"明細書に記載の発明。発明の要旨これらの目的は、フィブリン/フィブリノーゲン結合の結合体によって解決され、この結合体は、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分、薬学的に活性な物質と可逆的に結合し得る物質捕捉部分、および薬学的に活性な物質を含み、ここで、このフィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、この物質捕捉部分に結合されている。本発明に従う結合体においては、フィブリンまたはフィブリノーゲンに対する親和性を有する結合パートナーが、薬学的に活性な物質の結合パートナーをフィブリンゲルに連結するために用いられる。これらのフィブリンまたはフィブリノーゲンの結合部分に起因して、その結合体は、薬学的に活性な物質の溶出が、単純な拡散によって可能でなく、主として、フィブリンに対するフィブリン/フィブリノーゲン結合部分の親和性および薬学的に活性な物質に対する物質捕捉部分の結合親和性に依存するように十分に、フィブリンマトリクスに結合されている。物質捕捉部分へのフィブリン/フィブリノーゲン結合部分の結合は、例えば、当該分野で公知の1-エチル-3-3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミンEDC等の化学的なリンカーを使用して共有結合であり得るか、または静電力によるものであり得る。本発明の別の実施形態においては、結合体は、介在する物質捕捉部分を有しない、薬学的に活性な物質に共有結合されたフィブリン/フィブリノーゲン結合部分を含む融合タンパク質である。用語フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、1フィブリンまたは2フィブリノーゲンおよびフィブリンの両方、のいずれかに結合し得る結合部分に関する。その結合能力がフィブリンおよびフィブロイチンの両方に対するものである場合、本発明の結合体が予め充填されたフィブリノーゲン分子を用いてフィブリンゲルを形成し、薬物貯蔵部の均一な形成および結合体の均一な分散、従って、ならびにそのフィブリン薬物貯蔵部全体にわたる医薬を可能とし得る。本発明は、例えば以下の項目を提供する。項目1以下:フィブリン/フィブリノーゲン結合部分;薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分;および薬学的に活性な物質、を含む、フィブリン/フィブリノーゲン結合結合体であって、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、該物質捕捉部分に結合されている、結合体。項目2項目1に記載の結合体であって、前記フィブリン/フィブリノーゲン結合部分が、トロンビン、フィブロネクチン、細菌性フィブリノーゲン結合タンパク質、塩基性繊維芽細胞増殖因子、組織特異的プラスミノーゲン活性化因子、インテグリン、核酸、VEGF165C末端ドメインおよびこの群の任意のメンバー由来の部分からなる群より選択される、結合体。項目3項目1に記載の結合体であって、前記物質捕捉部分が、前記薬学的に活性な物質を特異的に認識する、抗体、レセプターまたはこの一部である、結合体。項目4項目1に記載の結合体であって、前記薬学的に活性な物質が、抗生物質、増殖因子、組織構成成分に対するレセプター、組織接着性物質、核酸、血漿タンパク質、ホルモン、ヘパリノイド、創傷治癒物質および画像剤からなる群より選択される、結合体。項目5項目1に記載の結合体であって、前記フィブリン/フィブリノーゲン結合部分および前記物質捕捉部分が、共有結合されている、結合体。項目6以下:フィブリン/フィブリノーゲン結合部分;および薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分、を含む、フィブリン/フィブリノーゲン結合結合体であって、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、該物質捕捉部分に結合されている、結合体。項目7以下:フィブリン/フィブリノーゲン結合部分;および薬学的に活性な物質、を含む、フィブリン/フィブリノーゲン結合結合体であって、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、該薬学的に活性な物質に結合されている、結合体。項目8前記フィブリン/フィブリノーゲン結合部分が、前記薬学的に活性な物質に共有結合されている、項目7に記載の結合体。項目9前記結合体が、組換え融合タンパク質である、項目8に記載の結合体。項目10前記フィブリン/フィブリノーゲン結合部分が、VEGF165のC末端ドメインを含む、項目9に記載の結合体。項目11前記フィブリン/フィブリノーゲン結合部分が、トロンビン、フィブロネクチン、細菌性フィブリノーゲン結合タンパク質、塩基性繊維芽細胞増殖因子、組織特異的プラスミノーゲン活性化因子、インテグリン、核酸、VEGF165C末端ドメインおよびこの群の任意のメンバー由来の部分からなる群より選択される、項目8に記載の結合体。項目12前記薬学的に活性な物質が、抗生物質、増殖因子、組織構成成分に対するレセプター、組織接着性物質、核酸、血漿タンパク質、ホルモン、ヘパリノイド、創傷治癒物質および画像剤からなる群より選択される、項目8に記載の結合体。項目13薬学的に活性な物質のための貯蔵部を形成するためのキットであって、以下:フィブリノーゲンに基づく組織接着剤、ならびにフィブリン/フィブリノーゲン結合部分、および薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分を含むフィブリン/フィブリノーゲン結合結合体であって、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、該物質捕捉部分に結合されている、結合体を備える、キット。項目14フィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングし得る因子を含む構成成分をさらに備える、項目13に記載のキット。項目15フィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングし得る因子を含む前記構成成分が、トロンビン調製物である、項目14に記載のキット。項目16前記組織接着剤および前記結合体を貯蔵部位に投与するためのデバイスをさらに備える、項目13に記載のキット。項目17薬学的に活性な物質の貯蔵部を生成するための方法であって、以下の工程:フィブリン/フィブリノーゲン結合部分、薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分および薬学的に活性な物質を含む、フィブリン/フィブリノーゲン結合結合体を提供する工程であって、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、該物質捕捉部分に結合されている、工程;該結合体をフィブリノーゲン調製物と一緒に貯蔵部位に投与する工程;該フィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングさせる工程であって、これによりフィブリン凝塊が形成される、工程;ならびに該フィブリン凝塊において該フィブリノーゲンに該結合体を結合させる工程、を包含する、方法。項目18薬学的に活性な物質の貯蔵部を生成するための方法であって、以下の工程:フィブリン/フィブリノーゲン結合部分、薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分および薬学的に活性な物質を含む、フィブリン/フィブリノーゲン結合結合体を提供する工程であって、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、該物質捕捉部分に結合されている、工程;該結合体をフィブリノーゲン調製物と一緒に貯蔵部に投与する工程;該フィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングさせる工程であって、これによりフィブリン凝塊が形成される、工程;ならびに該フィブリン凝塊に該結合体を結合させる工程、を包含する、方法。項目19前記フィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングさせる工程が、該フィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングさせ得る因子を添加することによって実施される、項目18に記載の方法。項目20前記因子が、外因性トロンビンである、項目19に記載の方法。項目21薬学的に活性な物質のための貯蔵部であって、該貯蔵部は、フィブリンおよびフィブリン/フィブリノーゲン結合結合体を含み、該結合体は、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分、薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分および薬学的に活性な物質を含み、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分が、該物質捕捉部分に結合されている、貯蔵部。項目22薬学的に活性な物質のための貯蔵部であって、該貯蔵部は、以下の工程:フィブリン/フィブリノーゲン結合結合体を提供する工程であって、該結合体は、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分、薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分および薬学的に活性な物質を含み、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分が、該物質捕捉部分に結合されている、工程;該結合体をフィブリノーゲン調製物と一緒に貯蔵部位に投与する工程;該フィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングさせて、これによりフィブリン凝塊が形成されることを可能にする工程;ならびに該結合体を、該フィブリノーゲンまたは該フィブリン凝塊に結合させる工程、によって取得可能である、貯蔵部。項目23病理学的状態を罹患する患者を処置するための方法であって、該病理学的状態は、薬学的に活性な物質で処置可能であり、ここで、該方法は、フィブリノーゲンに基づく組織接着剤の有効量およびフィブリン/フィブリノーゲン結合結合体を該患者に投与する工程を包含し、該結合体は、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分、該薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分および該薬学的に活性な物質を含み、ここで、該フィブリン/フィブリノーゲン結合部分が、該物質捕捉部分に結合されている、方法。発明の詳細な説明本発明は、フィブリンゲルに、および好ましくはフィブリノーゲンにも結合し得る結合体を有する、生体マトリクスを提供する。フィブリノーゲンへのこの結合体の結合親和性は、フィブリンへのフィブリノーゲンの切断後に、フィブリンの結合に変換される。本発明に従う1つの結合体は、フィブリン/フィブリノーゲンに結合する結合部分、薬学的に活性な物質に可逆的に結合し得る物質捕捉部分、および薬学的に活性な物質を含む。本発明に従って、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、好ましくは共有結合で、物質捕捉部分に結合される。例えば、フィブリン/フィブリノーゲン結合タンパク質またはフィブリン/フィブリノーゲンに結合するその一部は、物質捕捉部分に、結合またはカップリングされ得る。このカップリングは、化学的リンカー、組換えDNA技術、ペプチド合成またはそれらの技術の組み合わせにより達成され得る。本発明の別の結合体は、介在する物質捕捉部分を有しない、薬学的に活性な物質に直接共有結合されたフィブリン/フィブリノーゲン結合部分を含む。この結合体により形成される貯蔵部は、フィブリンからのフィブリン/フィブリノーゲン結合部分の放出速度、および経時的なフィブリン凝塊の自然な溶解に基いて、薬学的に活性な物質の持続的な放出を提供する。この例において、その薬学的に活性な物質は、それがフィブリン/フィブリノーゲン結合部分に共有結合されたままである場合でさえ、その活性を保持する。フィブリン/フィブリノーゲン結合部分は、トロンビン、フィブロネクチン、細菌性のフィブリノーゲン結合タンパク質、塩基性繊維芽細胞増殖因子、インテグリン、組織プラスミノーゲン活性化因子、VEGF165、および少なくとも1つのフィブリン/フィブリノーゲン結合部分を示す類似のタンパク質等の、天然に存在する生理学的結合タンパク質から誘導され得る。さらなる実施形態においては、核酸、特にDNAが、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分として用いられ得る。このDNAは、コード機能を有する必要が無く、従って、ランダムな配列のものであり得るが、その配列内において可能性のある炎症性モチーフ特に、CpGモチーフを避けるように注意が払われる必要がある。本発明の目的のために、DNAは、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分として、任意の形態これは、一本鎖DNAまたは二本鎖DNA、直鎖状DNAまたは環状DNAを意味するで用いられる。本発明の結合体について、タンパク質は、それらの生理学的形態またはプロセシングされた形態のいずれかにて用いられ得る。例えば、そのような生理学的結合パートナーは、これらのタンパク質の少なくともフィブリン/フィブリノーゲン結合部分を提供するために、公知の生化学的技術によってプロセシングされ得る。あるいは、フィブリン/フィブリノーゲンに結合することが公知の部分はまた、組換えDNA技術によって提供され得る。多くのフィブリン/フィブリノーゲン結合タンパク質に対して、三次元構造が記載または提唱され、このことは、当業者に、本発明における使用のためのフィブリン/フィブリノーゲン結合に関連するこれらのタンパク質の部分を選択させ得る。フィブリン/フィブリノーゲンに対する結合親和性を有する他の物質は、そのような物質が、タンパク質もしくはタンパク質誘導体、またはファージディスプレイによる選択物である場合、上述のタンパク質の既知の三次元モデルに基づいて例えば、配列分析によって、これらの推定上のフィブリン/フィブリノーゲン結合部位について分析がされ得る。物質捕捉部分または直接結合される薬学的に活性な物質の選択は、本質的には、フィブリン貯蔵部により投与される薬学的に活性な物質に依存する。物質捕捉部分および薬学的に活性な物質の適切な組み合わせは、当該分野にて公知である。例えば、物質捕捉部分は、抗体、レセプター、またはその一部であり得、それらは、目的の薬学的に活性な物質を例えば、抗原またはリガンドとして特異的に認識し、そして可逆的に結合する。本明細書において、用語抗体は、定常ドメインおよび可変抗原結合ドメインを含む、任意のクラスの完全な抗体、ならびに、抗体の部分または抗体由来の分子例えば、フラグメントまたは組換え構築物を含む。実際に、そのような古典的抗体のほとんどの部分は、薬学的に活性な物質の結合を可能にする本質的な部分すなわち、可変結合領域が存在する限り、省略され得る。さらなる物質捕捉部分の例は、抗体結合分子のグループ例えば、プロテインAまたはプロテインGのような細菌タンパク質、あるいはマクロファージのFcレセプター、ならびにそれらのフラグメントまたは組換え構築物であり得る。本発明の好ましい実施形態に従って、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体の抗原結合領域は、物質捕捉部分として用いられる。さらに、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分特に、フィブリン結合タンパク質への、このようなモノクローナル抗体またはその部分のカップリングは、古典的なタンパク質化学によって確立され得る。本発明は、可能な全ての薬学的に活性な物質特に、それに対する適切な結合パートナーが既知である物質例えば、抗原/抗体、レセプター/リガンド、複合体パートナーに対して適応され得る。薬物として適用される結合パートナーは、個々の対応する結合パートナーを介するのみで結合体に結合され、その後者が、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分に共有結合カップリングされている。本明細書において、用語可逆的結合とは、物質捕捉部分と薬学的に活性な物質との間に親和性を与える静電力に基づく非共有結合をいい、それによって、薬学的に活性な物質は、長時間にわたって放出され、フィブリン凝塊から拡散する。本発明の結合体において用いられる、好ましい薬学的に活性な物質は、抗生物質、増殖因子、組織構成成分に対するレセプター、組織接着性物質、抗腫瘍剤、細胞接着性物質、核酸、血漿タンパク質、抗プロテーアーゼ、フィブリン溶解インヒビター、ホルモン、ヘパリノイド、創傷治癒物質、およびそれらの混合物である。薬学的に活性な物質が、本発明の結合体の一部として、フィブリン溶解インヒビター例えば、アプロチニンである場合、結合体が結合される凝塊は、凝塊から容易に拡散する遊離のアプロチニンを単に含む凝塊よりも、長く持続する。これらの物質は、直接的に薬学的に活性であり得るか、または別の薬学的に活性な物質の改善された作用を可能とし得るかのいずれかであり得、これらの物質は、本発明の薬物貯蔵部と同時にか、または別々に適用され得る。例えば、組織構成成分に対するレセプター、または組織接着性物質が適用され得、これは、フィブリノーゲンに基づく組織接着剤の改善された能力を可能とする。組織接着剤の接着特性を変化させる他の例は、本発明の結合体と共に提供され得る物質である。古典的組織接着剤と共に適用される場合、接着特性に対する影響を有するそのような薬学的に活性な物質の存在は、特定の組織または細胞に対するフィブリノーゲン組織接着剤の接着性または非接着性の能力に影響する。核酸または抗腫瘍剤等の他の物質もまた、特定のフィブリン/フィブリノーゲン基剤と共に適用され、所望の効果が必要とされる部位に、それらの物質の貯蔵部を形成し得る。例えば、X線または磁気共鳴誘導法MRIあるいは呈色法等の画像に基づく診断法に対して有用な物質もまた、本発明に従って用いられ得る。本発明の好ましい実施形態に従って、結合体または二官能性分子が、古典的組織接着系に組み込むために設計される。通常、そのような系は、フィブリノーゲンおよびトロンビン含有調製物その調製物は、適用部位でのフィブリンの形成を生じる、1成分もしくは2成分の接着剤に類似するまたは予め形成されたフィブリン調製物例えば、フィブリンフリースfleeceを含む。形成されたフィブリン凝塊またはフィブリンフリースは、例えば、創傷閉鎖または組織の接着を可能にする。この系における別の成分は、例えば、第XIII因子架橋剤として、フィブリン溶解インヒビター、などである例えば、FibrinSealinginSurgicalandNon-SurgicalFields、SchlagG、RedlH編、Vols1-9を参照のこと。フィブリン/フィブリノーゲン結合部分および物質捕捉部分は、好ましくは、リンカー物質特に、タンパク質化学において使用され、そして好ましく適用され得ることが証明されたリンカー物質によって共有結合される。この好ましい実施形態は、それらの部分の増強された可撓性が所望される場合に、特に適切である。本発明に従う結合体の薬学的に活性な形態は、薬学的に活性な物質を含むが、本発明はまた、薬物を有さない結合体にも関する。そのような裸の結合体は、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分および物質捕捉部分を含む結合体を、それに対して物質捕捉部分が設計された個々の薬物で充填することにより、薬学的に活性な形態へと容易に転換され得る。本発明の特定の実施形態は、適用される薬物がフィブリン/フィブリノーゲン含有部分を保存するように設計された、結合体に関する。本発明のこの局面に従って、物質捕捉部分は、省略され得る。また、結合体は、タンパク質化学、ペプチド合成および/または組換え技術によって、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分と薬学的に活性な物質を結合することによって例えば、直接の共有結合によってか、または適切なリンカー物質で結合させることによって設計され得る。また、これらの結合体は、薬学的に活性な物質を別に充填することを必要とせず、上記のような通常の組織接着系において用いられ得る。好ましいフィブリン/フィブリノーゲン結合の結合体は、VEGF165のC末端ドメインが、その分子のフィブリン結合能力を担うという本発明者の発見に基づく。本明細書中で、用語VEGF165のC末端ドメインは、米国特許第5,332,671号、図10aおよび10bFerraraおよびLeungにおいて示されたような、アミノ酸残基C104-R165をいう。VEGF165はさらに、Tischerら、J.Biol.Chem.1991266:11947-11954;Sahniら、Blood200096:3772-3778;およびHouckら、J.Biol.Chem.1992267:26031-26037において記載されている。この結合体のフィブリン結合ドメインは、本明細書中の図10において示されるような、エキソン5、7、および8によりコードされている天然のアミノ酸配列に限定されない。その得られた融合タンパク質のフィブリン結合特性は、VEGF165C末端ドメインにおける特定のアミノ酸残基の付加、除去、または変異によって、フィブリン貯蔵部からの放出速度を増加または減少させるために変更され得る。VEGF165はまた、そのC末端ドメインの最初に、天然のプラスミン切断部位を含む。従って、VEGF165のC末端ドメインは、フィブリン結合部分と薬学的に活性な物質との間の物質結合部分を必要とすることなく、薬学的に活性な物質を有する融合タンパク質を形成し得る。その結合体が、創傷部位にてフィブリン凝塊に組み込まれる場合、その創傷に入る患者の血漿中の天然のプラスミノーゲンは、プラスミンへと変換され、次いで、そのプラスミンは、薬学的に活性な物質を放出するために、融合タンパク質を切断し、凝塊からのその拡散を可能にする。放出のための別の機構は、フィブリンからのVEGF165C末端ドメインの解離速度に基づく;この機構に従って、この結合体全体は、凝塊から放出され、そして拡散し、薬学的に活性な物質が、凝塊の外側で、創傷部位にて働くことを可能とする。以下は、VEGF165のC末端部分に融合され得る薬学的に活性な物質の例である:レプチンFrankら、J.Clin.Invest.2000106:501-509;Sierra-Honigmannら、Science1998281:1683-1686、IL-8、MCP-1、およびPF-4等の、サイトカイン、増殖因子、および創傷治癒物質。マガイニン、デフェンシン、およびグラヌリシン等の抗生物質ペプチド。アプロチニンおよびヒトリポタンパク関連凝固インヒビターのKunitzドメインLACI-D1;Marklandら、Biochemistry199635:8045-8057等のフィブリン溶解インヒビター。このように、放出される薬学的に活性な物質は、特定の細胞型の増殖、移動、および分化を方向付けるように作用し、従って、このことが、創傷治癒および組織修復の間の新生血管形成を増強する。別の局面に従って、本発明は、フィブリノーゲンに基づく組織接着剤および本発明に従う結合体を備える、薬学的に活性な物質のための貯蔵部を形成するためのキットに関する。その結合体は、医療使用の前に混合され得るように準備された、別々の形態において提供され得る。フィブリノーゲンに基づく組織接着剤および本発明に従う結合体の既時使用混合物は、古典的組織接着剤について当該分野において既に公知であるような手段および方法を用いて特に、このような接着剤のフィブリノーゲン成分を用いて適用され得る。このフィブリノーゲン成分は、フィブリンへフィブリノーゲンをプロセシングする活性好ましくは、トロンビン調製物を含む成分と共に、周知の方法において混合され得る。従って、本発明に従うキットはまた、組織接着剤および結合体、ならびに必要に応じて、フィブリノーゲンからのフィブリンへのプロセシング活性を投与するための適切なデバイスを備え得る。このようなデバイスについての例は、EP0037393A、EP0315222A、EP0156098A、EP0210160A、およびEP0292472Aにおいて記載されており、これらは、参考として本明細書中に援用される。別の局面に従って、本発明は、薬学的に活性な物質の貯蔵部を提供するための方法に関し、その方法は、本発明に従う結合体を提供する工程、フィブリノーゲン調製物と共に、貯蔵部位にてこの結合体を投与する工程、このフィブリノーゲンをフィブリンにプロセシングさせる工程であって、これによって、フィブリン凝塊が形成される、工程、およびこのフィブリノーゲンまたは形成されたフィブリン凝塊へこの結合体を結合させる工程を包含する。フィブリンへのフィブリノーゲンのプロセシングは、投与部位に既に存在しているトロンビンか、または外因的に添加されたフィブリノーゲンプロセシング活性のいずれかによって実施され得る。トロンビンまたはトロンビン由来プロテアーゼ以外に、ストレプチラーゼ、プロテアーゼIIIおよび毒性のプロテアーゼ例えば、バクソトロピン等の他のプロテアーゼが、フィブリノーゲン分子を切断するために用いられ得る。フィブリン/フィブリノーゲンへのこの結合体の結合は、フィブリン凝塊の形成の後で起こり得る。しかし、本発明に従う結合体の結合がフィブリノーゲンレベルにて起こり得るように、より早い段階例えば、フィブリノーゲンプロセシング工程の間に、またはもっとも好ましくはさらに前にで、この結合プロセスを行わせることが好ましい。これは、貯蔵部全体にわたる均一な結合体の分散を有するフィブリン貯蔵体を生じる。一方、この結合体が、主としてフィブリン貯蔵部の表面に位置されることが意図される場合、この結合体の結合は、フィブリン凝塊の形成後に成されるべきである。本発明の別の局面は、本発明に従う結合体およびフィブリン例えば、適切なフィブリンマトリクスを含む、薬学的に活性な物質のための貯蔵部に関する。このような貯蔵部は、例えば、本発明に従う結合体のフィブリン網状構造基剤への投与によって得ることが可能である。本発明のなおさらに別の目的は、病理学的状態に羅患している患者を処置するための方法に関し、この病理学的状態は、薬学的に活性な物質で処置され得、この方法は、この患者に、フィブリノーゲンに基づく組織接着剤、および本発明に従う結合体の有効量を投与する工程を包含する。それによって、適切な放出特性を有する薬学的に活性な物質の貯蔵部が提供され、その貯蔵部は、この物質を連続的および別々に提供することを必要とせずに、この薬学的に活性な物質での患者の適切な処置を可能とする。ここで、本発明は、実施例および図面によって、より詳細に説明されるが、本発明は、これらの実施例および図面に限定されない。実施例本実施例において、任意の薬学的に活性な物質の例としての腫瘍壊死因子TNFを、市販のTNF抗体を介して、フィブリン結合物質にカップリングする。トロンビンおよびフィブロネクチンを、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分を有する物質の例として選択した。トロンビンおよびフィブロネクチンへの抗体のカップリングを、1-エチル-3-3-ジメチル-アミノプロピルカルボジイミドEDCを用いて達成した。この型の反応において、カップリング成分のカルボキシル基を、EDCにより活性化した;これらの活性化されたカルボキシル基は、他の成分のアミノ基と反応する。この部分の特性は、どの成分が最初に活性化されるかに依存して異なり得るので、可能性とバリエーションは、常に調査されてきた。以下の実施例において、結合体A-Bは、成分Aが、カルボキシル基で活性化された成分であり、そして成分Bが、そのアミノ基を介してカップリングされている、ということを意味する。成功したカップリングの証明および個々の結合親和性TNF-抗体、トロンビン/フィブロネクチン-フィブリンの検出を、サンドイッチ-ELISAを介して分析した。実施例1:トロンビンへのTNF抗体のカップリング市販のTNF抗体を、EDCを介してトロンビンにカップリングした。この結合体におけるカップリングおよび個々の結合親和性の証明は、サンドイッチ-ELISA図1を介して検出した。簡単には、マイクロタイタープレートを、フィブリノーゲンを用いてコートし、その後、複合体トロンビン-TNF抗体またはTNF抗体-トロンビンと共に、TNFと共に、二次TNF抗体と共に、そしてその二次抗体を認識する酵素結合体と共に、インキュベートした。この酵素は、無色の基質を、有色の化合物に変換し、この化合物は、その後、検出可能である。この基質のターンオーバーは、両方の成分TNF抗体およびトロンビンが、EDC反応によって共有結合でカップリングされ、そして両方の結合親和性が保存された場合のみ可能となる。トロンビン-TNF抗体およびTNF抗体-トロンビンは、この系において陽性反応を示す図2。コントロールとして用いられた、改変されていないTNF抗体は、フィブリノーゲンマトリクスにTNFを結合し得なかった。実施例2:フィブロネクチンへのTNF抗体のカップリング市販のTNF抗体を、EDCを用いて、フィブロネクチンにカップリングさせた。この結合体におけるカップリングの証明および個々の結合親和性の測定を、実施例1におけるように、サンドイッチELISAを介して実施した図3。フィブロネクチン-TNF抗体およびTNF抗体-フィブロネクチンは、この系において陽性反応を示した図4。コントロールとしてのTNF抗体およびフィブロネクチンの混合物は、フィブリノーゲンマトリクスへのTNFの低度の結合性のみを示した。実施例3:組織接着凝塊からのTNFの遅延された遊離フィブリノーゲンに基づく組織接着凝塊におけるTNFの効率的な遅延の証明を、フィブリンシーラントのフィブリノーゲンゲン成分への、実施例2において記載されたようなTNFおよびフィブロネクチン-TNF抗体の複合体の添加によって実施した。コントロール実験において、TNFならびにフィブロネクチンおよびTNF抗体の混合物を、このフィブリノーゲン成分に添加された。フィブリン凝塊は、このような改変されたフィブリノーゲン成分により生成され、そしてこのフィブリン凝塊を、凝集60分後にPBSに移した。次いで、凝塊を、37°Cにてインキュベートし、そしてPBS上清を、規定の期間にて、新しいPBSで置換した。これらの上清中のTNF含量を、検出した図5。12日後、凝塊を、ウロキナーゼによって溶解し、溶解物中のTNF含量を、検出した。組織接着剤のフィブリノーゲン成分へのフィブロネクチン-TNF抗体複合体の添加は、フィブロネクチン-TNF抗体混合物の添加と比較して、TNFの遊離の有意な遅延を生じた。これは、PBS上清中の、TNFの初期の遊離の減少によって1日目から3日目、およびPBSにおける12日間のインキュベーション後の凝塊溶解物中のより高いTNF含量によって示された図5。フィブリン凝塊は、PBS中でインキュベートしただけであり、そしてタンパク分解性消化に曝されなかったので、測定されたTNFの遊離は、主としてフィブリン凝塊からの拡散に起因した。プロテアーゼ例えば、ウロキナーゼの添加を伴うインキューベーションは、より長時間にわたる、TNFの連続的な遊離を生じる。実施例4:フィブロネクチンを介するアプロチニンの結合フィブリン結合アンカーこの場合においてはフィブロネクチンへの活性物質この場合においてはフィブリン溶解インヒビターの共有結合に基いて、フィブリン凝塊から周辺の媒体へのフィブリン溶解インヒビターの遅延された放出が、示され得る。フィブロネクチン-アプロチニン結合体を、上記のように形成した。この結合体を、フィブリン凝塊におけるその結合体の均一な分散を確保するために、トロンビンとの混合の前に、フィブリノーゲン成分中に溶解した。その凝塊を、リン酸緩衝化生理食塩水PBS中で、37°Cにてインキュベートした。PBS上清を数回交換し、そして凝塊の持続性を、視覚的に確認したか、またはPBS上清中のタンパク濃度を測定することによって定量した。アプロチニン-フィブロネクチン結合体は、同じ活性の結合体化されていないアプロチニンを補充したフィブリン凝塊と比較して、凝塊の持続性を増加した。この凝塊の持続性の増加は、結合体化されていないアプロチニンと比較して、凝塊からのPBSへのこの結合体の減少された放出によって起こり得る図6。実施例5:細菌性のフィブリン結合タンパク質fbeの結合フィブリン結合アンカーについての別の実施例は、streptococcusepidermidisの細菌タンパク質fbeである。このタンパク質を、活性部分としてグルタチオン-S-トランスフェラーゼGSTを有する融合タンパク質として発現させた。融合タンパク質fbe-GSTもしくはGST単独のいずれかを発現する細菌からの溶解物を、同じ活性のGSTを含むように調製し、そしてフィブリノーゲンまたはBSAをコートしたELISA-プレートに適用した。結合されたGSTを、抗GST抗体によって検出した。融合タンパク質fbe-GSTは、そのfbe-ドメインを介してフィブリノーゲンに特異的に結合する。この融合タンパク質は、非特異的なタンパク質-タンパク質の相互作用のためのコントロールとして働く、ウシ血清アルブミンBSAに結合しない。fbeドメインを欠く単独のGSTは、フィブリノーゲンには結合しない図7。実施例6:フィブリン/フィブリノーゲンアンカーとしてのDNADNAは、フィブリン/フィブリノーゲンに非常に強く結合する。従って、DNAの一部を、フィブリンシーラントマトリクスにおいて包理し、そしてそのフィブリン/フィブリノーゲンに対する親和性は、長時間にわたる、DNAの遅いが持続的な放出を導く。本発明の目的のために、DNAは、いずれの形態においてもこれは、一本鎖DNAまたは二本鎖DNA、直鎖状DNAまたは環状DNAを意味する、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分として好ましく用いられる。本実験のために、ビオチン化した一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド20bおよびビオチン化した二本鎖DNA700bを、合成した。ビオチン化したDNA分子を、ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼ結合体と混合し、親和性に基づく複合体を形成させた。この複合体を、フィブリノーゲンまたはBSAをコートしたELISAプレートに適用し、そして結合されたペルオキシダーゼ活性を測定した。ペルオキシダーゼは、フィブリン/フィブリノーゲン結合部分としてのDNAを介して、フィブリノーゲンをコートしたウェルに特異的に結合された。BSAへの結合は認められず、そしてDNAへのストレプトアビジン-ペルオキシダーゼの非特異的な結合に起因する擬陽性の結果を除去するために、ビオチン化していないDNAを用いて、コントロール実験を実施し、これは、シグナルを示さなかった図8aおよび図8b。実施例7:フィブリン/フィブリノーゲンアンカーとしてのトロンビントロンビンは、フィブリノーゲン切断活性およびフィブリン/フィブリノーゲン結合活性を有する。この2つの活性は、その分子における別々の部位に位置されている。本実験のために、ビオチン化したアルブミンを、それ自体=遊離の形態でか、またはトロンビン-PPACK=D-Phe-Pro-Arg-クロロメチルケトンアンカーを介して結合された=共有結合された形態かのいずれかの、フィブリン凝塊に混合した。ビオチンを、アルブミンの両方の形態の放出量を測定するためのマーカーとして用いた。図9において示されたように、共有結合されたアルブミンは、フィブリンシーラント凝塊において、4日間遅延され、一方、遊離のアルブミンは1日以内に放出された。実施例8:フィブリン結合組換え融合タンパク質図11は、本実施例のために生成された組換え融合タンパク質を示す配列番号1。この融合タンパク質のフィブリン結合部分である、VEGF165のC末端部分を、薬学的に活性な物質の一例である、レプチンに融合する。この融合タンパク質は、VEGF165由来の天然のプラスミン切断部位を含む。C146において、全長レプチンにおける最後の残基は、VEGF165のC末端ドメインにおける最初のシステインと重複する。レプチン-VEGF165融合タンパク質をコードするDNA構築物を、HindIIIおよびPacI制限部位を用いて、図12において示されるプラスミドに挿入した。次いで、そのプラスミドを、E.coliにトランスフェクトし、そして、この融合タンパク質を、この細菌によって発現させた。この融合タンパク質を、遺伝子工学の分野において周知の技術を用いて、この細菌から精製する。次いで、その融合タンパク質を、フィブリン凝塊へと組み込み、ここで、VEGF165のC末端部分は、その凝塊中のフィブリンに結合する。生じた凝塊は、創傷治癒のプロモーターであることが公知である、レプチンの持続的な放出のための貯蔵部を形成する。その凝塊が、創傷部位に位置された場合、その創傷に入る患者の血漿中の天然のプラスミノーゲンは、プラスミンに変換され、次いで、そのプラスミンは、融合タンパク質を切断し、それによって、レプチン部分を放出し、凝塊から拡散させ、治癒において作用する。放出のための別の機構は、フィブリンからのVEGF165C末端ドメインの解離速度に基づく;本機構に従って、その結合体全体は、放出され、そして凝塊から拡散し、凝塊の外側で、レプチン部分が、創傷部位にて作用することを可能にする。"