刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルであって、該刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルがPEGポリマーのマトリックスを含み、該PEGポリマーが少なくとも1つの多機能性融合タンパク質を含むように修飾されており、該多機能性融合タンパク質が、構成要素として基質結合ペプチド、繰り返しRGD結合ペプチド、少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーならびに好ましくは精製用タグを含み、該少なくとも1つの多機能性融合タンパク質が該PEGポリマーと共有結合している前記刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。PEGポリマーがマルチアームPEGスターポリマーであり、好ましくは3~15アームPEGスターポリマーである、請求項1に記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。基質結合ペプチドが、エシェリキアコリからのDNAジャイレースサブユニットBのN末端配列、配列番号2のエシェリキアコリからのDNAジャイレースサブユニットBのN末端配列もしくは配列番号2に記載の配列に対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列またはタンパク質、FKBP、FM、ToxT、DHFR、Cyp、E、PIP、TetR、ArgR、ArsR、HucR、FRB、ストレプトアビジン、アビジン、ニュートラアビジン、ステロイドホルモン受容体、ステロイドホルモン、ヘパリン結合性タンパク質、リポカリンファミリーのメンバー、FluA、配列番号55に記載のFluA、DigA、配列番号57に記載のDigA、SABP2、配列番号59もしくは61に記載のSABP2または配列番号64に記載のFKBP42または配列番号69に記載のscFv断片またはこれらの基質結合ペプチドをコードする核酸あるいはこれらの配列に対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す配列から選択される、請求項1または2に記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。繰り返しRGD結合ペプチドが式nを有し、ここでRGD配列が、配列番号3~33のいずれかに記載のアミノ酸配列または配列番号3~33のいずれかに記載の配列に対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択される、請求項1~3の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。PEGポリマーが、チオエーテル結合によって少なくとも1つの多機能性融合タンパク質に共有結合することが可能であるように修飾される、請求項1~4の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。リンカーが、チオール含有部分、チオール修飾もしくはチオール含有アミノ酸、システイン、N末端システイン、ホモシステイン、マレイミドに連結されたチオール、ビニルスルホン部分、ペプチド配列、ペプチド結合、ハロタグ、SNAPタグ、CLIPタグ、トランスグルタミナーゼ反応結合、アミノ酸またはキレート形成物質NTAまたは多価金属イオンに結合するポリヒスチジンから選択されるか、またはそれを含み、あるいは、リジン、グルタミン、アミンまたはカルボキシル基から選択されることができるか、またはそれを含む、請求項1~5の1つの請求項に記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。精製用タグが、His6タグ、FLAGタグ、HAタグまたはMYCタグから選択される、請求項1~6の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。多機能性融合タンパク質が、構成要素として、基質結合ペプチド、繰り返しRGD結合ペプチド、精製用タグおよび少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカー部分を含む、請求項1~7の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。PEGハイドロゲルが、構成要素として基質結合ペプチド、ZZドメイン、精製用タグおよび少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを含む融合タンパク質でさらに修飾される、かつまたは構成要素として増殖因子、場合によりリンカー、場合によりFcドメインおよび場合により精製用タグを含む融合タンパク質でさらに修飾される、請求項1~8の1つの請求項に記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。幹細胞、ヒト幹細胞、成人幹細胞、胚性幹細胞、操作されたまたは操作されていない幹細胞、初代または不死化幹細胞、間葉系幹細胞、骨芽細胞、セメント芽細胞、結合組織由来の線維芽細胞、歯肉線維芽細胞、皮膚線維芽細胞、角膜線維芽細胞、単独または歯根膜線維芽細胞との併用、歯根膜線維芽細胞、ケラチノサイト、歯肉ケラチノサイト、口腔、上気道消化管、皮膚または眼表面由来の角化細胞、中枢神経系の細胞、神経細胞、脈管および角膜組織の内皮細胞、周皮細胞、筋細胞、脂肪細胞、アストロサイトならびにメラノサイトから選択される細胞が刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれる、請求項1~9の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。細胞、タンパク質、ポリペプチド、増殖因子、プロテアーゼ、抗生物質、抗体、抗菌剤ポリマーならびにアセチルサリチル酸、アリールプロピオン酸、アリール酢酸、インドール酢酸、アントラニル酸およびオキシカムの誘導体ならびにCOX2選択的阻害薬を含む臨床使用が認められた非ステロイド系抗炎症剤から選択されるさらなる構成要素が刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれる、請求項1~10の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。a本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質および請求項1~11のいずれかに記載のPEGポリマーを提供し、ここで少なくとも1つの多機能性融合タンパク質はPEGポリマーに共有結合しておりb段階aで得られた、本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質およびPEGポリマーと、請求項1~11のいずれかに記載の基質結合タンパク質の基質とを混合し、それによってPEGハイドロゲルを形成させる段階を含む、請求項1~11の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法。請求項1~11のいずれかに記載の多機能性融合タンパク質。医薬、医療デバイスまたは医療製品として使用するための、請求項1~11の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。インプラント学、上気道消化管における癌腫の治療における皮膚科学、耳鼻咽喉科学もしくは耳鼻咽頭科医学、口腔の創傷の治療、腫瘍性疾患による口腔の創傷治療、口腔手術および顎顔面外科手術、歯槽骨造成、抜歯後の歯槽突起予防、歯根膜を含む歯周欠損の治療、眼科学分野における疾患の治療、治療を受ける患者における角膜、好ましくは角膜の内皮もしくは上皮層の疾患の治療、フックス角膜内皮変性症の治療、熱傷被覆材、外科用パッチ、病変の治療、外科的包帯、創傷治療、インプラント学の分野における軟組織および硬組織再生、全体的にもしくは部分的に損傷したもしくは悪いもしくは除去された組織を再生もしくは再建するための細胞インプラントの調製、全体的にもしくは部分的に神経組織を再生もしくは再建するための神経細胞としての中枢神経系細胞のインプラントの調製、あるいは、invitro、invivoおよびまたはexvivo用途のための薬物送達デバイスもしくは細胞マトリックスに使用するための請求項1~11の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル。請求項1~11の1つに記載の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル、場合により請求項1~11の1つに記載のPEGハイドロゲルへの組み込みのためのさらなる成分および場合により使用説明書を含むキット、好ましくはパーツのキット。この目的は、添付の特許請求の範囲の主題事項によって解決される。第1の特定の実施形態によれば、本発明の基礎をなす目的は、少なくとも1つの多機能性融合タンパク質であって、好ましくは、構成要素として、基質結合ペプチド、好ましくは繰り返しRGD結合ペプチドおよびまたはZZ結合ドメイン、好ましくは精製用タグならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを含む前記多機能性融合タンパク質を含むように修飾されたPEGポリマーのマトリックスを含む刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルによって解決される。好都合には、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、コスト効率よく製造することができ、優れた可変性を提供する。このゲルは、基質結合ペプチドと共有結合でグラフトされた薬学的に認可されたポリエチレングリコールポリマーをベースにして製造されることができる。ゲル形成は、本明細書に記載の基質結合ペプチドの好ましくは特異的基質を介した相互作用または、基質結合ペプチドのその特異的基質への結合、例えばクーママイシンによる2つのGyrBサブユニットの二量体化もしくはGyrBのクーママイシンへの結合によって容易に達成される。アンタゴニスト作用を持つ化合物または基質、例えばGyrBの場合におけるノボビオシンを過剰に添加することによって、ハイドロゲルの分解を調節することが可能である。例えば、繰り返しRGD結合ペプチドnとしても書かれるの形での細胞接着モチーフの融合タンパク質配列への組み込みよって、ハイドロゲル上での細胞増殖が可能になる。例えばZZ結合ドメインを介してハイドロゲルに組み込まれた増殖因子、例えばFGF7は、誘導物質ノボビオシンによって時間制御的に、かつ用量反応的に放出されることができる。第1の実施形態によれば、PEGマトリックスのPEGポリマーを修飾するために用いられる本発明の多機能性融合タンパク質は、好ましくは、構成要素として、基質結合ペプチド、好ましくは繰り返しRGD結合ペプチド、例えばnとも定義されるならびにまたはZZ結合ドメイン、好ましくは精製用タグならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを含む。一般的には、本発明の多機能性融合タンパク質の基質結合ペプチドは、その特異的基質またはその基質結合ペプチドまたは異なる基質結合ペプチドに結合できるタンパク質またはポリペプチドから選択されるタンパク質またはポリペプチドであることができる。本発明においては、このような基質結合ペプチドは、例えば特異的基質を介して相互作用するか、または特異的基質に直接に結合するタンパク質またはポリペプチドから選択されることができる。従って、場合により特異的基質を介してPEGポリマーに結合されるとき、少なくとも2つのこのような基質結合ペプチドは、その単一PEGポリマー種を架橋することによって、複雑な分子集合体の形成またはゾルゲル転移およびハイドロゲル形成を行うことが可能になる。あるいは、すでにPEGポリマーに結合された基質結合ペプチドを、同様にさらなるPEGポリマーに結合されたその特異的基質に結合させることによって、ハイドロゲル形成を行うことが可能である。従って、好ましくはホモまたはヘテロ多量体、例えばホモまたはヘテロ二量体またはさらにはホモまたはヘテロ三量体などを形成する傾向を有するペプチドから適切な基質結合ペプチドが選択されることができる。あるいは、適切な基質結合ペプチドは、好ましくは特異的基質に特異的に結合するタンパク質またはポリペプチドから選択されることができる。より好ましくは、いずれの場合も、特異的基質を介する2以上の基質結合ペプチドの相互作用またはその特異的基質への基質結合ペプチドの相互作用は、特異的基質の添加または除去によって誘導または再分解することができる。このような特異的基質は、例えば核酸分子、ペプチド、小有機分子などであることができ、好ましくは本明細書に記載の基質結合ペプチドによって特異的に結合されている。特異的基質なしに、もしくはそれのと結合によって、あるいは基質結合ペプチドとその特異的基質との組み合わせによってホモまたはヘテロ多量体を形成する傾向を有する2以上の基質結合ペプチドの組み合わせは、本発明においては結合パートナーと呼ぶことができる。従って、少なくとも2以上の基質結合ペプチドが互いに相互作用する上記の意味の範囲内の結合パートナーは、好ましくは、限定するものではないが、例えば基質結合ペプチド基質結合ペプチド組み合わせまたは基質結合ペプチド特異的基質組み合わせから選択される。好ましくは、いずれの場合も、基質結合ペプチドは本発明の多機能性融合タンパク質の構成要素となり、全多機能性融合タンパク質にその結合特性を付与する。このような基質結合ペプチド基質結合ペプチド組み合わせまたは基質結合ペプチド特異的基質組み合わせは、限定するものではないが、例えばヘパリン結合性タンパク質ヘパリン結合性タンパク質、ヘパリン結合性タンパク質ヘパリン、GyrBGyrB、FKBPFRB、FMFM、ToxTToxTのToxTタンパク質、DHFRDHFR、FKBPFKBP、FKBPCypおよびCypCypから選択されることができる。このような結合パートナーは、上記の基質結合ペプチドの少なくとも2つのホモ多量体またはヘテロ多量体であることもできる。対応する特異的基質は、限定するものではないが、例えばヘパリン、クマリン抗生物質、ラパマイシンまたはFK506および誘導体、シクロスポリンおよび誘導体、FK506、ビルツスタチンならびにメトトレキサートおよびその誘導体から選択されることができ、かつまたは小有機化合物、例えば分子量100~5000gmol、特に100~2000gmolの化合物から選択されることができる。特定の側面によれば、基質結合ペプチドは、二量体を形成する傾向を有する基質結合ペプチドから選択されることができる。このような基質結合ペプチドの特定例は、好ましくは、限定するものではないが、例えばGyrB、FM、ToxT、FKBPおよびDHFRから選択される。これらの基質結合ペプチドの二量体化の誘導を可能にする特異的基質は、限定するものではないが、クマリン抗生物質、ラパマイシンおよび誘導体、ビルスタチン、FK1012およびメトトレキサートならびにそれらの誘導体から選択されることができる。これらの特異的基質はまた、これらの基質結合ペプチド間の相互作用を誘導およびまたは分解し、それによって両方の結合パートナー間の相互作用を中和することを可能にする化合物から選択されることができる。なぜなら、その中和によって、両方の基質結合ペプチドの相互作用を、例えば競合的に実質的に低下させることができるからである。このような化合物は、例えば、実質的に過剰に用いられた場合の上記の特異的基質であるか、あるいは好ましくは、他の、同じクラスの二量化する化合物の異なる代表、例えばクマリン抗生物質のクラス、ラパマイシンおよび誘導体ならびにメトトレキサート、葉酸拮抗剤およびそれらの誘導体であり、またFK506である。本明細書に記載の基質結合ペプチドの結合パートナーおよびそれらの特異的基質としての核酸は、例えば、EETRのMphRタンパク質およびそのオペレーターETR、PIPPIRのPIPタンパク質およびそのオペレーターPIR、TetRtetO、ArgRargO、ArsRarsOならびにHucRhucOである。他のこのような対には、RamosJLら、MartinezBuenoMらによって記載されているものおよびデータベースBacT調節因子に列挙されているものがある。これらの配列は、参照によりその全体が本願に組み込まれる。本発明の多機能性融合タンパク質の構成要素としてこのような基質結合ペプチドを用いる場合、その特異的基質は、好ましくは本明細書で使用するPEGポリマーに結合される。このような結合パートナーを用いる場合、相互作用、すなわち本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルを分解するのに適切な特定の化合物は、例えば、マクロライド系抗生物質、ストレプトグラミン抗生物質、テトラサイクリン抗生物質、アルギニン、重金属および尿酸である。本明細書に記載の基質結合ペプチドの結合パートナーおよびそれらの特異的基質としての小分子は、例えば、GyrBクマリン抗生物質、FKBPmTOR阻害薬、FRBmTOR阻害薬、FMmTOR阻害薬、Cypシクロスポリン、Cypアスコマイシン、DHFR葉酸代謝拮抗薬、ストレプトアビジンビオチンアナログ、アビジンビオチンアナログ、ニュートラアビジンビオチンアナログ、ステロイドホルモン受容体ステロイドホルモンおよびそのアナログならびにToxTビルスタチンである。特異的基質が小分子の場合、好ましくは、小分子は、好ましくは5000gmol未満の分子量、特に100~5000gmolの分子量を有する。これに関連して、クマリンおよびアミノクマリン抗生物質は、例えば、ノボビオシン、クロロビオシン、クーママイシンおよびジヒドロノボビオシンを含むことができる。シクロスポリンまたはアスコマイシンは、例えば、シクロスポリンA、ISAtx247、FK506、FK778、ABT281またはASM981であることができる。mTOR阻害薬は、例えば、ラパマイシンまたはその誘導体、例えばシロリムス、デフォロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、エベロリムス、CCI779、ABT578、バイオリムス7、バイオリムス9、ラパログ、例えばAP23573、アザチオプリン、campath1H、S1P受容体モジュレーター、例えばFTY720またはそのアナログであることができる。ラパログは、特に、ラパマイシンに対して以下の修飾の1以上を有するラパマイシンのバリアントを含むことができる脱メチル化、C7、C42およびまたはC29におけるメトキシ基の除去または置換C13、C43およびまたはC28におけるヒドロキシ基の除去、誘導体化または置換C14、C24およびまたはC30におけるケトン官能基の還元、除去または誘導体化5員ピロリニル環による6員ピペコラート環の置換ならびにシクロヘキシル環上の代替置換またはシクロヘキシル環の置換シクロペンチル環での置換。考慮されるさらなる修飾は、米国特許第5525610号第5310903号および第5362718号、さらには米国特許第5527907号における背景技術の項に記載されている。C28ヒドロキシ基の選択的エピマー化もまた考慮される。WO03064383およびWO0516252に記載されているような、種々のリン含有部分を含むラパマイシンアナログの使用もまた考慮される。考慮される他のラパログは、米国特許第6984635号、米国特許第6649595号および米国特許第7091213号に記載されている。葉酸拮抗剤は、例えば、メトトレキサート、トリメトプリムのようなDHFRに結合する化合物、ブロジモプリムおよびエピロプリムまたイクラプリムなどのジアミノピリミジンを含むことができる。考慮される他のDHFR阻害薬は、HawserSeralBiochemicalPharmacology719419482006に記載されている。最後に、ビオチンアナログは、例えば、ストレプトアビジン、ニュートラアビジンまたはアビジンに結合する化合物、例えば、ビオチン、HABA、デスチオビオチン、イミノビオチンまたはジアミノビオチンを含むことができる。好ましくは、本明細書に記載の基質結合ペプチドの特異的基質としての上記の小分子は、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのために本明細書で使用するPEGポリマーに結合させるのに適した誘導体化に供されることができる。このような誘導体化は、特異的基質へのアミン、アミド、チオール、ヒドロキシル、アルデヒド、アジド、アルキン、ケトン、エポキシドまたはカルボキシ官能基の導入を含むことができる。本発明においては、特に好ましい基質結合ペプチドおよびそれらの組み合わせならびにそれらの特異的基質は、好ましくは、以下の基質結合ペプチドの組み合わせおよびそれらの特異的基質から選択されるGyrBGyrBおよびそれらの特異的基質としてのアミノクマリン抗生物質、FMFMおよびFKBPFRBならびにそれらの特異的基質としてのラパマイシン、FK506およびその誘導体AP21998およびAP22542など、より好ましくは、組み合わせGyrBGyrB、FMFMおよびまたはFKBPFRBを用いる場合、最も好ましくはGyrBGyrBおよびまたはFMFMを用いる場合。極めて特定の選択肢によれば、本発明の多機能性融合タンパク質の構成要素としての基質結合ペプチドはGyrBであることができる。本発明においては、GyrBは、好ましくはエシェリキアコリからのDNAジャイレースサブユニットB由来のタンパク質であり、好ましくは、例えば、ノボビオシン、クロロビオシン、クーママイシンおよびジヒドロノボビオシン、好ましくはクーママイシンを含むアミノクマリン抗生物質から選択されるその基質に特異的に結合する。クーママイシンは、2つのGyrB結合部位を有する長いアミノクマリン分子であり、抗生物質としての用途を有するそのIUPAC系統名は、5ヒドロキシ62ヒドロキシ342ヒドロキシ73ヒドロキシ5メトキシ66ジメチル4オキシオキサン2イルオキシ8メチル4オキソクロメン3イルカルバモイル3メチル1Hピロール2カルボニルアミノ8メチル4オキソクロメン7イルオキシ3メトキシ22ジメチルオキサン4イル5メチル1Hピロール2カルボキシラートである。クーママイシンは、GyrBに対する2つの結合部位を含むため、クーママイシンは、同時に2つのGyrBサブユニットに結合することによって、同時に2つのGyrBサブユニットを二量体化することが可能である。この特有の特性は、GyrBのクーママイシンによる二量体化を互いに用いることによって、GyrBタンパク質またはペプチドに連結された2つの基質を架橋するために用いることができる。形成された二量体は、例えばさらなるアミノクマリン抗生物質である抗生物質ノボビオシンベンズアミド8メチルクマリン7イル3Oカルバモイル55diCメチルαlリキソフラノシドを有するを添加することによりその2つのモノマーGyrBサブユニットに再分解されることができる。ノボビオシンは、GyrBに対してただ1つの結合部位を含む。従って、GyrBクーママイシン系は、クーママイシンの添加により、GyrBサブユニットを含む本発明の多機能性融合タンパク質で修飾されたPEGポリマーを効率的に架橋し、PEGポリマーのゲル化およびタンパク質基質タンパク質相互作用にのみ基づく刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの形成をもたらすために用いることができる。このような刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルはまた、抗生物質ノボビオシンまたは他のアミノクマリン抗生物質を添加されたとき、特異的に再分解されることができる。なぜなら、これらのアミノクマリン抗生物質は、競合的に特異的にクーママイシンと置換し、従ってタンパク質基質タンパク質相互作用を遮断するからである。本発明においては、本発明の基質結合ペプチドとしてのGyrBは、エシェリキアコリからのDNAジャイレースサブユニットB、より好ましくはエシェリキアコリからのDNAジャイレースサブユニットBのN末端配列、よりさらに好ましくは、配列番号2に記載のエシェリキアコリからのDNAジャイレースサブユニットBのN末端配列または、配列番号2に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択される。さらに、前記GyrBは、配列番号1に記載の核酸配列または、配列番号1に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされることができる。さらに極めて特定の選択肢によれば、本発明の基質結合ペプチドは、ヘパリン結合性タンパク質であることができる。このようなヘパリン結合性タンパク質は、例えばヘパリン結合性増殖因子1、ヘパリン結合性増殖因子2、ヘパリン結合性増殖因子2、FGF4、アズロシジンまたは37kDaのカチオン性抗菌タンパク質などから選択されることができる。前記で定義されているように、ヘパリン結合性タンパク質は、好ましくは本発明の多機能性融合タンパク質の一部であり、一般的には基質としてのヘパリンに結合する。従って、前記で定義されているように、ヘパリン結合性タンパク質は、基質としての1つのヘパリン分子による2以上のヘパリン結合性タンパク質の二量体化またはさらには多量体化を可能にする。従って、このようなヘパリン結合性分子は、本発明の多機能性融合タンパク質に含まれた場合、ヘパリンの添加によって、ヘパリン結合性タンパク質を含む融合タンパク質で修飾されたPEGポリマーを効率的に架橋させ、PEGポリマーのゲル化およびタンパク質基質タンパク質相互作用のみに基づく刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの形成をもたらすために用いることができる。このような刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルはまた、競合基質、例えば、過剰量の、すなわちヘパリン結合性タンパク質の各ヘパリン結合性部位を飽和するのに十分な量のヘパリンを添加するとき、特異的に再分解されることもできる。刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルはさらに、競合ヘパリン結合性タンパク質、例えば前記のヘパリン結合性タンパク質または例えば多量体化に用いられるヘパリンに特異的に結合するヘパリン結合性タンパク質受容体2のいずれかを添加することによって特異的に分解されることができる。このような競合的基質およびまたはヘパリン結合性タンパク質が添加されるとき、タンパク質基質タンパク質相互作用は遮断され、ゲルは分解される。さらなる大変特定な選択肢によれば、本発明の基質結合ペプチドは、リポカリンファミリーの任意のメンバー、または特異的基質に結合するさらなる適切なタンパク質、特に以下のタンパク質基質組み合わせのタンパク質FluAフルオレセイン、DigAビオチンジゴキシンコンジュゲート、サリチル酸結合タンパク質2サリチル酸、または互いに相互作用するタンパク質、例えばコンペティターとしてさらにケルセチンと相互作用するFKBP42およびPGP1のいずれかから選択されることができる。これらのタンパク質基質組み合わせは本発明の生体機能化刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルを提供するために用いることができ、これらは、ヒトへの使用が認可され、ヒト生物体に有害ではない刺激を用いて形成されおよびまたは分解することができる。リポカリンファミリーは、200を超えるメンバーを含み114、これら引用されたリポカリンタンパク質ファミリーのメンバーおよび上記のDarrenRFlowerに記載の配列は、参照により本願に組み込まれる、その有名なメンバーはFluAおよびDigAである。大部分のリポカリンは、少量の不溶性または化学的に反応性の高い有機化合物のための貯蔵タンパク質または輸送タンパク質である。このファミリーメンバーの全構造は、低い配列同一性にもかかわらず高度に保存されている。しかしながら、結合ポケットを形成するループ領域は著しく異なり、全タンパク質構造に影響を与えることなく特定のリガンドのための基質特異性を得るためにさらに操作されることができる。本発明との関連において、FluAは、好ましくは、フルオレセインに対する高い基質特異性を有する人工のリポカリンとして理解される。リポカリンは、通例、生理学的に重要な化合物の貯蔵タンパク質または輸送タンパク質として役立つ。このタンパク質ファミリーの種々のメンバーは、すべて、ループ領域によって連結された8本のβバレルのストランドからなる。このループ領域は大変多様であり、基質結合ポケットを形成する。FluAが操作され、ランダムおよび合理的変異誘発の組み合わせによって改善された。例えば、人工のFluAのフルオレセインに対する基質親和性は1nMである。薬学的に認可されたポリエチレングリコールポリマーは、Eコリ内で過剰発現されたFluAと共有結合でグラフトされ、フルオレセインで標識される。ハイドロゲル形成は、もう1つのタンパク質のフルオレセイン標識、好ましくは本明細書に記載のさらなるFluA分子によって結合されたフルオレセイン標識に対するFluAの結合によって達成される。遊離フルオレセインの添加は、好ましくは、FluAの結合部位との競合的相互作用によってハイドロゲルの用量依存的分解をもたらす。好ましくは、FluAは、配列番号55に記載のアミノ酸配列または配列番号54もしくは55に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択される。さらに、前記FluAは、配列番号54に記載の核酸配列または、配列番号54に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされることができる。さらにまた、本発明においては、DigAは、好ましくは、ジゴキシンに対する操作された親和性を含む人工のリポカリンとして理解される。これは、FluAであるピエリスブラシカからの天然リポカリンであるビリン結合タンパク質に由来した。ジゴキシンに対するおおよそ31nMの基質親和性を達成することができた110520。図26は、このハイドロゲルの形成および分解を示す。基本的な機構は、FluAフルオレセインに関して記載したものと同じである。簡潔に言えば、薬学的に認可されたポリエチレングリコールポリマーはDigAと共有結合でグラフトされる。ハイドロゲル形成は、ビオチンジゴキシンコンジュゲートおよびストレプトアビジンの添加によって駆動される一方で、DigAはジゴキシンと高親和性で結合し、ストレプトアビジンはビオチンと結合する。本願との関係において、この構築物は、基質結合ペプチドがその基質に結合したものと考えられる。分解は、ビオチン結合部位と競合する遊離ビオチンの添加によって達成されることができる。ビオチンは種々の代謝反応を促進し、従って高用量で投与することができる。好ましくは、DigAは、配列番号57に記載の配列または、配列番号57に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択される。さらに、前記DigAは、配列番号56に記載の核酸配列または、配列番号56に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性によってコードされることができる。さらに、SABP2はSABP2SABP2様ファミリーに属する。このファミリーは、サリチル酸には結合しないいくつかのメンバーを含む。ジャスモン酸またはアブシジン酸などのようなストレスホルモンに対して親和性を示すものもある。さらに、配列分析によって、植物のいくつかのヒドロキシニトリルリアーゼおよび動物からのレシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼがSABP2Lタンパク質に分類されることが見出された。本発明においては、サリチル酸結合タンパク質2は、好ましくはタバコに由来し、動物における免疫応答に類似する植物の全身獲得抵抗性に重要な役割を果たしている。SARは、病原菌に対する長期持続性の広域スペクトル抵抗性を提供する。SABP2は、サリチル酸に対して高親和性を有するサリチル酸メチルエステラーゼであり、サリチル酸は、そのエステラーゼ活性のフィードバック阻害剤として機能する17738。図27は、ハイドロゲル形成のためにどのようにしてSABP2が用いられるかを示す。SABP2はEコリで過剰発現され、ホモ二量体で精製され、タンパク質1分子当たり2つのSA結合部位を生じる。薬学的に認可されたポリエチレングリコールポリマーは3アミノSAとグラフトされる。ハイドロゲル形成は、活性部位へのPEG化3アミノSAの結合により駆動される。遊離SAの添加により結合ポケットから3アミノSAが置換され、従ってハイドロゲルの分解が生じる。SAは、アスピリンの主代謝物であるため、SAはアセチルサリチル酸の形で投与されることができる。1日当たり8gまでのアスピリンを摂取することができる。好ましくは、SABP2は、配列番号59に記載のアミノ酸配列、配列番号61に記載のアミノ酸配列または、配列番号59もしくは61に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択される。さらに、前記SABP2は、配列番号58に記載の核酸配列、配列番号60に記載の核酸配列または、配列番号58もしくは60に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされることができる。配列番号61は、前記で定義されているように、SABP2に記載の配列にS81A変異を含む。配列番号60は、コードする核酸配列である。さらに、FKBPファミリーメンバーの大部分はFK506に結合し、ペプチジルプロリルシストランス異性化酵素活性を示す31825。FKBP42はFK506結合タンパク質である。PGP1は、フルサイズABCトランスポーターのサブグループである多剤耐性タンパク質またはP糖タンパク質のファミリーに属する。ABCトランスポーターは、解毒およびイオン調節過程ばかりでなく、植物成長過程にも関与している345355。本発明においては、タンパク質FKBP42は、好ましくはアラビドプシスFK506結合タンパク質であり、これはアラビドプシスの多剤耐性様ABCトランスポーターAtPGP1のC末端ドメインと相互作用する。両方のタンパク質は植物成長にとって重要である。例えば、AtPGP1は、オーキシン輸送およびオーキシンによる成長に関与する。この相互作用はその一次アミノ酸配列に依存し、グリコシル化は必要がないことが明らかにされた42384249。さらにまた、Baillyら2181726は、その相互作用が、フラボノイドケルセチンによって、~200nMのIC50で破壊されることができることを測定した。FKBP42およびAtPGP1を薬学的に認可されたポリエチレングリコールポリマーに結合させることによって、ハイドロゲル形成が達成される。ケルセチンの添加によってこのタンパク質タンパク質相互作用が破壊され、それによってハイドロゲルが分解される。ケルセチンは抗酸化物質であり、ヒトの健康に多くの有益な効果を有すると考えられる。一般的には、臨床には、経口用量400~500mg、1日3回が用いられている375388。好ましくは、FKBP42は、配列番号62に記載の核酸配列によってコードされるかまたはそれによってコードされるアミノ酸配列から選択され、または配列番号62に記載の核酸配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされるかまたはそれによってコードされるアミノ酸配列から選択される。さらに、前記FKBP42は、配列番号64に記載のアミノ酸配列または、配列番号64に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択されることができるか、または、配列番号63に記載の核酸配列または、配列番号63に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされることができる。前記で定義されているように、配列番号64は、配列番号62に記載のコードされたaa配列のaa1~163を含む。配列番号63はコードする核酸配列に相当する。同様に、好ましくは、AtPGP1は、配列番号66に記載のアミノ酸配列、配列番号68に記載のアミノ酸配列または、配列番号66もしくは68に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択される。さらに前記AtPGP1は、配列番号65に記載の核酸配列、配列番号67に記載の核酸配列または、配列番号65もしくは67に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされることができる。配列番号68は、前記で定義されているように、配列番号66に記載のアミノ酸配列の980~1286を含む。配列番号67はコードする核酸配列に相当する。本発明においては、AtPGP1およびFKBP42は、共に、基質結合タンパク質または基質として用いることができる。正確には、本発明においては、FKBP42は基質結合タンパク質として用いることができ、AtPGP1は、この基質結合タンパク質の基質として用いることができる。あるいは、本発明においては、AtPGP1は基質結合タンパク質として用いることができ、FKBP42は、この基質結合タンパク質の基質として用いることができる。ケルセチンの添加によってタンパク質タンパク質相互作用は破壊され、それによってハイドロゲルは分解される。いずれの場合においても、基質として用いられるタンパク質は、好ましくは二量体として提供され、ここでこのような二量体は、リンカー、好ましくは本明細書に記載のリンカー、より好ましくはペプチドリンカーと2つのこのようなタンパク質を連結させるか、あるいは化学架橋剤を用いてこれらのタンパク質を適切に架橋することによって提供されることができる。このようなタンパク質の製造の目的で、単量体タンパク質の製造後、例えば細菌発現によるモノマータンパク質の発現後に、あるいは例えば細菌発現による、コードされるペプチドリンカーを含む二量体タンパク質の発現によって、あるいは例えば化学架橋法またはペプチドリンカーを用いる単量体タンパク質の二量体化または架橋によってこれらの二量体を製造することができる。ペプチドリンカーは、好ましくは、4、5、5~10または10~約25アミノ酸の短いリンカーペプチドから選択される。リンカーは、通例、柔軟性のためにグリシンに富み、溶解性のためにセリンまたはトレオニンに富む。さらに、前記リンカーは、任意の適切な位置、好ましくはこれに関連して用いられる単量体タンパク質のN末端もしくはC末端のいずれかに位置することができる。あるいは、このようなリンカーは、本明細書に記載のマルチアームPEGまたは、好ましくは本明細書に記載のPEGから選択された非分岐PEGのいずれかの本明細書に記載のPEGであることができる。これらのタンパク質、特にリポカリン、FluA、DigA、SABP2、AtPGP1およびFKBP42は、好ましくは、それらの対応するタンパク質ファミリーの、好ましくは、リポカリンファミリー、SABP2SABP2様ファミリー、FKBPファミリーなどの単なる代表に過ぎない。故に、本発明においては、適切な基質結合タンパク質は、前記タンパク質ファミリーのさらなるメンバーをさらに含むことができる。このような、これらのタンパク質ファミリーのさらなるメンバーは、好ましくは、これらのタンパク質のホモログ、例えば植物のホモログ、そして好ましくは、上記の範囲内のより具体的に特定されたタンパク質リポカリン、FluA、DigA、SABP2、AtPGP1およびFKBP42のいずれかに配列同一性を示すホモログを含む。故に、それぞれのハイドロゲルの設定において、前記タンパク質は、前記ファミリーのこのような他のメンバーおよびそれらの個々の結合パートナーによって置換されることができる。さらなる好ましい側面によれば、本発明の多機能性融合タンパク質の基質結合ペプチドは、抗体フラグメント、好ましくは抗体の一本鎖抗体、好ましくは基質に結合することができるものであることができ、この基質は、同じタイプの抗体のさらなる一本鎖抗体によってさらに結合されることができる。これに関連して、抗体の一本鎖抗体は、好ましくは、4、5、5~10または10~約25アミノ酸の短いリンカーペプチドで連結された、免疫グロブリンのH鎖およびL鎖の可変領域の融合タンパク質である。リンカーは、通例、柔軟性のためにグリシンに富み、溶解性のためにセリンまたはトレオニンに富む。さらに、前記リンカーは、VHのN末端とVLのC末端を連結させることもできるし、逆もまた同様である。このタンパク質は、定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。本発明においては、特に好ましい一本鎖抗体は、一般的には医療に用いられ、より好ましくは診断医療などに用いられる造影剤に対する特異性を含むことができる。これに関連して、特に好ましい造影剤は、特に、フルオレセイン、フルオレセイン誘導体、FITCまたはそれらの誘導体などであり、これらはさらに、本明細書に記載の対応する基質結合ペプチドaの基質、特にこのような特異性を有する一本鎖抗体の基質として用いることができる。例示的な一本鎖抗体は、例えば、VaughanらNatBiotechnol14S309314を参照のことで公表されているFITCE2と名付けられたフルオレセインに対するscFvであることができる。このようなscFvは、例えばPedrazzietalFEBSLett415S289293またはRippmannetalApplEnvironMicrobiol64S48624869のL型細胞において発現を示すにおいて、C末端ヘキサヒスチジンタグ付きバージョンとして組換えにより製造されることができる。Eコリまたはプロテウスミラビリスのいずれかにおける発現が特に好ましい。好ましいタンパク質配列は、図33に示すように製造されたscFvのアミノ酸配列または、配列番号69に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列であることができる。さらにまた、このような基質結合タンパク質および同様に特異的scFv断片を含むこのような多機能性融合タンパク質によって結合される基質は、例えばフルオレセイン、FITC、またはそれらの誘導体であることができる。この基質は、さらに、ウシ血清アルブミンまたはアミン修飾マルチアームPEG誘導体に結合されることができる。さらに、任意のこのような基質または基質構築物を、本発明の生体機能化刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの形成に用いることができる。基質または基質構築物は、BSAフルオレセイン、BSAFITC、PEGフルオレセイン、PEGFITCなどで示すことができ、さらにそれは、本発明の多機能性融合タンパク質と結合したPEGと接する本発明の概念の範囲内の架橋剤として機能する。ポリマーとしては、好ましくはマルチアームPEGVSが用いられ、これはscFvまたは本明細書に記載の対応する多機能性融合タンパク質、例えばシステインを含むもので機能化されることができる。本発明の多機能性融合タンパク質のscFvは、それ自身で架橋することができるように、フルオレセイン、FITCまたはそれらの誘導体で、さらに直接に修飾されることができる。これに代えて、あるいはこれに加えて、本明細書に記載の増殖因子を、多機能性融合タンパク質内のscFvと融合タンパク質を形成させるために用いることができる。このような増殖因子は、本明細書に記載の融合タンパク質に組み込まれることができる。本発明の多機能性融合タンパク質のためのscFvと同様な適切なタンパク質の他の例は、ラクダサメ抗体、アドネクチン、タンパク質Zドメイン、ダルピン、アンチカリンなどを含むことができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのPEGポリマーを修飾するために用いられる多機能性融合タンパク質は、さらに、繰り返しRGD結合ペプチドを含むことができ、好ましくは式nとしても定義されるを含むものを含むことができる。一般的には、式nとしても定義されるの多機能性融合タンパク質のこのような繰り返しRGD結合ペプチドは、少なくとも1つのRGDペプチド配列、好ましくは少なくとも2つのRGDペプチド配列、またはさらには3つ、4つ、5つまたはそれ以上のRGDペプチド配列を含むペプチドであることができ、すなわちnは1、2、3、4、5またはさらにはそれ以上であることができ、好ましくは、nは1~5、1~4、1~3、2~5、2~4、2~3または3~5、3~4または4~5である。これに関連して、RGDペプチド配列は、一般的には3アミノ酸RGDを好ましくは示された順序で含む配列である。繰り返し回数の数は、好ましくは、上記の整数nによって決定される。このようなRGD配列は、一般的には、細胞外マトリックスタンパク質に対するインテグリン認識配列の一部に相当する。これに関連して、インテグリンは、細胞とその周囲の組織、例えば他の細胞または細胞外マトリックスとの間の接着を媒介する受容体として知られている。インテグリンはまた、細胞のシグナル伝達にも関与し、それによって細胞形状、移動性を定め、細胞周期を制御する。インテグリンを介して多価融合タンパク質への細胞の結合を可能にする本発明の目的のために用いることができるRGD配列は、一般的にはECMタンパク質またはRGDペプチド配列を含むペプチドまたは合成配列に由来し、いずれの場合にも、アミノ酸配列アルギニングリシンアスパラギン酸を含む。本発明の多機能性融合タンパク質に組み込まれることができるこのような細胞特異的接着配列は、例えばHerselら43854415によって概説され、リストされている。このような特異的RGDペプチド配列に関するHerselらにおけるそれぞれの開示および、そこに開示された特異的RGD配列は、好ましくはその全体が参照により本願に組み込まれる。よりさらに好ましくは、このようなRGD配列は、限定するものではないが、以下のアミノ酸配列の少なくとも1つから選択されることができRGDn、RGDS、n、GRGD、RGDV、RGDT、GRGDG、GRGDS、GRGDY、GRGDF、YRGDSYRGDG、YGRGD、GRGDSP、GRGDSG、GRGDSP、GRGDSY、GRGDVY、GRGDSPK、CGRGDSPK、CGRGDSY、YAVTGRGDS、AcCGGNGEPRGD、YRAYNH2、AcGCGYGRGDSPG、RGDSPASSKP、AcGRGDSPASSKG、あるいは環式RGD配列、例えば、βAXEPRGDNYRCを表し、βAはbアラニンを表し、この環式RGD配列は以下の構造を有する、KRGDf、GPenGRGDSPCA、vRGDEなどから選択されることができ、あるいは配列番号3~33のいずれかに記載の配列に対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択されることができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのPEGポリマーを修飾するために用いられる本発明の多機能性融合タンパク質は、さらに、少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを含むことができる。従って、リンカーは、本発明の多機能性融合タンパク質のN末端、C末端またはN末端およびC末端に位置することができる。このようなN末端およびまたはC末端リンカーは、共有結合または非共有結合によって、本発明の多機能性融合タンパク質を、本明細書に記載のPEGポリマーに本明細書に記載のさらなる構成要素に結合させるために用いることができる。本発明の意味において、非共有結合は、生理的条件下で105M未満の解離定数を有する結合である。本発明における適切なリンカーは、好ましくは、例えば、多価金属イオンに結合するNTAおよびポリヒスチジンなどのキレート形成物質、アミノ酸、チオール含有部分、例えばチオール修飾もしくはチオール含有アミノ酸など、システイン、ホモシステイン、任意のさらなるチオール含有部分、マレイミドに連結されたチオール、ビニルスルホン部分、ペプチド配列、ペプチド結合、ハロタグ、SNAPタグもしくはCLIPタグまたはトランスグルタミナーゼ反応結合を含むかまたは含有する。この目的のために、本発明に従って用いられるPEGポリマーは、好ましくは、本発明の多機能性融合タンパク質へのこのようなリンカーの共有結合または非共有結合を可能にするために、本発明の多機能性融合タンパク質の導入の前に相応じて修飾されている。本発明の多機能性融合タンパク質が、例えば本発明の多機能性融合タンパク質のN末端またはC末端にただ1つのリンカーを含む場合、このリンカーは、好ましくは、本発明の多機能性融合タンパク質を、好ましくは共有結合によって共有結合指させるのに用いられる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのPEGポリマーを修飾するために用いられる本発明の多機能性融合タンパク質が、例えば本発明の多機能性融合タンパク質のN末端およびC末端に2つのリンカーを含む場合、第1リンカーは、好ましくは共有結合によってPEGポリマーに本発明の多機能性融合タンパク質を共有結合させるのに用いるのが好ましく、第2リンカーは、好ましくは共有結合によって、本発明の多機能性融合タンパク質にさらなる構成要素を共有結合させるのに用いられるのが好ましい。極めて特定の側面によれば、本発明の多機能性融合タンパク質は、チオール含有部分、例えばチオール修飾もしくはチオール含有アミノ酸、システイン、ホモシステイン、任意のさらなるチオール含有部分、マレイミドに連結されたチオール、ビニルスルホン部分などを含むかまたはそれらから選択される。チオール含有部分を用いる場合、結合、好ましくはPEGポリマーまたはさらなる構成要素への結合は共有結合によって行われ、好ましくはチオエーテル結合によって行われる。この目的のために、例えば本発明に従って用いられるPEGポリマーは、好ましくは、例えばチオエーテル結合によってチオール含有部分と本発明の多機能性融合タンパク質の対応する反応性基との共有結合を可能にするために、本発明の多機能性融合タンパク質を導入されるまえに相応じて修飾されている。例えばチオエーテル結合によって、さらなる構成要素と本発明の多機能性融合タンパク質とを共有結合させるために、少なくとも1つのN末端およびまたはC末端チオール含有部分もまた用いることができる。本発明の多機能性融合タンパク質がただ1つのチオール含有部分、例えばシステイン部分を含む場合、チオール含有部分は、好ましくは、チオエーテル結合によって、本発明の多機能性融合タンパク質とPEGポリマーとを共有結合させるために用いられる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのPEGポリマーを修飾するために用いられる本発明の多機能性融合タンパク質が、2つのチオール含有部分、すなわち本発明の多機能性融合タンパク質のN末端およびC末端における2つのチオール含有部分を含む場合、第1チオール含有部分は、好ましくは、チオエーテル結合によって、本発明の多機能性融合タンパク質とPEGポリマーとを共有結合させるために用いられ、第2チオール含有部分は、好ましくは、チオエーテル結合によって、さらなる構成要素と本発明の多機能性融合タンパク質とを共有結合させるために用いられる。これに関連して、このようなさらなる構成要素は、本明細書に記載の細胞、本明細書に記載のタンパク質、本明細書に記載の融合タンパク質、本明細書に記載のさらなるPEGポリマーまたは本明細書に記載の任意の他の構成要素であることができ、ここで、さらなる構成要素は、好ましくは、例えばチオエーテル結合によって本発明の多機能性融合タンパク質のチオール含有部分との共有結合を可能にするこのような結合を調製する前に相応じて修飾されている。さらなる特定の側面によれば、本発明の多機能性融合タンパク質のリンカーは、以下の表に記載の共役リンカーを含むかまたはそれらから選択されることができる。好ましくは、リンカーは、例えばアミン、チオール含有部分、リジン、グルタミン、N末端システイン、アミン、アミンまたはカルボキシル基などの1以上から選択されることができる。このような目的のために、PEGポリマーは、好ましくは、例えば、アミンの場合は例えばNヒドロキシルスクシンイミドによって、チオール含有部分の場合は例えば前記のようにマレイミドもしくはビニルスルホンによって、リジンの場合は例えばグルタミンによって、グルタミンの場合は例えばリジンによって、N末端システインの場合は例えばチオエステルによって、アミンの場合は例えばアルデヒドによって、カルボキシル基の場合は例えばアミンによって相応に修飾される。これに関連して、共有結合は、当業者に公知の任意の化学、例えばLottspeichおよびEngels第61章および第631章に概説されている化学を用いて実施することができるBioanalytik2AuflMunchenHeidelbergElsevierSpektrumAkadVerlを参照のこと。限定するものではないが、リンカーの特定例および本明細書に記載のPEGポリマーの好ましい官能基化を以下の表に示す本発明の多機能性融合タンパク質は、精製用タグ、すなわちその特有の親和性によって融合タンパク質の回収を可能にする、本発明の多機能性融合タンパク質に付加されたアミノ酸のストレッチを含むこともできる。好ましくは、精製タグは、その近づきやすさを確実にし、融合タンパク質またはペプチドの種々の構成要素のタンパク質フォールディングを乱さないように、融合タンパク質またはペプチドのN末端またはC末端のいずれかに付加される。本発明の文脈内の精製タグは、例えば、His6タグ、FLAGタグ、HAタグ、MYCタグなどを含む。これに関連して、Hisタグは、好ましくは、6ヒスチジン残基からなるタグであり、これは、本発明の多機能性融合タンパク質を、ニッケルまたはコバルト段に対する親和性によって回収することを可能にする。FLAGタグは、好ましくは、例えば配列DYKDDDDKまたはさらなる配列を含み、これは、本発明の多機能性融合タンパク質の特異的抗体による回収を可能にする。本発明の文脈内のHAタグは、一般的には、インフルエンザタンパク質ヘマグルチニン由来のエピトープ例えばYPYDVPとの融合体であり、HA抗体による回収を可能にする。最後に、MYCタグは、通例、ヒトプロトオンコプロテインMYC由来のエピトープ例えばILKKATAYIL、EQKLISEEDLとの融合体であり、MYC抗体による回収を可能にする。さらなる精製タグは当業者に公知であり、本発明における多機能性融合タンパク質に適合させ、適切に用いることができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのPEGポリマーを修飾するために用いられる多機能性融合タンパク質は、Fcドメインを結合させ、それによってFcドメインを介したZZドメインへのさらなる構成要素の結合を可能にするさらなる結合ドメイン、例えばZZドメインを含むこともできる。本発明の目的に適したこのようなZZドメインは、例えばベクターpEZZ18に記載のZZドメインまたはIshikawaSakuraiらに記載のZZドメイン、好ましくはジストロフィンおよびユートロフィンのZZドメインを示す配列AKHQAKCNICKECPIIGFRYRSLKHFNYDICQSCFFSGRもしくは配列AKHQAKCNICKECPIVGFRYRSLKHFNYDVCQSCFFSGR、または配列AQHDEAVDNKFNKEQQNAFYEILHLPNLNEEQRNAFIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKVDNKFNKEQQNAFYEILHLPNLNEEQRNAFIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKVDANSSもまた参照のこと、あるいは、配列番号38~40のいずれかに記載の配列に対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択されることができる。本発明に記載の本発明の多機能性融合タンパク質の、例えば上記のリンカーを介した本明細書に記載のPEGポリマーへの結合は、構成要素と混合することによって、好ましくは本明細書に記載の範囲内で、結合される構成要素の濃度を変えることによって行うことができる。これによって、好ましくは、構成要素が互いに相互作用することを可能にし、それによって結合を形成させる。本発明の多機能性融合タンパク質を、場合により特異的基質または任意のさらなる化合物をPEGポリマーに結合させ、それによってこのポリマーを架橋させてPEGハイドロゲルを形成させるのに適切な、上記のこのようなリンカーに付け加えて、本発明の刺激応答性PEGハイドロゲル、従って本発明に記載の多機能性融合タンパク質に用いられるPEGポリマーにさらなるリンカーを導入することができる。これによって、本発明の刺激応答性PEGハイドロゲルのさらなる架橋を可能にすることができる。適切なクロスリンカーは、例えば、もう1つの分子、例えばBioconjugateTechnique、AcademicPress、2008に記載の分子に結合するための少なくとも2つの部位を示す任意のホモまたはヘテロ官能化化合物である。PEGポリマーを修飾するために用いられる本発明の多機能性融合タンパク質の構成要素は、本発明の多機能性融合タンパク質のN末端およびまたはC末端に決定された場合、その融合タンパク質のいずれの位置に位置することもできる。しかしながら、本発明の多機能性融合タンパク質は、それらの特異的基質との相互作用による基質結合ペプチドの効果的な多量体化またはその特異的基質への基質結合ペプチドの結合および並行して細胞の効果的な結合の両方を可能にするように構成されることが好ましい。さらにまた、場合により、それは例えばさらなる結合配列によりさらなる分子の結合を可能にするものとする。従って、本発明の多機能性融合タンパク質は、限定するものではないが、基質結合ペプチド、上記の繰り返しRGD結合ペプチドおよび少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを、例えば以下の順序の少なくとも1つで含むことができるなど。さらにまた、本発明の多機能性融合タンパク質は、限定するものではないが、基質結合ペプチド、繰り返しRGD結合ペプチドならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーならびに精製用タグを、例えば以下の順序の少なくとも1つで含むことができるなど。本発明の多機能性融合タンパク質はまた、限定するものではないが、基質結合ペプチド、繰り返しRGD結合ペプチドならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカー、本明細書に記載のZZ結合ドメインならびに場合により精製用タグを、例えば以下の順序の少なくとも1つで含むことができるなど。これに加えて、あるいはこれに代えて、PEGポリマーを修飾するために用いられる少なくとも1つの多機能性融合タンパク質は、構成要素として、上記の基質結合ペプチド、好ましくは上記のZZドメイン、好ましくは上記の精製用タグならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを含むことができる。従って、本発明の多機能性融合タンパク質は、限定するものではないが、構成要素として、上記の基質結合ペプチド、好ましくは上記のZZドメイン、好ましくは上記の精製用タグならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを、例えば以下の順序の少なくとも1つで含むことができるなど。同様にさらに、本明細書に記載のPEGポリマーは、構成要素として好ましくは上記のZZドメイン、好ましくは上記の精製用タグならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを含む少なくとも1つの多機能性融合タンパク質を用いて修飾することができる。従って、本発明の多機能性融合タンパク質は、限定するものではないが、構成要素として、上記のZZドメイン、好ましくは上記の精製用タグならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端リンカーを、例えば以下の順序の少なくとも1つで含むことができるなど。本発明に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質の種々の構成要素は、好ましくは、互いに直接に連結されるか、またはスペーサーを介して連結される。多機能性融合タンパク質の種々の構成要素がスペーサーを介して連結される場合、スペーサーは好ましくはペプチドスペーサーである。ペプチドスペーサーは、一般的には、1~20、好ましくは1~10アミノ酸、より好ましくは1~5、よりさらに好ましくは1~3アミノ酸の長さを有する。場合によっては、ペプチドスペーサー配列は、より長いことができ、21~50アミノ酸を含むことができる。ペプチドスペーサーは、種々のアミノ酸配列で構成されることができる。従って、このようなペプチドスペーサーは、好ましくは、本発明に記載の多機能性融合タンパク質の少なくとも2つの構成要素の間、より好ましくは、本発明に記載の多機能性融合タンパク質の3つ、4つまたはさらには5つまたはすべての構成要素の間にペプチド結合によって挿入される。好ましくは、ペプチドスペーサーは、連結される多機能性融合タンパク質の単一構成要素の間にいくらかの構造的柔軟性を導入する。このようなスペーサーを導入することにより、例えば、ペプチドスペーサー配列内に、好ましくは少なくとも30、より好ましくは少なくとも40よりさらに好ましくは少なくとも60、70、75、80、85、90またはさらには95または100のプロリンおよびまたはグリシン残基ならびにペプチドスペーサー配列内に場合により1~10、1~20、1~30もしくは1~40のセリン残基を有する、種々のグリシンまたはプロリン残基および場合によりセリン残基を含むペプチドスペーサー、例えば、n、nまたはnに記載の配列を示すスペーサーを有することにより、構造的柔軟性が得られる。さらにまた、このようなスペーサーにより、必要に応じて、多機能性融合タンパク質の他の構成要素に対する十分な距離を提供することができる。その構造とは関係なく、スペーサーは、好ましくは免疫学的に不活性であることができる。本明細書に記載の特に好ましい本発明の多機能性融合タンパク質は、pRG107、pRG111もしくはpRG116、または配列番号45、47もしくは49のいずれかに記載の配列に対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列、または配列番号44、46もしくは48のいずれかに記載の配列に対して少なくとも80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされるアミノ酸配列に記載の多機能性融合タンパク質から選択されることができる。本明細書に記載の2つのペプチドまたはタンパク質配列が同一である百分率を決定するために、続いて互いに比較するために、配列をアラインメントすることができる。従って、例えば第1配列の配列にギャップを挿入することができ、第2配列の対応する位置における構成要素を比較することができる。第1配列における位置が、第2配列における位置でも同じ構成要素で占められていれば、2つの配列はこの位置で同一である。2つの配列が同一である百分率は、位置の総数で同じ位置の数を割った関数である。2つの配列が同一である百分率は、数学的アルゴリズムを用いて決定できる。好ましいが、限定するものではない、使用できる数学的アルゴリズムは、KarlinetalPNASUSA9058735877またはAltschuletalNucleicavidsRes2533893402のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、BLASTプログラムに組み込まれている。本発明に記載の配列と一定程度同一である配列は、このプログラムによって同定することができる。核酸配列に対しても、同じことが同様に適用される。本発明はまた、上記の多機能性融合タンパク質をコードする核酸配列、ベクター配列、特に発現ベクターおよび、このような核酸配列でトランスフェクトされた細胞を提供する。核酸配列は、DNA、RNA、一本鎖、二本鎖、環状およびまたは線状であることができる。本発明の多機能性融合タンパク質は、例えば、合成法を用いて製造することもでき、一般的には当該技術分野で公知の多機能性融合タンパク質またはその配列をコードする発現ベクターもしくは発現プラスミドを用いる細菌発現法を用いて製造することもでき、あるいは当業者に公知の任意のさらなる方法を用いて製造することもできる。ハイドロゲル形成に用いることができる、本発明における特に好ましい多機能性融合タンパク質は、一般的には細菌発現系、例えばEコリ、プロテウスミラビリスなどにおいて発現される。本発明の多機能性融合タンパク質の上記の選択肢のいずれもが、PEGポリマーを修飾するために、そして本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル、例えば、構成要素として基質結合ペプチド、好ましくは繰り返しRGD結合ペプチド、例えばもしくはRGDnもしくはnおよびまたはZZ結合ドメイン、好ましくは精製用タグならびに少なくとも1つのN末端およびまたはC末端システイン部分を含む多機能性融合タンパク質または構成要素として上記の基質結合ペプチド、好ましくは上記のZZドメイン、好ましくは上記の精製用タグならびに上記の少なくとも1つのN末端およびまたはC末端システイン部分などを含む多機能性融合タンパク質を形成させるために用いることができる。本発明に記載の種々の多機能性融合タンパク質のタイプおよびまたは量に応じて、より正確には、種々の多機能性融合タンパク質のそれぞれにおいて含まれる特定のリンカーの数に応じて、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの架橋度は影響を受けることができる。さらに、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルにおけるさらなる構成要素の内容、例えば構成要素、例えば本発明の多機能性融合タンパク質内の本明細書に記載のRGD配列に結合している細胞の内容またはさらなる構成要素の結合、例えばさらなる構成要素のそのFcドメインを介したZZドメインの結合は、相応して変えることができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの架橋度を変えるための本発明の多機能性融合タンパク質として特に好ましいものは、上記の多機能性融合タンパク質であり、よりさらに好ましくは、以下から選択されるa上記のただ1つのリンカーを有する、本明細書に記載の多機能性融合タンパク質b上記の2つのリンカーを有する、本明細書に記載の多機能性融合タンパク質c上記のただ1つのリンカーを有する、本明細書に記載の多機能性融合タンパク質および、上記の2つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質の組み合わせ。特に好ましいものは、前記の本発明の多機能性融合タンパク質を含むさらなる本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルである。これに関連して、特に好ましいものは、上記のただ1つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質および上記の2つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質の組み合わせであるが、上記のただ1つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質および2つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質は、単独で使用することができる。好ましくは、選択肢cに記載の多機能性融合タンパク質は、前記の多機能性融合タンパク質のいずれか、より好ましくは上記のただ1つのリンカーを有し、基質結合タンパク質、RGD配列、例えばもしくはRGDnもしくはn、場合により精製用タグおよびN末端もしくはC末端リンカーを含む本明細書に記載の多機能性融合タンパク質ならびに、上記の2つのリンカーを有し、基質結合タンパク質、RGD配列、例えばもしくはRGDnもしくはn、場合により精製用タグならびにN末端およびC末端リンカーを含む本明細書に記載の多機能性融合タンパク質の混合物または組み合わせから選択されることができる。これに関連して、上記のただ1つのリンカーを有する本明細書に記載の例示的な多機能性融合タンパク質は、限定するものではないが、以下の少なくとも1つから選択されることができ、より好ましくは、から選択されることができ、あるいは、から選択されることができる。さらにまた、上記の2つのリンカーを有する本明細書に記載の例示的な多機能性融合タンパク質は、限定するものではないが、以下の1つから選択されることができ、より好ましくは、から選択されることができ、あるいは、から選択されることができる。本明細書に記載の例示的な多機能性融合タンパク質のいずれにおいても、N末端の位置およびC末端の位置は、互いに交換されることができる。さらに、これらの例示的な多機能性融合タンパク質のいずれにおいても、RGDドメインはZZドメインによって置換されることができる。本発明に記載の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、好ましくは、上記の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質を含むように修飾されたPEGポリマーのマトリックスを含む。本明細書においては、PEGはポリエチレングリコールと定義され、これは工業生産から医療までにおいて多くの用途を有するポリエーテル化合物である。PEGは、好ましくはその分子量に応じて、ポリエチレンオキシドまたはポリオキシエチレンとしても知られる。PEG、PEOまたはPOEは同義で用いられる場合もあり、エチレンオキシドのオリゴマーまたはポリマーを指す。これら3つの名称は、化学的には同義であるが、歴史的には、PEGは分子量20000gmol未満のオリゴマーおよびポリマーを、PEOは分子量20000gmolを超えるポリマーを、POEは任意の分子量のポリマーを指す傾向にあった。PEGおよびPEOは、一般的には、それらの分子量に応じて液体または低融点の固体である。PEGはエチレンオキシドの重合によって製造され、300gmol~10000000gmolの広範囲の分子量にわたって市販されている。種々の分子量を有するPEGおよびPEOは、種々の用途で使用され、種々の物理的特性、例えば鎖長効果による粘度を有するが、それらの化学的特性はほぼ同一である。重合プロセスに使われる開始剤に応じて種々の形のPEGが入手可能であり、その最も一般的なものは単官能性メチルエーテルPEGであり、これはmPEGと略記される。純オリゴマーとして低分子量PEGもまた入手可能であり、単分散、均一または不均一と呼ばれる。異なる幾何学的形態を有するPEGもまた入手可能である。分岐またはスターPEGStarPEGsは、中心コア基から放射状に広がった約3~100PEG鎖を有する。櫛状PEGは、通常はポリマー骨格にグラフトされた複数のPEG鎖を有する。上記の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに、任意のこのようなPEGポリマーを用いることができる。本発明においては、用語PEGまたはPEGポリマーは、好ましくは、上記のポリマーのいずれかを含み、より好ましくは、前記のPEG、PEOおよびPOEポリマーを含む。故に、本発明においては、上記の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに使用するためのPEGポリマーは、好ましくは、上記のPEGポリマー、PEOポリマーおよびまたはPOEポリマー、好ましくは約300gmol~10000000gmolの分子量、より好ましくは約300~50000Daの分子量、よりさらに好ましくは約300~38000Daなどの分子量、最も好ましくは約10~約50kDaの分子量、例えば約20~約40kDaの分子量、約30~約40kDaの分子量、例えば約35~約40kDaの分子量、例えば375kDaのポリマーから選択されることができる。より好ましくは、上記の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに使用するためのPEGポリマーは、上記の任意のPEGポリマー、好ましくは種々の幾何学的形態を有するPEGポリマー、例えば分岐PEG、例えば中心コア基から放射状に広がった約3~10PEG鎖を有するPEGポリマー、または例えば本明細書に記載の中心コア基から放射状に広がった約10~100PEG鎖を有するスターPEGを有するPEGポリマーから選択されることができる。よりさらに好ましくは、上記の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに使用するためのPEGポリマーは、本明細書に記載の任意のこのようなPEGポリマー、より好ましくは上記の分子量を有するPEGポリマー、好ましくは本明細書に記載の種々の幾何学的形態を有するPEGポリマー、例えばスターPEG、例えば中心コア基から放射状に広がった約3~約100PEG鎖を有するPEGポリマー、好ましくは中心コア基から放射状に広がった約3~約50、3~約30または3~約20PEG鎖を有するPEGポリマーから選択されることができる。上記の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに使用するための特に好ましいスターPEGは、中心コア基から放射状に広がった3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14もしくは15またはそれ以上の鎖を有する上記のPEGポリマー、すなわち3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14または15アームPEGスターポリマーであることができる。このようなPEGポリマーは、マルチアームスターPEG、例えば3~15マルチアームスターPEGとも呼ばれる。本発明においては、上記の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに使用するためのPEGポリマーは、本明細書に記載の本発明の多機能性融合タンパク質への共有結合または非共有結合を可能にするように修飾されることができる。このような共有結合または非共有結合は、好ましくは上記の共有結合または非共有結合である。好ましい場合において、このような結合は共有結合である。より好ましくは、このような結合はチオエーテル結合である。このようなチオエーテル結合は、上記の本発明の多機能性融合タンパク質のSH部分またはチオール含有部分と、例えばシステインの、チオエーテル結合の形成を可能にするビニルスルホン部分または任意のさらなる部分との反応によって形成されることができる。この目的のために、上記の本発明の多機能性融合タンパク質のSH部分またはチオール含有部分は、ビニルスルホン部分またはさらなる部分との反応の前に、還元剤、好ましくはTCEPを用いて還元されている。この段階により、チオール部分が反応してジスルフィド結合を形成するのを防ぎ、チオエーテル結合の形成が可能になる。これに関連して、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに使用するためのPEGポリマーは、好ましくは、チオエーテル結合の形成を可能にする、チオエーテル結合のための少なくとも1つの遊離ビニルスルホン部分または任意のさらなる部分を提供する。従って、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、このような修飾を導入するために、架橋する前に修飾されることができる。修飾は、例えば、上記のPEGポリマーのPEGOHポリマー、好ましくは上記のマルチアームスターPEGから出発することができる。例示的な修飾反応を以下に示す特定の一側面によれば、このような修飾は、上記のPEGポリマーのPEGOHポリマー、好ましくは上記のマルチアームスターPEGをスルホン化することによって、一般的にはスターPEGビニルスルホンに導くことによって行うことができる。極めて特定のプロトコルによれば、マルチアームスターPEGビニルスルホンは、8アームPEGOHから出発して、LutolfらcopeptidehydrogelsformedbyMichaeltypeadditionBiomacromolecules471322参照に従って合成することができる。マルチアームPEGVSは、例えば、PEGOHと過剰のジビニルスルホンとをカップリングさせることによって合成することができる。例として、PEGOHは、溶媒、例えばジクロロメタンに溶解することができ、あるいは場合によっては、反応を開始させる前に、例えばディーンスタークトラップを用いて、例えばトルエンでの共沸蒸留によってPEGを乾燥させることができる。ジクロロメタンに溶解したPEGに、好ましくはアルゴン雰囲気下で、好ましくはOH基に対してモル過剰量で、例えば4~6倍量で、例えば5倍量でNaOHを加えることができる。水素発生後、次に、OH基に対してモル過剰量で、好ましくは50~100倍量でジビニルスルホンを加えることができる。この反応は、一般的には、室温で、好ましくは1~3日間、例えば2~3またはさらには3日間、好ましくはアルゴン雰囲気下で一定に撹拌しながら行われる。その後、反応溶液は一般的には、好ましくは濃酸、例えば酢酸で中和され、濾過され、少量に濃縮される。次いで、残りの溶液に氷冷したジエチルエーテルを加えることによって、PEGを沈殿させることができる。次いで、濾過によりポリマーを回収し、例えばジエチルエーテルで洗浄し、好ましくは減圧下で乾燥することができる。次いで、この乾燥ポリマーを、塩化ナトリウムを含む脱イオン水に溶解し、ジクロロメタンで抽出することができる。この溶液を炭酸ナトリウムで乾燥し、その容量を蒸発によって減少させることができる。最後に、生成物を沈殿させ、例えばジエチルエーテルで洗浄して残りのすべてのジビニルスルホンを除去することができる。最終生成物を減圧下で乾燥し、不活性ガス下、例えばアルゴン下、好ましくは20°Cで保存することができる。誘導体化は、1HNMRで確認することができる。NMRによって示される末端基変換率は、好ましくは90~99の範囲であり、より好ましくは95~98の範囲である。出発材料と末端機能化PEGVSが同一の分子量分布を有することを確認するために、さらにゲル浸透クロマトグラフィーを用いることができる。前述の任意の結合または任意の他の可能な化学結合、例えばアミド形成、マイケル付加、クリックケミストリー、アルケンアルキンメタセシス反応、イミンもしくはヒドラゾン形成、錯体形成反応による化学結合または、Sn型置換反応を可能にする構成要素、またはさらなる構成要素の結合に用いることができる他の化学的部分によって、さらなる化学化合物を本明細書に記載のPEGポリマーに結合させることもできる。このような他の可能な化学結合を、本明細書に記載のさらなる構成要素、例えば本発明の多機能性融合タンパク質、さらなる構成要素、細胞などを本明細書に記載のPEGポリマーに共有結合させるために用いることもできる。本発明においては、上記の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに使用するためのPEGポリマーは、限定するものではないが、本発明の多機能性融合タンパク質のリンカーとの関係において前述した修飾およびそれらの指摘されたPEG修飾官能基化から選択される修飾のいずれかによって、本明細書に記載の本発明の多機能性融合タンパク質への共有結合を可能なように修飾されることもできる。このようなPEG修飾官能基化は、例えば、好ましくはアミンを含むリンカーによる、Nヒドロキシルスクシンイミドを用いる官能基化は、一般的には、タンパク質のアミン基と結合し、安定なアミド結合を生じる好ましくは上記のチオールを含むリンカーによる、マレイミドを用いる官能基化好ましくはチオールを含むリンカーによる、ビニルスルホンを用いる官能基化好ましくはリジンを含むリンカーによる、グルタミンを用いる官能基化好ましくはグルタミンを含むリンカーによる、リジンを用いる官能基化好ましくはN末端システインを含むリンカーによる、チオエステルを用いる官能基化好ましくはアミンを含むリンカーによる、アルデヒドを用いる官能基化好ましくはアミンを含むリンカーによる、カルボキシル基を用いる官能基化カルボジイミドによって媒介され、アミド結合が生成される好ましくはカルボキシル基を含むリンカーによる、アミンを用いる官能基化カルボジイミドによって形成され、アミド結合が生成されるなどを含むことができる。本発明の多機能性融合タンパク質または得られた本発明の生体機能化刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルが基質結合タンパク質としてscFv断片を含む場合、得られた本発明の生体機能化刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、好ましくは以下の方法の1つ物理的エントラップメント、FITCでの分子の官能基化およびハイドロゲルへの混合、本明細書に記載のZZドメインによって媒介されるFcタグ付き分子、同じ化学による、もしくはscFvとしてのリンカーによるハイドロゲルへの増殖因子のカップリングおよびまたはscFvとの融合タンパク質の形成による、例えば本明細書に記載の増殖因子または本明細書に記載の他の分子タンパク質の組み込みによってさらに修飾されることができる。それぞれの分子に結合するscFvを選択し、フルオレセインまたはFITCに関して行ったのと同様にポリマー上に標的分子を固定することによる、選り抜きの任意の小分子、ペプチドもしくはタンパク質標的の添加によって、このようなハイドロゲルをさらに修飾することができる。例えば架橋は、ビオチン結合scFvおよびビオチン修飾ポリマーによって媒介されることができる。本発明の基礎をなす目的は、さらに、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル、好ましくは上記の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法によって解決される。一般的には、上記のPEGポリマーのマトリックスを含む本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、以下の段階に従って製造することができるa本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質を提供し、b段階aに記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質と上記の基質結合タンパク質の基質とを混合しc本明細書に記載のPEGポリマーに、段階bに従って得られた混合物を加えそれによって好ましくはPEGハイドロゲルを形成させること。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aにおいて、少なくとも1つの多機能性融合タンパク質が提供される。すでに上記で示したように、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの架橋度は、本発明に記載の種々の多機能性融合タンパク質の特定のタイプおよびまたは量を選択的に用いることによって、より正確には、本明細書に記載のただ1つまたは2つのリンカー、例えば1つまたは2つのチオール含有部分、システインまたはホモシステインを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質を用いることによって、影響されることができる。容易に理解されるように、ただ1つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質は、通例、2つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質よりも種々のタイプの架橋をもたらす。従って、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aにおいて、種々の官能基を導入するためにばかりでなく、好ましくは本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのタイプおよび架橋度を修飾するためにも、本明細書に記載の種々の本発明の多機能性融合タンパク質を提供することができる。従って、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aにおいて、好ましくは、a上記のただ1つのリンカーを有する、本明細書に記載の多機能性融合タンパク質b上記の2つのリンカーを有する、本明細書に記載の多機能性融合タンパク質およびまたはc上記のただ1つのリンカーを有する、本明細書に記載の多機能性融合タンパク質および、上記の2つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質を用いることができる。特に好ましいものは選択肢cであり、すなわち、上記のただ1つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質および、上記の2つのリンカーを有する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質の混合物または組み合わせである。これに関連して、限定するものではないが、上記のただ1つのリンカーを有する、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aのための本明細書に記載の例示的な多機能性融合タンパク質は、最も好ましくは、例えば以下から選択されることができるさらにまた、限定するものではないが、上記の2つのリンカーを有する本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aのための本明細書に記載の例示的な多機能性融合タンパク質は、最も好ましくは、以下から選択されることができる好ましくは、本発明の方法の段階aに用いることができる、2つのリンカーを有する多機能性融合タンパク質に対するただ1つのリンカーを有する多機能性融合タンパク質のモル比は、好ましくは、約20対約1、約10対約1、約5対約1、約4対約1、約3対約1、約2対約1、約1対約1、約1対約2、約1対約3、約1対約4、約1対約5、約1対約10またはさらには約1対約20である。より好ましくは、2つのリンカーを有する多機能性融合タンパク質に対するただ1つのリンカーを有する多機能性融合タンパク質のモル比は、約10対約1、約5対約1、約4対約1、約3対約1、約2対約1または約1対約1であり、最も好ましくは約5対約1である。さらにまた、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aで提供されるこれらの多機能性融合タンパク質のタンパク質最終濃度は、限定するものではないが、約1~約500μgμl、約10~約300μgμl、約20~約250μgμl、約30~約200μgμl、約40~約175μgμl、約50~約150μgμl、より好ましくは約60~約140μgμl、約70~約130μgμl、約80~約120μgμlまたは約90~約110μgμlであることができる。架橋度に加えて、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルにおけるさらなる構成要素の内容、例えば本発明の多機能性融合タンパク質内の本明細書に記載のRGD配列に結合する細胞または、例えばFcドメインを介してZZドメインに結合しているさらなるペプチドもしくはタンパク質構成要素を相応に修飾することができる。従って、上記のZZドメインを含むこのような本発明の多機能性融合タンパク質を本発明のPEGハイドロゲルにさらに導入することもまた好ましい場合がある。従って、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aにおいて、本明細書に記載のZZドメインを含むこのような本発明の多機能性融合タンパク質をさらに提供することができる。一般に、本明細書に記載のZZドメインを含む任意の多機能性融合タンパク質を、この目的のために用いることができる。これに関連して、限定するものではないが、ZZドメインを含む本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階aのための本明細書に記載の例示的な多機能性融合タンパク質は、最も好ましくは、以下の1つから選択されることができる上記のZZドメインを含む本発明の多機能性融合タンパク質が本発明のPEGハイドロゲルに組み込まれる場合、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの本発明の製造方法の段階aで提供される多機能性融合タンパク質のタンパク質最終濃度は、すでに上記で示した範囲とおよそ同じ範囲であることができる。しかしながら、ZZドメインを含む本発明の多機能性融合タンパク質のタンパク質最終濃度を別々に決定することが好ましい場合があり、例えば限定するものではないが、約0001~約100μgμl、約0001~約50μgμl、約0001~約25μgμl、約0001~約20μgμl、約0001~約10μgμl、約0001~約5μgμlであり、より好ましくは約001~約25μgμlまたは約01~約2μgμlである。本発明に記載の種々の多機能性融合タンパク質のタイプおよびまたは量に応じて、より正確には、種々の多機能性融合タンパク質において含まれる特定のリンカーの数に応じて、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの架橋度は影響を受けることができる。さらに、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルにおけるさらなる構成要素の内容、例えば構成要素、例えば本発明の多機能性融合タンパク質内の本明細書に記載のRGD配列に結合している細胞の内容またはさらなる構成要素の結合、例えばさらなるペプチドもしくはタンパク質構成要素のそのFcドメインを介したZZドメインの結合は、相応して修飾することができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの本発明の製造方法の段階bにおいて、段階aにおいて提供された少なくとも1つの多機能性融合タンパク質と上記の基質結合タンパク質の基質とが互いに混合される。上記の基質結合タンパク質の特異的基質は、共有結合しているPEGポリマーの二量体化もしくは多量体化を可能にするために、あるいは基質結合タンパク質による基質のまさに特異的な結合を可能にするために、上記の少なくとも1つ、好ましくは少なくとも2つの基質結合タンパク質によって結合されていることができる、本明細書に記載の任意の適切な基質であることができる。例えば、上記の基質結合タンパク質GyrBの特異的基質は、2つのGyrBサブユニットによって結合されている抗生物質クーママイシンである。さらにまた、上記のヘパリン結合性タンパク質は、その基質としてヘパリンに結合することができ、ここで、好ましくは少なくとも1つの、好ましくは少なくとも2つのヘパリン結合性タンパク質が同じ基質に結合することができる。同様に、上記の任意のさらなる基質結合タンパク質を使用することができる。従って、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの本発明の製造方法の段階bにおいて、その基質に対して等モル量の、またはさらには2倍モル過剰量の、またはさらにはさらに高いモル過剰量の基質結合タンパク質を使用することが必要である場合がある。すなわち、ヘパリン結合性タンパク質とその基質のモル比は、好ましくは約11または21であり、またはさらにはそれ以上である。特定例として、使用されるGyrB含有多機能性融合タンパク質とその基質クーママイシンのモル比は、好ましくは約21である。同様に、使用されるヘパリン結合性タンパク質含有多機能性融合タンパク質とその基質のモル比は、好ましくは約21であり、またはさらには11である。段階bで得られた混合物は、混合後、好ましくはインキュベートして、十分な混合および好ましくは混合物の構成要素の相互作用を可能にする。特に、インキュベーションは、基質結合タンパク質のその特異的基質に対する結合、例えば、それぞれがGyrBサブユニットを含む1または2以上の多機能性融合タンパク質のその特異的基質である抗生物質クーママイシンに対する結合、または例えば、それぞれがヘパリン結合性タンパク質を含む1つまたは2つの多機能性融合タンパク質のその特異的基質ヘパリンに対する結合を可能にすることができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの製造方法の段階cにおいて、段階bで提供される混合物、すなわち、本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質および上記の基質結合タンパク質の基質の混合物は、好ましくは、同時にまたは種々の時点で交互に、例えば本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質を最初に、上記の基質結合タンパク質の基質を次にして、本明細書に記載のPEGポリマーに添加される。本明細書に記載のPEGポリマーへの、段階bで提供される混合物の添加は、一般的には、約15°C~約50°Cの温度範囲、より好ましくは約15°C~約40°Cの温度範囲、例えばおよそ室温または約37°Cで行われる。すでに上記で示したように、PEGポリマーは、チオエーテル結合、例えばビニルスルホン部分の形成を可能にするチオール含有部分または任意のさらなる部分を含むように修飾されることもできるし、本明細書に記載のリンカーに結合するような任意のさらなる官能基化を含むように修飾されることもできる。本発明の方法の段階cで提供されるPEGポリマーの反応性部分に対する本明細書に記載の多機能性融合タンパク質を含むのモル比は、好ましくは約11であり、例えば約0751~約1075、約081~約108、約0851~約1085、約091~約109、約0951~約1095または約11である。好ましくは、PEGポリマーの濃度は、wvもしくはvvもしくはwwのいずれかで、05~15、例えば約05~約5、約25~約75、約5~約10、約75~約125または約10~約15であることができ、これらの値のいずれか2つによって形成される範囲であることもできる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの本発明の製造方法の段階cに記載のハイドロゲル形成は、好ましくは、乾燥を防ぎ、それによって新しく形成されたPEGハイドロゲルの収縮を防ぐために加湿雰囲気中で行われる。本発明の方法の大変好ましい選択肢によれば、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、少なくとも1つの本発明の多機能性融合タンパク質、例えば本発明の方法の第1段階aにおけるものを提供することによって製造することができる。少なくとも1つの本発明の多機能性融合タンパク質は、好ましくは、1つのリンカーを含む上記の本発明の多機能性融合タンパク質を1つおよび好ましくは上記の2つのリンカーを含むさらなる本発明の多機能性融合タンパク質を、一般的には約10~約1、約5~約1、約4~約1、約3~約1、約2~約1、約1~約1、例えば約5~約1のモル量で、好ましくは約60~約140μgμl、約70~約130μgμl、約80~約120μgμlまたは約90~約110μgμl、例えば約100μgμlのタンパク質最終濃度で含む。さらなる修飾のために、段階a中に、本明細書に記載のZZドメインを含む多機能性融合タンパク質を、約0001~約10μgμl、約0001~約5μgμl、より好ましくは約001~約25μgμlまたは約01~約2μgμl、例えば1μgμlの最終濃度で加えることができる。大変好ましい選択肢の第2段階bにおいて、次いでタンパク質溶液は、好ましくは、基質結合タンパク質の基質、例えばクーママイシンと、多機能性融合タンパク質における基質結合タンパク質としてGyrBが用いられる場合は、好ましくはSBB基質のモル比約21で混合される。インキュベーション後、好ましくは約15°C~約40°Cの温度範囲、例えばRTまたは37°Cで、好ましくは約1時間、大変好ましい選択肢の第3段階cにおいて本明細書に記載のPEGポリマーを添加することができる。基質結合タンパク質を含む本明細書に記載の多機能性融合タンパク質とPEGポリマーの反応性部分は、好ましくは約11のモル比である。次いで、ハイドロゲル形成は、好ましくは、段階cで得られた混合物を、好ましくは約15°C~約40°Cの温度範囲、例えばRTまたは37°Cで、好ましくは約5~15時間、例えば10時間、好ましくは加湿雰囲気中でインキュベーションすることによって達成される。あるいは、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、例えば、a本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質および本明細書に記載のPEGポリマーを提供し、ここで、本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質は、好ましくは本明細書に記載のPEGポリマーに結合しておりb段階aで得られた、本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質およびPEGポリマーと、本明細書に記載の基質結合タンパク質の基質とを混合し、それによって好ましくはPEGハイドロゲルを形成させることによって、上記の段階を交替にすることによって製造することもできる。反応条件は、好ましくは、段階a、bおよびcに関して前述したものと同様である。本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質と本明細書に記載のPEGポリマーは、さらに好ましくは、第1の方法段階cに前記されているモル比および反応条件を用いて本明細書に記載されているように互いに共有結合している。さらなる選択肢によれば、例えば、a本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質および本明細書に記載のPEGポリマーを提供し、ここで本明細書に記載の基質結合タンパク質の基質はPEGポリマーに結合されておりb段階aで得られた本明細書に記載の少なくとも1つの多機能性融合タンパク質およびPEGポリマーと本明細書に記載の基質結合タンパク質の基質とを混合し、それによって、好ましくはPEGハイドロゲルを形成させることによって、上記の段階を交替することによって、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルを製造することもできる。反応条件は、好ましくは段階a、bおよびcに関して前述したものと同様である。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル、好ましくは上記のハイドロゲル、好ましくは上記の本発明の方法に従って製造されたハイドロゲルは、細胞、タンパク質、ポリペプチド、抗生物質、抗体、抗菌剤ポリマーならびにアセチルサリチル酸acelylsalicylacid、アリールプロピオン酸arylpropionacid、アリール酢酸arylacticacid、インドール酢酸indolaceticacid、アントラニル酸anthranilacidおよびオキシカムOxicamsの誘導体ならびにCOX2選択的阻害薬を含む臨床使用が認められた非ステロイド系抗炎症剤から選択されるさらなる構成要素が組み込まれることによってさらに修飾されることができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれることができるタンパク質は、限定するものではないが、例えば増殖因子から選択されることができる。これに関連して、限定するものではないが、増殖因子は、例えば、アドレノメデュリン、オートクリン運動性因子、骨形成因子、上皮増殖因子、エリスロポエチン、線維芽細胞増殖因子、例えばFGF7、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、増殖分化因子9、肝細胞増殖因子、肝癌由来増殖因子、ヘパリン結合性増殖因子、インスリン様成長因子、遊走刺激因子、ミオスタチン、神経成長因子および他のニューロトロフィン、血小板由来増殖因子、トロンボポエチン、トロンボスポンジン、トランスフォーミング増殖因子α、トランスフォーミング増殖因子β、血管内皮細胞増殖因子、胎盤増殖因子、ウシ胎児ソマトトロフィン、IL3およびIL6のIL1補因子、IL2T細胞増殖因子、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、腫瘍壊死因子、アンギオスタチンなどから選択されることができる。特に好ましい増殖因子は、例えばFFG7であり、より好ましくは配列番号50に記載の増殖因子である。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込むことができるよりさらに好ましい上記のタンパク質は、上記の増殖因子、場合により上記のリンカー、好ましくは本明細書に記載のFcドメインおよび場合により上記の精製用タグを含む融合タンパク質から選択される。最も好ましくは、このような融合タンパク質は、配列番号52に記載の配列または、配列番号52に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列から選択される。あるいは、このような融合タンパク質は、配列番号51に記載の核酸配列または、配列番号51に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示す核酸配列によってコードされる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれることができる上記のタンパク質は、例えば上記の組み込まれた本発明の多機能性融合タンパク質のZZドメインによってPEGハイドロゲルに結合されることができる。この目的のために、組み込まれるタンパク質は、一般的には、ZZドメインの結合パートナー、例えばFcドメイン、例えば配列番号53に記載の配列、または配列番号53に記載の配列に対して少なくとも50、60、70もしくは80、好ましくは少なくとも90、より好ましくは少なくとも95、よりさらに好ましくは少なくとも975の同一性を示すアミノ酸配列に融合される。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれるタンパク質は、好ましくは、上記のタンパク質と上記のZZドメインの結合パートナーの間に位置する特異的プロテアーゼ認識配列にさらに融合されることができる。このアプローチは、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルへのタンパク質の組み込みおよび、特異的タンパク質、例えば特異的増殖因子の、特異的トリガーによる本発明のハイドロゲルからの特異的放出を可能にする。このようなトリガーは、特異的プロテアーゼ認識配列として、上記のタンパク質と上記のZZドメインの結合パートナーを結合させるために用いられるアミノ酸配列を有するプロテアーゼであることができる。このようなプロテアーゼ認識配列は、マトリックスメタロプロテアーゼのような内因的に産生されたプロテアーゼBiomaterials2838563866に記載のものまたは、ハイドロゲル投与と同時または他の時点で外部から添加されることができるプロテアーゼのいずれかに特異的であることができる。従って、この側面に用いられるプロテアーゼは、このような内因的に産生されるプロテアーゼもしくはマトリックスメタロプロテアーゼまたは好ましくは、例えば、第Xa因子、カスパーゼもしくはタバコエッチウイルスプロテアーゼから選択されるプロテアーゼを含むことができる。同様に、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれる本発明の文脈のタンパク質は、上記のプロテアーゼであることができる。該タンパク質は、本発明のハイドロゲルの形成の前またはそれと並行して本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれることもできるし、本明細書に記載のPEGハイドロゲルと該タンパク質をインキュベートすることによって組み込まれることもできる。インキュベーションは、好ましくは、約15°C~約40°Cの温度範囲、例えばRTまたは37°Cで行われることができる。インキュベーションは、さらに、好ましくは、約60~約140ngμl、約70~約130ngμl、約80~約120ngμlまたは約90~約110ngμl、例えば約100ngμlのタンパク質最終濃度で行われることができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込まれるために用いることができる細胞は、限定するものではないが、例えば、幹細胞、例えばヒト幹細胞、成人幹細胞、胚性幹細胞、操作されたまたは操作されていない幹細胞、初代もしくは不死化幹細胞、好ましくは間葉系幹細胞、骨芽細胞、セメント芽細胞、すべての結合組織の線維芽細胞、例えば歯肉およびまたは皮膚および角膜線維芽細胞、単独または歯根膜線維芽細胞との併用eitheraloneortogetherwithperiodontalligamentfibroblasts、ケラチノサイト、例えば歯肉ケラチノサイトおよび口腔、上気道消化管、皮膚または眼表面由来の角化細胞、中枢神経系の細胞、神経細胞、脈管および角膜組織の内皮細胞、周皮細胞、筋細胞、脂肪細胞、アストロサイトならびにメラノサイトなどから選択されることができる。上記の細胞は、好ましくは自家細胞、すなわち治療を受ける患者由来の細胞である。好都合には、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、特異的刺激によって分解破壊されることができる。このような特異的刺激は、例えば、上記の基質結合タンパク質の特異的基質またはアンタゴニストの添加であることができる。例として、GyrBが、PEGハイドロゲルを架橋させるために用いられる多機能性融合タンパク質に含まれている場合、このPEGハイドロゲルは、特異的抗生物質ノボビオシンの添加によって破壊されることができる。分解破壊は、場合により、例えば本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルへの、上記の基質結合タンパク質の基質またはアンタゴニストの低速投与によって時間差で行うことができる。分解破壊は、通例、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの投与部位で行われる。さらなる特定の実施形態によれば、本発明の基礎をなす目的は、医薬、医療デバイスまたは医療製品としての本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの使用によって解決される。特にそれらの化学組成物、それらの生体活性を調節するそれらの可能性およびインテグリン認識配列を有するバイオミメティックパラメータならびに標的特異的増殖因子の組み込みは、多くの臨床応用において、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルを重要かつ有益な手段たらしめている。好都合には、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、多くの臨床応用において用いることができる。限定するものではないが、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのこのような臨床応用、好ましくは医薬、医療デバイスまたは医療製品の形での臨床応用は、例えば、インプラント学、皮膚科学および上気道消化管における癌腫ならびに口腔の創傷の分野における治療ならびに歯槽骨造成治療を含む。より正確には、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのこのような臨床応用は、再生医療、歯科学および歯科医術の分野における、例えば創傷被覆剤、組織支持用途または組織再生用途を含む。このような用途の中で、例えば慢性潰瘍性創傷は皮膚科学の分野において治療されることができ、創傷、特に上気道消化管の癌腫の外科的切除に際して生じることがある創傷ならびに口腔の創傷およびバリア機能としての歯槽骨造成の分野における再生医療で治療されることができる。潰瘍性創傷の場合、これはしばしば糖尿病患者の下肢に生じるが、自己ケラチノサイトは、照射細胞分裂不活化皮膚線維芽細胞の存在下で、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル上、invitroで、あらかじめ形成された上皮が得られるまで培養することができる。このような自己ケラチノサイトは、一般的には、例えば外毛根鞘に由来し、従って容易に入手できる。続いて、このような自家細胞が培養された本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、好ましくは、その細胞が由来する同じ患者のあらかじめ治療された創傷に投与される。好ましくは、以前治療された患者の創傷への本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの投与は、一般的には、好ましくは創傷の治癒を開始させ、好ましくは周辺組織および輸液からの栄養素で細胞の維持を可能にする密度およびサイズで行われる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの投与はまた、PEGハイドロゲルの指向性および系統的な分解ならびに特定のタンパク質、例えば角化細胞促進増殖因子、例えばEGFまたはFGF7のもたらされた放出によって創傷の閉塞を支持する。上記の上気道消化管の癌腫に関しては、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルを適用されるケラチノサイトは、一般的にはいわゆる前腕皮弁に由来する。この場合は、前腕の内側の一部の全皮膚片を除去し、結合組織の線維芽細胞および上皮ケラチノサイトをinvitroで増殖させる。このような腫瘍を有する患者は、一般的には、創傷治癒障害を患っており、従って相応じて肉芽組織の障害を示すため、このような患者の治療および外科的包帯は、好都合には、上皮細胞および線維芽細胞を含む本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの互い違いに配置された投与に基づいて行われる。このような互い違いに配置された本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、本明細書に記載の1つまたは2つの種々の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのいずれかにサンドイッチ状に上皮細胞および線維芽細胞を含むことができる。このようなサンドイッチは、例えば、初めに表面に本明細書に記載の細胞、例えば線維芽細胞を前培養し、これは下面と呼ぶことができ、一方でさらなる細胞、例えば角化細胞を一日遅らして播種し、このハイドロゲルの上面で増殖させることによって調製することができる。拡散性の増殖因子による両方の細胞型の相互作用によって、一般に経時的に層別の上皮形成または組織形成を生じるが、両方の細胞型は直接の細胞細胞接触を欠いている。好都合には、サンドイッチ刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルとも呼ばれるこのような互い違いに配置された本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、好ましくは、上皮組織の場合特に、拡散性増殖因子による線維芽細胞との相互作用によって、予め形成された組織の栄養を提供する。このアプローチを用いれば、上皮の閉塞下の創傷治癒は、純粋な予め形成された上皮よりも優れた結果を示す。この場合は、血管新生増殖因子例えばVEGFを本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルに組み込むことができる。これは、このゲルの分解によって、創傷組織または肉芽組織の新生血管にプラスの影響を与える。好ましくは医薬、医療デバイスまたは医療製品の形の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのさらに好都合な臨床応用は、治療を受ける患者における抜歯後の歯槽突起の予防を含む。このような用途は、歯科学および歯科医術における歯科インプラントの審美的および機能的成功に決定的に寄与することができる。ドイツにおいては、毎年、1400万の歯が抜歯されている。抜歯および歯の欠損に続いて、欠損した歯の支持骨は、多かれ少なかれある程度は衰弱する。従って、これに関連して、種々の程度の骨量減少または委縮が認められる。歯槽骨の委縮によって、審美的な外観が損なわれる恐れがある。さらに悪いことに、インプラント学の必要条件およびさらなる義歯リハビリテーションが障害を受ける。機能および審美的外観を改善するための造成手段が通例必要であり、従って、通例、侵襲性手術手順に対して金銭上の費用および手術の作業量は増加する。従って、抜歯または歯の欠損後の直接の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルの特定の用途は、このような費用およびその後の治療を避けるための適切で費用効率の高いツールを代表する。好ましくは医薬、医療デバイスまたは医療製品の形の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのさらに好都合な臨床応用は、治療を受ける患者におけるヒト角膜の疾患の治療を含む。このような用途は、角膜、すなわち上皮、結合組織線維芽細胞および内皮の疾患の治療において実施されることができる。角膜縁の疾患において、一般的には疾患に冒された患者における結合組織の濁った上皮を有する角膜は透明角膜となる。このような疾患の従来の治療は、一般的には、透明角膜上皮の前駆体細胞である角膜縁幹細胞による置換を必要とする。角膜縁の一方だけの疾患の場合、疾患に冒されていない眼からの生きた角膜縁組織を疾患に冒された眼に移植することによって治療を行うことができる。両側の場合には、このような治療は不可能であり、より問題が多い。このような場合において、少なくとも片方の眼に輪部機能が残っている場合、少量の細胞試料をベースとして、適切な担体マトリックス例えば本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル上で集密的細胞層を増殖させることができる。次いで、集密的細胞層を疾患に冒された眼に移植することができる。今日まで、担体マトリックスとしてヒト羊膜またはフィブリンゲルが用いられてきたが、抽出された細胞試料からの増殖細胞数は、このようなexvivo培養の最も重要な側面であった。残念なことに、長期観察によって、現在用いられている担体マトリックス、なわちヒト羊膜またはフィブリンゲル上の幹細胞数は少ないことが明らかとなった。この不首尾の理由は、これらの担体マトリックスが、このような幹細胞に対する最適の細胞外環境を提供しないという事実によるものであると考えられた。従って、これらの幹細胞は、最適の細胞増殖に必要なニッチを形成することができない。これに関連して、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、これらの幹細胞の必要条件に対して設計することができるそれらの個々に適合させうる特性によって最適の環境を提供する。好ましくは医療デバイスの形の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルのさらに好都合な臨床応用は、角膜の内皮の疾患の治療を含む。これに関連した特定の用途は、例えばフックス角膜内皮変性症の治療である。この疾患において、さらに他の疾患との関係においても、アポトーシスによって角膜内皮の細胞の劇的な減少が起こり、濁った角膜を生じる。本治療は、角膜のすべての層の移植または置換を含む角膜の移植を含む。代替治療は、ドナーからの内皮層の特定の移植による罹患細胞の置換を含む。移植材料はHLAが同一の材料ではないため、組織移植は拒絶されるおそれがあり、内皮層の顕著な損傷がもたらされる。これに関連して、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、治療を受ける患者からの内皮細胞を抜き取り、少量細胞試料をベースとして、適切な担体マトリックス例えば本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル上で集密的細胞層を増殖させることによって、上記と同様なこれらの内皮細胞を富化する可能性を提供する。再度、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、これらの幹細胞の必要条件に対して設計することができるそれらの個々に適合させうる特性によってこれらの細胞に対する最適の環境を提供する。次いで、これらの細胞を、角膜の後部に担体として本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルと共に移植することができ、従って移植片の拒絶を避けることができる。好ましくは医薬、医療デバイスまたは医療製品の形での本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、例えば、熱傷被覆材、外科用パッチ、病変の治療、外科的包帯、創傷治療、例えばインプラント学の分野における軟組織および硬組織再生、例えば腫瘍性疾患による口腔の創傷治療、眼科学分野、全体的にもしくは部分的に再生もしくは再建する損傷したもしくは悪いもしくは除去された組織、特に筋肉、心筋、結合、骨、腱もしくは靱帯、肝、腎、角膜、真皮もしくは表皮、関節軟骨組織の細胞インプラントの調製、歯根膜などを含む歯周欠損分野、全体的にもしくは部分的に再生もしくは再建するための神経細胞としての中枢神経系細胞のインプラントを調製するための神経組織、特に中枢神経系組織、神経組織、例えばパーキンソン病もしくは脊髄損傷もしくは腫瘍疾患もしくはアルツハイマー病の結果として損傷した神経組織、神経組織、例えば外科手術後に除去もしくはアブレーションした神経組織にさらに用いることができる。本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、さらに、薬物送達デバイス、invitro、invivoおよびまたはexvivo用途のための細胞マトリックス、組織モデルの調製のために、細胞移植マトリックスとして使用することができる。もう1つの特定の実施形態によれば、本発明の基礎をなす目的は、上記の疾患もしくは疾病状態の治療、一般の治療に、本明細書に記載の治療における本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルを使用することによって解決される。より好ましくは、本明細書に記載の本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルは、上記の疾患の治療のための医薬、医療デバイスまたは医療製品の製造において使用することができる。最後の特定の実施形態によれば、本発明の基礎をなす目的は、さらに、本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲル、場合により上記のPEGハイドロゲルへの組み込みのためのさらなる構成要素および場合により使用説明書を含むキット、好ましくはパーツのキットによって解決される。このようなキットは、本明細書に記載のように、かつ上記のように疾患もしくは疾病状態の治療、一般の治療に使用することができる。本キットは、好ましくは、キットの種々のパーツに種々の構成要素を含む。例えば、あるパーツは本発明の刺激応答性可溶性PEGハイドロゲルを含み、少なくとも1以上のパーツはさらなる構成要素の1以上を含む。本発明において、特記しない限り、選択肢および実施形態の種々の特徴は、互いに結び付けることができる。さらにまた、用語含んでいるは、特記しない限り、からなっているを意味すると解釈してはならない。しかしながら、本発明においては、用語含んでいるは、適切な場合には、用語からなっていると置き換えることができる。以下の図面によって前述の発明をさらに詳細に説明するが、これらの図面は、請求項の範囲をそれらに限定することを意図するものではない。以下の実施例によって前述の発明をさらに詳細に説明するが、以下の実施例は請求項の範囲をそれらに限定することを意図するものではない。ポリマーの合成および修飾8アームポリエチレングリコールビニルスルホンは、8アームPEGOHから出発して、LutolfMPHubbellJA2003SynthesisandphysicochemicalcharacterizationofendlinkedpolycopeptidehydrogelsformedbyMichaeltypeadditionBiomacromolecules471322に従って合成した。マルチアームPEGVSは、PEGOHと過剰のジビニルスルホンとをカップリングさせることによって合成した。PEGOHはそのまま使用し、乾燥ジクロロメタン300mLに直接に溶解するか、または場合により、反応開始前に、ディーンスタークトラップを用い、トルエンで共沸蒸留することによってPEGを乾燥した。ジクロロメタンに溶解したPEGに、アルゴン雰囲気下で、OH基に対して5倍モル過剰量でNaHを加えた。水素発生後、OH基に対して50~100倍のモル過剰量で素早くジビニルスルホンを加えた。アルゴン雰囲気下で室温で一定に撹拌しながら、3日間この反応を行った。その後、反応溶液を濃酢酸で中和し、紙で透明になるまで濾過し、回転蒸発により少量になるまで濃縮した。残りの溶液に氷冷したジエチルエーテルを滴下してPEGを沈殿させた。濾過によりポリマーを回収し、ジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥した。次いで、塩化ナトリウムおよそ5gを含む脱イオン水200mLにこの乾燥ポリマーを溶解し、ジクロロメタン200mLで3回抽出した。この溶液を炭酸ナトリウムで乾燥し、回転蒸発により再度容量を減少させた。最後に、生成物を再沈殿させ、ジエチルエーテルで十分に洗浄して残りのジビニルスルホンをすべて除いた。最終生成物を減圧下で乾燥し、アルゴン雰囲気下20°Cで保存した。NMRによって示される末端基変換率は95~98であった。出発材料と末端機能化PEGVSが同一の分子量分布を示すことをゲル浸透クロマトグラフィーを用いて確認した。例示的な本発明の多機能性融合タンパク質の製造以下の例示的な多機能性融合タンパク質をクローニングし、発現させたプラスミドpRG116は、EコリジャイレースBのN末端配列に続いて、二重RGD配列、精製のためのヘキサヒスチジンタグおよびPEGVSにカップリングさせるためのシステイン残基を含む。プラスミドpRG107は、pRG116に加えてN末端システイン残基を含む。プラスミドpRG111は、プロテインA由来の2つの合成Fc結合Zドメインに続いて、EコリジャイレースBのN末端配列、ヘキサヒスチジン精製用タグおよびPEGVSにカップリングさせるためのシステイン残基を含む。対応するGyrB発現プラスミドをEコリBL21STARにトランスフォームし、1mMIPTGを用い、37°Cで3時間OD6001でタンパク質産生を誘導した。細胞ペレットをPBSに再懸濁し、フレンチプレスを用いて破壊し、細胞の破片を30000xgの遠心分離で30分間除去した。透明にした細胞溶解物を、NTAアガロースSuperflowカラムに添着し、続いてこれを10カラム体積のPBS、10カラム体積の洗浄用緩衝液で洗浄し、2カラム体積の溶出緩衝液で溶出した。この溶出液に、最終濃度10mMになるまで500mMEDTAを加えた。ハイドロゲル集合体本発明の多機能性融合タンパク質をPEGVSポリマーにカップリングさせる前に、本発明の多機能性融合タンパク質を、還元剤、好ましくはTCEPを用いて還元した。この段階は、チオール部分が反応してジスルフィド結合になるのを防ぎ、本発明の多機能性融合タンパク質をPEGVSにカップリングさせるのに必要である。本発明の多機能性融合タンパク質の還元剤との反応に続いて、本発明の多機能性融合タンパク質は、好ましくは、カップリング反応中の、還元剤、例えばTCEPの、還元された多機能性融合タンパク質およびまたはPEGVSポリマーに対する妨害を防ぐために、還元剤を除去または少なくとも実質的に除去するように精製される。これに関連して、20倍モル過剰量のTCEPホスフィン塩酸塩、SigmaAldrich社、セントルイス、ミズーリ州、カタログ番号C4706を対応するタンパク質溶出液に加え、室温で1時間インキュベートした。続いて、サイズ排除カラムによる2回の分離によって、還元されたタンパク質試料の緩衝液をPBSに交換し、継続する窒素雰囲気下で限外濾過によって150μgμlの濃度まで濃縮した。5モル量の還元されたGyrB116と1モル量の還元されたGyrB107を混合してタンパク質最終濃度100μgμlにしてハイドロゲルを製造した。還元されたGyrB111を最終濃度1μgμlまで加えた。次いでこのタンパク質溶液を、GyrBクーママイシン21のモル比でクーママイシンと混合した。RTで1時間のインキュベーション後、GyrBVS基11のモル比でPEGVSを加えた。37°C、加湿雰囲気中10時間のインキュベーションによってハイドロゲル形成が達成された。増殖因子の組み込みC末端ヘキサヒスチジンおよびFcタグを有する増殖因子を哺乳動物細胞で産生させる。そのFcサブユニットによって、GyrB111のZZドメインへの結合によって、この増殖因子はハイドロゲルに組み込まれることができる。ハイドロゲル分解を導くノボビオシンの添加によって、この増殖因子はまた放出される。細胞接着実験開発されたRGD機能化ハイドロゲルの最適化された細胞接着能を評価するために、口腔の2つの細胞型、ヒト歯肉線維芽細胞および不死化ヒト歯肉角化細胞をハイドロゲル当たり5x104個の細胞密度で播種し、標準的な細胞培養条件下で24時間培養した。位相コントラスト顕微鏡検査によって、細胞増殖の挙動および形態について記録を行った。実験条件は、RGD官能基化の有り無しでハイドロゲル上で培養した2つの異なる細胞型の比較を含む。RGD配列なしのハイドロゲルでのPCMにより、hGFおよびIHGKの非定型形態が明らかとなった。両方の細胞型とも、それらの形態によって示されるように、ハイドロゲル表面への接着が少ないのは明らかであり、小さな細胞島のみの形成によって確認されるように、大変低い増殖率を示した。これとは明らかに異なり、RGD配列を有するハイドロゲル上での細胞挙動は、このタイプの修飾が、研究中の細胞型に対して快適な環境をもたらすことを明らかにした。さらに詳細には、hGFおよびIHGKは、それらの天然の細胞形態を示し、RGD配列なしのハイドロゲル上で増殖した細胞とは対照的に、増殖率の劇的な増加を示したが、これは、PCMモードによって明らかにされたほぼ完全な細胞カーペットによって証明された。適切な細胞接着および通常の細胞形態を確かめるために、両方のハイドロゲル配置上でhGFおよびIHGKを培養し、パラホルムアルデヒドで固定し、免疫染色プロトコルに供した。細胞形態を明示するために、細胞骨格のアクチンフィラメントに特異的にインターカレートする染色色素で細胞を処理した。ハイドロゲル配置上のhGFおよびIHGKの赤色蛍光染色パターンの比較により、位相コントラスト顕微鏡検査からの観察が確認され、RGD配列なしのハイドロゲル上の不規則な円い形の細胞形態が明らかとなった。対照的に、ハイドロゲルRGD配列上で培養したhGFおよびIHGKは、同様にそれらの規則的な細胞形態を示し、これは、細胞の周辺におけるアクチンフィラメント配向の観察によって強調された。RGD配列は、細胞外マトリックスにおける細胞接着部分であり、マトリックス分子I型コラーゲンおよびフィブロネクチンの構成要素である。細胞は、インテグリンサブユニットβ1を含む特定のインテグリンサブユニットを介してこれらのRGD配列に接着することができる。従って、2つのハイドロゲル配置上に播種したhGFおよびIHGKにおけるインテグリンサブユニットβ1の分布を分析した。インテグリンβ1特異的緑色蛍光シグナルの分布の比較によって、同様に、適切な細胞接着、接触点の形成および規則的な細胞形態の発達を示す、RGDハイドロゲル配置上の細胞周辺における集積が明らかになった。対照的に、RGDハイドロゲル配置上で培養した細胞におけるインテグリンβ1の分布は、その細胞が表面上に適切な接着部分を見出すことができず、従って不規則な円い形の形態のままであったことを示唆している。さらに、インテグリンβ1特異的緑色蛍光シグナルは大変弱いままであったが、これは、接着部位を欠くことによるインテグリンβ1の発現の低下を示している。要約すれば、RGD配列のハイドロゲルへの組み込みは、hGFおよびIHGKの増殖および接着に関する本発明の医療デバイスの最適化に相当する。本発明のハイドロゲルでのさらなる細胞接着実験目的実施例1に従って製造されたRGD配列の有無による、本発明のハイドロゲル上に播種された歯肉線維芽細胞および歯肉角化細胞の形態学的変化、増殖および増殖特性を観察すること。方法ハイドロゲル本実施例に用いたハイドロゲルは、実施例1に概略を述べたプロトコルに従って、上記の前記実施例において記載され製造された様にジャイレースBタンパク質でスターPEG分子を官能基化することによって製造した。GyrBは細菌内のDNAのフォールディングに関与し、それとして、抗生物質ノボビオシンの標的である。従って、ハイドロゲルは、ジャイレースB機能化スターPEG分子が、概念上ノボビオシン二量体に類似し、近位ジャイレースBタンパク質と結合して3Dゲルネットワークを形成するのに役立つ分子であるクーママイシンと混合されるとき製造される。ジャイレースB部分に競合的親和性を有する分子であるノボビオシンのハイドロゲルへの添加によって、ハイドロゲルは分解されることができる。細胞がハイドロゲルに接着するための結合部位を提供するために、RGD配列がハイドロゲルに組み込まれた。視野位相差顕微鏡各ウェルに、半分がRGD配列を含み、半分がRGD配列を含まないハイドロゲルを40μL含む12ウェルプレートに入れた培地2mlに、1x105歯肉線維芽細胞および歯肉角化細胞細胞を播種した。細胞を48時間インキュベートし、その後倒立顕微鏡を用いてコンフルエンスおよび形態を検査した。免疫組織化学染色西洋ワサビペルオキシダーゼによる沈降12ウェルプレートに6xRGDおよび4xRGDハイドロゲルを製造した。1x105細胞ウェルでゲルにGFおよびGK細胞をプレーティングし、24時間インキュベートした。次いで培地を吸引し、ゲルをPBS2mLで2回洗浄した。染色のための抗体溶液を下記の表1に示すように調製した。12ウェルプレートにおいて、細胞を4ホルムアルデヒドで20分間固定した。次いで、このゲルをPBS2mLで3回洗浄した。続いて、ウェルの底からハイドロゲルをこそげ、~2cm平方のパラフィルムに乗せた抗体溶液50μL上に逆さにした。ハイドロゲルを1時間放置して1次抗体溶液に浸漬し、その後、スパチュラによって溶液から穏やかに引き揚げ、もう一片のパラフィルムに逆さにした。続いて、PBS溶液500μLでハイドロゲルを3回洗浄した。その後、適切な2次抗体100μLをハイドロゲル上にピペッティングし、40分間放置した。次いで、2次抗体を吸引し、ハイドロゲルをPBS500μLで3回洗浄した。事前調製されたDAB溶液100μLをハイドロゲル上にピペッティングし、10分間放置した。DAB溶液の除去後、ハイドロゲルを水で洗浄し、グリセリンを付けたカバークリップ上に乗せた。角膜角化細胞および歯肉線維芽細胞のFアクチンに対するファロイジンローダミン免疫組織化学染色実施例1に従って製造した、12ウェルシリコーンプレートにプレーティングしたハイドロゲルを図10に示すように配置した。歯肉角化細胞の代わりに角膜角化細胞を用いた。ハイドロゲルの上部に、35x104細胞ウェルと同等の7x103細胞ウェルを培地200μLで、GFおよびCK細胞をプレーティングした。細胞を5日間放置して増殖させ、その後、細胞を検査し、さらなる処理の前に倒立顕微鏡で写真を撮った。ハイドロゲルを含むウェルの上部から培地を吸引し、ハイドロゲルをPBS200μLで2回洗浄し、次いで細胞を4ホルムアルデヒド200μLで半時間固定した。ホルムアルデヒドの除去後、ハイドロゲルをPBS200μLで2回洗浄し、次いで薄めてないウシ血清アルブミンで3時間処理した。その後、BSAを吸引し、ハイドロゲルをPBS200μLで2回洗浄した。次いで、140に希釈したローダミンファロイジン30μLで各ハイドロゲル上の細胞を20分間処理した。続いて、ローダミンファロイジン溶液を吸引し、ウェル内のハイドロゲルをPBS溶液200μLで3回洗浄した。次いで、細胞を300nMDAPI30μLで10分間染色し、続いてPBS200μLで3回洗浄した。次いで、それが接着していたスライドガラスからシリコーンウェル構造物を取り除き、ハイドロゲルをVectorshieldに乗せ、ハイドロゲルの上部にスライドガラスを置いた。試料を観察し、60xオイル対物レンズを備えた蛍光顕微鏡を用いて写真を撮影した。歯肉角化細胞および歯肉線維芽細胞のインテグリンαVおよびインテグリンβ1免疫組織化学染色図10に示すように、シリコーンウェル中にハイドロゲルを配置した。ハイドロゲル上に、歯肉線維芽細胞および歯肉角化細胞を、ウェル当たり7x103細胞培地200μLで播種した。細胞を24時間インキュベートし、倒立顕微鏡下で検査し、倒立顕微鏡を用いて写真を撮影した。その後、以下の表2に概略を述べるようにして、抗体を用いて細胞を免疫化学的に染色した。染色プロトコル培地を除去し、各ウェルをPBS200μLで2回洗浄した。その後、細胞を4パラホルムアルデヒドで半時間固定した。PFを除去し、細胞をPBSで2回洗浄した。その後、PBSを除去し、BSA200μLを細胞上にピペッティングし、1時間放置した。BSAを除去し、ゲルをPBSで洗浄した。一次抗体をPBTで150に希釈し、二次抗体を1300に希釈した。各一次抗体30μLをゲル上にピペッティングし、4°Cで終夜放置した。結果視野位相コントラスト倒立顕微鏡検査ハイドロゲル上の細胞の倒立顕微鏡画像は、RGDハイドロゲルと比較して、RGDハイドロゲル上の強い増殖およびまたは接着を示した。これを図11に示すが、RGDハイドロゲルは上部左に見える。ハイドロゲルの周辺のウェル表面と比較して、ハイドロゲル表面上で増殖している線維芽細胞がないことが明確に見て取れる。これとはまったく対照的に、RGDハイドロゲルでは、図12に示すように、細胞の連続したカーペットが観察され、ハイドロゲルの縁は識別できない。増殖およびまたは接着のこのパターンは、歯肉角化細胞の外観に反映されていた。ハイドロゲルの縁は角化細胞のほぼ集密的なカーペットによって覆われていたが、ハイドロゲル表面上の細胞のまばらな密度はこれとは著しく対照的であった。これは図13に示されており、図14とは対照的である。ハイドロゲル上で増殖している細胞はプレート表面上で増殖しているものよりは密集していない。しかしながら、これはRGDハイドロゲル表面上で増殖している細胞を著しく超える。免疫組織化学沈降染色西洋ワサビペルオキシダーゼRGDおよびRGDハイドロゲルの顕微鏡画像をそれぞれ左および右に示す図15に示すように、サイトケラチン19免疫組織化学染色は、RGDハイドロゲルおよびRGDハイドロゲル上で増殖している歯肉角化細胞の形態における著しい対照が明らかとなった。図16における歯肉角化細胞のK19染色の高倍率写真は、ケラチン19タンパク質の分布を大変詳細に示している。DABキット西洋ワサビペルオキシダーゼ系を用いたインテグリンβ3に対する歯肉線維芽細胞の免疫組織化学染色は、以下の図17に示すように、RGDハイドロゲルおよびRGDハイドロゲル上で増殖している細胞間で形態における大きな差異を示した。RGDハイドロゲル上のほぼ完全な細胞のカーペットは、RGDハイドロゲル上の非定型形態のまれにしか存在しない細胞の外観とは対照的であった。ファロイジンローダミン染色によって、歯肉線維芽細胞および角膜角化細胞に関して、図2に示すように、蛍光顕微鏡下で細胞内のFアクチンフィラメントが示された。両方の細胞型に関して、RGDハイドロゲル上で増殖している細胞は、RGDハイドロゲル上で増殖している細胞と比較して、顕著により膨張性の形態を示した。20x075PlanApoObjectiveによって蛍光顕微鏡検査を行った。顕著な非特異的バックグラウンド蛍光のために、高解像性は達成することが困難であった。これにもかかわらず、インテグリンβ1染色は、RGD細胞と比較してRGDハイドロゲル上で培養した細胞の形態、増殖および伸展における明白な差異を明らかにした。これを図3に示す。GK細胞に関するインテグリンαV免疫化学染色は、GF細胞のインテグリンβ1に関して見られたものと同様に、RGDおよびRGDハイドロゲル上で培養した細胞間で同様な不均衡を示した。この差異は、図3において明確にみられる。考察製造された本発明のPEGハイドロゲルのあらゆる種類の解析は、歯肉線維芽細胞および歯肉角化細胞の両方が、RGDハイドロゲル上に接着し、そこで増殖したことを示した。歯肉線維芽細胞の場合は、図12に示すように、ハイドロゲルとプレート底面との間の境界線の非存在によって示されるように、プレート底面での細胞の増殖率と増殖率が同様であると思われた。図13および図14に示すように、このことは歯肉角化細胞の場合には当てはまらないと思われた。この場合、RGDハイドロゲル上で増殖しているものよりも、RGDハイドロゲルの周辺当たりでみられる細胞カーペットの方が密集していた。しかしながら、この現象は、凸状のディスクであるハイドロゲルの形状を考慮することによっても説明される。従って、細胞定着時に、PEG材料に接着する限定された能力によって、多くの細胞はRGDハイドロゲルから転がり落ち、ハイドロゲル周辺のプレート表面への細胞の濃縮効果をもたらした可能性がある。一方、RGDハイドロゲルへの細胞の接着は、全体の細胞の密度分布に平準化効果を示したと考えられる。DAB西洋ワサビペルオキシダーゼ法を用いるサイトケラチン19染色は、RGDおよびRGDハイドロゲル上で培養したGK間の形態の対比に有用であった。ここで、RGDハイドロゲル上での、まばらにしか見られない球状の細胞と比較して、RGDハイドロゲル上での、正常な形態を有する多くの細胞が見られる。K19は、角質化角化細胞においては通常発現されないが、非角質化上皮基底細胞ALimitedRoleforRetinoicAcidandRetinoicAcidReceptorsRARagrandRARbetainRegulatingKeratin19ExpressionandKeratinizationinOralandEpidermalKeratinocytes107428438を参照のことならびに正常および良性過形成非角質化基底粘膜細胞の両方AmericanJournalofPathology1348998を参照のことにおいて見られる。HPV16不死化子宮膣部および包皮角化細胞におけるサイトケラチン19発現増加InternationalJournalofCancer54656662を参照のことならびにHPV16不死化歯肉角化細胞における胎児性ケラチンK19ExperimentalCellResearch10164169を参照のことの根拠も見られる。現在提示されている結果において見られるK19の発現は、これらの著者の観察と矛盾しない。同様に、RGDハイドロゲル上のGF細胞の細胞接着タンパク質インテグリンβ3の染色は、ハイドロゲル表面上にこのタンパク質のほぼ完全な被覆を明らかにしており、包括的な細胞接着を示している。しかしながら、RGDハイドロゲルは、高度に非定型形態の細胞をほとんど示さなかった。GFおよび角膜角化細胞上のFアクチンのローダミンファロイジン染色もまた、RGDおよびRGDハイドロゲル上の細胞間の差異を強調し、RGD上の細胞では、細胞を通じてFアクチンの正規分布が示された。GKの免疫組織化学染色では、RGDハイドロゲル上よりも、RGDハイドロゲル上の細胞からの接着タンパク質αVのシグナルの方がより顕著に示された。αVβ6インテグリンは、粘膜損傷状態およびinvitroでの継代培養後に角化細胞によって発現されるKeratinocytesinHumanWoundsExpressagrvbeta6Integrin1064248を参照のこと。大量のバックグラウンド蛍光が観察されたが、インテグリンβ1染色によって、RGDハイドロゲルと比較してRGDハイドロゲル上の方が、この接着タンパク質がかなり多く存在することが示された。インテグリンβ1は歯肉線維芽細胞において発現されることが示されており、エナメル基質タンパク質への接着にとって重要でありJournalofPeriodontalResearch37317323を参照のこと、その代謝および分布は、たばこの煙におけるニコチンによって影響を受けることが示されており、歯周付着を弱める可能性が示されているJournalofPeriodontologyJPeriodontol7350510を参照のこと。結論本発明に記載のRGD配列を有する、ジャイレースBおよびクーママイシンによって形成される自己放出型PEGハイドロゲルは、RGDを含まないハイドロゲルと比較して大変優れた細胞培養支持体であり、細胞培養プレートに匹敵することが証明された。RGD配列を含むハイドロゲルおよびRGDを含まないハイドロゲルの粘弾性特性の試験さらなる試験において、実施例1の記載に従って製造されたRGD配列を含む本発明のPEGハイドロゲルおよびPEGRGDを含まない比較上のハイドロゲルの粘弾性特性を試験した。機械的なハイドロゲルの解析のために、2つのシリコン化ガラス製カバースリップの間にハイドロゲルディスクを製造し、合成体液中1時間膨張させた。タンパク質動的粘弾性測定装置IIを用い、20°Cで20mm平行スチールプレートおよびギャップサイズ05mmを用いて小歪交番剪断実験で貯蔵弾性率および損失弾性率を得た。機械的スペクトルを得るために、周波数応答関数として定歪モードで測定を行った。これに関連して、図29は、RGD配列を含むハイドロゲルおよびRGDを含まない比較上のハイドロゲルの周波数依存性粘弾性特性の試験結果を示すで示されている。図30は、RGD配列を含むハイドロゲルおよびRGDを含まない比較上のハイドロゲルの周波数依存性粘弾性特性の試験結果を示すで示されている。両方の試験は、実施例1に従って製造されたRGD配列の有無による本発明のPEGハイドロゲルのゲル様特性を証明している。合成体液中のGyrBPEGハイドロゲルの分解キネティクスさらなる実施例において、ノボビオシンの種々の濃度に依存した合成体液中の本発明のGyrBPEGハイドロゲルの分解キネティクスが研究された。非結合構成要素を除くために、最初にハイドロゲルを合成体液中4°Cで24時間インキュベートした。その後、ハイドロゲルを対応する濃度のノボビオシンを含む合成体液に移し、4°Cでインキュベートした。Bradford法を用い、上清に放出されたタンパク質を定量することによってハイドロゲルの分解をモニターした。この結果は、本発明のGyrBPEGハイドロゲルの用量調整分解キネティクスを証明している。本発明のGyrBPEGハイドロゲルは、実施例1に従って製造されたRGD配列を含む本発明のPEGハイドロゲルである。ハイドロゲルの長期安定性さらに、実施例1に従って製造されたRGD配列を含む本発明のPEGハイドロゲルのハイドロゲル長期安定性を研究した。この目的のために、このゲルを合成体液中4°Cで24時間インキュベートした。次いで、このハイドロゲルを合成体液に移し、4°Cで25日間保存した。25日後に1mMノボビオシンを添加することによってハイドロゲルの完全な分解を起こったが、これはBradford法を用い、上清に放出されたタンパク質を定量することによってモニターされた。ノボビオシンなしでのインキュベーションはハイドロゲルの分解をもたらさなかった。その結果、実施例1に従って製造されたハイドロゲルは、長期保存期間にわたって安定であり、かつその後にノボビオシンによって分解されることができることが明らかとなった。scFvハイドロゲルの製造序論本実施例のハイドロゲル設計は、フルオレセインおよびその誘導体の一部、例えばフルオレセインイソチオシアネートに特異的に結合する一本鎖抗体にグラフトされた分岐ポリマーをベースとする。FITC修飾ウシ血清アルブミンによって媒介されるscFVタンパク質の架橋によってゲル形成が達成される。フルオレセインの添加によって、ハイドロゲルの用量および時間調節分解が可能である。ポリマー合成本実施例との関係において用いるポリマーとして、対応するPEGポリマーの特性の見積もりのためにポリを用いた。このポリマーは最初に合成された。ポリの合成は、NatMater7S800804に記載されている。対応する本発明のPEGポリマーの製造は後に続く。タンパク質産生さらにまたscFv断片を製造した。これらのscFvはフルオレセインに指向され、FITCE2と名付けられ、VaughanらNatBiotechnol14S309314によって公表されている。産生のために、このscFvは、確立された発現系においてC末端ヘキサヒスチジンタグ付きバージョンとして組換えにより製造された。これは、例えば、FEBSLett415S289293ApplEnvironMicrobiol64S48624869に記載されている。産生されるscFvのタンパク質配列を図33に示す。発現後、細胞ペレットをPBSに再懸濁し、フレンチプレスを用いて破壊し、細胞の破片を30000xgの遠心分離で30分間除去した。透明にした細胞溶解物を、NTAアガロースSuperflowカラムに添着し、続いてこれを10カラム体積のPBS、10カラム体積の洗浄用緩衝液で洗浄し、2カラム体積の溶出緩衝液で溶出した。サイズ排除カラムによる2回の分離によって、タンパク質溶出液の緩衝液を50mMNaH2PO4、300mMNaCl、10mMイミダゾール、pH80に交換し、限外濾過によって40mgmlに濃縮した。FITCBSA産生ウシ血清アルブミンを10倍モル過剰量のフルオレセインイソチオシアネートと混合し、4°Cで12時間インキュベートした。NH4Clを最終濃度50mMになるまで添加して反応を停止させ、続いて、サイズ排除カラムによる2回の分離によって、緩衝液を50mMNaH2PO4、300mMNaCl、10mMイミダゾール、pH80に交換し、限外濾過によって100mgmlに濃縮した。BSAに対するFITCのカップリングにより得られたモル比は29~1であり、これはそれぞれ495nmおよび280nmの吸光度を測定することによって決定された。ハイドロゲル集合体5倍量精製scFvを1倍量のFITCBSAおよび2倍量のポリに加え、穏やかに撹拌することによって混合した。ハイドロゲルは直ちに形成され、さらに加湿雰囲気中、RTで12時間インキュベートした。scFvハイドロゲルの検証非結合構成要素を除くために、最初にハイドロゲルを50mMNaH2PO4、300mMNaCl、10mMイミダゾール、pH801ml中RTで24時間インキュベートし、その後、ハイドロゲルを、1mMフルオレセインを含む50mMNaH2PO4、300mMNaCl、10mMイミダゾール、pH801mlに移した。1日後、Bradford法を用いて、上清に放出されたタンパク質を定量した。