前駆体細胞からインスリン産生細胞の分化を促進およびまたは誘導する薬物製造のためのニュールツリン産物およびまたはその修飾因子エフェクターの使用法。前駆体細胞が幹細胞であることを特徴とする請求項1の使用法。幹細胞が胚細胞または体細胞の幹細胞であることを特徴とする請求項1の使用法。該幹細胞が哺乳動物由来、好ましくは、ヒト胎児の使用を除くことを条件に、ヒト由来であることを特徴とする請求項1~3の任意の一項に記載の使用法。該前駆体細胞が膵臓遺伝子、具体的にはPax4遺伝子をトランスフェクトされていることを特徴とする請求項1~4の任意の一項に記載の使用法。インスリン産生細胞の保護、生存およびまたは再生を促進する薬物製造のためのニュールツリン産物およびまたはその修飾因子エフェクターの使用法。該インスリン産生細胞がβ細胞であることを特徴とする請求項6の使用法。該インスリン産生細胞が哺乳動物由来、好ましくはヒト由来であることを特徴とする請求項6または7の使用法。該インスリン産生細胞が膵臓遺伝子、具体的にはPax4遺伝子をトランスフェクトされていることを特徴とする請求項6~8の任意の一項に記載の使用法。β細胞の機能障害に伴う疾患の予防または治療のための請求項1~9の任意の一項に記載の使用法。1型糖尿病、LADA、または進行した2型糖尿病に苦しむ患者におけるβ細胞変性の治療のための請求項10の使用法。β細胞変性を生じる危険のある患者、たとえば、限定するものではないが、1型または2型糖尿病、または初期段階のLADAに苦しむ患者におけるβ細胞変性の予防のための請求項10の使用法。ニュールツリン産物の発現量または機能に影響をおよぼすニュールツリン産物またはその修飾因子エフェクターが下記の形態で患者に投与されることを特徴とする請求項1~12の任意の一項に記載の使用法。i医薬組成物として、たとえば、腸内投与、非経口投与または膵臓に直接的に局所投与される形態と、iiニュールツリンタンパク質産物発現細胞の移植を介する形態、およびまたはiii遺伝子療法を介する形態。ニュールツリン産物またはその修飾因子エフェクターが、β細胞の変性を治療するのに有用な別の医薬組成物、たとえば限定するものではないが、ホルモン、成長因子、または免疫調整剤と併用されることを特徴とする請求項13の使用法。ニュールツリン産物が、精製された天然、合成または組換え型のニュールツリンおよびその変種をはじめとするタンパク質であることを特徴とする請求項1~14の任意の一項に記載の使用法。変異体が、挿入変異体、置換変異体、欠損変異体およびまたは化学修飾した誘導体、たとえば限定するものではないが、好ましくはGDNFファミリーからのニュールツリンおよび他のTGFβタンパク質のハイブリッド選択されることを特徴とする請求項15の使用法。ニュールツリン産物が、GenBankアクセッション番号NP004549として公表されたアミノ酸配列を有するヒトニュールツリン前駆体タンパク質、およびまたはGenBankアクセッション番号NP004549として公表されたニュールツリンタンパク質前駆体の切断によって生じる成熟ニュールツリンタンパク質産物に対して実質的に相同であるタンパク質またはペプチドより選択されることを特徴とする請求項15または16の使用法。ニュールツリン産物が、核酸、たとえばニュールツリンタンパク質産物をコードするRNAおよびまたはDNAであることを特徴とする請求項1~17の任意の一項に記載の使用法。ニュールツリン産物が、他のタンパク質が好ましくは該GDNFファミリーまたはその核酸コーディングに属するような、ニュールツリンタンパク質産物および別のタンパク質のニュールツリンホモ二量体またはヘテロ二量体より選択されることを特徴とする請求項1~18の任意の一項に記載の使用法。ニュールツリン産物が哺乳動物由来、好ましくはヒト由来であることを特徴とする請求項1~19の任意の一項に記載の使用法。前駆体、たとえば幹細胞のインスリン産生細胞へのインビトロ分化が下記の工程を含むことを特徴とする請求項1~20の任意の一項に記載の使用法。a前駆体細胞内の1つまたは複数の膵臓遺伝子を任意選択で活性化する工程と、b当該細胞を任意選択で凝集させ、胚様体を形成させる工程と、cニュールツリンタンパク質産物を含有する特定の分化培地内で当該細胞または胚様体を培養する工程と、dインスリン産生細胞を同定するおよび任意選択する工程。ニュールツリン処理されたインスリン産生細胞が下記であることを特徴とする請求項21の使用法。iグルコース応答する能力のあること、およびまたはiiグルカゴンを発現する能力のあること。ニュールツリン処理されたインスリン産生細胞が、マウスへの移植後に血糖値を正常化する能力のあることを特徴とする請求項21~22の任意の一項に記載の使用法。インビトロでニュールツリン処理された細胞の有効量が必要患者に移植されることを特徴とする請求項1~23の任意の一項に記載の使用法。ニュールツリン発現の促進作用を含む請求項1~24の任意の一項に記載の使用法であって、インビトロでニュールツリンタンパク質産物を産生および分泌するように改変されている必要患者から取り出した細胞が該患者に再移植されることを特徴とし、およびまたは必要患者の細胞が改変されて、インビボでニュールツリンタンパク質産物を産生および分泌することを特徴とすることを特徴とする請求項1~24の任意の一項に記載の使用法。少なくとも1つのさらなる他薬剤と併用される、請求項1~25の任意の一項に記載の使用法。膵臓の疾患およびまたは肥満症およびまたは代謝症候群の治療または予防に好適な少なくとも1つのさらなる薬剤と併用される、請求項26の使用法。前駆体細胞からのインスリン産生細胞の分化を促進およびまたは誘導に好適な少なくとも1つのさらなる薬剤と併用される、請求項27の使用法。免疫抑制活性を持つ少なくとも1つのさらなる薬剤と併用される、請求項26の使用法。細胞を機能膵臓細胞に分化または再生するための方法であって、該方法は下記工程を含む。aインビトロでニュールツリン有効量の存在下で、膵臓細胞に分化または再生される能力のある細胞を培養する工程、bによって、することが可能になる該細胞が成長して分化およびまたは少なくとも1つの膵臓機能を再生することを可能にする工程と、c分化または再生した膵臓細胞の有効量を、その必要患者への移植のために任意選択で調製する工程。該必要患者がヒト個体であることを特徴とする請求項30の方法。該必要患者が、膵臓細胞のa機能異常、b数の減少およびまたはc機能異常および数の減少を持つことを特徴とする請求項30または31の方法。当該必要患者が、1型糖尿病患者または2型糖尿病患者またはLADA患者であることを特徴とする請求項30~32に記載の任意の一項に記載の方法。該膵臓細胞がインスリン産生細胞であることを特徴とする請求項30~33に記載の任意の一項に記載の方法。該膵臓細胞が該膵島のβ細胞であることを特徴とする請求項30~34に記載の任意の一項に記載の方法。工程aの細胞が、胚性幹細胞、成体幹細胞、または体細胞の幹細胞から選択されることを特徴とする請求項30~35に記載の任意の一項に記載の方法。工程aの細胞が哺乳動物由来、ヒト胎児の使用を除くことを条件に、好ましくはヒト由来であることを特徴とする請求項31~36に記載の任意の一項に記載の方法。ニュールツリンが1~500ngml、好ましくは10~100ngml、より望ましくは約50ngmlの濃度で添加されることを特徴とする請求項30~37に記載の任意の一項に記載の方法。少なくとも1つの膵臓機能が、グルコースおよびグルカゴン発現に反応してインスリン産生より選択されることを特徴とする請求項30~38に記載の任意の一項に記載の方法。細胞を機能膵臓細胞に分化または再生するための方法であって、該方法は下記工程を含む。ニュールツリン産物またはニュールツリン産物を発現する能力のある細胞の有効量を、その必要患者に投与するために調製する工程。ニュールツリン産物がニュールツリンタンパク質産物であることを特徴とする請求項40の方法。ニュールツリン産物がニュールツリンタンパク質産物をコードする核酸であることを特徴とする請求項40の方法。ニュールツリンタンパク質産物を産生および分泌するために細胞が改変されており、該患者の好適な部位に移植するために調製されることを特徴とする請求項40の方法。請求項30~39に記載の任意の一項に記載の方法によって入手可能である、ニュールツリン処理された機能膵臓の細胞を含む細胞調製。請求項30~43に記載の任意の一項に記載の方法によって入手可能であるニュールツリン産物発現細胞を含む細胞調製。医薬組成物である請求項44または45の製剤。膵臓の疾患、具体的には糖尿病の治療または予防のための、請求項44~46の任意の一項に記載の製剤。移植による投与または医療機器における使用のための請求項44~47の任意の一項に記載の製剤。薬理学的に許容される担体、希釈液、およびまたは添加物を含有する、請求項44~48の任意の一項に記載の製剤。診断組成物である、請求項44~49の任意の一項に記載の製剤。治療組成物である、請求項44~50の任意の一項に記載の製剤。膵臓組織または細胞、具体的には膵β細胞の再生のための薬剤製造向けの、請求項44~51の任意の一項に記載の製剤。インビボで利用するための、請求項44~52の任意の一項に記載の製剤。インビトロで利用するための、請求項44~53の任意の一項に記載の製剤。細胞の機能膵臓細胞、具体的にはインスリン産生細胞への分化または再生を調節する能力のある化合物を同定およびまたは特徴付けするための下記工程を含む方法。被検化合物を細胞と接触させる工程であって、該細胞がニュールツリン存在下で膵機能細胞に分化または再生される能力があり、該分化過程で該化合物の効果を定量する能力もあるという条件下で行われることを特徴とする工程。該細胞を、β細胞分化に関与する遺伝子の調節管理下でレポーター遺伝子を含有するDNAコンストラクトでトランスフェクトすること、当該トランスフェクション細胞を被検化合物と接触させること、およびレポーター遺伝子の活性を定量することを含む請求項55の方法。β細胞分化を強化する分化培地で培養される胚様体を被検化合物と接触させること、およびインスリン産生細胞への分化を定量することを含む請求項54または55の方法。細胞の機能膵臓細胞、具体的にはインスリン産生細胞への分化または再生を調節する能力のある化合物を同定およびまたは特徴付けするための下記工程を含む方法。被検化合物を細胞と接触させる工程であって、該細胞が膵機能細胞に分化または再生される能力があり、ニュールツリン発現時に該化合物の効果を定量する能力があるという条件下で行われることを特徴とする工程。糖尿病の治療と予防のためのニュールツリン発現細胞の製剤使用法。膵臓細胞の再生を誘導するための請求項59の使用法。膵臓細胞がランゲルハンス島のβ細胞であることを特徴とする請求項60の使用法。糖尿病を治療およびまたは予防するためのニュールツリン処理された細胞の製剤使用法。該細胞が、インスリン産生能力を有する分化した前駆体細胞であることを特徴とする請求項62の使用法。本発明では、インスリン産生β細胞の形成または再生を促進するための、これまでは知られていない新規の神経栄養因子ニュールツリンの使用法を開示するものであって、その結果、糖尿病の治療と予防における使用法を開示するものである。神経栄養因子は、生存を調節し、特定の神経細胞集団およびまたはグリア細胞集団の表現型分化を維持する成長因子であるVaronらの1978AnnRevNeurosience1327361ThoenenらのScience2292382421985。神経成長因子NGFが、最初に同定され、そして特徴付けられた神経栄養因子であったLeviMontalciniらの1951JExpZool116321。このファミリーで第2番目に発見されたのは、脳由来の神経栄養因子であったLeibrockらの1989Nature341149152。構造的にNGFと無関係の神経栄養因子であるグリア由来の神経栄養因子GDNFは、パーキンソン病において変性する中脳ドーパミン作動性ニューロンの生存にとって極めて重要な因子の検索中に発見されたLinらの1993Science26011302。配列分析によって、該因子は、トランスフォーミング成長因子8TGFβ因子のスーパーファミリの遠いメンバーであることが明らかにされた。GDNFに構造的に近縁するがNGFとは無関係である別の神経栄養因子がニュールツリンであるKotzbauerらの1996Nature384467470。ニュールツリン、GDNFおよび他の2つの関連因子アーテミンおよびパーセフィンは、TGFβ関連神経栄養因子と呼ばれる神経栄養因子ファミリーを定義する。これらの神経栄養因子は、枢運動神経細胞およびドーパミンニューロンだけではなく、末梢自律神経細胞および感覚神経を含めた種々の神経細胞の生存を促進し、神経変性疾患治療用薬剤として提唱されているTakahashi2001CytokineGrowthFactorRev1236173によるレビューを参照。また、たとえば米国特許6090778および欧州特許EP1005358B1も参照。これら開示文献をここに参照することにより、本明細書の一部となす。TGFβ関連神経栄養因子は、グリコシルホスファチジルイノシトール結合型の細胞表面分子、GDNFファミリー受容体αGFRαおよび受容体タンパク質チロシンキナーゼRETからなる独自の2つの受容体複合体を介してシグナルを発する。記載の神経細胞組織の機能のほかに、GDNFRETシグナル伝達機能は、特定の非神経細胞組織の分化にとって極めて重要な機能である。たとえば、GFRα1および該RETは両方共に、尿管芽の成長と、それに引き続く発達中の腎臓における分岐にとって必要な受容体成分であるCacalanoらの1998Neuron215362Tangらの1998JCellBiol142133745。RET、GFRα1GDNF受容体、およびGFRα2ニュールツリン受容体は精巣生殖細胞によって発現されるが、GDNFおよびニュールツリンはセルトリ細胞によって発現される。GDNFおよびニュールツリンは両方共に、精原細胞内のDNA合成を促進する。その上、GFRα、GFRαリガンドおよび補助受容体は胚細胞性腫瘍において発現されるので、精子形成におけるパラクリン因子としての役割を果たすことができるVigliettoらの2000IntJOncol1668994。ごく最近になって、GDNFシグナル伝達の生物学的研究が、当初憶測されたよりもはるかに複雑であることが明らかになった。また、GDNFファミリーリガンドも、神経細胞接着分子NCAMを介してシグナルを発する。RETに欠ける細胞では、GDNFはNCAMおよびGFRα1複合体に対して高親和性で結合するSariolaSaarma2003JCellSci116385562によるレビューを参照。また、cMet受容体キナーゼを介するシグナル伝達も実証されているPopsuevaらの2003JCellBiol16111929を参照。GDNFRETシグナル伝達が神経細胞組織および特定の非神経細胞組織の分化にとって極めて重要であることは従来の技術において論考されているが、TGFβ関連神経栄養因子ファミリーメンバーが該再生膵臓組織に関与することは開示されていない。驚いたことに本発明者等は、ニュールツリンが、糖尿病に重要な役割を果たすインスリンを分泌する膵臓β細胞の形成または再生を促進することを見出した。かくして本発明者等は、糖尿病の治療と予防におけるニュールツリンの使用法を本発明において開示するものである。本発明は、前駆体細胞、たとえば幹細胞のインスリン産生細胞への分化を促進およびまたは誘導するための新方法、またはニュールツリン産物およびまたはニュールツリンタンパク質産物の発現量または機能に影響をおよぼす具体的には機能を高めるニュールツリンタンパク質産物の修飾因子エフェクターを用いて、インスリン産生細胞の保護、生存およびまたは再生を促進するための新方法に関するものである。したがって、本発明は、膵島細胞、具体的にはインスリン産生β細胞の機能異常およびまたは該細胞数の減少によって引き起こされる疾患、関連疾患、およびまたは付随疾患に苦しむ患者を、ニュールツリン発現量または機能に影響をおよぼすニュールツリン産物または化合物の治療有効量を投与することにより治療するための方法を提供する。膵島細胞機能の障害または低下は、たとえば糖尿病1型またはLADAなどにおける自己免疫発作、およびまたは進行した2型糖尿病などにおける細胞変性に起因し得る。また、本発明の方法を用いて、インスリン産生β細胞の変性を生じる危険のある患者を治療し、かかる過程の開始または進渉を防止することもできる。該ニュールツリン産物またはそのエフェクター修飾因子は、ニュールツリン産物発現細胞の移植、およびまたはを遺伝子療法を介して、たとえば医薬組成物として投与することが可能である。さらに、本発明は、ニュールツリン処理されたインスリン産生細胞またはニュールツリン発現細胞を含む細胞調製に関するものである。本発明の多数のさらなる態様および利点は、以下の好適な実施形態を説明する本発明の図面および詳細な説明の記述を考慮すれば、当業者には明らかとなるであろう。本発明により、膵島細胞、具体的にはインスリン産生β細胞の機能異常およびまたは該細胞数の減少によって引き起こされる疾患、関連疾患、およびまたは付随疾患に苦しむ患者を、ニュールツリン発現量または機能に影響をおよぼすニュールツリン産物または化合物の治療有効量を投与することにより治療するための方法を提供できた。膵島細胞機能の障害または低下は、たとえば糖尿病1型またはLADAなどにおける自己免疫発作、およびまたは進行した2型糖尿病などにおける細胞変性に起因し得る。また、本発明の方法を用いて、インスリン産生β細胞の変性を生じる危険のある患者を治療し、かかる過程の開始または進渉を防止することもできる。本発明を説明する前に、本明細書中で使用したすべての技術用語および科学用語が、本発明の属する技術分野における当業者に一般に理解されている意味と同じ意味を持つことは、当然のことながら通常の認識とする。本発明における用語β細胞再生は、機能インスリン分泌β細胞数の増加すること、およびまたは機能異常β細胞において正常機能を回復することによる、正常β細胞機能の少なくとも部分的な回復を意味する。本明細書中で使用した用語ニュールツリン産物には、精製された天然または合成ニュールツリンおよびその変種などのニュールツリンタンパク質産物が含まれる。変異体には、挿入変異体、置換変異体および欠損変異体、および化学修飾した誘導体が含まれる。また、変異体には、組換えタンパク質、たとえば限定するものではないが、ニュールツリンおよび他のTGFβタンパク質好ましくはから該GDNFファミリーのハイブリッドも含まれる。また、さらに含まれるのは、配列番号6で示されたアミノ酸配列を有するヒトニュールツリン前駆体タンパク質に対して実質的に相同であるタンパク質またはペプチドである。また、用語ニュールツリン産物には、上記のニュールツリンタンパク質産物をコードするポリヌクレオチドたとえば、mRNADNAも含まれる。また、用語ニュールツリン産物には、ニュールツリンタンパク質産物および別のタンパク質のニュールツリンホモ二量体またはヘテロ二量体も含まれており、ここで、他のタンパク質が好ましくはGDNFファミリーに属することを特徴とする。本明細書中で使用した用語生物学的活性は、ニュールツリン産物がインスリン産生細胞の前駆体、たとえば幹細胞からの分化を誘導およびまたは促進すること、およびまたはインスリン産生細胞、たとえばβ細胞の保護、生存、または再生を促進することを意味する。ニュールツリン産物の生物学的活性は、本出願の実施例に記載のように定量することができる。本明細書中で使用した用語実質的に相同であるは、配列番号6で示されたアミノ酸配列を有するニュールツリン前駆体の切断によって生じる生物学的活性なヒトニュールツリン産物またはヒトニュールツリン前駆体自体に対してある程度の相同性、すなわち、好ましくは70を上回り、最も好ましくは80を上回り、さらに望ましくは90または95を上回る相同性を有することを意味する。マウスタンパク質とヒトタンパク質間の相同度は約91であり、好適な哺乳動物のニュールツリンタンパク質が同様に高い相同度を有するものと考えられる。また、さらに含まれるのは、ニュールツリンと、別のTGFβタンパク質、好ましくは、ニュールツリンにおいて見出される島細胞形成に促進効果をおよぼすGDNFファミリーの別メンバーとの間のハイブリッドであるタンパク質である。相同率、またはニュールツリン産物と、そのヒトニュールツリンタンパク質または前駆体または核酸コーディングとの間の同一性は、標準手順、たとえば該BLASTアルゴリズムを用いることによって定量することができる。好ましくは、相同率または同一性は、4つの間隙が、100ヌクレオチドまたはアミノ酸長に導入され、その協調を補助することが可能であるとき、比較されている配列内の同一ヌクレオチドまたはアミノ酸残基と協調する2つの配列のうちの小さいほうに見出されるヌクレオチドまたはアミノ酸残基のパーセントとして計算される。また、実質的に相同であるものとして含まれるのは、ニュールツリンタンパク質産物に対する抗体との交差反応性により単離することができる任意のニュールツリンタンパク質産物、またはその遺伝子が、該遺伝子またはニュールツリンタンパク質産物をコードする該遺伝子のセグメントとのハイブリダイゼーションを通じて単離することができる任意のニュールツリンタンパク質産物である。本発明に関しては、用語前駆体細胞は、インスリン産生細胞に分化する能力のある未分化細胞に関連する。本用語には特に、幹細胞、すなわち未分化細胞または未熟胚細胞、成人細胞、または種々の特異性細胞型を作り出すことができる体細胞が含まれる。用語幹細胞には、胚性幹細胞ESおよび原始生殖細胞EG、哺乳動物細胞、たとえばヒトまたは動物由来細胞を含むことができる。かかる細胞の単離および培養は当業者に公知のものであるたとえば、Thomsonらの1998Science28211451147Shamblottらの1998ProcNatlAcadSciUSA951372613731米国特許6090622米国特許5914268国際公開番号WO0027995Notarianniらの1990JReprodFert415156Vassilievaらの2000ExpCellRes258361373を参照。成人細胞または体細胞は、幹細胞、腸、筋肉、骨髄、肝臓、および脳などの多数の異なる組織で同定されている。国際公開番号WO03023018では、治療用に、腸管幹細胞を単離、培養、および分化するための新方法が記述されている。膵臓におけるいくつかの徴候は、幹細胞が成人組織内にも存在していることを示唆するGuSarvetnick1993Development1183346Bouwens1998MicroscResTech43332336BonnerWeir2000JMolEndocr24297302。胚性幹細胞は、移植前の胚の内細胞塊ES細胞、または移植後の胚の生殖隆起に見出される原始生殖細胞EG細胞から単離することができる。撹拌培養または懸滴などの特殊な培養条件で増殖すると、ES細胞およびEG細胞は両方共に、凝集して胚様体EBを形成する。EBは、胚発生中に存在する細胞型と同様の種々の細胞型で構成される。適切な培地内で培養されたEBを用いると、胚体外内胚葉、造血細胞、神経細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、および血管細胞などのインビトロ分化表現型を作ることができる。本発明者等は先に、EBがインスリン産生細胞への効率的な分化を成し遂げることができる方法を説明しているそれらの方法は、特許出願PCTEP0204362に記載の方法、国際公開番号WO02086107として公表された方法、およびBlyszczukらの2003ProcNatlAcadSciUSA1009981003における方法などであり、ここに参照することにより本明細書の一部となす。用語培養培地は、幹細胞の増殖と分化を支持する能力のある好適な培地を意味する。用語分化培地は、幹細胞のインスリン産生細胞への分化を誘導するための好適な培地を意味する。用語最終分化培地は、インスリン産生細胞の最終分化に好適な培地を意味する。好ましい培地例が国際公開番号WO023018に記載されているが、それらの例をここに参照することにより本明細書の一部となす。本発明では、本発明者等は、インスリン産生細胞の形成または再生を促進およびまたは誘導するための、これまでは知られていない新規の神経栄養因子ニュールツリンの使用法を開示するものであって、その結果、β細胞機能障害、たとえば限定するものではないが真性糖尿病に伴う疾患たとえば、合併症、関連疾患または付随疾患の治療と予防における使用法を開示するものである。より具体的には、該疾患は、1型糖尿病、2型糖尿病またはLADAである。本発明は、ニュールツリンがインビトロでの幹細胞からのインスリン産生細胞の分化を促進するという驚くべき知見に基づく。したがって、ニュールツリン産物の治療有効量を投与して促進該再生膵β細胞を促進すること、またはインビトロまたはインビボでの幹細胞または前駆体細胞からのインスリン産生細胞の形成を促進することが可能である。本発明はさらに、本発明の方法から直接的に発生する医療分野における用途に関するものである。加えて、本発明は、本発明の方法から直接的に発生する治療の医療効果または毒性効果を有する化合物を同定および特徴付けするための用途に関するものでもある。本発明によれば、下記の方法でニュールツリン産物を投与することが可能である。i医薬組成物として、たとえば腸内投与、非経口投与または局所投与、好ましくは膵臓への直接投与する方法と、iiニュールツリンタンパク質産物発現細胞の移植による方法、およびまたはiii遺伝子療法を介する方法。詳細は下記を参照さらに、患者におけるニュールツリン発現量は、下記の方法によって投与されるニュールツリン修飾因子エフェクターに影響される可能性がある。i医薬組成物として、たとえば腸内投与、非経口投与または局所投与、好ましくは膵臓への直接投与する方法と、ii細胞ベースの療法を介する方法、およびまたはiii遺伝子療法を介する方法。詳細は下記を参照ニュールツリン産物またはニュールツリン修飾因子エフェクター、すなわち、ニュールツリン発現量または機能に影響し、特にそれらを増加させる薬理学的に活性な物質を、単独、またはβ細胞の変性の治療に有用な別の医薬組成物、たとえばホルモン、成長因子または免疫調整剤を併用して、上記方法で投与することが可能である。ニュールツリン産物またはその修飾因子エフェクターは、β細胞機能障害、たとえば限定するものではないが、1型糖尿病、LADA、または進行した2型糖尿病に伴う疾患に苦しむ患者に投与することが可能である。ニュールツリン産物またはその修飾因子エフェクターは、β細胞の変性を生じる危険のある患者、たとえば、限定するものではないが、初期段階の2型糖尿病またはLADAに苦しむ患者に予防的に投与することが可能であることもさらに考えられる。種々の医薬品製剤および様々な送達技術を下記にさらに詳しく説明する。本発明はまた、インビトロにて前駆体細胞をインスリン産生細胞へ分化させるための、下記を含む方法に関するものでもある。a前駆体、たとえば幹細胞における、1つまたは複数の膵臓遺伝子を活性化させること任意的な工程、特に胚性幹細胞が使用される場合、b胚様体を形成するために当該細胞を凝集させること任意的な工程、特に胚性幹細胞が使用される場合、c胚様体を培養すること、またはβ細胞分化が大幅に強化されることを特徴とする条件下で、ニュールツリンタンパク質産物およびまたはその修飾因子エフェクターを含有する特定の分化培地で成体幹細胞たとえば導管細胞を培養することと、dインスリン産生細胞を同定及び選択すること。膵臓遺伝子の活性化には、発現制御配列、たとえば国際公開番号WO03023018に記載の好適なトランスフェクションベクター上に動作可能に結合された膵臓遺伝子を用いた細胞のトランスフェクションを含むことが可能であり、該国際公開番号WO03023018をここに参照することによって本明細書の一部となす。好ましい膵臓遺伝子の例としては、Pdx1、Pax4、Pax6、neurogenin3ngn3、Nkx61、Nkx62、Nkx22、HB9、B2ニューロD、Isl1、HNF1α、ヒトまたは動物由来のHNF1βおよびHNF3が挙げられる。個々の遺伝子は、個々または少なくとも他の1つの遺伝子と併用して使用することができる。Pax4は特に好ましい。ニュールツリン産物、たとえばニュールツリンタンパク質または核酸生成物は、好ましくは組換え技術を介して作られる。その理由は、かかる方法が高量のタンパク質を高い純度で実現する能力を持つと同時に、細菌細胞系、植物細胞系、哺乳動物細胞系、または昆虫細胞系で発現される生成物に限定されないためである。ニュールツリンタンパク質産物組換え型ニュールツリンタンパク質産物形態には、タンパク質のグリコシル化型および非グリコシル化型が含まれる。一般に、組換え技術に含まれるのは、ニュールツリンタンパク質産物をコードしている遺伝子の単離、好適なベクターおよびまたは細胞型における遺伝子のクローニング、所望変異体をコード化する必要がある場合の遺伝子の修飾、およびニュールツリンタンパク質産物を作るための遺伝子の発現である。別法として、所望ニュールツリン産物をコードするヌクレオチド配列を化学的に合成してもよい。ニュールツリン産物は、選択細胞によるタンパク質産物の産生を促進するためになされた遺伝暗号または対立遺伝子変異または改変の変性に起因するコドン使用頻度によって異なるヌクレオチド配列を用いて発現することが可能であると考えられる。KotzbauerらのNature384467470では、ニュールツリンタンパク質の、マウスcDNAおよびアミノ酸配列と、ヒトcDNAおよびアミノ酸配列の同定が記述されている。本発明に係るニュールツリン産物は、種々の手段によって単離または生成することができる。ニュールツリン産物を作るための有用な例示方法は特許出願WO9708196に記載されているので、ここにその開示を参照することにより、本明細書の一部となす。また、同文書には、種々のベクター、宿主細胞、およびニュールツリンタンパク質の発現のための培養増殖条件、ならびにニュールツリンタンパク質産物バリアントの合成方法も記載されている。大腸菌内におけるニュールツリンタンパク質産物の発現に好適な追加ベクターは、特許番号EP0423980に開示されているので、ここに参照することにより、本明細書の一部となす。精製ニュールツリンの分子量は、生物学的活性型のタンパク質がジスルフィド結合二量体であること指摘する。細菌系における発現後に単離された物質は本質的に生物学的不活性であり、モノマーとして存在する。生物学的活性なジスルフィド結合二量体を作るためにはリフォールディングを行う必要がある。細菌系で発現ニュールツリンのリフォールディングと成熟に好適なプロセスは、国際公開番号WO9306116に記載の方法と実質的に同様である。また、ニュールツリン活性定量のための標準インビトロアッセイは、国際公開番号WO9306116および米国特許申請番号08535681に記載のようにGDNF活性定量法と実質的に同様であるので、ここに参照することにより、本明細書の一部となす。ニュールツリン産物バリアントは、適切なヌクレオチド変化をポリペプチドをコードするDNAに導入することによって、または所望ポリペプチドのインビトロ化学合成によって調製する。当業者であれば当然のことながら、欠損、挿入、および置換の多くの組み合わせが可能であり、その結果、ニュールツリン生物学的活性を示すタンパク質産物バリアントを得ることができる。1つまたは複数の選択アミノ酸残基の置換、挿入または欠損のための変異誘発技術は、当業者に公知であるたとえば米国特許4518584であり、ここにその開示を参照することにより、本明細書の一部となす。ニュールツリン置換変異体では、少なくとも1つの、ヒトまたはマウスのニュールツリンアミノ酸配列のアミノ酸残基が除去され、異なる残基がその場所に挿入されている。かかる置換変異体には、種集団における天然ヌクレオチド配列変化を特徴とする対立遺伝子変異体が含まれるが、その結果としてアミノ酸変化が生じるかどうかは分からない。また、ニュールツリンタンパク質産物の化学修飾した誘導体は、本明細書中での開示を所与として、当技術分野技能のうちの1つによって調製することが可能である。誘導体化に最も好適な化学的部分には、水性ポリマーが含まれる。生理環境などの水環境では付着するタンパク質が沈着しないため、水性ポリマーが望ましい。望ましくは、該ポリマーは、治療薬または治療組成物の調製に薬理学的に許容されるであろう。当業者であれば、該ポリマータンパク質複合物が治療的に使用できるかどうかを決定し、使用できる場合には、望ましい投与量、循環時間、タンパク質分解プロテオリシス耐性、および他の考慮事項などに基づいて所望ポリマーを選択できるであろう。特に本発明でも使用に好適な水溶性ポリマーはポリエチレングリコールである。受容体結合に重要な残基での結合は、受容体結合が望まれる場合には回避する必要がある。N末端が化学修飾されたタンパク質が特に望まれる場合もあろう。本発明では、少なくとも1つのポリエチレングリコール分子に結合する原核生物発現ニュールツリン、またはその変種である誘導体の使用法、ならびに、アシルまたはアルキル結合を介して1つまたは複数のポリエチレングリコール分子に結合するニュールツリン、またはその変種の使用法を検討するものである。ペグ化の実行は、当技術分野で公知の任意のペグ化反応によって行うことができる。たとえば、FocusonGrowthFactors34101992と、EP0154316ここにその開示を参照することにより、本明細書の一部となすと、EP0401384と、ペグ化に関係する本明細書で引用した他の刊行物を参照すること。また、本発明は、少なくとも1つの疎水性残基、たとえば脂肪酸分子に結合する原核生物発現ニュールツリン、またはその変種である誘導体の使用法、ならびに、1つまたは複数の疎水性残基に結合するニュールツリン、またはその変種の使用法も開示するものである。たとえば、国際公開番号WO03010185として公表された特許出願ここに参照することにより、本明細書の一部となすでは、所望ポリペプチドの前駆体分子を発現することによって、形質転換された宿主細胞内でアシル化ポリペプチドを作るための方法が記述されている該ポリペプチドは次いで、引き続くインビトロ工程においてアシル化される。ニュールツリンタンパク質産物をコードするポリヌクレオチド本発明はさらに、組換え産物であるか天然産物であるかを問わず、ニュールツリンタンパク質産物をコード化するポリヌクレオチドを提供する。ニュールツリンタンパク質産物をコードする核酸配列は、限定するものではないが、たとえば化学合成、cDNAまたはゲノムのライブラリースクリーニング、発現ライブラリースクリーニング、およびまたはcDNAのPCR増幅をはじめとする種々の方法で容易に得ることが可能である。これらの方法およびかかる核酸配列の単離に有用な他の方法には、たとえば、SambrookらによるMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNY1989、Ausubelらによる、版CurrentProtocolsinMolecularBiologyCurrentProtocolsPress1994、およびBergerとKimmelによるMethodsinEnzymologyGuidetoMolecularCloningTechniquesvol152AcademicPressIncSanDiegoCA1987が挙げられる。また、ニュールツリンタンパク質産物をコード化する核酸配列化学合成を、Engelsらによって示されたAngewChemIntlEd28716734301989などの当技術分野で公知の方法を用いて実現することもできる。本発明の範囲内に含まれるのは、天然シグナル配列および他のプレプロ配列を有するニュールツリン産物ポリヌクレオチド、ならびに、天然シグナル配列が削除され、異種シグナル配列で置換されていることを特徴とするポリヌクレオチドである。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識および処理すなわちシグナルペプチダーゼによって切断されるシグナル配列である必要がある。天然ニュールツリンシグナル配列を認識および処理しない原核生物宿主細胞の場合、該シグナル配列は、たとえばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、または熱安定性エンテロトキシン11リーダーからなる群から原核生物のシグナル配列によって置換される。酵母分泌に関しては、天然ニュールツリンシグナル配列を酵母インベルターゼ、α因子、または酸ホスファターゼリーダーによって置換することができる。哺乳動物細胞発現では、他の哺乳動物シグナル配列が好適である場合もあるが、天然シグナル配列で十分である。発現ベクターおよびクローニングベクターには通常、1つまたは複数の選択される宿主細胞内で該ベクターの複製を可能にする核酸配列が含まれる。ニュールツリン産物の医薬組成物ニュールツリン産物の医薬組成物には通常、1つまたは複数の薬理学的および生理的に許容される製剤との混合物中ニュールツリン産物の治療有効量が含まれる。該活性成分に加えて、ニュールツリン産物の医薬組成物は、該活性化合物を薬理学的に使用できる製剤製造過程を促進する賦形剤および助剤を含む、薬理学的に許容される好適な担体を含有することができる。製剤技術および投与技術に関する詳細は、RemingtonsPharmaceuticalSciencesのMaackPublishingCoEastonPaの最近版に記載されており、ここにその開示を参照することにより、本明細書の一部となす。製剤された該治療組成物は、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、または脱水粉末または凍結乾燥粉末として滅菌瓶に保管することができる。かかる製剤は、すぐにでも使用できる形態、または、たとえば、投与に先立って再構成を必要とする凍結乾燥形態で保管することができる。最適な医薬品製剤は、当業者であれば、投与経路および所望投与量などを考慮して決定できるであろう。かかる製剤は、現ニュールツリンのタンパク質、変異体および誘導体の物理的状態、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響を及ぼし得る。徐放製剤、噴霧吸入、または経口で有効な製剤などのその他の効果的な投与形態も想定される。たとえば、持続放出製剤では、ニュールツリン産物は、高分子化合物ポリ乳酸酸、ポリグリコール酸などまたはリポソームの粒子調製に結合されるか、または取り込まれる。ニュールツリン産物の投与と送達当業者には周知のように、ニュールツリン産物投与は、任意の好適な手段、好ましくは腸投与または非経口投与にまたは膵臓に直接的に局所投与によって行うことが可能である。体重、体表面積または臓器の大きさを考慮して、特定の投与量を算定することもできる。前記製剤のそれぞれに関与して、治療に適切な投与量を決定するために必要な精密計算は、当業者によって日常的に行われており、日常的に行われる作業領域範囲内にある。適切な投与量は、適切投与量反応データと併せて利用される投与量決定のために確立されているアッセイの使用を通して確認することができる。上記状態を治療するための方法に関与する最終投与計画は、薬物作用を修飾する種々の要因、たとえば、患者の年齢、状態、体重、性別および食習慣、感染の重症度、投与時間および他の臨床因子を考慮して、主治医によって決定されるであろう。諸研究が行われるにつれて、種々の疾患および状態を治療するための適切な投与量に関して、さらなる情報が出現するであろう。ニュールツリン産物の連続投与または継続送達が所与の治療に有益であり得ることも想定される。連続投与は、輸液ポンプなどの機械的手段を介して達成することが可能であるが、他方式の連続投与または近連続投与も実践可能であると考えられている。たとえば、化学的誘導体化またはカプセル化により、継続的存在効果を有するタンパク質の持続放出型を、決定された投与計画に基づいて、予測可能な量で得ることが可能である。したがって、ニュールツリンタンパク質産物には、かかる連続投与を達成するために、誘導体化あるいは別の方法で製剤されるタンパク質が含まれる。また、ニュールツリン産物細胞療法、すなわちニュールツリンタンパク質産物を作る細胞の膵臓移植も考えられる。この実施形態では、ニュールツリンタンパク質産物の生物学的活性化型を合成および分泌する能力のある細胞の患者への移植を必要とする。かかるニュールツリンタンパク質産物を作る細胞は、ニュールツリンタンパク質産物の天然生成体であっても良いし、または該タンパク質を発現するために改変される細胞であっても良い。かかる改変細胞には、その発現および分泌の促進に好適なベクター内で、所望ニュールツリンタンパク質産物をコードする遺伝子による形質転換によってニュールツリンタンパク質産物を作る能力が増大されている組換え細胞が含まれる。外来種のニュールツリンタンパク質産物を投与されている患者の免疫学的反応の可能性を最小化するために、該ニュールツリンタンパク質産物を作る細胞がヒト由来であり、そしてヒトニュールツリンタンパク質産物を作ることが好ましい。同様に、該ニュールツリンタンパク質産物を作る組換え細胞がヒトニュールツリンタンパク質産物をコードする遺伝子を含有する発現ベクターで形質転換されることが好ましい。移植細胞をカプセル化して、周囲組織の浸潤を回避することも可能である。ヒトまたは非ヒト動物細胞は、生物学的に適合な重合体の半透過性封入体または、ニュールツリンタンパク質産物の放出を許容するが、患者の免疫系または、周囲組織からの他有害因子による細胞破壊を防止する膜において、患者に移植しても良い。あるいは、ニュールツリンタンパク質産物分泌細胞を、局所麻酔を用いて経皮経肝的アプローチを介して、必要患者の門脈内に導入することも可能である。好ましくは、体重1キログラム当たり3000から100000個に相当する分化したインスリン産生細胞を投与する。かかる外科的技術は当分野で公知であり、canbeされたなしでせずに任意の必要以上の実験なしに適用できるものである。Pyzdrowskiらの1992NewEnglandJMedicine327220226HeringらのTransplantationProc265705711993ShapiroらのNewEnglandJMedicine3432302382000を参照。さらなる好適な実施形態では、ニュールツリンタンパク質産物を、インスリン産生細胞の分化を促進するために、前駆体、たとえば幹細胞に直接的に送達することができる。たとえば、タンパク質送達は、ポリカチオンリポソームSellsらのBiotechniques197276、Tat媒介タンパク質形質導入FawellらのProcNatlAcadSci米国特許91664668および、B型肝炎ウイルスのPreS2領域に由来する細胞透過性モチーフにタンパク質を融合することOessおよびHildtGeneTher7750758によって実現することができる。かかるタンパク質の細菌、酵母または真核細胞からの調製、産生および精製は、当業者に周知のものである。本発明の実施形態におけるニュールツリンは、好ましくは1~500ngml、より望ましくは10~100ngml、たとえば約50ngmlの濃度で添加することが可能である。さらに、本発明は、分化した前駆体細胞、たとえばインスリン産生を示す幹細胞、具体的には上記方法によって入手可能なインスリン産生細胞株を含む細胞調製に関するものである。該インスリン産生細胞は、β細胞分化に関与する少なくとも1つの膵臓遺伝子の安定発現または一過性発現を示す。該細胞は、好ましくはヒト幹細胞に由来するヒト細胞である。治療に応用される場合は、患者の成体幹細胞から取り出したヒト自家細胞の産生が特に好ましい。しかしながら、該インスリン産生細胞は非自己細胞由来であっても良い。必要があれば、非所望の免疫反応は、カプセル化、免疫抑制およびまたは調節によるか、または該細胞の非免疫抗原性に基づいて回避することができる。本発明のインスリン産生細胞は、好ましくは天然β細胞に酷似する特徴を示す。さらに本発明の細胞には、好ましくはグルコースに敏感に反応する能力がある。277mMのグルコース添加後、インスリン産生は少なくとも2倍、好ましくは3倍増強される。さらに、本発明の細胞には、マウスへの移植後に、血糖値を正常化させる能力がある。本発明にはさらに、入手可能または本発明に係る方法によって得られる膵機能細胞が包含される。該細胞は、好ましくは哺乳動物、たとえばヒト由来細胞である。好ましくは、当該細胞は、膵β細胞、たとえば成熟膵β細胞または膵β細胞に分化した幹細胞である。かかる膵β細胞は、好ましくはグルコースに反応してインスリンを分泌する。また、本発明は、グルコースに反応してグルカゴンを発現する膵機能細胞を提供する。本発明の細胞を含む製剤は、α細胞、δ細胞およびまたはPP細胞などの他の内分泌細胞型の性質を持つ細胞をさらに含有する。これらの細胞は好ましくはヒト細胞である。本発明の細胞調製は、好ましくは、薬理学的に許容される担体、希釈液およびまたはアジュバントと共に該細胞を含む医薬組成物である。該医薬組成物は、好ましくは膵臓の疾患、たとえば糖尿病の治療または予防に使用される。本発明によれば、ニュールツリン処理された機能インスリン産生細胞は、好ましくは肝内に、必要とする個々の膵臓に直接的に、または他の方法によって移植することが可能である。あるいは、かかる細胞を、任意の部位、より望ましくは膵臓の近傍、または膀胱、または肝臓、または皮下で個々の体に導入することができる、移植可能なカプセルに封入することも可能である。細胞を個人に導入する方法は、当業者には公知であり、限定するものではないが、注射投与、静脈内投与または非経口投与が含まれる。単回投与、反復投与、連続投与または間欠投与を誘起することができる。該細胞は、いくつかの異なる部位、たとえば限定するものではないが、膵臓、腹腔、腎臓、肝臓、腹腔動脈、門脈または脾臓のいずれかに導入することができる。また、該細胞は個々の膵臓に沈着させることも可能である。生細胞の膜カプセル化方法論は当業者にはよく知られており、カプセル化細胞の調製およびその患者への移植は、必要以上の実験無しに達成することができる。たとえば、特にここに参照することにより、本明細書の一部となす米国特許第4892538号、第5011472号、および第5106627号を参照。生細胞をカプセル化するためのシステムは、AebischerらのPCT申請番号WO9110425に記載されているので、ここに参照することにより、本明細書の一部となす。また、特にここに参照することにより、本明細書の一部となすAebischerらのPCT申請番号WO9110470、Winnらの、ExperNeurolの1133223291991、Aebischerらの、ExperNeurol1112692751991Trescoらの、ASAIO3817231992も参照のこと。また、リポソーム担体、生体内分解性粒子またはビーズおよび蓄積注射などの種々の他持続送達手段または制御送達手段を処方するための技術も当業者に公知である。別の実施形態では、キソビボでの遺伝子療法も想定されている。すなわち、患者自身の細胞をエキソビボで転換させ、ニュールツリンタンパク質産物またはニュールツリン発現を促進するタンパク質を作り、直接的に再移植することが可能である。たとえば、患者から取り出した細胞を培養し、適切なベクターで形質転換させることが可能である。選択的繁殖拡大段階後、該細胞を同一患者の体、具体的には、該細胞が所望ニュールツリンタンパク質産物を作り放出する膵臓に移植し直すことができる。トランスフェクションおよびリポソーム注射による送達は、当分野で公知の方法を用いて達成することが可能である。上記治療方法のいずれも、たとえば、哺乳類イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サルなど、および最も好ましくはヒトを含めた任意の好適な被検体に適用することが可能である。また、核酸コンストラクトの局所注射または他の適切な送達方法を介してニュールツリンタンパク質産物を標的膵臓細胞にコードしている遺伝子導入することによって、インビボでのニュールツリン産物遺伝子療法も想定されるHeftiJNeurobiol25141814351994。たとえば、ニュールツリンタンパク質産物をコードする核酸配列は、膵臓細胞への送達のために、アデノ関連ウイルスベクターまたはアデノウイルスベクターに含有されることが可能である。代替ウィルスベクターには、限定するものではないが、レトロウイルス、単純ヘルペスウイルスおよび乳頭腫ウイルスベクターが含まれる。インビボまたはエキソビボのいずれかの適切な物理的移動も、リポソーム媒介移動、直接注射裸のDNA、受容体媒介移動リガンドDNA複合体、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿またはマイクロパーティクル微粒子照射遺伝子銃によって達成することができる。シクロスポリンなどの免疫抑制薬も、必要とする患者に投与して、移植片対宿主反応を抑制することができる。本発明の方法によって得られた細胞を用いた同種移植も、少なくとも部分的な膵臓機能を複数のレシピエントにおいて再生するために1つの健康なドナーが十分な細胞供給し得るという理由から、有用である。ニュールツリン核酸とタンパク質およびそのエフェクター修飾因子は、単独療法として、または他の薬剤を用いた併用療法としてのいずれの療法によっても投与することが可能である。たとえば、それらニュールツリン核酸とタンパク質およびそのエフェクター修飾因子は、膵臓の疾患およびまたは肥満症およびまたは代謝症候群の治療または予防に好適な他の薬剤、特に、インスリン産生細胞の前駆体細胞からの分化を促進およびまたは誘導するために好適な他の薬剤と共に投与することが可能である。さらに、それらニュールツリン核酸とタンパク質およびそのエフェクター修飾因子は、たとえば抗体、ポリペプチドおよびまたはペプチド性または非ペプチド性低分子物質などの免疫抑制活性を有する薬剤と共に投与することも可能である。免疫抑制薬の好ましい例を以下の第1表に記載する。第1表免疫抑制のための典型的な薬剤該併用療法には、治療期間中の薬物同時投与およびまたは該治療期間における異なる時間間隔中の単一薬物の分離投与を含むことができる。ニュールツリンタンパク質産物および/または医薬組成物におけるその修飾因子エフェクターの、それを必要とする被検体、具体的にはヒト患者への投与は、少なくとも部分的な膵臓細胞の再生を引き起こす。好ましくは、これらの細胞は、糖尿病状態の改善に寄与するインスリン産生β細胞である。この組成物の、たとえば、短期間または定期的な投与により、β細胞量の増加を実現することもできる。これは、体が糖尿病状態を部分的または完全に逆転させる上で効果がある。被検体のグルコース恒常性が改善するにつれて、投与製剤の強度を低下させることが可能である。少なくとも一部の事例では、投与を完全に停止することができ、該被検体はさらなる治療を受けることなしに、正常量のインスリンを引き続き産生する。それによって、該被検体を治療することができるばかりでなく、糖尿病状態を完全に治癒することもできる。しかしながら、β細胞量における中程度の改善でさえも、必要な外因性インスリン量の減少、糖血症制御の改善、および引き続く糖尿病合併症の低減をもたらすことができる。別の実施例では、本発明の組成物はまた、β細胞が再生される場合に、膵臓癌、異形成、または膵炎などの他膵臓疾患を有する患者の治療に効力を持つ。さらなる実施形態では、本発明によって、β細胞分化、インスリン分泌およびまたはグルコース応答性を促進する化合物、より具体的には、ニュールツリン発現量または機能を増加させる化合物の同定およびまたは特徴付けのための細胞産生が可能になる。この方法は、特に診断用途および薬物開発またはスクリーニングのためのインビボ試験に好適である。所定の化合物が好適な細胞に加えられ、ニュールツリン発現または機能が定量される。あるいは、所定の化合物が、ニュールツリン処理された細胞に加えられ、細胞分化およびまたはインスリン産生への影響が定量される。好ましくは、分化したインスリン産生細胞を使用する。処理された細胞内のインスリン値濃度は、たとえば酵素免疫測定法ELISAまたはラジオイムノアッセイRIAによる定量化によって決定できる。この方法を用いると、多数の化合物をスクリーニングすることができ、ニュールツリン発現を誘導するか、またはニュールツリン活性を支持し、結果としてβ細胞分化およびまたはインスリン分泌を促進する化合物を容易に同定できる。ハイスループットスクリーニング法では、該細胞は、β細胞分化に関与する遺伝子プロモーター、たとえば好ましくはPax4プロモーターの調節管理下で、DNAコンストラクト、たとえばレポーター遺伝子たとえばlacZ遺伝子または該GFP遺伝子を含有するウィルスまたは非ウィルスベクターをトランスフェクトされる。トランスフェクトされた該細胞はアリコットに分かれており、個々のアリコットは試験物質、たとえば候補1、候補2、および候補3と接触する。該レポーター遺伝子活性は、該試験化合物の能力に相当してβ細胞分化を誘導する。さらなる実施形態上記のようにハイスループットスクリーニングと組み合わせることができるでは、培養液処理量の確認が実行される。その確認では、該試験化合物は培養されている細胞に加えられ、ニュールツリン発現およびまたはインスリン産生が定量される。Pax4プロモーターがβ細胞再生のためにマーカーとして使用される、上記で概説した細胞ベースのアッセイなどの初期ハイスループットアッセイに続いて、当該化合物を胚様体の培養培地に加えることを含むバリデーションアッセイでは、β細胞分化を誘導する候補分子の活性が試験される。次いで、化合物の有効性を査定するため、インスリン産生細胞への分化が、野生型およびまたはPax4発現細胞に対して比較することによって評価される。実施例本発明のより良い理解とその多くの利点は、実例として示した以下の実施例から明らかであろう。実施例1Pax4遺伝子を発現するES細胞の作成。マウスR1ES細胞NagyらのProcNatlAcadSciUSA9084248428を、ホスホグリセラートキナーゼIプロモーターpGK1制御下のCMVプロモーターおよび該ネオマイシン耐性遺伝子の制御下で、Pax4遺伝子を用いて電気穿孔した。ES細胞を、45glのグルコース、104Mのβメルカプトエタノール、2nMのグルタミン、1非必須アミノ酸、1nMのピルビン酸ナトリウム、15FCSおよび500Umlの白血病抑制因子抑制因子を含有するダルベッコ変法イーグル培地内で培養した。つまり、08mlのリン酸緩衝食塩水PBS中に再懸濁された約107個のES細胞を、25μgmlの線形発現ベクターJoynerGeneTargetingAPracticalApproachOxfordUniversityPressNewYork1993を用いた電気穿孔法に供した。電気穿孔法の5分間後、ES細胞を、100μgmlのマイトマイシンCを用いた処理によって予め不活化された線維芽細胞の支持細胞を含有するペトリ皿にプレーティングした。電気穿孔法の1日後、培養培地を450μgmlのG418を含有する培地に変更した。耐性クローンを別々に単離して、選択培地を加えた後に14日間培養した。細胞は常に37°C、5二酸化炭素にて培養した。これらの未処理および未分化状態のES細胞を、図1に示した実験の対照として使用した図1ではESと呼ぶ。実施例2ES細胞のインスリン産生細胞への分化図1では対照と呼ぶPax4図1ではPax4ESを恒常的に発現するES細胞株R1野生型、図1ではwtESおよびES細胞を、ここに参照することによって本明細書の一部となす、国際公開番号WO02086107として公表された特許出願PCTEP0204362、およびBlyszczukらによる2003ProcNatlAcadSciUSA1009981003に記載のように、下記および第2表の培地を用いて、懸滴法によって胚様体EBとして培養した。該胚様体を2日間懸滴培養して形成せしめ、次いで移動し、ペトリ皿中で3日間懸濁培養した。5日目で、EBを、イスコーブ変法ダルベッコ培地をベースに調製した分化培地を含有するゼラチンコーティングの6cmの細胞培養皿に別々にプレーティングした。解離および14日目での再プレーティング後、ダルベッコ変法イーグル培地:栄養素混合物F12DMEMF12をベースに調製した分化培地で、細胞を最大で40日間まで培養した。実施例3ES細胞のインスリン産生細胞への分化後の膵臓特異的遺伝子の発現膵臓特異的遺伝子の発現量を半定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応RT-PCR分析によって測定した。胚様体形成後、分化した野生型ESおよびPax4ES細胞を回収し、溶解緩衝液4Mのグラニジウムチオシアナート、25mMのクエン酸ナトリウム、pH7と、05サルコシル、01Mのβメルカプトエタノール中で懸濁した。全RNAを、ChomczynskiSacchiの1987AnalBiochem162156159によって記述された一段階抽出法によって単離した。ポリTテールプライマーオリゴdT16PerkinElmer社を用いてmRNAを逆転写し、結果として得られたcDNAを、β細胞グルコーストランスポーターGlut2およびインスリンの転写物と相補的かつ同一のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅した。ハウスキーピング遺伝子βチューブリンを内部標準として使用した。逆転写RTを、MuLV逆転写酵素PerkinElmer社を用いて行った。多重PCRポリメラーゼ連鎖反応を、前出のWobusらの1997に記載のように、AmpliTaqDNAポリメラーゼPerkinElmer社を用いて実行した。Glut2およびインスリンをコードする遺伝子のmRNAレベルを、製造者の指示に従ってDynalbeadsmRNADIRECTマイクロキットDynal社を用いて分析した。各PCR反応の3分の1を電気泳動によって分離した。ゲルの臭化エチジウムの蛍光シグナルを、特別ソフトウェアTINA208eによって分析した。臭化エチジウムの蛍光シグナル強度を各ピークのカーブ下面積から定量し、標的遺伝子データをハウスキーピング遺伝子βチューブリンの発現に対応する変化率としてプロットした。結果は、β細胞分化機能のマーカーが、分化した野生型ES細胞内よりも、Pax4分化ES細胞内で高いレベルで発現し、膵臓発生調節遺伝子の活性化が、野生型ES細胞に対するよりもより効果的に分化させることを実証することを示す図1。分化した幹細胞内のGlut2発現は、ホルモン産生細胞がグルコースに応答する能力のあることを指摘する。分化した幹細胞におけるかなりの量のインスリン発現は、分化した細胞がβ細胞と同様の表現型を示すことを指摘する。実施例4ニュールツリンによるインスリン産生細胞の分化誘導図1ではEBNTNと呼ぶインビトロでβ細胞を分化誘導するニュールツリンの効果を研究するために、本発明者等は、実施例1に記載のようにサイトメガロウイルスCMV初期プロモーターエンハンサー領域制御下で、Pax4を発現する安定したマウス胚性幹ES細胞を作った。次いで、Pax4細胞および野生型ES細胞を懸滴または撹拌培養で培養して、胚様体を形成させた。PBS01BSA中、50ngmlのニュールツリン溶液存在下で、胚様体を形成した。引き続いて、胚様体プレーティングし、この場合も12日目まで隔日にニュールツリンを添加し、その後で酵素的に解離し、再プレーティングした。解離後に細胞を、種々の成長因子を含有する分化培地で培養した詳細は第2表を参照。ニュールツリンを米国RDIResearchDiagnostics社から、注文番号RDI4511で取得した。かかる条件下でインスリンの発現を、2つの別例においてニュールツリンによって有意に誘導した図1Aおよび1B。加えて、2つの別例における分化培地へのニュールツリンの添加は、グルコーストランスポーターGlut2の発現を大幅に強化しなかった図1Cおよび1D。ちなみに、野生型ES細胞は、同一段階でインスリン産生細胞をまったく含有せず、僅かな数のGlut2発現細胞のみを含有するにすぎなかった。これらのデータは、ニュールツリンが、野生型ES細胞と比較して、ES細胞のインスリン産生細胞への分化を有意に促進および強化できることを実証する。図1に示した結果は明らかに、ニュールツリンが胚様体に添加される場合の、インスリン分泌図1Aおよび1B細胞およびグルコース応答性図1Cおよび1D細胞の分化が有意に誘導されることを実証する。したがって、ニュールツリンは、インスリン産生β細胞の分化に強力な誘導作用を持つものである。第2表ニュールツリンによるインスリン産生細胞の分化誘導プロトコル培地B1、B2およびB27補充NAニコチン酸アミドは、Rolletschekらの2001MechDev10593104に記載されている。実施例5分化したインスリン産生細胞の機能的特徴1つの重要なβ細胞の性質は、グルコース応答性インスリン分泌である。Pax4由来のインスリン産生細胞がこのグルコース応答性を有していたかどうかを確認するため、インビトロで分化細胞のグルコース応答測定法を行った。該測定法の当日、12または6ウェルプレートの分化培地を除去し、28mMのグルコースで補充したKrebsRingerBicarbonateHepesBufferKRBH、125mMの塩化ナトリウム、47mMの塩化カリウム、1mMの塩化カルシウム、12mMのリン酸二水素カリウム、12mMの硫酸マグネシウム、5mMの炭酸水素ナトリウム、25mMのHEPES、01BSAを用いて該細胞を3回洗浄した。プレインキュベーションのため、細胞を、KRBH28mMのグルコース中で2時間、37°Cにてインキュベートした。その後細胞を、750μl~1mlのKRBH28mMのグルコース中で1時間、37°Cにてインキュベートした。その上澄みは、基礎インスリン分泌測定のために保存した。インスリン放出を促進するため、167mMのグルコースを含有する750μl~1mlのKRBHを該細胞に添加した。37°Cにて1時間のインキュベーション後、グルコース誘導性インスリン分泌を測定するため、KRBHを回収し、該細胞を、酸エタノールを用いて抽出したIrmingerJCらの2003Endocrinology14413681379も参照。インスリン値濃度を、製造者の提案に従ってマウスインスリンの酵素免疫測定法ELISAMercodiaによって定量した。適切なインスリン放出のために、非必須アミノ酸Gibco、原液1:100および前述の付加因子で補充したグルコース濃度1glGibcoのDMEMをベースにした代替培地を使用した。かかる培地は、該細胞を使用する1~6日間前に加えることができる。基礎インスリン分泌は、野生型および細胞ニュールツリン誘導性インスリン産生細胞が両方共に低グルコース濃度28mMで培養されるときに認められる。しかしながら、ニュールツリン誘導性インスリン産生細胞は、グルコース刺激に対して高度に反応する。高グルコース濃度167mM存在下では、ニュールツリンES由来のインスリン産生細胞におけるインスリン分泌の増加が認められる。実施例6STZ糖尿病マウスにおけるPax4ES由来のインスリン産生細胞の移植。糖尿病を改善および治癒するためのニュールツリン誘導性インスリン産生細胞の治療可能性は、該細胞のストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスへの移植によって検討することができる。ストレプトゾトシンは、特定の投与量で投与されると、β細胞に対して細胞毒性を示す抗生物質であるRodriguesらのStreptozotocininduceddiabetesMcNeillExperimentalModelsofDiabetesCRCPressLLC1999を参照。その毒性効果は急速であり、48時間以内に重度な糖尿病を動物に与える。非絶食雄BALBcマウスにSTZを投与して、STZ処理後に高血糖を引き起こさせた。マウスの血糖値が3日間以上連続して10mmollを超える場合、該マウスが糖尿病であると見なした。細胞を、動物の腎臓被膜下と脾臓内に移植した。インスリン産生細胞が存在することを、移植組織の免疫組織学的分析によって確認した。結果は、移植細胞が糖尿病動物の血糖値を正常化できることを実証すると期待されるものである。上記諸元で言及したすべての刊行物および特許は、ここに参照することによって本明細書の一部となす。本発明に記載の方法および体系の種々の修正形態および変形形態は、当業者であれば当然のことであり、本発明の範囲および真の趣旨から逸脱することなく行い得る。本発明について説明するにあたり、特定の好適な実施例に関連して説明を行ったが、本発明の特許請求の範囲が、かかる特定の実施例に不当に制限されるべきではないことは当然のことながら共通認識とする。実際に、分子生物学または関連分野における当業者ならば当然のことながら、本明細書に記載した本発明を実施方法の種々の修正形態は以下の特許請求の範囲内にあるものとする。実施例7mDG770トランスジェニックコンストラクトの作成mDG770の完全オープンリーディングフレームORFを、ゲートウェイシステムInvitrogen社を用いて、ラットインスリンプロモーターIILomedicoらのCell18545558の制御下でクローニングした。トランスジェニックコンストラクトの構造に関しては、図2も参照。実施例8RIPmDG770トランスジェニックマウスの作成トランスジェニックコンストラクトDNA実施例7を参照を、標準技術たとえば、BrinsterらのProcNatlAcadSciUSA8244384442を参照を用いてC57BL6xCBA胎仔HarlanWinkelmannBorchenGermanyに注射投与した。mDG770導入遺伝子実施例7を参照を、当業者に公知の技術たとえば、GunnigらのProcNatlAcadSciUSA8448314835を参照を用いて、ラットインスリンプロモーターII前出のLomedicoらの制御下で発現させた。この技術を用いて、いくつかの独立した創始系統founderlinesを作成した。実施例9RIPmDG770トランスジェニックマウスの遺伝子型分析遺伝子型決定法を、該尾端から単離されたゲノムDNAを用いて、PCRポリメラーゼ連鎖反応によって行った。mDG770導入遺伝子を検出するため、導入遺伝子に特異的なフォーワードプライマー5tgctatctgtctggatgtgcc3およびmDG770導入遺伝子に特異的なリバースプライマー5aaggacacctcgtcctcaタグ3を使用した。実施例10TagMan分析を介したmDG770発現解析該ラ氏島内mDG770導入遺伝子の発現をTagMan分析によって監視した。この分析には、トランスジェニックマウスから単離された膵島RNAに由来する25ngのcDNA、およびそれらの同腹仔、およびmDG770に特異的なプライマープローブペアを用いて、内因性、ならびに、遺伝子導入mDG770発現mDG7701フォーワードプライマー:5GCCTATGAGGACGAGGTGTCC3、mDG770リバースプライマー:5AGCTCTTGCAGCGTGTGGT3、mDG770プローブ:5TCCTGGACGTGCACAGCCGC3を検出した。TagMan分析を、当業者に公知の標準技術を用いて行った。異所性導入遺伝子発現を、分析した4つのうちの3つのRIPmDG770遺伝子導入創始系統founderlinesから検出した。最も高い導入遺伝子発現量を示す2つの創始系統founderlinesをさらなる分析に使用した。野生型動物と比較した、遺伝子導入動物のラ氏島内におけるmDG70発現に関しては図3も参照すること。実施例11mDG770トランスジェニックマウスで行われる分析的操作方法1ケージあたり3~6匹のマウスを収容し、適時に給餌した。代謝血液パラメータを、尾静脈から単離された静脈血または眼窩球後出血を介して得られる静脈血を用いて決定した。血糖値を、ワンタッチ血糖測定器LifeScanGermanyを用いて測定した。mDG770トランスジェニックマウスは、野生型wtマウスと比較して、ランダムな低血糖値を示すRIPmDG770。図4も参照のこと。細胞からインスリン産生細胞の分化を促進およびまたは誘導する薬物製造のためのニュールツリン産物およびまたはその修飾因子エフェクターの使用法。