"チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数の異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及びイソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;を含む組み換えラクトバチルス属Lactobacillus宿主細胞であって、イソプロパノールを生産することが可能である、組み換え宿主細胞。前記細胞がラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、ラクトバチルスフルクチボランスLactobacillusfructivorans又はラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri細胞である、請求項1に記載の組み換え宿主細胞。前記チオラーゼが、a配列番号3、35、114、又は116の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するチオラーゼ;b配列番号1、2、34、113、若しくは115の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるチオラーゼ;及びc配列番号1、2、34、113、又は115の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるチオラーゼから選択される、請求項1又は2に記載の組み換え宿主細胞。前記チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、請求項1~3のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記Co-Aトランスフェラーゼがスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼである、請求項1~4のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号6の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号4若しくは5の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号4又は5の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号9の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号7若しくは8の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号7又は8の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、請求項5に記載の組み換え宿主細胞。前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号12の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号10若しくは11の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号10又は11の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号15の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号13若しくは14の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号13又は14の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、請求項5のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記CoA-トランスフェラーゼが、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼである、請求項1~4のいずれか1項に記載の組み換え宿主細胞。前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号37の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号39の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、請求項8に記載の組み換え宿主細胞。前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号41の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号43の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、請求項8に記載の組み換え宿主細胞。前記CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数の異種のポリヌクレオチドが、異種のプロモーターと作動式に連結される、請求項1~10のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記アセトアセテートデカルボキシラーゼが、a配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するアセトアセテートデカルボキシラーゼ;b配列番号16、17、44、117、若しくは119の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼ;及びc配列番号16、17、44、117、又は119の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼから選択される、請求項1~11のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、請求項1~12のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼが、a配列番号21、24、47、又は122の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;b配列番号19、20、22、23、46、若しくは121の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号19、20、22、23、46、又は121の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼからなる群から選択される、請求項1~13のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、請求項1~14のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドをさらに含む組み換え宿主細胞であって、n-プロパノールを生産することができる、請求項1~15のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、a配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドと少なくとも80の配列同一性を有するアルデヒドデヒドロゲナーゼ;b配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも中~高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも80の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼから選択される、請求項16に記載の組み換え宿主細胞。前記アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、請求項16又は17に記載の組み換え宿主細胞。メチルマロニル-CoAムターゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドをさらに含む、請求項16~18のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞。イソプロパノールを生産する方法であって、aイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で請求項1~15のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を培養し;そしてb前記イソプロパノールを回収することを含む、方法。イソプロパノール及びn-プロパノールを生産する方法であって、aイソプロパノール及びn-プロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で請求項16~19のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を培養し;b前記イソプロパノール及びn-プロパノールを回収することを含む、方法。プロピレンを生産する方法であって、aイソプロパノール及び/又はn-プロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で請求項1~19のいずれか一項に記載の組み換え宿主細胞を培養し;b前記イソプロパノール及び/又はn-プロパノールを回収し;cプロピレンを生産するための好適な条件下で、イソプロパノール及び/又はn-プロパノールを脱水し;そしてd前記プロピレンを回収することを含む、方法。前記培地が、サトウキビ汁を含む発酵培地である、請求項20~22に記載の方法。発明の概要本発明は、とりわけ、n-プロパノール及び/又はイソプロパノール生産のための組み換え宿主細胞に関する。一つの態様では、前記宿主細胞は、チオラーゼ活性、CoA-トランスフェラーゼ活性、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性、及び/又はイソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を含み、ここで宿主細胞は、イソプロパノールを生産するあるいは生産することができる。一つの態様では、前記宿主細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を含み、ここで宿主細胞は、n-プロパノールを生産するあるいは生産することができる。一つの態様では、前記宿主細胞は、チオラーゼ活性、CoA-トランスフェラーゼ活性、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性、及び/又はアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を含み、ここで宿主細胞は、n-プロパノール及びイソプロパノールを生産するあるいは生産することができる。これらの態様によっては、前記宿主細胞は、任意で、メチルマロニル-CoAムターゼ活性、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性、メチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼ活性をさらに含む。一つの態様では、前記組み換え宿主細胞は、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド例えば、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。前記宿主細胞は、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチド、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドをさらに含んでもよい。本発明はまた、n-プロパノールの生産、イソプロパノールの生産、又はn-プロパノール及びイソプロパノールの共生産のための組み換え宿主細胞を用いる方法に関する。一つの態様では、本発明は、イソプロパノールを生産する方法であって、aイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で、チオラーゼ活性、CoA-トランスフェラーゼ活性、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性、及びイソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する組み換え宿主細胞を培養し;そしてbイソプロパノールを回収することを含む方法に関する。本発明の実施形態によっては、前記組み換え宿主細胞は、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はイソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。別の態様では、本発明は、n-プロパノールを生産する方法であって、an-プロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有する組み換え宿主細胞を培養し;そしてbn-プロパノールを回収することを含む方法に関する。本発明の実施形態によっては、前記組み換え宿主細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。本発明の実施形態では、前記組み換え宿主細胞は、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。別の態様では、本発明は、n-プロパノール及びイソプロパノールを共生産する方法であって、an-プロパノール及びイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で、チオラーゼ活性、CoA-トランスフェラーゼ活性、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性、及びアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有する組み換え宿主細胞を培養し;そしてbn-プロパノール及びイソプロパノールを回収することを含む方法に関する。本発明の実施形態によっては、前記組み換え宿主細胞は、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド例えば、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。本発明の宿主細胞は、任意で、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼコードする異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼコードする異種のポリヌクレオチドを更に含んでもよい。本発明はまた、プロピレンを生産する方法であって、an-プロパノール及び/又はイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で、本明細書に記載の組み換え宿主細胞を培養し;bn-プロパノール及び/又はイソプロパノールを回収し;cプロピレンを生産するための好適な条件下で、n-プロパノール及び/又はイソプロパノールを脱水し;そしてdプロピレンを回収することを含む方法に関する。態様によっては、前記宿主細胞は、ラクトバチルス属Lactobacillus宿主細胞例えば、L.プランタルムLplantarum又はL.ロイテリLreuteri宿主細胞である。他の態様では、前記宿主細胞は、プロピオニバクテリウム属Propionibacterium例えば、プロピオニバクテリウムアシディプロピオニッチPropionibacteriumacidipropionici宿主細胞である。定義チオラーゼ:用語チオラーゼとは、二つの分子のアセチル-CoAからアセトアセチル-CoAとCoAへの化学反応を触媒するアシルトランスフェラーゼEC2.3.1.9として、本明細書で定義される。本明細書に記載される本発明の目的において、チオラーゼ活性は、DPWiesenbornetal1988ApplEnvironMicrobiol5427172722により記載される手順に従って決定することができ、この内容は参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。例えば、チオラーゼ活性は、100mMトリス塩酸pH7.4中3-ヒドロキシアシル-CoAデヒドロゲナーゼ、1.0mMアセチル-CoA、0.2mMNADH、1mMジチオスレイトール、及び2Uの3-ヒドロキシアシル-CoAデヒドロゲナーゼを用いた、NADHの酸化と連動した縮合反応を観察することにより、分光光度的に測定することができる。30°Cにおいて2分間、キュベット内容物の平衡化後、10μLの約125ngのチオラーゼの添加により、反応を開始する。NADHの酸化による340nmにおける吸光度の減少が測定され、6.22mM1cm1の減衰係数が用いられる。チオラーゼ活性の一単位は、pH7.4、30°Cにおいて1分間あたりに1マイクロモルのアセトアセチル-CoAを放出することができる酵素の量と等しい。チオラーゼは、配列番号3、35、114、又は116の成熟ポリペプチドの少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のチオラーゼ活性を有してもよい。CoA-トランスフェラーゼ:本明細書で用いられる用語CoA-トランスフェラーゼとは、アセトアセチル-CoAからの補酵素Aの除去を触媒し、アセトアセテートを生成する任意の酵素として定義される。態様によっては、CoA-トランスフェラーゼは、EC2.8.3.9のアセトアセチル-CoA:アセテート/ブチレートCoAトランスフェラーゼである。態様によっては、CoA-トランスフェラーゼは、EC3.1.2.11のアセトアセチル-CoA:アセテート/ブチレートCoAヒドラーゼである。態様によっては、CoA-トランスフェラーゼは、アセトアセチル-CoAとアセテートをアセトアセテートとアセチル-CoAに変換するアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼである。Co-Aトランスフェラーゼは、配列番号37の成熟ポリペプチド及び配列番号39の成熟ポリペプチドを含むタンパク質複合体;又は配列番号41の成熟ポリペプチド及び配列番号43の成熟ポリペプチドを含むタンパク質複合体の少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のCo-Aトランスフェラーゼ活性を有してもよい。態様によっては、前記CoA-トランスフェラーゼは、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼである。本明細書で用いられるスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼは、アセトアセチル-CoAとスクシネートのアセトアセテートとスクシニル-CoAへの化学反応を触媒するアセトトランスフェラーゼEC2.8.3.5である。スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼは、本明細書に記載されるように、1又は複数のいくつかのサブユニット例えば、二つのヘテロマーサブユニットを含むタンパク質複合体の形態でもよい。本明細書に記載される本発明の目的において、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性は、LStolsetal1989ProteinExpressionandPurification53396403により記載される手順に従って決定することができ、この内容は参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。例えば、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性は、アセトアセチル-CoAのエノラートアニオンの形成を観察することにより分光光度的に測定することができ、ここで吸光度は、50mMTris中67mMリチウムアセトアセテート、300μMスクシニル-CoA、及び15mMMgCl2、pH9.1のアッセイバッファ中、4分にわたる310nm/30°Cにおいて測定される。スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性の一単位は、pH9.1、30°Cにおいて1分間あたりに1マイクロモルのアセトアセテートを放出することができる酵素の量と等しい。スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼは、配列番号6の成熟ポリペプチド及び配列番号9の成熟ポリペプチドを含むタンパク質複合体;又は配列番号12の成熟ポリペプチド及び配列番号15の成熟ポリペプチドを含むタンパク質複合体の少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のスクシニル-Co-A:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有してもよい。アセトアセテートデカルボキシラーゼ:用語アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートの二酸化炭素とアセトンへの化学反応を触媒する酵素EC4.1.1.4として定義される。本明細書に記載される本発明の目的において、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性は、DJPetersenetal1990ApplEnvironMicrobiol5634913498により記載される手順に従って決定することができ、この内容は参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。例えば、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性は、26°Cにおいて、5nMアセトアセテート、0.1MKPO4、pH5.9中で、270nmにおけるアセトアセテートの減少を観察することにより、分光光度的に測定することができる。アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性の一単位は、pH5.9、26°Cにおいて1分間あたりに1マイクロモルのアセトアセテートを消費することができる酵素の量と等しい。アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドの少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のアセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有してもよい。イソプロパノールデヒドロゲナーゼ:用語イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、アセトンのイソプロパノールへの還元を触媒する任意の好適なオキシドレダクターゼ例えば、EC1.1.1.1又はEC1.1.1.80の任意の好適な酵素として定義される。本明細書に記載される本発明の目的において、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性は、25°Cにおいて、25mMリン酸カリウム中200μMNADPH及び10mMアセトンを含むアッセイにおいて、340nmにおける吸光度の減少により、分光光度的に測定することができる。イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性の一単位は、6220M1cm1のNADPHのモル吸光係数を用いて、1分間あたりに1マイクロモルのNADPを放出することができる酵素の量として定義することができる。イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号21、24、47、又は122の成熟ポリペプチドの少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のイソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有してもよい。アルデヒドデヒドロゲナーゼ:用語アルデヒドデヒドロゲナーゼは、アルデヒドの酸化を触媒する酵素EC1.2.1.3として本明細書で定義される。アルデヒドデヒドロゲナーゼは、可逆的であり、例えばプロピオニル-CoAのプロパナールへの化学反応を触媒することができる。本明細書に記載される本発明の目的において、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性は、NHosoietal1979JFermentTechnol57418427により記載される手順に従って決定されることができ、この内容は参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。例えば、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性は、100μmolプロピオンアルデヒド、3μmolNAD、0.3μmolCoA、30μmolGSH、100μgウシ血清アルブミン、120μmolベローナル-HClバッファpH8.6を含む3mLの溶液を用いて、30°Cにおいて、340nmにおける吸光度の増加により、NADの還元を観察することにより、分光光度的に測定することができる。アルデヒドデヒドロゲナーゼトランスフェラーゼ活性の一単位は、pH8.6、30°Cにおいて1分間あたりに1マイクロモルのプロピオニル-CoAを放出することができる酵素の量と等しい。アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドの少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有してもよい。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、同一条件下で、プロピオニル-CoA基質についての反応初速度v0の95、90、80、70、60、50、40、30、20、15、10、7.5、5、2.5、又は1未満であるアセチル-CoA基質についての反応初速度v0を有する。メチルマロニル-CoAムターゼ:用語メチルマロニル-CoAムターゼは、メチルマロニル-CoAのスクシニル-CoAへの可逆的異性化を触媒する酵素EC5.4.99.2として本明細書で定義される。態様によっては、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、メチルマロニル-CoAムターゼ活性のためにビタミンB12を要求する。本明細書に記載される本発明の目的において、メチルマロニル-CoAムターゼ活性は、THalleretal2000Biochemistry3946224629により記載される手順に従って決定することができ、この内容は参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。例えば、メチルマロニル-CoAムターゼ活性は、pH7.5において、スクシニル-CoA2~43μM、メチルマロニル-CoAムターゼ8nM、KCl30mM及び速度論的に過剰なメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼygfGTHalleretal2000、同上を含むTris-HClナトリウム50mMの500μL溶液中の37°Cにおけるスクシニル-CoAの減少を測定するためのHPLC分析により測定することができる。メチルマロニル-CoAムターゼ活性の一単位は、pH7.5、37°Cにおいて1分間あたりに1マイクロモルのスクシニル-CoAを消費することができる酵素の量と等しい。メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号93の成熟ポリペプチド配列;又は配列番号66の成熟ポリペプチド配列を有する第一のサブユニット、及び配列番号69の成熟ポリペプチド配列を有する第二のサブユニットを含むタンパク質複合体の少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のメチルマロニル-CoAムターゼ活性を有してもよい。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ:用語メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、メチルマロニル-CoAのプロピオニル-CoA及び二酸化炭素への化学反応を触媒する酵素例えば、EC4.1.1.41として本明細書で定義される。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、2R-メチルマロニル-CoA、2S-メチルマロニル-CoAのいずれか若しくは双方の変換を触媒することができる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、同一の条件下で、2S-メチルマロニル-CoAよりも2R-メチルマロニル-CoAに優れた特異性を有する。別の態様では、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、同一の条件下で、2R-メチルマロニル-CoAよりも2S-メチルマロニル-CoAに優れた特異性を有する。本明細書に記載される本発明の目的において、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性は、THalleretal2000、同上、により記載される手順に従って決定することができる。例えば、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性は、37°Cにおいて、オキサルアセテート、トランスカルボキシラーゼ、及びラクテートデヒドロゲナーゼの存在下で、NADHの酸化を観察することによりメチルマロニル-CoAのプロピオニル-CoAへの変換を測定するために、連続的な分光光度的分析により測定することができる。この例では、リン酸カリウムの1.2mL溶液16.7mMは、pH7.2において、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ0.6μM、メチルマロニル-CoA3~45μM、オキサルアセテート8.3mM、NADH0.33mM、トランスカルボキシラーゼ5mU、及びラクテートデヒドロゲナーゼ4mUを含む。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性の一単位は、pH7.2、37°Cにおいて1分間あたりに1マイクロモルのメチルマロニル-CoAを脱カルボキシル化することができる酵素の量と等しい。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103の成熟ポリペプチドの少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性を有してもよい。メチルマロニル-CoAエピメラーゼ:用語メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、メチルマロニル-CoAの化学的エピマー化例えば、R-メチルマロニル-CoAからS-メチルマロニル-CoAへ、そして/あるいはS-メチルマロニル-CoAからR-メチルマロニル-CoAへ;EC5.1.99.1を参照のことを触媒する酵素として本明細書で定義される。本明細書に記載される本発明の目的において、メチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性は、Dayemetal2002Biochemistry4151935201により記載される手順に従って決定することができ、この内容は参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75の成熟ポリペプチドの少なくとも20、例えば少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100のメチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性を有してもよい。n-プロパノールデヒドロゲナーゼ:用語n-プロパノールデヒドロゲナーゼは、プロパナールのn-プロパノールへの還元を触媒する任意のアルコールデヒドロゲナーゼEC1.1.1.1として本明細書で定義される。本明細書に記載される本発明の目的において、n-プロパノールデヒドロゲナーゼ活性は、CDrewkeandMCiriacy1988BiochemicaetBiophysicaActa9505460により記載される手順に従って決定することができ、この内容は参照によりその全体において本明細書に組み込まれる。例えば、n-プロパノールデヒドロゲナーゼ活性は、pH8.3において、NADH酸化のNAD還元の反応速度論に従って、分光光度的に測定することができる。n-プロパノールデヒドロゲナーゼ活性の一単位は、pH8.3、30°Cにおいて1分間あたりに1マイクロモルのプロパナールをn-プロパノールに変換することができる酵素の量と等しい。異種のポリヌクレオチド:用語異種のポリヌクレオチドは、宿主細胞由来ではないポリヌクレオチド;コーディング領域に構造的改変がされた自己のポリヌクレオチド;組み換えDNA技術、例えば異なる異種のプロモーターによりDNA操作の結果としてその発現が量的に改変された自己のポリヌクレオチド;又は宿主細胞への1又は複数のいくつかの過剰なコピーのポリヌクレオチドの導入によりその発現が量的に改変された自己のポリヌクレオチドとして本明細書で定義される。単離された/精製された:用語単離された又は精製されたとは、天然に結合している少なくとも一つの成分から除去されたポリペプチド又はポリヌクレオチドを意味する。例えば、ポリペプチドは、SDSPAGEにより測定して、少なくとも1純粋、例えば少なくとも5純粋、少なくとも10純粋、少なくとも20純粋、少なくとも40純粋、少なくとも60純粋、少なくとも80純粋、少なくとも90純粋、少なくとも93純粋、少なくとも95純粋、少なくとも97、少なくとも98純粋、又は少なくとも99純粋でもよく、そしてアガロース電気泳動により測定して、少なくとも1純粋、例えば少なくとも5純粋、少なくとも10純粋、少なくとも20純粋、少なくとも40純粋、少なくとも60純粋、少なくとも80純粋、少なくとも90純粋、少なくとも93純粋、少なくとも95純粋、少なくとも97、少なくとも98純粋、又は少なくとも99純粋でもよい。成熟ポリペプチド配列:用語成熟ポリペプチド配列とは、任意の翻訳後配列修飾例えばN末端プロセシング及び/又はC末端切断後の、参照されるポリペプチド配列の部分を意味する。成熟ポリペプチド配列は、例えばSignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016又はInterProScanプログラムTheEuropeanBioinformaticsInstituteに基づいて予測されてもよい。場合によっては、前記成熟ポリペプチド配列は、参照されるポリペプチド配列全体と同一でもよい。宿主細胞が、同一のポリヌクレオチドにより発現される2又はそれ以上の異なる成熟ポリペプチド配列即ち、異なるC末端及び/又はN末端アミノ酸を有するの混合物を生産し得ることは、当該技術分野において知られている。成熟ポリペプチドコーディング配列:用語成熟ポリペプチドコーディング配列とは、参照される成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。配列同一性:二つのアミノ酸配列間、又は二つのヌクレオチド配列間の関係性は、配列同一性なるパラメータにより記載される。本発明の目的において、二つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度は、EMBOSSパッケージ、及びS.セレビシエScerevisiaeチオラーゼNP015297HiseretaIJBioIChem2693138331389、C.パストゥリアヌムCpasteurianumチオラーゼ例えば、proteinIDABAI8857l、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiチオラーゼ例えば、proteinIDEAP599041又はEAP593311、クロストリジウムパーフリンジェンスClostridiumperfringensチオラーゼ例えば、proteinIDABG86544lABG83108l、クロストリジウムディフィシルClostridiumdiflicileチオラーゼ例えば、proteinIDCAJ679001又はZP012319751、サーモアナエロバクターサーモサッカロリチカムThermoanaerobacteriumthermosaccharolyticumチオラーゼ例えば、proteinIDCAB075001、サーモアナエロバクターテングコンジェンシスThermoanaerobactertengcongensisチオラーゼ例えば、ALM238251、カルボキシドテルムスヒドロゲノフォルマンスCarboxydothermushydrogenoformansチオラーゼ例えば、proteinIDABB13995l、デスルホトマクルムレデューセンスDesulfotomaculumreducensMI-lチオラーゼ例えば、proteinIDEAR451231、又はカンジダトロピカリスCandidatropicalisチオラーゼ例えば、proteinIDBAA027161又はBAA027151が挙げられる。前述の種について、本発明は、知られている種名にかかわらず、完全及び不完全な状態の双方、並びに分類学上の同等物、例えば、アナモルフを含むことは理解される。当業者は、適切な同等物の同一性を容易に認識する。これらの種の株は、公の多くの菌株保存機関、例えば、AmericanTypeCultureCollectionDeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHCentraalbureauVoorSchimmelculturesandAgriculturalResearchServicePatentCultureCollectionNorthernRegionalResearchCenterから容易に入手できる。前記チオラーゼはまた、上述のプローブを用いて、天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。自然の生息地から微生物及びDNAを単離するための技術は、当該技術分野において知られている。チオラーゼをコードするポリヌクレオチドは、別の微生物のゲノム若しくはcDNAライブラリー、又は混合されたDNAサンプルを同様にスクリーニングすることにより生成されてもよい。一度チオラーゼをコードするポリヌクレオチドが本明細書に記載されるような好適なプローブを用いて検出されると、前記配列は、当業者に知られている技術例えばJSambrookEFFritschandTManiatus1989MolecularCloningALaboratoryManual2deditionColdSpringHarborNewYorkを参照のことを用いることにより単離又はクローニングされてもよい。CoA-トランスフェラーゼ及びCoA-トランスフェラーゼをコードするポリヌクレオチド本発明では、CoA-トランスフェラーゼは、本発明の実施に好適である任意のCoA-トランスフェラーゼであり得る。態様によっては、前記CoA-トランスフェラーゼは、EC2.8.3.9のアセトアセチル-CoA:アセテート/ブチレートCoAトランスフェラーゼである。態様によっては、前記CoA-トランスフェラーゼは、EC3.1.2.11のアセトアセチル-CoAヒドラーゼである。態様によっては、前記CoA-トランスフェラーゼは、アセトアセチル-CoAとアセテートをアセトアセテートとアセチル-CoAに変換するアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼである。態様によっては、前記CoA-トランスフェラーゼは、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼである。一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、増加した量のアセトアセテートが生産される培養条件下で過剰発現するCoA-トランスフェラーゼである。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、CoA-トランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここでCoA-トランスフェラーゼ複合体をコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチドが第一のポリペプチドサブユニットをコードする第一の異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする第二のポリヌクレオチドを含む。一つの態様では、タンパク質複合体は、ヘテロマーのタンパク質複合体であって、第一のポリペプチドサブユニットと第二のポリペプチドサブユニットが、異なるアミノ酸配列を含む、タンパク質複合体である。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドは、単一の異種のポリヌクレオチドに含まれる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドは、別々の異種のポリヌクレオチドに含まれる。CoA-トランスフェラーゼ及び他のポリペプチドに関する核酸コンストラクトの拡張された議論は、本明細書に記載される。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、CoA-トランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号6、12、37、又は41の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号4、5、10、11、36、若しくは40の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号4、5、10、11、36、又は40の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号9、15、39、又は43の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号7、8、13、14、38、若しくは42の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号7、8、13、14、38、又は42の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、タンパク質複合体である。当業者に理解されるように、場合によっては、第一及び第二のポリペプチドサブユニットは、上記に記載の1超の選択肢a、b及びcの下に限定されてもよい。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号6の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号4若しくは5の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号4又は5の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号9の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号7若しくは8の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号7又は8の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、タンパク質複合体である。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号12の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号10若しくは11の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号10又は11の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号15の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号13若しくは14の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号13又は14の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、タンパク質複合体である。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号37の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号39の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、タンパク質複合体である。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号41の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号43の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、タンパク質複合体である。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号6、12、37、又は41の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号9、15、39、又は43の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号6、12、37、又は41と10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号9、15、39、又は43と10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号6の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号9の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号12の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号15の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号37の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号39の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号41の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号43の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号6、12、37、41のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなり;第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号9、15、39、43のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号6のアミノ酸配列を含み;第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号12のアミノ酸配列を含む。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号9のアミノ酸配列を含み;第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号15のアミノ酸配列を含む。本明細書に記載の配列番号9の態様によっては、配列番号9のアミノ酸1は、バリン又はメチオニンでもよい。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号37のアミノ酸配列を含み;第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号39のアミノ酸配列を含む。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号41のアミノ酸配列を含み;第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号43のアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号4、5、10、11、36、40の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号7、8、13、14、38、42の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、上記。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号4若しくは5の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号7若しくは8の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号10若しくは11の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号13若しくは14の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号4、5、10、11、36、又は40のサブ配列によりコードされ;そして/あるいは第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号7、8、13、14、38、又は42のサブ配列によりコードされ、ここで第一のポリペプチドサブユニットは、第二のポリペプチドサブユニットと一緒にCoA-トランスフェラーゼ活性例えば、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性又はアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体を形成する。配列番号4、5、7、8、10、11、13、14、36、38、40、若しくは42のポリヌクレオチド;又はこれらのサブ配列;及び配列番号6、9、12、15、37、39、41、43のコードされたアミノ酸配列;又はこれらのフラグメントを、上述のように、異なる属又は種の株からのポリペプチドサブユニットをコードするDNAを同定、及びクローニングするための核酸プローブを設計するために用いることができる。かかるプローブは、本発明に含まれる。かかる他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、上述のように、上述のプローブとハイブリダイズし、ポリペプチドサブユニットをコードするDNAについてスクリーニングされてもよい。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号4、5、7、8、10、11、13、14、36、38、40、又は42である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号6、9、12、15、37、39、41、43をコードするポリヌクレオチド配列、又はこれらのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、大腸菌DSM24122中のプラスミドpTRGU60に含まれる成熟ポリペプチドコーディング配列であって、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体のポリペプチドサブユニットをコードする、成熟ポリペプチドコーディングである。別の態様では、前記核酸プローブは、大腸菌DSM24123中のプラスミドpTRGU61に含まれる成熟ポリペプチドコーディング配列であって、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体のポリペプチドサブユニットをコードする、成熟ポリペプチドコーディング配列である。少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブについて、極めて低~極めて高ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。約15ヌクレオチド長~約70ヌクレオチドヌクレオチド長の短いプローブについて、ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号4、5、10、11、36、又は40の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされ;第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号7、8、13、14、38、又は42の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号4又は5の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号7又は8の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号10又は11の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号13又は14の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、大腸菌DSM24122中のプラスミドpTRGU60に含まれる成熟ポリペプチドコーディング配列によりコードされ;そして/あるいは第二のポリペプチドサブユニットは、大腸菌DSM24123中のプラスミドpTRGU61に含まれる成熟ポリペプチドコーディング配列によりコードされる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされ、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされ;第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、上述のように、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号6、12、37、41の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体であり;そして/あるいは第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号9、15、39、又は43の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号6、9、12、15、37、39、41、又は43の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。態様によっては、配列番号6、9、12、15、37、39、41、又は43の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10である。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号6、12、37、若しくは41のフラグメントであり、及び/又は第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号9、15、39、若しくは43のフラグメントであり、ここで第一及び第二のポリペプチドサブユニットは、CoA-トランスフェラーゼ活性例えば、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性又はアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体を一緒に形成する。CoA-トランスフェラーゼ及びこれらのポリペプチドサブユニットはまた、上述のように、融合ポリペプチド又は切断可能な融合ペプチドを含むことができる。CoA-トランスフェラーゼ、及びこれらのポリペプチドサブユニットをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。前記CoA-トランスフェラーゼ及びこれらのポリペプチドサブユニットは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のCoA-トランスフェラーゼでもよい。一つの態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、バチルス属スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ、例えば配列番号6の第一のポリペプチドサブユニット、及び配列番号9の第二のポリペプチドサブユニットを有するバチルスサブチリスBacillussubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ;又は配列番号12の第一のポリペプチドサブユニット、及び配列番号15の第二のポリペプチドサブユニットを有するバチルスモジャベンシスBacillusmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼである。別の態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ、例えば配列番号37の第一のポリペプチドサブユニット、及び配列番号37の第二のポリペプチドサブユニットを有する大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼである。別の態様では、前記CoA-トランスフェラーゼは、C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ、例えば配列番号41の第一のポリペプチドサブユニット、及び配列番号43の第二のポリペプチドサブユニットを有するC.アセトブチリカムアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼである。本発明の実施に用いることのできる他のスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼとしては、例えばヘリコパクターピロリHelicobacterpyloriスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼYP627417YP627418CorthesyTheulazetaIJBiolChem2722565925667、及びヒトHomosapiensスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼNP000427NP071403FukaoTetaIGenomics68144151TanakaHetaIMolHumReprod81623が挙げられる。CoAトランスフェラーゼ及びこれらのサブユニットはまた、上述のように天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物などの他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。アセトアセテートデカルボキシラーゼ及びアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードするポリヌクレオチド本発明では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、本発明の実施に好適である任意のアセトアセテートデカルボキシラーゼであり得る。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、増加した量のアセトンが生産される培養条件下で過剰発現するアセトアセテートデカルボキシラーゼである。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、a配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアセトアセテートデカルボキシラーゼ;b配列番号16、17、44、117、若しくは119の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼ;及びc配列番号16、17、44、117、又は119の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼから選択される。当業者に理解されるように、場合によっては、アセトアセテートデカルボキシラーゼは、上記に記載の1超の選択肢a、b及びcの下に限定されてもよい。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号18の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼが、配列番号18と10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号18のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号18の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、配列番号18の成熟ポリペプチドは、配列番号18のアミノ酸1~246を含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号45の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼが、配列番号45と10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号45のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号45の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、配列番号45の成熟ポリペプチドは、配列番号45のアミノ酸1~259を含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号118の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼが、配列番号118と10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号118のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号118の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号120の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼが、配列番号120と10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号120のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号120の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号16若しくは17の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、上記。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号16又は17のサブ配列によりコードされ、ここで前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有する。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号44の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号44のサブ配列によりコードされ、ここで前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有する。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号117の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号117のサブ配列によりコードされ、ここで前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有する。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号119の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号119のサブ配列によりコードされ、ここでアセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有する。配列番号16、17、44、117、若しくは119のポリヌクレオチド;又はこれらのサブ配列;及び配列番号18、45、118、若しくは120のアミノ酸配列;又はこれらのフラグメントを、上述のように、異なる属又は種の株からのアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードするDNAを同定、及びクローニングするための核酸プローブを設計するために用いることができる。かかるプローブは、本発明に含まれる。かかる他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、上述のように、上述のプローブとハイブリダイズし、アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードするDNAについてスクリーニングされてもよい。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号16、17、44、117、又は119である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号16である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号17である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号44である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号17である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号117である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号17である。一つの態様では、前記核酸プローブは配列番号、119である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号18をコードするポリヌクレオチド配列、又はこれのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号45をコードするポリヌクレオチド配列、又はこれのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号118をコードするポリヌクレオチド配列、又はこれのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号120をコードするポリヌクレオチド配列、又はこれのサブ配列である。少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブについて、極めて低~極めて高ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。約15ヌクレオチド長~約70ヌクレオチドヌクレオチド長の短いプローブについて、ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、配列番号16又は17の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、配列番号44の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、配列番号117の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードし、配列番号119の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、上述のように、配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号18又は45の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。別の態様では、配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10である。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、配列番号18、45、118、又は120のフラグメントであって、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性を有するフラグメントである。一つの態様では、前記フラグメント中のアミノ酸残基の数は、配列番号18、45、118、又は120中のアミノ酸残基の数の少なくとも75、例えば少なくとも80、85、90、又は95である。アセトアセテートデカルボキシラーゼはまた、上述のように、融合ポリペプチド又は切断可能な融合ペプチドを含むことができる。アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のアセトアセテートデカルボキシラーゼでもよい。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、クロストリジウム属アセトアセテートデカルボキシラーゼ、例えば配列番号18のクロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ、又は配列番号45のクロストリジウムアセトブチリクムClostridiumacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼである。別の態様では、前記アセトアセテートデカルボキシラーゼは、ラクトバチルス属アセトアセテートデカルボキシラーゼ、例えば配列番号118のラクトバチルスサリバリウスLactobacillussalvariusアセトアセテートデカルボキシラーゼ、又は配列番号120のラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumアセトアセテートデカルボキシラーゼである。本発明の実施に用いルことのできる他のアセトアセテートデカルボキシラーゼとしては、例えばクロストリジウムサッカロパーブチルアセトニカムClostridiumsaccharoperbutylacetonicumアセトアセテートデカルボキシラーゼAAP425661KosakaetaIBiosciBiotechnolBiochem715868が挙げられる。アセトアセテートデカルボキシラーゼはまた、上述のように天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。イソプロパノールデヒドロゲナーゼ及びイソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチド本発明では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、本発明の実施に好適である任意のイソプロパノールデヒドロゲナーゼあり得る。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、増加した量のイソプロパノールが生産される培養条件下で過剰発現するイソプロパノールデヒドロゲナーゼである。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、a配列番号21、24、47、又は122の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;b配列番号19、20、22、23、46、若しくは121の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号19、20、22、23、46、又は121の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼから選択される。当業者に理解されるように、場合によっては、イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、上記に記載の1超の選択肢a、b及びcの下に限定されてもよい。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号21の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号24の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号47の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号122の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号21、24、47、122のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号21の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、配列番号21の成熟ポリペプチドは、配列番号21のアミノ酸1~351である。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号24の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、配列番号24の成熟ポリペプチドは、配列番号21のアミノ酸1~352である。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号47の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、配列番号47の成熟ポリペプチドは、配列番号47のアミノ酸1~356である。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号122の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号19、20、22、23、46、若しくは121の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、上記。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号19、20、22、23、46、又は121のサブ配列によりコードされ、ここで前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号19若しくは20の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号19又は20のサブ配列によりコードされ、ここで前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号22若しくは23の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号22又は23のサブ配列によりコードされ、ここで前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号46の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号46のサブ配列によりコードされ、ここで前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号121の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号121のサブ配列によりコードされ、ここで前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する。配列番号19、20、22、23、46若しくは121のポリヌクレオチド;又はこれらのサブ配列;及び配列番号21、24、47若しくは122のアミノ酸配列;又はこれらのフラグメントを、上述のように、異なる属又は種の株からのイソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードするDNAを同定、及びクローニングするための核酸プローブを設計するために用いることができる。かかるプローブは、本発明に含まれる。かかる他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、上述のように、上述のプローブとハイブリダイズし、イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードするDNAについてスクリーニングされてもよい。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号19、20、22、23、46、又は121の成熟ポリペプチドコーディング配列である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号19又は20の成熟ポリペプチドコーディング配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号19又は20である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号22又は23の成熟ポリペプチドコーディング配列である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号22又は23の成熟ポリペプチドコーディング配列である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号46の成熟ポリペプチドコーディング配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号46である。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号121の成熟ポリペプチドコーディング配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号121である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号21、24、47、122をコードするポリヌクレオチド配列又はこのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号21をコードするポリヌクレオチド配列又はこのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号24をコードするポリヌクレオチド配列又はこのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号47をコードするポリヌクレオチド配列又はこのサブ配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号122をコードするポリヌクレオチド配列又はこのサブ配列である。少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブについて、極めて低~極めて高ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。約15ヌクレオチド長~約70ヌクレオチドヌクレオチド長の短いプローブについて、ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号19、20、22、23、46、又は121の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号19又は20の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号22又は23の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号46の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号121の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、上述のように、配列番号21、24、47、又は122の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号21の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号24の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号47の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号122の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号21、24、47又は122の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。態様によっては、配列番号21、24、47又は122の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10である。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、配列番号21、24、47、又は122のフラグメントであり、前記フラグメントは、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する。一つの態様では、前記フラグメント中のアミノ酸残基の数は、配列番号21、24、47、又は122中のアミノ酸残基の数の少なくとも75、例えば少なくとも80、85、90、又は95である。イソプロパノールデヒドロゲナーゼはまた、上述のように、融合ポリペプチド又は切断可能な融合ペプチドを含むことができる。イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のイソプロパノールデヒドロゲナーゼでもよい。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、クロストリジウム属イソプロパノールデヒドロゲナーゼ、例えば配列番号21のクロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiイソプロパノールデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、サーモアナエロバクター属イソプロパノールデヒドロゲナーゼ、例えば配列番号24のサーモアナエロバクターエタノリカスThermoanaerobacterethanolicusイソプロパノールデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼは、ラクトバチルス属イソプロパノールデヒドロゲナーゼ、例えば配列番号47のラクトバチルスアントリLactobacillusantriイソプロパノールデヒドロゲナーゼ、又は配列番号122のラクトバチルスファーメンタムLactobacillusfermentumイソプロパノールデヒドロゲナーゼである。本発明の実施に用いることのできる他のデヒドロゲナーゼとしては、例えばサーモアナエロバクターブロッキイThermoanaerobacterbrockiiデヒドロゲナーゼP149411HanaietalApplEnvironMicrobiol7378147818PeretzetaIAnaerobe3259270、ラルストニアユートロファRalstoniaeutrophaデヒドロゲナーゼ以前はアルカリゲネスユートロフスAlcaligeneseutrophus、バークホルデリア属Burkholderia種AIU652デヒドロゲナーゼ、及びフィトモナス属Phytomonas種デヒドロゲナーゼAAP398691UttaroandOpperdoesetalMolBiochemParasitol85213219が挙げられる。イソプロパノールデヒドロゲナーゼはまた、上述のように天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。アルデヒドデヒドロゲナーゼ及びアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチド本発明では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、本発明の実施に好適である任意のアルデヒドデヒドロゲナーゼであり得る。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、増加した量のプロパナールが生産される培養条件下で過剰発現するアルデヒドデヒドロゲナーゼである。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、a配列番号27、30、33、51、54、57、60又は63の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するアルデヒドデヒドロゲナーゼb配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼから選択される。当業者に理解されるように、場合によっては、アルデヒドデヒドロゲナーゼは、上記に記載の1超の選択肢a、b及びcの下に限定されてもよい。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号27の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号30の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号33の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号51の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号54の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号57の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号60の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号63の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号27、30、33、51、54、57、60、若しくは63のアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖例えばJSambrookEFFritschandTManiatus、上記を参照のことと、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号25若しくは26の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号28若しくは29の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号31若しくは32の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号48、49若しくは50の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号52若しくは53の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号55若しくは56の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号58若しくは59の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号61若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62のサブ配列によりコードされ;ここで、前記サブ配列は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする。配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、若しくは62のポリヌクレオチド;又はこれらのサブ配列;及び配列番号27、30、33、51、54、57、60、若しくは63のアミノ酸配列;又はこれらのフラグメントを、上述のように、異なる属又は種の株からのアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードするDNAを同定、及びクローニングするための核酸プローブを設計するために用いることができる。かかるプローブは、本発明に含まれる。かかる他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、上述のように、上述のプローブとハイブリダイズし、アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードするDNAについてスクリーニングされてもよい。少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブについて、極めて低~極めて高ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。約15ヌクレオチド長~約70ヌクレオチドヌクレオチド長の短いプローブについて、ストリンジェンシー及び洗浄条件は上述のように定義される。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号25又は26の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つ態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号28又は29の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つ態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号31又は32の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つ態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号48、49又は50の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つ態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号52又は53の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つ態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号55又は56の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つ態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号58又は59の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つ態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号61又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、上述のように、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。別の態様では、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10である。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63のフラグメントであって、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有するフラグメントである。一つの態様では、前記フラグメント中のアミノ酸残基の数は、配列番号27、30、33、51、54、57、60又は63中のアミノ酸残基の数の少なくとも75、例えば少なくとも80、85、90、又は95である。前記アルデヒドデヒドロゲナーゼはまた、上述のように、融合ポリペプチド又は切断可能な融合ペプチドを含むことができる。アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のアルデヒドデヒドロゲナーゼでもよい。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、細菌のアルデヒドデヒドロゲナーゼである。例えば、グラム陽性細菌のポリペプチド、例えばバチルス属Bacillus、ストレプトコッカス属Streptococcus、ストレプトマイセス属Streptomyces、スタフィロコッカス属Staphylococcus、エンテロコッカス属Enterococcus、ラクトバチルス属Lactobacillus、ラクトコッカス属Lactococcus、クロストリジウム属Clostridium、ゲオバチルス属Geobacillus、オセアノバチルス属Oceanobacillus若しくはプロピオニバクテリウム属Propionibacteriumのアルデヒドデヒドロゲナーゼ、又はグラム陰性細菌のポリペプチド、例えば大腸菌EcoliDawesetal1956BiochimBiophysActa22253、この内容は参照により本明細書に組み込まれる、シュードモナス属Pseudomonas、サルモネラ属Salmonella、カンピロバクター属Campylobacter、ヘリコバクター属Helicobacter、フラボバクテリウム属Flavobacterium、フソバクテリウム属Fusobacterium、イリオバクター属Ilyobacter、ナイセリア属Neisseria、若しくはウレアプラズマ属Ureaplasmaアルデヒドデヒドロゲナーゼでもよい。一つの態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、バチルス属アルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばバチルスアルカロフィラスBacillusalkalophilus、バチルスアミロリケファシエンスBacillusamyloliquefaciens、バチルスブレビスBacillusbrevis、バチルスサーキュランスBacilluscirculans、バチルスクラウジイBacillusclausii、バチルスコアギュランスBacilluscoagulans、バチルスファルマスBacillusfirmus、バチルスロータスBacilluslautus、バチルスレンタスBacilluslentus、バチルスリケニフォルミスBacilluslicheniformis、バチルスメガテリウムBacillusmegaterium、バチルスプミラスBacilluspumilus、バチルスステアロサーモフィラスBacillusstearothermophilus、バチルスサブチリスBacillussubtilis、又はバチルスチューリンゲンシスBacillusthuringiensisアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、ラクトバチルス属アルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばラクトバチルスコリノイデスLactobacilluscollinoidesアルデヒドデヒドロゲナーゼ例えば、配列番号30のラクトバチルスコリノイデスアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、プロピオニバクテリウム属アルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばプロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ例えば、配列番号27又は51のプロピオニバクテリウムフロイデンライシイアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、ロドシュードモナス属Rhodopseudomonasアルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばロドシュードモナスパルストリスRhodopseudomonaspalustrisアルデヒドデヒドロゲナーゼ例えば、配列番号54のロドシュードモナスパルストリスアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、ロドバクター属アルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばロドバクターカプスラータRhodobactercapsulatusアルデヒドデヒドロゲナーゼ例えば、配列番号57のロドバクターカプスラータアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、ロドスピリルム属Rhodospirillumアルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばロドスピリラムラブラムRhodospirillumrubrumアルデヒドデヒドロゲナーゼ例えば、配列番号60のロドスピリラムラブラムアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、ユウバクテリウム属Eubacteriumアルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばユウバクテリウムハリイEubacteriumhalliiアルデヒドデヒドロゲナーゼ例えば、配列番号63のユウバクテリウムハリイアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、ストレプトコッカス属アルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばストレプトコッカスエクイシミリスStreptococcusequisimilis、ストレプトコッカスピオゲネスStreptococcuspyogenes、ストレプトコッカスウベリスStreptococcusuberis、又はストレプトコッカスエクィStreptococcusequi亜種ズーエピデミカスZooepidemicusアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、ストレプトマイセス属アルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばストレプトマイセスアクロモゲネスStreptomycesachromogenes、ストレプトマイセスアベルミティリスStreptomycesavermitilis、ストレプトマイセスセリカラーStreptomycescoelicolor、ストレプトマイセスグリセウスStreptomycesgriseus、又はストレプトマイセスリビダンスStreptomyceslividansアルデヒドデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記アルデヒドデヒドロゲナーゼは、クロストリジウム属アルデヒドデヒドロゲナーゼ、例えばクロストリジウムベイジェリンキイClostridiumbeijerinckiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ例えば、配列番号33のクロストリジウムベイジェリンキイアルデヒドデヒドロゲナーゼ、又はクロストリジウムクルイベリClostridiumkluyveriアルデヒドデヒドロゲナーゼBurtonetal1953JBiolChem202873、この内容は、参照により本明細書に組み込まれるである。本発明の実施に用いることのできる他のアルデヒドデヒドロゲナーゼとしては、限定することなく、ロドコッカスオパカスRhodococcusopacusGenBankAccessionNoAP0111151、エントアメーバディスパーEntamoebadisparGenBankAccessionNoDS5482071、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriGenBankAccessionNoACHG010001871が挙げられる。前記アルデヒドデヒドロゲナーゼはまた、n-プロパノールデヒドロゲナーゼ活性を含み、前記酵素は、プロピオニル-CoAをプロパナールに変換し、さらにプロパナールをn-プロパノールに還元することができる。アルコールデヒドロゲナーゼ活性及びアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を有するかかる多機能酵素の例としては、限定することなく、ラクトバチルスサケイLactobacillussakeiGenBankAccessionNoCR9365031、ジアルジアインテスティナリスGiardiaintestinalisGenBankAccessionNoU933531、シュワネラアマゾネンシスShewanellaamazonensisGenBankAccessionNoCP0005071、サーモシネココッカスエロンガタスThermosynechococcuselongatusGenBankAccessionNoBA0000392、クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumGenBankAccessionNoAE0014383、及びクロストリジウムカルボキシディボランスClostridiumcarboxidivoransATCCNoBAA624TGenBankAccessionNoACVI010001011が挙げられる。アルデヒドデヒドロゲナーゼはまた、上述のように天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。メチルマロニル-CoAムターゼ及びメチルマロニル-CoAムターゼをコードするポリヌクレオチド組み換え宿主細胞、及びこれらの使用の方法の態様によっては、宿主細胞は、メチルマロニル-CoAムターゼ活性を有する。態様によっては、前記宿主細胞は、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチドを含む。前記メチルマロニル-CoAムターゼは、本発明の実施に好適な任意のメチルマロニル-CoAムターゼでもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、増加した量のR-メチルマロニル-CoAが生産される培養条件下で過剰発現されるメチルマロニル-CoAムターゼである。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、a配列番号93の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するメチルマロニル-CoAムターゼ;b配列番号79若しくは80の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAムターゼ;及びc配列番号79又は80の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAムターゼから選択される。当業者に理解されるように、場合によっては、メチルマロニル-CoAムターゼは、上記に記載の1超の選択肢a、b及びcの下に限定されてもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号93の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、又はからなる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼが、配列番号93の成熟ポリペプチドと10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号93の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又はメチルマロニル-CoAムターゼ活性を有する前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号93のアミノ酸配列を含む、あるいはからなる。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号93の成熟ポリペプチドを含む、あるいはからなる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号79若しくは80の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、同上。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号79又は80の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号79又は80、これらの成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号79若しくは80、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号79又は80の成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号79若しくは80のサブ配列、又はこれらの変性したコーディング配列によりコードされ、ここで前記サブ配列は、メチルマロニル-CoAムターゼ活性を有するポリペプチドをコードする。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、上述のように、配列番号93の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、上述のように、配列番号93の1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号93の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号93の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、配列番号93のフラグメントであって、メチルマロニル-CoAムターゼ活性を有するフラグメントである。一つの態様では、前記フラグメント中のアミノ酸残基の数は、配列番号93中のアミノ酸残基の数の少なくとも75、例えば少なくとも80、85、90、又は95である。本明細書に記載される組み換え宿主細胞及び方法の一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、メチルマロニル-CoAムターゼ活性を有するタンパク質複合体であり、メチルマロニル-CoAムターゼ複合体をコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチドは、第一のポリペプチドサブユニットをコードする第一の異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする第二の異種のポリヌクレオチドを含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニット及び第二のポリペプチドサブユニットは、異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドは、単一の異種のポリヌクレオチドに含まれる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドは、別々の異種のポリヌクレオチドに含まれる。メチルマロニル-CoAムターゼ及び他のポリペプチドに関する核酸コンストラクトの拡大された議論は、本明細書に記載される。メチルマロニル-CoAムターゼタンパク質複合体の一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号66の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号64若しくは65の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号64又は65の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され;そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号69の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号67若しくは68の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号67又は68の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号66の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み;第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号69の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号66の成熟ポリペプチドと10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号69の成熟ポリペプチドと10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号66のアミノ酸配列、配列番号66の成熟ポリペプチド、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなり;第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号69のアミノ酸配列、配列番号69の成熟ポリペプチド、これらの対立遺伝子変異体、又は前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69のアミノ酸配列を含む。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66の成熟ポリペプチドを含み、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69の成熟ポリペプチドを含む。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ;第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、同上を参照のこと。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66のサブ配列によりコードされ;及び/又は第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69のサブ配列によりコードされ;ここで第一のポリペプチドサブユニットが第二のポリペプチドサブユニットと一緒にメチルマロニル-CoAムターゼ活性を有するタンパク質複合体を形成する。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号66の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされ;第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号69の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66、これらの成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされ;第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69、これらの成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66の成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69の成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66のサブ配列によりコードされ;及び/又は第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69のサブ配列によりコードされ;ここで第一のポリペプチドサブユニットは第二のポリペプチドサブユニットと一緒にメチルマロニル-CoAムターゼ活性を有するタンパク質複合体を形成する。別の態様では、上述のように、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66又はこれらの成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体であり;そして/あるいは第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69又はこれらの成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号66若しくはこれらの成熟ポリペプチド配列のアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数;又は配列番号69若しくはこれらの成熟ポリペプチド配列のアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。別の態様では、第一のポリペプチドサブユニットは、配列番号66のフラグメントであり、そして/あるいは第二のポリペプチドサブユニットは、配列番号69のフラグメントであり、ここで前記第一及び第二のポリペプチドサブユニットは、メチルマロニル-CoAムターゼ活性を有するタンパク質複合体を一緒に形成する。一つの態様では、前記フラグメント中のアミノ酸残基の数は、配列番号66又は69中のアミノ酸残基の数の少なくとも75、例えば少なくとも80、85、90、又は95である。メチルマロニル-CoAムターゼ又はこれらのサブユニットはまた、メチルマロニル-CoAムターゼの対立遺伝子変異体、又は人工的な変異体でもよい。メチルマロニル-CoAムターゼ又はこれらのサブユニットはまた、上述のように、融合ポリペプチド又は切断可能な融合ペプチドを含むことができる。メチルマロニル-CoAムターゼ及びこれらのサブユニットをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。配列番号79、80、64、65、67、及び68のポリヌクレオチド配列;又はこれらのサブ配列;並びに配列番号93、66、及び69のアミノ酸配列;又はこれらのフラグメントを、上述のように、異なる属又は種の株からのメチルマロニル-CoAムターゼをコードするDNAを同定、及びクローニングするための核酸プローブを設計するために用いることができる。かかるプローブは、本発明に含まれる。かかる他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、上述のように、上述のプローブとハイブリダイズし、メチルマロニル-CoAムターゼをコードするDNAについてスクリーニングされてもよい。少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブについて、極めて低~極めて高ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。約15ヌクレオチド長~約70ヌクレオチドヌクレオチド長の短いプローブについて、ストリンジェンシー及び洗浄条件は上述のように定義される。前記メチルマロニル-CoAムターゼ及びこれらのサブユニットは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のメチルマロニル-CoAムターゼでもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、大腸菌メチルマロニル-CoAムターゼ、例えば配列番号93の大腸菌メチルマロニル-CoAムターゼである。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAムターゼは、プロピオニバクテリウム属メチルマロニル-CoAムターゼ、例えば配列番号66の第一のサブユニット及び配列番号69の第二のサブユニットを含むプロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiメチルマロニル-CoAムターゼタンパク質複合体である。本発明の実施に用いることのできる他のメチルマロニル-CoAムターゼとしては、限定することなく、ヒトメチルマロニル-CoAムターゼGenBankIDP220333PadovaniBiochemistry4593009306を参照のこと及びメチロバクテリウムエキストロクエンスMethylobacteriumextorquensメチルマロニル-CoAムターゼmcmAサブユニット、GenBankIDQ84FZ1、及びmcmBサブユニット、GenBankIDQ6TMA2;KorotkovaJBiolChem2791365213658を参照のこと、並びにシゲラフレクスネリShigellaflexnerisbmGenBankIDNP8383971、サルモネラエンテリカSalmonellaentericSARI04585GenBankIDABX243581及びエルシニアフレデリクセニイYersiniafrederikseniiYfreA_01000861GenBankIDZP008307761が挙げられる。メチルマロニル-CoAムターゼ、及びこれらのサブユニットはまた、上述のように天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。組み換え宿主細胞、及びこれらの使用の方法の態様によっては、宿主細胞は、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。かかるポリペプチドは、メチルマロニル-CoAムターゼの活性を増加させ、例えば、メチルマロニル-CoAムターゼ起源遺伝子に由来し、隣接する遺伝子から発現させてもよい。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、a配列番号72又は94の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号70、71、81、若しくは82の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号70、71、81、又は82の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号72の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、あるいはからなる。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号72の成熟ポリペプチドと10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号94の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、あるいはからなる。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号94の成熟ポリペプチドと10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号72又は94の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列、これらの対立遺伝子変異体、又はメチルマロニル-CoAムターゼ活性を有する前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号70若しくは71の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、上記。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号81若しくは82の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号70又は71の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号81又は82の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号70、71、81、82、これらの成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、上述のように、配列番号72又は94の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号72又は94の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数は、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。別の態様では、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドは、配列番号72又は94の成熟ポリペプチドのフラグメントである。本発明を実施するために用いることができる、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化する他のポリペプチドとしては、限定することなく、プロピオニバクテリウムアクネスPropionibacteriumacnesKPAI71202GenBankIDYP0553101及びメチロバクテリウムエキストロクエンスMethylobacteriumextorquensmeaBGenBankID2QM8BKorotkovaJBiolChem2791365213658を参照のことからのポリペプチドが挙げられる。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ及びメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードするポリヌクレオチド組み換え宿主細胞、及びこれらの使用の方法の態様によっては、宿主細胞は、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性を有する。態様によっては、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、本発明を実施するのに好適である任意のメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼでもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、増加した量のプロピオニル-CoAが生産される好適な条件下で過剰発現するメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼである。一つの態様では、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、a配列番号103の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ;b配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ;及びc配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼから選択される。当業者に理解されるように、場合によっては、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、上記に記載の1超の選択肢a、b及びcの下に限定されてもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、又はからなる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103の成熟ポリペプチドと10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103のアミノ酸配列、配列番号103の成熟ポリペプチド配列、これらの対立遺伝子変異体、又はメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性を有する前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103のアミノ酸配列を含む、あるいはからなる。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103の成熟ポリペプチドを含む、あるいはからなる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、同上。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも65、例えば少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号102、これらの成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号102、又はこれの変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号102のサブ配列、又はこれらの変性したコーディング配列によりコードされ、ここで前記サブ配列は、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、上述のように、配列番号103の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号103のアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数が、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、配列番号103のフラグメント、又はこれの成熟ポリペプチドコーディング配列であり、前記フラグメントは、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性を有する。一つの態様では、前記フラグメント中のアミノ酸残基の数は、配列番号103中のアミノ酸残基の数の少なくとも75、例えば少なくとも80、85、90、又は95である。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼはまた、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼの対立遺伝子変異体、又は人工的な変異体でもよい。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼはまた、上述のように、融合ポリペプチド又は切断可能な融合ペプチドを含むことができる。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。配列番号102のポリヌクレオチド配列、又はこれらのサブ配列;及び配列番号103のアミノ酸配列;又はこれらのフラグメントを、上述のように、異なる属又は種の株からのメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードするDNAを同定、及びクローニングするための核酸プローブを設計するために用いることができる。かかるプローブは、本発明に含まれる。かかる他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、上述のように、上述のプローブとハイブリダイズし、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードするDNAについてスクリーニングされてもよい。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号102、又はこれらの変性したコーディング配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの変性したコーディング配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号103、これらの成熟ポリペプチド配列又は前述のフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列である。少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブについて、極めて低~極めて高ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。約15ヌクレオチド長~約70ヌクレオチドヌクレオチド長の短いプローブについて、ストリンジェンシー及び洗浄条件は上述のように定義される。前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼでもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼは、大腸菌メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ、例えば配列番号103の大腸菌メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼである。本発明の実施に用いることのできる他のメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼとしては、限定することなく、プロピオニゲニウムモデスツムPropionigeniummodestummmdAサブユニット、GenBankIDCAA05137;mmdBサブユニット、GenBankIDCAA05140;mmdCサブユニット、GenBankIDCAA05139;mmdDサブユニット、GenBankIDCAA05138;BottetalEurJBiochem250590599を参照のこと、及びベイロネラパルブラVeillonellaparvulammdAサブユニット、GenBankIDCAA80872;mmdBサブユニット、GenBankIDCAA80876;mmdCサブユニット、GenBankIDCAA80873;mmdDサブユニット、GenBankIDCAA80875;mmdEサブユニット、GenBankIDCAA80874;HuderJBioiChem2682456424571を参照のことが挙げられる。メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼはまた、上述のように天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。メチルマロニル-CoAエピメラーゼ及びメチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードするポリヌクレオチド組み換え宿主細胞、及びこれらの使用の方法の態様によっては、宿主細胞は、メチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性を有する。態様によっては、メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む。メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、本発明を実施するのに好適である任意のメチルマロニル-CoAエピメラーゼでもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、増加した量のS-メチルマロニル-CoAが生産される好適な条件下で過剰発現するメチルマロニル-CoAエピメラーゼである。一つの態様では、メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、a配列番号75の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するメチルマロニル-CoAエピメラーゼ;b配列番号73若しくは74の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるエピメラーゼ;及びc配列番号73又は74の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAエピメラーゼから選択される。当業者に理解されるように、場合によっては、メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、上記に記載の1超の選択肢a、b及びcの下に限定されてもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、又はからなる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼが、配列番号75の成熟ポリペプチドと10アミノ酸以下、例えば5アミノ酸以下、4アミノ酸以下、3アミノ酸以下、2アミノ酸以下、又は1アミノ酸以下異なるアミノ酸配列を含む。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75のアミノ酸配列、配列番号75の成熟ポリペプチド配列、これらの対立遺伝子変異体、又はメチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性を有する前述のフラグメントを含む、あるいはからなる。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75のアミノ酸配列を含む、あるいはからなる。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75の成熟ポリペプチドを含む、あるいはからなる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号73若しくは74の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるJSambrookEFFritschandTManiatis1989、同上。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号73又は74の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号73若しくは74、これらの成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号73若しくは74、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号73若しくは74の成熟ポリペプチドコーディング配列、又は前述の変性したコーディング配列によりコードされる。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号73若しくは74のサブ配列、又はこれらの変性したコーディング配列によりコードされ、ここで前記サブ配列は、メチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、上述のように、配列番号75の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75の1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75の成熟ポリペプチドの1又は複数のいくつかのアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入を含む変異体である。態様によっては、配列番号75の成熟ポリペプチドのアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入の合計数が、10以下、例えば1、2、3、4、5、6、7、8又は9以下である。別の態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、配列番号75のフラグメントであって、メチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性を有するフラグメントである。一つの態様では、前記フラグメント中のアミノ酸残基の数は、配列番号75中のアミノ酸残基の数の少なくとも75、例えば少なくとも80、85、90、又は95である。メチルマロニル-CoAエピメラーゼはまた、メチルマロニル-CoAエピメラーゼの対立遺伝子変異体、又は人工的な変異体でもよい。メチルマロニル-CoAエピメラーゼはまた、上述のように、融合ポリペプチド又は切断可能な融合ペプチドを含むことができる。メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。配列番号75のポリヌクレオチド配列又はこれらのサブ配列;及び配列番号73若しくは74のアミノ酸配列又はこれらのフラグメントを、上述のように、異なる属又は種の株からのメチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードするDNAを同定、及びクローニングするための核酸プローブを設計するために用いることができる。かかるプローブは、本発明に含まれる。かかる他の生物から調製されたゲノムDNA又はcDNAライブラリーは、上述のように、上述のプローブとハイブリダイズし、メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードするDNAについてスクリーニングされてもよい。一つの態様では、前記核酸プローブは、配列番号73若しくは74、又はこれらの変性したコーディング配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号75の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの変性したコーディング配列である。別の態様では、前記核酸プローブは、配列番号75、これの成熟ポリペプチド配列、又は前述のフラグメントをコードするポリヌクレオチド配列である。少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブについて、極めて低~極めて高ストリンジェンシー条件及び洗浄条件は上述のように定義される。約15ヌクレオチド長~約70ヌクレオチドヌクレオチド長の短いプローブについて、ストリンジェンシー及び洗浄条件は上述のように定義される。前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のメチルマロニル-CoAエピメラーゼでもよい。一つの態様では、前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼは、プロピオニバクテリウム属メチルマロニル-CoAエピメラーゼ、例えばプロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiメチルマロニル-CoAエピメラーゼ、例えば配列番号75のプロピオニバクテリウムフロイデンライシイメチルマロニル-CoAエピメラーゼである。本発明の実施に用いることのできる他のメチルマロニル-CoAエピメラーゼとしては、限定することなく、バチルスサブチリスBacillussubtilisYqjCGenBankIDNP390273HallerBiochemistry3946224629を参照のこと、ヒトMCEEGenBankIDQ96PE71を参照のこと、ラッタスノルベギカスRattusnorvegicusMceeGenBankIDNP0010998111BobikBiolChem2763719437198を参照のこと、プロピオニバクテリウムシェルマニPropionibacteriumshermaniiAF454511GenBankIDAAL578461HallerBiochemistry3946229McCarthyStructure963746andFullerBiochemistry1213643650を参照のこと、及びバチルスセレウスBacilluscereusAE016877GenBankIDAAP088111が挙げられる。メチルマロニル-CoAエピメラーゼはまた、天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は上述のように天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。N-プロパノールデヒドロゲナーゼ及びN-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチド本発明では、前記n-プロパノールデヒドロゲナーゼは、本発明の実施に好適である任意のアルコールデヒドロゲナーゼであり得る。一つの態様では、前記n-プロパノールデヒドロゲナーゼは、増加した量のn-プロパノールが生産される培養条件下で過剰発現するn-プロパノールデヒドロゲナーゼである。n-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチドを単離又はクローニングするために用いられる技術は、上記に記載される。前記n-プロパノールデヒドロゲナーゼは、微生物の任意の属から得られてもよい。一つの態様では、前記n-プロパノールデヒドロゲナーゼは、本明細書に記載の任意の微生物から得られる細菌、酵母、又は真菌のn-プロパノールデヒドロゲナーゼでもよい。別の態様では、前記n-プロパノールデヒドロゲナーゼは、P.シェルマニPshermaniin-プロパノールデヒドロゲナーゼである。別の態様では、前記n-プロパノールデヒドロゲナーゼは、S.セレビシエScerevisiaen-プロパノールデヒドロゲナーゼである。n-プロパノールデヒドロゲナーゼはまた、上述のように天然例えば、土壌、堆肥、水等から単離される微生物を含む他の起源、又は天然素材例えば、土壌、堆肥、水等から直接得られるDNAサンプルから同定され、得られてもよい。核酸コンストラクト本発明は、制御配列と適合性のある条件下で、好適な宿主細胞において、コーディング配列の発現を支持する1又は複数のいくつかの制御配列と連結された、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、CoA-トランスフェラーゼ例えば本明細書に記載のスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド、アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド及び任意で、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチド、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む核酸コンストラクトに関する。かかる核酸コンストラクトは、本明細書に記載の任意の宿主細胞及び方法が用いられてもよい。本明細書に記載のポリヌクレオチドは、所望のポリペプチドの発現のために提供される様々な方法において操作されてもよい。ベクターへのこの挿入の前のポリヌクレオチドの操作は、発現ベクターに依存して望ましい、又は必須である。組み換えDNA法を用いるポリヌクレオチドを改変するための技術は、当該技術分野においてよく知られている。制御配列は、本明細書に記載される任意のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現のための宿主細胞により認識されるポリヌクレオチドである、プロモーター配列でもよい。前記プロモーター配列は、ポリペプチドの発現を仲介する転写制御配列を含む。前記プロモーターは、変異の、切断された、及びハイブリッドのプロモーターを含む選択の宿主細胞において転写活性を示す任意のポリヌクレオチドでもよく、そして前記宿主細胞と同種又は異種のいずれかの細胞外又は細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得られてもよい。本明細書に記載の各ポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。例えば、一つの態様では、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。別の態様では、アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。別の態様では、イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。別の態様では、アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。別の態様では、CoA-トランスフェラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。別の態様では、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。別の態様では、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。別の態様では、n-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドは、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。上述のように、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドによりコードされるタンパク質複合体例えば、CoA-トランスフェラーゼタンパク質複合体のために、各ポリヌクレオチドは、単一の異種のポリヌクレオチド例えば、単一のプラスミド、あるいは別々のポリヌクレオチド例えば、別々のプラスミド上に含まれてもよい。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドは、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドの双方とは異種のプロモーターに作動式に連結される単一の異種のポリヌクレオチドに含まれてもよい。一つの態様では、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドは、別々の異種のポリヌクレオチドに含まれ、ここれ第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドは異種のプロモーターと作動式に連結されてもよい。前述のプロモーターは、同一であっても異なってもよい。細菌宿主細胞における本発明の核酸コンストラクトの転写を指示するための好適なプロモーターの例としては、バチルスアミロリケファシエンスBacillusamyloliquefaciensアルファ-アミラーゼ遺伝子amyQ、バチルスリケニフォルミスBacilluslicheniformisアルファ-アミラーゼ遺伝子amyL、バチルスリケニフォルミスペニシリナーゼ遺伝子penP、バチルスステアロサーモフィラスBacillusstearothermophilusマルトース生成アミラーゼ遺伝子amyM、バチルスサブチリスBacillussubtilisレバンスクラーゼ遺伝子sacB、バチルスサブチリスxylA及びxylB遺伝子、大腸菌lacオペロン、大腸菌trcプロモーターEgonetal1988Gene69301315、ストレプトマイセスセリカラーStreptomycescoelicolorアガラーゼ遺伝子dagA、及び原核生物ベータ-ラクタマーゼ遺伝子VillaKamaroffetal1978ProcatlAcadSciUSA7537273731、及びtacプロモーターDeBoeretal1983ProcNatlAcadSciUSA802125から得られるプロモーターが挙げられる。糸状菌宿主細胞における本発明の核酸コンストラクトの転写を指示するための好適なプロモーターの例としては、アスペルギルスニデュランスAspergillusnidulansアセトアミダーゼ、アスぺルギルスニガーAspergillusniger中性アルファ-アミラーゼ、アスぺルギルスニガー酸安定性アルファ-アミラーゼ、アスぺルギルスニガー又はアスぺルギルスアワモリAspergillusawamoriグルコアミラーゼglaA、アスぺルギルスオリゼーAspergillusoryzaeTAKAアミラーゼ、アスぺルギルスオリゼーアルカリプロテアーゼ、アスぺルギルスオリゼートリオースリン酸イソメラーゼ、フザリウムオキシスポラムFusariumoxysporumトリプシン様プロテアーゼ国際公開第96/00787号、フザリウムヴェネナツムFusariumvenenatumアミログルコシダーゼ国際公開第00/56900号、フザリウムヴェネナツムDaria国際公開第00/56900号、フザリウムヴェネナツムQuinn国際公開第00/56900号、リゾムコールミエヘイRhizomucormieheiリパーゼ、リゾムコールミエヘイアスパラギン酸プロテイナーゼ、トリコデルマリーゼイTrichodermareeseiベータ-グルコシダーゼ、トリコデルマリーゼイセロビオヒドラーゼI、トリコデルマリーゼイセロビオヒドラーゼII、トリコデルマリーゼイエンドグルカナーゼI、トリコデルマリーゼイエンドグルカナーゼII、トリコデルマリーゼイエンドグルカナーゼIII、トリコデルマリーゼイエンドグルカナーゼIV、トリコデルマリーゼイエンドグルカナーゼV、トリコデルマリーゼイキシラナーゼI、トリコデルマリーゼイキシラナーゼII、トリコデルマリーゼイベータ-キシロシダーゼから得られるプロモーター、並びにNA2tpiプロモーター非限定的な例として、その非翻訳リーダーがアスペルギルス属中のトリオースリン酸イソメラーゼをコードする遺伝子からの非翻訳のリーダーにより置き換えられる、アスペルギルス属中の中性アルファ-アミラーゼをコードする遺伝子からの改変されたプロモーター;その非翻訳リーダーがアスペルギルスニデュランス又はアスペルギルスオリゼー中のトリオースリン酸イソメラーゼをコードする遺伝子からの非翻訳のリーダーにより置き換えられる、アスぺルギルスニガー中の中性アルファ-アミラーゼをコードする遺伝子からの改変されたプロモーターが挙げられる;及びこれらの変異導入され、切断された、ハイブリッドのプロモーターが挙げられる。酵母宿主では、有用なプロモーターは、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeエノラーゼENO-1、サッカロマイセスセレビシエガラクトキナーゼGAL1、サッカロマイセスセレビシエアルコールデヒドロゲナーゼ/グリセルアルデヒド-3-ホスフェートデヒドロゲナーゼADH1、ADH2/GAP、サッカロマイセスセレビシエトリオースリン酸イソメラーゼTPI、サッカロマイセスセレビシエメタロチオネインCUP1、及びサッカロマイセスセレビシエ3-ホスホグリセリン酸キナーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主のための他の有用なプロモーターは、Romanosetal1992Yeast8423488により記載される。前記制御配列はまた、転写を終結するために宿主細胞により認識される好適な転写ターミネーター配列でもよい。前記ターミネーター配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの3’末端に作動式に連結される。選択の宿主細胞において機能する任意のターミネーターは、本発明に用いられてもよい。糸状菌宿主細胞についての好ましいターミネーターは、アスペルギルスニデュランスAspergillusnidulansアントラニル酸シンターゼ、アスぺルギルスニガーAspergillusnigerグルコアミラーゼ、アスぺルギルスニガーアルファ-グルコシダーゼ、アスぺルギルスオリゼーAspergillusoryzaeTAKAアミラーゼ、及びフザリウムオキシスポラムFusariumoxysporumトリプシン様プロテアーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞についての好ましいターミネーターは、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeエノラーゼ、サッカロマイセスセレビシエシトクロムCCYC1、及びサッカロマイセスセレビシエグリセルアルデヒド-3-ホスフェートデヒドロゲナーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞についての他の有用なターミネーターは、Romanosetal1992、同上、により記載される。前記制御配列はまた、転写される場合、宿主細胞による翻訳に重要であるmRNAの非翻訳領域である、好適なリーダー配列でもよい。前記リーダー配列は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの5’末端に作動式に連結される。選択の宿主細胞において機能する任意のリーダー配列は、本発明に用いられてもよい。糸状菌宿主細胞についての好ましいリーダーは、アスぺルギルスオリゼーAspergillusoryzaeTAKAアミラーゼ及びアスペルギルスニデュランスAspergillusnidulansトリオースリン酸イソメラーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞についての好ましいリーダーは、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeエノラーゼENO-1、サッカロマイセスセレビシエ3-ホスホグリセリン酸キナーゼ、サッカロマイセスセレビシエアルファ因子、及びサッカロマイセスセレビシエアルコールデヒドロゲナーゼ/グリセルアルデヒド-3-ホスフェートデヒドロゲナーゼADH2/GAPについての遺伝子から得られる。前記制御配列はまた、ポリアデニル化配列;ポリヌクレオチドの3’末端に作動式に連結される配列でもよく、そして転写される場合、転写されたmRNAにポリアデノシン残基を付加するためのシグナルとして宿主細胞により認識される。選択の宿主細胞において機能する任意のポリアデニル化配列は、用いられてもよい。糸状菌宿主細胞についての好ましいポリアデニル化配列は、アスぺルギルスオリゼーAspergillusoryzaeTAKAアミラーゼ、アスぺルギルスニガーAspergillusnigerグルコアミラーゼ、アスペルギルスニデュランスAspergillusnidulansアントラニル酸シンターゼ、フザリウムオキシスポラムFusariumoxysporumトリプシン様プロテアーゼ、及びアスぺルギルスニガーアルファ-グルコシダーゼについての遺伝子から得られる。酵母宿主細胞についての有用なポリアデニル化配列は、GuoandSherman1995MolCellularBiol1559835990により記載される。前記制御配列はまた、ポリペプチドのN末端に連結されるシグナルペプチドをコードし、細胞の分泌経路にポリペチドを向かわせるするシグナルペプチドコーディング領域でもよい。ポリヌクレオチドのコーディング配列の5’末端は、ポリペプチドをコードするコーディング配列のセグメントを含む翻訳リーディングフレームと天然に連結しているシグナルペプチドコーディング配列を先天的に含んでもよい。あるいは、コーディング配列の5’末端は、前記コーディング配列と異なるシグナルペプチドコーディング配列を含んでもよい。異種のシグナルペプチドコーディング配列は、前記コーディング配列がシグナルペプチドコーディング配列を天然に含まない場合、要求されてもよい。あるいは、異種のシグナルペプチドコーディング配列は、ポリペプチドの分泌を増大させるために、天然のシグナルペプチドコーディング配列を単純に置き換えてもよい。しかしながら、選択の宿主細胞の分泌経路に発現したポリペプチドを向かわせる任意のシグナルペプチドコーディング配列が用いられてもよい。細菌宿主細胞についての有効的なシグナルペプチドコーディング配列は、バチルス属NCIB11837マルトース産生アミラーゼ、バチルスリケニフォルミスBacilluslicheniformisサブチリシン、バチルスリケニフォルミスベータ-ラクタマーゼ、バチルスステアロサーモフィラスBacillusstearothermophilusアルファ-アミラーゼ、バチルスステアロサーモフィラス中性プロテアーゼnprT、nprS、nprM、及びバチルスサブチリスBacillussubtilisprsAについての遺伝子から得られるシグナルペプチドコーディング配列である。更なるシグナルペプチドは、SimonenandPalva1993MicrobiologicalReviews57109137により記載される。糸状菌宿主細胞についての有効的なシグナルペプチドコーディング配列は、アスぺルギルスニガーAspergillusniger中性アミラーゼ、アスぺルギルスニガーグルコアミラーゼ、アスぺルギルスオリゼーAspergillusoryzaeTAKAアミラーゼ、フミコーラインソレンスHumicolainsolensセルラーゼ、フミコーラインソレンスエンドグルカナーゼV、フミコーララヌギノサHumicolalanuginosaリパーゼ、及びリゾムコールミエヘイRhizomucormieheiアスパラギン酸プロテイナーゼについての遺伝子から得られるシグナルペプチドコーディング配列である。酵母宿主細胞についての有用なシグナルペプチドは、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeアルファ因子、及びサッカロマイセスセレビシエインベルターゼについての遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコーディング配列は、Romanosetal1992、同上、に記載される。前記制御配列はまた、ポリペプチドのN末端に位置するプロペプチドをコードするプロペプチドコーディング配列でもよい。得られるポリペプチドは、プロ酵素又はプロポリペプチド又は場合によってはチモーゲンとして知られる。プロポリペプチドは、一般的に不活性であり、プロポリペプチドからプロペプチドの触媒的又は自己触媒的切断により活性ポリペプチドに変換され得る。前記プロペプチドコーディング配列は、バチルスサブチリスBacillussubtilisアルカリプロテアーゼaprE、バチルスサブチリス中性プロテアーゼnprT、ミセリオフトラサーモフィラMyceliophthorathermophilaラッカーゼ国際公開第95/33836号、リゾムコールミエヘイRhizomucormieheiアスパラギン酸プロテイナーゼ、及びサッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeアルファ因子についての遺伝子から得られてもよい。シグナルペプチド及びプロペプチド配列の双方が、ポリペプチドのN末端に存在する場合、前記プロペプチド配列は、ポリペプチドのN末端の隣に位置し、前記シグナルペプチド配列は、プロペプチド配列のN末端の隣に位置する。宿主細胞の増殖に関するポリペプチドの発現の制御を可能にする調節配列を付加することはまた、好ましい。調節系の例としては、調節化合物の存在などの化学的又は物理的刺激に対する応答をオンオフするための遺伝子の発現を引き起こすものが挙げられる。原核生物系における調節系としては、lac、tac、及びtrpオペレーター系が挙げられる。酵母では、ADH2系又はGAL1系が用いられてもよい。糸状菌では、アスぺルギルスニガーAspergillusnigerグルコアミラーゼプロモーター、アスぺルギルスオリゼーAspergillusoryzaeTAKAアルファ-アミラーゼプロモーター、及びアスぺルギルスオリゼーグルコアミラーゼプロモーターが用いられてもよい。調節配列の他の例としては、遺伝子増幅を可能にするものである。真核生物系において、これらの調節配列としては、メトトレキサートの存在下で増幅されるジヒドロホレートレダクターゼ遺伝子、及び重金属を用いて増幅するメタロチオネイン遺伝子が挙げられる。これらの場合、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、調節配列と作動式に連結される。発現ベクター本発明はまた、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、CoA-トランスフェラーゼ例えば本明細書に記載されるスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド、アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、及び/又はアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド及び任意で、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチドメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドメチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド並びにプロモーター;及び転写及び翻訳終止シグナルを含む組み換え発現ベクターに関する。かかる組み換え発現ベクターは、本明細書に記載される任意の宿主細胞及び方法を用いてもよい。様々なヌクレオチド及び制御配列は、組み換え発現ベクターを生産するためにともに結合され、これはかかる部位においてポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの挿入又は置換を可能にする1又は複数のいくつかのの便利な制限酵素認識部位を含んでもよい。あるいは、前記ポリヌクレオチドは、発現のために、前記配列を含むポリヌクレオチド又は核酸コンストラクトを適切なベクターに挿入することにより発現されてもよい。発現ベクターの製作においては、コーディング配列は、前記コーディング配列が発現のために適切な制御配列とともに作動式に連結されるように位置する。前記組み換え発現ベクターは、好都合に組み換えDNA手順に供することができ、ポリヌクレオチドの発現をもたらし得る任意のベクター例えば、プラスミド又はウイルスでもよい。ベクターの選択は、典型的に、ベクターとベクターが導入される宿主細胞との適合性に依存する。前記ベクターは、線形又は閉環状プラスミドでもよい。一つの態様では、本明細書に記載のチオラーゼ、CoA-トランスフェラーゼ、アセトアセテートデカルボキシラーゼ、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ、メチルマロニル-CoAムターゼ、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする各ポリヌクレオチドは、独立したベクター上に含まれる。一つの態様では、少なくとも二つのポリヌクレオチドは、単一のベクター上に含まれる。一つの態様では、チオラーゼ、CoA-トランスフェラーゼ、アセトアセテートデカルボキシラーゼ、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ、及びアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする全てのポリヌクレオチドは、単一のベクター上に含まれる。前記ベクターは、自立複製ベクター、即ち染色体外物質として存在し、その複製が、染色体の複製と独立しているベクター、例えばプラスミド、染色体外エレメント、ミニ染色体、又は人工染色体でもよい。前記ベクターは、自己複製を確実にするための任意の手段を含んでもよい。あるいは、前記ベクターは、宿主細胞に導入される場合、ゲノムに統合され、それが統合された染色体と一緒に複製されるものでもよい。さらに、宿主細胞のゲノムに導入される全DNAを一緒に含む、一つのベクター若しくはプラスミド、又は2若しくはそれ以上のベクター若しくはプラスミド、又はトランスポゾンは用いられてもよい。前記ベクターは、好ましくは、形質転換された、トランスフェクトされた、形質導入された細胞等の容易な選択を可能にする、1又は複数のいくつかの選択可能マーカーを含む。選択可能マーカーは、遺伝子産物が殺生物剤若しくはウイルス抵抗性、重金属に対する抵抗性、及び栄養要求体に対する原栄養性等を提供する遺伝子である。細菌の選択可能なマーカーの例としては、バチルスサブチリスBacillussubtilis若しくはバチルスリケニフォルミスBacilluslicheniformisからのdal遺伝子、又は抗生物質耐性、例えばアンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、又はテトラサイクリン耐性を与えるマーカーが挙げられる。酵母宿主細胞に好適なマーカーは、ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、及びURA3である。糸状菌宿主細胞において使用のための選択可能なマーカーとしては、限定することなく、amdSアセトアミダーゼ、argBオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ、barホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ、hphハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ、niaD硝酸レダクターゼ、pyrGオロチジン-5’-リン酸デカルボキシラーゼ、sC硫酸アデニルトランスフェラーゼ、及びtrpCアントラニル酸シンターゼ、並びにこれらの同等物が挙げられる。アスペルギルス属細胞において使用には、アスペルギルスニデュランスAspergillusnidulans又はアスぺルギルスオリゼーAspergillusoryzaeのamdS及びpyrG遺伝子、並びにストレプトマイセスハイグロスコピカスStreptomyceshygroscopicusのbar遺伝子が、好ましい。前記ベクターは、好ましくはベクターの宿主細胞のゲノムへの統合、又はゲノムから独立した細胞におけるベクターの自己複製を可能にするエレメントを含んでもよい。宿主細胞ゲノムへの統合のために、前記ベクターは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列、又は相同的又は非相同的組み換えによるゲノムへの統合のためのベクターの任意の他のエレメントに依存してもよい。あるいは、前記ベクターは、染色体における正確な位置において宿主細胞のゲノムへの相同的組み換えによる統合を指示するための更なるポリヌクレオチドを含んでもよい。正確な位置における統合の可能性を増加させるために、統合エレメントは、十分な数の核酸、例えば100~10,000塩基対、400~10,000塩基対、及び800~10,000塩基対を含むべきであり、これは、相同的組み替えの確率を増大させるための対応する標的配列と高い程度の配列同一性を有する。前記統合エレメントは、宿主細胞のゲノムにおける標的配列と相同の任意の配列でもよい。さらに、前記統合エレメントは、ポリヌクレオチドをコードしてもコードしなくてもよい。他方で、前記ベクターは、非相同的組み換えにより、宿主細胞のゲノムに統合されてもよい。自己複製のために、前記ベクターは、前記宿主細胞においてベクターが自発的に複製することを可能にする複製起点をさらに含んでもよい。前記複製起点は、細胞において機能する自己複製を仲介する任意のプラスミド複製開始点でもよい。用語複製起点又はプラスミド複製開始点とは、プラスミド又はベクターがインビボで複製することを可能にするポリヌクレオチドを意味する。細菌の複製起点の例としては、大腸菌における複製を可能にする、pBR322、pUC19、pACYC177、及びpACYC184、並びにバチルス属における複製を可能にするpUB110、pE194、pTA1060、及びpAMβ1であるプラスミドの複製起点である。酵母宿主細胞おいて使用のための複製起点の例としては、2ミクロン複製起点である、ARS1、ARS4、並びにARS1とCEN3の組み合わせ、及びARS4とCEN6の組み合わせである。糸状菌細胞に有用な複製起点の例としては、AMA1及びANS1Gemsetal1991Gene986167Cullenetal1987NucleicAcidsRes1591639175;国際公開第00/24883号である。AMA1遺伝子の単離及び前記遺伝子を含むプラスミド又はベクターの構築は、国際公開第00/24883号に記載される方法に従って達成される。本発明のポリヌクレオチドの1超のコピーは、ポリペプチドの生産を増加させるために宿主細胞に挿入されてもよい。ポリヌクレオチドのコピー数の増加は、少なくとも1つの更なるコピーが宿主細胞ゲノムに配列に統合されることにより、あるいは選択可能なマーカー遺伝子の増幅されたコピーを含む細胞、及びそれによりポリヌクレオチドの更なるコピーが適切な選択可能な薬剤の存在下において細胞を培養することにより選択され得る場合、ポリヌクレオチドを含む増幅可能で選択可能なマーカー遺伝子を含むことにより、得ることができる。本発明の組み換え発現ベクターを構築するための上述のエレメントをライゲートするために用いられる手順は、当業者によく知られている例えばSambrooketal1989、同上、を参照のこと。宿主細胞本明細書に記載されるように、本発明は、とりわけ、n-プロパノール、イソプロパノールの組み換え生産、又はn-プロパノール及びイソプロパノールの双方の共生産のためのポリペプチドの発現を指示する1又は複数のいくつかの制御配列と作動式に連結されてもよい、本明細書に記載の1又は複数のいくつかのポリヌクレオチドを含む組み換え宿主細胞に関する。本発明はまた、n-プロパノール、イソプロパノールの組み換え生産、又はn-プロパノール及びイソプロパノールの双方の共生産のためのかかる宿主細胞を用いる方法を含む。前記宿主細胞は、記載されるポリヌクレオチドのいずれか1つ又は複数の組み合わせを含んでもよい。例えば、n-プロパノール及びイソプロパノールの双方の共生産のために設計される宿主細胞例えば、ラクトバチルス属宿主細胞は、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼ例えばスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;イソプロパノールデヒドロゲナーゼアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及びアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含んでもよく、ここで前記細胞はn-プロパノール及びイソプロパノールの双方を生産するあるいは生産することができる。一つの典型的な態様では、n-プロパノール及びイソプロパノールの共生産のための前記組み換え宿主細胞例えば、ラクトバチルス属宿主細胞は、1配列番号3、35、114、又は116の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するチオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;2第一のポリペプチドサブユニット及び第二のポリペプチドサブユニットを含むCoA-トランスフェラーゼタンパク質複合体であって、第一のポリペプチドサブユニットが、配列番号6、12、37、又は41の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有し、第二のポリペプチドサブユニットが、配列番号9、15、39、又は43の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するタンパク質複合体をコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;3配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;4配列番号21、24、47、又は122の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するイソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び5配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドと少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含み、ここで前記組み換え宿主細胞は、n-プロパノール及びイソプロパノールを生産することができる。態様によっては、前記組み換え宿主細胞は、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチド、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドをさらに含む。1若しくは複数のいくつかのポリヌクレオチドを含むコンストラクト若しくはベクター又は複数のコンストラクト若しくはベクターは、前記コンストラクト又はベクターが、上述のように染色体組み込み体として、又は自己複製染色体外ベクターとして維持されるように、宿主細胞に導入される。用語宿主細胞は、複製の間に生じる変異のために親細胞と同一でない親細胞の任意の後代を含む。宿主細胞の選択は、ポリペプチドをコードする遺伝子、及びその起源に大きく依存する。後述する態様は、宿主細胞自体、及び宿主細胞を用いる方法に適用される。宿主細胞は、本発明のポリペプチドの組み換え生産を可能にする任意の細胞、例えば原核生物若しくは真核生物、及び/又はn-プロパノール、イソプロパノール、又はn-プロパノール及びイソプロパノールの双方の組み換え生産が可能である任意の細胞でもよい。原核生物宿主細胞は、任意のグラム陽性又はグラム陰性細菌でもよい。グラム陽性細菌としては、限定することなく、バチルス属Bacillus、クロストリジウム属Clostridium、エンテロコッカス属Enterococcus、ゲオバチルス属Geobacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、ラクトコッカス属Lactococcus、オセアノバチルス属Oceanobacillus、スタフィロコッカス属Staphylococcus、ストレプトコッカス属Streptococcus、及びストレプトマイセス属Streptomycesが挙げられる。グラム陰性細菌としては、限定することなく、カンピロバクター属Campylobacter、大腸菌Ecoli、フラボバクテリウム属Flavobacterium、フソバクテリウム属Fusobacterium、ヘリコバクター属Helicobacter、イリオバクター属Ilyobacter、ナイセリア属Neisseria、シュードモナス属Pseudomonas、サルモネラ属Salmonella、及びウレアプラズマ属Ureaplasmaが挙げられる。細菌宿主細胞としては、限定することなく、バチルスアルカロフィラスBacillusalkalophilusバチルスアミロリケファシエンスBacillusamyloliquefaciens、バチルスブレビスBacillusbrevis、バチルスサーキュランスBacilluscirculans、バチルスクラウジイBacillusclausii、バチルスコアギュランスBacilluscoagulans、バチルスファルマスBacillusfirmus、バチルスロータスBacilluslautus、バチルスレンタスBacilluslentus、バチルスリケニフォルミスBacilluslicheniformis、バチルスメガテリウムBacillusmegaterium、バチルスプミラスBacilluspumilus、バチルスステアロサーモフィラスBacillusstearothermophilus、バチルスサブチリスBacillussubtilis、及びバチルスチューリンゲンシスBacillusthuringiensis細胞などの任意のバチラス属細胞でもよい。細菌宿主細胞はまた、限定することなく、ストレプトコッカスエクイシミリスStreptococcusequisimilis、ストレプトコッカスピオゲネスStreptococcuspyogenes、ストレプトコッカスウベリスStreptococcusuberis、及びストレプトコッカスエクィStreptococcusequi亜種ズーエピデミカスZooepidemicus細胞などの任意のストレプトコッカス属細胞でもよい。細菌宿主細胞はまた、限定することなく、ストレプトマイセスアクロモゲネスStreptomycesachromogenes、ストレプトマイセスアベルミティリスStreptomycesavermitilis、ストレプトマイセスセリカラーStreptomycescoelicolor、ストレプトマイセスグリセウスStreptomycesgriseus、及びストレプトマイセスリビダンスStreptomyceslividans細胞などの任意のストレプトマイセス属細胞でもよい。細菌宿主細胞はまた、限定することなく、L.アセトトレランスLacetotolerans、L.アシジファリネLacidifarinae、L.アシジピシスLacidipiscis、L.アシドフィルスLacidophilus、L.アギリスLagilis、L.アルギダスLalgidus、L.アリメンタリウスLalimentarius、L.アミロリティカスLamylolyticus、L.アミロフィルスLamylophilus、L.アミロトロフィカスLamylotrophicus、L.アミロボラスLamylovorus、L.アニマリスLanimalis、L.アントリLantri、L.アポデミLapodemi、L.アクアティカスLaquaticus、L.アリゾネンシスLarizonensis、L.アビアリウスLaviarius、L.ババリクスLbavaricus、L.ビフェルメンタンスLbifermentans、L.ボバリウスLbobalius、L.ブレビスLbrevis、L.ブチネリLbuchneri、L.ブルガリクスLbulgaricus、L.カカオヌムLcacaonum、L.カメリエLcamelliae、L.カピラタスLcapillatus、L.カルミLcarni、L.カゼイLcasei、L.カテナホルミスLcatenaformis、L.セロビサスLcellobiosus、L.セティLceti、L.コレオホミニスLcoleohominis、L.コリノイデスLcollinoides、L.コムポスチLcomposti、L.コンカバスLconcavus、L.コンフューサスLconfusus、L.コリニホルミスLcoryniformis、L.クリスパタスLcrispatus、L.クルストラムLcrustorum、L.クルバタスLcurvatus、L.サイプリカセイLcypricasei、L.デルブリュッキイLdelbrueckii、L.デキストリニクスLdextrinicus、L.ディオリボランスLdiolivorans、L.ダイバージェンスLdivergens、L.ジュリアニスLdurianis、L.エクイLequi、L.エクイカーソリスLequicursoris、L.エクイジェネロシLequigenerosi、L.ファビファーメンタスLfabifermentans、L.ファルシミニスLfarciminis、L.ファラギニスLfarraginis、L.フェリントシェンシスLferintoshensis、L.フェルメンタムLfermentum、L.ホルニカリスLfornicalis、L.フルクチボランスLfructivorans、L.フルクトサスLfructosus、L.フルメンティLfrumenti、L.フクエンシスLfuchuensis、L.ガリナラムLgallinarum、L.ガッセリLgasseri、L.ガストリクスLgastricus、L.ガネンシスLghanensis、L.グラミニスLgraminis、L.ハロトレランスLhalotolerans、L.ハッメシLhammesii、L.ハムステリLhamsteri、L.ハルビネンシスLharbinensis、L.ハヤキテンシスLhayakitensis、L.ヘルヴェティクスLhelveticus、L.ヘテロヒオキイLheterohiochii、L.ヒルガルディLhilgardii、L.ホモヒオキイLhomohiochii、L.ホルデイLhordei、L.イネルスLiners、L.イングルビエイLingluviei、L.インテスティナリスLintestinalis、L.ジェンセニLjensenii、L.ジョンソニLjohnsonii、L.カリキセンシスLkalixensis、L.カンドレリLkandleri、L.ケフィラノファシエンスLkefiranofaciens、L.ケフィールグラナムLkefirgranum、L.ケフィリLkefiri、L.キムチLkimchii、L.キソネンシスLkisonensis、L.キタサトニスLkitasatonis、L.クンケイLkunkeei、L.ラクティスLlactis、L.ライヒマニLleichmannii、L.リンドネリLlindneri、L.マレフェルメンタンスLmalefermentans、L.マリLmali、L.マルタロミカスLmaltaromicus、L.マニホチボランスLmanihotivorans、L.ミンデンシスLmindensis、L.マイナーLminor、L.ミヌタスLminutus、L.ムコサエLmucosae、L.ムリナスLmurinus、L.ナゲリLnagelii、L.ナムレンシスLnamurensis、L.ナンテンシスLnantensis、L.ノデンシスLnodensis、L.オエニLoeni、L.オリゴフェルメンタンスLoligofermentans、L.オリスLoris、L.オタキエンシスLotakiensis、L.パニスLpanis、L.パンテリスLpantheris、L.パラブレビスLparabrevis、L.パラブクネリLparabuchneri、L.パラカゼイLparacasei、L.パラコリノイデスLparacollinoides、L.パラファラギニスLparafarraginis、L.パラケフィリLparakefiri、L.パラリメンタリウスLparalimentarius、L.パラプランタラムLparaplantarum、L.ペントサスLpentosus、L.ペロレンスLperolens、L.ピシコーラLpiscicola、L.プランタラムLplantarum、L.ポブジヒイLpobuzihii、L.ポンティスLpontis、L.シタッシLpsittaci、L.ラピLrapi、L.レニニLrennini、L.ロイテリLreuteri、L.ラムノサスLrhamnosus、L.リメLrimae、L.ロゴサエLrogosae、L.ロッシエLrossiae、L.ルミニスLruminis、L.セリムネリLsaerimneri、L.サケイLsakei、L.サリバリウスLsalivarius、L.サンフランシセンシスLsanfranciscensis、L.サツメンシスLsatsumensis、L.セカリフィラスLsecaliphilus、L.センマイズケイLsenmaizukei、L.シャーペアエLsharpeae、L.シリギニスLsiliginis、L.シミリスLsimilis、L.ソブリウスLsobrius、L.スピチェリーLspicheri、L.スシコーラLsucicola、L.スエビカスLsuebicus、L.サンキイLsunkii、L.サントリウスLsuntoryeus、L.タイワンシスLtaiwanensis、L.タイランデンシスLthailandensis、L.サーモトレランスLthermotolerans、L.トリコデスLtrichodes、L.ツセチLtucceti、L.ウリLuli、L.ウルツネンシスLultunensis、L.ウバルムLuvarum、L.ワクシノステルカスLvaccinostercus、L.ヴァギナリスLvaginalis、L.ベルスモルデンシスLversmoldensis、L.ヴィリデセンスLviridescens、L.ヴィツリナスLvitulinus、L.キシロサスLxylosus、L.ヤマナシエンシスLyamanashiensis、L.ゼアエLzeae、及びL.ジマエLzymaeなどの任意のラクトバチルス属細胞でもよい。一つの態様では、細菌宿主細胞は、L.プランタラム、L.フルクチボランス、又はL.ロイテリである。一つの態様では、前記宿主細胞は、エシェリキア属例えば、大腸菌、ラクトバチルス属例えば、ラクトバチルスプランタラムLactobacillusplantarum、ラクトバチルスフルクチボランスLactobacillusfructivorans、又はラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri、及びプロピオニバクテリウム属例えば、プロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiから選択される属のメンバーである。一つの好ましい態様のでは、前記宿主細胞は、ラクトバチルス属宿主細胞である。バチラス属細胞へのDNAの導入は、例えば、プロトプラスト形質転換により例えばChangandCohen1979MolGenGenet168111115を参照のこと、コンピテント細胞を用いることにより例えばYoungandSpizizen1961JBacteriol81823829、又はDubnauandDavidoffAbelson1971JMolBiol56209221を参照のこと、エレクトロポレーションにより例えばShigekawaandDower1988Biotechniques6742751を参照のこと、あるいはコンジュゲーションにより例えばKoehlerandThorne1987JBacteriol16952715278を参照のこと行なわれてもよい。大腸菌細胞へのDNAの導入は、例えば、プロトプラスト形質転換により例えばHanahan1983JMolBiol166557580を参照のこと、あるいはエレクトロポレーションにより例えばDoweretal1988NucleicAcidsRes1661276145を参照のこと行なわれてもよい。ストレプトマイセス属細胞へのDNAの導入は、例えば、プロトプラスト形質転換及びエレクトロポレーションにより例えばGongetal2004FoliaMicrobiol49399405を参照のこと、コンジュゲーションにより例えばMazodieretal1989JBacteriol17135833585を参照のこと、あるいは形質導入により例えばBurkeetal2001ProcNatlAcadSciUSA9862896294を参照のこと行なわれてもよい。シュードモナス属細胞へのDNAの導入は、例えば、エレクトロポレーションにより例えばChoietal2006JMicrobiolMethods64391397を参照のこと、あるいはコンジュゲーションにより例えばPinedoandSmets2005ApplEnvironMicrobiol715157を参照のこと行なわれてもよい。ストレプトコッカス属細胞へのDNAの導入は、天然の能力competenceにより例えばPerryandKuramitsu1981InfectImmun3212951297を参照のこと、プロトプラスト形質転換により例えばCattandJollick1991Microbios68189207を参照のこと、エレクトロポレーションにより例えばBuckleyetal1999ApplEnvironMicrobiol6538003804を参照のこと、あるいはコンジュゲーションにより例えばClewell1981MicrobiolRev45409436を参照のこと行なわれてもよい。また一方で、宿主細胞へのDNAを導入するための当該技術分野において知られている方法を用いることができる。宿主細胞はまた、真核生物、例えば、哺乳動物、昆虫、植物、又は真菌細胞でもよい。前記宿主細胞は真菌細胞でもよい。本明細書で用いられる真菌としては、子嚢菌門Ascomycota、担子菌門Basidiomycota、ツボカビ門Chytridiomycota、及び接合菌門ZygomycotaHawksworthetalInAinsworthandBisby’sDictionaryofTheFungi8thedition1995CABInternationalUniversityPressCambridgeUKにより定義される及び卵菌門OomycotaHawksworthetal1995同上page171に引用される並びに全ての栄養胞子形成菌Hawksworthetal1995、同上が挙げられる。真菌宿主細胞は酵母細胞でもよい。本明細書で用いられる酵母としては、有子嚢胞子酵母エンドミセス目Endomycetales、担子胞子酵母、及び不完全真菌に属する酵母不完全酵母菌類Blastomycetesが挙げられる。酵母の分類は、本発明の目的において、将来変更されてもよいので、酵母は、BiologyandActivitiesofYeastの記載に従って定義されるべきである。酵母宿主細胞は、カンジダ属Candida、ハンゼヌラ属Hansenula、クリベロマイセス属Kluyveromyces、ピキア属Pichia、サッカロマイセス属Saccharomyces、シゾサッカロマイセス属Schizosaccharomyces、又はヤロウイア属Yarrowia細胞、例えばクリベロマイセスラクティスKluyveromyceslactis、サッカロマイセスカールスベルゲンシスSaccharomycescarlsbergensis、サッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、サッカロマイセスディアスタティカスSaccharomycesdiastaticus、サッカロマイセスドウグラシSaccharomycesdouglasii、サッカロマイセスクリヴェリSaccharomyceskluyveri、サッカロマイセスノルベンシスSaccharomycesnorbensis、又はサッカロマイセスオビフォルミスSaccharomycesoviformis、又はヤロウイアリポリティカYarrowialipolytica細胞でもよい。真菌宿主細胞は、糸状菌細胞でもよい。糸状菌としては、真菌類Eumycotaの亜門及び卵菌門Oomycotaの全ての糸状形態が挙げられるHawksworthetal1995、同上、により定義される。糸状菌は、一般的に、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナン、及び他の複合多糖からなる菌糸壁により特性決定される。栄養増殖は菌糸伸長により、炭素異化は偏性好気性である。対照的に、酵母、例えばサッカロマイセスセレビシエSaccharomycescerevisiaeによる栄養増殖は、単細胞性葉状体の出芽により、炭素異化は発酵性でもよい。前記糸状菌宿主細胞はまた、アクレモニウム属Acremonium、アスペルギルス属Aspergillus、アウレオバシジウム属Aureobasidium、ブジェルカンデラ属Bjerkandera、セリポリオプシス属Ceriporiopsis、クリソスポリウム属Chrysosporium、コプリナス属Coprinus、コリオラス属Coriolus、クリプトコッカス属Cryptococcus、フィリバシジウム属Filibasidium、フザリウム属Fusarium、フミコラ属Humicola、マグナポルテ属Magnaporthe、ムコール属Mucor、ミセリオフトラ属Myceliophthora、ネオカリマスティクス属Neocallimastix、ニューロスポラ属Neurospora、ペシロマイセス属、ペニシリウム属Penicillium、ファネロカエーテ属Phanerochaete、フレビア属Phlebia、ピロマイセス属Piromyces、プレオロータス属Pleurotus、シゾフィラム属Schizophyllum、タラロマイセス属Talaromyces、サーモアスカス属Thermoascus、チエラビア属Thielavia、トリポクラジウム属Tolypocladium、トラメテス属Trametes、又はトリコデルマ属Trichoderma細胞でもよい。例えば、前記糸状菌宿主細胞は、アスペルギルスアクレアツスAspergillusaculeatus、アスぺルギルスアワモリAspergillusawamori、アスペルギルスフォエティダスAspergillusfoetidus、アスペルギルスフミガーツスAspergillusfumigatus、アスペルギルスジャポニクスAspergillusjaponicus、アスペルギルスニデュランスAspergillusnidulans、アスぺルギルスニガーAspergillusniger、アスペルギルスオリゼーAspergillusoryzae、ブジェルカンデラアズスタBjerkanderaadusta、セリポリオプシスアネイリナCeriporiopsisaneirina、セリポリオプシスカレジエアCeriporiopsiscaregiea、セリポリオプシスギルベッセンスCeriporiopsisgilvescens、セリポリオプシスパノシンタCeriporiopsispannocinta、セリポリオプシスリブロサCeriporiopsisrivulosa、セリポリオプシスサブルファCeriporiopsissubrufa、またはセリポリオプシスサブベルミスポラCeriporiopsissubvermispora、クリソスポリウムイノプスChrysosporiuminops、クリソスポリウムケラチノフィラムChrysosporiumkeratinophilum、クリソスポリウムラクノウェンスChrysosporiumlucknowense、クリソスポリウムメルダリウムChrysosporiummerdarium、クリソスポリウムパニコラChrysosporiumpannicola、クリソスポリウムクイーンスランジカムChrysosporiumqueenslandicum、クリソスポリウムトロピクムChrysosporiumtropicum、クリソスポリウムゾナツムChrysosporiumzonatum、コプリヌスシネレウスCoprinuscinereus、コリオルスハースタスCoriolushirsutus、フザリウムバクトリディオデスFusariumbactridioides、フザリウムセレアリスFusariumcerealis、フザリウムクロックウェルエンスFusariumcrookwellense、フザリウムクルモラムFusariumculmorum、フザリウムグラミネアラムFusariumgraminearum、フザリウムグラミヌムFusariumgraminum、フザリウムヘテロスポルムFusariumheterosporum、フザリウムネグンディFusariumnegundi、フザリウムオキシスポラムFusariumoxysporum、フザリウムレティクラツムFusariumreticulatum、フザリウムロゼウムFusariumroseum、フザリウムサンブシヌムFusariumsambucinum、フザリウムサルコチロウムFusariumsarcochroum、フザリウムスポロトリキオイデスFusariumsporotrichioides、フザリウムスルプレウムFusariumsulphureum、フザリウムトルローサムFusariumtorulosum、フザリウムトリコテシオイデスFusariumtrichothecioides、フザリウムヴェネナツムFusariumvenenatum、フミコーラインソレンスHumicolainsolens、フミコーララヌギノサHumicolalanuginosa、ムコールミエヘイMucormiehei、ミセリオフトラサーモフィラMyceliophthorathermophila、ノイロスポラクラッサNeurosporacrassa、ペニシリウムプルプロゲヌムPenicilliumpurpurogenum、ファネロケテクリソスポリウムPhanerochaetechrysosporium、フレビアラジアータPhlebiaradiata、プレウロツスエリンギPleurotuseryngii、チエラビアテレストリスThielaviaterrestris、トラメテスビロサTrametesvillosa、トラメテスベルシカラーTrametesversicolor、トリコデルマハルジアナムTrichodermaharzianum、トリコデルマコニンギTrichodermakoningii、トリコデルマロンギプラチアタムTrichodermalongibrachiatum、トリコデルマリーセイTrichodermareesei、又はトリコデルマビリデTrichodermaviride細胞でもよい。一つの態様では、前記宿主細胞はアスペルギルス属宿主細胞である。別の態様では、前記宿主細胞は、アスペルギルスオリゼーである。真菌細胞は、本質的に知られている方法において、プロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、及び細胞壁の再生を含むプロセスにより形質転換されてもよい。アスペルギルス属及びトリコデルマ属宿主細胞の形質転換のための好適な手順は、欧州特許第238023号、及びYeltonetal1984ProcNatlAcadSciUSA8114701474に記載される。フザリウム属種を形質転換するための好適な方法は、Malardieretal1989Gene78147156、及び国際公開第96/00787号により記載される。酵母は、BeckerandGuarenteInAbelsonJNandSimonMIeditorsGuidetoYeastGeneticsandMolecularBiologyMethodsinEnzymologyVolume194pp182187AcademicPressIncNewYorkItoetal1983JBacteriol153163andHinnenetal1978ProcNatlAcadSciUSA751920に記載される手順を用いて形質転換されてもよい。態様によっては、前記宿主細胞は、本明細書に記載の1又は複数のいくつかのポリヌクレオチドを含み、ここで前記宿主細胞は、同一の条件下で培養した場合、1又は複数のいくつかのポリヌクレオチドを含まない宿主細胞と比較して、増加したレベルのイソプロパノール及び/又はn-プロパノールを分泌するそして/あるいは分泌することができる。態様によっては、前記宿主細胞は、同一の条件下で培養した場合、1又は複数のいくつかのポリヌクレオチドを含まない宿主細胞と比較して、少なくとも25、例えば少なくとも50、少なくとも100、少なくとも150、少なくとも200、少なくとも300、又は500増加したレベルのイソプロパノール及び/又はn-プロパノールを分泌する、そして/あるいは分泌することができる。任意のこれらの態様では、前記宿主細胞は、理論的値の少なくとも10超、例えば少なくとも20超、少なくとも30超、少なくとも40超、少なくとも50超、少なくとも60超、少なくとも70超、少なくとも80超、又は少なくとも90超の収率において、n-プロパノール及び/又はイソプロパノールを生産するそして/あるいは生産することができる。任意のこれらの態様では、前記組み換え宿主は、1時間あたり約0.1g/L超、例えば1時間あたり約0.2g/L超、1時間あたり約0.5g/L超、1時間あたり約0.75g/L超、1時間あたり約1.0g/L超、1時間あたり約1.25g/L超、1時間あたり約1.5g/L超、1時間あたり約1.75g/L超、1時間あたり約2.0g/L超、1時間あたり約2.25g/L超、1時間あたり約2.5g/L超、又は1時間あたり約3g/L超のn-プロパノール及び/又はイソプロパノール容積生産性又は合わされたn-プロパノール及びイソプロパノール容積生産性を有する。組み換え宿主細胞は、本技術分野において知られている方法を用いて、本明細書に記載される酵素の生産に好適な栄養培地中で培養されてもよい。例えば、前記細胞は、所望のポリペプチドの発現及び/又は単離を可能にする好適な培地及び条件下で行なわれる実験室用又は工業用発酵槽において、振盪フラスコ発酵、又は小スケール若しくは大スケールの発酵連続的、バッチ、フェド-バッチ、又は固相状態発酵を含むより培養されてもよい。培養は、当該技術分野において知られている手順を用いて、炭素及び窒素源、並びに無機塩を含む好適な栄養培地中で行なわれる。好適な培地は供給者により市販されており、公開されている組成物例えばtheAmericanTypeCultureCollectionのカタログに従って調製されてもよく、市販の成分から調製されてもよい。ここで、酵素及びこれらの活性は、当該技術分野において知られている方法、及び/又は上述の方法を用いて検出することができる。これらの検出方法は、特定の抗体の使用、酵素産物の生成、酵素基質の消失を含んでもよい。例えば、SambrooketaIMolecularCloningALaboratoryManualThirdEdColdSpringHarborLaboratoryNewYorkAusubeletaICurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileyandSonsBaltimoreMDandHanaietalApplEnvironMicrobiol7378147818を参照のこと。方法本発明はまた、n-プロパノール、イソプロパノールの生産、又はn-プロパノール及びイソプロパノールの共生産のための本明細書に記載の組み換え宿主細胞を用いる方法に関する。一つの態様では、本発明は、n-プロパノールを生産する方法であって、an-プロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で本明細書に記載の組み換え宿主細胞例えば、メチルマロニル-CoAムターゼ活性、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性、メチルマロニル-CoAエピメラーゼ活性、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する任意の宿主細胞のいずれか一つを培養し;そしてbn-プロパノールを回収することを含む方法を含む。一つの態様では、前記組み換え宿主細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性を含む。一つの態様では、本発明は、n-プロパノールを生産する方法であって、n-プロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で本明細書に記載の組み換え宿主細胞であって、アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含むそして任意でメチルマロニル-CoAムターゼをコードする1又は複数の異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む前記宿主細胞のいずれか一つを培養し;そしてbn-プロパノールを回収すること、を含む方法を含む。一つの態様では、前記培地は発酵培地である。一つの態様では、本発明は、例えばグルコース、スクシネート、スクシニル-CoA、又はプロピオニル-CoAから、本明細書に記載のn-プロパノールを生産する方法を含む。一つの態様では、本発明は、例えばグルコース、スクシネート、スクシニル-CoA、又はプロピオニル-CoAから、本明細書に記載の組み換え宿主細胞によりプロパナールを生産する方法を含む。一つの態様では、本発明は、イソプロパノールを生産する方法であって、aイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で本明細書に記載の組み換え宿主細胞例えば、チオラーゼ活性、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性、及びイソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する任意の宿主細胞のいずれか一つを培養し;そしてbn-プロパノールを回収すること、を含む方法を含む。一つの態様では、本発明は、イソプロパノールを生産する方法であって、aイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で本明細書に記載の組み換え宿主細胞であって、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はイソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;を含む前記宿主細胞のいずれか一つを培養し、;そしてbイソプロパノールを回収することを含む方法を含む。一つの態様では、前記培地は発酵培地である。別の態様では、前記培地はサトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む発酵培地である。一つの態様では、本発明は、n-プロパノール及びイソプロパノールを共生産する方法であって、an-プロパノール及びイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で本明細書に記載の組み換え宿主細胞チオラーゼ活性、CoA-トランスフェラーゼ活性、アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性、イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性、メチルマロニル-CoAムターゼを活性、メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ活性、アルデヒドデヒドロゲナーゼ活性、及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼ活性を有する任意の宿主細胞のいずれか一つを培養し、;そしてbn-プロパノール及びイソプロパノールを回収することを含む方法を含む。一つの態様では、本発明はn-プロパノール及びイソプロパノールを共生産する方法であって、an-プロパノール及びイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で本明細書に記載の組み換え宿主細胞であって、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoAトランスフェラーゼ例えばスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はメチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む前記宿主細胞のいずれか一つを培養し、;そしてbn-プロパノール及びイソプロパノールを回収すること、を含む方法を含む。一つの態様では、前記培地は発酵培地である。別の態様では、前記培地はサトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む発酵培地である。本発明は、任意の1又は複数のいくつかの糖、例えばグルコース、フルクトース、スクロース、セロビオース、キシロース、キシルロース、アラビノース、マンノース、ガラクトース、及び/又は可溶性オリゴ糖を含む発酵培地中で行なわれてもよい。場合によっては、前記発酵培地は、天然資源、例えばサトウキビ、でんぷん、又はセルロース由来であり、酵素的加水分解糖化による資源の前処理の結果でもよい。一つの態様では、前記培地はサトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む発酵培地である。1又は複数のいくつかの糖からの適切な炭素源に加えて、発酵培地は、当業者に知られている他の栄養素又は刺激物、例えば主要栄養素例えば、窒素源及び微量栄養素例えば、ビタミン、無機塩、及び金属補因子を含んでもよい。態様によっては、前記炭素源は、優先的に少なくとも一つの窒素源、例えば酵母抽出物、N2、又はペプトン例えば、Bacto商標ペプトンで供給され得る。ビタミンの非限定的な例としては、マルチビタミン、ビオチン、パントテネート、ニコチン酸、メソイノシトール、チアミン、ピリドキシン、パラ-アミノ安息香酸、葉酸、リボフラビン並びにビタミンA、B、C、D及びEが挙げられる。無機塩及び金属補酵素の例としては、限定することなく、Na、P、K、Mg、S、Ca、Fe、Zn、Mn、及びCuが挙げられる。生産の方法に用いられる好適な条件は、本明細書の技術を考慮して当業者により決定されてもよい。本方法の態様によっては、宿主細胞は、約12~約216時間、例えば約24~約144時間、約36~約96時間培養してもよい。温度は、典型的には、約pH3~約pH8、例えば約pH4~5、6又は7において、約26°C~約60°C、特に約34°C又は50°Cである。培養は、必要に応じて、嫌気的条件下、実質的に嫌気的微好気的条件下、又は好気的条件下で行なわれてもよい。手短に言えば、嫌気的とは、酸素のない環境を意味し、嫌気的微好気的とは、空気より酸素濃度が低い環境を意味し、好気的とは、酸素濃度が空気の酸素濃度と等しい、又はそれ以上である環境を意味する。実質的に嫌気的な条件としては、例えば、培地中の溶存酸素濃度が飽和の10未満を維持するような培養であるバッチ発酵又は連続発酵が挙げられる。実質的に嫌気的な条件としてはまた、酸素1未満の大気で維持された密閉チャンバー内の液体培地中、又は固体寒天上の増殖細胞若しくは静止細胞が挙げられる。酸素のパーセントは、N2/CO2混合物又は他の非酸素ガスを培養に注入することにより維持することができる。実施形態によっては、培養は、嫌気条件下又は実質的に嫌気条件下で行なわれる。本発明の方法は、任意の好適な発酵オペレーションモードを用いることができる。例えば、発酵の初めに設定された培地及び宿主微生物に、特定の薬剤、例えばpH制御、泡制御、又はプロセスの維持に要求されるものを除くさらなる投入がない、閉鎖系のバッチモード発酵を用いてもよい。本発明に記載されるプロセスはまた、フェド-バッチ、又は連続モードにおいて用いることができる。本発明の方法は、いくつかのバイオリアクター構成、例えば撹拌タンク、気泡塔、エアリフトリアクター、及び他の当業者に知られているものにおいて行なわれてもよい。前記方法は、必要に応じて遊離細胞培養、又は固定化細胞培養において行ってもよい。固定化細胞のための任意の材料支持体に、例えばアルギネート、繊維床、又はアーガイル材料、例えばクリソタイル、モンモリロナイトKSF、及びモンモリロナイトK-10を用いてもよい。本発明の一つの態様では、生産物例えば、n-プロパノール及び/又はイソプロパノールは、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超の力価において生産される。本発明の一つの態様では、生産物例えば、n-プロパノールは、糖質1gあたり約0.01g超、例えば糖質1gあたり約0.02、0.05、0.75、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、又は1.0g超の力価において生産される。本発明の一つの態様では、生産物例えば、イソプロパノール及び/又はn-プロパノールの量は、同一の条件下で異種のポリヌクレオチドを含まない宿主細胞を培養することと比べて、少なくとも5、例えば少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも50、少なくとも75、又は少なくとも100超である。組み換えn-プロパノール及びイソプロパノールは、任意で、これに限定することなく、クロマトグラフィー例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動手順、異なる可溶性、浸透性、蒸留、抽出例えば、液体-液体抽出、浸透気化、抽出的濾過、膜濾過、膜分離、逆濾過、又は限外濾過などの当該技術分野において知られている任意の手順を用いて発酵培地から回収することができる。一つの例では、イソプロパノールは、従来方法の蒸留により、他の発酵材料から分離され、精製される。従って、一つの態様では、前記方法は、回収したn-プロパノール及びイソプロパノールを蒸留により精製することをさらに含む。組み換えn-プロパノール及びイソプロパノールはまた、不純物混入物質をイソプロパノールからより容易に除去される生産物への化学的変換により、上述の手順例えば、クロマトグラフィー、電気泳動手順、異なる可溶性、蒸留、又は抽出により、そして/あるいは1又は複数のいくつかの不純物のn-プロパノール又はイソプロパノールへの直接的な化学的変換により、精製されてもよい。例えば、一つの態様では、本方法は、アセトン混入物をイソプロパノールに変換することにより、回収されたイソプロパノールを精製することをさらに含む、あるいはプロパナール混入物をn-プロパノールに変換することにより、回収されたn-プロパノールを精製することをさらに含む。アセトンからイソプロパノールへの、あるいはプロパナールからn-プロパノールへの変換は、当該技術分野において知られている任意の好適な還元剤例えば、水素化アルミニウムリチウムLiAlH4、ナトリウム種例えばナトリウムアマルガム、又は水素化ホウ素ナトリウムNaBH4、スズ種例えば塩化スズII、ヒドラジン、亜鉛-水銀アマルガムZnHg、水素化ジイソブチルアルミニウムDIBAH、シュウ酸C2H2O4、ギ酸HCOOH、アスコルビン酸、鉄種例えば硫酸鉄II等を用いて達成されてもよい。本発明の態様によっては、任意で精製される前及び/又は後の組み換えn-プロパノール及びイソプロパノールは、実質的に純粋である。イソプロパノールを生産する方法に関して、実質的に純粋とは、15以下の不純物を含むn-プロパノール及びイソプロパノールの回収された調製物を意味するここで、不純物とは、プロパノール以外の化合物を意味するが、他のプロパノール異性体を含まない。一つのバリエーションでは、実質的に純粋なイソプロパノールの調製物であって、25以下の不純物、又は20以下の不純物、又は10以下の不純物、又は5以下の不純物、又は3以下の不純物、又は1以下の不純物、又は0.5以下の不純物を含む、調製物を提供する。本明細書に記載の方法のいずれかにより生産されるN-プロパノール及びイソプロパノールは、プロピレンに変換されてもよい。プロピレンを、当該技術分野において知られている酸触媒、例えば酸性アルミナ及びゼオライト、酸性有機スルホン酸レジン、鉱酸、例えばリン酸、硫酸、並びにルイス酸、例えば三フッ化ホウ素、及びアルミニウム化合物MarchJerryAdvancedOrganicChemistryNewYorkJohnWileyandSons1992を用いたn-プロパノール及び/又はイソプロパノールの化学的脱水により生産することができる。n-プロパノール及び/又はイソプロパノールのプロピレンへの脱水のための好適な温度は、典型的には、約180°C~約600°C、例えば300°C~約500°C、又は350°C~約450°Cに及ぶ。n-プロパノール及び/又はイソ-プロパノールの脱水反応は、典型的に、断熱又は等温リアクターで行なわれ、これはまた、固定若しくは流動床リアクターであり;約0.1~約60秒、例えば約1~約30秒の範囲の滞留時間を用いて最適化することができる。変換されていないアルコールを、脱水リアクターで再利用することができる。一つの態様では、本発明は、プロピレンを生産する方法であって、an-プロパノール及び/又はイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で本明細書に記載の組み換え宿主細胞を培養し;bn-プロパノール及びイソプロパノールを回収し;cプロピレンを生産するための好適な条件下で、n-プロパノールとイソプロパノールを脱水し;dプロピレンを回収することを含む方法を含む。一つの態様では、前記培地は発酵培地である。別の態様では、前記培地はサトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む.発酵培地である。一つの態様では、n-プロパノール及びイソプロパノールを脱水する前に生産されるn-プロパノール及び/又はイソプロパノールの量又はn-プロパノール及びイソプロパノールの合計量は、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である。一つの態様では、プロピレンを生産するために好適な条件下でn-プロパノール及びイソプロパノールを脱水することは、当該技術分野において知られているように、n-プロパノール及びイソプロパノールを酸触媒と接触させること、又は処理することを含む。脱水の間に生成され得る混入物質は、当該技術分野において知られている技術を用いた精製を通して除去されてもよい。例えば、プロピレンを、二酸化炭素などの酸性化合物を除去するために水又は苛性溶液で洗浄することができ、水などの極性化合物を吸収するために、あるいは例えば一酸化炭素の除去のために、床に注入されてもよい。あるいは、高級炭化水素、例えばプロパン、ブタン、ブチレン、及びより高級の化合物を分離するために、蒸留塔を用いることができる。エチレンなどの混入物質からのプロピレンの分離は、当該技術分野において知られている方法、例えば低温蒸留により、行なわれてもよい。本明細書に記載の生産の方法及び宿主細胞についての、n-プロパノール、イソプロパノール、及びプロピレンの生産について試験するための好適なアッセイを、当該技術分野において知られている方法を用いて行なうことができる。例えば、最終生産物のn-プロパノール及びイソプロパノール、中間体例えば、アセトン、並びに有機化合物を、例えばHPLC高速液体クロマトグラフィー、GC-MSガスクロマトグラフィー-質量分析、及びLC-MS液体クロマトグラフィー-質量分析、又は当該技術分野においてよく知られている日常的な手順を用いる他の好適な分析方法などの方法により、分析することができる。発酵培地中のn-プロパノール及びイソプロパノールの放出を、培養上清を用いて試験することもできる。発酵培地中の副産物及び残存糖例えば、グルコースを、例えばグルコース及びアルコールについて屈折率検出器、並びに有機酸についてUV検出器LinetalBiotechnolBioeng90775779を用いて、あるいは当該技術分野においてよく知られている他の好適なアッセイ及び検出方法を用いて、HPLCにより定量することができる。n-プロパノールから生産されるプロピレンは、当該技術分野において知られている重合プロセスにより、ポリプロピレン又はポリプロピレンコポリマーに更に変換されてもよい。好適な温度は、典型的に、バルク重合について約105°C~約300°C、又は懸濁液中の重合について約50°C~約100°Cに及ぶ。あるいは、ポリプロピレンは、約60°C~約80°Cの温度範囲で、重合触媒、例えばチーグラーナッタ、又はメタロセン触媒の存在下で気相リアクターにおいて生産されることができる。本発明は、本発明の範囲を限定するものとして構成されるべきではない以下の実施例によりさらに記述される。実施例バッファ及び基質として用いられる化学薬品は、少なくとも試薬グレードの化学薬品であった。培地LBプレートは、37gLB寒天SigmacatnoL3027及び1Lまでの再蒸留水からなった。LBPGSプレートは、37gLB寒天SigmacatnoL3027、0.5でんぷんMerckcatno101252、0.01MK2PO4、0.4グルコース、及び1Lまでの再蒸留水からなった。TYブイヨン培地は、20gトリプトンDifcocatno211699、5g酵母抽出物Difcocatno212750、7103g塩化鉄ferrochloride、1103g塩化マンガンII、1.5103g硫酸マグネシウム、及び1Lまでの再蒸留水からなった。最小培地MMは、20gグルコース、1.1gKH2PO4、8.9gK2HPO4;1.0gNH42SO4;0.5gクエン酸Na;5.0gMgSO47H2O;4.8mgMnSO4H2O;2mgチアミン;0.4mg/Lビオチン;0.135gFeCl36H2O;10mgZnCl24H2O;10mgCaCl26H2O;10mgNa2MoO42H2O;9.5mgCuSO45H2O;2.5mgH3BO3;及び1Lまでの再蒸留水からなり、HClでpH7に調製された。MRS培地は、以下の組成Difco商標ラクトバチルスMRS寒天:プロテオースペプトンNo.310.0g、牛肉抽出物10.0g、酵母抽出物5.0g、デキストロース20.0g、ポリソルベート801.0g、クエン酸アンモニウム2.0g、酢酸ナトリウム5.0g、硫酸マグネシウム0.1g、硫酸マンガン0.05g、リン酸二カリウム2.0g、寒天15.0g及び1Lまでの水。Difco商標ラクトバチルスMRS培地:寒天を含まない同一の成分からなる。を有するDifco商標ラクトバチルスMRS寒天又はDifco商標ラクトバチルスMRS培地のいずれかであるDifco商標から得られた。LCラクトバチルス属運搬培地は、トリプチケース10g、トリプトース3g、酵母抽出物5g、KH2PO43g、Tween801ml、酢酸ナトリウム1g、クエン酸アンモニウム1.5g、システイン-HCl0.2g、MgSO47H2O12mg、FeSO47H2O0.68mg、MnSO42H2O25mg、及び1Lまでの再蒸留水からなり、HClでpH7に調製された。滅菌グルコースは、15mlの20グルコースストック溶液/100ml培地までオートクレーブ後に添加された。宿主株ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumSJ10656O4ZY1:プラスミドpVS2vonWrightATynkkynenSSuominenMCloningofaStreptococcuslactissubspLactischromosomalfragmentassociatedwiththeabilitytogrowinmilkAppliedandEnvironmentalMicrobiology5315841588を含むラクトバチルスプランタルム株NC8AukrustTandBlomHTransformationofLactobacillusstrainsusedinmeatandvegetablefermentationsFoodResearchInternational25253261を、5μg/mlエリスロマイシンを含むMRS寒天プレート上で受け取り、SJ10491として凍結させた。SJ10491を、実質的に、RuizBarbaetalRuizBarbaJLPlardJCJimenezDiazRPlasmidprofilesandcuringofplasmidsinLactobacillusplantarumstrainsisolatedfromgreenolivefermentationsJournalofAppliedBacteriology71417421より記載されるように、0.125μg/mlにおいてノボビオシンを含むMRS培地中で増殖させた培養物から単一コロニーにプレーティングすることにより、pVS2について保存された。エリスロマイシン感受性コロニーを同定し、pVS2の不存在をプラスミド調製及びプラスミド特異的プライマーを用いたPCR増幅により確認し、プラスミド-フリー誘導体をSJ10511として凍結した。SJ10511をMRS培地に植菌し、振盪することなく37°Cで1日増殖させ、MRS寒天プレート上に播種し、単一コロニーを得た。37°Cで一晩培養後、単一のコロニーをMRS寒天プレート上で再単離し、単一コロニーを得た。37°Cで二日間培養後、単一のコロニーをMRS寒天プレート上で再び再単離し、37°Cで三日間インキュベートし、プレート上での細胞増殖をこすり落とし、SJ10656別名:O4ZY1として収集保存株に保存した。ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriSJ10655O4ZXV:ラクトバチルスロイテリDSM20016として記載される株を、公の株保存施設から得て、NN016599としてNovozymesの収集保存株に保存した。この株をMRS培地中で二次培養し、一定量をSJ10468として凍結した。SJ10468をMRS培地に植菌し、振盪することなく37°Cで一日増殖させ、MRS寒天プレートに播種し、単一のコロニーを得た。37°Cで二日間の培養後、単一のコロニーをMRS寒天プレート上で再単離し、37°Cで三日間インキュベートし、プレート上での細胞増殖をこすり落とし、SJ10655別名:O4ZXVとして収集保存株に保存した。同一の細胞増殖を10mlMRS培地に植菌するために用い、これを振盪することなく37°Cで3日間インキュベートし、その後、細胞を遠心分離により回収し、ゲノムDNAをQIAGEN製のQIAampDNA血液キットを用いて調製し、ゲノム配列決定のために送った。ゲノム配列は、単離されたSJ1655O4ZXVが、密接に関連する株であるDSM20016よりも、JCM1112と実質的に同一のゲノムを有することを明らかにした。JCM1112及びDSM20016は、同一の起源の単離体L.ロイテリLreuteriF275MoritaHTohHFukudaSHorikawaHOshimaKSuzukiTMurakamiMHisamatsuSKatoYTakizawaTFukuokaHYoshimuraTItohKO’SullivanDJMcKayLOhnoHKikuchiJMasaokaTHattoriMComparativegenomeanalysisofLactobacillusreuteriandLactobacillusfermentumrevealagenomicislandforreuterinandcobalaminproductionDNAresearch15151161に由来する。ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriSJ11044:L.ロイテリLreuteriSJ11044は、以下の手順によりSJ10655O4ZXVから得られた。SJ10655をアルコール-デヒドロゲナーゼ発現コンストラクトを含むpVS2に基づくプラスミドである、pSJ10769下記に記載されるを用いて形質転換し、SJ11016下記に記載されるを得た。SJ11016を0.25μg/mlノボビオシンを含むMRS培地中で増殖させ、プラスミドについて株を保存し、MRS寒天プレート上にプレートし、エリスロマイシン感受性コロニーをレプリカ平板法により同定した。一つのかかる株をSJ11044として保存した。株SJ11044を元の株SJ10655とともにエレクトロポレーションのために調製し、試験プラスミドとしてpSJ10600下記に記載されるを用いたエレクトロポレーション頻度において差がないことが観察された。かかる操作がされたSJ11044エレクトロコンピテント細胞を、SJ10655の同一の代わりとしてその後、特定の実験に用いた。バチルスサブチリスBacillussubtilisDN1885は、DiderichsenBWedstedUHedegaardLJensenBRSjoholmCCloningofaldBwhichencodesalphaacetolactatedecarboxylaseanexoenzymefromBacillusbrevisJournalofBacteriology17243154321に記載されている。バチルスサブチリスBacillussubtilisJA1343は、PL1801の胞子形成陰性誘導体である。遺伝子SpoIIACの部分は、胞子形成陰性表現型を得るために欠失している。大腸菌Escherichiacoli:SJ2:DiderichsenBWedstedUHedegaardLJensenBRSjoholmCCloningofaldBwhichencodesalphaacetolactatedecarboxylaseanexoenzymefromBacillusbrevisJournalofBacteriology17243154321。MG1655:BlattnerFRPlunkettG3rdBlochCAPernaNTBurlandVRileyMColladoVidesJGlasnerJDRodeCKMayhewGFGregorJDavisNWKirkpatrickHAGoedenMARoseDJMauBShaoYThecompletegenomesequenceofEscherichiacoliK12Science27714531462。TG1:TG1は、一般的に用いられるクローニング株であり、供給者から得られ、以下の遺伝子型:F’[traD36lacIqΔlacZM15proAB]glnVsupEthi-1ΔmcrB-hsdSM5rK-mK-McrB-thiΔlac-proABを有する。実施例1:ラクトバチルス属株のためのエレクトロポレーションプロトコールプラスミドDNAをエレクトロポレーションによりラクトバチルス属株に導入した。ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum株をエレクトロポレーションのために以下のように調製した。前記株を凍結保存培養から1まで添加されたグリシンを含むMRS培地に植菌し、振盪することなく37°Cで一晩インキュベートした。これをその後、新しいMRS1グリシンに、1:100に希釈し、37°Cで振盪することなく、OD600が0.6に達するまでインキュベートした。細胞を30°Cで10分間、4000rpmにおける遠心分離により回収した。その後、前記細胞ペレットをもとの容量の1mMMgCl2に再懸濁し、上述のように遠心分離によりペレットにした。その後、前記細胞ペレットをもとの容量の30PEG1500に再懸濁し、上述のように遠心分離によりペレットにした。最終的に、これらをもとの容量の30PEG1500に1/100で穏やかに再懸濁し、50μLの量をアルコール/ドライアイス槽中で急速に凍結させ、使用まで-80°Cで保存した。プランタルムのエレクトロポレーションのために、凍結細胞を氷上で溶かし、2μLのTEバッファ中DNA懸濁液を添加した。40μLの混合物を氷冷した2mmエレクトロポレーションキュベットに移し、1.5kV;25マイクロファラッド;400Ohmの設定で、BioRadGenePulser商標においてエレクトロポレーションを行なった。500μLのMRS-スクロース-MgCl2混合物MRS:6.5ml;2Mスクロース:2.5ml;1MMgCl2:1mlを添加し、プレーティングの前に、混合物を振盪することなく30°Cで2時間インキュベートした。ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株をエレクトロポレーションのために以下のように調製した。前記株を凍結保存培養からLCM培地に植菌し、振盪することなく37°Cで一晩インキュベートした。5mLの量を500mlLCMに移し、振盪することなく、OD600が0.8に達するまで37°Cでインキュベートした。前記細胞を上述のように遠心分離により回収し、再懸濁し、室温において50mlのイオン交換滅菌水で2回洗浄し、そして遠心分離により回収した。最終的に、前記細胞を2.5mlの30PEG1500に穏やかに再懸濁し、50μLの量をアルコール/ドライアイス槽中で急速に凍結し、使用まで-80°Cで保存した。ロイテリのエレクトロポレーションのために、凍結細胞を氷上で溶かし、2μLのTEバッファ中DNA懸濁液を添加した。40μLの混合物を氷冷した2mmエレクトロポレーションキュベットに移し、1~3分間氷上に放置し、1.5kV;25マイクロファラッド;400Ohmの設定で、BioRadGenePulser商標においてエレクトロポレーションを行なった。500μLのLCMを添加し、プレーティングの前に、前記混合物を振盪することなく37°Cで2時間インキュベートした。細胞を要求される抗生物質が添加されたLCM寒天プレート寒天で固めたLCM培地又はMRS寒天プレートのいずれか上にプレートし、嫌気的チャンバーOxoid;Anaerogensachetを備えている中でインキュベートした。実施例2:発現ベクターpTRGU88の構築LacIqリプレッサー、trcプロモーター、及びマルチクローニングサイトMCSを含む2349bpフラグメントを、下記に示すpTrcBglIItop及びpTrcScaIbotを用いてpTrc99AEAmannandJBrosius1985Gene40183190から増幅した。プライマーpTrcBglIItop:5’-GAAGATCTATGGTGCAAAACCTTTCGCGG-3’配列番号83プライマーpTrcScaIbot:5’-AAAAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAG-3’配列番号84PCRを、PlatinumPfxDNAポリメラーゼInvitrogenUKを用いて行い、増幅反応を、95°Cで2分;その後95°Cで30秒、42°Cで30秒、そして72°Cで2分を25サイクル;その後72°Cで3分を1サイクルでプログラムした。得られたPCR産物を製造者の使用説明書に従って、PCR精製キットQiagenHildenGermanyで精製し、各5ユニットのBglIINewEnglandBiolabsIpswichMAUSA及びScaINewEnglandBiolabs制限酵素認識部位は、上記プライマー中の下線であるで37°Cで一晩消化した。消化されたフラグメントを製造者の使用説明書に従って、PCR精製キットQiagenを用いて精製した。p15A複製起点を有するプラスミドpACYC177YKMoketal1988NucleicAcidsRes16356を、5単位のScaINewEnglandBiolabs及び10単位のBamHINewEnglandBiolabsを用いて、37°Cで2時間消化した。消化物に10単位の仔牛腸ホスファターゼCIPNewEnglandBiolabsを添加し、インキュベーションをさらに1時間続け、3256bpフラグメント及び685bpフラグメントを得た。前記消化混合物を1アガロースゲル上で泳動し、3256bpフラグメントをゲルから抽出し、製造者の使用説明書に従ってQIAquickゲル抽出キットをQiagenHildenGermany用いて精製した。精製された2349bpのPCR/制限フラグメントを、製造者の使用説明書に従って、ラピッドライゲーションキットFHoffmannLaRocheLtdBaselSwitzerlandを用いて3256bpの制限フラグメントにライゲートさせ、pMlBa2を得た。プラスミドpMlBa2をNewEnglandBiolabsにより提案される標準バッファ3及びBSAを用いてPstIで消化し、blaTEM-1blaTEM-1プロモーター及びRBSを含むの最初の547bpを含む1078bpPstIフラグメント、並びにp15A複製起点、LacIqリプレッサー、trcプロモーター、マルチクローニングサイトMCS、及びアミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼ遺伝子を含む4524bpフラグメントを得た。4524bpフラグメントを、10mMATPFHoffmannLaRocheLtdを含むT4DNAリガーゼバッファ中でT4DNAリガーゼを用いて16°Cで一晩ライゲートさせた。1μLの量のライゲーション混合物をエレクトロポレーションを用いて大腸菌SJ2細胞を形質転換した。形質転換体を20μg/mlカナマイシンを含むLBPGSプレート上にプレートし、37°Cで一晩インキュベートした。選択されたコロニーを200μg/mLアンピシリンを含むLBプレート、及び20μg/mLカナマイシンを含むLBプレート上に縞状に播種した。アンピシリン感受性、かつカナマイシン耐性である8つの形質転換体を単離し、20μg/mLカナマイシンを含むLBプレート上で縞状に播種し、純化した。8個のコロニーのそれぞれを液体TYブイヨン培地中に植菌し、37°Cで一晩インキュベートした。各コロニーからのプラスミドをQiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いて単離し、その後EcoRI及びMluIを用いて二重に消化した。各プラスミドは、LonzaBaselSwitzerland製の電気泳動システムFlashGel登録商標システムを用いて分析した場合、1041bp及び3483bpの正しい制限パターンを得た。大腸菌TRGU88と称される一つの形質転換体の一晩の液体培養物を、-80°Cで30グリセロール中で保存した。対応するプラスミドpTRGU88図4を製造者の使用説明書を用いてQiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いて大腸菌TRGU88から単離し、-20°Cで保存した。実施例3:HindIII制限酵素認識部位においてサイレント変異を有する合成アミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼ遺伝子の設計及びベクターpTRGU186の構築上記のベクターpTRGU88中1524~2494bpに及ぶ971bpのヌクレオチド配列は、後述のサイレント変異を用いて除かれる、HindIII制限酵素認識部位を含むアミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼ遺伝子のコーディング配列を含む。サイレント変異を含むbla遺伝子:5’-CATAAACTTTTG-3’野生型bla遺伝子:5’-CATAAGCTTTTG-3’サイレント変異を含む971bpDNAフラグメントを、pTRGU186に合成的に構築した。得られた配列は、その後GeneartAGにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成される場合、続くクローニングステップを容易にするために、DNAフラグメントをStuI制限酵素認識部位と隣接させた。アミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、サイレント変異を含む配列、推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号76、77、及び78として示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む816bpであり、コードされる予測タンパク質は、271アミノ酸である。実施例4:ベクターpTRGU88のアミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼ遺伝子中のHindIII部位の除去、及びベクターpTRGU187の構築ベクターpTRGU88及びpTRGU18でNEB製のdam/dcm大腸菌CatnoC2925Hを化学的に形質転換し、LB培地中50mlの一晩培養物の5x4mlから、Qiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いてそれぞれ再単離した。pTRGU88中アミノグリコシド3’-ホスホトランスフェラーゼ遺伝子を、1336bp~2675bpに亘るDNAフラグメントを切り出すために用いられるStuI制限酵素認識部位と隣接させた。このフラグメントは、コーディング配列の上流284bp、及び下流243bpを含む。400bp~1376bpに及ぶpTRGU186のStuIフラグメントは、HindIII部位を含まないコーディング配列、並びにコーディング配列の上流99bp、及び下流65bpを含む。pTRGU88及びpTRGU186の双方をStuINEBを用いて37°Cで一晩消化した。前記酵素を65°Cで20分間熱不活性化し、pTRGU88反応混合物を37°Cで30分間1U仔牛腸ホスファターゼCIPNEBを用いて脱リン酸化した。消化されたpTRGU88及びpTRGU186を1アガロースゲルで泳動し、予測されるサイズpTRGU88:1340bp;pTRGU186:977bpのバンドを、その後、製造者の使用説明書に従ってQIAquickゲル抽出キットQiagenHildenGermanyを用いて精製した。単離されたDNAフラグメントを、10mMATPFHoffmannLaRocheLtdBaselSwitzerlandを含むT4DNAリガーゼバッファ中T4DNAリガーゼを用いて、16°Cで一晩ライゲートした。1μLの量のライゲーション混合物でエレクトロポレーションにより大腸菌TOP10を形質転換した。形質転換体を20μg/mLカナマイシンを含むLBプレート上にプレートし、37°Cで一晩インキュベートした。選択されたコロニーを、その後20μg/mLカナマイシンを含むLBプレート上に縞状に播種した。大腸菌TRGU187の一つのコロニーを10μg/mLカナマイシンを含む液体TYブイヨン培地に植菌し、37°Cで一晩インキュベートした。対応するプラスミドpTRGU187をQiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いて単離し、BamHI及びClaIを含む制限酵素分析に供し、これはBamHI-ClaI:1764bp及びClaI-BamHI:2760bpのバンドをもたらし、pTRGU187中の遺伝子の時計回りの向きを確認した。pTRGU187を含む一晩の液体培養液からの大腸菌TRGU187を、-80°Cにおいて30グリセロール中でに保存した。実施例5:ペプチド誘導可能pSIP発現ベクターペプチド誘導可能発現ベクターpSIP409、pSIP410、及びpSIP411SorvigEMathiesenGNaterstadKEijsinkVGHAxelssonLHighlevelinduciblegeneexpressioninLactobacillussakeiandLactobacillusplantarumusingversatileexpressionvectorsMicrobiology15124392449は、LarsAxelssonNofimaMatASNorwayから提供された。pSIP409及びpSIP410でエレクトロポレーションにより大腸菌SJ2を形質転換し、37°CにおいてLB寒天プレート上でエリスロマイシン耐性150μg/mlを選択した。pSIP409を含む二つの形質転換体をSJ10517及びSJ10518として保存し、pSIP410を含む二つの形質転換体をSJ10519及びSJ10520として保存した。本質的に記載されるようにYasbinREWilsonGAYoungFETransformationandtransfectioninlysogenicstrainsofBacillussubtilisEvidenceforselectiveinductionofprophageincompetentcellsJournalofBacteriology121296304、pSIP411で天然のコンピテントバチルスサブチリスBacillussubtilisDN1885細胞を形質転換し、37°CにおいてLBPGSプレート上でエリスロマイシン耐性5μg/mlについて選択した。二つのかかる形質転換体をSJ10513及びSJ10514として保存した。pSIP411でエレクトロポレーションにより大腸菌MG1655を形質転換し、37°CにおいてLB寒天プレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択し、二つの形質転換体をSJ10542及びSJ10543として保存した。ラクトバチルス属におけるこれらのベクターからの遺伝子発現の導入に使用のために、M-19-Rと称され、以下のアミノ酸配列:Met-Ala-Gly-Asn-Ser-Ser-Asn-Phe-Ile-His-Lys-Ile-Lys-Gln-Ile-Phe-Thr-His-Argを有する誘導ペプチドを、PolypeptideLaboratoriesFrance7ruedeBoulogne67100StrasbourgFranceから得た。実施例6:構成的発現のためのpVS2に基づくベクターpSJ10600及びpSJ10603の構築一連の構成的発現ベクターは、プラスミドpVS2vonWrightATynkkynenSSuominenMCloningofaStreptococcuslactissubspLactischromosomalfragmentassociatedwiththeabilitytogrowinmilkAppliedandEnvironmentalMicrobiology5315841588及びRudetalRudIJensenPRNaterstadKAxelssonLAsyntheticpromoterlibraryforconstitutivegeneexpressioninLactobacillusplantarumMicrobiology15210111019により記載されるプロモーターに基づいて構築された。隣接する制限酵素認識部位の選択を含むP11プロモーターを含むDNAフラグメント、及び隣接する制限酵素認識部位の選択を含むP27を含む別のフラグメントは、GeneartAGにより化学的に合成された。隣接する制限酵素認識部位の選択を含むP11プロモーターを含むDNAフラグメント、及び隣接する制限酵素認識部位の選択を含むP27を含むDNAフラグメントは、それぞれ配列番号:85及び86に示される。フラグメントが標準的なGeneartベクターであるpMAに挿入される場合、双方のDNAフラグメントは、DNA調製物の形態において得られる。P11を含むベクターで、大腸菌SJ2細胞を形質転換し、プラスミドpSJ10560を含む形質転換体は、SJ10560として保存された。P27を含むベクターで、大腸菌SJ2細胞を形質転換し、プラスミドpSJ10561を含む形質転換体を、SJ10561として保存した。176bpHindIIIフラグメントの形態中のプロモーターを含むフラグメントを、Geneartベクターから切り出し、HindIII消化したpUC19とライゲートさせた。P11を含むフラグメントをSJ10560から調製されたベクターから切り出し、pUC19とライゲートさせ、pSJ10585及びpSJ10586をそれぞれを含む大腸菌SJ2の正確な形質転換体をSJ10585及びSJ10586として保存した。P27を含むフラグメントをSJ10561から調製されたベクターから切り出し、pUC19とライゲートさせ、pSJ10587及びpSJ10588をそれぞれを含む大腸菌SJ2の正確な形質転換体をSJ10587及びSJ10588として保存した。プラスミドpVS2をSJ10491として保存された株であるラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumNC8において得て、当該技術分野において知られている標準的なプラスミド調製手順によりこの株から抽出し、大腸菌MG1655を形質転換し、37°CにおいてLB寒天プレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。二つのかかる形質転換体をSJ10583及びSJ10584として保存した。pVS2にP11を挿入するために、P11を含む176bpHindIIIフラグメントを切り出し、pSJ10585からアガロースゲル電気泳動により精製し、SJ10583から調製されたHindIII消化したpVS2とライゲートさせた。ライゲーション混合物でエレクトロポレーションにより大腸菌MG1655を形質転換し、LB寒天プレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択し、二つの可能性のある方向のうちの一つにおいてプロモーター挿入を含むプラスミドを双方ともに有する二つのかかる形質転換体を、SJ10600及びSJ10601として保存し、これはpSJ10600図5及びpSJ10601を含む。二つの可能性のある方向のうちの他方においてプロモーター挿入を有する別の形質転換体を、SJ10602として保存し、これはpSJ10602を含む。SJ10602からのプラスミド調製物は、SJ10600及びSJ10601からの同程度の調製物よりも少ないDNAを含むように見え、更なる研究において、pSJ10602はプラスミド集団において支配的である欠失誘導体を含み、やや不安定であるように見えた。pVS2にP27を挿入するために、P27を含む176bpHindIIIフラグメントを切り出し、pSJ10588からアガロースゲル電気泳動により精製し、SJ10583から調製されたHindIII消化したpVS2とライゲートさせた。ライゲーション混合物でエレクトロポレーションにより大腸菌MG1655を形質転換し、LB寒天プレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択し、二つの可能性のある方向のうちの一つにおいてプロモーター挿入を含むプラスミドを双方ともに有する二つの形質転換体を、SJ10603及びSJ10604として保存し、これはpSJ10603図6及びpSJ10604を含む。二つの可能性のある方向のうちの他方においてプロモーター挿入を有する別の形質転換体を、SJ10605として保存し、これはpSJ10605を含む。このプラスミドにおけるプロモーター方向性は、上述のようにpSJ10602においてと同一である。SJ10605からのプラスミド調製物は、SJ10603及びSJ10604からの同程度の調製物よりも少ないDNAを含むように見え、更なる研究において、pSJ10605はプラスミド集団において支配的である欠失誘導体を含み、やや不安定であるように見えた。実施例7:発酵生成物分析本明細書に記載の発酵培養中のアセトン、1-プロパノール及びイソプロパノールは、GC-FIDにより検出可能であった。サンプルを、メタノール中0.05テトラヒドロフランで、11に希釈し、分析した。GCパラメータは、表1に列挙する。実施例8:イソプロパノール経路遺伝子のクローニングクロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumチオラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10705の構築クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumにおいて同定されたチオラーゼ遺伝子の1176bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における最適な発現のために設計し、pSJ10705に合成的に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTTC-3’HindIII部位を付加し、開始領域をNcoI-互換的BspHI部位に変換するために、及びすぐ下流に配列5’-TAGTCTAGACTCGAGGAATTCGGTACC-3’終始コドン、及び制限酵素認識部位XbaI-XhoI-EcoRI-KpnIを付加するためにが含まれるように設計した。得られた配列は、その後GeneartAGにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。GeneartからのDNA調製物で、エレクトロポレーションにより大腸菌SJ2を形質転換し、アンピシリン耐性200μg/mlを選択し、2つの形質転換体を、SJ10705SJ2/pSJ10705及びSJ10706SJ2/pSJ10706として保存した。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号1、2、及び3である。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1179bpであり、コードされる予測されるタンパク質は、392個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドはないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、41.4kDaの予測分子量、及び7.08の等電pHを有する392個のアミノ酸を含む。ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriチオラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10694の構築ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri由来の1176bpチオラーゼコーディング配列終始コドンを含まないを、下記に示されるプライマー671826及び671827を用いて、SJ10468同上の染色体DNAから増幅した。プライマー671826:5’-AGTCAAGCTTCCATGGAGAAGGTTTACATTGTTGC-3’配列番号87プライマー671827:5’-ATGCGGTACCGAATTCCTCGAGTCTAGACTAAATTTTCTTAAGCAGAACCG-3’配列番号88PCR反応を、94°Cで2分;その後95°Cで30秒、59°Cで1分、そして72°Cで2分を19サイクル;その後72°Cで5分を1サイクルでプログラムした。約1.2kbのPCR増幅断片を、NcoIEcoRIで消化し、アガロースゲル電気泳動により精製し、その後アガロースゲル電気泳動により精製されたプラスミドpSIP409のEcoRI-NcoIベクターフラグメントとライゲートさせた。ライゲーション混合物で大腸菌SJ2を形質転換し、アンピシリン耐性200μg/mlを選択し、形質転換体を制限酵素消化及びDNA配列決定により正確であるとみなし、SJ10694SJ2/pSJ10694として保存した。L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号34及び35である。コーディング配列は、終始コドンを含む1179bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、392個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、41.0kDaの予測分子量、及び5.4の等電pHを有する392個のアミノ酸を含む。プロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiチオラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10676の構築プロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiにおいて同定されたチオラーゼ遺伝子の1152bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10676に構築した。コドン最適化CDSを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTTC-3’HindIII部位を付加し、開始領域をNcoI-互換的BspHI部位に変換するために、及びすぐ下流に配列5’-TAGTCTAGACTCGAGGAATTCGGTACC-3’配列番号112終始コドン、及び制限酵素認識部位XbaI-XhoI-EcoRI-KpnIを付加するためにが含まれるように設計した。得られた配列は、その後GeneartAGにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。Geneartに由来するDNA調製物で、エレクトロポレーションにより大腸菌SJ2を形質転換し、アンピシリン耐性200μg/mlを選択し、2つの形質転換体を、SJ10676SJ2/pSJ10676及びSJ10677SJ2/pSJ10677として保存した。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiチオラーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号113及び114である。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1155bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、384個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、39.8kDaの予測分子量、及び6.1の等電pHを有する384個のアミノ酸を含む。ラクトバチルスブレビスLactobacillusbrevisチオラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10699の構築ラクトバチルスブレビスLactobacillusbrevisにおいて同定されたチオラーゼ遺伝子の1167bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物において最適な発現のために設計し、合成的にpSJ10699に構築した。コドン最適化CDSを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCC-3’HindIII部位を付加し、開始領域をNcoI部位に変換するために、及びすぐ下流に配列5’-TAGTCTAGACTCGAGGAATTCGGTACC-3’配列番号112終始コドン、及び制限酵素認識部位XbaI-XhoI-EcoRI-KpnIを付加するためにが含まれるように設計した。得られた配列は、その後GeneartAGにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。Geneartに由来するDNA調製物を、エレクトロポレーションにより大腸菌SJ2に形質転換し、アンピシリン耐性200μg/mlを選択し、2つの形質転換体を、SJ10699SJ2/pSJ10699及びSJ10700SJ2/pSJ10700として保存した。L.ブレビスLbrevisチオラーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号115及び116である。コーディング配列は、終始コドンを含む1170bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、389個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、40.4kDaの予測分子量、及び6.5の等電pHを有する389個のアミノ酸を含む。B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子のクローニング並びにベクターpSJ10695及びpSJ10697の構築B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのscoAサブユニットの699bpコーディング配列終始コドンを含まない及びB.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのscoBサブユニットの648bpコーディング配列を、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における最適な発現のために設計し、合成的にpSJ10695及びpSJ10697にそれぞれ構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCTCGAGACTATTACAAGGAGATTTTAGCC-3’配列番号89HindIII部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEcoRI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10695SJ2/pSJ10695及びSJ10696SJ2/pSJ10696を得た。スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのB.サブチリスBsubtilisscoAサブユニットの野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号7、8、及び9である。コーディング配列は、終始コドンを含む702bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、233個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、25.1kDaの予測分子量、及び6.50の等電pHを有する233個のアミノ酸を含む。コドン最適化scoBコーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GAATTCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号90EcoRI部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI-互換的BspHI部位中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEagI及びKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトをGeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10697SJ2/pSJ10697及びSJ10698SJ2/pSJ10698を得た。スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのB.サブチリスBsubtilisscoBサブユニットの野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号7、8、及び9である。コーディング配列は、終始コドンを含む651bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、216個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、23.4kDaの予測分子量、及び5.07の等電pHを有する216個のアミノ酸を含む。B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子のクローニング並びにベクターpSJ10721及びpSJ10723の構築B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのscoAサブユニットの711bpコーディング配列終始コドンを含まない及びB.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのscoBサブユニットの654bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における最適な発現のために設計し、合成的にpSJ10721及びpSJ10723にそれぞれ構築した。コドン最適化scoAコーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCTCGAGACTATTACAAGGAGATTTTAGCC-3’配列番号89HindIII部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI部位中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEcoRI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10721SJ2/pSJ10721及びSJ10722SJ2/pSJ10722を得た。スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのB.モジャベンシスBmojavensisscoAサブユニットの野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号10、11、及び12である。コーディング配列は、終始コドンを含む714bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、237個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、上記を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、25.5kDaの予測分子量、及び5.82の等電pHを有する237個のアミノ酸を含む。コドン最適化scoBヌクレオチドコーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GAATTCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号90EcoRI部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI-互換的BspHI部位中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEagI及びKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトをGeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10723SJ2/pSJ10723及びSJ10724SJ2/pSJ10724を得た。スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼのB.モジャベンシスBmojavensisscoBサブユニットの野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号13、14、及び15である。コーディング配列は、終始コドンを含む657bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、218個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、23.7kDaの予測分子量、及び5.40の等電pHを有する218個のアミノ酸を含む。大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子のクローニング並びにベクターpSJ10715及びpSJ10717の構築大腸菌アセチル-CoAトランスフェラーゼのatoAサブユニットuniprot:P76459の648bpコーディング配列終始コドンを含まない及び大腸菌アセチル-CoAトランスフェラーゼのatoDサブユニットuniprot:P76458の660bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10715及びpSJ10717にそれぞれ構築した。コドン最適化atoAサブユニットヌクレオチドコーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCTCGAGACTATTACAAGGAGATTTTAGCC-3’配列番号89HindIII及びXhoI部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI部位中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEcoRI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10715SJ2/pSJ10715及びSJ10716SJ2/pSJ10716を得た。アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼの大腸菌atoAサブユニットのコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号36及び37である。コーディング配列は、終始コドンを含む651bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、216個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、23.0kDaの予測分子量、及び5.9の等電pHを有する216個のアミノ酸を含む。コドン最適化atoDヌクレオチドコーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GAATTCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号90EcoRI部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI-互換的BspHI部位中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEagI及びKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10717SJ2/pSJ10717及びSJ10718SJ2/pSJ10718を得た。アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼの大腸菌atoDサブユニットのコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号38及び39である。コーディング配列は、終始コドンを含む663bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、220個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、23.5kDaの予測分子量、及び4.9の等電pHを有する220個のアミノ酸を含む。クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子のクローニング並びにベクターpSJ10727及びpSJ10731の構築C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセチル-CoAトランスフェラーゼのctfAサブユニットuniprot:P33752の654bpコーディング配列終始コドンを含まない及びC.アセトブチリカムアセチル-CoAトランスフェラーゼのctfBサブユニットuniprot:P23673の663bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10727及びpSJ10731にそれぞれ構築した。コドン最適化ctfAサブユニットコーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCTCGAGACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号91HindIII及びXhoI部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI-互換的BspHI部位中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEcoRI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトをGeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10727SJ2/pSJ10727及びSJ10728SJ2/pSJ10728を得た。アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼのC.アセトブチリカムCacetobutylicumctfAサブユニットのコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号40及び41である。コーディング配列は、終始コドンを含む657bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、218個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、23.6kDaの予測分子量、及び9.3の等電pHを有する218個のアミノ酸を含む。コドン最適化ctfBサブユニットコーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GAATTCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号90EcoRI部位、ラクトバチルスRBSを付加し、NcoI-互換的BspHI部位中に開始コドンを持たせるために、及びすぐ下流にEagI及びKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトをGeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10731SJ2/pSJ10731及びSJ10732SJ2/pSJ10732を得た。アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼのC.アセトブチリカムCacetobutylicumctfBサブユニットのコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号42及び43である。コーディング配列は、終始コドンを含む666bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、221個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、23.6kDaの予測分子量、及び8.5の等電pHを有する221個のアミノ酸を含む。クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10711の構築C.アセトブチリカムCacetobutylicum由来のアセトアセテートデカルボキシラーゼuniprot:P23670の777bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10711に構築した。コドン最適化アセトアセテートデカルボキシラーゼコーディング配列abcを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCGGCCGACTATTACAAGGAGATTTTAGCC-3’配列番号92HindIII及びEagI部位、及びラクトバチルスRBSを付加するために、及びすぐ下流にKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10711SJ2/pSJ10711及びSJ10712SJ2/pSJ10712を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号44及び45である。コーディング配列は、終始コドンを含む780bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、259個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、27.5kDaの予測分子量、及び6.2の等電pHを有する259個のアミノ酸を含む。クロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10713の構築C.ベイジェリンキCbeijerinckii由来のアセトアセテートデカルボキシラーゼuniprot:Q716S5の738bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10713に構築した。コドン最適化アセトアセテートデカルボキシラーゼコーディング配列adcCbを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCGGCCGACTATTACAAGGAGATTTTAGCC-3’配列番号92HindIII及びEagI部位、ラクトバチルスRBSを付加するために、及びすぐ下流にKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10713SJ2/pSJ10713及びSJ10714SJ2/pSJ10714を得た。C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号16、17、及び18である。コーディング配列は、終始コドンを含む741bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、246個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、27.5kDaの予測分子量、及び6.18の等電pHを有する246個のアミノ酸を含む。ラクトバチルスサリバリウスLactobacillussalvariusアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10707の構築L.サリバリウスLsalvarius由来のアセトアセテートデカルボキシラーゼSWISSPROT:Q1WVG5の831bpCDS終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10707に構築した。コドン最適化アセトアセテートデカルボキシラーゼCDSadcLsを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCGGCCGACTATTACAAGGAGATTTTAGAC-3’配列番号92HindIII及びEagI部位、並びにラクトバチルスRBSを付加するために、及びすぐ下流にKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10707SJ2/pSJ10707及びSJ10708SJ2/pSJ10708を得た。L.サリバリウスLsalvariusアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号117及び118である。コーディング配列は、終始コドンを含む834bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、277個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、30.9kDaの予測分子量、及び4.6の等電pHを有する277個のアミノ酸を含む。ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10701の構築L.プランタルムLplantarum由来のアセトアセテートデカルボキシラーゼSWISSPROT:Q1WVG5の843bpCDS終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10701に構築した。コドン最適化アセトアセテートデカルボキシラーゼCDSadcLpを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-AAGCTTCGGCCGACTATTACAAGGAGATTTTAGCC-3’配列番号92HindIII及びEagI部位、並びにラクトバチルスRBSを付加するために、及びすぐ下流にKpnI制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10701SJ2/pSJ10701及びSJ10702SJ2/pSJ10702を得た。L.プランタルムLplantarumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号119及び120である。コーディング配列は、終始コドンを含む846bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、281個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、30.8kDaの予測分子量、及び4.7の等電pHを有する281個のアミノ酸を含む。サーモアナエロバクターエタノリカスThermoanaerobacterethanolicusイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10719の構築T.エタノリカスTethanolicus由来のイソプロパノールデヒドロゲナーゼuniprot:Q2MJT8の1056bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10719に構築した。コドン最適化イソプロパノールデヒドロゲナーゼコーディング配列adhTeを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GGTACCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号95KpnI部位、ラクトバチルスRBSを付加するために、そしてNcoI-互換的BspHI部位中に開始コドンをもたせるために、並びにすぐ下流にXmaI及びHindIII制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10719SJ2/pSJ10719及びSJ10720SJ2/pSJ10720を得た。T.エタノリカスTethanolicusイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号22、23、及び24である。コーディング配列は、終始コドンを含む1059bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、352個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、37.7kDaの予測分子量、及び6.23の等電pHを有する352個のアミノ酸を含む。クロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10725の構築C.ベイジェリンキCbeijerinckii由来のイソプロパノールデヒドロゲナーゼuniprot:P25984の1053bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10725に構築した。コドン最適化イソプロパノールデヒドロゲナーゼコーディング配列adhCbを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GGTACCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号95KpnI部位、ラクトバチルスRBSを付加するために、そしてNcoI-互換的BspHI部位中に開始コドンをもたせるために、並びにすぐ下流にXmaI及びHindIII制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10725SJ2/pSJ10725及びSJ10726SJ2/pSJ10726を得た。C.ベイジェリンキCbeijerinckiiイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号19、20、及び21である。コーディング配列は、終始コドンを含む1056bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、351個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、37.8kDaの予測分子量、及び6.64の等電pHを有する351個のアミノ酸を含む。ラクトバチルスアントリLactobacillusantriイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10709の構築L.アントリLantri由来のイソプロパノールデヒドロゲナーゼSWISSPROT:C8P9V7の1068bpコーディング配列終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10709に構築した。コドン最適化イソプロパノールデヒドロゲナーゼコーディング配列sadhLaを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GGTACCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号95KpnI部位、ラクトバチルスRBSを付加するため、並びにすぐ下流にXmaI及びHindIII制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトをGeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10709SJ2/pSJ10709及びSJ10710SJ2/pSJ10710を得た。L.アントリLantriイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号46及び47である。コーディング配列は、終始コドンを含む1071bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、356個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、38.0kDaの予測分子量、及び4.9の等電pHを有する356個のアミノ酸を含む。ラクトバチルスファーメンタムLactobacillusfermentumイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子のクローニング及びベクターpSJ10703の構築L.ファーメンタムLfermentum由来のイソプロパノールデヒドロゲナーゼSWISSPROT:B2GDH6の1068bpCDS終始コドンを含まないを、大腸菌Escherichiacoli、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、及びラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriの3つの生物における発現のために最適化し、合成的にpSJ10703に構築した。コドン最適化イソプロパノールデヒドロゲナーゼCDSsadhLfを含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前に配列5’-GGTACCACTATTACAAGGAGATTTTAGTC-3’配列番号95KpnI部位及びラクトバチルスRBSを付加するため、並びにすぐ下流にXmaI及びHindIII制限酵素認識部位が含まれるように設計した。設計されたコンストラクトを、GeneartAGから得て、上述のように形質転換し、SJ10703SJ2/pSJ10703及びSJ10704SJ2/pSJ10704を得た。L.ファーメンタムLfermentumイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子のコドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号121及び122である。コーディング配列は、終始コドンを含む1071bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、356個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal、同上を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、37.9kDaの予測分子量、及び5.2の等電pHを有する356個のアミノ酸を含む。実施例9:大腸菌中でのイソプロパノール生産のための経路コンストラクトの構築及び形質転換C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含むpSJ10843の構築プラスミドpSJ10725及びpSJ10713を、個別にKpnIAlwNIで消化した。プラスミドpSJ10725を、さらにPvuIで消化し、望ましくないフラグメントのサイズを減少させた。得られたpSJ10725の1689bpフラグメントと、pSJ10713の2557bpフラグメントを、それぞれゲル電気泳動を用いて精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物を大腸菌SJ2化学的コンピテント細胞の形質転換に用い、形質転換体を200μg/mlのアンピシリンを含むLBプレート上で選択した。100超の形質転換体の中から選択された4つのコロニーを、HindIIIを用いた制限酵素分析により、全て所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10843SJ2/pSJ10843及びSJ10844SJ2/pSJ10844を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含むpSJ10841の構築プラスミドpSJ10725及びpSJ10711を、個別にKpnIAlwNIで消化し、加えてpSJ10725を、さらにPvuIで消化し、望ましくないフラグメントのサイズを減少させた。得られたpSJ10725の1689bpフラグメントと、pSJ10711の2596bpフラグメントを、それぞれゲル電気泳動を用いて精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物を大腸菌SJ2化学的コンピテント細胞の形質転換に用い、形質転換体を200μg/mlのアンピシリンを含むLBプレート上で選択した。100超の形質転換体の中から選択された4つのコロニーを、BsgIを用いた制限酵素分析により、全て所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10841SJ2/pSJ10841及びSJ10842SJ2/pSJ10842を得た。B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子を含むpSJ10748の構築プラスミドpSJ10697及びpSJ10695を、個別にEcoRI及びKpnIで消化した。得られたpSJ10697の690bpフラグメントと、pSJ10695の3106bpフラグメントを、それぞれゲル電気泳動を用いて精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物をエレクトロポレーションによる大腸菌SJ2の形質転換に用い、形質転換体を200μg/mlのアンピシリンを含むLBプレート上で選択した。50超の形質転換体の中から選択された3つのコロニーを、PvuIを用いた制限酵素分析により、全て所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10748SJ2/pSJ10748及びSJ10749SJ2/pSJ10749を得た。B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子を含むpSJ10777の構築プラスミドpSJ10723及びpSJ10721を、それぞれEcoRIKpnIで消化した。得られたpSJ10723の696bpフラグメントと、pSJ10721の3118bpフラグメントを、それぞれゲル電気泳動を用いて精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物を大腸菌SJ2化学的コンピテント細胞の形質転換に用い、形質転換体を200μg/mlのアンピシリンを含むLBプレート上で選択した。500超の形質転換体の中から選択された4つのコロニーを、PvuIを用いた制限酵素分析により、全て所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、保存し、SJ10777SJ2/pSJ10777を得た。大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子を含むpSJ10750の構築プラスミドpSJ10717及びpSJ10715を、それぞれEcoRIKpnIで消化した。得られたpSJ10717の702bpフラグメントと、pSJ10715の3051bpフラグメントを、それぞれゲル電気泳動を用いて精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物をエレクトロポレーションによる大腸菌SJ2の形質転換に用い、形質転換体を200μg/mlのアンピシリンを含むLBプレート上で選択した。50超の形質転換体の中から選択された3つのコロニーを、ApaLIを用いた制限酵素分析により、全て所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10750SJ2/pSJ10750及びSJ10751SJ2/pSJ10751を得た。クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子を含むpSJ10752の構築プラスミドpSJ10731及びpSJ10727を、それぞれEcoRIKpnIで消化した。得られたpSJ10731の705bpフラグメントと、pSJ10727の3061bpフラグメントを、それぞれゲル電気泳動を用いて精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物をエレクトロポレーションによる大腸菌SJ2の形質転換に用い、形質転換体を200μg/mlのアンピシリンを含むLBプレート上で選択した。50超の形質転換体の中から選択された3つのコロニーを、PvuIを用いた制限酵素分析により、全て所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10752SJ2/pSJ10752及びSJ10753SJ2/pSJ10753を得た。クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumチオラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10798の構築プラスミドpSJ10705を、BspHI及びEcoRIで消化し、他方でpSJ10600をNcoI及びEcoRIで消化した。得られたpSJ10705の1193bpフラグメントと、pSJ10600の5147bpフラグメントを、それぞれゲル電気泳動を用いて精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物をエレクトロポレーションによる大腸菌TG1の形質転換に用い、形質転換体を200μg/mlのエリスロマイシンを含むLBプレート上で選択した。4つのコロニー中3つを、NsiIを用いた制限酵素分析、及びDNA配列決定により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10798TG1/pSJ10798及びSJ10799TG1/pSJ10799を得た。L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10796の構築プラスミドpSJ10694をNcoI及びEcoRIで消化し、得られた1.19kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びEcoRIで消化し、得られた5.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物で大腸菌TG1エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、NsiIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つをDNA配列決定によりさらに確認し、保存し、SJ10796TG1/pSJ10796及びSJ10797TG1/pSJ10797を得た。プロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiチオラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10795の構築プラスミドpSJ10676をBspHI及びEcoRIで消化し、得られた1.17kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びEcoRIで消化し、得られた5.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物で大腸菌TG1エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、NsiIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの一つをDNA配列決定によりさらに確認し、保存し、SJ10795TG1/pSJ10795を得た。ラクトバチルスブレビスLactobacillusbrevisチオラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10743の構築プラスミドpSJ10699をNcoI及びEcoRIで消化し、得られた1.18kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びEcoRIで消化し、得られた5.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの16個を分析し、2つをClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、更にDNA配列決定により確認し、保存し、SJ10743TG1/pSJ10743及びSJ10757TG1/pSJ10757を得た。バチルスサブチリスBacillussubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10886の構築プラスミドpSJ10748をNcoI及びKpnIで消化し、得られた1.4kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びKpnIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、HindIIIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを更にDNA配列決定により確認し、保存し、SJ10886TG1/pSJ10886及びSJ10887TG1/pSJ10887を得た。大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10888の構築プラスミドpSJ10750をNcoI及びKpnIで消化し、得られた1.35kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びKpnIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、HindIIIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを更にDNA配列決定により確認し、保存し、SJ10888TG1/pSJ10888及びSJ10889TG1/pSJ10889を得た。C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10756の構築プラスミドpSJ10713をEagI及びKpnIで消化し、得られた0.77kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をEagI及びKpnIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、ClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、DNA配列決定により確認し、SJ10756TG1/pSJ10756として保存した。C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10754の構築プラスミドpSJ10711をEagI及びKpnIで消化し、得られた0.81kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をEagI及びKpnIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、3つをClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、DNA配列決定により確認し、SJ10754MG1655/pSJ10754及びSJ10755MG1655/pSJ10755として保存した。L.サリバリウスLsalvariusアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10780の構築プラスミドpSJ10707をPciI及びKpnIで消化し、得られた0.84kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びKpnIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、ClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、2つをDNA配列決定により確認し、SJ10780MG1655/pSJ10780及びSJ10781MG1655/pSJ10781として保存した。L.プランタルムLplantarumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10778の構築プラスミドpSJ10701をNcoI及びKpnIで消化し、得られた0.85kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びKpnIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、ClaIを用いた制限酵素分析により、全て所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、2つをDNA配列決定により確認し、SJ10778MG1655/pSJ10778及びSJ10779MG1655/pSJ10779として保存した。ラクトバチルスアントリLactobacillusantriイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10768の構築プラスミドpSJ10709をKpnI及びXmaIで消化し、得られた1.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をXmaI及びKpnIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、2つをClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、DNA配列決定により確認し、SJ10768TG1/pSJ10768及びSJ10769TG1/pSJ10769として保存した。サーモアナエロバクターエタノリカスThermoanaerobacterethanolicusイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10745、pSJ10763、pSJ10764、及びpSJ10767の構築プラスミドpSJ10719をBspHI及びXmaIで消化し、得られた1.06kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNco及びXmaIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせた。ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、得られたコロニーのうちの1つを、ClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、DNA配列決定により確認し、SJ10745MG1655/pSJ10745として保存した。ライゲーション混合物で大腸菌JM103エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、4つのコロニーのうちの2つを、ClaIを用いた制限酵素分析により、所望のプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10763JM103/pSJ10763及びSJ10764JM103/pSJ10764として保存した。最終的に、ライゲーション混合物でTG1エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、4つのコロニーのうちの3つを、ClaIを用いた制限酵素分析により、所望のプラスミドを含んでいるとみなし、その一つであるSJ10767JM103/pSJ10767をDNA配列決定により確認した。クロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10782の構築プラスミドpSJ10725をBspHI及びXmaIで消化し、得られた1.06kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をNcoI及びXmaIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、2つをClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、DNA配列決定により確認し、SJ10782TG1/pSJ10782及びSJ10783TG1/pSJ10783として保存した。ラクトバチルスファーメンタムLactobacillusfermentumイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10762の構築プラスミドpSJ10703をBspHI及びXmaIで消化し、得られた1.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10600をXmaI及びNcoIで消化し、得られた5.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でJM103及びTG1エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。形質転換体を分析し、2つ各宿主株から一つをClaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、DNA配列決定により確認し、SJ10762JM103/pSJ10762及びSJ10765TG1/pSJ10765として保存した。形質転換体SJ10766JM103/pSJ10766がラクトバチルスファーメンタムLactobacillusfermentumイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含むことを確認した。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10954の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10777をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10954TG1/pSJ10954及びSJ10955TG1/pSJ10955を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10956の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10777をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10956TG1/pSJ10956及びSJ10957TG1/pSJ10957を得た。独立した構築プロセス消化、フラグメント精製、ライゲーション、エレクトロポレーションによる形質転換から、一つの形質転換体をXbaIを用いた制限酵素分析により所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10926TG1pSJ10926として保存した。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10942の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10748をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10942TG1/pSJ10942及びSJ10943TG1/pSJ10943を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.アセトブチリカムアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10944の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10748をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10944TG1/pSJ10944及びSJ10945TG1/pSJ10945を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10946の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10750をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.37kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10946TG1/pSJ10946及びSJ10947TG1/pSJ10947を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.アセトブチリカムアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10948の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10750をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.37kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10948TG1/pSJ10948及びSJ10949TG1/pSJ10949を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10950の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10752をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.38kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10950TG1/pSJ10950及びSJ10951TG1/pSJ10951を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.アセトブチリカムアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10952の構築プラスミドpSJ10798をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10752をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.38kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの二つを保存し、SJ10952TG1/pSJ10952及びSJ10953TG1/pSJ10953を得た。P11プロモーターの制御下でC.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10790の構築プラスミドpTRGU001782010年10月29日に出願された米国仮特許出願第61/408,138号を参照のことをNcoI及びBamHIで消化し、得られた1.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。pTRGU00178をBamHI及びSalIで消化し、得られた2.1kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSIP409をNcoI及びXhoIで消化し、得られた5.7kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でSJ2エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。2つの形質転換体をEcoRI、BglII、及びHindIIIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10562SJ2/pSJ10562及びSJ10563SJ2/pSJ10563として保存した。プラスミドpSJ10562をXbaI及びNotIで消化し、得られた7.57kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpTRGU00200同上をXbaI及びNotIで消化し、得られた2.52kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。2つの形質転換体をNotIXbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10593MG1655/pSJ10593及びSJ10594MG1655/pSJ10594として保存した。プラスミドpTRGU00200をEcoRI及びBamHIで消化し、得られた1.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。pSJ10600をEcoRI及びBamHIで消化し、得られた5.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。2つの形質転換体をEcoRIBamHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10690MG1655/pSJ10690及びSJ10691MG1655/pSJ10691として保存した。プラスミドpSJ10593をBamHI及びXbaIで消化し、得られた3.25kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。pSJ10690をBamHI及びXbaIIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。2つの形質転換体をNsiIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10790TG1/pSJ10790及びSJ10791TG1/pSJ10791として保存した。P27プロモーターの制御下でC.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含むpSJ10792の構築プラスミドpTRGU00200をEcoRI及びBamHIで消化し、得られた1.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。pSJ10603をEcoRI及びBamHIで消化し、得られた5.2kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でMG1655エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。2つの形質転換体をEcoRIBamHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10692MG1655/pSJ10692及びSJ10693MG1655/pSJ10693として保存した。プラスミドpSJ10593をBamHI及びXbaIで消化し、得られた3.25kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。pSJ10692をBamHI及びXbaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1エレクトロコンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。2つの形質転換体をNsiIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10792TG1/pSJ10792及びSJ10793TG1/pSJ10793として保存した。L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ11208の構築プラスミドpSJ10796下記に記載をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10954をXhoI及びXmaIで消化し、得られた3.28kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの3つをXbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを保存し、SJ11208TG1/pSJ11208及びSJ11209TG1/pSJ11209を得た。L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子、B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ11204の構築プラスミドpSJ10796下記に記載をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10942をXhoI及びXmaIで消化し、得られた3.26kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーの内の4つを分析し、XbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを保存し、SJ11204TG1/pSJ11204及びSJ11205TG1/pSJ11205を得た。L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子、大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ11230の構築プラスミドpSJ10796下記に記載をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10946をXhoI及びXmaIで消化し、得られた3.23kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーの内の7つを分析し、5つをXbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを保存し、SJ11230TG1/pSJ11230及びSJ11231TG1/pSJ11231を得た。L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニット、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ11206の構築プラスミドpSJ10796下記に記載をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.3kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。プラスミドpSJ10951をXhoI及びXmaIで消化し、得られた3.23kbフラグメントをゲル電気泳動を用いて精製した。精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーの内の4つを分析し、2つをXbaIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ11206TG1/pSJ11206及びSJ11207TG1/pSJ11207として保存した。実施例10:大腸菌の小スケールバッチ増殖の間のアセトン及びイソプロパノールの生産実施例9に記載された大腸菌株を-80°C保存培養から直接植菌し、37°Cで300rpmで振盪させて、1グルコース及び100μg/mlエリスロマイシンを添加したLB培地中で一晩培養した。各培地から1.5mLのサンプルを24時間後に回収した。各サンプルを卓上遠心分離装置を用いて15000xgにおいて遠心分離し、上清をガスクロマトグラフィーを用いて分析した。発酵培地中のアセトン及びイソプロパノールを上述のようにGC-FIDにより検出した。結果を表2に示し、ここで遺伝子コンストラクトは、以下の略記で表す。thl_Ca:C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子adh_Cb:C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼscoAB_Bm:B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニットscoAB_Bs:B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニットatoAD_Ec:大腸菌E.coliアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニットctfAB_Ca:C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子双方のサブユニットadc_Cb:C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子adc_Ca:C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子対照株として、大腸菌SJ10766同一の発現ベクターバックボーンを含むが、配列番号121のイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子L.ファーメンタムLfermentumsadh_Lfのみを含む及び大腸菌SJ10799同一の発現ベクターを含むが、配列番号2のC.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子のみを含むを同様の方法で植菌した。同様の培養物を、振盪することなくインキュベートした;これらの全てにおいて、2-プロパノールレベルは、二つの対照株SJ10766及びSJ107990を除いて0.001~0.009であり、一方でイソプロパノールは検出されなかった。実施例11:様々なグルコース濃度下の大腸菌の小スケールバッチ増殖の間のアセトン及びイソプロパノールの生産発酵培地100μg/mlエリスロマイシン、及び1、2、5又は10グルコースのいずれかを含む、合計量10mlまでのLBに株を凍結培養から直接植菌し、37°Cで振盪させてインキュベートした。上清サンプルを1、2、及び3日後に摂取し、上述のようにアセトン及びイソプロパノール含量について分析した。株SJ10766同一の発現ベクターバックボーンを含むが、アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子sadh_Lfのみを含むを陰性対照としてインキュベートした。結果を表3に示し、ここで、遺伝子コンストラクトは、実施例3に示される略記を用いて表される。全てのイソプロパノールオペロン株は、1g/l超のイソプロパノールを超えて生産することができ、この実験において最も多く生産した株であるSJ10946は0.208のイソプロパノールを生産した。実施例12:大腸菌の小スケールバッチ増殖の間のアセトン及びイソプロパノールの生産選択された上述の大腸菌株を、-80°C保存培養から直接、2式に植菌し、37°Cにおいて、300rpmで振盪させながら10mlチューブ中で、1グルコース及び100μg/mlエリスロマイシンを添加したLB培地中で一晩増殖させた。各培地からの1.5mLサンプルを24時間後に採取した。各サンプルを15000xgで遠心分離し、上述のように上清をアセトン及びイソプロパノール含量について分析した。結果を表4に示し、ここで、遺伝子コンストラクトは、実施例3に示される略記で表され、thl_Lrは、L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子コンストラクトを表す。この実験は、L.ロイテリLreuteriチオラーゼ遺伝子を含むpSJ10600に基づく発現ベクターを含む大腸菌TG1が、有意な量のイソプロパノールを生産することができることを示す。実施例13:L.プランタルムLplantarumにおけるイソプロパノール生産のためのペプチド誘導可能経路コンストラクトの構築及び形質転換クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumチオラーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10776の構築プラスミドpSJ10705をBspHI及びEcoRIで消化し、pSIP409をNcoI及びEcoRIで消化した。得られたpSJ10705の1.19kbフラグメントとpSIP409の5.6kbフラグメントをゲル電気泳動によりそれぞれ精製し、その後、本明細書に概略されるようにライゲートさせた。一定量のライゲーション混合物を、本明細書に記載されるように大腸菌MG1655化学的コンピテント細胞の形質転換に用い、形質転換体を37°Cで200μg/mlのエリスロマイシンを含むLBプレート上で選択した。1つの形質転換体を、PstINsiIを用いた制限酵素分析、及びDNA配列決定により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、SJ10776MG1655/pSJ10776として保存した。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10903の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10748をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、2つの株をBspHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、保存し、SJ10903TG1/pSJ10903及びSJ10904TG1/pSJ10904を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10905の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10748をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、3つをBspHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを保存し、SJ10905TG1/pSJ10905及びSJ10906TG1/pSJ10906を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10907の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10750をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.37kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、3つをBspHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを保存し、SJ10907TG1/pSJ10907及びSJ10908TG1/pSJ10908を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、大腸菌アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10909の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10750をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.37kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、3つをBspHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、これらのうちの2つを保存し、SJ10909TG1/pSJ10909及びSJ10910TG1/pSJ10910を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10911の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10777をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。得られたコロニーのうちの4つを分析し、2つをBspHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、保存し、SJ10911TG1/pSJ10911及びSJ10912TG1/pSJ10912を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10940の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10777をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.43kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。数個の得られたコロニーを分析し、2つをBspHIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、保存し、SJ10940TG1/pSJ10940及びSJ10941TG1/pSJ10941を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10973の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10752をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.38kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10843をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.85kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。数個の得られたコロニーを分析し、2つをPstI及びApaLIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなし、保存し、SJ10973TG1/pSJ10973及びSJ10974TG1/pSJ10974を得た。C.アセトブチリカムCacetobutylicumチオラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムCacetobutylicumアセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ遺伝子、C.アセトブチリカムアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターpSJ10975の構築プラスミドpSJ10776をXhoI及びXmaIで消化し、得られた6.8kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10752をXhoI及びEagIで消化し、得られた1.38kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。プラスミドpSJ10841をEagI及びXmaIで消化し、得られた1.89kbフラグメントをゲル電気泳動により精製した。3つの精製されたフラグメントを混合し、ライゲートさせ、ライゲーション混合物でTG1化学的コンピテント細胞を形質転換し、37°CにおいてLBプレート上でエリスロマイシン耐性200μg/mlを選択した。数個の得られたコロニーを分析し、3つをPstI及びApaLIを用いた制限酵素分析により、所望の組み換えプラスミドを含んでいるとみなした。これらのうちの2つを、SJ10975TG1/pSJ10975及びSJ10976TG1/pSJ10976として保存した。ペプチド誘導可能なイソプロパノールオペロンコンストラクトを含む発現ベクターを用いたL.プランタルムLplantarumSJ10656の形質転換L.プランタルムLplantarumSJ10656を、プラスミドを用いて上述のエレクトロポレーションにより形質転換し、各プラスミドを含む形質転換体を得て、保存した表5を参照のこと。コンストラクトは、上記の実施例に示される略記を用いて表される。実施例14:形質転換株のサブセットを用いたL.プランタルムLplantarumにおけるイソプロパノール及びアセトン生産MRS培地10μg/mlエリスロマイシンを含む2mlの合計容量に2mlエッペンドルフチューブに-80°Cで保存されていたストックバイアルからの組み換えL.プランタルムLplantarum株を植菌し、振盪することなく37°Cで一晩インキュベートした。翌日、これらの培養物から50μL容量の培養液を用いて、各株についてMRS10μg/mlエリスロマイシンを含む二つの10mlバイアルのそれぞれに植菌した一つは、約50ng/mlの濃度においてpSIPベクターシステムのための誘導ペプチドM-19-Rを含む。バイアルを閉じ、37°Cで振盪することなくインキュベートした。上清サンプルをインキュベーションの1日及び2日後に回収し、上述のようにアセトン及びイソプロパノール含量について分析した。結果を表6に示す。コンストラクトは、上記の実施例に示される略記を用いて表される。実施例14:L.プランタルムLplantarumにおけるイソプロパノール及びアセトン生産、並びにアセトン添加の効果組み換えL.プランタルムLplantarum株を37°Cで3日間、10μg/mlエリスロマイシンを含む静置されたMRS培地において、培養した。培養物は、表7に示すように、誘導M-19-Rポリペプチド50ng/ml及び/又はアセトン5ml/lを含むを含んだ。上清を、上述のようにアセトン及びイソプロパノールについて分析した。対照株SJ10678は、空pSJ10600発現ベクターを含む。結果を表7に示す。コンストラクトは、上記の実施例に示される略記を用いて表される。表7に示すように、イソプロパノールは、誘導した場合、全てのイソプロパノール-オペロンを含む株において検出される。添加されず、誘導されない培養物は、検出可能なイソプロパノールを生産しなかった。アセトンの添加とともに、イソプロパノールは、誘導されないイソプロパノールオペロン培養物について少量検出されしかし対照においては検出されない、誘導ペプチドで誘導した場合、有意に増加した。実施例15:L.ロイテリLreuteriチオラーゼを有するコンストラクトを含む発現ベクターを含むL.プランタルムLplantarumにおけるイソプロパノール及びアセトン生産選択された上記の組み換えL.プランタルムLplantarum株及びB、-C、-D等に示されるように、調製からの更なる形質転換体コロニーを、MRS培地10μg/mlエリスロマイシンを含むを含む2mlエッペンドルフチューブに植菌し、振盪させることなく、37°Cで一晩保存した。各植菌について、0.5mlの上清サンプルを本明細書に記載のように、アセトン及びイソプロパノール含量について分析した。結果を表8に示す。コンストラクトは、上記の実施例に示される略記で表される。実施例16:イソプロパノール経路酵素発現L.プランタルムLplantarumにおけるチオラーゼ発現及び活性プラスミドpSJ10796及びpSJ10798を、上述のようにエレクトロポレーションによりL.プランタルムLplantarumSJ10656に導入し、MRS寒天プレート上でエリスロマイシン耐性10μg/mlを選択した。30°Cで3日インキュベーション後、各形質転換から二つのコロニーをエリスロマイシン10μg/mlを含むMRS培地に植菌し、一定量の細胞を37°Cで一晩インキュベーション後、遠心分離により、回収した。DNAをExtractAmp商標プラントキットSigmaを用いて抽出し、プライマー663783及び663784下記を用いたPCR増幅を、プラスミド上に有するエリスロマイシン耐性遺伝子の存在を確認するために用いた。プライマー663783:5’-CTGATAAGTGAGCTATTC-3’配列番号123プライマー663784:5’-CAGCACAGTTCATTATC-3’配列番号124pSJ10796又はpSJ10798を有する形質転換体を、それぞれSJ10858及びSJ10859として保存した。L.プランタルムLplantarumの以下の4つの株をチオラーゼ発現を確かめるために用いた。SJ10857:望ましくない欠損を含む、配列番号114のプロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiチオラーゼをコードする遺伝子を含む。SJ10858:配列番号35のラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriチオラーゼをコードするpSJ10796を含む。SJ10859:配列番号3のクロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumチオラーゼをコードするpSJ10798を含む。SJ10870:配列番号116のラクトバチルスブレビスLactobacillusbrevisチオラーゼをコードする遺伝子を含む。前記株を、37°Cで1日の静置培養において10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させた。培養物をその後プールし、細胞を遠心分離により回収した。前記細胞ペレットを、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、40秒、3サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブ中で500μLのバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTT中でガラスボールを用いた処理により機械的に破砕した。細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を分析に用いた。混合されたサンプル中のチオラーゼ酵素活性を後述のように確認した。チオラーゼ酵素を、マイクロタイタープレートのウェル中で50μl200μMアセトアセチル-CoASigmaA1625、50μl200μM補酵素ASigmaC3144、50μlバッファ100mMTris、60mMMgCl2、pH8.0、及び細胞溶解液からの50μl上清MilliQ水で20~80倍希釈を混合することにより測定した。チオラーゼが触媒するアセチル-CoAの形成によるマグネシウムとのアセトアセチル-CoA複合体の消失の反応速度を、続いて310nm20分間、毎秒20秒に測定されるにおいてプレートリーダーMolecularDevicesSpectraMaxPlusで分光光度的に測定した。添加される補酵素Aを含まないブランクサンプルは含められ、引かれた。チオラーゼ活性を方程式:活性=-サンプルの傾斜-ブランクの傾斜希釈倍率、を用いて初期吸光度傾斜から計算した。混合された細胞溶解液中の活性は、400±70mOD/分であった。混合されたサンプルを、導入された組み換えプラスミドから推定される4つのチオラーゼタンパク質に加えて、ゲノム配列から推定されるラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumWCFS1からなるデータベースとペプチドスペクトラムとを比較する下記の実施例に記載される質量分析計によるタンパク質分析に供した。同定された279個のタンパク質の中でも、クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumチオラーゼを4.02のemPAI値で同定し、ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriチオラーゼを1.53のemPAI値で同定した。別の実験では、株SJ10857、SJ10858、SJ10859、SJ10870、及びSJ10927正確なプロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiチオラーゼ遺伝子を含むを、37°Cで1日間、静置培養において10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ、前記細胞を1mlの培養量から遠心分離により回収した。それぞれの細胞ペレットを、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、40秒、4サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブ中で50μLのバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTT中でガラスボールを用いた処理により機械的に破砕した。450μLのバッファを添加し、細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を分析に用いた。有意なチオラーゼ酵素活性を、上述のアッセイを用いてSJ10858及びSJ10859即ち、ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri及びクロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumチオラーゼを含むコンストラクトを含む株からの溶解液において検出した。220mOD/分及び19mOD/分の活性がそれぞれSJ10858及びSJ10859において見られた。L.ロイテリLreuteriにおけるチオラーゼ発現及び活性L.ロイテリLreuteriSJ10655のエレクトロコンピテント細胞を、選択されたチオラーゼをコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドを用いて上述のように調製及び形質転換した。以下のプラスミドは、示される形質転換体をもたらし、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS寒天プレート上で選択し、嫌気性チャンバー中で37°Cにおいてインキュベートした。pSJ10795thl_Pf;配列番号113を含む:SJ11175pSJ10798thl_Ca;配列番号2を含む:SJ11177pSJ10743thl_Lb;配列番号115を含む:SJ11179pSJ10796thl_Lr;配列番号34を含む:SJ11181これらの株を、37°Cで1日静置培養において、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ、前記細胞を4mlの培養量から遠心分離により回収した。細胞を500μLのバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTTで1回洗浄し、50μLのバッファに再懸濁し、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、4.0m/sの設定で40秒において4サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブ中でガラスボールによる処理により機械的に破砕した。450μLのバッファを添加し、細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を酵素活性分析に用いた。同様に、各培養物の1mlを混合し、混合されたサンプルを上述のように洗浄、及び破砕し、この混合されたサンプルを他で記載されるように、質量分析によるタンパク質分析に用いた。クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumチオラーゼは8.16の相対的emPAI値で検出され、ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriチオラーゼは1.2の相対的emPAI値で検出され、そしてラクトバチルスブレビスLactobacillusbrevisチオラーゼは0.46の相対的emPAI値で検出された。個別のサンプルを酵素活性分析のために用い、以下の相対的活性レベルを得た。A.pSJ10795thl_Pf;配列番号113を含む:SJ11175=36B.pSJ10798thl_Ca;配列番号2を含む:SJ11177=22000C.pSJ10743thl_Lb;配列番号115を含む:SJ11179=2100D.pSJ10796thl_Lr;配列番号34を含む:SJ11181=3000L.プランタルムLplantarumにおけるCoAトランスフェラーゼ発現及び活性プラスミドpSJ10886及びpSJ10887を、上述のようにエレクトロポレーションによりL.プランタルムLplantarumSJ10656に導入し、ベクターのエリスロマイシン耐性遺伝子の存在をプライマー663783及び663784同上を用いたPCR増幅により確認した。pSJ10886を含む形質転換体をSJ10922として保存し、pSJ10887を含む形質転換体をSJ10923として保存した。同様に、pSJ10888をSJ10656に導入してSJ10988を得て、pSJ10889をSJ10656に導入してSJ10929を得た。株SJ10922及びSJ10923B.サブチリスBsubtilisscoAB遺伝子対を含む並びに株SJ10929及びSJ10988大腸菌atoAD遺伝子対を含むを37°Cで1日間、2mlの静置培養において10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ、前記細胞を遠心分離により回収した。それぞれの細胞ペレットを、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、40秒、5サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブ中で50μLのバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTT中でガラスボールを用いた処理により機械的に破砕した。450μLのバッファを添加し、細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を分析に用いた。SJ10929及びSJ10923からの溶解液をプールし、質量分析計により分析した。同定された461個のタンパク質の中でも、AtoDサブユニットを3.9のemPAI値で同定し、ScoBサブユニットを0.14のemPAI値で同定した。同様に、SJ10922からの溶解液を、B.モジャベンシスBmojavensisからのscoAB遺伝子を含む発現プラスミドを含むL.プランタルムLplantarum株から同様に得られた溶解液とともにプールし、分析した。同定された472個のタンパク質の中でも、B.サブチリスBsubtilisScoAサブユニットは0.65のemPAI値で同定され、B.サブチリスBsubtilisScoBサブユニットは0.14のemPAI値で同定された。スクシニル-CoAアセトアセテートトランスフェラーゼ活性を以下のプロトコールを用いて細胞溶解液において測定した。マイクロタイタープレートのウェル中で、50μl80mMLi-アセトアセテートSigmaA8509、50μl400μMスクシニル-CoASigmaS1129、50μlバッファ200mMTris、60mMMgCl2、pH9.1及び50μl細胞溶解液MilliQ水で5~20x希釈を混合した。マグネシウムとの酵素的反応複合体において形成されるアセトアセチル-CoAを20分間、20秒毎に310nmにおいて吸光度を測定することにより、プレートリーダーMolecularDevicesSpectraMaxPlusにおいて分光光度的に検出した。細胞溶解液を含まないブランクサンプルは、含まれる。トランスフェラーゼ活性を、方程式:活性=サンプルの傾斜-ブランクの傾斜希釈倍率、を用いて吸光度の増加の初期傾斜から計算した。SJ10922からの細胞溶解液において、5.6±0.5mOD/分の活性が見られた。L.ロイテリLreuteriにおけるCoAトランスフェラーゼ発現及び活性L.ロイテリLreuteriSJ10655のエレクトロコンピテント細胞を、選択されたCoAトランスフェラーゼをコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドを用いて、上述のように調製及び形質転換した。以下のプラスミドは、示される形質転換体をもたらし、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS寒天プレート上で選択し、嫌気性チャンバー中で37°Cでインキュベートした。pSJ10887scoAB_Bs;配列番号:58を含む:SJ11197pSJ10888atoAD_Ec;配列番号:3638を含む:SJ11199pSJ10990ctfAB_Ca;配列番号:4042を含む:SJ11221これらの株を、37°Cで1日静置培養において、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ、細胞を4mlの培養物量から遠心分離により回収した。細胞を500μLのバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTTで1回洗浄し、50μLのバッファに再懸濁し、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、4.0m/sの設定で40秒において4サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブ中でガラスボールによる処理により機械的に破砕した。450μLのバッファを添加し、細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を酵素活性分析に用いた。同様に、各培養物の1mlを混合し、混合されたサンプルを上述のように洗浄、及び破砕し、この混合されたサンプルを他で記載されるように、質量分析によるタンパク質分析に用いた。バチルスサブチリスBacillussubtilisからのScoAサブユニットは、0.33の相対的emPAI値で検出され、バチルスサブチリスBacillussubtilisからのScoBサブユニットは、0.08の相対的emPAI値で検出され、そして大腸菌EscherichiacoliからのAtoAサブユニットは0.06の相対的emPAI値で検出された。個別のサンプルを酵素活性分析のために用い、以下の相対的活性レベルを得た。A.pSJ10887scoAB_Bs;配列番号:58を含む:SJ11197AtoAD活性=0±30;ScoAB活性=320±40B.pSJ10888atoAD_Ec;配列番号:3638を含む:SJ11199AtoAD活性=6±4;ScoAB活性=1±2C.pSJ10990ctfAB_Ca;配列番号:4042を含む:SJ11221AtoAD活性=1±1;ScoAB活性=1±3L.プランタルムLplantarumにおけるアセトアセテートデカルボキシラーゼ発現及び活性プラスミドpSJ10756を、上述のようにエレクトロポレーションによりL.プランタルムLplantarumSJ10511SJ10656と同一に導入し、ベクターのエリスロマイシン耐性遺伝子の存在をプライマー663783及び663784同上を用いたPCR増幅により確認した。二つの形質転換体をSJ10788及びSJ10789として保存した。同様に、プラスミドpSJ10754及びpSJ10755で、SJ10511を形質転換し、SJ10786及びSJ10787を得、プラスミドpSJ10778及びpSJ10779で、SJ10656を形質転換し、SJ10849及びSJ10850を得、プラスミドpSJ10780及びpSJ10781で、SJ10656を形質転換し、SJ10851及びSJ10852を得た。以下の8つの株をアルコールデカルボキシラーゼ発現を確認するために用いた。配列番号45のクロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする遺伝子を双方ともに含む、SJ10786及びSJ10787。配列番号18のクロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする遺伝子を双方ともに含む、SJ10788及びSJ10789。配列番号118のラクトバチルスサリバリウスLactobacillussalvariusアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする遺伝子を双方ともに含む、SJ10851及びSJ10852。配列番号120のラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする遺伝子を双方ともに含む、SJ10849及びSJ10850。前記株を37°Cで静置培養において1日、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ、培養物をプールし、細胞を遠心分離により回収した。細胞をもとの容量の1/3のバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTTに懸濁し、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、4.0m/sの設定で40秒において5サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブにおいて500μLの量中でガラスボールを用いた処理により機械的に破砕した。細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を分析に用いた。このプールされたサンプルを、上述のように質量分析計によるタンパク質分析に用い、同定された245個のタンパク質の中でも、クロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼを0.26のemPAI値で同定した。L.ロイテリLreuteriにおけるアセトアセテートデカルボキシラーゼ発現及び活性L.ロイテリLreuteriSJ10655のエレクトロコンピテント細胞を、選択されたアセトアセテートデカルボキシラーゼをコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドを用いて上述のように調製及び形質転換した。以下のプラスミドは、示される形質転換体をもたらし、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS寒天プレート上で選択し、嫌気性チャンバー中で37°Cでインキュベートした。pSJ10754adc_Ca;配列番号44を含む:SJ11183pSJ10756adc_Cb;配列番号17を含む:SJ11185pSJ10780adc_Ls;配列番号117を含む:SJ11187pSJ10778adc_Lp;配列番号119を含む:SJ11189これらの株を、37°Cで1日静置培養において、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ、細胞を4mlの培養物量から遠心分離により回収した。細胞を500μLのバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTTで1回洗浄し、50μLのバッファに再懸濁し、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、4.0m/sの設定で40秒において4サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブ中でガラスボールによる処理により機械的に破砕した。450μLのバッファを添加し、細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を酵素活性分析に用いた。同様に、各培養物の1mlを混合し、混合されたサンプルを上述のように洗浄、及び破砕し、この混合されたサンプルを他で記載されるように、質量分析によるタンパク質分析に用いた。ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumからのアセトアセテートデカルボキシラーゼは0.08の相対的emPAI値で検出され、クロストリジウムアセトブチリカムClostridiumacetobutylicumからのアセトアセテートデカルボキシラーゼは0.08の相対的emPAI値で検出された。個別のサンプルを酵素活性分析のために用い、以下の相対的活性レベルを得た。A.pSJ10754adc_Ca;配列番号44を含む:SJ11183=6±13B.pSJ10756adc_Cb;配列番号17を含む:SJ11185=-1±16C.pSJ10780adc_Ls;配列番号117を含む:SJ11187=7±12D.pSJ10778adc_Lp;配列番号119を含む:SJ11189=5±9L.プランタルムLplantarumにおけるアルコールデヒドロゲナーゼ発現及び活性プラスミドpSJ10745を、上述のようにエレクトロポレーションによりL.プランタルムLplantarumSJ10511SJ10656と同一に導入し、ベクターのエリスロマイシン耐性遺伝子の存在をプライマー663783及び663784同上を用いたPCR増幅により確認した。二つの形質転換体をSJ10784及びSJ10785として保存した。同様に、プラスミドpSJ10768及びpSJ10769を、SJ10656に導入し、それぞれSJ10883及びSJ10898を得、プラスミドpSJ10782及びpSJ10783を、SJ10656に導入し、それぞれSJ10884及びSJ10885を得、プラスミドpSJ10762及びpSJ10765を、SJ10656に導入し、それぞれSJ10896及びSJ10897を得た。全ての場合において、エリスロマイシン耐性遺伝子の存在をPCR増幅により確認した。以下の8つの株をアルコールデヒドロゲナーゼ発現を確認するために用いた。配列番号47のラクトバチルスアントリLactobacillusantriアルコールデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を双方ともに含む、SJ10883及びSJ10898。配列番号122のラクトバチルスファーメンタムLactobacillusfermentumアルコールデヒドロゲナーゼをコードするpSJ1075を双方ともに含む、SJ10896及びSJ10897。配列番号24のサーモアナエロバクターエタノリカスThermoanaerobacterethanolicusアルコールデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を双方ともに含む、SJ10784及びSJ10785。配列番号21のクロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を双方ともに含む、SJ10784及びSJ10785。前記株を37°Cで静置培養において1日、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ2mlエッペンドルフチューブ中1.5ml培養容量、培養物をプールし、細胞を遠心分離により回収した。細胞をもとの容量の1/3のバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTTに懸濁し、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、4.0m/sの設定で40秒において5サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブにおいて500μLの量中でガラスボールを用いた処理により機械的に破砕した。細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を分析に用いた。このプールされたサンプルを、上述のように質量分析計によるタンパク質分析に用い、同定された160個のタンパク質の中でも、クロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiアルコールデヒドロゲナーゼを0.09のemPAI値で同定した。同一のプールされたサンプルを後述のようにイソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性について分析した。マイクロタイタープレートのウェル中で、50μl200mMアセトン、50μl400μMNADPHSigmaN1630、50μlバッファ100mMリン酸カリウム、pH7.2及び50μlプールされた細胞溶解液MilliQ水で1~20x希釈を混合することにより測定した。NADPHの消失をプレートリーダーMolecularDevicesSpectraMaxPlusにおいて20分間、毎秒20秒、340nmにおいて吸光度を測定することにより観察した。イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を方程式:活性=サンプルの傾斜希釈倍率、を用いて初期傾斜から計算した。10.4±0.8mOD/分の活性がサンプルにおいて見られた。L.ロイテリLreuteriにおけるアルコールデヒドロゲナーゼ発現及び活性L.ロイテリLreuteriSJ10655のエレクトロコンピテント細胞を、選択されたアルコールデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドを用いて、上述のように調製及び形質転換した。以下のプラスミドは、示される形質転換体をもたらし、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS寒天プレート上で選択し、嫌気性チャンバー中で37°Cでインキュベートした。pSJ10768sadh_La;配列番号46を含む:SJ11191pSJ10762sadh_Lf:配列番号121を含む:SJ11201pSJ10766sadh_Lf;配列番号121を含む:SJ11193pSJ10782adh_Cb;配列番号20を含む:SJ11195これらの株を、37°Cで1日静置培養において、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中で増殖させ、細胞を4mlの培養物量から遠心分離により回収した。細胞を500μLのバッファ0.1MTrispH7.5、2mMDTTで1回洗浄し、50μLのバッファに再懸濁し、サイクルの間、氷上で冷却しながらBeadBeaterFastPrepFP120BIO101Savantにおいて、4.0m/sの設定で40秒において4サイクル、1.5mlエッペンドルフチューブ中でガラスボールによる処理により機械的に破砕した。450μLのバッファを添加し、細胞残屑を遠心分離により除去し、上清を酵素活性分析に用いた。同様に、各培養物の1mlを混合し、混合されたサンプルを上述のように洗浄、及び破砕し、この混合されたサンプルを他で記載されるように、質量分析によるタンパク質分析に用いた。クロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckii由来のアルコールデヒドロゲナーゼは0.12の相対的emPAI値で検出され、ラクトバチルスファーメンタムLactobacillusfermentum由来のアルコールデヒドロゲナーゼは0.04の相対的emPAI値で検出され、ラクトバチルスアントリLactobacillusantri由来のアルコールデヒドロゲナーゼは0.04の相対的emPAI値で検出された。個別のサンプルを酵素活性分析のために用い、以下の相対的活性レベルを得た。A.pSJ10768sadh_La;配列番号46を含む:SJ11191=5±2B.pSJ10762sadh_Lf:配列番号121を含む:SJ11201=1±1C.pSJ10766sadh_Lf;配列番号121を含む:SJ11193=1900D.pSJ10782adh_Cb;配列番号20を含む:SJ11195=3±4実施例17:L.プランタルムLplantarumアルコールデヒドロゲナーゼ発現株を用いたアセトンからのイソプロパノール生産アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む発現ベクターを有する株、及び空発現ベクターを有する株SJ10678を、37°Cで静置培養において、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地中2mlエッペンドルフチューブ中1.5ml培養容量で2式増殖させ、ここで、培養物のうちの1つの培地にアセトン約100μLのアセトン/リットルを添加した。1日のインキュベーション後、100μLの上清を遠心分離により回収した。合計4日のインキュベーション後、別の100μLの上清が回収され、上述のようにアセトン及びイソプロパノール含量についてサンプルを分析した。結果を表9に示す。コンストラクトは、上記の実施例に示される略記を用いて表される。アセトン添加は、ラクトバチルスアントリLactobacillusantri、サーモアナエロバクターエタノリカスThermoanaerobacterethanolicus、及びクロストリジウムベイジェリンキーClostridiumbeijerinckiiからのアルコールデヒドロゲナーゼを発現する株について測定されるイソプロパノール濃度を増加させた。全ての発酵において、少量のアセトンが検出された。対照株SJ10678及びラクトバチルスファーメンタムLactobacillusfermentumコンストラクトを含む株は、これらの試験条件下でイソプロパノールを生産しなかった。実施例18:L.プランタルムLplantarumアルコールデヒドロゲナーゼ発現株におけるイソプロパノール生産に関する様々なアセトン濃度の効果株SJ10898、SJ10785、及びSJ10885を、対照株SJ10678とともに様々なレベルで添加されるアセトンを含む培地中で発酵させた。株を凍結された収集保存株バイアルから、2mlエッペンドルフチューブ中に10μg/mlエリスロマイシンを含む1.8mlMRSに植菌し、これを振盪させながら37°Cで一晩インキュベートした。これらの培養物から50μLを、10μg/mlエリスロマイシンと示されるアセトンレベルを含む1.8mlMRS培地に植菌するために用いた。100μL上清を上述のように1日及び4日の発酵後、アセトン及び2-プロパノール含量の分析のために回収した。結果を表10に示す。コンストラクトは、上記の実施例に示される略記を用いて表される。アセトンのイソプロパノールへの有意な変換は、3つのアルコールデヒドロゲナーゼ発現株について観察された一方で、イソプロパノールは、対照株SJ10678で検出されなかった。実施例19:ラクトバチルス属誘導可能イソプロパノール-オペロンコンストラクトからの大腸菌におけるイソプロパノール生産ペプチド誘導可能ラクトバチルス属プロモーターシステムにより制御されるイソプロパノールオペロンは上記に記載され、ここでプラスミドは、大腸菌において構築される。これらの大腸菌株を、上述のように37°Cで1日間、300rpmで振盪させながらの、誘導ペプチドの添加を含む或いは含まない、LB100μg/mlエリスロマイシン1グルコース中での発酵によるイソプロパノール生産について試験した。前記株を、凍結保存培養から発酵培地試験管中10mlに直接植菌した。結果を表11Aに示す。コンストラクトは、上記の実施例に示される略記を用いて表される。有意なイソプロパノール生産は、試験された全てのイソプロパノールオペロンコンストラクトからの大腸菌において観察された。実施例20:アセトン及び/又は1,2-プロパンジオールが添加されたL.ロイテリLreuteriアルコールデヒドロゲナーゼ発現株からのイソプロパノール生産L.ロイテリLreuteriSJ10655のエレクトロコンピテント細胞を、選択されたアルコールデヒドロゲナーゼをコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドを用いて上述のように調製及び形質転換した。以下のプラスミドは示される形質転換体をもたらし、抽出されたプラスミドの制限酵素分析により確認された。pSJ10600:SJ11011及びSJ11012pSJ10765:SJ11013及びSJ11014pSJ10769:SJ11015及びSJ11016pSJ10783:SJ11024pSJ10745:SJ11053及びSJ11054形質転換体を10μg/mlエリスロマイシンを含むLCM寒天プレート上で選択し、嫌気性チャンバー中で37°Cにおいてインキュベートした。別の実験では、L.ロイテリLreuteriSJ10655のエレクトロコンピテント細胞を、上述のように調製及び形質転換した。以下のプラスミドは示される形質転換体をもたらし、抽出されたプラスミドの制限酵素分析により確認された、以下の株を保存した。pSJ10768:SJ11191及びSJ11192:pSJ10766:SJ11193及びSJ11194pSJ10782:SJ11195及びSJ11196pSJ10762:SJ11201及びSJ11202選択されたL.ロイテリLreuteri形質転換体を、凍結保存培養からエリスロマイシン10μg/ml及びアセトン5ml/lが添加された2mlMRS培地に直接植菌し、チューブを振盪させることなく、37°Cで3日間インキュベートした。上清を回収し、上述のように1-プロパノール、2-プロパノール及びアセトン含量について分析した。結果を表11Bに示す。別の実験では、株SJ11024、SJ11053及びSJ11054を、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRSに植菌し、37°Cで一晩インキュベートした。これらの培養物を、下記の表に示されるようにアセトン及び/又は1,2-プロパンジオールが添加され、10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地を含む2mlエッペンドルフチューブに植菌するために用い、振盪することなく、37°Cで2日間インキュベートした。その後1ml上清サンプルを本明細書に記載されるように分析し、結果をn-プロパノール、イソプロパノール、アセトン、及び1,2-プロパンジオール含量について、それぞれ表11C、11D、11E、及び11Fに示す。実施例21:L.ロイテリLreuteri発現株を用いたイソプロパノール生産L.ロイテリLreuteriSJ11044を、上述のプロトコールを用いてエレクトロポレーションにより選択された組み換えプラスミドを用いて形質転換した。選択された形質転換された株及び調製物からのさらなる形質転換体コロニー、-B、-C、-D等として示されるを10μg/mlエリスロマイシンを含むMRS培地を含む2mlエッペンドルフチューブにプレート上のコロニーから植菌し、振盪させることなく37°Cで一晩インキュベートした。0.5mlの上清サンプルを本明細書に記載のように、アセトン及びイソプロパノール含量について分析した。結果を表12Aに示す。コンストラクトは、上述の実施例に示される略記で表される。4つの異なるラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株及び植菌されていない培地対照サンプルを、多数の異なる培地において、2mlの静置培養で37°Cで2日間インキュベートした。その後、サンプルを本明細書に記載のように、アセトン、n-プロパノール及びイソプロパノール含量について分析した。結果を表12Bに示す。コンストラクトは、上述の実施例に示される略記で表される。実施例22:サトウキビ汁におけるL.ロイテリLreuteri発現株を用いたイソプロパノール生産株SJ11278を酵母抽出物10g/l、Tween801g/l、MnSO4H2O50mg/l及びエリスロマイシンを含むサトウキビ汁培地BRIX=5において増殖させた。前記培養物を37°Cで1日間インキュベートした。50mLの上記培養物を、以下の組成:サトウキビ汁BRIX10に調整;PluronicDowfax63N、1mL/L;Bacto酵母抽出物、10g/L;Tween80、1g/L;MnSO4H2O、25mg/L;フィチン酸、650mg/L;エリスロマイシン、4mLのエタノール中5mg/mL溶液を含む1950mL培地を含む発酵槽に植菌するために用いた。発酵は、窒素0.1L/分が注入され、400RPMの速度で撹拌された。温度及びpHは、それぞれ37°C及びpH6.5で一定に保った。発酵の3日後、前記イソプロパノール濃度は0.3mL/Lであった。同一の条件下でエリスロマイシンの添加を除く増殖させた形質転換していない宿主株を用いた対照実験においては、イソプロパノールは検出することはできなかった。同一時点におけるn-プロパノール濃度は、SJ11278及び対照株での発酵について、それぞれ0.07mL/L及び0.08mL/Lまで測定された。発酵の3日後に得られたSJ11278培養物を、コンタネーションについて分析し、SJ11278を含む発酵は、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarumが混入していたことが分かった。植菌源は、その後再試験され、ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株SJ11278であることが分かった。培養物にコンタネーションがない場合、イソプロパノールの優れた力価が得られることは、想像される。実施例23:ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriにおけるn-プロパノール耐性ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriは、後述の条件下でn-プロパノールに対する耐性を有することを示した。タンク発酵のための種菌源を調製するために、ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri株の前培養を上述のように行なった。50mLのこの培養物を、後述のように調製された1950mLの培地を含む発酵槽に植菌するために用いた。培地組成:水道水で5の最終BRIXに調製された濃縮されたサトウキビ汁BRIX53を、基本成分として用いた。この希釈されたサトウキビ汁に、酵母抽出物Bactoを10g/Lの量で添加し、消泡剤PluronicDowfax63Nを1mL/Lの量で添加した。この混合物をラボスケール発酵槽3リットルベッセルに移し、121~123°Cで30分間オートクレーブした。オートクレーブ後、温度を37°Cに調整し、80mL40ml/Lに相当のn-プロパノールを濾過滅菌によりタンクに添加した。植菌後、温度を約37°Cに維持し、例えば、10w/wNH4OHの添加によりpHを6.5又はpH3.8のいずれかに維持した。N2の小流入は、400rpmでの撹拌の間、培養物が嫌気的であることを確実にした。細胞増殖を観察するために、OD650測定を発酵の間中行った。ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriは、4n-プロパノール中pH6.5及びpH3.8の双方において増殖が可能であった。pH3.8において、増殖速度は、幾分か遅かったが、発酵の約40時間後に同一の最大ODに到達した。発酵の112時間後に採取された発酵サンプルのガスクロマトグラフィー-質量分析GCMSに基づく分析は、n-プロパノールの初期量を示し、pH6.5及びpH3.8は、それぞれ79.8及び93.1含んだ。これは、本実験に用いられるn-プロパノールが、96n-プロパノールに加えて、約4イソプロパノールを最初に含んでいたことを決定した。実施例24:野生型ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriにおけるn-プロパノール生産野生型ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriO4ZXVは、後述の条件下で、n-プロパノールを生産することを示した。タンク発酵のための野生型ラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteriO4ZXVの前培養を、通気又は振盪することなくMRS培地中で37°Cにおいて2時間増殖させた。この培養物のサンプルを1950mLの以下の培地を含む発酵槽に植菌するために用いた。培地組成:水道水で5の最終BRIXに調製された濃縮されたサトウキビ汁BRIX53を、基本成分として用いた。この希釈されたサトウキビ汁に、酵母抽出物Bactoを10g/Lの量で添加し、消泡剤PluronicDowfax63Nを1mL/Lの量で添加した。この混合物をラボスケール発酵槽3リットルベッセルに移し、121~123°Cで30分間オートクレーブした。オートクレーブ後、10w/wNH4OHの添加によりpHを6.5に維持し、温度を37°Cで維持した。培養物をN21分あたり0.1リットルの小流入により嫌気性を維持し、撹拌速度は400rpmであった。発酵の48時間後に採取された発酵サンプルのガスクロマトグラフィー-質量分析計GCMSに基づく分析は、培養物が約40μL/Ln-プロパノールを含むことを示した。pHが、pH6.5の代わりにpH3.8において一定に保たれることを除く同一条件下で、上記と同一の株を用いて行われた別の実験では、発酵の48時間後に採取されたサンプルは、培養物が約40μL/Ln-プロパノールを含んだことを示した。実施例25:n-プロパノールアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子のクローニングP.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPPsyn2のクローニング、及びベクターpTRGU30の構築P.フロイデンライシイPfreudenreichiiにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1500bpコーディング配列を、大腸菌における発現のために最適化し、合成的にpTRGU30に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、NotI-BamHI-RBS-CDS-XbaI-HindIIIであり、pTRGU30をもたらす。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号25、26、及び27に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1503bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、500個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。このプログラムに基づいて予測される成熟タンパク質は、53.7kDaの予測分子量、及び6.39の等電pHを有する500個のアミノ酸を含む。L.コリノイデスLcollinoidesアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPLcのクローニング及びベクターpTRGU31の構築L.コリノイデスLcollinoidesにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1443bpコーディング配列を、大腸菌における発現のために最適化し、合成的にpTRGU31に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、PacI-NotI-RBS-CDS-HindIII-AscIであり、pTRGU31をもたらす。L.コリノイデスLcollinoidesアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号28、29、及び30に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1446bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、481個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。ベクターNTIInvitrogenPaisleyUK分析に基づいて予測された成熟タンパク質は、51.2kDaの予測分子量、及び5.24の等電pHを有する481個のアミノ酸を含む。C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPCbのクローニング及びベクターpTRGU85の構築C.ベイジェリンキCbeijerinckiiにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1404bpコーディング配列を、大腸菌における発現のために最適化し、合成的にpTRGU85に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、PacI-NotI-RBS-CDS-HindIII-AscIであり、pTRGU85をもたらす。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号31、32、及び33に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1407bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、468個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。ベクターNTIInvitrogenPaisleyUK分析に基づいて予測された成熟タンパク質は、51.3kDaの予測分子量、及び5.88の等電pHを有する468個のアミノ酸を含む。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduP_Pf_syn2aのクローニング及びベクターpTRGU300の構築二つの潜在的な開始コドンがpduP_Pf_syn2中に見られ、一つはpduP_Pf_syn2ヌクレオチド配列の末端に適用され、二つ目は及び最初の開始コドンの93bp下流に位置する。二つ目の開始コドンの適用は、P.フロイデンライシイPfreudenreichiiにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1407bpコーディング配列を、生じる。この配列は、最初の93bpを除いて上記で適用される配列と同一であり、大腸菌における発現のために最適化された。前記配列を、合成的にpTRGU300に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、PacI-NotI-BamHI-RBS-CDS-XbaI-HindIII-AscIであり、pTRGU300をもたらす。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号48、49、及び51に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1410bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、469個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。ベクターNTIInvitrogenPaisleyUK分析に基づいて予測された成熟タンパク質は、50.1kDaの予測分子量、及び5.69の等電pHを有する469個のアミノ酸を含む。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduP_Pf_syn2bのクローニング及びベクターpTRGU399の構築上述のpduP_Pf_syn2aのクローニングは、前記遺伝子がインビボ転写効率を低くすることができる二次構造を潜在的に有することを示した。それ故、P.フロイデンライシイPfreudenreichiiにおいて同定された同一のアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1407bpコーディング配列を、タンパク質のアミノ酸配列を維持しつつDNA配列を改変するために、大腸菌における発現のために再最適化した。再最適化配列は、合成的にpTRGU399に構築された。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントは、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’を伴って設計された。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、PacI-NotI-BamHI-RBS-CDS-XbaI-HindIII-AscIであり、pTRGU399をもたらす。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子のこの第二のコドン最適化ヌクレオチド配列COは、配列番号50として示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1410bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、上記の配列配列番号51と同一である。R.パルストリスRpalustrisアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPRpのクローニング及びベクターpTRGU344の構築R.パルストリスRpalustrisにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1392bpコーディング配列を、大腸菌における発現のために最適化し、合成的にpTRGU344に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入した。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、EcoRI-PacI-RBS-CDS-SbfI-HindIII-XbaIであり、pTRGU85をもたらす。R.パルストリスRpalustrisアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号52、53、及び54に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1395bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、464個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。ベクターNTIInvitrogenPaisleyUK分析に基づいて予測された成熟タンパク質は、49.3kDaの予測分子量、及び5.98の等電pHを有する464個のアミノ酸を含む。R.カプスラータRcapsulatusアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPRcのクローニング及びベクターpTRGU346の構築R.カプスラータRcapsulatusにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1599bpコーディング配列を、大腸菌における発現のために最適化し、合成的にpTRGU346に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、EcoRI-PacI-RBS-CDS-SbfI-HindIII-XbaIであり、pTRGU346をもたらす。R.カプスラータRcapsulatusアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号55、56、及び57に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1602bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、533個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。ベクターNTIInvitrogenPaisleyUK分析に基づいて予測された成熟タンパク質は、55.9kDaの予測分子量、及び6.32の等電pHを有する533個のアミノ酸を含む。R.ルブラムRrubrumアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPRrのクローニング及びベクターpTRGU348の構築R.ルブラムRrubrumにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1590bpコーディング配列を、大腸菌における発現のために最適化し、合成的にpTRGU348に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、EcoRI-PacI-RBS-CDS-SbfI-HindIII-XbaIであり、pTRGU348をもたらす。R.ルブラムRrubrumアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号58、59、及び60に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1593bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、530個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。ベクターNTIInvitrogenPaisleyUK分析に基づいて予測された成熟タンパク質は、52.3kDaの予測分子量、及び6.06の等電pHを有する498個のアミノ酸を含む。E.ハリイEhalliiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPEhのクローニング及びベクターpTRGU361の構築E.ハリイEhalliiにおいて同定されたアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の1404bpコーディング配列を、大腸菌における発現のために最適化し、合成的にpTRGU360に構築した。コドン最適化コーディング配列を含むDNAフラグメントを、開始コドンの直前にリボソーム結合部位RBS、配列5’-GAAGGAGATATACC-3’が含まれるように設計した。得られた配列は、GeneartAGRegenburgGermanyにより置換及び合成され、β-ラクタマーゼをコードする遺伝子blaTEM-1を含むpMAバックボーンベクターに導入された。合成された場合、続くクローニングステップを容易にするために、コーディング配列及びRBSフラグメントを制限酵素認識部位と隣接させた。pMAベクターにクローニングされた合成フラグメント全体は、EcoRI-PacI-RBS-CDS-SbfI-HindIII-XbaIであり、pTRGU346をもたらす。E.ハリイEhalliiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列WT、コドン最適化ヌクレオチド配列CO、及び推定されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号61、62、及び63に示される。前記コーディング配列は、終始コドンを含む1407bpであり、コードされ、予測されるタンパク質は、468個のアミノ酸である。SignalPプログラムNielsenetal1997ProteinEngineering1016を用いて、配列中にシグナルペプチドがないことが予測された。ベクターNTIInvitrogenPaisleyUK分析に基づいて予測された成熟タンパク質は、50.9kDaの予測分子量、及び5.79の等電pHを有する533個のアミノ酸を含む。実施例26:n-プロパノール生産のためのアルデヒドデヒドロゲナーゼを含む経路コンストラクトの構築及び形質転換P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPPfsyn2を発現するpTRGU44の構築及び形質転換アルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む1536bpフラグメントを、下記に示すプライマーP0017及びP0021を用いてpTRGU30実施例15から増幅した。プライマーp0017:5’-ATCCTCTAGAGAAGGAGATATACCATGCGT-3’配列番号96プライマーp0021:5’-TGCAAGCTTTTAGCGGATATTCAGGCCAC-3’配列番号97PCR反応のために、Phusion登録商標HotStartDNAポリメラーゼFinnzymesFinlandを用い、増幅反応を、95°Cで2分;95°Cで30秒、55°Cで1分、72°Cで1分を29サイクル;その後72°Cで5分を1サイクルでプログラムした。得られたPCR産物を製造者の使用説明書に従って、PCR精製キットQiagenを用いて精製した。続いて、PCR産物及びpTrc99AEAmannandJBrosius1985Gene40183190の双方を、XbaINewEnglandBiolabsIpswichMAUSA及びHindIIINEB制限酵素認識部位は、上記のプライマー中の下線であるで37°Cで一晩消化した。前記酵素を65°Cで20分間加熱不活性化し、pTrc99A反応混合物を37°Cで30分間1U仔牛腸ホスファターゼCIPNEBを用いて脱リン酸化した。消化されたpTrc99A及びPCR産物を1アガロースゲルで泳動し、その後製造者の使用説明書に従ってQIAquickゲル抽出キットをQiagenHildenGermany用いて精製した。消化されたPCR産物を、10mMATPFHoffmannLaRocheLtdBaselSwitzerllandを含むT4DNAリガーゼバッファ中T4DNAリガーゼを用いて、16°Cで一晩pTrc99Aの4152bpフラグメントとライゲートした。ライゲーション混合物の1μLの量でエレクトロポレーションにより大腸菌TOP10を形質転換した。形質転換体を200μg/mLアンピシリンを含むLBプレート上にプレートし、37°Cで一晩インキュベートした。選択されたコロニーを、その後200μg/mLアンピシリンを含むLBプレート上に縞状に播種した。一つのコロニーである大腸菌TRGU44を、200μg/mLアンピシリンを含む液体TYブイヨン培地に植菌し、37°Cで一晩インキュベートした。対応するプラスミドpTRGU44をQiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いて単離し、にDNA配列決定に供し、アルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子がベクターに統合されていることを確認した。pTRGU44を含む一晩の液体培養液からの大腸菌TRGU44を、-80°Cで30グリセロールに保存した。L.コリノイデスLcollinoidesアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPLcを発現するpTRGU42の構築及び形質転換アルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子を含む1479bpフラグメントを、下記に示すプライマーP0013及びP0019を用いてpTRGU31から増幅した。プライマーp0013:5’-ATCCTCTAGAGAAGGAGATATACCATGGCC-3’配列番号98プライマーp0019:5’-TGCAAGCTTTTAGACCTCCCAGGAACGCA-3’配列番号99PCR反応のために、Phusion登録商標HotStartDNAポリメラーゼFinnzymesFinlandを用い、増幅反応を、95°Cで2分;95°Cで30秒、55°Cで1分、72°Cで1分を29サイクル;その後72°Cで5分を1サイクルでプログラムした。得られたPCR産物を、製造者の使用説明書に従ってPCR精製キットQiagenを用いて精製した。続いて、PCR産物及びpTrc99AEAmannandJBrosius1985Gene40183190の双方を、XbaINewEnglandBiolabsIpswichMAUSA及びHindIII183190の双方を、XbaINewEnglandBiolabsIpswichMAUSA及びHindIIINEB制限酵素認識部位は、上記のプライマー中の下線であるで37°Cで一晩消化した。前記酵素を65°Cで20分間加熱不活性化し、pTrc99A反応混合物を37°Cで30分間1U仔牛腸ホスファターゼCIPNEBを用いて脱リン酸化した。消化されたpTrc99A及びPCR産物を1アガロースゲルで泳動し、その後製造者の使用説明書に従ってQIAquickゲル抽出キットをQiagenHildenGermany用いて精製した。消化されたPCR産物を、10mMATPFHoffmannLaRocheLtdBaselSwitzerllandを含むT4DNAリガーゼバッファ中T4DNAリガーゼを用いて、16°Cで一晩pTrc99Aの4152bpフラグメントとライゲートした。ライゲーション混合物の1μLの量でエレクトロポレーションにより大腸菌TOP10を形質転換した。形質転換体を200μg/mLアンピシリンを含むLBプレート上にプレートし、37°Cで一晩インキュベートした。選択されたコロニーを、その後200μg/mLアンピシリンを含むLBプレート上に縞状に播種した。一つのコロニーである大腸菌TRGU91を、200μg/mLアンピシリンを含む液体TYブイヨン培地に植菌し、37°Cで一晩インキュベートした。対応するプラスミドpTRGU91をQiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いて単離し、DNA配列決定に供し、アルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子がベクターに統合されていることを確認した。pTRGU91を含む一晩の液体培養液からの大腸菌TRGU91を、-80°Cで30グリセロールに保存した。P.フロイデンライシイPfreudenreichiiアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子pduPPfsyn2aを発現するpTRGU531の構築及び形質転換遺伝子pduP_Pf_syn2aをpTRGU300中の隣接部位BamHI及びXbaIを用いてベクターpTRGU88にクローニングした。pTRGU88及びpTRGU300の双方を、20ulベクター、5μlNEB2バッファ、2μlXbaI、2μlBamHI、0.5μlBSA及び20μlH2Oを用いて消化した。pTRGU88及びpTRGU300の双方を、37°Cで一晩消化した。前記酵素を65°Cで20分間加熱不活性化し、pTRGU88反応混合物を37°Cで30分間1U仔牛腸ホスファターゼCIPNEBを用いて脱リン酸化した。消化されたpTRGU88及びpTRGU300を1アガロースゲルで泳動し、予測されるサイズpTRGU88:4518bp;pTRGU300:1430bpのバンドを、その後、製造者の使用説明書に従ってQIAquickゲル抽出キットをQiagenHildenGermany用いて精製した。単離されたDNAフラグメントを、10mMATPFHoffmannLaRocheLtdBaselSwitzerllandを含むT4DNAリガーゼバッファ中T4DNAリガーゼを用いて、16°Cで一晩ライゲートした。1μLの量のライゲーション混合物でエレクトロポレーションにより大腸菌TOP10を形質転換した。形質転換体を20μg/mLカナマイシンを含むLBプレート上にプレートし、37°Cで一晩インキュベートした。選択されたコロニーを、その後20μg/mLカナマイシンを含むLBプレート上に縞状に播種した。一つのコロニーである大腸菌TRGU304を、10μg/mLカナマイシンを含む液体TYブイヨン培地に植菌し、37°Cで一晩インキュベートした。対応するプラスミドpTRGU304をQiaprep登録商標スピンミニプレップキットMolecularCellularProteomics412651272に従ってmolを計算した。表24に示す設定をMascotサーチに用いた。選択されたサンプルのMS結果選択されたサンプルは、結果を確認するために2回、例えばMS1、及びMS7において分析された。得られた結果を表25に示す。表25の結果は、pduP_Pf_syn2aの発現は、低コピー数プラスミドpTRGU304表21からよりも、TRGU302中の高コピー数プラスミドpTrc99Aからの大腸菌TOP10において高いことを示す。TRGU462及びTRGU422を除く全ての場合において、生産されたタンパク質は、MSにより検出された。実施例33:様々な異種のn-プロパノール経路遺伝子の組み合わせを含む組み換え大腸菌MG1655におけるn-プロパノールの生産表19に示すpTRGU409~pTRGU517のプラスミドを含む大腸菌MG1655を、10μg/mLカナマイシン及び1mMイソプロピル-ベータ-チオガラクトピラノシドを含む10mLMM中で、37°Cで振盪250rpmさせながら個別に一晩培養した。各培地から17、44、及び116時間後に2mlのサンプルを採取した。各サンプルを本明細書で概略を示すようにガスクロマトグラフィーを用いて分析した。培養発現の結果を表26に示す。表26の結果は、いずれかの試験されたPduP遺伝子を含むpTRGU88発現ベクターで形質転換された場合、大腸菌MG1655が、少量のn-プロパノールを生産することができることを示す。多くの場合において、想定されるn-プロパノール生合成経路の残りの遺伝子を挿入することは、生産されるプロパノールの量を増加させる。また、単一のpduP遺伝子発現、例えばno.11~15、17-20、22、37、39、43、45、及び47と比較して、プロパノール生産が増加する遺伝子組み合わせのいくつかの例は示される。これらの中でも、多くの遺伝子組み合わせが、MutAB遺伝子と比較してSbm遺伝子を含むが、YgfD、Mme、YgfG及びPduP_syn2aと組み合わせてMutABを含むno.46は、pduP_Pf_syn2a単独の発現と比較して116時間後に増加したプロパノール濃度をもたらさなかった。実施例34:組み換え大腸菌TOP10におけるイソプロパノール及びn-プロパノールの生産発現ベクターpTrc99A及びpTRGU88で、上述のエレクトロポレーションにより、大腸菌TOP10を同時に形質転換した。形質転換体を200μg/mLアンピシリン及び20μg/mLカナマイシンを含むLB寒天プレート上で選択した。その後選択されたコロニーを、200μg/mLアンピシリン及び20μg/mLカナマイシンを含むLB寒天プレート上に縞状に播種し、37°Cで一晩インキュベートした。二つのコロニーが選択され、100μg/mLアンピシリン及び20μg/mLカナマイシンを含む10mLTYブイヨン培地のチューブを植菌するために用い、その後振盪250rpmさせながら37°Cで一晩インキュベートした。その後、培養物を遠心分離により回収し、Qiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いてプラスミドを単離した。プラスミドをXbaIで消化し、各形質転換体中の二つのプラスミドの存在を、上述のゲル電気泳動で分析した場合、4176bp及び4524bpにおける二つのバンドの存在により、確認した。構築された大腸菌株TRGU284を-80°Cで30グリセロール中に保存した。前記発現ベクターpTRGU44同上及びpTRGU196C.アセトブチリカムCacetobuylicumチオラーゼ遺伝子、B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ遺伝子、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ遺伝子、及びC.ベイジェリンキイソプロパノールデヒドロゲナーゼ遺伝子を発現する;2010年10月29日に出願された米国仮出願第61/408,138号を参照のことを、上述のエレクトロポレーションにより、大腸菌TOP10を同時に形質転換した。形質転換体を200μg/mLアンピシリン及び20μg/mLカナマイシンを含むLB寒天プレート上で選択した。選択されたコロニーを、その後200μg/mLアンピシリン及び20μg/mLカナマイシンを含むLB寒天プレート上に縞状に播種し、37°Cで一晩インキュベートした。二つのコロニーを選択し、100μg/mLアンピシリン及び20μg/mLカナマイシンを含む10mLTYブイヨン培地のチューブを植菌するために用い、その後振盪250rpmさせながら37°Cで一晩インキュベートした。その後、培養物を遠心分離により回収し、Qiaprep登録商標スピンミニプレップキットQiagenを用いてプラスミドを単離した。プラスミドをXbaIで消化し、各形質転換体中の二つのプラスミドの存在を、上述のゲル電気泳動で分析した場合、pTRGU44及びpTRGU196について5676bp及び8930bpにおける二つのバンドの存在により確認した。構築された大腸菌株TRGU261を-80°Cで30グリセロール中に保存した。大腸菌株Trc99A、TRGU44、TRGU196、及びTRGU261を、100μg/mLアンピシリン及び1mMイソプロピル-ベータ-チオガラクトピラノシドIPTGを含む10mLLB培地中で、振盪250rpmさせながら37°Cで一晩培養した。各株からの0.5mLのサンプルを採取し、卓上遠心分離装置を用いて15000xgで1分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後各株を、何も添加していない0.5mL最小培地MMに再懸濁した。その後、前記サンプルを各株について新しい10mL培養物に植菌するために用いた。培養物を振盪250rpmさせながら37°Cで119時間インキュベートした。培養の終了時に2mLサンプルを採取し、遠心分離し、各サンプルの上清をガスクロマトグラフィーにより分析した。発酵培地中のアセトン、1-プロパノール及びイソプロパノールを、本明細書に記載の手順を用いて、GC-FIDにより検出した。サンプルをメタノール中0.05テトラヒドロフランで11に希釈し、分析した。表28に示すように、n-プロパノールは、大腸菌TRGU44により20mg/Lで生産され、ごく微量が陰性対照株大腸菌Trc99Aにおいて検出された。イソプロパノールは、大腸菌TRGU196により10mg/Lにおいて生産された。驚くべきことに、大腸菌TOP10における異種のpduP及び異種のイソプロパノール経路遺伝子の共発現は、20mg/Lにおいて生産されるn-プロパノール、及びイソプロパノールの27倍の上方制御をもたらした。実施例35:組み換え大腸菌におけるイソプロパノール及び1-プロパノールの生産プラスミドpSJ10942及びpTRGu668で大腸菌TG1化学的コンピテント細胞を同時に形質転換し、LB寒天プレート上でエリスロマイシン100μg/ml及びカナマイシン50μg/ml耐性を選択し、更にエリスロマイシン100μg/ml及びカナマイシン20μg/mlを含むTY培地中で増殖させ、HindIIIを用いた制限酵素分析により判断された株を二つのプラスミドを含んでいるとみなし、SJ11046として保存した。プラスミドpSJ10942及びpTRGu671で上述のように大腸菌TG1を同時に形質転換し、HindIIIを用いた制限酵素分析により判断された二つの株を二つのプラスミドを含んでいるとみなし、SJ11047及びSJ11048として保存した。株SJ10942を100μg/mlエリスロマイシンとともに増殖させ、前述のようにエレクトロポレーションのために調製した。この株をプラスミドpTRGu507で形質転換し、LB寒天プレート上でエリスロマイシン200μg/ml及びカナマイシン30μg/ml耐性を選択した。二つの形質転換体を、HindIIIを用いた制限酵素分析により所望のプラスミドを含んでいるとみなし、SJ11051及びSJ11052として保存した。本明細書に記載のように構築された株及びイソプロパノールオペロンのみを含むSJ10942を、グルコース1及びB12ビタミン10μLの5mM7.9mg/mlストック溶液を添加したLB培地を含む10mlチューブ中に、収集保存株の凍結バイアルから、直接植菌した。B12ビタミン添加を、2日の発酵後に繰り返した。抗生物質を、エリスロマイシンについて100μg/ml全ての株、そしてカナマイシンについて20μg/ml株SJ11046、-47、-48、-51及び-52添加した。培養物を、表29、30、及び31に示すように、それぞれ26°C、30°C、又は37°Cのいずれかで振盪した。1-プロパノール、2-プロパノール、及びアセトンレベルを上述のように、1、2及び4日の発酵後、測定した。イソプロパノール及びn-プロパノールの双方は、双方の経路を含む株から生産された一方で、n-プロパノールは、イソプロパノール経路のみを含む株により生産されなかった。実施例36:代謝中間体からの組み換えL.ロイテリLreuteriにおけるイソプロパノール及びn-プロパノールの生産株SJ11011、SJ11012、SJ11015、SJ11016、及びSJ11024同上を、エッペンドルフチューブ中で10μg/mlエリスロマイシンを含む2mlMRSに植菌し、振盪することなく37°Cで一晩インキュベートした。その後、50μLの量を、下記の表に示すように様々な濃度において、アセトン及び1,2-プロパンジオールが添加された10μg/mlエリスロマイシンを含む新しい2mlMRSチューブに植菌するために用いた。培養物を37°Cで2日間インキュベートし、上清サンプルを上述のようにn-プロパノール、イソプロパノール、アセトン、及び1,2-プロパンジオールについて分析した。得られたn-プロパノール、イソプロパノール、アセトン、及び1,2-プロパンジオールのレベルをそれぞれ表32、33、34、及び35に示す。MRS-10ermは、いずれの株も植菌していないが、インキュベーション及び分析を行った培養培地を意味する。実施例36:代謝中間体からの組み換えL.ロイテリLreuteriにおけるイソプロパノール及びn-プロパノールの生産株SJ11011、SJ11012、SJ11015、SJ11016、及びSJ11024同上を、エッペンドルフチューブ中で10μg/mlエリスロマイシンを含む2mlMRSに植菌し、振盪することなく37°Cで一晩インキュベートした。その後、50μLの量を、下記の表に示すように様々な濃度において、アセトン及び1,2-プロパンジオールが添加された10μg/mlエリスロマイシンを含む新しい2mlMRSチューブに植菌するために用いた。培養物を37°Cで2日間インキュベートし、上清サンプルを上述のようにn-プロパノール、イソプロパノール、アセトン、及び1,2-プロパンジオールについて分析した。得られたn-プロパノール、イソプロパノール、アセトン、及び1,2-プロパンジオールのレベルをそれぞれ表32、33、34、及び35に示す。MRS-10ermは、いずれの株も植菌していないが、インキュベーション及び分析を行った培養培地を意味する。実施例は、小スケールバッチ培養において、組み換えL.ロイテリLreuteriが、1g/lを上回る力価において代謝中間体からイソプロパノール及び1-プロパノールの双方を生産することができることを示す。実施例37:組み換えB.サブチリスBsubtilisにおけるイソプロパノールの生産C.アセトブチリカムCacetobuylicumチオラーゼ配列番号3、B.サブチリスBsubtilisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ配列番号:6及び9、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ配列番号18、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ配列番号21をコードする遺伝子を、プラスミドpTRGU196からPCRにより増幅した。プライマー下記を参照のことは、チオラーゼ遺伝子の直前のamyLリボソーム結合部位を組み込んでいる。下線の配列は、チオラーゼP265及びアルコールデヒドロゲナーゼP266遺伝子のコーディング配列と相補的であった。プライマーp265:5’-CCACATTGAAAGGGGAGGAGAATCATGAAGGAAGTTGTGATTGCTTCT-3’配列番号125プライマーp266:5’-AGTCGACGCGGCCGCTAGCACGCGTTATAAGATGACAACGGCTTTGAT-3’配列番号126得られたフラグメントを、好適なプロモーターを含むように改変し、標準的な手順を用いてpel遺伝子座を標的とする天然のコンピテントB.サブチリスBsubtilisJA1343細胞を形質転換した。形質転換体を0.01MKH2PO4/K2HPO4pH7、0.4グルコース、及び180μg/mlスペクチノマイシンを添加したLB培地プレートで選択した。得られた形質転換体のうち、5つをイソプロパノール生産について試験した。これらのうち、3つの形質転換体が、上述の手順を用いた検出可能なイソプロパノール生産をもたらし、これらのうちの一つは、20mg/lイソプロパノールをもたらした。上記と同様の手法を用いて、C.アセトブチリカムCacetobuylicumチオラーゼ配列番号3、B.モジャベンシスBmojavensisスクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ配列番号:12及び15、C.ベイジェリンキCbeijerinckiiアセトアセテートデカルボキシラーゼ配列番号18、及びC.ベイジェリンキアルコールデヒドロゲナーゼ配列番号21をコードする遺伝子を、配列番号:125及び126に示されるプライマーを用いてプラスミドpTRGU200からPCRにより増幅した。得られたフラグメントを上述の標準的な手順を用いてpel遺伝子座を標的とする天然のコンピテントB.サブチリスBsubtilisJA1343細胞を形質転換した。3つの形質転換体をイソプロパノール生産について試験し、全てが10mg/lイソプロパノールの生産をもたらした。陰性対照を試験し、イソプロパノールは、これらの条件下で組み換え遺伝子配列を含まずには生産されないことを確認した。生物学的材料の寄託以下の生物学的材料は、ブダペスト条約の取り決めに従って、DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbHMascheroderWeg1BD38124BraunschweigGermanyに寄託され、以下の受託番号が与えられた。寄託物受託番号寄託日大腸菌NN059298DSM241222010年10月26日大腸菌NN059299DSM241232010年10月26日前記株は、培養物の入手が、本特許出願が係属している間、これらに権利を与えるための外国の特許法により決定されるものに可能であることを確実にする条件下で寄託された。寄託物は、寄託された株の実質的な純粋培養を表す。寄託物は、諸外国における特許法による要求に応じて入手可能であり、ここで本願の同等物又はその後代は保管される。しかしながら、寄託物の利用可能性は、行政措置により認められる特許権の特例において、本発明を実施するライセンスに相当しないことは理解されるべきである。本発明は、以下の番号が付された段落により更に記述されてもよい。[A1]アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む組み換え宿主細胞であって、n-プロパノールを生産することができる、組み換え宿主細胞。[A2]前記宿主細胞が原核生物である、段落A1に記載の組み換え宿主細胞。[A3]前記宿主細胞が、バチルス属Bacillus、クロストリジウム属Clostridium、エンテロコッカス属Enterococcus、ゲオバチルス属Geobacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、ラクトコッカス属Lactococcus、オセアノバチルス属Oceanobacillus、プロピオニバクテリウム属Propionibacterium、スタフィロコッカス属Staphylococcus、ストレプトコッカス属Streptococcus、ストレプトマイセス属Streptomyces、カンピロバクター属Campylobacter、エシェリキア属Escherichia、フラボバクテリウム属Flavobacterium、フソバクテリウム属Fusobacterium、ヘリコバクター属Helicobacter、イリオバクター属Ilyobacter、ナイセリア属Neisseria、シュードモナス属Pseudomonas、サルモネラ属Salmonella、及びウレアプラズマ属Ureaplasmaからなる群から選択される属のメンバーである、段落A2に記載の組み換え宿主細胞。[A4]前記宿主細胞が、ラクトバチルス属例えば、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、ラクトバチルスフルクチボランスLactobacillusfructivorans、若しくはラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri、又はプロピオニバクテリウム属例えば、プロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiのメンバーである、段落A3に記載の組み換え宿主細胞。[A5]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、a配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するアルデヒドデヒドロゲナーゼ;b配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼから選択される、段落A1~A4のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A6]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する、段落A1~A5のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A7]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる、段落A1~A6のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A8]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる、段落A1~A7のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A9]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63のアミノ酸配列を含む、又はからなる、段落A1~A8のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A10]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列を含む、又はからなる、段落A1~A9のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A11]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落A1~A10のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A12]前記細胞が、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを更に含む、段落A1~A11のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A13]前記メチルマロニル-CoAムターゼが、a配列番号93の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するメチルマロニル-CoAムターゼ;b配列番号79若しくは80の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAムターゼ;及びc配列番号79又は80の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAムターゼから選択される、段落A12に記載の組み換え宿主細胞。[A14]前記メチルマロニル-CoAムターゼがタンパク質複合体であって、前記メチルマロニル-CoAムターゼをコードする1又は複数の異種のポリヌクレオチドが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落A13に記載の組み換え宿主細胞。[A15]前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号66の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号64若しくは65の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号64又は65の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され;そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号69の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号67若しくは68の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号67又は68の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落A14に記載の組み換え宿主細胞。[A16]メチルマロニル-CoAムターゼ又はこれらのサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドが、異種のプロモーターと作動式に連結される、段落A12~A15のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A17]前記細胞が、メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドを更に含む、段落A12~A16のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A18]前記メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化する前記ポリペプチドが、a配列番号72又は94の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号70、71、81、若しくは82の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号70、71、81、又は82の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落A17に記載の組み換え宿主細胞。[A19]前記メチルマロニル-CoAムターゼと結合又は複合体化するポリペプチドをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落A17又はA18に記載の組み換え宿主細胞。[A20]前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼが、a配列番号103の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ;b配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼ;及びc配列番号102の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼから選択される、段落A12に記載の組み換え宿主細胞。[A21]前記メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落A20に記載の組み換え宿主細胞。[A22]前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼが、a配列番号75の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するメチルマロニル-CoAエピメラーゼ;b配列番号73若しくは74の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAエピメラーゼ;及びc配列番号73又は74の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるメチルマロニル-CoAエピメラーゼから選択される、段落A12に記載の組み換え宿主細胞。[A23]前記メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落A22に記載の組み換え宿主細胞。[A24]前記n-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落A22に記載の組み換え宿主細胞。[A25]前記細胞が、メチルマロニル-CoAムターゼをコードする異種のポリヌクレオチド、及びメチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落A1~A24のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[A26]前記細胞が、n-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落A25に記載の組み換え宿主細胞。[A27]前記細胞が、メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落A25又はA26に記載の組み換え宿主細胞。[A28]段落A1~A27のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞を含む組成物。[A29]前記培地が発酵基質を含む、段落A28に記載の組成物。[A30]前記発酵基質が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁である、段落A29に記載の組成物。[A31]n-プロパノールを更に含む、段落A28~A30のいずれか一つに記載の組成物。[A32]前記n-プロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落A31に記載の組成物。[A33]n-プロパノールを生産する方法であって、an-プロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で段落A1~A33に記載の組み換え宿主細胞を培養し;そしてb前記n-プロパノールを回収することを含む、方法。[A34]前記培地が発酵培地である、段落A33に記載の方法。[A35]前記発酵培地が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む、段落A34に記載の方法。[A36]生産されるn-プロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落A33~A35のいずれか一つに記載の方法。[A37]回収されたn-プロパノールを蒸留により精製することを更に含む、段落A33~A36のいずれか一つに記載の方法。[A38]還元剤の存在下で、プロピオンアルデヒド混入物質をn-プロパノールに変換することにより、回収されたn-プロパノールを精製することを更に含む、段落A33~A37のいずれか一つに記載の方法。[A39]得られたn-プロパノールが、実質的に純粋である、段落A33~A37のいずれか一つに記載の方法。[A40]プロピレンを生産する方法であって、an-プロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で段落A1~A27に記載の組み換え宿主細胞を培養し;bn-プロパノールを回収し;cプロピレンを生産するための好適な条件下で前記n-プロパノールを脱水し;そしてd前記プロピレンを回収することを含む、方法。[A41]前記培地が発酵培地である、段落A40に記載の方法。[A42]前記発酵培地が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む、段落A41に記載の方法。[A43]生産されるn-プロパノールが、力価で約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落A40~A42のいずれか一つに記載の方法。[A44]前記n-プロパノールを脱水することが、酸触媒でn-プロパノールを処理することを含む、段落A40~A43のいずれか一つに記載の方法。[B1]チオラーゼ活性;スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性;アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性;及びイソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性を含む、組み換え宿主細胞であって、イソプロパノールを生産することができる、組み換え宿主細胞。[B2]チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はイソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、組み換え宿主細胞であって、イソプロパノールを生産することができる、組み換え宿主細胞。[B3]前記宿主細胞が原核生物である、段落B1又はB2に記載の組み換え宿主細胞。[B4]前記宿主細胞が、バチルス属Bacillus、クロストリジウム属Clostridium、エンテロコッカス属Enterococcus、ゲオバチルス属Geobacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、ラクトコッカス属Lactococcus、オセアノバチルス属Oceanobacillus、プロピオニバクテリウム属Propionibacterium、スタフィロコッカス属Staphylococcus、ストレプトコッカス属Streptococcus、ストレプトマイセス属Streptomyces、カンピロバクター属Campylobacter、エシェリキア属Escherichia、フラボバクテリウム属Flavobacterium、フソバクテリウム属Fusobacterium、ヘリコバクター属Helicobacter、イリオバクター属Ilyobacter、ナイセリア属Neisseria、シュードモナス属Pseudomonas、サルモネラ属Salmonella、及びウレアプラズマ属Ureaplasmaからなる群から選択される属のメンバーである、段落B3に記載の組み換え宿主細胞。[B5]前記宿主細胞が、ラクトバチルス属例えば、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、ラクトバチルスフルクチボランスLactobacillusfructivorans、若しくはラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri、又はプロピオニバクテリウム属例えば、プロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiのメンバーである、段落B4に記載の組み換え宿主細胞。[B6]前記細胞が、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落B1~B5のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B7]前記細胞が、CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチドCoA-トランスフェラーゼを含む、段落B1~B6のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B8]前記細胞が、アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落B1~B7のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B9]前記細胞が、イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落B1~B8のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B10]前記細胞が、チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかのポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、段落B1~B9のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B11]前記チオラーゼが、a配列番号3、35、114、又は116の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するチオラーゼ;b配列番号1、2、34、113、若しくは115の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるチオラーゼ;及びc配列番号1、2、34、113、又は115の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるチオラーゼから選択される、段落B7~B10のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B12]前記チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落B7~B10のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B13]前記CoA-トランスフェラーゼが、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼである、段落B7~B12のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B14]前記CoA-トランスフェラーゼが、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼである、段落B7~B12のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B15]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号6の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号4若しくは5の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号4又は5の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され;そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号9の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号7若しくは8の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号7又は8の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落B7~B14のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B16]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号12の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号10若しくは11の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号10又は11の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号15の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号13若しくは14の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号13又は14の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落B7~B14のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B17]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号37の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号39の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落B7~B14のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B18]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号41の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号43の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落B7~B14のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B18]前記CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチドが、異種のプロモーターと作動式に連結される、段落B7~B14のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B19]前記アセトアセテートデカルボキシラーゼが、a配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するアセトアセテートデカルボキシラーゼ;b配列番号16、17、44、117、若しくは119の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼ;及びc配列番号16、17、44、117、又は119の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼから選択される、段落B8~B18のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B20]前記アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落B8~B19のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B21]前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼが、a配列番号21、24、47、又は122の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;b配列番号19、20、22、23、46、若しくは121の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号19、20、22、23、46、又は121の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼからなる群から選択される、段落B9~B20のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B22]前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落B9~B21のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[B23]段落B1~B22のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞を含む、組成物。[B24]前記培地が発酵基質を含む、段落B23に記載の組成物。[B25]前記発酵基質が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁である、段落B24に記載の組成物。[B26]イソプロパノールを更に含む、段落B23~B25のいずれか一つに記載の組成物。[B27]前記イソプロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落B26に記載の組成物。[B28]イソプロパノールを生産する方法であって、aイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で段落B1~B22に記載の組み換え宿主細胞を培養し;そしてb前記イソプロパノールを回収することを含む、方法。[B29]前記培地が発酵培地である、段落B28に記載の方法。[B30]前記発酵培地が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む、段落B29に記載の方法。[B31]生産されたイソプロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落B28~B30のいずれか一つに記載の方法。[B32]回収されたイソプロパノールを蒸留により精製することを更に含む、段落B28~B31のいずれか一つに記載の方法。[B33]還元剤の存在下で、アセトン混入物質をイソプロパノールに変換することにより、回収されたイソプロパノールを精製することを更に含む、段落B28~B32のいずれか一つに記載の方法。[B34]得られたイソプロパノールが、実質的に純粋である、段落B28~B33のいずれか一つに記載の方法。[B35]プロピレンを生産する方法であって、aイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で段落B1~B22に記載の組み換え宿主細胞を培養し;b前記イソプロパノールを回収し;cプロピレンを生産するための好適な条件下で、イソプロパノールを脱水し;そしてd前記プロピレンを回収することを含む、方法。[B36]前記培地が発酵培地である、段落B35に記載の方法。[B37]前記発酵培地が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む、段落B36に記載の方法。[B38]生産されたイソプロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落B35~B37のいずれか一つに記載の方法。[B39]前記n-プロパノールを脱水することが、酸触媒でn-プロパノールを処理することを含む、段落B35~B38のいずれか一つに記載の方法。[C1]n-プロパノール及びイソプロパノールを生産することができる組み換え宿主細胞。[C2]チオラーゼ活性;CoA-トランスフェラーゼ活性;アセトアセテートデカルボキシラーゼ活性;イソプロパノールデヒドロゲナーゼ活性;及びアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性;を含む、組み換え宿主細胞であって、n-プロパノール及びイソプロパノールを生産することができる、段落C1に記載の組み換え宿主細胞。[C3]チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及びアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドを含む組み換え宿主細胞であって、n-プロパノール及びイソプロパノールを生産することができる、段落C1又はC2に記載の組み換え宿主細胞。[C4]メチルマロニル-CoAムターゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;メチルマロニル-CoAエピメラーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;及び/又はn-プロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチド;をさらに含む、段落C3に記載の組み換え宿主細胞。[C5]前記宿主細胞が原核生物である、段落C1~C4のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C6]前記宿主細胞が、バチルス属Bacillus、クロストリジウム属Clostridium、エンテロコッカス属Enterococcus、ゲオバチルス属Geobacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、ラクトコッカス属Lactococcus、オセアノバチルス属Oceanobacillus、プロピオニバクテリウム属Propionibacterium、スタフィロコッカス属Staphylococcus、ストレプトコッカス属Streptococcus、ストレプトマイセス属Streptomyces、カンピロバクター属Campylobacter、エシェリキア属Escherichia、フラボバクテリウム属Flavobacterium、フソバクテリウム属Fusobacterium、ヘリコバクター属Helicobacter、イリオバクター属Ilyobacter、ナイセリア属Neisseria、シュードモナス属Pseudomonas、サルモネラ属Salmonella、及びウレアプラズマ属Ureaplasmaからなる群から選択される属のメンバーである、段落C5に記載の組み換え宿主細胞。[C7]前記宿主細胞が、ラクトバチルス属例えば、ラクトバチルスプランタルムLactobacillusplantarum、ラクトバチルスフルクチボランスLactobacillusfructivorans、若しくはラクトバチルスロイテリLactobacillusreuteri、又はプロピオニバクテリウム属例えば、プロピオニバクテリウムフロイデンライシイPropionibacteriumfreudenreichiiのメンバーである、段落C6に記載の組み換え宿主細胞。[C8]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、a配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するアルデヒドデヒドロゲナーゼ;b配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアルデヒドデヒドロゲナーゼから選択される、段落C3~C7のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C9]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドと、少なくとも60、例えば、少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有する、段落C3~C8のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C10]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、若しくは62の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件、例えば中ストリンジェンシー条件、中~高ストリンジェンシー条件、高ストリンジェンシー条件、又は極めて高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる、段落C3~C9のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C11]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号25、26、28、29、31、32、48、49、50、52、53、55、56、58、59、61、又は62の成熟ポリペプチドコーディング配列と、少なくとも60、例えば少なくとも65、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも91、少なくとも92、少なくとも93、少なくとも94、少なくとも95、少なくとも96、少なくとも97、少なくとも98、少なくとも99、又は100の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる、段落C3~C10のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C12]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63のアミノ酸配列を含む、又はからなる、段落C3~C11のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C13]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼが、配列番号27、30、33、51、54、57、60、又は63の成熟ポリペプチドのアミノ酸配列を含む、又はからなる、段落C3~C12のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C14]前記アルデヒドデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落C3~C13のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C15]前記チオラーゼが、a配列番号3、35、114、又は116の成熟ポリペプチドと少なくとも60配列同一性を有するチオラーゼ;b配列番号1、2、34、113、若しくは115の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるチオラーゼ;及びc配列番号1、2、34、113、又は115の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるチオラーゼから選択される、段落C3~C14のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C16]前記チオラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落C3~C15のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C17]前記CoA-トランスフェラーゼが、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼである、段落C3~C16のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C18]前記CoA-トランスフェラーゼが、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼである、段落C3~C16のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C19]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号6の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号4若しくは5の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号4又は5の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号9の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号7若しくは8の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号7又は8の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落C3~C18のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C20]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、スクシニル-CoA:アセトアセテートトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号12の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号10若しくは11の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号10又は11の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号15の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号13若しくは14の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号13又は14の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落C3~C18のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C21]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号37の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号36の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号39の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号38の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落C3~C18のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C22]前記CoA-トランスフェラーゼが、第一のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチド、及び第二のポリペプチドサブユニットをコードする異種のポリヌクレオチドを含む、アセトアセチル-CoAトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質複合体であって、ここで前記第一のポリペプチドサブユニットが、a配列番号41の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列又はこれらの完全長相補鎖と少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号40の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択され、そして前記第二のポリペプチドサブユニットが、a配列番号43の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するポリペプチド;b配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、少なくとも低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;及びc配列番号42の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドから選択される、段落C3~C18のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C23]CoA-トランスフェラーゼをコードする1又は複数のいくつかの異種のポリヌクレオチドが、異種のプロモーターと作動式に連結される、段落C3~C22のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C24]前記アセトアセテートデカルボキシラーゼが、a配列番号18、45、118、又は120の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するアセトアセテートデカルボキシラーゼ;b配列番号16、17、44、117、若しくは119の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼ;及びc配列番号16、17、44、117、又は119の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるアセトアセテートデカルボキシラーゼから選択される、段落C3~C23のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C25]前記アセトアセテートデカルボキシラーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落C3~C24のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C26]前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼが、a配列番号21、24、47、又は122の成熟ポリペプチドと少なくとも60の配列同一性を有するイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;b配列番号19、20、22、23、46、若しくは121の成熟ポリペプチドコーディング配列、又はこれらの完全長相補鎖と、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼ;及びc配列番号19、20、22、23、46、又は121の成熟ポリペプチドコーディング配列と少なくとも60の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるイソプロパノールデヒドロゲナーゼからなる群から選択される、段落C3~C25のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C27]前記イソプロパノールデヒドロゲナーゼをコードする異種のポリヌクレオチドが、前記ポリヌクレオチドとは異種のプロモーターと作動式に連結される、段落C3~C26のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C28]前記宿主細胞が、1時間あたり約0.1g/L超、例えば1時間あたり約0.2g/L超、1時間あたり約0.5g/L超、1時間あたり約0.75g/L超、1時間あたり約1.0g/L超、1時間あたり約1.25g/L超、1時間あたり約1.5g/L超、1時間あたり約1.75g/L超、1時間あたり約2.0g/L超、1時間あたり約2.25g/L超、1時間あたり約2.5g/L超、又は1時間あたり約3.0g/L超のイソプロパノール及び/又はn-プロパノール容積生産性を有する、段落C1~C27のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞。[C29]段落C1~C28のいずれか一つに記載の組み換え宿主細胞を含む、組成物。[C30]前記培地が発酵基質を含む、段落C29に記載の組成物。[C31]前記発酵基質が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁である、段落C30に記載の組成物。[C32]イソプロパノール及び/又はn-プロパノールを更に含む、段落C29~C31のいずれか一つに記載の組成物。[C33]前記イソプロパノール及び/又はn-プロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落C32に記載の組成物。[C34]n-プロパノール及びイソプロパノールを生産する方法であって、an-プロパノール及びイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で段落C1~C28に記載の組み換え宿主細胞を培養し;そしてb前記n-プロパノール及びイソプロパノールを回収することを含む、方法。[C35]前記培地が発酵培地である、段落C34に記載の方法。[C36]前記発酵培地が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む、段落C35に記載の方法。[C37]生産されるn-プロパノール及び/又はイソプロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落C34~C36のいずれか一つに記載の方法。[C38]回収されたn-プロパノール及びイソプロパノールを蒸留により精製することを更に含む、段落C34~C37のいずれか一つに記載の方法。[C39]還元剤の存在下で、プロピオンアルデヒド混入物質をn-プロパノールに変換すること、そして/あるいはアセトン混入物質をイソプロパノールに変換することにより、回収されたn-プロパノール及びイソプロパノールを精製することを更に含む、段落C34~C38のいずれか一つに記載の方法。[C40]得られたn-プロパノール及びイソプロパノールが、実質的に純粋である、段落C34~C39のいずれか一つに記載の方法。[C41]プロピレンを生産する方法であって、an-プロパノール及びイソプロパノールを生産するための好適な条件下において、培地中で段落C1~C28に記載の組み換え宿主細胞を培養し;b前記n-プロパノール及びイソプロパノールを回収し;cプロピレンを生産するための好適な条件下で、n-プロパノール及びイソプロパノールを脱水し;そしてd前記プロピレンを回収することを含む、方法。[C42]前記培地が発酵培地である、段落C41に記載の方法。[C43]前記発酵培地が、サトウキビ汁例えば、未滅菌サトウキビ汁を含む、段落BC42に記載の方法。生産されたn-プロパノール及び/又はイソプロパノールが、力価において、約0.01g/L超、例えば約0.02g/L、0.05g/L、0.075g/L、0.1g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L、60g/L、65g/L、70g/L、75g/L、80g/L、85g/L、90g/L、95g/L、100g/L、125g/L、150g/L、200g/L、又は250g/L超である、段落C41~C43のいずれか一つに記載の方法。[C45]n-プロパノール及びイソプロパノールを脱水することが、酸触媒でn-プロパノール及びイソプロパノールを処理することを含む、段落C41~C43のいずれか一つに記載の方法。本明細書に開示される特定の態様は、本発明のいくつかの態様の例証として意図され、本明細書に記載され、請求される本発明は、これらの態様により範囲が限定されるものではない。任意の同等の態様は、本発明の範囲内であることを意図する。実際、本明細書に示され、記載されるものに加えて、本発明の様々な改変は、上述の記載から当業者に明らかになる。かかる改変はまた、特許請求の範囲内であることを意図する。矛盾する場合、定義を含む本開示が支配する。"