"バイオプロセス操作において使用するための多成分混合物を特徴付ける方法であって、a公知の成分の既定量を含む多成分混合物標準物を提供するステップ、b多成分混合物標準物に対してラマン分光分析を実施するステップ、cバイオプロセス操作から多成分試験混合物を提供するステップ、d多成分試験混合物に対してラマン分光分析を実施するステップおよびe多成分試験混合物を特徴付けるためにステップdの分析をステップbの分析と比較するステップを含む、方法。多成分混合物標準物および多成分試験混合物がいずれも多糖、アミノ酸およびpH緩衝液の1種以上を含む、請求項1に記載の方法。多成分混合物標準物および多成分試験混合物がいずれも多糖、アミノ酸およびpH緩衝液の少なくとも2種を含む、請求項2に記載の方法。多糖がマンニトールである、請求項3に記載の方法。pH緩衝液がヒスチジンおよびクエン酸塩製剤から選択される、請求項3に記載の方法。多成分混合物標準物および多成分試験混合物がさらに界面活性剤を含む、請求項3に記載の方法。界面活性剤がポリソルベート80である、請求項6に記載の方法。ランダムに選択された公知の成分の既定量を含む一連の多成分混合物標準物を提供するステップおよび一連の多成分混合物標準物に対してラマン分光分析を実施するステップを含む、請求項1に記載の方法。一連の多成分混合物標準物に対するラマン分光分析の偏最小2乗回帰分析に基づいて多成分試験混合物を特徴付けるためのモデルを作成することをさらに含む、請求項8に記載の方法。多成分混合物が、動物対象に投与するために適切な製剤である、請求項1に記載の方法。対象がヒトである、請求項10に記載の方法。製剤が生物学的活性剤と組み合わされるものであり、生物学的活性剤および製剤が組み合わされて規制機関によって承認される、請求項11に記載の方法。多成分混合物標準物および多成分試験混合物が、モノクローナル抗体、DNA、RNA、タンパク質、ウイルス、ウイルスサブユニット、ペプチドおよびワクチンから選択される作用物質をさらに含む、請求項1に記載の方法。多成分混合物標準物および多成分試験混合物がモノクローナル抗体を含む、請求項13に記載の方法。多成分試験混合物に対するラマン分光分析がバイオプロセスからのオンライン試料で行われる、請求項1に記載の方法。ラマン分光分析が、品質管理手順の一部として定期的な間隔で実施される、請求項15に記載の方法。バイオプロセスが濾過または精製操作である、請求項15に記載の方法。多成分混合物標準物の少なくとも一部が多成分試験混合物に添加される、請求項1に記載の方法。多成分試験混合物が、トニサイザーtonicizer、界面活性剤、キレート剤、塩およびアルコールの少なくとも1種をさらに含む、請求項2に記載の方法。モノクローナル抗体がアダリムマブである、請求項14に記載の方法。品質および組成をリアルタイムまたは準リアルタイムで保証するために、生物製剤プロセス中間体のこのような多成分混合物を迅速で正確に試験する方法が依然として必要とされている。特定の実施形態では、本発明で開示した主題は、公知の成分の既定量を含む多成分混合物標準物を提供するステップ、多成分混合物標準物に対してラマン分光分析を実施するステップ、バイオプロセス操作から1つまたは複数の多成分試験混合物を提供するステップ、多成分試験混合物に対してラマン分光分析を実施するステップおよび多成分試験混合物を特徴付けるために多成分混合物標準物と多成分試験混合物の分析を比較するステップを含む、バイオプロセス操作において使用するための多成分混合物を特徴付ける方法を提供する。例えば、多成分試験混合物を特徴付けるために多成分混合物標準物と多成分試験混合物の分析を比較するステップは、キャリブレーションモデルを得るために多成分混合物標準物から得られたデータを統計学的方法によって当てはめること、その後多成分試験混合物において濃度を測定するためにキャリブレーションモデルを使用することを含む。特定の実施形態では、多成分混合物標準物および多成分試験混合物はいずれも糖例えば、マンニトール、アミノ酸例えば、L-アルギニン、メチオニン、L-ヒスチジン、L-オルニチン、プロリン、アラニン、l-アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、リシン、ヒスチジンおよびグルタミン酸、界面活性剤例えば、ポリソルベート80、Tween商標およびpH緩衝液例えば、クエン酸塩製剤、トリス緩衝液または酢酸塩緩衝液の1種以上、少なくとも2種、少なくとも3種、またはそれぞれを含む。これらの製剤混合物は、抗菌剤例えば、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノール、m-クレゾールまたはEDTAなどのキレート剤またはポリオール、PEGなどのその他の成分またはBSAなどのタンパク質または塩化ナトリウム、コハク酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウムおよび塩化カルシウムなどの塩またはエタノールなどのアルコールなどのその他の成分を含有することができる。特定の実施形態では、公知の成分の既定量を含む一連の多成分混合物標準物は、ランダムに選択されることが可能で、一連の多成分混合物標準物のラマン分光分析が実施される。データプロセシング法および主要成分法は、確実に信頼性のある予測をすることができる。例えば、ラマン分光分析の偏最小2乗回帰分析は、モデル例えば、検量線を作成するために一連の多成分混合物標準物について実施され得る。特定の実施形態では、多成分混合物は、動物対象例えば、ヒト対象に投与するために適した製剤である。例えば、多成分混合物は、生物学的活性剤例えば、モノクローナル抗体と組み合わせるように企図された製剤緩衝液であってもよい。ある種のこのような実施形態では、多成分混合物生物学的活性剤を含むまたは含まないは、規制機関例えば、米国食品医薬品局に従い、規制認可を得た。特定の実施形態では、生物学的活性剤は、モノクローナル抗体例えば、アダリムマブである。特定の実施形態では、多成分試験混合物に対するラマン分光分析は、オンライン、オフラインまたはアットラインのいずれかのバイオプロセス操作例えば、濾過または精製操作から得られる。例えば、特定の実施形態では、試料は、品質管理手順の一部として定期的に入手され得る。制約のためではなく明瞭化のために、本発明の詳細な説明は以下の小区分に分けられる:i定義ii適用可能なプロセスおよび系、ならびにiiiラマン分光器具および技術。i定義本明細書で使用したように、糖という用語は、一般式CH2Onの化合物およびそれらの誘導体を含み、単糖類、二糖類、三糖類、多糖類、糖アルコール、還元糖、非還元糖などをさらに含む。本明細書では糖の非限定的な例は、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、グリセリン、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、シリトールsylitol、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレチトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソマルツロースなどを含む。本明細書で使用したように、界面活性剤という用語は、表面活性剤を意味する。一実施形態では、界面活性剤は、非イオン性表面活性剤である。界面活性剤の例は、限定はしないが、ポリソルベート例えば、ポリソルベート20およびポリソルベート80、ポロクサマー例えば、ポロクサマー188、Triton商標、ドデシル硫酸ナトリウムSDS、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル-、ミリスチル-、リノレイル-またはステアリル-スルホベタイン、ラウリル-、ミリスチル-、リノレイル-またはステアリル-サルコシン、リノレイル-、ミリスチル-またはセチル-ベタイン、ラウロアミドプロピル-、コカミドプロピル-、リノレアミドプロピル-、ミリストアミドプロピル-、パルミドプロピル-またはイソステアラミドプロピル-ベタイン例えば、ラウロアミドプロピル、ミリストアミドプロピル-、パルミドプロピル-またはイソステアラミドプロピル-ジメチルアミン、メチルココイルタウレートナトリウムまたはメチルオレイルタウレート2ナトリウムならびにMONAQUAT商標シリーズMonaIndustries,Inc.、Paterson、NewJersey、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコールならびにエチレンおよびプロピレングリコールのコポリマー例えば、Pluronics商標、PF68商標などなどを含む。本明細書で使用したように、pH緩衝液という用語は、その酸-塩基共役成分の作用によって、pHの変化に対抗する緩衝化溶液を意味する。pHを制御するpH緩衝液の例は、トリス、トロラミン、リン酸塩、ビス-トリスプロパン、ヒスチジン、酢酸塩、コハク酸塩、コハク酸塩、グルコン酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、グリシルグリシンおよびその他の有機酸緩衝液を含む。本明細書で使用したように、生物製剤とは、細胞、分子、細胞器官天然もしくは合成または組換え源もしくは天然源いずれかの非合成化学物質由来の生きた生物から得られたその他の物質を意味する。例は、限定はしないが、DNA、RNA、ウイルス、ウイルスサブユニット、ウイルス様粒子、ペプチド合成および天然、タンパク質を含む。これらの分子のいずれも、測定が可能で、系のモニタリングおよび制御において使用が可能なラマンシグナルを提供することができる。本明細書で使用したように、産業規模で実現されているという用語は、例えば、治療薬または商業的に関心のあるその他の最終生成物の販売または流通から収入を得ることを見込んで、治療薬例えば、ヒトに投与するためのモノクローナル抗体またはその他の最終生成物が、長期間にわたって例えば、少なくとも1週間、または1ヵ月、または1年にわたって継続的に維持または向上のために供給停止を必要とすることなく生産される、バイオプロセスを意味する。産業規模での生産は、実験または調査の限られた期間のためのみに通常維持され、研究目的のために実施され、それによって生産された最終生成物の販売または流通から収入を得ることを期待しない、研究室でのベンチトップ生成と区別される。ii適用可能なプロセスおよびシステム本出願の特定の実施形態は、バイオプロセス操作において使用された成分例えば、多成分混合物を特徴付けるために、ラマン分光技術を使用する。例えば、特定の実施形態では、ラマン分光法は、生物学的活性剤例えば、モノクローナル抗体と一緒にするように企図された製剤を特徴付けるために使用され得る。時々製剤緩衝液と呼ばれるこれらの製剤は、通常、生物製剤における賦形剤レベルを測定する多成分混合物である。例えば、このような製剤は一般的に、以下の、pH緩衝液例えば、クエン酸塩、トリス、酢酸塩またはヒスチジン化合物、界面活性剤例えば、ポリソルベート80、糖および糖アルコール例えば、マンニトールおよび/またはアミノ酸例えば、L-アルギニンまたはメチオニンの1種以上を含む。製剤緩衝液中の誤差はしばしば、バッチ廃棄の原因となり、ひいては深刻な損失を引き起こす。特定の実施形態では、ラマン分光技術は、タンパク質凝集を確認するために使用され得る。例えば、限定はしないが、本発明のラマン分光技術は、特定の実施形態において、抗体薬剤物質および薬剤製品試料などのタンパク質薬剤物質および薬剤製品試料の凝集を確認することができる。特定の実施形態では、ラマン分光技術は、薬剤物質および薬剤製品試料中における賦形剤濃度を確かめるために使用され得る。ある種のこのような実施形態では、賦形剤濃度は、一連の分析試験を必要とすることなく、単一の読み取りに基づいた品質制御プロセスの一部として確かめられる。特定の実施形態では、ラマン分光法はまた、製品希釈およびpH調節を必要とするバイオプロセスで使用され得る。特定の実施形態では、ラマン分光法は、モノクローナル抗体例えば、アダリムマブなどの生物学的活性剤が精製される濾過操作などの濾過操作例えば、限外濾過/ダイアフィルトレーションプロセスにおいて存在する製剤を試験し、特徴付けるために使用され得る。例えば、限定はしないが、本発明のラマン分光技術は、単一の読み取りにおいて存在する成分の本質および量の両方を把握するためにオンラインまたはオフラインで得られる試料を入手するために使用され得る。特定の実施形態では、タンパク質濃度は、賦形剤濃度に加えて測定され得る。ある種のこのような実施形態では、0から150mg/mlの範囲のタンパク質濃度が分析され得る。特定の実施形態では、ラマン分光法は、バイオプロセス操作をモニターし、確かめ、試験して、それをもとにして制御するために使用され得る。バイオプロセス操作で使用される単位操作、例えば、クロマトグラフィー、濾過、pH変化、成分の添加または溶液の希釈による組成変化は全て、有機成分または無機成分および生物学的分子から構成される混合物を生じる。したがって、例えば、ラマン分光法を使用することによって、中間体の組成を迅速および正確に測定することは、操作ならびに生物学的生成物の均一性および品質を改善し、維持する機会を提供する。特定の実施形態では、ラマン分光法によって混合物中の個々の成分の組成を測定することは、生物学的分子が存在していてもいなくても、このような混合物を正確に調製することを可能にする。例えば、特定の実施形態では、このような測定は、調製物の均一性を改善するまたは緩衝溶液の準リアルタイム調製を提供するという有益性を備えたバイオプロセス操作において幅広く使用されている緩衝溶液の調製において有用である。特定の実施形態では、これは、緩衝溶液の調製、保持および輸送のための複雑な装置の必要性を排除する。特定の実施形態では、ラマン分光法の使用によって、緩衝製剤の潜在的誤差例えば、化学成分濃度、不適切な化学物質などが簡単な機器でリアルタイムに検出される緩衝溶液の試験および放出が実施され得ることが可能になる。試験が可能な製剤は、限定はしないが、タンパク質を含まない3成分製剤緩衝液糖アミノ酸、タンパク質および糖製剤、タンパク質および界面活性剤製剤ならびにタンパク質および緩衝液製剤を含む。特定の実施形態では、溶液組成の正確な測定は、生物学的溶液の調節を可能にし、したがって添加物陰イオン、陽イオン、疎水性、溶媒などの適格な標的組成が実現され得る。近年、このような測定は冗長で、リアルタイム使用で実行するために受け入れられにくく、洗練された分析方法が必要とされている。ラマン分光法を測定に使用すると、非常に高い精度の記録作成が可能となり、管理された産業において期待されている。特定の実施形態では、本発明の技術は、化学的、物理的または生物学的手段によって実現されるタンパク質-タンパク質反応、タンパク質-低分子反応および/またはタンパク質修飾をモニターおよび制御する能力を可能にする。ある種のこのような実施形態では、反応物元の状態の生物製剤および生成物最終状態の生物製剤の特有の生化学的特性ならびに天然において化学物質または生物物質のいずれかであるその他の反応物/触媒は、ラマン分光法を使用してモニターされる。反応物複数可および生成物複数可をこのような方法でモニターすることによって、とりわけ反応条件および反応物量のフィードバック制御が可能である。特定の実施形態では、生成物によって反応を停止する系を設計することおよび/または品質またはこのような系の性能を継続的に最適化、改善または維持することも可能である。特定の実施形態では、ラマン分光法はまた、クロマトグラフィー操作における生物製剤生成物の単離および精製を可能にする。ある種のこのような実施形態では、生成物/生成物変種/生成物アイソフォームまたは不純物の溶出はモニターされることが可能で、カラム溶出物の分画は、所望する生成物の品質またはプロセスの性能をベースにして実施され得る。特定の実施形態では、限定はしないが、濾過および非クロマトグラフィー分離などのその他の単位操作における画分の単離/濃縮にラマン分光法を適用することも可能である。特定の実施形態では、ラマン分光法は、非侵襲性の道具として導入されることが可能である。例えば、限定はしないが、ラマン分光測定法は、シグナルを妨害しない材料を通して実施され得る。これは、これらの混合物を含有する容器/器物の完全性を維持することが重要なバイオプロセス操作においてさらに特有の利点となる。特定の実施形態において、ラマン分光法は、その他の成分を含む溶液の汚染を検出する非常に価値のある手段となり得る。ある種のこのような実施形態では、汚染された溶液から得られたラマン分光データは、統計比較技術またはスペクトル比較技術を使用して予測スペクトルと比較され、異なっているならば、バイオプロセスで使用される前に、これらの溶液の製剤における誤差の迅速な検出を可能にすることができる。特定の実施形態では、概念の実証として以下の実施例によって示したように、宿主細胞タンパク質、DNA、脂質などを含む細胞培養収集物材料からの不純物を含有する混合物中における抗体の濃度は、ラマン分光法を使用して定量的に測定され得る。このような実施形態では、前記方法は、不純な混合物を含有するバイオプロセス操作の流入液および溶出液をモニターするために使用され得る。例には、限定はしないが、カラム、フィルターおよび非クロマトグラフィー分離装置膨張床、流動床、2相抽出などの添加操作および溶出操作を含むことができる。用意された例は、0.1から1g/Lの抗体濃度が、合成培地をベースにした細胞培養プロセスから調製された透明な収集溶液が添加されたプロテインAアフィニティークロマトグラフィーカラムからの未結合画分を含むマトリックスにおいて、定量され得ることを示している。ラマン分光法がインラインで組み込まれているならば、このような測定は、直接モニタリングを可能にし、カラム添加の制御を可能にし、動的結合容量のパーセントまたは静的平衡容量のパーセントのいずれかを表す予め定義された結合容量で、カラムの均一で最適な添加を可能にする。このような技術を前述したような様々なその他の操作に適用することは、当業者には明らかである。特定の実施形態では、ラマン分光法は、バイオプロセス精製操作における品質制御および/またはフィードバック制御のために例えば、アダリムマブ精製プロセスのためのインラインでの緩衝液希釈を制御するために使用され得る。ある種のこのような実施形態では、全体を参照により本明細書に組み込んだAnal.Chem.,77:1228-12362005で記載されたように、ラマン分光法は、タンパク質結合反応またはその他の化学反応例えば、液相ヘック反応が関与するプロセスにおける品質制御および/またはフィードバック制御のために使用され得る。本発明で開示した主題の様々な実施形態では、本明細書で開示したラマン分光技術は、前記で定義したように、産業規模で実現されているバイオプロセス操作において使用される。便宜上、本出願の主題は、主としてバイオプロセス法に関して記載されているが、バイオプロセス自体を実施するための系も提供される例えば、実施例13参照。したがって、本出願の特定の実施形態は、産業規模で実現されているバイオプロセス系を含むバイオプロセス操作を実施するための系であって、それぞれのプロセスからオンラインまたはオフラインによって採取された試料と連絡する液体中にラマンプローブがある系を提供する。系自体に関する情報は、対応するプロセスの説明から得ることができる。iiiラマン分光器具および技術ラマン分光法は、単色の入射放射は材料上で特定の様式で反射、吸収または散乱され、これは放射を受容する特定の分子またはタンパク質に左右されるという原理に基づいている。エネルギーの大部分は、同じ波長で散乱しレイリー散乱、放射の少量例えば、10-7がいくらか異なる波長で散乱するストークスおよびアンチストークス散乱。この散乱は、回転、振動および電気的レベルの遷移を伴う。散乱した光子の波長の変化は、化学的および構造的情報をもたらす。特定の実施形態では、ラマン分光法は多成分混合物で実施され、成分の特異性の高いフィンガープリントを形成することができる。混合物のラマン分光分析から生じるスペクトルフィンガープリントは、個々の成分それぞれを重ね合わせたものである。バンドのそれぞれの強度は、特定の成分の相対的濃度と相関している。したがって、特定の実施形態では、ラマン分光法は、成分の混合物を定性的および定量的に特徴付けるために使用され得る。ラマン分光法は、非常に短いシグナル取得時間で、固体、液体、スラリー、ゲル、フィルム、粉末およびいくつかの気体を含むほとんどの試料を特徴付けるために使用され得る。一般的に、試料は、特殊な調製技術を必要とすることなく、問題のバイオプロセスから直接採取され得る。また、入射光および散乱光は、長距離にわたって透過され得るので、遠距離モニタリングが可能である。さらに、水は、弱いラマン散乱のみを与えるので、水性試料は、水から重大な妨害を受けることなく特徴付けられることが可能である。適用可能なプロセスおよび本明細書で記載した組成物は、市販のラマン分光分析器に基づいて分析され得る。例えば、RamanRX2商標分析器またはKaiserOpticalSystems,Inc.AnnArbor、MI社から市販されているその他の分析器が使用され得る。あるいは、ラマン分析器は、例えば、PerkinElmerWaltham、MA社、RenishawGloucestershire、UK社およびPrincetonInstrumentsTrenton、NJ社から市販されている。市販されているラマン分光分析器の技術的な詳細および操作パラメータは、それぞれの製造業者から入手され得る。適切な曝露時間、試料サイズおよび試料採取頻度は、例えば、ラマン分光分析器およびこれが使用されるプロセスに基づいて例えば、UF/DFバイオプロセス操作のリアルタイムモニタリングを提供するプロセスにおいて決定され得る。同様に、適切なプローブ設置はまた、分析器および分析器が使用されるプロセスに基づいて決定され得る。例えば、浸漬プローブが適切なシグナルを提供するための試料サイズは、20mL未満、または10mL未満例えば、8mL以下であることができる。適切なシグナルを提供するための曝露時間は、2分未満、または1分未満例えば、30秒であることができる。例えば、定量が所望され、複数のpH依存イオン化型で存在する成分例えば、ヒスチジンについて、所与のpH範囲にわたって濃度を予測するために、様々な濃度および/または様々なpHでラマンキャリブレーションが実施されることが可能で、したがって、成分例えば、ヒスチジンの測定はpHに依存しない。例えば、様々なpH依存型のヒスチジンのキャリブレーションモデルは、様々なイオン化型のヒスチジンを測定し定量するために使用されることが可能で、したがって溶液特性が把握され得る。強度修正例えば、標準正規変数SNVおよび/またはベースライン修正例えば、1次導関数を含むことができるシグナルプロセシングが実施され得る。代表的な試験溶液のCCD飽和を測定し、これらが許容され得る機器範囲例えば、40-80内に確実にあることによって、曝露時間は決定され得る。上記に記載したように、いくつかの実施形態では、pH制御またはpH範囲モデリングが、特定の成分例えば、ヒスチジンなどの緩衝液のために使用される。いくつかの実施形態では、入射光は最小限に抑えられ、これは、例えば、周囲の光源が分光器を妨害するのを遮断する覆い例えば、アルミホイルを使用することによって、実現され得る。特定の実施形態では、例えば、タンパク質抗体などは荷電していない種と共に濃縮され、タンパク質は溶液の体積の大部分を占め、大量の溶質を排除する。これは、荷電していない種の濃度の純減を引き起こす。この効果は、容積排除と呼ばれ、タンパク質濃度に比例する。荷電した成分のアッセイが関与する実施形態などの特定の実施形態では、高濃度では、タンパク質の電荷が溶液中における全体の荷電種に著しく関与するようになるので、ドナン効果が生じる。平衡は、膜の片側で確立されることが予測されるので、電気的中性の必要性のため、膜のもう一方の側の正に荷電した種例えば、緩衝液種の純減が引き起こされる。この現象は、ドナン効果と呼ばれる。本出願の特定の実施形態によれば、RamanRX2商標分析器が使用される。この分析器は、その他の市販のラマン分析器と同様に、完全なスペクトルを同時に網羅する4チャンネルまでのモニタリング性能を実現する。特定の実施形態では、試料適合性を最大限にするために、標準NIRレーザー励起が使用される。プログラミング可能な連続的モニタリング形式が、例えば、RamanRX2商標分析器によって使用されることが可能で、この器具はプロセス光学に適合しており、発見段階から生産段階まで1種類の分析器が使用されることを可能にする。携帯式密封容器および光ファイバーサンプリングインターフェースは、分析器が複数の位置において使用されるのを可能にする。本発明で開示した主題の特定の実施形態では、公知の成分の既定量すなわち、多成分混合物標準物類を含有する少なくとも1種の多成分混合物標準物は、未知の成分および/または公知の成分または未知の成分の未知の濃度を含む混合物で使用するためのモデル例えば、検量線を得るために、ラマン分光法によって特徴付けられる。好ましくは、公知の成分の既定量を含む一連の多成分混合物標準物は、モデルを得る目的のためにラマン分光法によって特徴付けられる。未知の成分および/または公知の成分または未知の成分の未知の濃度を含む混合物で使用するためのモデルを得るための方法は、当業者によって決定され得る。例えば、多成分試験混合物中に存在することが予測される主要成分に基づく偏最小2乗回帰分析。また、ラマン分光法製造業者から入手可能なソフトウェアプログラムは、多成分混合物標準物を設計するために使用されることが可能で、次に多成分試験混合物と共に使用するためのモデルを開発するために使用されることが可能である。さらに、公知の成分の既定量を含む多成分混合物標準物を提供することおよび多成分混合物標準物に対してラマン分光分析を実施することという場合、より一般的に、未知の成分または成分の未知の濃度を含む多成分混合物を特徴付けるためのモデルを作成することはいずれも並行分析すなわち、オンサイトで得られたデータを含み、多成分混合物標準物、すなわち公知の濃度の公知の成分を含む多成分混合物の以前に得られた、または以前に記録された結果例えば、ラマンスペクトルフィンガープリントの場合も同様であると理解される。例えば、製造業者の製品文献から得られたラマンスペクトルの結果の場合、公知の成分の既定量を含む多成分混合物標準物を提供することおよび多成分混合物標準物に対してラマン分光分析を実施することが包含される。本発明は、以下に述べた実施例によってさらに説明される。このような実施例の使用は一例に過ぎず、本発明または例示したいかなる用語の範囲および意味を決して限定しない。同様に、本発明は、本明細書で記載したいかなる特定の好ましい実施形態にも限定されない。実際に、本明細書を読むことによって、当業者には本発明の多くの改変および変更が明らかである。したがって、本発明は、本発明の範囲が権利を与えられる等価物の全範囲と共に添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるものである。[実施例1]3成分製剤緩衝液の試験アルギニン、クエン酸およびトレハロースの既定の混合物を含有する製剤緩衝液は、水溶媒によって調製された。成分は、0から100nMまで変動させた。800から1700cm-1の範囲にわたるラマンスペクトルは、RAMANRXN2商標分析器2スペクトル/混合物を使用して、各混合物15mLずつについて得られた。スペクトルのフィルタリングパラメータは、標準正規分散SNVによる強度正規化に設定し、1次導関数gapベースライン修正は15ポイントスムージング、平均センタリング差スペクトルは平均強度値=0に設定した。これは、スペクトルフィルターよりもデータスケーリングであると考えられる。スペクトルは、浸漬式プローブを使用し、試料当たり30秒の曝露時間で収集された。主成分法は、モデルを作成するために使用された。PLS潜在的構造に対する偏最小2乗回帰分析モデルは、成分間の相関を測定するために3成分それぞれに適用された。この結果は、スペクトル強度例えば、1700-800cm-1を濃度ax1bx2zx900=濃度と解釈する線形モデルである。ここで示したキャリブレーション結果のために使用したソフトウェアは、ThermoGalactic社のPLSplus/IQアドインを備えたGRAMS/AIV7.02であった。図および実験モデル作成の多くには、SIMCAPが使用された。試料は、2つの試料を除去することによって交差検定された。成分間相関の誤差閾値が2を下回るまで相関の試験および公差検定のステップが繰り返されるように、データ分析が実施された。緩衝液成分の正確な定量例えば、2以内は、1回の読み取りで実現することができた。検量線は、ランダム混合物デザインRandomMixtureDesignを使用して得ることができる。上記で作成した3成分モデルは、アルギニン、クエン酸およびトレハロースのランダム混合物のスペクトルについて予測を行うために使用された。これらの予測は、モデルの既定の許容限界が±2であることを確認するために、実際のスペクトルと比較された。結果は図2および3に示されている。測定を行うためにモデルが使用され得ることを確かめるために、ランダム混合物の独立した測定値が得られた。[実施例2]4成分製剤緩衝液の試験実施例1の方法は、成分がマンニトール、メチオニン、ヒスチジンおよびTween商標ポリソルベート80である4成分を含有する製剤緩衝液に適用された。既定の混合物の測定スペクトルは、図4-6に示されている。波数は遠赤外領域から中赤外領域までの範囲である。サファイアカバーによる限界のため、この特定の実施例では100-800cm-1の範囲は無視することができ、キャリブレーションは800-1800cm-1で行われる。実施例1で得られた3成分モデルと同じように、4成分緩衝系についてモデルが得られた。得られたモデルをベースにした予測は、このモデルが十分に正確であることを確認するために、ランダム混合物の実際のスペクトルに対して比較された。結果は図7および8に示されている。[実施例3]タンパク質を含む3成分製剤緩衝液の試験実施例2の方法は、0から100mg/mlの範囲の濃度のタンパク質と共に3成分を含有する製剤緩衝液に適用された。成分は、マンニトール、メチオニン、ヒスチジンおよびD2E7アダリムマブであった。既定の混合物の測定スペクトルは、図9-11に示されている。実施例2で得られた4成分モデルと同じように、タンパク質を含む3成分緩衝系についてモデルが得られた。得られたモデルをベースにした予測は、このモデルが十分に正確であることを確認するために、ランダム混合物の実際のスペクトルに対して比較された。結果は図12に示されている。実際のスペクトル対予測されたスペクトルの測定値の係数R2および公差検定値の標準誤差SECVは以下の表1に示されている。[実施例4]アダリムマブUF/DFプロセス限外濾過/ダイアフィルトレーションプロセスUF/DFは、アダリムマブの溶液に賦形剤を導入するために確立されており、図13に示されている。供給ポンプ100は、タンジェンシャルフロー濾過膜を横断するクロスフローを供給し、膜上の貯蔵液中のアダリムマブ含有溶液を送る。ダイアフィルトレーション緩衝液メチオニン、マンニトールおよびヒスチジンを含有する製剤緩衝液は、膜の濾過速度膜の透過側を通る液体流に合うように貯蔵液中にポンプで送り込まれる110。供給タンクから出てくる供給流120は、ポンプ130によって膜モジュール140に向けられる。水、分子の大きさが比較的小さい緩衝液成分などを含有する透過流150は膜モジュールを通過する。濃縮されたアダリムマブを含有する残留流160は、残留バルブ170によって制御されて、供給タンクに送り戻される。KaiserOpticals社のRamanRX2商標分析器190に適合したラマンプローブ180は、タンクの含量を定期的に特徴付ける能力を実現するために、供給タンク内に設置される。得られたスペクトルは、キャリブレーションファイルを使用して成分濃度に変換され、これをもとにしてダイアフィルトレーションプロセスの進行がモニターされ得る。さらに、タンパク質の濃度増加によって生じるドナン効果および電荷排除効果によって引き起こされる賦形剤濃度の変化は、モニターされ、場合によって制御され得る。RamanRX2商標分析器以外のその他のラマン系も、アダリムマブ精製プロセスの品質管理の一部として定期的に、限外濾過/ダイアフィルトレーションプロセスからのオンライン試料を特徴付けるために使用され得る。例えば、ラマン分析の結果は、ダイアフィルトレーションプロセスの完了および最終的な賦形剤濃度の評価に使用され得る。ヒスチジン、マンニトールおよびメチオニンの混合物は、UF/DF膜からダイアフィルトレーションされた。ラマンプローブは、残留貯蔵液中に設置された。ラマンスペクトルは指定された間隔で得られ、各読み取りは曝露時間30秒毎に行われ、10回反復された10走査。図14-15は、ダイアフィルトレーション中の濃度変化を示している。予測通り、個々の成分の濃度は、ダイアフィルトレーション中に増加して、プラトーに達した。図14-15は、ダイアフィルトレーションプロセスのオンライモニタリングの結果を表す。図14では、糖、緩衝液およびアミノ酸の濃度が様々なダイアフィルトレーション時間について表されている。図14および15で示されたように、アミノ酸はメチオニンであり、濃度mMはy軸にプロットされ、糖はマンニトールであり、w/vはy軸にプロットされ、緩衝液はヒスチジンであり、濃度mMはy軸に沿ってプロットされている。図14-15におけるプロットそれぞれのx軸は滞留時間であり、0から81分までの濃度が測定され、x軸に沿ってプロットされている。次に、水中に存在する約40mg/mlのアダリムマブは、5キロダルトンUF/DF膜0.1sq.m.から糖溶液中に7ダイアフィルトレーション容量でダイアフィルトレーションされた。ラマンプローブは、残留貯蔵液中に設置された。ラマンスペクトルは指定された間隔で得られ、各読み取りは曝露時間30秒毎に行われ、10回反復された10走査。その後、タンパク質は140g/Lまで濃縮された。図16は、UF/DF系で使用され、前述の通りに測定された糖/タンパク質系マンニトール/アダリムマブから得られたキャリブレーションデータを表している。図16の検量線は、図17および18においてマンニトールおよびアダリムマブ濃度を把握するために使用された。図17および18は、糖のダイアフィルトレーション中の濃度変化を示している。右のプロットは、ダイアフィルトレーション中およびその後の限外濾過中のタンパク質濃度を示している。図17および18において、糖濃度は滞留容量0から6までに対してプロットされ、アダリムマブ濃度g/lは滞留容量0から6までに対してプロットされている。予測通り、糖の濃度は、ダイアフィルトレーション中に増加して、プラトーに達した。タンパク質は、標的濃度に達した。図17において、50g/Lにキャリブレーションされたモデルが使用された。図18は、タンパク質120g/Lおよび糖混合物で得られたキャリブレーションを使用して算出された糖およびタンパク質の濃度を示している。水中に存在する約20mg/mlのアダリムマブは、5キロダルトンUF/DF膜0.1sq.m.からヒスチジン溶液50mM中に7ダイアフィルトレーション容量でダイアフィルトレーションされた。ラマンプローブは、残留貯蔵液中に設置された。ラマンスペクトルは指定された間隔で得られ、各読み取りは曝露時間30秒毎に行われ、10回反復された10走査。その後、タンパク質は50g/Lまで濃縮された。図19は、緩衝液ヒスチジン/タンパク質アダリムマブ系から得られたキャリブレーションデータを表している。これは、ヒスチジン/アダリムマブ混合物のタンパク質50g/Lまでのキャリブレーションモデルである。図20は、緩衝液/タンパク質系における低濃度の緩衝液およびタンパク質について、ヒスチジン濃度nMおよびアダリムマブ濃度g/lに対するダイアフィルトレーション容量ダイアフィルトレーション容量0から6のプロットを表している。このプロットは、ヒスチジンのダイアフィルトレーション中の濃度変化を示しているnM。右のプロットは、ダイアフィルトレーション中およびその後の限外濾過中のタンパク質濃度g/lを示している。予測通り、糖の濃度はダイアフィルトレーション中に増加して、プラトーに達した。タンパク質は、標的濃度に達した。このプロット図19において、50g/Lにキャリブレーションされたモデルが使用された。プロット中の濃度は、モデルの限界のため、予測より低く、ヒスチジンのイオン化に関連することが後に確認された。モデルは、ヒスチジンのイオン化状態を実際の全ヒスチジン濃度および溶液特性と相関させることができる。このデータは、タンパク質およびその他の単一成分の低および高濃度UF/DF操作をモニターする性能を示している。濃度は、3分毎に読み取ることができ、したがって、リアルタイムまたは準リアルタイムで濃度をモニターする能力を実現する。糖/タンパク質系において、タンパク質の濃度全てに対して非常に高い精度の糖が得られた。緩衝液/タンパク質系において、高い緩衝液濃度および低いタンパク質濃度で緩衝液の高い精度が得られた。容積排除効果およびドナン効果を検出し測定する能力もリアルタイムまたは準リアルタイムで実現されている。したがって、ラマン分光法は、タンパク質溶液における賦形剤濃度測定の道具として有用で、プロセス制御を実現するために賦形剤濃度に加えてタンパク質濃度を測定する能力も実現する。[実施例5]タンパク質を含む2成分製剤緩衝液の試験実施例1の方法は、2成分、トリスおよび酢酸塩、ならびにタンパク質、アダリムマブを含有する製剤緩衝液に適用された。これらの成分には、以下の範囲、トリス50-160mM;酢酸塩30-130mMおよびアダリムマブ4-15g/Lが含まれていた。検量線は、実施例1で概略を示したように得ることができる。前記のように作成されたモデルは、表2の濃度に従って調製された試料において、トリス、酢酸塩およびアダリムマブの混合物のスペクトルについて予測を行うために使用された。これらの予測は、モデルが既定の許容限界にあることを確認するために、実際のスペクトルと比較された。この結果は図21A-Cに示されている。[実施例6]タンパク質を含む細胞培養収集物の試験実施例1の方法は、1成分、Tween商標およびタンパク質、アダリムマブを含有する製剤緩衝液に適用された。細胞培養培地は、細胞培養バッチから収集され、濾過され、プロテインAカラムに添加された。プロテインAカラム流出液はプールされ、その後、滅菌濾過してから保存および試験された。この方法は、プロテインAカラム添加の終点を測定するために使用される。濾過された細胞培養収集物は、捕捉カラム典型的には、プロテインAに添加される。カラム添加溶出をモニターする現在の方法は、A280吸収を使用している。しかし、培養収集物は、280nmで光を吸収する多くの構成物を含有する。A280吸収は通常飽和しており、A280法はカラム添加相中に出現する抗体を測定することができなくなっている。ラマン分光器は、捕捉カラム添加溶出流カラムの溶出液中における抗体の特異的測定を実現する。この試験は、プロテインA溶出プール中に様々な濃度の精製抗体API薬剤物質例えば、アダリムマブを添加することによって、推奨のオンライン抗体測定をシミュレートする。添加実験に使用されたAPI試料は、0.1Tween商標を含有している。直接添加実験中、Tween商標濃度は抗体と正比例して変化するので、ラマンスペクトルキャリブレーション中、抗体と間違われる可能性がある。これを回避するため、Tween商標は追加的成分と考えられ、抗体濃度と独立して添加された。したがって、これらの成分は、以下の範囲、Tween商標0.1-1.0およびアダリムマブ0.1-1.0g/Lで含められた。検量線は、実施例1で概略を示したように得ることができる。上記で作成されたモデルは、表3の濃度に従って調製された試料において、Tween商標およびアダリムマブの混合物のスペクトルについて予測を行うために使用された。これらの予測は、モデルが予め測定された許容限界にあることを確認するために、実際のスペクトルと比較された。これらの結果は図22A-Bに示されている。[実施例7]抗体凝集検出の試験2種類の抗体D2E7およびABT-874は、未修飾タンパク質の光誘導性架橋PICUPを使用して別々に凝集した。これらの抗体は凝集光源に0-4時間曝露され図23および24、サイズ排除クロマトグラフィーSECによって凝集は定量された。試料は、ラマン分光法によって測定され、スペクトルは主要成分分析PCA図25および26および偏最小2乗回帰分析PLS図27Aおよび27Bを使用してモデル化された。図25および26は、凝集した試料が明確な主要成分スコアを有し、ラマン分光法を使用して凝集から区別され得ることを示している。図27Aおよび27Bは、ラマン分光法の結果とSEC測定の間にいくらか相関があることを示している。様々な出版物が本明細書では引用されているが、それらの内容は全体を参照により本明細書に組み込む。本出願は、2010年9月17日出願のU.S.S.N.61/384,131および2011年3月15日出願のU.S.S.N.61/452,978の優先日の利益を主張し、いずれも全体を参照により本明細書に組み込む。"