"α螺旋及び1つ又はそれ以上の分子鎖を含んでなり、それぞれの分子鎖が当該ペプチドのα螺旋上に存在している残基の1対と共有結合で結合しており、それによりインスリン分泌促進ポリペプチドを構造的に強化する、構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。インスリン分泌促進ポリペプチドが、エクセナチド、GIPP、GIP、GLP-1前駆体、GLP-1、GLP-2、GLP-17~37、GLP-17~36、リラグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド又はLY2189265である、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。インスリン分泌促進ポリペプチドがエクセナチドである、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。分子鎖の数が、1~2、2~3、2~4、2~5、2~6、2~7、2~8、2~9又は2~10の間である、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。少なくとも1つの残基対がポリペプチドのN-末端半分内にある、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。少なくとも1つの残基対がポリペプチドのC-末端半分内にある、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。ポリペプチドのC-末端半分内にある少なくとも1つの結合残基対及びポリペプチドのN-末端半分内にある別の結合残基を含んでなる、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。ポリペプチドが、配列番号2又は15~38のうち何れか1つで表わされる配列を有しているエクセナチドに対応している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。ポリペプチドが、配列番号39~62のうち何れか1つで表わされる配列を有しているGLP-1に対応している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。ポリペプチドのα螺旋の残基位置に対して位置i、i3、又はi、i4又はi、i7に位置している第1分子鎖を含んでなる、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。ポリペプチドのα螺旋の残基位置に対して位置i、i3、又はi、i4又はi、i7に位置している第1分子鎖、及びポリペプチドのα螺旋の残基位置に対して位置i、i3、又はi、i4又はi、i7に位置している第2分子鎖を含んでなるが、第1分子鎖と第2分子鎖が同一位置に位置していない、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドの半減期より少なくとも2倍長い半減期を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドの半減期より少なくとも3倍長い半減期を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドの半減期より少なくとも8倍長い半減期を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおけるキモトリプシンに対する耐性より少なくとも2倍大きいインビボにおけるキモトリプシンに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおけるキモトリプシンに対する耐性より少なくとも3倍大きいインビボにおけるキモトリプシンに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおけるキモトリプシンに対する耐性より少なくとも8倍大きいインビボにおけるキモトリプシンに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおけるペプシンに対する耐性より少なくとも6倍大きいインビボにおけるペプシンに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおけるペプシンに対する耐性より少なくとも13倍大きいインビボにおけるペプシンに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおける血清プロテアーゼに対する耐性より少なくとも2倍大きいインビボにおける血清プロテアーゼに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおける血清プロテアーゼに対する耐性より少なくとも5倍大きいインビボにおける血清プロテアーゼに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。強化されたポリペプチドが、強化されていない対応するポリペプチドのインビボにおける血清プロテアーゼに対する耐性より少なくとも10倍大きいインビボにおける血清プロテアーゼに対する耐性を保有している、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。請求項1~22の何れか一項に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド及び1つ又はそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を含んでなる、医薬組成物。ポリペプチド鋳型が、配列番号2で表わされる配列のエクセナチド又はその機能的断片或いは誘導体である、請求項23に記載の医薬組成物。請求項1~22の何れか一項に記載のインスリン分泌促進ポリペプチドの治療有効量を投与することを含んでなる、糖尿病を治療又は予防する方法。ポリペプチドがエクセナチド又はその機能的断片或いは誘導体である、請求項25に記載の方法。請求項23に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含んでなる、糖尿病を治療又は予防する方法。ポリペプチドがエクセナチド又はその機能的断片或いは誘導体である、請求項27に記載の方法。α螺旋及び1つ又はそれ以上の分子鎖を含んでなり、それぞれの分子鎖が当該ポリペプチドのα螺旋上に存在している非天然アミノ酸残基の1対と共有結合で結合している、構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチドの治療有効量を投与することを含んでなる、糖尿病を治療又は予防する方法。インスリン分泌促進ポリペプチドが、エクセナチド、GIPP、GIP、GLP-1前駆体、GLP-1、GLP-2、GLP-17~37、GLP-17~36、リラグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド或いはLY2189265、又はこれらの機能的断片或いは誘導体である、請求項29に記載の方法。インスリン分泌促進ポリペプチドが、エクセナチド又はその機能的断片或いは誘導体である、請求項29に記載の方法。インスリン分泌促進ポリペプチドを経口送達経路を介して投与する、請求項29に記載の方法。インスリン分泌促進ポリペプチドを注射による経路を介して投与する、請求項29に記載の方法。インスリン分泌促進ポリペプチドを経口送達経路を介して投与し、ここで経口送達される生体利用可能なポリペプチドのレベルが静脈注射で送達される生体利用可能なポリペプチドのレベルとほぼ同等である、請求項29に記載の方法。連続して配置され縫い合わせられた配置にあり、それによって第1分子鎖の末端と第2分子鎖の始点がポリペプチド中の共通残基を起源としている、少なくとも2つの分子鎖を含んでなる、請求項1に記載の構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチド。従って、優れた安定性、プロテアーゼ耐性、及び薬理学的特性を付与されている、最適化されたエクセナチドのような、最適化されたインクレチンに基づく、或いはその他のインスリン分泌促進ペプチド治療剤の開発、更には、代替えの、より患者に適合した送達経路例えば、エクセナチドの経口送達形態によって十分に送達できる例えば、改善されたバイオアベイラビリティー、胃腸吸収及び薬理学的特性を達成できるような治療薬の開発は技術における大幅な進歩となるだろう。本発明は、その一部分が、インクレチンホルモン例えば、グルカゴン様ペプチド-1、インクレチン類縁体例えば、リラグルチド又はインクレチン模倣体例えば、エクセナチドを包含する、インスリン分泌活性を有するポリペプチドを安定に架橋結合することが、異常なグルコースホメオスタシスに関連する疾患、例えば、2型糖尿病及び2型糖尿病に関連する疾患の治療において優れた予想外の恩恵をもたらすという意外な発見に基づいている。このような利益は、これに限定されないが、非架橋対応物質と比較した、延長された半減期、増強されたα螺旋性、改善された熱安定性及びプロテアーゼ耐性、増大した機能活性及び薬理学的特性、如何なる経路で投与しても改善されたバイオアベイラビリティー、並びに経口で送達したときの改善されたバイオアベイラビリティー及び胃腸吸収を包含する。従って、本発明は以前は得られなかった又は入手不可能であった利益をもたらすインスリン分泌促進ポリペプチドを投与する新規且つ有利な方法を提供する。従って、本発明は注射による経路で送達されたインスリン分泌促進ポリペプチドの改善された半減期及びそれによる、バイオアベイラビリティー、有効性などを可能にする。更に、本発明は、経口、経鼻、及び舌下経路を包含する、非注射経路を介するインスリン分泌促進ポリペプチド薬剤例えば、GIP、GLP-1、GLP-2、エクセナチド、リラグルチド、タスポグルチド、又はアルビグルチドの有効量を送達することを可能にするすなわち、送達により生物利用が可能であるので、優れた患者コンプライアンスの機会及び使用容易性を改善する。従って、一態様では、本発明は、2型糖尿病及び2型糖尿病に関連している疾患の治療又は予防に用いるための、インクレチンホルモン例えば、グルカゴン様ペプチド-1、類縁体例えば、リラグルチド又は模倣体例えば、エクセナチドを包含する、構造強化したインスリン分泌促進ポリペプチド薬剤を提供し、ここで当該薬剤は延長された半減期、増強されたα螺旋性、改善された熱安定性及びプロテアーゼ耐性、増大した機能活性及び薬理学的特性、並びに如何なる経路で投与されても改善されたバイオアベイラビリティーを保有している。別の態様では、本発明は、延長された半減期、増強されたα螺旋性、改善された熱安定性及びプロテアーゼ耐性、増大した機能活性及び薬理学的特性、並びに如何なる経路で投与されても改善されたバイオアベイラビリティーを付与するために、インクレチンホルモン、類縁体及び模倣体を包含する、インスリン分泌促進ポリペプチド薬剤を構造強化する方法及び組成物を提供する。更に別の態様では、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチド薬剤の治療有効量を何れかの経路で例えば、注射用又は経口用薬剤として投与することによる2型糖尿病又は2型糖尿病に関連している疾患を治療又は予防するための治療方法を提供する。本発明のインスリン分泌促進ポリペプチド薬剤は、全長のインクレチンホルモン、類縁体又は模倣体、或いは生物活性を保持しているそれらの適切な機能的断片又は変異体を包含する化合物又はこれに基づいている。更に別の実施態様では、本発明は、エクセナチドのアミノ酸1~39を有していて構造的に拘束されているポリペプチドを提供する。ある特定の実施態様では、エクセナチドペプチドのアミノ酸1~39はペプチドの第一次配列における連続アミノ酸でよい。ある特定の実施態様では、アミノ酸は互いに隣接していて、例えば、アミノ酸は、全長ポリペプチドの状況でペプチド配列の少なくとも1つの天然状態において、螺旋の同じ面に存在している。例えば、隣接アミノ酸は螺旋内の単一積み重ねカラム中に或いは構造化螺旋の単一面におけるアミノ酸の隣接する積み重ね中に存在していてよい。実施態様では、構造的に拘束されているポリペプチドは、炭化水素架橋、アミノ酸突然変異、及び非天然アミノ酸の取り込みからなる群からの少なくとも1つの改変を含んでいる。ある特定の実施態様では、構造的に拘束されているポリペプチドは、2、3、4、5又はそれ以上の改変を含んでいる。ある特定の実施態様では、拘束されているポリペプチドは、これに限定されないが、S5-S5対すなわち、i、i4、S5-R8対すなわち、i、i7、S8-R5対すなわち、i、i7、R3-S6対すなわち、i、i3、R6-S3対すなわち、i、i3、R3-S5対すなわち、i、i3、R5-S3対すなわち、i、i3、又はペプチド配列内の対の組合わせからなる群より選ばれる対を包含する多種の炭化水素架橋を含んでいる。別の実施態様では、エクセナチドのアミノ酸1~39は、少なくとも3個の連続アミノ酸、又は螺旋上の単一面にある少なくとも2個のアミノ酸、又は少なくとも2個の相互作用面アミノ酸;或いはそれらの同類置換を含んでいる。螺旋の単一面は、1個、2個、3個、又は4個のアミノ酸の積み重ねカラムを含んでいて、ここでアミノ酸の積み重ねカラムは、2回転当り7アミノ酸を有するα螺旋ここでアミノ酸は連続して一連に位置a~gを割り当てられている中の位置a、d、及びg;位置b及びe;又は位置c及びf;によって例えば、図3を参照されたい;そして2回転あたり2個のアミノ酸を有している310螺旋中ここでアミノ酸は連続して一連に位置a~fを割り当てられている中の位置a及びd;位置b及びe;又は位置c及びf;又はそれらの同族体によって規定されている。本発明は別の実施態様で、本発明で用いるためのエクセナチド及びその他の生物活性インスリン分泌促進ポリペプチドを提供する。本発明の構造的に拘束されているエクセナチドペプチドは、位置24と28の間すなわち、図7BのSAH-ExBに炭化水素架橋を、そして任意に位置10と14の間すなわち、図7BのSAH-ExBに炭化水素架橋、並びに少なくとも3個の連続アミノ酸、又は少なくとも2個のアミノ酸を螺旋の単一面上に、或いはGLP-1の少なくとも2個の相互作用面アミノ酸図2Aを参照されたい又はこれらの同族体を含んでいる。本発明の構造的に拘束されるペプチドはエクセナチド又はGLP-1配列のみ、又はC末端、又はN-末端、或いは両方の側面に位置するエクセナチド又はGLP-1配列を包含できる。本発明で提供されるペプチドは、ペプチドを構造的に拘束する改変に加えて、非アミノ酸改変を更に包含できる。例えば、インビボにおけるペプチドの標的化のため、或いはペプチドの薬物動態及び/又は薬力学的特性を変えるために官能基を包含できる。このような改変は当該技術分野で公知である。アミノ酸の積み重ねカラムを構成するアミノ酸の位置を、配列番号1で示されるペプチド配列の螺旋輪上の位置に対応する位置で定義できる図3を参照されたい。構造的に拘束されているペプチドの配列を、GIPP、GIP、GLP-1前駆体、GLP-1、GLP-2、リラグルチド、タスポグルチド、及びアルビグルチドを包含する、その他の同族インスリン分泌促進ペプチドの配列と位置合わせすることができる。配列位置合わせを実施する方法は当業者に公知である。更に、螺旋中の対応アミノ酸を多数の市販コイル決定プログラムの何れかを用いて決定できる。配列番号1で示される配列に関して、アミノ酸の積み重ねカラムは図3に描かれているものを包含できる。本発明は、配列番号1で表されるエクセナチドポリペプチド配列又はその同族体に由来する、少なくとも3個の相互作用面アミノ酸又は相互作用面アミノ酸の同類置換を有するポリペプチドも提供する。このポリペプチドの相互作用面はペプチドの単一面であって、ここで相互作用面アミノ酸は、H1、D9、F22、I23及びL26のような、配列番号1由来のアミノ酸に対応する位置、又は構造決定PDBID3C5T及び/又は配列番号1のアラニンスキャニングによって特定された、G4、F6、T17、G30、P31、P36、P37、P38のような、生物活性に対して重要であることが知られているその他の重要な残基に対応する位置から選択される。本発明で提供される構造的に拘束されるペプチドはエクセナチド由来のその他の配列又はその他のインスリン分泌促進ポリペプチド由来の配列の何れかの、更なるアミノ酸配列を包含できる。更なるアミノ酸配列は構造的に拘束されてもされていなくてもよい。本発明は、エクセナチド、或いはエクセナチド又は同族ペプチドの少なくとも3連続アミノ酸、或いはエクセナチド又は同族ペプチドの螺旋の単一面上の少なくとも2個のアミノ酸、或いはエクセナチド又は同族ペプチドの少なくとも2個の相互作用面アミノ酸;或いはそれらの同類置換を有する同族配列の使用を提供する。エクセナチド又は同族ペプチドの螺旋の単一面は、1個、2個、3個、又は4個の隣接するアミノ酸の積み重ねカラムを包含し、ここではアミノ酸の積み重ねカラムは、α螺旋中の、位置a、d、及びg;位置b及びe;又は位置c及びfによって定義され、ここで位置aは螺旋中のアミノ酸であって、アミノ酸はα螺旋;又はその同族体中で連続的に順にaからgの文字を割り当てられている。例えば、ペプチドのα螺旋及びアミノ酸の積み重ねカラムは、配列番号1又はその同族体の位置1、4、5、8、11、12、15、18、19、22、25、26、29、32、及び33;又は位置2、5、6、9、12、13、16、19、20、23、26、27、30、33、及び34;又は位置3、6、7、10、13、14、17、20、21、24、27、28、31、及び34;又は位置4、7、8、11、14、15、18、21、22、25、28、29、32、及び35;又は位置5、8、9、12、15、16、19、22、23、26、29、30、及び33;又は位置6、9、10、13、16、17、20、23、24、27、30、31、及び34;又は7、10、11、14、17、18、21、24、25、28、31、32、及び35として定義される。本明細書で提供される、α螺旋構造を有するペプチドの単一面は、1個、2個、3個、又は4個の隣接するアミノ酸の積み重ねカラムを包含できる。本発明は更に、エクセナチド又は同族ペプチドの相互作用面アミノ酸を有するペプチドを提供する。相互作用面は、本発明によって提供される螺旋ペプチド上の1つの面の例である。相互作用面のアミノ酸は配列番号1のH1、G2、T5、S8、D9、K12、E15、E16、V19、R20、F22、I23、I26、K27のような位置に対応するアミノ酸を包含するか、又は配列番号1上の位置H1、D9、F22、I23及びL26に対応するアミノ酸に更に限定されてもよい。更なる実施態様では、本発明は薬学的に許容される担体中にある本発明の構造的に拘束されるペプチドの何れかを提供する。本発明は更に、単位剤形中の薬学的に許容される担体中にある本発明のペプチドを提供する。本発明は機能的に担体に結合している本発明の構造的に拘束されているペプチドを提供する。ある特定の実施態様では、担体は、構造的に拘束されるペプチドの薬物動態及び/又は薬物動態特性を変えるタンパク質又は脂質を包含している。ある特定の実施態様では、組成物の構造的に拘束されるペプチドは担体タンパク質と部位特異的連結によって確立される特定の方位に機能的に結合している。更なる実施態様では、本発明は、本発明の構造的に拘束されるペプチドの治療有効量を対象に投与することによって、例えば、対象の1型又は2型糖尿病を予防、改善、又は治療する方法を提供する。方法は更に、糖尿病の予防、改善又は治療が必要であるかについて対象を1つ又はそれ以上確認すること、又は糖尿病の予防、改善又は治療について対象を観察することの1つ又はそれ以上を包含する。ある特定の実施態様では、本発明は糖尿病を予防、改善、及び治療する方法を提供し、そこではインスリン放出を増強することによる血糖正常値を促進することの少なくとも1つを包含している。本発明は、注射、吸入、又は経口で送達されて正常血糖値を促進する、本発明の構造的に拘束されるペプチドを包含している薬剤の製剤を提供する。薬剤は糖尿病の予防及び/又は治療のためになる。ある特定の実施態様では、本発明は少なくとも1つの構造的に拘束される本発明のペプチド及び使用説明書を包含しているキットを提供する。一態様では、本発明は、α螺旋及び1つ又はそれ以上の分子鎖を含んでいる構造的に強化されたインスリン分泌促進ポリペプチドを提供し、ここではそれぞれの分子鎖が当該ポリペプチドのα螺旋上に存在している残基の1対を共有結合して、それによりインスリン分泌促進ポリペプチドを構造的に強化している。別の態様では、本発明は、本発明の構造的に強化したインスリン分泌促進ポリペプチド及び1つ又はそれ以上の薬学的に許容される担体を含んでいる医薬組成物を提供する。更なる態様では、本発明は、本発明の構造的に強化したインスリン分泌促進ポリペプチドの治療有効量、又は本発明の構造的に強化したインスリン分泌促進ポリペプチドを含んでいる組成物を投与することを含んでなる、糖尿病を治療又は予防する方法を提供する。一実施態様では、本発明の構造的に強化したインスリン分泌促進ポリペプチドはエクセナチド、GIPP、GIP、GLP-1前駆体、GLP-1、GLP-2、GLP-17~37、GLP-17~36、リラグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド又はLY2189265であってよい。別の実施態様では、本発明の構造的に強化したインスリン分泌促進ポリペプチドはエクセナチドであってよい。更に別の実施態様では、ポリペプチド当りの分子鎖の数は1~2、2~3、2~4、2~5、2~6、2~7、2~8、2~9又は2~10の間であってよい。更に別の実施態様では、少なくと1つの残基対はポリペプチドのN-末端半分内に存在している。少なくと1つの残基対はポリペプチドのC-末端半分内に存在できる。少なくと1つの残基対はポリペプチドに沿うどの位置に存在していてもよい。更に別の実施態様では、ポリペプチドのC-末端半分以内にポリペプチドは少なくとも1つの結合した残基対を、そしてポリペプチドのN-末端半分以内に別の結合した残基を含んでいる。更に別の実施態様では、ポリペプチドは、配列番号2又は15~38で表される配列の何れか1つを有しているエクセナチドに対応している。更なる実施態様では、ポリペプチドは、配列番号39~62で表される配列の何れか1つを有しているGLP-1に対応している。更なる実施態様では、ポリペプチドは、ポリペプチドのα螺旋の残基位置に対して位置i、i3、又はi、i4又はi、i7に位置する第1分子鎖を有している。ポリペプチドは、ポリペプチドのα螺旋の残基位置に対して位置i、i3、又はi、i4又はi、i7に位置する第2分子鎖を有していてもよいが、第1及び第2分子鎖は同一位置には位置していない。ある特定の実施態様では、少なくとも2つの分子鎖を用いる場合は、少なくとも2つの分子鎖を縫い合わせたstitched配置に構成できる。縫い合わされた分子鎖とは、連続的に配置されている結合が共通の起源から作られていることを示す。すなわち、縫い合わせた架橋の使用は、そこでは二重連結が共通の起源例えば、X1、X5、及びX9、ここでX5は両架橋のアンカーポイントであるから作られていることである。従って、本発明は、配列を更に安定化するかあるいは、より長いポリペプチド伸張の構造安定性、タンパク質分解耐性、熱安定性、酸安定性、薬理学的特性、及び生物活性増強を促進するためにポリペプチド配列内に1つ又はそれ以上の架橋の組み込みを包含している。図5Bは、縫い合わせの配置にある複数の架橋又は分子鎖を有しているポリペプチドの実施態様を示している。従って、一実施態様では、本発明の連結されているポリペプチドは、縫い合わせ配置にある1対の分子鎖を含んでよく、それによって第1分子鎖の末端と第2分子鎖の開始点はポリペプチド中の共通残基に由来している。更に別の実施態様では、強化したポリペプチドは、強化していない対応ポリペプチドの半減期より少なくとも2倍、又は3倍、或いは8倍も長い半減期を有している。更に別の実施態様では、強化したポリペプチドは、強化していない対応ポリペプチドのインビトロにおけるキモトリプシンへの耐性の、少なくとも2倍、又は3倍、或いは8倍も大きいインビトロにおけるキモトリプシンへの耐性を有している。更に別の実施態様では、強化したポリペプチドは、強化していない対応ポリペプチドのインビトロにおけるキモトリプシンへの耐性の、少なくとも6倍、又は13倍大きいインビトロにおけるキモトリプシンへの耐性を有している。更に別の実施態様では、強化したポリペプチドは、強化していない対応ポリペプチドのインビボにおける血清プロテアーゼへの耐性の、少なくとも2倍、又は5倍、又は10倍大きいインビボにおける血清プロテアーゼへの耐性を有している。ある特定の実施態様では、本発明の糖尿病を治療する方法は、経口送達経路を介して本発明のポリペプチドを投与することを含んでいる。ある特定の別の実施態様では、本発明の糖尿病を治療する方法は、注射による送達経路を介して本発明のポリペプチドを投与することを含んでいる。本発明の別の実施態様は、以下に提供した開示に基づいて理解できるだろう。本発明は、インクレチンホルモン例えば、グルカゴン様ペプチド-1、インクレチン類縁体例えば、リラグルチド又はインクレチン模倣体例えば、エクセナチドを含む、インスリン分泌促進活性を有するポリペプチドを安定に架橋することが、異常なグルコースホメオスタシスに関連する疾患、例えば、2型糖尿病及び2型糖尿病に関連している疾患の治療において優れた予期しない利益をもたらすという予期しない発見に関連している。このような利益は、これに限定されないが、架橋されていない対応物と比較して、延長された半減期、増強されたα螺旋性、改善された熱安定性及びプロテアーゼ耐性、増大した機能活性及び薬理学的特性、何れかの経路で投与したときの改善されたバイオアベイラビリティー、並びに経口で送達されたときの改善されたバイオアベイラビリティー及び胃腸吸収を包含する。従って、本発明は以前は得られなかったか又は入手可能ではなかった、利益をもたらすインスリン分泌促進ポリペプチドを投与する新規且つ有益な手法を提供する。従って、本発明は注射による経路で送達されたインスリン分泌促進ポリペプチドの改善された半減期及びこれによるバイオアベイラビリティー、有効性、などを可能にする。更に、本発明は、経口、経鼻及び舌下経路を包含する、非注射経路を介して、インスリン分泌促進ポリペプチド薬剤例えば、GIP、GLP-1、GLP-2、エクセナチド、リラグルチド、タスポグルチド、又はアルビグルチドの有効量を送達するすなわち、これは送達されて生物学的に利用可能となることを可能にし、それによってよりよい患者のコンプライアンスの可能性及び使いやすさを改善する。従って、本発明は、異常なグルコースホメオスタシスを伴う疾患、例えば、2型糖尿病及び2型糖尿病に関連する疾患の治療及び/又は予防に用いるための、構造的に拘束されているインクレチンホルモン例えば、グルカゴン様ペプチド-1、インクレチン類縁体例えば、リラグルチド又はインクレチン模倣体例えば、エクセナチドを包含する、構造的に拘束されているインスリン分泌促進ポリペプチドを使用及び/又は製造する組成物、キット並びに方法を対象としている。本発明は、少なくともその一部が、炭化水素で架橋されたα螺旋エクセナチドペプチド及びその機能的変異体が、α螺旋構造強化、中性及び酸性プロテアーゼ耐性、熱安定性、及び経口吸収、長いペプチド治療剤の従来の欠点の改善を包含する、強化された薬理学的特性示すことを明らかにしている本明細書で提供された結果に基づいている。その結果、このペプチドはその非改変対応物と比較してインビボにおける優れた薬理学的特性を有し、非改変ポリペプチド配列と比較して投与が必要な構造的に拘束されたペプチドの頻度及び量を低減する。さまざまな実施態様では、本発明のポリペプチドは、少なくとも1つの分子鎖、例えば炭化水素架橋、で安定化されている1つ又はそれ以上のα螺旋ドメインを含んでいるが、2つ、3つ又はそれ以上のこのような炭化水素架橋を含んでもよい。複数の炭化水素架橋を包含することは長さが20又はそれ以上のアミノ酸であるα螺旋ペプチドに特に適している。1つ以上ペプチドの長さにより、例えば、2、3、4、5つの炭化水素架橋の包含は、改変したポリペプチドの優れた構造、中性及び酸性プロテアーゼ耐性、及び熱安定性をもたらし、インビボにおける際立って改善された薬理学的特性を有する生物活性ペプチドを産生する。本明細書で明らかにしたように、本発明の架橋したインスリン分泌促進ポリペプチド例えば、架橋したエクセナチド安定化されたα螺旋性、タンパク質分解及び熱に対する安定性、及び相当する構造的に拘束されていないポリペプチドより、より望ましい薬物動態及びバイオアベイラビリティー特性を明らかにしている。重要なことは、本明細書で更に明らかにされるように、本発明の架橋されたポリペプチドは経口送達及び胃腸管暴露の間中プロテアーゼ作用に耐えることができて、これは特定のFDAに承認されている静脈内投与用インスリン分泌促進薬剤例えば、エクセナチド又はリラグルチドには不可能なことである。定義本発明は本明細書に記載されている特定の物質及び方法に限定されないことを理解されたい。本明細書で用いられている専門用語は特定の態様を記載することが目的であって、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図していないことも理解されたい。別に定義されていない限り、本明細書で用いられている全ての技術及び科学用語は本発明が属する技術分野の当業者によって普通に理解されている意味を有している。本明細書で言及されている全ての刊行物は、細胞株、プロトコル、試薬及びベクターを記載及び開示することを目的として引用されていて、これらは刊行物中に報告されていて本発明に関連して用いることができる。本明細書中にはこのような引用文献が先行技術であることを承認すると解釈されるものは何もない。本明細書で用いられているような、単数形a、an、及びtheは、文脈が他のものを明確に指示していない限り複数への言及を含んでいる。例えば、宿主細胞、ahostcellへの言及は、当業者に公知の複数のこのような宿主細胞を含んでいる。薬剤は、治療効果のある化合物又は潜在的に治療効果のある化合物を包含すると本明細書では理解されている。薬剤は以前に公知であるか又は未知である化合物である。本明細書で用いられるような、薬剤は細胞に基づいていない化合物であるが、薬剤は生物学的治療薬剤、例えば、ポリペプチド例えば、インスリン分泌促進ポリペプチド又は核酸治療剤、サイトカイン、抗体、等を含むことができる。薬剤は一重又は多重架橋されたインスリン分泌促進ポリペプチド例えば、エクセナチド、及び機能的な同族体、断片、類縁体、誘導体又はその模倣体を含むことができる。本明細書で用いられる用語機能的断片は、インクレチンホルモン例えば、グルカゴン様ペプチド-1、インクレチン類縁体例えば、リラグルチド、又はインクレチン模倣体例えば、エクセナチドを包含する、本発明の何れかのインスリン分泌促進ポリペプチドのポリペプチド断片を示し、これはその対応する元のインスリン分泌促進ポリペプチド、例えば、エクセナチド又はGLP-1の生物学的又は薬理学的活性又は特性の少なくとも約10、又は約20又は30、又は40、又は50、又は60、又は70、又は80、又は90以上、又は少なくとも99又はそれ以上を保持している。断片はそれが基になっているポリペプチドのアミノ酸の任意の連続領域であってよい。断片は、共に結合して断片を形成している、基になっているポリペプチドのアミノ酸の2つ又はそれ以上の異なった連続領域のキメラ配列の形態であってもよい。本発明の関連において、天然のインスリン分泌促進ポリペプチド例えば、GLP-1の断片の1例は、GLP-1の残基1~20であるこれはGLP-11~20と、或いは当業者に明らかな命名法を用いて同様に表示できる。本明細書で用いられる用語類縁体、analog又はanalogueは、Xの機能活性に必要なXの化学構造を保持しているが、Xとは異なるある特定の化学構造も含んでいる、化合物X例えば、ポリペプチド、ペプチド又はアミノ酸を示す。本発明の関連において、天然のインスリン分泌促進ポリペプチドの類縁体の1例は、1つ又はそれ以上の非天然アミノ酸、例えば、本発明の炭化水素架橋に関与しているアミノ酸交換のようなもの、を含んでいるGLP-1ポリペプチドである。本発明の類縁体は、その対応する元のインスリン分泌促進ポリペプチド、例えば、エクセナチド又はGLP-1の生物学的又は薬理学的活性又は特性の少なくとも約10、又は約20又は30、又は40、又は50、又は60、又は70、又は80、又は90以上、又は少なくとも99又はそれ以上を保持していることが好ましい。本明細書で用いられるような、化合物Xの模倣体は、Xの機能活性に必要であるXの化学構造が、Xの配座を模倣している別の化学構造と置き換わっている化合物を示す。ペプチド模倣体の例は、ペプチド骨格が1つ又はそれ以上のベンゾジアゼピン分子で置換されているペプチド化合物例えば、JamesGLetalScience26019371942を参照されたい、全てのL‐アミノ酸が対応するD-アミノ酸で置換されているペプチド、及び逆-インベルソペプチド米国特許第4,522,752号Sisto公報を参照されたいを包含する。本発明の関連において、模倣体はそれを比較する対応ポリペプチドと殆ど又は全く配列相同性を有しておらず非常に異なった長さであってもよい天然又は合成ポリペプチドも包含してもよく、よって模倣体はこれと比較される対応ポリペプチドの生物学的又は薬理学的活性又は特性の少なくとも約10、又は約20又は30、又は40、又は50、又は60、又は70、又は80、又は90以上、又は少なくとも99又はそれ以上を有している。例えば、エクセナチドはGLP-1の模倣体であって、全体の配列53の同一性及び伸張したC-末端領域を殆ど有していないが、GLP-1受容体でGLP-1の生物活性を共有している。本明細書で用いられるような、化合物X例えば、ペプチド又はアミノ酸の誘導体は、化合物上の1つ又はそれ以上の反応基が置換基で誘導体化されているXの一形態を示す。ペプチド誘導体の例は、そのアミノ酸側鎖、ペプチド骨格、又はアミノ-又はカルボキシ-末端が誘導体化されているペプチド例えば、メチル化アミド結合を有するペプチド化合物を包含する。本明細書で用いられる用語機能的エクセナチド変異体、エクセナチド様ペプチド、エクセナチド同族体、又はそのエクセナチドの機能的変異体は、エクセナチドと類似の又は同種の配列を有していて、エクセナチド活性をアッセイする適切な方法の何れかで測定して、配列番号1で表わされるエクセナチドペプチドの活性の少なくとも50、又は60、又は70、又は80、又は90、又は95、或いは99又はそれ以上を有している何れかのペプチドを参照することを意味している。本明細書で用いられる用語インスリン分泌促進ポリペプチド又はインスリン分泌促進剤は、インスリン分泌促進活性を有しているポリペプチド又は小分子或いはその他の化合物を示す。本明細書で用いられるような、インスリン分泌促進活性を有しているポリペプチドは、インスリンの産生例えば、発現、放出、分泌、形成、等及び/又は活性及び/又は量を、直接的あるいは間接的に、刺激するか又はこれに影響を及ぼすものであると定義される。例えば、インスリン分泌促進ポリペプチドは、直接的あるいは間接的に、膵臓のβ細胞からインスリンの放出を引き起こし、そして/又は、直接的あるいは間接的に、血漿中のインスリン濃度の増大を引き起こすものを示すことができる。インスリン分泌促進ポリペプチドは、天然又は合成ポリペプチドを包含でき、更にそれらの機能的断片、誘導体、変異体、同族体、又は模倣体の何れも包含できる。インスリン分泌促進ポリペプチドは、インクレチン系の成分例えば、GLP-1、GIP及びそれらの類縁体、機能的断片、誘導体又は模倣体の何れも包含できる。インスリン分泌促進活性はグルコース依存性又はグルコース非依存性であってよい。本発明のインスリン分泌促進ポリペプチドはその上に更なる又はその他の活性を有していてよく、この用語は、どんな方法によっても、そのような別の活性を限定することを意味していない。例えば、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチド、例えば、エクセナチド又はGLP-1は、直接的あるいは間接的に、グルカゴンの生産を阻害又は最小化することもできる。用語インスリン分泌促進活性は、特定の作用メカニズムの何れかと結び付けることを意味していない。例えば、DPP-IVは、GLP-1及びGIPの正常な分解酵素として機能するインクレチン系の調節分解酵素である。突然変異DPP-IVは、その分解活性が、GLP-1及びGIP両者はインスリンの生産を刺激するの有効量が増大するように阻害されるか又は減少すると、インスリン分泌促進性になれる。従って、このような突然変異DPP-IVは、間接的にインスリンの量を増大するので、インスリン分泌促進性である。当然のことながら、インスリン分泌促進剤又はポリペプチドすなわち、インスリン分泌促進活性を有しているは、糖調節又は血糖調節活性を有する薬剤又はポリペプチドと見なすことができる。従って、本発明は、糖調節又は血糖調節活性を有しているポリペプチドも意図している。本明細書で用いられる用語糖調節又は血糖調節活性は直接的又は間接的に関与している活性が体内のグルコースの代謝に応答するか又はこれを調節することを示している。従って、本発明はインスリン分泌促進活性を有するポリペプチドに限定されず、代わりに糖を調節するか又は血糖調節活性を有するポリペプチドの何れかまで広げることができ、これは例えば、直接的或いは間接的に、グルコース、インスリン、又はグルカゴン等の産生例えば、発現、放出、分泌、形成等及び/又は活性及び/又は量に影響を及ぼすポリペプチドの何れかを包含できる。本明細書で用いられる改善又は治療は、特定の病気又は疾患、例えば、2型糖尿病又はそれに関連する疾患の少なくとも1つの前兆、症状、兆候、影響を低下又は減少すること意味すると理解される。例えば、2型糖尿病の改善又は治療は、血中のグルコース濃度を安定化することでよい。改善又は治療は薬剤の1以上の用量を単独で又は他の治療薬及び治療介入と組合わせて投与することを必要とすることができる。改善又は治療は疾患が治ることを必要としない。本明細書で用いられる用語アミノ酸は、アミノ基とカルボキシル基の両方を含有している分子を示す。適切なアミノ酸は、限定されないが、ペプチド中で見出せる20個の通常の天然アミノ酸例えば、A、R、N、C、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V1文字略号として知られているのD-及びL-異性体の両方、並びに有機合成又はその他の代謝経路で製造されて、化学的多様性、機能性、結合能力、構造擬態、及び安定性を増大するような特定な用途に適用できるβアミノ酸を含む天然又は非天然アミノ酸を包含する。本明細書で用いられる用語アミノ酸側鎖またはアミノ酸のR基は、アミノ酸のα炭素に結合している部分を示す。例えば、アラニンのアミノ酸側鎖又はR基はメチル基でであり、フェニルアラニンのアミノ酸側鎖はフェニルメチルであり、システインのアミノ酸側鎖はチオメチルであり、アスパラギン酸のアミノ酸側鎖はカルボキシメチルであり、チロシンのアミノ酸側鎖は4-ヒドロキシフェニルメチルである、等である。その他の非天然アミノ酸側鎖も、例えば、天然のもの例えば、アミノ酸代謝物又は合成的に作られたもの例えば、αジ置換アミノ酸、βアミノ酸含まれる。本発明の構造的に拘束されているペプチドと組成物中で用いる担体タンパク質は、拘束されているペプチド結合したときにインスリン産生の増大を引き起こすタンパク質又は液体のようなその他の物質であると理解される。担体複合体の例は当該技術分野で公知であって、例えば、一重又は多重架橋されたエクセナチドペプチド又はその同族体を標的にして適切な受容体にする分子を包含する。本明細書で用いられるコントロールサンプル又は対象と比較して変化したは、正常な、未処置の又はコントロールサンプル由来のサンプルとは統計的に異なっているレベルで検出される被分析物或いは診断又は治療指標のレベルを有していると理解される。コントロールサンプルは、例えば、培養物中の細胞、1つ又はそれ以上の実験動物、1人又はそれ以上のヒト対象を包含する。コントロールサンプルを選択して試験する方法は当業者の能力の範囲内である。被分析物は細胞又は有機体例えば、抗体により特徴的に発現又は生産される天然物質又はレポータ構築物例えば、β-ガラクトシダーゼ又はルシフェラーゼによって生産される物質であってよい。検出に用いた方法によって、変化の量及び計量は変化する。コントロール参照サンプルと比較して変化したものはリガンドの受容体、例えば膵臓GLP-1受容体への、抗体、拮抗剤、又はその他の阻害剤の存在下での、減少した結合も包含できる。統計的有意性の決定は当業者の能力の範囲内である。本明細書で用いられる用語併用投与は、薬剤が対象内で同時に存在して作用するように1つ又はそれ以上のの薬剤を対象に投与することであると理解される。併用投与は薬剤の混合剤を調剤すること及び薬剤の同時投与を必要としない。本明細書で用いられる用語同類アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似した側鎖を有しているアミノ酸残基で置き換えられていることである。例えば、類似した側鎖を有しているアミノ酸残基のファミリーが当該技術分野で定義されている。これらのファミリーは塩基性の側鎖例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、酸性側鎖例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、非荷電の極性側鎖例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、非極性側鎖例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、β分岐側鎖例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン及び芳香族側鎖例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジンを有するアミノ酸を包含する。その他の同類アミノ酸置換は、ペプチドの電荷を修正するためにアスパラギン酸をアスパラギンで置換する場合のような、アミノ酸側鎖ファミリーを越えて生じてもよい。よって、エクセナチドポリペプチド配列番号1にある予測非必須アミノ酸残基を、例えば、同じ側鎖ファミリー又はファミリーを越えた同族体例えば、アスパラギン酸をアスパラギンに、グルタミン酸をグルタミンに由来の別のアミノ酸残基で置き換えることができる。同類変更は更に、化学的に同族である非天然アミノ酸の置換すなわち、ロイシンの代わりに合成非天然疎水性アミノ酸を、トリプトファンの代わりに合成非天然芳香族アミノ酸をを含むことができる。本明細書で用いられる用語細胞を接触させるは、薬剤又は単離された細胞が試験細胞又は処置する細胞と相互作用するように、試験細胞又は処置される細胞に取り込まれる可能性のあるように、及び試験細胞又は処置される細胞に効果を及ぼすように、薬剤を試験細胞、例えば、培養液中で又は動物体内で試験される細胞に提供することであると理解される。薬剤又は単離された細胞は細胞に直接送達されるか例えば、薬剤の培養培地への添加によって、又は目的の細胞又は組織内への注射によって、或いは血液循環、リンパ循環、又はその他の方法で細胞へ送達するための投与の経腸又は非経口経路による生体への送達によるものでよい。本明細書で用いられる検出すること、検出等は、サンプル中の特定の被分析物、サンプル中のレポータ構築物由来の産物、又はサンプル中の薬剤の活性例えば、結合阻害、合胞体の形成の阻害、伝染性阻害を確認するために実施されるアッセイであると理解される。検出は、ELISAキット又はLC/MS分析による血中の架橋ペプチドの濃度、血清グルコース濃度、血清インスリン濃度又はヘモグロビンA1Cパーセントのような生理学的情報による架橋ペプチドの機能的効果の確定を包含できる。被分析物の量又はサンプル中で検出された活性は、特定のアッセイに関する検出、アッセイ又は方法の検出のゼロ、又は低いレベルの範囲内に入る。本明細書で用いられる用語診断とは、病気、障害、又は疾患の少なくとも1つの兆候又は症状の存在に基づいて病気、障害、又は疾患を有している対象を確認するための観察、試験又は状況に基づく対象の疾患の臨床的又はその他の評価を示す。典型的には、本発明の方法を用いる診断は、病気、障害、又は疾患、例えば、2型糖尿病のその他の兆候又は症状についての対象の観察を包含している。用語有効量、又は有効用量或いは治療有効量又は用量は、意図された薬理学、治療又は予防結果を生じるための薬剤のその量を示す。薬理学的有効量は2型糖尿病又は関連疾患の1つ又はそれ以上の兆候又は症状の改善をもたらす。例えば、治療有効量は、好ましくは、治療されないコントロール対象と比較して、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも35、少なくとも40、少なくとも45、少なくとも50、少なくとも55、少なくとも60、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、又はそれ以上までに、血中のグルコース濃度を減少する治療剤の量を示す。量が有効量であるか否かの評価は、血中グルコース濃度の変化、血清インスリンの増大した濃度、減少したヘモグロビンA1Cパーセントすなわち、長期の血糖状況及び糖尿病コントロールを測定することを包含する、糖尿病の領域における当業者に公知の標準的な試験の何れかを用いて行うことができる。薬剤の1用量以上が有効用量をもたらすのに必要であろう。本明細書で用いられる用語効果がある及び有効性は、薬理学的有効性と生理学的安全性の両方を含んでいる。薬理学的有効性は患者に所望の生物学的効果をもたらすその治療剤の能力を示す。生理学的安全性は、その治療の投与がもたらす細胞、臓器及び/又は生命体レベルにおける毒性、又はその他の有害な生理作用副作用と言われることが多いのレベルを示す。一方、用語効果がないは、少なくとも無成層群において、有害作用は存在しなくても、治療が治療的に有用であるほど十分な薬理学的効果をもたらさないことを意味している。このような治療は、発現プロファイル又は複数プロファイルで確認できるサブグループにおいて無効であろう。効果が弱いは、薬理学的有効性の有意に低いレベル及び/又は有害な生理作用、例えば、肝毒性の治療的に高いレベルをもたらす治療を意味する。従って、薬剤の投与に関連して、病気又は疾患に対して有効である薬剤は、臨床的に適切な方法による投与が、症状の改善、治癒、疾患の兆候又は症状の減少、余命の延長、生活の質の改善、或いは病気又は疾患の特殊なタイプの治療に通じている医師によって一般に肯定的に認識されているその他の効果のような、有益な効果を、少なくとも統計的に有意な数の患者にもたらすということを意味している。本明細書で用いられる、螺旋、例えば、α螺旋又は310螺旋の面は、螺旋が垂直に配置されたときに、単面にあるアミノ酸が他のものの頂部にあるものとして表わされるように、タンパク質の螺旋に積み重ねられているアミノ酸と理解される例えば、図3を参照されたい。例えば、α螺旋は1回転当たり約3.6個のアミノ酸を有している。従って、配列abcdefga’b’c’d’e’f’g’を有しているペプチドがα螺旋を形成するときは、4番目と5番目のアミノ酸i3及びi4、すなわち、アミノ酸d及びeは、1番目のアミノ酸上に積み重なり位置1~3.6アミノ酸、そして8番目のアミノ酸である、アミノ酸a’i7はアミノ酸aの上に積み重なって螺旋の面を形成してアミノ酸a’と新しい回転を開始する例えば、図3を参照されたい。α螺旋において、2番目のアミノ酸である、アミノ酸bは5番目と6番目のアミノ酸、すなわち3と4位でアミノ酸e及びf、及び7位でアミノ酸b’と積み重なって螺旋の面を形成する。アミノ酸c、d、e、f、及びgで始まる螺旋の面は上記の開示に基づいて容易に確認できる。更に、螺旋の面は、2つの隣接した、3つの隣接した或いは4つの隣接した積み重なった残基のカラムを包含できる。螺旋の面の例は、螺旋の相互作用面を包含する例えば、図3は、GLP-1受容体と結合することが知られているエクセナチドのような相互作用面を示す。相互作用面のアミノ酸残基は、ポリペプチドの野生型配列から変化したときに、受容体と接触して例えば、図2及び3を参照されたい、ポリペプチドの機能活性を無効或いは実質的に無効にする残基である。実質的に無効にすることとは、適切なアッセイ例えば、受容体結合アッセイ、第2メッセンジャーのシグナル伝達又は受容体シグナル伝達の下流エフェクターのリン酸化状態の変化を観察する機能アッセイ、或いはインビトロ又はインビボにおけるグルコース濃度又はグルコース刺激インスリン放出を観察するアッセイで野生型ペプチドの約50未満、約40未満、約30未満まで、エクセナチド又は機能的に同族のペプチドの機能活性を減少させることであると理解される。エクセナチド及びエクセナチド様ペプチドの相互作用面のアミノ酸残基は、図2に描かれているように、GLP-1受容体及びエクセナチドの小断片アミノ酸9~33について報告されているような、構造確認及びアラニンスキャンニングのような、当該技術分野で周知の方法によって容易に確認できる。本明細書で用いられる用語相互作用面アミノ酸残基は、配列の機能を妨害しない相互作用面アミノ酸の同類置換を包含する。一般に相互作用面アミノ酸残基はα螺旋の相互作用面で見られるコアエクセナチドα螺旋に関する図2及び3で定義されているように。いくつかのインスリン分泌促進ポリペプチド例えば、エクセナチド又はそれらの機能的同族体残基は置換されにくいのに対して、他のものは、本明細書で更に記載されているような、例えば、アラニン又は架橋スキャンニングによって確認できるような、変化をより受けやすい。エクセナチド、GLP-1、及びリラグルチドのようなインスリン分泌促進ポリペプチドは、当業者により、配列に基づく相同性、構造的相同性及び/又は機能的相同性により容易に確認できる同族の配列及びα螺旋を含んでいる。このような方法は当該技術分野で周知であって、対残基相関に基づく生物情報学プログラム例えば、chembnetorgsoftwareCOILSformhtmlを包含し、これはタンパク質配列及びそれらの構造モデルからコイルドコイルを認識する能力があるLupasAetalScience1991252p11621164を参照されたい。本明細書で用いられる用語炭化水素架橋化は、ポリペプチドの生来の二次構造を配座的に与えるのを助ける少なくとも2つの改変アミノ酸を有するポリペプチドを安定に架橋結合する工程を示す。炭化水素架橋化は、螺旋二次構造、例えば、α螺旋二次構造を有しやすいペプチドの螺旋二次構造を促進又は保持して、その生来のα螺旋配座を得るか或いは保持する。この二次構造はポリペプチドのタンパク分解的切断及び熱に対する耐性を増大し、そして疎水性も増大する。炭化水素架橋化を示すために用いられる代替え命名は、炭化水素鎖化又は架橋化、分子鎖化、残基内架橋化、鎖化、又は架橋結合化、ペプチド内架橋化、鎖化又は架橋結合化等を包含する。炭化水素架橋は、α螺旋構造を熱力学的に促すペプチド内のα螺旋二次構造を促進して保持する。述べたように、ポリペプチドの二次構造の強化はポリペプチドのタンパク分解的切断例えば、キモトリプシン又は胃腸管内のその他のプロテアーゼによる及び熱に対する耐性を増大し、そしてポリペプチドの疎水性も増大することができる。従って、炭化水素架橋されたそしてその結果、構造的に拘束及び強化された本明細書に記載されているような本発明のポリペプチドは、対応する炭化水素で架橋されていない構造的に拘束されていないポリペプチドと比較して、何れかの経路で投与したときの延長された半減期、増大したα螺旋性、改善された熱安定性及びプロテアーゼ耐性、増大した機能活性及び薬理学的特性、並びに改善されたバイオアベイラビリティーを含む、改善された生物学的活性を有している。炭化水素で架橋されたポリペプチドは、2つの非天然アミノ酸の間に1つ又はそれ以上の鎖結合を含むことができ、この鎖はポリペプチドの螺旋二次構造を有意に増強する。一般に、螺旋構造を促進するために、鎖を1つ又は2つの螺旋回転の長さすなわち、約3~3.6又は約7アミノ酸にわたり広がっている。従って、i及びi3:i及びi4;又はi及びi7に位置するアミノ酸は、化学修飾及び架橋のために理想的な候補である。従って、例えば、ペプチドが配列X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9...を有していて、アミノ酸Xがそれぞれの位置で独立して選択される場合は、X1とX4の間、又はX1とX5の間、又はX1とX8の間の架橋結合は、X2とX5の間、又はX2とX6の間、又はX2とX9の間等の架橋結合と同様に有用である。多数の架橋結合の使用例えば、2、3、4又はそれ以上も意図されている。多数の架橋結合の使用はペプチド、インスリン分泌促進性エクセナチド及びエクセナチド様ペプチドのようないくつかの非常に長いペプチドの場合と同様に、特に長さが伸びたペプチドでは、ペプチドの安定化及び最適化に効果的である。従って、本発明はポリペプチド配列内へ1つ以上の架橋を取り込むことを包含している。多数の架橋の使用は、ペプチド、特に長さが伸びているペプチドを安定化及び最適化するのに有効である。本発明はポリペプチド配列内に1つ又はそれ以上の架橋の取り込みも包含しており、ここでは架橋は縫い合わせた配置内で形成され、すなわち、2つの連続的に発生している架橋架橋結合が共通の起源残基から生じている例えば、図5Bに描かれているように。本発明で用いられている用語架橋スキャン又は架橋スキャンニングは、ペプチド配列鋳型の長さ方向に沿った架橋位置のシーケンス評価に関与していることを示している。一実施態様では、架橋スキャンニングは架橋ペプチドライブラリーの合成によって達成でき、これによってiとi3;iとi4;及びiとi7単一又は複数縫合縫い合わせ配置にあるの位置をペプチド配列の長さにそって順に置いて、全ての可能な位置にサンプリングして架橋又は縫合構築物について所望の又は最適な特性及び活性を確認する。分子内鎖、例えば炭化水素架橋を形成する方法は、例えば、米国特許出願公開第2006/0014675A1号、同第2006/0008848A1号、同第2004/0171809A1及び米国特許第7,723,469号、同第7,192,713号、及び同第7,084,244号公報に見出せ、これらはそれぞれ参照により本明細書に取り込まれている。分子内鎖は1つ又はそれ以上のエーテル、チオエーテル、エステル、アミン又はアミド部分を包含できる。ある場合では、天然のアミノ酸側鎖を鎖内に組み込むことができる。例えば、鎖を例えば、セリン中のヒドロキシル、システイン中のチオール、リジン中の1級アミン、アスパラ酸又はグルタミン酸中の酸或いはアスパラギン又はグルタミのアミドのような官能基と結合できる。従って、2つの非天然アミノ酸を結合して作られた鎖を用いるよりむしろ、天然のアミノ酸を用いて鎖を作成することが可能である。1つの非天然アミノ酸を天然のアミノ酸と共に用いることも可能である。鎖の長さは変更可能であることが更に想定されている。例えば、二次α螺旋構造に対して比較的高度の拘束を与えることが望ましい場合は、より短い鎖を用いることができ、それに対してと同様に、特にある場合は、二次α螺旋構造に低い拘束を与えることが望ましいので、より長い鎖が望まれる。また、主にα螺旋の単一面にある鎖を供給するようにアミノ酸iからi3、iからi4;及びiからi7に渡る鎖の例を記載したが、多数のアミノ酸の組合わせの何れかに渡るように鎖を合成することができる。場合によっては、αジ置換アミノ酸を、α螺旋二次構造の安定性を改善するためにポリペプチド中で用いる。しかし、αジ置換アミノ酸は必要ではなく、そしてモノα置換体例えば、連結されたアミノ酸においてを使用する例も想定されている。本明細書で用いられる用語同一性又は同一性パーセントは、2つの高分子、例えば、2つのポリヌクレオチド又は2つのポリペプチドの間のサブユニット配列類似性を示す。2つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットでしめられている場合、例えば、2つのペプチドのそれぞれ内のある位置がセリンで占められているなら、これらはその位置で同一である。2つの配列間の同一性は、マッチングした或いは同一位置の数の一次関数である。例えば、2つのペプチド又は化合物配列の半分例えば、長さが10サブユニットポリマー中で5つの位置が同一なら、2つの配列は50同一であり、位置の90、例えば、10のうち9がマッチしているならば、2つの配列は90の配列同一性を共有している。2つの配列間の同一性はマッチング又は同一の位置の数の一次関数である。従って、参照配列の一部が特定のペプチド中で欠失している場合は、欠失部分は配列同一性を算出する目的ではカウントしない。同一性は配列分析ソフトウェア、例えば、BLASTN又はBLASTPを用いて測定するることが多い。BLASTNヌクレオチド配列用によって2つの配列を比較するための初期設定パラメータ例えば、互いに2つの配列をBlastingは、マッチ=1、ミスマッチに対するペナルティー=-2、オープンギャップ=5、エクステンションギャップ=2とする。タンパク質配列のためにBLASTPを用いる場合は、初期設定パラメータを、マッチ=0、ミスマッチに対するペナルティー=0、オープンギャップ=11、及びエクステンションギャップ=1とする。更に、同一性を確認するためのコンピュータプログラムは当該技術分野で公知である。本明細書で用いられる、ポリペプチドを参照して用いるときの単離された又は精製されたは、天然のポリペプチド又はタンパク質が正常な生理環境から取り除かれているか例えば、血漿又は組織から単離されたタンパク質又は非天然環境で合成された例えば、インビトロの翻訳系で又は化学合成を用いて人工的に合成されたことを意味する。従って、単離された又は精製されたポリペプチドは、無細胞溶液中に或いは異なった細胞環境に置くことができる例えば、異種細胞型内で発現される。用語精製されたは、そのポリペプチドが存在する唯一のポリペプチドであることを意味しないが、自然にそれに付随している細胞又は有機物質を本質的に含まない約90~95、99~100純粋であるので、天然のポリペプチドと区別される。同様に、単離された核酸はその正常な生理環境から除去されている。細胞に関連して用いられる単離されたは、初代細胞又は細胞株の細胞が、細胞培養又は臓器培養の何れかで、培養中である動物内には無いといことを意味する。細胞は、正常動物、形質転換動物、自然発症遺伝子変化を有する動物、及び/又は遺伝性及び/又は誘導性の病気又は疾患を有する動物から単離できる。本明細書で用いられるキットは、本発明の方法で用いる、少なくとも1つの基準外の実験用試薬を含んでいると理解される。例えば、キットは、少なくとも1つの改変用ペプチド、1つ又はそれ以上のペプチドの改変用アルデヒド分子、及び使用説明書ののうち少なくとも1つ、好ましくは少なくとも2つを、その全てを適切な包装中に含むことができる。キットは、乾燥粉末、濃縮溶液、又はすぐに使える溶液のような、本発明の方法を実施するのに必要なその他の成分の何れかを更に含むことができる。ある実施態様では、キットは本発明の方法で用いる試薬を含有する1つ又はそれ以上の容器を含んでいて;このような容器は箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、又は当該技術分野で公知の適切な容器形態であってよい。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属ホイル、又は試薬を保持するのに適切なその他の物質から作ることができる。非必須アミノ酸残基は、ポリペプチドの野生型配列から、その機能的活性及び/又は二次構造α螺旋構造を無効にしないか或いは実質的に変更しないで、変えることができる残基である。得ることは製造すること、入手すること、又はその他の方法で手に入れることと本明細書では理解される。本明細書で用いられる操作可能に結合したは、操作可能に結合した部分の活性を実施例に提供されている方法の少なくとも1つを用いてアッセイすることができ、そして検出可能な活性を有することができるように、操作可能に結合した2つ又はそれ以上の成分がそれらの最初の活性を保持しているか、又は結合によって活性を得ているという形式で、結合している、好ましくは共有結合により、例えば、1つのペプチドのアミノ末端と別のペプチドのカルボキシ末端が結合していると理解される。語句、薬学的に許容される担体は当該技術分野で認識されていて、本発明の化合物を哺乳動物に投与するのに適している、薬学的に許容される物質、組成物又は賦形剤を包含する。担体は、1つの臓器又は身体の部分から別の臓器又は身体の部分へ対象薬剤を輸送又は移送することに関わる、液体又は固体の増量剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又は封入材料を包含する。それぞれの担体は、製剤の他の成分と適合して患者に有害ではないという意味で、許容可能でなくてはならない。例えば、細胞の投与のための薬学的に許容される担体は、典型的に、注射による送達に許容可能な担体であって、送達する細胞を損傷させ得る洗浄剤又はその他の化合物などの薬剤を包含していない。薬学的に許容される担体として働く物質のいくつかの例は:乳糖、ブドウ糖及び蔗糖のような糖類;トウモロコシ澱粉及びジャガイモ澱粉のような澱粉類;カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースのようなセルロース及びその誘導体;粉末トラガカント;麦芽;ゼラチン;タルク;ココアバター及び坐薬ワックスのような賦形剤;落花生油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及び大豆油のような油類;プロピレングリコールのようなグリコール類;グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールのようなポリオール類;オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのようなエステル類;寒天;水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムのような緩衝剤;アルギン酸;発熱因子を含まない水;等張食塩水;リンゲル液;エチルアルコール;リン酸緩衝溶液;及び医薬製剤中で用いられるその他の非毒性の適合可能物質を包含する。湿潤剤、乳化剤並びにラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムのような、滑沢剤、更に着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味、着香及び芳香剤、保存料並びに抗酸化剤も組成物中に存在させることができる。薬学的に許容される抗酸化剤の例は:アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等のような、水溶性抗酸化剤;パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソールBHA、ブチル化ヒドロキシトルエンBHT、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロール等のような、油溶性抗酸化剤;並びにクエン酸、エチレンジアミン四酢酸EDTA、ソルビトール、酒石酸、リン酸等のような金属キレート化剤を包含する。本発明の製剤は、経口、経鼻、局所、経皮、皮下、口腔、舌下、吸入、筋肉内、腹腔内、直腸内、膣内及び/又は非経口投与に適しているものを包含する。製剤は便宜上単回剤形で存在してもよく、医薬品の技術分野で周知の何れかの方法で製造できる。担体物質と組合わせて単回剤形を生産できる活性成分の量は一般に、治療効果をもたらす化合物の量であろう。本明細書で用いられる複数は1つ以上を意味すると理解される。例えば、複数は少なくとも2、3、4、5、又はそれ以上を示す。本明細書で用いられる用語ペプチド、ペプチド化合物及びペプチド構造は、天然のL-アミノ酸からなるペプチド、更に天然のL-アミノ酸構造のペプチド誘導体、ペプチド類縁体及びペプチド模倣体を包含するように意図されている。本明細書で用いられる用語ペプチド類縁体、ペプチド誘導体及びペプチド模倣体は、ペプチドの化学構造を模倣していてペプチドの機能特性例えば、GLP-1受容体に結合する能力を保持している分子を包含するように意図されている。ペプチド類縁体、誘導体及び模倣体を設計する方法は当該技術分野で公知である。例えば、FarmerPSinDrugDesignAcademicPressNewYork1980vol10pp119143BallJBandAlewoodPFJMolRecognition355MorganBAandGainorJAAnnRepMedChem24243及びFreidingerRMTrendsPharmacolSci10270を参照されたい。本明細書で用いられるポリペプチドは、2つ又はそれ以上の独立して選ばれた共有結合例えば、ペプチド結合で結合した天然又は非天然のアミノ酸と理解される。ポリペプチドは、ペプチド結合で連結している2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、又はそれ以上の天然又は非天然アミノ酸を含有できる。本明細書に記載されているポリペプチドは全長タンパク質例えば、十分に処理されたタンパク質を、更により短いアミノ酸配列例えば、天然タンパク質の断片又は合成ポリペプチド断片を包含する。本発明のポリペプチドの例は、本明細書に記載されている疎水性の架橋されたインスリン分泌促進ポリペプチド、及びその何れかの断片、類縁体、又は模倣体を包含する。本明細書で用いられる予防は、発病の速度又は程度を制限し、減少し、或いは病気又は疾患の少なくとも1つの兆候又は症状の進展を阻害すると理解される。予防は薬剤又は治療法の少なくとも1つの用量の投与を必要とする。本明細書で用いられるサンプルは、その環境例えば、動物由来の血液又は組織、細胞、或いは組織培養由来の調製済み培地から単離された生体材料で、ウィルス、抗体、又はレポータ構築物由来の産物のような被分析物を含有していることが疑われているか又は含有していることが知られているか、或いは、本発明のように、送達された架橋ペプチドの濃度又はインスリン及び/又はグルコースのような機能的に読み取れる被分析物の濃度が測定可能である。サンプルは、組織又は体液の部分的に精製された分画であってもよい。参照サンプルは、病気又は疾患体液を有していない提供者由来の、又は病気又は疾患を有している対象の正常組織例えば、非感染組織対感染組織由来の正常サンプルであってよい。参照サンプルは非処置提供者、又は活性薬剤で処置されていない非処置又は賦形剤のみ投与細胞培養由来でもよい。参照サンプルは細胞又は対象を試験薬剤と接触させる前の0時点に採取することもできる。2つ又はそれ以上のポリペプチド配列に関連している類似性又は類似性パーセントは、同一であるか又はアミノ酸残基の特定パーセント又はそれらの同類置換を有している、2つ又はそれ以上の配列又はサブ配列を示し、これは以下の配列比較アルゴリズムを用いて又は目視検査で測定して、最大一致について比較及び整列したときに同一である。ポリペプチドに関して本明細書で用いられている用語安定な又は安定化したは、螺旋構造を促進及び/又は保持し、そして/又はプロテアーゼ耐性を改善し、そして/又は酸安定性を改善し、そして又は熱安定性を改善し、そして又は薬理学的特性を改善するために炭化水素架橋されているポリペプチドを示す。安定化されたポリペプチドは一種の構造的に拘束されているポリペプチドである。ポリペプチドは本明細書に記載されている方法に従って、同一又は異なった炭化水素架橋で一重に、二重に、三重に、又は多重に架橋できる。本明細書で用いられている構造的に拘束されているポリペプチド又は構造的に強化されている等は、構造的に拘束されているペプチドが非改変ペプチドより限られた数の構造を導入するように、幾らかのすなわち、少なくとも1つの化学修飾、例えば、元の又は天然の配列の天然又は非天然アミノ酸による突然変異;分子鎖を組み込む化学修飾;ジスルフィド架橋の形成を促進する化学修飾;等を有する改変ポリペプチドを包含すると理解される。構造的に拘束されているポリペプチドは、天然の、野生型配列と比べて1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12又はそれ以上の突然変異を包含できる。例えば、分子鎖は安定な螺旋構造、特にα螺旋及び310構造の形成を促進する炭化水素架橋、又は鎖の末端の位置と鎖の長さに応じたねじれを包含できる。天然又は非天然アミノ酸を、ねじれ例えば、2つの隣接している構造間の可変角によって確定されるような構造中の屈曲又はその他の好ましい配座を促進するために使用できる。例えば、天然アミノ酸、プロリンはアミノ酸R基の構造及び水素結合供与体の欠如によって、ペプチドにねじれを誘導できる。非天然アミノ酸、特に大きくてそして/又は荷電したR基、或いはN-メチル化アミド、N-置換グリシン、環状α,αジ置換、環状N,N-ジ置換を有するもの、及びβアミノ酸は特定の、望ましい配座を促進できる。溶液中の構造的に拘束されているペプチドの集団は全て常に望ましい配座を有しているとは限らないということが理解される。かわりに、溶液中の構造的に拘束されているペプチドの集団において、化学修飾以前の溶液中の天然又は元のペプチド配列より、その時点で望ましい配座が、少なくとも約30、40、50、60、70、80、90、100又はそれ以上存在している。溶液中のペプチドの集団の配座は、これに限定されないが、円偏光2色性及びNMR分光法を包含する、当業者に公知の多種の方法によって確認できる。結晶形態にすると、拘束されているペプチドの構造を確認するためにX線結晶学を適用できる。本明細書で用いられる小分子は、化合物、典型的に、約1500Da、1000Da、750Da、又は500Daより大きくない分子量を有している有機化合物であると理解される。一実施態様では、小分子は天然のアミノ酸及び/又はヌクレオチドのみを含有しているポリペプチド又は核酸を包含しない。非特異的化合物、又は非特異的化合物のプールと比較して、少なくとも100倍、好ましくは少なくとも500倍、好ましくは少なくとも1000倍、好ましくは少なくとも5000倍、好ましくは少なくとも10,000倍優先的に標的分子を結合させる場合に、薬剤、抗体、ポリペプチド、核酸又はその他の化合物は、標的分子、例えば、抗原、ポリペプチド、核酸又はその他の化合物と特異的に結合する。特異的に結合するとは、物理学的に関連する構造を有する2つ又はそれ以上の関連化合物のうちの1つと結合することに関して用いることができる。絶対的又は相対的な、結合優先性及び親和性は、例えば、それぞれの対について個別に親和性を確認して、或いは競合アッセイ又は当業者に公知のその他の方法によって、確認できる。本明細書で用いられる対象は生きている有機体を示す。ある特定の実施態様では、生きている有機体は動物である。ある特定の好ましい実施態様では、対象は哺乳動物である。ある特定の実施態様では、対象は家畜である。対象の例は、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ヤギ、及びヒツジを包含する。ヒト対象を異常なグルコースホメオスタシス疾患、例えば、2型糖尿病を有しているか、又は2型糖尿病を発症する恐れがある患者をも示す。特定の病気、疾患、又は症候群に罹っているか又は罹る恐れがある対象は、対象が病気、疾患、又は症候群に罹っていると知識のある人間が診断又は疑いを持つような、十分な数の危険因子を有しているか、或いは病気、疾患、又は症候群の兆候又は症状の十分な数又はこれらの組み合わせを有している。2型糖尿病のような疾患に罹っているか又は罹る恐れのある対象を識別する方法は当該技術分野に属するものの能力の範囲内である。特定の病気、疾患、又は症候群に罹っている対象と罹る恐れがある対象は必ずしも2つの異なった群ではない。医薬品は好都合に単位剤形で投与でき、医薬分野における周知の方法の何れか、例えば、Remington’sPharmaceuticalSciencesに記載されているような方法で製造できる。非経口投与用の製剤は、滅菌水又は食塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール類、植物由来の油類、水素化ナフタレン類等のような一般的な賦形剤を含有することができる。特に、生体適合性があり、生物分解性があるラクチド重合体、ラクチド/グリコリド共重合体、又はポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレン共重合体はある特定の薬剤の制御放出に有用な賦形剤であろう。ある特定の実施態様では、経口的に送達できる製剤を、医薬製剤に関するその他の論文のなかでも、とりわけRemington’sPharmaceuticalSciencesに記載されているものを包含する、公知の方法に基づいて製造することができる。当然のことながら、所定の治療法で用いられる活性化合物の実際の好ましい量は、例えば、用いられる特定の化合物、製剤化された特定の組成物、投与方法及び対象の特徴、例えば対象の人種、性別、体重、全体的な健康及び年齢によって変化するだろう。投与の所定プロトコールに対する最適な投与速度は、前記ガイドラインに関して実施される従来の用量確認試験を用いて当業者が容易に確定できる。本明細書で用いられている、特定の病気又は疾患などに罹りやすい又は罹る傾向にある又は罹る素因があるは、遺伝、環境、健康、及び/又はその他の危険因子に基づいて、一般集団より病気又は疾患を発症する可能性が高い個人を示す。疾患、例えば、2型糖尿病を発症する可能性の増大は、約10、20、50、100、150、200、又はそれ以上の増加であろう。以下の化学物質を定義しなければならないと思われる。用語アルケニルは、1つ又はそれ以上の炭素-炭素二重結合を有している直鎖又は分岐鎖であってよい炭化水素鎖を示す。アルケニル部分は表示された数の炭素原子を含有している。例えば、C2-C10は、その基がそこに2~10個これを含むの炭素原子を有していいてもよいことを表わす。用語低級アルケニルはC2-C8アルケニル鎖を示す。数の指定がない場合は、アルケニルはその中に2~20個これを含むの炭素原子を有している鎖直鎖又は分岐鎖である。用語アルキニルは、1つ又はそれ以上の炭素-炭素三重結合を有している直鎖又は分岐鎖であってよい炭化水素鎖を示す。アルキニル部分は表示された数の炭素原子を含有している。例えば、C2-C10は、その基がそこに2~10個これを含むの炭素原子を有していいてもよいことを表わす。用語低級アルキニルはC2-C8アルケニル鎖を示す。数の指定がない場合は、アキケニルはその中に2~20個これを含むの炭素原子を有している鎖直鎖又は分岐鎖である。用語アリールは、それぞれの環の0、1、2、3、又は4個の原子が置換基で置換されていてもよい、6炭素の単環式又は10炭素の二環式芳香環系を示す。アリール基の例は、フェニル、ナフチルなどを包含する。用語アリールアルキル又は用語アラルアルキルはアリールで置換したアルキルを示す。用語アリールアルコキシはアリールで置換したアルコキシを示す。本明細書で用いられる用語シクロアルキルは、3~12個の炭素、好ましくは3~8個の炭素、さらに好ましくは3~6個の炭素を有している飽和又は部分飽和の環状炭化水素基を示し、ここでシクロアルキル基はさらに置換されていてもよい。好ましいシクロアルキル基は、これに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを包含する。用語ハロはフッ素、塩素、臭素又はヨウ素の何れかの基を示す。用語アルキルは、表示されている数の炭素原子を含有している、直鎖又は分岐鎖であってよい炭化水素鎖を示す。例えば、C1-C10は、この基が1~10個これを含むの炭素原子をその中に有していてもよいことを表わす。数の指定がない場合は、アルキルは1~10個これを含む、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20個の炭素原子をその中に有している鎖直鎖又は分岐鎖である。用語アルキレンは2価のアルキルすなわち、Rを示す。、用語ヘテロアリールは、単環式の場合は1~3個のヘテロ原子、二環式の場合は1~6個のヘテロ原子、或いは三環式の場合は1~9個のヘテロ原子を有している、芳香族の5~8員単環式、8~12員の二環式、又は11~14員の三環式の環系を示し、当該ヘテロ原子はO、N、又はSから選択され例えば、単環、二環、三環の場合は、それぞれ、炭素原子と1~3、1~6、又は1~9個のN、O、又はSのヘテロ原子、ここで各環の0、1、2、3、又は4個の原子は置換基で置換されていてよい。ヘテロアリール基の例は、ピリジル、フリル又はフラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリミジニル、チオフェニル又はチエニル、キノリニル、インドリル、チアゾリルなどを包含する。用語ヘテロアリールアルキル又は用語ヘテロアラルキルは、ヘテロアリールで置換されているアルキルを示す。用語ヘテロアリールアルコキシは、ヘテロアリールで置換されているアルコキシを示す。用語ヘテロシクリルは、単環式の場合は1~3個のヘテロ原子、二環式の場合は1~6個のヘテロ原子、或いは三環式の場合は1~9個のヘテロ原子を有している、非芳香族の5~8員単環式、8~12員の二環式、又は11~14員の三環式の環系を示し、当該ヘテロ原子はO、N、又はSから選択され例えば、単環、二環、三環の場合は、それぞれ、炭素原子と1~3、1~6、又は1~9個のN、O、又はSのヘテロ原子、ここで各環の0、1、2、又は3個の原子は置換基で置換されていてよい。ヘテロシクリル基の例は、ピペラジニル、ピロリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニルなどを包含する。用語置換基は、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリール基上の、その基の何れかの原子において置換されている基を示す。適切な置換基は、これに限定されないが、ハロ、ヒドロキシ、メルカプト、オキソ、ニトロ、ハロアルキル、アルキル、アルカリル、アリール、アラルキル、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アルコキシカルボニル、アミド、カルボキシ、アルカンスルホニル、アルキルカルボニル、及びシアノ基を包含する。本発明で提供する範囲は、その範囲内の全ての値に対する省略型であると理解される。配列番号の範囲が提供されている場合、これは個々の配列全てを包含している。例えば、1~50の範囲は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50よりなる群からの何れかの数、数の組合わせ、又は下位範囲を含むと理解される。明確な記述がない限り或いは文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられる用語又はは包括的であると理解される。明確な記述がない限り或いは文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられる用語約は、当該技術分野における通常の許容誤差の範囲内、例えば、平均値の2標準偏差以内であると理解される。約は、定められた値の10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.1、0.05、又は0.01以内であると理解される。文脈から明確である場合を除いて、本明細書で提供された全ての数値は用語約で改変できる。本明細書の可変基の定義の何れかにおける化学基のリストの記述は、1つの基又は列挙された基の組合わせとしてのその可変基の定義を包含する。本明細書の可変基又は態様に関する実施態様の記述は、1つの実施態様の何れか、又は他の実施態様或いはそれらの部分との組合わせとしてのその実施態様を包含している。記号、は分子構造の部分として用いられる場合、一重結合又はシス或いはトランス二重結合を示す。本明細書で提供された組成物又は方法は何れも本明細書で提供された1つ又はそれ以上の他の組成物又は方法の何れかと組合わせることができる。インスリン分泌促進ポリペプチド本発明の別の態様は本発明のインスリン分泌促進ポリペプチドを提供し、これは本明細書で概説された方法に従って、本発明ポリペプチドのアミノ酸配列に沿った何れかの位置複数もを1、2、3、4、5、6、7、8、9、10又はそれ以上の炭化水素架橋で改変できる。本発明は、エクセンジン-4、エクセナチド、胃抑制ポリペプチド前タンパク質GIPP、胃抑制ペプチドGIP、グルカゴン様ペプチド-1前駆体GLP-1P、グルカゴン様ペプチド-1GLP-1、グルカゴン様ペプチド-2GLP-2、GLP-1の断片、リラグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド及びLY2189265これらの全ては炭化水素架橋による構造強化のために本発明の各種実施態様において鋳型として用いることができる例示的なインスリン分泌促進ポリペプチドである図1を参照されたいを包含する、天然又は合成起源の、及びインスリン分泌促進特性を有していることが知られているか又は未だ確認されていないポリペプチドを含んでいるかもしれない、特定のインスリン分泌促進ポリペプチドの何れかに限定されない。インスリン分泌促進ポリペプチドは上記のこれらのポリペプチドの何れかの同族体、類縁体、誘導体、機能的な断片又は模倣体も包含できる。本発明のインスリン分泌促進ポリペプチド、例えば、エクセナチドの何れかのα螺旋は、本明細書に記載されている炭化水素架橋のための方法を用いるか、又は米国特許出願公開第2006/0014675A1号、同第2006/0008848A1号、同第2004/0171809A1号及び米国特許第7,723,469号、同第7,192,713号、及び同第7,084,244号公報これらはそれぞれ参照により本明細書に取り込まれているに記載の方法教示に従って、少なくとも1つの炭化水素架橋で安定化できる。別の実施態様では、少なくとも2つ、3つ、又は4つも或いは12まで又はそれ以上も含む、1つ以上の炭化水素架橋を本発明のエクセナチドを安定化するために用いることができる。改変されたポリペプチドの何れかで用いるのに適している炭化水素架橋は、本明細書に、又は米国特許出願公開第2005/0250680号公報に或いは米国特許第7,723,469号公報安定化したα螺旋ペプチド及びその使用これらそれぞれはその全てが参照により取り込まれているに記載されている。炭化水素架橋化は、螺旋二次構造を有する傾向があるポリペプチドが、その生来の螺旋配座を保持してその安定性及び有効性を増大することを可能にする。一実施態様では、円偏光二色性で確認すると、水溶液中の改変ポリペプチドは少なくとも10、20、30、35、40、45、50、60、70、80、又は90又はそれ以上の螺旋性を有している。円偏光二色性を確認するアッセイは当該技術分野で公知であって本明細書に記載されている。特定の実施態様では、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチド、例えば、エクセナチドは、N-末端の近くに1つの炭化水素架橋を包含できる。別の特定の実施態様では、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチド、例えば、エクセナチドは、C-末端の近くに1つの炭化水素架橋を包含できる。その他の特定の実施態様では、本発明のエクセナチドは配列の中間でN-及びC-末端の間の何れかの位置に炭化水素架橋を包含できる。更に別の実施態様では、本発明のエクセナチドは1つの炭化水素架橋をC-末端の近くに、そして別の炭化水素架橋をN-末端の近くに包含できる。更に別の実施態様では、本発明のエクセナチドは1つの炭化水素架橋をC-末端の近くにそして別の炭化水素架橋を配列の中間に、或いは1つの炭化水素架橋をN-末端の近くにそして別の炭化水素架橋を配列の中間に包含できる。更に別の実施態様では、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチドは、N-末端又はC-末端の何れかから連続的に、或いは短縮された変異体内に炭化水素架橋を挿入しているN-及びC-末端から代替え方法で切断できる。本発明の架橋されたポリペプチドの例は図7に示されている。炭化水素架橋されたポリペプチドは2つのアミノ酸の間に鎖を包含していて、この鎖はポリペプチドの螺旋二次構造を有意に強化する。一般に、この鎖は1つ又は2つの螺旋回転にわたり広がるすなわち、約3,4又は約7アミノ酸。従って、iとi3;iとi4;又はiとi7に位置しているアミノ酸は化学改変及び架橋結合の理想的な候補である。それにより、本発明の改変されたポリペプチドのアミノ酸残基の何れかを上記に適合させて連結例えば、架橋結合できる。適切な鎖は本明細書及び米国特許公開第2005/0250680号公報並びに米国特許第7,723,469号公報両者は参照により本明細書に取り込まれているに記載されている。炭化水素架橋のような鎖を別の間隔で位置づけて、螺旋変異体例えば、異なった傾斜、角度又は回転当りのそれらの残基及び画分を伴い又は螺旋以外の構造を進展できるということが理解される。更なる実施態様では、第1アミノ酸iと、第1アミノ酸の3アミノ酸下流にある、第2アミノ酸i3を結合するように、炭化水素架橋を位置づける。別の実施態様では、第1アミノ酸iと、第1アミノ酸の4アミノ酸下流にある、第2アミノ酸i4を結合するように、炭化水素架橋を位置づける。更に別の実施態様では、第1アミノ酸iと、第1アミノ酸の7アミノ酸下流にある、第2アミノ酸i7を結合するように、炭化水素架橋を位置づける。インスリン分泌促進ポリペプチドの突然変異、切断、及び延長本発明は同類又は非同類アミノ酸置換を有するインスリン分泌促進ペプチド例えば、エクセナチドを意図している。同類アミノ酸置換は、例えばグルタミン酸Eをアスパラギン酸Dに、アスパラギン酸DをアスパラギンNに、そしてグルタミン酸EをグルタミンQにアミノ酸置換するような、1つ又はそれ以上のアミノ酸を電荷、大きさ、及び/又は疎水性特性が類似しているアミノ酸と置き換えることからなる。非同類置換は、例えば、グルタミン酸EをバリンVに置換するような、1つ又はそれ以上のアミノ酸を非類似の電荷、大きさ、及び/又は疎水性特性を保持しているアミノ酸と置き換えることからなる。置換は同類又は非同類の非天然アミノ酸の使用を包含できる。アミノ酸挿入は単一のアミノ酸残基又は残基の伸張からなる。挿入は、全長又は切断したエクセナチドペプチドのカルボキシ又はアミノ末端で、さらにはペプチドの内部の位置で行うことができる。このような挿入は一般に長さが2~15アミノ酸の範囲である。目的のペプチドのカルボキシ又はアミノ末端の何れかで行われる挿入は、好ましくは約2~約50アミノ酸による、広い大きさの範囲のものでよいことが意図されている。1つ又はそれ以上のこのような挿入は、そのような挿入により相当する出発ポリペプチド例えば、配列番号1で表される改変エクセナチドの活性を少なくとも約50、又は60、又は70、又は80、又は90、又は95、又は99、又はそれ以上未だ示すことのできる改変ペプチドがもたらされる限り、全長又は切断型インスリン分泌促進ポリペプチド例えば、エクセナチドに導入することができる。このような変更は、経口投与可能なままであり、そして/又は血液及び組織中での長期に渡る安定性を保持しているエクセナチド変異体ももたらす。全長又は切断型エクセナチドペプチドの欠失も本発明の範囲内である。このような欠失は、エクセナチドペプチド;又はエクセナチド変異体から、得られるペプチド配列が4、5、又は6アミノ酸であるという長さの下限つきで、1つ又はそれ以上のアミノ酸を除去することからなる。このような欠失は、ペプチド配列の単一の隣接する或いは1つ以上の別々の位置を含む。このような欠失が、相当する出発ポリペプチド例えば、配列番号1の改変エクセナチドの活性を、少なくとも約50、又は60、又は70、又は80、又は90、又は95、又は99又はより高く未だ示すことができて、好ましく経口投与可能であり、そして/又は血中及び組織中で長期に渡る安定性を保持しているペプチドをもたらす限り、1つ又はそれ以上のそのような欠失を全長又は切断型インスリン分泌促進ペプチド例えば、エクセナチドに導入できる。インスリン分泌促進ポリペプチド例えば、エクセナチドの安定化本発明の改変したインスリン分泌促進ポリペプチド例えば、エクセナチドは構造的に拘束されている例えば、安定化させた、架橋した螺旋であり、そして/又は生理学的状況から取り出されたときに生物活性形状を失い得るよう、元来の配列と比べてペプチドの構造的柔軟性を制限する天然及び/又は非天然アミノ酸を取り込むために、元来のすなわち、野生型の或いは天然の配列と比べて1つ又はそれ以上のアミノ酸配列の改変を含んでいる。好ましくは、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチドは、炭化水素架橋のような、少なくとも1つの分子鎖を含んでいる。炭化水素架橋は米国特許出願公開第2005/0250680号公報又は米国特許第7,723,469号公報これらはその全てが参照により本明細書に取り込まれているに、更にはWalenskyetalScience2004305146670WalenskyetalMolCell2006Oct2024199210BernaletalJAmChemSoc2007Apr251295298DanialetalNatMed20082008Feb1414453Epub2008Jan27GavathiotisetalNature2008Oct2345510479StewartetalNatureChemBio2010Jun20に、更には米国特許出願公開第2006/0014675A1号、同第2006/0008848A1号、同第2004/0171809A1号、並びに米国特許第7,192,713号、及び同第7,084,244号これらはそれぞれ参照により本明細書に取り込まれているに記載されており、これらは全てが参照により本明細書に取り込まれている。ペプチドα螺旋は、比較的大きい接触表面に渡って順序よく正確に配列されている特定のアミノ酸残基を提示することにより非常に重要なタンパク質相互作用に関与しているChittendenTetalEmboJournal199514p55895996KussiePHetalScience1996274p948953EllenbergerTEetalCell199271p12231237。α螺旋ドメイン及び他のタンパク質構造特性は、タンパク質の残余部分の骨格配列によって安定化されることが多く、これは螺旋構造、例えば、α螺旋構造の形成及び維持を促す。文脈から切り離すと、α螺旋ペプチドのモチーフは広げることができ、生物活性の欠損を誘導する。重大な挑戦は、その天然のα螺旋構造を促進及び/又は維持を含むα螺旋ペプチドを開発すること及びタンパク質分解、酸及び熱分解に耐えて、よってインビボにおいて無傷のままを保つことができるペプチドを製造することである。例えば、本発明の構造的に拘束されているペプチドはエクセナチドポリペプチドのα螺旋ドメインを包含できる。ある例では、構造的に拘束されているペプチドはN-末端の炭化水素架橋で拘束されている。ある例では、構造的に拘束されているペプチドはC-末端の炭化水素架橋で拘束されている。別の例では、構造的に拘束されているペプチドはペプチドの中央にある炭化水素架橋で拘束されている。更に別の例では、構造的に拘束されているペプチドは1つ以上の炭化水素架橋で拘束されていて、例えば、そこでは鎖の少なくとも1つ又は両方がペプチドの末端又はその近くにあるすなわち、ペプチドのN-又はC-末端から1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、又は15番目の残基から始まる。特定の実施態様では、エクセナチドペプチドは、N-及びC-末端の両方に又はその近くに鎖を含んでいるすなわち、ペプチドのN-又はC-末端から1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、又は15番目の残基から始まる。炭化水素架橋多重架橋の配置は所定のインスリン分泌促進ポリペプチドの長さ方向に沿ってどの位置又は位置の組合わせであってもよいので、炭化水素架橋化についての特定の位置は決して限定されているわけではない。このような位置は、本明細書の図面に記載及び示されている架橋走査方法を用いて過度な実験無しで、経験的に決定及び最適化できる。炭化水素架橋されたポリペプチドは、2つのアミノ酸の間に鎖架橋を含んでいて、この鎖はポリペプチドの螺旋二次構造を有意に強化する。一般に、鎖は1つ又は2つの螺旋回転にわたり広がっているすなわち、約3~3.6又は約7アミノ酸。従って、iとi3;iとi4;又はiとi7に位置するアミノ酸は化学修飾及び架橋のために理想的な候補である。従って、例えば、ペプチドが配列X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9を有している場合は、X1とX4の間、又はX1とX5の間、又はX1とX8の間の架橋は、X2とX5の間、又はX2とX6の間、又はX2とX9の間、などの架橋と同様に有用である。複数の架橋例えば、2、3、4、又はそれ以上も達成されていて、個々の架橋付加の利点を組合わせている。例えば、改善された螺旋性及び活性;改善された螺旋性及び熱安定性;改善された螺旋性及び酸安定性;改善された螺旋性と薬理学的特性。従って、本発明は、更に配列を安定化するためか、或いは構造的安定性、タンパク質分解耐性、熱安定性、酸安定性、薬理学的特性、及びより長いポリペプチドストレッチの生物学的活性増強を促進するために、ポリペプチド配列内に1つ以上の架橋を取り込むことを包含している。本発明は、連続して生じる架橋又は鎖の対を縫い合わせ配置中に形成できる、すなわち、ここでは、例えば、図5Bに例示したように、最初に生じる鎖の終端を第2の連続して発生する架橋の開始と同じ残基を起源とすることも意図している。本発明のある実施態様では、鎖、例えば、炭化水素架橋を螺旋以外の構造を安定化するために用いる。このような場合は、鎖の末端をi、i3、i4、及びi7以外の間隔で配置させることができる。例えば、ペプチドドメインのねじれ領域を安定化して螺旋のような平坦な連続面ではなく湾曲した表面を産生するために分子鎖を用いることができる。アミノ酸配列及び鎖の端部の配置が、鎖が架けられているアミノ酸の数を決定する。このような検討は当業者によく理解されるだろう。一実施態様では、本発明の改変ポリペプチドは式Iを有している。式中の、R1及びR2は、独立して、H、又はC1~C10アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、或いはヘテロシクリルアルキルであり;R3は、アルキル、アルケニル、アルキニル;[R4--K--R4]nであり;これらはそれぞれ0~6個のR5で置換されていて;R4は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり;R5は、ハロ、アルキル、OR6、NR62、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光性部分、又は放射性同位元素であり;Kは、O、S,SO、SO2、CO、CO2、CONR6、又はであり、R6は、H、アルキル、又は治療薬剤であり;nは、1~4の整数であり;xは、2~10の整数であり;それぞれのyは、独立して0~100の整数であり;zは、1~10例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10の整数であり;そしてそれぞれのXaaは、独立してアミノ酸である。改変ポリペプチドは、α螺旋を形成して、配列番号1~4で表わされるアミノ酸配列と30又はそれ以上同一であるか、又はこれに由来する7連続アミノ酸を含有しているアミノ酸配列を包含でき、ここでXは何れかのアミノ酸であって、更に炭化水素架橋によって結合しているアミノ酸残基を特定し、そしてBはメチオニン又はノルロイシンである。鎖は、アルキル、アルケニル、又はアルキニル部分例えば、C5、C8又はC11アルキル或いはC5、C8又はC11アルケニル、或いはC5、C8又はC11アルキニルを包含できる。連結アミノ酸はαジ置換例えば、C1~C3又はメチルされていてもよい。ある例では、xが2、3、又は6である。ある例では、それぞれのyが独立して、3と15の間の整数である。ある例では、それぞれのyが独立して1と15の間の整数である。ある例では、R1とR2がそれぞれ独立して、H又はC1~C6アルキルである。ある例では、R1とR2がそれぞれ独立して、C1~C3アルキルである。ある例では、少なくとも1つのR1とR2がメチルである。例えば、R1とR2の両方がメチルである。ある例では、R3がアルキル例えば、C8アルキルであり、そしてxが3である。ある例では、R3がC11アルキルであり、そしてxが6である。ある例では、R3がアルケニル例えば、C8アルケニルであり、そしてxが3である。ある例では、xが6であり、そしてR3がC11アルケニルである。ある例では、R3が直鎖のアルキル、アルケニル、又はアルキニルである。ある例では、R3がCH2CH2CH2CH=CHCH2CH2CH2である。ある特定の実施態様では、α,αジ置換立体中心の両方がR配置又はS配置である例えば、i、i4架橋か、或いは一方の立体中心がRで他方がSである例えば、i、i7架橋。従って、ここで式Iをと描く。例えば、Xが3であるときは、C’及びCジ置換立体中心は共にR配置であるか、或いはこれらは両方がS配置にある。xが6のときは、C’ジ置換立体中心はR配置にあり、そしてCジ置換立体中心はS配置にある。R3二重結合はE又はZの立体化学配置であってよい。ある実施態様では、R3が[R4KR4]であり、そしてR4が直鎖のアルキル、アルケニル、又はアルキニルである。ある実施態様では、改変ポリペプチドは、インスリン分泌促進ポリペプチドの少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50個、又はそれ以上の連続アミノ酸を含んでいる。それぞれの[Xaa]yは独立して、インスリン分泌促進ポリペプチド、例えば、図1の配列の少なくとも5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25個又はそれ以上の連続アミノ酸を含むことができる。改変ポリペプチドは、インスリン分泌促進ポリペプチド、例えば図1、の3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50連続アミノ酸を含有でき、ここで2、3又は6個のアミノ酸により分離されている2つのアミノ酸はR3を介して結合しているアミノ酸置換基によって置き換えられている。従って、少なくとも2つのアミノ酸は連結アミノ酸又は連結アミノ酸置換によって置き換えることができる。従って、ここで式Iはと描け、[Xaa]y’及び[Xaa]yはそれぞれ同一又は異なった7回繰り返し又は7回繰り返し様ドメイン由来の連続ポリペプチド配列を包含できる。本発明は、インスリン分泌促進ポリペプチド例えば、図1の配列の1011、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50又はそれ以上連続アミノ酸を含有している架橋されたポリペプチドを特徴としており、ここでは2、3又は6個のアミノ酸で分離されている2つのアミノ酸のα炭素がR3を介して結合して、2つのα炭素のうちの1つがR1で置換され、他方がR2で置換されていて、それぞれがペプチド結合を介してさらなるアミノ酸と結合している。別の実施態様では、本発明の改変ポリペプチドは式IIを有している。式中の、R1及びR2は、それぞれ独立して、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、又はヘテロシクリルアルキルであり;それぞれのnは独立して、1~15の整数であり;xは、2、3、又は6であり;それぞれのyは独立して、0~100の整数であり;zは1~10例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10の整数であり;それぞれのXaaは、独立してアミノ酸である。改変ポリペプチドは、α螺旋を形成して、そして配列番号2、15~38エクセナチド及び39~62GLP-17~37で表わされるアミノ酸配列と30又はそれ以上同一であるか、又はこれに由来する7連続アミノ酸を含有していてα螺旋を形成するアミノ酸配列を有することができ、ここでXは何れかのアミノ酸であって、更に炭化水素架橋によって結合しているアミノ酸残基を特定して、そしてBはメチオニン又はノルロイシンである。改変ポリペプチドは、α螺旋を形成して、配列番号2、15~38エクセナチド及び39~62GLP-17~37で表わされる配列を有するアミノ酸配列と少なくとも30又はそれ以上同一であるか、又はこれに由来する3連続、好ましくは7連続アミノ酸、或いはペプチドによって形成された螺旋の面からの少なくとも2個のアミノ酸を含有している、アミノ酸配列を包含でき、ここでXは何れかのアミノ酸であって、更に炭化水素架橋によって結合しているアミノ酸残基を特定し、そしてBはメチオニン又はノルロイシンである。さらに別の実施態様では、本発明の改変ポリペプチドは式IIIを有している。式中の、R1及びR2は、それぞれ独立して、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、又はヘテロシクリルアルキルであり;R3は、アルキル、アルケニル、アルキニル、[R4KR4]又は天然アミノ酸側鎖であって、これらのそれぞれは0~6個のR5で置換されていて;R4は、アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり;R5は、ハロ、アルキル、OR6、NR62、SR6、SOR6、SO2R6、CO2R6、R6、蛍光性部分、又は放射性同位元素であり;Kは、O、S,SO、SO2、CO、CO2、CONR6、又はであり;R6は、H、アルキル、又は治療薬剤であり;R7は、アルキル、アルケニル、アルキニル、[R4KR4]又は天然アミノ酸側鎖であって、これらのそれぞれは0~6個のR5で置換されていて;nは、1~4の整数であり:xは、2~10の整数であり;それぞれのyは独立して、0~100の整数であり;zは、1~10例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10の整数であり;そしてそれぞれのXaaは、独立してアミノ酸である。改変ポリペプチドは、α螺旋を形成して、配列番号2、15~38エクセナチド及び39~62GLP-17~37で表わされる配列を有するアミノ酸配列と少なくとも30又はそれ以上同一であるか、又はこれに由来する7連続アミノ酸、或いはペプチドによって形成された螺旋の面からの少なくとも2個のアミノ酸を含有している、アミノ酸配列を包含でき、ここでXは何れかのアミノ酸であって、更に炭化水素架橋によって結合しているアミノ酸残基を特定し、そしてBはメチオニン又はノルロイシンである。炭化水素鎖を記載しているが、別の鎖も想定されている。例えば、鎖は、1つ又はそれ以上のエーテル、チオエーテル、エステル、アミン、又はアミド部分を包含できる。ある場合は、天然アミノ酸側鎖を鎖の中に取り込むことができる。例えば、鎖はセリン中のヒドロキシル、システイン中のチオール、リジン中のアミン、アスパラギン酸又はグルタミン酸中の酸、或いはアスパラギン又はグルタミン中のアミドのような官能基と結合できる。従って、2つの非天然アミノ酸を結合して作られる鎖を用いるよりむしろ、天然アミノ酸を用いて鎖を作ることも可能である。単一の非天然アミノ酸を天然のアミノ酸と共に用いることも可能である。鎖の長さは変更可能であるということが更に想定されている。例えば、二次構造に比較的高度な拘束をもたらすことが望ましい場合により短い鎖を用いることができ、一方、ある場合は二次構造に低い拘束を与えることが望ましく、そのためにより長い鎖が望まれるだろう。アミノ酸配列が螺旋を形成する傾向を持たない場合は、アミノ酸配列部位に又はその中への鎖の挿入は螺旋形成をもたらさないということも更に理解できる。更に、α螺旋の単一面に主として存在する鎖を提供するために、アミノ酸i~i3、i~i4及びi~i7を架橋する鎖の例を記載しているが、α螺旋以外の構造を促進及び/又は保持するためにアミノ酸の数の任意の組み合わせを架橋するように鎖を合成できる。当業者には当然のことながら、本明細書に記載されている化合物を合成する方法は当業者には明白であろう。さらに、様々な合成工程を代替え順序又は順番で実施して望ましい化合物を得ることができる。本明細書に記載されている化合物を合成するのに有用な合成化学変換及び保護基の手順保護及び脱保護は当該技術分野で公知であって、例えば、RLarockComprehensiveOrganicTransformationsVCHPublishersTWGreeneandPGMWutsProtectiveGroupsinOrganicSynthesis2dEdJohnWileyandSonsLFieserandMFieserFieserandFieser’sReagentsforOrganicSynthesisJohnWileyandSons及びLPaquetteedEncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesisJohnWileyandSons、並びにその続版に記載されているようなものを包含する。特定のペプチド合成方法は本発明を限定するものではない。本発明のポリペプチドの合成本発明のペプチドは、当業者に周知であって本明細書に記載されている、化学合成方法によって作成できる。例えば、FieldsetalChapter3inSyntheticPeptidesAUser’sGuideedGrantWHFreemanCoNewYorkNY1992p77を参照されたい。従って、例えば、AppliedBiosystemsPeptideSynthesizerModel430A又は431或いはtheAAPPTECmultichannelsynthesizerAPEX396上で側鎖保護アミノ酸を用いる、t-Boc又はF-moc化学の何れかで保護したα-NH2で固相合成の自動化メリフィールド技術を用いてペプチドを合成できる。本明細書に記載されているペプチドを作る1つの方法は、固相ペプチド合成SPPSの利用である。C-末端アミノ酸をリンカー分子を用いて酸に不安定な結合によって架橋ポリスチレン樹脂に結合する。この樹脂は合成用の溶媒に不溶であるので、過剰な試薬及び副産物を比較的容易且つ迅速に洗浄できる。Nー末端を、酸に安定であるが、塩基によって除去できる、Fmoc基で保護する。側鎖官能基の何れもを塩基に安定で、酸に不安定な基で保護する。より長いペプチドも天然の化学ライゲーションを用いて、個々の合成ペプチドを対等接続することによって作成できる。あるいは、より長い合成ペプチドを周知の組み換えDNA技術によって合成できる。このような技術は、詳細なプロトコールを有する周知の標準マニュアルに提供されている。本発明のペプチドをコードするコード配列を構築するために、好ましくは遺伝子を発現する有機体に最適なコドンを用いて、アミノ酸配列を逆翻訳してアミノ酸配列をコードする核酸配列を得る。次に、典型的には、ペプチド及び、必要に応じて、いくつかの調節エレメントをコードするオリゴヌクレオチドを合成して、コード配列を作成する。コード配列を適切なクローニングベクターに挿入して宿主細胞内にトランスフェクトする。更に、炭化水素架橋のための非天然アミノ酸を取り込めるように宿主細胞を操作する。次いで、選択した発現系及び細胞に相応しい適切な条件下でペプチドを発現する。LiuetalProcNatAcadSci941009210097を参照されたい。ペプチドを精製して、標準的な方法で特徴付ける。ペプチドは、ハイスループットな、コンビナトリアル方法、例えば、AdvancedChemtechAPPTTECから入手できるような、ハイスループットポリケミカルコンビナトリアル合成器を用いて、作成できる。本発明のインスリン分泌促進ポリペプチドの活性をアッセイする本発明の構造的に拘束されているインスリン分泌促進ポリペプチド例えば、エクセナチドの、インビトロ、インビボの何れか又は好ましくは両方における、インスリンの産生を増強する能力を評価する方法が本明細書に記載されている。特に、このようなアッセイは以下に及び実施例に記載されている。インスリンを増強するエクセナチドの活性を評価するためのさらなるアッセイは、当該技術分野の当業者に周知である。更に、経口送達されたときの改善されたバイオアベイラビリティー、及び、これに限定されないが、何れかの経路で投与されたときの延長された半減期、その増強されたα螺旋性、その改善された熱安定性及びプロテアーゼ耐性、並びにその増大された機能活性及び薬理学的特性、並びに改善されたバイオアベイラビリティを包含する、本発明のポリペプチドのその他の利点を含む、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチド例えば、エクセナチドのその他の態様及び特性を評価する方法が本明細書に記載されている。これらの特性の多くは明細書に記載されていて明らかにされている;しかし、当業者は過度の実験をせずに本発明のインスリン分泌促進ポリペプチドにもたらされた改善された特性を公知の方法及びアッセイを用いて確認できるということに留意されたい。例えば、アッセイは、プロテアーゼ耐性のアッセイ、血漿安定性のアッセイ、薬物動態アッセイ、GLP-1受容体結合アッセイ、GLP-1受容体第2メッセンジャーシグナル伝達アッセイ、グルコース刺激インスリン放出細胞アッセイ、インスリン分泌促進ペプチド処置に応答する血清グルコース及びインスリン濃度のインビボ観察、及び血中のインスリン、グルカゴン又はその他の糖調節成分の量を測定する一般的なELISA又は抗体に基づく方法を包含し、これらの全ては本明細書の実施例の文脈において、更には当業者が保有している知識に基づいて理解されるだろう。このようなアッセイ及び測定の全ては過度な実験なしで実施できる。特定の例では、インスリン分泌促進活性は、サンプル中のインスリンを検出することによって測定できる。本発明は非改変インスリン分泌促進ポリペプチドのインスリン分泌促進活性を上回るか又はそれと等しい改変インスリン分泌促進ポリペプチドに関する。薬剤のインスリン分泌促進特性は、薬剤を動物細胞に供給するか、又は薬剤を動物に注射して、免疫反応性インスリンIRIの、それぞれ培地中へ又は動物の循環系への放出を観察することによって確認できる。IRIの存在はインスリンを特異的に検出できるラジオイムノアッセイの使用によって検出できる。IRIの存在を検出できるラジオイムノアッセイはどれも利用できるが、1つの特定方法は、AlbanoJDMetalのアッセイ方法の改変を使用する。この改変では、pH7.4のリン酸/アルブミン緩衝液を用いる。500μLのリン酸緩衝液、50μLのサンプル潅流液又はラット標準インスリンの潅流液、100μLの抗インスリン抗血清WellcomeLaboratories1:40,000希釈、及び100μLの[125I]インスリンを、10×75mmの使い捨てガラス管中で総容量750μLにして、連続条件で培養を調製する。4°Cで2~3日培養した後、遊離インスリンを、抗体結合インスリンから活性炭分離で分離する。アッセイの感度は通常1~2μlU/mlである。組織培養中で細胞生育する細胞培養培地へのIRIの放出を測定するために、プロインスリンへ放射活性標識を取り込むことが好ましい。ポリペプチドを標識できる放射活性標識は何れも使用できるが、プロインスリンの標識を得るために、3Hロイシンを使用することが好ましい。標識化はプロインスリン分子の検出可能な標識化プールを形成するために十分である期間の何れでも行うことができるが;しかし、放射活性標識の存在下で60分間細胞を培養することが好ましい。化合物がインスリン分泌促進効果を有しているか否かを確認するためにインスリンを発現できるどの細胞株も使用できるが、ラットインスリノーマ細胞、特にRIN-38ラットインスリノーマ細胞を使用することが好ましい。このような細胞は何れの適切な培地中でも生育できるが;しかし、0.1のBSA及び25mMのグルコースを含有しているDME培地を用いることが好ましい。本発明の炭化水素架橋されたポリペプチドのインスリン分泌促進特性は膵臓インスリンによっても確認できる。insitu単離された潅流ラット膵臓調製液はPenhosJCetalの方法の改変である。このような方法によると、体重350~650gの、絶食させたラット好ましくは雄性チャールスリバー系シロネズミをアモバルビタール塩EliLillyandCo160ng/kgの腹腔内注射で麻酔する。腎臓、副腎、胃、及び下部結腸の血管を結紮する。十二指腸の約4cm並びに下行結腸及び直腸以外の全ての腸を切除する。従って、腸のほんの一部分を潅流して、インスリン分泌促進性免疫反応性を有する腸溶性物質による可能性のある妨害を最小化する。潅流液は、4のデキストランT70及びウシ血清アルブミン画分Vを有する改変クレブスリンゲル重炭酸塩緩衝液であってよく、そして95のO2及び5のCO2で泡立てることができる。非拍動流、4チャンネルのローラーベアリングポンプBuchlerpolystaticBuchlerInstrumentsDivisionNuclearChicagoCorpを使用でき、そして一方潅流源から他方への切り替えを三方活栓を切り替えて行える。潅流を実施し、改変し、そして分析する方法は、WeirGCetalの方法に従うことができて、これは参照により本明細書に取り込まれている。医薬組成物及び投与経路1つ又はそれ以上の本発明の構造的に拘束されているインスリン分泌促進ポリペプチドを、2型糖尿病及び関連疾患を予防及び/又は治療する医薬組成物中で用いることができる。医薬品の併用は糖尿病のような、複雑で危険な疾患の治療によく用いられる。本明細書で提供される治療及び予防方法は構造的に拘束されているインスリン分泌促進ポリペプチドの組み合わせを用いて実施でき、これは耐性の進展を抑えるように選択及び組合わせ可能で、或いは対象の疾患の状態及び特質に基づいて選択又は組合わせることができる。本発明の医薬組成物は2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、又はそれ以上の構造的に拘束されているポリペプチドを包含できる。構造的に拘束されているペプチドを他の薬剤、例えば、糖尿病を治療するための公知処置剤又は治療剤と併用もできる。本明細書で用いられるような、本発明の化合物は、その薬学的に許容される誘導体を包含すると定義される。薬学的に許容される誘導体は薬学的に許容される塩、エステル、エステルの塩又は本発明の化合物のその他の誘導体の何れかを意味し、これらは受容者に投与されると、本発明の化合物を直接又は間接的に提供可能である。特に好ましい誘導体は、このような化合物を哺乳動物に投与すると、本発明の化合物のバイオアベイラビリティーを増大する例えば、経口投与された化合物が、より速やかに血中に吸収され、血清安定性を増大し或いは化合物のクリアランス速度を減少できるようにか、又は親化合物の生体区画例えば、脳又はリンパ系への送達を親種と比べて増大するようなものである。誘導体は、水溶性又は腸膜を通過する能動輸送を増大する基が本明細書記載されている式の構造に付加している誘導体を包含する。選択的な生物学的特性を増強するように適切な官能基を付加させることによって、本発明の化合物を改変できる。このような改変は当該技術分野で公知であって、所定の生体区画例えば、血液、リンパ系、中枢神経系、膵臓内への生物学的浸透を増大する、経口利用可能性を増大する、注射投与を可能にするよう溶解性を増大する、代謝を変える、そして排泄速度を変えるようなものを包含する。本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機及び有機の酸及び塩基に由来するものを包含する。適切な酸塩の例は、酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸、ヨウ化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、パルモ酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオンサン塩、サルチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩及びウンデカン酸塩を包含する。適切な塩基に由来する塩は、アルカリ金属例えば、ナトリウム、アルカリ土類金属例えば、マグネシウム、アンモニウム及びN-アルキル4塩を包含する。本発明は本明細書に開示されている化合物の塩基性窒素含有基の何れかの四級化も想定している。水又は油に溶解又は分散可能な産物はこのような四級化で得ることができる。本発明の化合物は、例えば、静脈内に、動脈内に、真皮下に、腹腔内に、筋肉内に、又は皮下に注射して;又は経口で、舌下に、経鼻で、経粘膜で、膣内に、子宮頸部に、局所的に、眼科用製剤で、又は吸入で、約0.001~約100mg/体重kg、又は特定の薬剤の必要に応じて、及びより好ましくは0.5~10mg/体重kg範囲の用量を投与できる。本明細書の方法は、望ましい或いは所定の効果を達成するための化合物又は化合物組成物の有効量を投与することを意図している。好ましい組成物では、本発明のインスリン分泌促進ポリペプチドが経口投与用に製剤化される。適切な薬学的に許容される賦形剤、担体、溶媒、安定化剤等を本発明のエクセナチドペプチドの経口製剤を得るために用いることができる。経口送達は、錠剤、ピル、懸濁液、速放性ストリップ等によることを包含する、適切な方法の何れかでよい。担体物質と混ぜて単回投与剤形を製造してもよい活性成分の量は、治療される宿主及び投与の特定の経路によって変化する。典型的な製剤は約1~約95w/wの活性成分を含有している。或いは、このような製剤は約20~約80の活性化合物を含有している。上で挙げたものより低いか又は高い用量も必要であろう。特定の患者に対する特定の用量及び治療計画は、用いられる特定化合物の活性、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食習慣、投与時刻、排泄の速度、薬剤の併用、病気、疾患又は症状の重症度及び経過、病気、疾患又は症状に罹りやすい患者の傾向、及び治療医師の判断を含む多種の因子によって決まる。患者の疾患が改善されると、必要に応じて、本発明の化合物、組成物又は組み合わせの維持用量が投与されてもよい。続いて、投与の用量又は回数、又は両方を、症状に応じて、改善された疾患が維持されるレベルまで減少できる。しかし、患者は疾患症状の何らかの再発によって長期の間欠治療を必要とするかもしれない。本発明の医薬組成物は、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩;及び、例えば、これに限定されないが、インスリン、スルホニル尿素類トルブタミドOrinase、アセトヘキサミドDymelor、トラザミドTolinase、クロルプロパミドDiabinese、グリピジドGlucotol、グリブリドDiabeta、Micronase、Glynase、グリメピリドAnaryl、及びグリクラジドDiamicron、メグリチニド類レパグリニドPrandin、ナテグリニドStarlix、ビグアニド類メトホルミン、フェンホルミン、ブホルミン、チアゾリジンジオン類、αグルコシダーゼ阻害剤、DPP-4阻害剤、非架橋インクレチン模倣体、及びアミリン類縁体を包含する、糖尿病の予防及び/又は治療のための1つ又はそれ以上の治療薬剤を包含する追加の薬剤を含有している。用語薬学的に許容される担体又はアジュバントは、本発明の化合物と一緒に、患者に投与できる担体又はアジュバントを示し、そしてこれは化合物の治療量を送達するのに十分な用量で投与したときに、その薬理学的活性を失わせず、そして非毒性である。薬学的に許容される担体、アジュバント及び賦形剤は、本発明の医薬組成物中で用いることができ、これに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、d-α-トコフェロールポリエチレングリコール100コハク酸塩のような自己乳化型薬物送達システムSEDDS、Tween登録商標又はその他の類似重合体送達マトリックスのような医薬剤形中で用いられる界面活性剤、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムのような緩衝物質、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩のような塩又は電解質、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースからなる物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロック重合体、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂を包含する。α-、β-、及びγ-シクロデキストリンのようなシクロデキストリンも本明細書に記載されている式の化合物の送達を増大するために有利に用いることができる。本発明の医薬製剤は、経腸的に、例えば経口投与で、非経口で、吸入スプレーで、局所的に、経直腸で、経鼻で、舌下に、膣内に、又は移植した貯留槽を介して、好ましくは経口又は膣内投与、或いは注射による投与で、投与することができる。本発明の医薬組成物は、通常の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント又は賦形剤の何れも含有できる。ある場合は、製剤のpHを、薬学的に許容される酸、塩基、又は緩衝剤を用いて調節して製剤化した化合物又は送達形態の安定性を増大することができる。本明細書で用いられる用語、非経口は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、及び頭蓋内注射、又は輸液技術を包含する。剤形の例は、これに限定されないが:錠剤;カプレット;ソフトゼラチンカプセルのような、カプセル;カシェー;トローチ;薬用キャンディー;分散剤;坐剤;軟膏;パップ湿布;ペースト;粉剤;包帯剤;クリーム;プラスター;溶液;パッチ;エアゾール剤例えば、経鼻スプレー又は吸入剤;ゲル;懸濁液例えば、水性又は非水性液体懸濁液、又は水中油型エマルジョン、又は油中水型液体エマルジョン、溶液、及びエリキシル剤を包含する、患者への経口又は粘膜投与に適している液体剤形;患者への非経口投与に適している液体剤形;及び患者への非経口投与に適している液体剤形をもたらすように再構築できる滅菌固体例えば、結晶又は非結晶固体を包含する。医薬組成物は滅菌注射製剤、例えば、滅菌注射水性又は油性の懸濁液のような形態にできる。この懸濁液は適切な分散及び湿潤剤例えば、Tween80登録商標のような及び懸濁剤を用いて当該技術分野で公知の技術に従って製剤化できる。滅菌注射製剤も、非毒性で非経口投与に許容される希釈剤又は溶媒中の、例えば、1,3-ブタンジオール溶液のような、滅菌注射用溶液又は懸濁液であってよい。使用可能な許容される賦形剤又は溶媒には、マンニトール、水、リンゲル液及び等張食塩水がある。加えて、滅菌、固定油は溶媒又は懸濁媒体として従来通りに使用できる。この目的のために、合成モノ-又はジ-グリセリドを包含する無菌固定油の何れかを使用できる。オリーブ油又はヒマシ油のような、天然の薬学的に許容される油が、特にそれらのポリオキシエチル化型において有用であるように、オレイン酸のような脂肪酸及びそのグリセリド誘導体は注射剤の製造に有用である。これらの油溶液又は懸濁液は、乳化剤又は懸濁液のような薬学的に許容される剤形の製剤化に通常用いられている長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、又はカルボキシメチルセルロース或いは同様の分散剤も含むことができる。その他の通常用いられているツイーン或いはスパンのような界面活性剤及び/又は薬学的に許容される個体、液体、或いはその他の剤形の製造に通常用いられているその他の同様の乳化剤或いはバイオアベイラビリティー増強剤も製剤化の目的で用いることができる。本発明の医薬組成物は、これに限定されないが、カプセル、錠剤、乳化剤及び水性懸濁剤、分散剤並びに溶液を包含する、経口投与が許容される何れかの剤形で経口投与できる。経口使用のための錠剤の場合は、通常用いられる担体は乳糖及びコーンスターチを包含する。ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤も一般に加えられる。カプセル形態で経口投与する場合の、有用な希釈剤は乳糖及び乾燥コーンスターチを包含する。水性懸濁液及び/又は乳化剤を経口投与する場合は、活性成分を油層に懸濁又は溶解でき、これを乳化及び/又は懸濁剤と混合する。所望により、ある特定の甘味剤及び/又は着香料及び/又は着色剤を添加してもよい。本発明の医薬組成物は、直腸内投与用の坐剤の形態でも投与できる。これらの組成物は、本発明の化合物を、室温では個体であるが直腸の温度では液体であるので直腸内で融解して活性化合物を放出する、適切な非刺激性賦形剤と混合することによって製造できる。このような物質は、これに限定されないが、ココアバター、蜜蝋及びポリエチレングリコールを包含する。本発明の医薬組成物は局所に又は膣内に投与できる。この医薬組成物は担体に懸濁又は溶解した活性成分を含んでいる適切な軟膏を用いて製剤化される。本発明の化合物を局所投与するための担体は、これに限定されないが、鉱物油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋及び水を包含する。あるいは、医薬組成物は、担体に懸濁又は溶解した活性化合物を含有している適切なローション又はクリームを用いて製剤化できる。更に別の実施態様では、医薬組成物を膣リングとして製剤化される。適切な担体は、これに限定されないが、鉱物油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベ-ト60、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、2-オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水を包含する。本発明の医薬組成物は直腸坐薬製剤で、又は適切な注腸製剤で下部腸管に局所適用することもできる。局所経皮パッチ及びイオン導入投与も本発明に含まれる。一実施態様では、本発明の化合物は性行為感染症の予防的治療として膣内に投与される。本発明の医薬組成物は鼻エアゾール又は吸入によって投与できる。このような組成物は医薬製剤の技術分野で周知の技術によって製造でき、そしてベンジルアルコール又はその他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティーを増強する吸収促進剤、フッ化炭素類、及び/又は当該技術分野で公知の溶解又は懸濁化剤を用いて、生理食塩水溶液として製造できる。本発明の組成物が本明細書に記載されている式の化合物と追加の治療又は予防薬剤との組み合わせを含んでいる場合は、化合物と追加の薬剤の両方を、単独療法計画で通常投与される用量の約1~100の間、好ましくは約5~95間の用量レベルで存在させるべきである。追加薬剤は、複数回投与計画の一部として、本発明の化合物と別に投与できる。あるいは、これらの薬剤を本発明の化合物と共に単一の組成物に混合した、単一剤形の一部にしてもよい。本発明の本明細書で標的にしているペプチド又は抗体の投与すべき有効用量は、生物学的半減期、バイオアベイラビリティー、及び毒性のようなパラメータを扱う技術分野の当業者に周知の手順を経て確認できる。治療有効用量は、患者の症状の改善又は生存期間の延長をもたらすのに十分な化合物又は抗体の量を示す。治療方法本発明は、例えば、インスリン依存性糖尿病1型糖尿病及び非インスリン依存性糖尿病2型糖尿病を包含する、異常或いは基準を外れたグルコースホメオスタシスに関連する疾患に罹るる危険性がある罹りやすい或いは疾患を有する対象を治療する予防的及び治療的方法の両方を提供する。本明細書で用いられる用語治療は、疾患、疾患の症状又は疾患になりやすい傾向を、治療する、治す、軽減する、改める、修復する、改善する、改良する或いはこれに影響を及ぼす目的で、疾患、疾患の症状又は疾患になりやすい傾向を有する患者への治療薬剤の適用又は投与、或いは患者由来の単離された組織又は細胞株への治療薬剤の適用又は投与であると定義される。治療薬剤は、これに限定されないが、小分子、ペプチド、抗体、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを包含する。本発明のポリペプチドは、糖尿病、空腹時血糖異常、グルコース耐性異常、高血糖、及び肥満の治療に有用な他の医薬品と併用して用いることもできる。適切な薬剤は、インスリン分泌促進剤、インスリン増感剤、及びメトフォルミンHClを包含する。本発明は糖尿病及び関連する病気及び疾患を治療する方法を包含している。このような方法の1つは、本発明の1つ又はそれ以上の炭化水素架橋インスリン分泌促進ポリペプチドの治療有効量を、これを必要としている対象に投与する段階を含んでいる。本発明のポリペプチドは2型糖尿病を包含する、糖尿病のような疾患を治療するために本発明の方法で用いることができる。このような方法は糖尿病及び糖尿病合併症の発症を遅らせることもできる。本発明の方法で本発明のポリペプチドを用いて治療又は予防できる他の病気及び疾患は:若年者の成人発症型糖尿病MODYHermanetalDiabetes4340、成人潜在性自己免疫性糖尿病LADAZimmetetalDiabetesMed11299、耐糖能障害IGTExpertCommitteeonClassificationofDiabetesMellitusDiabetesCare22S5、空腹時血糖異常IFGCharlesetalDiabetes40796、妊娠糖尿病、及びメタボリックシンドロームXを包含する。本発明のポリペプチドは糖尿病の第二病因ExpertCommitteeonClassificationofDiabetesMellitusDiabetesCare22S5を治療するために本発明の方法で使用することもできる。このような第二病因は、グルココルチコイド過剰、成長ホルモン過剰、褐色細胞腫、及び薬物誘発性糖尿病を包含する。糖尿病を誘発する可能性がある薬物は、これに限定されないが、ピリミニール、ニコチン酸、グルココルチコイド類、フェニトイン、甲状腺ホルモン、βアドレナリン作動薬、αインターフェロン、及びHIV感染症の治療に用いられる薬剤を包含する。本発明のポリペプチドは、脂質異常症に関連しているもの、及び例えば、コレステロール胆石、癌例えば、大腸、直腸、前立腺、乳腺、卵巣、子宮内膜、子宮頸部、胆嚢、及び胆管、生理不順、不妊、多嚢胞性卵巣、変形性関節症、及び睡眠時無呼吸のようなその他の肥満及び過剰体重に関連している合併症を包含している拒食症及び肥満の治療に、更には、食欲及び食物摂取量の調節、脂質異常症、高トリグリセリド血症、心不全のようなアテローム性動脈硬化症、高脂血症、高コレステロール血症、低いHDLレベル、高血圧、心血管系疾患アテローム性動脈硬化症、冠動脈心疾患、冠動脈疾患、及び高血圧を含む、脳血管疾患及び末梢血管疾患のようなこれらに関連するその他の多数の医薬用途に有用である。本発明のポリペプチドは、例えば、インスリン感受性、炎症応答、血漿トリグリセリド、HDL、LDL、及びコレステロール濃度の等の調節に関連する生理学的障害を治療するためにも有用である。本発明の方法及びポリペプチドは、単独で或いは糖尿病及び関連疾患の治療における分野の当業者に公知の追加の治療及び/又は化合物と組合わせて用いることができる。あるいは、本明細書に記載されている方法及びポリペプチドを併用療法において、部分的に又は完全に、用いることができる。本発明のポリペプチドは糖尿病を治療するために、PPAR作動薬、スルホニル尿素剤、非スルホニル尿素分泌促進剤、αグルコシダーゼ阻害剤、インスリン増感剤、インスリン分泌促進剤、肝臓グルコース生産低下剤、インスリン及び抗肥満薬を包含する、他の公知治療薬と組合わせても投与できる。このような治療薬は本発明の化合物の投与の前に、同時に、又はそれに続いて投与できる。インスリンは、インスリンの長期間作用型及び短時間作用型の形態及び製剤の両方を含んでいる。PPAR作動薬はPPARサブユニット又はそれらの組み合わせの何れかの作動薬を含んでいてよい。例えば、PPAR作動薬は、PPAR-α、PPAR-γ、PPAR-δの作動薬、又はPPARサブユニットの2つ又は3つの組み合わせの何れかを含むことができる。このようなPPAR作動薬は、例えば、ロシグリタゾン及びピオグリタゾンを包含する。スルホニル尿素剤は、例えば、グリブリド、グリメピリド、クロルプロパミド、及びグリピジドを包含する。本発明の化合物と共に投与すると糖尿病の治療に有用なαグルコシダーゼ阻害剤は、アカルボース、ミグリトール及びボグリボースを包含する。式Iの化合物と共に投与すると糖尿病の治療に有用なインスリン増感剤は、チオゾリジンジオン及び非チオゾリジンジオンを包含する。本発明の化合物と共に投与すると糖尿病の治療に有用な肝臓グルコース生産低下剤は、GLUCOPHAGE登録商標及びGLUCOPHAGEXR登録商標のような、メトホルミンを包含する。本発明の化合物と共に投与すると糖尿病の治療に有用なインスリン分泌促進剤は、スルホニル尿素剤及び非スルホニル尿素剤:GLP-1、GIP、PAC/VPAC受容体作動薬、セクレチン、ナテグリニド、メグリチニド、レパグリニド、グリベンカルミド、グリメピリド、クロルプロパミド、グリピジドを包含する。GLP-1は、例えば、脂肪酸誘導体化されたGLP-1及びエクセンジンのような、天然のGLP-1より長い半減期を有するGLP-1の誘導体を包含する。本発明の一実施態様では、本発明のポリペプチドは、膵臓β細胞のインスリン分泌促進剤に対する感受性を増大するためにインスリン分泌促進剤と併用して用いられる。本発明のポリペプチドは抗肥満薬と併用して本発明の方法で用いることもできる。抗肥満薬は、β-3作動薬;CB-1拮抗薬;例えば、シブトラミンMERIDIA登録商標のような、食欲抑制剤;及び例えば、オルリスタットXENICAL登録商標のような脂質阻害剤を包含する。本発明のポリペプチドは糖尿病患者の脂質異常症を治療するために通常用いられる薬剤と併用して本発明の方法で用いることもできる。このような薬剤は、これに限定されないが、HMG-CoA還元酵素阻害剤、ニコチン酸、胆汁酸抑制薬、及びフィブリン酸誘導体を包含する。本発明のポリペプチドは、例えば、β‐遮断薬及びACE阻害剤のような、抗高血圧薬と併用しても用いることもできる。このような併用治療法は、2つ又はそれ以上の薬剤の何れかの組合わせで投与できる例えば、本発明の化合物をインスリン増感剤及び抗肥満薬と組合わせて。このような併用治療法は、上記のような医薬組成物の形態で投与できる。キット本発明は、包装済みでラベルが貼られている医薬製品又は実験用試薬も包含する。この製造品は密封されている、ガラス製の薬瓶又はその他の容器のような、適切な器又は容器内に適切な使用説明書を含んでいる。医薬品は、例えば、第1容器に単回投与剤形にある本発明の化合物を、そして第2容器内に、注射用滅菌水又はアジュバントを含有することができる。あるいは、単回投与剤形は、経口、経皮、鼻内、膣内、子宮頸部リング、又は局所送達に適している固体であってよい。特定の実施態様では、単回投与剤形は、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、経口、膣内、子宮頸部に、局所又は皮下送達に適している。従って、本発明は、それぞれの送達経路に適している、好ましくは滅菌した溶液、固体、フォーム、ゲルを包含する。別の特定の実施態様では、単回投与剤形は経口投与に適している。従って、本発明は経口経路に適している、好ましくは滅菌した溶液、固体、フォーム、ゲルを包含する。何れの医薬品とも同様に、包装材料及び容器は保管及び輸送中に製品の安定性を保護するように設計されている。更に、本発明の製品は、使用説明書又は、医師、技師、又は患者に、問題になっている病気又は疾患を如何に適切に予防又は治療するかについてアドバイスするその他の情報資料を包含する。すなわち、製品は、これに限定されないが、実際の用量、観察方法例えば、感染の検出及び定量、及びその他の観察情報を包含する、投与計画を示すか示唆する説明書を包含している。具体的には、本発明は、箱、ボトル、チューブ、バイアル、容器、噴霧器、吸入器、静脈内i.v.バッグ、薬袋などのような、包装材料;及び当該包装材料内に含まれている医薬品の少なくとも1つの単回投与剤形を包含し、ここで当該医薬品は本発明の化合物を含み、そして当該包装材料は、本明細書に記載されるように、特定用量を投与して特定の投与計画を用いることにより、疾患に関連する1つ又はそれ以上の症状を予防、管理、治療、及び/又は改善する、或いは免疫応答を刺激して疾患を予防するために当該化合物を用いることができることを示す指示手段を包含している。以下の実施例は本発明の多種の態様の説明としてのみ提供されていて、本発明を限定することを決して意図していない。実施例1.材料及び方法炭化水素架橋されたα螺旋ポリペプチドの合成構造分析と化学合成を組合わせた方法を改変した、構造的に拘束されたペプチドを構築するために適用した。R-Fmoc-2’-ペンテニルアラニンR5,S-Fmoc-2’-ペンテニルアラニンS5,R-Fmoc-2’-オクテニルアラニンR8,S-Fmoc-2’-オクテニルアラニンR8α,α-ジ置換アミノ酸の不斉合成を先に報告されたように実施したSchafmeisterCEJPoandGLVerdineJournaloftheAmericanChemicalSociety2000122p58915892WalenskyLDetalScience2004305p14661470。R又はSFmoc-2’-プロペニルアラニン類縁体の合成を図6に図式化して以下に記載する新しい方法を用いて製造した。RプロリンとKOHのイソプロパノール溶液を製造し、そこに塩化ベンジルを加えて室温で3時間撹拌した。酸性を徐々に上げて89の収率で沈殿物を単離した。この産物を氷冷した塩化メチレンに溶解し、そこに塩化チオニル及び2-アミノベンゾフェノンを加えて反応混合物を10時間撹拌して室温まで暖めた。塩基性にして、R-2-[N-N’-ベンジルプロリルアミノ]ベンゾフェノンBPBを収率81で得た。KOHのMeOH溶液を、不活性ガス雰囲気中、40°Cで撹拌しているMeOH中のBPB、NiNO32-6H2O、アラニンの混合物に注入した。得られた混合物を2時間撹拌し、塩基性にしてAla-NiII-BPB-複合体を91の収率で得たTetrahedronAsymmetry942494252。Ala-NiII-BPB-複合体をアセトン中、塩基性条件下で、3-ブロモ-1-プロペンと反応させて、R-BPB-R-トランス-2’-プロペニルアラニンのシッフ塩基のNiII複合体[R-2]とS-BPB-S-トランス-2’-プロペニルアラニンのシッフ塩基のNiII複合体[S-2]の混合物を6:1の比で得た。シリカゲルカラムで分離した後に、ジアステレオマー的に純粋なR-2複合体を収率44で得た。R-2複合体を3NのHCL/MeOHで分解して、R-2’-プロペニルアラニンを、そしてDCMで抽出してキラルリガンドも得た。作成後に、R-2’-プロペニルアラニンをFmoc-OSuで保護してR-Fmoc-2’-プロペニルアラニンを収率93で得た2工程。Tetrahedron5625772582少なくと2つの天然アミノ酸を2、3又は6アミノ酸の何れか離れた位置、すなわちそれぞれi、i3、i、i4又はi、i7の位置でα,α-ジ置換された非天然アミノ酸と置き換えた。非天然アミノ酸及びそれに続く炭化水素架橋複数もの位置を、重要なGLP-1受容体の相互作用を妨げないように、或いはインスリン分泌促進活性にとって重要であることが知られている残基が置き換わらないように注意深く選択した図2及び3。改変ポリペプチド、SAH-Ex及びSAH-GLP1図7を、固相Fmoc化学及びルテニウム触媒化オレフィンメタセシスを用いて生成し、次いでペプチド脱保護及び開裂、逆相高速液体クロマトグラフィーで精製し、そしてLC/MS質量分析及びアミノ酸分析を用いて化学的に特性化した。これに代えて、確立されている断片に基づく手法を遂行できるBrayBLNatureReviewsDrugDiscovery20032p587593MYUNGCHOLKANGBBetalMethodsandcompositionsforpeptidesynthesisUSPaTOfficeEditorJanuary182000USA。この手法では、N-末端部、中央部、及びC-末端部を個別に合成するように、ペプチドを3つの断片に分割する。これらのペプチド断片は超酸開裂樹脂上で固相Fmoc化学及びルテニウム触媒化オレフィンメタセシスを用いて生成しなければならず、これはN-末端、及びC末端アミドC-末端断片について又は遊離カルボキシレート中央及びN-末端断片についての何れかがFmocを有している完全に保護されているペプチドを生じる。これらの完全保護断片を逆相高速液体クロマトグラフィーで精製し、次いで連続脱保護、カップリング、及び精製すると全長の完全保護ポリペプチドが得られる。全体的な脱保護、次いで逆相高速液体クロマトグラフィーによって最終生成物が得られ、これをLC/MS質量分析及びアミノ酸分析を用い特性化できるだろう。ペプチドを、Apex396Aapptec自動ペプチドシンセサイザー上で、RinkアミドAMLL樹脂EMDBiosciences、0.2ミリモル/樹脂を用い、50ミリモルスケールで生産した。標準Fmocプロトコールは、20のピペリジン/NMP中で10分の脱保護を2回、次いで連続メタノール及びジメチルホルムアミドDMFの対の洗浄を採用した。組み込んだ非天然アミノ酸を20のピペリジン/NMP中での10分間培養を4回行って完全脱保護を達成した。アミノ酸のカップリングは、Fmoc-保護アミノ酸の0.4Mの原液、0.67Mの2-6-クロロ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル-1,1,3,3-テトラメチルアミニウムヘキサフルオロリン酸HCTU、及び2MのN,N-ジイソプロピルエチルアミンDIEAを用いて実施して、1mLの0.2M活性エステル4当量を得た。カップリング頻度及び培養時間は、標準残基に30分で2回、オレフィン非天然アミノ酸に45分で2回、非天然アミノ酸に続く残基に45分で3回であった。オレフィンメタセシスは1,2-ジクロロエタンで樹脂を第1次膨張し、次いで1,2-ジクロロエタン樹脂置換に基づいて0.20モル中のビストリシクロヘキシン-ベンジリデンルテニウムIVジクロライドGrubbの第1次生成触媒10mM溶液に2時間、暴露する。架橋反応を2回実施する。次いで、樹脂に結合したペプチドを1,2-ジクロロエタンで3回洗浄して、窒素気流下で乾燥する。完成したペプチドを樹脂から解離し、TFA/トリイソプロピルシランTIS/水95、2.5、2.5のようなトリフルオロ酢酸TFAから作られる開裂カクテルに暴露して脱保護して、メチル-tert-ブチルエーテルを用いて沈殿させ、次いで凍結乾燥する。凍結乾燥したSAHBをC18カラムを用いる逆相HPLCで精製する。陽イオンモード中の電気スプレーによって得られた質量スペクトルを用いる、LC/MSで化合物を特性化する。定量化は、Beckman6300高速アミノ酸アナライザーによるアミノ酸分析で達成する。改変ポリペプチドの二次構造及び熱安定性の確認架橋化改変ポリペプチドのα螺旋性をその非改変対応物と円偏光2色性によって比較した。CDスペクトルを、以下の標準測定パラメータを用いてAriv分光偏光計上で20°Cで得た:波長、190~260nm;ステップ分解、0.5nm;速度、20nm/秒;蓄積、10;応答、1秒;バンド幅、1nm;路長、0.1cm。それぞれのペプチドのα螺旋含量は、平均残基楕円率[θ]222obsをモデル螺旋ペプチドについて報告されている[θ]222obsで割るかForoodBEJFelicianoandKPNambiarPNAS199390p838842JMartinScholtzBiopolymers199131p14631470LawlessMKetalBiochemistry199635p1369713708、或いは、例えば、異なった5つの二次構造比螺旋、平行及び逆平行βシート、β回転及びランダムコイルを推定するためにBrohmによって開発されたCDNNソフトウェアを用いるArivマシーンを用いて、算出する。ProteinEngineering19925p191195。熱安定性は、広範囲の温度に渡る円偏光2色性スペクトルを得て、それぞれの拘束されたペプチドの融点を測定して評価する。ハイスループット法で合成された多様な改変ペプチドライブラリーを評価することによる改変ポリペプチドの生物物理学的及び生物化学的特性の最適化ハイスループット技術を用いて改変ポリペプチド活性を細胞及びインビボ研究について最適化した。例えば、Apex396マルチチャネルシンセサイザーAAPPTECLouisvilleKentuckyを用いて生物学的評価のためにポリペプチドライブラリーを作り出した。ポリペプチド化合物を、伸張、切断、又は天然アミノ酸及び選択非天然アミノ酸にわたるアミノ酸置換によって多様化し、そして異なった架橋位置を作成して所望の生物物理学的及び生物化学的特性を最大化した。ハイスループット固相Fmoc化学及びルテニウム触媒化オレフィンメタセシス並びにペプチド脱保護及び開裂を用いてライブラリーを作成した。ペプチド精製は逆相C18HPLCによって行い、生成物をLC/MS質量分析及びアミノ酸分析によって特性化した。プロテアーゼ耐性のアッセイ構造化ペプチドのインビトロでのタンパク質分解を以下のパラメータを用いるLC/MSAglient1200で測定した:20μLの注入、0.6mLの流速、10分にわたる水0.1ギ酸から20~80アセトニトリル0.075ギ酸の勾配からなる15分のランタイム、洗浄から勾配条件の開始に戻るのに4分、そして0.5分のポストタイム。DADシグナルを8nmのバンド幅をもたせて280nmに設定して、MSDを、1つのチャンネルがM2H/2、1質量単位にあり、そして別のチャンネルがM3H/3、1質量単位にあるスキャンモードに設定した。それぞれのMSDシグナルの積分が108より大きいカウントの曲線下面積を生じた。反応サンプルは、DMSO1mMの原液中のペプチド5μL及び2mMのCaCl2を含有しているpH7.4の50mMリン酸緩衝液からなる195μLの緩衝液で構成されていた。0時間時点にサンプルを注入したらすぐ、50ng/μLのキモトリプシンSigmaを2μL添加して、徐々に連続注入して無傷ペプチドの量を定量した。各MSDデータ時点を正規化するために、100μMの濃度でアセチル化トリプトファンカルボキサミドの内部コントロールを用いた。時間に対するMSD領域のプロットが指数減衰曲線を生じ、そしてPrismソフトウェアGraphPadを用いる非線回帰分析によって半減期を確認した。アッセイはトリプシン及びペプシンをそれらの適切な緩衝条件中で用いても実施した。血漿安定性及び薬物動態ペプチド5~10μgをマウス血漿と共に37°Cで培養し、雄性C57/BL6マウスに尾静脈内に注入又は経口強制投与した10、20mg/kg。各種時間間隔例えば、0.5、1、2、4、8、12時間;n=3時点当りのエクスビボ及びインビボサンプル後眼窩放血によって採取をLC/MS分析、又は入手可能なELISAキット例えば、Exendin4EIAKitPhoenixPharmaceuticalsIncEK07094による定量のために処理した。エクスビボ血清安定性の検討のために、PrismソフトウェアGraphPadを用いてプロットした指数減衰曲線の非線回帰分析によってペプチドの半減期を算出した。示された時点におけるインビボ血清濃度を、血清半減期、血清最高濃度、総血清クリアランス、及び非コンパートメント分析を用いる分配の見掛け容量を算出するために用いる。生成されたプロテアーゼ耐性及びPKプロファイルはインビボ適用のために最も安定に構造化されたペプチドを選択するための尺度としての機能を果たす。GLP-1受容体結合アッセイ高感度緑色蛍光タンパク質EGFPのN-末端と融合している、ヒトGLP1受容体を安定に発現する組み換えU2OS細胞を製造会社の指示書に従って実施される、GLP-1RRedistributionAssayThermoScientificで用いた。GLP-1Rアッセイは、GLP1Rの内在化を最も有利に引き起こす架橋インスリン分泌促進ポリペプチド作動薬をスクリーニングするために用いられる。GLP-1はこのアッセイで参照化合物として用いられ、そしてリガンドは、スポット検出画像分析アルゴリズムによって、GLP-1内在化を誘発するそれらの能力についてアッセイされる。GLP-1R-EGFPの転移は蛍光顕微鏡上に画像化される。フィルターをHoechst350/461nm及びGFP/FITC488/509nm最大励起及び放射の波長用に設定する。転移は20倍又はそれ以上の倍率で撮った画像上で分析する。GLP-1R再分配アッセイにおける最初のアウトプットは細胞質におけるスポットの形成である。従って、データ分析は細胞質におけるスポットの数、領域又は強度に対応しているアウトプットを報告している。GLP-1受容体関与の第2メッセンジャーのシグナル伝達アッセイGLP-1作動薬は、多数の前臨床モデルにおいて実験的糖尿病を予防或いは改善して、β細胞量を保存するということが既に示されている。従って、賦形剤のみで又は架橋されたインスリン分泌促進ポリペプチドで処理した細胞におけるERストレスへの応答に重要なマーカーの発現を検討できる。ERストレスは、ATF-4、XBP-1、phospho-eIF2aSer51P[Ser51]-eIF2a、及びCHOPのような多くのシグナル伝達タンパク質のリン酸化に関与する広げられたタンパク質応答によって引き起こされるシグナル伝達経路を活性化するDrukeretalCellMetabolism2006v4p391406。そのため、ラットINS‐1又はマウスMIN6インスリノーマ細胞を架橋したインスリン分泌促進ポリペプチドの連続希釈の非存在下又は存在下で、賦形剤のみ、タプシガルジン、又はツニカマイシンで最大4時間処置した。あるいは、培養物を、架橋したインスリン分泌促進ポリペプチドの非存在下又は存在下でタプシガルジンで4時間処理する前、又はその間に、培養物を賦形剤のみ、又はH89、U0126、又はLy294002の何れかに20分間暴露する。総ての細胞抽出物をATF-4、XBP-1、phospho-eIF2aSer51P[Ser51]-eIF2a、及びCHOPに関して時間に対するイムノブロッティングで分析した。グルコース刺激インスリン放出の細胞アッセイINS-1細胞を、5mMのグルコース及び10のウシ胎仔血清を含んでいるダルベッコ変性イーグル培地中、希釈剤のみ又は各種濃度の架橋されたインスリン分泌促進ポリペプチドの存在下で、1晩培養する。3.3mMグルコースの存在下で前培養した後、次いで3mM又は20mMの何れかの存在下で細胞を37°Cで45分間培養する。次いで上澄液を除去し、300gで10分間遠心分離して、インスリンについてアッセイする。インスリン含量を算定するために、先に記載されているように、細胞を酸/エタノール混合物中で1晩抽出する。次いで、インスリンの量をELISAで定量するAmericanLaboratoryProductsCompanyAminetalTheJournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics2002v303p8288。インスリン分泌促進ペプチド処置への応答における血清グルコース及びインスリン濃度のインビボ観察レプチン受容体を欠損しているdb/dbマウスC57BLKS/J-Leprdb/Leprdb及びその同腹子を4週齢で、JacksonLaboratories231238、胃腸系により全身循環へ吸収されるような、経口投与可能な形態へ変換する能力を強調している。陰性コントロールとしての、賦形剤で処置された動物の血清ではEIAによってシグナルが検出されなかった。実施例6.架橋したインスリン分泌促進ペプチドの構造確認。GLP-1受容体に結合している架橋したインスリン分泌促進ペプチドの明確な構造を定義付けるために、記述されているRungeSetal2008JBiolChem2831134011347ようにしてX線結晶方法を適用できるだろう。架橋したインスリン分泌促進ペプチドに対する結晶化条件をフェニックス結晶化ロボットを用いてセットした96ウェルsittingdrop法用プレートCrystalQuickHamptonResearchを用いてスクリーニングする。初期条件はHTIndexScreen、JSCGSuite及びPro-ComplexSuiteを包含する。種々のpH並びに塩及び洗浄剤の濃度を包含する、結晶生育に対する最良の条件を特定するために、ベストヒット周辺のスクリーニングを実施する。生成するとすぐに、結晶を取り出し、結晶化緩衝液中で洗浄して、質量分析に付して結晶中のペプチドの存在を確認する。次いで、結晶を抗凍結剤中に浸し、急速冷凍して、液体窒素中で保管する。適切な結晶をArgonneNationalLaboratoryのシンクロトロン施設で試験した。分子置換、それに続くデータ分析及び微調整Phaser、Phenix、及びCootsソフトウェアによって相を得る。構造分析のための代替的で補完的なアプローチは1H-NMR分析を利用する。溶液中の架橋したインスリン分泌促進ペプチドのスペクトルは、z-シールド勾配及び三重共鳴クリオプローブを備えたBrukerAvanceDRXスペクトロメーター上600MHzで得られる。二次元のDQF-COSY、TOCSY、及びNOESYスペクトルを100D2O及び90H2O/10D2O中で測定する。TOCSYデータセットは40及び80msの混合時間を用いて、NOESYスペクトルは75、100、125及び200msの混合時間を用いて得られる。NMRデータセットは、NMRPipeスペクトル分析パッケージを用いて処理されて、プロトン共鳴の割り当てはCaraを用いて実施する。構造計算は標準プロトコールを用いるプログラムCYANAを用いて実行する。最終構造ファミリーは、最も低い標的機能、並びにプログラムWHATCHECK及びPROCHECK_NMRで測定したキラリティー及び立体化学に対する最も良い総合的価値を有する20の構造からなっている。構造はプログラムPYMOL及びMOLMOLを用いて提示し、そして分析した。構造データを、架橋したインスリン分泌促進ペプチド構造を、個々に及びGLP-1Rとの複合体として、本明細書に記載されているアッセイで評価した機能活性と関連付けるために用いる。実施例7.炭化水素架橋の挿入によってもたらされるタンパク質分解耐性のメカニズム図13。炭化水素架橋が非常に長いペプチド治療薬にプロテアーゼ耐性をもたらすメカニズムを、gp41に由来するHIV-1融合阻害ペプチド鋳型を用いて検討した。2対のオレフィン非天然アミノ酸の架橋しない挿入例えば、gp41の非架橋α螺旋:UAH-gp41626-662A、Bはキモトリプシンのタンパク質分解からの有意な保護をもたらさない。しかし、オレフィンメタセシスによって、対応する二重架橋類縁体、SAH-gp41626-662A、BはUAH-gp41626-662A、Bより8倍長い半減期を示し、著しいプロテアーゼ耐性をもたらすためには、架橋自体が必要であることを示唆している図13A。UAH-及びSAH-gp41626-662A、Bは、それぞれ27°Cと22°CのTm値を有して、同様な円偏光二色性溶解プロファルを示した。温度依存性のアンフォールディングは、重複している繰り返し溶融曲線図13Bから分かるように、両ペプチドに関して可逆的であった。これらのデータは、全体的なα螺旋安定性が、2つの構造に関して類似していて、SAH-gp41626-662A、Bの顕著なプロテアーゼ耐性の主要因とはならないことを明らかにしている。加えて、アンフォールディングの可逆性はペプチド凝集の非存在を強調しており、これも同様にSAH-gp41626-662A、Bの顕著なプロテアーゼ耐性の主要因とはならない。非改変、一重架橋、二重架橋、及び4ヶ所置換されているが架橋されていないペプチドの競合キモトリプシン分解パターンは、N-末端架橋がその架橋に隣接する切断部位のタンパク質分解的加水分解を、LC/MS分析で観察された対応するM18種を伴わずに、固有に阻止したことを明らかにした図13C。C-末端架橋は、架橋の上流部のタンパク質分解を完全に遮断した、というよりむしろ遅らせた。4ヶ所置換されているが架橋されていない誘導体UAH-gp41626-662A、Bは、非天然アミノ酸のN-末端対に隣接している位置のタンパク質分解を阻害できず、C-末端一重架橋ペプチドのように効果的にはタンパク質分解の速度を遅らせることもできなかったSAH-gp41626-662BのT1/2は77分;UAH-gp41626-662A、BのT1/2は36分。二重架橋ペプチドSAH-gp41626-662A、Bは、N-末端及びC-末端架橋の両方の抗タンパク質分解特性から相乗的に有利性をもたらされた。SAH-gp41626-662A、B及び対応する非改変鋳型ペプチド、T649vの競合1HNMR分析は、T649vの2つのN-末端トリプトファン残基に対応するインドールプロトン~10.6ppmが、複数の配座間の速い変換と一致して、T649vの2つの鋭いピークによって表わされていることを明らかにした図13D。対照的に、SAH-gp41626-662A、Bの1HNMRスペクトルは、ペプチド架橋の結果として個々に構造化されたN-末端を反映して、広がって分割されている。纏めると、これらのデータは、ペプチド二重架橋によってもたらされたタンパク質分解の有利性は、プロテアーゼ開裂部位の突然変異生成、α螺旋性のみの最大化、4ヶ所非天然アミノ酸置換、或いはペプチド凝集に由来していないことを示す。かわりに、二重架橋ペプチドの顕著なプロテアーゼ耐性は、1α螺旋構造の導入によるタンパク質分解の減少した速度、及び2i、i4架橋部分内またはこれに直接隣接した局部的な部位におけるペプチド開裂の完全な阻害の組み合わせによってもたらされると言うことを確認した実施例8.構造的に安定化されてプロテアーゼ耐性のSAH-Ex及びSAH-GLPペプチドはグルコース刺激インスリン放出GSISを増進する。SAH-Ex及びSAH-GLPペプチドの原液を、凍結乾燥粉末を脱イオン水に100μMで溶解して作成した。バッチGSISアッセイのために以下の処置溶液を作成した:1.67mMのグルコース、16.7mMのグルコース、1.67mMのグルコース10nMのペプチド、16.7mMのグルコース10nMのペプチド、全てが1×KRB緩衝液、2mMのCaCl2、0.05BSA中。野生型マウスの膵臓から単離した膵島をKRB緩衝液で3回洗浄して、試験管当り5個の膵島を1.67mMのグルコースを含有しているKRB緩衝液中で30分37°Cで培養した。次いで、膵島をペレット状にして緩衝液を上記の処置溶液に置き換えた。それぞれの実験をn=8で繰り返して実験した。37°Cで1時間培養した後、膵島をペレット状にして、グルコース刺激インスリン放出測定のために上澄液を採取した。ペレットを可溶化して細胞数を正規化するために細胞内インスリン含有量を評価した。インスリンは標準としてマウスインスリンを用いるELISAで測定したInsulinELISAKit、cat.80-INSMS-E01、ALPCO。インスリンのELISAプロットについては、1.67mMから16.7mMのグルコース用量の段階的増大に応答して放出されたインスリンの量に微増がみられる。しかし、インスリン分泌促進性EX4及びGLP1、並びに選択したSAH類縁体に応答して、GSISの実質的な増大がみられる。これらのデータは、Ex4及びGLP1の構造安定性、プロテアーゼ耐性、及び薬理学的特性を改善する炭化水素架橋がインクレチンの重要な機能的GSIS活性も保存することを強調している。追加参照文献WalenskyLDKungALEscherIMaliaTJBarbutoSetalActivationofapoptosisinvivobyahydrocarbonstapledBH3helixScience30514661470。BirdGHBernalFPitterKandWalenskyLDSynthesisandbiophysicalcharacterizationofstabilizedalphahelicesofBCL2domainsMethodsEnzymol446369386。GavathiotisESuzukiMDavisMLPitterKBirdGHetalBAXactivationisinitiatedatanovelinteractionsiteNature45510761081。参照による取り込み本明細書で引用された全ての特許、特許出願、GenBank/PBDナンバー、及び公表された文献は、これらが個々に取り込まれているようにその全てが参照により本明細書に取り込まれている。本発明はその好ましい実施態様に関して具体的に示され記載されているが、形態及び詳細の様々な変更が、添付されている特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなく、そこで実施できるということを当業者は理解できるだろう。均等物当業者は、本明細書に記載されている具体的な実施態様の均等物を認識できるか、或いは通常の実験のみを用いて確かめることができるだろう。このような均等物は以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。"