抗EGFL7mumab4F1118、抗EGFL7mumab10G916、及び抗EGFL7mumab18F718からなる群から選択されるハイブリドーマによって産生される抗体。4F11CDRL1配列KASQSVDYDGDSYMS;4F11CDRL2配列GASNLES;4F11CDRL3配列QQNNEDPYT;4F11CDRH1配列TYGMS;4F11CDRH2配列WINTHSGVPTYADDFKG;及び、4F11CDRH3配列LGSSAからなる群から選択される一又は複数の相補性決定領域を含んでなる抗EGFL7抗体。前記抗体の軽鎖が、KASQSVDYDGDSYMS、GASNLES、及びQQNNEDPYTから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含む、請求項2に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の重鎖が、TYGMS、WINTHSGVPTYADDFKGおよびLGSSAから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含む、請求項2に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の軽鎖が、KASQSVDYDGDSYMS、GASNLESおよびQQNNEDPYTから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含み、前記抗体の重鎖が、TYGMS、WINTHSGVPTYADDFKGおよびLGSSAから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含む、請求項2に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の軽鎖が配列:DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMSWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKVEIKRを含む、請求項2に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の重鎖が配列:QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGHTFTTYGMSWVKQAPGKGLKWMGWINTHSGVPTYADDFKGRFAFSLETSASTAHLQINNLKNEDTATYFCARLGSSAVDYWGQGTTVTVSSを含む、請求項2に記載の抗EGFL7抗体。10G9CDRL1配列RSSQSLVHTNGITYLH;10G9CDRL2配列KVSNRFS;10G9CDRL3配列SQSTHVPLT;10G9CDRH1配列DYYMNSDYYMN;10G9CDRH2配列DINPKNGGTTYNQKFKG;及び、10G9CDRH3配列ALGVFDYからなる群から選択される一又は複数の相補性決定領域を含んでなる抗EGFL7抗体。前記抗体の軽鎖が、RSSQSLVHTNGITYLH、KVSNRFSおよびSQSTHVPLTから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含む、請求項8に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の重鎖が、DYYMNSDYYMN、DINPKNGGTTYNQKFKGおよびALGVFDYから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含む、請求項8に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の軽鎖が、RSSQSLVHTNGITYLH、KVSNRFSおよびSQSTHVPLTから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含み、前記抗体の重鎖が、DYYMNSDYYMN、DINPKNGGTTYNQKFKGおよびALGVFDYから選択されるCDR配列の少なくとも1、少なくとも2又は3つすべてを含む、請求項8に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の軽鎖が配列:DIVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHTNGITYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPLTFGAGTKVEIKRを含む、請求項8に記載の抗EGFL7抗体。前記抗体の重鎖が配列:EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFSDYYMNSDYYMNWVKQSHGKSLEWIGDINPKNGGTTYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCAREADYDPIYYAMDYWGQGTTLTVSAを含む、請求項8に記載の抗EGFL7抗体。CCP、RTIYからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合する抗EGFL7抗体。ヒトEGFL7上の請求項1から14のいずれか一の抗体と同じエピトープに結合する単離された抗体。EGFL7結合について請求項1から14のいずれか一の抗体と競合する単離された抗体。抗体がモノクローナル抗体である、請求項1から16のいずれか一に記載の抗体。抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、親和性成熟された抗体、ヒト抗体および二重特異性抗体からなる群から選択される、請求項1から17のいずれか一に記載の抗体。抗体が抗体断片である、請求項1から18のいずれか一に記載の抗体。請求項1から19のいずれか一に記載の抗EGFL7抗体をを含有してなる製薬的組成物。さらに抗血管新生剤を含有してなる、請求項20に記載の製薬的組成物。抗血管新生剤がベバシズマブおよびラニビズマブからなる群から選択される、請求項21に記載の製薬的組成物。請求項1から19のいずれか一に記載の抗体をコードするポリヌクレオチド。請求項23のポリヌクレオチドを含むベクター。前記ベクターが発現ベクターである、請求項24に記載のベクター。請求項24又は25のベクターを含む宿主細胞。宿主細胞が原核生物である、請求項26に記載の宿主細胞。宿主細胞が真核生物である、請求項26に記載の宿主細胞。宿主細胞が哺乳類である、請求項26に記載の宿主細胞。適切な宿主細胞内で請求項25に記載のベクターを発現させ、抗体を回収することを含む、抗EGFL7抗体の作製方法。宿主細胞が原核生物である、請求項30に記載の方法。宿主細胞が真核生物である、請求項30に記載の方法。血管新生と関係する病的状態を有する被検体の血管新生を低減又は阻害する方法であって、請求項1から19のいずれか一に記載の抗EGFL7抗体又は請求項20に記載の製薬的組成物の有効量を被検体に投与することを含む方法。病的状態が新生物である、請求項33に記載の方法。新生物がカルチノーマである、請求項34に記載の方法。病的状態が眼と関係している、請求項33に記載の方法。病的状態が眼内新生血管疾患である、請求項36に記載の方法。さらに、抗血管新生剤を被検体に投与することを含む、請求項33から35のいずれか一に記載の方法。抗血管新生剤が血管内皮細胞増殖因子のアンタゴニストである、請求項38に記載の方法。アンタゴニストが抗VEGF抗体である、請求項39に記載の方法。抗VEGF抗体がベバシズマブである、請求項40に記載の方法。さらに、抗血管新生剤を被検体に投与することを含む、請求項36又は37に記載の方法。抗血管新生剤が血管内皮細胞増殖因子のアンタゴニストである、請求項42に記載の方法。アンタゴニストが抗VEGF抗体である、請求項43に記載の方法。抗VEGF抗体がラニビズマブである、請求項44に記載の方法。抗血管新生剤が抗EGFL7抗体の投与の前又は投与の後に投与される、請求項38から45のいずれか一に記載の方法。抗血管新生剤が抗EGFL7抗体と同時に投与される、請求項38から45のいずれか一に記載の方法。血管新生と関係する病的状態を有する被検体において抗血管新生剤の効果を上げる方法であって、請求項1から19のいずれか一に記載の抗体又は請求項20又は21に記載の製薬的組成物を被検体に投与することを含む方法。病的状態が新生物である、請求項38に記載の方法。新生物がカルチノーマである、請求項39に記載の方法。抗抗原剤がベバシズマブである、請求項48から50のいずれか一に記載の方法。さらに、化学療法剤を投与することを含む、請求項48から51のいずれか一に記載の方法。病的状態が眼と関係している、請求項48に記載の方法。病的状態が眼内新生血管疾患である、請求項53に記載の方法。抗血管新生剤が、ラニビズマブである、請求項53又は54に記載の方法。さらに、副腎皮質ステロイドを投与することを含む、請求項53から55のいずれか一に記載の方法。さらに、光線力学的療法を投与することを含む、請求項53から55のいずれか一に記載の方法。実施例1EGFL7に対するモノクローナル抗体の産生と特徴付けモノクローナル抗体の産生新規のヒト分泌型膜貫通型タンパク質、特に血管の発達の調節に関与するものを発見するためにEGFL7を同定してクローニングした。ヒトEGFL7のクローニング及び発現の詳細は、例えば米国特許公開第2003/0224948号A1に記載されている。ヒトEGFL7のGenBank寄託番号はNM_016215である。Egfl7ホモ接合体ノックアウトマウスの足蹠に、Ribiアジュバントにて希釈した大腸菌産生のHis6タグ化組み換えヒト及びマウスEGFL7タンパク質を週に2回、8用量を投与して免疫化した。高い血清力価を示す10匹のマウスからリンパ節のB細胞を採取し、マウスメラノーマ細胞と融合させた。10~14日後に、組み換えEGFL7タンパク質を用いた直接ELISAにより、抗体産生について上清をスクリーニングした。ポジティブクローンを2回サブクローニングして単クローン性を達成した。精製した抗体を大規模に生成するために、ハイブリドーマ細胞を、プリスチンで初回刺激したBALB/cマウスの腹腔内に投与するか、又はインテグラバイオリアクターにて培養した。腹水液又は培養液上清を、プロテインA親和性クロマトグラフィにて精製した。更なる分析のために、モノクローナル抗体のうち4F11、10G9および18F7なる3つを選択した。これらのモノクローナル抗体は、2006年1月にATCCに寄託した。HUVEC細胞接着および移動を遮断するモノクローナル抗体培養プレート上にコートしたEGFL7は、その接着強度はフィブロネクチン及びコラーゲンなどの他の細胞接着分子よりも著しく弱いにもかかわらず、ヒトの臍帯静脈内皮細胞接着を促すことが既に示されている。したがって、発明者等はMab4F11、10G9および18F7がEGFL7コートプレートへの細胞接着を遮断するか否かを決定するために実験を行った。5μg/mlのフィブロネクチンと大腸菌の組み換えヒトEGFL7生成物にてプレートをコートした。PBSにてすすいだ後、HUVECを、EGM2培地に5×105/cm2の密度で播き、140gで5分間遠心して細胞接着を同期させ、その後インキュベートした。抗体活性を分析するために、EGM2培地中のHUVEGを、播く前に0.5、5又は50μg/mlの濃度の抗体を含む50mMトリス/125mMNaCl、pH8.6とともに予めインキュベートした。Mab4F11、10G9及び18F7のそれぞれは濃度に依存して、ヒト又はマウスのEGFL7タンパク質コートプレートへの細胞接着を遮断し、いずれのMabもフィブロネクチンコートプレートへの細胞接着を遮断しなかった。この遮断はEGFL7に特異的であったことが確認された。また、これらの抗体がEGFL7コートプレート上でのHUVEC移動を遮断するか否かを調べた。プレートは、5μg/mlの以下のタンパク質のいずれか一にてコートした。BSA、コラーゲン、フィブロネクチンおよび組み換えヒトEGFL7。PBSですすいだ後、HUVECは、EGM2に5×105/cm2の密度で播いた。細胞を2時間接着させ、単層をピペットチップで瘢痕化した。EGM2にて2回ウェルを洗浄し、50μg/mlのコントロールmab又は4F11、10G9、18F7を含有する新鮮培地をそれぞれ加えた。ウェルは、数時間おきに24時間にわたって撮影し、瘢痕閉鎖をモニターした。Mab4F11、10G9、18F7のそれぞれはEGFL7タンパク質コートプレート上での細胞移動を遮断したが、他のタンパク質でコートしたプレート上の細胞移動は遮断しなかった。コントロールmabはいずれのタンパク質に対しても遮断活性を持たない。これらの結果から、3つすべての抗EGFL7mabはEGFL7上のHUVEC移動を特異的に遮断したことが示唆される。興味深いことに、本発明者等はMab4F11による遮断は形態に依存していたことを明らかにした。具体的には、抗体は、抗体貯蔵液を50mMトリス/125mMNaClにて調製した場合にはHUVEC細胞接着の遮断に高い有効性があるが、PBSにて調製した場合にはわずかな有効性しか示さなかった。この違いは他の2つのMabでは観察されなかった。Mab4F11および10G9の配列決定総RNAは、RNeasyミニキットを用いて、マウス抗ヒトEGFL7モノクローナル抗体4F11および10G9を産生するハイブリドーマ細胞から抽出した。4F11および10G9の可変軽鎖および可変重鎖ドメインは、以下の変性プライマーを用いたRTPCRを使用して増幅した。4F11用:軽鎖フォワード:5GTCAGATATCGTKCTSACMCARTCTCCWGC3重鎖フォワード:5GATCGACGTACGCTCAGATHCARYTGGTGCARTCTGGGATCGACGTACGCTCAGATHCARYTGGTGCARTCTGG310G9用:軽鎖フォワード:5GATCGATATCGTGATGACBCARACTCCACT3重鎖フォワード:5GATCGACGTACGCTGAGGTYCAGCTSCAGCAGTCTGG34F11および10G9用:軽鎖リバース:5TTTDAKYTCCAGCTTGGTACC3重鎖リバース:5ACAGTGGGCCCTTGGTGGAGGCTGMRGAGACDGTGASHRDRGT3フォワードプライマーは、2つの抗体のVL及びVH領域のN末端アミノ酸配列に特異的であった。LCおよびHCそれぞれのリバースプライマーは、2つの抗体で同一であり種間で高度に保存されている、定常軽鎖および定常重鎖ドメイン1の領域にアニールするように設定している。増幅されたVLは、pRK哺乳類細胞の発現ベクターにクローニングした。増幅されたVHは、pRK哺乳類細胞の発現ベクターに挿入した。挿入物のポリヌクレオチド配列は、慣例的な配列決定法を用いて決定した。4F11軽鎖および重鎖と10G9軽鎖及び重鎖の配列を図1から4に示す。アイソタイプ試験と結合親和性Mab4F11、10G9および18F7を、標準的な方法を用いてアイソタイプIgG2bであることを決定した。ヒトおよびマウスのEGFL7に対するMabの結合親和性は、室温のファルマシアBIAcore3000を参照を用いた表面プラスモン共鳴によって決定した。抗EGFL7抗体を一次アミン基を介してセンサーチップに固定した。カルボキシメチル化センサーチップ表面マトリクスを、0.025MNヒドロキシスクシニミドと0.1MNエチルNカルボジイミドの20μl混合物を5μl/分で注入することによって活性化した。10ug/mlの組み換えヒト又はマウスEGFL7タンパク質を含む5~10μlの10mM酢酸ナトリウム、pH4.5を5μl/分で注入した。カップリングの後、チップ上の空いている部位は、20μlの1Mエタノールアミン、pH8.5を注入して反応を止めた。ランニングバッファは、0.05ポリソルベート20を含有するPBSであった。動態測定のために、ポリHisタグ化EGFL7のランニングバッファによる2倍段階希釈物を30μl/分の流速で3分間フローセルに対して注入し、結合したポリhisタグ化EGFL7を20分かけて分離した。20μlの10mMグリシンHClを注入することによって結合表面を再生した。活性化されているが固定化された抗体を持たないフローセルを参照細胞として用いた。フローセルに対するポリHisタグ化EGFL7の非特異的な有意な結合はなかった。見かけの結合親和性を算出するために、データは、包括的フィッティングを用いた11結合モデルによって分析した。会合および解離速度定数は同時にフィットさせた。50mMトリス/125mMNaClのMab貯蔵液を用いたこれらの実験の結果を表2に示す。表2.ヒトおよびマウスのEGFL7に対するMabのKDMabによって認識されるEGFL7エピトープの決定本発明者等はモノクローナル抗体によって認識されるエピトープを決定し、最初に各々のMabに結合したEGFL7の領域をマッピングした。293細胞に、図5に示すタンパク質の完全長EGFL7又は切断型を含む発現ベクターを形質移入した。次いで、形質移入した細胞の細胞溶解物のウエスタンブロットを、Mab4F11、10G9および18F7のプローブにて行った。本発明者等は、各々のMabがEGFL7のEMIタンパク質に結合したことを明らかにした。各々のMabによって認識される特定のエピトープを限定するために、本発明者等は、EMIドメインの一部を占めるオーバーラッピングポリペプチドを合成し、Mab結合について完全長EGFL7と競合する能力について試験した。例えば、Mab4F11に用いるポリペプチドの配列は以下の通りである。本発明者等は、Mab4F11とEGFL7タンパク質を混合し、10倍モル過剰量のポリペプチドp1、p2およびp3それぞれによって結果として生じる複合体を免疫沈降させ、SDSPAGEにてそれらを視覚化した。Mab4F11では、Mab4F11結合についてp2のみが完全長EGFL7と競合したことが明らかになった。結果から、Mab4F11が配列CCPを含むEGFL7のエピトープを認識することが示唆される。本発明者等は、以下の配列を有するポリペプチドを用いたその他の2つのMabにより同様な実験を行った。本発明者等は、Mab10G9および18F7がともに、配列RTIYを含むエピトープを認識することを決定した。実施例2インビボの腫瘍増殖を抑制する抗EGFL7Mabこの実施例では、いくつかのモデルにおいて、抗EGFL7Mabをインビボでの腫瘍増殖の阻害能について試験した。最初にColo205モデルおよびA673モデルにおいてMab含有PBSを試験した。発明者等は、単剤としてMab含有PBSを用いたところこれらのモデルにおける効果は観察されなかった。次いで、Mab単独および/またはMabと抗VEGF抗体であるB2041の組み合わせを試験した。以下の3つのモデルにおいて抗体を試験した。Her2ヒト乳癌モデル、ヒト肺癌モデル及び別のヒト乳癌モデル。これらの腫瘍モデルは十分に樹立されており、例えば、Lee等ClinCancerRes11606574;Cameron等CancerCellInt523;Finkle等ClinicalCancerRes102499251において記述される。各々の動物は、抗ブタクサMab;B204単独;18F7単独;またはB204と4F11、10G9又は18F7にて治療した。簡単に言うと、H1299モデルでは、HRLN雌nu/nuマウスの横腹の皮下に1×107のH1299腫瘍細胞を注入し、MDAMB231モデルでは、HRLN雌nu/nuマウスの横腹の皮下に5×106のMDAMB231腫瘍細胞を注入した。各々のモデルでは、平均腫瘍サイズが100mm3に達した場合に抗体治療を開始した。抗ブタクサコントロールMabとB204は10mg/kgで週に1回投与し、4F11、10G9及び18F7は10mg/kgで週に2回投与した。Fo5モデルでは効果が観察されなかった。他の2つのモデルでは有意な腫瘍抑制効果が観察された。図6~7に示すように、H1299モデルでは、Mab4F11とB2041の組合せは、コントロール又はB2041単独より有意に良好な効果を示した。図8に示すように、MDAMB231では、Mab4F11又はMab10G9とB2041の組合せは、コントロール又はB2041単独より良好な効果を示した。図9に示すように、MDAMB231では、Mab18F7単独はコントロールより良好な効果を示し、Mab18F7とB2041の組合せは、Mab18F7又はB2041単独より有意に良好な効果を示した。興味深いことに、本発明者等は、H1299モデルにおけるMab4F11による治療は、抗VEGF療法の中断後の完全な血管回復を阻害することも明らかにした。治療中断後に、腫瘍血管パターンをB2041単独で治療した腫瘍とB2041と4F11で治療した腫瘍との間で比較すると、腫瘍の血管再生に有意な遅延が観察された。これらの結果から、抗VEGF療法と組み合わせた場合に、抗EGFL7療法が相加的又はさらに相乗的な効果を示しうることが強く示唆される。また、抗EGFL7抗体の抗腫瘍活性を試験するための分野で利用できる他の腫瘍モデルを使用する。この腫瘍モデルには、限定するものではないが、LS174T、BXPC3、HCT116、MV522、SKMES、Colon26、MDAMB231、MCF7、H1299、SW620、LL、Fo5、4T1、HT29、SW480、7860。下記のハイブリドーマは、アメリカ培養細胞系統保存機関、POBox1549ManassasVA20108USAに寄託されている。これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約及びその規則の規定に従って行われた。これは、寄託の日付から30年間、寄託の生存可能な培養が維持されることを保証するものである。これらの細胞系統は、ブダペスト条約の条項に従い、またジェネンテク社とATCCとの間の合意に従い、ATCCから入手することができ、これは、どれが最初であろうとも、関連した米国特許の発行時又は任意の米国又は外国特許出願の公開時に、細胞系統を永久かつ非制限的に入手可能とすることを保証し、米国特許法第122条及びそれに従う特許庁長官規則に従って権利を有すると米国特許商標庁長官が決定した者に細胞系統を入手可能とすることを保証するものである。本出願の譲受人は、寄託した細胞系統が、適切な条件下で培養されていた場合に死亡もしくは損失又は破壊されたならば、通知により細胞系統を同一の他のものと即座に取り替えることに同意する。寄託された細胞系統の入手可能性は、特許法に従いあらゆる政府の権限下で認められた権利に違反して、本発明を実施するライセンスであるとみなされるものではない。前述の発明は、理解を明確にするための図説及び実施例によってある程度詳細に記載されているが、この説明及び実施例は本発明の権利範囲を限定するものとみなされるものではない。