"下記の式I:CCによって表される、12~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とするペプチド。下記の式II:CLCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、請求項1に記載のペプチド。下記の式III:CLXYGVCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、請求項2に記載のペプチド。下記の式IV:CLXYGVCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、請求項3に記載のペプチド。18アミノ酸残基とした場合の、N末端から1~3、5~14、16~18番目の各アミノ酸残基が、1番目のアミノ酸残基QHKRS又はP、2番目のアミノ酸残基MKRLVA又はD、3番目のアミノ酸残基RLM又はV、5番目のアミノ酸残基L、6番目のアミノ酸残基SHQTKRN又はA、7番目のアミノ酸残基Y、8番目のアミノ酸残基K又はR、9番目のアミノ酸残基C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、10番目のアミノ酸残基C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、11番目のアミノ酸残基G、12番目のアミノ酸残基RST又はK、13番目のアミノ酸残基RMKEN又はP、14番目のアミノ酸残基V、16番目のアミノ酸残基LFV又はI、17番目のアミノ酸残基WLRETSQP又はA、あるいは、18番目のアミノ酸残基LIYA又はVである、請求項1~4のいずれか1項に記載のペプチド。上記の式I~式IVのペプチドにおいて、18アミノ酸残基とした場合のN末端から16番目のアミノ酸残基Xがロイシン又はフェニルアラニン残基である、請求項1~5のいずれか1項に記載のペプチド。上記の式I~式IVのペプチドにおいて、18アミノ酸残基とした場合のN末端から18番目のアミノ酸残基Xがロイシン残基である、請求項1~6のいずれか1項に記載のペプチド。以下の1~26のいずれかのアミノ酸配列からなる、請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチド。1HMRCLHYKGRRVCFLL配列番号12QMRCLSYKGRRVCLWL配列番号23HKRCLHYRGRMVCFLI配列番号34KRLCLQYKGSKVCFRL配列番号45RMRCLTYRGRRVCLEL配列番号56SMRCLQYRGSRVCLTL配列番号67QKRCLKYKGSRVCFFL配列番号78HLRCLRYKGTRVCFSL配列番号89HVRCLSYKGREVCVQL配列番号910PRMCLHYKGRRVCIPY配列番号1011HVRCLRYRGKNVCFLL配列番号1112SDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1513RDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1614HDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1715SMVCLRYRGRPVCFQV配列番号1916SAVCLRYRGRPVCFQV配列番号2017SDVCLNYRGRPVCFQV配列番号2418SDVCLHYRGRPVCFQV配列番号2519SDVCLAYRGRPVCFQV配列番号2620SDVCLRYRGRPVCFRV配列番号3721SDVCLRYRGRPVCFLV配列番号3822SDVCLRYRGRPVCFAV配列番号3923SDVCLRYRGRPVCFQL配列番号4124SDVCLRYRGRPVCFQA配列番号4225HMVCLAYRGRPVCFAL配列番号4326HMVCLSYRGRPVCFSL配列番号44ペプチドが2つのシステイン残基間でジスルフィド結合を形成している、請求項1~8のいずれか1項に記載のペプチド。IgAの血清型単量体及び分泌型二量体に結合する、請求項1~9のいずれか1項に記載のペプチド。標識が結合されている、請求項1~10のいずれか1項に記載のペプチド。請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチドと連結されたタンパク質からなる融合タンパク質。請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチドを固相に結合してなる固定化ペプチド。請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチドをコードする核酸。請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項13に記載の固定化ペプチドをIgAと結合させること、並びに、結合したIgAを遊離させてIgAを回収することを含む、IgAの精製方法。請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項13に記載の固定化ペプチドにサンプル中のIgAを結合させ、結合したIgAを検出することを含む、IgAの検出方法。請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項13に記載の固定化ペプチドの少なくとも1種を含む、ヒトIgAの分析又は精製のためのキット。請求項13に記載の固定化ペプチドを含有する、IgA分離用カラム。本発明は、ヒトIgAに特異的又は選択的に結合性を有するペプチドを提供することを目的とする。本発明はまた、該ペプチドを用いてヒトIgAを精製する又は分析例えば、検出又は定量する方法を提供することを別の目的とする。ヒトIgAは、背景技術に記載したように、粘膜及び血中に存在し、感染等に対する防御に重要な役割を果たしている。このような特性のために、IgAは抗体医薬として感染症や腫瘍等の疾患の治療に使用されようとしている。本発明は、このような状況を踏まえたものであり、ヒトIgAに特異的又は選択的に結合可能なペプチドを提供することによって医薬として使用可能なIgAの精製及び分析のために有用であると考えられる。本発明は、要約すると、以下の特徴を有する。1下記の式I:CCによって表される、12~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とするペプチド。2下記の式II:CLCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、上記1に記載のペプチド。3下記の式III:CLXYGVCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、上記2に記載のペプチド。4下記の式IV:CLXYGVCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、上記3に記載のペプチド。518アミノ酸残基とした場合の、N末端から1~3、5~14、16~18番目の各アミノ酸残基が、1番目のアミノ酸残基QHKRS又はP、2番目のアミノ酸残基MKRLVA又はD、3番目のアミノ酸残基RLM又はV、5番目のアミノ酸残基L、6番目のアミノ酸残基SHQTKRN又はA、7番目のアミノ酸残基Y、8番目のアミノ酸残基K又はR、9番目のアミノ酸残基C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、10番目のアミノ酸残基C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、11番目のアミノ酸残基G、12番目のアミノ酸残基RST又はK、13番目のアミノ酸残基RMKEN又はP、14番目のアミノ酸残基V、16番目のアミノ酸残基LFV又はI、17番目のアミノ酸残基WLRETSQP又はA、あるいは、18番目のアミノ酸残基LIYA又はVである、上記1~4のいずれかに記載のペプチド。6上記の式I~式IVのペプチドにおいて、18アミノ酸残基とした場合のN末端から16番目のアミノ酸残基Xがロイシン又はフェニルアラニン残基である、上記1~5のいずれかに記載のペプチド。7上記の式I~式IVのペプチドにおいて、18アミノ酸残基とした場合のN末端から18番目のアミノ酸残基Xがロイシン残基である、上記1~6のいずれかに記載のペプチド。8以下の1~26のいずれかのアミノ酸配列からなる、上記1~7のいずれかに記載のペプチド。1HMRCLHYKGRRVCFLL配列番号12QMRCLSYKGRRVCLWL配列番号23HKRCLHYRGRMVCFLI配列番号34KRLCLQYKGSKVCFRL配列番号45RMRCLTYRGRRVCLEL配列番号56SMRCLQYRGSRVCLTL配列番号67QKRCLKYKGSRVCFFL配列番号78HLRCLRYKGTRVCFSL配列番号89HVRCLSYKGREVCVQL配列番号910PRMCLHYKGRRVCIPY配列番号1011HVRCLRYRGKNVCFLL配列番号1112SDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1513RDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1614HDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1715SMVCLRYRGRPVCFQV配列番号1916SAVCLRYRGRPVCFQV配列番号2017SDVCLNYRGRPVCFQV配列番号2418SDVCLHYRGRPVCFQV配列番号2519SDVCLAYRGRPVCFQV配列番号2620SDVCLRYRGRPVCFRV配列番号3721SDVCLRYRGRPVCFLV配列番号3822SDVCLRYRGRPVCFAV配列番号3923SDVCLRYRGRPVCFQL配列番号4124SDVCLRYRGRPVCFQA配列番号4225HMVCLAYRGRPVCFAL配列番号4326HMVCLSYRGRPVCFSL配列番号449ペプチドが2つのシステイン残基間でジスルフィド結合を形成している、上記1~8のいずれかに記載のペプチド。10IgAの血清型単量体及び分泌型二量体に結合する、上記1~9のいずれかに記載のペプチド。11標識が結合されている、上記1~10のいずれかに記載のペプチド。12上記1~11のいずれかに記載のペプチドと連結されたタンパク質からなる融合タンパク質。13上記1~11のいずれかに記載のペプチドを固相に結合してなる固定化ペプチド。14上記1~11のいずれかに記載のペプチドをコードする核酸。15上記1~11のいずれかに記載のペプチド又は上記13に記載の固定化ペプチドをIgAと結合させること、並びに、結合したIgAを遊離させてIgAを回収することを含む、IgAの精製方法。16上記1~11のいずれかに記載のペプチド又は上記13に記載の固定化ペプチドにサンプル中のIgAを結合させ、結合したIgAを検出することを含む、IgAの検出方法。17上記1~11のいずれかに記載のペプチド又は上記13に記載の固定化ペプチドの少なくとも1種を含む、ヒトIgAの分析又は精製のためのキット。18上記13に記載の固定化ペプチドを含有する、IgA分離用カラム。本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2010118508号の明細書および/または図面に記載される内容を包含する。本発明のヒトIgA結合性ペプチドは、IgG、IgM及びIgEと比べてIgAに対し高い選択性をもってヒトIgAに結合可能であるという利点を有している。このことは、例えばヒト血清等からIgAを選択的に分離することを可能にすることを意味する。今回、本発明者らが見出したヒトIgAに対し特異的又は選択的な結合性を有するペプチドは、T7ファージ提示システムによって構築された分子内に1つのジスルフィド結合を含むランダムペプチドライブラリTheJournalofbiologicalchemistry28499869993を参考に、新たにデザイン、構築したライブラリからバイオパンニング法を利用して単離されたものであり、このとき得られた4種の特異的クローンは、互いに共通の配列の相同性が見られ、その配列を基に多様に置換又は欠失して調製した合成ペプチドは、IgAに対する優れた特異性と親和性を示した。これらのペプチドのIgA結合に必須の残基の同定を行い、親和性増強へのアプローチ並びに該ペプチドを使ったヒト血清からのIgAの精製への応用を可能にした。本発明のIgA結合性ペプチドは、最もコンパクトな、すなわち小さな、もので、12又は13残基であり、非特許文献13に記載されたStreptococcusSir22由来の約50残基のSapペプチドC末端に1つのCysを有する。に比べても4分の1程度と小さく、これにより低コストによるペプチドをベースにしたIgAの精製システムの構築が期待できる。以下に、本発明についてさらに詳細に説明する。具体的には、本発明のIgA結合性ペプチド、該ペプチドによるIgAの精製法及び分析法、そのようなIgA精製又は検出のためのキットについて説明する。IgA結合性ペプチド本発明のペプチドは、多数のランダムペプチドを含むファージライブラリのなかからヒトIgAと特異的に又は選択的に結合性を有するものとしてスクリーニングされたものであり、従来公知の非特許文献13に記載されるようなポリペプチドとはその由来や一次構造が異なるものである。本明細書中で使用するヒトIgAは、IgA1及び又はIgA2を指すものとする。すなわち、本発明のペプチドは、最も広義の一次構造として、下記の式I:CCによって表される、12~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とするペプチドである。上記式で、N末端又はC末端のX13という表記は、システイン以外の独立的に任意のアミノ酸残基Xが1~3個連続していることを意味し、それを構成するアミノ酸残基は同じか又は異なる残基であるが、好ましくは3個すべてが同じ残基でない配列からなる。同様に、X810もシステイン以外の独立的に任意のアミノ酸残基Xが8~10個連続していることを意味し、それを構成するアミノ酸残基は同じか又は異なる残基であるが、好ましくは3個以上が同じ残基でない配列からなる。また、以下の式でX3、X79、X2などの表記がでてくるが、これらも同様の意味を有する。式Iの2つのシステイン残基はジスルフィド結合して環状ペプチドを形成することができる。通常、式Iのペプチドはジスルフィド結合している。式Iのペプチドのアミノ酸配列においてアミノ酸残基Xをさらに特定した式II、式III及び式IVで表されるペプチドを以下に示す。すなわち、式IIで表されるペプチドは、CLCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする。式IIIで表されるペプチドは、CLXYGVCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする。式IVで表されるペプチドは、CLXYGVCによって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする。上記の式II~IVのペプチドのアミノ酸配列において、18アミノ酸残基とした場合の、N末端から9番目及び10番目のアミノ酸残基Xはともに欠失していることが好ましく、そのようなペプチドは16アミノ酸長からなる。本明細書で使用する18アミノ酸残基とした場合のとは、ペプチドのアミノ酸残基をアミノ酸位置番号で呼ぶときに、最長のアミノ酸長である18残基のN末端から順番に1番目から18番目まで番号づけするために便宜的に表現した用語である。さらに、上記の各式のペプチドのアミノ酸配列のシステイン以外のアミノ酸残基、すなわち、18アミノ酸残基とした場合のN末端から1~3、5~14、16~18番目の各アミノ酸残基は、以下のものから選択されることが好ましい。ここで、各大文字のアルファベットは、アミノ酸の一文字表記である。1番目のアミノ酸残基QHKRS又はP、好ましくはH2番目のアミノ酸残基MKRLVA又はD、好ましくはM3番目のアミノ酸残基RLM又はV、好ましくはV5番目のアミノ酸残基L6番目のアミノ酸残基SHQTKRN又はA、好ましくはS又はA7番目のアミノ酸残基Y8番目のアミノ酸残基K又はR、好ましくはR9番目のアミノ酸残基C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、好ましくは欠失している10番目のアミノ酸残基C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、好ましくは欠失している11番目のアミノ酸残基G12番目のアミノ酸残基RST又はK、好ましくはR13番目のアミノ酸残基RMKEN又はP、好ましくはP14番目のアミノ酸残基V16番目のアミノ酸残基LFV又はI、好ましくはL又はF17番目のアミノ酸残基WLRETSQP又はA、好ましくはS又はA18番目のアミノ酸残基LIYA又はV、好ましくはL本発明のペプチドの具体例のいくつかを以下の1~26に列挙するが、これらに制限されないことはいうまでもない。このようなペプチドはいずれもヒトIgAに対し他の種の免疫グロブリンと比べて格別に高い結合特異性又は結合選択性を有している。1HMRCLHYKGRRVCFLL配列番号12QMRCLSYKGRRVCLWL配列番号23HKRCLHYRGRMVCFLI配列番号34KRLCLQYKGSKVCFRL配列番号45RMRCLTYRGRRVCLEL配列番号56SMRCLQYRGSRVCLTL配列番号67QKRCLKYKGSRVCFFL配列番号78HLRCLRYKGTRVCFSL配列番号89HVRCLSYKGREVCVQL配列番号910PRMCLHYKGRRVCIPY配列番号1011HVRCLRYRGKNVCFLL配列番号1112SDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1513RDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1614HDVCLRYRGRPVCFQV配列番号1715SMVCLRYRGRPVCFQV配列番号1916SAVCLRYRGRPVCFQV配列番号2017SDVCLNYRGRPVCFQV配列番号2418SDVCLHYRGRPVCFQV配列番号2519SDVCLAYRGRPVCFQV配列番号2620SDVCLRYRGRPVCFRV配列番号3721SDVCLRYRGRPVCFLV配列番号3822SDVCLRYRGRPVCFAV配列番号3923SDVCLRYRGRPVCFQL配列番号4124SDVCLRYRGRPVCFQA配列番号4225HMVCLAYRGRPVCFAL配列番号4326HMVCLSYRGRPVCFSL配列番号44上記の26種のペプチドのうち配列番号43及び配列番号44のペプチドがとりわけヒトIgAとの高い親和性を有している。前述のとおり、本発明に関わる上記式のペプチドは、各アミノ酸配列のなかに離間した2つのシステイン残基を有し、該システイン残基間でジスルフィド結合を形成しうるようにシステイン残基が配置されていることを特徴としており、好ましいペプチドは、2つのシステイン残基がジスルフィド結合して環状ペプチドを形成し、各システイン残基のN末端側及びC末端側には1~3個、好ましくは3個、のシステイン以外の任意のアミノ酸残基を有している。1~3、16~18番目のそのようなアミノ酸残基は、上記例示のものである。本発明のペプチドは、ヒトIgAとの結合親和性が、他のヒト免疫グロブリンIgG、IgE又はIgMと比較して約10倍以上、好ましくは約50倍以上、より好ましくは約200倍以上高い。本発明のペプチドとヒトIgAとの結合に関する解離定数は、表面プラズモン共鳴スペクトル解析例えばBIACOREシステムタンパク質相互作用解析使用により決定可能であり、例えば1×105M~1×107M未満、好ましくは1×108M未満、より好ましくは1×109M未満、さらに好ましくは1×1010M未満である。固相に固定化した本発明のペプチドを用いて、実際にヒト血清中のIgAとの結合を試みたときには、IgAの血清型単量体及び分泌型二量体に結合することが判明し、そのいずれのIgAの分離も可能であることが示された。本発明のペプチドは、慣用の液相合成法、固相合成法などのペプチド合成法、自動ペプチド合成機によるペプチド合成などによって製造することができるVol12p119StewartetalSolidPhasePeptideSynthesisWHFreemanCoHoughtenProcNatlAcadSciUSA82p5132、新生化学実験講座1タンパク質IV1992日本生化学会編,東京化学同人、東京、日本国。あるいは、本発明のペプチドをコードする核酸を用いた遺伝子組換え法やファージディスプレイ法などによって、ペプチドを製造してもよい。例えば本発明のペプチドのアミノ酸配列をコードするDNAを発現ベクター中に組み込み、宿主細胞中に導入し培養することにより、目的のペプチドを製造することができる。製造されたペプチドは、常法により、例えば、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換カラムクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、逆相カラムクロマトグラフィー、HPLCなどのクロマトグラフィー、硫安分画、限外ろ過、免疫吸着法などにより、回収又は精製することができる。ペプチド合成は、各アミノ酸の、結合しようとするα-アミノ基とα-カルボキシル基以外の官能基を保護したアミノ酸類を用意し、それぞれのアミノ酸のα-アミノ基とα-カルボキシル基との間でペプチド結合形成反応を行う。通常、ペプチドのC末端に位置するアミノ酸残基のカルボキシル基を適当なスペーサー又はリンカーを介して固相に結合しておく。上で得られたジペプチドのアミノ末端の保護基を選択的に除去し、次のアミノ酸のα-カルボキシル基との間でペプチド結合を形成する。このような操作を連続して行い側基が保護されたペプチドを製造し、最後に、すべての保護基を除去し、固相から分離する。保護基の種類や保護方法、ペプチド結合法の詳細は、上記の文献に詳しく記載されている。遺伝子組換え法は、本発明のペプチドをコードするDNAを適当な発現ベクター中に挿入し、適当な宿主細胞にベクターを導入し、細胞を培養し、細胞内から又は細胞外液から目的のペプチドを回収することを含む。ベクターは、限定されないが、例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、ファージミド、ウイルスなどのベクターである。プラスミドベクターとしては、限定するものではないが、大腸菌由来のプラスミド例えばpET22b、pBR322、pBR325、pUC118、pUC119、pUC18、pUC19、pBluescript等、枯草菌由来のプラスミド例えばpUB110、pTP5等、酵母由来のプラスミド例えばYEp13、YCp50等などが挙げられる。ファージベクターとしては、限定するものではないが、T7ファージディスプレイベクターT7Select103b、T7Select11b、T7Select12a、T7Select12b、T7Select12c等本発明はさらに、上記の本発明のペプチド又は固定化ペプチドにサンプル中のIgAを結合させ、結合したIgAを検出することを含む、IgAの検出方法を提供する。ここで、検出には、定性又は定量のいずれかの分析を含むものとする。IgAの検出は、操作中に適するバッファーを使用しながら、メンブランやポリスチレンウエルプレートなどにサンプルを結合し、これに本発明の標識ペプチドを接触させ、必要に応じて洗浄後、標識のレベルを定性又は定量することによって行うことができる。あるいは、上記のような本発明のペプチドを固定化したHPLCカラムを使用する場合には、該カラムに、ヒトIgAを含有するサンプルを注入し、結合バッファーを流してペプチドにヒトIgAを結合し、例えば吸光度280nmで、もしくは280nmの励起光による350nmの蛍光で、タンパク質を検出し記録し、溶出緩衝液例えば、015MのNaClを含む01Mグリシン塩酸緩衝液pH25へのグラジエント溶出にてカラムから溶出させ、現れたピーク及びピーク面積により、IgAの定性及び定量を行うことができる。キット及びカラム本発明はさらに、上記の本発明のペプチド又は固定化ペプチドの少なくとも1種を含む、ヒトIgAの分析定性、定量等又は精製のためのキットを提供する。本発明のキットに含まれる個々のペプチド又は固定化ペプチドは、個別の容器に収容される。また、必要であれば、ヒトIgAの分析手順や精製手順を記載した使用説明書をキットに備えてもよい。さらにキットには、分析に必要な試薬やバッファー、固定化ペプチド充填カラムなどを含めてもよい。本発明はさらに、上記の本発明の固定化ペプチドを含有する、IgA分離用カラムを提供する。固定化ペプチドは、ペプチドを、一般にクロマトグラフィー用の担体充填材に共有的に又は非共有的に結合することによって作製されうる。そのような担体の例は、アガロースやセファロースなどの多糖類ベースの担体、シリカゲルベースの担体、樹脂ベース若しくはポリマーベースの担体などである。ペプチドを担体に結合するときには、炭化水素鎖例えばC4~C16のようなスペーサーを介して結合してもよい。上記IgA分離用カラムは、IgAを分離するためのカラムであり、具体的には、IgAの分析又は精製分取のための、クロマトグラフィーカラム、高速液体クロマトグラフィーカラム等のカラムを包含する。カラムのサイズは、特に制限されないものとし、分析用、精製分取用などの用途、アプライ又は注入する量、などに応じて変化させうる。また、カラムの材質は、金属、プラスチック、ガラス等の、カラムとして通常使用されるようなものでよい。上記のカラムは、上記の手法に準じて作製した本発明の固定化ペプチド乾燥又は湿潤状態をカラムに密に充填することによって製造できる。以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は、それらの実施例によって制限されないものとする。[実施例1]ランダムペプチドT7ファージライブラリからのヒトIgA特異的ファージの単離既に構築しているT7ファージ提示システムを用いたランダムペプチドライブラリCX710C並びにX3CX710CX3から、ヒトIgA特異的なファージを単離するため、以下のバイオパンニングの手法を用いた。すなわち、05BSAを含むPBS中の5×1010pfuのT7ファージライブラリCX710CとX3CX710CX3の混合物溶液を、ヒトIgGポリクローナル、ICNCappelBiomedicalsをコート1μg100μlwellし、05BSAでブロッキングした96穴マイクロプレートNuncMaxisorpのウェルに加え、1時間反応させた吸収ステップ。その上清を、次に、ヒトIgAFromhumanplasmaAthensResearchTechnologyAthensGAUSAをコート1μg100μlwellし、05BSA牛血清アルブミンでブロッキングしたウェルに移し、1時間反応を行った結合ステップ。上清のファージ溶液を除いた後、01Tween登録商標を含むPBSリン酸緩衝塩水で5回ウェルを洗浄した洗浄ステップ。大腸菌5615Novagenの培養液300μlを加えて感染させ、3mlの大腸菌培養液と一緒に37°Cにて、増殖、溶菌するまでインキュベートした増殖ステップ。溶菌後の培養液から定法に従い、ポリエチレングリコールによるファージ沈殿法によってファージを回収した。得られたファージは、PBSに溶解させ、045μmのフィルターを通した後、次のパンニングに用いた。上記を含め5回のパンニングを行うことによって、IgA特異的なファージを濃縮した。ただし、3~5回目のパンニングでは、吸収ステップでは、ヒトIgG並びにマウスIgEそれぞれ1μgwellをコートしたウェルを用いて、また、洗浄ステップでは、03Tween登録商標を含むPBSで10回洗浄した。5回のパンニング後に得られたファージの種々のイムノグロブリンに対する結合特異性をELISAで調べたところ、図1に示したように、元のライブラリを用いたELISAの結果に比べ、明らかにヒトIgAに対する結合活性の増大が見られた。そこで、これらのファージをランダムに20クローン、クローニング後、ELISAによって結合活性の見られた10クローンについて、提示するペプチドモチーフの解析を行い、アミノ酸配列を決定した表1。得られたペプチドについて4種のモチーフhA1234が得られた。得られたモチーフのうち、hA2が最も高い出現頻度を示した。また得られたモチーフ間のアミノ酸配列の比較では、完全に保存された残基がライブラリのデザイン時に導入されたCysを除いてLeu5、Phe16、また18番目には疎水性残基が好まれる傾向を示した。クローン化したファージhA1234の種々のイムノグロブリンに対する結合特性を調べた結果を図2に示す。いずれのクローンともヒトIgAに特異性が見られ、hA2に関しては、マウスIgAにも結合活性が見られた。得られたIgA特異的ペプチドモチーフにおける重要な残基を解析するため、最も結合力の高かったhA2モチーフを基に、以下のような変異ライブラリを作製した。すなわち、図3のhIgA2ペプチドモチーフ配列番号1をコードする塩基配列配列番号45のうち、アミノ酸番号4と13のCys以外の残基をコードする塩基を、混合ヌクレオチドによって合成し、部分的にランダムなアミノ酸が発生するようなペプチドライブラリを作製したライブラリの配列の多様性は、14×107。混合ヌクレオチドは、元の塩基配列が70、残りの3つの塩基が10ずつになるように作成し、結果として、元のコドンが理論的に35の確率で出現するようにした。この部分変異ライブラリを用いて、再度、hIgAに対して、パンニングを行い、特異的なファージの濃縮を試みた。図4に示すように、2ラウンドからIgA結合ファージの濃縮が見られ、3ラウンド後では、さらに結合活性が増大した。そこで3ラウンド後のファージをクローン化し、21クローンの結合活性をELISA評価した。その結果、10クローンに結合活性が見られ、それらの提示するモチーフを解析した結果、表2のようなアミノ酸配列のモチーフが得られた。興味深いのは、hA2モチーフのうち、アミノ酸番号で、5、7、9、12番は完全に保存されており、結合に重要な残基であることが考えられた。また、アミノ酸番号14と16番の残基についても、疎水性残基で占められており、この領域での疎水性相互作用の重要性を示唆している。一方、アミノ酸番号8番の残基については塩基性のアミノ酸のみで占められており、抗体側の負電荷との相互作用の存在が推定される。なお、上記のアミノ酸番号は、表2に示すように、16アミノ酸残基18アミノ酸残基とした場合の第9番目と第10番目の残基がともに欠失された残りの16アミノ酸残基のアミノ酸番号である。表2に示した各hA2ペプチドモチーフのアミノ酸配列は、上から順番にすなわち、hIgA24hIgA26hIgA215hIgA218hIgA221hIgA22hIgA26hIgA29hIgA217hIgA216の順に配列番号234567891011として配列表に示されている。hIgA2のペプチドモチーフを基に、ペプチドを合成し、そのペプチドの結合特異性を評価した。ペプチドは、N末端側にビオチン化PEG4基を付加したものを用いた。各標的タンパク質を固定化50ngwellしたマイクロプレートのウェルに、AP標識化したストレプトアビジンとペプチドをモル比で14となるように混ぜたもの75nMと30nMを加え、反応させた。PBSTすなわち、PBSTrisで5回洗浄後、PNPリン酸を基質とした、発色法により結合を検出した。結果を図5に示す。hIgA2ペプチドに関しては、他のタンパク質との若干の結合があるものの、ヒトIgAに特に強く結合していることが分かった。さらに、この結合の特異性を確認するために、ProteOnXPR36を用いた表面プラズモン共鳴解析による結合力を評価した図6。実施例2hIgA2ペプチドによるヒトIgAの精製hIgA2ペプチドが、ヒトIgAの精製用リガンドとして、機能するかどうかを検討するために、ビオチン化PEO4hIgA2を、1mlのHiTrapStreptavidinHPに固定化し、種々のタンパク質を注入し、その結合能を評価した図7。コントロールタンパク質として用いたヒトIgG、HASヒト血清アルブミン、BSA牛血清アルブミンは、カラムからほぼ素通りしたが、IgA510μgは、カラムに吸着され、PBSで洗浄後、PBSから03MNaClを含む02MglycineHClへのグラジエント溶出によって、カラムから溶出された。このことは、hIgA2ペプチドは、ヒトIgA精製用リガンドとして、特異性、結合能の基本的な性能を有していることが分かった。さらに、hIgA2ペプチド固定化カラムの有用性を検討するため、ヒト血清からのIgAの精製を試みた。ヒト血清1mlをPBSで5倍に希釈した後、Profiniaタンパク質精製システムBioRadに接続したカラムにアプライした。PBSで洗浄後、03MNaClを含む02MglycineHCl、引き続き03MNaClを含む02MglycineHClで結合タンパク質を溶出した図8。クロマトグラフィーによって溶出された各分画は、SDSPAGE並びに、抗ヒトIgA抗体を用いたWesternBlottingによって分析された図9。酸性溶出画分分画Dは、SDSPAGE後のタンパク質染色によって、標品のIgAタンパク質とほぼ同様な130180kDaのスメアなバンドとして検出された。一方、抗ヒトIgA抗体によるWesternBlottingでは、まず、血清並びに標品のIgA共に、先の130~180kDaのバンド以外に、300kDa以上の位置にスメアなバンドが見られた。これは、血清中のIgAは、血清型単量体が主要な成分であるが、一部、J鎖を介した二量体分泌型が含まれることから、このような2つのバンド帯になったものと考えられる。カラムから溶出された分画Dでは、同様にこの2つのバンド帯が検出された。このことからhIgA2ペプチド固定化カラムでは、血清型、分泌型両方の精製に用いることができることが分かった。さらに、素通り画分である分画Aや洗浄画分B、Cには、ほとんどIgAに由来するバンドは検出されなかったことから、このクロマトグラフィーで、血清中のIgAは、ほぼ回収されたことが分かった。以上の結果は、今回単離されたhIgA2ペプチドを含む類縁のペプチドが、ヒトIgAに特異的であり、精製用のアフィニティリガンドとして、高い有用性をもっていることを示している。このような低分子分子量約2000での、ヒトIgAの精製リガンド、検出リガンドは、未だ報告されておらず、単にヒトIgAの検出、精製試薬に留まらず、将来的に新たな抗体医薬として期待されるヒトIgA抗体医薬に向けた標準的精製システムとしても有用である。実施例3hIgAと高親和性を示すA3ペプチドモチーフを有するペプチド類実施例2から、部分変異ライブラリを用いたパンニングによって16アミノ酸からなるペプチド18アミノ酸残基とした場合の第9番目と第10番目の残基がともに欠失された残りの16アミノ酸残基のアミノ酸番号5、7、9、12はIgAとの結合に重要な残基であることが考えられた。そこで、より高い親和性を示す配列探索のため、これらのアミノ酸を固定して、それ以外はランダムなアミノ酸が発生するような最適化ライブラリを、実施例1と同様に作製した図10。このライブラリを用いて、再度、hIgAに対するパンニングを行い、hIgAに対する高いアフィニティを有する特異的なファージの濃縮を試みた。図11に示すように2ラウンドからhIgA結合ファージの濃縮がみられ、5ラウンド後にはさらに結合活性が増大した。そこで、5ラウンド後のファージをクローン化し、結合活性の優れた29クローンのファージに関して結合特異性をELISAで評価した。その結果、A2ペプチドよりも高い結合特異性および結合活性を有するA31ペプチド16アミノ酸残基からなる。が得られた図12。結合活性を示したクローンの提示するアミノ酸配列を解析した結果、得られたモチーフの各アミノ酸サイトでは、表3に示すような出現傾向が見られた。hIgAとの結合における出現頻度の高いアミノ酸残基の重要性を確認するため、A31ペプチドの配列に頻度の高いアミノ酸とA2ペプチドで見られたアミノ酸を導入した。同時に各残基の側鎖の重要性を見るために、アラニンスキャニングを行った。各アミノ酸置換体のhIgAに対する親和性評価は、BiacoreT100GEHealthcareを用いた表面プラズモン共鳴解析により行った。hIgAを固定化したCM5センサーチップを用いて、化学合成した各ペプチドを分析し、得られたセンサーグラムを基に各置換体のhIgAに対する親和性を算出した。部分変異ライブラリの結果から重要と考えられた16アミノ酸からなるペプチド下記表4のアミノ酸番号5、7、9、12のアラニン置換体はIgAへの結合力が減少し、その重要性を再確認した。中でもアミノ酸番号5および7番の結合力の減少が顕著であり、hIgAとの結合に非常に重要であると考えられる。また、各置換体において、アミノ酸番号1、2、6、15、16を置換した場合に、A31ペプチドと比較してhIgAに対する親和性の向上が見られた。結果を表4に示した。ここで、表4中のA31ペプチドA31A31A31A31A31A31のアミノ酸配列をそれぞれ順番に、配列番号15、16、1742、43、44として配列表に示した。表4において、示されたペプチドとヒトIgAとの結合に関する解離定数が特に1μM未満のペプチドは、配列番号15161719202425263738394142のアミノ酸配列を有するものであり、ヒトIgAと高い親和性を有していた。さらに、これらの結果を基に16アミノ酸からなるペプチドの各アミノ酸サイトにおいて最も親和性の向上がみられたアミノ酸を導入したペプチドを設計した。すなわち、アミノ酸番号1にヒスチジン残基、2にメチオニン残基、6にアラニン残基、15にアラニン残基、16にロイシン残基を導入したA31Opt1ペプチド配列番号43を合成した。また、溶解性向上を図るため、アミノ酸番号6および15のアラニン残基をセリン残基に置換したA31Opt2ペプチド配列番号44を合成した。A31Opt1ペプチドおよびA31Opt2ペプチドのhIgAに対する親和性を評価した結果、それぞれ0044μMおよび0025μMであり、A31と比較してそれぞれ約12倍および約21倍の親和性の上昇が確認された。最も高い親和性を示したA31の特異性を確認するため、BiacoreT100GEHealthcareを用い、A31Opt2を固定化したセンサーチップにhIgA1およびhIgA2を注入することで表面プラズモン共鳴解析を行った図13。A2ペプチドやA31ペプチドと同様に、hIgAに対して高い特異性を有しており、またhIgA1およびhIgA2に対する結合力を評価したところ、hIgA2に対する結合力がわずかに強いことが分かった。A31ペプチドは、A2ペプチドと比較して約52倍の親和性を有するペプチドであった。そこで、A31ペプチドカラムを作製し、ヒト血清からのhIgAの精製を行った。ヒト血清1mlをPBSで5倍に希釈した後、Profiniaタンパク質精製システムBioRadに接続したカラムにアプライした。PBSで洗浄後、02MglycineHClで結合タンパク質を溶出した図14。A2ペプチドカラムと比較して図8、溶出画分においてより明確なピークが検出された。親和性の向上によって、カラム内に吸着されるhIgA量が増加したことが推察された。"