"LRP8結合分子及び少なくとも1つのCNS活性化合物を含む組成物。LRP8結合分子が、少なくとも1つのCNS活性化合物にコンジュゲートしている、請求項1に記載の組成物。コンジュゲーションが、LRP8結合分子および少なくとも1つのCNS活性化合物との間の共有結合である、請求項2に記載の組成物。コンジュゲーションがリンカーによる、請求項2に記載の組成物。LRP8結合分子が、LRP8の天然リガンド、LRP8の天然リガンドの断片、LRP8の天然リガンドの修飾された形態、及びLRP8の天然リガンドの修飾された形態の断片から選択される、請求項1に記載の組成物。LRP8の天然リガンドがリーリン及びセレノプロテインPから選択される、請求項5に記載の組成物。LRP8結合分子が抗体である、請求項1に記載の組成物。抗体が多重特異性抗体である、請求項7に記載の組成物。抗体が、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及びLRP8に結合する抗体断片から選択される請求項7に記載の組成物。LRP8結合分子が、LRP8への結合において、LRP8の1つ以上の天然リガンドと競合しない、請求項1に記載の組成物。LRP8結合分子が、LRP8への結合において、LRP8の1つ以上の天然リガンドと競合する、請求項1に記載の組成物。LRP8結合分子がLRP8の細胞外ドメインに結合する請求項1に記載の組成物。LRP8結合分子が脳で発現されたLRP8に優先的に結合する請求項1に記載の組成物。CNS活性化合物が、治療用化合物及び診断用化合物から選択される、請求項1に記載の組成物。治療用化合物が、神経栄養因子、及び神経障害、アミロイドーシス、癌、眼の疾患又は障害、ウイルス又は細菌感染、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、及びリソソーム蓄積症の一つ以上を治療又は予防するための化合物から選択される、請求項14に記載の組成物。治療用化合物が、パーキンソン病を治療するための化合物及びアルツハイマー病を治療するための化合物から選択される、請求項15に記載の組成物。診断用化合物が、CNS標的に特異的に結合する標識されたペプチド又は抗体である、請求項15に記載の組成物。LRP8へのLRP結合分子の結合が、血液脳関門を通過するCNS活性化合物の輸送をもたらす、請求項1に記載の組成物。請求項1に記載の組成物及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤。追加の治療剤を更に含む請求項19に記載の薬学的製剤。医薬としての使用のための、請求項1から18の何れかに記載の組成物。LRP8の発現、安定性又は活性を調節することにより、哺乳動物における血液脳関門を通過するCNS活性化合物の輸送の調節に使用するための請求項1から18の何れかに記載の組成物。LRP8を標的とすることで、タイトジャンクションを含む血管内皮細胞層を横切るCNS活性化合物の輸送の調節に使用するための請求項1から18の何れかに記載の組成物。CNS疾患又はCNS障害の重症度、持続時間、又は症状の減少又は予防における使用のための、請求項1から18の何れかに記載の組成物。CNS疾患又はCNS障害の診断における使用のための、請求項1から18の何れかに記載の組成物。CNS疾患又はCNS障害のステージ分類における使用のための、請求項1から18の何れかに記載の組成物。医薬の製造における、請求項1から18の何れかに記載の組成物の使用。医薬が、LRP8の発現、安定性又は活性を調節することにより、哺乳動物における血液脳関門を通過するCNS活性化合物の輸送の調節に使用されるためのものである、請求項27の使用。医薬が、LRP8を標的とすることで、タイトジャンクションを含む血管内皮細胞層を横切るCNS活性化合物の輸送の調節に使用されるためのものである、請求項27の使用。医薬が、CNS疾患又はCNS障害の重症度、持続時間、又は症状の減少又は予防における使用のためのものである、請求項27の使用。医薬が、CNS疾患又はCNS障害の診断における使用のためのものである、請求項27の使用。医薬が、CNS疾患又はCNS障害の診断におけるステージ分類における使用のためのものである、請求項27の使用。III.実施例以下は本発明の方法および組成物の例である。上記提供される一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。実施例1:候補のBBB特異的転座促進標的としてのLRP8の同定マイクロアレイ遺伝子発現解析が、a血液脳関門に特異的で、b高発現レベルが示され、c動物のライフサイクル中に異なる時点で常に存在するタンパク質を同定するために行われた。従って、タンパク質の発現は、胎仔、若年、及び成体マウスにおける、精製された脳内皮細胞対肝臓及び肺細胞において解析された。具体的には、C57bl6成体、仔生後7日目、及び胎仔14.5日マウスが、標準的な技術により屠殺された。成体と仔については、大脳皮質、肝臓と肺が氷冷PBS中に採取された。各組織において単一細胞懸濁液を以下のように調製した。脳について、髄膜が除去され成体と仔ではワットマン紙により、及び胎仔では鉗子による及び大脳皮質が切開され前脳から離された。パパインベースの神経解離キットMiltenyiを、PBSの代わりのHBSSを用いたことを除いて、製造業者の指示に従って使用し、細胞を70ミクロンのフィルターを通じて3分間1200rpmで遠心して濾過した。キットの通常のミエリン除去工程は胎仔サンプルの場合に用いられなかった。肺成体、仔、及び胎仔の各々の全肺葉および肝臓肝門脈を避けるために選択された各葉の周辺領域については、修飾された神経解離キットMiltenyiを用い、そこでは最初のパパインインキュベーションは、メーカーが指示した15分の代わりに、1時間成体、30分仔または1から5分胎仔行われた。成体のサンプルについてのみ、肝肺サンプルは粉砕の前に、ローターで均質化した。すべての細胞懸濁液において内皮細胞のFACS選別は以下のように行った。細胞懸濁液を、FACS緩衝液PBS中2BSAで1回洗浄した。1:100のFcプレブロックpreblockCD16またはCD32が4°Cで10分間添加され、その後、細胞マーカーに特異的な2つの蛍光標識された一次抗体の各々の付加1:100が続いた内皮細胞マーカーとしてFITCとコンジュゲートした抗マウスCD31及び有核造血細胞のマーカーとしてフィコエリトリンとコンジュゲートした抗マウスCD45。細胞をFACS緩衝液で2回洗浄し、70ミクロンのフィルターを通じて3分間1,200rpmで遠心分離し濾過した。FACSソーティングの最中に死んだ細胞の選別を可能にするために、ヨウ化プロピジウムが最終濃度1μg/mlまで添加された。脳細胞試料の約0.8がCD31陽性かつCD45陰性内皮細胞であり、そのRNAがRNeasyマイクロプラスキットQiagenにより精製され、マイクロアレイ解析でさらに使用するために採取された図2A参照。上記の結果を検証するために、特定の細胞特異的なマーカーについての標準技術を使用して、定量的RT-PCR法も行われた。RT-PCR反応は、QuantiTectSYBRGreenのRT-PCRキットワンステップキットQiagenを用いて、以下ように異なる細胞に特異的なプライマーにより、一般的に実施された。内皮細胞の含量を評価するために、マーカーのTie2が、Mm_Tek_1SGのQuantiTectプライマーアッセイQiagenを用いて測定された。星状細胞含量を評価するために、マーカーのアクアポリン4がMm_Aqp4_1_SGのQuantiTectプライマーアッセイQiagenを用いて測定された。オリゴデンドロサイトの含量を評価するために、マーカーのSOX10がMm_Sox10_2_SGのQuantiTectプライマーアッセイQiagenを用いて測定された。ニューロン含量を評価するために、マーカーSNAP25はMm_Snap25_2_SGのQuantiTectプライマーアッセイQiagenを用いて測定された。ミクログリア含量を評価するために、マーカーCD68がMm_CD68_1_SGのQuantiTectプライマーアッセイQiagenを用いて測定された。全ての反応は、鋳型RNAまたは限られた入手可能な出発材料の場合には2ngを約10ngで使用され、製造元の指示に従った。RT-PCR反応はストラタジーン社MX3000PPCRシステムで、96ウェルプレート中で行った。RNAのマイクロアレイ解析については、RNA濃度が、分光光度計光度計ND-1000を用いて測定された。全RNAが二本鎖DNAを合成するために使用され、標準的な手順を用いて、標識cRNAを生成する蛍光色素の存在下でインビトロ転写を行った。Cy5標識試験サンプルのRNA及びCy3標識ユニバーサルマウスの参照RNAが、自動化された装置テカンを使用して、商用のAgilent全マウス遺伝子発現アレイ4x44KをWMGに同時にハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーション後、アレイは、洗浄され、スキャンした画像は、特徴抽出ソフトウェアAgilentで処理された。得られたデータは、生物分析ソフトウェアPartekGenomicSuiteと他の自動化されたマイクロアレイ解析を用いて解析された。定量的RT-PCRが、上記の最上位の2つの結果を確認するために用いられた。RT-PCRは上記のように、しかし以下のプライマーQiagenからすべてで実行された:LRP8:QT00156100、及び比較目的のためにLRP1:QT00155981。結果を図2B-2Dに示す。一方、多数の低密度リポタンパク質受容体ファミリーのメンバーが、成体マウスの血液脳関門の内皮細胞を精製で高度に発現されたが、唯一LRP8が脳血管内皮細胞に高発現を、肺/肝細胞に最小発現を示した2B-1から図2B-3。更に、この高発現は、胎仔、仔、成体サンプル図2C-1、2C-2で一貫して発見されたが、肺/肝臓での発現は、すべての時点にわたり常に最小限に抑えられた。これらのマイクロアレイの結果は、これらのマイクロアレイヒットの最良の2つ、LRP8及び比較目的のLRP1に特異的なプライマーを用いて、qRT-PCRにより確認した図2D。LRP1は肺/肝細胞に比べて脳血管内皮細胞により高度に発現していたが、肺/肝細胞におけるLRP8の発現が事実上無かったが、肺/肝細胞内でLRP1の有意な発現は、LRP8がBBB特異的ターゲティング及びBBBを通過してCNSへの輸送を追求するために同定された分子間の好ましい選択肢であることが示唆された。実施例2:血管内皮細胞におけるLRP8発現の局在前の例では、LRP8が高度に特異的にBBBの内皮細胞上に発現し、LRP8を発現するファージは、インビトロでD3細胞単層を横切って移行することができることを示した。LRP8の役割と、それが治療的送達のために利用されるかもしれないかどうかをより良く理解するため、細胞や組織サンプルにおけるLRP8の局在を決定するために実験が行われた。A入手可能な抗LRP8抗体の同定と特徴付け異なる市販のモノクローナルおよびポリクローナル抗LRP8抗体の結合の調査が、標準的な技術を用いたウェスタン分析によって行われ、精製された状態で、またはタンパク質の複合混合物すなわち細胞ライセートでLRP8を認識することができる1つ以上の抗体を同定した。組換えヒトApoER2RDSystems社3520-ARが1Xの還元剤でインビトロジェンLDSサンプルバッファー中に希釈され、10ng、3ng、1ng、及び0.3ngで10のビス-トリスNupage15穴ゲルInvitrogenNP0303BOXへ負荷された。ゲルは室温で50分間、MOPS緩衝液で泳動され、その後、iBlotシステムミリポア社へ移され、ブロッキング緩衝液Invitrogenで2時間ブロッキングした。一ブロット図3A、左のパネルは、一次抗体として、1:500の希釈2.0μg/mlで、マウス抗ApoER2モノクローナル抗体Abcamab58216と共に、回転体上4°Cで48時間インキュベートされた。洗浄後、ブロットを室温で2時間1:2000の希釈でヒオチンXX抗マウス二次抗体とインキュベートした。もう一つのブロット図3A、中央パネルは、ウサギ抗ApoER2ポリクローナル一次抗体Invitrogen40から7800と共に回転体上4°Cで48時間インキュベートされた。洗浄後、ブロットを室温で2時間1:2000希釈ビオチンXX抗ウサギ二次抗体とインキュベートした。第三ブロット図3A、右パネルを1:5002.0μg/mlでの希釈度回転体上のでマウス抗LRP8ポリクローナル一次抗体AbnovaH00007804-A01と共に4°Cで48時間インキュベートした。洗浄後、ブロットを室温で2時間1:2000希釈ビオチンXX抗マウス二次抗体とインキュベートした。すべてのブロットは、InvitrogenQdot625ストレプトアビジンコンジュゲートを使用して開発された。図3Aは、テストした3つの抗体のLRP8の中でも最も高感度な検出が一番左のブロットで観察されたことを示す。Abcam抗LRP8抗体が細胞溶解物中LRP8を検出することができたかどうかを評価するために、更なるウェスタンブロット実験を行った。D3細胞は、継代30までT175フラスコ中で増殖され、細胞が掻き取られ、PBSで洗浄し、ピペットチップを介して浸漬することによって200μlの溶解緩衝液20mMリン酸ナトリウム、500mMの塩化ナトリウム、2mMのMgCl2、4mMのOG、1X完全を添加して溶解した。サンプルを10分間70,000rpmで遠心分離し、清澄は100μlの7M尿素、0.1MのNaH2PO4、100mMのトリス-HCl、2mMのMgCl2に加えた。この混合物に0.5μlの1MのMgCl2および0.5μlベンゾナーゼヌクレアーゼが添加され、その後、ボルテックスし、20°Cで10分間、7万rpmで遠心分離した。得られたペレットを尿素に溶解し、抽出液と溶解液は、1x還元剤でインビトロジェンLDSサンプルバッファー中に希釈した。サンプルは様々な量で、10ng、3ng、1ng、及び0.3ngの組換えヒトApoER2、10μgの可溶化液mBR/293、図3Bまたは36μgの可溶化液hu-胎盤/mBR/293、図3Cを含み、4-12NuPageビス-トリスゲルInvitrogenにロードされた:ゲルは室温で50分、200VでMOPS緩衝液で泳動され、iBlotシステムMillipore中のニトロセルロースに移され、ブロッキング緩衝液Invitrogenを用いて1時間ブロックされた。ブロットを4°Cで1:500に希釈した一次抗体アブカム抗ApoER258216の1μg/mlで一晩インキュベートし、その後、室温で4時間1:2000希釈した二次抗体ビオチンXX抗マウスでインキュベートした。ブロットは、InvitrogenQDot625ストレプトアビジンコンジュゲートを使用して開発された。データは明らかにD3の細胞株にLRP8の存在を示している図3Bおよび3Cを参照。細胞溶解物中LRP8を検出するための抗体の特定の能力は類似のアッセイを用いて決定され、そこではヒト臍帯静脈内皮細胞HUVEC、ヒト脳微小血管内皮細胞HBMECのサンプルはトリトン溶解バッファーで、4°Cで30分間、プロテアーゼ阻害剤の存在下完全ミニEDTAフリープロテアーゼ阻害剤錠剤、Roche社で溶解された。一次抗ApoER2抗体2μg/mlのZymed40-7800;0.3μg/mlのNovusNB100-41391とのインキュベーションは4°Cで一晩起きることが許可され、二次抗体抗ヤギまたは西洋ワサビペルオキシダーゼに結合した抗ウサギ抗体が室温で1時間インキュベートされた。感受性の異なる細胞抽出物の両方でLRP8を検出することができるいくつかの市販の抗体が同定され図3B-3Dを参照、そのうちのいくつかは、ヒトとマウスLRP8両方を特異的に認識した例えば図3B及び3Cを参照。これらの特性マウスモノクローナル抗ヒトApoER2、Abcam58216で同定された一抗体が、製造元の指示に従って、Cy5標識キットAmershamを用いて蛍光色素Cy5で標識した。標準的なELISAアッセイが、1μg/mlの組換えヒトApoER2でコーティングしたウェルでプレートを用いて行われ、種々の濃度の抗ApoER2が、一晩4°Cで結合することを認められた。プレートを洗浄し、1:10,000希釈で、西洋ワサビペルオキシダーゼをコンジュゲートさせた二次抗マウスIgG抗体で処理し、プレートが読み取られた。結果により、この特定の抗ApoER2抗体についてのIC50は68ng/mlであったことが示された。抗体が、ApoER2への結合に対してRAPと競合するかどうかを判断するために、別のELISAが上記のように行われたが、抗ApoER2の濃度を変化させる代わりに、様々な量の組換えヒトRAPの量の存在下または非存在下で、一貫して1μg/mlの抗ApoER2が使用された。具体的には、Nunc-ImmunoTMポリスチレンマキシソープ96穴プレートNUNCが、PBS中の1μg/mlの組換えヒトApoER2RDSystems3520-ARを100μl/ウェルにて、4°Cで一晩、被覆された。5粉ミルクBioRad170-0604のT-PBS0.1のTween-20Sigma93773-250Gの200マイクロリットルが、室温で2時間、各ウェルに添加された。洗浄緩衝液で洗浄した後、ヒトRAPInnovativeResearchIRAPが添加され50μl/ウェル、1MPT-PBS中に0.003-2.0μg/ml、室温で30分間プレインキュベートした。抗ApoER2アブカム58216が添加され50μl/ウェルへ1MPT-PBS中1μg/mlの最終濃度に、プレートが4°Cで一晩インキュベートされた。ウェルが、以前と同様に洗浄され、1MPT-PBS中のHRPコンジュゲート抗マウスIgGSigma-9044100μl/ウェルが、製造元が推奨する希釈に従って各ウェルに添加され、ウェルはTMB基質キットPierce34021を用いて開発された。450nmでの光学密度がVersamaxリーダーを用いて測定された。図3Eに示すように、このアッセイにおいて、この抗体とrhRAP間で全く競争は観察されなかった。B.内皮細胞内および種々の組織におけるLRP8分布の解析免疫細胞化学的および免疫組織化学的分析が、異なる起源からのヒト血管内皮細胞や組織でのLRP8の分布を評価するために行われた。1.HUVEC免疫細胞化学的解析がヒト血管内皮細胞上LRP8の分布を評価するために行われた。簡単に言えば、HUVEC細胞は、約5000細胞/cm2の密度まで増殖させた。細胞は4PFAで固定され、PBSで2回洗浄し、次いで、5BSA0.3Triton-X100のPBSで室温で30分間、ブロックされた。一次抗LRP8抗体Zymed40-7800;SantaCruz10112が、1:100で1BSA0.3Triton-X100中の細胞に加えられ、室温で2時間インキュベートした。細胞をPBSで2回洗浄し、適切な二次抗ヤギIgGまたは抗ウサギIgG抗体Alexaが1BSA0.3Triton-X10中に1:1000で加えられた。免疫蛍光をAxioplan2イメージングZeissで観察した。図4Aに示すように、透過性HUVECにおいてLRP8染色は断続するように見えたが、すべての細胞での一貫性のある染色が観察された。しかしこれらの実験は、上記のように、PBSによる洗浄前に、5nM、25nM又は125nMのLRP8リガンドのリーリンUSBiologicalsによる37°Cで30分間の処理と、その後の固定と免疫標識を施されたHUVECで繰り返された。未処理HUVECは、任意の濃度のリーリンで前処理されていたHUVECと同じ染色パターンを表示し、リーリンは、HUVECでLRP8局在に影響を与えなかったことを示す図4C。2.hCMEC/D3と一次ヒト脳血管内皮細胞コラーゲン被覆カバーガラス上でコンフルエンスまで増殖した、一次ヒト脳血管内皮細胞CellSystemsとhCMEC/D3細胞の単層は、メタノールで-20°Cで10分間固定された。細胞は1.5BSAを含む1×PBSで室温で1時間インキュベートし、0.1TritonX-100で1×PBSで10分間透過処理され、SigmaA3481またはAbcamab52905から入手したウサギ抗ヒトApoER2抗体と共に室温で1時間インキュベートした。細胞は1×PBSで15分間洗浄に施され、その後、室温で1時間、ヤギ抗ウサギIgG-AlexaFlour4881:200,Invitrogen1:200、Invitrogenでインキュベートした。細胞を30分間1XPBSで洗浄し、カバーガラスにUltraCruzの蛍光封入剤SantaCruzにマウントされ、蛍光顕微鏡により分析された。結果を図4Bに示す。両方の画像がLRP8の膜と小胞の分布を示し、発現レベルは不死化細胞株左パネルに比べて初代細胞右パネルの方が高い。3.マウスとヒトの脳組織同様の研究を、マウスの脳組織で実施した。まず、インビトロでの組織内LRP8可視化を評価した。実験は以下のように行った。C57BL6マウスから脳を採取し、PBSで灌流し、4°Cで48時間4PFAで固定した。組織は、その後、4°Cで24時間、30ショ糖溶液中でインキュベートした。一次ウサギ抗ヒト抗体LRP840から7800をZymed社と抗CD31抗体BDBiosciencesを1:500希釈でそれぞれ添加し、4°Cで一晩インキュベートした。組織は、PBSを複数回変更して洗浄し、二次抗ウサギまたは抗ヤギIgG抗体Alexaは1:200の希釈で添加され、サンプルを室温で2時間インキュベートした。免疫蛍光画像が可視化され、Axioplan2イメージング顕微鏡およびソフトウェアZeissで評価された。図4Dに示すように、LRP8染色はCD31染色と共局在していた。CD31は、既知の血管内皮細胞マーカーであるので、これはLRP8がインビボで、このような細胞に発現していることを示唆し、そのLRP8染色は、血液脳関門で見つけられるようにCD31陽性血管内皮細胞に特異的である。全身的に投与される抗LRP8抗体が脳内で検出される可能性があるかどうかを決定するために、マウスに標識抗体を静脈内注射し、脳内の抗体の存在を評価した。簡単に説明すると、マウスに、2.5mg/kgの用量でAlexa488コンジュゲート抗LRP8抗体AbcamまたはAlexa488コンジュゲート制御免疫グロブリンが、静脈尾静脈を介して注入された。1時間後、マウスをPBSで灌流し、脳を摘出し、すぐに固定せずに凍結した。脳はクライオスタット上に40ミクロンの切片切片にされ、その切片ははフルオロゴールドでスライド上にマウントされた。免疫蛍光画像が可視化され、Axioplan2イメージング顕微鏡およびソフトウェアZeissで評価された。図4Eに示すように、染色はほとんど全くコントロール抗体像左パネルで観察されなかったが、有意な染色は抗LRP8抗体画像右パネルで観察された。血管がひどく血液脳関門におけるLRP8の存在のために期待されるように染色されたが、しかし有意な染色もまた斑点状のパターンで脳組織全体で観察された。これは、尾静脈注射によって投与、抗LRP8抗体が循環して、マウスの脳にBBBを横切って輸送されたことを示す。図4Fに示す免疫組織化学データは、間接免疫蛍光法により標識した、死体解剖から得た大脳皮質領域由来の固定されていないヒト脳組織の凍結切片を用いて実施した。連続した2段階のインキュベーションは、Alexa555MolecularProbes社とコンジュゲートアフィニティー精製ヤギ抗ウサギIgGHLを含むウサギポリクローナル抗LRP8抗体Sigmaを検出するために使用された。切片化、染色、蛍光顕微鏡法は、細胞核を識別するために、DAPI染色とともに標準的な手順に従って行った。血管と一致するLRP8の染色は容易に検出された。実施例3:インビトロ血管外移動アッセイ前の例では、LRP8が高度かつ特異的に、インビトロ及びインビボの両方で血液脳関門における血管内皮細胞上に発現されることを実証している。血管内皮細胞層を横切って関連するタンパク質を移行することLRP8の能力を評価するために、血管外移動アッセイを行った。実験のセットアップを図5Aに模式的に説明する。簡単に言えば、hCMEC/D3細胞を、10μg/mlのコラーゲンラット尾部コラーゲン1型35436の0.02N酢酸中でプレコートされた12穴培養プレート上で1.1平方センチメートルの増殖領域を持つコーニング0.4μmのトランスウェル3460を使用して、トランスウェルプレートに播種した。細胞は、0.5ml/ウェル1.5ミリリットル側低の総量中に、12.5ヒト血清および2.2μMのヒドロコルチゾンSigmaH0888を含む静止培地EGM2基本培地;LonzaCC-4176に2.5x104細胞/mlの密度で播種された。培地は3日目と6日以降に変更された。細胞は8日目でコンフルエントであった。Cy5標識抗LRP8抗体はCy5のモノクローナル抗体ラベリングキットAmershamPA35001を用いて調製し、トランスウェルプレートの頂端側に500μlの培地中0.23mg/mlの濃度に添加した。Cy5標識コントロール抗体抗IL1βが同様に同じキットを用いて調製され、また、頂端側に追加された。血管外移動実験では、抗LRP8-Cy5の抗体0.01μMの最終濃度は1.5μg/mlまたは抗LRP8-Cy5抗体は、組換えヒトApoER2の10倍過剰最終濃度0.11μM、/10μg/mlで予め混合され、トランスウェルの頂端側のD3細胞に添加した。2つのタイプのトランスウェルのセットアップが評価された:高密度孔フィルター及び低密度孔フィルター。抗IL1β-Cy5の抗体コントロールは同一濃度を用いて行った。D3細胞を欠いたフィルターのみのコントロールコラーゲンをコートしたが、バックグランド輸送を測定するために使用された。トランスウェルプレートの基底側からの培地のアリコート100μlが、様々な時間間隔で除去され、エンビジョン蛍光リーダーDakoCytomationを用いた抗LRP8と抗IL1β含有量が、側底チャンバーへのサンプルの交換の前に96ウェル黒色プレート中で620nmの励起波長および685nmの発光波長を使用して測定された。図5Bの結果は、抗LRP8抗体がD3細胞層を越えて遊出し、この遊出は過剰な可溶性LRP8競合者の存在下で減少したことを示す。D3細胞層を通過する抗IL1β抗体の輸送はほとんど観察されなかった。これらの結果は明らかに、輸送を促進するためのこの系におけるLRP8に対する特異的結合の必要性を示唆している。図5Cは、実施例2のELISA法と同様に実行されたELISA実験を示している。プレートを100μl/ウェルの体積になるようにPBSに希釈された1μg/mlの組換えヒトApoER2RDSystems社3520-ARで被覆し、4°Cで一晩インキュベートした。ウェルをT-PBS0.1のTween-20、シグマ93773-250Gに希釈した200μlの5粉乳BioRad社170から6404の添加によりブロックし、プレートを室温で2時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、抗LRP8-Cy5を含有する上記実験からの側底媒体100μl/ウェルが、LRP8を添加又は添加せずに、加えられ、4°Cで一晩インキュベートした。ウェルを洗浄し、1MPT-PBSに希釈されたHRP標識抗マウスIgGシグマ-9044が100μl/ウェル追加された。プレートは、製造元の指示に従って、TMB基質キットPierce34021を使用して開発され、VersaMaxリーダーMolecularDevicesにおいて450nmで測定された。結果図5Cは、図5Bのデータと一致し、抗LRP8抗体はD3細胞層を横切って輸送され、さらに可溶性LRP8との競争が存在しない場合、より多くの量の抗LRP8抗体が、D3細胞層を横切って輸送されることを示している。LRP8の10倍過剰による頂端サンプルの低い観測値は、ELISAアッセイでの干渉によるものである。実施例4:インビボでの血管外移動アッセイ前の実施例では、抗LRP8抗体がLRP8に結合し、インビトロでBBBを通過して移動していることを実証している。実験はマウスモデルにおけるインビボでの単回静脈内投与後の標識抗LRP8抗体の組織分布を評価するために行われる。簡単に言えば、LRP8に結合しない131I-標識コントロール抗体の存在下または非存在下で、C57BL/6マウスに125I標識抗LRP8を注射する。各グループの2つのマウスは注射後30分、1時間、4時間、12時間および24時間の時点で屠殺され、血液や組織は、各標識の存在と量の分析のために収集される。前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示および実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。すべての特許および本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。"