"SAPに特異的に結合し、かつ配列番号7の重鎖可変領域配列および配列番号9の軽鎖可変領域配列を含んでなる参照抗体とSAPへの結合について競合する、非マウス抗原結合タンパク質。SAPに結合し、かつ配列番号3に示されるCDRH3またはCDRH3の機能的変異体を含んでなる、非マウス抗原結合タンパク質。CDRH1配列番号1、CDRH2配列番号12、CDRL1配列番号4、CDRL2配列番号5およびCDRL3配列番号6、またはCDRH1、CDRH2、CDRL1、CDRL2もしくはCDRL3の機能的変異体から選択される1つ以上またはすべてのCDRをさらに含んでなる、請求項2に記載の抗原結合タンパク質。前記CDRH3機能的変異体が、配列番号3の変異体であり、ここで、Ser102は、Tyr、His、Val、Ile、AspまたはGlyに対して置換されている、請求項2または3に記載の抗原結合タンパク質。a前記CDRH1機能的変異体が、配列番号1の変異体であり、ここで、Tyr32は、Ile、His、Phe、Thr、Asn、Cys、GluまたはAspに対して置換されており、Asn33は、Tyr、Ala、Trp、Gly、Thr、LeuまたはValに対して置換されており、Met34は、Ile、ValまたはTrpに対して置換されており、および/またはHis35は、Glu、Asn、Gln、Ser、TyrまたはThrに対して置換されており、b前記CDRH2機能的変異体が、配列番号2の変異体であり、ここで、Tyr50は、Arg、Glu、Trp、Gly、Gln、Val、Leu、Asn、LysまたはAlaに対して置換されており、Ile51は、Leu、Val、Thr、SerまたはAsnに対して置換されており、Tyr52は、Asp、Leu、AsnまたはSerに対して置換されており、Gly53は、Ala、Tyr、Ser、Lys、ThrまたはAsnに対して置換されており、Asp54は、Asn、Ser、Thr、LysまたはGlyに対して置換されており、Asn56は、Tyr、Arg、Glu、Asp、Gly、Val、SerまたはAlaに対して置換されており、および/またはAsn58は、Lys、Thr、Ser、Asp、Arg、Gly、PheまたはTyrに対して置換されており、c前記CDRL1機能的変異体は、配列番号4の変異体であり、ここで、Asn28は、Ser、Asp、ThrまたはGluに対して置換されており、Ile29は、Valに対して置換されており、Tyr30は、Asp、Leu、Val、Ile、Ser、Asn、Phe、His、GlyまたはThrに対して置換されており、Ser31は、Asn、Thr、LysまたはGlyに対して置換されており、Tyr32は、Phe、Asn、Ala、His、SerまたはArgに対して置換されており、Leu33は、Met、Val、IleまたはPheに対して置換されており、および/またはAla34は、Gly、Asn、Ser、His、ValまたはPheに対して置換されており、d前記CDRL2機能的変異体は、配列番号5の変異体であり、ここで、Ala51は、Thr、GlyまたはValに対して置換されており、および/またはe前記CDRL3機能的変異体は、配列番号6の変異体であり、ここで、Gln89は、Ser、Gly、PheまたはLeuに対して置換されており、His90は、GlnまたはAsnに対して置換されており、His91は、Asn、Phe、Gly、Ser、Arg、Asp、Thr、TyrまたはValに対して置換されており、Tyr92は、Asn、Trp、Thr、Ser、Arg、Gln、His、AlaまたはAspに対して置換されており、Gly93は、Glu、Asn、His、Thr、Ser、ArgまたはAlaに対して置換されており、Ala94は、Asp、Tyr、Thr、Val、Leu、His、Asn、Ile、Trp、ProまたはSerに対して置換されており、および/またはLeu96は、Pro、Tyr、Arg、Ile、TrpまたはPheに対して置換されている、請求項3または4に記載の抗原結合タンパク質。SAPに特異的に結合する抗原結合タンパク質であって、ここで、該抗原結合タンパク質は、配列番号7の可変ドメイン配列の対応するCDRH3またはCDRH3の機能的変異体を含んでなる、キメラ抗体またはヒト化抗体である、抗原結合タンパク質。配列番号7の可変ドメイン配列のCDRH1もしくはCDRH2、または配列番号9の可変ドメイン配列のCDRL1、CDRL2、CDRL3、またはCDRH1、CDRH2、CDRL1、CDRL2もしくはCDRL3の機能的変異体から選択される対応するCDRの1つ以上またはすべてをさらに含んでなる、請求項6に記載の抗原結合タンパク質。SAPに特異的に結合し、かつ配列番号7のKabat残基95~101を含んでなる結合単位H3または結合単位H3の機能的変異体を含んでなる、抗原結合タンパク質。配列番号7のKabat残基31~32を含んでなるH1、配列番号7のKabat残基52~56を含んでなるH2、配列番号9のKabat残基30~34を含んでなるL1、配列番号9のKabat残基50~55を含んでなるL2、および配列番号9のKabat残基89~96を含んでなるL3、または結合単位H1、H2、L1、L2もしくはL3の機能的変異体から選択される1つ以上またはすべての結合単位をさらに含んでなる、請求項8に記載の抗原結合タンパク質。前記抗原結合タンパク質が、重鎖および/または軽鎖を含んでなり、ここで:a重鎖フレームワークが、以下の残基:2位にVal、IleもしくはGly、4位にLeuもしくはVal、20位にLeu、Ile、MetもしくはVal、22位にCys、24位にThr、Ala、Val、GlyもしくはSer、26位にGly、29位にIle、Phe、LeuもしくはSer、36位にTrp、47位にTrpもしくはTyr、48位にIle、Met、ValもしくはLeu、69位にIle、Leu、Phe、MetもしくはVal、71位にVal、AlaもしくはLeu、78位にAla、Leu、Val、TyrもしくはPhe、80位にLeuもしくはMet、90位にTyrもしくはPhe、92位にCys、および/または94位にArg、Lys、Gly、Ser、HisもしくはAsnを含んでなり、ならびに/あるいはb軽鎖フレームワークが、以下の残基:2位にIle、LeuもしくはVal、3位にVal、Gln、LeuもしくはGlu、4位にMetもしくはLeu、23位にCys、35位にTrp、36位にTyr、LeuもしくはPhe、46位にLeu、ArgもしくはVal、49位にTyr、His、PheもしくはLys、71位にTyrもしくはPhe、88位にCys、および/または98位にPheを含んでなる、請求項1~9のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。前記重鎖フレームワークが、以下の残基:2位にVal、4位にLeu、20位にVal、22位にCys、24位にAla、26位にGly、29位にPhe、36位にTrp、47位にTrp、48位にMet、69位にIle、71位にAla、78位にAla、80位にMet、90位にTyr、92位にCysおよび94位にArgを含んでなり、および/または前記軽鎖フレームワークが、以下の残基:2位にIle、3位にGln、4位にMet、23位にCys、35位にTrp、36位にTyr、46位にLeu、49位にHis、71位にPhe、88位にCysおよび98位にPheを含んでなる、請求項1~10のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。配列番号25に示されるようなフレームワーク領域に対して75以上の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン抗体フレームワーク、および/または配列番号32に示されるようなフレームワーク領域に対して75以上の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン抗体フレームワークをさらに含んでなる、請求項1~11のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。SAPに特異的に結合し、かつ配列番号27~31から選択される重鎖可変領域、および/もしくは配列番号34~36から選択される軽鎖可変領域、または75以上の配列同一性を有する変異体重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域を含んでなる、抗原結合タンパク質。SAPに特異的に結合し、かつ配列番号62の重鎖、および/もしくは配列番号64の軽鎖、または75以上の配列同一性を有する変異体重鎖もしくは軽鎖を含んでなる、抗原結合タンパク質。前記SAPが、インビボにおいてアミロイド原線維に結合されているヒトSAPである、請求項1~14のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。前記抗原結合タンパク質が、ヒトSAPのA面に結合する、請求項1~15のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。前記抗原結合タンパク質が、ヒト補体系を活性化する、請求項1~16のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。キメラ、ヒト化またはヒトにおけるものである、請求項1~5、8、9または15~17のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。前記抗原結合タンパク質が、ヒトIgG1またはIgG3ヒト定常ドメインを含んでなる、請求項1~18のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。請求項1~19のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質をコードする核酸分子。前記核酸配列が、配列番号54および/または配列番号59を含んでなる、請求項20に記載の核酸分子。前記核酸配列が、配列番号61および/または配列番号63を含んでなる、請求項21に記載の核酸分子。請求項20~22のいずれか一項に記載の核酸分子を含んでなる、発現ベクター。請求項23に記載の発現ベクターを含んでなる、組換え宿主細胞。請求項1~19のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質を生成するための方法であって、請求項24に記載の宿主細胞を培養する工程および前記抗原結合タンパク質を回収する工程を含んでなる、方法。請求項1~19のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質と、薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。アミロイド沈着を伴う疾患に罹患している被験体を治療する方法であって、治療有効量の請求項1~19のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質または請求項26に記載の組成物を前記被験体に投与する工程を含んでなる、方法。被験体におけるアミロイド沈着を伴う疾患を予防する方法であって、予防的に有効な量の請求項1~19のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質または請求項26に記載の組成物を前記被験体に投与する工程を含んでなる、方法。前記抗原結合タンパク質が、SAP枯渇化合物とともに投与される、請求項27または28に記載の方法。アミロイド沈着を伴う疾患を治療または予防する際に使用するための、請求項1~19のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質であって、ここで、前記抗原結合タンパク質は、SAP枯渇化合物とともに投与される、抗原結合タンパク質。アミロイド沈着を伴う疾患を治療または予防する際に使用するためのSAP枯渇化合物であって、ここで、前記SAP枯渇化合物は、請求項1~19のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質とともに投与される、SAP枯渇化合物。前記抗原結合タンパク質およびSAP枯渇化合物の投与が連続的である、請求項27、28もしくは29に記載の方法、請求項29に記載の抗原結合タンパク質、または請求項31に記載のSAP枯渇化合物。前記SAP枯渇化合物が最初に投与される、請求項32に記載の方法、抗原結合タンパク質またはSAP枯渇化合物。前記抗原結合タンパク質が、被験体内を循環しているSAPの実質的にすべてが除去されたときに投与される、請求項33に記載の方法、抗原結合タンパク質またはSAP枯渇化合物。前記疾患が、全身性アミロイドーシス、局所性アミロイドーシス、アルツハイマー病、2型糖尿病、透析関連アミロイドーシス、モノクローナル免疫グロブリン鎖ALアミロイドーシスおよび脳アミロイドアンギオパチーからなる群から選択される、請求項27、28、29、31、33もしくは34に記載の方法、請求項30、32、33もしくは34に記載の抗原結合タンパク質、または請求項31、32、33もしくは34に記載のSAPアンタゴニスト化合物。前記SAP枯渇化合物が、D-プロリン誘導体またはグリセロール環状ピルビン酸塩誘導体である、請求項27、28、29、32、33、34もしくは35に記載の方法、請求項30、32、33、34もしくは35に記載の抗原結合タンパク質、または請求項31、32、33、34もしくは35に記載のSAP枯渇化合物。前記D-プロリン誘導体が、CPHPCである、請求項36に記載の方法、抗原結合タンパク質またはSAP枯渇化合物。したがって、器官の機能を保存するためおよび延命するために、SAPを特異的に標的にし、かつアミロイド沈着を伴う疾患を有する患者、特に、ヒト患者において改善された治療効果を提供する、抗体、特に、ヒト化抗体またはヒト抗体が当該分野において必要とされている。本発明は、第1の態様において、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号7の重鎖可変領域配列および配列番号9の軽鎖可変領域配列を含む参照抗体とSAPへの結合について競合する、抗原結合タンパク質を提供する。本発明の第2の態様では、SAPに結合し、かつ配列番号3に示されるCDRH3またはCDRH3の機能的変異体を含んでなる、抗原結合タンパク質が提供される。本発明の第3の態様では、SAPに特異的に結合する抗原結合タンパク質が提供され、ここで、その抗原結合タンパク質は、配列番号7の可変ドメイン配列の対応するCDRH3またはCDRH3の機能的変異体を含んでなる、キメラ抗体またはヒト化抗体である。本発明の第4の態様では、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号7のKabat残基95~101を含んでなる結合単位H3または結合単位H3の機能的変異体を含んでなる、抗原結合タンパク質が提供される。本発明の第5の態様では、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号27~31から選択される重鎖可変領域、および/もしくは配列番号34~36から選択される軽鎖可変領域、または75以上の配列同一性を有する変異体重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域を含んでなる、抗原結合タンパク質が提供される。本発明の第6の態様では、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号62の重鎖、および/もしくは配列番号64の軽鎖、または75以上の配列同一性を有する変異体重鎖もしくは軽鎖を含んでなる、抗原結合タンパク質が提供される。本発明はまた、本発明の抗原結合タンパク質をコードする核酸分子、それを含んでなる発現ベクター、および本発明の抗原結合タンパク質を産生することができる宿主細胞を提供する。本発明のさらなる態様では、本明細書中で定義されるような抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物が提供される。本発明はまた、アミロイド沈着を伴う疾患に罹患しやすいまたは罹患している被験体を予防および/または治療する方法を提供し、その方法は、予防的または治療的に有効な量の抗原結合タンパク質を前記被験体に投与する工程を包含する。アミロイド沈着を伴う疾患に罹患しやすいまたは罹患している被験体を予防および/または治療するための本明細書中で定義されるような抗原結合タンパク質の使用が提供される。アミロイド沈着を伴う疾患に罹患しやすいまたは罹患している被験体を予防および/または治療するための医薬を製造するための本明細書中で定義されるような抗原結合タンパク質の使用もまた提供される。本発明は、特異的抗原として、血清アミロイドP成分SAP、例えば、ヒトSAPに結合する抗原結合タンパク質すなわち、SAP結合タンパク質を提供する。その抗原結合タンパク質は、本発明の治療的適用において、組織からの異常な残屑をクリアランスするための身体の強力な機構を活性化する。その抗原結合タンパク質は、抗体、例えば、モノクローナル抗体であり得る。本発明の抗原結合タンパク質は、マウス抗体ではない。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、マウス抗原結合タンパク質ではない。特に、本発明の抗原結合タンパク質は、キメラ、ヒト化またはヒト抗原結合タンパク質である。血清アミロイドP成分またはSAPとは、ペントラキシンファミリーのホモ五量体の血漿糖タンパク質のことを指す。各分子は、5つの同一のプロトマーから構成され、その各々は、環状五量体の対称性を有する円盤様の環として非共有結合的に会合された扁平なβ-ゼリーロールフォールドおよび単一のアルファヘリックスを有するHutchinsonetal.,2000Mol.Med.,6:482-493、Pepysetal.,2002Nature,417:254-259。用語SAPは、本明細書中で使用されるとき、ヒト遺伝子APCS染色体:1、位置:1q21-q23または他の生物における相同遺伝子によってコードされる個別のサブユニット、例えば、配列番号43に示されるような配列を有するヒトSAPポリペプチドサブユニット、ならびにSAPの天然の五量体型、ならびにインビボにおいてアミロイド原線維に結合する生物学的活性を保持するSAPの任意のフラグメントおよび変異体も含んでなる。本発明のSAP結合タンパク質は、上に記載された種々の形態のSAPのいずれか1つまたは任意の組み合わせに結合することができる。特定の実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、ヒトSAPに結合する。本発明のSAP結合タンパク質は、SAPが、任意のタイプかつ体内の任意の細胞外の位置のアミロイド原線維に結合されているとき、そのSAPに結合することができる。本発明の抗原結合タンパク質は、結合されていない天然のSAPにも結合し得る。治療方法において本発明のSAP結合タンパク質を利用する本質的な局面は、循環中のSAPの濃度が、SAP結合タンパク質の投与前の通常値よりも少なくとも90減少しなければならない局面である。具体的には、これは、循環SAPの量を減少させる化合物、および特に、本明細書中でSAP枯渇化合物として定義される、循環SAPの枯渇をもたらす化合物によって達成することができる。そのような化合物は、SAPに結合されるリガンドであり、アミロイド原線維へのSAPの結合の競合的インヒビター例えば、D-プロリン誘導体およびグリセロール環状ピルビン酸塩誘導体である。D-プロリン誘導体は、EP0915088その全体が本明細書中で参考として援用されるに開示されており、用語D-プロリン誘導体は、国際公開第03/051836号これもその全体が本明細書中で参考として援用されるに開示されているプロドラッグなどのプロドラッグを含む。以下の式のD-プロリン:または式中、Rは、であり、基R1は、水素またはハロゲンであり、Xは、-CH2n-、-CHR2CH2n-、-CH2OCH2n-、-CH2NH-、-CR2=CH-、-CH2CHOH-、またはチアゾール-2,5-ジイル、-O-であり、Yは、-S-S-、-CH2n-、-O-、-NH-、-NR2-、-CH=CH-、-NHCONH-、-NR2CONR2-、-N[CH2C6H3OCH32]-、-NCH2C6H5-、-NCH2C6H5CONCH2C6H5-、-Nアルコキシアルキル-、Nシクロアルキル-メチル-、2,6-ピリジル、2,5-フラニル、2,5-チエニル、1,2-シクロヘキシル、1,3-シクロヘキシル、1,4-シクロヘキシル、1,2-ナフチル、1,4-ナフチル、1,5-ナフチル、1,6-ナフチル、または1,2-フェニレン、1,3-フェニレンおよび1,4-フェニレンであり、ここで、そのフェニレン基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシ、-COO-低級アルキル、ニトリロ、5-テトラゾール、2-カルボン酸ピロリジン-1-イル-2-オキソ-エトキシ、N-ヒドロキシカルバミミオジル、5-オキソ[1,2,4オキサジアゾリル、2-オキソ[1,2,3,5]オキサチアジアゾリル、5-チオキソ[1,2,4]オキサジアゾリルおよび5-tert-ブチルスルファニル-[1,2,4]オキサジアゾリルから選択される1~4個の置換基で必要に応じて置換されてもよく、X’は、-CH2n-、-CH2nCHR2-、-CH2nOCH2-、-NHCH2-、-CH=CR2-、CHOHCH2、またはチアゾール-2,5-ジイル、-O-であり、R2は、低級アルキル、低級アルコキシまたはベンジルであり、nは、0~3であり、ここで、アルキルまたは低級アルキルは、C1-6アルキルであり、アルコキシまたは低級アルコキシは、C1-6アルコキシであり、シクロアルキルは、C3-6シクロアルキルcyclocalkylであり、ハロゲンは、F、ClまたはBrであり、式中の点線で表されている位置は、単結合または二重結合である、あるいはその薬学上許容される塩またはモノエステルもしくはジエステルが企図される。上記の式I-AのD-プロリンは、リガンド-リンカー-リガンドと記載することができ、ここで、式formalI-AのX-Y-X’部分が、リンカーを形成する。リンカーX-Y-X’は、4~15個の線状の炭素原子、5~10個の線状の炭素原子および6~8個の線状の炭素原子の長さを含む、4~20個の線状の炭素原子の長さであり得る。そのリンカーは、直鎖状もしくは分枝状であり得るか、または1つ以上の環構造を必要に応じて形成し得るが、ただし、少なくとも4つの線状または直鎖の炭素原子が、そのリンカーに存在する。その線状または直鎖のC原子の少なくとも1つは、N、OまたはS、好都合にはOまたはS、好都合にはOから選択される少なくとも1つのヘテロ原子で必要に応じて置換されてもよい。したがって、必要に応じて置換されてもよいリンカーは、分枝をもたらす1つ以上の置換および/またはリンカーの線状もしくは直鎖の炭素原子の1つ以上の置換を有し得る例えば、リンカーは、エーテルまたは置換エーテルであり得る。R-1-[6-[R-2-カルボキシ-ピロリジン-1-イル]-6-オキソ-ヘキサノイル]ピロリジン-2-カルボン酸CPHPCは、本発明によって企図される特定のD-プロリンである。特定の実施形態において、CPHPCは、ヒト患者に投与される。グリセロール環状ピルビン酸塩Gylcerolcyclicpyruvate誘導体は、国際公開第2004/099173号その全体が本明細書中で参考として援用されるに開示される。本明細書中で使用される用語抗原結合タンパク質は、SAPに結合することができる抗体、抗体フラグメントおよび他のタンパク質構築物例えば、ドメインのことを指す。用語抗体は、免疫グロブリン様ドメインを有する分子のことを指すために最も広い意味において本明細書中で使用され、それには、モノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体およびヘテロ結合体抗体、単一可変ドメイン、ドメイン抗体、抗原結合フラグメント、免疫学的に有効なフラグメント、一本鎖Fv、ダイアボディ、TandabsTMなどが含まれる別の抗体の形式の概要については、HolligerandHudson,NatureBiotechnology,2005,Vol23,No.9,1126-1136を参照のこと。句単一可変ドメインとは、異なる可変領域または可変ドメインとは無関係に、抗原またはエピトープに特異的に結合する抗原結合タンパク質可変ドメイン例えば、VH、VHH、VLのことを指す。ドメイン抗体またはdAbは、抗原に結合することができる単一可変ドメインと同じであると考えてよい。単一可変ドメインは、ヒト抗体可変ドメインであり得るが、げっ歯類などの他の種由来の単一の抗体の可変ドメイン例えば、国際公開第00/29004号に開示されているようなもの、コモリザメおよびラクダ科のVHHdAbも含む。ラクダ科のVHHは、本来軽鎖を有しない重鎖抗体を生成する、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダおよびグアナコを含む種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドである。そのようなVHHドメインは、当該分野において利用可能な標準的な手法に従ってヒト化されることがあり、そのようなドメインは、ドメイン抗体であると考えられる。本明細書中で使用されるとき、VHには、ラクダ科のVHHドメインが含まれる。本明細書中で使用されるとき、用語ドメインとは、そのタンパク質の残りの部分とは独立した三次構造を有する折り畳まれたタンパク質構造のことを指す。一般に、ドメインは、タンパク質の別々の機能的特性に関与し、多くの場合、そのタンパク質および/またはドメインの残部の機能喪失を起こさずに、付加され得るか、除去され得るか、または他のタンパク質に移され得る。単一可変ドメインは、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含む折り畳まれたポリペプチドドメインである。ゆえに、単一可変ドメインには、例えば、1つ以上のループが、抗体可変ドメインに特徴的でない配列もしくは短縮された抗体可変ドメインで置き換えられているか、またはNもしくはC末端の伸長、ならびに完全長ドメインの結合活性および特異性を少なくとも保持する可変ドメインの折り畳まれたフラグメントを含む、完全な抗体可変ドメインおよび改変された可変ドメインが含まれる。ドメインは、異なる可変領域または可変ドメインとは無関係に抗原またはエピトープに結合することができる。抗原結合フラグメントは、ドメインなどの非抗体タンパク質足場に1つ以上のCDRを配置することによって提供され得る。そのドメインは、ドメイン抗体であってもよいし、CTLA-4、リポカリン、SpA、Affibody、アビマーavimer、GroEl、トランスフェリン、GroESおよびフィブロネクチン/アドネクチンadnectinからなる群から選択される足場の誘導体であるドメイン天然リガンド以外のSAPなどの抗原への結合性を獲得するためにタンパク質工学に供されたドメインであってもよい。抗原結合フラグメントまたは免疫学的に有効なフラグメントは、部分的な重鎖可変配列または軽鎖可変配列を含み得る。フラグメントは、少なくとも5、6、7、8、9または10アミノ酸長である。あるいは、そのフラグメントは、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも50、少なくとも75または少なくとも100アミノ酸長である。抗原結合タンパク質に関して本明細書全体を通じて使用される用語特異的に結合するは、その抗原結合タンパク質が、他の任意のタンパク質ヒトにおいて残基アミノ酸配列相同性について55の厳密な残基を共有し、かつ本質的に同じタンパク質の折り畳みを有する、C反応性タンパク質CRPなどの密接な関係がある分子を含むに結合せずに、または他の任意のタンパク質にほんのわずかに結合しつつ、SAPに結合することを意味する。抗原結合タンパク質とSAPとの相互作用の平衡解離定数KDは、1mM以下、100nM以下、10nM以下、2nM以下または1nM以下であり得る。あるいは、そのKDは、5~10nM、または1~2nMであり得る。そのKDは、1pM~500pM、または500pM~1nMであり得る。結合親和性は、BIAcoreTM、例えば、第一級アミンカップリングおよびこの表面上への抗体の捕捉によってカルボキシメチルデキストランcarboxymethydextranチップ上に結合されたSAPを用いた抗原捕捉によって測定され得る。あるいは、結合親和性は、CM5チップ上に固定化されたO-ホスホエタノールアミンによって捕捉される、ヒトSAPへの抗SAP抗体の結合によってBIAcoreTMで測定され得る。実施例8に記載されるBIAcoreTM法は、結合親和性を測定するために使用され得る。解離速度定数kdは、1×10-3s-1以下、1×10-4s-1以下または1×10-5s-1以下であり得る。kdは、1×10-5s-1~1×10-4s-1、または1×10-4s-1~1×10-3s-1であり得る。低kdは、抗原結合タンパク質-リガンド複合体の遅い解離およびアミロイドに結合したSAPの複合体の改善されたクリアランスをもたらし得る。用語由来は、それがその材料に対する物理的起源であるという意味における供給源を定義するだけでなく、その材料と構造的に同一であるが言及している供給源が起源でない材料も定義すると意図されることは、当業者に明らかであろう。したがって、ドナー抗体に見られる残基は、必ずしもドナー抗体から洗練されている必要はない。単離は、抗原結合タンパク質などの分子が、それが天然に見られ得る環境から取り出されていることを意図している。例えば、その分子は、それが天然において通常存在し得る物質から精製されているかもしれない。例えば、サンプル中のその分子の質量は、総質量の95であり得る。キメラ抗体とは、ドナー抗体に由来する天然に存在する可変領域軽鎖および重鎖を、アクセプター抗体に由来する軽鎖および重鎖定常領域と併せて含む、操作された抗体の1タイプのことを指す。ヒト化抗体とは、非ヒトドナー免疫グロブリンに由来するCDRを有する操作された抗体の1タイプのことを指し、その分子の残りの免疫グロブリンに由来する部分は、1つ以上のヒト免疫グロブリンに由来する。さらに、フレームワーク支持残基は、結合親和性を保存するように変更され得る例えば、Queenetal.Proc.NatlAcadSciUSA,86:10029-100321989、Hodgsonetal.Bio/Technology,9:4211991を参照のこと。好適なヒトアクセプター抗体は、ドナー抗体のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列との相同性によって、従来のデータベース、例えば、KABAT登録商標データベース、LosAlamosデータベースおよびSwissProteinデータベースから選択されるものであり得る。ドナー抗体のフレームワーク領域との相同性アミノ酸基準を特徴とするヒト抗体は、ドナーCDRを挿入するための重鎖定常領域および/または重鎖可変フレームワーク領域を提供するのに適し得る。軽鎖定常領域または軽鎖可変フレームワーク領域を供与することができる好適なアクセプター抗体は、同様の様式で選択され得る。アクセプター抗体の重鎖と軽鎖とは、同じアクセプター抗体が起源である必要はないことに注意すべきである。従来技術には、そのようなヒト化抗体を作製するいくつかの方法が記載されている例えば、EP-A-0239400およびEP-A-054951を参照のこと。用語ドナー抗体とは、その可変領域、CDRまたはそれらの他の機能的フラグメントもしくはアナログのアミノ酸配列を第1の免疫グロブリンパートナーに提供する抗体のことを指す。ゆえに、そのドナーは、変更された免疫グロブリンコード領域、ならびにドナー抗体に特徴的な抗原特異性および中和活性を有する、結果として発現される変更された抗体を提供する。用語アクセプター抗体とは、その重鎖フレームワーク領域および/もしくは軽鎖フレームワーク領域ならびに/またはその重鎖定常領域および/もしくは軽鎖定常領域をコードするアミノ酸配列のすべてまたは任意の一部を第1の免疫グロブリンパートナーに提供する、ドナー抗体とは異種の抗体のことを指す。ヒト抗体は、アクセプター抗体であり得る。用語ヒト抗体とは、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列に由来する抗体のことを指す。これらの完全なヒト抗体は、免疫原性の低い治療用抗体の起源として、再操作されたまたは脱免疫されたde-immunizedげっ歯類モノクローナル抗体例えば、ヒト化抗体に対する代替物を提供し、それらは通常、ファージディスプレイまたはトランスジェニックマウスプラットフォームのいずれかを用いて作製される。ある実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗体である。用語VHおよびVLは、それぞれ抗原結合タンパク質の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のことを指すために本明細書中で使用される。CDRは、抗原結合タンパク質の相補性決定領域のアミノ酸配列と定義される。これらは、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には、3つの重鎖CDRおよび3つの軽鎖CDRまたはCDR領域が存在する。したがって、本明細書中で使用されるCDRは、3つすべての重鎖CDR、3つすべての軽鎖CDR、重鎖CDRおよび軽鎖CDRのすべて、または少なくとも2つのCDRのことを指す。本明細書全体を通じて、可変ドメインの配列および完全長抗体の配列におけるアミノ酸残基は、Kabatナンバリングの慣習に従ってナンバリングされる。同様に、実施例において使用される用語CDR、CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2、CDRH3は、Kabatナンバリングの慣習に従っている。さらなる情報については、Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,4thEd.,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NationalInstitutesofHealth1987を参照のこと。しかしながら、本発明者らは、本明細書全体を通じて、可変ドメインの配列および完全長抗体の配列におけるアミノ酸残基についてKabatナンバリングの慣習を使用するが、可変ドメインの配列および完全長抗体の配列におけるアミノ酸残基について代替のナンバリングの慣習が存在することは当業者には明らかであろう。CDR配列に対する代替のナンバリングの慣習も存在する例えば、Chothiaetal.1989Nature342:877-883に示されるもの。抗体の構造およびタンパク質フォールディングは、他の残基もCDR配列の一部であると考えられることを意味し得、当業者によってそのように理解され得る。CDR配列に対する当業者に利用可能な他のナンバリングの慣習には、AbM法UniversityofBathおよびcontact法UniversityCollegeLondonが含まれる。Kabat法、Chothia法、AbM法およびcontact法のうちの少なくとも2つを用いたときの最小重複領域が、最小結合単位をもたらすと判断することができる。最小結合単位は、CDRの一部であり得る。下記の表1は、CDRまたは結合単位の各々に対して各ナンバリング慣習を用いたときの1つの定義を表している。表1では、可変ドメインのアミノ酸配列をナンバリングするためにKabatナンバリングスキームが使用されている。CDRの定義のいくつかは、使用される個別の出版物に応じて変動することがあることに注意すべきである。本明細書中で使用されるとき、用語抗原結合部位とは、抗原に特異的に結合することができる抗原結合タンパク質上の部位のことを指す。これは、単一ドメイン例えば、エピトープ結合ドメインまたは一本鎖FvScFvドメインであってもよいし、標準的な抗体に見ることができるような対になったVH/VLドメインであってもよい。本明細書中で使用される用語エピトープは、抗原結合タンパク質の特定の結合ドメインと接触する抗原の一部のことを指す。エピトープは、抗原由来の線状本質的に線状を含むのアミノ酸配列であり得る。あるいは、エピトープは、立体構造をとっていてもよいし、不連続であってもよい。例えば、立体構造エピトープは、構造的に拘束するエレメントを必要とするアミノ酸残基を含む。立体構造エピトープの場合、上記残基は、ペプチド鎖の種々の領域に由来し得るが、それらは、抗原の3次元構造において近接し得る。SAPなどの多量体の抗原の場合、立体構造エピトープは、その抗原の3次元構造において近接し得る異なるペプチド鎖由来の残基を含み得る。そのような構造的に隣接する残基は、コンピュータモデリングプログラム、またはX線結晶構造解析などの当該分野で公知の方法によって得られた3次元構造によって決定することができる。不連続なエピトープは、他の配列によって分断された、すなわち、抗原の1次配列では連続した配列ではないアミノ酸残基を含む。抗原の3次および4次構造の文脈において、不連続なエピトープの残基は、抗原結合タンパク質によって結合されるのに互いに十分近い。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、ヒトSAPの残基140~158内のエピトープに結合する。ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列について、用語同一または配列同一性とは、最適にアラインメントされ、適切な挿入または欠失を用いて比較されたときの、2つの核酸配列間または2つのアミノ酸配列間の一致の程度のことを指摘する。2つの配列間の同一性パーセントは、その2つの配列を最適にアラインメントするために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れたときの、それらの配列が共有する同一の位置の数の関数であるすなわち、同一性=同一の位置の数/位置の総数に100を乗じた値。配列の比較および2つの配列間の同一性パーセントの算出は、下に記載されるような数学的アルゴリズムを用いて行うことができる。2つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、NWSgapdna.CMP行列、ならびに40、50、60、70または80のギャップウェイトおよび1、2、3、4、5または6のレングスウェイトを使用した、GCGソフトウェアパッケージにおけるGAPプログラムを用いて算出することができる。2つのヌクレオチド配列間または2つのアミノ酸配列間の同一性パーセントもまた、PAM120重み付き残基表weightresiduetable、12というギャップ長ペナルティgaplengthpenaltyおよび4というギャップペナルティgappenaltyを使用した、ALIGNプログラムバージョン2.0に組み込まれたE.MeyersおよびW.MillerのアルゴリズムComput.Appl.Biosci.,4:11-171988を用いて算出することができる。さらに、2つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Blossum62行列またはPAM250行列、ならびに16、14、12、10、8、6または4というギャップウェイトおよび1、2、3、4、5または6というレングスウェイトを使用した、GCGソフトウェアパッケージ内のGAPプログラムに組み込まれたNeedlemanおよびWunschJ.Mol.Biol.48:444-4531970のアルゴリズムを用いて算出することができる。例として、あるポリヌクレオチド配列は、本明細書中に記載されるような参照ポリヌクレオチド配列例えば、配列番号8、10、18、20、45~48、51~61、63、65~73を参照のことと同一、すなわち、100同一であり得るか、または参照配列と比べてある特定の整数までのヌクレオチドの変更を含み得る例えば、少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98または99同一。そのような変更は、少なくとも1つのヌクレオチドの欠失、置換変化およびトランスバージョンを含むまたは挿入から選択され、ここで、前記変更は、参照ヌクレオチド配列の5’もしくは3’末端の位置、またはそれらの末端の位置の間の任意の位置その任意の位置は、参照配列内のヌクレオチドの間に個別に散在しているか、または参照配列内の1つ以上の連続した群内に散在しているにおいて生じ得る。ヌクレオチドの変更の数は、本明細書中に記載されるような参照ポリヌクレオチド配列例えば、配列番号8、10、18、20、45~48、51~61、63、65~73を参照のこと内のヌクレオチドの総数にそれぞれの同一性パーセントの数値的なパーセント100で除した値を乗じて、その積を本明細書中に記載されるような参照ポリヌクレオチド配列例えば、配列番号8、10、18、20、45~48、51~61、63、65~73を参照のこと内のヌクレオチドの前記総数から減算することによって、すなわち:nn≦xn-xny,によって算出される式中、nnは、ヌクレオチドの変更の数であり、xnは、本明細書中に記載されるような参照ポリヌクレオチド配列例えば、配列番号8、10、18、20、45~48、51~61、63、65~73を参照のこと内のヌクレオチドの総数であり、yは、50の場合0.50、60の場合0.60、70の場合0.70、75の場合0.75、80の場合0.80、85の場合0.85、90の場合0.90、95の場合0.95、98の場合0.98、99の場合0.99または100の場合1.00であり、は、乗算演算子のシンボルであり、ここで、xnおよびyの任意の非整数の積は、それをxnから減算する前に、最も近い整数に端数が切り捨てられる。同様に、あるポリペプチド配列は、本明細書中に記載されるようなポリペプチド参照配列例えば、配列番号1~7、9、11~17、19、21~24、27~31、34~42、62、64、74を参照のことと同一、すなわち、100同一であり得るか、または同一性が100未満例えば、少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98または99同一であるように、参照配列と比べてある特定の整数までのアミノ酸の変更を含み得る。そのような変更は、少なくとも1つのアミノ酸の欠失、置換保存的置換および非保存的置換を含むまたは挿入からなる群から選択され、ここで、前記変更は、参照ポリペプチド配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端の位置、またはそれらの末端の位置の間の任意の位置その任意の位置は、参照配列内のアミノ酸の間に個別に散在しているか、または参照配列内の1つ以上の連続した群内に散在しているにおいて生じ得る。所与の同一性に対するアミノ酸の変更の数は、本明細書中に記載されるようなポリペプチド参照配列によってコードされるポリペプチド配列例えば、配列番号1~7、9、11~17、19、21~24、27~31、34~42、62、64、74を参照のこと内のアミノ酸の総数にそれぞれの同一性パーセントの数値的なパーセント100で除した値を乗じて、次いで、その積を本明細書中に記載されるようなポリペプチド参照配列例えば、配列番号1~7、9、11~17、19、21~24、27~31、34~42、62、64、74を参照のこと内のアミノ酸の前記総数から減算することによって、すなわち:na≦xa-xay,によって算出される式中、naは、アミノ酸の変更の数であり、xaは、本明細書中に記載されるような参照ポリペプチド配列例えば、配列番号1~7、9、11~17、19、21~24、27~31、34~42、62、64、74を参照のこと内のアミノ酸の総数であり、yは、50の場合0.50、60の場合0.60、70の場合0.70、75の場合0.75、80の場合0.80、85の場合0.85、90の場合0.90、95の場合0.95、98の場合0.98、99の場合0.99または100の場合1.00であり、は、乗算演算子のシンボルであり、ここで、xaおよびyの任意の非整数の積は、それをxaから減算する前に、最も近い整数に端数が切り捨てられる。同一性は、配列の長さ全体にわたって算出され得る。用語ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質の各々は、2つ以上のアミノ酸残基を含む分子のことを指す。ペプチドは、単量体または重合体であり得る。ある特定のアミノ酸置換が保存的であると見なされることは、当該分野において十分に認識されている。アミノ酸は、共通の側鎖特性に基づいて群に分けられ、抗原結合タンパク質の結合親和性のすべてまたは実質的にすべてを維持する群内での置換は、保存的置換と見なされる。下記の表2を参照のこと:本抗原結合タンパク質は、配列番号7の重鎖可変領域配列および配列番号9の軽鎖可変領域配列を含んでなる参照抗体とSAPへの結合について競合し得る。あるいは、本抗原結合タンパク質は、配列番号17の重鎖可変領域配列および配列番号19の軽鎖可変領域配列を含んでなる参照抗体とSAPへの結合について競合し得る。本抗原結合タンパク質と参照抗体との競合は、競合ELISA、FMATまたはBIAcoreによって測定され得る。競合する抗原結合タンパク質は、同じエピトープ、重複するエピトープまたは参照抗体が結合するエピトープに近位のエピトープに結合し得る。本発明はまた、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号3のCDRH3またはその変異体CDRを含んでなる、抗原結合タンパク質も提供する。その抗原結合タンパク質は、CDRH1配列番号1、CDRH2配列番号2、CDRL1配列番号4、CDRL2配列番号5およびCDRL3配列番号6、またはそれらの変異体から選択される1つ以上のCDRまたはすべてのCDRを任意の組み合わせでさらに含み得る。例えば、上記抗原結合タンパク質は、CDRH3配列番号3およびCDRH1配列番号1またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRH3配列番号3およびCDRH2配列番号2またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRH1配列番号1およびCDRH2配列番号2およびCDRH3配列番号3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRL1配列番号4およびCDRL2配列番号5またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRL2配列番号5およびCDRL3配列番号6またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRL1配列番号4、CDRL2配列番号5およびCDRL3配列番号6またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRH3配列番号3およびCDRL3配列番号6またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRH3配列番号3、CDRH2配列番号2およびCDRL3配列番号6またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRH3配列番号3、CDRH2配列番号2、CDRL2配列番号5およびCDRL3配列番号6またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、CDRH1配列番号1、CDRH2配列番号2、CDRH3配列番号3、CDRL1配列番号4、CDRL2配列番号5およびCDRL3配列番号6またはそれらの変異体を含み得る。本発明はまた、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号13のCDRH3またはその変異体CDRを含んでなる、抗原結合タンパク質を提供する。その抗原結合タンパク質は、CDRH1配列番号11、CDRH2配列番号12、CDRL1配列番号14、CDRL2配列番号15およびCDRL3配列番号16、またはそれらの変異体から選択される1つ以上のCDRまたはすべてのCDRを任意の組み合わせでさらに含み得る。本発明はまた、SAPに特異的に結合する抗原結合タンパク質を提供し、ここで、その抗原結合タンパク質は、配列番号7の可変ドメイン配列の対応するCDRH3または変異体CDRH3を含んでなるキメラ抗体またはヒト化抗体である。そのキメラ抗原結合タンパクまたはヒト化抗原結合タンパク質は、配列番号7もしくは配列番号9の可変ドメイン配列から選択される対応するCDRまたはその変異体CDRの1つ以上またはすべてをさらに含み得る。例えば、上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRH3および対応するCDRH1またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRH3および対応するCDRH2またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRH1、対応するCDRH2および対応するCDRH3、またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRL1および対応するCDRL2またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRL2および対応するCDRL3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRL1、対応するCDRL2および対応するCDRL3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRH3および対応するCDRL3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRH3、対応するCDRH2および対応するCDRL3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRH3、対応するCDRH2、対応するCDRL2および対応するCDRL3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、対応するCDRH1、対応するCDRH2、対応するCDRH3、対応するCDRL1、対応するCDRL2および対応するCDRL3またはそれらの変異体を含み得る。上記の対応するCDRは、Kabat法1987、Chothia法1989、AbM法もしくはcontact法、またはこれらの方法の組み合わせを参照することにより定義することができる。それらの各方法の1つの定義は、表1に見ることができ、対応するCDRを判定するために、参照重鎖可変ドメイン配列番号7および参照軽鎖可変ドメイン配列番号9に適用することができる。本発明はまた、SAPに特異的に結合する抗原結合タンパク質を提供し、ここで、その抗原結合タンパク質は、配列番号17の可変ドメイン配列の対応するCDRH3または変異体CDRH3を含んでなるキメラ抗体またはヒト化抗体である。そのキメラ抗原結合タンパク質またはヒト化抗原結合タンパク質は、配列番号17もしくは配列番号19の可変ドメイン配列から選択される対応するCDRまたはそれらの変異体CDRの1つ以上またはすべてをさらに含み得る。本発明はまた、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号7のKabat残基95~101を含んでなる結合単位H3または変異体H3を含んでなる、抗原結合タンパク質を提供する。その抗原結合タンパク質は、配列番号7のKabat残基31~32を含んでなるH1、配列番号7のKabat残基52~56を含んでなるH2、配列番号9のKabat残基30~34を含んでなるL1、配列番号9のKabat残基50~55を含んでなるL2および配列番号9のKabat残基89~96を含んでなるL3、または変異体結合単位から選択される1つ以上またはすべての結合単位をさらに含み得る。例えば、上記抗原結合タンパク質は、結合単位H3および結合単位H1またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位H3および結合単位H2またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位H1、結合単位H2および結合単位H3、またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位L1および結合単位L2またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位L2および結合単位L3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位L1、結合単位L2および結合単位L3、またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位H3および結合単位L3またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位H3、結合単位H2および結合単位L3、またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位H3、結合単位H2、結合単位L2および結合単位L3、またはそれらの変異体を含み得る。上記抗原結合タンパク質は、結合単位H1、結合単位H2、結合単位H3、結合単位L1、結合単位L2および結合単位L3、またはそれらの変異体を含み得る。本発明はまた、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号17のKabat残基95~101を含んでなる結合単位H3または変異体H3を含んでなる、抗原結合タンパク質を提供する。その抗原結合タンパク質は、配列番号17のKabat残基31~32を含んでなるH1、配列番号17のKabat残基52~56を含んでなるH2、配列番号19のKabat残基30~34を含んでなるL1、配列番号19のKabat残基50~55を含んでなるL2および配列番号19のKabat残基89~96を含んでなるL3、または変異体結合単位から選択される1つ以上またはすべての結合単位をさらに含み得る。CDR変異体または変異体結合単位は、少なくとも1つのアミノ酸によって改変されたアミノ酸配列を含み、ここで、前記改変は、化学的であり得るか、またはアミノ酸配列の部分的な変更例えば、10アミノ酸以下の変更であり得、その改変によって、変異体が未改変配列の生物学的特徴を保持することが可能になる。例えば、その変異体は、SAPに特異的に結合し、かつ組織由来のアミロイドに結合したSAPの複合体のクリアランスを活性化する、機能的変異体である。CDRのアミノ酸配列の部分的な変更は、1個から数個のアミノ酸の欠失もしくは置換、または1個から数個のアミノ酸の付加もしくは挿入、あるいはそれらの組み合わせ例えば、10アミノ酸以下であり得る。そのCDR変異体または結合単位変異体は、アミノ酸配列において、1、2、3、4、5または6アミノ酸の置換、付加または欠失を任意の組み合わせで含み得る。CDR変異体または結合単位変異体は、アミノ酸配列において、1、2または3アミノ酸の置換、挿入または欠失を任意の組み合わせで含み得る。アミノ酸残基の置換は、保存的置換、例えば、1つの疎水性アミノ酸を代替の疎水性アミノ酸の代わりに用いることであり得る。例えば、ロイシンは、バリンまたはイソロイシンで置換され得る。本明細書中に記載されるCDR、対応するCDR、変異体CDRまたは結合単位の1つ以上は、ヒトフレームワークの文脈において、例えば、ヒト化可変ドメインまたはキメラ可変ドメインとして存在することがある。本明細書中に記載されるCDR、対応するCDR、変異体CDRまたは結合単位の1つ以上を含んでなる完全ヒト抗体も企図され、それは、本発明の範囲内である。CDRのL1、L2、L3、H1およびH2は、有限数の主鎖コンフォメーションのうちの1つを構造的に示す傾向がある。CDRの特定の基準の構造クラスは、CDRとフレームワーク領域の両方において重要な位置に位置する残基構造上決定的な残基またはSDRによって決定されるループパッキングとCDRの長さとの両方によって定義される。MartinおよびThornton1996;JMolBiol263:800-815は、重要な残基の基準テンプレートを規定する自動的な方法を生み出した。クラスター解析を用いることにより、CDRのセットに対する基準のクラスが定義され、次いで、埋もれている疎水性残基hydrophobics、水素結合している残基、ならびに保存されたグリシンおよびプロリンを解析することによって、基準テンプレートが特定される。抗体配列のCDRは、それらの配列を重要な残基テンプレートと比較し、同一性または類似性の行列を用いて各テンプレートをスコアリングすることによって、基準のクラスに割り当てることができる。本発明の範囲内のCDRの基準の例を下記に示す。使用されるアミノ酸のナンバリングは、Kabatである。配列番号1に示されるようなCDRH1、その変異体、配列番号7のCDRH1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Tyr32は、Ile、His、Phe、Thr、Asn、Cys、GluまたはAspに対して置換されており、Asn33は、Tyr、Ala、Trp、Gly、Thr、LeuまたはValに対して置換されており、Met34は、Ile、ValまたはTrpに対して置換されており、および/またはHis35は、Glu、Asn、Gln、Ser、TyrまたはThrに対して置換されている。配列番号2に示されるようなCDRH2、その変異体、配列番号7のCDRH2または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Tyr50は、Arg、Glu、Trp、Gly、Gln、Val、Leu、Asn、LysまたはAlaに対して置換されており、Ile51は、Leu、Val、Thr、SerまたはAsnに対して置換されており、Tyr52は、Asp、Leu、AsnまたはSerに対して置換されており、Gly53は、Ala、Tyr、Ser、Lys、ThrまたはAsnに対して置換されており、Asp54は、Asn、Ser、Thr、LysまたはGlyに対して置換されており、Asn56は、Tyr、Arg、Glu、Asp、Gly、Val、SerまたはAlaに対して置換されており、および/またはAsn58は、Lys、Thr、Ser、Asp、Arg、Gly、PheまたはTyrに対して置換されている。配列番号3に示されるようなCDRH3、その変異体、配列番号7のCDRH3または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Ser102は、Tyr、His、Val、Ile、AspまたはGlyに対して置換されている。配列番号4に示されるようなCDRL1、その変異体、配列番号9のCDRL1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Asn28は、Ser、Asp、ThrまたはGluに対して置換されており、Ile29は、Valに対して置換されており、Tyr30は、Asp、Leu、Val、Ile、Ser、Asn、Phe、His、GlyまたはThrに対して置換されており、Ser31は、Asn、Thr、LysまたはGlyに対して置換されており、Tyr32は、Phe、Asn、Ala、His、SerまたはArgに対して置換されており、Leu33は、Met、Val、IleまたはPheに対して置換されており、および/またはAla34は、Gly、Asn、Ser、His、ValまたはPheに対して置換されている。配列番号5に示されるようなCDRL2、その変異体、配列番号9のCDRL1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Ala51は、Thr、GlyまたはValに対して置換されている。配列番号6に示されるようなCDRL3、その変異体、配列番号9のCDRL1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Gln89は、Ser、Gly、PheまたはLeuに対して置換されており、His90は、GlnまたはAsnに対して置換されており、His91は、Asn、Phe、Gly、Ser、Arg、Asp、Thr、TyrまたはValに対して置換されており、Tyr92は、Asn、Trp、Thr、Ser、Arg、Gln、His、AlaまたはAspに対して置換されており、Gly93は、Glu、Asn、His、Thr、Ser、ArgまたはAlaに対して置換されており、Ala94は、Asp、Tyr、Thr、Val、Leu、His、Asn、Ile、Trp、ProまたはSerに対して置換されており、および/またはLeu96は、Pro、Tyr、Arg、Ile、TrpまたはPheに対して置換されている。配列番号11に示されるようなCDRH1、その変異体、配列番号17のCDRH1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Tyr32は、Ile、His、Phe、Thr、Asn、Cys、GluまたはAspに対して置換されており、Trp33は、Tyr、Ala、Gly、Thr、LeuまたはValに対して置換されており、Met34は、Ile、ValまたはTrpに対して置換されており、および/またはHis35は、Glu、Asn、Gln、Ser、TyrまたはThrに対して置換されている。配列番号12に示されるようなCDRH2、その変異体、配列番号17のCDRH1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Met50は、Arg、Glu、Trp、Tyr、Gly、Gln、Val、Leu、Asn、LysまたはAlaに対して置換されており、Ile51は、Leu、Val、Thr、SerまたはAsnに対して置換されており、His52は、Asp、Leu、Asn、SerまたはTyrに対して置換されており、Asn53は、Ala、Gly、Tyr、Ser、LysまたはThrに対して置換されており、Ser54は、Asn、Thr、Lys、AspまたはGlyに対して置換されており、Asn56は、Tyr、Arg、Glu、Asp、Gly、Val、SerまたはAlaに対して置換されており、および/またはAsn58は、Lys、Thr、Ser、Asp、Arg、Gly、PheまたはTyrに対して置換されている。配列番号13に示されるようなCDRH3、その変異体、配列番号17のCDRH1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Val102は、Tyr、His、Ile、Ser、AspまたはGlyに対して置換されている。配列番号14に示されるようなCDRL1、その変異体、配列番号19のCDRL1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Asn28は、Ser、Asp、ThrまたはGluに対して置換されており、Val29は、Ileに対して置換されており、Asn30は、Asp、Leu、Tyr、Val、Ile、Ser、Phe、His、GlyまたはThrに対して置換されており、Ser31は、Asn、Thr、LysまたはGlyに対して置換されており、Asn32は、Phe、Tyr、Ala、His、SerまたはArgに対して置換されており、Val33は、Met、Leu、IleまたはPheに対して置換されており、Ala34は、Gly、Asn、Ser、His、ValまたはPheに対して置換されている。配列番号15に示されるようなCDRL2、その変異体、配列番号19のCDRL1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Ala51は、Thr、GlyまたはValに対して置換されている。配列番号16に示されるようなCDRL3、その変異体、配列番号19のCDRL1または対応するCDRに対する基準の例は、以下である:Gln89は、Ser、Gly、PheまたはLeuに対して置換されており、Gln90は、AsnまたはHisに対して置換されており、Cys91は、Asn、Phe、Gly、Ser、Arg、Asp、His、Thr、TyrまたはValに対して置換されており、Asn92は、Tyr、Trp、Thr、Ser、Arg、Gln、His、AlaまたはAspに対して置換されており、Asn93は、Glu、Gly、His、Thr、Ser、ArgまたはAlaに対して置換されており、Tyr94は、Asp、Thr、Val、Leu、His、Asn、Ile、Trp、ProまたはSerに対して置換されており、および/またはPhe96は、Pro、Leu、Tyr、Arg、IleまたはTrpに対して置換されている。CDR1つにつき、対応するCDR1つにつき、結合単位1つにつき、重鎖可変領域または軽鎖可変領域1つにつき、重鎖または軽鎖1つにつき、および抗原結合タンパク質1つにつき複数の変異体CDRの基準の位置が存在し得るので、本発明の抗原結合タンパク質がSAPに特異的に結合することができるようにCDRの基準構造が維持されるならば、任意の組み合わせの置換が、その抗原結合タンパク質に存在してもよい。上で論じられたように、CDRの特定の基準の構造クラスは、CDRとフレームワーク領域の両方における重要な位置に位置する残基によって決定されるループパッキングとCDRの長さとの両方によって定義される。したがって、配列番号1~6もしくは11~16に列挙されるCDR、配列番号7、9、17もしくは19のCDR、対応するCDR、結合単位またはそれらの変異体に加えて、本発明の抗原結合タンパク質の基準のフレームワーク残基は、Kabatナンバリングを使用して:重鎖:2位にVal、IleまたはGly、4位にLeuもしくはVal、20位にLeu、Ile、MetもしくはVal、22位にCys、24位にThr、Ala、Val、GlyもしくはSer、26位にGly、29位にIle、Phe、LeuもしくはSer、36位にTrp、47位にTrpもしくはTyr、48位にIle、Met、ValもしくはLeu、69位にIle、Leu、Phe、MetもしくはVal、71位にVal、AlaもしくはLeu、78位にAla、Leu、Val、TyrもしくはPhe、80位にLeuもしくはMet、90位にTyrもしくはPhe、92位にCys、および/または94位にArg、Lys、Gly、Ser、HisもしくはAsn軽鎖:2位にIle、LeuもしくはVal、3位にVal、Gln、LeuもしくはGlu、4位にMetもしくはLeu、23位にCys、35位にTrp、36位にTyr、LeuもしくはPhe、46位にLeu、ArgもしくはVal、49位にTyr、His、PheもしくはLys、71位にTyrもしくはPhe、88位にCys、および/または98位にPheを含み得る。特定の実施形態において、重鎖フレームワークは、以下の残基:2位にVal、4位にLeu、20位にVal、22位にCys、24位にAla、26位にGly、29位にPhe、36位にTrp、47位にTrp、48位にMet、69位にIle、71位にAla、78位にAla、80位にMet、90位にTyr、92位にCysおよび94位にArgを含み、軽鎖フレームワークは、以下の残基:2位にIle、3位にGln、4位にMet、23位にCys、35位にTrp、36位にTyr、46位にLeu、49位にHis、71位にPhe、88位にCysおよび98位にPheを含んでなる。上に記載されたフレームワーク位置のいずれか1つ、任意の組み合わせまたはすべてが、本発明の抗原結合タンパク質に存在し得る。重鎖可変領域または軽鎖可変領域1つにつき、重鎖または軽鎖1つにつき、および抗原結合タンパク質1つにつき複数の変異体フレームワークの基準の位置が存在し得るので、フレームワークの基準構造が維持されるならば、任意の組み合わせが、本発明の抗原結合タンパク質に存在してもよい。ヒト化重鎖可変ドメインは、フレームワーク領域内において、配列番号25のヒトアクセプター可変ドメイン配列と75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、98以上、99以上または100の同一性を有するアクセプター抗体フレームワーク内に配列番号1~3に列挙されるCDR、変異体CDR、配列番号7内の対応するCDR、結合単位、またはその変異体を含み得る。ヒト化軽鎖可変ドメインは、フレームワーク領域内において、配列番号32のヒトアクセプター可変ドメイン配列と75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、98以上、99以上または100の同一性を有するアクセプター抗体フレームワーク内に配列番号4~6に列挙されるCDR、変異体CDR、配列番号9内の対応するCDR、結合単位、またはその変異体を含み得る。ヒト化重鎖可変ドメインは、フレームワーク領域において、配列番号25のヒトアクセプター可変ドメイン配列と75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、98以上、99以上または100の同一性を有するアクセプター抗体フレームワーク内に配列番号11~13に列挙されるCDR、変異体CDR、配列番号17の対応するCDR、結合単位、またはそれらの変異体を含み得る。ヒト化軽鎖可変ドメインは、フレームワーク領域内において、配列番号32のヒトアクセプター可変ドメイン配列と75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、98以上、99以上または100の同一性を有するアクセプター抗体フレームワーク内に配列番号14~16に列挙されたCDR、変異体CDR、配列番号19の対応するCDR、結合単位、またはそれらの変異体を含み得る。本発明はまた、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号27~31のうちのいずれか1つから選択される重鎖可変領域を含んでなる、抗原結合タンパク質を提供する。その抗原結合タンパク質は、配列番号34~36のうちのいずれか1つから選択される軽鎖可変領域を含み得る。その重鎖可変領域のいずれかとその軽鎖可変領域のいずれかとが組み合され得る。上記抗原結合タンパク質は、以下の重鎖可変領域と軽鎖可変領域との組み合わせのいずれか1つを含み得る:H0L0配列番号27および配列番号34、H0L1配列番号27および配列番号35、H0L2配列番号27および配列番号36、H1L0配列番号28および配列番号34、H1L1配列番号28および配列番号35、H1L2配列番号28および配列番号36、H2L0配列番号29および配列番号34、H2L1配列番号29および配列番号35、H2L2配列番号29および配列番号36、H3L0配列番号30および配列番号34、H3L1配列番号30および配列番号35、H3L2配列番号30および配列番号36、H4L0配列番号31および配列番号34、H4L1配列番号31および配列番号35またはH4L2配列番号31および配列番号36。本発明はまた、SAPに特異的に結合し、かつ配列番号37~40のうちのいずれか1つから選択される重鎖可変領域を含んでなる、抗原結合タンパク質を提供する。その抗原結合タンパク質は、配列番号41、配列番号42または配列番号74の軽鎖可変領域を含み得る。その重鎖可変領域のいずれかとその軽鎖可変領域のいずれかとが組み合され得る。上記抗原結合タンパク質は、以下の重鎖可変領域と軽鎖可変領域との組み合わせのいずれか1つを含み得る:H0L0配列番号37および配列番号41、H0L1配列番号37および配列番号42、H1L0配列番号38および配列番号41、H1L1配列番号38および配列番号42、H2L0配列番号39および配列番号41、H2L1配列番号39および配列番号42、H3L0配列番号40および配列番号41またはH3L1配列番号40および配列番号42。L0配列番号41は、L091A配列番号74で置換され得る。上記の抗体重鎖可変領域は、配列番号28に対して75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上または100の同一性を有し得る。上記の抗体軽鎖可変領域は、配列番号35に対して75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上または100の同一性を有し得る。上記の抗体重鎖可変領域は、配列番号40に対して75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上または100の同一性を有し得る。上記の抗体軽鎖可変領域は、配列番号41に対して75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上または100の同一性を有し得る。上記の抗体軽鎖可変領域は、配列番号74に対して75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上または100の同一性を有し得る。上記の抗体重鎖可変領域は、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2または1アミノ酸の置換、挿入または欠失を含んでなる、配列番号27~31のうちのいずれか1つの変異体であり得る。上記の抗体軽鎖可変領域は、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2または1アミノ酸の置換、挿入または欠失を含んでなる、配列番号34~36のうちのいずれか1つの変異体であり得る。上記の抗体重鎖可変領域は、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2または1アミノ酸の置換、挿入または欠失を含んでなる、配列番号37~40のうちのいずれか1つの変異体であり得る。上記の抗体軽鎖可変領域は、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2または1アミノ酸の置換、挿入または欠失を含んでなる、配列番号41、42または74の変異体であり得る。例えば、上に記載された基準CDRおよび基準フレームワーク残基の置換は、少なくとも75同一であるかまたは30アミノ酸までの置換を含んでなる変異体配列として、変異体重鎖可変領域または変異体軽鎖可変領域にも存在し得る。上記重鎖可変領域のいずれかが、好適なヒト定常領域と組み合わされ得る。上記軽鎖可変領域のいずれかが、好適な定常領域と組み合わされ得る。本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号62の重鎖および/または配列番号64の軽鎖可変領域を含み得る。上記の抗体重鎖は、配列番号62に対して75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上または100の同一性を有し得る。上記の抗体軽鎖は、配列番号64に対して75以上、80以上、85以上、90以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上または100の同一性を有し得る。上記の抗体重鎖は、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2または1アミノ酸の置換、挿入または欠失を含んでなる、配列番号62のいずれか1つの変異体であり得る。上記の抗体軽鎖は、30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2または1アミノ酸の置換、挿入または欠失を含んでなる、配列番号64のいずれか1つの変異体であり得る。円盤様のSAP分子は、2つの面を有する。5つの各プロトマー上に存在する単一のアルファヘリックスは、A面上に位置する。各プロトマーのカルシウム依存性リガンド結合ポケットは、B面上に位置し、ゆえに、この面は、SAPがアミロイド原線維に結合していると塞がれる。治療的有用性を有する本発明の抗原結合タンパク質の場合、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質によって認識されるエピトープは、望ましくは、SAPがアミロイド沈着物に結合しているときにSAPに接近しやすいものであるので、SAP分子のA面または縁に位置する。そして、本抗原結合タンパク質は、アミロイドと結合したSAPを認識することができ、アミロイドと結合したSAPに結合することができ、その結果、身体の効率的なマクロファージ依存性クリアランス機構の引き金を引く補体の活性化をもたらす。したがって、本発明の実施形態では、本抗原結合タンパク質は、インビボにおいてアミロイド原線維に結合したヒトSAPに結合する。本発明の別の実施形態では、本抗原結合タンパク質は、ヒトSAPのA面に結合する。本抗原結合タンパク質は、ラット、マウス、ウサギ、ラクダまたは関連するラクダ科の種または霊長類例えば、カニクイザル、旧世界ザル、大型類人猿またはヒトに由来し得る。特定の実施形態において、本抗原結合タンパク質は、マウスに由来する。別の実施形態において、本抗原結合タンパク質は、ヒトに由来する。本抗原結合タンパク質は、ヒト化抗体またはキメラ抗体であり得る。本抗原結合タンパク質は、ヒト抗体であり得る。本抗原結合タンパク質は、マウス抗体ではない。本抗原結合タンパク質は、任意のアイソタイプまたはサブクラスであり得る定常領域を含み得る。その定常領域は、IgGアイソタイプ、例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4またはそれらの変異体であり得る。本抗原結合タンパク質の定常領域は、IgG1であり得る。本発明の特定の実施形態において、本抗原結合タンパク質は、補体の活性化において機能的な定常領域、例えば、ヒトIgG1、IgG2またはIgG3の定常領域を含む。本発明の別の実施形態において、本抗原結合タンパク質は、マクロファージへの結合において機能的な定常領域、例えば、ヒトIgG1またはIgG3の定常領域を含む。本発明のさらなる実施形態において、抗原結合タンパク質は、補体の活性化とマクロファージへの結合の両方において機能的な定常領域、例えば、ヒトIgG1またはIgG3の定常領域を含む。本抗原結合タンパク質は、その抗体が、変更されたエフェクター機能/ADCCおよび/または補体の活性化を有するように変異された定常ドメインから選択される1つ以上の改変を含み得る。好適な改変の例は、Shieldsetal.J.Biol.Chem2001276:6591-6604、Lazaretal.PNAS2006103:4005-4010およびUS6737056、国際公開第2004063351号および国際公開第2004029207号に記載されている。本抗原結合タンパク質は、その抗原結合タンパク質が、変更されたエフェクター機能/ADCCおよび/または補体の活性化を有するように変更されたグリコシル化プロファイルを有する定常ドメインを含み得る。変更されたグリコシル化プロファイルを有する抗原結合タンパク質を生成するのに適した方法の例は、国際公開第2003/011878号、国際公開第2006/014679号およびEP1229125に記載されている。本発明の実施形態では、抗原結合に関与する領域例えば、CDR内にアミド分解を受けやすい残基を有しない抗原結合タンパク質が選択される。本発明のさらなる実施形態では、補体の活性化に関与する領域内にアミド分解を受けやすい残基を有しない抗原結合タンパク質が選択される。本発明はまた、本明細書中に記載されるような抗原結合タンパク質をコードする核酸分子を提供する。その核酸分子は、重鎖可変配列または重鎖完全長配列と、軽鎖可変配列または軽鎖完全長配列の両方をコードする配列を含み得る。あるいは、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質をコードする核酸分子は、重鎖可変配列もしくは重鎖完全長配列、または軽鎖可変配列もしくは軽鎖完全長配列をコードする配列を含み得る。重鎖可変領域をコードする核酸分子は、配列番号51または53~57のうちのいずれか1つを含み得る。軽鎖可変領域をコードする核酸分子は、配列番号52または58~60のうちのいずれか1つを含み得る。上記重鎖をコードする核酸分子は、配列番号61を含み得る。上記軽鎖をコードする核酸分子は、配列番号63を含み得る。上記重鎖可変領域をコードする核酸分子は、配列番号65または67~70のうちのいずれか1つを含み得る。上記軽鎖可変領域をコードする核酸分子は、配列番号66または71~73のうちのいずれか1つを含み得る。上記核酸分子はまた、コードされる重鎖および/または軽鎖のアミノ酸配列を変更しない1つ以上のヌクレオチド置換を含み得る。本発明はまた、本明細書中に記載されるような核酸分子を含む発現ベクターを提供する。本明細書中に記載されるような発現ベクターを含む組換え宿主細胞もまた提供される。本明細書中に記載される抗原結合タンパク質は、好適な宿主細胞において産生され得る。本明細書中に記載されるような抗原結合タンパク質を生成するための方法は、本明細書中に記載されるような宿主細胞を培養する工程および抗原結合タンパク質を回収する工程を包含し得る。形質転換された、トランスフェクトされたまたは形質導入された組換え宿主細胞は、少なくとも1つの発現カセットを含み得、ここで、前記発現カセットは、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質の重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、さらに、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。あるいは、形質転換された、トランスフェクトされたまたは形質導入された組換え宿主細胞は、少なくとも1つの発現カセットを含み得、ここで、第1の発現カセットが、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質の重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、さらに、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む第2のカセットを含む。安定的に形質転換された宿主細胞は、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質の重鎖および/または軽鎖をコードする1つ以上発現カセットを含むベクターを含み得る。例えば、そのような宿主細胞は、軽鎖をコードする第1のベクターおよび重鎖をコードする第2のベクターを含み得る。宿主細胞は、真核生物、例えば、哺乳動物の細胞であり得る。そのような細胞株の例としては、CHOまたはNS0が挙げられる。宿主細胞は、培養液、例えば、無血清培養液中で培養され得る。本抗原結合タンパク質は、宿主細胞によって培養液中に分泌され得る。本抗原結合タンパク質は、本抗原結合タンパク質を含む前記培養液に対して少なくとも95以上例えば、98以上に精製することができる。本抗原結合タンパク質および薬学上許容される担体を含んでなる医薬組成物が提供され得る。使用するための指示書とともに医薬組成物を備えるキットオブパーツkit-of-partsが提供され得る。便宜のために、そのキットは、使用するための指示書とともに、所定量の試薬を備え得る。抗体の構造インタクトな抗体ほとんどの脊椎動物種由来の抗体の軽鎖は、定常領域のアミノ酸配列に基づいて、カッパーおよびラムダと呼ばれる2つのタイプのうちの1つに割り当てることができる。ヒト抗体は、重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、5つの異なるクラスIgA、IgD、IgE、IgGおよびIgMに割り当てることができる。IgGおよびIgAは、さらに、サブクラスIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4、ならびにIgA1およびIgA2に細分することができる。少なくともIgG2a、IgG2bを有するマウスおよびラットにおいて種変異体が存在する。可変領域のより保存された部分は、フレームワーク領域FRと呼ばれる。インタクトな重鎖および軽鎖の可変ドメインの各々は、3つのCDRに接続された4つのFRを含む。各鎖におけるCDRは、FR領域によって共に近位に保持され、他の鎖のCDRとともに抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常領域は、抗体と抗原との結合に直接関わらないが、走化性作用、オプソニン作用、および潜在的には、生細胞の抗原標的の場合、補体の細胞溶解作用をもたらす様々なエフェクター機能例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害ADCCへの関与、Fcγ受容体への結合によるファゴサイトーシス、胎児型Fc受容体FcRnを介した半減期/クリアランス速度、およびC1q成分を介した補体の活性化を示す。IgG1クラスのヒト抗体は、補体系の活性化において最も強力であり、ゆえに、本発明の抗体を治療に適用するために望ましいアイソタイプである。ヒトIgG2定常領域は、古典経路によって補体を活性化する能力または抗体依存性細胞傷害を媒介する能力を本質的に欠くと報告されている。IgG4定常領域は、古典経路によって補体を活性化する能力を欠くと報告されており、抗体依存性細胞傷害をほんの弱く媒介する。これらのエフェクター機能を本質的に欠く抗体は、非溶解性抗体と呼ばれることがある。ヒト抗体ヒト抗体は、当業者に公知のいくつかの方法によって生成され得る。ヒト抗体は、ヒトミエローマ細胞株またはマウス-ヒトヘテロミエローマ細胞株を用いたハイブリドーマ法によって生成することができるKozbor1984J.Immunol133,3001およびBrodeur,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,51-63MarcelDekkerInc,1987を参照のこと。代替方法としては、ファージライブラリーまたはトランスジェニックマウスその両方ともがヒト可変領域レパートリーを使用するの使用が挙げられるWinter1994Annu.Rev.Immunol12:433-455;Green1999J.Immunol.Methods231:11-23を参照のこと。マウス免疫グロブリン遺伝子座がヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントで置き換えられたいくつかの系統のトランスジェニックマウスが、現在入手可能であるTomizuka2000PNAS97:722-727;Fishwild1996NatureBiotechnol.14:845-851;Mendez1997NatureGenetics,15:146-156を参照のこと。抗原チャレンジの際、そのようなマウスは、ヒト抗体のレパートリーを産生することができ、そのレパートリーから目的の抗体を選択することができる。ヒト抗原結合タンパク質およびそのフラグメントを生成するために、ファージディスプレイ技術を用いることができるMcCafferty1990Nature348:552-553およびGriffithsetal.1994EMBO13:3245-3260を参照のこと。親和性成熟の手法MarksBio/technol199210:779-783を用いることにより、結合親和性が改善されることがあり、ここで、重H鎖可変領域および軽L鎖可変領域を天然に存在する変異体で順次置き換え、改善された結合親和性に基づいて選択することによって、最初のヒト抗体の親和性が改善される。この手法の変法例えば、エピトープインプリンティングもまた、現在利用可能である例えば、国際公開第93/06213号;Waterhouse1993Nucl.AcidsRes.21:2265-2266を参照のこと。キメラ抗体およびヒト化抗体キメラ抗体は、通常、組換えDNA法を用いて作製される。その抗体をコードするDNA例えば、cDNAを、従来の手順を用いて例えば、抗体のH鎖およびL鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって単離し、配列決定する。ハイブリドーマ細胞は、そのようなDNAの典型的な起源として役立つ。そのDNAは、いったん単離されると、発現ベクターに配置され、次いでその発現ベクターを、別途、免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞例えば、E.coli、COS細胞、CHO細胞またはミエローマ細胞にトランスフェクトすることにより、抗体の合成がもたらされる。そのDNAは、ヒトのL鎖およびH鎖に対するコード配列で、対応する非ヒト例えば、マウスH定常領域およびL定常領域を置換することによって、改変され得る例えば、Morrison1984PNAS81:6851を参照のこと。免疫原性の大幅な低下は、非ヒト例えば、マウス抗体ドナー抗体のCDRだけをヒトフレームワークアクセプターフレームワークおよびヒト定常領域に移植してヒト化抗体を作製することによって達成することができるJonesetal.1986Nature321:522-525;およびVerhoeyenetal.1988Science239:1534-1536を参照のこと。しかしながら、CDR移植自体では、抗原結合特性が完全に保持されない可能性があり、かなりの抗原結合親和性を回復するべきである場合、ドナー抗体のいくつかのフレームワーク残基時折、復帰突然変異と呼ばれるをヒト化分子において保存する必要があることが頻繁にみられるQueenetal.1989PNAS86:10,029-10,033:Coetal.1991Nature351:501-502を参照のこと。この場合、ヒトフレームワークFRをもたらすために、非ヒトドナー抗体と最も高い配列相同性を示すヒト可変領域をデータベースから選択する。ヒトFRの選択は、ヒトコンセンサス抗体または個別のヒト抗体のいずれかから行うことができる。必要ならば、ドナー抗体の重要な残基をヒトアクセプターフレームワークに置換することによって、CDRのコンフォメーションを保存することができる。そのような構造的に重要な残基の特定を助けるために、抗体のコンピュータモデリングを用いてもよい国際公開第99/48523号を参照のこと。あるいは、ヒト化は、ベニアリングveneeringのプロセスによって行ってもよい。独特のヒトおよびマウスの免疫グロブリン重鎖可変領域および免疫グロブリン軽鎖可変領域の統計解析から、露出される残基の正確なパターンが、ヒト抗体およびマウス抗体において異なり、ほとんどの個別の表面の位置が、少数の種々の残基に対して強い優先性を有することが明らかになったPadlanetal.1991Mol.Immunol.28:489-498;およびPedersenetal.1994J.Mol.Biol.235:959-973を参照のこと。ゆえに、そのフレームワーク領域内の、ヒト抗体に通常見られる残基とは異なる露出残基を置き換えることによって、非ヒトFvの免疫原性を低下させることが可能である。タンパク質の抗原性は、表面への接近可能性と相関し得るので、表面残基の置換は、マウス可変領域をヒト免疫系に対して見えなくするのに十分であり得るMarketal.1994inHandbookofExperimentalPharmacologyVol.113:ThepharmacologyofMonoclonalAntibodies,Springer-Verlag,105-134もまた参照のこと。このヒト化の手順は、抗体の表面だけを変更して、支持残基はそのまま保つので、ベニアリングと呼ばれる。さらなる代替アプローチとしては、国際公開第04/006955号に示されているアプローチ、および細菌発現系を使用し、配列においてヒト生殖系列に近い抗体を生成するHumaneeringTMKalobiosの手順Alfenito-MAdvancingProteinTherapeuticsJanuary2007,SanDiego,Californiaが挙げられる。二重特異性抗原結合タンパク質二重特異性抗原結合タンパク質は、少なくとも2つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗原結合タンパク質である。そのような抗原結合タンパク質を作製する方法は、当該分野で公知である。従来、二重特異性抗原結合タンパク質の組換え作製は、2つの免疫グロブリンH鎖-L鎖対の同時発現に基づき、ここで、その2つのH鎖は、異なる結合特異性を有するMillsteinetal.1983Nature305:537-539;国際公開第93/08829号;およびTrauneckeretal.1991EMBO10:3655-3659を参照のこと。H鎖とL鎖とのランダムな組み合わせを理由に、潜在的に10個の異なる抗体構造の混合物そのうちの1つだけが、所望の結合特異性を有するが生成される。代替アプローチは、所望の結合特異性を有する可変ドメインを、ヒンジ領域、CH2およびCH3領域の少なくとも一部を含む重鎖定常領域と融合することを含む。軽鎖結合に必要な部位を含むCH1領域は、その融合物の少なくとも1つに存在し得る。これらの融合物および所望であればL鎖をコードするDNAが、別個の発現ベクターに挿入され、次いで、好適な宿主生物に同時トランスフェクトされる。にもかかわらず、2つまたは3つすべての鎖に対するコード配列を1つの発現ベクターに挿入することも可能である。1つのアプローチにおいて、二重特異性抗体は、一方の腕における第1の結合特異性を有するH鎖、および他方の腕における第2の結合特異性を提供するH-L鎖対から構成される国際公開第94/04690号を参照のこと。Sureshetal.1986MethodsinEnzymology121:210もまた参照のこと。抗原結合フラグメント定常領域を欠くフラグメントは、古典経路によって補体を活性化する能力または抗体依存性細胞傷害を媒介する能力を欠く。従来、そのようなフラグメントは、例えば、パパイン消化による、インタクトな抗体のタンパク分解性の消化によって生成されるが例えば、国際公開第94/29348号を参照のこと、組換え的に形質転換された宿主細胞から直接産生されてもよい。ScFvの生成については、Birdetal.1988Science242:423-426を参照のこと。さらに、抗原結合フラグメントは、下に記載されるような種々の操作手法を用いて生成されてもよい。Fvフラグメントは、Fabフラグメントよりも低いその2本の鎖の相互作用エネルギーを有するとみられる。VHドメインとVLドメインとの会合を安定化するために、それらは、ペプチドBirdetal.1988Science242:423-426;Hustonetal.1988PNAS8516:5879-5883、ジスルフィド架橋Glockshuberetal.1990Biochemistry29:1362-1367およびノブインホールknobinhole変異Zhuetal.1997ProteinSci.,6:781-788を用いて連結された。ScFvフラグメントは、当業者に周知の方法によって作製することができるWhitlowetal.1991MethodsCompanionMethodsEnzymol,2:97-105およびHustonetal.1993Int.Rev.Immunol10:195-217を参照のこと。ScFvは、E.coliなどの細菌細胞または真核細胞において産生されることがある。ScFvの欠点の1つは、その生成物が一価であることそのせいで、多価の結合によるアビディティーの増強が妨げられるおよび半減期が短いことである。これらの問題を克服する試みとしては、化学的結合Adamsetal.1993Can.Res53:4026-4034;およびMcCartneyetal.1995ProteinEng.8:301-314によるか、または対になっていないC末端のシステイン残基を含むScFvの自発的な部位特異的二量体化Kipriyanovetal.1995Cell.Biophys26:187-204を参照のことによる、追加のC末端システインを含むScFvから作製される二価ScFv’2が挙げられる。あるいは、ペプチドリンカーを3~12残基に短縮することによってScFvが多量体を形成せざるを得なくすることにより、ダイアボディを形成することができるHolligeretal.1993PNAS90:6444-6448を参照のこと。そのリンカーの短縮は、なおもさらにScFv三量体トリアボディtriabodies、Korttetal.1997ProteinEng10:423-433を参照のことおよび四量体テトラボディtetrabodies、LeGalletal.1999FEBSLett,453:164-168を参照のことをもたらすことができる。二価のScFv分子の構築は、タンパク質二量体化モチーフとの遺伝的融合によってミニ抗体Packetal.1992Biochemistry31:1579-1584を参照のことおよびミニボディminibodiesHuetal.1996CancerRes.56:3055-3061を参照のことを形成することによっても行うことができる。ScFv-Sc-FvタンデムScFV2は、2つのScFv単位を第3のペプチドリンカーによって連結することによっても生成され得るKuruczetal.1995J.Immol.154:4576-4582を参照のこと。1つの抗体由来のVHドメインが別の抗体のVLドメインに短いリンカーによって接続されたものからなる2つの一本鎖融合産物を非共有結合的に会合することによって、二重特異性ダイアボディを作製することができるKipriyanovetal.1998Int.J.Can77:763-772を参照のこと。そのような二重特異性ダイアボディの安定性は、前に記載されたようなジスルフィド架橋もしくはノブインホール変異を導入することによって、または一本鎖ダイアボディScDbを形成することによって増強することができ、ここで、2つのハイブリッドScFvフラグメントは、ペプチドリンカーを介して接続されるKontermannetal.1999J.Immunol.Methods226:179-188を参照のこと。四価の二重特異性分子は、例えば、ScFvフラグメントを、ヒンジ領域を介してIgG分子のCH3ドメインまたはFabフラグメントに融合することによって、入手可能であるColomaetal.1997NatureBiotechnol.15:159-163を参照のこと。あるいは、四価の二重特異性分子は、二重特異性の一本鎖ダイアボディの融合によって作り出されたAltetal.1999FEBSLett454:90-94を参照のこと。ヘリックス-ループ-ヘリックスモチーフを含むリンカーを用いたScFv-ScFvタンデムの二量体化DiBiミニ抗体、Mulleretal.1998FEBSLett432:45-49を参照のことまたは分子内の対形成を防止する配向で4つの抗体可変ドメインVHおよびVLを含む一本鎖分子の二量体化タンデムダイアボディ、Kipriyanovetal.1999J.Mol.Biol.293:41-56を参照のことによって、より小さい四価の二重特異性分子を形成することもできる。Fab’フラグメントの化学的結合によるか、またはロイシンジッパーを介したヘテロ二量体化によって、二重特異性Fab’2フラグメントを作り出すことができるShalabyetal.1992J.Exp.Med.175:217-225;およびKostelnyetal.1992,J.Immunol.148:1547-1553を参照のこと。単離されたVHおよびVLドメインDomantisplcもまた利用可能であるUS6,248,516;US6,291,158;およびUS6,172,197を参照のこと。ヘテロ結合体抗体ヘテロ結合体抗体は、任意の好都合な架橋方法を用いて形成される、2つの共有結合的に結合された抗体から構成される。例えば、US4,676,980を参照のこと。他の改変本発明の抗原結合タンパク質は、そのエフェクター機能を増強または変更する他の改変を含み得る。抗体のFc領域と様々なFc受容体FcγRとの相互作用は、抗体依存性細胞傷害ADCC、補体の固定、ファゴサイトーシスおよび抗体の半減期/クリアランスを含む、抗体のエフェクター機能を媒介すると考えられている。抗体のFc領域に対する様々な改変は、所望の特性に応じて行われ得る。例えば、別途溶解性の抗体を非溶解性にするFc領域における特定の変異は、EP0629240およびEP0307434に詳述されているものであるか、またはサルベージ受容体に結合するエピトープを抗体に組み込むことにより、血清半減期を延長し得るUS5,739,277を参照のこと。ヒトFcγ受容体としては、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIaおよび胎児型FcRnが挙げられる。Shieldsetal.2001J.Biol.Chem276:6591-6604では、IgG1残基の共通のセットが、すべてのFcγRへの結合に関わるが、FcγRIIおよびFcγRIIIは、この共通セットの外側の異なる部位を利用することが立証された。1つの群のIgG1残基は、アラニンに変更されたとき、すべてのFcγRへの結合性を低下させた:Pro-238、Asp-265、Asp-270、Asn-297およびPro-239。そのすべてが、IgGCH2ドメインに存在し、CH1およびCH2を結合するヒンジ付近に密集している。FcγRIは、結合のためにIgG1残基の共通セットだけを利用するが、FcγRIIおよびFcγRIIIは、その共通セットに加えて異なる残基と相互作用する。いくつかの残基の変更によって、FcγRII例えば、Arg-292またはFcγRIII例えば、Glu-293に対する結合だけが低下した。いくつかの変異体は、FcγRIIまたはFcγRIIIに対して改善された結合性を示したが、他方の受容体への結合性に影響しなかった例えば、Ser-267Alaは、FcγRIIへの結合性を改善したが、FcγRIIIへの結合性は影響されなかった。他の変異体は、FcγRIIまたはFcγRIIIに対する改善された結合性を示し、他方の受容体への結合性を低下させた例えば、Ser-298Alaは、FcγRIIIへの結合性を改善し、FcγRIIへの結合性を低下させた。FcγRIIIaについては、最もよく結合するIgG1変異体は、Ser-298、Glu-333およびLys-334においてアラニン置換を組み合わせていた。胎児型FcRn受容体は、抗体のクリアランスと組織を越えたトランスサイトーシスの両方にかかわると考えられているJunghans1997Immunol.Res16:29-57;およびGhetieetal.2000Annu.Rev.Immunol.18:739-766を参照のこと。ヒトFcRnと直接相互作用すると判定されたヒトIgG1残基としては、Ile253、Ser254、Lys288、Thr307、Gln311、Asn434およびHis435が挙げられる。この項に記載される位置のいずれにおける置換も、血清半減期の延長および/または抗体のエフェクター特性の変更を可能にし得る。他の改変としては、抗体のグリコシル化変異体が挙げられる。定常領域内の保存された位置における抗体のグリコシル化は、抗体の機能、特に、上に記載された機能などのエフェクター機能に対して著明な影響を有すると知られている例えば、Boydetal.1996Mol.Immunol.32:1311-1318を参照のこと。1つ以上の炭水化物部分が付加、置換、削除または改変された、抗体またはその抗原結合フラグメントのグリコシル化変異体が企図される。アスパラギン-X-セリンまたはアスパラギン-X-トレオニンモチーフを導入することにより、炭水化物部分を酵素的に結合するための潜在的な部位が作り出されるので、それを用いて、抗体のグリコシル化を操作してもよい。Rajuetal.2001Biochemistry40:8868-8876では、ベータ-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼgalactosyltransferaceおよび/またはアルファ,2,3シアリルトランスフェラーゼを用いた再ガラクトシル化regalactosylationおよび/または再シアル化resialylationのプロセスによって、TNFR-IgGイムノアドヘシンの末端のシアル化sialyationが増加した。末端のシアル化の増加は、免疫グロブリンの半減期を延長させると考えられる。抗体は、ほとんどの糖タンパク質と同様に、通常、グリコフォームの混合物として生成される。この混合物は、抗体が真核生物、特に、哺乳動物の細胞において産生されるとき、特に明らかである。規定のグリコフォームを製造する種々の方法が開発されているZhangetal.2004Science303:371:Searsetal.2001Science291:2344;Wackeretal.2002Science298:1790;Davisetal.2002Chem.Rev.102:579;Hangetal.2001Acc.Chem.Res34:727を参照のこと。本明細書中に記載されるような抗体例えば、IgGアイソタイプ、例えば、IgG1の抗体は、規定数例えば、7つ以下、例えば、5つ以下、例えば、2つまたは1つのグリコフォームを含み得る。抗体は、非タンパク質性non-proteinaeousポリマー例えば、ポリエチレングリコールPEG、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンに結合されてもよい。タンパク質とPEGとの結合体化は、タンパク質の半減期を延長するため、ならびにタンパク質の抗原性および免疫原性を低下させるための、確立された手法である。種々の分子量およびスタイル線状または分枝状を有するPEG化の使用が、インタクトな抗体ならびにFab’フラグメントを用いて調べられているKoumenisetal.2000Int.J.Pharmaceut.198:83-95を参照のこと。生成方法抗原結合タンパク質は、トランスジェニック生物例えば、ヤギPollocketal.1999J.Immunol.Methods231:147-157を参照のこと、ニワトリMorrow2000Genet.Eng.News20:1-55を参照のこと、マウスPollocketal.を参照のことまたは植物Doran2000Curr.OpinionBiotechnol.11:199-204;Ma1998Nat.Med.4:601-606;Baezetal.2000BioPharm13:50-54;Stogeretal.2000PlantMol.Biol.42:583-590を参照のことにおいて産生され得る。抗原結合タンパク質は、化学合成によっても生成され得る。しかしながら、抗原結合タンパク質は、通常、当業者に周知の組換え細胞培養技術を用いて生成される。抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、単離され、複製可能なベクター例えば、さらなるクローニング増幅または発現のためのプラスミドに挿入される。特に、宿主細胞がCHOまたはNS0である場合、1つの発現系は、グルタメート合成酵素系例えば、LonzaBiologicsが販売するものである。抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、従来の手順例えば、オリゴヌクレオチドプローブを用いて、容易に単離され、配列決定される。使用され得るベクターとしては、プラスミド、ウイルス、ファージ、トランスポゾン、ミニ染色体が挙げられ、その中でもプラスミドが通常使用される。一般に、そのようなベクターは、発現を促進するために、抗原結合タンパク質ポリヌクレオチドに作動可能に連結された、シグナル配列、複製起点、1つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーターおよび転写終結配列をさらに含む。軽鎖および重鎖をコードするポリヌクレオチドは、別個のベクターに挿入され、同じ宿主細胞に同時にもしくは連続的に導入されてもよいし例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションまたは形質導入によって、所望であれば、重鎖と軽鎖の両方を、前記導入の前に同じベクターに挿入してもよい。コドン最適化は、その配列でトランスフェクトされたときのレベルと比較して、コドン最適化された遺伝子でトランスフェクトされたときに宿主細胞によって産生されるタンパク質の総レベルをより高くする目的で使用されることがある。いくつかの方法が公開されているNakamuraetal.1996NucleicAcidsResearch24:214-215;W098/34640;W097/11086。遺伝暗号の重複性に起因して、本明細書中に開示されるポリヌクレオチドに対する代替のポリヌクレオチド特に、所与の宿主細胞における発現のためにコドン最適化されたものもまた、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質をコードし得る。ゆえに、本発明の抗原結合タンパク質のコドン使用頻度は、転写物および/または生成物の収量を増大するように、宿主細胞のコドンバイアスに適応するように改変することができる例えば、HoekemaetalMolCellBiol198778:2914-24。コドンの選択は、発現のために使用される宿主細胞との好適な適合性に基づき得る。シグナル配列抗原結合タンパク質は、成熟タンパク質のN末端に特異的な切断部位を有する異種のシグナル配列との融合タンパク質として生成されてもよい。そのシグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされるべきである。原核生物の宿主細胞の場合、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼまたは熱安定性エンテロトキシンIIリーダーであり得る。酵母による分泌の場合、シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダーまたは酸ホスファターゼリーダーであり得る例えば、国際公開第90/13646号を参照のこと。哺乳動物細胞系では、単純ヘルペスgDシグナルなどのウイルスの分泌リーダー、および天然の免疫グロブリンシグナル配列が好適であり得る。通常、シグナル配列は、抗原結合タンパク質をコードするDNAに読み枠でライゲートされる。配列番号79に示されるシグナル配列などのマウスシグナル配列が使用され得る。複製起点複製起点は、当該分野で周知であるほとんどのグラム陰性菌に適するpBR322、ほとんどの酵母に適する2μプラスミド、およびほとんどの哺乳動物細胞に適する様々なウイルス起点例えば、SV40、ポリオーマ、アデノウイルス、VSVまたはBPV。一般に、複製起点の構成要素は、哺乳動物の発現ベクターにとって必要とされないが、SV40は、初期プロモーターを含むので、使用されることがある。選択マーカー典型的な選択遺伝子は、a抗生物質または他のトキシン、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、またはb栄養要求性のauxiotrophic欠損を補完するか、もしくは複合培地において利用可能でない栄養分を供給するタンパク質、あるいはcそれらの両方の組み合わせをコードする。選択スキームは、宿主細胞の成長の停止を含み得る。抗原結合タンパク質をコードする遺伝子で首尾よく形質転換された細胞は、例えば、同時に送達された選択マーカーによって付与された薬物耐性に起因して、生存する。一例は、DHFR選択マーカーであり、ここで、形質転換体は、メトトレキサートの存在下において培養される。目的の外来性遺伝子のコピー数を増幅させるために、メトトレキサートの存在下において、そのメトトレキサートの量を増加させながら細胞を培養することができる。CHO細胞は、DHFR選択にとって特に有用な細胞株である。さらなる例は、グルタメート合成酵素発現系LonzaBiologicsである。酵母において使用するための選択遺伝子の例は、trp1遺伝子であるStinchcombetal.1979Nature282:38を参照のこと。プロモーター抗原結合タンパク質の発現に適したプロモーターは、その抗原結合タンパク質をコードするDNA/ポリヌクレオチドに作動可能に連結される。原核生物宿主用のプロモーターとしては、phoAプロモーター、ベータ-ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン、ならびにTacなどのハイブリッドプロモーターが挙げられる。酵母細胞における発現に適したプロモーターとしては、3-ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の糖分解酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒドglyceralderhyde3リン酸脱水素酵素、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース6リン酸イソメラーゼ、3-ホスホグリセリン酸ムターゼおよびグルコキナーゼが挙げられる。誘導性酵母プロモーターとしては、アルコールデヒドロゲナーゼ2、イソシトクロムC、酸ホスファターゼ、メタロチオネイン、および窒素代謝またはマルトース/ガラクトース利用に関与する酵素が挙げられる。哺乳動物細胞系における発現用のプロモーターとしては、ウイルスプロモーター例えば、ポリオーマ、鶏痘およびアデノウイルス例えば、アデノウイルス2、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス特に、前初期遺伝子プロモーター、レトロウイルス、B型肝炎ウイルス、アクチン、ラウス肉腫ウイルスRSVプロモーターおよび初期または後期サルウイルス40が挙げられる。当然のことながら、プロモーターの選択は、発現に使用される宿主細胞との好適な適合性に基づく。第1のプラスミドは、RSVおよび/またはSV40および/またはCMVプロモーター、軽鎖可変領域VLをコードするDNA、ネオマイシンおよびアンピシリン耐性選択マーカーとともにκC領域を含み得、第2のプラスミドは、RSVまたはSV40プロモーター、重鎖可変領域VHをコードするDNA、γ1定常領域をコードするDNA、DHFRおよびアンピシリン耐性マーカーを含み得る。エンハンサーエレメント必要に応じて、例えば、高等真核生物における発現のために、ベクター内のプロモーターエレメントに作動可能に連結されたエンハンサーエレメントを使用してもよい。哺乳動物のエンハンサー配列としては、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、フェトプロテインおよびインスリン由来のエンハンサーエレメントが挙げられる。あるいは、真核eukaroytic細胞ウイルス由来のエンハンサーエレメント例えば、SV40エンハンサーbp100~270におけるもの、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマpolymaエンハンサー、バキュロウイルスエンハンサーまたはマウスIgG2a遺伝子座国際公開第04/009823号を参照のことを使用してもよい。エンハンサーは、ベクター上のプロモーターに対して上流の部位に配置され得る。あるいは、エンハンサーは、他の位置、例えば、非翻訳領域内またはポリアデニル化シグナルの下流に配置され得る。エンハンサーの選択および位置決めは、発現に使用される宿主細胞との好適な適合性に基づき得る。ポリアデニル化/終結真核生物系において、ポリアデニル化シグナルは、本抗原結合タンパク質をコードするDNA/ポリヌクレオチドに作動可能に連結される。そのようなシグナルは、通常、オープンリーディングフレームの3’に配置される。哺乳動物系において、非限定的な例としては、成長ホルモン、伸長因子-1アルファおよびウイルス例えば、SV40遺伝子に由来するシグナル、またはレトロウイルスの末端反復配列が挙げられる。酵母系において、ポリアデニル化polydenylation/終結シグナルの非限定的な例としては、ホスホグリセリン酸キナーゼPGKおよびアルコールデヒドロゲナーゼ1ADH遺伝子に由来するものが挙げられる。原核生物系において、ポリアデニル化シグナルは、通常必要とされず、その代わりにより短くかつより明確なターミネーター配列を使用することが通例である。ポリアデニル化/終結配列の選択は、発現に使用される宿主細胞との好適な適合性に基づき得る。高収量のための他の方法/エレメント上記に加えて、収量を増加させるために使用することができる他の特徴としては、クロマチンリモデリングエレメント、イントロンおよび宿主細胞特異的なコドンの改変が挙げられる。宿主細胞抗原結合タンパク質をコードするクローニングベクターまたは発現ベクターに適した宿主細胞は、原核prokaroytic細胞、酵母細胞または高等真核細胞である。好適な原核細胞としては、真正細菌、例えば、腸内細菌科例えば、Escherichia例えば、E.coli例えば、ATCC31,446;31,537;27,325、Enterobacter、Erwinia、KlebsiellaProteus、Salmonella例えば、Salmonellatyphimurium、Serratia、例えば、SerratiamarcescansおよびShigella、ならびにBacilli例えば、B.subtilisおよびB.licheniformisDD266710を参照のこと、Pseudomonas例えば、P.aeruginosaおよびStreptomycesが挙げられる。酵母宿主細胞のうち、Saccharomycescerevisiae、Schizosaccharomycespombe、Kluyveromyces例えば、ATCC16,045;12,424;24178;56,500、yarrowiaEP402、226、PichiapastorisEP183070、Pengetal.2004J.Biotechnol.108:185-192もまた参照のこと、Candida、TrichodermareesiaEP244234、Penicillin、TolypocladiumおよびAspergillus宿主例えば、A.nidulansおよびA.nigerもまた企図される。高等真核生物宿主細胞としては、哺乳動物細胞例えば、COS-1ATCCNo.CRL1650、COS-7ATCCCRL1651、ヒト胎児腎株293、ベビーハムスター腎臓細胞BHKATCCCRL.1632、BHK570ATCCNO:CRL10314、293ATCCNO.CRL1573、チャイニーズハムスター卵巣細胞CHO例えば、CHO-K1、ATCCNO:CCL61、DHFR-CHO細胞株例えば、DG44Urlaubetal.1986SomaticCellMol.Genet.12:555-556を参照のこと、特に、懸濁培養に適合されたCHO細胞株、マウスセルトリ細胞、サル腎臓細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞ATCCCRL-1587、HELA細胞、イヌ腎臓細胞ATCCCCL34、ヒト肺細胞ATCCCCL75、HepG2およびミエローマまたはリンパ腫細胞、例えば、NS0US5,807,715を参照のこと、Sp2/0、Y0が挙げられる。そのような宿主細胞は、抗原結合タンパク質の質、機能および/または収量を改変するようにさらに操作され得るか、または適合され得る。非限定的な例としては、特定の修飾例えば、グリコシル化酵素およびタンパク質フォールディングシャペロンの発現が挙げられる。細胞培養方法抗原結合タンパク質をコードするベクターで形質転換された宿主細胞は、当業者に公知の任意の方法によって培養され得る。宿主細胞は、スピナーフラスコ、ローラーボトルまたは中空糸システムにおいて培養され得るが、大規模生成の場合、特に懸濁培養のために撹拌槽反応器が使用される。その撹拌タンカーstirredtankersは、例えば、スパージャー、バッフルまたは低剪断インペラーを用いた通気に適合され得る。バッフルカラムおよびエアリフト反応器の場合、空気または酸素バブルによる直接的な通気が使用され得る。宿主細胞が、無血清培養液中で培養される場合、その培地には、通気プロセスの結果としての細胞損傷の防止を助ける細胞保護剤例えば、プルロニックF-68が補充される。宿主細胞の特徴に応じて、足場依存性細胞株に対する増殖基質としてマイクロ担体を使用してもよいし、細胞を懸濁培養これが典型的であるに適合してもよい。宿主細胞の培養、特に、無脊椎動物宿主細胞の培養では、種々の操作上の様式例えば、流加培養法、反復バッチ処理repeatedbatchprocessingDrapeauetal.1994Cytotechnology15:103-109を参照のこと、拡張バッチextendedbatchプロセスまたは灌流培養を利用してよい。組換え的に形質転換された哺乳動物宿主細胞は、ウシ胎仔血清FCSなどの血清含有培地中で培養され得るが、そのような宿主細胞は、必要に応じてエネルギー源例えば、グルコース、および組換えインスリンなどの合成成長因子が補充された、合成無血清培地例えば、Keenetal.1995Cytotechnology17:153-163に開示されているものまたは商業的に入手可能な培地例えば、ProCHO-CDMまたはUltraCHOTMCambrexNJ,USA中で培養され得る。宿主細胞の無血清培養は、それらの細胞が無血清条件において生育するように適合されていることが求められる場合がある。1つの適合アプローチは、そのような宿主細胞を血清含有培地中で培養し、その宿主細胞が無血清条件に適合できるようになるように、その培養液の80を無血清培地と繰り返し交換することである例えば、Scharfenbergetal.1995AnimalCellTechnology:Developmentstowardsthe21stcenturyBeuveryetal.eds,619-623,KluwerAcademicpublishersを参照のこと。培地中に分泌される抗原結合タンパク質は、意図された用途に適した精製の程度をもたらす種々の手法を用いて回収および精製され得る。例えば、ヒト患者を治療するための抗原結合タンパク質の使用では、通常、少なくとも95の純度、より通常では、98または99以上の純度粗培養液と比べてが要求される。その培養液由来の細胞残屑は、通常、遠心分離に続く、例えば、精密濾過、限外濾過および/または深層濾過を用いた、上清の清澄化工程によって除去される。種々の他の手法例えば、透析およびゲル電気泳動、ならびにクロマトグラフィー法例えば、ヒドロキシアパタイトHA、アフィニティークロマトグラフィー必要に応じて、ポリヒスチジンなどの親和性タグ化システムを含むおよび/または疎水性相互作用クロマトグラフィーHIC、US5,429,746を参照のことも利用可能である。様々な清澄化工程の後の抗体は、プロテインAまたはGアフィニティークロマトグラフィーを用いて捕捉することができる。さらなるクロマトグラフィー工程例えば、イオン交換および/またはHAクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換、サイズ排除クロマトグラフィーおよび硫酸アンモニウム沈殿を続けることができる。様々なウイルス除去工程例えば、DV-20フィルターを用いた、例えば、ナノ濾過も用いてもよい。これらの様々な工程の後、少なくとも75mg/ml以上、または100mg/ml以上の抗原結合タンパク質を含む精製された例えば、モノクローナル調製物が提供される。そのような調製物は、凝集型の抗原結合タンパク質を実質的に含まない。抗原結合フラグメントの発現のために、細菌系が使用され得る。そのようなフラグメントは、細胞内、周辺質内に局在化され得るか、または細胞外に分泌され得る。不溶性タンパク質が、抽出され、再度折り畳まれることにより、当業者に公知の方法に従って活性なタンパク質を形成することができるSanchezetal.1999J.Biotechnol.72:13-20;およびCupitetal.1999LettApplMicrobiol29:273-277を参照のこと。アミド分解は、アミド官能基が除去される化学反応である。生化学では、その反応は、アミノ酸のアスパラギンおよびグルタミンのアミド含有側鎖を損傷するので、タンパク質の分解において重要である。アスパラギンは、イソアスパルテートとアスパルテートとの混合物に変換される。グルタミン残基のアミド分解は、かなり低比率でしか生じない。アミド分解反応は、タンパク質の有用な寿命を制限し得る要因の1つであると考えられており、治療用タンパク質の製造中に生じる最も一般的な翻訳後修飾の1つでもある。例えば、インビトロまたはインビボにおける生物学的活性の低下または喪失は、組換えヒトDNAseおよび組換え可溶性CD4について報告されているのに対し、他の組換えタンパク質は、影響されないとみられる。医薬組成物本明細書中に記載されるような抗原結合タンパク質の精製された調製物は、本明細書中に記載されるヒトの疾患、障害および状態の治療において使用するために医薬組成物に組み込まれ得る。疾患、障害および状態という用語は、交換可能に使用される。上記医薬組成物は、アミロイド沈着物が組織に存在し、臨床上の疾病に至る構造的および機能的な損傷に関与する、任意の疾患の治療において使用することができる。SAPは、インビボにおいてアミロイド沈着物のすべてに常に存在し、治療有効量の本明細書中に記載される抗原結合タンパク質を含む医薬組成物は、その組織からのアミロイド沈着物のクリアランスに応答する疾患の治療において使用することができる。上記医薬調製物は、薬学上許容される担体とともに抗原結合タンパク質を含み得る。その抗原結合タンパク質は、単独で投与されてもよいし、医薬組成物の一部として投与されてもよい。通常、そのような組成物は、公知であるような、かつ基準に合った薬務によって求められているような、薬学上許容される担体を含む例えば、RemingtonsPharmaceuticalSciences,16thedition1980MackPublishingCo.を参照のこと。そのような担体の例としては、必要に応じて好適な緩衝剤で5~8の範囲内のpHに緩衝される、滅菌された担体例えば、食塩水、Ringer溶液またはデキストロース溶液が挙げられる。医薬組成物は、注射または持続注入例えば、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、筋肉内または門脈内によって投与され得る。そのような組成物は、好適には、目に見える粒子状物質を含まない。医薬組成物、具体的にはCPHPCを含む医薬組成物は、経口的にも投与され得る。医薬組成物は、1mg~10gの抗原結合タンパク質、例えば、5mg~1gの抗原結合タンパク質を含み得る。あるいは、その組成物は、5mg~500mg、例えば、5mg~50mgを含み得る。そのような医薬組成物を調製するための方法は、当業者に周知である。医薬組成物は、必要に応じて、使用するための指示書とともに、単位剤形として1mg~10gの抗原結合タンパク質を含み得る。医薬組成物は、当業者に周知または明らかな方法に従った、投与前の再構成用に凍結乾燥フリーズドライされ得る。抗体が、IgG1アイソタイプを有する場合、銅のキレート剤例えば、クエン酸塩例えば、クエン酸ナトリウムまたはEDTAまたはヒスチジンを医薬組成物に加えることにより、このアイソタイプの抗体の銅によって媒介される分解の程度を低下させてもよいEP0612251を参照のこと。医薬組成物は、アルギニン塩基などの可溶化剤、ポリソルベート80などの界面活性剤/抗凝集剤、および不活性ガス例えば、バイアルのヘッドスペースの酸素を置き換える窒素も含むことがある。本抗原結合タンパク質を投与するための有効量および治療レジメンは、通常、経験的に決定され、患者の年齢、体重および健康状態、ならびに治療される疾患または障害などの因子に依存し得る。そのような因子は、主治医の範囲内である。適切な用量を選択する際の指針は、例えば、Smithetal1977Antibodiesinhumandiagnosisandtherapy,RavenPress,NewYorkに見られることがある。被験体に投与される抗原結合タンパク質の投与量は、通常、1μg/kg~150mg/kg、0.1mg/kg~100mg/kg、0.5mg/kg~50mg/kg、1~25mg/kgまたは1~10mg/kg被験体体重である。例えば、用量は、10mg/kg、30mg/kgまたは60mg/kgであり得る。本抗原結合タンパク質は、非経口的に、例えば、皮下に、静脈内にまたは筋肉内に投与され得る。SAP枯渇化合物は、その活性に応じて0.1mg/kg~2mg/kgの用量で投与され得る。SAP枯渇化合物は、被験体の体重あたりの用量の比とは無関係に、固定された用量で投与され得る。SAP枯渇化合物は、1回以上の別々の、同時のまたは連続的な非経口の、100mg以下、50mg以下、25mg以下または10mg以下の用量で、投与され得る。所望であれば、有効な1日量の治療用組成物は、その日のうちに、必要に応じて単位剤形で、適切な間隔で別々に投与される2、3、4、5、6つまたはそれ以上の分割用量sub-dosesで投与され得る。本抗原結合タンパク質は、単一の大用量で投与されてもよいし、より低用量で繰り返し投与されてもよい。1用量の投与は、2~24時間例えば、2~12時間または2~6時間の時間にわたるゆっくりとした持続注入によるものであり得る。これにより、毒性の副作用が減少することがある。1用量の投与は、必要であれば1回以上繰り返され得る例えば、1日に3回、1日に1回、2日に1回、1週間に1回、2週間に1回、1ヶ月に1回、3ヶ月おきに1回、6ヶ月おきに1回または12ヶ月おきに1回。本抗原結合タンパク質は、維持療法によって、例えば、6ヶ月以上にわたって1週間に1回、投与され得る。本抗原結合タンパク質は、例えば3~6ヶ月にわたる間欠療法、次いで、3~6ヶ月間は投与せず、その後、再度、3~6ヶ月にわたる抗原結合タンパク質の投与など、周期的に投与され得る。例えば、14または28日おきに1回、各投与日において複数の分割用量の形態で皮下に投与され得る。本抗原結合タンパク質は、治療を特定部位に対して標的にするような方法で被験体に投与され得る。例えば、抗原結合タンパク質は、組織内の限局性の局所アミロイド塊に局所的に注射されてもよいし、アミロイドが存在する器官への輸血用血液中に注入されてもよい。本抗原結合タンパク質は、本明細書中に記載される疾患を治療するための1つ以上の他の治療的に活性な薬剤、具体的にはSAP枯渇化合物と併用して使用されなければならない。SAP結合タンパク質の投与が完全かつ効果的に行われるために、循環からのSAPの効果的な枯渇は、SAP結合タンパク質の投与前に達成されなければならない。最初にSAP枯渇化合物が投与されて、ほぼすべての循環SAPが除去される。これにより、組織においてアミロイド沈着物と会合した相当量のSAPが残されるので、続いて抗SAP抗原結合タンパク質を投与することによって、アミロイド沈着物への局在化および特異的な結合がその迅速かつ広範な退縮を促進することが可能になる。好適には、その抗SAP抗原結合タンパク質は、SAP枯渇化合物による治療を開始してから1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20または25日以上後に投与され得る。上記の連続的な投与は、SAP枯渇化合物による2回以上の連続的治療の後の抗SAP抗原結合タンパク質による2回以上の連続的治療を含むことがある。上記の連続的な投与は、SAP枯渇化合物による1回の治療の後の抗SAP抗原結合タンパク質による1回の連続的治療、次いでそれを1回以上繰り返す治療を含み得る。上記の連続的/その後の用量は、最初の/その前の用量より多い量であってもよいし、最初の/その前の用量より少ない量であってもよい。最初の用量のSAP枯渇化合物タンパク質の投与の後に、1回以上の連続的な例えば、その後の用量のSAP枯渇化合物および/または抗SAP抗原結合タンパク質が投与され得、ここで、前記1回以上の連続的な用量は、最初の用量とほぼ同じであるかまたはそれより少ない量であり得る。循環SAPの最初の枯渇の後、さらなる用量のSAP枯渇化合物および第1の用量の抗SAP抗原結合タンパク質の投与に続いて、1回以上の連続的な例えば、その後の用量が投与され得、ここで、その後の用量の少なくとも1つは、最初の用量よりも多い量である。したがって、投与は、所定または通例の投与スケジュールを使用してもよく、それにより、用量投与の間に所定の指定期間がもたらされる。そのスケジュールは、予め定められている限り、同じまたは異なる長さの期間を包含してもよい。適切なスケジュールが、ある特定の日の投与を含むと前もって定められている限り、任意の特定の組み合わせが、そのスケジュールによって網羅されるだろう。医薬組成物は、他の医薬とともに必要に応じて、使用するための指示書とともに、抗原結合タンパク質のキットオブパーツを構成し得る。便宜のため、そのキットは、使用するための指示書とともに、所定量の試薬を備え得る。用語個体、被験体および患者は、本明細書中で交換可能に使用される。被験体は、霊長類例えば、マーモセットまたはサルであり得る。被験体は、通常、ヒトである。治療は、治療的、予防的または防止的であり得る。被験体は、治療の必要のある者であり得る。治療の必要のある者には、将来、特定の医学的疾患を発症し得る者に加えて、すでにその疾患に罹患している個体が含まれる場合がある。したがって、SAP枯渇化合物に続く本明細書中に記載されるSAP抗原結合タンパク質は、予防的または防止的な治療のために使用することができる。この場合、本明細書中に記載される連続的治療は、疾患の1つ以上の態様または症状の発生を予防するためまたは遅延させるために個体に施される。アミロイド沈着物は、臨床症状をもたらすのに十分な損傷を引き起こす前にある期間にわたって組織に存在し、蓄積すると知られているので、被験体は、無症候性でいることができるか、またはその疾患に対する遺伝的素因を有している可能性がある。そのような無症候性のアミロイド沈着は、組織生検材料の組織学的検査または非侵襲性のイメージング手技放射標識されたSAPのシンチグラフィー、心エコー検査および心臓磁気共鳴画像法を含むによって検出することができる。まず循環SAPを除去した後、予防的に有効な量の抗原結合タンパク質をそのような個体に投与する。予防的に有効な量は、本明細書中に記載される疾患の1つ以上の態様または症状の発生を予防するかまたは遅延させる量である。本明細書中に記載される抗原結合タンパク質は、治療方法においても使用され得る。用語治療は、ある疾患の少なくとも1つの態様または症状の軽減、減少または防止を包含する。例えば、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質を用いることにより、本明細書中に記載される疾患の1つ以上の態様または症状が回復または減少し得る。本明細書中に記載される抗原結合タンパク質は、治療的、予防的または防止的な治療のために有効な量で使用される。本明細書中に記載される抗原結合タンパク質の治療有効量は、疾患の1つ以上の態様または症状を回復または減少させるのに有効な量である。また、本明細書中に記載される抗原結合タンパク質を用いることによって、本明細書中に記載される疾患が治療、予防または治癒され得る。本明細書中に記載される抗原結合タンパク質は、被験体の健康状態に対して一般に有益な効果を有することができ、例えば、それは、被験体の予想寿命を延ばすことができる。本明細書中に記載される抗原結合タンパク質は、完治に作用する必要はないか、またはその疾患のすべての症状もしくは徴候を皆無にして、実現可能な治療的治療の構成要素となる必要はない。関連分野において認識されているように、治療薬として使用される薬物は、所与の疾患状態の重症度を低下させることがあるが、有用な治療薬と見なされるためにその疾患のすべての徴候を無くす必要はない。同様に、予防的に施される治療は、実現可能な予防薬の構成要素となるために、疾患の発生の防止において完全に有効である必要はない。単に疾患の影響を減少させること例えば、その症状の数もしくは重症度を減少させることによって、または別の治療の有効性を高めることによって、または別の有益な効果をもたらすことによって、またはその疾患が被験体において生じる可能性例えば、その疾患の発生を遅延させることによってもしくは悪化する可能性を低下させることで十分である。本明細書中に記載される抗原結合タンパク質は、アミロイド沈着を伴う疾患、すなわち、アミロイドーシスの治療または予防において使用されることがある。アミロイドーシスは、身体の様々な器官および組織におけるアミロイドの細胞外の蓄積を特徴とする任意の疾患である。用語アミロイドとは、特徴的な超微細構造的形態であるクロス-βシートコア構造、およびアルカリ性アルコール溶液からのコンゴーレッド色素に結合して、強い交差偏光において顕微鏡で観察するときに赤緑二色性を与えるという特徴的な組織化学的着色特性を有する原線維から構成される不溶性タンパク質繊維の組織における細胞外の沈着物のことを指す。約25の種々の無関係なタンパク質が、ヒト組織に沈着するアミロイド原線維を形成すると知られており、それらは、これらの典型的な特性のすべてを共有する。脳実質brainsubstanceにおけるアミロイド沈着物である大脳アミロイドは、それが常に限局的であり、微視的なサイズであり、通常はアミロイド斑と呼ばれるという点において、体内の他の箇所のアミロイド沈着物とはいくらか異なる。組織におけるアミロイドの沈着によって直接引き起こされる疾患であるアミロイドーシスは、局所性アミロイドーシス沈着物が1つの解剖学的領域および/または1つの組織もしくは器官系に限局されるアミロイドーシスと全身性アミロイドーシス沈着物が、血管および結合組織を含む体内の任意の器官または組織に生じ得るアミロイドーシスの両方を含む。アミロイドーシスの原因は、後天性または遺伝性であり得る。後天性アミロイドーシスは、先行する病状それ自体が後天性または遺伝性であり得るの合併症として生じる。したがって、アミロイドAタンパク質AAタイプとして知られる反応性全身性アミロイドーシスは、慢性活動性炎症性疾患例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、クローン病、慢性感染症および慢性敗血症および遺伝性周期性発熱症候群例えば、家族性地中海熱、マックルウェルズ症候群およびCINCA症候群の合併症である。透析関連アミロイドーシスは、末期腎不全の結果としてのβ2-ミクログロブリンの蓄積によって引き起こされる。モノクローナル免疫グロブリン軽鎖ALアミロイドーシスは、多発性骨髄腫またはそれでなければ良性M蛋白血症benignmonoclonalgammopathy意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症monoclonalgammopathyofuncertainsignificance,MGUSの合併症である。トランスサイレチンタイプの後天性アミロイドーシスは、いかなる先行する疾病もなしに発生することができ、単に老齢の合併症である。遺伝性アミロイドーシスは、アミロイド原線維を形成する性質の強い変異体タンパク質の発現をコードする様々なタンパク質に対する遺伝子の変異によって引き起こされ、それには、トランスサイレチン、アポリポタンパク質AI、ゲルゾリン、リゾチーム、シスタチンCおよびアミロイドβ-タンパク質によって引き起こされる疾患が含まれる。種々の形態のすべてのアミロイドーシスおよび関わるタンパク質の包括的な説明は、教科書および科学文献において入手可能であるPepys,M.B.2006Annu.Rev.Med.,57:223-241;PepysandHawkins2003Amyloidosis.OxfordTextbookofMedicine,4thEd.,Vol.2,OxfordUniversityPress,Oxford,pp.162-173;PepysandHawkins2001Amyloidosis.Samter’sImmunologicDiseases,SixthEd.,Vol.1,LippincottWilliamsWilliams,Philadelphia,pp.401-412。1つの器官または組織に限局された局所的なアミロイド沈着は、臨床的に無症状であることもできるし、重篤な組織損傷および疾患を引き起こすこともできる。例えば、血管のアミロイド沈着物がAβタンパク質から構成される脳アミロイドアンギオパチーは、他の任意の病態が存在しない場合では理解されない理由によって生じる通常は孤発性後天性の状態であり、かつ脳出血および脳卒中の主因である。いくつかの非常に重要かつ罹患頻度の高い疾患、特に、アルツハイマー病ADおよび2型糖尿病が存在し、それらにおいては、アミロイド沈着物が常に存在するが、これらのそれぞれの疾患を引き起こす正確な機序は未だ不明である。それにもかかわらず、アルツハイマー病における脳内および脳血管内、ならびに糖尿病における膵島内のアミロイドの局所的な沈着は、病態および疾患を悪化させる可能性が非常に高い。したがって、本発明は、本明細書中に開示されるような抗原結合タンパク質を用いた、アルツハイマー病と2型糖尿病の両方、実際には、組織内のアミロイド沈着物の存在を伴う任意の状態の治療を含む。伝達性海綿状脳症プリオン病の多くの形態は、脳内のアミロイド沈着物を伴っているので、本発明は、これらの状態のすべてヒトにおける変異型クロイツフェルトヤコブ病、クロイツフェルトヤコブ病自体、クールーおよび他の様々な形態のヒトプリオン病、ならびにウシ海綿状脳症、ミュールジカおよびエルクの慢性消耗病、ならびにミンクの伝達性脳症も含むに関する。有用な診断方法本明細書中に記載される抗原結合タンパク質は、診断目的で、生物学的サンプル中のSAPをインビトロまたはインビボにおいて検出するために使用され得る。例えば、抗SAP抗原結合タンパク質は、血清中のSAP、またはアミロイド例えば、アミロイド斑と会合したSAPを検出するために使用することができる。そのアミロイドは、まず、ヒトまたは動物の身体から取り出され得る例えば、生検。ELISA、ウエスタンブロット、免疫組織化学または免疫沈降を含む従来のイムノアッセイが使用され得る。本抗原結合タンパク質は、1つ以上の抗原結合タンパク質、検出可能な標識、およびキットを使用するための指示書を備える診断キットとして提供されることがある。便宜上、そのキットは、使用するための指示書とともに、所定量の試薬を備えることがある。実施例1-ハイブリドーマ可変ドメインの配列決定:SAP-EおよびSAP-KSAP-EおよびSAP-Kは、抗SAPモノクローナルの2つの群に由来し、その各群が、インビトロにおいてヒトSAPへの結合について別個に試験された。SAP-EおよびSAP-Kは、それらの群のうちSAPへの最も強い結合性を示し、種々のアッセイにおいて互いに比較された。第1の群の抗体には、精製ヒトSAP下記に示される配列番号43ヒトSAPを精製するための方法の詳細は、Hawkinsetal.1991Clin.Exp.Immunol.84,308-316に示されているでの1回の従来の免疫および融合プロトコルにおいて作製された7種のハイブリドーマに由来する抗体が含まれ、それらをSAP-AからSAP-Gと命名する。これらの抗体のうちの2つであるSAP-EおよびSAP-Bは、IgG2aアイソタイプであり、その他のものはすべてIgG1アイソタイプである実施例13、表11を参照のこと。第2の群の抗体には、精製ヒトSAP下記に示される配列番号43Hawkinsetal.1991Clin.Exp.Immunol.84,308-316での免疫および通例の方法によってクローン化されるハイブリドーマを作製する従来の融合から標準的な手法によって得られた6種の異なるIgG2aモノクローナルSAP-HからSAP-Mが含まれた。homosapiensSAP成熟アミノ酸配列配列番号43HTDLSGKVFVFPRESVTDHVNLITPLEKPLQNFTLCFRAYSDLSRAYSLFSYNTQGRDNELLVYKERVGEYSLYIGRHKVTSKVIEKFPAPVHICVSWESSSGIAEFWINGTPLVKKGLRQGYFVEAQPKIVLGQEQDSYGGKFDRSQSFVGEIGDLYMWDSVLPPENILSAYQGTPLPANILDWQALNYEIRGYVIIKPLVWV比較する目的で、ヒトSAPと69.4の同一性を有するマウスSAP配列を下記に示す。musmusculusSAP成熟タンパク質配列番号44QTDLKRKVFVFPRESETDHVKLIPHLEKPLQNFTLCFRTYSDLSRSQSLFSYSVKGRDNELLIYKEKVGEYSLYIGQSKVTVRGMEEYLSPVHLCTTWESSSGIVEFWVNGKPWVKKSLQREYTVKAPPSIVLGQEQDNYGGGFQRSQSFVGEFSDLYMWDYVLTPQDILFVYRDSPVNPNILNWQALNYEINGYVVIRPRVW全RNAを、Qiagen製のRNeasyキット74106を用いておよそ106個の細胞のハイブリドーマ細胞ペレットから抽出した。AccessQuickRT-PCRSystemA1702を使用し、マウス免疫グロブリン遺伝子リーダー配列およびマウスIgG2a/K定常領域に特異的な縮重プライマーを用いて可変重鎖領域および可変軽鎖領域のcDNAを生成した。精製されたRT-PCRフラグメントを、Invitrogen製のTAクローニングキットK2000-01を用いてクローニングした。配列アラインメント、およびKABATSequencesofProteinsofImmunologicalInterest,4thEd.,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NationalInstitutesofHealth1987に列挙されている公知の免疫グロブリン可変配列とのアラインメントによって各ハイブリドーマに対するコンセンサス配列を得た。SAP-EおよびSAP-Kに対するコンセンサス配列を下記に示す。SAP-E配列SAP-ECDRH1配列番号1TYNMHSAP-ECDRH2配列番号2YIYPGDGNANYNQQFKGSAP-ECDRH3配列番号3GDFDYDGGYYFDSSAP-ECDRL1配列番号4RASENIYSYLASAP-ECDRL2配列番号5NAKTLAESAP-ECDRL3配列番号6QHHYGAPLTCDRに下線を引いたSAP-EVHアミノ酸配列配列番号7QASLQQSGTELVRSGASVKMSCKASGFTFATYNMHWIKQTPGQGLEWIGYIYPGDGNANYNQQFKGKATLTADTSSNTAYMQISSLTSEDSAVYFCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTTLTVSSSAP-EVHDNA配列配列番号8CAGGCTTCTCTACAGCAGTCTGGGACTGAGCTGGTGAGGTCTGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTTCACATTTGCCACTTACAATATGCACTGGATTAAGCAGACACCCGGACAGGGCCTGGAATGGATTGGGTATATTTATCCTGGAGATGGTAATGCTAACTACAATCAGCAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACATGCAGATCAGCAGCCTGACATCTGAAGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGGGGACTTTGATTACGACGGAGGGTACTACTTTGACTCCTGGGGCCAGGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCACDRに下線を引いたSAP-EVLアミノ酸配列配列番号9DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGRSPQLLVHNAKTLAEGVPSRVSGSGSGTHFSLKINGLQPEDFGNYYCQHHYGAPLTFGAGTKLELKSAP-EVLDNA配列配列番号10GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAGATCCCCTCAGCTCCTGGTCCATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGGTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACACTTTTCTCTGAAGATCAACGGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAATTATTACTGTCAACATCATTATGGTGCTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAACTGAAASAP-K配列SAP-KCDRH1配列番号11SYWMHSAP-KCDRH2配列番号12MIHPNSVNTNYNEKFKSSAP-KCDRH3配列番号13RNDYYWYFDVSAP-KCDRL1配列番号14KASQNVNSNVASAP-KCDRL2配列番号15SASYRYSSAP-KCDRL3配列番号16QQCNNYPFTCDRに下線を引いたSAP-KVHアミノ酸配列配列番号17QVQLQQPGAELIKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSVNTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRNDYYWYFDVWGTGTTVTVSSSAP-KVHDNA配列配列番号18CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTGATAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACTTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAATGATTCATCCTAATAGTGTTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGTAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAACAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGACGGAATGATTACTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCACDRに下線を引いたSAP-KVLアミノ酸配列配列番号19DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVNSNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSEDLAEYFCQQCNNYPFTFGSGTKLEIKSAP-KVLDNA配列配列番号20GACATTGTGATGACCCAGTCTCAAAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGAATTCTAATGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCAATCTCCTAAAGCACTGATTTACTCGGCTTCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGAGTATTTCTGTCAGCAATGTAACAACTATCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAA。実施例2:キメラ抗体の構築SAP-EおよびSAP-Kについて、ヒトIgG1/κ野生型定常領域に移植された親マウス可変ドメインを含むキメラ抗体をPCRクローニングによって構築した。コンセンサス配列に基づいて、哺乳動物発現ベクターへのクローニングを容易にするために必要な制限酵素認識部位を組み込んで、マウス可変ドメインを増幅するプライマーを設計した。FR4フレームワーク領域4CDR3の後ろかつ第1定常ドメインの前のV-領域配列に制限酵素認識部位を導入することによって、SAP-EにおけるVHアミノ酸配列を、配列番号7に示されるようなTTLTVSSからTLVTVSSに変更し、SAP-KにおけるVHアミノ酸配列を、配列番号17に示されるようなTTVTVSSからTLVTVSSに変更した。SAP-K可変軽鎖では、CDRL1に内部のEcoRI部位が存在するので、1塩基対を変更することによってこれによりアミノ酸配列は変化しなかった、この望まれない内部のEcoRI部位を除去する突然変異誘発プライマーを設計した。SAP-Eキメラ抗体cSAP-Eの完全長重鎖タンパク質配列および完全長軽鎖タンパク質配列を、それぞれ配列番号21および配列番号22に示す。SAP-Kキメラ抗体cSAP-Kの完全長重鎖タンパク質配列および完全長軽鎖タンパク質配列を、それぞれ配列番号23および配列番号24に示す。SAP-EVHキメラヌクレオチド配列配列番号45CAGGCTTCTCTACAGCAGTCTGGGACTGAGCTGGTGAGGTCTGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTTCACATTTGCCACTTACAATATGCACTGGATTAAGCAGACACCCGGACAGGGCCTGGAATGGATTGGGTATATTTATCCTGGAGATGGTAATGCTAACTACAATCAGCAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACATGCAGATCAGCAGCCTGACATCTGAAGACTCTGCGGTCTATTTCTGTGCAAGAGGGGACTTTGATTACGACGGAGGGTACTACTTTGACTCCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGSAP-EVHキメラアミノ酸配列配列番号21QASLQQSGTELVRSGASVKMSCKASGFTFATYNMHWIKQTPGQGLEWIGYIYPGDGNANYNQQFKGKATLTADTSSNTAYMQISSLTSEDSAVYFCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSAP-EVLキメラヌクレオチド配列配列番号46GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAGATCCCCTCAGCTCCTGGTCCATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCATCAAGGGTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACACTTTTCTCTGAAGATCAACGGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAATTATTACTGTCAACATCATTATGGTGCTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAACTGAAACGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCSAP-EVLキメラアミノ酸配列配列番号22DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGRSPQLLVHNAKTLAEGVPSRVSGSGSGTHFSLKINGLQPEDFGNYYCQHHYGAPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSAP-KVHキメラヌクレオチド配列配列番号47CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTGATAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACTTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAATGATTCATCCTAATAGTGTTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGTAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAACAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGACGGAATGATTACTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCACAGGGACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGSAP-KVHキメラアミノ酸配列配列番号23QVQLQQPGAELIKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPNSVNTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRNDYYWYFDVWGTGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSAP-KVLキメラヌクレオチド配列配列番号48GACATTGTGATGACCCAGTCTCAAAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGAACTCTAATGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGGCAATCTCCTAAAGCACTGATTTACTCGGCTTCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCAATGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGAGTATTTCTGTCAGCAATGTAACAACTATCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAACGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCSAP-KVLキメラアミノ酸配列配列番号24DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVNSNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSEDLAEYFCQQCNNYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。実施例3:ヒト化ストラテジーマウス抗体由来のCDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2およびCDRL3を好適なヒトフレームワーク配列に移植するプロセスによって、ヒト化抗体を作製した。SAP-Eのヒト化ストラテジーSAP-E重鎖のヒト化SAP-Eマウス可変重鎖配列に対しては、JH1ミニ遺伝子Kabat:AEYFQHWGQGTLVTVSS配列番号26とともに、マウスSAP-E可変重鎖配列配列番号7と60の同一性CDRを含むを有するヒト生殖系列アクセプターフレームワークを選択したIGHV1-69,配列番号25。JH1ミニ遺伝子残基の最初の6残基は、CDR3領域の範囲に含まれ、ドナー抗体由来の新しく入ったCDRで置き換えられた。配列比較および抗体機能に対して考えられる影響に基づいて、5つのヒト化変異体を作製した。構築物H0は、上で選択されたヒトアクセプターフレームワークにマウスCDRKabat定義を使用するときのものをそのまま移植したものstraightgraftだった。構築物H1は、残基27および30に追加の復帰突然変異を有する。構築物H2およびH3は、H1に基づき、かつ残基2H2ならびに48および67H3に追加の復帰突然変異を有する。構築物H4は、H3に基づき、かつ残基69、73および91に追加の復帰突然変異を有する。表3を参照のこと。H0、H1、H2、H3およびH4のヒト化可変重鎖ドメインの配列を下記に示すそれぞれ配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30および配列番号31。SAP-E軽鎖のヒト化SAP-Eマウス可変軽鎖配列に対しては、配列類似性に基づいて、J-領域カッパー2ミニ遺伝子Kabat:YTFGQGTKLEIK,配列番号33とともに、マウスSAP-E可変軽鎖配列配列番号9と68の同一性CDRを含むを有するヒト生殖系列アクセプターフレームワークを選択したIGKV1-39,配列番号32。JK-2ミニ遺伝子残基の最初の2残基は、CDR3領域の範囲に含まれ、ドナー抗体由来の新しく入ったCDRで置き換えられた。配列比較および抗体機能に対して考えられる影響に基づいて、3つのヒト化変異体を作製した。構築物L0は、上で選択されたヒトアクセプターフレームワークにマウスCDRKabat定義を使用するときのものをそのまま移植したものだった。構築物L1は、残基49に復帰突然変異を有し、構築物L2は、48および49位に復帰突然変異を有する。表4を参照のこと。L0、L1およびL2のヒト化可変軽鎖ドメインの配列を下記に示すそれぞれ配列番号34、配列番号35および配列番号36。SAP-Kのヒト化ストラテジーSAP-K重鎖のヒト化SAP-Kマウス可変重鎖配列に対しては、JH1ミニ遺伝子Kabat:AEYFQHWGQGTLVTVSS配列番号26とともに、マウスSAP-K可変重鎖配列配列番号17と65の同一性CDRを含むを有するヒト生殖系列アクセプターフレームワークを選択したIGHV1-69,配列番号25。JH1ミニ遺伝子残基の最初の6残基は、CDR3領域の範囲に含まれ、ドナー抗体由来の新しく入ったCDRで置き換えられた。配列比較および抗体機能に対して考えられる影響に基づいて、4つのヒト化変異体を作製した。構築物H0は、上で選択されたヒトアクセプターフレームワークにマウスCDRKabat定義を使用するときのものをそのまま移植したものだった。構築物H1は、残基27および30に追加の復帰突然変異を有する。構築物H2は、H1に基づき、かつ残基48および67に追加の復帰突然変異を有する。構築物H3は、H2に基づき、かつ残基69および71に追加の復帰突然変異を有する。表5を参照のこと。H0、H1、H2およびH3のヒト化可変重鎖ドメインの配列を下記に示すそれぞれ配列番号37、配列番号38、配列番号39および配列番号40。SAP-K軽鎖のヒト化SAP-Kマウス可変軽鎖配列に対しては、配列類似性に基づいて、J-領域カッパー2ミニ遺伝子Kabat:YTFGQGTKLEIK,配列番号33とともに、マウスSAP-K可変軽鎖配列配列番号19と63の同一性CDRを含むを有するヒト生殖系列アクセプターフレームワークを選択したIGKV1-39,配列番号32。JK-2ミニ遺伝子残基の最初の2残基は、CDR3領域の範囲内に含まれ、ドナー抗体由来の新しく入ったCDRで置き換えられた。配列比較および抗体機能に対して考えられる影響に基づいて、2つのヒト化変異体を作製した。構築物L0は、上で選択されたヒトアクセプターフレームワークにマウスCDRKabat定義を使用するときのものをそのまま移植したものだった。構築物L1は、残基46に復帰突然変異を有する。L0およびL1のヒト化可変軽鎖ドメインの配列を下記に示すそれぞれ配列番号41および配列番号42。ヒト化抗体ベクターの構築ヒト化可変領域DNA配列の配列最適化を行った。ヒト化された可変重鎖領域および可変軽鎖領域をコードするDNAフラグメントを、PCRベースのストラテジーおよび重複するオリゴヌクレオチドを用いて新規に構築した。そのPCR産物を、それぞれヒトガンマ1定常領域およびヒトカッパー定常領域を含む哺乳動物発現ベクターにクローニングした。これは、野生型Fc領域である。IGHV1-69ヒト可変重鎖生殖系列アクセプターヌクレオチド配列配列番号49CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAIGHV1-69ヒト可変重鎖生殖系列アクセプターアミノ酸配列配列番号25QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARIGKV1-39ヒト可変重鎖生殖系列アクセプターヌクレオチド配列配列番号50GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTIGKV1-39ヒト可変重鎖生殖系列アクセプターアミノ酸配列配列番号32DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPJH1ミニ遺伝子配列番号26AEYFQHWGQGTLVTVSSJκ2ミニ遺伝子配列番号33YTFGQGTKLEIKコドン最適化されていないSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H0ヌクレオチド配列配列番号51CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCACTTACAATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATATATTTATCCTGGAGATGGTAATGCTAACTACAATCAGCAGTTCAAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGACTTTGATTACGACGGAGGGTACTACTTTGACTCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAコドン最適化されていないSAP-Eヒト化軽鎖V領域変異体L0ヌクレオチド配列配列番号52GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACATCATTATGGTGCTCCGCTCACGTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAASAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H0ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号53CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGGGGCACCTTCTCCACCTACAACATGCACTGGGTCAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTATATCTACCCCGGCGACGGCAACGCCAACTACAACCAGCAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCGACTTCGACTACGACGGCGGCTACTACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H0アミノ酸配列配列番号27QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYNMHWVRQAPGQGLEWMGYIYPGDGNANYNQQFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTLVTVSSSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H1ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号54CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGGTTCACCTTCGCCACCTACAACATGCACTGGGTCAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTATATCTACCCCGGCGACGGCAACGCCAACTACAACCAGCAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCGACTTCGACTACGACGGCGGCTACTACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H1アミノ酸配列配列番号28QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFATYNMHWVRQAPGQGLEWMGYIYPGDGNANYNQQFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTLVTVSSSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H2ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号55CAGGCGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGGTTCACCTTCGCCACCTACAACATGCACTGGGTCAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTATATCTACCCCGGCGACGGCAACGCCAACTACAACCAGCAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCGACTTCGACTACGACGGCGGCTACTACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H2アミノ酸配列配列番号29QAQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFATYNMHWVRQAPGQGLEWMGYIYPGDGNANYNQQFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTLVTVSSSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H3ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号56CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGGTTCACCTTCGCCACCTACAACATGCACTGGGTCAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTATATCTACCCCGGCGACGGCAACGCCAACTACAACCAGCAGTTCAAGGGCAGGGCCACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCGACTTCGACTACGACGGCGGCTACTACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H3アミノ酸配列配列番号30QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFATYNMHWVRQAPGQGLEWIGYIYPGDGNANYNQQFKGRATITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTLVTVSSSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H4ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号57CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGGTTCACCTTCGCCACCTACAACATGCACTGGGTCAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTATATCTACCCCGGCGACGGCAACGCCAACTACAACCAGCAGTTCAAGGGCAGGGCCACCCTGACCGCCGACACCAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGCGCCAGGGGCGACTTCGACTACGACGGCGGCTACTACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Eヒト化重鎖V領域変異体H4アミノ酸配列配列番号31QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFATYNMHWVRQAPGQGLEWIGYIYPGDGNANYNQQFKGRATLTADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTLVTVSSSAP-Eヒト化軽鎖V領域変異体L0ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号58GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCAGGGCCTCCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAACGCCAAGACCCTCGCCGAGGGCGTCCCTAGCAGGTTCTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTATTACTGCCAGCACCACTACGGCGCCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGSAP-Eヒト化軽鎖V領域変異体L0アミノ酸配列配列番号34DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGAPLTFGQGTKLEIKSAP-Eヒト化軽鎖V領域変異体L1ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号59GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCAGGGCCTCCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCCACAACGCCAAGACCCTCGCCGAGGGCGTCCCTAGCAGGTTCTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTATTACTGCCAGCACCACTACGGCGCCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGSAP-Eヒト化軽鎖V領域変異体L1アミノ酸配列配列番号35DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIHNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGAPLTFGQGTKLEIKSAP-Eヒト化軽鎖V領域変異体L2ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号60GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCAGGGCCTCCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGGTGCACAACGCCAAGACCCTCGCCGAGGGCGTCCCTAGCAGGTTCTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTATTACTGCCAGCACCACTACGGCGCCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGSAP-Eヒト化軽鎖V領域変異体L2アミノ酸配列配列番号36DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLVHNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGAPLTFGQGTKLEIKSAP-Eヒト化重鎖H1の完全な成熟ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号61CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGGTTCACCTTCGCCACCTACAACATGCACTGGGTCAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTATATCTACCCCGGCGACGGCAACGCCAACTACAACCAGCAGTTCAAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGGCGACTTCGACTACGACGGCGGCTACTACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGSAP-Eヒト化重鎖H1の完全な成熟アミノ酸配列配列番号62QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFATYNMHWVRQAPGQGLEWMGYIYPGDGNANYNQQFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDFDYDGGYYFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSAP-Eヒト化軽鎖L1の完全な成熟ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号63GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCTCACTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCAGGGCCTCCGAGAACATCTACAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCCACAACGCCAAGACCCTCGCCGAGGGCGTCCCTAGCAGGTTCTCTGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTATTACTGCCAGCACCACTACGGCGCCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAACTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCSAP-Eヒト化軽鎖L1の完全な成熟アミノ酸配列配列番号64DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIHNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGAPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECコドン最適化されていないSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H0ヌクレオチド配列配列番号65CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATGATTCATCCTAATAGTGTTAATACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGTAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACGGAATGATTACTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAコドン最適化されていないSAP-Kヒト化軽鎖V領域変異体L0ヌクレオチド配列配列番号66GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGAACTCTAATGTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTCGGCTTCCTACCGGTACAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAATGTAACAACTATCCATTCACGTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAASAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H0ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号67CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCGGAACCTTCAGCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCATGATCCACCCCAACAGCGTGAACACCAACTACAACGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTATATGGAGCTGAGCTCTCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGAACGACTACTACTGGTACTTCGACGTCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H0アミノ酸配列配列番号37QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYWMHWVRQAPGQGLEWMGMIHPNSVNTNYNEKFKSRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRNDYYWYFDVWGQGTLVTVSSSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H1ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号68CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCATGATCCACCCCAACAGCGTGAACACCAACTACAACGAGAAGTTCAAGAGCAGAGTGACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTATATGGAGCTGAGCTCTCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGAACGACTACTACTGGTACTTCGACGTCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H1アミノ酸配列配列番号38QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGMIHPNSVNTNYNEKFKSRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRNDYYWYFDVWGQGTLVTVSSSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H2ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号69CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCATGATCCACCCCAACAGCGTGAACACCAACTACAACGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCATCACCGCCGACAAGAGCACCAGCACCGCCTATATGGAGCTGAGCTCTCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGAACGACTACTACTGGTACTTCGACGTCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H2アミノ酸配列配列番号39QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWIGMIHPNSVNTNYNEKFKSRATITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRNDYYWYFDVWGQGTLVTVSSSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H3ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号70CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCATGATCCACCCCAACAGCGTGAACACCAACTACAACGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCCTGACCGTGGACAAGAGCACCAGCACCGCCTATATGGAGCTGAGCTCTCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGAACGACTACTACTGGTACTTCGACGTCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCSAP-Kヒト化重鎖V領域変異体H3アミノ酸配列配列番号40QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWIGMIHPNSVNTNYNEKFKSRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRNDYYWYFDVWGQGTLVTVSSSAP-Kヒト化軽鎖V領域変異体L0ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号71GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCTTCACTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAACGTGAACAGCAACGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAAGCCCCCAAGCTCCTGATCTACAGCGCCAGCTACAGATATAGCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGAAGCGGGACCGATTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACTTACTACTGCCAGCAGTGCAACAACTACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSAP-Kヒト化軽鎖V領域変異体L0アミノ酸配列配列番号41DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVNSNVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQCNNYPFTFGQGTKLEIKSAP-Kヒト化軽鎖V領域変異体L1ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号72GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCTTCACTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAACGTGAACAGCAACGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAAGCCCCCAAGGCCCTGATCTACAGCGCCAGCTACAGATATAGCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGAAGCGGGACCGATTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACTTACTACTGCCAGCAGTGCAACAACTACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSAP-Kヒト化軽鎖V領域変異体L1アミノ酸配列配列番号42DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVNSNVAWYQQKPGKAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQCNNYPFTFGQGTKLEIKSAP-Kヒト化H3重鎖ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号75CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCACCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCATGATCCACCCCAACAGCGTGAACACCAACTACAACGAGAAGTTCAAGAGCAGAGCCACCCTGACCGTGGACAAGAGCACCAGCACCGCCTATATGGAGCTGAGCTCTCTGAGGAGCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGAGGAACGACTACTACTGGTACTTCGACGTCTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGSAP-Kヒト化H3重鎖アミノ酸配列配列番号76QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWIGMIHPNSVNTNYNEKFKSRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRNDYYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSAP-Kヒト化L0軽鎖ヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号77GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCTTCACTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAACGTGAACAGCAACGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAAGCCCCCAAGCTCCTGATCTACAGCGCCAGCTACAGATATAGCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGAAGCGGGACCGATTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACTTACTACTGCCAGCAGTGCAACAACTACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCSAP-Kヒト化L0軽鎖アミノ酸配列配列番号78DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVNSNVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQCNNYPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC免疫グロブリン鎖に対するリーダー配列配列番号79MGWSCIILFLVATATGVHS。実施例4:-抗体の発現組換え抗体の発現キメラ抗体またはヒト化抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする発現プラスミドを、Fectin293を使用した脂質トランスフェクションによってHEK2936E細胞に一過性に同時トランスフェクトした。細胞を、10プルロニックF68および50mg/mlジェネテシンを含むFreestyle発現培地293中で37度C、5CO2で72~120時間生育し、上清を遠心分離によって回収した。いくつかの場合では、上清材料を結合アッセイにおける被験物質として使用した。他の場合では、上清材料を無菌濾過し、ProteinAMAbSelectSuREカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーに続くPBSへの透析によって抗体を回収した。ハイブリドーマの抗体発現ハイブリドーマ細胞を、4mMglutamaxおよび10低IgGFCSが補充されたEx620培地の入った振盪フラスコ内で生育した。その細胞を継代し、無血清培地中で十分生育するまで血清を除去した。次いで、その細胞を10Lのwavebag用の種として使用した。その細胞を、生存率が30に低下するまで、そのwavebag内で22回の振盪/分、37度C、5CO20.1L/分で生育した。培養上清を無菌濾過によって回収した。組換えProteinAを使用したアフィニティークロマトグラフィーに続くPBSへの透析によって、抗体を回収した。実施例5~7:ハイブリドーマおよび/またはキメラmAbおよび/またはヒト化Mabの間の比較データ実施例5:ヒトSAP結合ELISAにおけるSAP-KハイブリドーマとSAP-Eハイブリドーマとの比較1μg/mLまたは5μg/mLのヒトSAPを、ELISAプレート上に直接固定化し、1BSA/TBS0.05TWEEN20でブロッキングした。精製された材料からの抗SAP抗体を、そのプレートの端から端へ漸増させた。ウマ-ラディッシュペルオキシダーゼHRP結合体化ウサギ抗マウスIgG抗体Dako,P0260で処理することによって、結合した抗体を検出した。O-フェニレンジアミン二塩酸塩OPDペルオキシダーゼ基質Sigma,P9187を用いて、ELISAを発色させた。図1は、1μg/mLのコーティング濃度のヒトSAPにおけるマウス抗体SAP-EおよびSAP-Kに対する結合曲線を示している。図2は、5μg/mLのコーティング濃度のヒトSAPにおけるマウス抗体SAP-EおよびSAP-Kに対する結合曲線を示している。5μg/mLのコーティング濃度では、SAP-KおよびSAP-Eは、固定化されたヒトSAPに対して類似の結合性を示したのに対し、1μg/mLのより低い密度のコーティングでは、SAP-Kが、SAP-Eよりも高い結合性を示した。この形式を用いたその後のヒトSAP結合ELISAのすべてにおいて、それら2つの抗体の結合特性を区別するために、低密度の1μg/mLのコーティング濃度を使用した。実施例6:ヒトSAP結合ELISAにおけるSAP-Kキメラ/ヒト化mAbとSAP-Eキメラ/ヒト化mAbとの比較1μg/mLのヒトSAPを、ELISAプレート上に直接固定化し、1BSA/TBS0.05TWEEN20でブロッキングした。試験上清または精製された材料からの抗SAP抗体を、そのプレートの端から端へ漸増させた。ヤギ抗ヒトカッパー軽鎖ペルオキシダーゼ結合体Sigma,A7164で処理することによって、結合した抗体を検出した。O-フェニレンジアミン二塩酸塩OPDペルオキシダーゼ基質Sigma,P9187を用いて、ELISAを発色させた。図3は、キメラ抗体cSAP-EおよびcSAP-Kに対する結合曲線を示している。それらのキメラ抗体に対する曲線のプロファイルは、相当するハイブリドーマのプロファイルと同じである。図4は、SAP-Kキメラと比較されたSAP-KH0L0、SAP-KH1L0、SAP-KH2L0およびSAP-KH3L0、ならびにSAP-Eキメラと比較されたSAP-EH1L1に対する結合曲線を示している。無関係なヒトIgG1カッパー抗体もまた、ネガティブコントロールとして試験した。このデータは、SAP-K抗体をヒト化することによって、ヒトSAPへの結合活性が親SAP-Kキメラと比べておよそ2倍失われたのに対し、ヒト化SAP-E抗体は、親SAP-Eキメラに匹敵する結合活性を保持したことを示している。実施例7-競合ELISAELISAプレートを、1μg/mLSAP-Kキメラとの競合の場合または5μg/mLSAP-Eキメラとの競合の場合のヒトSAPでコーティングし、1BSA/PBSでブロッキングした。一定濃度のキメラ抗SAPmAbを、段階希釈された1:1量のマウス抗SAPmAbと混合した。プレートを洗浄し、固定化されたヒトSAPに結合したキメラ抗体の量を、ヤギ抗ヒトカッパー軽鎖ペルオキシダーゼ結合体Sigma,A7164を用いて検出した。O-フェニレンジアミン二塩酸塩OPDペルオキシダーゼ基質Sigma,P9187を用いて、ELISAを発色させた。図5は、SAP-Eキメラとの競合ELISAにおける、精製SAP-Kマウスモノクローナル抗体および精製SAP-Eマウスモノクローナル抗体を示している。図6は、SAP-Kキメラとの競合ELISAにおける精製SAP-Kマウスモノクローナル抗体および精製SAP-Eマウスモノクローナル抗体を示している。図5と図6の両方において、SAP-E抗体とSAP-K抗体との間に競合は観察されないことから、それらの2つの抗体が、ヒトSAP分子上の異なるエピトープに結合することが示される。実施例8:結合動態の測定ヒト化抗SAP抗体変異体と精製ヒトSAPおよび精製カニクイザルcynomologusmonkeySAPとの結合のBiacore解析製造者の指示書に従って、ヒトおよびカニクイザルのSAPを第一級アミンカップリングによってBiacoreC1チップ上に固定化した。培養上清中に含まれるヒト化抗SAP抗体および512nMの精製キメラ抗体を、ヒトSAP表面とカニクイザルSAP表面の両方の上を通過させ、結合センサーグラムbindingsensogramsを得た。すべてのランを、ヒト表面上およびカニクイザルSAP表面上への、精製サンプルに対しては緩衝液の注入、または上清サンプルに対しては培地で2回較正doublereferencedした。HBS-EP緩衝液を用いて25°Cで解析を行った。3MMgCl2の存在下で表面の再生を行ったが、その再生は、抗体がその後のサイクルにおいてヒトSAPに再結合する能力に影響しなかった。BiacoreT100評価ソフトウェア内の1対1解離モデルを用いて、データを解析した。表6aおよび6bに生成されたデータは、それぞれヒト化SAP-E抗体上清およびヒト化SAP-K抗体上清の解離速度off-rateskdを示している。これらの値は、単一の曲線に基づき、ヒトSAPへの結合について種々の構築物をランク付けする目的で使用された。ヒト化SAP-E抗体は、ヒトSAPへの結合について、ヒト化SAP-K抗体よりも優れた解離速度を示した。いくつかのSAP-Kヒト化抗体変異体は、カニクイザルSAPへの結合を示した注意:SAP-KキメラはカニクイザルSAPに結合したのに対し、ヒト化SAP-E抗体変異体は、カニクイザルSAPに結合しなかった注意:同様にSAP-EキメラはカニクイザルcynomologousmonkeySAPに結合しなかった。そのまま移植されたヒト化重鎖H0もしくはそのまま移植されたヒト化軽鎖L0またはその両方の組み合わせを含むヒト化SAP-E変異体は、最も成績の悪い解離速度を示した。SAP-Eヒト化L1軽鎖は、最も良い軽鎖変異体であり、そのL1とH1重鎖変異体との組み合わせによって、復帰突然変異の数を最小限に維持しつつ、許容可能な解離速度を有するヒト化抗体がもたらされた。ヒト化SAP-K変異体の解離速度のランク付けにより、そのまま移植されたL0が最も優れたヒト化軽鎖変異体であり、そのまま移植されたH0が最も成績の悪いヒト化重鎖変異体であることが示された。固相支持体上に直接固定化された精製ヒトSAPへの抗SAP抗体の結合のBiacore解析製造者の指示書に従って、ヒトSAPを第一級アミンカップリングによってBiacoreCM3チップ上に固定化した。抗SAP抗体を、512、128、32、8、2、0.5nMでこの表面の上に通過させ、結合センサーグラムを得た。すべてのランを、ヒトSAP表面上への、緩衝液の注入によって2回較正した。HBS-EP緩衝液を用いて25°Cで解析を行った。数分間にわたってその表面上に緩衝液を流すことによって表面の再生を行ったが、その再生は、ヒトSAPがその後のサイクルにおいて抗体に再結合する能力に影響しなかった。BiacoreT100評価ソフトウェアに固有の二価のアナライトモデルを用い、128~0.5nMのランのデータを解析した。生成され、表7に編集されたデータは、構築物間の比較用であり、このアッセイではSAP-K抗体がより優れた会合速度を有し、SAP-E抗体がより優れた解離速度を示すことを示している。さらに、ヒト化によってSAP-E抗体の結合動態が変化しなかったのに対し、SAP-Kについては、ヒト化の後に会合速度および解離速度の低下が観察された。固定化されたO-ホスホエタノールアミン上に捕捉された精製ヒトSAPへの抗SAP抗体の結合のBiacore解析製造者の指示書に従って、O-ホスホエタノールアミンを第一級アミンカップリングによってBiacoreCM5チップ上に固定化した。次いで、インビボにおいてアミロイド原線維に結合したSAP分子の正確な配向をインビトロのBiacore系において再現するために、ヒトSAPを塩化カルシウムの存在下でその表面上に捕捉した。次いで、抗SAP抗体を256、64、16、4、1nMでこの表面の上に通過させ、結合センサーグラムを得た。ランニング緩衝液として4BSA、10mMTris、140mMNaCl、2mMCaCl2、0.05界面活性物質P20、0.02NaN3,pH8.0を用いて25°Cで解析を行った。結合したヒトSAPを除去するが、その後の固定化されたホスホエタノールアミンへのSAPの結合に有意に影響しない、Tris-EDTA10mMTris、140mMNaCl、10mMEDTA,pH8.0の2回のパルスを用いて、再生を行った。生成されたデータを、ヒトSAP表面上への緩衝液の注入によって2回較正し、BiacoreT100評価ソフトウェアにおける二価のアナライトモデルを用いて解析した。表8に示されるような生成されたデータは、単に構築物間の比較用と意図されたものである。それらは、そのアッセイ形式における固有のアビディティー作用によって結合が改変された可能性に起因して、正確な動態学的値を構成していない。アビディティーは、抗体の解離速度に影響した可能性が高く、それにより、KD値がより低く算出された。さらに、すべてのSAP-E抗体に対して、得られた解離速度kdが、Biacore測定範囲の限度外である。それにもかかわらず、それらの結果は、本発明の治療標的であるインビボにおけるアミロイド沈着物におけるような、固相リガンドとSAPとの相互作用によって固定化されたヒトSAPへの抗SAP抗体の強い結合を示唆する。実施例9:SAP-KL0ヒト化軽鎖の91位のアミノ酸スキャン部位特異的飽和突然変異誘発を用い、91位においてNNKをコードする突然変異誘発プライマーを使用することによってここで、Nは、アデノシンまたはシチジンまたはグアノシンまたはチミジンをコードし、Kは、グアノシンguanisineまたはチミジンをコードする、単一の反応において91位のシステイン残基Kabatナンバリングが潜在的に他の19種のアミノ酸のすべてで置換された変異体のパネルを作製した。作製された変異体の抗体上清に対して行われたBiacore解離速度のランク付けから、HEK2936E細胞におけるスケールアップおよび精製のために4つを選択した。実施例7に詳述されたようなO-ホスホエタノールアミン法を用いたBiacore動態解析は、91位にアラニンを有する変異体配列番号43が、野生型と比べて改善された親和性を有することを示した;それぞれ0.436nMおよび36.8nMというKD値が測定された。注意:すべての変異体が、表7に示される結果をもたらすために使用された同じ実験において試験された。他の変異体、例えば、グリシン、セリンおよびバリンも、H3L0と比べて結合性を改善したが、アラニンほどではなかった。さらに、軽鎖がH1と対にされたとき、これらの4つの変異体がL0よりも良好な結合特性を有したという事実もまた、結合ELISAおよびBiacore解離速度ランク付け実験において観察された。SAP-Kヒト化軽鎖V領域変異体L091Aヌクレオチド配列コドン最適化された配列配列番号73GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCTCTTCACTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAACGTGAACAGCAACGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAAGCCCCCAAGCTCCTGATCTACAGCGCCAGCTACAGATATAGCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGAAGCGGGACCGATTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACTTACTACTGCCAGCAGGCGAACAACTACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSAP-Kヒト化軽鎖V領域変異体L091Aアミノ酸配列配列番号74DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVNSNVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANNYPFTFGQGTKLEIK実施例10:抗SAP抗体によるアミロイドクリアランスの補体依存性補体欠損のマウスと補体が十分な正常動物とにおける治療の効率を比較することによって、抗SAP抗体によるアミロイドクリアランスにおける補体の役割を調べた。C1qに対する遺伝子の標的化欠失は、C1qと抗体抗原複合体との結合によって惹起される補体古典経路の活性化を阻止するが、走化性およびオプソニン化に関与する中心的な機能工程であり、補体の主要な生物学的機能であるC3の活性化はなおも、副経路およびレクチン経路を介して、ならびに非補体セリンプロテイナーゼによる直接的なC3の切断によって、進むことができる。C3に対する遺伝子の標的化欠失は、これらの機能を完全に無くす。AAアミロイドーシスの誘導補体欠損マウスの2つの群:C3ノックアウトn=14およびC1qノックアウトn=12ならびに15匹の野生型マウスにおいて、AAアミロイドーシスを誘導し、確認した。すべてのマウスが、純系のC57BL/6だった。アミロイド原線維を含むアミロイド性組織の抽出物である単一用量のアミロイド増強因子Baltzetal,1986PlenumPress,NewYork,pp.115-121を静脈内注射によって各マウスに投与し、その4日後に、0.1MNaHCO3中の溶液としての10w/vカゼインを12日間にわたる連日の10回の皮下注射によって投与したBottoetal,1997NatureMed.,3:855-859。カゼインは、持続的な急性炎症、および血清アミロイドAタンパク質SAA産生の持続性の増加を誘発し、それにより、すべての動物においてAAアミロイド沈着をもたらす。最後のカゼイン注射の7日後に、すべてのマウスの飲料水にKIを導入し、3日後に、標準的な用量の125I標識ヒトSAPHawkinsetal,1990J.Clin.Invest.,86:1862-1869およびHawkinsetal,1988J.Exp.Med.,167:903-913を各マウスに静脈内注射した。すべてのマウスにおいて、トレーサー注射の24時間後および48時間後に全身放射能計測を行うことにより、全身のアミロイド負荷の正確な指標である放射能の保有を測定した。125I-SAPトレーサー注射の10日後に、マウス1匹あたり10mgの単離された純粋なヒトSAPの単回の腹腔内注射によって、すべてのマウスにヒトSAPを負荷した。アミロイドを有するマウスに注射されたヒトSAPは、アミロイド沈着物に局在し、その位置において約3~4日の半減期で存続するのに対し、アミロイドに結合していない任意のヒトSAPは、約3~4時間の半減期で循環から除去されるHawkinsetal,1988J.Exp.Med,,167:903-913およびPepysetal,2002Nature,417:254-259。単離された純粋なヒトSAPを注射した後のアミロイドを有するマウスの脾臓における抗ヒトSAP抗体での免疫組織化学的染色は、典型的な辺縁帯分布ですべてのアミロイド沈着物が強く陽性染色されることを示す。この結合したヒトSAPは、本発明に係る治療用の抗SAP抗体の標的である。抗SAP治療ヒトSAPがもはや循環中で検出可能でなくなるヒトSAP注射の3日後に、各補体ノックアウト群における2匹を除くすべてのマウスに、リン酸緩衝食塩水PBS中の溶液として50mg/mlの単一特異的なヒツジ抗ヒトSAP抗血清の1mlの全IgG画分batchno.28667mg/mlの実際の抗SAP抗体を含むの単回の腹腔内注射を行った。その抗血清は、TheBindingSiteLtd,Birmingham,UKによって、ヒトSAP厳密には、UniversityCollegeLondonCentreforAmyloidosisandAcutePhaseProteinsにおいて100まで精製されたものおよび専売の免疫化手順を用いて製造されたものだった。次いで、アルカリ性かつアルコール性のコンゴーレッド染色Puchtler,H.,Sweat,F.andLevine,M.1962OnthebindingofCongoredbyamyloid.J.Histochem.Cytochem.,10:355-364によるアミロイド負荷の組織学的評価のために、すべての動物を抗SAP投与の15日後に殺傷した。すべての動物の脾臓および肝臓のコンゴーレッド切片が、各マウスが受けた治療について知らされていない1人以上の専門の観察者によって独立して検査され、以前に報告されたようにBottoetal,1997NatureMed.,3:855-859、存在するアミロイドの量についてスコア付けされた。1~5のスコアは、1特定の器官のいくつかの切片における1または2個の小さいアミロイドの斑に対応するから、5グレード1Bottoetal,1997NatureMed.,3:855-859よりも約10,000倍多いアミロイドを含む大量の広範な沈着物に対応するまでの、底が10の対数のおよそのランキングスケールである。数人の観察者は、整数の中間の.5のスコアも使用したが、異なる観察者のスコアは、常に高度に一致していた。各動物の各器官に対するすべての観察者のスコアの算術平均を統計解析に使用した。結果補体が十分な野生型マウスにおけるアミロイド沈着物の効果的なクリアランスと大いに異なって、補体欠損動物の両群には、なおも大量のアミロイドが存在したが、各タイプの2匹のコントロール補体欠損マウスよりも断片化された外観を呈する傾向があった。脾臓アミロイドスコアの中央値、範囲は、以下だった:野生型、1.17、0.0~1.5、n=15;C3ノックアウト、1.92、1.17~4.33、n=12;C1qノックアウト、1.25、1.17~3.5、n=10クラスカルワリスノンパラメトリックANOVA,P<0.001。野生型コントロールと両方の補体欠損群との差は、有意だったC3ノックアウトについてはP<0.001およびC1qノックアウトについてはP=0.036多重比較のためのボンフェローニの補正後が、C3ノックアウトとC1qノックアウトとの差は、有意でなかったP=0.314Mann-WhitneyU検定。考察C1qまたはC3を欠くマウスでは、抗SAP治療は、補体が十分な野生型マウスにおけるものと同程度には効率的にアミロイド沈着物を除去しなかった。したがって、抗SAPの治療効果は、極めて実質的に補体依存的であり、理論的にはFcγ受容体を介して食細胞が関わり得るIgG抗体結合だけによって媒介されるものではない。それにもかかわらず、補体欠損マウスにおいて持続性のアミロイド沈着物がより断片化された外観を呈したことは、抗体単独の少なくともいくらかの影響を示唆した。また、C3欠損動物よりもC1q欠損におけるクリアランスのほうが大きいという傾向は、C3活性化が重要であること、およびいくらかの補体の活性化がC1qの非存在下において生じている可能性があることを示唆した。実施例11:インタクトなIgG抗SAP抗体の必要性IgG抗体による補体の活性化には、Fc領域を含むそのインタクトな分子全体が必要であり、その活性化は、C1qの結合によって惹起される古典経路を介して進む。しかしながら、いくつかの抗体抗原系では、Fab2フラグメントによって、副経路を介した補体の活性化が媒介され得る。抗SAP抗体によるアミロイド除去の補体依存性を確認するため、およびその抗体のFc領域に対する潜在的な必要性を調べるために、Fab2抗SAP抗体ヒツジポリクローナル抗ヒトSAP抗血清batch2866のIgG画分のpH4.0におけるペプシン切断によって生成され、標準的な方法によって精製されたものの作用を試験した。AAアミロイドーシスの誘導および治療上記の実施例10に詳述されたように野生型C57BL/6マウスにおいてAAアミロイドーシスを誘導し、確認した。実施例10に詳述されたようにアミロイド沈着物にヒトSAPを負荷した後、マウスの群を、ヒツジポリクローナル抗ヒトSAP抗血清の全IgG画分、緩衝液ビヒクル単独またはIgG画分のFab2フラグメントで治療した。注射された抗SAP抗体活性の用量は、Fab2を投与されたマウス1匹あたり7.28mg、および全IgGを投与されたマウス1匹あたり7mg通常50mgの全IgGだった。コンゴーレッド染色によるアミロイド負荷の評価のために、14日後にすべてのマウスを殺傷した。結果アミロイド沈着物のクリアランスは、ビヒクル単独を投与されたコントロールマウスにおける大量のアミロイド沈着物と比べて、IgG抗SAP抗体を投与されたマウスではほぼ完全だった。Fab2を投与されたマウスは、無処置コントロールよりも少ないアミロイドを有したが、全IgG抗SAP抗体で処置されたマウスよりもなおも実質的に多かった表9。クラスカルワリス検定:脾臓,P<0.001;肝臓P<0.001マンホイットニー検定:1対2、脾臓と肝臓の両方,P<0.001;1対3、脾臓と肝臓の両方,P=0.001;2対3,脾臓,P=0.284;肝臓,P=0.019群2における単一の域外値は、IgG抗SAP処置にもかかわらず脾臓アミロイドが多かった。この動物を除くと、IgG処置の有効性とFab2抗SAP抗体処置の有効性との間に高度な有意差がもたらされる。多重比較に起因して、0.01以下のP値が有意性のために必要とされる。考察本研究において使用されたFab2抗SAP抗体のモル用量は、全IgGよりもFab2フラグメントの分子量が小さいことに起因して、IgG抗体のモル用量よりも約3分の1多かった。アミロイドクリアランスに対する最適な作用のために、Fcが必要とされる。補体が十分なマウスにおけるFab2よりも補体欠損マウスにおける全IgGが有効でなかったので、これは、Fcγ受容体による細胞認識の直接的な関与が理由ではない。投与された高用量のFab2が、副経路を介していくらかの補体を活性化することができた可能性がある。実施例12:マクロファージの必要性US2009/0191196に記載されている組織学的研究および組織化学的研究は、抗SAP抗体で処置されたマウスにおいてアミロイド沈着物を浸潤し、包囲し、貪食する細胞がマクロファージであることを示している。実際にマクロファージがアミロイドのクリアランスに関与していることを確認するために、ヒツジポリクローナル抗ヒトSAP抗血清batch2866の全IgG画分による処置の効果を、リポソームのクロドロネートの投与によってすべてのマクロファージ活性が阻害されたマウスにおいて試験した。試薬、実験プロトコル、およびリポソームのクロドロネートのマクロファージ機能に対する作用は、十分に確立されており、広く実証されているVanRooijenetal,2002J.LiposomeResearch.Vol.12.Pp,81-94。AAアミロイドーシスの誘導および処置上記の実施例10に詳述されたプロトコルを用いて野生型マウスにおいてAAアミロイドーシスを誘導し、確認した後、すべての動物に、10mgという単一の腹腔内用量の単離された純粋なヒトSAPを投与することにより、その沈着物にヒトSAPを負荷した。次いで、直ちにならびにその2、7および14日後に、0.3mlのリポソームのクロドロネートを試験群の腹腔内に投与した。ヒトSAP注射の3日後に、1つのコントロール群および試験群に、50mgという単一の腹腔内用量のヒツジ抗ヒトSAP抗血清のIgG画分を投与した。第2のコントロール群には、抗SAP処置および他の追加の処置を行わなかった。試験群および抗体コントロール群に抗SAPを投与した14日後に、コンゴーレッド染色によるアミロイド負荷の評価のために、すべてのマウスを殺傷した。結果抗SAPによる処置は、抗体を投与されなかった群と比べて、アミロイド沈着物のほぼ完全なクリアランスをもたらした。対照的に、マクロファージ機能を完全に無くすと知られるレジメンでリポソームのクロドロネートを投与されたマウスでは、アミロイド沈着物のクリアランスが見られなかった表10。クラスカルワリス検定:脾臓,P<0.001;肝臓P<0.001ボンフェローニの補正を伴うマンホイットニー検定:1対2:脾臓と肝臓の両方,P<0.003;1対3:脾臓,P=0.078;肝臓,P=0.411;2対3,脾臓と肝臓の両方,P<0.003.考察この特定の実験における結果から、マクロファージの機能が、抗ヒトSAP抗体によるアミロイド沈着物のクリアランスに必要であることが確認された。実施例13:マウスの全身性AAアミロイド沈着物の除去におけるマウスモノクローナル抗ヒトSAP抗体SAP-Eの有効性様々なモノクローナル抗体がヒトSAPを含むマウスのAAアミロイド沈着物のクリアランスを媒介する能力を、ポジティブコントロールとしての標準的なヒツジポリクローナル抗ヒトSAP抗体との比較において詳しく調べた。AAアミロイドーシスの誘導および処置マウスSAP遺伝子が欠失した純系のC57BL/6動物Bottoetal,1997NatureMed.,3:855-859を、ヒトSAPトランスジーンを有するC57BL/6マウスYamamuraetal,1993Mol.Reprod.Dev.,36:248-250およびGillmoreetal,2004Immunology,112:255-264と交雑することによって、ヒトSAPをトランスジェニックしたSAPノックアウトC57BL/6マウスを作出した。したがって、これらのマウスは、マウスSAPを欠くが、ヒトで見られる濃度よりも有意に高い濃度でヒトSAPを発現する。ヒトSAPトランスジェニックマウスSAPノックアウトマウスにおいて、実施例10に記載されたように全身性AAアミロイドーシスを誘導し、それらのマウスへの最後のカゼイン注射の9日後に、トレーサー用量の125I-標識ヒトSAPの注射後のアミロイドの全身放射能計測によって通常通り、アミロイド沈着の存在および程度を確認した。すべてのマウスが実質的かつ比較可能な量のアミロイドを有し、種々の処置を行うために、それらのマウスを密接にマッチした群に割り当てた。トレーサー注射の1週間後に、5mgという単一用量のCPHPCを腹腔内注射によって各マウスに投与することにより、循環ヒトSAPを枯渇させ、続いて、5時間後に同じ経路を介して、標準的なヒツジポリクローナル抗ヒトSAPIgG画分batch2866,7mg/mlの抗ヒトSAP抗体を含む50mg/mlの総タンパク質における1mlまたは5mgの9つの異なる単離された純粋なモノクローナル抗ヒトSAP抗体のうちの1つを投与した表11。抗体注射の21日後にすべてのマウスを殺傷し、その脾臓のコンゴーレッド組織学的検査によってアミロイド負荷を測定した。試験されたモノクローナル抗体のうち、SAP-Eだけが、アミロイド沈着物のクリアランスをもたらしたが、その効果は、ヒツジポリクローナル抗体の高度に再現性のある劇的な作用と同じだった。重要なことには、SAP-Eは、マウス補体を活性化すると知られるマウスIgG2aアイソタイプであるが、SAP-Bを除く他のモノクローナルのすべてが、補体を活性化しないマウスIgG1アイソタイプだった。SAP-Bは、マウスIgG2aアイソタイプであるが、そのインビトロにおけるSAPへの結合は、SAP-Eの結合よりも著しく低く、明らかにインビボにおいて有効であるには十分でなかった。考察これらの結果から、十分に強く補体を活性化するIgG2aマウスモノクローナル抗ヒトSAP抗体が、インビボにおいてヒツジポリクローナル抗ヒトSAP抗体と同程度に効率的にアミロイドクリアランスを媒介することが実証される。実施例14:モノクローナルマウス抗ヒトSAP抗体であるSAP-KおよびSAP-Eのインビトロにおける比較による特徴付けSAP-Kは、精製ヒトSAPでの免疫、および通例の方法によってクローン化されるハイブリドーマを生成する従来の融合から標準的な手法によって得られた、異なる6つの最も強く結合するマウスIgG2aモノクローナルから選択された。これらのIgG2a抗体のうち、SAP-Kは、固定化されたヒトSAPに対して最も強い結合を示した。これは、ヒトSAPが、プラスチック表面上に、非特異的付着もしくは共有結合によって直接固定化されるか、または固定化されたリガンドそれがアミロイド原線維であるか小分子リガンドのホスホエタノールアミンであるかを問わないへのSAPの特異的なカルシウム依存性結合によって直接固定化されるかに関係ない例である。また、SAP-Kは、カルシウムの存在下または非存在下において、およびSAPがCPHPCと予め複合体化されて十量体のSAP-CPHPC複合体において共有結合的に固定されている場合に、直接固定化されたSAPに十分結合したPepys,M.B.etal2002TargetedpharmacologicaldepletionofserumamyloidPcomponentfortreatmentofhumanamyloidosis.Nature,417:254-259;Kolstoe,S.E.etal2009MoleculardissectionofAlzheimer’sdiseaseneuropathologybydepletionofserumamyloidPcomponent.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,106:7619-7623。SAP-Eもまた、これらの異なる配置のすべてにおいてヒトSAPに十分に結合した。しかしながら、これら2つの抗体は、ヒトSAPが低密度にしか利用可能でないとき、例えば、コーティングのためにプレートがほんの1μg/mlのヒトSAPにしか曝露されていないとき、SAP-Eよりもかなり多くのSAP-Kが結合するようになるのに対し、より大量の固定化されたSAPが存在するとき、例えば、コーティング溶液が100μg/mlのSAPを含むとき、SAP-KよりもSAP-Eが多く結合したという点において大きく異なる。この差異は、2以上のSAP分子が別のSAP分子と接近して会合した状態であるとき、SAP-Eが最適に結合する一方で、SAP-Kは、孤立した単一のSAP分子に強く結合することを示唆する。この機構は、ポリクローナルヒツジ抗ヒトSAPbatch2866でコーティングされたプレート上への捕捉によってヒトSAPが固定化されて、それによって、各ヒツジIgG抗体分子の2本の腕において共に接近して保持されるSAP分子の対がもたらされたとき、SAP-Eが、ヒトSAP投入の全レベルにおいてSAP-Kよりも良好に結合したという知見によって裏づけられる図7。図7は、固定化されたヒツジポリクローナル抗ヒトSAP抗体によって捕捉される、ヒトSAPに対するモノクローナルマウス抗体の結合についてのイムノラジオメトリックアッセイを示している。提供されたヒトSAPのすべての濃度において、SAP-Kよりも実質的に多いSAP-Eが結合した。各点は、3回の反復の平均値である。非常に重要なことには、SAP-EとSAP-Kの両方が、天然ヒトSAPに明らかに等しく十分に結合したこれは、単離された純粋なヒトSAPとヒト全血清との両方に対するアガロースゲルでの二重免疫拡散法において両方の抗体が類似の免疫沈降を示したことによって示された。これらの2つのマウスモノクローナル抗体の類似の結合性は、チップ上に共有結合的に固定化されたヒトSAPを用いてBiacore装置BIAcoreX,PharmaciaBiosensorAB,Uppsala,Swedenにおいて測定された類似のパラメータとして反映された表12。示された値は、3回の反復測定の平均値およびSDである。対照的に、両方の抗体が、生理学的緩衝液におけるアガロースゲル電気泳動後のウエスタンブロッティングにおいて未変性ヒトSAPに結合したが、還元SDS-PAGEからのウエスタンブロッティングではSAP-EだけがヒトSAPに結合した。したがって、SAP-Eは、変性したヒトSAPを認識するが、SAP-Kは、未変性ヒトSAPだけを認識し、立体構造エピトープに結合していると考えられる。ヒトSAPのCNBr消化によって、159Mと160Wとの間で切断が生じるこれにより、159位がメチオニンからホモセリンラクトンに変換された新しいペプチド150-158-ホモセリンラクトンと呼ばれるがもたらされる。SDS-PAGEからのウエスタンブロッティングにおいて、SAP-Eは、残基Met159におけるSAPのCNBr切断によって放出されたN末端の1-158-ホモセリンラクトンポリペプチドに結合したが、カルシウムの非存在下におけるキモトリプシン消化によって放出された1-140フラグメントとはほとんど反応しなかった図8。ゆえに、SAP-Eの結合が、溶液中のペプチド136~147、138~149、140~151および112~119によって強く阻害されないので、SAP-Eによって認識されるエピトープは、いくらか変性に抵抗性の二次構造を明らかに含む領域140~158に存在すると考えられる。これは、SAPの変性に対する動態安定性および抵抗性と一致するManning,M.andColon,W.2004Biochemistry,43:11248-11254。図8は、モノクローナル抗ヒトSAP抗体SAP-Eについてのエピトープマッピングを示している。A,70TFA中のCNBrによって切断される点残基159Mおよびカルシウムの非存在下における重炭酸アンモニウム中での還元/カルバミドメチル化carbamidomethylationなしのキモトリプシンによって切断される点残基140Yおよび144Fを示しているヒトSAPの完全なアミノ酸配列。B,CNBrで切断されたSAPのSDS-PAGE解析。左パネル:クマシーブルー染色;レーン1,未処理コントロールSAP;レーン2,ほんのわずかな未切断のインタクトな残留プロトマー、ならびにそれぞれおよそ20kD残基1-158-ホモセリン-ラクトンおよび5kD160-204の予想フラグメントを示している、CNBr切断後のSAP。これらは、質量分析によって正確に確認された。右パネル:レーン1100ng充填および210ngには、インタクトな未処理SAPの強い染色、ならびにレーン3600ng、4130ngおよび564ngには、CNBrで切断されたSAPにおけるインタクトな残留SAPおよびより大きい残基1-158-ホモセリン-ラクトンフラグメントを示している、SAP-5でのウエスタンブロット。レーン6には、SAP-5が全く反応しない単離された純粋なヒトCRPが含まれていた。C,キモトリプシンで消化されたSAPのSDS-PAGE解析。左パネル:クマシーブルー染色;レーン1,未処理コントロールSAP;レーン2,残基1~140および145~204に対応する主要な予想フラグメントを示している、キモトリプシン消化後のSAP。これらは、質量分析によって正確に確認された。右パネル:レーン1500ng充填および2100ngには、インタクトな未処理SAPの強い染色、ならびにレーン3および4には、キモトリプシンで消化された異なる充填量のSAPを含むインタクトな残留SAPを示している、SAP-Eによるウエスタンブロット。残基1~140フラグメントへのSAP-Eの非常に弱い結合が、最も多く充填されたレーン3にだけ見られる。レーン5500ngおよび6100ngには、SAP-Eが全く反応しない単離された純粋なヒトCRPが含まれていた。D,ヒトSAPhとマウスSAPmとの残基136~147に対する配列比較。上パネル,マウス配列中に黒で示される残基によって差異を上に示した。下パネル,ヒトSAPの3Dサブユニット構造において白色で示された頂部に140Yを有するこの伸長されたループの位置。マウス配列において異なる残基が黒色で示されている。灰色の球形は、リガンド結合ポケットに結合したカルシウム原子を表している。SAP-Kによって認識される立体構造エピトープは、CLIPS登録商標技術のエピトープマッピングPepscanPrestoBVによって、円盤様の五量体の天然SAP分子の周縁における外側の露出されるループである残基121~131と特定された。図9は、SAP-Kによって認識されるヒトSAP上のエピトープA,黒色で強調されている、CLIPS登録商標技術によって決定された部分およびSAP-Eによって認識されるヒトSAP上のエピトープB,白色で示されている、SAPのCNBr切断産物およびカルシウムの非存在下におけるキモトリプシン消化によって放出されたフラグメントとの結合の結果によって決定された140~158の位置を示している。実施例15:マウスAAアミロイドーシスモデルにおけるインビボのアミロイド沈着物の除去におけるSAP-Kマウスモノクローナル抗ヒトSAP抗体の有効性SAP-Kの効力を、マウスにおける確立された全身性AAアミロイド沈着物の除去における標準的なヒツジポリクローナル抗体の作用と比較した。AAアミロイドーシスの誘導および処置上記の実施例10に詳述されたように野生型C57BL/6マウスにおいてAAアミロイドーシスを誘導し、確認した。実施例10に詳述されたようにアミロイド沈着物にヒトSAPを負荷した後、ヒツジポリクローナル抗ヒトSAP抗血清の全IgG画分batch2866としてマウス1匹あたり50mgの全IgG7mgという用量の実際の抗SAP抗体をもたらす、マウス1匹あたり5mgという用量の単離精製SAP-K、マウス1匹あたり1mgという用量の単離精製SAP-K、およびネガティブコントロールとして、無関係なヒト抗原に特異的かつヒトSAPまたは任意のマウス抗原に非反応性の単離、精製されたモノクローナルマウスIgG2a抗体でマウスの群を処置した。コンゴーレッド染色によるアミロイド負荷の評価のために、17日後にすべてのマウスを殺傷した。結果5mgのSAP-Kで処置されたマウスは、7mgの用量のヒツジポリクローナル抗体を用いたときに見られるものと同じ顕著な脾臓および肝臓のアミロイド沈着物のクリアランスを示した。無関係なコントロールマウスIgG2a抗体を投与されたすべての動物における広範な脾臓および肝臓のアミロイド沈着物とははっきり異なって、処置されたマウスの脾臓には微量のアミロイドの斑だけしか残らず、肝臓の多くでは何も検出されなかった表13。マウス1匹あたり1mg、0.5mgおよび0.1mg0.5mgおよび0.1mgについてはデータ示さずという低用量のSAP-Kでは、有意な効果がなかった。クラスカルワリス検定:脾臓,P<0.001;肝臓P,0.001マンホイットニー検定:1対2,脾臓,P=0.002;肝臓,P=0.002;1対3,脾臓,P=0.173;肝臓,P=0.083;1対4,脾臓,P<0.001;肝臓,P<0.001;2対3,脾臓,P=0.0.001;肝臓,P=0.019;2対4,脾臓,P=0.513;肝臓,P=0.768;3対4,脾臓,P<0.001;肝臓,P=0.004。多重比較に起因して、0.01以下のP値が有意性のために必要とされる。考察これらの結果から、立体構造エピトープを特異的に認識する、補体を活性化するマウスIgG2aアイソタイプのモノクローナル抗ヒトSAP抗体のインビボでのアミロイド沈着物の除去における有効性が立証される。したがって、本発明に係る使用のためのモノクローナル抗ヒトSAP抗体は、主に配列エピトープ例えば、抗体SAP-E、または全体的に立体構造エピトープ例えば、SAP-Kに対して抗体産生され得る。実施例16:マウスの全身性AAアミロイド沈着物の除去におけるSAP-EおよびSAP-Kの有効性の比較、ならびに血漿中の抗SAP抗体濃度の推定AAアミロイドーシスの誘導および処置上記の実施例10に詳述されたように野生型C57BL/6マウスにおいてAAアミロイドーシスを誘導し、確認した。実施例10に詳述されたようにアミロイド沈着物にヒトSAPを負荷した後、マウス1匹あたり3mgおよび1mgの2つの異なる抗体で、マウスの群を処置した。アミロイドを誘導されたコントロール群には、抗体の代わりに単なるPBSを投与し、さらなる2つの群には、5mg/マウスという公知の有効量の各抗体を投与した。抗体を投与した1、5および15日後に、循環抗SAP抗体のアッセイのためにすべてのマウスから採血し、コンゴーレッド染色によるアミロイド負荷の評価のために、21日目にすべてを殺傷した。既知濃度で正常マウス血清に加えられたそれぞれ精製SAP-Eおよび精製SAP-Kで標準化された頑強なイムノラジオメトリックアッセイを用いて、すべての血清を抗SAP活性についてアッセイした。結果調べられた各組織の情報について全員が知らされていない4人の独立した専門の観察者によって、アミロイド負荷がスコア付けされた。すべての観察者のスコアは、通常のとおり高度に一致しており、統計解析のために、各マウスの脾臓と肝臓の両方に対するすべての観察者の総スコアを合計した。両方の抗体が、先に証明されたように有効であり、明らかな用量依存性の作用が存在したが、より低用量ではSAP-Eが、SAP-Kよりも明らかに強力だった。クラスカルワリス検定:P<0.001マンホイットニー検定:K5対E5,P=0.095;K3対E3,P=0.684;K1対E1,P=0.001;K5対K3,P=0.594;K5対K1,P=0.001;K3対K1,P<0.001;E5対E3,P=0.008;E5対E1,P=0.001;E3対E1,P=0.004;K5対C,P=0.001;E5対C,P=0.001;K3対C,P<0.001;E3対C,P<0.001;K1対C,P=0.043;E1対C,P<0.001。多重比較に起因して、0.01以下のP値が有意性のために必要とされる。すべての動物に単一用量が投与された後、より低用量の各群における1匹の外れた個体は別として、循環抗SAP抗体活性の濃度は一貫して強く用量依存性だった。マウス1匹あたり1mgが投与された1日後でさえ、ほとんどのマウスにおいてバックグラウンドを超えるものは概して検出可能でなかった。対照的に、5mgが投与された15日後でも大量の抗体が存在し、3mgが投与された5日後には、ほとんどのマウスが循環抗体を有したが、15日後はより少なくなった表15。SAP-Eに対するパターンとSAP-Kに対するパターンとの間に有意差はなかった。17μg/ml未満という見かけの抗SAP抗体の濃度が、このアッセイに対するバックグラウンドであり、真の活性に相当するわけではない。考察一対一での直接的な比較において、SAP-Eが、わずかであるがSAP-Kよりも有意に強力であるという一貫した証拠が存在する。マウス1匹あたり1mgを投与した後、循環抗SAP抗体の活性は、1日後には検出可能でなかったことから、明らかにすべてが、アミロイド沈着物内のヒトSAPに局在化した。3mgを投与した後、大量の抗SAPが、1日後には循環中に存在し、5日後にも存在した。マウス1匹あたり5mgを投与した後は、15日後であっても血液中にかなり濃度の抗SAPが存在した。これらの観察結果から、アミロイドクリアランスを誘発するのに、低用量の抗SAP抗体の反復投与で十分であり得ることが示唆される。実施例17:マウスにおいて全身性AAアミロイド沈着物を除去する際の低用量のSAP-EおよびSAP-Kの有効性の比較AAアミロイドーシスの誘導および処置上記の実施例10に詳述されたように野生型C57BL/6マウスにおいてAAアミロイドーシスを誘導し、確認した。実施例10に詳述されたようにアミロイド沈着物にヒトSAPを負荷した後、マウス1匹あたり0.5mgおよび1mgという単一用量の2つの異なる抗体、または3もしくは4日間隔で投与される0.15mgという6回の反復用量で、マウスの群各々n=10を処置した。アミロイドを誘導されたコントロール群n=9には、抗体の代わりに単なるPBSを投与し、さらなる2つの群各々n=3には、5mg/マウスという公知の有効量の各抗体を投与した。コンゴーレッド染色によるアミロイド負荷の評価のために、29日目にすべてを殺傷した。結果低用量非常に低い反復用量を含むは、特に肝臓におけるアミロイド負荷の減少において有意な有効性を示した。また、SAP-Eは、SAP-Kよりも明らかに強力だった。クラスカルワリス検定:脾臓,P<0.001;肝臓,P=0.001マンホイットニー検定:E1対C:脾臓,P<0.001;肝臓P<0.001;E0.5対C:脾臓,P=0.604;肝臓P=0.004;Erep対C:脾臓、P0.002;肝臓,P<0.001;K1対C:脾臓,P=0.065;肝臓,P=0.001;K0.5対C:脾臓,P=0.022;肝臓,P=0.001;Krep対C:脾臓,P=0.079;肝臓,P<0.001;E1対E0.5:脾臓,P=0.005;肝臓P=0.143;E1対Erep:脾臓,P=0.043;肝臓,P=0.280;E0.5対Erep:脾臓,P=0.019;肝臓,P=0.043;K1対K0.5:有意差なし;K1対Krep:有意差なし;K0.5対Krep:有意差なし;E1対K1:脾臓,P=0.015;肝臓,P=0.353;E0.5対K0.5:有意差なし;Erep対Krep:有意差なし。多重比較に起因して、0.01以下のP値が有意性のために必要とされる。考察SAP-Kよりも有意に高いSAP-Eの効力は、再現性があるとみられる。繰り返し投与されるときの非常に低い用量の効果、および脾臓よりも肝臓アミロイド沈着物に対するより大きな作用に関する示唆は、興味深く、潜在的に臨床的に有意である。実施例18:インビトロにおけるヒト化モノクローナル抗ヒトSAP抗体による補体の活性化補体の活性化は、本発明に係る抗ヒトSAP抗体によるアミロイド除去の有効性にとって不可欠である。30mg/lのSAP濃度を含むヒト全血清、または単離された純粋なヒトSAPをこの同じ濃度まで加えたマウス全血清に種々の量の単離された純粋な抗体を加えることによって、ヒト化モノクローナル抗体であるSAP-EH1L1およびSAP-KH3L0がヒト血清中およびマウス血清中でC3を活性化する能力をインビトロにおいて比較した。両方の場合において、血清は、新鮮でありかつ補体が十分に存在し、実験条件は、希釈剤として補体結合試験緩衝液CFTを用いた補体の活性化について最適だった。すべてのチューブを37°Cで2時間インキュベートすることにより、補体の活性化を進めた。血清中では、ゆっくりとした自発的な活性化が常に起こっているので、M9およびH9の複製物でありM10およびH10と命名された2つの追加のコントロールを提供したこれらは、インキュベートされなかったが、混合後に直ちに-80°Cで凍結し、次いで、C3切断についてアッセイする直前に解凍した。M/H9とM/H10とを比較することにより、自発的なC3切断と、抗SAP抗体によってもたらされた任意の追加の活性化、ならびにマウス血清にヒトSAPだけを加えたときの任意の作用とを区別することが可能である。ヒトC3に対する単一特異的な抗体を用いた二次元免疫電気泳動によって、ヒト血清中のC3切断をアッセイした。マウスC3の種々の電気泳動移動度が、ヒトC3を用いた場合よりも信頼性をもって区別しにくいので、この方法は、マウスC3切断に対しては低感度である。ゆえに、アガロースゲル電気泳動後の単一特異的な抗マウスC3抗体を用いた免疫ブロッティングによって、マウスC3の切断をアッセイした。結果両方のヒト化抗体がヒト補体を効率的に活性化しC3の主な用量依存性の切断によって証明される、それによって、未変性C3の免疫沈降ピークのより遅い移動度のサイズが減少し、より速い切断されたC3cピークのサイズが増加した図10。図10は、ヒト全血清中のヒト化モノクローナル抗ヒトSAP抗体によるC3活性化を示している。サンプルH10におけるベースラインC3切断に対するコントロールを含むアッセイにおいて、両方の抗SAP抗体の最も低い用量でさえ、抗体なしの自発的な切断コントロールに見られるものよりも多いC3切断をもたらすことが明らかである図11。図11は、ヒト全血清中の低用量ヒト化モノクローナル抗ヒトSAP抗体によるC3活性化を示している。ヒトSAPが補充されたマウス全血清中のマウスC3の切断について非常に類似した結果が得られた。両方の抗体が、遅い移動度の未変性C3バンドの強度の低下およびより速い移動度の活性化型の強度の増加をもたらす、未変性マウスC3の用量依存性の切断を示した。また、各抗体の最も低い用量でさえ、抗体なしの自発的な活性化コントロールに見られるものよりも多いC3切断をもたらした図12。図12は、純粋なヒトSAPが補充されたマウス全血清中のヒト化モノクローナル抗ヒトSAP抗体によるC3活性化を示している。考察両方のヒト化モノクローナル抗ヒトSAP抗体が、ヒトSAPの存在下において補体を効率的に活性化するので、それらは、本発明に係る、全身性アミロイドーシスおよび組織における細胞外のアミロイド沈着物によって引き起こされる他の任意の疾患の治療における使用に適した候補である。"