少なくとも54°CのTmを有する、DOM7h11の抗血清アルブミン免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。前記変異体が、DOM7h11に比較して、位置22、42または91のいずれかに少なくとも1つの変異を含む、請求項1記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。前記変異体がDOM7h1115の変異体であり、かつDOM7h1115に比較して位置22、42または91のいずれかに少なくとも1つの変異を含む、請求項2記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。前記変異体が以下から選択される少なくとも1つの変異を含む、請求項1~3のいずれか一項記載の変異体:位置22SerPheThrAlaまたはCys位置42GluまたはAsp位置91ThrまたはSer。位置22がSerまたはPheである、請求項4記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。位置42がGluであり、かつ位置91がThrである、請求項4記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。位置91がThrである、請求項4記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。位置22がPheである、請求項4記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。前記変異体が、DOM7h1156、DOM7h1168、DOM7h1179およびDOM7h1180から選択された単一可変ドメインのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列、または選択された前記アミノ酸配列と比較して最大4つの変化を有するアミノ酸配列を含む、請求項1または2記載の変異体。前記変異体が、DOM7h11に比較して、FW3領域またはCDR3領域に少なくとも1つの変異を含む、請求項1記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。前記変異体がDOM7h1115の変異体であり、かつDOM7h1115に比較してFW3領域またはCDR3領域に少なくとも1つの変異を含む、請求項10記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。前記変異体が位置77、83、93または95のいずれかに少なくとも1つの変異を含む、請求項10または11記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。前記変異体が以下から選択される少なくとも1つの変異を含む、請求項10~12のいずれか一項記載の変異体:位置77AsnGln位置83ValIleMetLeuPheAlaまたはノルロイシン位置93ValIleMetLeuPheAlaまたはノルロイシン位置95HisAsnGlnLysまたはArg。位置106または108に変異をさらに含む、請求項1~13のいずれか一項記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。位置106がAsnまたはGlnである、請求項14記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。位置108がTrp、TyrまたはPheである、請求項14記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。位置77がAsnである、請求項1~16のいずれか一項記載の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体。位置83がValである、請求項1~17のいずれか一項記載の抗SA単一可変ドメイン変異体。位置95がHisである、請求項1~18のいずれか一項記載の抗SA単一可変ドメイン変異体。位置95がHisである、請求項1~19のいずれか一項記載の抗SA単一可変ドメイン変異体。位置93がValである、請求項1~20のいずれか一項記載の抗SA単一可変ドメイン変異体。前記変異体が、DOM7h1157、DOM7h1165、DOM7h1167およびDOM7h1169から選択された単一可変ドメインのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列、または選択された前記アミノ酸配列と比較して最大4つの変化を有するアミノ酸配列を含むが、ただし、該変異体のアミノ酸配列は請求項1~12のいずれか一項に記載した少なくとも1つの変異をFW3またはCDR3領域に有する、請求項1記載の変異体。前記変異体が少なくとも57°CのTmを有する、請求項10~21のいずれか一項記載の変異体。前記変異体がDOM7h11に比較して上昇したTm値を有する、請求項1~23のいずれか一項記載の変異体。前記変異体がDOM7h1115に比較して上昇したTm値を有する、請求項1~24のいずれか一項記載の変異体。請求項4および13に記載した変異のいずれかの任意の組合せを含む、請求項1~25のいずれか一項記載の変異体。前記変異体が、表面プラズモン共鳴で測定して、約01~約10000nM、必要に応じて約1~約6000nMの解離定数でヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1~26のいずれか一項記載の変異体。前記変異体が、表面プラズモン共鳴で測定して、約15×104~約01sec1、必要に応じて約3×104~約01sec1のオフ速度定数でヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1~27のいずれか一項記載の変異体。前記変異体が、表面プラズモン共鳴で測定して、約2×106~約1×104M1sec1、必要に応じて約1×106~約2×104M1sec1のオン速度定数でヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1~28のいずれか一項記載の変異体。前記変異体が、表面プラズモン共鳴で測定して、約01~約10000nM、必要に応じて約1~約6000nMの解離定数でカニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1~29のいずれか一項記載の変異体。前記変異体が、表面プラズモン共鳴で測定して、約15×104~約01sec1、必要に応じて約3×104~約01sec1のオフ速度定数でカニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1~30のいずれか一項記載の変異体。前記変異体が、表面プラズモン共鳴で測定して、約2×106~約1×104M1sec1、必要に応じて約1×106~約5×103M1sec1のオン速度定数でカニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む、請求項1~31のいずれか一項記載の変異体。請求項1~32のいずれか一項記載の抗SA変異体と、SA以外の標的抗原に特異的に結合する結合成分とを含んでなる多重特異性リガンド。前記可変ドメインが薬物にコンジュゲート化され、必要に応じて、選択された前記変異体がDOM7h1156、DOM7h1157、DOM7h1165、DOM7h1167、DOM7h1168、DOM7h1169、DOM7h1179、DOM7h1180、DOM7h1190、DOM7h1186、DOM7h1187またはDOM7h1188である、請求項1~32のいずれか一項記載の抗SA単一可変ドメイン変異体。請求項1~32のいずれか一項記載の変異体に融合されたポリペプチドまたはペプチド薬物を含んでなる融合タンパク質であって、必要に応じて、選択された前記変異体がDOM7h1156、DOM7h1157、DOM7h1165、DOM7h1167、DOM7h1168、DOM7h1169、DOM7h1179、DOM7h1180、DOM7h1190、DOM7h1186、DOM7h1187またはDOM7h1188である、融合タンパク質。前記融合タンパク質が変異体と薬物の間にリンカーを含む、請求項35記載の融合タンパク質。前記請求項のいずれか一項記載の変異体、融合タンパク質またはリガンドと、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤またはビヒクルとを含む組成物。請求項1~32のいずれか一項記載の変異体、または請求項33記載の多重特異性リガンド、または請求項35または36記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。DOM7h1156、DOM7h1157、DOM7h1165、DOM7h1167、DOM7h1168、DOM7h1169、DOM7h1179、DOM7h1180、DOM7h1190、DOM7h1186、DOM7h1187もしくはDOM7h1188のヌクレオチド配列から選択されたDOM7h11変異体のヌクレオチド配列、または選択された前記配列に対して少なくとも80同一であるヌクレオチド配列を含む核酸。請求項38または39記載の核酸を含むベクター。請求項40記載のベクターを含む単離された宿主細胞。少なくとも1回量の請求項1~32のいずれか一項記載の変異体を患者に投与することを含んでなる、患者の疾患もしくは障害の治療または予防方法。本明細書では、本発明は、明確かつ簡潔な明細書を記載することができるように、実施形態に関連して、説明されている。実施形態は、本発明から逸脱することなく、さまざまに組み合わせたり、分離したりできることが意図されており、また、そのように理解されるべきである。他に定義がない限り、本明細書中で用いるすべての技術用語および科学用語は、当業者が一般に理解しているものと同じ意味を有する。分子遺伝学的および生化学的方法ColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNYおよびAusubeletalShortProtocolsinMolecularBiology第4版JohnWileySonsIncを参照のことならびに化学的方法については標準的な技術が使用される。本明細書中で用いる用語腫瘍壊死因子受容体1のアンタゴニストまたは抗TNFR1アンタゴニストまたは同様の用語は、TNFR1に結合して、TNFR1の機能を阻害することができる物質を指す。例えば、TNFR1のアンタゴニストは、TNFαのTNFR1への結合を阻害すること、およびまたはTNFR1により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能である。したがって、TNFR1が介在するプロセスおよび細胞応答は、TNFR1のアンタゴニストを用いて抑制することができる。患者とは、任意の動物、例えば哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、マウス、ヒト、ウサギ、ラット、イヌ、ネコまたはブタである。一実施形態では、患者がヒトである。本明細書中で用いるペプチドとは、ペプチド結合によって一緒に連結された約2~約50アミノ酸を指す。本明細書中で用いるポリペプチドとは、ペプチド結合によって一緒に連結された、少なくとも約50アミノ酸を指す。ポリペプチドは一般的に三次構造を有し、機能性ドメインに折りたたまれる。本明細書中で用いる抗体とは、IgG、IgM、IgA、IgDもしくはIgE、またはフラグメント2、Fv、ジスルフィド結合したFv、scFv、閉鎖立体配座の多重特異性抗体、ジスルフィド結合したscFv、ダイアボディなどを指し、天然で抗体を産生するどの種に由来するか、または組換えDNA技術によって作製されるか、または血清、B細胞、ハイブリドーマ、トランスフェクトーマ、酵母もしくは細菌から単離されるかどうかを問わない。本明細書中で用いる抗体フォーマットとは、1つ以上の抗体可変ドメインが抗原に対する結合特異性をポリペプチド構造に付与するように組み込まれ得る、任意の適切なポリペプチド構造を指す。さまざまな適切な抗体フォーマットが当技術分野で知られており、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、一本鎖抗体、二重特異性抗体、抗体重鎖、抗体軽鎖、抗体重鎖およびまたは軽鎖のホモ二量体およびヘテロ二量体、前述のいずれかの抗原結合フラグメント、ジスルフィド結合Fv、Fabフラグメント、Fabフラグメント、F2フラグメント、単一抗体可変ドメイン、および前述のいずれかの改変型などである。用語免疫グロブリン単一可変ドメインとは、異なるV領域またはドメインから独立して、抗原またはエピトープに特異的に結合する抗体可変ドメインを指す。免疫グロブリン単一可変ドメインは、他の可変領域または可変ドメインと共にフォーマットで存在することができるが、その場合、他の領域またはドメインは単一免疫グロブリン可変ドメインによる抗原結合にとって必要とされない。ドメイン抗体またはdAbは、本明細書中で用いる免疫グロブリン単一可変ドメインという用語と同じである。単一免疫グロブリン可変ドメインは、本明細書中で用いる免疫グロブリン単一可変ドメインという用語と同じである。単一抗体可変ドメインまたは抗体単一可変ドメインは、本明細書中で用いる免疫グロブリン単一可変ドメインという用語と同じである。免疫グロブリン単一可変ドメインは、一実施形態では、ヒト抗体の可変ドメインであるが、げっ歯類、テンジクザメおよびラクダ科動物のVHHdAbなど、他の種に由来する単一抗体可変ドメインをも包含する。ラクダ科動物VHHは、もともと軽鎖を欠いている重鎖抗体を産生するラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコなどの種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドである。VHHはヒト化することができる。ドメインとは、タンパク質の残りの部分から独立した三次構造を有する、折りたたまれたタンパク質構造のことである。一般的に、ドメインはタンパク質の個別の機能的特性に関与しており、多くの場合、そのタンパク質の残部の機能およびまたはそのドメインの機能を失うことなく、他のタンパク質に付加、移動または転移することができる。単一抗体可変ドメインとは、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含む、折りたたまれたポリペプチドドメインである。したがって、それには、完全な抗体可変ドメインおよび改変された可変ドメイン、例えば1つ以上のループが抗体可変ドメインに特徴的でない配列によって置換されたもの、あるいはトランケートされているかまたはN末端もしくはC末端の延長部を有する抗体可変ドメイン、ならびに全長ドメインの少なくとも結合活性および特異性を保持する折りたたまれた可変ドメインのフラグメントが含まれる。系統とは、同じ親クローンに由来する免疫グロブリン単一可変ドメインの系列を指す。例えば、多くの変異体クローンを含む系統は、親または出発免疫グロブリン単一可変ドメインから、多様化、部位特異的突然変異誘発、エラープローンまたはドープライブラリーの作製によって作製することができる。適切には、結合分子は親和性成熟のプロセスで作製される。本発明では、PCTEP2010052008およびPCTEP2010052007に記載される抗SA免疫グロブリン単一可変ドメインであるDOM7h11について説明する。DOM7h1115は、本明細書に記載されるように、DOM7h11親クローンに由来するDOM7h11系統の一つである。本出願において、用語予防および予防するは、疾患または症状の誘導に先立って保護組成物を投与することを含む。治療および治療するは、疾患または症状の徴候が明らかになった後で保護組成物を投与することを含む。抑制または抑制するは、誘導事象の後で、しかし疾患または症状の臨床的出現の前に、該組成物を投与することを意味する。本明細書中で用いる用語用量は、一度に全部、または特定の時間間隔で2回以上、被験者に投与されるリガンドの量を意味する。例えば、用量は、1日、2日間、1週間、2週間、3週間、または1ヶ月以上にわたって被験者に投与されるリガンドの量を指すことができる。投与と投与の間隔は希望する任意の時間であり得る。用量に言及するときの用語薬学的に有効なとは、所望の効果を提供するのに十分な、リガンド、ドメインまたは医薬活性剤の量を意味する。有効である量は、個体の年齢および全身状態、特定の薬物または医薬活性剤などに応じて、被験者ごとに異なるだろう。したがって、すべての患者に適用できる正確な有効量を指定することが常に可能とは限らない。しかしながら、個々のケースにおける適切な有効用量は、ルーチンワーク的な実験を用いることにより、当業者が決定することができる。薬物動態の解析方法およびリガンドの半減期の測定方法は当業者によく知られている。詳細は、KennethAetalChemicalStabilityofPharmaceuticalsAHandbookforPharmacistsおよびPetersetalPharmacokineticanalysisAPracticalApproachに見いだすことができる。また、tαおよびtβ半減期、曲線下面積などの薬物動態パラメータについて記載しているPharmacokineticsMGibaldiDPerron発行MarcelDekker第2改訂版をも参照されたい。必要に応じて、本明細書中に引用されたすべての薬物動態パラメータおよび値は、ヒトの値であると解釈されるべきである。必要に応じて、本明細書中に引用されたすべての薬物動態パラメータおよび値は、マウスまたはラットまたはカニクイザルの値であると解釈されるべきである。半減期とAUCは、時間に対するリガンドの血清濃度の曲線から求めることができる。例えば、その曲線をモデル化するために、WinNonlin解析パッケージ、例えばバージョン51から入手可能を用いることができる。2コンパートメントモデルを使用する場合、第1相では、リガンドが、若干の排出を伴って、患者の体内に主に分布していく。第2相は、リガンドが全身にいきわたり、そしてリガンドが患者から消失されるにつれて血清濃度が低下していく時の相である。tα半減期は第1相の半減期であり、そしてtβ半減期は第2相の半減期である。かくして、一実施形態では、本発明との関連で、可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドは、15分またはそれ以上の範囲のtα半減期を有する。一実施形態では、その範囲の下端は30分、45分、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、10時間、11時間または12時間である。さらに、あるいはこれとは別に、本発明による可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドは、最大12時間までの範囲のtα半減期をもつだろう。一実施形態では、その範囲の上端は11、10、9、8、7、6または5時間である。適切な範囲の例は1~6時間、2~5時間または3~4時間である。一実施形態において、本発明は、25時間またはそれ以上の範囲のtβ半減期を有する本発明による可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドを提供する。一実施形態では、その範囲の下端は3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、10時間、11時間もしくは12時間である。さらに、あるいはこれとは別に、tβ半減期は最大で21または25日間である。一実施形態では、その範囲の上端は12時間、24時間、2日間、3日間、5日間、10日間、15日間、19日間、20日間、21日間または22日間である。例えば、本発明による可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドは12~60時間の範囲のtβ半減期をもつだろう。さらなる実施形態では、それは12~48時間の範囲である。さらに別の実施形態では、それは12~26時間の範囲である。2コンパートメントモデルに代わる手段として、当業者はノンコンパートメントモデルの使用に精通しており、このモデルを用いて終末半減期を求めることができる。例えば、この方法でその曲線をモデル化するために、WinNonlin解析パッケージ、例えばバージョン51から入手可能を使用することができる。この場合、一実施形態では、単一可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドは、少なくとも8時間、10時間、12時間、15時間、28時間、20時間、1日間、2日間、3日間、7日間、14日間、15日間、16日間、17日間、18日間、19日間、20日間、21日間、22日間、23日間、24日間または25日間の終末半減期を有する。一実施形態では、この範囲の上端は24時間、48時間、60時間、72時間または120時間である。例えば、終末半減期は、例えばヒトでは、8~60時間、8~48時間または12~120時間である。さらに、あるいは上記の基準とは別に、本発明による可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドは、1mgminmlまたはそれ以上の範囲のAUC値を有する。一実施形態では、その範囲の下端は5、10、15、20、30、100、200または300mgminmlである。さらに、あるいは別に、本発明による可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドは、最大600mgminmlまでの範囲のAUCを有する。一実施形態では、その範囲の上端は500、400、300、200、150、100、75または50mgminmlである。有利には、可変ドメイン、融合タンパク質またはリガンドは、以下からなる群より選択される範囲のAUCをもつだろう:15~150mgminml、15~100mgminml、15~75mgminml、および15~50mgminml。表面プラズモン共鳴:競合アッセイを用いて、ヒト血清アルブミンなどの特定の抗原またはエピトープが、本明細書に記載の血清アルブミン結合リガンドへの結合について、カニクイザル血清アルブミンなどの別の抗原またはエピトープと競合するかどうかを調べることができる。同様に、競合アッセイを用いて、dAbなどの第1のリガンドが、標的抗原またはエピトープへの結合について、dAbなどの第2のリガンドと競合するかどうかを調べることができる。本明細書中で用いる用語競合するとは、2つ以上の分子間の特異的結合相互作用をいくらかでも妨げることができる分子、化合物、好ましくはタンパク質、などの物質を指す。語句競合的に阻害しないとは、物質、例えば分子、化合物、好ましくはタンパク質が、2つ以上の分子間の特異的結合相互作用を測定可能な程度または有意な程度には妨げないことを意味する。2つ以上の分子間の特異的結合相互作用には、好ましくは、単一可変ドメインとそのコグネイトのパートナーまたは標的との特異的結合相互作用が含まれる。妨害または競合する分子は、別の単一可変ドメインであってもよいし、それはコグネイトのパートナーまたは標的と構造的およびまたは機能的に類似する分子であってもよい。用語結合成分とは、異なるエピトープまたは抗原結合ドメインから独立して、ある抗原またはエピトープに特異的に結合するドメインを指す。結合成分はドメイン抗体であってもよいし、天然のリガンド以外のリガンドに結合する非免疫グロブリンタンパク質スカフォールド、例えば、CTLA4、リポカリン、SpA、アドネクチン、アフィボディ、アビマー、GroE1、トランスフェリン、GroESおよびフィブロネクチンからなる群より選択されるスカフォールド、の誘導体であるドメインであってもよい。タンパク質スカフォールドの例、およびレパートリーから抗原またはエピトープに特異的な結合ドメインを選択するための方法を開示する、WO2008096158を参照されたい。WO2008096158のこれらの具体的な開示は、本発明で使用するために本明細書中に明確に記載されているかのように、参照により本明細書に明示的に組み入れられ、そしてそのような開示のどの部分も本明細書中の1つ以上の請求項に組み入れることができるものとする。一態様において、本発明は、DOM7h11の抗血清アルブミン免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体を提供し、ここで該変異体は、DOM7h11に比較して、位置22、42または91に少なくとも1つの変異を含む。一実施形態では、前記変異体は、DOM7h1115に比較して、位置22、42または91に少なくとも1つの変異を含む。適切には、本発明による変異体は、DOM7h11またはDOM7h1115のアミノ酸配列に比較して、1、2、3または最大8つの変化を有する。別の態様において、本発明は、DOM7h11の抗血清アルブミン免疫グロブリン単一可変ドメイン変異体を提供し、ここで該変異体は、DOM7h11に比較して、フレームワーク領域3または相補性決定領域3に少なくとも1つの変異を含み、かつ該変異体は、DOM7h11のアミノ酸配列に比較して、1、2、3または最大8つの変化を有する。一実施形態では、前記変異体は、DOM7h1115に比較して、これらの位置に少なくとも1つの変異を含む。一実施形態において、これらの位置の任意の位置での変異は、本明細書中の実施例の項に例示された残基への変異である。別の実施形態では、変異は例示された残基の保存的アミノ酸置換に対するものである。保存的アミノ酸置換は当業者によく知られており、以下の表に例示される:保存的アミノ酸置換はまた、非天然のアミノ酸残基、例えばペプチドミメティック、および化学的ペプチド合成により組み込むことができるアミノ酸部分の他の反転または逆転形態に関係してもよい。熱安定性、つまり熱力学的安定性は、昇温にさらされたときに可逆的なアンフォールディングに抵抗する物質タンパク質の性質である。熱安定性熱力学的安定性の測定は、示差走査熱量測定を用いて行うことができる。DSCは、サンプルと基準物質の温度を高めるのに必要なエネルギー量または熱量の差を温度の関数として測定する熱分析の手法である。それはタンパク質の広範囲の熱転移を研究するために使用することができ、また、融解温度ならびに熱力学的パラメータを測定するのに有用である。簡単に説明すると、タンパク質を180°C時の一定速度で加熱し、熱変性に関連づけられる検出可能な熱容量の変化を測定する。転移中間点が測定され、これはタンパク質の50がその天然のコンフォメーションをとり、残りの50が変性されるときの温度として説明される。ここでは、DSCにより、検査したタンパク質のほとんどが完全にはリフォールディングしないため、見かけの転移中間点が測定される。TmまたはappTmが高ければ高いほど、その分子は安定である。Originv70383のようなソフトウェアパッケージを用いて、Tm値を得ることができる。本発明の一実施形態において、改善された熱安定性とは、親分子と比べて増加したまたはより高いTmであることを意味する。適切には、親分子はDOM7h11またはDOM7h1115である。適切には、改善された熱安定性は、親分子のTm値より高いTm値を意味する。適切には、改善された熱安定性は少なくとも54°Cまたは少なくとも55°Cを意味する。一実施形態では、改善された熱安定性は少なくとも57°Cを意味する。別の実施形態では、改善された熱安定性は55°Cより高いまたは57°Cより高いことを意味する。好ましくは、Tmは本明細書に記載されるようにDSCを用いて測定される。免疫グロブリン単一可変ドメインの改善された熱安定性は、それが免疫グロブリン単一可変ドメインまたはタンパク質の安定性の向上をもたらすので望ましいことである。重要なことは、向上した熱安定性によって、その改良型の免疫グロブリン単一可変ドメインを含む製品が生産プロセス全体にわたる良好な安定性およびまたは適切な安定性貯蔵寿命をもつように開発できるタンパク質の可能性の尺度が提供されることである。改善された熱安定性およびそれを測定するための典型的な方法は、例えば、vanderSlootetalProteinEngineeringDesignandSelection2004vol17no9p673680およびDemarestetalJMolBiol20043354148に記載されている。改善されたまたはより高い熱安定性の分子基盤は、非熱安定性または低熱安定性の変異体で見られるよりも多い特定数の分子内水素およびイオン相互作用であり得る。改善された熱安定性をもつことが示されている免疫グロブリン単一可変ドメインはまた、直接的な結果として、宿主細胞発現系からのより高い初期発現収量を与え得る。その理由は、改善された熱安定性がそれらのより多数の分子内相互作用に起因し、ひいては翻訳中または膜貫通輸送中のより低レベルのミスフォールディングおよびまたはより速いフォールディング速度につながる可能性があるからである。さらに、改善された熱安定性を有する免疫グロブリン単一可変ドメインのようなタンパク質は、そのタンパク質が、熱安定性の低い免疫グロブリン単一可変ドメインに比べて、温度と圧力の上昇ならびに極端なpHおよび塩条件といった下流プロセスに対してより耐性である可能性が高いので、全体的に優れた開発可能性を示すことができる。一実施形態において、本発明による免疫グロブリン単一可変ドメインは、二重もしくは多重特異性の合成物または融合ポリペプチドを作製するために使用することができる。その結果、本発明による免疫グロブリン単一可変ドメインは、より大きい構築物中で使用され得る。適切な構築物には、抗SA免疫グロブリン単一可変ドメインとモノクローナル抗体、NCE、タンパク質またはポリペプチドなどとの融合タンパク質が含まれる。こうして、本発明による抗SA免疫グロブリン単一可変ドメインを用いて、多重特異性分子、例えば、dAbdAb、mAbdAb、またはポリペプチドdAb構築物などの二重特異性分子を構築することができる。これらの構築物では、抗SAdAb成分が血清アルブミンへの結合を介して半減期の延長をもたらす。適切なmAbdAbおよびこれらの構築物の作製方法は、例えば、WO2009068649に記載されている。向上した、改善された、または増大した熱安定性をもつ抗SA免疫グロブリン単一可変ドメインを選択することは、融合タンパク質へと作製される分子の出発点として望ましいと考えられる。それは、単一分子が二重特異性構築物へと連結された時点で、それらは熱安定性の特性を失う可能性があるからである。したがって、より高い熱安定性をもつ成分から出発することによって、熱安定性のいかなる消失をも考慮することができるようになり、その結果、二重特異性構築物が作製された後で、全体的に有用な熱安定性が維持されるだろう。一実施形態において、前記変異体は次の動態特性の1つ以上を含む:変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、01~10000nM、必要に応じて1~6000nMの解離定数で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、15×104~01sec1、必要に応じて3×104~01sec1のオフ速度定数で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、2×106~1×104M1sec1、必要に応じて1×106~2×104M1sec1のオン速度定数で、ヒトSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、01~10000nM、必要に応じて1~6000nMの解離定数で、カニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、15×104~01sec1、必要に応じて3×104~01sec1のオフ速度定数で、カニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、2×106~1×104M1sec1、必要に応じて1×106~5×103M1sec1のオン速度定数で、カニクイザルSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、1~10000nM、必要に応じて20~6000nMの解離定数で、ラットSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、2×103~015sec1、必要に応じて9×103~014sec1のオフ速度定数で、ラットSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、2×106~1×104M1sec1、必要に応じて1×106~3×104M1sec1のオン速度定数で、ラットSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、1~10000nMの解離定数で、マウスSAに特異的に結合する結合部位を含む;変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、2×103~015sec1のオフ速度定数で、マウスSAに特異的に結合する結合部位を含む;およびまたは変異体は、表面プラズモン共鳴で測定して、2×106~1×104M1sec1、必要に応じて2×106~15×104M1sec1のオン速度定数で、マウスSAに特異的に結合する結合部位を含む。必要に応じて、変異体は以下を有する:Iとに記載のKD、とに記載のKd、およびとに記載のKa;またはIIとに記載のKD、とに記載のKd、およびとに記載のKa;またはIIIとに記載のKD、とに記載のKd、およびとに記載のKa;またはIVIおよびIIに記載の動態;またはVIおよびIIIに記載の動態;またはVII、IIおよびIIIに記載の動態。本発明はまた、本発明の上記態様または実施形態のいずれかの変異体を含むリガンドを提供する。例えば、リガンドは二重特異性リガンドであり得る。一態様では、本発明は、本発明の上記態様または実施形態のいずれかの抗SA変異体と、SA以外の標的抗原に特異的に結合する結合成分とを含む、多重特異性リガンドを提供する。その結合成分は標的に特異的に結合するどのような結合成分であってもよく、例えば、その成分は抗体、抗体フラグメント、scFv、Fab、dAb、または非免疫グロブリンタンパク質スカフォールドを含む結合成分である。そのような成分はWO2008096158に詳しく開示されている。非免疫グロブリンスカフォールドの例は、CTLA4、リポカリン、ブドウ球菌プロテインA、アフィボディ、アビマー、アドネクチン、GroELおよびフィブロネクチンである。一実施形態では、抗標的結合成分と抗SA単一変異体との間にリンカーが配置され、そのリンカーはアミノ酸配列AST、必要に応じてASTSGPSを含む。代替リンカーはWO2007085814に記載されており、また、WO2008096158に記載されている。多重特異性リガンドの一実施形態において、標的抗原はポリペプチド、タンパク質もしくは核酸、またはその一部とすることができ、天然に存在しても合成のものでもよい。これに関して、本発明のリガンドは、その標的抗原に結合してアンタゴニストまたはアゴニストとして作用することができる。当業者であれば、その選択肢が大規模で多様であることを理解するであろう。それらは、例えば、ヒトもしくは動物のタンパク質、サイトカイン、サイトカイン受容体、酵素、酵素の補因子、またはDNA結合タンパク質であり得る。適切なサイトカインおよび増殖因子としては以下が挙げられるが、好ましくはこれらに限定されるものではない:ApoE、ApoSAA、BDNF、カルジオトロフィン1、EGF、EGF受容体、ENA78、エオタキシン、エオタキシン2、エクソダス2、EpoR、酸性FGF、塩基性FGF、線維芽細胞増殖因子10、FLT3リガンド、フラクタルカイン、GDNF、GCSF、GMCSF、GFβ1、インスリン、IFNγ、IGFI、IGFII、IL1α、IL1β、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL8、IL9、IL10、IL11、IL12、IL13、IL15、IL16、IL17、IL18、インヒビンα、インヒビンβ、IP10、ケラチノサイト成長因子2、KGF、レプチン、LIF、リンホタクチン、ミュラー管抑制因子、単球コロニー抑制因子、単球誘引タンパク質、MCSF、MDC、MDC、MCP1、MCP2、MCP3、MCP4、MDC、MDC、MIG、MIP1α、MIP1β、MIP3α、MIP3β、MIP4、骨髄系前駆細胞抑制因子1、NAP2、ニュールツリン、神経成長因子、βNGF、NT3、NT4、オンコスタチンM、PDGFAA、PDGFAB、PDGFBB、PF4、RANTES、SDF1α、SDF1β、SCF、SCGF、幹細胞因子、TARC、TGFα、TGFβ、TGFβ2、TGFβ3、腫瘍壊死因子、TNFα、TNFβ、TNF受容体I、TNF受容体II、TNIL1、TPO、VEGF、VEGF受容体1、VEGF受容体2、VEGF受容体3、GCP2、GROMGSA、GROβ、GROγ、HCC1、1309、HER1、HER2、HER3およびHER4、CD4、ヒトケモカイン受容体CXCR4またはCCR5、C型肝炎ウイルス由来の非構造タンパク質タイプ3、TNFα、IgE、IFNγ、MMP12、CEA、Hピロリ、TB、インフルエンザ、E型肝炎、MMP12、特定の細胞に過剰発現される内在化性受容体、例えば、上皮成長因子受容体、腫瘍細胞上のErBb2受容体、内在化性細胞受容体、LDL受容体、FGF2受容体、ErbB2受容体、トランスフェリン受容体、PDGF受容体、VEGF受容体、PsmAr、細胞外マトリックスタンパク質、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、α1アンチトリプシン、組織因子プロテアーゼ阻害剤、PDK1、GSK1、Bad、カスパーゼ9、フォークヘッド、ヘリコバクターピロリの抗原、ヒト型結核菌の抗原、ならびにインフルエンザウイルスの抗原。このリストは決して網羅的なものでないことが理解されよう。一実施形態において、多重特異性リガンドは本発明の抗SAdAb変異体と抗TNFR1結合成分を含む。場合により、前記リガンドは、受容体の架橋の可能性を減らすために、ただ1つの抗TNFR1結合成分を有する。一実施形態において、抗TNFR1結合成分は、WO2008149148に開示されるDOM1h131206である。一実施形態において、抗TNFR1結合成分またはdAbは、同時係属中の出願PCTEP2010052005に開示されるような成分またはdAbであり、その開示内容は参照により本明細書に組み入れられる。一実施形態では、抗TNFR1結合成分は、DOM1h574156、DOM1h57472、DOM1h574109、DOM1h574138、DOM1h574162もしくはDOM1h574180のアミノ酸配列、または表3に開示される任意の抗TNFR1dAbのアミノ酸配列に対して少なくとも95同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、本発明のリガンドは、1つ以上のポリペプチドに直接または間接的に融合された本発明の変異体を含む融合タンパク質である。例えば、その融合タンパク質は、WO2005118642に開示されるような薬物融合体であってよく、それは本発明の変異体とそのPCT出願に明示されるポリペプチド薬物とを含む。本明細書中で用いる薬物とは、個体の生物学的標的分子に結合するおよびまたは該標的分子の機能を変更することによって有益な、治療上のまたは診断上の効果を生み出すために、個体に投与することができる任意の化合物を指す。標的分子は個体のゲノムによってコードされる内因性の標的分子であってもよいし、病原体のゲノムによってコードされる外因性の標的分子であってもよい。本発明の抗SAdAb変異体を含む融合タンパク質およびコンジュゲートで使用するための適切な薬物は、WO2005118642およびWO2006059106に開示されている。例えば、その薬物はグルカゴン様ペプチド1もしくはその変異体、インターフェロンα2bもしくはその変異体、またはエキセンディン4もしくはその変異体であり得る。一実施形態において、本発明は、WO2005118642およびWO2006059106に定義されかつ開示された薬物コンジュゲートを提供し、該コンジュゲートは本発明の変異体を含む。一例では、薬物が変異体に共有結合で結合される。これとは別に、一例では、薬物が変異体に非共有結合で結合または会合される。薬物は変異体と直接または間接的にの非共有結合を介して共有結合または非共有結合で結合され得る。相補的結合パートナーを用いる場合には、結合パートナーの一方を薬物に直接または適切なリンカー成分を介して共有結合で結合させることができ、また、その相補的結合パートナーを変異体に直接または適切なリンカー成分を介して共有結合で結合させることができる。薬物がポリペプチドまたはペプチドである場合、その薬物成分を融合タンパク質とすることができ、その場合にポリペプチドまたはペプチド薬物およびポリペプチド結合成分は連続したポリペプチド鎖の個別の部分である。本明細書に記載されるように、ポリペプチド結合成分とポリペプチド薬物成分はペプチド結合を介して相互に直接結合されてもよいし、あるいは適切なアミノ酸またはペプチドもしくはポリペプチドリンカーを介して連結されてもよい。血清アルブミンに特異的に結合する、本発明の1つの単一可変ドメイン変異体を含むリガンド、または2つ以上の単一可変ドメインを含むリガンドは、以下から選択される1つ以上の成分をさらに含むことができるが、好ましくはそれらに限定されるものではない:標識、タグ、追加の単一可変ドメイン、dAb、抗体、抗体フラグメント、マーカーおよび薬物。これらの成分の1つ以上は、単一可変ドメインを含むリガンドのCOOH末端もしくはN末端に、またはN末端とCOOH末端の両方に位置づけることができる。これらの成分の1つ以上は、1つの単一可変ドメインを含むリガンドまたは2つ以上の単一可変ドメインを含むリガンドの、血清アルブミンに特異的に結合する単一可変ドメインのCOOH末端もしくはN末端、またはN末端とCOOH末端の両方に位置づけることができる。これらの末端の一方または両方に位置づけられるタグの非限定的な例としては、HA、hisまたはmycタグが挙げられる。1つ以上のタグ、標識および薬物を含めて、これらの成分は、血清アルブミンに結合する、1つの単一可変ドメインを含むリガンドまたは2つ以上の単一可変ドメインを含むリガンドに、上で説明したように直接またはリンカーを介して、結合させることができる。本発明の一態様は、融合産物、例えば、融合タンパク質、またはペプチドとの融合体、またはNCE薬物とのコンジュゲートを提供し、前記融合産物は本発明による上記のいずれかの変異体に融合されたまたはコンジュゲート化されたポリペプチド薬物を含む。本発明は、本発明のいずれかの態様の変異体、融合タンパク質、コンジュゲートまたはリガンドと、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤またはビヒクルとを含む組成物を提供する。本明細書にはまた、本明細書に記載の変異体、融合タンパク質、コンジュゲートまたはリガンドのいずれかをコードする単離された核酸、例えば、血清アルブミンに特異的に結合する、またはヒト血清アルブミンと少なくとも1種の非ヒト血清アルブミンの両方に特異的に結合する、本発明の1つの単一可変ドメイン変異体を含むリガンドもしくは2つ以上の単一可変ドメイン変異体を含むリガンドまたはその機能的に活性なフラグメントをコードする単離された核酸が包含される。さらに、本明細書には、ベクターおよびまたは発現ベクター、該ベクターを含む宿主細胞、例えば、ベクターで形質転換された植物もしくは動物細胞およびまたは細胞株、前記ベクターによってコードされる、血清アルブミンに特異的に結合する、1つの単一可変ドメイン変異体または2つ以上の単一可変ドメイン変異体を含む1つ以上の変異体、融合タンパク質もしくはリガンド、またはそのフラグメントを発現およびまたは産生させる方法を包含し、その方法は、場合によって、1つ以上の変異体、融合タンパク質もしくはリガンド、またはそのフラグメントが発現されるように宿主細胞を培養し、任意で、血清アルブミンに特異的に結合する、1つの単一可変ドメイン変異体または2つ以上の単一可変ドメイン変異体を含むリガンドを宿主細胞の培養培地から回収することを含む。また、本明細書に記載のリガンドを、血清アルブミン、およびまたは血清アルブミン以外の1つ以上の標的と接触させる方法が包含され、そして前記接触がinvitroである方法だけでなく、本明細書に記載の変異体、融合タンパク質またはリガンドのいずれかを個々の宿主動物または細胞にinvivoおよびまたはexvivoで投与する方法も包含される。好ましくは、血清アルブミンおよびまたは非ヒト血清アルブミンに対する単一可変ドメインと、血清アルブミン以外の1つ以上の標的に対する1つ以上のドメインとを含む、本明細書に記載のリガンドを投与することは、その抗標的リガンドの半減期を高めるだろう。前記変異体、融合タンパク質もしくは単一ドメイン含有リガンドまたはそのフラグメントをコードする核酸分子は、本明細書において企図される。前記核酸分子をコードするベクターは本明細書中で企図され、これらの発現ベクターの1つ以上を含む細胞株または生物に由来する宿主細胞も同様に企図される。また、上記の核酸、べクターおよび宿主細胞のいずれかを含むが、好ましくはそれらに限定されない、任意の変異体、融合タンパク質またはリガンドの生産方法も企図される。本発明の一態様は、本発明による変異体、または本発明の多重特異性リガンド、または本発明の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本発明の一態様は、DOM7h1156、DOM7h1157、DOM7h1165、DOM7h1167、DOM7h1168、DOM7h1169、DOM7h1179およびDOM7h1180から選択されるDOM7h11変異体のヌクレオチド配列、または選択された前記配列に対して少なくとも70、75、80、85、90、95、96、97、98または99同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本発明の一態様は、本発明の核酸を含むベクターを提供する。本発明の一態様は、該ベクターを含む単離された宿主細胞を提供する。ライブラリーベクター系、単一可変ドメインの組み合わせ、二重特異性リガンドの特性解析、二重特異性リガンドの構造、二重特異性リガンドの構築に用いるスカフォールド、抗血清アルブミンdAbおよび多重特異性リガンドおよび半減期増強リガンドの使用、ならびに抗血清アルブミンdAbを含む組成物および製剤の詳細については、WO2008096158を参照されたい。これらの開示内容は、本発明の変異体、リガンド、融合タンパク質、コンジュゲート、核酸、ベクター、宿主および組成物に関する指針を含めて、本発明で使用するための指針を与えるために、参照により本明細書に組み入れられる。本発明はDOM7h11変異体に関連して説明されているが、他の抗SA免疫グロブリン単一可変ドメイン系統への同様の変異が想定され得ることが理解されよう。上記表中でmyctag分子が示されている場合、これは実施例におけるPK研究で用いたものである。myctagのない配列が示されている場合は、実施例におけるPK研究はmyctagを付けた物質では行っていない。すなわち、記載したタグ付けされていない構築物で研究を行った。例証実験の項でのすべての番号付けはKabatに従うものであるColumbiaUniversitySequencesofproteinsofimmunologicalinterestedn5。DOM7h11変異体の誘導について説明する。Vk親和性成熟選択:HSAおよびRSA抗原はSigma社から入手した、凍結乾燥粉末、カタログ番号はそれぞれA3782およびA6414。上記2種の抗原のビオチン化産物は、EZLinkSulfoNHSSSBiotinを用いることにより作製した。遊離のビオチン試薬の除去は、サンプルをPD10脱塩カラムに2回通過させ、その後1000倍過剰量のPBSに対して4°Cで一晩透析することによって行った。得られた産物を質量分析で検査したところ、分子あたり1~2個のビオチンが観察された。親和性成熟ライブラリー:エラープローンライブラリーとCDRライブラリーは両方とも、DOM7h11およびDOM7h14親dAbを用いて作製した。CDRライブラリーをpDOM4ベクター中に作製し、そしてエラープローンライブラリーをpDOM33ベクター中に作製した。ベクターpDOM4は、遺伝子IIIシグナルペプチド配列が酵母糖脂質アンカー型表面タンパク質シグナルペプチドに置換されている、Fdファージベクターの誘導体である。また、それはリーダー配列と遺伝子IIIの間にcmycタグをも含み、これにより遺伝子IIIがインフレームに戻される。このリーダー配列はファージディスプレイベクター内でも他の原核生物発現ベクター内でもよく機能し、広く一般的に使用することができる。pDOM33は、dAbファージ融合体をタンパク質分解酵素トリプシンに対して耐性にする、cmycタグが除去されたpDOM4ベクターの改変型である。これは、タンパク質分解酵素に比較的安定しているdAbを選択するためのファージ選択におけるトリプシンの使用を可能にする。エラープローン成熟ライブラリーの場合は、成熟させるdAbをコードするプラスミドDNAを、GENEMORPHIIRANDOMMUTAGENESISKITを用いて、PCRにより増幅した。その産物をSalIとNotIで消化して、切断したファージベクターpDOM33とのライゲーション反応に使用した。CDRライブラリーの場合は、NNKまたはNNSコドンを含む縮重オリゴヌクレオチドを用いてPCR反応を行い、親和性成熟させるdAb中の必要な位置を多様化した。次にアセンブリPCRを用いて、多様化された完全長のインサートを作製した。そのインサートをSalIとNotIで消化して、複数残基の変異導入のためのpDOM4および単一残基の変異導入のためのpDOM5とのライゲーション反応に使用した。pDOM5ベクターは、タンパク質の発現がLacZプロモーターによって駆動される、pUC119ベースの発現ベクターである。GAS1リーダー配列が、分離された可溶性dAbを大腸菌のペリプラズムおよび培養上清に確実に分泌させる。dAbはこのベクター内のSalINotIにクローニングされ、それによりdAbのC末端にmycタグが付加される。SalIとNotIを用いるこのプロトコルは、結果的にN末端にSTアミノ酸配列を含めることになる。その後、いずれかの方法により生成されたライゲーション産物を用いて、大腸菌TB1株をエレクトロポレーションにより形質転換し、形質転換された細胞を15μgmlテトラサイクリン含有2×TY寒天上にプレートすると、5×107クローンを上回るライブラリーサイズが得られた。エラープローンライブラリーは次の平均変異率およびサイズを有していた:DOM7h11、サイズ:61×108;DOM7h14、サイズ:54×108。各CDRライブラリーは4アミノ酸の多様性を有する。2つのライブラリーがCDR1とCDR3のそれぞれのために作製され、そして1つのライブラリーがCDR2のために作製された。各ライブラリー内で多様化された位置は次のとおりである:選択戦略3つのファージ選択戦略がVκAlbudAbの親和性成熟のために採用された。1HSAのみに対する選択:HSAに対する選択を3ラウンド実施した。エラープローンライブラリーと各CDRライブラリーはすべてのラウンドで個々のプールとして選択された。第1ラウンドの選択は、1mgmlでイムノチューブに受動的にコーティングしたHSAに対して行った。ラウンド2は100nMHSAに対して実施し、ラウンド3は10nMまたは20もしくは100nMのHSAに対して、両方とも可溶性選択として実施し、続いて第4ラウンドの選択をエラープローンライブラリーで15nMHSAに対して可溶性選択として実施した。エラープローンライブラリーは01MグリシンpH20を用いて溶出してから、1MTrispH80で中和した。CDRライブラリーは1mgmlトリプシンで溶出してから、対数期TG1細胞に感染させた。第3ラウンドの各選択物はスクリーニングのためにpDOM5にサブクローニングした。可溶性選択ではビオチン化HSAを使用した。2HSAに対するトリプシン選択:親クローンと比べて増加したプロテアーゼ耐性をもち、かつ潜在的に改善された生物物理学的特性をもつdAbを選択するために、ファージ選択においてトリプシンを使用した。4ラウンドの選択をHSAに対して実施した。エラープローンライブラリーの第1ラウンドの選択は、トリプシンを用いることなく、1mgmlで受動的にコーティングされたHSAに対して実施した;第2ラウンドは、20μgmlトリプシンを用いて、1mgmlで受動的にコーティングされたHSAに対して37°Cで1時間実施した;第3ラウンドの選択は、20μgmlまたは100μgmlトリプシンを用いて、100nMHSAに対して、ビオチン化HSAを用いる可溶性選択として、37°Cで1時間実施した。最終ラウンドの選択は、100μgmlトリプシンを用いて、100nMHSAに対して、ビオチン化HSAを用いる可溶性選択として、37°Cで一晩実施した。3HSAおよびRSAに対するクロスオーバー選択:第1ラウンドの選択は、1mgmlで受動的にコーティングされたHSAまたは1μMHSAに対して実施し、その後さらに3ラウンドの可溶性選択を、ビオチン化RSAに対して、ラウンド1では1μM、ラウンド2では100nM、そしてラウンド3では20nM、10nMまたは1nMの濃度で実施した。スクリーニング戦略および親和性判別:それぞれの場合に選択後、適切なラウンドの選択から得られたファージDNAのプールをQIAfiltermidiprepキットにより調製し、そのDNAを制限酵素Sal1およびNot1で消化し、そして濃縮されたV遺伝子を、mycタグ付きdAbを発現する可溶性発現ベクターpDOM5の対応する部位にライゲートする。ライゲートされたDNAを用いて大腸菌HB2151細胞を電気的に形質転換し、続いて抗生物質カルベニシリンを含む寒天プレート上で一晩増殖させる。得られたコロニーを抗原結合について個別に評価する。それぞれの場合に、少なくとも96のクローンをHSA、CSA、MSAおよびRSAへの結合についてBIAcoreで試験した。MSA抗原はSigma社から入手し、凍結乾燥粉末、カタログ番号A3559、CSAはprometicblue樹脂を用いてカニクイザル血清アルブミンから精製した。可溶性dAbフラグメントは96ウェルプレートでONEX培養培地中の細菌培養により37°Cで一晩産生させた。可溶性dAbを含む培養上清を遠心分離して、高密度HSA、CSA、MSAおよびRSACM5チップへの結合についてBIAcoreで分析した。クローンは、オフ速度スクリーニングにより、これらすべての動物種の血清アルブミンに結合することが判明した。これらのクローンの配列を決定して、ユニークなdAb配列を明らかにした。選択されたクローンの親に対する最低の同一性は972であった。選択されたクローンの親に対する最低の同一性は963であった。ユニークなdAbは、25L振とうフラスコ内でOnex培地にて30°C、250rpmで48時間にわたり細菌上清として発現させた。dAbは、プロテインLアガロースへの吸着とその後の10mMグリシンpH20を用いた溶出によって培養培地から精製した。BIAcoreによるHSA、CSA、MSAおよびRSAへの結合は、1μM、500nMおよび50nMの3つの濃度の精製タンパク質を用いて確認した。各血清アルブミンへのAlbudAbの結合親和性を調べるために、精製dAbを5000nM~39nMのアルブミン濃度範囲にわたってBIAcoreで分析した。DOM7h14から誘導されたすべての変異体は、マウス、ラット、ヒトおよびカニクイザルの血清アルブミンに対して交差反応性である。DOM7h1410は、親に比較して、ラット、カニクイザルおよびヒト血清アルブミンに対する親和性が改善している。DOM7h1428は、RSAに対する親和性が改善している。DOM7h1436は、RSA、CSAおよびMSAに対する親和性が改善している。DOM7h113は、CSAとHSAに対する親和性が改善している。DOM7h1112は、RSA、MSAおよびHSAに対する親和性が改善している。DOM7h1115は、RSA、MSA、CSAおよびHSAに対する親和性が改善している。DOM7h1118とDOM7h1119は、RSA、MSAおよびHSAに対する親和性が改善している。主要なDOM7h11系統クローンの起源DOM7h113:CDR2ライブラリーを用いてHSAに対して実施された親和性成熟から、ラウンド3出力10nMHSAで得られた。DOM7h1112:エラープローンライブラリーを用いてHSAに対して実施された親和性成熟から、100μgmlトリプシン存在下にラウンド3出力で得られた。DOM7h1115:CDR2ライブラリーを用いて、ラウンド1としてHSAに対して、続いて追加の3ラウンドの選択としてRSAに対して実施されたクロスオーバー選択から、1nMRSAによるラウンド3選択で得られた。DOM7h1118:エラープローンライブラリーを用いて、ラウンド1としてHSAに対して、続いて追加の3ラウンドの選択としてRSAに対して実施されたクロスオーバー選択から、20nMRSAのラウンド3出力で得られた。DOM7h1119:エラープローンライブラリーを用いて、ラウンド1としてHSAに対して、続いて追加の3ラウンドの選択としてRSAに対して実施されたクロスオーバー選択から、5nMRSAのラウンド3出力で得られた。主要なDOM7h14系統クローンの起源DOM7h1419:エラープローンライブラリーを用いてHSAに対して実施された親和性成熟から、100μgmlトリプシン存在下にラウンド3出力で得られた。DOM7h1410、DOM7h1418、DOM7h1428、DOM7h1436:CDR3ライブラリーを用いてHSAに対して実施された親和性成熟から、ラウンド3の出力で得られた。発現および生物物理学的特性解析25L振とうフラスコ内でのルーチンの細菌発現レベルは、Onex培地で30°C、250rpmにて48時間培養した後に測定された。生物物理学的特性はSECMALLSおよびDSCにより測定された。SECMALLSは、溶液中の高分子を特性解析するための非侵襲的な手法である。簡単に説明すると、タンパク質を05ml分で、その流体力学的特性に従って、サイズ排除クロマトグラフィーにより分離する。分離後、そのタンパク質が光を散乱させる傾向を、多角度レーザー光散乱検出器を用いて測定する。タンパク質が検出器を通過している間の散乱光の強度を角度の関数として測定する。この測定を、屈折率検出器を用いて測定したタンパク質濃度と組み合わせると、適切な式を用いるモル質量の計算が可能となる。DSC:簡単に説明すると、タンパク質を180°C時の一定速度で加熱し、熱変性に伴う検出可能な熱変化を測定する。転移中間点が測定されるが、これはタンパク質の50がその天然のコンフォメーションをとり、残りの50が変性されるときの温度として説明される。ここでは、検査したタンパク質のほとんどが完全にはリフォールディングしないため、見かけの転移中間点をDSCにより測定した。Tmが高ければ高いほど、その分子は安定している。アンフォールディング曲線を非2状態方程式によって解析した。用いたソフトウェアパッケージはOriginv70383であった。表9に示したすべてのクローンの発現レベルは、大腸菌において15~119mgLの範囲で観察された。DOM7h14およびDOM7h11変異体に関しては、親和性成熟の間中、有益な生物物理学的パラメータと発現レベルが維持された。単量体状態は、それが二量体化を回避し、かつ細胞表面受容体のような標的を架橋しうる製品のリスクを回避するので、有利である。ラット、マウスおよびカニクイザルにおける血清半減期の測定AlbudAbであるDOM7h1410、DOM7h1418、DOM7h1419、DOM7h11、DOM7h1112およびDOM7h1115をpDOM5ベクターにクローニングした。各AlbudAbについて、20~50mg量を大腸菌において発現させ、細菌の培養上清からプロテインLアフィニティ樹脂を用いて精製し、100mMグリシンpH2により溶出した。そのタンパク質を1mgmLより高濃度へと濃縮し、PBSにバッファー交換し、Qスピンカラムを使ってエンドトキシンを枯渇させた。ラットの薬物動態解析のために、化合物あたり3匹のラットを用いて、AlbudAbを25mgkgで単回静脈注射として投与した。血清サンプルを016、1、4、12、24、48、72、120、168時間で採取した。血清レベルの分析は、以下に記載した方法に従って抗mycELISAにより行った。マウスのPKのために、DOM7h11、DOM7h1112およびDOM7h1115を3匹の被験体の用量群につき25mgkgで単回静脈注射として投与し、血清サンプルを10分1h8h24h48h72h96hで採取した。血清レベルの分析は、以下に記載した方法に従って抗mycELISAにより行った。カニクイザルのPKのために、DOM7h1410およびDOM7h1115を用量群あたり3匹の雌カニクイザルに25mgkgで単回静脈注射として投与し、血清サンプルを0083、025、05、1、2、4、8、24、48、96、144、192、288、336、504時間で採取した。血清レベルの分析は、以下に記載した方法に従って抗mycELISAにより行った。抗mycELISA法:血清中のAlbudAb濃度を抗mycELISA法で測定した。簡単に説明すると、ヤギ抗mycポリクローナル抗体をNunc96ウェルMaxisorpプレートに一晩コーティングして、5BSAPBS1Tweenを用いてブロッキングした。血清サンプルを既知濃度の標準と共に希釈範囲で添加した。次に、結合されたmycタグ付きAlbudAbを、ウサギポリクローナル抗Vkとその後に抗ウサギIgGHRP抗体を用いて検出した。アッセイの各段階の間に3×PBS01Tween20、続いて3×PBSを用いてプレートを洗浄した。最終洗浄後にTMBを添加して発色させた。これを1MHClで停止させてから、そのシグナルを450nmでの吸光度により測定した。生のELISAデータから、未知サンプルの濃度を標準曲線に対する内挿によって、希釈係数を考慮に入れて確定した。各時点からの平均濃度結果を反復値から求めて、WinNonLin解析パッケージから入手可能に入力した。ノンコンパートメントモデルを用いてデータをフィットさせ、そこでPKパラメータをそのソフトウェアで概算して終末半減期を得た。投薬情報および時点は、各PKプロファイルの終末相を反映するように選択された。ラット、マウスおよびカニクイザルの実験から得られた薬物動態パラメータはノンコンパートメントモデルを用いてフィットさせた。注釈:AUC:投薬時から無限大に外挿される曲線下面積;CL:クリアランス;t12:血中濃度が半分になる時間;Vz:終末相に基づいた分布容積。DOM7h1112およびDOM7h1115は、親に比較して、ラットとマウスで改善されたAUCおよびt12を有する。DOM7h1115はまた、親に比べて、カニクイザルでも改善されたAUCおよびt12を有する。このAUCt12の改善は、血清アルブミンに対するinvitroKDの改善と相関している。AlbudAbIFN融合体クローニングおよび発現:単一AlbudAbと同様に、親和性成熟させたVkAlbudAbをインターフェロンα2bに連結して、AlbudAbの有用なPKが融合タンパク質として維持されるかどうかを調べた。IFNα2bはTVAAPSリンカー領域を介してAlbudAbに連結させた。その構築物をSOEPCRの方法によるシングルオーバーラップエクステンションによりクローニングした。AlbudAbおよびIFN配列のPCR増幅は、TVAAPSリンカー領域で約15塩基対のオーバーラップをもつプライマーを用いて別々に実施した。用いたプライマーは次のとおりである:これらの断片を別々に精製し、続いてフランキングプライマーのみを用いてSOE反応でアセンブリした。アセンブリしたPCR産物は制限酵素BamHIおよびHindIIIを用いて消化し、その遺伝子を哺乳動物発現ベクターpDOM50内の対応する部位にライゲートさせた。このベクターは、細胞培地への発現を促進するためのN末端VJ2CマウスIgG分泌リーダー配列を有するpTT5誘導体である。リーダー配列:リーダー配列:プラスミドDNAはQIAfiltermegaprepを用いて調製した。1μgDNAmlを293FectinでHEK293E細胞にトランスフェクトし、無血清培地中で増殖させた。タンパク質を5日間の培養で発現させ、プロテインLアフィニティ樹脂を用いて培養上清から精製して、100mMグリシンpH2で溶出した。そのタンパク質を1mgmlより高濃度に濃縮し、PBSにバッファー交換し、そしてQスピンカラムを用いてエンドトキシンを枯渇させた。親和性判別および生物物理学的特性解析:AlbudAbIFNα2b融合タンパク質の各血清アルブミンへの結合親和性を判別するために、精製された融合タンパク質を、HBBIAcoreバッファー中5000nM~39nMの融合タンパク質濃度を用いて、アルブミンに対してBIAcoreで解析した。IFNα2bをAlbudAb変異体に連結させると、すべての場合に、血清アルブミンに結合するAlbudAbの親和性は減少する。DOM7h1410およびDOM71115は、親に比べて、種を越えて血清アルブミンに対し改善された結合親和性を保持する。DOM7h1112もまた、親に比べて、種を越えて血清アルブミンに対し改善された結合親和性を示す。表13に示したすべてのクローンの発現は、HEK293において175~54mgLの範囲で観察された。IFNα2bDOM7h14およびIFNα2bDOM7h11変異体に関しては、有益な生物物理学的パラメータおよび発現レベルが親和性成熟の間ずっと維持された。AlbudAbIFNα2b融合体のPK判別AlbudAbIFNα2b融合体であるDMS7321、DMS7322、DMS7323、DMS7324、DMS7325、DMS7326、DMS7327をHEK293細胞において20~50mg量でmycタグ付きで発現させ、プロテインLアフィニティ樹脂を用いて培養上清から精製して、100mMグリシンpH2で溶出した。タンパク質を1mgmLより高濃度へと濃縮し、ダルベッコPBSにバッファー交換し、Qスピンカラムを使ってエンドトキシンを枯渇させた。ラットのPKについては、化合物あたり3匹のラットを用いて、IFNAlbudAbを20mgkgで単回静脈注射として投与した。血清サンプルを016、1、4、8、24、48、72、120、168時間で採取した。血清レベルの分析は、EASYELISAを用いてメーカーの指示に従って行った。マウスのPKについては、DMS7322、DMS7325、DMS7326、DMS7327を3匹の被験体の用量群につき20mgkgで単回静脈注射として投与し、血清サンプルを10分1h8h24h48h72h96hで採取した。血清レベルの分析は、EASYELISAを用いてメーカーの指示に従って行った。ラットおよびマウスの実験から得られた薬物動態パラメータはノンコンパートメントモデルを用いてフィットさせた。注釈:AUC:投薬時から無限大に外挿される曲線下面積;CL:クリアランス;t12:血中濃度が半分になる時間;Vz:終末相に基づいた分布容積。IFNα2bAlbudAbをラットとマウスで試験した。ラットとマウスの両方で、すべてのIFNα2bDOM7h11変異体融合タンパク質に関して、t12は親に比べて改善される。t12の改善は、血清アルブミンに対するinvitroKDの改善と相関する。IFNα2bDOM7h1410変異体に関しては、血清アルブミンに対するinvitroKDの改善はまた、ラットにおいてt12の改善に相関していた。すべてのIFNα2bAlbudAb融合タンパク質は、単一AlbudAbに比べて、RSAへの結合が5~10倍減少する。この効果はDOM7h11系列よりもDOM7h14系列に対して顕著である。AlbudAbとタンパク質、ペプチドおよびNCEとのさらなる融合体他の化学物質、すなわちドメイン抗体、ペプチドおよびNCEに融合させた各種AlbudAbについて試験した。結果を表15に示す。注釈:DOM1m2123は抗TNFR1dAbであり、エキセンディン4は39アミノ酸長のペプチドである。NCE、NCEGGGGSCおよびNCETVAAPSCについては以下で説明する。以前に、抗TNFR1dAbのPK半減期をinvivoで引き延ばすためにアルブミン結合dAbとの遺伝子融合体を使用することが記載された。これらのPCT出願に記載されるプロトコルを参照されたい。上記の表において、DOM1m2123は抗マウスTNFR1dAbである。エキセンディン4と血清アルブミンに結合するDOM7h14との遺伝子融合体を作製するために、エキセンディン4リンカーAlbudAb配列をpTT5ベクターから入手可能にクローニングした。いずれの場合にも、エキセンディン4はその構築物の5末端側にあって、dAbは3末端側にあった。リンカーは3リンカーとした。エンドトキシンフリーのDNAをアルカリ溶菌法により大腸菌で調製し、HEK293E細胞から入手可能をトランスフェクトするために使用した。フラスコあたり250mlのHEK293E細胞に、フラスコあたり333μlの293fectinと250μgのDNAを用いてトランスフェクションを行い、30°Cで5日間発現させた。上清を遠心分離によって回収し、プロテインLでのアフィニティ精製によって精製した。タンパク質を樹脂にバッチ結合させ、カラムに充填して、10倍カラム容量のPBSで洗浄した。タンパク質を50mlの01MグリシンpH2で溶出し、TrispH8により中和した。予測されたサイズのタンパク質がSDSPAGEゲル上に同定された。NCEAlbudab融合体:新規化学物質AlbudAb融合体について試験した。NCEである小分子ADAMTS4阻害剤は、AlbudAbへのコンジュゲーションのためにPEGリンカーとマレイミド基をもつように合成した。AlbudAbへのNCEのコンジュゲーションは、アミノ酸位置R108Cの人工的に導入されたシスチン残基を介して、またはAlbudAbの末端に導入された5アミノ酸もしくは6アミノ酸スペーサーの後に行った。簡単に説明すると、AlbudAbをTCEPで還元し、PD10カラムを用いて25mMBisTris、5mMEDTA、10グリセロールpH65中に脱塩した。5倍モル過剰のマレイミド活性化NCEを、最終濃度が10を超えないようにDMSOに添加した。この反応を室温で一晩インキュベートし、20mMTrispH74中に十分に透析した。PEGリンカー:配列:DOM7h14R108C:ヌクレオチド:DOM7h1410TVAAPSCおよびDOM7h1410GGGGSCの配列については表5を参照されたい。NCEAlbudAbのDOM7h1410GGGGSCおよびDOM7h1410TVAAPSCは、化学物質に融合させたとき、BIAcoreで測定して、RSAに対するinvitro親和性が5~10倍減少する。これらの分子に関するPKデータはまだ得られていない。dAbAlbudab融合体:RSAに対して最高の親和性をもつ2種のDOM7h11AlbudAbは、非融合AlbudAbに比べて、治療用ドメイン抗体に融合させたとき、BIAcore上でRSAに対する親和性が2倍減少する。DOM7h11クローンは、非融合のときと同様に、融合させたときにもマイクロモルKDを示す。エキセンディン4AlbudAb融合体:AlbudAbのペプチドへの融合がRSA結合能に及ぼす効果は、結合が4倍しか減少しないDOM7h1410は別として、約10倍である。しかし、その効果は、DOM7h11系列に対して見られるよりもDOM7h14系列に対して顕著である。上記のすべてのデータに関して、融合体のt12は、動物種のSAに対する親和性の改善とともに増加した。一般的に、AlbudAb治療薬は、AlbudAb薬物融合体が血清アルブミンへの結合について01nM~10mMの親和性範囲を示すとき、治療上適していると分類される。AlbudAbおよびAlbudAb融合体の治療範囲は次のように説明される:慢性または急性の疾患、症状もしくは徴候の治療に有用な親和性範囲が示される。また、中間と区分された親和性範囲も示される。この範囲内に入るAlbudAbおよび融合体は、慢性または急性の疾患、症状もしくは徴候に対して有用である。このように、血清アルブミンに対するAlbudAbまたは融合体の親和性は、対処すべき疾患、症状もしくは徴候に応じて調整または選択することができる。上述したように、本発明は、さまざまな親和性をもつAlbudAbを提供し、各AlbudAbを高度親和性、中等度親和性または低度親和性と分類することを可能にするので、当業者は目下の治療に応じて本発明の適切なAlbudAbを選択できるようになる。図2を参照されたい。DOM7h1115S12P配列DOM7h1115S12Pのアミノ酸配列本発明の一態様は、DOM7h1115S12Pのヌクレオチド配列または選択された前記配列に対して少なくとも80同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。DOM7h1115S12Pは以下の核酸配列を用いて産生させた変化を表す:DOM7h1115S12Pは、PCRでのテンプレートとしてDOM7h1115を用いて構築したが、その際、S12P変異を導入するプライマーを用いた。そのプライマーの配列は次のとおりである:本発明の別の態様は、配列番号389のヌクレオチド配列または選択された前記配列に対して少なくとも80同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一実施形態では、DOM7h1115S12Pは、インラインタンパク質融合産物を作製するために、リンカー領域と、タンパク質もしくはペプチド薬物または単一可変ドメインもしくは他の抗体フラグメントをコードするC末端配列とを含むベクターによってコードされ、かつ該ベクターから発現される。そのリンカーは、一実施形態において、アミノ酸配列TVA、例えばTVAAPSを含む。本発明の他の態様は、前記核酸を含むベクター、ならびに該ベクターを含む単離された宿主細胞である。本発明はまた、少なくとも1回量のDOM7h1115S12Pを患者に投与することを含んでなる、患者の疾患もしくは障害の治療または予防方法を提供する。DOM7h1115変異体iVk親和性成熟選択:HSAおよびRSA抗原、ならびにビオチン化産物は実施例1に記載したとおりに入手した。親和性成熟ライブラリー:エラープローンライブラリーとドープライブラリーはどちらも、テンプレートとしてDOM7h1115親dAbを用いて作製したが、その際、位置108のアルギニンをトリプトファンに変異させて、ファージ選択のためにトリプシンを用いることができるようにした。ライブラリーはpDOM33ベクター内に作製した。ドープCDRライブラリーの場合、一次PCR反応は、dAbの必要な位置を多様化するために、偏りのある縮重コドンを含むドープオリゴヌクレオチドを用いて実施した。ドープライブラリーの作製は、例えば、BalintおよびLarrickGene137109118に記載される。プライマーは、各縮重コドンから最初の2個のヌクレオチドのみを変化させるように設計して、親ヌクレオチドが85のケースに存在し、5のケースに他のすべての可能なヌクレオチドが存在するようにした。CDRあたり6つのコドンが、親ヌクレオチドと異なるように、そのコドンのヌクレオチドあたり15の確率で同時に変異させるための標的となった。次に、アセンブリPCRを用いて、多様化された完全長のインサートを作製した。そのインサートをSalIおよびNotIで消化し、pDOM33とのライゲーション反応に使用した。その後、ライブラリーのライゲーション産物を用いてエレクトロポレーションにより大腸菌TB1株を形質転換し、形質転換された細胞を、15μgmlのテトラサイクリンを含む2×TY寒天上にプレートした。ドープライブラリーは3つ存在した。それらの変異率とライブラリーのサイズは次のとおりであった:CDR1ライブラリーdAbあたり16アミノ酸変異、ライブラリーサイズ14×108CDR2ライブラリーdAbあたり17アミノ酸変異、ライブラリーサイズ2×108CDR3ライブラリーdAbあたり2アミノ酸変異、ライブラリーサイズ11×108ii選択戦略HSAに対する選択:HSAに対する選択を2ラウンド実施した。各CDRライブラリーはすべてのラウンドで個別のプールとして選択した。両ラウンドの選択とも濃度10nMのビオチン化HSAに対して溶液中で行った。ライブラリーを01MグリシンpH20で溶出し、その後1MTrispH80で中和してから、対数期TG1細胞に感染させた。第2ラウンドの各選択物をスクリーニングのためにpDOM5にサブクローニングした。クロスオーバー選択:溶液中のビオチン化SAに対する選択を2ラウンド実施した。第1ラウンドは濃度10nMのHSAに対して行い、第2ラウンドは濃度100nMのRSAに対して行った。各CDRライブラリーはすべてのラウンドで個別のプールとして選択した。ライブラリーを01MグリシンpH20で溶出し、その後1MTrispH80で中和してから、対数期TG1細胞に感染させた。第2ラウンドの各選択物をスクリーニングのためにpDOM5にサブクローニングした。iiiスクリーニング戦略および親和性判別それぞれの場合に選択後、適切なラウンドの選択から得られたファージDNAのプールをQIAfiltermidiprepキットにより調製し、そのDNAを制限酵素Sal1およびNot1で消化し、そして濃縮されたV遺伝子を、mycタグ付きdAbを発現する可溶性発現ベクターpDOM5の対応する部位にライゲートする。ライゲートされたDNAを用いて、ケミカルコンピテント大腸菌HB2151細胞を形質転換し、その後抗生物質カルベニシリンを含む寒天プレート上で一晩増殖させる。得られたコロニーを抗原結合について個別に評価する。各選択出力につき、93のクローンをHSAおよびRSAへの結合についてBIAcoreで試験した。可溶性dAbフラグメントは96ウェルプレートでONEX培養培地中の細菌培養により37°Cで一晩産生させた。可溶性dAbを含む培養上清を遠心分離して、高密度HSAおよびRSACM5チップへの結合についてBIAcoreで分析した。オフ速度スクリーニングでこれら両方の動物種の血清アルブミンに親クローンと同等にまたはそれ以上に結合することが判明したクローンについて、その配列を決定し、ユニークなdAb配列を明らかにした。ユニークなdAbは、05L振とうフラスコ内でOnex培地にて30°C、250rpmで48時間にわたり細菌上清として発現させた。dAbを培養培地からプロテインLストリームラインへの吸着とその後の01MグリシンpH20での溶出によって精製した。ヒト、ラット、マウスおよびカニクイザル血清アルブミンへのAlbudAbの結合親和性を調べるために、精製dAbを500nM~39nMのアルブミン濃度範囲にわたってBIAcoreで分析した。MSA抗原はSigma社から入手し、凍結乾燥粉末、カタログ番号A3559、CSAはprometicblue樹脂を用いてカニクイザル血清アルブミンから精製した。試験したすべての血清アルブミン種に対する主要なクローンの親和性を表16に示す。これらのアッセイにおいては、mycタグ付き分子がPK試験で用いられた。すべてのDOM7h1115変異体はラット、ヒト、カニクイザルおよびマウスの血清アルブミンと交差反応性である。;オフ速度定数;オン速度定数。iv発現および生物物理学的特性解析細菌発現、ならびにSECMALLSおよびDSCによる解析は、先に実施例5で記載したように実施した。表2に示したすべてのDOM7h1115変異体は、有益な生物物理学的パラメータを有し、発現レベルは親和性成熟の間ほぼ維持された。熱安定性は、低いTmをもつAlbudAbと比較したとき、より高い融解温度をもつAlbudAbに融合された薬物の貯蔵寿命を向上させる可能性があるため、有利である。v最も高い熱安定性をもつクローンのCDR3およびフレームワーク3配列最も高い熱安定性をもつAlbudAbの特性の本質的な違いは、親クローンDOM7h1115と比較したときの、これらのクローンのCDR3またはフレームワーク3における単一アミノ酸変異によるものである。有益な変異を含むフレームワーク3またはCDR3の配列を表18および19に示す。熱安定性AlbudAbを親から区別するアミノ酸は太字で示してある。親DOM7h1115およびそのすべての熱安定性変異体の全アミノ酸およびヌクレオチド配列は、配列の項に示される。これらのクローンの大部分は、位置108のアルギニンがトリプトファンに変異されており、これは必要に応じてトリプシン主導の選択を可能にするために行われた。DOM7h1167には位置106のイソロイシンのアスパラギンへの変異も含まれていた。他のクローンが誘導されたが、これらは、位置108がアルギニンへの復帰変異を起こしており、また、場合により、位置106がイソロイシンへの復帰変異を起こしていた。これらのクローンの配列を以下に記載する。SAへの結合が以下の表に要約される:生物物理学的特性を示す表:同定されたDOM7h1115に対する変異は次のとおりである: