ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クレブシエラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、モラクセラカタラーリス、メチシリン耐性スタフィロコッカスアウレウスMRSA、スタフィロコッカスアウレウスから選ばれる少なくとも3種類の肺炎菌類を検出対象とする肺炎原因菌の検出方法であって、以下の工程a~工程fを備えたことを特徴とする検出方法。1試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸からプライマーを用いて1本鎖核酸として増幅する工程a;2増幅産物と相補的なヌクレオチド配列から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプローブ対を調製する工程b;3標識高分子担体に少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブを結合させ、第1プローブ結合標識高分子担体を調製する工程c;4第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブを、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化した第2プローブ担持展開支持体を調製する工程d;5前記増幅産物を、展開支持体に担持された第2プローブ及び標識高分子担体に結合した第1プローブにハイブリダイズさせて検出する工程e;6検出像を判定することにより評価する工程f;プライマーが、配列番号21に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号31に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号22に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号32に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号23に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号33に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号24に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号34に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号25に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号35に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号26に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号36に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号27に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号37に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号28に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号38に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号29に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号39に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号30に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号40に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプライマー対であることを特徴とする請求項1記載の検出方法。少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブが、配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAからなり、第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブが、配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAであることを特徴とする請求項1又は2記載の検出方法。ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クレブシエラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、モラクセラカタラーリス、メチシリン耐性スタフィロコッカスアウレウスMRSA、スタフィロコッカスアウレウスから選ばれる少なくとも3種類の肺炎菌類を検出対象とする肺炎原因菌の検出キットであって、試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸を増幅することができる配列番号21に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号31に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号22に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号32に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号23に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号33に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号24に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号34に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号25に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号35に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号26に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号36に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号27に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号37に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号28に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号38に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号29に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号39に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号30に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号40に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプライマー対を備えたことを特徴とするキット。さらに、1増幅産物と相補的なヌクレオチド配列から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブが標識高分子担体に結合された第1プローブ結合標識高分子担体;2第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブが、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化された第2プローブ担持展開支持体;を備えたことを特徴とする請求項4記載のキット。少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブが、配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAからなり、第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブが、配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAであることを特徴とする請求項5記載のキット。本発明の課題は、肺炎患者の診断に際して、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クレブシエラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、モラクセラカタラーリス、メチシリン耐性スタフィロコッカスアウレウスMRSA、スタフィロコッカスアウレウスこれら個々の菌を以下検出対象肺炎菌又は単に肺炎菌、総称して10種類の検出対象肺炎菌ということがある。の迅速で正確な検出方法や、それに用いる検出キットを提供することにある。本発明者らは、臨床における実用化を図るために、肺炎の原因菌の検出精度をより高める方法について検討し、DnaJ遺伝子が16SrRNA配列の約10倍の遺伝子多型を有するとされる知見をもとにDnaJ領域をはじめ、各種肺炎菌に特異的な遺伝子領域を中心に、10種類の各肺炎原因菌のDnaJ遺伝子等に含まれる10種類の検出対象肺炎菌の各ターゲット領域に対するプライマー対のセットを設計し、かかるプライマー対のセットを用いて、NASBA法により遺伝子産物を増幅し、増幅産物である標的核酸を定性定量して、複数種類の肺炎原因菌を高精度に検出できることを見いだした。さらにかかる増幅産物を、プライマー対のセットとは異なる10種類の検出対象肺炎菌の各ターゲット領域内の配列にハイブリダイズする各種肺炎菌固有のプローブ対のセットを設計し、かかるプローブ対のセットを用いて核酸クロマトグラフ法を行うことにより、一回の操作で10種類までの複数種類の検出対象肺炎菌を高精度に検出できることを見いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、1ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クレブシエラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、モラクセラカタラーリス、メチシリン耐性スタフィロコッカスアウレウスMRSA、スタフィロコッカスアウレウスから選ばれる少なくとも3種類の肺炎菌類を検出対象とする肺炎原因菌の検出方法であって、1試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸からプライマーを用いて1本鎖核酸として増幅する工程a;2増幅産物と相補的なヌクレオチド配列から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプローブ対を調製する工程b;3標識高分子担体に少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブを結合させ、第1プローブ結合標識高分子担体を調製する工程c;4第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブを、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化した第2プローブ担持展開支持体を調製する工程d;5前記増幅産物を、展開支持体に担持された第2プローブ及び標識高分子担体に結合した第1プローブにハイブリダイズさせて検出する工程e;6検出像を判定することにより評価する工程f;の各工程を備えたことを特徴とする検出方法や、2プライマーが、配列番号21に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号31に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号22に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号32に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号23に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号33に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号24に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号34に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号25に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号35に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号26に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号36に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号27に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号37に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号28に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号38に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号29に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号39に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号30に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号40に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプライマー対であることを特徴とする上記1記載の検出方法や、3少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブが、配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAからなり、第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブが、配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAである上記1又は2記載の検出方法に関する。また、本発明は、4ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クレブシエラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、モラクセラカタラーリス、メチシリン耐性スタフィロコッカスアウレウスMRSA、スタフィロコッカスアウレウスから選ばれる少なくとも3種類の肺炎菌類を検出対象とする肺炎原因菌の検出キットであって、試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸を増幅することができる配列番号21に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号31に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号22に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号32に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号23に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号33に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号24に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号34に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号25に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号35に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号26に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号36に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号27に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号37に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号28に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号38に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号29に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号39に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号30に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号40に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプライマー対を備えたことを特徴とするキットや、5さらに、1増幅産物と相補的なヌクレオチド配列から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブが標識高分子担体に結合された第1プローブ結合標識高分子担体;2第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブが、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化されたた第2プローブ担持展開支持体;を備えたことを特徴とする上記4記載のキットや、6少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブが、配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAからなり、第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブが、配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類のDNAであることを特徴とする上記5記載のキットに関する。本発明により、肺炎患者の診断に際して、簡便な方法により、迅速で正確な肺炎原因菌の特定が可能となった。本発明の肺炎原因菌を検出する方法としては、1試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸からプライマーを用いて1本鎖核酸として増幅する工程a;2増幅産物と相補的な配列番号1~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプローブ対を調製する工程b;3配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブを標識高分子担体に結合させ、第1プローブ結合標識高分子担体を調製する工程c;4配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる、第1のプローブと対をなす少なくとも3種類の各肺炎菌の第2のプローブを、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化した固相化第2プローブを担持した展開支持体を調製する工程d;5前記増幅産物を、展開支持体に担持された固相化第2プローブ及び標識高分子担体結合第1プローブにハイブリダイズさせて検出する工程e;6検出像を判定することにより評価する工程f;を備えた、10種類の検出対象肺炎菌から選ばれる少なくとも3種類の検出対象肺炎菌を検出対象とする方法であれば特に制限されないが、検出対象肺炎菌として少なくとも5種類、すなわち5~10種類を検出することが好ましい。本発明の肺炎原因菌を検出する方法としては、1試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸を増幅することができる配列番号21に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号31に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号22に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号32に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号23に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号33に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号24に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号34に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号25に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号35に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号26に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号36に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号27に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号37に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号28に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号38に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号29に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号39に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号30に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号40に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類のプライマー対を調製する工程a’;2検出対象の肺炎菌類の核酸を含む可能性のある被検試料と、少なくとも3種類のキメラプライマー対を接触させ、RNA増幅法により遺伝子産物を増幅する工程b’;3増幅産物である標的核酸を定性定量する工程c’;を備えた10種類の検出対象肺炎原因菌から選ばれる少なくとも3種類の検出対象肺炎原因菌を検出対象とする方法を用いることもできる。この方法においては、検出対象肺炎菌として少なくとも5種類、すなわち5~10種類を検出することが好ましい。上記検出対象肺炎菌が3種類の場合、外来患者において検出されることが多いストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ及びクラミドフィラニューモニエ以下外来患者用検出対象肺炎菌ともいうのうち、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ及びマイコプラズマニューモニエや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ及びレジオネラニューモフィラや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、及びクラミドフィラニューモニエ等の3種類の組合せや、院内感染により入院患者において検出されることが多いシュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、スタフィロコッカスアウレウス、MRSA、モラクセラカタラーリス以下入院患者用検出対象肺炎菌ともいうのうち、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ及びスタフィロコッカスアウレウスや、クレブシエラニューモニエ、スタフィロコッカスアウレウス及びMRSAや、シュードモナスアエルギノーサ、MRSA及びモラクセラカタラーリスや、スタフィロコッカスアウレウス、MRSA及びモラクセラカタラーリス等の3種類の組合せや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ及びMRSAや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ及びシュードモナスアエルギノーサ等の3種類の組合せなどからなる120通りの3種類の肺炎菌類の組合せを例示することができる。上記検出対象肺炎菌が4種類の場合、外来患者用検出対象肺炎菌のうち、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ及びレジオネラニューモフィラや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ及びクラミドフィラニューモニエや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、レジオネラニューモフィラ及びクラミドフィラニューモニエや、ストレプトコッカスニューモニエ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ及びクラミドフィラニューモニエや、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ及びクラミドフィラニューモニエ等の4種類の組合せや、入院患者用検出対象肺炎菌のうち、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、スタフィロコッカスアウレウス及びMRSAや、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、スタフィロコッカスアウレウス、及びモラクセラカタラーリスや、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、MRSA及びモラクセラカタラーリスや、シュードモナスアエルギノーサ、スタフィロコッカスアウレウス、MRSA及びモラクセラカタラーリスや、クレブシエラニューモニエ、スタフィロコッカスアウレウス、MRSA及びモラクセラカタラーリス等の4種類の組合せや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ及びMRSAや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、シュードモナスアエルギノーサ及びMRSA等の4種類の組合せなどからなる210通りの4種類の肺炎菌類の組合せを例示することができる。上記検出対象肺炎菌が5種類の場合、外来患者用検出対象肺炎菌5種類や、入院患者用検出対象肺炎菌5種類の他、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ及びMRSAや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ及びMRSAや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、MRSA及びスタフィロコッカスアウレウスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ及びクラミドフィラニューモニエや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、MRSA及びモラクセラカタラーリス等からなる252通りの5種類の肺炎菌類の組合せを例示することができる。上記検出対象肺炎菌が6種類の場合、外来患者用検出対象肺炎菌及びMRSAや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、MRSA及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、MRSA及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クラミドフィラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、シュードモナスアエルギノーサ、MRSAや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、MRSAや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス、モラクセラカタラーリス等からなる210通りの6種類の肺炎菌類の組合せを例示することができる。上記検出対象肺炎菌が7種類の場合、外来患者用検出対象肺炎菌、MRSA及びスタフィロコッカスアウレウスや、外来患者用検出対象肺炎菌、MRSA及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリス等からなる120通りの7種類の肺炎菌類の組合せを例示することができる。上記検出対象肺炎菌が8種類の場合、外来患者用検出対象肺炎菌、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリスや、外来患者用検出対象肺炎菌、シュードモナスアエルギノーサ、MRSA及びスタフィロコッカスアウレウスや、外来患者用検出対象肺炎菌、シュードモナスアエルギノーサ、MRSA及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、シュードモナスアエルギノーサ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、シュードモナスアエルギノーサ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス及びモラクセラカタラーリス等からなる90通りの8種類の肺炎菌類の組合せを例示することができる。上記検出対象肺炎菌が9種類の場合、外来患者用検出対象肺炎菌、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス、モラクセラカタラーリス、及びクレブシエラニューモニエや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、スタフィロコッカスアウレウス、MRSA、モラクセラカタラーリスや、ストレプトコッカスニューモニエ、ヘモフィルスインフルエンザ、マイコプラズマニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、シュードモナスアエルギノーサ、MRSA、スタフィロコッカスアウレウス、モラクセラカタラーリス等からなる10通りの9種類の肺炎菌類の組合せを例示することができる。上記工程aにおける増幅産物を調製する方法としては、検出対象肺炎菌を含む可能性のある試料中より任意に抽出された上記各検出対象肺炎菌に特異的な標的核酸を、当該標的核酸を増幅することができるプライマーを用いて1本鎖核酸として増幅する方法であれば特に制限されない。上記各肺炎菌に特異的な標的核酸としては、ストレプトコッカスニューモニエのlytAや、ヘモフィルスインフルエンザのdnaJや、マイコプラズマニューモニエのdnaJ1や、クラミドフィラニューモニエのdnaJや、スタフィロコッカスアウレウスのspaAや、MRSAのmecAや、レジオネラニューモフィラのdnaJや、モラクセラカタラーリスのdnaJや、シュードモナスアエルギノーサのdnaJや、クレブシエラニューモニエのdnaJに含まれる領域の核酸を例示することができる。上記工程a又はa’において用いられるプライマー対は、10種類の検出対象肺炎菌における各肺炎菌特異的な標的核酸を増幅することができるプライマー対であり、配列番号21~40に示されるヌクレオチド配列から選ばれる検出対象肺炎菌ごとに異なる標的配列を含むプライマー対である。より具体的には、ストレプトコッカスニューモニエには5’-CAATCTAGCAGATGAAGCAGG-3’配列番号21と5’-GGTTGTTTGGTTGGTTATTCG-3’配列番号31、ヘモフィルスインフルエンザには5’-TCAATACTCTTGCACATTGTGAT-3’配列番号22と5’-ATACGAAGAAACCTTGCTGAC-3’配列番号32、マイコプラズマニューモニエには5’-CCGGGATGGTTAGCTGTAACAG-3’配列番号23と5’-TACCTTCTTGTACTTACTTCC-3’配列番号33、クラミドフィラニューモニエには5’-CATGGTGTTGAGAAGGAACTTGTAGT-3’配列番号24と5’-TCCACGACTCTGTACCACTTG-3’配列番号34、レジオネラニューモフィラには5’-CGTCAATCACGTGGACAAAGAG-3’配列番号25と5’-AGTACCATGTCTTGGAACGGT-3’配列番号35、クレブシエラニューモニエには5’-GAAGTTCCGATCAACTTCAC-3’配列番号26と5’-AAGCTCTCCTGAAGCTCTTT-3’配列番号36、シュードモナスアエルギノーサには5’-ACAGGGATCGGAAATCAT-3’配列番号27と5’-CGCGGACCTGCGCTACACCCTGGACC-3’配列番号37、モラクセラカタラーリスには5’-CAAAGGCTTGCCCAAAGATA-3’配列番号28と5’-GAAGCCGAAGAAAAGCTCAA-3’配列番号38、MRSAには5’-GTATGTGGAAGTTAGATTGGG-3’配列番号29と5’-GATACATTCTTTGGAACGAT-3’配列番号39、スタフィロコッカスアウレウスには5’-GAGTACATGTCGTTAAACCTGGTG-3’配列番号30と5’-TACAGTTGTACCGATGAATGG-3’配列番号40にそれぞれに示される標的ヌクレオチド配列を含む、フォワードプライマーとリバースキメラプライマーからなるプライマー対の組合せが用いられる。また、上記配列に代えて、クレブシエラニューモニエについては5’-AGCGTATGAAATCCTGACTGAT-3’配列番号54と5’-CAAAGATATCGCTGAAGTCG-3’配列番号56、シュードモナスアエルギノーサについては5’-GCGAGGTGTCGCTCTGCAAC-3’配列番号55と5’-GATGTGCAAGGTGGTGGTGGA-3’配列番号57に示される標的ヌクレオチド配列を含む、フォワードプライマーとリバースキメラプライマーからなるプライマー対の組合せを用いることもできる。上記フォワードプライマーとして、配列番号21~30、54又は55に示されるヌクレオチド配列からなるプライマーを用いる。これら検出対象肺炎菌ごとに異なる10種類の各標的配列の5’末端側にはタグ配列を付加することができる。かかるタグ配列としては、5’-TAGCAGGATCCCTCTAAG-3’配列番号41を例示することができる。上記リバースプライマーとして、配列番号31~40、56又は57に示されるヌクレオチド配列、及びこれら検出対象肺炎菌ごとに異なる10種類の各標的配列の5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるプライマーを用いる。かかるRNAポリメラーゼプロモーター配列としては、T7RNAポリメラーゼのプロモーター配列、T3RNAポリメラーゼのプロモーター配列、SP6RNAポリメラーゼのプロモーター配列等を挙げることができるが、なかでもT7RNAポリメラーゼのプロモーター配列が、高いRNA増幅効率の点で好ましい。T7RNAポリメラーゼのプロモーター配列として、例えば、5’-AATTCTAATACGACTCACTATAGGGAG-3’配列番号42や5’-CTAATACGACTCACTATAGGGAG-3’配列番号43を挙げることができる。上記配列番号21~40又は54~57に示されるヌクレオチド配列において、1塩基又は数個例えば1~5個、好ましくは1~3個、より好ましくは1~2個、さらに好ましくは1個の塩基が欠失、置換又は付加されていても、各肺炎菌特異的な標的核酸を増幅することができるものであれば、本発明におけるプライマーとして使用することができる。上記フォワードプライマーやリバースプライマーは、DNA合成装置等を用いて常法により合成することができる。上記工程a又はb’における検出対象の肺炎菌類の核酸を含む可能性のある被検試料としては、肺炎罹患患者の唾液、喀痰、末梢血、気管支肺胞洗浄、鼻腔洗浄液、うがい液、鼻咽頭スワブ及びそれらに含まれる微生物や、かかる微生物の培養物の細胞溶解液等を挙げることができる。かかる被検試料から核酸を抽出するための方法としては、チオシアン酸グアニジンを用いるRNA抽出法や、EDTA-SDS-フェノール-エタノールを用いる核酸抽出法等の公知の方法の他、ExtragenII東ソー社製やMora-ExtractAdvancedMicroorganismResearch社製等の市販品を用いることができる。抽出したRNAやDNAを適宜切断処理して、1又は複数の標的RNAや標的DNAの5’側配列と3’側標的特異的配列とを含むRNAやDNAを調製することができる。標的核酸が標的RNAである場合、上記工程a又はb’において用いられる標的核酸を増幅するために、NASBA法、転写媒介性増幅法TMA法、転写酵素と逆転写酵素の協奏反応によるRNA増幅検出法TranscriptionReverseTranscriptionConcertedReaction、TRC法等の公知のRNA増幅法を用いることができるが、NASBA法、特に国際公開2009/057330号パンフレットに記載のNASBA法を有利に用いることができる。このNASBA法は、試料中の標的RNAをRNAポリメラーゼや逆転写酵素を介して増幅する方法であるが、例えば、国際公開2009/057330号パンフレットに記載のNASBA法においては、A標的RNAの5’側標的特異的配列に相当するDNA配列を含む、配列番号1~10に示されるキメラプライマーの5’末端を基板表面に固定させ、固相DNAプライマーを調製する工程;B標的RNAの3’側配列と相補的なcDNA配列を含むプライマーの5’末端側にT7RNAポリメラーゼプロモーター配列を付加した、配列番号11~20に示される液相cDNA-プライマーを調製する工程;B’必要に応じて、タグ配列の5’末端にRNAポリメラーゼプロモーター配列を付加した液相ユニバーサルプライマーを調製する工程;C標的RNAの3’側配列と5’側標的特異的配列とを含む試料RNAを調製する工程;D工程Bで調製された液相cDNA-プライマーと、工程Cで調製された試料RNA鎖とを液相で接触させ、液相cDNA-プライマーと試料RNAとをハイブリダイズさせ、次いで逆転写酵素によりDNA-鎖を伸長させてcDNA鎖-RNA鎖複合体を調製する工程;E工程Dで調製されたcDNA鎖-RNA鎖複合体に、DNA鎖-RNA鎖複合体におけるRNA鎖を特異的に分解するRNA分解酵素を作用させ、一本鎖DNA-を調製する工程;F工程Eで調製された一本鎖DNA-と、工程Aで調製された固相DNAプライマーとを液相で接触させ、一本鎖DNA-と固相DNAプライマーとをハイブリダイズさせ、次いでDNA依存性DNAポリメラーゼ活性能を有する酵素によりDNA鎖を伸長させて二本鎖DNAを調製する工程;G工程Fで調製された二本鎖DNAにRNAポリメラーゼを作用させ、DNA-鎖由来のRNAポリメラーゼプロモーター配列を利用して、一本鎖RNA-を増幅させる工程からなる方法が開示されている。標的核酸が標的DNAである場合も、上記工程a又はb’において用いられる標的核酸を増幅するためにNASBA法やPCR法、ストランド置換増幅法SDA法、リガーゼ連鎖反応法LCR法等を用いることができる。フォワードプライマーとして配列番号21~30、54又は55に示されるヌクレオチド配列から選ばれるプライマーが、リバースプライマーとして配列番号31~40、56又は57に示されるヌクレオチド配列を含むプライマーが用いられる。上記工程bにおいて用いられるプローブ対は、上記増幅産物と相補的なヌクレオチド配列から選ばれる肺炎菌ごとに異なるプローブ対、例えば配列番号1~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる肺炎菌ごとに異なるプローブ対であり、配列表では、便宜上DNA配列で示されているが、DNAのヌクレオチド配列からなるプローブ対であってもよいし、RNAのヌクレオチド配列からなるプローブ対であってもよい。しかし、プローブとしての安定性に優れていることからDNAのヌクレオチド配列からなるプローブ対であることが好ましい。上記の検出対象となる肺炎菌ごとに異なるプローブ対としては、ストレプトコッカスニューモニエの5’-ACGCACGAGTATTGCACGAATAACC-3’配列番号1と5’-TGCCGAAAACGCTTGATACAGGGAGT-3’配列番号11、ヘモフィルスインフルエンザの5’-AAACTTGTCCGCATTGCCACGGTTC-3’配列番号2と5’-CTCTGGGGCTGAAAAAGGTTCTAAAG-3’配列番号12、マイコプラズマニューモニエの5’-AGGCCAAACACAAGTGTAAGACTTG-3’配列番号3と5’-AGAATCAACGCTCCATCTTTGGTAC-3’配列番号13や、クラミドフィラニューモニエの5’-ATCTTGTGAAACCTGTTCTGGTCAA-3’配列番号4と5’-TCAAGGGATTAAATCCTGCGAACGT-3’配列番号14や、レジオネラニューモフィラの5’-GAAGTTGAAATTACCGTTCCAAGAC-3’配列番号5と5’-CAATTGACCCTTGAAGAAGCAGCTA-3’配列番号15、クレブシエラニューモニエの5’-GTGGTGGAGACGCCGGTGGGGCTGA-3’配列番号6と5’-TGAAACCCAGACCGGCAAGCTGTTC-3’配列番号16、シュードモナスアエルギノーサの5’-GGTGACCGGTGTGGTGCCGG-3’配列番号7と5’-GTCTTGCAACCGACCAGGGTCGGCA-3’配列番号17、モラクセラカタラーリスの5’-GGTTGCGCGTTTTTCAGGATCACTG-3’配列番号8と5’-CCACCAGAGCCCATGCCTTGTTCAT-3’配列番号18、MRSAの5’-AGACCGAAACAATGTGGAATTGGC-3’配列番号9と5’-ATGCAGAAAGACCAAAGCATACATAT-3’配列番号19、及び、スタフィロコッカスアウレウスの5’-CATGATCAAACCTGGTCAAGAACTTG-3’配列番号10と5’-CGGCACTACTGCTGACAAAATTGCT-3’配列番号20の組合せを具体的に示すことができる。また、プローブ対として、ヘモフィルスインフルエンザの5’-AACTTGTCCGCATTGCCACGGTTCT-3’配列番号44と5’-TGTGATAGCTGTGGTGGCTCTGGGG-3’配列番号49、クラミドフィラニューモニエの5’-TCAAGGGATTAAATCCTGCGAACGT-3’配列番号45と5’-ATCTTGTGAAACCTGTTCTGGTCAA-3’配列番号50、レジオネラニューモフィラの5’-AAGAAGCAGCTATAGGAAAAGAAGT-3’配列番号46と5’-GGGGCGCTGATTTGCAATTTAATGT-3’配列番号51、クレブシエラニューモニエの5’-TCGAACAGGGCGGCATGGGCGGCGG-3’配列番号47と5’-CAGAAGCGTGCGGCCTACGATCAGT-3’配列番号52、シュードモナスアエルギノーサの5’-TCCAGGTTCACCGGGGTTTCCACC-3’配列番号48と5’-GCTCTGCAACGACTTGCGGAACTC-3’配列番号53の組合せを用いることもできる。上記10種類のプローブ対のいずれを工程cにおける第1のプローブ又は工程dにおける第2のプローブにするかは、その存在が予想される検出対象肺炎菌等に応じて適宜選択決定することができる。また、上記配列番号1~20又は44~53に示されるヌクレオチド配列において、1塩基又は数個例えば1~5個、好ましくは1~3個、より好ましくは1~2個、さらに好ましくは1個の塩基が欠失、置換又は付加されていても、各肺炎菌特異的な標的核酸を検出することができるものであれば、本発明におけるプローブとして使用することができる。上記工程cにおける、第1プローブとしては、上記第2のプローブと対をなす少なくとも3種類のプローブ、例えば配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる第2のプローブと対をなす少なくとも3種類、好ましくは少なくとも5種類の各肺炎菌の第1プローブを挙げることができ、例えば、5種類の各肺炎菌の第1プローブが標識高分子担体に結合した第1プローブ結合標識高分子担体を同時に2組用いることもできる。かかる複数の第1のプローブを標識高分子担体に結合させる方法としては、5’又は3’末端に付加基を導入した配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列を有するDNAを、付加基を導入した標識高分子担体に結合させる方法を挙げることができる。上記付加基としては、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、チオール基等を挙げることができるが、例えば、標識高分子担体がカルボキシル基で修飾されている場合はアミノ基が好ましい。また、複数の第1のプローブを一つの標識高分子担体に結合させているので、この場合、検出に際して、従来のように、一つの標識高分子担体に一つの第1プローブを結合した第1プローブ結合標識高分子担体を複数混合する操作を必要としないことから、検出操作が簡便となるばかりでなく、標識ラテックス等の以下に述べる標識高分子担体濃度を至適濃度に設定することができる点で好ましい。本発明の1つの具体例を模式図として図13に示す。上記標識高分子担体における高分子担体としては、カルボキシメチルセルロースCMC、カルボキシル基を有するポリアクリル酸塩等の親水性樹脂やアクリル系ラテックス、ポリエステル系ラテックス、ポリスチレン系ラテックス、ポリウレタン系ラテックス、ポリ酢酸ビニル系ラテックス、SBR樹脂、NBR樹脂、ポリアミド系ラテックス、カルボキシ変性ポリスチレン系ラテックス等のラテックスなどを挙げることができるが、上記配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列にアミノ基が導入されている場合には、アミノ基とカルボキシキル基を介して共有結合を生じる反応によって、配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類、好ましくは少なくとも5種類の各肺炎菌の第1のプローブを標識高分子担体に結合させることが容易となるため、ポリスチレン系ラテックス中にカルボキシル基を導入したカルボキシ変性ポリスチレン系ラテックスが好ましく、具体的には、カルボキシル基含有ポリスチレンラテックス固型分4w/wDukeScientific社製やカルボキシル基含有ポリスチレンラテックス固型分10w/wBangs社製を用いることができる。具体的な第1プローブが複数結合した標識高分子担体である第1プローブ結合標識高分子担体の調製方法としては、例えば、配列番号1~10に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類の各肺炎菌の5末端にアミノ基を導入した第1プローブと、カルボキシル基含有ポリスチレンラテックスBangs社製と、水溶性カルボジイミドを50mMのMES2Morpholinoethanesulfonicacid、monohydrate同仁化学研究所社製緩衝液中で混合し、ラテックス中のカルボキシル基と第1のプローブのアミノ基とを結合させた後、モノエタノールアミン和光純薬工業社製を添加し、さらに反応させ、上記反応液を遠心分離後上清除去し、得られた沈殿に非イオン性の界面活性剤を含むHEPES241piperazinylethanesulfonicacid埼京化成社製緩衝液で洗浄及び再懸濁して調製する方法を挙げることができる。また、高分子担体の粒子径の大きさは適宜選択することができるが、メンブレン孔径より小さい粒径から選択されることが好ましく、例えば直径500nm以下の粒子の大きさを選択することができる。また、上記標識高分子担体として、展開支持体の色と識別可能な色を呈する、高分子担体を用いてもよく、顔料等を用いて着色した高分子担体を用いることもできる他、蛍光標識高分子担体を用いることもできる。上記工程dにおける第2プローブとしては、上記第1のプローブと対をなす少なくとも3種類のプローブ、例えば配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる、第1プローブと対をなす少なくとも3種類、好ましくは少なくとも5種類の各肺炎菌の第2プローブを挙げることができ、かかる第2プローブは支持体上に固相化されるが、一つの第2プローブを支持体上の所定の位置に固相化する専用ことも、複数の第2プローブを支持体上の所定の位置に固相化する共用こともできる。第2プローブを担持展開した支持体の調製方法としては、肺炎菌ごとに展開支持体上の識別可能な所定の位置に第2プローブを固相化する方法を挙げることができ、例えば、5’又は3’末端に付加基を導入した配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列を有するプローブを展開支持体に固相化させる方法を挙げることができる。上記付加基としては、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、チオール基等を挙げることができるが、例えば、展開支持体がカルボキシル基で修飾されている場合はアミノ基が好ましく、かかる付加基の付加の有無に関わらず、化学合成法等公知の方法を利用して第2のプローブを作製することが可能である。上記展開支持体としては、ナイロンメンブレンやカルボキシル基修飾ナイロンメンブレン等のナイロンメンブレン誘導体、セルロースメンブレンやニトロセルロースメンブレン等セルロースメンブレン誘導体などを挙げることができるが、上記配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列にアミノ基が導入されている場合には、アミノ基とカルボキシキル基を介して共有結合を生じる反応によって、配列番号11~20に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類、好ましくは少なくとも5種類の各肺炎菌の第2のプローブを展開支持体上の識別可能な所定の位置に固相化することが容易となるため、カルボキシル基修飾ナイロンメンブレンが好ましい。第2プローブ担持展開支持体の具体的な調製方法としては、例えば、カルボキシル基修飾ナイロンメンブレンを水溶性カルボジイミドにより処理し、脱イオン水で洗浄して活性化し、かかる活性化したカルボキシル基修飾ナイロンメンブレンに、第2のプローブ配列を有するヌクレオチドを肺炎菌ごとに識別可能となるように適宜割り振った所定の位置に固相化し、15分間風乾し、その後第2のプローブ配列を有するヌクレオチドが固相化されたカルボキシル基修飾ナイロンメンブレンをTrisベース緩衝液で処理することで活性基を消去し、ヌクレオチドが固相化されたメンブレンを脱イオン水で洗浄して調製する方法を例示することができる。第2プローブ配列を有するヌクレオチドの固相化の態様としては特に制限されず、ライン状でも円形スポット状でもよい。工程eにおける前記増幅産物を検出する方法としては、展開支持体に担持された第2プローブ及び標識高分子担体結合第1プローブに、増幅した1本鎖核酸をハイブリダイズさせて検出する方法であれば特に制限されないが、あらかじめ複数の第1プローブを標識高分子担体に結合した第1プローブ結合標識高分子担体を保持部に保持させておくことが好ましく、かかる保持部として、ADVANTEC製の吸収パッドを好適に例示することができる。かかる第1プローブ結合標識高分子担体を保持した吸収パッド等からなる保持部を、前記第2プローブ担持展開支持体の他端に順次連結することにより、本発明の検出方法に有利に用いることができる核酸クロマトグラフ用試験片とすることができる。保持部の作製方法としては、第1プローブ配列を有するヌクレオチドが複数結合している標識高分子担体を保持部に塗布し、乾燥させる方法を例示することができる。工程eにおいて、前記工程aにおける増幅産物を、展開支持体に担持された第2プローブ及び標識高分子担体に結合した第1プローブにハイブリダイズさせて検出する方法としては、例えば、上記核酸クロマトグラフ用試験片を、増幅産物を含む溶液に浸すことで、上記第1プローブ結合標識高分子担体は、上記保持部から展開支持体に浸出し、展開支持体上の第1プローブと対をなす各検出対象肺炎菌の第2プローブが固相化されている所定の位置に達した場合に、かかる所定の位置で、上記増幅産物をサンドイッチハイブリダイズすることで捕捉することができる。増幅産物中に標的となる1本鎖核酸が複数種存在する場合であっても順次所定の位置で各第2プローブにより補足されることになる。ついで、工程fにおいて、第1プローブ配列を有するヌクレオチドが結合している標識高分子担体が、第2プローブ配列を有するヌクレオチドが展開支持体上の固相化されている位置に達した所定の位置で蓄積することで、所定の位置に現れる着色ラインや着色スポット等の有無を検出像として直接又は蛍光可視化装置で、判定することにより評価することができ、かかる評価により検出対象肺炎菌肺炎原因菌を検出することができる。なお、上記判定は、簡便性の点で目視判定とすることが好ましい。また、配列番号1~10に示される配列からなる第1プローブに代えて又は追加して配列番号44~48に示される配列からなるヌクレオチドを用いることができ、配列番号11~20に示される配列からなる第2プローブに代えて又は追加して配列番号49~53に示される配列からなるヌクレオチドを用いることもできる。工程c’における標的核酸を定性定量する方法としては、電気泳動、ハイブリダイゼーション法、シークエンシング法を挙げることができる。電気泳動法としては、アガロースゲルを用いた分子ふるい効果で増幅産物の分子量解析をする方法や、キャピラリー電気泳動を利用したアジレントテクノロジー株式会社の解析システムを例示する事ができる。ハイブリダイゼーション法としては、リアルタイムPCRの様に、リアルタイムモニタリング用試薬を用いて増幅産物の生成過程をリアルタイムでモニタリングし解析する方法を挙げることができる。リアルタイムモニタリング試薬としては、例えば、TaqMan登録商標:AppliedBiosystems社製プローブ等を挙げることができる。ハイブリダイゼーション法には、ノーザンブロット法を含めることもできる。シークエンシング法としては、ジデオキシヌクレオチドを用いてDNAポリメラーゼの合成を塩基特異的に停止させるジデオキシ法等を例示することができる。本発明の肺炎原因菌の検出キットとしては、上記本発明の肺炎原因菌に検出方法に用いることができ、試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸を増幅することができる配列番号21に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号31に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号22に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号32に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号23に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号33に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号24に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号34に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号25に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号35に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号26に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号36に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号27に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号37に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号28に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号38に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号29に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号39に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号30に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号40に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号54に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号56に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;配列番号55に示されるヌクレオチド配列からなるフォワードプライマーと、配列番号57に示されるヌクレオチド配列及びその5’末端側に付加されたRNAポリメラーゼプロモーター配列からなるリバースプライマー;から選ばれる、肺炎菌ごとに異なる少なくとも3種類、好ましくは少なくとも5種類、すなわち5~10種類のプライマー対を備えたキットを例示することができ、かかるキットは、上記プライマー対の他、前記工程b’におけるRNA増幅法に用いられる各種試薬類や、前記工程c’における標的核酸を定性定量するために用いられる各種試薬類を備えていてもよい。または、試料中より任意に抽出された各肺炎菌に特異的な標的核酸からプライマーを用いて1本鎖核酸として増幅する増幅セットと;増幅産物と相補的なヌクレオチド配列、例えば配列番号1~10又は44~48に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類の各肺炎菌の第1のプローブが標識高分子担体に結合された第1プローブ結合標識高分子担体と;第1のプローブと対をなす第2のプローブ、例えば配列番号11~20又は49~53に示されるヌクレオチド配列から選ばれる少なくとも3種類の各肺炎菌の第2プローブが、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化された、各肺炎菌専用の又は複数の肺炎菌共用の第2プローブ担持展開支持体とを備えたキットであってもよく、上記増幅セットと前記核酸クロマトグラフ用試験片とを備えたキットを好適に例示することができる。かかるキットは上記本発明の肺炎原因菌の検出方法に好適に用いることができる。以下に、実施例を挙げてこの発明を更に具体的に説明するが、この発明の範囲はこれらの例示に限定されるものではない。[モラクセラカタラーリスdnaJプライマーの設計]これまでに、モラクセラカタラーリスのゲノム情報が解読されておらず、類縁属種のdnaJ遺伝子配列を基に設計を進めていたが、本菌に特異的なプライマーを設計することは困難であった。一方近年、本菌のゲノム配列情報のみが明らかとなったためこの配列を基にORF抽出によってdnaJ遺伝子のアノテーションをアライメントソフトDNASISproHitachiSoftware社製により実施し、この配列から新たなプライマーの設計を試みた。8株のモラクセラカタラーリス菌株を用いて新規プライマーの検証を実施した、試薬キットとしてTaKaRaPCRThermalCyclerGPを記載のプロトコルに準じて用い、機器としてEXTaqHotstartTaKaRabio社製を用いてPCRを95°C;3min、95°C;10sec、65°C;10sec、72°C;10sec×40cyclesの条件で実施した。得られたPCR産物は、MultiNAを用いて電気泳動により解析された。電気泳動の結果を図1に示す。いずれの菌株においても得られたPCR産物は増幅していたことから、新たに設計したプライマー対がモラクセラカタラーリスの検出に有用であることがわかった。[マルチプレックス化の検討]鋳型となるRNAの作製マイコプラズマニューモニエ及びクラミドフィラニューモニエは培養が困難であるため、プラスミドベクターを利用したDNAクローニングによって、鋳型となるRNAを作製した。標的遺伝子領域をクローニングし組換え体を作製した。まず、プラスミドベクターに、マイコプラズマニューモニエ又はクラミドフィラニューモニエの標的遺伝子dnaJの各DNA断片を挿入後、宿主となる大腸菌をそれぞれ形質転換した。大腸菌からプラスミドを抽出後PCRで標的遺伝子のDNA増幅をPCRで行い、得られたPCR産物からRiboMAX登録商標T7ExpressシステムPromega社製を用いてプロトコールにしたがってRNAを増幅し、得られたRNAをNASBA法の鋳型とした。マイコプラズマニューモニエ及びクラミドフィラニューモニエ以外の検出対象肺炎原因菌のRNAは常法により調製した。NASBA法によるRNA標的遺伝子の増幅フォワードプライマーとしては、配列番号21~40に示されるヌクレオチド配列から選ばれる検出対象肺炎菌ごとに10種類の各標的配列の5’末端側にTAGCAGGATCCCTCTAAG配列番号41を付加したプライマーを用い、リバースプライマーとしては、検出対象肺炎菌ごとに異なる10種類の各標的配列の5’末端側にT7RNAポリメラーゼのプロモーター配列として、CTAATACGACTCACTATAGGGAG配列番号43が付加されたプロモーターを用いた。上記ストレプトコッカスニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クレブシエラニューモニエ、モラクセラカタラーリス、スタフィロコッカスアウレウス、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエの7種の標準菌株から抽出したRNAを鋳型とし、1菌種ごとにNASBA法を実施して標的遺伝子のRNAを増幅したデータを示す。RNA抽出は、MORA-EXTRACTAdvancedMicroorganismResearch社製を用いて添付のプロトコールにしたがって実施し、NASBA法は、NASBAAmplificationキットカイノス製を用いて添付のプロトコールにしたがって実施した。ストレプトコッカスニューモニエ、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエ、レジオネラニューモフィラ、クレブシエラニューモニエ、モラクセラカタラーリス、スタフィロコッカスアウレウスの各鋳型としたRNA試料は、1、1/10、1/100、1/1000倍に希釈したものをそれぞれ用い、BioAnalyzerAgilentRNAPico6000を用いて行った。コントロールとして、酵素無添加の反応液を調製し、同様の工程にて実施した。結果を図2~8に示す。すべての標的検出対象肺炎原因菌種について、NASBA法によりRNAが増幅したことを確認した。各プライマー間における特異性の検証本件プライマー10対のマルチプレックス化を実施した際に、各プライマーが標的菌以外の対象菌と非特異反応を起こすか否かを検証した。結果を図9に示す。本件プライマー10対のすべてのプライマーにおいて非特異反応は認められなかった.マルチプレックスプライマーを用いたNASBA法による標的RNA増幅レジオネラニューモフィラ、シュードモナスアエルギノーサ、クラミドフィラニューモニエ、MRSA、ヘモフィルスインフルエンザについて、本件プライマー対を用いたマルチプレックス化の検討結果を図10に示す。また同様に、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスニューモニエ、モラクセラカタラーリス、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエについて、本件プライマー対を用いたマルチプレックス化の検討結果を図11に示す。すべての標的検出対象肺炎原因菌種のRNAがNASBA法により増幅されることが確認された。NASBA産物の確認NASBAによって増幅したRNAが目的の標的配列を有するか否かを判断する必要がある。NASBA反応の副産物として合成されるDNAを標的としたリアルタイムPCRを実施し、NASBA産物とNASBA未反応サンプルのコントロールのCt値を測定し、この差を比較することによって標的NASBA産物を間接的に確認した。SYBRpremixEXTaqHotstartTaKaRabio社製を用いて、プロトコルに準じ、PCRは、95°C;3min、95°C;10sec、65°C;10sec、72°C;10sec×40cyclesの条件で行った。全菌種において、NASBAによって増幅したRNAが目的の標的NASBA産物を間接的に確認された。モラクセラカタラーリスの例を図12に示す。[プローブ対の決定]検出対象となる各検出対象肺炎菌の以下の表1に示される遺伝子領域の核酸の標的配列に対し相補的配列を持つ1対のアミノ基含有オリゴヌクレオチドプローブの作製を試みた。各種肺炎菌について、表1に記載されている各遺伝子領域の増幅された一本鎖核酸に対するプローブ候補として20~30塩基長の配列を選択するために、配列情報解析ソフトウェアDNASISpro登録商標日立ソフトウェア社製を用いて解析し、配列番号1~20に示される配列を有するオリゴヌクレオチドプローブを決定した。[第1プローブ結合標識高分子担体の作製]オリゴヌクレオチドプローブとカルボキシル基含有ポリスチレンラテックスとを結合させるために、5’末端にアミノ基を導入した5’末端アミノ基導入オリゴヌクレオチドを合成した。上記で選択された配列からなる20種類の各オリゴヌクレオチドの5’末端アミノ基導入オリゴヌクレオチドを各肺炎菌の第一のプローブ配列として作製した。検出対象とされる、少なくとも3種類、好ましくは少なくとも5種類の各肺炎菌の第1のプローブ配列を有するヌクレオチドと、カルボキシル基含有ポリスチレンラテックスBangs社製とを、水溶性カルボジイミドを50mMのMES2Morpholinoethanesulfonicacid、monohydrate同仁化学研究所社製緩衝液中で混合し、ラテックス中のカルボキシル基と複数の第1プローブのアミノ基とを結合させた後、モノエタノールアミン和光純薬工業社製を添加し、さらに反応させた。上記反応液を遠心分離後上清除去し、得られた沈殿に非イオン性の界面活性剤を含むHEPES241piperazinylethanesulfonicacid埼京化成社製緩衝液で洗浄及び再懸濁して、第1のプローブ配列を有するヌクレオチドが複数結合している標識高分子担体が調製され、使用まで4°Cにて保存された。[第2プローブ配列を有するオリゴヌクレオチドが、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置に固相化された展開支持体の作製]上記で選択された第2プローブ配列からなるオリゴヌクレオチドと、カルボキシル基修飾ナイロンメンブレンポール社製とを結合させるために、選択された第2プローブ配列の3’末端にアミノ基を導入した3’末端アミノ基導入オリゴヌクレオチド第2プローブをDNA合成機により作製した。上記メンブレンを水溶性カルボジイミドにより処理し、脱イオン水で洗浄し活性化させた。かかる活性化されたカルボキシル基修飾ナイロンメンブレンに上記3’末端アミノ基導入オリゴヌクレオチド第2プローブの1種類を結合させ、15分間風乾した。風乾されたメンブレンをTrisベース緩衝液で処理し、残存する活性基を除去した後、メンブレンを脱イオン水で洗浄し、再び風乾することで、第2プローブ配列を有するオリゴヌクレオチドが、肺炎菌ごとに識別可能な所定の位置にライン状に固相化された展開支持体が作製された。検出対象の肺炎菌が3種以上のため、上記処理を肺炎菌ごとに少なくとも3回行った。5’又は3’末端側にアミノ基が導入された配列は以下表2の通りである。各種肺炎菌について、以下の組合せにより本発明の核酸クロマトグラフ法を行うこととした。なお、表中肺炎菌名最後尾のLは標識高分子担体に結合しているプローブであることを示し、Mは固相化されたプローブであることを示す。[リファレンスライン]肺炎原因菌の検出位置にラインが検出されなかった場合、検出される核酸が無いことがその要因である点を明らかとするために、クロマトストリップ上を標識高分子担体がフローできたことを証明する目的で検出されるラインがリファレンスラインである。なお、このラインは標識高分子担体のフローの確認を行う目的で検出されるため、検出される肺炎原因菌の核酸がある場合もリファレンスラインが検出されるようにすることが好ましい。[核酸クロマトグラフ測定用試験片の作製]本発明に用いられる核酸クロマトグラフ用試験片を以下のように作製した。上記各肺炎菌の第1プローブ配列を有するヌクレオチドが複数結合している標識高分子担体を緩衝液に溶解して展開パッドADVANTEC社製に塗布後、乾燥させて保持部とした。上記展開支持体の一端に、上記展開支持体とは重なり合わない部分で保持部を連結した。さらに、該展開支持体の他端に吸収パッドADVANTEC社製を連結し、核酸クロマトグラフ測定用試験片とした。[標識高分子担体結合第1プローブ間の非特異結合の確認]外来患者の肺炎菌特定に特に有効とされる5種類の肺炎原因菌についての外来用プローブセットと、入院患者の肺炎菌特定に特に有効とされる5種類の肺炎原因菌についての入院用プローブセットについて、各肺炎菌用の標識高分子担体結合第1プローブと第2プローブ専用との間において直接的にハイブリダイズして特異的結合が生じないかどうかを増幅産物の非存在下でチェックした。第1プローブ結合標識高分子担体として、外来患者用検出対象肺炎菌の5種類の第1プローブが結合された第1プローブ結合標識高分子担体と、入院患者用検出対象肺炎菌の5種類の第1プローブが結合された第1プローブ結合標識高分子担体とを用い、第2プローブ担持展開支持体としては、5種類の外来患者用検出対象肺炎菌の第2プローブがそれぞれ担持された5枚の第2プローブ担持展開支持体専用と、5種類の入院患者用検出対象肺炎菌の第2プローブがそれぞれ担持された5枚の第2プローブ担持展開支持体専用とを用いた。結果を図14に示す。実験に供したいずれの菌株においても、リファレンスの位置に赤色の着色線が観察され、増幅産物の非存在下において、標識高分子担体結合第1プローブと第2プローブとの間に非特異結合が生じないことが確認された。[核酸クロマトグラフ法による標的NASBA産物の検出]レジオネラニューモフィラ、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、MRSA、ヘモフィルスインフルエンザ、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスニューモニエ、モラクセラカタラーリス、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエについて、各菌に対するプライマーで増幅されたNASBA産物を核酸クロマトグラフィーで検出検討した。測定用試験片は、表2に示されるプローブを用いて、上記の方法に準じて各検出対象肺炎菌毎に個別に作製して行った。その結果を図15に示す。いずれのNASBA産物も、各肺炎菌専用プローブが結合されている核酸クロマトストリップで検出された。各プローブにおける特異性の検証各プローブが標的菌以外の対象菌のNASBA産物と非特異反応を起こすか否かを検証した。結果を図16に示す。本件プローブのすべてにおいて非特異反応は認められなかった。マルチプレックスプライマーで増幅されたNASBA産物の核酸クロマトグラフィーによる検出レジオネラニューモフィラ、シュードモナスアエルギノーサ、クレブシエラニューモニエ、MRSA、ヘモフィルスインフルエンザ、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスニューモニエ、モラクセラカタラーリス、マイコプラズマニューモニエ、クラミドフィラニューモニエについて、本件プライマー対を用いたマルチプレックスプライマーで増幅されたNASBA産物を核酸クロマトグラフィーで検出した。その結果を図17に示す。マルチプレックスプライマーを用いて増幅されたNASBA産物は、いずれも核酸クロマトグラフィーで検出された。[複数肺炎菌の検出]レジオネラニューモフィラは、BCYEα培地を用い35°Cで培養し、クラミドフィラニューモニエは、HEp-2細胞を用いて培養し、マイコプラズマニューモニエは、PPLO培地を用い37°Cで培養し、ヘモフィルスインフルエンザは、チョコレート培地を用い37°Cで培養し、ストレプトコッカスニューモニエは、羊血液培地を用い37°Cで培養した。培養後の各菌懸濁液100μLからEXTRAGENII試薬東ソー社製を用いて各試料より核酸を抽出し、50μLのRNasefreewaterで上記5種類の菌の核酸を溶解した。2.5μLの核酸溶液をNASBAAmplificationキットカイノス社製を用いてtotalRNAを鋳型としてNASBAAmplificationキットカイノス社製を使用し、本発明のプローブ対のセットとは異なる10菌種の各ターゲット領域内の配列にハイブリダイズする各菌種固有のプライマー対を用いて、NASBA増幅反応を行った。この際の各菌専用プライマー濃度は、最終濃度が0.2μMになるように調製した。増幅反応後各菌の溶液は、増幅終了後のNASBA増幅産物を前処理する事なく1本にまとめ、直ちに核酸クロマトストリップを用いて核酸クロマトグラフ法による肺炎菌の検出を試みた。NASBA産物をフローさせなかった場合は、フローが行われた事を示すリファレンスラインのみ検出された図18A参照。上記肺炎原因菌5菌種のNASBA産物をフローさせた場合リファレンスラインとは別に各々の検出位置にラインが検出された図18B参照。