"配列:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Xaa1-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-Xaa2-Xaa3配列番号:1配列中、位置22のXaa1はNalまたはPheであり、位置43のXaa2はCysまたは存在せず、位置44のXaa3はCysまたは存在せず、C末端アミノ酸は任意でアミド化され、位置43のXaa2または位置44のXaa3がCysならば、どちらかまたは両者は任意でPEG化されるを含む、ペプチド。Xaa1がNalである、請求項1に記載のペプチド。Xaa1がPheである、請求項1に記載のペプチド。Xaa2およびXaa3が両者とも存在しない、請求項1~3のいずれか一項に記載のペプチド。Xaa2およびXaa3が各々Cysである、請求項1~3のいずれか一項に記載のペプチド。位置43のCysもしくは位置44のCysのどちらかまたは両者が、18~22kDaのPEG分子でPEG化される、請求項1~3または5のいずれか一項に記載のペプチド。PEG分子が20~21kDaである、請求項6に記載のペプチド。PEG分子が20kDaである、請求項6に記載のペプチド。各PEGが直鎖状である、請求項1~3または5~8のいずれか一項に記載のペプチド。C末端アミノ酸がアミド化される、請求項1~9のいずれか一項に記載のペプチド。配列:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-CysPEG20K-CysPEG20K配列番号:2配列中、位置44のPEG化Cysのカルボキシル基はアミド化されるを含む、請求項1~3または5~10のいずれか一項に記載のペプチド。配列:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Nal-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-CysPEG20K-CysPEG20K配列番号:3配列中、位置44のPEG化Cysのカルボキシル基はアミド化されるを含む、請求項1~3または5~10のいずれか一項に記載のペプチド。薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に請求項1~12のいずれか一項に記載のペプチドを含む、医薬製剤。1つまたは複数の他の治療剤を含む、請求項13に記載の医薬製剤。有効量の請求項1~12のいずれか一項に記載のペプチドを患者に対して投与することによって、患者の糖尿病を治療する方法。有効量の請求項1~12のいずれか一項に記載のペプチドを患者に対して投与することによって、患者の体重減量を誘導する方法。治療法で使用される、請求項1~12のいずれか一項に記載のペプチド。糖尿病の治療で使用するための、請求項1~12のいずれか一項に記載のペプチド。体重減量の治療で使用するための、請求項1~12のいずれか一項に記載のペプチド。本発明は、GIPおよびGLP-1の両者についての活性を修飾し、一方でグルカゴンに関する選択性を維持するように導入されたアミノ酸置換を持つ、新規の強力で効果的なペプチドを提供する。本発明は、GLP-1のグルコース低下効果を達成し、GIPのグルコース刺激性インスリン分泌効果を利用する。さらに、本発明の特定の化合物は、体重の減少に効果的な治療を提供する。本発明は、配列:配列中、位置22のXaa1はNalまたはPheであり、位置43のXaa2はCysまたは存在せず、位置44のXaa3はCysまたは存在せず、C末端アミノ酸は任意でアミド化され、位置43のXaa2または位置44のXaa3がCysならば、どちらかまたは両者は任意でPEG化されるを含むペプチドを提供する。本発明の一実施形態は、Xaa1がPheであるペプチドに関する。本発明の好ましい実施形態は、Xaa1がNalであるペプチドに関する。本発明の一実施形態は、Xaa2およびXaa3が存在しないペプチドに関する。本発明の好ましい実施形態は、Xaa2およびXaa3が各々Cysであるペプチドに関する。前記実施形態において、位置44のCysのカルボキシル基のアミド化は好ましい。本発明のさらに好ましい実施形態は、ペプチドが位置43および44のどちらかのCysで20kDaのPEG分子によりPEG化されるペプチドに関する。前記実施形態において、C末端Cysのカルボキシル基のアミド化は好ましい。本発明の別の好ましい実施形態は、ペプチドが位置43および44のCysの両者で20kDaのPEG分子によりPEG化されるペプチドに関する。前記実施形態において、C末端Cysのカルボキシル基のアミド化は好ましい。本発明の一実施形態は、Xaa1がPheであり、Xaa2およびXaa3が存在しないペプチドに関する。前記実施形態において、位置42のC末端Glnのカルボキシル基のアミド化は好ましい。本発明の好ましい実施形態は、Xaa1がNalであり、Xaa2およびXaa3が存在しないペプチドに関する。前記実施形態において、位置42のC末端Glnのカルボキシル基のアミド化は好ましい。本発明のより好ましい実施形態は、Xaa1がPheであり、Xaa2およびXaa3が両者ともCysであり、両者は任意でPEG化され、位置44のCysのカルボキシル基が任意でアミド化されるペプチドに関する。本発明の特に好ましい実施形態は、Xaa1がNalであり、Xaa2およびXaa3がCysであり、どちらかまたは両方のCysは任意でPEG化され、位置44のCysのカルボキシル基が任意でアミド化されるペプチドに関する。本発明の特に好ましい実施形態は、Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-CysPEG20K-CysPEG20K配列番号:2であり、位置44のCysはアミド化される。このペプチドは、Aib2,Aib13,Aib29,Cys43PEG20K,Cys44PEG20K-GIPと称される。本発明の最も好ましい実施形態は、Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Ile-Ala-Gln-Arg-Ala-Nal-Val-Gln-Trp-Leu-Ile-Ala-Aib-Lys-Gly-Lys-Lys-Gln-Glu-Trp-Lys-His-Gln-Ile-Thr-Gln-CysPEG20K-CysPEG20K配列番号:3であり、位置44のCysはアミド化される。このペプチドはAib2,Aib13,Nal22,Aib29,Cys43PEG20K,Cys44PEG20K-GIPと称される。本発明は、かかる治療を必要とする患者に対して有効量の本発明のペプチドを投与することを含む、患者の糖尿病を治療する方法も提供する。本発明は、かかる治療を必要とする患者に対して有効量の本発明のペプチドを投与することを含む、患者のインスリン非依存性糖尿病を治療する方法をさらに提供する。本発明は、かかる治療を必要とする患者に対して有効量の本発明のペプチドを投与することを含む、患者のインスリン依存性糖尿病を治療する方法をさらに提供する。さらに、本発明は、かかる治療を必要とする患者に対して有効量の本発明のペプチドを投与することによって、肥満、メタボリックシンドローム、冠動脈疾患およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される病態を治療する方法も提供する。さらに、本発明は、かかる治療を必要とする患者に対して有効量の本発明のペプチドを投与することによって、体重減少を誘導する方法を提供する。本発明は、かかる治療を必要とする患者に対して有効量の本発明のペプチドを投与することによって、虚弱を治療する方法または骨強度を増加させる方法も提供する。さらに、本発明は、治療法で使用するための本発明のペプチドを提供する。特定の実施形態において、本発明は、糖尿病の治療のために使用する本発明のペプチドを提供する。本発明は、インスリン非依存性糖尿病の治療のために使用する本発明のペプチドを提供する。本発明は、インスリン依存性糖尿病の治療のために使用する本発明のペプチドを提供する。さらに、本発明は、肥満の治療のために使用する本発明のペプチドを提供する。加えて、本発明は、肥満、メタボリックシンドローム、冠動脈疾患およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される病態の治療のために使用する本発明のペプチドを提供する。本発明は、体重減少の誘導のために使用する本発明のペプチドをさらに提供する。さらに、本発明は、虚弱の治療または骨強度を増加させるために使用するための本発明のペプチドを提供する。本発明は、糖尿病の治療のための医薬品の製造での本発明のペプチドの使用も提供する。本発明は、肥満の治療のための医薬品の製造での本発明のペプチドの使用も提供する。本発明は、メタボリックシンドローム、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症からなる群から選択される病態の治療のための医薬品の製造での上述されたペプチドの使用をさらに提供する。本発明は、体重減少の誘発のための医薬品の製造での本発明のペプチドの使用をさらに提供する。本発明は、虚弱の治療または骨強度の増加のための医薬品の製造での本発明のペプチドの使用も提供する。加えて、本発明は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に本発明のペプチドを含む医薬製剤を提供する。さらに、本発明は、糖尿病の治療に適合した医薬製剤を提供する。本発明は、インスリン非依存性糖尿病の治療に適合した医薬製剤を提供する。本発明は、インスリン依存性糖尿病の治療に適合した医薬製剤を提供する。さらに、本発明は、肥満の治療に適合した医薬製剤を提供する。本発明は、メタボリックシンドローム、冠動脈疾患およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される病態の治療に適合した医薬製剤も提供する。本発明は、体重減少の誘発に適合した医薬製剤を提供する。本発明は、虚弱の治療または骨強度の増加に適合した医薬製剤をさらに提供する。特定の実施形態において、製剤は1つまたは複数の他の治療剤をさらに含む。本発明は、1つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と共に本発明のペプチドを含む医薬組成物も提供する。特定の実施形態において、組成物はさらに1つまたは複数の他の治療剤を含む。本発明は、DPPIVによる迅速な代謝不活性化を受けにくい安定分子をさらに提供する。本発明の配列は、20個の天然に存在するアミノ酸についての標準的な1文字または3文字のアミノ酸コードを含む。以下のように、他の使用されるアミノ酸コードは定義される。Aib=α-アミノイソ酪酸;Nal=1-ナフチルアラニン。C末端アミノ酸という用語は、遊離カルボキシル基を含む、ペプチド配列中の最後のアミノ酸を指す。本発明のC末端アミノ酸は、位置42のGln、位置43のCysまたは位置44のCysであり得る。ポリエチレングリコールまたはPEGという用語は、カップリング剤またはカップリング部分もしくは活性化部分による誘導体化を用いるかまたは用いてない、ポリアルキレングリコール化合物またはその誘導体を指す。その典型的な形態において、PEGは末端水酸基を持つ直鎖状ポリマーであり、式HO-CH2CH2-CH2CH2On-CH2CH2-OH式中nは約8~4000であるを有する。mPEGはモノメトキシ-ポリエチレングリコールである。PEGは分子量がある程度変動するPEG化合物の混合物として典型的には生成および使用されるので、当業者は、一般的には、特定のPEG化化合物を生成するPEG化反応において使用されるPEG試薬の平均分子量の記述によって、化合物に対して付加されたPEGの分子量を記述する。PEGの多数の誘導体が当該技術分野において存在する。本発明のペプチドに対して共有結合で付加されるPEG分子は、10,000ダルトン、20,000ダルトン、30,000ダルトンまたは40,000ダルトンであり得る。PEG分子の平均は好ましくは18,000~22,000ダルトンである。より好ましくは、平均は19,000~21,000ダルトンである。最も好ましくは、平均は20,000~21,000ダルトンである。PEG分子は直鎖状または分枝状であってもよく、単独またはタンデムで存在してもよい。本発明のPEG化ペプチドは好ましくはペプチドのC末端に付加されたタンデムな直鎖状PEG分子を有する。特に、PEG分子は好ましくは、nが10~2500であるmPEG-20kDaマレイミドmPEGMALIまたはmPEG-20kDaヨードアセトアミドIIによって、ペプチドのC末端の2個のシステイン残基に対して付加される。好ましくは、nは350~600である。より好ましくは、nは425~475である。PEG化という用語は、本明細書において使用される時、上記のような、本発明のペプチドに対する1つまたは複数のPEG分子の共有結合による付加を意味する。例えば、本発明のペプチドは、各々のCysのチオール基に対して共有結合される20kDaPEG分子により、位置43および44のCysでPEG化される。以下の略称が本明細書において使用される。t-Buはtert-ブチルを指し、fmocはフルオレニルメチルオキシカルボニルを指し、Pbfは2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニルを指し、Trtはトリチルまたはトリフェニルメチルを指し、OtBuはtert-ブトキシルを指し、Bocはtert-ブトキシカルボニルを指し、PyBOPはベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファートを指し、DIEAはジイソプロピルエチルアミンを指し、HEKはヒト胚腎臓を指し、トリスは2-アミノ-2-ヒドロキシメチル-プロパン-1,3-ジオールを指し、BSAはウシ血清アルブミンを指し、ヘペスは2-[4-2-ヒドロキシエチルピペラジン-1-イル]エタンスルホン酸を指し、PBSはリン酸緩衝生理食塩水を指し、NSBは非特異的結合を指し、HBSSはハンクス緩衝塩溶液を指し、IBMXは1-メチル-3-2-メチルプロピル-7H-プリン-2,6-ジオンを指し、DMSOはジメチルスルホキシドを指す。ペプチド合成本発明のペプチドはすべて、ProteinTechnologiesInc.のSymphony登録商標自動化ペプチド合成機で固相ペプチド合成によって生成される。合成は、Fmoc-Rinkアミドポリスチレン樹脂RappPolymereTubingen、ドイツで約0.7mmol/gの置換で実行される。合成はFmoc/t-Bu固相ペプチド合成を使用して実行される。使用されるアミノ酸側鎖誘導体は、ArgPbf、AspOtBu、CysTrt、GlnTrt、GluOtBu、HisTrt、LysBoc、SertBu、ThrtBu、TrpBocおよびTyrtBuである。カップリングは、室温で90分間ジメチルホルムアミドDMF中のジイソプロピルカルボジイミドDICおよびヒドロキシベンゾトリアゾールHOBt1:1:1モル比により活性化された約6当量のアミノ酸により行なわれる。以下の条件を位置22でのFmoc-1-Nal-OHのカップリングに使用した。DMF中のFmoc-1-Nal-OH3当量、PyBOP3当量およびDIEA6当量で室温で3時間。以下の条件を位置12でのFmoc-Ile-OHのカップリングに使用した。DMF中のFmoc-Ile-OH6当量、PyBOP6当量およびDIEA12当量で室温で10時間。同時に行う樹脂からの切断および側鎖保護基除去を、トリフルオロ酢酸TFA:トリイソプロピルシラン:1,2-エタンジチオール:メタノール:チオアニソール90:4:2:2:2v/vを含む溶液中で室温で2時間行う。溶液を濾過し、ペプチドを冷ジエチルエーテルにより沈殿させ、30~40mLの水中の10アセトニトリル中で再溶解し、C18の逆相HPLCカラム典型的にはWatersSymmetryPrep商標7μm、19×300mmで18mL/分の流速で精製した。サンプルを、5分間にわたる0~18のB続いて110分間にわたる18~45のBの2相性直線状AB勾配ここでA=0.05のTFA/水およびB=0.05のTFA/アセトニトリルにより溶出する。産物は一般的には28~35のアセトニトリルで溶出される。ペプチドの純度および分子量を、シングル四重極MS検出器によりAgilent1100シリーズLC-MSのシステムで確認する。分析HPLC分離は、15分間にわたる6~60のBの直線状AB勾配ここでA=0.05のTFA/H2OおよびB=0.05のTFA/アセトニトリルにより、Zorbax登録商標Eclipse商標XDB-C8、5μm、4.6mm内径×15cmカラムで流速1mL/分で行う。すべてのペプチドを>95の純度まで精製し、1原子質量単位以内の計算値に対応する分子量を有することを確認した。実施例1実施例2中間体1中間体2mPEG-MAL-20kDaによるペプチドのPEG化凍結乾燥したペプチドを計量する典型的には30~50mg。2.1倍モル当量のmPEG-20kDaマレイミドCH3OCH2CH2On-CH23NHCOCH22-マレイミドNOFSUNBRIGHTME-200MAmPEGMALを計量し、ペプチドと合わせる。反応物を、50/50v/v水/アセトニトリル混合物中で、約20mg/mLのペプチド濃度に溶解する。ペプチド溶液を、100mM酢酸アンモニウム、10mMEDTApH7により2倍希釈する。生じた混合物を室温で撹拌する。反応混合物を分析逆相HPLC分析HPLC分離は、5分間にわたる0~30のBおよび続いて30分間にわたる30~90のBの2相性直線状AB勾配ここでA=0.05のTFA/H2OおよびB=0.05のTFA/アセトニトリルにより、WatersSymmetryShield商標C18、3.5μm、4.6mm内径×10cmのカラムで、60°Cで流速1mL/分で行うによってモニターし、典型的には1~2時間の反応時間後に、ペプチドピークがほとんど完全に消失することが示される。モノPEG化ペプチドおよびジPEG化ペプチドに起因する2つのピークは、典型的にはジPEG化されたペプチドがピーク面積の合計の90~95を構成すると思われる。次いでサンプルを典型的には酸性水0.05TFA/水で約40mLに希釈し、15分間にわたる0~25のB、続いて100分間にわたる25~55のBの2相性直線状AB勾配ここでA=0.05のTFA/水およびB=0.05のTFA/アセトニトリルにより、10mL/分の流速で、C18逆相HPLCカラム典型的にはWatersSymmetryPrep商標7μm、19×300mmによって精製する。産物は一般的には35~40のアセトニトリルで溶出される。精製されたペプチドは、ペプチド配列に基づいた計算したモル吸光係数を使用して、280nmでのUV吸光度によって定量される。精製後の収率は典型的には、出発ペプチドの量に基づいて70の範囲である。実施例3Aib2,Aib13,Aib29,Cys43PEG20K,Cys44PEG20K-GIP実施例4Aib2,Aib13,Nal22,Aib29,Cys43PEG20K,Cys44PEG20K-GIP実施例3および実施例4のペプチドはmPEG-MALを使用してPEG化した。mPEG-ヨードアセトアミド-20kDaによるペプチドのPEG化凍結乾燥したペプチドを計量する典型的には30~50mg。2.1倍モル当量のmPEG-20kDaヨードアセトアミドCH3OCH2CH2On-CH23NHCOCH2-INOFSUNBRIGHTME-200IAを計量し、ペプチドと合わせる。反応物を、水性緩衝溶液pH8.5ホウ酸、塩化カリウム、水酸化ナトリウム緩衝液0.1M10mMEDTA20アセトニトリルv/v中で、約10mg/mLのペプチド濃度に溶解する。次いで生じた混合物を室温で撹拌する。反応混合物を、分析逆相HPLC分析HPLC分離は、5分間にわたる0~30のBおよび続いて30分間にわたる30~90のBの2相性直線状AB勾配ここでA=0.05のTFA/H2OおよびB=0.05のTFA/アセトニトリルにより、WatersSymmetryShield商標C18、3.5ミクロン、4.6mm内径×10cmカラムで60°Cで流速1mL/分で行うによってモニターし、典型的には18時間の反応時間後に、ペプチドピークがほとんど完全に消失することが示される。モノPEG化ペプチドおよびジPEG化ペプチドに起因する2つのピークは、典型的にはジPEG化されたペプチドがピーク面積の合計の90~95を構成すると思われる。次いでサンプルを典型的には酸性水0.05TFA/水で約50mLに希釈し、15分間にわたる0~25のB、続いて100分間にわたる25~55のBの2相性直線状AB勾配ここでA=0.05のTFA/水およびB=0.05のTFA/アセトニトリルにより、10mL/分の流速で、C18逆相HPLCカラム典型的にはWatersSymmetryPrep商標7μm、19×300mmによって精製した。産物は一般的には35~40のアセトニトリルで溶出される。精製されたペプチドは、ペプチド配列に基づいた計算したモル吸光係数を使用して、280nmでのUV吸光度によって定量される。精製後の収率は典型的には、出発ペプチドの量に基づいて70の範囲である。あるいは、凍結乾燥したペプチドを計量する典型的には30~50mg。2.1倍モル当量のmPEG-20kDaヨードアセトアミドCH3OCH2CH2On-CH23NHCOCH2-INOFSUNBRIGHTME-200IAを計量し、ペプチドと合わる。反応物を、水性緩衝溶液pH8.00.1M重炭酸塩緩衝液10mMEDTA20アセトニトリルv/v中で、約8mg/mLのペプチド濃度に溶解する。次いで生じた混合物を室温の暗所で撹拌する。反応混合物を、分析逆相HPLC分析HPLC分離は、5分間にわたる0~30のBおよび続いて30分間にわたる30~90のBの2相性直線状AB勾配ここでA=0.05のTFA/H2OおよびB=0.05のTFA/アセトニトリルにより、WatersSymmetryShield商標C18、3.5ミクロン、4.6mm内径x×10cmカラムで60°Cで流速1mL/分で行うによってモニターし、典型的には3時間の反応時間後に、ペプチドピークがほとんど完全に消失することが示される。モノPEG化ペプチドおよびジPEG化ペプチドに起因する2つのピークは、典型的にはジPEG化されたペプチドがピーク面積の合計の90~95を構成すると思われる。次いでサンプルを典型的には酸性水0.05TFA/水で約50mLに希釈し、上記のように精製する。精製後の収率は典型的には、出発ペプチドの量に基づいて70の範囲である。実施例5:配列番号:3Aib2,Aib13,Nal22,Aib29,Cys43PEG20K,Cys44PEG20K-GIP実施例5のペプチドはmPEG-ヨードアセトアミドを使用してPEG化する。アッセイインビトロ本明細書において例示した化合物を下記に述べるように本質的に試験し、GIP-RおよびGLP-1-Rに対する結合親和性Kiが100nM未満であり、およびGluc-Rに対する選択性比が少なくとも100倍であることを示す。さらに、本明細書における化合物は、GIP-RおよびGLP-1-Rについての結合アッセイにおいて、4:1~1:2GIP-R:GLP-1-Rの間の活性比を示す4:1はGIP-Rでより高い力価を示し、1:2はGLP-1-Rでより高い力価を示す。グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド受容体GIP-R結合アッセイヒトグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド受容体結合アッセイは、pcDNA3.1Promega-NeoRプラスミドの中へクローン化したhGIP-RUsdin,T.B.,Gruber,C.,Modi,W.andBonner,T.I.、GenBank:AAA84418.1を使用する。hGIP-R-pcDNA3.1/Neoプラスミドを懸濁培養のチャイニーズハムスター卵巣細胞CHO-Sの中へトランスフェクションし、500μg/mLジェネティシンInvitrogenの存在下において選択する。粗製原形質膜を、懸濁培養からの細胞を使用して調製する。細胞を、25mMトリスHClpH7.5、1mMMgCl2、DNAse120μ/mLおよびEDTA不含有RocheComplete商標Inhibitorsを含む低張緩衝液中で氷上で溶解する。細胞懸濁物を、テフロン登録商標乳棒を25ストロークで使用して、ガラスのダウンス型ホモジナイザーによりホモジナイズする。ホモジネートを4°Cで15分間1800×gで遠心分離する。上清を回収し、ペレットを低張緩衝液中で再懸濁し、再ホモジナイズする。混合物を15分間1800×gで遠心分離する。第2の上清を第1の上清と合わせる。合わせた上清を15分間1800×gで再遠心分離して清澄化する。清澄化した上清を高速用チューブに移し、4°Cで30分間25000×gで遠心分離する。膜ペレットをホモジナイズ用緩衝液中で再懸濁し、使用まで-80°Cフリーザーで凍結した小分けとして保存する。GIPは、Perkin-Elmer/NENで、I-125-ラクトペルオキシダーゼ手技Markalonis,J.J.,Biochem.J.113:2991969によって放射性ヨウ素で標識され、逆相HPLCによって精製されるNEX-402。比放射能は2200Ci/mmolである。KD決定は、飽和結合の代わりに、非放射性hGIPを使用する相同競合によって実行する。受容体結合アッセイは、1脂肪酸不含有BSAGibco、7.5BSAであらかじめブロッキングした小麦胚芽凝集素WGAビーズGEHealthCareにより、シンチレーション近接アッセイSPASun,S.,Almaden,J.,Carlson,T.J.,Barker,J.andGehring,M.R.Assaydevelopmentanddataanalysisofreceptor-ligandbindingbasedonscintillationproximityassay.MetabEng.7:38-442005を使用して行う。結合緩衝液は、25mMヘペスpH7.4、2.5mMCaCl2、1mMMgCl2、0.1脂肪酸不含有BSA、0.003Tween20およびEDTA不含有RocheComplete商標Inhibitorsを含む。hGIPおよびペプチドアナログをPBS中で溶解し、-80°Cで保存する。ペプチドアナログを結合緩衝液の中で連続的に希釈する。次いで、10μLの希釈したペプチドを、40μLのアッセイ結合緩衝液または非放射性GIP最終的に0.1μMでNSBを含むCorning登録商標3632透明底のアッセイプレートの中へ移す。次いで、90μLの膜4μg/ウェル、50μLの[125I]GIPPerkinElmerLifeandAnalyticalSciences、反応中で最終的に0.15nM、および50μLのWGAビーズ150μg/ウェルを添加し、密封し、転倒して混合する。室温で12時間の静置時間後に、プレートをMicroBeta登録商標シンチレーションカウンターにより読み取る。結果は、化合物の存在下における特異的なI-125-GIP結合のパーセントとして計算される。化合物の絶対IC50濃度は、I-125-GIPのパーセント特異的結合vs添加した化合物の濃度の非線形回帰によって導き出される。IC50濃度は、KDが0.174nMであると推測されるところで、Cheng-Prusoffの等式を使用して、Kiに変換されるCheng,Y.,Prusoff,W.H.,Biochem.Pharmacol.22,3099-3108,1973。これらのデータは、表1のペプチドがGIP-Rに結合しその受容体を活性化し、そしてGIP依存性生理反応を誘導し得ることを実証する。グルカゴン様ペプチド1GLP-1-R受容体結合アッセイGLP-1受容体結合アッセイは、293HEK膜から単離されたクローン化ヒトグルカゴン様ペプチド1受容体hGLP-1-RGrazianoMP,HeyPJ,BorkowskiD,ChicchiGG,StraderCD,BiochemBiophysResCommun.1961:141-6,1993を使用する。hGLP-1-RcDNAを、発現プラスミドphDTrans-activatedexpressionoffullygamma-carboxylatedrecombinanthumanproteinC,anantithromboticfactor.Grinnell,B.W.,Berg,D.T.,Walls,J.andYan,S.B.Bio/Technology5:1189-1192,1987の中へサブクローン化する。このプラスミドDNAを293HEK細胞の中へトランスフェクションし、200μg/mLのハイグロマイシンで選択する。粗製原形質膜を、懸濁培養からの細胞を使用して調製する。細胞を、25mMトリスHClpH7.5、1mMMgCl2、DNAse120μ/mLおよびEDTA不含有RocheComplete商標Inhibitorsを含む低張緩衝液中で氷上で溶解する。細胞懸濁物を、テフロン登録商標乳棒を25ストロークで使用して、ガラスのダウンス型ホモジナイザーによりホモジナイズする。ホモジネートを4°Cで15分間1800×gで遠心分離する。上清を回収し、ペレットを低張緩衝液中で再懸濁し、再ホモジナイズする。混合物を15分間1800×gで遠心分離する。第2の上清を第1の上清と合わせる。合わせた上清を15分間1800×gで再遠心分離して清澄化する。清澄化した上清を高速用チューブに移し、4°Cで30分間25000×gで遠心分離する。膜ペレットをホモジナイズ用緩衝液中で再懸濁し、使用まで-80°Cフリーザーで凍結した小分けとして保存する。グルカゴン様ペプチド1GLP-1は、Perkin-Elmer/NENで、I-125-ラクトペルオキシダーゼ手技によって放射性ヨウ素で標識され、逆相HPLCによって精製されるNEX308。比放射能は2200Ci/mmolである。KD決定は、I-125のGLP-1物質中の高プロパノール含有量に起因して、飽和結合の代わりに相同競合によって実行する。KDは0.96nMであると推測され、試験したすべての化合物についてのKi値の計算に使用される。受容体結合アッセイは、1脂肪酸不含有BSAGibcoであらかじめブロッキングした小麦胚芽凝集素WGAビーズにより、シンチレーション近接アッセイSPAを使用して行う。結合緩衝液は、25mMヘペスpH7.4、2.5mMCaCl2、1mMMgCl2、0.1脂肪酸不含有BSA、0.003Tween20およびEDTA不含有RocheComplete商標Inhibitorsを含む。グルカゴン様ペプチド1を1mg/mLでPBS中で溶解し、30μLの小分けで-80°Cで直ちに凍結する。グルカゴン様ペプチド1の小分けを希釈し、1時間以内に結合アッセイで使用する。ペプチドアナログをPBS中で溶解し、結合緩衝液中で連続的に希釈する。次いで、10μLの希釈した化合物またはPBSを、40μLのアッセイ結合緩衝液または非放射性グルカゴン最終的に1μMでNSBを含むCorning登録商標3632透明底のアッセイプレートの中へ移す。次いで、90μLの膜1μg/ウェル、50μLのI-125グルカゴン様ペプチド1反応中で最終的に0.15nM、および50μLのWGAビーズ150μg/ウェルを添加し、密封し、転倒して混合する。室温で12時間の静置時間後に、プレートをPerkinElmerLifeandAnalyticalSciencesTriluxMicroBeta登録商標シンチレーションカウンターにより読み取る。結果は、化合物の存在下における特異的なI-125-グルカゴン様ペプチド1結合のパーセントとして計算される。化合物の絶対IC50濃度は、I-125-グルカゴン様ペプチド1のパーセント特異的結合vs添加した化合物の濃度の非線形回帰によって導き出される。IC50濃度は、Cheng-Prusoffの等式を使用してKiに変換される。これらのデータは、表2のペプチドがGLP-1-Rに結合し、したがってその受容体を活性化し、GLP-1依存性生理反応を誘導し得ることを実証する。グルカゴン受容体hGlucR結合アッセイグルカゴン受容体結合アッセイは、293HEK膜から単離されたクローン化ヒトグルカゴン受容体Lok,S,et.al.,Gene1402,203-2091994を利用する。hGlucRcDNAを、発現プラスミドphDTrans-activatedexpressionoffullygamma-carboxylatedrecombinanthumanproteinC,anantithromboticfactor.Grinnell,B.W.,et.al.,Bio/Technology5:1189-11921987の中へサブクローン化する。このプラスミドDNAを293HEK細胞の中へトランスフェクトし、200μg/mLハイグロマイシンで選択する。粗製原形質膜を、懸濁培養からの細胞を使用して調製する。細胞を、25mMトリスHClpH7.5、1mMMgCl2、DNAse120μ/mLおよびEDTA不含有RocheComplete商標Inhibitorsを含む低張緩衝液中で氷上で溶解する。細胞懸濁物を、テフロン登録商標乳棒を25ストロークで使用して、ガラスのダウンス型ホモジナイザーによりホモジナイズする。ホモジネートを4°Cで15分間1800×gで遠心分離する。上清を回収し、ペレットを低張緩衝液中で再懸濁し、再ホモジナイズする。混合物を15分間1800×gで遠心分離する。第2の上清を第1の上清と合わせる。合わせた上清を15分間1800×gで再遠心分離して清澄化する。清澄化された上清を高速用チューブに移し、4°Cで30分間25000×gで遠心分離する。膜ペレットをホモジナイズ用緩衝液中で再懸濁し、使用まで-80°Cフリーザーで凍結した小分けとして保存する。グルカゴンは、Perkin-Elmer/NENで、I-125-ラクトペルオキシダーゼ手技によって放射性ヨウ素で標識され、逆相HPLCによって精製されるNEX207。比放射能は2200Ci/mmolである。KD決定は、I-125グルカゴン物質中の高プロパノール含有量に起因して、飽和結合の代わりに相同競合によって実行する。KDは2.62nMであると推測され、試験したすべての化合物についてのKi値の計算に使用される。受容体結合アッセイは、1脂肪酸不含有ウシ血清アルブミンBSAGibco、7.5BSAであらかじめブロッキングした小麦胚芽凝集素WGAビーズにより、シンチレーション近接アッセイSPAを使用して行う。結合緩衝液は、25mM4-2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジンエタンスルホン酸HEPESpH7.4、2.5mMCaCl2、1mMMgCl2、0.1脂肪酸不含有BSA、0.003Tween20およびEDTA不含有RocheComplete商標Inhibitorsを含む。グルカゴンを1mg/mLで0.01NのHCl中で溶解し、30μLの小分けで-80°Cで直ちに凍結する。グルカゴンの小分けを希釈し、1時間以内に結合アッセイで使用する。ペプチドアナログをリン酸緩衝生理食塩水PBS中で溶解し、結合緩衝液中で連続的に希釈する。次いで、10μLの希釈した化合物またはPBSを、40μLのアッセイ結合緩衝液または非放射性グルカゴン最終的に1μMで非特異的結合NSBを含むCorning登録商標3632透明底のアッセイプレートの中へ移す。次いで、90μLの膜3μg/ウェル、50μLのI-125グルカゴン反応中で最終的に0.15nM、および50μLのWGAビーズ150μg/ウェルを添加し、密封し、転倒して混合する。室温で12時間の静置時間後に、プレートをPerkinElmerLifeandAnalyticalSciencesTriluxMicroBeta登録商標シンチレーションカウンターにより読み取る。結果は、化合物の存在下における特異的なI-125-グルカゴン結合のパーセントとして計算される。化合物の絶対IC50濃度は、I-125-グルカゴンのパーセント特異的結合vs添加した化合物の濃度の非線形回帰によって導き出される。IC50用量はCheng-Prusoff等式を使用して、Kiに変換される。これらのデータは、表3のペプチドがGluc-Rについてより選択的ではなく、したがってGluc-R媒介性の生理反応を開始しないことを実証する。細胞内cAMPを生成するhGIP-R細胞の機能的活性化cAMP機能的アッセイは、上述したhGIP-R結合アッセイのために単離した同一のクローン化GIP-R細胞株を使用する。細胞をペプチドで刺激し、細胞内で生成されたcAMPをCisBiocAMPDynamic2HTRF登録商標アッセイキット62AM4PEBを使用して定量する。簡潔には、細胞内で誘導されたcAMPは、細胞溶解緩衝液の存在下においてcAMP-d2捕捉抗体に対する結合によって検出される。第2の検出抗体anti-cAMPCryptateを添加してサンドイッチを生成し、次いでこれをPerkin-ElmerLifeSciencesEnvision登録商標装置を使用して検出する。hGIP-R-CHO-S細胞を、Enzyme-FreeCellDissociationSolutionSpecialtyMedia5-004-Bでサブコンフルエントな組織培養ディッシュから採取する。細胞を低速度でペレットにし、cAMPアッセイ緩衝液[0.1脂肪酸不含有BSAGibco、7.5BSA、500μMIBMXを含む、MgおよびCa含有HBSSGIBCO、14025-092中の25mMヘペス]で3回洗浄し、次いで1mLあたり312,000細胞の最終的な濃度に希釈する。hGIPおよびペプチドを5倍ストック溶液として調製し、cAMPアッセイ緩衝液の中で連続的に希釈し、同様に、cAMPスタンダードカーブを-20°Cで保存したPBS中の2,848nMcAMPの凍結ストックから調製する。アッセイを開始するために、40μLの細胞懸濁物を、黒色の組織培養用の処理をしていないハーフウェルのプレートCoStar3694へ移し、続いて10μLの5倍ペプチド希釈物を添加する。細胞を室温で1時間放置する。反応をCisBio溶解緩衝液の中で希釈した25μLのcAMP-d2捕捉抗体CisBioの添加によって停止し、次いでtiter-tekシェーカーで穏やかに混合する。15分間の溶解後に、25μLの検出抗体抗cAMPCryptateCisBioを添加し、穏やかに混合する。溶解した細胞および抗体混合物を、室温で1時間後に、Perkin-ElmerEnvision登録商標を使用して読み取る。Envision登録商標ユニットをcAMPスタンダードカーブを使用して、nMcAMP/ウェルに変換する。各ウェル中で生成されたnmolecAMPを、hGIP対照で観察された最大反応のパーセントに変換する。相対的なEC50値は、パーセント最大反応vs添加したペプチドの濃度を使用して、非線形回帰分析によって導き出される。これらのデータは、表4のペプチドがGIP-Rを結合および活性化し、それによってGIP-R媒介性の生理反応を開始できることを実証する。細胞内cAMPを生成するhGLP-1-R細胞の機能的活性化cAMP機能的アッセイは、pcDNA3.1/NeoPromegaGrazianoMP,HeyPJ,BorkowskiD,ChicchiGG,StraderCD,BiochemBiophysResCommun.1993Oct15;1961:141-6の中へクローン化したhGLR-1-Rのトランスフェクションから単離した、hGLP-1-R発現細胞のクローンを使用し、293HEK細胞の中へトランスフェクションする。hGLP-1-R細胞をペプチドで刺激し、細胞内で生成されたcAMPをCisBiocAMPDynamic2HTRF登録商標アッセイキット62AM4PEBを使用して定量する。簡潔には、細胞内で誘導されたcAMPは、細胞溶解緩衝液の存在下においてcAMP-d2捕捉抗体CisBioに対する結合によって検出される。第2の検出抗体抗cAMPCryptateCisBioを添加してサンドイッチを生成し、次いでこれをPerkin-ElmerEnvision登録商標装置を使用して検出する。hGLP-1-R-293HEK細胞を、Enzyme-FreeCellDissociationSolutionSpecialtyMedia5-004-Bでサブコンフルエントな組織培養ディッシュから採取する。細胞を低速度でペレットにし、cAMPDMEMアッセイ緩衝液[0.5FBSおよび2mMグルタミンならびに500μMIBMXを含むDMEMGibco-31053中の10mMヘペス]で3回洗浄し、次いで1mLあたり50,000細胞の最終的な濃度に希釈する。hGLP-1およびペプチドを5倍ストック溶液として調製し、cAMPDMEMアッセイ緩衝液の中で連続的に希釈し、同様に、cAMPスタンダードカーブを-20°Cで保存したPBS中の2,848nMcAMPの凍結ストックから調製する。アッセイを開始するために、40μLの細胞懸濁物を、黒色の組織培養用の処理をしていないハーフウェルのプレートCoStar3694へ移し、続いて10μLの5倍ペプチド希釈物を添加する。細胞を1時間室温で放置する。反応をCisBio溶解緩衝液の中へ希釈した25μLのcAMP-d2捕捉抗体CisBioの添加によって停止し、次いでtiter-tekシェーカーで穏やかに混合する。15分間の溶解後に、25μLの検出抗体抗cAMPCryptateCisBioを添加し、穏やかに混合する。溶解した細胞および抗体混合物を、室温で1時間後に、Perkin-ElmerEnvision登録商標を使用して読み取る。Envision登録商標ユニットをcAMPスタンダードカーブを使用して、nMcAMP/ウェルに変換する。各ウェル中で生成されたnmolescAMPを、hGLP-1対照で観察された最大反応のパーセントに変換する。相対的なEC50値は、パーセント最大反応vs添加したペプチドの濃度を使用して、非線形回帰分析によって導き出される。これらのデータは、表5のペプチドがGLP-1-Rを結合および活性化し、それによってGLP-1-R媒介性生理反応を開始できることを実証する。食餌誘導性肥満DIOマウスにおける食物摂取、体重および身体組成に対するインビボの効果3~4か月齢のオス食餌誘導性肥満DIOマウスを使用する。動物を12時間の明/暗サイクル22:00で明かりがつくで、温度が制御された24°C施設中で個別に収容し、食物および水に自由に接近させる。施設に2週間順化させた後に、各群が類似した平均体重および脂肪量を有するように、マウスを処理群n=8~10/群に無作為化する。実験前にマウスを手技に慣れさせるために7日間媒質溶液を皮下注射scし計量する。DIOマウスに媒質または媒質中で溶解したペプチドアナログ用量範囲10~100nmol/kgをsc注射によって投与し、3日ごとに2~4週間、暗サイクルの開始の30~90分前に自由に食物を与える。体重および食物の重量ホッパーを同時に測定する。直前の24時間で消費された食物は、前日のものから現在のホッパー食物の重量を引くことによって計算する。体重の絶対変化は、第1の注射前に動物の体重を引くことによって計算する。1日目および14日目に、総脂肪量は、EchoMedicalSystemHouston、TX装置を使用して、核磁気共鳴NMRによって測定する。除脂肪量は総体重から脂肪量を引くことによって計算する。表6aおよび6bのデータは、14日間のDIOマウス研究において、実施例3、4および5は、媒質処理マウスと比較した場合、累積食物摂取および体重を減少させたことを示す。体重減少は主として脂肪量の減少のためであった。p<0.01、p<0.001vs媒質ダネット検定DIOマウスにおける2週間の処理後の経口グルコース耐性試験の間の血糖エクスカーションに対する効果上記のDIO研究における化合物の最終注射の56時間後、動物で経口グルコース耐性試験を行った。簡潔には、マウスをグルコース耐性試験の開始16時間前に絶食させた。時刻0で、動物に経口強制投与により2g/kgデキストロースを与える。血液を、グルコースチャレンジの0、15、30、60および120分間後に採取する尾部採血によって回収する。グルコース濃度はグルコメーターによって測定する。表7aおよび7b中のこれらのデータは、実施例3、4および5が経口グルコース負荷に後続するグルコースエクスカーションを有意に減少させることを示す。統計的有意性はダネット検定によって評価した。食餌誘導性肥満DIOのLongEvansラットにおける、食物摂取、体重および身体組成に対する効果4~5か月齢のオス食餌誘導性肥満のLongEvansラットを使用する。動物を12時間の明/暗サイクル22:00で明かりがつくで、温度が制御された24°C施設中で個別に収容し、食物食餌TD95217および水に自由に接近させる。動物は少なくとも2週間施設に順化させる。0日目に、身体組成をQNMRによって決定し、ラットを体重、脂肪および除脂肪重量に基づいてそれぞれの群n=6/群に無作為化する。化合物を1、4、8、11および15日目に皮下注射によって投与する。14日目に、身体組成をQNMRによって再び決定し、16日目に動物を計量し、サンプルのために尾より採血して、血漿グルコース、脂質、インスリン、グルカゴンおよびPYYを決定する。CO2による安楽死後に、曝露決定の分析のために心臓を突き刺すことによって、血液サンプルを採取する。16日にわたる実施例3および4の投与は、除脂肪重量のパーセンテージの増加および脂肪量のパーセンテージの減少によって、媒質処理DIOラットと比較して、DIOラットの体重および身体組成の変化を産生した。例えば、16日にわたる10nmol/kg用量の実施例3の投与後に、除脂肪重量は0.6増加し、脂肪量は1.3減少した。同様に、16日にわたる30nmol/kg用量の実施例3の投与後に、除脂肪重量は1.3増加し、脂肪量は2.3減少した。さらに、16日にわたる30nmol/kg用量の実施例4の投与後に、除脂肪重量は0.4増加し、脂肪量は1.8減少した。同様に、16日にわたる100nmol/kg用量の実施例4の投与後に、除脂肪重量は1.8増加し、脂肪量は3.2減少した。実施例3および4の投与は、媒質処理マウスと比較して、DIOラットにおけるトリグリセリドおよび総コレステロールを含む血漿脂質の量を低下させ、遊離脂肪酸の量を増加させた。例えば10nmol/kg用量の実施例3の投与後に、トリグリセリドおよび総コレステロールは、507.3mg/dLおよび104mg/dL媒質から262.1mg/dLおよび91mg/dLへそれぞれ減少し、遊離脂肪酸は0.69mEq/Lから0.94mEq/Lへ増加した。同様に30nmol/kg用量の実施例3の投与後に、トリグリセリドおよび総コレステロールは、507.3mg/dLおよび104mg/dL媒質から233.5mg/dLおよび94mg/dLへそれぞれ減少し、遊離脂肪酸は0.69mEq/Lから1.01mEq/Lへ増加した。さらに10nmol/kg用量の実施例4の投与後に、トリグリセリドおよび総コレステロールは、808.1mg/dLおよび127mg/dL媒質から488.7mg/dLおよび110mg/dLへそれぞれ減少した。同様に30nmol/kg用量の実施例4の投与後に、トリグリセリドおよび総コレステロールは、808.1mg/dLおよび127mg/dL媒質から212.2mg/dLおよび104mg/dLへそれぞれ減少し、遊離脂肪酸は0.67mEq/Lから0.82mEq/Lへ増加した。正常なラットにおける静脈内グルコース耐性試験の間の血糖エクスカーションに対する効果正常なオスWistarラット225~250gを研究で使用する。動物は餌を与えた体重および血糖に基づいた群へと無作為化する。動物に、試験開始の16時間前に媒質またはペプチドアナログ用量3~400μgペプチド含有量/kgを注射する。食物は注射時に除去する。アッセイ前に動物に麻酔腹腔内フェノバルビタール65mg/kgし、2つのカテーテルを挿入するが、それらは1つは頚静脈中および他は頚動脈中である。時刻0で、動物に静脈カテーテルを介して0.5gグルコース/kgを与える。時刻0グルコース前、グルコースチャレンジ後の2、4、6、10、20および30分で頚動脈から血液を回収する。グルコース濃度はグルコメーターによって測定する。インスリンはMesoscale登録商標によって測定する。有効性は、インスリン曲線下の合計面積=t0から30分を積分した血漿インスリン値の増加として測定され、加えて静脈内グルコースチャレンジに後続するグルコースエクスカーションの測定値であるグルコース曲線下の面積を測定した。実施例3および4の投与は、媒質処理ラットと比較して、インスリンAUCを増加させ、グルコースAUCを減少させた。例えば50μg/kg用量の実施例3の投与後に、インスリンAUCは55ng分/mL媒質から137ng分/mLへ増加し、グルコースAUCは7830mg分/dL媒質から6780mg分/dLへ減少した。同様に200μg/kg用量の実施例3の投与後に、インスリンAUCは55ng分/mL媒質から183ng分/mLへ増加し、グルコースAUCは7830mg分/dL媒質から7020mg分/dLへ減少した。さらに50μg/kg用量の実施例4の投与後に、インスリンAUCは44ng分/mL媒質から150ng分/mLへ増加し、グルコースAUCは8010mg分/dL媒質から7730mg分/dLへ減少した。同様に200μg/kg用量の実施例4の投与後に、インスリンAUCは44ng分/mL媒質から161ng分/mLへ増加し、グルコースAUCは8010mg分/dL媒質から7420mg分/dLへ減少した。50μg/kg用量の実施例5の投与後に、インスリンAUCは41ng分/mL媒質から133ng分/mLへ増加し、グルコースAUCは7739mg分/dL媒質から7202mg分/dLへ減少した。同様に200μg/kg用量の実施例5の投与後に、インスリンAUCは41ng分/mL媒質から124ng分/mLへ増加し、グルコースAUCは7739mg分/dL媒質から7351mg分/dLへ減少した。骨についての効果実施例4は、6か月齢の卵巣を切除したOvX;Endocrinology144:2008-2015を参照されたいSpragueDawleyラットで評価した。0、2.9、9.7または29nmol/kgの用量を、外科手術後9日目に開始する皮下注射としてラットに毎日与えた。処理を35日間続け、実施例4の用量は、擬似手術のOvXラットと比較して、飼料消費および体重を、応答して最大8まで減少させた。体重減少は減少した脂肪量のためであり、OvXラットにおける除脂肪重量に対する変化は観察されなかった。実施例4は、OvXラットにおける非絶食時血清グルコースおよびトリグリセリドを減少させた。化合物は、用量依存的に骨無機質含量および腰椎の骨無機質密度のOvX誘導性減量を防止したが、大腿皮質骨中央部では効果がなかった。実施例4は、OvXラットの大腿骨および腰椎の骨無機質密度または骨無機質含量に悪影響を及ぼさなかった。体重の減量この研究では8が直接骨量に影響を与え得ることに注目されたい。骨強度は負荷依存性であり、重量減量は重量を支える骨に対してより少ない負荷をもたらし、結果としてより少ない効果が、重量すなわち大腿皮質骨を支える骨の骨についてのパラメータで観察される。統計的有意性を、一元配置分散分析続いてダネット検定によって評価した。表8および9中のデータは、実施例4がOvXラットのBMCおよびBMDを改善することを示す。本発明の化合物は、様々な経路によって投与される医薬組成物として好ましくは製剤化される。最も好ましくは、かかる化合物は非経口投与のためのものである。かかる医薬組成物およびこれを調製するプロセスは当該技術分野において周知である。例えばRemington:TheScienceandPracticeofPharmacyA.Gennaro,et.al.編、第19版、MackPublishing、1995年を参照されたい。本発明の化合物は、一般的には広い投薬量範囲にわたり効果的である。例えば、1週間あたりの投薬量は、1~24mgのペプチドコンジュゲートまたは0.014~0.343mg/体重kgの範囲内である。いくつかの実例では、前記範囲の下限より下の投薬量レベルは適切以上であり得、一方他の実例ではさらに高用量をいかなる有害な副作用を引き起こさずに用いることができ、それゆえ上記の投薬量範囲はいかなる方法でも本発明の範囲を限定するようには意図されない。実際に投与する化合物の量は、治療される病態、選ばれる投与経路、投与される実際の化合物複数可、個々の患者の年齢、体重および応答、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連状況に照らして医師によって決定されることが理解されるだろう。本発明の他の修飾は本発明の範囲から逸脱せずに当業者に明らかである。"