"配列表の配列番号1に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。配列表の配列番号2に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。配列表の配列番号3に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。配列表の配列番号4に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。配列表の配列番号5に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。配列表の配列番号1乃至5のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列のうち少なくとも3000の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。配列表の配列番号1乃至5のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列のうち少なくとも2000の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。配列表の配列番号1乃至5のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列のうち少なくとも1500の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。請求項1乃至8のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列に対して95以上相同性を有するポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。請求項1乃至8のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列に対して99以上相同性を有するポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。請求項1乃至10のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列を二分子以上含むポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。請求項1乃至10のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列を二種以上含むことからなる、ポリヌクレオチド。請求項1乃至12のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列を含むことからなる、外来遺伝子発現ベクター。外来遺伝子にコードされる蛋白質が多量体蛋白質である、請求項13に記載の外来遺伝子発現ベクター。外来遺伝子にコードされる蛋白質がヘテロ多量体蛋白質である、請求項14に記載の外来遺伝子発現ベクター。外来遺伝子にコードされる蛋白質が抗体又はその機能性断片である、請求項15に記載の外来遺伝子発現ベクター。請求項13乃至16のいずれか一つに記載の外来遺伝子発現ベクターが導入された形質転換細胞。細胞が哺乳動物由来の培養細胞である、請求項17に記載の形質転換細胞。哺乳動物由来の培養細胞が、COS-1細胞、293細胞、及びCHO細胞からなる群から選択されるいずれか一つの細胞である、請求項18に記載の形質転換細胞。外来遺伝子にコードされる蛋白質が多量体蛋白質である、請求項17乃至19のいずれか一つに記載の形質転換細胞。外来遺伝子にコードされる蛋白質がヘテロ多量体蛋白質である、請求項20に記載の形質転換細胞。外来遺伝子にコードされる蛋白質が抗体又はその機能性断片である、請求項21に記載の形質転換細胞。請求項17乃至22のいずれか一つに記載の形質転換細胞を培養し、培養物から該外来遺伝子にコードされた蛋白質を取得することを特徴とする、該蛋白質の製造方法。請求項1乃至12のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド、又は請求項13乃至16のいずれか一つに記載の外来遺伝子発現ベクターを使用することを特徴とする、該外来遺伝子又は該ベクターが導入された形質転換細胞における該外来遺伝子の発現を亢進させる方法。形質転換細胞において外来遺伝子の発現を亢進させることを目的とする、請求項1乃至12のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列の使用。上記に挙げたように、調節ポリヌクレオチド配列であるDNAエレメントの種類はいまだ少なく、さらにその中でも外来遺伝子の高い発現亢進効果を有するDNAエレメントは極めて少ない。本発明の目的は、外来遺伝子発現ユニットが導入された遺伝子座周辺のクロマチン構造変化を伴う等により転写活性化を促進するDNAエレメントを用いることで、哺乳動物細胞が安定的に高発現を達成する手段を提供することにある。本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、哺乳動物培養細胞において特定の1種又は2種以上のDNAエレメントを用いて、発現対象となる外来蛋白質の分泌生産性を向上させることが可能であることを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は以下の発明を包含する。1配列表の配列番号1に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。2配列表の配列番号2に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。3配列表の配列番号3に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。4配列表の配列番号4に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。5配列表の配列番号5に記載のポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。6配列表の配列番号1乃至5のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列のうち少なくとも3000の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。7配列表の配列番号1乃至5のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列のうち少なくとも2000の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。8配列表の配列番号1乃至5のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列のうち少なくとも1500の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。91乃至8のいずれか一つに記載のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド配列に対して95以上相同性を有するポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。101乃至8のいずれか一つに記載のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド配列に対して99以上相同性を有するポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。111乃至10のいずれか一つに記載のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド配列を二分子以上含むポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。121乃至10のいずれか一つに記載のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド配列を二種以上含むことからなる、ポリヌクレオチド。131乃至12のいずれか一つに記載のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド配列を含むことからなる、外来遺伝子発現ベクター。14外来遺伝子にコードされる蛋白質が多量体蛋白質である、13に記載の外来遺伝子発現ベクター。15外来遺伝子にコードされる蛋白質がヘテロ多量体蛋白質である、14に記載の外来遺伝子発現ベクター。16外来遺伝子にコードされる蛋白質が抗体又はその機能性断片である、15に記載の外来遺伝子発現ベクター。1713乃至16のいずれか一つに記載の外来遺伝子発現ベクターが導入された形質転換細胞。18細胞が哺乳動物由来の培養細胞である、17に記載の形質転換細胞。19哺乳動物由来の培養細胞が、COS-1細胞、293細胞、及びCHO細胞からなる群から選択されるいずれか一つの細胞である、18に記載の形質転換細胞。20外来遺伝子にコードされる蛋白質が多量体蛋白質である、17乃至19のいずれか一つに記載の形質転換細胞。21外来遺伝子にコードされる蛋白質がヘテロ多量体蛋白質である、20に記載の形質転換細胞。22外来遺伝子にコードされる蛋白質が抗体又はその機能性断片である、21に記載の形質転換細胞。2317乃至22のいずれか一つに記載の形質転換細胞を培養し、培養物から該外来遺伝子にコードされた蛋白質を取得することを特徴とする、該蛋白質の製造方法。241乃至12のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド、又は13乃至16のいずれか一つに記載の外来遺伝子発現ベクターを使用することを特徴とする、該外来遺伝子又は該ベクターが導入された形質転換細胞における該外来遺伝子の発現を亢進させる方法。25形質転換細胞において外来遺伝子の発現を亢進させることを目的とする、1乃至12のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列の使用。本発明によれば、DNAエレメントを用いた外来遺伝子発現ベクターを哺乳動物宿主細胞へ導入することによって、治療用蛋白質や抗体等の外来遺伝子の発現が著しく亢進することが可能になる。以下、実施例により本発明を具体的に説明する。ただし、これらの実施例は本発明の技術的範囲をなんら限定するものではない。本発明で実施例で用いるプラスミド、制限酵素、DNA修飾酵素等は市販のものであり、常法に従って使用することが出来る。また、DNAのクローニング、ポリヌクレオチド配列の決定、宿主細胞の形質転換、形質転換宿主細胞の培養、得られえる培養液からの抗体の取得、精製等に用いた操作についても当業者によく知られているものであるか、文献により知ることが出来るものである。本明細書中において、遺伝子という語には、DNAのみならずそのmRNA、cDNA及びそのRNAも含まれるものとする。本明細書中において、ポリヌクレオチドという語は核酸と同じ意味で用いており、DNA、RNA、プローブ、オリゴヌクレオチド、及びプライマーも含まれている。本明細中においては、ポリペプチドと蛋白質は区別せずに用いている。本明細書中において、遺伝子発現という語は、ある遺伝子からmRNAが転写される現象、及び/又は該mRNAから蛋白質が翻訳される現象を意味している。本明細書中において、外来遺伝子という語は、人工的に宿主細胞に導入される遺伝子を意味している。本明細書中において、外来蛋白質という語は、外来遺伝子にコードされる蛋白質を意味している。本明細書中においては、遺伝子発現ユニットという語は、転写の読み枠の方向に、少なくともプロモーター領域、外来遺伝子、転写ターミネーター領域ポリA付加シグナルを有するポリヌクレオチドを意味している。本明細書中において外来遺伝子発現亢進活性とは、外来遺伝子を含む遺伝子発現ユニット周辺DNAに転写、翻訳に有利な環境を作り出し、転写、翻訳効率を大きく向上させることにより、外来蛋白質の宿主細胞における生産を亢進させる活性をいう。本明細書中においてDNAエレメントという語は、遺伝子発現ユニットの近傍又は、遺伝子発現ユニットの含まれる外来遺伝子発現ベクター上に配置された場合に、外来遺伝子発現亢進活性を有するポリヌクレオチドを意味する。本明細書中においては、抗体の機能性断片とは、抗原との結合活性を有する抗体の部分断片を意味しており、Fab、Fab’2等を含むが、抗原との結合能を有している限りこれらの分子に限定されない。1.外来遺伝子の発現亢進に使用されるDNAエレメント本発明におけるDNAエレメントは、実施例1に示されるように、アセチル化ヒストンH3との相互作用を指標として取得することが可能である。一般にヒストンH3、H4のアセチル化は転写の活性化に関与しているといわれており、主に2つの説が考えられている。ヒストンテールがアセチル化することで電荷的に中和され、DNAとヒストンとの結合が緩くなるというヌクレオソームの立体構造変化が関係している説MellorJ.2006Dynamicnucleosomesandgenetranscription.TrendsGenet.226:320-329と、様々な転写因子のリクルートに関与するという説NakataniY.2001Histoneacetylases-versatileplayers.GenesCells.62:79-86である。いずれの説においても、ヒストンのアセチル化が転写活性化に関与している可能性は高く、抗アセチル化ヒストンH3抗体を用いたクロマチン免疫沈降ChromatinImmunoprecipitation;ChIPによって、アセチル化ヒストンH3と相互作用するDNAエレメントを濃縮することが可能である。本発明において、外来遺伝子の発現亢進に使用されるDNAエレメントの1つとして、A2を挙げることができる。A2はヒト15番染色体80966429~80974878に位置しており、AT含量62.2、8450bpのポリヌクレオチド配列である。A2のポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号1に記載されている。同様のDNAエレメントとして、A7、A18、B5、C14を挙げることができる。A7はヒト11番染色体88992123~89000542に位置しており、AT含量64.52、8420bpの配列である。A7のポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号2に記載されている。A18は、ヒト4番染色体111275976~111284450に位置しており、AT含量62.54、8475bpの配列である。A18のポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号3に記載されている。B5は、ヒト1番染色体143034684~143043084に位置しており、AT含量66.37、8401bpの配列である。B5のポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号4に記載されている。最後に、C14は、ヒト11番染色体46089056~46097482に位置しており、AT含量63.81、8427bpの配列である。C14のポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号5に記載されている。本発明において、DNAエレメントの有する外来遺伝子発現亢進活性は、SEAP等のレポーター遺伝子にコードされる蛋白質の活性を指標として検定することが可能である。該DNAエレメントが存在しない場合と比較して、レポーター蛋白質の活性が好ましくは2倍以上、より好ましくは4倍以上、さらに好ましくは5倍以上に上昇した場合、該DNAエレメントが外来遺伝子発現亢進活性を有すると判断することができる。2倍程度以上の亢進によっても、細胞の培養スケールの削減、及び培養時間の短縮が期待され、結果として収量の向上と培養コストの削減が可能となる。収量が向上すれば、医薬としての外来蛋白質を安定して供給することが可能となる。又、培養コストが削減されれば、医薬としての外来蛋白質の原価が軽減され、外来蛋白質を投与される患者の金銭的負担も軽減される。本発明においては、上記DNAエレメントのいずれか1種を単独で使用しても良く、DNAエレメントの1種を2コピー以上使用しても良い。あるいは2種以上DNAエレメントを組み合わせて使用しても良い。本発明において使用されるDNAエレメントの好ましい例として、A2、A7、A18、B5、C14が挙げることができる。本発明において使用されるDNAエレメントは、配列番号1乃至5に示すポリヌクレオチド配列に対して80以上の相同性を有するポリヌクレオチド配列からなり、かつ外来遺伝子発現亢進活性を有するポリヌクレオチド配列であっても良い、上記80以上の相同性は、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、最も好ましくは99以上の相同性をいう。ポリヌクレオチド配列のホモロジー検索は、例えば、日本DNAデータバンクDNADatabankofJAPAN等を対象に、FASTAやBLAST等のプログラムを用いて行うことができる。本発明に使用されるDNAエレメントは、配列番号1乃至5に記載のポリヌクレオチド配列からなる群から選択されるいずれか一つのポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ外来遺伝子発現亢進活性を有するDNAエレメントであってもよい。ここで、ストリンジェントな条件とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。例えば、相同性が高いポリヌクレオチド配列、すなわち配列番号1乃至5に記載されているポリヌクレオチド配列からなる群から選択されるいずれか一つのポリヌクレオチド配列と80以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、最も好ましく99以上の相同性を有するポリヌクレオチド配列からなる核酸の相補鎖がハイブリダイズし、それより相同性が低いポリヌクレオチド配列からなる核酸の相補鎖がハイブリダイズしない条件を挙げることができる。より具体的には、ナトリウム塩濃度が15~750mM、好ましくは50~750mM、より好ましくは300~750mM、温度が25~70°C、好ましくは50~70°C、より好ましくは55~65°C、ホルムアミド濃度が0~50、好ましくは20~50、より好ましくは35~45での条件をいう。さらに、ストリンジェントな条件では、ハイブリダイゼーション後のフィルターの洗浄条件が、通常はナトリウム塩濃度が15~600mM、好ましくは50~600mM、より好ましくは300~600mM、温度が50~70°C、好ましくは55~70°C、より好ましくは60~65°Cである。当業者であれば、MolecularCloningSambrook,J.etal.,MolecularCloning:aLaboratoryManual2nded.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,10SkylineDrivePlainview,NY1989等を参照することにより、こうしたホモログ遺伝子を容易に取得することができる。また、上記のポリヌクレオチド配列の相同性は、同様に、FASTA検索やBLAST検索により決定することができる。上記ポリヌクレオチド配列の変異欠失、置換、及び/又は付加の導入は、Kunkel法若しくはGappedduplex法等の当該技術分野で公知の手法、又はこれに準ずる方法により行うことができ、例えば部位特異的突然変異誘発法を利用した変異導入用キット例えばMutant-Kタカラバイオ社製若しくはMutant-Gタカラバイオ社製、タカラバイオ社のLAPCRinvitroMutagenesisシリーズキット等が利用できる。このような変異ポリヌクレオチドも本発明のDNAエレメントとして使用することができる。本発明のDNAエレメントとしては、配列表の配列番号1乃至5のいずれか一つに記載のポリヌクレオチド配列のうち、少なくとも3000、あるいは、少なくとも2000の連続するヌクレオチドからなる部分断片を使用することができる。このような部分断片の例としては、A2の部分断片であるA2-1乃至A2-17、A7の部分断片であるA7-1乃至A7-18、A18の部分断片であるA18-1乃至A18-4、B5の部分断片であるB5-1乃至B5-6、又はC14の部分断片であるC14-1乃至C14-14を挙げることができるが、外来遺伝子発現亢進活性を有している限りこれらの部分断片に限定されない。本発明においては、上記部分断片のいずれか1種を単独で使用しても良く、部分断片の1種を2コピー以上使用しても良い。あるいは2種以上部分断片を組み合わせて使用しても良い。また、各DNAエレメントの全長配列と部分断片を組み合わせて使用しても良い。該組み合わせにおいて、部分断片は、組合せを構成する全長配列のDNAエレメント由来であっても、異なる全長配列のDNAエレメント由来であっても良い。A2の各断片のポリヌクレオチド配列においては、A2-1は配列表の配列番号1の1乃至3000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-2は配列表の配列番号1の2801乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-3は配列表の配列番号1の5401乃至8450番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-4は配列表の配列番号1の701乃至2700番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-5は配列表の配列番号1の701乃至2200番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-6は配列表の配列番号1の701乃至3700番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-7は配列表の配列番号1の2001乃至5000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-8は配列表の配列番号1の4001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-9は配列表の配列番号1の1乃至3700番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-10は配列表の配列番号1の2001乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-11は配列表の配列番号1の2801乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-12は配列表の配列番号1の701乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-13は配列表の配列番号1の2001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-14は配列表の配列番号1の2801乃至8450番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-15は配列表の配列番号1の1乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-16は配列表の配列番号1の701乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてA2-17は配列表の配列番号1の2001乃至8450番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。A7の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、A7-1は配列表の配列番号2の601乃至3600番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-2は配列表の配列番号2の3601乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-3は配列表の配列番号2の5401乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-4は配列表の配列番号2の3401乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-5は配列表の配列番号2の1501乃至4500番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-6は配列表の配列番号2の4401乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-7は配列表の配列番号2の2401乃至5400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-8は配列表の配列番号2の1乃至3600番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-9は配列表の配列番号2の1501乃至5400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-10は配列表の配列番号2の2401乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-11は配列表の配列番号2の3401乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-12は配列表の配列番号2の4401乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-13は配列表の配列番号2の1乃至5400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-14は配列表の配列番号2の1501乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-15は配列表の配列番号2の2401乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-16は配列表の配列番号2の3401乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-17は配列表の配列番号2の1乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてA7-18は配列表の配列番号2の1501乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。A18の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、A18-1は配列表の配列番号3の1乃至5040番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A18-2は配列表の配列番号3の1001乃至6002番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A18-3は配列表の配列番号3の2001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてA18-4は配列表の配列番号3の3000乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。B5の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、B5-1は配列表の配列番号4の1乃至4001番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-2は配列表の配列番号4の1乃至3200番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-3は配列表の配列番号4の2491乃至5601番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-4は配列表の配列番号4の5373乃至8401番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-5は配列表の配列番号4の901乃至4001番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてB5-6は配列表の配列番号4の4001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。C14の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、C14-1は配列表の配列番号5の960乃至4015番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-2は配列表の配列番号5の1987乃至5014番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-3は配列表の配列番号5の4020乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-4は配列表の配列番号5の960乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-5は配列表の配列番号5の960乃至6011番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-6は配列表の配列番号5の4939乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-7は配列表の配列番号5の960乃至5014番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-8は配列表の配列番号5の2994乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-9は配列表の配列番号5の4020乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-10は配列表の配列番号5の1乃至5014番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-11は配列表の配列番号5の1987乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-12は配列表の配列番号5の2994乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-13は配列表の配列番号5の960乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてC14-14は配列表の配列番号5の1987乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。2.ポリヌクレオチドの取得本発明において、後記の産生亢進の対象となる外来蛋白質をコードする外来遺伝子を含むポリヌクレオチドは、以下に示す一般的な方法により取得することができる。例えば、外来遺伝子が発現している細胞や組織に由来するcDNAライブラリーを、当該遺伝子断片をもとにして合成したDNAプローブを用いてスクリーニングすることにより単離することができる。mRNAの調製は、当該技術分野において通常用いられる手法により行うことができる。例えば、上記細胞又は組織を、グアニジニン試薬、フェノール試薬等で処理して全RNAを得、その後、オリゴdTセルロースカラムやセファロース2Bを担体とするポリU-セファロース等を用いたアフィニティーカラム法により、あるいはバッチ法によりポリARNAmRNAを得る。さらに、ショ糖密度勾配遠心法等によりポリARNAをさらに分画してもよい。次いで、得られたmRNAを鋳型として、オリゴdTプライマー及び逆転写酵素を用いて一本鎖cDNAを合成し、該一本鎖cDNAからDNA合成酵素I、DNAリガーゼ及びRNaseH等を用いて二本鎖cDNAを合成する。合成した二本鎖cDNAをT4DNA合成酵素によって平滑化後、アダプター例えば、EcoRIアダプターの連結、リン酸化等を経て、λgt11等のλファージに組み込んでinvivoパッケージングすることによってcDNAライブラリーを作製する。また、λファージ以外にもプラスミドベクターを用いてcDNAライブラリーを作製することもできる。その後、cDNAライブラリーから目的のDNAを有する株ポジティブクローンを選択すればよい。また、蛋白質の産生亢進に用いる上記DNAエレメント、又は外来遺伝子を含むポリヌクレオチドをゲノムDNAから単離する場合、あるいは、プロモーター、ターミネーター領域を含むポリヌクレオチドの単離は、一般的手法MolecularCloning1989,MethodsinEnzymology1941991に従い、採取源となる生物の細胞株よりゲノムDNAを抽出し、ポリヌクレオチドを選別することにより行う。ゲノムDNAの抽出は、例えば、Cryerらの方法MethodsinCellBiology,12,39-441975及びP.Philippsenらの方法MethodsEnzymol.,194,169-1821991に従って行うことができる。目的とするDNAエレメント、又は外来遺伝子を含むポリヌクレオチドの取得は、例えばPCR法PCRTechnology.HenryA.Erlich,Atocktonpress1989によって行うこともできる。PCR法を用いたポリヌクレオチドの増幅には、プライマーとして20~30merの合成1本鎖DNAを、鋳型としてゲノムDNAを用いる。増幅された遺伝子はポリヌクレオチド配列を確認した後、用いる。PCRの鋳型としては、バクテリア人工染色体BAC等のゲノムDNAライブラリーを使用することが可能である。一方、配列未知の外来遺伝子を含むポリヌクレオチドの取得は、a常法により遺伝子ライブラリーを作製し、b作製された遺伝子ライブラリーから所望のポリヌクレオチドを選択し、当該ポリヌクレオチドを増幅する、ことによって行うことができる。遺伝子ライブラリーは、採取源となる生物の細胞株から常法により得た染色体DNAを適当な制限酵素によって部分消化して断片化し、得られた断片を適当なベクターに連結し、該ベクターを適当な宿主に導入することによって調製することができる。また、細胞よりmRNAを抽出し、ここからcDNAを合成後、適当なベクターに連結し、該ベクターを適当な宿主に導入することによっても調製することができる。この際用いられるベクターとしては、通常公知の遺伝子ライブラリー調製用ベクターとして知られるプラスミドを用いることができ、ファージベクター又はコスミド等も広く用いることができる。形質転換又は形質導入を行う宿主は、上記ベクターの種類に応じたものを用いればよい。外来遺伝子を含むポリヌクレオチドの選択は、上記遺伝子ライブラリーから、外来遺伝子に特有の配列を含む標識プローブを用いるコロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法等によって行う。また外来遺伝子を含むポリヌクレオチドを化学的に全合成することもできる。例えば相補的な2対のオリゴヌクレオチドを作製しこれらをアニールさせる方法や、数本のアニールされたDNAをDNAリガーゼにより連結する方法、又は一部相補的な数本のオリゴヌクレオチドを作製しPCRによりギャップを埋める方法等により、遺伝子を合成することができる。ポリヌクレオチド配列の決定は、通常の方法、例えばジデオキシ法Sangeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,74,5463-54671977等により行うことができる。更に上記ポリヌクレオチド配列の決定は、市販のシークエンスキット等を用いることによっても容易に行い得る。3.外来遺伝子発現ベクター、エレメントベクター本発明の外来遺伝子発現ベクターとしては、上記DNAエレメントの1種、上記のDNAエレメントの1種を2個以上のコピー数、又は上記のDNAエレメントの2種以上の組み合わせを含み、さらに外来遺伝子発現ユニットを含むベクターが提供される。上記の外来遺伝子発現ベクターによって外来遺伝子を宿主細胞内で発現させる際には、DNAエレメントを遺伝子発現ユニットの直前又は直後に配置してもよく、又は遺伝子発現ユニットから離れた位置に配置しても良い。また、複数のDNAエレメントを含む1つの外来遺伝子発現ベクターを用いてもよい。なお、DNAエレメントの向きは、遺伝子発現ユニットに対して順方向又は逆方向のいずれであっても良い。また、本発明で使用されるベクターとしては、上記DNAエレメントの1種、上記のDNAエレメントの1種を2個以上のコピー数、又は上記のDNAエレメントの2種以上の組み合わせを含み、かつ遺伝子発現ユニットを含まないベクター以下、エレメントベクターという。も含まれる。このようなエレメントベクターは、上記のDNAエレメントを含む外来遺伝子発現ベクター、又は外来遺伝子発現ユニットのみを含みDNAエレメントは含まない外来遺伝子発現ベクターと組み合わせて使用することが可能である。エレメントベクターを並存させることによって、外来遺伝子発現ベクターを単独で使用する場合に比べて外来遺伝子の発現が亢進されるため、上記のベクターの組み合わせも本発明の外来遺伝子発現ベクターに含まれる。外来蛋白質をコードする遺伝子としては、特に限定はされないが、分泌型アルカリフォスファターゼSEAP、緑色蛍光蛋白質GFP、ルシフェラーゼ等のレポーター遺伝子、α-アミラーゼ遺伝子、α-ガラクトシダーゼ遺伝子等の各種酵素遺伝子、医薬上有用な生理活性蛋白質であるインターフェロンα、インターフェロンγ等の各種インターフェロン遺伝子、IL1、IL2等の各種インターロイキン遺伝子、エリスロポエチンEPO遺伝子、顆粒球コロニー刺激因子G-CSF遺伝子等の各種サイトカイン遺伝子、成長因子遺伝子、又は抗体遺伝子等を挙げることができる。これらの遺伝子はいかなる手法によって得られるものでもよい。本発明は特に疎水性の高い蛋白質、複合体を形成するような分泌生産が困難な蛋白質に対して有効であり、よって、上記の外来蛋白質には、多量体蛋白質、例えば、抗体又はその機能的断片であるヘテロ多量体が含まれる。抗体の機能性断片とは、抗原との結合活性を有する抗体の部分断片を意味しており、Fab、Fab’2、Fv、scFv、diabody、線状抗体、及び抗体断片より形成された多特異性抗体等を含む。また、Fab’2を還元条件下で処理した抗体の可変領域の一価の断片であるFab’も抗体の機能性断片に含まれる。但し、抗原との結合能を有している限りこれらの分子に限定されない。また、これらの機能性断片には、抗体蛋白質の全長分子を適当な酵素で処理したもののみならず、遺伝子工学的に改変された抗体遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された蛋白質も含まれる。遺伝子発現ユニットは、転写の読み枠の方向に、少なくともプロモーター領域、外来遺伝子、転写ターミネーター領域ポリA付加シグナルを有するものである。ここで使用し得るプロモーターとしては、構成発現プロモーターであっても、誘導発現プロモーターであってもよい。構成発現プロモーターとしては、例えば、種々の天然のプロモーターであるSV40earlyプロモーター、アデノウイルスE1Aプロモーター、CMVサイトメガロウイルスプロモーター、EF-1αヒト延長因子-1αプロモーター、HSP70プロモーター、MTプロモーター、RSVプロモーター、UBCプロモーター、アクチンプロモーター、人工融合プロモーターであるSRαプロモーター、CAGプロモーター等を挙げることができる。また、ポリA付加配列は、プロモーターからの転写に対して転写終結を起こす活性を有する配列であればよく、プロモーターの遺伝子と同じ又は異なる遺伝子のものであってもよい。外来蛋白質を生産亢進させるためには強力なプロモーターを用いることが必要であるが、高活性なプロモーターを用いてフォールディングされにくい蛋白質や、分泌されにくい蛋白質の生産を試みた場合、かえって分泌不全が起こることがある。これは、蛋白質の生産が、翻訳が行われるリボソーム、フォールディング分泌が行われる小胞体のキャパシティを越えることにより、過剰に生産されたタンパクが細胞内で変性し、蓄積、ユビキチン化され、プロテオソームにて分解するような状況になるためである。従って、生成する蛋白質が変性しアグリゲーションを起こさない、又は生産された蛋白質が分泌能のキャパシティを越えない程度の発現量を達成できるプロモーターを適宜採択するか、あるいは活性を弱める等の調整を行って使用することが好ましい。多量体蛋白質の中でも、ヘテロ多量体を形成する分子は上記の影響を受けやすく、特に抗体のような分子は重鎖、軽鎖が2分子ずつ会合したヘテロ4量体であるため、適切に会合させるためには発現度は重要な因子である。また、本発明の外来遺伝子発現ベクター及びエレメントベクターには、形質転換体を選抜するための選択マーカーを含めることができる。例えば、セルレニン、オーレオバシジン、ゼオシン、カナバニン、シクロヘキシミド、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、ブラストシジン、テトラサイクリン、カナマイシン、アンピシリン、ネオマイシン等の薬剤に対して耐性を付与する薬剤耐性マーカー等を使用することで、形質転換体の選抜を行うことが可能である。また、エタノール等に対する溶剤耐性や、グリセロールや塩等に対する浸透圧耐性、銅等の金属イオン耐性等を付与する遺伝子をマーカーにすることで、形質転換体の選抜を行うことも可能である。本発明の外来遺伝子発現ベクター及びエレメントベクターは、染色体DNAに組込まれないベクターであってもよい。一般的に、外来遺伝子発現ベクターは宿主細胞に遺伝子導入された後、ランダムに染色体に組込まれるが、simianvirus40SV40やpapillomavirusBPV、HPV、EBV等の哺乳動物ウイルス由来の構成成分を用いることにより、導入された宿主細胞中で自己複製が可能なepisomalvectorとして使用することができる。例えば、SV40由来の複製起点oriP及びtrans-actingfactorであるSV40largeT抗原をコードした配列を有するベクターやEBV由来のoriP及びEBNA-1をコードした配列を有するベクター等が広く用いられている。DNAエレメントの効果はベクターの種類、あるいは染色体への組込み有無を問わず、外来遺伝子発現亢進活性を示すことが可能である。4.形質転換細胞本発明の形質転換細胞は、前記1.のDNAエレメントを含む前記3.の外来遺伝子発現ベクターを用いて導入した形質転換細胞である。外来遺伝子発現ベクターとして、ADNAエレメントを含む外来遺伝子発現ベクターのみを導入しても良く、BDNAエレメントを含む外来遺伝子発現ベクターと3.に記載のエレメントベクターを組み合わせて導入しても良い。あるいは、CDNAエレメントを含まない外来遺伝子発現ベクターとエレメントベクターを組み合わせて導入しても良い。上記B又はCの組み合わせによる外来遺伝子の宿主細胞内での発現は、例えば、Girodらの方法BiotechinologyandBioengineering,91,2-112005及びOtteらの方法Biotechnol.Prog.,2007,23,801-8072007に従って行うことができる。形質転換させる宿主細胞としては、真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞、さらに好ましくはヒト、マウス、ラット、ハムスター、サル、又はウシ由来の細胞である。哺乳動物細胞としては、COS-1細胞、293細胞、CHO細胞CHO-K1、DG44、CHOdhfr-、CHO-S等を挙げることができるが、これらに限定されない。本発明において、宿主細胞への発現ベクターの導入方法としては、導入遺伝子が宿主内にて安定に存在し、かつ適宜発現させることができる方法であればいかなる方法でもよく、一般的に用いられている方法、例えば、リン酸カルシウム法Itoetal.,1984Agric.Biol.Chem.,48,341、エレクトロポレーション法Becker,D.M.etal.1990Methods.Enzymol.,194,182-187、スフェロプラスト法Cregghetal.,Mol.Cell.Biol.,5,33761985、酢酸リチウム法Itoh,H.1983J.Bacteriol.153,163-168、リポフェクション法等を挙げることができる。5.外来蛋白質の製造方法本発明における外来蛋白質の製造は、外来蛋白質をコードする遺伝子を、前記3.の項目に記載のベクターを用いて導入した、上記4.の項目に記載の形質転換細胞を公知の方法により培養し、その培養物から採取し、精製することにより行うことができる。培養物とは、培養上清のほか、培養細胞、又は細胞の破砕物のいずれをも意味するものである。なお、4.の項目に記載の形質転換細胞を用いて産生することのできる外来蛋白質としては、単量体蛋白質のみならず多量体蛋白質を選択することも可能である。異なる複数のサブユニットから構成されるヘテロ多量体蛋白質の生産を行う場合、これらのサブユニットをコードしている複数の遺伝子を、それぞれ4.の項目に記載の宿主細胞に導入する必要がある。形質転換細胞を培養する方法は、その宿主細胞の培養に用いられる通常の方法に従って行うことができる。形質転換細胞が哺乳動物細胞の場合は、例えば37°C、5又は8CO2条件下で培養し、培養時間は24~1000時間程度であり、培養は静置、振とう、攪拌、通気下の回分培養や流加培養又は連続培養等により実施することができる。上記の培養物培養液から外来蛋白質遺伝子の発現産物の確認は、SDS-PAGE、ウエスタン解析、ELISA等により行うことができる。生産された蛋白質を単離精製するためには、通常の蛋白質の単離、精製法を用いればよい。培養後、目的蛋白質が細胞内に生産される場合には、細胞を超音波破砕機、フレンチプレス、マントンガウリンホモゲナイザー、ダイノミル等により破砕することにより、目的蛋白質を採取する。また、目的蛋白質が細胞外に生産される場合には、培養液をそのまま使用するか、遠心分離等により細胞を除去する。その後、有機溶媒による抽出等により目的蛋白質を採取し、必要に応じて各種クロマトグラフィー疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー等、分子篩を用いたゲルろ過法、ポリアクリルアミドゲル等を用いる電気泳動法等の手法を単独あるいは組み合わせて用いて単離精製すればよい。上記の培養法、精製法は一例であって、これらに限定されるものではない。なお、精製された遺伝子産物が有するアミノ酸配列の確認は、公知のアミノ酸分析、例えばエドマン分解法による自動アミノ酸配列決定法等により行うことができる。6.抗体蛋白質の製造方法前記5.の項目に記載の製造方法を用いて製造されるヘテロ多量体蛋白質としては抗体蛋白質を挙げることができる。抗体蛋白質は、2分子の重鎖ポリペプチド及び2分子の軽鎖ポリペプチドからなる4量体蛋白質である。従って、抗原結合能を維持した形態で抗体蛋白質を取得するためには、前記4.の項目に記載の形質転換細胞において、重鎖及び軽鎖の遺伝子の双方が導入されている必要がある。この場合に、重鎖及び軽鎖の遺伝子発現ユニットは、同じ発現ベクター上に存在しても良く、あるいは異なる発現ベクター上に存在していても良い。本発明において製造される抗体としては、ウサギ、マウス、ラット等実験動物を所望の抗原で免疫して作製された抗体を挙げることができる。また、前記の抗体を原料とするキメラ抗体、及びヒト化抗体も本発明において製造される抗体として挙げることができる。さらに、遺伝子改変動物又はファージディスプレイ法によって取得されるヒト抗体についても、本発明において製造される抗体である。抗体製造に用いる抗体遺伝子としては、該抗体遺伝子より転写翻訳される重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの組合せが、任意の抗原蛋白質と結合する活性を保持している限り、特定のポリヌクレオチド配列を持つ抗体遺伝子に限定されない。また、抗体遺伝子としては、必ずしも抗体の全長分子をコードしている必要はなく、抗体の機能性断片をコードしている遺伝子を用いることができる。これらの機能性断片をコードする遺伝子は、抗体蛋白質の全長分子をコードする遺伝子を遺伝子工学的に改変することによって取得することができる。7.その他の外来蛋白質の製造方法本発明の製造方法の対象となる外来蛋白質としては、前述の抗体に加え、ヒト又は非ヒト動物由来の各種蛋白質、その機能性断片、その改変体等を挙げることができる。そのような蛋白質等としては、心房性ナトリウム利尿ペプチドANP、脳性ナトリウム利尿ペプチドBNP、C型ナトリウム利尿ペプチドCNP、バソプレッシン、ソマトスタチン、成長ホルモンGH、インスリン、オキシトシン、グレリン、レプチン、アディポネクチン、レニン、カルシトニン、オステオプロテジェリン、インスリン様成長因子IGF等のペプチドホルモン、インターロイキン、ケモカイン、インターフェロン、腫瘍壊死因子TNFα/βほかTNFスーパーファミリー等、神経成長因子NGF、細胞増殖因子EGF、FGF、PDGF、HGF、TGF等、造血因子CSF、G-CSF、エリスロポエチン等、アディポカイン等のサイトカイン、ТNF受容体等の受容体、リゾチーム、プロテアーゼ、プロテイナーゼ、ペプチダーゼ等の酵素、その機能性断片元の蛋白質の生物活性を一部又は全部保持している断片、それらの蛋白質を含むことからなる融合蛋白質等を挙げることができるが、それらに限定されるものではない。以下、実施例により本発明を具体的に説明する。ただし、これらの実施例は本発明の技術的範囲をなんら限定するものではない。本発明の実施例で用いるプラスミド、制限酵素、DNA修飾酵素等は市販のものであり、常法に従って使用することができる。また、DNAのクローニング、ポリヌクレオチド配列の決定、宿主細胞の形質転換、形質転換細胞の培養、得られる培養物からの蛋白質の採取、精製等に用いた操作についても当業者によく知られているものであるか、文献により知ることのできるものである。DNAエレメントの抽出1-1抗アセチル化ヒストンH3抗体を用いたクロマチン免疫沈降抗アセチル化ヒストン抗体を用いたChIPは、下記手順によりEZChIPUpstateを用いて行った。尚、特記がない限り、下記手順の中で使用した抗体、buffer等はUpstate社製品を使用した。まず、293F細胞InvitrogenをGIBCO登録商標FreeStyleTM293MediumInvitrogenを用いて37°C、8CO2条件下で培養を行い、遠心分離1000rpm、5分、室温により増殖期にある細胞を回収した。2×10^7個の細胞を1ホルムアルデヒド入り培地で10分間攪拌した後、10×グリシンを加えて5分間室温で攪拌を行った。遠心分離3000rpm、5分、4°Cにより上清を除き、PBSを加えて細胞縣濁後に再度、遠心分離によりPBSを除去し、SDSlysisbufferを加えて細胞の縣濁溶解を行った。溶解したサンプルを氷水で冷却しながら超音波ホモジナイザーBRANSONを用いてDNAの断片化を行い、proteaseinhibitorcocktail入りdilutionbuffer及びProteinG固定化アガロースを加え、4°Cで1時間攪拌し、遠心分離後に上清の回収を行った。次に、10μgのnormalrabbitIgG、又はα―acetylHistoneH3抗体を加え、4°Cで一晩攪拌を行った。その溶液にproteinG固定化アガロースを加えて、4°Cで1時間攪拌後、遠心分離によりペレットの回収を行った。そのペレットをLowSaltImmuneComplexWashBufferで2回、HighSaltImmuneComplexWashBufferで2回、LiClImmuneComplexWashBufferで2回、最後にTEBufferで4回洗浄し、elutionbuffer20μlの1M炭酸水素ナトリウム、10μlのSDS、170μlの滅菌水を加えて30分後に遠心分離を行い、上清の回収を行った。次に、その上清に5M塩化ナトリウムを加えて65°Cで一晩加熱し、更に、RNaseAを加えて37°Cで30分間インキュベートした。0.5MEDTA、1MTris-HCl、PtoteinaseKを加えて45°Cで2時間静置した。最後に、PtoteinaseKで処理した溶液の5倍量のReagentA、B、Cを加え、Spinfilterによる遠心分離10000rpm、30秒、室温によりクロマチン免疫沈降されたDNAの精製を行った。1-2マイクロアレイ解析GenomePlexCompleteWholeGenomeAmplificationWGAKitSigmaを用いて、1-1の各ChIPサンプルの増幅を行った。手順はKit付属のSigma社のプロトコールに従って行った。ChIPの確認を行うため、WGAにより増幅した各DNA320ngを鋳型として、下記プライマー及びSYBR登録商標PremixExTaqTMPerfectRealTimeTAKARAを用いて、PCR法95°C5秒、60°C20秒×45cycleによりグリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素glycelaldehyde-3-phosphatedehydrogenase:GAPDH遺伝子内部の増幅を行った。なお、GAPDHは、ChIPによりDNAエレメントが濃縮されたことを確認するための陽性コントロールとなるハウスキーピング遺伝子であり、EZChIPUpstateに付属のプライマーを用いてPCR法を実施した。5’-TACTAGCGGTTTTACGGGCG-3’5’-TCGAACAGGAGGAGCAGAGAGCGA-3’その結果、抗アセチル化ヒストンH3抗体で免疫沈降を行ったサンプル特異的にGAPDHの増幅が確認された。WGAによって増幅した各DNAサンプルをマイクロアレイ解析NimbleGenにかけることにより、ChromatinimmunoprecipitationonChipChIPonchipを行った。ChIPonchipは、1-1で濃縮されたDNAをマイクロアレイ解析に供することによって、各DNAエレメントの同定を行う手法である。1-3DNAエレメントの抽出1-2から得られたChIPonchip解析結果を基に、62以上のAT含量を有する5つの配列の抽出を行った。A2;15番染色体80966429~80974878A7;11番染色体88992123~89000542A18;4番染色体111275976~111284450B5;1番染色体143034684~143043084C14;11番染色体46089056~46097482分泌型アルカリフォスファターゼSEAPの発現を指標とした、DNAエレメントの効果2-1SEAP発現ベクターの構築pSEAP2-controlClontechを鋳型に、下記プライマー及びKOD-plus-TOYOBOを用いたPCR法94°C30秒、68°C2分×40cycleにより、SEAP遺伝子の増幅を行った。5’-AAAGCTAGCATGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGGCC-3’5’-AAAAGATCTTCATGTCTGCTCGAAGCGGCCGGCCGC-3’次に、アガロースゲル電気泳動により増幅されたSEAP断片を分離後、ゲルから切り出し、QIAquickGelExtractionKitQiagenにより精製し、このDNA断片をインサートとした。インサートを制限酵素NheI、BglII、ベクターpIREShyg3clontechを制限酵素NheI,BamHIで処理後、アガロース電気泳動によりそれぞれの目的断片を分離後、ゲルから切り出し、精製後に、ligation反応、transformationを行った。Ligation反応は、LigaFastRapidDNALigationSystemPromegaを用いて行った。Transformationは、まず、凍結しているコンピテントセルJM109TAKARAを融解し、その溶液にligation反応後の溶液10μlを加え、氷上で30分静置した。その後、heatshock42°C、45秒を行い、5分氷冷した。この菌体懸濁液に1mlのLB培地を加え、37°Cで1時間振とうし、0.1mg/mlアンピシリン入りのLBプレートに播き、37°Cで14~16時間培養した。その後、アルカリ法によりLBプレート上で培養したコロニーから目的プラスミドの回収を行った。最後に、アルカリ法にて得られたプラスミド中のSEAPのポリヌクレオチド配列を決定することで、pCMV/SEAPiresHygroを構築した。2-2DNAエレメントのクローニング次に、実施例1で抽出したDNAエレメントを、それぞれのポリヌクレオチド配列を有するバクテリア人工染色体BACからBACSUBCLONINGKitGeneBridgesを用いて2-1のSEAP発現ベクターへクローニングを行った。まず、2-1のpCMV/SEAPiresHygroを制限酵素SpeIで数時間処理し、エタノール沈殿を行い、滅菌水で溶解した。SpeI処理した上記ベクターを鋳型に、下記プライマー及びKOD-plus-TOYOBOを用いたPCR法94°C15秒、55°C30秒、68°C10分×30cycleを行った。A2D;5’-GGAAATTGAGAAGTATCATTCACAACAGTACCACAAACATGAAATAAATGTGGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2R;5’-CTCATTCTGTGGGTTGTCATTTCACTTCCTTGATGCTATCCTTTCAAGCAAAATCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’A7D;5’-CTTATTTTCTAAGTAGTATAGACTTAATTGTGAGAACAAAATAAAAACTTGGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A7R;5’-CTCTTCCCATTCTCATTTGAATCTACTTCAAAAGGTTTACCATACTAAGACCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’A18D;5’-CGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCTGAGGCGGGTGGATCACCTGAGGTCGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A18R;5’-CATACAGAAGCCAGTTTGAACTGAGACCTCACTCCATTTCTTACAAGTTATGCCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’B5D;5’-ACCGTTTTATATTGTTTAAGCATTTCCTAGACATATTTGGCTACAAATCTAGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’B5R;5’-GATCTTAGGGGGGCTGATTATATAAAACAATAGAAATGTAGTCTTAGATGAAACCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’C14D;5’-CACAAAGTTCACTGTCAAGGCCAGGTGATGAGGCCCACACATGCCCGGACCTTGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’C14R;5’-CAAAACCTCATCTCTACTGAAAATAGAAAATTAGCTGGGCGTGGTGGCAGGTGCCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’反応溶液の一部を用いてアガロースゲル電気泳動により増幅の確認を行った後、残りの溶液はエタノール沈殿を行い、滅菌水で溶解し、形質転換用DNAとした。次に、形質転換用大腸菌の調製を行った。実施例1で抽出された5配列と対応するBACクローンは以下の通り。融解した上記BAC株式会社ジェノテックス10μlを培地1ml最終濃度chloramphenicol15μg/ml含むに植菌し、37°Cで一晩培養を行った。その培養液30μlを1.4mlの培地最終濃度chloramphenicol15μg/ml含むに移し、37°Cで2時間培養を行い、遠心及び滅菌水による洗浄を2回繰り返し、20μlの滅菌水で懸濁した。冷却したキュベット0.1cmにpRED/ETGeneBridges1μl及び大腸菌を添加し、Electroporation1350V、10μFを行った後、SOC培地1mlを加え、30°Cで70分間の培養を行い、培養液100μlをLBプレート最終濃度tetracyclin3μg/ml、chloramphenicol15μg/ml含むに播種し、30°Cで一晩インキュベートした。次の日に得られたコロニーを培地1ml最終濃度tetracyclin3μg/ml、chloramphenicol15μg/ml含むに植菌し、30°Cで一晩培養を行った。培養液30μlを1.4ml培地最終濃度tetracyclin3μg/ml、chloramphenicol15μg/ml含むに移し、30°Cで2時間培養を行い、50μlの10L―arabinoseを添加し、更に37°Cで1時間の培養を行った。その後、滅菌水による洗浄を2回繰り返し、30μlの滅菌水で懸濁した大腸菌及び、形質転換用DNA1μlを、冷やしたキュベット0.1cmに添加し、Electroporation1350V、10μFを行った。SOC培地1mlを加え、37°Cで90分培養を行い、培養液全量をLBプレートアンピシリン100μg/ml含むへの播種、プレート培養、アルカリ法による目的プラスミドの取得を行った。最後に、取得されたプラスミドの配列確認及び制限酵素確認の実施により、目的プラスミドの構築を行った。2-3SEAP発現を指標とした評価宿主細胞CHO―K1細胞ATCC、遺伝子導入試薬Lipofectamine2000Invitrogenを用いて、2-2で構築された各プラスミドの評価を実施した。遺伝子導入2日後からhygromycin800μg/mlによる薬剤選択を約2週間行い、ポリクローナル安定発現株の構築を行った。樹立された細胞株は、測定前日に培地交換を行い、一定細胞数を24穴プレートIWAKIに播種した。播種24時間後に培養上清の回収を行い、SEAP活性の測定を行った。培養上清中のSEAP活性は、SensoLyteTMpNPPSecretedAlkalinePhosphataseReporterAssayANASPECを用いて、測定した。測定結果を図3に示す。NoelementであるコントロールのSEAP活性を1としたとき、DNAエレメントA2、A7、A18、B5、C14を有するCHO安定発現株の培養上清中のSEAP活性は5倍以上の数値を示した。このことにより、DNAエレメント5種類全てはSEAP発現を劇的に亢進することが確認された。なお、上記の5種類のポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号の1乃至5に記載されている。併用プロモーターの一般性実施例2においてDNAエレメントの評価に用いたベクターのプロモーターはCMVプロモーターであったが、他の一般的なプロモーターとの併用について検討を行った。3-1EF-1α及びSV40プロモーターを用いたSEAP発現ベクターの構築pSEAP2-controlClontechを鋳型に、2-1に記載のプライマー及びKOD-plus-を用いたPCR法94°C30秒、68°C2分×40cycleにより、SEAP遺伝子の増幅を行った。増幅されたSEAPは、2-1と同様の方法によりインサートとして調製した。インサートを制限酵素NheI、BglII、ベクターpIRESpuro3clontechを制限酵素NheI、BamHIで処理し、2-1と同様の方法でpCMV/SEAPiresPuroを構築した。次に、pEF1/V5-HisAInvitorogenを鋳型として、下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法94°C15秒、60°C30秒、68°C2分×30cycleにより、EF-1αプロモーターの増幅を行った。5’-AAAACTAGTCAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACC-3’5’-AAAGATATCCCTAGCCAGCTTGGGTGGTACCAAGC-3’上記で構築したpCMV/SEAPiresPuroをベクターとして、それぞれを制限酵素SpeI、EcoRVで処理し、2-1に記載の方法に準じてpEF/SEAPiresPuroの構築を行った。同様に、pcDNA3.1Invitrogenを鋳型に、下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法94°C15秒、60°C30秒、68°C1分×30cycleにより、SV40プロモーターの増幅を行った。5’-AAAACTAGTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTG-3’5’-AAAGATATCAGCTTTTTGCAAAAGCCTAGGCCTC-3’上記で構築したpCMV/SEAPiresPuroをベクターとして、それぞれを制限酵素SpeI、EcoRVで処理し、2-1に記載の方法に準じてpSV40/SEAPiresPuroの構築を行った。3-2DNAエレメントA2又はA7のクローニング3-1で構築したpEF/SEAPiresPuro及びpSV40/SEAPiresPuroを基本骨格として、DNAエレメントA2又はA7のクローニングを行った。まず、pEF/SEAPiresPuro及びpSV40/SEAPiresPuroを制限酵素SpeIで数時間処理し、エタノール沈殿を行い、滅菌水で溶解した。SpeI処理したそれぞれのベクターを鋳型に、下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法94°C15秒、55°C30秒、68°C10分×30cycleにより、形質転換用DNAの調製を行った。A2EF/D;5’-GGAAATTGAGAAGTATCATTCACAACAGTACCACAAACATGAAATAAATGTGCTAGTCAGAGAGGAATCTTTGCAGC-3’A2SV40/D;5’-GGAAATTGAGAAGTATCATTCACAACAGTACCACAAACATGAAATAAATGTGCTAGTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAG-3’A2共通/R;5’-CTCATTCTGTGGGTTGTCATTTCACTTCCTTGATGCTATCCTTTCAAGCAAAATTTTAAAACTTTATCCATCTTTGCA-3’A7EF/D;5’-CTTATTTTCTAAGTAGTATAGACTTAATTGTGAGAACAAAATAAAAACTTGCTAGTCAGAGAGGAATCTTTGCAGC-3’A7SV40/D;5’-CTTATTTTCTAAGTAGTATAGACTTAATTGTGAGAACAAAATAAAAACTTGCTAGTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAG-3’A7共通/R;5’-CTCTTCCCATTCTCATTTGAATCTACTTCAAAAGGTTTACCATACTAAGAACTAGTTTTAAAACTTTATCCATCTTTGCA-3’調製した形質転換用DNA及びpRed/ETを形質転換したBACを用いて、DNAエレメントA2、A7を3-1に記載のベクターへクローニングを行った。尚、操作は2-2に記載の方法に準じて行った。3-3SEAP発現を指標とした評価宿主細胞CHO―K1細胞ATCC、遺伝子導入試薬Lipofectamine2000Invitrogenを用いて、3-2で構築された各プラスミドの評価を実施した。遺伝子導入2日後からpuromycin8μg/mlによる薬剤選択を約2週間行い、ポリクローナル安定発現株の構築を行った。樹立された細胞株は、測定前日に培地交換後に一定細胞数を24穴プレートに播種した。播種24時間後に培養上清の回収を行い、SEAP活性の測定を行った。培養上清中のSEAP活性は、SensoLyteTMpNPPSecretedAlkalinePhosphataseReporterAssayANASPECを用いて、測定した。測定結果を図4に示す。NoelementであるコントロールのSEAP活性を1としたとき、DNAエレメントA2又はA7は、EF-1αプロモーターと併用することで2倍以上、SV40プロモーターと併用することで4倍以上の発現亢進効果を示した。このことから、これらのDNAエレメントは、一般的なプロモーターとの併用により外来遺伝子の発現亢進効果を示すことが確認された。抗体発現を指標とした評価4-1ヒト軽鎖発現ベクターpEF6KCLの構築プラスミドpEF6/V5-HisBInvitrogenを鋳型として下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法を行うことにより、BGHpAの直後SequencePosition2174から、SmaISequencePosition2958までのDNA断片f1originofreplication及びSV40promoterandoriginを含むDNAフラグメント、以下、フラグメントAとする。なお、フラクメントAのポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号6に記載されている。を取得した。5’-CCACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGC-3’5’-AAACCCGGGAGCTTTTTGCAAAAGCCTAGG-3’得られたフラグメントAと、ヒトκ鎖分泌シグナル、ヒトκ鎖定常領域及びヒトpolyA付加シグナルをコードするDNA配列を含むDNAフラグメント以下、フラグメントBとするをオーバーラップPCRにより結合した。得られたフラグメントAとフラグメントBとが結合したDNA断片を制限酵素KpnI及びSmaIで消化し、制限酵素KpnI及びSmaIで消化したプラスミドpEF6/V5-HisBInvitrogenとライゲーションし、EF-1αプロモーターの下流にシグナル配列、クローニングサイト、ヒトκ鎖定常領域、及びヒトpolyA付加シグナル配列をもつ、ヒト軽鎖発現ベクターpEF6KCLを構築した。上記の方法で得られたpEF6KCLから制限酵素KpnI及びSmaIで切り出されたDNA断片を、KpnI及びSmaIで消化したpEF1/myc-HisBInvitrogen社とligationし、transformation、アルカリ法、配列確認によりプラスミドpEF1KCLを構築した。4-2ヒト重鎖発現ベクターpEF1FCCUの構築ヒトIgG1シグナル配列及び定常領域のアミノ酸をコードするDNA配列を含むDNA断片このDNA断片の有するポリヌクレオチド配列は、配列表の配列番号7に記載されているを制限酵素NheI及びPmeIで消化し、NheI及びPmeIで消化したプラスミドpEF1KCLと結合し、EF-1αプロモーターの下流にシグナル配列、クローニングサイト、ヒト重鎖定常領域、及びヒトpolyA付加シグナル配列をもつヒト重鎖発現ベクターpEF1FCCUを構築した。4-3ヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNの構築4-1、4-2で構築したL鎖又はH鎖発現ベクターを結合させることにより、ヒト化抗体発現シングルベクターpEF_LHN可変領域なしの構築を行った。pEF1KCLのプロモーター上流及びpolyAの下流までの遺伝子発現ユニットの両端にPCR法により制限酵素SalIサイトの付加を行い、アガロースゲル電気泳動、切り出し、DNA断片の精製を行い、インサートとした。4-2で構築されたpEF1FCCUを制限酵素SalIで処理することで、遺伝子発現ユニットより上流に存在するSalIサイトでベクターをリニアーにし、上記インサートとligation反応を行い、transformation、アルカリ法、配列確認によりヒト化抗体発現シングルベクターpEF_LHN可変領域なしの構築を行った。次に、pEF_LHN可変領域なしのAatIIサイトへ下記オリゴの導入を行った。5’-CGCGGCCGCACTAGTGACGT-3’5’-CACTAGTGCGGCCGCGACGT-3’それぞれのオリゴを5pmolに希釈し、T4PolynucleotideKinaseTAKARAを用いて、37°Cで1時間反応後、10×HbufferTAKARAを添加し、96°C1分、室温30分の反応によりアニーリングを行った。このオリゴと、制限酵素AatII処理したベクターpEF_LHNとをligationし、transformation、アルカリ法、配列確認により、pEF_LHN可変領域なしを構築した。上記で構築した汎用ベクターpEF_LHN可変領域なしにヒト化抗体遺伝子Xの可変領域の組込みを行うことで、ヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNの構築を完成させた。まず、下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法94°C15秒、55°C30秒、68°C1分×30cycleにより、ヒト化抗体遺伝子XのL鎖可変領域の増幅を行った。L鎖可変領域;5’-AAACATATGGCGACATCCAGATGAC-3’5’-AAACGTACGCTTGATCTCCACCTTGG-3’増幅したL鎖可変領域断片及び汎用ベクターpEF_LHN可変領域なしを制限酵素NdeI、BsiWI処理し、アガロースゲル電気泳動による目的断片の切り出し、精製、ligation反応、transformation、アルカリ法、配列確認によりL鎖可変領域の組込みを行った。同様に、下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法94°C15秒、55°C30秒、68°C1分×30cycleにより、ヒト化抗体遺伝子XのH鎖可変領域の増幅を行った。H鎖可変領域;5’-AAAGCTGAGCCAGGTGCAGCTGCAGG-3’5’-AAAGCTGAGCTCACGGTCACCAGGGTTC-3’増幅したH鎖可変領域断片及びL鎖可変領域が挿入されたベクターを制限酵素BlpIで処理し、アガロースゲル電気泳動による目的断片の切り出し、精製、ligation反応、transformation、アルカリ法、配列確認によりH鎖可変領域の組込みを行い、ヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNを構築した。4-4ヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pCMV_LHNの構築4-3で構築したヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNをベクター基本骨格として、下記手順によってプロモーターの交換を行い、ヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pCMV_LHNの構築を行った。pIRESpuro3を鋳型として、下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法94°C30秒、68°C3分×40cycleによりCMVプロモーター断片の増幅を行った。H鎖上流;5’-CTTTTGCAAAAAGCTTCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCC-3’5’-TTCATGGTGGCGCTAGCCCGCAGATATCGATCCGAGCTCGGTA-3’L鎖上流;5’-TGACGTCGACAAGCTTCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCC-3’5’-CTGGATGTCGCCATATGCGCCGGAGATCCACAGCAGCAGGGAGATGAACACCTGGGTCTGCAGCACCATGGTGGCGCTAGCCCGCAGATATCGATCCGAGCTCGGTA-3’PCR反応溶液に制限酵素DpnIを加えて37°C、1時間反応させ、miniElutereactionCleanupkitQiagenにより精製を行い、In―Fusion用のサンプルとした。一方、ヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNを制限酵素HindIII、NheI、NdeI、FseIで処理し、アガロースゲル電気泳動を行うことで、断片の中で大きな断片2本の分離を行った。ゲルからそれぞれを切り出し、ゲルからDNAの抽出を行い、In―Fusion用のサンプルとした。全てのIN―Fusion用サンプルを集め、In―FusionTMAdvantagePCRクローニングキットTAKARA、transformation、アルカリ法、配列確認により、ヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pCMV_LHNを構築した。4-5DNAエレメントA7のクローニングSEAPの発現亢進効果が認められた5種類のDNAエレメントの中からA7を選択し、抗体発現ベクターへのクローニングを行った。2-2と同様の方法で、制限酵素NotI処理したヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHN、ヒト化抗体遺伝子X/pCMV_LHNそれぞれを鋳型として、下記プライマー及びKOD-plus-を用いてPCR法94°C15秒、55°C30秒、68°C11分×30cycleにより、形質転換用DNAの調製を行った。ヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHND;5’-CTCTTCCCATTCTCATTTGAATCTACTTCAAAAGGTTTACCATACTAAGACTCGAGGCACTAGTGACGTCAGGTGGCACT-3’ヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNR;5’-CTCTTCCCATTCTCATTTGAATCTACTTCAAAAGGTTTACCATACTAAGAGCACTAGTGACGTCAGGTGGCACTTTTCGG-3’ヒト化抗体遺伝子X/pCMV_LHND;ヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNDを使用。ヒト化抗体遺伝子X/pCMV_LHNR;ヒト化抗体遺伝子X/pEF_LHNRを使用。調製した形質転換用DNA及びpRed/ETを形質転換したBACを用いて、DNAエレメントA7を4-3、4-4記載のヒト化抗体遺伝子X発現シングルベクターへクローニングを行った。尚、操作は2-2に記載の方法に準じて行った。4-6抗体発現を指標とした評価宿主細胞CHO―K1細胞ATCC、遺伝子導入試薬Lipofectamine2000Invitrogenを用いて、4-5で構築された各プラスミドの評価を実施した。遺伝子導入2日後からGeneticinRoche800μg/mlによる薬剤選択を約2週間行い、ポリクローナル安定発現株の構築を行った。樹立された細胞株は、測定前日に培地交換後、一定細胞数を24穴プレートに播種し、播種24時間後に培養上清の回収を行い、ELISA法により培養上清中の抗体発現量の測定を行った。尚、ELISAは以下の方法で行った。Anti-kappaLightChainを50ng/wellでコーティングした96穴プレートに、除細胞した培養上清100μlを添加し、37°Cで1時間静置した。次に、サンプル培養上清を除き、PBS-Tween0.05200μlで各wellを洗った後、HRP標識されたanti-humanIgGFc100μlをwellに添加し、さらに37°Cで1時間静置した。その後、HRP標識されたanti-humanIgGFcを除き、PBS-Tween0.05で各wellを洗った後、POD基質A.B.T.S.キットnacalaiを用いて発色させ、測定波長405nmの吸光度を測定した。anti-kappaLightChain、anti-humanIgGFc及びサンプルの希釈にはPBS-Tween0.05を用いた。段階希釈12ng、6ng、3ng、1.5ng、0.75ng、0.375ng、0.1875ngしたhumanIgGをスタンダードに、サンプル濃度を算出した。結果を図6に示す。EF-1αプロモーター又はCMVプロモーターを有する抗体発現ベクターにおいて、DNAエレメントA7を持つサンプルは、noelementであるコントロールよりも大きな抗体生産亢進効果を示すことが確認された。外来遺伝子発現亢進活性を示す配列長5-1配列長の異なるDNAエレメントのクローニング実施例2で用いた配列長を基に、各DNAエレメントの異なる配列長を有するベクターの構築を行った。DNAエレメントA2、A7、A18、B5、C14のfulllengthを基に設計した異なる配列長を有するエレメントの詳細を図7、9、11、13、15に示す。2-1のpCMV/SEAPiresHygroを制限酵素SpeIで数時間処理し、エタノール沈殿を行い、滅菌水で溶解した。SpeI処理した上記ベクターを鋳型に、下記プライマー及びKOD-plus-を用いたPCR法94°C15秒、55°C30秒、68°C10分×30cycleを行い、形質転換用DNAの調製を行った。調製した形質転換用DNA及びpRed/ETを形質転換したそれぞれのBACを用いて、配列長の異なる各DNAエレメントを2-1のpCMV/SEAPiresHygroへクローニングを行った。尚、操作は2-2に記載の方法に準じて行った。A2-1D;5’-CATGCACAGATTAGCCATTTAGTACTTACTAAATCAAACTCAATTTCTGAAGTCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-1R;5’-CTCATTCTGTGGGTTGTCATTTCACTTCCTTGATGCTATCCTTTCAAGCAAAATTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A2-2D;5’-ACACTGGTCAAAGGGACAGGTCATTGTTATGCTGGCAATGCAGGCTGCTGAAAACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-2R;5’-ACTGTAGCTTCTTATTTTTTACCTGCAGTGCATTCCTGTAAAAGTAGTGTGGAGTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A2-3D;5’-CTGGAAATTGAGAAGTATCATTCACAACAGTACCACAAACATGAAATAAATGTGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-3R;5’-CCAAGCTTGTCCAACCGCGGCCTGCAGGCTGCATGCAGCCTGTGAAGGCTTTGATCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A2-4D;5’-TCAATCATTTATCAATTTTATCTTCAAAGTCCCTCACTTCAGGGAGATGATATACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-4R;5’-ATATATAAAAGTTCATGTATATATAAAATCATGCAATACACGGCCTTTTGTGACTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A2-5D;5’-CGCATAAAAGGAAAAGCATCCTTAAAATAAACACCATCAATGGCTCCTCGGTGGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-5R;A2-4Rを使用。A2-6D;5’-GGGAGGCTACAGCTTGCCTCTCTAACCACTAAAAGGCATGACCCTCCTCAAAGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-6R;A2-4Rを使用。A2-7D;5’-TCTGGCTTCCCTGGGCCACGCTGGAAGAAGAATTGTCTTGCGCCACACATAAAACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-7R;5’-AGCTGATTTTTACGTTAAATGTAACATGTAAAGAAATATATGTGTGTTTTTAGATCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A2-8D;5’-GTGAAGAGGAGGAGATGTCAAAATTCAAAGTCTTAAATGATGTAGTTTTAAGTACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A2-8R;5’-ATGACACTTGATATTGTTGTTTATATTGCTGGTTAGTATGTGCCTTCATTTACCTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A2-9D;A2-6Dを使用。A2-9R;A2Rを使用。A2-10D;A2-2Dを使用。A2-10R;A2-7Rを使用。A2-11D;A2-8Dを使用。A2-11R;A2-2Rを使用。A2-12D;A2-2Dを使用。A2-12R;A2-4Rを使用。A2-13D;A2-8Dを使用。A2-13R;A2-7Rを使用。A2-14D;A2Dを使用。A2-14R;A2-2Rを使用。A2-15D;A2-2Dを使用。A2-15R;A2Rを使用。A2-16D;A2-8Dを使用。A2-16R;A2-4Rを使用。A2-17D;A2Dを使用。A2-17R;A2-7Rを使用。A7-1D;5’-AAAAACAAAACTGGAGTAAACAAGATGAATTGTTTTAATAGAGGCACTGTATTACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A7-1R;5’-ATACAATGTTCCATGTATTCTGTGCCTGAACCTATGCAGCTGATGTAGCTGAAGTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A7-2D;5’-GATCTTATTTTCTAAGTAGTATAGACTTAATTGTGAGAACAAAATAAAAACTTGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A7-2R;5’-TGTTGTTTTCAGCCACTAAGTTTGAGGTGATTTGTTCTGGCAGTCCTAGGAAACTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A7-3D;A7-2Dを使用。A7-3R;5’-AGCCTACACTACCCTTTGCAGCCTTTGGTAACTATCCTTCTGCTGTCTACCTCCTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A7-4D;5’-AGGAGCTCCTGAATGAAGGACATCACTCAGCTGTGTTAAGTATCTGGAACAATACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A7-4R;5’-GACATAAAATGTAAGATATGATATGCTATGTAAGATATGATACCTGCCTTAAAATCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A7-5D;5’-CACTGCTTGATACTTACTGTGGACTTTGAAAATTATGAATGTGTGTGTGTGTGTCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A7-5R;5’-CAATTACATTCCAGTGATCTGCTACTTAGAATGCATGACTGAACTCCTGGGTGGTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A7-6D;5’-TTATTTTGAAGAGAAACTCCTGGTTCCCACTTAAAATCCTTTCTTGTTTCCAAGCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A7-6R;5’-AAGCAGTGTGTGTTTACCTGCATGTGTATGTGAATTAACTCTGTTCCTGAGGCATCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A7-7D;5’-ATTGCATGTTCTCATTTATTTGTGGGATGTAAAAATCAAAACAATAGAACGTATCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A7-7R;5’-TTGGGAGGCCGCAGCTGGTAGATCACTTGAGGCCACGAATTTGACACCAGCAGGTCAATAATCAATGTCAACGCGTATAT-3’A7-8D;A7-1Dを使用。A7-8R;A7Rを使用。A7-9D;A7-7Dを使用。A7-9R;A7-5Rを使用。A7-10D;A7-4Dを使用。A7-10R;A7-7Rを使用。A7-11D;A7-6Dを使用。A7-11R;A7-4Rを使用。A7-12D;A7-2Dを使用。A7-12R;A7-6Rを使用。A7-13D;A7-7Dを使用。A7-13R;A7Rを使用。A7-14D;A7-4Dを使用。A7-14R;A7-5Rを使用。A7-15D;A7-6Dを使用。A7-15R;A7-7Rを使用。A7-16D;A7-2Dを使用。A7-16R;A7-4Rを使用。A7-17D;A7-4Dを使用。A7-17R;A7Rを使用。A7-18D;A7-6Dを使用。A7-18RA7-5Rを使用。A18-1;5’-ATCCCCTGCTCTGCTAAAAAAGAATGGATGTTGACTCTCAGGCCCTAGTTCTTGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A18-1R;A18Rを使用。A18-2D;5’-CTAAAGTGCTGGGATTACAGGCATAAGCCACCGTGCCCGGCTGGAGCATTGGGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A18-2R;5’-ACTACTTACACATTTCGAGTTTTAAATAAGGCGTTCAATATAGAGTGAACACCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’A18-3D;5’-CAGGCATAAGCCACCGCACCCGGCCACCCCTTACTAATTTTTAGTAACGTCGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’A18-3R;5’-CTGATTGACTTTGACCTCTGCTTTCCAACTTTGCCCCAAAGAAAGTTAGTCACCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’A18-4D;A18-3Dを使用。A18-4R;5’-TTCAATGAAACAAGCTCTGTGAGGCTCATTTGTACCCATTTTGTTCAGTACTGCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’B5-1D;5’-ACATACCCAGAGACACTGAGAGAGACAGACAGACAGTAAACAGAGGAGCACGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’B5-1R;B5Rを使用。B5-2D;5’-GCTCAATTGTATCTTATGAAAACAATTTTTCAAAATAAAACAAGAGATATGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’B5-2R;B5Rを使用。B5-3D;5’-CCTGTGCTGAATACCGTCTGCATATGTATAGGAAAGGGTTAACTCAGCAGGGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’B5-3R;5’-TATGTGAATGGAAATAAAATAATCAAGCTTGTTAGAATTGTGTTCATAATGACCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’B5-4D;B5Dを使用。B5-4R;5’-GAAAGTCTACAATTTTTTCAGTTTAAAATGGTATTTATTTGTAACATGTACCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’B5-5D;B5-1Dを使用。B5-5R;5’-CAAAGATGAAGGATGAGAGTGACTTCTGCCTTCATTATGTTATGTGTTCATATCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’B5-6D;5’-CAGTGAATTATTCACTTTGTCTTAGTTAAGTAAAAATAAAATCTGACTGTGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’B5-6R;5’-GAACAGACAGGTGAATGAGCACAGAGGTCATTTGTAAACCGTTTGTGGTTAGCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’C14-1D;5’-CTTTTTGGCTTCTGTGTTTAAGTTATTTTTCCCCTAGGCCCACAAACAGAGTCGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’C14-1R;5’-AACCTTGGAAAAATTCTGTTGTGTTTAGAAGCATGTACCAATCTATCACTCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’C14-2D;5’-CTATTCACTGTCTGTAGGATGAAAAAGTTAATAACACCCTGAGAGGTTTCGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’C14-2R;5’-CCTTAGATTAGTTTATTGTATTTTTTATCAGCTACTATAAGGTTTACACACCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’C14-3D;5’-CAAGACCCTCAAAATTCAAAAATTTCCTTTATCTTGCTGTAGCACCTCCTGCGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’C14-3R;5’-GGAGGGGATAGGAAGGGGATGAGGCCTAACAGGTTGATGATCTAGGCTTTACCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’C14-4D;5’-CTCAAAAAGGAGATAATTCCAGCCCCTCGCCTTAAAGAATCCCTATCAAGTGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’C14-4R;C14-1Rを使用。C14-5D;5’-CGCTTGAACCTGGGAGGCAGAGGTTGCAGTGAGCCGAGATCACGCCGTTGGATCCTATTAATAGTAATCAATTACG-3’C14-5R;C14-1Rを使用。C14-6D;C14-4Dを使用。C14-6R;5’-TTAACTTTTTCATCCTACAGACAGTGAATAGTAAAGCTTTCTGTGAAGACATACCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’C14-7D;C14-2Dを使用。C14-7R;C14-1Rを使用。C14-8D;C14-3Dを使用。C14-8R;5’-AAATTATTTCCTGGTGGGCAATATTAGAATATGGGGAATGTTTGCTTCTGAGCCTAGTCAATAATCAATGTCAACG-3’C14-9D;C14-4Dを使用。C14-9R;C14-3Rを使用。C14-10D;C14-2Dを使用。C14-10R;C14Rを使用。C14-11D;C14-3Dを使用。C14-11R;C14-2Rを使用。C14-12D;C14-4Dを使用。C14-12R;C14-8Rを使用。C14-13D;C14-3Dを使用。C14-13R;C14-1Rを使用。C14-14D;C14-4Dを使用。C14-14R;C14-2Rを使用。A2の各断片のポリヌクレオチド配列においては、A2-1は配列表の配列番号1の1乃至3000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-2は配列表の配列番号1の2801乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-3は配列表の配列番号1の5401乃至8450番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-4は配列表の配列番号1の701乃至2700番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-5は配列表の配列番号1の701乃至2200番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-6は配列表の配列番号1の701乃至3700番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-7は配列表の配列番号1の2001乃至5000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-8は配列表の配列番号1の4001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-9は配列表の配列番号1の1乃至3700番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-10は配列表の配列番号1の2001乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-11は配列表の配列番号1の2801乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-12は配列表の配列番号1の701乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-13は配列表の配列番号1の2001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-14は配列表の配列番号1の2801乃至8450番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-15は配列表の配列番号1の1乃至5800番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A2-16は配列表の配列番号1の701乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてA2-17は配列表の配列番号1の2001乃至8450番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。A7の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、A7-1は配列表の配列番号2の601乃至3600番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-2は配列表の配列番号2の3601乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-3は配列表の配列番号2の5401乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-4は配列表の配列番号2の3401乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-5は配列表の配列番号2の1501乃至4500番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-6は配列表の配列番号2の4401乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-7は配列表の配列番号2の2401乃至5400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-8は配列表の配列番号2の1乃至3600番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-9は配列表の配列番号2の1501乃至5400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-10は配列表の配列番号2の2401乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-11は配列表の配列番号2の3401乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-12は配列表の配列番号2の4401乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-13は配列表の配列番号2の1乃至5400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-14は配列表の配列番号2の1501乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-15は配列表の配列番号2の2401乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-16は配列表の配列番号2の3401乃至8420番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A7-17は配列表の配列番号2の1乃至6400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてA7-18は配列表の配列番号2の1501乃至7400番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。A18の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、A18-1は配列表の配列番号3の1乃至5040番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A18-2は配列表の配列番号3の1001乃至6002番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、A18-3は配列表の配列番号3の2001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてA18-4は配列表の配列番号3の3000乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。B5の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、B5-1は配列表の配列番号4の1乃至4001番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-2は配列表の配列番号4の1乃至3200番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-3は配列表の配列番号4の2491乃至5601番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-4は配列表の配列番号4の5373乃至8401番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、B5-5は配列表の配列番号4の901乃至4001番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてB5-6は配列表の配列番号4の4001乃至7000番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。C14の各断片のポリヌクレオチド配列おいては、C14-1は配列表の配列番号5の960乃至4015番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-2は配列表の配列番号5の1987乃至5014番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-3は配列表の配列番号5の4020乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-4は配列表の配列番号5の960乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-5は配列表の配列番号5の960乃至6011番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-6は配列表の配列番号5の4939乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-7は配列表の配列番号5の960乃至5014番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-8は配列表の配列番号5の2994乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-9は配列表の配列番号5の4020乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-10は配列表の配列番号5の1乃至5014番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-11は配列表の配列番号5の1987乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-12は配列表の配列番号5の2994乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、C14-13は配列表の配列番号5の960乃至7119番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当し、そしてC14-14は配列表の配列番号5の1987乃至8141番目のヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列に相当する。各断片の全長配列上の始点と終点は、図18及び図19でも示されている。5-2配列長の異なるDNAエレメントの評価宿主細胞CHO―K1細胞ATCC、遺伝子導入試薬Lipofectamine2000を用いて、5-1で構築された各プラスミドの評価を実施した。2-3の方法と同様に、遺伝子導入後からhygromycinによる薬剤選択を行い、ポリクローナル安定発現株の樹立を行った。樹立された細胞株は、測定前日に培地交換後、一定細胞数を24穴プレートに播種し、播種24時間後に培養上清の回収を行い、SEAP活性の測定を行った。測定結果を図8、10、12、14、16に示す。fulllengthのDNAエレメントだけでなく、fulllengthより短い配列長を有するクローンにおいても発現亢進効果が確認された。このことより、DNAエレメントA2、A7、A18、B5、C14はfulllengthに比べて短い配列長を持つ場合においても外来遺伝子発現亢進活性を示すが、配列長がfulllengthの場合に最も大きな効果を発揮することが確認された。CHO細胞以外での効果実施例2~5における評価細胞にはCHO細胞が用いられてきたが、CHO細胞以外の細胞株としてHEK293細胞を選択した。HEK293細胞は10FCS入りのDMEM培地Invitrogenを用いて37°C、5CO2存在下で静置培養を行い、遺伝子導入前日に一定細胞数を6穴プレートに播種した。3-2で構築された各DNAエレメントを有するSEAP発現ベクターの評価を行うため、各プラスミド及び遺伝子導入試薬Lipofectamine2000Invitrogenを用いて遺伝子導入を行い、遺伝子導入2日後からhygromycinによる薬剤選択を約2週間行い、ポリクローナル安定発現株の樹立を行った。樹立された細胞株は、測定前日に培地交換後に一定細胞数を24穴plateに播種し、播種24時間後に培養上清の回収を行い、SEAP活性の測定を行った。培養上清中のSEAP活性は、SensoLyteTMpNPPSecretedAlkalinePhosphataseReporterAssayANASPECを用いて、測定した。測定結果を図17に示す。実施例3における結果と同様、各DNAエレメントはHEK293細胞においても外来遺伝子SEAPの高い発現亢進効果を有することが確認された。"