および解離の連続した繰り返しにより、所望のDNA配列の迅速かつ高度に特異的な増幅が生じる。DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法の工程1において、対象DNAは、リアルタイムPCRなどのPCR手順を用いて増幅できる。PCRは、当該分野において公知の方法のいずれかによって実行されてもよい。例えば、PCRは、分析されるDNA、オリゴヌクレオチドプライマー、dNTP、Mg、熱安定性DNAポリメラーゼ、および適切な緩衝溶液の混合物を調製すること;この混合物を初期の加熱、例えば、95°Cの温度に10分間供すること、次いで、DNAを増幅するために適切な温度サイクルに供することを含んでもよい。例えば、各温度サイクルは、PCR混合物を95°Cで30秒間の間加熱すること、次いで、このPCR混合物を60°Cで1分間冷却することを含んでもよい。特定の実施形態において、PCRはARMSPCRであってもよく、3’エキソヌクレアーゼ活性を欠くポリメラーゼ例えば、Taqポリメラーゼが使用され、一方のプライマーの3’末端が、検出される標的KRAS変異と一致する。蛍光標識プローブなどの他の技術とのARMSPCRの組み合わせは、リアルタイムPCR反応における変異の検出を可能にする。蛍光標識プローブを用いて、DNAにおけるKRAS変異の存在の検出が、ABIPRISM7700または7900SequenceDetectionSystem[TaqMan登録商標]AppliedBiosystems,FosterCity,CaliforniaまたはHeidetal.,GenomeRes1996;6:986-994およびGibsonetal.GenomeRes1996;6:995-1001によって記載されているような同様のシステムによるなどの蛍光ベースのリアルタイム検出法を使用して行われてもよい。ABI7700またはABI7900の出力は、Ctまたはサイクル閾値で表現され、これは、レポーター蛍光が閾値よりも大きいPCRサイクル数をいい、閾値は任意のレベルの蛍光であって、それよりも上では、検出されるシグナルが真のシグナルと見なされる。閾値は、ベースラインの変動性に基づいて選択されてもよく、各々の実験について調整できる。サンプル中の標的分子の数がより多いと、より少ないPCRサイクルを用いてシグナルを生成しより低いCt、サンプル中の標的分子の数がより少ないと、より多くのPCRサイクルを用いてシグナルを生成するより高いCt。本明細書で使用される場合、プライマーとは、増幅されるDNA鋳型フラグメントの1つの鎖の最初とハイブリダイズする短いオリゴヌクレオチド鎖をいい、DNAポリメラーゼが結合し、プライマーの3’末端を伸長することによって新たなDNA鎖を合成する。本明細書で使用される場合、上皮成長因子受容体を指向する化学療法またはEGFRを指向する化学療法は、EGFRを包含するシグナル経路を損なうかまたはそれに干渉することができる物質の投与を介した化学療法である。EGFRを指向する化学療法には、EGFR阻害剤の投与が包含され得る。EGFR阻害剤の例としては、ゲフィチニブおよびエルロチニブなどの低分子チロシンキナーゼ阻害剤、またはセツキシマブおよびパニツムマブなどの抗EGFR抗体が挙げられる。本発明の1つの態様は、EGFRを指向する化学療法に対する、患者における腫瘍の感受性を予測することに関し、この方法は、本明細書に開示されるDNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法を使用して、腫瘍から得られたDNA中のKRAS遺伝子のエキソン2のコドン12の変異および/またはコドン13の変異が存在するか否かを決定することを含む。コドン12の変異および/またはコドン13の変異の検出は、コドン12およびコドン13に変異を有さない同じ型の腫瘍と比較して、EGFRを指向する化学療法に対して、低下した感受性を腫瘍が有することを予測する。本発明の予測方法のある実施形態において、腫瘍は、肺腫瘍、例えば、非小細胞肺癌、および、喫煙の経歴、特に、重度の喫煙の経歴がある患者における肺腺癌などの肺腺癌である。本発明の予測方法のある実施形態において、腫瘍は、膵臓癌、または、好ましくは、結腸直腸癌である。KRAS遺伝子のエキソン2のコドン12における変異および/またはコドン13における変異が腫瘍中で検出されるならば、EGFRを指向する化学療法を利用しない腫瘍治療を使用することは有益である。本発明は、本明細書に開示されるDNAにおけるKRAS変異を検出する方法を提供する。工程1において増幅される対象のDNAは、ヒトの組織から入手されたゲノムDNAまたはcDNAであり得る。当該分野において公知である多くのプロセスが、ゲノムDNAまたはcDNAを入手するために使用できる。例えば、組織中の細胞は、例えば、界面活性剤を用いて溶解され、DNAは、高濃度の酢酸アンモニウムまたは酢酸カリウムを使用して、タンパク質および他の夾雑物を塩析し、続いて遠心分離することによって得られ、DNAは、アルコールを用いる沈殿を介して得られる。別のDNA単離方法において、細胞の溶解物中のDNAは、アルコールを用いて沈殿され、次いで、塩化セシウム勾配中での遠心分離を介して精製される。細胞の溶解物中のDNAはまた、固相陰イオン交換クロマトグラフィーを用いても精製できる。市販のキット、例えば、InvitrogenからのDynabeadsDNADirectKitまたはQiagenからのDNeasyTissueKitもまた、ゲノムDNAを入手するために使用できる。ゲノムDNAは、米国特許第6,248,535号および同第6,610,488号に開示される方法を用いるホルマリン固定パラフィン包埋FFPE組織から単離されたDNAであり得、これらの特許の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ゲノムDNAを入手するための方法は、フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール10:1.93:0.036などの有機溶媒、およびグアニジニウムイソチオシアネートなどの適切なカオトロピック剤と組織サンプルを混合すること;次いで、遠心分離によって、この混合物を、下部有機相DNAを含有する、中間相DNAを含有する、および上部水相RNAを含有するの3相に分離すること;中間相を取り出すこと;冷アルコールまたはイソプロパノールを用いて中間相におけるDNAを沈殿させること、次いで遠心分離すること;得られたDNAペレットを冷エタノールで洗浄すること、および再度遠心分離すること;DNAペレットを乾燥させること;TrisまたはTETris-EDTAなどの緩衝液にDNAを再溶解することを含んでもよい。cDNAは、逆転写酵素PCRおよびポリdTオリゴヌクレオチドなどの適切なプライマーを使用するなどして、組織から単離されたmRNAの逆転写から入手することができる。例えば、RT-PCRは、適切な緩衝液中で、mRNAを、dNTP、ウシ血清アルブミンBSA、RNAse阻害剤、ランダムヘキサマー、およびモロニーマウス白血病ウイルスウイルス逆転写酵素と混合すること、ならびにこの混合物を熱サイクルに供することによって実施されてもよい。各熱サイクルは、26°Cで8分間、42°Cで45分間、および95°Cで5分間を含んでもよい。mRNAは、米国特許第6,248,535号および同第6,610,488号に開示される方法を用いてFFPE組織から単離できる。mRNAはまた、米国特許第6,428,963号に開示されるように、体液の水性サンプルではない組織からも単離でき、この特許の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ゲノムDNAまたはmRNAが単離できる組織は、結腸直腸癌、例えば、転移性結腸直腸癌、膵臓癌、または肺癌、例えば、肺腺癌および非小細胞肺癌などの腫瘍組織であってもよい。パラフィン包埋組織サンプルからmRNAを単離する例示的な方法は:a有機溶媒を用いて、例えば、サンプルをキシレンと激しく混合すること、続いて、チューブ中で組織をペレット化させるために十分な速度、通常は約10,000~約20,000×gでの遠心分離を行うことにより、サンプルを脱パラフィン化すること;bメタノール、エタノール、プロパノール、およびブタノールなどの低級アルコールの水溶液を用いて、脱パラフィン化されたサンプルを再水和すること;c任意に、機械的な手段、超音波的な手段、または他の均質化の手段を使用して、サンプルを均質化すること;dサンプルを、グアニジニウムチオシアネートなどのカオトロピック剤を含むカオトロピック溶液中で、約30~約60分間の間、約50~約100°Cの範囲の温度に加熱すること;ならびにe有機溶媒を用いる抽出、例えば、クロロホルム抽出、フェノール-クロロホルム抽出、エタノールもしくはイソプロパノールもしくは任意の他の低級アルコールを用いる沈殿を含む多数の方法のいずれかによって、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、シリカゲルクロマトグラフィー、および逆相クロマトグラフィーを含むクロマトグラフィーによって、またはポリアクリルアミドゲル電気泳動およびアガロースゲル電気泳動を含む電気泳動法によって、カオトロピック溶液からRNAを回収することを含む。例えば、RNAは、以下のようにして回収されてもよい:1サンプルは、2M酢酸ナトリウムpH4.0および新鮮に調製したフェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール10:1.93:0.036を用いて、約10秒間の間の激しく攪拌すること、次いで、約15分間の間、氷上で冷却することによって抽出される;2溶液は、最大速度で約7分間の間遠心分離され、上部水相は新しいチューブに移される;3RNAはグリコーゲンおよびイソプロパノールで、-20°Cで30分間沈殿される;4RNAは、最大速度でベンチトップ遠心分離機において約7分間の遠心分離によってペレット化され;上清はデカントされ、そして廃棄され;ペレットは約70~75エタノールで洗浄される;ならびに5サンプルは、再度、最大速度で7分間、遠心分離される。上清はデカントされ、ペレットは風乾される。次いで、ペレットは適切な緩衝液例えば、50μL5mMTris塩化物、pH8.0に溶解される。本発明の方法は、広い範囲の組織および腫瘍の型に適用可能であり、従って、胸部、頭頸部、肺、食道、結腸直腸、膵臓などを含む一連の癌についての予後診断の評価のために使用できる。好ましくは、本発明の方法は、非小細胞肺癌NSCLCおよび結腸直腸癌CRCの予後診断に適用される。癌におけるKRAS遺伝子のエキソン2のコドン12の変異および/またはコドン13の変異は、EGFRを指向する化学療法に対する癌の感受性の減少を示す。癌は、肺腺癌およびNSCLCなどの肺癌、ならびに結腸直腸癌であり得る。DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法の工程1において使用されるDNAポリメラーゼは、3’エキソヌクレアーゼ活性を欠いている耐熱性DNAポリメラーゼである。3’エキソヌクレアーゼ活性の欠如により、このDNAポリメラーゼは、プライマーの3’末端で、増幅されるべきDNAとのミスマッチを有するオリゴヌクレオチドプライマーを伸長させることが困難である。3’エキソヌクレアーゼ活性を欠いている耐熱性DNAポリメラーゼの例としては、Bacillusstearothermophilusから単離された耐熱性BstDNAポリメラーゼIAlitottaetal.,GeneticAnalysis:BiomolecularEngineering1996,vol.12,pp.185-195;IsoThermDNAポリメラーゼEpicentreTechnologies,Madison,Wisconinから入手可能;エキソヌクレアーゼ活性に必須であるアミノ酸残基の酸化を介して3’→5’エキソヌクレアーゼ活性が除去されているSequenaseVertion1または3’→5’エキソヌクレアーゼ活性のために必須である28アミノ酸を遺伝的に欠失させることによるSequenaseVersion2T7DNAポリメラーゼ;VentRexoDNAポリメラーゼ;および、好ましくは、Taqポリメラーゼが挙げられる。DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法の工程2において、工程1Iの産物が、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の一方のメンバーから、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他方のメンバーまでに及ぶか、または対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の一方のメンバーに相補的な領域から、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他方のメンバーに相補的な領域にまでに及ぶ、エキソン4のDNA領域の増幅産物を含むか否かは、当該分野において公知である適切な手順を用いて決定できる。例えば、工程1Iの産物がエキソン4のDNA領域の増幅産物を含むか否かは、工程1Iの産物のDNA配列決定、および対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の一方のメンバーから、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他方のメンバーまでに及ぶKRAS遺伝子のエキソン4のヌクレオチド配列と、得られたヌクレオチド配列の比較により決定できる。あるいは、DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法の工程2において、工程1Iの産物が、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の一方のメンバーから、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他方のメンバーまでに及ぶか、または対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の一方のメンバーに相補的な領域から、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他方のメンバーに相補的な領域にまでに及ぶ、エキソン4のDNA領域の増幅産物を含むか否かは、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の一方のメンバーから、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対の他方のメンバーまでに及ぶKRAS遺伝子のエキソン4配列の適切なセグメントについてのオリゴヌクレオチドプローブの使用によって決定できる。例えば、本発明の方法の工程2は、aKrasEx4対照フォワードプライマーとKrasEx4対照リバースプライマーに相補的な領域の間、またはbKrasEx4対照リバースプライマーとKrasEx4対照フォワードプライマーに相補的な領域の間に位置しているエキソン4のDNA領域に特異的なオリゴヌクレオチドプローブと、工程1IのPCR産物を混合することを含むことができ、エキソン4のDNA領域とのオリゴヌクレオチドプローブのハイブリダイゼーションは、工程1Iの産物がエキソン4のDNA領域の増幅産物を含むことを示し、このことは、対象DNAがKRAS遺伝子を含むことを示す。オリゴヌクレオチドプローブの例は、配列番号13のヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドからなるKrasEx4対照プローブである。同様に、DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法の工程3において、工程1IIの産物が、変異したコドン12および/または変異したコドン13を含有するエキソン2のDNA領域の増幅産物を含むか否かは、当該分野において公知である適切な手順を用いて決定でき、増幅産物は、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の一方のメンバーから、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他方のメンバーまでに及ぶか、または変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の一方のメンバーに相補的な領域から、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他方のメンバーに相補的な領域までに及ぶ。例えば、工程1IIの産物が、エキソン2において変異したコドン12および/または変異したコドン13を含有するDNA領域の増幅産物を含むか否かは、工程1IIの産物のDNA配列決定、および変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の一方のメンバーから、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他方のメンバーまでに及ぶKRAS遺伝子のエキソン2のヌクレオチド配列と、得られたヌクレオチド配列の比較により決定できる。あるいは、DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法の工程3において、工程1IIの産物が、変異したコドン12および/または変異したコドン13を含有するエキソン2のDNA領域の増幅産物を含むか否かは、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の一方のメンバーから、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他方のメンバーまでに及ぶKRAS遺伝子のエキソン2配列の適切なセグメントについてのオリゴヌクレオチドプローブの使用によって決定でき、増幅産物は、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の一方のメンバーから、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他方のメンバーまでに及び、または変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の一方のメンバーに相補的な領域から、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対の他方のメンバーに相補的な領域までに及ぶ。例えば、工程1IIAに列挙されるように、KRAS変異を検出するための本発明の方法の工程1IIにおいて、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対が使用されるとき、本発明の方法の工程3は、工程1IIのPCR産物、およびa工程1IIAiに列挙されるリバースプライマーと、工程1IIAiiに列挙されるフォワードプライマーに相補的な領域の間、またはb工程1IIAiiに列挙されるフォワードプライマーと、工程1IIAiに列挙されるリバースプライマーに相補的な領域の間に位置しているエキソン2のDNA領域に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを混合することを含むことができ、エキソン2のDNA領域とのオリゴヌクレオチドプローブのハイブリダイゼーションは、工程1IIの産物がエキソン2のコドン13を含有するDNA領域の増幅産物を含むことを示し、このことは、対象DNAがKRAS遺伝子のエキソン2のコドン13に変異を含むことを示す。オリゴヌクレオチドプローブの例は、a配列番号3のヌクレオチド配列、またはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドからなるC13プローブ、およびb配列番号6によって示されるヌクレオチド配列からなるKrasC13_Mc、またはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドである。例えば、工程1IIBに列挙されるように、KRAS変異を検出するための本発明の方法の工程1IIにおいて、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対が使用されるとき、本発明の方法の工程3は、工程1IIのPCR産物、およびa工程1IIBiに列挙されるフォワードプライマーと、工程1IIBiiに列挙されるリバースプライマーに相補的な領域の間、またはb工程1IIBiiに列挙されるリバースプライマーと、工程1IIBiに列挙されるフォワードプライマーに相補的な領域の間に位置しているエキソン2のDNA領域に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを混合することを含むことができ、エキソン2のDNA領域とのオリゴヌクレオチドプローブのハイブリダイゼーションは、工程1IIの産物がエキソン2のコドン13を含有するDNA領域の増幅産物を含むことを示し、このことは、対象DNAがKRAS遺伝子のエキソン2のコドン13に変異を含むことを示す。オリゴヌクレオチドプローブの例は、配列番号20のヌクレオチド配列からなるC12共通プローブ、またはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドである。例えば、工程1IICに列挙されるように、KRAS変異を検出するための本発明の方法の工程1IIにおいて、コドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対が使用されるとき、本発明の方法の工程3は、工程1IIのPCR産物、およびa工程1IICiに列挙される少なくとも1つのフォワードプライマーと、工程1IICiiに列挙される少なくとも1つのリバースプライマーに相補的な領域の間、またはb工程1IICiiに列挙される少なくとも1つのリバースプライマーと、工程1IICiに列挙される少なくとも1つのフォワードプライマーに相補的な領域の間に位置しているエキソン2のDNA領域に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを混合することを含むことができ、エキソン2のDNA領域とのオリゴヌクレオチドプローブのハイブリダイゼーションは、工程1IIの産物がエキソン2のコドン12を含有するDNA領域の増幅産物を含むことを示し、このことは、対象DNAがKRAS遺伝子のエキソン2のコドン12に変異を含むことを示す。オリゴヌクレオチドプローブの例は、配列番号20のヌクレオチド配列からなるC12共通プローブ、またはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドである。DNAのKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、工程1IIは、Aコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対であって、i配列番号1によって表されるヌクレオチド配列からなる、リバースプライマーとしての13ASPリバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、およびii配列番号2によって表されるヌクレオチド配列からなる、フォワードプライマーとしてのC13フォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対、またはBコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対であって、i配列番号7によって表されるヌクレオチド配列からなる、フォワードプライマーとしての13ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなる、リバースプライマーとしてのC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対を含む、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対を使用する。DNAのKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、工程1IIは、Aコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対であって、i配列番号1によって表されるヌクレオチド配列からなる、リバースプライマーとしての13ASPリバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、およびii配列番号2によって表されるヌクレオチド配列からなる、フォワードプライマーとしてのC13フォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対;ならびにBコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対であって、i配列番号7によって表されるヌクレオチド配列からなる、フォワードプライマーとしての13ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなる、リバースプライマーとしてのC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対を含む、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対を使用する。DNAのKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、工程1IIは、Cコドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対であって、iフォワードプライマーとしての以下のプライマー:a配列番号8によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12VALフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;b配列番号14によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12SERフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;c配列番号15によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ARGフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;d配列番号16によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12CYSフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;e配列番号17によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;f配列番号18によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ALAフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;g配列番号9によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasM35T_1GA-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;またはh配列番号10によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras35T_3CG-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対を含む、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対を使用する。DNAのKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、工程1IIは、Cコドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーであって、iフォワードプライマーとしての以下のプライマー:a配列番号8によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12VALフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;b配列番号14によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12SERフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;c配列番号15によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ARGフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;d配列番号16によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12CYSフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;e配列番号17によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;f配列番号18によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ALAフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;g配列番号9によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasM35T_1GA-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびh配列番号10によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras35T_3CG-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;ならびにii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーを含む、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対を使用する。DNAのKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、工程1IIにおいて使用される変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対は、Aコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対であって、i配列番号1によって表されるヌクレオチド配列からなる、リバースプライマーとしての13ASPリバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド、およびii配列番号2によって表されるヌクレオチド配列からなる、フォワードプライマーとしてのC13フォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第1の対、Bコドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対であって、i配列番号7によって表されるヌクレオチド配列からなる、フォワードプライマーとしての13ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなる、リバースプライマーとしてのC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン13変異型オリゴヌクレオチドプライマーの第2の対;ならびにCコドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーであって、iフォワードプライマーとしての以下のプライマー:a配列番号8によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12VALフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;b配列番号14によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12SERフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;c配列番号15によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ARGフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;d配列番号16によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12CYSフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;e配列番号17によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ASPフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;f配列番号18によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチド12ALAフォワードプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;g配列番号9によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKrasM35T_1GA-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;およびh配列番号10によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドKras35T_3CG-Fもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチド;ならびにii配列番号19によって表されるヌクレオチド配列からなるオリゴヌクレオチドリバースプライマーC12共通リバースプライマーもしくはこれと実質的に同一であるオリゴヌクレオチドを有する、コドン12変異型オリゴヌクレオチドプライマーを含む。DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、工程1において、DNA、対照オリゴヌクレオチドプライマーの対、および変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対は、AppliedBiosystemsからのTaqMan1000ReactionGold/BufferAPack、およびAppliedBiosystemsまたはGEHealthcareから入手できる100mM総dNTPの混合物である反応ミックスAとともに混合される。対象DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、この方法はまた、対象DNAに加えて、鋳型を含まない対照NTCとも呼ばれるDNA陰性対照にも適用される。この方法は、対照DNAに適用され、この方法の別個の実行はまた、並行様式でNTCに実質的に同時に適用され、NTCにおいて、対照DNAの代わりに、DNAを含有しない液体サンプルが工程1において使用される。換言すれば、DNAを含有しない液体サンプルは、3’エキソヌクレアーゼ活性を欠いている耐熱性DNAポリメラーゼおよび工程1に列挙されているプライマーを使用するPCRに供される。この方法は、対象DNAの代わりに、DNAを含有しない液体サンプルが使用されるときに、工程2および3において増幅産物を生じないはずである。DNAを含有しない液体サンプルは、液体媒体中にDNAが存在しない以外は、対象DNAを保持するために使用される、同じ液体媒体、例えば、5mMTris、pH8.0などの適切な緩衝液であるべきである。例えば、対象DNAはFFPE組織から得られる場合、DNA陰性対照またはNTC実行のためのDNAを含有しない液体サンプルは、グアニジニウムイソチオシアネートを含有するがDNAを含有しない、5mMTris緩衝液、pH8.0であり得る。DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、リアルタイムPCRが使用されてもよく、リアルタイムPCRは、以下のサイクリングパラメーターを用いて実施できる:第1段階:50°Cで15秒間、1サイクル;第2段階:95°Cで10分間、1サイクル;ならびに第3段階:95°Cで15秒間および60°Cで1分間、42サイクル。リアルタイムPCRを使用して、DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、DNAは、対照アッセイおよび変異アッセイにおいて本発明のKRAS変異を検出する方法の、工程1Iおよび工程1IIのそれぞれにおいて、PCRを用いて増幅され、増幅産物は、蛍光標識されたオリゴヌクレオチドプローブを使用して同定でき、次いで、この方法はさらに、変異Ct、対照Ct、およびデルタCtの値を決定すること、ならびに、デルタCt値を、表2に開示された所定のデルタCt値と比較することによってDNAにおけるKRAS変異の存在を決定することを含む。本明細書で使用される場合、変異Ctとは、変異アッセイのためのCtをいい、DNAは、本発明のKRAS変異を検出するための方法の工程1IIに記載されるように、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対を用いて増幅され、変異型オリゴヌクレオチドプライマーの少なくとも1つの対は、エキソン2のコドン12または13の変異に特異的である。変異Ctは、変異アッセイからのレポーター蛍光が閾値よりも大きいPCRサイクル数である。本明細書で使用される場合、対照Ctという用語は、対照アッセイのためのCtをいい、DNAは、本発明のKRAS変異を検出するための方法の工程1Iに記載されるように、対照オリゴヌクレオチドプライマーの1つの対を用いて増幅される。対照Ctは、対照アッセイからのレポーター蛍光が閾値よりも大きいPCRサイクル数である。この閾値は、工程1IにおけるKrasEx4フォワード対照プライマーおよびKrasEx4リバース対照プライマーの使用に伴って、gDNAの対照アッセイのための27.0~29.0の間のCt値を提供するための点に設定でき、Promegaから商業的に入手可能なgDNAG3041が、工程1において、対象または試験DNAの代わりに使用される。本明細書で使用される場合、デルタCtΔCtとは、変異Ctと対照Ctの間の差をいい、すなわち、ΔCt=[変異Ct]-[対照Ct]である。DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法のある実施形態において、この方法は、対照DNAの試験サンプルに適用され、別個に、この方法はまた、並行様式でDNA陰性対照NTCサンプルにも適用できる。NTCサンプルおよび対象DNAの試験サンプルの各々は2連で実行でき、NTCサンプルおよび試験サンプルの各々の2連の実行のための変異Ctの平均値および対照Ctの平均値が計算され、そしてNTCサンプルおよび試験サンプルの各々についてのデルタCtもまた、平均変異Ctおよび平均対照Ctから計算される。リアルタイムPCRが対象DNAの試験サンプルに対して使用されるとき、NTCに対して並行実行するとともに、この方法は、NTCのために表1に列挙された受容判断基準以上である平均Ct値を与えるべきである。表1NTCサンプルのための平均Ctの受容判断基準使用したプライマーNTCKrasEx43712SERフォワードAGT4012ARGフォワードCGT4012CYSフォワードTGT4012ASPフォワードGAT4012ALAフォワードGCT4012VALフォワードGTT4013ASPリバースGACR40NTCについての平均Ct値が表1に列挙されるCt受容判断基準以上である場合、DNAにおけるKRAS変異を検出するための本発明の方法のこれらの実施形態において、対象DNAの試験サンプルについての平均Ct値が、使用される特異的プライマーについて表2に列挙される最大Ct値以下である場合には、対象DNAの試験サンプルに対する方法の結果が受容可能であると見なされる。表2試験サンプルについてのCt受容判断基準使用したプライマー最大Ct最大ΔCtKrasEx430N/A12SERフォワード37.46.512ARGフォワード35.96.612CYSフォワード36.86.712ASPフォワード36.06.812ALAフォワード37.76.612VALフォワード38.46.713ASPリバース36.76.7これらの実施形態において、デルタCt値が、使用された特異的変異型プライマーについて表2に列挙された最大デルタCt値よりも低いとき、KRAS変異は、使用された特異的変異型プライマーに対応するコドンにおいて、対象DNAの試験サンプルに存在するものと決定される。"