"ヘリピロンAを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤。経口剤である請求項1記載のアディポネクチン産生促進剤。請求項1又は請求項2に記載のアディポネクチン産生促進剤を有効成分とする食後血糖改善剤。請求項1又は2に記載のアディポネクチン産生促進剤を有効成分とする糖尿病治療剤。ヘリピロンAを有効成分とするPPARγ活性化剤。本発明の目的は、新規なアディポネクチンの産生分泌促進剤を提案することである。本発明者は、ヘリピロンAの新たな用途を調査研究した結果、アディポネクチンの産生分泌促進作用を知見したので提案する。すなわち、本発明の主な構成は、次のとおりである。1ヘリピロンAを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤2経口剤である1に記載のアディポネクチン産生促進剤31又は2に記載のアディポネクチン産生促進剤を有効成分とする食後血糖改善剤41又は2に記載のアディポネクチン産生促進剤を有効成分とする糖尿病治療剤。5ヘリピロンAを有効成分とするPPARγ活性化剤。本発明の有効成分であるヘリピロンAは、アディポネクチン産生促進作用を有するため、アディポネクチン産生が低下した状態を改善する。これによりアディポネクチンが関与する種々のインスリン抵抗性を改善し、メタボリックシンドロームに基づく種々の病態の治療予防に役立つことが期待される。特にアディポネクチン産生促進によって食後血糖の上昇を抑制するため、糖尿病などの血糖コントロールを必要とする患者にとって有効な治療剤となる。またヘリピロンAは核内レセプターであるPPARγを活性化させる作用を有しておりPPARγが関わる疾患の治療や改善に有用である。以下、本発明を詳細に説明する。本発明で用いるヘリピロンAは化学的に合成される。あるいは植物から抽出することができる。合成方法は公知であるが、以下に概要を示す。ヘリピロンAHelipyroneAの化学合成ヘリピロンAHelipyroneAの化学合成については、上述したように非特許文献1EsahakAlietalPhytochemistry198221243244、に開示されている。例えば、本発明では、次のように合成した。400mLのヘキサン溶媒を用いて、四塩化チタンの存在下で化合物1ジエチルケトン172gと化合物2テトラヒドロ-1,4-オキサジンterahydro14oxazine1000gを4°Cで3時間で反応させ、蒸留処理で精製し、化合物3N-イソプロペニル-テトラヒドロ-1,4-オキサジンterahydro14oxazine50357g収率811を得た。200mLのトルエン溶媒を用いて、化合物3N-イソプロペニル-テトラヒドロ-1,4-オキサジンterahydro14oxazine167gを化合物4エチルマロニルクロライドethylmalonylchloride81gとメタノール-氷冷17°C~11°C条件で反応させ、一般式2で表される化合物5を合成した。一般式2化合物3と化合物4との反応は2N塩酸添加で終了させ、クロロホルム抽出後に硫酸マグネシウム乾燥処理を行った。その次に反応溶液にトルエン200mLと25塩酸400mLを順次加えて液-液分配でトルエン層を回収した。トルエン層を01N塩酸400mLで洗浄し、硫酸マグネシウム乾燥処理後にトルエンを真空エバポレーターで除去して橙色油状溶液を得た。この溶液にPPAポリリン酸1kgを加え、110°C~118°Cで環化して化合物5を合成した。化合物5は室温に冷却し、クロロホルム抽出で回収し、硫酸マグネシウム乾燥処理後に真空エバポレータ-でクロロホルムを除去した。固形物をシリカゲルクロマトグラフィークロロホルム:メタノール=50:1vvで橙色固形の化合物5を457g得た。本反応の収率は183であった。この化合物5について1N塩酸の存在下でホルムアルデヒドを重合反応することで化合物6ヘリピロンAHelipyroneAを化学合成した。化合物5の457gをエタノール460mLに溶解し、濃塩酸25mLの存在下でホルムアルデヒド3724781gを79°Cで還流反応させ、結晶が析出した。この結晶をエタノール300mLで洗浄し、白色結晶としてヘリピロンAHelipyroneAを3401g得た。本反応の収率は716であった。得られたヘリピロンAHelipyroneAの物性値を以下に示す。外観:白色結晶NMRスペクトル400MHz溶媒;CDCl31HNMRδ=a1231、b1969、c2554、d3616、e1119913CNMR400MHz、溶媒;CDCl3δ=I→169335tH→168499mG→160160mF→108709mE→101592tD→24368qtC→19176tB→11689qtA→9476q一般式3一般式4分子量:320341gmol質量分析分子式:C17H20O6質量分析融点:218-220°C本発明のヘリピロンAHelipyroneAを含有するアディポネクチン産生促進剤としては、経口投与、経皮投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。ヘリピロンAは血中アディポネクチン量の増加作用をもたらす。従って上記作用を有することにより、アディポネクチンの欠乏や不足に伴う各種疾患、特に肥満や糖尿病の改善剤として使用できる。ヘリピロンAのアディポネクチン産生促進効果試験アディポネクチン産生促進試験の陽性対照としてピオグリタゾン以下PGZ、シグマを用い以下の試験を行った。[invitro試験]前駆脂肪細胞の分化促進作用、およびアディポネクチン産生促進作用1.試験方法マウス由来前駆脂肪細胞3T3L1、DSファーマバイオメディカルを10FBS、1PenicilinStreptmycinを含有したDulbeccos変法Eagle培地DMEMにて継代培養した。これを試験細胞とする。試験は、ラット尾コラーゲンIをコートしたマルチウェルプレート48ウェル、BDBioCoat、BDBioscienceに1ウェル当り5×104個の3T3L1細胞を播種し、コンフルエントになるまで培養した6~8日。その後、1mMデキサメタゾンシグマ555mLと3イソブチルメチルキサンチンシグマ6105mg、10mgmLインスリンウシ膵臓由来、シグマ氷酢酸を添加してpH調製した酸性水pH20555μLを含む誘導培地500mLにて3~4日間培養して前駆脂肪細胞から未熟脂肪細胞へ分化誘導した。次いで、10mgmLインスリン555μLとDMSOに溶解させた被験サンプルを含む維持培地にて1週間培養した。1週間の培養の後、成熟脂肪細胞中の脂肪滴の量をOilRedO染色法にて測定した。測定方法は、培養上清に存在する産生分泌されたアディポネクチンの量をELISAキットマウスラットアディポネクチンELISAキット、大塚製薬を用いて測定した。すなわち、未熟脂肪細胞に被験サンプルを添加し、維持培地にて培養したのち、各ウェルを01Mリン酸緩衝液PBS200μLで2回洗浄した。洗浄後、各ウェルに100μLの10中性ホルマリンを加えて1時間室温にて放置し、細胞を固定させた。その後ホルマリンを除去し、イソプロパノールで溶解した50gLOilRedO染色液予め半日撹拌し、使用直前に濾紙にて濾過したを各ウェルに100μL加えて、15分間室温で放置した。その後各ウェルを蒸留水200μLで3回洗浄し、洗浄後各ウェルに150μLのイソプロパノールを加えて15分間室温で放置し、細胞内の脂肪滴の色素を脱色した。15分後、脱色されたイソプロパノールを96ウェルプレートIWAKIに移し、490nmの吸光度を測定した。コントロールには、DMSOのみ添加し、前駆脂肪細胞からの分化促進作用の相対的な活性を求めた。アディポネクチン濃度の測定は、1週間の維持培地での培養後、培養上清500μLを15mLのチューブに移し、80°Cで凍結後、凍結乾燥させた。その後、蒸留水100μLを加えて再溶解させ、ELISAキットマウスラットアディポネクチンELISAキット、大塚製薬のマニュアルに従い測定した。2.試験結果前駆脂肪細胞の分化促進作用、およびアディポネクチン産生分泌促進作用に対する各サンプルの結果を図1、図2に示した。ヘリピロンAは濃度依存性で、前駆脂肪細胞を脂肪細胞へ分化させることが確認できた。また同様にアディポネクチン産生を促進させることが確認できた。PeroxisomeproliferatoractivatedreceptorPPARγに対するリガンド活性の測定核内転写因子であるPPARγは主に脂肪組織に分布して脂肪細胞分化などに関与する他、マクロファージや血管内皮細胞などにも発現が見られる。インスリン抵抗性改善薬の標的分子でもある。このリガンド活性を測定することでアディポネクチンが脂肪組織に有効に作用し、脂肪組織においてインスリン抵抗性が改善し、グルコースが細胞内に取り込まれ、抗糖尿病作用を示すことを確認できる。1.試験方法被験サンプルのPPARγに対するリガンド活性の測定は被験サンプルをDMSOに溶解して、市販のキットEnBioRCASforPPARγ、藤倉化成のマニュアルに従い測定した。なおこの測定はコアクチベータの関与を確認できる測定方法である。2.試験結果前駆脂肪細胞のインシュリン抵抗性の指標となるPPARγに対するリガンド活性をヘリピロンAは有していた。図3に示すとおり、ヘリピロンAは濃度依存的に、PPARγに対するリガンド活性を有しており、この核内レセプターを介してアディポネクチンの産生を促進していることが裏付けられた。またこの反応はコアクチベータが関わっていることが確認できた。[invivo試験]マウス血中アディポネクチン分泌促進と血糖改善作用1.試験方法試験動物には4週齢の雄性のKKAyTaJclマウス日本クレア19匹を用いた。マウス搬入後、7日間は馴化期間とし、食餌はCRF1オリエンタル酵母、給水は水道水の自由摂取とした。5週齢より本飼育を開始した。試験食として、高脂肪高ショ糖食オリエンタル酵母、F2HFHSD粉末飼料、以下HFとする、HFにヘリピロンA以下HPAとするを01となるように添加した。また、HFの対照となる試験飼料はAIN93Gオリエンタル酵母、以下LFとするを用いた。試験動物の馴化終了後、上記の各試験食を4週間摂取させた。試験期間中、食餌摂取量、および体重を週2回測定した。4週間の食餌摂取後に約16時間の絶食処置をし、経口グルコース負荷試験OGTTを実施した。OGTTでは絶食時に尾切断により採血したのち、Dグルコース2g10mlkg溶液を強制経口投与して投与開始30分、60分、120分後に尾切断により採血した。血液は6200g、5分間遠心分離して血漿を得た。得られた血漿を用いて血漿中のグルコース濃度を富士ドライケム3500富士フィルム測定キットは富士ドライケムスライドGLUPIIIを使用にて測定した。OGTT後、各群に1週間各試験群の試験飼料を再摂食させ、1週間後に16時間以上の絶食下にて解剖を実施した。また、解剖までの約16時間に排泄された尿を全量採取した。解剖は絶食下にて断頭屠殺にて実施し、血液を採取し、6200g、15分間遠心分離して得られる血漿を採取し、分析まで80°Cで保存した。尿を用いて尿糖のレベルをプレテスト3aII和光純薬にて測定した。2.統計解析invivo試験における尿糖の分析以外のすべての結果を平均値±標準誤差Means±SEで示した。HF群との有意差の検定には、Dunnett法を用いて統計学的な解析を行った。尿糖の分布の分析にはクラスカルウォルス検定を行い、HF群との有意差の検定にはSteel法を用いた。いずれの検定も統計学的な有意差をp005とした。3.試験結果<食餌摂取量、および体重推移>試験期間中の食餌摂取量、および体重推移を図4、図5に示した。試験期間を通じての総食餌摂取量については、HF群と比較して有意な差は確認されなかった。体重推移については、試験期間を通じてLF群においてHF群と比較して有意に低値であった試験期間3日目~35日目。<グルコース付加試験耐糖能試験>OGTTでの血漿グルコース濃度の推移を図6に示した。糖負荷後の血中グルコース濃度はLF群、HPAはHF群と比較して低値に推移した。この結果はヘリピロンAが食後血糖を低下させる効果を有することを意味している。また血中グルコース濃度の曲線下面積AUCを図7に示す。HPA群はHF群に比して低い傾向が認められた。すなわち、食後血中に出現するグルコース総量を引き下げる作用を有することがわかった。<血中アディポネクチン産生量>血中アディポネクチン産生量を図8に示す。ヘリピロンAを投与したHPA群は、LF群、HF群の約2倍量のアディポネクチンが血中に産生されることがわかった。ヘリピロンAは強いアディポネクチン産生促進作用を示すことが確認された。<尿糖の測定結果>高脂肪食摂取することで肥満に伴う血中グルコースが尿糖に漏出すると糖尿病と呼ばれる。図9に示すとおりヘリピロンAは肥満に伴って発生した尿糖を低下させた。以上のinvitro、invivo試験から、ヘリピロンAは血中のアディポネクチン産生を促進し、さらに食後血中グルコース濃度を低下させ、糖尿病治療に有用であることが明らかとなった。"