凍結材料の氷結晶を観察するための試料を作製する凍結材料の氷結晶観察用試料作製方法において、前記凍結材料を凍結用包埋材で包埋する包埋工程と、該包埋工程で包埋した凍結材料に、該凍結材料の凍結温度下で粘着性を有する粘着面を備えたフィルムを貼着するフィルム貼着工程と、前記フィルムに貼着された凍結材料を薄切する薄切工程と、該薄切工程で製造された薄切片を凍結状態のまま凍結温度条件下で氷を昇華させて乾燥し、前記フィルムに固着させる昇華乾燥工程と、フィルムに固着された凍結材料を常温下で有機溶剤に浸漬し、該凍結材料の細胞質内物質の構造変化を抑える浸漬固定工程と、該浸漬固定工程の後で、薄切片を染色して観察用試料を作製する染色工程と、からなり、作製された観察用試料から氷結晶の存在形態及び組織の損傷程度を観察するようにしたことを特徴とする凍結材料の氷結晶観察用試料作製方法。前記昇華乾燥工程は、前記薄切片を凍結状態のまま、前記凍結材料の凍結温度条件下で静置するか又は冷風に当て、氷結晶を溶解させずに昇華させて乾燥し、前記フィルムに固着させるものであることを特徴とする請求項1に記載の凍結材料の氷結晶観察用試料作製方法。前記薄切片は、3~10μmの厚さであることを特徴とする請求項1又は2に記載の凍結材料の氷結晶観察用試料作製方法。非特許文献1に開示された凍結置換法は、浸漬置換固定工程102で長い時間がかかり、凍結試料110の作製に1ヶ月近くを要する。このため、例えば、工場などでは、凍結製品の製造効率を低下させたり、作製中に凍結条件が変化し、不適切な凍結条件で凍結してしまい、凍結製品の品質低下を招くおそれがあった。また、植物組織細胞に対しては、植物の種類によっては十分に固定できないことも多く、凍結時の氷結晶や組織状態を正確に観察することが困難である場合もあった。また、凍結材料をプラスチックフィルム等の支持体に粘着させた状態で薄切し、その後に浸漬置換固定工程を行なう方法の場合であっても、植物組織の場合、浸漬置換工程や染色工程において、支持体からの薄切片の遊離が起こることがあった。また、浸漬置換固定工程で、有機溶剤を用いる理由は、凍結材料のたんぱく質構造に架橋をつくり、凝固変性させ、組織構造を保ち組織に硬度を持たせることと同時に、氷を溶出融解ではなくさせるためである。しかし、植物組織や炊飯粒など糖質系組織は、たんぱく質が主体でないため、十分な固定ができないこともあり、このため、正確な観察ができない場合もあった。非特許文献2に開示された植物組織細胞の試料作製フローは、常温における組織観察方法であり、凍結温度以下の材料を用いた試料作製方法ではない。従って、凍結材料の氷結晶形態の痕跡及び周辺組織の破壊状態を観察するのに適した方法ではない。本発明は、かかる従来技術の課題に鑑み、凍結材料、特に凍結された植物組織細胞の氷結晶形態の痕跡及び周辺組織の破壊状態の観察を可能にすると共に、浸漬置換固定工程に要する時間を大幅に短縮でき、かつ凍結時の氷結晶の状態を正確に観察可能な試料作製方法を実現することを目的とする。かかる目的を達成するため、本発明の凍結材料の氷結晶観察用試料作製方法は、凍結材料の氷結晶を観察するための試料を作製する凍結材料の氷結晶観察用試料作製方法において、凍結材料を凍結用包埋材で包埋する包埋工程と、包埋工程で包埋した凍結材料に、凍結材料の凍結温度下で粘着性を有する粘着面を備えたフィルムを貼着するフィルム貼着工程と、フィルムに貼着された凍結材料を薄切する薄切工程と、薄切工程で製造された薄切片を凍結状態のまま凍結温度条件下で氷を昇華させて乾燥し、フィルムに固着させる昇華乾燥工程と、フィルムに固着された凍結材料を常温下で有機溶剤に浸漬し、凍結材料の細胞質内物質の構造変化を抑える浸漬固定工程と、浸漬固定工程の後で、薄切片を染色して観察用試料を作製する染色工程と、からなり、作製された観察用試料から氷結晶の存在形態及び組織の損傷程度を観察するようにしたものである。本発明方法では、凍結材料をフィルムに貼着して薄切した薄切片を、凍結材料の凍結温度条件下で凍結材料に含まれる氷を昇華させることで、氷結晶を融解させることなく、乾燥できる。これによって、凍結材料をフィルムの粘着面に固着させることができる。このように、凍結材料をフィルムに固着させることで、昇華乾燥工程以降に常温下で行われる浸漬固定工程や染色工程で、凍結材料の薄切片のフィルムからの遊離や、凍結材料の氷結晶痕跡や組織の変形を防止でき、かかる良好な状態での観察が可能となる。また、凍結材料をフィルムに貼着して薄切した薄切片を有機溶剤で浸漬固定するので、浸漬固定に要する時間を大幅に短縮でき、観察用試料を短時間で作製できる。非特許文献1に開示された従来の凍結置換法は、有機溶剤への浸漬時間が長かったため、組織の脱水収縮が生じることがあった。これに対し、本発明方法によれば、浸漬時間を大幅に短縮できるため、凍結材料の組織の脱水収縮を最小限に抑えることができ、これによって、凍結材料の氷結晶の存在形態及び組織の損傷を正確に観察できる。さらに、凍結材料をフィルムに貼着した状態で薄切しているため、薄切時や浸漬固定時における凍結材料の組織の変形や欠損を防止でき、氷結晶形態の痕跡を良好に維持することが可能になる。なお、有機溶剤は、一般的に植物組織観察で用いられているFAAホルマリン:氷酢酸:50エタノールは組織浸透性が良く、入力手しやすく、かつ安価であり、これを用いるとよい。本発明方法において、昇華乾燥工程では、薄切片を凍結状態のまま、凍結材料の凍結温度条件下で静置するか又は冷風に当て、氷結晶を溶解させずに昇華させて乾燥し、フィルムに固着させるようにするとよい。これによって、凍結材料からの氷結晶の分離除去を容易にかつ短時間で行なうことができる。また、薄切片は、3~10μmの厚さであることが好ましい。薄切片の厚さが3μm未満では、氷結晶の痕跡が薄切片に明瞭に残らない可能性があり、10μmを超えると、薄切片の浸漬置換固定に時間がかかってしまう。前記厚さ範囲とすることで、短時間で薄切片の浸漬置換固定が可能であり、氷結晶の痕跡を精度良く観察できる。本発明方法によれば、凍結材料の氷結晶を観察するための試料を作製する凍結材料の氷結晶観察用試料作製方法において、凍結材料を凍結用包埋剤で包埋する包埋工程と、包埋工程で包埋した凍結材料に、凍結材料の凍結温度下で粘着性を有する粘着面を備えたフィルムを貼着するフィルム貼着工程と、フィルムに貼着された凍結材料を薄切する薄切工程と、薄切工程で製造された薄切片を凍結状態のまま凍結温度条件下で氷を昇華させて乾燥し、フィルムに固着させる昇華乾燥工程と、フィルムに固着された凍結材料を有機溶剤に浸漬し、凍結材料の細胞質内物質の構造変化を抑える浸漬固定工程と、浸漬固定工程の後で、薄切片を染色して観察用試料を作製する染色工程と、からなり、作製された観察用試料から氷結晶の存在形態及び組織の損傷程度を観察するようにしたので、昇華乾燥工程を行なうことで、浸漬固定工程及び染色工程で薄切片の遊離や組織の変形を防止できる。また、薄切工程後に昇華乾燥工程及び浸漬固定工程を行なうようにしたので、昇華乾燥工程及び浸漬固定工程に要する時間を大幅に短縮でき、観察用試料を短時間で作製可能となる。また、従来の凍結置換法は、有機溶剤への浸漬時間が長かったため、組織の脱水収縮が生じることがあったが、本発明方法によれば、有機溶剤への浸漬時間を大幅に短縮できるため、組織の脱水収縮を最小限に抑えることが可能になり、これによって、凍結時の氷結晶の状態を正確に観察することができる。さらに、凍結材料をフィルムに貼着させた状態で薄切し、かつ凍結材料の凍結温度条件下で氷結晶を昇華させ、フィルムに固着させているため、薄切工程及び浸漬固定工程における組織の変形を防止でき、氷結晶形態の痕跡を良好な状態のまま維持することが可能となる。以下、本発明を図に示した実施形態を用いて詳細に説明する。但し、この実施形態に記載されている構成部品の寸法、材質、形状、その相対配置などは特に特定的な記載がない限り、この発明の範囲をそれのみに限定する趣旨ではない。本発明方法を凍結された植物組織の観察用試料作製に適用した一実施形態を図1~図3に基づいて説明する。図1において、本実施形態の観察用試料作製工程は、凍結された植物組織からなる凍結材料10を凍結温度下で包埋処理する包埋工程12と、凍結材料10にフィルムを貼着するフィルム貼着工程14と、凍結材料10を薄切する薄切工程16と、薄切工程16で薄切された薄切片を昇華乾燥する昇華乾燥工程18と、乾燥されフィルムに固着された薄切片を常温下で有機溶剤に浸漬し、細胞質内物質の流出を抑え、構造の変化を最小限に抑える固定処理を行なう浸漬固定工程20と、浸漬固定工程後の薄切片を染色して薄切試料24を作製する染色工程22とからなる。そして、作製された薄切試料24のうち染色されていない部分を氷結晶の存在痕跡として観察するようにしている。包埋工程12は、凍結用包埋材を用いて凍結材料10を凍結温度条件下で包埋処理する工程であるが、凍結用包埋材として、例えば、CMCcarboxymethylcellcelose又はOCTOptimalCuttingTemperatureコンパウンドを用いる。この包埋工程12により、凍結材料10に均一な硬度をもたせ、後工程の薄切工程14で凍結材料10が変形するのを防止する。フィルム貼着工程14では、包埋した凍結材料10に、凍結材料10の凍結温度条件下で粘着性を有する粘着面を備えたフィルムを貼着する。即ち、図2Aに示すように、凍結用包埋材120で包埋処理された凍結材料10を、後述する薄切装置に固定するための支持台122に固定しておき、該支持台122と対面する側の凍結材料面にプラスチック製のフィルム124を貼着する。薄切工程16では、凍結温度下で、フィルム124に貼着した状態の凍結材料10を所定厚さに薄切する。薄切装置として、例えば、ミクロトーム等の薄切装置を用いる。図2Bに示すように、凍結材料10の支持台122を薄切装置図示省略に固定し、フィルム124に平行となるように、凍結材料10に刃126を挿入し、凍結材料10を所定厚さに薄切する。このとき、薄切片の厚さは3~10μmとすることが好ましい。薄切片の厚さが3μm未満の場合、薄切片に氷結晶の痕跡が明瞭に残らない可能性があり、10μmを超えると、薄切片の浸漬固定に薄切片の浸漬固定に時間がかかる。浸漬固定工程に時間がかかると、例えば、凍結食品の製造工場などでは、凍結製品の製造効率を低下させたり、作製中に凍結条件が変化し、不適切な凍結条件で凍結してしまい、凍結製品の品質低下を招くおそれがある。前記範囲とすることで、短時間で薄切片の浸漬固定が可能になり、氷結晶の痕跡を精度良く観察可能になると共に、凍結食品の製造効率を向上でき、かつ凍結食品の品質低下を招かない。昇華乾燥工程18では、凍結材料10が薄切された薄切片を、凍結状態のまま凍結材料10の凍結温度条件下で氷結晶の昇華及び乾燥を行なう。昇華乾燥工程18では、凍結材料10の凍結温度条件下の低温薄切装置内又は冷凍庫内で、好ましくは5~30分程度静置乾燥するか又は冷風を当てて乾燥する。これによって、昇華乾燥工程を容易に実施できると共に、薄切片の氷結晶を溶解させることなく昇華除去でき、氷結晶の痕跡及びその周辺組織を良好な状態に保持できる。また、乾燥により凍結材料10がフィルム124に固着し、浸漬固定工程20及び染色工程22で、フィルム124から薄切片が遊離離脱するのを防止できる。浸漬固定工程20では、常温下で薄切片を化学固定する。即ち、常温下で乾燥されフィルム124に固着された薄切片を有機溶剤に浸漬し、細胞質内物質の流出を抑え、構造の変化を最小限に抑え、できるだけ凍結材料10を凍結時の状態に保存する。本実施形態では、有機溶剤として、FAAホルマリン:氷酢酸:50エタノール=5:5:90を用いている。FAAは、組織浸透性が良く、入力手しやすく、かつ安価であり、FAAを用いることで、固定処理に要する時間を短縮できる。FAA以外に、例えば、エタノール、ホルマリン、アセトン、又はこれらのうち少なくとも2以上の有機溶剤を混合した混合液を用いることができる。浸漬固定工程20では、組織内物質の流出を抑えると共に、薄切片の構造変化を最小限に抑え、氷結晶の痕跡やその周辺組織を凍結時の状態に保持する。染色工程22では、常温下で薄切片を染色剤により染色し、封入剤を浸透させた薄切試料24を作製する。染色剤として、例えば、トルイジンブルー、アニリンブルー、ファストグリーンFCF等の周知の染色剤を用いることができる。その後、薄切試料24を、フィルム124に貼着したまま、フィルム124とガラス板との間に挟み込み、正立型顕微鏡などの顕微鏡で、薄切試料24のうち染色されていない部分で示される氷結晶の痕跡の大きさや周辺組織の損傷程度を観察する。本実施形態によれば、包埋工程12から染色工程22までの所要時間は数十分に短時間で行うことができる。即ち、フィルム124に貼着して薄切した薄切片を有機溶剤で浸漬固定しているため、浸漬固定工程20に要する時間を大幅に短縮でき、そのため、観察用試料を短時間で作製できる。従来の凍結置換法は、有機溶剤への浸漬時間が長かったため、組織の脱水収縮が生じることがあったが、本実施形態の試料作製方法によれば、浸漬固定時間を大幅に短縮できるため、組織の脱水収縮を最小限に抑えることが可能になり、凍結材料10の凍結時の氷結晶の状態を正確に観察できる。また、薄切片をフィルム124に貼着した状態で薄切しているため、薄切時や浸漬固定時における組織の変形を防ぐことができる。さらに、氷結晶の昇華及び乾燥を行なうことで、薄切片をフィルム124に固着できるので、フィルム124からの薄切片の遊離離脱を防ぎ、氷結晶形態の痕跡を良好な状態のまま保存できる。次に、前記実施形態による観察用試料の作製を実際に行なったときの実施例を説明する。本実施例では、凍結材料として、庫内温度を-15°Cに設定した連続式フリーザで凍結させた枝豆を用いた。この凍結枝豆を凍結用包埋材CMC又はOCTコンパウンドで包埋し、-20°C以下に設定したクリオスタットにセットし、トリミングした後、凍結枝豆の表面に低温で粘着性を有する粘着面を備えたプラスチックフィルムを貼着した。そして、該プラスチックフィルムを貼着した状態で、凍結枝豆を回転式ミクロトームに設置し、凍結温度条件下で薄切した。この薄切片を、プラスチックフィルムを貼着したまま、-20°C以下の環境下で氷結晶の昇華及び乾燥を行なった。この際、-20°C以下の冷風を当てることで、昇華及び乾燥に要する時間を早めることができた。次に、有機溶剤としてFAAホルマリン:氷酢酸:50エタノール=5:5:90を用い、薄切片をFAAに0.5~2分程度浸漬させて固定処理した。次に、固定処理した薄切片を、染色剤としてトルイジンブルーを用い、水洗→トルイジンブルーによる染色→水洗の手順で染色した。このようにして作製された薄切試料の顕微鏡写真を図3に示す。同写真において、染色されている部分が凍結枝豆の組織30を示し、染色されていない部分が氷結晶の痕跡32を示す。本実施例によれば、全工程が10~40分程度の短時間しかかからず、この時間で薄切試料を作製でき、かつ薄切試料の氷結晶の痕跡を明瞭に観察可能できることがわかった。