試験薬剤を、脂肪生成活性についてスクリーニングする方法であって、脂肪生成能を有する哺乳動物の試験細胞を準備する工程であって、前記細胞は、脂肪細胞への分化のために予備刺激されるが、分化していない、工程;前記細胞を、前記試験薬剤と接触させる工程;および前記試験細胞を、脂肪細胞の表現型についてスクリーニングする工程であって、脂肪細胞に特徴的な特質の存在が、前記試験薬剤が脂肪生成性を有することの指標である、工程を含む、方法。脂肪生成能を有する前記細胞が、間葉系幹細胞、乳頭状および網状真皮線維芽細胞、脂肪由来の幹細胞/間質細胞、前脂肪細胞、骨髄前駆体、脂肪生成能を有する筋原性前駆体、血管細胞、胚性外胚葉、ならびに胚性中胚葉からなる群から選択される細胞である、請求項1に記載の方法。脂肪生成能を有する前記細胞が、皮膚由来の前脂肪細胞、脂肪吸引由来の前脂肪細胞、毛包、および脂肪肉腫由来の前脂肪細胞である、請求項2に記載の方法。脂肪生成能を有する前記細胞が、内臓の前脂肪細胞である、請求項2に記載の方法。前記前脂肪細胞が、褐色前脂肪細胞である、請求項4に記載の方法。前記前脂肪細胞が、白色前脂肪細胞である、請求項4に記載の方法。前記前脂肪細胞が、大綱または腸間膜の前脂肪細胞である、請求項4に記載の方法。脂肪生成能を有する前記細胞が、皮下の前脂肪細胞である、請求項2に記載の方法。前記細胞が、3T3-L1細胞、3T3-F422A細胞、1246細胞、Ob1771細胞、TA1細胞および30A5細胞からなる群から選択される細胞である、請求項2に記載の方法。前記細胞が、肥満または痩身の傾向のある動物由来の細胞である、請求項2に記載の方法。前記準備する工程が、前記細胞を、脂肪細胞への分化に必要とされる少なくとも1つの因子を欠く、脂肪細胞分化混合物と接触させる工程を含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。前記脂肪細胞分化混合物が、IBMX、レプチン、アディポネクチン、グルコース、脂肪生成サイトカイン、脂肪生成植物、デキサメタゾン、IGF-1およびインスリンからなる群から選択される1つまたは複数の因子を含む、請求項11に記載の方法。前記脂肪細胞分化混合物が、IBMX、デキサメタゾン、IGF-1およびインスリンからなる群から選択される1つまたは複数の因子を含む、請求項11に記載の方法。前記脂肪細胞分化混合物が、インスリン、IGF-1、抗ウイルス薬、脂肪生成サイトカイン、脂肪生成因子および脂肪生成植物からなる群から選択される1つまたは複数の薬剤を含まない、請求項11から13のいずれか一項に記載の方法。前記脂肪細胞分化混合物が、インスリンおよび/またはIGF-1を含まない、請求項11から14のいずれか一項に記載の方法。前記脂肪細胞分化混合物が、抗ウイルス薬を含まない、請求項11から15のいずれか一項に記載の方法。前記スクリーニングする工程が、脂肪細胞によって特異的に発現されるタンパク質を検出または定量する工程を含む、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。前記タンパク質が、アディポネクチン、脂質結合タンパク質、および、脂肪生成トランスクリプトームを促進する転写因子からなる群から選択される、請求項17に記載の方法。前記スクリーニングする工程が、前記細胞における脂質の蓄積を検出または定量する工程を含み、脂質の蓄積が、前記細胞が、脂肪細胞の特徴を獲得したことを示す、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。前記脂質の蓄積を検出または定量する工程が、脂質の染色を検出または定量する工程を含む、請求項19に記載の方法。前記スクリーニングする工程が、前記細胞に対する前記試験薬剤によって得られる結果を、完全な脂肪細胞分化混合物と接触した同じ細胞種を含む陽性対照と、比較する工程を含み、前記試験細胞と前記陽性対照との間に有意差が存在しないことが、前記試験薬剤が脂肪生成性を有することの指標である、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。前記完全な脂肪細胞分化混合物が、IBMX、デキサメタゾンおよびインスリンを含む、請求項21に記載の方法。前記スクリーニングする工程が、前記細胞に対する前記試験薬剤によって得られる結果を、分化混合物に曝露されなかった同じ細胞種を含む陰性対照と、比較する工程を含み、前記試験細胞と前記陰性対照との間に有意差が存在しないことが、前記試験薬剤が脂肪生成性を有しないことの指標である、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法。前記試験細胞が、多ウェル器具または多容器器具における複数の異なる容器またはウェルに配置される、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。複数の試験薬剤が、アッセイされ、異なる試験薬剤が、異なる容器またはウェルに配列される、請求項24に記載の方法。複数の試験薬剤が、単一のウェルまたは容器に存在する、請求項24に記載の方法。試験薬剤を含有する各々のウェルまたは容器が、単一の試験薬剤を含有する、請求項24に記載の方法。1つまたは複数の容器またはウェルが、陽性対照細胞を含有する、請求項24から27のいずれか一項に記載の方法。1つまたは複数の容器またはウェルが、陰性対照細胞を含有する、請求項24から28のいずれか一項に記載の方法。前記アッセイが、24ウェル形式、96ウェル形式、384ウェル形式または1536ウェル形式で実施される、請求項24から29のいずれか一項に記載の方法。前記細胞が、2D細胞培養で培養される、請求項1から30のいずれか一項に記載の方法。前記細胞が、3D細胞培養で培養される、請求項1から30のいずれか一項に記載の方法。前記細胞が、集密状態まで増殖する、請求項31または32に記載の方法。前記試験細胞が、皮下の前脂肪細胞、および内臓の前脂肪細胞を含み、前記スクリーニングする工程が、皮下の前脂肪細胞において、脂肪生成を誘導し、且つ、内臓の前脂肪細胞において、より少ない量の脂肪生成を誘導するか、または脂肪生成を誘導しない試験薬剤を、陽性と判定する工程を含む、請求項1から33のいずれか一項に記載の方法。線維芽細胞を、前記試験薬剤と接触させる工程;および前記線維芽細胞を、筋線維芽細胞の活性の変化についてスクリーニングする工程をさらに含み、脂肪生成活性と筋線維芽細胞の活性の阻害とを示す試験薬剤が、セルライトの治療または予防のための候補薬剤である、請求項1から34のいずれか一項に記載の方法。前記方法が、ハイスループット形式で行われる、請求項1から35のいずれか一項に記載の方法。陽性であるとスクリーニングされた試験薬剤が、非ヒト哺乳動物における皮下注射によってさらに検証される、請求項1から36のいずれか一項に記載の方法。試験薬剤を、脂肪生成活性についてスクリーニングするための細胞培養システムであって、脂肪生成能を有する哺乳動物細胞を含有する、1つまたは複数の細胞培養容器を含み、前記細胞は、脂肪細胞への分化のために予備刺激されるが、分化していない、細胞培養システム。脂肪生成能を有する前記細胞が、間葉系幹細胞、乳頭状および網状真皮線維芽細胞、脂肪由来の幹細胞/間質細胞、前脂肪細胞、骨髄前駆体、脂肪生成能を有する筋原性前駆体、血管細胞、胚性外胚葉、ならびに胚性中胚葉からなる群から選択される細胞である、請求項38に記載の細胞培養システム。脂肪生成能を有する前記細胞が、皮膚由来の前脂肪細胞、脂肪吸引由来の前脂肪細胞、毛包、および脂肪肉腫由来の前脂肪細胞である、請求項39に記載の細胞培養システム。脂肪生成能を有する前記細胞が、内臓の前脂肪細胞である、請求項39に記載の細胞培養システム。前記前脂肪細胞が、褐色前脂肪細胞である、請求項41に記載の細胞培養システム。前記前脂肪細胞が、白色前脂肪細胞である、請求項41に記載の方法。前記前脂肪細胞が、大綱または腸間膜の前脂肪細胞である、請求項41に記載の細胞培養システム。脂肪生成能を有する前記細胞が、皮下の前脂肪細胞である、請求項39に記載の細胞培養システム。前記細胞が、3T3-L1細胞、3T3-F422A細胞、1246細胞、Ob1771細胞、TA1細胞および30A5細胞からなる群から選択される細胞である、請求項38に記載の細胞培養システム。前記細胞が、肥満または痩身の傾向のある動物由来の細胞である、請求項38から45のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記細胞が、脂肪細胞への分化に必要とされる少なくとも1つの因子を欠く、脂肪細胞分化混合物において培養される、請求項38から47のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記脂肪細胞分化混合物が、IBMX、レプチン、アディポネクチン、グルコース、脂肪生成サイトカイン、脂肪生成植物、デキサメタゾン、IGF-1およびインスリンからなる群から選択される1つまたは複数の因子を含む、請求項48に記載の細胞培養システム。前記脂肪細胞分化混合物が、IBMX、デキサメタゾン、IGF-1およびインスリンからなる群から選択される1つまたは複数の因子を含む、請求項48に記載の細胞培養システム。前記脂肪細胞分化混合物が、以下:インスリン、IGF-1、抗ウイルス薬、脂肪生成サイトカイン、脂肪生成因子および脂肪生成植物のうち1つまたは複数を含まない、請求項48から50のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記脂肪細胞分化混合物が、インスリンおよび/またはIGF-1を含まない、請求項48から51のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記脂肪細胞分化混合物が、抗ウイルス薬を含まない、請求項48から52のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記細胞が、脂肪細胞によって特異的または優先的に発現されるタンパク質の存在を示す指示物と接触する、請求項38から53のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記指示物が、アディポネクチン、脂質結合タンパク質、および、脂肪生成トランスクリプトームを促進する転写因子からなる群から選択されるタンパク質と結合する抗体を含む、請求項54に記載の細胞培養システム。前記細胞が、脂質の存在を示す指示物と接触する、請求項38から55のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記細胞培養システムが、完全な脂肪細胞分化混合物と接触した同じ細胞種を含む陽性対照細胞をさらに含む、請求項38から56のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記脂肪細胞分化混合物が、IBMX、デキサメタゾンおよびインスリンを含む、請求項57に記載の細胞培養システム。前記細胞培養システムが、分化混合物に曝露されなかった同じ細胞種を含む陰性対照細胞をさらに含む、請求項38から58のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記試験細胞が、多ウェル器具または多容器器具における複数の異なる容器またはウェルに配置される、請求項38から59のいずれか一項に記載の細胞培養システム。異なる試験薬剤が、異なる容器またはウェルに存在する、請求項60に記載の細胞培養システム。複数の試験薬剤が、単一のウェルに存在する、請求項60に記載の細胞培養システム。試験薬剤を含有する各々のウェルが、単一の試験薬剤を含有する、請求項60に記載の細胞培養システム。1つまたは複数の容器またはウェルが、陽性対照細胞を含有する、請求項38から63のいずれか一項に記載の細胞培養システム。1つまたは複数の容器またはウェルが、陰性対照細胞を含有する、請求項60から64のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記培養システムを構成する細胞が、12ウェル形式、24ウェル形式、96ウェル形式、384ウェル形式または1536ウェル形式で存在する、請求項60から65のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記細胞が、2D細胞培養で培養される、請求項38から66のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記細胞が、3D細胞培養で培養される、請求項38から66のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記細胞が、集密状態まで増殖する、請求項67または68に記載の細胞培養システム。前記試験細胞が、皮下の前脂肪細胞、および内臓の前脂肪細胞を含む、請求項38から69のいずれか一項に記載の細胞培養システム。線維芽細胞をさらに含む、請求項38から70のいずれか一項に記載の細胞培養システム。前記システムが、ハイスループットスクリーニングのために構成される、請求項38から71のいずれか一項に記載の細胞培養システム。適切な細胞の脂肪生成を促進する能力についての、1つまたは複数の試験薬剤の評価を容易化し、これらの試験薬剤複数の場合もあるに対する、invivoでの例えば、皮膚または他の組織における脂肪生成応答を予測する方法が、本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、このアッセイは、皮膚において見出される細胞例えば、皮下の脂肪細胞においては、脂肪生成性を有するが、内臓において見出される細胞例えば、内臓の前脂肪細胞においては、脂肪生成性がより低いか、または脂肪生成性を全く有しない試験薬剤を同定する。そのような試験薬剤は、内臓脂肪の産生の増大によって引き起こされる悪影響を回避しながら、しわを低減するのに、再建外科処置または美容外科処置、例えば火傷患者への組織の移植後の皮膚の外観を正常化するのに、創傷治癒中および創傷治癒後の皮膚の外観を正常化するのに有用であることが期待される。美容の用途においては、定期的に注射しなければならない神経毒薬剤とは異なり、本明細書において記載されるアッセイを使用して同定される脂肪生成剤の局所的な注射は、筋肉の麻痺を伴わない、長く持続する皮膚のボリュームを出す効果をもたらすはずであり、このことは、これらを顔に注射した場合に、動きおよび表情の喪失が存在しないであろうことを意味する。様々な実施形態において、前記スクリーニングの方法は、典型的には、脂肪生成能を有する哺乳動物の試験細胞を準備する工程であって、前記細胞は、脂肪細胞への分化のために予備刺激されるが、分化していない、工程を伴う。前記細胞は、対象の試験薬剤複数の場合もあると接触し、引き続き、脂肪細胞に特徴的な1つまたは複数の特質についてスクリーニングされる。そのような特質の存在が、前記試験薬剤複数の場合もあるが、脂肪生成性を有することの指標である。脂肪細胞に特徴的な一つの例示的な特質は、脂質の蓄積であり、これは、容易に検出される。このアッセイにおける陽性の結果が、前記試験薬剤複数の場合もあるが、invivoで例えば、ラットの皮膚モデルにおいて、ヒト等において同様の活性を有すると考えられることの良好な指標であることが実証された例えば、実施例1を参照されたい。したがって、脂肪生成活性についてのこの基本アッセイは、再建外科処置後の皮膚の外観の正常化に使用するための、創傷治癒に使用するための、しわの低減のための、フェイスリフト、または他の美容処置等のための、良好な候補薬剤を同定する。試験細胞例えば、皮下の前脂肪細胞に対する陽性の脂肪生成活性についてのスクリーニングに加えて、本明細書において記載されるアッセイは、また、そのような活性が存在しないことについてまたは、他の細胞に対する脂肪生成活性の低減についてスクリーニングするために使用することができる。したがって、例えば、試験薬剤を、皮膚において典型的に見出される細胞例えば、皮下の前脂肪細胞に対する、および内臓に例えば、内臓の前脂肪細胞として典型的に見出される細胞に対する脂肪生成活性についてスクリーニングすることができる。皮下由来の細胞、および内臓由来の細胞は、脂肪生成の表現型の1つまたは複数の特徴についてスクリーニングされる。皮膚において見出される細胞に対して陽性の活性、および内臓の細胞に対してより低い活性または、活性がないことを示す試験薬剤が、特に望ましい。そのような試験薬剤は、内臓脂肪の産生の増大によって引き起こされる悪影響を回避しながら、しわを低減するのに、再建外科処置または美容外科処置後の皮膚の外観を正常化するのに、創傷治癒中および創傷治癒後の皮膚の外観を正常化するのに、有益な効果を有することが期待される。前記試験薬剤が、内臓脂肪の産生を抑制する場合、前記試験薬剤は、肥満と関連する悪影響例えば、高血圧、心疾患、肥満症を低減することが期待される。ある特定の実施形態では、前記試験薬剤を、また、線維芽細胞を筋線維芽細胞へと分化するように活性化することに対する、それらの効果についてスクリーニングすることができる。セルライトは、脂肪の沈着と、筋線維芽細胞によって引き起こされる細胞収縮とを特徴とする。したがって、ある特定のアッセイにおいては、試験薬剤は、例えば皮下の前脂肪細胞の、脂肪生成を誘導する、それらの能力についてスクリーニングされる。前記薬剤は、また、線維芽細胞に対する活性についてスクリーニングされる。薬剤は、これが、脂肪生成能を有する前記試験細胞において脂肪生成を誘導するが、線維芽細胞に対して低い効果を有するもしくは効果を有しないか、または線維芽細胞の、筋線維芽細胞への分化を抑制する場合、陽性と判定される。筋線維芽細胞の表現型への分化についてのアッセイは、当業者に周知であり、例えば、平滑筋アクチンの発現について細胞をアッセイすることを含む。そのようなアッセイは、平滑筋アクチンについての免疫組織化学アッセイ、平滑筋アクチンプロモーターと操作可能に連結されたレポーター遺伝子、収縮力アッセイ等を含むが、これらに限定されない。線維芽細胞における平滑筋アクチンについての、一つの例示的であるが限定的ではないアッセイは、非特許文献1に記載されている。前記アッセイは、微量培養された線維芽細胞におけるαSMAについての、酵素免疫アッセイEIAに基づくものであった。産生された前記αSMAは、標識され、アルカリホスファターゼを使用する間接酵素免疫アッセイに供され、光学密度が測定された。様々な実施形態において、陰性対照細胞および/または陽性対照細胞が含まれる。陽性対照細胞は、前記試験薬剤と接触さられる細胞と同種の細胞を、脂肪生成能を有する細胞の、脂肪細胞への最終的な分化を誘導する試薬例えば、IBMX、デキサメタゾンおよびインスリンの組合せに曝露することによって、準備される。様々な実施形態において、陰性対照が、前記試験薬剤と接触する細胞と同種の細胞を、脂肪細胞への分化を誘導しない培養培地において培養して、準備される。脂肪生成能を有する細胞。本明細書において記載されるアッセイにおいて、試験薬剤複数の場合もあるの脂肪生成活性を評価するために使用される細胞は、典型的には、脂肪生成能を有する細胞である。この文脈において、脂肪生成能は、適切な条件下で、脂肪細胞の表現型を実質的にまたは完全に獲得する例えば、脂肪細胞へと実質的にまたは完全に分化する、前記細胞の能力を指す。分化は、invivoで起こるものであっても良く、またはinvitroで起こるものであっても良い例えば、適切な試薬の投与によって。脂肪生成能を有する細胞は、幹細胞胚性幹細胞、成体幹細胞、人工多能性幹細胞IPSC等、線維芽細胞および前脂肪細胞を含むが、これらに限定されない。例示的な多能性線維芽細胞は、例えば、10T1/2、Balb/c3T3、1246、RCJ3.1およびCHEF/18線維芽細胞を含む。前脂肪細胞は、典型的には単能性であり脂肪細胞系列への決定を受けており、拘束されている、前脂肪細胞のまま留まる場合があり、または脂肪細胞への転換conversion/分化を起こす場合がある。例示的な前脂肪細胞は、3T3-L1細胞株、3T3-F422A細胞株、1246細胞株、Ob1771細胞株、TA1細胞株および30A5細胞株を含むが、これらに限定されない。他の好適な細胞種は、骨髄前駆体、および脂肪生成能を有する血管細胞を含むが、これらに限定されない。様々な実施形態において、前記細胞は、生物の特定の領域例えば、皮膚、内臓等に特徴的である、および/または、特定の脂肪細胞例えば、褐色脂肪細胞または白色脂肪細胞へと特徴的に分化する細胞である。ある特定の実施形態では、前記幹細胞、前記線維芽細胞および前記前脂肪細胞は、当業者に周知の方法によって、組織例えば、皮膚由来のもの、脂肪吸引由来のもの、脂肪肉腫由来のもの、および脂肪由来の幹細胞/間質細胞から、直接得ることができる。例えば、脂肪組織由来の前脂肪細胞の初代培養物を調製する方法は、非特許文献2、非特許文献3等に記載されている。幹細胞、ISPCおよび線維芽細胞を入手および培養する同様の方法が、当業者に周知である。人工多能性幹細胞iPSCは、身体の体細胞を再プログラム化することによって得られる。IPSCを作製する方法は、当業者に周知である例えば、非特許文献4、非特許文献5、非特許文献6、非特許文献7、非特許文献8、非特許文献9、非特許文献10、非特許文献11、非特許文献12、非特許文献13、非特許文献14、非特許文献15を参照されたい。加えて、幹細胞、線維芽細胞および前脂肪細胞は、多数の供給業者のうちのいずれかから商業的に入手することができる。例えば、大綱の前脂肪細胞、腸間膜の前脂肪細胞、および腎周囲の前脂肪細胞を含む内臓の前脂肪細胞は、TebuBioIledeFranceFrancewwwtebubiocomを参照されたいから入手可能である。皮下の前脂肪細胞、および前脂肪細胞の培地は、また、TebuBioおよびZenBioResearchTriangleParkNCから入手可能である。間葉系線維芽細胞および真皮線維芽細胞は、PromoCellGmbhHeidelbergGermanyから市販されている。これらの細胞の供給源は、例示的なものであり、限定的なものでないことが意図される。様々な実施形態において、前記細胞例えば、間葉系幹細胞、皮膚の前脂肪細胞、および脂肪生成能を有する他の細胞種は、好ましくは継代回数が少なく、集密状態に達しない培養物として維持されており、継代する場合、好ましくは1:6の希釈率を超えない。脂肪生成能を有する細胞の予備刺激。本明細書において記載されるアッセイは、試験細胞を、脂肪生成のために予備刺激するが、前記細胞に、脂肪細胞への最終的な分化を行わせないことを伴う。これは、前記細胞を、脂肪細胞への最終的な分化を誘導するために必要とされる1つまたは複数の因子を欠く、脂肪細胞分化混合物と接触させること例えば、前記細胞を、前記脂肪細胞分化混合物において培養することによって、達成することができる。前記試験細胞とは対照的に、陽性対照細胞は、完全な脂肪細胞分化混合物と接触し例えば、前記完全な脂肪細胞分化混合物においてインキュベートされ、それによって、脂肪細胞への分化が誘導される。典型的には、少なくとも1時間、少なくとも2時間、少なくとも4時間、少なくとも6時間、少なくとも12時間、少なくとも1日間、少なくとも2日間、少なくとも3日間、少なくとも4日間、またはそれ以上、前記試験細胞は、予備刺激混合物に曝露され、陽性対照を利用する場合、陽性対照は、前記完全な分化混合物に曝露される。一般的に、前記試験薬剤複数の場合もあるが、脂肪生成活性を有する場合、前記曝露の期間は、前記細胞の分化を誘導するのに十分となるように選択される。脂肪生成混合物/カクテル。集密状態にある前脂肪細胞を、所定の脂肪細胞分化混合物脂肪生成カクテルによって、同調的に分化させることができる。様々な実施形態において、最大の分化が、インスリン、グルココルチコイドグルココルチコイドアゴニスト、細胞内cAMPレベルを上昇させる薬剤、および適切な培養培地例えば、ウシ胎児血清を含む培地の組合せを用いる処理によって、達成される。インスリンは、インスリン様増殖因子1IGF-1受容体を介して作用することが知られており、IGF-1を、前記脂肪生成カクテルにおいて、インスリンの代わりに用いることができる非特許文献16。合成グルココルチコイドアゴニストであるデキサメタゾンDEXは、伝統的に、グルココルチコイド受容体経路を刺激するために使用される。好適であると考えられている他のグルココルチコイドアゴニストは、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、酢酸デキサメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、デキサメタゾンジエチルアミノアセテート、デキサメタゾンイソニコチネート、デキサメタゾンtert-ブチルアセテート、デキサメタゾンテトラヒドロフタレート等を含むが、これらに限定されない。他の例示的なグルココルチコイド受容体アゴニストは、特許文献1に記載されている。これらのグルココルチコイドアゴニストは、例示的なものであり、限定的なものでないことが意図される。本明細書において提示される教示を使用すると、当業者は、他の好適なグルココルチコイドアゴニストを認識するであろう。メチルイソブチルキサンチンMIXおよび3-イソブチル-1-メチルキサンチンIBMXは、cAMP-依存性タンパク質キナーゼ経路を刺激して、細胞内CAMPを増大させるために伝統的に使用される、cAMP-ホスホジエステラーゼ阻害剤である。細胞内CAMPを増大させることが知られている他の薬剤例えば、特許文献2を、また、使用することができる。一つの例示的な試薬は、インスリンを加えた血清置換培地例えば、KnockOutSRInvitrogenのカタログ番号10828-028;DMEM10FCSおよびオレエート非特許文献17等を含む。ある特定の実施形態では、脂肪生成因子は、また、インドメタシン、PPARGγアゴニスト、ビオチン、パントテネートpanthothenate、トランスフェリン、コルチゾール、トリヨードチロニンT3、トログリタゾンおよび/またはロシグリタゾンの任意の組合せを含んでいても良い。ある特定の実施形態では、RHAMMアンタゴニストは、これらの試薬の脂肪生成効果を補償することができるか、またはこれを増大させることができる。最も標準的な脂肪細胞分化混合物は、IBMX、デキサメタゾンおよびインスリンを含む。IBMXは、細胞内cAMPを増大させ、デキサメタゾンは、グルココルチコイド受容体と結合し、インスリンは、インスリン受容体および/またはIGF-1受容体と結合する。これらの3つの経路は、最終的に、分泌因子、インスリン受容体、および細胞内の脂質滴を形成する脂肪酸の合成および結合に関与するタンパク質をコードする、脂肪細胞に特異的な遺伝子を活性化する、PPARγおよびC/EBPファミリー遺伝子の活性化に至る。予備刺激混合物/カクテル。脂肪生成能を有する細胞は、前記細胞を、脂肪細胞への最終的な分化に必要とされる1つまたは複数の因子を欠く、脂肪細胞分化混合物と接触させること例えば、前記細胞を、前記脂肪細胞分化混合物において培養することによって、予備刺激するが、脂肪細胞への分化を行わせないことができる。一つの例示的な実施形態では、予備刺激混合物/カクテルは、インスリンを含有しないおよび、好ましくは、インスリン受容体および/またはIGF-1受容体と結合する薬剤を含有しない。したがって、一つの例示的な実施形態では、前記予備刺激カクテルは、デキサメタゾンおよびIBMXを含む。ある特定の実施形態では、前記予備刺激混合物は、グルココルチコイドアゴニスト例えば、デキサメタゾン、または細胞内CAMPを刺激する薬剤複数の場合もあるを除外していても良い。これらの予備刺激カクテルは、例示的なものであり、限定的なものでないことが意図される。本明細書において提示される教示を使用すると、細胞を、脂肪細胞への分化のために予備刺激するが、最終的な分化は行わせない他のカクテルが、当業者には利用可能であろう。分化した脂肪細胞の1つまたは複数の特徴についての、細胞に対するスクリーニング。前記細胞を、上で記載されるような1つまたは複数の試験薬剤と接触させ、前記細胞を、脂肪細胞への分化を行わせるのに十分な時間培養した後、前記細胞は、脂肪細胞の表現型および/または遺伝子型についてスクリーニングされ、ここで、脂肪細胞に特徴的な特質の存在が、前記試験薬剤が脂肪生成性を有することの指標である。脂質細胞および脂肪細胞としても知られる、分化した脂肪細胞は、脂肪としてのエネルギーの貯蔵に専門化した、脂肪組織を主に構成する細胞である。2種類の脂肪組織、すなわち白色脂肪組織WATおよび褐色脂肪組織BATが存在し、これらは、また、それぞれ白色脂肪および褐色脂肪として知られ、2種類の脂肪細胞を含む。分化した白色脂肪細胞または単胞monovacuolar細胞は、細胞質の層によって取り囲まれた大きな脂質滴を含有する。核は、平坦であり、周辺部に位置する。貯蔵される脂肪は、半液体状態であり、トリグリセリドおよびコレステリルエステルから主に構成される。白色脂肪細胞は、レジスチン、アディポネクチンおよびレプチンを分泌する。したがって、ある特定の実施形態では、白色脂肪細胞分化を示す、検出することができる特徴は、脂質滴の蓄積、細胞核の周辺部の配置、レジスチン分泌、アディポネクチン分泌、レプチン分泌、および/または、分化した脂肪細胞に特徴的な様々な他の遺伝子の上方調節もしくは下方調節を含むが、これらに限定されない。褐色脂肪細胞または複胞plurivacuolar細胞は、多角形の形状を有する。白色脂肪細胞とは異なり、これらの細胞は、相当な大きさの細胞質を有し、脂質滴が全体にわたって分散している。核は円形であり、偏在しているが、細胞の周辺部には存在しない。褐色の色は、大量のミトコンドリアに由来する。脱共役タンパク質-1UCP-1のタンパク質発現は、また、褐色脂肪細胞の、高度に特異的なマーカーである。したがって、ある特定の実施形態では、褐色脂肪細胞分化を示す、検出することができる特徴は、脂質滴の蓄積、褐色細胞の色ミトコンドリア蓄積、UCP-1の上方調節、および/または、分化した脂肪細胞に特徴的な様々な他の遺伝子の上方調節もしくは下方調節を含むが、これらに限定されない。より一般的には、脂質滴の形成および代謝の工程は、脂質滴と会合するタンパク質によって調節または影響されることが認識される。PATタンパク質ペリリピン、脂肪分化関連タンパク質ADFP/アディポフィリン/ペリリピン2およびTIP47である、ファミリーの初期のfounding成員にちなんで命名されたは、共通して、脂質滴と会合し、それらの形成および成熟を調整する。PATタンパク質は、組織特異的に発現され、ペリリピン発現は、脂肪細胞およびステロイド産生細胞に限定されている。さらに、これらのタンパク質のいずれかを、脂肪生成のマーカーとして使用することができる。脂肪細胞に特徴的な遺伝子の調節、発現の特徴的なパターン、または特定のタンパク質を検出する方法は、当業者に周知である。したがって、例えば、非特許文献18は、UCP-1タンパク質の組織化学的検出を記載するものであった。同様に、様々な免疫アッセイのいずれかを、レジスチン、アディポネクチン、レプチン、または脂肪細胞分化に特徴的な他のタンパク質マーカーを検出/定量するために使用することができる。多数の方法が、また、遺伝子発現の変化の検出について知られている。そのような方法は、例えば、insituハイブリダイゼーション、リアルタイムQPCR等を含む。しかしながら、最も典型的には、検出および/または定量するための最も容易な特徴は、脂質および/または脂質滴の形成である。脂肪細胞を、親油性の色素例えば、オイルレッドOで染色した場合、染色の程度は、脂質の量に、および、示唆的に細胞の分化の程度に比例する。したがって、ある特定の実施形態では、前記細胞を、親油性色素例えば、オイルレッドOを用いて染色することができ、色素の量は、分光光度法例えば、510nmでの吸光度によって検出される。親油性染料オイルレッドOは、トリグリセリドおよびコレステリルオレエートを特異的に染色するが、他の脂質を染色せず、脂肪細胞分化の良好な尺度を提供する例えば、非特許文献19を参照されたい。他の好適なマーカーは、FITCもしくはRITCと共に、蛍光顕微鏡法を用いて、または蛍光光度計を使用して検出することができる親油性色素BODIPY登録商標例えば、BODIPY登録商標12carbonredfattyacidMolecularProbesInvitrogenDetectionTechnologies;カタログ番号D3822を含むが、これらに限定されない。トリグリセリドを測定するための別の一般的な方法は、比色定量用TAG検出試薬ThermoElectronCorpMelbourneAustralia、カタログ番号2780-400Hである。細胞における脂質の蓄積の迅速な定量のための試薬およびシステムは、市販されていることが注記される。例えば、ValaSciencesIncは、脂質滴を染色および検出するための試薬を含有する、商業的な脂質滴分析キットを提供する。ValaSciencesIncは、また、脂質滴の検出および定量の自動化のための、ソフトウェアCYTESEER登録商標画像解析ソフトウェアを提供する。ValaScienceのCYTESEER登録商標画像解析プラットフォームプログラムにおける脂質滴アルゴリズムは、視野における各々の細胞と会合した脂質滴を定量するために、核および脂質の画像を使用する。このシステムの使用の例示的な説明は、例えば、非特許文献20に見出すことができ、これは、分化する脂肪細胞における脂質滴ならびにペリリピンおよび他のマーカーの検出および定量を記載している。前述の検出方法は、例示的なものであり、限定的なものでないことが意図される。本明細書において提示される教示を使用すると、脂肪細胞分化を検出する他の方法は、当業者に利用可能であろう。試験薬剤前記薬剤は、実際上、任意の化学的化合物であり得る。前記薬剤は、単一の単離化合物として存在していも良く、または、化学例えば、コンビナトリアルライブラリの成員であっても良い。例示的な試験薬剤は、タンパク質、ペプチド模倣物、核酸例えば、siRNA、レクチン、抗体、小有機分子等を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、前記試験薬剤は、脂肪生成活性を有すると考えられているか、またはそのように推定されている化合物を含む。そのような化合物は、例えば、CAMPの上方調節因子、グルココルチコイド類似体、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体PPAR結合因子等を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、前記試験薬剤は、RHAMMの発現および/または活性の阻害剤であると考えられている化合物を含む。そのような薬剤は、抗RHAMM抗体、RHAMM結合レクチン、RHAMMsiRNA、RHAMMイントラボディintrabodies、RHAMMリボザイム、RHAMM合成ペプチド、RHAMM模倣ペプチド、ヒアルロナン模倣ペプチド等を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、前記試験薬剤は、経験的にapriori知られているか、または推定されている活性を有しない分子を含む。アッセイ形式。本明細書において記載されるアッセイは、多数の形式のいずれかで行うことができる。ある特定の実施形態では、前記細胞は、2次元2D細胞培養として、多ウェルプレート例えば、12ウェル形式、24ウェル形式、96ウェル形式、384ウェル形式、1536ウェル形式等で培養される。2次元培養システムは、3Dシステムより単純であり、手動による介入をあまり必要とせず、ハイスループットスクリーニングHTSシステムに十分に適する。様々な実施形態において、1つまたは複数の異なる試験薬剤が、同時にアッセイされる。様々な実施形態において、単一の試験薬剤が、各々のウェルに配列される。任意に、さらなるウェルが、陽性対照脂肪細胞分化混合物で処理された細胞として機能し得る。任意に、さらなるウェルが、陰性対照例えば、分化混合物と接触しない細胞として機能し得る。加えて、複数の細胞種例えば、内臓の脂肪細胞、皮下の脂肪細胞等を、異なるウェルにおいて、異なる細胞種と同時にスクリーニングすることができる。加えて、異なるウェルが、異なるアッセイを提供しても良い。したがって、例えば、ある特定のウェルを、脂質の蓄積をアッセイするために使用することができ、それと同時に、他のウェルが、ペリリピンまたはアクチンの産生をアッセイするために使用される。また、単一のウェルから複数の読み取り値を得ることが可能である。したがって、例えば異なる指示試薬を使用して、単一のウェルにおいて、脂質の蓄積、ペリリピンの共局在化、アクチンの発現、および他のパラメータをアッセイすることが可能である。多数の試験薬剤のスクリーニングを容易化するために、ある特定の実施形態では、多重アッセイが行われる。そのようなアッセイにおいては、複数の試験薬剤が、各々のウェルに配列される。陽性の結果を示すウェルにおいて使用された前記薬剤複数の場合もあるが、前記複数の試験薬剤のうちのどれが所望の効果をもたらしたのかを決定するために、個別にまたはサブコンビネーションとして、引き続き試験される。具体的なアッセイ形式を、例えば、アッセイ対象の細胞種、所望の読み取り値、および試験薬剤の数によって、決定することができる。これらのアッセイ形式は、例示的なものであり、限定的なものでないことが意図される。本明細書において提示される教示を使用すると、多数のアッセイ形式が、当業者に利用可能であろう。判定Scoring。様々な実施形態において、本明細書において記載されるアッセイは、前記試験薬剤複数の場合もあるへの曝露が、前記試験細胞において、脂肪細胞の表現型の1つまたは複数の特徴をもたらす場合、陽性の結果を示すと判断される。ある特定の実施形態では、前記アッセイは、前記試験薬剤複数の場合もあるへの曝露が、皮膚に特徴的な試験細胞例えば、皮下の前脂肪細胞において、脂肪細胞の表現型の1つまたは複数の特徴例えば、脂質の蓄積をもたらし、内臓の組織由来の試験細胞例えば、内臓の前脂肪細胞において、より低い効果をもたらすか、または効果をもたらさない場合、陽性の結果を示すと判断される。ある特定の実施形態では、これは、陽性対照例えば、完全な脂肪生成混合物/カクテルに曝露される細胞および/または陰性対照例えば、脂肪生成混合物/カクテルまたは予備刺激混合物/カクテルに曝露されない細胞について測定されるまたは知られるレベルとの関係で、決定される。一つの実施形態では、前記アッセイは、試料と陰性対照との間の差異が、統計的に有意である例えば、85以上、好ましくは90以上、より好ましくは95以上、最も好ましくは98もしくは99以上の信頼水準で場合、および/または試料と陽性対照との間の差異が、統計的に有意でない場合、陽性の結果例えば、試験薬剤の脂肪生成活性を示すと判断される。ハイスループットスクリーニング。本明細書において記載されるアッセイは、ハイスループット様式に適している。従来的には、有用な特性例えば、皮下の前脂肪細胞に対する脂肪生成活性を有する新たな化学的実体は、望ましい特性または活性例えば、RHAMMの発現および/または活性の阻害を有する化学的化合物リード化合物と称されるを同定すること、前記リード化合物の変異体を創出すること、ならびにこれらの変異体化合物の特性および活性を評価することによって、作製される。しかしながら、現在の傾向は、薬剤発見の全ての局面についてのタイムスケールを短縮することである。多数のものを迅速且つ効率的に試験することができるため、ハイスループットスクリーニングHTS方法は、従来のリード化合物同定方法に取って代わりつつある。一つの実施形態では、ハイスループットスクリーニング方法は、所望の脂肪生成の活性を潜在的に有する多数の化合物候補化合物を含有する、ライブラリを準備する工程を伴う。そのようなコンビナトリアル化学ライブラリが、所望の特徴的な活性を示すこれらのライブラリの成員特定の化学物質の種または小分類を同定するために、本明細書において記載されるように、1つまたは複数のアッセイにおいて、引き続きスクリーニングされる。そのようにして同定された化合物は、従来のリード化合物の役割を果たすことができ、またはそれ自体を、有望なもしくは実際の治療薬として使用することができる。コンビナトリアル化学ライブラリある特定の実施形態では、コンビナトリアル化学ライブラリを、新たなリード化学的化合物の作製において支援するために使用することができる。コンビナトリアル化学ライブラリは、試薬等の多数の化学的な構成要素を組み合わせることによる、化学的合成または生物学的合成のいずれかによって作製された、多様な化学的化合物の収集物である。例えば、線形linearコンビナトリアル化学ライブラリ、例えばポリペプチドライブラリは、所与の化合物の長さすなわち、ポリペプチド化合物におけるアミノ酸の数に対して、考え得るあらゆる方法で、アミノ酸と呼ばれる一組の化学的構成要素を組み合わせることによって、形成される。何百万種類の化学的化合物を、化学的構成要素の、そのようなコンビナトリアル混合を介して、合成することができる。例えば、一人の評論家が、100種類の互換的な化学的構成要素の体系的なコンビナトリアル混合が、1億種類の四量体化合物または100億種類の五量体化合物の理論的合成をもたらすことを観察した非特許文献21。コンビナトリアル化学ライブラリの調製およびスクリーニングは、当業者に周知である。そのようなコンビナトリアル化学ライブラリは、ペプチドライブラリ例えば、特許文献3、非特許文献22、非特許文献23を参照されたいを含むが、これらに限定されない。ペプチド合成は、本明細書において記載されるアッセイによる使用のために想定および意図される、唯一のアプローチでは決してない。化学的多様性ライブラリを作製するための他の化学的手段を、また、使用することができる。そのような化学的手段は、以下のものを含むが、これらに限定されない:ペプトイドPCTの出願公開公報特許文献4、コードされるペプチドPCTの出願公開公報特許文献5、ランダムバイオオリゴマーPCTの出願公開公報特許文献6、ベンゾジアゼピン特許文献7、ディバーソマーdiversomers、例えばヒダントイン、ベンゾジアゼピンおよびジペプチド非特許文献24、ビニログ性vinylogousポリペプチド非特許文献25、β-D-グルコース骨格を有する非ペプチド性nonpeptidalペプチド模倣物非特許文献26、小化合物ライブラリの類似の有機合成非特許文献27、オリゴカルバメート非特許文献28、および/またはペプチジルホスホネート非特許文献29。以下を参照されたい:包括的に非特許文献30、核酸ライブラリ例えば、StrategeneCorpを参照されたい、ペプチド核酸ライブラリ例えば、特許文献8を参照されたい、抗体ライブラリ例えば、非特許文献31および特許文献9を参照されたい、炭水化物ライブラリ例えば、非特許文献32および特許文献10を参照されたい、PPAR阻害剤ライブラリ例えば、EanamineLtdを参照されたい、および小有機分子ライブラリ例えば、ベンゾジアゼピンについては非特許文献33、イソプレノイドについては特許文献11、チアゾリジノンおよびメタチアザノンについては特許文献12、ピロリジンについては特許文献13および特許文献14、モルホリノ化合物については特許文献15、ベンゾジアゼピンについては特許文献7等を参照されたい。コンビナトリアルライブラリを調製するための器具は、市販されている例えば、357MPS、390MPSAdvancedChemTechLouisvilleKY、SymphonyRaininWoburnMA、433AAppliedBiosystemsFosterCityCA、9050PlusMilliporeBedfordMAを参照されたい。多数の周知のロボットシステムが、また、溶液相化学のために開発されている。これらのシステムは、TakedaChemicalIndustriesLTDOsakaJapanによって開発された自動化合成装置等の、自動化ワークステーション、および化学者が行う手技による合成操作を模倣する、ロボットアームを利用する多くのロボットシステムZymateIIZymarkCorporationHopkintonMass、OrcaHewlettPackardPaloAltoCalifを含む。上記の器具のうちのいずれかが、本明細書において記載される方法による使用に好適である。本明細書において論じられるように作動することができるような、これらの器具に対する改良存在する場合の性質および実行は、当業者には明らかであろう。加えて、多数のコンビナトリアルライブラリそれ自体が、市販されている例えば、ComGenexPrincetonNJ、AsinexMoscowRu、TriposIncStLouisMO、ChemStarLtdMoscowRU、3DPharmaceuticalsExtonPA、MartekBiosciencesColumbiaMD等を参照されたい。化学ライブラリのハイスループットアッセイ。本明細書において記載される脂肪生成活性についてのアッセイは、ハイスループットスクリーニングに適している。ある特定の好ましいアッセイは、前記試験薬剤複数の場合もあるとの接触によってもたらされる、脂質の蓄積の検出によって、および/または特徴的なタンパク質マーカーの上方調節によって、脂肪細胞の分化の増大を検出する。ハイコンテントアナリシスHCAは、候補医薬品またはゲノム例えば、RNAiもしくはcDNAライブラリまたは抗体ライブラリまたはペプチドライブラリ等を、マイクロタイタープレート上で培養した細胞に対して行うアッセイを介して、可能性のある有益な効果について試験する技術である例えば、非特許文献34、非特許文献35、非特許文献36、非特許文献37、非特許文献38、非特許文献39、非特許文献40、非特許文献41、非特許文献42、非特許文献43、非特許文献44、非特許文献45、非特許文献46、非特許文献47を参照されたい。前記細胞を、引き続き、構造またはタンパク質を可視化するために、染色または標識することができ、ロボットデジタル顕微鏡ワークステーションによって、撮影することができる。画像は、特定の細胞/疾患モデルに関連する情報を特定および抽出するために設計されたアルゴリズムによって、情報について解析される例えば、非特許文献48、非特許文献49、非特許文献50等を参照されたい。自動的な取得、測定、比較、およびパターン分類の進歩が、形態学的パラメータ、タンパク質レベル、遺伝子発現等を含むがこれらに限定されない、多数の細胞パラメータの検出および/または定量を容易化している。従来の共焦点顕微鏡法によるデジタル画像を、顕微鏡法に基づく細胞の表現型の特徴付けに対する定量的アプローチを可能とする、洗練された画像解析アルゴリズムによって、解析することができる例えば、非特許文献51、非特許文献52を参照されたい。数十万個の個々の細胞を表す数千個の画像を、単一の実験セッションにおいて、HCAワークステーションを介して、取得することができ、数十万種類の化合物の迅速なスクリーニングを可能とする。多数の販売者が、マイクロタイタープレートにおいて増殖した細胞の、蛍光標識された成分の画像を生成することが可能な、顕微鏡に基づく機器を提供している。これらの機器は、典型的には、細胞ごとの複数の蛍光マーカーの相対分布を規定することが可能な解析ソフトウェアと併せて販売されている。読み取り装置が改良されており、画像の取得および解析の時間が低減されているため、より大きな化合物ライブラリをスクリーニングする可能性が出てきている。したがって、ハイコンテントスクリーニングHCS、すなわち単一のウェルからの複数のパラメータのデータの生成は、ハイスループットスクリーニングHTSの研究室における重要なツールとなっている。脂肪細胞分化の特定のマーカーについてのHCA解析が、当業者に知られている。例えば非特許文献20は、ValaSciencesIncの市販の、脂質滴を染色および検出するための試薬を含有する脂質滴解析キット、ならびに脂質滴の検出および算出を自動化するためのCYTESEER登録商標画像解析ソフトウェアを使用する、脂肪細胞分化についてのHCAスクリーニングを記載するものであった。そこで記載される一つの実験において、同じ視野が、核、脂質滴およびタンパク質を選択的に可視化するために、3つの別々の光学チャネルにおいて画像化された。脂質滴が、CYBERSEER登録商標ソフトウェアを使用して、定量された。加えて、タンパク質ペリリピンの共局在化が、また、決定された。多数のハイスループットスクリーニングシステムが、市販されている例えば、ZymarkCorpHopkintonMA、AirTechnicalIndustriesMentorOH、BeckmanInstrumentsIncFullertonCA、PrecisionSystemsIncNatickMA等を参照されたい。これらのシステムは、典型的には、全ての試料および試薬のピペッティング、液体の分注、時限的インキュベーション、ならびに、アッセイに適切な検出器複数の場合もあるにおけるマイクロプレートの最後の読み取りを含む、全手順を自動化する。これらの構成可能なシステムは、ハイスループットおよび迅速な開始、ならびに高度の柔軟性およびカスタマイゼーションをもたらす。そのようなシステムの製造業者は、様々なハイスループットの詳細なプロトコルを提供している。したがって、例えばZymarkCorpは、遺伝子転写、リガンド結合等の変調を検出するためのスクリーニングシステムを記載する、技術的報告書を提供している。これらのハイスループットシステムおよび例は、例示的なものであり、限定的なものでないことが意図される。本明細書において提示される教示を使用すると、本明細書において記載されるアッセイは、多数の他のHTS/HCA解析システムにおいて、容易に実行することができる。細胞培養システム。様々な実施形態において、本明細書において記載されるアッセイを行うための細胞培養システムが、提供される。ある特定の実施形態では、前記細胞培養システムは、脂肪生成能を有する哺乳動物細胞を含有する、1つまたは複数の細胞培養容器を含み、前記細胞は、脂肪細胞への分化のために予備刺激されるが、分化していない。様々な実施形態において、前記細胞は、急性のacute培養物中に存在するが、他の実施形態においては、前記細胞は、多数回継代された樹立細胞株である。例示的な細胞は、間葉系幹細胞、乳頭状および網状真皮線維芽細胞、脂肪由来の幹細胞/間質細胞、前脂肪細胞、骨髄前駆体、血管の脂肪細胞前駆体等を含むが、これらに限定されない。様々な実施形態において、前記細胞は、脂肪細胞への分化に必要とされる少なくとも1つの因子を欠く、脂肪細胞分化混合物中において、準備される。前記細胞培養システムは、多数の形式で、提供することができる。例えば、ある特定の実施形態では、前記システムは、多ウェル器具または多容器器具例えば、12ウェル形式、24ウェル形式、96ウェル形式、384ウェル形式または1536ウェル形式等でで提供される。ある特定の実施形態では、前記培養システムは、特定のHTSおよび/またはHCAシステムに適合性を有する形式で提供される。スクリーニングのための動物モデル。ある特定の実施形態では、上で記載される、細胞に基づくinvitroのアッセイにおいて、陽性の結果を示す試験薬剤複数の場合もあるは、invivo動物モデルにおいて、さらに検証される。例えば、invivoでの脂肪生成の効果的な促進因子である試薬を同定するための、前記スクリーニングのフィデリティを、前記試験薬剤複数の場合もあるを、動物モデルにおいて例えば、7月齢の雌のラットの皮膚の下に注射した場合に、皮下脂肪の蓄積を促進するそれらの能力について、スクリーニングすることによって、試験することができる。ある特定の実施形態では、外耳における注射が行われる。この部位における注射が良好なデータをもたらすことが観察されている。間葉系幹細胞の脂肪細胞への分化を促進する、試験薬剤複数の場合もあるの能力が、invivoでラットの皮膚または、他の動物モデルにおける皮下脂肪の蓄積を促進する、これらの試薬の能力と非常に密接に対応することが見出されている。キット。ある特定の実施形態では、本明細書において記載されるアッセイを実施するためのキットが提供される。ある特定の実施形態では、前記キットは、脂肪生成能を有する1つまたは複数の細胞種例えば、前脂肪細胞を含有する。前記キットは、前記細胞を、脂肪生成のために予備刺激するが、前記細胞に、脂肪細胞への最終的な分化を行わせないための試薬混合物をさらに含み得る。前記キットは、前記細胞を増殖および/または維持するための培地をさらに含有していても良い。前記キットは、分化した脂肪細胞を検出するための、1つもしくは複数の試薬、および/またはそのような検出を容易化するためのソフトウェアをさらに含んでいても良い。前記キットは、本明細書において記載されるアッセイの実施を容易化するための、任意の試薬および/または装置を任意に含んでいても良い。そのような試薬は、緩衝剤、標識、標識された抗体、標識された核酸、蛍光標識の可視化のためのフィルターセット、ブロッティング膜等を含むが、これらに限定されない。加えて、前記キットは、本発明のアッセイ方法の実施のための指示すなわち、プロトコルを含有する取扱説明資料を任意に含んでいても良い。前記取扱説明資料は典型的には、記載または印刷された資料を含むが、前記取扱説明資料は、そのようなものに限定されない。そのような取扱説明書を保存し、それらをエンドユーザーに伝達することが可能な任意の媒体が、本発明によって意図される。そのような媒体は、電子保存媒体例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ、光学媒体例えば、CD-ROM等を含むが、これらに限定されない。そのような媒体は、そのような取扱説明資料を提供する、インターネットサイトのアドレスを含んでいても良い。以下の実施例は、特許請求される発明を例示するために提供するものであり、前記発明を限定するために提供するものではない。実施例1脂肪生成アッセイ細胞種:ある特定の実施形態では、任意の前脂肪生成細胞、真皮線維芽細胞、多能性線維芽細胞例えば、3T3-L細胞または間葉系幹細胞が、このアッセイに好適である。材料細胞は、96ウェルまたは他の多ウェル組織培養プレートにおいて、培養することができる。脂肪生成開始/予備刺激培地:脂肪生成開始/予備刺激培地を調製するために、IBMX標準溶液0.5mMを、1:1000で希釈し、デキサメタゾン標準溶液1μMデキサメタゾン標準溶液DMSO中を、DMEM10FCSにおいて1:10000で希釈する。抗生物質の典型的なカクテルを、微生物の増殖を制限するために添加することができる。この開始培地は、4°Cで最大6週間保存することができる。脂肪生成進行培地:陽性対照進行培地を調製するために、標準インスリン溶液10μg/mlのインスリンを、DMEM10FCSにおいて1:1000で希釈する。最適な抗生物質を、微生物の増殖を制御するために添加する。この対照進行培地は、4°Cで最大6週間保存することができる。実験/試験例えば、RHAMM遮断試薬、または他の実験的脂肪生成促進試薬進行培地を調製するために、試験薬剤を、標準溶液において準備する例えば0.001から10μgのRHAMM抗体、ペプチド模倣物複数の場合もある、または他の試験薬剤複数の場合もある。試験薬剤溶液を、DMEM10FCSにおいて所望の濃度例えば1ngから10μgのRHAMMペプチドまで希釈する。脂肪維持培地は、以下を含み得る:陽性対照としてDMEM10FCS、陰性対照としてDMEM10ウシ血清CS、および実験/試験培地としてDMEM10FCS脂肪生成試薬例えば、RHAMM抗体、ペプチド、他の試験薬剤複数の場合もある等。3D培養アッセイ一つの好適な3D脂肪生成アッセイは、非特許文献53に記載されるアッセイの変法である。ヒトの皮膚の前脂肪細胞を含む前脂肪細胞、網状線維芽細胞、間葉系幹細胞、および脂肪生成能を有する他の細胞種を、DMEM低グルコース10ウシ胎児血清添加物において、組織培養プラスチック表面上で集密状態まで培養する。細胞を、脂肪細胞へと分化するまで、脂肪生成を促進する因子のカクテルに曝露する。分化した脂肪細胞を、DMEM低グルコース10FCSにおいて維持し、マトリゲルを、脂肪細胞の単層の最上部に重層する。網状および乳頭状線維芽細胞を、重合したマトリゲル層の表面上に、低密度例えば、1ml当たりの細胞数5×103個で播種し、マトリゲル中に浸潤させる。ケラチノサイト初代または細胞株を、マトリゲルの表面上に播種し、引き続き、上清培養培地を除去し、それによって、ケラチノサイトが、マトリゲル層の表面上に拡散し、角質化する。このアッセイは、皮膚に典型的な3層の形成をもたらす:分化した皮下脂肪層、線維芽細胞を含有する真皮層、および分化したケラチノサイトの表面層。このアッセイは、無傷の皮膚の条件に類似するまたはこれのモデルとなる条件下で、ヒト前脂肪細胞の分化に影響を及ぼす因子を評価するのに、特に有用である。ラットおよびヌードモルモットへのペプチドの注射。ヌードモルモットにおける皮下の脂肪生成に対する、RHAMMの機能を遮断する抗体R-6836-B、およびRHAMM合成ペプチドBの効果を、以下の試薬を使用して、評価した:1抗RHAMM抗体R-6836-B0.025mg/ml、2RHAMM合成ペプチド1mg/ml、3ラット尾I型コラーゲン1mg/ml、および4重炭酸ナトリウム。ある特定の実施形態では、RHAMMペプチドおよび抗体の量は、約0.1から約250μg/mlまで、より好ましくは約0.25から約100μg/mlまでの範囲である。試料調製:コラーゲン溶液のpHは、重炭酸ナトリウム溶液を添加することによって、7から8に調節した1mlのコラーゲン溶液に対して30μlの重炭酸ナトリウムを添加する。その処理中、コラーゲン溶液は氷上に維持した。抗RHAMM抗体を、コラーゲン溶液に添加して、異なる濃度溶液1ml当たり抗体0.25μgおよび2.5μgを調製した。また、RHAMM合成ペプチドBを、コラーゲンに添加して、溶液1ml当たりペプチドB10μgおよび100μgを調製した。注射処置:各々の条件について1匹の動物を使用した合計4匹のヌードモルモットおよび2匹のスプラーグドーリーラット。各々のヌードモルモットの5つの位置背中の2箇所、乳腺の脂肪体の近くの胃の2箇所、および頸部の背部の1箇所に、試薬を注射した。G20からG22の皮下用注射針を有する1mlのシリンジを、注射に使用した。動物を、イソフルランガスレベル1から1.5。O2と混合を用いて鎮静化した。動物の注射部位を、アルコールワイプを用いて清浄化したスプラーグドーリーラット上の注射部位は、注射の前に剪毛した。0.25μgの抗体を含有するコラーゲン溶液1mlを、動物の背中または胃において、皮膚の下に、非常にゆっくりと注射した。各々の注射の後、各々の動物を、最大5分間、同じ姿勢で留まらせた。注射部位に、油性シャーピーペンを用いて、マークを付した。同じ手順を、2.5μg/mlの抗体、ならびに10μg/mlおよび100μg/mlのRHAMMペプチドBを用いて、行った。対照のために、各々の注射に対して1mlのコラーゲンのみをRHAMM試薬なしで、反対側の部位に注射した。2匹のラットを、陽性対照として使用した:1匹には、既知の最適用量のRHAMM抗体2.5μg/mlを注射し、もう1匹には、既知の最適用量のRHAMM合成ペプチドB100μg/mlを注射した。動物を、通常通りに7日間収容した。培養スクリーニングアッセイ細胞の維持細胞株の供給業者からの取扱説明書の通りに、細胞ストックを維持する。最良の結果のために、DMEM10CSFCSではなくにおいて細胞を維持する。細胞を、培養の集密によって起こるバックグラウンドの脂肪生成を低減するために、低い培養密度例えば、ディッシュ100mm当たり4×105個の細胞に常に維持する。多ウェルアッセイ脂肪生成スクリーニングのための細胞は、以下の通りに蒔くことができる:細胞を、トリプシン処理し、引き続き、1mlのDMEM10CSに再懸濁して、トリプシンを中和する。細胞を引き続き計数する。ある特定の実施形態では、DMEM10CS1ml当たり約30000個の細胞を蒔く。細胞を、1から2日間、この培地中に放置する。ある特定のウェル、例えば、細胞を含まない1行のウェルを、ブランク複数の場合もあるをもたらすために、維持することができる。DMEM10CSを除去し、適切な量多ウェルディッシュの大きさに対しての開始培地に置き換える。陰性対照については、陰性対照培地例えば、陰性対照として上で記載されるDMEM10ウシ血清CSを、使用することができる。細胞を、37°C、5CO2で48時間インキュベートする。脂肪生成アッセイを、培養物から除去し、陽性対照または実験試薬進行培地を添加する。細胞を、上記と同様に48時間インキュベートする。進行培地を、引き続き、除去し、維持培地に置き換える。陰性対照は、陰性対照維持培地において維持するべきである。細胞を、引き続き、例えば5から7日間放置しても良く、引き続き、BODIPY登録商標色素25μMまたは1オイルレッドOのいずれかを、15分間添加する。引き続き、細胞を、リン酸緩衝食塩水で穏やかに洗浄する。色素を、メタノール:エタノール1:1混合物を用いて抽出することができ、オイルレッドOについては、ELISAプレートリーダーを使用して520nmで、またはBODIPY登録商標については、FITCを検出する蛍光光度計を使用して、読み取ることができる。この方法を、平滑筋アクチン標識された抗平滑筋アクチン抗体によって検出される等の他の分子について共染色するように、適合させることができる。第二または第三の分子についての染色は、脂質と同時に行うことが考えられ、または抽出後の細胞に対して、実施することができる。後者の方法を使用する場合、脂質抽出後、細胞を、PBS中、3の新たに調製されたパラホルムアルデヒドに固定するべきである。さらなる分子についての染色を、引き続き、抗体製造業者の方法に従って、実施する。脂肪生成アッセイの様々な実施形態において、脂肪生成能を有する細胞の単層を、脂肪生成カクテルを含有するアガロース0.3から1、培養培地に溶解させた低融点アガロース、例えばSeaPlaqueAgaroseLonzaの層で被覆する。15ウシ胎児血清添加物を添加した培養培地例えばダルベッコ変法イーグル培地DMEM、またはDMEM/Ham’s培地混合物を、重合アガロースの最上部上に重層する。この方法は、アガロースが、脂肪生成因子の持続的な緩慢な放出を可能とし、ハイスループット解析のためのアッセイの使用を妨げる可能性がある細胞単層の巻き上がりrollingupを妨げるため、脂肪生成を促進する。加えて、前脂肪細胞を、単層の脱離巻き上がりを低減し、脂肪生成を促進するために、カバーガラス、またはフィブロネクチン等の接着性タンパク質上に置くことができる。結果。ラット間葉系細胞およびマウス胚性前脂肪生成線維芽細胞例えば、3T3-L細胞が、進行培地においてインスリンに曝露すると、脂肪生成を起こしたラット間葉系幹細胞が図1に示される。脂質の蓄積の程度を、520nmで検出されるオイルレッドOの量を測定することによって、定量した。この程度を、100として示す。脂肪生成に対するRHAMM機能を遮断する抗体抗ペプチドB抗体の効果を、図1の上パネルに示し、ELISAにおいて、RHAMMペプチドBおよびRHAMM模倣ペプチドP15の効果と併せて定量する結果を、図1の下パネルに示す。RHAMM抗ペプチドB抗体の効果は、インスリンの5倍の大きさであり、RHAMMペプチド配列Bおよび模倣ペプチドは、それぞれ3倍および2倍の大きさである。陰性対照の細胞は、DMEMCS中で増殖させ、開始培地または進行培地のいずれにも曝露しなかった。先のスクリーニングにおいて、20種類のペプチド、およびRHAMMに対する抗体の組合せを試験した。このスクリーニングにおいて、3種類の試験薬剤抗ペプチドB、ペプチドBおよびペプチドP-1が、脂肪生成性を有しており、このスクリーニングにおいてこれらの試験薬剤が脂肪生成性を有する程度は、3Dおよびinvivoにおいて再現された。加えて、ラットおよびヒトの細胞は、invivoでの脂肪生成を予測する上で、等しく良好であった。図2は、この事例では15-1のスクランブルペプチド配列である、RHAMM試薬についての対照を使用する、ラット間葉系幹細胞の脂肪生成に対する、RHAMMペプチド模倣物P15-1の効果を示す。ホフマンオプティクスは、細胞単層の存在を明らかにする。脂質滴を、多数の細胞において見ることができ、脂質滴が、bodipyの取込み緑色蛍光色素、矢印、およびオイルレッドOの取込み赤色の液滴、矢印によって、示される。グラフは、偏りのないunbiasedスクリーニングを使用して単離されたP-1ペプチド、RHAMMとそのリガンドとの間の既知の分子の相互作用に基づき合理的に設計されたB-1ペプチド、およびRHAMM抗体が、培養物中における、および老化ラットの真皮中に注射した場合の、前脂肪細胞性の幹細胞preadipocytestemcells、および線維芽細胞に対するそれらの効果についてアッセイされたことについての用量応答曲線を示す。試薬は、0から5の尺度で順位付けされ、5は、考え得る最高のスコアを表した。脂質を検出するために、BODIPY登録商標色素の取込みを使用する、RHAMM模倣ペプチド15-1の脂肪生成効果。invivoでの脂肪生成の効果的な促進因子である試薬を同定するための、スクリーニングのフィデリティを、培養スクリーニングにおける試薬の順位付けを、7月齢の雌のラットの皮膚の下に注射した場合に、皮下脂肪の蓄積を促進する、それらの相対的な能力と比較することによって、試験した。ラットにおけるRHAMMの機能を遮断する試薬の注射によってもたらされる、皮下の脂肪体の蓄積を、図3に示す。間葉系幹細胞の脂肪細胞への分化を促進する、試薬の能力は、invivoでのラットの皮膚における皮下脂肪の蓄積を促進する、これらの試薬の能力と非常に密接に対応する。培養スクリーニング方法を使用して、我々は、複数のヒトの皮膚の前脂肪細胞株、および網状の真皮線維芽細胞が、脂肪生成の制御を示すことを示した。一般的なヒト線維芽細胞包皮由来、および皮膚の乳頭状線維芽細胞は、このアッセイにおいて、脂肪生成能を示さなかった。したがって、このスクリーニング方法は、また、脂肪細胞性の幹細胞adipocytestemcell集団を選択的に同定するために、使用することができる。上で記載される培養スクリーニングによって同定されたRHAMM試薬を、また、培養スクリーニングの2D方法において増殖させた、および、また、3Dにおいて増殖させた、ヒト皮膚細胞における脂肪生成を促進する、それらの能力について試験した図4。図4の結果は、RHAMMペプチドBが、培養スクリーニング方法を使用して増殖させると、または、コラーゲンI型ゲルを使用する3次元培養環境において増殖させると、ヒト前脂肪細胞株において、脂肪生成を促進することを示す。培養スクリーニングによって、前脂肪生成性を有するとして同定されたRHAMM試薬を、ヌードモルモットモデルにおいて試験した。このモデルは、毛髪が存在せず、ラットおよびマウスの、まさにその表皮層とは異なりケラチノサイト層が複数重層されており、皮下脂肪層が非常に薄いという点でヒトの顔の皮膚に類似するため、ヒトの皮膚のモデルとして、使用されることが多くなっている。このモデルでは、本明細書において記載されるアッセイにおいて、前脂肪生成性を有するとして同定されたRHAMM薬剤が、動物モデルにおいて、皮下脂肪を増大させた。図5のグラフに示される結果は、ラット間葉系幹細胞を、インドメタシン100μM、インスリン10μg/ml、デキサメタゾン1μMおよびIBMX0.5mMによって誘導した際の、試験ペプチドの、増大した脂肪生成効果を示す。このグラフは、また、このペプチドのある特定の断片が、試験ペプチドの全体と、同様の活性を有する、または、より高い活性を有することを示す。実施例2前脂肪細胞の、2D脂肪生成分化。前脂肪細胞、または脂肪由来の幹細胞、または間葉系幹細胞MSCを分化させるための、GIBCOから市販されているキットSTEMPRO登録商標脂肪生成分化キット。脂肪生成分化継代回数の少ない脂肪由来の幹細胞およびMSC継代回数8から10回未満は、より強い多能性を示す。培養が、60から80の集密度に到達した時に、継代を行うべきである集密状態は、また、多能性を低減する可能性がある。細胞を、標準的な増殖培地において培養し、中期対数増殖期の集密度60から80を確保する。好適な増殖培地は、10FCSMSC用、200mML-グルタミン、および10mg/mlゲンタマイシンを添加した、DMEM:Ham’sF-121:1である。培地および浮遊細胞を、引き続き、培養フラスコから吸引し、廃棄する。5から10mLのDPBSを添加し、細胞単層を穏やかにリンスする。DPBSを除去し、1から2mLの予め加温したトリプシン0.25を添加する。細胞を、37°Cで2分間、または細胞が完全に脱離するまでインキュベートする。引き続き、4mlの増殖培地を添加して、トリプシンを中和する。脱離した細胞を、穏やかにピペッティングして、単一の細胞の溶液にすることができる。細胞懸濁物を、容器例えば、フラスコから取り出し、遠心分離用チューブに移す。細胞を、100×g、5から10分間の処理で、ペレットとする。細胞の生存度および総細胞密度は、例えば、トリパンブルー染色、および手動または自動での血球板による細胞計数方法を使用して、決定することができる。ペレットを、引き続き、適切な体積の予め加温した増殖培地において再懸濁する。細胞を、引き続き、例えば1cm2当たりの細胞数1×104個で、播種し、37°C、5CO2で、最低で2時間、最大で4日間、増殖培地においてインキュベートする。培地を、引き続き、予め加温した脂肪生成分化培地に置き換え、インキュベーションを継続する。細胞は、脂肪生成条件下で分化するため、限定的な増殖をし続けるであろう。培養物に、3から4日ごとに、再供給することができる。脂肪生成分化培地について、GibcoまたはZenBioから市販される培地を使用することができ、または、脂肪生成カクテルを、以下の通りに処方することができる:DMEM:Ham’sF-121:1に、3FCS、200mML-グルタミン、10mg/mlゲンタマイシン、100nMインスリン、0.2nMT3、1μMデキサメタゾン、0.25mMIBMX、および1μMロシグリタゾンを添加する。7から14日後に、脂肪生成培養物を、遺伝子解析、またはオイルレッドOもしくは例えばBODIPY登録商標による染色のために、処理することができる。実施例3前脂肪細胞の3D培養および脂肪分化以下の表2に従って、好ましくは使用の前日、1週間前以後に、プレミクス溶液を調製する。この溶液は氷上で調製し、使用前に0.22μmのフィルターを用いて滅菌ろ過し、1NHCl溶液を用いてpHを7.5に調節する。3Dコラーゲンシステムにおける前脂肪細胞の培養全ての試薬を予め冷却する。ヒト前脂肪細胞を、80未満の集密度で回収し、細胞数を決定する。脂肪生成分化培地を、引き続き、細胞に添加し、細胞濃度を、例えば培地1ml当たり細胞数2×105個の播種密度に、調節する。50ml容ファルコンチューブに、ウシ尾コラーゲン1.1mg/mlを、プレミクス溶液と混合し、氷上でかき混ぜ、十分に混合する。脂肪分化培地中の細胞を、コラーゲン混合物中に添加し、穏やかにかき混ぜ、気泡発生を回避する。脂肪生成分化培地について、GIBCOまたはZenBioから市販されている商品を、使用することができるか、または、以下の成分を有する分化培地を使用することができる:DMEM:Ham’sF-121:1、3FCS、200mML-グルタミン、10mg/mlゲンタマイシン、100nMインスリン、0.2nMT3、1μMデキサメタゾン、0.25mMIBMX、および1μMロシグリタゾン。3mlのこの混合物を、各々のウェル中にピペッティングする。ゲルを、37°Cのインキュベーター中で30分間、重合させる。ゲルが重合したら、2mlの脂肪生成分化培地を、ゲルのみの最上部に添加する。培地を、その後3週間、2から3日ごとに交換する。本明細書において記載される実施例および実施形態は、例示目的のためのものにすぎないこと、ならびに、それに鑑みて、様々な修正または変更が、当業者に対して示唆され、本出願および添付の特許請求の範囲の精神および範囲の内に含まれるべきであることが理解される。本明細書において引用される全ての出版物、特許および特許出願は、全ての目的に対して、その全体が参照により本明細書によって援用される。