対象における細胞外ヒストンの細胞毒性活性を阻害する方法であって、該対象に多価陰イオンの有効量を投与する段階を含む、該方法。対象における細胞外ヒストンの蓄積を阻害する方法であって、該対象に多価陰イオンの有効量を投与する段階を含む、該方法。対象における細胞外ヒストンの細胞毒性活性を阻害することにより敗血症を処置する方法であって、該対象に多価陰イオンの有効量を投与する段階を含む、該方法。細胞外ヒストンの細胞毒性活性を阻害することによる敗血症の処置用の医薬の製造のための多価陰イオンの有効量の使用。多価陰イオンが実質的な抗凝固活性を持たない、請求項1~3のいずれか一項記載の方法または請求項4記載の使用。多価陰イオンが実質的に非免疫原性である、請求項1~3のいずれか一項記載の方法または請求項4記載の使用。多価陰イオンが、一般構造を有する多価陰イオンオリゴ糖でありAnD式中でAおよびBが各々独立して、環状単糖類または環状デオキシ単糖類でありDが環状単糖類、環状デオキシ単糖類、開環単糖類、または糖アルコールでありnが、0、1、2、3、4、5、6、7および8より選択される整数でありかつここで環状単糖類、環状デオキシ単糖類、開環単糖類、または糖アルコールの各々がOSO3、COO、OPO3、置換されてもよいアルキル、置換されてもよいアルケニル、置換されてもよいアルキニル、置換されてもよいアリール、または置換されてもよいアラルキルで独立して置換されてもよくかつここで多価陰イオンオリゴ糖が、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される少なくとも2つの陰イオン置換基を含む、請求項1~3のいずれか一項記載の方法または請求項4記載の使用。環状単糖類が、グルコース、ガラクトース、フルクトース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、プシコース、ソルボース、タガトースおよびセドヘプツロースからなる群より選択される、請求項7記載の方法または使用。環状単糖類が、グルコース、ガラクトースおよびフルクトースからなる群より選択される、請求項8記載の方法または使用。環状デオキシ単糖類が、フコース、デオキシリボースおよびラムノースからなる群より選択される、請求項7記載の方法または使用。糖アルコールが、グリコール、グリセロール、エリトリトール、トレイトール、リビトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ズルシトール、イジトールおよびフシトールからなる群より選択される、請求項7記載の方法または使用。開環単糖類が、グルコース、ガラクトース、フルクトース、エリトロース、トレオース、エリトルロース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、プシコース、ソルボース、タガトースおよびセドヘプツロースからなる群より選択される、請求項7記載の方法または使用。多価陰イオンオリゴ糖が一般構造を有する、請求項7記載の方法または使用式中で各R1が、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されかつnが0、1、2、3、4、5、6、7、および8の間の整数でありかつR1の少なくとも2つが、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される。多価陰イオンオリゴ糖が一般構造を有する、請求項7記載の方法または使用ここで各R1が、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されかつnが0、1、2、3、4、5、6、7、および8の間の整数でありかつR1の少なくとも2つが、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される。多価陰イオンオリゴ糖が、以下からなる群より選択される、請求項7記載の方法または使用式中で各R2が、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されかつR2の少なくとも2つが、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される。多価陰イオンオリゴ糖が、マルトース硫酸、マルトトリオース硫酸、マルトテトラオース硫酸、マルトペンタオース硫酸、マルトヘキサオース硫酸、マルトヘプタオース硫酸、マルトオクタノース硫酸、マルトノナオース硫酸およびマルトデカオース硫酸、パノース硫酸、イソマルトトリオース硫酸、エルロース硫酸、セロビオース硫酸ならびにラフィノース硫酸からなる群より選択される、請求項7記載の方法または使用。多価陰イオンオリゴ糖がセロビオース硫酸である、請求項7記載の方法または使用。多価陰イオンが、一般構造を有するシクロデキストリンである、請求項1~3のいずれか一項記載の方法または請求項4記載の使用式中、各R3が、置換されてもよいOアルキル、Oアリール、Oアラルキル、Oアルケニル、Oアルキニル基、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択され、かつ各R4がOSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されxが3、4、5、6、7、8、9、および10の間の整数であり、かつ多価陰イオンシクロデキストリンがOSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される少なくとも2つの陰イオン置換基を含む。シクロデキストリンがαシクロデキストリン、βシクロデキストリンまたはγシクロデキストリンである、請求項18記載の方法または使用。定義ある種の用語が本明細書において用いられ、それらは以下のように記載した意味を有するものとする。本明細書において用いられる場合、含むという用語は主に含むが、必ずしも単独で含むわけではないことを意味する。さらに、含むおよび含むのような含むという単語の変形は、対応して変化させた意味を有する。文脈上他の意味に解すべき場合を除き、またはそうでないと特に述べられていない限り、本明細書において単数の整数、段階または要素として列挙されている本発明の整数、段階または要素は、列挙されている整数、段階または要素の単数形も複数形もともに明らかに包含する。本明細書において用いられる場合、処置するおよび処置という用語は、状態もしくは症状を軽減するか、状態もしくは疾病の定着を予防するか、またはさもなくば、状態もしくは疾患もしくは他の望ましくない症状の進行を任意の方式で予防、妨害、遅延、または回復させる、任意のおよび全ての使用をいう。本明細書において治療的用途で用いるということは、獣医学的用途のような、ヒトおよび非ヒトでの用途に等しく適用可能であるものと理解されることに留意されたい。ゆえに、特に指示されている場合を除き、患者、対象または個体への言及は、鳥類、ウサギ類、ヒツジ類、ウシ類、ウマ類、ブタ類、ネコ類、イヌ類、霊長類およびげっ歯類種を含むがこれらに限定されない、社会的、経済的または研究的に重要な任意の種の個体のような、ヒトまたはヒト以外のものを意味することが理解されよう。本明細書の文脈において、有効量という用語はその意味のなかに、望ましい効果を供与するのに十分であるが無毒な、本発明の化合物または組成物の量を含む。必要とされる正確な量は、所望の効果、処置される種、対象の年齢および全身状態、処置される状態の重症度、投与される特定の薬剤、投与方法などのような要因に依り対象によって異なるであろう。したがって、正確な有効量を明記することはできない。しかしながら、所与のどの場合にも、当業者は日常的な実験だけを用いて適切な有効量を判定することができる。本明細書において用いられる場合、単糖類という用語はその意味のなかに、一般式CnH2nOnの糖または炭水化物を含む。例えば、単糖類という用語はグルコース、ガラクトース、フルクトース、エリトロース、トレオース、エリトルロース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、プシコース、ソルボース、タガトースおよびセドヘプツロースを含むが、これらに限定されることはない。単糖類は天然に存在してもまたは合成されてもよい。大部分の単糖類は開環単糖類または環状単糖類のどちらかとして存在する。本明細書において用いられる場合、デオキシ単糖類またはデオキシ糖という用語はその意味のなかに、炭素原子よりも少ない酸素原子を含有し、その結果、分子中に結合ヒドロキシル基を欠いた1つまたは複数の炭素を生ずる糖を含む。例えば、デオキシ単糖類という用語は、フコース、デオキシリボースおよびラムノースを含むが、これらに限定されることはない。本明細書において用いられる場合、糖アルコールという用語はその意味のなかに、カルボニル基が第一または第二ヒドロキシル基に還元された、水素添加型の炭水化物または単糖類を含む。糖アルコールは一般式Hn1Hを有する。例えば、糖アルコールという用語は、グリコール、グリセロール、エリトリトール、トレイトール、リビトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ズルシトール、イジトールおよびフシトールを含むが、これらに限定されることはない。本明細書において用いられる場合、オリゴ糖という用語はその意味のなかに、酸により加水分解されて、構成成分の単糖類単位を生じうる、グリコシド結合を通じて連結された2~10個の単糖類残基から構成される炭水化物を含む。本明細書において用いられる場合、多糖類という用語はその意味のなかに、酸により加水分解されて、構成成分の単糖類単位を生じうる、グリコシド結合を通じて連結された10個またはそれ以上の単糖類残基を含有する単糖類の重合体を含む。本明細書において用いられる場合、アルキルという用語はその意味のなかに、1~18個の炭素原子、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17または18個の炭素原子を有する一価直鎖または分岐鎖飽和炭化水素基を含む。例えば、アルキルという用語は、メチル、エチル、1プロピル、イソプロピル、1ブチル、2ブチル、イソブチル、tertブチル、アミル、12ジメチルプロピル、11ジメチルプロピル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、4メチルペンチル、1メチルペンチル、2メチルペンチル、3メチルペンチル、22ジメチルブチル、33ジメチルブチル、12ジメチルブチル、13ジメチルブチル、122トリメチルプロピル、112トリメチルプロピル、2エチルペンチル、3エチルペンチル、ヘプチル、1メチルヘキシル、22ジメチルペンチル、33ジメチルペンチル、44ジメチルペンチル、12ジメチルペンチル、13ジメチルペンチル、14ジメチルペンチル、123トリメチルブチル、112トリメチルブチル、113トリメチルブチル、5メチルヘプチル、1メチルヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリスカイデシル、テトラデシル、クインデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシルなどを含むが、これらに限定されることはない。本明細書において用いられる場合、アルキレンという用語はその意味のなかに、二価飽和直鎖炭化水素基を含む。本明細書において用いられる場合、アリールという用語はその意味のなかに、一価の、単一の、多核の共役および縮合芳香族炭化水素基、例えばフェニル、ナフチル、アントラセニル、ピレニル、フェナントラセニルを含む。本明細書において用いられる場合、アリーレンという用語はその意味のなかに、二価の、単一の、多核の共役および縮合芳香族炭化水素基を含む。本明細書において用いられる場合、アラルキルという用語はその意味のなかに、例えば、ベンジル、フェニルメチル、フェニルエチル、フェニルプロピル、フェニルイソプロピル、フェニル第三ブチルなどのような、1つまたは複数のアリールまたは置換アリール基により置換された低級アルキル残基を含む。アルケニルという用語は、少なくとも1つの炭素炭素二重結合を有する炭化水素基をいう。C2~C6アルケニル基は、直鎖状または分岐状アルケニル骨格中に2~6個の炭素原子を有するアルケニル基である。例示的なアルケニル基は、非限定的に、ビニル、プロペニル、2ブテニルなどを含む。アルケニル基は、アルキル基について記述した通りの1つまたは複数の部分で置換されてもよい。アルキニルという用語は、本明細書において用いられる場合、少なくとも1つの炭素炭素三重結合を有する炭化水素基をいう。C2~C6アルキニル基は、直鎖状または分岐状アルキニル骨格中に2~6個の炭素原子を有するアルキニル基である。例示的なアルキニル成分はプロピニル、3ヘキシニルなどを含む。アルキニル基は、アルキル基について記述した通りの1つまたは複数の部分で置換されてもよい。本明細書において用いられる場合、本明細書において用いられる置換されてもよいという用語は、この用語が言及する基が未置換であっても、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルキニル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、チオアルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ハロアルケニルオキシ、窒素含有基、例えばNO2、NO3、N2、NH、ニトロアルキル、ニトロアルケニル、ニトロアルキニル、ニトロヘテロシクリル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルケニルアミンおよびアルキニルアミノ、アシル、アルケノイル、アルキノイル、アシルアミノ、ジアシルアミノ、アシルオキシ、アルキルスルホニルオキシ、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロアミノ、ハロヘテロシクロアルキル、アルキルスルフェニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキルチオ、アシルチオ、リン含有基、例えばホスホノおよびホスフィニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アラルキル、アルキルヘテロアリール、シアノ、シアネート、イソシアネート、硫黄含有基、例えばSO3H、SO3、OSO3、SO3アルキル、SO3アリール、NHSO3H、およびNHSO3、CO2H、COO、CO2アルキル、CNH2、CNH、ならびにCN2より独立して選択される1つまたは複数の基で置換されてもよいことを意味する。好ましい置換基はC1~10アルキル、C1~10アルコキシ、CH2アルコキシ、C6~10アリール、例えばフェニル、CH2フェニル、ハロ、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、およびハロアルキル、例えばCF3、CH2CF3を含む。特に好ましい置換基はC1~10アルキル、C1~10アルコキシ、ハロ、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、例えばCH2OH、およびハロアルキル、例えばCF3、CH2CF3を含む。本明細書において用いられる場合、敗血症という用語はその意味のなかに、標準的な医学文献書によって特徴付けられるおよびまたは当業者に知られる疾患または状態の全ての段階を含む。例えば、敗血症は重症敗血症、急性および慢性敗血症ならびに敗血性ショックを含む。敗血症は火傷の患者、がん患者の治療計画、妊婦患者における周産期合併症、被移植者のための免疫抑制的予防、および外科手術後の患者と関連する敗血症エピソードも含む。本明細書において用いられる場合、ナノ粒子という用語は、直径1ミクロン未満の任意の固体粒子をいう。具体的には、ナノ粒子は、黒鉛状炭素の複数の層によって被包されたテクネチウム99m放射性核種の金属プレートレットからなるFibrinLiteナノ粒子でありうる。FibrinLiteナノ粒子の直径は、およそ200nmの中位径で20~400nmの範囲にわたり対数正規分布される。詳細な説明本発明は、感染による敗血症に罹患している患者の処置のための方法に関し、多価陰イオンを利用して、細胞外ヒストンタンパク質と複合体を素早く形成させ、かくして、細胞外ヒストンタンパク質、例えば、敗血症患者の循環血中に見られる細胞外ヒストンタンパク質の細胞毒性活性を中和または阻害する。さらに、多価陰イオンは細胞外ヒストンと複合体を形成することができ、臓器、具体的には肺でのヒストンの蓄積を防ぐことができる。好ましい態様において、多価陰イオンは、血液凝固および止血へのその低障害ならびにまたは循環血中に存続するその能力について選択される。本発明は、抗凝固性をわずかにしか持ちえないオリゴ糖多価陰イオンが、生きている動物の循環血中のヒストンと複合体を形成でき、臓器へのヒストンの結合を防止できるという所見を前提としている。これらの多価陰イオンは、敗血症での治療的介入の新たな手段を提供し、中和抗体、APCまたはヘパリンの使用に代わるさらに魅力的な手段を提供する。敗血症敗血症は、動脈低血圧、代謝性アシドーシス、全身性血管抵抗減少、多呼吸および臓器機能不全によって特徴付けられる全身性反応である。敗血症は、サイトカインネットワーク、白血球、ならびに補体および凝固線溶系を含むいくつかの宿主防御機構の活性化に関連した、かつそれによって媒介される、感染または外傷に対する全身性炎症反応である。さまざまな臓器の微小血管系での線維素の広範な沈着を伴う播種性血管内凝固は、敗血症の早期徴候でありうる。DICは、多臓器不全症候群の発症における重要なメディエータであり、敗血性ショックを有する患者の予後不良の一因となる。敗血症は血流中の生物、その代謝産物または毒素から発生しうる。すなわち、敗血症は菌血症、真菌血症、ウイルス血症および寄生虫血症を包含する。したがって、いくつかの生物または疾患過程によって敗血性ショックが引き起こされうる。敗血症は外傷、重度の火傷、腸捻転、羊水塞栓症および臓器移植のような非感染刺激によっても引き起こされうる。敗血症を有する多くの患者は、24~48時間にわたって急速な悪化を示す。したがって、効果的な敗血症処置には素早い処置が不可欠である。残念ながら、感染のタイプの診断には、病原体を特定するための微生物分析が必要となり、これには何日かかかりうる。それゆえ、病原体を取り除くための治療は、病原体のタイプおよび種の認識を持たずに、および感染の程度を知る手段を持たずに開始されなければならない。炎症の鍵になるメディエータに対するモノクローナル抗体および活性化プロテインCのような、敗血症患者に有効な新しい治療法を見つけ出すために、いくつかの試みがなされてきた。しかしながら、これらの処置には臨床的影響がほとんどなく、APCは最近になって市場から引き揚げられている。低用量ヘパリンが敗血症患者の処置において用いられているが、この状況でそれを用いることは、敗血症が播種性血管内凝固を誘発した場合には特に、血小板数の低下およびまたは凝固因子の枯渇に起因して敗血症患者でよく認識されている出血リスクの増大により複雑であり、議論の余地が残されている。低用量ヘパリンによる血小板およびまたは凝固因子の枯渇はその後、凝固機能不全につながる可能性があり、壊滅的な出血が起こる可能性がある。ヘパリンはまた、一部の患者において、抗体を介した血小板破壊が同じく危険な出血につながりうる、ヘパリン誘導性血小板減少症として公知の状態を誘発しうる。ヒストンヒストンは、リジンまたはアルギニンの含量が高い低分子量の塩基性タンパク質であり、DNAのパッケージングにおいて機能する。ヒストンは、高度に保存されており、コアヒストンおよびリンカーヒストンの2つのスーパークラスで構成されている5つの主要なクラスH1H5、H2A、H2B、H3およびH4に分類することができる。各コアヒストンの2つがアセンブルして、タンパク質複合体の周りにDNAを巻き付けることにより八量体のヌクレオソームコア粒子を形成させる。リンカーヒストンはヌクレオソームおよびヌクレオソームの出入口のDNAに結合し、それによって所定位置にDNAを固定し、高次構造の形成を容易にする。本明細書において記述されるように、ヒストンは全長ヒストン、その断片または変種であってよい。ヒストン変種は、例えば、アミノ酸の欠失、付加およびまたは置換によって修飾されてもよい。あるいは、ヒストンはリジンおよびアルギニンのアセチル化およびまたはメチル化によって修飾されてもよい。概して、修飾は、ヒストンの多価陽イオン性または臓器に局在するヒストンの能力を実質的に損なわない。適当なアミノ酸置換は、当技術分野において保存的として公知のアミノ酸置換を含むが、必ずしもこれに限定されることはない。保存的置換は、ペプチド化学の当業者であればポリペプチドの生物活性、二次構造およびまたは疎水性親水性指標の性質が実質的に不変であるものと予想するような、あるアミノ酸が類似の特性を有する別のアミノ酸に置換されたものである。アミノ酸置換は一般に、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性およびまたは両親媒性における類似性に基づいてなされうる。例えば、負に荷電したアミノ酸はアスパラギン酸およびグルタミン酸を含む正に荷電したアミノ酸はリシン、ヒスチジンおよびアルギニンを含むならびに類似の親水性値を有する非荷電極性頭部基を持つアミノ酸は、ロイシン、イソロイシンおよびバリングリシンおよびアラニンアスパラギンおよびグルタミンならびにセリン、トレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンを含む。保存的変化に相当しうるアミノ酸の他の群は以下のものを含むala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thrcys、ser、tyr、thrval、ile、leu、met、ala、phelys、arg、hisおよびphe、tyr、trp、his。ヒストン変種は同様に、またはあるいは、非保存的アミノ酸変化を含んでもよい。ある種の態様において、ヒストン変種は、アミノ酸の欠失、付加およびまたは置換によって修飾されてもよく、5個のアミノ酸またはそれ以下の、例えば4個、もしくは3個、もしくは2個、もしくは1個だけのアミノ酸の置換、欠失または付加によって非修飾配列とは異なる。本明細書において用いられる場合、ヒストン変種は、天然に存在するヒストンの配列と実質的に類似の配列を有するヒストンをいう。一般に、2つの配列は、その2つの配列が、同じものであるアミノ酸残基の特定の割合を有するなら実質的に類似する。したがって、ヒストン配列の変種は、参照ヒストン配列と少なくとも約40、45、50、55、60、65、70、75、80、83、85、88、90、93、95、96、97、98または99の配列同一性を共有しうる。一般に、ヒストン配列変種は共通の定性的生物活性を保有する。変種という用語の意味のなかに同様に含まれるのは、ヒストンの相同体である。ヒストン相同体は、典型的には、異なる種由来であるが、しかし別の種由来の対応するヒストンと実質的に同じ生物機能または活性を共有している。例えば、ヒストンの相同体は、微生物または哺乳動物の異なる種由来のものを含むが、これらに限定されることはない。さらに変種という用語はまた、ヒストン配列の類似体を含む。ヒストン類似体は、所与のヒストンの誘導体であるポリペプチドであり、この誘導体は、ポリペプチドが実質的に同じ機能を保持するような、1つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、置換を含む。上記のように、保存的アミノ酸置換という用語は、ヒストン配列内でのあるアミノ酸の、類似の特性を有する別のアミノ酸への置換または置き換えをいう。ある種の態様において、ヒストンの変種は5個のアミノ酸またはそれ以下の、例えば4個、もしくは3個、もしくは2個、もしくは1個だけのアミノ酸の置換、欠失または付加によって配列が異なる。本発明の範囲内に同様に含まれるのは、ヒストンの断片である。ヒストン断片は、ヒストンまたはその変種の構成成分であるポリペプチドである。典型的には、断片は、これが構成成分であるヒストンと共通の定性的生物活性を保有する。典型的には、ヒストン断片は、50超のアミノ酸長、約5~約50アミノ酸残基長、約5~約45アミノ酸残基長、約5~約40アミノ酸残基長、約5~約35アミノ酸残基長、約5~約30アミノ酸残基長、約5~約25アミノ酸残基長、約5~約20アミノ酸残基長、約5~約15アミノ酸残基長、または約5~約10アミノ酸残基長でありうる。ある種の態様において、本発明のポリペプチドの断片は、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、または25超のアミノ酸残基長である。多価陰イオン本発明者らは、ヒストンが高い等電点を有する多価陽イオンであるので、それらは硫酸化された多価陰イオン多糖類、多価陰イオンオリゴ糖および二糖類、直鎖状多価陰イオン、シクリトール多価陰イオン、およびアリーレン尿素多価陰イオンのような、DNA以外の多価陰イオンと複合体を形成すると考えられることを提唱する。いくつかの態様において、多価陰イオンは、凝固系に何らの影響を及ぼすことなく循環血中ヒストンと複合体を形成し、かくして循環血中ヒストンの生物活性を阻害しうる。これは、処置に当たる医師に、DICが存在する場合でさえも、出血なく、そしてさらに出血を促進させることもなく、敗血症患者の血小板数および凝固状態とは完全に独立して、利用されうるさらに広い用量範囲の多価陰イオンという選択肢を提供するであろう。これらの多価陰イオンは、血小板の破壊も促進しないはずである。好ましい態様において、多価陰イオンは安定であり、インビボですぐには分解されない。さらに、本明細書において記述される多価陰イオンは、室温で安定であり、かくして、実質的分解なしに長期間貯蔵されうる。多価陰イオン多糖類ヘパリンは、抗凝固剤として臨床医学において広く使われている天然の硫酸化多糖類である。その抗凝固活性はプロタミンのような薬学的に許容される多価陽イオンの投与により、患者において制御され、または場合により中和されうる。ヘパリン、つまり多価陰イオンは、循環血中の多価陽イオンヒストンと複合体を形成し、それゆえ、循環血中のヒストンと複合体を形成するには十分な、しかし明らかな抗凝固効果を及ぼすには不十分な用量で敗血症患者に有益であるものと提唱される。プロテオグリカンのペルレカンおよびシンデカンを含むヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸デルマタン硫酸ペントサン多硫酸、スロデキシド、過硫酸化ヒアルロン酸、フコイダンならびに過硫酸化コンドロイチン硫酸のような、当業者に公知の他の多価陰イオン多糖類が、循環血中のヒストンと複合体を形成するには十分な、しかし感知できるほどの抗凝固効果を及ぼすには不十分な投与量で用いられてもよい。他の態様において、多価陰イオン多糖類は、硫酸基のいくつかを除去するために化学的に修飾されている部分的に脱硫酸化されたヘパリン、低分子量ヘパリン、または顕著な抗凝固活性を欠くが、しかしヒストンと効率的にすばやく複合体形成する能力を保持している化学的に修飾されたヘパリンでありうる。いくつかの態様において、多価陰イオン多糖類は、Nアセチル化ヘパリン、グリコール分割ヘパリン、グリコール分割Nアセチル化ヘパリン、エノキサパリン、グリコール分割エノキサパリンおよびグリコール分割低分子量ヘパリンからなる群より選択されうる。多価陰イオンオリゴ糖1つの態様において、多価陰イオンは、一般構造を有する多価陰イオンオリゴ糖でありAnD式中でAおよびBが各々独立して、環状単糖類または環状デオキシ単糖類でありDが環状単糖類、環状デオキシ単糖類、開環単糖類、または糖アルコールでありnが、0、1、2、3、4、5、6、7および8より選択される整数でありならびにここで環状単糖類、環状デオキシ単糖類、開環単糖類、または糖アルコールの各々がOSO3、COO、OPO3、置換されてもよいアルキル、置換されてもよいアルケニル、置換されてもよいアルキニル、置換されてもよいアリール、または置換されてもよいアラルキルで独立して置換されてもよくならびにここで多価陰イオンオリゴ糖が、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される少なくとも2つの陰イオン置換基を含む。1つの態様において、環状単糖類は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、プシコース、ソルボース、タガトースおよびセドヘプツロースからなる群より選択される。別の態様において、環状単糖類は、グルコース、ガラクトースおよびフルクトースからなる群より選択される。1つの態様において、環状デオキシ単糖類は、フコース、デオキシリボースおよびラムノースからなる群より選択される。1つの態様において、糖アルコールは、グリコール、グリセロール、エリトリトール、トレイトール、リビトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ズルシトール、イジトールおよびフシトールからなる群より選択される。別の態様において、糖アルコールは、ソルビトールおよびズルシトールからなる群より選択される。1つの態様において、開環単糖類は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、エリトロース、トレオース、エリトルロース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、プシコース、ソルボース、タガトースおよびセドヘプツロースからなる群より選択される。1つの態様において、開環単糖類は、アリールまたはアルキルアミンで還元的にアミノ化されうる。1つの態様において、環状単糖類は、11、12、13、14、15または16結合によって連結される。1つの態様において、環状単糖類は、14または16結合によって連結される。1つの態様において、環状単糖類は、α結合によって連結される。別の態様において、環状単糖類は、β結合によって連結される。さらなる態様において、2つより多くの単糖類が存在する場合、単糖類の各々はα結合によって連結される。さらなる態様において、2つより多くの単糖類が存在する場合、単糖類の各々はβ結合によって連結される。別の態様において、2つより多くの単糖類が存在する場合、単糖類はα結合およびβ結合の組み合わせによって連結される。1つの態様において、A、BおよびDは各々、グルコース、ガラクトースおよびフルクトースからなる群より選択される環状単糖類であり、グルコース、ガラクトースまたはフルクトースの各ヒドロキシル基はSO3またはPO3で置換されてもよい。多価陰イオンオリゴ糖は、マルトース硫酸、マルトトリオース硫酸、マルトテトラオース硫酸、マルトペンタオース硫酸、マルトヘキサオース硫酸、マルトヘプタオース硫酸、マルトオクタノース硫酸、マルトノナオース硫酸およびマルトデカオース硫酸、パノース硫酸、イソマルトトリオース硫酸、エルロース硫酸、セロビオース硫酸ならびにラフィノース硫酸を含む群より選択されうる。さらなる態様において、多価陰イオンオリゴ糖は、セロビオース硫酸でありうる。別の態様において、多価陰イオンは、一般構造を有する多価陰イオンオリゴ糖でありうる式中、各R1が、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されならびにnが0、1、2、3、4、5、6、7、および8の間の整数でありならびに式中でR1の少なくとも2つが、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される。1つの態様において、nは1、2、3または4である。別の態様において、nは1または2である。1つの態様において、各R1はOSO3である。別の態様において、多価陰イオンは、一般構造を有する多価陰イオンオリゴ糖でありうるここで各R1が、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されならびにnが0、1、2、3、4、5、6、7、および8の間の整数でありならびに式中でR1の少なくとも2つが、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される。1つの態様において、nは1、2、3または4である。別の態様において、nは1または2である。1つの態様において、各R1はOSO3である。別の態様において、多価陰イオンオリゴ糖は、以下の群より選択されうる式中、各R2が、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されならびに式中でR2の少なくとも2つが、OSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される。さらなる態様において、多価陰イオンは、一般構造を有する多価陰イオンシクロデキストリンでありうる式中、各R3が、置換されてもよいOアルキル、Oアリール、Oアラルキル、Oアルケニル、Oアルキニル基、OSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択され、ならびに各R4がOSO3、COO、OPO3、OHまたはHより独立して選択されxが3、4、5、6、7、8、9、および10の間の整数であり、ならびにここで多価陰イオンシクロデキストリンがOSO3、COO、およびOPO3からなる群より選択される少なくとも2つの陰イオン置換基を含む。1つの態様において、xは4、5または6である。シクロデキストリンはαシクロデキストリン、βシクロデキストリンまたはγシクロデキストリンでありうる。別の態様において、オリゴ糖は硫酸化オリゴ糖または開環オリゴ糖である。他の態様において、多価陰イオンは、それぞれ、硫酸化マルトトリイトールおよびマルトテトライトールのような、三糖類または四糖類の還元糖末端の硫酸化開環形態でありうる。それらの三糖類または四糖類の誘導体は、還元糖の環を維持しているかまたは開環しているかのどちらかの、アルキルおよびアリール基で還元的にアミノ化された部分でありうる。別の態様において、多価陰イオンは、以下の構造式を有する二糖類、オリゴ糖、開環二糖類または開環オリゴ糖であるEa式中でaが1~10の整数でありEが、ジオース、トリオース、テトラオース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトースおよびノノースからなる群より選択され、ならびに各独立したGが、ジオース、トリオース、テトラオース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトースおよびノノースからなる群より選択されEおよびG、ならびにaが2またはそれ以上の整数である場合には、GおよびGが、OxO、O、OCH2、NH、S、NRxArxNR1、NRxNR1、OxArxO、CNxNC、NCArxArCNおよびNXNより選択される群によって連結されR、R1およびR2が水素、アルキル、アリール、ヘテロアリールおよびCアルキルからなる群より選択されxが0~10の整数でありEおよびGが、アルキル、アルケニル、アリール、ハロ、ヘテロアリール、NHCOCH3のようなアミド誘導体、OCH3のようなアルコキシ、OおよびOHからなる群より選択される官能基で置換されてもよくならびにここで該ジオース、トリオース、テトラオース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトースおよびノノースが硫酸化され、リン酸化されまたはカルボキシル化されてもよい。1つの態様において、Eおよび各Gは、ペントース、ヘキソースおよびヘプトースからなる群より独立して選択され、OxO、O、OCH2、NRxArxNR1、OxArxO、CNxNC、NCArxArCNより選択される基によって連結され、R、R1、およびR2は、水素、アセチルおよびアルキルからなる群より選択され、ならびにxは1~6の整数である。別の態様において、ヘキソースは、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、フコース、およびイドースからなる群より選択されてもよく、ペントースはキシロースであってもよい。直鎖状および連結された多価陰イオン他の態様において、多価陰イオンはその還元末端を通じて、還元的に連結された2つの糖の硫酸化構築体であり、したがって開環を有し、直鎖状ポリオール構造を提示しうる。例えば、リンカーNH2CH2CHOHCH2NH2が2つの還元グルコースまたはグルクロン酸単位を連結しうる。このタイプの構造における1分子当たりの潜在的な硫酸基の鎖長および数は、開始サブユニットとしての糖のタイプの適切な選択、例えばグルコースのようなヘキソースに代えてセドヘプツロースのようなヘプトースにより伸長させることもできる。他の態様において、多価陰イオンは、環状単糖類と開環単糖類との間にリンカーを有する硫酸化構築体でありうる。他の態様において、多価陰イオンは12、13、13、15、16、17、または18個の炭素原子鎖長の多価陰イオン直鎖状ポリオールでありうる。多価陰イオン直鎖状ポリオールは、不飽和結合、分岐鎖、または飽和もしくは不飽和であってよい環構造を含みうる。多価陰イオン直鎖状ポリオールは、置換されてもよい。アルコール前駆体の例は、121314テトラデカンテトラオール、5ウンデカン156711ペントール、オクタデカン118ジオール、および加水分解スクアレン誘導体である。1つの態様において、多価陰イオン直鎖状ポリオールは硫酸化される。他の態様において、多価陰イオン直鎖状ポリオールは、硫酸基、カルボキシレート基およびリン酸基より選択される少なくとも2つの置換基を含む。他の態様において、多価陰イオンは、アルキルポリオールに基づくまたは芳香環に結合された多価陰イオン化合物、例えばスラミンおよび関連する誘導体でありうる。シクリトール多価陰イオンさらなる態様において、多価陰イオンは、以下の構造式を有するシクリトールである式中でHが、N、CH、O、S、またはCONHKNHCO、NHCOKCONH、NHKNH、OKOより選択されるリンカーからなる群より選択されKが、アルキレンおよびアリーレンからなる群より選択されR10が、飽和または不飽和である4員、5員または6員炭素環であり、ここで環は少なくとも1つの硫酸基、少なくとも1つのカルボキシレート基または少なくとも1つのリン酸基を含み、R11が、飽和または不飽和である4員、5員または6員炭素環からなる群より選択され、ここで環は少なくとも1つの硫酸基、少なくとも1つのカルボキシレート基または少なくとも1つのリン酸基、水素、アリールおよびアルキルを含みJが、水素、アルキル、アリール、LCおよびアセタートからなる群より選択されLが、x、CH2ArCH2、CH2CHCH2、xArxからなる群より選択され、ここでL基は1つもしくは複数の硫酸基、1つもしくは複数のカルボキシレート基または1つもしくは複数のリン酸基を任意で含んでもよく、R12およびR13が、飽和または不飽和である4員、5員または6員炭素環、水素、アリールおよびアルキルからなる群より独立して選択され、ここでR12およびまたはR13は1つもしくは複数の硫酸基、1つもしくは複数のカルボキシレート基または1つもしくは複数のリン酸基を含んでもよく、ならびにxが0~10の整数である。1つの態様において、Lは、xが2~10の整数であるx、CH2ArCH2およびCH2CHCH2からなる群より選択される。代替的な態様において、R10、R11、R12およびR13は以下より独立して選択されてもよく式中でTが、SO3H、SO3、COOH、COO、OPO3HおよびOPO3からなる群より独立して選択される。アリーレン尿素多価陰イオン第1の局面のさらなる態様において、多価陰イオンは下記式のアリーレン尿素である式中で各Yが、SO3H、SO3、水素、アルキル、ハロ、フェニル、アミド誘導体、NHCOCH3、NO3O、OCH3、COOH、COO、OPO3HおよびOPO3からなる群より独立して選択され、各Vが、Phz、uおよびフェニルからなる群より独立して選択されWがNHCNHでありuおよびzが互いに独立していてもよく、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9および10の間の整数であってもよい。1つの態様において、アリーレン尿素はスラミン、またはその塩であってもよい。本発明の方法および組成物において有用な多価陰イオンの例としては、以下が挙げられる。多価陰イオンの調製本発明の組成物および方法で用いるための多価陰イオンは、購入されてもよく、または当業者に公知の方法によって調製されてもよい。本発明の方法および組成物において用いられる硫酸化されたオリゴ糖化合物は、同様に当業者に公知の方法による、対応するオリゴ糖の硫酸化により調製されてもよい。例えば、オリゴ糖化合物を、適切な溶媒の存在下においてピリジン三酸化硫黄複合体のような硫化剤で処理してもよい。本発明の1つの局面において、多価陰イオンはオリゴ糖とピリジン三酸化硫黄複合体との反応によって得られた化合物の混合物でありうる。オリゴ糖には1つまたは複数の硫酸基が存在してもよい。これらの硫酸基をさまざまな塩基と反応させて、塩を形成させてもよい。硫酸化化合物は、塩の形態である場合に安定である。遊離形態の硫酸化化合物は、Dowex50WX8のような陽イオン交換樹脂を利用することによりその塩から導出されうる。任意で、塩を従来のイオン交換に供して、それを、さまざまな他の望ましい塩のいずれか1つに変換してもよい。硫酸化されるオリゴ糖は、天然に存在する産物、例えばラフィノース、スタキオースまたはシクロデキストリンであってよい。あるいは、多価陰イオンが化学合成によって調製されてもよく、またはオリゴ糖が天然多糖類の酵素的もしくは化学的分解により、引き続きその後の化学修飾により調製されてもよい。多価陰イオンの抗凝固活性一部の多価陰イオンは抗凝固活性を持ちうる。抗凝固活性という用語は、インビトロまたはインビボ血液凝固アッセイ法において血液凝固を阻止する、阻害するまたは引き延ばす物質の活性をいう。血液凝固アッセイ法は、当技術分野において公知であり、フィブリン塊の形成に必要とされる時間を測定するアッセイ法を含む。例えば、アッセイ法はプロトロンビン時間、部分トロンボプラスチン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、フィブリノゲンアッセイ法、トロンビン凝固時間および活性化凝固時間を含みうる。いくつかの態様において、多価陰イオンの抗凝固活性は、本明細書において記述される方法において有用な多価陰イオンの臨床応用または有効用量に影響を与えうる。しかしながら、抗凝固活性を有する多価陰イオンはそれでもなお、本明細書において記述される方法において有用である。好ましい態様において、多価陰イオンは実質的な抗凝固活性を持たない。実質的な抗凝固活性のない多価陰イオンは、正常範囲と比べてPT、PTT、APTT、TCTまたはACTを実質的に増大しない。例えば、実質的な抗凝固性を持たない多価陰イオンは、PT、PTT、APTT、TCTまたはACTを増大しないものと考えられ、あるいは多価陰イオンは、正常範囲の0~約10だけPT、PTT、APTT、TCTまたはACTを増大するものと考えられる。他の態様において、多価陰イオンは、正常範囲の約1~約5だけPT、PTT、APTT、TCTまたはACTを増大するものと考えられる。さらなる態様において、多価陰イオンは、正常範囲の約25~約75だけPT、PTT、APTT、TCTまたはACTを増大するものと考えられる。さらなる態様において、多価陰イオンは、正常範囲の約5~約10だけPT、PTT、APTT、TCTまたはACTを増大するものと考えられる。さらなる態様において、多価陰イオンは、正常範囲の約125~約15だけPT、PTT、APTT、TCTまたはACTを増大するものと考えられる。別の態様において、多価陰イオンは、正常範囲の約15~約20だけPT、PTT、APTT、TCTまたはACTを増大するものと考えられる。ナノ粒子Methodfordetectionoffibrinclotsという名称の米国特許第6977068号には、フィブリン塊の検出において炭素封入された放射性核種ナノ粒子を用いるための方法が記述されている。Amethodofforminganinjectableradioactivecompositionofacarbonencapsulatedradioactiveparticulateという名称の、2006年4月28日付で出願され、かつWO2006116798A1として公開された国際特許出願第PCTAU2006000554号には、炭素封入ナノ粒子の注射製剤の生成のためのプロセスが記述されている。その中に記述されているプロセスは、FibrinLiteプロセスということができ、そのようにして生成されたナノ粒子はFibrinLiteといわれうる。許される範囲内で、US6977068およびPCTAU2006000554の内容全体が参照により本明細書に組み入れられる。当業者は、炭素封入ナノ粒子複合材の水分散液を生成する方法が放射性エアロゾルの水性捕捉の段階を含みうること、およびこの段階がいくつかの方法で達成されうることを承知しているものと理解されよう。例えば、炭素封入ナノ粒子複合材を作出するために用いられる放射性エアロゾルの水性捕捉の段階は、ベンチュリスクラッバにおけるエアロゾルの収集、液体電極でのエアロゾルの濃縮、またはサイクロン装置の使用を含んでもよいが、これらに限定されなくてもよい。1つの態様において、炭素封入ナノ粒子複合材は、PCTAU200600054に記述されているプロセスを用いて調製されてもよく、ここでこのプロセスは、内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5792241号に記述されているブロウィット沈殿分離装置を用いた水中での放射性エアロゾルの捕捉を伴う。既述のように、炭素封入ナノ粒子は、ヒストンのような巨大分子の高い比放射能および高い親和性標識をもたらしうる。PCTAU2006000554に記述されるように、炭素封入放射性微粒子は、炭素るつぼにテクネチウムまたは他の同位体を充填すること、充填されたるつぼを予め加熱すること、粒子の瞬時放出、水または他の水溶液中での粒子捕捉によって調製されうる。PCTAU2006000554に記述されるように、同位体の比放射能が十分に高いなら、例えば、100mCimLなら蒸発法により、単純に、同位体のアリコットをるつぼの中の溶液に入れ、るつぼの抵抗加熱の入念な調節により液体を蒸発乾固させることによって、適当な黒鉛るつぼに充填するように同位体を用いてもよい。あるいは、るつぼを陰極としておよび純プラチナワイアの陽極を流体送出管にて用いることにより、るつぼに電解充填してもよい。この管は同位体溶液をるつぼへ送出し、同位体は電気分解および連続ポンピングの複合作用によってるつぼの内表面に濃縮されうる。充填の後、るつぼを予加熱段階に供して、同位体溶液中の任意の担体を除去し、例えば塩化ナトリウムを、好ましくは不活性ガス流、例えば、アルゴン流への蒸発により、除去する。予加熱段階は、るつぼから後に除去される遊離炭素の量を減らし、ナノ粒子に混入している遊離同位体のレベルを減らし、およびより小さな粒子画分に存在する同位体の割合を増やす。予め処理したるつぼを電子サーボ装置により3秒間、例えば2740~2790°Cにまで瞬時加熱して、急速な立ち上がり時間、その後、例えば2765°C±15°Cを所定の加熱時間にわたって維持するフラットなプラトーを特徴とする、厳密に調節されたるつぼ加熱プロファイルをもたらす。この段階中に、ナノ粒子はるつぼの表面から除去される。るつぼから除去された粒子を、低濃度の界面活性剤、例えば、10マイクロモルのデオキシコール酸ナトリウムを含有する水および非常に低いイオン強度条件中で沈殿させる。好ましい態様において、ナノ粒子は非常に低い濃度の弱酸性緩衝液中で沈殿されてもよく、またはこれは沈殿分離装置からの収集後にナノ粒子分散液、例えば、終濃度300マイクロモルのクエン酸二水素ナトリウム、pH41に加えられてもよい。したがって、ナノ粒子は、10mMNaClに相当するものより低い、非常に低い電解質濃度を有する安定な水溶性分散液として作出されうる。PCTAU2006000554に記述されている、またはそこから粒子の調製のために導出される方法のいずれかを、本発明で用いるためのナノ粒子の調製において利用してもよい。1つの態様において、これは、例えば、15秒間およそ1600~1650°Cで同位体を負荷された黒鉛るつぼを加熱して、2700°C超で放射性同位体の焼灼前に担体の塩化ナトリウムを除去することによって達成されうる。塩化ナトリウムの沸点は、1413°Cでしかなく、Tc99m放射性同位体はこの温度では蒸発しない。別の放射性同位体が本発明の方法にて利用される場合、当業者は例えばPCTAU2006000554を参照することにより、焼灼の適切な温度を判定することができるであろう。PCTAU2006000554によって作出されたナノ粒子の水溶性分散液は、例えば48時間の放置において凝集せず、沈殿せず、または沈降しない。ナノ粒子の分散液は、生体の血液循環に適合性があり、注射されうる、非常に低い濃度の陰イオン界面活性剤、典型的にはデオキシコール酸ナトリウムを含みうる。ナノ粒子は、300マイクロモルのクエン酸二水素ナトリウムpH41の終濃度でなどの、低濃度の弱酸性緩衝液中での貯蔵によるような、任意の適切な方法で、好ましくは分散液の安定性を可能とするようにして貯蔵されうる。ナノ粒子の分散液は安定であり、孔隙率が800、450および220nmで入手できる、ミリポア製混合セルロースエステルシリンジ型フィルタのような、容易に入手可能な親水性膜フィルタの使用によってサイズ分画されうる。典型的なナノ粒子調製物中の放射能の90超が800nmのMCEフィルタを通過し、その調製物は、典型的には5未満の溶解性の同位体を含むことが薄層クロマトグラフィーによって示されうる。放射性同位体当業者は、金属元素の任意の放射性同位体がナノ粒子に組み入れられうることを理解するであろう。PCTAU2006000554およびPCTAU2009000508に記述されているように、Tc99m、Ga67のような、γ線を放出するものY90のような、β線を放出するものBi213のような、α線を放出するものおよびCu64のような、ポジトロンを放出するものを含む、さまざまな放射性同位体がナノ粒子に組み入れられうる。198Au、64Cu、213Bi、57Co、51Cr、165Dy、169Er、59Fe、67Ga、68Ga、153Gd、166Ho、111In、113mIn、177Lu、23Na、24Na、103Pd、81Rb、82Rb、186Re、188Re、75Se、153Sm、117mSn、89Sr、201Th、90Y、169Yb、192Irを含めて、任意の適当な金属放射性同位体が利用されうる。ナノ粒子において、それゆえ、本発明の方法において使用されうる同位体の範囲は、Tc99mもしくはGa67を用いた単光子放出コンピュータ断層撮影法、およびCu64もしくはZr89を用いたポジトロン放出断層撮影法またはガンマシンチグラフィーのような、画像診断用途に理想的に適したものを含む。PCTAU2006000554およびPCTAU2009000508に記述されているように、例示的な放射性核種はTc99mである。ナノ粒子は、従来の標識法で得られるようなものを軽く超える、非常に高いレベルの比放射能が容易に得られうるように、そのコアの中に何万ものまたはそれ以上の同位体原子をそれぞれ保有しうる。モデルとなる封入された放射性同位体としてのTc99mの場合、およびそれを用いて、約1から約100mCi、約5から約100mCi、約75から約95mCi、約10から約90mCi、約15から約85mCi、約20から約80mCi、約25から約75mCi、約30から約70mCi、約35から約65mCi、約40から約60mCi、約45から約55mCi、または約50から約55mCiの範囲で投入されたTc99mが調製されうる。典型的な粒子調製物は、所望のように、水溶性懸濁液2mL中に約1~約30mCiを含むように容易に作出されうる。走査型移動度粒径測定を用いた粒子の気相の特徴付けから、懸濁液は、比放射能が600mCimgの、または22GBqmg超ほどの高さで作出されうるように、ナノ粒子材料およそ50μgを含みうることが示されうる。調製物の比放射能は、エアロゾル発生器中のるつぼに投入するために使用される同位体の放射能を変化させることによって所望のように調整されうる。ナノ粒子によるヒストンの標識好ましい態様において、ヒストンの標識は、標識ヒストンがインビボで典型的に直面する条件の下で実質的に不可逆的である。典型的には、ヒストンの高親和性の標識は、インビボ条件下での解離が約10未満となるようなものである。Methodsforradiolabellingmacromoleculesという名称の、2009年4月23日付で出願され、かつWO2009129577A1として公開された国際特許出願第PCTAU20O9000508号には、ポリペプチドのような生体巨大分子の標識のためのプロセスが記述されている。許される範囲内で、PCTAU2009000508の内容全体が参照により本明細書に組み入れられる。PCTAU2009000508には、放射性標識巨大分子がナノ粒子を用いて調製されうる方法が記述されており、本発明者らは、金属同位体を炭素ケージ内に包み、その結果、これはその外部環境との接触から物理的に単離されることになり、特にそれらがインビボで用いられる場合、粒子つまり巨大分子にとっては特に価値のある特性になる炭素封入プロセスを活用する。放射性標識巨大分子のインビボにおける放射性金属イオンの浸出および生物学的吸収の可能性は、ナノ粒子複合材の炭素外装だけが、インビボにおける生物学的環境に曝露されるため、事実上存在しない。PCTAU2009000508には、ナノ粒子をヒストンのような多価陰イオンでコーティングすることができ、その結果、得られる粒子は、検出可能な放射性標識の高比放射能のコアおよび強固に結合されたヒストンを有するという方法が記述されている。放射性標識ヒストンは、ヒストンが肺のような、臓器と有する特異的な生物相互作用に基づいて、インビボで所定の部位に、容易に検出可能な同位体を局在させるように用いられてよい。例えば、本明細書において実証されるように、仔ウシ胸腺ヒストンとの複合体中のTc99mナノ粒子は、肺組織に選択的であり、対象に投与される場合、ガンマシンチグラフィーによって可視化したときに、肺を選択的に標的化するであろう。このように、ヒストンコーティングナノ粒子を、肺内でのヒストンの蓄積を阻害する候補化合物の能力を試験するためのスクリーニング剤として用いることができる。ナノ粒子を用いてヒストンを放射性標識するための条件このようにして作出されまたは得られたナノ粒子は、ヒストンを放射性標識するためにPCTAU2009000508に記述されている方法において用いられうる。疎水性界面、例えば空気水界面、炭化水素水界面、および推論して水溶性ナノ粒子懸濁液中のような黒鉛水界面は、純水中わずかに優位の水酸化イオンを一般的に引き付ける。この結果は、表面電位が通常非常に低いとはいえ、これらの界面が、わずかに負に荷電したものとして挙動するというものである。ナノ粒子は、陰イオン界面活性剤、典型的には、それらの調製において用いられるデオキシコール酸塩の吸着に起因して、それらの表面上の負の荷電の増加も持ちうる。粒子および巨大分子が同じ水性媒体中で同様に負に荷電しているなら、それらの荷電が拡散する二層が重複している場合、何十ナノメートルの規模で互いに弱く反発しうる。しかし、ヒストンのpIでのような、ヒストンの正味荷電が実質的にゼロである水性媒体のpHの選択によって、これらの系における巨大分子への粒子の吸着および密着に対するエネルギー障害がほとんどないように、この電位が非常に迅速に遮蔽される。デバイ長が85のHUVECおよびおよそ55のHMECを死滅させた。後続の阻害実験において、仔ウシ胸腺ヒストンをHUVECの場合には200μgmlおよびHMECの場合には400μgmlで用いたが、これらの濃度は内皮細胞の両集団のおよそ50の死滅化をもたらした。阻害実験において、各ウェルへのHUVECHMEC、カルセインAMおよびPIの添加の前に阻害剤を仔ウシ胸腺ヒストンと混合した。マルトトリオース硫酸およびマルトペンタオース硫酸が、HUVECに対するヒストン細胞毒性の強力な阻害剤であり、100μgmlでヒストン毒性を完全に阻害し、そしてなお、25μgmlで極めて効果的であることが分かった。マルトトリオース硫酸に対する一次フローサイトメトリーデータのいくつかを図5に提示して、この硫酸化三糖類の強力な阻害活性をさらに強調する。対照的に、二糖類のマルトース硫酸は、ヒストン細胞毒性の弱い阻害剤であり、マルトース系列の多価陰イオンオリゴ糖では、鎖長が阻害活性において重要な役割を果たすことが示唆された。しかしながら、イソマルトトリオース硫酸は、マルトトリオース硫酸よりも低い活性の阻害剤であり、糖結合も阻害活性に影響を与えうることが示唆された。しかしながら、環状βシクロデキストリン硫酸は、直鎖状マルトトリオース硫酸およびマルトペンタオース硫酸分子とほぼ同じくらい活性であった。HMECを内皮細胞標的として用い、ヒストン毒性に及ぼすマルトトリオース硫酸および他の硫酸化オリゴ糖の同様の阻害効果を認めた。実際に、HMECを標的内皮細胞として用い、ヒストン毒性に及ぼすさまざまな範囲の多価陰イオンの阻害活性のさらに詳細な分析を表1に示す。表1ヒストンによるHMECの死滅化を阻害する異なる多価陰イオンの能力HMECに対する仔ウシ胸腺ヒストンの細胞毒性を阻害する能力について50μgmlで試験した化合物。太字斜体の値は、ヒストン毒性を80だけ阻害した化合物を表す。HMECヒト微小血管内皮細胞。LMWH低分子量ヘパリン。異なる硫酸化二糖類は、その阻害活性が異なり、セロビオース硫酸がヒストン毒性の強力な阻害剤であったのに対し、マルトース硫酸および八硫酸スクロースはもっと弱い阻害剤であった。しかしながら、マルチトール、つまり開環型のマルトースの阻害活性はマルトースよりも高かった。硫酸化三糖類もその阻害活性がさまざまであり、硫酸化マルトトリオース、ラフィノースおよびパノースは硫酸化イソマルトトリオースよりも活性が高かった。この分析からも、硫酸化された結合グルコース分子はいくらかの阻害活性を示し、硫酸化βシクロデキストリンは活性であるが、しかしカルボキシル化βシクロデキストリンは活性ではなく、ヘパリン、低分子量ヘパリンおよびいくつかの化学的変種は活性であることが明らかになった。さらなる研究から、ヒストン細胞毒性が細胞表面ヘパラン硫酸に依らないことが明らかになった。かくして、ヒト血小板ヘパラナーゼまたはフラボバクテリウムヘパリナム由来のヘパリチナーゼI、IIおよびIIIによるHMECの処理、つまり細胞表面ヘパラン硫酸を除去する酵素手順では、ヒストン細胞毒性に対するHMECの感受性に影響がなかった。同様に、野生型チャイニーズハムスター卵巣細胞およびこの細胞株のヘパラン硫酸欠損変種の比較から、両方の細胞株がヒストン細胞毒性に対して等しく感受性のあることが明らかになった。実施例2静脈内に注射されたヒストンはウサギの肺内に蓄積する仔ウシ胸腺ヒストンをTc99mナノ粒子の表面上への吸着によって放射性標識した。Tc99mナノ粒子の水性コロイド懸濁液を室温にて1時間ヒストンで処理した。放射性標識ヒストンをガンマ線カメラ下に置いた麻酔下のウサギの耳静脈へ注射し、動態像を、注射の初めから開始して、連続30秒ずつの収集として得た。図9A中の像は、ヒストン誘導性の組織損傷の肺局在性と一致して、肺内でのヒストンの迅速かつ選択的な蓄積を示す。ヒストンが結合していない放射性標識ナノ粒子は、細網内皮系による循環血中の外来粒子の迅速な除去について予想されるように、肝臓、脾臓および骨髄中に局在していた。実施例3肺内でのヒストンの蓄積の競合的阻害仔ウシ胸腺ヒストンをTc99mナノ粒子の表面上への吸着によって放射性標識した。放射性標識したこの調製物を次いで、半分に分けた。最初の半分をガンマ線カメラ下に置いた麻酔下の対照ウサギの耳静脈へ注射し、動態像を、注射の初めから開始して、連続30秒ずつの収集として得た。上記の実施例2と同様に、図10A中の像は、対照ウサギの肺内での放射性標識ヒストンの迅速かつ選択的な蓄積を示す。放射性標識したヒストン調製物のもう半分を、15分前に15mgkgのナトリウムマルトヘキサオース硫酸を静脈内注射しておいた麻酔下のウサギの耳静脈へ注射した。前処置したこのウサギの、放射性標識の注射当初からのガンマ線画像化から、肺内での放射性標識ヒストンの蓄積がブロックされたことが示された。放射性標識ヒストンは、肺を通過し、肝臓および脾臓中に局在した。実施例4マルトテトラオース硫酸によるウサギ肺内でのヒストンの蓄積の遮断放射性標識したヒストン調製物を、15分前に15mgkgのナトリウムマルトテトラオース硫酸を静脈内注射しておいた麻酔下のウサギの耳静脈へ注射した。前処置したこのウサギの、放射性標識の注射当初からのガンマ線画像化から、肺内での放射性標識ヒストンの蓄積がブロックされたことが示された放射性標識ヒストンは、結合することなく肺を通過し、肝臓および脾臓中に局在した。図11のフレーム1~4は30秒ずつの収集であり、一方でフレーム5~8は60秒ずつの収集である。実施例5セロビオース硫酸によるウサギ肺内でのヒストンの蓄積の遮断放射性標識したヒストン調製物を、15分前に15mgkgのナトリウムセロビオース硫酸を静脈内注射しておいた麻酔下のウサギの耳静脈へ注射した。前処置したこのウサギの、放射性標識の注射当初からのガンマ線画像化から、肺内での放射性標識ヒストンの蓄積がブロックされたことが示された放射性標識ヒストンは、結合することなく肺を通過し、肝臓および脾臓中に局在した。図12のフレーム1~4は30秒ずつのガンマ線カメラ収集である。実施例6マウスでのLPS誘導性の敗血症の研究敗血症のリポ多糖類誘導マウスモデルにおける被験物質1、2および3のインビボでの効力を評価するために研究を行った。内毒素血症を1日目にLPSの腹腔内注射によって誘導した。被験物質は1日目に同時に腹腔内投与し、その後、さらに2日間、毎日、腹腔内投薬した。下記表2に示されるように被験物質1および2を2用量の濃度で評価し、被験物質3を1濃度で評価した。表2結果動物が死体で見つかるまで、または安楽死されねばならなくなるまでの時間が、図13中のカプランマイヤープロットに示されている。本研究において用いたマルトトリオース硫酸の高用量では、3回目の投薬後にいくらかの毒性を生じるように思われたが、しかし低用量ではもっと耐容性が高かった。両用量でのセロビオース硫酸は耐容性良好であったが、ヘパリンの場合に選択した低用量でもそうであった。図13中のカプランマイヤープロットから、マルトトリオース硫酸の低用量およびセロビオース硫酸の両用量では生存の延長が得られることが示唆された。ヘパリンの場合、対照と比べて、生存プロットの明らかな変化は認められなかった。