"哺乳動物中の異常細胞を処置する方法であって、前記異常細胞に感染することによってそれらの細胞の死を引き起す能力を持ち、かつ前記異常細胞に感染するために免疫グロブリンIgスーパーファミリーの細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスの有効量を、前記哺乳動物に投与することを含む方法。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項1に記載の方法。前記ウイルスが異常細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項1または2に記載の方法。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項1に記載の方法。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項3または4に記載の方法。前記細胞接着分子の発現が、正常な表現型を示す正常な前記細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記細胞接着分子の発現が、前記異常細胞が見いだされる周囲組織の細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項9に記載の方法。前記ウイルスがCAV-13、CAV-15、CAV-18およびCAV-21からなる群より選択される請求項10に記載の方法。前記ウイルスが組換えウイルスである請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。前記異常細胞が皮膚の悪性腫瘍、前立腺癌、胃癌、乳癌および大腸癌からなる群より選択される悪性腫瘍の細胞である請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが静脈内、腫瘍内、腹腔内もしくは筋肉内投与されるか、または局所外用によって投与される請求項1~13のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが注射によって投与される請求項1~14のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが接種物1mlあたり約1×102プラーク形成単位を超える投与量で患者に投与される請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが接種物1mlあたり約1×102~1×1010プラーク形成単位の投与量で患者に投与される請求項16に記載の方法。患者中のメラノーマを処置する方法であって、メラノーマ細胞に感染することによってそれらの細胞の死を引き起す能力を持ち、かつ前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスの有効量を、前記患者に投与することを含む方法。前記細胞接着分子が免疫グロブリンIgスーパーファミリーのメンバーである請求項18に記載の方法。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項18または19に記載の方法。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子を認識する請求項18~20のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項18~21のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項18に記載の方法。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項22または23に記載の方法。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項18~24のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項18~25のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項18~26のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがCAV-13、CAV-15、CAV-18およびCAV-21からなる群より選択される請求項27に記載の方法。前記ウイルスが静脈内、腫瘍内、腹腔内もしくは筋肉内投与されるか、または局所外用によって投与される請求項18~28のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが注射によって投与される請求項29に記載の方法。前記ウイルスが接種物1mlあたり約1×102プラーク形成単位を超える投与量で患者に投与される請求項18~30のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが接種物1mlあたり約1×102~1×1010プラーク形成単位の投与量で患者に投与される請求項31に記載の方法。異常細胞がウイルス誘発細胞死に対して感受性であるかどうかを決定するために異常細胞をスクリーニングする方法であって、a異常細胞を用意する工程、b前記異常細胞に感染するために免疫グロブリンIgスーパーファミリーの細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスの有効量を、前記細胞に加える工程、c前記ウイルスの存在下に前記異常細胞をある期間にわたってインキュベートする工程、およびdウイルスが異常細胞の少なくとも一部に感染してその死を引き起したかどうかを決定する工程、を含む方法。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項33に記載の方法。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項33または34に記載の方法。前記ウイルスが異常細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項33に記載の方法。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項35または36に記載の方法。前記細胞接着分子の発現が、正常な表現型を示す正常な前記細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項33~37のいずれか一項に記載の方法。前記細胞接着分子の発現が、前記異常細胞が見いだされる周囲組織の細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項33~37のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項33~39のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項33~40のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項33~41のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項42に記載の方法。前記異常細胞が皮膚の悪性腫瘍、前立腺癌、胃癌、乳癌および大腸癌からなる群より選択される悪性腫瘍の細胞である請求項33~43のいずれか一項に記載の方法。メラノーマ細胞がウイルス誘発細胞死に対して感受性であるかどうかを決定するためにメラノーマ細胞をスクリーニングする方法であって、aメラノーマ細胞を用意する工程、b前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスの有効量を、前記メラノーマ細胞に加える工程、c前記ウイルスの存在下に前記メラノーマ細胞をある期間にわたってインキュベートする工程、およびd前記ウイルスが前記メラノーマ細胞の少なくとも一部に感染してその死を引き起したかどうかを決定する工程、を含む方法。前記細胞接着分子が免疫グロブリンIgスーパーファミリーのメンバーである請求項45に記載の方法。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項46に記載の方法。前記ウイルスがメラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子を認識する請求項45~47のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項45~48のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項45に記載の方法。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項45~50のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項45~51のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項52に記載の方法。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項53に記載の方法。異常細胞に感染してその死を引き起す能力に関してウイルスをスクリーニングする方法であって、a前記異常細胞に感染するために免疫グロブリンIgスーパーファミリーの細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスを選択する工程、b選択した前記ウイルスを、異常細胞の試料と共に、ある期間にわたってインキュベートする工程、およびc選択した前記ウイルスが前記異常細胞の少なくとも一部の死を引き起すかどうかを決定する工程、を含む方法。前記異常細胞に感染してその死を引き起すウイルスの能力を、別の細胞試料を使って工程bおよびcに付した異なる前記ウイルスの能力と比較する工程をさらに含む請求項55の方法。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項55または56に記載の方法。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために細胞接着分子を認識する請求項55~57のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項55~58のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項55に記載の方法。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項59または60に記載の方法。前記細胞接着分子の発現が、正常な表現型を示す正常な前記細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項55~61のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項55~62のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項55~63のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項64に記載の方法。前記異常細胞が皮膚の悪性腫瘍、前立腺癌、胃癌、乳癌および大腸癌からなる群より選択される悪性腫瘍の細胞である請求項55~59のいずれか一項に記載の方法。メラノーマ細胞に感染してその死を引き起す能力に関してウイルスをスクリーニングする方法であって、a前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスを選択する工程、b選択した前記ウイルスを、前記メラノーマ細胞の試料と共に、ある期間にわたってインキュベートする工程、およびc選択した前記ウイルスが前記メラノーマ細胞の少なくとも一部の死を引き起すかどうかを決定する工程、を含む方法。前記メラノーマ細胞に感染してその死を引き起すウイルスの能力を、別の細胞試料を使って工程bおよびcに付した異なる前記ウイルスの能力と比較する工程をさらに含む請求項67の方法。前記細胞接着分子が免疫グロブリンIgスーパーファミリーのメンバーである請求項67または68に記載の方法。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項67~69のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項67~69のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項67または68に記載の方法。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項71または72に記載の方法。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項67~73のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項67~74のいずれか一項に記載の方法。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項75に記載の方法。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項76に記載の方法。異常細胞に感染することによってそれらの細胞の死を引き起す能力を持ち、かつ前記異常細胞に感染するために免疫グロブリンIgスーパーファミリーの細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスと、医薬的に許容できる担体とを含む医薬組成物。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項78に記載の医薬組成物。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために細胞接着分子を認識する請求項78または79に記載の医薬組成物。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項78~80のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスが異常細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項78に記載の医薬組成物。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項82に記載の医薬組成物。前記細胞接着分子の発現が、正常な表現型を示す正常な前記細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項78~81のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項78~84のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項78~85のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項86に記載の医薬組成物。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項87に記載の医薬組成物。前記異常細胞が皮膚の悪性腫瘍、前立腺癌、胃癌、乳癌および大腸癌からなる群より選択される悪性腫瘍の細胞である請求項78~88のいずれか一項に記載の医薬組成物。メラノーマ細胞に感染することによってそれらの細胞の死を引き起す能力を持ち、かつ前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスと、医薬的に許容できる担体とを含む医薬組成物。前記細胞接着分子が免疫グロブリンIgスーパーファミリーのメンバーである請求項90に記載の医薬組成物。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項90または91に記載の医薬組成物。前記ウイルスがメラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子を認識する請求項90~92のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項90~93のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項90に記載の医薬組成物。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項95に記載の医薬組成物。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項90~96のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項90~97のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項98に記載の医薬組成物。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項99に記載の医薬組成物。前記ウイルスがCAV-13、CAV-15、CAV-18およびCAV-21からなる群より選択される請求項100に記載の医薬組成物。請求項78~101のいずれか一項に定義した医薬組成物が皮膚と接触するように含浸されている、患者の皮膚上に保持される送達手段。パッチ、パッド、ワッドまたは包帯を含む請求項102に記載の送達手段。患者の皮膚に粘着することによって前記医薬組成物を皮膚と接触した状態に保つようになっている請求項102または103に記載の送達手段。異常細胞に感染することによってそれらの細胞の死を引き起す能力を持ち、かつ前記異常細胞に感染するために免疫グロブリンIgスーパーファミリーの細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスの、異常細胞処置用医薬の製造における使用。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するためにICAM-1を認識する請求項105に記載の使用。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項105または106に記載の使用。前記ウイルスが前記異常細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項105に記載の使用。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項107または108に記載の使用。前記細胞接着分子の発現が、正常な表現型を示す悪性でない前記細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項105~107のいずれか一項に記載の使用。前記細胞接着分子の発現が、前記異常細胞が見いだされる周囲組織の細胞と比較して、異常細胞では上方制御される請求項105~107のいずれか一項に記載の使用。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項105~111のいずれか一項に記載の使用。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項105~112のいずれか一項に記載の使用。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項113に記載の使用。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項114に記載の使用。前記ウイルスがCAV-13、CAV-15、CAV-18およびCAV-21からなる群より選択される請求項115に記載の使用。前記異常細胞が皮膚の悪性腫瘍、前立腺癌、胃癌、乳癌および大腸癌からなる群より選択される悪性腫瘍の細胞である請求項105~115のいずれか一項に記載の使用。メラノーマ細胞に感染することによってそれらの細胞の死を引き起す能力を持ち、かつ前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子および補体調節タンパク質の少なくとも一方を認識するウイルスの、メラノーマ処置用医薬の製造における使用。前記細胞接着分子が免疫グロブリンIgスーパーファミリーのメンバーである請求項118に記載の使用。前記細胞接着分子がICAM-1である請求項118または119に記載の使用。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子を認識する請求項118~120のいずれか一項に記載の使用。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために細胞接着分子と補体調節タンパク質の両方を認識する請求項118~121のいずれか一項に記載の使用。前記ウイルスが前記メラノーマ細胞に感染するために補体調節タンパク質を認識する請求項118に記載の使用。前記補体調節タンパク質がDAFである請求項122または123に記載の使用。前記ウイルスが動物RNAウイルスである請求項118~124のいずれか一項に記載の使用。前記ウイルスがピコルナウイルス科の一種である請求項118~125のいずれか一項に記載の使用。前記ウイルスがエンテロウイルスである請求項125または126に記載の使用。前記ウイルスがコクサッキーウイルスである請求項127に記載の使用。前記ウイルスがCAV-13、CAV-15、CAV-18およびCAV-21からなる群より選択される請求項128に記載の使用。あるウイルスがある腫瘍の細胞に感染してそれらの死を引き起す能力を持つかどうかを決定するには、通常の技術を使って腫瘍から生検材料を採取し、細胞の調製物を調製した後、iウイルス受容体細胞表面発現を確認し、iiそれらの細胞をウイルスにばく露し、所定の培養期間典型的には約2日であるが、これは使用するウイルスによって変動しうるにわたって、感染および細胞死に関してそれらの細胞を監視することができる。この方法では、調製した悪性細胞を少しずつ使って、多数のウイルスを同時にスクリーニングすることができ、より高度の感染性と細胞死を示すウイルスを選択して、前記生検材料を採取した処置対象に投与することができる。同様に、様々な供給源から採取した生検材料から調製した様々な悪性細胞調製物を特定のウイルスを使ってアッセイに使用してもよい。生検材料は一個体の様々な部位から採取してもよいし、多数の個体から採取してもよい。本明細書に記載する方法で使用されるウイルスは、望ましくは、受容者に臨床症状をほとんど引き起さないか、または極わずかな臨床症状しか引き起さないだろう。そのようなウイルスは当業者によく知られている供給業者から容易に入手することができ、本方法での有効性については上述した方法でスクリーニングすることができる。望ましくは、ウイルスは通常は、コクサッキーA群ウイルスから選択されるだろう。CAV21は好ましく、CAV21Kuykendallは特に好ましいSicklesG.M.,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.102:742;ShafrenD.ら,J.Virol1997,71:4736;Hughesら,J.GenVirol.1989,70:2943;Schmidt,N.J.ら,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,1961,107:63。CAV21KuykendallはアメリカンタイプカルチャーコレクションATCCアメリカ合衆国バージニア州20110-2209マナッサス、ユニバーシティーブールバード10801から受託番号VR-850として入手することができる。与えられたウイルスが悪性細胞に感染してその死を引き起す能力を持つかどうかを簡単にスクリーニングする目的には、生検材料から単離された初代悪性細胞ではなく悪性細胞株を使用することができる。典型的にはICAM-1および補体調節タンパク質DAFの少なくとも一方を認識するウイルスが使用されるだろう。DAFはメラノーマ細胞上に発現することの他にCheungN.K.ら;1998、生体内原位置の大腸腺癌細胞上およびヒト大腸腺癌細胞株HT29上での発現が上方制御されることも示されている。DAFの発現は、補体による損傷に対する細胞の耐性を増進すると考えられているので、腫瘍エスケープの機序であることが考えられるBjφrgeL.ら;1996。上方制御されたICAM-1の発現は、胃癌および腺腫細胞NasuR.,1996;KoyamaS.,1992、前立腺癌細胞RokhlinO.W.およびCohenM.B.,1995ならびにヒト乳癌細胞SgagiusM.K.,1996を含む様々な悪性細胞タイプで報告されている。乳癌細胞上にはICAM-1と共にV-CAM1が発現されることも、研究によって示されているRegidorP.A.ら;1998。またICAM-1は、髄様癌細胞BacussS.S.ら;1994、骨髄腫細胞MaloneyD.G.ら;1999および甲状腺癌細胞上に発現することも知られている。ICAM-1陽性染色は乳糖腺癌などの原発腫瘍ならびに脳、肝臓および副腎からの転移性腫瘍でも報告されているFernandez-RealJ.M;1996。メラノーマなどの皮膚上に生じる腫瘍はウイルスによる処置のとりわけ好適な候補である。メラノーマがリンパ節、肺または他の器官に転移している場合は、処置を施すために外科手術によってそれらの部位を露出する際に、上述のように、これらの部位および/または周囲組織にウイルスを投与することができる。選択したウイルスは、好ましくは、ウイルスによる感染を受けうる腫瘍の領域が最大になるように、悪性腫瘍上の多数の部位に直接注射されるだろう。通常、腫瘍を取り囲む組織は、その組織中に悪性細胞が存在する可能性を考えて、注射または他の方法により、ウイルスで処置されるだろう。比較的進行するまで腫瘍が検出されない場合は、腫瘍自体を外科的に切除した後、ウイルスを注射することができる。ウイルスは、悪性腫瘍に直接注射するのではなく、腫瘍に送達されるように腫瘍部位に隣接する位置で受容者の血流中に静脈内注射することによって全身投与してもよい。同様にウイルスは、適当であると考えられる場合は、皮下、腹腔内、または例えば筋肉内に投与してもよい。しかし一般的には、ウイルスに特異的な抗体が存在することによって上記のような他のウイルス送達法の効力が低下する可能性を考えると、腫瘍への直接注射が好ましい。ウイルスは、単独でまたは腫瘍中へのウイルスの直接注射と組み合わせて、腫瘍に局所外用してもよい。この場合、ウイルスは、処置すべき皮膚上の悪性腫瘍部位に押しつけられる送達手段であって、ウイルスによる悪性細胞の感染が可能なようにウイルスの完全性を維持するのに適した医薬的に許容できる担体が含浸された送達手段を使って適用することができる。この送達手段は、処置すべき領域にウイルスを局在化させておくのに適した例えばパッチ、パッド、ワッドwad、包帯などの形状を取ることができる。典型的には、前記送達手段は、パッチを皮膚に貼り付けることによって所望の位置にパッチを保持して接種物を患者の皮膚と接触させておくために下面外縁部に接着剤が塗布されているパッチだろう。一般的には、悪性腫瘍および/または周囲組織に1または複数の小さい切開を施して、ウイルスがそこに進入するための部位が設けられるだろう。ウイルスを受容者に接種するために使用される運搬媒体は生理食塩水などの液体であるか、適当と考えられる従来から知られている他の任意の媒体、例えば医薬用途および処置部位へのウイルスの投与に適した市販のゲルなどであることができる。接種物は一般的には接種物1mlにつき約1×102~約1×1010プラーク形成単位を含むだろう。接種物は好ましくは接触物1mlにつき約1×105プラーク形成単位以上を含むだろう。主治医または外科医は、患者の全身状態、悪性腫瘍の段階と位置、ウイルスで処置すべき領域の総サイズと分布を考慮し、一般に認められた医療に従って、患者に投与される接種物の量を容易に決定することができる。典型的には、患者は初回量のウイルスで処置された後、適切な期間にわたって監視され、次に、ウイルスの初回投与に対する患者の応答および初回処置がもたらすウイルス感染と悪性細胞死の程度などといった因子に応じて、その患者にさらにウイルスを投与するという決定を下す。個体は、望ましくは、ある期間にわたって所定の間隔で、ウイルスによって処置されるだろう。間隔は毎日または24時間~72時間以上の範囲でそれぞれの状況に合わせて決定することができる。先に投与したウイルスに対する何らかの免疫応答の影響を回避するためまたは最小限にするために、毎回同じウイルスまたは異なるウイルスを投与することができ、1回の処置クールは主治医の決定に応じて1~2週間以上に及ぶことができる。最も好ましくは、当該哺乳動物が過去にばく露されたことのないウイルス、または当該哺乳動物は比較的軽微な免疫応答しか生じないと標準的技術で決定されるようなウイルスが投与されるだろう。本発明の方法には容易に入手できる既知ウイルスを好適に使用することができるが、通常の技術を使って改変または操作されたウイルスも利用することができる。例えば、追加の細胞接着分子を細胞レセプターとして利用するようにウイルスを改変することができる。例えばコクサッキーウイルスA21は、コクサッキーA9CAV-9の場合と同様にペプチドモチーフRGDがウイルスキャプシド表面に発現するように、部位特異的突然変異導入法を使って改変することができる。RGDモチーフは全てのαvインテグリンヘテロ二量体によって認識される。このキャプシド改変により、ウイルスは、例えばインテグリンαvβ3これは悪性メラノーマ病巣の表面でICAM-1と一緒に上方制御されることが示されている細胞接着分子であるNataliP.G.;1997を結合することができるようになり、その結果、インテグリン分子との相互作用または続いて起こるICAM-1との相互作用によるウイルスの取り込みが増大する。あるいは、E-セレクチンなどのセレクチンを認識するようにウイルスを改変することもできる。以下、実施例を挙げて本発明を説明する。実施例11.1細胞株ICAM-1を発現する横紋筋肉腫細胞RD-ICAM-1、HeLa-B細胞およびヒト肺線維芽細胞MRC5の連続培養物は、ダルベッコ改変イーグル培地DMEMと10ウシ胎仔血清FCS中で維持した。2つのメラノーマ細胞株Sk-Mel-28およびME4405は、モナッシュ大学生化学分子生物学部オーストラリア国ビクトリア州のRalph博士およびロイヤルニューカッスル病院癌研究部門オーストラリア国ニューサウスウェールズ州ニューカッスルデビッドマディソンビルディング4階のPeterHersey博士からそれぞれ入手した。細胞株Sk-Mel-28は、化学療法剤に耐性であることが見いだされた転移性メラノーマ細胞株である56。メラノーマ細胞培養ME4405は原発性メラノーマ病巣の標本から樹立された69。これら2つのメラノーマ細胞株は、10FCSを含むDMEMで維持した。横紋筋肉腫細胞RD、異数性ヒト胚細胞株、およびHeLa-B細胞、ヒト扁平上皮細胞由来の異数性細胞クローンは、フェアフィールド病院腸呼吸器研究所オーストラリア国ビクトリア州メルボルンから入手した。免疫グロブリンスーパーファミリー分子ICAM-1をコードするcDNAをRD細胞に安定にトランスフェクトしたRD-ICAM-1細胞株は別途記載されているShafrenDRら;1997。ヒト肺線維芽細胞由来のMRC5細胞はBio-Whittaker社米国から入手した。1.2ウイルスCAV21Kuykendall株、CAV15G-9およびCVB3Nancyの株はMargeryKennettオーストラリア国ビクトリア州メルボルン、フェアフィールド病院胃呼吸器研究所から入手した。1.3ウイルス増殖標準的方法に従ってRD-ICAM-1培養80~95コンフルエントを104TCID5050組織培養感染量のコクサッキーウイルスA株に感染させた。完全な細胞変性効果が観察されるまで2日以内、感染細胞を37°Cでインキュベートした。次に細胞を-80°Cで凍結し融解して、残っている細胞内ウイルス粒子を放出させた。1000×gで5分間の遠心分離により、ウイルス含有培地から細胞片を除去し、500μlずつに分けて-80°Cで保存した。CVB3は上記の同じ方法によりHeLa-B細胞中で増殖させた。1.4モノクローナル抗体MAbDAFの第3SCRを認識するMAbIH424は、オースチン研究所オーストラリア国ビクトリア州メルボルンのB.Loveland博士からもらった。MAbWEHI-CAMはICAM-1の第1ドメインを認識する抗体でありBerendtARら;1992、ウォルターアンドイライザホール研究所オーストラリア国ビクトリア州メルボルンのA.Boyd博士によって提供された。1.5フローサイトメトリー解析液量100μl中の細胞1×106を1FCSを含むDMEMに希釈したMabIH4またはMabWEHI-CAMと共に氷上で30分間インキュベートした。次に細胞を5.0mlのPBSで洗浄し、1000×gで5分間ペレット化し、PBSに希釈したフルオレセインイソチオシアネート結合ヤギ抗マウス免疫グロブリンGSilenus社オーストラリア、メルボルン100μlに再懸濁した。氷上で30分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、ペレット化し、PBSに再懸濁して、FACStarアナライザーBectonDickinson社オーストラリア、シドニーによる解析を行った。1.6比色法による感染力アッセイCAV21およびCAV15のウイルス保存液を、1ウシ胎仔血清FCSを含むDMEMに、10倍ずつ段階希釈した。96ウェルプレート中のRD-ICAM-1細胞単層をウイルスの段階希釈液100μlと共に37°Cで48時間インキュベートした。細胞の生存を定量するために、単層を100μlのクリスタルバイオレット/メタノール溶液PBS中の5w/vクリスタルバイオレット、10v/vメタノール、10v/vホルムアルデヒド溶液と共にインキュベートし、蒸留水で洗浄した。波長540nmのマルチスキャン酵素結合免疫吸着検定プレートリーダーでプレートを読みとった。50終点力価を計算しReedLJおよびMuenchHA;1938、1ミリリットルあたりの50組織培養感染量TCID50として表した。吸光度がウイルスなしの対照の3標準偏差未満である場合は、そのウェルを陽性と記録した。CAV21のTCID50は2.7×104単位/mlと決定され、CAV15のTCID50は1.6×104単位/mlと決定された。1.7ICAM-1およびDAFの表面発現メラノーマ細胞株SK-Mel-28およびME4405の表面におけるICAM-1およびDAF発現の相対レベルを、フローサイトメトリー解析によって決定した。結果を図2に示す。図からわかるように、フローサイトメトリー解析により、2つのメラノーマ細胞株の表面では、同程度の高レベルなICAM-1発現とDAF発現が明らかになった。転移性メラノーマに由来するさらに6つのメラノーマ細胞株も高レベルのICAM-1とDAFを発現させた非掲載データ。試験した全ての転移性メラノーマ細胞に高レベルのICAM-1発現が見いだされたことは、インビボでのICAM-1発現レベルの増加が転移能の増加と相関することを示すいくつかの報文を裏付けるものであるJohnsonJPら:1988;KageshitaTら:1993;MillerBEおよびWelchDR:1990;NataliePGら:1997。実施例22.1CAV21によるメラノーマ細胞株の感染2つの培養適応メラノーマ細胞株MillerおよびMM200の単層を、実施例1で調製したCAV21に、感染多重度1.0で1時間感染させた後、接種物を除去し、細胞を培養培地1ウシ胎仔血清およびペニシリン-ストレプトマイシンを含むDMEM中、37°Cで24時間インキュベートした。図3に示す結果は、CAV21が感染後PI5時間で早くも両細胞株の有意な細胞病理学的変化を誘導し、PI9時間までに全メラノーマ細胞のほとんど完全な死滅を誘導できたことを示している。実施例33.1原発性メラノーマから得られたメラノーマ細胞のCAV21による感染先にME4405株のヒトメラノーマ細胞を通常の方法で皮下に接種しておいたヌードマウスから取り出した原発性メラノーマから得られた細胞は、図4に示すように、1メラノーマ細胞あたり0.005CAV21粒子のばく露率challengerateでも、CAV21による感染および殺滅を著しく受けやすかった。実施例44.1組織生検材料から単離されたメラノーマ細胞のCAV21による感染メラノーマ細胞を、原発性胸壁メラノーマの新鮮な生検材料から、スピリングspilling法とコラーゲン-トリプシンおよびDNアーゼ消化によって単離した。簡単に述べると、生検材料を10ml注射器のプランジャでほぐすことによって、細胞をメラノーマ生検材料から遊離させた。得られたメラノーマ細胞懸濁液をフィコール-ハイパックAmershamPharmacia社スウェーデン国ウプサラ勾配で精製した。ヒト線維芽細胞に対するモノクローナル抗体カタログ番号MAS516X、SeraLab社と白血球共通抗原に対するモノクローナル抗体CD45、カタログ番号17-0804-3、AmradBiotech社オーストラリア国ビクトリア州でコーティングされたDynalビーズと混合することによって、混入している線維芽細胞と白血球を除去した。次に、1×106細胞を24穴組織培養プレートに入れ、実施例1で調製した約1×105プラーク形成単位のCAV21を接種した。37°Cで20時間インキュベートした後、ヨウ化プロピジウム染色と検鏡により、細胞を細胞死について評価した。図5は、付着および懸濁原発性メラノーマ細胞が、CAV21感染の結果として、20時間のインキュベーション期間中に、どちらも効率よく殺されたことを示している。実施例55.1CAV21感染に対して感受性を示すメラノーマ細胞でのICAM-1およびDAFの発現メラノーマ細胞がCAV21による感染とその結果起こる死滅に高い感受性を持つことを確認するために、原発性ヒトメラノーマに由来するさらに6つのヒトメラノーマ細胞株を実施例1で調製したCAV21に感染させた。図6Aは、1株ME105を除く全てのメラノーマ細胞株がCAV21感染の結果として23時間のインキュベーション期間中に死滅したことを示している。悪性メラノーマ細胞表面のICAM-1とDAFの高レベル発現を確認するために、各細胞株の細胞をMabIH4およびMabWEHI-CAMで処理した。抗DAFおよび抗ICAM-1Mabの結合は、上述のようにフローサイトメトリー解析によって検出した。図6Bに示す蛍光ヒストグラムは、ME105細胞株を除いて、調べた全メラノーマ細胞株の表面にDAFとICAM-1の高レベルに発現することを裏付けている。DAFおよびICAM-1発現の欠如は、その細胞株をCAV21感染に対して抵抗性にした。実施例66.1ICAM-1を発現するメラノーマ細胞の選択的感染ICAM-1発現ヒトメラノーマ細胞のCAV21感染の選択性を強調するために、メラノーマ細胞株MM200の単層に、約1×105プラーク形成単位のCAV21、コクサッキーウイルスB3CVB3、エコーウイルス7型E7またはコクサッキーウイルスB1CVB1を、それぞれ24穴組織培養プレートのウェル中、37°Cで1時間接種した。次にウイルス接種物を除去し、細胞単層をリン酸緩衝食塩水PBSで洗浄し、1.0ウシ胎仔血清を含む1.0mlのDMEMを各ウェルに加え、細胞を37°Cで48時間インキュベートした。細胞の生存を定量するために、単層をクリスタルバイオレット/メタノール溶液と共にインキュベートし、蒸留水で洗浄し、100倍の顕微鏡で調べた。図7は、48時間のインキュベーション期間後に、CAV21だけがMM200メラノーマ細胞に感染したのに対し、CVB1、CVB3およびE7感染と死滅が明白な横紋筋肉腫細胞RDではその逆であったことを示している。RD細胞はDAFを発現させるが、ICAM-1を発現させない。しかしRD細胞の表面にICAM-1を発現させると、それらはCVA21による感染と死滅に高い感受性を示すようになる。実施例77.1CAV21によるメラノーマ生検材料の感染固形ヒトメラノーマリンパ節生検材料の切片を24穴組織培養プレートのウェルに入れ、模擬感染させるか、約1×105プラーク形成単位のCAV21またはCVB3にばく露した。図8の結果は、CAV21感染により、当該ウイルスで処理されたメラノーマ生検材料の外辺部に重度の組織破壊が起こったが、模擬感染およびCVB3感染した生検材料では検出できるウイルス膜破壊は観察されなかったことを示している。実施例88.1CAV21およびCAV15によるヒトメラノーマ細胞の細胞溶解性感染ヒトメラノーマ細胞株に対するCAV15およびCAV21の腫瘍細胞溶解能をアッセイするために、Sk-Mel-28細胞とME4405細胞を平底96穴マイクロタイタープレートBectonDickinson社に1ウェルあたり3×104細胞の密度で播種した。37°Cで24時間インキュベートした後、培養培地を除去して、適当なウイルス段階希釈液を含む最終液量100μlの新しい培地と置き換えた。保存ウイルス調製物を10-1から10-7まで段階希釈した。ウイルス接種の後、プレートを37°Cで48時間インキュベートし、細胞の生存を上述のようにクリスタルバイオレット染色によって検出した。3つの細胞株RD-ICAM-1、Sk-Mel-28およびME4405は全て、CAV21とCAV15による細胞溶解性感染に対して許容性であることがわかった。48時間のインキュベーション期間後に、ウイルスなしの対照はウイルス誘発性CPEの徴候を何も示さなかったが、10-1および10-2の希釈率では全ての細胞培養に著しい細胞溶解が観察された。さらに高いウイルス希釈率では、Sk-Mel-28細胞は、ME4405およびRD-ICAM-1細胞株と比較してウイルス溶解に対する許容性が高いことがわかった。CAV21およびCAV15の総腫瘍細胞溶解能は対照RD-ICAM-1細胞と比べてメラノーマ細胞株の方が高かった。どの細胞タイプも同じぐらいのレベルのICAM-1を発現させるが、RD-ICAM-1細胞でのDAF発現はメラノーマ細胞よりも有意に低く図2参照、RD-ICAM-1細胞へのDAFによるウイルス付着が少ない理由になっている。DAFは、多くのコクサッキーウイルスにとって低親和性隔離sequestration分子であり、ウイルス粒子の捕捉を補助し、よって細胞の感染性を補助することが、先に明らかにされているLeaSMら;1998。メラノーマ細胞株にはRD-ICAM-1細胞よりも高レベルのDAF発現が存在するので、ICAM-1受容体にウイルスが接近する可能性が増し、よって感染および細胞溶解のレベルが増大する。8.2コクサッキーウイルスによるヒト前立腺癌細胞の細胞溶解性感染ヒト前立腺癌細胞株CP3ICAM-1を発現させるの細胞を平底96穴マイクロタイタープレートBectonDickenson社に3×104細胞/ウェルの密度で播種し、上記実施例8.1に記述したように、細胞をインキュベートした後、上記実施例CAV13、CAV15、CAV21およびコクサッキーウイルスB群ウイルスCVB3の段階希釈液で処理した。PC3細胞はアメリカンタイプカルチャーコレクションATCC米国バージニア州マナッサスから受託番号CRL-1435として入手することができる。図9に示すように、PC3細胞はCAV15による細胞溶解性感染に対して著しく許容性だった。CAV13およびCAV21でも著しい細胞溶解性感染が観察された。8.3ヒトメラノーマ細胞株Sk-Mel-28およびME4405におけるCAV21およびCAV15の選択的複製メラノーマ細胞株Sk-Mel-28およびME4405に対するCAV21およびCAV15の選択性を、インビトロ特異性アッセイ法で調べた。滅菌細胞培養インサートを使って、標準的な6穴組織培養プレートのウェルを分割した。細胞培養インサートの内部でSk-Mel-28細胞またはME4405細胞を生育させ、細胞培養インサートの周りでMRC5またはRD細胞を生育させた。細胞が付着したら、細胞培養インサートを各ウェルから取り除いて、細胞培養培地が共培養を均等に覆うようにした。両細胞集団の外辺部が融合したら、共培養物をPBSで2回洗浄し、次に500μlのPBSまたは保存ウイルス105TCID50を37°Cで1時間接種した。37°Cでインキュベートした後、1FCSを含む新しいDMEMを各ウェルに加え、プレートを5CO2雰囲気下に37°Cで48時間インキュベートした。細胞単層を光学顕微鏡によって、ウイルス誘発性CPEの徴候についてモニターした後、各ウェルを3mlのクリスタルバイオレット溶液で染色して、ウイルスによる細胞溶解性感染からの細胞の生残を検出した。周囲の非メラノーマ細胞に感染することなくメラノーマ細胞を特異的に溶解によって破壊するCAV21およびCAV15ウイルスの能力を図10に示す。図からわかるように、CAV21またはCAV15で処理した各ウェルの内側のメラノーマ細胞培養物はウイルスによって完全に破壊されたが、細胞に進入するためのレセプターとしてICAM-1を使用しないCVB3ウイルスによる影響は受けなかった。CVB3は細胞への進入にコクサッキーおよびアデノウイルスレセプターCARを利用する10。MRC5細胞はCAV21およびCAV15による細胞溶解性感染には抵抗性であるように見えた。これらの細胞はヒト肺線維芽細胞培養物に由来し、ICAM-1を低レベルにしか発現しない未公表データ。このデータは、迅速かつ効果的なターゲット細胞の細胞溶解性感染が、ICAM-1およびDAFの高レベル発現を助長したことを示している。ICAM-1を発現しないRD細胞はCAV21感染またはCAV15感染によって破壊されなかった。さらに、上記の結果は、ウイルス感染したレセプター保有細胞と直接接触したレセプター陰性細胞へのCAV21およびCAV15の伝播が、あったとしても極めてわずかに過ぎないことを示している。実施例9NOD-SCIDマウスを使った一連の動物ばく露実験により、インビボの既成メラノーマ腫瘍の細胞溶解性感染を評価した。9.1NOD-SCIDマウスにおけるメラノーマ異種移植片の成長全ての動物実験は、ニューカッスル大学動物実験倫理委員会が承認したガイドラインに基づいて実施した。NOD-SCIDマウスは動物実験施設オーストラリア国ニューサウスウェールズ州ニューカッスルデビッドマディソンビルディング5階にある病原体フリーの飼育器で飼育した。Sk-Mel-28細胞およびME4405細胞は10FCSを含むDMEMで生育した。細胞を収集し、DMEMで2回洗浄し、滅菌PBSに再懸濁した。懸濁液の細胞濃度を血球計数器で決定し、細胞の生存力をトリパンブルー染色によって評価した。>95が生存可能な細胞調製物だけを異種移植に使用した。異種移植に先立って、ロンプン/ケタミン50mg/kgの腹腔内i.p注射によって動物を麻酔した。動物を監視し腫瘍成長を測定するために、動物を3イソフルオランで麻酔した。腫瘍細胞は麻酔した4~6週齢の雌NOD-SCIDマウスの側腹部に異種移植した。異種移植片腫瘍成長は毎日観察し、様々な間隔でキャリパスを用いて測定し、全ての測定値を5週間にわたってミリメートルの単位で記録した。腫瘍体積の推定値は既知の方法を使って計算したDaviesCDら;1997。9.2皮下ウイルス送達15匹のNOD-SCIDマウスを使った予備実験で、エクスビボ感染細胞によるウイルスの局所皮下送達を、腫瘍成長の阻害について評価した。対照群のマウスn=5にはSk-Mel-28細胞1×107を、上下両方の側腹部の個々の部位に皮下注射した。CAV21群n=5には1×107個のSk-Mel-28細胞を上側腹部に注射すると共に、室温にて104TCID50のCAV21と共にエクスビボで1時間プレインキュベートしておいたSk-Mel-28細胞1×107も注射した。CAV15群n=5は、下側腹部に施した第2の注射が104TCID50のCAV15と共にインキュベートしておいたSk-Mel-28細胞1×107を含む点を除いて、CAV21群と同じように処置した。注射の4週間後に、対照群の一匹を屠殺したところ、Sk-Mel-28細胞1×107の注射部位2カ所に対応する2つの腫瘍塊が個別に存在することが明らかになった。これに対し、CAV21群の一匹には、非感染細胞注射部位にもウイルス感染細胞注射部位にも検出できる腫瘍形成はなかった図11。剖検では、対照群の残りのメンバーは全て2つの独立したメラノーマ異種移植片腫瘍成長物を持つことが明らかになったが、CAV21群の残りのメンバー注射後17週間はどちらの注射部位にも検出可能な腫瘍成長を示さなかった。CAV15群のマウスは注射後4週間の時点で腫瘍形成を示さなかった。9.3腫瘍内ウイルス送達NOD-SCIDマウス20匹の上側腹部にSk-Mel-28細胞1×107を注射した。腫瘍体積が約50~100mm3に達したら、動物を無作為に5匹ずつの群に分割し、独立したケージで飼育した。マウス群にはそれぞれ103.2または104.2TCID50の用量を含む100μlの活性CAV21またはCAV15を腫瘍内注射した。残りの動物には100μlのPBSを異種移植片中に直接注射した。ウイルスおよび他の病原体が個々のケージ内に確実に保たれるように、異なる処置群は個別の通気口を持つケージで陰圧下に飼育した。それぞれ103.2または10-4.2TCID50のCAV21またはCAV15の用量は、注射後14日の時点で既成Sk-Mel-28腫瘍を持つ動物で有意な腫瘍減少をもたらすのに十分だった。腫瘍組織量の減少傾向はその後、14~21日間続いた。注射後30~35日の時点で検出可能な腫瘍は観察されなかった図12および13参照。CAV21処置群とPBS処置対照群の間で観察された相違は統計的に有意だったP=0.0023、t検定。Sk-Mel-28腫瘍を持ちCAV21を注射された動物はCAV21疾患の臨床徴候を何も示さなかった。メラノーマ腫瘍組織量を劇的に減少させるCAV15の能力を図14に示す。注射後35日の時点で、PBSで処置したメラノーマ異種移植片は体積が約2037mm3だったが、CAV15処置腫瘍は約2mm3だったP=0.053、t検定。図示したCAV15処置腫瘍は、ほとんどが残存している結合組織からなる。9.4ME4405異種移植片へのCAV21の腫瘍内送達このウイルスの抗腫瘍治療能力をさらに裏付けるために、別のメラノーマME4405異種移植片へのCAV21の腫瘍内送達を試みた。NOD-SCIDマウス15匹の側腹部の一カ所にME4405細胞5×106を皮下注射した。腫瘍体積が約500mm3に達したら、動物を無作為に5匹ずつの群に分割し、独立したケージで飼育した。5匹の動物には103.2TCID50の用量を含む100μlの活性CAV21を腫瘍内注射し、5匹のマウスには100μlのPBSを異種移植片中に直接注射し、残りの5匹には何も処置しなかった。図15に示すように、CAV21の腫瘍内投与は、たとえば初期注射前腫瘍体積が上で使用したものより5倍大きかったとしても、注射後25日以内にME4405細胞の腫瘍成長を著しく減少させることができた。ME4405異種移植片は、対照群における有意に速い腫瘍成長速度から推定されるように、Sk-Mel-28腫瘍よりも侵襲性であることが観察された。ME4405細胞株は、成長速度が遅くME4405腫瘍ほどには血管性でないSk-Mel-28腫瘍と比較して、高度に血管性の侵襲的腫瘍を生成した。Sk-Mel-28異種移植片を持つマウスとは対照的に、ME4405腫瘍を持つ動物にCAV21を注入すると、疾患の徴候が多少観察され、最も顕著な徴候は前後両肢の一過性の衰弱だった。位置異常は観察されなかった。9.5結果の考察この研究は、CAV13、CAV15およびCAV21が悪性細胞株を細胞溶解的に破壊する能力を持つことを実証するものである。具体的に述べると、メラノーマ細胞のCAV21およびCAV15感染のインビトロ解析は、これら2つのウイルスが、ICAM-1とDAFの発現の結果として、Sk-Mel-28およびME4405細胞株に選択的に感染できると同時に、それぞれのコクサッキーウイルスが前立腺癌株PC3の細胞に感染してその死を引き起すことができたことを明らかにしている。さらに、NOD-SCIDマウスの側腹部で生育したヒトメラノーマ細胞株の異種移植片へのCAV21およびCAV15の腫瘍内注射により、CAV21およびCAV15は悪性メラノーマに対して治療的用途を持つことがわかる。これらの2つのウイルスのいずれかを既成のメラノーマ腫瘍に直接注射すると、対照動物と比較して腫瘍成長が抑制され、有意な腫瘍退縮が起こり、場合によっては完全な腫瘍破壊が起こった。さらに、エクスビボでウイルスに感染させた細胞の送達は腫瘍成長の完全な阻害をもたらし、エクスビボCAV21感染メラノーマ細胞が局所腫瘍成長を阻害するのに十分なウイルスを送達できることを示した。また、最初の腫瘍攻撃位置から離れた領域への感染細胞の皮下注射により、ウイルスは全身的に移動できることがわかる。CAV21およびCAV15感染症の発生は主に無症候性であるか、またはせいぜい軽微な倦怠感が現れるぐらいである。CAV21のCoe株は、アメリカ合衆国の食品医薬品局FDAにより、CAV21に対する特異的抗ウイルス剤の臨床評価を行うための生投与が認証された90。CAV21およびCAV15に対する特異的抗ウイルス剤が最近開発されたことで、薬物介入によるウイルス感染の管理という安全対策が加わることになる。以上、好ましい態様をいくつか挙げて本発明を説明したが、本発明の範囲から逸脱することなく数多くの変更態様が考えられることは、当業者には理解されるだろう。"