以下の使用が幹細胞または前駆細胞の細胞分化を誘導することを可能にする、骨芽細胞機能または分化の異常調節および/または骨芽細胞と破骨細胞との間の機能不均衡によって引き起こされる疾患を治療するための使用のための、次の一般式の化合物:式中、Xは、オルト、メタまたはパラ位において、H、OH、NH2、ハロゲン原子、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルまたはアリール基を表し;R8は、X基を有する炭素以外の炭素上のオルト、メタまたはパラ位において、NHR1、OR1またはNHR1を表し;Wは、H、OH、NH2またはハロゲン原子を表し;R1、R2およびR3は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して;水素原子;または1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基1以上の2重もしくは3重結合で任意に不飽和であり、1以上のヘテロ原子、1以上のハロゲン原子または1以上のアリールもしくはヘテロアリール基で任意に置換される;または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキル1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基またはアルコキシ基で任意に置換されるを表し;R4、R5、R6およびR7は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、H、Cl、Br、I、CN、NO2、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルから選択され;R3およびR4は、それらを有するキノリン環の隣接する窒素および炭素原子と一緒になって5もしくは6員環を形成するように縮合することができると解釈される。骨粗鬆症;ならびに骨減少症;骨形成不全症;高カルシウム血症;副甲状腺機能亢進症;骨軟化症;骨壊死;骨のパジェット病;リウマチ性関節炎;炎症性関節炎;骨髄炎;歯周炎;骨転移から生じる骨格の脆弱性および/または骨の希薄化および/または骨組織の脆化のような障害の治療のための、請求項1に記載の化合物。間葉細胞の骨芽細胞への分化を誘導することにより、怪我および/または外科手術後の骨組織の減少を改善するための、骨芽細胞へ分化させた自己細胞の移植片を製造するための、一般式の化合物:式中、Xは、オルト、メタまたはパラ位において、H、OH、NH2、ハロゲン原子、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルまたはアリール基を表し;R8は、X基を有する炭素以外の炭素上のオルト、メタまたはパラ位において、NHR1、OR1またはNHR1を表し;Wは、H、OH、NH2またはハロゲン原子を表し;R1、R2およびR3は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して;水素原子;または1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基1以上の2重もしくは3重結合で任意に不飽和であり、1以上のヘテロ原子、1以上のハロゲン原子または1以上のアリールもしくはヘテロアリール基で任意に置換される;または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキル1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基またはアルコキシ基で任意に置換されるを表し;R4、R5、R6およびR7は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、H、Cl、Br、I、CN、NO2、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルから選択され;R3およびR4は、それらを有するキノリン環の隣接する窒素および炭素原子と一緒になって5もしくは6員環を形成するように縮合することができると解釈される。R3基が3~8個の炭素原子を有するアルキル基であり;R2基が水素原子または1~3個の炭素原子を有するアルキル基であり;R4、R5、R6およびR7基が水素原子または1~3個の炭素原子を有するアルキル基を表すことを特徴とする、請求項1~3のいずれか1つに記載の化合物。化合物が、プロピル4ベンゾエート;エチル4ベンゾエート;エチル4ベンゾエート;4安息香酸;ブチル4ベンゾエート;tertブチル4ベンゾエート;ベンジル4ベンゾエート;Nフェニル1ヘキシル4ヒドロキシ2オキソ12ジヒドロキノリン3カルボキシアミド;イソプロピル4ベンゾエートから選択されることを特徴とする、請求項1~4のいずれか1つに記載の化合物。請求項1~5で定義される一般式の化合物の少なくとも1つを溶液状態で含み、成体幹細胞または前駆細胞の発達を可能にする液体栄養培地中で、前記細胞を十分な時間インキュベートすることにある工程を含む、成体幹細胞または前駆細胞から骨芽細胞を製造する方法。ブチル4ベンゾエートを除く、一般式の化合物:式中、Xは、オルト、メタまたはパラ位において、H、OH、NH2、ハロゲン原子、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルまたはアリール基を表し;R8は、X基を有する炭素以外の炭素上のオルト、メタまたはパラ位において、NHR1、OR1またはNHR1を表し;Wは、H、OH、NH2またはハロゲン原子を表し;R1およびR3は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、3~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基1以上の2重もしくは3重結合で任意に不飽和であり、1以上のヘテロ原子、1以上のハロゲン原子または1以上のアリールもしくはヘテロアリール基で任意に置換されるを表し;R4、R5、R6およびR7は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、H、Cl、Br、I、CN、NO2、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルから選択され;R3およびR4は、それらを有するキノリン環の隣接する窒素および炭素原子と一緒になって6員環を形成するように縮合することができると解釈される。医薬としての、請求項7に記載の一般式の化合物。活性成分として請求項8に記載の一般式の少なくとも1つの化合物および少なくとも1つの医薬的に許容な賦形剤を含むことを特徴とする医薬組成物。しかしながら、細胞分化を調節することができる新規な分子、特に、骨形成活性を有し、良好な活性と限られた費用を結びつけることができる分子を特定することはなお有用である;そのような分子は、骨関連の病態を治療するために特に興味があるであろう。本発明者らは、細胞分化、特に骨芽細胞分化を誘導することができる一般式の化合物を特定した;それゆえ、これらの化合物は、幹細胞または前駆細胞の骨芽細胞またはその他の細胞型への分化を刺激するための新規な薬剤を表す。幹細胞の用語は、細胞分化によって特殊化した細胞を生じることができ、それ自身を実質的に無制限に再生することができる未分化の胚または成体細胞を意味することが意図される。好ましくは、成体幹細胞が用いられる。前駆細胞は多能性の成体細胞、すなわち、その細胞分化がいくつかの細胞型をもたらすことができる細胞である。本出願において、細胞がアルカリホスファターゼを産生するとき、細胞が骨芽細胞分化に関与すると見なされ、その結果、それらは、骨芽細胞表現型を有する細胞と称される。そのような細胞は、栄養培地中でのそれらの継続的インキュベーションの間および/またはそれらの注入が、該細胞の少なくとも一部が最終分化のところまで分化することを高めることを可能にするほど骨芽細胞分化に十分に関与する。これらの細胞の特有の性質の実証は、慣用的、例えば以下の実験の部で言及される試験を用いて行うことができる。その結果、本発明の主体は、幹細胞または前駆細胞の細胞分化を誘導するための使用、具体的には、以下の使用が幹細胞または前駆細胞の細胞分化を誘導することを可能にする、骨芽細胞機能または分化の異常調節および/または骨芽細胞と破骨細胞との間の機能不均衡によって引き起こされる疾患を治療するための使用のための、次の一般式の化合物である:式中、Xは、オルト、メタまたはパラ位において、H、OH、NH2、ハロゲン原子、好ましくは塩素もしくは臭素、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルまたはアリール基を表し;R8は、X基を有する炭素以外の炭素上のオルト、メタまたはパラ位において、NHR1、OR1またはNHR1を表し;Wは、H、OH、NH2またはハロゲン原子、好ましくは塩素もしくは臭素を表し;R1、R2およびR3は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して;水素原子;または1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基1以上の2重もしくは3重結合で任意に不飽和であり、OおよびSのような1以上のヘテロ原子、1以上のハロゲン原子または1以上のアリールもしくはヘテロアリール基、好ましくはピリジン基で任意に置換される;または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキル1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基またはアルコキシ基で任意に置換されるを表し;R4、R5、R6およびR7は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、H、Cl、Br、I、CN、NO2、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキル、例えばシクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシルから選択され;R3およびR4は、それらを有するキノリン環の隣接する窒素および炭素原子と一緒になって5もしくは6員環を形成するように縮合することができると解釈される。本発明のために、アルキルの用語は、1~10個の炭素原子、好ましくは3~8個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖状の飽和炭化水素ベースの脂肪族基を意味することが意図される。分枝の用語は、1~6個の炭素原子を有する少なくとも1つのアルキル基、例えばメチルまたはエチルを、直鎖のアルキル鎖が有していることを意味する。ハロゲン原子の用語は、臭素、塩素、ヨウ素またはフッ素原子を意味することが意図され;臭素および塩素の意味が好ましい。アリール基の用語は、少なくとも1つの芳香環から誘導されるいずれかの官能基または置換基を意味することが意図され;フェニル、ベンジルシクロブテン、ペンタレン、ナフタレン、ベンジルフェニルおよびアントラセン基が挙げられうる。ヘテロアリール基の用語は、前で定義された芳香環の少なくとも1つから誘導され、かつP、S、OおよびNから選択されるヘテロ原子を少なくとも1つ含む、いずれかの官能基または置換基を意味することが意図されヘテロアリール基の中で、フラン、ピリジン、ピロール、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、ベンゾフラン、イソベンゾフラン、インドール、イソインドール、ベンゾチオフェン、ベンゾcチオフェン、ベンズイミダゾール、インダゾール、ベンズオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、キノリン、イソキノリン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プリンおよびアクリジン基が挙げられうる。好ましくは、一般式の化合物は、R3基が、3~8個の炭素原子を有するアルキル基、例えばヘキシル基であり;R2基が、水素原子または1~3個の炭素原子を有するアルキル基であり;R4、R5、R6およびR7基は、水素原子または1~3個の炭素原子を有するアルキル基を表すようなものである。一般式の化合物として、、非限定的に、次の化合物が特に挙げられうる:プロピル4ベンゾエートエチル4ベンゾエートエチル4ベンゾエート4安息香酸ブチル4ベンゾエートtertブチル4ベンゾエートベンジル4ベンゾエートNフェニル1ヘキシル4ヒドロキシ2オキソ12ジヒドロキノリン3カルボキシアミドイソプロピル4ベンゾエート本発明に基づく一般式の化合物は、図1に示される合成スキームに従って製造される。図1の合成スキームに従って、第1の工程において、アニリンが、キノリノンカルボキシレートを得るためにマイクロウエーブ照射下、トリエチルメタントリカルボキシレートと縮合され;次に、該キノロンが、カルボキシアミドキノリノンエステルを得るためにマイクロウエーブ照射下、4tertブチルアニリンと縮合され;次の工程は、酸を得るためにこれらの化合物のエステル官能基をけん化することからなり、該酸が、実施例に示される種々の変更のための出発点である。本発明による一般式の化合物は、間葉細胞の骨芽細胞への分化を誘導する性質を有する。この点で、これらの化合物は、骨芽細胞への分化が誘導された自己細胞から得られる移植片の製造で興味がある;これらの移植片は、怪我および/または外科手術後の骨組織の減少を改善するのに役に立つ。、それゆえ、一般式の化合物は、骨芽細胞機能または分化の異常調節および/または骨芽細胞と破骨細胞との間の機能不均衡によって引き起こされる疾患の治療で特に興味がある。具体的には、これらの化合物は、骨粗鬆症;ならびに骨減少症;骨形成不全症;高カルシウム血症;副甲状腺機能亢進症;骨軟化症;骨壊死;骨のパジェット病;リウマチ性関節炎;炎症性関節炎;骨髄炎;歯周炎;骨転移から生じる骨格の脆弱性および/または骨の希薄化および/または骨組織の脆化のような障害の治療に役に立つ。さらに、より一般的に、前駆細胞分化に作用する分子は、多くの急性、亜急性または慢性、遺伝的または後天的病態の内科的または外科的治療において、非限定的に、神経系中枢神経系および末梢神経系、骨、軟骨、精巣、肝臓、脾臓、腸、膵臓、腎臓、平滑筋および骨格筋、心臓、肺、皮膚および体毛系、粘膜、血液細胞および免疫細胞のような組織の活性の形成、再生、回復および/または増加を誘導するのに役に立つ。これらの病態の非限定の例として、神経障害および関連神経筋疾患、糖尿病、脱毛症、やけど、潰瘍ならびに精子形成障害が特に挙げられうる。本発明は、溶液状態で一般式の化合物の少なくとも1つを含み、幹細胞または間葉細胞のような前駆細胞の発達を可能にする液体栄養培地中で、幹細胞または間葉細胞のような前駆細胞を十分な時間インキュベートする工程を含む、幹細胞または間葉細胞のような前駆細胞から骨芽細胞を製造する方法にも関する。実際には、前記細胞は、それらの発達、すなわちそれらの生存だけでなく増殖および/または分化を可能にする標準的条件下の培地中でインキュベートされる。ヒト細胞を培養するための標準的条件は知れらており、例えば約37°Cの温度;空気CO955の雰囲気;中性に近いpHである。用いられる培地は、哺乳動物の細胞の発達に必要な成分を含む、慣用の液体栄養培地である。これらの成分は知られている。それらは、主に無機塩、アミノ酸、ビタミンおよび炭素源である。ウシ胎仔血清または好ましくは自己ヒト血清が追加されたイーグル最小必須培地MEMのような栄養培地の使用が特に挙げられうる。任意にハムF12培地との混合物として、血清を含むか含まない、好ましくは自己血清の存在下での、DMEタイプのより手の込んだ栄養培地も使用されうる。これらの培地は、前記以外のBMP因子のような骨誘導因子が追加されうる。これらの因子は、本発明の方法で用いられるヒト細胞の骨芽細胞分化を誘導するために必ずしも必要でない。それゆえ、骨誘導因子を含まない培地を用いることができる。好ましくは、用いられる培地は、アスコルビン酸およびβグリセロホスフェートのような骨促進因子が追加される。本発明は、ブチル4ベンゾエート自身および医薬としてその使用のためを除く、一般式の新規な化合物にも関する:式中、Xは、オルト、メタまたはパラ位において、H、OH、NH2、ハロゲン原子、好ましくは塩素もしくは臭素、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、3~8個の炭素原子を有するシクロアルキルまたはアリール基を表し;R8は、X基を有する炭素以外の炭素上のオルト、メタまたはパラ位において、NHR1、OR1またはNHR1を表し;Wは、H、OH、NH2またはハロゲン原子、好ましくは塩素もしくは臭素を表し;R1およびR3は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、3~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基1以上の2重もしくは3重結合で任意に不飽和であり、OおよびSのような1以上のヘテロ原子、1以上のハロゲン原子または1以上のアリールもしくはヘテロアリール基、好ましくはピリジン基で任意に置換されるを表し;R4、R5、R6およびR7は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、H、Cl、Br、I、CN、NO2、1~10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、または3~8個の炭素原子を有するシクロアルキル、例えばシクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシルから選択され;R3およびR4は、それらを有するキノリン環の隣接する窒素および炭素原子と一緒になって6員環を形成するように縮合することができると解釈される。好ましいR5およびR7基は、互いに独立して、H、Cl、Br、CNおよびアルキル基またはアルコキシ基から選択される。有用な用量は、治療される病気、投与経路および投与速度により、ならびに治療される対象ヒトまたは動物の種および体重によっても変化するであろう。本発明は、活性成分として本発明による一般式の少なくとも1つの化合物および少なくとも1つの医薬的に許容な賦形剤を含むことを特徴とする医薬組成物にも関する。本発明に基づく医薬組成物において、好ましくは、一般式の化合物は、およそ1mg~2gの間の単位用量で投与することができる量で用いられる。当業者は、医薬組成物の投与経路により、1以上の医薬的に許容な賦形剤を選択するであろう。もちろんその際に、当業者は、用いられる賦形剤が本発明に基づく組成物に関連する固有特性と両立できることを確認するであろう。さらに、医薬または薬組成物の形態例えば、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、カプセル剤、坐剤等は、選択される投与経路に依存するであろう。したがって、本発明のために、医薬または医薬組成物は、例えば、経口、肛門、局所、全身、静脈内、筋肉内または粘膜のようないずれかの適した経路あるいはパッチを用いて、代替として、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル等の状態でカプセル化された形態または固定化された形態で投与される。経口投与に適した賦形剤の非限定的な例として、特に、タルク、乳糖、澱粉およびその誘導体、セルロースおよびその誘導体、ポリエチレングリコール、アクリル酸ポリマー、ゼラチン、ステアリン酸マグネシウム、動物性、植物性または合成脂肪、パラフィン誘導体、グリコール、安定化剤、保存剤、酸化防止剤、湿潤剤、凝固防止剤、分散剤、乳化剤、味覚調節剤、浸透剤、可溶化剤等が挙げられうる。医薬および医薬組成物の製剤化および投与の技術は、ここでの考慮の技術でよく知られており、特に、当業者は、ハンドブックRemingtonsPharmaceuticalSciencesを参照することができる。前記の取り決めに加えて、本発明は、以下の記載から現れるであろうその他の取り決めも含み、それは、本発明による一般式の化合物の合成の実施例、使用の実施例に言及し、次における添付の図にも言及する:実施例1:式の種々の化合物の合成エチル1ヘキシル4ヒドロキシ2オキソ12ジヒドロキノリン3カルボキシレートの製造コンデンサーを備えた丸底フラスコ中、メタントリカルボン酸トリエチルエステルの溶液に、Nヘキシルアニリンを加える。得られる反応混合物をCEMDiscoveryマイクロウエーブオーブン中に入れ、開放した丸底フラスコ中で照射し、次いで生成されるエタノールを溜去するパラメータは次のとおりである:出力250W、温度225°C、実行時間5分、保持時間15分。マイクロウエーブ加熱後、粗反応混合物を、41で石油エーテル:酢酸エチルを用いるクロマトグラフィーカラムで精製する。得られる結晶の生成物を乾燥し、本化合物:収量430mgを得る。1HNMRδ816764727719448418172086IAtertブチル4ベンゾエートエチル1ヘキシル4ヒドロキシ2オキソ12ジヒドロキノリン3カルボキシレートおよびtertブチル4アミノベンゾエートを無水トルエン中に懸濁し、開放の容器を用いてマイクロウエーブ加熱したパラメータは次のとおりである:出力200W、温度120°C、実行時間7分、保持時間10分。反応の最後で、溶媒の23をコンデンサーなしで蒸発させる。粗反応混合物を41の石油エーテル:酢酸エチルを用いるクロマトグラフィーカラムにより精製する。得られる結晶の生成物を乾燥し、標記の化合物:収量195mgを得る。1HNMRδ816790775738425160152139128084IB4安息香酸0°Cに冷却したトリフルオロ酢酸の溶液に、tertブチル4ベンゾエートを少しずつ加え、該混合物を3時間反応させる。得られる粗生成物を、白色の結晶固体が生じるまでエチルエーテルで洗浄する。生成物を乾燥し、収量61mgを得る。1HNMRδ816797765738427159139128084ICベンジル4ベンゾエート4安息香酸のTHF溶液を0°Cに冷却し、ベンジルアルコールをEDCIおよびジメチルアミノピリジンと一緒に加える。反応混合物を終夜撹拌する。有機層を水で洗浄し、減圧下に蒸発させる。粗生成物を41石油エーテル:酢酸エチルを用いるカラムクロマトグラフィーで精製し、収量30mgを得る。1HNMRδ816804783768746725738530428159141115084実施例II一般式の化合物の骨形成への効果の立証本発明に基づく一般式の骨形成の刺激に対する効果を、インビトロで多能性間葉細胞株C3H10T12の分化を分析することにより測定した。II1材料と方法化合物の溶解、細胞培養式の試験化合物は、ジメチルスルホキシド中、25mMの濃度に溶解され、次いで、用いられるまで20°Cの温度で保存された。C3H10T12多能性線維芽細胞株は、10のウシ胎仔血清が追加されたDMEM培地中、37°Cの温度で、5CO2雰囲気下、播種後24時間、ATCCによって推奨される条件下で培養され、該細胞は、前記培地で直接希釈された一般式の化合物の存在下、6日間刺激された。これらの化合物による活性化は、前記細胞株の骨芽細胞系への分化を引き起こし、後者がアルカリホスファターゼを発現できるようする。次いで、該アルカリホスファターゼを組織化学および酵素アッセイにより検出する。組織化学によるアルカリホスファターゼの検出この実験のために、細胞はガラス製のカバースリップを含む6ウエルプレート中で培養され、005mgmlポリDリシンで1時間処理される。C3H10T12細胞をウエル当たり150000細胞の密度で播種する。化合物を10μMの濃度で適用し、記載された手順に従ってSigma染色キットを用いた。簡単に言えば、クエン酸塩/アセトンの溶液で30秒間、細胞を固定した後、次いで再蒸留水で洗浄し、暗所で、FastVioletナフトールの溶液の存在下、30分間染色を行った。次いで、カバースリップを再蒸留水で完全に洗浄し、次いで水性媒体中で標本にした後、DMRXA2顕微鏡で撮影した。アルカリホスファターゼを発現する細胞は赤く染色される。96ウエルプレート中でのアルカリホスファターゼの酵素アッセイC3H10T12細胞を、ウエル当たり5×103細胞の密度で96ウエルプレートに播種した。化合物を10nM~10μMの範囲の増大濃度で適用した。次いでプレートを6日間インキュベートし、次いで、前に記載された方法に従って、4反復でアッセイを行った。細胞を冷たいリン酸緩衝液中で洗浄し、次いで、09のNaClおよび02のTritonX100を含む50μlの溶液中、4°Cでの超音波処理により溶解した。次いで、得られた溶解物中のアルカリホスファターゼを、Pepinskyらによって記載された方法に従って測定した。100μlの反応緩衝液と50μlの基質の溶液を添加後、該溶解物を37°Cで60分間インキュベートし、次いで光学密度を415nmの波長で読み取った。比較のために、ヘッジホッグ経路に作用することによって骨形成を活性化するSAG化合物の活性を同条件下で試験した。GraphPadPrism4ソフトウエアを用いて、曲線を描き、有効濃度50を決定した。II2結果II21式の化合物による、間葉系幹細胞の骨芽細胞系への分化の組織化学的実証C3H10T12多能性細胞での骨形成の刺激を、アルカリホスファターゼの誘導を観察することによりアッセイした。10μMの式の化合物の存在下での分化の6日後、APの発現を組織化学的染色によって検出した。例として、化合物1、4、6および8の存在下、標識された細胞数の増加が、程度の差はあるが強い輝度で観察された。溶媒で処理された細胞は、この方法による検出可能なレベルでAPを発現しない。II22式の化合物による、間葉系幹細胞の分化:アルカリホスファターゼ活性のアッセイ式の化合物の用量作用曲線を10nM~10μMの間で作図し、C3H10T12細胞分化の活性化に対する化合物の親和性を測定した。図3は、受容体アゴニストSAGのそれと並行して作成された、化合物1の代表的曲線を示している。それらの親和性は類似しているが、SAGは化合物1より低い最大刺激を与える。化合物2~9に対して得られた曲線が図4~11に示される。これらの化合物全て、それぞれの化合物に対して特徴的な差を有して分化を刺激することができる。最大の活性は、大半は10μMで観察される。これらの曲線の搾取の結果が、以下の表Iに示される。化合物の親和性は、1マイクロモルのオーダーである。化合物2は、化合物1の4の最大活性を有して最も低い活性である。逆に、化合物4は、06μmの親和性と化合物1のそれより20大きい最大刺激を有して最も良好な活性を示す化合物である。分化に対する化合物の有効濃度50はμMで表される。最大刺激は、同じ実験において化合物1で得られた最大刺激の百分率として表される。データは2~5の独立実験の平均に相当する。参考文献AghalooTLCMamanteaetalOxysterolsenhanceosteoblastdifferentiationinvitroandbonehealinginvivoJOrthopRes25148897AmanteaCMWKKimetalOxysterolinducedosteogenicdifferentiationofmarrowstromalcellsisregulatedbyDkk1inhibitableandPI3kinasemediatedsignalingJCellBiochem10542436BelotiMMLSBellesinietalPurmorphamineenhancesosteogenicactivityofhumanosteoblastsderivedfrombonemarrowmesenchymalcellsCellBiolInt2953741BoonenSCRosenetalMusculoskeletaleffectsoftherecombinanthumanIGFIIGFbindingprotein3complexinosteoporoticpatientswithproximalfemoralfractureadoubleblindplacebocontrolledpilotstudyJClinEndocrinolMetab8715939CentrellaMMCHorowitzetalTransforminggrowthfactorbetagenefamilymembersandboneEndocrRev152739ChenJKJTaipaleetalSmallmoleculemodulationofSmoothenedactivityProcNatlAcadSciUSA99140716CorcoranRBandMPScottOxysterolsstimulateSonichedgehogsignaltransductionandproliferationofmedulloblastomacellsProcNatlAcadSciUSA103840813DwyerJRNSeveretalOxysterolsarenovelactivatorsofthehedgehogsignalingpathwayinpluripotentmesenchymalcellsJBiolChem282895968FrankKamenetskyMXMZhangetalSmallmoleculemodulatorsofHedgehogsignalingidentificationandcharacterizationofSmoothenedagonistsandantagonistsJBiol110FromigueODModrowskietalGrowthfactorsandboneformationinosteoporosisrolesforfibroblastgrowthfactorandtransforminggrowthfactorbetaCurrPharmDes102593603GiustinaAGMazziottietalGrowthhormoneinsulinlikegrowthfactorsandtheskeletonEndocrRev2953559GuanCCMYanetalSonichedgehogalleviatestheinhibitoryeffectsofhighglucoseontheosteoblasticdifferentiationofbonemarrowstromalcellsBone45114652HuHMJHiltonetalSequentialrolesofHedgehogandWntsignalinginosteoblastdevelopmentDevelopment1324960InghamPWandAPMcMahonHedgehogsignalinginanimaldevelopmentparadigmsandprinciplesGenesDev15305987JohnsonEEandMRUristHumanbonemorphogeneticproteinallograftingforreconstructionoffemoralnonunionClinOrthopRelatRes6174LumLandPABeachyTheHedgehogresponsenetworksensorsswitchesandroutersScience30417559MartiEandPBovolentaSonichedgehoginCNSdevelopmentonesignalmultipleoutputsTrendsNeurosci258996MohammadKSCGChenetalPharmacologicinhibitionoftheTGFbetatypeIreceptorkinasehasanabolicandanticataboliceffectsonbonePLoSOne4e5275PepinskyRBCZengetalIdentificationofapalmiticacidmodifiedformofhumanSonichedgehogJBiolChem2731403745SpinellaJaegleSGRawadietalSonichedgehogincreasesthecommitmentofpluripotentmesenchymalcellsintotheosteoblasticlineageandabolishesadipocyticdifferentiationJCellSci114208594vanderHorstGHFarihSipsetalHedgehogstimulatesonlyosteoblasticdifferentiationofundifferentiatedKS483cellsBone33899910VarjosaloMandJTaipaleHedgehogfunctionsandmechanismsGenesDev22245472WechslerReyaRandMPScottThedevelopmentalbiologyofbraintumorsAnnuRevNeurosci24385428WuXJWalkeretalPurmorphamineinducesosteogenesisbyactivationofthehedgehogsignalingpathwayChemBiol11122938YamaguchiATKomorietalRegulationofosteoblastdifferentiationmediatedbybonemorphogeneticproteinshedgehogsandCbfa1EndocrRev21393411YuPBCCHongetalDorsomorphininhibitsBMPsignalsrequiredforembryogenesisandironmetabolismNatChemBiol43341