"下記のA~Fの特性を有し、かつ好気性微生物由来であることを特徴とするセロビオース2-エピメラーゼ。ASDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が37,800~48,400の範囲B分子量の理論値が42,500~50,100の範囲C至適pHが6~9の範囲DpH安定性がpH2~12の範囲E至適温度が30~90°Cの範囲F熱安定性の上限が30~80°Cの範囲下記のP1からP9のいずれかのアミノ酸配列からなることを特徴とする請求項1記載のセロビオース2-エピメラーゼ。P1:下記のP1a、P1bまたはP1cのアミノ酸配列P1a:配列番号2のアミノ酸配列P1b:配列番号2のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P1c:配列番号2のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P2:下記のP2a、P2bまたはP2cのアミノ酸配列P2a:配列番号4のアミノ酸配列P2b:配列番号4のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P2c:配列番号4のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P3:下記のP3a、P3bまたはP3cのアミノ酸配列P3a:配列番号6のアミノ酸配列P3b:配列番号6のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P3c:配列番号6のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P4:下記のP4a、P4bまたはP4cのアミノ酸配列P4a:配列番号8のアミノ酸配列P4b:配列番号8のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P4c:配列番号8のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P5:下記のP5a、P5bまたはP5cのアミノ酸配列P5a:配列番号10のアミノ酸配列P5b:配列番号10のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P5c:配列番号10のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P6:下記のP6a、P6bまたはP6cのアミノ酸配列P6a:配列番号12のアミノ酸配列P6b:配列番号12のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P6c:配列番号12のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P7:下記のP7a、P7bまたはP7cのアミノ酸配列P7a:配列番号14のアミノ酸配列P7b:配列番号14のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P7c:配列番号14のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P8:下記のP8a、P8bまたはP8cのアミノ酸配列P8a:配列番号16のアミノ酸配列P8b:配列番号16のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P8c:配列番号16のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P9:下記のP9a、P9bまたはP9cのアミノ酸配列P9a:配列番号18のアミノ酸配列P9b:配列番号18のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P9c:配列番号18のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列前記好気性微生物が、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans、スピロソマリングアレSpirosomalinguale、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinusおよびフラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniaeからなる群から選択される少なくとも一種であることを特徴とする請求項1または2記載のセロビオース2-エピメラーゼ。前記セロビオース2-エピメラーゼが、固定化担体に固定化された固定化酵素であることを特徴とする請求項1から3のいずれか一項に記載のセロビオース2-エピメラーゼ。下記のG1からG9の塩基配列のいずれかの塩基配列からなることを特徴とするセロビオース2-エピメラーゼ遺伝子。G1:下記のG1a、G1b、G1cまたはG1dの塩基配列G1a:配列番号1の塩基配列G1b:配列番号1の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G1c:配列番号1の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G1d:配列番号1の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2:下記のG2a、G2b、G2cまたはG2dの塩基配列G2a:配列番号3の塩基配列G2b:配列番号3の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2c:配列番号3の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2d:配列番号3の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3:下記のG3a、G3b、G3cまたはG3dの塩基配列G3a:配列番号5の塩基配列G3b:配列番号5の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3c:配列番号5の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3d:配列番号5の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4:下記のG4a、G4b、G4cまたはG4dの塩基配列G4a:配列番号7の塩基配列G4b:配列番号7の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4c:配列番号7の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4d:配列番号7の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5:下記のG5a、G5b、G5cまたはG5dの塩基配列G5a:配列番号9の塩基配列G5b:配列番号9の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5c:配列番号9の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5d:配列番号9の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6:下記のG6a、G6b、G6cまたはG6dの塩基配列G6a:配列番号11の塩基配列G6b:配列番号11の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6c:配列番号11の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6d:配列番号11の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7:下記のG7a、G7b、G7cまたはG7dの塩基配列G7a:配列番号13の塩基配列G7b:配列番号13の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7c:配列番号13の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7d:配列番号13の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8:下記のG8a、G8b、G8cまたはG8dの塩基配列G8a:配列番号15の塩基配列G8b:配列番号15の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8c:配列番号15の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8d:配列番号15の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9:下記のG9a、G9b、G9cまたはG9dの塩基配列G9a:配列番号17の塩基配列G9b:配列番号17の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9c:配列番号17の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9d:配列番号17の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列セロビオース2-エピメラーゼの製造方法であって、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans、スピロソマリングアレSpirosomalinguale、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinusおよびフラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniaeからなる群から選択される少なくとも一種の好気性微生物を培養する工程と、前記好気性微生物の培養物から無細胞抽出物を得る工程とを含むことを特徴とする製造方法。請求項6のセロビオース2-エピメラーゼの製造方法に使用する好気性微生物であって、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans、スピロソマリングアレSpirosomalinguale、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinusおよびフラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniaeからなる群から選択される少なくとも一種であることを特徴とする好気性微生物。還元末端糖残基がβ-1,4結合で結合している、2つ以上の糖残基からなる糖を基質とし、セロビオース2-エピメラーゼの酵素反応により、前記還元末端糖残基の2位の水酸基がエピメリ化された糖を製造する、エピメリ化糖の製造方法であって、前記セロビオース2-エピメラーゼとして、請求項1から4のいずれか一項に記載のセロビオース2-エピメラーゼを使用することを特徴とする製造方法。前記基質が、ラクトースである、請求項8記載の製造方法。前記酵素反応の温度が、40~100°Cの範囲である請求項8または9記載の製造方法。前記酵素反応における基質濃度が、溶媒100gあたり25~90gの範囲である請求項8から10のいずれか一項に記載の製造方法。前記セロビオース2-エピメラーゼが、前記好気性微生物からの無細胞抽出物、および前記好気性微生物の菌体の少なくとも一方であることを特徴とする請求項8から11のいずれか一項に記載の製造方法。そこで、本発明は、工業的な製造が可能である、新たなセロビオース2-エピメラーゼの提供を目的とする。本発明のセロビオース2-エピメラーゼは、下記のA~Fの特性を有し、かつ好気性微生物由来であることを特徴とする。ASDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が37,800~48,400の範囲B分子量の理論値が42,500~50,100の範囲C至適pHが6~9の範囲DpH安定性がpH2~12の範囲E至適温度が30~90°Cの範囲F熱安定性の上限が30~80°Cの範囲本発明のセロビオース2-エピメラーゼ遺伝子は、下記のG1からG9の塩基配列のいずれかの塩基配列からなることを特徴とする。G1:下記のG1a、G1b、G1cまたはG1dの塩基配列G1a:配列番号1の塩基配列G1b:配列番号1の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G1c:配列番号1の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G1d:配列番号1の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2:下記のG2a、G2b、G2cまたはG2dの塩基配列G2a:配列番号3の塩基配列G2b:配列番号3の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2c:配列番号3の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2d:配列番号3の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3:下記のG3a、G3b、G3cまたはG3dの塩基配列G3a:配列番号5の塩基配列G3b:配列番号5の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3c:配列番号5の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3d:配列番号5の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4:下記のG4a、G4b、G4cまたはG4dの塩基配列G4a:配列番号7の塩基配列G4b:配列番号7の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4c:配列番号7の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4d:配列番号7の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5:下記のG5a、G5b、G5cまたはG5dの塩基配列G5a:配列番号9の塩基配列G5b:配列番号9の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5c:配列番号9の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5d:配列番号9の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6:下記のG6a、G6b、G6cまたはG6dの塩基配列G6a:配列番号11の塩基配列G6b:配列番号11の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6c:配列番号11の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6d:配列番号11の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7:下記のG7a、G7b、G7cまたはG7dの塩基配列G7a:配列番号13の塩基配列G7b:配列番号13の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7c:配列番号13の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7d:配列番号13の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8:下記のG8a、G8b、G8cまたはG8dの塩基配列G8a:配列番号15の塩基配列G8b:配列番号15の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8c:配列番号15の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8d:配列番号15の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9:下記のG9a、G9b、G9cまたはG9dの塩基配列G9a:配列番号17の塩基配列G9b:配列番号17の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9c:配列番号17の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9d:配列番号17の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列本発明の製造方法は、セロビオース2-エピメラーゼの製造方法であって、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans、スピロソマリングアレSpirosomalinguale、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinusおよびフラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniaeからなる群から選択される少なくとも一種の好気性微生物を培養する工程と、前記好気性微生物の培養物から無細胞抽出物を得る工程とを含むことを特徴とする。本発明の好気性微生物は、前記本発明のセロビオース2-エピメラーゼの製造方法に使用する好気性微生物であって、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans、スピロソマリングアレSpirosomalinguale、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinusおよびフラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniaeからなる群から選択される少なくとも一種であることを特徴とする。本発明の製造方法は、還元末端糖残基がβ-1,4結合で結合している、2つ以上の糖残基からなる糖を基質とし、セロビオース2-エピメラーゼの酵素反応により、前記還元末端糖残基の2位の水酸基がエピメリ化された糖を製造する、エピメリ化糖の製造方法であって、前記セロビオース2-エピメラーゼとして、前記本発明のセロビオース2-エピメラーゼを使用することを特徴とする。本発明のセロビオース2-エピメラーゼは、好気性微生物由来であることから、例えば、本発明の好気性微生物から容易に製造可能である。このため、本発明のセロビオース2-エピメラーゼは、例えば、工業的に生産可能であり、これによって、さらに、機能性糖質として有用性が高いエピラクトース等を、工業レベルで生産し、有効利用することが可能となる。本発明において、以下、セロビオース2-エピメラーゼを、CEといい、セロビオース2-エピメラーゼ遺伝子を、CE遺伝子という。<セロビオース2-エピメラーゼ:CE>CEとは、以下の触媒活性を有するポリペプチドを意味する。定義CEは、国際生化学分子生物学連合により、EC番号5.1.3.11に分類され、グルコースがβ―1,4結合されたセロビオースを4-O-β-グルコシルマンノースへ変換、またはその逆反応を触媒する。また、CEは、還元末端糖残基がβ-1,4結合で結合している、2つ以上の糖残基からなる糖について、前記還元末端糖残基の2位の水酸基を2-エピメリ化異性化する反応、またはその逆反応を触媒する。以下、この触媒活性を、CE活性といい、前記糖を、糖基質という。CEの酵素単位1Uは、30°C、pH7の条件下、1分間に1μmolの前記糖基質例えば、ラクトースをエピメリ化するエピメリ化糖を生成する酵素量とした。本発明において、ポリペプチドは、タンパク質またはペプチドの意味を含む。本発明のCEは、前述のように、下記のA~Fの特性を有し、かつ好気性微生物由来であることを特徴とする。ASDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が37,800~48,400の範囲B分子量の理論値が42,500~50,100の範囲C至適pHが6~9の範囲DpH安定性がpH2~12の範囲E至適温度が30~90°Cの範囲F熱安定性の上限が30~80°Cの範囲前記Aの分子量は、例えば、39,800~43,900が好ましく、より好ましくは、39,800~42,800の範囲、さらに好ましくは、41,700~42,800の範囲である。前記Aの分子量は、以下のSDS-PAGEの条件により特定できる。なお、この方法は、前記Aの特性を特定するための方法であって、本発明を制限するものではない。SDS-PAGEの条件は、例えば、ポリアクリルアミドゲルのゲル濃度12.5であり、定電流25mA、精製タンパク質量1~5μgとした。前記Bの分子量の理論値は、例えば、45,300~48,100が好ましく、より好ましくは、45,300~47,500の範囲、さらに好ましくは、45,300~47,300の範囲である。前記Cの至適pHは、30°Cで最も高い活性を示すpHである。前記至適pHは、例えば、5~9が好ましく、より好ましくは、6~8.8の範囲、さらに好ましくは、6.3~8.4の範囲、特に好ましくは、6.3~7の範囲である。CEの基質となる還元糖は、例えば、アルカリ性条件下で高温にさらされた場合、その還元末端が異性化してしまう。すなわち、例えば、基質としてセロビオースを使用した場合、セロビウロースβ-D-グルコピラノシル--D-フラクトースが、副生成物として生じる。また、基質としてラクトースを使用した場合、ラクチュロースβ-D-ガラクトピラノシル--D-フラクトースが副生成物として生じる。これらの副生成物は、目的生成物である4-β-グルコシルマンノース-D-マンノースまたはエピラクトースと分離することが、工業的に極めて困難である。このため、前記条件下でCEにより還元糖を変換した場合、目的生成物の収量が減じたり、目的生成物の純度が低下するおそれがある。このため、CEによる還元糖の変換は、酸性領域の条件下で行うのが好ましい。したがって、酸性領域に高い活性を示す、本発明のCEは、例えば、少量で長時間に亘って、副生成物を生じさせずに、基質を目的生成物に変換できる。これにより、高い純度の目的生成物が得られる。このような観点から、本発明のCEは、有用である。なお、前記副生成物を生じさせないとは、基質から副生成物への生成率が、好ましくは5以下であり、より好ましくは3以下であり、特に好ましくは1以下であることをいう。前記DのpH安定性は、例えば、2~12が好ましく、より好ましくは、2.2~11.8の範囲である。前記pH安定性は、所定pH、4°C、24時間の条件で、CEを保存した後、保存前のCEの活性を100とした場合に、80以上の残存活性を示すpHである。この場合、活性測定の条件は、例えば、30~40°C、各CEの前記至適pHとする。前記Eの至適温度は、例えば、35~90°Cの範囲、好ましくは、40~85°Cの範囲、より好ましくは、45~80°Cの範囲である。酵素反応時における微生物汚染の防止の観点から、前記至適温度は、例えば、55~80°Cの範囲が特に好ましい。前記至適温度は、前記至適pHにおいて、最も高いCE活性を示す温度である。前記Fの熱安定性の上限は、例えば、35~80°Cが好ましく、より好ましくは、40~80°C、さらに好ましくは、45~80°Cである。前記熱安定性は、所定温度、pH7.0、15~30分間例えば、15分間または30分間の条件で、CEを保存した後、保存前のCEの活性を100とした場合に、80以上の残存活性を示す温度である。この場合、活性測定の条件は、例えば、30°C、各CEの前記至適pHとする。前記Fの熱安定性の下限は、特に制限されない。本発明のCEの基質は、還元末端糖残基がβ-1,4結合で結合している、2つ以上の糖残基からなる糖である。以下、前記糖を、糖基質という。本発明のCEは、例えば、前記糖基質に属するいずれか一種類の糖を基質としてもよいし、二種類以上の糖を基質としてもよい。なお、前記糖基質は、高純度である必要はなく、例えば、牛乳、ホエー等の、糖基質以外にタンパク質または脂質等を含有する飲食品、植物由来セルロースをセルラーゼで加水分解反応させた反応液そのもの等を用いてもよい。前記糖基質において、糖残基の数は、前述のように2以上であればよく、その上限は特に制限されない。前記糖残基の上限は、例えば、4個であり、好ましくは、3個であり、より好ましくは、2個である。前記糖基質は、前記糖残基が2個の場合、二糖の基質ということができ、前記糖残基が3個以上の場合、多糖の基質ということができる。前記糖基質の具体例としては、例えば、ラクトース、エピラクトース、セロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、4-β-グルコシルマンノース-D-マンノース、4-β-セロビオシルマンノース-β-D-グルコピラノシル--D-マンノース、4-β-セロトリオシルマンノース-β-D-グルコピラノシル--β-D-グルコピラノシル-D-マンノース、4-β-セロテトラオシルマンノース-β-D-グルコピラノシル--β-D-グルコピラノシル-β-D-グルコピラノシル-D-マンノース、4-β-マンノビオース-D-マンノース、4-β-マンノシルグルコース-D-グルコース、グロボトリオース-β-D-ガラクトピラノシル--D-グルコース等が例示できる。本発明のCEは、セロビオース、ラクトースを基質とすることが好ましい。本発明のCEは、例えば、本発明のCEが固定化担体に固定化された固定化酵素でもよい。本発明のCEを固定化酵素とすることで、例えば、高基質濃度および高温において、反応生成物の製造を行うことができ、また、バイオリアクター方式による反応生成物の製造を行うこともできる。前記固定化担体は、特に制限されず、例えば、本発明のCEが吸着または架橋結合され、本発明のCEの活性が保持されるもの使用できる。前記固定化担体は、例えば、陰イオン交換担体、陽イオン交換担体、疎水性担体等があげられる。前記固定化担体の具体例は、例えば、キトサンゲル、イオン交換ゲルである。前記キトサンゲルは、例えば、キトパールBCW-2510、キトパールBCW-3010、キトパールBCW-3510等のキトパールシリーズ富士紡績社製等があげられる。前記イオン交換ゲルは、例えば、ダイヤイオン登録商標SK1B、ダイヤイオン登録商標PK212、ダイヤイオン登録商標HPA25等のダイヤイオン登録商標シリーズ三菱化学社製;セパビーズ登録商標SP-207、セパビーズ登録商標SP-850等のセパビーズ登録商標シリーズ三菱化学社製;デュオライトA568、デュオライトA7、デュオライトXAD761等のデュオライトシリーズ三菱化学社製等があげられる。前記固定化担体の形状は、特に制限されず、例えば、膜、ビーズ、プレート等があげられる。本発明のCEの前記固定化担体への固定化方法は、特に制限されず、例えば、緩衝液等の溶媒に本発明のCEと前記固定化担体とを添加し、この混合液を振とうすることで行える。前記固定化の際の前記固定化担体と本発明のCEとの混合割合重量比は、特に制限されず、例えば、1:0.000001~1:1の範囲であり、好ましくは1:0.000005~1:0.1の範囲であり、より好ましくは1:0.00001~1:0.1の範囲である。本発明のCEは、さらに、下記のGの特性を有することが好ましい。下記アシルグルコサミンは、例えば、N-アシル-D-グルコサミンがあげられる。下記アシルマンノサミンは、例えば、N-アシル-D-マンノサミンがあげられる。Gアシルグルコサミンおよびアシルマンノサミンを実質的に基質としない実質的に基質にしないとは、例えば、ラクトースを基質とした相対活性を100とした場合に、アシルグルコサミンおよびアシルマンノサミンを基質とした相対活性が5以下であることを意味し、好ましくは1以下であり、より好ましくは0であり、さらに好ましくは、アシルグルコサミンおよびアシルマンノサミンを基質とする活性が測定不可であり、特に好ましくは、アシルグルコサミンおよびアシルマンノサミンを基質とする触媒反応が完全に生じないことを意味する。本発明のCEは、さらに、下記のHの特性を有することが好ましい。下記α-1,4結合の糖は、例えば、マルトースがあげられる。Hα-1,4結合の糖を実質的に基質としない本発明のCEは、さらに、下記のIの特性を有することが好ましい。下記β-1,2結合の糖は、例えば、ソホロースがあげられる。Iβ-1,2結合の糖を実質的に基質としない本発明のCEは、さらに、下記のJの特性を有することが好ましい。下記β-1,3結合の糖は、例えば、ラミナリビオースがあげられる。Jβ-1,3結合の糖を実質的に基質としない本発明のCEは、さらに、下記のKの特性を有することが好ましい。下記β-1,6結合の糖は、例えば、ゲンチオビオースがあげられる。Kβ-1,6結合の糖を実質的に基質としない本発明のCEは、前記A~Fの特性を満たしていればよく、その他の条件は特に制限されない。本発明のCEは、具体例として、下記のP1からP9のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。以下、P1~P9の各アミノ酸配列からなるCEを、それぞれ、RmCE、SdCE、SlCE、HaCE、TtCE、DfCE、CpCE、FjCE、PhCEという。RmCEP1:下記のP1a、P1bまたはP1cのアミノ酸配列P1a:配列番号2のアミノ酸配列P1b:配列番号2のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P1c:配列番号2のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号2VSTETIPDVRRLRALQAEVHEELTENILKFWATRTPDLVHGGFVGRVGPDGRPHPEAPRGAILNARILWTFAAAYRQLGTPLYREMAEHAYRYFVRHFVDADHGGVYWLVAADGRPLDTRKHVYAQSFAIYALSEWHRATGDEAALALARAIYGLIEAHCADRVHGGYVEACDRAWRPLEDVRLSAKDAPEPRSMNTHLHVLEAYTNLYRVWPDAELAVRLQALIELFLRAIYHPATGHLILFFDERWRPRSRAVSFGHDIETSWLLLEAVDVLGQATLRPRVQQASLHLARATLAEGRAPDGSLYYEIDEQGRLDTDRHWWPQAEALVGFLNAYQESGEVAFYEAAEGVWRYIRKRQRDTQGGEWFARVRDDGTPYPDDKVDFWKGPYHNGRACLEAIQRLRHLLEHARSR前記P1aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Rhodothermus属から得ることができ、具体例としては、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus以下、Rmというから得ることができる。前記Rmは、例えば、独立行政法人理化学研究所登録番号JCM9785、ATCC登録番号ATCC43812から入手できる。前記P1aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A1SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が40,800~44,800の範囲B1分子量の理論値が45,300~49,300の範囲C1至適pHが6~7の範囲D1pH安定性がpH3~12の範囲E1至適温度が80~90°Cの範囲F1熱安定性の上限が35~80°Cの範囲前記P1bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P1cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。相同性は、例えば、比較する配列同士を適切にアライメントしたときの同一性の程度であり、前記配列間のアミノ酸の正確な一致の出現率を意味する。同一性は、例えば、配列におけるギャップの存在およびアミノ酸の性質が考慮される。前記アライメントは、例えば、任意のアルゴリズムの利用により行うことができ、具体的に、BLASTBasiclocalalignmentsearchtool、BLAST-2、FASTA、Smith-Waterman、ALIGN、Megasalin等の相同性検索ソフトウエアが使用できる。同一性の算出は、例えば、前述のような公知の相同性検索プログラムを用いて算出でき、具体例は、例えば、全米バイオテクノロジー情報センターNCBIの相同性アルゴリズムBLASThttpwwwncbinlmnihgovBLASTにおいて、デフォルトのパラメーターを用いることによって算出できる。以下、同様である。SdCEP2:下記のP2a、P2bまたはP2cのアミノ酸配列P2a:配列番号4のアミノ酸配列P2b:配列番号4のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P2c:配列番号4のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号4MGVPLKKNKLNYSDLNNAFESELHAIADWWVDNTVDEIHGGFVGEMSVDNKVNATADKGIILNTRILWFFSEAALFTGNKRYAQMAERAYYYIVDHFLDTEHGGVFWALDYRGNVVNNRKQVYAQAFAIYGLSAYYRLTKQADVLAQAHAIFELTEANAQDENHQGYLEAFSNTWGRLDDMRLSEKDLNSPKSMNTHLHILEAYTALHIAAPSPKVSAAIKHCLELFDRYIINKANWHLRMFQDMDWEDVSASYSYGHDIECSWLMWEAVESLESEELHAHYKPAVIALAETCLEQGIGRYNEVLDAYNFETQTLVDERVWWVQAEALVGFLNAYHLAGEQRYLDAALNVWEFINSYQKDSVGGEWHWLSRLDLPHTGDCKMGPWKAPYHNGRAMMESIKLVQRIFGNNE前記P2aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Saccharophagus属から得ることができ、具体例としては、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans以下、Sdというから得ることができる。前記Sdは、例えば、ATCCから入手できる登録番号ATCC43961。前記P2aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A2SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が43,000~47,000の範囲B2分子量の理論値が45,200~49,200の範囲C2至適pHが7~8の範囲D2pH安定性がpH3.5~11の範囲E2至適温度が30~40°Cの範囲F2熱安定性の上限が30~40°Cの範囲前記P2bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P2cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。SlCEP3:下記のP3a、P3bまたはP3cのアミノ酸配列P3a:配列番号6のアミノ酸配列P3b:配列番号6のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P3c:配列番号6のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号6MDLKQLRAELRQEHKDILAYWTRYAPDPVHGGFYGRVNYQNQPDPNAEKGIVLNARILWTFSAALRETQHEEYRSIADQAFQYIKTYFVDPEYGGIYWSVDATGKPKNALKHLYGQAFTLYGLSEYVRATKALALAKEVFQNMVKHAYDPKKGGFVEALARDWSPATDYIISKYDNQEIKTMNTHLHILESFTCLYHVWPDKSVAEQMRGMLHMFQIHIIDPTTYRMNLFMDMNWKVRRTAVSYGHDIEASWLLPEAADLLAAKNPADKPLQKAFQHIGVKMARAASTGYDPTDGGMNYELEPDGHLNKERSWWVLAEAMVGFMNAYQLTHEKPFLDKSIKSWEFTKKYLLDRQNGEWYMGVTGDHTIVGKDKISMWKCPYHNSRACLEMLERLDHLHG前記P3aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Spirosoma属から得ることができ、具体例としては、スピロソマリングアレSpirosomalinguale以下、Slというから得ることができる。前記Slは、例えば、ATCCから入手できる登録番号ATCC33905。前記P3aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A3SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が44,400~48,400の範囲B3分子量の理論値が44,600~48,600の範囲C3至適pHが7~8の範囲D3pH安定性がpH2~10の範囲E3至適温度が40~50°Cの範囲F3熱安定性の上限が35~50°Cの範囲前記P3bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P3cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。HaCEP4:下記のP4a、P4bまたはP4cのアミノ酸配列P4a:配列番号8のアミノ酸配列P4b:配列番号8のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P4c:配列番号8のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号8MANLVDGGFDHGLREMWQAQFRDEVLGNILPFWANHTLDHEHGGFYGGLTNDLTIHNEFPRSAVLCGRILWTFACAYRMLGDPRDLAVAEYAYAYLKQAFWDQTYGGLYWSIDANGQPLADHKQTYAQSFAIYGLAEYVRATGDQSALELAQTLFHLIENHAFDAVYGGYIEGCDRVWQPLGDSRLSKLEPEARKTMNTMLHMMEAYANLLRVWDVADVRQQLASLIEACCEHIIDPVQGRFHLFFDDQWNHHEHGISYGHDIEGSWLLMEAAHVLGDEHLIAKAETLAIGMADAVYRNGRHADGSIIHERAPDGSINLERHWWPQAEAVVGFYNAYQATGKPEFAQAAYDSWNFIQRYFIDHDHGDWFKILDAQNQPLGAIPKVGPWECPYHHARVCFEMIERLAEHNVSVQMRG前記P4aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Herpetosiphon属から得ることができ、具体例としては、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus以下、Haというから得ることができる。前記Haは、例えば、ATCCから入手できる登録番号ATCC23779。前記P4aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A4SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が37,800~41,800の範囲B4分子量の理論値が45,500~49,500の範囲C4至適pHが7~8の範囲D4pH安定性がpH7~12の範囲E4至適温度が40~50°Cの範囲F4熱安定性の上限が35~50°Cの範囲前記P4bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P4cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。TtCEP5:下記のP5a、P5bまたはP5cのアミノ酸配列P5a:配列番号10のアミノ酸配列P5b:配列番号10のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P5c:配列番号10のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号10METETDTREQLILLQNNCANELAHLVSWWANNVVGDGNFSGEINSQGLPQHQAGKGGIYGSRLLWFFSEVAILGRDSLAPASGPTSGLASAKVSAQALYQYFSHHFIDPEYGGVVWELHANGELRDGRKQIYAQAFAIYCLSAYYRLTSDEDALAQALTIYELVEDFALDRAHCGYFEAFSREWRELDDIRLSEKDLASPKTMNTHLHLLEAYTGLLRALRQAGSPALQKVATSVQQLLELYVSRVYNSSSRHVHMFMNTHWEDESLAFSYGHDIESSWLLWEAADVLGDDALKQSYRHDVIALAETCLAQARATDGSLYDVFDKQRQLNIPERVWWVQAEAMVGFFNAWQLTGQQKYLDAVFSLWRYLEAEFITPGSEWPWLARSDQGAGYRAYLAGFWKGPYHNGRALMELISRINSVLNVDC前記P5aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Teredinibacter属から得ることができ、具体例としては、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae以下、Ttというから得ることができる。前記Ttは、例えば、ATCCから入手できる登録番号ATCC39867。前記P5aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A5SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が41,900~45,900の範囲B5分子量の理論値が46,100~50,100の範囲C5至適pHが8~9の範囲D5pH安定性がpH3~11の範囲E5至適温度が40~50°Cの範囲F5熱安定性の上限が35~45°Cの範囲前記P5bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P5cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。DfCEP6:下記のP6a、P6bまたはP6cのアミノ酸配列P6a:配列番号12のアミノ酸配列P6b:配列番号12のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P6c:配列番号12のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号12MAAFTPEAFKKEFIAILDYWEKYGLDSEKGGFYGRVNYENQPVKDAAKSVVLTGRILWTFSLAHRLLKEAKYLTLADRAYQQLARHFFDPEHGGVYWSVNADGSPLETKKQIYGNAFAMYGLAEYYRVTHFKPALEKAQSLFEIIEKHAFDPVNGGYREAFARDWSATDDYILSKSPWNKSMNTHLHLVEAYTNLYSVWPDARLKKQTAGMLDTIITRIVNPKTETMQLFFDEQWKAKDNIVSYGHDIEASWLLFETAEILHDEKLIGRMKQKSIAMAATAAKGLGADGALNYEYDPETKHTQTDRSWWVVAEQLVGFYNAYQLTKDAQFKTKAEKSWDYIVNEFIDHERGEWFGTVKEDGTPVKGDKINFWKCPYHNARACAEMWRRTGKA前記P6aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Dyadobacter属から得ることができ、具体例としては、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans以下、Dfというから得ることができる。前記Dfは、例えば、ATCCから入手できる登録番号ATCC700827。前記P6aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A6SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が39,700~43,700の範囲B6分子量の理論値が43,300~47,300の範囲C6至適pHが7~8の範囲D6pH安定性がpH2~10.5の範囲E6至適温度が45~55°Cの範囲F6熱安定性の上限が35~50°Cの範囲前記P6bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P6cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。CpCEP7:下記のP7a、P7bまたはP7cのアミノ酸配列P7a:配列番号14のアミノ酸配列P7b:配列番号14のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P7c:配列番号14のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号14MNWTSDEKQQLPVNTLKQELLQELKRILVYWTTETVDERNGGFIGRISAHNVKDPYAVKGSVLNTRILWTFSAAYNLLKTDQYLTLANRAWDYLYAHFADKVHGGLYWTVDYTGKAVDGKKQVYAIAFGVYACSEYFKASRNETAKQTAIAWYHAIRQYAYDKIYGGYIEACTQDWQPLSDLRLSLKDANERKSMNTHLHVLEAWTTLYEIWPDEQLKADILELLMLFDKQIIHPTTHHLQLFFTDNWTVKSTLISYGHDIEAAWLLLEAAIAVGDEQELSRFRVRAINLVRAALKGMDKDGGLWYEYDTAEQHLIAEKHWWPQAEALVGLVNAWELSGDPYYLDKAMASWQFIQQFLLDKTDGEWHWGVGLDGKPIEEVKVGLWKCPYHNARACMEVVKRLK前記P7aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Chitinophaga属から得ることができ、具体例としては、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis以下、Cpというから得ることができる。前記Cpは、例えば、独立行政法人製品評価技術基盤機構から入手できる登録番号NBRC15968。前記P7aのポリペプチドは、例えば、前記Bの特性として、以下の特性を有する。B7分子量の理論値が44,700~48,700の範囲前記P7bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P7cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。FjCEP8:下記のP8a、P8bまたはP8cのアミノ酸配列P8a:配列番号16のアミノ酸配列P8b:配列番号16のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P8c:配列番号16のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号16MPANLKQLKSELTAELDSILNYWSKHTLDNQNEGFVGQIDFNDHIVANAEKGSVLNSRILWTFSSSYQITKKENHKEIAKRAFEYLSKYFYDPEFNGLFWSINADKTPKDTKNQIYALAFAIYGLSEYYVISQDQKALETAVNLYKSIQKYSYDPVNKGYLEAFTRNWQPIEDLRLSDKDANEKKTMNTHLHIIEAYANLFKVWKDETLKKDSIELLETIEKHFINTETGHLRLFFDENWIEKPDVISYGHDIEAAWLLLQCAEVLEEENLIANYKKHAVQIAEVTKEGFDTDGGLWYEFEPKENELIAEKHWWVQAEALIGFYNAYQLTGNEEYLKIVFENWNFIKKHILDHKNGEWFWGIHKDYSLIQKDKAGFWKCPYHNSRACLELINRIKT前記P8aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Flavobacterium属から得ることができ、具体例としては、フラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniae以下、Fjというから得ることができる。前記Fjは、例えば、独立行政法人製品評価技術基盤機構から入手できる登録番号NBRC12017。前記P8aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A8SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が39,700~43,700の範囲B8分子量の理論値が44,700~48,700の範囲C8至適pHが8~9の範囲D8pH安定性がpH4~10の範囲E8至適温度が35~40°Cの範囲F8熱安定性の上限が35~40°Cの範囲前記P8bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P8cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。PhCEP9:下記のP9a、P9bまたはP9cのアミノ酸配列P9a:配列番号18のアミノ酸配列P9b:配列番号18のアミノ酸配列において、1個から数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列P9c:配列番号18のアミノ酸配列との相同性が70以上であるアミノ酸配列であって、セロビオース2-エピメラーゼ活性を有するアミノ酸配列配列番号18MTSIFKNRLEQLQKVHQTLIHQKNQIETGGNGIFDRYRYPVLTAAHIPLTWKYDFDAKANPYFMERIGFNAVFNAGAIKFNGKFILVARVEGADRKSFFAIAESENGIDGFEFWNAPIVFDTDEHADTNVYDMRLVKHEDGWIYGLFCTEKRDPSAPESDQTSALAQCGIIRTKDLKKWDRLPDLKTPSPQQRNVVLHPEFVGGKYAFYTRPQDSFIEAGTGGGIGFGLADNIENATITHEAIFYKKEYHTVYEAKNGQGPAPIKTDKGWLHLAHGVRNTAAGLRYVLYMFMTDLDDLTKVIYKPGGYFIAPEGEERVGDVSNVTFCNGWIADQDEKVYIYYASSDTRMHVATSTVEQLIDYVVNTPEDGLSSAKSIKNIVGLIDKNSIHSFSKI前記P9aのポリペプチドは、例えば、好気性微生物Pedobacter属から得ることができ、具体例としては、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinus以下、Phというから得ることができる。前記Phは、例えば、独立行政法人製品評価技術基盤機構から入手できる登録番号NBRC14942。前記P9aのポリペプチドは、例えば、前記A~Fの特性として、以下の特性を有する。A9SDS-ポリアクリルアミド電気泳動法により測定された分子量が38,700~42,700の範囲B9分子量の理論値が42,500~46,500の範囲C9至適pHが6~7の範囲D9pH安定性がpH5~12の範囲E9至適温度が35~40°Cの範囲F9熱安定性の上限が35~40°Cの範囲前記P9bにおいて、欠失、置換、付加および/または挿入されたアミノ酸残基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~4個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記P9cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。前記P1~P9の中でも、例えば、耐熱性に優れることから、P1のRm由来CE、P4のHa由来CE、P6のDf由来CE、P3のSlCEが好ましく、より好ましくはP1のRm由来CEである。このように耐熱性に優れるCEであれば、例えば、雑菌等の繁殖を防止するために、高い温度条件下で処理をする場合であっても、十分に優れた活性を維持した状態で使用できる。本発明のCEは、例えば、前記P1~P9のアミノ酸配列において、1個または数個のアミノ酸残基が、さらに修飾基を有してもよい。前記修飾基は、特に制限されず、例えば、糖鎖、リン酸基、メチル基等があげられる。本発明のCEの活性は、前記基質から2-エピメリ化された生成物を定量または定性することにより、測定できる。本発明のCEを用いた反応は、例えば、緩衝液中で行うことができる。前記緩衝液のpHは、特に制限されず、例えば、前述のような至適pHおよびpH安定性のpHが好ましい。前記緩衝液の種類は、特に制限されず、例えば、グッド緩衝液、リン酸緩衝液、ブリトン-ロビンソン緩衝液、McIlvaine緩衝液等が使用できる。<CE遺伝子>本発明のCE遺伝子は、下記のG1からG9の塩基配列のいずれかの塩基配列からなることを特徴とする。本発明のCE遺伝子は、前記本発明のCEをコードする遺伝子である。このため、本発明のCE遺伝子を発現させることによって、前述した本発明CEを得ることができる。以下、G1~G9の各塩基配列からなるCE遺伝子を、それぞれ、RmCE遺伝子、SdCE遺伝子、SlCE遺伝子、HaCE遺伝子、TtCE遺伝子、DfCE遺伝子、CpCE遺伝子、FjCE遺伝子、PhCE遺伝子という。また、本発明のCE遺伝子は、例えば、前記G1~G9の各塩基配列に相補的な塩基配列からなるアンチセンス鎖でもよい。RmCE遺伝子G1:下記のG1a、G1b、G1cまたはG1dの塩基配列G1a:配列番号1の塩基配列G1b:配列番号1の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G1c:配列番号1の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G1d:配列番号1の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号1GTGAGCACGGAAACCATCCCGGACGTTCGGCGCCTGCGCGCGCTGCAGGCGGAGGTCCACGAAGAACTGACCGAGAACATCCTGAAGTTCTGGGCCACGCGCACGCCCGATCTGGTGCACGGTGGGTTTGTGGGACGGGTGGGGCCGGACGGCCGGCCCCACCCGGAAGCCCCGCGCGGAGCGATCCTGAACGCCCGGATCCTGTGGACGTTTGCCGCGGCCTACCGCCAGCTCGGCACGCCGCTGTATCGGGAGATGGCCGAGCATGCCTACCGGTACTTCGTCCGGCACTTCGTGGACGCCGACCACGGCGGCGTTTACTGGCTGGTGGCCGCCGACGGCCGTCCGCTGGACACCCGCAAGCACGTCTACGCTCAGTCCTTCGCCATCTACGCCCTGAGCGAGTGGCACCGGGCCACGGGCGACGAAGCGGCGCTGGCGCTGGCCCGCGCGATCTATGGCCTGATCGAAGCCCACTGCGCCGATCGGGTGCACGGCGGCTATGTGGAAGCCTGCGATCGCGCCTGGCGGCCGCTCGAAGATGTGCGGCTCAGCGCCAAGGACGCGCCCGAGCCGCGCAGCATGAACACGCACCTGCACGTGCTGGAGGCCTACACCAACCTGTATCGCGTCTGGCCCGATGCGGAGCTGGCCGTACGGCTTCAGGCGCTGATCGAGCTGTTCCTGCGGGCCATCTACCACCCGGCCACCGGGCATCTCATCCTGTTCTTCGACGAGCGCTGGCGGCCGCGCTCGCGGGCCGTCTCGTTCGGGCACGACATCGAGACAAGCTGGCTGCTTCTGGAAGCCGTCGATGTGCTGGGGCAGGCGACGTTGCGCCCGCGGGTGCAGCAGGCTTCACTGCATCTGGCCCGCGCCACGCTGGCCGAAGGCCGGGCACCGGACGGTAGCCTCTACTACGAGATCGACGAGCAGGGCCGTCTCGATACCGACCGGCACTGGTGGCCACAGGCCGAAGCGCTGGTGGGATTCCTGAACGCCTATCAGGAAAGCGGCGAGGTGGCCTTCTACGAAGCGGCCGAAGGCGTCTGGCGCTACATCCGAAAGCGCCAGCGTGACACGCAGGGGGGCGAATGGTTTGCCCGCGTGCGCGACGACGGCACCCCCTACCCCGACGACAAGGTGGACTTCTGGAAGGGGCCCTACCACAACGGCCGCGCCTGTCTGGAGGCGATCCAGCGCTTGCGGCACCTCCTGGAACACGCTCGATCCCGGTAG前記G1aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P1aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G1aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Rhodothermus属から得ることができ、具体例としては、前記Rmから得ることができる。前記G1bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号1の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G1cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。相同性は、例えば、比較する配列同士を適切にアライメントしたときの同一性の程度であり、前記配列間の塩基の正確な一致の出現率を意味する。同一性は、例えば、配列におけるギャップの存在および塩基の性質が考慮される。前記アライメントは、例えば、任意のアルゴリズムの利用により行うことができ、前述したアミノ酸配列と同様である。前記G1dにおいて、ストリンジェントな条件は、例えば、当該技術分野における標準の条件があげられる。具体例としては、温度条件は、例えば、前記配列番号で示された塩基配列のTm値の±5°C、好ましくは±2°C、より好ましくは±1°Cである。条件の具体例は、5×SSC溶液、10×Denhardt溶液、100μg/mLサケ精子DNAおよび1SDS中、65°Cでのハイブリダイゼーション、0.2×SSCおよび1SDS中、65°C、10分の洗浄2回があげられる。これらの条件以外にも、ハイブリダイゼーションについては、例えば、MolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarberLaboratorypressNewYork1989等に準じて行うこともできる。また、市販のツールを使用する場合は、例えば、添付の使用説明書にしたがって行える。ストリンジェントな条件は、以下同様である。SdCE遺伝子G2:下記のG2a、G2b、G2cまたはG2dの塩基配列G2a:配列番号3の塩基配列G2b:配列番号3の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2c:配列番号3の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G2d:配列番号3の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号3ATGGGTGTGCCGCTTAAAAAAAATAAATTGAATTATTCCGATTTGAATAATGCTTTTGAATCGGAGTTACACGCTATAGCCGATTGGTGGGTGGACAATACGGTCGATGAAATCCACGGTGGTTTTGTGGGTGAAATGAGCGTAGACAACAAGGTGAACGCCACAGCCGATAAAGGCATTATCCTCAATACGCGTATTCTTTGGTTTTTTAGCGAAGCGGCACTGTTTACCGGCAACAAGCGCTATGCGCAAATGGCTGAGCGCGCATACTATTATATAGTGGACCATTTTTTAGATACCGAACATGGCGGTGTATTTTGGGCGTTAGATTACCGCGGTAACGTTGTAAATAACCGCAAACAAGTATATGCACAGGCGTTTGCCATTTACGGTTTAAGCGCTTATTACAGGCTTACTAAGCAAGCCGACGTGCTGGCGCAGGCGCATGCTATTTTTGAGCTAACAGAAGCCAACGCGCAGGATGAAAATCACCAAGGCTATTTAGAGGCTTTCTCTAATACTTGGGGTCGCTTAGACGATATGCGTTTAAGCGAAAAAGATTTAAATTCGCCCAAGTCCATGAACACGCATTTACACATTCTAGAAGCTTATACCGCATTACATATTGCCGCACCCAGCCCAAAAGTGAGCGCAGCTATAAAGCATTGCTTAGAGTTGTTCGACCGTTACATTATCAACAAGGCAAACTGGCATTTGCGCATGTTTCAAGATATGGATTGGGAGGATGTTTCCGCAAGCTATTCCTACGGGCATGATATTGAGTGCAGTTGGTTGATGTGGGAGGCGGTCGAGTCTTTAGAGTCCGAAGAGTTGCATGCACACTACAAACCCGCGGTTATTGCCTTAGCCGAAACCTGTTTAGAGCAGGGTATTGGCAGGTACAACGAAGTGCTCGATGCATACAACTTTGAAACCCAAACGTTGGTGGATGAGCGCGTGTGGTGGGTGCAAGCCGAAGCCCTGGTTGGCTTTTTAAATGCCTACCACCTTGCCGGTGAGCAGCGATATTTAGATGCAGCATTAAATGTTTGGGAATTTATAAATAGCTATCAAAAAGATAGCGTTGGGGGCGAGTGGCATTGGTTGTCGCGTTTAGATTTACCCCACACGGGCGATTGTAAAATGGGCCCTTGGAAAGCGCCGTACCATAATGGCCGCGCTATGATGGAATCGATAAAGCTTGTGCAGAGAATATTTGGTAATAACGAATAA前記G2aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P2aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G2aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Saccharophagus属から得ることができ、具体例としては、前記Sdから得ることができる。前記G2bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号3の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G2cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。SlCE遺伝子G3:下記のG3a、G3b、G3cまたはG3dの塩基配列G3a:配列番号5の塩基配列G3b:配列番号5の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3c:配列番号5の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G3d:配列番号5の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号5ATGGACTTAAAGCAACTTCGCGCCGAACTGCGGCAGGAACATAAGGACATACTTGCTTATTGGACCCGCTACGCGCCCGATCCTGTGCATGGTGGTTTCTACGGCCGGGTCAATTACCAAAACCAGCCCGACCCAAACGCCGAAAAAGGTATCGTTTTGAATGCCCGCATCTTGTGGACCTTCTCGGCGGCCCTCCGGGAGACGCAGCACGAAGAGTATCGCTCCATTGCCGATCAGGCTTTTCAATACATCAAGACGTACTTTGTCGACCCCGAATACGGCGGAATCTACTGGTCGGTGGATGCAACCGGCAAGCCTAAAAATGCCCTCAAGCATCTCTACGGACAGGCATTTACGCTCTATGGGCTCAGTGAGTACGTTCGTGCCACCAAATCGGAACCCGCGCTTGCTCTGGCCAAAGAGGTATTTCAAAATATGGTGAAGCACGCGTACGATCCCAAGAAAGGCGGGTTTGTAGAAGCTCTCGCCCGCGACTGGTCGCCCGCCACCGATTACATTATCAGCAAATACGATAATCAGGAAATAAAGACGATGAACACGCACCTCCACATTCTGGAGTCGTTCACGTGTCTGTATCATGTTTGGCCCGACAAATCCGTGGCTGAGCAGATGCGCGGTATGCTGCACATGTTTCAGATTCATATCATCGACCCGACAACTTACCGCATGAATCTGTTTATGGACATGAACTGGAAAGTCCGGCGGACGGCCGTTTCTTACGGTCACGACATCGAAGCCTCCTGGCTGCTCCCCGAAGCCGCCGATTTGCTGGCCGCCAAAAATCCAGCCGATAAGCCATTGCAAAAAGCGTTTCAGCACATTGGGGTAAAAATGGCGCGGGCAGCCTCCACCGGTTACGACCCAACCGACGGGGGAATGAACTACGAACTGGAGCCTGACGGCCACCTCAACAAAGAACGTTCGTGGTGGGTACTGGCCGAAGCCATGGTTGGGTTCATGAATGCTTACCAGCTCACACACGAGAAGCCGTTTCTGGACAAGTCCATAAAAAGCTGGGAATTCACAAAGAAGTACTTACTCGACCGCCAGAACGGCGAATGGTACATGGGCGTTACCGGCGATCATACCATAGTGGGAAAAGACAAAATCAGCATGTGGAAATGTCCTTACCACAATAGCCGCGCCTGTCTTGAAATGCTGGAACGACTGGATCATCTGCATGGATAA前記G3aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P3aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G3aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Spirosoma属から得ることができ、具体例としては、前記Slから得ることができる。前記G3bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号5の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G3cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。HaCE遺伝子G4:下記のG4a、G4b、G4cまたはG4dの塩基配列G4a:配列番号7の塩基配列G4b:配列番号7の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4c:配列番号7の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G4d:配列番号7の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号7ATGGCGAATCTCGTAGATGGCGGCTTTGATCATGGCTTGCGCGAAATGTGGCAAGCGCAGTTTCGCGATGAAGTGTTGGGCAATATTTTGCCATTTTGGGCAAACCACACGCTTGATCATGAGCACGGTGGCTTTTATGGCGGCTTAACCAACGATCTGACAATCCATAATGAGTTTCCTCGCTCAGCCGTATTATGTGGTCGGATTCTCTGGACGTTTGCCTGTGCCTATCGCATGCTCGGCGATCCCCGCGATTTGGCGGTGGCTGAGTATGCCTATGCCTACCTCAAACAGGCTTTTTGGGATCAAACTTATGGCGGATTGTATTGGTCGATCGATGCCAACGGCCAGCCTTTGGCCGACCATAAACAAACCTATGCTCAATCGTTCGCCATCTACGGGTTGGCCGAGTATGTTCGAGCTACAGGCGATCAGAGCGCCTTGGAATTGGCGCAAACCCTGTTTCACTTGATCGAAAATCATGCCTTTGATGCGGTTTATGGTGGCTATATCGAGGGCTGTGATCGGGTTTGGCAACCCTTGGGCGATAGCCGCCTGAGCAAGCTTGAGCCAGAAGCCCGCAAAACCATGAACACCATGTTGCATATGATGGAGGCCTATGCCAACTTGCTGCGAGTTTGGGATGTGGCCGATGTGCGCCAGCAATTGGCCAGCCTGATCGAGGCCTGCTGCGAACATATTATCGACCCTGTGCAAGGCCGCTTTCATCTATTTTTCGATGACCAATGGAACCACCACGAACATGGTATTTCGTATGGCCACGATATCGAAGGCAGTTGGTTATTGATGGAAGCAGCCCATGTGTTGGGCGATGAACACTTAATTGCCAAGGCCGAAACTTTAGCGATTGGCATGGCCGATGCGGTCTATCGCAATGGCCGCCACGCCGATGGCAGCATTATTCACGAACGCGCTCCCGATGGCTCGATTAATTTGGAACGCCATTGGTGGCCCCAAGCTGAAGCCGTTGTTGGCTTCTACAACGCCTATCAGGCCACTGGCAAACCTGAGTTTGCTCAAGCCGCCTACGATAGTTGGAATTTTATTCAACGCTATTTTATCGACCACGATCATGGTGATTGGTTCAAAATTCTTGATGCTCAAAACCAACCGTTGGGAGCGATTCCAAAAGTTGGCCCATGGGAATGCCCGTATCACCATGCCCGCGTTTGTTTTGAAATGATCGAACGTTTAGCTGAACACAACGTGAGTGTTCAGATGCGAGGGTAA前記G4aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P4aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G4aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Herpetosiphon属から得ることができ、具体例としては、前記Haから得ることができる。前記G4bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号7の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G4cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。TtCE遺伝子G5:下記のG5a、G5b、G5cまたはG5dの塩基配列G5a:配列番号9の塩基配列G5b:配列番号9の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5c:配列番号9の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G5d:配列番号9の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号9ATGGAAACTGAAACGGATACCCGCGAGCAGTTAATTCTCCTACAGAATAATTGTGCTAACGAATTAGCGCATCTGGTTAGCTGGTGGGCGAACAATGTGGTGGGCGATGGCAATTTTTCTGGTGAGATCAACAGCCAGGGGCTTCCCCAGCACCAAGCTGGTAAAGGCGGTATTTACGGTTCGCGCTTACTCTGGTTTTTTAGTGAAGTGGCAATACTGGGTAGAGATTCTTTAGCGCCTGCATCAGGACCGACGTCCGGGCTCGCATCTGCAAAGGTATCTGCACAGGCGCTCTACCAGTATTTTAGCCACCATTTTATTGATCCGGAATACGGCGGTGTTGTTTGGGAATTGCATGCAAACGGTGAGCTTCGCGACGGGCGCAAGCAAATATATGCGCAGGCATTTGCTATTTACTGTCTCAGTGCCTATTACCGATTAACCTCGGATGAGGATGCGTTAGCACAGGCGTTGACGATCTATGAGCTGGTGGAAGACTTTGCGCTGGATCGCGCCCACTGTGGATATTTCGAAGCGTTTAGTCGCGAGTGGCGTGAGCTCGACGATATTCGTTTAAGCGAAAAAGATTTAGCCAGCCCCAAAACCATGAACACGCATTTGCATTTACTGGAGGCGTATACGGGTTTACTGCGCGCACTCAGGCAGGCCGGGTCGCCAGCGCTACAGAAGGTTGCAACGAGTGTTCAGCAATTGCTCGAACTCTATGTTTCCCGTGTGTATAACTCGAGTTCCAGGCACGTTCACATGTTTATGAATACTCATTGGGAAGATGAAAGCCTGGCGTTCAGTTACGGTCACGATATAGAAAGCAGTTGGTTGCTGTGGGAAGCCGCTGATGTGCTGGGGGACGATGCGCTAAAGCAATCTTACCGGCACGATGTTATTGCGCTGGCTGAAACCTGCTTAGCCCAAGCGCGCGCAACCGATGGCTCGCTTTACGACGTGTTCGATAAACAGCGCCAGTTGAACATTCCGGAGCGAGTATGGTGGGTTCAGGCGGAGGCCATGGTGGGCTTTTTTAATGCGTGGCAATTAACAGGGCAACAAAAATACCTGGATGCCGTGTTTTCCCTGTGGCGATATTTGGAAGCGGAATTTATTACCCCGGGCAGTGAATGGCCCTGGCTCGCACGCAGTGATCAGGGGGCAGGTTATCGCGCCTATCTGGCGGGCTTTTGGAAGGGGCCGTATCACAACGGTCGTGCGCTGATGGAATTAATTTCTCGGATTAATTCGGTGTTGAATGTCGACTGTTAG前記G5aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P5aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G5aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Teredinibacter属から得ることができ、具体例としては、前記Ttから得ることができる。前記G5bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号9の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G5cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。DfCE遺伝子G6:下記のG6a、G6b、G6cまたはG6dの塩基配列G6a:配列番号11の塩基配列G6b:配列番号11の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6c:配列番号11の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G6d:配列番号11の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号11ATGGCGAATCTCGTAGATGGCGGCTTTGATCATGGCTTGCGCGAAATGTGGCAAGCGCAGTTTCGCGATGAAGTGTTGGGCAATATTTTGCCATTTTGGGCAAACCACACGCTTGATCATGAGCACGGTGGCTTTTATGGCGGCTTAACCAACGATCTGACAATCCATAATGAGTTTCCTCGCTCAGCCGTATTATGTGGTCGGATTCTCTGGACGTTTGCCTGTGCCTATCGCATGCTCGGCGATCCCCGCGATTTGGCGGTGGCTGAGTATGCCTATGCCTACCTCAAACAGGCTTTTTGGGATCAAACTTATGGCGGATTGTATTGGTCGATCGATGCCAACGGCCAGCCTTTGGCCGACCATAAACAAACCTATGCTCAATCGTTCGCCATCTACGGGTTGGCCGAGTATGTTCGAGCTACAGGCGATCAGAGCGCCTTGGAATTGGCGCAAACCCTGTTTCACTTGATCGAAAATCATGCCTTTGATGCGGTTTATGGTGGCTATATCGAGGGCTGTGATCGGGTTTGGCAACCCTTGGGCGATAGCCGCCTGAGCAAGCTTGAGCCAGAAGCCCGCAAAACCATGAACACCATGTTGCATATGATGGAGGCCTATGCCAACTTGCTGCGAGTTTGGGATGTGGCCGATGTGCGCCAGCAATTGGCCAGCCTGATCGAGGCCTGCTGCGAACATATTATCGACCCTGTGCAAGGCCGCTTTCATCTATTTTTCGATGACCAATGGAACCACCACGAACATGGTATTTCGTATGGCCACGATATCGAAGGCAGTTGGTTATTGATGGAAGCAGCCCATGTGTTGGGCGATGAACACTTAATTGCCAAGGCCGAAACTTTAGCGATTGGCATGGCCGATGCGGTCTATCGCAATGGCCGCCACGCCGATGGCAGCATTATTCACGAACGCGCTCCCGATGGCTCGATTAATTTGGAACGCCATTGGTGGCCCCAAGCTGAAGCCGTTGTTGGCTTCTACAACGCCTATCAGGCCACTGGCAAACCTGAGTTTGCTCAAGCCGCCTACGATAGTTGGAATTTTATTCAACGCTATTTTATCGACCACGATCATGGTGATTGGTTCAAAATTCTTGATGCTCAAAACCAACCGTTGGGAGCGATTCCAAAAGTTGGCCCATGGGAATGCCCGTATCACCATGCCCGCGTTTGTTTTGAAATGATCGAACGTTTAGCTGAACACAACGTGAGTGTTCAGATGCGAGGGTAA前記G6aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P6aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G6aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Dyadobacter属から得ることができ、具体例としては、前記Dfから得ることができる。前記G6bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号11の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G6cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。CpCE遺伝子G7:下記のG7a、G7b、G7cまたはG7dの塩基配列G7a:配列番号13の塩基配列G7b:配列番号13の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7c:配列番号13の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G7d:配列番号13の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号13ATGAATTGGACATCAGACGAAAAACAACAGCTACCAGTCAACACGCTGAAACAGGAACTTTTACAGGAGCTTAAACGTATACTCGTTTACTGGACGACTGAAACTGTAGACGAGCGCAATGGCGGTTTTATAGGCCGTATCTCCGCTCACAATGTAAAAGACCCTTATGCCGTCAAAGGAAGTGTGCTCAATACCCGTATACTCTGGACATTCTCTGCAGCTTATAATCTGTTAAAGACTGACCAGTATCTTACATTGGCTAATCGCGCCTGGGATTACCTCTATGCTCACTTCGCTGATAAAGTGCATGGAGGTCTTTATTGGACGGTGGACTATACCGGTAAAGCAGTCGATGGCAAAAAGCAGGTCTATGCCATTGCATTCGGCGTATATGCCTGCAGCGAGTACTTTAAGGCAAGCAGAAACGAAACAGCTAAACAAACTGCGATAGCATGGTACCATGCTATCCGTCAGTATGCCTACGATAAGATATACGGCGGCTATATAGAAGCCTGTACGCAAGACTGGCAACCACTATCTGATCTTCGGCTGAGTCTGAAAGATGCGAATGAAAGAAAGTCCATGAATACACATCTGCATGTGCTGGAAGCCTGGACTACCTTATATGAGATCTGGCCGGATGAACAACTGAAAGCAGATATCCTGGAATTACTGATGCTTTTTGACAAGCAGATCATTCATCCCACTACACACCATTTGCAATTATTCTTCACGGACAACTGGACGGTGAAAAGCACCTTGATTTCTTATGGCCATGATATAGAAGCAGCATGGCTGTTACTGGAGGCGGCAATTGCAGTTGGTGATGAACAGGAGCTCAGTCGTTTCCGTGTCCGCGCCATCAACCTGGTAAGAGCCGCCCTGAAAGGCATGGATAAAGACGGTGGCCTCTGGTATGAATACGATACTGCTGAGCAACACCTGATAGCAGAAAAACACTGGTGGCCACAGGCGGAAGCCCTGGTAGGACTGGTCAATGCCTGGGAACTAAGCGGCGATCCTTACTACCTGGATAAAGCGATGGCCAGCTGGCAATTTATACAACAGTTCCTGCTGGATAAAACAGACGGAGAATGGCATTGGGGCGTCGGTCTCGACGGCAAGCCGATAGAAGAAGTAAAGGTAGGATTATGGAAGTGTCCCTATCATAATGCGAGAGCATGCATGGAGGTCGTGAAGCGTTTGAAGTGA前記G7aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P7aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G7aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Chitinophaga属から得ることができ、具体例としては、前記Cpから得ることができる。前記G7bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号13の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G7cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。FjCE遺伝子G8:下記のG8a、G8b、G8cまたはG8dの塩基配列G8a:配列番号15の塩基配列G8b:配列番号15の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8c:配列番号15の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G8d:配列番号15の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号15ATGCCAGCAAATCTAAAACAGCTTAAATCTGAATTGACAGCCGAACTTGACTCGATTTTAAATTATTGGTCAAAACATACGCTCGATAATCAAAATGAAGGTTTTGTCGGGCAGATTGATTTCAACGATCACATTGTTGCCAATGCAGAAAAAGGTTCCGTTTTGAATTCCAGAATTCTATGGACATTTTCATCCAGTTATCAGATCACAAAAAAAGAAAACCACAAAGAAATTGCAAAAAGAGCTTTCGAATATCTTTCAAAATATTTCTACGATCCTGAATTTAACGGGCTTTTTTGGAGCATAAACGCTGATAAAACACCAAAAGATACTAAAAACCAAATCTATGCCTTAGCTTTTGCTATTTATGGATTATCTGAATATTATGTTATTTCTCAAGATCAAAAAGCTTTAGAAACTGCTGTTAATTTATACAAAAGCATACAAAAATACAGTTACGATCCTGTAAACAAAGGCTATCTCGAAGCTTTTACACGCAATTGGCAGCCCATTGAAGATTTACGTTTAAGCGACAAAGACGCCAACGAAAAAAAGACGATGAATACACATTTGCATATTATTGAAGCGTATGCCAATTTGTTTAAAGTCTGGAAAGATGAAACACTCAAAAAAGACAGCATCGAACTATTAGAAACAATAGAAAAACATTTTATTAATACCGAAACCGGACATCTTCGTTTGTTTTTTGATGAAAACTGGATCGAAAAACCAGACGTAATTTCATACGGACACGACATCGAAGCAGCCTGGCTTTTATTGCAATGTGCAGAAGTTTTAGAAGAGGAAAACCTAATTGCCAATTATAAAAAACACGCTGTTCAAATTGCCGAAGTTACCAAAGAAGGATTCGATACCGATGGCGGATTATGGTACGAGTTTGAACCTAAAGAAAACGAATTAATTGCCGAAAAACACTGGTGGGTTCAGGCAGAAGCGCTGATTGGTTTTTACAATGCCTATCAATTAACAGGAAATGAAGAATATCTGAAGATTGTTTTTGAAAACTGGAATTTCATTAAAAAACACATTTTGGATCATAAAAATGGTGAATGGTTCTGGGGAATTCATAAAGATTATTCACTCATCCAAAAAGACAAAGCCGGATTCTGGAAATGTCCGTATCATAACAGCCGTGCCTGTTTAGAGCTTATTAACCGAATTAAAACCTAA前記G8aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P8aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G8aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Flavobacterium属から得ることができ、具体例としては、前記Fjから得ることができる。前記G8bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号15の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G8cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。PhCE遺伝子G9:下記のG9a、G9b、G9cまたはG9dの塩基配列G9a:配列番号17の塩基配列G9b:配列番号17の塩基配列において、1個から数個の塩基が、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9c:配列番号17の塩基配列との相同性が70以上である塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列G9d:配列番号17の塩基配列の相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列であって、セロビオース2-エピメラーゼをコードする塩基配列配列番号17ATGAGCGAAATTCTTATACAAGAGTTTGAAAAGGAACTGGCCGGTATGCTGAACTACTGGGCTACATATACAGTAGACAAAGTGCATACAGGCTTTTATGGACAAGTTGATAATGACAATAATGCTATTGAAAAAGCAGATAAAGGTGCTGTGTTAAACTCCCGCATCCTTTGGTTTTTCTCTGCTGCCTATAATTACAAGAGCTGGCCCGAAAGTTTACATCTGGCCAGAAGAAGCTATGATTATATAAGAGACCACTTTGTGGACAAGCAATTTGGAGGAGTATATTGGTCTGTAGATTTTCAGGGCAAACCAGCAGATACCAAAAAACAGATGTATGCACTAGCGTTTGCCCTGTATGGGATAACAGAGTTTTATAAGGCTAGCAGAGAGGAAGAGGCATTGGCCCTGGCTAAAATTCTTTATGCTGATATAGAGAAACATAGCTTCGACCCCATAAATAATGGATATTTTGAAGCTTTTTCCTGCCAGTGGTCAGAATTGACAGACCAACGTTTAAGTGATAAGGATGCCAACGAAAAAAAGACTATGAATACACACCTTCATGTTTTAGAGGCATATACCAGTCTTTACACTGTTTGGCCCGATGAGGGATTGGGCAGGCAGATCCGTAATTTGCTTGGTGTTTTTACAGATAAGATTATTGACAGAGATACCCATCATCTGATGCTTTTTTTTGACGAAAGCTGGCATTCAAAATCCCGGGCAATTTCTTTTGGACACGATATAGAGGCTTCCTGGCTTTTGCTGGAAGCAGCGGAATCTTTGGGAGATGAAAACCTGATCTGGCAATTTAAAGATGTAGCAGTAAAGATGGCCATGGCATCTATTCAAGGGCTAGATGAAAATGGAGGGCTAAACTATGAGTTTGAACCATCCAATTGGAGCAGAGAAAAACATTGGTGGGTACAAGCTGAAGCCATGGTAGGTTTTTTTAATGCTTTTCAGCTTACGAAAGAACAGACCTACTACGATAAATTTTTAAAATGCTGGGAGTTTACAAAAGCGCACATTATCAATACACAAAAAGGAGAGTGGTTTTGGGGTGTAAATGAAGATCTTTCCTTGATGCCTGAACAATATAAAGTTGGTTTATGGAAGTGCCCATATCATAATGGCAGGGCCTGCTTGGAGATGATACGCCGCCTTGGTGTCAATTTCGATTTTTCCTGA前記G9aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、前記P9aのアミノ酸配列からなるCEをコードする。前記G9aの塩基配列からなるCE遺伝子は、例えば、好気性微生物Pedobacter属から得ることができ、具体例としては、前記Phから得ることができる。前記G9bの塩基配列において、欠失、置換、付加および/または挿入された塩基の個数は、特に制限されず、例えば、1~30個、好ましくは、1~20個、より好ましくは、1~10個、さらに好ましくは、1~5個、特に好ましくは、1~3個、最も好ましくは、1個または2個である。前記欠失等された塩基配列は、例えば、配列番号17の塩基配列と、同じ読み枠の塩基配列である。前記G9cにおいて、前記相同性は、例えば、80以上であり、好ましくは、90以上であり、より好ましくは、95以上である。本発明のCE遺伝子において、前記塩基配列は、例えば、前述したような好気性微生物から取得してもよいし、遺伝子工学的な手法または化学合成的な手法により、製造することもできる。<ベクター>本発明のCE発現ベクターは、本発明のCE遺伝子を有することを特徴とする。本発明のCE発現ベクターは、前記本発明のCE遺伝子を発現可能なように有していればよく、その他の構成は何ら制限されない。本発明のCE発現ベクターは、例えば、後述するように、宿主に導入し、前記宿主内で前記CE遺伝子を発現させることによって、本発明のCEを製造できる。本発明のCE発現ベクターは、基本ベクターに前記本発明のCE遺伝子が挿入されていることが好ましい。この際、前記CE遺伝子は、前記基本ベクターにおける発現制御配列に、機能的に結合または配置されていることが好ましい。機能的に結合または配置するとは、例えば、前記CE遺伝子が発現しうる状態で結合または配置されていることを意味する。前記基本ベクターの種類は、特に制限されず、例えば、本発明のCE発現ベクターを導入する宿主の種類に応じて、適宜決定できる。前記基本ベクターは、例えば、非ウイルス性ベクターおよびウイルス性ベクターがあげられる。前記非ウイルスベクターは、例えば、プラスミドDNA、ファージDNA等があげられる。前記プラスミドDNAは、例えば、pBR322、pBR325、pUC118、pUC119等の大腸菌由来プラスミド;pUB110、pTP5等の枯草菌由来のプラスミド;YEp13、YEp24、YCp50等の酵母由来のプラスミド等があげられる。前記ファージDNAは、例えば、Charon4A、Charon21A、EMBL3、EMBL4、λgt10、λgt11、λZAP等のλファージ等があげられる。前記ウイルスベクターは、例えば、レトロウイルスまたはワクシニアウイルス等の動物ウイルス;バキュロウイルス等の昆虫ウイルスベクター等があげられる。本発明のCE発現ベクターは、例えば、さらに、他の塩基配列を有してもよい。前記塩基配列は、例えば、プロモーター配列、エンハンサー配列、リボソーム結合配列、シグナルペプチドをコードする塩基配列、タグをコードする塩基配列、選択マーカー遺伝子の塩基配列等があげられる。前記選択マーカー遺伝子は、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子等があげられる。<本発明の形質転換体>本発明の形質転換体は、本発明のCE遺伝子を含む。本発明の形質転換体は、例えば、本発明のCEを発現し得るように、本発明のCE遺伝子を宿主に導入することにより得られる。本発明の形質転換体は、例えば、本発明のCE発現ベクターを有することが好ましい。この場合、宿主に、本発明のCE発現ベクターを導入することによって、前記形質転換体を得ることができる。前記宿主は、特に制限されず、本発明のCE遺伝子から本発明のCEを発現できるものがあげられる。前記宿主は、例えば、大腸菌等のエッシェリヒア属、バシラスズブチリス等のバシラス属、シュードモナスプチダ等のシュードモナス属、リゾビウムメリロティ等のリゾビウム属に属する細菌;サッカロミセスセレビシエ、シゾサッカロミセスポンベ等の酵母;COS細胞、CHO細胞等の動物細胞;Sf9、Sf21等の昆虫細胞等があげられる。形質転換の方法は、制限されず、例えば、宿主および前記ベクターの種類に応じて、適宜、従来公知の方法が採用できる。具体例としては、例えば、カルシウムイオンを用いる方法、リン酸カルシウム法、スフェロプラスト法、DEAEデキストラン法、接合伝達法、エレクトロポレーション法等があげられる。<CEの製造方法>本発明の製造方法は、CEの製造方法であって、前述のように、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans、スピロソマリングアレSpirosomalinguale、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinusおよびフラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniaeからなる群から選択される少なくとも一種の本発明の好気性微生物を培養する工程と、前記好気性微生物の培養物から無細胞抽出物を得る工程とを含むことを特徴とする。前記好気性微生物は、例えば、列挙した好気性微生物の変異株を含む。本発明の製造方法は、列挙した好気性微生物を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の製造方法は、例えば、前記無細胞抽出物を得る工程に代えて、または、さらに、前記培養物から培養上清を回収する工程を含んでもよい。本発明によれば、前述した本発明のCEを製造できる。特に、本発明の好気性微生物は、培養が容易であることから、例えば、工業的な大量培養が可能であり、これによって、本発明のCEを容易に製造できる。前記培養工程の条件は、例えば、前記好気性微生物の種類に応じて適宜設定できる。培養の温度は、例えば、20~80°Cであり、30~80°Cが好ましく、より好ましくは、40~80°Cである。前記好気性微生物が、Rhodothermusmarinusの場合、培養の温度は、例えば、40~80°Cであり、50~80°Cが好ましく、Herpetosiphonaurantiacusの場合、培養の温度は、例えば、20~37°Cであり、25~37°Cが好ましい。培養のpHは、例えば、5~10であり、6~9が好ましい。培養時間は、例えば、15~72時間である。前記培養は、好気条件で行うことが好ましく、撹拌培養が好ましい。培地は、特に制限されず、前記好気性微生物の種類に応じて適宜使用できる。本発明は、前記好気性微生物の培養後、得られた培養物から無細胞抽出物を得る。前記好気性微生物において、本発明のCEは、例えば、菌体内酵素として生成される。そこで、前記無細胞抽出物は、例えば、前記培養物中の好気性微生物を破砕し、細胞画分を除去することにより得られる。前記好気性微生物の破砕方法は、特に制限されず、例えば、超音波破砕、ホモジナイザーによる破砕、ガラスビーズ等のビーズによる破砕、リゾチーム等の酵素による破砕等があげられる。前記細胞画分の除去は、例えば、破砕物を遠心分離または珪藻土ろ過等して、沈殿物を除去することにより行える。前記無細胞抽出物は、そのまま、本発明のCEを含む画分として使用してもよいし、さらに、精製処理を施してもよい。前記精製処理は、特に制限されず、従来公知の手法が採用でき、一種類でもよいし二種類の手法を組合せてもよい。前記精製処理は、例えば、塩析法、透析法、限外濾過法、等電点沈澱法、ゲル濾過法、電気泳動法、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー等のアフィニティークロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー等が採用できる。本発明のCEは、例えば、本発明の形質転換体を使用して製造することもできる。この場合、本発明の製造方法は、本発明の形質転換体を培養する工程を含むことを特徴とする。本発明の製造方法は、本発明の形質転換体を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。前記形質転換体は、例えば、これらの変異株を含む。本発明の製造方法は、例えば、前記形質転換体の培養後、得られた培養物から無細胞抽出物を得る。本発明のCEは、例えば、前記形質転換体における本発明のCE遺伝子に応じて、例えば、菌体内酵素として発現させてもよいし、菌体外酵素として発現させてもよい。前記本発明のCEが、菌体内酵素の場合、前記無細胞抽出物は、例えば、前記培養物中の形質転換体を破砕し、細胞画分を除去することにより得られる。前記本発明のCEが、菌体外酵素の場合、前記無細胞抽出物は、例えば、培養物から培養菌体を除去することにより得られる。また、前記無細胞抽出物は、前述のように、さらに精製処理を施してもよい。<好気性微生物>本発明の好気性微生物は、前記本発明のCEの製造方法に使用する好気性微生物であって、ロドサーマスマリナスRhodothermusmarinus、サッカロファガスデグラダンスSaccharophagusdegradans、スピロソマリングアレSpirosomalinguale、ヘルペトシフォンアウランチアクスHerpetosiphonaurantiacus、テレディニバクターツルネラエTeredinibacterturnerae、ディアドバクターファーメンタンスDyadobacterfermentans、キチノファーガピネンシスChitinophagapinensis、ペドバクターヘパリナスPedobacterheparinusおよびフラボバクテリウムジョンソニエFlavobacteriumjohnsoniaeからなる群から選択される少なくとも一種であることを特徴とする。本発明の好気性微生物は、列挙した好気性微生物の変異株も含む。本発明の好気性微生物によれば、前述した本発明のCEを容易に製造できる。このため、本発明の好気性微生物を、工業的に大量培養することによって、大量の本発明のCEを容易に製造できる。<エピメリ化糖の製造方法>本発明の製造方法は、還元末端糖残基がβ-1,4結合で結合している、2つ以上の糖残基からなる糖を基質とし、CEの酵素反応により、前記還元末端糖残基の2位の水酸基がエピメリ化された糖を製造する、エピメリ化糖の製造方法であって、前記CEとして、本発明のCEを使用することを特徴とする。本発明の製造方法において、本発明のCEは、例えば、精製タンパク質でもよいし、未精製タンパク質でもよい。また、本発明のCEは、例えば、固定化されていない酵素でもよいし、固定化担体に固定化された固定化酵素でもよい。前記固定化担体の形状および材質等は、特に制限されず、例えば、前述と同様である。また、本発明の製造方法において、本発明のCEは、例えば、前記好気性微生物からの無細胞抽出物でもよいし、前記好気性微生物の菌体でもよい。前記好気性微生物の菌体は、例えば、エピラクトース等の製造に、菌体そのものとして使用してもよいし、前記菌体を固定化担体に固定化した状態で使用してもよい。前記固定化担体は、例えば、前述と同様のものを使用できる。前記基質は、特に制限されず、前述のような糖基質が使用でき、中でも、好ましくはラクトースである。また、前記糖基質は、高純度である必要はなく、糖基質以外にタンパク質または脂質等を含有する牛乳、ホエー等を使用してもよい。前記酵素反応の条件は、特に制限されず、例えば、前述した本発明のCEの特性、反応形態または反応液の生成処理条件等に応じて、適宜決定できる。さらに、前記酵素反応の条件は、例えば、特開2004-222506号公報を参照し、他の酵素と組み合わせて、CEの基質となるセロビオースを生成し、同時に、セロビオースをCEと反応させる場合、または、植物由来セルロースをセルラーゼで加水分解し、同時に、基質をCEと反応させる場合には、組み合わせる他の酵素の特性、例えば、至適pH、pH安定性、至適温度、熱安定性等を考慮して決定できる。反応温度は、例えば、40~100°Cの範囲であり、好ましくは、45~95°Cの範囲であり、より好ましくは、50~90°Cの範囲であり、特に好ましくは、50~85°Cの範囲である。反応pHは、例えば、4~9の範囲であり、好ましくは、5~8.5の範囲であり、より好ましくは、5.5~8.5の範囲であり、特に好ましくは、6~8.5の範囲である。前記反応液における基質濃度は、特に制限されず、例えば、前記酵素反応が進行可能な範囲において、基質濃度が高いほど経済的に有利である。基質としてラクトースを使用する場合、ラクトース濃度は、例えば、反応液の溶媒を水100gと仮定した場合、前記溶媒100gあたり25~90gの範囲であり、好ましくは、30~70gの範囲であり、より好ましくは、30~67gの範囲である。前記反応液の溶媒は、特に制限されず、例えば、水、前述のような緩衝液等があげられる。なお、選択した基質の溶媒への溶解度が低い場合、例えば、所望の濃度で完全に溶解されない場合がある。バッチ式で酵素反応を行う場合、例えば、反応初期において基質が完全に溶解された状態である必要はなく、酵素反応の終了時に溶解される基質濃度を選択すればよい。一方、固定化酵素を充填したカラムを酵素反応に使用する場合、例えば、カラムの目詰まりによる圧力損失を避けるために、基質が完全に溶解された状態であることが好ましい。また、固定化酵素を充填したカラムを酵素反応に使用する場合、例えば、基質溶液を、前記カラムに還流させて、連続的に通液するのが好ましい。つぎに、本発明の実施例について説明する。本発明は、以下の実施例により制限されない。[実施例1]本例では、好気性微生物から、CEを単離し、その活性を確認した。1粗酵素液の調製1-1フラボバクテリウムジョンソニアエF.johnsoniaeの粗酵素液の調製F.johnsoniaeは、独立行政法人製品評価技術基盤機構に寄託されている菌株NBRC14942を使用した。まず、下記表1の培地に、1.5w/vとなるようにアガー和光純薬工業社製を添加して、寒天培地を調製した。本菌株を、前記寒天培地で、30°C、2日間培養し、シングルコロニーを得た。このシングルコロニーを、下記表1に示す培地50mLに接種し、30°C、1日間振とう培養した。培養終了後、得られた培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。前記菌体を、5mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7に懸濁し、microsom登録商標ultrasoniccelldisruptorを用いて、破砕した。得られた菌体破砕液を、前述と同様の条件で遠心分離し、上清を回収した。前記上清を、粗酵素液無細胞抽出液とした。表1成分濃度w/vポリペプトン※11イーストエキストラクト※20.2MgSO47H2O1コンニャク抽出物※30.2※1日本製薬株製以下、同様※2ディフコ社製以下、同様※3清水化学株製商品名レオレックスワン以下、同様1-2ロドサーマスマリナスR.marinusの粗酵素液の調製R.marinusは、独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンターに分譲されているものを使用した。まず、下記表2の培地に、1.5w/vとなるようにアガー和光純薬工業社製を添加して、寒天培地を調製した。本菌株を、前記寒天培地で、70°C、3日間培養し、シングルコロニーを得た。このシングルコロニーを、前記表2の培地50mLに摂取し、70°C、1日間振とう培養した。培養終了後、得られた培養液を、前記1-1と同様に処理し、粗酵素液無細胞抽出液を調製した。表2成分濃度w/vマリンブロス2216※43.7コンニャク抽出物※30.2※4商品名、ディフコ社製2エピラクトース生成能の評価2-1反応生成物の検出CE活性として、前記1で調製した粗酵素液について、エピラクトース生成能を評価した。まず、前記粗酵素液40μLに、200mmol/Lラクトース1水和物を含む50mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH750μLおよび水10μLを添加し、所定条件で反応させた。反応条件は、F.johnsoniaeの粗酵素液について、30°C、15分間として、R.marinusの粗酵素液について、40°C、24時間とした。反応後、前記反応液を水で10倍に希釈し、前記希釈液を、イオン交換樹脂オルガノ社製:商品名アンバーライト登録商標MB4、以下、同様を用いて脱塩し、さらに、フィルター孔径0.45μm、Φ13mm、ミリポア社製、商品名MILLEXHP、以下、同様でろ過した。そして、ろ液を、下記条件で高速液体クロマトグラフィーHPLCに供し、前記ろ液中のエピラクトースを検出した。また、ブランクとして、前記粗酵素液に代えて、水を使用し、反応条件を、40°C、24時間とした以外は、前述と同様にして、HPLCを行った。HPLC分析条件カラム:Shodex登録商標SugarSP0810昭和電工株製カラムサイズ:Φ8.0×300mmカラム温度:80°Cサンプル注入量:99μL溶離液:水流速:0.8mL/min検出器:示差屈折計図1に、HPLCのクロマトグラムを示す。図1aは、ブランク、図1bは、F.johnsoniaeの粗酵素液、図1cは、R.marinusの粗酵素液の結果を示す。図1に示すように、前記各粗酵素液を添加したものでは、ラクトースのピークの後に、ブランクでは検出されなかった反応生成物のピーク図1bおよびcにおいて、矢印で示すピークが検出された。前記図1bおよびcにおいて、リテンションタイムがほぼ同等であったことから、前記両粗酵素液を用いた反応液において、同じ反応生成物が得られていると考えられる。2-2反応生成物の精製および分析前記R.marinusの粗酵素液による反応生成物を精製し、分析した。前記1で調製したR.marinusの粗酵素液400μLに、200mmol/Lラクトース1水和物を含む50mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7500μLおよび水100μLを添加し、40°Cで48時間反応させた。反応後、前記2-1と同様にして、前記反応液からろ液を回収し、同条件のHPLCにより、反応生成物を分取した。同じ操作を6回繰り返し、反応生成物約2mgを得た。前記反応生成物を、前記2-1と同条件のHPLCに供した。図2aに、HPLCのクロマトグラムを示す。また、図2bに、エピラクトース標品シグマアルドリッチ社製のHPLCのクロマトグラムを示す。図2aおよびbに示すように、前記反応生成物と前記エピラクトース標品のピークは、完全に同じリテンションタイムであることから、前記反応生成物は、エピラクトースであることが推測された。さらに、前記反応生成物を酸加水分解して、単糖分析を行った。まず、0.4w/v反応生成物25μLおよび4mol/Lトリフルオロ酢酸25μLを混合し、100°Cで2時間反応させた。反応後の混合液を、減圧下に置き、トリフルオロ酢酸を除去して、乾固させた。この乾固物を、水25μLに溶解し、1μLを薄層クロマトグラフィーTLCに供した。TLCの展開溶媒は、1-ブタノール:2-プロパノール:水=体積比2:2:1の混合溶媒を使用した。糖の検出は、10硫酸/メタノールをTLCプレートに噴霧し、オーブントースターで加熱して行った。図3に、TLCの写真を示す。図3において、レーン1は、反応生成物の酸加水分解物、レーン2は、グルコース、レーン3は、ガラクトース、レーン4は、マンノース、レーン5は、フラクトースの結果を示す。図3に示すように、前記反応生成物の酸加水分解物は、ガラクトースとマンノースとからなることがわかった。このため、R.marinusの粗酵素液により、ラクトース中のグルコシル基がマンノシル基に変換され、エピラクトースが生成されたと判断された。以上の結果から、F.johnsoniaeおよびR.marinusが、ラクトースをエピメリ化し、エピラクトースを生成することが確認された。[実施例2]本例では、R.marinus由来のセロビオース2-エピメラーゼ以下、RmCEというを精製し、RmCEの特性評価を行った。基質ラクトース1水和物およびグルコースは、関東化学工業社製、セロビオース、ソホロース、ゲンチオビオース、セロテトラオース、セロペンタオースおよびマンノースは、シグマアルドリッチ社製、ラミナリビオース、マンノビオースおよびセロトリオースは、生化学工業社製、ガラクトースは、和光純薬工業社製、N-アセチルグルコサミンおよびN-アセチルマンノサミンは、ナカライテスク社製のものを、それぞれ使用した。エピラクトースは、Ruminococcusalbus由来のセロビオース2-エピメラーゼにより生成し、精製したものを使用した。グルコシルマンノースおよびマンノシルグルコースは、F.johnsoniae由来のセロビオース2-エピメラーゼにより生成し、精製したものを使用した。マルトースは、日本食品化工社製、フラクトースは、ナカライテスク社製のものを使用した。活性測定まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.00.5mLに、酵素試料0.5mLを添加して、30°Cで10分間反応させた。この反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。前記反応液に、さらに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加し、前記イオン交換樹脂を用いた脱塩、前記フィルターを用いたろ過を行った。そして、サンプル注入量を50μLとした以外は、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCを行った。そして、HPLCの結果から、標準曲線を用いて、生成したエピラクトース量を測定した。エピラクトースの標準曲線は、0~0.25w/vエピラクトースを用いて作成した。酵素単位1Uは、前記条件下で、1分間に1μmolのエピラクトースを生成させる酵素量と定義した。以下の実施例においても、特に示さない限り、同様である。タンパク質の定量粗酵素液のタンパク質定量は、ブラッドフォード法により行った。すなわち、適宜水で希釈した酵素試料0.1mLに、5倍希釈ブラッドフォード試薬1mLを添加し、このうちの0.2mLを96ウェルプレートに入れ、波長595nmの吸光度A595を測定した。また、カラムクロマトグラフィーにより得られた画分のタンパク質定量は、波長280nmにおける吸光度A280を測定した。いずれの方法においても、タンパク質の標準曲線は、0~0.14mg/mLbovineserumalbuminバイオラッド社製を用いて作成した。以下の実施例においても、特に示さない限り、同様である。タンパク質の純度タンパク質の純度は、SDS-PAGESodiumdodecylsulfatePoly-AcrylamideGelElectrophoresisにより評価した。ポリアクリルアミドゲル12.5は、アトー社製の商品名e-PAGELを使用した。タンパク質は、5μgを供した。サイズマーカーは、インビトロジェン社製の商品名Mark12UnstainedStandardを使用した。電気泳動は、25mAの定電流で行った。タンパク質の染色は、関東化学社製の商品名ラピッドCBBKantoを使用して、添付のプロトコルに従って行った。以下の実施例においても、特に示さない限り、同様である。1RmCEの精製まず、R.marinusを、下記表3の培地消泡剤未添加50mLに接種し、70°C、150rpm、24時間、回転振とう培養した。前記培養した本菌株を、下記表3の培地3Lに入れ、アジテーター速度600rpm、通気量0.5WVM、70°Cの条件で、16~20時間培養した。得られた培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。前記菌体を、10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7200mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、20分の条件で遠心分離し、上清を回収した。前記上清に、90w/v飽和となるように硫酸アンモニウムを添加し、4°Cに静置した。前記培養から塩沈までの操作を5回繰り返した。前記静置後の液体を、98,000m/s210,000×g、4°C、20分の条件で遠心分離して、沈殿を回収した。前記沈殿物を、10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7200mLに溶解し、同じ緩衝液で透析した。これを、粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が11,839mgであり、CE活性の総活性が約182Uであり、比活性が0.0153U/mgであった。表3成分濃度w/vマリンブロス2216※43.7コンニャク抽出物※30.2消泡剤※50.05※5信越化学株製、商品名KM72F前記粗酵素液を、10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7.0で平衡化したイオン交換カラムに、以下の条件で供し、非吸着画分部分精製酵素液1を回収した。条件カラム:TOYOPEARL登録商標DEAE-650M東ソー株製カラムサイズ:Φ5.0×42cmゲル量:824mL溶出液:10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7.0流速:2mL/min前記部分精製酵素液1は、タンパク質量が490mg、セロビオース2-エピメラーゼ活性の総活性が289U、比活性が0.589U/mgであり、前記粗酵素液からの精製度は39倍であった。前記部分精製酵素液1に、硫酸アンモニウムの濃度が0.5mol/Lとなるように添加した後、これを、0.5mol/L硫酸アンモニウムを含む10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7.0で平衡化した疎水性カラムに、以下の条件で供した。そして、硫酸アンモニウム濃度0.4mol/L付近で溶出された活性画分部分精製酵素液2を回収した。条件カラム:TOYOPEARL登録商標Butyl東ソー株製カラムサイズ:Φ2.6×35cmゲル量:約175mL溶出液:10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7.0硫酸アンモニウム濃度0.5mol/L~0mol/Lのリニアグラジエント溶出液量:600mL流速:2mL/min前記部分精製酵素液2は、タンパク質量が8.36mg、セロビオース2-エピメラーゼ活性の総活性が24U、比活性が4.19U/mgであり、前記粗酵素液からの精製度は190倍であった。前記部分精製酵素液2を、限外ろ過膜分画分子量:10,000、ミリポア社製、商品名ULTRACEL-10Kを用いて、5mL程度に濃縮した後、0.1mol/LNaClを含む10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7で洗浄したゲルろ過カラムに、以下の条件で供した。そして、セロビオース2-エピメラーゼ活性が認められた画分を回収した。条件カラム:Sephacryl登録商標S-200GEヘルスケア社製カラムサイズ:Φ2.6×87cmゲル量:435mL溶出液:0.1mol/LNaClを含む10mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH7流速:0.3mL/min前記画分は、タンパク質量が1.05mgであり、セロビオース2-エピメラーゼ活性の総活性が6.36U、比活性が6.05U/mgであり、前記粗酵素液からの精製度は400倍、前記粗酵素液からの回収率は、3.5であった。この画分を、SDS-PAGEにより供した。この結果を、図4の写真に示す。図4において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図4のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、RmCEは単一に精製されていることがわかった。得られた精製RmCEについて、各種特性を確認した。下記表4に、RmCEの精製の概要を示す。下記表4において、比活性は、タンパク質1mgあたりのCE活性U/mgを示し、回収率は、粗酵素液の総活性に対するCE活性の残存率を示し、精製度は、粗酵素液の比活性に対する倍率倍を示す以下、同様。2RmCEの特性2-1SDS-PAGEによる分子量前記図4のSDS-PAGEの結果から、RmCEのSDS-PAGEによる分子量は、42.8kDaであった。2-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、250mmol/Lラクトース1水和物100μL、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH6.0~12.025μLおよび水0.4mLを混合し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、160μg/mLRmCE25μLを添加して、さらに30°Cで10分間インキュベートして、酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸50μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水75μLおよび内部標準として1w/vソルビトール37.5μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース生成量を示したpHの活性を100として、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、190μg/mLRmCE5μLに、12.5mmol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.020μL、0.1mol/LKCl-HCl緩衝液pH2.010μLまたは0.1mol/LKCl-NaOH緩衝液pH13.010μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、容量が125μLとなるように水を添加し、さらに、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.3125μLを添加し、40°Cで60分間インキュベートして、酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸50μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水412.5μLおよび内部標準として1w/vソルビトール37.5μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示したpHの活性を100として、各pHの残存活性を求めた。図5のグラフに、RmCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図5において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適pHの結果、白丸○はpH安定性の結果を示す。図5に示すように、RmCEは、pH6.3において最大活性を示し、pH3.4~11.8において、80以上の残存活性を示した。この結果から、RmCEの至適pHは6.3であり、pH安定領域は、pH3.4~11.8であることがわかった。2-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.30.125mLを、40°C~100°Cで5分間インキュベートした。これに、32.2μg/mLRmCE0.125mLを添加して、40~100°Cで30分間インキュベートして、酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸50μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水37.5μLおよび内部標準として1w/vソルビトール37.5μLを添加し、さらに、水で2倍希釈した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成エピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース生成量を示した温度の活性を100として、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、32.2μg/mLRmCE0.125mLを、40~100°Cで30分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のRmCEを使用し、緩衝液をpH6.3とした以外は、前記活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図6のグラフに、RmCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図6において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は、至適温度の結果、白丸○は、熱安定性の結果を示す。図6に示すように、RmCEは、80~90°Cにおいて最大活性を示した。また、RmCEは、80°C以下で80以上の残存活性を示し、70°C以下で95以上の残存活性を示し、さらに、100°Cにおいても活性を示した。この結果から、RmCEの至適温度は90°Cであり、熱安定領域は、80°C以下であることがわかった。2-4基質特異性RmCEについて、ラクトース1水和物、セロビオース、マンノビオース、エピラクトース、マンノース、グルコース、ガラクトース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、セロトリオース、マルトース、N-アセチルグルコサミンおよびN-アセチルマンノサミンの基質に対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.32.5μLおよび190μg/mLRmCE2.5μLを混合し、40°Cで24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。N-アセチルグルコサミンについては、反応生成物をHPLCで検出することにより、基質特異性を確認した。まず、200mmol/LN-アセチルグルコサミン50μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.325μLおよび190μg/mLRmCE25μLを混合し、40°Cで24時間インキュベートした。この反応液を、水で10倍希釈し、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、反応生成物を確認した。また、ブランクとして、RmCEに代えて水を使用し、同様にしてHPLCを行った。図7に、TLCの結果を示す。図7において、Glcはグルコース、Galはガラクトース、Lacはラクトース1水和物、Epiはエピラクトース、Celはセロビオース、Cel3はセロトリオース、Man2はマンノビオース、Genはゲンチオビオース、Malはマルトース、Lamはラミナリビオース、Sopはソホロース、Manはマンノース、GlcNAcはN-アセチルグルコサミン、ManNAcはN-アセチルマンノサミンを示す。各基質について、左側のレーンは基質の結果を示し、右側のレーンは反応生成物の結果を示す。図7に示すように、RmCEは、セロビオース、ラクトース、エピラクトースおよびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類およびセロトリオースに作用した。一方、RmCEは、N-アセチルマンノサミンには作用しなかった。図8に、HPLCのクロマトグラムを示す。図8aは、ブランクの結果、図8bは、基質としてN-アセチルグルコサミンを用いた反応液の結果を示す。図8に示すように、同じ保持時間のみにピークが確認されたことから、RmCEは、N-アセチルグルコサミンに作用しないことがわかった。2-5エピラクトース生成反応に対する温度の影響まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む50mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH750μLに、前記1で調製した粗酵素液比活性:0.18U/mg40μLおよび水10μLを添加し、所定温度40°C、50°C、60°Cおよび70°Cで24時間インキュベートした。この反応液を、水で10倍に希釈した後、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、反応に供したラクトース量を100とし、エピラクトースに変換されたラクトース量の相対値を変換率として求めた。図9のグラフに、ラクトースからエピラクトースへの変換率と反応温度との関係を示す。図9において、横軸は反応温度°C、縦軸はエピラクトースへの変換率を示す。図9に示すように、反応温度50°Cおよび60°Cの場合に、エピラクトースへの変換率がそれぞれ26.8および26.7となった。高温70°Cでの反応では、非酵素的異性化によるラクチュロースの生成が認められ、反応後のラクチュロース含量は7.2であった。このことから、高温70°Cでの反応におけるエピラクトース生成量の低下は、非酵素的異性化によることが明らかになった。2-6アミノ酸配列定法に従い250pmоlの精製RmCEについてSDS-PAGEを行った後、PVDF膜商品名immobilon-PSQ、ミリポア社製への転写を行い、これを、N末端アミノ酸配列分析の試料とした。そして、プロテインシーケンサー商品名Procise492cLCN、AppliedBiosystems社製により、前記精製RmCEのN末端アミノ酸配列を解析した。その結果、N末端アミノ酸配列は、E-T-I-P-D-V-R-R-Lであることが明らかとなった。本配列は、配列番号1に示すRmCE塩基配列の10~36塩基に対応するアミノ酸配列と一致していた。したがって、CE活性を有する本タンパク質は、配列番号1に示す遺伝子の翻訳産物であることがわかった。3RmCE遺伝子のクローニングR.marinusJCM9785から、RmCE遺伝子をクローニングした。RmCE遺伝子の塩基配列は、配列番号1の塩基配列であった。前記塩基配列から、RmCEは、配列番号2で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、47.3kDaであることがわかった。4参考例:非酵素反応によるラクチュロースの生成ラクトースから効率的にエピラクトースを生成するには、副生成物ラクチュロースの生成を抑制することが重要である。そこで、非酵素反応におけるラクチュロースの生成を確認し、前記RmCEが、至適pHにおいて、ラクチュロース生成を抑制して、効率的にエピラクトースを生成可能であることを確認した。まず、250mmоl/Lラクトース1水和物水溶液0.4mLに、0.1mоl/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH5~90.1mLを添加し、60°Cまたは80°Cで24時間静置した。前記反応液を、適宜希釈し、前記活性測定と同条件のHPLCを行い、ラクチュロース量を測定した。そして、ラクチュロースの生成率を、ラクトースとラクチュロースとの総量に対するラクチュロース量の割合として求めた。ラクチュロース標品は、シグマアルドリッチ社製のものを使用した。下記表5に、ラクチュロースの生成率とpHおよび温度との関係を示す。下記表5に示すように、pH5.2~8.9の範囲において、pHおよび温度が高いほど、ラクチュロース生成量が多くなることが明らかとなった。特に、pH7.2以上、80°Cの条件において、ラクチュロース生成率が10を超えた。このことから、このような条件は、エピラクトース製造において不都合であることが明らかとなった。一方、pH6.1およびpH5.2の条件では、ラクチュロースの生成率は、80°Cおよび60°Cにおいて、それぞれ、3未満および0であった。RmCEは、前述のように、至適pHが6.3であることから、特に、副生成物ラクチュロースの産生を抑え、かつ、より効率的にエピラクトースを製造可能であることがわかった。[実施例3]本実施例では、F.johnsoniaeからCE遺伝子FjCE遺伝子をクローニングし、組換酵素FjCEの特性評価を行った。1FjCE遺伝子のクローニングF.johnsoniaeNBRC14942から、FjCE遺伝子をクローニングした。FjCE遺伝子の塩基配列は、配列番号15の塩基配列であった。前記塩基配列から、FjCEは、配列番号16で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、46.7kDaであることがわかった。2FjCEの精製配列番号15に示すFjCE遺伝子をpET22bのXhoI-NdeIサイトに導入して、発現ベクターを構築した。前記発現ベクターを、大腸菌BL21DE3RILに導入して、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地25mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地500mLに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド0.5mLを添加して、16°Cで24時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.515mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、5分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを、粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が420mg、CE活性の総活性が5780Uであった。前記粗酵素液を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5で平衡化したイオン交換カラムに、以下の条件で供した。条件カラム:TOYOPEARL登録商標DEAE東ソー社製カラムサイズ:Φ1.6×15cmゲル量:30mL溶出液:塩化ナトリウムを含む10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5塩化ナトリウム濃度0mol/L~0.5mol/Lのリニアグラジエント溶出液量:100mL流速:2mL/min前記イオン交換カラムにより、塩化ナトリウム濃度0.1~0.2mol/LNaClで溶出された吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分の純度は、SDS-PAGEにより確認し、純度の高い画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が71.8mg、CE活性の総活性が1900U、比活性が32.8U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、32.9であった。この画分を、SDS-PAGEにより供した。この結果を、図10の写真に示す。図10において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図10のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、FjCEは単一に精製されていることがわかった。得られた精製FjCEについて、各種特性を確認した。下記表6に、FjCEの精製の概要を示す。前記精製FjCEを、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0で透析した後、終濃度が30v/vとなるようにグリセロールを添加し、-20°Cで保存した。3FjCEの特性3-1SDS-PAGEによる分子量前記図10のSDS-PAGEの結果から、FjCEのSDS-PAGEによる分子量は、41.7kDaであった。3-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、250mmol/Lラクトース1水和物0.4mL、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH6.0~12.00.1mLおよび水0.4mLを混合し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、71.8μg/mLFjCE0.1mLを添加して、さらに30°Cで10分間インキュベートして、酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース生成量を示したpHの活性を100として、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、7.18mg/mLFjCE10μLに、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.010μLおよび水80μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7400μL、および、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7500μLを添加し、30°Cで10分間インキュベートした。前記反応液に、0.1mol/L塩酸200μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水150μLおよび内部標準として1w/vソルビトール150μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示したpHの活性を100として、各pHの残存活性を求めた。図11のグラフに、FjCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図11において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、白丸○は至適pH、黒丸●はpH安定性の結果を示す。図11に示すように、FjCEは、pH8.4において最大活性を示し、pH4.7~9.8において、80以上の残存活性を示し、pH4.7~9.8において、90以上の残存活性を示した。この結果から、FjCEの至適pHは8.4であり、pH安定領域は、pH4.7~9.8であることがわかった。なお、FjCE無添加では、エピラクトース生成が確認されなかったことから、エピラクトース生成は、FjCEによることは明らかである。3-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.40.5mLを、25~55°Cでインキュベートした。これに、14.4μg/mLFjCE0.5mLを添加して、25~55°Cで10分間インキュベートして、酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース生成量を示した温度の活性を100として、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、14.4μg/mLFjCE0.5mLを、25~55°Cで15分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のFjCEを使用し、緩衝液をpH8.4とした以外は、前記実施例2の活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図12のグラフに、FjCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図12において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、白丸○は至適温度、黒丸●は熱安定性の結果を示す。図12に示すように、FjCEは、35°Cにおいて最大活性を示した。また、FjCEは、40°C以下で80以上の残存活性を示し、30°C以下で90以上の残存活性を示した。この結果から、FjCEの至適温度は35°Cであり、熱安定領域は、40°C以下であることが明らかになった。3-4反応生成物の構造解析FjCEによるラクトースからの反応生成物について、核磁気共鳴NMRおよび質量分析MSにより構造解析を行った。まず、10w/vラクトース1水和物を含む5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.4に、7.18mg/mLFjCE68μLラクトース1g当たり10Uを添加し、30°Cで一晩インキュベートした。前記反応液を、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例1の2-2と同様にして、TLCに供した。具体的には、シリカゲルプレート厚み2mmに、前記反応液750μLを供し、20cm展開させた。展開後、前記シリカゲルプレートの両端を1.5cm程度ずつ切り取り、エタノールで10v/vに希釈した硫酸を噴霧し、加熱して糖を検出した。前記シリカゲルプレートから、反応生成物と同様の移動度の領域を掻き取り、水100mLに懸濁した。この懸濁液をろ紙でろ過し、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩し、さらに、前記フィルター孔径:0.45μmでろ過した。このろ液を、1mL程度に濃縮し、前記濃縮液を、前記実施例1の2-1と同条件でHPLCに供し、反応生成物を精製した。このようにして、純度97.6の反応生成物12.8mgを得た。これを試料として、ESI-MSおよび13C-NMRを用いて、構造解析を行った。図13に、ESI-MSによる反応生成物の質量分析の結果を示す。図13に示すように、前記反応生成物の分子量は、342であった。この結果から、反応生成物が、二糖類であることが確認された。下記表7に、前記反応生成物およびエピラクトースの13C-NMRスペクトラムを示す。下記表7に示すように、両者の13C-NMRスペクトラムは、ほぼ一致していることから、FjCEによる反応生成物は、エピラクトースであることがわかった。3-5基質特異性FjCEについて、前記実施例2の2-4で列挙した基質に対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.42.5μLおよび1.5U/mLFjCE2.5μL50U/g-dsを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。なお、上記酵素濃度におけるdsは、固形分を示す以下、同様。図14に、TLCの結果を示す。図14aは、FjCE添加の反応液の結果、図14bは、FjCE未添加のブランクの結果を示す。図14aおよびbにおいて、基質の表記は、前記図7と同様である。図14aにおいて、矢印は、反応生成物を示している。図14に示すように、FjCEは、セロビオース、ラクトース、エピラクトース、およびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類に作用した。3-6基質濃度の影響10~300mmol/Lラクトース1水和物を基質として、各濃度における反応生成物の生成量を測定した。まず、前記ラクトース溶液1mLに、1mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.410μLおよび7.18mg/mLFjCE10μLを添加し、30°Cで4時間インキュベートした。前記反応液を、基質濃度が10mmol/Lとなるように希釈した。これを、サンプル注入量を50μLとした以外は、前記実施例1の2-1と同条件でHPLCに供し、生成したエピラクトース量を測定した。そして、反応に供したラクトース量を100とし、エピラクトースに変換されたラクトース量の相対値を変換率として求めた。図15のグラフに、ラクトースからエピラクトースへの変換率とラクトース濃度との関係を示す。図15において、横軸は、ラクトース濃度mmol/L、縦軸は、エピラクトースへの変換率を示す。図15に示すように、ラクトース濃度10~300mmol/Lの間において、エピラクトースへの変換率には、ほぼ変化は無く、28程度であった。3-7エピラクトース含有液糖の調製ラクトース1水和物500gを水2Lに懸濁し、さらに、1mol/Lリン酸カリウム緩衝液pH8.3およびFjCE1000Uを添加した。これを、25°Cで3日間インキュベートした。この結果、25w/vのエピラクトースが生成された。3-8エピラクトースの最大生成量100mmol/Lラクトース1水和物を含む10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.51mLに、7.18mg/mLFjCE10μLを添加し、30°Cで4時間インキュベートし、酵素反応した。前記反応液のうち0.1mLを、経時的にサンプリングし、煮沸して酵素を失活させた後、水で10倍希釈した。これを、サンプル注入量を50μLとした以外は、前記実施例1の2-1と同条件でHPLCに供し、反応生成物の生成量を測定した。そして、反応に供したラクトース量を100とし、エピラクトースに変換されたラクトース量の相対値を変換率として求めた。図16のグラフに、ラクトースからエピラクトースへの変換率と反応時間との関係を示す。図16において、横軸は、反応時間時間を示し、縦軸は、エピラクトースへの変換率を示す。図16に示すように、反応開始から2.5時間まで反応生成物の生成量が増加し、それ以降はほぼ変化が無かった。FjCEによる変換率は、29.6程度であった。[実施例4]本実施例では、サッカロファガスデグラダンスS.degradansからCE遺伝子SdCE遺伝子をクローニングし、組換酵素SdCEの特性評価を行った。1SdCE遺伝子のクローニングS.degradansATCC43961から、SdCE遺伝子をクローニングした。SdCE遺伝子の塩基配列は、配列番号3の塩基配列であった。前記塩基配列から、SdCEは、配列番号4で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、47.2kDaであることがわかった。2SdCEの精製配列番号3に示すSdCE遺伝子を使用した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地25mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地3Lに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド30mLを添加して、16°Cで24時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.540mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、5分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを、粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が347mg、CE活性の総活性が2270Uであった。前記粗酵素液を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5で平衡化したイオン交換カラムに、以下の条件で供した。条件カラム:TOYOPEARL登録商標DEAE-650M東ソー社製カラムサイズ:Φ1.6×15cmゲル量:30mL溶出液:塩化ナトリウムを含む10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5塩化ナトリウム濃度0mol/L~1.0mol/Lのリニアグラジエント溶出液量:80mL流速:1mL/min分画液量:非吸着画分15mL、吸着画分1mL前記イオン交換カラムにより、塩化ナトリウム濃度0.1~0.2mol/Lで溶出された吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分の純度を、SDS-PAGEにより確認し、純度の高い画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が77.3mg、CE活性の総活性が878U、比活性が11.4U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、38.8であった。回収した画分を、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0で透析した。これを、同緩衝液で平衡化した吸着カラムに、以下の条件で供した。条件カラム:HydroxyApatiteBio-GelHTGelBioRad社製カラムサイズ:Φ1.6×7cmゲル量:14mL溶出液:リン酸ナトリウム緩衝液pH7.0リン酸ナトリウム濃度5mmol/L~200mmol/Lのリニアグラジエント溶出液量:80mL流速:2mL/min分画液量:5mL前記吸着カラムにより、リン酸ナトリウム濃度5mmol/Lの非吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分5μLについて、純度を、SDS-PAGEにより確認し、単一バンドとなった画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が30.7mg、CE活性の総活性が844U、比活性が27.5U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、37.2であった。この画分を、SDS-PAGEに供した。この結果を、図17の写真に示す。図17において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図17のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、SdCEは単一に精製されていることがわかった。前記精製SdCEは、限外ろ過膜分画分子量10,000、Millipore社製、商品名AmiconUltra-15centrifugalFilterUnit、以下、同様を用いて濃縮した後、終濃度が30v/vとなるようにグリセロールを添加し、-20°Cで保存した。前記精製SdCEについて、各種特性を確認した。下記表8に、SdCEの精製の概要を示す。3SdCEの特性3-1SDS-PAGEによる分子量前記図17のSDS-PAGEの結果から、SdCEのSDS-PAGEによる分子量は、45.0kDaであった。3-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、前記実施例3の3-2と同様にして混合液を調製し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、100μg/mLSdCE0.1mLを添加し、さらに30°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、4.8mg/mLSdCE12.5μLに、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.010μLおよび水77.5μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7400μL、および、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7500μLを添加し、30°Cで10分間インキュベートした。前記反応液に、0.1mol/L塩酸200mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水150μLおよび内部標準として1w/vソルビトール150μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの残存活性を求めた。図18のグラフに、SdCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図18において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適pH、白丸○はpH安定性の結果を示す。図18に示すように、SdCEは、pH7.7において最大活性を示し、pH3.9~10.8において、80以上の残存活性を示した。この結果から、SdCEの至適pHは7.7であり、pH安定領域は、pH3.9~10.8であることがわかった。なお、SdCE無添加では、エピラクトース生成が確認されなかったことから、エピラクトース生成は、SdCEによることは明らかである。3-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.70.5mLを、25~55°Cでインキュベートした。これに、20μg/mLSdCE0.5mLを添加し、30°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-3と同様にして、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、20μg/mLSdCE0.5mLを、40~100°Cで30分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のSdCEを使用し、緩衝液をpH7.7とした以外は、前記実施例2の活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図19のグラフに、SdCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図19において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適温度、白丸○は熱安定性の結果を示す。図19に示すように、SdCEは、35°Cにおいて最大活性を示した。また、SdCEは、35°C以下で80以上の残存活性を示した。この結果から、SdCEの至適温度は35°Cであり、熱安定領域は、35°C以下であることが明らかになった。3-4基質特異性SdCEについて、前記実施例2の2-4で列挙した基質に対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.72.5μLおよび1.5U/mLSdCE2.5μL50U/g-dsを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。N-アセチルグルコサミンについては、反応生成物をHPLCで検出することにより、基質特異性を確認した。まず、200mmol/LN-アセチルグルコサミン0.5mL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.70.25mLおよび1.5U/mLSdCE0.25mLを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液を、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、反応生成物を確認した。また、ブランクとして、SdCEに代えて水を使用し、同様にしてHPLCを行った。図20に、TLCの結果を示す。図20において、基質の表記は、前記図7と同様である。各基質について、左側のレーンは基質の結果を示し、右側のレーンは反応生成物の結果を示す。図20に示すように、SdCEは、ラクトース、エピラクトース、セロビオースおよびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類に作用した。これらの反応生成物は、それぞれ、エピラクトース、ラクトース、グルコシルマンノース図示せずおよびマンノシルグルコース図示せずと同一のRf値を示した。また、SdCEは、セロトリオースにも作用した。図21に、HPLCのクロマトグラムを示す。図21aは、ブランクの結果、図21bは、基質としてN-アセチルグルコサミンを用いた反応液の結果を示す。図21に示すように、同じ保持時間のみにピークが確認されたことから、SdCEは、N-アセチルグルコサミンに作用しないことがわかった。3-5反応生成物の分析基質として、ラクトース、エピラクトース、セロビオースおよびマンノビオースを使用し、SdCEによる反応生成物を分析した。まず、100mmol/Lの前記基質を含む10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7100μLに、4.8mg/mLSdCE10μLを添加し、30°Cで24時間インキュベートした。この反応液を煮沸してSdCEを失活させた後、水で5倍に希釈した。これを、前記実施例1の2-1と同条件でHPLCに供した。溶出液を20秒毎に分取し、分取した各画分を、同じ条件でHPLCに供した。そして、反応生成物が単一成分として検出された画分、減圧下で乾固させた。この乾固物を、純水50μLに溶解し、さらに、4mol/Lトリフルオロ酢酸溶液450μLを添加して、100°Cで2時間インキュベートした。これにより、前記反応生成物のグリコシド結合を切断した。この反応液を、再度、減圧下で乾固させた後、純水50μLに溶解した。得られた溶液のうち2μLを、TLCに供した。TLCの展開溶媒は、前記実施例1の2-2と同じ混合溶媒を使用した。糖の検出は、アニスアルデヒド溶液エタノール68mL、硫酸2.5mL、酢酸1.2mLおよびアニスアルデヒド1.9mLをTLCプレートに噴霧し、オーブントースターで加熱して行った。図22に、単糖の分析結果を示す。図22において、Lacはラクトースの反応生成物、Epiは、エピラクトースの反応生成物、Celはセロビオースの反応生成物、Man2はマンノビオースの反応生成物の結果を示す。Glcはグルコース、Glaはガラクトース、Frcはフラクトース、Manはマンノースを示す。図22に示すように、ラクトースからの反応生成物は、その構成糖が、ガラクトースおよびマンノースであった。エピラクトースからの反応生成物は、その構成糖が、ガラクトースおよびグルコースであった。セロビオースからの反応生成物は、その構成糖が、グルコースおよびマンノースであった。マンノビオースからの反応生成物は、その構成糖が、グルコースおよびマンノースであった。このように、各反応生成物は、基質であるエピラクトース、ラクトース、グルコシルマンノースおよびマンノシルグルコースと同様の単糖組成であった。また、ラクトースおよびエピラクトースからの反応生成物は、それぞれ、エピラクトースおよびラクトースと同一のRf値であった。このことから、SdCEによる反応は、還元末端糖であるグルコースまたはマンノースの2位のOH基をエピメリ化することが明らかとなった。一方、セロビオースおよびマンノビオースからの反応生成物は、その単糖の組成が、いずれもグルコースおよびマンノースであった。SdCEは、前述のように、還元末端糖に作用することが明らかであるため、これら二糖類の反応生成物は、グルコシルマンノースおよびマンノシルグルコースであると判断した。すなわち、SdCEは、還元末端糖であるグルコシル残基またはマンノシル残基の2位のOH基をエピメリ化する酵素であることが明らかとなった。3-6基質濃度の影響10~300mmol/Lラクトース1水和物およびセロビオースを基質として、各濃度における反応生成物の生成量を測定した。まず、前記基質溶液1mLに、1mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.710μLおよび4.8mg/mLSdCE100μLを添加し、30°Cで24時間インキュベートした。前記反応液を、基質濃度が10mmol/Lとなるように希釈した。そして、前記実施例3の3-6と同様にして、基質から反応生成物への変換率を求めた。図23のグラフに、基質から反応生成物への変換率と基質濃度との関係を示す。図23において、横軸は、基質濃度mmol/L、縦軸は、反応生成物への変換率を示す。図23に示すように、基質濃度10~300mmol/Lの間において、反応生成物への変換率には、ほぼ変化は無く、30程度であった。[実施例5]本実施例では、ヘルペトシフォンアウランチアクスH.aurantiacusからCE遺伝子HaCE遺伝子をクローニングし、組換酵素HaCEの特性評価を行った。1HaCE遺伝子のクローニングH.aurantiacusATCC23779から、HaCE遺伝子をクローニングした。HaCE遺伝子の塩基配列は、配列番号7の塩基配列であった。前記塩基配列から、HaCEは、配列番号8で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、47.5kDaであることがわかった。2HaCEの精製配列番号7に示すHaCE遺伝子を使用した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地25mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地2Lに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド2mLを添加して、16°Cで24時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.535mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、5分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを,粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が1085mg、CE活性の総活性が22351Uであった。前記粗酵素液を、25mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5で平衡化したイオン交換カラムに、以下の条件で供した。条件カラム:TOYOPEARL登録商標DEAE-650M東ソー社製カラムサイズ:Φ1.6×15cmゲル量:30mL溶出液:塩化ナトリウムを含む25mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5塩化ナトリウム濃度0mol/L~0.5mol/Lのリニアグラジエント溶出液量:100mL流速:2mL/min分画液量:非吸着画分15mL、吸着画分3mL前記イオン交換カラムにより、塩化ナトリウム濃度0.1~0.2mol/Lで溶出された吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分の純度は、SDS-PAGEにより確認し、純度の高い画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が261mg、CE活性の総活性が8430U、比活性が32.3U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、37.7であった。回収した画分を、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0で透析した。これを、前記実施例4の2と同条件で、吸着カラムに供した。前記吸着カラムにより、リン酸ナトリウム緩衝液濃度5mmol/Lの非吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分5μLについて、純度を、SDS-PAGEにより確認し、目的サイズの単一バンドとなった画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が140mg、CE活性の総活性が6490U、比活性が46.4U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、29.0であった。この画分を、SDS-PAGEに供した。この結果を、図24の写真に示す。図24において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図24のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、HaCEは単一に精製されていることがわかった。前記精製HaCEは、前記実施例4の2と同様にして濃縮した後、終濃度が30v/vとなるようにグリセロールを添加し、-20°Cで保存した。前記精製HaCEについて、各種特性を確認した。下記表9に、HaCEの精製の概要を示す。3HaCEの特性3-1SDS-PAGEによる分子量前記図24のSDS-PAGEの結果から、HaCEのSDS-PAGEによる分子量は、39.8kDaであった。3-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、前記実施例3の3-2と同様にして混合液を調製し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、400μg/mLHaCE0.1mLを添加し、さらに30°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、0.8mg/mLHaCE45μLに、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.010μLおよび水45μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.3400μL、および、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.3500μLを添加し、30°Cで10分間インキュベートした。前記反応液に、0.1mol/L塩酸200μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水150μLおよび内部標準として1w/vソルビトール150μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの残存活性を求めた。図25のグラフに、HaCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図25において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適pH、白丸○はpH安定性の結果を示す。図25に示すように、HaCEは、pH7.3において最大活性を示し、pH7.3~11.8において、80以上の残存活性を示し、pH3.5~6.3において、50~60の残存活性を示した。この結果から、HaCEの至適pHは7.3であり、pH安定領域は、pH7.3~11.8であることがわかった。なお、HaCE無添加では、エピラクトース生成が確認されなかったことから、エピラクトース生成は、HaCEによることは明らかである。3-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.30.5mLを、25~55°Cでインキュベートした。これに、80μg/mLHaCE0.5mLを添加し、25~55°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-3と同様にして、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、80μg/mLHaCE0.5mLを、25~55°Cで15分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のHaCEを使用し、緩衝液をpH7.3とした以外は、前記実施例2の活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図26のグラフに、HaCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図26において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適温度、白丸○は熱安定性の結果を示す。図26に示すように、HaCEは、45°Cにおいて最大活性を示した。また、HaCEは、50°C以下で80以上の残存活性を示した。この結果から、HaCEの至適温度は45°Cであり、熱安定領域は、50°C以下であることが明らかになった。3-4基質特異性HaCEについて、前記実施例2の2-4で列挙した基質、セロテトラオースおよびセロペンタオースに対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.32.5μLおよび1.5U/mLHaCE2.5μL50U/g-dsを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。N-アセチルグルコサミンについては、反応生成物をHPLCで検出することにより、基質特異性を確認した。本実施例では、緩衝液として、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.3、酵素として、1.5U/mLHaCE0.25mLを用いた以外は、前記実施例4の3-4と同様にして、反応生成物を確認した。また、ブランクとして、HaCEに代えて水を使用し、同様にしてHPLCを行った。図27に、TLCの結果を示す。図27において、Cel4は、セロテトラオース、Cel5は、セロペンタオースを示し、これら以外の基質の表記は、前記図7と同様である。各基質について、左側のレーンは基質の結果を示し、右側のレーンは反応生成物の結果を示す。図27に示すように、HaCEは、セロビオース、ラクトース、エピラクトースおよびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類およびセロトリオースに作用した。一方、HaCEは、セロテトラオース、セロペンタオースおよびN-アセチルマンノサミンには作用しなかった。図28に、HPLCのクロマトグラムを示す。図28aは、ブランクの結果、図28bは、基質としてN-アセチルグルコサミンを用いた反応液の結果を示す。図28に示すように、同じ保持時間のみにピークが確認されたことから、HaCEは、N-アセチルグルコサミンに作用しないことがわかった。3-5反応生成物の分析基質としてラクトース、セロビオース、マンノビオースおよびエピラクトースを使用し、HaCEによる反応生成物を分析した。緩衝液として、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.3を使用し、酵素として、80μg/mLHaCEを使用した以外は、前記実施例4の3-5と同様にして、反応生成物を分析した。図29の写真に、単糖の分析結果を示す。図29において、基質の表記は、前記図22と同様である。図29に示すように、ラクトースからの反応生成物は、その構成糖が、ガラクトースおよびマンノースであった。エピラクトースからの反応生成物は、その構成糖が、ガラクトースおよびグルコースであった。セロビオースからの反応生成物は、その構成糖が、グルコースおよびマンノースであった。マンノビオースからの反応生成物は、その構成糖が、グルコースおよびマンノースであった。このように、各反応生成物は、基質であるエピラクトース、ラクトース、グルコシルマンノースおよびマンノシルグルコースと同様の単糖組成であった。また、ラクトースおよびエピラクトースの反応生成物は、それぞれ、エピラクトースおよびラクトースと同一のRf値であった。このことから、HaCEによる反応は、還元末端糖であるグルコースまたはマンノースの2位のOH基をエピメリ化することが明らかとなった。一方、セロビオースおよびマンノビオースからの反応生成物は、その単糖の組成が、いずれもグルコースおよびマンノースであった。HaCEは、前述のように、還元末端糖に作用することが明らかであるため、これら二糖類の反応生成物は、グルコシルマンノースおよびマンノシルグルコースであると判断した。すなわち、HaCEは、還元末端糖であるグルコシル残基またはマンノシル残基の2位のOH基をエピメリ化する酵素であることが明らかとなった。3-6基質濃度の影響10~300mmol/Lラクトース1水和物およびセロビオースを基質として、各濃度における反応生成物の生成量を測定した。まず、前記基質溶液1mLに、1mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.710μLおよび0.8mg/mLHaCE100μLを添加し、30°Cで24時間インキュベートした。前記反応液を、基質濃度が10mmol/Lとなるように希釈した。この希釈液を使用した以外は、前記実施例3の3-6と同様にして、基質から反応生成物への変換率を求めた。図30のグラフに、基質から反応生成物への変換率と基質濃度との関係を示す。図30において、横軸は、基質濃度mmol/L、縦軸は、反応生成物への変換率を示し、黒丸●はラクトースの結果、白丸○はセロビオースの結果を示す。図30に示すように、ラクトースおよびセロビオースの両基質において、基質濃度10~300mmol/Lの間において、反応生成物への変換率には、ほぼ変化は無く、30程度であった。[実施例6]本実施例では、ディアドバクターファーメンタンスD.fermentansからCE遺伝子DfCE遺伝子をクローニングし、組換酵素DfCEの特性評価を行った。1DfCE遺伝子のクローニングD.fermentansATCC700827から、DfCE遺伝子をクローニングした。DfCE遺伝子の塩基配列は、配列番号11の塩基配列であった。前記塩基配列から、DfCEは、配列番号12で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、45.3kDaであることがわかった。2DfCEの精製配列番号11に示すDfCE遺伝子を使用した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地25mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地1.5Lに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド1.5mLを添加して、16°Cで24時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.535mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、5分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が486mg、CE活性の総活性が6637Uであった。前記粗酵素液を、25mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5で平衡化したイオン交換カラムに、前記実施例5の2と同条件で供した。前記イオン交換カラムにより、非吸着画分に目的の活性が確認された。各画分の純度は、SDS-PAGEにより確認し、純度の高い画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が481mg、CE活性の総活性が10377U、比活性21.6U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、156であった。回収した画分を、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0で透析した。これを、カラムサイズΦ1.6×10cm、ゲル量20mL、溶出液量60mLとした以外は、前記実施例4の2と同条件で、吸着カラムに供した。前記吸着カラムにより、リン酸ナトリウム緩衝液濃度50~100mmol/Lで溶出された吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分1μLまたは5μLについて、純度を、SDS-PAGEにより確認し、目的サイズの単一バンドとなった画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が252mg、CE活性の総活性が6624U、比活性が26.2U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、100であった。回収した画分を、SDS-PAGEに供した。この結果を、図31の写真に示す。図31において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図31のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、DfCEは単一に精製されていることがわかった。前記精製DfCEは、終濃度が30v/vとなるようにグリセロールを添加し、-20°Cで保存した。前記精製DfCEについて、各種特性を確認した。下記表10に、DfCEの精製の概要を示す。3DfCEの特性3-1SDS-PAGEによる分子量前記図31のSDS-PAGEの結果から、DfCEのSDS-PAGEによる分子量は、41.7kDaであった。3-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、前記実施例3の3-2と同様にして混合液を調製し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、500μg/mLDfCE0.1mLを添加し、さらに30°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、10mg/mLDfCE5μLに、水85μLおよび0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.010μL、0.1mol/LKCl-HCl緩衝液pH2.0または0.1mol/LKCl-NaOH緩衝液pH13.010μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7400μL、および、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7500μLを添加し、30°Cで10分間インキュベートした。前記反応液に、0.1mol/L塩酸200μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水150μLおよび内部標準として1w/vソルビトール150μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの残存活性を求めた。図32のグラフに、DfCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図32において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適pH、白丸○はpH安定性の結果を示す。図32に示すように、DfCEは、pH7.7において最大活性を示し、pH2.2~10.2において、80以上の残存活性を示した。この結果から、DfCEの至適pHは7.7であり、pH安定領域は、pH2.2~10.2であることがわかった。なお、DfCE無添加では、エピラクトース生成が確認されなかったことから、エピラクトース生成は、DfCEによることは明らかである。3-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.70.5mLと20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.70.4mLとの混合液を、25~55°Cでインキュベートした。前記混合液に、500μg/mLDfCE0.1mLを添加し、25~55°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-3と同様にして、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、500μg/mLDfCE0.1mLを、25~55°Cで15分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のDfCEを使用し、緩衝液をpH7.7とした以外は、前記実施例2の活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図33のグラフに、DfCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図33において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適温度、白丸○は熱安定性の結果を示す。図33に示すように、DfCEは、50°Cにおいて最大活性を示した。また、DfCEは、50°C以下で80以上の残存活性を示した。この結果から、DfCEの至適温度は50°Cであり、熱安定領域は、50°C以下であることが明らかになった。3-4基質特異性DfCEについて、前記実施例2の2-4で列挙した基質に対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.72.5μLおよび1.5U/mLDfCE2.5μL50U/g-dsを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。N-アセチルグルコサミンについては、反応生成物をHPLCで検出することにより、基質特異性を確認した。本実施例では、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7および1.5U/mLDfCEを用いた以外は、前記実施例4の3-4と同様にして、反応生成物を確認した。また、ブランクとして、DfCEに代えて水を使用し、同様にしてHPLCを行った。図34に、TLCの結果を示す。図34において、基質の表記は、前記図7と同様である。各基質について、左側のレーンは基質の結果を示し、右側のレーンは反応生成物の結果を示す。図34に示すように、DfCEは、セロビオース、ラクトース、エピラクトースおよびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類に作用した。図35に、HPLCのクロマトグラムを示す。図35aは、ブランクの結果、図35bは、基質としてN-アセチルグルコサミンを用いた反応液の結果を示す。図35に示すように、同じ保持時間のみにピークが確認されたことから、DfCEは、N-アセチルグルコサミンに作用しないことがわかった。3-5基質濃度の影響10~300mmol/Lラクトース1水和物およびセロビオースを基質として、各濃度における反応生成物の生成量を測定した。まず、前記基質溶液0.5mLに、1mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.75μLおよび5mg/mLDfCE50μLを添加し、30°Cで24時間インキュベートした。前記反応液を、基質濃度が10mmol/Lとなるように希釈した。この希釈液を使用した以外は、前記実施例3の3-6と同様にして、基質から反応生成物への変換率を求めた。図36のグラフに、基質から反応生成物への変換率と基質濃度との関係を示す。図36において、横軸は、基質濃度mmol/L、縦軸は、反応生成物への変換率を示し、白丸○はラクトースの結果、白三角△はセロビオースの結果を示す。図36に示すように、ラクトースおよびセロビオースの両基質において、基質濃度10~300mmol/Lの間において、反応生成物への変換率には、ほぼ変化は無く、30程度であった。3-6高基質濃度におけるエピラクトース生成反応ラクトース1水和物を、ラクトース無水物に換算して以下の所定濃度となるように、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0に添加した。前記所定濃度は、29、34、40または46w/w溶媒100gに対してそれぞれラクトース無水物40.6g、52.0g、66.9gまたは86.5gとした。前記ラクトースを含む前記緩衝液を、沸騰水中で完全に溶解した。前記溶液を、50~60°Cで30分間インキュベートし、130U/mLDfCEを5U/g-dsとなるよう添加し、50~60°Cで100時間インキュベートした。前記反応液を水でブリックス5に希釈し、前記希釈液のうち10μLを、前記実施例2の活性測定と同様の条件でHPLCを行い、前記実施例2の2-5と同様の方法で、エピラクトース変換率を算出した。図48のグラフに、ラクトースからエピラクトースへの変換率とラクトース濃度との関係を示す。図48において、横軸は、ラクトース濃度w/w、縦軸は、エピラクトースへの変換率を示し、白丸○は50°Cの結果、白三角△は55°Cの結果、白四角□は60°Cの結果を示す。図48に示すように、ラクトース濃度29~40w/wの間において、エピラクトースへの変換率には、ほぼ変化はなく、約30であった。また、ラクトース濃度46w/w、60°Cの結果も同様であった。また、これらの変換率は、上記3-5のラクトース濃度300mmol/Lにおけるエピラクトース変換率と同等であった。このように、DfCEは、耐熱性であることから、例えば、高濃度基質の場合にも、より効率よくエピメリ化できることがわかった。なお、実施例2のRmCEについても、同様の条件で高基質濃度におけるエピラクトース生成反応を確認したところ、DfCEと同じ結果を示した。3-7牛乳に含まれるラクトースの変換糖基質以外にタンパク質または脂質等を含有する飲食品である牛乳について、DfCEによる、エピラクトースの生成量を測定した。まず、牛乳pH6.7、商品名おいしい牛乳、明治乳業社製10mLに、130U/mLDfCE6.5Uを添加し、50°Cで3時間インキュベートした。前記反応液を、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩し、さらに、前記フィルター孔径:0.45μmでろ過した。そして、ろ液のうち10μLを、前記実施例2の活性測定と同様の条件でHPLCに供し、前記実施例2の2-5と同様の方法で、エピラクトース変換率を算出した。ブランクは、DfCE無添加とした。なお、反応前の前記牛乳には、エピラクトースは含まれていないことを確認済みである。ブランクおよびDfCEの反応液におけるエピラクトースへの変換率は、それぞれ、0および29.9であった。この結果から、牛乳のような、ラクトース以外のタンパク質および脂質を含む溶液においても、本実施例のCEは機能し、例えば、本実施例のように、3時間といった短時間の反応においても、エピラクトースを有効に生成可能であることがわかった。[実施例7]本実施例では、テレディニバクターツルネラエT.turneraeからCE遺伝子TtCE遺伝子をクローニングし、組換酵素TtCEの特性評価を行った。1TtCE遺伝子のクローニングT.turneraeATCC39867から、TtCE遺伝子をクローニングした。TtCE遺伝子の塩基配列は、配列番号9の塩基配列であった。前記塩基配列から、TtCEは、配列番号10で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、48.1kDaであることがわかった。2TtCEの精製配列番号9に示すTtCE遺伝子をpET22bのEcoRI-NdeIサイトに導入して、発現ベクターを構築した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地25mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地2Lに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド2mLを添加して、16°Cで24時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.535mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、5分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを、粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が400mg、CE活性の総活性が3248Uであった。前記粗酵素液を、前記実施例5の2と同じ条件で、イオン交換カラムに供した。前記イオン交換カラムにより、塩化ナトリウム濃度約0.1mol/Lで溶出された吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分の純度は、SDS-PAGEにより確認し、純度の高い画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が117mg、CE活性の総活性が1415U、比活性が12.1U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、43.6であった。回収した画分を、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0で透析した。これを、前記実施例4の2と同条件で、吸着カラムに供した。前記吸着カラムにより、リン酸ナトリウム緩衝液濃度5mmol/Lの非吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分5μLについて、純度を、SDS-PAGEにより確認し、目的サイズの単一バンドとなった画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が72.2mg、CE活性の総活性が584U、比活性が8.1U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、18.0であった。この画分を、前記限外ろ過膜を用いて、1.6mg/mL程度に濃縮した後、タンパク質量1μgを、SDS-PAGEに供した。この結果を、図37の写真に示す。図37において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図37のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、TtCEは単一に精製されていることがわかった。前記精製TtCEは、終濃度が30v/vとなるようにグリセロールを添加し、-20°Cで保存した。前記精製TtCEについて、各種特性を確認した。下記表11に、TtCEの精製の概要を示す。3TtCEの特性3-1SDS-PAGEによる分子量前記図37のSDS-PAGEの結果から、TtCEのSDS-PAGEによる分子量は、43.9kDaであった。3-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、前記実施例3の3-2と同様にして混合液を調製し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、900μg/mLTtCE0.1mLを添加し、さらに30°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、0.45mg/mLTtCE90μLに、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.010μLまたは0.1mol/LKCl-HCl緩衝液pH2.010μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、5mmol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH8.8400μL、および、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH8.8500μLを添加し、30°Cで10分間インキュベートした。前記反応液に、0.1mol/L塩酸200μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水150μLおよび内部標準として1w/vソルビトール150μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの残存活性を求めた。図38のグラフに、TtCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図38において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適pH、白丸○はpH安定性の結果を示す。図38に示すように、TtCEは、pH8.8において最大活性を示し、pH3.4~10.2において、80以上の残存活性を示した。この結果から、TtCEの至適pHは8.8であり、pH安定領域は、pH3.4~10.2であることがわかった。なお、TtCE無添加では、エピラクトース生成が確認されなかったことから、エピラクトース生成は、TtCEによることは明らかである。3-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.80.5mLと20mmol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH8.80.4mLとの混合液を、25~55°Cでインキュベートした。前記混合液に、900μg/mLTtCE0.1mLを添加し、25~55°Cで10分間インキュベートして、酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-3と同様にして、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、900μg/mLTtCE0.1mLを、25~55°Cで15分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のTtCEを使用し、緩衝液をpH8.8とした以外は、前記実施例2の活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図39のグラフに、TtCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図39において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適温度、白丸○は熱安定性の結果を示す。図39に示すように、TtCEは、35°Cにおいて最大活性を示した。また、TtCEは、45°C以下で80以上の残存活性を示した。この結果から、TtCEの至適温度は35°Cであり、熱安定領域は、45°C以下であることが明らかになった。3-4基質特異性TtCEについて、前記実施例2の2-4で列挙した基質、およびセロテトラオースに対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.82.5μLおよび1.5U/mLTtCE2.5μL50U/g-dsを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。N-アセチルグルコサミンについては、反応生成物をHPLCで検出することにより、基質特異性を確認した。本実施例では、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.8および1.5U/mLTtCEを用いた以外は、前記実施例4の3-4と同様にして、反応生成物を確認した。また、ブランクとして、TtCEに代えて水を使用し、同様にしてHPLCを行った。図40に、TLCの結果を示す。図40において、基質の表記は、前記図7および前記図27と同様である。各基質について、左側のレーンは基質の結果を示し、右側のレーンは反応生成物の結果を示す。図40に示すように、TtCEは、セロビオース、ラクトース、エピラクトースおよびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類に作用した。一方、セロテトラオースには作用しなかった。図41に、HPLCのクロマトグラムを示す。図41aは、ブランクの結果、図41bは、基質としてN-アセチルグルコサミンを用いた反応液の結果を示す。図41に示すように、同じ保持時間のみにピークが確認されたことから、TtCEは、N-アセチルグルコサミンに作用しないことがわかった。3-5反応生成物の分析基質としてラクトース、セロビオース、マンノビオースおよびエピラクトースを使用し、TtCEによる反応生成物を分析した。緩衝液として、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.8を使用し、酵素として、900μg/mLTtCEを使用した以外は、前記実施例4の3-5と同様にして、反応生成物を分析した。図42の写真に、単糖の分析結果を示す。図42において、基質の表記は、前記図22と同様である。図42に示すように、ラクトースからの反応生成物は、その構成糖が、ガラクトースおよびマンノースであった。エピラクトースからの反応生成物は、その構成糖が、ガラクトースおよびグルコースであった。セロビオースからの反応生成物は、その構成糖が、グルコースおよびマンノースであった。マンノビオースからの反応生成物は、その構成糖が、グルコースおよびマンノースであった。このように、各反応生成物は、基質であるエピラクトース、ラクトース、グルコシルマンノースおよびマンノシルグルコースと同様の単糖組成であった。また、ラクトースおよびエピラクトースの反応生成物は、それぞれ、エピラクトースおよびラクトースと同一のRf値であった。このことから、TtCEによる反応は、還元末端糖であるグルコースまたはマンノースの2位のOH基をエピメリ化することが明らかとなった。一方、セロビオースおよびマンノビオースからの反応生成物は、その単糖の組成が、いずれもグルコースおよびマンノースであった。TtCEは、前述のように、還元末端糖に作用することが明らかであるため、これら二糖類の反応生成物は、グルコシルマンノースおよびマンノシルグルコースであると判断した。すなわち、TtCEは、還元末端糖のグルコシル残基またはマンノシル残基の2位のOH基をエピメリ化する酵素であることが明らかとなった。3-6基質濃度の影響10~300mmol/Lラクトース1水和物およびセロビオースを基質として、各濃度における反応生成物の生成量を測定した。まず、前記所定濃度の基質溶液1mLに、1mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.810μLおよび0.9mg/mLTtCE100μLを添加し、30°Cで24時間インキュベートした。前記反応液を、基質濃度が10mmol/Lとなるように希釈した。この希釈液を使用した以外は、前記実施例3の3-6と同様にして、基質から反応生成物への変換率を求めた。図43のグラフに、基質から反応生成物への変換率と基質濃度との関係を示す。図43において、横軸は、基質濃度mmol/L、縦軸は、反応生成物への変換率を示し、白丸○はラクトースの結果、白三角△はセロビオースの結果を示す。図43に示すように、ラクトースおよびセロビオースの両基質において、基質濃度10~300mmol/Lの間において、反応生成物への変換率には、ほぼ変化は無く、30程度であった。[実施例8]本実施例では、ペドバクターヘパリナスP.heparinusからCE遺伝子PhCE遺伝子をクローニングし、組換酵素PhCEの特性評価を行った。1PhCE遺伝子のクローニングP.heparinusNBRC12017から、PhCE遺伝子をクローニングした。PhCE遺伝子の塩基配列は、配列番号17の塩基配列であった。前記塩基配列から、PhCEは、配列番号18で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、44.5kDaであることがわかった。2PhCEの精製配列番号17に示すPhCE遺伝子を使用した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地30mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地2100mL700mL×3に入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド2.1mL0.7mL×3を添加して、12°Cで48時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.535mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が252mg、CE活性の総活性が1950Uであった。前記粗酵素液を、リン酸ナトリウム緩衝液の濃度を10mmol/Lとし、溶出液量を120mLとし、吸着画分の分画液量を4mLとした以外は、前記実施例5の2と同条件で、イオン交換カラムに供した。前記イオン交換カラムにより、塩化ナトリウム濃度0.1~0.2mol/Lで溶出された吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分の純度は、SDS-PAGEにより確認し、純度の高い画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が189mg、CE活性の総活性が861U、比活性が4.6U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、44.2であった。回収した画分を、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.4で透析した。これを、同緩衝液で平衡化した吸着カラムに、以下の条件で供した。条件カラム:HydroxyApatiteBio-GelHTGelBioRad社製カラムサイズ:Φ1.6×15cmゲル量:30mL溶出液:リン酸ナトリウム緩衝液pH7.4リン酸ナトリウム濃度5mmol/L~200mmol/Lのリニアグラジエント溶出液量:120mL流速:2mL/min分画液量:非吸着画分15mL、吸着画分4mL前記吸着カラムにより、非吸着画分およびリン酸ナトリウム濃度10~50mmol/Lで溶出された吸着画分に、目的の活性が確認された。前記両画分を、SDS-PAGEに供して、純度を確認し、目的サイズの単一バンドであった前記非吸着画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が30.7mg、CE活性の総活性が331U、比活性が10.8U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、17.0であった。回収した画分を、SDS-PAGEに供した。この結果を、図44の写真に示す。図44において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図44のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、PhCEは単一に精製されていることがわかった。得られた精製PhCEについて、各種特性を確認した。下記表12に、PhCEの精製の概要を示す。3PhCEの特性3-1SDS-PAGEによる分子量前記図44のSDS-PAGEの結果から、PhCEのSDS-PAGEによる分子量は、40.7kDaであった。3-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、前記実施例3の3-2と同様にして混合液を調製し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、221μg/mLPhCE0.1mLを添加し、さらに30°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、1.77mg/mLPhCE10μLに、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.010μLおよび水80μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.3400μL、および、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.3500μLを添加し、30°Cで10分間インキュベートした。前記反応液に、0.1mol/L塩酸200μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水150μLおよび内部標準として1w/vソルビトール150μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの残存活性を求めた。図45のグラフに、PhCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図45において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適pH、白丸○はpH安定性の結果を示す。図45に示すように、PhCEは、pH6.3において最大活性を示し、pH5.3~11.8において、80以上の残存活性を示した。この結果から、PhCEの至適pHは6.3であり、pH安定領域は、pH5.3~11.8であることがわかった。なお、PhCE無添加では、エピラクトース生成が確認されなかったことから、エピラクトース生成は、PhCEによることは明らかである。3-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH8.40.5mLを、25~55°Cでインキュベートした。これに、44.3μg/mLPhCE0.5mLを添加し、25~55°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-3と同様にして、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、44.3μg/mLPhCE0.5mLを、25~55°Cで15分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のPhCEを使用し、緩衝液のpHを6.3とした以外は、前記実施例2の活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図46のグラフに、PhCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図46において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適温度、白丸○は熱安定性の結果を示す。図46に示すように、PhCEは、35°Cにおいて最大活性を示した。また、PhCEは、35°C以下で80以上の残存活性を示した。この結果から、PhCEの至適温度は35°Cであり、熱安定領域は、35°C以下であることが明らかになった。3-4基質特異性PhCEについて、前記実施例2の2-4で列挙した基質N-アセチルグルコサミンおよびN-アセチルマンノサミンを除くに対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.32.5μLおよび1.5U/mLPhCE2.5μL50U/g-dsを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。図47に、TLCの結果を示す。図47において、基質の表記は、前記図7と同様である。各基質について、左側のレーンは基質の結果を示し、右側のレーンは反応生成物の結果を示す。図47に示すように、PhCEは、セロビオース、ラクトース、エピラクトースおよびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類に作用した。一方、セロトリオースには作用しなかった。[実施例9]本実施例では、スピロソマリングアレS.lingualeからCE遺伝子SlCE遺伝子をクローニングし、組換酵素SlCEの特性評価を行った。1SlCE遺伝子のクローニングS.lingualeATCC33905から、SlCE遺伝子をクローニングした。SlCE遺伝子の塩基配列は、配列番号5の塩基配列であった。前記塩基配列から、SlCEは、配列番号6で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、46.6kDaであることがわかった。2SlCEの精製配列番号5に示すSdCE遺伝子を使用した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地5mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地0.6Lに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド0.6mLを添加して、16°Cで24時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.530mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、5分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを、粗酵素液とした。前記粗酵素液は、タンパク質量が88.9mg、CE活性の総活性が1973Uであった。前記粗酵素液を、25mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.5で平衡化したイオン交換カラムに、前記実施例5の2と同条件で供した。前記イオン交換カラムにより、塩化ナトリウム濃度0mol/Lの非吸着画分に、目的の活性が確認された。各画分の純度を、SDS-PAGEにより確認し、純度の高い画分を回収した。回収した画分は、タンパク質量が37.2mg、CE活性の総活性が1702U、比活性が45.7U/mgであり、前記粗酵素液からの回収率は、86.3であった。回収した画分を、SDS-PAGEに供した。この結果を、図49の写真に示す。図49において、レーン1は、分子量マーカーであり、レーン2は、前記画分の結果である。図49のレーン2に示すように、一本のバンドのみが検出されたことから、前記画分において、SlCEは単一に精製されていることがわかった。終濃度が30v/vとなるようにグリセロールを添加し、-20°Cで保存した。前記精製SlCEについて、各種特性を確認した。下記表13に、SlCEの精製の概要を示す。3SlCEの特性3-1SDS-PAGEによる分子量前記図49のSDS-PAGEの結果から、SlCEのSDS-PAGEによる分子量は、46.4kDaであった。3-2至適pHおよびpH安定性至適pHまず、前記実施例3の3-2と同様にして混合液を調製し、30°Cで5分間インキュベートした。前記混合液に、120μg/mLSlCE0.1mLを添加し、さらに30°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの相対活性を求めた。pH安定性まず、600μg/mLSlCE20μLに、0.1mol/Lブリトン-ロビンソン緩衝液pH3.0~12.0または0.1mol/LKCl-HCl緩衝液pH2010μLおよび水70μLを添加し、4°Cで24時間インキュベートした。前記混合液に、5mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7400μL、および、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7500μLを添加し、30°Cで10分間インキュベートした。前記反応液に、0.1mol/L塩酸200μLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水150μLおよび内部標準として1w/vソルビトール150μLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-2と同様にして、各pHの残存活性を求めた。図50のグラフに、SlCEの至適pHおよびpH安定性の結果を示す。図50において、横軸はpHであり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適pH、白丸○はpH安定性の結果を示す。図50に示すように、SlCEは、pH7.7において最大活性を示し、pH2.2~9.5において、80以上の残存活性を示した。この結果から、SlCEの至適pHは7.7であり、pH安定領域は、pH2.2~9.5であることがわかった。なお、SlCE無添加では、エピラクトース生成が確認されなかったことから、エピラクトース生成は、SlCEによることは明らかである。3-3至適温度および熱安定性至適温度まず、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.70.5mLを、25~55°Cでインキュベートした。これに、5mmоl/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.7および150μg/mLSlCE0.1mLを添加し、25~55°Cで10分間インキュベートして酵素反応させた。前記反応液に、0.1mol/L塩酸0.2mLを添加して反応を停止し、2分間煮沸した。これに、水0.15mLおよび内部標準として1w/vソルビトール0.15mLを添加した。これを、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩した後、前記実施例3の3-3と同様にして、各温度の相対活性を求めた。熱安定性まず、150μg/mLSlCE0.1mLを、25~55°Cで15分間インキュベートし、速やかに氷冷した。氷冷後のSlCEを使用し、緩衝液をpH7.7とした以外は、前記実施例2の活性測定に示す方法により、生成したエピラクトース量を測定した。そして、最も高いエピラクトース量を示した温度の活性を100として、各温度の残存活性を求めた。図51のグラフに、SlCEの至適温度および熱安定性の結果を示す。図51において、横軸は、温度であり、左側の縦軸は相対活性、右側の縦軸は残存活性であり、黒丸●は至適温度、白丸○は熱安定性の結果を示す。図51に示すように、SlCEは、45°Cにおいて最大活性を示した。また、SlCEは、50°C以下で80以上の残存活性を示した。この結果から、SlCEの至適温度は45°Cであり、熱安定領域は、50°C以下であることが明らかになった。3-4基質特異性SlCEについて、前記実施例2の2-4で列挙した基質に対する特異性を評価した。まず、200mmol/L基質5μL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.72.5μLおよび1.5U/mLSlCE2.5μL50U/g-dsを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液のうち1μLを、TLCに供した。TLCは、前記実施例1の2-2と同様にして行った。N-アセチルグルコサミンについては、反応生成物をHPLCで検出することにより、基質特異性を確認した。まず、200mmol/LN-アセチルグルコサミン0.5mL、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.70.25mLおよび1.5U/mLSlCE0.25mLを混合し、室温で24時間インキュベートした。この反応液を、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、反応生成物を確認した。また、ブランクとして、SlCEに代えて水を使用し、同様にしてHPLCを行った。図52に、TLCの結果を示す。図52において、基質の表記は、前記図7と同様である。各基質について、左側のレーンは基質の結果を示し、右側のレーンは反応生成物の結果を示す。図52に示すように、SlCEは、ラクトース、エピラクトース、セロビオースおよびマンノビオース等のβ-1,4結合からなる二糖類に作用した。これらの反応生成物は、それぞれ、エピラクトース、ラクトース、グルコシルマンノース図示せずおよびマンノシルグルコース図示せずと同一のRf値を示した。また、SlCEは、セロトリオースにも作用した。図53に、HPLCのクロマトグラムを示す。図53aはブランクの結果、図53bは基質としてN-アセチルグルコサミンを用いた反応液の結果を示す。図53に示すように、同じ保持時間のみにピークが確認されたことから、SlCEは、N-アセチルグルコサミンに作用しないことがわかった。[実施例10]本実施例では、キチノファーガピネンシスC.pinensisからCE遺伝子CpCE遺伝子をクローニングし、組換酵素CpCEの特性評価を行った。1CpCE遺伝子のクローニングC.pinensisNBRC15968から、CpCE遺伝子をクローニングした。CpCE遺伝子の塩基配列は、配列番号13の塩基配列であった。前記塩基配列から、CpCEは、配列番号14で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質であり、分子量の理論値は、46.7kDaであることがわかった。2粗酵素液の調製配列番号13に示すCpCE遺伝子を使用した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地5mLに植菌し、37°Cで一晩培養した。これを、LBA培地100mLに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、37°Cで培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように、0.1mol/Lイソプロピルβ-チオガラクトピラノシド0.1mLを添加して、16°Cで24時間培養した。培養液を、68,600m/s27,000×g、4°C、10分の条件で遠心分離し、菌体を回収した。菌体を、10mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH6.530mLに懸濁し、前記実施例1の1-1と同様にして、超音波破砕により菌体を破砕した。得られた菌体破砕液を、98,000m/s210,000×g、4°C、5分の条件で遠心分離し、上清を回収した。これを粗酵素液とし、下記の実験に使用した。3エピラクトース生成能の評価CE活性として、前記2で調製した粗酵素液について、エピラクトース生成能を評価した。まず、前記粗酵素液0.8mL、1mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液pH7.0125μL、5w/vラクトース1水和物4mLを混合し、室温で一晩インキュベートした。これを、煮沸し、前記イオン交換樹脂を用いて脱塩し、さらに、前記フィルターでろ過した。そして、ろ液のうち1μLを、TLCに供した。TLCの展開溶媒は、イソプロパノール:1-ブタノール:水=体積比7:6:2の混合溶媒を使用した。発色試薬は、アニスアルデヒド試薬1アニスアルデヒドおよび2硫酸を酢酸と混合したものを使用した。糖の検出は、前記発色試薬をTLCプレートに噴霧し、オーブントースターで加熱して行った。図54に、TLCの写真を示す。図54において、Lacは、ラクトースの結果、Epiはエピラクトースの結果、Pは、C.pinensisの粗酵素液による反応生成物の結果を示す。図54に示すように、C.pinensisの粗酵素液による反応生成物において、エピラクトースと同Rf値のスポットが観察された。したがって、C.pinensisの粗酵素液により、ラクトースがエピラクトースに変換されていることが明らかとなった。[実施例11]本実施例では、前記実施例2の3でクローニングしたRmCE遺伝子について、組換酵素RmCEを精製し、その特性を確認した。1RmCEの精製配列番号1に示すRmCE遺伝子を使用した以外は、前記実施例3の2と同様にして、形質転換体を調製した。前記形質転換体を、100μg/mLのアンピシリンを含むLBA培地3mLに植菌し、30°Cで一晩培養した。前記培養液のうち0.2mLを、新たなLBA培地200mLに入れ、波長600nmの吸光度A600が0.5になるまで、30°Cで振とう培養した。培養液を氷冷した後、終濃度0.1mmol/Lとなるように0.1mol/Lのイソプロピルβ-チオガラクトピラノシドを添加し、16°Cで24時間振とう培養した。前記培養液から、前記実施例3と同様にして、菌体の回収破砕および菌体破砕液の遠心分離を行い、粗酵素液40mLを得た。前記粗酵素液は、タンパク質量が134mg、CEの活性は1050Uであった。本粗酵素液を、70°Cにて30分間インキュベートし、前記インキュベート後、遠心分離68,600m/s27000×gにより、凝集成分を取り除いた。凝集成分除去前の粗酵素液および凝集成分除去後の精製酵素液を、SDS-PAGEにより供した。この結果を、図55の写真に示す。図55において、レーンMは、分子量マーカーであり、レーン1は、前記凝集成分除去前の粗酵素液の結果であり、レーン2は、前記凝集成分除去後の精製酵素液の結果である。図55のレーン2に示すように、SDS-PAGE上で単一バンドのみが検出されたことから、前記凝集成分除去後の精製酵素液において、RmCEが単一に精製されていることがわかった。得られたRmCE組換えRmCEの各種特性を確認した。その結果、組換えRmCEは、SDS-PAGEによる分子量、至適pHおよびpH安定性、至適温度および熱安定性、基質特異性、ならびにエピラクトース生成反応に対する温度の影響について、前記実施例2で野生株R.marinusより精製したRmCEと、ほぼ同様の性質を示した。なお、本実施例では、反応温度を60°Cとした以外は、前記実施例2と同条件で、活性測定を行った。2基質濃度の影響10~1000mmol/Lラクトース1水和物を基質として、各濃度における反応生成物の生成量を測定した。前記所定濃度のラクトース1水和物を含む5mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH6.5に、30U/g-dsとなるように組換えRmCEを添加し、60°Cで24時間インキュベートした。前記反応液を煮沸して組換えRmCEを失活させた。そして、前記実施例3の3-6と同様にして、基質から反応生成物への生成率変換率、を求めた。下記表14に、基質から反応生成物への生成率と基質濃度との関係を示す。下記表14に示すように、基質濃度10~1000mmol/Lの間において、エピラクトースの生成率は、約30であった。この結果から、耐熱性を示すRmCEを使用することにより、高基質濃度および高温において、エピラクトース生成反応を行えることがわかった。3固定化酵素の調製本実施例の組換えRmCEを、固定化担体に吸着させて、固定化酵素を調製した。具体的には、固定化担体として、キトパールBCW-2510、キトパールBCW-3010、キトパールBCW-3510いずれも、富士紡績社製;ダイヤイオン登録商標HPA25、セパビーズ登録商標SP-207、セパビーズ登録商標SP-850いずれも、三菱化学社製;デュオライトA568、デュオライトA7、デュオライトXAD761いずれも、住化ケムテックス社製を使用した。前記組換えRmCEの前記固定化担体への吸着処理は、20mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH6.5に、前記固定化担体樹脂および前記組換えRmCEを、それぞれ適当量添加し、室温で数時間振とうすることで行った。このようにして、各種固定化担体に固定化された固定化酵素を調製した。4固定化酵素によるエピラクトース生成100mmol/Lラクトース溶液pH6.56mLに、前記組換えRmCEを固定化した樹脂1gを添加し、この混合液を、60°Cで2時間保持した。この反応液を、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、反応に供したラクトース量を100とし、エピラクトースに変換されたラクトース量の相対値を生成率変換率、として求めた。エピラクトース生成率は、17~30であった。5バイオリアクター方式によるエピラクトースの生成上記3と同様にして、キトパールBCW-35101gあたりに、本実施例の組換えRmCEを0.5mg吸着させて、固定化酵素を調製した。この固定化酵素を、ガラスカラムφ30mmに、高さ130mmとなるように充填した。このカラムを65°Cに保持した状態で、30w/vラクトース1水和物を含む5mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH6.5を、流速8.4mL/hで、前記カラムに通液させた。通液開始から24時間経過後に、前記カラムから溶出された反応液を採取した。この反応液を、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、反応に供したラクトース量を100とし、エピラクトースに変換されたラクトース量の相対値を生成率変換率、として求めた。エピラクトース生成率は、29.5であった。また、前記カラムに前記リン酸カリウム緩衝液を5日間連続して通液した後に採取した反応液では、エピラクトース生成率は、28.6であった。これらの結果、RmCEの固定化酵素により、従来不可能であった高温および高基質濃度において、バイオリアクター方式によるエピラクトースの製造が可能であることが明らかとなった。[実施例12]本実施例では、R.marinus菌体によるエピラクトース生成を確認した。前記R.marinusを、前記表2の培地50mLで、70°Cで114時間振とう培養した。培養終了後、得られた培養液から、遠心分離68,600m/s27000×gにより、菌体を回収した。回収した菌体を、5mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH6.55mLに懸濁した。この懸濁液を、200mmol/Lラクトース1水和物を含む20mmol/Lリン酸カリウム緩衝液pH6.50.5mLに等量添加し、60°Cで10分間インキュベートした。前記反応液を、定法に従いフィルターろ過し、前記実施例1の2-1と同条件のHPLCにより、生成したエピラクトース量を測定した。そして、反応に供したラクトース量を100とし、エピラクトースに変換されたラクトース量の相対値を生成率変換率、として求めた。エピラクトース生成率は、1.7であった。この結果、CEを有する好気性微生物の菌体そのものによっても、ラクトースを基質として、エピラクトースを生成できることが明らかとなった。"