"結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。1約:5.2、7.5、9.6、16.7、18.3、および22.2のXRPD2θ-反射°;2約:5.0、7.3、9.4、および18.1のXRPD2θ-反射°;3約:4.9、6.9、9.8、19.8、20.6、24.7、および26.1のXRPD2θ-反射°;4約:6.9、9.8、19.7、20.6、および24.6のXRPD2θ-反射°;5約:5.0、6.8、19.9、20.6、20.9、および24.9のXRPD2θ-反射°;6約:5.2、6.6、7.1、15.7、19.1、および25.0のXRPD2θ-反射°;または7約:6.1、8.2、10.4、12.7、17.2、17.7、18.0、18.8、19.4、19.8、20.1、20.8、21.8、および23.3のXRPD2θ-反射°を有する、結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。1約:5.2、7.5、9.6、16.7、18.3、および22.2のXRPD2θ-反射°;2約:5.0、7.3、9.4、および18.1のXRPD2θ-反射°;または7約:6.1、8.2、10.4、12.7、17.2、17.7、18.0、18.8、19.4、19.8、20.1、20.8、21.8、および23.3のXRPD2θ-反射°を有する、請求項2記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。1約:5.2、7.5、9.6、16.7、18.3、および22.2のXRPD2θ-反射°;2約:5.0、7.3、9.4、および18.1のXRPD2θ-反射°;または7約:6.1、8.2、10.4、12.7、17.2、17.7、18.0、18.8、19.4、19.8、20.1、20.8、21.8、および23.3のXRPD2θ-反射°を有する、請求項2記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。約:5.2、7.5、9.6、16.7、18.3、および22.2のXRPD2θ-反射°を有する、請求項2記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。約:5.0、7.3、9.4、および18.1のXRPD2θ-反射°を有する、請求項2記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。約:6.1、8.2、10.4、12.7、17.2、17.7、18.0、18.8、19.4、19.8、20.1、20.8、21.8、および23.3のXRPD2θ-反射°を有する、請求項2記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。請求項1記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを含む組成物。請求項1記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび薬剤的に許容される媒体を含む、医薬組成物。それを必要とする対象者においてC型肝炎ウイルス感染を治療する方法であって:対象者に、有効量の請求項1記載の結晶性2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを投与することを含む、方法。構造式式中、LG’は脱離基であるにより表される化合物。LG’が、トシレート、カンファースルホネート、ベンゾ[d]チアゾリド-23H-チオン、アリールオキシド、または少なくとも1つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドである、請求項11記載の化合物。LG’が、2,4-ジニトロフェノキシド、4-ニトロフェノキシド、2-ニトロフェノキシド、2-クロロ-4-ニトロフェノキシド、2,4-ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドである、請求項11記載の化合物。2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。請求項11記載の化合物を調製するためのプロセスであって、a第1の組成物;b第2の脱離基前駆体;c非求核性塩基;およびd液体組成物;を含む組成物から化合物を結晶化させること、を含み、ここで、第1組成物が、化合物およびその対応するPベースのジアステレオマーを含む、前記プロセス。化合物のモル量およびそのPベースのジアステレオマーのモル量が同一または異なる、請求項16記載のプロセス。化合物のモル量が、その対応するPベースのジアステレオマーのモル量よりも多い、請求項17記載のプロセス。第2の脱離基前駆体が、2,4-ジニトロフェノール、4-ニトロフェノール、2-ニトロフェノール、2-クロロ-4-ニトロフェノール、2,4-ジクロロフェノール、またはペンタフルオロフェノールである、請求項16記載のプロセス。LG’がペンタフルオロフェノキシドである、請求項19記載のプロセス。第2の脱離基前駆体がペンタフルオロフェノールである、請求項20記載のプロセス。ペンタフルオロフェノールの量が、化合物およびそのPベースのジアステレオマーのモル量に対して約0.01モル当量~約10モル当量の範囲である、請求項21記載のプロセス。ペンタフルオロフェノールの量が、化合物およびそのPベースのジアステレオマーのモル量に対して約0.1モル当量~約1モル当量の範囲である、請求項21記載のプロセス。結晶化が約-10°C~約40°Cの範囲の温度で起こる、請求項16記載のプロセス。結晶化がほぼ室温で起こる、請求項16記載のプロセス。非求核性塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン-1,8-ジアミン、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン、1,8-ジアザビシクロウンデク-7-エン、4-ジメチルアミノ-ピリジン、ピリジン、2,6-ジ-C1~6-アルキル-ピリジン、2,4,6-トリ-C1~6-アルキル-ピリジン、およびそれらの混合物から選択される、請求項16記載のプロセス。非求核性塩基がトリエチルアミンである、請求項16記載のプロセス。非求核性塩基が、化合物およびそのPベースのジアステレオマーの総モル量に対して約0.01モル当量~約10モル当量の範囲の量で存在する、請求項16記載のプロセス。非求核性塩基が、化合物およびそのPベースのジアステレオマーの総モル量に対して約0.1モル当量~約1モル当量の範囲の量で存在する、請求項16記載のプロセス。化合物の溶解度が、液体組成物中のその対応するPベースのジアステレオマーの溶解度よりも低い、請求項16記載のプロセス。液体組成物が溶媒および貧溶媒の少なくとも1つを含む、請求項16記載のプロセス。液体組成物が、C1~C8アルコール、C2~C8エーテル、C3~C7ケトン、C3~C7エステル、C1~C2クロロカーボン、C2~C7ニトリル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む、請求項16記載のプロセス。液体組成物が、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む、請求項16記載のプロセス。液体組成物が、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、およびC5~C12飽和炭化水素の少なくとも1つを含む、請求項16記載のプロセス。液体組成物が、酢酸エチル、t-ブチル-メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも1つを含む、請求項34記載のプロセス。液体組成物が酢酸エチルおよびヘキサンを含む、請求項34記載のプロセス。液体組成物がt-ブチル-メチルエーテルおよびヘキサンを含む、請求項34記載のプロセス。液体組成物の量が、第1組成物1グラムにつき約1mL~約10mLの範囲である、請求項16記載のプロセス。結晶性化合物を組成物に添加することをさらに含む、請求項16記載のプロセス。約0.1~約1重量の結晶性化合物を第1組成物に添加することをさらに含む、請求項16記載のプロセス。aPhOPOLG2およびiPr-Ala-NH2HClを第1塩基の存在下で反応させて、PhOPOLGNHAla-iPrを得;bPhOPOLGNHAla-iPrを第1の脱離基前駆体LG’Hと第2塩基の存在下で反応させて、化合物およびそのPベースのジアステレオマーを含む組成物を得ることをさらに含み;ここで、LGおよびLG’は、互いに独立して、脱離基であり;ここで、第1の脱離基前駆体および第2の脱離基前駆体は同一または異なり;そして第1塩基および第2塩基が同一または異なる、請求項16記載のプロセス。結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するプロセスであって2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを、a第1の組成物;bペンタフルオロフェノール;c非求核性塩基;およびd液体組成物を含む第2の組成物から結晶化すること、を含み、ここで、第2の組成物が、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを含む、前記プロセス。2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量および2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量が同一または異なる、請求項42記載のプロセス。2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量が、2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量よりも多い、請求項42記載のプロセス。ペンタフルオロフェノールの量が、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量に対して、約0.01モル当量~約10モル当量の範囲である、請求項43記載のプロセス。結晶化が、約-10°C~約40°Cの範囲の温度で起こる、請求項42記載のプロセス。結晶化がほぼ室温で起こる、請求項42記載のプロセス。非求核性塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン-1,8-ジアミン、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン、1,8-ジアザビシクロウンデク-7-エン、4-ジメチルアミノ-ピリジン、ピリジン、2,6-ジ-C1-6-アルキル-ピリジン、2,4,6-トリ-C1-6-アルキル-ピリジン、およびそれらの混合物から選択される、請求項42記載のプロセス。非求核性塩基がトリエチルアミンである、請求項42記載のプロセス。非求核性塩基が、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの総モル量に対して約0.1~約1モル当量の範囲の量で存在する、請求項42記載のプロセス。2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの溶解度が、2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの液体組成物中の溶解度よりも低い、請求項42記載のプロセス。液体組成物が、溶媒および貧溶媒の少なくとも1つを含む、請求項42記載のプロセス。液体組成物が、C1~C8アルコール、C2~C8エーテル、C3~C7ケトン、C3~C7エステル、C1~C2クロロカーボン、C2~C7ニトリル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む、請求項42記載のプロセス。液体組成物が、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む、請求項42記載のプロセス。液体組成物が、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、およびC5~C12飽和炭化水素の少なくとも1つを含む、請求項42記載のプロセス。液体組成物が、酢酸エチル、t-ブチル-メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも1つを含む、請求項55記載のプロセス。液体組成物が、酢酸エチルおよびヘキサンを含む、請求項55記載のプロセス。液体組成物が、t-ブチル-メチルエーテルおよびヘキサンを含む、請求項55記載のプロセス。1グラムの第1組成物について、液体組成物の量が約1~約10mLの範囲である、請求項42記載のプロセス。結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを第2の組成物に添加することをさらに含む、請求項42記載のプロセス。第1組成物中の2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの総重量を基準として、約0.1~約1重量の結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを添加することをさらに含む、請求項42記載のプロセス。請求項42記載のプロセスにより得られる結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピル。2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するためのプロセスであって:2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを、a第1の組成物;bペンタフルオロフェノール;c非求核性塩基;およびd液体組成物;を含む第2の組成物から結晶化させること、を含み、ここで、第1組成物が、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを含む、前記プロセス。2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するためのプロセスであって:2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを、t-ブチルマグネシウムハライドと1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオンとt-ブチルマグネシウムハライドとを反応させることにより得られる生成物と接触させることを含む、前記プロセス。接触を、約0°C~約40°Cの範囲の温度を有する媒体中で行う、請求項64記載のプロセス。接触を、約0°C~約30°Cの範囲の温度を有する媒体中で行う、請求項64記載のプロセス。t-ブチルマグネシウムハライドの1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオンに対するモル比が約2~約2.2の範囲である、請求項64記載のプロセス。t-ブチルマグネシウムハライドの1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオンに対するモル比が約2.1である、請求項64記載のプロセス。t-ブチルマグネシウムハライドがt-ブチルマグネシウムクロリドである、請求項64記載のプロセス。実質的に純粋な2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するプロセスであって:請求項35記載のプロセスにしたがって、2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを得、そしてそのようにして形成された2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを結晶化させることを含む、前記プロセス。本明細書中で開示されるのは、式4により表される化合物および式Sp-4およびRp-4により表されるそのそれぞれのリンベースのジアステレオマーである:定義本明細書中で用いられるaまたはan実体という語法は、1以上のその実体を指し;例えば、化合物acompoundは、1以上の化合物または少なくとも1つの化合物を指す。このように、aまたはan、1以上、および少なくとも1つという用語は、本明細書中では交換可能に用いられる。任意のまたは場合によってという用語は、本明細書中で用いられる場合、その後に記載される事象または状況が起こる可能性があるが、起こる必要はないことと、この記載が、その事象または状況が起こる場合と起こらない場合を含むこととを意味する。例えば、任意の結合とは、その結合が存在してもよいし、または存在しなくてもよいこと、そしてこの記載が単結合、二重結合、または三重結合を含むことを意味する。Pという用語は、リン原子がキラルであり、それらの認められた簡単な意味を有するRまたはSの対応するカーンインゴールドプレログ表示を有することを意味する。精製という用語は、本明細書中で記載される場合、所定の化合物の純度を指す。例えば、化合物は、所定の化合物が組成物の主成分である場合、すなわち、少なくとも50w/wの純度である場合に、精製されている。したがって、精製とは、少なくとも50w/wの純度、少なくとも6つの0w/wの純度、少なくとも70の純度、少なくとも80の純度、少なくとも85の純度、少なくとも90の純度、少なくとも92の純度、少なくとも94の純度、少なくとも96の純度、少なくとも97の純度、少なくとも98の純度、少なくとも99の純度、少なくとも99.5の純度および少なくとも99.9の純度を包含し、この場合、実質的に純粋とは、少なくとも97の純度、少なくとも98の純度、少なくとも99の純度、少なくとも99.5の純度、および少なくとも99.9の純度を含む。代謝物という用語は、本明細書中で用いられる場合、それを必要とする対象者への投与後にインビボで産生される化合物を指す。約という用語~によっても表されるは、記載された数値が標準的な実験誤差内で変化する範囲の一部であることを意味する。指定されたXRPDパターンで実質的に示されるようにという表現は、XRPDパターンにおいて示されるピーク位置が、目視検査または選択されたピークリスト±0.2°2θを用いる手段で実質的に同じであることを意味する。当業者は、強度が試料によって変化し得ることを理解する。実質的に無水とは、物質が最大で10重量の水、好ましくは最大で1重量の水、さらに好ましくは最大で0.5重量の水、そして最も好ましくは最大で0.1重量の水を含むことを意味する。溶媒または貧溶媒反応、結晶化などで用いられるもの、または格子および/もしくは吸着溶媒としては、少なくとも1つのC1~C8アルコール、C2~C8エーテル、C3~C7ケトン、C3~C7エステル、C1~C2クロロカーボン、C2~C7ニトリル、種々の溶媒、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素が挙げられる。C1~C8アルコールは、そのような数の炭素を有する直線状/分枝および/または環状/非環状アルコールを指す。C1~C8アルコールとしては、これらに限定されるものではないが、メタノール、エタノール、n-プロパノール、イソプロパノール、イソブタノール、ヘキサノール、およびシクロヘキサノールが挙げられる。C2~C8エーテルは、そのような数の炭素を有する直線状/分枝および/または環状/非環状エーテルを指す。C2~C8エーテルとしては、これらに限定されるものではないが、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジ-n-ブチルエーテル、メチル-t-ブチルエーテルMTBE、テトラヒドロフラン、およびジオキサンが挙げられる。C3~C7ケトンは、そのような数の炭素を有する直線状/分枝および/または環状/非環状ケトンを指す。C3~C7ケトンとしては、これらに限定されるものではないが、アセトン、メチルエチルケトン、プロパノン、ブタノン、メチルイソブチルケトン、メチルブチルケトン、およびシクロヘキサノンが挙げられる。C3~C7エステルは、そのような数の炭素を有する直線状/分枝および/または環状/非環状エステルを指す。C3~C7エステルとしては、これらに限定されるものではないが、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸n-ブチルなどが挙げられる。C1~C2クロロカーボンは、そのような数の炭素を有するクロロカーボンを指す。C1~C2クロロカーボンとしては、これらに限定されるものではないが、クロロホルム、塩化メチレンDCM、四塩化炭素、1,2-ジクロロエタン、およびテトラクロロエタンが挙げられる。C2~C7ニトリルは、そのような数の炭素を有するニトリルを指す。C2~C7ニトリルとしては、これらに限定されるものではないが、アセトニトリル、プロピロニトリルなどが挙げられる。種々の溶媒は、有機化学で通常用いられる溶媒を指し、これらに限定されるものではないが、ジエチレングリコール、ジグリムジエチレングリコールジメチルエーテル、1,2-ジメトキシ-エタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、エチレングリコール、グリセリン、ヘキサメチルホスホルアミド、ヘキサメチル亜リン酸トリアムtriame、N-メチル-2-ピロリジノン、ニトロメタン、ピリジン、トリエチルアミン、および酢酸が挙げられる。C5~C12飽和炭化水素という用語は、直線状/分枝および/または環状/非環状炭化水素を指す。C5~C12飽和炭化水素としては、これらに限定されるものではないが、n-ペンタン、石油リグロイン、n-ヘキサン、n-ヘプタン、シクロヘキサン、およびシクロヘプタンが挙げられる。C6~C12芳香族という用語は、それらの骨格としてフェニル基を有する置換および非置換炭化水素を指す。好ましい炭化水素としては、ベンゼン、キシレン、トルエン、クロロベンゼン、o-キシレン、m-キシレン、p-キシレン、キシレン類が挙げられ、トルエンがさらに好ましい。ハロまたはハロゲンという用語は、本明細書中で用いられる場合、クロロ、ブロモ、ヨードおよびフルオロを包含する。ブロッキング基という用語は、下記特性を示す化学基を指す。基は、保護化合物から誘導される。ホスホルアミデートの安定性にふさわしい条件下pH2~8で付加することができる第2ヒドロキシルよりも第1ヒドロキシルについて選択的であり、結果として得られる生成物に対して実質的に異なる物理的特性を付与して、3’-ホスホルアミデート-5’-新規基生成物を未反応の所望の化合物からより容易に分離することを可能にする基。この基は、良好な収率で選択的に反応して、予想される反応に対して安定な、保護された基質をもたらすことができなければならないProtectiveGroupsinOrganicSynthesis3ndedTWGreeneandPGMWutsJohnWileySonsNewYorkNY1999を参照のこと。基の例としては、これらに限定されるものではないが:ベンゾイル、アセチル、フェニル置換ベンゾイル、テトラヒドロピラニル、トリチル、DMT4,4’-ジメトキシトリチル、MMT4-モノメトキシトリチル、トリメトキシトリチル、ピクシル9-フェニルキサンテン-9-イル基、チオピクシル9-フェニルチオキサンテン-9-イルまたは9-p-メトキシフェニルキサンチン-9-イルMOXなど;CO-アルキル、COPh、COアリール、CH2O-アルキル、CH2O-アリール、SO2-アルキル、SO2-アリール、tert-ブチルジメチルシリル、tert-ブチルジフェニルシリルが挙げられる。アセタール、例えばMOMまたはTHP等が可能な基と考えられる。フッ素化化合物もまた、それらが化合物に結合することができ、フルオラスfluorous固相抽出媒体FluoroFlash登録商標を通過させることによって選択的に除去することができる限りにおいて、想定される。具体例としては、フッ素化トリチルアナログ、トリチルアナログ1-[4-1H,1H,2H,2H-パーフルオロデシルフェニル-1,1-ジフェニルメタノールが挙げられる。トリチル、BOC、FMOC、CBzなどの他のフッ素化アナログも想定される。p-トルエンスルホニルクロリドなどのスルホニルクロリドは、5’位置上で選択的に反応することができる。酢酸エステルおよび安息香酸エステルなどのエステルが選択的に形成され得る。無水コハク酸およびその誘導体などの無水ジカルボン酸を用いて、遊離カルボン酸とのエステル結合を精製させることができ、そのような例としては、これらに限定されるものではないが、オキサリル、マロニル、スクシニル、グルタリル、アジピル、ピメリル、スペリル、アゼライル、セバシル、フタリル、イソフタリル、テレフタリルなどが挙げられる。遊離カルボン酸は、極性を劇的に増大させ、また、反応生成物を重炭酸ナトリウム溶液などの弱塩基性水性相中に抽出するための手段として用いることもできる。ホスホルアミデート基は酸性媒体中で比較的安定であり、したがって酸性反応条件を必要とする基、例えばテトラヒドロピラニルも使用できる。保護化合物から誘導される保護基という用語は、その簡単で通常の意味を有し、すなわち、少なくとも1つの保護またはブロッキング基が、少なくとも1つの他の官能基の化学的修飾を可能にする少なくとも1つの官能基例えば、-ΟΗ、-NH2などと結合している。保護基の例としては、これらに限定されるものではないが、ベンゾイル、アセチル、フェニル置換ベンゾイル、テトラヒドロピラニル、トリチル、DMT4,4’-ジメトキシトリチル、MMT4-モノメトキシトリチル、トリメトキシトリチル、ピクシル9-フェニルキサンテン-9-イル基、チオピクシル9-フェニルチオキサンテン-9-イルまたは9-p-メトキシフェニルキサンチン-9-イルMOXなど;CO-アルキル、COPh、COアリール、COO低級アルキル、COO低級アルキレンアリール例えば、-COOCH2Ph、COOアリール、CH2O-アルキル、CH2O-アリール、SO2-アルキル、SO2-アリール、少なくとも1つのケイ素原子を含む保護基、例えば,tert-ブチルジメチルシリル、tert-ブチルジフェニルシリル、Si低級アルキル2OSi低級アルキル2OH例えば、-SiiPr2OSiiPr2OHが挙げられる。保護化合物という用語は、本明細書中で用いられる場合で、特に別段の定義がないかぎり、保護基を含有し、保護され得る官能基を含有する化合物と反応することができる化合物を指す。脱離基という用語は、本明細書中で用いられる場合、当業者に対してと同じ意味を有しAdvancedOrganicChemistryreactionsmechanismsandstructureFourthEditionbyJerryMarchJohnWileyandSonsEd1992pages351357、基質分子の一部であり、基質分子に結合した基を表し;基質分子が例えば求核試薬と置換反応を受ける反応では、脱離基を次いで置換する。脱離基の例としては、これらに限定されるものではないが:ハロゲンF、Cl、Br、およびI、好ましくはCl、Br、またはI;トシレート、メシレート、トリフレート、アセテート、カンファースルホネート、アリールオキシド、および少なくとも1つの電子吸引基で置換されたアリールオキシド例えば、p-ニトロフェノキシド、2-クロロフェノキシド、4-クロロフェノキシド、2,4-ジニトロフェノキシド、ペンタフルオロフェノキシドなどなどが挙げられる。電子吸引基という用語は、本明細書中のその簡単な意味に一致する。電子吸引基の例としては、これらに限定されるものではないが、ハロゲン、-NO2、-CO低級アルキル、-COアリール、-COO低級アルキル、-COOアリールなどが挙げられる。塩基性試薬という用語は、本明細書中で用いられる場合、ヒドロキシル基を脱プロトン化することができる化合物を意味する。塩基性試薬の例としては、これらに限定されるものではないが、アルコール性溶媒と組み合わせたオキシド低級アルコキシド低級アルキルOMが挙げられ、ここで、オキシド低級アルコキシドとしては、これらに限定されるものではないが、MeO-、EtO-、nPrO-、iPrO-、iBuO-、iAmO-イソ-アミルオキシドなどが挙げられ、Mは、アルカリ金属カチオン、例えばLi、Na、Kなどである。アルコール性溶媒としては、低級アルキルOH、例えば、MeOH、EtOH、nPrOH、iPrOH、iBuOH、iAmOHなどが挙げられる。非アルコキシ塩基、例えば、水素化ナトリウム、ヘキサメチルジシラザンナトリウム、ヘキサメチルジシラザンリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、DBU、DBN、グリニャール試薬、例えば低級アルキルMgハロゲンこれらに限定されるものではないが、MeMgCl、MeMgBr、iBuMgCl、iBuMgBrなどが挙げられるも用いることができる。塩基という用語は、塩基性試薬という用語を包含し、プロトン含有化合物を脱プロトン化することができる化合物、すなわちブレンステッド塩基であることを意味する。上述の例に加えて、塩基のさらなる例としては、これらに限定されるものではないが、ピリジン、コリジン、2,6-低級アルキル-ピリジン、ジメチル-アニリン、イミダゾール、N-メチル-イミダゾール、ピラゾール、N-メチル-ピラゾール、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどが挙げられる。非求核性塩基という用語は、ブレンステッド塩基として作用することができるが、低い求核性を有する化合物を意味する。非求核性塩基の例としては、これらに限定されるものではないが、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン-1,8-ジアミン、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン、1,8-ジアザビシクロウンデク-7-エン、4-ジメチルアミノ-ピリジン、ピリジン、2,6-ジ-C1-6-アルキル-ピリジン、2,4,6-トリ-C1-6-アルキル、-ピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノン-5-エン、および1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタンが挙げられる。電子吸引基という用語は、その簡単な意味と一致する。電子吸引基の例としては、これらに限定されるものではないが、ハロゲンF、Cl、Br、またはI、-NO2、-CO低級アルキル、-COアリール、-COO低級アルキル、-COOアリールなどが挙げられる。共結晶という用語は、薬剤的に許容される塩を包含する塩と組み合わせられた4、Rp-4、またはSp-4の共結晶を包含する。塩という用語は、本明細書で用いられる場合、プロトン受容部分のプロトン化および/またはプロトン供与部分の脱プロトン化により産生することができる、カチオンおよびアニオンを含む化合物を指す。プロトン受容部分のプロトン化の結果、カチオン性種が形成され、ここでは、電荷は、生理学的アニオンの存在により釣り合っており、一方、プロトン供与部分の脱プロトン化の結果、アニオン性種が形成され、ここでは、電荷は、生理学的カチオンの存在により釣り合っていることに注目すべきである。薬剤的に許容される塩という語句は、薬剤的に許容されるものである塩を意味する。薬剤的に許容される塩の例としては、これらに限定されるものではないが:1例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成されるか;もしくはグリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、3-4-ヒドロキシベンゾイル安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン-ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、サリチル酸、ムコン酸などの有機酸と形成される酸付加塩、または2前述の無機酸のいずれかの共役塩基と形成される塩基付加塩であって、ここでは、共役塩基は、Na、K、Mg2、Ca2、NHgR’4-gここで、R’はC1~3アルキルであり、gは0、1、2、3、または4から選択される数であるから選択されるカチオン性成分を含む。薬剤的に許容される塩についての全ての言及は、同じ酸付加塩の、本明細書中で定義される溶媒付加形態溶媒和物または結晶形多形を包含することを理解すべきである。アルキルという用語は、1~30個の炭素原子を含有する非分枝または分枝鎖、飽和、一価炭化水素残基を指す。C1~Mアルキルという用語は、1~M個の炭素原子を含むアルキルを指し、ここで、Mは、以下の値:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、または30を有する整数である。C1~4アルキルは、1~4個の炭素原子を含有するアルキルを指す。低級アルキルという用語は、1~6個の炭素原子を含む直線状または分枝鎖炭化水素残基を意味する。C1~20アルキルという用語は、本明細書中で用いられる場合、1~20個の炭素原子を含むアルキルを指す。C1~10アルキルという用語は、本明細書中で用いられる場合、1~10個の炭素を含むアルキルを指す。アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、t-ブチルまたはペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、およびオクチルをはじめとする低級アルキル基が挙げられる。アルアルキル、またはヘテロアリールアルキルという用語は、アルキル基が、場合によって、それぞれアリール、またはヘテロアリール基により置換されていることを示す。アルケニルという用語は、1または2個のオレフィン性二重結合、好ましくは1個のオレフィン性二重結合を有する2~10個の炭素原子を有する非置換炭化水素鎖ラジカルを指す。C2-Nアルケニルという用語は、2~N個の炭素原子を含むアルケニルを指し、ここで、Nは、以下の値:3、4、5、6、7、8、9、または10を有する整数である。C2~10アルケニルという用語は、2~10個の炭素原子を含むアルケニルを指す。C2~4アルケニルという用語は、2~4個の炭素原子を含むアルケニルを指す。例としては、これらに限定されるものではないが、ビニル、1-プロペニル、2-プロペニルアリルまたは2-ブテニルクロチルが挙げられる。アリールという用語は、本明細書中で用いられる場合、そして特別の定めのない限り、置換または非置換フェニルPh、ビフェニル、またはナフチルを指し、好ましくは、アリールという用語は、置換または非置換フェニルを指す。アリール基は、当業者には知られているように、保護されていないか、または例えば、TWGreeneandPGMWutsProtectiveGroupsinOrganicSynthesis3rdedJohnWileySons1999で教唆されるように、必要に応じて保護されているかのいずれかの、ヒドロキシル、F、Cl、Br、I、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェート、およびホスホネートから選択される1以上の部分で置換することができる。アリールオキシドという用語は、本明細書中で用いられる場合、そして特別な定めのない限り、置換または非置換フェノキシドPhO-、p-フェニル-フェノキシドp-Ph-PhO-、またはナフトキシドを指し、好ましくは、アリールオキシドという用語は、置換または非置換フェノキシドを指す。アリールオキシド基は、保護されていないか、または、当業者には知られているように、必要に応じて、例えば、TWGreeneandPGMWutsProtectiveGroupsinOrganicSynthesis3rdedJohnWileySons1999で教唆されているように保護されているかのいずれかの、ヒドロキシル、F、Cl、Br、I、-CO低級アルキル、-COO低級アルキル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェート、およびホスホネートから選択される1以上の部分で置換することができる。製剤または投与形態という用語は、活性化合物の固体および液体処方の両方を含むことが意図され、当業者は、活性成分が所望の用量および薬物動態学的パラメータによって異なる製剤中に存在し得ることを理解するであろう。賦形剤という用語は、本明細書中で用いられる場合、一般的に安全で、非毒性かつ、生物学的にもその他でも有害ではない医薬組成物を調製するために用いられる化合物を指し、獣医学的使用ならびにヒト製薬学的使用に許容される賦形剤を含む。結晶性という用語は、X線粉末回折または単結晶X線技術により測定される場合、Sp-4またはRp-4のいずれかの固体試料が結晶性特性を有する状態を指す。結晶様という用語は、Sp-4またはRp-4のいずれかの固体試料が、ある1つの手段、例えば視覚的に、または光学もしくは偏光顕微鏡法により測定される場合に結晶性特性を有するが、別の手段、例えばX線粉末回折により測定される場合は結晶性特性を有さない状態を指す。視覚によるか、または光学もしくは偏光顕微鏡法により、固体試料の結晶性を視覚的に測定する方法は、USP<695>および<776>どちらも参照により本明細書中に組み込まれるで開示されている。結晶様であるSp-4またはRp-4のいずれかの固体試料は、ある条件下で結晶性であり得るが、他の条件に付された場合には非結晶性になる可能性がある。アモルファスという用語は、Sp-4またはRp-4のいずれかが結晶性でも結晶様でもない状態を指す。実施形態第1の実施形態は、式4:式中、Pは、キラルなリン原子を表すにより表される化合物に関する。キラルなリン原子のために、式4により表される化合物は、Rp-4およびSp-4と表される2つのジアステレオマーを含む。式4により表される化合物は、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物/水和物の一部であり得る。溶媒和物は4nSと表され、一方、水和物は4mH2Oと表され、ここで、Sは格子溶媒であり、nは約0~約3の整数または非整数量で変化し、mは約0~約5の整数または非整数量で変化すると表される。最後に、式4により表される化合物は溶媒和物または水和物として存在しない可能性があるが、ある有利な量の吸着溶媒Sまたは水を有する。その場合、Sまたは水の量は、式4により表される化合物の重量を基準として、約0重量~約10重量で変化し得る。式4により表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファスである。第2の実施形態は、式Rp-4:により表される化合物に関する。式Rp-4により表される化合物は、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物/水和物の一部でもあり得る。溶媒和物は、Rp-4nSと表示され、一方、水和物は、Sp-4mΗ2Oと表示され、ここで、Sは、格子溶媒であり、nは約0~約3の整数または非整数で変化し、mは約0~約5の整数または非整数で変化する。最後に、式Rp-4により表される化合物は、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物/水和物として存在しないが、ある有利な量の吸着溶媒S、水、またはSおよび水の両方を有する可能性がある。その場合、Sまたは水の量は、式Rp-4により表される化合物の重量を基準として約0重量~約10重量で変化し得る。式Rp-4により表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファスである。第2の実施形態の第1の態様は、結晶性Rp-4に関する。第2の実施形態の第2の態様は、約:6.6、7.1、9.0、11.6、17.9、20.7、24.1、24.4、および26.2のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Rp-4に関する。第2の実施形態の第3の態様は、約:6.6、7.1、9.0、11.0、11.6、12.0、16.0、17.9、19.6、20.7、21.0、21.7、21.9、22.2、23.1、24.1、24.4、26.1、27.3、27.7、および28.2のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Rp-4に関する。第2の実施形態の第4の態様は、実質的に図2で示されるようなXRPD回折パターンを有する結晶性Rp-4に関する。第2の実施形態の第5の態様は、次のFT-IRピークcm-1:1742、1713、1679、1460、1377、1259、1157、および1079を有するRp-4に関する。第2の実施形態の第6の態様は、実質的に図15で示されるようなFT-IRスペクトルを有するRp-4に関する。第2の実施形態の第7の態様は、実質的に純粋なRp-4に関する。第2の実施形態の第8の態様は、実質的に純粋な結晶性Rp-4に関する。第2の実施形態の第9の態様は、実質的に純粋なアモルファスなRp-4に関する。第3の実施形態は、式Sp-4:により表される化合物に関する。式Sp-4によって表される化合物はまた、溶媒和物、水和物、または混合溶媒和物/水和物の一部でもあり得る。溶媒和物は、Sp-4nSと表され、一方、水和物は、Sp-4mH2Oと表され、ここで、Sは格子溶媒であり、nは、約0~約3の整数または非整数で変化し、mは、約0~約5の整数または非整数で変化する。最後に、式Sp-4により表される化合物は、溶媒和物または水和物として存在しないが、ある有利な量の吸着溶媒Sまたは水を有する可能性がある。その場合、Sまたは水の量は、式Sp-4により表される化合物の重量を基準として約0重量~約10重量で変化し得る。式Sp-4により表される化合物およびその溶媒和物およびその水和物は、結晶性、結晶様、またはアモルファスである。第3の実施形態の第1の態様は結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第2の態様は、好ましくは次の単位胞パラメータa約12.88Å、b約6.17Å、c約17.73Å、およびβ約92.05°を有する単斜晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第3の態様は、好ましくは次の単位胞パラメータa約20.09Å、b約6.10Å、c約23.01Å、およびβ約112.29°を有する単斜晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第4の態様は、好ましくは、次の単位胞パラメータa約12.83Å、b約6.15Å、c約17.63Å、およびβ約91.75°を有する単斜晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第5の態様は、好ましくは、次の単位胞パラメータa約12.93Å、b約6.18Å、c約18.01Å、およびβ約96.40°を有する単斜晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第6の態様は、約:5.2、7.5、9.6、16.7、18.3、22.2でXRPD2θ-反射°を有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第7の態様は、約:5.0、7.3、9.4、および18.1のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第8の態様は、約:4.9、6.9、9.8、19.8、20.6、24.7、および26.1のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第9の態様は、:6.9、9.8、19.7、20.6、および24.6のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第9の態様は、約:5.0、6.8、19.9、20.6、20.9、および24.9のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第10の態様は、約:5.2、6.6、7.1、15.7、19.1、および25.0のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第11の態様は、約:6.1、8.2、10.4、12.7、17.2、17.7、18.0、18.8、19.4、19.8、20.1、20.8、21.8、および23.3のXRPD2θ-反射°を有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第12の態様は、実質的に図3、図4、図5、図6、図7、図8、および図21のいずれか1つで示されるようなXRPD回折パターンを有する結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第13の態様は、約:1743、1713、1688、1454、1378、1208、および1082でFT-IRピークcm-1を有するSp-4に関する。第3の実施形態の第14の態様は、実質的に図7で示されるようなFT-IRスペクトルを有するSp-4に関する。第3の実施形態の第15の態様は、実質的に純粋なSp-4に関する。第3の実施形態の第16の態様は、実質的に純粋な結晶性Sp-4に関する。第3の実施形態の第17の態様は、実質的に純粋なアモルファスSp-4に関する。用量、投与、および使用第4の実施形態は、化合物4、Rp-4、またはSp-4のずれかを使用した任意のウイルス性因子の治療および/または予防のための組成物に関する。可能なウイルス性因子としては、これらに限定されるものではないが:C型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルスウイルス、A型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、日本脳炎ウイルス、またはペスチウイルス、ヘパシウイルス、もしくはフラビウイルスの群に属するウイルスが挙げられる。この実施形態の態様は、本明細書中で開示される任意のウイルス性因子の治療のための組成物に関し、前記組成物は、賦形剤、担体、希釈剤、および同等の媒体から選択される薬剤的に許容される媒体、ならびに化合物4、Rp-4、もしくはSp-4のいずれかその水和物、溶媒和物、および化合物4、Rp-4、もしくはSp-4のいずれかの任意の結晶性形態またはその水和物およびその溶媒和物を含むことが意図されるを含む。化合物4、Rp-4、またはSp-4は、様々な経口投与形態および担体で独立して処方することができる。経口投与は、錠剤、コーティング錠、ハードおよびソフトゼラチンカプセル、溶液、エマルジョン、シロップ、または懸濁液の形態であり得る。化合物4、Rp-4、またはSp-4は、他の投与経路のうち、坐剤投与により投与される場合に有効である。最も好都合な投与法は、一般的に、疾患の重症度および抗ウイルス剤に対する患者の反応にしたがって調節することができる、好都合な連日投与方式を用いる経口である。化合物4、Rp-4、またはSp-4は、1以上通常の賦形剤、担体、または希釈剤とあわせて、医薬組成物の形態および単位用量中に入れることができる。医薬組成物および単位投与形態は、さらなる活性化合物の有無にかかわらず通常の割合の通常の成分から構成される可能性があり、単位投与形態は、採用される所望の1日投与量範囲にふさわしい任意の好適な有効量の活性成分を含み得る。医薬組成物は、経口使用のための、固体、例えば錠剤もしくは充填カプセル、半固体、粉末、持続放出性処方、または液体、例えば懸濁液、エマルジョン、または充填カプセル;あるいは直腸または膣投与のための坐剤の形態などとして用いることができる。典型的な製剤は、約5~約95の活性化合物複数可w/wを含む。化合物4、Rp-4、またはSp-4は、単独で投与することができるが、一般的には、所望の投与経路および標準的な製薬法に関して選択される1以上の好適な医薬賦形剤、希釈剤または担体との混合物で投与される。固体形態製剤としては、例えば、粉末、錠剤、ピル、カプセル、坐剤、および分散可能な顆粒が挙げられる。固体担体はさらに、希釈剤、矯味矯臭剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁化剤、バインダー、防腐剤、錠剤崩壊剤、または封入材料として作用することができる1以上の物質であり得る。粉末において、担体は、一般的に、微粉活性成分との混合物である微粉固体である。錠剤において、活性成分を、一般的に、好適な割合で必要な結合能力を有する担体と混合し、所望の形状およびサイズに圧縮する。好適な担体としては、これらに限定されるものではないが、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂などが挙げられる。固体形態製剤は、活性成分に加えて、着色剤、フレーバー、安定剤、緩衝液、人工および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含み得る。固体処方の例は、欧州特許第0524579号;米国特許第2002/0142050号;米国特許第2004/0224917号;米国特許第2005/0048116号;米国特許第2005/0058710号;米国特許第2006/0034937号;米国特許第2006/0057196号;米国特許第2006/0188570号;米国特許第2007/0026073号;米国特許第2007/0059360号;米国特許第2007/0077295号;米国特許第2007/0099902号;米国特許第2008/0014228号;米国特許第6,267,985号;米国特許第6,294,192号;米国特許第6,383,471号;米国特許第6,395,300号;米国特許第6,569,463号;米国特許第6,635,278号;米国特許第6,645,528号;米国特許第6,923,988号;米国特許第6,932,983号;米国特許第7,060,294号;および米国特許第7,462,608号そのそれぞれは参照により本明細書中に組み込まれるで例示されている。液体処方もまた、経口投与に好適であり、エマルジョン、シロップ、エリキシルおよび水性懸濁液をはじめとする液体処方を含む。これらとしては、使用直前に液体形態製剤に変換されることが意図される固体形態製剤が挙げられる。液体処方の例は、米国特許第3,994,974号;第5,695,784号;および第6,977,257号で例示されている。エマルジョンは、溶液中、例えば、水性プロピレングリコール溶液中で調製することができるか、またはレシチン、ソルビタンモノオレアート、もしくはアカシアなどの乳化剤を含み得る。水性懸濁液は、微粉活性成分を水中に粘稠性材料、例えば天然または合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁化剤とともに分散させることによって調製することができる。化合物4、Rp-4、またはSp-4は、坐剤としての投与のために独立して処方することができる。低融点ワックス、例えば脂肪酸グリセリドまたはカカオ脂の混合物をまず融解させ、そして活性成分を、例えば撹拌により均一に分散させる。溶融した均質混合物を次いで通常のサイズの型中に注ぎ、冷却させ、そして凝固させる。化合物4、Rp-4、またはSp-4を膣投与のために独立して処方することができる。活性成分に加えて、当該技術分野において適切であることが知られている担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォームまたはスプレー。これらの処方のあるものはさらに、殺精子剤を含むかまたは含まないコンドームと併用することもできる。好適な処方は、医薬担体、希釈剤および賦形剤と合わせて、RemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy1995editedbyEWMartinMackPublishingCompany19theditionEastonPennsylvania参照により本明細書中に組み込まれるで記載されている。熟練した薬剤師は、明細書中の教唆の範囲内で処方を修飾して、本明細書中で想定される化合物を含有する組成物を不安定にすることなく、またはそれらの治療活性を損なうことなく、特定の投与経路について多くの処方を提供することができる。さらに、精製された化合物4、Rp-4、またはSp-4は、リポソームまたはミセルとあわせて、独立して処方することができる。リポソームに関しては、米国特許第4,797,285号;第5,013,556号;第5,077,056号;第5,077,057号;第5,154,930号;第5,192,549号;第5,213,804号;第5,225,212号;第5,277,914号;第5,316,771号;第5,376,380号;第5,549,910号;第5,567,434号;第5,736,155号;第5,827,533号;第5,882,679号;第5,891,468号;第6,060,080号;第6,132,763号;第6,143,321号;第6,180,134号;第6,200,598号;第6,214,375号;第6,224,903号;第6,296,870号;第6,653,455号;第6,680,068号;第6,726,925号;第7,060,689号;および第7,070,801号そのそれぞれは、参照により本明細書中に組み込まれるで開示されているような方法で処方することができると考えられる。ミセルに関しては、精製された化合物を、米国特許第5,145,684号および第5,091,188号どちらも参照により本明細書中に組み込まれるで開示されているのと同じ方法で処方することができると考えられる。第5の実施形態は、以下のウイルス性因子:C型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、A型肝炎ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルスおよび日本脳炎ウイルスのいずれか1つによる感染の結果である任意の状態の治療用医薬における化合物4、Rp-4、またはSp-4のいずれかの使用に関する。医薬という用語は、それを必要とする対象者の治療および/または予防法において用いられる物質を意味し、この物質としては、これらに限定されるものではないが、化合物4、Rp-4、またはSp-4のいずれかを含む組成物、処方、投与形態などが挙げられる。本明細書中で開示される抗ウイルス状態のいずれかの治療のための医薬の製造において化合物4、Rp-4、またはSp-4のいずれかの、単独または本明細書中で開示される別の化合物との組み合わせた使用が想定される。医薬としては、これらに限定されるものではないが、本明細書中で開示される第4の実施形態により想定される組成物のいずれか1つが挙げられる。第6の実施形態は、それを必要とする対象者における治療および/または予防法に関し、前記方法は、治療有効量の任意の化合物4、Rp-4、またはSp-4のいずれかを対象者に投与することを含む。それを必要とする対象者は、これらに限定されるものではないが、C型肝炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、ライノウイルス、ポリオウイルス、A型肝炎ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルスまたは日本脳炎ウイルス、フラビウイルスウイルスもしくはペスチウイルスもしくはヘパシウイルスまたは前記ウイルスのいずれかと等しいかまたは匹敵する症状を引き起こすウイルス性因子を包含する、本明細書中で開示されるウイルス性因子のいずれかによる感染の結果である任意の状態を有する者であることが意図される。対象者という用語は、これらに限定されるものではないが、ウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、シチメンチョウ、バッファロー、ラマ、ダチョウ、イヌ、ネコ、およびヒトを含むほ乳類を意味し、好ましくは、対象者はヒトである。第9の実施形態の対象者を治療する方法において、本明細書中で想定される化合物のいずれかを単独または本明細書中で開示される他の化合物と組み合わせて用いることができると考えられる。治療有効量という用語は、本明細書中で用いられる場合、個体における疾患の症状を軽減するために必要な量を意味する。用量をそれぞれの特定の場合における個々の要件に対して調節する。その投与量は、治療される疾患の重症度、患者の年齢および全体的な健康状態、患者を治療するために用いられる他の医薬、投与経路および投与形態ならびに関与する医師の好みおよび経験などの多くの因子に応じて広い範囲内で変化し得る。経口投与に関して、1日あたり、約0.001~約10g中間の全ての値、例えば0.001、0.0025、0.005、0.0075、0.01、0.025、0.050、0.075、0.1、0.125、0.150、0.175、0.2、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、および9.5を含むの1日投与量が単剤療法および/または併用療法で適切である。特定の1日投与量は、1日あたり約0.01~約1g中間の0.01gすなわち、10mgの全ての増分値を含むであり、好ましい1日投与量は約0.01~約0.8g/日であり、さらに好ましくは約0.01~約0.6g/日であり、そして最も好ましくは約0.01~約0.25g/日であり、そのそれぞれは、中間の0.01gの全ての増分値を含む。一般的に、治療は、大きな初期負荷用量で開始して、ウイルスを迅速に減少または除去し、続いて感染の再発を防止するために十分なレベルまで用量を減少させる。本明細書中で記載される疾患の治療で通常の技術を有する者は、必要以上の実験をすることなく、また知識、経験および本出願の開示に基づいて、所定の疾患および患者に関して本明細書中で開示される化合物の治療有効量を確定することができる。治療効果は、これらに限定されるものではないが、血清タンパク質例えば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ例えば、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、5’-ヌクレオシダーゼ、γ-グルタミニルトランスペプチダーゼglutaminyltranspeptidaseなどなどのタンパク質レベル、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成をはじめとする肝機能;これらに限定されるものではないが、炭水化物代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝をはじめとする肝臓代謝機能の試験から確認することができる。別法として、治療有効性は、HCV-RNAを測定することによってモニタリングすることができる。これらの試験の結果により用量を最適化することが可能になる。第6の実施形態の第1の態様は、それを必要とする対象者における治療および/または予防法に関し、前記方法は、対象者に、治療有効量の、化合物4、Rp-4、またはSp-4のいずれかにより表される化合物および治療有効量の別の抗ウイルス剤を投与することを含み;ここで、投与は同時または代替的である。代替的投与の時間間隔は、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、および23時間を含む任意の部分範囲を含む、1~24時間の範囲であり得ると理解される。別の抗ウイルス剤の例としては、これらに限定されるものではないが:HCVNS3プロテアーゼ阻害剤欧州特許第1881001号、米国特許第2003187018号、米国特許第2005267018号、国際公開第2003006490号、国際公開第200364456号、国際公開第2004094452号、国際公開第2005028502号、国際公開第2005037214号、国際公開第2005095403号、国際公開第2007014920号、国際公開第2007014921号、国際公開第2007014922号、国際公開第2007014925号、国際公開第2007014926号、国際公開第2007015824号、国際公開第2008010921号、および国際公開第2008010921号を参照のこと;HCVNS5B阻害剤米国特許第2004229840号、米国特許第2005154056号、米国特許第2005-98125号、米国特許第20060194749号、米国特許第20060241064号、米国特許第20060293306号、米国特許第2006040890号、米国特許第2006040927号、米国特許第2006166964号、米国特許第2007275947号、米国特許第6784166号、米国特許第20072759300号、国際公開第2002057287号、国際公開第2002057425号、国際公開第2003010141号、国際公開第2003037895号、国際公開第2003105770号、国際公開第2004000858号、国際公開第2004002940号、国際公開第2004002944号、国際公開第2004002977号、国際公開第2004003138号、国際公開第2004041201号、国際公開第2004065367号、国際公開第2004096210号、国際公開第2005021568号、国際公開第2005103045号、国際公開第2005123087号、国際公開第2006012078号、国際公開第2006020082号、国際公開第2006065335号、国際公開第2006065590号、国際公開第2006093801号、国際公開第200702602号、国際公開第2007039142号、国際公開第2007039145号、国際公開第2007076034号、国際公開第2007088148号、国際公開第2007092000号、および国際公開第2007095269号を参照のこと;HCVNS4阻害剤国際公開第2005067900号および国際公開第2007070556号を参照のこと;HCVNS5a阻害剤米国特許第2006276511号、国際公開第2006035061号、国際公開第2006100310号、国際公開第2006120251号、および国際公開第2006120252号を参照のこと;トール様受容体アゴニスト国際公開第2007093901号を参照のこと;および他の阻害剤国際公開第2000006529号、国際公開第2003101993号、国際公開第2004009020号、国際公開第2004014313号、国際公開第2004014852号、および国際公開第2004035571号を参照のこと;ならびに2008年3月21日付で出願された米国特許出願第12/053,015号米国特許第2010/0016251号その内容は、参照により本明細書中に組み込まれるで開示されている化合物、インターフェロンα、インターフェロンβ、ペグ化インターフェロンα、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、別のヌクレオシドHCVポリメラーゼ阻害剤、HCV非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、HCVプロテアーゼ阻害剤、HCVヘリカーゼ阻害剤またはHCV融合阻害剤が挙げられる。化合物4、Rp-4、またはSp-4のいずれかを、別の抗ウイルス剤と組み合わせて投与する場合、活性は、親化合物を越えて増加する可能性がある。治療が併用療法である場合、そのような投与は、ヌクレオシド誘導体に関して同時または連続的であり得る。同時投与という用語は、本明細書中で用いられる場合、したがって、同じ時間または異なる時間での薬剤の投与を含む。2以上の薬剤の同じ時間での投与は、2以上の活性成分を含有する単一処方によるか、または2以上の投与形態と単一活性剤とを実質的に同時に投与することにより、達成することができる。治療についての本明細書中での言及は、既存の状態の予防ならびに治療に及ぶと理解されるであろう。さらに、HCV感染の治療という用語は、本明細書中で用いられる場合、HCV感染に関連するかもしくは媒介される疾患または状態、あるいはその臨床症状の治療または予防も包含する。調製第7の実施形態は、化合物4、Rp-4、またはSp-4のいずれか1つを調製するためのプロセスに関し、このプロセスは:aイソプロピル-アラネート、A、ジ-LG-フェニルホスフェート、B、2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン、3、および塩基を反応させて、少なくとも1つのSp-4およびRp-4を含む第1の混合物を得、ここで、Xは、酸の共役塩基であり、nは0または1であり、そしてLGは脱離基である;b第1混合物を保護化合物と反応させて、少なくとも1つの保護されたSp-4および保護されたRp-4を含む第2の混合物を得;そしてc場合によって、4、Sp-4、またはRp-4を得るために、第2の混合物を、結晶化、クロマトグラフィー、または抽出に付すこと、を含む。第7の実施形態の第1の態様において、イソプロピルアラネートは、その塩酸塩として存在し、これは、好ましくは実質的に無水である。第7の実施形態の第2の態様において、塩基はN-メチルイミダゾールである。第7の実施形態の第3の態様において、A:B:3のモル比は、約1.6:1.3:1である。第7の実施形態の第4の態様において、保護化合物はt-ブチル-ジメチル-シリル-クロリドである。第8の実施形態は、Sp-4またはRp-4を調製するためのプロセスに関し、このプロセスは:aイソプロピル-アラネート、A、ジ-LG-フェニルホスフェート、B、2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン、3、および塩基を反応させて、少なくとも1つのSp-4およびRp-4を含む第1の混合物を得式中、Xは酸の共役塩基であり、nは0または1であり、LGは脱離基である;そしてb場合によって、精製されたSp-4またはRp-4を得るために、第2の混合物を結晶化、クロマトグラフィー、または抽出に付すこと、を含む。Rp-4を調製するための第8の実施形態の第1の態様は、第2の混合物または精製されたRp-4混合物を溶媒中に溶解または懸濁させることにより、第2の混合物または精製されたRp-4をさらに精製し;場合によって、続いて結晶性Rp-4を播種し;そして結晶性Rp-4を得るために十分な貧溶媒を添加することをさらに含む。Sp-4を調製するための第8の実施形態の第2の態様は、d第2の混合物または精製されたSp-4を溶媒中に溶解または懸濁させ、続いて結晶性Sp-4をほぼ室温で播種し;その大部分がSp-4を含む第1の固体を集め;第1固体を溶媒中にその還流温度で溶解させ;そして冷却するかまたは貧溶媒を添加して、第2の固体を得ることにより、第2の混合物または精製されたSp-4をさらに精製することをさらに含む。Sp-4を調製するための第8の実施形態の第3の態様は、d第2の混合物または精製されたSp-4混合物を第1の溶媒中に溶解または懸濁させ、続いて貧溶媒を添加して、第1の組成物を得ここで、デカントすることにより残存する溶媒/貧溶媒を除去して、残留物を得る;第1溶媒および貧溶媒を含む溶液で残留物を処理して、第2の組成物を得、圧力を減少させて、第1の固体を得;第2の溶媒を用いて第1固体を溶解または懸濁させて、第3の組成物を得;Sp-4の種結晶を第3の組成物に添加し;第2の固体を集め;第2の固体を、場合によって第3の溶媒の還流温度まで加熱した第3の溶媒中に溶解または懸濁させて、第4の組成物を得、そして必要ならば、第4の組成物を冷却して、Sp-4を含む第3の固体を得、これをろ過により集めることにより、Sp-4をさらに精製することをさらに含む。Sp-4を調製するための第8の実施形態の第4の態様において、第2の混合物または精製されたSp-4により、dシリカゲルを第2の混合物または精製されたSp-4に添加し、続いて溶媒を蒸発させて、乾燥スラリーを得;乾燥スラリーを第1の溶媒/貧溶媒の組み合わせ中で撹拌して、第1の湿潤スラリーを得;第1溶媒/貧溶媒組み合わせを第1湿潤スラリーからデカントして、第2の湿潤スラリーおよび第1の組成物を得;第2の湿潤スラリーに第2の溶媒/貧溶媒組み合わせを添加し、続いて撹拌し;第2の溶媒/貧溶媒組み合わせを第2の湿潤スラリーからデカントして、第3の湿潤スラリーおよび第2の組成物を得;場合によって第3の湿潤スラリーまたはさらなる湿潤スラリーに関してステップg~hを繰り返し;溶媒を第2の組成物および場合によって任意のステップiから得られる任意のさらなる組成物から蒸発させて、第1の固体を得;第3の溶媒および場合によって第4の溶媒を含む溶液中に第1固体を溶解または懸濁させて、第3の組成物を得;場合によってSp-4の種結晶を第3の組成物に添加し;第3の組成物からSp-4を含む第2の固体を得;そして場合によって第3の溶媒を用いて第2の固体を再結晶して、Sp-4を含む第3の固体を得ることにより、Sp-4をさらに精製する。当業者は、化合物を伝統的な抽出、伝統的な結晶化または伝統的なクロマトグラフィー技術により分離できることを理解するであろう。伝統的なクロマトグラフィー技術としては、これらに限定されるものではないが、シリカゲル上クロマトグラフィー例えば、3~5のDCM中メタノールまたは4~6のDCM中イソプロパノールを使用を含み、増大したレベルの1つの異性体50~100を産生し、次いでこれを結晶化する。あるいは、逆相クロマトグラフィー例えば、1~30のアセトニトリル-水性移動相を使用を使用することができる。さらに、主溶媒として二酸化炭素および修飾剤としてメタノールなどのアルコールを用い、好ましくは適切なキラル媒体、例えば、DaicelChiralpackIAを使用する、超臨界流体クロマトグラフィーSFCにより、化合物を単離することができる。別法として、適切なキラル媒体、例えば、DaicelChiralpackIAを用い、ヘキサン/イソプロパノールなどの溶媒の混合物または酢酸エチルなどの単一溶媒を用いるSMBクロマトグラフィーを採用することができる。第9の実施形態は、Sp-4を調製するためのプロセスであって:aイソプロピル-アラニル-ホスホルアミデートを3’-O-保護または非保護3、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Sp-4を含む組成物を得ること、を含むプロセスに関しここで、イソプロピル-アラニル-ホスホルアミデートは、次の構造:により表されるジアステレオマーの混合物から構成され、ここで、C:C’の比は約1:1である。第1の態様において、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C:C’の比は、約1:1以上である。第2の態様において、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C:C’の比は約1:1を越える。第3の態様において、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C:C’の比は、少なくとも約1.5:1、約2.3:1、約4:1、約5.7:1、約9:1、約19:1、約32.3:1、約49:1、または約99:1である。第4の態様LG’は、2,4-ジニトロフェノキシド、4-ニトロフェノキシド、2-ニトロフェノキシド、2-クロロ-4-ニトロフェノキシド、2,4-ジクロロフェノキシド、およびペンタフルオロフェノキシドから選択され、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C:C’の比は、少なくとも約1.5:1、約2.3:1、約4:1、約5.7:1、約9:1、約19:1、約32.3:1、約49:1、または約99:1である。Sp-4を調製するための第5の態様は:aイソプロピル-アラニル-ホスホルアミデートCを3’-O-保護または非保護3、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Sp-4を含む組成物を得、式中、Zは保護基または水素であり;LG’は脱離基である;そしてb場合によって、精製された保護または非保護Sp-4を得るために、得られた保護または非保護Sp-4をクロマトグラフィー、抽出、または結晶化に付すことを含む。下位実施形態において、LG’は、トシレート、カンファースルホネート、または少なくとも1つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドであり;さらに好ましくは、LG’は、2,4-ジニトロフェノキシド、4-ニトロフェノキシド、2-ニトロフェノキシド、2-クロロ-4-ニトロフェノキシド、2,4-ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドから選択される。さらなる下位実施形態において、Sp-4が保護されている場合、すなわち、Zが水素でない場合、第9の実施形態のプロセスは、保護されたSp-4の脱保護にさらに関する。さらなる下位実施形態において、反応は、極性非プロトン性溶媒、例えば、テトラヒドロフランまたは別のエーテル系溶媒単独、または互いと、もしくはC2~C7ニトリル、例えばアセトニトリルとの組み合わせのいずれか中で実施される。第9の実施形態のプロセスは、1LG’POLG2ここで、LGは、LG’から独立して、脱離基であるをiイソプロピル-アラネートおよび第1の塩基と反応させて、LG’POLGNHAla-iPrを得、続いてLG’POLGNHAla-iPrをフェノールおよび第2塩基と反応させて、CおよびC’を含む混合物を得、iiフェノールおよび第1の塩基と反応させて、LG’POLGOPhを得、続いてLG’POLGOPhをイソプロピル-アラネートおよび第2塩基と反応させて、CおよびC’を含む混合物を得るか、またはiiiイソプロピル-アラネート、フェノール、および少なくとも1つの塩基を組み合わせて反応させて、CおよびC’を含む混合物を得るか;あるいは2PhOPOLG2ここで、LGは脱離基であるをiイソプロピル-アラネートおよび第1の塩基と反応させてPhOPOLGNHAla-iPrを得、続いてPhOPOLGNHAla-iPrを脱離基前駆体LG’Hおよび第2塩基と反応させて、CおよびC’を含む混合物を得そして混合物をクロマトグラフィーに付すかまたは混合物を結晶化してCを得ること;をさらに含む。第9の実施形態の態様において、イソプロピルアラネートはその塩酸塩として存在し、これは好ましくは実質的に無水である。第10の実施形態は、Rp-4を調製するためプロセスであって:aイソプロピル-アラニル-ホスホルアミデートを3’-O-保護または非保護3、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Rp-4を含む組成物を得ること、を含むプロセスに関し、ここで、イソプロピル-アラニル-ホスホルアミデートは、以下の構造:により表されるジアステレオマーの混合物から構成される式中、C’:Cの比は約1:1である。第1の態様において、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C’:Cの比は約1:1以上である。第2の態様において、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C’:Cの比は約1:1以上である。第3の態様において、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C’:Cの比は、少なくとも約1.5:1、約2.3:1、約4:1、約5.7:1、約9:1、約19:1、約32.3:1、約49:1、または約99:1である。第4の態様LG’はp-ニトロフェノキシドであり、塩基性試薬はt-ブチルマグネシウムクロリドであり、C’:Cの比は、少なくとも約1.5:1、約2.3:1、約4:1、約5.7:1、約9:1、約19:1、約32.3:1、約49:1、または約99:1である。Rp-4を調製するための第5の態様は:aイソプロピル-アラニル-ホスホルアミデートC’を3’-O-保護または非保護3、および塩基性試薬と反応させて、保護または非保護Rp-4を含む組成物を得式中、Zは保護基または水素であり;LG’は脱離基である;そしてb場合によって、精製された保護または非保護Rp-4を得るために、得られた保護または非保護Rp-4をクロマトグラフィー、抽出、または結晶化に付すことを含む。下位実施形態において、LG’は、トシレート、カンファースルホネート、または少なくとも1つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドであり;さらに好ましくは、LG’は、p-ニトロフェノキシド、2,4-ジニトロフェノキシド、およびペンタフルオロフェノキシドから選択される。さらなる下位実施形態において、Rp-4が保護されている場合、すなわち、Zが水素でない場合、第9の実施形態のプロセスは、保護されたRp-4の脱保護にさらに関する。さらなる下位実施形態において、反応は、極性非プロトン性溶媒中、例えば、テトラヒドロフランまたは別のエーテル系溶媒単独または互いともしくはC2~C7ニトリル、例えばアセトニトリルとの組み合わせのいずれかで行われる。第10の実施形態のプロセスは、1LG’POLG2ここで、LGは、LG’と独立して、脱離基であるをiイソプロピル-アラネートおよび第1の塩基と反応させて、LG’POLGNHAla-iPrを得、続いてLG’POLGNHAla-iPrをフェノールおよび第2塩基と反応させて、CおよびC’を含む混合物を得、iiフェノールおよび第1の塩基と反応させて、LG’POLGOPhを得、続いてLG’POLGOPhをイソプロピル-アラネートおよび第2塩基と反応させて、CおよびC’を含む混合物を得るか、またはiiiイソプロピル-アラネート、フェノール、および少なくとも1つの塩基を組み合わせて反応させて、CおよびC’を含む混合物を得るか;または2PhOPOLG2式中、LG’は、LGから独立して、脱離基であるをiイソプロピル-アラネートおよび第1の塩基と反応させて、PhOPOLGNHAla-iPrを得、続いてPhOPOLGNHAla-iPrを脱離基前駆体および第2塩基と反応させて、CおよびC’を含む混合物を得、そして、混合物をクロマトグラフィーに付すかまたは混合物を結晶化して、C’を得ること、をさらに含む。第9の実施形態の態様において、イソプロピルアラネートは、その塩酸塩として存在し、これは好ましくは実質的に無水である。第11の実施形態は、第7の実施形態、第8の実施形態、第9の実施形態または第10の実施形態ならびにそれらそれぞれの態様で記載されたプロセスにより得られる組成物に関する。第11の実施形態の態様は、下記で開示される例示された実施形態のいずれか1つにより得られる組成物に関する。そのようにして得られた組成物は、結晶性、結晶様、アモルファス、またはそれらの組み合わせで有り得る。第12の実施形態は、化合物3式中、Zは保護基または水素であるに関し;これは、Rp-4またはSp-4の調製に有用である。第12の実施形態の第1の態様は、次の構造を有する化合物から選択される。第13の実施形態は、次の構造式中、LG’は、脱離基であるにより表される、化合物、その塩、水和物、溶媒和物、またはそれらの組み合わせに関し、これは、Rp-4またはSp-4の調製に有用である。第13の実施形態の第1の態様では、LG’は、トシレート、カンファースルホネート、アリールオキシド、または少なくとも1つの電子吸引基で置換されたアリールオキシドである。第13の実施形態の第2の態様では、LG’は、2,4-ジニトロフェノキシド、4-ニトロフェノキシド、2-ニトロフェノキシド、2-クロロ-4-ニトロフェノキシド、2,4-ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドから選択される。第13の実施形態の第3の態様では、LG’は、ペンタフルオロフェノキシドまたは4-ニトロ-フェノキシドである。第13の実施形態の第4の態様は、LG’が、2,4-ジニトロフェノキシド、4-ニトロフェノキシド、2-ニトロフェノキシド、2-クロロ-4-ニトロフェノキシド、2,4-ジクロロフェノキシド、またはペンタフルオロフェノキシドである化合物Cに関する。第13の実施形態の第5の態様は、LG’が、4-ニトロフェノキシドまたはペンタフルオロフェノキシドである化合物Cに関する。第13の実施形態の第6の態様は、LG’が4-ニトロフェノキシドである化合物Cに関する。第13の実施形態の第7の態様は、LG’が4-ニトロフェノキシドである結晶性化合物Cに関する。第13の実施形態の第8の態様は、LG’がペンタフルオロフェノキシドである化合物Cに関する。第13の実施形態の第9の態様は、LG’がペンタフルオロフェノキシドである結晶性化合物Cに関する。第14の実施形態は、構造式により表される化合物を調製し、化合物を、a第1の組成物;b第2の脱離基前駆体;c非求核性塩基;およびd液体組成物を含む組成物から結晶化するためのプロセスに関し、ここで、第1組成物は、化合物およびその対応するPベースのジアステレオマーを含む。第14の実施形態の第1の態様において、化合物のモル量およびそのPベースのジアステレオマーのモル量は同一または異なる。第14の実施形態の第2の態様において、化合物のモル量は、その対応するPベースのジアステレオマーのモル量よりも多いか、またはその逆である。第14の実施形態の第3の態様において、第2の脱離基前駆体は、2,4-ジニトロフェノール、4-ニトロフェノール、2-ニトロフェノール、2-クロロ-4-ニトロフェノール、2,4-ジクロロフェノール、またはペンタフルオロフェノールである。第14の実施形態の第4の態様において、LG’はペンタフルオロフェノキシドである。第1の下位態様において、第2の脱離基前駆体はペンタフルオロフェノールである。第2の下位態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、化合物およびそのPベースのジアステレオマーのモル量に対して約0.01モル当量~約10モル当量の範囲およびその中間の全てのモル当量に及ぶ。第3の下位態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、化合物およびそのPベースのジアステレオマーのモル量に対して約0.1モル当量~約1モル当量の範囲およびその中間の全てのモル当量に及ぶ。第14の実施形態の第5の態様において、結晶化は、約-10°C~約40°Cの範囲およびその中間の全ての温度値で起こる。第1の下位態様において、結晶化はほぼ室温で起こる。第14の実施形態の第6の態様において、非求核性塩基は、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン-1,8-ジアミン、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン、l,8-ジアザビシクロウンデク-7-エン、4-ジメチルアミノ-ピリジン、ピリジン、2,6-ジ-C1~6-アルキル-ピリジン、2,4,6-トリ-C1~6-アルキル-ピリジン、およびそれらの混合物から選択される。第1の下位態様において、非求核性塩基は、トリエチルアミンまたは1,8-ジアザビシクロウンデク-7-エンである。第2の下位態様において、非求核性塩基はトリエチルアミンである。第14の実施形態の第7の態様において、非求核性塩基は、化合物およびそのPベースのジアステレオマーの総モル量に対して、約0.01モル当量~約10モル当量の範囲、およびその中間の全てのモル当量に及ぶ量で存在する。第1の下位態様において、非求核性塩基は、化合物およびそのPベースのジアステレオマーの総モル量に対して、約0.1モル当量~約1モル当量の範囲の量、およびその中間の全てのモル当量に及ぶ量で存在する。第14の実施形態の第8の態様において、化合物の溶解度は、液体組成物中のその対応するPベースのジアステレオマーの溶解度より少ないか、またはその逆である。第14の実施形態の第9の態様において、液体組成物は、溶媒および貧溶媒の少なくとも1つを含む。第1の下位態様において、液体組成物は、C1~C8アルコール、C2~C8エーテル、C3~C7ケトン、C3~C7エステル、C1~C2クロロカーボン、C2~C7ニトリル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む。第2の下位態様において、液体組成物は、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む。第3の下位態様において、液体組成物は、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、およびC5~C12飽和炭化水素の少なくとも1つを含む。第4の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチル、t-ブチル-メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも1つを含む。第5の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチルおよびヘキサンを含む。第6の下位態様において、液体組成物は、t-ブチル-メチルエーテルおよびヘキサンを含む。第14の実施形態の第10の態様において、液体組成物の量は、第1組成物1グラムにつき約1mL~約10mLの範囲およびその中間の全てのmL/g値に及ぶ。第14の実施形態の第11の態様は、結晶性化合物を組成物に添加することをさらに含む。第1の下位態様は、約0.1~約1重量、およびその中間の全ての重量値の結晶性化合物を第1組成物に添加することをさらに含む。第14の実施形態の第12の態様は、aPhOPOLG2およびiPr-Ala-NH2HClを第1塩基の存在下で反応させて、PhOPOLGNHAla-iPrを得;bPhOPOLGNHAla-iPrを第1の脱離基前駆体LG’Hと第2塩基の存在下で反応させて、化合物およびそのPベースのジアステレオマーを含む組成物を得ることをさらに含み;ここで、LGおよびLG’は、互いに独立して、脱離基であり;第1脱離基前駆体および第2の脱離基前駆体は、同一または異なり;そして第1塩基および第2塩基は、同一または異なる。第15の実施形態は、以下の構造を有する結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するためのプロセスであって:2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを、a第1の組成物;bペンタフルオロフェノール;c非求核性塩基;およびd液体組成物を含む第2の組成物から結晶化させること、を含むプロセスに関し、ここで、第2の組成物は、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを含む。第15の実施形態の第1の態様において、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量および2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量は、同一または異なる。第15の実施形態の第2の態様において、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量は、2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量よりも多い。第15の実施形態の第3の態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの量に対して、約0.01モル当量~約10モル当量およびその中間の全てのモル当量値に及ぶ。第1の下位態様において、ペンタフルオロフェノールの量は、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルのモル量に対して、約0.1モル当量~約1モル当量およびその中間の全てのモル当量値に及ぶ。第15の実施形態の第4の態様において、結晶化は、約-10°C~約40°Cの範囲の温度およびその中間の全ての温度値で起こる。第1の下位態様において、結晶化はほぼ室温で起こる。第15の実施形態の第5の態様において、非求核性塩基は、炭酸カリウム、炭酸セシウム、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、キヌクリジン、ナフタレン-1,8-ジアミン、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン、1,8-ジアザビシクロウンデク-7-エン、4-ジメチルアミノ-ピリジン、ピリジン、2,6-ジ~C1~6-アルキル-ピリジン、2,4,6-トリ-C1~6-アルキル-ピリジン、およびそれらの混合物から選択される。第1の下位態様において、非求核性塩基は、トリエチルアミンまたは1,8-ジアザビシクロウンデク-7-エンである。第2の下位態様において、非求核性塩基はトリエチルアミンである。第15の実施形態の第6の態様において、非求核性塩基は、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの総モル量に対して、約0.1~約1モル当量およびその中間の全てのモル当量値の範囲の量で存在する。第15の実施形態の第7の態様において、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの溶解度は、液体組成物中の2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの溶解度よりも低い。第15の実施形態の第8の態様において、液体組成物は、溶媒および貧溶媒の少なくとも1つを含む。第1の下位態様において、液体組成物は、C1~C8アルコール、C2~C8エーテル、C3~C7ケトン、C3~C7エステル、C1~C2クロロカーボン、C2~C7ニトリル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む。第2の下位態様において、液体組成物は、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、C5~C12飽和炭化水素、およびC6~C12芳香族炭化水素の少なくとも1つを含む。第3の下位態様において、液体組成物は、C2~C8エーテル、C3~C7エステル、およびC5~C12飽和炭化水素の少なくとも1つを含む。第4の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチル、t-ブチル-メチルエーテル、およびヘキサンの少なくとも1つを含む。第5の下位態様において、液体組成物は、酢酸エチル、およびヘキサンを含む。第6の下位態様において、液体組成物は、t-ブチル-メチルエーテル、およびヘキサンを含む。第15の実施形態の第9の態様において、液体組成物の量は、第1組成物1グラムにつき、約1~約10mLおよびその中間の全てのmL/g値に及ぶ。第15の実施形態の第10の態様は、結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを第2の組成物に添加することをさらに含む。第15の実施形態の第11の態様は、第1組成物中の2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルの総重量を基準として、約0.1~約1重量および中間の全ての重量値の結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを添加することをさらに含む。第16の実施形態は、第15の実施形態のプロセスにより得られる、結晶性2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルに関する。第17の実施形態は、2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するためのプロセスであって:2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを、a第1の組成物;bペンタフルオロフェノール;c非求核性塩基;およびd液体組成物を含む第2の組成物から結晶化すること、を含むプロセスに関し;ここで、第1組成物は、2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルおよび2-R-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを含む。第17の実施形態の第1の態様は、2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するためのプロセスであって:2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを、t-ブチルマグネシウムハライドと1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオンとt-ブチルマグネシウムハライドとを反応させることにより得られる生成物と接触させること、を含むプロセスに関する。第17の実施形態の第2の態様において、接触は、約0°C~約40°Cの範囲の温度および中間のすべての温度値を有する媒体中で起こる。第17の実施形態の第3の態様において、接触は、約0°C~約30°Cの範囲の温度および中間のすべての温度値で起こる。第17の実施形態の第4の態様において、t-ブチルマグネシウムハライドの1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオンに対するモル比は、約2~約2.2の範囲に及ぶ。第1の下位態様において、t-ブチルマグネシウムハライドの1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオンに対するモル比は約2.1である。第17の実施形態の第5の態様において、t-ブチルマグネシウムハライドはt-ブチルマグネシウムクロリドである。第18の実施形態は、実質的に純粋な2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを調製するためのプロセスであって:本明細書中で開示される関連する実施形態のいずれかにしたがって2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを得、そしてそのようにして形成された2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパン酸S-イソプロピルを結晶化すること、を含むプロセスに関する。第19の実施形態は、は、Rp-4またはSp-4の同位体標識されたアナログに関する。同位体標識されたアナログという用語は、重水素化アナログ、13Cで標識されたアナログ、または重水素化/13C標識アナログであるRp-4またはSp-4のアナログを指す。重水素化アナログという用語は、1H-同位体、すなわち水素Hが、2H-同位体、すなわち重水素Dで置換されている、本明細書中に記載される化合物を意味する。重水素置換は、部分的または完全であり得る。部分重水素置換とは、少なくとも1つの水素が少なくとも1つの重水素により置換されていることを意味する。例えば、Rp-4またはSp-4について、当業者は、次の部分重水素化アナログ式中、dnは、n個の重水素原子を表し、例えば、イソプロピル基についてはn=1~7であり、一方、フェニル基については、n=1~5である、ならびに下記で図示されるものを想定することができる。上記のメチル基は完全に重水素化されたものとして示されているが、部分重水素化形、例えば-CDH2および-CD2Hも可能であることが理解されるであろう。フラノースおよび塩基上の同位体標識も想定される。同様に、13Cで標識されたアナログおよび重水素化/13Cで標識されたアナログという用語は、13C同位体を多く含む本明細書中に記載される化合物を指し、約1.1の通常の天然存在度を超える富化の程度を意味する。一例に限定されず、以下の実施例は、本開示のよりよい理解を容易にするのに役立つ。合成態様ウリジンヌクレオシドを調製するために、パイロットプラントスケールですでに効率的に産生された3下記を参照のことのある3’,5’-ジアシル化アナログの合成において高度なトリベンゾイル化シチジン中間体を利用することができる国際公開第2006/031725号または米国特許第2006/0122146号どちらもそれらの全体として参照により組み込まれるを参照のこと。下記方法は、スケーラブルであり、かつ費用効果が優れていることが判明した。3’,5’-O-ジベンゾイル-2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチル-N4-ベンゾイルシチジン1は、国際公開第2006/031725号および国際公開第2008/045419号どちらも、その全体として参照により本明細書中に組み込まれるで開示される方法により得られる。1を70の水性酢酸で処理して、3’,5’-O-ジベンゾイル-2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチル-ウリジン2を形成する。ベンゾイルエステルを、多くの方法によって、アルコール性溶媒中アルコキシド、例えばメタノール中ナトリウムメトキシド、メタノールまたはエタノールアナログ中炭酸カリウム、メタノール中メチルアミン、ブチルアミンなどのアルキルアミンなどにより、同様に加水分解することができる。メタノール性アンモニアをより大規模な実験に関して選択した。ウリジン生成物3を結晶化により精製して、トリベンゾイル化シチジン1から70の収率を得ることができる。多くの文献の手順が、数倍当量の試薬を用いてホスホルアミデートを作製する異なるための経路および条件を詳細に記載している。例えば、McGuiganetalJMedChem20054835043515およびMcGuiganetalJMedChem2006497215を参照のこと。製造スケールの実験については、現在知られている例は1例しかなく、これはLehstenetalOrgProcessResDev20026819822Lehstenで開示されている。この参考文献では、著者等は、アミノ酸塩酸塩およびフェニルジクロロホスフェートをあわせてN-メチルイミダゾールとジクロロメタン中で反応させる、ワンポット手順の概念を導入している。後で、ヌクレオシドを添加して、所望の5’-O-ホスホルアミデート生成物を形成し、これにより、この場合では、式4により表される化合物が生成する。残念ながら、Lehstenの手順には欠点がある。例えば、Lehstenの手順は、必要であるよりはるかに過剰の試薬を用い、これによりクロマトグラフィー精製のコストや困難さが増大した。さらに、Lehstenは、低温の使用やヌクレオシドをゆっくりと添加することにより、参考文献と比較して、3’-ヒドロキシルよりも5’-ヒドロキシルに対する反応の選択性を制御することができることを示唆している。本明細書中で開示される化合物に関してLehstenの手順を使用して、約1~5のモノ置換3’-O-ホスホルアミデートジアステレオマー5および約10~30のビス置換生成物6を得た。3’-ジアステレオマーの極性は所望の5’-ジアステレオマー4と非常に類似していたので、クロマトグラフ分離は非常に困難であった。プロセスの拡大は、かなりの部分の極性の低い5’-ジアステレオマー4を廃棄するかまたは3’-ジアステレオマー5の高レベルの汚染を受けることなしにはほぼ不可能であった。最初の50gスケールアップで、結果として得られる生成物は、約3の3’-ジアステレオマー5汚染を含み、これは極性の低い5’-ジアステレオマー4と共溶出した。本明細書中で開示されるのは、より少ない量の試薬を使用する反応条件、およびより簡単なクロマトグラフ分離で不純物3’-O-ホスホルアミデートジアステレオマー5を選択的に除去し、これにより所望の5’-O-ホスホルアミデートジアステレオマーをはるかに高い純度で得る方法である4。試薬化学量論に関して、試薬の化学量論を系統的に変更し、結果をLehstenが報告したような粗反応のリンNMRによりモニタリングする研究を行った。より大きな成果をあげた実験において、所望の生成物の単離収率および純度を比較した。第1の5’-ヒドロキシルは、第2の3’-ヒドロキシルよりも速い速度で反応することが観察された。これは、全ての出発ヌクレオシドを消費する反応進行と、5’-および3’-一置換生成物4および5を5’,3’-ビス置換生成物6に変換する反応進行との間で競合的状況を生み出す。3’-一置換生成物は、5’-一置換生成物よりも速い速度でビス生成物になり、したがって、反応をビス置換生成物側へ進ませることにより3’-ジアステレオマー汚染レベルを減少させることが可能である。しかし、3’-ジアステレオマーを除去するための効果的な方法で、反応を最適化して、ビス置換体6に変換される5’-ジアステレオマーの多くを犠牲にすることがなく、より多くの所望の5’-ジアステレオマーを産生することができる。アミノ酸塩酸塩が非常に吸湿性であることも観察された。存在するいかなる水も同量のフェニルジクロロホスフェート試薬を消費するので、配慮してアミノ酸を実質的に無水に保たなければならないか、または使用前に実質的に無水にしなければならない。つまり、Lehstenは、アミノ酸とフェニルジクロロホスフェートとヌクレオシドの最適比がそれぞれ3.5:2.5:1であったことを報告した。約1.6:約1.3:約1のアミノ酸とフェニルジクロロホスフェートとヌクレオシドの最適比は、3’-ジアステレオマーを効率的に除去することができる条件下およびアミノ酸塩酸塩が実質的に無水である場合に最適であることが判明した。より少ない量の試薬を使用することにより、試薬副生成物および低レベルのビスジアステレオマーからの所望の生成物のクロマトグラフ分離の簡素化とあわせて、コスト削減が実現される。別の手順において、3の3’-ヒドロキシブロック化誘導体を、2ステップでt-ブチルジメチルシリルブロッキング基を用いて調製した。これを次いでその5’-ホスホルアミデート誘導体に変換した。シリル基を次いで除去して、3’異性体5または3’,5’-ビスホスホルアミデート6は存在しないのが望ましい。類似したアプローチがBorchおよびFries米国特許第5,233,031号により、全収率が低いアルキルホスホルアミデートについて示された。別の代替的アプローチは、直接合成を使用し、次いで3’-ジアステレオマー不純物5と所望の5’-ジアステレオマー4とを区別するのを助け、分離に役立つ化学を使用する。所望の5’-O-ホスホルアミデート4の遊離第2ヒドロキシルよりも、3’-O-ホスホルアミデート不純物5の遊離第1ヒドロキシルと選択的に反応する基が望まれた。結果として得られる5’-O-ブロック化3’-O-ホスホルアミデート生成物の極性を、所望の5’-O-ホスホルアミデート4から有意に変える保護基も望まれた。所望の5’-ジアステレオマー4は変化しないので、保護基を除去するために余分なステップは必要ない。化学的に改変された3’-ジアステレオマーはしたがって、より容易なクロマトグラフ分離または特殊なスカベンジング支持体もしくは抽出に分離を可能にする。特に、ブロッキング基tert-ブチルジメチルシリルtBDMSは、これらの基準を満たし、示された最初のものであり、その後、数キログラムのスケールで使用された。溶媒および塩基としてのピリジン中などのある条件下で、tBDMS基は、3’第2ヒドロキシル位置よりも第1ヒドロキシル位置で高い選択性で反応する。ホスホルアミデート反応は、N-メチルイミダゾールNMIを塩基として使用する。NMIの存在下で、シリル化は低選択的である。好ましくは、NMIの量を減少させなければならない。これは、反応溶液を1Nの塩酸で洗浄することにより、ホスホルアミデート反応後に容易に達成することができる。NMIおよび残存するヌクレオシドを除去し、モノおよびビス置換生成物ならびに試薬副生成物の粗混合物が残る。これを次いでピリジン中に溶解させ、tert-ブチルジメチルシリルクロリドで処理する。3’-一置換生成物5は数時間以下で5’-O-tBDMS-3’-O-ホスホルアミデート7に変換される。反応の進行はHPLCによってモニタリングすることができる。シリル化生成物7の極性は、ビス-ホスホルアミデート6よりも低く、クロマトグラフィーにより容易に除去することができる。この方法を用いて、3’-モノホスホルアミデート5のレベルを、シリル処理なしで1~3であるのに対して、5’-生成物4の0.1未満まで減少させることが可能であった。同様に、同じ条件下でジメトキシトリフェニルメチルクロリドDMT-C1での処理は、全く同じ働きをした。DMT含有分子は加熱または酸への暴露により明橙色に染色するので、TLCによりDMT反応生成物を同定することもより容易であった。前述の様に、多くの他の保護基を想定することもできる。反応条件および3’-不純物のスカベンジングはどちらも一般的方法であり、3’ヒドロキシルを有するヌクレオシドホスホルアミデートのほとんどに適用することができた。ホスホルアミデート部分は、アミノ酸エステルおよび芳香族アルコールの任意の組み合わせであり得る。ヌクレオシド部分は、5’ホスホルアミデートが5’-モノホスフェートとなり、さらに代謝されて5’-トリホスフェート形となり得る、任意のヌクレオシドであり得る。以下のスキームは、2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジンのイソプロピルL-アラネートフェニルホスホルアミデートを作製するために示された主な反応スキームであり、主生成物は所望の5’-O-ホスホルアミデート4、2つのジアステレオマーであり、副生成物は3’-O-ホスホルアミデート5、2つのジアステレオマーおよび3’,5’-ビス-O-ホスホルアミデート6、4つのジアステレオマーである。試薬を、調製法の部分で記載する様な化学量論比で添加する。薄層クロマトグラフィーTLC上でUV視覚化により判定して出発物質の約5が残存するまで反応を進行させる。また、UPLC/MSは、所望の5’-生成物と比較して、約10の3’,5’ビス-ホスホルアミデート6が形成されたことを示した。クエンチングおよび酸性水性仕上げ処理の後、シリル化のために有機層から粗残留物を調製した。記載された反応条件下で、シリル基は優先的に3’-O-ホスホルアミデートの遊離5’-ヒドロキシルと反応して、7を形成した。3’-O-ホスホルアミデートがUPLC/MSによりもはや検出されなくなるまで、反応を継続した。シリル化反応を完了させた後、所望の生成物をシリカゲル上クロマトグラフィーに付し、ジクロロメタン中メタノール1~4の勾配で溶出させる。所望の5’-モノホスホルアミデート4は最後に溶出する。調製方法実施例1.2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン3の調製10Lフラスコに、3’,5’-O-ジベノジル-2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチル-N4-ベンゾイルシチジン500g、0.874mol及び70酢酸水溶液7.5Lを加えた。溶液を20時間加熱還流した110°C。TLCは反応の完了を示した5メタノールのジクロロメタンDCM溶液で、Rf=0.6。混合物を雰囲気温度まで冷却し、水2Lで希釈した。2時間撹拌した後、生成した沈殿物を濾過して回収し、固体を水5Lで洗い、空気中雰囲気温度で12時間乾燥し、360g88を得た。このジベンゾイルウリジン中間体の全量を、新たに調製したメタノールアンモニア5.4L、約25に0°Cで加えて、次の工程で直接使用した。この温度を3時間維持した後、24時間で15°Cまで昇温させた。TLCは反応の完了を示した10メタノールのDCM溶液で、Rf=0.4。反応混合物をセライト層で濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物216gを得た。粗生成物を酢酸エチル325mLと合わせて、雰囲気温度で3時間撹拌した。生成した固体を濾過して回収し、酢酸エチル216mLで洗った。固体を真空下、雰囲気温度で4時間乾燥し、所望の産物をHPLC純度98.7で160g78得た。1H-NMRDMSO-d6δ11.44brs,1H,NH、7.95d,1H,C-6H、5.97d,1H,C-1’H、5.64d,1H,C-5H、3.84-3.77m,3H,C-5’-Ha,C-3’H.C-4’H、3.63-3.60m,1H,C5’-Hb、1.23d,3H,C-2’-CH3。ES-MSM-1259。実施例2.S-2-{[1R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロ-2H-ピリミジン-1-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸イソプロピルエステル4の調製別名:5’-O-イソプロピル-L-アラナート,フェニルホスホルアミジル-2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチル-ウリジンジアステレオマー混合物5Lの三口フラスコに、メカニカルスターラー、氷塩浴、内部温度計を取り付け、窒素雰囲気とした。フラスコに、L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩82.0g、0.490moles、及び無水ジクロロメタン0.80Lを加えた。これを撹拌しながら、ジクロロリン酸フェニル85.0g、0.40molesを一度に加えて撹拌した。内部温度を-5~5°Cに保ちながら、N-メチルイミダゾールNMI、250g、3.07molesのジクロロメタン250mL溶液を30分間かけて加えた。溶液は、この温度範囲で1時間撹拌させた。2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチル-ウリジン3、80.0g、0.307molesを0°Cで一度に加え、その後、反応フラスコを塩浴中でゆっくりと昇温させた。1時間経過時点で、内部温度は-2°Cに上昇した。1時間経過時点でのTLC5メタノールのDCM溶液では、50を超えるヌクレオシドが消費されていることが示された。塩浴を取り除き、さらに1時間かけて、反応フラスコを雰囲気温度にした。3時間後、そして全体では5時間経過時点でのTLCでは、開始時のヌクレオシドの95が消費されていることが示された。反応混合物は、メタノール100mLを加えて5分間撹拌することで、反応を停止した。反応混合物を1NのHCl2X500mL、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液2X500mLで洗った。分離した有機層を無水硫酸ナトリウム50gで乾燥させ、濾過した。溶液を減圧下そしてさらに高真空下で蒸発乾固させ、粗生成物を粘性油状物として得た170g。粗生成物のNMR31P及び1Hを測定した。31P-NMRでは、全リン酸同化の約1は3’異性体5の存在によるものであることが示された。粗生成物に無水ピリジン1700mLを加えた。粗混合物の含水量を同時蒸発で減らすため、溶媒は減圧下そしてさらに高真空下で蒸発させた。得られた油状物は、無水ピリジン500mLに再度溶解し、過剰量のt-ブチルジメチルシリルクロリド9.0g、60mMを加えた。反応物を雰囲気温度で撹拌した。反応の進行は、UPLC/MSで観察した。3時間後、3’不純物5は検出されなくなり、メタノール50mLを加えて反応を停止した。反応物を減圧下で油状物まで蒸発させた。残渣を酢酸エチル1.5Lに溶かし、1NのHCl2X500mL、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液2X500mLで洗った。有機層を無水硫酸ナトリウム50gで乾燥させ、濾過し、そして減圧下で蒸発させ、粗生成物を淡黄色油状物として得た。粗油状物は、同体積のジクロロメタンで希釈し、空気圧100psiで遠心圧縮モジュールの2.5Kgシリカゲルカートリッジに充填した。60psi、流速400mL/minでグラジエントポンプを用い、カートリッジを塩化メチレン4Lで洗い、続いて、濃度勾配1~4のメタノール塩化メチレン溶液48Lで洗った。主要な不純物ジ-イソプロピルアラニルフェニルホスフェート,3’,5’-ビスホスホルアミダート6、3’-ホスホルアミダート-5’-TBDMS付加物7のほとんどは、~3の濃度勾配で溶出した。所望の生成物は、3~4のメタノールで溶出した。生成物を含む画分は2つのロットに分別した。第1は少量の上流不純物を含み、第2は純粋な生成物である。第1群の画分は、3’,5’-ビスホスホルアミダートやジ-アラニルフェニルホスフェートなどのより極性の低い不純物上流不純物、及び多くの場合Rpジアステレオマーを少量含み、さらにカラム精製を行う必要がある。相対的な語句である上流と下流は、順相シリカゲルクロマトグラフィーでの溶出を意味し、上流異性体とは最初に溶出される異性体を意味する。第2群の画分は、有意な量の不純物を含んでおらず、わずかな残りのRPおよび大部分はSPジアステレオマーである。第2群は、その後、カラム精製を2度行った画分と合わせた。溶媒を減圧下で留去し、生成した白色の泡状物をさらに1時間乾燥させ0.20mmHg、42gの非純粋ロット31P-NMRで、上流異性体対下流異性体=4:1と38gの純粋ロット上流異性体対下流異性体=1:3を得た。非純粋ロットは同様の方法で再度カラム精製し、3.8gの97純粋な上流異性体取り除く画分と、36gの純粋生成物を4:1の割合で得た。2つのメインロットはDCMに溶解し、1つにまとめ、減圧下で蒸発させて乾燥し50°C、0.2mmHg、24h、74g45.7の純粋生成物4ジアステレオマー比48:51を白色の泡状物融点約75~85°Cとして得た。ジアステレオマー混合物の非結晶固体を作製するため、白色の泡状物74gをt-ブチルメチルエーテル750mL中で撹拌し、部分溶液と粘質固体残留物を得た。撹拌しながら、ヘプタン750mLをゆっくりと加え、粘質物のほとんどが白色固体になるまで、懸濁液をメカニカルスターラーで1時間撹拌した。固体をへらでこすりとり、懸濁したスラリーを濾過した。固体をヘプタン4X50mLで洗い、真空下で乾燥させ50°C、0.2mmHg、24h、約70~80°Cの広融点範囲を持つ白色の非結晶粉末64gを得た。1H及び31PNMRは構造と一致し、HPLCで純度99.8、ジアステレオマー比46:54であることが示された31PNMRでも確認された。4の固体混合物を作製する別の方法。クロマトグラフィーの後、残渣を2回、ジクロロメタンで同時蒸発させ5mL/g、35~40°C、35~45mTorrで24時間乾燥させた。泡状の残渣を250ミクロンのふるいにかけ、残留ジクロロメタンがヘッドスペースGCで400ppmを下回るまで、同様の条件でさらに乾燥させた。得られたオフホワイト~白色の非結晶微粉末は、ガラス転移温度の範囲が53.7~63.5°Cであった。異性体4混合物の特性評価:1H-NMRCDCl3δ10.05brs,1H,NH,SP、10.00brs,1H,NH,RP、7.49d,1H,C6-H,SP、7.36m,5H,C6-H,RP,芳香族、7.23-7.14m,6H,RP/SP,芳香族、6.18brd,2H,Cl’-H,RP/SP、5.63d,1H,C5-H,SP、5.58d,1H,C5-H,RP、5.01m,2H,CH-CH32,RP/SP、4.46-4.33m,8H,C-5’-H2,ala-NH,C3’-OH,RP/SP、4.12m,2H,ala-CH-CH3,RP/SP、4.01-3.85m,4H,C3’-H,C4’-H,RP/SP、1.39-1.22m,12H,allCH3,RP/SP。31P-NMRCDCl3δ3.60RP、3.20Spトリフェニルホスフェートでは17.80ppm。ES-MSMl530.2。元素分析:計算値カールフィッシャー法により測定した0.29の水分を含むC,49.75;H,5.54;N,7.90;F,3.58;P,5.84。実測値:C,49.50;H,5.44;N,7.85;F,3.62;P,6.05。異性体の分離に関する検討化合物4は、リンにおけるキラリティーのため、2つのジアステレオマーからなり、それらはSP-4及びRP-4と呼ばれる。立体化学的分析は、SP-4の単結晶X線分析に基づいて行った。RP-4及びSP-4はともに結晶性生成物を生成した。結晶化の方法の概略を以下に示す。実施例3.RP-4異性体の結晶化最初に溶出した極性の低いRP-4異性体3.8g、純度97を含むクロマトグラフィーの画分を、イソプロパノール36gに溶解し、濁りが生じるまでヘプタンで希釈した72g。溶液にシードを入れ、雰囲気温度で5時間撹拌した。生成した固体を減圧濾過で回収し、ヘプタンで洗い2X20mL、乾燥させ50°C、0.2mm、24h、2.3gの微小な白色の針状結晶体融点136.2~137.8°Cを得た。HPLCによる生成物質の純度は、99.02であった。RP-4:1H-NMRCDCl3δ9.10brs,1H,NH、7.36m,2H,o-芳香族、7.26-7.16m,4H,C6-H,m,p-芳香族、6.16brd,1H,Cl’-H、5.58d,1H,C5-H、5.01sept,1H,CH-CH32、4.52-4.47m,2H,C-5’-H2、4.10d,1H,C3’-H、4.02-3.76m,4H,ala-NH,C3’-OH,C4’-H,ala-CH-CH3、1.37-1.20m,12H,allCH3。実施例4.SP-4の調製と結晶化方法1:粗生成の4からの直接沈殿:撹拌したL-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩10.5g、61.5mmol、トルエン50mLと共沸による乾燥を2回行ったのジクロロメタン100mL溶液に、ジクロロリン酸フェニル7.5mL、50mmolを室温で加えた。混合物を-10°Cまで冷却し、その後、NMI30.5mL、384.3mmolの30mLジクロロメタン溶液を30分かけて添加した。添加終了後、混合物を-10~-15°Cで1時間撹拌した。上記混合物に、2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン310g、38.4mmolを一度に加え、混合物を-10°C以下で3時間撹拌し、その後、20°Cまでゆっくりと昇温させた6時間。混合物を同温度で一晩撹拌し15時間、その後、メタノール10mLで反応を停止した。溶媒を留去し、残渣をEtOAc200mLに再度溶解した。EtOAc層を、水100mL、1NHCl3x75mL、2NaHCO3水溶液50mL、及び食塩水50mLで洗った。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を高真空下で2時間乾燥させ、白色の泡状物22gを得た。上記の泡状物を33mLのDCMに溶解し、次に65mLのIPEイソプロピルエーテルを加え、飽和溶液とした。溶液を小型のセライトパッドで濾過し、濾液をSP-4シードとともに72時間、雰囲気温度で撹拌した約22°C:懸濁液を0°Cに冷却すると粗生成物がオイルアウトしたため、注意が必要である。白色の固体を濾過し、IPE20mLで洗い、乾燥して、4.58gの白色粉末を得た31PNMRの測定で、SP-4:RP-4=~85:15の混合物。上記固体を23mLのDCMに懸濁し、3時間還流した。混合物を室温まで冷却し、15時間撹拌した。白色固体を濾過し、4.5mLの低温のDCMで洗い、高真空下45°Cで乾燥させ、純粋なSP-4融点93.9~104.7°C、HPLC純度99.74を得た3.11g、ウリジンヌクレオシドから15.2。SP-4:1H-NMRCDCl3δ8.63brs,1H,NH、7.47d,1H,C6-H、7.30m,2H,o-芳香族、7.26-7.18m,3H,m,p-芳香族、6.18brd,1H,Cl’-H、5.70d,1H,C5-H、5.02sept,CH-CH32、4.53m,2H,C-5’-H2、4.11d,1H,C3’-H、3.97m,3H,C3’-OH,C4’-H,ala-CH-CH3、3.77brs,1H,ala-NH、1.39d,3H,C2’-CH3、1.37d,3H,ala-CH3、1.24d,6H,CH-CH32。方法2:粗生成の4からのオイルアウト:撹拌したL-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩20.6g、123mmol、トルエン75mLと共沸による乾燥を2回行ったのジクロロメタン200mL溶液に、ジクロロリン酸フェニル14.9mL、100mmolを室温で加えた。混合物を-10°Cまで冷却し、その後、NMI61.3mL、769mmolの60mLジクロロメタン溶液を30分かけて添加した。添加終了後、混合物を-10°C~-15°Cで1時間撹拌した。上記混合物に、2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン320g、76.9mmolを一度に加え、混合物を-10°C以下で3時間撹拌し、その後、20°Cまでゆっくりと昇温させた6時間。混合物を同温度で一晩撹拌し15時間、その後、メタノール10mLで反応を停止した。溶媒を留去し、残渣をEtOAc400mLに再度溶解した。EtOAc層を、水200mL、1NHCl3x100mL、2NaHCO3水溶液100mL、及び食塩水50mLで洗った。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を高真空下で2時間乾燥させ、白色の泡状物43gを得た。上記の泡状物を、メカニカルスターラーを備えた二口丸底フラスコ中で、86mLのEtOAcに溶解した。撹拌しながら、100mLのヘプタンをゆっくりと加え、懸濁液を1時間撹拌した。最上層をデカントし、残渣をさらにEtOAc/ヘプタン=2:3の溶液50mLとともに10分間撹拌し、その後デカントした。残渣を高真空下で乾燥させ、白色泡状物31gを得た。上記の泡状物を46mLのDCMに溶解し、次に95mLのIPEを加え、飽和溶液とした。溶液を小型のセライトパッドで濾過し、濾液をSP-4シードとともに72時間、雰囲気温度で撹拌した。白色の固体を濾過し、IPE30mLで洗い、乾燥して、7.33gの白色粉末を得た31PNMRの測定で、SP-4:RP-4=~85:15の混合物。上記固体を36mLのDCMに懸濁し、3時間還流した。混合物を室温まで冷却し、15時間撹拌した。白色固体を濾過し、7.5mLの低温のDCMで洗い、高真空下45°Cで乾燥させ、>99の純粋なSP-4を得た4.78g、ウリジンヌクレオシドから11.6。方法3:4粗生成物のシリカゲルへの充填:ジアステレオマー混合物と同様の方法で、約2.5gの2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン3から開始して、カラムクロマトグラフィーの工程の直前まで行い、5.0gの4粗生成物を生成した。粗生成物を10mLのDCMに溶解し、10gのシリカゲルを溶液に加えた。溶媒を留去し、ドライスラリーを得た。スラリーを40mLの50EtOAc/ヘキサンとともに15分間撹拌し、濾過した。シリカゲルをさらに10mLの50EtOAc/ヘキサンで洗った。次に、シリカゲルを15MeOH/DCM100mLで洗い、別に回収した。溶媒を留去し、高真空下で乾燥させ、4.0gの残渣泡状物を得た。残渣をDCM6mLに溶解し、次に、~9mLのIPEを加えて飽和溶液とした。その後、混合物を、SP-4シードとともに、雰囲気温度で緩やかに一晩撹拌した。白色固体を濾過し、IPE5mLで洗い、1.28gの生成物を得た。31PNMRでは、上記生成物は、SP-4:RP-4を77:23で含むことが示された。これを20mLのDCMから再結晶化し、>99の純粋なSP-4を0.75g得たウリジンヌクレオシドから約12。このSP-4の調製方法では、混合物で行ったシリル化の工程は不要で、全反応手順が上記に示されている。SP-4の単結晶及び多形型の特徴は、以下に記載する。方法4:40.0gの1:1混合物の4を、90mLのジクロロメタンに溶解した。ジイソプロピルエーテル70mLを上記溶液に加え、飽和溶液とした。ジイソプロピルエーテルの量は、生成物の純度により異なる場合がある。溶液に純粋なSP-4>99のシードを加え、混合物を室温で20時間、撹拌子を用いて緩やかに撹拌した固体の形成は2時間後に観察された。固体を濾過し、40mLのジイソプロピルエーテル/ジクロロメタン1:1混合液で洗い、乾燥して、白色固体を得た16.6g、NMR測定純度89.35のSP-4。この固体を83mLのジクロロメタンに懸濁し、3時間還流した。懸濁液を室温に冷却し、一晩撹拌した。固体を濾過し、10mLの低温のDCMで洗った。固体を真空下で乾燥させ、SP-413.1g、HPLC測定純度99.48を得た。この固体11gを330mLのDCMに高温条件で再度溶解した。溶液を室温まで冷却し、同温度で一晩置いた。結晶生成物を濾過して乾燥させ、10.5gのSP-4HPLC測定純度99.74を得た。SP-4及びRP-4化合物は、第9又は第10番目の実施形態に従って、ヌクレオシド保護又は無保護3をイソプロピル-アラニル-ホスホルアミダートCとC’の混合物、C、又はC’と反応させることで、下記式に示すように選択的に調製することができる。またはPDHowesetalNucleosidesNucleotidesNucleicAcids2003Vol22Nos58pp687689以下Howesでは、t-ブチルマグネシウムクロリドとの反応で2’-及び5’-ホスホルアミダートが得られることが示されている。それによると、3’-デオキシ-シチジンヌクレオシドを、S-2-[クロロ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸メチルエステルと、1.2当量のt-ブチルマグネシウムクロリドの存在下で反応させた場合、2’位の選択的なリン酸化が起きるが、さらに当量のt-ブチルマグネシウムクロリドを加えると、5’位の選択的なリン酸化が起きることが示されている。これは、HowesのScheme1に示される内容と対比する必要がある。実施例5-1.S-2-[4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルの調製撹拌した4-ニトロフェニルホスホロジクロリデート12.8g、50mmolのジクロロメタン100mL溶液に、フェノール及びトリエチルアミン7.7mL、55mmolのジクロロメタン100mL溶液を、-78°Cで20分かけて加えた。混合物を同温度で30分撹拌し、その後、L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩8.38g、50mmolのジクロロメタン100mL溶液を入れた別の丸底フラスコに0°Cで移した。混合物にさらにトリエチルアミン14.6mL、105mmolを15分かけて加えた。混合物を0°Cで1時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル150mLでトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、淡黄色の油状物を得た。粗生成化合物を、0~20酢酸エチル/ヘキサンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、ジアステレオマー比が約1:1の混合物である生成物を得た17g、収率83。31PNMR162MHz,DMSO-d6:δ-0.31、-0.47;1HNMR400MHz,DMSO-d6:δ8.31-8.27m,2H、7.51-7.37m,4H、7.27-7.19m,3H、6.70-6.63m,1H、4.85-4.78m,1H、3.97-3.86m,1H、1.21-1.19m,3H、1.11-1.09m,6H;MSESIm/z407M-1。31PNMR162MHz,CDCl3:δ-2.05、-2.10;1HNMR400MHz,CDCl3:δ8.22d,J=9.2Hz,2H、7.41-7.33m,4H、7.26-7.18m,3H、5.05-4.96m,1H、4.14-4.05m,1H、3.93-3.88m,1H、1.38d,J=6.8Hz,3H、1.22dd,J=6.23.0Hz,6H;MSESIm/z407M-1。実施例5-2.SP-4/RP-4の調製撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン130mg、0.5mmolの無水THF1.5mL溶液に、1.0Mのtertブチルマグネシウムクロリド1.05mL、1.05mmol、2.1当量溶液を、室温で5分間かけて加えた。30分後、S-2-[4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル異性体の1:1混合物、408mg、1mmolのTHF1.5mL溶液を、5分間かけて滴加した。混合物を室温で48時間撹拌し、その後、飽和NH4Cl水溶液20mLで反応を停止した。混合物を、酢酸エチル50mLと水20mLの間で分割した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、淡黄色の残渣が得られた。残渣を、0~2MeOH/ジクロロメタンの濃度勾配によるカラムクロマトグラフィーに供し、白色の泡沫状固体を得た125mg、収率47、SP-4/RP-4の混合比率約3.05:1.0。実施例6.S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルの調製及びクロマトグラフィー以外による分離L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩330g、1.97molを、トルエン2x400mLと減圧下で同時蒸発して予備乾燥し、真空オーブンで乾燥させた50°C、0.2mmHg、17h。撹拌した4-ニトロフェニルホスホロジクロリデート500.0g、1.953molの無水ジクロロメタン3.0L溶液に、フェノール183.8g、1.953mol及びトリエチルアミン300mL、2.15molのジクロロメタン900mL溶液を、内部温度-60°Cで3時間かけて加えた。混合物を同温度でさらに30分撹拌し、その後、2.5時間で-5°Cまで昇温させた。予備乾燥したアミノ酸エステルを、窒素雰囲気下、-5~0°Cで10分間かけて加えた。フラスコ内に残ったアミノエステル塩の残渣は、ジクロロメタン2x100mLですすいで、反応混合物に移した。混合物を0°Cで40分撹拌し、さらにトリエチルアミン571mL、4.10molを0°Cで40分間かけて加えた。混合物を0~10°Cで3時間撹拌し、続いて白色固体トリエチルアミン塩酸塩を濾過して取り除き、ジクロロメタン3x300mLですすいだ。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をメチルt-ブチルエーテルMTBE、4Lでトリチュレートした。これにより形成された付加的な固体の塩は、濾過して取り除き、MTBE3x150mLですすいだ。濾液を減圧下で濃縮し、透明な淡褐色の油状物を得た。残渣をヘキサン2x140mLで同時蒸発してMTBEの残留分をすべて取り除き、さらに真空下40°Cで2時間乾燥させた。乾燥した残渣をジイソプロピルエーテルIPE、1.1Lと混合し、氷水浴中5°Cで撹拌した。生成物の所望のSP異性体の種結晶を溶液に少量加え、5°Cで22時間以上撹拌し、中粘度のスラリーを形成した。これをフリーザー-10°C中に44時間放置した。沈殿した生成物を濾過で回収し、あらかじめ冷却したIPEとヘキサンの混合溶媒1:1、3x190mLですすいだ。固体を真空下0.5mmHg、雰囲気温度で恒量になるまで乾燥し、227.23g収率:28.5の白色粉末固体を得た。2つのジアステレオマーの比率は、31PNMR162MHz、DMSO-d6、δ-0.31SP、-0.47で測定したところ、SP:RPが9.65/1であった。生成物は、IPE840mLに60°Cの浴槽で加熱しながら溶解させて再結晶化させた。上記溶液を室温で1時間撹拌し、その後、Sp異性体の種結晶を少量加えた。2時間以内に白色粉末固体の形成が見られ、フラスコをフリーザー-10°C中に16時間置いた。得られた白色の微細な結晶性固体を濾過し、あらかじめ冷却したIPE3x50mLで洗い、真空下雰囲気温度、0.5mmHgで恒量になるまで乾燥させ、白色で毛羽状の固体が得られた177.7g、全体収率22又はSP異性体の理論収率に基づく全体収率44。P-NMRによるジアステレオマー比は48/1で、融点は62~66°C。31PNMR162MHz,DMSO-d6:δ-0.31;1HNMR400MHz,DMSO-d6:δ8.30-8.27m,2H、7.49d,J=8.8Hz,2H、7.41-7.37m,2H、7.23-7.19m,3H、6.66dd,J=13.6,10.0Hz,1H、4.86-4.78m,1H、3.97-3.86m,1H、1.19d,J=7.2Hz,3H、1.10d,J=6.4Hz,6H;31PNMR162MHz,CDCl3:δ-2.05;162MHz,DMSO-d6:δ-0.31;1HNMR400MHz,CDCl3:δ8.22d,J=9.2Hz,2H、7.41-7.33m,4H、7.26-7.18m,3H、5.05-4.96m,1H、4.14-4.05m,1H、3.93-3.88m,1H、1.38d,J=6.8Hz,3H、1.22dd,J=6.23.0Hz,6H;1HNMR400MHz,DMSO-d6:δ8.30-8.27m,2H、7.49d,J=8.8Hz,2H、7.41-7.37m,2H、7.23-7.19m,3H、6.66dd,J=13.6,10.0Hz,1H、4.86-4.78m,1H、3.97-3.86m,1H、1.19d,J=7.2Hz,3H、1.10d,J=6.4Hz,6HMSESIm/z407M-1。8SP-異性体の立体構造は、単結晶X線結晶構造解析により確認されている。詳細は下記を参照。実施例7.ジアステレオマー混合物S-2-[4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルのSFCによる分離RP-異性体を多く含むジアステレオマー混合物の試料4.8gを、ChiralPakAD-H2x15cmカラムを用いたSFCに供し、二酸化炭素中35イソプロパノールを用いて100barで溶出した。4mLのインジェクション量に対して、試料の濃度を17mg/mLのメタノール溶液とした。RP-異性体[S-2-[R-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル]が先に溶出した。複数回操作して適切な画分を1つにまとめ、減圧下で濃縮し、2.9gのRP-異性体[S-2-[R-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル]が淡黄色の粘性の油状物として得られ、1.9gのSP-異性体[S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル]が白色固体として得られた。RP-異性体の解析データは、上記の結晶化方法により分離した生成物と同様である。S-2-[R-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、RP-異性体の解析データ:31PNMR162MHz,DMSO-d6:δ-0.47;1HNMR400MHz,DMSO-d6:δ8.30-8.27m,2H、7.46-7.38m,4H、7.27-7.20m,3H、6.68dd,J=13.8,10.2Hz,1H、4.86-4.77m,1H、3.97-3.86m,1H、1.20d,J=7.2Hz,3H、1.10dd,J=6.2,2.2Hz,6H;MSESIm/z407M-1。実施例8-1.2-[4-クロロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル±ラセミ体の調製:撹拌した4-クロロ-フェニルホスホロジクロリデート2.45g、10.0mmolのジクロロメタン20mL溶液に、フェノール0.94g、10mmol及びトリエチルアミン1.56mL、11mmolのジクロロメタン20mL溶液を、-78°Cで20分間かけて加えた。混合物を同温度で30分撹拌し、その後、L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩1.67g、10mmolのジクロロメタン50mL溶液を入れた別の丸底フラスコに0°Cで移した。混合物に、さらにトリエチルアミン2.92mL、21mmolを15分間かけて加えた。混合物を0°Cで1時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル30mLでトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、淡黄色の油状物を得た。粗生成化合物を、10~20酢酸エチル/ヘキサンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、ジアステレオマー比が約1:1の混合物である生成物を得た2.0g、収率50。31PNMR162MHz,CDCl3:δ-1.58,-1.62;1HNMR400MHz,CDCl3:δ7.06-7.51m,8H、7.15-7.28m,2H、7.29-7.47m,2H、4.0-4.10m,1H、3.82-3.88m,3H、1.35-1.36dd,6H;1.19-1.22m,3H。MSESIm/z398M-1。得られた生成物は、上記のように、抽出、結晶化、又はクロマトグラフィーにより精製する。実施例8-2.S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2イルメトキシフェノキシ-ホスホリルアミノプロパノエート4の調製撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン3、2.6g、10mmolの無水THF50mL溶液に、1.7Mのtertブチルマグネシウムクロリド12.4mL、21mmol、2.1当量溶液を、室温で15分間かけて加えた。30分後、2-[4-クロロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルのラセミ体4.08g、l0mmolのTHF15mL溶液を、10分間かけて滴加した。混合物を室温で72時間撹拌した。TLCで純物質と同時展開させたところ、出発時のヌクレオシドと比べて、およそ5の所望の生成物が形成されたことが示された。実施例9-1.2-[2-クロロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル±ラセミ体の調製撹拌した2-クロロ-フェニルホスホロジクロリデート9.8g、40mmolのジクロロメタン80mL溶液に、フェノール3.76g、40mmol及びトリエチルアミン6.16mL、44mmolのジクロロメタン80mL溶液を、-78°Cで20分間かけて加えた。混合物を同温度で30分撹拌し、その後、L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩6.7g、40mmolのジクロロメタン150mL溶液を入れた別の丸底フラスコに0°Cで移した。混合物に、さらにトリエチルアミン11.6mL、84mmolを15分間かけて加えた。混合物を0°Cで1時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル100mLでトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、淡黄色の油状物を得た。粗生成化合物を、10~20酢酸エチル/ヘキサンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、ジアステレオマー比が約1:1の混合物である生成物を得た11.3g、収率72。31PNMR162MHz,CDCl3:δ-1.58,-1.61;1HNMR400MHz,CDDCl3:δ7.06-7.51m,8H、5.02-5.94m,1H、4.10-4.16m,1H、3.31-3.94m,1H、1.18-1.35m,3H、1.38-1.40dd,6H;MSESIm/z398M-1。得られた生成物は、上記のように、抽出、結晶化、又はクロマトグラフィーにより精製する。実施例9-2.S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2イルメトキシフェノキシ-ホスホリルアミノプロパノエートの調製撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン3、2.6g、10mmolの無水THF50mL溶液に、1.7Mのtertブチルマグネシウムクロリド12.4mL、21mmol、2.1当量溶液を、室温で15分間かけて加えた。30分後、2-[2-クロロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルラセミ体4.08g、l0mmolのTHF15mL溶液を、10分間かけて滴加した。混合物を室温で72時間撹拌した。TLCで純物質と同時展開させたところ、出発時のヌクレオシドと比べて、およそ5~10の所望の生成物が形成されたことが示された。実施例10-1.2-[2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル±ラセミ体の調製撹拌したペンタフルオロフェニルホスホロジクロリデート6.0g、20mmolのジクロロメタン40mL溶液に、フェノール及びトリエチルアミン3.08mL、22mmolのジクロロメタン40mL溶液を、-78°Cで20分間かけて加えた。混合物を同温度で30分撹拌し、その後、L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩3.35g、20mmolのジクロロメタン100mL溶液を入れた別の丸底フラスコに0°Cで移した。混合物に、さらにトリエチルアミン5.84mL、42mmolを15分間かけて加えた。混合物を0°Cで1時間撹拌し、その後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル60mLでトリチュレートし、白色固体を濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、ジアステレオマー比が約1:1の混合物である淡黄色の油状物を得た。31PNMR162MHz,CDCl3:δ-0.49,-0.58。得られた生成物は、上記のように、抽出、結晶化、又はクロマトグラフィーにより精製する。実施例10-2.S-2-[2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルのジアステレオマー混合物の調製と、S-2-[S-2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル単一ジアステレオマーの結晶化誘導動的分解による複数の産物を伴う単離メカニカルスターラーと低温温度計を備えた2Lの三口丸底フラスコに、60g284mmolのジクロロリン酸フェニルと300mLの無水ジクロロメタンを加えた。溶液を窒素雰囲気下で0°Cに冷却し、イソプロピルアラネート塩酸塩減圧絶乾したもの、47.7g、284mmolを固体の状態で素早く加えた。混合物をドライアイス-アセトン浴で撹拌し、-55°Cに冷却した。トリエチルアミン60.32g596mmolのジクロロメタン300mL溶液を、添加用漏斗を用いて70分間かけて加えた。白濁した混合物を-55°Cで30分撹拌し、その後、1.5時間で-5°Cまでゆっくりと昇温させた。あらかじめ冷却室温した、ペンタフルオロフェノール52.42g、284mmol及びトリエチルアミン32.11g、317mmolを180mLのジクロロメタン中に混合したものを、添加用漏斗を用いて1時間かけて0°Cで混合物に加え、得られた混合物を0°Cで4時間撹拌した。白色の沈殿物TEAHClを濾過して取り除き、ジクロロメタン3x50mLですすいだ。濾液を減圧下で濃縮し、白色の固体残渣を880mLのt-ブチルメチルエーテルTBME中で1時間、室温でトリチュレートした。白色の懸濁液を濾過し、固体をTBME3x150mLですすいだ。固体を酢酸エチル600mLと水150mLの混合物中に溶解させた。有機層を分離し、水3x100mLで洗った。有機層をMgSO4で乾燥させ、濃縮し、29.92g66mmolの生成物X線結晶構造解析によりSP-異性体と確認された;下記参照が白色の羽状固体として得られた。上記TBMEのトリチュレーションの濾液を減圧下で濃縮して白色の固体残渣とし、この固体を450mlの酢酸エチルヘキサン混合物20:80、v/v中で75分間、室温でトリチュレートした。固体固体1を濾過して回収し、20酢酸エチルのヘキサン溶液75mL、2x30mLですすいだ。母液を濃縮してオフホワイトの固体を得て、これを20酢酸エチルのヘキサン溶液185mL中で17時間、室温でトリチュレートした。白色固体固体2を濾過して回収し、20酢酸エチルのヘキサン溶液2x10mLですすいだ。固体1と固体2を1つにまとめ、1.2Lの酢酸エチルに溶解した。溶液を水3x150mL、食塩水50mLで洗い、MgSO4で乾燥させた。溶液を減圧下で濃縮し、72.8g161mmolの純粋な生成物を得た。生成物の合計は102.72g226mmol、80となった。1HNMRCDCl3,400MHzδ:.7.38-7.33m,2H、7.27-7.24m,2H、7.23-7.19m,1H、5.04hept,1H、4.18-4.09m,1H、4.01-3.96m,1H、1.45d,3H、1.25dd,6H。31PNMRCDCl3,162MHzδ;-0.50。実施例10-3.S-2-[2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルのジアステレオマー混合物の調製と、S-2-[S-2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル単一ジアステレオマーの結晶化誘導動的分解による単一の産物での単離低温温度計とメカニカルスターラーを備えた1Lの乾燥した三口フラスコに、フェニルホスホロジクロリデート25g、118.5mmolを入れた。無水ジクロロメタン125mLを加え、溶液を0°Cに冷却した。アラニンエステル塩絶乾したもの19.86g、1当量を窒素雰囲気下で撹拌しながら素早く加えた。溶液を約-50°C内部温度まで冷却したアセトン-ドライアイス浴、窒素雰囲気中。トリエチルアミン25.2g、2.1当量のDCM125mL溶液を、添加用漏斗を用いて0.5時間かけて-50°Cで滴加し、得られた白色スラリーを約-50°Cで0.5時間撹拌した。混合物を1.5時間で0°Cまで昇温させ、あらかじめ混合して冷却したペンタフルオロフェノール21.82g、1当量及びTEA13.2g、1.1当量のDCM75mL溶液を、添加用漏斗を用いて0.5時間かけて0°Cで加えた。混合物を0°Cでさらに4時間撹拌した。混合物をブフナー漏斗で濾過し、回収した固体のトリエチルアミン塩酸塩をDCM3x40mLですすいだ。濾液を31PNMRで測定し比率は約1.14:1でSP-ジアステレオマーが多い-低磁場ピーク、等重量で2つに分けた。そのうちの一つを減圧下で濃縮した。白色の固体残渣31gを、EtOAcとヘキサンの混合物150mL、20:80、v/v中、室温で17時間トリチュレートし、溶解性の低いSP異性体の動的分解の時間をおいた。白色スラリーを濾過し、固体を20EtOAcのヘキサン溶液2x25mLですすいだ。固体22.58gを1H-NMR及び31P-NMRで測定し、トリエチルアミン塩酸塩が混入した単一異性体としての生成物を含むことが示された。固体を310mLのEtOAcと100mLの水に溶解して分離した。有機層を分離した後、水層をEtOAc50mLで逆抽出した。有機層を合わせて、水3x80mL、食塩水50mLで洗い、MgSO4で乾燥させた。溶液を減圧下で濃縮し、その後、高真空下、室温で恒量になるまで乾燥させ、白色固体として17.36gの生成物を反応物の半分から得た。収率は64となった。上記からの母液を濃縮し、31P-NMRの結果、試薬を1:1.2の比率所望のもの/不要のもので含む粘質の残渣7.89gが得られた。実施例10-4.S-2-[2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルの調製DCM11.5Lを、洗浄された乾燥したガラス製反応器に入れた。ジクロロリン酸フェニル2.3kg、10.9molを窒素雰囲気下で反応器に加えた。その後、溶液を0°Cに冷却した。次に、L-アラニンイソプロピルエステル塩酸塩1.83kg、10.9molを一度に加え、30分撹拌を続けた。ドライアイス/アセトン浴を用いて、反応物を内部温度-50°Cに冷却した。内部温度を-40~-50°Cに保ち、TEA2.1当量、3.17LのDCM11.5L混合物を上記反応液に8時間かけてゆっくりと添加した。添加終了後、反応液を同温度範囲に約1時間置いた。混合物を約4時間で0°Cまで昇温させた。その間に、別の反応器にDCM6.9Lを入れ、次にペンタフルオロフェノール2.0Kg、10.9molを窒素雰囲気下で加えた。溶液を0°Cに冷却し、その後、TEA1.1当量、1.65Lをペンタフルオロフェノール溶液発熱性に約2時間かけて加えた。次に、得られた溶液を、ジクロロリン酸フェニルとアミノ酸エステルを含む第1の溶液に、温度を0~5°Cに保ちながら約7時間かけてゆっくりと添加した。添加終了後、同温度範囲で約4時間撹拌を続けた。反応の進行はHPLCで観察した。残存するペンタフルオロフェノールが5を下回った時点で反応を停止した。キラルHPLCでは、この時点での生成物がジアステレオマーの均等な混合物であることが示された。反応懸濁液をヌッチェフィルターで濾過し、懸濁したトリエチルアミン塩酸塩の大部分を除去した。芒硝を過剰量のDCM9Lで洗い、洗浄液を主濾液に加えた。濾液を減圧下35°Cで濃縮し、固体残渣を得た。固体残渣をヘキサン4Lと同時蒸発させ、残留DCMレベルをさらに低下させた。この固体残渣に20MTBE/ヘキサン6Lを加え、懸濁液を雰囲気温度で約17時間撹拌し、HPLCで観察した。溶液のpHは、残留TEAにより塩基性のままであった。この間に動的分解が起こり、沈殿した固体は所望のSP-4異性体であり、上清はSP-4とRP-4の平衡状態で維持された。懸濁液をヌッチェフィルターで濾過し、まだTEA塩酸塩が混入している所望の生成物の固体を、5MTBE/ヘキサン1Lで洗った。固体を酢酸エチル35Lに溶解し、溶液を水3x35L及び食塩水10Lで洗い、その後、溶液を固体硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、反応器温度を44°C未満に維持して減圧下で濃縮した。固体残渣をヘキサン4Lと同時蒸発させた。反応器を雰囲気温度にし、5MTBE/ヘキサン5Lを加えた。濃い懸濁液を15分撹拌し、その後、固体を濾過して回収した。回収した固体をヘキサン2.5Lで洗い、高真空下、雰囲気温度で恒量になるまで乾燥させ、最終生成物SP-4を白色固体として2.6kg53得た;HPLC純度99.5、その他RP-4が0.4。実施例10-5.S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2イルメトキシフェノキシ-ホスホリルアミノプロパノエートの調製撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン3、2.6g、10mmolの無水THF50mL溶液に、1.7Mのtertブチルマグネシウムクロリド溶液12.4mL、21mmol、2.1当量を、室温で15分間かけて加えた。30分後、2-[2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステルの粗生成ラセミ体4.08g、l0mmolのTHF15mL溶液を、10分間かけて滴加した。混合物を室温で72時間撹拌した。TLCで純物質と同時展開させたところ、出発時のヌクレオシドと比べて、およそ40~50の所望の生成物が形成されたことが示された。実施例10-6.S-2-[S-2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル及び結晶化のみによる精製を用いたS-イソプロピル2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2イルメトキシフェノキシ-ホスホリルアミノプロパノエートSP-4の調製撹拌した310g、38.46mmol、真空下50°Cで20時間乾燥の無水THF165mL溶液に、1.7MのtertブチルマグネシウムクロリドのTHF溶液47.5mL、80.77mmolを、フラスコを冷水浴5°Cに入れたまま、窒素雰囲気下で20分間かけて加えた。添加終了後、冷浴から取り出し、白色の懸濁液を室温20°Cで30分撹拌した。その後、S-2-[S-2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェノキシ-フェノキシホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル20.9g、46.11mmolの無水THF165mL溶液を反応混合物に30分間かけて加えた。混合物を室温20°Cで3.5時間撹拌した。さらに撹拌を1.5時間続け、この段階では、>95の変換、及び3’,5’-ビス-ホスホルアミダートの不純物強度に2時間の時点から顕著な変化がないことが、TLCによって示された。反応混合物を飽和NH4Cl水溶液10mLで反応停止し、その後、溶媒を25°Cで留去した。残渣を酢酸エチル400mLと飽和塩化アンモニウム60mL/水20mLとで分離した。有機層を分離し、飽和塩化アンモニウム80mLと水3x60mLで洗った。この時点までの水層を別に取った。有機層を5炭酸ナトリウム水溶液3x50mL及び水2x60mLで洗った。第1の水層をさらに酢酸エチル100mLで抽出し、水2x20mLで洗い、その後、炭酸ナトリウム洗浄液から得た水層を同じ酢酸エチル抽出液で抽出した。有機層を水2x20mLで洗い、主ロットと合わせた。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮し、泡沫状の固体19.32gを得た。残渣を60mLのジクロロメタンに溶解し約5分で白色固体が析出し、固形物が形成された、その後、25mLのIPEを加えた。懸濁液を室温で2時間撹拌した。白色固体を濾過し、低温0°CのIPE/ジクロロメタンの1:1混合物20mLで洗い、乾燥して、11.77g収率58の生成物を非結晶白色固体として得た。上記固体をジクロロメタン350mLに再度溶解し、濾過し、大気圧浴温45°Cで~120mLまで蒸発させた。溶液を室温21°Cで20時間放置した。白色結晶性固体ジクロロメタン溶媒和物を濾過して回収し、低温0°Cのジクロロメタン10mLで洗い、高真空下、雰囲気温度で4時間乾燥させ、純粋な非溶媒和生成物10.62g、収率52を白色の針状物として得た。HPLC純度は99.8となった。スペクトル特性は、本明細書に記載する値と一致した。実施例10-7.S-2-[S-2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル、異なる反応条件及び検査、並びに結晶化のみによる精製を用いたS-イソプロピル2-S-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチルテトラヒドロフラン-2イルメトキシフェノキシ-ホスホリルアミノプロパノエートSP-4の調製撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオン3、5.0g、19.1mmol、真空下50°Cで20時間乾燥の無水THF75mL懸濁液に、1.7MのtertブチルマグネシウムクロリドのTHF溶液23.7mL、40.35mmolを、添加用漏斗を用いて、30分間かけて-5°Cで加えた。白色の懸濁液を同温度で30分撹拌し、その後、雰囲気温度20°Cに昇温させ、同温度でさらに30分撹拌した。反応混合物を5°Cに冷却し、その後、S-2-[S-2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェノキシ-フェノキシホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル10.45g、23.06mmolのTHF50mL溶液を30分間かけて加えた。混合物を5°Cで18時間撹拌し、-5°Cに冷却し、その後、2NHCl25mLで反応を停止した。トルエン100mLを混合物に加え、室温に昇温させた。20分後、層を分離した。有機層を1NHCl2x10mL、水10mL、5Na2CO3水溶液4x10mL、水2x10mL、及び食塩水10mLで洗った。すべての水層をトルエン20mLで再抽出し、5Na2CO3水溶液2x5mL、水10mL、及び食塩水5mLで洗った。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、約20mLまで蒸発させた。ジクロロメタン20mLを溶液に加え、混合物を室温で18時間撹拌した。固体を濾過し、MTBE/DCMの1:1混合物2x10mLで洗い、高真空下で乾燥させ、白色固体7.7gを得た。この時点での固体のHPLCは、SP-4が98.21、未反応の3が0.18、3’,5’-ビス-ホスホルアミダート不純物が0.67であった。上記SP-4の固体をジクロロメタン77mL、圧力容器で55°Cに加熱に再度溶解し、室温で20時間放置した。結晶性固体を濾過し、低温のジクロロメタン5mL、0°Cで洗い、高真空下で乾燥して、純生成物を白色固体として得た6.9g、収率68、HPLC純度99.79。C又はC’の調製及び精製により、以下の実施例に示すように、SP-4又はRP-4を直接得ることができる。実施例11.SP-4の調製32mgスケール:撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン332mg、0.12mmolの無水THF1mL溶液に、t-ブチルマグネシウムクロリド0.26mL、0.26mmol、2.1当量の1M溶液を室温で3分間かけて加えた。30分後、S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、SP-異性体のTHF0.5mL溶液を3分間かけて滴加した。混合物を室温で42時間撹拌し、その後、飽和NH4Cl水溶液10mLで反応を停止した。混合物を酢酸エチルと水で分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を、0~4メタノール/ジクロロメタンの濃度勾配でクロマトグラフィーに供し、SP-4を泡沫状の固体として得た29mg、収率44.5。1H及び31PNMRは、本明細書に記載するものと一致した。実施例12.SP-4の調製2.6gスケール、クロマトグラフィーなし:撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン2.6g、10mmolの無水THF50mL溶液に、t-ブチルマグネシウムクロリド12.4mL、21mmol、2.1当量の1.7M溶液を室温で15分間かけて加えた。30分後、S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、SP-異性体、4.08g、10mmolのTHF15mL溶液を10分間かけて滴加した。混合物を室温で60時間撹拌し、その後、飽和NH4Cl水溶液20mLで反応を停止した。混合物を酢酸エチル150mL、続いて10Na2CO3水溶液3x20mLと水20mLで分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧化で濃縮し、淡黄色の残渣3.8gを得た。残渣をジクロロメタン7.6mLに溶解させ、その後、室温で20時間撹拌した。白色固体を濾過し、1:1のIPE/ジクロロメタン5mLで洗い、真空下で乾燥させ、純生成物を白色固体として得た1.85g、収率35。実施例13.NaHMDSを用いたSP-4の調製:撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン71mg、0.27mmolの無水THF2.0mL溶液に、2.0MのナトリウムビスアミドNaHMDSのTHF270μL、0.54mmol溶液を-78°Cで2分間かけて加えた。30分後、S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、SP-異性体、111mg、0.27mmolのTHF1mL溶液を混合物に加えた。反応混合物を同温度で2時間撹拌し、その後、-20°Cに昇温させ、同温度でさらに20時間撹拌した。TLCでは、未反応のヌクレオシド出発物質が~30であることが示された。そのため、さらに0.5当量の試薬55mg、0.14mmolのTHF0.5mL溶液を反応混合物に加え、さらに6時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、その後、酢酸エチルと水で分離させた。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、淡褐色の残渣を得た。粗生成物を、0~5メタノール/ジクロロメタンの濃度勾配でカラムクロマトグラフィーに供し、SP-422mg、収率15、3’-ホスホルアミダート5、SP-異性体、11.5mg、収率16、及びビスホスホルアミダート6、SP、SP-異性体、12.6mgを得た。実施例14.RP-4の調製260mgスケール:撹拌した1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン260mg、1mmolの無水THF6mL溶液に、tert-ブチルマグネシウムクロリド1.23mL、2.1mmol、2.1当量の1.7M溶液を室温で5分間かけて加えた。30分後、S-2-[R-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、RP-異性体のTHF3mL溶液を3分間かけて滴加した。混合物を室温で96時間撹拌し、その後、飽和NH4Cl水溶液10mLで反応を停止した。混合物を酢酸エチル50mLと水2x20mLで分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧化で濃縮し、淡黄色の残渣490mgを得た。残渣を、0~5メタノール/ジクロロメタンの濃度勾配でクロマトグラフィーに供し、白色固体の生成物を得た160mg、収率30。SP-4又はRP-4の調製は、以下の実施例に示すように、3’-保護化した3を適切な試薬C又はC’、若しくはC及びC’を含む混合物と反応させることで実施することもできる。実施例15.3aを合成中間体として用いたSP-4の調製実施例15-1.5’-O-tert-ブチルジメチルシリル-2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン9の合成:撹拌した2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジン3、81.1g、312mmolの無水ピリジン750mL溶液に、TBDMSCl103.19g、685.6mmolの無水ピリジン500mL溶液を45分間かけて雰囲気温度で滴加した。反応物を雰囲気温度で24時間撹拌した。メタノール85mLを反応混合物に加え、10分撹拌し、その後、溶媒を減圧化で留去した。温水45°C1Lを反応物に加え、混合物を酢酸エチル2x500mLで抽出し、水1x500mLで洗った。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。酢酸エチルを留去し、得られた残渣をトルエン2x500mLと同時蒸発させ、粗生成の9を白色の泡状物として得た。収量=116.9g定量。1HNMRCDCl3,300MHz:δ0.1s,6H、0.91s,9H、1.22d,3H,J=21Hz、2.50s,2H、3.75-4.05m,4H、5.54d,1H,J=9Hz、5.73s,1H、6.0d,1H,J=18Hz、7.81d,1H,J=9Hz、8.57br,s,1H、11.1s,1H。実施例15-2.5’-O-tert-ブチルジメチルシリル-3’-O-レブリニル-2’-デオキシ-2’-フルオロ2’-C-メチル-ウリジン10の合成:撹拌したヌクレオシド9116.9g、312.1mmolのDCM1L溶液に、DMAP30.5g、249.7mmolを加え、これを室温で20分撹拌した。無水レブリン酸133.6g、642.3mmolのDCM200mL溶液を混合物に加え、24時間撹拌した。混合物のTLCは反応の完了を示した。冷水500mLを加え、混合物を20分撹拌した。層を分離し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液2x250mLで洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、その後、溶媒を減圧化で留去し、黄色油状物を得た。粗収量:197.6g135。この物質をそのまま次の工程に用いた。1HNMRCDCl3,300MHzδ0.11s,6H、0.94s,9H、1.34d,3H,J=21Hz、2.22s,3H、2.6-2.89m,4H、3.72m,1H、4.01d,1H,J=12Hz、4.23d,1H,J=9Hz、5.33dd,1H,J=15Hz、5.73d,1H,J=6Hz、6.26d,1H,J=15Hz、8.12d,1H,J=12Hz、8.72br,s,1H。実施例15-3.3’-O-レブリニル-2’-デオキシ-2’-フルオロ2’-C-メチル-ウリジン3aの合成:粗生成の10197.6g、~312.1mmolをDCM1Lに溶解し、TEA.3HF50.3g、312.1mmolを加え、雰囲気温度で一晩撹拌した。混合物のTLCは、反応の約50の完了を示した。さらに当量のTEA.3HF50.3g、312.1mmolを加え、反応混合物を6時間撹拌した。この時点でのTLCでは、未反応の出発物質が約10であった。さらに0.25当量のTEA.3HF12.5g、78.0mmolを加え、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、黄色油状物を得た。すべての処理分から得た粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し0~2MeOHのDCM溶液、124.1gの3’-レブリン酸塩を白色の泡状固体として得た2’-デオキシ-2’-フルオロ-2’-C-メチルウリジンから3工程で精製収率90。1HNMR:CDCl3,400MHzδ1.55d,3H,CH3,J=20Hz、2.36s,3H,CH3、2.8-3.03m,5H,CH2CH3、3.91-3.96dd,1H,CH、4.2-4.25m,1H,CH’、4.34dd,1H,CH,J=8Hz、5.25dd,1H,J=16Hz、5.93d,1H,J=8Hz、8.20d,1H,J=8Hz、9.18s,1H。実施例15-4.S-2-{[1R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロ-2H-ピリミジン-1-イル-4-R-フルオロ-3-4-オキソペンタノイル-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸S-イソプロピルエステル11の立体選択的合成:0°Cに冷却したヌクレオシド3a、1.00mmol、358mgの5mL無水THF溶液に、tBuMgCl1.7MのTHF溶液、2当量を加え、雰囲気温度まで昇温させ、30分撹拌した。混合物に試薬キラル純度約97S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、SP-異性体408mg、1.00mmol、1.00当量を一度に加え、室温で撹拌した。16時間後、残った出発物質は~30となった。反応混合物を飽和NH4Cl水溶液10mLで反応停止し、水相を酢酸エチル3x25mLで抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固し、淡黄色泡状物500mgを得た。これを、2~5メタノールの塩化メチレン溶液を用いてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、Pキラル純度約97の白色泡状物の生成物275mgと、未反応の出発物質162mgを得た。消費された出発物質から、収率は76となった。31PNMRCDCl3,162MHz:3.7ppm;1HNMRCDCl3,400MHz:δ1.22dd,6H,J=6.4Hz、1.37s,3H、1.58s,3H、2.18s,3H、2.63-2.9m,4H、4.0d,1H,J=8Hz、4.2-4.33m,1H、4.57d,1H,J=8Hz、4.96-5.00sept,1H、5.2dd,1H,J=9Hz、5.42d,1H,J=8Hz、6.19d,1H,J=18Hz、7.15-7.35m,5H、7.5d,1H,J=5.6Hz、8.2br,s,1H。実施例15-5.S-2-{[1R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロ-2H-ピリミジン-1-イル-4-R-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イルメトキシ]-フェノキシ-ホスホリルアミノ}-プロピオン酸S-イソプロピルエステルSP-4の合成:Na2S2O31.51gとNa2S2O50.57gを水25mLに加えて亜硫酸ナトリウム水溶液を調製した。レブリン酸塩11、250mg、0.40mmolの無水THF2.5mL溶液に、1.0mlの亜硫酸ナトリウム水溶液を加えた。これを室温で4時間撹拌した。反応混合物を水15mLに注ぎ、酢酸エチル3x25mLで抽出し、乾燥、蒸発させた。これにより、保護化していないヌクレオシドから直接生成したSP-4の物理的特性及びスペクトル特性と一致する、Pキラル純度約97の白色固体生成物を定量的に得た。実施例16.3aからSP-4を調製する別の手法撹拌した4-オキソ-ペンタン酸2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロ-2H-ピリミジン-1-イル-4-フルオロ-2-ヒドロキシメチル-4-メチル-テトラヒドロ-フラン-3-イルエステル3a、210mg、0.59mmolの無水THF1.5mL溶液に、1.7Mのtert-ブチルマグネシウムクロリド1.07mL、1.82mmol溶液を室温で2分間かけて加えた。最初に白色沈殿物が観察され、10分後、反応混合物は暗黄色の溶液に変化した。30分後、S-2-[S-4-ニトロフェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8SP-異性体、382mg、0.94mmolのTHF1.5mL溶液を3分間かけて滴加した。混合物を40°Cで5時間加熱し、この時点でのTLC及び1HNMRでは、未反応の出発物質は2未満であった。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、その後、酢酸エチルと水で分離させた。合わせた有機層を10Na2CO3水溶液3x10mL、次に水で洗った。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、褐色の残渣を得た410mg。粗生成物をテトラヒドロフラン1.0mLに溶解させ、その後、亜硫酸ナトリウム37mg、0.295mmolとメタ重亜硫酸ナトリウム224mg、1.18mmolの混合物を1mLの水に溶かした水溶液を加えた。混合物を45°Cで20時間加熱したが、この時点でTLCにより測定した変換率はわずか約10であったため、さらに亜硫酸ナトリウム74mgとメタ重亜硫酸ナトリウム448mgを加え、さらに52時間加熱を続けた。この時点でTLCにより測定した変換率は約40であった。反応混合物を水と酢酸エチルで分離した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、褐色の残渣を得た210mg。残渣を0~5MeOH/DCMの濃度勾配によるカラムクロマトグラフィーに供し、未反応の出発物質89mgとSP-457mg、収率18、回収した出発物質ベースで24を得た。実施例17.3cを合成中間体として用いたSP-4の調製実施例17-1.1-[2R,3R,4R,5R-4-tert-ブチルジメチルシラニロキシ-3-フルオロ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル]-1H-ピリミジン-2,4-ジオン:12の調製310.0g、38.43mmolのピリジン50mL溶液に、ジクロロメタン50mLを加えた。溶液を0°Cに冷却した。溶液に4,4’-ジメトキシトリチルクロリド14.32g、42.27mmolを加え、溶液を0°Cで5時間撹拌した。メタノール5mLを加えて反応を停止した。溶液を減圧下で濃縮乾固し、残渣を酢酸エチル500mLと水50mLで分離した。有機溶液を食塩水50mLで洗い、乾燥させた硫酸ナトリウム、4g。溶媒を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタン100mLに溶解した。溶液にイミダゾール7.83g、115mmolとt-ブチルジメチルシリルクロリド8.68g、57.6mmolを加えた。溶液を雰囲気温度で16時間撹拌した。メタノールを加えて反応を停止し5mL、溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチル500mLと水50mLで分離した。有機溶液を乾燥させ硫酸ナトリウム、4g、減圧下で蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィー10~40EtOAcのヘキサン溶液で精製し、5’-O-DMT-3’-O-tBDMS中間生成物を得た。これを次に1トリフルオロ酢酸のジクロロメタン200mL溶液で処理した。溶液を雰囲気温度で1時間撹拌した。水20mLを加え、溶液を雰囲気温度でさらに1時間撹拌した。メタノール5mLをゆっくりと加え、溶液を雰囲気温度でさらに1時間撹拌した。水酸化アンモニウムを加えて溶液のpHを7に調整した。有機溶液を分離し、乾燥させ硫酸ナトリウム、4g、減圧下で濃縮乾固させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー1~5メタノールのジクロロメタン溶液で精製し、12を7.5gの白色固体として、3工程の収率50で得た。1HNMRDMSO-d6δppm11.48brs,1H,NH、7.94d,1H,H-6、6.00d,1H,Η-1’、5.69d,1H,H-5、4.06dd,1H,3’-H、3.85m,2H,H-5’a,H-4’、3.58brd,1H,H-5’b、1.27d,3H,2-CH3、0.89s,9H,CCH33、0.12s,6H,SiCH32。実施例17-2.1-[2R,3R,4R,5R-4-tert-ブチルジメチルシラニロキシ-3-フルオロ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル]-1H-ピリミジン-2,4-ジオン3cを用いたSP-4の調製撹拌した1-[2R,3R,4R,5R-4-tert-ブチルジメチルシラニロキシ-3-フルオロ-5-ヒドロキシメチル-3-メチル-テトラヒドロ-フラン-2-イル]-1H-ピリミジン-2,4-ジオン12、374mg、1mmolの無水THF3mL溶液に、1.7Mのtert-ブチルマグネシウムクロリド1.8mL、3.1mmol溶液を室温で2分間かけて加えた。最初に白色沈殿物が観察され、10分後、反応混合物は透明な暗黄色の溶液に変化した。30分後、S-2-[S-4-ニトロフェノキシ-フェノキシ-ホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、SP-異性体、653mg、1.6mmolのTHF2.5mL溶液を3分間かけて滴加した。混合物を40°Cで20時間加熱し、この時点でのTLC及び1HNMRでは、未反応の出発物質は5未満であった。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、その後、酢酸エチルと水で分離させた。有機層を10Na2CO3水溶液3x10mL、次に水20mLで洗った。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、3cを含む褐色の残渣を得た850mg。粗生成物をテトラヒドロフラン2mLに溶解させ、0.8mLの80ギ酸水溶液を室温で加えた。反応混合物を50°Cで96時間加熱した。TLCにより、約70の変換が観察された。反応混合物を低温の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、その後、酢酸エチルと水で分離した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、褐色の残渣を得た220mg。残渣を0~5MeOH/DCMの濃度勾配によるカラムクロマトグラフィーに供し、未反応の出発物質21mgとSP-477mg、収率35、回収した出発物質ベースで39を得た。実施例18.3dを合成中間体として用いたSP-4の調製実施例18-1.3dの調製0°Cの撹拌した3のピリジン20mL溶液に、TIPDS-Clを15分間かけて滴加した。混合物をゆっくりと室温に昇温させ、同温度で16時間撹拌した。ピリジンを留去し、残渣をトルエン50mLと同時蒸発させた。その後、残渣をヘキサンでトリチュレートし、白色沈殿物を、セライトパッドを用いて濾過して取り除いた。濾液を減圧下で濃縮し、泡沫状の固体12.97gを得た。粗生成物13をテトラヒドロフラン75mLに再度溶解し、TFAの水溶液75mL、1:1TFA/水を0°Cで20分間かけて加えた。混合物を同温度で6時間撹拌した。TLCでは、~5の出発物質が観察された。反応混合物に飽和NaHCO3水溶液をpH8になるまで加えて反応を停止し、その後、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出液を水で洗い、乾燥させ、濃縮し、白色結晶性固体を得た。固体をさらにヘキサン30mLでトリチュレートし、得られた白色固体を濾過し、高真空下で乾燥して3dを得た10.1g、2工程収率84。1HNMR400MHz,CDCl3:δ8.83bs,1H、7.94bd,J=6.0Hz,1H、6.10bd,J=18.4Hz,1H、5.71d,J=8.2Hz,1H、4.43bs,1H、4.36dd,J=22.6,9.0Hz,1H、4.27bs,1H、4.10d,J=13.2Hz,1H、4.03d,J=9.2Hz,1H、3.92d,J=13.2Hz,1H、1.39d,J=22.0Hz,3H、1.11-0.92m,28H。実施例18-2.SP-4の調製撹拌した3d520mg、1mmolの無水THF5mL溶液に、1.7Mのtert-ブチルマグネシウムクロリド1.8mL、3.1mmol、3.1当量溶液を室温で15分間かけて加えた。30分後、S-2-[S-4-ニトロ-フェノキシ-フェノキシホスホリルアミノ]プロピオン酸イソプロピルエステル8、SP-異性体、653mg、1.6mmolのTHF1mL溶液を3分間かけて滴加した。混合物を室温で60時間撹拌した。粗生成試料の1H及び31PNMRでは、ジアステレオマーの混合比率がおよそ1:0.76であった。反応混合物を飽和NH4Cl水溶液20mLで反応停止した。混合物を酢酸エチル150mL、次に10Na2CO3水溶液3x20mLと水20mLで分離した。合わせた有機抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、淡黄色の残渣を得た14、878mg。上記化合物14をテトラヒドロフラン3mLに再度溶解させ、その後、80ギ酸水溶液を加えた。混合物を55°Cで20時間加熱した。反応混合物を0°Cに冷却し、その後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液pH7.0で反応を停止した。その後、反応混合物を酢酸エチルと水で分離した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、560mgの残渣を得た。残渣を0~5メタノール/ジクロロメタンの濃度勾配によるクロマトグラフィーに供し、未反応の出発物質14、242mgとSP-480mg、収率15を白色固体として得た。実施例19.同位体標識されたSP-4の調製実施例19-1.1-6aR,8R,9R,9aS-9-ヒドロキシ-2,2,4,4-テトライソプロピルテトラヒドロ-6H-フロ[3,2-f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン-8-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオン:16の調製ウリジン15、100.0g、409.5mmolを無水ピリジン600mLと同時蒸発して乾固し、無水ピリジン700mLに再度懸濁した。撹拌した微細粒子懸濁液に、1,3-ジクロロ-1,1,3,3-テトライソプロピルジシロキサン135.7g、482.5mmolを雰囲気温度で60分間かけて加えた。微細粒子懸濁液を雰囲気温度で17時間撹拌した後、メタノール20mLを加えて反応を停止し、その後、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル1.5Lと水2Lで分離した。有機層をさらに5塩酸2x1L、食塩水500mLで洗い、固体硫酸ナトリウム50gで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物約250gを得た。残渣を、シリカゲルと酢酸エチルのヘキサン溶液20~65の濃度勾配を用いた濾過カラムに供した。相同TLC1:1ヘキサン-酢酸エチル溶液でRf=0.55で確認した純生成物の画分を合わせて、減圧下で濃縮し、乾燥させ40°C、0.2mmHg、24時間、16を白色の泡状固体として145.5g76得た。わずかに純粋でない16の別の画分35gも回収した。1HNMRDMSO-d6δppm11.35s,1H,NH、7.66d,1H,J=7.6Hz,H-6、5.57d,1H,J=4.8Hz,2’-OH、5.50-5.49m,2H,1’-H及びH-5、4.14-4.18m,3H,2’,3’,4’-H、3.97-3.87m,2H,5’-Ha及びHb、1.02-0.95m,28Η,CHCH32。実施例19-2.1-6aR,8R,9aR-2,2,4,4-テトライソプロピル-9-オキソテトラヒドロ-6H-フロ[3,2-f][1,3,5,2,4]トリオキサジシロシン-8-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオン:17の調製乾燥した三口丸底フラスコに、無水DCM600mLとDMSO30.82g、394.5mmolを加えた。溶液を窒素雰囲気下、ドライアイス/アセトン浴で-78°Cに冷却した。トリフルオロ酢酸無水物無水、77.7g、369.8mmolをシリンジで40分間かけて加え、濁った混合物を得た。混合物に、ウリジン誘導体16のDCM600mL溶液を、添加用漏斗を用いて、-78°Cで75分間かけて滴加した。この不均一混合物を-78~-65°Cで2時間撹拌し、その後、無水トリエチルアミン92mLをシリンジで素早く加え、透明な淡黄色の溶液を得た。低温で1時間後、反応の完了をTLC30EtOAcのヘキサン溶液で確認した。冷却浴を取り除き、反応混合物を雰囲気温度まで1時間でゆっくりと昇温させた。飽和NH4Cl180mLを加えて反応を停止した。水200mLを加え、有機層を分離した。水層を再度DCM300mLで抽出した。合わせた有機層を水3x400mL、食塩水150mLで洗い、Na2SO4で乾燥させた。溶媒を除去し、粘質の褐色残渣を得た。粗生成の油状残渣微量のDCMを含むをフリーザーに一晩置いた。その後、油中に結晶性固体が一部観察された。油状物を500mLのヘキサンに雰囲気温度で溶解させた。溶液をフリーザーに24時間置き、固体がさらに形成された。固体を濾過して回収し、低温の10DCMのヘキサン溶液1Lで洗い、オレンジ色がほとんど除かれた。固体17を真空下で2時間乾燥させ、その後、24時間風乾させた。真空下50°Cで乾燥させた後、固体の重量は21gとなった。濾液を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー10~70酢酸エチルのヘキサン溶液で精製し、17を淡オレンジ色の固体としてさらに37g得た合計収率97。実施例19-3.1-2R,3S,4R,5R-3,4-ジヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-13C-ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオン:18の調製5塩酸水溶液で洗い、乾燥50°C、0.2mmHg、24時間したマグネシウム3.53g、147mmolを、マグネチックスターラーとコンデンサーを備えた二口丸底フラスコに入れた。フラスコをアルゴンガスで満たし、その後、無水エーテル80mLを加えた。エーテル中のマグネシウムに、ヨウ化ペルジュウテリオ-13Cメチル15.06g、110.3mmolをゆっくりと加え、発熱反応が起きた。反応混合物が冷めた後、上清を、乾燥した化合物1750°C、0.2mmHg、15時間10.0g、20.63mmolの無水THF1L溶液に、-50°Cで20分間かけて移した。温度を-40°Cまで昇温させ、混合物を-40~-25°で4時間撹拌した。反応終了後、混合物をEtOAc1Lにより-50°Cで希釈し、その後、食塩水300mLをゆっくりと加えた。有機層を分離し、その後、飽和塩化アンモニウム水溶液300mLx2で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過及び減圧下での濃縮後、残渣をMeOH250mLに溶解させた。フッ化アンモニウム12gとTBAF400mgを加えた。混合物を90°Cで7時間撹拌し、その後、シリカゲル20gを用いて減圧下で濃縮した。真空で完全乾燥した後、得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーMeOH:CH2Cl2=1:20~1:10で精製し、化合物185g、46を白色固体として得た。1HNMRDMSO-d6δppm11.26s,1Η,ΝΗ、7.65d,1H,J=8.4Hz,H-6、5.77d,1H,J=2.4Hz,H-1’、5.57d,1H,J=8.0Hz,H-5、5.46d,1H,J=5.2Hz,HO-3’、5.24d,1H,J=2.4Hz,HO-2’、5.14t,1H,J=5.6Hz,HO-5’、3.74-3.56m,4H,H-3’,4’,5’,5。実施例19-4.2R,3R,4S,5R-3-アセトキシ-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-ジヒドロキシ-4-13C-ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン-2-イルメチルアセテート:19の調製化合物185.00g、19.1mmolの無水ピリジン100mL溶液に、無水酢酸3mLを雰囲気温度で加えた。得られた混合物を雰囲気温度で15時間撹拌し、EtOAc250mLで希釈し、水50mLx3で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過及び濃縮後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー0~5MeOHのCH2Cl2溶液で精製し、化合物194.0g、68を灰色の固体として得た。実施例19-5.2R,3R,4R,5R-3-アセトキシ-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-4-13C-ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン-2-イルメチルアセテート:20の調製化合物192.33g、6.73mmolの無水CH2Cl260mL溶液に、DAST1.33mL、10.1mmolを-78°Cでゆっくりと加えた。得られた混合物を、雰囲気温度にさらした後、30分撹拌した。同様の方法で、2.33gスケールの2つの反応物と、1.00gスケールの1つの反応物をさらに処理した。4つの反応混合物のすべてを合わせ、CH2Cl2300mLで希釈し、氷水100mLx2、続いて、低温のNaHCO3水溶液100mLx2で洗った。乾燥、濾過、濃縮後、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し0~50EtOAcのヘキサン溶液、化合物は48前後で確認された、化合物20を白色固体として得た2.0g、合計7.99gの化合物19から24。1HNMRCDCl3δppm8.27s,1H,NH、7.55d,1H,J=8.4Hz,H-6、6.17d,1H,J=18.8Hz,Η-1’、5.78dd,1H,J=1.2,8.4Hz,H-5、5.12dd,1H,J=9.6,21.6Hz,H-3’、4.40-4.31m,3H,H-4’,5’,5、2.19s,3H,CH3、2.15s,3H,CH3。実施例19-6.1-2R,3R,4R,5R-3-フルオロ-4-ヒドロキシ-5-ヒドロキシメチル-3-13C-ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン-2-イルピリミジン-2,41H,3H-ジオン:21の調製化合物202g、5.74mmolのメタノール20mL溶液に、n-ブチルアミン6mLを加えた。得られた混合物を室温で15時間撹拌し、シリカゲルを用いて真空中で濃縮した。得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー0~10MeOHのCH2Cl2溶液で精製し、化合物211.3g、85を白色固体として得た。1HNMRCD3ODδppm8.08d,1H,J=8.0Hz,H-6、6.13d,1H,J=18.4Hz,H-1’、5.70d,1H,J=8.0Hz,H-5、3.99d,1H,J=13.6Hz,H-5’、3.97-3.91m,2H,H-3’,4’、3.80dd,1H,J=2.0,12.8Hz,H-5、ESMSM1推定265、実測265。実施例19-7.S-イソプロピル2-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-13C-ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシフェノキシホスホリルアミノプロパノエート:22の調製保護化されていないヌクレオシド21207mg、0.783mmol及びN-メチルイミダゾール0.4ml、5mmolのTHF4mL溶液に、あらかじめ調製したホスホロクロリデートのTHF溶液1.0M、2.35ml、2.35mmolを0°Cで滴加した。反応物を1時間かけてゆっくりと雰囲気温度に昇温させ、その後、水1mLとEtOAc5mLを加えた。有機溶液を飽和一塩基クエン酸ナトリウム水溶液2x2ml、飽和NaHCO3水溶液1x2mlで洗い、乾燥させMgSO4、減圧下で濃縮した。粗生成物を、0~5iPrOHのCH2Cl2溶液を溶出剤として用いたシリカカラムクロマトグラフィーで精製し、ホスホルアミダート22216mg、52、P-ジアステレオマーの1:1混合物を白色固体として得た:1HNMR400MHz,DMSO-d6δ11.54s,1H、7.56d,J=6.8Hz,1H、7.40-7.35m,2H、7.23-7.18m,3H、6.14-5.96m,2H、5.89dd,J=5.6,25.6Hz,1H、5.55t,J=8.4Hz,1H、4.85dq,J=1.6,6.0Hz,1H、4.44-4.32m,1H、4.25m,1H、4.06-3.98m,1H、3.86-3.70m,2H、1.30-1.08m,9H;31PNMR162MHz,DMSO-d6δ4.90、4.77;LRMSESI[MH]C2113CH27D3FN3O9Pの計算値534.5、実測値534.4。実施例19-8.2S-2-2R,3R,4R,5R-5-2,4-ジオキソ-3,4-ジヒドロピリミジン-12H-イル-4-フルオロ-3-ヒドロキシ-4-13C-ペルジュウテリオメチルテトラヒドロフラン-2-イルメトキシヒドロキシホスホリルアミノプロパン酸:23の調製ホスホルアミダート22147mg、0.276mmolをトリエチルアミン2mLと水0.5mLに懸濁し、60°Cで30時間加熱した。その後、揮発性成分を減圧下で留去した。粗生成物を、シリカカラムクロマトグラフィーにより、50~70iPrOHのCH2Cl2溶液、次に0~20NH4OHのiPrOH溶液で溶出させて精製し、23を白色固体として得た95mg、83:1HNMR400MHz,DMSO-d6δ8.00d,J=8.4Hz,1H、5.98d,J=19.2Hz,1H、5.52d,J=8.4Hz,1H、4.02-3.81m,4H、1.10d,J=6.8Hz,3H;31PNMR162MHz,DMSO-d6δ8.12;LRMSESI[MH]C1213CH17D3FN3O9Pの計算値416.3、実測値416.4。RP-4、4、及びSP-4の試料の特性RP-4、4、及びSP-4の試料を、X線粉体回折XRPD、核磁気共鳴NMR分析法、フーリエ変換赤外FT-IR分光法、示差走査熱量測定DSC、熱重量分析TGA、重量法水蒸気吸着測定GVS、熱力学的水溶解度、及び高速液体クロマトグラフィーHPLCで分析した。実施例20.X線粉体回折RP-4、4、及びSP-4の試料を、X線粉体回折XRPDにより下記の条件で分析した。a.BrukerAXS/SiemensD5000X線粉体回折パターンを、SiemensD5000回折計により、CuKα放射40kV、40mA、θ-θ角度計、V20及び受光スリットの発散、グラファイト二次モノクロメーター、並びにシンチレーションカウンターを用いて収集した。本機器を、認証されたコランダム標準NIST1976を用いて、性能検査を行う。データ収集用のソフトウェアとして、DiffracPlusXRPDCommanderv2.3.1を用い、データの解析及び提示にはDiffracPlusEVAv11.0.0.2又はv13.0.0.2.を用いた。環境条件環境条件下で計測した試料は、受領したままの粉体を用いて、平板試料として調製した。約35mgの試料を、滑らかなゼロバックグラウンド510シリコンウエハーに切り込まれた穴に軽く詰めた。分析中、試料はその平面で回転させた。データ収集の詳細は、角度範囲:2~42°2θ;ステップサイズ:0.05°2θ;及び、収集時間:4s.ステップ-1とした。b.BrukerAXSC2GADDSX線粉体回折パターンを、BrukerAXSC2GADDS回折計により、CuKα放射40kV、40mA、自動XYZステージ、自動サンプル位置決め用レーザービデオ顕微鏡、及びHiStar2次元領域検出器を用いて収集した。X線光学系は、0.3mmのピンホールコリメータに連結された単一のGobel多層膜鏡から成る。ビーム発散、すなわち試料上のX線ビームの有効な大きさは、約4mmであった。θ-θ連続スキャンモードを試料-検出器間距離20cmで用い、これにより、3.2°~29.7°の有効2θ範囲が得られた。通常、試料はX線ビームに120秒間当てられる。データ収集用のソフトウェアとしてGADDSforWNT4.1.16を用い、データの解析及び提示にはDiffracPlusEVAv9.0.0.2又はv13.0.0.2を用いた。環境条件環境条件下で計測した試料は、受領したままの粉体を用いて、粉砕を行わず、平板試料として調製した。約1~2gの試料をスライドガラスに軽く押し付け、平面にした。X線粉体回折XRPDXRPDにより、4は非結晶であることがわかった図1参照。実施例3に従って調製したRP-4の高分解能XRPD分析では、SP-4実施例4、方法4に従って調製のものとは異なる粉体パターンを呈する結晶性固体が確認され、またSP-4も結晶性固体であることが確認された。RP-4及びSP-4のXRPDの結果を表1に示す≦5RP-4及び≦3SP-4の強度を示すピークはすべて除く。表1.RP-4及びSP-4のXRPDデータSP-4の試料は、乳棒と乳鉢で粉砕し、その後、500μmと250μmの篩に連続してかけ、微粉末の試料とした。この試料を高分解能XRPDで再分析し、形態の変化が起きていないことを確認した。実施例21.SP-4の結晶化の検討結晶性のSP-4は多形性を示す。そのため、ある態様は、結晶性SP-4及びその個々の多形型に向けられている。SP-4は少なくとも5つの多形型で存在でき、それらを形態1~5と呼ぶ。さらに、非結晶SP-4も調製することができる。一般的な結晶化では、約100mgのSP-4を適切な量の結晶化溶媒アセトニトリル5vol、クロロホルム5vol、酢酸n-ブチル7vol、ジクロロメタン50vol、アニソール7vol、及び1:1MTBE/ヘプタン50volに溶解し、その後、溶液を5°Cで蒸発させる。様々な結晶形が得られるが、濾過及び/又は乾燥により、各結晶形から形態1が得られる。形態1、2、及び3は、それぞれ、溶媒和されていない形態、1:1のDCM溶媒和物、1:1のクロロホルム溶媒和物であり、単結晶X線及びXRPD分析で確認されている。形態4及び5は、SP-4をそれぞれアセトニトリルとアニソールの溶液から結晶化することで得られる。形態4及び5は、十分な質の単結晶が得られなかったため、溶媒和されていない形態であるか、水和物であるか、又は溶媒和物であるかを決定する十分なデータを収集することができなかった。形態4及び5は、濾過により形態1に変換される。SP-4を酢酸n-ブチルnBuAc、並びにメチル-tブチルエーテルMTBE及びヘプタンを含む溶液から結晶化させることで、2つのさらなる結晶形態が得られた;濾過により、これらの結晶形態はともに形態1に変換される。形態2及び3も、単離することで形態1に変換される。形態1は、溶媒和されていない形態であり、幅広い融解吸熱範囲を持ち、開始温度は94.3°C、ΔHfusは24.0kJmol-1である。SP-4形態1のさらなるXRPDパターンを図4に示す。SP-4の形態1からSP-4の形態6への変換形態1は、少なくとも2つの方法で、形態2に変換することができる。まず、形態1の微細結晶を大気湿度に数日間さらし、固化したゴム質の外観を呈する形態1の一水和物を生成する。一水和物の固体を粉砕して微粉末にした後も、XRPDパターンは形態1と一致したままであった。開放容器に6~10週間放置したところ、粉砕した物質はゆっくりと無水固体である形態6に変化した。密閉容器内では、形態1は少なくとも2年間安定である。別の方法として、形態1を雰囲気温度で水に5~50mg/mLで懸濁し、数時間で形態6に変換することができる。水変換処理は、水を形態1がさらに溶解する温度まで加熱し、固化したゴム質からSP-4の混合しない部分の流動性を高め、懸濁油状物程度又はそれ以上にすることで、効率を上げることができる。時間が経つと、形態6は50°Cで結晶化し始める。懸濁液をさらに0~10°Cに冷却すると、固体の回収率を上げることができる。また、水からの結晶化は、極性の微量不純物をより多く取り除くことができ、全体の純度を高めることができる。ジクロロメタン又はアセトニトリルなどの有機溶媒に、形態6を再度溶解させ、続いて結晶化させることで、形態6の結晶をシードに用いた場合でも、形態1を生成することができる。ゴム隔膜とマグネット撹拌子を備えた、乾燥した100mLの一口丸底フラスコに、1.04gのSP-4形態1を入れた。HPLC純度99.7。40mLの脱イオン水を加えた。懸濁液を勢いよく撹拌し、50°Cまで加熱した。50°Cに達すると、大部分が均質な溶液を60分間放置し、その間に固体が溶液から沈殿して薄いスラリーを形成した。スラリーを90分間かけて20°Cに冷却し、20°Cで16時間放置し、その後さらに30分間かけて0~5°Cに冷却し、0~5°Cで2.5時間放置した。スラリーを、中程度の間隙率のガラスフリット付き漏斗で濾過し、10mLの氷冷水で洗った。湿った固形物を2時間真空乾燥し、その後、真空オーブンで一晩23時間、50°Cで乾燥させた。0.88g回収率84.6のSP-4形態6を単離した。形態6は、約124.5~126°Cの実測融点を有する。実施例21-1.SP-4形態1表2に、SP-4形態1のピークのリストを示す。実施例21-2.SP-4形態2図5に、SP-4形態2のXRPDパターンを示す。表3に、SP-4形態2のピークのリストを示す。実施例21-3.SP-4形態3図6に、SP-4形態3のXRPDパターンを示す。表4に、SP-4形態3のピークのリストを示す。実施例21-4.SP-5形態4図7に、SP-4形態4のXRPDパターンを示す。表5に、SP-4形態4のピークのリストを示す。実施例21-5.SP-4形態5図8に、SP-4形態5のXRPDパターンを示す。表6に、SP-4形態5のピークのリストを示す。実施例21-5.SP-4形態6図21に、SP-4形態6のXRPDパターンを示す。下記表に、SP-4形態6のピークのリストを示す。実施例21-7.SP-4非結晶図9に、非結晶SP-4のXRPDパターンを示す。実施例22.SP-4及びその溶媒和物の単結晶X線結晶構造解析実施例22-1.SP-4形態1の単結晶X線結晶構造解析図10は、SP-4形態1のX線結晶構造を示す。この図では、結晶構造から見た形態1の分子を示し、また用いたナンバリング方式を示している。非水素原子の異方性原子変位楕円体は、50の確率水準で示されている。水素原子は任意の小半径で示されている。構造解は、直接的手法、加重w-1=σ2Fo20.0592P20.6950Pここで、P=Fo22Fc2/3を用いたF2の完全行列最小二乗精密化、異方性変位パラメーター、球面調和関数を用いた経験的吸収補正を、SCALE3ABSPACKスケーリングアルゴリズムに実施して得た。すべてのデータで最終wR2={Σ[wFo2-Fc22]/Σ[wFo22]1/2}=0.0871、Fo>4σFoである7090個の反射のF値について通常R1=0.0329、すべてのデータ及び870個のパラメーターでS=1.016。最終Δ/σ最大0.001、Δ/σ平均0.000。最終差分マップは0.534~-0.36eÅ-3。表7.形態1の単結晶パラメーター実施例22-2.SP-4形態2の単結晶X線結晶構造解析図11は、SP-4形態2のX線結晶構造を示す。この図では、結晶構造から見た形態2の分子を示し、また用いたナンバリング方式を示している。データが非常に弱いため、ヘテロ原子は等方性で分割している。水素原子は示していない。構造解は、直接的手法、加重w-1=σ2Fo20.0975P210.6969Pここで、P=Fo22Fc2/3を用いたF2の完全行列最小二乗精密化、異方性変位パラメーター、球面調和関数を用いた経験的吸収補正を、SCALE3ABSPACKスケーリングアルゴリズムに実施して得た。すべてのデータで最終wR2={Σ[wFo2-Fc22]/Σ[wFo22]1/2}=0.1883、Fo>4σFoである2525個の反射のF値について通常R1=0.0741、すべてのデータ及び158個のパラメーターでS=1.05。最終Δ/σ最大0.000、Δ/σ平均0.000。最終差分マップ1.388~-0.967eÅ-3。表8.形態2の単結晶パラメーター実施例22-3.SP-4形態2の単結晶X線結晶構造解析図12は、SP-4形態2のX線結晶構造ORTEP-異方性を示す。SP-4形態2の塩化メチレン溶媒和物C23H31N3PO9FCl2の結晶構造は、単斜晶系空間群P21消滅則0k0:k=奇数を生じ、a=12.882214Å、b=6.16907Å、c=17.7332Å、β=92.0453°、V=1408.43Å3、Z=2、d計算値=1.449g/cm3である。X線強度データは、RigakuMercuryCCD面検出器により、グラファイトで単色化したMo-Kα放射λ=0.71073Åを用いて、温度143Kで収集した。予備指標化は、照射時間30秒で一連の12個の0.5°回転イメージから行った。結晶-検出器間距離35mm、2θスイング角-12°、回転幅0.5°、及び照射30秒で、合計648個の回転イメージを収集した:スキャン番号1は、ω=10°、χ=20°で315°~525°のφ-スキャン;スキャン番号2は、χ=-90°、φ=315°で-20°~5°のω-スキャン;スキャン番号3は、χ=-90°、φ=135°で-20°~4°のω-スキャン;スキャン番号4は、χ=-90°、φ=225°で-20°~5°のω-スキャン;スキャン番号5は、χ=-90°、φ=45°で-20°~20°のω-スキャン。回転イメージは、CrystalClearCrystalClear:株式会社リガク、1999を用いて処理し、平均化していないF2及びσF2値のリストを作成し、その後、それらをCrystalStructureCrystalStructure:CrystalStructureアナリシスパッケージ、株式会社リガク、Rigaku/MSC2002プログラムパッケージにより、DellPentiumIIIコンピューターを用いて、さらなる処理と構造解析を行った。5.48≦2θ≦50.04°、-14≦h≦15、-7≦k≦6、-19≦l≦21の範囲で、合計7707個の反射を測定し、4253個の固有反射Rint=0.0180が得られた。強度データは、ローレンツ効果及び分極効果、並びに吸収の補正を、REQABを用いて行った最小及び最大トランスミッション0.824、1.000。構造は、直接的手法により解明したSIR97、SIR97:AltomareAMBurlaMCamalliGCascaranoCGiacovazzoAGuagliardiAMoliterniGPolidoriRSpagnaJApplCryst32115119。精密化は、F2の完全行列最小二乗法を、SHELXL-97を用いて行ったSHELXL-97:SheldrickGMActaCrystA64112122。精密化では、すべての反射を用いた。用いた加重の式は、w=1/[σ2Fo20.0472P20.4960P]ここで、P=Fo22Fc2/3。非水素原子は異方的に精密化し、水素原子はライディングridingモデルを用いて精密化した。精密化は、F>4σFである4046個の反射に対してR1=0.0328及びwR2=0.0817、全4253個の固有の非ゼロ反射及び358の変数に対してR1=0.0348、wR2=0.0838、GOF=1.056に収束させたR1=Σ||Fo|-|Fc||/Σ|Fo|;wR2={ΣwFo2-Fc22/ΣwFo22}12;GOF={ΣwFo2-Fc22/n-p}12;ここで、n=反射の数、p=精密化するパラメーターの数。最小二乗の最終サイクルの最大Δ/σは、0.000で、最終差分フーリエの2つの最も突出したピークは、0.312と-0.389e/Å3であった。フラックFlack絶対構造パラメーターは-0.066に精密化し、これにより表題化合物の立体化学を確認した。表1に、セル情報、データ収集パラメーター、及び精密化データを記載する。最終ポジション及び等価の等方性熱パラメーターを表2に示す。異方性熱パラメーターを表3に示す。ORTEPIIAFortranThermalEllipsoidPlotProgramforCrystalStructureIllustrations、CKJohnsonORNL5138。確率30の熱振動楕円体で分子を示している。表9.SP-4CH2Cl2化合物の構造決定の概要実施例22-4.SP-4形態3の単結晶X線結晶構造解析図13は、SP-4形態3のX線結晶構造を示す。この図では、結晶構造から見た形態3の分子を示し、また用いたナンバリング方式を示している。非水素原子の異方性原子変位楕円体は、50の確率水準で示されている。水素原子は任意の小半径で示されている。構造解は、直接的手法、加重w-1=σ2Fo20.0512P20.6810Pここで、P=Fo22Fc2/3を用いたF2の完全行列最小二乗精密化、異方性変位パラメーター、球面調和関数を用いた経験的吸収補正を、SCALE3ABSPACKスケーリングアルゴリズムに実施して得た。すべてのデータで最終wR2={Σ[wFo2-Fc22]/Σ[wFo22]1/2}=0.0796、Fo>4σFoである2486個の反射のF値に関して通常R1=0.0294、すべてのデータ及び377個のパラメーターでS=1.068。最終Δ/σ最大0.001、Δ/σ平均0.000。最終差分マップは0.211~-0.334eÅ-3。表10.形態3の単結晶パラメーター実施例23.高温及び高相対湿度における安定性RP-4の試料を40°C、相対湿度75の湿度室に1週間置き、試料をXRPDで再度分析した。得られたRP-4の粉末パターンは、実験中に実質的な変化が起きていないことを示しており、すなわち固体形状に変化は観察されなかった。これは、4の試料とは対照的で、4の試料では40°C、相対湿度75で保管すると約16時間以内に潮解が起きた。実際の4の潮解性質を以下に説明する。4の試料を250μmの篩にかけ、その後、試料を40°C/75RH及び25°C/53相対湿度に置き、目視による観察を一定間隔で行った。結果を表4に示す。表11.高相対湿度に対する4の安定性SP-4の試料は、40°C、相対湿度75に置くと、16時間以内に潮解した。例として、SP-4の試料を乳棒と乳鉢で粉砕し、その後、500μmと250μmの篩に連続してかけ、微粉末の試料とした。この物質の試料を40°C、相対湿度75、及び25°C、53RHに置き、目視による観察を一定間隔で行った。結果を表5に示す。表12.高相対湿度に対するSP-4の安定性25°C、53RHに104時間置いた試料のXRPD分析では、生成されたディフラクトグラムに実質的な変化は見られず、形態の変化は起きていないことが示された。実施例24.フーリエ変換-赤外FT-IR分光法汎用減衰全反射ATRサンプリング付属装置を取り付けたパーキンエルマーSpectrumOneを用いてデータを収集した。データは、Spectrumv5.0.1ソフトウェアを用いて収集、解析を行った。4、RP-4、SP-4の得られたIRスペクトルを、それぞれ図5~7に示す。主要なピークを波長数cm-1で以下に記載する:4:~1680、~1454、~1376、~1205、~1092、~1023図14;RP-4:~1742、~1713、~1679、~1460、~1377、~1259、~1157、~1079図15;及びSP-4形態1:~1743、~1713、~1688、~1454、~1378、~1208、~1082図16。実施例25.示差走査熱量測定DSC及び熱重量分析TGADSCのデータを、50検体オートサンプラーを備えたTAInstrumentsのQ2000で収集した。熱容量の校正はサファイアを用いて行い、エネルギーと温度の校正は認証付きインジウムを用いて行った。温度変調DSCは、通常、各試料0.8~1.2mgに対して、小さな穴を設けたアルミニウムパンで、底部加熱速度2°C.min-1、温度変調パラメーター±0.2°C.min-1及び40秒によって実施した。試料に対して乾燥窒素のパージを50ml.min-1で維持した。機器の制御ソフトウェアは、QSeries用Advantagev2.8.0.392及びThermalAdvantagev4.8.3を用い、データ解析はUniversalAnalysisv4.3Aを用いて行った。DSCのデータを、34検体オートサンプラーを備えたMettlerDSC823eで収集した。機器のエネルギーと温度の校正は認証付きインジウムを用いて行った。通常、各試料0.8~1.2mgを、小さな穴を設けたアルミニウムパン中で、10°C.min-1で25°Cから250°Cまで加熱した。試料に対して乾燥窒素のパージを50ml.min-1で維持した。機器の制御及びデータ解析のソフトウェアには、STARev9.20を用いた。SP-4形態6のDSCデータは、DSC装置TAQ2000を用いて、加熱速度10°C/min、乾燥窒素ガスの連続流入下100ml/minで収集した。約2.2mgの試料を正確に計量し、密閉されていないゆるい蓋の付いたTzeroパン中で加熱した。機器は、インジウム標準物エンタルピー及び温度とサファイア標準物熱容量で校正を行った。不安定性は、温度で±0.1°C、計測エンタルピーで±5と推定される。開始温度の測定には、TAUniversalAnalysisソフトウェアを用いた。TGAデータは、34検体オートサンプラーを備えたMettlerTGA/SDTA851eで収集した。認証付きインジウムで機器の温度の校正を行った。通常、各試料8~12mgを、あらかじめ計量したアルミ製るつぼにのせ、10°C.min-1で雰囲気温度から350°Cまで加熱した。試料に対して窒素のパージを50ml.min-1で維持した。機器の制御及びデータ解析のソフトウェアには、STARev9.20を用いた。4のDSC分析では、58.7°Cから始まる単一の広い吸熱ΔH14J.g-1が、さらなる変調DSC分析によるガラス転移中の分子緩和によるものであることが確認された図17。4のTGA分析では、240°Cを超えた分解の前に重量の減少は見られず、該物質が溶媒和されないことが確認された。4のXRPD分析で該物質が非晶質であることが確認されたため、ガラス転移点を算出するために変調DSC分析を実施し、それが57°Cであることがわかった。DSC分析では、136.2°Cから始まる単一の急な吸熱ΔH76J.g-1が高温顕微鏡観察による溶解であることが確認された。図18参照。RP-4のTGA分析では、240°Cを超えた分解の前に重量の減少は見られず、該物質が溶媒和されないことが確認された。SP-4のDSC分析では、93.9°Cから始まる単一の広い吸熱ΔH43J.g-1が高温顕微鏡観察による溶解であることが確認された。図19参照。SP-4のTGA分析では、240°Cを超えた分解の前に重量の減少は見られず、該物質が溶媒和されないことが確認された。SP-4形態6のDSC分析では、120.7°Cから始まる広い吸熱ΔH79J.g-1が見られた。実施例26.重量法水蒸気吸着測定GVSSMSDVSIntrinsic収着等温線は、SMSDVSIntrinsic水分収着等温線分析計を用いて、SMSAnalysisSuiteソフトウェアで制御を行って得た。試料温度は、機器制御により25°Cに維持した。湿度は、乾燥窒素と湿性窒素の混合流で制御し、合計流量は200ml.min-1とした。相対湿度は、校正済みのRotronic製プローブダイナミックレンジ1.0~100RHを試料の近くに置いて計測した。RHの作用として、試料の重量変化質量の緩和を微量天秤精度±0.005mgで常に測定した。通常、試料5~20mgを、環境条件下で、風袋を計量したメッシュのステンレススチール製バスケットに入れた。試料の出し入れは、40RH、25°C一般的な室内条件で行った。水分収着等温線は以下に示す概要で測定した2回のスキャンで全サイクル1回。標準等温線は、25°C、10RH間隔で0.5~90RHの範囲において測定した。表13.SMSDVSIntrinsic試験の手法のパラメーター等温線の測定後、試料を回収し、XRPDで再度分析した。GVS分析では、RP-4は非吸湿性であり、相対湿度0~90で約0.2wtの水を可逆的に取り込んでいたことが示された。GVS試験後の試料をXRPDで再度分析したところ、形態に変化は見られなかった。SP-4の試料を乳棒と乳鉢で粉砕し、その後、500μmと250μmの篩に連続してかけて微粉末の試料とし、これを1サイクルに変更した方法で分析した。試料は、標準方法の90ではなく、40RHほぼ環境条件から60RHで取り、その後、0まで、そして逆に40RHまで測定した。この分析により、SP-4は、60RHまでは非吸湿性であり、0~60RHで~0.2重量の水を可逆的に取り込んでいたことが示された。実施例27.熱力学的水溶解度水溶解度は、十分な量の化合物を水に懸濁し、化合物の親遊離型の≧10mg.ml-1の最大最終濃度を得ることで決定した。懸濁液は、25°C、24時間で平衡化し、その後、pHを測定した。その後、懸濁液をガラス繊維Cフィルターで濾過し、96ウェルプレートに入れた。その後、濾液を101倍に希釈した。定量はHPLCで行い、約0.1mg.ml-1のDMSO溶液を標準液とした。異なる量の標準試料溶液、希釈試料溶液、及び未希釈試料溶液を注入した。溶解度は、標準試料の主要ピークと同じ保持時間にあるピークを積分して求めたピーク面積を用いて算出した。表14.溶解度測定のためのHPLCの手法のパラメーター分析は、上記の条件で、ダイオードアレイ検出器を備えたAgilentHP1100シリーズシステムにより、ChemStationのソフトウェアvB.02.01-SR1を用いて実施した。表15.RP-4、4、SP-4の水溶解度の結果実施例28.HPLCによる化学的純度の決定本明細書に記載する化合物の化学的純度の決定には、様々なHPLCの条件を用いることができる。その1つの例が、熱力学的水溶解度の試験に関連して、上記に記載されている。以下に別の例を記載する。これらの条件で、4、RP-4、及びSP-4の純度は、それぞれ~99.6、~99、及び~99.5と決定された。上記の手法を最適化することで、より高い純度を得ることもできる。XRPDのディフラクトグラムを検討すると、2つの結晶性単一ジアステレオ異性体は、はっきりと異なるXRPDパターンを示している。さらに、2つの結晶性ジアステレオ異性体の融点には明確な差があり、RP-4の開始温度がSP-4よりも大幅に高くなっている136°C対94°C。実施例29.その他の分離方法下記のSFC分離法条件は以下に記載で、RP-4とSP-4のジアステレオマー混合物が適切に分離された。下記のSFC分離法条件は以下に記載で、RP-4とSP-4のジアステレオマー混合物が適切に分離された。表16.RP-4、4、及びSP-4のバッチ特性評価結果のまとめ実施例30.8SP-異性体のX線結晶構造解析化合物8SP-異性体C18H21N2PO7は、単斜晶系空間群P21消滅則0k0:k=奇数で結晶化し、a=5.33124Å、b=15.33888Å、c=23.780713Å、β=92.8913°、V=1942.22Å3、Z=4、及びd計算値=1.397g/cm3である。X線強度データは、BrukerAPEXIICCD面検出器により、グラファイトで単色化したMo-Kα放射λ=0.71073Åを用いて、温度1001Kで収集した。図20A及び20Bは、非対称ユニットのそれぞれ番号1と番号2の分子を示す。予備指標化は、照射時間30秒で一連の36個の0.5°回転フレームから行った。結晶-検出器間距離70.00mm、回転幅0.5°、及び照射20秒で、合計3608個のフレームを収集した:回転フレームは、SAINTBruker2009SAINT。BrukerAXSInc.、米国ウィスコンシン州マディソンを用いてまとめ、平均化していないF2及びσF2値のリストを作成し、その後、それらをSHELXTLBruker2009SHELXTL。BrukerAXSInc.、米国ウィスコンシン州マディソンプログラムパッケージにより、DellPentium4コンピューターを用いて、さらなる処理と構造解析を行った。1.58≦θ≦25.09°、-6≦h≦6、-18≦k≦18、-28≦l≦28の範囲で、合計6909個の反射を測定し、6909個の固有反射Rint=0.0581が得られた。強度データは、ローレンツ効果及び分極効果、並びに吸収の補正を、SADABSSheldrickGMSADABSUniversityofGottingenGermanyを用いて行った最小及び最大トランスミッション0.6093、0.7452。構造は、直接的手法により解明したSHELXS-97SheldrickGMActaCrystA64112122。精密化は、F2の完全行列最小二乗法を、SHELXL-97SheldrickGMActaCrystA64112122を用いて行った。精密化では、すべての反射を用いた。用いた加重の式は、w=1/[σ2Fo20.0000P214.0738P]ここで、P=Fo22Fc2/3。非水素原子は異方的に精密化し、水素原子はライディングモデルを用いて精密化した。精密化は、F>4σFである6173個の観察された反射に対してR1=0.0847及びwR2=0.1899、全6909個の固有の非ゼロ反射及び512の変数に対してR1=0.0963、wR2=0.1963、GOF=1.119に収束させたR1=Σ||Fo|-|Fc||/Σ|Fo|;wR2=[ΣwFo2-Fc22/ΣwFo22]12;GOF=[ΣwFo2-Fc22/n-p]12;ここで、n=反射の数、p=精密化するパラメーターの数。最小二乗の最終サイクルの最大Δ/σは、0.000で、最終差分フーリエの2つの最も突出したピークは、0.402と-0.559e/Å3であった。図20A及び20Bは、非対称ユニットの分子1と分子2のORTEP確率30の熱振動楕円体である。表17.化合物8SP-異性体の構造決定のまとめ実施例32.S-イソプロピル2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノエートのX線結晶構造解析S-イソプロピル2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノエート、C18H17NPO5F5は、三斜晶系空間群P1で結晶化し、a=5.26416Å、b=12.054813Å、c=16.430715Å、α=74.9604°、β=83.9594°、γ=80.2754°、V=990.4018Å3、Z=2、及びd計算値=1.520g/cm3である。X線強度データは、BrukerAPEXIICCD面検出器により、グラファイトで単色化したMo-Kα放射λ=0.71073Åを用いて、温度1431Kで収集した。予備指標化は、照射時間20秒で一連の36個の0.5°回転フレームから行った。結晶-検出器間距離37.600mm、回転幅0.5°、及び照射20秒で、合計3593個のフレームを収集した:回転フレームは、SAINTBruker2009SAINT。BrukerAXSInc.、米国ウィスコンシン州マディソンを用いてまとめ、平均化していないF2及びσF2値のリストを作成し、その後、それらをSHELXTLBruker2009SHELXTL。BrukerAXSInc.、米国ウィスコンシン州マディソンプログラムパッケージにより、DellPentium4コンピューターを用いて、さらなる処理と構造解析を行った。1.77≦θ≧25.12°、-6≦h≦6、-14≦k≦14、-19≦l≦19の範囲で、合計17880個の反射を測定し、6897個の固有反射Rint=0.0212が得られた。強度データは、ローレンツ効果及び分極効果、並びに吸収の補正を、SADABSSheldrickGMSADABSUniversityofGottingenGermanyを用いて行った最小及び最大トランスミッション0.6887、0.7452。構造は、直接的手法により解明したSHELXS-97SheldrickGMActaCrystA64112122。精密化は、F2の完全行列最小二乗法を、SHELXL-97SheldrickGMActaCrystA64112122を用いて行った。精密化では、すべての反射を用いた。用いた加重の式は、w=1/[σ2Fo20.0344P20.1102P]ここで、P=Fo22Fc2/3。非水素原子は異方的に精密化し、水素原子はライディングモデルを用いて精密化した。精密化は、F>4σFである6527個の観察された反射に対してR1=0.0259及びwR2=0.0609、全6897個の固有の非ゼロ反射及び548の変数に対してR1=0.0284、wR2=0.0621、GOF=1.040に収束させたR1=Σ||Fo|-|Fc||/Σ|Fo|;wR2=[ΣwFo2-Fc22/ΣwFo22]12;GOF=[ΣwFo2-Fc22/n-p]12;ここで、n=反射の数、p=精密化するパラメーターの数。最小二乗の最終サイクルの最大Δ/σは、0.001で、最終差分フーリエの2つの最も突出したピークは、0.254と-0.236e/Å3であった。図22A及び22Bは、非対称ユニットの分子1と分子2のORTEP確率30の熱振動楕円体である。表18.S-イソプロピル2-S-パーフルオロフェノキシフェノキシホスホリルアミノプロパノエートの構造決定のまとめ実施例33.生物活性レプリコンを含む細胞を、白色/不透明の96ウェルプレートに3,000細胞/ウェル50μL、又は白色/不透明の384ウェルプレートに1,500細胞/ウェル25μLで播種した。50μLの2X化合物を96ウェルプレートに加え、又は25μLの2X化合物を384ウェルプレートに加えた。プレートを、加湿した5CO2雰囲気下、37°Cで4日間培養した。培養後、Bright-Glo試薬96ウェルプレートに50μL、384ウェルプレートに25μLを加え、HCVの複製をホタルルシフェラーゼレポーターで測定した。阻害率は、薬剤なしの対照と比較して算出した。RP-4及びSP-4は、広い遺伝子型範囲を有することが実証されている。例えば、双方ともC型肝炎ウイルスの遺伝子型1~4に対して活性であることが示されている。本出願は、2010年5月20日に提出された米国特許出願第12/783,680号の一部継続出願であり、該出願は、2009年5月20日に提出された米国仮特許出願第61/179,923号及び2010年3月31日に提出された第61/319,513号に対する優先権を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。米国特許出願第12/783,680号及び第12/053,015号、並びに2009年5月20日に提出された米国仮特許出願第61/179,923号及び2010年3月31日に提出された第61/319,513号の内容は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。引用したすべての文献の内容は、参照により本明細書に取り込まれる。取り込まれる用語の意味が本明細書に定義する用語の意味と矛盾する場合、本明細書における用語の意味が、取り込まれる用語の意味よりも優先される。"