"吸着剤の拡張ベッドの使用を含む、混合物から対象となるウイルス様粒子を捕捉する方法であり;好適には、a吸着剤の拡張ベッドを提供する工程と;b混合物中のウイルス様粒子が吸着剤に結合するように、混合物を吸着剤と接触させる工程と;c任意で吸着剤を洗浄する工程と;d任意で吸着剤からウイルス様粒子を溶出する工程とを含む前記方法。前記ウイルス様粒子がインフルエンザウイルスのタンパク質を含む、請求項1に記載の方法。前記ウイルス様粒子が、赤血球凝集素;好適にはH1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15もしくはH16またはその2つ以上の組み合わせからなる群から選択される赤血球凝集素サブタイプを含む、請求項1または請求項2のいずれか一項に記載の方法。前記混合物が植物の破壊細胞を含み;好適には前記植物がタンパク質を植物中で一過性に発現する核酸分子によりインフィルトレーションされたタバコ植物であり、前記タンパク質がウイルス様粒子中に存在し;より好適には前記混合物が植物の地上部であるかまたは植物の地上部に由来する、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記ビーズが、プラスチック、メタクリレート、陰イオン交換体、ジエチルアミノエチル、陽イオン交換体、多糖、シリカ、ポリスチレンジビニルベンゼン、ポリアクリルアミド、セラミックおよびその誘導体またはその2つ以上の組み合わせからなる群から選択される材料を含むか、それらからなるか、または本質的になり;好適には、前記ビーズが、セルロース、アガロースおよびデキストランならびにその誘導体またはその2つ以上の組み合わせからなる群から選択される多糖を含むか、それらからなるか、または本質的になる、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。前記ビーズが、石英、シリカ、Nd-Fe-B合金、ステンレス鋼、酸化ジルコニウム、ジルコニア、金属ケイ酸塩、金属硼ケイ酸塩、セラミック二硼化チタン、炭化チタン、二硼化ジルコニウム、炭化ジルコニウム、炭化タングステン、炭化ケイ素、窒化アルミニウム、窒化ケイ素、窒化チタン、酸化イットリウム、シリコン金属粉末およびケイ化モリブデンを含む;酸化マグネシウム、酸化アルミニウム、酸化チタン、酸化バナジウム、酸化クロミウム、酸化ジルコニウム、酸化ハフニウム、酸化マンガン、酸化鉄、酸化コバルト、酸化ニッケル、酸化銅および酸化銀を含む、金属酸化物および硫化物;非金属酸化物;硫酸バリウムを含む金属塩;タングステン、ジルコニウム、チタン、ハフニウム、バナジウム、クロミウム、マンガン、鉄、コバルト、ニッケル、インジウム、銅、銀、金、パラジウム、プラチナ、ルテニウム、オスミウム、ロジウムおよびイリジウムを含む、金属元素、ならびに前記金属元素およびその誘導体またはその2つ以上の組み合わせの間に形成された合金等の金属元素の合金からなる群から選択される材料を含むか、それらからなるか、または本質的なる不活性コアを含む、請求項5に記載の方法。対象となる粒子を結合する前記ビーズのサイズが約25μm~100μmの間;好適には約50μmである、請求項5または6のいずれか一項に記載の方法。前記方法が吸着剤の第1の拡張ベッドの使用を含む前捕捉工程を含み;好適には前記ビーズのサイズが約125μm~250μmの間;より好適には約150μmである、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。前記吸着剤がリガンドを含むか、それからなるか、または本質的になり;好適には前記リガンドが、iベンジルアミンまたはその誘導体;iiアルキルアミンもしくはその誘導体;iiiアルケニルアミンもしくはその誘導体;ivアルキニルアミンもしくはその誘導体;vアルコキシルアミンもしくはその誘導体;およびvi単環式もしくは二環式の芳香族もしくはヘテロ芳香族のモイエティもしくはその誘導体のアミン、またはその2つ以上の組み合わせからなる群から選択されるリガンドを含むか、それらからなるか、または本質的になるか;または前記リガンドが陰イオン交換樹脂を含むか、それからなるか、または本質的になり;好適には前記陰イオン交換樹脂が、ジエチルアミノエチルセルロースベースのイオン交換樹脂を含むか、それからなるか、もしくは本質的になるか、またはジエチルアミノエチルセルロースデキストランベースのイオン交換樹脂を含むか、それからなるか、もしくは本質的になる、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。吸着剤との接触の前の前記混合物の伝導率が約1mS/cm~10mS/cmの間であり;および/または吸着剤との接触の前の前記混合物のpHが約pH6.0~pH8.0の間である、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。前記拡張ベッドの拡張度が約1~5の範囲であり:前記混合物を約1cm/分~15cm/分の間の範囲の直線的フロー率で拡張ベッドを介してフローさせる、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。i吸着剤の密度が約2.5g/ml~3.5g/mlの間であり、平均吸着剤粒子サイズが約50である、ジエチルアミノエチルセルロースデキストランを含む吸着剤の拡張ベッドをカラム中に提供する工程と;ii約pH6.0~8.0範囲のpHで樹脂材料を平衡化する工程と;iiiタバコ植物材料を含む混合物であって、約2mS/cm~3mS/cmの間の伝導率を有する前記混合物を提供する工程と;ivカラム中の拡張ベッドの拡張度が約2で、約2.5cm/分のフロー率で、混合物をカラム上にロードしてウイルス様粒子を結合させる工程と;v約pH6.0~8.0の範囲のpHを有するバッファーを使用してロードしたカラムを洗浄する工程と;vi1つまたは複数の画分でカラムから対象となる結合粒子を溶出する工程とを含む、対象となるウイルス様粒子を混合物から捕捉する方法。工程iiiが、aウイルス様粒子中に存在するタンパク質を一過性に発現する全体のタバコ植物を提供することと;bタバコ植物の葉および茎の細胞を破壊してタバコ植物材料を産生することと;cバッファーまたは純水による希釈によって混合物のpHおよび伝導率を合わせることとを含む、請求項12に記載の方法。工程ivの前に、工程iiiの混合物を濾過することおよび工程iiiの濾過された混合物をビーズのサイズが約150μmであるポリエチレンイミンを含む吸着剤の第1の拡張ベッドと接触させて所望されない物質を混合物から除去することを含む工程をさらに含む、請求項12に記載の方法。それへ可逆的に結合されたウイルス様粒子を含む、吸着剤の拡張ベッド。対象となるウイルス様粒子を混合物から捕捉するための、吸着剤の拡張ベッドの使用であり、混合物がタンパク質を一過性に発現する植物に由来し、前記タンパク質がウイルス様粒子中に存在する、吸着剤の拡張ベッドの使用。本発明は拡張ベッド吸着によって対象となる粒子を混合物から捕捉する方法を提供する。対象となる粒子は1つまたは複数の対象となるタンパク質を含み、そのうちの1つまたは複数は宿主細胞によって組換えにより産生することができる。拡張ベッド吸着EBAは固体-液体分離および産物精製を組み合わせる単位操作である。プロセスは、上向きの液体フローにより拡張された、異なるサイズ、密度または両方である吸着剤のベッドにより操作される。様々な実施形態において、カラムは、乱流および過剰な液体混合特にカラムの軸に沿った逆混合を回避し、一方個別のビーズは、カラム中の局所的ゾーンでのみ狭く移動する固定されない動的状態で維持されるようにデザインされる。拡張ベッドはカラムの下部において小さな混合ゾーンを有することができ、そこでは入って来る液体がカラムの断面の全体にわたって分布し;好適には拡張ベッドはプラグフロー条件下で一般的に操作される。ロセスは原料中の液体および固体の成分の両方が吸着剤と接触し相互作用することを可能にし、それによってカラム中での多段階クロマトグラフィー分離の実行を可能にする。ベッド拡張は、原料中の固形微粒子がベッドを通して差異的に通過することを可能にし、それによって清澄化機能を提供する。従来の充填ベッドクロマトグラフィー法において、樹脂がカラムの下部とフローアダプターとの間で拘束されているところでは、微粒子物質および細胞残屑が緊密に充填された樹脂の周囲で流れることができない時に目詰まりが起こる。これとは対照的に、EBAにおける液体のフローは下から供給され、アダプターは充填された樹脂レベルから離れて保たれて、吸着剤の拡張する余地を与え、従って空間をその間に生ずる。ベッドの拡張度は、混合物のフロー率、混合物の粘度に加えて、吸着剤の密度によって影響を受ける。吸着剤がカラム中に充填される場合、それはともに密接して位置し、大きな凝集およびクランプが動く余地がほとんど残されない。バッファーが下から注入されるので、吸着剤は流動体化されるようになり、吸着剤の沈降速度が上向きの液体フロー速度と等しい場合安定した濃度勾配を形成する。EBAの様々な形式は利用可能であり、そのいくつかはカラムの基部での濾過手段を含み、他のものは含まない。一実施形態において、カラムは濾過手段をカラムの基部で含まない。ベッドは好適な容器カラム等中に存在し得る。本文脈において、カラムという用語は、カラムへの混合物のインプットのための少なくとも1つの注入口、および続いて対象となる粒子または対象となるタンパク質を混合物から溶出するための少なくとも1つの流出口を供給することができる、任意の種類の容器に関する。一実施形態において、容器はカラム形状である。典型的には拡張ベッド吸着カラムは、吸着剤ベッドにおける最小のバックミキシングおよび乱流によるプラグフロー条件下で操作される。本発明によれば、混合物は吸着剤を含む拡張ベッドカラムへと導入され、そこで混合物の組成はカラム中で吸着剤と接触し相互作用する。当業者は、混合物のインプット体積に応じて、特定の直径および高さを備えたカラムをデザインすることができるだろう。混合物がカラムの中へ導入されるにつれて、固体粒子および細胞残屑は吸着剤の周囲に自由に移動し、最終的にはカラムの上部を通して出る。任意のクロマトグラフィー工程と同様に、吸着剤は典型的には激しい洗浄を受けて非特異的相互作用を限定する。その間に、対象となる粒子および対象となるタンパク質は吸着剤と相互作用し、吸着剤に結合し、カラム上で保持される。次いでカラムを充填させ、フローを逆にし、対象となる粒子を従来の方法でのようにビーズから溶出させることができる。さらなる態様は、吸着剤へ可逆的に結合された対象となる粒子を含む吸着剤の拡張ベッドに関する。吸着剤は、好適には吸着剤について本明細書において記載された1つまたは複数の特性を有する。さらなる態様は、拡張ベッド吸着剤の使用または対象となる粒子を混合物から捕捉するためのEBAクロマトグラフィーの使用に関する。対象となる粒子の混合物からの捕捉のためのプロセスは、EBAにおいて使用できる任意の形状および形式の任意のタイプの固相材料への吸着に基づく。さらに、吸着は、選択的吸着剤特徴、リガンド化学またはその組み合わせの使用によって特徴づけることができ、実質的に対象となる粒子のみの特異的な結合および後続の溶出を可能にするか、または代わりに少数の生体分子物質群に特異的な結合と続いて吸着剤からの対象となる粒子の選択的で連続的な溶出を可能にする。様々な実施形態において、吸着剤はビーズの形態である。ビーズは、サイズ、密度、重量もしくは組み合わせにおいて一様であり得るか、またはサイズ、密度、重量もしくはその組み合わせにおいて変動し得る。一実施形態は、サイズにおいては一様であるが、変動する密度もしくは重量または両方を有するビーズに関する。この構成はビーズの分布を生成し得る。ビーズのサイズは典型的には5μm~500μmにわたるだろう。ビーズの好適なサイズは、約5μm~500μm、約5μm~400μm等、または約5μm~300μm、または約5μm~200μm、約5μm~100μm、約50μm~400μm、または約50μm~300μm、または約50μm~200μm、または約50μm~150μmまたは50μm~100μm、約20μm~80μm等、約150μm、約100μm、または約50μmの直径範囲であり得る。体積で少なくとも約70、約80、約90、約95、約96、約97、約98、約99または100の個別のビーズがこの体積を有し得る。より大きなビーズは流動体化されたベッドのより下の部分を占め、一方より小さなビーズがより上の部分を占める。ビーズが小さすぎれば、微粒子混入物の脱出速度に匹敵する速度で拡張が起こり、捕捉効率を低下させる。同様に、ビーズが大きすぎるならば、流動化はより高いフロー率を必要とし、タンパク質結合はビーズの中での不適切な拡散のために損なわれる。ビーズは、本質的に球状、細長い形状、円筒状、柱状、または不規則な形状等であるがこれらに限定されない任意の形状であり得る。一実施形態において、ビーズは球状である。当業者は、使用されるプロセスに応じて、好適なビーズのサイズ、形状および孔隙率を選択することができる。別の実施形態において、対象となる粒子を捕捉するビーズのサイズは約25μm~125μm;好適には約25μm~100μm;より好適には約25μm~95μm;さらにより好適には約25μm~90μm;特に好適には約30μm~90μm;より特に好適には約30μm~85μm;さらにより特に好適には約35μm~85μm;より好適には約35μm~80μm;より好適には約40μm~80μm;より好適には約40μm~75μm;より好適には約45μm~75μm;より好適には約45μm~70μm;より好適には約40μm~70μm;より好適には約40μm~65μm;より好適には約45μm~65μm;より好適には約45μm~60μm;より好適には約45μm~55μmの間;最も好適には約50μmである。別の実施形態において、対象となる粒子以外の材料例えば植物材料を捕捉するビーズのサイズは、約130μm~250μm;好適には約135μm~250μm;より好適には約135μm~225μm;より好適には約135μm~200μm;より好適には約135μm~175μm;より好適には約135μm~170μm;より好適には約140μm~170μm;より好適には約140μm~165μm;より好適には約140μm~160μm;より好適には約145μm~160μm;より好適には約145μm~145μmの間;最も好適には約150μmである。好適には、これらのビーズは、拡張ベッド吸着剤を使用して前捕捉する工程において使用することができる。別の実施形態において、吸着剤粒子の密度は、約1g/ml~20g/mlの範囲;より好適には約2g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約3g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約4g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約4g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約5g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約6g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約7g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約8g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約9g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約10g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約11g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約12g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約13g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約14g/mlから20g/mlの範囲で;より好適には約14g/mlから19g/mlの範囲で;より好適には約14g/mlから18g/mlの範囲で;より好適には約14g/mlから17g/mlの範囲で;より好適には約15g/mlから17g/mlの範囲で;最も好適には16g/mlであり得る。本発明は吸着剤としての使用のために任意の特定の材料に限定されておらず、当業者は適切な材料を選択できるだろう。方法は、異なるビーズの新規の組み合わせまたは同じビーズ上の官能基もしくはリガンドの新規の組み合わせを使用することができる。ビーズは、非常に多孔性、マクロ多孔性、わずかに多孔性、非多孔性、親水性、疎水性、高荷電性、わずかに荷電性、非電荷性、剛性、または膨潤性であり得るが、これらに限定されない。ビーズは、プラスチック、メタクリレート、多糖アガロースおよびセルロース等、シリカ例えば制御された孔径のガラス、ポリスチレンジビニルベンゼン、ポリアクリルアミド、セラミックビーズおよびこれらのいずれかの誘導体であり得るが、これらに限定されない。さらなる例は、高結合能力、低結合能力例えばQを備えた強陰イオン交換体、弱陰イオン交換ビーズ例えばジエチルアミノエチルDEAE、ANX、強陽イオン交換材料例えばSP、または弱陽イオン交換材料例えばCMを含む。上向きのフローにおける原料中の吸着剤の速度と微粒子の速度との間の差異を強調するために、様々な吸着剤材料を使用することができる。極めて粘稠な原料を加工するために、または高フロー率を達成するために、サイズ、密度または両方での増加が所望される。本発明の様々な実施形態において、密度の増加は、高密度多孔性材料の使用によって、または多孔性材料により高密度非多孔性材料をコートすることによって遂行することができる。有機材料のみから作製されたビーズは限定された密度を有し、従来のクロマトグラフィーの考慮高い沈降速度等のためには非常に大きな直径を有する必要があるだろう。かかる大きなビーズ直径は長い拡散の経路長をもたらし、それは多くの物質移動抵抗を引き起こし、生産性を打ち消す。本発明は、有機材料よりも密度の高い不活性コア材料を含む複合ビーズの使用を意図する。本文脈において、コアという用語はビーズ内部に存在する非多孔性コアに関する。コアはビーズの中心に位置すると限定されていない。かかるビーズが本発明の方法に適する高密度およびビーズサイズを有することは利益がある。材料の密度は、約1.2~約4.0、例えば石英1.2、シリカ1.4~1.6、Nd-Fe-B合金1.8~2.1、ステンレス鋼、炭化タングステン2.5~3.5、酸化ジルコニウム3.2またはジルコニア3.85にわたり得る。コアのコートに使用できる多孔性材料は、アガロース、セラミックハイドロキシアパタイト、セルロース、酸化ジルコニウムゲル、シリカゲルおよびヒドロキシエチルメタクリレート-エチレンジメチルアクリレートコポリマーを含むが、これらに限定されない。好適な非多孔性コア材料のさらなる例は、無機化合物、金属、重金属、非金属元素、金属酸化物、非金属酸化物、金属塩および金属合金である。かかるコア材料の例は、金属ケイ酸塩、金属硼ケイ酸塩;二硼化チタン、炭化チタン、二硼化ジルコニウム、炭化ジルコニウム、炭化タングステン、炭化ケイ素、窒化アルミニウム、窒化ケイ素、窒化チタン、酸化イットリウム、ケイ素金属粉末およびケイ化モリブデンを含む、セラミック;酸化マグネシウム、酸化アルミニウム、酸化チタン、酸化バナジウム、酸化クロミウム、酸化ジルコニウム、酸化ハフニウム、酸化マンガン、酸化鉄、酸化コバルト、酸化ニッケル、酸化銅および酸化銀を含む、金属酸化物および硫化物;非金属酸化物;硫酸バリウムを含む金属塩;タングステン、ジルコニウム、チタン、ハフニウム、バナジウム、クロミウム、マンガン、鉄、コバルト、ニッケル、インジウム、銅、銀、金、パラジウム、プラチナ、ルテニウム、オスミウム、ロジウムおよびイリジウムを含む、金属元素、ならびに前記金属元素の間で形成された合金等の金属元素の合金、例えばステンレス鋼;グラファイト、カーボンブラックおよび活性炭を含む、炭素の結晶性形態および非晶性形態である。好適な非多孔性コア材料は、炭化タングステンビーズ、タングステンビーズ、鋼ビーズおよびチタンビーズステンレス鋼ビーズ等である。非多孔性コアは、典型的には吸着剤粒子の全体積のうちの多くとも70多くとも60、好適には多くとも50、好適には多くとも40、好適には多くとも30、好適には多くとも20、好適には多くとも15、好適には多くとも10、最も好適には多くとも5等を構成する。吸着剤として使用される一般に使用される材料はアガロースであり、工業規模のクロマトグラフィーについてうまく機能することが証明された材料である。従って、一実施形態において、吸着剤はアガロースまたはアガロースベースのものである。おそらく高度に架橋されたアガロースマトリックスのマクロ多孔性構造は、高い化学的および機械的な高安定性と巨大分子タンパク質等についての良好な結合能力を組み合わせる。別の実施形態において、吸着剤はデキストランまたはデキストランベースのものである。高い機械的安定性は使用されるマトリックスの重要な特性であり、ビーズが自由に移動している時の消耗の効果を弱めるものである。拡張ベッド法のデザインはカラムクロマトグラフィーとは異なる考慮を可能にするので、アガロースビーズはより小さいかもしくはより大きいかまたは架橋量において標準的ビーズとは異なり得る。これらの変更または非変更はベッド材料中のすべての構造材料について意図される。修飾されたアガロースマトリックスは、無機材料いくつかのガラスまたはセラミック材料等よりも脆弱ではないだろう。カラム内のビーズ多分散性は本発明によって意図される。サイズおよび密度勾配により、ビーズはカラムまたはベッドで特異的な所在に配置される。より小さくより軽ビーズはある位置におよびより大きくより重いビーズは異なる位置に移動する。他のビーズ特徴における多分散性または多様性は本発明によって意図される。サイズ、密度、結合能、排除孔サイズ、支持体材料の差異は、本発明の方法で使用される幅広いバラエティーの構成要素および因子の組み合わせのうちの少数である。本発明の特定の実施形態において、吸着剤は対象となる粒子を捕捉するのに好適なリガンドを含む。本発明の特定の実施形態において、吸着剤は対象となる粒子または対象となるタンパク質を精製するのに好適なリガンドを含む。本発明において使用されるリガンドは、iベンジルアミンまたはその誘導体と;ii直鎖状、分岐状、または環状であり得る1~12の炭素原子を有するアルキル基例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはデカリニル等であり、前記アルキル基は任意で酸性基以外の少なくとも1つの基により置換されるを有するアルキルアミンを含む、アルキルアミンと;iii直鎖状、分岐状、または環状であり得、二重結合複数可が鎖または環複数可中のどこでも存在し得る2~12の炭素原子を持つ一価不飽和、二価不飽和、または多価不飽和のアルキル基を含むアルケニル基前記アルケニル基は任意で酸性基以外の少なくとも1つの基により置換されるを含む、アルケニルアミンと;iv酸性基以外の少なくとも1つの基により置換され得るアルキニル基アルケニルアミンと本質的に同様に定義されたC212アルキニル基を含むを含む、アルキニルアミンと;v任意で酸性基以外の少なくとも1つの基と置換されるC212アルコキシ基を持つ、アルコキシルアミンと;vi任意で酸性基以外の少なくとも1つの基により置換される、単環式または二環式の芳香族またはヘテロ芳香族のモイエティのアミンとを含むか、それらからなるか、または本質的になるリガンドを含むが、これらに限定されない。さらなる実施形態において、対象となる粒子VLP等を捕捉できるリガンドは、iベンジルアミンまたはその誘導体と;ii直鎖状、分岐状、または環状であり得る1~12の炭素原子を有するアルキル基例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、ドデシル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはデカリニル等であり、前記アルキル基は任意で酸性基以外の少なくとも1つの基により置換されるを有するアルキルアミンを含む、アルキルアミンと;iii直鎖状、分岐状、または環状であり得、二重結合複数可が鎖または環複数可中のどこでも存在し得る2~12の炭素原子を持つ一価不飽和、二価不飽和、または多価不飽和のアルキル基を含むアルケニル基前記アルケニル基は任意で酸性基以外の少なくとも1つの基により置換されるを含む、アルケニルアミンと;iv酸性基以外の少なくとも1つの基により置換され得るアルキニル基アルケニルアミンと本質的に同様に定義されたC212アルキニル基を含むを含む、アルキニルアミンと;v任意で酸性基以外の少なくとも1つの基と置換されるC212アルコキシ基を持つ、アルコキシルアミンと;vi任意で酸性基以外の少なくとも1つの基により置換される、単環式または二環式の芳香族またはヘテロ芳香族のモイエティのアミンとまたはその組み合わせを含むか、それらからなるか、または本質的になるリガンドからなる群から選択される。さらなる実施形態において、リガンドは、カルボン酸、スルホン酸、ホスホン酸およびボロン酸からなる群から選択される芳香族酸またはヘテロ芳香族酸を含むか、それらからなるか、または本質的になる。好適には、リガンドは、2-メルカプト安息香酸、2-メルカプトニコチン酸、2-アミノ安息香酸、3-アミノ安息香酸および4-アミノ安息香酸、4-ヒドロキシフェニル-メルカプト-酢酸、4-ヒドロキシフェニル-メルカプト-プロピオン酸、4-ヒドロキシフェニル-メルカプト-ブタン酸、2,3-ジヒドロキシ-安息香酸、2,4ジヒドロキシ-安息香酸、2,5ジ-ヒドロキシ-安息香酸、2,6ジヒドロキシ-安息香酸、3,4-ジヒドロキシ-安息香酸、3,5-ジヒドロキシ-安息香酸、メルカプトベンズイミダゾールスルホン酸、オルタニル酸、メタニル酸、スルファニル酸、4-メチルアニリン-2-スルホン酸、4-メトキシアニリン-2-スルホン酸、アニリン-2,5-ジスルホン酸、N-メチルメタニル酸、7-アミノ-1-ナフトール-3-スルホン酸、1-ナフトール-4-スルホン酸、2-ナフトール-6-スルホン酸および2-ヒドロキシ-3-ナフトエ酸および2-メルカプトベンズイミダゾール-スルホン酸からなる群から選択される。さらなる実施形態において、リガンドは、i安息香酸2-アミノ安息香酸、3-アミノ安息香酸、4-アミノ安息香酸、2-メルカプト安息香酸、4-アミノ-2-クロロ安息香酸、2-アミノ-5-クロロ安息香酸、2-アミノ-4-クロロ安息香酸、4-アミノサリチル酸、5-アミノサリチル酸、3,4-ジアミノ安息香酸、3,5-ジアミノ安息香酸、5-アミノイソフタル酸および4-アミノフタル酸等;桂皮酸ヒドロキシ-桂皮酸等;ニコチン酸2-メルカプトニコチン酸等;ナフトエ酸2-ヒドロキシ-1-ナフトエ酸等;キノリン2-メルカプトキノリン等;テトラゾール酢酸5-メルカプト-1-テトラゾール酢酸等;チアジアゾール2-メルカプト-5-メチル-1,3,4-チアジアゾール等;ベンズイミダゾール2-アミノ-ベンズイミダゾール、2-メルカプトベンズイミダゾールおよび2-メルカプト-5-ニトロベンズイミダゾール等;ベンゾチアゾール2-アミノベンゾチアゾール、2-アミノ-6-ニトロベンゾチアゾール、2-メルカプトベンゾチアゾールおよび2-メルカプト-6-エトキシベンゾチアゾール等;ベンズオキサゾール2-メルカプトベンズオキサゾール等;チオフェノールチオフェノールおよび2-アミノチオフェノール等;2-4-アミノフェニルチオ酢酸;芳香族またはヘテロ芳香族のスルホン酸およびホスホン酸1-アミノ-2-ナフトール-4-スルホン酸等ならびにフェノール2-アミノ-4-ニトロ-フェノール等の官能基タイプを含むリガンドと;ii2-ヒドロキシ-桂皮酸、3-ヒドロキシ-桂皮酸および4-ヒドロキシ-桂皮酸を含むリガンドと;iii置換基としてカルボン酸およびアミノ基2-アミノ-ニコチン酸、2-メルカプト-ニコチン酸、6-アミノ-ニコチン酸および2-アミノ-4-ヒドロキシピリミジン-カルボン酸を含むリガンドと;ivヘテロ芳香族環系と融合したベンゼン環に由来するラジカルを含むリガンド、例えば、ベンゾイミダゾール2-メルカプト-ベンズイミダゾールおよび2-メルカプト-5-ニトロ-ベンズイミダゾール等;ベンゾチアゾール2-アミノ-6-ニトロベンゾチアゾール、2-メルカプトベンゾチアゾールおよび2-メルカプト-6-エトキシベンゾチアゾール等;ベンズオキサゾール2-メルカプトベンズオキサゾール等;から選択されるリガンドと;vチオフェノールチオフェノールおよび2-アミノチオフェノール等の群から選択されたリガンドとからなる群から選択される芳香族基またはヘテロ芳香族基ラジカルを含むか、それらからなるか、または本質的になる。リガンドは対象となる粒子または対象となるタンパク質への親和性を有することができる。従って、リガンドは、高度に特異的な生物学的相互作用抗原と抗体、酵素と基質、または受容体と受容体リガンド等との間に起こり得るものが可能であり得る。従って、リガンドは、抗体、抗原、酵素、酵素基質、受容体、受容体リガンドまたはアプタマーおよび同種のものであり得る。一実施形態において、リガンドは抗体である。生物学的リガンドは、単独でまたは本明細書において記載される1つもしくは複数の化学的リガンドと組み合わせて使用することができる。生物学的リガンドは、任意で本明細書において記載されるような1つまたは複数の化学的リガンドと組み合わせて1つまたは複数の同じまたは異なるリガンドを含むことができる。リガンドを含む吸着剤は、典型的には対象となる粒子の結合が最適に起こるpH条件に平衡化される。平衡工程は、約3~10の範囲約5~7の範囲等pH7のpHのバッファーを適用することによって典型的には実行される。リガンドを含むビーズは一般に複数のリガンドを含むだろう。特定の実施形態において、ビーズは、第2の種類のリガンドと組み合わせて上記のようなリガンドを含み、本発明に記載のリガンドは、全リガンド量のうちの少なくとも約30、好適には少なくとも約50、より好適には少なくとも約70および最も好適には少なくとも約90まで存在する。かかる組み合わせたリガンド分離マトリックスは、特定の事例のためにデザインすることができ、さらなる相互作用のエレメントはその分離特性を改善する。第2の種類のリガンドは、1つまたは複数の荷電基電荷反発作用による化合物の溶出に使用する陽イオン交換体等;疎水基;水素結合が可能な基;親和性基または同種のものを含み得る。従って、本明細書において記載されるような対象となる粒子を結合できる異なるリガンドの組み合わせも意図され、それは等しい比率または異なる比率であり得る。様々な実施形態において、原料中の微粒子の最終速度を上回るがビーズの最終速度は上回らないフロー率で方法を操作することが所望される。一実施形態において、拡張ベッドにおける直線的フロー率は少なくとも約2cm/分、少なくとも約3cm/分、少なくとも約4cm/分、少なくとも約5cm/分、少なくとも約6cm/分、少なくとも約7cm/分、少なくとも約8cm/分、少なくとも約10cm/分、少なくとも約12cm/分、少なくとも約15cm/分、少なくとも約20cm/分、少なくとも約25cm/分、少なくとも約30cm/分、少なくとも約40cm/分、または少なくとも約50cm/分である。別の実施形態において、直線的フロー率は、約1cm/分~15cm/分、約2cm/分~10cm/分、または約2cm/分~9cm/分、または約2cm/分~8cm/分、または約3cm/分~8cm/分、または約3.5cm/分~7.5cm/分等の範囲である。一実施形態において、フロー率は約3.8cm/分である。別の実施形態において、フロー率は約7.5cm/分である。定義された期間で排出口で液体の体積を採取することによって、フロー率を測定することができる。他の実施形態において、拡張ベッド中の原料のインプットは、少なくとも約150cm/時間少なくとも約180cm/時間、少なくとも約200cm/時間、少なくとも約210cm/時間、少なくとも約220cm/時間、少なくとも約230cm/時間、少なくとも約240cm/時間、少なくとも約250cm/時間、少なくとも約300cm/時間、少なくとも約400cm/時間、少なくとも約425cm/時間、少なくとも約450cm/時間、少なくとも約475cm/時間、少なくとも約500cm/時間、または少なくとも約600cm/時間等の直線的フロー率により実行することができる。別の実施形態において、拡張ベッド中の原料のインプットは、約200~500cm/時間約300~500cm/時間または約400cm/時間等の直線的フロー率により実行することができる。一実施形態において、フロー率は約228cm/時間である。別の実施形態において、フロー率は約450cm/時間である。方程式:高さ0/高さ1式中、高さ1はカラムを通るフローのない充填ベッドモードにおけるベッドの高さであり、高さ0はカラムを通るフローのある拡張モードにおけるベッドの高さであるを使用して、ベッドの拡張度を測定することができる。一実施形態において、拡張度は1~5の範囲例えば、1~4または1~3または1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等である。いくつかの実施形態については、拡張度は多くとも約1.2である。別の実施形態において、フロー率は約5cm/分であり、拡張度は1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。別の実施形態において、フロー率は約6cm/分であり、拡張度は1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。別の実施形態において、フロー率は約7cm/分であり、拡張度は1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。別の実施形態において、フロー率は約8cm/分であり、拡張度は1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。別の実施形態において、フロー率は約9cm/分であり、拡張度は1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。別の実施形態において、フロー率は約10cm/分であり、拡張度は1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。別の実施形態において、フロー率は約4cm/分例えば約3.8cm/分であり、拡張度は、1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。別の実施形態において、フロー率は約8cm/分例えば約7.8cm/分であり、拡張度は、1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等;好適には1.2である。混合物からの対象となる粒子の捕捉のためにリガンドとカップルさせた拡張ベッド吸着剤の使用は、1つまたは複数の対象となる粒子を含む混合物を最初に提供する工程を含むことができる。混合物は定義されたpHを有するか、または混合物のpHを調整して所望されるpHを得ることができる。混合物は拡張ベッド吸着剤と接触させられ、任意で1つまたは複数のバッファーにより洗浄される。1つまたは複数の対象となる粒子は吸着剤に可逆的に結合されるようになり得るか、またはそれらは未結合のままであり得る。次いで吸着剤をバッファーにより洗浄して非結合材料を含む画分を得ることができる。次いで吸着剤を少なくとも1つの溶出バッファーにより洗浄して吸着剤に可逆的に結合された1つまたは複数の対象となる粒子を含む少なくとも1つの溶出物を得ることができる。洗浄工程、溶出工程または両方は、吸着剤と最初に接触させる混合物のpHよりも高いpHを有するバッファーにより実行することができる。バッファー複数可は1つまたは複数のさらなる化合物1つまたは複数の界面活性剤等を含み得る。吸着剤は各々の溶出工程間でバッファーにより洗浄することができる。溶出工程において得られる非結合材料もしくは対象となる粒子または両方を含む画分は、限定されずに、クロマトグラフィー、免疫精製、濾過、精密濾過、遠心分離、デカンテーション、沈降および同種のもの、または2つ以上の前述の技法の組み合わせを含む、本明細書において論じられるようなさらなる下流の加工にかけることができる。溶出工程の間のベッドの拡張度は、0.5~5の範囲、例えば、1~4または1~3または1~21.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8または1.9等である。いくつかの実施形態については、拡張度は多くとも約1.2である。一実施形態において、2つ以上の対象となる粒子は2つ以上の異なる吸着剤の使用によって混合物から捕捉することができ、そこで吸着剤の1つ以上例えばすべては拡張ベッドモードである。従って、本発明は、対象となる粒子の捕捉のために2つ以上、3つ以上、4つ以上、または5つ以上の異なる吸着剤の使用を意図する。さらなる態様において、本発明は、対象となる粒子を混合物から捕捉する方法であって、対象となる粒子が吸着剤に結合する条件下で混合物を拡張ベッド吸着剤と接触させることおよび対象となる粒子が吸着剤から溶出されるように条件を変化させることを含む方法に関する。複数の実施形態において、方法は、混合物中に最初に存在する対象となる粒子の合計量の少なくとも50対象となる粒子の少なくとも60、70、80または90を含むを捕捉する。少なくとも92.5、95、96、97、98または少なくとも99等のさらに高い捕捉率を達成することができる。本発明のさらなる実施形態はここで記載される。捕捉の前に、対象となる粒子を含む宿主細胞を、溶解、均質化、破砕、粉末化、粉砕、乾燥例えば凍結乾燥、押出、または前述のものの2つ以上の組み合わせにかけることができる。バルク材のサイズを減少、細胞複数可を破壊、または細胞複数可の内容物を放出する他の公知の方法も使用することができる。宿主細胞が植物宿主細胞であるならば、細胞は、ねじプレス例えばコーンに対して少なくとも45psiの圧力を使用して約15kg/時間~20kg/時間で、VincentCP-4ねじプレス、パスタカッター、またはタバコの加工において一般に使用される1つまたは複数の機械例えば押出し機等であるがこれらに限定されない、当該技術分野において公知の方法を使用して、破壊またはホモジナイズすることができる。得られた抽出物は採取され、任意で保存される。緑色葉が出発材料において優勢な場合は、抽出物は緑色ジュースまたは緑色抽出物とも称される。かかる抽出物は、細胞間隙すなわちアポプラスト中の内容物だけでなく細胞の細胞内内容物も含む。一実施形態において、抽出物を1つまたは複数の化学物質または組成物および同種のものの添加によってさらに処理することができる。従って、一実施形態において、メタ重亜硫酸ナトリウムを抽出物に添加することができる。対象となる粒子が細胞から分泌され得るので、これはオプションの工程である。当該技術分野において公知の方法CondutimeterMulti350i/セットの使用によって等を使用して、抽出物の伝導率を測定することができる。伝導率が所望される範囲でないならば、抽出物は使用前に純水により希釈することができる。例えば、タバコの茎および葉の均質化により約20mS/cmの伝導率を有する植物材料がもたらされることが観察されている。この値は、N.tabacumおよびN.bentamianaに由来するホモジナイズされた植物材料において一貫して観察された。一実施形態によれば、伝導率は、1mS/cm~10mS/cm;好適には2mS/cm~8mS/cm;好適には3mS/cm~7mS/cm;好適には4mS/cm~6mS/cmの範囲、例えば、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8または5.9mS/cmでなくてはならない。他の実施形態によれば、伝導率は、1mS/cm~5mS/cm;好適には2mS/cm~3mS/cmの範囲、例えば、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8または2.9mS/cmでなくてはならない。別の実施形態において、抽出物のpHは、約pH6.0~8.0の間;好適には約pH7.0である。捕捉の前に原料を前処理することは所望され得る。対象となる粒子が植物抽出物中に存在する場合、捕捉プロセスの間に目詰まりおよび閉塞を引き起こし得る植物に由来するマクロ分子のうちのいくつかを除去することは有利であろう。一実施形態によれば、イオン交換体ポリエチレンイミンPEIイオン交換体等を使用して所望されない植物由来マクロ分子を結合する。この工程は好適には第1のカラムにおいてバッチインキュベーションモードで行うことができ、それから得られた溶出材料は拡張ベッドを含む第2のカラムと任意で接触される。好適には、この前捕捉工程において使用されるイオン交換体は、約100μm~200μm;好適には約pH7で約150μmの平均吸着剤粒子サイズを有する。典型的には、イオン交換体は、好適なバッファー0.5Mトリス/HClバッファーpH7、続いて10mMトリス/HClバッファーpH7.0等により平衡化されるだろう。濾過、精密濾過、遠心分離例えば低速遠心分離、デカンテーションもしくは沈降またはこれらの方法の2つ以上の組み合わせを含み得る他の前捕捉工程が意図される。他の実施形態によれば、前捕捉工程は吸着剤の拡張ベッドの使用を含む。好適には、前捕捉工程において使用されるビーズのサイズは、約130μm~250μm;好適には約135μm~250μm;より好適には約135μm~225μm;より好適には約135μm~200μm;より好適には約135μm~175μm;より好適には約135μm~170μm;より好適には約140μm~170μm;より好適には約140μm~165μm;より好適には約140μm~160μm;より好適には約145μm~160μm;より好適には約145μm~145μmの間;最も好適には約150μmである。好適には、これらのビーズは、拡張ベッド吸着剤を使用して前捕捉する工程において使用することができる。従って、本発明のさらなる態様は、a吸着剤の第1の拡張ベッドを提供する工程と;b混合物中の望まれない材料が第1の吸着剤に結合するような条件下で、混合物を第1の吸着剤と接触させる工程と;c吸着剤の第2の拡張ベッドを提供する工程と;d対象となる粒子が第2の吸着剤に結合するような条件下で、工程bからの対象となる粒子を第2の吸着剤と接触させる工程と;e任意で第2の吸着剤を洗浄する工程と;f任意で対象となる粒子を第2の吸着剤から溶出する工程と;g任意で1つまたは複数のさらなる回数で工程a~fを反復する工程とを含む、混合物から対象となる粒子を捕捉する方法に関する。一実施形態において、拡張ベッドモードにおいて使用される吸着剤は、陰イオン交換樹脂ジエチルアミノエチルセルロースベースのイオン交換樹脂、好適にはジエチルアミノエチルセルロースデキストランベースのイオン交換樹脂等である。樹脂は、典型的には、例えば、0.5Mトリス/HClバッファーpH7、続いて10mMトリス/HClpH7.0を使用して、約pH6.0~8.0の間;好適にはpH7.0のpHにバッファーにより平衡化されるだろう。一実施形態において、吸着剤の平均吸着剤粒子サイズは、約25μm~200μm;好適には約25μm~75μmの間、および最も好適には約50μmである。方法が拡張ベッドカラムにおいて実行されるならば、当業者は、カラムの様々なサイズを使用できることを認識するだろう。一実施形態において、カラムは、約70cmのカラム高および約15cmのベッド高で直径1cmである。より大きなカラム工業規模で使用できるカラム等のこの使用も本発明によって包含される。例えば、カラムは、直径で直径約1cm~少なくとも1500cm直径で最大約10cm、直径で最大約100cm、直径で最大約250cm、直径で最大約500cm、直径で最大約750cm、直径で最大約1000cm、直径で最大約1250cm、直径で最大約1500cm、直径で最大約1750cmまたは少なくとも直径で最大約2000cm等のサイズにわたり得る。他の直径は2cmの直径、10cmの直径、45cmの直径および150cmの直径を含む。本明細書において記載されるように、上清は所望されるフロー率でカラム上にロードされ、カラムはロード後に約pH6.0~8.0の間;好適にはpH7.0のpHを備えた洗浄バッファー10mMトリス/HClpH7.0等により典型的には洗浄される。次いで結合された材料は典型的には洗浄バッファーより高いまたは低いpHの好適な溶出バッファーを使用して溶出することができる。一実施形態において、洗浄バッファーは50mMトリス/HClおよび1MNaCl、pH9.0を含む。好適には、溶出物を1つの画分で回収し、pHは、溶出物の回収前にチューブにバッファー1Mトリス/HCl、pH6.5溶液等を添加することによって、溶出の間にpH7に調節する。操作の1つのモードによれば、植物抽出物中に存在する対象となる粒子の結合および溶出は、DEAEイオン交換体、続いてPEIイオン交換体による前捕捉を使用して達成される。別の実施形態において、抽出物は1工程の結合および溶出プロセスにおいて対象となる粒子を単離することができるように前処理されない。操作のこのモードは、拡張ベッド吸着を使用する対象となる粒子の大スケール捕捉のために、特に適している。従って、少なくとも100リットル例えば少なくとも250リットル、少なくとも500リットル、少なくとも750リットル、少なくとも1000リットル、少なくとも1250リットル、少なくとも1500リットル、少なくとも1750リットル、および少なくとも2000リットルの抽出物は、この方法に従って加工され得る。一実施形態において、ビーズ組成物は、エピクロルヒドリン架橋アガロース例えば4w/vで等のアガロースベースである。ビーズは、残りのビーズに異なる組成物のコア炭化タングステンコア等を含み得る。好適なリガンドは、典型的には約50μmの平均直径を備えたDEAEイオン交換体である。吸着剤粒子の平均密度は好適には約16kg/Lである。好適なカラム直径は約45cmであり、空隙体積は沈殿した状態で充填体積の約40を構成する。一実施形態において、カラムを0.5Mトリス-Clバッファー、pH7、続いて10mMトリス-Clバッファー、pH7により平衡化する。好適には、抽出物のローディングは、本明細書において記載されるようなフロー率で抽出物を上に向かってポンプで入れることによって達成される。拡張係数は典型的には2.0~2.5の領域中であり、未結合の材料を同じ拡張率で10mMトリス/HCl、pH7により洗浄する。EBAクロマトグラフィー工程に続いて、対象となる粒子は約1.2の拡張率で50mMトリス-Clおよび1MNaCl、pH9により溶出され得る。溶出された画分を、溶出ピークの回収前に1Mトリス/HCl、pH6.5を容器に添加することによって中和することができる。対象となる粒子を含むかまたはそれらから構成される画分は、さらなる捕捉および精製のためにプールすることができる。ビーズの平均密度は約1g/ml~20g/mlであり得、直線的フロー率は少なくとも約150cm/時間であり得、拡張ベッドの拡張度は約1~5であり得る。本発明の一実施形態において、吸着剤に、1つまたは複数の洗浄バッファーおよび平衡バッファーにより、任意でそれぞれ洗浄もしくは平衡化または両方を行うことができる。吸着剤に適用される混合物は条件付けた混合物であり得る。吸着剤がカラム内で保持されないケースにおいて、それは、固相膜ベースの吸着のためのもの等で、例えば膜フィルター、繊維またはシートであり得、リガンドはそこへカップルされる。従って、さらなる態様は、i吸着剤の密度が約1g/ml~20g/mlの間であり、拡張ベッドの拡張度が約1~5の間であり、平均吸着剤粒子のサイズが約25μm~約200μmの間である、リガンドを含む吸着剤の拡張ベッドを10cmを超える沈降ベッド高でカラム中に提供する工程と;ii約pH6.0~8.0範囲のpHで樹脂材料を平衡化する工程と;iii対象となる粒子を含む混合物であって、約1mS/cm~10mS/cmの間の伝導率を有する前記混合物を提供する工程と;iv約1cm/分~15cm/分の間の範囲の直線的フロー率でカラム上に混合物をロードして対象となる粒子を結合する工程と;iv約pH6.0~8.0の範囲のpHを有するバッファーを使用してロードしたカラムを洗浄する工程と;v1つまたは複数の画分でカラムから対象となる結合粒子を溶出する工程とを含む、混合物から対象となる粒子を捕捉する方法に関する。本明細書において参照されるとき、バッファーは、その酸-塩基のコンジュゲート成分の作用による酸または塩基の添加によってpHにおける変化に耐える溶液である。様々なバッファーは、バッファーの所望されるpHおよび捕捉プロセスにおける特定の工程に応じて用いることができる。本発明の方法のためのpH範囲の所望される制御に使用できるバッファー成分の非限定的例は、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、アンモニウムバッファー酢酸アンモニウム等、コハク酸塩、MES、CHAPS、MOPS、MOPSO、HEPES、トリスおよび同種のものに加えて、これらのトリス-リンゴ酸-NaOHの組み合わせ、マレイン酸塩、クロロ酢酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、プロピオン酸塩、ピリジン、ピペラジン、ADA、PIPES、ACES、BES、TES、トリシン、ビシン、TAPS、エタノールアミン、CHES、CAPS、メチルアミン、ピペリジン、ホウ酸、炭酸、乳酸、ブタンアンジオン酸butaneandioicacid、ジエチルマロン酸、グリシルグリシン、HEPPS、HEPPSO、イミダゾール、フェノール、POPSO、コハク酸塩、TAPS、ベンジルアミン、トリメチルアミンもしくはジメチルアミンもしくはエチルアミンもしくはフェニルアミン、エチレンジアミン、またはモルホリンを含む。追加成分添加剤は、バッファー中に必要に応じて存在することができ、例えば、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウムおよび塩化カリウム等の塩;ならびにアミノ酸グリシンおよびヒスチジン等、カオトロープ尿素等、アルコールエタノール、マンニトール、グリセロールおよびベンジルアルコール等、界面活性剤上を参照および糖ショ糖、マンニトール、マルトース、トレハロース、グルコースおよびフルクトース等等の他の添加剤をバッファーのイオン強度の調節に使用することができる。バッファーの成分および添加剤ならびに使用される濃度は、本発明において実施されるクロマトグラフィーのタイプに従って変動させることができる。界面活性剤という用語はイオン性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤を指し、それはタンパク質の凝集を防止することおよび非特異的相互作用または対象となるタンパク質への混入物の結合を防止することに有用であり、清浄化バッファー、平衡化バッファー、ローディングバッファー、ロード洗浄複数可バッファー、溶出バッファーまたはストリップバッファーを含む本発明において使用される様々なバッファー中に存在することができる。特定の実施形態において、界面活性剤は洗浄バッファーへ添加される。本発明において使用することができる界面活性剤の例は、ポリソルベート例えばポリソルベート20または80;ポロキサマー例えばポロキサマー188;トリトン;ドデシル硫酸ナトリウムSDS;ラウリル硫酸ナトリウム;オクチルグリコシドナトリウム;ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、またはステアリルスルホベタイン;ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシンまたはステアリルサルコシン;リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、またはセチルベタイン;ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノレアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミドプロピルベタイン、またはイソステアラミドプロピルベタイン例えばラウロアミドプロピル;ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、またはイソステアラミドプロピルジメチルアミン;ココイルメチルタウリンナトリウム、またはオレイルメチルタウリン二ナトリウム;MONAQUAT商標シリーズMonaIndustries,Inc.、Paterson、NJ.;IgepalCA-630、Pluronic、トリトン、BRIJ、AtlasG2127、Genapol、HECAMEG、LUBROLPX、MEGA、NP、THESIT、TOPPS、CHAPS、CHAPSO、DDMAU、EMPIGENBB、AWITTERGENTおよびC12E8を含むが、これらに限定されない。界面活性剤は任意のワーキングバッファー中に添加することができ、対象となる分子を含むフィード中に含むことができる。界面活性剤は、本明細書において記載された方法での使用のために好適な任意の量、例えば、約0.001~約20、および典型的には約0.01~約1で存在することができる。特定の実施形態において、ポリソルベート80はCEXCのための洗浄バッファー中で使用される。クロマトグラフィー性能は、当該技術分野において周知の様々な方法を使用して280nmおよび600nmでのUV吸収の測定によって、伝導率によってもしくはpHによってまたはその組み合わせによって等、モニタリングすることができる。所望される対象となる粒子の捕捉は、対象となるタンパク質に特異的な適切なアッセイを使用してモニタリングすることができる。アッセイ周知のBradfordアッセイ等を使用して画分の全タンパク質含有量を決定することができる。SDS-PAGEを使用して純度を確立することができる。ウエスタンブロットは対象となるタンパク質の同定および特徴づけのために使用することができる。本明細書において記載されるような赤血球凝集素アッセイ等のタンパク質活性を測定する方法も使用することができる。他の実施形態によれば、拡張ベッドおよびカラムを使用後に浄化および再生する。従って、例えば、溶出後に、樹脂を0.5MNaOH続いて蒸留水による洗浄によって浄化および再生する。再平衡化は10mMトリス-Clバッファー、pH7を使用して達成することができる。従って、本発明の態様は対象となる粒子の植物からの捕捉に関する。従って、一態様は、拡張ベッドまたはEBAのクロマトグラフィーの使用を含む、植物、植物細胞または植物抽出物から対象となる粒子を捕捉する方法に関する。一実施形態によれば、この方法は、a吸着剤;好適にはDEAEベースの吸着剤の拡張ベッドを提供する工程と;b植物材料を吸着剤と接触させる工程と;c任意で吸着剤をリンスする工程と;d任意で対象となる粒子を吸着剤から溶出する工程とを含む。好適には、吸着剤との接触の前の植物抽出物の伝導率は、約1mS/cm~10mS/cm、好適には2mS/cm~3mS/cmである。好適には、吸着剤は複数のビーズアガロースおよび対象となる粒子を結合するのに好適なリガンドを含むビーズ等を含む。ビーズは約50μmの平均直径を有し得る。好適には、リガンドは、陰イオン交換樹脂ジエチルアミノエチルセルロースベースのイオン交換樹脂、好適にはジエチルアミノエチルセルロースデキストランベースのイオン交換樹脂等を含むか、それらからなるか、または本質的になる。好適には、ビーズの平均密度は約1g/ml~20g/mlである。好適には、直線的フロー率は少なくとも約150cm/時間である。好適には、拡張ベッドの拡張度は約1~5である。VLPは一般的に感染において産生されるビリオンに抗原性的に類似するが、複製に十分な遺伝情報を欠き、従って典型的には非感染性である。VLPは感染において産生されるビリオンに形態学的に類似し得るが、必ずしもそうだとは限らない。VLP植物由来するVLP等は多くのサイズ分布を有し、感染において産生されるビリオンと異なる形状であり得、球状ではないか、長い軸であるか、または押しつぶされた外観等を有する。VLPは、パルボウイルス科例えばアデノ随伴ウイルス、レトロウイルス科例えばHIVおよびフラビウイルス科例えばC型肝炎ウイルスを含む、様々なウイルス科の構成要素から産生されている。VLPは、哺乳類細胞株、昆虫細胞株、酵母および植物細胞を含む様々な細胞培養システムにおいて産生することができる。特定の実施形態において、VLP中に存在する1つまたは複数のタンパク種は、天然に存在する配列から修飾され得る。VLPは、哺乳類細胞、細菌細胞、植物細胞および昆虫細胞を含む好適な宿主細胞において産生され得る。一実施形態において、VLPは植物の細胞において産生される。VLPは多くの場合異種発現によって大量に産生することができる。VLPはインタクトな構造として宿主または宿主細胞から単離され得る。VLPは、例えば免疫アッセイ、機能的アッセイ例えば凝集、電子顕微鏡検査、またはサイズ排除クロマトグラフィーによって、構造およびサイズについて査定され得る。VLPは1つ以上または2つ以上の異なる対象となるタンパク質を含むことができる。タンパク質は異なる生物学的起源であり得るが、その少なくとも1つはウイルス起源である。1つ以上のタンパク種を含むVLPについて、タンパク種は、ウイルスの同じ種からのものであり得るか、または異なる種、属、亜科または科のウイルスからのタンパク質を含み得る。VLPは、非タンパク性の他のタイプの分子脂質および炭水化物等であるがこれらに限定されないを加えて含み得る。一実施形態において、VLPは、対象となるタンパク質の単量体単位の多量体集合体である。様々な実施形態において、対象となるタンパク質はウイルスタンパク質カプシド等であるがこれらに限定されないである。大部分のウイルス構造はそれらのカプシドの構造に基づき、螺旋状形態、20面体形態もしくは等軸形態またはエンベロープを有する形態で存在することができる。螺旋対称はウイルスの円周の周囲のタンパク質サブユニットをアレンジして、ディスクを形成する。20面体対称のカプシドは疑似球状構造を形成し;エンベロープウイルスと共にタンパク質サブユニットは外部環境に曝露される。様々な実施形態において、VLPは3~約200のカプシドを含むカプシドから構成される。一実施形態において、VLPは、少なくとも30、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも90または少なくとも120のカプシドを含む。別の実施形態において、各々のVLPは、少なくとも150のカプシド、少なくとも160、少なくとも170または少なくとも180のカプシドを含む。他の実施形態において、対象となるタンパク質は、ウイルスマトリックスタンパク質またはウイルス糖タンパク質および同種のものであり得る。一実施形態において、VLPは20面体構造として発現される。別の実施形態において、VLPは、カプシド配列が由来する生来のウイルスと同じ幾何学的形状で発現される。別の実施形態において、VLPは生来のウイルスと同一の幾何学的形状を有していない。一実施形態において、カプシドの少なくとも1つは、少なくとも1つの対象となるタンパク質を含む。一実施形態において、本発明によって捕捉されたVLPを使用して、ワクチンインフルエンザまたは鳥インフルエンザのワクチン等を含むがこれらに限定されない医薬組成物を作製することができる。かかるワクチンをはヒトまたは動物に投与して、病原体ウイルス、細菌、原生動物、線虫、寄生動物等であるがこれらに限定されないによる感染を防止することまたはかかる病原体による感染を処理することができる。対象となる粒子は細菌のゴースト粒子であり得る。このタイプの粒子は、細菌グラム陰性菌等の空の細菌細胞エンベロープである。それらは、典型的には細菌特にグラム陰性菌の部分的溶解をもたらす遺伝子の制御された異種発現によって調製される。例えば、溶菌遺伝子はポリペプチドをコードするバクテリオファージφX174遺伝子Eであり得、このポリペプチドはグラム陰性菌の細胞エンベロープ複合体の中へ挿入され、内膜および外膜を介する膜貫通トンネル構造の形成を引き起こす。このトンネル構造の内径は、適用される溶解条件に応じて、約20nm~400nm、特に40nm~200nm、500nm~1,000nmの範囲中であり得る。細胞質成分はこのトンネル構造によって放たれ、インタクトな形態を有する空の細胞エンベロープ複合体いわゆる細菌のゴーストが得られる。WO91/13555およびWO93/01791で細菌のゴーストの使用を開示する。細菌のゴースト粒子は組換えゴースト粒子であり得る。細菌のゴースト粒子は、その表面上で1つまたは複数の対象となるタンパク質ワクチン抗原等を提示する組換えゴースト粒子であり得る。プロセスはVLPの形態で少なくとも0.1g/Lのタンパク質を産生することができる。別の実施形態において、プロセスはVLPの形態で0.1g/L~10g/Lのタンパク質を産生する。他の実施形態において、プロセスは、VLPの形態で少なくとも約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9または1.0g/Lのタンパク質を産生する。一実施形態において、産生されたVLPの全量は少なくとも1.0g/Lである。対象となるタンパク質に作動可能に連結された発現されるウイルスカプシドの部分は、細胞中で不溶性の凝集物として形成され得る。一実施形態において、対象となるタンパク質は、本明細書において論じられるような不溶性の凝集物から復元される。一実施形態において、ウイルスカプシド配列に作動可能に連結されたタンパク質は少なくとも2つのアミノ酸を含む。別の実施形態において、タンパク質は、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、または少なくとも6アミノ酸を含む。別の実施形態において、タンパク質は、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、または少なくとも11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900または1000またはそれ以上のアミノ酸長である。一実施形態において、タンパク質は、少なくとも25kDa、50kDa、100kDaまたは150kDaまたはそれ以上の分子量を有する。対象となるタンパク質は、ウイルスに由来せず、任意で宿主細胞と同じ種に由来しない異種タンパク質であり得る。対象となるタンパク質は機能的タンパク質;構造タンパク質;抗原;免疫原;毒素;ヒトまたは動物の疾患の処理もしくは防止または両方に有用な抗微生物タンパク質、治療的タンパク質または予防的タンパク質であり得る。本明細書において記載されたタンパク質の断片、融合タンパク質、前駆体またはコンカテマーも意図される。機能的タンパク質の非限定的例は、免疫活性タンパク質例えば抗原性タンパク質、アレルゲン性タンパク質、免疫調節因子、免疫修飾因子;シグナリングおよびシグナル伝達タンパク質ならびに阻害タンパク質例えば、タンパク質毒素および抗微生物タンパク質等の、毒性タンパク質、殺生物性タンパク質、または静生物性タンパク質を含むが、これらに限定されない。構造タンパク質は、アプタマー;折り畳みタンパク質、接着促進タンパク質、接触面タンパク質、マイクロ構造およびナノ構造の建築タンパク質ならびに前活性化タンパク質を含むが、これらに限定されない。触媒タンパク質は、例えばRNA編集タンパク質;tRNAシンセターゼの触媒タンパク質;リボソーム不活性化タンパク質;およびウイルス触媒タンパク質を含む。対象となるタンパク質は、関連するタンパク質のエピトープ、ハプテン例えば、抗原性ウイルスタンパク質;ウイルス関連タンパク質、抗体のイディオタイプドメイン;細胞表面タンパク質;ヒト、動物、原生生物、植物、真菌、細菌、または古細菌起源の抗原性タンパク質;アレルゲン性タンパク質およびアレルゲン脱感作タンパク質であり得る。タンパク質は、免疫調節因子または免疫修飾因子例えばインターフェロン、インターロイキン、免疫抑制因子および免疫強化因子;抗体例えば、単一鎖抗体;単一鎖抗体断片およびコンストラクト、例えば単一鎖Fv分子;抗体軽鎖分子、抗体重鎖分子、ドメイン欠失抗体の軽鎖分子または重鎖分子;単一鎖抗体のドメインおよび分子、例えばCH1、CH1-3、CH3、CH1-4、CH4、VHCH1、CL、CDR1、FR1-CDR1-FR2ドメイン;パラトープペプチド;マイクロ抗体;他の結合タンパク質例えば、アプタマー、細胞内および細胞表面の受容体タンパク質、受容体断片でもあり得る。タンパク質は、酵素基質もしくは酵素抑制物質または細胞表面の受容体、リガンド、アゴニストおよびアンタゴニスト、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、ウイロカインおよびウイロセプター、ホルモン放出タンパク質およびホルモン放出阻害タンパク質、神経伝達物質またはチャンネルブロッカー、毒素または毒素前駆体であり得る。タンパク質は、代謝および消化に関連するタンパク質、細胞接着を修飾または媒介するタンパク質、細胞外基質タンパク質、神経保護因子または髄鞘形成促進タンパク質;または凝集阻害タンパク質でもあり得る。対象となるタンパク質は分泌タンパク質であり得る。タンパク質についてのコード配列は生来のコード配列であり得るが、より典型的には選択された発現宿主細胞中での使用のために、例えば、宿主動物種のコドン使用優先性を反映する遺伝子を合成することまたはシグナルペプチドを組み入れることによって、選択、改善または最適化されたコード配列であるだろう。一実施形態において、対象となるタンパク質はワクチンまたはワクチン組成物中で使用することができる抗原である。好適には、ワクチンは、薬学的に許容されるキャリアーもしくはアジュバントまたは両方も含む。ワクチンは予防的または治療的であることが意図される。予防的処理は、病変を生じるリスクを低下させる目的のために、疾患の徴候を示さないかまたは初期徴候のみを示す被験体に投与される処理である。ワクチンは、病変を生じる可能性を減少させるかまたはもし生じていれば病変の重症度を最小限にする予防的処理として与えることができる。治療的処理は、徴候または症状を減じるかまたは消失させる目的のために、病変の徴候または症状を示す被験体に投与される処理である。徴候または症状は、生化学的、細胞性、組織学的、機能的、主観的または客観的であり得る。一実施形態において、抗原は、赤血球凝集素HAまたはその断片もしくは誘導体である。HAは、約560アミノ酸を含むウイルス表面の糖タンパク質である。それは、感染の早期ステージにおけるウイルスの接着および宿主細胞の中への浸透に関与する。H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15またはH16サブタイプとして分類される少なくとも16の公知のHAサブタイプがある。赤血球凝集素は、インフルエンザウイルスに加えて他の多くの細菌およびウイルスの表面上で見出される。現在、ヒトにおけるインフルエンザ感染の最も重要な原因は、インフルエンザタイプAのサブタイプH1N1およびH3N2に起因するものである。しかしながら、パンデミック感染を引き起こし得る、典型的なインフルエンザワクチンによって保護されないインフルエンザ株は、例えばH5N1サブタイプである。H2、H7およびH9サブタイプもパンデミックの可能性を有する。高病原性鳥インフルエンザウイルスは、鳥類における、重篤な呼吸器疾患および死亡を引き起こし得る。この特徴は、H5およびH7のサブタイプのHAのみについて知られている。いくつかの鳥ウイルスにはヒトに伝達する能力があるので、ヒトの健康の不安にもなっている。鳥インフルエンザウイルスの病原性はポリジーンの特性であるが、HAタンパク質が感染において主要な役割を有することが示されている。HAタンパク質は単量体、二量体または、三量体の形態で発現され得る。任意のHAサブタイプおよびバリアントに加えて任意のHAの単量体、二量体または三量体の形態は、対象となるタンパク質であり得、本明細書において記載されたVLP中に存在することができる。赤血球凝集素タンパク質は、抗体の使用を含む標準的方法を使用して、ELISAによって検出することができる。赤血球凝集の活性を測定する方法は、当該技術分野において周知であり、WO2004/098533中に記載されるような赤血球によるインキュベーションを含む。対象となる粒子の産生のための宿主は、典型的にはウイルスタンパク質が細胞の複製または感染を可能にしないものであるだろう。一実施形態において、ウイルスタンパク質は、宿主細胞に由来する細胞種に感染しないウイルスに由来するだろう。例えば、一実施形態において、ウイルス種は哺乳動物に感染し、発現システムは植物宿主細胞を利用する。宿主細胞は対象となる粒子の集合を改善するように修飾され得る。宿主細胞は、例えば発現されたウイルスタンパク質から対象となる粒子の形成を促進するシャペロンタンパク質を含むように修飾され得る。別の実施形態において、宿主細胞をリプレッサータンパク質を含むように修飾し、より効率的にカプシドの発現を調節して対象となる粒子の調節された形成を促進する。宿主細胞は、細菌細胞、酵母細胞、藻細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞および植物細胞を含む。本発明のいくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Agrobacterium属例えばA.radiobacter、A.rhizogenes、A.rubiである。本発明のいくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Arthrobacter属例えばA.aurescens、A.citreus、A.globformis、A.hydrocarboglutamicus、A.mysorens、A.nicotianae、A.paraffineus、A.protophonniae、A.roseoparqffinus、A.sulfureusおよびA.ureafaciensである。本発明のいくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Bacillus属例えばB.thuringiensis、B.anthracis、B.megaterium、B.subtilis、B.lentos、B.circulans、B.pumilus、B.lautus、B.coagulans、B.brevis、B.firmus、B.alkaophius、B.licheniformis、B.clausii、B.stearothermophilus、B.haloduransおよびB.amyloliquefaciensである。特定の実施形態において、宿主細胞は、B.subtilis、B.pumilus、B.licheniformis、B.megaterium、B.clausii、B.stearothermophilusおよびB.amyloliquefaciensを含むがこれらに限定されない産業用のBacillus系統であるだろう。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Clostridium属例えばC.acetobutylicum、C.tetaniE88、C.lituseburense、C.saccharobutylicum、C.perfringens、C.beijerinckiiである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Corynebacterium属例えばC.glutamicum、C.acetoacidophilumである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Escherichia属例えばE.coliである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Erwinia属例えばE.uredovora、E.carotovora、E.ananas、E.herbicola、E.punctata、E.terreusである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Pantoea属例えばP.citreaおよびP.agglomeransである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Pseudomonas属例えばP.putida、P.aeruginosa、P.mevaloniiである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Streptococcus属例えばS.equisimiles、S.pyogenes、S.uberisである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Streptomyces属例えばS.ambofaciens、S.achromogenes、S.avermitilis、S.coelicolor、S.aureofaciens、S.aureus、S.fungicidicus、S.griseus、S.lividansである。いくつかの実施形態において、細菌宿主細胞は、Zymomonas属例えばZ.mobilisおよびZ.lipolyticaである。組換えタンパク質には、迅速で効果的で低費用で多量の収率の可能性があるので、対象となる粒子VLP等のの産生のための発現システムにおける宿主細胞として細菌を検査した。研究者は、非熱帯性腸内細菌において、組換えタンパク質挿入物のない特定の野生型ウイルスカプシドを遺伝子導入により発現させることができることを示している。研究者は、これらのカプシドをインビボおよびインビトロの両方で集合させて対象となる粒子VLP等を形成できることも示している。酵母宿主細胞は、Candida属、Hansenula属、Saccharomyces属、Schizosaccharomyces属、Pichia属、Kluyveromyces属およびYarrowia属であるがこれらに限定されない細胞であり得る。本発明のいくつかの実施形態において、酵母細胞は、Hansenulapolymorpha、Saccharomycescerevisiae、Saccaromycescarlsbergensis、Saccharomycesdiastaticus、Saccharomycesnorbensis、Saccharomyceskluyveri、Schizosaccharomycespombe、Pichiapastoris、Pichiafinlandica、Pichiatrehalophila、Pichiakodamae、Pichiamembranaefaciens、Pichiaopuntiae、Pichiathermotolerans、Pichiasalictaria、Pichiaquercuum、Pichiapijperi、Pichiastipitis、Pichiamethanolica、Pichiaangusta、Kluyveromyceslactis、CandidaalbicansおよびYarrowialipolyticaである。真菌宿主細胞は、Achlya属、Acremonium属、Aspergillus属、Aureobasidium属、Bjerkandera属、Ceriporiopsis属、Cephalosporium属、Chrysosporium属、Cochliobolus属、Corynascus属、Cryphonectria属、Cryptococcus属、Coprinus属、Coriolus属、Diplodia属、Endothis属、Fusarium属、Gibberella属、Gliocladium属、Humicola属、Hypocrea属、Myceliophthora属、Mucor属、Neurospora属、Penicillium属、Podospora属、Phlebia属、Piromyce属、Pyricularia属、Rhizomucor属;Rhizopus属、Schizophyllum属、Scytalidium属、Sporotrichum属、Talaromyces属、Thermoascus属、Thielavia属、Trametes属、Tolypocladium属、Trichoderma属、Verticillium属、Volvariella属、またはその有性世代もしくは無性世代および異名もしくは分類学的同等物であるがこれらに限定されない細胞であり得る。本発明のいくつかの実施形態において、宿主細胞は、Chlamydomonas例えばC.ReinhardtiiおよびPhormidiumP.種ATCC29409等の藻細胞である。昆虫宿主細胞の例は、SpodopterafrugiperdaSf9またはSf21またはTrichoplusioani細胞HighFive等の鱗翅目細胞株を含む。哺乳類宿主細胞の例は、チャイニーズハムスターCHO細胞株例えばCHO-K1;ATCCCCL-61、ミドリザル細胞株COS例えばCOS1ATCCCRL-1650、COS7ATCCCRL-1651;マウス細胞例えばNS/O、ベビーハムスター腎臓BHK細胞株例えばATCCCRL-1632またはATCCCCL-10、およびヒト細胞例えばHEK293ATCCCRL-1573を含む。一実施形態において、宿主は植物であり、宿主細胞は植物細胞である。植物細胞は植物に由来または由来可能であるか、または植物の外部で培養された培養植物細胞であり得る。従って、一実施形態において、植物は、植物細胞インビトロで成長させた植物細胞または細胞のクランプ等の培養でまたは植物の外部で成長させた植物細胞等である。植物の非限定的例は、単子葉植物および双子葉植物作物植物、観賞植物、および非栽培植物または野生植物等を含む。さらなる例は、作物植物特にヒト食品または動物食物のために使用される作物植物、木材またはパルプを産生する樹木、野菜植物、果実植物および観賞用植物等の商業用または農業用に興味を持たれる植物を含む。植物の非限定的例は、穀類作物植物コムギ、カラスムギ、オオムギ、トウモロコシ、ライムギ、ライコムギ、コメ、キビ、ソルガム、キノア、アマランサスおよびソバ等;飼料作物植物アルファルファ、カラスノエンドウ、クローバおよび同種のものを含む飼料用草および飼料用双子葉植物等;脂肪種子作物植物綿、ベニバナ、ヒマワリ、ダイズ、キャノーラ、ナタネ、アマ、ピーナッツおよびアブラヤシ等;樹木の木の実クルミ、カシュー、ヘーゼルナッツ、ピーカン、アーモンドおよび同種のもの等;サトウキビ、ココナッツ、ナツメヤシ、オリーブ、テンサイ、茶およびコーヒー;木材またはパルプを産生する樹木;マメ科植物例えばマメ、エンドウ、ヒラマメ、アルファルファ、ピーナッツ、レタス、アスパラガス、アーティチョーク、セロリ、ニンジン、ラディッシュ、アブラナ科植物例えばキャベツ、ケール、カラシナおよび他の葉が多いアブラナ科植物、ブロッコリ、カリフラワー、メキャベツ、カブ、コールラビ、ウリ科植物例えばキュウリ、メロン、夏カボチャ、冬カボチャ、ネギ科植物例えば玉ねぎ、ニンニク、リーキ、エシャロット、チャイブ、ナス科植物のメンバー例えばトマト、ナス、じゃがいも、胡椒、ホオズキ、およびアカザ科の植物のメンバー例えばビート、フダンソウ、ホウレンソウ、キノア、アマランサス等の野菜作物植物;リンゴ、西洋ナシ、柑橘類例えばオレンジ、ライム、レモン、グレープフルーツおよび他のもの、核果例えばアプリコット、モモ、プラム、ネクタリン、バナナ、パイナップル、ブドウ、キーウィフルーツ、パパイア、アボカドおよびベリー等の果実作物植物;ならびに観賞用顕花植物、観賞用樹木および低木、観賞用地被植物ならびに観賞用草を含む観賞用植物を含む。双子葉植物のさらなる例は、キャノーラ、綿、ジャガイモ、キノア、アマランサス、ソバ、ベニバナ、ダイズ、テンサイおよびヒマワリ、より好適にはダイズ、キャノーラおよび綿を含むが、これらに限定されない。単子葉植物のさらなる例は、コムギ、カラスムギ、オオムギ、トウモロコシ、ライムギ、ライコムギ、コメ、観賞用草および飼料草、ソルガム、キビならびにサトウキビを含むが、これらに限定されない。組換えタンパク質産生宿主としての植物は、対象となる粒子の捕捉および精製の間に除去され得る混入物のユニークなセットを含む。さらに、植物固形物抽出後の早期除去が要求されるは、一般的に従来の細菌および哺乳類の細胞培養残屑よりも、より高い濃度でより広い範囲でより稠密なものである。典型的な植物の加工および精製のスキームは、組換えタンパク質を含む植物組織の単離、粒子サイズ減少に加えて組織の分画、水性媒質の中への標的タンパク質の抽出、粗製抽出物の清澄化、および最終的な生産物の精製からなる。それゆえ、植物細胞からの対象となる粒子の捕捉における改良は、全体的な生産コストに有利な影響を与えるだろう。本発明において使用のために好適な植物材料は、以下の科のうちの1つからの種を含む単子葉植物もしくは双子葉植物またはそれらの植物細胞システムであり得るかまたはそれらに由来し得る。Acanthaceae、Alliaceae、Alstroemeriaceae、Amaryllidaceae、Apocynaceae、Arecaceae、Asteraceae、Berberidaceae、Bixaceae、Brassicaceae、Bromeliaceae、Cannabaceae、Caryophyllaceae、Cephalotaxaceae、Chenopodiaceae、Colchicaceae、Cucurbitaceae、Dioscoreaceae、Ephedraceae、Erythroxylaceae、Euphorbiaceae、Fabaceae、Lamiaceae、Linaceae、Lycopodiaceae、Malvaceae、Melanthiaceae、Musaceae、Myrtaceae、Nyssaceae、Papaveraceae、Pinaceae、Plantaginaceae、Poaceae、Rosaceae、Rubiaceae、Salicaceae、Sapindaceae、Solanaceae、Taxaceae、またはVitaceae。好適な種は、属、Abelmoschus、Abies、Acer、Agrostis、Allium、Alstroemeria、Ananas、Andrographis、Andropogon、Artemisia、Arundo、Atropa、Berberis、Beta、Bixa、Brassica、Calendula、Camellia、Camptotheca、Cannabis、Capsicum、Carthamus、Catharanthus、Cephalotaxus、Chrysanthemum、Cinchona、Citrullus、Coffea、Colchicum、Coleus、Cucumis、Cucurbita、Cynodon、Datura、Dianthus、Digitalis、Dioscorea、Elaeis、Ephedra、Erianthus、Erythroxylum、Festuca、Fragaria、Galanthus、Glycine、Gossypium、Helianthus、Hevea、Hordeum、Hyoscyamus、Jatropha、Lactuca、Linum、Lolium、Lupinus、Lycopersicon、Lycopodium、Manihot、Medicago、Mentha、Miscanthus、Musa、Nicotiana、Oryza、Panicum、Papaver、Parthenium、Pennisetum、Petunia、Phalaris、Phleum、Pinus、Poa、Poinsettia、Populus、Rauwolfia、Ricinus、Rosa、Saccharum、Salix、Sanguinaria、Secale、Solanum、Sorghum、Spartina、Spinacea、Tanacetum、Taxus、Theobroma、Triticosecale、Triticum、Uniola、Veratrum、Vinca、Vitis、およびZeaのメンバーを含み得る。好適な種は、Panicum属の種、Sorghum属の種、Miscanthus属の種、Saccharum属の種、Erianthus属の種、Populus属の種、Andropogongerardiiビッグブルーステム、Pennisetumpurpureumエレファントグラス、Phalarisarundinaceaクサヨシ、Cynodondactylonバミューダグラス、Festucaarundinaceaヒロハノウシノケグサ、Spartinapectinataプレーリーコードグラス、Medicagosativaアルファルファ、Arundodonaxダンチク、Secalecerealeライムギ、Salix属の種ヤナギ、Eucalyptus属の種ユーカリ、Triticosecale属コムギ類-コムギ×ライムギ、タケ、Helianthusannuusヒマワリ、Carthamustinctoriusベニバナ、Jatrophacurcasジャトロファ、Ricinuscommunisキャスター、Elaeisguineensisヤシ、Linumusitatissimumアマ、Brassicajuncea、Betavulgarisテンサイ、Manihotesculentaキャッサバ、Lycopersiconesculentumトマト、Lactucasativaレタス、Musaparadisiacaバナナ、Solanumtuberosumジャガイモ、Brassicaoleraceaブロッコリ、カリフラワー、メキャベツ、Camelliasinensis茶、Fragariaananassaイチゴ、Theobromacacaoココア、Coffeaアラビカコーヒー、Vitisviniferaブドウ、Ananascomosusパイナップル、Capsicumannumトウガラシおよび甘トウガラシ、Alliumcepa玉ねぎ、Cucumismeloメロン、Cucumissativusキュウリ、Cucurbitamaximaカボチャ、Cucurbitamoschataカボチャ、Spinaceaoleraceaホウレンソウ、Citrulluslanatusスイカ、Abelmoschusesculentusオクラ、Solanummelongenaナス、Rosa属の種バラ、Dianthuscaryophyllusカーネーション、Petunia属の種ペチュニア、Poinsettiapulcherrimaポインセチア、Lupinusalbusルピナス、Uniolapaniculataカラスムギ、ベントグラスAgrostis属の種、Populustremuloidesアスペン、Pinus属の種マツ、Abies属の種モミ、Acer属の種モミジ、Hordeumvulgareオオムギ、Poapratensisブルーグラス、Lolium属の種ライグラスおよびPhleumpratenseオオアワガエリ、Panicumvirgatumスイッチグラス、Sorghumbicolorソルガム、スーダングラス、Miscanthusgiganteusススキ、Saccharum属の種エネルギー用サトウキビ、Populusbalsamiferaポプラ、Zeamaysトウモロコシ、Glycinemaxダイズ、Brassicanapusキャノーラ、Triticumaestivumコムギ、Gossypiumhirsutum綿、Oryzasativaコメ、Helianthusannuusヒマワリ、Medicagosativaアルファルファ、BetavulgarisテンサイまたはPennisetumglaucumトウジンヒエを含み得る。植物材料は、属NicotianaNicotiana属の様々な種の植物を含み、N.benthamianaおよびN.tabacum例えばLAB21、LNKY171、TI1406、Basma、Galpao、Perique、Beinhart1000-1およびPeticoを含む、天然に存在、突然変異、天然に存在しない、またはトランスジェニックのタバコ植物であり得るかまたはそれらに由来し得る。他の種は、N.acaulis、N.acuminata、N.acuminata多花性変種、N.africana、N.alata、N.amplexicaulis、N.arentsii、N.attenuata、N.benavidesii、N.rustica、N.bigelovii、N.bonariensis、N.cavicola、N.clevelandii、N.cordifolia、N.corymbosa、N.debneyi、N.excelsior、N.forgetiana、N.fragrans、N.glauca、N.glutinosa、N.goodspeedii、N.gossei、N.hybrid、N.ingulba、N.kawakamii、N.knightiana、N.langsdorffii、N.linearis、N.longiflora、N.maritima、N.megalosiphon、N.miersii、N.noctiflora、N.nudicaulis、N.obtusifolia、N.occidentalis、N.occidentalis亜種hesperis、N.otophora、N.paniculata、N.pauciflora、N.petunioides、N.plumbaginifolia、N.quadrivalvis、N.raimondii、N.repanda、N.rosulata、N.rosulata亜種ingulba、N.rotundifolia、N.setchellii、N.simulans、N.solanifolia、N.spegazzinii、N.stocktonii、N.suaveolens、N.sylvestris、N.tabacum、N.thyrsiflora、N.tomentosa、N.tomentosiformis、N.trigonophylla、N.umbratica、N.undulata、N.velutina、N.wigandioides、およびN.xsanderaeを含む。栽培品種または選良栽培品種からのまたはそれらに由来する植物材料の使用も意図される。品種または栽培品種の非限定的例は、BD64、CC101、CC200、CC27、CC301、CC400、CC500、CC600、CC700、CC800、CC900、Coker176、Coker319、Coker371Gold、Coker48、CD263、Denzizli、DF911、Galpaoタバコ、GL26H、GL350、GL600、GL737、GL939、GL973、HB04P、K149、K326、K346、K358、K394、K399、K730、KDH959、KT200、KT204LC、KY10、KY14、KY160、KY17、KY171、KY907、KY907LC、KTY14xL8LC、Karabaglar、LittleCrittenden、McNair373、McNair944、msKY14xL8、NarrowLeafMadole、NC100、NC102、NC2000、NC291、NC297、NC299、NC3、NC4、NC5、NC6、NC7、NC606、NC71、NC72、NC810、NCBH129、NC2002、NealSmithMadole、OXFORD207、Periqueタバコ、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R610、R630、R7-11、R7-12、RG17、RG81、RGH51、RGH4、RGH51、RS1410、Speight168、Speight172、Speight179、Speight210、Speight220、Speight225、Speight227、Speight、SpeightG-28234、SpeightG-70、SpeightH-6、SpeightH20、SpeightNF3、TI1406、TI1269、TN、TN86LC86、TN90、TN97、TN97LC、TND94、TND950、TRTomRossonMadole、TurkishSamson、VA309、VA359、DAC、Mata、Fina、PO2、BY-64、AS44、RG17、RG8、HB04P、BasmaXanthiBX2A、Coker319、Hicks、McNair944MN944、Burley、K149、YakaJB125/3、KasturiMawar21、NC297、Coker371Gold、PO2、Wislica、Simmaba、TurkishSamsun、AA37-1、B13P、BU21×HojaParado系統97の交配からのF4、SamsunまたはPO1である。N.tabacum栽培品種の非限定的例は、AA37-1、B13P、XanthiMitchell-Mor、KTRD3ハイブリッド107、Bel-W3、79-615、SamsunHolmesNN、KTRDC2ハイブリッド49、KTRDC4ハイブリッド110、Burley21、BY-64、KTRDC5KY160SI、KTRDC7FCA、KTRDC6TN86SI、Coker371Gold、K149、K326、K346、K358、K394、K399、K730、KY10、KY14、KY160、KY17、KY8959、KY9、KY907、MD609、McNair373、NC2000、PG01、PG04、M066、PO1、PO2、PO3、RG11、RG17、RG8、SpeightG-28、TN86、TN90、VA509、AS44、BanketA1、BasmaDramaB84/31、BasmaIZichnaZP4/B、BasmaXanthiBX2A、Batek、BesukiJember、C104、Coker319、Coker347、CriolloMisionero、DACMataFina、Delcrest、Djebel81、DVH405、GalpaoComum、HB04P、HicksBroadleaf、KabakulakElassona、KasturiMawar、KutsageE1、KY14xL8、KY171、LABU21、McNair944、NC2326、NC71、NC297、NC3、PVH03、PVH09、PVH19、PVH2110、RedRussian、Samsun、Saplak、Simmaba、Talgar28、TurkishSamsun、Wislica、Yayaldag、NC、TRMadole4、PrilepHC-72、PrilepP23、PrilepPB156/1、PrilepP12-2/1、YakaJK-48、YakaJB125/3、TI-1068、KDH-960、TI-1070、TW136、SamsunNN、Izmir、Basma、TKF4028、L8、TKF2002、TN90、GR141、Basmaxanthi、GR149、GR153、PetitHavanaまたはXanthiNNである。一過性の発現システムは、本発明の方法において使用される植物を生成するのに特に好適である。かかる一過性の発現システム好適にはNicotiana属の様々な種およびN.tabacumの品種と共に使用されるは、当該技術分野において公知であり、アグロバクテリウムが植物細胞の中へ対象となるタンパク質をコードする核酸分子典型的にはアグロバクテリウム中で複製することができる発現コンストラクトを移行させる能力に依存する、物理的方法例えば真空または大気圧を超える圧力の適用を介する遺伝子操作されたAgrobacteriumtumefaciensの懸濁物の植物全体の葉の中へのインフィルトレーションを含む。インフィルトレーションされた植物細胞中での発現コンストラクトのコピー数は、遺伝子導入植物の生成に使用されるものよりも高い。アグロバクテリウムのインフィルトレーションは組み込みをもたらし得るが、本発明において使用される植物の生成に使用している一過性の発現は、植物ゲノムの中への発現コンストラクトの組み込みを要求しないことによって特徴づけられる。従って、大多数のインフィルトレーションしされた植物細胞は、組み込まれた発現コンストラクトを含むゲノムを含まない。一過性の発現は、子孫植物の中への発現コンストラクトの伝達も要求しない。一般的に、インフィルトレーション後の2~15日または好適には4~6日内に、組換えタンパク質はインフィルトレーションされた植物細胞中に蓄積し、ウイルス様粒子を形成する。バイオマス特にインフィルトレーションされた葉をこの時に収穫し、粒子の単離のために加工することができる。従って、植物材料は、ウイルス様粒子中に存在するタンパク質を一過性に発現する植物NicotianabenthamianaまたはNicotianatabacumの品種等、好適にはタンパク質をコードし、インフィルトレーションした植物細胞中でタンパク質の発現を一過性に可能にする発現コンストラクトを含むアグロバクテリウム細胞によりインフィルトレーションされた植物に由来し得る。原料としての植物材料の使用は、例えば5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20w/wを超える固形物の高含有量のためにさらなる難題となる。原料は、細胞培養上清中で見出されたものよりも高い、高濃度の材料、例えば、104~102、104~101、103~101、104~1mm、103~1mm、または102~1mmの範囲中の対象となる粒子を含み得る。原料は、典型的には、脂質、デンプン、リグニン、フェノール化合物および色素を含む化学的な複合体である。細胞培養と比較して植物中の組換えタンパク質の低い収率は、原料のより高い体積のローディングを要求する。混合物が植物であるかまたは植物に由来するならば、それは植物ジュース抽出物の形態であり得る。本明細書において使用される時、植物ジュース抽出物という用語は、葉緑素を含む植物に由来する液体材料を指す。植物ジュース抽出物は条件付けた植物ジュース抽出物であり得る。対象となるタンパク質が1つまたは複数の対象となる粒子中に含まれ得ることを当業者は理解するが、いくつかの実施形態については、対象となる粒子から対象となるタンパク質を単離または精製することが所望され得る。従って、本明細書において記載された方法は、対象となる粒子にタンパク質を精製する任意のさらなる工程を含むことができる。従って、対象となる粒子中に含まれる対象となるタンパク質は、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ニッケルクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、レクチンクロマトグラフィー、分取電気泳動、界面活性剤可溶化、カラムクロマトグラフィーのような物質による選択的沈殿、免疫精製法、および他の物を含むがこれらに限定されない当該技術分野において周知の標準的技法によって、実質的な純度に精製することができる。例えば、確立された分子接着特性を有するタンパク質をリガンドに可逆的に融合させることができる。適切なリガンドにより、タンパク質は精製カラムに選択的に吸着され、次いで比較的純粋な形態でカラムから遊離させることができる。加えて、タンパク質は免疫親和性カラムまたはNi-NTAカラムを使用して精製することができる。本発明の方法は、拡張ベッドとの接触の前または後のいずれかで材料を加工するさらなる工程を含み得ることも理解すべきである。従って、本明細書において記載された方法はさらに上流または下流の加工工程を含み得る。従って、一実施形態において、方法は、拡張ベッドとの接触の前または後に材料を処理する任意のさらなる工程を含む。別の実施形態において、方法は、対象となる粒子が吸着剤から溶出されたならばそれを処理する任意のさらなる工程を含む。従って、例示として、材料は、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ニッケルクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、レクチンクロマトグラフィー、分取電気泳動、界面活性剤可溶化、カラムクロマトグラフィーのような物質による選択的沈殿、免疫精製法、濾過、精密濾過、遠心分離、デカンテーション、もしくは沈降または前述のものの組み合わせにかけられ得る。陽イオン交換樹脂は負に荷電しており、それは吸着剤または固相の上またはそれらを通って通過される水溶液中の陽イオンとの交換のための遊離陽イオンを有する。陽イオン交換樹脂の形成に好適な任意の負に荷電したリガンド、例えばカルボン酸塩、スルホン酸塩および以下で記載されるような他のものを使用することができる。商業的に入手可能な陽イオン交換樹脂は、例えば、スルホナートベースの基を有するもの例えばGEHealthcareからのMonoS、MiniSおよびSource15Sおよび3OS、SPSepharoseFastFlow商標、SPSepharoseHighPerformance、TosohからのToyopearlSP-650SおよびSP-650M、BioRadからのMacro-PrepHighS、PallTechnologiesからのCeramicHyperDS、TrisacrylM、およびLSSPおよびSpherodexLSSP;スルホエチルベースの基を有するもの例えばEMDからのFractogelSE、AppliedBiosystemsからのPorosS-10およびS-20;スルホプロピルのベースの基を有するもの例えばTosohからのTSKGelSP5PWおよびSP-5PW-HR、AppliedBiosystemsからのPorosHS-20およびHS50;スルホイソブチルベースの基を有するもの例えばEMDからのFractogelEMDSO3;スルホキシエチルベースの基を有するもの例えばWhatmanからのSE52およびSE53およびExpress-IonS、カルボキシメチルベースの基を有するもの例えばGEHealthcareからのCMSepharoseFastFlow、BiochromLabsInc.からのHydrocellCM、BioRadからのMacro-PrepCM、PallTechnologiesからのCeramicHyperDCM、TrisacrylMCM、TrisacrylLSCM、MilliporeからのMatrxCellufmeC500およびC200、WhatmanからのCM52、CM32およびCM23およびExpress-IonC、TosohからのToyopearlCM-650S、CM-650MおよびCM-650C;スルホンおよびカルボン酸ベースの基を有するもの例えばJ.T.BakerからのBAKEPVBONDカルボキシ-スルホン;カルボン酸ベースの基を有するもの例えばJ.TBakerからのWPCBX、DowLiquidSeparationsからのDOWEXMAC-3、Sigma-AldrichからのAmberliteWeakCationExchangers、DOWEXWeakCationExchangerおよびDiaionWeakCationExchangersおよびEMDからのFractogelEMDCOO-;スルホン酸ベースの基を有するもの例えばBiochromLabsInc.からのHydrocellSP、DowLiquidSeparationsからのDOWEXFineMeshStrongAcidCationResin、J.T.BakerからのUNOsphereS、WPSulfonic、SartoriusからのSartobindS膜、Sigma-AldrichからのAmberliteStrongCationExchangers、DOWEXStrongCationおよびDiaionStrongCationExchanger;ならびにオルトエステルのベースの基を有するもの例えばWhatmanからのPI1を含むが、これらに限定されない。陰イオン交換樹脂は正に荷電しており、従ってそれへ付加された1つまたは複数の正に荷電したリガンドを有する。陰イオン交換樹脂の形成に好適な吸着剤または固相に付加された任意の正に荷電したリガンド四級アミノ基等を使用することができる。商業的に入手可能な陰イオン交換樹脂は、AppliedBiosystemsからのDEAEセルロース、PorosPI20、PI50、HQ10、HQ20、HQ50、D50、SartoriusからのSartobindQ、MonoQ、MiniQ、Source15Qおよび3OQ、Q、DEAEおよびANXSepharoseFastFlow、QSepharosehighPerformance、QAEHADEX商標ならびにFASTQHAROSE商標GEHealthcare、J.T.BakerからのWPPEI、WPDEAM、WPQUAT、BiochromLabsInc.からのHydrocellDEAEおよびHydrocellQA、BioradからのUNOsphereQ、Macro-PrepDEAEおよびMacro-PrepHighQ、PallTechnologiesからのCeramicHyperDQ、CeramicHyperDDEAE、TrisacrylMおよびLSDEAE、SpherodexLSDEAE、QMASpherosilLS、QMASpherosilMおよびMustangQ、DowLiquidSeparationsからのDOWEXFineMeshStrongBaseTypeIおよびTypeIIAnionResinsおよびDOWEXMONOSPHERE77、弱塩基陰イオン、MilliporeからのInterceptQ膜、MatrexCellufmeA200、A500、Q500およびQ800、EMDからのFractogelEMDTMAE、FractogelEMDDEAEおよびFractogelEMDDMAE、Sigma-AldrichからのAmberiiteの弱および強陰イオン交換体タイプIおよびII、DOWEXの弱および強陰イオン交換体タイプIおよびII、Diaionの弱および強陰イオン交換体タイプIおよびII、Duolite、TosohからのTSKゲルQおよびDEAE5PWおよび5PW-HR、ToyopearlSuperQ-650S、650Mおよび650C、QAE-550Cおよび650S、DEAE-650Mおよび650C、WhatmanからのQA52、DE23、DE32、DE51、DE52、DE53、Express-IonDおよびExpress-IonQを含む。チオフィリッククロマトグラフィーの使用も意図され、チオフィリック吸着クロマトグラフィーとして公知である。チオフィリックという用語は、チオエーテル基に近接して位置するスルホン基についてタンパク質が有する選択性を指す。これは非親和性クロマトグラフィーの1タイプであり、対象となるタンパク質それはチオフィリック領域および芳香族アミノ残基を含むは、タンパク質の単離のための硫黄含有リガンドに結合する。チオフィリックゲルはβ-メルカプトエタノールによりジビニルスルホンSepharose4Bにカップルされたを還元することによって調製することができる。チオフィリック吸着クロマトグラフィーは電子供与体-受容体特性に基づき、疎水性に基づいたクロマトグラフィーとは異なる。チオ-エチルスルホン構造が明らかな疎水性またはイオン電荷を持たないので、疎水性会合およびイオン相互作用はチオフィリック吸着剤により起こらない。商業的に入手可能なチオフィリッククロマトグラフィー樹脂の例はFractogelEMDTAMerck;Rahway、NJ、UniflowおよびSuperflow樹脂ClontechおよびT-GelPierceを含む。親和性クロマトグラフィーという用語は、対象となるタンパク質が、通常空間的相補性および1つまたは複数のタイプの化学的相互作用例えば結合部位での静電力、水素結合、疎水性力および分子間力の組み合わせとして、生物学的に特異的なリガンドに可逆的および特異的に結合される分離技法を指す。これらの相互作用は、分子の一般的特性等電点、疎水性またはサイズ等起因するものではないが、対象となるタンパク質とリガンドとの間の特異的な相互作用例えばエピトープに結合する免疫グロブリン、免疫グロブリンに結合するプロテインA、生物学的応答修飾因子とその細胞表面受容体との間の相互作用の結果である。多くの実例において、生物学的に特異的なリガンドはタンパク質またはポリペプチドでもあり、固相ビーズ等上に固定化され得る。ミックストモードイオン交換樹脂も本明細書において意図され、カチオン性モイエティ、アニオン性モイエティまたは疎水性モイエティにより共有結合で修飾される固相を指す。ミックストモードイオン交換樹脂の例は、BAKERBONDABX商標J.T.Baker;Phillipsburg、NJ、セラミックハイドロキシアパタイトタイプIおよびIIならびにフッ化ハイドロキシアパタイトBioRad;Hercules、CAならびにMEPおよびMBIHyperCelPallCorporation;EastHills、NYを含む。疎水性電荷誘導クロマトグラフィーまたはHCICという用語は、添加塩例えばリオトロピック塩の非存在下において穏やかな疎水性相互作用を介してイオン化リガンドに混合物中の対象となるタンパク質が結合するタイプのミックストモードクロマトグラフィープロセスである。ミックストモードは、結合のための1つのモードおよび溶出のための他のモードを指す。例えば、HCICにおいて有用な固相は、その分離性能のためにチオフィリック効果すなわち、チオフィリッククロマトグラフィーの特性を利用する、疎水性およびイオン化基の組み合わせた特性を有するリガンドを含む。従って、本発明の方法において使用される吸着剤は、イオン化リガンドを含み、中性生理的または弱酸性のpH例えば約pH5~10、好ましくは約pH6~9.5で穏やかに疎水性である.このpH範囲で、リガンドの大部分は非荷電であり、穏やかな非特異的疎水性相互作用によって対象となるタンパク質を結合する。pHが減少するにつれて、リガンドは電荷を獲得し、疎水性結合はpHシフトに起因して溶質への静電荷反発作用によって破壊される。HCICで使用される好適なリガンドの例は、任意のイオン化芳香族または複素環構造例えば2-アミノメチルピリジン、3-アミノメチルピリジンおよび4-アミノメチルピリジン、2-メルカプトピリジン、4-メルカプトピリジンまたは4-メルカプトエチルピリジン等のピリジン構造を有するもの、メルカプト酸、メルカプトアルコール、メルカプトメチルイミダゾール、2-メルカプトベンズイミダゾール、アミノメチルベンズイミダゾール、ヒスタミン、メルカプトベンズイミダゾール、ジエチルアミノプロピルアミン、アミノプロピルモルホリン、アミノプロピルイミダゾール、アミノカプロン酸、ニトロヒドロキシ安息香酸、ニトロチロシン/エタノールアミン、ジクロロサリチル酸、ジブロモチラミン、クロロヒドロキシフェニル酢酸、ヒドロキシフェニル酢酸、チラミン、チオフェノール、グルタチオン、重硫酸塩、および色素を含み、その誘導体を含む。対象となる粒子中で発現される1つまたは複数のタンパク質は、配列が由来する生来のタンパク質の少なくとも20、30または40、および好適には少なくとも50、60または70、ならびに最も好適には少なくとも80、90または95の特異的な活性を有することができる。さらに、基質特異性kcat/kmは生来のタンパク質のものに任意で実質的に類似する。典型的には、kcat/kmは、生来のタンパク質の少なとも30、40または50;およびより好適には少なくとも60、70、80または90になるだろう。タンパク質およびタンパク質活性ならびに基質特異性kcat/kmのアッセイおよび測定値の定量化の方法は、当業者に周知である。組換えタンパク質の活性は、従来確立されている生来のタンパク質標準活性と比較することができる。あるいは、組換えタンパク質の活性は、生来のタンパク質と共に同時または実質的に同時に、比較アッセイにおいて決定することができる。例えば、インビトロのアッセイを使用して、組換えタンパク質と標的との間の、例えば発現された酵素と基質との間の、発現されたホルモンとホルモン受容体との間の、発現された抗体と抗原との間のなどの任意の検出可能な相互作用を決定することができる。かかる検出は、熱量変化、増殖変化、細胞死、細胞反発、放射能の変化、可溶性の変化、ゲル電気泳動またはゲル排除方法によって測定された分子量の変化、リン酸化能力、ELISAアッセイなどの抗体特異性アッセイの測定を含むことができる。加えて、インビボのアッセイは、産生されたタンパク質の生理的作用例えば免疫反応または炎症の誘導を、生来のタンパク質の生理的作用に比較して検出するアッセイを含むが、これらに限定されない。一般的に、任意のインビトロまたはインビボのアッセイを使用して、対象となる粒子の活性本質を決定することができる。あるいは、本発明において産生されたタンパク質は、タンパク質と、通常はタンパク質と相互作用する分子例えば基質との間の相互作用を刺激または阻害する能力についてアッセイすることができる。かかるアッセイは、典型的には相互作用を可能にする条件下で基質分子とタンパク質を組み合わせる工程を含み、相互作用の生化学的帰結を検出することができる。発現されたタンパク質が不溶性タンパクとして発現されるならば、次いでそれを復元または再び折り畳んで、二次および三次のタンパク質構造立体配座を生成することができる。タンパク質を再び折り畳む工程は、組換え生産物の立体配置の完成において必要に応じて使用することができる。再折り畳みおよび復元は、当該技術分野においてタンパク質の解離/会合を促進することが公知の薬剤を使用して遂行することができる。例えば、タンパク質をジチオスレイトールによりインキュベーション、続いて酸化されたグルタチオンジナトリウム塩によりインキュベーション、続いて再折り畳み薬剤尿素等を含むバッファーによりインキュベーションすることができる。組換えタンパク質は、例えばリン酸緩衝生理食塩水PBSまたは50mMNa-酢酸塩、pH6バッファー200mMNaClに対して透析することによっても復元することができる。あるいは、500mMNaCl、20グリセロール、20mMトリス/HCl、pH7.4、プロテアーゼ阻害剤含有中で、直線的6M-1M尿素勾配を使用することによって、カラムNiNTAカラム等上で固定化される間にタンパク質を再び折り畳むことができる。復元は1.5時間またはそれ以上の期間にわたって実行することができる。復元後に、タンパク質は250mMイミダゾールの添加によって溶出することができる。イミダゾールは、PBSまたは50mM酢酸ナトリウムpH6バッファー200mMNaClに対する最終的な透析工程によって除去することができる。精製されたタンパク質は、4°Cで保存または-80°Cで凍結することができる。本発明に従って得られるかまたは得ることができる所望の純度を有する対象となる粒子の配合は、任意の薬学的に許容されるキャリアー、賦形剤または安定剤Remington’sPharmaceuticalSciences第16版、Osol,A.編1980を参照と混合することによって、凍結乾燥された配合または水溶液の形態で、保存のために調製することができる。許容可能なキャリアー、賦形剤または安定剤は、用いられた用量および濃度でレシピエントに無毒であり、バッファーリン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸等;アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤;防腐剤オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム等;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール;メチルパラベンまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;およびm-クレゾール等;低分子量約10残基未満ポリペプチド;タンパク質血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等;親水性ポリマーポリビニルピロリドン等;アミノ酸グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン等;単糖、二糖類、および他の炭水化物グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む;キレート試薬EDTA等;糖ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール等;塩形成カウンターイオンナトリウム等;金属複合体例えばZnタンパク質複合体;または非イオン性界面活性剤TWEEN商標、PLURONICS商標またはポリエチレングリコールPEG等を含む。本発明は以下の実施例中にさらに記載され、それは請求項中に記載される本発明の範囲を限定することを意図しない。以下の実施例は限定としてではなく例証として提供される。特別の指示の無い限り、本発明は、生化学、分子生物学および植物生物学の従来の技法および方法を用いる。実施例1Nicotianabenthamianaにおけるインフルエンザウイルス様の粒子の一過性の発現インフルエンザウイルス様粒子は、D’Aoust,M.-A.,Lavoie,P.-O.,Couture,M.M.-J.,Trepanier,S.,Guay,J.-M.,Dargis,M.,Mongrand,S.,Landry,N.,Ward,B.J.,Vezina,L.-P.Influenzavirus-likeparticlesproducedbytransientexpressioninNicotianabenthamianainduceaprotectiveimmuneresponseagainstalethalviralchallenge.PlantBiotechnologyJournal62008930-940中で記載されるようなNicotianabenthamiana植物において生産される。実施例2赤血球凝集素の検出赤血球凝集はWO2004/098533中で記載されるような赤血球によるインキュベーションによって測定される。赤血球凝集素タンパク質は標準的方法を使用してELISAによって検出される。赤血球凝集素H5タンパク質の検出については、Immunetechからのウサギ抗H5抗体カタログIT-003-005VおよびJacksonからのホースラディシュペルオキシダーゼ標識二次抗体カタログ11-035-046を使用する。実施例3N.benthamianaの抽出実施例1中におよびD’Aoustetal.2008年、前出によって記載されるように、インフィルトレーションされたN.benthamiana植物を収穫前に6日間温室でインキュベーションする。葉の収穫に際して、バイオマスを暗所で4°Cで一晩維持し、コーン上に少なくとも45psiの圧力を使用する15~20kg/時間のねじプレスVincentCP-4を使用してホモジナイズする。緑色ジュース抽出物を回収し、メタ重亜硫酸ナトリウムを10mMの最終濃度に緑色ジュースに添加する。伝導率を測定し、必要に応じて抽出物を捕捉実験での使用前に水で希釈する。実施例4植物ジュース抽出物からのウイルス様粒子を結合するためのリガンド抽出物。赤血球凝集素H5ウイルス様粒子D’Aoustetal.2008、前出を含むN.benthamiana緑色ジュース抽出物を実施例3中に記載されるようなねじプレスを使用して得た。緑色ジュース抽出物を純水中で5倍に希釈し最終pH7、伝導率を測定した。伝導率は5.6mS/cmであった。以下の異なる4つのリガンドを結合について試験した。ジエチルアミノエチルDEAEイオン交換体、デキストランベースのDEAEイオン交換体、デキストランベースのクロロメチル-2-ベンズイミダゾールおよびデキストランベースの1-2-クロロエチル塩酸ピペリジンリガンド。様々な吸着剤対使用されるサンプルの比率は1:5であった。静的モードにおけるバッチインキュベーション後に、上清を回収し、赤血球凝集を実施例2の手順に従って測定した。結果DEAE、デキストランベースのDEAE、デキストランベースのクロロメチル-2-ベンズイミダゾール、およびデキストランベースの1-2-クロロエチル塩酸ピペリジンリガンドとのインキュベーションに際して、赤血球凝集アッセイを使用して測定した、上清中の赤血球凝集素に加えてリガンドに結合した赤血球凝集素の量は、表1中に与えられる。この実験において、緑色植物ジュース抽出物中の赤血球凝集素を含むウイルス様粒子は、DEAEベースのイオン交換体吸着剤に最も良好に結合した。表1様々な吸着剤対赤血球凝集素ウイルス様粒子を含む緑色ジュース抽出物の比率、ならびに静的モードにおける様々な吸着剤との抽出物のインキュベーションに際して、上清および結合した材料の赤血球凝集活性初期抽出物の。実施例5DEAEイオン交換体への結合への伝導率の影響実施例1および3中の記述に従って得られるような、赤血球凝集素H5ウイルス様粒子を含む緑色ジュース抽出物の伝導率の、静的結合モードにおけるDEAEリガンドへのウイルス様粒子の結合に対する効果を測定して、どのくらい高い伝導率でも緑色ジュース抽出物中のウイルス様粒子がDEAEイオン交換体に結合できるかを調べる。DEAEイオン交換体を、5ベッド体積の0.5Mトリス/HCl、pH7バッファー、続いて10ベッド体積の2mMNaCl、pH7により平衡化した。緑色ジュース抽出物を、脱イオン水により2.5、3、3.4、4、5、6および7倍に希釈し、pHを7に調節した。様々に希釈された緑色ジュース抽出物の伝導率を測定し、抽出物を静的結合バッチモードにおいてDEAEイオン交換体により2時間インキュベーションした。様々な伝導率を表2中に示す。各々についての比率は希釈していない抽出物による1:1に対応した。バッチインキュベーション後に、上清を回収し、赤血球凝集を実施例2の方法に従って測定した。結果を表2中に示す。この実験において、緑色ジュース抽出物中のウイルス様粒子の結合は、低伝導率および高伝導率でならびに高希釈および低希釈の緑色ジュース抽出物において等しく効果的だった。表2緑色ジュース抽出物の異なる伝導率での静的モードにおけるDEAEイオン交換体への赤血球凝集素の結合。実施例6植物に由来するウイルス様粒子の2工程の捕捉プロセス2工程プロセス。抽出物および特に緑色の原因となる抽出物中の任意の材料が、大部分のリガンドに粘着し、カラムの目詰まりおよび閉塞を引き起こすので、実施例3中に記載される方法に従って得られた緑色植物ジュース抽出物は、前捕捉を利用する。この目的のために、植物に由来するウイルス様粒子のための2工程の捕捉プロセスを設定した。プロセスは以下のものを含んでいた。工程1、ポリエチレンイミンPEIpH7で150μmの平均粒子径を備えたイオン交換体を使用して、静的結合/バッチインキュベーションモードにおいて、緑色植物ジュース抽出物の緑色を決定する不純物および材料を結合させること;工程2、pH7で50μmの平均粒子径を備えたDEAEイオン交換体を使用して、拡張ベッド吸着モードにおいて、工程1の上清からのウイルス様粒子を結合させること。実験的なセットアップ。実施例3において記載されるようにN.benthamiana抽出物を調製し、濾過し、使用前に脱イオン水により5倍に希釈した。最終pHは7であり、工程1におけるインキュベーションの全体積は150mLであった。伝導率は5.3mS/cmであった。PEIイオン交換体を、5ベッド体積の0.5Mトリス/HClバッファーpH7、続いて10ベッド体積の10mMトリス/HClバッファーpH7.0により平衡化した。静的モードにおいてPEI吸着剤対緑色ジュース抽出物の比率は1:15であった。合計9.5mLのPEI吸着剤が使用された。工程2について、インキュベーションは室温で30分間であり、140mLの上清をインキュベーション後に回収した。工程2において、120mLの工程1の上清をpH7.0に調整し、拡張ベッド吸着モードにおいて実行した。伝導率は5.4mS/cmであり、拡張ベッドモードにおいて使用されるDEAEイオン交換体を、5ベッド体積の0.5Mトリス/HClバッファーpH7、続いて10ベッド体積の10mMトリス/HClバッファーpH7.0により平衡化させた。合計12mLのDEAE吸着剤が使用された。拡張ベッドカラムは70cmのカラム高で直径1cmであった。ベッド高は15cmであった。DEAE吸着剤対サンプルの比率は1:10であった。工程1の上清を3.8cm/分のフロー率でカラム上にロードし、ローディング後に、カラムを10mMトリス/HClpH7.0を含む洗浄バッファーにより洗浄した。結合材料を、50mMトリス/HClおよび1MNaCl、pH9.0を含む溶出バッファーを使用して溶出した。素通りおよび洗浄画分を25mLの体積で回収した。溶出物を1つの画分で回収し、pHは、溶出物の回収前にチューブに1/10体積の1Mトリス/HCl、pH6.5の溶液を添加することによって、溶出の間にpH7に調節した。赤血球凝集素の検出。赤血球凝集素タンパク質の量を、実施例2において記載されるように、工程1に入る前に濾過されたN.benthamiana緑色ジュース抽出物、静的モードにおけるインキュベーション後の上清、フロースルー、拡張ベッドモード吸着および溶出後の洗浄物および溶出物について推測した。抽出物および画分中の全タンパク質含有量を標準的プロトコルを使用して推測した。結果濾過された緑色ジュース抽出物、PEIイオン交換体による静的モードにおけるインキュベーションのための出発材料、PEIイオン交換体による抽出物のインキュベーションに由来する上清、DEAEイオン交換体を使用する拡張ベッド吸着のための出発材料、拡張ベッドカラムの溶出の素通りおよび溶出物中の、赤血球凝集アッセイを使用して測定した赤血球凝集素の量を、前記画分およびサンプルの全タンパク質含有量と共に表3中に示す。この実験において、赤血球凝集素タンパク質の損失のないPEI吸着剤を使用して、カラムの緑色および目詰まりを引き起こす大部分の材料を工程1において除去することができ、DEAEイオン交換体を使用して、赤血球凝集素タンパク質を含むウイルス様粒子を拡張ベッド吸着モードの間に捕捉することができた。表3工程1および2の様々な抽出物および画分についての赤血球凝集活性初期抽出物のおよび全タンパク質含有量mg/mL。ND、決定されない。実施例7DEAEのイオンの交換体の実験的なセットアップのための溶出条件の最適化。実施例6中に記載されるような充填ベッドモードにおけるDEAEイオン交換体におよび続いてPEIイオン交換体による前捕捉による、実施例3中に記載されていた方法に従って得られた緑色植物ジュース抽出物中に存在するウイルス様粒子の結合および溶出を、50mMトリス/HCl、pH8.5を含む溶出バッファーに1MNaCl、0.8MNaCl、0.6MNaCl、0.4MNaCl、0.2MNaClまたは0.1MNaClを添加したものを使用して試験した。抽出物のローディング前に、緑色植物ジュース抽出物を、脱イオン水中で5倍に希釈し、pHをpH7に調節した。伝導率は5.1mS/cmであった。実施例6の工程1で記載されるように、濾過された緑色植物ジュース抽出物を、バッチインキュベーションモードにおいて、15:1の抽出物対リガンドの比率で、150μmの平均粒子径のPEIイオン交換体により最初に30分間インキュベーションした。使用されるDEAEイオン交換体は50μmの平均粒子径を有し、上清対吸着剤の比率は5:1であった。実施例2中に記載されるように赤血球凝集素タンパク質の量を測定した。素通りおよび洗浄物、DEAEイオン交換体に結合したもの、ならびに溶出物中の赤血球凝集素の相対量を、表4中に示す。この実験において、0.4、0.6、0.8または1.0MのNaClを含む溶出バッファーの使用は、赤血球凝集アッセイを使用して測定されるウイルス様粒子の類似した捕捉をもたらした。表4DEAEイオン交換体を使用する充填ベッドモードにおいて異なる溶出バッファーを使用する、素通りおよび洗浄物、結合ならびに溶出物画分中の相対的赤血球凝集活性。実施例8異なるフロー率での拡張ベッド吸着モードにおける破過曲線緑色植物ジュース抽出物中に存在し、実施例3中に記載される方法に従って得られたウイルス様粒子の結合を、拡張ベッド吸着モードの1工程の結合プロセスにおいて、228cm/時間および450cm/時間のフロー率で測定した。5ベッド体積の0.5Mトリス/HCl、pH7バッファーおよび10ベッド体積の10mMトリス、pH7を使用して平衡化したDEAEイオン交換体を使用した。使用されるDEAEイオン交換体は50μmの平均粒子径を有していた。吸着剤対緑色植物ジュース抽出物の比率は常に1:20だった。ベッド高は50cmであり、カラムは39.3mLの吸着剤DEAEイオン交換体を含んでいた。緑色植物ジュース抽出物を脱イオン水中で5倍に希釈し、ローディング前に伝導率を測定した。洗浄バッファーは10mMトリス、pH7.0、および溶出バッファーは50mMトリス/HCl、1MNaCl、pH9.0であった。228cm/hでロードした緑色ジュース抽出物の伝導率は4.96mS/cmであった。合計786mLを3.8cm/分228cm/時間と等しいのフロー率でロードした。洗浄および溶出も3.8cm/分のフロー率で実行した。450cm/時間でロードした緑色ジュース抽出物の伝導率は4.61mS/cmであった。合計786mLを7.6cm/分450cm/時間と等しいのフロー率でロードした。洗浄は7.6cm/分および溶出は3.8cm/分であった。素通りおよび洗浄物を4画分で回収した。溶出画分の回収前に容器に1/10体積の1Mトリス/HCl、pH6.5バッファーを添加することによって、溶出物をpH7に中和した。溶出物を1つのピークで回収した。赤血球凝集素の量を実施例2中に記載される方法に従って測定した。全タンパク質含有量をBradfordに従って測定した。両方のフロー率についての赤血球凝集アッセイの結果を、素通り画分1~3、組み合わせた素通りおよび洗浄物画分、ならびに組み合わせた素通りおよび洗浄物、ならびに溶出物について表5中に示す。注入された抽出物、全素通りおよび洗浄物ならびに溶出物中の全タンパク質のBradford測定についての結果を表6中に示す。この実験において、1工程の結合および溶出プロセスでは、抽出物のローディングについて450cm/時間のフロー率が最もよく動作し、インプットの緑色ジュース抽出物に関して45の赤血球凝集活性の回収をもたらした。表5相対的赤血球凝集活性C/C0でであり、式中、Cは排出された画分素通り1~3、組み合わせた素通りおよび洗浄物4、全素通りおよび洗浄物、または溶出物の赤血球凝集活性であり、C0は100に設定された注入された溶液のものである。表6異なるフロー率でロードおよび溶出された様々な画分の全タンパク質含有量。実施例9450cm/時間のフロー率で前処理されたサンプルの破過曲線前処理された緑色植物ジュース抽出物中に存在し、実施例3中に記載される方法に従って得られたウイルス様粒子の結合を、本質的に実施例8中に記載されるように、拡張ベッド吸着モードの1工程の結合プロセスにおいて、450cm/時間のフロー率で測定した。すべての実験条件は、初期抽出物の伝導率が希釈後に5.36mS/cmだったことおよび抽出物が拡張ベッド吸着モードにおける1工程の結合プロセスに適用する前に酸沈殿および濾過されたこと以外は、実施例8において使用されたものに類似していた。独立した2つの実験を実行した。両方の実験についての赤血球凝集アッセイの結果を、素通り画分1~3、組み合わせた素通りおよび洗浄物画分、および組み合わせた素通りおよび洗浄物、および溶出物について表7中に示す。注入された抽出物、全素通りおよび洗浄物ならびに溶出物中の全タンパク質のBradford測定についての結果を表8中に示す。この実験において、赤血球凝集アッセイを使用して測定されるような緑色植物ジュース抽出物からのウイルス様粒子の捕捉は、1工程の結合および溶出プロセスにおいて100であった。表7相対的赤血球凝集活性C/C0でであり、式中、Cは排出された画分素通り1~3、組み合わせた素通りおよび洗浄物4、全素通りおよび洗浄物、または溶出物の赤血球凝集活性であり、C0は100に設定された注入された溶液のものである。表8450cm/時間のフロー率でロードおよび溶出された様々な画分の全タンパク質含有量。ND、決定されない。実施例10拡張ベッドクロマトグラフィーを使用するウイルス様粒子の大スケール捕捉抽出物。記載されるD’Aoustetal.2008、前出ように、7,500のN.benthamiana植物をインフィルトレーションして、赤血球凝集素H5ウイルス様粒子を含む250kgの粗製バイオマスを生成する。インフィルトレーション後に、植物を収穫前に6日間温室でインキュベーションする。本質的に実施例3中に記載されるように、葉の収穫に際して、バイオマスを暗所で4°Cで一晩維持し、コーン上に少なくとも45psiの圧力を使用する15~20kg/時間のねじプレスVincentCP-4を使用してホモジナイズする。緑色ジュースを回収し、メタ重亜硫酸ナトリウムを10mMの最終濃度で緑色ジュースに添加する。伝導率を測定し、使用前に抽出物を約10の最終伝導率に水により希釈する。抽出物を室温で維持する。希釈後の全体積は約1250Lの抽出物である。カラム特性。ビーズ組成物:エピクロルヒドリンで架橋したアガロース4w/v。コア:炭化タングステンビーズの体積の約10~15を占める。リガンド:DEAEイオン交換体。粒子の平均直径:50μm。吸着剤粒子の平均密度:16kg/L。カラム直径:45cm。沈殿した状態における空隙体積:充填体積の約40。全体積:63Lの吸着剤材料を45cmの直径カラムに添加する。カラムを5カラム体積の0.5Mトリス-Clバッファー、pH7、続いて10カラム体積の10mMトリス-Clバッファー、pH7により平衡化する。ローディング。実施例8および9中に記載されるように、450cm/時間653L/時間と本質的に等しいのフロー率で1250Lの抽出物を上に向かってポンプで入れることによってローディングを実行する。拡張係数を2.0~2.5で維持し、未結合の材料を同じ拡張率で10mMトリス/HCl、pH7により洗浄する。溶出。インフルエンザウイルス様粒子を1.2の拡張率で50mMトリス-Clおよび1MNaCl、pH9による溶出によって回収する。溶出された画分を、溶出ピークの回収前に1/10体積の1Mトリス/HCl、pH6.5を容器に添加することによって中和する。実施例2の方法に従って測定されるような赤血球凝集素を含むウイルス様粒子を含む画分を、さらなる捕捉および精製のためにプールする。性能モニタリング。クロマトグラフィー性能を、280nmおよび600nmでのUV吸収、伝導率およびpHの測定によってモニタリングする。赤血球凝集素H5を含むウイルス様粒子の捕捉は、実施例2中でまたはD’Aoustetal.2008年、前出に従って記載されるようなELISAおよび赤血球凝集によって定量的に測定される。Bradfordアッセイを使用して画分の全タンパク質含有量を決定する。実施例2中でおよびD’Aoustetal.2008年、前出によって記載されるように、SDS-PAGEを純度を確立するためにならびに赤血球凝集素H5特異的抗体を使用するウエスタンブロットを同定および特徴づけのために使用する。実施例11拡張ベッドカラムの洗浄および再生溶出後に、樹脂を4カラム体積の0.5MNaOH続いて4カラム体積の蒸留水による洗浄によって浄化および再生する。再平衡を10mMトリス-Clバッファー、pH7中で行う。実施例12さらなる最適化アグロ-インフィルトレーションの6日後に収穫されたH5-VLPを発現するN.benthamiana植物を、4°Cで一晩暗所で維持する。葉および茎を含む植物バイオマスを、ねじプレスGreenStarCorrupad、GS、KoreaCo.1000を使用してホモジナイズする。MBSを10mMの最終濃度で添加してサンプル酸化を回避する。ねじプレスから得られた粗製ジュースを、20に希釈した酢酸を使用してpH5.3に迅速に調節する。抽出物は部分的清澄化のために撹拌せずに室温で20~30分間放置する。濾過は、高さ3mmのCelpureP300MBS10mM中の10CelpureP300スラリーにより前コートされたWhatmanの濾紙を通して実行する。真空を508mbarで維持した。CelpureP30010を抽出物に添加し、1分間混合する。最終的に、抽出物-celpureスラリーを穏やかに添加して、抽出物を小分けにして濾過する濾過ケーキにわたって2cm以下の液相。可能性のある4つの吸収剤を選択し、それらの結合条件をバッチモードにおける静的結合条件下で最適化する。表9中の結果は、イオン交換体吸着剤の結合能力が以下の2つの因子によって影響を受けることを示す。i低イオン強度2.3mS/cm以下および従ってii吸着剤の単位質量あたりの植物抽出物の高体積20mlの抽出物に対して1gの吸着剤。追加の実験を静的結合条件下のバッチモードにおいて実行して、ビーズサイズ、およびプロセスにおける初期の負の吸着工程の組み入れを調べる。1つの実験において、負の吸収の第1の工程は、リガンドのポリエチレンイミンPEIを含む250μm未満の範囲中の寸法の粒子を使用して適用され、50μm未満のPEI粒子の上への正の吸収の第2の工程が続く。150μmの平均粒子径を備えたPEIを使用して、清澄化した抽出物から50を超える可溶性タンパク質不純物および色を除去できる、H5-VLPは小さな粒子サイズの吸収剤にのみ吸収されることが実証される。抽出物の希釈も1:10および1:20の間の比率に最適化され、このときH5の100が吸収されるが、比率1:40ではH5の70のみが結合される。しかしながら、PEIを良好な吸収剤として判断することができたが、H5-VLPの溶出は最適ではなかった。静的結合条件下のバッチモードにおける他の実験において、DEAEデキストランを1工程および2工程の方法における最適化のために使用する。約50μmの平均寸法を備えたDEAEイオン交換ビーズ上にH5-VLPの約87を吸収できることが示される。しかしながら、1工程の結合プロセスにおいてVLPの溶出は不良である。第2の実験において、PEIビーズによる第1の負の吸収工程が適用され、DEAEデキストランビーズを使用する第2の正の吸収工程が続き、VLPの17が溶出および回収される。次いで、さらなる実験を2工程プロセスを使用して実行する。1つの実験において、ホモジナイズされた植物材料緑色ジュースとも称されるを水中で5倍に希釈し、5.9mS/cmの伝導率にし、Celpure3000を使用して濾過する。PEIイオン交換樹脂を15mlの緑色ジュースに対して1gの吸着剤の比率で吸着剤として使用して、植物材料から色素および不純物を除去する。PEIイオン交換樹脂はpH7で150μmの平均粒子径を有する。第2の工程は、15cmのベッド高、3.8cm/分のフロー率および溶出バッファー50mMトリスおよび1MNaClpH9で、約50μmの平均粒子径を備えたDEAEイオン交換体を使用するフロー条件下の拡張ベッドモードにおいて、この様式で得られたタバコ材料をフローすることを含む。素通りおよび洗浄物を回収し、VLPを含む樹脂を、単一ピークとして溶出物を回収する前に1/10体積の1Mトリス/HClpH6.5を添加することによってpH7に中和する。溶出物は67で赤血球凝集素の収率を提供した出発材料中の100と比較して。他の実験において、ホモジナイズされた植物材料は濾過なしに使用され、同じ条件下で2工程のプロセスを用い、全赤血球凝集素の22は溶出物中に回収されるが、13は素通りおよび洗浄物画分中に検出される。上記の明細書中で言及された出版物はすべて、参照として本明細書に援用される。本発明の様々な修飾および変形は本発明の範囲および趣旨から逸脱せずに当業者に明らかであろう。本発明は好適な実施形態に関して記載されたが、請求の範囲に記載される本発明は、かかる特定の実施形態に過度に限定されるべきでないことを理解すべきである。実際、細胞生物学、分子的生物学および植物生物学または関連する分野における当業者に明らかな、本発明の実行のために記載されるモードの様々な修飾は、以下の請求項の範囲内であることが意図される。"