"がん患者の生存指標を測定する方法であって、前記がん患者に由来する腫瘍サンプル中のCD3γ、CD3δ及びCD3εの遺伝子の1つ又は複数における少なくとも1つのCpG位置のメチル化状態に基づいて、腫瘍浸潤全Tリンパ球oTLの数及び/又は量を分析することを含み、高いoTLの数及び/又は量が、非乳がん患者におけるより良好な生存及び/又はより良好な無進行生存の指標となるとともに、高いoTLの数及び/又は量が、乳がん患者における生存の不良及び/又は無進行生存の不良の指標となる、がん患者の生存指標を測定する方法。前記サンプルにおける少なくとも1つのCpG位置の少なくとも90の脱メチル化が、CD3Tリンパ球細胞、CD3CD4Tリンパ球細胞及び/又はCD3CD8Tリンパ球細胞の指標となる、請求項1に記載の方法。前記サンプルにおけるTreg対oTL比を決定する、請求項1又は2に記載の方法。前記少なくとも1つのCpG位置が、CD3遺伝領域内の転写開始部位、プロモーター領域、イントロン及び/又はエクソン/イントロン境界より上流の5’領域に存在する、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。メチル化状態の分析がメチル化特異的酵素消化、バイサルファイトシークエンシングから選択される方法、プロモーターメチル化、CpG島メチル化、MSP、HeavyMethyl、MethyLight、Ms-SNuPEから選択される分析、若しくは増幅DNAの検出に基づく他の方法、又はCD3特異的qPCRを含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。例えばGAPDH等のハウスキーピング遺伝子における少なくとも1つのCpG位置のメチル化分析を更に含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。CD4及び/又はCD8、CD8βの遺伝子、又はFOXP3、CD25、CD127、CTLA4、GITR、CD45RA、CD103、GNGT2、CRTAM、IL2RB及びZBTB32、若しくはFLJ00060、FLJ38379、PPP6C、CD226、ZBTB7B及びTNFAIP8の遺伝子、又はFOXP3遺伝子内のTSDRにおける少なくとも1つのCpG位置のメチル化分析を更に含む、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。前記がんが、結腸直腸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、気管支がん、乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫及び/又は非小細胞気管支癌、特に乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫から選択される、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。前記決定に基づく予後診断を更に含み、高い腫瘍浸潤oTLの数及び/又は量が、前記非乳がん患者に対するより良好な予後の指標となるとともに、高いoTLの数及び/又は量が、乳がん患者における生存の不良及び/又は無進行生存の不良の指標となる、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。より良好な予後が、7という中央値よりも高いoTL数と関連する、請求項9に記載の方法。前記サンプルが、固形腫瘍サンプル、ヒト血液サンプルを含む哺乳動物の体液、又は組織、器官若しくは細胞型の血液サンプル、血中リンパ球のサンプル若しくはその画分から選択される、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。前記哺乳動物がマウス、ラット、サル又はヒトである、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。前記がん患者に与える化学物質及び/又は生物学的物質に応じた前記oTLの数及び/又は量を測定及び/又はモニタリングすることを更に含む、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。請求項1~13のいずれか一項に記載の方法を行うためのキットであって、がん患者におけるoTLの数及び/又は量を、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法に従い、遺伝子CD3内のCpG位置のメチル化状態の分析に基づいて同定、測定及び/又はモニタリングするための材料を含む、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法を行うためのキット。がん患者におけるoTLを同定及び/又はモニタリングするための請求項14に記載のキットの使用。CD4細胞及びCD8細胞の測定及び決定は概して容易であり、通常は細胞表面上の上記抗原の発現を分析することによって臨床的に達成されるが、一般的に使用されるFACS分析については、細胞の構成要素entitiesを無傷に維持するには細胞サンプルを新たに単離するか、又は即座に固定する必要があるため、これらの細胞型を決定するのは依然として困難である。したがって、Tリンパ球の検出は所望されているが、特に日常的適用にとって問題をはらんでいる。上記を鑑みると、腫瘍浸潤Tリンパ球の検出に基づきがん患者の生存指標を測定するためのDNAメチル化分析に基づく改善された、特に確実な方法を提供することが本発明の一目的である。別の目的は、腫瘍浸潤Tリンパ球の検出に基づいて、患者におけるがん治療の転帰を予測する改善された方法を提供することであり得る。本発明の第1の態様において、本発明は、がん患者の生存指標を測定する方法であって、上記がん患者に由来する腫瘍サンプル中のCD3γ、CD3δ及びCD3εの遺伝子の1つ又は複数における少なくとも1つのCpG位置のメチル化状態に基づいて、腫瘍浸潤全Tリンパ球oTLの数及び/又は量を分析することを含み、高いoTLの数及び/又は量が、非乳がんにおける上記がん患者のより良好な生存及び/又はより良好な無進行生存の指標となる、がん患者の生存指標を測定する方法を提供することにより上記目的を解決する。全てではないが多くの分析された他のがんサンプルにおける状況とは対照的に、本明細書中に記載されるものと同一のアッセイによって乳がんサンプルを用いて得られたデータは、腫瘍浸潤Tリンパ球の存在下での無進行生存の顕著な減少を示した。したがって、検査される腫瘍対象物entityに応じて乳がん対他のがん、腫瘍部位においてTリンパ球が多数存在することは、このように無進行生存に有益である場合も、又は有害である場合もある。固形腫瘍は、VEGF及びFGFのような血管新生促進因子proangiogenicfactorsを時期依存的に高度に発現するようである。したがって、腫瘍がより進行すると、血流量及び血液細胞の蓄積が高くなり、転帰が不良となる。腫瘍が最初から高い血流量を有する場合例えば結腸直腸がんの場合、血管新生は正常組織に対して又は時期依存的に腫瘍における血流量を実質的に変化させず、予後がoTLの数と正に相関することとなる。本発明との関連で、高いoTLの数及び/又は量とは、Treg対oTL比の中央値を健常組織と腫瘍組織とで比較した場合に、増大したoTLの数及び/又は量を意味するものとする。一例では健常組織の3~8に対して腫瘍対象物で18~25であり、すなわち少なくとも2倍~10倍、好ましくは少なくとも5倍~10倍に増大する。本発明は、特異的な後成的マーカーとしてのCD3遺伝子の同定が、上記の状況の分析の日常的臨床応用を著しく促進することができるという本発明者らの驚くべき発見に基づく。詳細には、全Tリンパ球oTLに対する後成的イムノフェノタイピングの概念が本発明との関連で用いられる。この手段によって、少なくともFACS分析と同等の精度の免疫細胞定量化が可能となり、これは血液及び固形組織の分析に採用可能である。本発明者らのデータから、遺伝子内のCD3G領域及びCD3D領域が、CD3T細胞におけるバイサルファイト変換にしか利用可能でないことが更に実証される。この特有の性質に基づいて、Tリンパ球の高感度定量化のための特異的qPCRアッセイを設計した。このアッセイは、任意でFOXP3qPCRアッセイとともに、oTL及びTregの定量化に好適な技術的アプローチとなる。好ましい実施の形態では、全ての細胞型においてバイサルファイトが反応可能なaccessibleハウスキーピング遺伝子、好ましくはGAPDHのCpG島内の領域を用いて総細胞カウントを決定することができる。等モルの定量標準としてFOXP3、CD3及びGAPDHの対応する標的領域を単一プラスミド特許文献4を参照にクローニングすることは、任意の所与のサンプルにおける指定の細胞型の完全に同等な分析を可能にする。凍結又はパラフィン包埋したサンプルに対して測定を行うことができ、結果が新たなサンプルを用いたFACS分析によって得られた細胞カウントと良好に相関するため図2、この技術は、サンプルの管理が未だ中核的な課題である臨床試験及び日常診断の用途に適している。この方法に基づいて、本発明者らは、一部ドナーをマッチさせた616個のサンプルを用いて、卵巣、結腸直腸、乳房及び気管支の健常組織及び腫瘍組織の独立コホートにおいて、Tregの頻度、oTL及びそれらの比率を分析した。本発明者らは、Treg対oTL比の中央値が、健常組織の3~8から全ての腫瘍対象物の18~25までシフトすることを見出した。重要なことには、後成的に決定されたoTLカウントが、結腸直腸がん及び卵巣がんの転帰と相関していた。したがって、このデータは、腫瘍微小環境における免疫細胞の組成を後成的測定によって定量的に評価することができることを示している。この組成は固形腫瘍において乱され、腫瘍免疫回避の基本的機構が示される。免疫組織化学とは対照的に、Tリンパ球の後成的定量化は、転帰予測の独立した臨床的パラメータとなる。本発明による方法の別の好ましい実施の形態では、上記サンプルにおける少なくとも1つのCpG位置の少なくとも90の脱メチル化が、CD3Tリンパ球細胞、特にCD3CD4Tリンパ球細胞、及び/又はCD3CD8Tリンパ球細胞の指標となる。好ましくは、上記サンプルにおける上記少なくとも1つのCpG位置は、91超、好ましくは92超、最も好ましくは95超脱メチル化されている。好ましい1つの実施の形態では、非常に良好な領域の1つは、プロモーターであるか、又は例えばバイサルファイトシークエンシング方法を使用する場合、CD4細胞若しくはCD8細胞のいずれかにおいてCD3を発現する細胞を、CD3を発現しない他の全ての細胞と比較した際に、差次的differentialメチル化状態を示す多くのCpGモチーフを含有する、例えば特許文献4等に記載されるようなヌクレオチド配列を有するTLSDRである。本発明者らは、CD3細胞においてCpGモチーフがほぼ完全にすなわち70超、好ましくは80、好ましくは90超、最も好ましくは95超脱メチル化されている一方で、全てのCD3-細胞においては同じモチーフが完全にメチル化されていることを実証することができた。上述の領域内のCpGモチーフの差次的メチル化は、CD3発現と相関する。したがって、CD3遺伝子座のメチル化状態の決定は、Tリンパ球を同定するうえで有益な手段となり得る、例えば記載のように、がんにおいてTリンパ球を測定するのに必要とされるか、又は少なくとも幾らか有用であるとされる。このアッセイは、精製又は任意の染色手順なしにTリンパ球の測定を可能にする。固形腫瘍又は他の固形組織において、上記領域で脱メチル化される細胞の数もさらに報告され、それによりCD3陽性腫瘍浸潤Tリンパ球の総量が示される。本発明者らは、Tリンパ球におけるCD3の構成的発現が、後成的調節、すなわちDNAメチル化に基づく調節と同時に起こる可能性を示した。DNAメチル化は生物学的かつ化学的に安定な後成的修飾であり、長期の遺伝子発現変化をもたらす。本発明者らは、全ての主要な末梢血細胞型について試験し、様々な腫瘍細胞株を含む非血液細胞を選択したところ、ヒトのCD3遺伝子座での脱メチル化がTリンパ球に限定されることを見出した。これらのデータによって、CD3遺伝子座における後成的修飾が、特異的なδ副鎖subchains又はγ副鎖の発現にかかわらず、Tリンパ球の表現型を有する細胞の同定に対する有益なマーカーとなることが示された。上記サンプルにおけるTreg対oTL比を、マーカーそれぞれTreg特異的対非Treg特異的及び本明細書に記載の方法に基づいて決定することが、本発明による方法との関連で更に好ましい。本発明による方法の別の好ましい実施の形態では、上記少なくとも1つのCpG位置は、CD3遺伝子又は遺伝領域内の転写開始部位、プロモーター領域、イントロン、及び/又はエクソン/イントロン境界より上流の5’領域に存在する。本発明はまた、CD3遺伝子の特に好ましい領域、いわゆるTLSDR特許文献4に記載のTリンパ球特異的脱メチル化領域においてCpGモチーフがほぼ完全にすなわち90超、好ましくは91、好ましくは92超、最も好ましくは95超脱メチル化されている一方で、全ての非Tリンパ球においては同じモチーフが完全にメチル化されているという驚くべき発見を提示する。したがって、これらの領域及びその診断用途は、本発明による診断分析に対して有益かつ確実な手段を提供するものでもある。CpG位置のメチル化状態を分析するために、DNAメチル化を分析する任意の既知の方法を用いることができる。本発明による方法の別の好ましい態様では、メチル化状態の分析は、メチル化特異的酵素消化、バイサルファイトシークエンシングから選択される方法、プロモーターメチル化、CpG島メチル化、MSP、HeavyMethyl、MethyLight、Ms-SNuPEから選択される分析、又は増幅DNAの検出に基づく他の方法、好ましくはCD3特異的qPCRを含む。これらの方法は当業者に既知であり、それぞれの文献中に見ることができる。好ましくは、例えばMSP、HeavyMethyl、Scorpion、MS-SNUPE、MethyLight、バイサルファイトシークエンシング、メチル特異的制限アッセイの状況における増幅には、ポリメラーゼ酵素、PCR増幅反応若しくは化学的増幅反応、又は当業者に既知の他の増幅方法が含まれる。増幅によって、本発明による方法複数可を行うための特に好ましい手段である、CD3遺伝子又は例えば特許文献4に記載されるような任意のパラログ若しくはオーソログ中のTLSDR又は任意の他の領域のアンプリコンが生成される。当業者であれば、分析すべき部位の量を最小限にするために、CpG位置の特異的サブセット、例えば分析対象の任意のアンプリコン、例えば特許文献4に記載のアンプリコンのCpG位置1、2、3、4、5、6、7、8、9及び10の少なくとも1つ、又はCD3遺伝子座内の他の配列を更に選択することが可能である。これらの位置は、生成及び分析されるアンプリコンの5’末端から数値的に数えられる。位置4、5、6又は7の組合せが好ましく、これらは本発明との関連で情報を提供するのに十分な情報を生み出す。本発明による方法の好ましい実施の形態では、上記方法は例えばDNAチップ上での日常的適用に好適である。当業者であれば、上記の情報及びそれぞれの文献に基づいて上記の方法をかかる状況に適応させることができる。本発明による方法の別の好ましい実施の形態では、ハウスキーピング遺伝子、例えばGAPDH内の少なくとも1つのCpG位置の更なるメチル化分析を、上記サンプル中のoTLの量及び/又は数を正規化するために行うことができる。ハウスキーピング遺伝子は、典型的には基本的な細胞機能の維持に必要とされ、全てのヒト細胞に見られる構成遺伝子である。他の好適なハウスキーピング遺伝子は当業者にとって既知であり、例えばHuggettJDhedaKBustinSZumlaARealtimeRTPCRnormalizationstrategiesandconsiderationsGenesImmun2005Jun627984、又はRomanowskiTMarkiewiczABednarzNBielawskiKPHousekeepinggenesasareferenceinquantitativerealtimeRTPCRPostepyHigMedDosw2007Sep286150010に記載されている。本発明による方法の別の好ましい態様では、CD4及び/又はCD8、特にCD8βの遺伝子、又はFOXP3、CD25、CD127、CTLA4、GITR、CD45RA、CD103、GNGT2、CRTAM、IL2RB及びZBTB32、若しくはFLJ00060、FLJ38379、PPP6C、CD226、ZBTB7B及びTNFAIP8の遺伝子、好ましくはFOXP3遺伝子内のTSDRにおける少なくとも1つのCpG位置のメチル化状態を、CD3についての本明細書中の記載と同様にして分析する。したがって、これらの遺伝子は全てのCD3陽性Tリンパ球の明確な同定も可能にする。したがって、本発明による方法の好ましい実施の形態では、上記少なくとも1つのCpG位置は、CD3陽性Tリンパ球において遺伝子複数の場合もありFOXP3、GNGT2、CRTAM、IL2RB及びZBTB32内の転写開始部位、プロモーター領域、イントロン及び/又はエクソン/イントロン境界より上流の5’領域に存在する。これらのマーカーによって、CD8陽性細胞とCD4陽性細胞とを分離することが可能である。この分析は、Tリンパ球のCD3表現型についての分析と同時に、又はそれに続いて行うのが好ましい。同様に、FLJ00060、FLJ38379、PPP6C、CD226、ZBTB7B及びTNFAIP8によって、全血においてCD4発現細胞を確実に同定し、CD4陽性CD3陽性細胞とCD8陽性CD3陽性細胞とを分離することが可能である。本発明による方法は、好ましくは原発性又は続発性転移の固形腫瘍に由来する材料に対して行われる。更に好ましいのは、前記がんが、結腸直腸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、気管支がん、乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫及び/又は非小細胞気管支癌から選択される、本発明による方法である。本発明による方法の別の好ましい態様は、前記決定に基づく予後診断を更に含み、任意で健常組織又は非悪性組織と比較して高い腫瘍浸潤oTLの数及び/又は量が、上記非乳がん患者に対するより良好な予後の指標となる。より良好な予後は、がん患者についてのより長期の全生存、無再発期間、無進行期間及び転移がないことの少なくとも1つを含むものとする。乳がんにおいては、任意で健常組織又は非悪性組織と比較して高い腫瘍浸潤oTLの数及び/又は量が、上記乳がん患者についての予後不良の指標となる。本発明による方法の更に別の好ましい態様では、より良好な予後が、例えば7という健常組織の中央値よりも高いoTLカウントと関連する。本発明による方法の更に別の好ましい実施の形態では、サンプルは、固形腫瘍サンプル、ヒト血液サンプルを含む哺乳動物の体液、又は組織、器官若しくは細胞型の血液サンプル、血中リンパ球のサンプル若しくはその画分から選択される。好ましくは、上記がん患者はマウス、ラット、サル又はヒトである。サンプルは必要に応じて好適にプールすることができる。次に、本発明による方法の別の好ましい態様は、例えば抗がん治療、例えば結腸直腸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、気管支がん、乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫及び/又は非小細胞気管支癌、好ましくは結腸がん又は卵巣がんに対する化学療法として、上記がん患者に与える化学物質及び/又は生物学的物質に応じた上記oTLの数及び/又は量を測定及び/又はモニタリングすることを更に含む上記の方法に関する。次に、本発明の更に別の好ましい態様は、抗がん治療、例えば結腸がん又は卵巣がんに対する化学療法として、本明細書の記載の本発明の方法を用いて与えられる化学物質及び/又は生物学的物質に応じた上記oTLの数及び/又は量を測定及び/又はモニタリングすることを含む、がん、例えば結腸直腸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、気管支がん、乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫及び/又は非小細胞気管支癌、特に結腸がん、乳がん、気管支がん又は卵巣がんを治療する方法に関し、この場合、任意で未治療のがん患者と比較して高いoTLの数及び/又は量が、上記非乳がんの治療の指標となる。次に、本発明の更に別の好ましい態様は、例えば抗がん治療、例えば結腸直腸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、気管支がん、乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫及び/又は非小細胞気管支癌、特にinparticular結腸がん、乳がん、気管支がん又は卵巣がんに対する化学療法として、上記がん患者に与える化学物質及び/又は生物学的物質に応じた上記oTLの数及び/又は量を測定及び/又はモニタリングすることと、上記がん患者に与えられる化学物質及び/又は生物学的物質に応じた上記oTLの数及び/又は量の変化に基づいて、上記抗がん治療、例えば結腸直腸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、気管支がん、乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫及び/又は非小細胞気管支癌、特に結腸がん又は乳がん、気管支がん又は卵巣がんに対する上記化学療法の変更、継続又は中止を決定することとを含む、がん、例えば結腸直腸がん、子宮内膜がん、膵臓がん、食道がん、前立腺がん、気管支がん、乳がん及び/又は卵巣がん、及び/又は黒色腫及び/又は非小細胞気管支癌、特に結腸がん、乳がん、気管支がん又は卵巣がんを治療する改善された方法に関する。次に、本発明の更に別の好ましい態様は、上記に記載の本発明による方法に従って、遺伝子CD3内のCpG位置のメチル化状態の分析に基づいて、がん患者におけるoTLの数及び/又は量を同定、測定及び/又はモニタリングするための材料を含む、上記に記載の本発明による方法を行うためのキットに関する。好ましくは、上記キットは、aバイサルファイト試薬と、b上記に記載の本発明による方法に従う遺伝子CD3内のCpG位置のメチル化分析のための材料とを含む。最後に、本発明は、がん患者におけるoTLを同定及び/又はモニタリングするための本発明によるキットの使用も包含する。本発明のデータから、遺伝子内のCD3G領域及びCD3D領域が、CD3T細胞におけるバイサルファイト変換にしか利用可能でないことがことが実証される。この特有の性質に基づいて、Tリンパ球の高感度定量化のための特異的qPCRアッセイを設計した。このアッセイは、FOXP3qPCRアッセイとともに、oTL及びTregの定量化に好適な技術的アプローチとなる。全ての細胞型においてバイサルファイトが反応可能なハウスキーピング遺伝子GAPDHのCpG島内の領域を用いて総細胞カウントを決定することができる。等モルの定量標準としてFOXP3、CD3及びGAPDHの対応する標的領域を単一プラスミドにクローニングすることは、任意の所与のサンプルにおける指定の細胞型の完全に同等な分析を可能にする。凍結又はパラフィン包埋したサンプルに対して測定を行うことができ、結果が新たなサンプルを用いたFACS分析によって得られた細胞カウントと良好に相関するため図2、この技術は、サンプルの管理が未だ中核的な課題である臨床試験及び日常診断の用途に適している。本発明では、固形の卵巣腫瘍、気管支腫瘍及び結腸直腸腫瘍を有する患者の罹患組織における免疫細胞の役割を解明するためにこの技術を適用した。データから、分析した他の組織と比較して、顕著に低いTreg浸潤及びoTLが健常卵巣組織において示された。本発明者らは、この観察結果を組織特異的なレベルの潅流によるものと考える。ただし、Treg対oTL比の平均は、全ての健常組織において安定して3.5~7の範囲であり図3C、これは末梢血において測定される比率に相当し図2、FACS分析を用いて別項に報告した。このことは、Tリンパ球の10分の1までが抑制表現型を示す場合に健常な免疫バランスが得られることを示している。本発明者らは、試験した全ての腫瘍対象物において、より高頻度のTregを観察した図3A。oTLカウントは肺腫瘍及び結腸直腸腫瘍のサンプルでは低減したが、卵巣腫瘍サンプルでは増大した図3B。健常卵巣組織におけるTリンパ球カウントが、他の組織よりも低い値を示したことからより低い組織潅流に起因する可能性が高い、本発明者らは、Tregレベルの著しい上昇及びoTLレベルの顕著な増大が、腫瘍によって媒介される潅流の増大のためであると仮定する。他の健常組織では、腫瘍組織及び健常組織における潅流の差があまり明白でないことから、この影響は顕著には観察されない。潅流関連因子を除く免疫状態を利用するために、Treg対oTL比を決定した。本発明者らは、腫瘍中の組織浸潤免疫T細胞の総サブセットにおいて少なくとも抑制性T細胞の中央値レベルの倍増を観察した。とりわけ、このシフトは全ての腫瘍対象物にわたって観察された。この研究の信頼性を、2つの独立したCRCコホートによるデータを比較する際の仮想結果の合同congruenceによって更に高くした図3。さらに、本発明によるマッチドペアmatchedpair分析から、177人のうち153人86の患者においてTregの相対的な富化が示された。この傾向の例外は主に結腸直腸サンプルにおいて観察された。組織学的な組織割り当てがこれらのサンプルにいて特に要求されるため、本発明者らは組織選択の技術的課題を外れ値の適切な解釈であると考える。CD25FOXP3細胞は、腫瘍組織において上方調節を示す。CD25CD4FOXP3細胞の数の低さ及びCD3mRNAの数の高さは、より良好ながん患者の生存と関連していた。しかしながら、ヒト研究には、CD25FOXP3細胞が活性化エフェクターT細胞を含み、mRNA、IHC又はFACS分析のいずれかを用いた組織分析が、限られた精度の絶対的定量及び相対的定量しかもたらさないという問題がある。ここで、本発明者らは、異なる技術的アプローチを用いて、不均衡なdysbalancedTreg対oTL浸潤比が、固形腫瘍において高頻度で顕著に観察されるということを示した。FOXP3及びCD3の後成的分析はTreg及びoTLのみに関連したものであり、正確かつ完全に定量的なデータを提供する。様々な腫瘍対象物にわたって一様な不均衡が、以前の報告とともにjointwith、この影響が固形腫瘍に関連する免疫状態の恒常的欠如であることを示唆している。本発明者らは、この不均衡が腫瘍確立に対抗する身体の病理学的な不能に寄与し、永続的な腫瘍確立の必須条件であり得ると仮定する。しかしながら、後成的分析は、その記述的なdescriptive性質のために、かかる仮説を正式に証明するには不十分である。主要なヒト組織では、機能的重要性の評価の近似として生存分析が使用される。したがって、本発明者らは患者の生存に対する腫瘍におけるTリンパ球浸潤の役割を試験した。本発明者らのデータは、状況が逆である乳がんを除いて、腫瘍内oTLの数の増大がより良好な予後につながることを示す以前の報告を裏付けるものである。この傾向は、無進行生存PFS分析及び関連の全生存OS分析についての3回の独立研究の全てにおいて観察される。PFS及びOSの両方についての全てのコホートにわたるデータの定性的同等性は、この観察結果の高い関連性を示している。したがって、日常的適用のための後成的予測手段の開発が可能である。oTLのプラスの影響は、腫瘍浸潤Tリンパ球の即応性、したがってTreg対oTL比が腫瘍の展開に直接影響するという仮説と一致する。これは全Tリンパ球が主にエフェクターT細胞に相当するためである。要約すると、本発明者らは、免疫細胞の後成的分析が血液、場合によっては、更に重要なことには固形組織におけるイムノフェノタイピングを容易にする新規の方法であるという証拠を示す。示したデータは、腫瘍確立におけるTreg対oTL比の重要な役割を強く確立するものである。正式に証明されてないにもかかわらず、このデータは、抑制性TregとエフェクターTリンパ球との不均衡が腫瘍免疫回避と同時に起こり、腫瘍確立の固有の特徴であり得るという見解を確かに広めるものである。したがって、寛容原性免疫系対エフェクター免疫系の細胞の比率の変化が抗腫瘍戦略の強い標的となり得る。患者の予後に対する腫瘍内Tリンパ球カウントのプラスの影響は、免疫細胞の存在及び均衡が、抗腫瘍応答が機能していない身体の重要な要素であるという見解を更に支持する。本発明をここで、以下の実施例に基づき、添付の図面及びシークエンシングプロトコルを参照してこれらに限定されない更に説明する。本発明の目的上、本明細書中に引用される全ての参考文献は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする。実施例1本発明者らは、oTLの同定のための特異的マーカーとして遺伝子間CD3G/CD3D領域の後成的パターンを決定した。本発明者らは、高感度の定量的リアルタイムPCRベースアッセイを開発した。また、グリセルアルデヒドglyceraldehyde-3-リン酸デヒドロゲナーゼGAPDH遺伝子の調節領域内のCpG島に基づいた同様の後成的アッセイを確立することによって、総細胞計数のための全般的な基準系を提供する。これらの後成的アッセイ系を適用することによって、本発明者らは、気管支、結腸直腸及び卵巣起源の健常組織及び腫瘍組織における組織浸潤Treg及びoTLを分析した。データは、腫瘍におけるoTL浸潤の頻度が患者の予後と相関すること、及びTreg対oTL比が腫瘍では不均衡であり、そのことが腫瘍確立に不可欠であり得ることを明らかに示している。細胞及び組織FFPEサンプルについては、ベルリン大学附属シャリテ病院のベンジャミンフランクリンキャンパスChariteBerlinCampusBenjaminFranklinの病理学研究所のアーカイブから検索した。対応する正常実質を含む結腸直腸癌又は気管支癌の標本の組織マイクロアレイTMAを、直径1mmのコアを用いて構築した。新鮮な卵巣組織及び血液については、ベルリン大学附属シャリテ病院のウィルヒョーキャンパスCampusVirchowの卵巣がん腫瘍バンクから検索した。ゲノムDNAの単離及びバイサルファイト変換ゲノムDNAの精製のために、DNeasyBloodandTissueKitQiagenを使用した。FFPEサンプルからのゲノムDNAは、QIAampDNAFFPETissueKitQiagenを用いて単離した。パラフィンブロックをトリミングして余分なパラフィンを除去し、組織切片の厚さを10μmに調整した。各々の反応は10個の組織切片を用いて行った。バイサルファイト変換は、EpiTectBisulfiteKitQiagenを用いて行った。0.5μg~1μgのゲノムDNAを用いて反応を行った。オリゴヌクレオチドオリゴヌクレオチドフォワードプライマーfp及びリバースプライマーrp、並びにプローブpは、ヒトゲノムGRCh37eEnsemblerelease56;2009年9月のアセンブリに対するそれらの染色体位置によって表される。バイサルファイトシークエンシング用オリゴヌクレオチド:a遺伝子間CD3GENSG00000160654/CD3DENSG00000167286領域:アンプリコン番号1、fp:11:118213200-21:1、rp:11:118213616-37:1;アンプリコン番号2、fp:11:118214271-92:1、rp:11:118214685-705:1;アンプリコン番号3、fp:11:118214702-23:1、rp:11:118215151-73:1;bGAPDHENSG00000111640CpG島:アンプリコン番号3、fp:12:6644119-35:1、rp:12:6644635-56:1;アンプリコン番号4、fp:12:6643586-604:1、rp:12:6643990-4011:1。RT-PCR用オリゴヌクレオチド:aFOXP3ENSG00000049768TSDR:CpG特異的:fp:X:49117219-46:1、rp:X:49117283-307:1、p:X:49117256-73:1;TpG特異的:7fp:X:49117219-46:1、rp:X:49117283-307:1、p:X:49117256-78:1。bCD3:CpG特異的:fp:11:118213633-53:1、rp:11:118213686-707:1、p:11:118213670-87:1;TpG特異的:fp:11:118213632-53:1、rp:11:118213686-709:1、p:11:118213664-90:1。cGAPDH:TpG特異的:fp:12:6644378-99:1、rp:12:6644456-76:1、p:12:6644429-57:1。バイサルファイトシークエンシングPCRを7ngのDNA、1×PCRバッファー、1UのTaqDNAポリメラーゼQiagen、200uMdNTP、12.5pmolのプライマーを含有する25ul中で行った熱サイクリング条件:1×95°C、15分;40×95°C、1分;55°C、45秒;72°C、1分;1×72°C、10分。PCR産物をExoSAP-ITUSBCorpを用いて精製し、増幅プライマー及びBigDyeTerminatorv1.1chemistryAppliedBiosystemsを用いてシークエンシングした。産物をエタノール沈殿し、1Mベタインbetaineに溶解させ、ABI3100遺伝子分析装置でキャピラリー電気泳動を行った。ESMEを用いてABIファイルを解釈したLewinJetalQuantitativeDNAmethylationanalysisbasedonfourdyetracedatafromdirectsequencingofPCRamplificatesBioinformatics200420p300512。リアルタイムPCRqPCRqPCRは、30pmolの各プライマー、5pmolのプローブ、50ngのλファージDNANewEnglandBiolabs、及び60ngのDNA鋳型又は対応量のプラスミド標準を含有する20μl中で、RocheのLightCycler480ProbesMasterchemistry又はEpitect-MSPQiagenを用いて行った。各々のサンプルを三連で分析した。全てのアッセイについて、サイクリング条件は1×95°C、10分;50×95°C、15秒;61°C、1分であった。CPクロッシングポイントcrossingpointを、二次導関数最大値secondderivativemaximum法LC480ソフトウェアによってコンピュータで計算した。コピー数を線形回帰によるプラスミドベース標準の段階希釈を用いた検量線から算出した。プラスミド標準様々なリアルタイムPCRベースアッセイのためのバイサルファイト変換されたメチル化標的領域及びバイサルファイト変換された脱メチル化標的領域をコンピュータ内で設計し、合成しGenscriptInc、断片をプラスミドpUC57に挿入した。組み換えプラスミドを線状化し、10ng/μlのλ-ファージDNANewEnglandBiolabs中で段階希釈して、リアルタイムPCRベースアッセイのための標準を、1回の反応当たりの鋳型コピー数が12500、2500、500、100及び20という最終濃度で得た。主要末梢血白血球集団の細胞選別末梢血サンプルを、地方倫理委員会の承認に従って健常ドナーから得た。顆粒球CD15、単球CD14、CD4T細胞CD3CD4、TregCD4CD25highCD45RA-、B細胞CD19、NK細胞CD56、CD56bright、CD56dim、ナイーブCD8T細胞CD3CD8CD45RACD127、及び記憶CD8T細胞CD3CD8CD45RA-CD127/-等の異なる白血球集団への血液サンプルの分画を、以前に記載されるように行ったBaronUetalDNAdemethylationinthehumanFOXP3locusdiscriminatesregulatoryTcellsfromactivatedFOXP3conventionalTcellsEurJImmunol200737p237889。選別した細胞の純度はフローサイトメトリーによって求められるように97超であり、生存度は常に99超であった。統計分析鋳型コピー数を、二次導関数最大値法によるクロッシングポイントでの線形回帰による検量線から推定したRasmussenRQuantificationontheLightCyclerinRapidcyclerealtimePCRmethodsandapplicationsWtCMeuerSNakagawaraKEditor2001SpringerPressHeidelbergp2134。中央値を使用して試験サンプルの三連の測定値を統合した。遺伝子特異的DNAの割合を、遺伝子特異的specificTpG変異体DNAと、この遺伝子のTpG変異体とCpG変異体との合計、又はGAPDHTpG変異体コピーの数との比率としてコンピュータで計算した。累積生存率はカプランマイヤー法によって算出したKaplanEGCivicHospitalareportofitsfirstyearofoperationJAmPodiatryAssoc195848p1123。単変量比較については、統計的有意性をコックスマンテル検定を用いて評価したMantelNEvaluationofsurvivaldataandtwonewrankorderstatisticsarisinginitsconsiderationCancerChemotherRep196650p16370。相関分析については、スピアマンの順位相関統計を使用した。差の中央値は、サンプリング方法に応じて、ウイルコクスンの順位和検定OTコホート及びOvCaコホートに対する又はウイルコクソンの符号付き順位検定BTコホート、BCaコホート、並びにCTコホート及びCRCコホートの両方に対するを用いて試験した。全てのP値は両側とした。分析については、統計ソフトウェアSAS9.2TS2M2SASInstituteInc,CaryNC,USAを使用した。完全バイサルファイト変換の影響を受けやすい細胞型特異的遺伝子領域本発明者らは、CD3D遺伝子及びCD3G遺伝子の遺伝子間制御領域内のCpGジヌクレオチド、並びにGAPDH遺伝子内のCpG島のバイサルファイト変換性を、バイサルファイトシークエンシングを用いて試験した図1A。本発明者らは、分析したCD3領域の全てのシトシンがナイーブCD4ナチュラルTregを含むにおいて完全に変換され、CD8Tリンパ球がTpG変異体のみを生じることを見出した図1B。顆粒球、単球、Bリンパ球及びNK細胞を含む他の細胞型におけるバイサルファイト変換は、この遺伝子領域においてCpG変異体を生じた。本発明者らは、全ての試験した細胞型においてGAPDHのTpG変異体のみを見出し図1B、様々な複合組織においてこれを確認した。これらのデータに基づいて、本発明者らは、CD3及びGAPDHの分析される遺伝子座に対する定量的リアルタイムPCRアッセイqPCRを設計した。各々の領域について、本発明者らは、各々のアッセイに対する変異体特異的な蛍光標識検出プローブを含む、TpG鋳型のみを認識する1つのqPCRシステム、及びCpG鋳型に特異的な1つのqPCRシステムを開発した図1C。コピー数の定量標準を提供するために、本発明者らは、TpG変異体及びCpG変異体に相当する両方の遺伝子座に対するプラスミド系を構築した。本発明者らは、3桁にわたる増幅の直線性を示し増幅効率は1.95~2の範囲であった、本発明者らは、互いに対の鋳型変異体を用いた、TpG変異体及びCpG変異体の各々に特異的なPCRシステムの交差反応性を検出しなかった図1C。CD3及びGAPDHに特異的な後成的qPCRアッセイの特性化CD3及びGAPDHのqPCRを、文献BaronUetalDNAdemethylationinthehumanFOXP3locusdiscriminatesregulatoryTcellsfromactivatedFOXP3conventionalTcellsEurJImmunol200737p237889に従って精製した分離血液細胞画分について分析した。標準と同等のバイサルファイト変換されたTpGDNA又はCpGDNAの標的領域を含有するプラスミドの段階希釈物を用いて、本発明者らはDNAコピー数を決定した。TpG/TpGCpGのコピーの比率を、各々の遺伝子領域について算出した表1。結果から、CD8T細胞及びCD4T細胞が、CD3遺伝子座について99を超えるTpG変異体を含有する一方で、CD19B細胞、CD15顆粒球、CD14単球及びCD3-CD56ナチュラルキラー細胞が実質的に99超CpG変異体のみからなることが示される。GAPDH遺伝子座の標的化によって、CpG変異体の増幅は起こらなかったが、TpG変異体が全ての細胞型において効率的に増幅されることが示された表1。したがって、GAPDH脱メチル化の定量的分析は、所与のサンプル中の全ての細胞の総DNAコピー数を検出する細胞型独立マーカーをもたらす。両方のqPCRアッセイの技術的精度を更に実証するために、DNAスパイクspiking実験を行った。そこで本発明者らは、CD3遺伝子座及びFOXP3遺伝子座の両方においてバイサルファイト変換されたDNAが99.5超のTpG変異体からなるFACS精製した調節性T細胞及び顆粒球99.7超のCpG変異体からなるを選択した。CD3内の領域のTpG変異体及びCpG変異体と同一の配列を含有するプラスミド、並びに陽性対照としてFOXP3のTSDR、並びに正規化のためにGAPDHのTpG変異体を用いて、本発明者らは全細胞カウントと比較したCD3及びFOXP3のTpG変異体の相対量を定量した。そこで、本発明者らは40、20、10、5、3、2及び1のTregDNAを、顆粒球DNAのバックグラウンドに人工的にスパイクした。GAPDH及び相対的定量のためのDNA系の特異的TpG変異体を用いて、本発明者らは、スパイクしたサンプルについて理論的に推定された値と、CD3及びFOXP3qPCRの測定値との間に厳密な相関を見出したFOXP3及びCD3の両方についてピアソンR=0.998。全血サンプル中のTreg及び全Tリンパ球の分析Treg及び全Tリンパ球oTLに対する後成的マーカーを、17個の全血サンプルについて試験し、その結果を、Tregについては系統特異的表面分子CD4及びCD25、oTLについてはCD3を用いて、同じ17個のサンプルについて測定された、フローサイトメトリー分析によって得られたデータと比較した。FACS分析によって決定されたCD3細胞の割合は、CD3qPCRによって決定されたTpG変異体の割合と厳密に相関するスピアマンR=0.78;p=2.0E-4図2A。同様に、FACS測定によって得られたCD4CD25CD127細胞の割合と、FOXP3のTSDR遺伝子座に対して見られたTpGDNAとの比較は、強い相関を示したスピアマンR=0.74、p=7.0E-4。FACS又は後成的分析によるFOXP3対CD3比の測定値も、強く相関していたスピアマンR=0.7、p=1.8E-3。コルモゴロフKolmogolovスミルノフによる適合度検定から、FACS分析の正規分布からの有意な偏差が明らかとなり、一方で後成的測定の正規分布が認められたため、スピアマンの順位相関を比較のために使用した。この発見からFACS分析についての外れ値のより高い頻度が示唆される。TregはoTLの部分群であるため、これら2つの細胞集団の相互依存性についても調査した。本発明者らは、全血において、oTLカウント及びTregカウントが顕著なスピアマンの相関係数R=0.47、p=3.8E-8で互いに相関することを観察した。固形健常組織及び腫瘍組織におけるFOXP3のTSDR及びCD3のqPCR分析固形組織における組織浸潤FOXP3調節性T細胞Treg及び全CD3Tリンパ球oTLの完全に定量的な評価を提供するために、本発明者らは、卵巣、気管支及び結腸直腸起源の健常組織及び腫瘍組織から単離したDNAを比較した図3A~図3C。健常卵巣組織OTにおける浸潤免疫細胞の量の中央値は、Treg及びoTLのそれぞれについて0.12及び4.27である。病理学的に確認された卵巣がんのサンプルOvCaについては、本発明者らは1.28のTreg及び7.76のoTLという中央値を観察した。独立したサンプルに対するノンパラメトリックなウイルコクスンの順位和検定によると、健常組織OTと比較して腫瘍における両方のパラメータの上昇が統計的に極めて有意であるpTreg=2.34E-11;poTL=0.0066;図3A及び図3B。健常気管支組織BTでは、2.0のTreg及び29.6のoTLが観察された。隣接する腫瘍病変BCaを試験したところ、本発明者らは4.2のTreg及び22.3のoTLを観察した。腫瘍における、健常組織と比較してより高いTregカウント及びより低いoTLカウントの両方が、対応のあるpairedサンプルについてのウイルコクソンの符号付き検定によって統計的に有意であるp=0.0024及びp=0.0015;図3A及び図3B。2つの独立した結腸直腸がんコホートを用いて同じ分析を行い、健常な腫瘍に隣接する組織CTと腫瘍組織CRCとを比較した。第1のコホートでは、本発明者らは、健常サンプルCT-Iにおいて、それぞれ1.9及び33.5というTregカウント及びoTLカウントの中央値、腫瘍組織CRC-Iにおいて、それぞれ3.8のTreg及び26.1のoTLを観察した図3A及び図3B。ウイルコクソンの符号付き検定から、腫瘍におけるより高い割合のTregp=3.80E-4;図3A及び低下した割合のoTLp=1.0E-4;図3Bが統計的に有意であることが示される。全ての統計分析が多重検定のための補正後も有意なままである。第2のCRCコホートからのデータによって、腫瘍サンプルCRC-IIにおける4.3のTreg及び23.9のoTLとは対照的に、健常組織CT-IIにおける1.8のTreg及び32.3のCD3細胞を示すこの観察結果を確認したTreg及びoTLについて、それぞれp=1.0E-4及びp=0.0296。CRC-IIコホートにおける健常な及び腫瘍性のTreg及びoTLの間の差異を多重検定について補正すると、oTL値は正式に統計的有意性を下回るがp=0.1、本発明者らの見解では傾向の関連性が明らかなままである。4つ全てのコホートについて、本発明者らはTreg対oTL比を分析した図3C。健常組織では、oTLにおける相対Treg量の中央値は3~8の範囲であったOTの中央値:3.4、BTの中央値:7.6、CT-Iの中央値:5.9、CT-IIの中央値:7.8。腫瘍対象物では、この比率はTregの割合の増大へとシフトするOvCaの中央値:19.7、BCaの中央値:18.3、CRCIの中央値:17.5、CRC-IIの中央値:21.6。全ての変化は統計的に極めて有意であるpOvCa対OTp=8.06E-07、pBCa対BTp=1.59E-14、pCRC-I対CTp=3.05E-13、pCRC-II対CT-IIp=5.10E-7。気管支がん患者及び結腸直腸がん患者のコホートについては、腫瘍及び隣接する健常組織のドナーをマッチさせたペアを使用したため、本発明者らは、ドナー間変動による影響を受けずに、ドナーをマッチさせた分析においてTreg対oTLカウントを直接比較した。本発明者らは、93.546個のうち43個のペアが、健常隣接組織BTと比較して気管支腫瘍BCaにおけるTreg対oTL比の増大を示すことを見出した。CRC-Iコホートでは、本発明者らは8148個のうち39個の症例において同等の増大を見出し、CRC-IIコホートではこの増大が8683個のうち71個のペアにおいて観察される。本発明者らはまた、Treg及びoTLの相互依存性を調査した。全血サンプルで見られる相関と同様に、本発明者らは健常気管支組織スピアマンR=0.68、p=8.6E-08及び結腸組織RCT-I=0.55、p=4.4E-5、RCT-II=0.54、p=2.1E-8において、Treg浸潤とoTL浸潤との間に顕著な相関を観察した。限定数の卵巣組織サンプルN=13を用いた同じ分析は、有意な相関を示さなかったR=0.15、p=0.6。病変組織におけるこの相互依存性を試験したところ、本発明者らは卵巣がん組織における強い相関ROvCa=0.77、p=3.5E-21、並びにBCa及びCRCにおける顕著な相関RBCa=0.48、p=3.25E-8;RCRC-I=0.37、p=0.02;RCRC-II=0.58、p=1.2E-10を観察した。患者の生存と腫瘍内免疫細胞カウントとの関連付け結腸直腸がん患者及び卵巣がん患者について、追跡調査データが利用可能であった。したがって、本発明者らは腫瘍浸潤oTLの数が患者の予後と相関するか否かについて試験した図4。oTL数によって示される影響を検出するために、本発明者らはoTLカウントの中央値で患者を2つのグループに分けた。このグループ分けは任意であるが、バランスの取れたサンプリングサイズを提供する。CRCコホート-Iでは、20例の再発無進行生存PFSの終点が報告される及び10例の死亡全生存OSの終点が、それぞれ77個及び90個の打ち切りデータ点によって報告された。これらの事象数は、統計的に有意な生存分析に十分ではないが、高いoTLの数を有する患者についてPFS及びOSの改善傾向が観察された。高いoTLカウントを有する患者の10未満及び低いoTLカウントを有する患者のおよそ25で、20ヶ月後に再発が起こった。高いoTLの数を有する患者の5及び低いoTLの数を有する患者の15が、診断から40ヶ月後に死亡した図4。次いで、本発明者らは、I期疾患患者を除く独立した結腸直腸がんコホートCRC-IIを用いて、観察された傾向を確認した。このコホートでは、80人の患者が十分な追跡調査を受け、39例の再発及び30例の死亡が報告された。このコホートにおけるoTLカウントの中央値は23.9であった4.9~72.1の範囲。PFSについての単変量カプランマイヤーMeier分析では、高いoTLカウントを有する患者のより良好な生存の明白な傾向40ヶ月に対して82ヶ月という中央値が見出された。高いoTLを有する患者についてはOSの中央値に到達せず、低いoTLカウントで80ヶ月であり、統計的に有意な生存率の改善survivaladvantageが示されたp=0.039。このコホートでは、本発明者らはIHCを用いることによってもoTL数を決定した。これらのデータは、より良好な予後又は後成的分析において見られるデータとは相関しなかった。OvCaコホートでは、67人の患者からのデータがPFS分析に含まれ、45例の再発が報告された。OS分析については、79人の患者が含まれ、30例の再発事象が報告された。OvCaコホートにおける単変量分析から、この場合7.76という中央値よりも高いoTLカウントを有する患者について、より良好な予後が示唆される図4。PFSの中央値は、高いoTLの数を有する患者については40ヶ月、低いoTLの数を有する患者については25ヶ月であった。同様に、OSの中央値は、低いoTLカウントを有する患者52ヶ月と比較して、高いoTLカウントを有する患者でより良好であった70ヶ月。3つ全てのコホートのPFS及びOSについて、本発明者らはコックス回帰モデルを算出した。連続的に増加するoTLの影響は全ての分析にわたって、年齢、悪性度grading、病期及び他のコホート特異的パラメータについて調節した後も保護的であった。PFSに関するハザード率はOvCa及びCRC-IIのそれぞれについて0.966及び0.998、OSに関してはOvCa及びCRC-IIのそれぞれについて0.98及び0.987であった。CRC-Iについては、小数の事象によって確実なモデリングが無効となるが、暫定的なハザード率はPFS及びOSのそれぞれについて0.995及び0.972であり、Tリンパ球数の上昇によって媒介される腫瘍応答の改善傾向が更に確認される。まとめると、コックス回帰分析から、腫瘍環境におけるoTL含量の1の増加毎に、再発又は死亡のリスクがおよそ0.2~3.4減少することが示される。実施例2本実施例は、腫瘍発生における免疫系の悪化の理解に寄与することを目的とする。そこで、本発明者らは以下のコホートを使用した:a良性卵巣組織成長を表す卵巣嚢胞、b卵巣の全ての悪性疾患の同等に最良の転帰を有する半悪性腫瘍を表す非浸潤性境界型腫瘍、c幾らかより危険であるが、依然として半悪性の形態の卵巣腫瘍を表す浸潤性境界型腫瘍、並びに、d異なる進行の病期で見られる最も悪性の形態の卵巣腫瘍を表す早期及び後期の卵巣がん。本発明による後成的試験を用いて、これらの種々の卵巣疾患における調節性T細胞及び全T細胞の頻度及び比率を決定した。15人のドナーのコホートでは、健常良性卵巣組織において0.12という調節性T細胞Tregの中央値が、0.01の最小値及び0.71の最大値で見られた。非浸潤性境界型腫瘍n=23では、0.35最小値=0.06、最大値=1.48という平均が見られた。浸潤性境界型腫瘍の患者n=24では、この平均値は更に0.57まで増大した最小値=0.06、最大値=3.96。早期卵巣がん患者では、0.8というTregレベルの中央値最小値=0.11、最大値=8.16が観察され、後期卵巣がんでは、Tregレベルの中央値は更に1.32まで増大した最小値=0.05、最大値=11.95。早期卵巣がん対後期卵巣がんの比較を除く全ての比較が、ノンパラメトリック両側t検定において試験した場合に統計的に有意であった。次に、本発明者らは全Tリンパ球oTLの数を分析した。これらの細胞の頻度は所与の組織における免疫系の活性を示すものとする。健常卵巣組織4.27、n=15、非浸潤性境界型腫瘍2.93、n=25、及び早期卵巣がん3.47、n=40の間で比較的安定なoTLカウントが観察された。同等により良好な転帰を有する形態の疾患すなわち、非浸潤性境界型腫瘍、卵巣組織及び早期卵巣がんと比較して、浸潤性境界型腫瘍5.71、n=25及び後期卵巣がん7.94、n=77の増大が観察された。最後に、種々の腫瘍対象物におけるTregとoTLとの間の比率を、上記に記載の実験において得られたデータに基づいて決定した。調節性T細胞の活性がエフェクターT細胞を標的とし、エフェクターT細胞の活性がそれらの存在度だけでなく、腫瘍を攻撃するそれらの能力によっても決定されるため、これは全てのアプローチの中で最も重要である。この能力は、抑制性Tregの存在によって大きく損なわれる。本発明者らは、非悪性卵巣組織ではこの比率はおよそ3.5であることを観察した。この値は血液及び他の健常組織における比率と一致する。この比率は、半悪性非浸潤性腫瘍9.58及び浸潤性境界型腫瘍10.51ではおよそ10にまで増大する。同じ傾向が更に悪性腫瘍にも当てはまり、oTL集団におけるTregの保有率prevalenceが更に早期腫瘍において17.22、後期腫瘍において20.22にまで増大する。要約すると、悪性度の増大及びTregカウントの増大、並びにoTL、すなわち腫瘍微小環境におけるエフェクターT細胞コンパートメントの占有率の減少は密接に関連している。本発明者らはここで、Treg及びoTLの保有率が、身体の応答に打ち勝ち、回避する腫瘍の能力の重要な決定因子であるという更なる証拠を提供する。免疫細胞濃度に影響を与える腫瘍細胞の能力が、腫瘍の悪性度プロファイルの極めて重要な特徴であることが推測され得る。表1実施例2によるデータ:OT=卵巣組織;non-invBOT=非浸潤性境界型腫瘍、invBOT=浸潤性境界型腫瘍、OvCa=卵巣がん、earlyOvCa=早期卵巣がん、lateOvCa=後期卵巣がん、Level=レベル、median=中央値、mean=平均、min=最小値、max=最大値、S.D.=標準偏差、T-Testp-Value;2-sided=t検定p値;両側、vs=対"