任意で実施例14に記載した通りに判定した場合に、可溶性ヒト上皮細胞成長因子受容体2HER2に対する参照抗体の結合をブロックするモノクローナル抗体であって、参照抗体が、以下のものからなる群より選択される重鎖可変VH領域および軽鎖可変VL領域を含む、モノクローナル抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:12の配列を含むVL領域006;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059;dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域060;eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:33の配列を含むVL領域106;ならびにfSEQIDNO:36の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:40の配列を含むVL領域111。a~fにおける参照抗体のうち少なくとも2つ、好ましくは少なくとも3つの結合をブロックする、請求項1記載の抗体。a~fにおける参照抗体の結合をブロックする、請求項1記載の抗体。aにおける参照抗体、fにおける参照抗体、またはその両方の結合をブロックする、請求項1記載の抗体。参照抗体が固定化されている、請求項1~4のいずれか一項記載の抗体。参照抗体の結合を完全にブロックする、請求項1~5のいずれか一項記載の抗体。参照抗体と同じHER2上のエピトープと結合し、以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:12の配列を含むVL領域006;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059;dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域060;eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:33の配列を含むVL領域106;fSEQIDNO:36の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:40の配列を含むVL領域111;gSEQIDNO:43の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:44の配列を含むVL領域041;hSEQIDNO:45の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:46の配列を含むVL領域150;iSEQIDNO:47の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:48の配列を含むVL領域067;jSEQIDNO:49の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:50の配列を含むVL領域072;kSEQIDNO:51の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:52の配列を含むVL領域163;lSEQIDNO:53の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:54の配列を含むVL領域093;ならびにmSEQIDNO:55の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:56の配列を含むVL領域044。aまたはfにおける参照抗体と同じHER2上のエピトープと結合する、請求項7記載の抗体。以下のものからなる群より選択されるCDR3配列を含むVH領域を含む、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:59、例えばSEQIDNO:4、25および32005、060、106から選択される配列;bSEQIDNO:62、例えばSEQIDNO:11006;cSEQIDNO:65、例えばSEQIDNO:18059;ならびにdSEQIDNO:67、例えばSEQIDNO:39111。以下のものからなる群より選択されるCDR3配列を含むVH領域を含む抗体:aSEQIDNO:59、例えばSEQIDNO:4、25および32005、060、106から選択される配列;bSEQIDNO:62、例えばSEQIDNO:11006;cSEQIDNO:65、例えばSEQIDNO:18059;ならびにdSEQIDNO:67、例えばSEQIDNO:39111。以下のものからなる群より選択されるCDR1、CDR2、CDR3配列を含むVH領域を含む、請求項9または10記載の抗体:aそれぞれSEQIDNO:57、58および59、ここで該VH領域は任意でIgHV5511生殖系列に由来する;bそれぞれSEQIDNO:60、61および62、ここで該VH領域は任意でIgHV3231生殖系列に由来する;cそれぞれSEQIDNO:63、64および65、ここで該VH領域は任意でIgHV1181生殖系列に由来する;ならびにdそれぞれSEQIDNO:66、38および67、ここで該VH領域は任意でIgHV1694生殖系列に由来する。以下のものからなる群より選択されるCDR1、CDR2、CDR3配列を含むVH領域を含む、請求項11記載の抗体:aそれぞれSEQIDNO:2、3および4005;bそれぞれSEQIDNO:23、24および25060;cそれぞれSEQIDNO:30、31および32106;dそれぞれSEQIDNO:9、10および11006;eそれぞれSEQIDNO:16、17および18059;ならびにfそれぞれSEQIDNO:37、38および39111。以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む、請求項12記載の抗体:aそれぞれSEQIDNO:2、3および4のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:6、GASおよびSEQIDNO:7のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVL領域005;bそれぞれSEQIDNO:9、10および11のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:13、DASおよびSEQIDNO:14のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVL領域006;cそれぞれSEQIDNO:16、17および18のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:20、GASおよびSEQIDNO:21のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVL領域059;dそれぞれSEQIDNO:23、24および25のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:27、GASおよびSEQIDNO:28のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVL領域060;eそれぞれSEQIDNO:30、31および32のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:34、GASおよびSEQIDNO:35のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVL領域106;ならびにfそれぞれSEQIDNO:37、38および39のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQIDNO:41、GASおよびSEQIDNO:42のCDR1、CDR2、およびCDR3配列を含むVL領域111。以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:11の配列を含むVL領域006;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059;dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:26の配列を含むVL領域060;eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:33の配列を含むVL領域106;fSEQIDNO:36の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:40の配列を含むVL領域111;gSEQIDNO:43の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:44の配列を含むVL領域041;hSEQIDNO:45の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:46の配列を含むVL領域150;iSEQIDNO:47の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:48の配列を含むVL領域067;jSEQIDNO:49の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:50の配列を含むVL領域072;kSEQIDNO:51の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:52の配列を含むVL領域163;lSEQIDNO:53の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:54の配列を含むVL領域093;mSEQIDNO:55の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:56の配列を含むVL領域044;ならびにn好ましくは多くとも1個、2個または3個のアミノ酸修飾を有し、より好ましくはアミノ酸置換、例えば保存的アミノ酸置換、および新たなアミノ酸が図1または2におけるアラインメントされた配列中で同じ位置に、特に対応するコンセンサス配列中でXによって示された位置にある置換などを有する、前記のいずれかの抗体の変種。実施例14に記載した通りに判定した場合に、可溶性HER2に対する参照抗体の結合をブロックしないヒト抗体であって、参照抗体がトラスツズマブ、ペルツズマブ、F1およびC5のいずれかのVH配列およびVL配列を含む、ヒト抗体。実施例12に記載した通りに判定した場合に、HER2発現細胞に対する結合に関して080μg/ml未満、好ましくは050μg/ml未満のEC50値を有し、かつ好ましくは、以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックする、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:11の配列を含むVL領域006;ならびにcSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059。実施例13に記載した通りに判定した場合に、HER2陽性アカゲザル上皮細胞と特異的に結合し、かつ好ましくは、以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックする、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:11の配列を含むVL領域006;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059;dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域060;eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:33の配列を含むVL領域106;ならびにfSEQIDNO:36の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:40の配列を含むVL領域111。実施例16に記載した通りに判定した場合に、HER2を発現するAU565細胞と特異的に結合するが、細胞のリガンド非依存的増殖をF5よりも促進せず、かつ好ましくは、以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックする、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;ならびにbSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域060。治療用部分、例えば短縮型のシュードモナス外毒素Aなどと結合体化された場合、実施例17に記載した通りに判定した場合に、HER2を発現する腫瘍細胞株の少なくとも60、好ましくは少なくとも70を死滅させ、かつ好ましくは、以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックする、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005、bSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060、cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059、ならびにdSEQIDNO:36の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:40の配列を含むVL領域111。HER2を発現する腫瘍細胞株が細胞当たり平均約30000個未満のHER2分子を発現し、かつ抗体が好ましくは、以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックする、請求項19記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;ならびにbSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060。実施例18に従って判定した場合に、HER2を発現する腫瘍細胞株によってトラスツズマブよりも多くの量の抗体が内部移行を受け、かつ抗体が好ましくは、以下のものからなる群より選択されるVH領域およびVL領域を含む参照抗体をクロスブロックする、前記請求項のいずれか一項記載の抗体:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:11の配列を含むVL領域006;cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059;dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:26の配列を含むVL領域060;eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:33の配列を含むVL領域106;ならびにfSEQIDNO:36の配列を含むVH領域およびSEQIDNO:40の配列を含むVL領域111。参照抗体が可溶性HER2に結合するのを完全にブロックし、好ましくは参照抗体と同じエピトープに結合する、請求項16~21のいずれか一項記載の抗体。二価抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。抗原結合性断片である、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。完全長抗体、好ましくはIgG1抗体、特にIgG1κ抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。エフェクター機能欠損性抗体、例えば安定化されたヒトIgG4抗体、例えばヒトIgG4の重鎖定常領域における位置409のアルギニンが、リジン、トレオニン、メチオニン、もしくはロイシン、好ましくはリジンで置換されている、および/またはヒンジ領域がCysProProCys配列を含む抗体などである、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。一価抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。一価抗体が、i請求項1~25のいずれか一項記載の抗体の可変領域または該領域の抗原結合性部分、ならびにii免疫グロブリンのCH領域、またはCH2領域およびCH3領域を含むその断片であって、ヒンジ領域に対応する領域、および免疫グロブリンがIgG4サブタイプでない場合にはCH領域の他の領域、例えばCH3領域などが、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCH領域とのジスルフィド結合、または同一のCH領域との他の共有結合性もしくは安定な非共有結合性の重鎖間結合を形成しうるアミノ酸残基を全く含まない、CH領域またはその断片を含む、請求項27記載の抗体。段階iiで言及した免疫グロブリンがIgG4サブタイプのものである、請求項28記載の抗体。ヒンジ領域全体が欠失するように重鎖が改変されている、請求項29記載の抗体。前記請求項のいずれか一項に定義された抗体の第1の抗原結合領域と、ヒトエフェクター細胞、ヒトFc受容体、B細胞受容体、またはHER2の非ブロッキングエピトープに対する結合特異性といった異なる結合特異性を有する第2の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。別の部分、例えば細胞傷害性部分、放射性同位体、薬物またはサイトカインなどと結合体化している、前記請求項のいずれか一項記載の抗体。細胞傷害性部分が、タキソール;サイトカラシンB;グラミシジンD;臭化エチジウム;エメチン;マイトマイシン;エトポシド;テニポシド;ビンクリスチン;ビンブラスチン;コルヒチン;ドキソルビシン;ダウノルビシン;ジヒドロキシアントラシンジオン;チューブリン阻害剤、例えばマイタンシンまたはその類似体もしくは誘導体;ミトキサントロン;ミトラマイシン;アクチノマイシンD;1デヒドロテストステロン;グルココルチコイド;プロカイン;テトラカイン;リドカイン;プロプラノロール;ピューロマイシン;カリチアマイシンまたはその類似体もしくは誘導体;代謝拮抗物質、例えばメトトレキサート、6メルカプトプリン、6チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、5フルオロウラシル、ダカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビンまたはクラドリビン;アルキル化剤、例えばメクロレタミン、チオテパ、クロランブシル、メルファラン、カルムスチンBSNU、ロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジンDTIC、プロカルバジン、マイトマイシンC、シスプラチン、カルボプラチン、デュオカルマイシンA、デュオカルマイシンSA、ラケルマイシンrachelmycinCC1065またはそれらの類似体もしくは誘導体;抗生物質、例えばダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、アントラマイシンAMC;有糸分裂阻害剤、例えばモノメチルアウリスタチンEもしくはFまたはそれらの類似体もしくは誘導体;ジフテリア毒素および関連分子、例えばジフテリアA鎖およびその活性断片、ならびにハイブリッド分子、リシン毒素、例えばリシンAまたは脱グリコシル化リシンA鎖毒素など、コレラ毒素、志賀毒素様毒素、例えばSLTI、SLTII、SLTIIVなど、LT毒素、C3毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ダイズBowmanBirkプロテアーゼインヒビター、シュードモナス属Pseudomonasエキソトキシン、アロリンalorin、サポリン、モデシンmodeccin、ゲラニンgelanin、アブリンA鎖、モデシンA鎖、αサルシン、シナアブラギリAleuritesfordiiタンパク質、ジアンチンタンパク質、アメリカヤマゴボウPhytolaccaamericanaタンパク質、例えばPAPI、PAPII、およびPAPSなど、ニガウリmomordicacharantiaインヒビター、クルシン、クロチン、サボンソウsapaonariaofficinalisインヒビター、ゲロニン、ミトゲリンmitogellin、レストリクトシンrestrictocin、フェノマイシンphenomycinおよびエノマイシンenomycin毒素など;リボヌクレアーゼRNアーゼ;DNアーゼI、ブドウ球菌StaphylococcalエンテロトキシンA;ヨウシュヤマゴボウpokeweed抗ウイルスタンパク質;ジフテリン毒素;ならびにシュードモナス属エンドトキシンからなる群より選択される、請求項32記載の抗体。マイタンシン、カリチアマイシン、デュオカルマイシン、ラケルマイシンCC1065、モノメチルアウリスタチンE、またはそれらのいずれかの類似体、誘導体、もしくはプロドラッグからなる群より選択される細胞傷害性部分と結合体化されている、請求項32記載の抗体。IL2、IL4、IL6、IL7、IL10、IL12、IL13、IL15、IL18、IL23、IL24、IL27、IL28a、IL28b、IL29、KGF、IFNα、IFNβ、IFNγ、GMCSF、CD40L、Flt3リガンド、幹細胞因子、アンセスチムおよびTNFαからなる群より選択されるサイトカインと結合体化されている、請求項32記載の抗体。放射性同位体と結合体化されている、請求項32記載の抗体。SEQIDNO:1、5、8、12、15、19、22、26、29、33、36、40、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55および56からなる群より選択されるアミノ酸配列のうち1つまたは複数をコードするヌクレオチド配列。ある抗体の機能的に連結した軽鎖の定常領域、重鎖の定常領域、または軽鎖および重鎖の両方をさらにコードする、請求項37記載のヌクレオチド配列を含む発現ベクター。請求項1~31のいずれか一項に定義された抗体を産生する、組換え真核宿主細胞または原核宿主細胞。請求項1~31のいずれか一項に定義された抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。請求項32~36のいずれか一項に定義された抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。医薬として用いるための、請求項1~31のいずれか一項記載の抗体。医薬として用いるための、請求項32~36のいずれか一項記載の抗体。癌の治療に用いるための、請求項1~31のいずれか一項記載の抗体。癌の治療に用いるための、請求項32~36のいずれか一項記載の抗体。癌が、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌、頭頸部の扁平上皮癌、子宮頸癌、膵癌、精巣癌、悪性黒色腫および軟部組織織癌からなる群より選択される、請求項44および45のいずれか一項記載の使用のための抗体。化学療法剤などの1つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わせて癌の治療に用いるためのものである、請求項44~46のいずれか一項記載の使用のための抗体。請求項46および/または47のさらなる特徴を任意で含む、癌の治療用の医薬の製造のための、請求項1~36のいずれか一項記載の抗体の使用。HER2を発現する1つまたは複数の腫瘍細胞の成長および/または増殖を阻害するための方法であって、それを必要とする個体に対する請求項1~36のいずれか一項記載の抗体の投与を含む、方法。前記抗体が請求項31~36のいずれか一項記載の特徴を含み、かつ1つまたは複数の腫瘍細胞がHER2ならびにEGFRおよび/またはHER3を共発現する、請求項49記載の方法。aHER2ならびにEGFRおよび/またはHER3を共発現する腫瘍細胞を含む、癌に罹患した対象を選択する段階、ならびにb請求項1~36のいずれか一項記載の抗体を該対象に投与する段階を含む、癌を治療するための方法。癌が、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌/子宮頸癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、精巣癌、軟部組織織腫瘍、例えば滑膜肉腫など、および膀胱癌からなる群より選択される、請求項51記載の方法。a請求項39記載の宿主細胞を培養する段階、およびb抗体を培地から精製する段階を含む、請求項1~36のいずれか一項記載の抗体を作製するための方法。試料を、請求項1~36のいずれか一項記載の抗体と、抗体とHER2との複合体の形成を可能にする条件下で接触させる段階、および複合体が形成されたか否かを分析する段階を含む、試料中のHER2の存在を検出するための方法。請求項1~36のいずれか一項記載の抗体、およびキットの使用説明書を含む、試料中のHER2の存在を検出するためのキット。発明の詳細な説明定義HER2ErbB2、NEU、HER2、およびCD340とも知られるという用語は、本明細書において用いられる時には、ヒト上皮細胞成長因子受容体2SwissProtP04626を指し、腫瘍細胞を含む細胞によって天然に発現されたHER2、またはHER2遺伝子でトランスフェクトされた細胞上に発現されたHER2の任意の変種、アイソフォーム、および種ホモログを含む。種ホモログには、アカゲザルHER2アカゲザルmacacamulatta;GenBankアクセッション番号GI:109114897が含まれる。免疫グロブリンという用語は、一対が低分子量の軽鎖L、一対が重鎖Hの二対のポリペプチド鎖からなり、4本全てがジスルフィド結合で相互接続されている構造的に関連する糖タンパク質のクラスをいう。免疫グロブリンの構造は詳細に特徴づけられている。例えば、FundamentalImmunologyCh7PaulWed2ndedRavenPressNY1989を参照されたい。簡単に述べると、それぞれの重鎖は、典型的には、重鎖可変領域本明細書ではVHまたはVHと省略するおよび重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、典型的には、3つのドメイン、CH1、CH2、およびCH3からなる。それぞれの軽鎖は、典型的には、軽鎖可変領域本明細書ではVLまたはVLと省略するおよび軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、典型的には、1つのドメインCLからなる。VH領域およびVL領域は、相補性決定領域CDRとも呼ばれる超可変性領域または配列が著しく変化し得る、およびもしくは構造が規定されたループの形をとり得る超可変領域にさらに細分することができ、超可変性領域は、フレームワーク領域FRと呼ばれる保存領域と共に散在している。それぞれのVHおよびVLは、典型的には、3つのCDRおよび4つのFRからなり、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で並べられているChothiaandLeskJMolBiol1969019171987も参照されたい。特に定めのない限り、または文脈によって明らかに否定されない限り、本明細書のCDR配列はIMGT規則に従って特定されるBrochetXNuclAcidsRes2008;36:W503508およびLefrancMPNucleicAcidsResearch1999;27:209212;インターネットhttpアドレスimgtcinesfrIMGTvquestvquestlivret0OptionhumanIgも参照されたい。しかしながら、抗体配列におけるアミノ酸残基のナンバリングは、KabatetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMD1991に記載の方法によって行うこともできる本明細書におけるKabatと同様の可変ドメイン残基ナンバリング、Kabat位置、またはKabatによるなどの句は、このナンバリングシステムをいう。特に、定常領域におけるアミノ酸のナンバリングの場合、Kabatら、前記によるEUインデックスナンバリングシステムを使用することができる。Kabat残基ナンバリングは、ある特定の抗体について、Kabatによってナンバリングされた標準配列と抗体配列との相同性領域でのアラインメントによって決定することができる。本発明の文脈において抗体Abという用語は、免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の断片、またはそのいずれかの誘導体を指し、これらは、代表的な生理学的条件下で、かなり長い半減期、例えば少なくとも約30分、少なくとも約45分、少なくとも約1時間、少なくとも約2時間、少なくとも約4時間、少なくとも約8時間、少なくとも約12時間、約24時間以上、約48時間以上、約3日、4日、5日、6日、7日以上など、あるいは他の任意の関連する、機能によって規定された期間例えば、抗体と抗原との結合に関連する生理学的応答を誘導する、促進する、増強する、および/もしくは調節するのに十分な時間、ならびに/または抗体がエフェクター活性を高めるのに十分な時間で抗原に特異的に結合する能力を有する。免疫グロブリン分子の重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体Abの定常領域は、免疫グロブリンと、免疫系の様々な細胞例えば、エフェクター細胞および補体系成分、例えば補体活性化の古典経路の第1の成分であるC1qを含む、宿主組織または宿主因子との結合を媒介することができる。HER2抗体はまた、二重特異性抗体、ダイアボディdiabody、または類似の分子でもよい例えば、ダイアボディの説明については、PNASUSA9014644481993を参照されたい。実際には、本発明によって提供される二重特異性抗体、ダイアボディなどは、HER2の一部に加えて、任意の適切な標的に結合することができる。前記のように、本明細書において抗体という用語は、特に定めのない限り、または文脈によって明らかに否定されない限り、抗原結合断片である抗体断片、すなわち抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体断片を含む。抗体の抗原結合機能は完全長抗体の断片によって果たし得ることも示されている。抗体という用語の中に含まれる抗原結合断片の例には、iFabまたはFab断片、VL、VH、CL、およびCH1ドメインからなる一価断片、またはWO2007059782Genmabに記載の一価抗体;iiFab2断片、2つのFab断片がヒンジ領域でのジスルフィド架橋によって連結された二価断片;iiiVHおよびCH1ドメインから本質的になるFd断片;iv抗体のシングルアームのVLおよびVHドメインから本質的になるFv断片、vVHドメインから本質的になり、ドメイン抗体Holtetal;TrendsBiotechnol2003Nov;2111:48490とも呼ばれる、dAb断片WardetalNature3415445461989;viキャメリドcamelidまたはナノボディnanobodyRevetsetal;ExpertOpinBiolTher2005Jan;51:11124、ならびにvii単離された相補性決定領域CDRが含まれる。さらに、Fv断片の2つのドメインであるVLおよびVHは別々の遺伝子によってコードされるが、VLおよびVH領域が対形成して一価分子単鎖抗体または単鎖FvscFvと知られる。例えば、BirdetalScience2424234261988およびHustonetalPNASUSA85587958831988を参照されたいを形成する1本のタンパク質鎖として作られるのを可能にする合成リンカーによって、組換え法を用いて接続されてもよい。このような単鎖抗体は、特に定めのない限り、または文脈によって明らかに示されない限り、抗体という用語の中に含まれる。このような断片は、一般的に、抗体の意味の中に含まれるが、ひとまとめにして、およびそれぞれ独立して、本発明の独特の特徴であり、異なる生物学的な特性よび有用性を示す。本発明の文脈における、これらの抗体断片および他の有用な抗体断片は、そのような断片の二重特異性抗体の形態と同様、本明細書においてさらに議論される。抗体という用語は、特に定めのない限り、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体mAb、抗体様ポリペプチド、例えばキメラ抗体およびヒト化抗体、ならびに任意の公知の技法、例えば酵素切断、ペプチド合成、および組換え技法によって提供される抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体断片抗原結合断片も含むことも理解すべきである。作製される抗体は任意のアイソタイプを有してよい。本明細書で使用するアイソタイプは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリンクラス例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE、またはIgMをいう。一価抗体という用語は、本発明の文脈では、抗体分子が1種類の抗原分子にしか結合できない、従って、抗原架橋できないことを意味する。エフェクター機能が欠損している抗体またはエフェクター機能欠損性抗体は、1つまたは複数のエフェクター機構、例えば補体活性化もしくはFc受容体結合を活性化する能力が大幅に低下しているかまたはその能力が無い抗体をいう。従って、エフェクター機能欠損性抗体は、抗体依存性細胞傷害ADCCおよび/もしくは補体依存性細胞傷害CDCを媒介する能力が大幅に低下しているかまたはその能力が無い。このような抗体の一例はIgG4である。HER2抗体または抗HER2抗体とは、抗原HER2に特異的に結合する前記の抗体である。本明細書で使用するヒト抗体という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基例えば、インビトロでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によって、またはインビボで体細胞変異によって導入された変異を含んでもよい。しかしながら、本明細書で使用するヒト抗体という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するCDR配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことは意図されない。本明細書中で使用するヒト抗体は、その抗体がヒト免疫グロブリン配列を用いた系から、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを免疫することによって、またはヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることによって獲得される場合、特定の生殖系列配列に由来し、ここで、選択されたヒト抗体は、アミノ酸配列において、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも90、例えば少なくとも95、例えば少なくとも96、例えば少なくとも97、例えば少なくとも98、または例えば、少なくとも99同一である。典型的には、特定のヒト生殖系列配列由来のヒト抗体は、重鎖CDR3外では、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、20個以下のアミノ酸の違い、例えば10個以下のアミノ酸の違い、例えば9個以下、8個以下、7個以下、6個以下、または5個以下、例えば4個以下、3個以下、2個以下、または1個以下のアミノ酸の違いを示す。好ましい態様において、本発明の抗体は単離されている。本明細書で使用する単離された抗体は、抗原特異性の異なる他の抗体を実質的に含まない抗体をいうことが意図される例えば、HER2に特異的に結合する単離された抗体は、HER2以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。しかしながら、HER2のエピトープ、アイソフォーム、または変種に特異的に結合する単離された抗体は、他の関連抗原、例えば他の種に由来する抗原例えば、HER2の種ホモログとの交差反応性を有することがある。さらに、単離された抗体は、他の細胞の材料および/または化学物質を実質的に含まないことがある。本発明の1つの態様では、詳細に明らかにされた組成物において、抗原結合特異性の異なる、2種類以上の単離されたモノクローナル抗体が組み合わされる。2種類以上の抗体の文脈に関して本明細書において用いられる場合、と競合するまたはと交差競合するという用語は、2種類以上の抗体がHER2との結合において競合する、例えば、実施例14に記載のアッセイにおいてHER2との結合において競合することを示す。抗体は、好ましくは、実施例14のアッセイを用いて確かめられた時に、1つまたは複数の他の抗体と25以上競合すれば、1つまたは複数の他の抗体とHER2との結合をブロックまたはクロスブロックし、25~74は部分ブロックに相当し、75~100は完全ブロックに相当する。一部の抗体対については、実施例のアッセイにおける競合またはブロッキングは一方の抗体がプレート上にコーティングされ、他方の抗体が競合に用いられた時のみに観察され、逆は同じではない。特に定めのない限り、または文脈によって明らかに否定されない限り、と競合する、と交差競合する、ブロックする、またはクロスブロックするという用語は、本明細書において用いられる場合、このような抗体対をカバーすることも意図される。エピトープという用語は、抗体に特異的結合することができるタンパク質決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の表面グループからなり、通常、特異的な三次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有する。コンホメーションエピトープおよび非コンホメーションエピトープは、変性溶媒の存在下では前者への結合が失われるが、後者への結合が失われないという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基エピトープ免疫優性成分とも呼ばれる、および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば特異的に抗原に結合するペプチドによって効果的にブロックされるアミノ酸残基言い換えると、このアミノ酸残基は、特異的に抗原に結合するペプチドのフットプリントfootprintの中にあるを含むことがある。本明細書で使用するモノクローナル抗体という用語は、分子組成が1種類しかない抗体分子の調製物をいう。モノクローナル抗体組成物は、ある特定のエピトープに対して結合特異性および親和性を1つしか示さない。従って、ヒトモノクローナル抗体という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する、結合特異性を1つしか示さない抗体をいう。ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物またはトランスクロモソーム非ヒト動物、例えばヒト重鎖トランスジーンおよび軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニックマウスから得られたB細胞が不死化細胞と融合したハイブリドーマによって作製することができる。抗体と所定の抗原との結合に関して本明細書で使用する結合という用語は、典型的には、例えば表面プラズモン共鳴SPR技術によって、BIAcore3000機器において、リガンドとして抗原、分析物として抗体を用いて確かめられた時に、約107M以下、例えば約108M以下、例えば約109M以下、約1010M以下、または約1011Mまたはさらにそれ未満のKDに対応する親和性での結合であり、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原例えば、BSA、カゼインとの結合の親和性の少なくとも1/10以下、例えば少なくとも1/100以下、例えば少なくとも1/1000以下、例えば少なくとも1/10000以下、例えば少なくとも1/100000以下のKDに対応する親和性で所定の抗原に結合する。親和性が小さくなる量は抗体のKDに依存し、その結果、抗体のKDが非常に低いすなわち、抗体が高特異性である場合、抗原に対する親和性が非特異的抗原に対する親和性よりも小さくなる量は少なくとも1/10000以下であり得る。本明細書で使用するkdsec1という用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離速度定数をいう。この値は、koff値とも呼ばれる。本明細書で使用するkaM1xsec1という用語は、特定の抗体抗原相互作用の会合速度定数をいう。本明細書で使用するKDMという用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離平衡定数をいう。本明細書で使用するKAM1という用語は、特定の抗体抗原相互作用の会合平衡定数をいい、kaをkdで割ることによって得られる。本明細書で使用する増殖を阻害する例えば、腫瘍細胞などの細胞を指している場合という用語は、例えば、実施例におけるアッセイによって確かめられた時に、細胞とHER2抗体が接触した時に、HER2抗体と接触していない同じ細胞の増殖と比較して任意の実質的な細胞増殖減少、例えば、細胞培養増殖の少なくとも約10、少なくとも約20、もしくは少なくとも約30、またはトラスツズマブなどの参照抗体と少なくとも同程度の阻害を含むことが意図される。本明細書で使用する増殖を促進する例えば、腫瘍細胞などの細胞を指している場合という用語は、例えば、実施例におけるアッセイによって確かめられた時に、細胞とHER2抗体が接触した時に、HER2抗体と接触していない同じ細胞の増殖と比較して任意の実質的な細胞増殖増加、例えば、細胞培養増殖の少なくとも約10、少なくとも約20、もしくは少なくとも約30、またはF5などの参照抗体と少なくとも同程度の促進を含むことが意図される。本明細書で使用する内部移行は、HER2抗体に関して用いられた時に、抗体が細胞表面およびまたは周囲媒体から、例えば、エンドサイトーシスを介してHER2発現細胞に内部移行される任意の機構を含む。抗体の内部移行は、内部移行された抗体の量を測定する直接アッセイ例えば、実施例18に記載のfabCypHer5Eアッセイ、または内部移行された抗体毒素結合体の作用が測定される間接アッセイ例えば、実施例17の抗κETAアッセイを用いて評価することができる。本発明はまた、実施例の抗体のVL領域、VH領域、または1つもしくは複数のCDRの機能的変種を含む抗体を提供する。HER2抗体に関して用いられるVL、VH、またはCDRの機能的変種は依然として、親抗体の親和性/アビディティおよび/または特異性/選択性の少なくともかなりの部分少なくとも約50、60、70、80、90、95以上を抗体が保持することを可能にする。場合によっては、このようなHER2抗体は、親抗体より高い親和性、選択性、および/または特異性に関連することがある。このような機能的変種は、典型的には、親抗体と大きな配列同一性を保持している。2つの配列間のパーセント同一性は、2つの配列の最適アラインメントのために導入される必要のある、ギャップの数およびそれぞれのギャップの長さを考慮に入れた、これらの配列が共有する同一の位置の数の関数すなわち、相同性=同一の位置の数/位置の総数x100である。2つのヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ALIGNプログラムバージョン20の中に組み込まれている、EMeyersandWMillerComputApplBiosci411171988のアルゴリズムを使用し、PAM120ウエイト残基表、12のギャップレングスペナルティ、および4のギャップペナルティを用いて決定することができる。さらに、2つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、NeedlemanandWunschJMolBiol484444531970アルゴリズムを用いて決定することができる。例示的な変種には、対応するコンセンサス配列中にXで示された1つまたは複数の変種アミノ酸位置において、図1および図2に示した親抗体VH配列およびまたはVL配列とは異なる変種が含まれる。好ましい変種は、新たなアミノ酸が、図1および図2のアライメント配列の1つの対応する位置にあるアミノ酸より選択される変種であるCDR配列変種に関する詳細については、表4を参照されたい。または、もしくはさらに、VH変種、VL変種、またはCDR変種の配列は、主に、保存的置換によって親抗体配列のVH、VL、またはCDRの配列と異なってもよい。例えば、変種における置換の少なくとも10個、例えば、少なくとも9個、8個、7個、6個、5個、4個、3個、2個、または1個は保存的アミノ酸残基交換である。本発明の文脈において、保存的置換は、以下の表に反映されるアミノ酸クラスの中の置換によって定義することができる。保存的置換のためのアミノ酸残基クラス本明細書で使用する組換え宿主細胞または単に宿主細胞という用語は、発現ベクター、例えば本発明の抗体をコードする発現ベクターが導入されている細胞をいうことが意図される。組換え宿主細胞には、例えばトランスフェクトーマtransfectoma、例えばCHO細胞、HEK293細胞、NS/0細胞、およびリンパ球細胞が含まれる。トランスジェニック非ヒト動物という用語は、1つまたは複数のヒト重鎖および/または軽鎖のトランスジーンまたはトランスクロモソームtranschromosomeを含む動物の天然ゲノムDNAに組み込まれた、または組み込まれていないゲノムを有し、完全なヒト抗体を発現することができる非ヒト動物をいう。例えば、トランスジェニックマウスは、HER2抗原および/またはHER2発現細胞で免疫した時にヒトHER2抗体を産生するように、ヒト軽鎖トランスジーンおよびヒト重鎖トランスジーンまたはヒト重鎖トランスクロモソームを有することができる。ヒト重鎖トランスジーンは、トランスジェニックマウス、例えばHuMAbマウス、例えばHCo7、HCo12、もしくはHCo17マウスのようにマウスの染色体DNAに組み込まれてもよく、または、ヒト重鎖トランスジーンは、WO02/43478に記載のトランスクロモソームKMマウスのように染色体外に維持されてもよい。さらに大きなヒトAb遺伝子レパートリーを有する類似のマウスにはHCo7およびHCo20が含まれる例えば、WO2009097006を参照されたい。このようなトランスジェニックマウスおよびトランスクロモソームマウス総称して本明細書においてトランスジェニックマウスと呼ばれるは、VDJ組換えおよびアイソタイプスイッチを受けることによって、ある特定の抗原に対して、複数のアイソタイプのヒトモノクローナル抗体例えば、IgG、IgA、IgM、IgD、および/またはIgEを産生することができる。トランスジェニック非ヒト動物はまた、このような特異的抗体をコードする遺伝子を導入することによって、例えばこれらの遺伝子と、動物の乳の中に発現される遺伝子とを機能的に連結することによって、ある特定の抗原に対する抗体を産生するのに使用することもできる。治療とは、症状または疾患状態を緩和する、寛解させる、抑止する、または根絶する治癒する目的で、治療活性のある有効量の本発明の化合物を投与するこという。有効量とは、望ましい治療結果を得るために必要な投与および時間で効果を示す量をいう。HER2抗体の治療的有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体においてHER2抗体が望ましい応答を誘発する能力などの要因に応じて変わることがある。治療的有効量はまた、抗体または抗体部分の治療に有益な作用が毒性作用または有害作用を上回る量でもある。抗イディオタイプ抗体は、概して抗体の抗原結合部位に結合する独特の決定基を認識する抗体である。本発明のさらなる局面および態様前記のように、第1の局面において、本発明は、HER2に結合するモノクローナル抗体に関する。本発明のモノクローナル抗体は、例えばKohleretalNature2564951975によって初めて述べられたハイブリドーマ法によって産生されてもよく、組換えDNA方法によって産生されてもよい。モノクローナル抗体はまた、例えばClacksonetalNature3526246281991およびMarksetalJMolBiol2225815971991に記載の技法を用いてファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。モノクローナル抗体は任意の適切な供給源から得ることができる。従って、例えばモノクローナル抗体は、関心対象の抗原、例えば表面上に抗原を発現する細胞、または関心対象の抗原をコードする核酸の形をした抗原で免疫したマウスから得られたマウス脾臓B細胞から調製されたハイブリドーマから得られてもよい。モノクローナル抗体はまた、免疫したヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えばラット、イヌ、霊長類などの抗体発現細胞に由来するハイブリドーマから得られてもよい。1つの態様において、本発明の抗体はヒト抗体である。HER2に対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を有するトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソームマウスを用いて作製することができる。このようなトランスジェニックマウスおよびトランスクロモソームマウスは、本明細書において、それぞれ、HuMAbマウスおよびKMマウスと呼ばれるマウスを含み、本明細書において総称してトランスジェニックマウスと呼ばれる。HuMAbマウスは、再編成されていないヒト重鎖μおよびγ免疫グロブリン配列ならびにκ軽鎖免疫グロブリン配列と、内因性μ鎖およびκ鎖遺伝子座を不活化する標的変異をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含有するLonbergNetalNature3688568591994。従って、このマウスはマウスIgMまたはκの低発現を示し、免疫に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖トランスジーンはクラススイッチおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトIgGκモノクローナル抗体を産生するLonbergNetal1994前出;LonbergNHandbookofExperimentalPharmacology113491011994、LonbergNandHuszarDInternRevImmunolVol1365931995、およびHardingFandLonbergNAnnNYAcadSci7645365461995に概説。HuMAbマウスの調製は、TaylorLetalNucleicAcidsResearch20628762951992、ChenJetalInternationalImmunology56476561993、TuaillonetalJImmunol152291229201994、TaylorLetalInternationalImmunology65795911994、FishwildDetalNatureBiotechnology148458511996に詳述されている。US5545806、US5569825、US5625126、US5633425、US5789650、US5877397、US5661016、US5814318、US5874299、US5770429、US5545807、WO9824884、WO9425585、WO931227、WO9222645、WO9203918、およびWO0109187も参照されたい。HCo7、HCo12、HCo17、およびHCo20マウスは、内因性軽鎖κ遺伝子におけるJKD破壊ChenetalEMBOJ128218301993に記載、内因性重鎖遺伝子におけるCMD破壊WO0114424の実施例1に記載、およびKCo5ヒトκ軽鎖トランスジーンFishwildetalNatureBiotechnology148458511996に記載を有する。さらに、Hco7マウスはHCo7ヒト重鎖トランスジーンUS5770429に記載を有し、HCo12マウスはHCo12ヒト重鎖トランスジーンWO0114424の実施例2に記載を有し、HCo17マウスはHCo17ヒト重鎖トランスジーンWO0109187の実施例2に記載を有し、HCo20マウスはHCo20ヒト重鎖トランスジーンを有する。結果として生じたマウスは、内因性マウス重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座がホモで破壊されたバックグラウンドでヒト免疫グロブリン重鎖トランスジーンおよびκ軽鎖トランスジーンを発現する。KMマウス系統では、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、ChenetalEMBOJ128118201993に記載のようにホモで破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、WO0109187の実施例1に記載のようにホモで破壊されている。このマウス系統は、FishwildetalNatureBiotechnology148458511996に記載のように、ヒトκ軽鎖トランスジーンであるKCo5を有する。このマウス系統はまた、WO0243478に記載のように、第14番染色体断片hCFSC20からなるヒト重鎖トランスクロモソームも有する。HCo12BalbCマウスは、WO097006に記載のように、HCo12をKCo5JKBalbと交雑することによって作製することができる。これらのトランスジェニックマウスに由来する脾細胞を用いると、周知の技法に従って、ヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製することができる。さらに、本発明のヒト抗体または他の種に由来する本発明の抗体は、当技術分野において周知の技法を用いた、ファージディスプレイ、レトロウイルスディスプレイ、リボソームディスプレイ、および他の技法を含むが、それに限定されるわけではないディスプレイ型技術によって特定することができ、得られた分子は、このような技法が当技術分野において周知のように親和性成熟などのさらなる成熟に供することができる例えば、HoogenboometalJMolBiol2273811991ファージディスプレイ、VaughanetalNatureBiotech143091996ファージディスプレイ、HanesandPlucthauPNASUSA94493749421997リボソームディスプレイ、ParmleyandSmithGene733053181988ファージディスプレイ、ScottTIBS172412451992、CwirlaetalPNASUSA87637863821990、RusseletalNuclAcidsResearch21108110851993、HogenboometalImmunolReviews13043681992、ChiswellandMcCaffertyTIBTECH1080841992、およびUS5733743を参照されたい。非ヒト抗体を作製するためにディスプレイ技術が用いられるのであれば、このような抗体をヒト化することができる。1つの局面において、本発明のHER2抗体は、ヒトHER2のドメインIIIと結合する。本発明の発明者らは、抗体005、006、059、060、106および111が、抗κETAモデル系において、強化された内部移行、リソソーム分解および毒性を示すことを示している。したがって、いかなる理論にも拘束されないものの、HER2のドメインIIIに対する抗体の結合は抗体の内部移行のために重要と考えられ、それ故に抗体薬物結合体ADCにとって有用と考えられる。抗体005、006、059、060、106および111は、HER2のヘテロ二量体化における機能が不明であるHER2ドメインIIIに存在する、あるエピトープを認識する。一方、HER2ドメインIVハーセプチンによる結合を受けるは、HER2のリガンド非依存的ヘテロ二量体化に関与することが報告されておりJuntillaetalCancerCell200915429440、HER2ドメインIIペルツズマブによる結合を受けるは、HER2のリガンド誘導性ヘテロ二量体化に関与することが報告されているLandgrafetalBreastCancerResearch20079202。本発明者らは、HER2/ErbBヘテロ二量体の形成が、HER2抗体/受容体複合体の十分な内部移行および分解を得るために決定的に重要であるとの仮説を立てている。このため、HER2ヘテロ二量体によって主導される内部移行および分解を利用するHER2抗体は、HER2を標的とする今後のADC治療剤にとって非常に魅力的であるように思われる。特に、HER2を極めて高いレベルでは過剰発現しない腫瘍細胞上でのHER2/ErbBヘテロ二量体の形成は、HER2抗体にADCを送達させるための魅力的なアプローチであると考えられる。本発明のHER2抗体の1つの局面において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、トラスツズマブ、ペルツズマブ、F1およびC5のいずれかのVH配列およびVL配列を含む、任意で固定化された形態の第2の抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックしない。本発明の抗体の1つの追加的または代替的な局面において、本抗体は、本明細書に記載の新規ヒト抗体の1つまたは複数の、可溶性HER2に対する結合をブロックするかまたはクロスブロックする。1つの態様において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、任意で固定化されている参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックし、ここで参照抗体はSEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含み005、好ましくは本抗体は完全に遮断性である。1つの態様において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、任意で固定化されている参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックし、ここで参照抗体はSEQIDNO:8の配列を含むVH領域とSEQIDNO:12の配列を含むVL領域とを含み006、好ましくは本抗体は完全に遮断性である。1つの態様において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、任意で固定化されている参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックし、ここで参照抗体はSEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含み059、好ましくは本抗体は完全に遮断性である。1つの態様において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、任意で固定化されている参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックし、ここで参照抗体はSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含み060、好ましくは本抗体は完全に遮断性である。1つの態様において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、任意で固定化されている参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックし、ここで参照抗体はSEQIDNO:29の配列を含むVH領域とSEQIDNO:33の配列を含むVL領域とを含み106、好ましくは本抗体は完全に遮断性である。1つの態様において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、任意で固定化されている参照抗体の可溶性HER2に対する結合をブロックし、ここで参照抗体はSEQIDNO:36の配列を含むVH領域とSEQIDNO:40の配列を含むVL領域とを含み111、好ましくは本抗体は完全に遮断性である。別個および特定的な態様において、本抗体は、前記の態様の2つ、3つ、4つ、5つまたは6つの参照抗体、例えば、抗体005および111、抗体005および006;抗体059および106;抗体006および059;抗体059、106、005および060;抗体006、59、060および111;または抗体059、106、005、060、111および006などの結合をブロックする。1つの態様において、本抗体は、実施例14に記載した通りに判定した場合に、可溶性HER2に対する結合に関して、以下のすべてのものと少なくとも25、好ましくは少なくとも50競合する:SEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む、任意で固定化されている参照抗体005;SEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含む、任意で固定化されている参照抗体059;SEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む、任意で固定化されている参照抗体060;SEQIDNO:29の配列を含むVH領域とSEQIDNO:33の配列を含むVL領域とを含む、任意で固定化されている参照抗体106;SEQIDNO:36の配列を含むVH領域とSEQIDNO:40の配列を含むVL領域とを含む、任意で固定化されている参照抗体111。1つの態様において、本抗体は、固定化された場合、実施例14に記載した通りに判定した場合に、以下のもの:SEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005;SEQIDNO:8の配列を含むVH領域とSEQIDNO:12の配列を含むVL領域とを含む抗体006;SEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含む抗体059;SEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060;SEQIDNO:29の配列を含むVH領域とSEQIDNO:33の配列を含むVL領域とを含む抗体106;ならびにSEQIDNO:36の配列を含むVH領域とSEQIDNO:40の配列を含むVL領域とを含む抗体111からなる群より選択される少なくとも1つの抗体の、可溶性HER2に対する結合をブロックし、好ましくは、固定化された抗体は完全に遮断性である。1つの態様において、本抗体は、固定化された場合、実施例14に記載した通りに判定した場合に、可溶性HER2に対する結合に関して、前記の態様において定義されたすべての抗体と、25またはそれ以上、好ましくは50またはそれ以上競合する。本発明の抗体の1つの局面において、本抗体は、本明細書に記載の新規ヒト抗体の1つまたは複数と、HER2上の同じエピトープに結合する。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005と、同じエピトープに結合する。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:8の配列を含むVH領域とSEQIDNO:12の配列を含むVL領域とを含む抗体006と、同じエピトープに結合する。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含む抗体059と、同じエピトープに結合する。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060と、同じエピトープに結合する。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:29の配列を含むVH領域とSEQIDNO:33の配列を含むVL領域とを含む抗体106と、同じエピトープに結合する。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:36の配列を含むVH領域とSEQIDNO:40の配列を含むVL領域とを含む抗体111と、同じエピトープに結合する。1つの態様において、本抗体は、以下のものからなる群より選択される少なくとも1つの抗体と、同じエピトープに結合する:aSEQIDNO:43の配列を含むVH領域とSEQIDNO:44の配列を含むVL領域とを含む抗体041bSEQIDNO:45の配列を含むVH領域とSEQIDNO:46の配列を含むVL領域とを含む抗体150、ならびにcSEQIDNO:47の配列を含むVH領域とSEQIDNO:48の配列を含むVL領域とを含む抗体067;dSEQIDNO:49の配列を含むVH領域とSEQIDNO:50の配列を含むVL領域とを含む抗体072;eSEQIDNO:51の配列を含むVH領域とSEQIDNO:52の配列を含むVL領域とを含む抗体163;fSEQIDNO:53の配列を含むVH領域とSEQIDNO:54の配列を含むVL領域とを含む抗体093;gSEQIDNO:55の配列を含むVH領域とSEQIDNO:56の配列を含むVL領域とを含む抗体044。本発明の抗体の別の追加的または代替的な局面において、本抗体はHER2と結合し、かつ、本明細書に記載の新規抗体と類似するかまたは同一である配列を含むVHCDR3、VH領域および/またはVL領域の配列を含む。1つの態様において、本抗体は、以下のものからなる群より選択されるアミノ酸配列を有するVHCDR3領域を含む:SEQIDNO:59、例えばSEQIDNO:4、25、32の配列005、060、106、ここで任意でVH領域がIgHV5511生殖系列に由来する;SEQIDNO:62、例えばSEQIDNO:11の配列006、ここで任意でVH領域がIgHV3231生殖系列配列に由来する;SEQIDNO:65、例えばSEQIDNO:18の配列059、ここで任意でVH領域がIgHV1181生殖系列配列に由来する;またはSEQIDNO:67、例えばSEQIDNO:39の配列111、ここで任意でVH領域がIgHV1694生殖系列配列に由来する。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:59のアミノ酸配列を含むVHCDR3領域を含み、式中、X1=Q、HまたはL;X2=R、A、TまたはK;X3=G;X4=D;X5=Rまたは無し;X6=Gまたは無し;X7=YまたはF;X8=YまたはD;X9=Y、FまたはH;X10=Y、D、S、FまたはN;X11=MまたはL;およびX12=VまたはIであり;好ましくは、式中、X1=Q、X2=RまたはA;X5=X6=無し;X7=YまたはF;X8=Y;X9=F;X10=Y;およびX12=Vである。1つの特定の態様において、本抗体は、SEQIDNO:59のアミノ酸配列を含むVHCDR3領域を含み、式中、X1=Q、X2=RまたはA;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=YまたはF;X8=Y;X9=F;X10=Y;およびX12=Vである。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:59のアミノ酸配列を含むVHCDR3領域を含み、式中、X1=Q、X2=K;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=F;X8=Y;X9=X10=F;X11=L;およびX12=Vである;またはX1=Q、X2=A;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=X8=Y;X9=Y;X10=N;X11=M;およびX12=Vである;またはX1=Q、X2=K;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=X8=Y;X9=H;X10=Y;X11=L;およびX12=Vである;またはX1=Q、X2=K;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=Y;X8=Y;X9=F;X10=N;X11=L;およびX12=Vである;またはX1=Q、X2=R;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=Y;X8=Y;X9=F;X10=N;X11=L;およびX12=Vである;またはX1=Q、X2=R;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=Y;X8=Y;X9=X10=F;X11=L;およびX12=Iである;またはX1=Q、X2=A;X3=G;X4=D、X5=X6=無し;X7=X8=Y;X9=Y;X10=N;X11=M;およびX12=Vである。1つの態様において、本抗体は、図1に示すように、抗体041、150、067、072、163または093のうち1つのVHCDR3領域を含み、ここで任意でVH領域はIgHV5511生殖系列に由来する。1つの態様において、本抗体は、以下のものからなる群より選択されるVH領域を含む:aSEQIDNO:57、58および59のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVH領域、例えば、a.SEQIDNO:2、23および30から選択されるCDR1配列;3、24および31から選択されるCDR2配列;ならびに4、25および32から選択されるCDR3配列005、060、106、b.それぞれSEQIDNO:2、3および4のCDR1、CDR2およびCDR3配列005、c.それぞれSEQIDNO:23、24および25のCDR1、CDR2およびCDR3配列060、d.それぞれSEQIDNO:32、33および34のCDR1、CDR2およびCDR3配列106、ここで任意でVH領域はIgHV5511生殖系列に由来する;bSEQIDNO:60、61および62のCDR1、CDR2およびCDR3配列、例えばそれぞれSEQIDNO:9、10および11のCDR1、CDR2およびCDR3配列006などを含むVH領域、ここで任意でVH領域はIgHV3231生殖系列に由来する;ならびにcSEQIDNO:63、64および65のCDR1、CDR2およびCDR3配列、例えばそれぞれSEQIDNO:16、17および18のCRD1、CDR2およびCDR3配列059などを含むVH領域、ここで任意でVH領域はIgHV1181生殖系列に由来する;ならびにdSEQIDNO:66、38および67のCDR1、CDR2およびCDR3配列、例えばそれぞれSEQIDNO:37、38および39のCRD1、CDR2およびCDR3配列111などを含むVH領域、ここで任意でVH領域はIgHV1694生殖系列に由来する。1つの態様において、本抗体は、前記の態様a、cまたはdから選択されるVH領域と、それぞれSEQIDNO:68、GASおよびSEQIDNO:69のCDR1、CDR2およびCDR3配列、例えばSEQIDNO:6、20、27、34および41から選択されるCDR1配列、GASであるCDR2、ならびに7、21、28、35および42から選択されるCDR3配列005、059、060、106、111などを含むVL領域とを含み、ここで任意でVL領域はIgKV32001生殖系列に由来する。1つの態様において、本抗体は、前記の態様bであるVH領域と、それぞれSEQIDNO:13、DASおよびSEQIDNO:14のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVL領域とを含み006、ここで任意でVL領域はIgKV31101に由来する。1つの態様において、本抗体は、それぞれSEQIDNO:2、3および4のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVH領域と、それぞれSEQIDNO:6、GASおよびSEQIDNO:7のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVL領域とを含む005。1つの態様において、本抗体は、それぞれSEQIDNO:9、10および11のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVH領域と、それぞれSEQIDNO:13、DASおよびSEQIDNO:14のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVL領域とを含む006。1つの態様において、本抗体は、それぞれSEQIDNO:16、17および18のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVH領域と、それぞれSEQIDNO:20、GASおよびSEQIDNO:21のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVL領域とを含む059。1つの態様において、本抗体は、それぞれSEQIDNO:23、24および25のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVH領域と、それぞれSEQIDNO:27、GASおよびSEQIDNO:28のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVL領域とを含む060。1つの態様において、本抗体は、それぞれSEQIDNO:30、31および32のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVH領域と、それぞれSEQIDNO:34、GASおよびSEQIDNO:35のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVL領域とを含む106。1つの態様において、本抗体は、それぞれSEQIDNO:37、38および39のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVH領域と、それぞれSEQIDNO:41、GASおよびSEQIDNO:42のCDR1、CDR2およびCDR3配列を含むVL領域とを含む111。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、式中、X1=S、X2=T、およびX3=S;SEQIDNO:58のCDR2配列、式中、X1=YおよびX2=H;ならびにSEQIDNO:59のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=K、X3=G、X4=D、X5=X6=無し、X7=F、X8=Y、X9=X10=F、X11=L、およびX12=Vを含むVH領域と、SEQIDNO:68のCDR1配列、式中、X1=X2=S;CDR2配列GAS;ならびにSEQIDNO:69のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=S、X3=X4=無しおよびX5=Lを含むVL領域とを含む041。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、式中、X1=S、X2=TおよびX3=S;SEQIDNO:58のCDR2配列、式中、X1=YおよびX2=H;ならびにSEQIDNO:59のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=A、X3=G、X4=D、X5=X6=無し、X7=X8=Y、X9=Y、X10=N、X11=M、およびX12=Vを含むVH領域と、SEQIDNO:68のCDR1配列、式中、X1=X2=S;CDR2配列GAS;ならびにSEQIDNO:69のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=S、X3=X4=無しおよびX5=Lを含むVL領域とを含む150。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、式中、X1=S、X2=TおよびX3=S;SEQIDNO:58のCDR2配列、式中、X1=YおよびX2=D;ならびにSEQIDNO:59のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=K、X3=G、X4=D、X5=X6=無し、X7=X8=Y、X9=H、X10=Y、X11=L、およびX12=Vを含むVH領域と、SEQIDNO:68のCDR1配列、式中、X1=X2=S;CDR2配列GAS;ならびにSEQIDNO:69のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=S、X3=P、X4=RおよびX5=Lを含むVL領域とを含む067。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、式中、X1=S、X2=TおよびX3=S;SEQIDNO:58のCDR2配列、式中、X1=YおよびX2=D;ならびにSEQIDNO:59のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=K、X3=G、X4=D、X5=X6=無し、X7=Y、X8=Y、X9=F、X10=N、X11=L、およびX12=Vを含むVH領域と、SEQIDNO:68のCDR1配列、式中、X1=X2=S;CDR2配列GAS;ならびにSEQIDNO:69のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=S、X3=P、X4=RおよびX5=Lを含むVL領域とを含む072。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、式中、X1=R、X2=IおよびX3=S;SEQIDNO:58のCDR2配列、式中、X1=YおよびX2=D;ならびにSEQIDNO:59のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=R、X3=G、X4=D、X5=X6=無し、X7=Y、X8=Y、X9=F、X10=N、X11=L、およびX12=Vを含むVH領域と、SEQIDNO:68のCDR1配列、式中、X1=X2=S;CDR2配列GAS;ならびにSEQIDNO:69のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=S、X3=X4=無しおよびX5=Lを含むVL領域とを含む163。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、式中、X1=S、X2=TおよびX3=S;SEQIDNO:58のCDR2配列、式中、X1=YおよびX2=D;ならびにSEQIDNO:59のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=R、X3=G、X4=D、X5=X6=無し、X7=Y、X8=Y、X9=X10=F、X11=L、およびX12=Iを含むVH領域と、SEQIDNO:68のCDR1配列、式中、X1=X2=S;CDR2配列GAS;ならびにSEQIDNO:69のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=S、X3=X4=無しおよびX5=Lを含むVL領域とを含む093。1つの態様において、本抗体は、SEQIDNO:57のCDR1配列、式中、X1=R、X2=SおよびX3=S;SEQIDNO:58のCDR2配列、式中、X1=FおよびX2=D;ならびにSEQIDNO:59のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=A、X3=G、X4=D、X5=X6=無し、X7=X8=Y、X9=Y、X10=N、X11=M、およびX12=Vを含むVH領域と、SEQIDNO:68のCDR1配列、式中、X1=X2=S;CDR2配列GAS;ならびにSEQIDNO:69のCDR3配列、式中、X1=Q、X2=S、X3=X4=無しおよびX5=Lを含むVL領域とを含む044。別個の態様において、本抗体は、以下のものを含む:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:5の配列を含むVL領域005、bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:11の配列を含むVL領域006、cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:19の配列を含むVL領域059、dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:26の配列を含むVL領域060、eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:33の配列を含むVL領域106、fSEQIDNO:36の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:40の配列を含むVL領域111、gSEQIDNO:43の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:44の配列を含むVL領域041、hSEQIDNO:45の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:46の配列を含むVL領域150、iSEQIDNO:47の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:48の配列を含むVL領域067、jSEQIDNO:49の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:50の配列を含むVL領域072、kSEQIDNO:51の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:52の配列を含むVL領域163、lSEQIDNO:53の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:54の配列を含むVL領域093、mSEQIDNO:55の配列を含むVH領域、および好ましくはSEQIDNO:56の配列を含むVL領域044、n好ましくは多くとも1個、2個または3個のアミノ酸修飾を有し、より好ましくはアミノ酸置換、例えば保存的アミノ酸置換、および新たなアミノ酸が図1または2におけるアラインメントされた配列中で同じ位置に、特に対応するコンセンサス配列中でXによって示された位置にある置換などを有する、前記のいずれかの抗体の変種。本発明の抗体の別の局面において、本抗体は、好ましくは実施例14に記載した通りに判定した場合に、本明細書に記載の新規抗体のうち1つまたは複数の、可溶性HER2に対する結合を部分的または完全にクロスブロックし;かつ、実施例12、13、15、16、17および18に記載した通りに判定される1つまたは複数の性質によってさらに特徴づけられる。1つの態様において、HER2抗体は、実施例12に記載した通りに判定した場合に、A431細胞に対する結合に関してトラスツズマブよりも低いEC50値半値有効濃度、好ましくは080、050または030μg/mlよりも低いEC50値を有し、かつ、以下のものからなる群より選択される少なくとも1つの抗体をクロスブロックする:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005;bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域とSEQIDNO:11の配列を含むVL領域とを含む抗体006;ならびにcSEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含む抗体059。別個かつ特定的な態様において、前記の態様の抗体は、抗体005、006、059またはそれらの組み合わせを完全にクロスブロックし、好ましくは、それらと同じエピトープと結合する。追加的または代替的な態様において、HER抗体は、実施例13に記載した通りに判定した場合に、HER2陽性アカゲザル上皮細胞と特異的に結合し、以下のものからなる群より選択される少なくとも1つの抗体交差をブロックする:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域とSEQIDNO:11の配列を含むVL領域とを含む抗体006cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含む抗体059dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域とSEQIDNO:33の配列を含むVL領域とを含む抗体106fSEQIDNO:36の配列を含むVH領域とSEQIDNO:40の配列を含むVL領域とを含む抗体111。別個かつ特定的な態様において、前記の態様の抗体は、抗体005、006、059、060、106、111またはそれらの組み合わせを完全にクロスブロックし、好ましくはそれらと同じエピトープと結合する。追加的または代替的な態様において、HER2抗体は、HER2を発現するAU565細胞と特異的に結合するが、実施例16に記載した通りに判定した場合に、細胞のリガンド非依存的増殖をF5よりも促進せず、増殖を好ましくは30未満、より好ましくは20未満しか促進せず、かつ、以下のものから選択される少なくとも1つの抗体をクロスブロックする:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005;およびbSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060。別個かつ特定的な態様において、前記の態様の抗体は、抗体005、060またはそれらの組み合わせを完全にクロスブロックし、好ましくはそれらと同じエピトープと結合する。追加的または代替的な態様において、本抗体は、治療用部分、例えば短縮型のシュードモナスエキソトキシンAなどと直接的または間接的に結合体化された場合に、実施例17に記載した通りに判定した場合に、AU565細胞、A431細胞、またはAU565細胞およびA431細胞の両方を死滅させることにおいて、トラスツズマブよりも有効である。1つの態様において、結合体化された抗体は、実施例17に記載した通りに判定した場合に、AU565細胞またはA431細胞の少なくとも60、好ましくは少なくとも70を死滅させ、かつ、以下のものから選択される少なくとも1つの抗体をクロスブロックする:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005、bSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060、cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含む抗体059、ならびにdSEQIDNO:36の配列を含むVH領域とSEQIDNO:40の配列を含むVL領域とを含む抗体111。別個かつ特定的な態様において、前記の態様の抗体は、抗体005、060、059、111またはそれらの組み合わせを完全にクロスブロックし、好ましくは、それらと同じエピトープと結合する。追加的または代替的な態様において、本抗体は、治療用部分と直接的にまたは間接的に結合体化された場合に、好ましくは実施例17に記載した通りに判定した場合に、非結合体化抗体が細胞の死滅を誘導しない濃度で、発現される細胞当たりのHER2コピーの平均量がAU565細胞よりも少ない、例えば、細胞当たりのHER2が平均で約500000コピーもしくはそれ未満、100000コピーもしくはそれ未満、または30000コピーもしくはそれ未満例えば、実施例12に言及されたように決定した場合にである腫瘍細胞を死滅させることができる。1つの態様において、前記の態様の抗体は、実施例17に記載した通りに判定した場合に、A431細胞の少なくとも80を死滅させ、かつ、以下のものから選択される少なくとも1つの抗体をクロスブロックする:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005、ならびにbSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060。別個かつ特定的な態様において、前記の態様の抗体は、抗体005、060またはそれらの組み合わせを完全にクロスブロックし、好ましくはそれらと同じエピトープと結合する。追加的または代替的な態様において、本抗体は、好ましくは実施例18に従って判定した場合に、トラスツズマブよりも、HER2を発現する腫瘍細胞、例えばAU565細胞などによる内部移行を受け、好ましくは、内部移行を受けるトラスツズマブの量の2倍または3倍を上回る内部移行を受け、かつ、以下のものからなる群より選択される少なくとも1つの抗体をクロスブロックする:aSEQIDNO:1の配列を含むVH領域とSEQIDNO:5の配列を含むVL領域とを含む抗体005bSEQIDNO:8の配列を含むVH領域とSEQIDNO:11の配列を含むVL領域とを含む抗体006cSEQIDNO:15の配列を含むVH領域とSEQIDNO:19の配列を含むVL領域とを含む抗体059dSEQIDNO:22の配列を含むVH領域とSEQIDNO:26の配列を含むVL領域とを含む抗体060eSEQIDNO:29の配列を含むVH領域とSEQIDNO:33の配列を含むVL領域とを含む抗体106fSEQIDNO:36の配列を含むVH領域とSEQIDNO:40の配列を含むVL領域とを含む抗体111。別個かつ特定的な態様において、前記の態様の抗体は、抗体005、006、059、060、106、111またはそれらの組み合わせを完全にクロスブロックし、好ましくはそれらと同じエピトープと結合する。1つのさらなる態様において、本抗体は、好ましくは実施例に記載した通りに判定した場合に、HER2を発現する腫瘍細胞の増殖をF5よりも促進せず、トラスツズマブよりも、HER2を発現する腫瘍細胞内への内部移行を受ける。抗体形式本発明は、典型的には、HER2発現腫瘍細胞のリガンド非依存性増殖を有意に促進することなく、HER2発現腫瘍細胞に効率的に結合し、HER2発現腫瘍細胞に内部移行するHER2抗体を提供する。下記のように、特定の用途の望ましい機能特性に応じて、本発明において提供される抗体セットから特定の抗体を選択することができる、およびまたはこれらの特性を変えるように、これらの形式を合わせることができる。本発明の抗体はいかなるアイソタイプでもよい。アイソタイプの選択は、典型的には、ADCC誘導などの望ましいエフェクター機能によって導かれる。例示的なアイソタイプは、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4である。ヒト軽鎖定常領域であるκまたはλのどちらか一方を使用することができる。所望であれば、本発明のHER2抗体のクラスを公知の方法によってスイッチすることができる。例えば、最初にIgMであった本発明の抗体を本発明のIgG抗体にクラススイッチすることができる。さらに、クラススイッチ法を用いて、あるIgGサブクラスを別のIgGサブクラスに、例えば、IgG1からIgG2に変換することができる。従って、本発明の抗体のエフェクター機能は、様々な治療用途に合わせて、例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE、またはIgM抗体へのアイソタイプスイッチによって変えることができる。1つの態様において、本発明の抗体は、IgG1抗体、例えば、IgG1κである。さらなる態様において、本発明の抗体は、例えば、US2009317869に記載のように、もしくはvanBerkeletal2010BiotechnolBioeng105:350に記載のように抗体産生中に培地に化合物を添加することによって、または、例えば、YamaneOhnukietal2004BiotechnolBioeng87:614に記載のようにFUT8ノックアウト細胞を使用することによって、フコースを低減し、従って、ADCCを強化するように糖が操作されている。または、ADCCは、Umanaetal1999NatureBiotech17:176に記載の方法を用いて最適化されてもよい。さらなる態様において、本発明の抗体は、補体活性化を増強するように、例えば、Natsumeetal2009CancerSci100:2411に記載のように操作されている。1つの態様において、本発明の抗体は、完全長抗体であり、好ましくは、IgG1抗体、特に、IgG1κ抗体である。別の態様において、本発明の抗体は抗体断片または単鎖抗体である。抗体断片は、例えば、従来の技法を用いた断片化によって得ることができ、この断片は、抗体全体について本明細書で説明されたものと同じやり方で有用性についてスクリーニングすることができる。例えば、Fab2断片は、抗体をペプシンで処理することによって作製することができる。ジスルフィド架橋が少なくなるように、得られたFab2断片をジチオスレイトールなどの還元剤で処理して、Fab断片を作製することができる。Fab断片は抗体をパパインで処理することによって得ることができる。Fab2断片はまた、チオエーテル結合またはジスルフィド結合を介してFab断片を結合させることによって作製することもできる。抗体断片はまた、組換え細胞において、このような断片をコードする核酸を発現させることによって作製することもできる例えば、EvansetalJImmunolMeth184123381995を参照されたい。このような切断型抗体断片分子を生じるために、Fab2断片の一部をコードするキメラ遺伝子は、H鎖のCH1ドメインおよびヒンジ領域をコードするDNA配列の後に翻訳停止コドンを含んでもよい。前記で説明したように、1つの態様において、本発明のHER2抗体は、二価抗体である。別の態様において、本発明のHER2抗体は一価抗体である。1つの態様において、本発明の抗体は、例えばUS20080063641Genentechに記載のFab断片もしくは1アーム抗体、または例えばWO2007048037Amgenに記載の一価抗体である。好ましい態様において、一価抗体は、ヒンジ領域が欠失されている、WO2007059782Genmab参照により本明細書に組み入れられるに記載の構造を有する。従って、1つの態様において、前記抗体は一価抗体であり、HER2抗体は、以下の段階を含む方法によって構築される:i前記一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物を準備する段階であって、前記構築物が、選択された抗原特異的HER2抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列とIgの定常CL領域をコードするヌクレオチド配列とを含み、前記選択された抗原特異的抗体のVL領域をコードするヌクレオチド配列および前記IgのCL領域をコードするヌクレオチド配列が一緒に機能的に連結され、IgG1サブタイプの場合、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、または動物もしくはヒトに投与された時に、CL領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとジスルフィド結合または共有結合を形成することができるいかなるアミノ酸もCL領域が含有しないように、CL領域をコードするヌクレオチド配列が修飾されている、段階;ii前記一価抗体の重鎖をコードする核酸構築物を準備する段階であって、前記構築物が、選択された抗原特異的抗体のVH領域をコードするヌクレオチド配列とヒトIgの定常CH領域をコードするヌクレオチド配列とを含み、ヒンジ領域に対応する領域、およびIgサブタイプにより必要とされる場合にはCH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、または動物もしくはヒトに投与された時に、ヒトIgのCH領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとのジスルフィド結合、または共有結合もしくは安定した非共有結合による重鎖間結合の形成に関与するいかなるアミノ酸残基も含まないように、CH領域をコードするヌクレオチド配列が修飾されており、前記選択された抗原特異的抗体のVH領域をコードするヌクレオチド配列および前記IgのCH領域をコードするヌクレオチド配列が一緒に機能的に連結されている、段階;iii前記一価抗体を産生するための細胞発現系を準備する段階;iviiiの細胞発現系の細胞において、iおよびiiの核酸構築物を同時発現させることによって、前記一価抗体を産生する段階。同様に、1つの態様において、HER2抗体は、以下を含む一価抗体である:i本明細書に記載の本発明の抗体の可変領域または該領域の抗原結合部分、ならびにiiヒンジ領域に対応する領域、および免疫グロブリンがIgG4サブタイプでない場合はCH領域の他の領域、例えばCH3領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で同一のCH領域とのジスルフィド結合または同一のCH領域との他の共有結合もしくは安定した非共有結合による重鎖間結合を形成することができるいかなるアミノ酸残基も含まないように修飾されている、免疫グロブリンのCH領域、またはCH2領域およびCH3領域を含むその断片。そのさらなる態様において、一価HER2抗体の重鎖は、ヒンジ全体が欠失されるように修飾されている。別のさらなる態様において、前記一価抗体はIgG4サブタイプであるが、CH3領域は、以下のアミノ酸置換の1つまたは複数がなされるように修飾されている。CH3変異のナンバリングKABATは、KabatKabatetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMD1991に準拠するアミノ酸ナンバリングを示す。EUインデックスは、Kabatetal上記に概説されたEUインデックスに準拠するアミノ酸ナンバリングを示す。別のさらなる態様において、前記一価抗体の配列は、N結合型グリコシル化のアクセプター部位を含まないように修飾されている。本発明のHER2抗体はまた単鎖抗体を含む。単鎖抗体は、重鎖Fv領域および軽鎖Fv領域が接続されているペプチドである。1つの態様において、本発明は、1本のペプチド鎖において、本発明のHER2抗体のFvの重鎖および軽鎖が可動性ペプチドリンカー典型的には、約10個、12個、15個以上のアミノ酸残基からなるとつながっている単鎖FvscFvを提供する。このような抗体を作製する方法は、例えばUS4946778、PluckthuninThePharmacologyofMonoclonalAntibodiesvol113RosenburgandMooreedsSpringerVerlagNewYorkpp2693151994、BirdetalScience2424234261988、HustonetalPNASUSA85587958831988、およびMcCaffertyetalNature3485525541990に記載されている。単鎖抗体は、1種類のVHおよびVLしか用いられないのであれば一価であり得、2種類のVHおよびVLが用いられるのであれば二価であり得、3種類以上のVHおよびVLが用いられるのであれば多価であり得る。1つの態様において、本発明のHER2抗体はエフェクター機能欠損性抗体である。1つの態様において、エフェクター機能欠損性のHER2抗体は、Fabアーム交換を阻止するように修飾されている、安定化されたIgG4抗体であるvanderNeutKolfschotenetal2007Science3175844:15547。適切な安定化されたIgG4抗体の例は、KabatetalのようにEUインデックスで示されたヒトIgG4の重鎖定常領域の位置409にあるアルギニンが、リジン、スレオニン、メチオニン、もしくはロイシン、好ましくはリジンで置換されている抗体WO2006033386Kirinに記載、および/またはヒンジ領域がCysProProCys配列を含むように修飾されている抗体である。1つの態様において、安定化されたIgG4HER2抗体は、重鎖および軽鎖を含むIgG4抗体であり、前記重鎖は、409に対応する位置に、Lys、Ala、Thr、Met、およびLeuからなる群より選択される残基、ならびに/または405に対応する位置に、Ala、Val、Gly、Ile、およびLeuからなる群より選択される残基を有するヒトIgG4定常領域を含み、前記抗体は、任意で1つまたは複数のさらなる置換、欠失、および/または挿入を含むが、ヒンジ領域にCysProProCys配列を含まない。好ましくは、前記抗体は、409に対応する位置にLysもしくはAla残基を含むか、または抗体のCH3領域は、ヒトIgG1、ヒトIgG2、もしくはヒトIgG3のCH3領域で置換されている。WO2008145142Genmabも参照されたい。なおさらなる態様において、安定化されたIgG4HER2抗体は、重鎖および軽鎖を含むIgG4抗体であり、前記重鎖は、409に対応する位置に、Lys、Ala、Thr、Met、およびLeuからなる群より選択される残基、ならびに/または405に対応する位置に、Ala、Val、Gly、Ile、およびLeuからなる群より選択される残基を有するヒトIgG4定常領域を含み、前記抗体は、任意で1つまたは複数のさらなる置換、欠失、および/または挿入を含み、ヒンジ領域にCysProProCys配列を含む。好ましくは、前記抗体は、409に対応する位置にLysもしくはAla残基を含むか、または抗体のCH3領域は、ヒトIgG1、ヒトIgG2、もしくはヒトIgG3のCH3領域で置換されている。さらなる態様において、エフェクター機能欠損性のHER2抗体は、ADCCなどのエフェクター機能を媒介する能力が低下するように、さらにはエフェクター機能が無くなるように変異されている、非IgG4型、例えばIgG1、IgG2、またはIgG3の抗体である。このような変異は、例えばDallAcquaWFetalJImmunol1772:112911382006およびHezarehMJVirol;7524:12161121682001に記載されている。結合体さらなる態様において、本発明は、治療部分、例えば細胞毒、化学療法薬、サイトカイン、免疫抑制剤、または放射性同位体と結合体化されたHER2抗体を提供する。このような結合体は本明細書において免疫結合体と呼ばれる。1種類または複数種の細胞毒を含む免疫結合体は免疫毒素と呼ばれる。細胞毒または細胞傷害剤には、細胞に有害な例えば、細胞を死滅させる任意の薬剤が含まれる。本発明の免疫結合体を形成するための適切な治療剤には、タキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシドtenoposide、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイタンシンまたはそれらの類似体もしくは誘導体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン;カリチアマイシンまたはそれらの類似体もしくは誘導体;代謝拮抗物質例えば、メトトレキサート、6メルカプトプリン、6チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、5フルオロウラシル、デカルバジンdecarbazine、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、クラドリビン、アルキル化剤例えば、メクロレタミン、チオエパthioepa、クロランブシル、メルファラン、カルムスチンBSNU、ロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジンDTIC、プロカルバジン、マイトマイシンC、シスプラチンおよび他の白金誘導体、例えば、カルボプラチン;ならびにデュオカルマイシンA、デュオカルマイシンSA、CC1065akaラケルマイシンまたはCC1065の類似体もしくは誘導体、抗生物質例えば、ダクチノマイシン以前はアクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン以前はダウノマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、アントラマイシンAMC、有糸分裂阻害剤例えば、チューブリン阻害剤、例えば、モノメチルアウリスタチンE、モノメチルアウリスタチンF、またはドラスタチン10の他の類似体もしくは誘導体;ジフテリア毒素および関連分子例えば、ジフテリアA鎖およびその活性断片、ならびにハイブリッド分子、リシン毒素例えば、リシンAまたは脱グリコシル化リシンA鎖毒素、コレラ毒素、志賀毒素様毒素SLTI、SLTII、SLTIIV、LT毒素、C3毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、ダイズBowmanBirkプロテアーゼインヒビター、シュードモナス属エキソトキシン、アロリンalorin、サポリン、モデシンmodeccin、ゲラニンgelanin、アブリンA鎖、モデシンA鎖、αサルシンsarcin、シナアブラギリAleuritesfordiiタンパク質、ジアンチンdianthinタンパク質、アメリカヤマゴボウPhytolaccaamericanaタンパク質PAPI、PAPII、およびPAPS、ニガウリmomordicacharantiaインヒビター、クルシン、クロチン、サボンソウsapaonariaofficinalisインヒビター、ゲロニン、ミトゲリンmitogellin、レストリクトシンrestrictocin、フェノマイシンphenomycin、およびエノマイシンenomycin毒素が含まれる。他の適切な結合体化分子には、抗菌性溶解性ペプチド、例えば、CLIP、マガイニン2、メリチン、セクロピン、およびP18;リボヌクレアーゼRNアーゼ、DNアーゼI、ブドウ球菌エンテロトキシンA、ヨウシュヤマゴボウpokeweed抗ウイルスタンパク質、ジフテリン毒素、およびシュードモナス属エンドトキシンが含まれる。例えば、PastanetalCell476411986およびGoldenbergCalifACancerJournalforClinicians44431994を参照されたい。本明細書の他の場所で説明されるように本発明のHER2抗体と組み合わせて投与され得る治療剤、例えば、抗癌サイトカインまたはケモカインは、本発明の抗体と結合体化するのに有用な治療部分の候補である。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、結合体化された核酸または核酸関連分子を含む。1つのこのような態様において、結合体化される核酸は、細胞傷害性リボヌクレアーゼ、アンチセンス核酸、抑制性RNA分子例えば、siRNA分子、または免疫賦活性核酸例えば、免疫賦活性CpGモチーフ含有DNA分子である。別の態様において、本発明のHER2抗体はアプタマーまたはリボザイムに結合体化される。1つの態様において、1つまたは複数の放射標識アミノ酸を含むHER2抗体が提供される。放射標識されたHER2抗体は診断目的および治療目的で使用することができる放射標識分子との結合体化は別の可能性のある特徴である。ポリペプチドの標識の非限定的な例には、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、および125I、131I、ならびに186Reが含まれる。1つの態様において、前記抗体は、放射性同位体または放射性同位体含有キレートと結合体化される。例えば、前記抗体は、キレート剤リンカー、例えば、DOTA、DTPA、チウキセタンと結合体化することができる。キレート剤リンカーがあると、抗体と放射性同位体との複合体化が可能になる。前記抗体は同様にまたは代替として、1つまたは複数の放射標識アミノ酸または他の放射標識分子を含んでもよくまたはそれらと結合体化されてもよい。放射標識されたCD74抗体は診断目的および治療目的で使用することができる。放射性同位体の非限定的な例には、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、125I、111In、131I、186Re、213Bs、225Ac、および227Thが含まれる。HER2抗体はまた、例えば、循環半減期を延ばすために、ポリマーと共有結合することによって化学修飾されてもよい。例示的なポリマーおよびポリマーをペプチドに取り付ける方法は、例えば、US4766106、US4179337、US4495285、およびUS4609546に例示されている。さらなるポリマーには、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコールPEG例えば、約1000~約40000、例えば、約2000~約20000の分子量を有するPEGが含まれる。HunteretalNature1449451962、DavidetalBiochemistry1310141974、PainetalJImmunolMeth402191981、およびNygrenJHistochemandCytochem304071982に記載の方法を含む、HER2抗体を結合体化分子、例えば前記の結合体化分子と結合体化するための、当技術分野において公知の任意の方法を使用することができる。このような抗体は、他の部分をHER2抗体またはその断片例えば、HER2抗体H鎖またはL鎖のN末端側またはC末端側を化学的に結合体化することによって作製することができる例えば、AntibodyEngineeringHandbook編集OsamuKanemitsu出版社ChijinShokan1994を参照されたい。このような結合体化された抗体誘導体はまた、適切な場所にある内部の残基または糖における結合体化によって作製することもできる。前記薬剤は、本発明のHER2抗体に直接的または間接的に結合されてもよい。第2の薬剤の間接的な結合の一例は、スペーサー部分を介した、抗体にあるシステイン残基またはリジン残基への結合である。1つの態様において、HER2抗体は、スペーサーまたはリンカーを介して、インビボで活性化されて治療用薬物になることができるプロドラッグ分子と結合体化される。投与後、スペーサーまたはリンカーは、腫瘍細胞関連酵素または他の腫瘍特異的状態によって切断され、これによって活性薬物が形成される。このようなプロドラッグ技術およびリンカーの例は、SyntargaBVらによるWO02083180、WO2004043493、WO2007018431、WO2007089149、およびWO2009017394に記載されている。適切な抗体プロドラッグ技術およびデュオカルマイシン類似体は米国特許第6989452号Medarexにおいても見られる。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、キレート剤リンカー、例えばチウキセタンに取り付けられる。キレート剤リンカーがあると、抗体と放射性同位体との結合体化が可能になる。二重特異性抗体さらなる局面において、本発明は、本明細書前記に記載の本発明のHER2抗体に由来する第1の抗原結合部位と、例えばヒトエフェクター細胞、ヒトFc受容体、T細胞受容体、B細胞受容体に対する結合特異性またはHER2の非重複エピトープに対する結合特異性といった異なる結合特異性を有する第2の抗原結合部位とを含む、二重特異性分子、すなわち例えば実施例14に記載のように試験された時に、第1の抗原結合部位および第2の抗原結合部位がHER2との結合において互いにクロスブロックしない二重特異性抗体に関する。本発明の例示的な二重特異性抗体分子は以下を含む:iHER2に対する特異性を有する抗体と、第2の標的に対する特異性を有する別の抗体が結合体化されている2つの抗体;iiHER2に特異的な1本の鎖またはアームおよび第2の分子に特異的な第2の鎖またはアームを有する1つの抗体;iiiHER2および第2の分子に対する特異性を有する単鎖抗体、例えば、余分なペプチドリンカーによって直列に連結された2本のscFvを介した単鎖抗体;ivそれぞれの軽鎖および重鎖が短いペプチド結合を介して直列に2つの可変ドメインを含む、二重可変ドメイン抗体DVDIgWuetalGenerationandCharacterizationofaDualVariableDomainImmunoglobulinDVDIg商標MoleculeIn:AntibodyEngineeringSpringerBerlinHeidelberg2010;v化学的に連結された二重特異性Fab2断片;vi2つの単鎖ダイアボディが融合して、標的抗原のそれぞれに対して2つの結合部位を有する四価二重特異性抗体となった、Tandab;viiscFvとダイアボディdiabodyとが組み合わされて多価分子となった、フレキシボディflexibody;viiiプロテインキナーゼAにある二量体化ドッキングドメインに基づく、いわゆるドックロックdockandlock分子、これをFabに適用すると、2つ同一のFab断片が異なる1つのFab断片と連結した三価二重特異性結合タンパク質を得ることができる;ixいわゆる、スコーピオンScorpion分子、例えば、2つのscFvがヒトFc領域の両末端と融合しているスコーピオン分子;ならびにxダイアボディ。1つの態様において、本発明の二重特異性抗体は、ダイアボディである。1つの態様において、第2の分子は、癌抗原腫瘍関連抗原、例えば、癌胎児抗原CEA、前立腺特異的抗原PSA、RAGE腎臓抗原、αフェトプロテイン、CAMEL黒色腫においてCTLによって認識される抗原、CT抗原例えば、MAGEB5、B6、C2、C3、およびD;Mage12;CT10;NYESO1、SSX2、GAGE、BAGE、MAGE、およびSAGE、ムチン抗原例えば、MUC1、ムチンCA125など、ガングリオシド抗原、チロシナーゼ、gp75、cMet、Cmyc、Mart1、MelanA、MUM1、MUM2、MUM3、HLAB7、およびEpCAM、または癌関連インテグリン、例えばα5β3インテグリンである。別の態様において、第2の分子は、T細胞抗原およびまたはNK細胞抗原、例えば、CD3またはCD16である。別の態様において、第2の分子は、血管新生因子または他の癌関連増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子、上皮細胞成長因子、アンジオゲニンまたはこれらの任意の受容体、特に、癌進行に関連する受容体例えば、HER受容体の別の受容体;HER1、HER3、またはHER4である。1つの態様において、第2の抗原結合部位は、本発明の抗体が結合するHER2部位とは異なる部位、好ましくは、非ブロッキング部位に結合する。例えば、第2の分子は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、F5、もしくはC1に由来してもよく、またはトラスツズマブ、ペルツズマブ、F5、もしくはC1のHER2結合をクロスブロックしてもよい。核酸配列、ベクターおよび宿主細胞1つのさらなる局面において、本発明は、本発明の抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸配列、例えばDNA配列などに関する。1つの態様において、核酸配列は、SEQIDNO:1、5、8、12、15、19、22、26、29、33、36、40、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55および56からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードする。別の特定の態様において、核酸配列は、SEQIDNO:1、8、15、22、29、36、43、45、47、49、51、53および55からなる群より選択されるVHアミノ酸配列をコードする。別の特定の態様において、核酸配列は、SEQIDNO:5、12、19、26、33、40、44、46、48、50、52、54および56からなる群より選択されるVLアミノ酸配列をコードする。さらに別のさらなる態様において、本発明は、本発明の抗体をコードする1つの発現ベクターまたは発現ベクターのセットに関する。抗体の重鎖および軽鎖は、同じベクターによってコードされてもよく、または異なるベクターによってコードされてもよい。そのような発現ベクターを、本発明の抗体の組換え作製のために用いることができる。1つの態様において、本発明の発現ベクターは、SEQIDNO:1、5、8、12、15、19、22、26、29、33、36、40、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55および56からなる群より選択されるアミノ酸配列のうち1つまたは複数をコードするヌクレオチド配列を含む。別の特定の態様において、本発明の発現ベクターは、SEQIDNO:SEQIDNO:1、8、15、22、29、36、43、45、47、49、51、53および55からなる群より選択されるVHアミノ酸配列のうち1つまたは複数をコードするヌクレオチド配列を含む。別の特定の態様において、本発明の発現ベクターは、SEQIDNO:SEQIDNO:5、12、19、26、33、40、44、46、48、50、52、54および56からなる群より選択されるVLアミノ酸配列のうち1つまたは複数をコードするヌクレオチド配列を含む。さらなる態様において、発現ベクターは、抗体、例えばヒト抗体の軽鎖、重鎖、または軽鎖および重鎖の両方の定常領域をコードするヌクレオチド配列をさらに含む。本発明の文脈において発現ベクターは、染色体核酸ベクター、非染色体核酸ベクター、および合成核酸ベクター適切な一組の発現制御エレメントを含む核酸配列を含む任意の適切なベクターでよい。このようなベクターの例には、SV40、細菌プラスミド、ファージDNA、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドおよびファージDNAの組み合わせに由来するベクター、ならびにウイルス核酸RNAまたはDNAベクターの誘導体が含まれる。1つの態様において、HER2抗体をコードする核酸は、例えば直鎖発現エレメントを含む、裸のDNAベクターもしくはRNAベクター例えば、SykesandJohnstonNatBiotech17355591997に記載、圧縮された核酸ベクター例えば、US6077835および/もしくはWO0070087に記載、プラスミドベクター、例えばpBR322、pUC1918、もしくはpUC118119、midge最小サイズ核酸ベクター例えば、SchakowskietalMolTher37938002001に記載、または沈殿された核酸ベクター構築物、例えばCaPO4によって沈殿された構築物例えば、WO0046147、BenvenistyandReshefPNASUSA839551551986、WigleretalCell147251978、およびCoraroandPearsonSomaticCellGenetics76031981に記載の中に含まれる。このような核酸ベクターおよびその利用は当技術分野において周知である例えば、US5589466およびUS5973972を参照されたい。本発明の抗体のための例示的な発現ベクターは、実施例2および3にも記載する。1つの態様において、ベクターは、細菌細胞におけるHER2抗体の発現に適している。このようなベクターの例には、発現ベクター、例えばBlueScriptStratagene、pINベクターVanHeekeSchusterJBiolChem264550355091989、pETベクターNovagenMadisonWIなどが含まれる。同様にまたは代替として、発現ベクターは、酵母系における発現に適したベクターでもよい。酵母系における発現に適した任意のベクターを使用することができる。適切なベクターには、例えば構成的プロモーターまたは誘導性プロモーター、例えばα因子、アルコールオキシダーゼ、およびPGHを含むベクターが含まれるFAusubeletaledCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenePublishingandWileyInterScienceNewYork1987、およびGrantetalMethodsinEnzymol1535165441987に概説。同様にまたは代替として、発現ベクターは、哺乳動物細胞における発現に適したベクター、例えば選択マーカーとしてグルタミン合成酵素を含むベクター、例えばBebbington1992BiotechnologyNY10:169175に記載のベクターでもよい。核酸および/またはベクターはまた、分泌配列/局在化配列をコードする核酸配列を含んでもよい。分泌配列/局在化配列は、ポリペプチド、例えば新生ポリペプチド鎖を細胞周辺腔にまたは細胞培地中に標的化することができる。このような配列は当技術分野において公知であり、分泌リーダーまたはシグナルペプチドを含む。本発明の発現ベクターでは、HER2抗体をコードする核酸は、任意の適切なプロモーター、エンハンサー、および他の発現促進エレメントを含んでもよく、これらと結合してもよい。このようなエレメントの例には、強発現プロモーター例えば、ヒトCMVIEプロモーター/エンハンサーならびにRSV、SV40、SL33、MMTV、およびHIVLTRプロモーター、有効なポリA終結配列、大腸菌におけるプラスミド産物用の複製起点、選択マーカーとしての抗生物質耐性遺伝子、ならびに/または便利なクローニングサイト例えば、ポリリンカーが含まれる。核酸はまた、構成的プロモーターと相対する誘導性プロモーター、例えばCMVIEを含んでもよい。1つの態様において、HER2抗体をコードする発現ベクターは、ウイルスベクターを介して、宿主細胞もしくは宿主動物の中に配置されてもよく、および/または宿主細胞もしくは宿主動物に送達されてもよい。なおさらなる局面において、本発明は、本明細書において定義される本発明の抗体を産生する、組換え真核宿主細胞または原核宿主細胞、例えばトランスフェクトーマに関する。宿主細胞の例には、酵母細胞、細菌細胞、および哺乳動物細胞、例えばCHO細胞またはHEK細胞が含まれる。例えば、1つの態様において、本発明は、本発明のHER2抗体の発現をコードする配列を含む核酸が細胞ゲノムに安定に組み込まれている細胞を提供する。別の態様において、本発明は、本発明のHER2抗体の発現をコードする配列を含む、非組み込み型核酸、例えばプラスミド、コスミド、ファージミド、または直鎖発現エレメントを含む細胞を提供する。さらなる局面において、本発明は、本明細書において定義される本発明の抗体を産生するハイブリドーマに関する。なおさらなる局面において、本発明は、ヒト重鎖およびヒト軽鎖をコードする核酸を含む、トランスジェニック非ヒト動物または植物に関し、ここで、このような動物または植物は本発明の抗体を産生する。さらなる局面において、本発明は、本発明のHER2抗体を産生するための方法に関し、本方法は、a本明細書において前述された本発明のハイブリドーマまたは宿主細胞を培養する段階、およびb培地から本発明の抗体を精製する段階を含む。組成物さらなる主な局面において、本発明は、本明細書において定義されたHER2抗体、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物に関する。本発明の薬学的組成物は、本発明の1種類の抗体または本発明の異なる抗体の組み合わせを含有してもよい。薬学的組成物は、従来の技法、例えばRemington:TheScienceandPracticeofPharmacy19thEditionGennaroEdMackPublishingCoEastonPA1995に開示される技法に従って処方することができる。本発明の薬学的組成物は、例えば希釈剤、増量剤、塩、緩衝液、界面活性剤例えば、非イオン性界面活性剤、例えばTween20もしくはTween80、安定剤例えば、糖もしくはタンパク質を含まないアミノ酸、防腐剤、組織固定液、可溶化剤、および/または薬学的組成物に含めるのに適した他の材料を含んでもよい。薬学的に許容される担体には、本発明の化合物と生理学的に適合する、任意のおよび全ての適切な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、酸化防止剤および吸収遅延剤などが含まれる。本発明の薬学的組成物において使用することができる適切な水性および非水性の担体の例には、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、エタノール、デキストロース、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど、および適切なその混合物、植物油、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、トラガカントゴムおよび注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチル、ならびに/または様々な緩衝液が含まれる。薬学的に許容される担体には、滅菌した水溶液または分散液、および滅菌した注射液または分散液を即時調製するための滅菌した散剤が含まれる。適切な流動性は、例えばコーティング材料、例えばレシチンを使用することによって、分散液の場合、必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。本発明の薬学的組成物はまた、薬学的に許容される酸化防止剤、例えば、1水溶性の酸化防止剤、例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど;2油溶性の酸化防止剤、例えばアスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロールなど;および3金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸EDTA、ソルビトール、酒石酸、リン酸などを含んでもよい。本発明の薬学的組成物はまた、組成物中に、等張剤、例えば糖、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、グリセロール、または塩化ナトリウムを含んでもよい。本発明の薬学的組成物はまた、薬学的組成物の貯蔵寿命または有効性を増強することができる、選択された投与経路に適した1種類または複数種の佐剤、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、防腐剤、または緩衝液を含んでもよい。本発明の化合物は、急速に放出されないように化合物を保護する担体、例えば移植片、経皮パッチ、およびマイクロカプセルに閉じ込めた送達系を含む徐放製剤を用いて調製されてもよい。このような担体は、ゼラチン、モノステアリン酸グリセリン、ジステアリン酸グリセリン、生分解性生体適合性ポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のみもしくはポリ乳酸とろう、または当技術分野において周知の他の材料を含んでもよい。このような製剤を調製するための方法は一般的に当業者に公知である。滅菌注射液は、必要とされる量の活性化合物を、必要に応じて、例えば前記で列挙された成分の1つまたは組み合わせと共に適切な溶媒中に組み込んだ後に、滅菌精密濾過を行うことによって調製することができる。一般的に、分散液は、活性化合物を、基本分散媒、および必要とされる他の成分、例えば前記で列挙されたものを含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射液を調製するための滅菌散剤の場合、調製方法の例は、活性成分任意のさらなる望ましい成分の散剤をそれらの予め濾過滅菌した溶液から生じさせる真空乾燥およびフリーズドライ凍結乾燥である。薬学的組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、患者への毒性無く、特定の患者、組成物、および投与方法について望ましい治療応答を実現するのに有効な活性成分量を得るように変えることができる。選択される投与量レベルは、使用される本発明の特定の組成物またはそのアミドの活性、投与経路、投与時間、使用されている特定の化合物の排出速度、治療期間、使用される特定の組成物と併用される他の薬物、化合物、および/または材料、治療されている患者の年齢、性別、体重、状態、身体全体の健康、および前病歴、ならびに医学分野において周知の同様の要因を含む様々な薬物動態要因に依存する。薬学的組成物は、任意の適切な経路および方法によって投与することができる。1つの態様において、本発明の薬学的組成物は非経口投与される。本明細書で使用する非経口投与されるとは、経腸投与および局所投与以外の投与方法、通常、注射による投与方法を意味し、表皮、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、腱内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、硬膜外、および胸骨内への注射および注入を含む。1つの態様において、薬学的組成物は、静脈内または皮下への注射または注入によって投与される。使用さらなる主な局面において、本発明は、医薬として使用するための本発明のHER2抗体に関する。本発明のHER2抗体は多くの目的に使用することができる。特に、本発明の抗体は、転移性癌および難治性癌を含む様々な形態の癌の治療に使用することができる。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、原発性乳癌、転移性乳癌、および難治性乳癌を含む乳癌の治療に用いられる。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌、頭頚部の扁平上皮癌、子宮頚癌、膵臓癌、精巣癌、悪性黒色腫、および軟部組織癌例えば、滑膜肉腫からなる群より選択される癌の一形態の治療に用いられる。1つの態様において、本発明は、HER2を発現する1つまたは複数の腫瘍細胞の成長および/または増殖を阻害するための方法に関し、本方法は、それを必要とする個体に対する本発明による抗体の投与を含む。1つの態様において、本抗体は別の部分と結合体化されている。1つの態様において、1つまたは複数の腫瘍細胞は、HER2ならびにEGFRおよび/またはHER3を共発現する。本発明はまた、癌を治療するための方法に関し、本方法は、aHER2ならびにEGFRおよび/またはHER3を共発現する腫瘍細胞を含む、癌に罹患した対象を選択する段階、ならびにb請求項1~35のいずれか一項記載の抗体を該対象に投与する段階を含む。1つの態様において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌/子宮頸癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、精巣癌、軟部組織織腫瘍、例えば滑膜肉腫など、および膀胱癌からなる群より選択される。同様に本発明は、それを必要とする個体に、有効量の本発明の抗体、例えば抗体薬物結合体ADCを投与する段階を含む、HER2発現腫瘍細胞を死滅させるための方法に関する。1つの態様において、前記腫瘍細胞は、乳癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、食道癌および頭頚部の扁平上皮癌、子宮頚癌、膵臓癌、精巣癌、悪性黒色腫、ならびに軟部組織癌例えば、滑膜肉腫からなる群より選択される癌の一形態に関与する。1つの態様において、腫瘍細胞は、HER2およびEGFRファミリーの少なくとも1つの他のメンバー、好ましくは、EGFR、HER3、またはEGFRおよびHER3の両方を同時発現する腫瘍細胞であり、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌子宮頚癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、軟部組織腫瘍例えば、滑膜肉腫、または膀胱癌に関与する腫瘍細胞である。1つの局面において、本発明は、HER2ならびにEGFRおよびまたはHER3を同時発現する腫瘍細胞を含む癌に罹患している対象を選択する段階、ならびに本発明の抗体、任意で、細胞傷害剤または薬物と結合体化されている抗体の形をした本発明の抗体を対象に投与する段階を含む、対象において癌を治療するための方法に関する。1つの態様において、対象は、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌子宮頚癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、軟部組織腫瘍例えば、滑膜肉腫、または膀胱癌からなる群より選択される癌に罹患している。また、本発明は、癌、例えば、前述された特定の癌適応症の1つを治療するための医用薬剤を調製するための、ヒトHER2に結合するモノクローナル抗体の使用に関する。さらに、本発明は、癌、例えば、前述された特定の癌適応症の1つの治療において使用するためのモノクローナル抗体に関する。本発明の治療方法のさらなる態様において、治療の効力は、療法中に、例えば所定の時点で、関連腫瘍細胞における腫瘍量またはHER2発現レベルを確かめることによってモニタリングされる。前記の治療方法および使用における投与計画は、最適な望ましい応答例えば、治療応答をもたらすように調節される。例えば、単一ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割量を、ある期間にわたって投与してもよく、その用量は、治療状況の難局により示されるように比例して減少または増加してもよい。投与の容易さおよび投薬の均一性のために単位剤形で非経口組成物が処方されてもよい。HER2抗体の効率的な投与量および投与計画は、治療しようとする疾患または状態に左右され、当業者によって決定することができる。本発明の化合物の治療的有効量の例示的で非限定的な範囲は、約01~100mg/kg、例えば約01~50mg/kg、例えば約01~20mg/kg、例えば約01~10mg/kg、例えば約05mg/kg、例えば約03mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、または約8mg/kgである。当技術分野において通常の知識を有する医師または獣医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、薬学的組成物において用いられるHER2抗体の用量を、望ましい治療効果を達成するのに必要とされる用量より低いレベルで開始し、望ましい効果が達成されるまで投与量を段々と増やすことができる。一般的に、本発明の組成物の適切な一日量は、治療効果を生じるのに有効な最小用量である化合物量である。投与は、例えば非経口投与、例えば静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与でもよい。1つの態様において、HER2抗体は、10~500mg/m2、例えば200~400mg/m2の毎週投与量で注入されることによって投与されてもよい。このような投与は、例えば1~8回、例えば3~5回繰り返されてもよい。投与は、2~24時間、例えば2~12時間の期間にわたる連続注入によって行われてもよい。1つの態様において、毒性副作用を弱めるために、HER2抗体は、長期間にわたる、例えば24時間を超える、ゆっくりとした連続注入によって投与されてもよい。1つの態様において、HER2抗体は、250mg~2000mg、例えば300mg、500mg、700mg、1000mg、1500mg、または2000mgの毎週投与量で、8回まで、例えば4~6回、投与されてもよい。このようなレジメンは、例えば6ヶ月後または12ヶ月後に、必要に応じて1回または複数回、繰り返されてもよい。投与量は、投与の際の本発明の化合物の血中量を測定することによって、例えば、生物学的試料を採取し、本発明のHER2抗体の抗原結合領域を標的とする抗イディオタイプ抗体を使用することによって決定または調節されてもよい。1つの態様において、HER2抗体は、維持療法によって、例えば、6ヶ月以上にわたって1週間に1回、投与することができる。HER2抗体はまた、癌を発症するリスクを下げるために、癌進行における事象の発生の開始を遅延するために、および/または癌が軽快している時の再発のリスクを下げるために予防的に投与することもできる。HER2抗体はまた併用療法で投与することができる、すなわち、治療しようとする疾患または状態に関連する他の治療剤と組み合わせて投与することができる。従って、1つの態様において、抗体を含有する医薬は、1種類または複数種のさらなる治療剤、例えば細胞傷害剤、化学療法剤、または抗血管新生剤と併用するためのものである。このような併用投与は同時に行われてもよく、別々に行われてもよく、連続して行われてもよい。同時投与の場合、薬剤は、適宜、1つの組成物として投与されてもよく、別々の組成物として投与されてもよい。従って、本発明はまた、前記のHER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供し、本方法は、下記の1種類または複数種のさらなる治療剤と組み合わせて本発明のHER2抗体を投与する段階を含む。1つの態様において、本発明は、対象において、HER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供し、本方法は、治療的有効量の本発明のHER2抗体、および少なくとも1種類のさらなる化学療法剤を、障害の治療を必要とする対象に投与する段階を含む。1つの態様において、本発明は、癌を治療または予防するための方法を提供し、本方法は、治療的有効量の本発明のHER2抗体および少なくとも1種類のさらなる化学療法剤を、癌の治療または予防を必要とする対象に投与する段階を含む。1つの態様において、このようなさらなる治療剤は、代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、6メルカプトプリン、6チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、5フルオロウラシル、デカルバジンdecarbazine、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、またはクラドリビンにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、アルキル化剤、例えばメクロレタミン、チオエパthioepa、クロランブシル、メルファラン、カルムスチンBSNU、ロムスチンCCNU、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジンDTIC、プロカルバジン、マイトマイシンC、シスプラチンおよび他の白金誘導体、例えばカルボプラチンにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、有糸分裂阻害剤、例えばタキサン、例えばドセタキセルおよびパクリタキセル、ならびにビンカアルカロイド、例えばビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびビノレルビンにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、例えばトポテカンもしくはイリノテカン、または細胞分裂停止薬、例えばエトポシドおよびテニポシドにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、増殖因子阻害剤、例えばErbB1EGFR阻害剤例えば、EGFR抗体、例えばザルツムマブ、セツキシマブ、パニツムマブもしくはニモツズマブnimotuzumab、または他のEGFR阻害剤、例えばゲフィチニブもしくはエルロチニブ、ErbB2HER2/neuの別の阻害剤例えば、HER2抗体、例えばトラスツズマブ、トラスツズマブDM1、またはペルツズマブ、あるいはEGFRおよびHER2両方の阻害剤、例えばラパチニブにより選択されてもよい。別の態様において、このようなさらなる治療剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、例えばイマチニブGlivec、GleevecSTI571またはラパチニブ、PTK787/ZK222584により選択されてもよい。別の態様において、本発明は、対象において、HER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供し、本方法は、治療的有効量の本発明のHER2抗体、ならびに血管形成、新血管新生、および/または他の血管新生の少なくとも1種類の阻害剤を、障害の治療を必要とする対象に投与する段階を含む。このような血管形成阻害剤の例は、ウロキナーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤例えば、マリマスタット、ネオバスタットneovastat、BAY129566、AG3340、BMS275291、および類似の薬剤、内皮細胞の遊走および増殖の阻害剤例えば、TNP470、スクアラミン、2メトキシエストラジオール、コンブレタスタチン、エンドスタチン、アンギオスタチン、ペニシラミン、SCH66336ScheringPloughCorpMadisonNJ、R115777JanssenPharmaceuticaIncTitusvilleNJ、および類似の薬剤、血管新生増殖因子のアンタゴニスト例えば、ZD6474、SU6668、血管新生剤および/またはその受容体例えば、VEGF例えば、ベバシズマブ、bFGF、およびアンジオポエチン1に対する抗体、サリドマイド、サリドマイド類似体例えば、CC5013、Sugen5416、SU5402、抗血管新生リボザイム例えば、アンギオザイムangiozyme、インターフェロンα例えば、インターフェロンα2a、スラミン、および類似の薬剤、VEGFRキナーゼ阻害剤および他の抗血管新生性のチロシンキナーゼ阻害剤例えば、SUO11248、内皮特異的インテグリン/生存シグナル伝達の阻害剤例えば、ビタキシンvitaxinおよび類似の薬剤、銅アンタゴニスト/キレート剤例えば、テトラチオモリブデートtetrathiomolybdate、カプトプリル、および類似の薬剤、カルボキシアミドトリアゾールCAI、ABT627、CM101、インターロイキン12IL12、IM862、PNU145156E、ならびに血管形成を阻害するヌクレオチド分子例えば、アンチセンスVEGFcDNA、アンギオスタチンをコードするcDNA、p53をコードするcDNA、および欠損VEGF受容体2をコードするcDNAである。血管形成、新血管新生、および/または他の血管新生のこのような阻害剤の他の例は、抗血管新生性のヘパリン誘導体例えば、ヘペリナーゼheperinaseIII、テモゾロミド、NK4、マクロファージ遊走阻害因子、シクロオキシゲナーゼ2阻害剤、低酸素誘導性因子1の阻害剤、抗血管新生性のダイズイソフラボン、オルチプラズ、フマギリンおよびその類似体、ソマトスタチン類似体、多流酸ペントサン、テコガランナトリウム、ダルテパリン、タムスタチン、トロンボスポンジン、NM3、コンブレスタチンcombrestatin、カンスタチンcanstatin、アバスタチンavastatin、他の標的に対する抗体、例えば抗αv/β3インテグリンおよび抗キニノスタチン抗体である。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗癌免疫原、例えば癌抗原/腫瘍関連抗原例えば、上皮細胞接着分子EpCAM/TACSTD1、ムチン1MUC1、癌胎児抗原CEA、腫瘍関連糖タンパク質72タグ72、gp100、MelanA、MART1、KDR、RCAS1、MDA7、癌関連ウイルスワクチン例えば、ヒトパピローマウイルスワクチン、または腫瘍由来熱ショックタンパク質でもよい。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗癌性サイトカイン、ケモカイン、またはその組み合わせでもよい。適切なサイトカインおよび増殖因子の例には、IFNγ、IL2、IL4、IL6、IL7、IL10、IL12、IL13、IL15、IL18、IL23、IL24、IL27、IL28a、IL28b、IL29、KGF、IFNα例えば、INFα2b、IFNβ、GMCSF、CD40L、Flt3リガンド、幹細胞因子、アンセスチム、およびTNFαが含まれる。適切なケモカインは、GluLeuArgELRネガティブケモカイン、例えばヒトCXCおよびCCケモカインファミリーからのIP10、MCP3、MIG、およびSDF1αを含んでもよい。適切なサイトカインには、サイトカイン誘導体、サイトカイン変種、サイトカイン断片、およびサイトカイン融合タンパク質が含まれる。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、細胞周期制御/アポトーシス制御因子または制御剤でもよい。細胞周期制御/アポトーシス制御因子は、細胞周期制御/アポトーシス制御因子を標的とし、調節する分子、例えば、icdc25例えば、NSC663284、ii細胞周期を過度に刺激するサイクリン依存性キナーゼ例えば、フラボピリドールL868275、HMR1275、7ヒドロキシスタウロスポリンUCN01、KW2401、およびロスコビチンRロスコビチン、CYC202、ならびにiiiテロメラーゼモジュレーター例えば、BIBR1532、SOT095、GRN163、ならびに例えば、US6440735およびUS6713055に記載の組成物を含んでもよい。アポトーシス経路に干渉する分子の非限定的な例には、TNF関連アポトーシス誘発リガンドTRAIL/アポトーシス2リガンドApo2L、TRAIL受容体を活性化する抗体、IFN、およびアンチセンスBcl2が含まれる。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、ホルモン制御剤、例えば抗アンドロゲン療法および抗エストロゲン療法に有用な薬剤でもよい。このようなホルモン制御剤の例は、タモキシフェン、イドキシフェン、フルベストラント、ドロロキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ジエチルスチルベストロール、エチニルエストラジオール/エスチニルestinyl、抗アンドロゲン例えば、フルタミンドflutaminde/エルレキシンeulexin、プロゲスチン例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロキシプロゲステロン/プロベラ、酢酸メゲストロール/メゲース、副腎皮質ステロイド例えば、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、黄体形成ホルモン放出ホルモンおよびその類似体、ならびに他のLHRHアゴニスト、例えばブセレリンおよびゴセレリン、アロマターゼ阻害剤例えば、アナストラゾールanastrazole/アリミデックス、アミノグルテチミド/シトラデンcytraden、エキセメスタン、またはホルモン阻害剤例えば、オクトレオチド/サンドスタチンである。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗アネルギー剤、例えばCTLA4の活性をブロックする分子、例えばイピリムマブでもよい。1つの態様において、前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤は、抗癌性核酸または抗癌性抑制性RNA分子でもよい。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、分化誘導剤、レチノイン酸類似体例えば、オールトランスレチノイン酸、13cisレチノイン酸、および類似の薬剤、ビタミンD類似体例えば、セオカルシトールseocalcitolおよび類似の薬剤、ErbB3、ErbB4、IGFIR、インシュリン受容体、PDGFRa、PDGFRβ、Flk2、Flt4、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、TRKA、TRKC、RON例えば、抗RON抗体、Sea、Tie、Tie2、Eph、Ret、Ros、Alk、LTK、PTK7の阻害剤、および類似の薬剤である。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、エストラムスチンおよびエピルビシンである。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、HSP90阻害剤、例えば17アリルアミノゲルダナマイシン、腫瘍抗原、例えばPSA、CA125、KSAなどに対する抗体、インテグリン、例えばインテグリンβ1、またはVCAM阻害剤である。前記の障害を治療するためにHER2抗体と併用するための治療剤として関連し得る他の抗癌剤の例は、カルシニューリン阻害剤例えば、バルスポダールvalspodar、PSC833および他のMDR1またはp糖タンパク質阻害剤、TOR阻害剤例えば、シロリムス、エベロリムス、およびラパミンrapamcyin、ならびにリンパ球ホーミング機構の阻害剤例えば、FTY720、ならびに細胞シグナル伝達に作用する薬剤、例えば接着分子阻害剤例えば、抗LFAなどである。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、1種類または複数種の他の治療用抗体、例えば、オファツムマブ、ザノリムマブzanolimumab、ダラツムマブdaratumumab、ラニビズマブ、Zenapax、Simulect、Remicade、Humira、Tysabri、Xolair、raptiva、およびまたはリツキシマブと併用するためのものである。別の態様において、本明細書に記載の2つ以上の異なる本発明の抗体は、疾患の治療のために併用される。特に興味深い組み合わせには2種類以上の非ブロッキング抗体が含まれる。このような併用療法によって、細胞1個あたり多数の抗体分子が結合することがあり、それによって、効力が増大する、例えば、補体媒介性溶解の活性化を介して効力が増大することがある。前記に加えて、本発明の併用療法の他の態様は、以下を含む:乳癌の治療の場合、HER2抗体またはその治療用結合体と、メトトレキセート、パクリタキセル、ドキソルビシン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ダウノルビシン、エピルビシン、5フルオロウラシル、ゲムシタビン、イクサベピロン、ムタマイシンmutamycin、ミトキサントロン、ビノレルビン、ドセタキセル、チオテパ、ビンクリスチン、カペシタビン、EGFR抗体例えば、ザルツムマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、もしくはニモツズマブnimotuzumab、または他のEGFR阻害剤例えば、ゲフィチニブまたはエルロチニブ、別のHER2抗体もしくはHER2結合体例えば、トラスツズマブ、例えば、トラスツズマブDM1もしくはペルツズマブ、EGFRおよびHER2両方の阻害剤例えば、ラパチニブとの併用、ならびにあるいはHER3阻害剤との併用;非小細胞肺癌の治療の場合、HER2抗体と、EGFR阻害剤、例えば、EGFR抗体、例えば、ザルツムマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、もしくはニモツズマブ、または他のEGFR阻害剤例えば、ゲフィチニブもしくはエルロチニブとの組み合わせ、あるいは別のHER2薬剤例えば、HER2抗体、例えば、トラスツズマブ、トラスツズマブDM1もしくはペルツズマブとの組み合わせ、あるいはEGFRおよびHER2両方の阻害剤、例えば、ラパチニブとの併用、あるいはHER3阻害剤との併用;結腸直腸癌の治療の場合、HER2抗体と、ゲムシタビン、ベバシズマブ、FOLFOX、FOLFIRI、XELOX、IFL、オキサリプラチン、イリノテカン、5FU/LV、カペシタビン、UFT、EGFR標的剤、例えばセツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ;VEGF阻害剤、またはチロシンキナーゼ阻害剤、例えばスニチニブより選択される1種類または複数種の化合物との併用;前立腺癌の治療の場合、HER2抗体と、ホルモン/抗ホルモン療法;例えば、抗アンドロゲン、黄体形成ホルモン放出ホルモンLHRHアゴニスト、および化学療法剤、例えばタキサン、ミトキサントロン、エストラムスチン、5FU、ビンブラスチン、およびイクサベピロンより選択される1種類または複数種の化合物との併用。放射線療法外科手術1つの態様において、本発明は、対象において、HER2を発現する細胞に関与する障害を治療するための方法を提供するものであり、この方法は、それを必要とする対象への、治療的有効量のHER2抗体、例えば本発明のHER2抗体および放射線療法の投与を含む。1つの態様において、本発明は、癌を治療または予防するための方法を提供するものであり、この方法は、それを必要とする対象への、治療的有効量のHER2抗体、例えば本発明のHER2抗体および放射線療法の投与を含む。1つの態様において、本発明は、放射線療法と組み合わせて投与される癌を治療するための薬学的組成物を調製するための、HER2抗体、例えば本発明のHER2抗体の使用を提供する。放射線療法は放射線を含む場合があり、または患者への放射性医薬品の関連する投与が提供される。放射線源は、治療を受けている患者の外部にあってもよく、内部にあってもよい放射線治療は、例えば外部ビーム放射線療法EBRTまたは近接照射療法BTの形をとってもよい。このような方法の実施において使用することができる放射性元素には、例えばラジウム、セシウム137、イリジウム192、アメリシウム241、金198、コバルト57、銅67、テクネチウム99、ヨウ素123、ヨウ素131、およびインジウム111が含まれる。さらなる態様において、本発明は、癌を治療または予防するための方法を提供し、本方法は、癌の治療または予防を必要とする対象に、治療的有効量のHER2抗体、例えば本発明のHER2抗体を外科手術と組み合わせて投与する段階を含む。診断用途本発明のHER2抗体は診断目的でも使用することができる。従って、さらなる局面において、本発明は、本明細書において定義されたHER2抗体を含む診断用組成物に関する。1つの態様において、本発明のHER2抗体は、HER2を発現する活性化細胞が発病において積極的な役割を果たしている疾患を診断するために、HER2レベルまたは膜表面にHER2を含有する細胞のレベルを検出することによってインビボまたはインビトロで使用することができる。これは、例えば試験しようとする試料とHER2抗体とを、任意で対照試料と共に、抗体とHER2との複合体が形成する条件下で接触させることによって達成することができる。従って、さらなる局面において、本発明は、試料中のHER2抗原またはHER2を発現する細胞の存在を検出するための方法に関し、本方法は、試料と本発明のHER2抗体とを、抗体とHER2との複合体が形成する条件下で接触させる段階;および複合体が形成したかどうか分析する段階を含む。1つの態様において、前記方法はインビトロで行われる。さらに具体的には、本発明は、浸潤細胞および浸潤組織、ならびに本発明のHER2抗体によって標的化される他の細胞を特定および診断するための方法、ならびに治療処置の進行、治療後の状況、癌が発症するリスク、癌の進行などをモニタリングための方法を提供する。このような技法において用いられるHER2抗体および/または二次抗体に適した標識は当技術分野において周知である。さらなる局面において、本発明は、本発明のHER2抗体または本発明の二重特異性分子;およびキットを使用するための説明書を含む、試料中のHER2抗原またはHER2を発現する細胞の存在を検出するためのキットに関する。1つの態様において、本発明は、HER2抗体、およびHER2抗体とHER2との結合を検出するための1種類または複数種の試薬を含む容器を含む、癌を診断するためのキットを提供する。試薬は、例えば蛍光タグ、酵素タグ、または他の検出可能なタグを含んでもよい。試薬はまた、二次もしくは三次の抗体または酵素反応用試薬を含んでもよく、酵素反応によって、視覚化可能な産物が産生される。抗イディオタイプ抗体さらなる局面において、本発明は、本明細書に記載のように本発明のHER2抗体に結合する抗イディオタイプ抗体に関する。抗イディオタイプId抗体は、概して、抗体の抗原結合部位に関連する独特の決定基を認識する抗体である。Id抗体は、HER2mAbの供給源と同じ種および遺伝子型の動物を、抗Idの抗原となるmAbで免疫することによって調製することができる。免疫された動物は、典型的には、免疫用抗体のイディオタイプ決定基に対する抗体抗Id抗体を産生することによって、これらのイディオタイプ決定基を認識し、イディオタイプ決定基に応答することができる。抗Id抗体はまた、さらに別の動物において免疫応答を誘導するための免疫原として使用して、いわゆる抗抗Id抗体を産生することもできる。抗抗Idは、抗Idを誘導した最初のmAbとエピトープが同一である可能性がある。従って、mAbのイディオタイプ決定基に対する抗体を用いることによって、特異性が同一の抗体を発現する他のクローンを特定することができる。本発明は以下の実施例によってさらに例示される。実施例は、本発明の範囲を限定するものであると解釈してはならない。実施例1HER2およびHER2変種のための発現構築物完全長HER21255aa、SwissprotP04626、HER2細胞外ドメインECDHer2ECDHis、C末端His6タグを有するaa1~653、天然HER2スプライスバリアントHer2delex16、エキソン16欠失から生じ、aa633~648を欠く、および切断型HER2受容体Her2stumpy、aa648~1256を発現させるために、完全にコドン最適化された構築物を作製した。これらの構築物は、クローニングに適した制限部位および最適Kozak配列KozakMGene1999;2342:187208を含んだ。これらの構築物を、哺乳動物発現ベクターpEE134LonzaBiologics;BebbingtonCRetalBiotechnologyNY1992;102:16975にクローニングし、構築物が正しいことを確認するために全配列決定した。実施例2ペルツズマブ、C1、およびF5のための発現構築物HEK細胞においてIgG1抗体ペルツズマブ、C1、およびF5の重鎖HCおよび軽鎖LCを発現させるために、完全にコドン最適化された構築物を作製した。これらの構築物によってコードされる可変領域は、ペルツズマブ重鎖および軽鎖については米国特許第6949245号ならびにC1およびF5重鎖および軽鎖については米国特許第7244826号と同一である。C1およびF5については、ヒトIgG1重鎖アロタイプfの完全にコドン最適化された定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターp33G1f、ヒトκ軽鎖またはヒトλ軽鎖の完全にコドン最適化された定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターp33Kまたはp33LpcDNA33Invitrogenを使用した。ペルツズマブについては、ヒトIgG1重鎖アロタイプfの完全にコドン最適化された定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターpG1fpEE124LonzaBiologics、およびヒトκ軽鎖の完全にコドン最適化された定常領域を含有するpKappapEE64LonzaBiologicsを使用した。トラスツズマブHerceptin登録商標は、例えば、米国特許第7632924号に記載の重鎖配列および軽鎖配列を用いて同じやり方で生成することができる。実施例3HEK293細胞またはCHO細胞における一過性発現Freestyle商標293F懸濁増殖および既知組成のFreestyle培地に順応させたHEK293サブクローン、HEK293F細胞をInvitrogenから入手し、適切なプラスミドDNAと293fectinInvitrogenを用いて製造業者の説明書に従ってトランスフェクトした。抗体発現の場合、適切な重鎖発現ベクターおよび軽鎖発現ベクターを同時発現させた。pEE134Her2、pEE134Her2delex16、およびpEE134Her2stumpyを、Freestyle商標CHOSInvitrogen細胞株においてFreestyleMAXトランスフェクション試薬Invitrogenを用いて一過性にトランスフェクトした。HER2およびHer2delex16の発現を、下記のようにFACS分析によって試験した。実施例4NSOにおける安定ポリクローナルプール発現pEE134Her2、pEE134Her2delex16、およびpEE134Her2stumpyを、ヌクレオフェクションnucleofectionAmaxaによってNSO細胞に安定にトランスフェクトした。組み込まれたグルタミン合成酵素選択マーカーBarnesLMetalCytotechnology2000;322:109123に基づくグルタミン依存性増殖による選択後に、安定にトランスフェクトされた細胞のプールを樹立した。実施例5Hisタグ化HER2の精製Her2ECDHisをHEK293F細胞において発現させた。Her2ECDHisの中にあるHisタグは、固定化金属アフィニティクロマトグラフィーを用いた精製を可能にした。なぜなら、Hisタグ化タンパク質は樹脂ビーズに強く結合するが、培養上清中に存在する他のタンパク質は強く結合しないからである。このプロセスでは、クロマトグラフィー樹脂上に固定化されたキレート剤にCo2カチオンが充填されている。バッチモードですなわち、溶液中で、Her2ECDHisを含有する上清を樹脂とインキュベートした。インキュベーション後、ビーズを上清から取り出し、カラムに詰めた。弱く結合しているタンパク質を除去するためにカラムを洗浄した。次いで、強く結合しているHer2ECDHisタンパク質を、HisとCo2との結合において競合するイミダゾールを含有する緩衝液で溶出した。脱塩カラムにおける緩衝液交換によって溶出剤をタンパク質から除去した。実施例6‐トランスジェニックマウスの免疫処置手順抗体005、006、041、044、059、060、067、072、093、106および111を、以下の免疫処置手順によって得た:2匹の雌性HCo12マウス、1匹の雌性および1匹の雄性HCo12Balb/Cマウス、1匹の雌性および1匹の雄性HCo17マウス、ならびに2匹の雄性HCo20マウスMedarexSanJoseCAUSAに対して、Her2ECDを一過性にトランスフェクトした5×106個のNS0細胞の腹腔内IP免疫処置、およびハプテンのキーホールリンペットヘモシアニンKLHと結合させた20μgのHer2ECDHisタンパク質を一過性にトランスフェクトした5×106個のNS0細胞の尾基部への皮下SC免疫処置を、交互に2週間毎に行った。マウス1匹当たり最大で8回の免疫処置を行った4回のIP免疫処置および4回のSC免疫処置。細胞による初回免疫処置は完全フロイントアジュバントCFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSA中で行った。他の免疫処置についてはすべて、細胞をPBS中にてIP注射し、KLHを結合させたHer2ECDを、不完全フロイントアジュバントIFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAを用いてSC注射した。抗体150は、1匹の雌性HCo17マウスMedarexに対する、Her2delex16を一過性にトランスフェクトした5×106個のNS0細胞のIP免疫処置、およびハプテンのキーホールリンペットヘモシアニンKLHと結合させた20μgのHer2ECDHisタンパク質を一過性にトランスフェクトした5×106個のNS0細胞の尾基部へのSC免疫処置を、14日の間隔をおいて交互に行うことによって得た。最大で8回の免疫処置を行った4回のIP免疫処置および4回のSC免疫処置。細胞による初回免疫処置は完全フロイントアジュバントCFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSA中で行った。他の免疫処置についてはすべて、PBS中にある細胞をIP注射し、KLHと結合させたHer2ECDは不完全フロイントアジュバントIFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAを用いてSC注射した。抗体163は、1匹の雄性HCo20マウスMedarexに対する、ハプテンのキーホールリンペットヘモシアニンKLHと結合させた20μgのHer2ECDHisタンパク質による、14日間隔でのIPおよび尾基部へのSCの交互の免疫処置によって得た。最大で8回の免疫処置を行った4回のIP免疫処置および4回のSC免疫処置。初回免疫処置は完全フロイントアジュバントCFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSA中でIPで行った。他の免疫処置は、不完全フロイントアジュバントIFA;DifcoLaboratoriesDetroitMIUSAを用いて注射した。抗原特異的FMATスクリーニングアッセイ実施例7に記載においてTC1014Her2、TC1014Her2delex16、またはTC1014Her2stumpyに対する力価が少なくとも2回連続して認められたマウスを陽性とみなし、融合した。実施例7:均質抗原特異的スクリーニングアッセイ免疫マウスの血清中またはHuMabヒトモノクローナル抗体ハイブリドーマもしくはトランスフェクトーマの培養上清中にあるHER2抗体の存在を、均質抗原特異的スクリーニングアッセイ4クワドラントfourquadrantによってFluorometricMicrovolumeAssayTechnologyFMAT;AppliedBiosystemsFosterCityCAUSAを用いて確かめた。このために、4種類の細胞ベースのアッセイの組み合わせを使用した。TC1014Her2HER2受容体を一過性に発現するHEK293F細胞;前記のように作製された、TC1014Her2delex16Her2delexの細胞外ドメインを一過性に発現するHEK293F細胞HER2受容体の16アミノ酸欠失変異体;前記のように作製された、およびTC1014Her2stumpyHER2受容体の細胞外stumpyドメインを一過性に発現するHEK293F細胞;前記のように作製された、ならびにHEK293野生型細胞HER2を発現しない負の対照細胞との結合を確かめた。HER2と結合させるために、試料を細胞に添加した。その後に、蛍光結合体ヤギ抗ヒトIgGCy5;JacksonImmunoResearchを用いて、HuMabの結合を検出した。TH1014ペルツズマブHEK293F細胞において作製されたを正の対照として使用し、HuMabマウスプール血清およびHuMabKLHを負の対照として使用した。試料を、AppliedBiosystems8200CellularDetectionSystem8200CDSを用いてスキャンし、カウントx蛍光を読み取り値として使用した。カウントが50を超えた時に試料は陽性と示され、カウントx蛍光は、負の対照の少なくとも3倍であった。実施例8:HuMabハイブリドーマの作製十分な抗原特異的力価前記で定義したが発生したHuMabマウスを屠殺し、脾臓ならびに腹大動脈および大静脈に隣接するリンパ節を収集した。脾細胞およびリンパ節細胞とマウスミエローマ細胞株を、CEEF50ElectrofusionSystemCytoPulseSciencesGlenBurnieMDUSAを用いて、本質的に製造業者の説明書に従って融合した。次に、一次ウェルを、ClonePixシステムGenetixHampshireUKを用いてサブクローニングした。この目的のために、特異的な一次ウェルハイブリドーマを、40CloneMediaGenetixHampshireUKおよび60HyQ2x完全培地HycloneWalthamUSAから作られた半固体培地に播種した。実施例7に記載のように抗原特異的結合アッセイにおいてサブクローンを再試験した。さらに増殖させるために、OctetFortebioMenloParkUSAを用いてIgGレベルを測定して、一次ウェル1個につき最も特異的でかつ最も産生しているクローンを選択した。結果として生じたHuMabハイブリドーマのさらなる増殖および培養は、標準的なプロトコール例えば、ColiganJEBiererBEMarguliesDHShevachEMandStroberWedsCurrentProtocolsinImmunologyJohnWileySonsInc2006に記載のプロトコールに基づいて行った。このプロセスによって得られたクローンをPC1014と名付けた。実施例9精製された抗体の質量分析6ウェルまたはHyperflask段階からの抗体含有上清の小さな08mlアリコートを、ScicloneALH3000ワークステーションCaliperLifesciencesHopkintonUSAにおいてプロテインG樹脂PhyNexusIncSanJoseUSAを含有するPhyTipカラムを用いて精製した。PhyTipカラムを製造業者の説明書に従って使用したが、緩衝液を、BindingBufferPBSBBraunMedicalBVOssNetherlandsおよびElutionBuffer01MグリシンHClpH27FlukaRiedeldeHaenBuchsGermanyと交換した。精製後、試料を2MTrisHClpH90SigmaAldrichZwijndrechtNetherlandsによって中和した。または、場合によっては、さらに多量の培養上清を、MabSelectSuReを用いて精製した。精製後、試料を384ウェルプレートWaters100ul角型ウェルプレート部品番号186002631に入れた。NグリコシダーゼFRocheカタログ番号11365177001を用いて、試料を37°Cで一晩、脱グリコシルした。DTT15mgmLを添加し1μlウェル、37°Cで1時間インキュベートした。試料5μlまたは6μlを、AcquityUPLC商標WatersMilfordUSAにおいてBEH300C18、17μm、21x50mmカラムを用いて60°Cで脱塩した。01ギ酸Flukaカタログ番号56302BuchsGermanyを含むMQ水および01ギ酸Flukaカタログ番号56302BuchsGermanyを含むLCMS等級のアセトニトリルBiosolveカタログ番号01204101ValkenswaardTheNetherlandsを、それぞれ、溶出剤EluensAおよびBとして使用した。飛行時間型エレクトロスプレーイオン化質量スペクトルを、陽イオンモードで動いているmicrOTOF商標質量分析計BrukerBremenGermanyにおいてオンラインで記録した。分析の前に、900~3000mzスケールを、ESチューニングミックスtuningmixAgilentTechnologiesSantaClaraUSAを用いて較正した。DataAnalysis商標ソフトウェアv34Brukerと5~80kDaの分子量を探すMaximalEntropyアルゴリズムを用いて、質量スペクトルをデコンボリューションした。デコンボリューション後、重複する抗体を見つけるために、全ての試料について、得られた重鎖および軽鎖の質量を比較した。これは時として余分な軽鎖の存在によるものであったが、重鎖の比較では、C末端リジン変種が存在する可能性があることも考慮に入れた。これにより、重複しない抗体、すなわち、ある特定の重鎖および軽鎖の重複しない組み合わせのリストが得られた。重複する抗体が見つかった場合には、他の試験からの結果に基づいて、1つの重複しない抗体が選択された。実施例10HER2抗体可変ドメインの配列分析および発現ベクターへのクローニングHER2HuMabの全RNAを5x106個のハイブリドーマ細胞から調製し、SMARTRACEcDNAAmplificationキットClontechを用いて製造業者の説明書に従って、100ngの全RNAから5RACEComplementaryDNAcDNAを調製した。VHコード領域およびVLコード領域をPCR増幅し、連結非依存クローニングligationindependentcloningAslanidisCandPJdeJongNucleicAcidsRes1990;1820:606974によって、pG1f発現ベクターおよびpKappa発現ベクターにインフレームで直接クローニングした。このプロセスによって得られたクローンをTH1014と名付けた。それぞれの抗体について、16個のVLクローンおよび8個のVHクローンを配列決定した。さらなる研究および発現のために、重鎖質量および軽鎖質量の推定値が質量分析によって求められた同じ抗体のハイブリドーマ由来材料の質量と一致するクローンを選択した。結果として生じた配列を図1および図2ならびに配列表に示した。選択された配列を下記においてもさらに詳細に説明する。CDR配列を、IMGTLefrancMPetalNucleicAcidsResearch272092121999およびBrochetXNuclAcidsRes36W5035082008に従って定義した。表1、表2、および表3は抗体配列情報または生殖系列配列の概要を示す。表4はコンセンサス配列を示す。表1HuMab005、006、059、060、106、および111の重鎖可変領域VH、軽鎖可変領域VL、およびCDR配列表2HuMab005、006、059、060、106、および111のマウス起源ならびに重鎖配列相同性および軽鎖配列相同性表3HuMab041、150、067、072、163、093、および044の重鎖可変領域VH配列、軽鎖可変領域VL配列。それぞれのCDRは、図1において下線が引かれたVH配列のCDRおよび図2において下線が引かれたVL配列のCDRに対応する。表4図1および2に示された配列アラインメントに基づくコンセンサスCDR実施例11抗体の精製培養上清を02μmデッドエンドフィルターで濾過し、5mlのMabSelectSuReカラムGEHealthCareにロードし、01Mクエン酸ナトリウムNaOHpH3を用いて溶出した。すぐに、溶出液を2MTrisHClpH9で中和し、126mMNaH2PO4、140mMNaClpH74BBraunに対して一晩、透析した。または、精製後、溶出液をHiPrepDesaltingカラムにロードし、抗体を126mMNaH2PO4、140mMNaClpH74BBraun緩衝液に交換した。透析後または緩衝液交換後、試料を02μmデッドエンドフィルターで滅菌濾過した。純度をSDSPAGEによって求め、濃度を比濁分析および280nmでの吸光度によって測定した。精製抗体を4°Cで保管した。実施例9に記載のように、ハイブリドーマによって発現された抗体重鎖および軽鎖の分子量を特定するために、質量分析を行った。実施例12‐FACS分析を利用して測定した、膜結合型HER2を発現する腫瘍細胞に対するHER2クローンの結合AU565細胞ATCCで購入、CRL2351およびA431細胞ATCCで購入、CRL1555に対するHER2抗体の結合を、フローサイトメトリーを用いて試験したFACSCantoIIBDBiosciences。Qifi分析DakoGlostrupDenmarkにより、AU565細胞が細胞当たり平均1000000コピーのHER2タンパク質を発現し、一方、A431細胞は細胞当たり平均15000コピーを発現したことが判明した。HER2抗体の結合は、フィコエリトリンPE結合ヤギ抗ヒトIgG抗体Jacksonを用いて検出した。臨床グレードのハーセプチン登録商標Rocheを陽性対照として用い、アイソタイプ対照抗体を陰性対照として用いた。EC50値は、非線形回帰傾きが変化するS字形用量反応を利用して、GraphPadPrismV403ソフトウエアGraphPadSoftwareSanDiegoCAUSAを用いて決定した。図3に示すように、試験したHER2抗体はすべて、AU565細胞およびA431細胞の両方の上で発現されたHER2と用量依存的な様式で結合した。結合に関するEC50値は、AU565細胞については0304~2678μg/mL、A431細胞については0106~1982μg/mLとさまざまであった。特にA431細胞に関しては、試験した抗体の間でEC50値の大きな違いが観察された。最大結合レベルのある程度の違いは、異なる抗体間でも観察された。特に、抗体005および006は、他のHER2抗体と比較して、A431上でのより高度な最大結合レベルを明らかに示した。実施例13FACS分析によって測定された、HER2抗体と、アカゲザル上皮細胞上に発現している膜結合型HER2との結合アカゲザルHER2との交差反応性を確かめるために、フローサイトメトリーFACSCantoIIBDBiosciencesを用いて、HER2抗体とHER2陽性アカゲザル上皮細胞4MBr5、ATCCで購入との結合を試験した。フィコエリトリン結合ヤギ抗ヒトIgG抗体Jacksonを二次結合体として使用した。アイソタイプ対照抗体を負の対照抗体として使用した。図4に示したように、試験した全てのHER2抗体がアカゲザルHER2と交差反応した。どちらの試験濃度1μgmLおよび10μgmLでもHER2抗体はアカゲザルHER2に特異的に結合することができた。アイソタイプ対照抗体を用いた場合、結合は観察されなかった。実施例14サンドイッチELISAにおいて測定された、可溶性Her2ECDHisとの結合におけるHER2抗体の競合最適な試験HER2抗体コーティング濃度および最適なHer2ECDHis濃度を以下のように求めた。ELISAウェルを、PBSで連続希釈したHER2HuMab2倍希釈で0125~8μgmLで4°Cで一晩コーティングした。次に、ELISAウェルをPBST005Tween20SigmaAldrichZwijndrechtTheNetherlandsを添加したPBSで洗浄し、PBSTC2vvニワトリ血清GibcoPaisleyScotlandを添加したPBSTで室温RTで1時間ブロックした。次いで、ELISAウェルをPBSTで洗浄し、PBSTCで連続希釈したHer2ECDHis2倍希釈で025~2μgmLとRTで1時間インキュベートした。結合しなかったHer2ECDHisをPBSTで洗い流し、結合したHer2ECDHisを、025μgmLビオチン化ウサギ抗6xhisbiotAbcamCambridgeUKとRTで1時間インキュベートした。その後に、プレートをPBSTで洗浄し、PBSTで希釈した01μgmLストレプトアビジンポリHRPSanquinAmsterdamTheNetherlandsと1時間インキュベートした。洗浄後、光から保護しながら、22アジノビスABTS:1個のABTS錠剤を50mLABTS緩衝液RocheDiagnosticsAlmereTheNetherlandsで希釈したとRT室温で15分間インキュベートすることによって、反応を視覚化した。等量のシュウ酸SigmaAldrichZwijndrechtTheNetherlandsを添加することによって発色を止めた。405nmでの蛍光をマイクロタイタープレートリーダーBiotekInstrumentsWinooskiUSAによって測定した。それぞれの抗体の最適以下の結合をもたらした抗体濃度を求め、以下のクロスブロック実験に使用した。各HER2抗体を、上記の通りに決定した準最適用量でELISAウェルにコーティングした。ELISAウェルのブロック後に、ウェルを、所定の濃度の1μg/mLビオチン化Her2ECDHisとともに、過剰な第2の競合用HER2抗体の存在下または非存在下でインキュベートした。次いでELISAを上記の通りに行った。コーティングされた抗体に対するHer2ECDHisの残留結合を、競合用抗体の非存在下で観察された結合に対する相対的なパーセンテージとして表した。続いて、それぞれの抗体の組み合わせに関する競合率を、100から阻害率を差し引いたものとして求めた。75の競合は完全なブロック、25~74の競合は部分的ブロック、および0~24の競合はブロックがないことを表した。表5に示すように、HER2抗体はすべて、Her2ECDHisに対する結合に関して、それら自体と少なくとも部分的には競合した。トラスツズマブ臨床グレードのハーセプチン登録商標およびペルツズマブTH1014pert、HEK293細胞において一過性に産生は、それら自体と競合することのみが可能であり、列記した他のHER2抗体のいずれとも競合することができなかった。C1およびF5どちらもHEK293細胞において一過性に産生は、Her2ECDHisに対する結合に関して互いに競合したが、他のHER2抗体とは競合しなかった。抗体005、006、059、060、106および111はすべて、Her2ECDHisに対する結合に関して互いに競合したが、トラスツズマブ、ペルツズマブ、C1またはF5のいずれともクロスブロックは行わなかった。クローン005、059、060および106は、006が競合用抗体である場合にのみ006をブロックした。006を固定化した逆反応では、005、059、060または106によるブロックは全く見られなかった。これは、クローン006の見かけの親和性が、図3Aおよび3Bに示した005、059、060、106および111と比較して、より高い結果である可能性がある。100よりも高い値は、結合活性効果、および2つの非ブロッキング抗体を含む抗体Her2ECDHis複合体の形成によって説明することができる。表5Her2ECDHisに対する結合に関するHER2抗体の競合およびブロック示した値は、2回の独立した実験の、競合用抗体の非存在下で観察された結合に対する相対的な結合の平均阻害率である。HEKにより産生されたC1およびF5TH1014C1およびTH1014F5を用いる競合実験は1回行った。トラスツズマブ臨床グレードのハーセプチン登録商標およびHEKにより産生されたペルツズマブTH1014pertについても2回試験した。実施例15抗体依存性細胞傷害ADCCSKBR3細胞ATCCで購入、HTB30を収集し5x106個の細胞、洗浄しPBSで1500rpm、5分間、2回、10コスミックcosmic仔ウシ血清CCSHyCloneLoganUTUSAを添加したRPMI1640培地1mLに収集した。これに、200μCi51Crクロム51;AmershamBiosciencesEuropeGmbHRoosendaalTheNetherlandsを添加した。振盪している水浴中で、混合物を37°Cで15時間インキュベートした。細胞をPBSで1500rpm、5分間、2回洗浄した後に、10CCSを添加したRPMI1640培地に再懸濁し、トリパンブルー排除によって計数し、1x105細胞mLの濃度まで希釈した。その間、末梢血単核球PBMCを、標準的なFicoll密度遠心分離を用いて製造業者の説明書リンパ球分離培地;LonzaVerviersFranceに従って、新鮮なバフィーコートSanquinAmsterdamTheNetherlandsから単離した。細胞を、10CCSを添加したRPMI1640培地に再懸濁した後に、トリパンブルー排除によって計数し、1x107細胞mLまで濃縮した。ADCC実験のために、96ウェルマイクロタイタープレートの中で、50μLの51Cr標識SKBR3細胞5000個の細胞を、総体積100μLの10CCS添加RPMI培地に溶解した15μgmLHER2抗体IgG1κとプレインキュベートした。RTで15分後に、50μLのPBMC500000個の細胞を添加して、100:1のエフェクター:標的比にした。細胞溶解の最大量は、50μLの51Cr標識SKBR3細胞5000個の細胞を100μLの5TritonX100とインキュベートすることによって確かめられた。自然溶解量は、抗体またはエフェクター細胞を含まない150μLの培地中で5000個の51Cr標識SKBR3細胞をインキュベートすることによって確かめられた。抗体非依存性細胞溶解のレベルは、抗体を使用せずに5000個のSKBR3細胞を500000個のPBMCとインキュベートすることによって確かめられた。その後に細胞を、37°C、5CO2で4時間インキュベートした。細胞溶解量を確かめるために、細胞を遠心分離1200rpm、3分し、75μLの上清をミクロニックチューブmicronictubeに移し、この後に、放出された51Crを、ガンマカウンターを用いてカウントした。測定されたカウント毎分cpmを用いて、以下のように抗体性溶解のパーセントを計算した:cpm試料cpmAb非依存性溶解cpm最大溶解cpm自然溶解x100。図5に示すように、HER2抗体はすべて、SKBR3細胞のADCCを介した効率的な溶解を誘導した。種々の抗体による平均溶解率は15~28の間であったが、トラスツズマブハーセプチン登録商標だけは例外で、平均41の溶解を示した。理論に拘束されるものではないが、トラスツズマブによるより高い溶解率は、HEKにより産生された他のHER2抗体上のほぼ4の非コアnoncoreフコシル化と比較して、そのCHO産生に起因する非コアフコシル化グレードの増大124が原因で、またはHER2受容体抗体複合体の、より少ない内部移行を誘導するエピトープを認識することによって、起こった可能性がある。実施例16AU565細胞のリガンド非依存性増殖の阻害HER2抗体がインビトロでAU565細胞の増殖を阻害する能力を試験した。AU565細胞上でのHER2発現レベルが高いために実施例12に記載のように細胞1個あたり約1000000コピー、これらの細胞においてHER2は常時活性型であり、従って、リガンド誘導性ヘテロ二量体化に依存しない。96ウェル組織培養プレートGreinerbiooneFrickenhausenGermanyの中に、1ウェルにつき9000個のAU565細胞を、無血清細胞培地に溶解した10μgmLHER2抗体の存在下で播種した。対照として、細胞を、抗体を含まない無血清培地に播種した。3日後に、AlamarblueBioSourceInternationalSanFranciscoUSを用いて製造業者の説明書に従って、生細胞量を定量した。EnVision2101MultilabelリーダーPerkinElmerTurkuFinlandと標準的なAlamarblue設定を用いて、蛍光をモニタリングした。抗体処理細胞のAlamarblueシグナルを未処理細胞に対するパーセントでプロットした。統計解析にはダネット検定を適用した。結果は図6に描写されており、これはHER2抗体処理後のAU565細胞の増殖率を、100に設定した非処理細胞と比較して示している。ハーセプチンは見かけ上、AU565細胞増殖を阻害したが、この効果は統計学的に有意ではなかった。TH1014F5はAU565細胞の増殖を有意に強化し、このことはこれがアゴニスト抗体であることを示しているが、一方、試験した他の抗体はいずれも005、060およびペルツズマブ、AU565増殖に対して実質的効果を有しなかった。トラスツズマブハーセプチン登録商標およびペルツズマブに関して、これはJuntillaetalCancerCell200915429440によって記載された結果に一致している。表6100に設定した非処理細胞と比較した、HER2抗体処理後のAU565細胞の平均増殖率実施例17抗κETAアッセイ抗体薬物結合体アプローチへのHER2抗体の適性を調べるために、κ指向性シュードモナス属エキソトキシンA抗κETAを用いた商標登録で保護されていないgenericインビトロ細胞ベース殺傷アッセイを開発した。このアッセイでは、切断型シュードモナス属エキソトキシンAと結合体化された高親和性抗κドメイン抗体を使用する。抗κETAドメイン抗体は内部移行するとタンパク質分解され、ジスルフィド結合が還元されて、触媒ドメインと結合ドメインは分離される。触媒ドメインはKDEL保留モチーフを介してゴルジ体から小胞体に輸送され、その後にサイトゾルに移動される。サイトゾルにおいて触媒ドメインはタンパク質合成を阻害し、アポトーシスを誘導するKreitmanRJBioDrugs2009;231:113。このアッセイにおいて、内部移行および毒素による死滅を可能にするHER2抗体を特定するために、HER2抗体は抗κETAと先に結合体化された後に、HER2陽性細胞とインキュベートされる。上述の通り、AU565細胞は、細胞当たり多数のHer2分子を発現し約106分子/細胞、一方A431細胞は、細胞当たり少数のHer2分子を発現する約30000分子/細胞。最初に、それぞれの細胞株に最適な抗κETA濃度、すなわち、非特異的細胞死を誘導しない最大投与可能量を求めた。AU565細胞7500細胞ウェルおよびA431細胞2500細胞ウェルを正常細胞培地が入っている96ウェル組織培養プレートGreinerbiooneに播種し、少なくとも4時間、付着させた。次に、細胞を、正常細胞培地で溶解した100μgmL、10μgmL、1μgmL、01μgmL、001μgmL、0001μgmL、および0μgmLの抗κETA希釈液とインキュベートした。3日後に、AlamarblueBioSourceInternationalSanFranciscoUSを用いて製造業者の説明書に従って、生細胞量を定量した。EnVision2101MultilabelリーダーPerkinElmerTurkuFinlandと標準的なAlamarblue設定を用いて、蛍光をモニタリングした。単独で細胞を死滅させなかった抗κETA最高濃度を以下の実験に使用したAU565の場合、05μgmL、A431の場合、1μgmL。次に、異なるHER2抗体について、抗体によって媒介された内部移行および毒素による死滅を試験した。細胞を前記のように播種した。HER2抗体の希釈シリーズを所定の濃度の抗κETAと30分間プレインキュベートした後に、細胞に添加した。3日間インキュベートした後に、生細胞量を前記のように定量した。抗κETA結合抗体で処理された細胞のAlamarblueシグナルを、抗体のみで処理された細胞と比較してプロットした。細胞死滅については正の対照として234μgmLのスタウロスポリンを使用した。負の対照としてアイソタイプ対照抗体を使用した。図7Aおよび表7に示す通り、抗κETA結合HER2抗体はすべて、AU565細胞を用量依存的な様式で死滅させることができた。抗κETA結合ハーセプチンはAU565細胞の32のみを死滅させ、一方、他の結合体化抗体はすべて、50~72の細胞死滅を誘導した。さらに、抗体005および111は、トラスツズマブ7849ng/mLと比較して、EC50値それぞれ1513ng/mLおよび2420ng/mLを3倍を超えて向上させることが実証された。トラスツズマブを除き、非結合体化HER2抗体は、試験した濃度ではAU565細胞の死滅を誘導しなかった。表7抗κETA結合HER2抗体によるAU565細胞の死滅。示したデータは、1つの代表的な実験で測定した、抗κETA結合HER2抗体で処理したAU565細胞のEC50値および最大細胞死滅率である。スタウロスポリンによって誘導された細胞死滅を100に設定し、非処理細胞のMFIを0に設定した。Ndetは検出されなかったことを意味する。図7Bおよび表8に示すように、抗体005および060は、抗κETAと結合体化させた場合にA431細胞の有効な死滅85以上を誘導することができたが、一方、抗κETA結合ハーセプチンおよびアイソタイプ対照抗体はA431細胞の死滅を誘導しなかった。さらに、抗体005および111は、低い抗体濃度10ng/mLで既にA431細胞を死滅させ、EC50値は約10ng/mLであることが実証された。非結合体化HER2抗体では細胞死滅は全く観察されなかった。表8抗κETA結合HER2抗体によるA431細胞の死滅。示したデータは、1つの代表的な実験で測定した、抗κETA結合HER2抗体で処理したAU431細胞のEC50値および最大細胞死滅率である。スタウロスポリンによって誘導された細胞死滅を100に設定し、非処理細胞のMFIを0に設定した。実施例18‐FMATに基づくfabCypHer5Eアッセイを用いて測定したHER2抗体の内部移行前の実施例で記載したκ毒素ETAアッセイにおいて観察されたAU565細胞の強化された死滅が、HER2抗体の強化された内部移行と相関するか否かを調べるために、fabCypHer5Eに基づく内部移行アッセイを行った。CypHer5Eは、塩基性pH細胞外:培養培地では非蛍光性であって、酸性pH細胞内:リソソームでは蛍光性であるpH感受性色素であり、酸解離定数pKaは73である。AU565細胞を、240ng/mLのfabCypHer5Eヤギfab抗ヒトIgG[Jackson]とCypHer5E[GEHealthcareEindhovenTheNetherlands]とを製造元の指示に従って自社内で結合体化を加えた通常の細胞培養培地中にて、384ウェル組織培養プレートGreinerbiooneに細胞3000個/ウェルで播種した。次に、HER2抗体を正常細胞培養培地中に系列希釈した上で細胞に添加し、室温で9時間そのまま置いた。細胞内CypHer5Eの平均蛍光強度MFIを8200FMATAppliedBiosystemsNieuwerkerkADIJsselTheNetherlandsを用いて測定し、カウント数×蛍光を読み取り値として用いた。アイソタイプ対照抗体を陰性対照抗体として用いた。EC50値および最大MFIは、非線形回帰傾きが変化するS字形用量反応を利用して、GraphPadPrismV403ソフトウエアGraphPadSoftwareSanDiegoCAUSAを用いて決定した。結果は表9に示されており、これはAU565細胞を用いたCypHer5E内部移行アッセイにおける試験したHER2抗体すべてに関するEC50値および最大MFIを描写している。最大MFI値は、結合に際してどの程度の数のHER2抗体が内部移行を受けたかを反映している。ヒトHER2抗体はすべて、トラスツズマブ35000およびTH1014pert35323よりも高い最大MFI値130529~57428を示し、このことはこれらの抗体が強化された受容体内部移行を誘導したことを示している。TH1014F5の強化された内部移行は、そのアゴニスト活性およびHER2HER2二量体化の誘導の結果である可能性がある実施例16参照。表9HER2抗体のCypher5に基づく内部移行アッセイ。示したデータは、fabCypHer5E標識HER2抗体で処理したAU565細胞を用いた2回の実験からの1つの代表的な実験のMFIおよびEC50値である。実施例19‐HER2のダウンモジュレーション本発明の抗体によって誘導された強化されたHER2内部移行が、強化された受容体ダウンモジュレーションももたらすか否かを調べるために、005を代表的抗体として選択し、HER2のダウンモジュレーションを誘導する能力に関して試験した。このために、AU565細胞をHER2抗体とともに3日間インキュベートして、HER2の存在に関して分析した。AU565細胞を正常細胞培養培地中にて24ウェル組織培養プレート細胞100000個/ウェルに播種して、10μg/mLのHER2抗体の存在下で37°Cで3日間培養した。PBSで洗浄した後に、細胞を、25μLのSurefire溶解緩衝液PerkinElmerTurkuFinlandとともに室温で30分間インキュベートすることによって溶解させた。ビシンコニン酸BCAタンパク質アッセイ試薬Pierceを製造元のプロトコールに従って用いて、総タンパク質レベルを定量した。溶解液におけるHER2タンパク質レベルを、HER2特異的サンドイッチELISAを用いて分析した。ウサギ抗ヒトHER2細胞内ドメイン抗体CellSignalingを用いてHER2およびビオチン化ヤギ抗ヒトHER2ポリクローナル抗体RDを捕捉し、その後にストレプトアビジンポリHRPを用いて結合型HER2を検出した。反応を22アジノビスABTS:ABTSの1錠を50mLABTS緩衝液[RocheDiagnosticsAlmereTheNetherlands]中に希釈を用いて視覚化し、シュウ酸SigmaAldrichZwijndrechtTheNetherlandsを用いて停止させた。405nmの蛍光をマイクロタイタープレートリーダーBiotekInstrumentsWinooskiUSAで測定し、HER2の量を非処理細胞に対する相対的なパーセンテージとして表した。結果は図8および以下の表10に示されており、これはHER2の量を非処理細胞と比較したパーセンテージとして表している。図8および表10における結果は、抗体005がおよそ30のHER2ダウンモジュレーションを誘導し、一方、ハーセプチンがおよそ20のHER2ダウンモジュレーションを誘導したことを明らかに示している。これは抗体005によって観察された強化された内部移行と合致する。表10抗体が誘導したHER2のダウンモジュレーションを、非処理細胞と比較したHER2のパーセンテージとして表す実施例20‐共焦点顕微鏡検査によって分析したHER2抗体とリソソームマーカーLAMP1との共存実施例19に記載したHER2ダウンモジュレーションアッセイ、およびCypHer5Eに基づく内部移行アッセイにより、本発明のHER2抗体がより効率的に内部移行を受け、リソソームに向けて標的化されることが示された。これらの知見を確かめるために、共焦点顕微鏡検査技術を適用した。AU565細胞を標準的な組織培養培地中にてカバーガラス厚さ15ミクロン、ThermoFisherScientificBraunschweigGermany上で37°Cで3日間増殖させた。リソソーム活性をブロックするために細胞を50μg/mLのロイペプチンSigmaとともに1時間プレインキュベートし、その後に10ug/mLのHER2抗体を添加した。細胞を37°Cでさらに3時間または18時間インキュベートした。その後にそれらをPBSで洗浄した上で、4ホルムアルデヒドKlinipathとともにRT室温で30分間インキュベートした。スライドをブロック用緩衝液01サポニン[Roche]および2BSA[Roche]を加えたPBSで洗浄して、ホルムアルデヒドを失活させるための20mMNH4Clを含むブロック用緩衝液中で20分間インキュベートした。スライドを再びブロック用緩衝液で洗浄した上で、リソソームを同定するためのマウス抗ヒトCD107aLAMP1BDPharmingenとともに室温で45分間インキュベートした。ブロック用緩衝液で洗浄した後に、スライドを、二次抗体の混合液;ヤギ抗マウスIgGCy5Jacksonおよびヤギ抗ヒトIgGFITCJacksonとともに室温で30分間インキュベートした。スライドを再びブロック用緩衝液で洗浄して、20μLの封入剤6グラムのグリセロール[Sigma]および24グラムのMowiol488[Omnilabo]を6mL蒸留水に溶解させ、それに12mLの02MTris[Sigma]pH85を添加して、その後に50~60°Cで10分間インキュベートした。封入剤を等分して20°Cで保存したを用いて顕微鏡用スライド上にマウントした。スライドを、63倍13206油浸対物レンズを装着したLeicaSPEII共焦点顕微鏡LeicaMicrosystemsおよびLASAFソフトウエアによって画像化した。重複ピクセル強度の定量が可能となるように、ピクセル飽和を伴わずに抗体が可視化されるようにレーザー強度、ゲインおよびオフセットを調整した。これらの設定を、すべての共焦点スライドで同一に保った。12ビットのグレースケールTIFF画像を、MetaMorph登録商標ソフトウエアバージョンMetaSeries61、MolecularDevicesIncSunnyvaleCaliforniaUSAを用いて、共存に関して分析した。FITC画像およびCy5画像をスタックとして取り込み、バックグラウンドを減算した。すべてのFITC画像およびすべてのCy5画像に関して、同一の閾値設定を用いた手動で設定。共存を重複領域ROIにおけるFITCのピクセル強度として描写したが、ここでROIはすべてのCy5陽性領域で構成される。いくつかのHER2抗体で染色した異なるスライドを比較するために、Cy5のピクセル強度を用いて画像を標準化した。ヤギ抗マウスIgGCy5を、リソソームマーカーLAMP1CD107aの染色のために用いた。LAMP1のピクセル強度は、試験したさまざまなHER2抗体の間で異ならないはずである。結果は図9および以下の表11に示されており、これらはさまざまなHER2抗体に関して、Cy5と重複するFITCピクセル強度を描写している。各抗体に関して、およそ1個、3個または5個を上回る細胞を含む1枚のスライドからの3つの異なる画像を分析した。各スライド内の異なる画像間で有意な差異が観察された。それでもなお、抗体005は、ハーセプチンおよびペルツズマブと比較した場合、リソソームマーカーLAMP1との共存の増加を明らかに示すことが明確であった。これらの結果は、ひとたび内部移行を受けるとHER2抗体005はリソソーム区画に向かって効率的に局在化されることを示しており、このことは抗体薬物結合体アプローチにとって特に興味深い。表11任意単位で示した、Cy5と重複する平均FITCピクセル強度実施例21ヒトとニワトリとのHER2細胞外ドメインシャッフル本発明の抗体によって認識されるHER2結合領域をさらに規定するために、HER2細胞外ドメインシャッフル実験を行った。この目的のために、ヒトHER2細胞外ドメインのドメインI、II、III、またはIVの配列を、ニワトリHER2ニワトリGallusgallusアイソフォームBNCBI:NP0010381261の対応する配列と交換した5つの構築物を用いて小さな遺伝子合成ライブラリーを作製した:1完全ヒトHER2UniprotP04626、以下huHER2と呼ぶ、2ニワトリドメインIを有するhuHER2ヒトHer2のアミノ酸aa1~203を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIと呼ぶ、3ニワトリドメインIIを有するhuHER2ヒトHer2のアミノ酸aa204~330を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIIと呼ぶ、4ニワトリドメインIIIを有するhuHER2ヒトHer2のaa331~507を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIIIと呼ぶ、および5ニワトリドメインIVを有するhuHER2ヒトHer2のaa508~651を対応するニワトリHer2領域と交換した、以下huHER2chIVと呼ぶ。ヒトHER2オルソログおよびニワトリHER2オルソログは細胞外ドメインでは67の相同性、ドメインIでは62の相同性、ドメインIIでは72の相同性、ドメインIIIでは63の相同性、ドメインIVでは68の相同性を示す。これらの構築物を、Freestyle商標CHOSInvitrogen細胞株において、FreestyleMAXトランスフェクション試薬Invitrogenを用いて製造業者の説明書に従って一過性にトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を20時間、培養した。トランスフェクトされた細胞に対するHER2抗体の結合をフローサイトメトリーによって分析した。トランスフェクトされたCHOS細胞を収集し、FACS緩衝液で洗浄し、10μgmLHER2抗体と氷上で30分間インキュベートした。HER2抗体の結合を、フィコエリトリンPE結合ヤギ抗ヒトIgG抗体Jacksonを用いて検出した。異なるバッチ間で発現が同一であるかどうか調べるために、細胞を固定し、CytofixCytoperm溶液BDを用いて製造業者の説明書に従って透過処理し、ウサギ抗ヒト細胞内HER2抗体DAKOと二次PE結合ヤギ抗ウサギ抗体Jacksonの組み合わせを用いて染色した。アイソタイプ対照抗体を負の対照として使用した。蛍光をFACSCantoIIBDによって測定し、GraphPadPrismV403ソフトウェアGraphPadSoftwareSanDiegoCAUSAを用いて、結合曲線を非線形回帰によって作成した傾きが変わるS字形用量反応。異なる抗体によって、どのHER2ドメインが認識されるのかを特定するために、結合の消失を読み取り値として使用した。抗体106に関する例示的な曲線を図10に示している。すべての結合結果は表12に示す。ハーセプチンはHuHER2chIVに対しては結合低下を示したが、シャッフリングした残りのドメインの1つを有するタンパク質に対してはそうでなく、このことからハーセプチンのエピトープがHER2ドメインIVに存在することが裏づけられた。ペルツズマブはHuHER2chIIのみに対して結合低下を示し、このことはそのエピトープがHER2ドメインIIに存在することを裏づけている。抗体005、006、060および111はHER2ドメインIIIの置換時に結合低下を示したが、このことからそのエピトープがHER2ドメインIIIに存在することが実証された。興味深いことに、抗体059および106はhuHER2chIIIおよびhuHER2chIの両方に対する結合低下を明らかに示したが、このことは抗体059および106がこれらの2つのドメイン内の立体構造エピトープを認識することを意味する。表12異なるHER2ECD受容体構築物に対するHER2抗体の結合の概要。FL;huHER2、I;huHER2chI、II;huHER2chII、III;huHER2chIII、IV;huHER2chIV。は正常な結合を示し、はhuHER2に対して観察された結合と比較して減少した結合を示し、-は全く結合が検出されなかったことを示す。実施例22‐SCIDマウスでのNCIN87ヒト胃癌異種移植片におけるHER2HuMab005のインビボ有効性雌性CB17重症複合免疫不全症SCIDマウスでのNCIN87ヒト胃癌異種移植モデルにおける腫瘍成長および生存に対するHER2HuMab005のインビボ効果を判定した。50マトリゲル中の10×106個のNCIN87腫瘍細胞を、雌性SCIDマウスに、各群当たりマウス10匹ずつ皮下注射した。腫瘍接種から8日後に、HER2HuMabs005または対照抗体HuMabHepCの静脈内投与を開始した。図11中で、これは第1日、治療開始日として示されている。初回用量は40mg/kgとし、その後、治療開始後の第4日、8日、11日、15日、18日、22日および25日には10mg/kgとした。腫瘍体積を毎週少なくとも2回測定した。体積mm3は、キャリパーPLEXX測定値から幅2×長さ/2として算出した。腫瘍のキャリパー計測は週2回行い、その腫瘍が所定のエンドポイント体積800mm3に達した時点で各動物を安楽死させた。図11Aおよび11Bに示すように、HuMab005を投与されたマウスは、陰性対照抗体HuMabHepCを投与されたマウスよりも、より緩徐な腫瘍成長Aおよびより良好な生存Bのそれぞれを明らかに示した。