"本明細書に記載の発明。発明の要旨本発明は、網膜外縁部の障害の処置、特に:AMD;RPおよび遺伝性変性網膜疾患の他の形態;網膜剥離および涙液;黄斑の皺macularpuker;網膜外縁部に影響する虚血;糖尿病網膜症;光治療PDTを含むレーザー治療関連の傷害格子、焦点、および網膜全体panretinal;傷害;外科的網膜転移、中隔網膜手術、または硝子体切除網膜症または光誘導性網膜症;ならびに網膜移植物の保存に有用であることが発見された5-HT1Aアゴニストに関連する。本発明は、例えば以下の項目を提供する。項目1網膜外縁部の障害を処置するための方法であって、5-HT1Aアゴニスト活性を有する化合物の薬学的に有効な量を投与する工程を包含する、方法。項目2項目1に記載の方法であって、ここで前記化合物が、タンドスピロン、ウラピジル、ジプラシドン、レピノタン塩酸塩、キサリプロデン塩酸塩SR-57746A、ブスピロン、フレシノキサン、EMD-68843、DU-127090、ジェピロン、アルネスピロン、PNU-95666、AP-521、フリバンセリン、MKC-242、レソピトロン、サリゾタン塩酸塩、E-5842、SUN-N4057、Org-13011、Org-12966および8-OH-DPATからなる群より選択される、方法。項目3項目1に記載の方法であって、ここで前記障害が、AMD;RPおよび遺伝的変性網膜疾患の他の形態;網膜剥離および涙液;黄斑の皺;網膜外縁部に影響する虚血;糖尿病網膜症;光力学的治療PDTを含むレーザー治療格子、焦点および網膜全体に関連する傷害;外傷;外科的網膜転移、網膜下手術、または硝子体切除または光誘導性医原性網膜症;ならびに網膜移植物の保存からなる群より選択される、方法。項目4前記障害がAMDである、項目3に記載の方法。項目5項目3に記載の方法であって、ここで前記化合物が、タンドスピロン、ウラピジル、ジプラシドン、レピノタン塩酸塩、キサリプロデン塩酸塩SR-57746A、ブスピロン、フレシノキサン、EMD-68843、DU-127090、ジェピロン、アルネスピロン、PNU-95666、AP-521、フリバンセリン、MKC-242、レソピトロン、サリゾタン塩酸塩、E-5842、SUN-N4057、Org-13011、Org-12966および8-OH-DPATからなる群より選択される、方法。項目6項目5に記載の方法であって、ここで前記障害が、AMD、RP、および糖尿病網膜症からなる郡より選択される、方法。好ましい実施形態の詳細セロトニン作動性5-HT1Aアゴニストは、中枢神経系への種々の侵襲の後の潜在的な神経保護剤であることが示されてきた。予想外にも、発明者らは、8-OH-DPAT8-ヒドロキシ-2-ジ-n-プロピルアミノテトラリン、ブスピロン、およびSR-57746Aが、網膜において強力な神経保護活性を示し、そして光受容体およびRPE細胞の光誘導性アポトーシス細胞死を阻害を示すことを実証した。発明者らは、ブスピロンが、光酸化誘導性網膜症を完全に阻害し得、そして網膜のDNAおよびONLの脆弱化を有意に減少し得ることを見出した。これらの化合物のいくつかの安全上の利点は、それらを急性および慢性の治療の両方について特に望ましいものとしている。このような薬剤は、種々の網膜外縁部変性疾患の処置において利用性を有する。光損傷の実例において、抗酸化剤は、効果がないαトコフェロールかまたは高い用量でわずかに効果があるアスコルビン酸、ビタミンEアナログかのいずれかであった。同様に、いくつかのカルシウムアンタゴニストフルナリジン、ニカルジピンは、中程度に効果があったが、その他ニフェジピン、ニモジピン、ベラパミルは、光誘導性機能変化または光誘導性形態変化を阻害するという効果はなかった。しかし、5-HT1Aアゴニストが、これらの光損傷の実例において100倍以上強力であり、従って、網膜外縁部の疾患を処置するために有用であることが発見された。本発明は、網膜外縁部の障害を処置するための任意の薬学的に受容可能な5-HT1Aアゴニスト薬学的に受容可能な塩を含む化合物の使用を意図する。薬学的に受容可能なは、網膜外縁部の疾患の処置のために安全に使用され得る化合物を意味する。本明細書中で使用される場合、網膜外縁部は、RPE、光受容体、ミュラー細胞これらのプロセスが網膜外縁部まで延長される範囲まで、および外縁部網状層を含む。これらの化合物は、全身性送達または局所眼送達のために処方される。網膜外縁部の疾患は、正常または遺伝的に素因の有る個体における光受容体およびRPE細胞の急性および慢性の環境的に誘導された外傷、虚血、光酸化ストレス変性状態を含む。これには、AMD、RPおよび遺伝的変性網膜疾患の他の形態、網膜剥離、涙液、黄斑の皺、網膜外縁部に影響する虚血、糖尿病網膜症、光線力治療法PDTを含むレーザー治療関連の傷害格子、焦点および網膜全体、温熱療法もしくは寒冷療法、外傷、外科手術網膜転移、網膜下外科手術、もしくは硝子体切除または光誘導された医原性網膜症ならびに網膜移植物の保存が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物は、約500nM好ましくは100nM未満までのIC50を有する5-HT1Aレセプターについての強力な親和性を有する。これらの化合物はまた、約1μM好ましくは500nM未満までのIC50を有する完全なアゴニストまたは部分的なアゴニストのいずれかである。本発明に従う有用な、代表的な5-HT1Aアゴニストとして以下が挙げられるが、これらに限定されない:タンドスピロン、ウラピジル、ジプラシドン、レピノタンrepinotan塩酸塩、キサリプロデン塩酸塩SR-57746A、ブスピロン、フレシノキサン、EMD-68843、DU-127090、ジェピロン、アルネスピロン、PNU-95666、AP-521、フリバンセリン、MKC-242、レソピトロン、サリゾタン塩酸塩、Org-13011、Org-12966、E-5842、SUN-N4057、および8-OH-DPAT。本発明に従うレセプター結合およびアゴニスト活性は、以下の方法を使用して決定され得る。方法15-HT1Aレセプター結合アッセイ5-HT1A結合の研究を、3H8-OHDPATをリガンドとして使用してチャイニーズハムスター卵巣CHO細胞中で発現されたヒトクローン化レセプターを用いて行った。クローン化した5-HT1AレセプターBiosignal,Inc.、Montreal,CanadaによるMENについて製造されたを発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞CHO由来の膜を、約40容量の50mMTrispH7.4に5秒間ホモジェナイズした。薬物の希釈物をBeckmanBiomek2000ロボットBeckmanInstruments、Fullerton,CAを使用して作製した。膜調製物、試験化合物、および0.25nM3H8-OH-DPATMEN、Boston,MAを共に同一の緩衝液中で27°C、1時間インキュベーションを行った。アッセイを、0.3のポリエチレンイミンに予め浸漬したWhatomanGF/Bグラスファイバーでの急速吸引濾過によって終結した。結合した放射活性を、液体シンチレーションスペクトロメトリーを使用して測定した。データを非直線性曲線適合プログラムSharifら、JPharmacPharmacol、51:685~694、1999を使用して解析した。リガンド結合研究をまた、子ウシの脳およびラットの脳局所的供給源ならびにヒト皮質膜由来の膜調製物を使用して実施し得る。特定の脳領域を、切開し、10容量の0.32Mスクロースにホモジェナイズし、そして700×gで10分間、遠心分離した。生じた上清を、43、500×gで10分間遠心分離し、ペレットを、10秒間のポリトロン処理を使用して、50mMのTris-HClpH7.7、25°Cに再懸濁した。アリコートを-140°Cで保存した。外因性のセロトニンを除去するために、調製物を実験前に10分間37°Cでインキュベートした。アッセイインキュベーションを、Brandel細胞回収器を使用してWhatmanGF/Cフィルターでの急速吸引により終結した。Ki値をCheng-Prusoffの式DeVryら、JPharmExperTher、284:1082~1094、1998を使用して計算した。方法25-HT1A機能アッセイ本発明の化合物の機能を、5-HT1Aアゴニストの機能的活性を評価するための種々の方法を使用して決定し得た。このようなアッセイの1つを、雄性Sprague-Dawleyラット由来の海馬スライスを使用して実施し、フォルスコリン刺激アデニル化シクラーゼの阻害を測定するJMedChem、42:36、1999;JNeurochem、56:1114、1991;JPharmExperTher、284:1082、1998。ラット海馬の膜を、25倍容量の0.3Mスクロース1mMEGTA、5mMEDTA、5mMジチオスレイトール、および20mMTris-HClを含有する、pH7.4に25°Cでホモジェナイズした。ホモジネートを1,000×gで10分間、遠心分離した。上清を引続き39,000×gで10分間遠心分離した。生じたペレットを、タンパク質濃度が約1mg/mlのホモジェナイズ用緩衝液中に再懸濁し、そしてアリコートを-140°Cで保存した。使用の前に、膜をPotter-Elvehjemホモジェナイザーで再度ホモジェナイズした。膜懸濁液の50μl50μgのタンパク質を、100mMNaCl、2mM酢酸マグネシウム、0.2mMATP、1mMcAMP、0.01mMGTP、0.01mMフォルスコリン、80mMTris-HCl、5mMリン酸クレアチン、0.8U/μlのクレアチンホスホキナーゼ、0.1mMIBMX、1~2μCiα-[32P]ATPを含有するインキュベーション用緩衝液に添加した。試験化合物とのインキュベーション30°Cで10分間を、膜溶液のインキュベーション混合物30°Cで5分間、予備加温への添加によって開始した。[32P]cAMPをSalomonの方法AdvCyclicNucleotideRes、10:35~55、1979に従って、測定した。タンパク質をBradfordAnalBiochem、72:248~254、1976アッセイを使用して測定した。機能的活性はまた、Schoeffterらの方法Neuropharm、36:429~437、1997に従って組換えヒトレセプターで決定し得る。組換えヒト5-HT1Aレセプターで感染したHeLa細胞を、24ウェルのプレートでコンフルーエンスになるまで増殖させた。細胞を、Hepes緩衝化生理食塩水NaCl130mM、KCl5.4mM、CaCl21.8mM、MgSO40.8mM、NaH2PO40.9mM、グルコース25mM、Hepes20mM、pH7.4およびフェノールレッド5mg/lでリンスした。細胞を、0.5mLの生理食塩水中の6μCi/mlの[3H]アデニン23Ci/mmol,Amersham、RahnAG、Zurich、Switzerlandを用いて37°Cで2時間標識した。プレートを引続いて1mMのイソブチルメチルキサンチンを含有する緩衝化生理食塩水で2回リンスした。細胞を、10μMフォルスコリンおよび試験化合物の存在または非存在下で、この溶液の1ml37°C中で15分間インキュベートした。次いで、緩衝液を除去し、そして1mlの5トリクロロ酢酸TCA0.1mMcAMPおよび0.1mMATPを含有するをサンプルを抽出するために加えた。4°Cで30分後、TCA抽出物を、DowexAG50W-X4およびアルミナカラムでクロマトグラフィー分離に供したSalmon、MethEnzymol、195:22~28、1991。サイクリックAMP産生を、[3H]cAMP/[3H]cAMP[3H]ATPの比として計算した。方法1および2に開示された上記手順を使用して、以下のデータを作成した。表1:5-HT1Aレセプター結合および機能アッセイデータ一般的に、変性疾患について、本発明の5-HT1Aアゴニストは、経口的に投与され、そしてこれらの化合物の1日の投薬量は、約0.001~約500mgの間の範囲である。好ましい1日の全用量は、約1~約100mgの間の範囲である。非経口投与例えば、硝子体内、局所的眼、経皮パッチ、皮内、非経口、眼内、結膜下、もしくは視蓋延髄すなわちテノン内注射、強膜貫通イオン泳動を含む、または徐放性生物崩壊性ポリマーすなわちリポソームは、化合物の治療的に有効な量を提供するために必要な1日の全用量の調整を必要とし得る。5-HT1Aアゴニストはまた、眼の洗浄溶液で送達され得る。濃度は、約0.001μM~約100μM、好ましくは約0.01μM~約5μMの範囲であるべきである。5-HT1Aアゴニストは、眼への送達のための種々の型の眼科的処方物に組込まれ得る例えば、局所的、房内に、または移植物を介して。これらは、眼科学的に受容可能な、保存剤、界面活性剤、粘度増強剤、ゲル化剤、浸透性増強剤、緩衝液、塩化ナトリウム、および水性の滅菌眼科用懸濁液もしくは溶液を形成するための水、または予備形成されたゲルもしくはインサイチュで形成されるゲルと組み合わせられ得る。眼科的溶液処方物は、生理学的に受容可能な等張性の水性緩衝液に化合物を溶解することによって調製され得る。さらに、眼科的溶液は、化合物の溶解を補助するための眼科的に受容可能な界面活性剤を含み得る。眼科的溶液は、粘性増強剤例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどを結膜嚢における処方物の保持を改善するために含み得る。滅菌眼科用軟膏処方物を調製するために、活性成分を、適切なビヒクル例えば、鉱油、液体ラノリン、または白色ペトロラタム中の保存剤と組合わせる。滅菌眼科用ゲル処方物を、例えば、類似する眼科用調製物について公開された処方に従って、カルボポル-940などとの組合せから調製された親水性塩基中に活性成分を懸濁することによって調製し得る;保存剤および張性剤を組込み得る。局所的に投薬される場合、5-HT1Aアゴニストは好ましくは、約4~8のpHの局所的な眼科用懸濁液または溶液として処方される。通常、5-HT1Aアゴニストは、0.001重量~5重量でこれらの処方物に含まれるが、好ましくは、0.01重量~2重量の量である。従って、局所的な症状について、これらの処方物の1~2滴が、熟練した臨床医の裁量に従って1日当たり1~4回、眼の表面に送達される。以下の局所的な眼科用処方物が、本発明に従って有用であり、熟練した臨床医の裁量に従って1日あたり1~4回投与される。実施例1実施例2実施例3実施例4実施例5実施例6方法3ラットの光酸化誘導性網膜症モデルにおける神経保護効果これらの5-HT1Aアゴニストの網膜保護効果を、発明者らの光酸化誘導性網膜症の実例において評価した。光化学的損傷の誘導光化学的損傷を、暗順応させたラット24時間において、青色光220fc半振幅帯域=435~475nmに6時間、曝露することによって誘導した。動物を、5日間暗所で回復させた後に、網膜機能の電気的診断評価を行った。ラットを、この光曝露の間、清潔なポリカーボネートケージに1匹で入れた。電気的診断評価電気的網膜造影ERGを、24時間の暗順応期間後の麻酔したラットから記録した。ラットを、ケタミン-HCl75mg/Kgおよびキシラジン6mg/Kgを有するIP注射によって麻酔した。角膜に配置されたプラチナ-イリジウムワイヤーループ電極から記録されたフラッシュERGを全体野を観察することによって、引き出した。強度が漸増する一連の光のフラッシュに対する電気的応答をデジタル化し、波形および応答電圧-対数強度VlogI相関の一時的な特性を解析した。ERGのa波における変化は、光受容体および網膜色素上皮損傷に関連し、一方、内側網膜に対する損傷は、ERGb波における変化において反映される。網膜形態の評価眼組織を、コントロールならびに薬物投与されたラットおよびビヒクル投与されたラットから得、そして2のパラホルムアルデヒドおよび2のグルタルアルデヒドの混合物に浸漬することによって固定した。固定された眼球を、連続して漸増するエタノール中で脱水し、JB-4プラスチック樹脂に包埋し、そして1~1.5ミクロンの薄層切片を顕微鏡に接続した定性的コンピュータ画像解析を使用して解析した。網膜層の厚さ網膜色素上皮、RPE;外側核層の厚み、ONL;内側核層の厚み、INL;ならびに光受容体の内側および外側セグメント、ISOSを測定した。DNA変化の評価アルビノラットを、CO2吸引によって安楽死させ、そして個々の網膜を別々の試験管中で冷凍した。各網膜を、0.8ml2.0MNaCl、50mMNaPO4、pH7.4、2mMEDTA中で超音波破砕し、均一なホモジネートを得、そして凍結保存した。各サンプルのアリコート0.1mlを、2.0MNaCl、50mMNaPO4pH7.4、2mMEDTA1.1μg/mlビスベンズイミダゾールHoechst33258を含有するで10倍希釈した。標準曲線を、同じ緩衝液中の0~25μg/mlの子ウシ胸腺DNAを使用して作成した。各網膜サンプルおよび標準の0.2mlの3つのアリコートを、CytofluorIIにおける蛍光測定のために96ウェルプレートにピペットで移した。励起波長は360nmであり、そして放射波長は460nmであった。被験体および投薬雄SpragueDawleyラットを、薬物実験グループおよびビヒクル実験グループにランダムに分けた。コントロールラットを、正常周期の光の曝露下でこれらのホームケージに入れた。すべてのラットを、6時間の青色光の曝露の48、24および0時間前に投薬した。投与は以下のとおりであった。1.8-OH-DPAT8-ヒドロキシ-2-ジ-n-プロピルアミノテトラリン:ビヒクルN=10または8-OH-DPAT0.5mg/kgN=5または1.0mg/kgN=10のいずれかを受けたラットに3回の皮内注射を与えた後、光曝露した。5匹のラットをコントロールとして使用した。網膜保護を、EPG応答を解析することおよび網膜形態における変化を測定することにより評価した。2.ブスピロン:DNA定量化のために、処置群あたり6匹のラットを、光曝露前にビヒクルまたはブスピロン0.5および1mg/kgを用いてIP投薬した。7匹の正常ラットからの網膜を、コントロールとして使用した。網膜形態の変化を評価するために、ラットに、ビヒクルN=8またはブスピロン1.0mg/kgN=9のいずれかを投薬IPした。6匹のラットをコントロールとして使用した。網膜保護を、網膜DNAにおける変化を定量することおよび網膜形態学における変化を測定することによって評価した。3.SR-57746A:ラットを、ビヒクルN=15またはSR-57746A0.5mg/kgまたは1mg/kgN=15で投薬IPした。11匹のラットをコントロールとして使用した。ERGを5日間の回復後に解析し、その後網膜保護を評価した。8-OH-DPAT評価結果6時間の青色光曝露は、5日間の回復期の後に測定した場合に、正常と比較してERG応答振幅ANOVA、p<0.001;Bonferronit-検定、p<0.05の有意な減少を生じた図1AおよびB。青色光曝露は、コントロールと比較してビヒクル投与されたラットにおいて最大a波およびb波で75の減少を生じた。さらに、閾値応答はより低くそしてより明るいフラッシュ強度で励起した。8-OH-DPATで投薬されたラットは、外縁部および内側網膜機能のこの光酸化誘導性網膜症に対する用量依存性保護を示した図1AおよびB。8-OH-DPAT0.5mg/kgを投薬されたラットにおける最大a波およびB波応答の振幅は、ビヒクル投薬されたラットと代わらず、そしてコントロールの振幅の約27であった。しかし、8-OH-DPAT1.0mg/kgを投薬されたラットからの最大a波およびb波応答の振幅は、それぞれ正常の約53および61であり、そしてビヒクル投薬ラットで測定された応答よりも有意に高かった図1Aおよび1B。これらのERGの変化に一致して、3週間の回復後のこれらの網膜の形態的解析は、受容体細胞の有意なANOVA、p<0.01損失、光受容体内側外側セグメント長の短縮化、およびビヒクル投薬動物におけるRPEの平坦化を実証した。INLの厚みにおける有意な変化は検出されなかった。コントロールと比較してONLの厚みは73減少し、内側外側セグメント長は82減少し、そしてRPEの厚みは、59減少した図2。8-OH-DPAT0.5mg/kgを投薬されたラットにおいて観察される損傷は、ビヒクル投薬されたラットで測定された損傷と有意に異ならなかった。一方、ERGは、約63減少し、ONLの厚みは53まで減少し、光受容体セグメント長は、60減少し、そしてRPEの厚みは34減少した。しかし、8-OH-DPAT1.0mg/kgを投薬されたラットにおいて観察された光損傷は、ビヒクル投薬されたラットとは有意に異なった。一方、ビヒクル投薬されたラットと比較して、ERG応答振幅は、正常よりも50大きく、ONLの厚みは2.4倍厚く、光受容体セグメント長は、2.9倍長く、そしてRPEの厚みは1.9倍厚かった。ブスピロン評価結果図3Aに見られるように、ビヒクル投薬された網膜DNAレベルは、コントロールレベルから約30、有意にANOVA。p=0.017減少した。有意な差異は、ビヒクルまたは0.1mg/kgのブスピロンで投薬されたグループ間で測定されなかった。網膜保護は、ブスピロン1mg/kgを投薬されたラットで測定された。網膜DNAレベルは、ビヒクル投薬ラットで測定されたよりも顕著に高かったが、コントロールとは有意な差異がなかった。6時間の青色光への曝露は、光受容体の数において顕著な減少を生じたANOVA、p<0.05。4週間の回復期後のこれらの網膜の形態学的解析は、コントロールと比較してビヒクル投薬されたラットにおいて、外側の明瞭でない層の54の薄弱化を示した図3B。しかし、ONLの厚みにおける有意な差異は、正常ラットおよびブスピロン処置したラット間で測定されなかった。ブスピロン1mg/kgを投薬されたラットにおいて、ONLの厚みは、正常ラットの30.4μと比較して28.3μであった。SR-57746A評価結果網膜機能の有意な保護が、光に曝露されたラットSR-57746A0.5および1.0mg/kgを投薬されたにおいて測定された。コントロールと比較して、最大a波およびb波応答の振幅は、ビヒクル投薬されたラットにおいて50まで減少した図4AおよびB。最大応答はSR-57746A0.5mg/kgを投薬されたラットにおけるコントロールラットの82であり、1mg/kgを投与されたラットにおける正常ラットの70であった。結論これらの5-HT1Aアゴニスト8-OH-DPAT、ブスピロンおよびSR-57746Aは、網膜変性疾患のこの酸化モデルにおける良好な能力および有効性を示した。機能的保護および構造的保護が、1mg/kgという低い用量を3日間連続して投薬されたラットにおいて達成された。"