"α及び/又はγインターフェロンの産生増加により細胞の免疫応答を発生することができ、また急速複製を行うことができるウイルスベクターであって、PRRSウイルスに対して抗原活性を有するタンパク質をコーディングする外因性ヌクレオチド配列を挿入した、ことを特徴とするウイルスベクター。前記ウイルスベクターは、パラミクソウイルスである、請求項1に記載のウイルスベクター。前記パラミクソウイルスは、あらゆる血清型、遺伝子型のパラミクソウイルスから選択され、前記パラミクソウイルスは、レントジェニック型、メソジェニック型及びベロジェニック型ウイルスを含み、逆遺伝学的技術を実施して、パラミクソウイルスに病原性を付与する117位置からフェニルアラニンを除去し、またQ114位置に近接する位置から塩基性アミノ酸を除去することが可能なパラミクソウイルス、又はトリ感染アブラウイルス属に含まれるパラミクソウイルスから選択される、請求項2に記載のウイルスベクター。前記パラミクソウイルスは、ニューカッスル病ウイルス又はセンダイウイルスから選択される、請求項3に記載のウイルスベクター。前記パラミクソウイルスは、ニューカッスル病ウイルスである、請求項4に記載のパラミクソウイルスベクター。前記ニューカッスル病ウイルスは、LaSota株、B1株、QV4株、ウルスター株、ローキン株、コマロフ株から選択される、請求項5に記載のウイルスベクター。外因性ヌクレオチド配列は、ORF5、ORF6及びその組合せから選択される、請求項1に記載のウイルスベクター。前記ORF5は配列ID番号:1の配列を有し、前記ORF6は配列ID番号:2の配列を有する、請求項7に記載のウイルスベクター。α及び/又はγインターフェロンの産生増加により細胞の免疫応答を発生することができ、また急速複製を行うことができるウイルスベクターであって、PRRSウイルスに対して抗原活性を有するタンパク質をコーディングする外因性ヌクレオチド配列を挿入した、該ウイルスベクターと、薬学的に許容可能な担体、アジュバント及び/又は賦形剤とを含む、ことを特徴とする組換えワクチン。前記ウイルスベクターのウイルスは、パラミクソウイルスである、請求項9に記載の組換えワクチン。前記パラミクソウイルスは、生又は不活化のウイルスである、請求項10に記載の組換えワクチン。前記パラミクソウイルスは、あらゆる血清型、遺伝子型のパラミクソウイルスから選択され、前記パラミクソウイルスは、レントジェニック型、メソジェニック型及びベロジェニック型ウイルスを含み、逆遺伝学的技術を実施して、パラミクソウイルスに病原性を付与する117位置からフェニルアラニンを除去し、またQ114位置に近接する位置から塩基性アミノ酸を除去することが可能なパラミクソウイルス、又はトリ感染アブラウイルス属に含まれるパラミクソウイルスから選択される、請求項11に記載の組換えワクチン。前記パラミクソウイルスは、ニューカッスル病ウイルス又はセンダイウイルスから選択される、請求項12に記載の組換えワクチン。前記パラミクソウイルスは、ニューカッスル病ウイルスである、請求項13に記載の組換えワクチン。前記ニューカッスル病ウイルスは、LaSota株、B1株、QV4株、ウルスター株、ローキン株、コマロフ株から選択される、請求項14に記載の組換えワクチン。外因性ヌクレオチド配列は、ORF5、ORF6及びその組合せから選択される、請求項9に記載の組換えワクチン。前記ORF5は配列ID番号:1の配列を有し、前記ORF6は配列ID番号:2の配列を有する、請求項16に記載の組換えワクチン。前記薬学的に許容可能な担体は、好適には、含水溶液又はエマルションとした、請求項9に記載の組換えワクチン。前記薬学的に許容可能な担体は、水-油、油-水、又は水-油-水型のエマルションから選択される、請求項18に記載の組換えワクチン。前記薬学的に許容可能な担体は、水-油-水型のエマルションである、請求項19に記載の組換えワクチン。抗原反応を得るのに必要なウイルス濃度は、106.0~1010.0DIEP50/mLである、請求項9に記載の組換えワクチン。抗原反応を得るのに必要なウイルス濃度は、108.0~109.5DIEP50/mLである、請求項21に記載の組換えワクチン。組換えワクチンは、筋肉内、鼻腔内、又は皮下を経由するにより散布、噴霧又は飲料水内で投与する、請求項9に記載の組換えワクチン。組換えワクチンは、筋肉内経由で投与する、請求項23に記載の組換えワクチン。請求項9記載の組換えワクチンを使用する方法であって、前記組換えワクチンをPRRS制御に使用する、使用方法。請求項9記載の組換えワクチンをPRRS制御に使用する方法であって、前記組換えワクチンを2回投与した後に、免疫付与された動物の肺病変部位が12未満となるようにする、使用方法。従来技術の欠点に鑑み、本発明の目的は、ブタ繁殖呼吸障害症候群PRRSに対抗する有効なウイルスベクター組換えワクチンを得ることにある。本発明の他の目的は、全PRRSウイルスに基づくワクチンよりも迅速な免疫応答を発生する抗PRRSのウイルスベクター組換えワクチンを得ることにある。本発明のさらに他の目的は、PRRSを抑制するウイルスベクター組換えワクチンの使用法を得ることにある。本発明の別の目的は、PRRSウイルスに対する抗原活性を有するタンパク質をコーディングする外因性ヌクレオチド配列を挿入したウイルスベクターを得ることにある。この目的を達成するため組換えワクチンを発明したもので、本発明の組換えワクチンは、α及び/又はγインターフェロンの産生増加により細胞の免疫応答を発生することができ、また急速に複製を行うことができるウイルスベクターであって、好適には、ニューカッスル病ウイルスをベースとし、ORF5、ORF6及びこれらの組合せから選択してPRRSのヌクレオチド配列を挿入した、該ウイルスベクターと、薬学的に許容可能な担体、アジュバント及び/又は賦形剤とを含む。新規な態様を考慮した本発明の特徴は、特許請求の範囲に特別に定義した。しかし、その若干の実施形態、特徴並びに若干の目的及び利点は、添付図面とともに以下の詳細な説明を読むことによって、よりよく理解できるであろう。本発明を開発する間に、驚くべきことに、α及び/又はγインターフェロンの産生増加により細胞の免疫応答を発生することができるウイルスベクターであって、急速複製を行うことができ、PRRSウイルスvPRRSの抗原部位をコーディングする外因性ヌクレオチド配列を挿入した、該ウイルスベクターと、薬学的に許容可能な担体、アジュバント及び/又は賦形剤とを含む組換えワクチンによれば、ブタ繁殖呼吸障害症候群に対抗する適切な保護を行えることが分かった。ウイルスベクターとしては、生活動している又は不活化死んでいるの状態のもとを使用することができる。不活化によって、ウイルスベクターとして作用し、またvPRRSの抗原部位をコーディングするヌクレオチド配列を有する組換えウイルスは、複製能力を失うと理解される。不活化は既知の物理的又は化学的な処理手順によって、好適には、ホルムアルデヒド又はβ-プロピオラクトンでの化学的不活化によって行う動物間流行病学会のオフィスインターナショナル、2008年、ニューカッスル病、陸生動物の診断検査及びワクチンのOIEマニュアル、動物間流行病学会のオフィスインターナショナル、フランス、第576~589頁参照。逆に活性又は生ウイルスは、複製能力を保持していると理解される。好適には、使用するウイルスベクターは、任意のパラミクソウイルスから選択したパラミクソウイルスとすることができ、あらゆる血清型、遺伝子型のパラミクソウイルスから選択でき、レントジェニック型、メソジェニック型及びベロジェニック型ウイルスを含むパラミクソウイルスから選択できる。同様に、逆遺伝学的技術を実施して、パラミクソウイルスに病原性を付与する117位置からフェニルアラニンを除去し、またQ114位置に近接する位置から塩基性アミノ酸を除去したパラミクソウイルス、又はトリ感染アブラウイルス、例えば、ニューカッスル病ウイルス若しくはセンダイウイルスに含まれるパラミクソウイルスを使用することができる。より好適には、ウイルスベクターは、ニューカッスル病ウイルスであり、このウイルスベクターはレントジェニック株又はメソジェニック株から選択し、例えば、LaSota株、B1株、QV4株、ウルスター株、ローキン株、コマロフ株から選択すると好適である。好適には、LaSota株から組換えウイルスを選択する。vPRRSの抗原部位をコーディングするヌクレオチド配列に関しては、従来幾つかのORF配列が記載されており、ORF5及びORF6の配列は、米国特許第5,888,513号明細書及び米国特許第7,041,443号明細書、並びに中国特許出願公開第1778926号明細書に記載されているように、抗PRRSワクチンを産生するのに使用することができる。本発明の場合、使用するヌクレオチド配列は、配列ID番号:1ID番号:2Orf56を産生するpSL1180NDVLSベクターのSacll部位内におけるvPRRSからのORF5及びORF6遺伝子のクローニングA:plntNhe中間ベクターの産生ニューカッスル病と称されるORF5及びORF6遺伝子の5′末端におけるGE/GSから転写配列を導入する目的で、新しい中間ベクター、いわゆるplntNheを形成し、この形成は、GE/GS配列のPCR初期増幅によって、ニューカッスル病ゲノムを鋳型として使用し、またこれら配列をpGEM-T内に後で挿入することによって行った。B:ベクターplntNheに対するORF5及びORF6遺伝子のサブクローニングplntNheプラスミドをSpel-Hpalで消化し、つぎにplntNhe内にクローンを形成し、plntNhe56プラスミドを得た。C:ベクターpSL1180NDVLSに対するGEGSORF56のサブクローニングplntNhe56プラスミドをNhel酵素で消化し、pSL1180NDVLSプラスミドをSacllで消化した。消化生成物を削り取り、相溶性結合部位を残し、またGEGSORF56領域を精製し、pNDVLSのSacll部位に挿入し、pNDVLSOrf56と称される感染クローンを得た。実施例4細胞培養内での組換えウイルスrNDVLSOrf56の産生Hep2及びA549細胞をMAV7ウイルスに感染多重度1で感染させた。37 ゚C、5CO2大気中で1時間の培養後、細胞にpNDVLSOrf56クローンからのDNAを1マイクログラムμg導入し、これとともに双方の細胞タイプにおける組換えの産生に必要なウイルスタンパク質P,NP及びLのコーディングを行う発現プラスミドpNP,pP及びpLからのDNAを02μg導入した。核酸導入後44時間して、双方の細胞タイプで得られた組換えウイルスを回収集菌し、生後10日目のSPFニワトリ胚に注入し、産生ウイルスを増殖させた。回収したアラントイドallantoid液体をプレートアッセイによってベロ細胞内で滴定し、ワクチンを調製するのに使用する最終組換えウイルスを生じた。実施例5vPRRSからのORF5及びORF6インサートを持つニューカッスル病LaSota組換えウイルスを有するワクチン:pNDVLSOrf56vacの製造方法種の産生から開始し、ニワトリの特定病原体未感染SPF:freeofspecificpathogensの孵化胚含有卵に予め決定した感染ドーズを接種した。胚を37 ゚Cで72時間にわたり培養し、生死を毎日モニタリングした。この時間経過後、生きている胚を1日から翌日にかけて、好適には24時間冷凍し、アミノアラントイドaminoallantoid液体FAAを無菌条件の下で回収し、遠心分離によって浄化した。FAAを検査にかけてその純度、無菌度及びDIEP力価を決定した。生ワクチン及び不活化ワクチンを水-油-水型エマルション内で調製した。油相を調製するため、Span80及びTween80タイプの鉱油及び界面活性剤を使用した。水相を調製するため、FAAを防腐作用のある溶液チメロサールに混合した。エマルションを調製するため、水相をゆっくりと油相に一定の撹拌をしながら添加した。ホモジナイザ又はコロイド化ミルを使用して特定粒度にした。上述のワクチンを、最小の1080DIEP5005mLとなるよう調剤し、ブタ1頭につき2.0mLの投与量で使用できるようにした。上述の手順に従って、ORF5及びORF6の遺伝子を有するベクターpSL1180NDVLS内で実験的組換えワクチン、いわゆるpNDVLSOrf56vacを産生し、アジュバントなしの生形態実施例5A、水-油水型アジュバントを有する生形態実施例5B、及び水-油水型アジュバントを有する不活化形態実施例5Cで検査し、すべてのケースで2回の投与で適用した。実施例6組換えワクチンpNDVLSOrf56vacの効能の生体内評価本発明によるワクチンの有効性を決定するため、またこれらワクチンが市販のワクチンよりも効果的であることを実証するため1投与で適用、その有効性を検査した。PRRSの病原体活性ウイルスを45分あたり1060DICC50mLの投与量で使用し、異なる実験で抗原投与し、ワクチンの有効性を測定した。この目的のため、104頭の生後3~5週間のSPFブタを使用し、これらブタは、個別番号を重複させて耳タグに付し、計量し、また表1に従って9つの処置グループにランダムに割り当てた。ブタを負圧の隔離室内に収容し、治療前に3日間順応させた。すべてのグループに対して、動物に市販の飼料を給餌し、生活用飲み水を自由に与え、飼料及び飲み水は添加物及び/又は抗生物質がないものとした。同様に、空気濾過システム及び気密シールを各部屋に配置した。ブタは、実施例5A~5Cによって得られた本発明によるワクチンpNDVLSOrf56vacを、1回のブタ投与につき2.0mLを使用し、0日目及び14日目に接種して免疫付与した。比較目的のため、他のグループには、PRRSに対して一般的に使用されている市販のワクチンIngelvacPRRSMLVをブタ1頭につき2.0mLの1回投与で接種して免疫付与した。ワクチン接種日は接種日後ゼロDPV0と指定した。同様に血液サンプルをすべてのグループにおける動物から大静脈穿刺によって、以下の日取りで採取した。すなわち、DPV0,DPV7,DPV14,DPV21,DPV28,DPV35,DPV42及びDPV49殺処分。陰性対照グループを除くすべてのグループにおけるすべてのブタにおける抗原投与は、DPV35DPDF0に行った。攻撃ウイルスは、ブタに割り当てられた室内に噴霧によって投与した。DPV49すなわちDPDF14に、すべてのグループにおけるすべてのブタを殺処分し、検視を受けた。ワクチンの有効性を検認するため、免疫付与したブタにおける成長能力及び肺の病変割合を評価した。肺の病変割合異なるグループからのブタをDPDF14に電気ショック及び血抜きによって殺処分し、次いで検視した。依然として気管に取り付いていた状態で送気した肺を切除した。左右の肺葉の肺尖部、左右の肺葉の心臓寄り部、左肺の上葉端縁、右肺葉の横隔膜寄り下葉部及び中葉部に対して評価した。損傷の有無に基づいて、組織サンプルを罹患臓器から収集した。vPRRSによる感染を示唆する顕微鏡的損傷部は、面積測定法Ciprianetal1988Laraetal2008で決定し、この結果を下記の表に示す。表から分かるように、異なった変数生、アジュバントを含む生、及びアジュバントを含む不活化のワクチンpNDVLSOrf56投与によれば、陽性対照に比べると肺病変減少率を67にも達する割合にするすることができるとともに、市販のワクチンを使用した陽性対照では、肺病変の割合が30も増えている。このことは、従来技術で知らされていることと一致しているThanawongnuwechandSuradhat2010。血清学すべてのグループにおける動物から採取した血液サンプルを使用して血清学的検査を行い、基礎サンプル、抗原投与前日サンプル、及び殺処分当日サンプルに対応するものを選択した。セロコンバージョン検査を、製造業者の指示書に従って、IDEXXのELISAHerdCheckPRRS2XRを使用して行った。得られた結果は以下の表に示す。上述の結果は、予想通り、すべてのSPFブタの基礎サンプリングは陰性であった。抗原投与の時点でセロコンバージョンした唯一のグループはIngelvacPRRSMLVで免疫付与されたものであり、一方、セロコンバージョンのないものは本発明ワクチンで免疫付与されたあらゆるグループで検出された。この結果は、市販で入手可能なELISAキットのみが、実施例5A~5Cのワクチンのいずれにも存在しないORF7によってコーディングされたヌクレオカプシドタンパク質に対する抗体応答を検出するからである。殺処分当日に関しては、市販のワクチンを投与されたグループが血清反応陽性のままであり、残りのグループは血清反応陰性であることが分かり、このことは、抗原投与と殺処分との間の経過時間が短く、使用した抗原ウイルスのセロコンバージョン時間が不十分であったことに起因する。しかし、抗原投与グループにおけるウイルスの存在は、PCR検査によって確認された。同様に、pNDVLSOrf56vacに対するセロコンバージョンを検出する目的で、上述の血清サンプルを使用する場合、HI検査は、従来既知の方法を使用して行った。得られた結果を以下の表で示す。表から分かるように、検査を開始する時点でSPFブタは、異なった実施例E:5A~5CにおけるpNDVLSOrf56vacワクチンに対して完全に陰性であった。しかし、抗原投与前日の時点で本発明ワクチンを接種したグループでは完全なセロコンバージョンが見られ、ワクチン接種した動物の100が、使用した処置に従う異なる抗体力価で血清反応陽性を示すとともに、陰性対照、陽性対照及び市販のワクチンで免疫付与されたグループ血清反応陰性のままであった。殺処分当日では、pNDVLSOrf56vacのワクチン接種したグループが動物100において100のセロコンバージョンを維持し、残りのグループは陰性のままであった。上述のことから、増大したインターフェロンα及び/又はγに起因する細胞免疫応答を発生することができ、また急速複製を可能にするウイルスベクターを選択することの効能が効果的なワクチン生成の解決法であることを示している。成長能力目標到達した発育を生ずる目的で、ブタは、殺処分検視の研究における開始時、研究中、及び終了時に個別に軽量した。図1から分かるように、市販ワクチンに比べて、アジュバントを含む不活化した実施例5CのワクチンpNDVLSOrf56vacを使用するとき、ブタの体重増加wに僅かな増加が見られた。一方、生ワクチンで免疫を付与されたブタに関しては図2参照、アジュバントの有無に係わらず、pNDVLSOrf56vacをワクチン接種した動物の体重増加は、市販ワクチンのものと比べて相当大きいことが分かる。これら実験によれば、本発明の成功を裏付けるものであり、なぜなら、本発明のワクチンは市販ワクチンよりもセロコンバージョンする時間に明らかな優位性を示し、したがって、ブタの肺病変の大幅な減少から見てよりよい保護レベルを達成していることを示しているからである。このことから、産生パラメータにおける改善がワクチン非接種動物に比べてなされた。同様に、現場の病原体ウイルス又は既存の市販活性ワクチンによって生ずるのとは異なった、測定可能な血清学的応答を誘発し、このことは、本発明による組換えワクチンがDIVADifferentiationofinfectedfromvaccinatedAnimalsのパラメータに合致することを意味する。本発明の特定の実施形態を示しまた説明したが、ウイルスベクターとして使用するウイルス及び使用するエマルション又は担体のタイプに多くの変更を加えることができることを強調しなければならない。したがって、本発明は、従来技術及び特許請求の範囲を除いて限定されるべきものではない。"