"対象由来の生物学的試料におけるWHSC1遺伝子の発現レベルまたはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を決定する段階を含む、対象においてがんを検出または診断する方法であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該レベルの増加が、該対象ががんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクを有することを示し、該発現レベルが、以下からなる群より選択される方法によって決定される、前記方法:aWHSC1のmRNAまたはWHSC1L1のmRNAのいずれかまたは両方を検出する方法;bWHSC1遺伝子によってコードされるタンパク質またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるタンパク質のいずれかまたは両方を検出する方法;およびcWHSC1によってコードされるタンパク質の生物学的活性またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性のいずれかまたは両方を検出する方法。前記増加が正常対照レベルより少なくとも10高い、請求項1記載の方法。対象由来の生物学的試料が生検試料または血液試料である、請求項1記載の方法。以下からなる群より選択される試薬を少なくとも1つ含む、がんを診断するためのキット:aWHSC1またはWHSC1L1のmRNAを検出するための試薬;bWHSC1またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するための試薬;およびcWHSC1またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性を検出するための試薬。試薬が、以下からなる群より選択される、請求項4記載のキット:aWHSC1またはWHSC1L1のmRNAに対するプローブ;およびbWHSC1またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるタンパク質に対する抗体。以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる段階;b該ポリペプチドと該試験物質との間の結合活性を検出する段階;およびc該ポリペプチドに結合する試験物質を選択する段階。以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法:a試験物質を、WHSC1およびWHSC1L1遺伝子のいずれかまたは両方を発現している細胞と接触させる段階;bWHSC1の発現レベルまたはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を検出する段階;およびb試験物質の非存在下で検出される発現レベルと比較して、WHSC1遺伝子の発現レベルまたはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を低下させる試験物質を選択する段階。以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる段階;b段階aのポリペプチドの生物学的活性を検出する段階;およびc試験物質の非存在下で検出される生物学的活性と比較して、該ポリペプチドの生物学的活性を抑制する試験物質を選択する段階。生物学的活性が、細胞増殖活性、メチルトランスフェラーゼ活性、またはIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、もしくはβカテニンポリペプチドに対する結合活性である、請求項8記載の方法。以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法:aWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の転写調節領域と、該転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子とを含むベクターが導入されている細胞と、試験物質を接触させる段階;b該レポーター遺伝子の発現または活性を測定する段階;およびc試験物質の非存在下での発現または活性と比較して、該レポーター遺伝子の発現または活性を低下させる試験物質を選択する段階。以下を含む、がんの治療もしくは予防、またはがん細胞増殖の阻害のための候補物質をスクリーニングする方法:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物を、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;b段階aの、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つと、WHSC1ポリペプチドとの間の結合を検出する段階;ならびにc試験物質の非存在下で検出される結合と比較して、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つと、WHSC1ポリペプチドとの間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。センス鎖とアンチセンス鎖とを含み、かつWHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害する二本鎖分子であって、前記センス鎖が配列番号:29、32、35、および38からなる群より選択される標的配列に対応するヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が該標的配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、該センス鎖およびアンチセンス鎖が互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する、前記二本鎖分子。約19~約25ヌクレオチド長である、請求項12記載の二本鎖分子。一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一のポリヌクレオチド分子である、請求項12または13記載の二本鎖分子。前記ポリヌクレオチドが、以下の一般式を有する、請求項14記載の二本鎖分子:5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は配列番号:29、32、35、および38からなる群より選択される標的配列に対応するヌクレオチド配列を含むセンス鎖であり;[B]は約3~約23ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり;かつ[A]は前記標的配列に相補的なヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖である。請求項12~15のいずれか一項記載の二本鎖分子をコードするベクター。センス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドの組み合わせの各々を含み、かつ標的遺伝子の発現を阻害するベクターであって、前記センス鎖核酸が配列番号:29、32、35、および38からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖核酸が該センス鎖に相補的な配列からなり、該センス鎖およびアンチセンス鎖の転写物が互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する、前記ベクター。WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子または該二本鎖分子をコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを対象に投与する段階を含む、対象においてがんを治療または予防する方法であって、前記二本鎖分子が、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に、細胞増殖およびWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する、前記方法。二本鎖分子が請求項12~15のいずれか一項記載の二本鎖分子である、請求項18記載の方法。ベクターが請求項16または17記載のベクターである、請求項18記載の方法。WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子または該二本鎖分子をコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、がんの治療または予防のための組成物であって、前記二本鎖分子が、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に、細胞増殖およびWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する、前記組成物。二本鎖分子が請求項12または15のいずれか一項記載の二本鎖分子である、請求項21記載の組成物。ベクターが請求項16または17記載のベクターである、請求項21記載の組成物。以下を含む、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物との間の結合を阻害するための物質をスクリーニングする方法:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物を、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;b段階aの、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにcIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβカテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。態様の説明本材料および本方法を説明する前に、本発明が、本明細書に記載された特定のサイズ、形、寸法、材料、方法論、プロトコル等に限定されず、これらがルーチンの実験法および最適化に従い変動し得ることを理解されたい。また、明細書中で使用される用語は、特定の形式または態様を記載するためのものに過ぎず、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図していないことも理解されたい。本明細書中で言及された各々の公開、特許、または特許出願の開示は、参照によりその全体が具体的に本明細書に組み入れられる。しかしながら、本明細書中のいかなる記載も、先行発明のため、本発明がそのような開示に先行している資格を有しないことの承認として解釈されるべきではない。他に規定のない限り、本明細書で使用される全ての専門用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾が生じた場合には、定義を含む本明細書が優先される。定義1つのa、1つのan、およびそのtheという単語は、本明細書で使用される場合、特に指定のない限り、少なくとも1つのを意味する。物質例えば、ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド等に関して使用される単離されたおよび精製されたという用語は、その物質が、天然起源では通常含まれ得る物質を少なくとも1つ実質的に含まないことを示す。したがって、単離されたまたは精製された抗体とは、タンパク質抗体が由来する細胞もしくは組織起源に由来する、炭水化物、脂質、もしくはその他の混入タンパク質などの細胞物質を実質的に含まないか、または、化学合成された場合には、前駆化学物質もしくはその他の化学物質を実質的に含まない抗体をさす。細胞物質を実質的に含まないという用語には、ポリペプチドの単離元であるか、または組換えにより作製されたポリペプチドの元となる細胞の細胞成分からポリペプチドが分離されている、ポリペプチドの調製物が含まれる。したがって、細胞物質を実質的に含まないポリペプチドには、乾燥重量で約30、20、10、または5未満の異種タンパク質本明細書中、混入タンパク質とも呼ばれるを有するポリペプチドの調製物が含まれる。ポリペプチドが組換えにより作製される場合には、それは、好ましくは、培養培地も実質的に含まず、そのようなポリペプチドには、タンパク質調製物の容積の約20、10、または5未満の培養培地を含むポリペプチド調製物が含まれる。ポリペプチドが化学合成によって作製される場合には、それは、好ましくは、前駆化学物質またはその他の化学物質を実質的に含まず、そのようなポリペプチドには、タンパク質調製物の容積の乾燥重量で約30、20、10、5未満の、タンパク質の合成に関与する前駆化学物質またはその他の化学物質を含むポリペプチド調製物が含まれる。特定のタンパク質調製物が、単離または精製されたポリペプチドを含有していることは、例えば、タンパク質調製物のドデシル硫酸ナトリウムSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲルのクーマシーブリリアントブルー染色等の後の単一バンドの出現によって示され得る。好ましい態様において、本発明の抗体およびポリペプチドは、単離または精製されている。cDNA分子などの単離されたまたは精製された核酸分子は、組換え技術によって作製された場合には、他の細胞物質もしくは培養培地を実質的に含まない可能性があり、または、化学合成された場合には、前駆化学物質もしくはその他の化学物質を実質的に含まない可能性がある。好ましい態様において、本発明の抗体をコードする核酸分子は、単離または精製されている。ポリペプチド、ペプチド、およびタンパク質という用語は、アミノ酸残基のポリマーをさすために、同義的に本明細書中で使用される。これらの用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーのみならず、1つまたは複数のアミノ酸残基が修飾された残基であるか、または対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的模倣体などの天然には存在しない残基である、アミノ酸ポリマーにも当てはまる。アミノ酸という用語は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸をさし、かつ、天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体をさす。天然に存在するアミノ酸とは、遺伝暗号によってコードされたもの、ならびに細胞内で翻訳後に修飾されたもの例えば、ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタミン酸、およびO-ホスホセリンである。アミノ酸類似体という語句は、天然に存在するアミノ酸と同一の基本化学構造水素に結合したα炭素、カルボキシ基、アミノ基、およびR基を有するが、修飾されたR基または修飾された骨格を有する化合物例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニン、スルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムをさす。アミノ酸模倣体という語句は、一般的なアミノ酸と異なる構造を有するが、類似した機能を有する化学物質をさす。アミノ酸は、本明細書中、IUPAC-IUB生化学命名委員会BiochemicalNomenclatureCommissionによって推奨された、それらの一般的に公知の3文字記号または1文字記号により言及される場合もある。ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および核酸という用語は、特に具体的な指示がない限り同義的に使用され、ヌクレオチド残基のポリマーを意味する。これらの用語は、1つまたは複数のヌクレオチド残基が、改変残基、または対応する天然ヌクレオチドの人工の化学的模倣体のような非天然残基であるヌクレオチドポリマー、ならびに天然のヌクレオチドポリマーに適用される。ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、または核酸は、DNA、RNA、またはその組合せから構成されてよい。ヌクレオチドという用語は、アミノ酸と同様に、天然および非天然のヌクレオチドを意味する。アミノ酸と同様に、ヌクレオチドは、一般に認められている1文字記号によって言及される。他に規定されない限り、がんという用語は、WHSC1および/もしくはWHSC1L1遺伝子、またはWHSC1およびWHSC1L1遺伝子のいずれか、または両方を過剰発現する任意のがんを意味する。WHSC1遺伝子を過剰発現するがんの例には、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、慢性骨髄性白血病CML、食道癌、肝細胞癌HCC、非小細胞肺癌NSCLC、SCLCsmallcelllungcarcinoma、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍が含まれるが、それらに限定されるわけではない。WHSC1L1遺伝子を過剰発現するがんの例には、膀胱癌、乳癌、CML、リンパ腫、および肺癌特にSCLCが含まれるが、それらに限定されるわけではない。阻害性のポリヌクレオチドおよびポリペプチドという文脈における特異的に阻害するという用語は、剤またはリガンドがWHSC1またはWHSC1L1の発現または生物学的機能を阻害する能力を意味する。典型的には、特異的阻害は、WHSC1またはWHSC1L1の発現例えば、転写もしくは翻訳または測定される生物学的機能例えば、細胞の増殖growthもしくは増殖proliferation、アポトーシスの抑制をバックグラウンドよりも少なくとも約2倍強く阻害し、好ましくは約10倍強く、および最も好ましくは100倍強く阻害する。発現レベルおよび生物学的機能のいずれかまたは両方は、処理細胞および未処理細胞、または処理前および処理後の細胞集団を比較する状況において、測定することができる。いくつかの態様において、WHSC1またはWHSC1L1の発現または生物学的機能は、完全に阻害される。典型的には、特異的阻害とは、適切な統計学的試験による、WHSC1またはWHSC1L1の発現または生物学的機能の統計学的に意味のある低減である例えば、p≦0.05。WHSC1およびWHSC1L1の遺伝子およびタンパク質:本発明は、WHSC1およびWHSC1L1をコードする遺伝子が、非がん組織と比べていくつかのがんにおいて過剰発現されているという発見に一部基づいている。WHSC1Wolf-Hirschhornsyndromecandidate-1は、ウォルフヒルシュホーン症候群WHSの同定された重要な領域中のいくつかの遺伝子のうちの1つによってコードされるタンパク質であり、公知である全WHS症例において欠失しており、リンパ系多発性骨髄腫ではt4;14転座によって調節不全にされているBergemannADetalTrendsGenet211881952005StecIetalHumMolGenet7107110821998。WHSC1タンパク質は、酵母H3K36特異的メチルトランスフェラーゼSet2に高度に保存されているAWS-SET-ProSETドメインを含むSunXJetalJBiolChem28035261352712005。WHSC1L1Wolf-Hirschhornsyndromecandidate1-like1は、WHSC1遺伝子に関連しており、PWWPproline-tryptophan-tryptophan-prolineドメインを有するタンパク質をコードしているStecIvanOmmenGJdenDunnenJTGenomics20017658。WHSC1L1は染色体8p12中に位置しており、特に、機能的ドメインを含むタンパク質の3領域において、WHSC1およびNSD1に対して強い配列類似性を示すStecIvanOmmenGJdenDunnenJTGenomics20017658DouglasJColemanKTattonBrownKetalEurJHumGenet2005131503。WHSC1の例示的なポリペプチド配列および核酸配列は、配列番号:2および1にそれぞれ示される。また、WHSC1L1の例示的なポリペプチド配列および核酸配列は、配列番号:4または50、および配列番号:3または49にそれぞれ示される。また、WHSC1およびWHSC1L1の配列データは、次のGenBank商標アクセッション番号を通して入手可能である:WHSC1:NM_001042424.2、NM_007331.1、NM_133330.2、NM_133331.2、NM_133334.2、NM_133335.3これらの開示内容全体が参照により本明細書に組み入れられる、WHSC1L1:NM_017778.2、NM_023034.1これらの開示内容全体が参照により本明細書に組み入れられる。本発明のある局面によれば、機能的等価物もまたWHSC1ポリペプチドまたはWHSC1L1ポリペプチドとみなされる。本明細書において、あるタンパク質例えば、WHSC1ポリペプチドまたはWHSC1L1ポリペプチドの機能的等価物は、そのタンパク質と同等の生物学的活性を有するポリペプチドである。すなわち、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質の生物学的能力を保持している任意のポリペプチドが、本発明において、そのような機能的等価物として使用され得る。WHSC1およびWHSC1L1は、ヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を有していることが公知である。したがって、WHSC1タンパク質およびWHSC1L1タンパク質の機能的等価物は、好ましくは、ヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を保持している。さらに、実施例において開示される結果から、WHSC1およびWHSC1L1が細胞増殖活性細胞増殖を促進する活性を有することが実証される。したがって、これらのタンパク質の機能的等価物は細胞増殖活性を保持している。さらに、WHSC1タンパク質の機能的等価物は、IQGAP1、TIAM1、AKT2、またはβ-カテニンに対する結合活性も保持し得る。好ましい態様において、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質の機能的等価物は、WHSC1タンパク質またはWHC1L1タンパク質の前述の生物学的活性のうちの1つまたは複数を保持している。例えば、WHSC1タンパク質の機能的等価物の好ましい例には、WHSC1タンパク質のSETドメイン例えば、配列番号:2の1066~1179を含むポリペプチドが含まれる。また、WHSC1L1タンパク質の機能的等価物の好ましい例には、WHSC1L1タンパク質のSETドメイン例えば、配列番号:50の1148~1261を含むポリペプチドが含まれる。WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質の機能的等価物には、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質の天然に存在するアミノ酸配列と比べて、1つまたは複数のアミノ酸が置換されているか、欠失しているか、付加されているか、または挿入されているものが含まれる。あるいは、このポリペプチドは、それぞれのタンパク質の配列に対して少なくとも約80の相同性配列同一性とも呼ばれる、より好ましくは少なくとも約90~95の相同性、多くの場合、約96、97、98、または99の相同性を有するアミノ酸配列を含む。他の態様において、このポリペプチドは、WHSC1遺伝子またはWHSC1L1遺伝子の天然に存在するヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされていてもよい。本発明のポリペプチドは、それを作製するために使用された細胞もしくは宿主、または利用された精製法に依って、アミノ酸配列、分子量、等電点、糖鎖の有無、または形態における変動を有することができる。にもかかわらず、本発明のヒトWHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質のものと同等な機能を有する限り、それは本発明の範囲内である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件という語句は、核酸分子が、その標的配列、典型的には核酸の複雑な混合物中にある標的配列とハイブリダイズするが、他の配列とは検出可能にハイブリダイズしない条件をさす。ストリンジェントな条件は、配列依存性であり、異なる状況下で異なる。より長い配列は、より高い温度で特異的にハイブリダイズする。核酸のハイブリダイゼーションに関する広範囲のガイドは、TijssenTechniquesinBiochemistryandMolecularBiologyHybridizationwithNucleicProbesOverviewofprinciplesofhybridizationandthestrategyofnucleicacidassaysに見出される。一般的に、ストリンジェントな条件は、規定のイオン強度およびpHにおける特定の配列の熱融解点Tmよりも約5~10°C低く選択される。Tmとは、平衡状態で、標的に相補的なプローブの50が、標的配列とハイブリダイズする規定のイオン強度、pH、核濃度での温度である標的配列が過剰に存在するので、Tmでは、平衡時に、プローブの50が占有される。ホルムアミドなどの脱安定化剤の添加によっても、ストリンジェントな条件を達成することができる。選択的または特異的なハイブリダイゼーションのため、陽性シグナルは、バックグラウンドの少なくとも2倍、好ましくは、バックグラウンドハイブリダイゼーションの10倍である。例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件には、以下のものが含まれる:50ホルムアミド、5×SSC、および1SDS、42°Cでのインキュベーション、または5×SSC、0.1SDS、65°Cでのインキュベーションと、50°Cでの0.2×SSCおよび0.1SDSによる洗浄。本発明との関連において、ヒトWHSC1またはWHSC1L1タンパク質と機能的に等価なポリペプチドをコードするDNAを単離するためのハイブリダイゼーションの条件を、当業者はルーチンに選択することができる。例えば、Rapid-hybbufferAmershamLIFESCIENCEを使用して、68°Cで30分以上プレハイブリダイゼーションを実施し、標識されたプローブを添加し、68°Cで1時間以上加熱することにより、ハイブリダイゼーションを実施することができる。例えば、低ストリンジェントな条件においては、以下の洗浄工程を実施することができる。例示的な低ストリンジェントな条件には、42°C、2×SSC、0.1SDS、好ましくは、50°C、2×SSC、0.1SDSが含まれ得る。多くの場合、高ストリンジェンシー条件が好んで使用される。例示的な高ストリンジェンシー条件には、2×SSC、0.01SDSで20分間、室温での3回の洗浄、次いで1×SSC、0.1SDSで20分間、37°Cでの3回の洗浄、および1×SSC、0.1SDSで20分間、50°Cでの2回の洗浄が含まれ得る。しかしながら、温度および塩濃度などのいくつかの因子が、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響を及ぼす場合があり、当業者は、必要なストリンジェンシーを達成するために適切に因子を選択することができる。一般的に、タンパク質内の1つまたは複数のアミノ酸の改変は、そのタンパク質の機能に影響を与えないことが知られている。実際、ある特定のアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加によって改変されたアミノ酸配列を有するタンパク質である、変異したまたは改変されたタンパク質は、元の生物学的活性を保持することが公知であるMarketalProcNatlAcadSciUSA8156626ZollerandSmithNucleicAcidsRes106487500DalbadieMcFarlandetalProcNatlAcadSciUSA79640913。したがって、単一のアミノ酸もしくは少ない比率のアミノ酸を変える、アミノ酸配列に対する個々の付加、欠失、挿入、および置換からなる群より選択される少なくとも1つの変異もしくは変化、または保存的改変であるとみなされるものであって、タンパク質の変化が類似の機能を有するタンパク質をもたらすものは、本発明との関連において許容可能であることを、当業者は認識するであろう。タンパク質の活性が維持される限り、アミノ酸変異の数は特に限定されない。しかしながら、アミノ酸配列の5以下を変えることが一般的に好ましい。したがって、好ましい一態様において、そのような変異体において変異させるべきアミノ酸の数は、一般的には、30アミノ酸以下、好ましくは20アミノ酸以下、より好ましくは10アミノ酸以下、より好ましくは6アミノ酸以下、さらに好ましくは3アミノ酸以下である。変異させられるアミノ酸残基は、好ましくは、アミノ酸側鎖の特性が保存される異なるアミノ酸に変異させられる保存的アミノ酸置換として公知のプロセス。アミノ酸側鎖の特性の例は、疎水性アミノ酸A、I、L、M、F、P、W、Y、V、親水性アミノ酸R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T、および以下の官能基または特徴を共通に有する側鎖である:脂肪族側鎖G、A、V、L、I、P;ヒドロキシル基を含有している側鎖S、T、Y;硫黄原子を含有している側鎖C、M;カルボン酸およびアミドを含有している側鎖D、N、E、Q;塩基を含有している側鎖R、K、H;ならびに芳香族を含有している側鎖H、F、Y、W。機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換の表は、当技術分野で周知である。例えば、以下の8つの群は、各々、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有している:1アラニンA、グリシンG;2アスパラギン酸D、グルタミン酸E;3アスパラギンN、グルタミンQ;4アルギニンR、リシンK;5イソロイシンI、ロイシンL、メチオニンM、バリンV;6フェニルアラニンF、チロシンY、トリプトファンW;7セリンS、スレオニンT;および8システインC、メチオニンM例えば、CreightonProteins1984を参照されたい。そのような保存的に改変されたポリペプチドは、本発明に使用されるWHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質に含まれる。しかしながら、本発明は、これらに限定されず、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質は、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質の生物学的活性が少なくとも1つ保持される限り、非保存的改変を含む。さらに、改変されたタンパク質は、多型バリアント、種間相同体、およびこれらのタンパク質の対立遺伝子によってコードされるものを除外しない。さらに、本発明のWHSC1遺伝子またはWHSC1L1遺伝子には、それぞれWHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質のそのような機能的等価物をコードするポリヌクレオチドが包含される。WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質と機能的に等価なポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを単離するためには、ハイブリダイゼーションに加えて、タンパク質をコードするDNAの配列情報配列番号:1または3または49に基づき合成されたプライマーを使用した、遺伝子増幅法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応PCR法を利用することができる。ヒトWHSC1またはWHSC1L1の遺伝子およびタンパク質と機能的に等価なポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、それぞれ、通常、それらの元のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列に対して高い相同性を有する。高い相同性とは、典型的には40以上、好ましくは60以上、より好ましくは80以上、さらに好ましくは90~95以上の相同性をさす。特定のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの相同性は、WilburandLipmanProcNatlAcadSciUSA8072630のアルゴリズムに従い、決定され得る。がんを診断するための方法:本明細書において開示するように、WHSC1遺伝子の発現レベルは、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍を含むいくつかのがんにおいて特異的に上昇していることが判明した図1、2、3、表5。さらに、WHSC1L1遺伝子の発現レベルもまた、膀胱癌、CML、肺癌例えばSCLC、乳癌、およびリンパ腫を含むいくつかのがんにおいて特異的に上昇していることが判明した図1、表5。したがって、本明細書において同定されるWHSC1およびWHSC1L1遺伝子、ならびにそれらの転写産物および翻訳産物は、上記のがんのようながんのマーカーとして診断に有用である。対象におけるがんの診断または検出は、対象由来の試料におけるWHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを決定し、かつそのような発現レベルを正常試料中で検出される発現レベルと比較することによって行うことができる。好ましい態様において、診断または検出されるがんには、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC例えば、肺腺癌、肺扁平上皮癌SCC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、およびリンパ腫が含まれる。あるいは、本発明は、対象由来の組織試料におけるがん細胞を検出または同定するための方法を提供し、該方法は、遺伝子の正常対照レベルと比較した発現レベルの増加が、該組織におけるがん細胞の存在または疑いを示す、対象由来の生物学的試料すなわち、対象から得た試料におけるWHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを決定する段階を含む。本発明によれば、対象の状態を検査するための中間的な結果が提供され得る。このような中間結果を追加的な情報と組み合わせて、対象が疾患に罹患しているかを医師、看護師、または他の実務者が診断するのを援助することができる。あるいは、本発明を用いて、対象由来の組織におけるがん細胞を検出し、対象が疾患に罹患しているかを診断するのに有用な情報を医師に提供することもできる。例えば、本発明によれば、対象から得られた組織におけるがん細胞の存在に関して疑いがある場合、WHSC1遺伝子および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルに加えて、組織病変、血液中の公知の腫瘍マーカーのレベル、および対象の臨床経過などを含む疾患の異なる側面を考察することにより、臨床的判断に至ることができる。例えば、血液中のいくつかの周知の診断用がんマーカーには、ACT、AFP、BCA225、BFP、CA15-3、CA19-9、CA50、CA72-4、CA125、CA130、CA602、CEA、DUPAN-2、IAP、KMO-1、α-マクログロブリン、NCC-ST-439、NSE、PIVKA-II、SCC、sICAM-1、SLX、SP1、SOD、Span-1、STN、TK活性、TPA、YH-206、エラスターゼI、サイトケラチン-19断片、およびCYFRA21-1が含まれる。すなわち、本発明のこの特定の態様において、遺伝子発現解析の結果は、対象の疾患病期をさらに診断するための中間的な結果として役立つ。具体的には、本発明は以下の方法[1]~[10]を提供する:[1]対象由来の生物学的試料におけるWHSC1遺伝子の発現レベルおよび/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを決定する段階を含む、対象においてがんを検出または診断する方法であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該発現レベルの増加が、該対象ががんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクを有することを示す、前記方法;[2]試料中のWHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを決定する段階を含む、対象由来の生物学的試料におけるがん細胞を検出する方法であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該発現レベルの増加が、試料中のがん細胞の存在または疑いを示す、前記方法;[3]前記発現レベルが正常対照レベルより少なくとも10高い、[1]または[2]に記載の方法;[4]前記発現レベルが、以下の中より選択される方法によって検出される、[1]~[3]のいずれか1つに記載の方法:aWHSC1のmRNAおよび/またはWHSC1L1のmRNAを検出する方法;bWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質および/またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質を検出する方法;ならびにcWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性および/またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性を検出する方法;[5]がんが、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫である、[1]~[4]のいずれか1つに記載の方法;[6]前記発現レベルが、mRNAを対象とするプローブとそのmRNAとの間のハイブリダイゼーションレベルを検出することによって決定される、[1]~[5]のいずれか1つに記載の方法;[7]前記発現レベルが、タンパク質に対する抗体とそのタンパク質との間の結合レベルを検出することによって決定される、[1]~[5]のいずれか1つに記載の方法;[8]生物学的試料が生検試料もしくは生検標本、尿、痰、または血液を含む、[1]~[7]のいずれか1つに記載の方法;[9]対象由来の生物学的試料が、上皮細胞を含む、[1]~[8]のいずれか1つに記載の方法;[10]対象由来の生物学的試料が、がん細胞を含む、[1]~[9]のいずれか1つに記載の方法;[11]対象由来の生物学的試料が、がん上皮細胞を含む、[1]~[10]のいずれか1つに記載の方法;ならびに[12]対象由来の生物学的試料が、膀胱、乳房、胆管、骨髄、食道、肝臓、肺、骨、膵臓、前立腺、腎臓、軟部組織、またはリンパ節に由来する細胞を含む、[1]~[11]のいずれか1つに記載の方法。別の態様において、[1]対象由来の生物学的試料におけるWHSC1遺伝子の発現レベルもしくはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を決定する段階を含む、対象においてがんを検出または診断する方法であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該発現レベルの増加が、対象ががんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクを有することを示す、前記方法が提供される。さらに、別の態様において、[2]試料中のWHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を決定する段階を含む、対象由来の生物学的試料におけるがん細胞を検出する方法であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該発現レベルの増加が、試料中のがん細胞の存在または疑いを示す、前記方法もまた提供される。あるいは、別の態様において、[3]前記発現レベルが、以下の中より選択される方法によって検出される、[1]~[3]のいずれか1つに記載の方法もまた、提供される:aWHSC1のmRNAまたはWHSC1L1のmRNAのいずれかまたは両方を検出する方法;bWHSC1遺伝子のいずれかにコードされるタンパク質またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質または両方を検出する方法;およびcWHSC1遺伝子のいずれかにコードされるタンパク質の生物学的活性またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性または両方を検出する方法。がんを診断するまたはがん細胞を検出する方法を、以下に、より詳細に説明する。本方法によって診断される、または生物学的試料の入手元である対象は、好ましくは、哺乳動物である。例示的な哺乳動物には、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシが含まれるが、これらに限定されない。診断を実施するためには、診断すべき対象から生物学的試料を収集することが好ましい。WHSC1および/またはWHSC1L1の転写産物または翻訳産物を含む限り、任意の生物学的材料を、がんの診断またはがん細胞の検出のための生物学的試料として使用することができる。生物学的試料には、生検標本または試料などの、がんを診断することが望まれるかまたはがんに罹患していることが疑われる体組織、ならびに血液、痰、および尿などの体液が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、生物学的試料は、上皮細胞、より好ましくは、がん性上皮細胞、またはがん性であることが疑われる組織に由来する上皮細胞を含む細胞集団を含有している。さらに、必要であれば、得られた体組織および体液から細胞集団を精製し、次いで、それを生物学的試料として使用してもよい。好ましい態様において、診断すべきがんには、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、およびリンパ腫が含まれるが、それらに限定されるわけではない。また、検出されるがん細胞には、膀胱癌細胞、乳癌細胞、胆管細胞癌細胞、CML細胞、食道癌細胞、HCC細胞、NSCLC細胞、SCLC細胞、骨肉腫細胞、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍細胞、およびリンパ腫細胞が含まれるが、それらに限定されるわけではない。このようながんを診断するためまたはこのようながん細胞を検出するために、対象から採取された以下の器官に由来する生物学的試料が、生物学的試料として使用され得る:膀胱癌の場合は膀胱;乳癌の場合は乳房;胆管細胞癌の場合は胆管;CMLの場合はリンパ球、リンパ球を含む血液試料、骨髄;食道癌の場合は食道;HCCの場合は肝臓;NSCLCおよびSCLCの場合は肺;骨肉腫の場合は骨;膵癌の場合は膵臓;前立腺癌の場合は前立腺;腎細胞癌の場合は腎臓;軟部組織腫瘍の場合は軟部組織;ならびにリンパ腫の場合はリンパ球またはリンパ節。好ましくは、生物学的試料は、前述の器官においてがん性であると疑われる部位から採取され得る。したがって、膀胱、乳房、胆管、リンパ球、骨髄、食道、肝臓、肺、骨、膵臓、前立腺、腎臓、軟部組織、リンパ球、またはリンパ節から採取された生検組織または外科的に切除された組織が、本発明の生物学的試料として好ましい。本発明によると、対象由来の生物学的試料におけるWHSC1および/またはWHSC1L1の発現レベルが決定される。当技術分野で公知の方法を使用して、転写核酸産物レベルで、発現レベルを決定することができる。例えば、WHSC1および/またはWHSC1L1のmRNAを、ハイブリダイゼーション法例えば、ノーザンハイブリダイゼーションによってプローブを使用して定量することができる。検出は、チップ上またはアレイ上で実施されてもよい。アレイの使用は、WHSC1および/またはWHSC1L1を含む複数の遺伝子例えば、様々ながんに特異的な遺伝子の発現レベルを検出するために好ましい。当業者は、WHSC1および/またはWHSC1L1の配列情報を利用して、そのようなプローブを調製することができる。例えば、WHSC1またはWHSC1L1のcDNAをプローブとして使用することができる。必要であれば、色素、蛍光、および同位体などの好適な標識によりプローブを標識し、ハイブリダイズした標識の強度として、遺伝子の発現レベルを検出してもよい。さらに、増幅に基づく検出法例えば、RT-PCRにより、プライマーを使用して、WHSC1および/またはWHSC1L1の転写産物を定量することもできる。そのようなプライマーも、利用可能な遺伝子の配列情報に基づき調製され得る。例えば、実施例で使用されるプライマーWHSC1の場合は配列番号:9および10、または11および12、ならびにWHSC1L1の場合は配列番号:13および14、または15および16が、RT-PCRまたはノーザンブロットによる検出のために利用され得るが、本発明はそれらに限定されない。特に、本発明の方法のために使用されるプローブまたはプライマーは、ストリンジェントな条件、中程度にストリンジェントな条件、または低ストリンジェントな条件の下で、WHSC1またはWHSC1L1のmRNAとハイブリダイズする。本明細書で使用される場合、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件という語句は、プローブまたはプライマーが、その標的配列とハイブリダイズするが、他の配列とはハイブリダイズしない条件をさす。ストリンジェントな条件は、配列依存性であり、異なる状況下では異なる。より長い配列の特異的なハイブリダイゼーションは、より短い配列よりも高い温度で観察される。一般的に、ストリンジェントな条件の温度は、規定のイオン強度およびpHでの特定の配列の熱融解点Tmよりも約5°C低く選択される。Tmとは、平衡時に、標的配列に相補的なプローブの50が標的配列とハイブリダイズする規定のイオン強度、pH、および核酸濃度における温度である。概して標的配列が過剰に存在するので、Tmでは、平衡時に、プローブの50が占有される。典型的には、ストリンジェントな条件は、塩濃度が、pH7.0~8.3で、約1.0M未満のナトリウムイオン、典型的には、約0.01~1.0Mのナトリウムイオンまたはその他の塩であり、温度が、短いプローブまたはプライマー例えば、10~50ヌクレオチドの場合には少なくとも約30°Cであり、より長いプローブまたはプライマーの場合には少なくとも約60°Cであるものである。ホルムアミドなどの脱安定化剤の添加によっても、ストリンジェントな条件を達成することができる。あるいは、本発明の診断のために、翻訳産物を検出することもできる。例えば、WHSC1および/またはWHSC1L1タンパク質の量を決定することができる。翻訳産物として該タンパク質の量を決定する方法には、該タンパク質を特異的に認識する抗体を使用するイムノアッセイ法が含まれる。抗体はモノクローナルであってもよいしまたはポリクローナルであってもよい。さらに、断片がWHSC1またはWHSC1L1タンパク質に対する結合能を保持している限り、抗体の任意の断片または改変例えば、キメラ抗体、scFv、Fab、Fab2、Fv等を、検出のために使用することができる。タンパク質の検出のためのこれらの種類の抗体を調製する方法は、当技術分野で周知であり、本発明においては、そのような抗体およびそれらの等価物を調製するために、任意の方法を利用することができる。翻訳産物に基づきWHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを検出する別の方法として、WHSC1またはWHSC1L1タンパク質に対する抗体を使用した免疫組織化学分析を介して染色の強度を観察することができる。すなわち、強い染色の観察は、タンパク質の増加した存在を示し、同時に、この遺伝子の高い発現レベルを示す。さらに、診断の正確性を改善するために、WHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルに加えて、他のがん関連遺伝子、例えば、がんにおいて異なって発現されることが公知の遺伝子の発現レベルも決定することができる。生物学的試料におけるWHSC1およびWHSC1L1遺伝子を含むがんマーカー遺伝子の発現レベルは、対応するがんマーカー遺伝子の対照レベルから、例えば、10、25、もしくは50増加している場合;または1.1倍超、1.5倍超、2.0倍超、5.0倍超、10.0倍超、もしくはそれ以上に増加している場合、増加していると見なされ得る。疾患状態がん性であるか非がん性であるかが既知である対象から以前に収集され保管されていた試料を使用することによって、試験生物学的試料と同時に対照レベルを決定することができる。あるいは、疾患状態が既知である対象由来の試料において、以前に決定されたWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを分析することによって得られた結果に基づき、統計的方法によって対照レベルを決定してもよい。さらに、対照レベルは、以前に試験された細胞からの発現パターンのデータベースであってもよい。さらに、本発明の一局面によると、複数の参照試料から決定された複数の対照レベルと、生物学的試料におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを比較してもよい。患者由来の生物学的試料のものと類似した組織型に由来する参照試料から決定された対照レベルを使用することが好ましい。さらに、疾患状態が既知である集団におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルの標準値を使用することが好ましい。標準値は、当技術分野で公知の任意の方法によって入手され得る。例えば、平均値±2S.D.または平均値±3S.D.の範囲を、標準値として使用することができる。本発明の文脈において、がん性ではないことが既知の生物学的試料から決定された対照レベルは、正常対照レベルと呼ばれる。他方、対照レベルががん性生物学的試料から決定される場合、それはがん性対照レベルと呼ばれる。WHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルが正常対照レベルと比較して増加しているか、またはがん性対照レベルと類似している場合、対象は、がんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクを有すると診断され得る。さらに、複数のがん関連遺伝子の発現レベルが比較される場合、試料とがん性である参照との間の遺伝子発現パターンの類似性は、対象が、がんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクを有することを示す。試験生物学的試料の発現レベルと対照レベルとの間の差は、細胞のがん性状態または非がん性状態によって発現レベルが異ならないことが既知の対照核酸、例えば、ハウスキーピング遺伝子の発現レベルに対して標準化され得る。例示的な対照遺伝子には、β-アクチン、グリセルアルデヒド3リン酸デヒドロゲナーゼ、およびリボソームタンパク質P1が含まれるが、これらに限定されない。別の局面において、本発明は、対象由来の生物学的試料におけるWHSC1遺伝子の発現レベルおよび/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを決定する段階を含む、がんに罹患していると疑われる対象を特定する方法であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該レベルの増加が、対象ががんに罹患していることを示し、該発現レベルが、以下からなる群より選択される方法によって決定される、前記方法を提供する:aWHSC1のmRNAまたはWHSC1L1のmRNAを検出する方法;bWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質を検出する方法;およびcWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性を検出する方法。別の局面において、本発明は、生物学的試料におけるWHSC1遺伝子の発現レベルおよび/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを決定する段階を含む、がん細胞を含むと疑われる、対象由来の生物学的試料を特定する方法であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該レベルの増加が、生物学的試料ががん細胞を含むと疑われることを示し、該発現レベルが、以下からなる群より選択される方法によって決定される、前記方法を提供する:aWHSC1のmRNAまたはWHSC1L1のmRNAを検出する方法;bWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質を検出する方法;およびcWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性を検出する方法。WHSC1遺伝子またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルの決定は、前述した方法によって行うことができる。候補対象または疑わしい生物学的試料を特定した後、例えば、他の腫瘍マーカー、画像処理解析、病理学的観察などによって、このような候補対象または試料をさらに検査することができる。がんを診断するためのキット:本発明は、がんを診断するためのキットを提供する。好ましくは、がんは、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、およびリンパ腫である。具体的には、キットは、対象由来の生物学的試料におけるWHSC1遺伝子および/またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを検出するための少なくとも1種の試薬を含み、この試薬は、以下からなる群より選択され得る:aWHSC1遺伝子のmRNAおよび/またはWHSC1L1遺伝子のmRNAを検出するための試薬;bWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質および/またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質を検出するための試薬;ならびにcWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性および/またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性を検出するための試薬。あるいは、キットは、対象由来の生物学的試料におけるWHSC1遺伝子の発現レベルまたはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を検出するための少なくとも1種の試薬を含み、この試薬は、以下からなる群より選択され得る:aWHSC1遺伝子のmRNAまたはWHSC1L1遺伝子のmRNAのいずれかまたは両方を検出するための試薬;bWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質のいずれかまたは両方を検出するための試薬;およびcWHSC1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性またはWHSC1L1遺伝子にコードされるタンパク質の生物学的活性のいずれかまたは両方を検出するための試薬。WHSC1またはWHSC1L1遺伝子のmRNAを検出するのに適した試薬には、WHSC1mRNAまたはWHSC1L1mRNAに特異的に結合するか、またはそれを特定する核酸、例えば、WHSC1mRNAまたはWHSC1L1mRNAの一部分に対する相補的配列を有するオリゴヌクレオチドが含まれる。これらの種類のオリゴヌクレオチドの例は、WHSC1mRNAまたはWHSC1L1mRNAに特異的なプライマーおよびプローブである。これらの種類のオリゴヌクレオチドは、当技術分野において周知の方法に基づいて調製することができる。必要であれば、WHSC1mRNAまたはWHSC1L1mRNAを検出するための試薬を固体マトリックス上に固定することができる。さらに、WHSC1mRNAまたはWHSC1L1mRNAを検出するための複数の試薬をキットに含めることもできる。本発明のプローブまたはプライマーは、典型的には、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む。典型的には、オリゴヌクレオチドは、少なくとも約2000個、1000個、500個、400個、350個、300個、250個、200個、150個、100個、50個、または25個の、WHSC1もしくはWHSC1L1配列を含む核酸の連続したセンス鎖ヌクレオチド配列、またはWHSC1もしくはWHSC1L1配列を含む核酸のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列、またはこれらの配列の天然の変異体にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含む。特に、例えば、好ましい態様において、長さが5~50個のオリゴヌクレオチドが、検出すべき遺伝子を増幅するためのプライマーとして使用され得る。より好ましくは、長さが15~30bのオリゴヌクレオチドプローブまたはオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子のmRNAまたはcDNAを検出することができる。好ましい態様において、オリゴヌクレオチドプローブまたはオリゴヌクレオチドプライマーの長さは、15~25個より選択され得る。このようなオリゴヌクレオチドプローブまたはオリゴヌクレオチドプライマーを用いて遺伝子を検出するためのアッセイ手順、装置、または試薬は周知である例えば、オリゴヌクレオチドマイクロアレイまたはPCR。これらのアッセイにおいて、プローブまたはプライマーはまた、タグ配列またはリンカー配列も含んでよい。さらに、プローブまたはプライマーは、検出可能な標識または捕捉するための親和性リガンドで修飾されてもよい。あるいは、ハイブリダイゼーションに基づいた検出手順において、長さが数百個例えば、約100~200個の塩基~数千個例えば、約1000~2000個の塩基であるポリヌクレオチドもまた、プローブ用に使用され得る例えば、ノーザンブロットアッセイまたはcDNAマイクロアレイ解析。いくつかの態様において、プローブまたはプライマーのヌクレオチド配列は、WHSC1またはWHSC1L1の各転写物に特異的な領域より選択され得る。あるいは、WHSC1およびWHSC1L1の両方の転写物を認識するプローブまたはプライマーもまた、両方の転写物を検出するのに適している。本発明において、WHSC1またはWHSC1L1は有用な診断マーカーであるだけでなく、がん治療に適した標的でもあることが明らかにされている。したがって、WHSC1またはWHSC1L1を標的とするがん治療が、本発明によって実現され得る。本発明において、WHSC1またはWHSC1L1を標的とするがん治療とは、がん細胞における、WHSC1の活性および発現のいずれかもしくは両方、またはWHSC1L1の活性および発現のいずれかもしくは両方の抑制または阻害を意味する。任意の抗WHSC1剤または抗WHSC1L1剤が、WHSC1またはWHSC1L1を標的とするがん治療のために使用され得る。本発明において、抗WHSC1剤または抗WHSC1L1剤には、活性成分として以下の物質が含まれる:a本発明の二本鎖分子、b前記二本鎖分子をコードするDNA、またはc前記二本鎖分子をコードするベクター。さらなる好適な試薬は、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質を検出するための試薬でありうる。そのような試薬には、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質に対する抗体が含まれる。抗体はモノクローナルであってもよいしまたはポリクローナルであってもよい。さらに、断片がWHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質に対する結合能を保持している限り、抗体の任意の断片または改変例えば、キメラ抗体、scFv、Fab、Fab2、Fv等を、試薬として使用することができる。前記タンパク質の検出のためのこれらの種類の抗体を調製する方法は、当技術分野で周知であり、本発明においては、そのような抗体およびそれらの等価物を調製するために、任意の方法を利用することができる。さらに、直接結合または間接標識技術を介して、シグナル生成分子によって抗体を標識してもよい。標識、および抗体を標識して抗体とその標的との結合を検出する方法は、当技術分野で周知であり、任意の標識および方法を本発明のために利用することができる。さらに、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質を検出するための複数の試薬が、キットに含まれていてもよい。さらに、生物学的試料において、例えば、発現されたWHSC1および/またはWHSC1L1タンパク質による細胞増殖活性を測定することによって、生物学的活性を決定してもよい。例えば、細胞を、対象由来の生物学的試料の存在下で培養し、次いで、増殖のスピードを検出するか、または細胞周期もしくはコロニー形成能を測定することによって、生物学的試料の細胞増殖活性を決定することができる。さらに、WHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質の生物学的活性を検出するための複数の試薬が、キットに含まれていてもよい。キットは、前記試薬を複数含有していてもよい。さらに、キットは、WHSC1遺伝子またはWHSC1L1遺伝子を対象とするプローブまたはタンパク質に対する抗体を結合させるための固体マトリックスおよび試薬、細胞を培養するための培地および容器、陽性および陰性の対照試薬、ならびにWHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質に対する抗体を検出するための二次抗体を含んでいてもよい。例えば、がんに罹患している対象またはがんに罹患していない対照対象から入手された組織試料が、有用な対照試薬として役立ち得る。本発明のキットは、緩衝液、希釈剤、フィルター、針、注射器、および使用のための説明を含む添付文書例えば、文書、テープ、CD-ROM等を含む、商業的見地および使用者の見地から望ましいその他の材料をさらに含んでいてもよい。これらの試薬等は、ラベルを有する容器に入っていてもよい。好適な容器には、ボトル、バイアル、および試験管が含まれる。容器は、ガラス、またはプラスチックなどの多様な材料から形成されていてよい。本発明の一態様として、試薬がWHSC1のmRNAまたはWHSC1L1のmRNAに対するプローブである場合、少なくとも1つの検出部位が形成されるよう、該試薬を多孔質ストリップなどの固体マトリックスの上に固定化することができる。多孔質ストリップの測定領域または検出領域は、核酸プローブを各々が含有している複数の部位を含んでいてもよい。テストストリップは、陰性対照および/または陽性対照のための部位も含有していてもよい。あるいは、対照部位は、テストストリップから分離されたストリップの上に位置していてもよい。任意で、異なる検出部位は、固定化された核酸を、異なる量、含有していてもよい。すなわち、第1の検出部位に、より高い量を含有し、その後の部位に、より少ない量を含有していてもよい。試験試料の添加時、検出可能シグナルを示す部位の数が、試料中に存在するWHSC1のmRNAまたはWHSC1L1のmRNAの量の定量的な指標を提供する。検出部位は、任意の適切に検出可能な形で配置され得、典型的には、テストストリップ幅にわたるバーまたはドットの形である。本発明のキットは、陽性対照試料またはWHSC1標準試料および/もしくはWHSC1L1標準試料をさらに含んでよい。本発明の陽性対照試料は、WHSC1陽性試料および/またはWHSC1L1陽性試料を採取し、次いで、WHSC1レベルおよび/またはWHSC1L1レベルを分析することによって調製することができる。1つの態様において、WHSC1陽性組織試料またはWHSC1L1陽性組織試料は、WHSC1またはWHSC1L1を発現するがん細胞から構成され得る。このようながんには、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫が含まれるが、それらに限定されるわけではない。陽性対照試料のWHSC1レベルおよび/またはWHSC1L1レベルは、例えば、カットオフ値より高くてよい。例えば、陽性対照試料は、カットオフ値を決定し、かつカットオフ値より多い量のWHSC1mRNAもしくはWHSC1タンパク質、および/またはカットオフ値より多い量のWHSC1L1mRNAもしくはWHSC1L1タンパク質を含む試料を調製することによって、調製することができる。本明細書において、カットオフ値という語句は、正常範囲とがん性範囲を区分する値を意味する。例えば、当業者は、受信者動作特性ROC曲線を用いてカットオフ値を決定することができる。あるいは、本発明のキットは、カットオフ値の量のWHSC1mRNAもしくはWHSC1タンパク質を含むWHSC1標準試料、および/またはカットオフ値の量のWHSC1L1mRNAもしくはWHSC1L1タンパク質を含むWHSC1L1標準試料を含んでもよい。あるいは、本発明のキットは、陰性対照試料を含む。陰性対照試料は、非がん細胞株もしくは非がん組織から調製することができ、またはカットオフ値より少ないWHSC1mRNAもしくはWHSC1タンパク質、および/またはカットオフ値より少ないWHSC1L1mRNAもしくはWHSC1L1タンパク質を含む試料を調製することによって、調製することができる。別の局面において、本発明は、がんの診断において使用するための、WHSC1mRNAもしくはWHSC1L1mRNAを対象とするプローブもしくはプライマーセット、またはWHSC1タンパク質もしくはWHSC1L1タンパク質に対する抗体を提供する。別の局面において、本発明は、WHSC1mRNAもしくはWHSC1L1mRNAを対象とするプローブもしくはプライマーセット、またはWHSC1タンパク質もしくはWHSC1L1タンパク質に対する抗体を含む、対象においてがんを診断するための試薬を提供する。別の局面において、本発明は、がんの診断用の試薬を製造するための、WHSC1mRNAもしくはWHSC1L1mRNAを対象とするプローブもしくはプライマーセット、またはWHSC1タンパク質もしくはWHSC1L1タンパク質に対する抗体の使用を提供する。抗がん物質のスクリーニング:本発明との関連において、本スクリーニング方法により同定される物質は、任意の化合物、またはいくつかの化合物を含む組成物でありうる。さらに、本発明のスクリーニング方法によって細胞またはタンパク質に曝露される試験物質は、単一の化合物であっても、または化合物の組み合わせであってもよい。化合物の組み合わせを前記方法において使用する場合には、化合物を逐次的に接触させてもよいし、または同時に接触させてもよい。任意の試験物質、例えば、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産物、海洋生物抽出物、植物抽出物、精製されたタンパク質または粗タンパク質、ペプチド、非ペプチド物質、合成微小分子物質アンチセンスRNA、siRNA、リボザイム、およびアプタマー等などの核酸構築物を含む、および天然物質を、本発明のスクリーニング方法において使用することができる。本発明の試験物質は、1生物学的ライブラリ、2空間的にアドレス可能なパラレルな固相または液相のライブラリ、3デコンボリューションを必要とする合成ライブラリ法、4一ビーズ一化合物ライブラリ法、および5アフィニティークロマトグラフィー選択を使用する合成ライブラリ法を含む、当技術分野で公知のコンビナトリアルライブラリ法の多数のアプローチのいずれかを使用して入手され得る。アフィニティークロマトグラフィー選択を使用する生物学的ライブラリ法はペプチドライブラリに限定されるが、他の4つのアプローチは化合物のペプチドライブラリ、非ペプチドオリゴマーライブラリ、または低分子ライブラリに適用可能であるLamAnticancerDrugDes19971214567。分子ライブラリの合成法の例は、当技術分野で見い出され得るDeWittetalProcNatlAcadSciUSA199390690913ErbetalProcNatlAcadSciUSA199491114226ZuckermannetalJMedChem372678851994ChoetalScience199326113035CarelletalAngewChemIntEdEngl1994332059CarelletalAngewChemIntEdEngl1994332061GallopetalJMedChem199437123351。化合物のライブラリは、溶液中HoughtenBioTechniques19921341221を参照されたい、またはビーズ上LamNature1991354824、チップ上FodorNature19933645556、細菌上米国特許第5,223,409号、胞子上米国特許第5,571,698号;第5,403,484号、および第5,223,409号、プラスミド上CulletalProcNatlAcadSciUSA19928918659、もしくはファージ上ScottandSmithScience199024938690DevlinScience19902494046CwirlaetalProcNatlAcadSciUSA199087637882FeliciJMolBiol199122230110;米国特許出願第2002103360号に提示され得る。その構造の一部が、付加、欠失、および/または置換により変換された物質は、本発明のスクリーニング方法によって入手される物質に含まれる。さらに、スクリーニングされた試験物質がタンパク質である場合、タンパク質をコードするDNAを入手するためには、タンパク質の全アミノ酸配列を決定して、タンパク質をコードする核酸配列を推定することもできるし、または入手されたタンパク質の部分アミノ酸配列を分析して、その配列に基づきオリゴDNAをプローブとして調製し、そのプローブを用いてcDNAライブラリをスクリーニングして、タンパク質をコードするDNAを入手することもできる。入手されたDNAは、がんを治療または予防するための候補である試験物質の調製における有用性に関して確認される。本明細書に記載されるスクリーニングにおいて有用な試験物質は、WHSC1タンパク質もしくはWHSC1L1タンパク質に特異的に結合する抗体であってもよく、またはインビボで元のタンパク質の生物学的活性を欠く、WHSC1タンパク質もしくはWHSC1L1タンパク質の部分ペプチドに特異的に結合する抗体であってもよい。本明細書において、WHSC1またはWHSC1L1の発現レベルおよび生物学的活性のいずれかまたは両方を抑制することにより、がん細胞の増殖が抑制されることが明らかにされる。したがって、ある物質がWHSC1またはWHSC1L1の発現および活性のいずれかまたは両方を抑制する場合、そのような抑制は、対象における潜在的治療効果を示している。本発明との関連において、潜在的治療効果とは、合理的な見込みのある臨床的な利点を意味する。このような臨床的な利点の例には、以下のものが含まれるがそれらに限定されるわけではない。aWHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子の発現減少、b対象におけるがんの大きさ、蔓延、もしくは転移能の低減、cがん形成の予防、またはdがんの臨床症状の予防もしくは緩和。試験物質ライブラリの構築は当技術分野で周知であるが、本スクリーニング方法のための試験物質の同定およびそのような物質のライブラリの構築におけるさらなる指針を以下に提供する。i分子モデリング:試験物質ライブラリの構築は、求められる特性を有することが既知の化合物の分子構造、および/またはWHSC1タンパク質またはWHSC1L1タンパク質の分子構造の知識により容易になる。さらなる評価のために好適な試験物質を予備スクリーニングするための1つのアプローチは、試験物質とその標的との間の相互作用のコンピュータモデリングである。コンピュータモデリング技術により、選択された分子の三次元原子構造の可視化、およびその分子と相互作用する新たな化合物の合理的設計が可能になる。三次元構築物は、典型的には、選択された分子のX線結晶学的分析またはNMRイメージングからのデータに依存する。分子動力学は力場データを必要とする。コンピュータグラフィックスシステムは、新たな化合物が標的分子にどのように結合するかを予測可能にし、結合特異性を完全にするための化合物および標的分子の構造の実験的操作を可能にする。一方または両方に軽微な変化が加えられた場合に、分子-化合物相互作用がどのようになるかを予測するには、分子力学ソフトウェアおよび計算集約型コンピュータが必要とされ、それらは、通常、分子設計プログラムと使用者との間のユーザーフレンドリーなメニュー方式のインターフェースと連結される。上記に概説された分子モデリングシステムの例には、CHARMmプログラムおよびQUANTAプログラム、PolygenCorporation,Waltham,Massが含まれる。CHARMmは、エネルギー最小化および分子動力学の機能を実行する。QUANTAは、分子構造の構築、グラフィックモデリング、および分析を実行する。QUANTAは、相互作用的構築、改変、可視化、および分子の互いの挙動の分析を可能にする。RotivinenetalActaPharmaceuticaFennica19889715966RipkaNewScientist1988548McKinlayRossmannAnnuRevPharmacolToxiciol19892911122PerryDaviesProgClinBiolRes198929118993LewisDeanProcRSocLond19892361254014162;および核酸成分のモデル受容体に関するAskewetalJAmChemSoc1989111108290など、多数の論文が特定のタンパク質と相互作用する薬物のコンピュータモデリングを検討している。化学物質をスクリーニングし図示するその他のコンピュータプログラムは、BioDesignInc、AllelixInc、およびHypercubeIncなどの会社から入手可能である。例えば、DesJarlaisetalJMedChem1988317229MengetalJComputerChem19921350524MengetalProteins19931726678ShoichetetalScience1993259144550を参照されたい。推定上の阻害剤が同定されたならば、以下に詳述されるように、同定された推定上の阻害剤の化学構造に基づき、任意の数のバリアントを構築するため、コンビナトリアルケミストリー技術を利用することができる。その結果得られた推定上の阻害剤または試験物質のライブラリは、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、およびリンパ腫などのがんの治療または予防のための候補物質を同定するため、本発明の方法を使用してスクリーニングされ得る。iiコンビナトリアル化学合成:試験物質のコンビナトリアルライブラリは、既知の阻害剤に存在しているコア構造の知識を含む、合理的薬物設計プログラムの一部として作製され得る。このアプローチにより、ハイスループットスクリーニングを容易にする適度のサイズにライブラリを維持することが可能になる。あるいは、ライブラリを構成する分子ファミリーの全順列を簡便に合成することにより、単純な、特に短い、重合体分子ライブラリを構築することもできる。この後者のアプローチの一例は、6アミノ酸長の全ペプチドのライブラリである。そのようなペプチドライブラリは、6アミノ酸配列のあらゆる順列を含み得る。この種類のライブラリは、線形コンビナトリアルケミカルライブラリと称される。コンビナトリアルケミカルライブラリの調製は、当業者に周知であり、化学合成または生物学的合成のいずれかにより作製され得る。コンビナトリアルケミカルライブラリには、ペプチドライブラリ例えば、米国特許第5,010,175号;FurkaIntJPeptProtRes19913748793HoughtenetalNature1991354846を参照されたいが含まれるが、これらに限定されない。化学的多様性ライブラリを作製するためのその他の化学を使用することもできる。そのような化学には、ペプチド例えば、PCT公報WO91/19735、コードされたペプチド例えば、WO93/20242、ランダムバイオオリゴマー例えば、WO92/00091、ベンゾジアゼピン例えば、米国特許第5,288,514号、ヒダントイン、ベンゾジアゼピン、およびジペプチドなどのダイバーソマーdiversomersDeWittetalProcNatlAcadSciUSA199390690913、ビニロガスvinylogousポリペプチドHagiharaetalJAmerChemSoc19921146568、グルコース足場を有する非ペプチド性ペプチド模倣体HirschmannetalJAmerChemSoc199211492178、低分子化合物ライブラリの類似有機合成ChenetalJAmerChemSoc19941162661、オリゴカルバメートChoetalScience19932611303、および/またはペプチジルホスホネートCampbelletalJOrgChem199459658、核酸ライブラリAusubelCurrentProtocolsinMolecularBiology1995supplementSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManual1989ColdSpringHarborLaboratoryNewYorkUSAを参照されたい、ペプチド核酸ライブラリ例えば、米国特許第5,539,083号を参照されたい、抗体ライブラリ例えば、VaughanetalNatureBiotechnology19961430914およびPCT/US96/10287を参照されたい、炭水化物ライブラリ例えば、LiangetalScience1996274152022;米国特許第5,593,853号を参照されたい、ならびに有機低分子ライブラリ例えば、ベンゾジアゼピン、GordonEMCurrOpinBiotechnol1995Dec1662431;イソプレノイド、米国特許第5,569,588号;チアゾリジノンおよびメタチアザノン、米国特許第5,549,974号;ピロリジン、米国特許第5,525,735号および第5,519,134号;モルホリノ化合物、米国特許第5,506,337号;ベンゾジアゼピン、米国特許第5,288,514号等を参照されたいが含まれるが、これらに限定されない。コンビナトリアルライブラリの調製のための装置は市販されている例えば、357MPS、390MPSAdvancedChemTech,LouisvilleKY、SymphonyRainin,Woburn,MA、433AAppliedBiosystems,FosterCity,CA、9050PlusMillipore,Bedford,MAを参照されたい。さらに、コンビナトリアルライブラリ自体も多数市販されている例えば、ComGenex,Princeton,N.J.、Tripos,Inc.,St.Louis,MO、3DPharmaceuticals,Exton,PA、MartekBiosciences,Columbia,MD等を参照されたい。iiiその他の候補:別のアプローチは、ライブラリを作製するために組換えバクテリオファージを使用する。ファージ法ScottSmithScience199024938690CwirlaetalProcNatlAcadSciUSA199087637882DevlinetalScience19902494046を使用すれば、極めて大きいライブラリを構築することができる例えば、106~108個の化学物質。第2のアプローチは、主として化学的な方法を使用し、Geysenの方法GeysenetalMolecularImmunology19862370915GeysenetalJImmunologicMethod198710225974;およびFodorらの方法Science1991,251:767-73がその例である。Furkaら14thInternationalCongressofBiochemistry1988Volume5AbstractFR013FurkaIntJPeptideProteinRes19913748793、Houghten米国特許第4,631,211号、およびRutterら米国特許第5,010,175号は、アゴニストまたはアンタゴニストとして試験され得るペプチドの混合物を作製する方法を記載している。アプタマーは、特定の分子標的に強固に結合する核酸から構成された巨大分子である。TuerkおよびGoldScience249505510は、アプタマーの選択のためのSELEXSystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment法を開示している。SELEX法においては、核酸分子の大きなライブラリ例えば、1015個の異なる分子をスクリーニングに使用することができる。1ポリペプチドに基づいたスクリーニング:本発明は、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを用いてがんの治療および/または予防に応用可能な候補物質をスクリーニングする方法を提供する。本発明のスクリーニング方法との関連において、使用すべきWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドは、例えば、精製されたポリペプチド、可溶性タンパク質、担体に結合された形態、または他のポリペプチドと融合された融合タンパク質でよい。さらに、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドは、組換えポリペプチド、自然界に由来するタンパク質またはその部分ペプチドでよい。改変ペプチドが元のポリペプチドの少なくとも1種の生物学的活性を保持している限りにおいて、天然のWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドのほかに、これらのポリペプチドの機能的等価物を、本発明のスクリーニングのために使用するWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに含めてよい。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドの生物学的活性の例には、細胞増殖活性、メチルトランスフェラーゼ活性、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、またはβ-カテニンポリペプチドに対する結合活性が含まれるが、それらに限定されるわけではない。このような機能的等価物の好ましい例は、WHSC1およびWHSC1L1の遺伝子およびタンパク質と題した項において前述した。例えば、このような機能的等価物の好ましい例には、WHSC1ポリペプチドのSETドメイン例えば、配列番号:2の1066~1179を含むポリペプチドが含まれる。また、WHSC1L1タンパク質の機能的等価物の好ましい例には、WHSC1L1ポリペプチドのSETドメイン例えば、配列番号:50の1148~1261を含むポリペプチドが含まれる。前記ポリペプチドは、結合過程および結合された物質が元のポリペプチドおよび/または断片の生物学的活性を妨害しない限りにおいて、他の物質にさらに結合されてよい。使用可能な物質には、例えば、ペプチド、脂質、糖および糖鎖、アセチル基、天然および合成のポリマーなどが含まれる。これらの種類の修飾は、付加的な機能を与えるため、またはポリペプチドおよび断片を安定させるために実施され得る。本発明の方法のために使用されるポリペプチドは、従来の精製方法によって天然のタンパク質として自然界から、または選択されたアミノ酸配列に基づく化学合成を通じて、得ることができる。例えば、合成のために採用することができる従来のペプチド合成方法には、以下のものが含まれる:1PeptideSynthesisInterscienceNewYork1966;2TheProteinsVol2AcademicPressNewYork1976;3ペプチド合成丸善19754ペプチド合成の基礎と実験丸善19855医薬品の開発続第14巻ペプチド合成広川書店19916WO99/67288;ならびに7BaranyGMerrifieldRBPeptidesVol2SolidPhasePeptideSynthesisAcademicPressNewYork1980100118。あるいは、ポリペプチドは、任意の公知の遺伝子工学的方法を本発明のポリペプチドの作製に適応させることによって、得ることもできる例えば、MorrisonJJBacteriology197713234951ClarkCurtissCurtissMethodsinEnzymology198310134762。例えば、最初に、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドを発現可能な形態で例えば、プロモーターを含む調節配列の下流に含む適切なベクターを調製し、適切な宿主細胞中に形質転換し、次いでその宿主細胞を培養して、そのタンパク質を産生させる。より具体的には、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドをコードしている遺伝子を、pSV2neo、pcDNAI、pcDNA3.1、pCAGGS、またはpCD8など外来遺伝子を発現させるためのベクター中にその遺伝子を挿入することによって、宿主例えば動物細胞などにおいて発現させる。発現のために、プロモーターを使用することができる。一般に使用される任意のプロモーターを使用することができ、例えば、SV40初期プロモーターRigbyWilliamsonGeneticEngineeringvol3AcademicPressLondon198283141、EF-αプロモーターKimetalGene19909121723、CAGプロモーターNiwaetalGene1991108193、RSVLTRプロモーターCullenMethodsinEnzymology1987152684704、SRαプロモーターTakebeetalMolCellBiol19888466、CMV前初期プロモーターSeedetalProcNatlAcadSciUSA19878433659、SV40後期プロモーターGheysenetalJMolApplGenet1982138594、アデノウイルス後期プロモーターKaufmanetalMolCellBiol19899946、およびHSVTKプロモーターなどが含まれる。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを発現させるための、宿主細胞中へのベクターの導入は、任意の従来の方法、例えば、エレクトロポレーション法ChuetalNucleicAcidsRes198715131126、リン酸カルシウム法ChenetalMolCellBiol19877274552、DEAEデキストラン法LopataetalNucleicAcidsRes198412570717SussmanetalMolCellBiol1985416413、およびリポフェクチンLipofectin法DerijardBCell19947102537LambetalNatureGenetics199352230RabindranetalScience19932592304などに従って実施することができる。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドはまた、従来のインビトロの翻訳系を用いてインビトロで作製することもできる。iWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合する物質のスクリーニング:本発明において、WHSC1遺伝子の過剰発現は、正常器官ではほとんど発現されないのにもかかわらず、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍においては検出された図1、2、3、および表5。さらに、WHSC1L1遺伝子の過剰発現は、正常器官ではほとんど発現されないのにもかかわらず、膀胱癌、乳癌、CML、肺癌例えばSCLC、およびリンパ腫においては検出された図1および表5。したがって、WHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子ならびにこれらの遺伝子によってコードされるポリペプチドを用いて、本発明は、WHSC1ポリペプチドまたはWHSC1L1ポリペプチドに結合する物質をスクリーニングする方法を提供する。WHSC1遺伝子およびWHSC1L1遺伝子ががんにおいて発現されるため、WHSC1ポリペプチドまたはWHSC1L1ポリペプチドに結合する物質は、がん細胞の増殖を抑制し、したがって、がんを治療または予防するのに有用であると予想される。したがって、本発明はまた、WHSC1ポリペプチドまたはWHSC1L1ポリペプチドを用いて、がん細胞の増殖を抑制する候補物質をスクリーニングするための方法、およびがんを治療または予防するための候補物質をスクリーニングするための方法も提供する。特に、このスクリーニング方法の態様は、以下の段階を含む:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子にコードされるポリペプチドと接触させる段階;bポリペプチドと試験物質との間の結合活性を検出する段階;およびcポリペプチドに結合する試験物質を選択する段階。あるいは、本発明によれば、がんの治療または予防に対する試験物質または試験化合物の潜在的治療効果もまた、評価または推定することができる。いくつかの態様において、本発明は、以下の段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1の過剰発現に関連したがんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法を提供する:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドと接触させる段階;bポリペプチドと試験物質との間の結合活性を検出する段階;およびc潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、物質がポリペプチドに結合する場合、潜在的治療効果が示される、段階。本発明の方法を、以下に、より詳細に説明する。スクリーニングに使用されるWHSC1ポリペプチドすなわちWHSC1遺伝子によりコードされるポリペプチドまたはWHSC1L1ポリペプチドすなわちWHSC1L1遺伝子によりコードされるポリペプチドは、組換えポリペプチドもしくは自然界由来のタンパク質、またはそれらの部分ペプチドであり得る。試験物質と接触させられるポリペプチドは、例えば、精製されたポリペプチド、可溶性タンパク質、担体と結合した形態、または他のポリペプチドと融合した融合タンパク質であり得る。タンパク質、例えば、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合するタンパク質を、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを使用してスクリーニングする方法として、当業者に周知の多くの方法を使用することができる。そのようなスクリーニングは、例えば、免疫沈降法により、特に、以下のように実施され得る。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドをコードする遺伝子は、該遺伝子をpSV2neo、pcDNAI、pcDNA3.1、pCAGGS、およびpCD8などの外来遺伝子用の発現ベクターに挿入することにより、宿主例えば、動物細胞等において発現される。発現に使用されるプロモーターは、一般に使用され得る任意のプロモーターであってよく、例えば、SV40初期プロモーターRigbyinWilliamsonGeneticEngineeringvol3AcademicPressLondon83141、EF-αプロモーターKimetalGene9121723、CAGプロモーターNiwaetalGene108193、RSVLTRプロモーターCullenMethodsinEnzymology152684704、SRαプロモーターTakebeetalMolCellBiol8466、CMV前初期プロモーターSeedandAruffoProcNatlAcadSciUSA8433659、SV40後期プロモーターGheysenandFiersJMolApplGenet138594、アデノウイルス後期プロモーターKaufmanetalMolCellBiol9946、HSVTKプロモーター等を含み得る。外来遺伝子を発現させるための宿主細胞への遺伝子の導入は、任意の方法、例えば、エレクトロポレーション法ChuetalNucleicAcidsRes15131126、リン酸カルシウム法ChenandOkayamaMolCellBiol7274552、DEAEデキストラン法LopataetalNucleicAcidsRes12570717SussmanandMilmanMolCellBiol416413、リポフェクチン法DerijardBCell76102537LambetalNatureGenetics52230RabindranetalScience2592304等に従い実施され得る。ポリペプチドのN末端またはC末端に、その特異性が明らかなモノクローナル抗体のエピトープを導入することにより、モノクローナル抗体の認識部位すなわちエピトープを含む融合タンパク質として、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子によりコードされるポリペプチドを発現させることができる。市販のエピトープ-抗体システムを使用することができるExperimentalMedicine13:85-901995。マルチクローニング部位の使用により、例えば、β-ガラクトシダーゼ、マルトース結合タンパク質、グルタチオンS-トランスフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質GFP等との融合タンパク質を発現し得るベクターが、市販されている。また、融合によりポリペプチドの特性が変化しないよう、数個~十数個のアミノ酸からなる小さなエピトープのみを導入することにより調製された融合タンパク質も使用され得る。ポリヒスチジンHis-タグ、インフルエンザ凝集HA、ヒトc-myc、FLAG、水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質VSV-GP、T7遺伝子10タンパク質T7-タグ、ヒト単純ヘルペスウイルス糖タンパク質HSV-タグ、E-タグモノクローナルファージ上のエピトープなどのエピトープと、これらを認識するモノクローナル抗体とを、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合するタンパク質をスクリーニングするためのエピトープ-抗体システムとして使用することができるExperimentalMedicine138590。免疫沈降においては、適切な界面活性剤を使用して調製された細胞溶解物に、これらの抗体を添加することにより、免疫複合体が形成される。免疫複合体は、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチド、該ポリペプチドとの結合能を有するポリペプチド、および抗体からなる。免疫沈降は、上記エピトープに対する抗体を使用する以外に、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに対する、上記のように調製され得る抗体を使用して実施されてもよい。抗体がマウスIgG抗体である場合、例えば、プロテインAセファロースまたはプロテインGセファロースにより、免疫複合体を沈降させることができる。WHSC1またはWHSC1L1遺伝子によりコードされるポリペプチドが、GSTなどのエピトープとの融合タンパク質として調製される場合には、グルタチオン-セファロース4Bなどのこれらのエピトープと特異的に結合する物質を使用して、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに対する抗体を使用する場合と同様に免疫複合体を形成させることができる。免疫沈降は、例えば、文献中の方法に従ってまたは準じて実施され得るHarlowandLaneAntibodies51152ColdSpringHarborLaboratorypublicationsNewYork。免疫沈降したタンパク質の分析には、SDS-PAGEが一般に使用され、結合したタンパク質は、適切な濃度を有するゲルを使用して、タンパク質の分子量により分析され得る。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合したタンパク質は、クマシー染色または銀染色などの一般の染色法によって検出することが困難であるため、細胞を、放射性同位体35S-メチオニンまたは35S-システインを含有している培養培地中で培養し、細胞内のタンパク質を標識し、タンパク質を検出することにより、タンパク質の検出感度を改善することができる。タンパク質の分子量が明らかである場合には、標的タンパク質をSDS-ポリアクリルアミドゲルから直接精製し、その配列を決定することができる。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合するタンパク質を、該ポリペプチドを使用してスクリーニングする方法として、例えばウエストウエスタンブロット分析SkolniketalCell658390を使用することができる。具体的には、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合するタンパク質を発現すると予想される培養細胞から、cDNAライブラリを、ファージベクター例えば、ZAPを使用して調製し、LB-アガロース上でタンパク質を発現させ、発現されたタンパク質をフィルター上に固定し、精製され標識されたWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを上記フィルターと反応させ、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合したタンパク質を発現しているプラークを標識によって検出することにより、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合するタンパク質を入手することができる。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドは、ビオチンとアビジンとの間の結合を利用するか、またはWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドと特異的に結合する抗体、もしくはWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドと融合させられるペプチドもしくはポリペプチド例えば、GSTを利用することにより、標識され得る。放射性同位体または蛍光等を使用する方法も、使用することができる。あるいは、本発明のスクリーニング方法の別の態様において、細胞を利用するツーハイブリッドシステムを使用してもよいMATCHMAKERTwo-Hybridsystem、MammalianMATCHMAKERTwo-HybridAssayKit、MATCHMAKERone-HybridsystemClontech;HybriZAPTwo-HybridVectorSystemStratagene;参考文献DaltonandTreismanCell68597612、FieldsandSternglanzTrendsGenet1028692。ツーハイブリッドシステムにおいては、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドをSRF結合領域またはGAL4結合領域に融合させ、酵母細胞において発現させる。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合するタンパク質を発現すると予想される細胞からのcDNAライブラリを、ライブラリが、発現された場合にVP16またはGAL4の転写活性化領域に融合するよう、調製する。次いで、cDNAライブラリを上記酵母細胞に導入し、ライブラリに由来するcDNAを、検出された陽性クローンから単離する本発明のポリペプチドに結合するタンパク質が酵母細胞において発現される場合、その2つの結合がレポーター遺伝子を活性化し、陽性クローンを検出可能にする。上記の単離されたcDNAを大腸菌に導入し、タンパク質を発現させることにより、cDNAによりコードされるタンパク質を調製することができる。レポーター遺伝子としては、HIS3遺伝子に加えて、例えば、Ade2遺伝子、lacZ遺伝子、CAT遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子等も使用することができる。アフィニティークロマトグラフィーを使用して、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子によりコードされるポリペプチドに結合する物質をスクリーニングすることもできる。例えば、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドをアフィニティーカラムの担体上に固定化し、この本発明のポリペプチドに結合可能なタンパク質を含有している試験物質をカラムにアプライする。本明細書中の試験物質は、例えば、細胞抽出物、細胞溶解物等であり得る。試験物質を負荷した後、カラムを洗浄し、本発明のポリペプチドに結合した物質を調製することができる。試験物質がタンパク質である場合には、入手されたタンパク質のアミノ酸配列を分析し、配列に基づきオリゴDNAを合成し、オリゴDNAをプローブとして使用してcDNAライブラリをスクリーニングして、タンパク質をコードするDNAを入手する。本発明においては、結合した物質を検出または定量化する手段として、表面プラズモン共鳴現象を使用するバイオセンサーを使用してもよい。そのようなバイオセンサーを使用した場合、極微量のポリペプチドのみを使用して、標識することなく、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドと試験物質との間の相互作用を、表面プラズモン共鳴シグナルとしてリアルタイムで観察することができる例えば、BIAcore、Pharmacia。したがって、BIAcoreなどのバイオセンサーを使用して、本発明のポリペプチドと試験物質との間の結合を評価することが可能である。タンパク質だけでなくWHSC1またはWHSC1L1タンパク質に結合する化学物質アゴニストおよびアンタゴニストを含むも単離するための、固定化されたWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを合成化学物質または天然物質バンクまたはランダムファージペプチドディスプレイライブラリに曝露した場合に結合する分子をスクリーニングする方法、およびコンビナトリアルケミストリー技術に基づくハイスループットを使用したスクリーニング方法WrightonetalScience27345864VerdineNature3841113HoganNature384179が当業者に周知である。iiWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドの生物学的活性を抑制する物質のスクリーニング:本発明において、WHSC1およびWHSC1L1ポリペプチドは、がん細胞の細胞増殖を促進する活性を有する図4。さらに、WHSC1およびWHSC1L1ポリペプチドは、ヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を有することが公知である。WHSC1およびWHSC1L1ポリペプチドががん細胞の生存において非常に重要な役割を果たすことが本明細書において実証されたため、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドのそれらの生物学的活性を抑制する物質は、がん治療のための候補薬物であることができる。したがって、本発明は、WHSC1および/またはWHSC1L1を発現するがん細胞の増殖を抑制する物質をスクリーニングするための方法、ならびに前述の生物学的活性を指標として用いて、がんを治療または予防するための候補物質をスクリーニングするための方法を提供する。本発明の方法によってスクリーニングされる物質は、がんがWHSC1および/またはWHC1L1の過剰発現に関連している限り、任意のがんのための候補薬物であることができる。例えば、WHSC1過剰発現に関連したがんには、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍が含まれるが、それらに限定されるわけではない。また、例えば、WHSC1L1過剰発現に関連するがんには、膀胱癌、乳癌、CML、肺癌例えばSCLC、およびリンパ腫が含まれるが、それらに限定されるわけではない。具体的には、本発明は、以下の段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子にコードされるポリペプチドを用いて、がんを治療および/または予防するための候補物質をスクリーニングする方法を提供する:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子にコードされるポリペプチドと接触させる段階;b段階aのポリペプチドの生物学的活性を検出する段階;およびc試験物質の非存在下で検出されるポリペプチドの生物学的活性と比較して、該ポリペプチドの生物学的活性を抑制する試験物質を選択する段階。あるいは、本発明は、以下の段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子にコードされるポリペプチドを用いて、がんの治療および予防のいずれかまたは両方のための候補物質をスクリーニングする方法を提供する:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子にコードされるポリペプチドと接触させる段階;b段階aのポリペプチドの生物学的活性を検出する段階;およびc試験物質の非存在下で検出されるポリペプチドの生物学的活性と比較して、該ポリペプチドの生物学的活性を抑制する試験物質を選択する段階。本発明によれば、WHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドの生物学的活性例えば、細胞増殖活性もしくはメチルトランスフェラーゼ活性の抑制に対する試験物質の治療効果、またはがんを治療もしくは予防するための候補物質を評価することができる。したがって、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドもしくはそれらの断片を用いて、WHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドの生物学的活性を抑制するための候補物質、またはがんを治療もしくは予防するための候補物質をスクリーニングする方法も提供する:a試験物質を、WHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドまたはその機能的断片と接触させる段階;およびb段階aのポリペプチドまたは断片の生物学的活性を検出する段階、およびcbの生物学的活性と試験物質の治療効果の相関関係を明らかにする段階。あるいは、いくつかの態様において、本発明は、以下の段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1の過剰発現に関連したがんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法を提供する:a試験物質を、WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドまたはその機能的断片と接触させる段階;b段階aのポリペプチドまたは断片の生物学的活性を検出する段階;およびc潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、試験物質の非存在下で検出される前記ポリペプチドまたは断片の生物学的活性と比較して、WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドまたは断片の生物学的活性を物質が抑制する場合、潜在的治療効果が示される、段階。このようながんには、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、およびリンパ腫が含まれる。本発明において、治療効果は、WHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドまたはその機能的断片の生物学的活性と相関関係があり得る。例えば、試験物質が、試験物質の非存在下で検出されるレベルと比べて、WHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドまたはその機能的断片の生物学的活性を抑制または阻害する場合、その試験物質は、治療効果を有する候補物質として同定または選択され得る。あるいは、試験物質が、試験物質の非存在下で検出されるレベルと比べて、WHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドまたはその機能的断片の生物学的活性を抑制も阻害もしない場合、その試験物質は、有意な治療効果を有さない物質として同定され得る。本発明の方法を、以下に、より詳細に説明する。WHSC1またはWHSC1L1タンパク質の生物学的活性を有する限り、任意のポリペプチドを本発明のスクリーニング方法のために使用することができる。このような生物学的活性には、例えば、細胞増殖活性細胞増殖を促進する活性およびメチルトランスフェラーゼ活性が含まれる。例えば、WHSC1またはWHSC1L1タンパク質を使用することができ、これらのタンパク質に機能的に等価なポリペプチドもまた、使用することができる。このようなポリペプチドは、細胞において内因性または外因性に発現させることができる。このスクリーニング方法によって単離される物質は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子にコードされるポリペプチドのアンタゴニストの候補である。アンタゴニストという用語は、ポリペプチドに結合することによって、そのポリペプチドの機能を阻害する分子を意味する。該用語は、WHSC1またはWHSC1L1をコードする遺伝子の発現を低減させるか、または阻害する分子も意味する。さらに、このスクリーニング方法によって単離された物質は、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドと分子DNAおよびタンパク質を含むとのインビボでの相互作用を阻害する物質の候補である。本発明のスクリーニング方法において検出される生物学的活性が細胞増殖活性である場合、それは、例えば、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを発現している細胞を調製し、試験物質の存在下でその細胞を培養し、細胞周期等を測定して細胞増殖のスピードを決定することにより、および、細胞の生存またはコロニー形成活性を測定することにより、検出され得る。WHSC1またはWHSC1L1を発現している細胞の増殖のスピードを低下させる物質を、がんを治療および/または予防するための候補物質として選択する。より具体的には、方法は、以下の段階を含む:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1を過剰発現している細胞と接触させる段階;b細胞増殖活性を測定する段階;およびc試験物質の非存在下で検出される細胞増殖活性と比較して、細胞増殖活性を低下させる試験物質を選択する段階。好ましい態様において、本発明の方法は、以下の段階をさらに含みうる:dWHSC1またはWHSC1L1を全くまたはほとんど発現していない細胞に対して影響を全くまたはほとんど及ぼさない試験物質を選択する段階。本発明のスクリーニング方法において検出される生物学的活性がメチルトランスフェラーゼ活性である場合、メチルトランスフェラーゼ活性は、基質のメチル化に適した条件下で、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを基質例えば、WHSC1の場合はLys-36を含むヒストンH3断片、WHSC1L1の場合はLys-4および/またはLys-27を含むヒストンH3断片KimSMetalBiochemBiophysResCommun2006Jun2334531823および補助因子例えばS-アデノシル-L-メチオニンと接触させ、基質のメチル化のレベルを検出することによって決定することができる。本発明において、メチルトランスフェラーゼ活性を用いたスクリーニング方法は、以下の[1]~[7]に記載の方法を包含する:[1]以下の段階を含む、がんを治療もしくは予防するため、またはがん細胞増殖を阻害するための候補物質をスクリーニングする方法:a試験物質の存在下で、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子にコードされるポリペプチドを基質および補助因子と接触させる段階;b段階aの基質のメチル化レベルを検出する段階;ならびにc試験物質の非存在下で検出されるメチル化レベルと比較して、基質のメチル化レベルを抑制する試験物質を選択する段階;[2]基質が、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドのための少なくとも1つのメチル化領域を含むヒストンまたはその断片である、[1]に記載の方法;[3]基質が、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドのための少なくとも1つのメチル化領域を含むヒストンH3またはその断片である、[2]に記載の方法;[4]メチル化領域が、ヒストンH3のリジン4、27、または36である、[3]に記載の方法;[5]補助因子がS-アデノシルメチオニンである、[1]~[4]のいずれか1つに記載の方法;[6]段階aがメチル化の促進剤の存在下で行われる、[1]~[5]のいずれか1つに記載の方法;および[7]メチル化の促進剤がS-アデノシルホモシステインヒドロラーゼSAHHである、[6]に記載の方法。本発明において、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドのメチルトランスフェラーゼ活性は、当技術分野において公知の方法によって決定することができる。例えば、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドおよび基質を、適切なアッセイ条件下で、標識されたメチル供与体と共にインキュベートすることができる。例えば、ヒストンH3ペプチド、およびS-アデノシル-[メチル-14C]-L-メチオニン、またはS-アデノシル-[メチル-3H]-L-メチオニンが、好ましくは、このような基質およびメチル供与体としてそれぞれ使用され得る。ヒストンH3ペプチドへの放射性標識物質の移動は、例えば、SDS-PAGE電気泳動およびフルオログラフィーによって検出することができる。あるいは、反応に続いて、ろ過によってヒストンH3ペプチドをメチル供与体から分離させ、フィルター上に保持された放射性標識物質の量をシンチレーション計数によって定量することもできる。メチル供与体に結合させることができる他の適切な標識、例えば、発色性標識および蛍光性標識、ならびにヒストンおよびヒストンペプチドへのこれらの標識の移動を検出する方法は、当技術分野において公知である。あるいは、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドのメチルトランスフェラーゼ活性は、未標識のメチル供与体例えばS-アデノシル-L-メチオニンおよびメチル化されたヒストンまたはヒストンペプチドを選択的に認識する試薬を用いて決定することもできる。例えば、基質のメチル化を可能にする条件下でのWHSC1またはWHSC1L1ポリペプチド、基質、およびメチル供与体のインキュベーション後に、メチル化された基質を免疫学的方法によって検出することができる。メチル化された基質を認識する抗体を用いた任意の免疫学的技術が、検出のために使用され得る。例えば、メチル化ヒストンに対する抗体が市販されているabcamLtd.。メチル化ヒストンを認識する抗体を用いたELISAまたはイムノブロッティングが、本発明のために使用され得る。本発明において、物質のメチル化の促進剤を使用することができる。SAHHまたはその機能的等価物は、メチル化の好ましい促進剤のうちの1つである。この剤は、物質のメチル化を促進し、それによって、より高感度でメチルトランスフェラーゼ活性を決定することができる。促進剤の存在下で、WHSC1またはWHSC1L1を基質および補助因子と接触させることができる。さらに、メチルトランスフェラーゼ活性を検出する本発明の方法は、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドを発現する細胞を調製し、試験物質の存在下で細胞を培養し、例えば、メチル化領域に特異的に結合する抗体を用いて、ヒストンのメチル化レベルを決定することによって、実施することができる。より具体的には、この方法は、以下の段階を含み得る:[1]試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1を発現する細胞と接触させる段階;[2]ヒストンH3のメチル化レベルを検出する段階;および[3]試験物質の非存在下で検出されるメチル化レベルと比較して、メチル化レベルを低下させる試験物質を選択する段階。あるいは、いくつかの態様において、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1の過剰発現に関連したがんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法も提供する:aヒストンH3のメチル化を可能にする条件下で、試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1を発現する細胞と接触させる段階;bヒストンH3のメチル化レベルを検出する段階;およびc潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、候補物質としての試験物質の非存在下で検出されるメチル化レベルと比較して、試験物質がヒストンH3のメチル化レベルを低下させる場合、潜在的治療効果が示される、段階。本明細書において定義される生物学的活性を抑制するとは、試験物質の非存在下での生物学的活性と比較して、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドの生物学的活性の、好ましくは少なくとも10の抑制、より好ましくは少なくとも25、50、または75の抑制、およびさらにより好ましくは90の抑制である。好ましい態様において、WHSC1およびWHSC1L1ポリペプチドのいずれかまたは両方を発現しない対照細胞が使用される。したがって、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1およびWHSC1L1ポリペプチドのいずれかもしくは両方またはその断片を用いて、WHSC1およびWHSC1L1のいずれかもしくは両方を過剰発現する細胞の増殖を阻害するための候補物質、またはWHSC1およびWHSC1L1のいずれかもしくは両方に関連した疾患を治療もしくは予防するための候補物質をスクリーニングする方法も提供する:a試験物質の存在下で、WHSC1およびWHSC1L1ポリペプチドのいずれかもしくは両方またはその機能的断片を発現する細胞、ならびにWHSC1およびWHSC1L1ポリペプチドのいずれかまたは両方もその機能的断片も発現しない対照細胞を培養する段階;bタンパク質を発現する細胞および対照細胞の生物学的活性を検出する段階;ならびにc対照細胞において、および前記試験物質の非存在下で検出される増殖と比較して、タンパク質を発現する細胞における生物学的活性を阻害する試験化合物を選択する段階。iiiWHSC1ポリペプチドとその結合タンパク質との間の結合を阻害する物質のスクリーニング:本発明によって、WHSC1ポリペプチドが、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドと相互に作用することが確認された。WHSC1ポリペプチドの発がんへの関与に加えて、これらのポリペプチドもまた発がんに関与していることが公知であるため、WHSC1ポリペプチドとこれらのポリペプチドとの間の相互作用は、がん細胞増殖にとって重要であるとみなされる。したがって、上記の相互作用を阻害する物質は、がん細胞の増殖および/または生存を阻害するのに有用であり、したがって、がんを治療または予防するのに有用であると予想される。したがって、本発明は、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、またはβ-カテニンポリペプチドとのWHSC1ポリペプチドの結合活性に基づいて、がんを治療または予防するための候補物質をスクリーニングする方法を提供する。本発明はまた、がん細胞の増殖および/または生存を阻害するための候補物質をスクリーニングする方法も提供する。具体的には、本発明のスクリーニング方法は、以下の段階を含む:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物をWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;b段階aの、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物とWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにc試験物質の非存在下で検出される結合と比較して、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物とWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。あるいは、本発明のスクリーニング方法は、以下の段階を含む:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物を、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;b段階aの、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにc試験物質の非存在下で検出される結合と比較して、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。本発明によって、がん細胞増殖の阻害に対する試験物質の治療効果、またはWHSC1に関連した疾患を治療もしくは予防するための候補物質を評価することができる。したがって、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物を用いて、細胞増殖を阻害するための候補物質もしくはWHSC1に関連した疾患を治療もしくは予防するための候補物質をスクリーニングする方法、またはWHSC1に関連した疾患に対する試験物質の治療効果を評価する方法も提供する:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物をWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;b段階aの、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物とWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにc段階bの結合と試験物質の治療効果との相関関係を明らかにする段階。あるいは、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物を用いて、WHSC1を過剰発現する細胞の増殖を阻害するための候補物質もしくはWHSC1に関連した疾患を治療もしくは予防するための候補物質をスクリーニングする方法、またはWHSC1に関連した疾患に対する試験物質の治療効果を評価する方法も提供する:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物を、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;b段階aの、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにc段階bの結合と試験物質の治療効果との相関関係を明らかにする段階。あるいは、いくつかの態様において、本発明はまた、以下の段階を含む、がんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法も提供する:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物を、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;b段階aの、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにc段階bで検出された結合レベルを、試験物質の非存在下で検出される結合レベルと比較する段階;ならびにd潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、試験物質が結合レベルを低下させる場合、潜在的治療効果が示される、段階。本発明において、治療効果は、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物に対する、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物の結合活性と相関関係があり得る。例えば、試験物質が、試験物質の非存在下で検出される結合活性と比較して、上記のポリペプチドに対するWHSC1ポリペプチドの結合活性を抑制または阻害する場合、その試験物質は、治療効果を有する候補物質として同定または選択され得る。あるいは、試験物質が、試験物質の非存在下で検出されるレベルと比較して、上記のポリペプチドに対するWHSC1ポリペプチドの結合活性を抑制も阻害もしない場合、その試験物質は、有意な治療効果を有さないものとして同定される。本発明の結果において、WHSC1ポリペプチドとIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物との結合活性を抑制することにより、がん細胞増殖を低減できることが示唆される。したがって、結合活性を抑制する候補物質をスクリーニングすることによって、がんを治療または予防する可能性を有する候補物質を同定することができる。これらの候補物質ががんを治療または予防する可能性は、がんに対する治療剤を同定するための二次的なスクリーニングおよび/またはさらなるスクリーニングによって評価することができる。本発明によって、WHSC1ポリペプチドが、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/またはβ-カテニンポリペプチドと相互作用することが見出された。したがって、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1ポリペプチドとIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/またはβ-カテニンポリペプチドとの間の結合を阻害する物質をスクリーニングする方法も提供する:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物をWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;bIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物とWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにc試験物質の非存在下で検出される結合と比較して、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチドまたはその機能的等価物とWHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。あるいは、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1ポリペプチドと、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つとの間の結合を阻害する物質をスクリーニングする方法も提供する:a試験物質の存在下で、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物を、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物と接触させる段階;bIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を検出する段階;ならびにc試験物質の非存在下で検出される結合と比較して、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つまたはその機能的等価物と、WHSC1ポリペプチドまたはその機能的等価物との間の結合を阻害する試験物質を選択する段階。本発明のスクリーニング方法で使用するためのIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、およびβ-カテニンポリペプチドは、それらのポリペプチドのアミノ酸配列データまたはそれらのポリペプチドをコードする遺伝子のヌクレオチド配列データに基づき、後述するような当技術分野において周知の方法によって調製することができる。IQGAP1IQmotifcontainingGTPaseactivatingprotein1providedは、IQGAPファミリーのメンバーである。IQGAP1ポリペプチドは190kDaのタンパク質であり、4個のIQドメイン、1個のカルポニン相同ドメイン、1個のRas-GAPドメイン、および1個のWWドメインを含む。これは、細胞骨格の構成要素と、細胞接着分子と、ならびに細胞の形態および運動性を調節するためのいくつかのシグナル伝達分子と相互作用する。IQGAP1ポリペプチドは、がん細胞の浸潤に関係している可能性が高い。IQGAP1遺伝子の典型的なヌクレオチド配列およびIQGAP1ポリペプチドの典型的なアミノ酸配列は、配列番号:39および配列番号:40にそれぞれ示す。これらの配列データはまた、GenBank商標アクセッション番号NM_003870によっても入手可能である。TIAM1T-celllymphomainvasionandmetastasis1は、マウスTリンパ腫細胞株において浸潤および転移を誘発する遺伝子として同定されている。TIAM1は、Rac特異的グアニンヌクレオチド交換因子であり、Rho様GTPアーゼRacを特異的に活性化する。TIAM1-Racシグナル伝達は、がん細胞の細胞遊走、浸潤、および転移に影響を及ぼす。TIAM1遺伝子の典型的なヌクレオチド配列およびIQGAP1ポリペプチドの典型的なアミノ酸配列は、配列番号:41および配列番号:42にそれぞれ示す。これらの配列データはまた、GenBank商標アクセッション番号NM_003253によっても入手可能である。AKT2v-aktmurinethymomaviraloncogenehomolog2は、SH2様Srchomology2-likeドメインを含むセリン/トレオニンキナーゼのサブファミリーに属するタンパク質をコードする推定上のがん遺伝子である。AKT2ポリペプチドは、いくつかの公知のタンパク質をリン酸化することができる一般的プロテインキナーゼである。AKT2遺伝子の典型的なヌクレオチド配列およびAKT2ポリペプチドの典型的なアミノ酸配列は、配列番号:43および配列番号:44にそれぞれ示す。これらの配列データはまた、GenBank商標アクセッション番号NM_001626によっても入手可能である。β-カテニンは、接着結合AJを構成するタンパク質の複合体の一部分である。β-カテニンは、Wnt/β-カテニンシグナル伝達経路に関与しており、Wnt/β-カテニンシグナル伝達経路の異常な活性化は、発がんを誘発するとみなされている。β-カテニン遺伝子の典型的なヌクレオチド配列およびβ-カテニンポリペプチドの典型的なアミノ酸配列は、配列番号:45、51、または52および配列番号:46にそれぞれ示す。これらの配列データはまた、GenBank商標アクセッション番号NM_001098209、NM_001098210、またはNM_001904によっても入手可能である。WHSC1ポリペプチドとIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/またはβ-カテニンポリペプチドとの間の結合を阻害する物質をスクリーニングする方法として、当業者に周知の多くの方法を使用することができる。あるいは、当業者に周知の多くの方法が、WHSC1ポリペプチドと、IQGAP1、TIAM1、AKT2、およびβ-カテニンからなる群より選択されるポリペプチドのうちの少なくとも1つとの間の結合を阻害する物質をスクリーニングするのに使用され得る。例えば、スクリーニングは、細胞系のようなインビトロのアッセイ系として実施することができる。より具体的には、最初にWHSC1ポリペプチド、またはIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチド、のいずれかを支持体に結合させ、かつ、他方のタンパク質を、試験物質と共にそれに添加する。次に、この混合物をインキュベートし、洗浄し、支持体に結合されたこの他方のタンパク質を検出および/または測定する。タンパク質を結合するのに使用され得る支持体の例には、例えば、アガロース、セルロース、およびデキストランなどの不溶性多糖;ならびにポリアクリルアミド、ポリスチレン、およびシリコンなどの合成樹脂が含まれ;好ましくは、上記の材料から調製された市販のビーズおよびプレート例えば、マルチウェルプレート、バイオセンサーチップなどが使用され得る。ビーズを使用する場合、カラム中にこれらを詰めることができる。あるいは、磁性ビーズの使用も当技術分野において公知であり、これにより、磁気を用いて、ビーズに結合されたタンパク質を容易に単離することが可能になる。支持体へのタンパク質の結合は、例えば化学的結合および物理的吸着などの日常的な方法に従って行うことができる。あるいは、タンパク質は、そのタンパク質を特異的に認識する抗体を介して支持体に結合され得る。さらに、支持体へのタンパク質の結合は、アビジンおよびビオチンを用いて行うこともできる。タンパク質間の結合は、好ましくは、緩衝液中で実施され、緩衝液の例には、リン酸緩衝液およびトリス緩衝液が含まれるがそれらに限定されるわけではない。しかしながら、選択される緩衝液は、タンパク質間の結合を阻害してはならない。本発明との関連において、表面プラズモン共鳴現象を使用するバイオセンサーが、結合されたタンパク質を検出または定量するための手段として使用され得る。このようなバイオセンサーが使用される場合、タンパク質間の相互作用は、ごくわずかな量のポリペプチドを用い、かつ標識せずに、表面プラズモン共鳴シグナルとしてリアルタイムで観察することができる例えば、BIAcore、Pharmacia。したがって、BIAcoreのようなバイオセンサーを用いてWHSC1ポリペプチドとIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/またはβ-カテニンポリペプチドとの間の結合を評価することが可能である。あるいは、WHSC1ポリペプチド、またはIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/もしくはβ-カテニンポリペプチド、のいずれかを標識することもでき、結合されたタンパク質の標識を用いて、結合されたタンパク質を検出または測定することができる。具体的には、これらのタンパク質のうちの1つを前標識した後、標識されたタンパク質を、試験物質の存在下でもう一方のタンパク質と接触させ、次いで、洗浄後に、結合されたタンパク質を標識に従って検出または測定する。放射性同位体例えば、3H、14C、32P、33P、35S、125I、131I、酵素例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、β-グルコシダーゼ、蛍光性物質例えば、フルオレセインイソチオシアナートFITC、ローダミン、およびビオチン/アビジンを非限定的に含む標識物質が、本発明の方法においてタンパク質を標識するために使用され得る。タンパク質が放射性同位体で標識される場合、検出または測定は、液体シンチレーションによって実施することができる。あるいは、酵素で標識されたタンパク質は、酵素の基質を添加して、色の生成のような基質の酵素的変化を吸光光度計で検出することによって、検出または測定することができる。さらに、蛍光性物質が標識として使用される場合は、蛍光光度計を用いて、結合されたタンパク質を検出または測定することができる。さらに、WHSC1ポリペプチドとIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/またはβ-カテニンポリペプチドとの間の結合はまた、そのポリペプチドに対する抗体を用いて検出または測定することもできる。例えば、支持体上に固定されたWHSC1ポリペプチドを試験物質ならびにIQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/またはβ-カテニンポリペプチドと接触させた後、この混合物をインキュベートおよび洗浄し、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、またはβ-カテニンポリペプチドに対する抗体を用いて、検出または測定を行うことができる。あるいは、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、および/またはβ-カテニンポリペプチドを支持体上に固定することもでき、WHSC1ポリペプチドに対する抗体を抗体として使用することができる。本発明のスクリーニングにおいて抗体を使用する場合、抗体は、好ましくは、前述の標識物質のうちの1つで標識され、その標識物質に基づいて検出または測定される。あるいは、WHSC1ポリペプチド、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、またはβ-カテニンポリペプチドに対する抗体を、標識物質で標識された2次抗体で検出するための1次抗体として使用することもできる。さらに、本発明のスクリーニングにおいてタンパク質に結合される抗体は、プロテインGカラムまたはプロテインAカラムを用いて検出または測定することもできる。本発明のスクリーニング方法において使用するためのポリペプチドは、標準的な手順を用いて組換えによって作製することができる。例えば、関心対象のポリペプチドをコードする遺伝子は、pSV2neo、pcDNAI、pcDNA3.1、pCAGGS、およびpCD8など外来遺伝子用の発現ベクター中にその遺伝子を挿入することによって、動物細胞において発現させることができる。発現用に使用するためのプロモーターは、一般に使用され得る任意のプロモーターでよく、例えば、SV40初期プロモーターRigbyWilliamsonGeneticEngineeringvol3AcademicPressLondon83141、EF-αプロモーターKimetalGene9121723、CAGプロモーターNiwaetalGene108193、RSVLTRプロモーターCullenMethodsinEnzymology152684704、SRαプロモーターTakebeetalMolCellBiol846672、CMV前初期プロモーターSeedandAruffoProcNatlAcadSciUSA8433659、SV40後期プロモーターGheysenandFiersJMolApplGenet138594、アデノウイルス後期プロモーターKaufmanetalMolCellBiol994658、HSVTKプロモーターなどが含まれる。外来遺伝子を発現させるための、動物細胞中への遺伝子の導入は、任意の従来の方法、例えば、エレクトロポレーション法ChuetalNucleicAcidsRes15131126、リン酸カルシウム法ChenandOkayamaMolCellBiol7274552、DEAEデキストラン法LopataetalNucleicAcidsRes12570717SussmanandMilmanMolCellBiol416413、リポフェクチン法DerijardBCell76102537LambetalNatureGenetics52230RabindranetalScience2592304などに従って実施することができる。ポリペプチドは、特異性が明らかにされているモノクローナル抗体のエピトープをポリペプチドのN末端またはC末端に導入することによって、モノクローナル抗体の認識部位エピトープを含む融合タンパク質として発現させることもできる。あるいは、市販のエピトープ-抗体系を使用することもできるExperimentalMedicine138590。マルチクローニング部位を用いることにより、例えば、β-ガラクトシダーゼ、マルトース結合タンパク質、グルタチオンS-トランスフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質GFPなどとの融合タンパク質を発現できるベクターが市販されている。融合によって元のポリペプチドの特性を変更しないように、数個~十数個のアミノ酸から構成される小さなエピトープのみを導入することによって調製された融合タンパク質もまた、本明細書において提供される。ポリヒスチジンHis-タグ、インフルエンザ凝集体HA、ヒトc-myc、FLAG、水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質VSV-GP、T7遺伝子10タンパク質T7-タグ、ヒト単純ヘルペスウイルス糖タンパク質HSV-タグ、E-タグモノクローナルファージ上のエピトープなどのエピトープおよびそれらを認識する抗体が、ポリペプチド間の結合活性を検出するためのエピトープ-抗体系として使用され得るExperimentalMedicine138590。本発明のスクリーニング方法において使用するための抗体は、当技術分野において周知の技術を用いて調製することができる。調製された抗体に対する抗原は、任意の動物種に由来してよいが、好ましくは、ヒト、マウス、ウサギ、またはラットなどの哺乳動物、より好ましくはヒトに由来する。抗原として使用されるポリペプチドは、組換えによって作製され得るか、または天然供給源から単離され得る。免疫化抗原として使用するためのポリペプチドは、完全なタンパク質または完全なタンパク質に由来する部分ペプチドでよい。任意の哺乳動物を抗原で免疫化することができる;しかしながら、好ましくは、細胞融合に使用される親細胞との適合性が考慮に入れられる。一般に、げっ歯目Rodentia、ウサギ目Lagomorpha、または霊長目Primateの動物が使用される。げっ歯目の動物には、例えば、マウス、ラット、およびハムスターが含まれる。ウサギ目の動物には、例えば、野ウサギ、ナキウサギ、およびウサギが含まれる。霊長目の動物には、例えば、カニクイザルMacacafascicularis、アカゲザル、マントヒヒ、およびチンパンジーなどの狭鼻下目Catarrhiniのサル旧世界ザルが含まれる。動物を抗原で免疫化するための方法は、当技術分野において周知である。抗原の腹腔内注射または皮下注射は、哺乳動物を免疫化するための標準的な方法である。より具体的には、抗原は、適切な量のリン酸緩衝化生理食塩水PBS、生理食塩水などにおいて希釈および懸濁させることができる。望ましければ、抗原懸濁液を、適切な量のフロイント完全アジュバントのような標準的アジュバントと混合し、エマルジョンにし、次いで哺乳動物に投与することができる。好ましくは、それに続いて、適切な量のフロイント不完全アジュバントと混合した抗原を4日~21日毎に数回投与する。適切な担体もまた、免疫化のために使用され得る。前述の免疫化の後、血清を、標準的な方法により、所望の抗体の量の増加に関して検査する。ポリクローナル抗体は、血清中の所望の抗体の増加に関して検査した免疫化哺乳動物から血液を採取することによって、かつ任意の従来の方法によってその血液から血清を分離することによって、調製することができる。ポリクローナル抗体には、ポリクローナル抗体を含む血清、ならびに血清から単離されたポリクローナル抗体を含む画分が含まれる。免疫グロブリンGまたはMは、例えば、目的のポリペプチドと結合されたアフィニティーカラムを用いて、このポリペプチドのみを認識する画分から調製することができ、かつプロテインAカラムまたはプロテインGカラムを用いてこの画分をさらに精製することができる。モノクローナル抗体を調製するために、前述したように抗原で免疫化し、かつ血清中の所望の抗体のレベル上昇を確認した哺乳動物から免疫細胞を採取し、それらを細胞融合に供する。細胞融合のために使用される免疫細胞は、好ましくは脾臓から得られる。上記の免疫細胞と融合させるための他の好ましい親細胞には、例えば、哺乳動物の骨髄腫細胞、およびより好ましくは、融合された細胞を薬物によって選択するための後天的性質を有する骨髄腫細胞が含まれる。上記の免疫細胞および骨髄腫細胞は、公知の方法、例えば、Milsteinらの方法GalfreandMilsteinMethodsEnzymol73346に従って融合することができる。細胞融合により得られる、結果として生じるハイブリドーマは、HAT培地ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含む培地のような標準的な選択培地中でそれらを培養することによって選択することができる。細胞培養は、典型的には、HAT培地中で数日間~数週間、すなわち、所望のハイブリドーマを除く他の細胞非融合細胞すべてを死滅させるのに充分な期間、継続する。次いで、標準的な限界希釈を実施して、所望の抗体を産生するハイブリドーマ細胞をスクリーニングおよびクローニングする。ハイブリドーマを調製するために非ヒト動物を抗原で免疫化する上記の方法のほかに、EBウイルスに感染されたもののようなヒトリンパ球をインビトロで、抗原、そのような抗原を発現する細胞、またはそれらの溶解物で免疫化してもよい。次いで、免疫化されたリンパ球を、U266のような無期限に分裂することができるヒト由来骨髄腫細胞と融合させて、抗原に結合できる所望のヒト抗体を産生するハイブリドーマを得る日本特許公開特許公報特開昭JP-A63-17688号。得られたハイブリドーマをマウスの腹腔中に続いて移植することができ、腹水を取り出すことができる。得られたモノクローナル抗体は、例えば、硫酸アンモニウム沈殿法、プロテインAカラムもしくはプロテインGカラム、DEAEイオン交換クロマトグラフィー、または目的の抗原を担持するアフィニティーカラムによって、精製することができる。WHSC1ポリペプチド、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、またはβ-カテニンポリペプチドに対する抗体は、本発明のスクリーニング方法においてだけでなく、がんを診断するための方法において説明したように生物学的試料中のがんマーカーとしてのポリペプチドの検出にも使用され得る。それらはさらに、関心対象のポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストの候補にもなり得る。さらに、アンタゴニストの候補となるこのような抗体は、後述するように、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍を含む、WHSC1ポリペプチドに関係した疾患の抗体治療に適用することもできる。このようにして得られるモノクローナル抗体は、遺伝子工学技術を用いて組換えによって調製することもできる例えば、MacMillanPublishersLTDによって英国で出版されたBorrebaeckandLarrickTherapeuticMonoclonalAntibodiesを参照されたい。例えば、ある抗体をコードするDNAを、その抗体を産生するハイブリドーマまたは免疫化リンパ球などの免疫細胞からクローニングし、適切なベクター中に挿入し、かつ宿主細胞中に導入して、組換え抗体を調製することができる。このような組換え抗体は、本発明のスクリーニングにおいても使用することができる。さらに、スクリーニングなどにおいて使用される抗体は、元の結合活性を保持している限り、抗体の断片または修飾抗体であることができる。例えば、抗体断片は、Fab、Fab2、Fv、または単鎖FvscFvH鎖およびL鎖に由来するFv断片が適切なリンカーによって連結されているでよいHustonetalProcNatlAcadSciUSA85587983。より具体的には、抗体断片は、パパインまたはペプシンなどの酵素で抗体を処理することによって作製することができる。あるいは、抗体断片をコードする遺伝子を構築し、発現ベクター中に挿入し、適切な宿主細胞中で発現させることもできる例えば、CoetalJImmunol152296876BetterおよびHorwitzMethodsEnzymol17847696PluckthunおよびSkerraMethodsEnzymol178497515LamoyiMethodsEnzymol12165263RousseauxetalMethodsEnzymol1216639BirdandWalkerTrendsBiotechnol91327を参照されたい。抗体は、ポリエチレングリコールPEGのような様々な分子と結合させることによって修飾することができる。修飾抗体は、抗体を化学的に修飾することによって得ることができる。これらの修飾方法は、当技術分野において慣習的である。前述のようにして得られた抗体を、均一になるまで精製することができる。例えば、抗体の分離および精製は、一般のタンパク質に対して使用される分離方法および精製方法に従って実施することができる。例えば、抗体は、適切に選択し、かつ組み合わせられた、アフィニティークロマトグラフィーのようなカラムクロマトグラフィー、ろ過、限外ろ過、塩析、透析、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動、および等電点電気泳動などによって、分離および単離することができるAntibodiesALaboratoryManualEdHarlowandDavidLaneColdSpringHarborLaboratory。しかしながら、本発明はこれらに限定されるわけではない。プロテインAカラムおよびプロテインGカラムをアフィニティーカラムとして使用することができる。使用され得る例示的なプロテインAカラムには、例えば、HyperD、POROS、およびセファロースF.F.Pharmaciaが含まれる。アフィニティークロマトグラフィーを別として、例示的なクロマトグラフィーには、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲルろ過、逆相クロマトグラフィー、および吸着クロマトグラフィーなどが含まれるStrategiesforProteinPurificationandCharacterizationALaboratoryCourseManualEdDanielRMarshaketalColdSpringHarborLaboratoryPress。クロマトグラフィー処置は、HPLCおよびFPLCなどの液相クロマトグラフィーによって実施することができる。あるいは、細胞を使用するツーハイブリッドシステムを、ポリペプチド間の結合活性を検出または測定するのに使用することもできるMATCHMAKERTwo-Hybridsystem、MammalianMATCHMAKERTwo-HybridAssayKit、MATCHMAKERone-HybridsystemClontech;HybriZAPTwo-HybridVectorSystemStratagene;参考文献DaltonandTreismanCell68597612、FieldsandSternglanzTrendsGenet1028692。ツーハイブリッドシステムでは、例えば、WHSC1ポリペプチドは、SRF結合領域またはGAL4結合領域に融合されており、酵母細胞において発現される。IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチド、またはβ-カテニンポリペプチドは、VP16またはGAL4転写活性化領域に融合され、同様に、試験物質の存在下で酵母細胞において発現される。あるいは、IQGAP1ポリペプチド、TIAM1ポリペプチド、AKT2ポリペプチドポリペプチド、またはβ-カテニンポリペプチドがSRF結合領域またはGAL4結合領域に融合されてもよく、WHSC1ポリペプチドがVP16またはGAL4転写活性化領域に融合されてもよい。2種のポリペプチドの結合によりレポーター遺伝子が活性化されて、陽性クローンが検出可能になる。レポーター遺伝子としては、HIS3遺伝子に加えて、例えば、Ade2遺伝子、lacZ遺伝子、CAT遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子などが使用され得る。2遺伝子発現に基づいたスクリーニング:iWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を変更する物質のスクリーニング:本発明において、siRNAによってWHSC1またはWHSC1L1の発現を低減させると、がん細胞増殖が阻害される図4。したがって、本発明は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する物質をスクリーニングする方法を提供する。WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する物質は、がん細胞の増殖を抑制すると予想され、したがって、がんを治療または予防するのに有用である。例えば、WHSC1の発現を阻害する物質は、限定されるわけではないが、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍を含むがんを治療または予防するための候補治療剤であり得る。また、WHSC1L1の発現を阻害する物質は、限定されるわけではないが、膀胱癌、乳癌、CML、肺癌例えばSCLC、およびリンパ腫を含むがんを治療または予防するための候補治療剤であり得る。したがって、本発明はまた、がん細胞の増殖を抑制する物質をスクリーニングするための方法、およびがんを治療または予防するための候補物質をスクリーニングするための方法も提供する。本発明との関連において、このようなスクリーニング方法は、例えば、以下の段階を含み得る:a試験物質を、WHSC1およびWHSC1L1遺伝子のいずれかまたは両方を発現する細胞と接触させる段階;bWHSC1遺伝子の発現レベルもしくはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を検出する段階;およびb試験物質の非存在下で検出される発現レベルと比較して、WHSC1遺伝子の発現レベルもしくはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を低下させる試験物質を選択する段階。あるいは、いくつかの態様において、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1の過剰発現に関連したがんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法も提供する:a試験物質を、WHSC1およびWHSC1L1遺伝子のいずれかまたは両方を発現する細胞と接触させる段階;ならびにb潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、物質が対照と比較して、WHSC1遺伝子の発現レベルもしくはWHSC1L1遺伝子の発現レベルのいずれかまたは両方を低下させる場合、潜在的治療効果が示される、段階。本発明の方法を、以下により詳細に説明する。WHSC1遺伝子を発現する細胞には、例えば、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍から樹立された細胞株が含まれる。また、WHSC1L1遺伝子を発現する細胞には、例えば、膀胱癌、乳癌、CML、肺癌例えばSCLC、およびリンパ腫から樹立された細胞株が含まれる。このような細胞は、前述した本発明のスクリーニングのために使用され得る。WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルは、当業者に周知の方法、例えば、RT-PCR、ノーザンブロットアッセイ、ウェスタンブロットアッセイ、免疫染色、およびフローサイトメトリー解析によって推定することができる。本明細書において定義する発現レベルの低下とは、物質の非存在下での発現レベルと比べて、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルの好ましくは少なくとも10の低下、より好ましくは少なくとも25、50、または75のレベル低下、およびさらにより好ましくは少なくとも95のレベル低下である。本明細書における物質には、化学物質、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子に対する二本鎖分子例えばsiRNA、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子に対するアンチセンス核酸などが含まれる。二本鎖ヌクレオチドの調製方法は、以下の項において説明する。本発明のスクリーニング方法において、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを低下させる物質を、がんの治療または予防に使用するための候補物質として選択することができる。あるいは、本発明のスクリーニング方法は、以下の段階を含み得る:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の転写調節領域およびその転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子を含むベクターが導入された細胞と接触させる段階;b該レポーター遺伝子の発現レベルまたは活性レベルを測定する段階;ならびにc試験物質の非存在下で検出される発現または活性と比較して、該レポーター遺伝子の発現または活性を低下させる試験物質を選択する段階。あるいは、いくつかの態様において、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1の過剰発現に関連したがんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法も提供する:a試験物質を、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の転写調節領域およびその転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子を含むベクターが導入された細胞と接触させる段階;b該レポーター遺伝子の発現または活性を測定する段階;ならびにc潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、試験物質が該レポーター遺伝子の発現または活性を低下させる場合、潜在的治療効果が示される、段階。好適なレポーター遺伝子および宿主細胞は、当技術分野で周知である。例えば、レポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質GFP、イソギンチャクモドキ属の一種Discosomasp.の赤色蛍光タンパク質DsRed、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼCAT、lacZ、およびβグルクロニダーゼGUSが含まれ、宿主細胞はCOS7、HEK293、HeLa等を含む。スクリーニングに必要とされるレポーター構築物は、レポーター遺伝子配列をWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の転写調節領域と接続することにより調製され得る。本明細書中のWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の転写調節領域は、転写開始部位から少なくとも500bp上流、好ましくは1,000bp、より好ましくは5,000bpまたは10,000bp上流までの領域である。転写調節領域を含有しているヌクレオチドセグメントは、ゲノムライブラリから単離されてもよいし、またはPCRによって増幅させられてもよい。スクリーニングに必要とされるレポーター構築物は、レポーター遺伝子配列をこれらの遺伝子のいずれか1つの転写調節領域と接続することにより調製され得る。転写調節領域を同定するための方法、およびアッセイプロトコルも周知であるMolecularCloningthirdeditionchapter172001ColdSpringsHarborLaboratoryPress。レポーター構築物を含有しているベクターを、宿主細胞に導入し、レポーター遺伝子の発現または活性を、当技術分野で周知の方法により例えば、ルミノメーター、吸光度計、フローサイトメーター等を使用して検出する。本明細書中で定義される発現または活性を低下させるとは、レポーター遺伝子の発現または活性の、物質の非存在下と比較した、好ましくは少なくとも10の低下、より好ましくは少なくとも25、50、または75の低下、およびさらにより好ましくは少なくとも95の低下である。iWHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドに結合するか;iiWHSC1もしくはWHSC1L1ポリペプチドの生物学的活性例えば、細胞増殖活性もしくはメチルトランスフェラーゼ活性を抑制/低減させるか;またはiiiWHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを低下させる試験物質をスクリーニングすることによって、がん例えば、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫を治療または予防する潜在能力を有する候補物質を同定することができる。これらの候補物質ががんを治療または予防する潜在能力は、がんに対する治療的物質を同定するための二次的なスクリーニングおよび/またはさらなるスクリーニングによって評価することができる。例えば、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドに結合する物質が、WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドの前述の活性を阻害する場合、このような物質は、WHSC1および/またはWHSC1L1の過剰発現に関連したがんに対して特異的な治療効果を有すると結論付けることができる。本発明において、WHSC1によって調節される下流遺伝子が同定された。siRNAによってWHSC1発現レベルを抑制するとがん細胞増殖が阻害されたように、WHSC1ポリペプチドは、発がんに関係する経路に関与している。したがって、下流遺伝子の発現レベルを調節する物質は、がんを治療または予防するのに有用であり得る。したがって、本発明はまた、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍などのがんを治療または予防するための候補物質をスクリーニングする方法も提供する。1つの態様において、がんを治療または予防するための候補物質をスクリーニングする方法は、以下の段階を含み得る:a試験物質を、WHSC1およびWHSC1の下流遺伝子を発現する細胞と接触させる段階;ならびにb候補物質の非存在下で検出される発現レベルと比較して、WHSC1の下流遺伝子の発現レベルを低下させる物質を選択する段階。あるいは、いくつかの態様において、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1の過剰発現に関連したがんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法も提供する:a試験物質を、WHSC1およびWHSC1の下流遺伝子を発現する細胞と接触させる段階;ならびにb潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、物質が対照と比較して、WHSC1の下流遺伝子の発現レベルを低下させる場合、潜在的治療効果が示される、段階。さらに、本発明において、表8に示す遺伝子が、WHSC1によって調節される下流遺伝子として同定された。したがって、本発明の方法において発現レベルに基づいて検出され得る下流遺伝子は、表8で説明する1種または複数種の遺伝子であり得る。例えば、CCND1の発現は、WHSC1発現の調節によって調節されることが確認された図6。したがって、本発明は、以下の段階を含む、がんを治療または予防するための候補物質をスクリーニングする方法を提供する:a試験物質を、WHSC1およびCCND1を発現する細胞と接触させる段階;ならびにb試験物質の非存在下で検出される発現レベルと比較して、CCND1の発現レベルを低下させる試験物質を選択する段階。あるいは、いくつかの態様において、本発明はまた、以下の段階を含む、WHSC1の過剰発現に関連したがんの治療または予防に対する試験物質の治療効果を評価または推定するための方法も提供する:a試験物質を、WHSC1およびCCND1を発現する細胞と接触させる段階;ならびにb潜在的治療効果と試験物質の相関関係を明らかにする段階であって、物質が対照と比較して、CCND1の発現レベルを低下させる場合、潜在的治療効果が示される、段階。CCND1遺伝子の発現レベルは、CCND1のヌクレオチド配列および/またはアミノ酸配列のデータを用いて、前述した方法がんを診断するための方法を参照されたいのような当技術分野において周知の方法によって検出することができる。CCND1の典型的なヌクレオチド配列は配列番号:47に示し、典型的なアミノ酸配列は配列番号:48に示す。これらの配列データはまた、GenBankアクセッション番号NM_053056によっても入手可能である。二本鎖分子:本明細書で使用される場合、単離二本鎖分子という用語は標的遺伝子の発現を阻害する核酸分子を意味し、例えば低分子干渉RNAsiRNA、例えば二本鎖RNAdsRNAまたは低分子ヘアピンRNAshRNAおよび低分子干渉DNA/RNAsiD/R-NA、例えばDNAとRNAとの二本鎖キメラdsD/R-NAまたはDNAとRNAとの低分子ヘアピンキメラshD/R-NAを含む。本明細書で使用される場合、標的配列とは、その遺伝子を発現している細胞中に二本鎖分子が導入された場合に標的遺伝子の完全mRNAの翻訳の抑制をもたらすであろう、標的遺伝子のmRNA配列内またはcDNA配列内のヌクレオチド配列である。標的遺伝子のmRNA配列内またはcDNA配列内のヌクレオチド配列は、標的配列に対応する配列を有する二本鎖分子が、その遺伝子を発現している細胞において、その遺伝子の発現を阻害する場合、標的配列であると決定され得る。標的配列がcDNA配列によって示される場合、二本鎖cDNAのセンス鎖配列、すなわち、mRNA配列がDNA配列へと変換された配列が、標的配列を定義するために使用される。二本鎖分子は、標的配列に対応する配列を有するセンス鎖と、標的配列の相補配列を有するアンチセンス鎖とから構成され、アンチセンス鎖は、相補配列においてセンス鎖とハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する。本明細書において、~に対応するとは、標的配列を、二本鎖分子のセンス鎖を構成する核酸の種類へ変換することを意味する。例えば、標的配列がDNA配列で示され、二本鎖分子のセンス鎖がRNA領域を有する場合、RNA領域内の塩基tは塩基uに交換される。他方、標的配列がRNA配列で示され、二本鎖分子のセンス鎖がDNA領域を有する場合、DNA領域内の塩基uはtに交換される。例えば、標的配列が配列番号:29、32、35、または38で示されるDNA配列であり、二本鎖分子のセンス鎖がRNAから構成される場合、標的配列に対応する配列は、CAGAUCUACACAGCGGAUA配列番号:29の場合、GUUAAUUGGCAUAUGGAAU配列番号:32の場合、CUCACAAAUGGGUAUCCAU配列番号:35の場合、またはGUACUGAAAUUCGGAGACA配列番号:38の場合である。また、二本鎖分子のアンチセンス鎖についての標的配列に対する相補配列は、アンチセンス鎖を構成する核酸の種類により定義され得る。例えば、標的配列が配列番号:29、32、35、または38で示されるDNA配列であり、二本鎖分子のアンチセンス鎖がRNAから構成される場合、標的配列に対する相補配列は、UAUCCGCUGUGUAGAUCUG配列番号:29の場合、AUUCCAUAUGCCAAUUAAC配列番号:32の場合、AUGGAUACCCAUUUGUGAG配列番号:35の場合、またはUGUCUCCGAAUUUCAGUAC配列番号:38の場合である。二本鎖分子は、標的配列に対応する配列およびその相補配列に加えて、2~5ヌクレオチド長の1個もしくは2個の3オーバーハング例えば、uu、および/またはヘアピン構造を形成するためのセンス鎖とアンチセンス鎖とを連結するループ配列を有し得る。本明細書で使用される場合、siRNAという用語は、標的mRNAの翻訳を防ぐ二本鎖RNA分子をさす。DNAが、RNAが転写される鋳型である技術を含む、siRNAを細胞に導入する標準的な技術が用いられる。あるいは、siRNAは、処置すべき細胞に直接導入してもよい。対象にsiRNAを導入する方法は、当技術分野において周知である。例えば、送達物質と併用したsiRNAの投与は、siRNAの導入に好ましい。siRNAは、WHSC1またはWHSC1L1のセンス核酸配列センス鎖とも称される、WHSC1またはWHSC1L1のアンチセンス核酸配列アンチセンス鎖とも称される、またはその両方を含む。単一の転写産物が、標的遺伝子のセンス核酸配列および相補的なアンチセンス核酸配列の両方、例えばヘアピンを有するように、siRNAを構築してもよい。siRNAはdsRNAまたはshRNAのいずれであってもよい。本明細書で使用される場合、dsRNAという用語は、互いに相補的な配列から構成され、かつその相補的な配列を介して共にアニーリングして二本鎖RNA分子を形成している、2つのRNA分子の構築物をさす。2つの鎖のヌクレオチド配列は、標的遺伝子配列のタンパク質コード配列から選択されるセンスまたはアンチセンスRNAだけでなく、標的遺伝子の非コード領域から選択されるヌクレオチド配列を有するRNA分子も含み得る。本明細書で使用される場合、shRNAという用語は、互いに相補的である第1および第2の領域、すなわちセンス鎖およびアンチセンス鎖から構成される、ステム-ループ構造を有するsiRNAをさす。該領域の相補性および配向性の程度は、塩基の対合が領域間で起こるのに十分であり、第1および第2の領域はループ領域によって連結し、該ループは、ループ領域内のヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体間の塩基対合の欠如によって生じる。shRNAのループ領域は、センス鎖とアンチセンス鎖との間に介在する一本鎖領域であり、介在一本鎖とも称され得る。本明細書で使用される場合、siD/R-NAという用語は、RNAおよびDNAの両方から構成される二本鎖ポリヌクレオチド分子を意味し、RNAおよびDNAのハイブリッドおよびキメラを含み、標的mRNAの翻訳を防ぐ。本明細書において、ハイブリッドは、DNAから構成されるポリヌクレオチドとRNAから構成されるポリヌクレオチドとが互いにハイブリダイズして二本鎖分子を形成する分子を示し、キメラは、二本鎖分子を含む鎖の一方または両方がRNAおよびDNAを含有し得ることを示す。siD/R-NAを細胞に導入する標準的な技術が用いられる。siD/R-NAは、WHSC1またはWHSC1L1のセンス核酸配列センス鎖とも称される、WHSC1またはWHSC1L1のアンチセンス核酸配列アンチセンス鎖とも称される、またはその両方を含む。単一の転写産物が、標的遺伝子由来のセンス核酸配列および相補的なアンチセンス核酸配列の両方、例えばヘアピンを有するように、siD/R-NAを構築してもよい。siD/R-NAはdsD/R-NAまたはshD/R-NAのいずれであってもよい。本明細書で使用される場合、標的配列のセンス鎖とは、ある遺伝子を発現している細胞へ本発明の二本鎖核酸分子が導入された場合に完全mRNAの翻訳の抑制をもたらすであろう、その遺伝子のmRNA配列内またはcDNA配列内のヌクレオチド配列である。遺伝子のmRNA配列内またはcDNA配列内のヌクレオチド配列は、標的配列に対応する配列を含む二本鎖ポリヌクレオチドが、その遺伝子を発現している細胞において、その遺伝子の発現を阻害する場合、標的配列であると決定され得る。遺伝子発現を抑制する二本鎖ポリヌクレオチドは、標的配列と、2~5ヌクレオチド長の3オーバーハング例えば、uuとからなり得る。本明細書で使用される場合、dsD/R-NAという用語は、互いに相補的な配列から構成され、かつ該相補的な配列を介して共にアニーリングして二本鎖ポリヌクレオチド分子を形成している、2つの分子の構築物をさす。2つの鎖のヌクレオチド配列は、標的遺伝子配列のタンパク質コード配列から選択されるセンスまたはアンチセンスポリヌクレオチド配列だけでなく、標的遺伝子の非コード領域から選択されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドも含み得る。dsD/R-NAを構築する2つの分子の一方または両方が、RNAおよびDNAの両方から構成されるかキメラ分子、またはもう1つの選択肢として分子の一方がRNAから構成され、もう一方がDNAから構成されるハイブリッド二本鎖。本明細書で使用される場合、shD/R-NAという用語は、互いに相補的である第1および第2の領域、すなわちセンス鎖およびアンチセンス鎖から構成される、ステム-ループ構造を有するsiD/R-NAをさす。該領域の相補性および配向性の程度は、塩基の対合が領域間で起こるのに十分であり、第1および第2の領域はループ領域によって連結し、該ループは、ループ領域内のヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体間の塩基対合の欠如によって生じる。shD/R-NAのループ領域は、センス鎖とアンチセンス鎖との間に介在する一本鎖領域であり、介在一本鎖とも称され得る。本明細書で使用される場合、単離核酸は、その元の環境例えば、天然物の場合は自然環境から取り出した核酸であり、したがって、その自然状態から合成的に変化させた核酸である。本発明において、単離核酸の例としてはDNA、RNA、およびその誘導体が挙げられる。標的mRNAにハイブリダイズする、WHSC1またはWHSC1L1に対する二本鎖分子は、遺伝子の通常一本鎖であるmRNA転写物と結合し、それにより、翻訳に干渉し、したがって、タンパク質の発現を阻害することにより、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子によってコードされるWHSC1またはWHSC1L1タンパク質の産生を減少させるかまたは阻害する。本明細書中で証明される通り、いくつかのがん細胞株におけるWHSC1またはWHSC1L1の発現はdsRNAによって阻害された図4。したがって、本発明は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に、その遺伝子の発現を阻害することができる単離された二本鎖分子を提供する。二本鎖分子の標的配列は、後述されるものなどのsiRNA設計アルゴリズムによって設計され得る。WHSC1遺伝子についての標的配列は、例えば配列番号:29および32のヌクレオチド配列を含み、標的配列は、例えば配列番号:35および38のヌクレオチド配列を含む。具体的には、本発明は、以下の[1]~[18]に記載の二本鎖分子を提供する:[1]互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とから構成され、細胞に導入された場合にWHSC1またはWHSC1L1のインビボ発現および細胞増殖を阻害する、単離された二本鎖分子;[2]配列番号:29、32、35、または38の標的配列にマッチするmRNAに対して作用する、[1]に記載の二本鎖分子;[3]センス鎖が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応するヌクレオチド配列を含有している、[1]に記載の二本鎖分子;[4]約100ヌクレオチド未満の長さを有する、[3]に記載の二本鎖分子;[5]約75ヌクレオチド未満の長さを有する、[4]に記載の二本鎖分子;[6]約50ヌクレオチド未満の長さを有する、[5]に記載の二本鎖分子;[7]約25ヌクレオチド未満の長さを有する、[6]に記載の二本鎖分子;[8]約19~約25ヌクレオチドの長さを有する、[7]に記載の二本鎖分子;[9]介在一本鎖により連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を有する単一ポリヌクレオチドから構成される、[1]~[8]のいずれか1つに記載の二本鎖分子;[10]一般式:5-[A]-[B]-[A]-3または5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含むセンス鎖であり、[B]は3個~23個のヌクレオチドから構成される介在一本鎖であり、[A]は[A]と相補的な配列を含むアンチセンス鎖であるを有する、[9]に記載の二本鎖分子;[11]RNAから構成される、[1]~[10]のいずれか1つに記載の二本鎖分子;[12]DNAおよびRNAの両方から構成される、[1]~[10]のいずれか1つに記載の二本鎖分子;[13]DNAポリヌクレオチドとRNAポリヌクレオチドとのハイブリッドである、[12]に記載の二本鎖分子;[14]センス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれDNAおよびRNAから構成される、[13]に記載の二本鎖分子;[15]DNAとRNAとのキメラである、[12]に記載の二本鎖分子;[16]アンチセンス鎖の3末端に隣接する領域、またはセンス鎖の5末端に隣接する領域およびアンチセンス鎖の3末端に隣接する領域の両方がRNAである、[15]に記載の二本鎖分子;[17]隣接領域が9個~13個のヌクレオチドから構成される、[16]に記載の二本鎖分子;ならびに[18]1つまたは2つの3オーバーハングを含有する、[2]に記載の二本鎖分子。本発明の二本鎖分子は以下でより詳細に説明される。細胞において標的遺伝子の発現を阻害する能力がある二本鎖分子を設計する方法が知られている例えば米国特許第6,506,559号その全体が参照により本明細書に組み入れられるを参照されたい。例えば、siRNAを設計するためのコンピュータプログラムは、Ambionのウェブサイトから入手可能であるwww.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html。コンピュータプログラムは、以下のプロトコルに基づき、二本鎖分子に対する標的ヌクレオチド配列を選択する。標的部位の選択:1.転写産物のAUG開始コドンから始めて、AAジヌクレオチド配列について下流を探索する。潜在的なsiRNA標的部位として、それぞれのAAの存在とその3側に隣接した19個のヌクレオチドとを記録する。Tuschletal.は、5および3非翻訳領域UTRおよび開始コドン近くの領域75塩基以内に対してsiRNAを設計することを避けることを推奨している。これは、これらの領域に調節タンパク質結合部位がより多く存在する可能性があり、UTR結合タンパク質および/または翻訳開始複合体が、siRNAエンドヌクレアーゼ複合体の結合に干渉する可能性があるためである。2.潜在的な標的部位と、適当なゲノムデータベースヒト、マウス、ラット等とを比較し、他のコード配列との相同性が大きい任意の標的配列を考慮から外す。基本的には、ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/でのNCBIサーバーにあるBLASTを用いるAltschulSFetalNucleicAcidsRes1997Sep1253389402。3.合成のために適格である標的配列を選択する。評価するために、遺伝子の長さに沿って標的配列をいくつか選択するのが一般的である。上記のプロトコルを使用して、本発明の単離二本鎖分子の標的配列を、以下のように設計した。WHSC1遺伝子に関して、配列番号:29または32、およびWHSC1L1遺伝子に関して、配列番号:35または38。上述の標的配列を標的とする二本鎖分子をそれぞれ、標的遺伝子を発現する細胞の増殖を抑制する能力について調査した。したがって、本発明はWHSC1遺伝子に関して、配列番号:29または32の配列、WHSC1L1遺伝子に関して、配列番号:35または38の配列を標的とする二本鎖分子を提供する。本発明の二本鎖分子は単一の標的WHSC1またはWHSC1L1遺伝子配列を対象としてもよく、または複数の標的WHSC1またはWHSC1L1遺伝子配列を対象としてもよい。WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の前記標的配列を標的とする本発明の二本鎖分子には、標的配列に対応する核酸配列、および/または標的配列の相補配列を含有している、単離されたポリヌクレオチドが含まれる。WHSC1遺伝子を標的とするポリヌクレオチドの例には、配列番号:29もしくは32の標的配列に対応する配列、および/またはそのような標的配列の相補配列を含有しているものが含まれる。また、WHSC1L1遺伝子を標的とするポリヌクレオチドの例には、配列番号:35もしくは38の標的配列に対応する配列、および/またはそのような標的配列の相補配列を含有しているものが含まれる。一態様において、二本鎖分子は二本のポリヌクレオチドから構成され、一方のポリヌクレオチドは、標的配列に対応する配列、すなわち、センス鎖を有し、もう一方のポリペプチドは、標的配列の相補配列、すなわち、アンチセンス鎖を有する。このセンス鎖ポリヌクレオチドおよびアンチセンス鎖ポリヌクレオチドは、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する。そのような二本鎖分子の例には、dsRNAおよびdsD/R-NAが含まれる。別の態様において、二本鎖分子は、標的配列に対応する配列、すなわち、センス鎖と、標的配列の相補配列、すなわち、アンチセンス鎖との両方を有するポリヌクレオチドから構成される。一般に、センス鎖およびアンチセンス鎖は、介在鎖によって連結されており、互いにハイブリダイズすることでヘアピンループ構造を形成する。そのような二本鎖分子の例には、shRNAおよびshD/R-NAが含まれる。換言すると、本発明の二本鎖分子は、標的配列のヌクレオチド配列を有するセンス鎖ポリヌクレオチドと、標的配列に相補的なヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖ポリヌクレオチドとから構成されており、両ポリヌクレオチドが互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する。これらのポリヌクレオチドを含む二本鎖分子において、鎖の一方または両方のポリヌクレオチドの一部分はRNAであり得、標的配列がDNA配列により定義される場合、標的配列内およびその相補配列内のヌクレオチドtは、uに交換される。本発明の1つの態様において、本発明のそのような二本鎖分子は、センス鎖およびアンチセンス鎖から構成されるステムループ構造を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖はループによって連結されていてよい。従って、本発明は、介在一本鎖によって連結されているかまたは介在一本鎖に隣接しているセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を含有している単一のポリヌクレオチドから構成された二本鎖分子も提供する。本発明において、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を標的とする二本鎖分子は、配列番号:29、32、35、および38の中から選択される配列を標的配列として有し得る。好ましい態様において、標的配列は配列番号:29、32、35、または38の配列である。従って、本発明の二本鎖分子の好ましい例は、配列番号:29、32、35、または38に対応する配列およびそれらの相補配列において互いにハイブリダイズするポリヌクレオチド、ならびに配列番号:29、32、35、または38に対応する配列およびそれらの相補配列を有するポリヌクレオチドを含む。しかしながら、本発明はこの例に限定されず、上述の標的配列における軽微な改変は、改変された分子がWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を抑制する能力を保持する限りは許容可能である。本明細書において、核酸配列と関連して使用される軽微な改変という句は、配列に対する1つ、2つ、またはいくつかの置換、欠失、付加、または挿入を示す。本発明の文脈において、核酸配列における置換、欠失、付加、および/または挿入に対し適用されるいくつかという用語は、3~7個、好ましくは3~5個、さらに好ましくは3~4個、さらに好ましくは3個の核酸残基を意味しうる。本発明によれば、本発明の二本鎖分子は、実施例で利用される方法を用いて、その能力に関して試験することができる。本明細書の以下の実施例では、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子のmRNAの様々な部分のセンス鎖、またはそれに対して相補的なアンチセンス鎖から構成される二本鎖分子を、標準的な方法に従って、がん細胞株におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子産物の産生を低減させる能力に関して、インビトロで試験した。さらに、例えば、候補分子の非存在下で培養した細胞に比べた、候補二本鎖分子と接触させた細胞におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子産物の低減は、例えば、実施例1における定量的RT-PCRの項で述べられたWHSC1またはWHSC1L1のmRNA用のプライマーを用いて、RT-PCRにより検出することができる。インビトロでの細胞ベースのアッセイにおいてWHSC1またはWHSC1L1遺伝子産物の産生を低減する配列は、続いて、細胞増殖に及ぼすこれらの阻害効果に関して試験することができる。インビトロでの細胞ベースのアッセイにおいて細胞増殖を阻害する配列は、続いて、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子産物の産生の低減およびがん細胞増殖の低減を確認するために、がんを有する動物、例えばヌードマウス異種移植片モデルを用いて、これらのインビボ能力に関して試験することができる。単離ポリヌクレオチドがRNAまたはそれらの誘導体である場合、ヌクレオチド配列において塩基tはuに置き換えるものとする。本明細書で使用される場合、相補性という用語は、ポリヌクレオチドのヌクレオチドユニット間のワトソンクリック型またはフーグスティーン型の塩基対合を表し、結合という用語は、2つのポリヌクレオチド間の物理的なまたは化学的な相互作用を意味する。ポリヌクレオチドが修飾ヌクレオチドおよび/または非ホスホジエステル結合を含む場合、これらのポリヌクレオチドもまた同じように互いに結合することができる。一般的に、相補的なポリヌクレオチド配列は、適当な条件下でハイブリダイズして、ほとんどまたは全くミスマッチを含有しない安定二本鎖を形成する。さらに、本発明の単離ポリヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、ハイブリダイゼーションによって二本鎖分子またはヘアピンループ構造を形成することができる。好ましい態様において、このような二本鎖は10個のマッチ毎にわずか1個のミスマッチしか含有していない。特に好ましい態様では、二本鎖の鎖が完全に相補的である場合、このような二本鎖はミスマッチを含有しない。ポリヌクレオチドは、好ましくは、1000ヌクレオチド未満の長さを有する。例えば、ポリヌクレオチドは、500、200、100、75、50、または25ヌクレオチド未満の長さを有する。本発明の単離されたポリヌクレオチドは、WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する二本鎖分子を形成させるのに、または二本鎖分子をコードする鋳型DNAを調製するのに有用である。ポリヌクレオチドが、二本鎖分子を形成させるために使用される場合、ポリヌクレオチドは、19ヌクレオチドより長くてもよく、好ましくは、21ヌクレオチドより長く、より好ましくは、約19~25ヌクレオチドの長さを有する。あるいは、本発明の二本鎖分子は、センス鎖が、標的配列においてアンチセンス鎖とハイブリダイズすることで、500、200、100、75、50、または25ヌクレオチド対未満の長さを有する二本鎖分子を形成するような二本鎖分子であってもよい。好ましくは、二本鎖分子は、約19~約25ヌクレオチド対の長さを有する。さらに、二本鎖分子のセンス鎖は、好ましくは、500、200、100、75、50、30、28、27、26、25個未満のヌクレオチドを含み得、より好ましくは、約19~約25個のヌクレオチドを含む。二本鎖分子が細胞へ導入された場合、二本鎖分子は、RISC複合体のための、mRNA内の相同配列を同定するためのガイドとして機能する。同定された標的RNAが、ダイサーのヌクレアーゼ活性により切断され分解され、そのことによって、二本鎖分子は、最終的には、RNAによってコードされたポリペプチドの産生発現を減少させるかまたは阻害する。従って、本発明の二本鎖分子は、ストリンジェントな条件の下で、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子のmRNAに特異的にハイブリダイズする一本鎖を生成する能力によって定義され得る。本明細書において、二本鎖分子から生成された一本鎖とハイブリダイズするmRNAの部分は、標的配列または標的核酸または標的ヌクレオチドと呼ばれる。本発明において、標的配列のヌクレオチド配列は、mRNAのRNA配列のみならず、mRNAから合成されたcDNAのDNA配列を使用して示されてもよい。本発明の二本鎖分子は、1つまたは複数の修飾ヌクレオチドおよび/または非ホスホジエステル結合を含有し得る。当技術分野において公知の化学修飾は、二本鎖分子の安定性、利用可能性、および/または細胞取り込みを増大させることができる。当業者は、本発明の分子に取り込むことができる他の種類の化学修飾にも気づくであろうWO2003/070744、WO2005/045037。一態様では、分解耐性の改善または取り込みの改善を与えるために、修飾を用いることができる。このような修飾の例としては、非限定的に、ホスホロチオエート結合、2-O-メチルリボヌクレオチド特に二本鎖分子のセンス鎖上、2-デオキシ-フルオロリボヌクレオチド、2-デオキシリボヌクレオチド、ユニバーサル塩基ヌクレオチド、5-C-メチルヌクレオチド、および逆方向デオキシ塩基残基の組み込みが挙げられる米国特許出願第20060122137号。別の態様では、二本鎖分子の安定性を向上させるために、または標的指向化効率を増大させるために、修飾を用いることができる。このような修飾の例としては、非限定的に、二本鎖分子の2つの相補鎖間の化学架橋結合、二本鎖分子の鎖の3または5末端の化学修飾、糖修飾、核酸塩基修飾および/または骨格修飾、2-フルオロ修飾リボヌクレオチド、ならびに2-デオキシリボヌクレオチドが挙げられるWO2004/029212。別の態様では、標的mRNAにおける、および/または相補的二本鎖分子鎖における相補的ヌクレオチドに対する親和性の増減に修飾を用いることができるWO2005/044976。例えば、非修飾ピリミジンヌクレオチドを2-チオピリミジン、5-アルキニルピリミジン、5-メチルピリミジン、または5-プロピルピリミジンに置換することができる。さらに、非修飾プリンを7-デザプリン、7-アルキルプリン、または7-アルケニルプリンに置換することができる。別の態様では、二本鎖分子が3オーバーハングを有する二本鎖分子である場合、3末端のヌクレオチドオーバーハングヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドに置き換えることができるElbashirSMetalGenesDev2001Jan1515188200。さらに詳細には、公開文献、例えば米国特許出願第20060234970号が利用可能である。本発明は、これらの例には限定されず、得られた分子が標的遺伝子の発現を阻害する能力を保持していれば、任意の公知の化学修飾を本発明の二本鎖分子に利用することができる。さらに、本発明の二本鎖分子はDNAおよびRNAの両方を含み得る例えばdsD/R-NAまたはshD/R-NA。特に、DNA鎖とRNA鎖とのハイブリッドポリヌクレオチドまたはDNA-RNAキメラポリヌクレオチドは安定性の増大を示す。DNAとRNAとの混合物、すなわちDNA鎖ポリヌクレオチドおよびRNA鎖ポリヌクレオチドから構成されるハイブリッド型二本鎖分子、一本鎖ポリヌクレオチドの一方または両方上でDNAおよびRNAの両方を含むキメラ型二本鎖分子等を、二本鎖分子の安定性を向上させるために形成することができる。DNA鎖とRNA鎖とのハイブリッドは、標的遺伝子を発現する細胞に導入した場合に該標的遺伝子の発現を阻害することが可能であれば、センス鎖がDNAであり、アンチセンス鎖がRNAであるか、またはその反対のいずれであってもよい。好ましくは、センス鎖のポリヌクレオチドがDNAであり、アンチセンス鎖のポリヌクレオチドがRNAである。また、キメラ型二本鎖分子は、標的遺伝子を発現する細胞に導入した場合に該標的遺伝子の発現を阻害する活性があれば、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方がDNAおよびRNAから構成されるか、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖のいずれか一方がDNAおよびRNAから構成されるか、のいずれであってもよい。二本鎖分子の安定性を向上するためには、分子は可能な限り多くのDNAを含有する事が好ましいが、標的遺伝子発現の阻害を誘導するためには、分子は発現の十分な阻害を誘導する範囲内でRNAである事が必要である。キメラ型二本鎖分子の好ましい例では、二本鎖分子の上流部分領域すなわちセンス鎖またはアンチセンス鎖内の標的配列またはその相補配列に隣接する領域はRNAである。好ましくは、上流部分領域は、センス鎖の5側5末端およびアンチセンス鎖の3側3末端を示す。あるいは、センス鎖の5末端および/またはアンチセンス鎖の3末端に隣接する領域が、上流部分領域と称される。すなわち、好ましい態様では、アンチセンス鎖の3末端に隣接する領域、またはセンス鎖の5末端に隣接する領域およびアンチセンス鎖の3末端に隣接する領域の両方がRNAから構成される。例えば、本発明のキメラまたはハイブリッド型の二本鎖分子は以下の組み合わせを含む。センス鎖:5-[---DNA---]-33-RNA-[DNA]-5:アンチセンス鎖、センス鎖:5-RNA-[DNA]-33-RNA-[DNA]-5:アンチセンス鎖、およびセンス鎖:5-RNA-[DNA]-33----RNA----5:アンチセンス鎖。上流部分領域は、好ましくは、二本鎖分子のセンス鎖またはアンチセンス鎖内で、標的配列またはこれに対する相補配列の末端から数えて9個~13個のヌクレオチドから構成されるドメインである。さらに、そのようなキメラ型二本鎖分子の好ましい例としては、ポリヌクレオチドの少なくとも上流半分の領域センス鎖では5側領域およびアンチセンス鎖では3側領域がRNAであり、もう半分がDNAである、19個~21個のヌクレオチド鎖長を有するものが挙げられる。そのようなキメラ型二本鎖分子では、アンチセンス鎖全体がRNAである場合、標的遺伝子の発現阻害効果が非常に高くなる米国特許出願第20050004064号。本発明において、二本鎖分子は、ヘアピン、例えば低分子ヘアピン型RNAshRNAおよびDNAおよびRNAからなる低分子のヘアピンshD/R-NAを形成することができる。shRNAまたはshD/R-NAは、RNA干渉を介して遺伝子発現をサイレンシングするのに使用することができる、タイトなヘアピンターンtighthairpinturnを作る、RNAまたはRNAとDNAとの混合物の配列である。shRNAまたはshD/R-NAは、一本鎖上にセンス標的配列とアンチセンス標的配列とを含み、これらの配列はループ配列によって分けられる。一般的に、ヘアピン構造は、細胞機構によってdsRNAまたはdsD/R-NAに切断され、続いてRNA誘導サイレンシング複合体RISCと結合する。この複合体は、dsRNAまたはdsD/R-NAの標的配列に適合するmRNAと結合してこれを切断する。任意のヌクレオチド配列から構成されるループ配列は、ヘアピンループ構造を形成するために、センス配列とアンチセンス配列との間に位置し得る。したがって、本発明は、一般式5-[A]-[B]-[A]-3または5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は標的配列に対応する配列を含むセンス鎖であり、[B]は介在一本鎖であり、かつ[A]は[A]に対する相補配列を含むアンチセンス鎖であるを有する二本鎖分子も提供する。標的配列は、例えば、WHSC1に関して、配列番号:29または32のヌクレオチド配列、およびWHSC1L1に関して、配列番号:35または38のヌクレオチド配列の中から選択され得る。本発明はこれらの例には限定されず、[A]における標的配列は、二本鎖分子が標的となるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を抑制する能力を保持していれば、これらの例から改変された配列であってもよい。[A]領域は[A]領域とハイブリダイズし、[B]領域から構成されるループを形成する。介在一本鎖部分[B]、すなわちループ配列は、好ましくは3~23ヌクレオチド長であり得る。例えばループ配列は、ambion.com/techlib/tb/tb_506.htmlから入手可能な配列の中から選択することができる。さらに、23個のヌクレオチドからなるループ配列は活性siRNAも提供するJacqueJMetalNature2002Jul254184358Epub2002Jun26:CCC、CCACC、またはCCACACC:JacqueJMetalNature2002Jul254184358Epub2002Jun26;UUCG:LeeNSetalNatBiotechnol2002May205005、FruscoloniPetalProcNatlAcadSciUSA2003Feb18100163944Epub2003Feb10;およびUUCAAGAGA:DykxhoornDMetalNatRevMolCellBiol2003Jun445767。ヘアピンループ構造を有する本発明の好ましい二本鎖分子の例は以下に示される。以下の構造では、ループ配列は、AUG、CCC、UUCG、CCACC、CTCGAG、AAGCUU、CCACACC、およびUUCAAGAGAの中から選択することができるが、本発明はこれらに限定されない:CAGAUCUACACAGCGGAUA-[B]-UAUCCGCUGUGUAGAUCUG標的配列配列番号:29に関する;GUUAAUUGGCAUAUGGAAU-[B]-AUUCCAUAUGCCAAUUAAC標的配列配列番号:32に関する;CUCACAAAUGGGUAUCCAU-[B]-AUGGAUACCCAUUUGUGAG標的配列配列番号:35に関する;およびGUACUGAAAUUCGGAGACA-[B]-UGUCUCCGAAUUUCAGUAC標的配列配列番号:38に関する。さらに、二本鎖分子の阻害活性を高めるために、いくつかのヌクレオチドを3オーバーハングとして標的配列のセンス鎖および/またはアンチセンス鎖の3末端に付加することができる。3オーバーハングを構成するヌクレオチドの好ましい例はtおよびuを含むがこれらに限定されない。付加されるヌクレオチドの数は少なくとも2、概して2~10、好ましくは2~5である。付加されるヌクレオチドは二本鎖分子のセンス鎖および/またはアンチセンス鎖の3末端で一本鎖を形成する。二本鎖分子が単一のポリヌクレオチドからなってヘアピンループ構造を形成する場合、3オーバーハング配列を単一のポリヌクレオチドの3末端に追加することができる。二本鎖分子を調製するための方法は特に限定されないが、当技術分野で公知の化学合成方法を使用するのが好ましい。化学合成方法に従って、センスおよびアンチセンスの一本鎖ポリヌクレオチドを別々に合成した後、それらを適当な方法により共にアニーリングして二本鎖分子を得る。アニーリングの具体的な例では、合成一本鎖ポリヌクレオチドは好ましくは少なくとも約3:7、より好ましくは約4:6、および最も好ましくは実質的に等モル量すなわち約5:5のモル比のモル比で混合される。次に、混合物を二本鎖分子が解離する温度まで加熱した後、徐々に冷ます。アニーリングした二本鎖ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の通常利用される方法によって精製することができる。精製方法の例としては、アガロースゲル電気泳動を利用するか、または残存一本鎖ポリヌクレオチドが、例えば適当な酵素による分解によって任意で取り除かれる方法が挙げられる。あるいは、二本鎖分子は、コーディング配列に近接している、適切な細胞において二本鎖分子の発現を指示する調節配列例えば、核内低分子RNAsnRNAU6由来のRNAポリIII転写ユニットまたはヒトH1RNAプロモーターを含有しているベクターへ、コーディング配列をクローニングすることにより、細胞内で転写されてもよい。二本鎖分子のコーディング配列に隣接する調節配列は、発現が独立に、または時間的にもしくは空間的様式で調節され得るよう、同一であってもよいし、または異なっていてもよい。二本鎖分子を産生することができるベクターの詳細は、以下に記載される。本発明の二本鎖分子を含有するベクター:本明細書に記載の二本鎖分子を1つまたは複数含有するベクター、および該ベクターを含有する細胞も本発明に包含される。具体的には、本発明は、以下の[1]~[11]に記載のベクターを提供する:[1]細胞に導入された場合にWHSC1またはWHSC1L1のインビボ発現および細胞増殖を阻害する二本鎖分子をコードするベクターであって、前記分子が、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とから構成される、前記ベクター;[2]配列番号:29、32、35、または38の標的配列にマッチするmRNAに対して作用する二本鎖分子をコードする、[1]に記載のベクター;[3]センス鎖が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有している、[1]に記載のベクター;[4]約100ヌクレオチド未満の長さを有する二本鎖分子をコードする[2]または[3]に記載のベクター;[5]約75ヌクレオチド未満の長さを有する二本鎖分子をコードする[4]に記載のベクター;[6]約50ヌクレオチド未満の長さを有する二本鎖分子をコードする[5]に記載のベクター;[7]約25ヌクレオチド未満の長さを有する二本鎖分子をコードする[6]に記載のベクター;[8]約19~約25ヌクレオチドの長さを有する二本鎖分子をコードする[7]に記載のベクター;[9]二本鎖分子が、介在一本鎖により連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を有する単一のポリヌクレオチドから構成される、[1]~[8]のいずれか1つに記載のベクター;ならびに[10]一般式5-[A]-[B]-[A]-3または5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有しているセンス鎖であり、[B]は3~23個のヌクレオチドから構成される介在一本鎖であり、かつ[A]は[A]に相補的な配列を含有しているアンチセンス鎖であるを有する二本鎖分子をコードする、[9]に記載のベクター。[11]センス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドの組み合わせの各々を含み、かつ標的遺伝子の発現を阻害するベクターであって、センス鎖核酸が、配列番号:29、32、35、および38からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖核酸が、センス鎖に相補的な配列からなり、センス鎖およびアンチセンス鎖の転写物が互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成する、前記ベクター。本発明のベクターは、好ましくは、発現可能な形態で本発明の二本鎖分子をコードする。本明細書において、発現可能な形態でという語句は、細胞に導入された場合に、ベクターが前記分子を発現するであろうことを示す。好ましい態様では、ベクターは、二本鎖分子の発現に必要な調節要素を含む。したがって、ある態様において、発現ベクターは本発明の核酸配列をコードし、その核酸配列の発現に適合される。そのような本発明のベクターは、本発明の二本鎖分子を生成するのに使用でき、またはがんを治療するための有効成分として直接使用することができる。本発明のベクターは、例えば、両方の鎖がDNA分子の転写によって発現されるような様式で調節配列がWHSC1またはWHSC1L1配列と機能的に連結するように、WHSC1またはWHSC1L1配列を発現ベクターにクローニングすることによって生成することができるLeeNSetalNatBiotechnol2002May205005。例えば、mRNAに対するアンチセンスであるRNA分子が第1のプロモーター例えばクローニングされたDNAの3末端と隣接するプロモーター配列によって転写され、mRNAに対するセンス鎖であるRNA分子が第2のプロモーター例えばクローニングされたDNAの5末端に隣接するプロモーター配列によって転写される。センス鎖とアンチセンス鎖とがインビボでハイブリダイズし、遺伝子をサイレンシングするための二本鎖分子構築物を生成する。あるいは、二本鎖分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖をそれぞれコードする2つのベクター構築物は、センス鎖およびアンチセンス鎖をそれぞれ発現した後、二本鎖分子構築物を形成するために利用する。さらに、クローニングされた配列は二次構造例えばヘアピンを有する構築物、すなわち標的遺伝子のセンス配列および相補的なアンチセンス配列の両方を含有するベクターの単一転写産物をコードすることができる。本発明のベクターは、標的細胞のゲノムへの安定した挿入を達成するためにそのようなものを具備することもできる例えば相同的な組換えカセットベクターの説明に関しては、ThomasKRCapecchiMRCell19875150312を参照されたい。例えば、WolffetalScience199024714658、米国特許第5,580,859号、同第5,589,466号、同第5,804,566号、同第5,739,118号、同第5,736,524号、同第5,679,647号、およびWO98/04720を参照されたい。DNAベースの送達技術の例としては、ネイキッドDNA、促進性ブピバカイン、ポリマー、ペプチド媒介性送達、カチオン性脂質複合体、および粒子媒介性遺伝子銃または圧力媒介性の送達が挙げられる例えば米国特許第5,922,687号を参照されたい。本発明のベクターは例えば、ウイルスベクターまたは細菌ベクターを含む。発現ベクターの例としては、弱毒化ウイルス宿主、例えばワクシニアまたは鶏痘が挙げられる例えば米国特許第4,722,848号を参照されたい。このアプローチは、例えば二本鎖分子をコードするヌクレオチド配列を発現するためのベクターとしてのワクシニアウイルスの使用を含む。標的遺伝子を発現する細胞に導入すると、組換えワクシニアウイルスは前記分子を発現し、それにより細胞の増殖を抑制する。使用することのできるベクターの別の例としてはカルメットゲラン桿菌BacilleCalmetteGuerinBCGが挙げられる。BCGベクターはStoveretalNature199135145660に記載されている。広範な他のベクターが、二本鎖分子の治療的投与および生成に有用である。例としては、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、チフス菌Salmonellatyphiベクター、無毒化炭疽毒素ベクター等が挙げられる。例えば、ShataetalMolMedToday200066671、ShedlocketalJLeukocBiol200068793806、およびHippetalInVivo20001457185を参照されたい。本発明の二本鎖分子を使用した、がん細胞の増殖の阻害もしくは低下、またはがんの治療の方法:本発明において、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子用のdsRNAを、細胞増殖を阻害する能力について試験した。WHSC1またはWHSC1L1遺伝子用のdsRNAは、いくつかのがん細胞株において遺伝子の発現を効果的にノックダウンし、同時に、細胞増殖を抑制した図4。従って、本発明は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現の阻害を介して、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の機能不全を誘導することにより、細胞増殖を阻害するための方法を提供する。WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を特異的に標的とする、前記の本発明の二本鎖分子のいずれかによって阻害され得る。WHSC1遺伝子に対する二本鎖分子またはそのような分子をコードするベクターによって増殖が阻害され得るがん細胞の例には、好ましくは、例えば、膀胱癌細胞、乳癌細胞、胆管細胞癌細胞、CML細胞、食道癌細胞、HCC細胞、NSCLC細胞、SCLC細胞、骨肉腫細胞、膵癌細胞、前立腺癌細胞、腎細胞癌細胞、および軟部組織腫瘍細胞が含まれる。WHSC1L1遺伝子に対する二本鎖分子またはそのような分子をコードするベクターによって増殖が阻害され得るがん細胞の例には、好ましくは、例えば、膀胱癌細胞、乳癌細胞、CML細胞、肺癌細胞例えば、SCLC細胞、およびリンパ腫細胞が含まれる。本発明の二本鎖分子およびそのような分子をコードするベクターの、がん細胞の細胞増殖を阻害する能力は、それらが、がんの治療および/または予防のための方法のために使用され得ることを示す。例えば、WHSC1遺伝子に対する二本鎖分子またはそれらをコードするベクターは、好ましくは、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍の治療および/または予防において使用され得る。また、例えば、WHSC1L1遺伝子に対する二本鎖分子またはそれらをコードするベクターは、好ましくは、膀胱癌、乳癌、CML、肺癌例えば、SCLC、およびリンパ腫の治療および/または予防において使用され得る。従って、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子は正常器官においては最小限にしか発現していないため図1、2、3、本発明は、WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する二本鎖分子、またはそれらの分子を発現するベクターを投与することにより、有害作用なしに、がんを有する患者を治療するための方法を提供する。具体的には、本発明は、以下の[1]~[33]に記載の方法を提供する:[1]WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現している細胞におけるその遺伝子の発現および細胞増殖を阻害する少なくとも1種の単離された二本鎖分子を投与する段階を含む、がん細胞の増殖の阻害、ならびにがんの治療および/または予防のための方法であって、前記がん細胞またはがんが、WHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子を発現しており、前記二本鎖分子が、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とから構成される、前記方法;[2]WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子またはそれをコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを、対象へ投与する段階を含む、対象におけるがんの治療および/または予防の方法であって、前記二本鎖分子が、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に細胞増殖およびWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する、前記方法;[3]二本鎖分子が、配列番号:29、32、35、および38の標的配列にマッチするmRNAにおいて作用する、[1]または[2]に記載の方法;[4]センス鎖が、配列番号:29、32、35、および38の標的配列に対応する配列を含有している、[1]または[2]に記載の方法;[5]がんが、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫である、[1]~[4]のいずれかの方法;[6]二本鎖分子が約100ヌクレオチド未満の長さを有する、[1]~[5]のいずれか1つに記載の方法;[7]二本鎖分子が約75ヌクレオチド未満の長さを有する、[6]に記載の方法;[8]二本鎖分子が約50ヌクレオチド未満の長さを有する、[7]に記載の方法;[9]二本鎖分子が約25ヌクレオチド未満の長さを有する、[8]に記載の方法;[10]二本鎖分子が約19~約25ヌクレオチドの長さを有する、[9]に記載の方法;[11]二本鎖分子が、介在一本鎖により連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を含有している単一のポリヌクレオチドから構成される、[1]~[10]のいずれか1つに記載の方法;[12]二本鎖分子が一般式5-[A]-[B]-[A]-3または5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有しているセンス鎖であり、[B]は3~23ヌクレオチドから構成される介在一本鎖であり、[A]は[A]に相補的な配列を含有しているアンチセンス鎖であるを有する、[11]に記載の方法;[13]二本鎖分子がRNAである、[1]~[12]のいずれか1つに記載の方法;[14]二本鎖分子がDNAおよびRNAの両方を含有している、[1]~[12]のいずれか1つに記載の方法;[15]二本鎖分子がDNAポリヌクレオチドおよびRNAポリヌクレオチドのハイブリッドである、[14]に記載の方法;[16]センス鎖ポリヌクレオチドおよびアンチセンス鎖ポリヌクレオチドが、それぞれ、DNAおよびRNAから構成される、[15]に記載の方法;[17]二本鎖分子がDNAおよびRNAのキメラである、[14]に記載の方法;[18]アンチセンス鎖の3末端に隣接する領域、またはセンス鎖の5末端に隣接する領域およびアンチセンス鎖の3末端に隣接する領域の両方が、RNAから構成される、[17]に記載の方法;[19]隣接する領域が9~13ヌクレオチドから構成される、[18]に記載の方法;[20]二本鎖分子が1個または2個の3オーバーハングを含有している、[1]~[19]のいずれか1つに記載の方法;[21]二本鎖分子またはベクターが、該分子に加え、トランスフェクション増強剤および薬学的に許容される担体を含む組成物に含有されている、[1]~[20]のいずれか1つに記載の方法;[22]二本鎖分子がベクターによってコードされる、[1]に記載の方法;[23]ベクターによってコードされる二本鎖分子が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列にマッチするmRNAにおいて作用する、[22]に記載の方法;[24]ベクターによってコードされる二本鎖分子のセンス鎖が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有している、[23]に記載の方法;[25]がんが、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫である、[22]~[24]のいずれか1つに記載の方法;[26]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約100ヌクレオチド未満の長さを有する、[22]~[25]のいずれか1つに記載の方法;[27]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約75ヌクレオチド未満の長さを有する、[26]に記載の方法;[28]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約50ヌクレオチド未満の長さを有する、[27]に記載の方法;[29]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約25ヌクレオチド未満の長さを有する、[28]に記載の方法;[30]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約19~約25ヌクレオチドの長さを有する、[29]に記載の方法;[31]ベクターによってコードされる二本鎖分子が、介在一本鎖により連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を含有している単一のポリヌクレオチドから構成される、[22]~[30]のいずれか1つに記載の方法;[32]ベクターによってコードされる二本鎖分子が一般式5-[A]-[B]-[A]-3または5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は配列番号:29、32、35、および38の標的配列に対応する配列を含有しているセンス鎖であり、[B]は3~23ヌクレオチドから構成される介在一本鎖であり、[A]は[A]に相補的な配列を含有しているアンチセンス鎖であるを有する、[31]に記載の方法;ならびに[33]ベクターによってコードされる二本鎖分子が、該分子に加え、トランスフェクション増強剤および薬学的に許容される担体を含む組成物に含有されている、[22]~[32]のいずれか1つに記載の方法。さらに、別の態様において、[1]WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現している細胞におけるその遺伝子の発現および細胞増殖を阻害する少なくとも1種の単離された二本鎖分子を投与する段階を含む、aがん細胞の増殖の阻害、bがんの治療、ならびにbがんの予防からなる群より選択される目的のための方法であって、前記がん細胞またはがんが、WHSC1およびWHSC1L1遺伝子のいずれかまたは両方を発現しており、前記二本鎖分子が、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とから構成される、前記方法が提供される。さらに、別の態様において、[2]WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子またはそれをコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを、対象へ投与する段階を含む、対象におけるがんの治療および予防のいずれかまたは両方の方法であって、前記二本鎖分子が、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に細胞増殖およびWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する、前記方法も、提供される。本発明の方法を、以下に、より詳細に説明する。WHSC1および/またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞の増殖は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子に対する二本鎖分子、該分子を発現するベクター、またはそれらを含有している組成物と、細胞を接触させることにより阻害され得る。さらに、細胞をトランスフェクション剤と接触させることもできる。好適なトランスフェクション剤は当技術分野で公知である。細胞増殖の阻害という語句は、その細胞が、分子に曝露されていない細胞と比較して、より低い速度で増殖するか、または減少した生存能を有することを示す。細胞増殖は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、MTT細胞増殖アッセイを使用して、測定され得る。細胞が、本発明の二本鎖分子の標的遺伝子を発現しているかまたは過剰発現している限り、任意の種類の細胞の増殖が、本発明の方法によって抑制され得る。WHSC1遺伝子を過剰発現している例示的な細胞には、例えば、膀胱癌細胞、乳癌細胞、胆管細胞癌細胞、CML、食道癌細胞、HCC細胞、NSCLC細胞、SCLC細胞、骨肉腫細胞、膵癌細胞、前立腺癌細胞、腎細胞癌細胞、および軟部組織腫瘍が含まれる。WHSC1L1遺伝子を過剰発現している例示的な細胞には、例えば、膀胱癌細胞、乳癌細胞、CML細胞、肺癌細胞例えば、SCLC細胞、およびリンパ腫細胞が含まれる。従って、WHSC1および/またはWHSC1L1の過剰発現に関連した疾患に罹患しているかまたはそれを発症するリスクを有する患者は、少なくとも1種の本発明の二本鎖分子、その分子を発現する少なくとも1種のベクター、またはそれらの分子を含有している組成物を投与することにより治療され得る。例えば、がん患者が、本発明の方法により治療され得る。がんの種類は、診断される腫瘍の特定の種類に応じて、標準的な方法により同定され得る。より好ましくは、本発明の方法により治療される患者は、RT-PCRまたはイムノアッセイにより、患者由来の生検標本または試料におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を検出することにより選択される。好ましくは、本発明の治療の前に、対象由来の生検標本または試料は、当技術分野において公知の方法、例えば、免疫組織化学的分析またはRT-PCRのような、がんを診断するための方法の項に記載される方法により、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の過剰発現について確認される。細胞増殖を阻害するために、本発明の二本鎖分子は、該分子と対応するmRNA転写産物との間の結合を達成する形態で、細胞に直接導入することができる。あるいは、上記のように、二本鎖分子をコードするDNAは、ベクターとして細胞に導入することができる。二本鎖分子またはベクターを細胞に導入するために、トランスフェクション増強剤、例えばFuGENERochediagnostics、Lipofectamine2000Invitrogen、OligofectamineInvitrogen、およびNucleofectorWakopureChemicalを利用することができる。治療は、臨床的利点、例えばWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現の低減、または対象におけるがんのサイズ、蔓延、もしくは転移能の減少をもたらす場合に、有効とみなされる。治療を予防的に適用する場合、有効とは、治療ががんの形成を遅らせるもしくは防ぐか、またはがんの臨床症状を防ぐかもしくは緩和するという意味である。有効性Efficaciousnessは、特定の腫瘍の種類を診断または治療するための任意の公知の方法に関連して求められる。本発明の二本鎖分子は、準化学量論的な量でWHSC1またはWHSC1L1のmRNAを分解することが理解される。いかなる理論にも束縛されることを望まないが、本発明の二本鎖分子によって、触媒的様式で標的mRNAの分解が起こると考えられている。したがって、標準的ながん治療に比べて、治療効果を発揮するためにがん部位またはその近くに送達されることが必要な二本鎖分子は有意に少ない。当業者は、例えば対象の体重、年齢、性別、疾患の種類、症状、および他の状態;投与経路;ならびに投与が局所的または全身的のいずれであるかなどの因子を考慮して、所定の対象に投与されるべき本発明の二本鎖分子の有効量を容易に求めることができる。概して、本発明の二本鎖分子の有効量は、がん部位またはその近くにおいて約1ナノモルnM~約100nM、好ましくは約2nM~約50nM、より好ましくは約2.5nM~約10nMである細胞内濃度である。より多くのまたはより少ない量の二本鎖分子を投与することができることが意図される。特定の状況において必要とされる正確な用量は、当業者により容易にかつルーチン的に決定されうる。本発明の方法は、WHSC1および/またはWHSC1L1を発現しているがんの増殖または転移を阻害するために使用され得る。例えば、WHSC1を発現しているがんには、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、および軟部組織腫瘍が含まれる。例えば、WHSC1L1を発現しているがんには、膀胱癌、乳癌、CML、肺癌例えば、SCLC、およびリンパ腫が含まれる。特に、WHSC1の標的配列好ましくは、配列番号:29もしくは32またはWHSC1L1の標的配列好ましくは、配列番号:35もしくは38に対応するヌクレオチド配列を含有している二本鎖分子が、がんの治療のために特に好ましい。がんを治療するために、本発明の二本鎖分子は、本発明の二本鎖分子とは異なる薬学的物質と併用して対象に投与することもできる。あるいは、本発明の二本鎖分子は、がんを治療するために設計された別の治療法と併用して対象に投与することができる。例えば、本発明の二本鎖分子は、がんを治療するまたはがん転移を予防するのに現在利用されている治療法例えば放射線療法、外科的手術、および化学療法剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、アドリアマイシン、ダウノルビシン、またはタモキシフェンを用いた治療と併用して投与することができる。本方法において、本発明の二本鎖分子は、送達試薬と共にネイキッド二本鎖分子として、または該二本鎖分子を発現する組換えプラスミドもしくはウイルスベクターとしてのいずれかで対象に投与することができる。本発明の二本鎖分子と共に投与するのに好適な送達試薬としては、MirusTransitTKO脂溶性試薬、リポフェクチン、リポフェクタミン、セルフェクチン、またはポリカチオン例えばポリリシン、またはリポソームが挙げられる。好ましい送達試薬はリポソームである。リポソームは、特定の組織、例えば肺の腫瘍組織への二本鎖分子の送達に役立ち、二本鎖分子の血中半減期も増大させ得る。本発明における使用に好適なリポソームは、標準的な小胞形成脂質から形成され、概してこれには、中性または負に帯電したリン脂質およびステロール、例えばコレステロールが含まれる。一般的には、所望のリポソームサイズおよび血流中におけるリポソームの半減期などの因子を考慮して、脂質の選択が導かれる。リポソームを調製するのに、例えばSzokaetalAnnRevBiophysBioeng19809467、ならびに米国特許第4,235,871号、同第4,501,728号、同第4,837,028号、および同第5,019,369号その開示全体が参照により本明細書に引用されるで記載されるような様々な方法が知られている。好ましくは、本発明の二本鎖分子を封入するリポソームは、リポソームをがん部位に送達することができるリガンド分子を含む。腫瘍または血管内皮細胞に広まった受容体に結合するリガンド、例えば腫瘍抗原または内皮細胞表面抗原と結合するモノクローナル抗体が好ましい。特に好ましくは、本発明の二本鎖分子を封入するリポソームは、例えばその構造の表面に結合したオプソニン化阻害部分を有することによって、単核マクロファージおよび網内系によるクリアランスを避けるように改変される。一態様では、本発明のリポソームは、オプソニン化阻害部分およびリガンドの両方を含み得る。本発明のリポソームを調製するのに用いるオプソニン化阻害部分は典型的に、リポソーム膜と結合する巨大な親水性ポリマーである。本明細書で使用される場合、オプソニン化阻害部分は、例えば脂質-可溶性アンカーの膜自体へのインターカレーションによって、または膜脂質の活性基への直接結合によって、膜と化学的にまたは物理的に接着する場合に、リポソーム膜と結合する。これらのオプソニン化阻害親水性ポリマーは、例えば米国特許第4,920,016号その開示内容全体は参照により本明細書に組み入れられるに記載されるように、マクロファージ-単球系MMSおよび網内系RESによるリポソームの取り込みを有意に低減する保護表面層を形成する。したがって、オプソニン化阻害部分を用いて改変されたリポソームは、非改変リポソームよりも非常に長く循環中に留まる。この理由から、そのようなリポソームはステルスリポソームと呼ばれることもある。ステルスリポソームは、多孔性または漏出性微小血管系によって送り込まれる組織中で集積することが知られている。したがって、そのような微小血管系の欠陥を特徴とする標的組織、例えば固形腫瘍は、効率的にこれらのリポソームを集積する。GabizonetalProcNatlAcadSciUSA198818694953を参照されたい。さらに、RESによる取り込みの低減が、肝臓および脾臓における有意な集積を防ぐことによって、ステルスリポソームの毒性を低下させる。したがって、オプソニン化阻害部分を用いて改変された本発明のリポソームは、本発明の二本鎖分子を腫瘍細胞に送達することができる。リポソームを改変するのに好適なオプソニン化阻害部分は、好ましくは、分子量が約500ダルトン~約40,000ダルトン、およびより好ましくは約2,000ダルトン~約20,000ダルトンの水溶性ポリマーであり得る。そのようなポリマーとしては、ポリエチレングリコールPEGまたはポリプロピレングリコールPPG誘導体;例えばメトキシPEGまたはPPG、およびPEGまたはPPGステアレート;合成ポリマー、例えばポリアクリルアミドまたはポリN-ビニルピロリドン;直鎖、分岐、または樹状のポリアミドアミン;ポリアクリル酸;多価アルコール、例えばカルボン酸基またはアミノ基が化学結合したポリビニルアルコールおよびポリキシリトール、ならびにガングリオシド、例えばガングリオシドGM1が挙げられる。PEG、メトキシPEG、もしくはメトキシPPGのコポリマー、またはそれらの誘導体も好適である。さらに、オプソニン化阻害ポリマーは、PEGと、ポリアミノ酸、多糖、ポリアミドアミン、ポリエチレンアミン、またはポリヌクレオチドのいずれかとのブロックコポリマーであり得る。オプソニン化阻害ポリマーは、アミノ酸またはカルボン酸を含有する天然多糖例えばガラクツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ヒアルロン酸、ペクチン酸、ノイラミン酸、アルギン酸、カラゲナン;アミノ化多糖またはオリゴ糖直鎖状または分岐状;または、例えばカルボン酸基の結果として生じた連結を有するカルボン酸の誘導体と反応させた、カルボキシル化多糖またはカルボキシル化オリゴ糖でもあり得る。好ましくは、オプソニン化阻害部分はPEG、PPG、またはその誘導体である。PEGまたはPEG誘導体を用いて改変したリポソームはPEG化リポソームと呼ばれることもある。オプソニン化阻害部分は、多くの公知の技術のいずれか1つによってリポソーム膜と結合することができる。例えば、PEGのN-ヒドロキシスクシンイミドエステルは、ホスファチジル-エタノールアミン脂質可溶性アンカーと結合し、続いて膜と結合することができる。同様に、デキストランポリマーは、60°CでNaCNBH3および溶媒混合物、例えば30:12の比のテトラヒドロフランおよび水を用いて、還元アミノ化によってステアリルアミン脂質可溶性アンカーで誘導体化することができる。本発明の二本鎖分子を発現するベクターが上記で検討されている。少なくとも1種の本発明の二本鎖分子を発現するそのようなベクターもまた、直接、またはMirusTransitLT1脂溶性試薬、リポフェクチン、リポフェクタミン、セルフェクチン、ポリカチオン例えばポリリシン、またはリポソームを含む好適な送達試薬と共に、投与することができる。本発明の二本鎖分子を発現する組換えウイルスベクターを患者のがん領域に送達する方法は当技術分野の技術範囲内である。本発明の二本鎖分子は、二本鎖分子をがん部位に送達するのに好適な任意の手段によって、対象に投与することができる。例えば、二本鎖分子は、遺伝子銃、電気穿孔法、または他の好適な非経口投与経路もしくは腸内投与経路によって投与することができる。好適な腸内投与経路としては、経口、直腸、または鼻腔内送達が挙げられる。好適な非経口投与経路としては、血管内投与例えば静脈ボーラス注射、静脈注入、動脈内ボーラス注射、動脈内注入、および血管系へのカテーテル点滴注入;周囲組織および組織内への注射例えば腫瘍周囲および腫瘍内注射;皮下注入を含む皮下注射または皮下沈着例えば浸透圧ポンプによって;例えばカテーテルもしくは他の留置装置例えば、多孔性、非孔性、またはゼラチン様の材料を含む、坐剤またはインプラントによる、がん部位の領域またはその近くの領域への直接適用;ならびに吸入が挙げられる。二本鎖分子またはベクターの注射または注入は、がんの部位でまたはその近くで行われることが好ましい。本発明の二本鎖分子は、単回投与または複数回の投与で投与することができる。本発明の二本鎖分子の投与が注入によるものである場合、注入は、単回の持続投与で行うか、または複数回の注入によって送達することができる。組織に直接的に行われる物質の注射は、がん部位、またはがん部位の近くで行うことが好ましい。がん部位の組織にまたはがん部位の近くの組織に物質を複数回注射することが特に好ましい。当業者は容易に、本発明の二本鎖分子を所定の対象に投与するのに適当な投与計画を決定することもできる。例えば、二本鎖分子は、例えばがん部位でのまたはその近くでの単回注射または沈着として、対象に1回で投与することができる。あるいは、二本鎖分子は、約3日~約28日、より好ましくは約7日~約10日の間、1日1回または2回、対象に投与することができる。好ましい投与計画では、二本鎖分子は1日1回7日間、がん部位にまたはその近くに注射される。投与計画に複数回の投与が含まれる場合、対象に投与される二本鎖分子の有効量は、投与計画全体を通して投与される二本鎖分子の総量を含むことが理解される。本発明において、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現しているがんは、a本発明の二本鎖分子、b該二本鎖分子をコードするDNA、およびc該二本鎖分子をコードするベクター:からなる群より選択される少なくとも1種の活性成分により治療され得る。がんには、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。従って、活性成分としての本発明の二本鎖分子の投与の前に、処置されるがん細胞またはがん組織におけるWHSC1またはWHSC1L1の発現レベルが、同一器官の正常細胞と比較して増強されていることを確認することが好ましい。従って、1つの態様において、本発明は、i治療すべきがんを有する対象から得られたがん細胞またはがん組織におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを決定する段階;iiWHSC1またはWHSC1L1の発現レベルを正常対照と比較する段階;ならびにiii正常対照と比較してWHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現しているがんを有する対象へ、a本発明の二本鎖分子、b該二本鎖分子をコードするDNA、およびc該二本鎖分子をコードするベクター:からなる群より選択される少なくとも1種の成分を投与する段階を含み得る、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現しているがんを治療する方法を提供する。あるいは、本発明は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現しているがんを有する対象への投与において使用するための、a本発明の二本鎖分子、b該二本鎖分子をコードするDNA、およびc該二本鎖分子をコードするベクターからなる群より選択される少なくとも1種の成分を含む薬学的組成物も提供する。換言すると、本発明は、対象由来のがん細胞またはがん組織におけるWHSC1またはWHSC1L1の発現レベルを決定する段階であって、該遺伝子の正常対照レベルと比較したレベルの増加が、対象が本発明の二本鎖分子により治療され得るがんを有することを示す、前記段階を含み得る、a本発明の二本鎖分子、b該二本鎖分子をコードするDNA、またはc該二本鎖分子をコードするベクターにより治療すべき対象を特定するための方法をさらに提供する。本発明のがんを治療する方法は、以下にさらに詳細に説明されるであろう。本発明により治療される対象は、好ましくは、哺乳動物である。例示的な哺乳動物には、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシが含まれるが、これらに限定されない。本発明によると、対象から得られたがん細胞またはがん組織におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルが決定される。発現レベルは、当技術分野において公知の方法を使用して、転写産物mRNAレベルで決定され得る。例えば、ハイブリダイゼーション法例えば、ノーザンハイブリダイゼーション、チップまたはアレイ、プローブ、RT-PCRが、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の転写産物レベルを決定するために使用され得る。あるいは、翻訳産物ポリペプチドまたはタンパク質が、本発明の治療のため検出されてもよい。例えば、観察されたタンパク質の量が決定され得る。翻訳産物に基づき、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現レベルを検出するための別の方法として、WHSC1またはWHSC1L1タンパク質に対する抗体を使用した免疫組織化学的分析によって、染色の強度が測定されてもよい。すなわち、この測定において、強力な染色は、タンパク質の存在/レベルの増加を示し、同時に、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の高い発現レベルを示す。WHSC1またはWHSC1L1ポリペプチドおよびそれらをコードするポリヌクレオチドの検出または測定の方法は、上記のように例示され得るがんを診断するための方法。本発明の二本鎖分子を含有している組成物:上記に加えて、本発明は、本発明の二本鎖分子またはその分子をコードするベクターを含む薬学的組成物も提供する。具体的には、本発明は、以下の組成物[1]~[33]を提供する:[1]WHSC1またはWHSC1L1の発現および細胞増殖を阻害する単離された二本鎖分子を含む、がん細胞の増殖の阻害、およびがんの治療のための組成物であって、前記がん細胞およびがんが、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現しており、前記分子が、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とから構成される、前記組成物;[2]WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子または該二本鎖分子をコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、がんの治療および/または予防のための組成物であって、前記二本鎖分子が、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に細胞増殖およびWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する、前記組成物;[3]二本鎖分子が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列にマッチするmRNAにおいて作用する、[1]または[2]に記載の組成物;[3]二本鎖分子、センス鎖が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有している、[1]または[2]に記載の組成物;[5]がんが、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫である、[1]に記載の組成物;[6]二本鎖分子が約100ヌクレオチド未満の長さを有する、[1]~[5]のいずれか1つに記載の組成物;[7]二本鎖分子が約75ヌクレオチド未満の長さを有する、[6]に記載の組成物;[8]二本鎖分子が約50ヌクレオチド未満の長さを有する、[7]に記載の組成物;[9]二本鎖分子が約25ヌクレオチド未満の長さを有する、[8]に記載の組成物;[10]二本鎖分子が約19~約25ヌクレオチドの長さを有する、[9]に記載の組成物;[11]二本鎖分子が、介在一本鎖により連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含有している単一のポリヌクレオチドから構成される、[1]~[10]のいずれか1つに記載の組成物;[12]二本鎖分子が一般式5-[A]-[B]-[A]-3または5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有しているセンス鎖配列であり、[B]は3~23ヌクレオチドからなる介在一本鎖であり、[A]は[A]に相補的な配列を含有しているアンチセンス鎖であるを有する、[11]に記載の組成物;[13]二本鎖分子がRNAである、[1]~[12]のいずれか1つに記載の組成物;[14]二本鎖分子がDNAおよびRNAから構成される、[1]~[12]のいずれか1つに記載の組成物;[15]二本鎖分子がDNAポリヌクレオチドおよびRNAポリヌクレオチドのハイブリッドである、[14]に記載の組成物;[16]センス鎖ポリヌクレオチドおよびアンチセンス鎖ポリヌクレオチドが、それぞれ、DNAおよびRNAから構成される、[15]に記載の組成物;[17]二本鎖分子がDNAおよびRNAのキメラである、[14]に記載の組成物;[18]アンチセンス鎖の3末端に隣接する領域、またはセンス鎖の5末端に隣接する領域およびアンチセンス鎖の3末端に隣接する領域の両方が、RNAから構成される、[15]に記載の組成物;[19]隣接する領域が9~13ヌクレオチドから構成される、[18]に記載の組成物;[20]二本鎖分子が1個または2個の3オーバーハングを含有している、[1]~[19]のいずれか1つに記載の組成物;[21]トランスフェクション増強剤および薬学的に許容される担体を含む、[1]~[20]のいずれかの組成物;[22]二本鎖分子がベクターによってコードされる、[1]~[21]のいずれか1つに記載の組成物;[23]ベクターによってコードされる二本鎖分子が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列にマッチするmRNAにおいて作用する、[22]に記載の組成物;[24]ベクターによってコードされる二本鎖分子のセンス鎖が、配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有している、[22]に記載の組成物;[25]がんが、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫である、[22]~[24]のいずれか1つに記載の組成物;[26]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約100ヌクレオチド未満の長さを有する、[22]~[25]のいずれか1つに記載の組成物;[27]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約75ヌクレオチド未満の長さを有する、[26]に記載の組成物;[28]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約50ヌクレオチド未満の長さを有する、[27]に記載の組成物;[29]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約25ヌクレオチド未満の長さを有する、[28]に記載の組成物;[30]ベクターによってコードされる二本鎖分子が約19~約25ヌクレオチドの長さを有する、[29]に記載の組成物;[31]ベクターによってコードされる二本鎖分子が、介在一本鎖により連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を含有している単一のポリヌクレオチドから構成される、[22]~[29]のいずれか1つに記載の組成物;[32]二本鎖分子が一般式5-[A]-[B]-[A]-3または5-[A]-[B]-[A]-3式中、[A]は配列番号:29、32、35、または38の標的配列に対応する配列を含有しているセンス鎖であり、[B]は3~23ヌクレオチドから構成される介在一本鎖であり、[A]は[A]に相補的な配列を含有しているアンチセンス鎖であるを有する、[31]に記載の組成物;ならびに[33]トランスフェクション増強剤および薬学的に許容される担体を含む、[22]~[32]のいずれか1つに記載の組成物。さらに、別の態様において、[2]WHSC1もしくはWHSC1L1遺伝子に対する薬学的に有効な量の二本鎖分子または該二本鎖分子をコードするベクターと、薬学的に許容される担体とを含む、がんの治療および予防のいずれかまたは両方のための組成物であって、前記二本鎖分子が、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現している細胞へ導入された場合に細胞増殖およびWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する、前記組成物が提供される。本発明の適切な組成物が、さらに詳細に以下に記載される。本発明の二本鎖分子は、好ましくは、当技術分野で公知の技術に従って、対象に投与する前に薬学的組成物として調合することができる。本発明の薬学的組成物は、少なくとも無菌でありかつパイロジェンを含まないことを特徴とする。本明細書で使用される場合、薬学的組成物は、ヒトおよび獣医学的使用のための製剤を含む。本発明の薬学的組成物を調製する方法は、例えばRemingtonsPharmaceuticalScience17thedMackPublishingCompanyEastonPaその開示全体が参照により本明細書に組み入れられるに記載のように当技術分野の技術範囲内である。本発明の薬学的組成物は、生理学的または薬学的に許容可能な担体媒体と組み合わせて、本発明の二本鎖分子もしくはこの分子をコードするベクター例えば0.1重量~90重量、または該分子の生理学的に許容可能な塩を含有する。好ましい生理学的または薬学的に許容可能な担体媒体は、水、緩衝水、通常の生理食塩水、0.4生理食塩水、0.3グリシン、ヒアルロン酸等である。さらに、本発明の二本鎖分子は、本発明の組成物においてリポソーム中に含有され得る。リポソームの詳細に関しては、二本鎖分子を使用した、がんの治療の方法の項を参照されたい。本発明の薬学的組成物は、従来の薬学的賦形剤および/または添加剤も含み得る。好適な薬学的賦形剤としては、例えば安定剤、抗酸化剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、およびpH調整剤が挙げられる。好適な添加剤としては、例えば生理学的に生体適合性がある緩衝剤例えば塩酸トロメタミン、キレート剤chelantの添加物例えばDTPAもしくはDTPA-ビスアミドもしくはカルシウムキレート錯体例えばカルシウムDTPA、CaNaDTPA-ビスアミド、または任意でカルシウム塩もしくはナトリウム塩の添加物例えば塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、もしくは乳酸カルシウムが挙げられる。本発明の薬学的組成物は、液体形態での使用のために包装されていても、または凍結乾燥されていてもよい。固体組成物には、従来の非毒性固体担体、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等を使用することができる。例えば、経口投与用の固体薬学的組成物は、上記で列挙された担体および賦形剤のいずれかと、10~95、好ましくは25~75の1つまたは複数の本発明の二本鎖分子とを含み得る。エアロゾル吸入投与用の薬学的組成物は、上記のようにリポソームに封入された0.01重量~20重量、好ましくは1重量~10重量の1つまたは複数の本発明の二本鎖分子と、噴霧剤とを含み得る。所望に応じて、担体、例えば鼻腔内送達ではレシチンが含まれ得る。上記に加えて、本発明の組成物は、本発明の二本鎖分子のインビボ機能を阻害しない限り、他の薬学的に活性のある成分を含有することができる。例えば本発明の組成物は、がんを治療するのに従来使用される化学療法剤を含有することができる。別の態様において、本発明は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を特徴とするがんの治療および/または予防用の薬学的組成物の製造における、本発明の二本鎖分子の使用も提供する。例えば、本発明は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現しているがんの治療用の薬学的組成物の製造のための、細胞におけるWHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を阻害する二本鎖分子の使用に関し、該分子は、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とを含み、かつ配列番号:29、32、35、または38の配列を標的とする。あるいは、本発明は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現している細胞におけるこの遺伝子の発現を阻害する二本鎖核酸分子と共に薬学的または生理学的に許容可能な担体を調合するための段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を特徴とするがんの治療および/または予防用の薬学的組成物を製造するための方法またはプロセスをさらに提供し、該分子は、活性成分として、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とを含み、かつ配列番号:29、32、35、または38の配列を標的とする。あるいは、本発明はさらに、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を発現するがんの治療における使用のための、本発明の二本鎖核酸分子も提供する。別の態様において、本発明はまた、活性成分を薬学的または生理学的に許容可能な担体と混和するための段階を含む、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子の発現を特徴とするがんの治療および/または予防用の薬学的組成物を製造するための方法またはプロセスも提供し、該活性成分は、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を過剰発現している細胞におけるこの遺伝子の発現を阻害する二本鎖分子であり、該分子は、互いにハイブリダイズすることで二本鎖分子を形成するセンス鎖とこれに相補的なアンチセンス鎖とを含み、かつ配列番号:29、32、35、または38の配列を標的とする。以降に、実施例を参照しながら本発明をさらに詳細に説明する。しかしながら、以下の材料、方法、および例は本発明の局面を例示したものに過ぎず、これらは本発明の範囲を限定する意図はない。したがって、本明細書に記載されるものと類似する、または同等の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができる。他に規定のない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好適な方法および材料を以下で説明する。本明細書に記載される全ての公報、特許出願、特許、および他の参照は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。矛盾が生じた場合は、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法、および例は例示に過ぎず、限定を意図するものではない。本発明を以下の実施例でさらに説明するが、これは特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定しない。実施例1:一般的方法膀胱組織試料およびRNA調製膀胱切開術または経尿道的膀胱腫瘍切除術TURBTのいずれかの際に、原発性尿路上皮癌の外科的標本120例を収集し、液体窒素中で急速凍結させた。正常膀胱尿路上皮組織の標本22例を、悪性病変の証拠がない患者の巨視的に正常な膀胱尿路上皮の区域から収集した。厚さ7μmの5つの連続切片を、各組織から切り出し、製造業者のプロトコルに従い、Histogene商標染色溶液Arcturus,California,USAを使用して染色し、無関係のコンサルタント泌尿組織病理学者が細胞充実性および腫瘍悪性度について評価した。次いで、スライドを、PixCellIIレーザーキャプチャー顕微鏡Arcturus,CA,USAを使用したマイクロダイセクションに移した。この技術は、関心対象の細胞の上で熱可塑性フィルムを融解させ、それに細胞を接着させるため、低出力の赤外レーザーを利用する。さらに、炎症細胞浸潤の程度低、中、および高によって、切片の悪性度を決定した。著しい炎症細胞浸潤を示す試料は、排除したWallardMetalBrJCancer945695772006。およそ10,000個の細胞を、各組織の間質コンパートメントおよび上皮/腫瘍コンパートメントの両方から顕微解剖した。RNAを、RNeasyMicroKitQIAGEN,Crawley,UKを使用して抽出した。著しい炎症細胞浸潤を含有している腫瘍または間質の著しい炎症区域を含む、がんまたは間質の区域は、コンタミネーションを防止するため、回避したWallardMetalBrJCancer945695772006。全RNAを逆転写し、下記のようにqRT-PCRを実施した。そのような小規模な試料からのRNAの収量は低いため、NanoDrop商標定量化は実施せず、無処置の出発RNAの量の正確な尺度として、内在性18SCT値についての補正を使用した。マイクロダイセクションの精度を検証するため、ビメンチンおよびウロプラキン用のプライマーおよびプローブを調達し、製造業者の指示に従い、qRT-PCRを実施したAssaysondemand,AppliedBiosystems,Warrington,UK。ビメンチンは、間葉系由来細胞に主として発現しており、間質マーカーとして使用された。ウロプラキンは、尿路上皮分化のマーカーであり、最大90もの上皮由来腫瘍で保存されているOlsburghJetalJPathol19941492003。実施例における組織の使用は、CambridgeshireLocalResearchEthicsCommitteeRef03/018によって承認された。組織マイクロアレイのための肺組織試料腫瘍切除前に抗がん治療を受けていない患者に由来する原発性非SCLCNSCLC組織試料および切除縁に近接するその対応する正常組織は、インフォームドコンセントの上で以前に入手されたものであったKatoTetalCancerRes200565563846、KikuchiTetalOncogene2003222129205、TaniwakiMetalIntJOncol20062956775。全ての腫瘍を、InternationalUnionAgainstCancerの病理学的なTNM分類に基づき病期決定した。組織マイクロアレイにおける免疫染色のため使用された、ホルマリン固定された原発性肺腫瘍および近接正常肺組織試料は、SaitamaCancerCenterSaitama,Japanで根治手術を受けた患者328人から入手されたものであったIshikawaNetalClinCancerRes200410836370、IshikawaNetalCancerRes2007671160111。当研究にとって適格となるよう、以下の基準を全て満たす患者から腫瘍試料を選択した:a組織学的に確認された病期pT1~pT3、pN0~pN2、およびpM0のみを有する原発性NSCLCに罹患していた患者;b根治手術を受けたが、術前処置は受けていない患者;c彼らのうち、陽性リンパ節転移pN1、pN2を有するNSCLC患者は、外科的切除後、白金に基づく補助化学療法により処置されたが、pN0を有する患者は、補助化学療法を受けなかった;およびd臨床的な追跡データが入手可能であった患者。本研究および言及された全ての臨床的材料の使用は、個々の機関の倫理委員会によって承認された。細胞培養全ての細胞株を次の適切な培地で単層で増殖させた:IMR-90、253J、253J-BV、HT1197、HT1376、J82、SCaBER、UMUC3膀胱癌細胞、およびSBC5小細胞肺癌細胞にはイーグル最小必須培地EMEM;5637膀胱癌細胞、ならびにA549、NCI-H2170、およびLC319非小細胞肺癌細胞、ならびにSNU475肝細胞癌細胞にはRPMI1640培地;EJ28膀胱癌細胞、RERF-LC-AI非小細胞肺癌細胞、HepG2肝細胞癌細胞、および293T細胞にはダルベッコ変法イーグル培地DMEM;RT4およびT24膀胱癌細胞ならびにHCT116結腸直腸癌細胞にはMcCoys5A培地;SW780細胞およびSW480細胞には10ウシ胎仔血清および1抗生物質/抗真菌溶液Sigmaが補足されたLeibovitzsL-15。LoVo細胞は、20ウシ胎仔血清および1抗生物質/抗真菌溶液Sigmaが補足されたHamsF-12培地で培養した。SAEC細胞は、52μg/mlウシ下垂体抽出物、0.5ng/mlヒト組換えEGF、0.5μg/mlヒドロコルチゾン、0.5μg/mlエピネフリン、10μg/mlトランスフェリン、5μg/mlインスリン、0.1mg/mlレチノイン酸RA、6.5ng/mlトリヨードチロ二ン、50μg/mlゲンタマイシン/アンホテリシンBGA-1000、および50μg/ml脂肪酸不含ウシ血清アルブミンBSAが補足された小気道上皮細胞基本培地で維持した。全ての細胞を、37°Cで、5CO2を含むかIMR-90、SAEC、5637、253J、253J-BV、EJ28、HT1197、HT1376、J82、RT4、SCaBER、T24、UMUC3、A549、H2170、LC319、RERF-LC-AI、SBC5、293T、HepG2、SNU475、Huh7、およびLoVoまたはCO2を含まないSW780およびSW480湿潤空気中で維持した。製造業者のプロトコルに従い、FuGENE6ROCHE,Basel,Switzerlandを用いて、細胞をトランスフェクトした。cDNAマイクロアレイを使用したがんにおける発現プロファイリング本発明者らは、米国国立バイオテクノロジー情報センターNationalCenterforBiotechnologyInformationNCBIのUniGeneデータベースから選択された36,864種のcDNAを用いて、網羅的なゲノムcDNAマイクロアレイを確立した。このマイクロアレイシステムは、以前に記載されたのと本質的に同様に構築されたKikuchiTetalOncogene22219222052003、KitaharaOetalCancerRes61354435492001、NakamuraTetalOncogene23238524002004。簡単に説明すると、様々なヒト器官から単離されたポリARNAを鋳型として使用したRT-PCRによって、cDNAを増幅した;いかなる反復配列またはポリA配列を含まないアンプリコンの長さは、200~1100bpの範囲であった。多くの種類の腫瘍および対応する非新生物組織を、以前に記載されたように、8μmで調製したKitaharaOetalCancerRes61354435492001。全部で30,000~40,000種のがん細胞または非がん細胞を、製造業者のプロトコルに従って、EZcutシステムSLMicrotestGmbH,Germanyを使用して選択的に収集した。全RNAの抽出、T7に基づく増幅、およびプローブの標識を、以前に記載されたように実施したKitaharaOetalCancerRes61354435492001。次いで、各々のがん組織および非がん組織に由来する2回増幅RNAaRNAの一定分量2.5μgを、それぞれ、Cy3-dCTPまたはCy5-dCTPにより標識した。定量的リアルタイムPCR以前に記載されたように、本発明者らは、CambridgeAddenbrookesHospitalにおいて膀胱癌組織121例および正常膀胱組織24例を調製した。定量的RT-PCR反応のため、全てのヒトGAPDHハウスキーピング遺伝子、ヒトSDHハウスキーピング遺伝子、ヒトWHSC1、およびヒトWHSC1L1用の特異的プライマーを設計したプライマー配列は表1に記載。製造業者のプロトコルに従って、ABIprism7700配列検出システムAppliedBiosystems,Warrington,UKを使用して、PCR反応を実施した。UNGを含まない50SYBRGreenUNIVERSALPCRMasterMixAppliedBiosystems,Warrington,UK、各50nMの順方向プライマーおよび逆方向プライマー、ならびに2μlの逆転写cDNAを適用した。増幅条件は、まず、95°C5分、次いで、95°C10秒、55°C1分、および72°C10秒から各々なる45サイクルであった。この後、融解曲線を描くため、95°Cで15秒間、65°Cで1分間、試料をインキュベートし、50°Cに10秒間冷却した。標的遺伝子増幅用の反応条件は、上記の通りであり、逆転写されたRNA5ngを各反応において使用した。表1定量的RT-PCR用のプライマー配列免疫組織化学染色ヒト膀胱組織の切片を、VECTASTAIN登録商標ABCキットVECTORLABORATORIES,CA,USAにより染色した。簡単に説明すると、キシレンにより脱パラフィン処理され脱水された切片の内在性ペルオキシダーゼ活性を、0.3H2O2/メタノールによる処理により阻害した。周囲温度で30分間、加湿チャンバー内で3BSAと共に切片をインキュベートすることにより、非特異的結合をブロッキングし、続いて、500倍希釈のウサギポリクローナル抗WHSC1HPA015801,SIGMA-ALDRICH,St.Louis,MO,USA抗体と共に4°Cで一夜インキュベートした。切片をPBS-により2回洗浄し、1BSAを含有しているPBS-において、500倍希釈のヤギ抗ウサギビオチン化IgGおよび500倍希釈のヤギ抗マウスビオチン化IgGと共に周囲温度で30分間インキュベートし、次いで、ABC試薬と共に30分間インキュベートした。特異的な免疫染色を3,3-ジアミノベンジジンにより可視化した。段階的なアルコールおよびキシレンによる洗浄によりスライドを脱水し、カバーガラスにマウントした。核の対比染色のため、ヘマトキシリンを使用した。膀胱腫瘍および肺腫瘍ならびに正常ヒト組織におけるWHSC1の発現パターンを、以前に記載されたように免疫組織化学により調査したUnokiMetalBrJCancer200910198105。簡単に説明すると、パラフィン包埋された膀胱腫瘍標本および正常ヒト組織のスライドを、抗原賦活液、高pH9S2367,DakoCytomation,Carpinteria,CA,USAにおいて高圧下で処理し125°C30秒、ペルオキシダーゼブロッキング試薬により処理し、次いで、タンパク質ブロッキング試薬K130,X0909,DakoCytomationにより処理した。組織切片をウサギ抗WHSC1ポリクローナル抗体HPA015801,1:25,SIGMA-ALDRICH,St.Louis,MO、ウサギ抗WHSC1L1ポリクローナル抗体HPA005659,1:25,SIGMA-ALDRICH,St.Louis,MO、または正常ウサギIgG1:25,SantaCruz,SantaCruz,CA,USAと共にインキュベートし、続いて、HRP標識二次抗体DakoCytomationと共にインキュベートした。発色基質Dako液体DAB色素原;DakoCytomationにより抗原を可視化した。最後に、細胞質から核を識別するため、20秒間、マイヤーヘマトキシリン武藤化学株式会社、東京、日本により組織標本を染色した。siRNAトランスフェクションヒトWHSC1およびヒトWHSC1L1の転写物を標的とするためのsiRNAオリゴヌクレオチド二重鎖を、SIGMAGenosysから購入した。siEGFP、および3種の異なるオリゴヌクレオチド二重鎖の混合物であるsiネガティブコントロールsiNCを、対照siRNAとして使用した。siRNA配列は表2に記載される。siRNA二重鎖100nM最終濃度を、Lipofectamine2000Invitrogenにより、72時間、膀胱癌細胞株および肺癌細胞株へトランスフェクトし、CellCountingKit-8同仁堂、熊本、日本を使用して、細胞生存能を調査した。表2siRNA配列フローサイトメトリーアッセイFACS細胞周期におけるWHSC1の役割を調査するため、SW780細胞およびA549細胞をsiWHSC1siWHSC11、siWHSC12または対照siRNAsiEGFPおよびsiNCにより処理し、37°Cで72時間、CO2インキュベーター内で培養した。一定分量1×105個の細胞をトリプシン処理により収集し、製造業者の指示に従いCaymanChemical,AnnArbor,MI、ヨウ化プロピジウムにより染色した。詳細な細胞周期状態について、MultiCycleforWindowsソフトウェアBECKMANCOULTERを用いたFACScanBECKMANCOULTER,Brea,CAにより、細胞を分析した。細胞周期のG0/G1期、S期、およびG2/M期にある細胞の割合を、少なくとも20,000個のゲーティングされていない細胞から決定した。さらなる詳細のため、細胞周期動態を決定し、増殖中の細胞のDNAへのBrdUの取り込みを測定するため、5-ブロモ-2-デオキシウリジンBrdUフローキットBDPharmingen,SanDiego,CAを使用した。製造業者のプロトコルに従って、アッセイを実施した。簡単に説明すると、細胞1ウェル当たり2×105個を6ウェル組織培養プレートに一夜播種し、10FBS含有培地中の最適濃度のsiRNAにより72時間処理し、続いて、10μMBrdUを添加し、さらに30分間インキュベーションを続けた。各処理点毎に3連のウェルから浮遊細胞および付着細胞の両方をプールし、パラホルムアルデヒドおよび界面活性剤サポニンを含有している溶液で固定し、37°Cで1時間、DNaseと共にインキュベートした各試料当たり30μg。FITC標識抗BrdU抗体洗浄緩衝液中50倍希釈;BDPharmingen,SanDiego,CAを添加し、室温で20分間インキュベーションを続けた。細胞を洗浄緩衝液で洗浄し、全DNAを7-アミノ-アクチノマイシンD7-AAD;各試料当たり20μLにより染色し、続いて、FACScanBECKMANCOULTERを使用したフローサイトメトリー分析を行い、全DNA含量7-AADをCXPAnalysisSoftwareVer.2.2BECKMANCOULTERにより決定した。下流遺伝子の解明のためのマイクロアレイハイブリダイゼーションおよび統計分析精製された全RNAを標識し、製造業者の指示に従って、AffymetrixGeneChipU133Plus2.0オリゴヌクレオチドアレイAffymetrix,SantaClara,CAにハイブリダイズさせた。プローブシグナル強度をRMAおよび分位数Quantileにより正規化したRおよびBioconductorを使用。次に、実験間のばらつきによるシグナル強度の変動を推定した。各実験を反復し1および2回、中間点がlog2強度1強度2/2=5、7、9、11、13、および15である強度範囲のセットの各々について、log2強度2/強度1の標準偏差stdevを計算した。本発明者らは、式stdevlog2強度2/強度1=alog2強度1強度2/2bを使用して強度のばらつきをモデル化し、最小二乗法を使用してパラメータaおよびbを推定した。これらの値を使用して、強度変動の標準偏差を計算した。次いで、各プローブのシグナル強度を、siWHSC1EXPと対照EGFP/FFLucCONTとの間で比較し、zスコア:log2強度EXP/強度CONT/alog2強度EXP強度CONT/2bを計算することにより上方/下方制御について試験した。各プローブの最終P値を計算するため、複製セットについて得られたP値を乗じた。これらの手法を各比較:siEGFP対siWHSC1、siFFLuc対siWHSC1、およびsiEGFP対siFFLucにそれぞれ適用した。本発明者らは、以下の基準を同時に満たすものとして、上方制御された遺伝子セットおよび下方制御された遺伝子セットを決定した:1EGFP対siWHSC1について、Benjamini-Hochberg偽発見率falsediscoveryrate/FDR≦0.05である、2FFLuc対siWHSC1について、FDR≦0.05であり、調節方向が1と同一である、3EGFP対FFLucが1および2と反対の方向を有するか、またはEGFP対FFLucについて、P>0.05である。最後に、本発明者らは、上方制御された遺伝子セットおよび下方制御された遺伝子セット間のオーバーラップの確率を計算する超幾何分布検定、および無作為抽出された別の遺伝子リストに対して比較された各GOカテゴリを使用して、パスウェイ解析を実施した。本発明者らは、GeneOntologyデータベースにより定義された生物学的過程Biologicalprocesses857カテゴリの各カテゴリにおいて、同定された上方/下方制御された遺伝子が有意に濃縮されているか否かFDR≦0.05を試験するため、それらに検定を適用した。クロマチン免疫沈降アッセイChIP製造業者のプロトコルに従って、ChIPAssayキットMillipore,Billerica,MAを使用して、ChIPアッセイを実施した。簡単に説明すると、pCAGGS-n3FCベクターmock、pCAGGS-n3FC-WHSC1wtベクターWHSC1wt、およびpCAGGS-n3FC-WHSC1[Δ]SETベクターWHSC1[Δ]SETによるトランスフェクションから48時間後、WHSC1の断片とクロマチン複合体とを、抗FLAG抗体により免疫沈降させた。WHSC1wtまたはWHSC1[Δ]SETに結合したDNA断片を溶出させた後、その量を定量的リアルタイムPCR反応に供した。プライマー配列は表3に示される。表3ChIPアッセイ用のプライマー配列TOPFLASHレポーターおよびFOPFLASHレポーターの活性についてのルシフェラーゼアッセイ製造業者のプロトコルに従って、Dual-LuciferaseReporterAssaySystemPromegaを使用して、ルシフェラーゼアッセイを実施した。293T細胞を24ウェルマイクロプレートで培養し、適当な組み合わせで、mockベクター、pCAGGS-WHSC1ベクター、TOPFLASHベクター、FOPFLASHベクター、および内部対照として使用されたpRL-TKベクターによりコトランスフェクトした。分析のためトランスフェクションから24時間後に細胞を溶解させ、ルミノメーターBERTHOLDTECHNOLOGIES,BadWildbad,Germanyによりルシフェラーゼ活性を測定した。さらに、293T細胞を24ウェルマイクロプレートで培養し、適当な組み合わせで、pCAGGS-n3FCベクターmock、pCAGGS-n3FC-WHSC1wtベクターWHSC1wt、pCAGGS-n3FC-WHSC1[Δ]SETベクターWHSC1[Δ]SET、TOPFLASHベクター、FOPFLASHベクター、および内部対照として使用されたpRL-TKベクターによりコトランスフェクトした。分析のためトランスフェクションから48時間後に細胞を溶解させ、ルミノメーターBERTHOLDTECHNOLOGIES,BadWildbad,Germanyによりルシフェラーゼ活性を測定した。実施例2:臨床がん組織におけるWHSC1の過剰発現英国人臨床膀胱癌試料の小規模なサブセットにおけるヒストンリジンメチルトランスフェラーゼ遺伝子のレベルの調査を通して、本発明者らは、がん試料ではWHSC1およびWHSC1L1が非がん試料と比較して有意に過剰発現していることを見出した。その後、本発明者らは、膀胱癌試料120例および正常対照試料22例英国人を分析し、腫瘍細胞においてWHSC1発現レベルが正常細胞と比較して有意に上昇していることを確認したいずれもP=0.0002、マンホイトニーU検定、図1A。WHSC1発現は進行期pT3およびpT4において高いようであったが、腫瘍悪性度、転移状態、性別、再発状態、および喫煙歴による腫瘍の細分類では、他の要因における有意差は認められなかった表4。さらに、正常細胞と比較した腫瘍細胞におけるWHSC1およびWHSC1L1の発現レベルの有意な上昇が確認されたいずれもP<0.0001、マンホイトニーU検定。腫瘍悪性度、転移状態、性別、再発状態、および喫煙歴による腫瘍の細分類では、発現レベルの有意差は認められなかった表5。膀胱組織におけるWHSC1およびWHSC1L1のタンパク質発現レベルを評価するため、本発明者らが抗WHSC1抗体および抗WHSC1L抗体を使用した免疫組織化学的分析を実施したところ、悪性細胞の核において強い染色が観察されたが、非新生物組織における染色は弱いかまたは存在しなかった図1B。さらに、多数の臨床試料の以前のマイクロアレイ発現分析KikuchiTetalOncogene22219222052003、NakamuraTetalOncogene23238524002004、NishidateTetalIntJOncol257978192004、TakataRetalClinCancerRes11262526362005は、WHSC1発現が、膀胱癌、乳癌、前立腺癌、腎臓癌、小細胞肺癌SCLC、および膵癌を含む様々な種類のがんにおいて有意に上方制御されており、乳癌、CML、リンパ腫、および肺癌においてはWHSC1L1発現の上昇も観察されることを示した図1C、表6。表4臨床膀胱組織におけるWHSC1発現レベルの統計分析表5臨床膀胱組織におけるWHSC1およびWHSC1L1の発現レベルの統計分析表6cDNAマイクロアレイにより分析されたがん組織におけるWHSC1およびWHSC1L1の発現同一患者に由来する、腫瘍組織と、対応する非新生物組織との間で、WHSC1およびWHSC1L1のシグナル強度を比較した。実施例3:WHSC1タンパク質は多数の膀胱腫瘍組織および肺腫瘍組織において有意に上方制御されていた膀胱組織におけるWHSC1のタンパク質発現レベルをさらに検証するため、膀胱組織切片29例を使用した組織マイクロアレイ実験を実施したところ図2、表7、17例において強い染色が検出され、9例において弱いかまたは中程度の染色が観察された。さらに、本発明者らは、本発明者らのリアルタイムPCRの結果と一致して、WHSC1タンパク質発現レベルと臨床病理学的特徴との間に有意な関係を見出さなかった。さらに、本発明者らは、組織マイクロアレイにより、様々な組織学的な種類の肺腫瘍組織において、WHSC1の発現レベルを測定した図3、表8。調査した腫瘍組織切片62例のうち、本発明者らは19例において強い染色を観察し、24例において弱いかまたは中程度の染色を観察した。WHSC1発現と臨床成績との関連をさらに詳細に分析するため、本発明者らは、さらに、アーカイブの非小細胞肺癌NSCLC328個を含有している腫瘍組織マイクロアレイを実施した図10。WHSC1染色は174例53.0で陽性、154例47.0で陰性であった。一方、WHSC1陽性と任意の患者の特徴との間には統計的有意性は観察されなかった表9。次いで、予後とWHSC1発現との関連を評価するため、単変量解析を適用したが、統計的有意性は観察されなかったログランク検定によりP=0.8629;図10Bおよび表10。これらの結果は、WHSC1が、臨床的特徴とは無関係に、肺癌において高頻度に過剰発現されており、予後マーカーとしては機能しないことを明らかにしている。表7組織マイクロアレイにおける膀胱組織の臨床病理学的特徴-発現陰性低いかまたは中程度の発現高発現表8組織マイクロアレイにおける肺組織の臨床病理学的特徴-発現陰性低いかまたは中程度の発現高発現表9NSCLCにおけるWHSC1陽性と患者の特徴との間の関連n=328略語:ADC、腺癌;SCC、扁平上皮癌;その他、大細胞癌LCC腺扁平上皮癌ASCADC対非ADCNS、有意性なし表10NSCLCを有する患者における予後因子のコックス比例ハザードモデル解析略語:ADC、腺癌P<0.05NS、有意性なし実施例4:WHSC1およびWHSC1L1はがん細胞の増殖を調節するWHSC1およびWHSC1L1の上昇した発現が、がん細胞の増殖において何らかの重要な役割を果たすか否かを調査するため、本発明者らは、WHSC1siWHSC11、2およびWHSC1L1siWHSC1L11、2の発現を特異的に抑制するsiRNAオリゴヌクレオチド二重鎖を調製し、各々をがん細胞へトランスフェクトした。定量的リアルタイムPCRを使用して、様々な種類のがん細胞におけるWHSC1およびWHSC1L1の発現レベルを調査したところ、その結果、様々な種類のがん細胞においてこれらの遺伝子が多量に発現されていることが確認された図7。図4Aに示されるように、各siRNAは、siEGFP対照およびsiNC対照と比較して、WHSC1およびWHSC1L1の発現を効果的に下方制御した。その後、細胞計数キットシステムにより、がん細胞の増殖に対するsiRNAの効果を調査したところ図4B、2種の膀胱癌細胞株および3種の肺癌細胞株への2種の独立のsiWHSC1およびsiWHSC1L1のトランスフェクションが、siEGFPまたはsiNCによるものと比較して、それらの増殖を有意に抑制することが見出された。また、がん細胞の詳細な細胞周期状態を分析するため、BrdUおよび7-AAD染色を実施したところ、WHSC1のノックダウンの後、S期にあるがん細胞の割合が有意に低下し図4C、G2/M期にある細胞の割合が増加することが確認され、このことから、WHSC1のノックダウンがG2/M停止を誘導し得ることが示された。これらの結果は、WHSC1およびWHSC1L1が、がん細胞の増殖調節において重要な役割を果たしており、WHSC1がG2/M移行のための必須因子であることを明らかにしている。実施例5:WHSC1はWntカスケード、JNKカスケード、MAPキナーゼカスケード、細胞周期、およびDNA複製の調節を通して発がんに寄与し得るWHSC1の下流のシグナル経路を同定するため、本発明者らは、マイクロアレイ発現分析を実施した。SW780癌細胞およびA549癌細胞におけるWHSC1のノックダウンの後、本発明者らは、siWHSC11による処理から24時間後に、SW780およびA549から全RNAを単離した。これらの細胞の発現プロファイルを、AffymetrixのHG-U133Plus2.0Arrayを使用して、対照siRNAsiEGFPおよびsiFFLucにより処理された細胞と比較した。WHSC1のノックダウンにより、統計的に74遺伝子の発現が減少し、1遺伝子の発現が増加し、従って、これらの75遺伝子が、WHSC1のノックダウンにより影響を受ける下流遺伝子であることが示唆された図5A、表11。本発明者らは、数種の無作為に選択された下流遺伝子候補の下方制御を検証することができたため、再現性が示された。GeneOntologyデータベースを使用して下流候補を決定するためのシグナル経路解析方法;表11は、WHSC1が、Wntカスケード、JNKカスケード、MAPキナーゼカスケード、細胞周期、およびDNA複製を調節し得ることを示した。従って、WHSC1発現の機能異常は、部分的にはこれらの経路の調節を通して、ヒトの発がんに寄与している可能性が高い。表11WHSC1のノックダウンにより影響を受ける出力比実施例6:WHSC1はIQGAP1、TIAM1、AKT2、およびβカテニンと相互作用し得るタンパク質相互作用を同定するため、本発明者らは、次に、免疫沈降質量分析IP-MSを実施し、IQGAP1、TIAM1、およびAKT2がWHSC1と相互作用することを見出した図5B。本発明者らは、さらに、特異抗体を使用した免疫共沈降アッセイを実施し、各相互作用を検証した図5C。IQGAP1およびTIAM1は、βカテニンタンパク質との相互作用を通してWntシグナル伝達経路に関与するため、本発明者らは、WHSC1とβカテニンとの相互作用の可能性を検討し、図5Cに示されるように、それらの相互作用を確認した。興味深いことに、核/細胞質分画後の免疫沈降分析は、WHSC1とβカテニンとの相互作用が核画分において特異的に観察されることを示した図5D。さらに、本発明者らは、WHSC1およびβカテニンが核に共局在していることを確認し図5E、このことから、それらが核において協力的に作用していることが示された。次いで、本発明者らは、TOPFLASHレポーターおよびFOPFLASHレポーターの分析を適用し、WHSC1の過剰発現がTOPFLASHレポーター活性を有意に増強し得ることを検出し図6A、このことから、WHSC1がβカテニン/Tcf-4活性を正に調節し得ることが示された。さらに、本発明者らは、マイクロアレイデータにより、siWHSC1による処理の後、βカテニン/Tcf-4複合体の重要な下流遺伝子であるCCND1の発現が減少することも確認し図6B、そのデータはリアルタイムPCR分析によっても検証された図6C。重要なことに、GeneOntologyデータベースを使用した下流候補を決定するためのシグナル経路解析方法;表12は、WHSC1が、MAPキナーゼ経路およびJNK経路に加え、Wntシグナル伝達経路も調節する可能性を有することを示した。次に、CCND1遺伝子のプロモーター領域を標的とする5種の異なるプライマーを使用したクロマチン免疫沈降ChIP分析を実施した。図6Bに示されるように、野生型WHSC1および酵素不活enzyme-deadWHSC1の両方がその領域に完全に結合し、特に、転写開始部位に近い位置との強い結合を示した図11。酵素不活WHSC1WHSC1[Δ]SETは、野生型WHSC1WHSC1wtより弱い結合を示す傾向があった。一方、CCND1遺伝子のプロモーター領域におけるH3K36me3レベルは、野生型WHSC1によるトランスフェクションの後、有意に増加したが、WHSC1[Δ]SETトランスフェクションの場合には上昇が観察されなかった。H3K36me3状態は、野生型WHSC1蓄積の状態と相関する可能性が高かった。これらの結果は、WHSC1がCCND1のプロモーター領域と結合し、ヒストンH3リジン36を直接トリメチル化し得ることを示唆している。結果として、CCND1発現は転写的に活性化される。さらに、TOPFLASHレポーターおよびFOPFLASHレポーターの分析を適用したところ、野生型WHSC1の過剰発現がTOPFLASHレポーター活性を有意に増強するが図12、酵素不活WHSC1はその活性を示さないことが検出され、このことから、WHSC1がβカテニン/Tcf-4活性を正に調節し得ることが示された。これらの結果は、WHSC1がβカテニンとの相互作用を通してWntシグナル伝達経路を調節することを示しており、WHSC1がヒトの発がんに寄与する機序を指摘している。表12Affymetrixのマイクロアレイデータに基づくGeneOntology経路解析考察ヒストンリジンメチルトランスフェラーゼであるWHSC1が、いくつかのがんの種類において上方制御されており、Wntシグナル伝達経路の調節を通してがん細胞の増殖調節において重要な役割を有している可能性が高いことが、本明細書において証明される。WHSC1は、現在、2種のさらなるメンバー:核受容体結合SETドメインタンパク質1NSD1およびWHSC1L1を含んでいる遺伝子ファミリーのメンバーであり、それらはいずれも70~75のWHSC1との配列同一性を示す。AMLにおいては、再発性のt5;11q35;p15.5転座がNSD1をヌクレオポリン98NUP98に融合するCerveiraNetalLeukemia20031722447。NUP98-NSD1は、インビボでAMLを誘導し、インビトロで骨髄幹細胞の自己再生を持続させることが示されたWangGGetalNatCellBiol2007980412。機構的には、NUP98-NSD1複合体は、HoxA7およびHoxA9に近接するゲノム要素に結合し、ヒストンH3Lys36H3K36メチル化およびヒストンアセチル化の調節を通して、分化の間、EZH2により媒介されるHox-A遺伝子座の転写抑止を維持するWangGGetalNatCellBiol2007980412。重要なことに、メチルトランスフェラーゼ活性の不活化をもたらすNUP98FGリピートドメインの欠失またはNSD1の変異のいずれかは、Hox-A遺伝子活性化および骨髄前駆細胞不死化の両方を妨げ、このことから、NSD1のメチルトランスフェラーゼ活性が、腫瘍発生において重要な役割を果たしている可能性が高いことが示された。NSD1に加え、本発明者らは、WHSC1L1が数種の腫瘍において過剰発現されており、その発現の調節異常がヒトの発がんに関与し得ることを見出した。これらのデータは、ヒストンメチルトランスフェラーゼのファミリーNSD1、WHSC1、およびWHSC1L1の異常な発現が、ヒトの発がんにおいて重要であることを示している。IQGAP1は、複数のタンパク質相互作用ドメインを含有し、βカテニンに化学量論的に結合する190kDaのタンパク質であるKurodaSetalScience19982818325。SW480結腸癌細胞におけるIQGAP1の過剰発現は、核内のβカテニンの量を増加させ、βカテニンにより媒介される転写活性化を増強したBriggsMWetalJBiolChem2002277745365。βカテニン機能に対するIQGAP1の異なる効果は、悪性細胞の増殖能TCF/LEFにより調節されるプロモーターの転写の増強によるおよび転移の可能性細胞間接着の低下によるの両方を増加させるよう協同するBriggsMWetalJBiolChem2002277745365。他方、TIAM1T細胞リンパ腫侵襲転移誘導タンパク質1の過剰発現は、高度に侵襲性の乳房腫瘍AdamLetalJBiolChem20012762844350および結腸癌LiuLetalWorldJGastroenterol2005117057MinardMEetalClinExpMetastasis20062330113において見出された。Wnt経路刺激により、βカテニンはTIAM1と複合体を形成し得、それが、TCF/LEFを含有しているプロモーター結合複合体によりWnt標的遺伝子のプロモーターへと動員されて、GDPと結合したRac1を不活化する。次いで、TIAM1が、GDPのGTPへの交換を触媒することによりRac1を活性化し、それにより、Wntにより誘導される転写因子複合体に対するRac1の刺激効果を媒介する。これは、CCND1のような無制限の細胞増殖を促進するものを含む、Wnt標的遺伝子のサブセットの転写の増強をもたらすBuongiornoPetalMolCancer2008773。この研究において、本発明者らは、WHSC1がIQGAP1、TIAM1、およびβカテニンと相互作用し得ることを見出し、一連の実験は、WHSC1ががん細胞におけるWntシグナル伝達経路を調節し得ることを暗示している。Wntシグナル伝達経路の調節異常は、肺癌および膀胱癌を含む、多くのヒトがんに関与していることが報告されているMinnaJDetalCancerCell200214952YueWSunQDacicSetalCarcinogenesis2008298492ThievessenIetalBrJCancer20038819328。総合すると、本明細書に開示されたデータは、WHSC1が広範囲のヒトがんにおいて過剰発現されていることを示しており、このことは、Wntシグナル伝達経路のWHSC1依存性の調節異常機序が、ヒトの発がんにおける重要な因子のうちの1つであることを示している。発現分析は、正常組織におけるWHSC1およびWHSC1L1の発現レベルが極めて低いことを示した図8。BioGPSデータベースも、多くの種類の組織におけるこれらの遺伝子の発現が極めて低いことを明らかにした図9。様々な種類のがんにおけるWHSC1およびWHSC1L1の発現レベルは、対応する非新生物組織におけるレベルより有意に高いため、WHSC1およびWHSC1L1は、新規がん治療の開発のための有望な標的である。さらに、WHSC1またはWHSC1L1のいずれかのノックダウンは、数種のがん細胞の増殖を抑制したため、これらの酵素は、がん細胞の増殖調節において重要な役割を有しているようである。データは、WHSC1およびWHSC1L1用の阻害物質が、がんの分子標的治療のための理想的な候補であることを示している。wingless/intWntシグナル伝達経路は、脊椎動物および無脊椎動物において細胞の増殖および分化を調節する。βカテニンは、Wntシグナル伝達経路およびEカドヘリン-カテニン複合体における二重機能性分子である。βカテニンは、核内に蓄積するにつれ、細胞接着分子としての機能を失い、それにより、Wntシグナル伝達経路が活性化され、CCND1のような標的遺伝子の転写が開始される。Wntシグナル伝達経路の調節異常は、膀胱癌および肺癌を含む、多くのヒトがんに関与していることが報告されている3337MazieresJetalCancerLett2005222110、MinnaJDetatCancerCell200214952、ThievessenIetalBrJCancer20038819328、UrakamiSetalClinCancerRes20061238391、YueWetalCarcinogenesis2008298492。Wntシグナル伝達経路の構成的な活性化を促進する変異はがんをもたらす。最も周知の例は、患者が結腸および直腸にポリープを示す、常染色体優性遺伝性疾患である家族性腺腫性ポリポージスFAPである。この疾患は、細胞増殖の増加により腺腫性病変をもたらすWnt経路の異常な活性化を促進する、APCの短縮により、最も高頻度に引き起こされるNishishoIetalScience19912536659。βカテニンの変異も散発性結腸癌において見出されているGilesRHetalBiochimBiophysActa20031653124。反対に、様々な種類のがんにおいてWntシグナル伝達の調節異常が暗示されているがNusseRCellRes2005152832PaulSetalNeoplasma20085516576、そのような変異は、膀胱癌および肺癌を含む、多数のがんにおいて稀であるようであるMazieresJetalCancerLett2005222110、OhgakiHetalCancerLett2004207197203、UedaMetalBrJCancer200185648。事実は、いくつかのその他の因子も、ヒトの発がんにおいてWnt経路を調節し得ることを示している。この研究において、WHSC1が、核内でβカテニンと相互作用して、CCND1のプロモーター領域においてヒストンH3のリジン36H3-K36におけるトリメチル化を促進し得ることが見出された図13。一般に、メチル化されたH3-K36は、活発な転写の領域において豊富でありPokholokDK,etal.Cell2005;122:517-27、これは、転写伸長XiaoTetalGenesDev20031765463およびオルタナティブスプライシングLucoRFetalScience3279961000にも関連づけられている。AMLにおいては、再発性のt5;11q35;p15.5転座が、WHSC1のファミリー遺伝子であるNSD1をヌクレオポリン98NUP98に融合するCerveiraNetalLeukemia20031722447。NUP98-NSD1は、インビボでAMLを誘導し、インビトロで骨髄幹細胞の自己再生を持続させることが示されたWangGGetalNatCellBiol2007980412。機構的には、NUP98-NSD1複合体は、HoxA7およびHoxA9に近接するゲノム要素に結合し、H3-K36トリメチル化を維持して、Hox-A遺伝子座の転写抑止を防止する。重要なことに、メチルトランスフェラーゼ活性の不活化をもたらすNUP98FGリピートドメインの欠失またはNSD1の変異のいずれかは、Hox-A遺伝子活性化および骨髄前駆細胞不死化の両方を妨げ、このことから、NSD1依存性のH3-K36メチル化が、腫瘍発生において重要な役割を果たしている可能性が高いことが示された。これと一致して、WHSC1は、H3-K36トリメチル化の維持を通して、βカテニンの転写活性を協力的に強制することが証明された。これは、WHSC1依存性のH3-K36メチル化が、βカテニンと相乗的に腫瘍発生を促進し得ることを暗示しており、エピジェネティック調節を通したヒトの発がんにおけるWnt経路調節異常の新規機序が提示された。発現分析は、βカテニンが膀胱癌細胞株および肺癌細胞株のみならず、ヒト結腸癌細胞株HCT116においても多量に発現されていることを示した図14A。がん細胞の増殖調節におけるβカテニンの重要性を解明するため、本発明者らは、βカテニンを標的とする特異的なsiRNAを使用したノックダウン実験を調査した図14BおよびC。βカテニンのノックダウンの後、膀胱癌細胞および肺癌細胞の増殖速度は有意に抑制され、このことから、Wnt/βカテニン経路がこれらの細胞の増殖調節において重要な役割を果たし得ることが示された。WHSC1は膀胱癌および肺癌の他にも、膵癌および乳癌のような様々な種類のがんにおいて過剰発現されているため、この研究において提示されたWnt/βカテニン経路の調節異常は他のがんにおいても観察される可能性がある。興味深いことに、フローサイトメトリーによる細胞周期分析は、WHSC1のノックダウンがS期にあるがん細胞の細胞集団を減少させ、G2/M期にあるものを増加させたことを明らかにした。実際、βカテニンを含むWNT/βカテニン経路の構成要素が、紡錘体または中心体に局在し、有糸分裂進行の調節に関与しているとの証拠が蓄積されてきておりBahmanyarSetalGenesDev20082291105、HadjihannasMVetalProcNatlAcadSciUSA2006131074752、このことは、WHSC1もWnt/βカテニン経路との相互作用を通してがん細胞のM期を調節し得ることを示している。さらに、βカテニンがWHSC1依存性のメチル化の基質として機能する可能性を検証するため、インビトロメチルトランスフェラーゼアッセイを実施したが、陽性シグナルは観察されなかったデータ非提示。従って、WHSC1のメチル化活性によるβカテニンの転写調節は、現在のところ、H3-K36メチル化に基づいているようである。前述のように、NSD1は、AMLにおいて腫瘍発生を促進することが報告されWangGGetalNatCellBiol2007980412、様々な種類のがんにおけるWHSC1およびWHSC1L1の発現レベルが、対応する非新生物組織におけるレベルより有意に高いことが確認された。これらのデータにより、本発明者らは、メチルトランスフェラーゼのファミリーNSD1、WHSC1、およびWHSC1L1の異常な発現が、ヒトの発がんにおいて重要であり得ることを提唱する。特に、発現分析は、正常組織におけるWHSC1およびWHSC1L1の発現レベルが有意に低いことを示し図8、BioGPSデータベースも多くの種類の組織におけるこれらの遺伝子の発現が極めて低いことを明らかにしたため図9、WHSC1およびWHSC1L1は、新規がん治療の開発のための有望な標的となる可能性が高い。WHSC1またはWHSC1L1のいずれかのノックダウンは数種のがん細胞の増殖を抑制したため、これらの酵素はがん細胞の増殖調節において重要な役割を有しているようである。データは、WHSC1およびWHSC1L1用の阻害物質が、がんの分子標的治療のための理想的な候補であり得ることを暗示している。メチルトランスフェラーゼ阻害剤の開発は最近開始されたばかりでありGreinerDetalNatChemBiol200511435、KubicekSetalMolCell20072547381、さらなる研究によって、近い将来、このアプローチの有用性が確実となり得る。産業上の利用可能性本発明者らは、WHSC1またはWHSC1L1遺伝子を特異的に標的とする二本鎖核酸分子によってがん細胞増殖が抑制されることを示した。従って、二本鎖核酸分子は、抗がん薬に有用である。WHSC1もしくはWHSC1L1タンパク質の発現を阻止するか、またはその活性を防止する剤は、抗がん剤、特に、膀胱癌、乳癌、胆管細胞癌、CML、食道癌、HCC、NSCLC、SCLC、骨肉腫、膵癌、前立腺癌、腎細胞癌、軟部組織腫瘍、またはリンパ腫の治療のための抗がん剤として治療的に利用可能であり得る。本発明を、詳細に、その具体的な態様を参照しながら説明したが、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、様々な変化および変更がなされ得ることが、当業者には明らかであろう。本明細書中に言及された刊行物、特許出願、特許、およびその他の参照は、全て、参照によりその全体が組み入れられる。矛盾する場合には、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法、および例は、例示的なものに過ぎず、限定されることを意図しない。"