以下のa又はb又はcの工程を含む、対象者が1つ以上のCVD合併症例えば急性心筋梗塞AMI及び/又はCVD死の発症リスクを有するか否かを決定する方法:a前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質の濃度を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき前記サンプルにおける濃度の増加又は低下が、前記対象者が1つ以上のCVD合併症例えばAMI又はCVD死を発症するリスクの増加を有することの指標であり、その濃度の増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質が、Cer、LacCer、Cer、LacCer、PSO182160アルケニル、PSO161182アルキル、総Cer、総LacCer、GlcCer、LacCer及びCerから選択され、その濃度の低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質が、総PCPC160204、Cer、総LPC、CE140、CE203、CE171、PC160203、LPC181、PC180203、PC180181及びCerから選択される、前記工程、又はb前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質脂質比を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき前記サンプルにおける脂質脂質比の増加又は低下が、前記対象者が1つ以上のCVD合併症例えばAMI又はCVD死を発症するリスクの増加を有することの指標であり、その増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質脂質比が、GlcCer総CE、Cer総PC、CerPC160204、CerPC160204、LacCerPC160203、総Cer総PC、総LacCer総PC、LacCerPC181182、PSO160182アルケニル総PSO、CerPC160204、LacCer総LPC及びLacCerPC160204から選択され、その低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質脂質比が、CerCer、CerCer、DAG160181総DAG、CerCer、Cer総CE、CerCer、Cer総Cer、CerCer、CerPSO160182アルケニル、CerLacCer、CerCer、CerCer、CerCer、CerPSO160182アルケニル、CerPSO161182アルキル、GlcCerLacCer、総LPC総LacCer及びGlcCerLacCerから選択される、前記工程、又はc前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質臨床濃度比を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき前記サンプルにおける脂質臨床濃度比の増加又は低下が、前記対象者が1つ以上のCVD合併症例えばAMI又はCVD死を発症するリスクの増加を有することの指標であり、その増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質臨床濃度比が、Cerアポリポタンパク質AI、Cerアポリポタンパク質AI、LacCerアポリポタンパク質AI、総Cerアポリポタンパク質AI、総LacCerアポリポタンパク質AI、Cerアポリポタンパク質AI、LacCerアポリポタンパク質AI、LacCerHDLコレステロール及びCerアポリポタンパク質Bから選択され、その低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質臨床濃度比が、Cerアポリポタンパク質B、Cer総コレステロール、Cerアポリポタンパク質B、PC160204アポリポタンパク質B及びCerアポリポタンパク質AIから選択される、前記工程。以下のa又はb又はcの工程を含む、CVD及び/又は1つ以上の前記の合併症例えばAMI又はCVD死の治療の有効性を対象者で評価する方法:a前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質の濃度を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき、前記サンプルにおける濃度の増加又は低下が前記治療の有効性の指標であり、その濃度の増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質が、Cer、LacCer、Cer、LacCer、PSO182160アルケニル、PSO161182アルキル、総Cer、総LacCer、GlcCer、LacCer及びCerから選択され、その濃度の低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質が、総PC、PC160204、Cer、総LPC、CE140、CE203、CE171、PC160203、LPC181、PC180203、PC180181及びCerから選択される、前記工程、又はb前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質脂質比を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき、前記サンプルにおける脂質脂質比の増加又は低下が前記治療の有効性の指標であり、その増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質脂質比が、GlcCer総CE、Cer総PC、CerPC160204、CerPC160204、LacCerPC160203、総Cer総PC、総LacCer総PC、LacCerPC181182、PSO160182アルケニル総PSO、CerPC160204、LacCer総LPC及びLacCerPC160204から選択され、その低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質脂質比が、CerCer、CerCer、DAG160181総DAG、CerCer、Cer総CE、CerCer、Cer総Cer、CerCer、CerPSO160182アルケニル、CerLacCer、CerCer、CerCer及びCerCer、CerPSO160182アルケニル、CerPSO161182アルキル、GlcCerLacCer、総LPC総LacCer及びGlcCerLacCerから選択される、前記工程、又はc前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質臨床濃度比を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき、前記サンプルにおける脂質臨床濃度比の増加又は低下が前記治療の有効性の指標であり、その増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質臨床濃度比が、Cerアポリポタンパク質AI、Cerアポリポタンパク質AI、LacCerアポリポタンパク質AI、総Cerアポリポタンパク質AI、総LacCerアポリポタンパク質AI、Cerアポリポタンパク質AI、LacCerアポリポタンパク質AI、LacCerHDLcholesterolandCerapolipoproteinBから選択され、その低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質臨床濃度比が、Cerアポリポタンパク質B、Cer総コレステロール、Cerアポリポタンパク質B、PC160204アポリポタンパク質B及びCerアポリポタンパク質AIから選択される、前記工程。以下のa又はb又はcの工程を含む、CVD及び/又は1つ以上の前記の合併症例えばAMI又はCVD死の適切な治療を対象者で選択する方法:a前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質の濃度を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき、前記サンプルにおける濃度の増加又は低下が、対象者には治療の必要があること、又は既に実施した治療の変更若しくは補充の必要があることの指標であり、その濃度の増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質が、Cer、LacCer、Cer、LacCer、PSO182160アルケニル、PSO161182アルキル、総Cer、総LacCer、GlcCer、LacCer及びCerから選択され、その濃度の低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質が、総PC、PC160204、Cer、総LPC、CE140、CE203、CE171、PC160203、LPC181、PC180203、PC180181及びCerから選択される、前記工程、又はb前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質脂質比を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき、前記サンプルにおける脂質脂質比の増加又は低下が、対象者には治療の必要があること、又は既に実施した治療の変更若しくは補充の必要があることの指標であり、その増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質脂質比が、GlcCer総CE、Cer総PC、CerPC160204、CerPC160204、LacCerPC160203、総Cer総PC、総LacCer総PC、LacCerPC181182、PSO160182アルケニル総PSO、CerPC160204、LacCer総LPC及びLacCerPC160204から選択され、その低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質脂質比が、CerCer、CerCer、DAG160181総DAG、CerCer、Cer総CE、CerCer、Cer総Cer、CerCer、CerPSO160182アルケニル、CerLacCer、CerCer、CerCer及びCerCer、CerPSO160182アルケニル、CerPSO161182アルキル、GlcCerLacCer、総LPC総LacCer及びGlcCerLacCerから選択される、前記工程、又はc前記対象者由来のサンプルで1つ以上の脂質臨床濃度比を決定する工程であって、コントロールサンプルと比較したとき、前記サンプルにおける脂質臨床濃度比の増加又は低下が、対象者には治療の必要があること、又は既に実施した治療の変更若しくは補充の必要があることの指標であり、その増加がコントロールと比較される1つ以上の脂質臨床濃度比が、Cerアポリポタンパク質AI、Cerアポリポタンパク質AI、LacCerアポリポタンパク質AI、総Cerアポリポタンパク質AI、総LacCerアポリポタンパク質AI、Cerアポリポタンパク質AI、LacCerアポリポタンパク質AI、LacCerHDLコレステロール及びCerアポリポタンパク質Bから選択され、その低下がコントロールと比較される1つ以上の脂質臨床濃度比が、Cerアポリポタンパク質B、Cer総コレステロール、Cerアポリポタンパク質B、PC160204アポリポタンパク質B及びCerアポリポタンパク質AIから選択される、前記工程。脂質濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比を決定する工程がアッセイを用いてそれぞれ実施される、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。前記治療が脂質改変治療である、請求項2から4のいずれか1項に記載の方法。aその濃度の増加がコントロールと比較される脂質が、Cer、LacCer、Cer、LacCer、LacCer及びCerから選択され、bその濃度の低下がコントロールと比較される脂質が、PC160204及びCerから選択され、cその増加がコントロールと比較される脂質脂質比が、CerPC160204、LacCerPC160203、PSO160182アルケニル総PSO及びCerPC160204から選択され、dその低下がコントロールと比較される脂質脂質比が、GlcCerLacCer、DAG160181総DAG、Cer総Cer、総LPC総LacCer、GlcCerLacCer、CerCer、CerCer、CerPSO160182アルケニル、CerCer、CerPSO160182アルケニル、CerPSO161182アルキル及びCerLacCerから選択され、eその増加がコントロールと比較される脂質臨床濃度比が、Cerアポリポタンパク質AI、Cerアポリポタンパク質AI、LacCerアポリポタンパク質AI、総LacCerアポリポタンパク質AI、LacCerHDLコレステロール及びCerアポリポタンパク質AIから選択される、請求項1から5のいずれか1項に記載の方法。少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、少なくとも6つ、少なくとも7つ、少なくとも8つの脂質濃度、脂質脂質比若しくは脂質臨床濃度比をそれぞれ、又は前記の組合せ決定する工程を含む、請求項1から6のいずれか1項に記載の方法。請求項1から7のいずれか1項に記載の方法であって、a前記CVDが、冠状動脈疾患、末梢動脈疾患、卒中及び/又はCVD死を特徴とし、及び/又はb前記CVDがアテローム性動脈硬化症により誘発され、及び/又はc前記対象者がアテローム性動脈硬化症であるか、又はd前記対象者がアテローム性動脈硬化症ではない、前記方法。請求項1から8のいずれか1項に記載の方法であって、a前記方法がさらに、総コレステロール、低密度リポタンパク質コレステロールLDLC、高密度リポタンパク質コレステロールHDLC、アポリポタンパク質BアポB及び/又はアポリポタンパク質CIIIアポCIIIの血清レベルを前記サンプルで決定する工程を含み、及び/又はb対象者が、総コレステロール、低密度リポタンパク質コレステロールLDLC、アポリポタンパク質CIIIアポCIII又はアポリポタンパク質BアポBの1つ以上の血清レベルの上昇、又はHDLコレステロールHDLCの血清レベルの低下を示さない、前記方法。前記対象者が、a1つ以上のスタチン及び/又は任意の他のHMGCoAレダクターゼ阻害剤で現在治療を受けているか、またはこれまで治療を受けていたか、又はbスタチン治療又は任意の他のHMGCoAレダクターゼ阻害剤治療をこれまで受けたことがない、請求項1から9のいずれか1項に記載の方法。脂質濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比が、質量分析、核磁気共鳴分光学、蛍光分光学又は二重分極干渉測定法、高速分離法例えばHPLC又はUPLC、免疫アッセイ例えばELISA、及び/又は特異的に分析物と結合できる結合成分と一緒に、用いることによって決定される、請求項1から10のいずれか1項に記載の方法。方法が、前記患者のCVD合併症死亡及び心筋梗塞MIを含むの発症リスクを決定するためである、請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。CVD合併症例えばAMI又はCVD死をその必要がある対象者で予防又は治療するために使用される薬剤であって、前記薬剤が、請求項1から3のいずれか1項又は請求項6a、b、c、d若しくはeに記載の脂質濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比の1つ以上を調節することができる、前記薬剤。前記1つ以上の脂質濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比が、コントロールサンプルと比較したとき有意な変動を示さないような用量で薬剤が投与されるものである、請求項13に記載の薬剤。CVD合併症例えばAMI又はCVD死をその必要がある対象者で治療又は予防する方法であって、前記方法が、請求項1から3のいずれか1項又は請求項6a、b、c、d若しくはeに記載の脂質濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比の1つ以上を調節することができる薬剤の治療的に有効な用量を投与する工程を含み、前記用量が、前記対象者由来のサンプルにおける前記1つ以上の脂質濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比が、コントロールサンプルと比較したとき有意な変動を示さないような用量である、前記方法。薬剤が、スタチン又は任意の他のHMGCoAレダクターゼ阻害剤;ナイアシンニコチン酸;コレステロール吸収阻害剤、例えばエゼチミブ又はSCH48461;コレステリルエステル転移タンパク質CETP阻害剤、例えばトルセトラピブ、アナセトラピブ又はJIT705;胆汁酸封鎖剤、例えばコレセベラム、コレスチラミン及びコレスチポル;フィブレート、例えばフェノフィブレート、ゲムフィブロジル、クロフィブレート及びベンザフィブレート;又はフィトステロールである、請求項13若しくは14に記載の薬剤又は請求項15に記載の方法。スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、XL、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン及び/又はシムバスタチンから成る群から選択される、請求項10に記載の方法又は請求項16に記載の薬剤若しくは方法。請求項1から3のいずれか1項に規定されてあるか、又はCVD合併症例えばAMI又はCVD死の発症リスクを有する対象者の予防又は治療で使用される脂質であって、前記脂質が食事用サプリメント又は医薬として摂取されるものである、前記脂質。CVD合併症例えばAMI又はCVD死の発症リスクを有する対象者で、請求項1から3のいずれか1項又は請求項6a、b、c、d若しくはeに記載の脂質濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比を調節するために使用される調節物質。調節物質が、小分子、アンチセンスRNA、小さな干渉性RNAsiRNA又は天然若しくは改変脂質である、請求項19に記載の調節物質。a対象者で1つ以上のCVD合併症例えばAMI又はCVD死を予測するか、又はb対象者で1つ以上のCVD合併症例えばAMI又はCVD死を予防又は治療する場合に使用される、請求項1から3又は6に規定の脂質のいずれか1つに対する抗体。対象者が、1つ以上のCVD合併症、例えば急性心筋梗塞及び/又は心脈管関係死を発症するリスクを有するか、又は前記に罹患している、請求項1から21のいずれか1項に記載の方法、薬剤、脂質又は抗体。請求項1から22のいずれか1項に記載のCVD合併症を予測するか、又は前記記載の方法若しくは使用を実施するためのキットであって、前記キットが、請求項1から3及び請求項6a、b、c、d又はeに規定の脂質から選択される脂質標準物、1つ以上のコントロールリピドームマーカー、及び/又は請求項1から3及び請求項6a、b、c、d又はeに規定の脂質のいずれか1つに対する抗体、並びに場合によって前記方法又は使用を実施するための試薬を含む、前記キット。対象者由来のサンプル中のその脂質濃度、脂質比又は脂質臨床濃度比が場合によって質量分析を用いることによって決定される、アテローム性動脈硬化症又はCVDを予測又は検出するための請求項23に規定のキットの使用。コントロールサンプルがこれまでいずれの主要なCVD合併症にも罹患したことがないCAD患者又はCAD患者グループに由来し、サンプルが好ましくは血液サンプル又は血清サンプルである、請求項1-12、15-17のいずれか1項に記載の方法、又は請求項13、14、16又は17に記載の薬剤。1つ以上のCVD合併症が重篤なCVD合併症、特にCVD死である、請求項1-12、15-17のいずれか1項に記載の方法、又は請求項13、14、16、17又は24に記載の薬剤。発明の詳細な説明定義:冠状血管系疾患/心脈管系疾患CVDは当分野におけるその一般的意味を有し、心臓、心臓弁、血液、及び身体の血管系に影響を与える多数の症状CADを含むを分類するために用いられる。本発明では、CVD及びCADという用語は互換的に用いることができる。心脈管系疾患には内皮機能不全、冠状動脈疾患、狭心症、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、うっ血性心不全、高血圧、脳血管疾患、卒中、一過性虚血性発作、深部静脈血栓症、末梢動脈疾患、心筋症、不整脈、大動脈狭窄症及び動脈瘤が含まれる。そのような疾患はしばしばアテローム性動脈硬化症を巻き込む。本発明の好ましい実施態様では、心脈管系疾患はアテローム性動脈硬化症関連心脈管系疾患である。CADは冠状動脈疾患であり、AMIは急性心筋梗塞であり、ACSは急性冠状動脈症候群であり、CACは冠状動脈カルシウム沈着であり、RCTは逆コレステロール輸送であり、LDLは低密度リポタンパク質であり、HDLは高密度リポタンパク質であり、LDLCは低密度リポタンパク質コレステロールであり、HDLCは高密度リポタンパク質コレステロールであり、アポAはアポリポタンパク質Aであり、アポBはアポリポタンパク質Bであり、アポCはアポリポタンパク質Cであり、MSは質量分析であり、HPLCは高速液体クロマトグラフィーであり、UPLCは超高速液体クロマトグラフィーである。本明細書で用いられるように、対象者には全ての哺乳動物が含まれるヒトを含むが非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ及びげっ歯類ただし前記に限定されないもまた含まれる。サンプルは、1人の対象者又は対象者のグループ若しくは集団から入手される任意の生物学的サンプルと規定される。本発明の目的のためには、生物学的サンプルは全血、血清、又は血漿であり得る。前記はまた組織サンプルでもよい。しかしながら、好ましい実施態様は、生物学的サンプルが血漿又は血清である実施態様である。患者の血液サンプルを採取することは通常の臨床行為の一部である。血液サンプルは、例えば患者のコレステロールレベルの測定の関連で採取できる。収集血液サンプルを調製し、血清または血漿を当業者に周知の技術で分離することができる。静脈血サンプルは、注射針及びBDバキュテイナーVacutainerプラスチックチューブ又はバキュテイナープラスプラスチックチューブBDVacutainerSSTTMチューブはスプレー被覆シリア及びポリマーゲルを血清分離のために含んでいるを用いて患者から収集することができる。血清は室温で10分間1300RCFの遠心分離によって分離し、小さなプラスチックチューブにて80°Cで保存することができる。本発明の目的のためには、リピドーム分析の脂質は以下の用語体系にしたがって名付けられる:CEはコレステロールエステル、Cerはセラミド、DAGはジアシルグリセロール、PCOはエーテル結合PC、GDはジシアロガングリオシド、GlcCerはガラクトシル及びグルコシルセラミド、GMはモノシアロガングリオシド、LacCerはラクトシルセラミド、LPCはリゾホスファチジルコリン、PCはホスファチジルコリン、PEはホスファチジルエタノールアミン、PIはホスファチジルイノシトール、SMはスフィンゴミエリン、S1Pはスフィンゴシン1ホスフェートである。用語XYは以下を示す:Xは分子の脂肪酸部分の総炭素原子数、及びYは分子の脂肪酸部分の二重結合の数である。用語ABは、DAG及びPCの分子について、当該分子のグリセロール骨格と結合した脂肪酸部分のA及びB型を示す。用語dCAは、Cer、GlcCer、LacCer及びSMの分子について、Cは、アミド結合したA、脂肪酸部分を有する長鎖ベースの型Cを示す。本明細書で用いられるコントロールサンプルと比較してという語句は、コントロールサンプルが、問題のリピドームマーカーに関してすなわち1つ以上の脂質の濃度、脂質脂質比又は脂質臨床濃度比又は前記の組合せに関して本発明の多様な特徴及び実施態様と関連して本明細書に特に記載したように実際に分析される実施態様を含むと理解されよう。しかしながら、上記の語句はまた、前記コントロールサンプルの前記リピドームマーカーに関する対応情報が単に文献から採用されているか、又は以前に決定、計算又は推論されているか、未だ決定、計算又は推論されていない実施態様も含むことは理解されよう。本明細書で用いられるように、抗体という用語にはモノクローナル及びポリクローナル抗体、全抗体、抗体フラグメント、及び前記脂質と特異的結合を示す抗体サブフラグメントが含まれる。したがって、適切な抗体は任意のクラスの完全な免疫グロブリン例えばIgG、IgM、IgA、IgD、IgE、二重又は多重抗原若しくはエピトープ特異性を有するキメラ抗体若しくはハイブリッド抗体、又はフラグメント例えばF2、Fab’、Fabなどハイブリッドフラグメントを含むであり得る。前記には、さらにまた任意の免疫グロブリン又は任意の天然、合成若しくは遺伝的操作タンパク質特異的抗原と結合して複合体を形成することによって抗体のように機能するが含まれる。抗体という用語は、抗体の抗原結合フラグメント例えば単鎖抗体、Fabフラグメント、F2、Fdフラグメント、Fvフラグメント及びdAbフラグメントを完全な抗体と同様に包含する。例えば、Fab分子は、遺伝的に形質転換した大腸菌EColiのような宿主で発現させてアッセンブリングすることができる。ラムダベクター系は、したがってその前に存在した抗体を生成する該当物の潜在的多様性と等価であるか又はそれを超える潜在的多様性を有するFab’の集団を発現させるために利用することができる以下を参照されたい:HuseWDetalScience1989246127581。そのようなFab’は抗体の定義に含まれる。抗体のように機能し、特異的抗原と特異的に結合するある分子抗体フラグメント又はサブフラグメントを含むの能力は、例えば結合パートナーとして問題の抗原を用いて、当分野で公知の結合アッセイによって決定することができる。本発明の脂質に対する抗体は当業者に周知の方法で調製することができる。例えばマウスをアジュバントとともに脂質で免疫することができる。2週間間隔で3回免疫を実施し、1週おきに血清の抗体力価について検査採血を実施したマウスから脾臓細胞をプールとして採集する。脾臓細胞は3つのアリコットとして調製し、それらを融合実験に直ちに使用するか、又は将来の融合に使用するために液体窒素で保存する。続いて文献StewartFullerJImmunolMethods19891234553の方法にしたがって融合実験を実施する。モノクローナル抗体MAb分泌物について、前記脂質で被覆した96ウェルのELISAプレートで酵素結合免疫吸着アッセイELISAによって、ハイブリッドが増殖しているウェルの上清をスクリーニングする。ELISA陽性培養を制限希釈によってクローニングし、典型的には2回の連続クローニング実験後に単一コロニーから樹立されたハイブリドーマが得られる。材料と方法この試験は、心脈管系疾患の疫学に関する大規模予想試験であるLURIC調査の部分コホートである。LURICデータベースは、3000人を超える患者の臨床情報基準時冠状動脈血管造影を含む、臨床的に用いられるバイオマーカーデータ及び例えば追跡期間3年間の間のCVD死亡率データもまた含んでいる。このバイオマーカー試験では、本発明者らは、CVDのために追跡中に死亡したCAD症例n=62を安定的なCADを示す患者n=173と比較した。血管造影写真で有意なアテローム性動脈硬化症レベルを示すが追跡中にCVD関連死を示さなかった対象者をコントロールとして用いたが、一方、前記症例グループは基準時に血管造影により同様に有意なアテローム性動脈硬化症を示し、さらに急性心脈管系事象のために追跡中に死亡した。統計解析は、スタチンで治療されなかった症例n=48及びコントロールn=128でも別個に実施した。臨床に関する特徴は表1に記載される。表1:リピドミクスにより解析したLURIC患者の背景特徴症例の定義:全ての症例が、冠状動脈血管造影で有意な血管の異常>=20狭窄を示し、全員が追跡中にCVDのために死亡した。コントロールの定義:全てのコントロールが冠状動脈血管造影で有意な血管の異常>=20狭窄を示したが、追跡調査中にCVDのために死亡することはなかった。分析方法質量分析によるリピドミクス:縦列質量分析と一組みにした直接注入すなわちショットガンリピドミクス及び2つの液体クロマトグラフィー縦列質量分析LCMSMSアプローチすなわちセラミド及びセレブロシドのリピドミクス並びにガングリオシドのリピドミクスを用い、ヒト血清、血漿及び頸動脈斑で分子性脂質種を分析することによって、冠状動脈疾患CVDリスクの脂質バイオマーカーを同定した。利用した方法は特に以下の定量のために最適化した:分子性コレステリルエステルCE、ホスファチジルコリンPC、リゾホスファチジルコリンLPC及び他のリゾリン脂質LPL、エーテル結合ホスファチジルコリンPCO及び他のエーテル結合リン脂質PLO、ホスファチジルセリンPS、ホスファチジルエタノールアミンPE、ホスファチジルグリセロールPG、ホスファチジルイノシトールPI、ホスファチジン酸PA、ジアシルグリセロールDAG、セラミドCer、グルコシルセラミドGlcCer及びラクトシルセラミドLacCer。以下の物質を本方法にしたがって用いた。HPLC又はLCMS等級のクロロホルム、メタノール、水、アセトニトリル、ギ酸、メタノール、イソプロパノール、酢酸アンモニウム、酢酸、塩化カリウム、及びブチル化ヒドロキシトルエンBHTはシグマ‐アルドリッチStLouisMOUSAから購入した。HPLCカラムAcquityBEHC18、21x50mm、内径17μmはウォータースWaters;MilfordMAUSAから購入した。HPLCプレカラムWideporeC18、4x20mmはフェノメネクスPhenomenex;TorranceCAUSAから購入した。抽出に用いた全ての実験室器具はクロロホルム耐性であった。エーロゾル耐性フィルターチップMolecularBioProducts、並びにエッペンドルフの2mLセーフロックチューブ、96ウェルツィンテクtwintecPCRプレート、及びピアスイットライトPierceitliteサーモシーリングフォイルはVWRインターナショナルVWRInternational;WestChesterPAUSAから購入した。COREフィルターチップ及び96ウェルの2mLワットマンユニプレートはハミルトンロボティクスHamiltonRobotics;BonaduzSwitzerlandから購入した。合成脂質標準物はアバンチポラーリピドAvantiPolarLipids;AlabasterALUSA及びマトレヤMatreya;PleasantGapPAUSAから購入した。脂質は以下のプロトコルにしたがってクロロホルム:メタノールで抽出した。データの標準化及び内因性脂質定量のために、既知量の非内在性合成内部標準物でサンプルをスパイクした。ショットガンリピドミクス分析では;LPC170、PC170170、PA170170、PE170170、PG170170、PS170170、DAG170170、D6CE180、セラミド及びセレブロシドのリピドミクスでは;Cerd181170、D3LacCerd181160及びD3GlcCerd181160を内部標準物として用いた。抽出後にスパイクした非内在性合成外部標準物を定量コントロールのために用いた。標準物のストック溶液は、適切に秤量した各標準物をクロロホルム:メタノール2:1v:vに溶解して調製し、最終濃度500μMを得た。標準物ストックの各々を含む内部標準混合物を作製し脂質抽出で用いた。サンプル及び各抽出バッチのための品質コントロールサンプルを氷上で融解した。クリオボックスを用いて頸動脈斑サンプルを氷上で秤量し、水に70の氷冷メタノール中で均質化した。ミキサーミル301テフロンアダプターは20°Cに維持した。均質化はミキサーミル301RetchGmbHGermanyで2-15分間、15-25Hzで実施した。ヒトサンプルの脂質抽出は、ハミルトンHamiltonMICROLASTAR系を用い自動化態様で実施した。よく混合したサンプルを、氷冷メタノール及び01BHTを含む96ウェル2mLワットマンユニプレートに分注した。5μLの血清及び血漿、並びに30μLの頸動脈斑をショットガンリピドミクス並びにセラミド及びセレブロシドのリピドミクスのために用い、さらに100μLの血清及び血漿、並びに200μLの頸動脈斑をガングリオシドのリピドミクスのために用いた。抽出プロトコルの各工程後のサンプルを十分に混合した。抽出は、適切な体積の内部標準混合物及びクロロホルムを、さらにガングリオシドのリピドミクスの場合にはメタノール及び水を添加することによって室温で進行させた。ショットガンリピドミクス並びにセラミド及びセレブロシドのリピドミクスでは、有機相分離は、20mMの酢酸の添加及び500xgで5分間の遠心分離によって促進した。有機相を新しい96ウェル2mLワットマンユニプレートに移した。残りの水含有相は適切な体積のクロロホルムを加え続いて遠心分離することによって洗浄した。前記2つの有機相をプールし、N2下で乾燥するまで蒸発させた。続いて、合成外部標準物を含むクロロホルム:メタノール1:2v:vに脂質抽出物を再溶解した。ガングリオシドのリピドミクスでは、十分に混合してから30分間2000xgで遠心分離した後上清を収集した。残りのペレットを適切な体積の水及びクロロホルム:メタノール1:2v:vで再抽出し、上記と同じ方法で上清を収集した。水を添加しサンプルチューブを逆さまにして、プールした上清を溶媒分配に付した。30分間2000xgで遠心分離した後上部相を収集した。下部相は塩化カリウムで十分に再抽出し、生じた上部相を上記に記載したように収集した。上部相をプールし、N2下で乾燥するまで蒸発させた。続いて前記脂質抽出物をクロロホルム:メタノール1:2v:vに再溶解した。MS分析の前に前記抽出物を20°Cにて2mLセーフロックエッペンドルフチューブで保存した。必要な体積の脂質抽出物をエッペンドルフ96ウェルツィンテクPCRプレートに分注し、前記プレートをアルミホイルでヒートシールして蒸発を防いだ。ショットガンリピドミクスでは、脂質抽出物は、自動ナノフローイオン源NanoMateHDAdvionBiosciencesを装備したハイブリッド三重四極子線状イオントラップhybridtriplequadrupolelineariontrap質量分析計QTRAP5500ABSciexにより分析した。前記装置は陽イオン及び陰イオンモードで作動させた。陽イオンでは、スプレー電圧は10から14kVに設定し、陰イオンモードでは10から14kVに設定した。ガス圧は03-08psiを用い、インターフェースヒーターは60°Cに設定した。衝突エネルギーCE及び脱クラスターポテンシャルDPは、合成標準物を用いて各脂質クラスについて最適化した。質量分析計は、スキャン速度200Dasを用いてユニット解析モードで作動させた。分子性脂質は、多重前駆体イオンスキャンニングMPIS及びニュートラルロススキャンニングNLSを用い陽イオン及び陰イオンモードの両方で分析した。用いた前駆体イオン並びに陽性モード及び陰性モードのニュートラルロススキャンは表2に要約される。表2:ショットガンリピドミクスセラミド及びセレブロシドのリピドミクスでは、高速液体クロマトグラフィーHPLC分析を以下の態様で実施した。クロマトグラフィーの装置は以下から成っていた:CTCHTCPALオートサンプラーCTCAnalyticsAGSwitzerland、レオスアレグロRheosAllegroUHPLCポンプFluxInstrumentsAGSwitzerland、外部カラムヒーターセラミド及びセレブロシドのリピドミクスのためには60°C、ガングリオシドのリピドミクスのためには45°Cに設定、及びインラインプレカラム付きアクィティAcquityBEHC18カラム。各々10μLの抽出サンプルを分析用カラムが続くプレカラムに注入し、質量分析計に流速500μL分でデリバーした。セラミド及びセレブロシドリピドミクスでは、脂質分析物の分離には溶媒A01ギ酸を含むHPLC等級の水に10mMの酢酸アンモニウムを含む及び溶媒B01のギ酸を含むアセトニトリル:イソプロパノール43v:v中の10mM酢酸アンモニウムによるグラディエントを用いた。グラディエントは以下の態様で構築した:0分-65B;2分-65B25分-75B;175分-100B;225分-100B;226分-65B;25分-65B。脂質抽出物はHPLCMSMSにより分析した。MS分析は、ターボVTMイオン源4000QTRAPABSciexを装備したハイブリッド三重四極子線状イオントラップ質量分析計で実施した。装置は陽性イオン及び陰性イオンモードで作動させた。イオン源電圧は、セラミド及びセレブロシドのリピドミクスについては5500Vに、ガングリオシドのリピドミクスについては4500Vに設定し、さらに供給源温度は400°Cに設定した。衝突エネルギーCE及び脱クラスターポテンシャルDPは、合成標準物を用いて各脂質クラスについて最適化した。各スキャンについて20秒の残存dwell時間を用いた。多重反応モニタリングMRMスキャンモードを用いた。各脂質種のMRM遷移は表3に要約される。表3:セラミド及びセレブロシドのリピドミクスデータ処理は以下の態様で実施した。内在性標準物を用い、さらに利用可能な場合は情報依存獲得InformationDependentAcquisitionIDA実験によって、まず初めに保持時間LCモード及び各ピークの同定を実施した。未加工データを自動化態様で検出されたピークおよび保持時間LC態様にしたがって処理した。実際の脂質ピークからバックグラウンドノイズを分離するために厳格なカットオフを用いた。各サンプルを管理し、厳格な許容基準を満たすときのみ受け入れた。検出ピークのピーク面積カウントcpsを対応する脂質名のリストに転換した。脂質はそれらの対応する内部標準物並びにサンプル体積又は組織重量に対して標準化し、それらの濃度を回収した。いくつかの品質コントロールをリピドミクス分析で用いた。合成または単離標準物を用いた検度線はサンプルの分析前に得た。合成標準物は用途に応じて選択し、内在性脂質又は問題の分析物質と同様な特性を有していた。検度線は、予想される定量範囲をカバーする、最小限5つの標準物点から成っていた。標準物無しで抽出したサンプル及びマトリックス無しで抽出した標準物を検度線と一緒に加えた。検度線を用いて、モニターされる各脂質クラスについて動力学的定量範囲、例えば直線的定量限界を決定した。用いた内部標準物が内在性脂質と同じ態様で反応するとき、それらを内在性脂質種の定量に用いた。検度線は、内在性脂質の定量に用いた同じ内部標準物を基準にした。脂質を抽出した各サンプルで、合成内部標準物ISと対応する抽出後スパイクした外部標準物ESとの比を決定した。内部標準物と外部標準物とのピーク面積cps比ISESを、全サンプルに対する変動係数CVの計算に用いた。ISES比は脂質抽出回収の計算を可能にした。装置コントロールICは各試験の最初、中間点及び最後に加えた。分析されるICサンプルは、装置の性能をモニターするためすなわちアッセイ内及びアッセイ間変動をモニターするために抽出される参照血漿及び標準物セットであった。各プラットフォームについて、厳格なカットオフを実際の脂質ピークからバックグラウンドノイズを分離するために用いた。各サンプルを管理し、厳格な許容基準を満たしたときのみ受け入れた。検出されたピークの質量およびカウントを対応する脂質名のリストに転換した。脂質をそれらの対応する内部標準物及びサンプル体積に対して標準化し、それらの濃度を回収した。統計解析:コントロール群と症例群との間の脂質濃度の百分率変動は以下のように計算した:100xコントロール群のABGC統計的有意は標準的なt検定のp値を基準にして割り当てた。さらにまた、最良の症例をコントロールから分離する脂質分子及び濃度カットオフを見つけるためにROC曲線を用いた。選択性は、症例総数で割った正しく特定された症例数として算出される。特異性は、コントロール総数によって割った正しく特定されたコントロール数として算出される。選択性及び特異性は、各脂質濃度、脂質対脂質比及び脂質対臨床濃度比について計算した。倫理:LURIC調査は、LandesarztekammerRheinlandPfalzMainzGermanyの倫理管理委員会により承認された。書面によるインフォームドコンセントが各参加者から得られた。結果:このLURIC調査の部分コホートでは、LDLコレステロール及びHDLコレステロール濃度を含む古くから用いられているバイオマーカーは両グループで実質的に同一であり、したがってこの試験ではCVD関連死亡率に関して予測性ではなかった。多くのリピドームマーカーがCVD死の重要な予測因子であるように思われた表4-13。合計151の分子性脂質を定量した。重要な予測因子を、利用可能な時には各カテゴリーから最上位50の候補物質を基準にして選択した。分子性脂質濃度を基準にしてバイオマーカー候補物質を表4、7、10及び13に提示する。候補物質は以下の基準にしたがって選択した:t検定のp値<=005又は感度=>60及び特異性=>70。古くから用いられている臨床化学から、アポリポタンパク質A1及び総コレステロールだけが、p値が005より低く統計的有意に達したが、変動はコントロールと症例の間で10未満であり、他の臨床値は全く統計的有意を示さなかった。新規なリピドームバイオマーカーの予測値は、それらのレベルが別個の脂質脂質比又は脂質臨床比として表されるときに増加した例えばLDLC又はHDLC。上位バイオマーカー候補物質は表13に提示される。利用可能な時には、各カテゴリーから上位の候補物質を以下の選択基準により選択した:t検定のp値<=005並びに感度=>60及び特異性=>70。詳細な分子性脂質解析の重要性質量分析による脂質解析の最近の進展は、臨床コホートの解析に要求される高い処理能力及び高品質で複雑なリピドームをそれらの分子性脂質種レベルにまで分解することを可能にした。この方法の高い感度及び特異性の結果として、わずかなサンプル量のリピドーム全体の解析が実行可能になった。本技術は種々の総量組成を有する脂質を同定することができるがすなわちホスファチジルコリンPC341、より重要なことは、分子性脂質種の同定である例えばPC160181。後者の分析では、脂肪酸のタイプ及び個々のPC分子を構成するグルセロール骨格と結合するそれらに位置に関する情報が得られる。極めて洗練された実験によって、シンザワイトーと共同研究者のセミナー研究は、チトクロームcオキシダーゼにおける酸素転移メカニズムは、グリセロール骨格のそれぞれsn1及びsn2位にパルミチン酸及びバクセン酸を有する特異的なホスファチジルグリセロール分子性脂質を要求することを示したShinzawaItohKAoyamaHMuramotoKetalStructuresandphysiologicalrolesof13integrallipidsofbovineheartcytochromecoxidaseEMBOJ20072617131725。他の研究とも一致して、前記の研究は、脂質構造が生物学的作用の必須の決定因子であることを疑う余地なく示している。したがって、分子性リピドミクスはバイオマーカー発見に必須である。図1は、2つのPC及びLacCer分子のバイオマーカーとしての価値を比較することによって、LURICコホートにおけるCVD死亡率の予測で分子性脂質データの重要性を示している。当該データは、LacCerは重要なCVD予測因子であるが、LacCerはバイオマーカーとして低い潜在能力しか持たないことを明らかにした。さらにまた、2つのPC分子、PC及びPCはCVD合併症に対して反対ですらある作用を有する。したがって、問題の脂質クラスについて常に全ての脂質種を同定及び定量することが必要である前記クラスにはコレステロールエステル、種々のリン脂質クラス、セラミド、セレブロシドラクトシルセラミド、グリコシルセラミド及びガングリオシドが含まれるが、ただしこれらに限定されない。表4:p値によって分類したLURIC調査の有意な脂質。負の相関関係について脂質名、p値及び変動が提示される。表4aは全ての調査対象者から得られた有意な脂質を示す。スタチン治療を受けていない対象者の有意な脂質は表4bに列挙される。4aLURIC調査でp値により分類した全調査対象者の有意な脂質4bLURIC調査でp値により分類したスタチン治療非実施対象者の有意な脂質表5:p値によって分類したLURIC調査の有意な脂質対脂質比。正及び負の相関関係の両方について脂質名、p値及び変動が提示される。表5aは全ての調査対象者から得られた有意な脂質を示す。スタチン治療を受けていない対象者の有意な脂質は表5bに列挙される。5aLURIC調査でp値により分類した全調査対象者の有意な脂質対脂質比5bLURIC調査でp値により分類したスタチン治療非実施対象者の有意な脂質対脂質比表6:p値によって分類したLURIC調査の有意な脂質対臨床比。正及び負の相関関係の両方について脂質名及び臨床測定、p値及びパーセンテージ変動が提示される。表6aは全ての調査対象者から得られた有意な脂質を示す。スタチン治療を受けていない対象者の有意な脂質は表6bに列挙される。6aLURIC調査でp値により分類した全調査対象者の有意な脂質対臨床比6bLURIC調査でp値により分類したスタチン治療非実施対象者の有意な脂質対臨床比測定される脂質のバイオマーカーとして能力はまた、各脂質の感度及び特異性の値並びに他の脂質又はこれまでのバイオマーカー例えばLDLC及びアポリポタンパク質に対するそれらの比率を計算することによって判定した。このROC曲線解析は、CVD合併症の予測について60を超えるか、60に等しい感度及び特異性を有する多数のバイオマーカー候補を明らかにした表7-9。表7:上位の感度及び特異性によって分類したLURIC調査の有意な脂質表7aは全ての調査対象者から得られた有意な脂質を示す。スタチン治療を受けていない対象者の有意な脂質は表7bに列挙される。7aLURIC調査で上位の感度及び特異性によって分類した全調査対象者の有意な脂質7bLURIC調査で上位の感度及び特異性によって分類したスタチン治療非実施対象者の有意な脂質表8:上位の感度及び特異性によって分類したLURIC調査の有意な脂質対脂質比の表表8aは全ての調査対象者から得られた有意な脂質を示す。スタチン治療を受けていない対象者の有意な脂質は表8bに列挙される。8aLURIC調査で上位の感度及び特異性によって分類した全調査対象者の有意な脂質対脂質比8bLURIC調査で上位の感度及び特異性によって分類したスタチン治療非実施対象者の有意な脂質対脂質比表9:上位の感度及び特異性によって分類したLURIC調査の有意な脂質対臨床比の表表9aは全ての調査対象者から得られた有意な脂質を示す。スタチン治療を受けていない対象者の有意な脂質は表9bに列挙される。9aLURIC調査で上位の感度及び特異性によって分類した全調査対象者の有意な脂質対臨床比の表9bLURIC調査で上位の感度及び特異性によって分類したスタチン治療非実施対象者の有意な脂質対臨床比本発明の好ましい脂質分子は以下のように選択された:a生物学的な意義を有する蓋然性が高かったこと、b好ましくは同様な態様を示す脂質ファミリーに属すること、c意義がありかつ測定可能な濃度で発現されること、d非常に有意なp値及び良好なAUC値>065を有し、さらに大半のものについては変動が実質的>20であること、及びe種々の検査で有意であるように思われたこと。約15の脂質又は脂質比それぞれ正又は負の相関関係を有するが、主観的に全脂質クラスの偏りのない提示を担保しつつ、最高のp値並びに最良の感度及び特異性を基準に選択された。感度及び特異性の閾値については、それぞれの閾値が60及び70に達した場合には注記を付した。好ましい実施態様の脂質、脂質脂質比及び脂質臨床比は表10-13に提示される。表10:LURICサンプルセットから検出された有意な脂質から選択された好ましい実施態様の脂質表11:LURICサンプルセットから検出された有意な脂質対脂質比から選択された好ましい実施態様表12:LURICサンプルセットの有意な脂質対臨床比から選択された好ましい実施態様表13:各カテゴリー利用可能な場合の上位候補を列挙する。最良の候補を以下の基準により選択した:t検定のp値<=005及び感度>=60及び特異性>=60リピドーム解析は、CVD合併症のための新規な血漿バイオマーカーの同定に有効であることが証明された。分子性脂質対分子性脂質比は、細胞脂質代謝脂質代謝経路の酵素活性を含むの重要な指標であり得る。したがって、これらの比は、分子性脂質単独の絶対的血漿濃度としてより多くの情報を提供することができる。健康な個体とアテローム性動脈硬化症患者との間の分子性脂質の絶対的血漿濃度の相違は一般的に30から70であるように思われるので、絶対的濃度単独の代わりに種々の比を計算し利用することは合理的であるかもしれない。リポタンパク質粒子例えばLDL、HDL及びVLDLは血流中の大半の脂質の担体として機能しているので、分子性脂質の濃度とリポタンパク質データの関係を知ることは適切である。したがって、分子性脂質対HDLコレステロール、LDLコレステロール、アポリポタンパク質AI及びアポリポタンパク質B比を計算した。実際、CVD患者の疾患マーカーとして、種々の分子性脂質の濃度との間の多数の比が絶対的血漿濃度よりも優れた性能を示した。検出された脂質はリポタンパク質粒子LDL、VLDL及びHDLで運ばれるので、対応するリポタンパク質分画の濃度は、全血清血漿サンプルにおける本調査の結果から得られた分子性脂質の予測潜在能力の改善すらもたらすであろう。薬剤の有効性を低下させる脂質はこれまでのところLDLC及びHDLCアッセイを基準にしていた。本発明者らは、これらの古典的分析よりも良好にCVD合併症の高リスク発症を予測する、より潜在能力の高いバイオマーカーを認めたので、更なる薬剤有効性プロファイリングは新規で感度が高く特異的なバイオマーカーを基準にすべきである。前記バイオマーカーは、LDLCよりも重症CVD関連合併症のリスクとより直接的に関係する。当業者は、単なる日常的実験を用いて、本明細書実施例及び本特許明細書全体の主要部分の両方に記載した具体的な実施態様と等価である多数の物を認識及び確認することができよう。そのような等価物は本発明の範囲内であると考えられ、以下の特許請求の範囲に転換される。