"個体が細菌性髄膜炎を有するか否かを同定する方法であって、前記個体においてHBPを測定し、それによって前記個体が細菌性髄膜炎を有するか否かを決定することを含む上記方法。前記HBPが前記個体から採取されたサンプルにおいて測定される、請求項1に記載の方法。前記サンプルが体液サンプル、好ましくは脳脊髄液CSFサンプルである、請求項2に記載の方法。前記個体が細菌性髄膜炎を有するか否かを決定することが、前記サンプル中のHBPの濃度が15ng/ml超、好ましくは25ng/ml超、より好ましくは35ng/ml超、最も好ましくは50ng/ml超であるか否かを決定することを含む、請求項2又は3に記載の方法。前記サンプル中のHBPのレベル又は濃度が、HBPのベースラインレベル又は濃度を基準として、少なくとも3倍又は4倍増加している、請求項2又は3に記載の方法。前記個体が髄膜炎を有することが疑われる、請求項1から5までのいずれか1項に記載の方法。前記個体が、最近、脳神経外科手術を受けた、請求項6に記載の方法。前記個体が、頭蓋骨外傷及び/又は頭蓋骨、頸部若しくは腰仙部領域に影響を与える解剖学的異常の病歴を有する、請求項6に記載の方法。前記個体が、免疫力が低下している;蝸牛インプラントを有する患者;頭蓋若しくは脳神経外科インプラントを有する患者、又はその任意の組み合わせである、請求項6から8までのいずれか1項に記載の方法。前記個体が、細菌性髄膜炎の治療をすでに受けている、請求項6から9までのいずれか1項に記載の方法。前記個体が哺乳類である、請求項1から10までのいずれか1項に記載の方法。前記哺乳類がヒトである、請求項11に記載の方法。個体が細菌性髄膜炎を有するか否かを決定することにおける使用のための、HBPの検出用の作用物質。HBP特異的抗体又はそのHBP結合断片を含む、請求項13に記載の作用物質。個体の細菌性髄膜炎を治療する方法であって、i請求項1から14までのいずれか1項に記載の方法を用いて、個体が細菌性髄膜炎を有するか否かを決定するステップと、iiiにおいてリスクを有すると同定された個体に、細菌性髄膜炎の治療に好適な作用物質の治療的有効量を投与するステップとを含む上記方法。前記細菌性髄膜炎の治療に好適な作用物質が抗生物質である、請求項15に記載の方法。個体が細菌性髄膜炎を有するか否かを決定する方法における使用のための試験キットであって、個体におけるHBPの検出用の作用物質を含む上記試験キット。方法試験対象母集団二つの異なるコホートからの計174人の患者由来のCSFサンプルを分析した。腰椎穿刺を受けた臨床的に髄膜炎が疑われる159人の成人患者を、2006年3月及び2009年11月にClinicforInfectiousDiseases,LundUniversityHospital,Swedenにおける前向き研究に登録した。疑われるウイルス性CNS感染症又は神経ボレリア症によるCSF髄液細胞増加を有するが、微生物学的診断が証明されていない14人の患者は除外したため、計145人の患者を含めた。さらに、ClinicforInfectiousDiseases,SahlgrenskaUniversityHospital,Gothenburg,Swedenにおいて1995年2004年のから間に集めた、細菌性髄膜炎を有する16人の患者及びHSV-1脳炎を有する13人の患者の別の既往コホートを含めた。これは、試験材料、特に前向きに集めた患者材料において不足したHSV-1脳炎患者の数を拡張させるため、及びより珍しい細菌性髄膜炎病原体の数を増加させるためにも行った。HBPの結果を知らない担当医師が、標準的な試験室試験及び微生物学的試験を用いて患者の精密検査及び最終診断を行った。患者を5つの群:1.急性細菌性髄膜炎、2.ウイルス性脳炎、3.ウイルス性髄膜炎、4.神経ボレリア症、5.正常なCSFWBC数を有する対照患者に分類した。細菌性膜炎の分類は、Durandらの基準NEnglJMed1993Jan7;3281:21~8ページに基づき、ここで、適合した臨床的特徴、髄液細胞増加及びaCSF培養陽性;bCSF培養陰性ただし、CSF抗原試験陽性、CSFのグラム染色における細菌の同定、16SrDNAPCR陽性、又は血液培養陽性のいずれかであるのうちの1つが細菌性髄膜炎の診断に必要であった。48時間未満の適切な抗生物質治療を受けた患者のみを含めた。ウイルス性CNS疾患の診断は、細菌性CNS感染症を除くウイルス性髄膜炎又は脳炎に適合する症状の急性発症、及びaCSF中のウイルスDNA又はRNAに関する陽性のPCR結果、或いはbダニ媒介脳炎TBEウイルスに関する特異的血清IgM抗体のいずれかに基づいた。神経ボレリア症の診断には、CSF中の特異的B.ブルグドルフェリB.burgdorferi抗体の検出と組み合わせたCSF髄液細胞増加が必要であった。Lund及びGothenburg大学の倫理委員会は試験を許可し、参加者のインフォームドコンセントを得てすべてのサンプルを採取した。HBP及び他のCSFマーカーの脳脊髄液中濃度の分析日常の患者管理の一部として、担当医師がCSFサンプルを集めた。HBP濃度は、常法を用いてELISAにより決定した。すなわち、コーティング緩衝液0.05MNaHCO3、pH9.6中1.1μg/mLのヒトHBPに対するマウスモノクローナル抗体2F23AでマイクロタイタープレートNUNCをコーティングした。プレートをPBST0.05Tweenを含むリン酸緩衝食塩水で洗浄し、PBST中2のウシ血清アルブミンSigmaでブロッキングした。次いで、サンプル緩衝液1MNaClで1/40に希釈した患者のCSFサンプルを二連でウエルに添加し、37°Cで60分間インキュベートした。各プレートは、既知濃度の組換えヒトHBP0~600ng/mLの較正サンプルも含んだ。洗浄後、プレートを、1/7000に希釈したヒトHBPに対するポリクローナルウサギ抗血清とともにインキュベートした。結合した抗体を、ペルオキシダーゼと結合した抗ウサギIgG抗体Bio-Rad1/3000とともにインキュベートすることによって検出した。プレートを発色させ、常法を用いて405nmにおける光学密度を決定した。各患者サンプル中のHBPのレベルを、二つ組の平均光学密度を計算し、これを標準曲線からの結果に相関させることによって決定した。アッセイの日日変動は、10未満の変動係数を有した。CSF中のWBC、グルコース、及びタンパク質の分析は、標準的手順であり、Lund及びSahlgrenskaUniversityHopitalにおける臨床化学試験室での日常的試験として実施した。CSFサンプル中の乳酸濃度は、Cobasc501Amazonasにおいて製造者の指示に従う試薬で分析した。統計解析二つの異なる群の間の比較をノンパラメトリックなマン-ホイットニーMann-WhitneyU検定によって行い、二つ超の群の間の比較においては、ノンパラメトリックなクラスカル-ウォリスKruskal-Wallis一元配置ANOVA分析を使用した。0.05未満の両側P値を統計学的に有意であるとみなした。患者群間の相関関係を計算するために、スピアマンのノンパラメトリックな相関係数を使用した。HBPに関する様々なカットオフレベルを図解するために、受信者操作特性ROC曲線及び曲線下面積AUCを作図した。AUC値は、95信頼区間95CIとともに報告する。計算のために、SPSS14.0ソフトウエアシステムSPSS及びGraph-PadPrism5.0Graph-Padsoftware、LaJolla、CAを使用した。結果患者特性41人の患者が細菌性髄膜炎を有すると分類され、19人はウイルス性脳炎、10人はウイルス性髄膜炎、7人は神経ボレリア症、及び97人は正常なCSFWBC数5×106/L未満を有し、CNS感染症を有さない対照群とみなされた。人口学的特性年齢及び性別は、感染症を有する上記4つの患者群間で類似した表1。対照群においては、平均年齢42才範囲18~85才で、男性/女性比は41/56であった。対照群における97人の患者のうち39人は、CNS感染症を伴わない発熱と頭痛を有し、後に様々な細菌性及びウイルス性感染症と診断された。細菌性髄膜炎群n=41においては、急性の地域感染型細菌性髄膜炎を有する37人の患者及び脳神経外科手術後の術後細菌性髄膜炎を有する4人の患者がいた。23人の患者56はCSF培養で陽性、13人は16SrDNAで陽性、1人はCSF抗原試験で陽性、及び4人の患者は血液培養で陽性であった。細菌性の病因は、肺炎連鎖球菌n=16、髄膜炎菌n=5、リステリアモノシトゲネスListeriamonocytogenesn=5、インフルエンザ菌HaemophilusInfluenzaen=2、大腸菌Esherichiacolin=2、A群連鎖球菌groupAstreptococcin=2、G群連鎖球菌groupGstreptococcin=2及びそれぞれ1人の黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureus、皮膚常在菌Staphylococcusepidermis、α連鎖球菌α-streptococci、大便連鎖球菌Enterococcusfaecalis、ゲメラ属Gemella種、肺炎桿菌Klebsiellapneumoniae、及び緑膿菌Pseudomonasaeruginosaであった。細菌性髄膜炎群の前向き部分では、28日間死亡率は16であった。ウイルス性CNS感染症の群においては、脳炎を有する19人の患者HSV-1n=15、TBEn=4、及び髄膜炎を有する10人の患者エンテロウイルスn=4、バリセラ-ゾスターウイルスVZVn=3、単純ヘルペスウイルス2型HSV-2n=2、及びサイトメガロウイルスCytomegalovirusCMVn=1がいた。HSV-1脳炎患者の中では、5人の患者が腰椎穿刺時にアシクロビルによる治療を受けず、腰椎穿刺前のアシクロビル治療の時間の中央値は、48時間範囲0~8日であった。CSF特性CSF中の総WBC、ポリ及びモノ数は、両群の間でかなりの重複があったにもかかわらず、ウイルス性CNS感染症及び神経ボレリア症群に比べて細菌性髄膜炎群において有意に高かったp<0.01図1B~D。また、ウイルス性CNS感染症群中の2人の患者が好中球優位を有した一方、細菌感染症を有する11人の患者27は単核球優位であり、17人の患者41は1000細胞未満の総CSFWBC数を有した図1B。CSFタンパク質及び乳酸レベルが、3つの他の群に比べて細菌性髄膜炎群において有意に高かったにもかかわらずp<0.01、CSFグルコースレベルは有意に低かったp=0.01図1E~G。CSF特性を比較した場合、ウイルス性髄膜炎又は脳炎と神経ボレリア症の群の間には有意差はなかったp>0.05図1B~F。HBPのCSFレベルウイルス性脳炎中央値5.0ng/mL、範囲3.0~41ng/mL、ウイルス性髄膜炎中央値4.2ng/mL、範囲3.1~40ng/mL、神経ボレリア症中央値3.6ng/mL、範囲3.2~10ng/mLを有する患者及びCSF中の髄液細胞増加を有さない対照群の患者中央値3.5ng/mL、範囲2.4~8.7ng/mLに比べて、細菌性髄膜炎患者中央値376ng/mL、範囲12~858ng/mLでは、HBPレベルが有意に高かったp<0.01図1A。細菌性髄膜炎を有する41人の患者のうちの37人90は、50ng/mL超のHBP濃度を有し、これは、3つの他の群において見出された最高のHBPレベルを上回った図1A。50ng/mL未満のCSFHBPレベルを有する4人の患者の中では、2つのケースにおいてL.モノシトゲネスL.monocytogenesに関してCSF培養が陽性であり、1人の患者においてインフルエンザ菌に関してCSF抗原試験が陽性であり、1人の患者においては、A群連鎖球菌に関して血液培養が陽性であった図2。41人の患者のうちの15人において、抗生物質の導入前にCSFサンプルを集めた。11人、8人及び7人の患者が、それぞれ、CSFサンプル収集の1~12、12~24及び24~48時間前に適切な抗生物質治療を受けた。サンプリングの24時間前まで抗生物質治療を受けた26人の患者のうち、24人は50ng/mL超のHBPレベルを有した。すべてが上昇したHBPレベルと結びついた、14の異なる細菌性病原体を見出した。6人の非生存者すべてが上昇したHBPレベルを有した385ng/mL超図2。ウイルス感染症の群において見出された最高のHBPレベルは、HSV-1脳炎を有する1人の患者41ng/mL及びHSV-2髄膜炎を有する他の患者40ng/mLにおいてであった図1A。HSV-1/2感染患者におけるアシクロビル処置の持続時間とHBP、乳酸、WBC、ポリ又はモノのレベルの間に相関関係はなかった。細菌性髄膜炎の検出のために、50ng/mLのカットオフレベルは90の感度と100の特異度を有した。受信者操作特性ROC曲線は、HBPに関して0.994の曲線下面積AUC値を示し、それを、この試験において細菌性髄膜炎と非細菌性髄膜炎又は神経ボレリア症の間の鑑別における最良のマーカーとしており、次いで、乳酸及び好中球ポリが続く図3。HBPと乳酸、WBC、ポリ、モノ、タンパク質及びICU滞在日数の間には有意な相関関係p<0.01があった。考察CNSの細菌性及びウイルス性感染症を有する患者の臨床的特徴には非常に類似しており、CSFにおける結果は決定的なものではないかも知れない。これは、CSF中の好中球由来HBPの存在を調査した最初の研究であり、私たちの知見は、HBPが細菌性及びウイルス性CNS感染症を有する患者の間の差別化における有用な診断マーカーであることを示す。伝統的に、CSF中の髄液細胞増殖は、細菌性及びウイルス性病因の鑑別における有用なツールと考えられており、低度の髄液細胞増殖又は相対的リンパ球増加は非細菌性の起源を示す。しかしながら、明白なCSF髄液細胞増殖のない細菌性髄膜炎の確認された症例が数報あったことを認識するのは重要である。RossらJNeurosurg1988Nov;695:669~74ページは、1000×106細胞/L超のCSF髄液細胞増殖は、術後の脳神経外科手術患者におけるCSF感染症の診断マーカーとしてわずかに61の感度と68の特異度しか有さなかったことを報告した。さらに、細菌性髄膜炎患者の94が好中球優位であったにもかかわらず、この基準は、わずかに28の特異度しか有さなかった。私たちの試験においては、細菌性髄膜炎患者の61とウイルス性CNS感染症を有するものの3が、1000×106細胞/L超のCSF髄液細胞増殖を有した。好中球優位は、細菌性髄膜炎患者とウイルス性CNS感染症患者のそれぞれ、73と7で見出された。細菌性髄膜炎の臨床的疑いを有する患者において、腰椎穿刺の前に抗生物質が導入されることは珍しくなく、微生物学的診断の機会を減らし、いくつかのケースでは抗生物質治療を長引かせる可能性がある。これは、本試験においても見られ、患者の64が腰椎穿刺の48時間前まで抗生物質を受容した。しかしながら、これらの26人の患者のうち24人はなお50ng/mL超のHBPレベルを有した。陽性のCSF培養は、細菌性髄膜炎の診断における究極の判断基準であり、培養陰性の場合に誤分類のリスクの可能性がある。CSF培養陽性の23人の患者のうち21人が上昇したHBPレベル50ng/mL超を有したことは、さらに、診断マーカーとしてのHBPの使用を支持する。興味深い発見は、B.ブルグドルフェリにより引き起こされた亜急性細菌性髄膜炎を有する患者が、CSF中のHBPレベルが低かったということである。神経ボレリア症患者はしばしば、比較的軽度な疾患を有し、入院することは稀である。細菌性髄膜炎群においては、最も一般的な細菌性病原体は、他の研究によれば、肺炎連鎖球菌、髄膜炎菌及びL.モノシトゲネスであった。しかしながら、この試験における患者の間では、14の異なる細菌種が発見されており、これらすべてのケースで顕著なHBP放出が誘発された。したがって、ほとんどの細菌種は、この特異的な好中球活性化が可能であると見られ、それは、重篤な敗血症を有する患者においても示されている。細菌性髄膜炎群の中の4人の患者は、緑膿菌、大腸菌、大便連鎖球菌及びS.エピデルミジスS.epidermidisにより引き起こされた脳神経外科手術後のCNS感染症を有し、すべての患者は上昇したHBPレベルを有した。術後髄膜炎/脳室炎の診断は、挑戦的な診断であることができ、したがって、HBPは脳神経外科設定において特別に有用なマーカーとなるであろう。4人の細菌性髄膜炎患者は、50ng/mL未満のHBPレベルを有した。1人は、血液培養において発見されたA群連鎖球菌によって引き起こされ、もう1人は、陽性の抗原試験によって診断されたインフルエンザ菌により引き起こされた。これらの患者はどちらもCSF培養陰性であった。これらのケースそれぞれにおいて、CSFの総WBC数は、300及び700×106/Lであり、乳酸レベルは2.7及び2.1mmol/Lであり、CSFサンプルは、適切な抗生物質治療の24から48時間後の間に集められた。50ng/mL未満のHBPレベルを有する他の2人の患者は、L.モノシトゲネスによる細菌性髄膜炎を有し、CSF培養陽性であり、サンプルは、抗生物質導入時点で集めた。CSF乳酸レベルは、2.8及び3.9mmol/L、並びにCSFWBCは、1000×106/L超であった。L.モノシトゲネスは、髄膜炎及び脳炎の両方をヒトにおいて引き起こす通性細胞内細菌であり、他の一般的な細菌性髄膜炎病原菌とは、その侵入メカニズム及びその後のライフサイクルにおいて異なる。計5人の患者がL.モノシトゲネス髄膜炎と診断された。彼らのうち、HBPレベルが緩やかにしか上昇しなかった2人の患者は、意識が正常でICU治療を必要としない、より良性の疾患も有した。ウイルス性CNS感染症群においては、2人の患者が他よりもかなり高いHBP濃度41ng/mL及び40ng/mLを有した。1人は、CSF中で、496×106/Lの総WBC及び6.6mmol/Lの顕著に上昇した乳酸レベルを伴うHSV-2髄膜炎を有した。他の患者は、緩やかに上昇したCSF-WBC84及び-乳酸2.3レベルを伴うHSV-1脳炎を有した。どちらもアシクロビル治療により合併症のない経過をたどった。HBPは、血管漏出と浮腫痙性を誘発し、脳浮腫は、細菌性髄膜炎における重篤で時には致死的な合併症である。先の研究と同様、この試験の前向き部分における死亡率は16であった。しかしながら、すべての非生存者が強力に上昇したHBPレベルを有した385ng/mL超。その後の血管漏出を伴うHBPの内皮細胞に対する効果を考慮すると、これは、細菌性髄膜炎での脳浮腫の発生におけるHBPの役割を示している。先の研究は、ヘパリン及びモノクローナルCD18抗体の両方による治療が、HBP放出に関与する好中球上のβ2-インテグリン受容体をブロックすることを示している。これらの治療は、白血球のローリング、接着及び活性化を阻害し、肺炎球菌髄膜炎のラット及びウサギモデルにおいて脳浮腫及び死亡率を低下させる。この効果は、HBPにより誘発された血管漏出の阻止に関連しうると仮定される。結論として、この試験は、急性の細菌性髄膜炎患者においてCSF中のHBPが上昇していることを示す。細菌性及びウイルス性CNS感染症の鑑別におけるより良好な診断正確度は、臨床医が適切な治療をより早期に開始することを可能とするであろう。"