"a以下の一般式:X1-X2-X3-R-X4-X5-X6-L-X7-L-X8配列番号1にしたがう阻害性のポリペプチド配列を含んでいるJNK阻害剤;ならびにbaに規定されている配列番号1と少なくとも80の配列同一性を共有している阻害性のポリペプチド配列を含んでいるJNK阻害剤からなる群から選択され、aにおいて、X1は、R、P、Qおよびrのアミノ酸から選択されるアミノ酸であり、X2は、R、P、Gおよびrのアミノ酸から選択されるアミノ酸であり、X3は、K、R、kおよびrのアミノ酸から選択されるアミノ酸であり、X4は、PおよびKのアミノ酸から選択されるアミノ酸であり、X5は、T、a、s、q、kのアミノ酸から選択されるアミノ酸であるか、または存在せず、X6は、T、DおよびAのアミノ酸から選択されるアミノ酸であり、X7は、N、n、rおよびKのアミノ酸から選択されるアミノ酸であり、X8は、F、fおよびwのアミノ酸から選択されるアミノ酸であり、大文字を付与されているアミノ酸残基はLアミノ酸を示しており、小文字を付与されているアミノ酸残基はDアミノ酸を示しており、X1、X2、X3、X5、X7およびX8からなる群から選択されるアミノ酸の少なくとも1つがD-アミノ酸であることを前提としており、bにおいて、配列番号1について、配列番号1と配列同一性を共有しているbにおける阻害性のポリペプチド配列は、4位における配列番号1のL-アルギニンR残基、ならびに8位および10位における配列番号1の2つのL-ロイシンL残基を保持しており、配列番号1と少なくとも少なくとも80の配列同一性を共有している上記配列における残りのアミノ酸少なくとも1つはD-アミノ酸であることを前提としている、JNK阻害剤。X3、X5、X7およびX8からなる群から選択される上記アミノ酸の少なくとも1つはD-アミノ酸である、請求項1に記載のJNK阻害剤。上記阻害性のポリペプチド配列は配列番号2~27のいずれか1つから選択される、請求項1または2に記載のJNK阻害剤。配列番号2~27のいずれか1つから選択される配列と少なくとも80の配列同一性を共有している阻害性のポリペプチド配列を含んでいる、請求項1または2に記載のJNK阻害剤。配列番号8を含んでいるか、または配列番号8と少なくとも80の配列同一性を共有している阻害性のポリペプチド配列を含んでいる、請求項1~4のいずれか1項に記載のJNK阻害剤。トランスポータ配列を含んでいる、請求項1~5のいずれか1項に記載のJNK阻害剤。上記阻害性のポリペプチド配列および上記トランスポータ配列は重なり合っている、請求項6に記載のJNK阻害剤。上記トランスポータ配列は、配列番号28~30のいずれか1つにしたがう、D-およびL-アミノ酸が交互になっている配列を含んでいる、請求項6または7に記載のJNK阻害剤。上記トランスポータ配列は配列番号31~170のいずれか1つから選択される、請求項6~8のいずれか1項に記載のJNK阻害剤。上記トランスポータ配列は、配列番号31~34、46、47および52~151のいいずれか1つから選択される、請求項6~9のいずれか1項に記載のJNK阻害剤。上記トランスポータ配列は、阻害性のポリペプチド配列のC末端またはN末端に直接に置かれている、請求項6~10のいずれか1項に記載のJNK阻害剤。a配列番号171~190のいずれか1つにしたがう配列、またはb配列番号171~190の少なくとも1つと少なくとも50の配列同一性を共有している配列を含んでおり、bにおいて、配列番号171~190のいずれか1つと配列同一性を共有している上記配列は、i配列番号1と対応する配列範囲の4位におけるL-アルギニンR残基を保持しており、ii配列番号1に対応する配列範囲における2つのL-ロイシンLを保持しており、iii配列番号1に対応する配列範囲の位置X1、X2、X3、X5、X7およびX8に少なくとも1つのD-アミノ酸を示していることを前提としている、請求項6~11のいずれか1項に記載のJNK阻害剤。a配列番号172にしたがう配列、またはb配列番号172と少なくとも50の配列同一性を共有している配列を含んでおり、bにおいて、配列番号172と配列同一性を共有している上記配列は、i配列番号1と対応する配列範囲の4位におけるL-アルギニンR残基を保持しており、ii配列番号1に対応する配列範囲における2つのL-ロイシンLを保持しており、iii配列番号1に対応する配列範囲の位置X1、X2、X3、X5、X7およびX8に少なくとも1つのD-アミノ酸を示していることを前提としている、請求項6~12のいずれか1項に記載のJNK阻害剤。aRPTTLNLF配列番号19、KRPTTLNLF配列番号192、RRPTTLNLFおよび/またはRPKRPTTLNLF配列番号193からなる配列の群から選択される配列を含んでいる阻害性のポリペプチド配列、ならびにb配列番号31~34および配列番号46~151から選択されるトランスポータ配列を含んでいる、JNK阻害剤。配列番号194または195の配列を含んでいる、JNK阻害剤。rKKRrQRr配列番号148、rKKRrQRrK配列番号149および/またはrKKRrQRrR配列番号150からなる配列の群から選択される、ポリペプチド。請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤を用いて非ヒトの動物を免疫する、方法であって、抗体産生にとって好適な非ヒトの動物特に非ヒトの哺乳類より好ましくは、ヤギおよびげっ歯類例えばマウス、ラットおよびウサギから選択される動物を、請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤より好ましくは配列番号1~27のいずれか1つから選択される配列を有しているポリペプチドを含んでいるJNK阻害剤と、接触させる免疫することを包含している、方法。請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤を認識するポリクローナル抗体を製造する方法であって、請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤より好ましくは配列番号1~27のいずれか1つから選択される配列を有しているポリペプチドを含んでいるJNK阻害剤と接触させられている免疫されている、抗体産生にとって好適な非ヒトの動物特に非ヒトの哺乳類より好ましくは、ヤギおよびげっ歯類例えばマウス、ラットおよびウサギから選択される動物から、上記JNK阻害剤を認識するポリクローナル抗体を単離することを包含している、方法。請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤を認識する抗体を産生する細胞を単離する方法であって、請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤より好ましくは配列番号1~27のいずれか1つから選択される配列を有しているポリペプチドを含んでいるJNK阻害剤を用いて接触させられている免疫されている、抗体産生にとって好適な非ヒトの動物特に非ヒトの哺乳類より好ましくは、ヤギおよびげっ歯類例えばマウス、ラットおよびウサギから選択される動物から、上記JNK阻害剤を認識する上記抗体を産生する細胞を単離すること、ならびに必要に応じて当該細胞を不死化することを包含している、方法。請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤を認識するモノクローナル抗体を製造する、方法であって、請求項1~14のいずれか1項に記載のJNK阻害剤を認識する抗体より好ましくは配列番号1~27のいずれか1つから選択される配列を有しているポリペプチドからなるJNK阻害剤を認識する抗体を、上記抗体を産生している細胞の細胞培養上清から単離することを包含しており、上記細胞は必要に応じて不死化されている、方法。請求項18または20に記載の方法を用いて産生可能な抗体であって、配列番号1~27のいずれか1つから選択されるポリペプチドの少なくとも1つを認識し、D-アミノ酸の代わりにL-アミノ酸を有している当該ポリペプチドと実質的に同じポリペプチドを認識しない、抗体。請求項19に記載の方法を用いて製造可能な細胞であって、請求項21に記載の抗体を産生する、細胞。実施例本発明の種々の実施形態および局面を例示する特定の実施例を以下に記載する。しかし、本発明の範囲は、本明細書に記載する特定の実施形態に限定されない。当業者であれば、上述の説明、添付の図面、および以下の実施例を参照することによって、本明細書に記載の実施形態およびその種々の変更も明らかになるであろう。なお、このような全ての変更も添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。実施例1:配列番号172のJNK阻害剤の合成本発明を説明するための実施例として、配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤の合成を以下に詳述する。当業者は、本発明の他のJNK阻害剤の合成についても、以下に詳述する合成法を使用し且つ容易に適用可能なことを理解する。Fmoc9-フルオレニルメチルオキシカルボニルを利用してペプチド固相合成を行って、配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤を作製した。ペプチドと樹脂との間のリンカーとして、Rinkアミドリンカーp-[Fmoc-23-ジメトキシベンジル]-フェノキシ酢酸を使用した。ペプチドの合成は、Fmoc脱保護とFmocアミノ酸結合のサイクルを連続して複数回行うことによって達成された。上記ペプチドの合成終了時に、トリフルオロ酢酸TFAを直接使用して、完成したペプチドを開裂させ、粗製C末端アミドを作成した。その後、上記粗製C末端アミドの精製を逆相分取HPLC法によって行った。精製後のペプチド画分は、その酢酸塩を得る目的で、イオン交換クロマトグラフィー法で処理した均一バッチ内にプールされた。その後、上記ペプチド画分を凍結乾燥した。1.1ペプチドの固相合成特記する場合を除き、エアフィルタリング環境下、室温22°C±7°Cにおいて上記JNK阻害剤の作製を行った。合成のスケールを説明すると、上記樹脂上の開始アミノ酸は0.7mmolであり、精製後に得られるペプチドの予想生成量は約1gであった。機械的攪拌および/または窒素バブリングを行いながら、フリットディスクを設けた30mL~50mLの容量のリアクタ内でペプチドの合成を手動で行った。1.2樹脂の調製まず、窒素の存在下で、p-メチルベンズヒドリルアミド樹脂MBHA-樹脂を、ジクロロメタン/ジメチルホルムアミド/ジイソプロピルエチルアミンを用いて洗浄した。洗浄後、PyBOBベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウム-ヘキサフルオロフォスフェイト/ジイソプロピルエチルアミン/1-ヒドロキシベンゾトリアゾール中で、上記p-メチルベンズヒドリルアミド樹脂をRinkアミドリンカーp-[Fmox-24-ジメトキシベンジル]-フェノキシ酢酸に結合させて、Fmoc-Rinkアミド-MBHA樹脂を作製した。1.3アミノ酸のカップリング以下のサイクルを行って、上記樹脂にアミノ酸をカップリングさせた。上記Fmoc-Rinkアミド-MBHA樹脂を35v/vのピペリジン/ジメチルホルムアミド中で洗浄した後、ジメチルホルムアミド中で洗浄して、脱保護を行った。上記脱保護の反応を約16分間行った。上記樹脂に対して、ジメチルホルムアミド/ジクロロメタン50/50中のFmoc-保護アミノ酸例えば、2等量のアミノ酸およびHOBt1-ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加した後、カップリング剤として2等量のジイソプロピルカルボジイミドDICを添加した。添加した上述のアミノ酸に応じて、カップリング反応は1時間~一晩の間行った。0.5mL/100mgのペプチド-樹脂に基づいてボリュームを計算し、各サイクル後に調整した。上記カップリング後、上記樹脂をDMFで3回洗浄した。上記カップリングの完遂度を、1級アミンにニンヒドリン試験またはKaiser試験1を行い、2級アミンにchloranyl試験2を行うことで検査した。ある場合では、信頼性の調整のために、上記chloranyl試験とニンヒドリン試験とを組み合わせ得る。上記カップリングの検査によってカップリング反応が未完了であることが示された場合、ジメチルホルムアミド/ジクロロメタンおよびジイソプロピルエチルアミン中において、より低過剰0.5等量~1等量のアミノ酸、PYBOP、HOBTの存在下でカップリング処理を繰り返す。上記樹脂の機能性を測定した結果、当該樹脂の初期のロード量に応じて、概して0.6meq/g~0.2meg/gであった。最後のアミノ酸をカップリングした後、上記ペプチド-樹脂を従来通り脱保護し、真空状態のオーブンで30°Cにおいて乾燥させる前にDCMを用いて5回洗浄した。上記ペプチド-樹脂を乾燥させた後、固相合成による生成率を、上記樹脂の初期のロード量から算出した理論上の重量増加と比較した上記ペプチド樹脂の重量増加の比率として、算出した。このように算出した上記生成率は、100に近い値であった。1.4切り出しおよび脱保護TFA/K試薬とも呼ばれるトリフルオロ酢酸/1,2-エタンジチオール/チオアニソール/水/フェノール88/2.2/4.4/4.4/7v/vの混合物中において、上記樹脂からの上記ペプチドの切り出しを室温において4時間行った。この際の反応ボリュームは、1mL/100mgのペプチド樹脂であった。上記樹脂を上記試薬に添加している間において、混合温度が30°C未満となるように管理した。1.5樹脂からのペプチド抽出フリットディスクを用いた濾過により、上記樹脂から上記ペプチドを抽出した。ロータベーパーrotavaporで体積を1/3にまで濃縮した後、上記ペプチドを冷却したt-ブチルメチルエーテルを使用して沈殿させ、濾過した。その後、このようにして得られた粗製ペプチドを真空中、30°Cにおいて乾燥させた。1.6分取HPLCを用いた精製その後、逆相HPLCを使用して、上記粗製ペプチドの純度が95以上となるように精製を行った。上記精製後、ロータベーパーで上記粗製ペプチドの精製分画を濃縮し、凍結乾燥させた。1.7イオン交換クロマトグラフィー配列番号172の配列を有している精製ペプチドの濃縮および凍結乾燥したプールを、水に溶解させ、Dowexアセテート50-100メッシュ樹脂Dowexacetate50-100meshresin上でイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。同様の方法により、本発明の他のJNK阻害剤の調製を行ってもよい。実施例2:本発明に係る選択されたJNK阻害剤の阻害効果以下に標準的な操作手順を詳述し、本発明のJNK阻害剤の阻害効果の測定方法を記載する。この方法より、JNKによるc-Jun特異的な基質のリン酸化を低下させる候補化合物の能力を、インビトロにおいて、非放射性標準化アッセイにより測定することが可能になった。さらに、JNK用に選択した化合物の阻害効果IC50およびKiの決定方法を説明する。この方法は、候補化合物がJNK活性を阻害するか否かの検証に好適である。当業者は、下記の方法を特定の目的および必要に応じて適合させる方法を理解する。2.1材料<AlphaScreen試薬およびプレート>-終濃度が5nMのHis-JNK1参照番号14-327、Upstate社、100μl中に10μg:濃度:2.2μM-終濃度が5nMのHis-JNK2参照番号14-329、Upstate社、100μl中に10μg:濃度:2μM-終濃度が5nMのHis-JNK3参照番号14-501、Upstate社、100μl中に10μg:濃度:1.88μM-終濃度が10nMのAntiPhosphocJun参照番号06-828、Upstate社、ロットDAM1503356、濃度:44.5μM-終濃度が30nMのBiotincJun29-67:配列:ビオチン-SNPKILKQSMTLNLADPVGSLKPHLRAKNSDLLTSPDVG配列番号198、水に溶解させたロット100509mw4382.11、P99.28、濃度:10mM-終濃度が5μMのATP参照番号AS001A、Invitrogen社、ロット50860B、濃度100mM-終濃度が20μg/mlのSADビーズ参照番号6760617M、PerkinElmer社、ロット540-460-A、濃度5mg/ml-終濃度が20μg/mlのAprotAビーズ参照番号6760617M、PerkinElmer社、ロット540-460-A、濃度5mg/ml-Optiplate384ウェルホワイトプレート参照番号6007299、PerkinElmer社、ロット654280/2008-ペプチドの希釈用の96ウェルプレート参照番号82.1581、Sarstedt社-TopSeals-A参照番号6005185、PerkinElmer社、ロット65673-生物発光エネルギー伝達の読取り-生物発光エネルギー伝達の読取りは、FusionAlphaPlate読取器PerkinElmer社を使用して行った。<ピペット>-電子ピペットであるEDP3ピペット20-300参照番号17007243;Rainin社を使用して、上記プレートに酵素-抗体ミックス、基質-ATPミックス、および上記ビーズを充填した。-PIPETMAN登録商標Ultramultichannel8X20参照番号21040;Gilson社を使用して、上記プレートに阻害化合物を充填した。<バッファおよび溶液>-キナーゼバッファ:20mMのトリスベースpH7.4、10mMのMgCl2、1mMのDTT、100μMのNa3VO4、0.01Tween、1DMSO-停止バッファ:20mMのトリスベースpH7.4、200mMのNaCl、80mMのEDTA-KpHde8、NaOHに代えてKOH、0.3BSA-JNK希釈キナーゼバッファ:50mMのトリスベースpH7.4、150mMのNaCl、0.1mMのEGTA、0.03のBrij-35、270mMのスクロース、0.1β-メルカプトエタノール。2.2方法上記ペプチドの阻害効果を評価するために、標準AlphaScreenアッセイ例えばGuenatetalJBiomolScreen200611pages10151026を参照を行った。異なる成分を調製し、その後説明する要領でミックスした。上記プレートを封止し、以下のようにインキュベーションを行った。5μlJNK抗体5μlTPキナーゼ/-阻害剤30分間のプレインキュベーション5μlビオチン-cJunATP24°Cで60分間のインキュベーション10μlSADビーズAprotA24°Cの暗室で60分間のインキュベーション。汚染を避けるために、ピペットを使用して上記ウェルの異なる隅部に上記ミックスを添加した。上記プレートに各ミックスを充填した後、上記プレートを軽く叩いて片側を固定して、反対側でテーブルを軽く叩いて、当該ミックスをウェルの壁に沈降させた。FusionAlphaPlate読取器PerkinElmer社を使用して、生物発光エネルギーの伝達を読み取った。全化合物に関して、JNKの各アイソフォームにつき、試験を少なくとも3つの独立した実験において3回繰り返して行う。試験対象とする化合物のとりうる濃度は、0nM、0.03nM、0.1nM、0.3nM、1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM、1μM、3μM、10μM、30μM、および100μMであった。コントロールとして、JNKまたは基質c-Junが不在のサンプルを使用した。<ミックスの調製>JNK1、JNK2、およびJNK35nMビオチン-cJun30nMATP5μM;抗ホスホ-cJunS6310nMBilleSADAprotA20μg/ml。抗体終濃度=10nM抗ホスホcJunS63検出の部:ミックスX525μlの最終体積中で5μlストック=44.5μM参照番号06-828、Upstate社、ロットDAM150335610μM→50nMキナーゼバッファ中。JNK1、JNK2、およびJNK3終濃度=5nM反応の部:ミックスX315μlの最終体積中で5μlストック=JNK12.2μM参照番号14-327、Upstate社、ロットD7KN022CUJNK22.0μM参照番号14-329、Upstate社、ロット33221CUJNK31.88μM参照番号14-501、Upstate社、ロットD7CN041CU5nM→15nM抗体バッファ中。阻害剤:反応の部:ミックスX315μlの最終体積中で5μlストック=10mM100μM→300μMキナーゼバッファ中30μM→90μMキナーゼバッファ中10μM→30μMキナーゼバッファ中...0.03nM→0.09nMキナーゼバッファ中0nM→キナーゼバッファ。96ウェルプレートにおいて10回の連続希釈を2シリーズ行い、このうち最初の連続希釈のシリーズでは300μMから開始して0nMまでであり、2回目のシリーズでは90μMから開始して0.03nMまでであった。384プレートへの上記ペプチドの添加は、8チャンネルのマルチピペット参照番号F14401、Gilson社、8X20を使用して行った。ATP終濃度=5μM反応の部:ミックスX315μlの最終体積中で5μlストック=100mM参照番号AS001A、Invitrogen社、ロット50860B5μM→15μMキナーゼバッファ中。ビオチンc-Jun終濃度=30μM反応の部:ミックスX315μlの最終体積中で5μlストック=10mM30nM→30nMATPバッファ中。SADビーズ/AProtA終濃度=20μg/ml感光性検出の部:ミックスX2.525μlの最終体積中で10μlストック=5mg/ml→20μg/ml50μg/mlSTOPバッファ中ミックスは、暗室緑色光中または暗闇中に。IC50曲線の分析GraphPadPrism4ソフトウェアにより、下記の等式を使用して分析を行った。ドーズ-応答のシグモイド制約無しYBottom。Grugg’sテストを使用して、異常値データを避けた。IC50の比較GraphPadPrism4ソフトウェアを使用して、下記テストにより上記分析を行った。OnewayANOVAテストを行った後に、TukeysMultipleComparisonテストを行った。P<0.05の場合、有意であると判断した。JNKに対するATPのKmおよびビオチン-cJun特異的ペプチドのKmをreportAlphaScreen標準アッセイで判定した。KiとIC50の数学的関係Ki=IC50/1基質/基質のKmを使用して当該Kiの値を算出してもよい。実施例3:内在化の実験および分析3.1取込み実験の材料および方法a細胞株本実験に使用する細胞株として、HL-60参照番号CCL-240、ATCC、ロット116523を使用した。b培養培地およびプレート2008年4月4日に56°Cで30分間デコンプリメントした10FBS参照番号a64906-0098、PAA社、ロットA15-151、1mMのピルビン酸ナトリウム参照番号S8636、Sigma社、ロット番号56K2386、およびペニシリン100ユニット/ml/ストレプトマイシン100μg/ml参照番号P4333、Sigma社、ロット番号106K2321を、2008年5月5日に補充した、RPMI参照番号21875-091、Invitrogen社、ロット8296またはDMEM参照番号41965、Invitrogen社、ロット13481。PBS10X参照番号70011、Invitrogen社、ロット8277:滅菌H2Oを使用して1Xまで希釈。トリプシン-0.05EDTA参照番号L-11660、PAA社、ロットL66007-1194。6ウェル培養プレート参照番号140675、Nunc社、ロット番号102613。24ウェル培養プレート商品番号142475、Nunc社、ロット番号095849。96ウェル培養プレート商品番号167008、Nunc社、ロット番号083310。タンパク質ドーズ用の96ウェルプレート識別番号82.1581、Sarstedt社。蛍光測定用の96ウェルプレート識別番号6005279、PerkinElmer社。c溶液ポリ-D-リジンコーティング溶液Sigma社P9011、ロット番号095K5104:PBS1x中の、25μg/mlの最終希釈物。酸性洗浄バッファ:0.2Mのグリシン、0.15MのNaCl、pH3.0。Ripaリーシスバッファ:10mMのNaH2PO4pH7.2、150mMのNaCl、1トリトンX-100、1mMのEDTApH8.0、200μMのNa3VO2、0.1SDS、1Xプロテアーゼ阻害剤カクテル参照番号11873580001、Roche社、ロット番号13732700。d顕微鏡法および蛍光プレート読取器倒立顕微鏡Axiovert40CFL;Zeiss社;20Xを使用して、細胞の数を数えるととともに、当該細胞の観察を行った。FusionAlphaPlate読取器PerkinElmer社を使用して、蛍光の読み取りを行った。e方法懸濁細胞において、FITCで標識化したペプチドの細胞内移行を研究した。ポリ-DL-リジンでコーティングしたディッシュに、1×106細胞/mlの密度で細胞を播種した。その後、既知濃度のペプチドを添加する前に、上記プレートを37°C、5CO2、および100の相対湿度下で24時間インキュベートした。上記ペプチドの添加後、上記細胞を37°C、5CO2、および100の相対湿度下で30分間、1時間、6時間、または24時間インキュベートした。その後、細胞表面に吸着したペプチドを除去するために、上記細胞を酸性バッファ0.2Mのグリシン、0.15MのNaCl、pH3.0で2回洗浄したKameyamaetalBiopolymers8898107を参照。塩基性アミノ酸がリッチなペプチドは細胞表面に強く吸着され、ペプチドの内在化がしばしば過大評価されるという結果を導く場合が多くなるため、上記酸性バッファを使用した。このように酸性バッファを使用した細胞の洗浄を採用して、細胞表面に吸着したペプチドを除去した。Fab/細胞浸透性ペプチドコンジュゲートの細胞内への取り込みを判定する際に上記酸性バッファによる洗浄を行い、その後、PBSにより2回洗浄した。RIPAリーシスバッファを添加することにより、上記細胞を破壊した。その後、バックグランドの除去およびタンパク質含有量のノーマライズを行った後に、内在化したペプチドの相対量を蛍光に基づいて決定した。すなわち、本方法の工程は以下のものである:1.細胞培養、2.酸性洗浄および細胞抽出物、3.蛍光プレート読取器を使用したペプチドの内在化の分析。f細胞培養およびペプチド処理上記6ウェル培養プレートは3mlのPoly-D-LysSigma社、P9011;PBS中25μg/mlでコーティングされており、上記24ウェルプレートは600μlのPoly-D-LysSigma社、P9011;PBS中25μg/mlでコーティングされており、上記96ウェルプレートは125μlのPoly-D-LysSigma社、P9011;PBS中25μg/mlでコーティングされており、各プレートは、37°C、5CO2、および100の相対湿度下で4時間インキュベートされる。4時間後、上記ディッシュをそれぞれPBSで2回洗浄した。すなわち、上記6ウェルプレートは3.5mlのPBSで、上記24ウェルプレートは700μlのPBSで、上記96ウェルプレートは150μlのPBSで2回洗浄した。上記細胞を1000000細胞/mlの密度で、懸濁細胞として、上記ディッシュ上の2.4mlの培地RPMI中に播種した。播種後、上記ペプチドを添加する前に、上記プレートを37°C、5CO2、および100の相対湿度下で24時間インキュベートした。処理当日において、接着細胞の密度は90~95となり、当該接着細胞をDMEM中に播種した。上記細胞を所望の濃度のFITC標識化ペプチドストック溶液は、H2O中、濃度が10mMで処理した。上記ペプチドの添加後、上記細胞を37°C、5CO2、および100の相対湿度下で0時間~24時間例えば、30分間、1時間、6時間、または24時間インキュベートした。酸性洗浄および細胞抽出物:上記抽出物を氷上で冷却する。懸濁細胞または上記皿に十分に接着していない細胞:上記細胞をFalcon15mlに移す。細胞を最大限に回収するため、上記ディッシュを1mlのPBSで洗浄する。最大で2400rpmの回転数で2分間回転させて上記細胞を回収。上記細胞を1mlの冷PBS中に懸濁する。コーティングを施したエッペンドルフチューブ1mlのポリDーLysで4時間コーティングを行い、1mlのPBSで2回洗浄を行ったエッペンドルフチューブに上記細胞を移す。1mlの冷却した酸性洗浄バッファで3回洗浄し、最大2400rpmの回転数で2分間遠心分離させる。エッペンドルフ中での細胞の拡散に注意する。1mlの冷却したPBSで2回洗浄して、中和させる。50μlのリーシスRIPAバッファを添加する。撹拌しながら、氷上で30分間~1時間インキュベートする。接着細胞:3ml、1ml、または200μlそれぞれ、6ウェルプレート、24ウェルプレート、または96ウェルプレートの場合の冷却した酸性洗浄バッファで3回洗浄する。ディッシュから剥がれる細胞の発生に注意する。1ml6ウェルプレート、24ウェルプレート、または96ウェルプレートの場合のPBSで2回洗浄して、中和させる。50μlのリーシスRIPAバッファを添加する。撹拌しながら、氷上で30分間~1時間インキュベートする。冷却したヘラで上記細胞をそぎ取る。24ウェルプレートおよび96ウェルプレートの場合、4000rpmの回転数および4°Cの温度で15分間、直接、遠心分離にかけて、細胞残屑を除去した。その後、得られた上清24ウェルプレートの場合は100ml、96ウェルプレートの場合は50mlを、暗くした96ウェルプレートに直接的に移した。上記プレートの読取を蛍光プレート読取器FusionAlpha、PerkinElmer社を使用して行った。上記のライセートを、コーティングを行ったエッペンドルフ1mlのポリD-Lysを使用して4時間コーティングを行い、1mlのPBSで2時間洗浄したエッペンドルフ内に移す。その後、上記の溶解細胞を4°Cの条件下で、1000gで30分間遠心分離して、細胞残屑を除去した。上澄を回収し、コーティングを行ったエッペンドルフ1mlのポリD-Lysを使用して4時間コーティングを行い、1mlのPBSで2時間洗浄したエッペンドルフ内で-80°Cにおいてこれを保存する。蛍光プレート読取器を使用したペプチドの内在化の分析:製造者による使用説明に従って、標準BACアッセイキット番号23225、Pierce社を使用して各タンパク質抽出物の内容を決定した。10μlの各サンプルを蛍光プレート読取器FusionAlpha、PerkinElmer社で読み取り、バックグラウンドを除去し、タンパク質濃度によるノーマライズを行った後に、当該各サンプルの相対蛍光を決定した。3.2摂取実験FITCにより標識化されたTAT由来のトランスポータ構築物の、HL-60細胞株の細胞内への時間依存的な内在化摂取は、配列番号52~96、43、および45~47の配列を有しているトランスポータペプチドの配列を使用して、上記のように行われた。上記トランスポータペプチドの配列を表4に示す。上記の表中、それぞれのアミノ酸残基の前の小文字のdでDアミノ酸を示す例えば、dR=D-Arg。幾つかの配列の場合では、残念ながら技術的理由により、最初のアプローチで合成が失敗した。図6中、これらの配列を1、2、3、4、5、6、7、8、43、52、53、54、55、56、57、85、86、87、88、89、および90でそれぞれ略記して示す。しかし、残りの配列は上記内在化実験で使用した。上記摂取実験の結果を図6に示す。図6に示すように、24時間のインキュベーション後、共通配列rXXXrXXXr配列番号31を有している全てのトランスポータが、上記L-TATトランスポータ配列番号43よりも高い内在化能を示した。10mMのr3-L-TAT由来トランスポータの存在下で、Hela細部を96ウェルプレート内で24時間培養した。その後、上記Hela細胞を酸性バッファ0.2Mのグリシン、0.15MのNaCl、pH3.0で2回洗浄し、PBSで2回洗浄した。そして、RIPAリーシスバッファを添加して細胞を破壊した。その後、各抽出物の蛍光強度をFusionAlphaプレート読取器PerkinElmer社を使用して読み取り、バックグラウンドの除去を行って、内在化したペプチドの相対量を決定した。図6に示すように、最も高いトランスポータ活性および改善されたトランスポータ活性の動態にとって1つの位置が重要であるように見える:第2の位置におけるY配列番号142に対応するペプチド番号91。上記実験結果から得られた結論は以下の通りである:24時間のインキュベーション後、共通配列rXXXrXXXr配列番号31を有している全トランスポータ可能性のある配列の選択については、表2を参照が、上記L-TATトランスポータ配列番号43よりも高い内在化能を示した図6。上記実験結果により、上記共通配列rXXXrXXXr配列番号31の有効性が十分に立証された。一つの位置が、最も高いトランスポータ活性およびに重要であること図6:第2の位置におけるY配列番号142に対応する配列91。したがって、表4に示すような上記第2の位置にYが配置されているTAT由来配列が好ましく、当該TAT由来配列が9アミノ酸からなり、かつ上記共通配列rXXXrXXXr配列番号31を示す場合に特に好ましい。実施例4:サイトカイン放出およびケモカイン遊離の測定以下に手順を詳述し、リガンド誘導分泌後に、ヒト細胞血液、WBC、PBMC、精製した一次リンパ球、細胞株、...から放出された数種類のヒトサイトカインの放出量をどのように測定したかを記載する。使用した技術は、2層の抗体すなわち、捕捉抗体および検出抗体間の抗原量の測定を可能にするサンドイッチELISA法であった。少なくとも2つの抗体がサンドイッチ状に機能するために、測定対象となる上記抗原は、抗体に結合可能な少なくとも2つの抗原部位を含んでいることが求められる。サンドイッチELISA系では、上記捕捉および検出抗体として、単クローン性またはポリクローン性の抗体を使用することができる。単クローン性の抗体は単一エピトープを認識し、抗原の僅かな差異を微細に検出および定量化することを可能にする。ポリクローン性抗体は、上記抗原を可能な限り多くプルダウンするための捕捉抗体として使用されることが多い。サンドイッチELISA法の利点は、分析前に上記サンプルを精製する必要が無いことであり、かつ、アッセイの精度が非常に高いことである直接法または間接法と比較して、アッセイ精度は最大で2倍から5倍高い。上記方法を使用して、本発明のJNK阻害剤の効果をインビトロinvitro/細胞培養中で判定してもよい。非毒性のドーズ下では、化合物の効果は、非処理サンプルと比較した場合のサイトカインレベルの低下450nmの吸収度における光学濃度のバラつきで示され、ELISA法によりモニタリングされる。これらの結果は、ng/mlの単位で示される。4.1材料96ウェルプレート:上記上澄の回収用参照番号82.1581、Sarstedt社。ELISA法用F96maxisorp、参照番号442404、Nunc社。TopSeal-A:96ウェルマイクロプレート用密閉材参照番号600585、PerkinElmer社。ELISA試薬コーティングバッファELISA:0.1MのNaCarbonatepH9.51リットルのH2O中、7.13gのNaHCO3参照番号71627、Fluka社および1.59gのNa2CO3参照番号71345、Fluka社、NaOHを含み9.5までのpH濃縮。洗浄バッファELISA:PBS1X0.01のTween20。1リットルのPBS1XPBS10X:参照番号70011、GIBCO社を調製し、磁気撹撹拌器で撹拌させながら100μlのTween20参照番号P1379、Sigma社をゆっくりと添加する。アッセイ希釈剤:PBS1X10FBS参照番号:A15-151、PAA、56°Cで30分間デコンプリメンテーション。DAKOTMB参照番号S1599、DAKO社:市販の基質溶液。停止液:1MのH3PO4200mlの場合、177mlのH2O23mlのH3PO485参照番号345245、Aldrich社。ELISAキット20プレート用の試薬IFN-γ:ヒトIFN-γELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555142、DB社。IL-1β:ヒトIL-1βELISAセットII、BDOptEIA商標参照番号557953、BD社。IL-10:ヒトIL-10ELISAセットII、BDOptEIA商標参照番号555157、DB社。IL-12:ヒトIL-12p70ELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555183、DB社。IL-15:ヒトIL-15ELISAセット、BDOptEIA商標参照番号559268、DB社。IL-2:ヒトIL-2ELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555190、DB社。IL-4:ヒトIL-4ELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555194、DB社。IL-5:ヒトIL-5ELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555202、DB社。IL-6:ヒトIL-6ELISAセットI、BDOptEIA商標参照番号555220、DB社。IL-8:ヒトIL-8ELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555244、DB社。MCP-1:ヒトMCP-1ELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555179、DB社。TNF-α:キットヒトTNFELISAセット、BDOptEIA商標参照番号555212、DB社。吸光度読取:上記吸光度をFusionAlphaPlate読取器PerkinElmer社で読み取った。反復ピペット、デジタルピペット、または多重チャンネルピペット。4.2方法サンプルの調製サンプルとして、培養したヒト細胞通常は、全血、WBC、PMBC、WBCの精製サブタイプ、癌性細胞株から得られた培養培地上澄を使用する。遠心分離400g、5分間、4°Cにより上記サンプルから粒子状物質を取り除き、この直後に、上記サンプルのアッセイを行うか、または上記サンプルを-20°C以下で保存する。凍結融解を繰り返し行うことは避ける。使用の1時間前に、凍結させた上記サンプルを解凍し、遠心分離器にかける。工程11において、上記サンプルをアッセイ希釈剤中で上記プレートにおいて直接的に希釈するアッセイ希釈剤を添加した後に上記サンプルを添加し、ピペットによる吸い上げ下げを行う。スタンダードの調製凍結乾燥したスタンダードを室温まで温めた後、材料損失を避けるようにバイアルを慎重に開ける。そして、上記凍結乾燥させたスタンダードを、企図する量の脱イオン水でもどし、スタンダードのストックを作製する。希釈を行う前に上記スタンダードを少なくとも15分間平衡化させる。穏やかにボルテックスして、混合する。上述のように上記凍結乾燥させたスタンダードを脱イオン水でもどした直後に、スタンダードのストックを各バイアル当たり50μlとなるようにポリプロピレン製バイアルに等分し、-20°Cで最大6か月間凍結させる。必要に応じて、これら等分/凍結を行う前に、2°C~8°Cで最大で8時間保存する。なお、上記脱イオン水でもどしたスタンダードを室温で静置することは避ける。使用直前に、Diluent試薬中で希釈倍率が2倍毎の段階的希釈法を使用して10ポイントの標準曲線を調製した。4000pg/mlの高スタンダードが推奨される。ディテクタミックスDetectorMixの調製ビオチン/SAv試薬の1工程インキュベーション。必要な量の検出用抗体をアッセイ希釈剤AssayDiluentに添加する。使用前15分以内に、必要な量の酵素試薬を添加して、ボルテックスまたは混合を十分に行う。推奨される希釈物を得るため、ロット固有の取扱説明書/分析証明書を参照。使用後、残留して動作しているディテクタを廃棄する。捕捉抗体によるコーティング1.コーティング用バッファ中に希釈した捕捉抗体を各ウェル当たり100μL使用して、PVCマイクロタイタープレートのウェルをコーティングする。推奨される抗体のコーティング用希釈物を得るため、ロット固有の説明書/分析証明書を参照。2.上記PVCマイクロタイタープレートを接着性プラスチックで覆い、4°Cの温度下で一晩かけてインキュベートする。3.上記コーティング溶液を取り除き、上記プレートのウェルに150μlの洗浄バッファを注入して洗浄する。4.上記プレートを浴槽上で軽く叩いて、コーティング溶液または洗浄液を取り除く。5.上述のプロセスを2回繰り返し行うことで、あわせて3回の洗浄を行う。6.最後の洗浄後、上記プレートを紙タオルで軽く叩いて、残留する洗浄バッファを取り除く。ブロッキング7.コーティングを行った上記ウェル内において、各ウェル当たり100μlのDiluent試薬を添加して、残留しているタンパク質結合部位をブロッキングする。8.上記プレートを接着性プラスチックで覆い、室温で1時間インキュベートする。9.上記インキュベーションの最中に、スタンダードの調製を開始する。サンプル添加10.洗浄バッファ150μlを使用して、工程3のように洗浄を1回行う。これにより、上記プレートは、サンプル添加への準備ができた状態である。11.各ウェルに対して、アッセイ希釈剤中に適切に希釈したサンプルを50μlづつ添加する。正確な定量結果を得るために、未知試料のシグナルを標準曲線のものと常に比較する。スタンダード3重とブランクとは各サイトカインを存在させて試験を行い、正確性を確保する。12.上記プレートを接着性プラスチックで覆い、室温で2時間インキュベートする。検出抗体と2次抗体を使用したインキュベーション13.上記工程3と同様に、上記プレートを150μlの洗浄バッファで4回洗浄する。14.推奨される希釈ロット固有の説明書/分析証明を参照において、50μlのディテクタミックスアッセイ希釈剤中の検出抗体二次ストレプタビジン-HRP抗体を各ウェルに添加する。15.上記プレートを接着性プラスチックで覆い、遮光した状態で、室温において1時間インキュベートする。16.上記工程3にように、上記プレートを150μlの洗浄バッファで6回洗浄する。17.各ウェルに50μlのDAKOTMB溶液を添加し、上記プレートを密閉せずに室温で15~20分間暗闇でインキュベートする。18.停止液50μlを各ウェルに添加する。上記プレートを優しくタップし、完全な混合を確保する。19.プレートミキサーにより、上記プレートを500rpmの回転数で5分間混合する。20.波長450nmで光学濃度を読み取るプログラム:FusionAlphaPlate読取器上でサイトカインELISA。データ分析各スタンダード対照スタンダードコントロールと各サンプルについて、3回繰り返した読取の平均をとる。ゼロ標準の光学濃度O.Dの平均を差し引く。O.D対数に対応するサイトカイン対数をプロットした標準曲線を引き、回帰分析により最もよく適合する線を決定する。サンプルを希釈した場合、上記標準曲線から読み取れる濃度値は、希釈係数を乗じた値になることが求められる。標準曲線は、分析対象の各サンプルのセットに対して作成する必要がある。Grugg試験を使用して、異常値データを避ける。その後、標準偏差の2倍の間隔内にないデータを廃棄する。ポジティブ対照ポジティブコントロールが予め確認されたようなデータを示す場合、独立したindependent実験を考慮に入れる。これら独立した実験をプールするN>3。データは、サイトカイン放出量単位:pg/ml、または阻害剤の処理を行わない誘導条件と比較した百分率で示す。実施例5:THP1の分化-サイトカイン放出のための刺激本実施例の手順を以下に詳述し、LPSの投与を6時間受けたヒトPMA分化THP1細胞から如何にしてサイトカイン生成を誘導したかを説明する。本実施例は、サイトカインの刺激誘導放出を減衰させることに関する、本発明にかかるJNK阻害剤特に、配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤の能力を試験するために行った。サイトカイン放出の読取のために、異なるリガンドを使用してTHP1細胞をex-vivoにおいて刺激した。非毒性のドーズ下では、JNK阻害剤の有効性は、非処理のサンプルと比較したサイトカインレベルの低下で示され、ELISA法によりモニタリングされる。化合物の毒性は、トレタゾリウム塩tretazoliumsaltMTSからホルマリンへの還元紫色を生じさせる。に基づき評価した。手順:a.材料細胞株:THP-1参照番号TIB-202、ATCC、ロット57731475。培養培地、試薬、およびプレート-以下の成分を補充したRMPI参照番号21875-091、Invitrogen社:10FBS参照番号A15-151、PAA社:56°Cで30分間のデコンプリメンテーション。10mMのHepes参照番号H0887、Sigma社。50Mの-メルカプトエタノール参照番号63690、Fluka社:14.3Mのストック:-20°CでストックしたPBSに対して、50mMのアリコート560lを添加。1mMのピルビン酸ナトリウム参照番号S8636、Sigma社。ペニシリン100ユニット/ml/ストレプトマイシン100g/ml参照番号P4333、Sigma社。その後、上記RPMI培地を0.22Mのフィルタ参照番号SCGPU05RE、Millipore社で濾過する。-PBS10X参照番号70011、Invitrogen社:滅菌H2Oを使用して1Xまで希釈する。-DMSO:参照番号41444、Fluka社。-PMAホルボール12-ミリステート-13アセテート、参照番号P1585、Sigma社、濃度1mM=616.8ug/ml、-20°CのDMSO中。RPMI中100nMの終濃度で10mlの培地中において1μl直接使用する。-LPSultrapureリポ多糖体、参照番号tlrl-eklps、Invivogen社、濃度5mg/ml:LPSのストック溶液:4°Cにおいて、PBS中3g/ml。RPMI培地中40ng/mlの4X濃度溶液を調製するために直接使用する最低限、1800l/プレート;5プレート:LPS3g/mlを125l9250lRPMI。-96ウェルプレート接着細胞培養用参照番号167008、Nunc社上澄回収用参照番号82.1581、Sarstedt社ELISA用F96maxisorp、参照番号442404、Nunc社コーティング溶液:ポリD-リジン参照番号P9011、Sigma社:PBS1X中、25g/mlの最終希釈物。ELISA試薬およびキット-コーティングバッファELISA:0.1MのNaCarbonatepH9.51リットルのH2O中、7.13gのNaHCO3参照番号71627、Fluka社および1.59gのNa2CO3参照番号71345、Fluka社、NaOHを含む9.5までのpH濃縮-洗浄バッファELISA:PBS1X0.01Tween20参照番号P1379、Sigma社、ロット094K0052=1リットルのPBS1Xを調製し、磁性撹拌器を使用して撹拌を行いながら100μlのTween20をゆっくりと添加する。-アッセイ希釈剤:PBS1X10FBS参照番号A15-151、PAA社、56°Cで30分間デコンプリメンテーション。-DAKOTMB参照番号S1599、DAKO社:市販の基質溶液。-停止液:1MのH3PO4200mlの場合、177mlのH2O23mlのH3PO485参照番号345245、Aldrich社。-TNF-:キットヒトTNFELISAセット、BDOptEIA参照番号555212、DB社。細胞毒性測定:CellTiter96試薬参照番号G3581、Promega社。コントロール対照化合物:SP600125参照番号ALX-270-339-M025、Alexis社、濃度:20mMDMSO。吸光度の読取:FusionAlphaPlate読取器PerkinElmer社で吸光度を読み取った。連続分注ピペット、デジタルピペット、またはマルチチャンネルピペットTopSeal-A:96ウェルマイクロプレートシール参照番号600585、PerkinElmer社。b方法ウェルのコーティング上記プレートを200lのポリD-リジン1xでコーティングした。そして、37°Cの温度条件下で、5CO2、100の相対湿度下で、インキュベーションを2時間行った。細胞播種2時間後、上記ウェルを200lのPBS1Xで2回洗浄した直ちに使用するか、または使用するまで200lのPBS1xの存在下で30°Cの温度で静置した但し、静置期間は3日を超えないものとした。上記細胞の数を数えた。そこから所望の数の細胞を取り出し、1000000細胞/mlの希釈を得るのに必要な量の培地中に再懸濁した。100nMのPMAを添加して、THP1が懸濁性の単球から接着性のマクロファージへ分化するのを誘起した。上記細胞を100lの培地中において1000000細胞/mlの密度で上記ウェルに播種した。播種後、30°Cの温度条件下で、5CO2、100の相対湿度でインキュベーションを3日間行うことで、実験的薬剤の添加前に上記細胞を分化させた。細胞処理3日後、顕微鏡を使用して上述の接着細胞を観察した。PMA含む上記培地を吸引して、PMAを含まない100lの新しいRPMI培地を代わりに供給したPBS1xによる洗浄工程は行わなかった。実験的薬剤は、H2O中またはDMSO中、その濃度が10mMとなるように調製した。このように調製した上記実験的薬剤を80°Cで保存した。日々の使用に供する前に、1アリコート分のJNK阻害剤を解凍し、まず4X濃縮溶液120Mを得るようにRPMI培地中に希釈し、その後RPMI中で所望の濃度となるように希釈した。SP600125は、まず4X濃縮溶液40Mを得るようにRPMI培地中に希釈した後、0.8DMSOを含むRPMI中で所望の濃度となるように希釈した。50lの培地か、あるいは最終的に所望とする薬剤の濃度JNK化合物は最終的に0、100nM、1M、3M、10M、または30Mの濃度、またはポジティブコントロールのSP600125は最終的に0nM、10nM、100nM、1M、3M、または10Mの濃度の4Xの溶液50lかを使用して、上記プレートを処理した。上記実験的薬剤の添加に続いて、37°Cの温度下で、5CO2、100の相対湿度で、プレートのインキュベーションをさらにもう1時間行った。1時間後、50lの4X濃縮のLPSultrapureの希釈物終濃度:3ng/mlを添加して、TNFの分泌を誘導した。アッセイ6時間後、100lの上澄を新しい96ウェルプレートへ移した。そして、上記96ウェルプレートを封止し、ELSA法実施例4を参照によるサイトカイン分泌の分析を行うまで-20°Cで保存した。化合物の細胞毒性効果をMTS吸収度により評価し例えば、実施例4を参照、倒立顕微鏡Axiovert40CFL;Zeiss;10Xを使用して細胞を観察した。データ分析上記データの分析をELISA法で説明したように行う実施例4を参照。簡単に説明すると、ELISA法の場合:各スタンダードコントロールおよび各サンプルについて、3重の読取をしてその平均をとる。そして、ゼロスタンダードの光学濃度O.Dの平均を差し引く。O.Dの対数に対応するサイトカイン濃度の対数をプロットする標準曲線を引き、回帰分析により最もよく適合する線を決定する。サンプルを希釈していた場合、上記標準曲線から読み取れる濃度値は希釈係数を乗じた値であることが求められる。標準曲線は、アッセイ対象のサンプルの各セットについて作成すべきである。Grugg試験を利用して、異常値データを避けた。標準偏差の2倍の間隔範囲の外にあるデータは廃棄した。ポジティブコントロールが以前に観察されたようなデータを示した場合は、独立した実験を考慮に入れる。上記独立した実験はプールされているN>3。細胞毒性効果の評価の場合:サイトカイン放出実験の分析において考慮した独立した実験それぞれの各プレート上において、上記培地のみの吸光度の平均値はバックグランドとして無視できないものであり、各吸光度値からこのバックグランドが差し引かれた。各化合物の非処理細胞の3重測定の平均は、100の実行性の上では無視できないものであった。各化合物のこの3重測定の平均は、その100によってノーマライズされた。Grugg試験を使用して異常値データを避けた。その後、標準偏差の2倍の間隔の範囲外のデータを廃棄した。上記独立した実験をプールしたN>3。GraphPadPrism4ソフトウェアを用いて、次の試験を行って、全ての条件に係る統計比較を行った:ここで試験は、onewayANOVA試験を行った後に、TukeysMultipleComparison試験を行った。P<0.05の場合、有意であると判断した。実施例6:配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤、およびラットまたはヒトのプライマリ全血細胞におけるTNFα放出クエン酸ナトリウムを含む、予め標識化された真空管に接続した静脈穿刺を利用して、麻酔をかけたラットまたは健康な志願人の全血を採取した。上記管を7、8回反転させて採取した全血とクエン酸ナトリウムを穏やかに混合させた後、得られたミックスを、刺激を与えるまで室温に保持した。配列番号172に示す配列を有しているJNK阻害剤を、PBS中6倍の濃縮度で調製し、30μl/ウェルの分量で上記ミックスを96ウェルプレートに添加した。全血をPBS中に1:2の比率で希釈し、PBSのみ又は上記配列番号172の配列を有している上記JNK阻害剤が予め添加されている各ウェルに120μlの希釈血液を添加した。StuartOrbitalインキュベータSI500の回転数を85rpmに設定し、全血を37°Cで60分間インキュベートした。活性化因子LPSは、6倍の濃縮度で調製したものを30μl/ウェルの分量で使用した。培養を60分間行った後、上記全血にLPSを添加し、ピペットによる吸い上げ下げを行って混合した。その後、得られたミックスを撹拌85rpmさせながら37°Cで4時間保存した。4時間のインキュベーションを行った後、上記プレートを予め冷却した遠心分離機にかけ、約770gおよび4°Cで15分間遠心分離を行った。最後に上澄を回収し、サイトカインの測定を行うまで-20°Cで保存した。その後、標準的なElisaキット例えば、RDSystems社製のDuoSetElisasまたはBDBiosciences社製のBDOpteiaSetElisaを使用して、サイトカインIL-6、IL-2、IFNγ、およびTNFαを測定した。測定結果を、上記サイトカインの、上澄中のpg/mlとして示す。活性化因子/刺激物としてLPSに代えてPMAイオノマイシンを使用して同様の実験を行った。実施例7:ここに開示する特定のJNK阻害剤の半減期配列番号196、197、および172の配列を有しているJNK阻害剤終濃度:0.1mMを、ヒト血清中PBS1x中で10および50で消化した。TugyietalProcNatlAcadSciUSA2005413418に開示されているように実験を行った。消化されずに残った完全なペプチドをUPLC-MSで定量化した。2つの別箇のアッセイを行う以外は同一の方法で、上記配列番号196、197、および172の配列の安定性を算定した。上記配列番号196の配列を有しているJNK阻害剤は6時間以内に完全に分解されてアミノ酸残基になった一方、上記配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤は14日後に漸く完全に分解された。上記配列番号197の配列を有しているJNK阻害剤は30日後も安定したままであった。実施例8:配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤による、ラットのプライマリT細胞内のCD3/CD28誘導IL-2放出のドーズ依存的抑制コントロールの動物を犠牲にし、そのリンパ節LNを採り、完全RPMI培地中で保存した。保存後、5mlのピストンを使用して、70μmフィルタ上で、上記LNを上記完全RPMI培地と混ぜて破砕した。数滴の培地を添加してストレーナーを濡れた状態に保った。450gおよび4°Cの条件下で細胞を7分間遠心分離した。沈殿物を5mlの新しい培地中に再懸濁した。再懸濁後、細胞を再度、セルストレーナーに通した。細胞を1400rmpの回転数および4°Cの条件下で10分間にわたり再度遠心分離しつつ、1アリコート分の細胞の数を数えた。細胞をMACSバッファ107細胞当たり80μlのMACSバッファ中に再懸濁した。1000万個の細胞当たり10μlの抗ラットMHCマイクロビーズを添加し、細胞を4°C~8°Cで15分間インキュベートした。そして、上記細胞を15mlのMACSバッファで洗浄し、700gおよび4°Cの条件下で7分間遠心分離した。108個の細胞当たり500μlのMACSバッファ中に沈殿物を再懸濁した。動物ごとに、上記MACSセパレータの磁界内にLSカラムLScolumnを1つ設置した。上記LSカラムを先ず3mlのMACSバッファでリンスした。上記LSカラムの下方において1つの管を氷中に設置して、細胞=T細胞を回収したネガティブセレクションを行い、溶出物を回収した。細胞懸濁物を添加し、溶出物を氷上で回収した。カラムを3mlのMACSバッファで3回洗浄した。溶出したT細胞を、700gおよび4°C下で7分間遠心分離した。再懸濁させた細胞の数を数え、200000細胞/ウェルの密度で100μlの完全培地中に播種した。2μg/mLのCD3抗体を使用する実験の前日に、プレートに予めコーティングを施し、実験日に当該プレートをPBSで3回洗浄した。リガンドによる活性化の1時間前に、2倍に濃縮した100μlのポリペプチドJNK阻害剤配列番号172で細胞を処理した。ポリペプチドJNK阻害剤配列番号172を用いた前処理の1時間後に、細胞を2μg/mLの抗CD28抗体で24時間刺激した。この24時間の刺激付与の後、上澄を回収し、分析を行うまで-20°Cで保存した。その後、標準のElisaキットを使用してサイトカインを測定した。測定結果を、上澄における、上記サイトカインのpg/mlとして示した。更なる実験では上述のものと基本的に同一のプロトコールを採用したが、配列番号172を有している上記ポリペプチドJNK阻害剤だけでなく配列番号197の配列を有しているJNK阻害剤および薬物分子SP600125も試験して、CD3/CD28誘導のIL-2放出に対する阻害について、これら阻害剤間で比較した。実施例9:ヒト全血における、JNK阻害剤およびTNFα/IL-2の放出クエン酸ナトリウムを含み、予め標識化された真空管に接続された静脈穿刺を使用して、健康状態の志願者からヒト全血を採取した。上記管を7、8回反転させて混合した後、刺激を与えるまで室温に保持する。1,2ml-96ウェルプレートに、350μlのRPMIP/Sを添加した。RPMIP/S各ウェル当たり50μl中において、配列番号172の10倍濃縮物を調製した。この50μlを1,2ml-96ウェルプレートに添加した。その後、培地のみ又はJNK阻害剤を予め添加した各ウェルに、50μlの全血を添加した。全血を37°Cおよび5CO2の条件下で60分間インキュベートした。RPMIP/S中に希釈した、ウェルあたり50μlのリガンドを、最終希釈の10倍濃度となるように調製した。上記60分間のインキュベーション後、リガンドを添加した。そして、ピペットで上記全血の吸い上げ下げして、上記ウェル内の混ぜ合わせを行った。上記全血は、37°Cで3日間インキュベーションを行った各ウェル内の吸い上げ下げを1日1回行い、当該ウェル内の混ぜ合わせをした。上記インキュベーションの終了時に、プレートの混ぜ合わせを行い、その後、予め冷却した遠心分離機を使用して、2500rpmおよび4°Cの条件下で遠心分離を15分間行った。その後、標準のElisaキットを使用してサイトカインを測定した。測定結果を、上記上澄における、上記サイトカインのpg/mlで示す。同様の実験を僅かに変化させて行った。CD3/CD8刺激の場合では、PBS中2μg/mLのCD3抗体で、4°Cで一晩、コーティングした。実験日、PBSでウェルを3回洗浄し、洗浄後の当該ウェルを使用時期が来るまで37°Cの条件下でPBS中に静置した。配列番号172の添加から1時間後に、2μg/mLの終濃度でCD28を添加した。刺激を印加してから3日後に、上澄を回収した。インビトロのAlphaScreenアッセイ増幅ルミネセンス近接ホモジニアスアッセイによって調べられた、本発明に係るいくつかのJNK阻害剤の阻害作用を示す図である。本発明に係るいくつかのJNK阻害剤配列番号193、2、3、5、6および7の阻害作用を示す図である。本発明に係るいくつかのJNK阻害剤の阻害作用を示す図である。本発明に係るいくつかのJNK阻害剤の阻害作用を示す図である。配列番号172、196および197を有しているJHK阻害剤の、50ヒト血清における安定性を示す図である。配列番号30に示されるようなD-アミノ酸/L-アミノ酸パターンを有しているTAT由来のトランスポータコンストラクトを用いた内在化実験を示す図である。配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤が、THP1-PMA-分化されたマクロファージにおけるLPSに誘導されるサイトカインおよびケモカインの放出を阻害することを示す図である。配列番号172の配列を有しているJNK阻害剤が、D-TAT-IB1配列番号197、dTAT配列番号45およびSP600125より高い作用強度を有して、THP1-分化されたマクロファージにおけるLPSに誘導されるIL6放出を阻害することを示す図である。配列番号172のJNK阻害剤が、D-TAT-IB1配列番号197、dTAT配列番号45およびSP600125より高い作用強度を有して、THP1-分化されたマクロファージにおけるLPSに誘導されるTNFα放出を阻害することを示す図である。配列番号172のJNK阻害剤が、D-TAT-IB1配列番号197およびL-TAT-IB1配列番号196より高い作用強度を有して、PMA-分化されたマクロファージにおけるLPSに誘導されるIL-6放出を阻害することを示す図である。配列番号172のJNK阻害剤が、D-TAT-IB1配列番号197およびL-TAT-IB1配列番号196より高い作用強度を有して、PMA-分化されたマクロファージにおけるLPSに誘導されるTNFα放出を阻害することを示す図である。配列番号172のJNK阻害剤が、ラットの初代の全血細胞におけるLPSに誘導されるTNFα放出を、3ng/mlにおいて阻害することを示す図である。配列番号172のJNK阻害剤が、PMA/イオノマイシンに応答した初代のヒトT細胞によるIL2分泌を阻害することを示す図である。配列番号172のJNK阻害剤が、CD3/CD28刺激に応答した初代のヒトT細胞によるIL2分泌を阻害することを示す図である。ラットのリンパ節から精製された初代のT細胞におけるCD3/CD28に誘導されるL-2放出の、配列番号172を有しているJNK阻害剤による用量依存的な阻害を示す図である。ラットのリンパ節から精製された初代のT細胞におけるCD3/CD28に誘導されるL-2放出の用量依存的阻害を示す図である。MAおよびイオノマイシンを用いて刺激したラット全血におけるIL-2放出の用量依存的阻害を示す図である。ヒト全血におけるJNK阻害およびIL-6放出を示す図である。ヒト全血におけるJNK阻害およびIL-2放出を示す図である。ヒト全血におけるJNK阻害およびIFN-γ放出を示す図である。ヒト全血におけるJNK阻害およびIFN-α放出を示す図である。ヒト全血におけるJNK阻害およびIFN-α放出を示す図である。ヒト全血におけるJNK阻害およびIL-2放出を示す図である。ヒト全血におけるJNK阻害およびTFN-α放出を示す図である。"