肥満症または糖尿病の治療、予防または軽減に好適な分子を同定するための、配列番号1、配列番号2もしくは配列番号4に示される核酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリヌクレオチドの使用。配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストの同定方法であって、候補分子を非ヒト動物に投与すること、および該動物が、野生型動物と比較して、体重の増加または脂肪率の増加を示すか否かを決定することを含む、前記方法。上記非ヒト動物が機能的なGpr100ポリペプチドを発現する、請求項2に記載の方法。上記非ヒト動物が野生型動物である、請求項2または3に記載の方法。上記非ヒト動物がげっ歯類である、請求項2、3または4に記載の方法。上記非ヒト動物がマウスである、請求項2~5のいずれか1項に記載の方法。上記決定が、高脂肪飼料または高カロリー飼料の給餌後の血清グルコースレベルの測定、グルコース耐性試験ならびに脂肪およびグルコース代謝のモニタリングを用いて行われる、請求項2~6のいずれか1項に記載の方法。個体における肥満症もしくは糖尿病の診断または肥満症もしくは糖尿病に対する感受性の決定に有用な指標を提供する方法であって、該個体由来のサンプルにおいて配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を有するGpr100ポリペプチドの発現パターンまたは発現レベルの変化を検出することを含む、前記方法。個体における肥満症もしくは糖尿病の診断または肥満症もしくは糖尿病に対する感受性の決定に有用な指標を提供する方法であって、該個体由来のサンプルにおいて配列番号1、配列番号2もしくは配列番号4に示される核酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリヌクレオチドにおける多型を検出することを含む、前記方法。上記候補分子が免疫グロブリンまたは抗体を含む、請求項1~9のいずれか1項に記載の方法または使用。上記免疫グロブリンまたは抗体が、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を有するGpr100ポリペプチドに特異的に結合できるものである、請求項10に記載の方法または使用。肥満症または糖尿病の治療または軽減のための、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストの同定方法における、機能的に破壊されている内在性Gpr100遺伝子を有するトランスジェニック非ヒト動物またはその単離した細胞もしくは組織の使用であって、前記Gpr100遺伝子は配列番号1、配列番号2もしくは配列番号4に示される核酸配列またはその一部あるいはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含む、前記使用。上記トランスジェニック非ヒト動物がGpr100遺伝子またはその一部に欠失を有する、請求項12に記載の使用。高脂肪飼料または高カロリー飼料の給餌後の血清グルコースレベルの測定、グルコース耐性試験または脂肪およびグルコース代謝のモニタリングによって測定した場合に、野生型動物と比較して、上記トランスジェニック非ヒト動物が体重の増加または脂肪率の増加を示す、請求項12または13に記載の使用。上記トランスジェニック非ヒト動物がマウスである、請求項12、13または14に記載の使用。上記トランスジェニック非ヒト動物が機能的に破壊されているGpr100遺伝子を含む、請求項12~15のいずれか1項に記載の使用。上記トランスジェニック非ヒト動物がGpr100遺伝子に欠失を含み、該Gpr100遺伝子は配列番号1、配列番号2もしくは配列番号4に示される核酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含む、請求項12~16のいずれか1項に記載の使用。肥満症または糖尿病用のモデルとしての、請求項12~16のいずれか1項に記載の非ヒト動物またはその単離した細胞もしくは組織の使用。個体における肥満症または糖尿病を治療するための医薬組成物の調製における、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を有するGpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストの使用。上記肥満症または糖尿病が、肥満もしくは体重増加の予防を含む肥満症、食欲抑制、代謝疾患、I型糖尿病およびII型疾患を含む糖尿病、ならびに関連障害および体重関連障害、障害性グルコース耐性、インスリン抵抗性症候群、症候群X、末梢神経障害、糖尿病性神経障害、糖尿病関連タンパク尿、高血糖、高脂血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症を含む脂質代謝障害、急性膵炎、循環器疾患、末梢血管疾患、高血圧症、心肥大、虚血性心疾患、高コレステロール血症、肥満症、および肥満または体重増加の予防を含む、請求項1~19のいずれか1項に記載の方法または使用。請求項1~20のいずれか1項に記載の方法または使用により同定された、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニスト。請求項21に記載のアゴニストまたはアンタゴニストを含む、肥満症または糖尿病を治療、予防または軽減するための医薬組成物。肥満症もしくは糖尿病またはそれらに対する感受性についての診断キットであって、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリペプチドまたはその一部、該Gpr100ポリペプチドに対する抗体、あるいはそれらをコードすることができる核酸のうちの1または複数を含む、前記キット。肥満症または糖尿病を患う個体を治療するための医薬組成物であって、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリペプチド、該Gpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを含む、前記医薬組成物。個体においてグルコース調節、脂肪代謝または体重増加をモジュレートするための医薬組成物であって、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列またはそれらと少なくとも90の配列同一性を有する配列を含むGpr100ポリペプチド、該Gpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを含む、前記医薬組成物。このように、Gタンパク質共役型受容体は、治療標的として、確立、証明された歴史を有する。明らかに、機能不全または疾患を防止、寛解または治すのに機能しうるさらなる受容体を同定および特徴付けることが必要とされており、かかる機能不全または疾患としては、限定はしないが、肥満症肥満または体重増加の予防を含む、食欲抑制、脂質代謝障害高脂血症、異リポイド血症dyslipoidemiaおよび高トリグリセリド血症を含む、鬱および不安、糖尿病および関連障害限定はしないが、I型糖尿病、II型糖尿病、障害性グルコース耐性、インスリン抵抗性症候群、症候群X、高血糖、急性膵炎、循環器疾患、高血圧症、心肥大、および高コレステロール血症が挙げられるが挙げられる。Gpr100関連疾患とりわけ、糖尿病および肥満症を治療、予防または軽減するのに好適な分子を同定するための方法であって、候補分子が、Gpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストであるか否かを決定することを含み、かかるGpr100ポリペプチドは、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも90同一である配列を含む、方法である。好ましくは、Gpr100ポリペプチドは、配列番号1、配列番号2もしくは配列番号4に示される核酸配列、またはそれらと少なくとも90同一である配列によってコードされる。好ましくは、本方法は、候補分子のGpr100ポリペプチドへの曝露、およびその曝露による、細胞内カルシウムレベルの変化を検出することを含む。好ましくは、本方法は、非ヒト動物またはその一部好ましくは、細胞、組織または器官を候補分子に曝すこと、およびその接触により、その動物の生物学的パラメータが、変化するか否かを測定することを含む。好ましくは、生物学的パラメータが、血清グルコースレベル、体重、グルカゴンレベル、脂肪率からなる群より選択される。本発明の第2の態様に従って、グルコース調節またはGpr100関連疾患、好ましくは、肥満症または糖尿病のモデルとして、機能的に破壊されている内在性Gpr100を有するトランスジェニック非ヒト動物、またはその単離された細胞もしくは組織の使用が提供される。好ましくは、このトランスジェニック非ヒト動物は、機能的に破壊されているGpr100遺伝子を含み、かかるGpr100遺伝子は好ましくは、Gpr100遺伝子またはその一部に欠失を含む。好ましくは、このトランスジェニック非ヒト動物は、野生型動物と比べて、血清グルコースレベルの減少、体重の増加、脂肪率の増加といった表現型のうちの1または複数において変化を示す。好ましくは、このトランスジェニック非ヒト動物は、げっ歯類であり、好ましくはマウスである。本発明の第3の態様に従って、本願発明者らは、Gpr100関連疾患、好ましくは、肥満症または糖尿病を治療、予防するための、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも90同一である配列を含むGpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するために、かかるGpr100ポリペプチドの使用を提供する。本発明の第4の態様として、Gpr100関連疾患、好ましくは、肥満症または糖尿病を治療、予防するための、配列番号1、配列番号2もしくは配列番号4に示される核酸配列、またはそれらと少なくとも90同一である配列を含むGpr100ポリヌクレオチドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するために、かかるGpr100ポリヌクレオチドの使用を提供する。本発明の第5の態様に従って、本願発明者らは、Gpr100関連疾患、好ましくは、糖尿病または肥満症を治療、予防または軽減するのに使用するためのGpr100ポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するための方法における、非ヒト動物またはその一部好ましくは、細胞、組織もしくは器官の使用を提供する。第6の態様において、本発明は、Gpr100関連疾患、好ましくは、肥満症または糖尿病を治療、予防または軽減するための、前記請求項のいずれかに記載される方法または使用によって同定されたアゴニストまたはアンタゴニストの使用を提供する。本発明の第7の態様において、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも90同一である配列を含む、個体のGpr100ポリペプチドの活性をモジュレートすることによって、この個体のグルコース調節、脂肪代謝または体重増加をモジュレートする方法を提供する。好ましくは、この方法は、個体にGpr100のアゴニストまたはアンタゴニストを投与することを含む。本発明の第8の態様に従って、本願発明者らは、Gpr100関連疾患に罹患する個体の治療方法を提供し、この方法は、個体におけるGpr100ポリペプチドの活性または量を増加または減少させることを含む。好ましくは、この方法は、Gpr100ポリペプチド、Gpr100ポリペプチドのアゴニストまたはGpr100のアンタゴニストを個体に投与することを含む。本発明の第9の態様に従って、本願発明者らは、Gpr100関連疾患の診断方法を提供し、この方法は、a疾患に罹患しているか、罹患していると思われる動物におけるGpr100ポリペプチドの発現レベルまたは発現パターンを検出すること、およびb正常な動物におけるその発現レベルまたは発現パターンと比較すること、を含む。本発明の第10の態様に従って、Gpr100関連疾患の診断方法を提供し、この方法は、疾患に罹患していると思われる個体において、上記のような生物学的パラメータの変化を検出することを含む。本発明の第11の態様において、本願発明者らは、Gpr100関連疾患、好ましくは、肥満症または糖尿病に対する感受性についての診断キットを提供し、かかる診断キットは、Gpr100ポリペプチドもしくはその一部、Gpr100ポリペプチドに対する抗体、またはそれらをコードできる核酸のうちの1または複数種を含む。好ましくは、Gpr100関連疾患は、以下からなる群より選択される:肥満症または体重増加、食欲抑制、代謝疾患、糖尿病I型糖尿病およびII型疾患を含む、ならびに関連障害および体重関連障害、障害性グルコース耐性、インスリン抵抗性症候群、症候群X、末梢神経障害、糖尿病性神経障害、糖尿病関連タンパク尿、脂質代謝障害、高血糖、高脂血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症を含む、急性膵炎、循環器疾患、末梢血管疾患、高血圧症、心肥大、虚血性心疾患、高コレステロール血症、肥満症および肥満症または体重増加の予防。配列表配列番号1は、ヒトGpr100のcDNA配列を示す。配列番号2は、配列番号1由来のオープンリーディングフレームを示す。配列番号3は、ヒトGpr100のアミノ酸配列を示す。配列番号4は、マウスGpr100のcDNAのオープンリーディングフレームを示す。配列番号5は、マウスGpr100のアミノ酸配列を示す。配列番号6-19は、ベクター構築物プロモーターおよびノックアウトベクター配列を示す。Gpr100GPCR本願発明者らは、Gタンパク質共役型受容体GPCR、とりわけオーファンGタンパク質共役型受容体本願発明者らは、Gpr100GPCRと示す、その相同体、変異体または誘導体、ならびにそれらの、Gpr100関連疾患例えば、糖尿病および肥満症を含む疾患の治療、軽減または診断における使用を記載する。本発明のこの実施形態および他の実施形態を、以下にさらに詳細に記載する。Gpr100はまた、Gpcr102およびリラキシン-3受容体-2としても知られており、Gタンパク質共役型受容体ファミリーの他のタンパク質と構造的に関連するヒトGpr100をコードする増幅されたcDNA産物の配列決定の結果によって示される。配列番号1のcDNA配列は、配列番号3に示される374個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム配列番号2、ヌクレオチド番号112~1039を含む。ヒトGpr100は、ヒト染色体1q22上にあることがわかっている。本発明の実施には、特に断りのない限り、化学、分子生物学、微生物学、組換えDNAおよび免疫学の従来技術を使用し、かかる技術は当業者の能力内である。このような技術は、文献中に説明されている例えば、JSambrookEFFritschおよびTManiatis1989MolecularCloningALaboratoryManual第2版Books1-3ColdSpringHarborLaboratoryPressAusubelFMら1995および定期的補遺CurrentProtocolsinMolecularBiologych913and16JohnWileySonsNewYorkNYBRoeJCrabtreeおよびAKahn1996DNAIsolationandSequencingEssentialTechniquesJohnWileySonsJMPolakandJamesO’DMcGee1990InSituHybridizationPrinciplesandPracticeOxfordUniversityPressMJGait編集者1984OligonucleotideSynthesisAPracticalApproachIrlPressDMJLilleyおよびJEDahlberg1992MethodsofEnzymologyDNAStructurePartASynthesisandPhysicalAnalysisofDNAMethodsinEnzymologyAcademicPressUsingAntibodiesALaboratoryManualPortableProtocolNOIbyEdwardHarlowDavidLaneEdHarlow1999ColdSpringHarborLaboratoryPressISBN0879695447AntibodiesALaboratoryManualbyEdHarlow編集者DavidLane編集者1988ColdSpringHarborLaboratoryPressISBN08796931421855LarsIngeLarssonImmunocytochemistryTheoryandPracticeCRCPressincBacaRatonFlorida1988ISBN0849360781JohnDPound編ImmunochemicalProtocolsvol80intheseriesMethodsinMolecularBiologyHumanaPressTotowaNewJersey1998ISBN0896034933HandbookofDrugScreeningRamakrishnaSeethalaPrabhavathiBFernandes編集2001NewYorkNYMarcelDekkerISBN0824705629LabRefAHandbookofRecipesReagentsならびにOtherReferenceToolsforUseattheBenchJaneRoskamsおよびLindaRodgers編集2002ColdSpringHarborLaboratoryISBN0879696303ならびにTheMerckManualofDiagnosisandTherapy第17版、BeersMHおよびBerkowR編ISBN0911910107JohnWileySons。これらの一般的なテキストの各々は、参考文献として本明細書中に援用される。Gpr100の発現プロファイルGpr100cDNAのポリメラーゼ連鎖反応PCR増幅は、小腸、肺、腎臓、白血球および脾臓において、Gpr100の発現量が異なることを検出する。Gpr100GPCRの発現プロファイルを、図2に示す。配列番号1のGpr100cDNAを用いて、BLASTNによってヒトESTデータ源を検索した場合、骨髄BF90022起源のライブラリーに由来するcDNAにおいて、同一性が見出される。このことは、Gpr100が、これらの正常なまたは異常な組織において発現されることを示す。したがって、Gpr100ポリペプチド、核酸、プローブ、抗体、発現ベクターおよびリガンドは、上記組織および他の組織におけるGpr100GPCRの過剰発現、過小発現および異常な発現に関連する疾患についての、検出、診断、治療および他のアッセイに有用である。本発明のこの実施形態および他の実施形態を、以下にさらに詳細に記載する。Gpr100GPCR関連疾患本明細書中に記載される方法および組成物によると、Gpr100GPCRは、疾患領域を治療および診断するのに有用である。これらの疾患を、便宜上Gpr100関連疾患という。従って、Gpr100欠損動物は、Gpr100関連疾患のモデルとして用いることができる。Gpr100、その断片、その相同体、変異体および誘導体、ならびにモジュレーター特にアゴニストおよびアンタゴニストを含むを用いて、Gpr100関連疾患を診断または治療することができる。特に、Gpr100は、その機能に作用しうる分子のスクリーニングに用いることができ、かかる分子はGpr100関連疾患を治療するために用いることができる。本願発明者らは本明細書中に、ヒトGpr100が、ヒト染色体1q22上に位置することを示す。従って、特定の実施形態において、Gpr100GPCRを用いて、疾患を治療または診断することができ、かかる疾患は、この遺伝子座、染色体のバンド、領域、アームまたは同一染色体上に位置する。Gpr100GPCRの染色体位置すなわち、ヒト染色体1q22と同一の遺伝子座、染色体のバンド、領域、アームまたは染色体と関連しているものとして決定された既知の疾患としては、以下のものが挙げられるカッコ内は位置てんかん1q21、ゴーシェ病1q21、リンパ腫進行1q22、CharcotMarieTooth病1B型1q22、先天性低有髄化神経障害1q22、および家族性混合型高脂血症に対する感受性1q22-q23。従って、好ましい実施形態によると、Gpr100GPCRを用いて、てんかん、ゴーシェ病、リンパ腫進行、CharcotMarieTooth病1B型、先天性低有髄化神経障害、および家族性混合型高脂血症に対する感受性を、本明細書中に記載される手段によって、診断または治療することができる。Gpr100を欠損したノックアウトマウスは、実施例に示されるような表現型の範囲を示す。要約すると、実施例に記載される実験は、II型糖尿病および肥満症へのGpr100受容体の関与を示す。Gpr100欠損マウスは、GTT、インスリン抑制検査ISTおよびグルコース刺激インスリン分泌検査GSISTを含む処置を受けた。II型糖尿病に見られるようなグルコース不耐性は、インスリンに応答して、筋肉、脂肪もしくは肝臓細胞がグルコースを取り込むことができないインスリン非感受性、または一般的に膵臓β細胞の機能不全により生じるインスリン欠乏のいずれか、あるいはその両方より生じうる。これらの検査は、グルコースの代謝および/または貯蔵、外因性インスリンに対する血中グルコースの感受性およびグルコースに応答したインスリン分泌に関するマウスの能力を測定する。これらの検査はまた、糖尿病および肥満症に関連する他の観察事項例えば、食物摂取、代謝率、呼吸交換率、活性レベル、体脂肪組成、血清化学パラメータ例えば、レプチン、および関連器官の組織学を見るためのものである。実施例は、Gpr100変異動物が、一晩の断食による代謝ストレスの後、重篤な低血糖を示すことを示す。これは、食物の欠乏から6時間後に明らかとなる。従って、Gpr100は、グルコースの調節に関与し、そのためGpr100欠損動物は、グルコース調節、特にグルコース調節に欠陥のある疾患例えば、糖尿病についてのモデルとして用いることができる。Gpr100を用いて、その機能のモジュレーターをスクリーニングしうる。このようなモジュレーターは、糖尿病などの疾患に罹患している動物に投与することができる。一般的に、本願発明者らは、個体の血中糖レベルを、低下させるための方法を開示し、これは好ましくは糖尿病を治療するためのものであって、個体におけるGpr100のレベルまたは活性を減少させることを含む。本明細書中で述べたように、これは、Gpr100の発現をダウンレギュレートすることによって、またはGpr100に対するアンタゴニストを用いることによって達成できる。実施例はまた、変異体が、グルコースに対する正常な耐性を有し、グルカゴンレベルの有意な変化を示さないことを示す。低血糖の表現型と合わせて考えると、これらの結果は、変異動物が、燃料産生のための脂肪酸酸化に切り換える能力に欠損を有することを示唆する。従って、特に、Gpr100欠損動物は、飢餓時に、燃料産生のために脂肪酸酸化に切り換えることにおける欠陥が、要素または原因である疾患のモデルとして用いることができる。Gpr100を、その機能に作用しうる分子をスクリーニングするために用いることができ、かかる分子は、そのような疾患を治療するために用いることができる。さらに、実施例3は、断食状態の後、年齢および性別が一致している対照マウスと比べて、ホモ接合変異体マウスが、白色脂肪組織の増加および脂肪細胞サイズの増大を示したことを示す。従って、Gpr100は、肥満の調節に関与し、そのためGpr100欠損動物は、肥満のモデルとして用いることができる。Gpr100、その断片、それらの相同体、変異体および誘導体、ならびにモジュレーター特にアゴニストおよびアンタゴニストを含むを用いて、肥満症を診断または治療することができる。特に、Gpr100は、その機能に作用しうる分子のスクリーニングに用いることができ、かかる分子は、肥満症を治療するのに用いることができる。一般に、本願発明者らは、個体の体脂肪を減少させるための方法を開示し、この方法は好ましくは肥満症を治療するためのものであり、個体のGpr100のレベルまたは活性を増加させることを含む。本明細書中で述べたように、この方法は、Gpr100の発現をアップレギュレーションするか、またはGpr100に対するアゴニストを用いることによって達成できる。Gpr100関連疾患Gpr100関連疾患は以下のいずれかを含む:肥満または体重増加の予防を含む肥満症、食欲抑制、代謝疾患、糖尿病I型糖尿病、およびII型疾患ならびに関連障害および体重関連障害、障害性グルコース耐性、インスリン抵抗性症候群、症候群X、末梢神経障害、糖尿病性神経障害、糖尿病関連タンパク尿、脂質代謝障害高血糖、高脂血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症を含む、急性膵炎、循環器疾患、末梢血管疾患、高血圧症、心肥大、虚血性心疾患、高コレステロール血症、肥満症および肥満または体重増加の予防。上記のように、Gpr100GPCRを用いて、これら特定疾患のいずれかを、本明細書中に記載される方法および組成物のいずれかを用いて、診断および/または治療することができる。さらに、Gpr100ノックアウトが、食欲および水の摂取を抑制し、そのためGpr100機能をモジュレートできる化合物を、栄養補助製品として、または食事制限および減量プログラムに用いることが可能であったことを示した。本願発明者らは特に、上に挙げた特定の疾患を治療または診断するために、核酸、Gpr100GPCR核酸を含むベクター、ポリペプチドそれらの相同体、変異体または誘導体を含む、医薬組成物、宿主細胞、ならびにGpr100GPCR核酸および/またはポリペプチドを含むトランスジェニック動物の使用を考察する。さらに、本願発明者らは、Gpr100GPCRと相互作用するか、またはGpr100GPCRに結合できる化合物好ましくはGpr100GPCRのアンタゴニスト、好ましくは細胞内の環状AMPの内在性レベルを低下させることができる化合物、Gpr100GPCRに対する抗体、ならびにこれらの製造方法または同定方法を、上に述べた特定の疾患、および障害もしくは状態を診断または治療するのに使用することを考察する。特に、本願発明者らは、これらの化合物、組成物、分子などのいずれかを、特定疾患の治療または予防用ワクチンの製造に用いることを含む。本願発明者らはまた、個体における特定疾患を検出するための診断キットを開示する。Gpr100GPCRを用いて治療可能または診断可能な、上記またはさらなる特定疾患を同定するための連鎖地図の作成方法は、当該分野で公知であり、また本明細書中のどこかに記載されている。グルコース調節グルコースは、全ての器官の適切な機能および生存を確実にするために必要なものである。低血糖が細胞死を生じるが、慢性的な高血糖もまた、組織または組織の損傷を生じうる。血漿グルコースはわずかな範囲通常4~7mMで残存し、小腸からのグルコース吸収、肝臓による産生、ならびに末梢組織による摂取および代謝との間のバランスによって制御されている。食後などの、グルコースの増加した血漿レベルに応答して、膵臓のランゲルハンス島のβ細胞は、インスリンを分泌する。その後、インスリンは筋肉および脂肪組織に作用し、これらの細胞へのグルコースの取り込みを刺激し、そして肝臓細胞においてグルコースの産生を阻止する。さらに、インスリンはまた、細胞の増殖および分化を刺激し、脂質生合成、グリコゲンおよびタンパク質の合成を刺激し、脂肪分解、グリコゲン分解およびタンパク質分解を阻害することによって、脂肪、肝臓および筋肉における基質の貯蔵を促す。グルコースの血漿レベルが減少すると、膵臓のα細胞はグルカゴンを分泌し、次にこれは肝臓において解糖を刺激し、血流へグルコースを放出する。糖尿病および肥満症は、当該分野で周知である疾患である。それぞれの大まかな説明は以下のとおりである。糖尿病糖尿病は、炭水化物および脂質の代謝が、インスリンによって不適切に調節されている状態と定義される。主要な2つの型の糖尿病が同定されており、それはI型およびII型である。I型糖尿病は、それほど蔓延している型ではなく、5~10の糖尿病患者が罹患している。膵臓ランゲルハンス島のインスリン産生β細胞の自己免疫性の破壊によって生じると考えられる。一般的にインスリンの外生投与によって、病態生理を緩和する。II型糖尿病は、最も一般的な疾患形態であり、おそらく、インスリンの分泌および作用機構における欠損の組合せによって生じる。I型およびII型の両方の型は、同様の合併症を伴うが、別々の病態生理である。第1段階のII型糖尿病は、正常な循環濃度のインスリンに対する筋肉および/または他の器官の不全によって特徴付けられる。これは一般に、肥満症、坐位の生活習慣、および/または遺伝的素因と関連している。引き続いて、膵臓β細胞からのインスリン分泌が増加し、かかる状態は高インスリン血症と呼ばれる。最終的に、膵臓β細胞は分泌増加を抑えることができず、障害性グルコース耐性、慢性高血糖、および組織の損傷を生じうる。血中グルコースおよび代謝の調節に関与する複合的なシグナリング経路は、異常なグルコース代謝の症状例えば、II型糖尿病または肥満症を治療するための、いくつかの潜在的な標的を提供する。肥満肥満は、少なくとも3900万人のアメリカ人全成人の4分の1以上および子供の約5人に1人が罹患している疾患である。毎年、米国では肥満によって、少なくとも300000人を超える死亡を生じ、1000億ドル以上の費用が国にかかる。過去10年間にわたって、肥満である米国人の割合は、25から32に増加した。肥満は、BodyMassIndexBMIによって測定され、かかるBMIは、ある人が、肥満または過体重であるか決定するために用いられる数学的な計算である。BMIは、ある人の体重kgをその人の身長mの二乗で割ることによって算出される。BMIが30またはそれ以上であれば、肥満と考えられ、BMIが25~299であれば、過体重と考えられる。しかし、この診断基準は、普通よりも筋肉量が多く、体脂肪が少ない人々例えば、スポーツ選手については当てはまらない。7000万人を超えるアメリカ人が、過体重であると考えられる。健康問題限定はしないが、循環器疾患、血圧、II型糖尿病、高コレステロール、痛風、特定の型の癌、および骨関節炎が挙げられるは、過体重状態および肥満と関連する。Gpr100に対する同一性および類似性Gタンパク質共役型受容体SALPRソマトスタチンおよびアンジオテンシン様ペプチド受容体。同一性14132243、ポジティブ19432259。pfamのHMM構造予測ソフトウェアhttpwwwsangeracukSoftwarePfamsearchshtmlを用いたGpr100ポリペプチド配列番号3の分析によって、Gpr100ペプチドが、7TM-1構造種のGPCRであることを確認した図1を参照のこと。ヒトGpr100GPCRのマウス相同体をクローン化し、その核酸配列およびアミノ酸配列を、配列番号4および配列番号5として、それぞれ示す。配列番号4のマウスGpr100GPCRcDNAは、ヒトGpr100GPCR配列配列番号2と高程度の同一性を示すが同一性57169382、一方マウスGpr100GPCRのアミノ酸配列配列番号5は、ヒトGpr100GPCR配列番号3と高程度の同一性および類似性を示す同一性23537962、ポジティブ26437969。したがって、ヒトおよびマウスのGpr100GPCRは、Gタンパク質共役型受容体GPCRの大きなファミリーのメンバーである。Gpr100GPCRポリペプチド本明細書中で用いられる場合、Gpr100GPCRポリペプチドという用語は、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはその相同体、変異体もしくは誘導体をいうものと意図される。好ましくは、このポリペプチドは、配列番号3に示される配列の相同体、変異体または誘導体であるか、またはそれらを含む。ポリペプチドとは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合すなわち、ペプチドアイソスターによって互いに結合した2またはそれ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質をいう。ポリペプチドとは、短鎖一般的に、ペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーとして示されると長鎖一般に、タンパク質として示されるの両方をいう。ポリペプチドは、20遺伝子でコードされるアミノ酸以外のアミノ酸を含みうる。ポリペプチドは、天然の処理例えば、翻訳後プロセッシング、または当該分野で周知である化学修飾技術のいずれかによって修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は、基本的なテキスト、より詳細な研究書、および多くの研究文献に十分に記載されている。修飾は、ポリペプチドのいずれかの位置ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノ末端またはカルボキシ末端を含むに生じうる。同じ型の修飾が、所定のポリペプチドのいくつかの部位において、同程度または様々な程度で存在しうることがわかる。また、所定のポリペプチドは、多数の型の修飾を含みうる。ポリペプチドは、ユビキチン化によって分岐されえ、また分岐を有しても、有していなくても良い環状でありうる。環状、分岐、および分岐環状ポリペプチドは、翻訳後の天然のプロセスによって生じても、合成法によって作製してもよい。修飾としては、アセチル化、アシル化、ADP-リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ-カルボキシル化、グリコシル化、GPIアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白分解的プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、トランスファーRNAによって仲介されるタンパク質へのアミノ酸付加例えば、アルギニン化およびユビキチン化が挙げられる。例えば、ProteinsStructureandMolecularProperties第2版TECreightonWHFreemanandCompanyNewYork1993およびWoldFPosttranslationalProteinModificationsPerspectivesandProspectspgs112inPosttranslationalCovalentModificationofProteinsBCJohnson編AcademicPressNewYork1983Seifterら、AnalysisforproteinmodificationsandnonproteincofactorsMethEnzymol1990182626-646およびRattanらProteinSynthesisPosttranslationalModificationsandAgingAnnNYAcadSci199266348-62を参照のこと。本願明細書との関連において、変異体、相同体、誘導体または断片という用語は、配列からの、または配列に対する1または複数のアミノ酸の置換、変異、改変、置換replacement、欠失または付加のいずれかを含む。特に断りのない限り、Gpr100およびGpr100GPCRとは、Gpr100の変異体、相同体、誘導体および断片などを示すものを含む。好ましくは、Gpr100に用いる場合、得られたアミノ酸配列は、GPCR活性を有し、より好ましくは、配列番号3または配列番号5に示されるGpr100GPCRと少なくとも同一の活性を有する。特に、相同体という用語は、GPCR活性を有する得られたアミノ酸配列を与える構造および/または機能に関する同一性も含む。配列同一性つまり、類似性については、好ましくは、少なくとも70、より好ましくは少なくとも75、より好ましくは少なくとも85、さらにより好ましくは少なくとも90の配列同一性を有する。より好ましくは、少なくとも95、より好ましくは少なくとも98の配列同一性を有する。これらの用語はまた、Gpr100GPCR核酸配列の対立遺伝子変異体であるアミノ酸由来のポリペプチドを含む。Gpr100GPCRなどの受容体の受容体活性または生物学的活性について参照される場合、これらの用語は、Gpr100受容体の代謝または生理学的機能同様の活性もしくは改善された活性または望ましくない副作用が少ないそれらの活性を含むをいうものと意図される。さらに、Gpr100受容体の抗原性活性および免疫原性活性が含まれる。GPCR活性の例、およびこれらの活性を分析および定量する方法は、当該分野で公知であり、本明細書中のどこかに詳細に記載される。本明細書中で用いられる場合、欠失とは、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列のいずれかにおける変化として定義され、かかる変化において、1または複数のヌクレオチド残基またはアミノ酸残基をそれぞれ、欠いている。本明細書中で用いられる場合、挿入または付加とは、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における変化であり、天然の物質と比べて、1または複数のヌクレオチド残基またはアミノ酸残基がそれぞれ付加されることによって生じる。本明細書中で用いられる場合、置換とは、1または複数のヌクレオチドまたはアミノ酸が、異なるヌクレオチドまたはアミノ酸によってそれぞれ交換されることによって生じる。Gpr100ポリペプチドはまた、アミノ酸残基の欠失、挿入または置換であって、サイレント変化を生じたり、機能的に等価であるアミノ酸配列を生じたりするものを有しうる。意図的なアミノ酸置換を、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および/または両親媒性の性質における類似性に基づいて行いうる。例えば、負電荷のアミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられ、正電荷のアミノ酸としては、リジンおよびアルギニンが挙げられ、そして同様の親水性の値を有する無電荷極性のヘッド基を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン、およびチロシンが挙げられる。保存的置換を、例えば、以下の表に従って行うことができる。第2列の同一ブロック内、好ましくは第3列の同じ行のアミノ酸を、互いに置換することができる。Gpr100ポリペプチドはさらに、一般的にN末端またはC末端、好ましくはN末端に、異種性アミノ酸配列を含むことができる。異種性配列は、細胞内または細胞外のタンパク質のターゲティングに作用する配列を含むことができる例えば、リーダー配列。異種性配列はまた、Gpr100ポリペプチドの免疫原性を高めるか、ならびに/またはポリペプチドの同定、抽出および/もしくは精製を容易にする配列を含むことができる。特に好ましい別の異種性配列は、ポリアミノ酸配列例えば、ポリヒスチジンであり、これは好ましくはN末端である。少なくとも10アミノ酸、好ましくは少なくとも17アミノ酸であるが50アミノ酸未満のポリヒスチジン配列が、特に好ましい。Gpr100GPCRポリペプチドは、成熟型タンパク質の形態であっても、融合タンパク質などの大きなタンパク質の一部であっても良い。しばしば、さらなるアミノ酸配列を含むことが有利であり、かかるさらなるアミノ酸配列は、分泌配列もしくはリーダー配列、プロ配列、精製を助ける配列複数のヒスチジン残基など、または組換え製造中の安定性に必要とされるさらなる配列を含む。Gpr100ポリペプチドは、既知の技術を用いた組換え法によって、有利に作製する。しかし、これらは、当業者に周知である技術を用いた合成法によって作製できる例えば、固相合成。Gpr100ポリペプチドはまた、例えば、抽出および精製を助けるための融合タンパク質として製造できる。融合タンパク質のパートナーの例としては、グルタチオン-S-トランスフェラーゼGST、6×His、GAL4DNA結合ドメインおよび/または転写活性化ドメインならびにβ-ガラクトシダーゼが挙げられる。さらに、融合タンパク質パートナーと目的のタンパク質配列の間にタンパク質分解性切断部位例えば、トロンビン切断部位を含め、融合タンパク質配列の除去を可能とすると便利でありうる。好ましくは融合タンパク質は、目的配列のタンパク質の機能を妨げない。Gpr100ポリペプチドは、実質的に単離された形態でありうる。この用語は、天然の状態から人の手により変えられていることをいうものと意図される。単離された組成物または物質が、天然に存在する場合、その元の環境から変えるか、もしくは取り出されるか、またはその両方が行われている。例えば、生きた動物に天然に存在するポリヌクレオチド、核酸またはポリペプチドは単離されたものではないが、しかし、その天然の状態において共存する物質から分離されたその同じポリヌクレオチド、核酸またはポリペプチドは、単離されたものである単離されたという用語が本明細書中で用いられる場合。しかし、Gpr100GPCRタンパク質は、タンパク質の意図される目的を妨げない担体または希釈剤と混合されえ、それでも実質的に単離されたものとみなされることがわかるであろう。Gpr100ポリペプチドはまた、実質的に精製された形態でありえ、その場合、調製物中にタンパク質を一般に含み、その調製物中の90以上例えば、95、98または99のタンパク質がGpr100GPCRポリペプチドである。本明細書はまた、Gpr100ポリペプチドの一部を含むペプチドに関する。Gpr100GPCRの断片およびその相同体、変異体または誘導体を含む。ペプチドは、2~200アミノ酸、好ましくは4~40アミノ酸の長さでありうる。ペプチドは、本明細書中に開示されるGpr100GPCRポリペプチドを、例えば、好適な酵素トリプシンなどを用いて消化したものに由来しうる。あるいは、ペプチド、断片などを、組換え法または統合的に合成することによって作製しうる。ペプチドという用語は、当該分野で公知である様々な合成ペプチド変異体例えば、レトロインベルソretroinversoDペプチドを含む。ペプチドは、抗原決定基および/またはT細胞エピトープでありうる。ペプチドは、invivoで免疫原性でありうる。好ましくはペプチドは、invivoにて中和抗体を誘導することができる。異なる種に由来するGpr100GPCR配列を整列させることによって、アミノ酸配列のどの領域が、異なる種間で保存されており相同領域そしてどの領域が、異なる種間で変化しているか非相同領域を決定することが可能である。そのため、Gpr100ポリペプチドは、相同領域の少なくとも一部に相当する配列を含むことができる。相同領域は、少なくとも2種間で高程度の相同性を示す。例えば、相同領域は、上記検査を用いて、アミノ酸レベルで少なくとも70、好ましくは少なくとも80、より好ましくは少なくとも90、さらにより好ましくは少なくとも95の同一性を示す。相同領域に相当する配列を含むペプチドを、以下にさらに詳細に説明するように治療ストラテジーに用いることができる。あるいは、Gpr100GPCRペプチドは、非相同領域の少なくとも一部に相当する配列を含むことができる。非相同領域は、少なくとも2種間で低度の相同性を示す。Gpr100GPCRポリヌクレオチドおよび核酸本開示は、Gpr100ポリヌクレオチド、Gpr100ヌクレオチドおよびGpr100核酸、これらの製造方法、使用などを含む本明細書中のどこかにさらに詳細に記載される。Gpr100ポリヌクレオチド、Gpr100ヌクレオチドおよびGpr100核酸という用語は、互換的に用いることができ、配列番号1、配列番号2もしくは配列番号4に示されるような核酸配列を含むポリヌクレオチド/核酸、またはその相同体、変異体もしくは誘導体をいうものと意図される。好ましくは、ポリヌクレオチド/核酸は、核酸配列配列番号1もしくは配列番号2、最も好ましくは、配列番号2の相同体、変異体もしくは誘導体であるか、またはそれらを含む。これらの用語はまた、Gpr100ポリペプチドおよび/またはペプチドをコードすることができる核酸配列を含むことが意図される。従って、Gpr100GPCRポリヌクレオチドおよび核酸は、配列番号3もしくは配列番号5に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードすることができるヌクレオチド配列、またはその相同体、変異体もしくは誘導体を含む。好ましくは、Gpr100GPCRポリヌクレオチドおよび核酸は、配列番号3に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードすることができるヌクレオチド配列、またはその相同体、変異体もしくは誘導体を含む。ポリヌクレオチドは一般に、ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドをいい、これらは、未改変のRNAもしくはDNAまたは改変したRNAもしくはDNAでありうる。ポリヌクレオチドとしては、限定はしないが、一本鎖および二本鎖DNA、一本鎖領域と二本鎖領域の混合型であるDNA、一本鎖および二本鎖RNA、一本鎖領域と二本鎖領域の混合型であるRNA、一本鎖もしくはより一般的には二本鎖、または一本鎖領域と二本鎖領域の混合型でありうるDNAおよびRNAを含むハイブリッド分子が挙げられる。さらに、ポリヌクレオチドとは、RNAもしくはDNAまたはRNAとDNAの両方を含む、三本鎖領域をいう。ポリヌクレオチドという用語はまた、安定性または他の理由のために、1または複数の改変された塩基を含むDNAまたはRNAおよび改変された骨格を有するDNAまたはRNAを含む。改変された塩基としては、例えば、トリチル化塩基および一般的ではない塩基例えば、イノシンが挙げられる。様々な改変が、DNAおよびRNAに対してなされており、そのためポリヌクレオチドは、一般的に天然で見出されるようなポリヌクレオチドの、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態、ならびにウイルスおよび細胞に特有のDNAおよびRNAの化学的形態を包含する。ポリヌクレオチドはまた、比較的短いポリヌクレオチドしばしばオリゴヌクレオチドと示されるを包含する。多数のヌクレオチド配列が、遺伝子コードの縮重によって、同一のポリペプチドをコードしうるということは、当業者には理解されるであろう。本明細書中に用いられるように、ヌクレオチド配列という用語は、ヌクレオチド配列、オリゴヌクレオチド配列、ポリヌクレオチド配列ならびにそれらの変異体、相同体、断片および誘導体例えば、それらの一部をいう。ヌクレオチド配列は、ゲノムまたは合成もしくは組換えを起源とするDNAまたはRNAでありえ、これらはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖またはそれらの組み合わせ体を表す二本鎖または一本鎖でありうる。ヌクレオチド配列という用語は、組換えDNA技術を用いて調製されうる例えば、組換えDNA。好ましくは、ヌクレオチド配列という用語は、DNAを意味する。本明細書との関連において、変異体、相同体、誘導体または断片という用語は、Gpr100ヌクレオチド配列の配列から、またはこの配列に対する1または複数の核酸の置換substitution、変異、改変、置換replacement、欠失または付加のうちのいずれかを含む。特に断りのない限り、Gpr100およびGpr100GPCRへの参照は、Gpr100のそのような変異体、相同体、誘導体および断片への参照を含む。好ましくは、得られたヌクレオチド配列は、GPCR活性、好ましくは配列番号3または配列番号5として示されるGPCRと少なくとも同一の活性を有するポリペプチドをコードする。好ましくは、相同体という用語は、構造および/または機能に関して同一性であり、その結果、得られたヌクレオチド配列が、GPCR活性を有するポリペプチドをコードすることも含むことが意図される。配列同一性すなわち、類似性に関して、好ましくは、少なくとも70、より好ましくは少なくとも75、より好ましくは少なくとも85、より好ましくは少なくとも90の配列同一性を有する。より好ましくは、少なくとも95、より好ましくは少なくとも98の配列同一性を有する。これらの用語はまた、配列の対立遺伝子の変異体を含む。配列相同性の算出本明細書中に示されるいずれかの配列に関する配列同一性は、1または複数の配列と別の配列を単純に視認比較しすなわち厳密な比較、他方の配列が、例えば、その1または複数の配列に対して少なくとも70の配列同一性を有するかを調べることによって測定できる。相対的な配列同一性はまた、商業的に入手可能なコンピュータープログラムによって測定でき、かかるプログラムは、2または複数の配列間の同一性を、例えば、デフォルトパラメータを用いる同一性を決定するのに好適な任意のアルゴリズムを用いて算出できる。このようなコンピュータープログラムの典型的な例は、CLUSTALである。2つの配列間の同一性および類似性を決定するための他のコンピュータープログラムとしては、限定はしないが、GCGプログラムパッケージDevereuxら1984NucleicAcidsResearch12387およびFASTAAtschulら1990JMolecBiol403-410が挙げられる。相同性は、連続した配列にわたって算出することができ、すなわち1の配列を、他方の配列と整列させ、そして1の配列中の各アミノ酸を、他方の対応するアミノ酸と、一度に1残基ずつ直接比較する。これをギャップなしアライメントと呼ぶ。一般に、このようなギャップなしアライメントは、比較的短い残基についてのみ行う。非常に単純で一貫した方法であるが、例えば、別の配列対において、1つの挿入または欠失によって、以降のアミノ酸残基がアライメントから排除され、その結果、全体的なアライメントが行われた場合、相同性が非常に減少することは考慮されない。従って、大多数の配列比較法は、全体的な相同性スコアを過度に減少させることなく、生じうる挿入および欠失を考慮した最適なアライメントを生じるように設計されている。これは、配列アライメント中にギャップを挿入し、局所的な相同性を最大限に評価するようにして達成される。しかし、これらのより複雑な方法は、ギャップペナルティーをアライメント中に生じる各ギャップに割り振り、その結果同数の同じアミノ酸について、できるだけ少ない数のギャップを有する配列アライメント2つの比較配列間でより高い関連性を反映するは、多数のギャップを有するものに比べて高いスコアを達成する。アフィンギャップコストが一般的に用いられ、これはギャップの存在には相対的に高いコストを、ギャップ中のその後の各残基については小さなペナルティーを課す。これは最も一般的に用いられるギャップスコアシステムである。高いギャップペナルティーは当然に、より少ないギャップを有する最適化されたアライメントを生じる。大多数のアライメントプログラムは、ギャップペナルティーを変更できる。しかし、配列比較にソフトウェアなどを使用する場合、デフォルト値を用いるのが好ましい。例えば、GCGWisconsinBestfitパッケージを用いる場合、アミノ酸配列についてのデフォルトギャップペネルティーは、ギャップについて-12、各伸長について-4である。従って、最大相同性の算出にはまず、ギャップペナルティーを考慮して、最適なアライメントを作製することを必要とする。このようなアライメントを実施するのに好適なコンピュータープログラムは、GCGWisconsinBestfitパッケージであるUniversityofWisconsinUSADevereuxら、1984NucleicAcidsResearch12:387。配列比較を実施できる他のソフトウェアの例としては、限定はしないが、BLASTパッケージAusubelら、1999同書、第18章、FASTAAtschulら、1990JMolBiol403-410および比較ツールのGENEWORKSスイートが挙げられる。BLASTおよびFASTAの両方は、オフラインおよびオンラインの検索に利用できるAusubelら、1999同書、758頁~760頁。最終的な相同性は、同一性によって測定しうるが、アライメントプロセス自体は一般的に、全か無かの対比較に基づかない。代わりに、換算類似性スコアマトリックスを一般に用いて、これが化学的類似性または進化距離に基づいて、各対比較にスコアを割り振る。一般的に用いられるこのようなマトリックスの例は、BLOSUM62マトリックスBLASTスイートプログラムのデフォルトマトリックスである。GCGWisconsinプログラムは一般に、一般のデフォルト値またはカスタムシンボル比較表得られるのであればのいずれかを使用する。GCGパッケージの一般的なデフォルト値を使用するか、または他のソフトウェアの場合は、BLOSUM62などのデフォルトマトリックスを使用するのが好ましい。有利には、BLASTアルゴリズムを、デフォルト値を示すパラメータを用いて使用する。BLASTアルゴリズムは、http:wwwncbinihgovBLASTblasthelphtmlに詳細に記載されており、これは本明細書中に参考として援用される。検索パラメータはまた、所定のデフォルトパラメータに有利に設定することができる。有利には、実質的に同一とは、BLASTによって評価する場合、少なくとも約7、好ましくは少なくとも約9および最も好ましくは10またはそれ以上のEXPECT値を有して一致する配列とみなす。BLAST検索におけるEXPECTについてのデフォルト閾値は通常、10である。BLASTBasicLocalAligmentSearchToolは、プログラムblastp、blastn、blastx、tblastnおよびtblastxに使用される機能的検索アルゴリズムであり、これらのプログラムは、有意性を少し充実させたKarlinおよびAltschulの統計方法KarlinおよびAltschul1990ProcNatlAcadSciUSA87:2264-68KarlinおよびAltschul1993ProcNatlAcadSciUSA90:5873-7http:wwwncbinihgovBLASTblasthelphtmlを参照のことを使用した所見に帰する。BLASTプログラムは、配列類似性の検索に適合させ、例えば、クエリー配列に対する相同体を同定する。配列データベースの類似性検索における基本的な問題に関する考察については、Altschulら1994NatureGenetics6:119-129を参照のこと。http:wwwncbinlmnihgovにて入手可能である5つのBLASTプログラムは、以下のタスクを実施する:blastpタンパク質配列データベースに対するアミノ酸クエリー配列を比較する;blastnヌクレオチドデータベースに対するヌクレオチドクエリー配列を比較する;blastxタンパク質配列データベースに対するヌクレオチドクエリー配列両方の鎖の6フレームの概念的翻訳産物を比較する;tblastn6つ全てのリーディングフレーム両方の鎖で動的に翻訳されたヌクレオチド配列データベースに対するタンパク質クエリー配列を比較する;tblastxヌクレオチド配列データベースの6フレームの翻訳物に対するヌクレオチドクエリー配列の6フレームの翻訳物を比較する。BLASTは、以下の検索パラメータを使用する:HISTOGRAM-各検索のスコアをヒストグラムで表示する。デフォルトはyesであるBLASTマニュアルのパラメータHを参照のこと。DESCRIPTIONS-報告された適合配列の短い記載の数を、特定の数に制限する。デフォルト限度は、100の記載であるマニュアルページのパラメータVを参照のこと。EXPECT-データベース配列に対する適合を報告するための統計学的有意性の閾値。デフォルト値は10であるKarlinandAltschulの確率モデルによれば、10の適合は偶然ではほとんど見出されてないと予想される。適合に帰する統計的有意性がEXPECT閾値よりも大きい場合、適合は報告されない。より低いEXPECT閾値はよりストリンジェントであり、適合が報告される機会はより少ない。分数値が許容されるBLASTマニュアルのパラメータEを参照のこと。CUTOFF-高スコアのセグメント対を報告するためのCutoffスコア。デフォルト値を、EXPECT値上記を参照のことから計算する。HSPに帰する統計的有意性が、少なくともCUTOFF値と等しいスコアを有する1のHSPに帰するほど高い場合に限り、データベース配列についてのHSPが報告される。CUTOFF値が高いほどよりストリンジェントであり、適合が報告される機会がより少ないBLASTマニュアルのパラメータSを参照のこと。典型的には、EXPECTを使用して有意性の閾値をより直感的に管理することができる。ALIGNMENTS-高スコアセグメント対HSP:highscoringsegmentpairsを報告するための特定の数にデータベース配列を制限する。デフォルト限度は50である。これよりも多数のデータベース配列が報告のための統計的有意性の閾値を満たす場合以下のEXPECTおよびCUTOFFを参照のこと、最も高い統計的有意性に帰する適合のみが報告されるBLASTマニュアル中のパラメータBを参照のこと。MATRIX-BLASTP、BLASTX、TBLASTN、およびTBLASTXのスコア行列の変化を特定する。デフォルトマトリックスは、BLOSUM62であるHenikoffHenikoff、1992。有効な別の選択には、PAM40、PAM120、PAM250、およびIDENTITYが含まれる。BLASTNには代わりのスコアマトリックスは利用不可能である;BLASTNリクエストにおいてMATRIX命令を特定すると、エラーが返ってくる。STRAND-データベース配列の先頭または末尾の鎖のみにTBLASTN検索を限定するか、クエリー配列の先頭または末尾の鎖上のリーディングフレームのみにBLASTN、BLASTX、またはTBLASTX検索を制限する。FILTER-WoottonFederhen1993ComputersandChemistry、17、149163のSEGプログラムで決定したところの組成が複雑ではないクエリー配列のセグメント、またはClaverieStates1993ComputersandChemistry、17、191201のXNUプログラムまたはBLASTN用のTatusovandLipmanのDUSTプログラムhttpwwwncbinlmnihgovによって決定したところの短い周期の内部反復からなるセグメントを遮蔽する。フィルタリングにより、blast出力由来の統計学的に有意であるが生物学的に関心のないレポート例えば、共通の酸性、塩基性、またはプロリンリッチな領域に対するヒットが排除され、データベース配列に対する特定の適合に利用可能なクエリー配列のより生物学的に興味のある領域が残る。フィルタープログラムによって見出された複雑でない配列を、ヌクレオチド配列中では文字Nを使用し例えば、NNNNNNNNNNNNN、タンパク質配列中では文字Xを使用して例えば、XXXXXXXXX置換する。フィルタリングは、クエリー配列またはその翻訳産物のみに適用し、データベース配列には適用しない。デフォルトフィルタリングは、BLASTNではDUST、他のプログラムではSEGである。SWISSPROTの配列に適用した場合に、SEG、XNU、またはその両方によって全くマスクされないことは珍しいことではないので、フィルタリングによって常に結果が得られると予想すべきではない。さらに、いくつかの場合、配列全体がマスクされる場合があるが、これはフィルタリングされていないクエリー配列に対して報告された任意の適合の統計的有意性に疑いがあることを示す。NCBI-gi-アクセッションおよび/または遺伝子座の名称に加えて、NCBIgi識別名を出力中に示す。最も好ましくは、配列比較は、http:wwwncbinlmnihgovBLASTにて提供される単純なBLAST検索アルゴリズムを用いて行う。いくつかの実施形態において、配列同一性を決定する場合に、ギャップペナルティーを用いない。ハイブリダイゼーション本明細書はまた、ヌクレオチド配列を含み、かかるヌクレオチド配列は、本明細書中に示される配列、またはその断片もしくは誘導体、あるいは上記いずれかの相補体にハイブリダイズすることができる。ハイブリダイゼーションとは、核酸の鎖が、塩基対によって相補鎖と結合することによるプロセスCoombsJ1994DictionaryofBiotechnologyStocktonPressNewYorkNYならびに、DieffenbachCWおよびGSDveksler1995PCRPrimeraLaboratoryManualColdSpringHarborPressPlainviewNYに記載されるようなポリメラーゼ連鎖反応技術において実施されるような増幅プロセスを意味する。ハイブリダイゼーション条件は、BergerおよびKimmelに教示されるように、核酸結合複合体の融解温度Tmに基づき1987GuidetoMolecularCloningTechniquesMethodsinEnzymologyVol152AcademicPressSanDiegoCA、以下に説明されるような所定のストリンジェンシーを与える。本明細書中に示されるヌクレオチド配列、またはその相補体に選択的にハイブリダイズできるヌクレオチド配列は一般に、本明細書中に示される対応するヌクレオチド配列に対して、少なくとも20、好ましくは少なくとも25または30、例えば、少なくとも40、60もしくは100またはそれ以上の連続したヌクレオチドからなる領域にわたって、少なくとも70、好ましくは少なくとも75、より好ましくは少なくとも85または90、さらにより好ましくは少なくとも95または98相同である。好ましいヌクレオチド配列は、配列番号1、2または4に相同である領域を含み、かかる領域は、これらの配列のうちの1に対して好ましくは少なくとも70、80または90、より好ましくは少なくとも95相同である。選択的にハイブリダイズ可能であるという用語は、プローブとして用いられたヌクレオチド配列が、標的ヌクレオチド配列がバックグラウンドを有意に上回るレベルでプローブにハイブリダイズすることが見出される条件下で用いられることを意味する。バックグラウンドのハイブリダイゼーションは、他のヌクレオチド配列が、例えば、スクリーニングされるcDNAまたはゲノムDNAライブラリー中に存在するために生じうる。この場合、バックグラウンドは、プローブとライブラリーの非特異的なDNA要素との間の相互作用により生じるシグナルレベルを示し、かかるレベルは、標的DNAを用いて観察される特異的な相互作用の10倍未満、好ましくは100倍未満の強度である。相互作用の強度は、プローブを例えば、32Pを用いて放射標識することによって測定できる。中程度から最高のストリンジェンシー条件下で本明細書中に示されるヌクレオチド配列にハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列もまた、本発明の範囲内に含まれる。ハイブリダイゼーション条件は、BergerおよびKimmelに教示されるように1987GuidetoMolecularCloningTechniquesMethodsinEnzymologyVol152AcademicPressSanDiegoCA核酸結合複合体の融解温度Tmに基づき、以下に説明されるような所定のストリンジェンシーを与える。最高のストリンジェンシーは一般的に、約Tm-5°CプローブのTmよりも5°C低いにて生じ、高いストリンジェンシーは、Tmより約5°C~10°C低い温度にて、中程度のストリンジェンシーは、Tmよりも約10°C~20°C低い温度にて、そして低いストリンジェンシーはTmよりも約20°C~25°C低い温度にて生じる。当業者には理解されるように、最高ストリンジェンシーにおけるハイブリダイゼーションは、同一ヌクレオチド配列を同定または検出するために用いることができ、一方中程度または低いストリンジェンシーにおけるハイブリダイゼーションは、類似または関連ヌクレオチド配列を同定または検出するために用いることができる。好ましい実施形態において、本願発明者らは、ストリンジェンシーな条件例えば、65°Cおよび01×SSC1×SSC015MNaCl0015Mクエン酸ナトリウムpH70下で、1または複数のGpr100GPCRヌクレオチド配列にハイブリダイズできるヌクレオチド配列を開示する。ヌクレオチド配列が二本鎖である場合、個々または組合せた二重鎖の両方の鎖も本開示に含まれる。ヌクレオチド配列が一本鎖である場合、このヌクレオチド配列の相補配列も含まれることがわかるだろう。本開示はまた、本明細書中に示される配列、またはその断片もしくは誘導体に相補的な配列にハイブリダイズ可能であるヌクレオチド配列を含む。同様に、本開示は、関連配列にハイブリダイズ可能である配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。これらの種類のヌクレオチド配列は、変異ヌクレオチド配列の例である。この点において、変異体という用語は、本明細書中に示されるヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能である配列に相補的な配列を含む。しかし、好ましくは、変異体という用語は、ストリンジェンシーな条件例えば、65°Cおよび01×SSC1×SSC015MNaCl0015クエン酸ナトリウムpH70下で、本明細書中に示されるヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能である配列に相補的な配列を含む。Gpr100GPCRおよび相同体のクローニング本開示はまた、本明細書中に示される配列、またはその断片もしくは誘導体に相補的なヌクレオチド配列を含む。配列がそれらの断片に相補的である場合、その配列を、プローブとして用いて、他の生物などにおける類似したGPCR配列を同定およびクローニングすることができる。従って、本明細書によって、ヒトおよび他の種例えば、マウス、ブタ、ヒツジなどに由来するGpr100GPCR、その相同体および他の構造的または機能的に関連した遺伝子のクローニングを可能とする。配列番号1、配列番号2、配列番号4またはそれらの断片に含まれるヌクレオチド配列と同一であるか、または十分に同一であるポリヌクレオチドをcDNAおよびゲノムDNAのためのハイブリダイゼーションプローブとして用いて、適切なライブラリーからGpr100GPCRをコードする、部分的または完全長のcDNAおよびゲノムクローンを単離しうる。このようなプローブをまた用いて、他の遺伝子ヒト以外の種に由来する相同体およびオルソログをコードする遺伝子を含むcDNAおよびゲノムクローンを単離することができ、かかる他の遺伝子は、Gpr100GPCR遺伝子に対する配列類似性、好ましくは高い配列類似性を有する。ハイブリダイゼーションスクリーニング、クローニングおよび配列決定の技術は、当業者に公知であり、例えば、Sambrookら前出に記載されている。一般的に、プローブとして用いるのに好適なヌクレオチド配列は、対象として示される配列と、70同一、好ましくは80同一、より好ましくは90同一、さらにより好ましくは95同一である。プローブは一般に、少なくとも15ヌクレオチドを含む。好ましくは、このようなプローブは、少なくとも30ヌクレオチドを有し、また少なくとも50ヌクレオチドを有することもできる。特に好ましいプローブは、150~500ヌクレオチドの範囲、より具体的には約300ヌクレオチドである。1実施形態では、Gpr100GPCRポリペプチドヒト以外の種に由来する相同体およびオルソログを含むをコードするポリヌクレオチドを得るために、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下にて、配列番号1、配列番号2、配列番号4またはそれらの断片を有する標識プローブを用いて、適切なライブラリーをスクリーニングするステップ、および部分または完全長のcDNAおよびポリヌクレオチド配列を含むゲノムクローンを単離するステップを含む。このようなハイブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、上記または他の条件50ホルムアミド、5×SSC150mMNaCl15mMクエン酸三ナトリウム、50mMリン酸ナトリウムpH76、5×デンハート溶液、10硫酸デキストランおよび20μg/mlの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中にて、一晩42°Cでインキュベートするであり、それに続いて約65°Cにて01×SSC中でフィルターを洗浄する。Gpr100GPCRの機能アッセイクローン化した推定Gpr100GPCRポリヌクレオチドは、配列分析または機能アッセイによって確認できる。例えば、推定Gpr100GPCRまたは相同体は、以下のように受容体活性について分析できる。Gpr100受容体cDNAをコードする線状化したプラスミドテンプレートに由来するキャップRNA転写物は、標準的な方法に従って、invitroにてRNAポリメラーゼを用いて合成する。Invitro転写物は、終濃度02mg/mlにて水に懸濁する。成体のメスヒキガエルより卵巣の葉を取り出し、濾胞を除去した第V段階の卵母細胞を得て、そしてRNA転写物10ng/卵母細胞を、マイクロインジェクション装置を使用して50nlボーラスで注射する。2つの電極電圧クランプを用いて、アゴニストへの曝露に反応したアフリカツメガエルXenopusの各卵母細胞からの電流を測定する。記録は、室温にて無Ca2バース培地中で行う。またXenopus系を用いて、既知のリガンドおよびリガンドを活性化させる組織/細胞抽出物をスクリーニングすることができる以下にさらに詳細に記載される。Gpr100GPCR発現アッセイGpr100GPCR関連疾患を処置するのに有用な治療を設計するために、Gpr100野生型または特定の変異体の発現プロファイルを決定することが有用である。従って、当該分野で公知である方法を用いて、Gpr100を発現する器官、組織および細胞型ならびに発生段階を決定することができる。例えば、従来のまたは電気的ノーザンを行うことができる。また、逆転写酵素PCRRT-PCRを用いて、Gpr100遺伝子または変異体の発現をアッセイできる。Gpr100の発現プロファイルを決定するためのより感度の高い方法としては、当該分野で公知であるようなRNAaseプロテクションアッセイが挙げられる。ノーザン分析は、遺伝子の転写物の存在を検出するために用いられる実験室用の技術であり、特定の細胞型または組織に由来するRNAがその表面に結合している膜への標識ヌクレオチド配列のハイブリダイゼーションを含むSambrook前出第7章およびAusubelFMら、前出第4章および第16章。BLASTを用いる類似したコンピューター技術電気的ノーザンを用いて、GenBankまたはLIFESEQデータベースIncytePharmaceuticalsなどのヌクレオチドデータベースの同一分子または関連分子について検索することができる。この種の分析は、複数の膜をベースとしたハイブリダイゼーションよりも迅速であるという利点を有する。さらに、コンピューター検索の感度を変更して、特定の適合が、完全な一致として、または相同として分類されるのかを決定できる。上記プローブを含むポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、動物およびヒトの疾患に対する治療および診断を発見するための研究試薬および材料として用いることができる本明細書中のどこかにさらに詳細に記載される。Gpr100GPCRポリペプチドの発現本開示は、Gpr100GPCRポリペプチドを作製する方法を含む。本方法は一般に、Gpr100GPCRポリペプチド、またはその相同体、変異体、もしくは誘導体をコードする核酸を含む宿主細胞を、好適な条件すなわち、Gpr100GPCRポリペプチドが発現される条件下にて培養することを含む。生物学的に活性なGpr100GPCRを発現するために、Gpr100GPCRまたはその相同体、変異体もしくは誘導体をコードするヌクレオチド配列を、適切な発現ベクターすなわち、挿入したコード配列の転写および翻訳に必要とされるエレメントを含むベクターに挿入する。当業者に周知である方法を用いて、Gpr100GPCRをコードする配列ならびに適切な転写および翻訳制御エレメントを含む発現ベクターを構築する。これらの方法は、invitro組換えDNA技術、合成技術、およびinvivo遺伝子組換えを含む。このような技術は、SambrookJら1989MolecularCloningALaboratoryManual第4、8、および16-17章ColdSpringHarborPressPlainviewNYならびにAusubelFMら1995および定期補遺CurrentProtocolsinMolecularBiology第9、13、および16章JohnWileySonsNewYorkNYに記載されている。様々な発現ベクター/宿主系を用いて、Gpr100GPCRをコードする配列を含めたり、発現させたりできる。これらの発現ベクター/宿主系としては、限定はしないが、微生物例えば、組換えバクテリオファージ、プラスミド、もしくはコスミドDNA発現ベクターを用いて形質転換させた細菌;酵母発現ベクターを用いて形質転換させた酵母;ウイルス発現ベクター例えば、バキュロウイルスに感染させた昆虫細胞系;ウイルス発現ベクター例えば、カリフラワーモザイクウイルスCaMVもしくはタバコモザイクウイルスTMVまたは細菌発現ベクター例えば、TiプラスミドもしくはpBR322プラスミドを用いて形質転換させた植物細胞系あるいは動物細胞系が挙げられる。これは、用いた宿主細胞によって限定されない。制御エレメントまたは調節配列とは、ベクターの非翻訳領域にあるものでありすなわち、エンハンサー、プロモーター、ならびに5’および3’の非翻訳領域、宿主細胞のタンパク質と相互作用し、転写および翻訳を実施する。このようなエレメントは、その効力および特異性において様々でありうる。用いたベクター系および宿主に応じて、構成的プロモーターおよび誘導性プロモーターを含む、多数の好適な転写および翻訳エレメントを用いることができる。例えば、細菌系にてクローニングする場合、誘導性プロモーター例えば、BLUESCRIPTファージミドStratageneLaJollaCalifまたはPSPORT1プラスミドGIBCOBRLのハイブリッドlacZプロモーターなどを用いることができる。バキュロウイルス多角体プロモーターを昆虫細胞に用いることができる。植物細胞のゲノム例えば、ヒートショック、RUBISCO、および貯蔵タンパク質遺伝子または植物ウイルス例えば、ウイルスプロモーターまたはリーダー配列に由来するプロモーターまたはエンハンサーを、ベクターにクローン化できる。哺乳動物細胞系において、哺乳動物の遺伝子または哺乳動物のウイルスに由来するプロモーターが好ましい。Gpr100GPCRをコードする配列の多数のコピーを含む細胞系統を作製する必要がある場合、SV40またはEBVに基づくベクターを、適切な選択可能なマーカーと共に用いることができる。細菌系において、多数の発現ベクターを、Gpr100GPCRの意図される用途に応じて選択できる。例えば、大量のGpr100GPCRが、抗体の誘導に必要とされる場合、容易に精製される融合タンパク質の高レベルの発現に作用するベクターを用いることができる。このようなベクターとしては、限定はしないが、多機能性Ecoliクローニングおよび発現ベクター例えば、BLUESCRIPTStratageneならびにpINベクターVanHeekeGandSMSchuster1989JBiolChem264:5503-5509などが挙げられ、かかる多機能性Ecoliクローニングおよび発現ベクターにおいては、Gpr100GPCRをコードする配列を、アミノ末端Metおよびそれに続くβ-ガラクトシダーゼの7残基の配列と共にインフレームでベクターにライゲーションし、その結果ハイブリッドタンパク質を作製できる。また、pGEXベクターPromegaMadisonWisを用いて、グルタチオンS-トランスフェラーゼGSTとの融合タンパク質として、外来性ポリペプチドを発現することができる。一般に、このような融合タンパク質は、可溶性であり、グルタチオンアガロースビーズに吸着させ、その後、遊離グルタチオンの存在下で溶出することによって、溶解した細胞から容易に精製できる。このような系で作製したタンパク質は、ヘパリン、トロンビンまたは因子XAプロテアーゼ切断部位を含むように設計し、そして目的のクローン化されたポリペプチドが、GST部分から自由に放出され得るようにできる。酵母Saccharomycescerevisiaeの場合、構成的または誘導性プロモーターを含む多数のベクター例えば、α因子、アルコールオキシダーゼ、およびPGHを用いることができる。総説については、Ausubel前出およびGrantら1987MethodsEnzymol153:516-544を参照のこと。植物発現ベクターを用いる場合、Gpr100GPCRをコードする配列の発現は、多数のプロモーターのうちのいずれかによって駆動できる。例えば、ウイルスプロモーター例えば、CaMVの35Sおよび19Sプロモーターを、単独でまたはTMVに由来するωリーダー配列と組み合わせて用いることができるTakamatsuN1987EMBOJ6:307-311。あるいは、植物プロモーター例えば、RUBISCOの小サブユニットのプロモーターまたは熱ショックプロモーターを用いることができるCoruzziGら1984EMBOJ3:1671-1680BroglieRら1984Science224:838-843およびWinterJら1991ResultsProblCellDiffer17:85-105。これらの構築物は、直接的なDNA形質転換または病原体媒介性トランスフェクションによって植物細胞に導入できる。このような技術は、一般に利用可能である多数の総説に記載されている例えば、HobbsSorMurryLEinMcGrawHillYearbookofScienceandTechnology1992McGrawHillNewYorkNYpp191-196を参照のこと。また、昆虫系を用いて、Gpr100GPCRを発現することができる。例えば、このような系に1つにおいて、Autographacalifornica核多角体病ウイルスAcNPVをベクターとして用いて、ヨトウガSpodopterafrugiperda細胞またはウワバTrichoplusiaの幼生において外来遺伝子を発現させる。Gpr100GPCRをコードする配列を、ウイルスの非必須領域例えば、多角体遺伝子にクローン化し、多角体プロモーターの制御下に配置できる。Gpr100GPCRの首尾のよい挿入によって、多角体遺伝子を不活性化し、コートタンパク質を欠いている組換えウイルスを作製する。次に、組換えウイルスを用いて、例えば、Sfrugiperda細胞またはTrichoplusiaの幼生を感染させることができ、これらはその中でGpr100GPCRを発現することができるEngelhardEKら1994ProcNatAcadSci91:3224-3227。哺乳動物宿主細胞において、多数のウイルスベースの発現系を用いることができる。アデノウイルスを、発現ベクターとして用いる場合、Gpr100GPCRをコードする配列を、後期プロモーターと3連のリーダー配列からなる、アデノウイルス転写/翻訳複合体にライゲーションできる。ウイルスゲノムの非必須E1またはE3領域への挿入を用いて、生存可能なウイルスを得ることができ、かかるウイルスは、感染した宿主細胞においてGpr100GPCRを発現することができるLoganJおよびTShenk1984ProcNatlAcadSci81:3655-3659。さらに、転写エンハンサー例えば、ラウス肉腫ウイルスRSVエンハンサーを用いて、哺乳動物宿主細胞における発現を増加させることができる。従って、例えば、Gpr100受容体が、ヒト胎児腎293HEK293細胞または接着性dhfrCHO細胞のいずれかで発現する。受容体の発現を最大にするために、一般的に全ての5および3非翻訳領域UTRを、pCDNまたはpCDNA3ベクターへ挿入する前に、受容体cDNAから除去する。これらの細胞は、リポフェクチンによって、個々の受容体cDNAを用いてトランスフェクトし、そして400mg/mlのG418存在下にて選択する。選択から3週間後、個々のクローンを拾い、そしてさらなる分析にために増殖させる。ベクターのみを用いてトランスフェクトしたHEK293またはCHO細胞をネガティブコントロールとする。個々の受容体を安定して発現する細胞系統を単離するために、約24個のクローンを一般的に選択し、ノーザンブロット分析によって分析する。受容体mRNAは一般に、分析されたG418耐性クローンの約50で検出可能である。また、ヒト人工染色体HACを用いて、プラスミド中に含まれ、発現されうる断片よりも大きなDNA断片を送達することができる。約6kb~10MbのHACを構築し、治療目的で、従来の送達方法リポソーム、ポリカチオン性アミノポリマー、またはベシクルによって送達する。また、特定の開始シグナルを用いて、Gpr100GPCRをコードする配列のより効率的な翻訳を達成することができる。このようなシグナルは、ATG開始コドンと隣接配列を含む。Gpr100GPCRをコードする配列ならびにその開始コドンおよび上流配列が、適切な発現ベクターに挿入される場合、さらなる転写または翻訳制御シグナルは必要でなくなりうる。しかし、コード配列またはその断片のみが挿入される場合、ATG開始コドンを含む外因性翻訳制御シグナルを備えなければならない。さらに、開始コドンは、正確なリーディングフレーム内に入れ、全挿入物の翻訳を確実にしなければならない。外因性翻訳エレメントおよび開始コドンは、様々な起源のものでありえ、天然および合成の両方でありうる。発現効率は、用いた特定の細胞系に適切なエンハンサー例えば、文献中に記載されるものを包含することによって、高めることができるScharfDら1994ResultsProblCellDiffer20:125-162。さらに、宿主細胞株を、挿入配列の発現をモジュレートする能力、または発現されたタンパク質を所望の形態にプロセシングする能力について選択しうる。このようなポリペプチドの改変としては、限定はしないが、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化およびアシル化が挙げられる。また、タンパク質のプレプロ形態を切断する翻訳後プロセシングを用いて、正確な挿入、折りたたみ、および/または機能を容易にすることができる。翻訳後活性の特定の細胞機構および特徴的な機構を有する異なる宿主細胞例えば、CHO、HeLa、MDCK、HEK293、およびWI38は、AmericanTypeCultureCollectionATCCBethesdaMdより入手可能であり、外来タンパク質の正確な修飾およびプロセシングを確実にするように選択しうる。長期間、組換えタンパク質を高収率で産生すること、安定して発現することが好ましい。例えば、Gpr100GPCRを安定して発現することが可能である細胞系統を、発現ベクターを用いて形質転換することができ、かかる発現ベクターは、ウイルス複製開始点および/または内在性発現エレメントならびに選択可能なマーカー遺伝子を、同一または別々のベクターに含むことができる。ベクター導入後、細胞を、選択培地に代えるまで冨栄養培地中で約1~2日間増殖させることができる。選択可能なマーカーの目的は、セレクションに対する耐性を与えるためであり、その存在によって、導入配列を首尾よく発現する細胞の増殖および回収を可能とする。安定した形質転換細胞の耐性クローンは、細胞型に適した組織培養技術を用いて増殖させることができる。多くの選択系を用いて、形質転換細胞系統を回収することができる。これらの選択系としては、限定はしないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子WiglerMら1977Cell11:223-32およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子LowyIら1980Cell22:817-23が挙げられ、これらは、tk-細胞またはapr-細胞にそれぞれ用いることができる。さらに、代謝拮抗剤、抗生物質、または除草剤耐性を、選択の基盤として用いることができる。例えば、dhfrは、メトトレキセートに対する耐性を与えWiglerMら1980ProcNatlAcadSci77:3567-70、nptは、アミノグリコシドネオマイシンおよびG-418に対する耐性を与えColbere-GarapinFら1981JMolBiol150:1-14、そしてalsまたはpatはそれぞれ、クロルスルフロンおよびホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼに対する耐性を与えるMurry前出。さらなる選択可能な遺伝子が記載されている例えば、細胞がトリプトファンに代えてインドールを利用することを可能にするtrpB、または細胞がヒスチジンに代えてヒスチノールhistinolを利用することを可能にするhisDHartmanSCおよびRCMulligan1988ProcNatlAcadSci85:8047-51。最近、可視マーカーを使用することが、アントシアニン、β-グルクロニダーゼおよびその基質のGUS、ならびにルシフェラーゼおよびその基質のルシフェリンなどのマーカーによって人気を得ている。これらのマーカーは、形質転換体を同定するだけではなく、特定のベクター系に起因する一過性または安定したタンパク質発現の量を定量することにも用いることができるRhodesCAら1995MethodsMolBiol55:121-131。マーカー遺伝子発現の有無は、目的遺伝子の存在も示唆するが、遺伝子の存在および発現を確かめる必要がありうる。例えば、Gpr100GPCRをコードする配列が、マーカー遺伝子配列内に挿入されている場合、Gpr100GPCRをコードする配列を含む形質転換細胞を、マーカー遺伝子機能がないことによって同定できる。あるいは、マーカー遺伝子を、単一のプロモーターの制御下に、Gpr100GPCRをコードする配列とタンデムに配置することができる。誘導または選択に応答したマーカー遺伝子の発現は通常、タンデム遺伝子と同様の発現を示す。あるいは、Gpr100GPCRをコードする核酸配列を含み、Gpr100GPCRを発現する宿主細胞は、当業者に公知である様々な方法によって同定することができる。これらの方法としては、限定はしないが、DNA-DNAまたはDNA-RNAハイブリダイゼーションおよびタンパク質バイオアッセイまたは免疫アッセイ技術が挙げられ、核酸もしくはタンパク質配列の検出および/または定量を行うための、膜、溶液、またはチップベースの技術を含む。Gpr100GPCRをコードするポリヌクレオチド配列の存在を、Gpr100GPCRをコードするポリヌクレオチドのプローブまたは断片を使用したDNA-DNAまたはDNA-RNAハイブリダイゼーション、あるいは増幅によって検出できる。核酸増幅ベースのアッセイは、Gpr100GPCRをコードするDNAまたはRNAを含む形質転換体を検出するために、Gpr100GPCRをコードする配列に基づくオリゴヌクレオチドまたはオリゴマーを使用することを含む。Gpr100GPCRの発現を検出および測定するための様々なプロトコルであって、Gpr100GPCRタンパク質に特異的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれかを用いるプロトコルは、当該分野で公知である。このような技術の例としては、酵素結合免疫吸着アッセイELISA、放射免疫アッセイRIA、および蛍光活性化細胞選別FACSが挙げられる。Gpr100GPCRの2つの非干渉エピトープに反応するモノクローナル抗体を用いる、2箇所のモノクローナルベースの免疫アッセイが好ましいが、競合的結合アッセイを用いることもできる。これらの、および他のアッセイは、当該分野において、例えば、HamptonRら1990SerologicalMethodsaLaboratoryManualSectionIVAPSPressStPaulMinnおよびMaddoxDEら1983JExpMed158:1211-1216に十分に記載されている。様々な標識およびコンジュゲート技術が当業者に公知であり、種々の核酸およびアミノ酸アッセイに用いることができる。Gpr100GPCRをコードするポリヌクレオチドに関連する配列を検出するための標識化ハイブリダイゼーションプローブまたはPCRプローブを作製する方法は、標識ヌクレオチドを用いたオリゴ標識、ニックトランスレーション、末端標識、またはPCR増幅を含む。あるいは、Gpr100GPCRをコードする配列またはそれらの断片を、mRNAプローブを製造するために、ベクターにクローン化できる。このようなベクターは、当該分野で公知であり、商業的に利用可能であり、また適切なRNAポリメラーゼT7、T3、またはSP6と標識したヌクレオチドを添加することによって、invitroにてRNAプローブを合成するために用いることができる。これらの方法は、様々な商業的に入手可能なキットを使用することによって行うことができ、かかるキットは、PharmaciaUpjohnKalamazooMich、PromegaMadisonWis、およびUSBiochemicalCorpClevelandOhioより供給される。検出を容易にするために用いられうる好適なレポーター分子および標識としては、放射性核種、酵素、蛍光、化学ルミネセンス、または発色剤、および基質、補因子、阻害剤、磁性粒子などが挙げられる。Gpr100GPCRをコードするヌクレオチド配列を用いて形質転換した宿主細胞を、細胞培養からのタンパク質の発現および回収に好適な条件下で培養できる。形質転換細胞によって産生されたタンパク質は、用いた配列および/またはベクターに応じて、細胞膜に配置されるか、分泌されるか、または細胞内に含まれうる。当業者に理解されるように、Gpr100GPCRをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、シグナル配列を含むように設計することができ、かかるシグナル配列は、原核細胞膜または真核細胞膜を介したGpr100GPCRの分泌を指令する。他の構築物は、ポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列にGpr100GPCRをコードする配列を結合するように用いることができ、かかるポリペプチドドメインは、可溶性タンパク質の精製を容易にする。このような精製を容易にするドメインとしては、限定はしないが、金属キレート化ペプチド例えば、固体化した金属上で精製することを可能とするヒスチジン-トリプトファンモジュール、プロテインAドメイン固定化した免疫グロブリン上で精製することを可能にするおよびFLAGS伸長/親和性精製系ImmunexCorpSeattleWashに用いられるドメインが挙げられる。切断可能なリンカー配列因子XAまたはエンテロキナーゼInvitrogenSanDiegoCalifに特異的な配列を精製ドメインとGpr100GPCRコード配列との間に含めることによって、精製を容易にすることができる。このような発現ベクターの1つは、Gpr100GPCRとチオレドキシンまたはエンテロキナーゼ切断部位の前にある6つのヒスチジン残基をコードする核酸を含む融合タンパク質の発現を提供する。ヒスチジン残基は、固定化した金属イオン親和性クロマトグラフィーIMIAC;PorathJら1992ProtExpPurif3:263-281に記載されているにおける精製を容易にするが、エンテロキナーゼ切断部位は、融合タンパク質からGpr100GPCRを精製するための方法を提供する。融合タンパク質を含むベクターの考察は、KrollDJら1993DNACellBiol12:441-453に与えられる。Gpr100GPCRの断片は、組換え製造だけでなく、固相技術を用いた直接ペプチド合成によっても製造することができるMerrifieldJ1963JAmChemSoc85:2149-2154。タンパク質合成は、手動による技術または自動化を使用することによって行うことができる。自動化合成は、例えば、AppliedBiosystems431Aペプチド合成機PerkinElmerを用いて達成できる。Gpr100GPCRの様々な断片を、別々に合成し、その後組み合わせて全長分子を作製することができる。バイオセンサーGpr100ポリペプチド、核酸、プローブ、抗体、発現ベクターおよびリガンドは、バイオセンサーとしておよびバイオセンサーを製造するのに有用である。Aizawa1988AnalChemSymp17:683によると、バイオセンサーとは、分子を認識するための受容体例えば、固定化抗体または受容体例えば、Gpr100Gタンパク質共役型受容体を有する選択層と、測定値を送信するためのトランスデューサーとの独特の組合せであると定義されている。このようなバイオセンサーの一群は、受容体と周囲の溶媒との相互作用に起因する表面層の光学的性質に生じる変化を検出する。このような技術の中でも、特に、エリプソメトリー法および表面プラズモン共鳴法が言及されうる。Gpr100を含むバイオセンサーを用いて、Gpr100リガンド例えば、プリンもしくはプリン類似体などのヌクレオチド、またはこれらリガンドの類似体の存在あるいはレベルを検出することができる。このようなバイオセンサーの構築は、当該分野で周知である。従って、Gpr100受容体を発現する細胞株を、3Hイノシトールリン酸または他の二次メッセンジャーの受容体が促進する形成を介して、リガンド例えば、ATPを検出するためのレポーター系として用いることができるWattら、1998JBiolChemMay29273。バイオセンサーのセンサーユニットは、例えば、US5492840に記載されている。スクリーニングアッセイ相同体、変異体、および誘導体を含むGpr100GPCRポリペプチドを天然であろうと、組換え体であろうと、化合物のスクリーニング方法に用いることができ、かかる化合物は受容体に結合し、Gpr100を活性化するかアゴニスト、またはGpr100の活性化を抑制するアンタゴニスト。従って、またGpr100ポリペプチドを用いて、例えば、細胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリー、および天然産物の混合物中の小分子基質およびリガンドの結合を評価することができる。これらの基質およびリガンドは、天然の基質およびリガンドであっても、構造的または機能的模倣体であってもよい。Coliganら、CurrentProtocolsinImmunology1。結果を、図9、図10および図12に示す。変異動物は、時間0にて低い血中グルコースレベルを有し、このことは、これまでの結果より、16時間の断食後の動物において予想され、この低いセットポイントは、曲線分析下のGTT面積が、統計学的に異なることデータは示さないを意味する。しかし、データが基底を超える変化について標準化する場合、変異動物のグルコースチャレンジに対する反応と、野生型動物の反応とに差異はない。末梢血試料中の上記のように測定されるグルカゴンレベルのRIA分析は、変異体が有意に変化したグルカゴンレベルを有さないことを示す。結果を、図11に示す。インスリンレベルのELISA分析は、インスリンレベルが、変異体において野生型動物よりも高いレベルまで高まることを示し、このことは変異体が高インスリン性であることを示している。要するに、Gpr100変異動物は、一晩の断食による代謝ストレスの後重篤な低血糖を示し、これは飼料を失くしてから6時間後に明白となる。変異体は、正常なグルコース耐性を有し、グルカゴンレベルにおいて有意な変化を示さない。合わせて考慮すると、これらの結果は、変異動物が、燃料産生のために脂肪酸酸化に切り換える能力に欠損を有することを示唆している。参考:StenebergPら2005TheFFAreceptorGPR40linkshyperinsulinemiahepaticsteatosisandimpairedglucosehomeostasisinmouseCellMetabolism1:245-258上記明細書中で引用した全ての刊行物は、本明細書中に参考として援用される。本発明の記載された方法および系の様々な変更形態および変化形態が、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して記載されているが、特許請求の範囲に記載の発明が、そのような特定の実施形態に不当に限定すべきでないことを理解すべきである。実際に、分子生物学または関連分野の当業者に自明である、本発明を実施するための記載された様式の様々な変更形態は、本願特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。