"ATPを用いた酵素反応によりADPを発生させる試料中の特定物質の測定方法であって、i試薬成分としてのATP中に不純物として存在するADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させる工程、ii生成するグルコース-6-リン酸にグルコース-6-リン酸脱水素酵素とNAD類を作用させる工程、およびiii生成するNADH類をピルビン酸と乳酸脱水素酵素を作用させNADH類を消去させる工程により試薬成分としてのATP中のADPを除去させるADP除去反応;次いでiv上記iからiiiの工程からなるADP除去反応によりADPが除去された試薬成分としてのATPを用いて試料中の特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程、v生成するADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させる工程、vi生成するグルコース-6-リン酸にグルコース-6-リン酸脱水素酵素とNADP類を作用させる工程、およびvii生成するNADPH類を測定する工程により試料中の特定物質を測定する特定物質測定反応からなることを特徴とする特定物質の測定方法。試薬成分としてのATP中のADPを除去させるADP除去反応後、該ADP除去反応における工程iiiの乳酸脱水素酵素反応が進行しない条件下で、ivからviiの工程からなる特定物質測定反応を行う、請求項1記載の特定物質の測定方法。工程viにおいて用いるNADP類がNADP類であり、かつ工程viiにおいて測定するNADPH類がNADPH類である、請求項2に記載の特定物質の測定方法。工程viにおいて用いるグルコース-6-リン酸脱水素酵素の基質親和性がNAD類よりNADP類の方が高い、請求項3に記載の特定物質の測定方法。試薬成分としてのATP中のADPを除去させるADP除去反応後、特定物質測定反応におけるviからviiのいずれもの工程での反応液に乳酸脱水素酵素阻害剤を含む、請求項2から4のいずれかに記載の特定物質の測定方法。乳酸脱水素酵素阻害剤がシュウ酸である、請求項5に記載の特定物質の測定方法。工程viにおいて、NADP類としてNADPとチオNADPを共存させて使用し、かつ、工程viiにおいて、NADPH類を測定する工程が、生成するチオNADPH由来の波長405nm付近の吸光度の増加を測定することにより行う、請求項1から6のいずれかに記載の特定物質の測定方法。特定物質が尿素であり、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程ivが、試料中の尿素にATP、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオン、およびウレアアミドリアーゼを作用させてADPを発生させる工程である、請求項1から7のいずれかに記載の特定物質の測定方法。ATPを用いた酵素反応によりADPを発生させる特定物質を測定するためのキットであり、かつ、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、金属イオン、グルコース-6-リン酸脱水素酵素、NAD類、ピルビン酸、乳酸脱水素酵素、およびATPを必須成分として含む第一試薬;およびNADP類を必須成分として含む第二試薬から構成され、かつ第一試薬または第二試薬に、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程に必須であってATP以外である試薬成分を他の試薬成分と独立に含む、特定物質測定用キット。特定物質が尿素であり、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程に必須であってATP以外の試薬成分が、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオン、およびウレアアミドリアーゼである、請求項9に記載のキット。第二試薬に乳酸脱水素酵素阻害剤を含む、請求項9または10に記載のキット。本発明の課題は、ATPを用いる酵素反応によりADPを発生する試料中の特定物質を測定する際、発生するADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させて生成するグルコース-6-リン酸を測定することにより、試料中の特定物質を測定する方法において、測定ブランクを減少させ、また、検量線の傾きを小さくすることにより、広範囲のADPの濃度を正確に測定する方法およびそれに使用する安定で安価な特定物質測定用キットを提供することにある。本発明者らは、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させ、次いで、生成するADPに、ADP依存性ヘキソキナーゼ等を作用させてADPを正確に測定できるとされている前記の方法を、補酵素としてチオNADPとNADPを併用して高濃度の尿素等の特定物質の測定に用いることを検討した。しかし、この前記の方法では、試料中の特定物質が高濃度になったり、補酵素としてチオNADPを用いて測定したりすると、ブランクが高くなったり検量線の傾きが大きくなり、特定物質を測定できる濃度範囲が狭くなる問題があり、実用性に問題が発生する場合があることを発見した。さらに、その問題を解決するため種々検討した結果、試薬としてのATP中に存在するADPを、ADP依存性ヘキソキナーゼ反応、グルコース-6-リン酸脱水素酵素反応、乳酸脱水素酵素反応の順で反応させてADPを除去した後に、特定物質を測定すると、測定ブランクが低くなり検量線の傾きが小さくなるため特定物質の測定可能な濃度範囲を広くなり、正確に測定できることを見出した。本発明は、かかる経過によりなされたものである。従って、本発明は、[1].ATPを用いた酵素反応によりADPを発生させる試料中の特定物質の測定方法であって、i試薬成分としてのATP中に不純物として存在するADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させる工程、ii生成するグルコース-6-リン酸にグルコース-6-リン酸脱水素酵素とNAD類を作用させる工程、およびiii生成するNADH類をピルビン酸と乳酸脱水素酵素を作用させNADH類を消去させる工程により試薬成分としてのATP中のADPを除去させるADP除去反応;次いでiv上記iからiiiの工程からなるADP除去反応によりADPが除去された試薬成分としてのATPを用いて試料中の特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程、v生成するADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させる工程、vi生成するグルコース-6-リン酸にグルコース-6-リン酸脱水素酵素とNADP類を作用させる工程、およびvii生成するNADPH類を測定する工程により試料中の特定物質を測定する特定物質測定反応からなることを特徴とする特定物質の測定方法;[2].試薬成分としてのATP中のADPを除去させるADP除去反応後、該ADP除去反応における工程iiiの乳酸脱水素酵素反応が進行しない条件下で、ivからviiの工程からなる特定物質測定反応を行う、上記[1]記載の特定物質の測定方法;[3].工程viにおいて用いるNADP類がNADP類であり、かつ工程viiにおいて測定するNADPH類がNADPH類である、上記[2]に記載の特定物質の測定方法;[4].工程viにおいて用いるグルコース-6-リン酸脱水素酵素の基質親和性がNAD類よりNADP類の方が高い、上記[3]に記載の特定物質の測定方法;[5].試薬成分としてのATP中のADPを除去させるADP除去反応後、特定物質測定反応におけるviからviiのいずれもの工程での反応液に乳酸脱水素酵素阻害剤を含む、上記[2]から[4]のいずれかに記載の特定物質の測定方法;[6].乳酸脱水素酵素阻害剤がシュウ酸である、上記[5]に記載の特定物質の測定方法;[7].工程viにおいて、NADP類としてNADPとチオNADPを共存させて使用し、かつ、工程viiにおいて、NADPH類を測定する工程が、生成するチオNADPH由来の波長405nm付近の吸光度の増加を測定することにより行う、上記[1]から[6]のいずれかに記載の特定物質の測定方法;[8].特定物質が尿素であり、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程ivが、試料中の尿素にATP、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオン、およびウレアアミドリアーゼを作用させてADPを発生させる工程である、上記[1]から[7]のいずれかに記載の特定物質の測定方法;[9].ATPを用いた酵素反応によりADPを発生させる特定物質を測定するためのキットであり、かつ、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、金属イオン、グルコース-6-リン酸脱水素酵素、NAD類、ピルビン酸、乳酸脱水素酵素、およびATPを必須成分として含む第一試薬;およびNADP類を必須成分として含む第二試薬から構成され、かつ第一試薬または第二試薬に、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程に必須であってATP以外である試薬成分を他の試薬成分と独立に含む、特定物質測定用キット;[10].特定物質が尿素であり、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程に必須であってATP以外の試薬成分が、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオン、およびウレアアミドリアーゼである、上記[9]に記載のキット;および[11].第二試薬に乳酸脱水素酵素阻害剤を含む、上記[9]または[10]に記載のキットに関する。本発明においては、ATPを用いる酵素反応によりADPを発生する試料中の特定物質を測定する際、試薬としてのATP中に存在するADPを、ADP依存性ヘキソキナーゼ反応、グルコース-6-リン酸脱水素酵素反応、乳酸脱水素酵素反応の順で反応させてADPを除去した後に、特定物質を測定することにより、測定ブランクが低く検量線の傾きも小さくなるため広範囲のADPの濃度を正確に測定できる。また、特定物質測定反応の補酵素としてチオNADPとNADPを併用したときには、高濃度の特定物質を測定しやすくなる。本発明に用いられる試料としては、酵素反応でATPをADPに変換する特定物質を含むサンプルであり、好ましくは液体であれば特に限定しないが、血清、血漿、尿等の生体試料、または、それらのモデルサンプルが好ましい。本発明において、特定物質とは、ATPを用いる酵素反応によりADPを生成する物質、すなわち、ATPよりADPを生成する酵素またはその基質であれば特に限定しない。そのような特定物質として尿素またはウレアアミドリアーゼ、クレアチンまたはクレアチンキナーゼ、コリンまたはコリンキナーゼを例示できる。本明細書においては、そのような特定物質とATPとよりADPを生成する酵素反応を特定物質酵素反応ともいうものとする。特定物質として尿素またはウレアアミドリアーゼを測定するときには、特定物質酵素反応として、尿素、ATP、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオンとウレアアミドリアーゼを作用させるウレアアミドリアーゼ反応を用いることができる。その反応式を下記に示す。特定物質としてクレアチンまたはクレアチンキナーゼを測定するときには、特定物質酵素反応として、クレアチン、ATP、マグネシウムイオンとクレアチンキナーゼを作用させるクレアチンキナーゼ反応を用いることができる。その反応式を下記に示す。特定物質としてコリンまたはコリンキナーゼを測定するときには、特定物質酵素反応として、コリン、ATP、マグネシウムイオン、コリンキナーゼを作用させるコリンキナーゼ反応を用いることができる。その反応式を下記に示す。本発明において、ADPとは、アデノシン二リン酸Adenosinediphosphateをいう。本発明において、ATPとは、アデノシン三リン酸Adenosinetriphosphateをいう。本発明において、NADP類とは、例えば、NAD、NADP、チオNAD、チオNADPのいずれかを意味し、NAD類とは、例えば、NAD、チオNADのいずれかを意味し、NADP類とは、例えば、NADP、チオNADPのいずれかを意味するが、脱水素酵素反応に用いる補酵素として働くそれらに類似した構造、例えば、リング骨格が同じで補酵素として機能を有することが知られている化合物でもよい。ここで、NADとはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを意味し、NADPとはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートを意味し、チオNADとはチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを意味し、チオNADPとはチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートを意味する。本発明において、NADPH類とは、NADP類の対応する還元型であり、例えば、NADP類がNAD、NADP、チオNAD、チオNADPのときは、それぞれ、NADH、NADPH、チオNADH、チオNADPHを意味する。本発明において、NADPとは、NADまたはNADPを意味し、NADPHとは、NADPの対応する還元型を意味し、NADPがNAD、NADPのときは、それぞれ、NADH、NADPHを意味する。本発明において、チオNADPとは、チオNADまたはチオNADPを意味し、チオNADPHとは、チオNADPの対応する還元型を意味し、チオNADPがチオNAD、チオNADPのときは、それぞれ、チオNADH、チオNADPHを意味する。本発明において、試料中の特定物質の測定方法は、以下のiからiiiの工程からなる試薬成分としてのATP中のADPを除去させるADP除去反応と、以下のivからviiの工程からなる試料中の特定物質を測定する特定物質測定反応を必須要件とする。本発明においては、iからiiiの工程からなるADP除去反応、ivからviiの工程からなる特定物質測定反応は、それぞれ、ワンポットで、すなわち一気に行うことが好ましい。ADP除去反応:i試薬成分としてのATP中に不純物として存在するADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させる工程この工程iにおいては、下記反応式本明細書ではこの反応をADP依存性ヘキソキナーゼ反応と記載することもあるにおいて、ADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させてグルコース-6-リン酸G6Pを生成させる。この工程においては、ADPは、試薬成分としてのATPに不純物として存在するADPである。金属イオンとしては、マグネシウムイオン、コバルトイオン、マンガンイオンなどが好ましい。ii生成するグルコース-6-リン酸にグルコース-6-リン酸脱水素酵素とNAD類を作用させる工程工程iiにおいては、工程iで生成するグルコース-6-リン酸G6Pが酵素反応に付される。下記反応式本明細書では、グルコース-6-リン酸脱水素酵素が関与する反応をグルコース-6-リン酸脱水素酵素反応ともいうのように、グルコース-6-リン酸脱水素酵素G6PDHとNAD類を作用させると、グルコノラクトン-6-リン酸6-PGLとともに、NADH類が発生する。次の工程iiiでは乳酸脱水素酵素反応を用いるが、この乳酸脱水素酵素反応は、補酵素としてNADH類を用いると反応が進行し、NADPH類を用いると反応が進行しないので、本工程iiで用いる補酵素は、NAD類とし、NADH類が生成するようにして、次の工程iiiの乳酸脱水素酵素反応が進行するようにすることが必要である。iii生成するNADH類をピルビン酸と乳酸脱水素酵素を作用させNADH類を消去させる工程特定物質測定反応における工程viで発生するNADPH類を工程viiで測定する際、工程iiで生成するNADH類は、ブランクの上昇の原因となるので、この工程iiiにおいては、工程iiで生成するNADH類をピルビン酸と乳酸脱水素酵素を作用させる乳酸脱水素反応によりNADH類をNAD類に変換させ消去させる。以上に説明したiからiiiの工程からなるADP除去反応によりADPが除去された試薬成分としてのATPが得られ、このATPを用いて、次の特定物質測定反応が行われる。特定物質測定反応:iv上記iからiiiの工程からなるADP除去反応によりADPが除去された試薬成分としてのATPを用いて試料中の特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程本工程ivにおいては、特定物質酵素反応を進行させるための試薬成分を用いた特定物質酵素反応により、測定対象である試料中の特定物質と、上記iからiiiの工程からなるADP除去反応によりADPが除去された試薬成分としてのATPとよりADPを生成させる。例えば、特定物質として尿素またはウレアアミドリアーゼを測定するときには、前記したウレアアミドリアーゼ反応から明らかなとおり、特定物質酵素反応のための試薬成分として、ウレアアミドリアーゼまたは尿素、ATP、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオンを用いる。特定物質として、クレアチンまたはクレアチンキナーゼ、コリンまたはコリンキナーゼを測定するときには、同様に、前記したクレアチンキナーゼ反応、コリンキナーゼ反応から特定物質酵素反応のための試薬成分を決めることができる。v生成するADPに、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、および金属イオンを作用させる工程この工程は、前記工程ivで生成するADPを、ADP依存性ヘキソキナーゼ反応に付す工程である。金属イオンとしては、マグネシウムイオン、コバルトイオン、マンガンイオンなどが好ましい。vi生成するグルコース-6-リン酸にグルコース-6-リン酸脱水素酵素とNADP類を作用させる工程この工程においては、工程vにより生成したグルコース-6-リン酸G6Pにグルコース-6-リン酸脱水素酵素G6PDHを作用させてグルコース-6-リン酸脱水素酵素反応を行い、グルコノラクトン-6-リン酸6-PGLとともにNADH類が生成する。なお、補酵素としては、工程iiとは異なり、工程iiの後の乳酸脱水素酵素反応を進行させることを考慮する必要がないので、NAD類に限定されず、NADP類を用いることができる。vii生成するNADPH類を測定する工程本工程においては、NADP類では吸光度がほとんどなくNADPH類で吸光度がある波長を用いて、NADPH類由来の吸光度の増加を測定する。そのNADPH類由来の吸光度の増加量から、あらかじめ作成した検量線と比較して、特定物質の濃度を測定することができる。工程viにおいて、補酵素のNADP類としてNADPを用いる場合は、生成するNADPHに由来する340nm付近、例えば、波長330~350nmの吸光度の増加量からADPを測定することができる。本発明において、工程viにおいて、補酵素のNADP類としてチオNADPを用いる場合は、生成するチオNADPHに由来する405nm付近、例えば、波長390~415nmの吸光度の増加量からADPを測定することができる。本発明においてこのチオNADPを用いることは、安価で入手しやすい可視分光光度計を用いて測定できる点、特定物質の測定領域を著しく改善できる点などで好適である。また、特定物質の測定領域をさらに広くするため、工程viにおいて、補酵素としてチオNADPとNADPを共存させてグルコース-6-リン酸脱水素酵素反応を行い、チオNADPHとNADPHを発生させ、生成したチオNADPH由来の波長405nm付近の吸光度の増加を測定することによりADPを測定することが特に好ましい。この場合、用いるNADPの量は特に限定しないが、検量線の傾きを適度に調整するため、用いるチオNADPの量の0.1~30倍モル数が好ましく、0.5~25倍モル数がさらに好ましい。本発明においては、iからiiiの工程からなるADP除去反応で試薬成分中のADPを除去させた後、工程iiiの乳酸脱水素酵素反応が進行しない条件下で、ivからviiの工程からなる特定物質測定反応を行うことが好ましい。特定物質測定反応において工程iiiの乳酸脱水素酵素反応が進行すると、工程viで生成するNADH類をNAD類にする逆反応が工程viiのNADPH類を測定する際の誤差の原因となるからである。本発明においては、工程iiiの乳酸脱水素酵素反応はNAD依存性なので、特定物質測定反応においてこの乳酸脱水素酵素反応を進行させないためには、工程viで用いるNADP類は、NADP類であることが好ましい。その際、グルコース-6-リン酸脱水素酵素は、基質親和性がNAD類よりNADP類の方が高いものが好ましい。この場合、グルコース-6-リン酸脱水素酵素は、NADP類に対するKmが、NAD類に対するKmの0.01~0.5倍が好ましい。また、乳酸脱水素酵素反応を特定物質測定反応において進行させないためには、試薬成分中のADPを除去させたADP除去反応後、ivからviiの工程からなる特定物質測定反応において、反応液に乳酸脱水素酵素阻害剤を存在させて乳酸脱水素酵素反応を阻害することも好ましい。乳酸脱水素酵素阻害剤としては、シュウ酸、オキサミン酸およびこれらの塩を例示することができ、中でも、シュウ酸が好ましい。本発明の特定物質の測定方法においては、iからiiiの工程からなるADP除去反応を進行させるための第一試薬、ivからviiの工程からなる特定物質測定反応を進行させるための第二試薬から構成される特定物質測定用キットを用いることが好ましい。この場合、例えば、第一試薬としては、グルコース、ADP依存性ヘキソキナーゼ、金属イオン、グルコース-6-リン酸脱水素酵素、NAD類、ピルビン酸、乳酸脱水素酵素、およびATPを必須成分として含むことが好ましい。一般に、このようなATPを含む第一試薬は、必須成分を混合した後、前処理としてATP中のADPを除去するため、例えば、室温から37°C、好ましくは室温で1時間以上放置しておくことが好ましい。この放置操作によりiからiiiの工程を、ワンポットで、すなわち一気に達成することができる。第二試薬には、ivからviiの工程からなる特定物質測定反応を進行させるための成分として、NADP類を必須成分として含むが、第一試薬に含まれている成分は省略してもよい。第一試薬または第二試薬には、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程に必須であってATP以外である試薬成分は、独立に含まれることが必要であり、さらに少なくともその必須成分の一部または全部が第二試薬に含まれていることが好ましい。例えば、特定物質が尿素の場合、特定物質を酵素反応に付しADPを発生させる工程に必須であってATP以外である試薬成分は、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオン、およびウレアアミドリアーゼであり、これらが独立に第一試薬または第二試薬に含まれていることが必要である。さらに少なくともその必須成分の一部または全部が第二試薬に含まれていることが好ましい。本発明の特定物質測定用キットの各成分は、例えば、NAD類、NADP類、金属イオン、グルコース-6-リン酸脱水素酵素等は、本発明の特定物質の測定方法で述べたものを適宜効果に併せて選択して使用することができる。例えば、第二試薬には、乳酸脱水素酵素阻害剤を含むことが好ましい。第一試薬または第二試薬には、界面活性剤、緩衝剤を適宜、加えてもよい。自動分析装置や可視部測定装置を用いてこのキットにより特定物質を測定することができる。例えば、iからiiiの工程を経た第一試薬を20~40°C好ましくは37°Cで混合し3~10分好ましくは5分で放置する。ついでそれに、試料および第二試薬を加え、ivからviiの工程を含む特定物質測定反応を、ワンポットで、すなわち一気に行い、生成するNADPHの増加を適当な波長の吸光度を測定することにより、特定物質を測定することができる。実施例1-7および比較例1-7チオNADPとNADPを用い阻害剤シュウ酸を用いない本発明による尿素の測定1.方法ウレアアミドリアーゼ、ADP依存性ヘキソキナーゼ、およびグルコース-6-リン酸脱水素酵素、チオNADP、NADPを用いた尿素窒素測定系において、試薬中のATP中に含有されるADPから、ADP依存性ヘキソキナーゼ、およびグルコース-6-リン酸脱水素酵素の反応によって生じるNADHの発色を、前もって試薬中の乳酸脱水素酵素を用いた反応によりNADHをNADに酸化して消去することにより防止した。この方法により、ブランク値、尿素の測定可能の濃度範囲を検討した。更に、乳酸脱水素酵素を用いることなく、NADHをNADに酸化して消去しないで測定する比較例と比較した。2.試料ブランク試料は生理食塩水を用いた。測定のための試料は尿素窒素として200mg/dLとなる様に尿素溶液を調製し、各濃度に生理食塩水で適宜希釈した。3.試薬試薬は、以下の第一試薬および第二試薬を用いた。第一試薬:第一試薬は、以下の組成のものを用いた。100mMBESN,N-ビス2-ヒドロキシエチル-2-アミノエタンスルホン酸pH7.510mMD-グルコース10mM炭酸水素カリウム5mMATP2Na種々の濃度のADPを含む10mMピルビン酸5mMNAD0.1界面活性剤6KU/Lヘキソキナーゼ2KU/Lウレアアミドリアーゼ2KU/Lグルコース-6-リン酸脱水素酵素200U/L乳酸脱水素酵素第二試薬:第二試薬は、以下の組成のものを用いた。100mMBESN,N-ビス2-ヒドロキシエチル-2-アミノエタンスルホン酸pH7.510mM酢酸マグネシウム四水和物5mMNADP1mMチオNADP0.1界面活性剤試薬組成について:本実施例では、表1に示すように試薬成分のATP中にADPが存在している試薬を用いた。本実施例に用いた第一試薬はADPより発生したNADHが乳酸脱水素酵素によりNADとなるように1時間以上放置し、十分な時間を置きATP中のADPを除去した。また、乳酸脱水素酵素LDHによる逆反応の影響を防ぐため、ADP測定系特定物質測定反応における工程viに用いる補酵素はLDHと反応するチオNADではなく、LDHと反応しないチオNADPを用いた。なお、このとき、その補酵素としてNADPを加えず、チオNADP単独では、測定ブランクが2倍以上で傾きが高く測定濃度範囲は、50mg/dL以下となるため、チオNADPとNADPを併用することにした。表1に示したとおり、比較例1から7に用いた第一試薬はLDHを添加せず、ADPの消去反応が起きない組成を用いた。加えて、測定系の測定可能範囲を広げることを目的とし、NADPとチオNADPの終濃度比が5:1となるような試薬組成を用いた。4.測定測定は以下のように行った。可視部測定装置吸光度信頼範囲2.5以下を用い、試料3.0μLと第一試薬100μLとを37°C、5分間混合した後、第二試薬100μLを加え同温度で5分間反応させた。発色反応後の吸光度を当該機種の1ポイントエンド法により波長405nmで測定した。5.結果aブランク吸光度の比較ブランクの吸光度の結果を図1と表2に示す。図1、表2の結果から、第一試薬に添加したLDHにより予め試薬中のADPを消去した実施例の組成では、LDHの添加が無い比較例の組成よりも、ブランクでの吸光度が低減されていることが判明した。b直線性の比較比較例1-7の検量線を図2に、実施例1-7の検量線を図3に示す。図2で示すように比較例1-7の組成では、尿素窒素濃度200mg/dLの試料を測定する場合、得られる吸光度が測定機器の吸光度上限である2.5を越え、測定不能であった。一方、図3が示すように実施例1-7では尿素窒素濃度200mg/dLの試料を測定しても得られる吸光度は2.5を越えず、本発明により尿素の測定可能範囲が拡大されることが判明した。実施例8-14および比較例8-14チオNADとNADを用いさらに阻害剤シュウ酸を用いた本発明による尿素の測定1.方法ウレアアミドリアーゼ、ADP依存性ヘキソキナーゼ、およびグルコース-6-リン酸脱水素酵素、チオNAD、NADを用いた尿素窒素測定系において、試薬中のATP中に含有されるADPから、ADP依存性ヘキソキナーゼ、およびグルコース-6-リン酸脱水素酵素の反応によって生じるNADHの発色を、前もって試薬中の乳酸脱水素酵素を用いた反応によりNADHをNADに酸化して消去することにより防止した。その後、乳酸脱水素酵素阻害剤シュウ酸によりその酵素反応を停止させた。この方法による、ブランク値、尿素の測定可能な濃度範囲を検討した。更に、乳酸脱水素酵素を用いることなく、NADHをNADに酸化して消去しないで測定する比較例と比較した。2.試料ブランク試料は生理食塩水を用いた。測定のための試料は尿素窒素として200mg/dLとなる様に尿素溶液を調製し、各濃度に生理食塩水で適宜希釈した。3.試薬試薬は、以下の第一試薬および第二試薬を用いた。第一試薬:第一試薬は、以下の組成のものを用いた。100mMBESN,N-ビス2-ヒドロキシエチル-2-アミノエタンスルホン酸pH7.510mMD-グルコース10mM炭酸水素カリウム5mMATP2Na種々の濃度のADPを含む10mMピルビン酸5mMNAD0.1界面活性剤6KU/Lヘキソキナーゼ2KU/Lウレアアミドリアーゼ2KU/Lグルコース-6-リン酸脱水素酵素200U/L乳酸脱水素酵素第二試薬:第二試薬は、以下の組成のものを用いた。100mMBESN,N-ビス2-ヒドロキシエチル-2-アミノエタンスルホン酸pH7.510mM酢酸マグネシウム四水和物100mMシュウ酸カリウム一水和物1mMチオNAD0.1界面活性剤試薬組成について:本実施例では、表3に示すように試薬成分のATP中にADPが存在している試薬を用いた。本実施例に用いた第一試薬はADPより発生したNADHが乳酸脱水素酵素LDHによりNADとなるように十分な時間を置き用いた。また、試料中の尿素窒素から生成されたNADHがLDHによって消去されないように、LDHに対するインヒビターであるシュウ酸を第二試薬組成中に添加した。表3に示すように比較例に用いた第一試薬はLDHを添加せず、ADPを消去しない組成を用いた。加えて、チオNAD単独では、測定ブランクが2倍以上で傾きが高く測定濃度範囲は、50mg/dl以下となるため、測定系の測定可能範囲を広げることを目的とし、NADとチオNADの終濃度比が5:1となるような試薬組成を用いた。4.測定測定は以下のように行った。可視部測定装置吸光度信頼範囲2.5以下を用い、試料3.0μLと第一試薬100μLとを37°C、5分間混合した後、第二試薬100μLを加え同温度で5分間反応させた。発色反応後の吸光度を当該機種の1ポイントエンド法により波長405nmで測定した。5.結果aブランク吸光度の比較ブランクの吸光度の結果を図4と表4に示す。図4と表4の結果から、第一試薬に添加したLDHにより予め試薬中のADPを消去した組成では、LDHの添加が無い組成よりも、ブランクでの吸光度が軽減されていることが判明した。b直線性の比較比較例8-14の検量線を図5に、実施例8-14の検量線を図6に示す。図5が示すように比較例8-14では、尿素窒素濃度200mg/dLの試料を測定する場合、得られる吸光度が測定機器の吸光度上限である2.5を越え、測定不能であった。一方、図6が示すように実施例8-14では尿素窒素濃度200mg/dLの試料を測定しても得られる吸光度は2.5を越えず、本発明により尿素の測定範囲が拡大されることが判明した。"