"モノクローナル抗体もしくはその免疫反応性断片であるか、又は抗体模倣物又は二重特異性抗体である結合部分であって、インフルエンザA型の代表的なグループ1及びグループ2の両方を含むインフルエンザウイルスクレードに由来するHA0タンパク質ストーク領域と交差反応する結合部分。インフルエンザウイルスクレードH1、H7及びH9、又はインフルエンザウイルスクレードH1、H7及びH3に由来するHA0タンパク質ストーク領域と交差反応する、請求項1に記載の結合部分。MAB53と同じエピトープに結合する、請求項1又は2に記載の結合部分。インビトロでpH6においてインフルエンザHA0タンパク質への結合を維持するか、又はエンドソーム経路による取込み後も前記ウイルスへの結合を維持する、請求項1~3のいずれか1項に記載の結合部分。ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である、抗体又はその断片である、請求項1~4のいずれか1項に記載の結合部分。MDCK細胞における、H1N1、H7N3又はH5N1ウイルスによる感染を中和する、請求項1~5のいずれかに記載の結合部分。マウスにおいて、そのような投与がなければ致死力価となるH1N1又はH5N1の感染に対して、1~10mg/kgの単回投与で防御効果を示す、請求項1~6のいずれか1項に記載の結合部分。抗体又はその断片であり、配列GGIIRKYAIN配列番号77の重鎖CDR1;配列GGIIAIFNTANYAQKFQG配列番号78の重鎖CDR2;配列ARGMNYYSDYFDY配列番号79の重鎖CDR3;配列RASQSVRSNNLA配列番号80の軽鎖CDR1;配列GASSRAT配列番号81の軽鎖CDR2;もしくは配列QQYGSSPALT配列番号82の軽鎖CDR3;又はそれらの組合せを含む、請求項1に記載の結合部分。配列GGIIRKYAIN配列番号77のCDR1、配列GGIIAIFNTANYAQKFQG配列番号78のCDR2、及び配列ARGMNYYSDYFDY配列番号79のCDR3を含む重鎖を含む、請求項8に記載の抗体又は断片。配列RASQSVRSNNLA配列番号80のCDR1、配列GASSRAT配列番号81のCDR2、及び配列QQYGSSPALT配列番号82のCDR3を含む軽鎖を含む、請求項8に記載の抗体又は断片。配列RASQSVRSNNLA配列番号80のCDR1、配列GASSRAT配列番号81のCDR2、及び配列QQYGSSPALT配列番号82のCDR3を含む軽鎖を含む、請求項9に記載の抗体又は断片。配列QVQLVQSGAEVRKPGSSVKVSCKVSGGIIRKYAINWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFNTANYAQKFQGRVTITADESTSTVYMELSSLRSEDTALYYCARGMNYYSDYFDYWGQGSLVTVSP配列番号75の1~120番目のアミノ酸を含む重鎖を含む、請求項8に記載の抗体又は断片。配列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSNNLAWYQHKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPALTFGGGTKVEIK配列番号76の1~109番目のアミノ酸を含む軽鎖を含む、請求項8に記載の抗体又は断片。配列EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSNNLAWYQHKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPALTFGGGTKVEIK配列番号76の1~109番目のアミノ酸を含む軽鎖を含む、請求項12に記載の抗体又は断片。請求項1~14のいずれか1項に記載の結合部分を含む医薬組成物。対象に有効量の請求項15に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるインフルエンザ感染の治療又は予防のための方法。発現制御配列に作動可能に連結された請求項8~14のいずれか1項に記載の抗体又は断片の重鎖又は軽鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を含む組換え発現系。請求項17に記載の発現系を含むように改変された組換え宿主細胞。請求項18に記載の細胞を前記ヌクレオチド配列が発現される条件下で培養することを含む、インフルエンザウイルスと免疫反応性のモノクローナル抗体又は断片の製造方法。本発明は、有用な抗体を提供するものであり、そのような抗体の後の容易な組換え技術による製造のために関連コード配列を解読し、保存することができるように該抗体を分泌する細胞を特定するための有効な手段を提供することを含む。当該方法には、二値論理に基づいたスクリーニング手順の設計が含まれる。そのような手順は、ヒト細胞に対して、特に、米国特許第7,413,868号参照により本明細書に組み込まれるに記載のCellSpot商標法を用いて容易に適用することができる。簡単に述べれば、該方法により、ヒト又は他の対象から得られた個々の細胞を、粒状標識での標識及び顕微鏡的観察を利用してハイスループットアッセイにおいてスクリーニングすることができる。例示的な一実施形態において、単独の細胞であっても、分泌された抗体について、該分泌された抗体を表面上に吸着又はカップリングさせ、次いで前記表面を、それぞれ識別用粒状標識にカップリングさせた所望の抗原で処理することにより解析することができる。従って、顕微鏡を用いることにより細胞のフットプリントを確認することができる。この手法を使用することで、数百万個もの細胞を所望の抗体の分泌についてスクリーニングすることができ、さらには、希少な抗体、例えば、本明細書における株全体に亘る受動インフルエンザ免疫化に望ましい抗体を回収することができる。ヒト対象には少なくとも一部のインフルエンザ株に対する抗体が既に存在しており、かつ、本発明の方法によって得られる抗体は保存配列に結合するため、このような抗体は、ヒト集団が経験を有する株とともに新しい株にも対処する目的に供される。本発明は、血球凝集素HA0切断部位コンセンサス配列の近傍の位置に結合するモノクローナル抗体を同定する方法を提供する。該方法は、候補モノクローナル抗体又は断片を:i前記コンセンサス配列の上流又は下流のアミノ酸配列から本質的になるが、前記コンセンサス配列が欠落したペプチド;ii前記コンセンサス配列の上流のアミノ酸配列から本質的になり、前記コンセンサス配列を含むペプチド;及びiii前記コンセンサス配列の下流のアミノ酸配列から本質的になり、前記コンセンサス配列を含むペプチドと接触させることを含み;ここで、iiとiiiのペプチドに結合するがiのペプチドには結合しないモノクローナル抗体が、HA0切断部位コンセンサス配列に特異的に結合するペプチドと同定される。また、二値論理に従う限り、当業者には明白であろう他の組合せを使用してもよい。例えば、i第1の株のコンセンサス配列の上流のアミノ酸から本質的になり、コンセンサス配列が欠落したペプチドを、ii第1の株に由来する完全HA0配列、及びiii第2の株に由来する完全HA0配列と共に使用してもよい。また、より短い部分を使用してもよい。また、さらなる確認のために、保存領域から単離したペプチドを使用してもよいが、より大きいタンパク質ドメインから得られる情報の方が完全抗原の認識に関する情報がより多く得られると考えられる。本方法はCellSpot商標法の使用に限定されず、ヒト抗体にも限定されない。該方法の二値論理は、任意の択一的なスクリーニング方法において使用することができる。同様に、前記方法は、天然免疫グロブリンに加えて、他の多様なライブラリーにも適用することができる。本発明の方法は二値論理に依存し、所望のコンセンサス配列及び上流及び/又は下流の追加部分を含むペプチドを試験ペプチドとして使用し、コンセンサス配列に欠ける領域と比較した抗体との複合体形成能を評価する。従って、適切な抗体を分泌している細胞を即座に特定できるパターンが得られる。例示的な一実施形態では、3種類の抗原を使用し、分泌抗体集団を評価する。第1のペプチドは、HA0に含まれるコンセンサス配列の上流のアミノ酸配列の全部又は実質的に全部であり、赤色などの粒状標識に結合させる。第2の試験抗原は、このような上流配列を含むが、コンセンサス配列も含み、異なる色、例えば青色の粒子で標識する。第3の試験ペプチドは、コンセンサス配列とHA0タンパク質の下流領域の全部又は実質的に全部を含み、第3の色、例えば緑色の粒状物で標識する上流部分は、コンセンサス配列からN末端の方向を意味し、下流部分は、コンセンサス配列からC末端の方向に向けて連続するアミノ酸配列を意味する。実質的に全部は、1個だけ、又は数個の非必須アミノ酸の欠落を意味する。コンセンサス配列に結合する抗体は、緑色及び青色の両方の粒状標識ペプチドに結合するが、コンセンサス配列が欠落した赤色標識された上流配列には結合しない。所望により、例えば黄色の粒状物標識に結合した、コンセンサス配列を有しない下流部分のみに代表される第4のペプチドを加えることにより特異性を確認することができ、ここで、黄色の粒状標識は本発明の抗体に結合しない。もちろん、上流部分又は下流部分を陰性対照として選択してもよい。様々なインフルエンザA型株及びインフルエンザB型株の切断部位が知られている。例えば、Bianchiらによる上述の論文には、表1に、いくつかのそのような株の切断部位周囲の配列が示されている。示したように、厳密なコンセンサスは、切断部位の上流のアルギニン残基から始まっており、従って、本発明の試験ペプチドに含まれる好ましいコンセンサス配列は、配列RGI/L/FFGAIAGFLE配列番号7を有する。試験ペプチドにおいて、この配列の一部分のみを使用することもできる。所望の抗体を分泌する細胞が同定された後、該抗体をコードするヌクレオチド配列を解読し、かつ、所望の抗体を組換え技術により大規模に製造することは容易に行われる。また、これにより、例えば、一本鎖抗体、又はその可変領域のみが産生できるように抗体を操作することも可能となる。解読した核酸は、後の組換え製造のために物理的に保存、回収してもよく、かつ/又は、該抗体をコードする配列に関する配列情報を解読し、後に適切な核酸を合成するために保存してもよい。既知の組換え製造法に加え、コード配列に含まれる情報が入手可能であり、かつ、迅速な合成及びクローニング技術があることにより、世界的流行又は他の緊急の事象の場合に、必要とされる抗体を迅速に製造することができる。本出願人らは、複数のクレードのインフルエンザのHA0タンパク質と免疫反応性である複数のモノクローナル抗体を回収した配列番号9~23、26~40、42~56、及び59~73。他の配列として、ヒトIgG1重鎖定常領域のアミノ酸配列配列番号8、ヒト軽鎖定常κ領域のアミノ酸配列配列番号24、ヒト軽鎖定常λ領域のアミノ酸配列配列番号25、ヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列配列番号41、ヒト軽鎖定常κ領域のヌクレオチド配列配列番号57、及びヒト軽鎖定常λ領域のヌクレオチド配列配列番号58が含まれる。これらのmAbのうち2種類のMAB53及びMAB8は、重要な遠縁インフルエンザクレード間において実質的な交差反応性を有する。図1A及びBに示すように、これらの各々は、3種類の異なるクレードに適度な親和性又は高親和性で結合する。MAB53は、H1、H9及びH7クレードに由来するHA0に結合し、MAB8は、H1、H7及びH3クレードに由来するHA0タンパク質に結合する。図1に示した結果は、HA0タンパク質に対するELISAアッセイにより得たものであり、親和性がナノモル域であることを示す。全てのグループ1クレードに由来するHAの天然三量体に対する反応性を、HEK293細胞で発現させたHAを用いて、フローサイトメトリーにより測定した抗体結合で確認した。図2A及び2Bに示すとおり、これらの結果を、択一的なアッセイ系である、ForteBio登録商標バイオセンサーと呼ばれるバイオレベル干渉法に基づく結合アッセイを用いて確認した。本アッセイでより厳密に測定することにより、親和性は以下のとおりであった:MAB53/H1=60pM,H5=6nM,H7=70pM,H9=30pMMAB8/H1=9nM,H3=16nM,H5=0.2nMMAB53及びMAB8は共に完全ヒト抗体であるが、他の種に特有の同様の抗体も本発明に含まれる。本発明との関連において、抗体及びその断片は、結合に関連する分子の一部分が含まれ;従って、断片は可変領域のみを含んでいてもよく、一般的な用語としての抗体はこのような断片も包含すると考えてもよい。従って、Fab断片、Fab’2、及びFv断片、並びに組換えにより作製された一本鎖抗体、及び二重特異性物質を与えるこのような構築物の融合体も包含される。キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体は、全て本発明の範囲に含まれ、フィブロネクチン、トランスフェリン又はリポカリンなどの他のタンパク質骨格を基礎とした抗体模倣物も本発明の範囲に含まれる。同様に、現在、2種類の別々の抗体に由来する抗原特異的ドメインが組み込まれた1種類の抗体様分子二重特異性抗体を作製するための複数の技術が存在している。従って、非常に広範な株に反応性を有する1種類の抗体が、それぞれグループ1及びグループ2に対して広範な反応性を有する個々の抗体のFabドメインを用いて構築することができる。好適な技術は、MacrogenicsRockville,MD、MicrometBethesda,MD及びMerrimacCambridge,MAに記載されている例えば、OrcuttKD,AckermanME,CieslewiczM,QuirozE,SlusarczykAL,FrangioniJV,WittrupKD.AmodularIgG-scFvbispecificantibodytopology,ProteinEngDesSel.201023:221-228;FitzgeraldJ,LugovskoyA.Rationalengineeringofantibodytherapeuticstargetingmultipleoncogenepathways.MAbs.20111:33;BaeuerlePA,ReinhardtC.BispecificT-cellengagingantibodiesforCancertherapy.CancerRes.200969:4941-4944を参照。MAB53が結合するエピトープを同定するため、非切断HA0タンパク質、HA1断片及びHA2断片に対してELISAアッセイを行った。図3A及びBに示すとおり、MAB53は、高親和性でHA0に結合するがHA1には結合しないことから、相補的なHA2断片に結合することが示唆された。この仮説を確認するため、HA2に由来するペプチドを、C末端のビオチンでストレプトアビジンコートプレート上に固定化した。具体的には、試験配列はRGLFGAIAGFIENGW配列番号74とした。無関連な隣接部分も使用した。MAB53は、このペプチドに結合できることが確認された。MAB53は、ウェスタンブロットによる試験でHA0に結合しないことから、主要なエピトープは、少なくとも天然の立体構造の一部にあると思われる。また、MAB8及びMAB53は、H1クレードのHA0タンパク質への結合において互いに競合することから、同一又は近くのエピトープに結合することが見出された。これは、2μg/mlの抗体及び50nMのH1由来HA0を用いて、ForteBio登録商標アッセイを使用することにより示された。図4Aに示すとおり、ForteBio登録商標表面に結合したMAB53から得られたシグナルは、50nMのHA0溶液を添加すると増大する。しかし、次いでMAB8を添加すると、さらなるシグナルは発生しない。従って、MAB53はMAB8が結合するエピトープをブロックする。しかし、図4Bに示すとおり、HA0と免疫反応性である別の抗体MAB30は、結合したMAB53-HA0に添加するとシグナルが強化されるため、明らかに異なるエピトープに結合する。重要なことに、MAB53及びMAB8は、MAB8がpHを6まで下げるとHA0タンパク質から放出されるのに対し、MAB53は放出されないという点で異なる。この違いは、これにより中和能が予測されると思われるため意義深い。MDCK標的細胞でのプラーク減少アッセイにおけるMAB8のH1N1ウイルス感染中和能の試験では、1~5μg/mlという低用量のMAB53が、H1N1、H7N3、H5N1及びH9N2による感染を中和した。しかし、MAB8は、これらの株による感染を中和しない。従って、一次スクリーニングの間に結合MAB又は断片をpH6で洗浄することにより、中和株を優先的に選択することができる。HA0から除去されることにより、抗体-ウイルス複合体として維持されていそうにないMABは、エンドソーム区画を介して細胞内に入り、それによりウイルス中和能が低減されると予測される。例えば、CellSpot法では、HA0を固相支持体蛍光ビーズに結合させ、MAB又はMAB混合物によって捕捉し、次いでpH6で洗浄する。MAB53は、組換え技術により作製されたものであり、配列決定されている。重鎖と軽鎖の完全長配列は以下のとおりである。重鎖:QVQLVQSGAEVRKPGSSVKVSCKVSGGIIRKYAINWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFNTANYAQKFQGRVTITADESTSTVYMELSSLRSEDTALYYCARGMNYYSDYFDYWGQGSLVTVSPASTKGPSVFPLVPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK配列番号75;及び軽鎖:EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSNNLAWYQHKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPALTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC配列番号76。下線の配列は可変ドメインであり、非下線の配列は、重鎖のIgG1定常鎖及び軽鎖のκ定常鎖を表す。また、これらの可変領域を、マッチするフレームワーク領域に基づきKabatCDR評価に従って解析した。図5Aに示すとおり、IGHV1-6901重鎖配列番号83のCDR1、CDR2及びCDR3は、それぞれ、GGIIRKYAIN配列番号77、GGIIAIFNTANYAQKFQG配列番号78及びARGMNYYSDYFDY配列番号79である。図5Bに示すとおり、IGKV3-2001軽鎖配列番号84のCDR1、CDR2及びCDR3は、それぞれ、RASQSVRSNNLA配列番号80、GASSRAT配列番号81及びQQYGSSPALT配列番号82である。図6に示すとおり、MAB53は、インビトロのプラークアッセイにおいてH1N1を中和する。また、図7に示すとおり、段階的用量のMAB53で前処理したマウスは、他の状況では致死的力価のH1N1及びH5N1ウイルスによる感染でも生存し、H1N1感染に対しては100の防御を示した。グループ2の株に対して活性を示さないCrucellに記載された先行技術の抗体と同等の効力である。ThrosbyM.ら,PLoSOne.20083:e3942.Epub2008Dec16。これらは、ヒトIgMメモリーB細胞から回収されたH5N1及びH1N1に交差防御的なヘテロサブタイプ中和モノクローナル抗体である。図7Aに示すとおり、MAB53は、10mg/kgで充分な防御を示し;2mg/kgで90が生存し、0.4mg/kgで50が生存した。それに比べ、Crucellの先行技術抗体では、2mg/kgで充分な防御を示したが、0.7mg/kgを投与した場合、20しか生存しなかった。ウイルス投与量の致死性は図7Aに示した実験のものより低い;90のマウスだけが感染後死亡しているが、図7Aに示した実験では、全てのマウスが6日目に死亡したにもかかわらずこのような結果となっている。これは、MAB53の能力が高いことを示す。H1N1による感染の代わりにH5N1による感染を行った場合、MAB53については図7Bに示すとおり、10mg/kgでは80が生存し;2mg/kgでは60が生存し、0.4mg/kgでは50が生存した。それに比べ、先行技術抗体では、5mg/kgで100の生存が得られ、1.7mg/kgでは60が生存した。従って、1.7mg/kgと2mg/kgでの生存率は同等であった。この試験においては、ウイルス投与量自体は、MAB53で試験したマウスの方が、若干能力が低かった。図8に示すとおり、MAB5310mg/kgを、感染後治療として3日目に、高度に病理的なH5N1株に対して投与した。対照抗体は、アイソタイプはマッチしているがどのインフルエンザ抗原も認識しない抗体とした。感染及び治療プロトコルは図7Aと同じであるが、-1日目ではなく3日目に投与した。ペプスキャン解析を行い、MAB53及びCR6261は、HAの類似する領域に結合するが、異なるエピトープに結合することが確立されたデータは非図示。これは、この2つの抗体の活性が異なることと整合する。従って、MAB53及び同じ条件下で同じエピトープに結合する抗体は、一時的流行及び世界的流行に対する集団の防御に適し、また、免疫機構が弱体化した患者の季節性インフルエンザに対する予防的又は治療的使用に適した受動ワクチンとして有効である。"