液体クロマトグラフィーを用いたヘモグロビン類の分析方法であって、予め検体を酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で処理することを特徴とするヘモグロビン類の分析方法。酸化剤は、ヘモグロビンをメト化させる物質であることを特徴とする請求項1記載のヘモグロビン類の分析方法。酸化剤は、亜硝酸塩であることを特徴とする請求項2記載のヘモグロビン類の分析方法。酸化剤は、亜硝酸ナトリウムであることを特徴とする請求項3記載のヘモグロビン類の分析方法。三価のヘム鉄への結合剤は、メトヘモグロビン中の三価の鉄に結合する物質であることを特徴とする請求項1記載のヘモグロビン類の分析方法。三価のヘム鉄への結合剤は、アジ化物であることを特徴とする請求項5記載のヘモグロビン類の分析方法。三価のヘム鉄への結合剤は、アジ化ナトリウムであることを特徴とする請求項6記載のヘモグロビン類の分析方法。液体クロマトグラフィーとして陽イオン交換液体クロマトグラフィーを用いることを特徴とする請求項1、2、3、4、5、6又は7記載のヘモグロビン類の分析方法。本発明は、液体クロマトグラフィーによって、ヘモグロビン類を短時間で高精度に分離できるヘモグロビン類の分析方法を提供することを目的とする。本発明は、液体クロマトグラフィーを用いたヘモグロビン類の分析方法であって、予め検体を酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で処理するヘモグロビン類の分析方法である。以下に本発明を詳述する。本発明者らは、予め検体を酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で処理することで、検体中のヘモグロビン類を全て安定化メトヘモグロビンに変化させ、各ヘモグロビンのカラム固定相への保持力を均一にし、短時間で高精度にヘモグロビン類を分離できることを見出し、本発明を完成させるに至った。本発明のヘモグロビン類の分析方法においては、予め検体を酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で処理する。酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で検体を処理することにより、ヘモグロビン類の分離能を向上させつつヘモグロビン類の溶出時間を短縮できる。更に、HPLC装置のデガッサーの立ち上げ直後の気体除去能力が安定しない場合においても、ヘモグロビン類の溶出時間の変動が発生しなくなるとともに、検出される溶出ピークがブロード化したり二峰性を示したりすることがなく、ヘモグロビン類が高精度に分離される。なお、本発明において、予め検体を酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で処理するとは、ヘモグロビン類が分離カラムで分離される前に、検体を酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で処理することを意味し、液体クロマトグラフィーでの測定開始前に処理することに限定されない。具体的には例えば、検体前処理液及び/又は溶離液に、表1に記載した組み合わせのいずれかで酸化剤と三価のヘム鉄への結合剤とを配合することにより、ヘモグロビン類が分離される前に検体を酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤で処理できる。表1中、○は配合することを意味し、-は配合しないことを意味する。本発明のヘモグロビン類の分析方法において、酸化剤は、ヘモグロビン類のヘム鉄を二価から三価に変化させ、メトヘモグロビンを形成する。酸化剤としては、ヘモグロビン類のヘム鉄を二価から三価に変化させる効果があれば特に限定されず、例えば、亜硝酸塩、フェリシアン化カリウム、メチレンブルー、過酸化水素、アスコルビン酸、硫化水素等が挙げられる。なかでも、亜硝酸塩が好適であり、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウムがより好適である。これらの酸化剤を用いることで、酸化力が強すぎてヘモグロビン類が分解したりすることがなく、また、メトヘモグロビンと結合して溶出パターンが大きく変化したり、ヘモグロビン類を検出する波長と酸化剤の吸光スペクトルが干渉してHPLC測定中にベースラインの変動が生じたりすることがなく、ヘモグロビン類の定量性により優れたものとなる。本発明のヘモグロビン類の分析方法において、三価のヘム鉄への結合剤は、メトヘモグロビンを安定化メトヘモグロビンにする。三価のヘム鉄への結合剤としては、例えば、アジ化物、シアン化物等が挙げられる。三価のヘム鉄への結合剤としてアジ化物又はシアン化物を用いることにより、メトヘモグロビンの構造を大きく変えてしまうことがなく、ヘモグロビン類の溶出挙動を大きく変化させてしまうこともない。従って、ヘモグロビン類の定量性により優れたものとなる。アジ化物としては、例えば、アジ化ナトリウム、ジフェニルリン酸アジド、4-ドデシルベンゼンスルフォニルアジド、4-アセチルアミノベンゼンスルフォニルアジド、アジ化カリウム、アジ化リチウム、アジ化鉄、アジ化水素、アジ化鉛、アジ化水銀、アジ化銅、アジ化銀等が挙げられる。シアン化物としては、例えば、シアン化カリウム、シアン化水素、シアン化ナトリウム、シアン化銀、シアン化水銀、シアン化銅、シアン化鉛、シアン化鉄、シアン化リチウム、シアン化アンモニウム等が挙げられる。これらの三価のヘム鉄への結合剤のなかでも、アジ化ナトリウムが好適である。検体前処理液としては、例えば、有機酸又はその塩類、アミノ酸類、無機酸又はその塩類、グッドの緩衝剤等の緩衝剤を含有する公知の緩衝液を用いることができる。有機酸としては、例えば、クエン酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸等が挙げられる。アミノ酸類としては、例えば、グリシン、タウリン、アルギニン等が挙げられる。無機酸としては、例えば、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、ホウ酸、酢酸等が挙げられる。また、緩衝液には、必要に応じて、界面活性剤、各種ポリマー、親水性の低分子化合物等が適宜添加されていてもよい。検体前処理液の緩衝剤濃度は特に限定されないが、好ましい下限は5mmol/L、好ましい上限は500mmol/Lである。緩衝剤濃度が5mmol/L未満であると、緩衝作用が充分に得られないことがある。緩衝剤濃度が500mmol/Lを超えると、緩衝剤の析出が起こり、HPLC装置の流路を詰まらせる原因となることがある。緩衝剤濃度のより好ましい下限は10mmol/L、より好ましい上限は200mmol/Lである。検体前処理液が酸化剤を含有する場合、検体前処理液中における酸化剤の濃度は特に限定されないが、好ましい下限は0.05mmol/L、好ましい上限は50mmol/Lである。検体前処理液中における酸化剤の濃度が0.05mmol/L未満であると、ヘモグロビン類のメト化が充分に行われず、オキシヘモグロビン、デオキシヘモグロビンが測定試料中に混在することで、検出される溶出ピークがブロード化したり二峰性を示したりすることがある。検体前処理液中における酸化剤の濃度が50mmol/Lを超えると、メトヘモグロビンが分解されてしまい、溶出ピークが検出されなかったり、異なる溶出時間に溶出ピークが検出されたりすることがある。検体前処理液中における酸化剤の濃度のより好ましい下限は0.5mmol/L、より好ましい上限は25mmol/Lである。検体前処理液が三価のヘム鉄への結合剤を含有する場合、検体前処理液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度は特に限定されないが、好ましい下限は0.05mmol/L、好ましい上限は50mmol/Lである。検体前処理液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度が0.05mmol/L未満であると、メトヘモグロビンの三価のヘム鉄への結合剤の結合が充分に行われず、検出される溶出ピークがブロード化したり二峰性を示したりすることがある。検体前処理液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度が50mmol/Lを超えると、メトヘモグロビンが分解されてしまい、溶出ピークが検出されなかったり、異なる溶出時間に溶出ピークが検出されたりすることがある。検体前処理液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度のより好ましい下限は0.5mmol/L、より好ましい上限は25mmol/Lである。検体前処理液のpHは特に限定されないが、好ましい下限は4.0、好ましい上限は10.0である。検体前処理液のpHが4.0未満もしくは10.0を超えると、ヘモグロビン類の安定性が低下し、溶出ピークが検出されなかったり、異なる溶出時間に溶出ピークが検出されたりすることがある。検体前処理液のpHのより好ましい下限は6.0、より好ましい上限は8.5である。溶離液としては、例えば、有機酸又はその塩類、アミノ酸類、無機酸又はその塩類、グッドの緩衝剤等の緩衝剤を含有する公知の緩衝液を用いることができる。有機酸としては、例えば、クエン酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸等が挙げられる。アミノ酸類としては、例えば、グリシン、タウリン、アルギニン等が挙げられる。無機酸としては、例えば、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、ホウ酸、酢酸等が挙げられる。また、緩衝液は、必要に応じて、界面活性剤、各種ポリマー、親水性の低分子化合物等が適宜添加されていてもよい。溶離液の緩衝剤濃度は特に限定されないが、好ましい下限は5mmol/L、好ましい上限は500mmol/Lである。緩衝剤濃度が5mmol/L未満であると、緩衝作用が充分に得られないことがある。緩衝剤濃度が500mmol/Lを超えると、緩衝剤の析出が起こりHPLC装置の流路を詰まらせる原因となったり、溶離液の切り替え効率が低下して平衡化に時間がかかる原因となったりすることがある。緩衝剤濃度のより好ましい下限は10mmol/L、より好ましい上限は200mmol/Lである。溶離液が酸化剤を含有する場合、溶離液中における酸化剤の濃度は特に限定されないが、好ましい下限は0.05mmol/L、好ましい上限は50mmol/Lである。溶離液中における酸化剤の濃度が0.05mmol/L未満であると、ヘモグロビン類のメト化が充分に行われず、オキシヘモグロビン、デオキシヘモグロビンが測定試料中に混在することで、溶出ピークがブロード化したり二峰性を示したりすることがある。溶離液中における酸化剤の濃度が50mmol/Lを超えると、溶出時間が早くなりすぎて分離能が悪化することがある。なお、溶出時間は、メトヘモグロビンが分解しない範囲内で溶離液中の緩衝剤濃度等を調整することで調節は可能である。溶離液中における酸化剤の濃度のより好ましい下限は0.5mmol/L、より好ましい上限は25mmol/Lである。溶離液が三価のヘム鉄への結合剤を含有する場合、溶離液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度は特に限定されないが、好ましい下限は0.05mmol/L、好ましい上限は50mmol/Lである。溶離液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度が0.05mmol/L未満であると、ヘモグロビン類のメト化が充分に行われず、オキシヘモグロビン、デオキシヘモグロビンが混在することで、溶出ピークがブロード化したり二峰性を示したりすることがある。溶離液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度が50mmol/Lを超えると、溶出時間が早くなりすぎて分離能が悪化することがある。なお、溶出時間は、メトヘモグロビンが分解しない範囲内で溶離液中の緩衝剤濃度等を調整することで調節は可能である。溶離液中における三価のヘム鉄への結合剤の濃度のより好ましい下限は0.5mmol/L、より好ましい上限は25mmol/Lである。本発明のヘモグロビン類の分析方法において、溶離液にのみ酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤を配合する場合は、少なくともHPLCによる測定の最初に送液する溶離液に酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤を配合する。また、酸化剤及び三価のヘム鉄への結合剤は、HPLCによる測定の最初に送液する溶離液以外の溶離液にも配合することが好ましく、測定に用いる全ての溶離液に配合することがより好ましい。溶離液は、pH調整剤として、公知の酸、塩基を含有してもよい。酸としては、例えば、塩酸、リン酸、硝酸、硫酸等が挙げられ、塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、水酸化バリウム、水酸化カルシウム等が挙げられる。溶離液は、メタノール、エタノール、アセトニトリル、アセトン等の水溶性有機溶媒を含有していてもよい。有機溶媒の濃度は、塩等が析出しない程度で用いることが好ましく、好ましい上限は80v/vである。溶離液のpHは特に限定されないが、好ましい下限は4.0、好ましい上限は10.0である。溶離液のpHが4.0未満であると、検出される溶出ピークのリーディングが大きくなったり、溶出ピークがブロードになったり二峰性を示したりすることがある。溶離液のpHが10.0を超えると、カラム固定相とヘモグロビン類との保持が弱まりヘモグロビン類の溶出時間が極端に早くなることに加え、検出される溶出ピークのテーリングが大きくなったり、また、溶出ピークがブロードになったり、二峰性を示したりすることがある。また、pHを4.0以上10.0以下とすることにより、測定試料中のヘモグロビン類の安定性が低下することがなく、ヘモグロビン類の溶出ピークが検出されなかったり、異なる溶出時間に溶出ピークが検出されたりすることがない。溶離液のpHのより好ましい下限は6.0、より好ましい上限は8.5である。本発明のヘモグロビン類の分析方法における液体クロマトグラフィーとしては、イオン交換液体クロマトグラフィーを用いることが好適である。イオン交換液体クロマトグラフィーとしては、公知の方法を用いることができる。例えば、ポンプを用いて溶離液を分離カラムに送液する際に、溶離液を、デガッサーを通した後に測定試料を注入して分離カラムに送り、分離カラムでヘモグロビン類を分離させて、溶出してきた溶出液中の分離成分を検出器により検出する方法が挙げられる。分離カラムは、カラム本体に固定相が充填されたものである。固定相としては、充填剤粒子、多孔質体等が挙げられる。なかでも、充填剤粒子が好ましい。充填剤粒子としては、無機系粒子、有機系粒子等が挙げられる。無機系粒子としては、シリカ、ジルコニア等で構成される粒子が挙げられる。有機系粒子としては、セルロース、ポリアミノ酸、キトサン等の天然高分子粒子や、ポリスチレン、ポリアクリル酸エステル等の合成高分子粒子が挙げられる。固定相としては、陽イオン交換基を有する固定相を用いることが好ましい。陽イオン交換基としては、カルボキシル基、リン酸基、スルホン酸基等が挙げられる。本発明のヘモグロビン類の分析方法における測定条件は、使用する測定試料、カラム等の種類によって適宜選択できるが、溶離液の流速の好ましい下限は0.05mL/分、好ましい上限は5mL/分、より好ましい下限は0.2mL/分、より好ましい上限は3mL/分である。ヘモグロビン類の検出波長は415nmが好ましいが、特にこれのみに限定されるわけではない。測定試料は、通常、界面活性剤等の溶血活性を有する物質を含む溶液により溶血された血液検体を希釈したものを用いる。測定試料の注入量は、血液検体の希釈倍率により異なるが、好ましくは0.1~100μL程度である。本発明のヘモグロビン類の分析方法は、優れた分離能を示すとともに、分析を短時間で行うことができ、かつ、従来分離が困難であったヘモグロビン類も分離し易くなる。即ち、本発明によれば、液体クロマトグラフィーによって、ヘモグロビン類を短時間で高精度に分離し、分析できる。以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されない。実施例1ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有するリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。分離カラムとして、粒子表面にスルホン酸基を導入した陽イオン交換樹脂充填剤をカラム本体に充填したカラムを用いた。HPLC装置には、オートサンプラーとしてSIL-20AC島津製作所社製、送液ポンプとしてLC-20AD島津製作所社製、デガッサーとしてDGU-20A5島津製作所社製、カラムオーブンとしてCTO-20AC島津製作所社製、検出器としてSPD-M20A島津製作所社製を用い、溶離液の流速を1.7mL/分、検出波長を415nm、測定試料注入量を10μLとした。溶離液としては、0.5分までは溶離液160mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4にて溶出し、0.5分を超え1.0分までは溶離液210mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0にて溶出し、1.0分を超え1.1分までは溶離液30.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0にて溶出し、1.1分を超え1.5分までは溶離液1にて溶出して測定試料の測定を行った。なお、HPLC装置の立ち上げ直後から連続して15回測定を行った。比較例1測定試料は、実施例1と同様のものを用いた。溶離液1を溶離液460mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4、溶離液2を溶離液510mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0に変更したこと以外は、実施例1と同様にして測定試料の測定を行った。実施例1及び比較例1における測定回数とヘモグロビンSの溶出時間との関係を図1に示した。図1より、ヘモグロビンSの溶出時間は、比較例1では測定回数の増加にともなって遅くなっていることが分かる。一方、実施例1では、ヘモグロビンSの溶出時間は測定回数に関係なくほぼ一定であった。実施例2グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。分離カラムは実施例1と同様の分離カラムを用いた。実施例1と同様のHPLC装置を用い、流速を1.7mL/分、検出波長を415nm、測定試料注入量を10μLとした。溶離液は、第1溶離液として溶離液630mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4と第2溶離液として溶離液70.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0とを用い、2液リニアグラジエントにて溶出して測定試料の測定を行った。第1溶離液と第2溶離液のグラジエント条件を図2に示した。図2は、第1溶離液と第2溶離液との合計量に対する第2溶離液の割合重量を示している。また、得られたクロマトグラムを図3に示した。実施例3グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第2溶離液を、実施例1で用いた溶離液30.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図4に示した。実施例4グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液830mmol/L過塩素酸ナトリウム、10mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液90.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、10mmol/L亜硝酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図5に示した。実施例5グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液1030mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、10mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液110.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウム、10mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図6に示した。実施例6グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液1230mmol/L過塩素酸ナトリウム、10mmol/L亜硝酸ナトリウム、10mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液130.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、10mmol/L亜硝酸ナトリウム、10mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図7に示した。実施例7グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/Lフェリシアン化カリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/Lフェリシアン化カリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液1430mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lフェリシアン化カリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液150.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lフェリシアン化カリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図8に示した。実施例8グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液1630mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lフェリシアン化ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、実施例1で用いた溶離液30.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図9に示した。比較例2グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液1730mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、実施例1で用いた溶離液30.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図10に示した。比較例3グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/L亜硝酸ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100、1mmol/L亜硝酸ナトリウムを含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液1830mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液190.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/L亜硝酸ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図11に示した。比較例4グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液2030mmol/L過塩素酸ナトリウム、1mmol/Lフェリシアン化カリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液210.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図12に示した。実施例9グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液2230mmol/L過塩素酸ナトリウム、25mmol/L亜硝酸ナトリウム、25mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液230.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、25mmol/L亜硝酸ナトリウム、25mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図13に示した。実施例10グリコヘモグロビンコントロールレベル2シスメックス社製を200μLの注射用水で溶解した後、検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。また、ヘモグロビンSを含む血液検体を検体前処理液0.1重量トリトンX-100を含有する10mmol/Lリン酸緩衝液pH7.0で100倍に希釈したものを測定試料として用いた。第1溶離液を、溶離液2430mmol/L過塩素酸ナトリウム、50mmol/L亜硝酸ナトリウム、50mmol/Lアジ化ナトリウムを含む20mmol/Lリン酸緩衝液pH5.4に変更し、第2溶離液を、溶離液250.8重量トリトンX-100、300mmol/L過塩素酸ナトリウム、50mmol/L亜硝酸ナトリウム、50mmol/Lアジ化ナトリウムを含む40mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0に変更したこと以外は、実施例2と同様にして測定試料の測定を行った。得られたクロマトグラムを図14に示した。実施例2~10、及び、比較例2~4の測定で用いた検体前処理液と溶離液の組成を表2、3に示した。また、得られたクロマトグラムのヘモグロビン類の分離状況とピークパターンを表4に示した。図3~14において、ピークAはヘモグロビンA0、ピークBはヘモグロビンA2、ピークCはヘモグロビンSを示している。図3~7実施例2~6において、ピークA、ピークCはシャープな単一ピークとして分離していることが確認された。図8実施例7はクロマトグラムに少しドリフトが確認されたために定量性が若干低下したが、ピーク同定は可能なレベルであった。一方、図9実施例8のピークA、ピークCはわずかに3峰性又は2峰性を示すピークとして検出されたが、問題の無い程度であった。また、図3~9実施例2~8ではピークBはピークAから分離していることが確認されたが、図10比較例2ではグリコヘモグロビンコントロール2を含有する測定試料ではピークBはピークAから全く分離できておらず、ヘモグロビンSを含有する測定試料ではピークAの後ろにピークBがわずかにショルダーとして確認できる程度であった。同様の現象は他のヘモグロビン種に対しても起こりえるものと考えられ、本発明を用いることで含有量の多いヘモグロビン種に隣接したピークを高精度に分離させ易くなる。図11、12比較例3、4では亜硝酸ナトリウム又はフェリシアン化カリウムによりメト化されたヘモグロビンがピークとして検出されているが、ヘモグロビン類の分解物とみられるピークが検出された。図13、14実施例9、10は亜硝酸ナトリウムとアジ化ナトリウムが共存していることから、単一ピークを形成しているものの、添加量が多過ぎるために溶出時間が早くなりすぎていた。しかしながら、単一ピークが形成されているので、緩衝剤濃度等の他の条件を調整することで、定量性を確保することが可能である。