"哺乳動物における腫瘍の治療に使用するための、トリパラミクソウイルスAPMVを含む医薬組成物であって、該治療が、第1APMVの細胞毒性量を該哺乳動物に投与する工程、ついで、第1APMVの投与から2~56週間以内に第2APMVの細胞毒性量を該哺乳動物に投与する工程を含み、ここで、第2APMVが、第1APMVのものとは免疫学的に異なるHNタンパク質を有する、医薬組成物。第2APMVが、第1APMVのものとは免疫学的に異なるFタンパク質を更に有する、請求項1記載の医薬組成物。第1APMVがニューカッスル病ウイルスである、請求項1または2記載の医薬組成物。第1APMVがAPMV3である、請求項1または2記載の医薬組成物。第1APMVがニューカッスル病ウイルスであり、第2APMVがAPMV3である、請求項3記載の医薬組成物。第1APMVがAPMV3であり、第2APMVがニューカッスル病ウイルスである、請求項4記載の医薬組成物。少なくとも第1または第2APMVが細胞溶解性である、請求項1~6のいずれか1項記載の医薬組成物。第1および第2APMVが細胞溶解性である、請求項7記載の医薬組成物。該哺乳動物がウマ、イヌまたはネコ種の哺乳動物である、請求項1~8のいずれか1項記載の医薬組成物。少なくとも第1または第2APMVの投与中に、ある量の抗腫瘍剤を共投与する、請求項1~9のいずれか1項記載の医薬組成物。少なくとも第1または第2APMVが、追加的遺伝子を含有する組換えAPMVである、請求項1~10のいずれか1項記載の医薬組成物。実施例1イヌにおける種々のレントゲニックAPMV株の安全性および複製1.序論1.1この実験の目的は、レントゲニックトリパラミクソウイルスAPMVNDVCloneクローン30、NDVUlsterおよびAPMV3がイヌにおいて安全であり複製されるかどうかを評価することであった。2.材料および方法2.1実験の概要3群のビーグル犬1群当たり2頭に、表1群分け及び投与に示されているとおり、レントゲニック生NDVClone30、NDVUlsterまたはAPMV3を経口、鼻腔内、眼内および皮下s.c.経路により接種した。3群に分けられた4頭1-1-2のイヌを接触対照歩哨動物として使用した。接種後の第3-6-9-13および15日の時点で、経口、眼内および直腸スワブを採取した。鼻腔内スワブは接種後の第3および6日においてのみ採取した。接種後8週間まで毎週、血液サンプルを採取した。第1接種後の第6週において、経口、鼻腔内、眼内および皮下経路によりNDVClone30またはAPMV3のいずれかでイヌに2回目の接種を行った表1群分け及び投与を参照されたい。第2接種後の第3日および6日に、経口、鼻腔内、眼内および直腸スワブを採取した。スワブはウイルスの再分離に使用されるように計画されている。第1および第2接種後の第3日および第6日に、膀胱から尿サンプルを採取した必要に応じて利尿薬を使用した。各接種後の14日間に、埋め込みチップを使用して各イヌの体温を測定した。疾患の臨床徴候または他の異常の発生に関してイヌを毎日観察した。第1接種の8週間後、すなわち、第2接種の2週間後、イヌを安楽死させ、肉眼的に検査した。組織学的検査のためのサンプルを膵臓、脾臓、肝臓、腎臓、脳、心臓、気管、肺および深鼡径リンパ節から採取した。使用した株:生NDVUlster:-9.7log10EID50/ml生NDVClone30:-9.5log10EID50/ml生APMV3:-8.7log10EID50/ml2.3接種表1に従い、T=0において生APMVをイヌに接種した。第1接種の6週間後、表1に示されているとおりに動物に第2接種を行った。2.4血液サンプル血清学的検査のための血液サンプルを、第8週まで毎週、全動物から採取した。第1および第2接種後の血液サンプル凝固体およびヘパリン添加体を、第7日ではなく第6日に採取した。SOP5619.074に従い、および接種前に、頸静脈から血液サンプル採取1頭のイヌ当たり少なくとも4~5mlを行った。血液サンプル凝固体を使用して、HIおよびIFT力価を決定した。2.5HIアッセイT=4、T=6およびT=8週におけるNDV特異的抗体の血清レベルを赤血球凝集阻止HIアッセイにより決定した。血清の系列2倍希釈液をマイクロタイタープレート内で調製し、8赤血球凝集単位/50μlNDV抗原を含有する等体積と混合した。力価は、ニワトリ赤血球緩衝食塩水中の1v/vの赤血球凝集の完全阻止を示す最高希釈度の逆数として表されている。サンプルは、希釈度>1:2において、赤血球凝集の阻止に関して陽性とみなされた。各接種イヌの血清を3つ全てのAPMVに対する交差反応性に関して試験した。2.6IFTアッセイまた、T=4、T=6およびT=8週におけるNDV特異的抗体の血清レベルを免疫蛍光試験IFTにより試験した。マイクロタイタープレートを、RPMI1640標準抗生物質混合物5FCS中、37°C/5CO2において、100μl/ウェルの1.5×106/mlニワトリ胚繊維芽細胞CEFで一晩コートした。24時間後、該培地を、100μl1:100のRPMI1640標準抗生物質混合物培地希釈APMVウイルスNDVClone30、NDVUlsterまたはAPMV3と交換した。24時間後、該プレートを空にし、該感染CEFを100μl/ウェルの氷冷96エタノール-70°Cで30分間固定した。イヌ血清の系列2倍希釈液をマイクロタイタープレート幾つかのNDV陽性およびNDV陰性ニワトリ血清の隣内で調製し、洗浄されたコート化プレートに加え、37°Cで1時間インキュベートした。ついでプレートを洗浄3×し、1:20希釈FITC標識ヤギ抗イヌIgGHLまたはヤギ抗ニワトリIgGHLポリクローナル抗体と共にインキュベートした。37°Cで1時間の後、該プレートを洗浄3×し、20μlのPBS/グリセロール1:1を各ウェルに加えた。力価は、特異的蛍光シグナルを与える最高希釈度の逆数として表されている。>12の力価は13log2として表されている。各接種イヌの血清を3つ全てのAPMVに対する交差反応性に関して試験した。スワブ第1接種後のT=3-6-9-13および15日において、経口、眼内および直腸スワブを採取した。鼻腔内スワブは第1および第2接種後の第3日および第6日にのみ採取した。第2接種後の第3日および第6日に、経口、鼻腔内、眼内および直腸スワブを採取した。スワブを2.5mlのトリプトン2.5中に集め、それに1000U/1000μg1ml当たりのPen/Strepを加えた-70°Cで保存。尿第1および第2接種後の第3日および第6日に、尿サンプルを膀胱から採取した必要に応じて利尿薬を使用した。ウイルス再分離10日齢の孵化卵N=8に0.1mlの未希釈サンプル物質を接種することによりウイルスの再分離を行った。4~6日間のインキュベーションの後、SpaermanおよびKaerberIn:B.BibrackおよびG.Whittmann編,Virologischearbeitsmethoden,FisherVerlag,Stuttgart1974,pp.37-39の方法に従い、全ての卵からの尿膜腔液をHA活性に関して試験した。2.10体温接種の当日および各接種後の14日間、各イヌの体温を、埋め込みチップを使用して測定した。2.11観察疾患の臨床徴候または他の異常の存在に関して動物を毎日観察した。2.12組織学的検査および病理学的検査該実験の終了時、すなわち、第1接種の8週間後/第2接種の2週間後、全てのイヌを安楽死させ、肉眼的に検査した。組織学的検査のためのサンプルを膵臓、脾臓、肝臓、腎臓、脳、心臓、気管、肺および深鼡径リンパ節から採取した。3.結果3.1NDVIFおよびHI抗体価NDVIF抗体価:第1接種の4週間後、該接種APMVに対する抗体がGr1、Gr3およびGr5において検出可能であった。このことは、これらのAPMV株がイヌにおいて複製され、抗体を誘導したことを示している。該データから、NDVUlsterに対して産生された抗体がNDVClone30と交差反応し、その逆も生じることも明らかである。これは、NDVUlsterともNDVClone30とも交差反応しないAPMV3特異的抗体には当てはまらない。第1接種の6週間後の抗体価はこの第4週のデータに匹敵する。興味深いことに、全ての群において第2接種の2週間後T=6週の時点でイヌに第2接種を行った、抗体価の増加が検出可能であった。これは、生ウイルスでの第2接種が追加免疫ブースター効果を誘導して、該ウイルスの複製による抗体価の増加をもたらすことを示している。NDVHI抗体価:これらのデータから、生ウイルスでの第2接種は、高い抗体価をもたらす強力な追加免疫効果を誘導することが、より一層明らかである。Gr1およびGr3においては特に、抗体価は、T=4週と比べてT=6週において低下すること、および第2接種の2週間後、抗体価は再び増加し、T=4週と比べて高くなることが明らかである。また、これらのデータは、該ウイルスがイヌにおいて複製されることを示している。3.2スワブおよび尿サンプル第1接種後の第3日および第6日に集められた、全てのイヌからの経口、眼内および直腸スワブならびに尿サンプルを、ウイルスの再分離のために使用した。全てのサンプルは陰性と評価された。3.3体温および観察接種の当日および各接種後の14日間に、埋め込みチップを使用して各イヌの体温を測定した。顕著な体温変化は認められなかった。該実験中、該イヌにおける疾患の臨床徴候または他の異常の存在に関する顕著な観察は得られなかった。3.4組織学的検査および病理学的検査実験の終了時に、全てのイヌを安楽死させ、肉眼的に検査した。該肉眼的観察は、Gr5からの1頭のイヌにおいて、脾臓における厚さ3mmの大きな白斑が認められることを示した。これは顕微鏡的には巣状中等度急性被膜下血腫に相当する。イヌにおける脾臓血腫はほとんどは外傷に由来する。全ての他の動物は剖検で肉眼的病変を示さなかった。組織学的検査のためのサンプルは膵臓、脾臓、肝臓、腎臓、脳、心臓、気管、肺および深鼡径リンパ節から採取した。鼻腔内、眼内および経口経路によるイヌにおけるレントゲニックトリパラミクソウイルスの接種は、NDVClone30およびNDVUlsterが接種されたイヌにおいて特に、肺における炎症病変を引き起こすと結論づけられた。APMV3が接種された1頭のイヌにおいて、膵臓炎症病変および重度の出血が認められた。結論:1NDVClone30、NDVUlsterおよびAPMV3はイヌに対して感染性であり、イヌにおいて複製能を有する。2該イヌにおいて臨床徴候は見出されず、ウイルスは再分離できなかった。これは、イヌにおけるそのようなウイルスの使用が安全であることを示している。3NDV株とAPMV3株との間に交差免疫は存在しない。実施例2ヒト腫瘍細胞系上でのAPMV3の増殖細胞培養に使用した細胞:ヒト結腸癌細胞系CL188.使用した培地:CL188:RPMI164010FBS1×標準抗生物質混合物L-グルタミン2μg/mlアンホテリシンB増殖培地。RPMI16402FBS1×標準抗生物質混合物2μg/mlアンホテリシンB維持培地。ウイルス株:トリパラミクソウイルス3型。9.7log10EID50/ml。卵源:L1110310日齢孵化卵。L1120311日齢孵化卵。力価測定およびHA試験:トリプトース2.5。Pen-Strep。5ニワトリ赤血球。0.1MPBS。APMV3での細胞の接種1個のフラスコの各細胞系/培地を継代の3日後に集めた。該細胞を計数して、0.1のMOIでのウイルス接種CL188のための希釈度を決定した。希釈は、適当な培地中で行った。該細胞の接種は以下のとおりに行った。付着細胞の培地CL188を取り出した。次に1mlのウイルスを該細胞に加えた。該細胞を37°Cで1時間インキュベートし、ついで4mlの新鮮培地を該細胞ウイルスに加えた。細胞を37°Cで更に4日間インキュベートした。接種後、残りの希釈ウイルスを-20°Cで保存した。4日後、該培養フラスコを-20°Cで3回、凍結-融解した。最後の融解の後、該細胞を15mlのチューブに移し、200×Gで5分間遠心させた。上清を集め、-70°Cの低温チューブ内で保存した。卵上の力価測定によるウイルス増殖の決定:2FBSの存在下のCL188細胞上で増殖させたウイルスからの回収物および接種物に関して力価測定を行った。サンプルを10-7の希釈度までトリプトース中で10倍希釈した。10個の10日齢孵化卵に0.2mlの希釈サンプル希釈度10-2/10-7を注入した。卵を37°Cで4日間インキュベートした。HA試験により力価を決定した。2FBSの存在下のCL188細胞上で増殖させたウイルスからの回収物および接種物に関して力価測定を繰返した。サンプルを10-4CL188接種物または10-5CL188回収物の希釈度までトリプトース中で10倍希釈した。11日齢孵化卵に0.2mlの希釈サンプルCL188接種物は希釈度10-2/10-4またはCL188回収物は希釈度10-2/10-5を注入した。卵を37°Cで3日間インキュベートした。HA試験により力価log10を決定した。結果4日間のインキュベーションの後、APMV3ウイルスに感染したCL188細胞上で明らかなCPE死細胞が視認可能であった。結論:APMV3ウイルスは、視認可能なCPEを伴ってヒト結腸癌細胞系CL188上で良く増殖することが示された。"