"患者におけるMECP2関連障害を処置することにおける使用のための、シスタミンもしくはシステアミンまたはその塩。MECP2関連障害が、レット症候群、自閉症、広汎性発達障害、非症候性知的障害、特発性新生児脳症および特発性脳性まひからなる群から選択される、請求項1に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのシスタミンまたはシステアミン。MECP2関連障害がレット症候群である、請求項2に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのシスタミンまたはシステアミン。別の薬学的に活性な化合物と組み合わせて使用するための、請求項1から3のいずれかに記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのシスタミンまたはシステアミン。ヒト患者におけるMECP2関連障害を処置することにおける使用のための、カルシニューリンインヒビター。マクロライドである、請求項5に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。カルシプレシン、タクロリムスおよびタクロリムス類似体、シクロスポリンAおよびシクロスポリンA類似体、LxPVタンパク質、2,6-ジアリール-置換ピリミジン誘導体およびFK506-結合タンパク質からなる群から選択される、請求項5または6に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。カルシプレシン1、カルシプレシン2、カルシプレシン3、タクロリムス、アスコマイシン、シロリムス、ピメクロリムス、シクロスポリンA、ボクロスポリン、LxPVc1、LxPVc2、LxPVc3、6-3,4-ジクロロ-フェニル-4-N,N-ジメチルアミノエチルチオ-2-フェニル-ピリミジンおよびFK506-結合タンパク質8からなる群から選択される、請求項7に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。タクロリムスである、請求項8に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。シクロスポリンAである、請求項8に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。MECP2関連障害が、レット症候群、自閉症、広汎性発達障害、非症候性知的障害、特発性新生児脳症および特発性脳性まひからなる群から選択される、請求項5から9のいずれかに記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。MECP2関連障害がレット症候群である、請求項11に記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。別の薬学的に活性な化合物と組み合わせて使用するための、請求項5から12のいずれかに記載のMECP2関連障害を処置することにおける使用のためのカルシニューリンインヒビター。発明の詳細な説明本発明者らは、BDNF輸送に関与する多くの転写産物がMeCP2欠損動物において一貫して脱調節されたことを示した。さらに、本発明者らは、MeCP2欠損動物においてBDNF輸送に対する2つの重要な寄与因子のタンパク質ハンチンチンおよびハンチンチン-関連タンパク質1のレベルの実質的な減少を見出した。さらに、本発明者らは、MeCP2-欠損軸索におけるBdnf含有小胞の速度が変化すること、および表現型がMeCP2発現により救済され得ることを観察した。これらのデータは、BDNF輸送の回復がMECP2関連障害を処置することにおいて有用であることを示す。本発明者らは、今回、BDNF輸送を回復するための2つの方法を示唆する:第1に、シスタミンおよび/またはシステアミンを使用することにより、HSJ1bおよびトランスグルタミナーゼを介してBDNFレベルを増加させる、第2に、カルシニューリンインヒビターを使用することにより、ニューロン全体で小胞輸送を修飾する。本発明において、MECP2関連障害の処置は、治療有効量のシスタミンおよび/またはシステアミンおよび/または治療有効量のカルシニューリンインヒビターの投与を含むことができる。神経発達および/または神経障害本発明の文脈において、対象または患者は、MeCP2と関連する神経発達および/または神経障害を有するあらゆる年齢または性別の哺乳動物、特にヒトを意味する。具体的になる用語は、家畜および一般的な実験哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ネコ、イヌ、ウマ、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウサギ、ラットおよびマウスを含む。好ましくは、処置される患者はヒトであり、子供または若者を含む。本発明の文脈において、MECP2関連障害は、MeCP2発現欠損、異常または異形および/またはMeCP2遺伝子突然変異欠損、異常または異形により引き起こされる神経学的および/または神経発達障害を示す。このような障害の例は、レット症候群、自閉症、広汎性発達障害、非症候性知的障害、特発性新生児脳症および特発性脳性まひを含むが、これらに限定されない。シスタミンおよびシステアミン化合物本発明の文脈において、シスタミンは、以下の式を有する有機ジスルフィドを示す。それらの任意の薬学的に許容される塩、特にジヒドロクロライド塩が使用され得る、本発明の文脈において、システアミンは、以下の式を有する化合物を示す。それらの任意の薬学的に許容される塩、ヒドロクロライド塩が使用され得る。カルシニューリンインヒビター本発明の文脈において、カルシニューリンインヒビターは、カルシニューリン阻害活性を有する化合物を示す。カルシニューリンは、細胞内シグナル伝達に関与するカルシウム/カルモジュリン調節タンパク質ホスファターゼである。好ましくは、本発明のカルシニューリンインヒビターはマクロライドである。本発明のカルシニューリンインヒビターは、カルシプレシンカルシニューリンのレギュレーターRCANタンパク質とも称される、タクロリムスおよびタクロリムス類似体、シクロスポリンAおよびシクロスポリンA類似体、LxPVタンパク質、2,6-ジアリール-置換ピリミジン誘導体およびFK506-結合タンパク質からなる群から選択することができる。例えば、本発明のカルシニューリンインヒビターは、カルシプレシン1、カルシプレシン2、カルシプレシン3RCAN1、2および3とも称される、タクロリムスFK506またはFujimycineとも称される、アスコマイシン、シロリムス、ピメクロリムス、シクロスポリンA、ボクロスポリンISA247とも称される、LxPVc1、LxPVc2、LxPVc3、6-3,4-ジクロロ-フェニル-4-N,N-ジメチルアミノエチルチオ-2-フェニル-ピリミジンCN585とも称されるおよびFK506-結合タンパク質8FKNP8とも称されるであり得る。本発明の文脈において、マクロライドは、活性がマクロライド環の存在に由来する薬物のグループを示す。マクロライド環は、1つ以上のデオキシ糖、通常、クラジノースおよびデソサミンが結合し得る大型大環状ラクトン環である。ラクトン環は、通常14-、15-もしくは16-員である。用量本発明の文脈において、治療有効量は、所望の結果を生じるために十分な用量を意味する。一般的に、所望の結果は、BDNFまたはAPP輸送および/または利用性の増加および/または回復である。治療有効量の薬剤は、必ずしも障害を治癒する必要はないが、障害または障害の発症を予防するための処置を改善する。当然、治療有効量を構成する量は、化合物、障害およびその重症度、処置される患者の年齢に依存して変化し、知識および本明細書を考慮して当業者により日常的に決定することができる。例えば、カルシニューリンインヒビターまたはシスタミンまたはシステアミンにおける治療有効量は、約0.01mg/Kg/用量から約100mg/Kg/用量であり得る。好ましくは、治療有効量は、約0.01mg/Kg/用量から約25mg/Kg/用量であり得る。さらに好ましくは、治療有効量は、約0.01mg/Kg/用量から約10mg/Kg/用量であり得る。より好ましくは、治療有効量は、約0.01mg/Kg/用量から約5mg/Kg/用量であり得る。したがって、本明細書に記載されている投与単位例えば、錠剤、カプセル、粉末、注射、坐薬、茶さじ単位型などあたりに含まれる治療有効量の活性成分は、例えば、70Kgの平均体重を有する、対象に対して約1mg/日から約7000mg/日であり得る。本発明の文脈において、BDNF輸送を増加またはBDNF輸送を回復は、脳におけるBDNFの輸送および/または利用性を増加するあらゆる方法/プロセスを示す。これは、カルシニューリンインヒビターとして作用する小胞輸送のモジュレーターの投与および/またはシスタミンおよび/またはシステアミンの投与を含むが、これらに限定されない。医薬組成物本発明の使用のために、カルシニューリンインヒビター、シスタミンおよびシステアミンは、当分野で知られている方法により製剤化することができる。経口、経直腸、非経口または局所適用のための組成物は、錠剤、カプセル、粒状物、坐薬、注入型、滅菌注射可能な水性もしくは油性溶液、懸濁液もしくはエマルジョン、エアロゾル、軟膏、クリーム、またはゲル、遅延調製もしくは遅延注入の形態で調製することができる。カルシニューリンインヒビター、シスタミンおよびシステアミンもまた、移植可能な投与系または潅流により投与され得る。投与経路本発明において、カルシニューリンインヒビター、シスタミンおよびシステアミンまたはそれらの医薬組成物は、慣用の任意の投与経路により投与され得、経口、肺内、腹腔内ip、静脈内iv、筋肉内im、皮下sc、経皮、経口内、経鼻、舌下、眼内、経直腸および膣内を含むがこれらに限定されない。加えて、神経系への直接的投与は、ポンプデバイスを備えた、または備えていない頭蓋内または脊椎内針またはカテーテルを介する送達による、限定はしないが、脳内、脳室内、脳室内、髄腔内、嚢内、髄腔内または脊髄周囲投与経路を含む。本明細書に記載されている治療効果を提供する投与のあらゆる用量または頻度が本発明における使用のために適当であることは当業者には容易に明らかである。さらに、標準医薬方法を使用し、作用期間をコントロールすることができる。これらは当分野でよく知られており、制御放出調製物を含み、適当な高分子、例えばポリマー、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニル、ピロリドン、エチレンビニルアセテート、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたは硫酸プロタミンを含むことができる。以下の実施例は本発明を説明するが、本発明の範囲を限定しない。実施例材料および方法動物実験は、SpraguedawleyラットおよびRTTに対するB6.129P2C-MeCP2tm1-1Birdマウスモデルにおいて行ったGuyJHendrichBHolmesMMartinJEBirdAAmouseMecp2nullmutationcausesneurologicalsymptomsthatmimicRettsyndromeNatGenet27322326。マウスは、JacksonLaboratoryから得、C57BL/6バックグラウンドにおいて維持した。ラットはCharlesRiverLaboratories、Franceから得た。実験処理は、実験動物のケアおよび使用のためのEuropeanガイドラインを維持して行ったCouncilDirective86/6009/EEC。マウス実験のために、半接合変異体オスMeCP2-/yを、ヘテロ接合体ノックアウトメスとC57BL/6オスを交配することにより作製した。遺伝子型決定は、JacksonLaboratoryプロトコールおよび以前に記載されているものにしたがって通常のPCR技術により行ったViemariJCRouxJCTrybaAKSaywellVBurnetHPenaFZanellaSBevengutMBarthelemyRequinMHerzingLBMonclaAManciniJRamirezJMVillardLHilaireGMeCP2deficiencydisruptsnorepinephrineandrespiratorysystemsinmiceJNeurosci251152111530。細胞培養トランスフェクションsiRNA、発現ベクターおよびビデオ顕微鏡E17ラット胎児の皮質を、以前に記載されているとおりに、解剖し、分離したSaudouFFinkbeinerSDevysDGreenbergMEHuntingtinactsinthenucleustoinduceapoptosisbutdeathdoesnotcorrelatewiththeformationofintranuclearinclusionsCell955566。皮質ニューロンを、供給者のマニュアルにしたがってラットニューロンNucleofector登録商標キットAmaxaBiosystemKoelnGermanyで電気穿孔し、ポリ-l-リシン被覆カバー-スリープSigma上に置いた。使用されるプラスミド:pcDNA3空のベクターInvitrogen、Bdnf-mCherry、G.Bankerからの素晴らしい贈り物OregonHealthandScienceUniversityPortlandOregon、MeCP2発現ベクター、N.Landsbergerからの素晴らしい贈り物UniversityofBustoArsizio、GFPAmaxaBiosystemKoelnGermany。使用されるSiRNA:ラットMeCP2Sigma、スクランブルRNAコントロールEurogentec。ニューロン培養物を、B27およびGlutamaxを補ったNeurobasal培地GIBCOにおいて維持した。インビトロで3日後、ニューロンをBdnf運動アッセイおよび/または免疫蛍光染色のために使用した。運動アッセイのために、ライブビデオ顕微鏡を、以前に列挙されたイメージング系を使用して行ったGauthierLRCharrinBCBorrellPagesMDompierreJPRangoneHCordelieresFPDeMeyJMacDonaldMELessmannVHumbertSSaudouFHuntingtincontrolsneurotrophicsupportandsurvivalofneuronsbyenhancingBDNFvesiculartransportalongmicrotubulesCell118127138。細胞を、Ludinチャンバーにおいてマウントされたガラスカバースリップ上で増殖させた。顕微鏡およびチャンバーは、37°Cを維持した。0.3μmのZ-段階で5-7イメージのスタックを、圧電デバイスPIと結合している100XPlanApoN.A.1.4油浸対物レンズで入手した。イメージは、50から150msの暴露時間で2X2ビニングで合わせた1スタック/sの頻度MicromaxカメラRopperScientificを使用して、streamモードにおいて回収した。全てのスタックを、光学系のPSFを使用する自動バッチ解析により処理した。画像、動画および分析を、ImageJソフトウェアhttprsbinfonihgovijNIHUSAを使用して作製した。動態を、特別なプラグインと時間の相関関係として細胞中のGFP小胞の位置を追跡することにより特徴付けたFPCordelieresIChttprsbinfonihgovijpluginstracktrackhtml。追跡中、小胞の中心のデカルト座標を使用して、動態パラメーター速度、方向性を計算した。免疫染色のため、細胞をPFA4で固定し、標準プロトコールで処理した。使用される抗体:MeCP2upstate、チューブリンクローン6-11B-1Sigma、アセチルチューブリンSigma。AlexaFluor-488およびAlexaFluor-555に結合させた抗-マウスおよび抗-ウサギ二次抗体を、MolecularProbeInvitrogenから購入した。イメージをLeicaSP5共焦点顕微鏡で得て、平均核強度を測定することにより染色強度をImageJソフトウェアで分析したhttprsbinfonihgovijNIHUSA。マイクロアレイプロトコールおよび分析P55野生型n=3およびMeCP2-欠損n=3マウスを、頸椎脱臼により殺した。延髄を解剖し、即座に-80°Cに置いた。凍結髄質を2mlチューブに液体窒素下に置き、組織を、陶器を使用する粉砕によりホモジェナイズした。全RNAを、製造業者の指示にしたがってTRIzol試薬Invitrogenを使用して抽出した。RNAサンプルを、30分間37°Cで1μgのRNAに対して0,5単位のDNaseI、RNasefreeQiagenで処理し、次に、5分間65°Cで酵素不活性化した。RNAの質および純度を、製造業者の指示にしたがって、Agilent2100BioanalyzerSoftwareを使用してAgilent2100BioanalyzerAgilentTechnologiesPaloAltoCAにおいて分析した。第1の鎖cDNAを、Cy3またはCy5dCTPのそれぞれの存在下で野生型およびMecp2-欠損脳幹のそれぞれのプール由来の500ngの全RNAから調製し、マウス60-merオリゴマイクロアレイAgilentMouseDevelopmentOligoMicroarray2x22Kにハイブリダイズした。ハイブリダイゼーションは、Cy5-CTP-標識Mecp2欠損標的とCy3-CTP-標識野生型標的とを比較し、製造業者の指示にしたがってAgilentGeneExpressionHybridizationKitG4121Aを使用して行った。簡潔には、500ngの処置サンプルcRNAを500ngのコントロールcRNAと混合し、該溶液をフラグメント化60°Cで30分に付し、次に回転オーブン65°C、17時間、10RPM中でアレイにハイブリダイズした。スライドを取りはずし、製造業者の洗浄バッファーキットの指示にしたがって溶液IおよびIIで洗浄し、AgilentDNAMicroarrayScannermodelG2505BAgilentTechnoilogiesでスキャンした。LOWESSアルゴリズムを使用して標準化を行い、染色標準化シグナルを使用して、ログ比率を計算した。ネガティブコントロール特性に対するバックグラウンドを<または>2SD超える参照値を有する特性は、欠測値と見なした。本発明者らは、それぞれのプロトコールに対する色素交換を使用して、2つの独立した実験それぞれの実験においてn=3Koおよびn=3Wtにおいて常に脱調節された遺伝子のみを考慮した。分散分析ANOVAおよび反復平均化を以前に記載されているとおりに行いCarterMGHamataniTSharovAACarmackCEQianYAibaKKoNTDudekulaDBBrzoskaPMHwangSSKoMSInsitusynthesizednovelmicroarrayoptimizedformousestemcellandearlydevelopmentalexpressionprofilingGenomeRes1310111021、マイクロアレイの有意な分析のために、t-検定アルゴリズムおよびBenjamin-Hochberg補正を生のデータにおいて適用した。RNA抽出およびRNA定量化全RNAを、P55およびP30オールドマウスからの延髄、橋または中脳-後脳サンプルから抽出した。サンプルを2mlチューブに液体窒素下に回収し、組織を、陶器を使用する粉砕によりホモジェナイズした。全RNAを、製造業者の指示にしたがってTRIzol試薬Invitrogenを使用して抽出した。RNAサンプルを、30分間37°Cで1μgのRNAに対して0,5KunitzのDNaseI、RNasefreeQiagenで処理し、次に、5分間65°Cで酵素不活性化した。脳橋のRNAサンプルの質および純度を、30分間37°Cで1μgのRNAに対して1単位のDnaseIRocheで処理し、次に、5分間75°Cで酵素不活性化した。500ngの全RNAの逆転写を、12,5ngのdedN6、40UのRnaseインヒビターPromega、10mMのdNTPおよび200UのSuperscriptII逆転写酵素Invitrogenを含む22μlのSuperscript反応バッファー中で行った。定量PCR反応のために、本発明者らはLightCycler480システムRocheを使用し、本発明者らはSYBRGreenIMasterキットRocheを選択した。それぞれの反応は、トリプリケートにおける2μlのcDNA第1の鎖の反応に対して1/2希釈および200nMのそれぞれのプライマーにおいて行った。第1に、本発明者らは、マイクロアレイプロトコールにおいて脱調節されると同定された12個の遺伝子が、リアルタイムPCRを使用して脱調節されるかを確認することを決定した。本発明者らはまた、一対の特異的プライマー転写産物を使用して、Bdnfの軸索輸送に関与する主な遺伝子のmRNA発現を定量した。内部コントロールとして、Gapdhを、Gapdhに特異的な一対のプライマーを使用するリアルタイム定量PCRにおいて同じ条件下で測定した。Ct値は、シグナルが、増幅の指数増殖期間に決定される閾値の関数において、バックグラウンドノイズよりも上になる閾値サイクルである。本発明者らの結果を標準化し、興味ある種々の遺伝子の発現を定量するために、本発明者らは、興味ある遺伝子と内部コントロールとの間のCtを比較することにおいてデルタCtΔCt方法を使用した。ΔCt=Ct興味ある遺伝子-CtGapdh。免疫染色および免疫定量化成体P55オスを致死ペントバルビタール注射100mgkg-1i.p.で麻酔し、経心的に潅流した1分間、冷却塩水、次に、10分間、4のパラホルムアルデヒドを含むPBS0.1M。脳を5時間潅流後、20のスクロースを含むPBS中に一晩置き、-80°Cで凍結した。脳の冠状断面20μmを、クライオスタットMicromFranceを使用して切り、全連続5スライスの1つをスライド上に連続的に配置した。断面を透過処理し0.15のTritonX-100、7標準血清ウサギでブロックし、3.5の血清、0.15のTritonX-100を含むPBS中で一次抗体と4°Cで一晩インキュベートした。断面を洗浄し、3.5の標準血清、0.15のTritonX-100を含むPBS中で二次抗体とインキュベートし、再洗浄した。次に、スライドを退色防止剤ThermoElectron中に置いた。Hap1を、それぞれ、アフィニティー-精製マウスモノクローナル抗体1:500、BDbioscienceH89720でプローブした。Httを、アフィニティー-精製マウス抗体1:1000、EuromedexHU-4C8-Asでプローブした。ヤギ-抗-ウサギalexa5461:400MolecularProbesEugeneOregonを二次抗体として使用した。免疫標識されたスライドを、CoolSNAPカメラPrincetonTrentonNJUSAを備えたLeicaDMR顕微鏡LeicaMicrosystemsWetzlarGermanyを使用してデジタル化し、記録した。HttまたはHap1タンパク質を免疫定量するために、たとえ、該方法が絶対値を提供しない場合であっても、本発明者らは、野生型とMeCP2-/y組織との間の染色の強度を比較することに非常に伸長であった。本発明者らは、異なる組織を同じ日に全ての以下の工程固定、凍結、切断、染色で解剖し、最後に像を同じ条件、溶液、時点で両方のグループの組織を交互に行うことによりスキャンした。光強度のあらゆる変化を回避するために、1日の最初にスキャンされた第1のスライスを、最後に再びスキャンした。カメラ応答の直線性をチェックし、本発明者らは、飽和に達さないために、蛍光強度の最小レベルと最高レベルとの範囲を注意深く選択した。全ての像をグレースケールに変換した。染色のデンシトメトリー分析輝度を、NationalInstitutesofHealthからのImageJソフトウェアhttprsbinfonihgovを適用して行った。光学濃度をOD=log10255/輝度として計算した。タンパク質単離およびウェスタンブロット分析.組織を超音波処理により抽出し、次に、タンパク質を20mMのTris-HCLph=7,5、150mMのNaCl、2mMのEGTA、0,1のTritonX-100および完全プロテアーゼインヒビタータブレットRocheを含む溶解バッファー中で単離した。タンパク質濃度を、BCAビシンコニン酸方法により決定した。96°Cで5分間の変性工程後、タンパク質20μgを8のSDS-ポリアクリルアミドゲル上で分離し、100Vで1時間、液体電気ブロッティングBioRadによりPVDF膜AmershamPharmaciaBiotech上に移した。室温で1時間TBSTween0,1中の5の無脂肪粉乳で膜をプレインキュベートすることにより、非特異的結合をなし遂げた。Hap11/5000マウス、BDBioscienceH89720、Htt抗体1/5000、マウスEuromedexHU-4C8-AsまたはGAPDH1/5000、Milliporeに対する一次抗体を、4°Cで一晩同じ溶液中で希釈し、4°Cで一晩インキュベートした。5の無脂肪粉乳TBSTween0,1で膜の広範囲の洗浄後、適当なペルオキシダーゼ-結合抗体と室温で2時間インキュベートした。結合したペルオキシダーゼ-結合抗体を強化化学発光試薬キットSupersignalWestFemtoPierceで示した。フィルムをカメラによりデジタル化し、シグナルを、NIHからのImageJソフトウェアを使用して16-ビットイメージにて定量した。Mecp2-欠損マウスのインビボシステアミン処置P30から、動物に飲料水中システアミン処置を与えた225mg/kg/日SigmaAldrichStQuentinFrance。2日毎に、マウスを計量し、システアミン溶液を新しくし、処置消費をチェックした。飲料水へのシステアミンの付加は、水消費に有意に影響を与えなかった未処置および処置Mecp2-欠損マウスに対して4.1±0.2および4.2±0.1ml/日。79匹のMecp2欠損マウスを試験した寿命試験、n=17システアミン処置およびn=42未処置;運動評価n=10システアミン処置およびn=10未処置。マウスを、遺伝子型を理解していない治験担当医により、それぞれの実験グループに割り当てた。オープンフィールド活性を、透明なパースペクスで作られた場38x30cmにおいて測定した。該試験期間は、Ethovision2.3.19追跡システムNoldusInformationTechnologyを使用して記録されたデータで15分存続させた。速度cm/sおよび動いた全距離cmを記録した。この値よりも短い移動が考慮されないようにできるように、Ethovisionに対する速度計算を、動いた最小距離0.6cmに合うインプットフィルターを使用して得た。統計分析StatviewソフトウェアSASInstituteIncCaryNCUSAを統計分析のために使用した。データは、平均±SEMとして示される。実施例1MeCP2-欠損マウスの延髄における転写プロファイリングは、BDNF輸送に関与する多くの遺伝子の異常発現を示した本発明者らは、DNAマイクロアレイを使用して、対症的P55MeCP2-欠損Kon=6および野生型マウスWtn=6延髄におけるmRNA発現パターンを分析した。それぞれのサンプルを独立してハイブリダイズし、色素交換を使用した。本発明者らは、全てのMeCP2-欠損サンプルにおいて脱調節された12個の遺伝子を見出した表1。マイクロアレイ結果を確認するために、本発明者らは、新規MeCP2-欠損延髄サンプルn=3を使用し、リアルタイム定量PCRを使用して転写産物レベルを測定した。12個の遺伝子のうち10個の発現が、試験された全てのMeCP2-欠損マウスの延髄において脱調節されることを確認した。これらの10個の遺伝子は、ハンチンチン-関連タンパク質1Hap1および血清/グルココルチコイド-調節キナーゼ1Sgk1によるBdnfのニューロン輸送において積極的な役割を果たすことが知られている2つを含んだ。リアルタイムPCR実験は、Hap1mRNAにおいて35減少およびSgk1mRNAにおいて55減少を見出した。Hap1は、ハンチンチンタンパク質Httとの複合体を形成することができ、該相互作用はBDNF輸送に直接的に関与するGauthierLRCharrinBCBorrellPagesMDompierreJPRangoneHCordelieresFPDeMeyJMacDonaldMELessmannVHumbertSSaudouFHuntingtincontrolsneurotrophicsupportandsurvivalofneuronsbyenhancingBDNFvesiculartransportalongmicrotubulesCell118127138。Sgk1は、Httをリン酸化、Htt機能を調節することが知られているRangoneHPoizatGTroncosoJRossCAMacDonaldMESaudouFHumbertSTheserumandglucocorticoidinducedkinaseSGKinhibitsmutanthuntingtininducedtoxicitybyphosphorylatingserine421ofhuntingtinEurJNeurosci19273279。本発明者らはまた、タイプ1イノシトール1,4,5-三リン酸塩受容体Itpr1、Hap1およびHttタンパク質を含む複合体との物理的相互作用を介する一般的な軸索輸送プロセスの制御に関与する遺伝子の脱制御を見出したTangTSTuHChanEYMaximovAWangZWellingtonCLHaydenMRBezprozvannyIHuntingtinandhuntingtinassociatedprotein1influenceneuronalcalciumsignalingmediatedbyinositoltriphosphatereceptortype1Neuron39227239。Hap1およびSgk1両方の発現がMeCP2-欠損マウスの延髄において減少するが、Itpr1mRNAレベルは2倍以上である109。表1.Mecp2欠損マウスの延髄における脱調節された遺伝子実施例2MeCP2-欠損マウスの脳全体におけるBDNF輸送に関与する遺伝子の下方発現延髄を分析して得られた知見をMecp2-欠損脳の他の領域に拡大することができるかを決定するために、本発明者らは、Hap1、Sgk1およびItpr1転写産物がP55で脳の異なる領域において異常に発現されるか否かを見るために、新規サンプルを試験した。解剖された脳領域に対してリアルタイム定量PCRを使用して、本発明者らは、Hap1がMeCP2-欠損マウスの延髄-47、n=5において、また橋-42、n=4において、および吻側脳-45、n=4において有意に下方調節されることを見出した図1。本発明者らは、Sgk1が延髄-50、n=5において下方調節されることを確認し、橋-37、n=5における下方調節を観察した。吻側脳44、n=4における有意な上方調節を見出した。本発明者らはまた、Itpr1が延髄110、n=5、橋150、n=5および吻側脳220、n=4において上方調節されることも確認した。本発明者らは、MeCP2-欠損マウスの脳においてBdnfmRNAレベルを測定した。本発明者らは、BdnfがMeCP2-欠損動物の延髄-48、n=5、また橋-53、n=5および吻側脳-51、n=4において下方発現されることを見出した。本発明者らは、Bdnfのニューロン輸送に関与することが知られている他の遺伝子:ハンチンチンHtt、ダイナクチン1Dctn1、ダイニン細胞質1重鎖1Dync1h1およびアベルソンヘルパー統合サイト1Ahi1に発現分析を拡大した。該分析のために、本発明者らは、これらの遺伝子の最も高いレベルを含むことが知られているため、吻側脳領域由来のサンプルを使用したChanEYNasirJGutekunstCAColemanSMacleanAMaasAMetzlerMGertsensteinMRossCANagyAHaydenMRTargeteddisruptionofHuntingtinassociatedprotein1resultsinpostnataldeathduetodepressedfeedingbehaviorHumMolGenet11945959andDragatsisIZeitlinSDietrichPHuntingtinassociatedprotein1mutantmicebypassingtheearlypostnatallethalityareneuroanatomicallynormalandfertilebutdisplaygrowthretardationHumMolGenet1331153125。本発明者らは、Htt-76、n=4、Dctn1-63、n=4、Dync1h1-73、n=4およびAhi1-65、n=4のmRNAレベルがMecp2-欠損脳において非常に減少したことを見出した。実施例3MeCP2の非存在は、脳全体でHttおよびHap1の出生後の段階的な下方発現を引き起こすMeCP2-欠損マウスは、運動および認識機能障害を徐々に発症する1月齢まで、正常であるGuyJHendrichBHolmesMMartinJEBirdAAmouseMecp2nullmutationcausesneurologicalsymptomsthatmimicRettsyndromeNatGenet27322326。本発明者らは、MeCP2-欠損マウスにおいて観察される進行性の神経学的機能障害が、進行性の出生後のHap1およびHtt発現の変化により引き起こされ得、同様に、BDNF輸送の進行性の変化および関連神経学的異常を誘導するという仮説を立てた。本発明者らは、第1の表現型発現の現れるまえに、P30で回収した新規Mecp2-欠損脳サンプル実験およびコントロールグループの両方においてn=4を使用した。リアルタイム定量PCRを使用して、本発明者らは、延髄、橋および吻側脳におけるHap1およびHttmRNAレベルを測定し、Hap1およびHtt発現がMeCP2-欠損動物においてP30で影響を与えなかったことを見出した図2。P55n=4で行われた同じ実験で、全ての3つの領域におけるHttおよびHap1の発現の顕著な減少を見出し、表現型発現の出生後の進行を示した図2。実施例4Mecp2-欠損脳におけるHttおよびHap1タンパク質のレベルの減少Mecp2-欠損脳において測定される異常mRNAレベルが異常タンパク質レベルと関連するか否かを決定するために、本発明者らは免疫組織蛍光を使用して新規脳サンプルn=4におけるHttおよびHap1タンパク質を定量し、染色が、Mecp2-欠損脳の異なる部分における両方のタンパク質の非常に低いレベルを示した。免疫定量化は、両方のタンパク質が特に豊富であるという理由のために注意深く選択されたいくつかの脳領域において行ったFujinagaRKawanoJMatsuzakiYKameiKYanaiAShengZTanakaMNakahamaKNaganoMShinodaKNeuroanatomicaldistributionofHuntingtinassociatedprotein1mRNAinthemalemousebrainJCompNeurol47888109andKotliarovaSJanaNRSakamotoNKurosawaMMiyazakiHNekookiMDoiHMachidaYWongHKSuzukiTUchikawaCKotliarovYUchidaKNagaoYNagaokaUTamaokaAOyanagiKOyamaFNukinaNDecreasedexpressionofhypothalamicneuropeptidesinHuntingtondiseasetransgenicmicewithexpandedpolyglutamineEGFPfluorescentaggregatesJNeurochem93641653andShengGChangGQLinJYYuZXFangZHRongJLiptonSALiSHTongGLeibowitzSFLiXJHypothalamichuntingtinassociatedprotein1asamediatoroffeedingbehaviorNatMed12526533。Hap1タンパク質レベルは、視床下部-37、延髄に位置する孤束核-53、中脳腹側領域-35および青斑核および橋-27において有意に減少したことを見出した。Httタンパク質レベルは、視床下部-32および海馬-56において有意に減少した。これらの結果を確認するために、本発明者らは、さらなるMeCP2-欠損n=3および野生型n=4マウスから興味ある脳領域を顕微解剖し、全タンパク質を抽出し、ウェスタンブロッティングを行った。ウェスタンブロット結果の定量化は、MeCP2-欠損マウスの中脳腹側領域においてHap1a-76およびHap1bアイソフォーム-77の低レベルを示した。明らかにHap1bアイソフォームが減少する傾向-76があったが、高い個体間の可変性のため、視床下部における統計的に有意な差異を見つけることができなかった。皮質において、Hap1aアイソフォームは51まで減少した。1つの予期されずに見出したことは、Hap1bアイソフォームがMeCP2-欠損マウスの皮質に全く存在しなかったことであった。Httタンパク質レベルの減少は、皮質-68、腹側中脳ドーパミン領域-55および橋-42において報告された。これらの結果は、MeCP2欠損がマウス脳全体でHttおよびHap1タンパク質レベルの全体的な減少を引き起こすことを示す。実施例5MeCP2-欠損マウスにおける線条体および皮質間の異常Bdnfタンパク質分配MeCP2-欠損マウスの脳におけるBdnf輸送の変化を見出した後、本発明者らは、Bdnf輸送がMeCP2-欠損マウスの脳において変化するか否かを決定するためにinsituで研究を続けた。実質的には線条体細胞においてBdnfmRNAが存在しないけれども、Bdnfが線条体ニューロンの成熟および代謝において重要な役割を果たすことが確立しているAltarCACaiNBlivenTJuhaszMConnerJMAchesonALLindsayRMWiegandSJAuterogradetransportofbrainderivedneurotrophicfactoranditsroleinthebrainNature38985660andAltarCADiStefanoPSNeurotrophintraffickingbyanterogradetransportTrendsNeurosci21433437。Bdnfタンパク質は、線条体の外側に移動させられ、脳のこの領域に順行性メカニズムにより能動的に輸送される。したがって、本発明者らは、翻訳部位皮質および標的部位線条体のBdnf染色を定量し、MeCP2の非存在下で、Bdnf染色レベルが皮質-30および線条体-44において減少したことを見出した。野生型動物において、線条体Bdnfは、皮質におけるBdnfの71を占める。MeCP2-欠損動物において、線条体Bdnfは、皮質Bdnfの45を占め、MeCP2が存在しないとき、Bdnfの輸送がインビボにて変化することを示す図3B。実施例6MeCP2サイレンシングはBdnf小胞の速度を変化するラットでの実験は、MeCP2の修飾がインビボでBdnf輸送を変化するか否かを決定するために行った。本発明者らは、MeCP2を過小または過剰発現するラット皮質ニューロンにおいてBdnf-cherry動態をモニタリングした。ラット皮質ニューロンを、不活性化MeCP2siRNA、コントロールスクランブルRNA、MeCP2-発現ベクターまたは空のベクターと電気穿孔した。培養3日後、Mecp2レベルを免疫蛍光により評価し、MeCP2シグナルの核強度を定量した。並行して、本発明者らは、高速ビデオ顕微鏡により、MeCP2サイレンシングの効果およびBdnf-cherry含有小胞の動態における過剰発現を分析した。MeCP2siRNAのトランスフェクションは、予期されるとおり、Mecp2レベルにおける減少を引き起こした-33.1。さらに興味深いことに、MeCP2サイレンシングは、Bdnf-cherry含有小胞の順行性-20.6および逆行-17.9速度の両方における減少を引き起こした図4。MeCP2-発現ベクター単独のトランスフェクションは、Bdnf-cherry含有小胞の順行性速度のみにおける減少を引き起こした-21.4図4。siRNAアプローチの特異性を確認するために、本発明者らは、レスキュー実験においてMeCP2siRNAおよびMeCP2-発現ベクターを共トランスフェクトし、MeCP2タンパク質を発現するプラスミドがトランスフェクションされると、Bdnf-cherry含有小胞の速度がコントロールレベルに完全に回復することを見出した図4。BDNF輸送の変化が微小管安定化の修飾により間接的に引き起こされ得るか否かを見るために、本発明者らは、チューブリンおよびアセチル化チューブリンを有する微小管を染色し、それらの構造を観察した。本発明者らは、Mecp2レベルが修飾されるとき、微小管構築に対する影響を何ら示すことができなかった。さらに、本発明者らは、細胞質GFPとの共エレクトロポレーションにより示されるとおり、MeCP2の過小または過剰発現がトランスフェクトされたニューロンの総体の形態を変化させることを見出すことができなかった。実施例7MeCP2サイレンシングはApp小胞の速度を変化する本発明者らは、アミロイド前駆体タンパク質App-YFP含有小胞を使用して実施例6のインビボ輸送実験を繰り返した。本発明者らは、mRNAおよびタンパク質レベルで何ら脱制御が見られなかった、さらに、App輸送は強くHtt/Hap1-依存性であるMcGuireetal2006JBiolChem281ColinEら2008EMBOJ27ため、Appが直接のMecp2標的ではないことを示した図5。これらの結果は、Mecp2のサイレンシングによるインビボApp輸送の脱制御を明白に示した図6。実施例8FK506タクロリムスおよび/またはシスタミンのインビボ投与FK506および/またはシスタミンが、毎日、慢性的にMeCP2-欠損マウスに提供される。何らかの改良があるか否かを決定するために、運動および呼吸評価を異なる発達段階で行う。-システアミン処置は、Mecp2-欠損マウスにおける寿命および運動欠損を改善する:本発明者らは、システアミン経口処置がMecp2-欠損マウスの生存期間を有意に延長することを見出したビヒクルグループ:65±2,2日間;システアミン基:74,8±5,2日間;p<0.05、Kaplan-Meirログランク検定図7A。したがって、本発明者らは、オープンフィールドアリーナを使用して移動における該処置の影響を評価した図7B-C。システアミン処置は、総移動距離および速度とりわけ後期の両方における統計的改良により示されるとおり、Mecp2-欠損マウスにおける移動を有意に改善した。システアミン処置は、進行的であり、これらの症状の著しい増加を示すプラセボグループと比較して運動症状の悪化を遅延することに強く効いた。結果として、システアミン処置グループおよびプラセボグループ間の違いは、進行的に増加し、後期の総距離P55:3、P65:40;P75:128、P85:485、p<0.05および速度P55:18、P65:33;P75:65、P85:74、p<0.05の両方において特に明らかであった。これらの結果は、システアミンの慢性投与が、随意運動行動を評価するパラダイムにおいてMecp2-欠損マウスの行動を改善することができることを示す。"