"ヒトにおける使用のためのワクチンであって、有効成分として組み換えマイコバクテリウムを含み、前記組み換えマイコバクテリウムは、ウレアーゼ欠損であり、aマイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、およびbファゴリソソームエスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含むことを特徴とするワクチン。請求項1に記載のワクチンであって、前記組み換えマイコバクテリウムの細胞が、組み換えMycobacteriumbovisBCGの細胞であり、特に、Danish株の亜型Prague由来の組み換えM.bovisの細胞であることを特徴とするワクチン。請求項1または2に記載のワクチンであって、前記マイコバクテリウム抗原がAg85Bであることを特徴とするワクチン。請求項1から3のいずれか一項に記載のワクチンであって、前記組み換えマイコバクテリウムの細胞が、抗生物質耐性遺伝子、例えば、ハイグロマイシン耐性遺伝子を持つことを特徴とするワクチン。請求項1から3のいずれか一項に記載のワクチンであって、前記組み換えマイコバクテリウムの細胞が、抗生物質耐性遺伝子を持たないことを特徴とするワクチン。請求項1から3のいずれか一項に記載のワクチンであって、rBCGΔUrec::Hly::HygVPM1002であることを特徴とするワクチン。請求項1から6のいずれか一項に記載のワクチンであって、マイコバクテリウム-未投与の対象、例えば、新生児への投与のためのワクチン。請求項1から6のいずれか一項に記載のワクチンであって、マイコバクテリウム-前暴露の対象への投与のためのワクチン。請求項1から8のいずれか一項に記載のワクチンであって、場合により再構成液と一緒の、凍結乾燥物であることを特徴とするワクチン。請求項1から9のいずれか一項に記載のワクチンであって、一回分約103~104CFU、約104~105CFUまたは約105~106CFUを含むことを特徴とするワクチン。請求項1から10のいずれか一項に記載のワクチンであって、皮内投与のためのワクチン。請求項1から11のいずれか一項に記載のワクチンであって、単回または複数回での投与のためのワクチン。請求項1から12のいずれか一項に記載のワクチンであって、多機能のCD4T細胞の上方調節のためのワクチン。請求項1から13のいずれか一項に記載のワクチンであって、結核に対して使用するためのワクチン。ヒト対象にワクチン接種するための方法であって、薬学的に有効な量の組み換えマイコバクテリウムを投与することを含み、前記組み換えマイコバクテリウムは、ウレアーゼ欠損であり、aマイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、およびbファゴリソソームエスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含むことを特徴とする方法。本発明の目的は、特に、流行地域における居住者、および非流行地域における危険性のある者のための、安全で、耐容性良好で効果的な、TBに対するワクチンの開発である。本ワクチンは、現在使用されているBCGワクチンに置き換わるものである。その新しいワクチンは、少なくとも、現在の株と同じくらい効果があり、BCGよりも安全である[5、7]。MycobacteriumtuberculosisおよびBCGは、宿主マクロファージによって取り込まれる。ファゴソーム内への配置は、主要組織適合性複合体MHCIIの経路を通じた細菌性抗原の輸送を引き起こす。これは、CD4T細胞の選択的刺激をもたらす。しかしながら、MHCI制限CD8細胞障害性T細胞が、Mycobacteriumtuberculosisに対する免疫において極めて重要であることが示されている[8、9]。Mycobacteriumtuberculosisとは対照的に、BCGは、CD8細胞障害性T細胞の弱い刺激を誘導するのみである[2、3、10]。それ故に、ファゴリソソームエスケープドメインphagolysosomalescapedomainを発現する組み換えBCG株が、マイコバクテリア抗原をMHCI経路に向かわせるために作り出された[2、7]。その株は、L.monocytogenesのリステリオリシンHlyを分泌する[7、11]。それは、ファゴソームの膜を穿孔することによって、感染した宿主細胞のファゴソームからその株が逃れることを可能にする。ウレアーゼC遺伝子の不活化は、最適なHly活性のための、酸性のファゴソームのpHを確実にするために必要であった。穿孔は、細胞質の中への、抗原の移行を促進させ、増加したアポトーシスを通してクロスプライミングを促進する[7、9]。この過程は、Mycobacteriumtuberculosisの免疫誘導をとても効果的に模倣する。その作用機序は、効果的で、耐容性良好な、TBに対するワクチンをもたらすと期待される。その概念は、その内容が本明細書中に参照により援用される、国際公開第99/101496号パンフレットおよび国際公開第2004/094469号パンフレットに記載されている。本研究において、組み換えウレアーゼ欠損BCGワクチンが、初めてヒト対象に適用された。本研究は、そのワクチンの安全性、局所的および全身的耐容性、並びに、免疫原性を評価した。それは、市販のBCGと比較して、用量漸増逐次計画に従った。ドイツにおける八十80の対象は無作為に20の対象からなる4グループに割り当てられ、それぞれは、BCGワクチン接種歴で階層化された。検査値、身体的安全評価、および、詳細な心電図分析を含む集中安全モニタリングが、標準安全モニタリングに加えて行われた。本発明の内容は、ヒトにおける使用のためのワクチンであって、有効成分として組み換えマイコバクテリウムを含み、前記組み換えマイコバクテリウムは、ウレアーゼ欠損であり、aマイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、およびbファゴリソソームphagolysomalエスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含む。本発明のさらなる内容は、ヒト対象にワクチン接種するための方法であって、薬学的に有効な量の組み換えマイコバクテリウムを投与することを含み、前記組み換えマイコバクテリウムは、ウレアーゼ欠損であり、aマイコバクテリウム抗原またはその免疫原性フラグメント、およびbファゴリソソームエスケープドメインを含む融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子を含む。本発明は、以下の図、配列表および実施例によってさらに説明される。特に好ましい実施態様において、例えば、選択マーカー遺伝子によって破壊されたureC遺伝子を含む自殺ベクターsuicidevectorを構築して、そのベクターで標的細胞を形質転換し、ウレアーゼ陰性の表現型を有する選択マーカー-陽性の細胞をスクリーニングすることによって[12]、ureC配列は不活化されるΔUrec。その細胞は、好ましくはM.bovisの細胞、M.tuberculosisの細胞であり、特に、弱毒化されたM.tuberculosisの細胞またはその他のマイコバクテリア、例えば、M.microti、M.smegmatis、M.canettii、M.marinumまたはM.fortuitumである。さらに好ましくは、その細胞は、組み換えM.bovisBCG細胞であり、特に、Danish株の亜型Prague[13]からの組み換えM.bovisの細胞である。最も好ましくは、その細胞は、rBCGΔUrec::Hly::HygVPM1002として特徴付けられる組み換えBCGのDanish株の亜型Pragueである。本発明のマイコバクテリウムの細胞は、組み換え核酸分子、例えば、配列番号1における核酸分子を含む。この核酸分子は、シグナルペプチドをコードする配列ヌクレオチド1-120、免疫原性ドメインをコードする配列ヌクレオチド121-153、ペプチドリンカーをコードする配列ヌクレオチド154-210、ファゴリソソームドメインをコードする配列ヌクレオチド211-1722、さらなるペプチドリンカーをコードする配列ヌクレオチド1723-1800、および、ランダムペプチドをコードする配列ヌクレオチド1801-1870を含む。対応するアミノ酸配列を配列番号2に示す。免疫応答を誘導することが可能なドメインは、M.bovisまたはM.tuberculosisからの免疫原性ペプチドまたはポリペプチドから、または、少なくとも6、好ましくは少なくとも8アミノ酸の長さを有するそれの免疫原性フラグメントから、選択される。適切な抗原の具体例は、M.tuberculosis由来のAg85Bp30Harthら、1996年、M.bovisBCG由来のAg85Bα-抗原Matsuoら、1988年、M.tuberculosis由来のAg85AHuygenら、1996年、および、M.tuberculosis由来のESAT-6Sorensenら、1996年;Harboeら、1996年;および、Andersenら、1995年である。さらに好ましくは、その免疫原性ドメインは抗原Ag85Bに由来する。最も好ましくは、その免疫原性ドメインは、配列番号2における41アミノ酸から51アミノ酸までの配列を含む。その組み換え核酸分子は、ファゴリソソームエスケープドメイン、すなわち、ファゴリソソームから哺乳類細胞の細胞質ゾルの中への融合ポリペプチドの流出に供されるポリペプチドドメインをさらに含む。好ましくは、そのファゴリソソームエスケープドメインは、本明細書中に参照により援用される米国特許第5733151号明細書に記載されている、リステリアのファゴリソソームエスケープドメインである。さらに好ましくは、そのファゴリソソームエスケープドメインは、L.monocytogenesのリステリオリシン遺伝子Hlyに由来する。最も好ましくは、そのファゴリソソームエスケープドメインは、a配列番号1に示されるヌクレオチド211-1722を含むヌクレオチド配列;baからの配列と同一のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列;および、caまたはbからの配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列;から選択される核酸分子でコードされる。配列番号1で示されるヌクレオチド配列の他に、本発明は、それとハイブリダイズする核酸配列も含む。本発明において、ハイブリダイゼーションの用語は、SambrookらMolecularCloning.Alaboratorymanual,ColdSpringHarborLaboratoryPress1989,1.101-1.104に定義された通りに用いられる。本発明に従って、ハイブリダイゼーションhybridizationの用語は、1×SCCおよび0.1SDSとともに55°Cにて、好ましくは62°Cにて、さらに好ましくは68°Cにて1時間、特に、0.2×SSCと0.1SDSの中で55°Cにて、好ましくは62°Cにて、さらに好ましくは68°Cにて1時間洗浄した後に、陽性のハイブリダイゼーションシグナルがまだなお観察され得る場合に用いられる。そのような洗浄条件下で配列番号1のとおりのヌクレオチド配列とハイブリダイズする配列は、本発明で好まれるファゴリソソームエスケープドメインをコードするヌクレオチド配列である。上述したファゴリソソームエスケープドメインをコードするヌクレオチド配列は、リステリア菌Listeriaorganismから、または、任意の組み換え源、例えば、対応するリステリア核酸分子または上述したその変異体を含む組み換え大腸菌E.coli細胞から直接得てよい。好ましくは、融合ポリペプチドをコードする組み換え核酸分子は、シグナルペプチドをコードする配列を含む。さらに好ましくは、そのシグナル配列は、マイコバクテリアにおいて、好ましくはM.bovisにおいて活性のシグナル配列、例えば、天然のM.bovisシグナル配列である。適切なシグナル配列の好ましい例は、配列番号1のヌクレオチド1から120に示された、Ag85Bシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列である。さらに、ペプチドリンカーが免疫原性ドメインとファゴリソソームエスケープドメインとの間に備えられることが好ましい。好ましくは、そのペプチドリンカーは5から50までのアミノ酸の長さを有する。さらに好ましくは、配列番号1のヌクレオチド154から210に示されたリンカーをコードする配列または遺伝子コードの変性に関してそれに対応する配列である。その核酸は、組み換えベクターに配置してよい。好ましくは、その組み換えベクターは、原核生物ベクター、すなわち、原核細胞における複製または/およびゲノム組み込みのための要素を含むベクターである。好ましくは、その組み換えベクターは、動作可能なように発現調節配列と連結された、本発明の核酸分子を持つ。その発現調節配列は、好ましくは、マイコバクテリアにおいて、特に、M.bovisにおいて、活性な、発現調節配列である。そのベクターは、染色体外ベクターまたは染色体内への組み込みに適したベクターであり得る。そのようなベクターの例は、当業者に知られており、例えば、上記のSambrookらに示されている。一部の実施態様において、その組み換えマイコバクテリウムの細胞は、抗生物質耐性遺伝子、例えば、ハイグロマイシンHyg耐性遺伝子を持っていてよい。他の実施態様において、その組み換えマイコバクテリウムの細胞は、抗生物質耐性遺伝子を持たない。好ましくは、そのワクチンは、ヒトにおける使用のため、例えば、結核のようなマイコバクテリア感染の流行地域の居住者における使用のため、または、非流行地域における危険性のある者における使用のための、生ワクチンである。そのワクチンは、マイコバクテリウム、例えばBCG-未投与naiveの対象、例えば、免疫原性のマイコバクテリウム抗原投与Mycobacteriumchallengeに前暴露pre-exposedされていない人、またはBCGで前免疫pre-immunizedされていない人への投与のためであってよい。そのような対象の例は、例えば、結核のようなマイコバクテリア感染の流行地域における、例えば、新生児、または、子供、例えば8才まで、または非感染地域における危険性のある者である。そのワクチンは、特に、HIV-陽性である親たち、例えば母親たちを有する対象への投与に適している。そのワクチンは、HIV-感染が流行している集団における、マイコバクテリウム-、例えば、BCG-未投与の対象へ投与されてよい。他の実施態様において、そのワクチンは、マイコバクテリウム、例えば、BCGの前暴露の対象、例えば、結核の流行地域に居住する、例えば、9才以降の子供または大人、または、BCGで前免疫された対象への投与のためであってよい。そのような対象においては、本発明のワクチンは、既存のBCG誘導の免疫状態を強化する効果boostingeffectを有する。さらに好ましい実施態様において、そのワクチンの投与は、未投与または前免疫の対象における増加したIFN-γ応答、および、CD4T細胞、特に多機能のCD4T細胞の上方調節をもたらす。好ましい実施態様において、そのワクチンは、マイコバクテリウム細胞、および、場合により物質、例えばグルコースおよび/またはデキストランを含む凍結乾燥物lyophilisateである。場合により、そのワクチンは、さらに、再構成液、注射用水または生理食塩水を含む。一部の実施態様において、そのワクチンは、一回分約103-104CFUコロニー形成単位、約104-105CFUまたは約105-106CFUを含む。粘膜面例えば、眼球、鼻腔内、口腔、胃、腸管、直腸、膣または尿路への、または非経口経路例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内または腹腔内による、投与が選択されてよい。特に好ましいのは皮内投与である。一部の実施態様において、そのワクチンは、単回での投与のためであり、マイコバクテリウム-未投与の対象の免疫付与、または、マイコバクテリウム-前暴露の対象の、例えばマイコバクテリウムに基づいたワクチン、例えば本発明のワクチンの投与の前にマイコバクテリア、例えば病原性マイコバクテリアと接触した対象のための天然のBCGワクチンで前ワクチン接種された対象の、ブースターワクチン接種boostervaccinationを含む。あるいは、本発明のワクチンは、2以上の回で投与されてよい。各回は、約1週間から約6箇月またはより長い間隔で投与されてよい。本発明のワクチンは、マイコバクテリア感染に対する使用のためであり、より具体的には、結核に対する使用のためである。配列番号1:マイコバクテリウム85B抗原およびリステリアのファージ-リソソームエスケープドメインphage-lysomalescapedomainをコードする核酸分子のヌクレオチド配列を示す。配列番号2:配列番号1の核酸分子の対応するアミノ酸配列を示す。BCGワクチン接種歴で階層化された健常男性ボランティアにおける、BCGと比較した本発明のワクチンVPM1002の安全性および免疫原性を評価するための第I相臨床試験。1.ワクチンVPM1002の特性VPM1002は、rBCGΔureC::Hly::Hygとして特徴付けられる、MycobacteriumbovisBCGのDanish株の亜型Pragueに由来する、遺伝子組み換えされたBCGワクチンである。VPM1002は、生きているMycobacteriumbovisBCGΔureC::Hly::Hygの凍結乾燥された固形物lyophilisedcakeとして入手された。1バイアルは5×106CFU範囲2-8×106CFUのVPM1002を含んでいた。リステリオリシンHlyに関する遺伝子がウレアーゼC遺伝子ureCの中に組み込まれることにより、ウレアーゼC活性の欠失およびリステリオリシン活性の導入がもたらされる。VPM1002はハイグロマイシンHyg耐性である。ハイグロマイシン耐性は、その株の遺伝子操作中の選択マーカーとしての役割を果たし、遺伝子組み換え生物GMO-モニタリングおよびGMO-緊急対策において、特異的マーカーとしての役割を果たす。VPM1002は、マイコバクテリア感染の治療において一般に使用される抗生物質、すなわち、イソニアジド、リファンピシンおよびエタンブトールに対して感受性である。VPM1002は、1mlの水純水aquaadinjectabiliaで再構成された、凍結乾燥の凍結乾燥されたlyophilized固形物として供給された。再構成後の濃度は、約5×106CFUであった。5×103および5×104CFUの用量の投与に関しては、その再構成されたVPM1002懸濁液は、それぞれ1:100または1:10に、滅菌されておりすぐに使用できる0.9塩化ナトリウム溶液を用いて希釈された。2.目的本研究の第一の目的は、単回のVPM1002の安全性を調査することであった。本研究の第二の目的は、結核に対するワクチン接種のための単回のVPM1002の免疫原性を調査することであった。3.方法論研究企画:これは、ヒトへのVPM1002の最初の適用であった。その研究は、公開の、無作為化され、管理された、用量漸増計画に従い、単回のVPM1002の安全性および免疫原性を評価した。VPM1002での1ワクチン接種が、BacilleCalmette-GuerinBCG未投与か、またはBCGでの前免疫付与を持つかワクチン接種資料において記録されたBCG-ワクチン接種またはBCG痕、どちらの場合においても加えて、精製タンパク質誘導物PPD-皮膚試験で弱陽性を超えない、のいずれかの対象に、皮内投与された。3段階に増加させた用量のVPM1002が調査された。対象の参照グループは、1回のBCGワクチンを投与された。以下のワクチン接種安全性パラメーターは、投薬後4時間まで厳重にモニターされた。その後、その対象は、ワクチン接種後24時間まで病院に滞在した、それぞれの用量グループのうちの最初の3対象を除いて、病院から退院した。安全性および薬力学的な評価は、ワクチン接種後Day57までと6箇月で再度、行われた。Day57の結果がそれぞれの群の最初の3対象から入手できた後に、中間安全解析が行われた。これらのデータに基づき、5×105CFUまでの用量でのVPM1002の投与が安全で耐容性良好であると見なされた。免疫原性の二次試験エンドポイントに基づき、サンプルサイズの統計的再評価が行われた。この分析結果p1=0.0119は、本研究に含まれた、計画されたサンプルサイズの80対象は、十分であることを示した。サンプルサイズの拡大は必要なかった。4.対象数四十40のBCG未投与およびBCG前ワクチン接種をされているまたはPPD陽性の40対象が、本研究に含まれるように計画された。追跡不能となった1対象を除き、全80対象が計画どおりに研究を完了した。5.診断および主な選定基準:18~55才両端含むの、全身性疾患または進行中の病気を示唆する何の兆候も、身体的兆候も、または、臨床検査値も無く、活性または潜伏性の結核感染LTBIの何の兆候も無い、健常男性対象。ツベルクリン-PPD試験は、ベースラインにおいて、以前にBCGワクチン接種歴のある対象に関しては10mmで、未投与の対象に関しては1mmであるべきであった。6.試験生産物、用量および投与方法、バッチ番号:VPM1002の活性成分は、MycobacteriumbovisrBCGΔureC::Hly::Hygであり、凍結-乾燥され、1適用あたりのマイコバクテリア生菌数コロニー形成単位CFUに標準化された。用量レベル:5×103CFUVPM1002範囲2~8×103CFU5×104CFUVPM1002範囲2~8×104CFU5×105CFUVPM1002範囲2~8×105CFUおよそ0.1mLの再構成されて希釈されたVPM1002懸濁液は、短いベベル針25G/0.50mmまたは26G/0.45mm、長さ10mmを装着した、mLの100分の11/100mLのサブ目盛りの付いた1mLのシリンジで皮内注射により投与された。ジェット式注射器または複合穿刺器具は許容されなかった。7.治療期間:1単回ワクチン接種8.参照治療、用量および投与方法、バッチ番号:BCGVaccineSSI、紛体および注射用懸濁液のための溶媒、デンマーク国立血清学研究所StatensSerumInstitutDenmark。再構成後、一回分0.1mL含有:MycobacteriumbovisBCGBacillusCalmette-Guerin、Danish株1331、弱毒化生、2~8×105CFU投与は、VPM1002に関して記述されたとおりに行われた。9.評価基準:安全性パラメーター:有害事象の発生率、有害事象の時間プロフィール、有害事象のその他のプロフィールワクチン接種部位における局所的反応の評価およびワクチン接種部位における局所的反応の写真記録Day1、5、11、29、57、6箇月後標準安全性検査パラメーター血液学、凝固、肝酵素を含む臨床化学、検尿ベースライン、Day5757日目およびMonth66箇月目におけるQuantiFerongoldtest心電図ECG、バイタルサインおよび体重を含む身体検査胸部X線ベースライン、Day57およびMonth6における超音波肝撮像対象の、忍容性の全体的評価。免疫原性パラメーター:リンパ球刺激試験LST:細胞あたりのインターフェロンIFN-γの量酵素結合免疫スポット技術ELIspot:末梢血単核細胞PBMCの総数あたりの、IFN-γを分泌するPBMCの数全血アッセイWBA:リンパ球の数あたりのIFN-γの量細胞内サイトカイン染色ICS蛍光活性化細胞選別FACS-分析:リンパ球の総数あたりの、CD4およびCD8リンパ球の数;それらはxxx-bright、xxx-brightおよびxxxbright三重陽性細胞triple-positive-cellsであった。10.研究のエンドポイント:第一のエンドポイント:身体検査、バイタルサイン、ECG、肝臓超音波検査、胸部X線、検査の安全性パラメーター血液学、凝固、臨床化学および検尿を含む、忍容性、併用薬の記録および有害事象のモニタリングにより評価されたとおりに、単回のVPM1002の安全性を評価すること。第二のエンドポイント:ツベルクリンPPDに関するLSTに続く、PBMCの上清におけるIFN-γ特異的酵素結合免疫吸着測定法ELISA;PPDで刺激後のIFN-γ分泌PBMC数に特異的なELISpot;PPDで3日間、細胞を刺激し、ELISAにより血漿中IFN-γを測定するWBA;により評価される免疫原性。試験のエンドポイント:PPDで一晩刺激したCD4およびCD8リンパ球における、IFN-γ、腫瘍壊死因子TNF-αおよびインターロイキンIL-2に関するICSのFACS-分析;PPDで一晩刺激したCD4およびCD8リンパ球における、カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステルcarboxyfluoresceindiacetatesuccinimidylestersCFSEで細胞内染色したFACS-分析;結核抗原TB-Ag85bペプチドカクテルでの刺激に関するLST、ELISpot、ICSおよびWBA;PPDまたはTB-Ag85Bペプチドカクテルに対する血清抗体の濃度;これらの血清抗体の免疫グロブリンIgG-サブタイプの定量化;により評価される免疫原性。11.統計的方法:記述統計学が、安全性パラメーターの評価のために用いられた。以下の統計的試験方法が、免疫原性データのために用いられた。BCGグループと比較した、繰り返し測定環境での、ベースラインからの調整された変化から用量反応関係を検出するためのヨンクヒールタプストラ検定JonckheereTerpstratestα=0.05事前に定義された推定の、治療因子の共変量および余因子を有するそれぞれのパラメーターでの、ベースラインから、ベースラインの後の個々の訪問値visitsへの変化を調整するための線形回帰モデル後退的選択グループ内、およびVPM1002グループとBCGグループとの比較の両方での、95信頼区間を用いた、治療効果ベースラインからの変化の推定調整回帰モデルにおける、統計学的に無関係の共変数/余因子の変数減少backwardelimination2つの治療グループ間の試験的比較に関するX2検定、t検定、U検定ノンパラメトリック分析の感度を推定するヨンクヒールタプストラ検定の代わりの多変量線形回帰12.研究母集団の要約:全80対象は、安全性母集団および包括解析IntentiontoTreatITT母集団に含まれた。全80対象は、免疫原性パラメーターに関して正当で解釈可能な評価を提供し、大幅な手順の逸脱は無く;したがって、全ての対象は、免疫原性ImmunogenicityIMおよび治験実施計画Per-ProtocolPP母集団として有効であった。全体平均年齢は33.1才異なる群に関する平均は25.2と38.7才との間であった。平均身長は179.7cm177.2と181.8cmとの間であり、平均体重は78.8kg73.0と82.5kgとの間であり、平均BMIは24.38kg/m222.98と25.78kg/m2との間であった。治療グループ間の違いは、臨床的に関連がないと見なされた。13.薬力学のPharmcodynamics要約本研究の第二の目的は、VPM1002の免疫原性を示すことであった。第二の目的は達成された。本研究は、VPM1002が、未投与およびBCG前免疫の対象の両層において、量的および質的に、非常に良好な細胞免疫応答を誘導することを示す。全ての観測データは、VPM1002によって誘導された、明確なTh1タイプの免疫応答を示す。その特定のワクチンVPM1002株の開発の当初の目標は、細胞媒介性の免疫応答を増大させること、および、BCGよりも質的により良い免疫応答を誘導することであった。これらの目標は達成可能であった。加えて、それは、BCGによって誘導された既存の免疫応答へのブーストワクチン接種の可能性も示す。リンパ球数あたりのIFN-γの量第二のエンドポイントのLSTおよびWBAに関しては、用量-反応の相関が、ノンパラメトリックおよびパラメトリック統計によって、VPM1002を投与されたグループ間で観察された。それぞれの層内で、ベースラインからの平均変化は、全試験日数において、5×105CFUVPM1002グループにおいて最も高く、5×103CFUVPM1002において最も低かった。これは、受容者に対するVPM1002の効果を証明する。第二のエンドポイントにおけるベースラインからの変化の線形回帰分析は、年齢、体重、ベースラインにおける総PBMCおよびベースラインにおける総リンパ球は、結果に対して統計的に有意な効果を有さないことを示した。試験のエンドポイントでは、両層において、多機能CD4T細胞の誘導にかなりの効果が観察された。結論として、VPM1002は、IFN-γを誘導することによって、BCGと量的に異なるだけでなく、多機能T細胞と質的にも異なるTh1免疫応答を引き起こす。これらの結果は、そのワクチンのさらなる開発を促す。14.安全性の要約:この第I相臨床試験の第一のエンドポイントは、VPM1002の安全性評価であった。実際、本研究はVPM1002に関して安全性に対する懸念を少しも見せなかった。詳しくは、最大で5×105CFUまでのVPM1002での単回ワクチン接種は、耐容性良好であった。重篤な有害事象AEは発生しなかった。全AEのうち80.7の全てが、治験責任医師によって、本研究の投薬に関係していると見なされた薬物有害反応ADRs:関係性は、確かであるcertain、可能性が高いprobableまたは可能性があるpossibleとして評価された。ADRsは全ての対象で報告された。ほぼ全てのADRが注射部位の障害であった全ADRsの98.0。ADRsの数は、用量が増加するのに伴い増加した。しかしながら、ADRsの頻度および強度は、VPM1002の最も高い用量5×105CFUにおいてさえ、常に医学的に容認可能であった。以前にBCGワクチン接種歴のある対象では、BCG前免疫付与無しの各治療グループと比較して、より高いADRsの発生率の傾向もあったそれぞれ239vs.204ADRs。全ての対象はAEを経験した。AEsの数は、BCGワクチン接種で前免疫されていない対象において、BCGおよび5×105CFUVPM1002グループで同様でありそれぞれ76および82AEs、その他の2グループでは、より低かった5×103CFUVPM1002後は47AEsで、5×104CFUVPM1002後は53AEs。以前にBCGワクチン接種歴のある対象のグループにおいては、AEsの数は、BCGグループにおける72AEsおよび5×103CFUと5×104CFUVPM1002グループの両方における61AEsと比較して、5×105CFUVPM1002グループにおいて最も高かった97AEs。BCG-未投与の対象の層内では、BCGおよびVPM1002を同じ用量範囲5×105CFUで投与された治療グループにおいて観察されたADRsは、同等の発生率および重症度であったBCGおよびVPM1002後、それぞれ、64対72。BCG前免疫の対象の層内では、ADRsの発生率は、5×105CFUBCGと比較して、5×105CFUVPM1002を投与された対象では、わずかに高かったVPM1002後、78ADRsに対し、BCG後、60ADRs。しかしながら、ADRsの強度は、両群間で同等であり、さらに詳しく調べると、この不均衡の主な原因は、VPM1002後の注射部位での潰瘍BCGおよびVPM1002後、それぞれ4および8事象;直径1から8mmと、それに付随して続いて生じる、当該注射部位での痂皮形成および剥脱BCGおよびVPM1002後、それぞれ、6対9および4対7のADRsのような関連事象が若干高い発生率であるからと考えられ、全ては強度が軽く、免疫原性の誘導の別の指標となると評価された。ほとんどのAEsは軽度の強度であり全AEの95.3、25AEs全AEの4.6は中度の強度であり、1AE全AEの0.1、BCG後に報告は重度の強度であった。AEが原因で中断した対象はなかった。概して、局所的反応を有する対象の数および局所的反応の強度は、用量が増加するのに伴い増加し、5×105CFUBCGとVPM1002グループで同等であった。BCG未投与の対象とBCGで前免疫した対象における結果は概して類似しており、異なる局所的反応に対する明確な傾向は観察されなかった。最も目立った局所的反応は紅斑と硬結であった。紅斑は全ての対象において観察された。紅斑の平均サイズは用量とともに増加した。平均紅斑サイズは、5×105CFUBCGおよびVPM1002でのワクチン接種後で同様であった。BCGグループでは、平均サイズは、前BCG-免疫付与無しの対象グループで、より高かったのに対し、5×105CFUVPM1002を投与された対象では、平均紅斑サイズは、前免疫の対象で、常に、より高かった。硬結を有する対象の数に関して明確な用量-関連性は観察されなかった。硬結の平均サイズは、5×105CFUBCGまたはVPM1002を投与された治療グループにおいて最も高かった。最大の硬結は5×105CFUBCGでワクチン接種したグループにおいておよそday3から5で発生し、それは、Day11から29に最大サイズを示した5×105CFUVPM1002でワクチン接種したグループでのよりも早かった。局所的な硬結のサイズは、局所的な細胞免疫応答の尺度である。VPM1002グループでの特徴的な時間プロフィールは、薬力学的な免疫原性の結果に合致するBCGグループでの時間プロフィールとは異なる。治療グループごとの平均紅斑サイズと試験日の相関関係を図1に示す。治療グループごとの平均硬結サイズと試験日の相関関係を図2に示す。全体的な忍容性は、対象ごとに、ほとんど常に、良い42または、とても良い57と評価された。1対象BCG、前にワクチン接種無しのみが、全体的な忍容性についてDay57で悪いと評価されたが、ワクチン接種6箇月後にはもはや悪くはなかった。検査値は、臨床的に関連する時間-または用量-に相関した差異を示さなかった。いくつかの対象は、ベースラインにおいて既に正常範囲を超えた値を有した。肝機能パラメーター、特にALTは、いくつかの対象19対象、BCG未投与の13対象および以前にBCGワクチン接種歴のある6対象において正常範囲を超えて増加した。ワクチン接種後に異常なALT値を有した対象の数は、BCG未投与であった、および5×105CFUVPM1002を投与された対象のグループにおいて最も高かった。しかしながら、さらに目立った増加が、より低用量のグループで観察され、そして、決して正常範囲の6倍を超えることはなく、研究の終わりまで減少した。バイタルサインおよびECGパラメーターは、時間-または用量-に相関した差異を示さなかった。臨床的に関連する知見は、ワクチン接種後の身体検査、肝臓超音波検査および胸部X線において観察されなかった。全てのQuantiFerongoldtestは陰性であった。15.結論薬力学第二の試験目的第二の試験目的は達成された。VPM1002は、用量依存的なIFN-γ刺激によって検出されたように免疫原性を示す。その結果を図3および4に示す。VPM1002は、BCGとは量的および質的に異なる免疫応答を誘導する。VPM1002は、既存のBCG誘導の免疫状態を強化する効果を有する。多機能CD4T細胞は、VPM10025×105CFUの全群において、上方調節された。その結果を図5に示す。安全性第一の試験目的第一の試験目的は達成された:最大で5×105CFUまでのVPM1002での単回ワクチン接種は安全で耐容性良好であった。薬剤関連と考えられた有害事象は、ほとんど常に注射部位での障害であった。AEsの数は、用量とともに増加し、5×105CFUVPM1002と5×105CFUBCGの参照ワクチンの後で、同様であった。局所的反応の数と強度は、VPM1002の用量とともに増加し、最も高い用量において、局所的反応の発生率は、BCGでのワクチン接種後に観察されたものと同様であった。VPM1002の全体的な忍容性は、対象ごとに、常に、良いまたは非常に良いと評価された。検査値、バイタルサインおよびECGデータは、臨床的に関連する時間-または用量-に相関した差異を示さなかった。16.総括VPM1002の安全性プロフィールは良好であった。VPM1002は免疫原性を示した。VPM1002の免疫原性プロフィールは、BCGのそれとは異なる。そのベネフィット/リスク比は、このワクチン候補の臨床開発を継続することを可能にする。[参考文献]ListofReferences1WorldHealthOrganizationWHOReport2009GlobaltuberculosiscontrolepidemiologystrategyfinancingWHOGeneva2AndersenPTuberculosisvaccinesanupdateNatRevMicrobiol54844873MittruckerHWSteinhoffUKohlerAKrauseMLazarDMexPMiekleyDKaufmannSHPoorcorrelationbetweenBCGvaccinationinducedTcellresponsesandprotectionagainsttuberculosisProcNatlAcadSciUSA10412434124394YoungDDyeCThedevelopmentandimpactoftuberculosisvaccinesCell1246836875KaufmannSHThecontributionofimmunologytotherationaldesignofnovelantibacterialvaccinesNatRevMicrobiol54915046GagneuxSDeRiemerKVanTKatoMaedaMdeJongBCNarayananSNicolMNiemannSKremerKGutierrezMCHiltyMHopewellPCSmallPMVariablehostpathogencompatibilityinMycobacteriumtuberculosisProcNatlAcadSciUSA103286928737GrodeLSeilerPBaumannSHessJBrinkmannVNasserEddineAMannPGoosmannCBandermannSSmithDBancroftGJReyratJMvanSoolongenDRaupachBKaufmannSHIncreasedvaccineefficacyagainsttuberculosisofrecombinantMycobacteriumbovisbacilleCalmetteGuerinmutantsthatsecretelisteriolysinTheJournalofClinicalInvestigation115247224798ChoSMehraVThomaUszynskiSStengerSSerbinaNMazzaccaroRJFlynnJLBarnesPFSouthwoodSCelisEBloomBRModlinRLSetteAAntimicrobialactivityofMHCclassIrestrictedCD8TcellsinhumantuberculosisProcNatlAcadSciUSA9712210122159WinauFWeberSSadSdeDiegoJLocatelliHoopsSBreidenBSandhoffKBrinkmannVKaufmannSHESchaibleUEApoptoticvesiclescrossprimeCD8TcellsandprotectagainsttuberculosisImmunity2410511710SchaibleUEWinauFSielingPAFischerKCollinsHLHagensKModlinRLBrinkmannVKaufmannSHApoptosisfacilitatesantigenpresentationtoTlymphocytesthroughMHCIandCD1intuberculosisNatMed91039104611HessJMikoDCaticALehmensiekVRusselDKaufmannSHMycobacteriumbovisbacilleCalmetteGuerinstrainssecretinglisteriolysinofListeriamonocytogenesProcNatlAcadSci955299530412ReyratJMBerthetFXGicquelBTheureaselocusofMycobacteriumtuberculosisanditsutilizationforthedemonstrationofallelicexchangeinMycobacteriumbovisbacillusCalmetteGuerinProcNatlAcadSciUSA9287687213BroschRGordonSVGarnierTEiglmeierKFriguiWValentiPDosSantosSDuthoySLacroixCGarciaPelayoCInwaldJKGolbyPGarciaJNHewinsonRGBehrMAQuailMAChurcherCBarrellBGParkhillJColeSTProcNatlAcadSciUSA2007Mar271045596601Epub2007Mar19"