"アミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬であって、有効成分として核タンパク質を含む予防改善薬。前記神経変性疾患の予防改善が、前記核タンパク質によるアミロイドβペプチド線維の形成阻害及び/又は中脳黒質のドーパミン神経の脱落の抑制によるものである請求項1記載の予防改善薬。前記神経変性疾患がアルツハイマー病である請求項1又は2記載の予防改善薬。前記神経変性疾患がパーキンソン病である請求項1又は2記載の予防改善薬。前記核タンパク質がヌクレオプロタミンである請求項1ないし4の何れか1項に記載の予防改善薬。前記ヌクレオプロタミンが鮭の白子由来のものである請求項5記載の予防改善薬。本発明は、アミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬の提供を課題とする。本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、核タンパク質が、アミロイドβペプチド線維の形成を阻害し、且つ、中脳黒質のドーパミン神経の脱落を抑制することを見出し、これにより、有効成分として核タンパク質を含む薬剤が、アミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善において有効であることを確認して本発明を完成させた。即ち、本発明は、1アミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬であって、有効成分として核タンパク質を含む予防改善薬、2前記神経変性疾患の予防改善が、前記核タンパク質によるアミロイドβペプチド線維の形成阻害及び/又は中脳黒質のドーパミン神経の脱落の抑制によるものである前記1記載の予防改善薬、3前記神経変性疾患がアルツハイマー病である前記1又は2記載の予防改善薬、4前記神経変性疾患がパーキンソン病である前記1又は2記載の予防改善薬、5前記核タンパク質がヌクレオプロタミンである前記1ないし4の何れか1つに記載の予防改善薬、6前記ヌクレオプロタミンが鮭の白子由来のものである前記5記載の予防改善薬、に関する。本発明により、アミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬が提供される。本発明者等は、今回、試験管内の研究において核タンパク質がアミロイド線維の形成を低下することを見出した。アミロイド線維は、タンパク質が規則的に会合することで形成されるタンパク質凝集体であり、規則的な繰り返し構造を形成することを特徴とする。アミロイド線維は、タンパク質の配列特異的な相互作用による、規則的な会合により形成されると考えられている。本研究によるアミロイド線維の形成抑制には大別して2つの機構すなわち凝集の遅延抑制もしくは凝集したアミロイド線維の解離分解促進である。本研究で用いたアミロイド形成タンパク質であるAβは、形成するアミロイド線維の詳細な構造解析がなされている例えば、LuhrsTRitterCAdrianMRiekLoherDBohrmannBDobeliHSchubertDandRiekR3DstructureofAlzheimersamyloidbetafibrilsProcNatlAcadSciUSA102173427頁参照。。Aβの線維形成に重要と考えられている相互作用の一つに、23番目のアスパラギン酸残基と、隣接するAβ分子の28番目のリジン残基の間の静電相互作用による会合が挙げられる。核タンパク質を構成するタンパク質はAβ分子の28番目のリジン残基と同様の正電荷に富むアミノ酸残基を豊富に有しており、さらに、DNAは電気的極性を示す塩基を含んでいる。よって、核タンパク質は、このような特異な構造を有することにより、その構造体部分構造が、Aβ分子間の会合部に入り込み、競合もしくは阻害したのではないかと考えられる。そして、その結果、Aβが規則的なアミロイド線維構造を構築することが不可能になり、アミロイド線維形成が抑制されたものと考察される。更に詳細に本発明を説明する。本発明のアミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬は、有効成分として核タンパク質を含むことを特徴とする。病態時に難溶性のタンパク質凝集体の形成アミロイド線維形成を伴う疾患は多数報告されており、また、アミロイド線維形成に関与するタンパク質は現在30種類以上報告されているが、これらのアミロイド線維を形成するタンパク質と該タンパク質によるアミロイド線維形成が原因となる疾患を以下の表1及び表2に纏めた。上記で示される疾患の中で、パーキンソン病、アルツハイマー病やハンチントン舞踏病など多くは神経系にアミロイド線維形成が認められ、神経細胞死を伴う神経変性疾患であるが、筋萎縮性側索硬化症や臓器アミロイドーシスのように筋肉や血管および全身性の臓器組織にアミロイド線維形成が認められる疾患も報告されている。従って、本発明の予防改善薬の対象となる疾患は、上記で示される全ての疾患を含むものである。また、本発明の予防改善薬の対象となる疾患としては、特に、アルツハイマー病が挙げられ、また、パーキンソン病が挙げられる。本発明の予防改善薬に有効成分として含まれる核タンパク質とは、タンパク質がリボ核酸に結合した複合体を意味し、該タンパク質としては、リボ核酸と結合し得る正荷電に富むタンパク質が挙げられる。具体的な核タンパク質としては、正荷電に富むタンパク質、例えば、ポリリシン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ヒストン、アビジンおよびプロタミン等がリボ核酸に結合した複合体が挙げられる。好ましくは、プロタミンがリボ核酸に結合した、ヌクレオプロタミンが挙げられる。上記ヌクレオプロタミンとしては、魚貝類の精巣白子から得られるヌクレオプロタミンが好ましく、鮭の白子から得られるヌクレオプロタミンがより好ましい。上記核タンパク質は、例えば、核タンパク質を多く含む魚貝類の精巣白子から抽出精製等の操作を行うことにより入手することができる。例えば、鮭由来の核タンパク質であるヌクレオプロタミンは、鮭白子をエタノールで洗浄して粉砕し、固液分離して固形分を採取し、滅菌し、乾燥し、粉砕した後、篩にかけることにより、粉末状の物質として得ることができる。また、上記のような天然由来のもののみに限らず、上述の正荷電に富むタンパク質とリボ核酸とを、公知の方法により結合させて複合体とすることによっても製造することができる。また、核タンパク質は、市販品を使用することもできる。本発明のアミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬の投与形態としては、注射剤皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内注射、軟膏剤、坐剤、エアゾール剤等による非経口投与又は錠剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、シロップ剤、液剤、乳剤、懸濁液剤等による経口投与をあげることができる。本発明のアミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬は、全組成物の質量に対して、有効成分である核タンパク質を約001~995質量、好ましくは、約01~30質量を含有する。本発明のアミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬は、有効成分である核タンパク質に加えて、他の医薬的に又は獣医薬的に活性な化合物を含ませることもできる。本発明のアミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬に含まれる核タンパク質の臨床的投与量は、年令、体重、患者の感受性、症状の程度等により異なるが、通常効果的な投与量は、成人一日0001~50g、好ましくは、05~25g程度である。しかし必要により上記の範囲外の量を用いることもできる。本発明のアミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬は、製薬の慣用手段によって投与用に製剤化される。即ち、経口投与用の錠剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤は、賦形剤、例えば白糖、乳糖、ブドウ糖、でんぷん、マンニット;結合剤、例えばヒドロキシプロピルセルロース、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビット、トラガント、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン;崩壊剤、例えばでんぷん、カルボキシメチルセルロース又はそのカルシウム塩、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール;滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸マグネシウム又はカルシウム、シリカ;潤滑剤、例えばラウリル酸ナトリウム、グリセロール等を使用して調製される。注射剤、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤及びエアゾール剤は、活性成分の溶剤、例えば水、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、プロピレングリコール、13-ブチレングリコール、ポリエチレングリコール;界面活性剤、例えばソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、水素添加ヒマシ油のポリオキシエチレンエーテル、レシチン;懸濁剤、例えばカルボキシメチルナトリウム塩、メチルセルロース等のセルロース誘導体、トラガント、アラビアゴム等の天然ゴム類;保存剤、例えばパラオキシ安息香酸のエステル、塩化ベンザルコニウム、ソルビン酸塩等を使用して調製される。経皮吸収型製剤である軟膏には、例えば白色ワセリン、流動パラフィン、高級アルコール、マクロゴール軟膏、親水軟膏、水性ゲル基剤等が用いられる。坐剤は、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコール、ラノリン、脂肪酸トリグリセライド、ココナット油、ポリソルベート等を使用して調製される。本発明のアミロイド線維の形成を伴う神経変性疾患の予防改善薬の製剤例を以下に示す。製剤例1錠剤核タンパク質20g乳糖260g微結晶セルロース600gコーンスターチ350gヒドロキシプロピルセルロース100gCMC-Ca140gステアリン酸マグネシウム30g全量1,500g上記成分を常法により混合したのち1錠中に1mgの活性成分を含有する糖衣錠10,000錠を製造する。製剤例2カプセル剤核タンパク質20g乳糖430g微結晶セルロース1,000gステアリン酸マグネシウム50g全量1,500g上記成分を常法により混合したのちゼラチンカプセルに充填し、1カプセル中に1mgの活性成分を含有するカプセル剤10,000カプセルを製造する。製剤例3軟カプセル剤核タンパク質25gPEG400464g飽和脂肪酸トリグリセライド1,500gハッカ油1gポリソルベート8010g全量2,000g上記成分を混合したのち常法により3号軟ゼラチンカプセルに充填し、1カプセル中に1mgの活性成分を含有する軟カプセル剤10,000カプセルを製造する。製剤例4軟膏核タンパク質1.0g流動パラフィン10.0gセタノール20.0g白色ワセリン68.4gエチルパラベン0.1gl-メントール0.5g全量100.0g上記成分を常法により混合し、1軟膏とする。製剤例5坐剤核タンパク質1gウィッテップゾールH15478gウィッテップゾールW35520gボリソルベート801g全量1,000gトリグリセライド系化合物の商標名ウィッテップゾール=Witepsol上記成分を常法により溶融混合し、坐剤コンテナーに注ぎ冷却固化して1mgの活性成分を含有する1g坐剤1,000個を製造する。製剤例6注射剤核タンパク質1mg注射用蒸留水5mL用時、溶解して用いる。製造例1:核タンパク質の製造鮭白子をエタノールで洗浄した後、ブレンダーで粉砕した。固液分離して固形分を採取した後、滅菌70°C、30分し、乾燥水分含量7以下した。得られた乾燥物を粉砕した後、40メッシュの篩にかけることにより、核タンパク質ヌクレオプロタミンを得た。尚、得られた核タンパク質の特性は以下の通りであった。外観淡黄色ないし淡褐色粉末粒径40メッシュパスにおい特有臭有り味特有味有りDNA含有量27以上タンパク質含有量50~52水分含有量7以下試験例1:アミロイドβペプチド線維の形成阻害活性の評価1アミロイドβペプチドAβ溶液の調製アミロイドβペプチドAβの凍結乾燥粉末株式会社ペプチド研究所製を、ジメチルスルホキシドに溶解させ、超音波処理によりペプチド凝集体を粉砕した。得られたAβ溶液をリン酸緩衝液10mMPBSで終濃度10μMに希釈し以降の反応に供した。2アミロイドβペプチドAβ線維の形成阻害活性の評価Aβの線維形成量は、アミロイド線維とチオフラビンTの特異的な結合を利用し測定した。チオフラビンTは、アミロイド線維に特徴的な四次構造であるクロスβ構造に結合し蛍光強度が上昇することが知られている。Aβを含む溶液に、チオフラビンT終濃度10μMと種々の濃度の核タンパク質NP溶液もしくは溶媒対照群とを添加混合し、96ウェルマイクロプレートに添加した最終容量200μL。37°Cでインキュベート開始後、20分毎に30時間後までチオフラビンT由来蛍光強度Ex440nm、Em480nmを測定し、Aβ線維形成量の経時変化を調べた。測定した各試料の蛍光強度は、インキュベート開始30時間後における対照群の蛍光強度を100とした際の相対値で表した。実験中、マイクロプレートはフィルムで覆い、インキュベート中の溶液の蒸発を防いだ。尚、データは、平均値±標準偏差で示した。図1に、核タンパク質NP0.6μg/mL▲、6μg/mL▼及び60μg/mL■を添加した際に、どの程度Aβ10μM添加によるアミロイド線維形成○:Noadditiveが抑制されるかを示したグラフを示しn=5、図2に、Aβ10μMのアミロイド線維形成に対する、核タンパク質NP:●の阻害効果の濃度依存性を示すグラフを示した。3結果終濃度10μMのAβとチオフラビンTをインキュベートした結果、チオフラビンT由来蛍光強度の経時的な上昇が観察されたため、この実験条件において、Aβがアミロイド線維を形成したと考えられた。チオフラビンTの蛍光特性は反応溶液中に、核タンパク質を単独で加えても顕著な影響はなかった。次に、Aβの線維形成に対する核タンパク質の影響を検討した図1。終濃度06、6、60μgmLの核タンパク質を反応溶液中に添加したところ、インキュベート開始30時間後におけるチオフラビンT由来の蛍光強度は、対照群に比べそれぞれ、930±68、838±125、231±79であった図1。核タンパク質によるAβ線維形成阻害効果の濃度依存性を図2にまとめた。終濃度60μgmLの核タンパク質を添加したときに、Aβの線維形成を有意に抑制したp005。本結果は、核タンパク質がAβの線維形成を抑制することを示した。試験例2:パーキンソン病様モデルマウスにおける運動機能評価1パーキンソン病様モデルマウスの作製MPTP1methyl4phenyl1236tetrahydropyridineHClシグマSigma社製セントルイスミズーリ州を、生理食塩水に5mgmlの濃度で溶解した。この溶液を、雄性の野生型C57BL6マウス体重20~30g、8~10週齢に対してMPTP20mgkg体重の投与量になるように、2時間おきに4回腹腔内投与して、パーキンソン病様モデルマウスを作製した。2運動機能評価footfaulttestマウスの運動機能はMPTP投与後7日目にfootfaulttestにより評価した。footfaulttestは、透明なケースの上に、31cm×47cmの金網約15cm四方の目の大きさを乗せ、マウスをこの金網の上に乗せて、5分間自由に歩かせた。観察は金網の下から行い、金網の目に後肢を踏み外した回数と後肢の総歩数をそれぞれ数えた。総歩数に対する金網を踏み外した回数の割合をfootfault率金網を踏み外した回数総歩数として算出した。3運動機能評価の実験スケジュール運動機能評価は図3で示される以下のスケジュールで行った。マウスを無作為に2群に分け、MPTP7日前7日より無核酸餌nonNPもしくは無核酸餌に12核タンパク質を含有させた餌NPを摂取させた。運動機能評価はMPTP投与7日後に行った。実験期間中の各時期について図3中に示した。MPTP投与を基準に0日、その7日前7日から各種餌の摂取を開始した。MPTP投与7日後7日に、マウスの運動機能をfootfaulttestにより評価した。尚、全てのデータは平均値±標準偏差で表した。対照群との有意差の検定は、StudentT検定により行った。p005の場合にその差は有意であるとした。図4に、生理食塩水Saline:○またはMPTP●の投与後7日目におけるマウスのfootfaulttestによる運動機能の評価結果を示すグラフを示し、図5に、MPTP投与により作成されたパーキンソン病様モデルマウスに、無核酸餌nonNP:○を摂取させた群と核タンパク質1.2を含有させた餌NP:●を摂取させた群のMPTP投与後7日目におけるfootfault率を示すグラフを示した。4結果MPTPMPTP投与群または生理食塩水対照群を投与したマウスについて、投与7日後のfootfault率を比較した。その結果、対照群のfootfault率が0035±0009であったのに対し、MPTP投与群のfootfault率は0088±0025であり、MPTP投与群は対照群に比べてfootfault率が有意に高かったp005Studentsttest図4。従ってMPTP投与した動物パーキンソン病様モデルマウスは、運動機能が低下していることが示された。次に核タンパク質のパーキンソン病様症候に与える影響を調べた。無作為に2群に分けたマウスはMPTP投与7日前より無核酸餌nonNP群もしくは無核酸餌に12核タンパク質を添加した餌NP群を与え、実験期間中、実験餌で飼育した。これら動物は、MPTP投与7日後にfootfaulttestを行いfootfault率を算出した図5。nonNP群は0066±0017を示し、上記MPTP群とほぼ同様であった。しかしながら、NP群のfootfault率は0038±0015を示し、nonNP群のfootfault率に比べて有意に低かった[p005Studentsttest]。以上の結果より、核タンパク質の摂取がパーキンソン病様症状である運動機能の低下を抑制していることが示された。試験例3:パーキンソン病様モデルマウスの中脳黒質における組織学的評価1試験方法試験例2で使用したマウスを、MPTP投与後8日目にネンブタールの腹腔内投与50mgkg体重により麻酔し、右心室より生理食塩水を還流し血液を除去した後に10中性緩衝ホルマリン液を還流し組織を固定した。ただちに脳を摘出し、脳は10中性緩衝ホルマリン液で後固定を3日間行った。脳はBregma1mm付近で前額断方向にトリミングを行い、通例の方法に従いパラフィン包埋した。包埋された脳はミクロトームを用い4μmの厚さに薄切した。中脳黒質の領域はbrainmapに従いBregma2mm付近から200μm間隔で6枚の切片を取りだし組織染色に用いた。中脳黒質におけるドーパミン神経はTHTyrosineHydroxylaseの免疫染色により同定した。上記の方法で作製したパラフィン切片は、脱パラフィン処理後免疫組織染色に供した。切片は、03過酸化水素を含むPBSに30min組織を浸漬し、組織中の内因性のペルオキシダーゼを不活化した。PBSで洗浄後、25正常ウマ血清NHSで1時間非特異的反応をブロックするためにインキュベートした。その後、切片は25NHSで2000倍希釈したrabbitantiTHantibodyMilliporeを添加し、一晩4°Cでインキュベートした。PBSで洗浄後、切片は、25NHSで200倍希釈したビオチン修飾されたgoatantirabbitIgGantibodyVector社を添加し、2時間インキュベートした。その後、AvidinBiotin溶液Vector社により60分間インキュベートAvidinBiotinComplex法したのち、33DiaminobenzidineDABによるDAB法により抗原抗体反応を検出した。最後に組織はヘマトキシリン溶液により核を染色し、光学顕微鏡により観察した。TH陽性細胞はTH免疫染色による陽性反応とヘマトキシリン染色による核が共染色された細胞をカウントし、TH陽性細胞数とした。ここで、全てのデータは平均値±標準偏差で表した。対照群との有意差の検定は、StudentT検定により行った。p005の場合にその差は有意であるとした。神経細胞の変性は変性神経細胞に結合する蛍光色素であるFJBによる組織染色により同定した。脱パラフィン処理した切片は、過マンガン酸カリウム液に15min浸漬した。蒸留水で洗浄後、FJB染色液に30min浸漬した。蒸留水で洗浄後、切片は暗所で風乾し、キシレンに浸漬した後、封入した。染色した切片は蛍光顕微鏡下で観察した。図6に、生理食塩水SalineまたはMPTPの投与後8日目におけるマウス中脳黒質近傍のドーパミン神経をTH免疫染色した際の写真生理食塩水Saline:上図、MPTP下図を示し、図7に、その際のTH陽性細胞数を示すグラフ生理食塩水Saline:○、MPTP●を示し、図8に、生理食塩水Saline:上図またはMPTP下図の投与8日後における、マウス中脳黒質近傍のFJBFluoroJadeB染色の典型的な染色像を示す写真を示し、図9に、MPTP投与により作製されたパーキンソン病様モデルマウスに、無核酸餌nonNP:○を摂取させた群と核タンパク質1.2を含有させた餌NP:●を摂取させた群のMPTP投与後8日目におけるマウス中脳黒質近傍のドーパミン神経をTH免疫染色した際の写真無核酸餌を摂取させた群nonNP:上図、核タンパク質1.2を含有させた餌を摂取させた群NP:下図を示し、図10に、その際のTH陽性細胞数を示すグラフを示した。2結果中脳黒質におけるドーパミン神経細胞の数を、MPTP投与群と対照群で比較した。典型的なTHの免疫組織染色像を図6に示し、そのTH陽性細胞数の比較は図7に示した。茶褐色に染色されたTH陽性細胞は、対照群に比べMPTP投与群で低下した。両群のTH陽性細胞数をカウントした結果、対照群のTH陽性細胞数12620±3613に比べMPTP投与群のそれは6984±1445であり、MPTP投与群のTH陽性細胞数は有意に少なかった[p005Studentsttest]。FJB染色により中脳黒質における変性神経細胞調べた図8。その結果、対照群にはFJB陽性細胞は認められなかったが、MPTP投与群には、FJB陽性細胞が認められた。次に、中脳黒質におけるドーパミン神経細胞の数を、nonNP群とNP群で比較した。THの免疫組織染色像は図9に示し、そのTH陽性細胞数の比較は図10に示した。TH陽性細胞はNP群において多くまた強く観察された。両群のTH陽性細胞数をカウントした結果、nonNP群は452±122であったのに対し、NP群は704±214を計上した。NP群のTH陽性細胞数はnonNP群に比べ有意に多かったp005。以上の結果より、核タンパク質の摂取がパーキンソン病様症状である運動機能だけでなく中脳黒質のドーパミン神経の脱落もまた抑制していることが示された。"