"測定試料中のヘモグロビン量および/または糖化ヘモグロビン量を比色定量する方法であって、少なくとも下記前処理液aと下記試験片bとを用い、かつ少なくとも下記工程iからivを経ることを特徴とする測定方法。前処理液a:少なくとも糖化アミノ酸オキシダーゼが含有された水溶液試験片b:少なくともプロテアーゼが担持された高分子基材工程i:測定試料と前処理液aとを体積比率1:1~1:15で混合させる工程工程ii:測定試料と前処理液aとの混合液を、試験片bに点着させる工程工程iii:反射光を用いて、試験片bの反射率および/または吸光度を測定する工程工程iv:得られた反射率および/または吸光度からヘモグロビン量、糖化ヘモグロビン量、糖化ヘモグロビン量のヘモグロビン量に対する割合からなる群より選ばれた1つ以上を算出する工程工程iが、測定試料と前処理液aとを体積比率1:1~1:10で混合させる工程であることを特徴とする請求項1に記載の測定方法。さらに、前処理液aと試験片bとの少なくとも一方に、ペルオキシダーゼおよび酸化還元系発色試薬がそれぞれ含有または担持されることを特徴とする請求項1または2に記載の測定方法。さらに、前処理液aと試験片bとの少なくとも一方に、界面活性剤が含有または担持されることを特徴とする請求項1から3のいずれかに記載の測定方法。プロテアーゼが、少なくともバチルスBacillus由来プロテアーゼ、アスペルギルスAspergillus由来プロテアーゼ、ストレプトマイセスStreptomyces由来プロテアーゼ、およびトリチラチウムTritirachium由来プロテアーゼからなる群より選ばれた1種以上であることを特徴とする請求項1から4のいずれかに記載の測定方法。酸化還元系発色試薬が、極大吸収波長が600~800nmのロイコ型色素であることを特徴とする請求項1から5のいずれかに記載の測定方法。界面活性剤が、親水親油バランスHydrophileLipophileBalance:HLBが10~20の非イオン性界面活性剤であることを特徴とする請求項1から6のいずれかに記載の測定方法。測定試料が全血検体であることを特徴とする請求項1から7のいずれかに記載の測定方法。請求項1から8のいずれかに記載の前処理液aと下記試験片bとからなる測定キット。本発明は、かかる従来技術の課題を背景になされたものである。すなわち、本発明の目的は、診断の現場で正確、簡便かつ迅速に測定試料中の糖化ヘモグロビン量を比色定量するための測定方法、および測定キットを提供することにある。さらに詳しくは、測定試料中に存在する可能性のある、糖化ヘモグロビンに由来しない糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドの影響を受けにくく、かつ保存安定性に優れた、糖化ヘモグロビン量を比色定量するための測定方法、および測定キットを提供することにある。本発明者らは、測定試料を試験片に点着させる前に、測定試料と糖化アミノ酸オキシダーゼが含有された水溶液とを混合することで、測定試料中に存在する可能性のある、糖化ヘモグロビンに由来しない糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドを分解処理し得ることを見出した。また、測定試料が全血検体の場合は、ヘモグロビン由来のスペクトルと色素由来のスペクトルが重なるため、再現性、正確性が低下することを見出した。さらに、プロテアーゼと糖化アミノ酸オキシダーゼがそれぞれ同一の前処理液または試験片に含有または担持されると、保存中にプロテアーゼによる糖化アミノ酸オキシダーゼの失活分解が生じ、保存安定性が著しく低下することを見出した。そこで、本発明者らは、前処理液に糖化アミノ酸オキシダーゼを含有させ、試験片にプロテアーゼを担持させた。また、測定試料を前記試験片に点着させる前に、測定試料と前記前処理液とを最適な混合比率で混合することとした。これにより、測定試料中に存在する可能性のある、糖化ヘモグロビンに由来しない糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドの影響を受けにくくなり、かつヘモグロビン由来のスペクトルの影響も軽減するため、測定の再現性、正確性が向上することを見出し、本発明に至った。加えて、プロテアーゼと糖化アミノ酸オキシダーゼをそれぞれ異なる前処理液または試験片に含有または担持させることにより、糖化アミノ酸オキシダーゼの保存安定性を向上させることも同時に成功し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、以下の構成からなる。1.測定試料中のヘモグロビンおよび/または糖化ヘモグロビン量を比色定量する糖化ヘモグロビンの測定方法であって、少なくとも下記前処理液aと下記試験片bとを用い、かつ少なくとも下記工程iからivを経ることを特徴とする測定方法。前処理液a:少なくとも糖化アミノ酸オキシダーゼが含有された水溶液試験片b:少なくともプロテアーゼが担持された高分子基材工程i:測定試料と前処理液aとを体積比率1:1~1:15で混合させる工程工程ii:測定試料と前処理液aとの混合液を、試験片bに点着させる工程工程iii:反射光を用いて、試験片bの反射率および/または吸光度を測定する工程工程iv:得られた反射率および/または吸光度からヘモグロビン量、糖化ヘモグロビン量、糖化ヘモグロビン量のヘモグロビン量に対する割合からなる群より選ばれた1つ以上を算出する工程2.工程iが、測定試料と前処理液aとを体積比率1:1~1:10で混合させる工程であることを特徴とする1.の測定方法。3.さらに、前処理液aと試験片bとの少なくとも一方に、ペルオキシダーゼおよび酸化還元系発色試薬がそれぞれ含有または担持されることを特徴とする1.または2.の測定方法。4.さらに、前処理液aと試験片bとの少なくとも一方に、界面活性剤が含有または担持されることを特徴とする1.から3.のいずれかの測定方法。5.プロテアーゼが、少なくともバチルスBacillus由来プロテアーゼ、アスペルギルスAspergillus由来プロテアーゼ、ストレプトマイセスStreptomyces由来プロテアーゼ、およびトリチラチウムTritirachium由来プロテアーゼからなる群より選ばれた1種以上であることを特徴とする1.から4.のいずれかの測定方法。6.酸化還元系発色試薬が、極大吸収波長が600~800nmのロイコ型色素であることを特徴とする1.から5.のいずれかの測定方法。7.界面活性剤が、親水親油バランスHydrophileLipophileBalance:HLBが10~20の非イオン性界面活性剤であることを特徴とする1.から6.のいずれかの測定方法。8.測定試料が全血検体であることを特徴とする1.から7.のいずれかの測定方法。9.1.から8.のいずれかの前処理液aと下記試験片bとからなる測定キット。本発明により、診断の現場で正確、簡便かつ迅速に測定試料中の糖化ヘモグロビン量を比色定量するための測定方法、および測定キットを提供することができる。さらに詳しくは、測定試料中に存在する可能性のある糖化ヘモグロビンに由来しない糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドの影響を受けにくく、かつ保存安定性に優れた、糖化ヘモグロビン量を比色定量するための測定方法、および測定キットを提供することができる。以下、本発明を詳述する。測定対象物本発明における測定対象物は、糖化ヘモグロビンであり、糖尿病診断への応用の観点から、ヘモグロビンのβ鎖N末端が糖化されたヘモグロビンA1c以下、HbA1cともいうことがある。が好ましい。なお、測定対象物である糖化へモグロビンに由来する糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドを測定対象糖化物といい、測定対象物である糖化へモグロビンに由来しない糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドを非測定対象糖化物ともいうことがある。測定試料本発明における測定試料としては、全血、血球、血漿、血清、髄液、汗、尿、涙液、唾液、皮膚、粘膜、毛髪等の生体試料すなわち生体から採取された試料や、飲料水、調味料等の食品類が挙げられる。また、生体試料はヒト由来に限らず、イヌ、ネコ、ウシ等の哺乳類動物由来の生体試料も対象である。これら中でも、糖尿病診断への応用の観点から、全血または血球が好ましく、POCTの観点から、前処理として血球/血漿または血清分離を行わない全血がより好ましい。本発明における測定試料の量は、特に限定されないが、例えば0.1~20μLが好ましく、0.1~10μLがより好ましく、0.1~5μLがさらに好ましい。測定試料量が0.1μLより少ないと、測定試料と前処理液との混合体積比率が不正確になり、測定値の誤差が大きくなる恐れがある。さらには、発色斑が生じる恐れもある。一方、測定試料量が20μLより多いと、例えば測定試料が血液の場合、患者の負担が大きくなるため好ましくない。測定原理本発明における糖化ヘモグロビンの測定原理は酵素反応を、測定試料と前処理液との混合液中の水分によって行ういわゆる、ドライケミストリーことで試験片を呈色させ、その呈色の程度を反射光測定によって検知する方法いわゆる、酵素比色法によって行なわれる。前記測定原理を用いることで、装置の小型軽量低価格化が可能となる。また、正確、簡便かつ迅速な測定が可能となる。以下に赤血球中の糖化ヘモグロビン量を測定する場合の反応について説明するが、本発明を何ら限定するものではない。1測定試料中の赤血球と界面活性剤を反応させ、溶血させ、糖化ヘモグロビンを取り出す工程。2非測定対象糖化物と糖化アミノ酸オキシダーゼを反応させ、非測定対象糖化物の影響を低減する工程。3前記糖化ヘモグロビンとプロテアーゼを反応させ、糖化ヘモグロビンの糖化されたβ鎖N末端から測定対象糖化物を切り出す工程。4前記測定対象糖化物と糖化アミノ酸オキシダーゼを反応させ、過酸化水素を生成する工程。5ペルオキシダーゼ存在下で、前記過酸化水素と酸化還元系発色試薬を反応させ、発色させる工程。6前記発色から測定試料中の糖化ヘモグロビン量を比色定量する工程。前処理液本発明における前処理液とは、測定試料中に存在する可能性のある、非測定対象糖化物を分解処理するために、測定試料と混合する液体を意味する。測定試料を試験片に点着させる前に、測定試料と前処理液とを混合することで、測定試料中に存在する可能性のある、非測定対象糖化物を分解処理するとともに、測定試料の希釈によりヘモグロビン由来のスペクトルの影響を軽減することができる。本発明における測定試料と前処理液との混合体積比率は、1:1~1:15であることが必要であり、1:1~1:10であることが好ましい。混合体積比率が、1:15より大きいと、測定試料中の糖化ヘモグロビン濃度が低くなり、すなわち色素の発色強度も低くなるため、検出が困難になる恐れがある。一方、混合体積比率が、1:1より小さいと、測定試料が十分希釈されず、ヘモグロビン由来のスペクトルの影響で、測定値に誤差が生じる恐れがある。なお、マイクロピペット、スポイト、キャピラリー等を用いて採取した測定試料を、所定量の前処理液へ添加することで、所定の体積比率で混合することが可能である。試験片本発明の試験片は、1以上の高分子基材以下、層ともいうことがある。からなる。前記試験片の層数は、実施形態に合わせて変化し得るが、1~5層が好ましく、1~4層がより好ましく、1~3層がさらに好ましい。なお、層数には、本発明に必要な試薬が担持された高分子基材に加え、血液を展開するための展開層や透明支持層なども含む。層数が5層より多いと、最上層から最下層まで展開するのに必要な測定試料量が多くなるため、好ましくない。前記試験片は、任意の手順を用いて作製することができる。典型的には、複数の層を別個に、一種以上の試薬溶液に浸漬し、乾燥する慣用の手順を用いることにより作製し、次いで最終的な試験片に組み立てることができる。高分子基材本発明の試験片を構成する高分子基材としては、本発明に必要な試薬を必要量担持でき、かつ測定試料を水平方向および垂直方向に適切に展開できれば、いかなる形態、組成のものを用いてもよい。以下に高分子基材の形態、組成の具体例を示すが、本発明を何ら限定するものではない。形態前記高分子基材の形態としては、ろ紙、繊維構造体、多孔質膜メンブレンフィルター、フィルム等の自立可能なものや、高分子ゲル等の自立不可能なものが挙げられる。なお、高分子ゲル等の自立不可能なものを用いる際は、ろ紙、繊維構造体、多孔質膜メンブレンフィルター、フィルム等の自立可能なものを支持体として設けるのが好ましい。組成前記高分子基材の組成としては、ポリエステル樹脂であるポリエチレンテレフタレートPET、ポリブチレンテレフタレートPBT、ポリエチレンナフタレートPEN、ポリブチレンナフタレートPBN等、オレフィン樹脂であるポリエチレンPE、ポリプロピレンPP、ポリブテン等、ビニル樹脂であるポリ塩化ビニルPVC、ポリ塩化ビニリデン、ポリ酢酸ビニル等、アクリル樹脂、アクリレート樹脂、フッ素樹脂であるポリテトラフルオロエチレンPTFE、ポリビニリデンフルオライドPVDF等、ポリカーボネート樹脂、ポリエーテル樹脂であるポリオキシメチレンPOM、ポリフェニレンオキシドPPO、ポリエーテルケトンPEK、ポリエーテルエーテルケトンPEEK、ポリフェニレンスルフィドPPS、ポリスルホンPSU、ポリエーテルスルホンPES、ポリエーテルイミドPEI等、ポリアミド樹脂であるナイロン、アラミド等、セルロース類であるセルロースアセテート、ニトロセルロース、再生セルロース等が挙げられる。前記高分子基材の形状は、特に限定されないが、例えば正方形、長方形、円形、楕円形等の薄板状が挙げられる。前記高分子基材の面積は、装置の小型軽量低価格化の観点から小さければ小さいほどよいが、例えば1~1000mm2が好ましく、2~500mm2がより好ましく、5~200mm2がさらに好ましい。前記高分子基材の1層の厚みは、測定試料の展開性、および酵素プロテアーゼ、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ反応性の観点から、例えば10~2000μmが好ましく、20~1000μmがより好ましく、50~500μmがさらに好ましい。構成本発明は、前処理液と試験片とからなる。前処理液としては、少なくとも糖化アミノ酸オキシダーゼが含有された水溶液である必要があり、試験片としては、少なくともプロテアーゼが担持された高分子基材である必要がある。糖化アミノ酸オキシダーゼを前処理液に含有させず試験片に担持させると、非測定対象糖化物の分解処理が不十分となり、見かけ上の測定値が増加してしまう恐れがある。また、糖化アミノ酸オキシダーゼとプロテアーゼがそれぞれ異なる前処理液または試験片に含有または担持されることが必要である。糖化アミノ酸オキシダーゼとプロテアーゼが同一の前処理液または試験片に含有または担持されると、プロテアーゼによる糖化アミノ酸オキシダーゼの失活分解が生じる恐れがある。以下に本発明の具体例を示すが、本発明を何ら限定するものではない。本発明は、前処理液として少なくとも糖化アミノ酸オキシダーゼが含有された水溶液、試験片として少なくともプロテアーゼが担持された高分子基材である以下の構成が挙げられる。1.前処理液:糖化アミノ酸オキシダーゼ、試験片:プロテアーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬2.前処理液:糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、試験片:プロテアーゼ、酸化還元系発色試薬3.前処理液:糖化アミノ酸オキシダーゼ、酸化還元系発色試薬、試験片:プロテアーゼ、ペルオキシダーゼ4.前処理液:糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬、試験片:プロテアーゼこれらの中でも、さらに溶液状態で不安定なすなわち、自己発色を生じる恐れのある酸化還元系発色試薬を前処理液中に含有しない以下の構成が好ましい。1.前処理液:糖化アミノ酸オキシダーゼ、試験片:プロテアーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬2.前処理液:糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、試験片:プロテアーゼ、酸化還元系発色試薬前記前処理液と前記試験片との少なくとも一方に、さらに界面活性剤が含有または担持されるが好ましい。検出反応の検出には、発色した試験片に対して光入射光をあて、その反射光を検出することが最も簡便であるが、これ以外の方法を用いても良い。光源としては、特に限定されないが、例えばUVランプ、キセノンランプ、クリプトンランプ、水銀ランプ、重水素ランプ、タングステンランプ、ハロゲンランプ、発光ダイオードLED、レーザー等が挙げられる。これらの中でも、光波長の制御の容易さ、および装置の小型軽量低価格化の観点から、発光ダイオードLEDが好ましい。前記入射光の角度入射角は、特に限定されず、任意の角度を用いることができる。一方、反射光の検出は、特に限定されないが、検出面に対して垂直が好ましい。なお、検出には、フォトダイオードや積分球等を用いれば簡便に行う事ができる。プロテアーゼ本発明に用いるプロテアーゼとしては、糖化ヘモグロビンの糖化されたβ鎖N末端に作用して測定対象糖化物を切り出すものであれば、いかなる種類のプロテアーゼを用いてもよく、例えば動物、植物、微生物由来のプロテアーゼ等が挙げられる。以下にプロテアーゼの具体例を示すが、本発明を何ら限定するものではない。動物由来プロテアーゼ動物由来のプロテアーゼとしては、ファクターXafactorXa、プラスミンplasmin、スロンビンthrombin、ペプシンpepsin、ロイシンアミノペプチダーゼleucinaminopeptidase、パンクレアチンpancreatin、エラスターゼelastase、トリプシンtrypsin、キモトリプシンAchymotrypsinA、アミノペプチダーゼMaminopeptidaseM、カルボキシペプチダーゼAcarboxypeptidaseA、カルボキシペプチダーゼBcarboxypeptidaseB、カルパインcalpain、カテプシンBcathepsinB、カテプシンCcathepsinC、カテプシンDcathepsinD、エンドプロテイナーゼArg-CendoproteinaseArg-C等が挙げられる。植物由来プロテアーゼ植物由来のプロテアーゼとしては、カルボキシペプチダーゼWcarboxypeptidaseW、カリクレインkallikrein、フィシンficin、パパインpapain、キモパパインchimopapain、ブロメラインbromelain等が挙げられる。微生物由来プロテアーゼ微生物由来のプロテアーゼとしては、ズブチリシンsubtilisin、サーモリシンthermolysin、ディスパーゼdispase、プロテイナーゼNproteinaseN等に代表されるバチルスBacillus由来プロテアーゼ、IP酵素等に代表されるアスペルギルスAspergillus由来プロテアーゼ、プロナーゼpronase等に代表されるストレプトマイセスStreptomyces由来プロテアーゼ、プロテイナーゼKproteinaseK等に代表されるトリチラチウムTritirachium由来プロテアーゼ、ペプチダーゼRpeptidaseR等に代表されるリゾバスRhizopus由来プロテアーゼ、カルボキシペプチダーゼP、carboxypeptidaseP、PD酵素等に代表されるペニシリウムPenicillium由来プロテアーゼ、エンドプロテイナーゼGlu-CendoproteinaseGlu-C等に代表されるスタフィロコッカスStaphylococcus由来プロテアーゼ、クロストリパインclostripain等に代表されるクロストリジウムClostridium由来プロテアーゼ、エンドプロテイナーゼLys-CendoproteinaseLys-C等に代表されるリソバクターLysobacter由来プロテアーゼ、メタロエンドペプチダーゼmetalloendopeputidase等に代表されるグリフォラGrifola由来プロテアーゼ、カルボキシペプチダーゼYcarboxypeptidaseY、プロテイナーゼAproteinaseA等に代表される酵母Yeast由来プロテアーゼ、アミノペプチダーゼTaminopeptidaseT等に代表されるサーマスThermus由来プロテアーゼ、エンドプロテイナーゼAsp-NendoproteinaseAsp-N等に代表されるシュードモナスPseudomonus由来プロテアーゼ、リジルエンドペプチダーゼlysylendopeputidase、アクロモペプチダーゼachromopeputidase等に代表されるアクロモバクターAchromobacter由来プロテアーゼ等が挙げられるこれらの中でも、安定性、反応性ヘモグロビンの切断速度、入手の容易性、価格等の理由から、微生物由来のプロテアーゼが好ましく、バチルスBacillus由来プロテアーゼ、アスペルギルスAspergillus由来プロテアーゼ、ストレプトマイセスStreptomyces由来プロテアーゼ、およびトリチラチウムTritirachium由来プロテアーゼからなる群より選ばれた1種以上であることがより好ましい。市販品としては、バチルスBacillus由来プロテアーゼのトヨチームNEP東洋紡績社製、Type-Xシグマ社製、Type-XXIVシグマ社製、サーモリシン大和化成社製、サモアーゼPC10大和化成社製、アスペルギルスAspergillus由来プロテアーゼのType-XIIIシグマ社製、Type-XXIIIシグマ社製、ストレプトマイセスStreptomyces由来プロテアーゼのType-XIV、トリチラチウムTritirachium由来プロテアーゼのプロテイナーゼKロシュ社製等が好適に用いられる。これらの中でも、ヘモグロビンA1c測定の観点から、バチルスBacillus由来プロテアーゼのトヨチームNEP東洋紡績社製、Type-Xシグマ社製、Type-XXIVシグマ社製、サーモリシン大和化成社製、サモアーゼPC10大和化成社製、ストレプトマイセスStreptomyces由来プロテアーゼのType-XIVがより好適に用いられる。前記プロテアーゼは、目的とする活性が発現すれば精製物であっても粗精製物であってもよい。また、遺伝子操作により作られたものでもよく、化学修飾の有無も問わない。さらに、前記プロテアーゼは単独で用いても、二種以上を組み合わせて用いてもよい。前記プロテアーゼの濃度は、特に限定されないが、0.1~10000U/cm2であることが好ましく、1~1000U/cm2がより好ましい。プロテアーゼ濃度が0.1U/cm2より少ないと、反応性の低下により測定時間が長くなるため好ましくない。一方、プロテアーゼ濃度が10000U/cm2より多いと、バッククラウンドの上昇や、高価格化の恐れがある。前記プロテアーゼの反応を行う際のpHは、無調整でもよいが、使用するプロテアーゼの至適pHとなるよう適当なpH調整剤、例えば下記の緩衝剤によって調整するのが好ましい。糖化アミノ酸オキシダーゼ本発明に用いる糖化アミノ酸オキシダーゼ以下、FAODともいうことがある。は、公知文献ではフルクトシルアミンオキシダーゼフルクトシルアミノ酸オキシダーゼフルクトシルペプチドオキシダーゼフルクトシルアミン酸化酵素フルクトシルアミノ酸酸化酵素フルクトシルペプチド酸化酵素糖化アミンオキシダーゼ糖化アミノ酸オキシダーゼ糖化ペプチドオキシダーゼ糖化アミン酸化酵素糖化アミノ酸酸化酵素糖化ペプチド酸化酵素アマドリアーゼケトアミンオキシダーゼケトアミン酸化酵素等、種々の名称で呼ばれている。本発明に用いる糖化アミノ酸オキシダーゼとしては、測定対象糖化物および/または非測定対象糖化物に特異的に作用し、過酸化水素を生成する酵素であれば、いかなる種類の酵素を用いてもよい。以下に糖化アミノ酸オキシダーゼの具体例を示すが、本発明を何ら限定するものではない。糖化アミノ酸オキシダーゼとしては、ギベレラGibberella由来酵素、アスペルギルスAspergillus由来酵素、ペニシリウムPenicillium由来酵素、フサリウムFusarium由来酵素、コリネバクテリウムCorynebacterium由来酵素、コニオカエタConiochaeta由来酵素、ユウペニシリウムEupenicillium由来酵素、アカエトミエラAchaetomiella由来酵素、カエトミウムChaetomium由来酵素、大腸菌由来酵素、酵母属デバリオマイゼスDebaryomyces由来酵素、カーブラリアCurvularia由来酵素、ネオコスモスポラNeocosmospora由来酵素、クリプトコッカスCryptococcus由来酵素、ファエオスフェリアPhaeosphaeria由来酵素、カンジダCandida由来酵素、アクレモニウムAcremonium由来酵素等が挙げられる。これらの中でも、安定性、反応性測定対象糖化物または非測定対象糖化物の酸化速度、入手の容易性、価格等の理由から、コニオカエタConiochaeta由来酵素、ユウペニシリウムEupenicillium由来酵素、カーブラリアCurvularia由来酵素、ネオコスモスポラNeocosmospora由来酵素、アスペルギルスAspergillus由来酵素、クリプトコッカスCryptococcus由来酵素、ファエオスフェリアPhaeosphaeria由来酵素からなる群より選ばれた1種以上であることが好ましく、コニオカエタConiochaeta由来酵素、アスペルギルスAspergillus由来酵素、クリプトコッカスCryptococcus由来酵素、ファエオスフェリアPhaeosphaeria由来酵素からなる群より選ばれた1種以上であることがより好ましい。これらの中でも、ヘモグロビンA1c測定の観点から、コニオカエタConiochaeta由来酵素、ファエオスフェリアPhaeosphaeria由来酵素からなる群より選ばれた1種以上であることがさらに好ましい。前記糖化アミノ酸オキシダーゼは、目的とする活性が発現すれば精製物であっても粗精製物であってもよい。また、遺伝子操作により作られたものでもよく、化学修飾の有無も問わない。さらに、前記糖化アミノ酸オキシダーゼは単独で用いても、二種以上を組み合わせて用いてもよい。前記糖化アミノ酸オキシダーゼの濃度は、特に限定されないが、0.1~10000U/mLであることが好ましく、1~1000U/mLがより好ましい。糖化アミノ酸オキシダーゼ濃度が0.1U/mLより少ないと、反応性の低下により測定時間が長くなるため好ましくない。一方、糖化アミノ酸オキシダーゼ濃度が10000U/mLより多いと、バッククラウンドの上昇や、高価格化の恐れがある。前記糖化アミノ酸オキシダーゼの反応を行う際のpHは、無調整でもよいが、使用する糖化アミノ酸オキシダーゼの至適pHとなるよう適当なpH調整剤、例えば下記の緩衝剤によって調整するのが好ましい。ペルオキシダーゼ本発明に用いるペルオキシダーゼとしては、過酸化水素と酸化還元系発色試薬との反応を触媒する酵素であれば、いかなる種類の酵素を用いてもよく、例えば植物由来、細菌由来、担子菌由来のペルオキシダーゼが挙げられる。これらの中でも、純度、入手の容易性、価格等の理由から、西洋ワサビ、イネ、大豆由来のペルオキシダーゼが好ましく、西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼがより好ましい。市販品としては、PEO-131東洋紡績社製、PEO-301東洋紡績社製、PEO-302東洋紡績社製等が好適に用いられる。前記ペルオキシダーゼの濃度は、特に限定されないが、0.01~1000U/cm2または0.1~10000U/mLであることが好ましく、0.1~100U/cm2または1~1000U/mLがより好ましい。ペルオキシダーゼ濃度が0.01U/cm2または0.1U/mLより少ないと、反応性の低下により測定時間が長くなるため好ましくない。一方、ペルオキシダーゼ濃度が1000U/cm2または10000U/mLより多いと、バッククラウンドの上昇や、高価格化の恐れがある。前記ペルオキシダーゼの反応を行う際のpHは、無調整でもよいが、使用するペルオキシダーゼの至適pHとなるよう適当なpH調整剤、例えば下記の緩衝剤によって調整するのが好ましい。酸化還元系発色試薬本発明に用いる酸化還元系発色試薬としては、過酸化水素と反応して呈色するものであれば、いかなる種類の色素を用いてもよく、例えば水素供与体とカップラー、ロイコ体等が挙げられる。なお、水素供与体とカップラーを用いた代表例は、水素供与体とカップラーとをペルオキシダーゼの存在下に過酸化水素によって酸化縮合させて色素を形成させるトリンダーTrinder法である。以下に酸化還元系発色試薬の具体例を示すが、本発明を何ら限定するものではない。水素供与体水素供与体としては、フェノール、フェノール誘導体、アニリン誘導体、ナフトール、ナフトール誘導体、ナフチルアミン、ナフチルアミン誘導体等が挙げられる。具体的には、N-エチル-N-3-スルホプロピルアニリンALPS、N-エチル-N-3-スルホプロピル-3-メチルアニリンTOPS、N-エチル-N-3-スルホプロピル-3-メトキシアニリンADPS、N-エチル-N-3-スルホプロピル-3,5-ジメチルアニリン、N-エチル-N-3-スルホプロピル-3,5-ジメトキシアニリン、N-エチル-N-2-ヒドロキシ-3-スルホプロピルアニリンALOS、N-エチル-N-2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル-3-メトキシアニリンTOOS、N-エチル-N-2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル-3,5-ジメチルアニリンMAOS、N-エチル-N-2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル-3,5-ジメトキシアニリンDAOS、N-エチル-N-3-メチルフェニル-N’-アセチルエチレンジアミン、N-エチル-N-3-メチルフェニル-N’-サクシニルエチレンジアミン、N-2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル-2,5-ジメチルアニリン、N-2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル-3,5-ジメトキシアニリンHDAOS、N-スルホプロピルアニリン、N-スルホプロピル-3,5-ジメトキシアニリン等が挙げられる。カップラーカップラーとしては、4-アミノアンチピリン4AA、アミノアンチピリン誘導体、バニリンジアミンスルホン酸、メチルベンズチアゾリノンヒドラゾンMBTH、スルホン化メチルベンズチアゾリノンヒドラゾンSMBTH等が挙げられる。ロイコ体ロイコ体としては、トリフェニルメタン誘導体、フェノチアジン誘導体、ジフェニルアミン誘導体等が挙げられる。具体的には、4,4’-ベンジリデンビスN,N-ジメチルアニリン、4,4’-ビス[N-エチル-N-3-スルホプロピルアミノ-2,6-ジメチルフェニル]メタン、1-エチルアミノチオカルボニル-2-3,5-ジメトキシ-4-ヒドロキシフェニル-4,5-ビス4-ジエチルアミノフェニルイミダゾール、4,4’-ビスジメチルアミノジフェニルアミン、N-カルボキシメチルアミノカルボニル-4,4’-ビスジメチルアミノジフェニルアミン塩DA64、10-カルボキシメチルアミノカルボニル-3,7-ビスジメチルアミノフェノチアジン塩DA67等が挙げられる。これらの中でも、モル吸光係数、極大吸収波長等の理由から、ロイコ体が好ましく、N-カルボキシメチルアミノカルボニル-4,4’-ビスジメチルアミノジフェニルアミン塩DA64、10-カルボキシメチルアミノカルボニル-3,7-ビスジメチルアミノフェノチアジン塩DA67がより好ましい。前記酸化還元系発色試薬の極大吸収波長は、600~800nmであることが好ましく、650~750nmがより好ましい。ヘモグロビンA1c測定の観点から、極大吸収波長が600nmより低波長側であると、酸化還元系発色試薬の発色スペクトルとヘモグロビンのスペクトルとが重なるため、感度が低下する恐れがある。一方、極大吸収波長が800nmより高波長側であると、検出機器が大型化する恐れがある。前記酸化還元系発色試薬の濃度は、特に限定されないが、0.0001~10mg/cm2または0.001~100mg/mLであることが好ましく0.001~1mg/cm2または0.01~10mg/mLがより好ましい。酸化還元系発色試薬濃度が0.0001mg/cm2または0.001mg/mLより少ないと、感度が低下する恐れがある。一方、酸化還元系発色試薬濃度が10mg/cm2または100mg/mLより多いと、バッククラウンドの上昇や、高価格化の恐れがある。界面活性剤本発明に用いる界面活性剤としては、溶血剤および/またはプロテアーゼ反応促進剤として作用すれば、いかなる種類の界面活性剤を用いてもよいが、溶血剤およびプロテアーゼ反応促進剤として作用する界面活性剤が好ましい。前記界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルTriton登録商標系界面活性剤等、ポリオキシエチレンアルキルエーテルBrij登録商標系界面活性剤等、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルTween登録商標系界面活性剤等、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アルキルグルコシド、ショ糖脂肪酸エステル等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。これらの中でも、溶血剤としての反応性溶血の速度、プロテアーゼ反応促進剤としての作用性、価格等の理由からポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルTriton登録商標系界面活性剤等が好ましい。市販品としては、TritonX登録商標-100ナカライテスク社製、TritonX登録商標-114ナカライテスク社製、Nonidet登録商標P-40ナカライテスク社製等が好適に用いられる。また、前記界面活性剤は単独で用いても、二種以上を組み合わせて用いてもよい。前記界面活性剤の親水親油バランスHydrophileLipophileBalance:HLBは、10~20であることが好ましく、12~20がより好ましく、14~20がさらに好ましい。HLB値が10より小さいと、十分な溶血効果、およびプロテアーゼ反応促進効果が得られない恐れがある。一方、HLB値が20より大きい界面活性剤は、HLBの定義上存在しない。前記界面活性剤の濃度は、特に限定されないが、0.0001~10mg/cm2または0.001~100mg/mLであるとこが好ましく0.001~1mg/cm2または0.01~10mg/mLがより好ましい。界面活性剤濃度が0.0001mg/cm2または0.001mg/mLより少ないと、十分な溶血効果、およびプロテアーゼ反応促進効果が得られない恐れがある。一方、界面活性剤濃度が10mg/cm2または100mg/mLより多くしても、効果の向上は見られない。本発明の非測定対象糖化物と糖化アミノ酸オキシダーゼを反応させ、非測定対象糖化物の影響を低減する工程にて発生する過酸化水素は、測定試料中が全血である場合は、全血中のカタラーゼによって酸素と水に分解されるが、必要に応じて前処理液にカタラーゼを含有させてもよい。本発明に用いるカタラーゼとしては、非測定対象糖化物を消去する際に生成する過酸化水素を不均化して酸素と水に分解する反応を触媒する酵素であれば、いかなる種類の酵素を用いてもよく、例えば動物由来、微生物由来のカタラーゼが挙げられる。これらの中でも、純度、入手の容易性、価格等の理由から、微生物由来のカタラーゼが好ましい。市販品としては、アスペルギルスAspergillus由来カタラーゼC3515シグマ社製、コリネバクテリウムCorynebacterium属由来カタラーゼ02071シグマ社製、マイクロコッカスMicrococcus属由来カタラーゼ60638シグマ社製等が好適に用いられる。前記カタラーゼの濃度は、特に限定されないが、0.1~10000U/cm2または1~100000U/mLであることが好ましく、1~1000U/cm2または10~10000U/mLがより好ましい。カタラーゼ濃度が0.1U/cm2または1U/mLより少ないと、非測定対象糖化物を消去する際に生成する過酸化水素を除去できず、見かけ上の測定値が増加してしまう恐れがある。一方、カタラーゼ濃度が10000U/cm2または100000U/mLより多いと、バッククラウンドの上昇や、高価格化の恐れがある。前記カタラーゼの反応を行う際のpHは、無調整でもよいが、使用するペルオキシダーゼの至適pHとなるよう適当なpH調整剤、例えば下記の緩衝剤によって調整するのが好ましい。前記カタラーゼの反応後、カタラーゼの影響を排除するため、試験片にアジ化ナトリウムなどのカタラーゼ阻害剤を担持させてもよい。あるいは、カタラーゼとペルオキシダーゼの基質に対する親和性の違いを利用して、カタラーゼとペルオキシダーゼとの濃度比率を適切に設定することにより、試験片にカタラーゼ阻害剤を担持させない構成も可能である。緩衝剤本発明に用いることができる緩衝剤としては、目的とするpH範囲において充分な緩衝能力を有していれば、いかなる種類の緩衝剤を用いてもよく、例えば、トリス、リン酸、フタル酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、ホウ酸、酒石酸、酢酸、炭酸、グッドバッファーMES、ADA、PIPES、ACES、コラミン塩酸、BES、TES、HEPES、アセトアミドグリシン、トリシン、グリシンアミド、ビシン等が挙げられる。これらの中でも、本発明に用いるプロテアーゼ、糖化アミノ酸オキシダーゼ、およびペルオキシダーゼの至適pH範囲である6.0~8.5好ましくは6.0~7.5において充分な緩衝能力を有する等の理由から、トリス、リン酸、MES、PIPES、TES、HEPESが好ましく、MES、PIPESがより好ましい。前記緩衝剤の濃度は、特に限定されないが、50~100mM程度が好ましい。その他試薬本発明では前記試薬界面活性剤、プロテアーゼ、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬等の他、必要に応じてヘモグロビンの酸化剤フェロシアン化物、アジ化物、亜硝酸塩、硝酸塩等、酵素反応を妨害するイオンを捕捉するキレート試薬エチレンジアミン、ビピリジン、エチレンジアミン四酢酸、フェナントロリン、ポルフィリン、クラウンエーテル等、過酸化水素の定量の妨害物質であるアスコルビン酸を消去するアスコルビン酸オキシダーゼ、塩類塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化アルミニウム等、酵素安定化剤単糖類、オリゴ糖類、多糖類、糖アルコール、グリセロール、グルコン酸塩、アミノ酸類、アルブミン類、グロブリン類、繊維性タンパク質等、酸化還元系発色試薬安定化剤シクロデキストリン類、還元性チオアルコール類、還元性硫酸塩類等を添加してもよい。これらは、単独で用いても、二種以上を組み合わせて用いてもよい。以下に実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。なお、明細書中の評価法は以下の通りである。[各種評価法]<1.プロテアーゼの活性測定>プロテアーゼの活性は、Folin-Ciocalteu試薬を用いたカゼインフォリン法により算出した。ここで、プロテアーゼの至適pHで、37°C-1分あたり、カゼインを加水分解し、1.0μmolのチロシンに相当する呈色を生ずる酵素量を1Uと定義した。<2.糖化アミノ酸オキシダーゼの活性測定>糖化アミノ酸オキシダーゼの活性は、ペルオキシダーゼ存在下で、糖化バリルヒスチジンと糖化アミノ酸オキシダーゼとの反応で生成した過酸化水素と酸化還元系発色試薬を反応させ、その吸光度変化から算出した。ここで、糖化アミノ酸オキシダーゼの至適pHpH=6.5で、37°C-1分あたり、糖化バリルヒスチジンを加水分解し、1.0μmolの過酸化水素を生成する酵素量を1Uと定義した。<3.ペルオキシダーゼの活性測定>ペルオキシダーゼの活性は、ペルオキシダーゼ存在下で、過酸化水素とピロガロールPyrogallolとを反応させ、生成したプルプロガリンPurpurogallinに由来する吸光度の変化から算出した。ここで、ペルオキシダーゼの至適pHpH=6.0で、20°C-20秒あたり、1.0mgのプルプロガリンPurpurogallinに相当する呈色を生ずる酵素量を1Uと定義した。<4.カタラーゼの活性測定>カタラーゼの活性は、ペルオキシダーゼ存在下で、過酸化水素を水と酸素に分解し、過酸化水素に由来する240nmでの吸光度の変化から算出した。ここで、ペルオキシダーゼの至適pHで、25°C-1分あたり、1.0μmolの過酸化水素を分解する酵素量を1Uと定義した。<5.親水親油バランスHydrophileLipophileBalance:HLBの測定>HLB値は、グリフィン法を用い、HLB値=20×親水部の式量の総和/分子量で算出した。なお、界面活性剤の混合物のHLB値は、各成分のHLB値の加重平均で表す。<6.糖化アミノ酸オキシダーゼの保存安定性>前処理液に糖化アミノ酸オキシダーゼが含有されている場合下記ブランク試薬を、加速試験として、恒温水槽TM-1アズワン社製にて37°C-5時間インキュベートした。次いで、前記ブランク試薬10μLと下記試薬11000μLとを混合した後、マイクロコン-3ミリポア社製にて14000Gで遠心濃縮し、200μLの濃縮液を得た。次いで、前記濃縮液50μLとLaemmliサンプルバッファーバイオラッドラボラトリーズ社製47.5μLと2-メルカプトエタノールバイオラッドラボラトリーズ社製2.5μLとを混合し、95°C-5分間ボイルすることで、ブランク溶液を得た。<ブランク試薬>100mMPIPES同仁化学研究所社製pH6.5500U/mL糖化アミノ酸オキシダーゼFPO-301東洋紡績社製<試薬1>100mMPIPES同仁化学研究所社製pH6.5100倍希釈プロテアーゼ阻害剤カクテル一般用、100倍濃縮ナカライテスク社製他方、本発明の前処理液を、加速試験として、恒温水槽TM-1アズワン社製にて37°C-5時間インキュベートした。次いで、前記前処理液10μLと前記試薬11000μLとを混合した後、マイクロコン-3ミリポア社製にて14000Gで遠心濃縮し、分子量3000以下の低分子量成分界面活性剤、酸化還元系発色試薬等を除去し、200μLの濃縮液を得た。次いで、前記濃縮液50μLとLaemmliサンプルバッファーバイオラッドラボラトリーズ社製47.5μLと2-メルカプトエタノールバイオラッドラボラトリーズ社製2.5μLとを混合し、95°C-5分間ボイルすることで、サンプル溶液を得た。試験片に糖化アミノ酸オキシダーゼが担持されている場合8mmφの桐山ろ紙NO.5A東京硝子器械社製に、前記ブランク試薬を10μL滴下し、遮光デシケーター3909-04東京硝子器械社製にて25°C-2時間乾燥させ、ブランク試験片を作製した。次いで、ブランク試験片を、加速試験として、プログラム低温恒温器IN604ヤマト科学社製にて37°C-5時間インキュベートした。次いで、マイクロチューブ内に前記ブランク試験片と前記試薬11000μLとを添加し、ボルテックスミキサーエムエス機器社製で1分間攪拌することで、ブランク試験片中の糖化アミノ酸オキシダーゼを抽出した。次いで、前記抽出液をマイクロコン-3ミリポア社製にて14000Gで遠心濃縮し、200μLの濃縮液を得た。次いで、前記濃縮液50μLとLaemmliサンプルバッファーバイオラッドラボラトリーズ社製47.5μLと2-メルカプトエタノールバイオラッドラボラトリーズ社製2.5μLとを混合し、95°C-5分間ボイルすることで、ブランク溶液を得た。他方、本発明の試験片を、加速試験として、プログラム低温恒温器IN604ヤマト科学社製にて37°C-5時間インキュベートした。次いで、マイクロチューブ内に前記試験片と前記試薬11000μLとを添加し、ボルテックスミキサーエムエス機器社製で1分間攪拌することで、試験片中の界面活性剤、プロテアーゼ、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬を抽出した。次いで、前記抽出液をマイクロコン-3ミリポア社製にて14000Gで遠心濃縮し、分子量3000以下の低分子量成分界面活性剤、酸化還元系発色試薬等を除去し、200μLの濃縮液を得た。次いで、前記濃縮液50μLとLaemmliサンプルバッファーバイオラッドラボラトリーズ社製47.5μLと2-メルカプトエタノールバイオラッドラボラトリーズ社製2.5μLとを混合し、95°C-5分間ボイルすることで、サンプル溶液を得た。得られたブランク溶液、およびサンプル溶液を、電気泳動ベストパッケージレディーゲル用バイオラッドラボラトリーズ社製を用い、下記条件1でSDS-PAGEを実施した。なお、ブランク溶液、およびサンプル溶液は、同一ゲルの別レーンに流した。<条件1>プレキャストゲル:レディーゲルJ10T、12well電気泳動システム:ミニプロティアンTetraセルパワーサプライ:パワーパックBasicスタンダード:プレシジョンPlusデュアルスタンダード泳動バッファー:プレミックスバッファートリス/グリシン/SDSスタンダード量:10μL泳動試料量:20μL泳動条件:100V定電圧-90分温度:25°C次いで、タイトボックスNO.3アズワン社製に泳動後のゲルと、蒸留水200mLとを添加し、ロッキングミキサーRM-80アズワン社製で5分間振とう後、蒸留水を除去するという洗浄作業を3回行なった。次いで、染色液Bio-SafeCBBG-250ステインバイオラッドラボラトリーズ社製50mLを添加し、前記ロッキングミキサーで1時間振とう後、前記染色液を除去した。最後に、蒸留水200mLを添加し、前記ロッキングミキサーで1時間振とう後、蒸留水を除去することで、泳動像が得られた。得られた泳動像中の50kDa付近の糖化アミノ酸オキシダーゼ由来のバンド太さ泳動方向のバンドの寸法および濃さバンドの吸光度を、GS-800CalibratedDensitometerバイオラッドラボラトリーズ社製で通法に従い測定した。得られたブランクおよびサンプルのバンド太さから下式1のバンド保持率1を、ブランクおよびサンプルのバンド濃さから下式2のバンド保持率2をそれぞれ算出し、バンド保持率1およびバンド保持率2≧90を◎Excellent、バンド保持率1およびバンド保持率2<90を×Badとして、糖化アミノ酸オキシダーゼの保存安定性つまり、耐分解性を評価した。[数1]バンド保持率1=サンプルバンド太さ/ブランクバンド太さ×100式1[数2]バンド保持率2=サンプルバンド濃さ/ブランクバンド濃さ×100式2<7.プロテアーゼの反応性>100g/LのヘモグロビンヒトH7379シグマ社製水溶液10μLと本発明の前処理液50μLとを混合した体積比率=1:5。次いで、前記混合液12μLを本発明の試験片に点着し、プログラム低温恒温器IN604ヤマト科学社製にて37°C-0、5、10、15、30、60分間インキュベートした。次いで、マイクロチューブ内に前記試験片と前記試薬11000μLとを添加し、ボルテックスミキサーエムエス機器社製で1分間攪拌することで、試験片中の界面活性剤、プロテアーゼ、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬を抽出した。次いで、前記抽出液をマイクロコン-3ミリポア社製にて14000Gで遠心濃縮し、分子量3000以下の低分子量成分界面活性剤、酸化還元系発色試薬等を除去し、200μLの濃縮液を得た。次いで、前記濃縮液25μLと蒸留水25μLとLaemmliサンプルバッファーバイオラッドラボラトリーズ社製47.5μLと2-メルカプトエタノールバイオラッドラボラトリーズ社製2.5μLとを混合し、95°C-5分間ボイルすることで、サンプル溶液1~6を得た。得られたサンプル溶液1~6を、電気泳動ベストパッケージレディーゲル用バイオラッドラボラトリーズ社製を用い、前記条件1でSDS-PAGEを実施した。なお、サンプル溶液1~6は、同一ゲルの別レーンに流した。次いで、タイトボックスNO.3アズワン社製に泳動後のゲルと、蒸留水200mLとを添加し、ロッキングミキサーRM-80アズワン社製で5分間振とう後、蒸留水を除去するという洗浄作業を3回行なった。次いで、染色液Bio-SafeCBBG-250ステインバイオラッドラボラトリーズ社製50mLを添加し、前記ロッキングミキサーで1時間振とう後、前記染色液を除去した。最後に、蒸留水200mLを添加し、前記ロッキングミキサーで1時間振とう後、蒸留水を除去することで、泳動像が得られた。得られた泳動像中の16kDa付近のヘモグロビンサブユニット由来のバンド太さ泳動方向のバンド寸法および濃さバンドの吸光度を、GS-800CalibratedDensitometerバイオラッドラボラトリーズ社製で通法に従い測定した。得られた37°C-0~60分インキュベート後のバンド太さから下式3のバンド消失率1を、37°C-0~60分インキュベート後のバンド濃さから下式4のバンド消失率2をそれぞれ算出し、バンド消失率1およびバンド消失率2が90以上となる時間以下、バンド消失時間ともいうことがある。が、0分<バンド消失時間≦5分を◎Excellent、5分<バンド消失時間≦10分を○Good、10分<バンド消失時間≦15分を△NotBad、15分<バンド消失時間を×Badとして、プロテアーゼの反応性を評価した。[数3]バンド消失率1={1-バンド太さ0~60分/バンド太さ0分}×100式3[数4]バンド消失率2={1-バンド濃さ0~60分/バンド濃さ0分}×100式4<8.酸化還元系発色試薬の感度、相関性>100g/LのヘモグロビンヒトH7379シグマ社製水溶液に、合成したフルクトシルバリルヒスチジン以下、F-VHともいうことがある。を、0、50、100、250、500μMとなるよう溶解させ、5水準の測定試料を調整した。次いで、前記測定試料10μLと本発明の前処理液50μLとを混合した体積比率=1:5。他方、本発明の試験片を、治具図1参照で上下から挟んで固定し、前記混合液10μLを点着し、室温-1分間インキュベート後、測定試料点着面とは反対面の反射率を、下記条件2で測定した。<条件2>測定試料:ヘモグロビンヒトH7379100g/LF-VH0、50、100、250、500μM装置名:分光光度計UV-2450島津製作所社製付属装置名:積分球ISR-2200島津製作所社製標準白板:硫酸バリウム標準白板測定波長:666nmDA67、727nmDA64、555nmTOOS、630nmMAOS入射角:0°スリット幅:2.0nm光束寸法:3mm×5mm温度:25°C得られたF-VH0~500μMでの反射率から、下式5のKubelka-Munk変換により、F-VH0~500μMでのK/S値を得た。得られたF-VH0μMでのK/S値と、F-VH500μMでのK/S値から、下式6のK/S変動率を算出し、K/S変動率≧1.5を◎Excellent、K/S変動率<1.5を×Badとして、酸化還元系発色試薬の感度を評価した。なお、式5中のRは反射率を意味し、式6中のK/S値0μMはF-VH0μMでのK/S値を、K/S値500μMはF-VH500μMでのK/S値をそれぞれ意味する。[数5]K/S値=1-R2/2×R式5[数6]K/S変動率=K/S値500μM/K/S値0μM式6また、得られたK/S値とF-VH濃度とのピアソン相関係数:rを算出し、r>0.95を◎Excellent、0.95≦r<0.90を○Good、0.90≦r<0.85を△NotBad、r≦0.85を×Badとして、相関性を評価した。<9.ヘモグロビンA1c値検量線の作成>HbA1c測定性能評価用試料QRMHbA1c2007-1一般社団法人検査医学標準物質機構社製と本発明の前処理液とを体積比率1:1、1:2、1:5、1:10、1:15、1:20、1:50にて混合し、恒温水槽TM-1アズワン社製にて37°C-5分間インキュベートした。他方、本発明の試験片を、治具図1参照で上下から挟んで固定し、前記混合液10μLを点着し、プログラム低温恒温器IN604ヤマト科学社製にて37°C-5分間インキュベート後、測定試料点着面とは反対面の反射率を、下記条件3で測定した。<条件3>測定試料:HbA1c測定性能評価用試料QRMLEVEL1、2、3、4、5装置名:分光光度計UV-2450島津製作所社製付属装置名:積分球ISR-2200島津製作所社製標準白板:硫酸バリウム標準白板測定波長:480nm、666nm入射角:0°スリット幅:2.0nm光束寸法:3mm×5mm温度:25°C得られた480nmでの反射率、および666nmでの反射率から、上式5のKubelka-Munk変換により480nmでのK/S値、および666nmでのK/S値を得た。次いで、得られた480nmでのK/S値と、666nmでのK/S値から、下式7のK/S比を算出した。なお、K/S比とヘモグロビンA1c値が比例することは公知である。非特許文献1参照また、式中のK/S値480nmは480nmでのK/S値を、K/S値666nmは666nmでのK/S値をそれぞれ意味する。[数7]K/S比=K/S値666nm/K/S値480nm式7得られたK/S比と、HbA1c測定性能評価用試料QRMで規定されているHbA1c値LEVEL1=4.67、LEVEL2=5.29、LEVEL3=6.96、LEVEL4=9.08、LEVEL5=10.79とのピアソン相関係数:rを算出し、r>0.95を◎Excellent、0.95≦r<0.90を○Good、0.90≦r<0.85を△NotBad、r≦0.85を×Badとして、相関性を評価した。<10.ヘモグロビンA1c値の測定>健常者血液に、合成したフルクトシルバリルヒスチジン以下、F-VHとも呼称するを、0、10、20、50、100μMとなるよう溶解させ、5水準の測定試料を調整した。次いで、前記測定試料と本発明の前処理液とを体積比率1:1、1:2、1:5、1:10、1:15、1:20、1:50にて混合し、恒温水槽TM-1アズワン社製にて37°C-5分間インキュベートした。他方、本発明の試験片を、治具図1参照で上下から挟んで固定し、前記混合液10μLを点着し、プログラム低温恒温器IN604ヤマト科学社製にて37°C-5分間インキュベート後、測定試料点着面とは反対面の反射率を、下記条件4で測定した。なお、健常者血液は、市販の自動分析機:日立自動分析機7180日立ハイテク社製、市販のヘモグロビンA1c測定試薬:ノルディアNHbA1c積水メディカル社製を用いて、通法に従い測定を実施し、ヘモグロビンA1c値を算出した。<条件4>測定試料:健常者血液5水準、糖尿病患者血液5水準装置名:分光光度計UV-2450島津製作所社製付属装置名:積分球ISR-2200島津製作所社製標準白板:硫酸バリウム標準白板測定波長:480nm、666nm入射角:0°スリット幅:2.0nm光束寸法:3mm×5mm温度:25°C得られた480nmでの反射率、および666nmでの反射率から、上式5のKubelka-Munk変換により480nmでのK/S値、および666nmでのK/S値を得た。次いで、得られた480nmでのK/S値と、666nmでのK/S値から、上式7のK/S比を算出した。得られたK/S比と、前項で得られた検量線から、ヘモグロビンA1c値を算出した。得られたF-VH0μMを添加した健常者血液のヘモグロビンA1c値と、F-VH100μMを添加した健常者血液のヘモグロビンA1c値から、下式8のHbA1c値差を算出し、HbA1c値差≦0.5を◎Excellent、0.5<HbA1c値差≦1.0を○Good、1.0<HbA1c値差≦1.5を△NotBad、1.5<HbA1c値差を×Badとして、測定試料中に存在する可能性のある糖化ヘモグロビンに由来しない糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドの影響を評価した。なお、式8中のHbA1c値0μMはF-VH0μMを添加した健常者血液のヘモグロビンA1c値を、HbA1c値100μMはF-VH100μMを添加した健常者血液のヘモグロビンA1c値をそれぞれ意味する。[数8]HbA1c値差=HbA1c値100μM-HbA1c値0μM式8また、得られたF-VH0μMを添加した健常者血液のヘモグロビンA1c値のn=10でのCVを算出し、0≦CV<3を◎Excellent、3≦CV<5を○Good、5≦CV<10を△NotBad、10≦CVを×Badとして、ばらつきを評価した。[試験片の作成][実施例1]前処理液として下記前処理液1を作製した。他方、8mmφの桐山ろ紙NO.5A東京硝子器械社製に、下記試薬2を10μL滴下し、遮光デシケーター3909-04東京硝子器械社製にて25°C-2時間乾燥させ、試験片を作製した。以下、特記がない限り、前処理液に含有された界面活性剤濃度は5.0mg/mL、プロテアーゼ濃度は50U/mL、糖化アミノ酸オキシダーゼ濃度は50U/mL、ペルオキシダーゼ濃度は200U/mL、酸化還元系発色試薬濃度は0.5mg/mLであり、試験片に担持された界面活性剤濃度は0.1mg/cm2、プロテアーゼ濃度は10U/cm2、糖化アミノ酸オキシダーゼ濃度は10U/cm2、ペルオキシダーゼ濃度は40U/cm2、酸化還元系発色試薬濃度は0.1mg/cm2であるとする。得られた前処理液および試験片の詳細を表1に示す。なお、表中のNP40はNonidet登録商標P-40が、NEPはトヨチームNEPが、FPOは糖化アミノ酸オキシダーゼFPO-301が、PEOはペルオキシダーゼPEO-302が、DA67はDA67がそれぞれ各層に担持されていること意味する。以下、同様である。<前処理液1>100mMPIPES同仁化学研究所社製pH6.55.0mg/mLNonidet登録商標P-40ナカライテスク社製500U/mL糖化アミノ酸オキシダーゼFPO-301東洋紡績社製<試薬2>100mMPIPES同仁化学研究所社製pH6.55.0mg/mLNonidet登録商標P-40ナカライテスク社製50U/mLトヨチームNEP東洋紡績社製2000U/mLペルオキシダーゼPEO-302東洋紡績社製5.0mg/mLDA67和光純薬工業社製[実施例2~4]界面活性剤、プロテアーゼ、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬が含有または担持される箇所が異なる以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。得られた前処理液および試験片の詳細を表1に示す。[比較例1~7]界面活性剤、プロテアーゼ、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、酸化還元系発色試薬が含有また担持される箇所が異なる以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。得られた前処理液および試験片の詳細を表2に示す。<糖化アミノ酸オキシダーゼの保存安定性>実施例1~4、比較例1~7の前処理液および試験片を用い、糖化アミノ酸オキシダーゼの保存安定性を評価した。得られた評価結果を表3、4に示す。糖化アミノ酸オキシダーゼの保存安定性の評価結果より、プロテアーゼと糖化アミノ酸オキシダーゼを前処理液に含有させると、プロテアーゼによる糖化アミノ酸オキシダーゼの失活分解が生じ、保存安定性は著しく低下した。他方、プロテアーゼと糖化アミノ酸オキシダーゼを試験片に含有させても、同様に、プロテアーゼによる糖化アミノ酸オキシダーゼの失活分解が生じ、保存安定性は著しく低下した。なお、糖化アミノ酸オキシダーゼの失活分解により、測定不能となる恐れがある。以上の結果より、プロテアーゼと糖化アミノ酸オキシダーゼがそれぞれ異なる前処理液または試験片に含有または担持されることが必要である。[実施例5~8]プロテアーゼをトヨチームNEP東洋紡績社製の代わりに、Type-XIVシグマ社製、Type-Xシグマ社製、プロテイナーゼKロシュ社製、Type-XIIIシグマ社製とする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。得られた前処理液および試験片の詳細を表5に示す。なお、表中のXIVはType-XIVが、XはType-Xが、KはプロテイナーゼKが、XIIIはType-XIIIがそれぞれ各層に担持されていること意味する。[比較例8]プロテアーゼをType-XIVシグマ社製の代わりに、Type-Iシグマ社製とする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。得られた前処理液および試験片の詳細を表5に示す。なお、表中のIはType-Iが各層に担持されていること意味する。<プロテアーゼの反応性>実施例1、5~8、比較例8の前処理液および試験片を用い、プロテアーゼの反応性を評価した。得られた評価結果を表6に示す。プロテアーゼ反応性の評価結果より、プロテアーゼとしては、バチルスBacillus由来プロテアーゼ、アスペルギルスAspergillus由来プロテアーゼ、ストレプトマイセスStreptomyces由来プロテアーゼ、およびトリチラチウムTritirachium由来プロテアーゼからなる群より選ばれた1種以上であることが好ましい。[実施例9]酸化還元系発色試薬をDA67和光純薬工業社製:λmax=666nmの代わりに、DA64和光純薬工業社製:λmax=727nmとする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。得られた前処理液および試験片の詳細を表7に示す。なお、表中のDA64はDA64が各層に担持されていること意味する。[比較例9、10]酸化還元系発色試薬をDA67和光純薬工業社製:λmax=666nmの代わりに、4AAナカライテスク社製とTOOS同仁化学研究所社製:λmax=555nm、4AAナカライテスク社製とMAOS同仁化学研究所社製:λmax=630nmとする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。なお、担持された4AA濃度は0.06mg/cm2、TOOS濃度は0.09mg/cm2、MAOS濃度は0.09mg/cm2である。得られた前処理液および試験片の詳細を表7に示す。なお、表中の4AAは4-アミノアンチピリンが、TOOSはTOOSが、MAOSはMAOSがそれぞれ各層に担持されていること意味する。<酸化還元系発色試薬の感度、相関性>実施例1、9、比較例9、10の前処理液および試験片を用い、酸化還元系発色試薬の感度、相関性を評価した。得られた評価結果を表8に示す。酸化還元系発色試薬の感度、相関性の評価結果より、酸化還元系発色試薬としては、モル吸光係数が高く、かつヘモグロビン由来のスペクトルの影響を受けにくい650~800nmに極大吸収波長を持つロイコ型色素が好ましい。[実施例10~12]界面活性剤をNonidet登録商標P-40ナカライテスク社製:HLB値=17.6の代わりに、Triton登録商標X-100ナカライテスク社製:HLB値=13.5、Tween登録商標20和光純薬工業社製:HLB値=16.7、Brij登録商標35和光純薬工業社製:HLB値=16.9とする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。得られた前処理液および試験片の詳細を表9に示す。なお、表中のTX100はTriton登録商標X-100が、Tw20はTween登録商標20が、Br35はBrij登録商標35がそれぞれ各層に担持されていること意味する。[比較例11、12]界面活性剤をNonidet登録商標P-40ナカライテスク社製:HLB値=17.6の代わりに、DKエステル登録商標F50第一工業製薬社製:HLB値=6.0、DKエステル登録商標F70第一工業製薬社製:HLB値=8.0とする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。得られた前処理液および試験片の詳細を表9に示す。なお、表中のF50はDKエステル登録商標F50第一工業製薬社製が、F70はDKエステル登録商標F70がそれぞれ各層に担持されていること意味する。<プロテアーゼの反応性>実施例1、10~12、比較例11、12の前処理液および試験片を用い、プロテアーゼの反応性を評価した。得られた評価結果を表10に示す。プロテアーゼ反応性の評価結果より、界面活性剤としては、プロテアーゼ反応促進効果に優れる、HLB値が10~20の非イオン性界面活性剤が好ましい。[実施例13~16]前処理液中の糖化アミノ酸オキシダーゼ濃度が50U/mLの代わりに、250U/mL、125U/mL、25U/mL、16.7U/mLとする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。[比較例13、14]前処理液中の糖化アミノ酸オキシダーゼ濃度が50U/mLの代わりに、12.5U/mL、5U/mLとする以外は、実施例1と同様にして、前処理液および試験片を作製した。<ヘモグロビンA1c値検量線の作成>実施例1、13~16、比較例1、13、14の前処理液および試験片を用い、HbA1c値の検量線を作成し、相関性を評価した。得られた評価結果を表11に示す。<ヘモグロビンA1c値の測定>実施例1、13~16、比較例1、13、14の前処理液および試験片を用い、前項で得られたHbA1c値の検量線を用い、HbA1c値を算出した。得られた評価結果を表12に示す。以上の結果より、本発明の前処理液および試験片を用い、かつ測定試料を前記試験片に点着させる前に、測定試料と前記前処理液とを体積比率1:1~1:15で混合させることで測定したヘモグロビンA1c値は、生化学自動分析装置を用いて測定したヘモグロビンA1c値とよく一致した。なおかつ、本発明の前処理液および試験片は測定試料中に存在する可能性のある糖化ヘモグロビンに由来しない糖化アミノ酸および/または糖化ペプチドの影響を受けにくく、かつ保存安定性に優れていることから、本発明の前処理液および試験片を用いることで、正確、簡便かつ迅速に測定試料中の糖化ヘモグロビン量を比色定量することができる。"