"1配列番号1の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号1の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号2の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号2の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット12配列番号3の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号3の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号4の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号4の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット23配列番号5の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号5の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号6の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号6の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット34配列番号7の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号7の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号8の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号8の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット45配列番号9の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号9の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号10の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号10の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット56配列番号11の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号11の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号12の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号12の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット67配列番号15の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号15の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号16の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号16の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット88配列番号17の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号17の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号18の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号18の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット99配列番号19の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号19の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号20の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号20の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット1010配列番号21の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号21の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号22の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号22の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット1111配列番号23の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号23の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号24の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号24の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット1212配列番号25の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号25の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとし、配列番号26の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド又は配列番号26の塩基配列と相補的な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするプライマーセット13プライマーセット1、2,3,4,5,6,7、8,9,10,11,12,13を混合し、1チューブでマルチプレックスPCRを行い、電気泳動で分離同定する工程。本発明は、我が国の子宮頸癌の主たる原因である7種類のHPV遺伝子型16,18,31,33,35,52,58型の型別検査を行い、その他の頻度の低い6種類のHPVは、A群とB群に分け、45,51,68型をA群とし、39型、56型、59型をB群として、一括して感染の有無を判定する。本発明は頻度の高い7種類の型別判定と頻度の低いA群及びB群を1チューブでマルチプレックスPCR法を行うことにより、高感度で且つ特異的に検出し、しかも、簡便で安価な方法を提供することを目的とする。課題は、第一に目的を解決するためのPCRプライマーセットの提供であり、第二にこれらのプライマーセットを混合して、1チューブでPCRを行うマルチプレックスPCRを行い、生成されたアンプリコンを電気泳動で分離同定する工程を提供することである。本発明は、子宮頸癌の主たる原因である13種類のPCRプライマーセットを提供する。型別検査を行うための7種類のプラマーセット及びA群、B群のプライマーセットは、アンプリコン増幅されたPCR産物の長さがお互いに十分違うように設計される。これらのすべてのプライマーを混合してマルチプレックスPCRを行い、アンプリコンを電気泳動で検出する。各プライマーの塩基配列は下記の表1に示される。配列番号13及び14は非特許文献4で公表されたものである。本発明のプライマーセットは配列番号1及び配列番号2で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット1、配列番号3及び配列番号4で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット2、配列番号5及び配列番号6で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット3、配列番号7及び配列番号8で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット4、配列番号9及び配列番号10で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット5、配列番号11及び配列番号12で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット6配列番号15及び配列番号16で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット8、配列番号17及び配列番号18で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット9、配列番号19及び配列番号20で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット10、配列番号21及び配列番号22で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット11、配列番号23及び配列番号24で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット12、配列番号25及び配列番号26で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット13からなる。各プライマーの設計は、複数のプライマーセットを混合して用いることから、お互いにプライマーダイマーを生じ難いように、又相同性の高いHPVの複数の遺伝型を特異的に同定でき、しかも、非特異的増幅が起きないように設計する必要がある。マルチプレックスPCR法による遺伝子検査では、アンプリコンPCR産物のサイズによって遺伝子型を同定するため、各プライマーセットによって出来るアンプリコンのサイズを変えて設計しなければならない。本発明によるアンプリコンのサイズは、プライマーセット1で536bp、プライマーセット2で427bp、プライマーセット3で132bp、プライマーセット4で249bp、プライマーセット5で633bp、プライマーセット6で332bpである。また、プライマーセット7は385bpである。プライマーセット8,9,10は166~181bpでありA群、プライマーセット11,12,13は481~490bpであるB群。参照図1本発明に従えば、13種類のプライマーセットを混合して用いて、7種類のHPV遺伝子型を特異的に検出し、6種類のHPV型を一括検出することが出来る。高リスクHPVには遺伝子型によって癌病変への進行が早いものと遅いものが含まれる。従って、癌への成り易さを知るにはHPV型別検査が必要である。本発明では、臨床検体組織試料、生検、スメア等を用いて、我が国の子宮頚癌に関連する7種類のHPVを特異的且つ高感度で、しかも迅速かつ簡便に検出することが出来る。加えて、我が国の子宮頚癌の約5に検出されるに過ぎないその他の高リスク群39,45,51,56,59,68に対しても、一括して検出するプライマーセットを加えることにより、陽性か否かの判定が出来る。即ち、1本のチューブで7種の型別同定と6種類のその他高リスク型群の検出が可能である。これを子宮頚癌の健診に使用すれば、一人ひとりに見合った検診スケジュールをたてることが出来る。これによって、被験者への過度の精神的苦痛を減らし、経済的負担を軽減することが出来るなど適切な子宮頚癌の発症予防に資することが出来る。本発明のプライマーセットのオリゴヌクレオチドは汎用のDNA合成装置を用いて化学的に合成することができる。検体におけるHPV遺伝子の存在を検出するためには、検体からDNAを抽出し、これをテンプレートとして、本発明のプライマーセットを用いてマルチプレックスPCRを行い、HPV遺伝子を増幅させる。増幅したHPV遺伝子断片を電気泳動で分離し、同定する。検体としては被験者から得られた組織試料、生検、スメア等を用いることができる。検体からのDNA抽出は市販の抽出試薬を用いてもよい。臨床検体から調整したDNA量は検体毎のバラツキがあるため内部標準としてβグロビンのゲノム領域を用いるPCR産物のサイズ196bp。検体から調整したDNAをテンプレートとし、HPV16型、18型、31型、33型、35型、52型、58型、45型、51型、68型、39型、56型、59型の13種類のプライマーセットとβグロビンのプライマーセットをミックスし混合プライマーセットと云う、これをプライマーとしてマルチプレックスPCRを行う。各々のプライマー濃度はHPV型によって適宜に調節することができる。マルチプレックスPCRはQIAGENMultiplexPCRKitQiagen社を用いて行うことができる。PCRの反応条件は95°Cで15分間、次に95°Cで30秒間、60°Cで15分間、72°Cで1分間を30サイクル、最後に72°Cで2分間である。アンプリコンを電気泳動で分離し、バンドの長さを判定することにより、試料中に存在するHPV型を知ることができる。電気泳動に、マイクロチップ電気泳動MCE202MultiNA、島津製作所製を使用することが出来る。プライマーの設計に必要なHPVの遺伝子配列はGenBankから入手した。各HPV遺伝子の配列に基づいて、以下の基準を満たすプライマーを設計した。融解温度が60~63°Cの範囲にある、PCR産物のサイズが132~589bpの範囲内にある、他の種類のHPVと有意なホモロジーを有しない、selfcomplementarityがない、プライマー同士がハイブリダイズしない。HPV16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型、68型、βグロビンのゲノムを含むサンプル混合テンプレートと云うをテンプレートとして、混合プライマーセットを用いてマルチプレックスPCRを行うと、HPV16型、18型、31型、33型、35型、52型、58型のピークとA群、B群のピーク、βグロビンのピークの10種のピークが同定可能である図1。アンプリコンはシークエンス解析で目的の型のHPV遺伝子の配列であることを確認した。市販のHPV4AACEScreening法SeegenInc韓国は、HPVtestのゴールドスタンダードと云われているHC2試験DigeneCorporationと同等の精度および感度を持っていると報告されているHongJHetalJKoreanMedSci20092457984。表2は臨床検体を用いて、本発明のマルチプレックスPCR法とHPV4AACEScreening法での結果を比較したものである。本発明の方法は、各型ともHPV4AACEScreeningと同等の感度を示している。"