"少なくとも2つの外部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも2つの抗原のうちの1つ以上のエピトープならびに少なくとも2つの内部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも2つの抗原のうちの1つ以上のエピトープを発現する改変ワクシニアウイルスアンカラMVAであって、前記抗原および/またはそのエピトープ複数可をコードする遺伝子が、少なくとも2つのMVA挿入部位に挿入される、改変ワクシニアウイルスアンカラ。前記MVAウイルスは、少なくとも3つの外部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも3つの抗原のうちの1つ以上のエピトープならびに少なくとも2つの内部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも2つの抗原のうちの1つ以上のエピトープを発現する、請求項1に記載のMVAウイルス。前記MVAウイルスは、少なくとも3つの外部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも3つの抗原のうちの1つ以上のエピトープならびに少なくとも3つの内部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも3つの抗原のうちの1つ以上のエピトープを発現する、請求項1または2に記載のMVAウイルス。前記MVAウイルスは、少なくとも6つの外部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも6つの抗原のうちの1つ以上のエピトープならびに少なくとも3つの内部インフルエンザウイルス抗原および/または前記少なくとも3つの抗原のうちの1つ以上のエピトープを発現する、請求項1~3のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記少なくとも2つの外部抗原および/または前記少なくとも2つの抗原のうちの1つ以上のエピトープ複数可は、HA、NA、およびM2からなる群から選択される、請求項1~4のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記外部抗原は、HA、NA、およびM2、ならびに/または前記抗原のうちの1つ以上のエピトープである、請求項1~5のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記少なくとも2つの内部抗原および/または前記少なくとも2つの抗原のうちの1つ以上のエピトープ複数可は、PB1、NP、およびM1からなる群から選択される、請求項1~6のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記内部抗原は、PB1、NP、およびM1、ならびに/または前記抗原のうちの1つ以上のエピトープである、請求項1~7のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記内部抗原であるPB1、NP、およびM1、ならびに/または前記抗原のうちの1つ以上のエピトープ複数可は、融合タンパク質として発現する、請求項8に記載のMVA。前記MVAウイルスは、4つの異なるHAタンパク質および/または前記タンパク質のうちの1つ以上のエピトープを発現する、請求項1~9のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記HAタンパク質は、H2、H5、H7、およびH9、ならびに/または前記タンパク質のうちの1つ以上のエピトープである、請求項10に記載のMVAウイルス。前記HAタンパク質は、H1、H3、および2つのB型HAタンパク質、ならびに/または前記タンパク質のうちの1つ以上のエピトープである、請求項10に記載のMVAウイルス。前記組み換えウイルスを生成するために使用される前記MVAウイルスは、MVA-BNまたはMVA-BNの変異体である、請求項1~12のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記インフルエンザウイルス抗原の前記発現は、2つ以上のポックスウイルスプロモータの制御下にある、請求項1~13のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記遺伝子は、MVAゲノムの少なくとも2つの遺伝子間領域に挿入される、請求項1~14のいずれか1項に記載のMVAウイルス。前記遺伝子間領域は、前記MVAウイルスのIGR44/45、IGR64/65、IGR88/89、およびIGR148/149から選択される、請求項15に記載のMVAウイルス。請求項1~16のいずれか1項に記載のMVAウイルスならびに薬学的に許容される担体、希釈剤、および/または添加剤を含む、ワクチンまたは薬学的組成物。薬剤またはワクチンを調製するための、請求項1~16のいずれか1項に記載のMVAの使用。ヒトを含む対象を治療するための方法であって、請求項1~16のいずれか1項に記載のMVAおよび/または請求項17に記載のワクチンもしくは薬学的組成物を、前記ヒトを含む前記対象に投与することを含む、方法。ヒトを含む対象のインフルエンザの治療もしくは予防に使用するための、請求項1~16のいずれか1項に記載のMVAウイルス、請求項17に記載の前記ワクチンもしくは薬学的組成物、請求項18に記載の使用、および/または請求項19に記載の方法。前記ヒトを含む前記対象は、2歳より大きい、請求項19もしくは20に記載の方法、ならびに/あるいは請求項20に記載のMVAウイルス、ワクチンもしくは薬学的組成物、および/または使用。前記ヒトを含む前記対象は、2歳未満である、請求項19もしくは20に記載の方法、ならびに/あるいは請求項20に記載のMVAウイルス、ワクチンもしくは薬学的組成物、および/または使用。前記MVAウイルスおよび/またはワクチンもしくは薬学的組成物は、未感作対象に単回または複数回投与で投与される、請求項19~22のいずれか1項に記載の方法、ならびに/あるいは請求項20~22のいずれか1項に記載のMVAウイルス、ワクチンもしくは薬学的組成物、および/または使用。前記ヒトを含む前記対象は、免疫不全である、請求項19~23のいずれか1項に記載の方法、ならびに/あるいは請求項20~23のいずれか1項に記載のMVAウイルス、ワクチンもしくは薬学的組成物、および/または使用。前記MVAウイルスおよび/またはワクチンもしくは薬学的組成物は、初回接種予備刺激接種および二回目接種追加免疫接種で、治療有効量で投与される、請求項19~24のいずれか1項に記載の方法、ならびに/あるいは請求項20~24のいずれか1項に記載のMVAウイルス、ワクチンもしくは薬学的組成物、および/または使用。第1のバイアル/容器に初回接種予備刺激接種用、および第2のバイアル/容器に二回目接種追加免疫接種用の、請求項1~16のいずれか一項に記載のMVAウイルスおよび/または請求項17に記載のワクチンもしくは薬学的組成物を含む、予備刺激/追加免疫化のためのキット。請求項1~16のいずれか1項に記載のMVAウイルス、および/または請求項17に記載のワクチンもしくは薬学的組成物の1つもしくは複数のバイアルと、前記ウイルスを対象に投与するための説明書とを含む、キット。請求項1~16のいずれか1項に記載のMVAウイルスを含む、細胞。次世代インフルエンザワクチンの課題に対応するために、本発明の発明者は、容易に入手可能な細胞培養系において産生され得るウイルスベクター中で外部および内部の両方のウイルスタンパク質を組み合わせるMVA系インフルエンザワクチンを開発した。抗体の外部ウイルス表面タンパク質への中和は、感染の確立を防止するのに重要な役割を果たし、一方、細胞毒性Tリンパ球の内部ウイルスタンパク質への中和は、既に感染した細胞を取り除く。したがって、本発明の発明者は、ワクチン構築物に外部および内部の両方のウイルスタンパク質を含むことは適切であると見なした。本発明のワクチンは、異なるインフルエンザ株に対して保護することができる季節的および流行性流感の両方の汎用ワクチンであると想定される。この目的のため、PB1ウイルスポリメラーゼのサブユニット、NP核タンパク質、および/またはM1基質タンパク質は、好ましくは内部抗原として使用され、HA血球凝集素、NAノイラミニダーゼ、および/またはM2基質タンパク質-2は、好ましくは外部抗原として使用される。加えて、ワクチンは、好ましくは4つの異なるHAタンパク質H2、H5、H7、およびH9流行性または前流行性ワクチン、またはH1およびH3ならびに2つのB型HAタンパク質季節的ワクチンを含む。本明細書で使用されるとき、汎用ワクチンとは、特に、本発明のワクチンがHクレードの範囲に汎用であることを意味する、即ち、ワクチンは、Russelletal.2004,Virology325:287-296に記載されるもの等本明細書の以下を参照の、特に、それぞれ、ヤマガタ系およびビクトリア系からのHクレードであるH2、H5、H7、および/もしくはH9、またはH1、H3および/もしくは2つのB型HAタンパク質に対する保護、ならびに/または特に、それぞれ、ヤマガタ系およびビクトリア系からのH2、H5、H7、および/もしくはH9、またはH1、H3および/もしくは2つのB型HAタンパク質とは異なる1つ以上のHクレードに対する交差保護を付与すると想定される。MVA株本発明は、インフルエンザウイルス遺伝子を含む改質ワクチンウイルスアンカラMVAおよびMVA系ワクチンを包含する。したがって、本発明は、組み換えMVAも包含する。MVA骨格は、受託番号V00083008でECACCに受託されるように、好ましくはMVA572、またはMVA575、またはMVA-BNであり得る。MVA系ワクチンは、いくつかの理由のため有利である。例えば、好ましい株であるMVA株のMVA-BNは、一次ニワトリ胚線維芽細胞CEFの細胞で良好に成長し、本明細書でより詳細に記載されるように、ヒト細胞で複製されない。ヒト細胞において、ウイルス遺伝子は発現するが、感染ウイルスは産生されない。限定されたMVA-BNの宿主域は、ヒトを含む哺乳類種の広範囲で生体内観察された非感染性表現型を明らかにしてもよい。これを有望なワクチンベクターにするMVA-BNのいくつかの重要な特徴は、以下を含む。●MVA-BNは、重度に免疫抑制されたマウスにおいても、ヒト細胞系または哺乳類において複製されない。●MVA-BNは、ウサギにおける反復毒性曝露ならびに妊娠中の雌親および子における周産期および出生後の奇形学研究を含む多数の毒性研究において安全であることが示され、またMVA-BNは、生体内分布研究において、ウサギから迅速に取り除かれるワクチン接種後48時間以内ことを示した。●MVA-BNは、ウイルスベクターに対する既存免疫の存在下でも、同種の予備刺激-追加免疫レジームにおいて使用され得る。●健康な対象、ヒト免疫不全ウイルスHIVに感染した人々CD4細胞=>200/μl、およびアトピー性皮膚炎ADと診断された人々を含む、2000人を超える人々がMVA-BNまたは組み換えMVA系ワクチンで安全にワクチン接種されている。●MVA-BNは、マウス痘の動物モデルにおける即時保護即ち、随伴性感染に対する保護を付与する、および/または曝露後の保護即ち、感染が生じた後の保護を付与するを提供することができる。MVA-mBN210は、高度に弱毒化された改質ワクシニアウイルスアンカラHA-MVAの例である。HA-MVAという用語は、本明細書で使用されるとき、MVA-BNという用語と互換的に使用される。本発明によると、HA-MVAまたはMVA-BNウイルスは、以下の性質を有するMVAウイルスである。●HA-MVAウイルスは、ヒト細胞系HaCaT、143B、293、およびHeLa等において、生体外で生殖的に複製されない。●HA-MVAウイルスは、ヒトおよびマウスにおいて、さらには重度の免疫抑制されたマウスにおいても、生体内で生殖的に複製されない。●HA-MVAウイルスは、Hela細胞およびHaCaT細胞系において、MVA-575より少なくとも2倍低いウイルス増幅率を有する。●HA-MVAウイルスは、ニワトリ胚線維芽細胞の細胞において生殖的に複製する能力を有する。本明細書で使用されるとき、高度に弱毒化とは、MVAは、ニワトリ胚線維芽細胞CEFにおいて生殖複製の能力を有するが、ヒトケラチノサイト細胞系HaCaT、ヒト骨の骨肉腫細胞系143B、ヒト胚腎臓細胞系293、およびヒト頚部腺癌細胞系HeLaにおいて生殖複製の能力を持たないことを意味する。生殖的に複製しないという用語は、国際特許公開第WO02/42480号に記載されるアッセイを使用して、感染4日後に1未満のウイルス増幅率を有するウイルスに適用され、このアッセイは、参照により本明細書に組み込まれる。好ましくは、HA-MVAは、Hela細胞およびHaCaT細胞系において、MVA-575より少なくとも3倍低いウイルス増幅率を有する。HA-MVAウイルスは、MVA-572またはMVA-575等の、改質ワクシニアウイルスアンカラMVAをさらに継代することにより誘導され得る。好ましい実施形態では、HA-MVAウイルスは、CEF細胞において、500より大きい増幅率を有する。HA-MVAウイルスは、HA-MVA、ならびにMVA-BNおよび例えばポックスウイルスプロモータの制御下で異種遺伝子を挿入することによる、MVA-BNに由来する組み換えウイルスを含む。MVA-BNの試料は、受託番号V00083008で、ECACCに受託された。本明細書で使用されるとき、HA-MVAの誘導体または変異体は、好ましくはHA-MVAと同じ性質を有する、即ち、ニワトリ胚線維芽細胞CEFにおいて生殖複製の能力を有するが、ヒトケラチノサイト細胞系HaCaT、ヒト骨の骨肉腫細胞系143B、およびヒト頚部腺癌細胞系HeLaにおいて生殖複製の能力を持たない。上記に示されるように、MVAのこれらの性質の試験およびアッセイは、国際特許公開第WO02/42480号参照により組み込まれるに説明されている。MVA-BNの誘導体とは、基本的にMVA-BNと同じ複製特徴を示すが、それらのゲノムの1つ以上の部分で相違を示すウイルスを指す。MVA-mBN210は、MVA-BNの誘導体である。好ましい実施形態では、本発明は、複数の外部および/または内部インフルエンザウイルス抗原をコードするHA-MVAウイルスを包含する。好ましい実施形態では、HA-MVAウイルスは、MVA-BNに由来する組み換えHA-MVAである、即ち、組み換えウイルスを生成するために使用されるMVAウイルスは、好ましくはMVA-BNまたは同じ成長特徴を有する変異体である上記を参照。インフルエンザウイルス遺伝子は、MVA-BNまたはその変異体にクローン化され得る。具体的な好ましい実施形態では、ウイルスは、MVA-mBN210図5を参照またはMVA-mBN242図8を参照である。MVAの増殖、例えば培養物中のHA-MVAは、HA-MVA等のMVAのゲノムにおいて変異をもたらすことができる。適切な選択手順を使用することにより即ち特定の細胞系上での増殖、これらの性質に影響を及ぼさずに変異を可能にする一方で、所望の表現型が維持され得る。様々な細胞系上でMVAを増殖する方法が当該技術分野において周知である。ウイルスが成長する培地に変異原を添加することにより、HA-MVAウイルス等のMVAのゲノムにおける変異の生成を促進することができる。同様に、MVA、例えばHA-MVAのゲノムの中に変異を導入するために、PCRおよび他の分子技法が使用され得る。これらの変異は、ゲノムの非必須領域を標的とするか、または無造作に生成され得る。一実施形態では、組み換えMVAは、107TCID50/ml以上の濃度である。好ましくは、組み換えMVAは、107TCID50/ml以上の濃度で、感染細胞、好ましくはCEFから産生される。好ましい実施形態では、組み換えMVAを、30°Cの温度で、好ましくは無血清培地例えば、VP-SFM登録商標中で成長させる。好ましい実施形態では、組み換えMVAを5.5未満、好ましくはpH5.2で成長させる。インフルエンザウイルス遺伝子インフルエンザウイルスA型は、ウイルスの分類において、オルトミクソウイルスと呼ばれるウイルスのファミリーの属である。インフルエンザウイルスA型は、属に1種のみを有し、その種は、インフルエンザAウイルスと呼ばれる。インフルエンザAウイルスは、鳥インフルエンザ鳥流感、鳥類流感、インフルエンザウイルスA流感、A型流感、またはA属流感としても知られるをもたらすが、ヒトインフルエンザ、ブタインフルエンザ、またはウマインフルエンザももたらす。鳥類は、その主要な病原体保有動物であるが、インフルエンザAウイルスは、哺乳類のいくつかの種に感染する場合がある。インフルエンザウイルスB型は、オルトミクソウイルスと呼ばれるウイルスのファミリーの別の属である。インフルエンザウイルスB型は、属に1種のみを有し、その種は、インフルエンザBウイルスと呼ばれる。インフルエンザウイルス抗原またはその抗原決定基もしくはエピトープは、好ましくは複数のインフルエンザウイルス株からである。本内容において複数とは、本発明のベクターおよびワクチンに適用されるとき、インフルエンザウイルス遺伝子/抗原/エピトープが異なるインフルエンザウイルス株からであることを意味する。例えば、M2遺伝子は、第1のインフルエンザウイルス株からであってもよく、一方、PB-2遺伝子は、第1の株とは異なる第2のインフルエンザウイルス株からであってもよい。しかしながら、本発明のベクターおよびワクチンに適用されるとき、インフルエンザウイルス遺伝子/抗原/エピトープのうちの1つ以上が同じインフルエンザウイルス株からであることもやはり好ましい。本明細書で使用される、エピトープまたは抗原決定基という用語は、本明細書で記載されるように、免疫系の成分により特異的に認識される、または特異的に結合される参照インフルエンザ抗原の短ペプチド配列を指すために、同義的に使用される。一般に、抗原は、それらが抗原提示細胞上で結合されるMHC/HLA分子の構成において認識される。エピトープまたは抗原決定基とは、エピトープまたは抗原決定基が由来する抗原に対して特異的な免疫応答を誘発するのに十分に長いアミノ酸ストレッチ、またはペプチド、または抗原の断片、または抗原性ポリペプチドもしくはタンパク質の断片を指す。よって、エピトープは、免疫系によって認識される抗原の一部であり、かつヒトを含むワクチン接種された動物の免疫応答を引き起こすことがなお可能であるペプチドの短ストレッチである。よって、エピトープまたは抗原決定基は、抗原もしくは抗原性ポリペプチドの断片、一部、またはセグメントである。ペプチドまたはアミノ酸配列という用語は、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質配列の断片、および天然のまたは合成の分子を指す。ポリペプチド断片、一部、またはセグメントは、少なくとも約5つのアミノ酸、好ましくは少なくとも約7つのアミノ酸、より好ましくは少なくとも約9つのアミノ酸、最も好ましくは約17~20以上のアミノ酸のアミノ酸残基のストレッチである。ペプチドは、好ましくは、約200のアミノ酸を超えない、より好ましくは150のアミノ酸未満、最も好ましくは100のアミノ酸未満である。好ましくは、ペプチドは、約5~約200のアミノ酸である。免疫原性であるために、即ちエピトープとしての機能を果たすために、任意のペプチドまたはポリペプチドは、生物学的および/または免疫学的活性を示すのに十分な長さでなければならない。好ましくは、本明細書に記載されるポリペプチド断片、一部、またはセグメントは、エピトープまたは抗原決定基としての機能を果たす。本明細書で使用される抗原決定基またはエピトープとは、明示的に記述されないとき、抗原という用語により常に包含される。組み換えMVAは、以下のインフルエンザウイルス遺伝子またはその断片もしくは変異体の任意のおよび全ての組み合わせを含むことができる:インフルエンザAおよび/またはBの血球凝集素HA、ノイラミニダーゼNA、基質タンパク質M2、M1、核タンパク質NP、ポリメラーゼ塩基PB1、PB2、PB1-F2、ポリメラーゼ酸PA、非構造タンパク質NS1、およびNS2。前記断片または変異体は、好ましくは、抗体、好ましくは中和抗体の産生等の体液性および/または細胞性免疫応答を含む免疫応答を誘発する、または細胞溶解免疫応答を誘発することがなお可能である。特に好ましい実施形態では、組み換えMVAは、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ以上のHA遺伝子および少なくとも1つのPB1遺伝子を含む。一実施形態では、組み換えMVAは、コードされたインフルエンザウイルスタンパク質、例えば非構造NS1またはNS2タンパク質の変異型または切断型をコードする1つ以上のインフルエンザウイルス遺伝子を含む。好ましい実施形態では、組み換えMVAは、インフルエンザウイルスの内部および外部遺伝子を含む。好ましくは、組み換えMVAは、少なくとも2つ、3つ、4つ、もしくは5つ、または6つの内部遺伝子、および少なくとも2つ、3つ、4つ、5つ、または6つの外部遺伝子を含む。より好ましくは、組み換えMVAは、少なくとも2つもしくは3つ、4つもしくは5つ、または6つの異なる内部遺伝子、および少なくとも2つ、3つ、4つ、5つ、または6つの異なる外部遺伝子を含む。特に好ましい実施形態では、組み換えMVAは、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ以上の異なるHA遺伝子および少なくとも1つのPB1遺伝子を含む。外部抗原は、初期の中和およびウイルスの侵入ならびに融合の阻止に重要であり、内部抗原は、T細胞応答、特にCTLに重要である。両方の抗原型は、交差反応免疫および交差保護免疫を誘発することができ、これは、多くの潜在的に興味深い株を持つ、または変異ウイルスによって生じる流感において重要である。内部抗原は、それらが全てのインフルエンザAおよびBウイルスにわたって良好に保存されているため、交差反応性を改善することが予想される。これらの抗原に対する抗体は有用であるが、十分な保護を提供しないため、内部抗原は、CTL応答を誘発すると想定される。CTL応答単独では、大半の場合、それ自体保護的ではないが、それらは保護の一因となり、一般に疾患対して保護しないが、疾患を軽減する、または死を防止することができる。ヘテロ亜型のCTLを誘発することが意図される他の既知の構築物とは対照的に、本発明の発明者は、頻繁に使用されるM1基質タンパク質およびNP核タンパク質抗原に加え、ウイルス性ポリメラーゼのPB1サブユニットをコードするオープンリーディングフレームORFを含んだ。PB1は、様々なMHCハプロタイプにわたり、ヒトにおいて、ヘテロ亜型のCTL応答の好ましい標的であることが示されてきたAssarssonetal.2008,J.Virol.82,12241-51。さらに、PB1遺伝子はヒトに由来するvH1N1の唯一の遺伝子であったため、最近のvH1N1ブタ流感は、好ましくはPB1を使用するという本発明の発明者の判断を確認したと思われる。したがって、ウイルスに特に重要なものであり得る。PB1、M1、および/またはNPの内部抗原および/またはエピトープ複数可は、好ましくは融合タンパク質として発現する。一実施形態では、組み換えMVAは、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、9つ、10、11、12、13、14、15以上のインフルエンザウイルス遺伝子を含む。インフルエンザウイルス遺伝子とは、本明細書で使用されるとき、好ましくは、インフルエンザウイルスオープンリーディングフレームを意味する。好ましい実施形態では、組み換えMVAは、9つのインフルエンザ遺伝子を含む。実際、本発明は、例えば3~4のワクチンにより、16の血球凝集素亜型全てを網羅するために多価ワクチンを想定し、これにより流行ライブラリを構築する。よって、MVA系ワクチンは、順応性があり、今後の新しいインフルエンザウイルスの大発生に対抗するための強力なツールである。一実施形態では、組み換えMVAは、少なくとも4つの異なるHA、1つのNA遺伝子、1つのM2遺伝子、1つのM1遺伝子、1つのNP遺伝子、および1つのPB1遺伝子を含む。M1は、ウイルスRNAに結合するタンパク質であり、ウイルス外被の内殻を構成する。M2は、ウイルスを脱外被し、その内容物8つのRNAセグメントを宿主細胞の細胞質に露出させるのを補助するタンパク質である。M2膜貫通型タンパク質は、効率的な感染に必要なイオンチャネルであるRobertB.Couch,Orthomyxoviruses,BaronS.ed.1996inMedicalMicrobiology,FourthEdition,TheUniversityofTexasMedicalBranchatGalveston,ISBN0-9631172-1-1。組み換えMVAは、少なくとも2、3、4、5、6、7、8以上の特定の遺伝子のコピーを含む。具体的には、今後流行をもたらす可能性があるインフルエンザウイルスの亜型を網羅するために、インフルエンザAのいくつかの少なくとも2つの亜型を網羅する多価ワクチンは、包囲種痘例えば、モデリングによるまたは曝露後予防PEPのために、いくつかの流行の可能性がある候補ウイルス一般使用予防、GUPに対して流行前に同時に対象を免疫化するのに、または流行が宣言された時に使用されるワクチンを備蓄するのに役立つ。今までに、H3N2、H1N1、および少なくとも1つのB型が季節的流感ウイルスとして同時流行した。1977年以来同時流行しているH1N1は、蔓延しているH1N1亜型としてvH1N1ブタ流感に取って代わり、消滅する可能性が高い。H3N2の今後は、今のところ開けているが、これも近い将来に消滅するかもしれない。1997年以来、B-ヤマガタに加え系統B-ビクトリアからのインフルエンザウイルスBIVBの再出現が生じ、それ以降、両方のB系統からのウイルスが同時流行している。多価のベクターワクチンは、いくつかの季節的ウイルスの同時流行を考慮する多価のワクチンを得るために、いくつかの一価のワクチンを混合する必要性を回避する。これは、その性質上多価である、本発明によって提供される1つのMVA系構築物において達成することができる。これは、確立されたアプローチと対照的に産生経路を容易にする。好ましくは、組み換えMVAは、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ以上のHA遺伝子を含む。好ましい実施形態では、組み換えMVAは、4つの異なるHA遺伝子を含む。別の好ましい実施形態では、組み換えMVAは、ビクトリアまたはヤマガタ系等からの、少なくとも2つの異なるB型HAタンパク質を含む。好ましくは、インフルエンザウイルス遺伝子は、完全長遺伝子である。他の実施形態では、遺伝子断片は、30、40、50、60、70、75、80、85、90、95、97、98、または99の完全長遺伝子を含む。好ましくは、挿入されたインフルエンザウイルス遺伝子の大きさは、約700、1000、1400、1500、1700、または2300のヌクレオチドである。少なくとも5,000、6,000、7,000、8,000、9,000、10,000、11,000、12,000、13,000、14,000、または15,000のヌクレオチドのインフルエンザウイルス遺伝子配列を含む組み換えMVAが、特に好ましい。例えば、MVAゲノムの2つ、3つ、4つ、5つ、または6つの異なる部位に挿入され、5つ、6つ、7つ、8つ、または9つのプロモータによって制御される、少なくとも13,700ヌクレオチドのインフルエンザウイルス遺伝子配列を含む組み換えMVAが特に好ましい。好ましい実施形態では、4つの異なるHA遺伝子は、天然に、ヌクレオチド配列レベルで70もの同一性を有する。好ましい実施形態では、4つの異なるHA遺伝子は、これらの遺伝子がアミノ酸配列に影響を及ぼさない変異で核酸配列を変更することによってヒト細胞で発現するために最適化された後、ヌクレオチド配列レベルで64を超えない同一性を有する。好ましい実施形態では、4つの異なるHA遺伝子は、核酸レベルで、52~64の同一性を有する。2つの配列間の同一性パーセントの判断は、KarlinandAltschul1993,PNAS90,5873-5877の数学的アルゴリズムを使用して達成される。そのようなアルゴリズムは、Altschuletal.1990,J.MoI.Biol.215,403-410のBLASTNおよびBLASTPのプログラムに組み込まれる。BLASTヌクレオチド検索は、好ましくは、スコア=100、ワード長=12のBLASTNプログラムで実施される。BLASTタンパク質検索は、好ましくは、スコア=50、ワード長=3のBLASTPプログラムで実施される。比較目的のためにギャップアラインメントを得るために、Altschuletal.1997,NucleicAcidsRes.25,3389-3402に記載されるギャップBLASTが利用される。BLASTおよびギャップBLASTプログラムを利用する場合、好ましくは、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータが使用される。好ましくは、HA遺伝子は、異なるHA亜型、即ちH1-H16からである。一実施形態では、組み換えMVAは、H2、H5、H7、および/またはH9H型のHA遺伝子を含む。一実施形態では、組み換えMVAは、H3、vH1のHA遺伝子、および2つのB型HA遺伝子、特に、B-BrisおよびB-YamHA亜型を含む。H9、H5、H2、H7HAの組み込みにより、ヒトでの感染が証明されている4つの亜型が、本発明のHA-MVAに組み込まれた。これにより、4つのHクレードのうちの3つRusselletal.2004,Virology325,287-296が網羅され、含まれないHクレードのギャップを埋めることが想定される。H34番目のHクレードは、とにかく季節的に流行するため、最良のシナリオは、このクレードが交差保護によりある程度網羅されることであろう。ヘテロ亜型の株に対してワクチンの有効性が低いと予測するかもしれないが、直ぐに入手可能な有効性の低いワクチンが非常に遅れてのみ入手可能な有効性の高いワクチンよりも価値が高いことがモデリングにより明らかになったため、免疫反応を誘発する有効性が低いワクチンでも、大きな価値があるであろう、重度の疾患または死を回避する、そしておそらく伝染を減少させるのに十分である。これは、好ましくは本発明のワクチンによって達成され得る。さらに好ましい実施形態では、組み換えMVAは、HA、NA、および/もしくはM2抗原複数可、ならびに/またはエピトープ複数可をコードする遺伝子を含む。好ましくは、HA遺伝子は、Russelletal.2004,Virology325,287-296で定義される異なるHAクレード、即ち、H1H1、H2、H5、H6、H11、H13、H16、H9H8、H9、H12、H3H3、H4、H14、またはH7H7、H10、H15クレードからである。好ましくは、組み換えMVAは、2つ、3つ、または4つ全てのHAクレードのHA遺伝子を含む。好ましい実施形態では、組み換えMVAは、H1、H3、H7、および/またはH9クレードのHA遺伝子を含む。特に好ましいHA遺伝子は、H5A-インドネシア-CDC1047-2007、H2A-ヒドリガモ-ノルウェー101783-2006、H9A-ニワトリ-広東-GZ02-2008、H7A-アヒル-モンゴル-720-2007、vH1A-カルフォルニア/7/2009、H3A-パース-16-2009、B-ブリスベン-03-2007、B-ブリスベン-03-2007、およびB-フロリダ-04-2006である。特に好ましいNA遺伝子は、N1A-インドネシア-CDC1047-2007である。特に好ましいM2遺伝子は、M2A-香港-2652-2006である。特に好ましいM1遺伝子は、M1A-台湾-843-2007である。特に好ましいNP遺伝子は、NPA-センダイ-H-441-2007である。特に好ましいPB1遺伝子は、PB1A-センダイ-H-441-2007である。好ましくは、MVA構築物におけるHA遺伝子のヌクレオチド配列は、任意の2つのHA遺伝子間の同一性を65未満に減少させるように変更される。例えば、H2遺伝子およびH5遺伝子のヌクレオチド配列は、これらの遺伝子間の核酸同一性を70から64に減少させるように変更され得る。好ましくは、アミノ酸配列を変更しない、および/または好ましくはヒト細胞のコドンを使用する保存的変異が使用される。好ましくは、組み換えMVAは、機能NAタンパク質を発現する。機能NAタンパク質は、組み換えウイルスの産生中、より良好なウイルスの収率を促進することができる。したがって、MVAに機能NAタンパク質を発現させるために、遺伝子は、異なる遺伝子間領域に、または別個のプロモータの制御下で別個の転写単位としてのいずれかで、かつ融合タンパク質の一部としてではなく別個の挿入部位に入れられた。この態様外で、ノイラミニダーゼは、好ましくは、免疫応答の幅を増加させるために、抗原としても作用する。あまり好ましくないが、インフルエンザ配列は、本発明のMVAベクターに全体として存在する必要がなくてもよい。本発明によると、完全長タンパク質のみ、またはエピトープもしくは複数のエピトープのみ、または全ての可能な組み合わせを、組み換えウイルスによって発現させることができる、即ち、組み換え体は、抗原のうちの1つ以上の、1つ以上のエピトープを含んでもよい。例として、組み換えウイルスは、第1の内部抗原全体、第2の内部抗原の1つ以上のエピトープ、第1の外部抗原の1つ以上のエピトープ、および完全な第2の外部抗原を発現してもよい。同様に、組み換えMVAベクターは、第1の内部抗原の1つ以上のエピトープ、第2の完全長内部抗原、第3の内部抗原の1つ以上のエピトープ、完全な第1の外部抗原、および第2の外部抗原の1つ以上のエピトープ等を発現してもよい。2つ以上のエピトープが好ましい。また、インフルエンザ配列は、例えばより良好に発現させる、またはより安定するために、コドン最適化され得る。様々な好ましい実施形態では、組み換えMVAは、IL-15をコードする遺伝子を含まない。MVAへの組み込み部位本発明は、MVAゲノムの様々な挿入部位に組み込まれたインフルエンザウイルス遺伝子を含む組み換えMVAを包含する。様々な挿入部位とは、外部および内部抗原ならびに/またはそのエピトープをコードするインフルエンザウイルス遺伝子がそれぞれMVAゲノムの同じまたは1つ以上の異なる挿入部位に挿入され得ることを意味するが、異なる挿入部位が好ましい。異なるとは、例えば、第1の挿入部位が第2の挿入部位と同じではないことを意味する。挿入部位および挿入部位の数に関する詳細は、本明細書で以下に記載される。インフルエンザウイルス遺伝子は、実施例に示されるように、別個の転写単位として、または融合遺伝子として組み換えMVAに挿入され得る。実際、最大4つの高度に相同の遺伝子を含有するMVAは、安定していることが知られている国際特許公開第WO03/097846号を参照。したがって、MVAは、本明細書に記載されるように、血球凝集素遺伝子等の高度に相同の遺伝子を取り込むのに適している。一実施形態では、インフルエンザウイルス遺伝子は、MVAの遺伝子間領域に挿入される。好ましい実施形態では、IGRは、IGR07/08、IGR44/45、IGR64/65、IGR88/89、IGR136/137、およびIGR148/149から選択され、IGR44/45、IGR64/65、IGR88/89、および/またはIGR148/149は、特に好ましい。好ましい実施形態では、HA遺伝子は、IGR44/45、IGR64/65、IGR88/89、および/またはIGR148/149に挿入される。好ましくは、組み換えMVAの5つ、4つ、3つ、または2つ未満のIGRは、インフルエンザウイルス遺伝子を含む。特に好ましい実施形態では、組み換えMVAは、1つ、2つ、3つ、または4つのIGRに挿入された3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ以上のHA遺伝子を含む。一実施形態では、インフルエンザウイルス遺伝子は、天然の欠失部位であるMVAのI、II、III、IV、V、またはVIに挿入される。さらに別の実施形態では、インフルエンザ遺伝子は、天然の欠失部位であるIIIに挿入されないことが好ましい。インフルエンザウイルス遺伝子を含有するMVAの挿入部位の数は、1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ以上であり得る。好ましい実施形態では、組み換えMVAは、4つ、3つ、2つ以下の挿入部位に挿入されたインフルエンザウイルス遺伝子を含む。最も好ましくは、2つまたは4つの挿入部位が使用される。季節的流感ワクチンについては、2つの部位が最も好ましく使用され、例えば図8を参照のこと。つまり、外部抗原をコードする2つのインフルエンザウイルス遺伝子は、第1の部位に挿入され、内部抗原をコードするインフルエンザウイルス遺伝子は、第2の部位第1の部位とは異なるに挿入される。同様に、4つの挿入部位は、流行性または流行前流感ワクチンに最も好ましく使用され、例えば、図5を参照のこと。つまり、第1のHA遺伝子は、第1の部位に挿入され、NA遺伝子および第2のHA遺伝子は、第2の部位に挿入され、第3のHA遺伝子およびM2遺伝子は、第3の部位に挿入され、第4のHA遺伝子ならびにM1、PB-1およびNP遺伝子は、第4の部位に挿入される。M1、PB-1、およびNP遺伝子は、好ましくは、融合として発現する。しかしながら、組み換えMVAは、2つ、3つ、または4つの挿入部位に挿入された少なくとも6つ、7つ、8つ、または9つの遺伝子を含むことも好ましい。好ましくは、NA遺伝子は、別個の転写単位として組み換えMVAに挿入される。より好ましくは、NA遺伝子は、IGR64/65または148/149に挿入される。組み換えMVAによる機能NAタンパク質の発現は、組み換えウイルスの産生中、より良好な収率を促進し、保護の一因となる許容免疫を誘発できるインフルエンザウイルスの抗原を表すことができる。したがって、NA遺伝子は機能NAタンパク質をコードすることが好ましい。好ましくは、M1、PB1、およびNP遺伝子は、実施例に示されるように、融合遺伝子として組み換えMVAに挿入される。より好ましくは、M1、PB1、およびNP遺伝子は、IGR148/149に挿入される。好ましくは、M2遺伝子は、別個の転写単位として組み換えMVAに挿入される。より好ましくは、M2遺伝子は、IGR88/89に挿入される。組み換えMVAウイルスは、当該技術分野において既知の慣用的方法によって生成され得る。例えば、MVAウイルスは、実施例に記述される手順に従い生成され得る。組み換えポックスウイルスを得るため、または外因性コード配列をポックスゲノムに挿入するための方法は、当業者に周知である。例えば、本方法は、以下の参考文献に記載されており、MolecularCloning,AlaboratoryManual,SecondEdition,byJ.Sambrook,E.F.FritschandT.Maniatis2003,ColdSpringHarborLaboratoryPressは、DNAのクローニング、DNAおよびRNAの単離、ウェスタンブロッド解析、RT-PCR、ならびにPCR増幅技法等の標準的な分子生物学の技術の技法を説明している。VirologyMethodsManual,editedbyBrianWJMahyandHillarOKangro1996,.AcademicPressは、ウイルスの取り扱いおよび操作についての技法を説明している。MolecularVirology:APracticalApproach,editedbyAJDavisonandRMElliott1993,ThePracticalApproachSeries,IRLPressatOxfordUniversityPress,Oxford,Chapter9,ExpressionofgenesbyVacciniavirusvectors。CurrentProtocolsinMolecularBiology,publisher:JohnWileyandSonInc1998,Chapter16,sectionIV:Expressionofproteinsinmammaliancellsusingvacciniaviralvectorは、MVAの取り扱い、操作、および遺伝子工学についての技法および専門的知識を説明している。本発明による組み換えポックスウイルスの生成において、異なる方法が適用可能であってもよい。ウイルスに挿入されるDNA配列は、ポックスウイルスのDNAの部分に相同なDNAが挿入される大腸菌プラスミド構築物の中に配置され得る。別個に、挿入されるDNA配列は、プロモータに連結され得る。プロモータ-遺伝子連結は、プロモータ-遺伝子連結が非必須遺伝子座を含有するポックスウイルスDNAの領域に隣接するDNA配列に相同なDNAによって両端上に隣接するように、プラスミド構築物に位置付けられ得る。得られたプラスミド構築物は、大腸菌細菌内での増殖によって増幅され、単離され得る。挿入されるDNA遺伝子配列を含有する単離されたプラスミドは、細胞培養物、例えばニワトリ胚線維芽細胞CEFに、ポックスウイルスによるこの培養物の感染とともに、形質移入され得る。プラスミドの相同ポックスウイルスDNAとウイルスゲノムとの間の組み換えは、それぞれ、外来DNA配列の存在により改変されたポックスウイルスを生成することができる。好ましい実施形態によると、適切な細胞培養物の細胞、例えばCEF細胞は、ポックスウイルスに感染させることができる。感染した細胞は、続いて、好ましくはポックスウイルス発現制御要素の転写制御下で、外来遺伝子または複数の遺伝子を含む第1のプラスミドベクターを形質移入され得る。上記で説明されるように、プラスミドベクターは、外因性配列のポックスウイルスゲノムの選択された部分への挿入を方向付けることができる配列も含む。任意に、プラスミドベクターは、マーカーおよび/またはポックスウイルスプロモータに機能的に連結された選択遺伝子を含むカセットも含有する。適切なマーカーまたは選択遺伝子は、例えば、緑色蛍光タンパク質、β-ガラクトシターゼ、ネオマイシン-ホスホリボシルトランスフェラーゼ、または他のマーカーをコードする遺伝子である。選択またはマーカーカセットの使用は、生成された組み換えポックスウイルスの識別および単離を簡略化する。しかしながら、組み換えポックスウイルスは、PCR技術によっても識別され得る。続いて、さらなる細胞を、上述のように得られた組み換えポックスウイルスに感染させ、第2の外来遺伝子または複数の遺伝子を含む第2のベクターを形質移入することができる。この遺伝子がポックスウイルスゲノムの異なる挿入部位に導入され得る場合、第2のベクターは、第2の外来遺伝子または複数の遺伝子のポックスウイルスのゲノムへの組み込みを方向付けるポックスウイルス-相同配列においても異なる。相同組み換えが生じた後、2つ以上の外来遺伝子を含む組み換えウイルスが単離され得る。さらなる外来遺伝子を組み換えウイルスに導入するために、感染のために前のステップで単離された組み換えウイルスを使用することにより、かつ形質移入のためにさらなる外来遺伝子または複数の遺伝子を含むさらなるベクターを使用することにより、感染および形質移入のステップが繰り返され得る。代替的に、上述の感染および形質移入のステップは互換性がある、即ち、適切な細胞を、最初に外来遺伝子を含むプラスミドベクターによって形質移入した後、ポックスウイルスに感染させることができる。さらなる代替として、各外来遺伝子を異なるウイルスに導入し、細胞を得られた組み換えウイルス全てと同時形質移入し、全ての外来遺伝子を含む組み換え体をスクリーニングすることも可能である。第3の代替例は、生体外でのDNAゲノムおよび外来配列の連結、ならびにヘルパーウイルスを使用した組み換えたワクシニアウイルスDNAゲノムの再構成である。第4の代替例は、細菌人工染色体BACとしてクローン化されたワクシニアウイルスゲノムと、ワクシニアウイルスゲノムの所望の組み込み部位に隣接する配列と相同なDNA配列と隣接する直鎖状外来配列との間での、大腸菌または別の細菌種における相同組み換えである。組み換えウイルスを生成するために使用される好ましいMVA株は、好ましくは、ニワトリ胚線維芽細胞CEFにおいて生殖複製の能力を有するが、ヒトケラチノサイト細胞系HaCaT、ヒト骨の骨肉腫細胞系143B、およびヒト頚部腺癌細胞系HeLaにおいて生殖複製の能力を持たない。好ましくは、MVA骨格株は、その株と同じ成長特徴を有し、その試料は、受託番号V00083008によりECACCに受託された。HeLaおよびHaCaT細胞系において、MVA575より少なくとも3倍低いウイルス増幅率を有するMVAウイルスならびに/またはCEF細胞において、500を超える増幅率を有するウイルスも好ましい。インフルエンザウイルス遺伝子の発現一実施形態では、インフルエンザウイルス遺伝子もしくは複数の遺伝子またはエピトープ複数可のうちの1つ、2つ以上、または全ての発現は、1つ以上のポックスウイルスプロモータの制御下にあり、2つ以上のポックスウイルスプロモータの使用が好ましい。好ましい実施形態では、ポックスウイルスプロモータは、国際特許公開第WO2010/102822号もしくは国際特許公開第WO2005/054484号に記載されるプロモータのうちの1つ等の、Pr7.5プロモータ、ハイブリッド初期/後期プロモータ、PrSプロモータ、合成または天然の初期もしくは後期のプロモータ、または牛痘ウイルスATIプロモータである。好ましくは、国際特許公開第WO2010/102822号図1bを参照に記載されるように、pSまたはpHybプロモータが使用される。インフルエンザ遺伝子複数可は、単一転写単位として発現することができる。例えば、インフルエンザ遺伝子複数可は、ワクシニアウイルスプロモータに機能的に連結され得て、および/またはワクシニアウイルス転写ターミネータに連結され得る。一実施形態では、1つ以上のインフルエンザ遺伝子は、融合タンパク質として発現する。転写単位は、単独で、MVAゲノムの挿入部位に挿入され得る。転写単位は、他の転写単位複数可を用いてMVAゲノムの挿入部位に挿入され得る。転写単位は、MVAゲノムにおいて天然に生じず即ち、異種もしくは外因性もしくは外来、感染細胞での転写が可能である。好ましくは、組み換えMVAは、MVAゲノムに挿入される3、4、5、6、7、8、9、10以上の転写単位を含む。一実施形態では、組み換えMVAは、3、4、5、6、7、8、9、10以上の転写単位によりコードされるインフルエンザタンパク質を安定的に発現する。様々な実施形態では、組み換えMVAは、MVAゲノムの1、2、3、4、5、6以上の挿入部位でMVAゲノムに挿入される3、4、5、6、7、8、9、10以上の転写単位を含む。HA-MVAウイルスを含むワクチン本発明による組み換えHA-MVAウイルスは、高度に複製が制限され、したがって高度に弱毒化されるため、ヒトおよびさらには免疫不全のヒトも含む広範な哺乳類の治療の理想的な候補である。さらに、MVAは便宜上CEF細胞中で培養されるため、HA-MVA系ワクチンの産生は、従来のインフルエンザワクチンに対する既存の産生能とおおよそ無関係である。よって、本発明のHA-MVA系ワクチンは、流行、または流行となる可能性があるかもしれない季節的流感の場合に重要となり得る短期間で、大量に産生され得る。さらに、本発明のMVAベクターワクチンは、複数のインフルエンザウイルス抗原を送達することができ、よって、多価ワクチンを開発する可能性を提供する、高レベルの体液性および細胞性免疫の同時誘発を可能にする。よって、本発明は、ヒトを含む生存動物体に免疫応答を誘発するための薬学的組成物およびワクチンも提供する。ワクチンは、好ましくは104~109TCID50/mlの濃度範囲、好ましくは105~5×108TCID50/mlの濃度範囲、より好ましくは106~108TCID50/mlの濃度範囲、最も好ましくは107~108TCID50/mlの濃度範囲のHA-MVAウイルスを含む。ヒトにおける好ましいワクチン用量は、106~109TCID50、最も好ましくは106TCID50、または107TCID50、または108TCID50の用量を含む。薬学的組成物は、一般に、1つ以上の薬学的に許容されるおよび/もしくは承認された添加剤、担体、ならびに/または希釈剤、抗生物質、防腐剤、アジュバント、および/もしくは安定剤を含んでもよい。そのような補助物質は、水、食塩水、グリセロール、エタノール、湿潤剤もしくは乳化剤、pH緩衝物質等であり得る。適切な担体は、典型的に、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマー、脂質凝集物等の、大きく、ゆっくり代謝される分子である。薬学的に許容されるという用語は、本発明によるMVAの生物学的活性の有効性に干渉しない非毒性材料を意味する。担体の特徴は、投与経路に依存する。薬学的組成物は、治療における活性または使用のいずれかを強化する他の薬剤をさらに含有してもよい。そのような追加因子および/または薬剤は、相乗効果を産生するために、または副作用を最小にするために、本発明による免疫化のための方法に適用される薬学的組成物に含まれ得る。本発明によるMVAの製剤化および投与の技法は、Remington’sPharmaceuticalSciencesMuckPublishingGompany,Easton,PA,latesteditionに見出すことができる。ワクチンの調製において、本発明による組み換えHA-MVAウイルスは、生理学的に許容される形態に変換され得る。これは、天然痘に対するワクチン接種に使用されるポックスウイルスワクチンの調製における経験に基づき行われ得るStickl,H.etal.1974,Dtsch.med.Wschr.99,2386-2392に記載される。例えば、精製されたウイルスは、約10mMのトリス、140mMのNaClpH7.4に製剤化された5×108TCID50/mlの力価で、-80°Cで保管され得る。ワクチン注射の調製において、例えば、102-108粒子のウイルスが、アンプル、好ましくはガラスアンプルに、2のペプトンおよび1のヒトアルブミンの存在下の100mlのリン酸緩衝食塩水PBSに凍結乾燥され得る。代替的に、ワクチン注射は、製剤にウイルスを段階的凍結乾燥することにより産生され得る。この製剤は、生体内投与に適したマンニトール、デキストラン、糖、グリシン、ラクトース、もしくはポリビニルピロリドン等のさらなる添加剤、または抗酸化剤等の他の補助剤、あるいは不活性ガス、安定剤もしくは組み換えタンパク質例えばヒト血清アルブミンを含有することができる。次いで、ガラスアンプルは、密封され、数ヶ月、4°C~室温で保管され得る。しかしながら、必要がない限り、アンプルは、好ましくは-20°Cより低い温度で保管される。ワクチン接種または治療において、凍結乾燥物は、水溶液、好ましくは生理学的食塩水もしくはトリス緩衝液に溶解され、全身的または局所的のいずれかで、即ち非経口、皮下、静脈内、筋肉内、または当業者に既知の他の投与経路で投与され得る。投与方法、用量、および投与回数は、既知の様式で、当業者により最適化され得る。しかしながら、最も一般的な患者は、最初のワクチン接種の注射から約1ヶ月から6週間後の2回目の注射でワクチン接種される。季節的流感ワクチンにおいて、複数のインフルエンザウイルスからのHA抗原を含む多価のHA-MVAが好ましい。例えば、MVAは、H3N2、H1N1、vH1N1から、ならびにB-ビクトリアおよび/またはB-ヤマガタ系統の株からのHA抗原を含むことができる。三価および四価のワクチンが特に好ましい。好ましくは、ワクチンは、インフルエンザAおよびBのうちの少なくとも3つの季節的亜型に対して広く反応性である。季節的流感ワクチンは、好ましくは、強いCTL応答を誘発するために、内部インフルエンザウイルス抗原を含む。最も好ましい実施形態では、ワクチンは、HA、NA、M2、PB1、NP、およびM1抗原を含む。好ましくは、インフルエンザウイルス抗原は、MVAの2つまたは3つの挿入部位に挿入される。最も好ましくは、ワクチンの季節的インフルエンザウイルス株の遺伝的推移への適応を容易にするために、A型のHA遺伝子および1つのB型のHA遺伝子が、組み換えゲノムの単一部位に挿入される。季節的流感ワクチンは、好ましくは、5歳、4歳、3歳、または2歳未満の未感作の小児を予備刺激するために、ならびに感作済の小児および成人を追加免疫するために使用される。流行性流感ワクチンにおいて、複数のインフルエンザA型ウイルスからのHA抗原を含む多価のHA-MVAが好ましい。例えば、MVAは、Russellら2004によると、4つのHAクレード即ち、H9、H1、H3、およびH7クレードのうちの少なくとも2つからのHA抗原を含むことができる。例えば、MVAは、H9、H5、H2、およびH7のHA抗原を含むことができる。3つまたは4つのワクチンにより16全てのHA亜型を網羅することができるワクチンのライブラリを構築することができる。三価および四価のワクチンが特に好ましい。流行性流感のワクチンは、好ましくは、強いCTL応答を誘発するために、内部インフルエンザウイルス抗原を含む。最も好ましい実施形態では、ワクチンは、HA、NA、M2、PB1、NP、およびM1抗原を含む。好ましくは、インフルエンザウイルス抗原は、MVAの2つ、3つ、4つ、または5つの挿入部位に挿入される。流行性流感ワクチンは、好ましくは、流行前ワクチンとして、早期応答者のための標的ワクチン接種として、または曝露後予防として投与される。HA-MVAウイルスを含むキット本発明は、HA-MVAウイルスを含むキットをさらに提供する。キットは、対象にウイルスを投与するための説明書とともに、1つもしくは複数のHA-MVAウイルスの容器またはバイアルを含むことができる。好ましい実施形態では、対象はヒトである。説明書は、HA-MVAウイルスが単一投与量または複数即ち、2、3、4等投与量で対象に投与されることを示す。説明書は、HA-MVAウイルスが未感作または感作済の対象に初回予備刺激および二回目追加免疫投与で投与されることを示す。したがって、または代替的に、本発明は、第1のバイアル/容器に初回接種予備刺激接種用、および第2のバイアル/容器に二回目接種追加免疫接種用の組み換えMVAウイルスおよび/または組み換えMVAウイルスを含むワクチンもしくは薬学的組成物を含む予備刺激/追加免疫化のためのキットを提供する。本発明は、ワクチンを含むワクチン接種キット、ワクチンを含む充填済シリンジ、ならびに他の保存および適用方法にも関する。HA-MVAウイルスによる免疫化の方法本発明による免疫化のための方法は、治療有効量のMVAを用いる。治療有効用量はさらに、症状の回復、例えばそのような症状の治療、治癒、予防、または回復をもたらすのに十分なその化合物/成分の量を指す。好ましい実施形態では、免疫化は、予防的および/または治療的の両方であってもよい。本発明は、鳥類を含む対象動物を免疫化するための方法を提供する。好ましくは、動物は、ラット、ウサギ、ブタ、マウス、およびヒトを含む哺乳類であり、HA-MVAの投与量を対象に投与することを含む。最も好ましくは、対象はヒトである。一実施形態では、対象は成人である。他の実施形態では、対象の年齢は、5歳未満、3歳未満、2歳未満、15ヶ月未満、12ヶ月未満、9ヶ月未満、6ヶ月未満、または3ヶ月未満であり得る。他の実施形態では、対象の年齢は、0~3ヶ月、3~6ヶ月、6~9ヶ月、9~12ヶ月、1~2歳、または2歳を超える、例えば2~5歳からであり得る。好ましくは、106~109TCID50のHA-MVAの投与量が対象に投与される。より好ましくは、106~5×108TCID50の投与量が対象に投与される。最も好ましくは、107~108TCID50の投与量が対象に投与される。ヒトにおける好ましい投与量は、107TCID50または108TCID50のHA-MVAウイルスを含む。HA-MVAウイルスは、単一投与量または複数即ち、2、3、4等投与量で、対象、特に未感作の対象に投与され得る。HA-MVAウイルスは、初回予備刺激および二回目追加免疫投与で投与され得る。一実施形態では、初回投与量は、107~108TCID50のHA-MVAウイルスを含み、二回目投与量は、107~108TCID50のHA-MVAウイルスを含む。免疫化は、全身的または局所的のいずれか、即ち、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、または当業者に既知の任意の他の投与経路で投与され得る。本発明によるワクチンは、特に、ヒトを含む免疫不全の対象の免疫化に適している。生体外/エクスビボおよび/または生体内のいずれかの本発明による組み換えMVAを含む細胞が、本発明によりさらに包含される。例えば、生体外細胞は、組み換えウイルスが、それぞれ、例えばニワトリ胚線維芽細胞CEFの細胞などで増幅され、産生される細胞系であってもよい。実施例1.MVA-PanFluの生成MVA-PanFlu構築物は、MVA-BNに基づき、相同組み換えを介して外来遺伝子を4連続挿入することにより生成された。選択遺伝子は、さらなる組み換え反応により除去された。得られたウイルスストックPremasterは、ウイルスの同一性、野生型または前駆体ウイルスの不在、選択遺伝子の不在、挿入物の正確な挿入、およびRT-PCRによる挿入物の転写について広範囲にわたって試験された。全挿入物の配列および周囲MVA配列を検証した。実施例2.MVA-mBN208Aの生成MVA-BNの株に基づく組み換えMVAを生成するために、外来遺伝子のIGR64/65国際特許公開第WO03/097845号に記載される、MVA-BNの遺伝子64と65との間の遺伝子間領域中への組み込みのための組み換えプラスミドは、それぞれがポックスウイルス発現のためのプロモータの制御下で、ノイラミニダーゼ遺伝子およびH2遺伝子を含有するように操作された。この組み換えプラスミドpBN367図2は、MVA-BNを含むCEF細胞の相同組み換えに使用された。得られた組み換えウイルスMVA-mBN208Aは、2回プラーク精製され、次の挿入を組み込むための基礎として使用された。選択カセットを、MVA-mBN209Bの生成中に欠失させた。一般に、ウイルス名の最後の文字のAは、なおも選択カセットを含有する組み換えウイルスを示し、一方、ウイルス名の最後の文字のBは、選択カセットを欠失させたウイルスを示す。実施例3.MVA-mBN209Bの生成組み換えMVA-mBN209BMVA-mBN208Aに基づくを生成するために、外来遺伝子のIGR88/89国際特許公開第WO03/097845号に記載される、MVA-BNの遺伝子88と89との間の遺伝子間領域中への組み込みのための組み換えプラスミドは、それぞれがポックスウイルス発現のためのプロモータの制御下で、H9遺伝子およびM2遺伝子を有するように操作された。この組み換えプラスミドpBN368図3は、MVA-mBN208Aを含むCEF細胞の相同組み換えに使用された。得られた組み換えウイルスMVA-mBN209Bは、選択遺伝子の損失後、5回プラーク精製され、次の挿入を組み込むための基礎として使用された。適切なウイルス価少なくとも1×107ウイルス粒子/mlを意味するによるMVA-mBN209のPremasterの産生は、4.6×107/mlのウイルス価により最終Premasterが生成され得る前に、数回の追加増幅を必要とした。実施例4.MVA-mBN207Bの生成組み換えMVA-mBN207BMVA-mBN209Bに基づくを生成するために、外来遺伝子のIGR148/149国際特許公開第WO03/097845号に記載される、MVA-BNの遺伝子148と149との間の遺伝子間領域中への組み込みのための組み換えプラスミドは、それぞれがポックスウイルス発現のためのプロモータの制御下で、H5遺伝子および融合遺伝子M1、PB1、およびNPからなるを有するように操作された。この組み換えプラスミドpBN366図1は、MVA-mBN209Bを含むCEF細胞の相同組み換えに使用された。得られた組み換えウイルスMVA-mBN207Bは、選択遺伝子の損失後、7回プラーク精製され、次の挿入を組み込むための基礎として使用された。最適な産生条件を識別するために、成長研究が行われなければならなかった。2.87×107/mlの力価は、4日間、pH5.2のVP-SFM培地中で、30°CでMOI=0.1で感染後、達成することができた。実施例5.MVA-mBN210Bの生成組み換えMVA-mBN210BMVA-mBN207Bに基づくを生成するために、外来遺伝子のIGR44/45国際特許公開第WO03/097845号に記載される、MVA-BNの遺伝子44と45との間の遺伝子間領域中への組み込みのための組み換えプラスミドは、ポックスウイルス発現のためのプロモータの制御下で、H7遺伝子を有するように操作された。この組み換えプラスミドpBN395図4は、MVA-mBN207を含むCEF細胞の相同組み換えに使用された。得られた組み換えウイルスMVA-mBN210図5は、選択遺伝子の損失後、5回プラーク精製された。4.3×107TCID50/mlの適切なウイルス価のpremasterウイルスストックは、30°Cで生成することができた。実施例6.MVA-FluSeasonalの生成MVA-FluSeasonal構築物であるMVA-mBN242図8は、MVA-BNに基づき、相同組み換えを介して外来遺伝子を2連続挿入することにより生成された。選択遺伝子は、さらなる組み換え反応により除去される。実施例7.MVA-mBN241Aの生成MVA-BNの株に基づく組み換えMVAを生成するために、外来遺伝子のIGR148/149国際特許公開第WO03/097845号に記載される、MVA-BNの遺伝子148と149との間の遺伝子間領域中への組み込みのための組み換えプラスミドは、1インフルエンザウイルスB型ヤマガタ系統B/フロリダ/4/2006のHA遺伝子、および2M1、PB1、およびNPからなる融合遺伝子、および3ノイラミニダーゼ遺伝子、および4M2遺伝子を有するように操作され、それぞれ、ポックスウイルス発現のためのプロモータの制御下にあった。この組み換えプラスミドpBN418図7は、MVA-BNを含むCEF細胞の相同組み換えに使用された。得られた組み換えウイルスMVA-mBN241Aは、2回プラーク精製され、次の挿入を組み込むための基礎として使用された。2つの挿入物を有するMVA-mBN242の生成において、選択カセットを、MVA-mBN242Bの生成中に欠失させる。1つの挿入物を有する組み換えウイルスであるMVA-mBN241Bの生成において、選択カセットを、相同組み換えの第2のステップで欠失させた。実施例8.MVA-mBN242Bの生成MVA-BNの株に基づく組み換えMVAを生成するために、外来遺伝子のIGR88/89国際特許公開第WO03/097845号に記載される、MVA-BNの遺伝子88と89との間の遺伝子間領域中への組み込みのための組み換えプラスミドは、それぞれポックスウイルス発現のためのプロモータの制御下で、1H3遺伝子、および2vH1遺伝子、および3インフルエンザウイルスB型ビクトリア系統B/ブリスベン/60/2008のHA遺伝子を有するように操作された。この組み換えプラスミドpBN417図6は、MVA-mBN241Aを含むCEF細胞の相同組み換えに使用された。得られた組み換えウイルスMVA-mBN242Aは、プラーク精製された。選択カセットを、MVA-mBN242Bの生成中、組み換えを介して欠失させた。季節的流感ワクチンとして使用するための組み換えウイルスは、図8に示される。"