本明細書中に記載の発明。1動物における免疫学的疾患の進行、重篤度、または影響を処置または軽減するための方法であって、治療有効量のLT-β-Rブロッキング剤および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。2前記LT-β-Rブロッキング剤が、可溶性リンホトキシン-βレセプター、LT-βレセプターに対する抗体、および表面LTリガンドに対する抗体からなる群より選択される、項目1に記載の方法。3前記動物が哺乳動物である、項目2の記載の方法。4前記哺乳動物が、ヒトである、項目3に記載の方法。5前記LT-β-Rブロッキング剤が表面LTリガンドに選択的に結合し得るリガンド結合ドメインを有する可溶性リンホトキシン-βレセプターを含む、項目1に記載の方法。6前記可溶性リンホトキシン-βレセプターがヒト免疫グロブリンFcドメインをさらに含む、項目5に記載の方法。7前記LT-β-Rブロッキング剤がLT-β-レセプターに対するモノクローナル抗体を含む、項目1に記載の方法。8項目7に記載の方法であって、前記組成物が、1~14日間に亘ってLT-βレセプター陽性細胞をコートするのに十分な量で投与される、方法。9前記LT-β-Rブロッキング剤が抗ヒトLT-β-RmAbBDA8を含む、項目4に記載の方法。10前記LT-β-Rブロッキング剤が表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体を含む、項目2に記載の方法。11項目10に記載の方法であって、前記組成物が、1~14日間に亘ってLT-リガンド陽性細胞をコートするのに十分な量で投与される、方法。12前記抗体が、前記LTリガンドのサブユニットに対するものである、項目10に記載の方法。13前記LT-β-Rブロッキング剤が抗ヒトmAbB9を含む、項目4に記載の方法。14前記哺乳動物がマウスであり、かつ、前記LT-β-Rブロッキング剤が、マウス表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体を含む、項目3に記載の方法。15動物におけるTh1細胞媒介性免疫応答を阻害するための方法であって、有効量のLT-β-Rブロッキング剤および薬学的に効果的なキャリアを含む薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。16前記LT-β-Rブロッキング剤が、可溶性リンホトキシン-βレセプター、LT-βレセプターに対する抗体、および表面LTリガンドに対する抗体からなる群より選択される、項目15に記載の方法。17前記動物が、哺乳動物である、項目16に記載の方法。18前記哺乳動物が、ヒトである、項目17に記載の方法。19前記LT-β-Rブロッキング剤が表面LTリガンドに選択的に結合し得るリガンド結合ドメインを有する可溶性リンホトキシン-βレセプターを含む、項目15に記載の方法。20前記可溶性リンホトキシン-βレセプターがヒト免疫グロブリンFcドメインをさらに含む、項目11に記載の方法。21前記LT-β-Rブロッキング剤がLT-βレセプターに対するモノクローナル抗体を含む、項目9に記載の方法。22項目21に記載の方法であって、前記組成物が、1~14日間に亘ってLT-βレセプター陽性細胞をコートするのに十分な量で投与される、方法。23前記LT-β-Rブロッキング剤が抗ヒトLT-β-RmAbBDA8を含む、項目18に記載の方法。24前記LT-β-Rブロッキング剤が表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体を含む、項目9に記載の方法。25項目24に記載の方法であって、前記組成物が、1~14日間に亘ってLT-リガンド陽性細胞をコートするのに十分な量で投与される、方法。26項目24に記載の方法であって、前記抗体が、LTリガンドのサブユニットに対するものである、方法。27前記LT-β-Rブロッキング剤が抗ヒトmAbB9を含む、項目18に記載の方法。28項目17に記載の方法であって、哺乳動物がマウスであり、かつ、前記LT-β-Rブロッキング剤が、マウス表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体を含む、方法。29前記Th1細胞媒介免疫応答が、遅延型過敏応答に寄与する、項目15に記載の方法。30前記遅延型過敏反応が、接触過敏である、項目29に記載の方法。31項目29に記載の方法であって、前記遅延型過敏反応が、ツベルクリン型過敏である、方法。32前記遅延型過敏反応が、肉芽腫性反応である、項目29に記載の方法。33前記Th1細胞媒介性免疫応答が、前記動物が組織移植片を受ける後の該動物における該組織の細胞性拒絶に寄与する、項目15に記載の方法。34前記Th1細胞媒介性免疫応答が、前記動物が器官移植物を受ける後の該動物における該器官の拒絶に寄与する、項目15に記載の方法。35前記Th1細胞媒介性免疫応答が、前記動物における自己免疫疾患に寄与する、項目9に記載の方法。36前記自己免疫疾患が、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、交感性眼炎、ブドウ膜炎、および乾癬からなる群より選択される、項目35に記載の方法。37前記Th1細胞媒介性免疫応答がTh2細胞依存性免疫応答を阻害することなしに阻害される、項目15に記載の方法。38治療有効量のLT-β-Rブロッキング剤および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。39前記LT-β-Rブロッキング剤が、可溶性リンホトキシン-β-レセプター、LT-βレセプターに対する抗体、および表面LTリガンドに対する抗体からなる群より選択される、項目38に記載の組成物。40前記可溶性リンホトキシン-βレセプターが表面LTリガンドに選択的に結合し得るLT-β-Rリガンド結合ドメインを含む、項目38に記載の組成物。41前記可溶性リンホトキシン-βレセプターがヒト免疫グロブリンFcドメインをさらに含む、項目40に記載の組成物。42前記LT-β-Rブロッキング剤がLT-βレセプターに対するモノクローナル抗体を含む、項目38に記載の組成物。43前記モノクローナル抗体が抗ヒトLT-β-RmAbBDA8である、項目42に記載の組成物。44前記LT-β-Rブロッキング剤が表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体を含む、項目38に記載の組成物。45前記抗体がLTリガンドのサブユニットに対する、項目44に記載の組成物。46前記モノクローナル抗体が抗ヒトLT-βmAbB9である、項目45に記載の組成物。47前記LT-β-Rブロッキング剤がマウス表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体を含む、項目22に記載の組成物。48項目42に記載の組成物であって、前記抗体が、LT-βレセプター陽性細胞を1~14日にわたってコートするのに十分な量で存在する、組成物。49前記抗体が、1~14日間に亘ってLT-リガンド陽性細胞をコートするのに十分な量で存在する、項目44に記載の組成物。50LT-β-Rブロッキング剤を選択するための方法であって、以下の工程:a有効量の少なくとも1つのLT-β-R活性化剤および推定のLT-β-Rブロッキング剤の存在下で腫瘍細胞を培養する工程;およびb該推定のLT-β-Rブロッキング剤が該LT-β-R活性化剤の抗腫瘍活性を減少させるかどうかを測定する工程、を包含する、方法。51項目50に記載の方法であって、前記LT-β-R活性剤が、LT-α/βヘテロマー複合体を含む、方法。52前記LT-α/βヘテロマー複合体が、化学量論LT-α1β2である、項目51に記載の方法。53項目50に記載の方法であって、前記LT-β-R活性剤が、LT-β-Rシグナリングを刺激する抗LT-β-R抗体を含む、方法。54TNF-Rシグナリングを阻害することなしにLT-β-Rシグナリングを阻害するための方法であって、有効量のLT-β-Rブロッキング剤を被験体に投与する工程を包含する、方法。55項目54に記載の方法であって、前記LT-β-Rブロッキング剤は、可溶性リンホトキシン-βレセプター、LT-βレセプターに対する抗体、および表面LTリガンドに対する抗体からなる群より選択される、方法。56項目54に記載の方法であって、前記被験体が、哺乳動物由来の1以上細胞を含む、方法。57項目56に記載の方法であって、前記哺乳動物がヒトである、方法。58項目54に記載の方法であって、前記LT-β-Rブロッキング剤が、表面LTリガンドに選択的に結合し得るリガンド結合ドメインを有する可溶性リンホトキシン-βレセプターを含む、方法。59前記可溶性リンホトキシン-βレセプターが、ヒト免疫グロブリンFcドメインをさらに含む、項目58に記載の方法。60項目54に記載の方法であって、前記LT-β-Rブロッキング剤が、LT-βレセプターに対するモノクローナル抗体を含む、方法。61前記LT-β-Rブロッキング剤は、抗ヒトLT-β-RmAbBDA8を含む、項目57に記載の方法。62項目54に記載の方法であって、前記LT-β-Rブロッキング剤が、表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体を含む、方法。63前記抗体が、LTリガンドのサブユニットに対するものである、項目62に記載の方法。64前記LT-β-Rブロッキング剤が、抗ヒトLT-βmAbB9を含む、項目57に記載の方法。65前記哺乳動物が、マウスであり、前記LT-β-Rブロッキング剤が、マウス表面LTリガンドに対するモノクローナル抗体である、項目56に記載の方法。66項目60に記載の方法であって、前記LT-β-Rブロッキング剤が、1~14日間に亘ってLT-βレセプター陽性細胞をコートするのに十分な量で投与される、方法。67項目62に記載の方法であって、前記LT-β-Rブロッキング剤が、1~14日間に亘ってLT-リガンド陽性細胞をコートするのに十分な量で投与される、方法。68炎症性腸管症候群の処置方法であって、治療有効量のLT-β-R融合タンパク質を投与する工程を包含する、方法。69前記融合タンパク質がLT-β-Rと免疫グロブリンFcドメインとの融合体である、項目68に記載の方法。発明の要旨本発明は、上で言及された問題を、リンホトキシンβレセプターブロッキング剤を使用してリンホトキシンβレセプターLTβRシグナリングを阻害することによって、免疫学的疾患を処置するための薬学的組成物および方法を提供することにより解決する。より特定すると、LTβRブロッキング剤を含む組成物および方法は、例えば炎症性腸管症候群のようなTh1細胞媒介性免疫応答を阻害するために有用である。1つの実施態様において、LTβRブロッキング剤として作用するリンホトキシンβレセプター細胞外ドメインの可溶性型が提供される。この実施態様の好ましい組成物および方法は、免疫グロブリン定常H鎖ドメインに融合されたLTβR細胞外リガンド結合ドメインを有する組換えリンホトキシンβレセプター融合タンパク質を含む。より好ましくは、LTβRリガンド結合ドメインはヒトIgGFcドメインに融合される。本発明の別の実施態様において、LTβRブロッキング剤として作用する抗体が提供される。この実施態様の好ましい組成物および方法は、リンホトキシンβレセプターに対する1つ以上の抗体を含む。より好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。この実施態様の他の好ましい組成物および方法は、表面リンホトキシンに対する1つ以上の抗体を含む。より好ましくは、抗体はリンホトキシンβに対するモノクローナル抗体である。本発明はさらに、LTβRブロッキング剤例えば、LTβRの可溶性型、抗LTAbおよび抗LTβRAbを選択するための新規なスクリーニングプロセスを提供する。このスクリーニングプロセスは、LTβRシグナリングをモニターする腫瘍細胞傷害性アッセイを実施することを含む。アッセイは、腫瘍細胞傷害性アッセイにおいてLTβR活性化剤例えば、LTα1β2の存在下におけるリガンド誘導性または抗体誘導性LTβRシグナリングに対するヒト腺ガン細胞の増加した感受性を使用する。LTβブロッキング剤は、腫瘍細胞に対するLTαβヘテロマー複合体または他のLTβR活性化剤の細胞傷害性効果を阻害する。推定のLTβRブロッキング剤を試験するために使用される手順は、抗LTβR抗体の場合LTβR活性化剤であるLTα1β2の存在下でについて例示され、そして以下の工程を含む:1腫瘍細胞例えば、HT29ヒト腺ガン細胞を、IFNγおよび精製LTα1β2を含有する培地中で、アッセイされる特定の抗LTβRAbの存在下または非存在下で数日間培養する;2細胞を、生存する細胞を染色する色素で処理する;そして3染色された細胞の数を定量して、各サンプルにおいてLTα1β2、IFNγ、および試験抗LTβRAbの存在下で傷害される腫瘍細胞の割合を決定する。あるいは、生存する細胞の数を、細胞生存性を測定する多くの周知のアッセイ例えば、DNAへの3Hチミジン取り込みのいずれかにより決定し得る。このアッセイにおいて傷害される腫瘍細胞の割合を少なくとも20減少する抗LTβRAbまたはAbの組み合わせは、本発明の範囲内のLTβRブロッキング剤である。この細胞傷害性アッセイは、LTαβヘテロマー複合体および他のLTβR活性化剤を、単独でまたは組み合わせてのいずれかで使用して実施され得る。アッセイは、必要に応じて新たなLTβRブロッキング剤を同定するために適合され得る。発明の詳細な説明本明細書に記載の発明が完全に理解され得るために、以下に詳細な説明を記載する。用語サイトカインは、細胞間の相互作用を媒介する分子を指す。リンホカインは、リンパ球によって放出されるサイトカインである。用語Tヘルパー細胞は、細胞傷害性T細胞の生成を助け、B細胞と協同して抗体産生を刺激するT細胞の機能的サブクラスを指す。ヘルパーT細胞は、クラスIIMHC分子とともに抗原を認識する。用語Th1は、LTα、インターフェロンγおよびIL2を産生し、チャレンジに対する細胞性応答に関連する炎症反応を誘発するTヘルパー細胞のサブクラスを指す。用語Th2は、免疫チャレンジに対する免疫グロブリン応答に関連するIL4、IL5、IL6、およびIL10を含むサイトカインを産生するTヘルパー細胞のサブクラスを指す。用語細胞媒介性は、応答を生じるT細胞およびそれらの産物の直接的な効果により生じる免疫学的事象を指す。このタイプの応答は、概してT細胞のTh1クラスに関連する。このカテゴリーには含まれないものは、概してT細胞のTh2クラスに関連するB細胞分化およびB細胞拡大に対するT細胞のヘルパー効果である。用語遅延型過敏症は、完全な効果が1~3日の間現れ、抗原に対する遅い応答に特徴づけられる免疫学的応答を指す。この遅い応答は、免疫グロブリン媒介性アレルギー反応に見られる相対的に速い応答と対照をなす。3タイプのDTH反応がある:接触過敏症、ツベルクリン型過敏症、および肉芽腫性反応。用語免疫グロブリン応答または体液性応答は、外来抗原に対する動物の免疫学的応答を指し、これにより動物が外来抗原に対する抗体を産生する。Tヘルパー細胞のTh2クラスは、高親和性抗体の効率的な産生に重要である。用語、抗体のFcドメインとは、ヒンジ、すなわちCH2およびCH3ドメインを含むが、抗原結合部位を欠く分子の一部をいう。この用語はまた、IgMまたは他の抗体イソタイプの等価領域を含むものとする。用語抗LTβレセプター抗体は、LTβレセプターの少なくとも1つのエピトープに特異的に結合する任意の抗体を指す。用語抗LT抗体は、LTα、LTβまたはLTαβ複合体の少なくとも1つのエピトープに特異的に結合する任意の抗体を指す。用語LTβRシグナリングは、LTβR経路に関連する分子反応、およびその結果生じるその後の分子反応をいう。用語LTβRブロッキング剤は、LTβRに結合したリガンド、細胞表面LTβRクラスタリング、またはLTβRシグナリングを減少することのできる、またはLTβRシグナルが細胞内においてどのように読みとられるかに影響を与え得る薬剤を指す。リガンドレセプター結合の工程において作用するLTβRブロッキング剤は、LTβRに対するLTリガンド結合を、少なくとも20阻害することができる。リガンドレセプター結合の工程の後に作用するLTβRブロッキング剤は、腫瘍細胞に対するLTβR活性化の細胞傷害性効果を少なくとも20阻害することができる。LTβRブロッキング剤の例として、可溶性LTβRFc分子、および抗LTα、抗LTβ、抗LTαβ、および抗LTβRAbが挙げられる。好ましくは、抗体は、LTαの分泌形態と交差反応しない。用語LTβR生物学的活性は:1LTβR分子または誘導体の、可溶性または表面LTβR分子と結合した可溶性または表面LTリガンドと競合する能力;または、2天然LTβR分子と共通する免疫調節応答または細胞傷害性活性を刺激する能力、を指す。用語LTαβヘテロマー複合体およびLTヘテロマー複合体は、少なくとも1つのLTαと、1つ以上のLTβサブユニットとの間の安定な会合体をいう。これらのサブユニットは静電気相互作用、ファンデルワールス相互作用、または共有結合相互作用によって会合し得る。好ましくは、LTαβヘテロマー複合体は、少なくとも2つの隣接するLTβサブユニットを有し、かつ隣接するLTαサブユニットを欠く。LTαβヘテロマー複合体が、細胞増殖アッセイにおいてLTβR活性化剤として作用する場合、複合体が可溶性であり、かつ化学量論LTα1β2を有することが好ましい。可溶性LTαβヘテロマー複合体は、膜貫通ドメインを欠き、そしてLTα、およびまたはLTβサブユニットを発現するように操作された適切な宿主細胞によって分泌され得る。用語LTリガンドは、LTβレセプターに特異的に結合し得るLTヘテロマー複合体、またはその誘導体を指す。用語LTβRリガンド結合ドメインは、LTリガンドの特異的な認識およびそれとの相互作用に関わるLTβRの部分または複数の部分を指す。用語表面LTαβ複合体および表面LT複合体は、細胞表面に表示されたLTαおよび膜結合LTβサブユニットを含む複合体を指す。表面LTリガンドは、LTβレセプターに特異的に結合し得る表面LT複合体またはその誘導体を指す。用語被験体は、動物、または動物由来の1つ以上の細胞を指す。好ましくは、動物は、哺乳動物である。細胞は、組織に保持された細胞、細胞クラスター、不死化細胞、トランスフェクションされた細胞または形質転換された細胞、ならびに物理的または表現型的に改変された動物由来の細胞を含むが、これらに限定されない、任意の形態であり得る。リンホトキシンβ:TNFファミリーのメンバー腫瘍壊死因子関連サイトカインは、宿主防御および免疫調節の多面発現性メディエーターの大きなファミリーとして出現した。このファミリーのメンバーは、細胞細胞接触を介して局所的に作用する膜結合形態、または遠くの標的に作用し得る分泌タンパク質として存在する。TNF関連レセプターの相等しいファミリーは、これらのサイトカインと反応し、そして細胞死、細胞増殖、組織分化、および炎症誘発性応答を含む種々の経路を引き起こす。TNF、リンホトキシンα、およびリンホトキシンβは、リガンドのTNFファミリーのメンバーであり、これはまた、Fas、CD27、CD30、CD40、OX40、および41BBレセプターに対するリガンドも含む。TNFファミリーのいくつかのメンバーによるシグナリングは、壊死またはアポトーシスにより腫瘍細胞死を誘導し得る。非腫瘍形成性細胞において、TNFおよび多くのTNFファミリーリガンドレセプター相互作用が、免疫システムの発達、および種々の免疫チャレンジに対する応答に影響を及ぼす。ほとんどのTNFファミリーリガンドは、細胞表面上の膜結合形態として見いだされる。TNFおよびLTαは、ヒトにおいて、分泌形態および膜に会合した表面形態の両方で見いだされる。表面TNFは、分泌形態を生成するためにタンパク質分解的に切断される膜貫通領域を有する。対照的に、表面LTαは、膜貫通領域を欠く。膜に会合したLTαは、LTαβ複合体において、LTβとのヘテロマー複合体として、細胞表面につなぎ留められる。ほとんどの膜に会合したLTαβ複合体は、LTα1β2化学量論を有する;Browningら、JImmunol、154、3346頁。表面LTリガンドは、高い親和性を有するTNFRと結合せず、TNFRシグナリングを活性化しない。LTβレセプターと称される、他のTNF関連レセプターは、高い親和性を有するこれらの表面リンホトキシン複合体と結合する。TNFRシグナリングと同様にLTβRシグナリングは、抗増殖効果を有し、腫瘍細胞に対して細胞傷害性であり得る。出願人の同時係属中の米国出願第08378968号において、LTβR活性化剤を用いてLTβRを選択的に刺激する組成物および方法が開示されている。LTβR活性化剤は、TNFR誘導性の炎症誘発性または免疫調節性経路を同時に活性化することなく、腫瘍細胞増殖を阻害するために有用である。非腫瘍細胞において、TNFおよびTNF関連サイトカインは、広い範囲の免疫応答において活性である。TNFおよびLTαリガンドの両方が、TNFレセプターに結合し、そしてそれを活性化する。TNFおよびLTαは、マクロファージおよび好中球の殺菌活性を増強する微生物感染に対して初期かつ迅速に応答して、マクロファージにより産生される。マクロファージ、または細胞傷害性Tリンパ球によって作られたTNFおよびLTαは、標的細胞表面上のTNFレセプターに結合し、そして感受性細胞の死を引き起こす。TNFおよびTNF関連サイトカインはまた、感染またはストレスに応答して炎症性カスケードを開始し得る。TNF、LTα、およびIFNγの放出は、血管内皮細胞と、特定のリンパ球タイプとの間の接着特性を変化させる。接着の増大は、食細胞および白血球の、血流から炎症部位を囲む組織への遊走を容易にする。同様の炎症反応が、組織移植片および器官移植物の細胞性拒絶、ならびに特定の免疫障害において主要な役割を果たす。細胞表面リンホトキシン複合体は、高レベルのLTを発現するCD4T細胞ハイブリドーマ細胞において特徴づけられている;Androlewiczら、JBiolChem、267、254247頁。LTβR、LTサブユニット、および表面LT複合体の発現および生物学的役割は、PathwaysforCytolysisCurrentTopicsMicrobiolImmunol、SpringerVerlag、175218頁における、CFWareら、リンホトキシン系のリガンドおよびレセプターにおいてレビューされている。主に活性化TおよびBリンパ球ならびにナチュラルキラー細胞によってLTα発現が誘導され、そしてLTαが分泌される。Tヘルパー細胞サブクラスの内、LTαは、Th2細胞ではなくTh1によって産生されるように思われる。LTαはまた、メラニン細胞において検出されている。多発性硬化症患者の病変における小膠細胞およびT細胞はまた、抗LTα抗血清によって染色され得る。リンホトキシンβは、Tリンパ球、T細胞株、B細胞株、およびリンホカイン活性化キラー細胞の表面上で同定されている。LTβは、本明細書において参考として援用される、出願人の同時係属中の国際出願、1992年1月9日にWO9200329として公開されたPCTUS9104588、および1994年6月23日にWO9413808として公開されたPCTUS9311669の主題である。表面LT複合体は、抗LTα抗体または可溶性LTβRFc融合タンパク質を用いて、FACS分析または免疫組織学によって定義されるように、主に活性化TおよびBリンパ球およびナチュラルキラー細胞によって発現される。表面LTはまた、ヒト細胞傷害性Tリンパ球クローン、活性化末梢単核リンパ球、IL2活性化末梢血リンパ球、アメリカヤマゴボウ分裂促進因子活性化または抗CD40活性化末梢Bリンパ球、ならびにTおよびB細胞系統の種々のリンパ性腫瘍についても記載されている。アロ抗原を有する標的細胞の連動は、CD8、およびCD4CTLクローンによって、表面LT発現を特異的に誘導する。LTβレセプターは、表面LTリガンドに特異的に結合する。LTβRは、LTヘテロマー複合体を結合するが、TNFまたはLTαを結合しない。LTβRによるシグナリングは、末梢リンパ性器官発達、および体液性免疫応答において役割を果たし得る。LTβR発現の研究は、初期段階にある。LTβRmRNAは、ヒト脾臓、胸腺、およびその他の主要な器官において見いだされる。LTβR発現パターンは、LTβRが末梢血T細胞およびT細胞株においてないことを除いては、p55TNFRについて報告されたものと類似している。可溶性LT複合体の産生可溶性LTαβヘテロマー複合体は、膜結合形態から可溶性形態に変化したLTβサブユニットを含む。これらの複合体は、本願出願人の同時係属中の国際出願WO9413808として1994年6月23日に公開されたPCTUS9311669に詳述されている。可溶性LTβペプチドは、膜貫通領域の末端すなわちアミノ酸番号44付近と最初のTNF相同領域すなわちアミノ酸番号88との間のいずれかの点で切断されるリンホトキシンβのアミノ酸配列によって規定される番号付与法はBrowningらCell7284756頁1993に従う。可溶性LTβポリペプチドは、LTβのN末端を短縮し、細胞質テールおよび膜貫通領域を除去することによって産生され得るCroweらScience264707710頁1994。あるいは、欠失によって、または、膜貫通ドメインを含む通常疎水性のアミノ酸残基を親水性のアミノ酸残基で置換することによって、膜貫通ドメインを不活化してもよい。いずれも場合も、実質的に親水性のハイドロパシープロフィールが作られ、それが脂質親和性を減少し、そして水溶性を改善する。膜貫通ドメインの欠失は、潜在的に免疫原性のエピトープの導入を避けるので、親水性アミノ酸残基による置換よりも好ましい。欠失または不活化した膜貫通ドメインは、I型リーダー配列例えばVCAM1リーダーと置換するか、またはI型リーダー配列に連結され得、その結果val40とpro88との間のどこかの配列で始まるタンパク質を分泌する。可溶性LTβポリペプチドはそのN末端に任意の数の周知のリーダー配列を含み得る。このような配列は、真核生物系においてそのペプチドを発現させ、そしてその分泌経路に標的化させる。例えば、Ernstら、米国特許第5082783号1992を参照のこと。可溶性LTαβヘテロマー複合体は、LTαおよび可溶性LTβをコードするDNAで適切な宿主細胞を同時にトランスフェクションすることによって産生され得るCroweらJImmunolMethods1687989頁1994。LTαの非存在下で分泌される可溶性LTβは高度にオリゴマー化される。しかし、LTαと同時に発現される場合、両方のタンパク質を含有する70kDaの三量体様構造が形成される。通常はLTαのみを発現する細胞株例えば上記のRPMI1788細胞を、可溶性LTβポリペプチドをコードする遺伝子でトランスフェクションすることによって、可溶性LTα1β2ヘテロマー複合体を産生することもできる。LTαポリペプチドおよびLTβポリペプチドを別々に合成し、それらを温和な界面活性化剤を用いて変性し、混合し、そして界面活性化剤を除去することによって復元して、分離され得る混合したLTヘテロマー複合体を形成させ得る下記を参照のこと。LTα1β2複合体の精製TNFレセプターおよびLTβレセプターをアフィニティー精製試薬として使用するクロマトグラフィーによって、異なるサブユニット化学量論を含む同時発現複合体から、可溶性LTα1β2ヘテロマー複合体を分離する。TNFレセプターはLT複合体のααクレフト内のみに結合する。LTβレセプターは、高い親和性でββクレフトと、そして低い親和性でヘテロマーLTαβ複合体のαβクレフトと結合する。従って、LTα3およびLTα2β1はTNFRと結合する。LTβRはまた、LTα2β1三量体と結合し得るが、LTα3を結合し得ない。さらに、LTβRは、LTα1β2およびLTβnを結合するレセプターアフィニティー試薬は、可溶性細胞外ドメイン例えばLoetscherらJBiolChem2661832429頁1991、または免疫グロブリンFcドメインにカップリングした細胞外リガンド結合ドメインを有するキメラタンパク質LoetscherらJBiolChem2661832429頁1991;CroweらScience264707710頁1994のいずれかとして調製され得る。レセプターは、日常的な手順を用いる化学的架橋によって、アフィニティーマトリックスにカップリングされる。レセプターおよび免疫アフィニティークロマトグラフィーを用いてLTα1β2リガンドを精製し得るスキームは2種類ある。第1のスキームでは、LTαと短縮型のLTβ形態との両方を同時発現する適切な発現系から得た上清をTNFRカラムに通す。TNFRはLTα3三量体およびLTα2β1三量体に結合する。TNFRカラムからの流出液はLTβをLTβRカラムに結合させ、そしてカオトロフまたはpH変化のような古典的な方法を用いて、そのカラムから溶出させる。LTα3はこのカラムを流出する。その溶出液を中和するか、またはカオトロフを除去し、次いでその溶出液を、LTα2β1三量体のみに結合するTNFRカラムに通す。このカラムの流出液はLTβ。LTβRシグナリングをブロックし得る抗体および他の因子は、以下のアッセイにおいてLTβRシグナリングの腫瘍細胞に対する細胞傷害性効果を阻害するそれらの能力に基づいて選択される:1HT29細胞のような腫瘍細胞を、培地、および試験される因子の段階希釈物の存在下または非存在下において、少なくとも1つのLTβR活性化剤を含む一連の組織培養ウェル中で3日から4日間培養する;2ミトコンドリアの機能を測定するMTTのような生体色素染色を腫瘍細胞混合物に添加し、そして数時間反応させる;3各ウェル中の混合物の光学密度を550nmの波長OD550で定量化する。OD550は、LTβR活性化剤および試験LTβRブロッキング剤の存在下で各ウェル中に残存する腫瘍細胞の数に比例する。このアッセイにおいてLTβR活性化腫瘍細胞の細胞傷害性を少なくとも20減少させ得る因子または因子の組合せは、本発明の範囲内のLTβRブロッキング剤である。LTβRシグナリングを活性化する任意の因子または因子の組合せが、上記のアッセイにおいてLTβRブロッキング剤を同定するために用いられ得る。LTβRシグナリングを誘導するLTβR活性化剤例えば、活性化抗LTβRmAbは、上記の腫瘍細胞アッセイを用いて、単独または他の因子との組合せで腫瘍細胞の細胞傷害性を増強するそれらの能力に基づいて選択され得る。LTβRブロッキング剤を選択するための他の方法は、LTリガンドレセプター結合を直接干渉する推定の因子の能力をモニターすることである。リガンドレセプター結合を少なくとも20ブロックし得る因子または因子の組合せは、本発明の範囲内のLTβRブロッキング剤である。リガンドレセプター結合の強さを測定する多くのアッセイの任意のものが、推定のLTβRブロッキング剤との競合アッセイを行うために用いられ得る。レセプターとリガンドとの間の結合の強さは、酵素結合免疫吸着検定法ELISAまたはラジオイムノアッセイRIAを用いて測定され得る。特異的結合はまた、抗体抗原複合体を蛍光的に標識し、そして蛍光活性化細胞選別FACS分析を行うことにより、または他のこのような免疫検出法を行うことにより測定され得る。これらの方法は全て、当該分野で周知の技術である。リガンドレセプター結合相互作用はまた、プラズモン共鳴検出を利用するBIAcore機器PharmaciaBiosensorを用いて測定され得るFaegerstramおよびOShannessySurfaceplasmonresonancedetectioninaffinitytechnologiesHandbookofAffinityChromatography22952頁、MarcelDekkerIncNewYork。BIAcore技術により、金表面にレセプターを結合させ、そしてその上にリガンドを流すことが可能になる。プラズモン共鳴検出は、表面に結合した物質の量の直接的定量化をリアルタイムで与える。この技術は、結合onおよび解離offの両方の速度定数を生じる。従って、リガンドレセプター解離定数および親和性定数が、推定のLTβRブロッキング剤の存在下および非存在下で直接決定され得る。レセプターリガンド相互作用を測定するためのこれらおよび他の任意の技術を用いて、表面または可溶性LTリガンドの表面または可溶性LTβR分子への結合を阻害するLTβRブロッキング剤単独または他の因子との組合せでの能力を評価し得る。このようなアッセイはまた、LTβRブロッキング剤、またはこのような因子の誘導体例えば、融合体、キメラ、変異体、および化学的に改変された形態単独または組合せでを試験し、LTβR活性化をブロックするその改変された因子の能力を至適化するために用いられ得る。可溶性LTβR分子の産生本発明の1つの実施態様におけるLTβRブロッキング剤は、可溶性LTβレセプター分子を含む。図1は、ヒトLTβRの細胞外部分の配列これは、リガンド結合ドメインをコードするを示す。図1の配列情報および当該分野で周知の組換えDNA技術を用いて、LTβRリガンド結合ドメインをコードする機能的フラグメントが、ベクターにクローン化され得、そして可溶性LTβR分子を産生するために適切な宿主において発現され得る。本明細書中に記載されるアッセイに従ってLTリガンド結合について天然のLTβレセプターと競合し得る可溶性LTβR分子は、LTβRブロッキング剤として選択される。図1に示す配列から選択されるアミノ酸配列を含む可溶性LTβレセプターは、1つ以上の異種タンパク質ドメイン融合ドメインに結合されて、レセプター融合タンパク質のインビボにおける安定性を増大させられるか、またはその生物学的活性もしくは局在化を調節され得る。好ましくは、安定な血漿タンパク質これらは、代表的には循環中で20時間より長い半減期を有するを用いて、レセプター融合タンパク質を構築する。このような血漿タンパク質は、免疫グロビン、血清アルブミン、リポタンパク質、アポリポタンパク質、およびトランスフェリンを含むが、これらに限定されない。可溶性LTβR分子を特定の細胞または組織タイプに標的化し得る配列はまた、特異的に局在化される可溶性LTβR融合タンパク質を作製するために、LTβRリガンド結合ドメインに結合させ得る。LTβRリガンド結合ドメインを含むLTβR細胞外領域の全てまたは機能的部分図1は、ヒトIgG1重鎖のFcドメインのような免疫グロビン定常領域に融合され得るBrowningら、JImmunol1543346頁。可溶性レセプターIgG融合タンパク質が好ましく、そしてそれらは一般的な免疫学的試薬であり、そしてこれらの構築のための方法は、当該分野で公知である例えば、米国特許第5225538号本明細書中で参考として援用されるを参照のこと。機能的LTβRリガンド結合ドメインは、IgG1以外の免疫グロブリンクラスまたはサブクラスに由来する免疫グロブリンIgFcドメインに融合され得る。異なるIgクラスまたはサブクラスに属する抗体のFcドメインは、多様な二次的エフェクター機能を活性化し得る。活性化は、Fcドメインが対応するcognateFcレセプターにより結合される場合に起こる。二次的エフェクター機能には、補体系を活性化する能力、胎盤を横切る能力、および種々の微生物のタンパク質に結合する能力が含まれる。免疫グロビンの異なるクラスおよびサブクラスの特性は、Roittら、Immunology48頁MosbyYearBookEuropeLtd第3版、1993に記載されている。補体系の活性化は、炎症を媒介する酵素反応のカスケードを開始する。補体系の産物は、細菌の結合、エンドサイトーシス、ファゴサイトーシス、細胞傷害性、フリーラジカル生成、および免疫複合体の可溶化を含む種々の機能を有する。補体酵素カスケードは、抗原に結合したIgG1、IgG3、およびIgM抗体のFcドメインによって活性化され得る。IgG2のFcドメインは、より効果的でないようであり、そしてIgG4、IgA、IgDおよびIgEのFcドメインは、補体を活性化することにおいて無効である。従って、その関連した二次的エフェクター機能が、LTβRFc融合タンパク質で処置される特定の免疫応答または疾患に望ましいのかどうかに基づいてFcドメインを選択し得る。LTリガンドを有する標的細胞を傷つけるかまたは殺すことが有利である場合には、特に活性なFcドメインIgG1を選択して、LTβRFc融合タンパク質を作製し得る。あるいは、LTβRFc融合体を細胞に補体系を誘導することなしに標的化することが所望される場合は、不活性なIgG4Fcドメインが選択され得る。Fcレセプターへの結合および補体活性化を低減または排除するFcドメイン中の変異が記載されているSMorrisonAnnuRevImmunol1023965頁。これらまたは他の変異が、単独または組合せで、LTβRFc融合タンパク質を構築するために用いられるFcドメインの活性を至適化するために用いられ得る。ヒト免疫グロブリンFcドメインに融合されたリガンド結合配列を含む可溶性ヒトLTβR融合タンパク質hLTβRFcの産生が実施例1に記載されている。hLTβRFcを分泌する実施例1に従って作製された1つのCHO株は、hLTβRhG1CHO14と呼ばれる。この株のサンプルは、ブダペスト条約の規定に従い1995年7月21日にアメリカンタイプカルチャーコレクションATCCRockvilleMDに寄託され、そしてATCC受託番号CRL11964を指定された。上記のATCC寄託物の公衆への入手可能性に関する全ての制限は、本出願に対する特許の認可の際に取り消し不能に除去される。レセプターIg融合タンパク質の連結点を形成する異なるアミノ酸残基は、可溶性LTβレセプター融合タンパク質の構造、安定性、および最終的な生物学的活性を変化させ得る。1つ以上のアミノ酸が、選択されたLTβRフラグメントのC末端に付加され、選択された融合ドメインとの連結点が修飾され得る。LTβR融合タンパク質のN末端はまた、選択されたLTβRDNAフラグメントが組換え発現ベクターへの挿入のためにその5末端で切断される位置を変えることにより変化され得る。各LTβR融合タンパク質の安定性および活性は、日常的な実験および本明細書中に記載のLTβRブロッキング剤を選択するためのアッセイを用いて試験されそして至適化され得る。図1に示す細胞外ドメイン内のLTβRリガンド結合ドメイン配列を用いて、アミノ酸配列改変体はまた、可溶性LTβレセプターまたは融合タンパク質のLTリガンドに対する親和性を改変するために構築され得る。本発明の可溶性LTβR分子は、表面LTリガンド結合について内因性の細胞表面LTβレセプターと競合し得る。細胞表面LTβレセプターとLTリガンド結合について競合し得るLTβRリガンド結合ドメインを含む可溶性分子はいずれも、本発明の範囲内のLTβRブロッキング剤である。LTβRブロッキング剤としての可溶性LTβR分子可溶性ヒトLTβレセプター免疫グロブリン融合タンパク質hLTβRFcは、実施例1における手順に従い作製され、そしてヒトHT29腫瘍細胞においてLTβR誘導性細胞傷害性をブロックするその能力について試験された。表1実施例3は、可溶性LTβレセプターhLTβRFcおよびTNFレセプターp55TNFRFc融合タンパク質が、種々のTNFおよび可溶性LTリガンドのHT29腫瘍細胞増殖に対する阻害的効果をブロックする能力を比較する。表1のデータは、可溶性LTβレセプターhLTβRFcが、LTα1β2リガンドと細胞表面LTβレセプターとの間の相互作用により引き起こされる腫瘍細胞死を、50ブロックし得る濃度を示す。腫瘍細胞増殖を少なくとも20ブロックする能力は、この可溶性LTβレセプターを本発明によるLTβRブロッキング剤として同定する。予想どおり、可溶性TNFR融合タンパク質p55TNFRFcは、TNF誘導性増殖阻害を、TNFに結合し、そしてその表面レセプターとの相互作用を妨害することにより完全にブロックした。可溶性TNFR融合タンパク質は、LTリガンドLTα1β2媒介性抗増殖効果に対して何の影響も及ぼさなかった。対照的に、LTβR融合タンパク質は、LTリガンド効果をブロックしたが、TNFの効果もLTαの効果もブロックしなかった。従って、可溶性ヒトLTβR融合タンパク質は、TNFおよびLTαリガンドによるTNFR活性化を干渉しない。LTβRシグナリングがまた、マウスにおいて腫瘍細胞に対して細胞傷害性であるかどうか、および可溶性LTβR融合タンパク質がLTβR誘導性細胞傷害性をブロックし得るかどうかを決定するために、類似の実験をマウス腫瘍細胞を用いて行った。可溶性マウスLTβRFc融合タンパク質mLTβRFc;実施例2を参照のことを、LTリガンドで処理されたマウスWEHI164細胞の死をブロックするその能力について試験した実施例4。図2は、可溶性マウスLTβRmLTβRFcの、マウスWEHI164細胞におけるLTリガンド誘導性LTβRシグナリングに対する効果を示す。このアッセイが示すように、WEHI164細胞は、可溶性LTα1β2リガンドで処理することにより死滅される。mLTβRFcの添加は、LTリガンド活性化細胞死をブロックする。コントロールのTNFレセプター融合タンパク質p55TNFRFcは、細胞死のブロッキングに対して効果をほとんど有さない。これらのデータは、可溶性LTβR融合タンパク質が、LTリガンド結合について効果的に表面LTβR分子と競合し得ることを示す。従って、可溶性mLTβRFc融合タンパク質は、マウスにおいてLTβRブロッキング剤として作用する。抗ヒトLTβR抗体の供給源本発明の別の実施態様において、ヒトLTβレセプターに対する抗体抗LTβRAbは、LTβRブロッキング剤として機能する。本発明の抗LTβRAbは、ポリクローナルまたはモノクローナルmAbであり得、そしてLTβRシグナリングをブロックするその能力、インビボでのバイオアベイラビリティー、安定性、または他の所望の特質を至適化するために改変され得る。ヒトLTβレセプターに対するポリクローナル抗体血清は、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスターまたはマウスなどの動物に、完全フロイントアジュバント中のヒトLTβレセプターFc融合タンパク質実施例1を皮下注射した後、不完全フロイントアジュバントで腹腔内または皮下の追加抗原注射をすることにより、従来の技術を用いて調製される。LTβレセプターに対する所望の抗体を含有するポリクローナル抗血清は、従来の免疫学的手順によりスクリーニングされる。ヒトLTβレセプターFc融合タンパク質に対するマウスモノクローナル抗体mAbは、実施例5に記載のように調製される。マウス抗ヒトLTβRmAbBDA8を産生するハイブリドーマ細胞株BDA8AB9は、ブダペスト条約の規定に従い1995年1月12日にアメリカンタイプカルチャーコレクションATCCRockvilleMDに寄託され、そしてATCC受託番号HB11798を指定された。上記のATCC寄託物の公衆への入手可能性に関する全ての制限は、本出願に対する特許の認可の際に取り消し不能に除去される。種々の形態の抗LTβR抗体はまた、標準的な組換えDNA技術WinterおよびMilsteinNature34929399頁1991を用いて作製され得る。例えば、動物抗体由来の抗原結合ドメインがヒト定常ドメインに連結されているキメラ抗体を構築し得る例えば、Cabillyら;米国特許第4816567号;MorrisonらProcNatlAcadSciUSA81685155頁1984。キメラ抗体は、ヒトの臨床処置に使用される場合、動物抗体により誘発される、観測される免疫原性応答を減少させる。さらに、LTβRを認識する組換えヒト化抗体を合成し得る。ヒト化抗体は、その中に特異的抗原結合に寄与する領域が挿入されている、主にヒトのIgG配列を含むキメラである例えば、WO9404679。動物を所望の抗原で免疫化し、対応する抗体を単離し、そして特異的抗原結合に寄与する可変領域配列の一部を取り出す。次いで、その動物由来の抗原結合領域を、抗原結合領域が欠失されているヒト抗体遺伝子の適切な位置にクローン化する。ヒト化抗体は、ヒト抗体における異種種間配列の使用を最小にし、そして処置される被験体における免疫応答を比較的誘発しそうにない。異なるクラスの組換え抗LTβR抗体の構築はまた、異なるクラスの免疫グロブリンから単離された、抗LTβR可変ドメインおよびヒト定常ドメインCH1、CH2、CH3を含むキメラまたはヒト化抗体を作製することにより達成され得る。例えば、増加した抗原結合部位結合価を有する抗LTβRIgM抗体は、ヒトμ鎖定常領域を有するベクターに抗原結合部位をクローン化することによって組換え生産され得るArulanandamらJExpMed177143950頁1993;LaneらEurJImmunol22257378頁1993;TrauneckerらNature3396870頁1989。さらに、標準的な組換えDNA技術を用いて、抗原結合部位の近傍にあるアミノ酸残基を変えることによって、組換え抗体のその抗原との結合親和性を変化させ得る。ヒト化抗体の抗原結合親和性は、分子モデリングに基づく変異誘発によって増大され得るQueenらProcNatlAcadSciUSA861002933頁1989;WO9404679。標的化される組織タイプまたは意図される特定の処置計画に依存して、LTβRに対する抗LTβRAbの親和性を増大させるか、または減少させることが所望され得る。例えば、半予防的処置のために、一定レベルの、LTβ経路を介してシグナルする能力が減少した抗LTβRAbで、患者を処置することが有利であり得る。同様に、LTβRに対して増大した親和性を有する阻害的抗LTβRAbは、短期の処置に有利であり得る。LTβRブロッキング剤としての抗LTβR抗体LTβRブロッキング剤として作用する抗LTβR抗体は、腫瘍細胞におけるLTβR誘導性細胞傷害性を阻害するその能力を試験することにより選択され得る実施例5。本発明の好ましい実施態様において、組成物および方法は、マウス抗ヒトLTβRmAbBDA8を含む。図3は、mAbBDA8が、本発明によって規定されるようなLTβRブロッキング剤として作用することを示す。WiDr腫瘍細胞は、IFNγおよび可溶性LTα1β2リガンドの存在下で増殖を停止する。コントロール抗体IgG1は、この増殖阻害に対し何ら影響を及ぼさない。対照的に、抗LTβRmAbBDA8は、WiDr細胞増殖を阻害する可溶性LTα1β2リガンドの能力をブロックする。従って、ヒトLTβRに対する抗体は、本発明により規定されるようなLTβRブロッキング剤として機能し得る。ヒトLTβレセプターに対する他の抗体を試験することにより、ヒトにおいてLTβRブロッキング剤として機能するさらなる抗LTβR抗体が、日常的な実験および本明細書中で記載のアッセイを用いて同定され得ることが予想される。抗表面LTリガンド抗体の供給源本発明の別の好ましい実施態様は、LTβRブロッキング剤として機能するLTリガンドに対する抗体を含む組成物および方法に関する。抗LTβRAbについて上記したように、LTβRブロッキング剤として機能する抗LTリガンド抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得、そして日常的な手順に従い改変して、その抗原結合特性および免疫原性を調節し得る。本発明の抗LT抗体は、可溶性の、変異体の、変化された、そしてキメラ型のLTサブユニットを含む、2つのLTサブユニットのいずれか1つに対して個々に惹起され得る。LTサブユニットが抗原として用いられる場合、好ましくはこれらは、LTβサブユニットである。LTαサブユニットが用いられる場合、得られる抗LTα抗体が、表面LTリガンドに結合し、そして分泌されるLTαと交差反応もせず、TNFR活性実施例3に記載のアッセイによるを調節もしないことが好ましい。あるいは、1つ以上のLTサブユニットを含むホモマーのLTβまたはヘテロマーのLTαβ複合体に対する抗体が、LTβRブロッキング剤としての活性について惹起されそしてスクリーニングされ得る。好ましくは、LTα1β2複合体は、抗原として用いられる。先に議論したように、得られる抗LTα1β2抗体が、分泌されるLTαに結合することなしに、そしてTNFR活性に影響を及ぼすことなしに表面LTリガンドに結合することが好ましい。ポリクローナル抗ヒトLTα抗体の産生は、本出願人等の同時係属出願WO9413808に記載されている。モノクローナル抗LTαおよび抗LTβ抗体もまた、記載されているBrowningら、JImmunol1543346頁。マウス抗ヒトLTβmAbは、実施例6に記載のように調製した。マウス抗ヒトLTβRmAbB9を産生するハイブリドーマ細胞株B9C91は、ブダペスト条約の規定に従い1995年7月21日にアメリカンタイプカルチャーコレクションATCC。このアッセイにおいて、可溶性ヒトLTβRFc融合タンパク質を、漸増量の試験抗体の存在下で、PMA活性化II23細胞これは表面LT複合体を発現するBrowningら、JImmunol1543346頁1995に添加した。LTβレセプター-リガンド相互作用を少なくとも20阻害し得る抗体を、LTβRブロッキング剤として選択する。マウス抗ヒトLTβmAbB9を試験するために行ったこのアッセイの結果を図4に示す。図4は、抗LTβmAbB9が、可溶性LTβRFc融合タンパク質の、活性化された細胞上に誘導された表面LTリガンドへの結合を選択的にブロックし得ることを示す。これらの結果は、LTリガンドサブユニットに対する抗体がLTβRブロッキング剤として機能することを確認する。上記のFACSアッセイをまた、ハムスターにおいて可溶性マウスLTαβ複合体に対して惹起されたmAbを試験するために用いた実施例7。ハムスター抗マウスLTαβmAbBBF6を試験するために行われたこのアッセイの結果を、表2に示す実施例7。表2は、抗LTαβmAbBBF6が、可溶性mLTβRFc融合タンパク質実施例2の、マウスT細胞ハイブリドーマ上に発現された表面LTリガンドへの結合を効果的にブロックし得、従って、本発明によるLTβRブロッキング剤であることを示す。LTサブユニットではなくむしろLTαβ複合体を、動物を免疫化するための抗原として用いることにより、より効果的な免疫化が導かれ得るか、または表面LTリガンドに対するより高い親和性を有する抗体が得られ得る。LTαβ複合体で免疫化することにより、LTαおよびLTβサブユニットの両方におけるアミノ酸残基例えば、LTαβクレフトを形成する残基を認識する抗体を単離し得ることが考えられる。ヒトLTαβヘテロマー複合体に対する抗体を試験することにより、ヒトにおいてLTβRブロッキング剤として機能するさらなる抗LT抗体が、日常的な実験および本明細書中に記載のアッセイを用いて同定され得ることが予想される。LTβRブロッキング剤は、マウスにおけるTh1細胞媒介性接触過敏症を阻害する本発明のLTβRブロッキング剤は、Th1細胞媒介性免疫応答を阻害し得る。このようなTh1媒介性応答の一つは、遅延型過敏症DTH;CherおよびMosmannJImmunol138368894頁;一般的議論については、IRoittらImmunology2212212頁MosbyYearBookEuropeLtd第3版もまた参照のことである。DTHは、抗原で感作したTh1細胞が、それと同一の抗原との二次接触の後にサイトカインを分泌するときに誘発される。Th1サイトカインは、マクロファージを誘引および活性化する。このマクロファージは、炎症反応を引き起こすさらなるエフェクター分子を放出する。DTH反応は、3つの異なるタイプ接触過敏症、ツベルクリン型過敏症、および肉芽腫性反応に分類される。3つのタイプの過敏症HSは、外来抗原が、感作された被験体に直接付与されるか、またはその皮下に注射される場合の、外来抗原に対する応答の速度および性質により区別され得る。DTH反応は、皮膚の肥厚化の速度および程度を測定することによりモニターされる。ツベルクリン型HS反応は、被験体に以前に曝された微生物例えば、mycobacteriumtuberculosisまたはMleprae由来の外来抗原の注射部位で生じる皮膚反応である。この皮膚反応は、48時間~72時間の間が最大であり、以前に遭遇した微生物に対する診断的感受性試験例えば、ツベルクリン皮膚試験の基礎として頻繁に用いられる。抗原が組織内に存続する場合は、ツベルクリン型病変が発達した結果、これは肉芽腫性反応になり得る。肉芽腫性反応は、臨床的に最も深刻なDTH反応である。なぜなら、これらは、Th1細胞媒介性疾患に関連する多くの病理学的影響をもたらし得るからである。肉芽腫性反応は、抗原または免疫複合体がマクロファージからクリアランスされず、そしてTh1サイトカイン分泌を刺激し続ける場合に生じる。刺激部位での慢性的炎症および活性化マクロファージの凝集は、肉芽腫性反応を特徴付ける。上皮細胞およびマクロファージのコアは、リンパ球および線維性沈着によっても囲まれ得、肉芽腫といわれる硬化した構造を形成する。ときどき、肉芽腫のコアの広い範囲において、細胞死が存在する例えば、結核に罹患した肺組織において。肉芽腫性反応の標的組織における硬化は、約4週間内に起きる。肉芽腫形成の頻度に影響を及ぼす因子は、住血吸虫に感染したマウスを用いて同定され得るAmiriらNature356604607頁。住血吸虫寄生虫住血吸虫は、感染した肝臓の門脈細静脈に産みつけられた住血吸虫の卵の周辺に肉芽腫形成をもたらす、寄生性疾患を生じ得る。このTh1細胞媒介性DTH応答を阻害する因子は、住血吸虫に感染したマウスの肝臓における、肉芽腫のサイズまたは肉芽腫形成の頻度もしくは速度を減少させ得る。住血吸虫の卵に対する細胞反応は、漸増濃度の推定LTβRブロッキング剤で経時的に処置したマウスにおいて形成された肉芽腫の数およびサイズを定量することにより評価され得る。接触過敏症CHSは、皮膚が標的器官である、DTHの1つのクラスである。CHSにおいて、炎症反応は、反応性のハプテンを皮膚上に局所適用することにより生じる。アレルゲンは、一般に、少なくとも1つのハプテン分子を含む。このハプテン分子は、通常、それ自身で抗原性であるためには、小さすぎる。ハプテンは皮膚に浸透し、そして皮下で正常なタンパク質と反応して新規の抗原複合体を生成する。感作した被験体のハプテンへの再曝露は、DTH応答を引き起こす。抗原提示細胞と組み合わせたハプテンキャリアタンパク質結合体は、サイトカインIL2、IL3、IFNγ、およびGMCSFを含むの放出を引き起こすエフェクター機構を活性化する。放出されたサイトカインのカスケードは、CD4T細胞を増殖させ、種々の細胞表面接着分子の発現パターンを変化させ、そしてT細胞およびマクロファージを皮膚の炎症部位に誘引する。サイトカインカスケードおよびそれにより生じる血管拡張、真皮および表皮の細胞浸潤および水腫は、標的組織の腫脹および炎症を導く。このことは、DTH反応に対する応答における測定可能な皮膚肥厚化を説明する。特定のハプテンが個体を感作し得る程度は、種々の要因に依存する。これらの要因は、ハプテンがどの程度充分に皮膚に浸透し得るか、および宿主のキャリアタンパク質と反応して結合体を形成し得るかを含む。ほぼ全ての個体を感作するハプテンの1つは、24ジニトロフルオロベンゼンDNFBである。DNFBのようなハプテンに対する皮膚のCHS応答は、細胞媒介性免疫についての古典的な動物モデルである。感作マウスの耳へのこのCHS応答の局在化は、耳の厚みを測定することにより、インビボでのこの細胞媒介性免疫応答の、容易で、正確かつ再現性の高い定量を可能にする。マウスのCHS反応およびDNFB誘導性炎症応答の組織病理学の詳細は、報告されているChisholmらEurJImmunol23682688頁。ほとんどの個体において接触過敏症応答を誘導するDNFBの能力は、Th1細胞媒介性DTH反応に関連する炎症応答を低減または排除する因子を同定するために使用され得る。可溶性マウスLTβRFc融合タンパク質は、マウスにおけるDNFB誘導性接触過敏症反応を有効に阻害する実施例8。マウスを、最初に、各後肢の踵にDNFBを2日間連続で適用することにより感作した。最初の感作の5日後に、キャリア溶液中の準刺激用量のDNFBを左耳の表面に付与した。キャリア溶液単独を、コントロールとして右耳に付与した。次いで、漸増濃度のLTβRブロッキング剤mLTβRFc実施例2を、マウスに静脈内注射した実施例8。PBS緩衝液単独、またはヒトIgG融合タンパク質LFA3Fcの注射をネガティブコントロールとして供し、そしてCHSを阻害することが知られる抗VLA4特異的mAbPS2mAbの注射をポジティブコントロールとして供した。抗原投与の24時間後、それぞれの耳の厚みDNFB抗原投与およびDNFB非投与についてを測定した。LTβRブロッキング剤による耳の腫脹応答の阻害を、処置した群とそれらのネガティブコントロール群とを比較することにより判断した。図5は、mLTβRFcが、阻害されないDNFB処置コントロール動物PBSおよびLFA3Fcと比較して、DNFB処理マウスの耳の腫脹応答において有意な低減を生じることを示す。可溶性LTβRは、インヒビター抗VLA4特異的mAbPS2mAbと同等に有効に、このCHS反応をブロックし得る。これは、抗原投与部位内へのT細胞の流入をブロックすることにより作用するChisholmらEurJImmunol2368288頁。これらのデータは、インビトロでLTβRブロッキング剤として作用する可溶性LTβR融合タンパク質がまた、動物に投与された場合に、Th1細胞媒介性免疫応答を有効に阻害し得ることを示す。インビトロで同定された本発明のLTβRブロッキング剤は、この耳腫脹アッセイ、または上記のアッセイのような他のDTHアッセイを用いて、インビボでのTh1細胞媒介性免疫応答の重篤度を低減するのに有用であるさらなるLTβRブロッキング剤を選択するために試験され得る。LTβRブロッキング剤は、Th2細胞媒介性体液性免疫応答を阻害しない上に示すように、本発明のLTβRブロッキング剤は、接触遅延型過敏症のようなTh1細胞媒介性エフェクター機構を阻害し得る図5。このTh1細胞媒介性応答は、Th2細胞依存性応答に顕著に影響を及ぼすことなく阻害される。Th1細胞媒介性免疫応答におけるLTβRブロッキング剤の差別的効果は、LTβRブロッキング剤の存在下でのTh2細胞依存性免疫応答例えば、一次抗体応答およびイソタイプスイッチングをモニタリングすることにより示された。マウスに、可溶性LTβR融合タンパク質mLTβRFc;実施例2もしくはコントロールのIgG融合タンパク質LFA3Fcのいずれかを10日間の日程で5回にわたって注射したか、または未処置のままにした。2回目の注射後、全てのマウスの尾の基部に、100μgのオボアルブミンを含有する100μlの完全フロイントアジュバントを注射した。11日後、一次血清の抗オボアルブミン特異的抗体の力価を、IgG1、IgG2a、およびIgMイソタイプに特異的なELISAを用いて分析した。図6は、オボアルブミンを免疫したマウスにおける血清の抗オボアルブミン抗体産生へのマウスLTβRブロッキング剤mLTβRFcの効果を示す実施例9。LTβRブロッキング剤の投与は、オボアルブミン免疫後の一次抗体の力価に顕著には影響を及ぼさない。比較すると、CD40リガンドに誘導されるCD40レセプターシグナリングを妨害することにより、マウスにおける抗原特異的IgG応答を完全にブロックするRenshawらJExpMed18018891900頁。CD40は、TNFファミリーにおける別のリガンド/レセプター対である。全免疫グロブリン産生および成熟は、明らかにTh2細胞依存性である。しかし、Th1サイトカインIFNγはIgG2aサブクラスへのスイッチに関与するが、そのために絶対的に必要とされるわけではないという証拠もあるHuangらScience259174245頁。LTβRブロッキング剤mLTβRFcは、これらの実験においてIgG2aスイッチを阻害しなかった。本発明のLTβRブロッキング剤が、Th1細胞媒介性応答のこの体液局面をブロックしないという可能性がある。さらに、mLTβRFcで処理したマウス由来のリンパ球の増殖応答は減少しなかった実施例10;図7。これらの実験は、本発明のLTβRブロッキング剤の投与に基づく治療が、免疫応答のTh2依存性抗体産生機能に有害には影響を及ぼさないことを示す。図6に例示する抗体応答の正常パターンはまた、可溶性mLTβRFcでの多数の処置がマウスに対して毒性を示さないことを示し、さらに、本発明に示す組成物および方法の有用な治療的性質を示す。Tヘルパー細胞媒介性疾患多くの器官特異的自己免疫状態は、病理学的Th1応答に関与するようである。これらのデータは概説されているModlinおよびNutmanCurrentOpinioninImmunol551117頁;RomagnaniらAnnRevImmunol1222757頁。これらの器官特異的自己免疫状態は、以下を包含する:多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、交感性眼炎、ブドウ膜炎、および乾癬。インスリン依存性糖尿病は、インスリンを産生するβ膵細胞がランゲルハンス島内に浸潤する白血球により破壊される、自己免疫疾患である。糖尿病は、活性化された前糖尿病性膵細胞を移入することにより、新生仔非肥満性糖尿病NODマウスにおいて迅速に誘導され得る。最近、Th1様細胞またはTh2様細胞、さもなければ遺伝的類似物が、新生仔NODマウスに移入された。Th1細胞のみが糖尿病を、そしてほぼ全てのレシピエントにおいて迅速に誘導したKatzらScience268118588頁。これは、本発明のLTβRブロッキング剤これは、Th1細胞媒介性免疫応答の効果をインビボで阻害し得るがインスリン依存性糖尿病を処置または予防するために有用であることを示す。いくつかの全身性自己免疫疾患種々の関節炎を含むはTh1細胞関連性である。慢性関節リウマチおよびSjorgren症候群は両方とも、Th0細胞およびTh1細胞に関与するようである。対照的に、全身性紅斑狼蒼SLEは、異常なTh0Th2支配性応答を有するようである。いくつかの慢性炎症性疾患はまた、異常なTh1型応答を有するようである。この応答は、炎症性腸管疾患、肺のサルコイドーシス、および同種移植片拒絶を包含する。ヒトにおける炎症性腸管疾患IBDは、少なくとも2つのカテゴリー潰瘍性結腸炎およびクローン病を包含する。両方の疾患は、免疫病理学的自己免疫様障害から生じると考えられる。IBDのいくつかのマウスモデルにおいて、Th1応答をブロックするいくつかの因子がこの疾患の進展または経過をブロックし得ることが明らかであるFPowrieらImmunity15531994。免疫応答のTh1成分の阻害が、ヒトのIBDにおいて有益な効果を有することが可能である。IBDの多くのモデルは、記載および概説されているCElsonらGastroenterology10913441995。少なくとも3群のモデル化学誘導型、ポリマー/微生物誘導型、および変異マウスを用いる免疫学型が存在する。通常用いられるポリマー/微生物誘導性モデルの1つにおいては、デキストラン硫酸溶液がマウスの飲料水中に導入され、そしてこれを摂取すると腸の上皮内層が刺激され、その損傷に対する強力な免疫応答がもたらされる。動物は、結腸炎を生じ、この結腸炎は、下痢、糞便中の血液、体重の減少、および結腸壁の膨張に起因する結腸長の短縮として現れる。このモデルは、左側の結腸炎および上皮形成異常を誘導する。上皮形成異常は、潰瘍性結腸炎の特徴であるガンを導き得る。第2のモデルは、選択されたセットのCD4T細胞をscidマウスすなわち、T細胞およびB細胞を欠くマウス内に移植することからなるFPowrieらInternationalImmunology5146114711993MorrisseyらJExpMed1782371993。選択された細胞CD45RBhi細胞といわれるが増殖し、そしてscidマウスを再構成するので、自己反応性T細胞の出現を防いでいる正常な機構は機能不全であり、そして自己反応性細胞が発達する。ラットにおいて、多くの器官と反応性の細胞が観察されるが、マウスにおいては反応性はまず腸管において生じる。自己反応性細胞が拡大および発達する経路を変化させる因子、または細胞が腸管を攻撃する能力をブロックし得る因子のいずれかがこのモデルにおいて効力を有する。さらに、このモデルは自己反応性免疫系細胞の病理学的進展を少なくとも部分的に模倣するので、このモデルをブロックする処理は、実際に、ヒトにおいて疾患を改変する挙動を有し得る。このモデルにおいて、TNFに対する抗体は、疾患をブロックし得FPowrieらImmunity15521994、そしてこれらの抗体は、ヒトの疾患の処置において効能があることが見出されているHMvanDullemenらGastroenterology1091091995。従って、このモデルは、どの因子がIBDにおいて治療的に有用であり得るかを予測し得る。さらに、CD45RBモデルがTh1媒介性疾患プロセスの1例であり、そして実際にラットにおいてこのモデルは多くの器官における疾患を導くので、この系におけるLTβRIgの効力は、LTβRIg、またはLTβRとそのリガンドとの相互作用をブロックする他の手段が広範囲の関連する免疫学的疾患において有益であり得ることを示す。一般に、特異的T細胞に対する自己抗体の正確な寄与は、これらの自己免疫疾患において示されていない。細胞応答は、現在、主に抗体により引き起こされると考えられるこれらの全身性自己免疫疾患例えば、種々の関節炎における病原性に対して大きく寄与し得る。いくつかの病原性感染因子に対する正常な免疫応答はまた、Th1応答を惹起する。Th1応答は過剰となり得、そしてそれ自身が医療的問題として存在する。重篤な医療的問題を導く肉芽腫性反応の例上記のDTH反応の1つのクラスは、癩病、結核患者の肺における肉芽腫形成、サルコイドーシス、および住血吸虫病を包含するRoittらImmunology2256頁MosbyYearBookEuropeLtd第3版1993。乾癬もまた、Th1細胞により媒介されるようである。細胞溶解性T細胞すなわち、CTLCD8陽性T細胞もまた、Th1様集団およびTh2様集団にさらに分けられ得る。従って、Th群に関して知られる多くのことをまた、CD8細胞に適用することが可能である。CD8細胞は、主に、抗ウイルス応答および移植組織拒絶応答に関連する。LTβRブロッキング剤を用いる処置本発明の組成物は、取り組まれる特定の臨床状態を処置するために、有効用量で投与される。与えられた適用に関して好ましい薬学的処方および治療的に有効な用量レジメの決定は、充分に当業者の技術範囲内であり、例えば、患者の状態および体重、望まれる処置の程度ならびにその処置に対する患者の寛容が考慮される。可溶性LTβRの約1mgkgの用量は、処置用量を最適化するための開始点として適切であると期待される。治療的有効用量の決定はまた、インビトロで、標的細胞ブロッキング剤に依存して、LTβRまたはLTリガンド陽性細胞を1~14日間コートするために必要とされるLTβRブロッキング剤の濃度を測定する実験を行うことにより決定され得る。本明細書中に記載されるレセプターリガンド結合アッセイは、細胞コーティング反応をモニターするために用いられ得る。LTβRまたはLTリガンド陽性細胞は、活性化したリンパ球集団からFACSを用いて分離され得る。これらのインビトロ結合アッセイの結果に基づいて、適切なLTβRブロッキング剤の適切な濃度範囲は、本明細書中に記載されるアッセイによって動物において試験するために選択され得る。本発明の可溶性LTβR分子、抗LTリガンド、および抗LTβRAb単離および精製形態の抗体もしくは複合体、その塩またはそれらの薬学的に受容可能な誘導体を含むの単独または組み合わせた投与は、免疫抑制活性を示す因子の通常受け入れられる任意の投与方法を用いて達成され得る。これらの治療において使用される薬学的組成物もまた、種々の形態であり得る。これらには、例えば、錠剤、丸剤、散剤、液体溶液または懸濁剤、坐剤、ならびに注射可能および注入可能な溶液のような固体、半固体、および液体の投薬形態が含まれる。好ましい形態は、目的とする投与方法および治療的適用に依存する。投与方法には、経口投与、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、病変内投与、または局所投与が含まれ得る。本発明の可溶性LTβR分子、抗LTリガンド、および抗LTβRAbは、例えば、取り込みまたは安定性を刺激するコファクターと共に、もしくはこれらを伴わずに、滅菌等張処方物中に入れられ得る。処方物は好ましくは液体であり、または凍結乾燥粉末であり得る。例えば、本発明の可溶性LTβR分子、抗LTリガンド、および抗LTβRAbを、50mgmlクエン酸一水和物、27mgmlクエン酸三ナトリウム、41mgmlマンニトール、1mgmlグリシン、および1mgmlポリソルベート20を含む処方緩衝液で希釈し得る。この溶液を凍結乾燥し、冷蔵状態で保存し、そして投与前に滅菌注射用水USPで再構成し得る。組成物はまた、好ましくは、当該分野において周知の通常の薬学的に受容可能なキャリア例えば、RemingtonsPharmaceuticalSciences第16版1980MacPublishingCompanyを参照のことを含む。このような薬学的に受容可能なキャリアは、他の医療用薬剤、キャリア、遺伝的キャリア、アジュバント、賦形剤などを含み得る。それには、例えばヒト血清アルブミンまたは血漿調製物がある。組成物は、好ましくは単位投与形態であり、そして通常は1日に1回以上投与される。本発明の薬学的組成物はまた、冒された組織または血流の中、その近傍、さもなければそれと連絡して配置される、マイクロスフェア、リポソーム、他の微小粒子送達系または徐放性処方物を用いて、投与され得る。徐放性キャリアの好適な例は、坐剤またはマイクロカプセルのような成形物の形態の半透過性ポリマーマトリックスを包含する。移植可能な徐放性マトリックスまたはマイクロカプセル状の徐放性マトリックスとしては、ポリラクチド米国特許第3773319号;EP58481、Lグルタミン酸とエチルLグルタメートとの共重合体SidmanらBiopolymers2254756頁1985;ポリ2ヒドロキシエチルメタクリレートまたはエチレンビニルアセテートLangerらJBiomedMaterRes15167277頁1981;LangerChemTech1298105頁1982が挙げられる。本発明の可溶性LTβR分子、抗LTリガンド、および抗LTβRAbを、単独で、または組み合わせて含有するリポソームは、周知の方法により調製され得る例えば、DE3218121;EpsteinらProcNatlAcadSciUSA82368892頁1985;HwangらProcNatlAcadSciUSA77403034頁1980;米国特許第4485045号および同第4544545号を参照のこと。通常、リポソームは、小さく約200~800オングストローム単層型であり、その脂質含量は約30モルコレステロールより多い。コレステロールの割合が選択されて、可溶性LTβR分子、抗LTリガンド、および抗LTβRAbの最適放出速度を制御する。本発明の可溶性LTβR分子、抗LTリガンド、および抗LTβRAbはまた、LTβRブロッキング活性を調節するために、他のLTβRブロッキング剤、免疫抑制剤、またはサイトカインを含有するリポソームに結合され得る。リポソームへのLTβR分子、抗LTリガンド、および抗LTβRAbの結合は、標的化送達のためにトキシンまたは化学療法剤を抗体に結合するのに広く使用されているヘテロ二官能性架橋剤のような、任意の公知の架橋剤によって達成され得る。リポソームへの結合はまた、炭水化物指向性架橋試薬である44マレイミドフェニル酪酸ヒドラジドMPBHを用いて達成され得るDuzgunesらJCellBiochemAbstSuppl16E771992。LTβRブロッキング剤を含む治療的組成物の利点本発明のLTβRブロッキング剤は、Thを選択的に阻害し得、そしてTh2細胞依存性免疫エフェクター機構は阻害し得ない。LTβRブロッキング剤は、Th1型サイトカイン例えば、IL2およびIFNγの活性により悪化させられる症状の処置に有用である。Th1サイトカインはTh2細胞依存性応答を阻害し得るので、LTβRブロッキング剤はまた、通常はTh1誘導性サイトカインカスケードにより阻害される特定のTh2細胞依存性応答を間接的に刺激し得る。Th1細胞応答を選択的に抑制するまたはTh2細胞応答を間接的に刺激する能力は、種々の自己免疫および慢性炎症性症状を含む多様な細胞媒介性免疫応答における異常性、抗原寛容、ならびに組織移植片および器官移植物の細胞性拒絶を処置するために有用である。上記のように、Th1細胞に基づく免疫学的状態の処置は、一般に免疫調節剤および免疫抑制剤を使用する。これらは、広範な細胞型および免疫学的応答に対する多面発現性効果を有する。これらの非特異的免疫抑制剤は一般に、有害な副作用を引き起こす、高くそしてしばしば細胞傷害性の用量で必要とされる。免疫学的応答の特徴を変化させる能力は、上記で議論されたマウス糖尿病の最近の研究、および同種異系移植物モデルにおいて支持されている。後の研究において、CD28B7T細胞共刺激経路をブロックする融合タンパク質は、腎移植片寛容を誘導することが示された。寛容は、インビボで、Th1サイトカインの減少、およびTh2サイトカインの増加と相関した。これらのデータは、本発明のLTβRブロッキング剤が、Th1細胞媒介性サイトカイン放出を阻害することによって組織移植片および器官移植物の細胞性拒絶を抑制することにおいて有用であることを示す。本発明の組成物および方法のLTβRブロッキング剤を改変して、処置される症状、障害、または疾患に依存するLTβRシグナリングの所望されるレベルが得られ得る。LTβRシグナリングの絶対レベルは、そのそれぞれの分子標的についてLTβRブロッキング剤の濃度および親和性を操作することによって、精密に調節され得ることが意図される。例えば、本発明の一つの実施態様において、可溶性LTβR分子を含む組成物が被験体に投与される。可溶性LTβレセプターは、表面LTリガンドの結合について、細胞表面LTβレセプターと有効に競合し得る。表面LTリガンドと競合する能力は、可溶性および細胞表面LTβR分子の相対的濃度、ならびにリガンド結合についてのその相対的親和性に依存する。その変異体可溶性LTβRの表面LTリガンドとの結合親和性を増加または減少させる変異を有する可溶性LTβR分子は、当業者に周知の標準的な組換えDNA技術を使用して作製され得る。部位特異的変異またはランダムな変異を有する多数の分子は、日常的な実験および本明細書中に記載される技術を使用して、LTβRブロッキング剤として作用するその能力について試験され得る。同様に、本発明の別の実施態様において、LTβレセプターまたは一つ以上のLTリガンドサブユニットのいずれかに対する抗体は、LTβRブロッキング剤として機能する。LTβレセプターのシグナリングをブロックするこれらの抗体の能力は、変異、化学的修飾、または被験体に送達される抗体の有効濃度または活性を変化させ得る他の方法によって、修飾され得る。LTβRのシグナリングを完全には阻害せずに減少させる能力は、正常な免疫機能を支持する一方で、過剰であるかまたは異常であるTh1細胞媒介性応答を阻害する、LTβRのシグナリングのレベルの減少を、確立するため、または維持するために、重要であり得る。マウスのLTα遺伝子の破壊によって、異常な末梢リンパ器官の発達が導かれる。このようなマウスは、リンパ節を欠き、そしてその脾臓は、通常は明らかな小節中のT細胞に富む領域とB細胞に富む領域との間の区別を欠いた。類似する表現型がTNFR活性を調節することによっては観察されていないので、本発明者らはこの表現型が表面LT誘導性のLTβRのシグナリングの欠失と関連すると考える。従って、LTβR経路を選択的または部分的にブロックする能力は、LTβR経路によるシグナルの誤発現または過剰発現に関連する異常なリンパ器官の発達を処置することにおいて有用であり得る。いくつかのTh1関連反応は、多数の細胞媒介性免疫応答の重大な要素であり、そしてTh1細胞活性の絶対的な阻害は、特定の環境においては所望でないかもしれない。例えば、マウスは、良好なTh1応答が配備され得る場合、寄生虫感染に有効に耐え得る。ListeriaおよびToxoplasmaのような感染性因子はまた、強力なTh1型応答を誘発する。ヒトにおいて、mycobacteriumtuberculosis応答は、Th1に基づくようである。リーシュマニア症の病原性は、マウスにおいて特徴付けられるTh1応答に類似する応答に相関する。LTβRのシグナリングをブロックすることによってTh1阻害のレベルに影響を及ぼす能力は、本発明のLTβRブロッキング剤での処置によって達成され得る有益な結果を最大にすることにおいて重要であり得る。以下は、本発明の可溶性LTβレセプター、抗LTリガンド、および抗LTβR抗体、ならびにそれらを特徴づけるために使用される方法を例証する実施例である。これらの実施例は、限定として解釈されるべきではない:本実施例は、例示の目的のために含まれており、そして本発明は、請求の範囲によってのみ限定される。実施例1免疫グロブリンFc融合タンパク質としての可溶性ヒトLTβレセプターの調製体細胞ハイブリッド由来のヒト12p転写配列のライブラリーから単離されたヒトcDNAクローンの配列は、GenBankに登録され、そして後にヒトLTβRをコードする配列として同定された。この全長ヒトLTβRcDNAクローンの配列は、1992年以来、GenBank登録番号L04270として入手可能である。膜貫通領域までのLTβRの細胞外ドメインを、5末端および3末端にそれぞれNotIおよびSalI制限酵素部位を取り込んだプライマーを使用して、cDNAクローンからPCRによって増幅した。増幅産物を、NotIおよびSalIで切断し、精製し、そしてヒトIgG1のFc領域をコードするSalINotIフラグメントと共に、NotIで線状化したベクターpMDR901に連結した。得られたベクターは、別々のプロモーターにより駆動されるジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子およびLTβRFc融合タンパク質を含んでいた。このベクターを、CHOdhfr細胞にエレクトロポレーションし、そしてメトトレキセート耐性クローンを、標準的な手順どおりに単離した。LTβRFcは培地中に分泌され、そしてELISAアッセイを用いて最高レベルのレセプター融合タンパク質を産生する細胞株を選択した。高産生の細胞株を多数になるまで増殖させ、そして馴化培地を回収した。純粋なLTβレセプター融合タンパク質を、ProteinASepharoseFastFlowアフィニティークロマトグラフィーによって単離した。実施例2免疫グロブリンFc融合タンパク質としての可溶性マウスLTβレセプターの調製mLTβRの完全なcDNAクローンを、pCDNA3InVitrogenSanDiegoCAのNotI部位に2つの部分cDNA単離物由来の5NotIApaLIフラグメントおよび3ApaLINotIフラグメントを連結することによって調製した。このcDNAクローンの配列は、GenBank登録番号U29173としてアクセス可能である。GenBank登録番号L38423に見出されるmLTβRについての別の登録配列と比較した場合、コード配列の差異は認められなかった。可溶性mLTβRhIgG1融合タンパク質を、テンプレートとしての全長mLTβRcDNAクローン、ならびにプライマー5AACTGCAGCGGCCGCCATGCGCCTGCCC3および5GACTTTGTCGACCATTGCTCCTGGCTCTGGGGG3のPCR増幅によって調製した。増幅産物を精製し、そしてNotIおよびSalIで切断し、そしてNotIで線状化しそしてホスファターゼで処理したSAB132中にSalINotIヒトIgG1Fcフラグメントとともに連結し、JLB122を形成した。安定な発現のために、mLTβRFcフラグメントを含むNotIカセットを、pMDR901のNotI部位に移入してPSH001を形成し、そしてこのベクターを記載のようにBrowningら、JImmunol1543346頁1995CHO細胞にトランスフェクトした。mLTβRFcを分泌する細胞クローンを、ELISA分析によって同定した。精製したレセプター融合タンパク質を、ProteinASepharoseFastFlowクロマトグラフィーPharmaciaによってCHO細胞上清から単離した。実施例3LTβレセプターリガンド相互作用をブロックするための可溶性ヒトLTβRFcの使用可溶性hLTβRFcを、上記の腫瘍細胞細胞傷害性アッセイにおけるLTβレセプターへのLTリガンド結合をブロックするその能力について試験した。このアッセイにおいて、LTβRシグナリングを活性化する可溶性型のLTリガンドhLTα1β2を使用し、ヒト腫瘍細胞を死滅させる。LTβRシグナリングのインヒビターは、LTβR誘導性腫瘍細胞細胞傷害性を減少させ得る。可溶性LTα1β2リガンドは、機能的膜貫通ドメインを欠く短縮されたかまたは改変されたLTβサブユニットを含む。可溶性LTα1β2リガンドは、LTリガンドの表面形態と同様に、LTβRに結合しそしてLTβRシグナリングを刺激するBrowningら、JImmunol1543346頁1995。hLTα1β2、hNTF、またはhLTαの連続希釈を、96ウェルプレート中の005ml中に調製し、そして80Uml抗ウイルスユニットのhuIFNγを含む005mlの培地中で5000個のトリプシン処理したHT29細胞ATCCを添加した。4日後、MTT色素のミトコンドリア性還元を以下のように測定した:10μlのMTTを添加しそして3時間後、還元された色素を10mMHClを含む009mlのイソプロパノールに溶解し、そして550nmにおけるODを測定した。可溶性レセプター形態または純粋なヒトIgGを10μl中で添加した後細胞を加え、5μgmlの最終濃度を得た。表1は、hLTβRFcおよびp55TNFRFcキメラコントロールとしてのヒトIgGとともにのHT29腫瘍細胞増殖に対する種々の可溶性TNFおよびLTリガンドの阻害効果をブロックする能力を比較する。a各細胞傷害剤を、細胞に添加する前に、Ig融合タンパク質と10分間予め混合した。融合タンパク質の最終濃度は、5μgmlであった。bより高い濃度は試験しなかった。表1中のデータは、可溶性ヒトLTβR融合タンパク質hLTβRFcが、LTリガンドLTα1β2と細胞表面LTβレセプターとの間の相互作用を効果的にブロックし得、従って本発明によるLTβRブロッキング剤であることを示す。予想されるように、可溶性TNFR融合タンパク質p55TNFRFcは、TNFへの結合および表面TNFレセプターとのその相互作用の妨害によってTNF誘導性増殖阻害を完全にブロックした。この可溶性TNFレセプターは、LTリガンド媒介性抗増殖効果に対する効果を有さなかった。それに対して、LTβRFcは、LTリガンド誘導性細胞傷害性効果をブロックしたが、TNFまたはLTαの細胞傷害性効果をブロックしなかった。従って、可溶性ヒトLTβR融合タンパク質は、TNFおよびLTαリガンドによるTNFR活性化を干渉しない。実施例4マウスLTβレセプターリガンド相互作用をブロックするための可溶性マウスLTβRFcの使用ヒトIgG1Fcドメインに結合した可溶性マウスLTβレセプターmLTβRFc;実施例2を参照のことを、マウス細胞に対する細胞傷害性アッセイを使用して、マウスにおけるLTβレセプター-リガンド相互作用をブロックするその能力について試験した図2。実施例3に記載のHT29細胞アッセイにおいて使用した手順と本質的に同一の手順を使用して、WEHI164細胞に対して細胞傷害性アッセイを行ったBrowningおよびRibolini、JImmunol143185967頁1989も参考のこと。図2は、マウスWEHI164細胞におけるリガンド誘導性LTβRシグナリングに対するmLTβRFcの効果を示す。このアッセイが示すように、WEHI164細胞は、約1~100ngmlの濃度範囲のLTαβリガンドでそれらを処理することにより死滅させられる。可溶性mLTβRFc10μmlは、LTリガンド活性化細胞死をブロックする。可溶性マウスp55TNFRFc融合タンパク質またはIgGコントロール抗体各10μmlの添加は、細胞死をブロックすることに対して効果をほとんど有さないかまたは全く有さなかった。これらのデータは、mLTβRFc融合タンパク質が、LTリガンド結合について表面LTβR分子と効果的に競合し得ることを示す。これらのデータはまた、LTαβ誘導性細胞傷害性がLTβR媒介性であり、そして本発明によるLTβRブロッキング剤として作用する可溶性mLTβRFcによって阻害され得ることを示す。実施例5LTβレセプター-リガンド相互作用をブッロクするための抗ヒトLTβR抗体の使用ヒトLTβレセプターに対するマウスモノクローナル抗体mAbを、アジュバントの非存在下でProteinASepharoseビーズに結合した、CHO細胞由来のhLTβRFc融合タンパク質を用いて、反復したRBFマウスの腹腔内免疫化により調製した。動物を、最後に、腹腔内および静脈内の両方で、可溶性hLTβRFcで追加免疫した。脾臓細胞を従来のプロトコルにより融合し、そしてハイブリドーマの上清をELISAによりスクリーニングしたLingら、JInterferonandCytokineRes155359頁。ハイブリドーマの上清を、細胞パンニングアッセイcellpanningassayにおいてLTβRFcでコートしたプレートへの活性化したII23ハイブリドーマ細胞これは、表面のLTα1/β2を発現するの結合をブロックするその能力についてさらにスクリーニングした。純粋なmAbを、培養上清からのIgGのProteinASepharosePharmacia精製により調製した。抗LTβレセプターmAbが、可溶性LTの結合により開始されるLTβRシグナリングをブロックし得るか否かを決定するために、腫瘍細胞傷害性アッセイを、WiDrヒトカルシノーマ細胞を用いて行った。細胞傷害性アッセイにおいて、段階希釈したLTα1/β2を96ウエルプレート中で005mlで調製し、そして10μlの、コントロールのマウスIgG1mAbまたは抗LTβレセプターmAbのいずれかを含有する100μgml溶液を添加した。次いで、トリプシン処理した5000個のWiDr細胞ATCCを、50Uml抗ウイルス単位のhuIFNγを含有する005mlの培地中で各ウエルに添加した。4日後、色素MTTのミトコンドリア還元を以下のように測定した:10μlのMTTを添加し、そして3時間後、還元された色素を、10mMHClを含む009mlのイソプロパノールで溶解し、そしてODを550nmで測定した。紫色の量は、細胞増殖の量と比例する。図3は、抗LTβRmAbBDA8が、本発明のLTβRブロッキング剤として作用することを示す。ヒトWiDrカルシノーマ細胞は、IFNγおよび可溶性LTα1/β2リガンドの存在下約005~50ngmlで増殖を停止する。IgG1コントロール抗体10μgmは、この増殖阻害に対して効果を有さなかった。対照的に、抗LTβRmAbBDA810μgmlは、可溶性LTα1/β2リガンドの存在下で増殖するWiDr細胞の能力を回復する。実施例6レセプター-リガンド相互作用をブロックするための抗ヒトLTβ抗体の使用抗ヒトLTβmAbを、CFA中の約1~2μgのヒト組換えLTβを含有する、洗浄したProteinASepharose9E10rLTβビーズでRBFマウスを免疫化することにより調製し、その後、IFA中の同じ物質で1回追加免疫した。最後の追加免疫の8週後、マウスに、30μgの精製した可溶性rLTβ9E10樹脂から酸溶出した、および2日後に20μgの同じ可溶性の物質を静脈内投与した。2回目の静脈内投与による追加免疫の翌日、脾臓細胞を従来のプロトコルを用いて融合し、mAbを作製した。ハイブリドーマの上清を、ELISAにより、またはPMA活性化II23細胞のFACS染色により直接スクリーニングした。純粋なmAbを、培養上清からのIgGのProteinASepharoseFastFlow精製により調製したPharmacia。FACSアッセイを用いて、細胞表面上のLTβレセプターへの可溶性LTα/βリガンドの結合を効果的にブロックし得る従って、インビボで2つの細胞間の相互作用を模倣するLTβに対する抗体を選択した。このアッセイにおいて、可溶性ヒトLTβRFc2μgmlは、漸増濃度の試験抗LTβmAb002~20μgmlの存在下で、PMA活性化II23細胞の表面LTリガンドへの結合が可能になったBrowningら、JImmunol1543346頁。細胞を洗浄し、そして結合したLTβRFcを、フィコエリトリンで標識したロバ抗ヒトIgGとの反応により検出した。結合した蛍光標識の量をFACS分析により決定し、そして平均蛍光強度をプロットした。図4は、上記の、LTβレセプター-リガンド相互作用をブロックする抗LTβmAbB9の能力を測定した、FACSアッセイの結果を示す。本実験は、抗LTβmAbB9002~5μgmlが、可溶性LTβR融合タンパク質2μgmlと結合する細胞表面LTリガンドを特異的にかつ効果的に競合し得ること、従って本発明のLTβRブロッキング剤として適することを示す。実施例7レセプター-リガンド相互作用をブロックするための抗マウスLTα/β抗体の使用可溶性マウスLTα/β複合体を、ヒト可溶性LTα/β複合体についての記載のように調製した。可溶性マウスLTβサブユニットを、以前に記載された配列情報に基づいて作製したLawtonら、JImmunol15423946頁。可溶性マウスLTα/β複合体を、バキュウロウイルス/昆虫細胞発現系を用いて発現し、そしてLTα/β複合体を、ヒトp55TNFRおよびLTβRカラムを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより単離した。これらは、本質的には、ヒトLTα/β複合体の発現および精製について上記に記載されている。アルメニアンハムスターを、本質的には実施例6に記載されるように、精製した可溶性マウスLTα/β複合体で免疫した。ハムスターの脾臓細胞を、記載されるように、マウスP3Xハイブリドーマ細胞株に融合したSanchezMadridら、MethodsofEnzymology12123944頁。ハイブリドーマを、LTα/β複合体またはLTα単独のいずれかに対するその結合特徴に基づいて、それぞれ、抗mLTβまたは抗mLTαとしてグループ分けした。ハイブリドーマ細胞を拡大培養し、そして抗体を、ProteinAアフィニティークロマトグラフィーPharmaciaを用いて、培養上清から精製した。ハムスターの抗マウスLTαmAbおよびLTβmAbが、mLTβRへのLTリガンド結合をブロックし得るか否かを評価するために、本発明者らは、TIMI4細胞ATCC、マウスT細胞株7時間のPMA活性化後、表面LTリガンドを発現するを用いた。ハムスター抗mLTαmAbまたは抗mLTβmAbを、上記の細胞とともに、30分間4°Cでプレインキュベートし、次いで2回洗浄した。洗浄した細胞を、1μgmlのmLTβRFcとともに4°Cでインキュベートした。30分後、細胞を結合しなかったmLTβRFcがなくなるまで洗浄し、次いで30分間、10μgmlのフィコエリトリン標識したロバ抗ヒトIgGとともにインキュベートして、結合したmLTβRFcを検出した。結合した蛍光標識の量を、FACS分析により決定し、そして平均蛍光強度を計算した。この分析を用いて、ハムスター抗mLTβmAb、T細胞表面LTリガンドへの可溶性LTβレセプターの結合を効果的にブロックし得ることを見出した。この結果を、表2に示す。aレセプター添加せずb平均蛍光チャンネル番号c阻害実施例8LTβRブロッキング剤はマウスのTh1媒介接触過敏を阻害する20gの雌BalbcマウスJacksonLaboratoriesBarHarborMEを、最初に、25μLの4:1vvのアセトン:オリーブ油中の0524ジニトロフルオロベンゼンDNFBを各後肢の付け根に塗布することにより感作した。最初の感作の24時間後、本発明者らは、再度、25μlの同じ溶液で各マウスを感作した。感作は、麻酔していないマウスを拘束しながら行った。5日目最初の感作の120時間後に、本発明者らは、マウスを90:10mgkgのケタミン:キシラジンでip麻酔し、そして亜刺激用量の10μlの02DNFBを左耳の表側および裏側に塗布した。右耳には、4:1vvのアセトン:オリーブ油ビヒクルを同様に塗布した。免疫応答の抗原投与の4時間後、本発明者らは、01mlのリン酸緩衝化食塩水PBS中の漸増濃度のmLTβRFc008~50mgkg;実施例2をマウスに静脈注射により投与した。PBS緩衝液単独、または20mgkgのヒトIgG融合タンパク質LFA3FcMillerら、JExpMed17821122頁の注射を、ネガティブコントロールとした。8mgkgの抗VLA4特異的mAbPS2mAb;Chisolmら、EurJImmunol2368288頁の注射を、ポジティブコントロールとした抗VLA4特異的mAbは、抗原投与部位へのT細胞の流入をブロックすることによりCHSを阻害することが知られている。4~8匹のマウスの群を、各濃度の抗体で処置した。抗原投与の24時間後、マウスを、再度、ケタミン:キシラジンで麻酔し、そして両方の耳の耳厚を、104インチの精度で技術者用のミクロメーターで測定した。各マウスの耳の腫脹応答は、コントロール投与およびDNFB投与の耳の厚さの間で異なっていた。典型的な阻害されなかった耳の腫脹応答は、95~110×104インチであった。耳の腫脹応答の阻害を、処置群と、そのネガティブコントロール群との比較により判断した。処置群間での相違の統計的な有意性を、偏差の片側分析onewayanalysisofvarianceを用いて評価し、その後p005でTukeyKramerHonestlySignificantDifferenceJMPSASInstituteのコンピューター処理を行った。図5は、漸増濃度のmLTβRFcの投与により、阻害されなかったDNFB処置コントロール動物PBS、LFA3Fcと比較して、DNFB処置マウスの耳の腫脹応答に有意な減少がもたらされることを示す。可溶性LTβR約1~5mgkgは、阻害剤である抗VLA4特異的mAbと同じくらい効果的に、この接触DTH反応をブロックし得る。阻害されないこの耳の腫脹アッセイの一部は、恐らく、非特異的顆粒球浸潤に由来する。実施例11デキストラン硫酸溶液DSSIBDモデルマウスを、図の説明に規定されるように、hLFA3Ig、すなわちコントロールIg融合タンパク質、またはmLTβRIgで腹腔内注射により処置した。0日目、飲み水を5デキストラン硫酸溶液に交換し、そしてマウスを、1週間この液体で飼育した。1週間後、すなわち、DSS投与の開始の2週間後、マウスを屠殺し、そして体重変化および大腸の長さ肛門から盲腸までを測定した。図は、種々の処置後の体重変化および大腸の長さを示す。短くなった腸の長さならびに体重減少は、IBDの指標である。mLTβRIg処置により、結腸の短縮および体重減少を示す効力が劇的に妨げられることを示した。図6:種々の処置後、飲み水中のDSSの開始後14日に観測された体重変化。Veh=ビヒクル、LTBrおよびLFA3は、mLTβRIg融合タンパク質およびhLFA3Ig融合タンパク質を示す。これらは、DSS添加の1週間前、DSS投与時点、および1週間後すなわち、1、0および1週間での3回の注射、100μgの腹腔内注射により投与された。1群あたり10匹の動物を用いた。図7:6に記載される種々の処置後のDSS投与後14日目の結腸の長さ。実施例10IBDのCD45RB高/scidモデルCD4ポジティブT細胞を、磁気ビーズ技術を用いて、以前に記載されたようにFPowrieら、InternationalImmunology5146114711993、CB17雌マウスから単離する。次いで、CD8ポジティブT細胞を枯渇させたCD4細胞、B細胞、および単球を、これもまた本質的には上記に記載されるように、蛍光活性化細胞分別によりCD45RB高集団およびCD45RB低集団に分別した。5×105のCD45RB細胞を、雌CB17scidマウスに静脈内注射し、そしてマウスの体重を追跡した。CD45RB低細胞を戻した動物は通常の様式で体重を得たことが示され得る。対照的に、CD45Rb高細胞を受けた動物は、事実上、体重が減少し、そして10週で瀕死となった。コントロールマウスは、その最初の体重の約20を失った場合、そのマウスを屠殺し、そして種々の臓器を組織学により分析した。悪液質のように見える典型的な病的動物は、下痢を呈し、そして劇的に大きくなった結腸および盲腸を有した。図の説明に記載されるように、hLFA3Igで処置した動物は、処置しなかった動物と同様であった一方で、mLTβRIgで処置した動物は、体重が減少せず、比較的正常なサイズの結腸を有し、そして結腸で典型的に観測される広範囲に及ぶ炎症性浸潤を示さなかった。図8は、種々の方法で処置した、CD45RB高を注射した動物の体重減少の時間経過を示す。そして、図9は、注射後8週間での最終的な体重を示す。IBDの非常に異なる2つのモデルすなわち、CD45RBモデルおよびDSSモデルにおけるmLTβRIgの効果は、免疫系に対するこの処置の十分な効果の強力な証拠を表す。図8:CD45RBCD4ポジティブT細胞のscidマウスへの注射後の体重の時間経過。各曲線は1匹の動物を示し、そしてパネル内の書き込みは、どの細胞すなわち、CD45RB高またはCD45RB低が注射されたか、および処置の特徴を示す。動物を、100μgのタンパク質を腹腔内注射することにより、毎週処置した。処置を、細胞の注射の2週間前に開始し、そして実験の期間中続けた。図9:移植後10週での種々の処置後に観測された体重変化の平均および標準偏差1群あたり5~6匹。実施例11遅延型過敏のSRBCモデル雌balbcマウスを、PBS中の2×107個の洗浄したヒツジ赤血球SRBCを皮下注射することにより感作する。5日後、マウスに、PBS中の1×108個のSRBCを右肢の足蹠内へ注射足裏注射することにより抗原投与する。足蹠内への注射後の種々の時期に、足蹠厚をカリパスで測定した。図10は、mLTβRIgでの腹腔内注射のいずれかによる処置のマウスにおける足蹠の腫脹応答を示す。感作の時点、または両方の感作の時点、または抗原投与段階のいずれかの、mLTβRIgでの処置はSRBC誘導DTH応答を阻害した。図10:SRBCでの抗原投与の注射後18時間で測定された足蹠厚の増加を示す。処置は、感作するためのSRBCの皮下注射の直前、抗原投与時、またはその両方の時点のいずれかで行われた、PBSのネガティブコントロール注射、ポジティブコントロール抗体PS2これは、VLA4相互作用、従って細胞のトラフィッキングtraffickingをブロックする、およびmLTβRIgのいずれかであった100μgの静脈注射。配列表