ヒトcMetタンパク質に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、ここで該抗体又はその抗原結合断片が:ヒトcMetタンパク質のHGF媒介性活性化の厳密な拮抗物質であること、ヒトcMetタンパク質のHGF非依存性活性化を阻害すること、及び細胞表面ヒトcMetタンパク質の有意なダウンレギュレーションを誘導しないこと:の特性の少なくとも2又は3つ全てを示す、前記抗体又は抗原結合断片。ヒトcMetタンパク質のIPT領域内のエピトープ、特にヒトcMetタンパク質のIPTドメイン12、23又は34内のエピトープに結合するか、或いはヒトcMetタンパク質のPSIIPT1領域内のエピトープに結合する、請求項1記載の抗体又は抗原結合断片。前記ヒトcMetタンパク質のPSIIPT1領域中のアミノ酸配列内のエピトープに結合する、請求項2記載の抗体又は抗原結合断片。前記ヒトcMetタンパク質の高親和性HGF結合部位へのHGFの結合をブロックする、請求項2又は3記載の抗体又は抗原結合断片。細胞表面ヒトcMetタンパク質のダウンレギュレーションを誘導せず、且つヒトcMetタンパク質のSEMAドメイン内のエピトープに結合する、請求項1記載の抗体又は抗原結合断片。前記ヒトcMetタンパク質の低親和性HGF結合部位へのHGFの結合をブロックする、請求項5記載の抗体又は抗原結合断片。完全なヒト配列を有するヒンジ領域を含む、請求項1~6のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。高ヒト相同性を有する、請求項1~7のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、ここでVH及びVLドメイン、又はそれらの1以上のCDRが、ラクダ科動物由来である、請求項1~8のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。ヒトcMetタンパク質に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、この抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、ここで該VH及びVLドメイン、又はそれらの1以上のCDRがラクダ科の動物由来である、前記抗体又は抗原結合断片。前記VHドメイン及び/又はVLドメインが、ラマに由来するか、又はラマVH若しくはVLドメインのヒト生殖細胞系列化バリアントである、請求項9又は10記載の抗体又は抗原結合断片。前記VHドメイン又はVLドメインのいずれか中の少なくとも1つの超可変ループが、ヒト抗体に生じるカノニカルフォールド構造と実質的に同一である、推定又は実際のカノニカルフォールド構造を示す、請求項1~11のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記超可変ループH1、H2、L1及びL2、並びに任意にL3の各々が、ヒト抗体に生じるカノニカルフォールド構造と実質的に同一である、推定又は実際のカノニカルフォールド構造を示す、請求項12記載の抗体又は抗原結合断片。前記超可変ループH1及びH2が、ヒト抗体に生じるカノニカルフォールド構造の組合せを形成し、且つ該超可変ループL1及びL2が、ヒト抗体に生じるカノニカルフォールド構造の組合せを形成する、請求項13記載の抗体又は抗原結合断片。単離された抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、前記抗体又は抗原結合断片が:配列番号21DVRVIATGWATANALDA、又はその配列バリアント、配列番号15VDDYYLGYDY、又はその配列バリアント、配列番号3RRDNYYGTSGEYDY、又はその配列バリアント、配列番号6DTVVSGNGY、又はその配列バリアント、配列番号9DLIGSHDY、又はその配列バリアント、配列番号12GPGWYSGSRNDY、又はその配列バリアント、配列番号18LEDYELAYDY、又はその配列バリアント、及び配列番号73SGYGSSLGDFGS、又はその配列バリアント:からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖CDR3を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、前記単離された抗体又はその抗原結合断片。前記重鎖可変ドメインが:配列番号XX1X1X2X3X4X5X6X7X8TYYAESMK、又はその配列バリアントであり、式中X1は、任意のアミノ酸、好ましくはT又はAであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはIであり;X3は、任意のアミノ酸、好ましくはS又はNであり;X4は、任意のアミノ酸、好ましくはWであり;X5は、任意のアミノ酸、好ましくはNであり;X6は、任意のアミノ酸、好ましくはD又はGであり;X7は、任意のアミノ酸、好ましくはI、G又はSであり;及びX8は、任意のアミノ酸、好ましくはN又はSであるもの;配列番号XX2VIAYDGSTX1YSPSLKS、又はそれらの配列バリアントであり、式中X1は、任意のアミノ酸、好ましくはY又はDであるもの;及び配列番号XX3RIDPEX1GGTKYAQKFQG、又はそれらの配列バリアントであり、式中X1は、任意のアミノ酸、好ましくはD、N又はEであるもの:からなる群から選択される配列を含む可変重鎖CDR2を更に含み、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項15記載の抗体又は抗原結合断片。前記重鎖可変ドメインが:配列番号XX4X1DYX2MX3、又はそれらの配列バリアントであり、式中X1は、任意のアミノ酸、好ましくはD又はSであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはA又はVであり;及びX3は、任意のアミノ酸、好ましくはT、N又はSであるもの;配列番号XX5X1NYYX2WS、又はそれらの配列バリアントであり、式中X1は、任意のアミノ酸、好ましくはG又はTであり;及びX2は、任意のアミノ酸、好ましくはA又はYであるもの;配列番号XX6X1X2X3ID、又はそれらの配列バリアントであり、式中X1は、任意のアミノ酸、好ましくはM又はNであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはN又はYであり;及びX3は、任意のアミノ酸、好ましくはS又はVであるもの:からなる群から選択される配列を含む可変重鎖CDR1を更に含み、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項15記載の抗体又は抗原結合断片。配列番号YY1QQGX1SFPX2X3、又はそれらの配列バリアントであり、式中、X1は、任意のアミノ酸、好ましくはY又はWであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはY又はLであり;X3は、任意のアミノ酸、好ましくはT又はSであるもの;配列番号YY2ASYRX1X2X3X4X5X6V、又はそれらの配列バリアントであり、式中、X1は、任意のアミノ酸、好ましくはS、I、R又はTであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはA、S、T又はRであり;X3は、任意のアミノ酸、好ましくはN又はTであり;X4は、任意のアミノ酸、好ましくはN、D、R又はKであり;X5は、任意のアミノ酸、好ましくはA、V、Y、N又はHであり;X6は、任意のアミノ酸、好ましくはV、A、S又はGであるもの:からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含み、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項15~17のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。配列番号YY3WASX1RES、又はそれらの配列バリアントであり、式中、X1は、任意のアミノ酸、好ましくはI又はTであるもの;配列番号YY4X1VX2X3RX4S、又はそれらの配列バリアントであり、式中、X1は、任意のアミノ酸、好ましくはD、A又はEであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはN又はSであり;X3は、任意のアミノ酸、好ましくはR、Y又はKであり;X4は、任意のアミノ酸、好ましくはA又はPであるもの:からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインCDR2を更に含み、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項18記載の抗体又は抗原結合断片。配列番号YY5KSSQSVLX1X2X3NX4KX5YLA、又はそれらの配列バリアントであり、式中、X1は、任意のアミノ酸、好ましくはW、L又はFであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはR又はSであり;X3は、任意のアミノ酸、好ましくはS又はPであり;X4は、任意のアミノ酸、好ましくはQ又はHであり;X5は、任意のアミノ酸、好ましくはN又はSであるもの;配列番号YY6X1GX2X3X4X5X6GX7X8X9YX10S、又はそれらの配列バリアントであり、式中、X1は、任意のアミノ酸、好ましくはA又はTであり;X2は、任意のアミノ酸、好ましくはT又はSであり;X3は、任意のアミノ酸、好ましくはS又はNであり;X4は、任意のアミノ酸、好ましくはS又はTであり;X5は、任意のアミノ酸、好ましくはD又はNであり;X6は、任意のアミノ酸、好ましくはV又はIであり;X7は、任意のアミノ酸、好ましくはY、G、D又はNであり;X8は、任意のアミノ酸、好ましくはG又はYであり;X9は、任意のアミノ酸、好ましくはN又はYであり;X10は、任意のアミノ酸、好ましくはV又はLであるもの:からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメインCDR1を更に含み、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項19記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号12又は配列番号21又はそれらの配列バリアントであり、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項1、又は5~17のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号21又は配列番号12又はそれらの配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号XX2又はそれらの配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号XX5又はそれらの配列バリアントであり、且つここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項21記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号21又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号20若しくはその配列バリアント又は配列番号83若しくはその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号19又はその配列バリアントであり、且つここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項22記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号12又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号11又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号10又はその配列バリアントであり、且つここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項22記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号YY2又はそれらの配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号YY4又はそれらの配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号YY6又はそれらの配列バリアントであり、且つここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項21~24のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号33又はその配列バリアント、配列番号145又はその配列バリアント、配列番号146又はその配列バリアント、配列番号147又はその配列バリアント、及び配列番号148又はその配列バリアントからなる群から選択され;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号32又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号31若しくはその配列バリアント、又は配列番号144若しくはその配列バリアントであり、且つここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項25記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号30又はその配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号29又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号28又はその配列バリアントであり、且つここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項25記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、該抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、ここで:該可変重鎖CDR3配列が、配列番号21又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号20、配列番号83及び配列番号84又はそれらの配列バリアントからなる群から選択され;並びに該可変重鎖CDR1配列が、配列番号19又はその配列バリアントであり;並びに、該軽鎖可変ドメインが:可変軽鎖CDR3配列が、配列番号33又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号32又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR1配列が、配列番号31又はその配列バリアントであり、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号145又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号32又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR1配列が、配列番号144又はその配列バリアントであり、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号146又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号32又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR1配列が、配列番号31又はその配列バリアントであり、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号147又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号32又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR1配列が、配列番号144又はその配列バリアントであり、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号148又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号32又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR1配列が、配列番号144又はその配列バリアントであり、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;から選択されるCDRの組合せを含む、請求項21又は22記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、該抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、ここで:該可変重鎖CDR3配列が、配列番号12又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号11又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号10又はその配列バリアントであり、該可変軽鎖CDR3配列が、配列番号30又はその配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号29又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号28又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項21又は22記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、該抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該重鎖可変ドメインが、配列番号51、88、92、94、96及び98からなる群から選択される配列と、少なくとも85配列同一性、又は少なくとも90配列同一性、又は少なくとも95配列同一性、又は少なくとも97、98若しくは99配列同一性を伴うVH配列を含む、請求項1、5~14又は21~29のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、該抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該重鎖可変ドメインが、配列番号51、88、92、94、96及び98からなる群から選択されるVHアミノ酸配列を含む、請求項1又は5~14のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、該抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該軽鎖可変ドメインが、配列番号55、93、95、97、99、158、159、160、161、162、163及び164からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80配列同一性、又は少なくとも85配列同一性、又は少なくとも90配列同一性、又は少なくとも95配列同一性、又は少なくとも97、98若しくは99配列同一性を伴うVλ配列を含む、請求項1、5~14又は21~31のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、該抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該軽鎖可変ドメインが、配列番号55、93、95、97、99、158、159、160、161、162、163及び164からなる群から選択されるVλアミノ酸配列を含む、請求項1、5~14又は21~31のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、且つcMet受容体のHGF媒介性活性化の厳密な拮抗物質である抗体又は抗原結合断片であって、該抗体が、配列番号51又は配列番号88として示されたアミノ酸配列又はそれらのヒト化若しくは親和性バリアントを含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号55として示されたアミノ酸配列、又はそれらのヒト化若しくは親和性バリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1又は5~14のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、請求項34記載の抗体のヒト生殖細胞系列化バリアントであり、該生殖細胞系列化バリアント抗体又は抗原結合断片が:‐配列番号92として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号93として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号94として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号95として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号96として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号97として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号98として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号99として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン:を含む、請求項1又は5~14のいずれか一項記載の単離された抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、請求項34の親和性バリアントであり、該親和性バリアントが、配列番号88として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、並びに配列番号156、配列番号157、配列番号158、配列番号159、配列番号160、配列番号161、配列番号162、配列番号163及び配列番号164からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1又は5~14のいずれか一項記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、且つcMet受容体のHGF媒介性活性化の厳密な拮抗物質である抗体又は抗原結合断片であり、該抗体が、配列番号48として示されたアミノ酸配列、又はそのヒト化若しくは親和性バリアントを含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号54として示されたアミノ酸配列、又はそのヒト化若しくは親和性バリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1又は5~14のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号15若しくは配列番号18又はそれらの配列バリアントであり、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項1~4、又は7~17のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号15若しくは配列番号18又はそれらの配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号XX3又はそれらの配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号XX6又はそれらの配列バリアントであり、並びに、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項38記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号15又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号14若しくはその配列バリアント又は配列番号85若しくはその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号13又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項39記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号18又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号17又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号16又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項39記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号YY1又はそれらの配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号YY3又はそれらの配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号YY5又はそれらの配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項39~41いずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号87又はその配列バリアント、配列番号139又はその配列バリアント、及び配列番号141又はその配列バリアントからなる群から選択され;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号23若しくはその配列バリアント又は配列番号26若しくはその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号86又はその配列バリアント、配列番号137又はその配列バリアント、配列番号138又はその配列バリアント、配列番号140又はその配列バリアント、配列番号142又はその配列バリアント、及び配列番号143又はその配列バリアントからなる群から選択され、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項42記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号24又はその配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号23又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号22又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項42記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号27又はその配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号25又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項42記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、ここで:該可変重鎖CDR3配列が、配列番号15又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号14又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号13又はその配列バリアントであり、該可変軽鎖CDR3配列が、配列番号87又はその配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号23又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号86又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項1~4、7~14又は40のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、ここで:該可変重鎖CDR3配列が、配列番号15又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号14又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号13又はその配列バリアントであり;並びに該軽鎖可変ドメインが:可変軽鎖CDR3配列が、配列番号24又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号23又はその配列バリアントであり;及び可変軽鎖CDR1配列が、配列番号22又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号87又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び可変軽鎖CDR1配列が、配列番号137又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号139又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び可変軽鎖CDR1配列が、配列番号138又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号141又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び可変軽鎖CDR1配列が、配列番号140又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号141又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び可変軽鎖CDR1配列が、配列番号142又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号87又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び可変軽鎖CDR1配列が、配列番号86又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの;又は可変軽鎖CDR3配列が、配列番号87又はその配列バリアントであり;可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び可変軽鎖CDR1配列が、配列番号143又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含むもの:から選択されるCDRの組合せを含む、請求項1~4、7~14又は40のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該可変重鎖CDR3配列が、配列番号18又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号17又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号16又はその配列バリアントであり、該可変軽鎖CDR3配列が、配列番号27又はその配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号26又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号25又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項38又は39記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該重鎖可変ドメインが、配列番号49、108、110、112、114、116、118及び120からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも85配列同一性、又は少なくとも90配列同一性、又は少なくとも95配列同一性、又は少なくとも97、98若しくは99配列同一性を伴うVH配列を含む、請求項1~4、7~14又は38~48のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該重鎖可変ドメインが、配列番号49、108、110、112、114、116、118及び120からなる群から選択されるVHアミノ酸配列を含む、請求項1~4又は7~14のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、ヒトcMetタンパク質に特異的に結合し、該抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該軽鎖可変ドメインが、配列番号52、89、109、111、113、115、117、119、121、149、150、151、152、153、154、155、156及び157からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも75配列同一性、又は少なくとも80配列同一性、又は少なくとも85配列同一性、又は少なくとも90配列同一性、又は少なくとも95配列同一性、又は少なくとも97、98若しくは99配列同一性を伴うVκ配列を含む、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。前記抗体又は抗原結合断片が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、該軽鎖可変ドメインが、配列番号52、89、109、111、113、115、117、119、121、149、150、151、152、153、154、155、156及び157からなる群から選択されるVκアミノ酸配列を含む、請求項1~4、7~14又は38~50のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体が、配列番号49として示されたアミノ酸配列、又はそのヒト化若しくは親和性バリアントを含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号52として示されたアミノ酸配列若しくは配列番号89として示されたアミノ酸配列、又はそれらのヒト化若しくは親和性バリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1~4又は7~14のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体が、配列番号49として示されたアミノ酸配列、又はそのヒト化若しくは親和性バリアントを含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号89として示されたアミノ酸配列、又はそのヒト化若しくは親和性バリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1~4、7~14、47又は50のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記抗体が、請求項54記載の抗体のヒト生殖細胞系列化バリアントであり、該生殖細胞系列化バリアント抗体が:‐配列番号108として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号109として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号110として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号111として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号112として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号113として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号114として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号115として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号116として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号117として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号118として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号119として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;又は配列番号120として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号121として示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン:を含む、請求項1~4又は7~14のいずれか一項記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。前記抗体が、請求項54記載の抗体の親和性バリアントであり、該親和性バリアント抗体が、配列番号49として示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、並びに配列番号149、配列番号150、配列番号151、配列番号152、配列番号153、配列番号154、配列番号155、配列番号156及び配列番号157からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1~4又は7~14のいずれか一項記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。前記抗体が、配列番号50として示されたアミノ酸配列、又はそのヒト化若しくは親和性バリアントを含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号53として示されたアミノ酸配列、又はそのヒト化若しくは親和性バリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1又は7~14のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号3、配列番号6又は配列番号9又はそれらの配列バリアントからなる群から選択され、ここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項1、7~14又は15~17のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号3、配列番号6又は配列番号9又はそれらの配列バリアントからなる群から選択され;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号XX1又はそれらの配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号XX4又はそれらの配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項58記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号3又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号2又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号1又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項59記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号6又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号5又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号4又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項59記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変重鎖CDR3配列が、配列番号9又はその配列バリアントであり;該可変重鎖CDR2配列が、配列番号8又はその配列バリアントであり;及び該可変重鎖CDR1配列が、配列番号7又はその配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項59記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号YY2又はそれらの配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号YY4又はそれらの配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号YY6又はそれらの配列バリアントであり、並びにここで該配列バリアントは、列挙された配列中に1、2又は3個のアミノ酸置換を含む、請求項59~62のいずれか一項記載の抗体又は抗原結合断片。前記可変軽鎖CDR3配列が、配列番号36又はその配列バリアントであり;該可変軽鎖CDR2配列が、配列番号35又はその配列バリアントであり;及び該可変軽鎖CDR1配列が、配列番号34又はその配列バリアントであり、並びにここで本発明は、以下の非限定的な実験的実施例を参照し、更に理解されるであろう。ラマの免疫化及び末梢血リンパ球の収集に加え、引き続きのRNA抽出及び抗体断片の増幅を、DeHaardとその同僚により説明されたように行った。8頭のラマを、cMetを過剰発現しているヒト胃細胞株MKN45により免疫化したを使用するフローサイトメトリーにより確認した。別の2頭のラマを、肺癌細胞株NCIH441細胞により免疫化した。これらのラマは、6週間にわたる1週間に1回頸部への筋肉内注射により免疫化した。およそ107個細胞を、頸筋に注射し、且つフロイントの不完全アジュバントを、これらの細胞の注射部位から数cm離れた位置の第二の領域に注射した。免疫応答を調べるために、血液試料10mlを免疫化前及び後に採取した。最後の免疫化から3~4日後、血液400mlを採取し、且つ総RNAを、フィコールパク勾配法及びChomczynskiPらの文献に説明された方法を用い、調製したPBLから抽出した。平均RNA収量は、450μgであった。その後DeHaardHらの文献に説明されたようにFab含有ファージミドライブラリーを構築するために、抽出されたRNAを、重鎖及び軽鎖V領域のランダムcDNA合成及びPCR増幅に使用した。得られたライブラリーは、良好なレベルの多様性を示した。MKN45細胞又はNCIH441細胞に対する免疫応答を、フローサイトメトリーを用いて調べた。希釈した血清100μlウェルを、これらの細胞に添加し、4°Cで30分間インキュベーションした。PBS及び1BSAで洗浄した後、FITC複合されたヤギ抗ラマ抗体01μg100μlウェルを添加し、4°Cで30分間インキュベーションした。PBS及び1BSAで洗浄した後、FACSCalibur上で結果を読み取り、平均蛍光を、血清の希釈に対してプロットした。cMetに対する特異的免疫応答を、免疫前及び免疫後血清を使用する、固定した組換えcMetによるELISAを用い決定した。固定されたcMetに結合したラマIgG1を、マウス抗ラマIgG1及びHRP複合されたロバ抗マウス抗体を用いて検出した。図2は、10頭の免疫化したラマのうちの4頭の免疫応答を示す。同様の免疫応答が、MKN45細胞で免疫化した別のラマ4頭で認められたが、NCIH441細胞で免疫化したラマについては認められなかった。Fabを発現しているファージを、標準プロトコールに従い作製し、更に固定された組換え二量体cMet又はcMetの組換え細胞外ドメイン上で選択した。トリプシンによるcMet結合ファージの総溶出を、標準ファージディスプレイプロトコールに従い行った。2~4回の選択を行い、ファージにより発現されたcMet特異性Fabを濃厚化した。個々のコロニーを単離し、ペリプラスム画分を、標準プロトコールに従い全てのライブラリーからIPTG誘導により生成した。固定されたcMetへの結合に関する成熟型HGFとの競合についてのcMet特異性Fabのスクリーニングは、ELISAベースの競合アッセイを用いて行った。ヤギ抗ヒトFcγ抗体2μgmlを、マキシソーブプレート上に固定し、PBS中の1カゼインで2時間ブロックした後、組換え二量体cMet100ngmlを添加し、室温で1時間インキュベーションした。洗浄後、Fab含有ペリス50μlを添加し、捕獲されたcMetへ結合させ、その後N末端ビオチニル化した成熟型HGF25ngmlを添加した。N末端ビオチニル化は、ThermoScientific社により提供されたプロトコールに従い、50mMリン酸緩衝液中、5倍過剰なNHSLCビオチンにより、4°Cで24時間行った。ビオチニル化された成熟型HGFを、室温で1時間インキュベーションし、その後洗浄し、ホースラディッシュ複合されたストレプトアビジンを添加し、更に1時間インキュベーションした。TMBを添加し、このプレートを620nmで読み取った。関係のないペリプラスム抽出物及び50倍過剰なコールドHGFを、全てのプレートにおいて陽性対照として含んだ。HGFと競合するFab含有ペリスの例を、図3に示す。HGF競合するクローンを、VH領域及びVL領域において配列決定し、VHのCDR3の配列を基にVHファミリーへ分割した。これらのVHファミリーを更に、解離及びSEMAPSI又はcMet細胞外ドメインの認識について、表面プラスモン共鳴により試験した。1000~2000RUの間の二量体cMet、SEMAPSI又はデコイcMetを、酢酸ナトリウム緩衝液中のアミンカップリングにより、VIAチップ上に固定した。Fab含有ペリスを、流量30μl分で添加し、且つRUの増加が認められる場合、Fabを結合しているとみなした。koffは、各試料について2分間測定した。表8には、様々なVHファミリーに関するドメイン認識及びkoffをまとめている。いくつかのVHファミリーは、SEMAPSIドメインを認識したのに対し、他のものは、デコイcMetのみを認識した。これらのFabは、103~104s1の範囲のkoffを有し、最良のものはkoff13×104s1を有した。拮抗性クローンのVHドメイン及びVLドメインを、ヒト定常IgG1ドメインと、並びにヒトCκドメイン又はCλドメインと融合させ、特許出願WO2009145606において説明されたシステムにおいて、二価モノクローナル抗体として作製し、その発現は、プロテインA精製後、15~30μgmlを生じた。cMetの異なるエクトドメインを、マキシソーブプレート上に、PBS中、4°Cで一晩固定した。抗体を、1μgmlで開始する3倍希釈で添加し、室温で1時間結合させた。この反応をH2SO4で停止した後、結合をHRP複合されたプロテインA及びTMBにより明らかにし、450nmで読み取った。この結合の結果を基に、デコイcMetのみに結合し且つ試験した他のドメインのいずれにも結合しなかったいくつかのmAbを除き、mAbをcMetの異なるドメインにマッピングすることができた。デコイcMetにのみ結合する幾つかの抗体は、IPT23領域又は組換えcMetタンパク質断片には認められないコンホメーションエピトープに結合することができる。IPT12ドメインに結合する抗体40B8の例は、図4Aに示し、且つSEMAドメインに結合する36C4は、図4Bに示している。血清欠乏状態のヒト膵臓癌細胞を、96ウェルプレートに、7000個細胞ウェルで播種した。2日目に、抗体を濃度30、10、3及び1μgmlで3つ組で添加し、且つこれらの細胞を30分間インキュベーションし、その後125ngmlHGFウェルを添加した。HPAF細胞をまた、HGFの非存在下で、抗体と一緒にインキュベーションした。3日目に、細胞を固定し、クリスタルバイオレットで染色した。分散量のスコア化を、3回独立して、二人の別人が行った。結果は、mAbによるHGF誘導した分散の投与量依存性の阻害を示し、試験した13のうち8つの抗体について強力なブロックを示し、そのうちの5つは、30μgmlで分散の完全なブロックを示した。また8つの拮抗性mAbは全て、HGFの非存在下、30μgmlで、作動作用を欠いていた。図5は、媒体対照及びHGF対照と比較した、HGFの存在及び非存在下での、38H10の分散の結果の例を示している。アカゲザルcMetECD及びマウスcMetへの交差反応を、結合ELISAにおいて行った。アカゲザルECDを、PBS中で、96ウェルマキシソーブプレート上に固定し、且つ4°Cで一晩インキュベーションした。PBS中1カゼインでブロックした後、10μgmlから開始する希釈した抗体を添加し、室温で1時間結合させた。プレートを洗浄し、且つヤギ抗ヒトFcγ抗体を添加し、室温で1時間インキュベーションした。洗浄後、TMBを添加し、プレートを620nmで読み取った。マウスcMetはまたFc部分を含むので、それらのmAbを、96ウェルマキシソーブプレート上に4°Cで一晩固定し、且つブロックした後、100ngmlのマウスcMetを添加し、室温で1時間インキュベーションした。HRP複合されたマウス抗His抗体を添加し、室温で1時間インキュベーションした。洗浄後、TMBを添加し、プレートを620nmで読み取った。ビオチニル化されたヤギ抗マウスcMet抗体は、マウスcMetの陽性対照としてストレプHRPを使用し、明らかにした。マウスcMetへの有意な結合は、いずれのmAbについても認められなかった。試験した6つのmAbは全て、アカゲザルcMetECDとの交差反応性を示し、ヒトECDcMetに対する交差反応性と比べ、ほぼ同じ結合を伴った。固定されたcMetへの結合に関するN末端ビオチニル化されたHGFとの競合は、ELISAベースの競合アッセイを用いて行った。マウス抗His抗体5μgmlを、マキシソーブプレート上に固定し、PBS中の1カゼインにより2時間ブロックした後、組換え二量体cMet100ngmlを添加し、室温で1時間インキュベーションした。洗浄後、抗体の希釈物を添加し、捕獲されたcMetに30分間結合させ、その後N末端ビオチニル化HGF25ngmlを添加した。ビオチニル化されたHGFを、室温で1時間インキュベーションし、その後洗浄した。ホースラディッシュ複合されたストレプトアビジンを添加し、更に1時間インキュベーションした。TMBを添加し、プレートを620nmで読み取った。マウスの5D5抗体に加え、アイソタイプ対照を、対照として含んだ。競合は、対照と比べた競合率として表し、抗体の濃度に対してプロットした。IC50は、GraphPadPrismを用いて算出した。抗体13E6及び20A11は、部分的にのみHGFに取って代わり、これはこれら2つのmAbがcMet上で認識するエピトープに関連し得る。図6は、cMet結合に関してHGFと競合する抗cMet抗体の例を示している。ヒト膵臓BxPC3細胞は、HGFに反応し、更に8種の候補mAbを調べる増殖アッセイに使用した。簡単に述べると、15000個の細胞を、血清の存在下で播種し、次に接着後血清を一晩欠乏させた。mAbを投与量20ngml~40μgmlで、拮抗性及び作動性を試験するために、各々、HGF75ngmlの存在下又は非存在下で添加した。3日間インキュベーション後、これらの細胞にアラマーブルーを添加し、37°Cで4時間インキュベーションし、その後励起波長550nm及び発光波長590nmで蛍光を読み取り、これにより細胞増殖に関する測定値を得た。このアッセイを3回繰り返した。作動性に関して独立して行った1つの実験の例、及び拮抗性について行った1つの例は、候補mAb及びキメラ224G11を含むベンチマークmAbについて示した。増殖は、HGF75ngmlで得られた増殖の百分率として表した。3種のmAbは、20未満の誘導された増殖を示し、38H10はベンチマークc224G11と同じ範囲であった。VL鎖シャッフリングを使用し、2つのmAbである38H10及び48A2の親和性を向上した。この方法において、親クローンの重鎖を、ファージミド軽鎖ライブラリーに再度導入した。この重鎖は、選択手順における親軽鎖の混入を更に避けるために、展示に必要なバクテリオファージ由来の遺伝子3を欠いている発現ベクターから抽出した。重鎖をファージミド軽鎖ライブラリーにクローニングし、且つライゲーションされたDNAを、大腸菌TG1細胞へ電気穿孔させ、軽鎖シャッフリングライブラリーを作製した。このライブラリーのサイズは、108クローンを上回った。オフレート洗浄と組合せた親和性選択を行い、cMetについて向上された親和性を持つ鎖シャッフリングされたFabを選択した。異なる量のFab発現しているファージを、溶液中で異なる濃度のFcMetと共にインキュベーションする設定を選択した。望ましい親和定数よりも低い濃度だが、ファージを上回る過剰なcMetの添加により、より高い親和性のファージの結合にとって好都合であった。次にFcMetファージ複合体を、抗FcmAbによりコートされたマイクロタイタープレート上で捕獲した。捕獲されたFcMetへの解離したファージの再度の結合を防止するために、このプレートを、デコイcMet溶液により37°Cで洗浄した。比較的低親和性バリアントを洗浄除去することによりより良いオフレートを持つファージを選択するために、各ラウンドで、洗浄時間を延長した。ファージは、トリプシンで溶出し、大腸菌TG1細胞の感染に使用した。合計で5ラウンドの選択を実行した。加えて投入したファージの量は、後続のラウンドで減少し、一方でバックグラウンドを減少し、且つ他方でmAb濃度をより低くし、これにより選択のストリンジェンシーを増大した。選択ラウンドIII、IV及びVからの少なくとも30クローンのスクリーニングを実行した。これらのクローンを、深いウェルプレートにおいて増殖し、且つペリプラスム画分を調製した。これらのペリプラスム抽出物を、ELISAにおいてHGFとの競合について最初に試験した。38H10について、低いELISAシグナルを生じる競合するクローンの頻度は、後続の選択ラウンドにおいて増加し、これらの異なるラウンドにおいてこの競合物質は明らかに濃厚化している。その後これらのクローンを、表面プラスモン共鳴により、それらの解離定数について試験した。ペリプラスム抽出物から明らかな結合プロファイルを得るために、FcMetのおよそ3000RUをCM5チップ上に直接固定した。向上したオフレートを有するクローンは、配列決定に送った。当初の対合した軽鎖を、軽鎖シャッフリング後に得たが、親Fabを上回る向上したオフレートは、38H10バリアント48A2についてのみ認められた。36C4に関して、親和性の向上は得られず、そのため親mAbを更なる作業のために保持した。多くのVLが、38H10重鎖可変ドメインを共有するFabとシャッフリングした。シャッフリングされた軽鎖を、対応するFabに関するオフレートと一緒に、以下に列記している。多くのVLが、36C4Q重鎖可変ドメインを共有するFabとシャッフリングした。シャッフリングされた軽鎖を、対応するFabに関するオフレートと一緒に、以下に列記している。更にmAbを調べるために、HGF依存性NSCLCA549細胞を使用するリン酸化アッセイを設定した。これらの細胞を、各抗体の作動活性を評価するためにHGFの非存在下で、更には各抗体の拮抗力を評価するためにHGFの存在下の両方で、インキュベーションした。簡単に述べると、40000個の細胞を播種し、且つプレートへの接着後血清を一晩欠乏させた。その後細胞を、mAbにより、37°Cで15分間処理した。拮抗性アッセイについては、HGF100ngmlを添加し、37°Cで更に15分間インキュベーションした。またHGF単独を、この実験に関する参照値を提供するために試験した。細胞を、冷PBSで洗浄し、且つPMSFを含有する弱い溶解緩衝液により、氷上で15分間溶解した。この溶解液50μlを、ヤギ抗cMet抗体で予備コートされた96ウェルプレートの1ウェルにつき添加し、且つ1カゼインPBSによりブロックした。次にこの溶解液中のcMetを4°Cで一晩結合させた。ホスホcMetは、ウサギ抗pY12341235抗体及びHRP複合されたヤギ抗ウサギ抗体により明らかになった。TMBを添加し、その反応を1MH2SO4により停止し、450nmで読み取った。これらの抗体は、異なる濃度で2つ組で試験し、且つ陽性対照及び陰性対照としてのHGFのみ及び細胞のみと平行して、対照mAbU16、キメラ224G11及びマウス224G11を、各試行において含んだ。図8ABは、対照と比べ、3つのmAbの低い作動作用を示している。ベンチマークc224G11と比べ、抗体38H10、48A2及び36C4は全て、より低いレベルのリン酸化されたcMetを生じている。図9は、ベンチマークc224G11と比べた、HGF誘導したリン酸化のブロックにおけるmAb48A2、36C4及び40B8の効力を示し、36C4が最良のブロック能を有している。リン酸化の比率は、HGF100ngmlにより誘導された最大リン酸化の百分率として表している。BxPC3細胞を使用するリン酸化アッセイを、A549細胞について同じ方式で行い、前記結果は、A549細胞について得られた結果と非常に良く相関していた。構成的に活性化された細胞におけるリン酸化を阻害するmAbの能力を試験するために、本発明者らは、胃MKN45細胞を使用した。これらの細胞は、cMet遺伝子増幅を有し、結果的にcMetの過剰発現を生じ、これにより構成的、すなわちHGFに非依存式のリン酸化を生じる。簡単には、5000個の細胞を、血清存在下で播種し、異なる濃度のmAbと一緒に37°Cで24時間インキュベーションした。リン酸化されたcMetの定量には、実施例8に記載したように、ELISAを行った。図10において、mAbのMKN45細胞におけるcMetリン酸化のブロック作用を認めることができる。この反応は、陰性対照mAbU161に対して規準化した。SIMPLE抗体36C4は、MKN45細胞におけるHGF非依存性リン酸化の最も強力な阻害物質であると結論づけることができる。c224G11は、36C4及び48A2程は強力ではなかった。40B8のみは、最高濃度でおよそ40ブロックし、急激に横ばいになった。MKN45細胞200000個を、抗体添加の前日に播種した。抗体の希釈物を細胞に添加し、且つ60分間予備インキュベーションし、その後エフェクター細胞を、E:T比:標的細胞株5:1で添加した。PBMC中のNK細胞の小集団を、各ドナーについてフローサイトメトリーにより、抗CD16対抗CD56の比として決定した。4時間インキュベーションした後、プレートを、DeadCellプロテアーゼキット細胞傷害アッセイを用いて読み取り、溶解した細胞の比率を得た。図11は、c224G11と比べた、投与量反応で試験した3種のmAbである48A2、40B8及び36C4により誘導された特異的溶解を示している。3種の試験したmAbのEC50は、同じ範囲のc224G11と同じであった。36C4誘導したADCC脱フコシル化された36C4を、PotelligentCHO細胞において作製し、且つプロテインAにより精製した。3名のドナーからのヒト末梢血単核細胞を、標準フィコール分離によりヘパリン処理した全血から個別に精製し、エフェクター細胞として使用した。これらの細胞を、ヒトIL2200Umlを含有する培地内に2×106個mlで浮遊させ、37°Cで一晩インキュベーションした。翌日、接着細胞及び非接着細胞を収集し、且つ培養培地において1回洗浄した。標的対エフェクター比1:50を使用した。これらの細胞を、5×106個細胞mlで浮遊させ、1ウェルにつき100μl添加した。106個の標的細胞NCIH441を、FCS05ml中の51Cr100μCiと一緒に、水浴中、37°Cで60分間インキュベーションした。細胞を洗浄し、1mlFCS中に再浮遊させ、水浴中37°Cで30分間インキュベーションした。その後細胞を、培地で2回洗浄し、最終容積2×105個細胞mlとし、1ウェルにつき50μlを添加した。このアッセイは3つ組で実行した。標識した細胞50μlを、エフェクター細胞100μl及び抗体50μlと一緒にインキュベーションした。51Crの自発的放出を制御するために、96ウェルプレートの1列は、標的細胞のみを含んだ。別の96ウェルプレートにおいて、ウェルの1列は、1TritonXで処理した標的細胞のみを含み、51Crの最大放出の読み値を生じた。37°Cで4時間インキュベーションした後、上清50μlを収集し、Lumaplate96に移し、乾燥させ、且つβ線カウンターによりカウントした。溶解率を、次式により決定した:溶解=/×100。図12は、正常にフコシル化された36C4に対する、Potelligent36C4によるNCIH441細胞の溶解率を示している。脱フコシル化された36C436C4は、NCIH441細胞の優れた溶解を誘導し、IC50は013ngmlであったのに対し、正常にフコシル化された36C4は、NCIH441細胞のいかなる溶解も誘導しなかった。c224G11により誘導された溶解率は、非常に低かった。明らかに36C4の脱フコシル化は、そのNCIH441細胞のADCCの誘導能を劇的に増強する。Potelligent技術による非フコシル化mAbは、マウスのインビボにおいて有意な作用を有さない。しかし、Fc突然変異は、インビボにおいて作用を有し、マウスFcγRIII、CD16に対する親和性の増大によりmAbのADCC作用を増強することが示された。S239D、I332E突然変異を、特異的プライマーによる部位特異的突然変異誘発を使用し、36C4のIgG1へ挿入し、36C4Eを作製した。36C4Eは、HEK293E細胞を使用し親36C4と同じ方式で生成し、且つプロテインAを用いて精製した。突然変異後のELISAベースの競合アッセイにおいて、親36C4と比べ、生成レベル又はHGF置換レベルにおいて、差異は存在しなかった。ADCC作用は、NCIH441細胞に対する51Cr放出アッセイで調べた。36C4の作用は存在せず、且つPotelligent36C4は、ADCC増強されたFc突然変異体36C4Eよりもわずかに低い溶解率を示した。36C4POT対36C4EのEC50は、004μgml対026μgmlであった。6~8週齢のCD1ヌードマウスに、MKN45細胞300万個を皮下注射した。注射の8日後、腫瘍は測定可能となり、9日目に、異なる量の被験抗体の1週間に2回の腹腔内注射により治療を開始した。6匹のマウス群に、36C4Eを注射し、腫瘍容積を測定した。c224G11に加え、IgG1アイソタイプ対照を、対照に含み、両方共最高濃度30mgkgであった。細胞の注射後23日目に、腫瘍容積に対する投与量依存性作用が、36C4Eで治療したマウスにおいて認められた。c224G11は、アイソタイプ対照と比べ、腫瘍成長に対する作用を有さなかった。前記mAbのドメイン認識のマッピングのために、ヒトラマグラマキメラcMetECD融合タンパク質を、ヒト及びラマグラマcMetのIPTドメインを交換することにより構築した。この構築は、標準組換えDNA法及びPCR法を用いて行った。ラマグラマ及びヒトのcMetを、各種の2匹のドナーからの末梢血リンパ球由来のRNAから増幅しcDNAへ変換した。ラマ及びヒトcMetECDを、HEK293細胞による可溶性タンパク質の発現のためにHisタグを持つ真核生物発現ベクターへクローニングした。スプライシング及び重複伸長PCRを使用し、ラマ由来のIPT14を、ヒトcMet内のヒトIPT14と交換し、且つ逆にヒトIPT14をラマcMet内のラマIPT14と交換した。4種の構築体であるラマcMet、ラマヒトIPT、ヒトcMet、ヒトラマIPTを全て、HEK293細胞において発現し、IMACカラムを用いて精製した。図15は、ヒトcMetの2匹のドナー由来のPBLから増幅されたラマグラマcMetとのアラインメントを示している。異なるキメラ組換えcMetタンパク質200ngを、マキシソーブプレート上に4°Cで一晩固定した。PBSで洗浄後、プレートを01カゼインにより室温で2時間ブロックし、その後mAbを添加し、cMetへ室温で1時間結合させた。洗浄後、HRP複合されたヤギ抗ヒト抗体を添加し、室温で1時間インキュベーションし、その後追加洗浄し、且つTMBを添加した。620nmでの吸光度を読み取り、これらの値をmAb濃度に対しグラフに示した。図16Aは、36C4のヒトcMet及びヒトラマIPT14への結合を示し、結果的にSEMAPSI領域へ結合することを示している。図16Bは、mAb13E6のヒトcMet及びラマヒトIPT14への結合を示している。いずれのmAbについても、ラマcMetへの結合は認められなかった。48A2も試験したが、ヒトSEMAPSIを持つ構築体との結合が主に示され、且つヒトIPTを持つ構築体とは一部結合し、これはPSIIPTドメインの重複領域への結合が存在することを指摘している。2種のmAb、36C4及び48A2が非重複エピトープへ結合するかどうかを調べるために、36C4又は48A2の3000RUを、CM5チップにカップリングさせた。40μgmlモノマー性デコイMetの60μlを注入し、チップ上に複合体を形成した。10μgml36C4の60μlを注入した。図16Aに示したように、Met:48A2複合体のみへの結合が認められた。同様に、48A2mAbのMet:36C4複合体及びMet:48A2複合体への結合を、CM5チップに結合した36C4又は48A2の3000RUを使用し行った。40μgmlデコイMetの60μlを注入し、チップ上に複合体を形成した。その後10μgml48A2の60μlを注入した。図16Bに示したように、Met:36C4複合体のみへの結合が認められた。これらの結果は、mAb36C4及び48A2の非重複エピトープの認識を示している。Biacoreにより示されるようにcMet上の非重複エピトープを認識する2つのmAb36C4及び48A2を、実施例10に記載のようにHGF非依存性MKN45細胞を使用するリン酸化アッセイにおいて、比1:1で一緒にした。この抗体混合物を、cMet自己リン酸化をブロックする能力について、濃度範囲にわたり、36C4及び48A2と比較した。この組合せは、個々のmAbと比較して、cMet自己リン酸化の有意により良い阻害を示した。078nMmAbで、36C4及び48A2単独では42及び32であるのに比べ、この混合物はリン酸化の75阻害を示した。36C4及び48A2の組合せはまた、NSCLCEBC1細胞の自己リン酸化のブロックで、個々の抗体よりもより強力であった。NSCLCA549細胞を使用するリン酸化アッセイを、mAb36C4及び48A2を、組合せて又は個別のいずれかで、それらの作動活性及び拮抗活性について調べるために、実施例9のように試行した。作動性レベルは、組合せの方がこれらのmAbのいずれか単独よりもより低く、且つHGF誘導したリン酸化のブロック作用は、組合せについて、これらのmAbのいずれか単独と比べ有意に増加した。36C4mAbのインビボにおける腫瘍成長に対する阻害作用を調べるために、オートクリンHGFを伴うU87MG細胞3×106個を、ヌードCD1nunuマウスの右後方横腹に皮下注射した。腫瘍が70~120mm3に達した時点で、マウスを階層化し、36C4、c224G11又はアイソタイプ対照抗体の1週間に2回の30mgkgの腹腔内投与による治療を開始した。この治療を、腫瘍細胞注射後35日目まで継続し、この時点で実験を終了した。mAbが投与される実験期間中は、腫瘍サイズを定期的に測定し、結果を図19に示している。比較用mAbc224G11に加え、36C430mgkgは、U87MG腫瘍成長を阻害した。36C4及び48A2のVH配列及びVL配列を、ヒト生殖細胞系列VH配列及びVL配列に対し芽細胞化し、且つ36C4は、IGHV430401及びIGLV21802の生殖細胞系列配列と密接に関連していた。48A2は、IGHV14601及びIGKV4101の生殖細胞系列配列と密接に関連していた。生殖細胞系列化のプロセスは、WO2010001251及びBacaらの文献2721067810684及びTsurushitaらの文献295919に説明されている。これは、その中にヒト及びラマの両方の残基に関して逸脱しているFR残基が組み入れられている、ライブラリーファージディスプレイ手法である。VH36C4又は48A2並びにVL36C4及び48A2の生殖細胞系列化されたライブラリーを、いくつかの位置に特異的突然変異を持つ重複しているオリゴヌクレオチドを使用し、PCRベースの遺伝子集成により作製した。これらの突然変異は、ヒトに加えラマのアミノ酸をコードするために、縮重し、このことはその野生型残基が高親和性結合にとって決定的である場合の結合の完全な喪失を防いでいる。集成された遺伝子は、ヒトCH及びCLを持つファージミドベクターにクローニングし、且つTG1大腸菌を形質転換し、全体のサイズ109クローンのライブラリーを作製した。機能性Fabを選択するために、ストリンジェントな選択条件を適用するファージディスプレーを使用した。個々のクローンを、オフレートについてスクリーニングし、且つベストヒットを配列決定し、ヒト配列同一性を決定した。>94のヒト同一性を持つクローンを、HEK293E細胞のトランスフェクション時の一過性発現により作製し、生成が>15μgmlであった場合、これらを更に特徴付けた。36C4に関して、4種の生殖細胞系列化されたクローンを、実施例9に説明したようにA549リン酸化アッセイにおける作動特性及び拮抗特性について、更に特徴付けた。図20Aに示したように、親36C4と比べ、生殖細胞系列化されたmAbである55A1254E及び53E254Eの作動特性の増加は存在しなかった。生殖細胞系列化バリアント53E3及び53A11は、同じ結果を示した。生殖細胞系列化mAbの拮抗作用は、55A1254E及び53E254Eにより例示された図20Bに示したようにいずれも有意には変更されなかった。PBS002Tween80中のIgG3mgmlの安定性を、4°C、室温及び37°Cで貯蔵後、0、1、7、14、28、56日目に調べた。全ての試料を、それらの効力について表面プラスモン共鳴により、カップリングされたcMetへの結合を調べ、流量30μl分での100~130秒の間の勾配を決定することにより試験した。機能性mAbの比率を、参照を基に計算した。図21は、様々な温度でのインキュベーションの56日後に、機能の有意な喪失が存在しないことを示しており、且つこれら4種の生殖細胞系列化mAbの間に有意差は存在しないように見える。生殖細胞系列化36C4及び48A2mAbの熱耐性を、様々な温度で1時間インキュベーションし、その後試料を、15000~17000RUデコイcMetをカップリングさせたCM5チップ上を流し、流量30μl分での100~130秒の間の勾配を決定することにより調べた。機能性mAbの比率を、100と設定した参照を基に計算した。図22Aに示したように、生殖細胞系列化mAbの融解温度は、36C4について672°C、55A1254Eについて671°C、53E254Eについて661°C、53E3について682°C、及び53A11について655°Cであった。48A2、生殖細胞系列化mAb56F3について、654°Cから711°Cへの融解温度の有意な改善が存在した。mAb36C4及び48A2が結合しているcMetアミノ酸の一部配列を更に規定するために、ヒトからラマcMetへのおよそ20~300個のaa交換を含むキメラcMet構築体を、PCR増幅、並びにFlagタグ及びストレプタグを持つヒトcMetを含むベクターへのライゲーションを用いて調製した。図23Aは、SEMAドメインに結合する36C4のペプチドマッピングに使用したキメラcMet構築体を示しているのに対し、図23Bは、PSIIPT1ドメインに結合する48A2のペプチドマッピングのためのキメラcMet構築体を示している。ラマヒトcMetキメラは、HEK293E細胞において生成し、且つストレプタクチンセファロースHPを用いて精製し、その後結合していないタンパク質を洗浄した。結合したタンパク質を、25mMデスチオビオチンpH82により溶出し、15ml画分を収集した。タンパク質濃度を、Nanodropにより決定した。タンパク質は、SDSPAGEにより品質管理した。ELISAを試行し、mAbの異なるキメラへの結合を調べた。36C4又は48A2の2μgmlを固定し、ブロックした後、cMetキメラを添加し、110000ストレプトアビジンHRPにより明らかにした。また表面プラスモン共鳴を用い、mAbの異なるラマヒトcMetキメラへの結合を調べた。36C4、48A2及びHGFの3000RUを、10mMNaAc中のCM5チップにカップリングさせた。異なるcMetキメラ10μgml溶液の60μlを、このチップ上を流量30μl分で流し、且つ2分間の会合を評価した。チップは、20mMNaOH及び1MNaClにより再生した。表16は、ヒトcMetとラマcMetペプチドと交換されたアミノ酸を含むキメラ、並びにプラスモン共鳴及びELISAを使用する結合の結果を示している。これらの結果は一貫しており、且つ36C4結合はaa199で停止することを示し、これはヒトcMetのaa98199内に認識部位があることを示唆している。これは、Stamosらにより公表された結晶構造で示されたように、HGFβ鎖結合部位を含むSEMAドメインの一部である。48A2mAbは、PSIドメインとIPT1ドメインの両方の部分を対象としている、ヒトcMetのaa523633に結合し、これは両方のドメイン内のコンホメーションエピトープを認識することを示唆している。還元条件下で試行したcMetによるウェスタンブロットを使用し、36C4及び48A2が、線状エピトープ又はコンホメーションエピトープに結合したかどうかを調べた。36C4又は48A2について結合は認められず、これはコンホメーションエピトープを認識することを示唆し、このことはキメラcMetタンパク質により確認した。mAb36C4により認識されたヒトcMetペプチドの配列配列番号181mAb48A2により認識されたヒトcMetペプチドの配列配列番号136mAbとのインキュベーション後にMKN45細胞の表面上に存在する総cMetの量を、フローサイトメトリーを用いて測定した。96ウェルプレート中の25000個MKN45細胞ウェルを播種し、且つ37°C、5CO2で24時間インキュベーションした。これらの細胞を8時間血清欠乏させ、その後mAb及び血清非含有培地中に希釈した10又は1μgmlのHGFを3つ組で添加した。マウス5D5抗体及びHGFを、総cMetのダウンレギュレーションに関する対照として含んだ。陰性対照は、36C4及び48A2と同じ様式で生成された無関係のIgG1mAbであった。これらの細胞を、PBSで洗浄し、且つ酵素非含有細胞解離溶液50μlウェルを添加し、37°Cで15分間インキュベーションした。細胞を、FACSプレート中に収集し、且つ結合緩衝液100μlを添加し、その後2000rpmで3分間遠心分離した。この時点から細胞を4°Cで維持した。細胞を結合緩衝液で2回洗浄し、次にマウス抗cMet抗体25μgmlを添加した。その後細胞を、4°Cで振盪しながら1時間インキュベーションし、引き続き結合緩衝液で2回洗浄した。APC複合されたヤギ抗マウス抗体を、濃度1500で添加し、且つ細胞を振盪しながら1時間インキュベーションした。次に細胞を、結合緩衝液で洗浄し、FACSCaliburで読み取った。2000事象を収集し、そのダウンレギュレーションを、培地対照におけるダウンレギュレーションに対する百分率として表した。一晩のインキュベーション後両方共50~60のcMetのダウンレギュレーションを誘導する5D5又はHGFのいずれかと比較して、mAb36C4及び48A2は、MKN45細胞の表面上のcMetの有意なダウンレギュレーションを誘導しないことを示している。