"オリゴヌクレオチドを合成する方法であって、一般式I、式中、Rは、アリール基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、環状炭素原子を介してS-原子に結合しており、R1及びR2は、独立に、有機残基、好ましくはC1-C20、任意に不飽和又は芳香族の炭化水素残基である。で規定される硫化剤を使用して、前記オリゴヌクレオチドの前駆体の少なくとも1つのリンインターヌクレオチド結合を硫化することを特徴とする方法。Rが、ハロフェニル又はアルキルフェニル、好ましくは4-ハロフェニル、特に好ましくは4-クロロフェニルである、請求項1に記載の方法。R1及びR2が、低級アルキル又はシクロアルキルC1-C7、置換フェニルを含むフェニル及びナフチル基、より好ましくはメチル基から選択される、請求項1又は2に記載の方法。前記硫化剤が、有機溶媒、好ましくはハロゲン化炭化水素溶媒に溶解される、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記硫化剤と、硫化されるリンインターヌクレオチド結合のモル比が、1.0から2.0である、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。前記オリゴヌクレオチドの前駆体が、リボヌクレオシド、2’-デオキシリボヌクレオシド、2’-置換リボヌクレオシド、2’-4’-ロックド-リボヌクレオシド、3’-アミノ-リボヌクレオシド、3’-アミノ-2’-デオキシリボヌクレオシドから選択されるヌクレオシドを有する、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。前記リンインターヌクレオチド結合が、H-ホスホン酸ジエステル結合である、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。カップリングが、液相で行われる、請求項7に記載の方法。請求項1~8のいずれか一項によって得られるオリゴヌクレオチドを精製するステップをさらに含む、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。前記オリゴヌクレオチドを少なくとも沈殿させるステップを含む、請求項9に記載の方法。前記オリゴヌクレオチドを溶媒で抽出することをさらに含む、請求項9又は10に記載の方法。前記オリゴヌクレオチドを、好ましくは塩化メチレン、クロロホルム、アセトニトリル、アセトン及びピリジンから選択される極性有機溶媒に溶解させるステップを含む、請求項10又は11に記載の方法。溶媒容量が、約0.5n1mLから約2.0n1mL、好ましくは約1.0n1mL式中、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲で用いられる、請求項12に記載の方法。前記オリゴヌクレオチドの溶液が、前記溶液が混濁するまで、好ましくは炭化水素、エーテル溶媒及びこれらの混合物から選択される非極性有機溶媒で処理される、請求項12又は13に記載の方法。溶媒容量が、約1n1mLから約4n1mL、好ましくは約2.0n1mL式中、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲で用いられる、請求項14に記載の方法。前記混濁溶液が、沈殿助剤で処理される、請求項14又は15に記載の方法。前記沈殿助剤が、好ましくはセライト、チャコール、木材セルロース、及びシリカ又はアルミナなどのクロマトグラフィー固定相から選択される不活性多孔質固体の中から選択される、請求項16に記載の方法。前記沈殿助剤が、約0.25n1gから約1.5n1g、好ましくは約0.75n1g式中、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲の量で用いられる、請求項16又は17に記載の方法。前記沈殿助剤を添加後、前記混合物が、非極性有機溶媒の第2の部分によって、一般に約1n1mLから約4n1mL、好ましくは約2.0n1mL式中、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲の前記部分の容量で処理される、請求項16に記載の方法。前記沈殿ステップで得られる固体物質が、ろ別及び洗浄される、請求項16~19のいずれか一項に記載の方法。前記オリゴヌクレオチドが、オリゴヌクレオチド含有沈殿物から溶媒で抽出される、請求項10~20のいずれか一項に記載の方法。前記溶媒が、好ましくはアセトニトリル、THF、DMF、及び脂肪族アルコールから選択される極性有機溶媒と、水性媒体、好ましくは水との混合物を含み、前記極性有機溶媒/水性媒体の容量比が、好ましくは約0.5から約1.5、より好ましくは約0.7である、請求項21に記載の方法。aハロゲン化スルフリル、好ましくは塩化スルフリルを、式R-S-H式中、Rは、アリール、アルキルアリール、ハロアリール、ニトロアリール、アルコキシアリールからなる群から選択される芳香族であるのチオールと反応させて、式R-S-W式中、Rは、上に記載されているとおりであり、Wは、ハロゲン、好ましくはClであるの中間体生成物を生成させるステップ、及びb前記中間体生成物を、式R1-NH-SO2-R2式中、R1及びR2は、独立に、有機残基、好ましくはC1-C20、任意に不飽和又は芳香族の炭化水素残基であるのN-スルホニル化合物と反応させることを含む、請求項1~22のいずれか一項で用いられるとおりの硫化剤を合成する方法。Rが、ハロフェニル、好ましくは4-ハロフェニル、より好ましくは4-クロロフェニルである、請求項23に記載の方法。R1及びR2が、低級アルキル又はシクロアルキルC1-C7、置換フェニルを含むフェニル及びナフチル基、より好ましくはメチル基から選択される、請求項23又は24に記載の方法。本発明により、新規な硫化剤を用いることによってオリゴヌクレオチドを合成する新規な方法が提供され、特に溶液中のオリゴヌクレオチドの経済的で効率的な合成及び精製が可能となる。本発明は特に、オリゴヌクレオチドを合成する方法であって、オリゴヌクレオチドの前駆体の少なくとも1つのリンインターヌクレオチド結合linkageを硫化するために、一般式I:式中、Rは、環状炭素原子を介してS-原子に結合しているアリール基及びヘテロアリール基からなる群から選択され、R1及びR2は、独立に、有機残基、好ましくはC1-C20、任意に不飽和又は芳香族の炭化水素残基であるの硫化剤を用いるステップを含む方法に関する。本発明は、特に、好ましくはH-ホスホン酸エステル法によって行われるオリゴヌクレオチドの合成において、既存のP-S結合形成法を上回るいくつかの利点を有する。例えば、新規な試薬によって、例えば、オリゴヌクレオチドへ転移される残基Rは、オリゴヌクレオチドの結晶化又は沈殿を促進することができ、最低限のクロマトグラフィー又はそれなしで生成物の簡単な精製を可能にする。特に溶液中でオリゴヌクレオチドを合成するための経済的な方法を開発する際の重要な要因は、オリゴヌクレオチド鎖伸長の各ステップにおける転換生成物の精製である。本発明による方法は、生成物の高い収率及び純度を確保するにもかからず、各伸長サイクルは、一般に3つのステップを含み、さもなければ途中で蓄積する少量の不純物でさえも除去することが有利である。多数のステップのために、各ステップにおけるクロマトグラフィーの使用は、実際的な大規模のオリゴヌクレオチド合成において経済的に実行可能でないことがある。本発明のフレームにおいて、オリゴヌクレオチドという用語は、特に、核酸塩基に連結された糖単位を含む、インターヌクレオチド結合によって連結されているヌクレオシド単量体単位のオリゴマーを意味する。インターヌクレオチド結合は、特に、2つのヌクレオシド部分間の化学的結合、例えば、典型的には自然に見出される核酸中に存在しているホスホジエステル結合、又は典型的には合成核酸及び核酸アナログ中に存在している他の結合を指す。このようなインターヌクレオチド結合は、例えば、ホスホ又はホスファイト基を含んでもよく、ホスホ又はホスファイト基の1個以上の酸素原子が、置換基で修飾、あるいは別の原子、例えば、硫黄原子、又はモノ-アルキルアミノ基もしくはジ-アルキルアミノ基の窒素原子で置き換えられている結合を含んでもよい。典型的なインターヌクレオチド結合は、リン酸又はその誘導体のジエステル、例えば、リン酸エステル、チオリン酸エステル、ジチオリン酸エステル、ホスホルアミデート、チオホスホルアミデートである。ヌクレオシドという用語は、特に、糖に連結した核酸塩基からなる化合物を意味すると理解される。糖としては、限定されるものではないが、フラノース環、例えば、リボース、2’-デオキシリボース及び非フラノース環、例えば、シクロヘキセニル、アンヒドロヘキシトール、モルホリノが挙げられる。ヌクレオシドに含まれる糖の以降に示される修飾、置換及び位置は、フラノース環に関して検討されるが、同じ修飾及び位置は、他の糖環の類似の位置にも適用される。糖は追加的に修飾されていてもよい。糖の修飾の非限定的な例としては、特に、例えば、水素;ヒドロキシ;アルコキシメトキシ、エトキシ、アリルオキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、メトシキエチル、アルコキシ、フェノキシなど;アジド;アミノ;アルキルアミノ;フルオロ;クロロ及びブロモを含むフラノシル糖環の、例えば、2’-又は3’-位、特に2’-位における修飾、2’-4’-及び3’-4’-連結フラノシル糖環修飾、例えば、S、CH2、NR、CHF又はCF2による環4’-Oの置換を含むフラニシル糖環における修飾を挙げることができる。核酸塩基という用語は、特に、相補的な核酸塩基又は核酸塩基アナログと対になることができる窒素含有ヘテロ環部分を意味すると理解される。典型的な核酸塩基は、プリン塩基のアデニンA及びグアミンG、ならびにピリミジン塩基のチミンT、シトシンC及びウラシルUを含む天然核酸塩基、ならびに他の合成及び天然核酸塩基を含む修飾核酸塩基、例えば、5-メチルシトシン5-me-C、5-ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2-アミノアデニン、アデニン及びグアニンの6-メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの2-プロピル及び他のアルキル誘導体、2-チオウラシル、2-チオチミン及び2-チオシトシン、5-ハロウラシル及びシトシン、5-プロピニルウラシル及びシトシン、ならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、6-アゾウラシル、シトシン及びチミン、5-ウラシルシュードウラシル、4-チオウラシル、8-ハロ、8-アミノ、8-チオール、8-チオアルキル、8-ヒドロキシル及び他の8-置換アデニン及びグアニン、5-ハロ、特に5-ブロモ、5-トリフルオロメチル及び他の5-置換ウラシル及びシトシン、7-メチルグアニン及び7-メチルアデニン、2-F-アデニン、2-アミノ-アデニン、8-アザグアニン及び8-アザアデニン、7-デアザグアニン及び7-デアザアデニン、3-デアザグアニン及び3-デアザアデニン、ならびにフッ素化塩基を含む天然核酸塩基である。さらなる修飾核酸塩基としては、三環式ピリミジン、例えば、フェノキサジンシチジン1H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾオキサジン-23H-オン、フェノチアジンシチジン1H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾチアジン-23H-オン、G-クランプ、例えば、置換フェノキサジンシチジン例えば、9-2-アミノエトキシ-H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾオキサジン-23H-オン、カルバゾールシチジン2H-ピリミド[4,5-b]インドール-2-オン、ピリドインドールシチジンH-ピリド[3’,2’:4,5]ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-オンが挙げられる。他の潜在的に好適な塩基としては、普遍的塩基、疎水性塩基、入り交ざったpromiscuous塩基及びサイズ拡大塩基が挙げられる。オリゴヌクレオチドは典型的には、約2から約50の連続サブユニットを有するヌクレオシドサブユニットポリマーを指す。ヌクレオシドサブユニットは、様々なサブユニット間結合によって連結され得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、糖骨格例えば、ホスホルアミデート、ホスホロジチオエート、糖例えば、2’-F、2’-OMeなどの2’置換基、塩基、ならびに3’及び5’末端に対する、当業者に公知の修飾を含む。典型的には、本発明において、オリゴヌクレオチドは、2から30のヌクレオチドを含む。好ましくは、それは、3から30のヌクレオチドを含む。本発明の異なる実施形態において、オリゴヌクレオチドは、リボヌクレオシド、2’-デオキシリボヌクレオシド、2’-置換リボヌクレオシド、2’,-4’-ロックド-リボヌクレオシド、3’-アミノ-リボヌクレオシド、3’-アミノ-2’-デオキシリボヌクレオシドから選択されるヌクレオシドを包含する。アリール基という用語は、特に、6から24個の炭素原子、好ましくは6から12個の炭素原子を含む芳香族炭素環系を意味することが意図される。アリール基は、非置換であっても、例えば、アリールもしくはヘテロアリール、アルキル基、シクロアルキル、又は官能基で置換されていてもよい。好ましくは、アリール基は、アルキル又はハロゲンで4位において置換されている。ヘテロアリールという用語は、特に、そのうちの少なくとも1個がヘテロ原子である、5から24個の原子、好ましくは5から12個の原子を含む芳香族炭素環系を意味することが意図される。ヘテロ原子は、B、N、O、Si、P及びSから選択されることが多い。それは、より多くの場合N、O及びSから選択される。アルキル基という用語は、特に、1から20個の炭素原子、好ましくは1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個の炭素原子を含む直鎖又は分岐のアルキル置換基を意味することが意図される。このような置換基の具体的な例は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンチル、n-ヘキシル、2-ヘキシル、n-ヘプチル、n-オクチル及びベンジルである。シクロアルキル基という用語は、特に、3から10個の炭素原子、好ましくは5、6又は7個の炭素原子を含む少なくとも1つの飽和炭素環を含む置換基を意味することが意図される。このような置換基の具体的な例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチルである。官能基という用語は、特に、ヘテロ原子を含む又はそれからなる置換基を意味することが意図される。ヘテロ原子は、B、N、O、Al、Si、P、S、Sn、As及びSeならびにハロゲンから選択されることが多い。それは、より多くの場合N、O、S及びハロゲン、特にハロゲンから選択される。官能基は、一般に1,2、3、4、5又は6個の原子を含む。官能基として、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル基、アルコキシ基、メルカプト基、アミノ基、ニトロ基、カルボニル基、アシル基、任意選択的にエステル化されたカルボキシル基、カルボキサミド基、尿素基、ウレタン基、及びカルボニル基を有する上述の基のチオール誘導体、ホスフィン、ホスホネート又はホスフェート基、スルホキシド基、スルホン基ならびにスルホネート基を挙げることができる。有機残基という用語は、特に、ヘテロ原子、例えば、特にホウ素、ケイ素、窒素、酸素又は硫黄原子及びハロゲン原子を有し得る直鎖又は分岐のアルキル又はアルキレン基、シクロアルキル基、ヘテロ環ならびに芳香族系を意味することが意図される。有機残基は、二重結合又は三重結合、及び官能基を有していてもよい。有機残基は、少なくとも1個の炭素原子を含む。それは、少なくとも2個の炭素原子を含むことが多い。それは、好ましくは少なくとも3個の炭素原子を含む。より特に好ましくは、それは、少なくとも5個の炭素原子を含む。有機残基は、一般に最大100個の炭素原子を含む。それは、最大50個の炭素原子を含むことが多い。それは、好ましくは最大40個の炭素原子を含む。より特に好ましくは、それは、最大30個の炭素原子を含む。アルキレン基又はシクロアルキレン基という用語は、特に、上に定義されたとおりのアルキル又はシクロアルキル基から誘導される二価の基を意味することが意図される。有機残基が、1つ又は任意選択的により多くの二重結合を有する場合、それは、多くの場合2から20個の炭素原子、好ましくは2、3、4、5、6、7、8、9又は10個の炭素原子を含むアルケニル又はシクロアルケニル基から選択される。このような基の具体的な例は、ビニル、1-アリル、2-アリル、n-ブタ-2-エニル、イソブテニル、1,3-ブタジエニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル及びスチリルである。有機残基が、1つ又は任意選択的により多くの三重結合を有する場合、それは、多くの場合2から20個の炭素原子、好ましくは2、3、4、5、6、7、8、9又は10個の炭素原子を含むアルキニル基から選択される。このような基の具体的な例は、エチニル、1-プロピニル、2-プロピニル、n-ブタ-2-イニル及び2-フェニルエチニルである。有機残基が、1つ又は任意選択的により多くの芳香族系を有する場合、それは、多くの場合6から24個の炭素原子、好ましくは6から12個の炭素原子を含むアリール又はアルキルアリール基である。このような基の具体的な例は、フェニル、1-トリル、2-トリル、3-トリル、キシリル、1-ナフチル及び2-ナフチルである。ヘテロ環という用語は、特に、その少なくとも1個がヘテロ原子である、3、4、5、6、7又は8個の原子から構成される少なくとも1つの飽和又は不飽和環を含む環系を意味することが意図される。ヘテロ原子は、B、N、O、Si、P及びSから選択されることが多い。それは、より多くの場合N、O及びSから選択される。このようなヘテロ環の具体的な例は、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、1,2,3,4-テトラヒドロキノリン、1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン、ペルヒドロキノリン、ペルヒドロイソキノリン、イソオキサゾリジン、ピラゾリン、イミダゾリン、チアゾリン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、ピラン、テトラヒドロピラン及びジオキサンである。以上に定義されたとおりの有機残基は、非置換であっても、官能基で置換されていてもよい。本明細書で先に示された官能基に対する同じ定義が同様に適用されることが理解される。本発明による方法の好ましい実施形態において、Rは、非置換又は置換フェニル基であり、好ましくは、Rは、ハロフェニル又はアルキルフェニルである。Rは、特に4-ハロフェニル基又は4-アルキルフェニル基、一般には4-C1-C4-アルキルフェニル基であり;Rは、より好ましくは4-ハロアルキル基であり、特に4-クロロフェニル基であり;R1及びR2は、独立に、C1-C20の飽和、不飽和、ヘテロ環式又は芳香族の炭化水素残基である。上述のとおり、R1及びR2は、同じか又は異なることができる。R1が飽和炭化水素残基である場合、それは、好ましくは直鎖、分岐又は環状のアルキル残基から選択される。R1は、例えば、独立に、低級アルキル又はシクロアルキルC1-C7残基から選択され得る。特定の飽和炭化水素残基は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert.ブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルから選択される。メチル、エチル又はn-プロピル基が好ましい。メチル基が、より特に好ましい。R1が芳香族残基である場合、それは、好適には5から14個の原子を有する芳香族系から選択される。特定の芳香族残基は、そのフェニル基が、例えば、アリールもしくはヘテロアリール、アルキル、シクロアルキル、ヘテロ環又はヘテロ置換基、例えば、ハロゲン、アミン、エーテル、カルボキシレート、ニトロ、チオール、スルホン酸及びスルホンで置換され得る、フェニル及びナフチル基から選択される。また、ナフチル基は、例えば、アリールもしくはヘテロアリール、アルキル、シクロアルキル、ヘテロ環、又はヘテロ置換基、例えば、ハロゲン、アミン、エーテル、カルボキシレート、ニトロ、チオール、スルホン酸及びスルホンで置換されていることもできる。R1が芳香族残基である場合、フェニル基が好ましい。R1がヘテロ環残基である場合、それは、環状炭素原子を介してNに結合している少なくとも1個の環状N、O又はS原子を有するヘテロ環から選択されることが多い。このようなヘテロ環残基の特定の例としては、ピリジン及びフランが挙げられる。R2が飽和炭化水素残基である場合、それは、好ましくは直鎖、分岐又は環状のアルキル残基から選択される。R2は、例えば、独立に、低級アルキル又はシクロアルキルC1-C7残基から選択され得る。特定の飽和炭化水素残基は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert.ブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルから選択される。メチル、エチル又はn-プロピル基が好ましい。メチル基が、より特に好ましい。R2が芳香族残基である場合、それは、好適には5から14個の原子を有する芳香族系から選択される。特定の芳香族残基は、そのフェニル及びナフチル基が、例えば、アリールもしくはヘテロアリール、アルキル、シクロアルキル、ヘテロ環又はヘテロ置換基、例えば、ハロゲン、アミン、エーテル、カルボキシレート、ニトロ、チオール、スルホン酸及びスルホンで置換され得る、フェニル及びナフチル基から選択される。R2が芳香族残基である場合、フェニル基が好ましい。好ましい実施形態において、R1及びR2は、同一であり、かつメチルを意味する。R2がヘテロ環残基である場合、それは、環状炭素原子を介してスルホニル基SO2に結合している少なくとも1個の環状N、O又はS原子を有するヘテロ環から選択されることが多い。このようなヘテロ環残基の特定の例としては、ピリジン及びフランが挙げられる。特定の態様において、R2は、式II式中、Rx及びRyは、独立に、アルキル又はヘテロアリールから選択されるに相当する。好ましくはRx及び/又はRyは、アルキル基である。この場合、Rx及び/又はRyは、例えば、低級アルキル又はシクロアルキルC1-C7残基から選択される。特定のアルキル基は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tertブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルから選択される。メチル、エチル又はn-プロピル基が好ましい。特定の好ましい態様において、Rx及びRyは、両方とも、特に前に本明細書で定義されたとおりのアルキル基である。N,N-ジメチル又はN,N-ジエチル基がより特に好ましい。この実施形態の別の態様において、Rx及びRyは、O、N及びSから選択される追加の環状ヘテロ原子を任意選択的に有する3から8員環を一緒に形成する。特定の例としては、N-ピペリジル又はN-ピロリジル基が挙げられる。記載の置換基は、例えば、ハロゲンもしくはアルコキシ置換基で任意選択的に置換されていてもよいか、又はそれらは、例えば、カテナリーヘテロ原子catenaryheteroatoms、特に酸素をアルキル鎖中へ含むことによって修飾されていてもよいことも理解される。本発明による硫化剤は、特に、オリゴヌクレオチド中式P-S-R式中、Rは、上に記載されたとおりであるのS-保護ホスホルチオエートインターヌクレオチド結合を形成するために、特に効率的な硫黄転移を可能にする。本発明による硫化剤は、それから保護基が選択的かつ効率的に開裂され得る保護硫黄を導入する。本発明による方法において、硫化剤と硫化されるリンインターヌクレオチド結合の量とのモル比は、一般に少なくとも1.0、多くの場合1.0から4.0、より多くの場合1.0から2.0、好ましくは1.05から2.0である。本発明の特定の態様は、オリゴヌクレオチドを合成する方法であって、オリゴヌクレオチドの前駆体の少なくとも1つのリンインターヌクレオチド結合を硫化するために、一般式I:式中、Rは、アリール基及びヘテロアリール基からなる群から選択され;これは、環状炭素原子を介してS-原子に結合しており、R1及びR2は、独立に、有機残基、好ましくはC1-C20、任意に不飽和又は芳香族の炭化水素残基であるの硫化剤の溶液を用いるステップを含む方法に関する。本発明による方法で用いられる硫化剤についての上記の定義及び選択は、硫化剤が溶液中にある場合に同様に適用される。本発明の目的上、溶液という用語は、溶媒として知られる別の物質中に溶解した、溶質として知られる1種以上の物質、特に硫化剤からなる均一混合物を意味することが意図される。本発明の目的上、均一混合物は、互いに視覚的に区別ができない2種以上の化合物の混合物である。本発明の目的上、硫化剤の溶液は、特に、有機溶媒有機溶液又はこの混合物から選択される溶媒中の硫化剤の溶液を意味することが理解される。用いられる有機溶媒は、例えば、例えば、N,N-ジメチルアセトアミドDMA、N,N-ジメチルホルムアミドDMF、N-メチルピロリドンNMP、ジメチルスルホキシドDMSOを含むアミド溶媒などの窒素含有溶媒;例えば、ピリジンを含むN-ヘテロ環溶媒;例えば、アセトニトリルを含むニトリル溶媒;ベンゼン、トルエンなどの芳香族炭化水素タイプの溶媒;例えば、ジクロロメタンDCM及びクロロホルムを含む塩素化炭化水素溶媒などのハロゲン化炭化水素タイプの溶媒、酢酸エチルAcOEt及び酢酸イソプロピルAcOiPrなどのエステルならびにジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフランTHF及びMTBEなどのエーテルから選択され得る。好ましくは、有機溶媒は、ハロゲン化炭化水素溶媒、ピリジン及びアセトニトリルから選択される。好ましくは、硫化剤は、ハロゲン化炭化水素溶媒中に溶解される。より好ましくは、有機溶媒は、塩素化炭化水素タイプの溶媒から選択される。良好な結果は、ジクロロメタンによって得られる。驚くべきことに、硫化剤は、有機溶媒中に効率的に溶解され、それにより濃有機溶液を与え得ることが見出された。その結果として、有機溶媒のより低い消費は有利にも、本発明の方法を、より経済的でかつ環境的により優しく、より安全にする。本発明による方法において、溶液中の硫化剤含有量は、一般に硫化剤及び有機溶媒の合計質量に対して1質量に等しいか又は少なくとも1質量である。好ましい実施形態において、硫化剤含有量は、硫化剤及び非プロトン性極性有機溶媒の合計質量に対して1質量に等しいか又は少なくとも1質量である。一部の実施形態において、溶液中の硫化剤含有量は、硫化剤及び好ましくは非プロトン性極性有機溶媒である有機溶媒の合計質量に対して1質量を超える。硫化剤含有量は、20質量以上であることが多い。好ましくは硫化剤含有量は、40質量以上である。溶液中の硫化剤含有量は、一般に硫化剤及び好ましくは非プロトン性極性有機溶媒である有機溶媒の合計質量に対して最大60質量である。具体的な好ましい実施形態において、本発明による方法で用いられる硫化剤は、ハロゲン化炭化水素溶媒、特に塩素化炭化水素溶媒、例えば、塩化メチレン中に溶解され、ハロゲン化炭化水素溶媒中硫化剤含有量は、前に本明細書で記載されたとおりである。本発明による方法において、前駆体のリンインターヌクレオチド結合は、ヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドから選択される2つの反応物質間のカップリング反応によって形成される。このようなカップリング反応に関する情報は、例えば、特許出願第PCT/EP2009/067902号明細書に見出すことができ、及び以下の実施例で例証することができる。したがって、本発明は、別の具体的な態様において、以下のステップ、すなわち、a前駆体のリンインターヌクレオチド結合が、ヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドから選択される2つの反応物質間で形成されるカップリングステップ、及びb上に記載されたとおりの式Iの硫化剤が、リンインターヌクレオチド結合を硫化するために用いられる硫化ステップを含むオリゴヌクレオチドを合成する方法に関する。本明細書で記載される本発明の最も好ましい態様において、リンインターヌクレオチド結合は、H-ホスホン酸ジエステル結合である。前記合成方法のステップaは、好ましくはH-ホスホン酸モノエステル塩を、遊離ヒドロキシ基を有する保護ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドとカップリングさせることによってH-ホスホン酸ジエステル結合を形成するステップを含む。カップリングは、好ましくは液相で行われる。ステップaは、好ましくは非プロトン性極性有機溶媒、例えば、ハロゲン化溶媒又は窒素含有溶媒、より具体的にはN-ヘテロ環溶媒又は塩素化炭化水素、さらにより具体的にはアセトニトリル及びピリジン、好ましくはピリジン中で行われる。H-ホスホン酸ジエステルを形成する反応は、好ましくはカルボン酸ハライド、特に塩化ピバロイルによって活性化される。ステップaは、一般に-40°Cから30°C、好ましくは0°Cから20°Cの温度で行われる。本発明による工程であるステップaにおいて、及びこの特定の実施形態において、液体反応媒体は、一般に反応媒体の合計質量に対して少なくとも10質量のH-ホスホン酸オリゴヌクレオチドを含有する。好ましくは、この含有量は、少なくとも20質量である。液体反応媒体は、一般に反応媒体の合計質量に対して最大50質量のH-ホスホン酸オリゴヌクレオチドを含有する。ステップaのカップリング生成物、特にH-ホスホン酸エステルは、単離され、その後にステップbで硫化され得る。それはまた、好ましくはステップbで単離なしに用いられ得る。形成されたジエステルの硫化は、好適には上記されたとおりの適当な溶媒中に溶解させて、又は反応混合物から形成されたジエステルを予備精製した後に、硫化反応剤のその場のin-situ添加によって行われ得る。ステップbは、好ましくは非プロトン性極性有機溶媒、例えば、ハロゲン化炭化水素溶媒、特に塩化メチレンなどの塩素化炭化水素溶媒を含む溶媒中で行われる。特定の態様において、ステップbは、ハロゲン化炭化水素溶媒及び窒素含有溶媒、より具体的にはN-ヘテロ環溶媒、好ましくはピリジンを含む溶媒混合物中で行われる。とくにステップaのカップリング生成物が単離なしで硫化される場合、ピリジン/塩化メチレン混合物が、より特に好ましい。ステップbは、一般に-40°Cから30°C、好ましくは0°Cから20°Cの温度で行われる。ステップbにおいて、硫化剤と硫化されるインターヌクレオチド結合の量とのモル比は、一般に少なくとも1、多くの場合1.5から4.0、好ましくは2.0から3.0である。一実施形態において、ステップbでは、硫化剤と硫化されるリンインターヌクレオチド結合の量とのモル比は、一般に少なくとも1、多くの場合1.0から4.0、好ましくは1.0から2.0、非常に好ましくは1.05から2である。非常に満足いく結果は、前記硫化剤と、インターヌクレオチド結合の、及びリンインターヌクレオチド結合の量とのモル比が、それぞれ、1.0から2.0の好ましい範囲にある場合にも得ることができる。ステップbにおいて、中間体H-ホスホン酸ジエステルは、好ましくは活性剤、特に塩基によって活性化される。好適な塩基としては、アルキルアミン、特に第三級アルキルアミンが挙げられ、ジイソプロピルエチルアミンが好ましい。本発明の第2の特定の目的は、上に記載されたとおりの硫化剤の合成のためのプロセスであって、aハロゲン化スルフリル、好ましくは塩化スルフリルを、式R-S-H式中、Rは、アリール、アルキルアリール、ハロアリール、ニトロアリール、アルコキシアリールからなる群から選択される芳香族であるのチオールと反応させて、式R-S-W式中、Rは、上に記載されたとおりであり、Wは、ハロゲン、好ましくはClであるの中間体生成物を生成させるステップ、及びb前記中間体生成物を式R1-NH-SO2-R2式中、R1及びR2は、独立に、有機残基、好ましくはC1-C20の、任意選択的に不飽和又は芳香族の炭化水素残基であるのN-スルホニル化合物と反応させるステップを含むプロセスに関する。硫化剤は、上に記載されたとおりのオリゴヌクレオチドを合成する方法で用いられ得る。本発明による方法について上に記載された定義及び選択は、本発明のプロセスに同様に適用される。特に、Rは、好ましくはハロフェニル、より好ましくは4-ハロフェニル、特には4-クロロフェニルである。R1及びR2は、好ましくは低級アルキルもしくはシクロアルキルC1-C7、置換フェニルを含むフェニル及びナフチル基、より好ましくはメチル基から選択される。また、ナフチル基は、置換されていてもよい。フェニル及びナフチル基の好ましい任意選択的な置換基は、上述のとおりである。最も好ましくは、R1及びR2は、メチルである。硫化剤の合成のための本発明によるプロセスにおいて、ステップaの反応は、一般に非プロトン性有機溶媒、例えば、ハロゲン化溶媒など、特に四塩化炭素などの塩素化溶媒中で行われる。硫化剤の合成のための本発明によるプロセスにおいて、ステップaの反応は、一般に-80°Cから30°Cの温度で行われる。硫化剤の合成のための本発明によるプロセスにおいて、ステップbの反応は、一般に非プロトン性極性有機溶媒、例えば、ハロゲン化炭化水素溶媒など、特に塩化メチレンなどの塩素化炭化水素溶媒中で行われる。硫化剤の合成のための本発明によるプロセスにおいて、ステップbの反応は、一般に-20°Cから50°C、好ましくは0°Cから30°Cの温度で行われる。第3の態様において、本発明は、前に本明細書で記載されたとおりの本発明の方法によって得られるオリゴヌクレオチドを精製する方法に関する。この態様の一実施形態において、この方法は、オリゴヌクレオチドを沈殿させるステップを含む。より具体的な実施形態において、この方法は、特に沈殿ステップから回収された固体物質から、溶媒によってオリゴヌクレオチドを抽出するステップをさらに含む。抽出のための好適な溶媒としては、極性有機溶媒が挙げられる。この精製は、記載された方法によって得られる保護オリゴヌクレオチドの沈殿と抽出との技術を組み合せることによって有効に行われ得ることが見出された。沈殿の正確な条件は、オリゴヌクレオチドの所与の配列及び長さによって決定され得る。沈殿法は、一般にaオリゴヌクレオチドを極性有機溶媒に溶解させるステップ及びb溶液が混濁するまで非極性有機溶媒を加えるステップを含む。本発明によるオリゴヌクレオチドは、一般に沈殿によって単離及び精製され得ることが見出された。ステップaにおいてオリゴヌクレオチドを溶解させるために用いられる溶媒は、好ましくは塩化メチレン及びクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素、アセトニトリル及びピリジンなどの窒素含有溶媒、ならびにアセトンなどのカルボニル含有溶媒から選択される。一般に、ステップaにおいて、溶媒容量は、約0.5n1mLから約2.0n1mL、好ましくは約1.0n1mLここで、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲で用いられる。オリゴヌクレオチドの溶液は、溶液が混濁するまで、好ましくは炭化水素、例えば、ヘキサンなどのアルカン溶媒、1種又は複数種のエーテル溶媒、特にMTBE、及びこれらの混合物、例えば、好ましくはヘキサン/MTBE混合物から選択される非極性有機溶媒で処理される。別の特定の実施形態において、混濁溶液はその後、沈殿助剤で処理される。この場合、沈殿助剤は、一般に不活性多孔質固体から選択され、好ましくはセライト、チャコール、木材セルロース、及びシリカ又はアルミナなどのクロマトグラフィー固定相から選択される。セライトは、珪藻土としても知られている。この場合、沈降助剤は、一般に約0.25n1gから約1.5n1g、好ましくは約0.75n1gここで、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲の量で用いられる。好ましくは、沈殿助剤を添加後、混合物は、前に本明細書で記載されたとおりの非極性溶媒の第2の部分で処理される。部分の容量は、一般に約1n1mLから約4n1mL、好ましくは約2.0n1mLここで、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲である。沈殿後、特に沈殿助剤が用いられる場合、得られた混合物は、一般に、例えば、好ましくは濾過などの固/液分離操作にかけられる。好ましくは、沈殿ステップで得られる固体物質は、ろ別及び洗浄される。オリゴヌクレオチドは一般に、固/液分離操作から回収される固体から、特に溶媒、特に、好ましくはアセトンなどのカルボニルタイプの溶媒、アセトニトリルなどの窒素含有溶媒又はホルムアミドタイプの溶媒、テトラヒドロフランなどの極性エーテル、塩化メチレン及びクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素、又は脂肪族アルコールで抽出することによって沈殿助剤から回収される。極性有機溶媒は、好ましくはアセトニトリル、テトラヒドロフランTHF、N,N-ジメチルホルムアミドDMF、及び脂肪族アルコールから選択される。上記沈殿処理から得られるオリゴヌクレオチドは、有機溶媒と水との間に分配することによってさらに精製され得る。このステップは通常、生成物から、水層に溶解する極性不純物を分離する。この実施形態において、オリゴヌクレオチドは、好適には有機溶媒、特にアセトニトリル、テトラヒドロフランTHF、N,N-ジメチルホルムアミドDMF、及び脂肪族アルコールから選択される極性有機溶媒に溶解される。この実施形態において、溶媒は、好ましくは、好ましくはアセトニトリル、THF、DMF、及び脂肪族アルコールから選択される極性有機溶媒と、水性媒体との混合物を含む。用いられる有機溶媒の容量は、一般に2.0n1mLから8.0n1mL、好ましくは約4.0n1mLここで、nは、ホスホロチオエートトリエステル結合のミリモル数であるの範囲である。溶液は、水性媒体、特に水で処理される。用いられる水性媒体の容量は、一般に有機溶媒の約0.5容量当量から有機溶媒の約1.5容量当量、通常は有機溶媒の約0.7容量当量である。水性媒体で処理後、オリゴヌクレオチド含有層は、一般に分離され、必要に応じてさらに処理されて、精製オリゴヌクレオチドを得ることができる。一般に、ホスホロチオエートインターヌクレオチド結合上の保護R基の開裂は、オキシム化処理oximatetreatmentによって行われ得る。アルドキシムの好適な例は、例えば、E-2-ニトロベンズアルドキシム、E-4-ニトロベンズアルドキシム及びsyn-ピリジン-2-カルボキサルドキシムから選択される。前記開裂は、一般にホスホジエステルインターヌクレオチド結合をもたらす。したがって、本発明による方法は、少なくとも1つのホスホジエステルインターヌクレオチド結合を含むオリゴヌクレオチドの製造に特に有用である。参照により本明細書に組み込まれる特許、特許出願、及び刊行物のいずれかの開示が、用語を不明瞭にし得る程度に本出願の記載と矛盾する場合は、本記載が優先するものとする。以下の実施例は、本発明を例証することが意図されるが、その範囲を限定するものではない。これらの実施例において及び本明細書を通して、用いられる略語は、以下のとおりに定義される。CH2Cl2は、ジクロロメタンであり、DIPEAは、ジイソプロピルエチルアミンであり、MTBEは、メチルtert-ブチルエーテルであり、HClは、塩酸であり、Na2SO4は、硫酸ナトリウムであり、N2は窒素であり、SO2Cl2は、塩化スルフリルであり、NaHCO3は、炭酸水素ナトリウムであり、CDCl3は、重水素化クロロホルムであり、THFは、テトラヒドロフランであり、DMSOは、ジメチルスルホキシドであり、DMFは、N,N-ジメチルホルムアミドである。Ap、Gp,Tpは、それぞれ、前述のとおりのA、G及びT核酸塩基に結合した、前述のとおりの2-デオキシリボース核酸塩基であり、ここで、A、G及びTは、以下のとおりに保護される:DMTrは、それに結合される場合、前述のとおりの対応するオリゴヌクレオチドの5-O’に結合した、当業者に知られているビスパラ-メトキシトリチル保護基である。Levは、前述のとおりの対応するオリゴヌクレオチドの3-O’に結合した、当業者に知られているペンタン1,4-ジオン保護基である。実施例1:4-クロロフェニル-N,N-メチル-メシル-スルフェンアミドの合成a4-クロロベンゼンスルフェニルクロリド2の調製170mLの無水四塩化炭素中4-クロロチオフェノール、120.15g、0.139molの溶液を、磁気撹拌機、熱電対、添加漏斗、窒素ライン、加熱マントル、凝縮器、及び酸性ガスSO2及びHClを吸収する苛性スクラバーを備えた0.5Lの三つ口丸底フラスコに入れた。この溶液に触媒量のピリジン3mLを加え、フラスコの内容物を約10°Cに冷やした。塩化スルフリル55.2g、0.409molを1の溶液にゆっくり加え、反応混合物を3時間穏やかに還流させた。得られた赤色の溶液を室温に冷却し、ガラスウールを通して急速に濾過し、ロータリエバポレータで濃縮して、粘性の赤色油として23gの4-クロロベンゼンスルフェニルクロリド、2を得た。この粗物質を4の調製に直ちに用いた。b4-クロロフェニル-N,N-メチル-メシル-スルフェンアミド4粗N-メチル-メシルアミン、316.6g、0.152molを、1Lの一口丸底フラスコに入れ、ロータリエバポレータで無水アセトニトリル1×150mLとともに共蒸発させた。残渣を120mLの無水ジクロロメタンに溶解させ、この溶液に無水ピリジン14.5g、0.183mol及び12gのモレキュラーシーブを加えた。フラスコは、熱電対、磁気撹拌機、窒素ライン及び冷却用氷浴を備えていた。フラスコの内容物を10分間撹拌し、次いで、約0°Cに冷やした。80mLの無水ジクロロメタン中粗4-クロロベンゼンスルフェニルクロリド、2の溶液を、アミン3が入っているフラスコ中にゆっくりと導入し、それにより、温度を約0°Cに維持した。添加を終了後、冷却用浴を取り除き、得られた濁った無色の混合物を周囲温度で一晩撹拌した。反応を、冷飽和重炭酸水素ナトリウム溶液0.4Lでクエンチし、ジクロロメタン2×100mLで抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ロータリエバポレータで濃縮後、合計で40gの暗色油を得た。この油を最少量のジクロロメタン約20mLに再溶解させ、短い約2cmのシリカゲルパッドによって濾過した。このパッドを、MTBE-ヘキサン=1:1の混合物約1Lで洗浄した。ろ液の濃縮後、オフホワイトの半固体を得た。この残渣に、MTBE-ヘキサン=1:2の混合物約0.5Lを加え、得られた懸濁液を氷上で冷やした。沈殿物を濾過し、最初にMTBEとヘキサンとの冷混合物1:2;50mL、次いでヘキサン100mLで洗浄し、続いて恒量が得られるまで乾燥させた。所望の化合物4を、白色の結晶固体として75収率24.24gで得た。1HNMRCDCl3、δ:7.38m、4H、3.32s、3H、3.00s、3H13CNMRAPTCDCl3、δ:134.64up、134.32up、129.45down、128.63down、42.02down、37.91down。実施例2:異なる硫化剤を用いるDMTrO-TpsT-Levの調製60mLのピリジン中トリエチルアンモニウム5’-O-4,4’-ジメトキシトリチル-チミジン-3’-H-ホスホネート4.26g、6.0mmol及び3’-O-レブリニルチミジン1.70g、5.0mmolの溶液を、蒸発乾固させた。残渣に、無水ピリジン12.5mLを加え、得られた溶液をアルゴン下0°Cで撹拌した。塩化ビバロイル1.24mL、10.0molを3分間かけてゆっくりと加えた。この混合物を0°Cで5分間さらに撹拌した。無水ジクロロメタンDCM又は無水ピリジン中6mmolの硫化剤それぞれの硫化剤及び用いた量は、表1に示すの溶液、続いてN,N-ジイソプロピルエチルアミン0.87mL、5.0mmolを2分間かけて加えた。冷浴を取り除き、混合物を周囲温度で30分間撹拌した。反応混合物を100mLのジクロロメタンで希釈し、冷水100mL、続いて飽和炭酸水素ナトリウム100mLで洗浄した。有機層を乾燥させNa2SO4、濃縮した。残渣を10mLのジクロロメタン及び0.1mLのトリエチルアミン中に溶解させ、溶液AMTBE:ヘキサン=2:1、16mL、続いてセライト7.5gを撹拌下15分間かけてゆっくりと加えた。混合物を撹拌し、追加の溶液A16mLを15分かけてゆっくりと加えた。30分間さらに撹拌後、混合物を濾過した。その固形物をCH2Cl2/溶液A、1:4v/vの混合物50mL×2で洗浄した。次いで、固形物をジクロロメタン50mL×3で洗浄した。ジクロロメタンろ液を濃縮した。残渣を40mLのアセトニトリル中に溶解させ、氷-水浴中で撹拌し、次いで、水36mLを20分間かけて加えた。底部の有機層を、ジクロロメタン80mLと、飽和炭酸水素ナトリウム30mL及びブライン30mLの混合物との間で分離及び分配した。有機層を乾燥させNa2SO4、濃縮して、白色固体として所望の生成物を得た。31PNMRCDCl3、121.5MHz:δ=23.3、23.2。結果を表1にまとめる。実施例3:以下のスキームに示すとおりの5’-OH完全保護三量体の完全脱保護完全保護三量体17.09g、5.0mmolを添加ピリジンの蒸発によって無水にさせる。残渣に、1,2,4-トリアゾール690.7mg、10.0mmol、4Åモレキュラーシーブ2.0g及び無水ピリジン25.0mLを加える。この混合物を撹拌し、N2下0°Cに冷却し、tert-ブチルアミン2.19g、30.0mmolを加える。次いで、得られた混合物を室温で4時間撹拌する。この溶液に、syn-2-ピリジンアルドキシム2.44g、20.0mmol、続いて、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン6.09g、40.0mmolを加える。室温で15時間撹拌後、モレキュラーシーブを濾過し、ピリジン10.0mLで洗浄する。ろ液を濃縮する。残渣を28アンモニア水25.0mL中に溶解させる。得られた溶液を55°Cで15時間加熱する。冷却後、混合物を、逆reversalC18クロマトグラフィーで濃縮及び精製する。得られた生成物を、Amberlite登録商標IR-120plusイオン交換樹脂ナトリウム型のカラム100gに適用する。カラムを水で溶出させ、所望の画分を合わせ、凍結乾燥させて、所望の生成物2を得る。"