"下記のi~iiiいずれか1つに記載のペプチド及び有用タンパク質を共発現可能な形質転換体に、前記ペプチド及び有用タンパク質を発現させる工程を有することを特徴とする有用タンパク質の高発現方法。i配列番号1で表されるアミノ酸配列を有するペプチドii配列番号1で表されるアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチドiii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチド1、5及び9番目の少なくとも2つに存在する非極性の側鎖を有するアミノ酸残基が、A、V、L、I、W、M、F、及びPよりなる群から選ばれたアミノ酸の残基である、請求項1に記載の有用タンパク質の高発現方法。3、7及び11番目の少なくとも2つに存在する負電荷基が存在するアミノ酸残基が、D又はEで表されるアミノ酸の残基である、請求項1又は2に記載の有用タンパク質の高発現方法。2、6及び8番目の少なくとも2つに存在する正電荷基が存在するアミノ酸残基が、K、R及びHよりなる群から選ばれたアミノ酸の残基である、請求項1~3いずれか1つに記載の有用タンパク質の高発現方法。下記のi~iiiいずれか1つに記載のペプチド及び有用タンパク質を共発現可能であることを特徴とする形質転換体。i配列番号1で表されるアミノ酸配列を有するペプチドii配列番号1で表されるアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチドiii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチド下記のi~iiiいずれか1つに記載のペプチドをコードするDNAを含むことを特徴とする発現ベクター。i配列番号1で表されるアミノ酸配列を有するペプチドii配列番号1で表されるアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチドiii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチド前記発現ベクターが、更に有用タンパク質をコードするDNAを含む、請求項6に記載の発現ベクター。本発明の課題は、目的タンパク質の発現を向上させる手段方法を提供することにある。前記課題を解決するために、本発明者らは、LEAタンパク質の基本配列である11アミノ酸からなるペプチドを目的タンパク質と共発現させると、目的タンパク質の発現量が増大することを知見し、本技術を有用タンパク質やその代謝物の安定した高生産に利用するという発明を完成するに至った。上記課題は、下記の<1>、<5>及び<6>に記載の手段によって解決された。好ましい実施態様である<2>~<4>、<7>とともに以下に記載する。<1>下記のi~iiiいずれか1つに記載のペプチド及び有用タンパク質を共発現可能な形質転換体に、前記ペプチド及び有用タンパク質を発現させる工程を有することを特徴とする有用タンパク質の高発現方法、i配列番号1AKDGTKEKAGEのアミノ酸配列を有するペプチドii配列番号1AKDGTKEKAGEのアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチドiii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチド<2>1、5及び9番目の少なくとも2つに存在する非極性の側鎖を有するアミノ酸残基が、A、V、L、I、W、M、F、及びPからなる群から選ばれたアミノ酸の残基である、<1>に記載の有用タンパク質の高発現方法、<3>3、7及び11番目の少なくとも2つに存在する負電荷基が存在するアミノ酸残基が、D又はEで表されるアミノ酸の残基である、<1>又は<2>に記載の有用タンパク質の高発現方法、<4>2、6及び8番目の少なくとも2つに存在する正電荷基が存在するアミノ酸残基が、K、R及びHからなる群から選ばれたアミノ酸の残基である、<1>~<3>いずれか1つに記載の有用タンパク質の高発現方法、<5>下記のi~iiiいずれか1つに記載のペプチド及び有用タンパク質を共発現可能であることを特徴とする形質転換体、iAKDGTKEKAGEのアミノ酸配列を有するペプチドiiAKDGTKEKAGEのアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチドiii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチド<6>下記のi~iiiいずれか1つに記載のペプチドをコードするDNAを含むことを特徴とする発現ベクター、iAKDGTKEKAGEのアミノ酸配列を有するペプチドiiAKDGTKEKAGEのアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチドiii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチド<7>前記発現ベクターが、更に有用タンパク質をコードするDNAを含む、<6>に記載の発現ベクター。本発明は、LEAタンパク質の繰り返し配列の一部である11アミノ酸又は、その置換、付加、欠失体を細胞内で目的タンパク質と共発現させることで、細胞内で目的タンパク質を高生産させることを目的としてなされたものである。本発明によれば、様々な宿主に対して、目的タンパク質と特定のペプチドを共発現させることで、目的タンパク質を高効率に発現生産することができた。本発明の有用タンパク質目的タンパク質ともいう。の高発現方法は、下記のi~iiiいずれか1つに記載のペプチド及び有用タンパク質を共発現可能な形質転換体に、前記ペプチド及び有用タンパク質を発現させる工程を有することを特徴とする。i配列番号1AKDGTKEKAGEのアミノ酸配列を有するペプチドii配列番号1AKDGTKEKAGEのアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチドiii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドなお、本発明において、有用タンパク質と、少なくともi~iiiで表されるいずれか1つのペプチドとを共発現させればよく、有用タンパク質と、i~で表されるペプチドの2つ以上とを共発現させてもよく、特に限定されない。LEAタンパク質は、塩ストレス耐性、乾燥ストレス耐性に関与するタンパク質として知られているが、本発明者らは、タンパク質を大量発現している細胞内も発現タンパク質による一種のストレス状態であると仮説を立て、LEAタンパク質を共発現させることで、封入体を形成することなく、目的タンパク質の発現効率を上げるということを着想したものである。その着想に基づき、細胞内でLEAタンパク質の主配列を繰り返した遺伝子を、目的タンパク質の遺伝子と共発現するように、それぞれプロモーターの下流に挿入したベクターを構築した。その形質転換細胞を用いて、発現誘導剤を過剰に加えることにより、細胞内に大量に目的タンパク質及びLEAタンパク質を発現させ、封入体形成の抑制及び目的タンパク質の発現効率の向上を検討した。そして、様々な繰り返し数のLEA由来のタンパク質を共発現させ試行錯誤をした結果、本発明者等は、上記の発現系において、LEAタンパク質の主配列である11アミノ酸からなるペプチドのみを共発現させたとき、目的タンパク質の発現が向上することを見出したものである。なお、前記の目的タンパク質の発現の向上は、封入体の形成が抑制されたためであると推測される。本目的に用いる上記iに示すペプチドは、LEAタンパク質中に含まれる配列のものである。LEAタンパク質は、線虫のCaenorhabditiselegansや細菌類のHaemophilusinfluenzae、Dienococcusradioduransにも、植物と同じように存在し、LEAタンパク質中に11アミノ酸の繰り返し配列が存在し、そのアミノ酸配列には配列の規則性が存在する。また、一次構造と発現パターンの違いからグループ1~6に分類され、中でも機能的に特徴があるグループ3のLEAタンパク質の配列のものが好ましい。以下に、本発明で使用するi~iiiのペプチド以下、i~iiiのペプチドを総称して、LEAペプチドともいう。について、以下に詳述する。<iAKDGTKEKAGEのアミノ酸配列を有するペプチド>上記iに示すペプチドは、上述の通り、グループ3に属するLEAタンパク質の主配列である11アミノ酸からなるペプチドの一種である。<iiAKDGTKEKAGEのアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有し、ペプチドの1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有し、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有し、かつ、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有するペプチド>iiに示すペプチドは、iに示す配列番号1のペプチドAKDGTKEKAGEのアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有する。該アミノ酸配列は、1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有する。非極性の側鎖を有するアミノ酸残基は、Aアラニン、Vバリン、Lロイシン、Iイソロイシン、Wトリプトファン、Mメチオニン、Fフェニルアラニン、及びPプロリンよりなる群から選択されたアミノ酸の残基であることが好ましい。A、V、L、I、F及びMよりなる群から選択されたアミノ酸の残基であることがより好ましく、A、V、L及びIよりなる群から選択されたアミノ酸の残基であることが更に好ましい。また、1、5及び9番目の少なくとも2つに非極性の側鎖を有するアミノ酸残基が、少なくとも1番目及び9番目に非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有することが好ましく、1、5及び9番目に非極性の側鎖を有するアミノ酸残基を有することが更に好ましい。また、1、5及び9番目のアミノ酸残基が、非極性の側鎖を有するアミノ酸残基以外である場合には、正又は負に荷電していないことが好ましい。また、iiに示すペプチドは、3、7及び11番目の少なくとも2つに負電荷基が存在するアミノ酸残基を有する。負電荷基が存在するアミノ酸残基は、Dアスパラギン酸又はEグルタミン酸で表されるアミノ酸の残基あることが好ましい。3、7及び11番目のアミノ酸残基のいずれもが、負電荷基が存在するアミノ酸残基であることがより好ましい。更に、iiに示すペプチドは、2、6及び8番目の少なくとも2つに正電荷基が存在するアミノ酸残基を有する。正電荷基が存在するアミノ酸残基は、Kリジン、Rアルギニン及びHヒスチジンよりなる群から選ばれたアミノ酸の残基であることが好ましい。2、6及び8番目のいずれもが、正電荷基が存在するアミノ酸残基であることがより好ましい。なお、iiに示すペプチドの4及び10番目は特に限定されず、いずれのアミノ酸残基であってもよいが、正電荷基及び負電荷基を有していないことが好ましい。iiに示すペプチドの具体例としては、AKDGTKEKAGEの5番目のTをLに置換したAKDGLKEKAGE配列番号2が挙げられる。<iii前記i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチド>iiiに示すペプチドは、i又はiiに記載のアミノ酸配列において、1又は複数個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列を有し、本発明の効果を有する限り、欠失及び/又は付加されたアミノ酸の数は特に限定されないが、1~3個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列であることが好ましく、1又は2個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列であることがより好ましく、1個のアミノ酸が欠失及び/又は付加されたアミノ酸配列であることが更に好ましい。1又は複数個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列としては、末端のアミノ酸が欠損したアミノ酸配列が例示され、より具体的には、AKDGTKEKAG配列番号3、KDGTKEKAGE配列番号4、AKDGLKEKAG配列番号5、KDGLKEKAGE配列番号6が例示される。また、1又は複数個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列としては、末端にアミノ酸が付加したアミノ酸が例示され、AKDGTKEKAGEA配列番号7、VAKDGTKEKAGE配列番号8、AKDGLKEKAGEA配列番号9、VAKDGLKEKAGE配列番号10が例示される。本発明の有用タンパク質の高発現方法は、前記i~iiiいずれか1つに記載のペプチドLEAペプチド及び有用タンパク質を共発現可能な形質転換体に、前記ペプチド及び有用タンパク質を発現させる工程を有する。本発明者らの検討では、LEAタンパク質の繰り返し配列の一部である11個のアミノ酸配列、あるいは、該アミノ酸配列において、1又は数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列から成るペプチドLEAペプチドを用いることに意義があるのであって、LEAタンパク質の繰り返し配列の全体を有するタンパク質を用いて共発現させると、本発明とは異なり、発現が抑制される結果が得られる。上記遺伝子が形質転換された宿主細胞内では、LEAペプチドにより目的タンパク質の翻訳修飾が促進され、かつ成熟した目的タンパク質を保護するため、その発現量の向上が可能となる。発現量の評価法として、細胞から目的タンパク質を抽出して、ポリアクリルアミド電気泳動にて発現量を比較することが出来る。例えば、GFPの場合は、その蛍光量からタンパク質量を評価することができる。その結果、LEAペプチド共発現により、GFPの発現量増大が認められ、宿主細胞において目的タンパク質の大量生産が可能となる。本発明の方法は、広く普遍性を有し、目的のタンパク質は特定のものには限定されない。<形質転換体発現ベクター>本発明の形質転換体は、前記i~iiiいずれか1つに記載のペプチド及び有用タンパク質を共発現可能であることを特徴とする。また、本発明の発現ベクターは、前記i~iiiいずれか1つに記載のペプチドをコードするDNAを含むことを特徴とする。形質転換体は、LEAペプチド及び有用タンパク質をコードするDNA遺伝子を含む発現ベクターを宿主細胞に導入して得られる。また、これらのDNA遺伝子を含む核酸構築物を宿主細胞に導入してもよい。宿主細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよく、具体的には、宿主細胞としては、大腸菌、放線菌、枯草菌等の細菌、酵母細胞、昆虫細胞、動物細胞例えば、哺乳動物細胞、植物細胞等の任意の細胞好ましくは培養細胞が例示される。本発明において用いる宿主細胞は、大腸菌、昆虫細胞、動物細胞であることが好ましく、大腸菌又は昆虫細胞であることがより好ましい。ここで、核酸構築物とは、自立複製能を有しないゲノム導入用の組換えDNA断片を意味する。核酸構築物は、プロモーターの制御下にLEAペプチドをコードする遺伝子及び有用タンパク質をコードする遺伝子を含むことが好ましい。核酸構築物としては、トランスポゾンやCreloxPシステムに基づくものが例示される。宿主細胞を形質転換するには、一般的に行われている遺伝子導入法、例えば、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法、リポフェクション法、パーテイクルガン法、ポリエチレングリコールPEG法、アグロバクテリウム法、プロトプラスト融合法等を用いればよい。形質転換体の選択は、常法に従って行うことができるが、通常は使用した組換えベクターに組み込まれた選択マーカー等を利用して行うことができる。本発明において、宿主細胞には、LEAペプチドをコードするDNA遺伝子とともに、有用タンパク質をコードするDNA遺伝子を導入し、それらを共発現させる。上記遺伝子は、1つの発現ベクター又は1つの核酸構築物中に組み込んで導入してもよいし、別々の発現ベクター又は核酸構築物中に組み込んで導入してもよい。本発明の発現ベクターは、LEAペプチドをコードするDNAを含んでいればよく、有用タンパク質をコードするDNAを含んでいる態様に限定されるものではない。本発明の発現ベクターは、プロモーターの下流にLEAペプチドをコードするDNAを導入した発現ベクターであり、LEAペプチドの発現を制御可能な発現ベクターとすることが好ましい。本発明の発現ベクターは、他の領域に、更にプロモーター領域を有していてもよく、該プロモーターの領域下流に有用タンパク質をコードするDNAを導入可能であるか、該DNAが導入されていることが好ましい。上述のように、1つの発現ベクターにLEAペプチドをコードするDNAと、有用タンパク質をコードするDNAを組み込む場合、LEAペプチドをコードするDNA及び有用タンパク質をコードするDNAは、別々のプロモーターの制御下に配置してもよいが、オペロンを構成するように1つのプロモーターの制御下に配置してもよい。なお、後述する実施例においては、2つのプロモーターを有する発現ベクターを使用し、ベクターの1つ目のプロモーターの下流にLEAペプチドの遺伝子配列を導入し、もう一方のプロモーターの下流に目的とするタンパク質有用タンパク質の遺伝子を導入し、共発現を可能としている。なお、上述したように、LEAペプチドの遺伝子を導入したベクターと、有用タンパク質の遺伝子を導入したベクターとの両方を用いて、宿主細胞内で共発現させてもよいが、導入及び発現制御の観点から、1つの発現ベクターを使用して、同一のベクターにLEAペプチドの遺伝子及び有用タンパク質目的タンパク質の遺伝子を導入することが好ましい。発現ベクターを作製するためには、LEAペプチドをコードする遺伝子をインサートDNAとして発現ベクターに組み込めばよい。発現ベクターには、プロモーター好ましくは構成性又は一過性の過剰発現をもたらすプロモーター、ターミネーター、リボソーム結合部位などの宿主生物における発現に必要な各種エレメントが含まれることが好ましい。また発現ベクターにはプロモーターを制御する遺伝子がさらに含まれてもよい。プロモーターは、その発現ベクターを導入すべき宿主細胞中でその制御下の遺伝子の発現を誘導できる任意のものであってよい。例えば大腸菌中で発現させるのであれば、T7プロモーター、trcプロモーター、tacプロモーター、lacプロモーター等を使用でき、動物細胞中で発現させるのであれば、SV40初期プロモーター、SV40後期プロモーター等を使用でき、植物で発現させるのであれば、CaMV35Sプロモーター、ユビキチンプロモーター等を利用できる。以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。実施例1以下の例では、大腸菌Escherichiacoliを宿主として、LEAペプチドとGFPとを共発現させ、GFPの発現量の向上を検討した。[発現ベクターの作製]発現ベクターにはNovagen社のpRSFDuetを用いた。このベクターには二つのT7プロモーターと、それぞれのプロモーターの下流にマルチクローニングサイトが存在する。一つ目のT7プロモーター以下プロモーターAの下流にGFP遺伝子を、二つ目のT7プロモーター以下プロモーターBの下流にLEAペプチドの遺伝子を挿入する。プロモーターBの下流にあるNdeI及びXhoI切断部位を、制限酵素NdeI、XhoIで切断し、以下に示す遺伝子配列番号11及び配列番号12で構築した2本鎖DNA断片を、ライゲーション酵素を用いて挿入することで、不要な遺伝子配列を除去した。配列番号11:5-TATGGATATCTAAC-3配列番号12:5-TCGAGTTAGATATCCA-3挿入した遺伝子配列にはEcoRV切断配列が入っており、EcoRVで切断後、下に示す遺伝子配列番号13及び14で構築した2本鎖DNA断片を、ライゲーション酵素を用いて挿入することで、LEAペプチドの遺伝子配列をプロモーターBの下流へ挿入した。配列番号13:SLEA:5-GCGAAAGACGGGACGAAAGAAAAAGCAGGAGAA-3配列番号14:ASLEA:5-TTCTCCTGCTTTTTCTTTCGTCCCGTCTTTCGC-3[発現タンパク質GFP遺伝子の増幅とプラスミドへの挿入]GFP遺伝子がコードされているプラスミドベクターpQBI63和光純薬工業株を、GFP増幅のための鋳型DNAとして用いて、GFP遺伝子のDNAをPCRにより増幅した。PCRはPrimestarPolymeraseタカラバイオ社を用いて、第1ステップ:94°Cで2分、第2ステップ:94°Cで15秒変性、55°Cで30秒アニーリング及び68°Cで1分伸長のサイクルを30サイクル、第3ステップ:68°Cで10分のステップで行った。使用したプライマー配列は以下の通りである配列番号15及び16。FwBamHIGFPは、5末端にBamHI切断部位を含み、かつその下流にGFP遺伝子の5末端から21bpに相補的な配列を含む。RevHindIIIGFPは、5末端にHindIII切断部位を含み、かつその下流にGFP遺伝子の終始コドンを含めて21bpに相補的な配列を含む。配列番号15:FwBamHIGFP:CGGGGATCCATGGCTAGCAAAGGAGAAGAA配列番号16:RevHindIIIGFP:GCCAAGCTTTCAGTTGTACAGTTCATCCAT増幅したDNA断片は、BamHI及びHindIIIによって切断し、アガロース電気泳動によりDNA断片の分画を行い、約800bpのGFP遺伝子のDNA断片を回収した。LEAペプチド遺伝子が挿入済みの、プラスミドDNAのプロモーターAの下流にあるBamHI及びHindIII切断部位を、制限酵素BamHI、HindIIで切断処理をし、その後、ライゲーション酵素を用いて回収したGFP遺伝子を挿入した。そして、発現プラスミド構築後、シーケンサーによりDNA配列を確認した。[LEAペプチド、タンパク質の共発現とその評価]構築したLEAペプチド、GFP共発現遺伝子を用いて、LEAペプチド共発現によるGFPの発現効率の向上を、以下のように評価した。構築したプラスミドDNA100ngを、コンピテント化した大腸菌BL21DE3株50μlと混ぜ、ヒートショック法にて形質転換し、LBトリプトン10g/l、乾燥酵母エキス5g/l、塩化ナトリウム10g/l、アンピシリンナトリウム100mg/lプレート培地に播種した。12時間培養後、コロニーが形成され形質転換体を得た。その後、LB液体培地3mlにコロニーを植菌し、37°Cで14時間前培養した。前培養によって得られた培養液500μlを、LB培地50mlに植菌し、37°Cで600nmの吸光度が0.5になるまで培養した。吸光度が0.5まで培養を行った培養液に、発現誘導剤IPTGを終濃度が0.1mMになるように加え、37°CでLEAペプチド及びGFPの発現を誘導した。発現誘導後、各時間に集菌し、吸光度及び蛍光強度を測定することで、菌体数に対するGFPの発現強度を評価した。結果は図1に示したとおり、本発明のものGFPLEA1はコントロールGFPに比べ、約2倍量発現していることが分かる。上記実施例ではLEA繰返し配列中の出現頻度の高いアミノ酸を選んだ、AKDGTKEKAGE配列を選択している。LEAは植物によく見られ、乾燥ストレスを受けた場合に発現し、保水機能で細胞の乾燥を防ぐといわれている。本ペプチドの作用機序としては目的遺伝子の転写量が変わらないことから、生成されたタンパク質の凝集を抑止しすることで、目的タンパク質の生成量を向上させていると考えられる。実施例2実施例2では、実施例1で発現させたLEAペプチドLEA-Iを、以下のLEA-II~LEA-Vのように変更した以外は、実施例1と同様にして形質転換体を作製し、GFPの発現量を評価した。LEA-IIは、LEA-Iの5番目のアミノ酸Tを疎水性アミノ酸Lに変更し、LEA-IIIは、LEA-Iの2、6、8番目の塩基性アミノ酸KをグリシンGに変更し、LEA-IVは、3、7、11番目の酸性アミノ酸D又はEをグリシンに変更し、LEA-Vは、1、9番目の疎水性アミノ酸Aを親水性アミノ酸Sに変更した。結果は図2に示した。なお、図2中、GFPとは、GFPのみを発現させたものである。実施例2-1:LEA-I配列番号1:AKDGTKEKAGE実施例2-2:LEA-II配列番号2:AKDGLKEKAGE比較例2-1:LEA-III配列番号17:AGDGTGEGAGE比較例2-2:LEA-IV配列番号18:AKGGTKGKAGG比較例2-3:LEA-V配列番号19:SKDGTKEKSGEなお、LEA-II~LEA-Vを発現させるために使用した遺伝子配列配列番号20~27を以下に示す。配列番号20:SLEA-II:5-GCGAAAGACGGGCTGAAAGAAAAAGCAGGAGAA-3配列番号21:ASLEA-II:5-TTCTCCTGCTTTTTCTTTCAGCCCGTCTTTCGC-3配列番号22:SLEAIII:5-GCGGGAGACGGGCTGGGAGAAGGAGCAGGAGAA-3配列番号23:ASLEAIII:5-TTCTCCTGCTCCTTCTCCCAGCCCGTCTCCCGC-3配列番号24:SLEA-IV:5-GCGAAAGGAGGGCTGAAAGGAAAAGCAGGAGGA-3配列番号25:ASLEA-IV:5-TCCTCCTGCTTTTCCTTTCAGCCCTCCTTTCGC-3配列番号26:SLEA-V:5-TCCAAAGACGGGACGAAAGAAAAAAGCGGAGAA-3配列番号27:ASLEA-V:5-TTCTCCGCTTTTTTCTTTCGTCCCGTCTTTGGA-3本発明よると、上記実施例で示したように、LEAタンパク質の基本配列である11アミノ酸からなるペプチドを目的タンパク質と共発現させることで、正しいフォールディングの目的タンパク質の発現量を増大させることができた。本目的に用いるペプチドは、1、5、9番目の少なくとも2つに疎水基、3、7、11番目の少なくとも2つに負電荷基、2、6、8番目の少なくとも2つに正電荷基を配置するアミノ酸配列であればよい。実施例3以下の例では、大腸菌Escherichiacoliを宿主として、LEAペプチドとルシフェラーゼLucとを共発現させ、その発現量の向上を検討した。[発現ベクターの作製]発現ベクターにはNovagen社のpRSFDuetを用いた。このベクターには二つのT7プロモーターと、それぞれのプロモーターの下流にマルチクローニングサイトが存在する。一つ目のT7プロモーター以下プロモーターAの下流にルシフェラーゼ遺伝子を、二つ目のT7プロモーター以下プロモーターBの下流にLEAペプチドの遺伝子を挿入した。プロモーターBの下流にあるNdeI及びXhoI切断部位を、制限酵素NdeI、XhoIで切断し、以下に示す遺伝子配列番号11及び12で構築した2本鎖DNA断片を、ライゲーション酵素を用いて挿入することで、不要な遺伝子配列を除去した。配列番号11:5-TATGGATATCTAAC-3配列番号12:5-TCGAGTTAGATATCCA-3挿入した遺伝子配列にはEcoRV切断配列が入っており、EcoRVで切断後、下に示す遺伝子配列番号13及び14で構築した2本鎖DNA断片を、ライゲーション酵素を用いて挿入することで、LEAペプチドの遺伝子配列をプロモーターBの下流へ挿入した。配列番号13:SLEA:5-GCGAAAGACGGGACGAAAGAAAAAGCAGGAGAA-3配列番号14:ASLEA:5-TTCTCCTGCTTTTTCTTTCGTCCCGTCTTTCGC-3[発現タンパク質Luc遺伝子の増幅とプラスミドへの挿入]ルシフェラーゼ遺伝子がコードされているプラスミドベクターを、ルシフェラーゼ増幅のための鋳型DNAとして用いて、ルシフェラーゼ遺伝子のDNAをPCRにより増幅した。PCRはPrimestarPolymeraseタカラバイオ社を用いて、第1ステップ:94°Cで2分、第2ステップ:94°Cで15秒変性、55°Cで30秒アニーリング及び68°Cで2分伸長のサイクルを30サイクル、第3ステップ:68°Cで10分のステップで行った。使用したプライマー配列は以下の通りである配列が番等28及び29。FwBamHILucは、5末端にBamHI切断部位を含み、かつその下流にルシフェラーゼ遺伝子の5末端から21bpに相補的な配列を含む。RevHindIIILucは、5末端にHindIII切断部位を含み、かつその下流にルシフェラーゼ遺伝子の終始コドンを含めて18bpに相補的な配列を含む。配列番号28:FwBamHILuc:GCCGGATCCGATGGAAGACGCCAAAAACATA配列番号29:RevHindIIILuc:GCCAAGCTTTTACAATTTGGACTTTCCGCC増幅したDNA断片は、BamHI及びHindIIIによって切断し、アガロース電気泳動によりDNA断片の分画を行い、約1,900bpのルシフェラーゼ遺伝子のDNA断片を回収した。LEAペプチド遺伝子が挿入済みの、プラスミドDNAのプロモーターAの下流にあるBamHI及びHindIII切断部位を、制限酵素BamHI、HindIIIで切断処理をし、その後、ライゲーション酵素を用いて回収したルシフェラーゼ遺伝子を挿入した。そして、発現プラスミド構築後、シーケンサーによりDNA配列を確認した。[LEAペプチド、タンパク質の共発現とその評価]構築したLEAペプチド、ルシフェラーゼ共発現遺伝子を用いて、LEAペプチド共発現によるルシフェラーゼの発現効率の向上を、以下のように評価した。構築したプラスミドDNA100ngを、コンピテント化した大腸菌BL21DE3株50μlと混ぜ、ヒートショック法にて形質転換し、LBトリプトン10g/l、乾燥酵母エキス5g/l、塩化ナトリウム10g/l、カナマイシン50mg/lプレート培地に播種した。12時間培養後、コロニーが形成され形質転換体を得た。その後、LB液体培地3mlにコロニーを植菌し、37°Cで14時間前培養した。前培養によって得られた培養液500μlを、LB培地50mlに植菌し、37°Cで600nmの吸光度が0.5になるまで培養した。吸光度が0.5まで培養を行った培養液に、発現誘導剤IPTGを終濃度が0.1mMになるように加え、37°CでLEAペプチド及びルシフェラーゼの発現を誘導した。発現誘導後、各時間に遠心分離にて集菌し、SoluLyse:タンパク質抽出溶液Genlantis社に溶解した。10分間反応後、再度遠心分離を行い、その上精にルシフェラーゼを含む可溶画分を得た。精製したルシフェラーゼは、ルシフェリンとの反応による発光強度でその触媒量を評価した。MolecularProbes社のATP検出キットの20×Reactionbuffer0.5ml、0.1MDTTsolution0.1ml、10mMLuciferin0.5ml、miliQ水8.9mlを混合して標準反応溶液を作製した。プラスチック試験管に1mMのATP5μl、精製したタンパク質抽出液を5μl加え、光を遮断した状態で標準反応溶液90μlを加え、GENELIGHT55株マイクロテックニチオン、型番:GL100で発光量を測定した。結果は図3に示したとおり、本発明のものLucLEAはコントロールLucに比べ、約1.3-1.5倍量発現していることが分かる。実施例4以下の例では、大腸菌Escherichiacoliを宿主として、LEAペプチドとGFP-HFBII融合タンパク質を共発現させ、その発現量の向上を検討した。HFBIIは非常に強い疎水領域を有する糸状菌由来の膜タンパク質である。[発現ベクターの作製]発現ベクターにはNovagen社のpRSFDuetを用いた。このベクターには二つのT7プロモーターと、それぞれのプロモーターの下流にマルチクローニングサイトが存在する。一つ目のT7プロモーター以下プロモーターAの下流にHFBII-GFP遺伝子を、二つ目のT7プロモーター以下プロモーターBの下流にLEAペプチドの遺伝子を挿入した。プロモーターBの下流にあるNdeI及びXhoI切断部位を、制限酵素NdeI、XhoIで切断し、以下に示す遺伝子配列番号11及び12で構築した2本鎖DNA断片を、ライゲーション酵素を用いて挿入することで、不要な遺伝子配列を除去した。配列番号11:5-TATGGATATCTAAC-3配列番号12:5-TCGAGTTAGATATCCA-3挿入した遺伝子配列にはEcoRV切断配列が入っており、EcoRVで切断後、下に示す遺伝子配列番号13及び14で構築した2本鎖DNA断片を、ライゲーション酵素を用いて挿入することで、LEAペプチドの遺伝子配列をプロモーターBの下流へ挿入した。配列番号13:SLEA:5-GCGAAAGACGGGACGAAAGAAAAAGCAGGAGAA-3配列番号14:ASLEA:5-TTCTCCTGCTTTTTCTTTCGTCCCGTCTTTCGC-3[発現タンパク質HFBII-GFP遺伝子の増幅とプラスミドへの挿入]HFBII-GFP遺伝子がコードされているプラスミドベクターを、HFBII-GFP増幅のための鋳型DNAとして用いて、HFBII-GFP遺伝子のDNAをPCRにより増幅した。PCRはPrimestarPolymeraseタカラバイオ社を用いて、第1ステップ:94°Cで2分、第2ステップ:94°Cで10秒変性、55°Cで15秒アニーリング及び72°Cで2分伸長のサイクルを30サイクル、第3ステップ:68°Cで10分のステップで行った。使用したプライマー配列配列番号30及び16は以下の通りである。FwBamHIHFBIIは、5末端にBamHI切断部位を含み、かつその下流にHFBII-GFP遺伝子の5末端から21bpに相補的な配列を含む。RevHindIIIGFPは、5末端にHindIII切断部位を含み、かつその下流にHFBII-GFP遺伝子の終始コドンを含めて21bpに相補的な配列を含む。配列番号30:FwBamHIHFBII:CGGGGATCCGCTGTCTGCCCTACCGGCCTC配列番号16:RevHindIIIGFP:GCCAAGCTTTCAGTTGTACAGTTCATCCAT増幅したDNA断片は、BamHI及びHindIIIによって切断し、アガロース電気泳動によりDNA断片の分画を行い、約1,000bpのHFBII-GFP遺伝子のDNA断片を回収した。LEAペプチド遺伝子が挿入済みの、プラスミドDNAのプロモーターAの下流にあるBamHI及びHindIII切断部位を、制限酵素BamHI、HindIIIで切断処理をし、その後、ライゲーション酵素を用いて回収したHFBII-GFP遺伝子を挿入した。そして、発現プラスミド構築後、シーケンサーによりDNA配列を確認した。[LEAペプチド、タンパク質の共発現とその評価]構築したLEAペプチド、HFBII-GFP共発現遺伝子を用いて、LEAペプチド共発現によるHFBII-GFPの発現効率の向上を、以下のように評価した。構築したプラスミドDNA100ngを、コンピテント化した大腸菌BL21DE3株50μlと混ぜ、ヒートショック法にて形質転換し、LBトリプトン10g/l、乾燥酵母エキス5g/l、塩化ナトリウム10g/l、カナマイシン50mg/lプレート培地に播種した。12時間培養後、コロニーが形成され形質転換体を得た。その後、LB液体培地3mlにコロニーを植菌し、37°Cで14時間前培養した。前培養によって得られた培養液500μlを、LB培地50mlに植菌し、37°Cで600nmの吸光度が0.5になるまで培養した。吸光度が0.5まで培養を行った培養液に、発現誘導剤IPTGを終濃度が0.1mMになるように加え、37°CでLEAペプチド及びHFBII-GFPの発現を誘導した。発現誘導後、4時間後に遠心分離にて集菌し、発現誘導4時間後に集菌し、吸光度及び蛍光強度を測定することで、菌体数に対するGFPの発現強度を評価した。精製したHFBII-GFPは、結果は図4に示したとおり、本発明のものはコントロールLEAペプチドを発現していないHFBIIGFPに比べ、約1.3倍量発現していることが分かる。実施例5実施例5では、昆虫細胞での共発現を行った。[細胞の培養]Sf9細胞はInvitrogenから購入し、GracesInsectCellCultureMediumInvitrogenに10FBS大日本製薬株と50U/mlペニシリン、50μg/mlストレプトマイシンを含む培地を用いて、27°Cで培養し、数日ごとに培地を交換した。細胞の継代は、セルスクレーパーBDFalconで細胞を剥離させた後、800rpmで5分間遠心し、培地を吸引した後、細胞数5×105個になるように新しい培地を加え懸濁し、50mlのカルチャーボトルBDFalconで培養した。細胞の保存は10DMSOを含む培地で1×106cellsmlの細胞懸濁液を作製し、-80°Cのディープフリーザで凍結保存した。凍結の際には、BICELL日本フリーザー株を用いて温度を徐々に-80°Cまで低下させた。解凍の際には、37°Cの恒温槽で急速解凍し、培地で洗浄することでDMSOの除去を行った。[発現ベクターの作製]pFastBacDualプラスミドInvitrogenをLEAペプチドと目的タンパク質GFPを共発現させるベクターに使用した。このプラスミドベクターにはタンパク質発現用に二つのプロモーターポリへドリンプロモーター、p10プロモーターを有しており、それぞれの下流にLEAペプチドの遺伝子とGFP遺伝子を挿入した。[発現タンパク質GFP遺伝子の増幅とプラスミドへの挿入]GFP遺伝子がコードされているpQBI63和光純薬工業株を、GFP遺伝子増幅のための鋳型DNAとして用いて、PCRにより増幅した。PCRはPrimestarPolymeraseタカラバイオ株を用いて、第1ステップ:94°Cで2分、第2ステップ:94°Cで15秒変性、55°Cで30秒アニーリング及び68°Cで1分伸長のサイクルを30サイクル、第3ステップ:68°Cで10分のステップで行った。使用したプライマー配列配列番号15及び16は以下の通りである。FwBamHIGFPは、5末端にBamHI切断部位を含み、かつその下流にGFP遺伝子の5末端から21bpに相補的な配列を含む。RevHindIIIGFPは、5末端にHindIII切断部位を含み、かつその下流にGFP遺伝子の終始コドンを含めて21bpに相補的な配列を含む。配列番号15:FwBamHIGFP:CGGGGATCCATGGCTAGCAAAGGAGAAGAA配列番号16:RevHindIIIGFP:GCCAAGCTTTCAGTTGTACAGTTCATCCAT増幅したDNA断片は、BamHI及びHindIIIによって切断し、アガロース電気泳動によりDNA断片の分画を行い、約800bpのGFP遺伝子のDNA断片を回収した。pFastBacDualプラスミドのポリへドリンプロモーター下流にあるBamHI及びHindIII切断部位を、制限酵素BamHI、HindIIIで切断した。その後、回収したGFP遺伝子を、ライゲーション酵素を用いて切断したプラスミドへ挿入した。発現プラスミド構築後、シーケンサーによりDNA配列を確認した。[LEAペプチド遺伝子の挿入]GFP遺伝子挿入済みのベクターのp10プロモーターの下流にあるXhoI及びKpnI切断部位を、制限酵素XhoI、KpnIで切断した。LEAペプチドの遺伝子は以下に示す遺伝子配列番号31及び32で構築した2本鎖DNA断片をハイブリダイゼーションさせ、その後、切断したプラスミドとライゲーション酵素を用いて結合することで、LEAペプチドの遺伝子配列をp10プロモーターの下流へ挿入した。構築後、シーケンサーによりDNA配列を確認した。配列番号31:SLEA:5-TCGAGATGGCGAAAGACGGGACGAAAGAAAAAGCAGGAGAATAAGGTAC-3配列番号32:ASLEA:5-CTTATTCTCCTGCTTTTTCTTTCGTCCCGTCTTTCGCCATC-3[コントロールベクターの作製]p10プロモーターからタンパク質発現をしないコントロールベクターを作製した。GFP遺伝子挿入済みのベクターのp10プロモーター下流にあるXhoI及びKpnI切断部位を、制限酵素XhoI、KpnIで切断した。以下に示す遺伝子配列番号33及び34で構築した2本鎖DNA断片をハイブリダイゼーションさせ、その後、切断したプラスミドとライゲーション酵素を用いて結合することで、終止コドンを複数有する遺伝子を挿入した。構築後、シーケンサーによりDNA配列を確認した。配列番号33:SATGXXX:5-TCGAGATGTAATAGGGTAC-3配列番号34:ASATGXXX:5-CCTATTACATC-3[バクミドDNAの精製]構築したpFastBacDualベクターから、DH10BaccompetentcellInvitrogenにGFP遺伝子及びLEA遺伝子をトランスポジションにより導入した。100μlのDH10Baccompetentcellをマイクロテストチューブに移し、5μlの構築したプラスミドDNAを加え、氷上で30分放置した。その後、42°Cで45秒間ヒートショックを行い、900μlのSOC培地を加えた。これを15mlチューブに移し、225rpm、37°Cで4時間培養した。その後、50μg/mlのカナマイシン、7μg/mlのゲンタマイシン、10μg/mlのテトラサイクリン、100μg/mlのBluogal、40μg/mlのIPTGを含むLBプレートに播種し、37°Cで48時間培養した。ブルーホワイトアッセイによってホワイトコロニーを選び、50μg/mlのカナマイシン、7μg/mlのゲンタマイシン、10μg/mlのテトラサイクリンを含む1mlのLB培地にて、48時間培養し、ミニプレップ法によりDNAを抽出精製した。得られたDNAをバクミドDNAとした。[Sf9への遺伝子導入]バクミドDNAのSf9細胞への導入にはリポフェクション法を用いた。1μgのバクミドDNAを100μlのGracesInsectCellCultureMedium血清抗生物質無しに加えた。同様に6μlのCellfectinRegentInvitrogenを100μlのGracesInsectCellCultureMediumに加えた。両者を緩やかに混合し、45分間、室温にて放置した後、0.8mlのGracesInsectCellCultureMedium血清抗生物質無しを加え、Sf9細胞にローディングし、GracesInsectCellCultureMedium血清抗生物質無しにおいて27°Cで5時間培養した。その後、Sf9細胞をGracesInsectCellCultureMedium血清有りで2回洗浄し、GracesInsectCellCultureMedium血清有り抗生物質無し中で、27°Cで72時間培養した。72時間後、細胞からDNAを抽出し、PCRによってGFP遺伝子の確認を行った。回収した培地をウイルス溶液として4°Cで遮光保存した。その後、ウイルス感染を繰り返すことで、感染させるのに十分な濃度のウイルス溶液を得た。ウイルス感染は、4mlのGracesInsectCellCultureMediumと1mlのウイルス溶液を混合し、培養中のSf9細胞の培地と交換することで行った。インフェクション3日後の細胞を感染細胞として実験に使用した。[GFP発現の確認]GFPの発現は、蛍光顕微鏡により確認した。露光時間を2sに設定し、50細胞の発現を計測し、1細胞数当たりの蛍光量を評価した。結果は図5に示したとおり、本発明のものGFPLEAはコントロールGFPに比べ、約1.2~1.3倍量発現していることが分かる。実施例6実施例6では、実施例1で発現させたLEAペプチドLEA-Iを、以下のLEAx1~LEAx6のように繰り返しした配列に変更した以外は、実施例1と同様にして形質転換体を作製し、GFPの発現量を評価した。LEAx1:LEA-ILEAx2:LEA-Iを2回繰り返した配列LEAx3:LEA-Iを3回繰り返した配列LEAx4:LEA-Iを4回繰り返した配列LEAx6:LEA-Iを6回繰り返した配列本発明よると、上記実施例で示したように、LEAタンパク質の基本配列である11アミノ酸からなるペプチドを目的タンパク質と共発現させることで、正しいフォールディングの目的タンパク質の発現量を増大させることができた。本目的に用いるペプチドは、その配列を繰り返すと効果がなくなることが分かった。"