"下記I~IIIに記載の少なくとも一種のポリヌクレオチドまたはそれを含んでなる組換えベクターを導入してなる微生物を、ピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、ピリピロペンAの製造法:I下記の~に記載されたヌクレオチド配列から選択された少なくとも1個のヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド:配列番号266のヌクレオチド配列、配列番号266のヌクレオチド配列の相補配列と厳密な条件下でハイブリダイズ可能なヌクレオチド配列であり、かつ配列番号266のヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、配列番号266のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドにおいて、1もしくは複数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加されたヌクレオチド配列であり、かつ配列番号266のヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、配列番号266のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドと少なくとも90以上の同一性を有するヌクレオチド配列であり、かつ配列番号266のヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、II配列番号267~275から選択される少なくとも一つのアミノ酸配列またはそれと実質的に同等なアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド、III下記の~に記載されたヌクレオチド配列から選択された少なくとも1個のヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド:1下記-に記載されたヌクレオチド配列:配列番号266で示されるヌクレオチド配列の3342番から5158番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の5382番から12777番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の13266番から15144番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の16220番から18018番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の18506番から19296番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の19779番から21389番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の21793番から22877番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の23205番から24773番までのヌクレオチド配列、および配列番号266で示されるヌクレオチド配列の25824番から27178番までのヌクレオチド配列21において記載されたヌクレオチド配列の相補配列と厳密な条件下でハイブリダイズ可能なヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、31において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドにおいて、1もしくは複数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加されたヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、41において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドと少なくとも90以上の同一性を有するヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列。プラスミドpCC1-PP1、pPP2、pPP3、pPP6、pPP7、およびpPP9からなる群より選択されるベクターを一種またはそれ以上含む微生物を、ピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、請求項1に記載のピリピロペンAの製造法。下記IV~Vに記載の少なくとも一種のポリヌクレオチドまたはそれを含んでなる組換えベクターを導入してなる微生物を、ピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、請求項1に記載のピリピロペンAの製造法:IV配列番号269、270、および275からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸配列またはそれと実質的に同等なアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列から選択された少なくとも1個のヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド、V下記の~に記載されたヌクレオチド配列から選択された少なくとも1個のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド:1下記-に記載されたヌクレオチド配列:配列番号266で示されるヌクレオチド配列の13266番から15144番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の16220番から18018番までのヌクレオチド配列、および配列番号266で示されるヌクレオチド配列の25824番から27178番までのヌクレオチド配列21において記載されたヌクレオチド配列の相補配列と厳密な条件下でハイブリダイズ可能なヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、31において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドにおいて、1もしくは複数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加されたヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、41において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドと少なくとも90以上の同一性を有するヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列。プラスミドpPP2、pPP3、およびpPP9を含む微生物を、ピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、請求項2に記載のピリピロペンAの製造法。請求項1のI~IIIに記載の少なくとも一種のポリヌクレオチドまたはそれを含んでなる組換えベクターを導入してなる微生物を、デアセチルピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンEおよびピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、ピリピロペンAの製造法。プラスミドpCC1-PP1、pPP2、pPP3、pPP6、pPP7、およびpPP9からなる群より選択されるベクターを一種またはそれ以上含む微生物を、デアセチルピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンEおよびピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、請求項5に記載のピリピロペンAの製造法。下記VIおよびVIIに記載の少なくとも一種のポリヌクレオチドまたはそれを含んでなる組換えベクターを導入してなる微生物を、デアセチルピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンEおよびピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、請求項5に記載のピリピロペンAの製造法:VI配列番号269、270、274、および275からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸配列またはそれと実質的に同等なアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列から選択された少なくとも1個のヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド、VII下記の~に記載されたヌクレオチド配列から選択された少なくとも1個のヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド:1下記-に記載されたヌクレオチド配列:配列番号266で示されるヌクレオチド配列の13266番から15144番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の16220番から18018番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の23205番から24773番までのヌクレオチド配列、および配列番号266で示されるヌクレオチド配列の25824番から27178番までのヌクレオチド配列、21において記載されたヌクレオチド配列の相補配列と厳密な条件下でハイブリダイズ可能なヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、31において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドにおいて、1もしくは複数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加されたヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、41において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドと少なくとも90以上の同一性を有するヌクレオチド配列であり、かつそれぞれのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列。プラスミドpPP2、pPP3、pPP7、およびpPP9を含む微生物を、デアセチルピリピロペンEとともに培養して、ピリピロペンEおよびピリピロペンOを経由してピリピロペンAを単離することを特徴とする、請求項6に記載のピリピロペンAの製造法。請求項1のI~IIIに記載の少なくとも一種のポリヌクレオチドまたはそれを含んでなる組換えベクターを導入してなる微生物を、4-オキソ-6-3-ピリジル-α-ピロンとともに培養して、4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンを単離することを特徴とする、4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンの製造法。プラスミドpCC1-PP1、pPP2、pPP3、pPP6、pPP7、およびpPP9からなる群より選択されるベクターを一種またはそれ以上含む微生物を、4-オキソ-6-3-ピリジル-α-ピロンとともに培養して、4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンを単離することを特徴とする、請求項9に記載の4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンの製造法。下記VIIIおよびIXに記載の少なくとも一種のポリヌクレオチドまたはそれを含んでなる組換えベクターを導入してなる微生物を、4-オキソ-6-3-ピリジル-α-ピロンとともに培養して、4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンを単離することを特徴とする、請求項9に記載の4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンの製造法:VIII配列番号273のアミノ酸配列またはそれと実質的に同等なアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列から選択される少なくとも1個のヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド、IX下記の~に記載されたヌクレオチド配列から選択された少なくとも1個のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド:1配列番号266で示されるヌクレオチド配列の21793番から22877番までのヌクレオチド配列、21において記載されたヌクレオチド配列の相補配列と厳密な条件下でハイブリダイズ可能なヌクレオチド配列であり、かつそのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、31において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドにおいて、1もしくは複数個のヌクレオチドが欠失、置換、挿入もしくは付加されたヌクレオチド配列であり、かつそのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列、41において記載されたヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドと少なくとも90以上の同一性を有するヌクレオチド配列であり、かつそのヌクレオチド配列がコードするタンパク質と実質的に同等なタンパク質をコードするヌクレオチド配列。プラスミドpPP6を含む微生物を、4-オキソ-6-3-ピリジル-α-ピロンとともに培養して、4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンを単離することを特徴とする、請求項11に記載の4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンの製造法。請求項1のI~IIIに記載の少なくとも一種の単離されたポリヌクレオチド。下記、、、、、、、およびから選択される単離された、請求項13に記載のポリヌクレオチド:配列番号266のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、配列番号269、270、273、274、および275から選択されるアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、配列番号269に記載のアミノ酸配列と実質的に同等なアミノ酸配列を有し、水酸化酵素活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、配列番号270に記載のアミノ酸配列と実質的に同等なアミノ酸配列を有し、水酸化酵素活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、配列番号273に記載のアミノ酸配列と実質的に同等なアミノ酸配列を有し、プレニルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、配列番号274に記載のアミノ酸配列と実質的に同等なアミノ酸配列を有し、アセチル化酵素活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および配列番号275に記載のアミノ酸配列と実質的に同等なアミノ酸配列を有し、アセチル化酵素活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド下記、、、、およびから選択されるヌクレオチド配列を有する、単離されたポリヌクレオチド:配列番号266で示されるヌクレオチド配列の13266番から15144番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の16220番から18018番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の21793番から22877番までのヌクレオチド配列、配列番号266で示されるヌクレオチド配列の23205番から24773番までのヌクレオチド配列、および配列番号266で示されるヌクレオチド配列の25824番から27178番までのヌクレオチド配列。下記、、およびから選択される単離された、請求項13または14に記載のポリヌクレオチド:配列番号275から選択されるアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、配列番号275に記載のアミノ酸配列と実質的に同等なアミノ酸配列を有し、アセチル化酵素活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列番号266で示されるヌクレオチド配列の25824番から27178番までのヌクレオチド配列を有する、単離されたポリヌクレオチド。請求項14の、、、、およびに記載のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列が、それぞれ、配列番号269、270、273、274、および275に記載のアミノ酸配列と90以上の配列同等性を有する、請求項14に記載のポリヌクレオチド。請求項15のに記載のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号275に記載のアミノ酸配列と90以上の配列同等性を有する、請求項15に記載のポリヌクレオチド。プラスミドpPP6、pPP7、およびpPP9からなる群より選択される、組換えベクター。プラスミドpPP6、pPP7、およびpPP9からなる群より選択されるベクターを一種またはそれ以上を含んでなる、形質転換体。ピリピロペンAおよび/またはその製造中間体の製造のための、請求項18に記載の組換えベクターの使用。ピリピロペンAおよび/またはその製造中間体の製造のための、請求項19に記載の形質転換体の使用。以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。実施例1:ペニシリウムコピロビウムPF1169株のゲノムDNAの調製三角フラスコ1Lに滅菌したNB培地500mlを入れ、12CMMY寒天培地において、28°Cで、4日間前培養していたペニシリウムコピロビウムPF1169株公開技報2008500997号特許文献3を上記の培地に加え、28°Cで、4日間液体培養した。ミラクロスで濾過により、菌体5gを得た。この菌体よりゲノムDNA精製キットGenomictip100Gキアゲン株式会社製を、添付のマニュアルに従い、30μgのゲノムDNAを取得した。実施例2:ポリケチド合成酵素増幅用縮重プライマーとその増幅断片種々の糸状菌ポリケチド合成酵素に保存されているアミノ酸配列より増幅用縮重プライマーとして下記プライマーをデザインし、合成した:LC1:GAYCCIMGITTYTTYAAYATG配列番号1LC2c:GTICCIGTICCRTGCATYTC配列番号2ただし、RAG、YCT、MAC、Iイノシン。この縮重プライマーを使用して、実施例1において調製したゲノムDNAと、ExTaqポリメラーゼタカラバイオ株式会社製とを、添付のマニュアルに従い反応させ、約700bpの増幅断片を検出した図1参照。そして、前記増幅断片を解析し、その内部500bpの配列を特定した配列番号3。実施例3:ゲノムDNAの大量シークエンスとアミノ酸配列相同性検索実施例1において得られたペニシリウムコピロビウムPF1169株のゲノムDNAを大量シークエンスと、アミノ酸配列の相同性検索とに供した。具体的にはゲノムDNA50μgの一部を前処理の後、Roche社454FLXDNAシークエンサーに供し、約250bp、103万本のフラグメント配列総計49Mbの配列を取得した。この配列に対し、ポリケチド合成酵素およびプレニルトランスフェラーゼで既知である配列として、下記の五種の配列ポリケチド合成酵素:AspergillusfumigatusPKS2146aaおよびPenicilliumgriseofluvum6methylsalycilicacidsynthase1744aa、プレニルトランスフェラーゼ:AspergillusfumigatusPrenyltransferase、AspergillusfumigatusPrenyltransferase4hydroxybezoateoctaprenyltransferase、およびPenicilliummarneffeiPrenyltransferase由来の配列を選定し、相同配列検索ソフトblastxによる検索を実施した。それぞれ89本、86本、2本、1本、および3本の相同配列を取得した表1参照。さらに、AfumigatusPKS2146aaおよびPgriseofluvum6methylsalycilicacidsynthase1744aaの相同配列から、それぞれ19本、23本のコンティグ配列を取得したAfumigatusPKS2146aaのコンティグ配列:配列番号179~197、Pgriseofluvum6methylsalycilicacidsynthase1744aaのコンティグ配列:配列番号198~220表2参照。実施例4:ゲノムDNAからのPCR増幅実施例3において取得したblastxの検索結果より、ポリケチド合成酵素に対して、配列番号227~252に示す13種のプライマー対を合成した。同様に、プレニルトランスフェラーゼに対して、配列番号253~262に示す5種のプライマー対を合成した。これらのプライマーを用いて、ゲノムDNAに対するPCRを行ったところ、全プライマー対について期待される大きさの増幅断片を認めた図1および図2参照。実施例5:ファージゲノムライブラリーの作製ペニシリウムコピロビウムPF1169株のλファージゲノムライブラリーを、λBlueSTARXhoIHalfsiteArmsKitを用いて、添付のマニュアルに従い、構築した。すなわち、ゲノムDNAを、制限酵素Sau3A1を用いて部分分解し、約20kbのDNA断片05μgをキットに添付されたλBlueSTARDNA05μgに連結した。このライゲーション溶液をLambdaINNPackagingkitを用い、キットに添付のマニュアルに基づいてinvitroパッケージングを行い、1mlの溶液を取得した。このパッケージングされたファージ溶液10μlを大腸菌ER1647株100μlに感染させ、プラーク形成培地において、37°Cで、一晩培養後、約500クローンのプラークを得た。このように感染により10~20kbのペニシリウムコピロビウムPF1169株のゲノムDNAが導入されたファージ約50000クローンからなるゲノムライブラリーを作製した。実施例6:ファージライブラリーからのスクリーニング実施例5において調製したファージライブラリー10000クローンに対して、上記で調製したLC1-LC2cプライマー対により増幅させたPCR産物をプローブとして、プラークハイブリダイゼーションによる1次スクリーニングを行った。プローブの標識と検出にはAlkPhosDirectLabellingandDetectionSystemwithCDPStarGEヘルスケア株式会社製CatNoRPN3690を用いた。前記ハイブリダイゼーションは、添付のマニュアルに従い、実施した。1次スクリーニングにより、6クローンが候補として残った。さらに、プラークハイブリダイゼーションによる2次スクリーニングの結果、4クローンを取得した。これらの陽性クローンは大腸菌BM258株に感染させ、添付のマニュアルに従いファージをプラスミドに変換させ、目的領域を含む4種のプラスミドを取得した。実施例7:フォスミドゲノムライブラリーの作製ペニシリウムコピロビウムPF1169株のゲノムライブラリーは、CopyControlFosmidLibraryProductionKitEPICENTRE社製、CatNoCCFOS110を、添付のマニュアルに従い、構築した。すなわち、約40kbのゲノムDNA025μgのDNA断片を末端の平滑化を行った後、フォスミドベクターpCCFOSEpicentre社製に組み込んだ。このライゲーション溶液を同キット添付のMaxPlaxLambdaPackagingExtractを用い、キットに添付のマニュアルに基づいて、invitroパッケージングを行った。このパッケージングされたウィルス溶液10μlを大腸菌EPI300TMT1R株100μlに感染させ、クロラムフェニコール含有培地において、37°Cで、一晩培養し選抜したところ、300クローンのコロニーを得た。このように感染により40kbのペニシリウムコピロビウムPF1169株のゲノムDNAが導入されたフォスミド約30000クローンを取得した。1wellあたり約50クローンとなるように96wellプレートに分注し、つまり、96のプール、約4800クローンからなるゲノムライブラリーを作製した。実施例8:フォスミドライブラリースクリーニングフォスミド添付のマニュアルに従い、実施例7において作成したライブラリーの96プールより各プラスミドDNAを調製した。実施例2で合成したポリケチド合成酵素増幅用縮重プライマーを用いて、この96プールのプラスミドDNAサンプルに対して、PCRを行った。その結果、約700bpのDNA断片が、9プールより増幅した。さらにこのポジティブプールから、約300クローン以上のコロニーを含むシャーレを作製し、コロニーハイブリダイゼーションにより再スクリーニングした。その結果、LC1LC2cプライマー対を用いて、約4800クローンより9種のフォスミドを取得した。実施例9:ゲノムDNAの大量シークエンスとアミノ酸配列相同性検索実施例1において得られたペニシリウムコピロビウムPF1169株のゲノムDNAを大量シークエンスと、アミノ酸配列の相同性検索とに供した。具体的にはゲノムDNA50μgの一部を前処理の後、Roche社454FLXDNAシークエンサーに供し、平均コンティグ長19621kb、1405本のフラグメント配列総塩基長27568160Mbの配列を取得した。この配列に対し、ポリケチド合成酵素およびプレニルトランスフェラーゼで既知である配列として、下記の五種の配列ポリケチド合成酵素:Penicilliumgriseofluvum6methylsalycilicacidsynthase1744aaおよびAspergillusfumigatusPKS2146aa、プレニルトランスフェラーゼ:PenicilliummarneffeiPrenyltransferase、AspergillusfumigatusPrenyltransferase、およびAspergillusfumigatusPrenyltransferase4hydroxybezoateoctaprenyltransferase由来の配列を選定し、相同配列検索ソフトblastxによる検索を実施した。それぞれ22本、21本、2本、3本、および3本の相同配列を取得した。実施例10:フォスミドライブラリースクリーニング及びクラスター遺伝子の配列解析フォスミドキットEPICENTRE社製CopyControlFosmidLibraryProductionKitに添付されているマニュアルに従い、実施例7において作成したライブラリーの96プールより各プラスミドDNAを調製した。Roche社454FLXDNAシークエンサーにより決定された塩基配列に基づいてアミノ酸配列の相同性検索を行い、ポリケチド合成酵素とプレニルトランスフェラーゼが近接する領域を検索した。得られた領域のプレニルトランスフェラーゼの塩基配列より400bpのDNA断片を増幅しうるプライマー対No27を合成した。このプライマーを用いて、この48プールのプラスミドDNAサンプルに対して、PCRを行った。その結果期待される約400bpのDNA断片配列番号263が、11プールより増幅した図3参照。さらに、このポジティブプールのうち6プールから、約300クローン以上のコロニーを含むシャーレを作製し、コロニーハイブリダイゼーションにより再スクリーニングした。その結果、27F27Rのプライマー対27Fプライマー:配列番号264、27Rプライマー:配列番号265を用いて、約4800クローンより4種のフォスミドを取得した。この内の一つをpCC1PP1と命名し、挿入断片の全配列を決定した配列番号266。得られたpCC1PP1により大腸菌EscherichiacoliEPI300TMT1R株フォスミドキットに付属を形質転換することにより大腸菌EscherichiacoliEPI300TMT1R株/pCC1PP1を得た。なお、前記配列番266の配列とCoAligase、LovBlikepolyketidesynthase、水酸化酵素であるCytochromeP450monooxygenase、Cyclase、FADdependentmonooxygenase、UbiAlikeprenyltransferase、アセチル化酵素であるAcetyltransferase、Acetyltransferase2、およびCationtransportingATPase上記酵素は、いずれもAspergillusfumigatusAf293株由来との、相同性検索をそれぞれ行ったところ、いずれも70以上の高い相同性を示した。配列番号266のヌクレオチド3342-5158は、CoAligaseをコードし、その対応するポリペプチドは、配列番号267に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド5382-12777は、LovBlikepolyketidesynthaseをコードし、対応するポリペプチドは、配列番号268に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド13266-15144以下、このポリヌクレオチド配列によりコードされるタンパク質をCytochromeP450monooxygenase1P4501とするおよび16220-18018以下、このポリヌクレオチド配列によりコードされるタンパク質をCytochromeP450monooxygenase2P4502とするは、CytochromeP450monooxygenaseをコードし、対応するポリペプチドは、それぞれ、配列番号269、270に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド18506-19296は、Cyclaseをコードし、対応するポリペプチドは、配列番号271に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド19779-21389は、FADdependentmonooxygenaseをコードし、対応するポリペプチドは、配列番号272に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド21793-22877は、UbiAlikeprenyltransferaseをコードし、対応するポリペプチドは、配列番号273に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド2320524773は、Acetyltransferaseをコードし、対応するポリペプチドは、配列番号274に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド25824-27178は、Acetyltransferase2をコードし、対応するポリペプチドは、配列番号275に記載したアミノ酸配列で示され、配列番号266のヌクレオチド27798-31855は、CationtransportingATPaseをコードし、対応するポリペプチドは、配列番号276に記載したアミノ酸配列で示された。実施例11:AspergillusOryzaeの形質転換による遺伝子の機能解析以下で用いるピリピロペンEは、特開平8-239385号公報、WO94/09147号公報、または米国特許5597835号公報に記載される方法に準じた微生物培養法によるか、TetrahedronLettersvol37No36646164641996に記載される全合成の方法によって製造することができた。また、以下で用いるピリピロペンOは、JAntibiotics492922981996またはWO94/09147号公報に記載される方法に準じた微生物培養法によって製造することができた。1糸状菌導入用発現ベクターの作製pUSA図4とpHSG399タカラバイオ社をそれぞれKpnI切断し、連結することにより、pUSAHSGを取得した。このプラスミドをSmaI、KpnIの順で切断し、ゲル精製することで、KpnIの粘着末端とSmaIの平滑末端を有す線状ベクターDNAを取得した。2pPP2のプラスミドの作製FosmidpCC1PP1を鋳型として、プライマー対P4501withKpnF配列番号277P4501withSwaR配列番号278を用いて前記P4501のポリヌクレオチドを増幅し、精製したDNA断片をpCRBluntInvitorogen社CatNoK270020にクローン化した。得られたプラスミドをKpnIとSwaIで切断し、前記P4501断片を上述したベクターpUSAHSGにライゲーションし、図5に示すpPP2のプラスミドを取得した。3pPP3のプラスミドの作製FosmidpCC1PP1を鋳型としてとして、図6に示す流れに従い、まず、プライマー対F1配列番号279R1配列番号280、F2配列番号281R2配列番号282、F3配列番号283R3配列番号284、F4配列番号285R4配列番号286、F5配列番号287R5配列番号288、およびF6配列番号289R6配列番号290を用い、エキソンのみを増幅し、六つの断片を取得した。次にこれらの断片を鋳型としてF1R2、F3R4、およびF5R6のプライマー対により増幅し、より長い断片を取得した。さらに、F1R4およびF1R6のプライマー対により増幅を繰り返すことによって前記P4502のポリヌクレオチドのイントロンを含まないcDNAを作製した。このcDNA断片をpCRBluntInvitorogen社CatNoK270020に導入し、得られたプラスミドを鋳型として、プライマー対infusionFofP4502cDNA配列番号291infusionRofP4502cDNA配列番号292により増幅した。キットのマニュアルに基づいて、InFusionAdvantagePCRCloningKitClontech社を用い、図7に示すpPP3のプラスミドを取得した。4pPP6、pPP7、およびpPP9の各プラスミドの作製上記実施例111で取得した糸状菌形質転換用ベクターpUSAHSGを使って、以下のpPP6、pPP7、およびpPP9の各プラスミドを取得した。1プラスミドpPP6の作製UbiAPTFosmidpCC1PP1を鋳型として、UbiAPTFwithKpn配列番号293とUbiAPTRwithSwa配列番号294を用いて前記UbiAPTのポリヌクレオチドを各々増幅し、精製したDNA断片をPCR断片用ベクターpCRBluntInvitorogen社CatNoK270020にクローン化した。得られたプラスミドをKpnIとSwaIとで切断し、各断片を精製した後、前記糸状菌ベクターpUSAHSGのKpnIとSmaIにライゲーションし、図12に示すpPP6のプラスミドを取得した。2pPP7のプラスミドの作製ATFosmidpCC1PP1を鋳型として、プライマー対ATFwithSwa配列番号295とATRwithKpn配列番号296を用いてATのポリヌクレオチドを各々増幅し、精製した断片をPCR断片用ベクターpCRBluntInvitorogen社CatNoK270020にクローン化した。得られたプラスミドをKpnIとSwaIで切断し、各断片を前記糸状菌ベクターpUSAHSGのKpnIとSmaIにライゲーションし、図12に示すpPP7のプラスミドを取得した。3pPP9のプラスミドの作製FosmidpCC1PP1を鋳型として、プライマー対infusionFofToxin配列番号297とinfusionRofToxin配列番号298を用いてToxin断片を増幅、InFusionAdvantagePCRCloningKitClontech社製CatNo639619をキットのマニュアルに基づいて前記糸状菌ベクターpUSAHSGのKpnIと、SmaIとの間に挿入し、図12に示すpPP9のプラスミドを取得した。5AspergillusOryzaeAoryzaeの形質転換体の取得CDMetLMethionine40μgml含有寒天培地でAoryzaeHL1105株を30°Cで1週間培養した。このシャーレから分生子>108を回収し、500mlのフラスコに100mlのYPD液体培地に接種した。20時間培養30°C、180rpm後、毬藻状の菌体を取得した。菌体を3G1グラスフィルターで集め、08MNaClで洗浄し、よく脱水し、TF溶液Iで懸濁後、30°C、60rpmで2時間振盪した。なお、30分間ごとに顕微鏡で観察し、プロトプラストの存在を確認した。その後、培養液を濾過し、遠心2000rpm、5分間によりプロトプラストを回収後、TF溶液IIで洗浄した。洗浄後、08容量のTF溶液IIおよび02容量のTF溶液IIIを加え混和して、プロトプラスト懸濁液を取得した。この懸濁液200μlにプラスミドDNApPP2あるいはpPP310μgを加え、氷上で30分間静置し、TF溶液III1mLを加え穏やかに混和した。その後、室温で15分間静置して、前記プロトプラストにプラスミドDNAを導入した。これにTF溶液IIを加え、遠心2000rpmで5分間し、1~2ml残してプロトプラストを回収した。再生培地下層に回収したプロトプラスト液を滴下し、再生培地上層を流し込み、シャーレを廻して混和後、30°Cで4~5日培養した。出てきたクローンを再生培地下層に単離し、植え継ぎ純化することにより形質転換体AspergillusoryzaePP21およびAspergillusoryzaePP32を取得した。上記実施例11の5に記載される方法に準じて各プラスミドDNApPP6、pPP7、およびpPP9を導入した形質転換体AspergillusoryzaePP6、AspergillusoryzaePP7、およびAspergillusoryzaePP9を取得した。上記TF溶液Iは下記組成を用いて調製した。上記組成を調製後、ろ過滅菌を行った。上記TF溶液IIは下記組成を用いて調製した。更に水を加えて全量を200mlとした。上記組成を調製後、オートクレーブ滅菌を行った。上記TF溶液IIIは下記組成を用いて調製した。更に水を加えて全量を10mlとした。上記組成を調製後、ろ過滅菌を行った。上記再生培地は下記組成を用いて調製した。更に水を加えて全量を1Lとした。上記組成を調製後pH55、オートクレーブ滅菌を行った。また、上記で用いたTraceelementssolutionは下記組成を用いて調製した。更に水を加えて全量を1Lとした。上記組成を調製後、オートクレーブ滅菌を行った。6P4501の機能解析および添加培養試験1マルトースを含むYPD培地酵母エキス、2ペプトン、2デキストロースDextroseに、1100容のピリピロペンEの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地Aとした。ツァペックドックス寒天培地に培養したAspergillusoryzaePP21の菌叢より分生子を採取し、滅菌水に懸濁した。この分生子懸濁液を104sporemLに調製し、この調製した分生子懸濁液のうち100μLを10mLの培地Aに添加し、25°Cで96時間振盪培養した。この培養液に10mLのアセトンを添加し、よく混合した後、遠心濃縮器を用いてアセトンを留去した。これに10mLの酢酸エチルを添加し、よく混合した後、酢酸エチル層のみを分取した。遠心濃縮器を用いて酢酸エチルを留去して得られた乾固物を1000μLのメタノールに溶解した。これをサンプルとして用い、LCMS、およびLCNMRにより分析した。上記LCMS測定の結果、得られた化合物はピリピロペンEよりも16分子量増加した単一の化合物Aであることを確認した。また、LCNMR測定の結果、この化合物AはピリピロペンEの11位水酸化体であることを確認した。前記CytochromeP450monooxygenase1はピリピロペンEを基質とし、ピリピロペンEの11位を水酸化する酵素活性を有することを確認した。前記化合物Aの物理化学的性状を下に示す。1.マススペクトラム:ESMS468MZ2.分子式:C27H33NO63.HPLC:カラムWatersXTerraColumnC18ピリピロペンEおよび上記4に記載の1HNMRスペクトルのチャートは、それぞれ、図8および図9に示される通りであった。7P4502の機能解析および添加培養試験1マルトースを含むYPD培地酵母エキス、2ペプトン、2デキストロースに1100容のピリピロペンEの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地A、同じく1100容のピリピロペンOの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地Bとした。ツァペックドックス寒天培地に培養したAspergillusoryzaePP32の菌叢より分生子を採取し、滅菌水に懸濁した。この分生子懸濁液を104sporemLに調製し、このうち500μLを50mLの培地Aまたは培地Bに添加し、25°Cで96時間振盪培養した。この培養液に50mLのアセトンを添加し、よく混合した後、遠心濃縮器を用いてアセトンを留去した。これに50mLの酢酸エチルを添加し、よく混合した後、酢酸エチル層のみを分取した。遠心濃縮器を用いて酢酸エチルを留去して得られた乾固物を1500μLのメタノールに溶解した。これをサンプルとし、LCMSおよびLCMNRで分析した。LCMS測定の結果、培地Aから得られたサンプルから、ピリピロペンEより32分子量の増加した化合物Bを検出した。また、培地Bから得られたサンプルから、ピリピロペンOより32分子量の増加した化合物Cを検出した。さらに、LCNMR測定の結果、化合物CはピリピロペンOの7位および13位水酸化体であることが確認された。前記CytochromeP450monooxygenase2は、ピリピロペンEまたはピリピロペンOのそれぞれ7位および13位を水酸化する酵素活性を有することが確認された。化合物Bの物理化学的性状を下に示す。1.マススペクトラム:ESMS484MZ2.分子式:C27H33NO73.HPLC:カラムWatersXTerraColumnC18、2.分子式:C29H35NO93.HPLC:カラムWatersXTerraColumnC18、ピリピロペンOおよび上記化合物Cの1HNMRスペクトルのチャートは、それぞれ、図10および図11に示される通りであった。8Prenyltransferaseの機能解析および添加培養試験1マルトースを含むYPD培地酵母エキス、2ペプトン、2デキストロースに1100容の化合物D4-オキソ-6-3-ピリジル-α-ピロン、以下同じ参考例1参照の2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地Cとした。ツァペックドックス寒天培地に培養したAspergillusoryzaePP6の菌叢より分生子を採取し、滅菌水に懸濁した。この分生子懸濁液を104sporemLに調整し、このうち200μLを20mLの培地Cに添加し、25°Cで96時間振盪培養した。この培養液に20mLのアセトンを添加し、よく混合した後、遠心濃縮器を用いてアセトンを留去した。これに20mLの酢酸エチルを添加し、よく混合した後、酢酸エチル層のみを分取した。遠心濃縮器を用いて酢酸エチルを留去して得られた乾固物を1000μLのメタノールに溶解した。これをサンプルとし、LCMSで分析した。LCMS測定の結果、化合物Dにファルネシル基が付加した化合物F4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オン、以下同じを検出し、参考例2に記載の化合物FとLCMS上での保持時間、分子イオンピーク、UV吸収の一致を確認した。このことから、Prenyltransferaseは化合物Dにファルネシル基を付加するプレニルトランスフェラーゼ活性を有することが確認された。9Acetyltransferase1の機能解析および添加培養試験1マルトースを含むYPD培地酵母エキス、2ペプトン、2デキストロースに1100容のデアセチルピリピロペンEの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地D、1100容の11位デアセチルピリピロペンO参考例4参照の2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地E、7位デアセチルピリピロペンAの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地Fとした。ツァペックドックス寒天培地に培養したAspergillusoryzaePP7の菌叢より分生子を採取し、滅菌水に懸濁した。この分生子懸濁液を104sporemLに調整し、このうち200μLを20mLの培地D、培地E、または培地Fに添加し、25°Cで96時間振盪培養した。この培養液に20mLのアセトンを添加し、よく混合した後、遠心濃縮器を用いてアセトンを留去した。これに20mLの酢酸エチルを添加し、よく混合した後、酢酸エチル層のみを分取した。遠心濃縮器を用いて酢酸エチルを留去して得られた乾固物を1000μLのメタノールに溶解した。これをサンプルとし、LCMSで分析した。LCMS測定の結果、培地DからデアセチルピリピロペンEよりも42分子量増加した単一化合物を検出し、ピリピロペンEと保持時間、分子イオンピーク、UV吸収が一致することを確認した。一方、培地Eおよび培地Fからは新たに生成した化合物を検出しなかった。このことから、Acetyltransferase1はデアセチルピリピロペンEの1位を特異的にアセチル化するアセチル化酵素活性を有することが確認された。10Acetyltransferase2の機能解析および添加培養試験1マルトースを含むYPD培地酵母エキス、2ペプトン、2デキストロースに1100容のデアセチルピリピロペンEの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地D、1100容の11位デアセチルピリピロペンOの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地E、7位デアセチルピリピロペンAの2mgmLジメチルスルホキシド溶液を添加した培地を培地Fとした。ツァペックドックス寒天培地に培養したAspergillusoryzaePP9の菌叢より分生子を採取し、滅菌水に懸濁した。この分生子懸濁液を104sporemLに調整し、このうち200μLを20mLの培地D、培地Eまたは培地Fに添加し、25°Cで96時間振盪培養した。この培養液に20mLのアセトンを添加し、よく混合した後、遠心濃縮器を用いてアセトンを留去した。これに20mLの酢酸エチルを添加し、よく混合した後、酢酸エチル層のみを分取した。遠心濃縮器を用いて酢酸エチルを留去して得られた乾固物を1000μLのメタノールに溶解した。これをサンプルとし、LCMSで分析した。LCMS測定の結果、培地Eから11位デアセチルピリピロペンOよりも42分子量増加した単一化合物を検出し、ピリピロペンO参考例7参照と保持時間、分子イオンピーク、UV吸収が一致することを確認した。また、培地Fから7位デアセチルピリピロペンAよりも42分子量増加した単一化合物を検出し、ピリピロペンA参考例8参照と保持時間、分子イオンピーク、UV吸収が一致することを確認した。一方、培地Dからは新たに生成した化合物を検出しなかった。このことから、Acetyltransferase2は11位デアセチルピリピロペンOの11位および7位デアセチルピリピロペンAの7位を特異的にアセチル化するアセチル化酵素活性を有することが確認された。参考例1:化合物D4-オキソ-6-3-ピリジル-α-ピロンの合成前記化合物Dは、JOrgChem1983483945に記載の方法で取得した。参考例2:化合物F4-ヒドロキシ-6-ピリジン-3-イル-3-2E6E-3,7,11-トリメチルドデカ-2,6,10-トリエニル-2H-ピラン-2-オンの取得および構造解析公開技法2008500997号特許文献3に記載の方法で取得したピリピロペン類を含有する培養ブロスを酢酸ブチルで抽出した後、セライトを用いて濾過した。濾過時に用いたセライトを取り出し、メタノールを加えた。室温で23時間撹拌後、不溶物を濾過で取り除き、減圧下でメタノールを留去することで化合物F191mgを得た。ESIMS;mz3941HNMRδ148151155169185191195201303498502513675754809866891参考例3:デアセチルピリピロペンEの合成および構造解析ピリピロペンE29mgをメタノール水191、1mLに溶解して、炭酸カリウム53mgを加えた。44時間撹拌した後、減圧下で溶媒を留去し、クロロホルムメタノール101の混合溶媒を加えた。濾過により不溶物を取り除き、減圧下で溶媒を留去することで、粗生成物を得た。粗生成物を分取薄層クロマトグラフィーMerckシリカゲル60F25405mm、クロロホルムメタノール101にて精製して、デアセチルピリピロペンE18mgを得た。ESIMS;mz4101HNMRδ082092100103104112127141153159175180184215218229254325643739811865899参考例4:11位デアセチルピリピロペンOの合成および構造解析ピリピロペンO30mgをメタノール水191、2mLに溶解して、炭酸カリウム20mgを加えた。22時間撹拌した後、酢酸01mlを加え、減圧下で溶媒を留去した。酢酸エチルと水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去することで、1位、11位デアセチルピリピロペンOの粗生成物30mgを得た。1位、11位デアセチルピリピロペンOの粗生成物23mgをNNジメチルホルムアミド04mLに溶解してトリエチルアミン8mg、無水酢酸を加えた。室温で23時間撹拌した後、水を加えて、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去することで、1位デアセチルピリピロペンOの粗生成物28mgを得た。1位デアセチルピリピロペンOの粗生成物28mgをトルエンに溶解して、18ジアザビシクロ5407ウンデセンを加えた。70°Cで20時間撹拌した後、放冷し、酢酸エチルと水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去することで、11位デアセチルピリピロペンOの粗生成物20mgを得た。これをメタノールで溶解後サンプルとし、HPLCSHIMADZU製LC-6ADSPDM20APDACBM20AColumnWatersXTerraC181HNMRδ068095121221125205220250294333487648757829868904参考例5:7位デアセチルピリピロペンAの合成7位デアセチルピリピロペンAは、特開平8259569号公報に記載の方法で合成された。参考例6:ピリピロペンEの取得ピリピロペンEは、特開平8239385号公報に記載の方法で取得した。参考例7:ピリピロペンOの取得ピリピロペンOは、JAntibiot199649292に記載の方法で取得した。参考例8:ピリピロペンAの合成ピリピロペンAは、WO94/09147号公報に記載の方法で取得した。"