"以下:a第1アミノ酸配列を含む第1ポリペプチドであって、ここで、該第1アミノ酸配列は、i配列番号1に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号1由来もしくは配列番号1に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第1ポリペプチド;b第2アミノ酸配列を含む第2ポリペプチドであって、ここで、該第2アミノ酸配列は、i配列番号2に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号2由来もしくは配列番号2に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第2ポリペプチド;c第3アミノ酸配列を含む第3ポリペプチドであって、ここで、該第3アミノ酸配列は、i配列番号3に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号3由来もしくは配列番号3に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第3ポリペプチド;d第4アミノ酸配列を含む第4ポリペプチドであって、ここで、該第4アミノ酸配列は、i配列番号4に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号4由来もしくは配列番号4に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第4ポリペプチド;e第5アミノ酸配列を含む第5ポリペプチドであって、ここで、該第5アミノ酸配列は、i配列番号5に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号5由来もしくは配列番号5に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第5ポリペプチド;f第6アミノ酸配列を含む第6ポリペプチドであって、ここで、該第6アミノ酸配列は、i配列番号6に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号6由来もしくは配列番号6に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第6ポリペプチド;ならびに/あるいはg第7アミノ酸配列を含む第7ポリペプチドであって、ここで、該第7アミノ酸配列は、i配列番号7に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号7由来もしくは配列番号7に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第7ポリペプチドのうちの少なくとも2つを含む、免疫原性組成物。以下:a第1アミノ酸配列を含む第1ポリペプチドであって、ここで、該第1アミノ酸配列は、i配列番号1に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号1由来もしくは配列番号1に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第1ポリペプチド;b第2アミノ酸配列を含む第2ポリペプチドであって、ここで、該第2アミノ酸配列は、i配列番号2に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号2由来もしくは配列番号2に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第2ポリペプチド;c第3アミノ酸配列を含む第3ポリペプチドであって、ここで、該第3アミノ酸配列は、i配列番号3に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号3由来もしくは配列番号3に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第3ポリペプチド;d第4アミノ酸配列を含む第4ポリペプチドであって、ここで、該第4アミノ酸配列は、i配列番号4に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号4由来もしくは配列番号4に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第4ポリペプチド;e第5アミノ酸配列を含む第5ポリペプチドであって、ここで、該第5アミノ酸配列は、i配列番号5に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号5由来もしくは配列番号5に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第5ポリペプチド;f第6アミノ酸配列を含む第6ポリペプチドであって、ここで、該第6アミノ酸配列は、i配列番号6に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号6由来もしくは配列番号6に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第6ポリペプチド;ならびに/あるいはg第7アミノ酸配列を含む第7ポリペプチドであって、ここで、該第7アミノ酸配列は、i配列番号7に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号7由来もしくは配列番号7に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第7ポリペプチドのうちの少なくとも2つを含む、ポリペプチド。アミノ酸配列:A-{-X-L}n-Bを含むポリペプチドであって、ここで:各Xは、請求項1に定義されたような、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド、第4ポリペプチド、第5ポリペプチド、第6ポリペプチドまたは第7ポリペプチドのアミノ酸配列であり、各Xは、異なるポリペプチドであり;Lは、任意のリンカーアミノ酸配列であり;Aは、任意のN末端アミノ酸配列であり;Bは、任意のC末端アミノ酸配列であり;nは、2またはそれ以上の整数である、ポリペプチド。前記第1ポリペプチドが、配列番号10D3、配列番号36D3サブフラグメント、配列番号51D3D4Hまたは配列番号53D2D3D4Hのアミノ酸配列を含む配列番号1のフラグメントからなる第1アミノ酸配列を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。前記第2ポリペプチドが、配列番号14D3、配列番号38D3サブフラグメント、配列番号55D3D4Hまたは配列番号57D2D3D4Hのアミノ酸配列を含む配列番号2のフラグメントからなる第2アミノ酸配列を含む、請求項1~4のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。前記第3ポリペプチドが、配列番号18D3、配列番号40D3サブフラグメント、配列番号59D3D4Hまたは配列番号61D2D3D4Hのアミノ酸配列を含む配列番号3のフラグメントからなる第3アミノ酸配列を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。前記第4ポリペプチドが、配列番号22D3、配列番号42D3サブフラグメント、配列番号63D3D4Hまたは配列番号65D2D3D4Hのアミノ酸配列を含む配列番号4のフラグメントからなる第4アミノ酸配列を含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。前記第5ポリペプチドが、配列番号26D3、配列番号44D3サブフラグメント、配列番号67D3D4Hまたは配列番号69D2D3D4Hのアミノ酸配列を含む配列番号5のフラグメントからなる第5アミノ酸配列を含む、請求項1~7のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。前記第6ポリペプチドが、配列番号30D3、配列番号46D3サブフラグメント、配列番号71D3D4Hまたは配列番号73D2D3D4Hのアミノ酸配列を含む配列番号6のフラグメントからなる第6アミノ酸配列を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。前記第7ポリペプチドが、配列番号34D3、配列番号48D3サブフラグメント、配列番号75D3D4Hまたは配列番号77D2D3D4Hのアミノ酸配列を含む配列番号7のフラグメントからなる第7アミノ酸配列を含む、請求項1~9のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。配列番号83、84、85、86および87からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項2または請求項3に記載のポリペプチド。治療において使用するための、請求項1~11のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。髄膜炎の処置または予防を含む、GBSによって引き起こされる疾患および/または感染の処置または予防において使用するための、請求項1~11のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチド。哺乳動物におけるGBSによって引き起こされる疾患および/または感染、好ましくは、髄膜炎の処置または予防の方法であって、有効量の請求項1~11のいずれか1項に記載の免疫原性組成物またはポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。以下:a第1アミノ酸配列を含む第1ポリペプチドであって、ここで、該第1アミノ酸配列は、i配列番号1に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号1由来もしくは配列番号1に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第1ポリペプチド;b第2アミノ酸配列を含む第2ポリペプチドであって、ここで、該第2アミノ酸配列は、i配列番号2に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号2由来もしくは配列番号2に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第2ポリペプチド;c第3アミノ酸配列を含む第3ポリペプチドであって、ここで、該第3アミノ酸配列は、i配列番号3に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号3由来もしくは配列番号3に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第3ポリペプチド;d第4アミノ酸配列を含む第4ポリペプチドであって、ここで、該第4アミノ酸配列は、i配列番号4に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号4由来もしくは配列番号4に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第4ポリペプチド;e第5アミノ酸配列を含む第5ポリペプチドであって、ここで、該第5アミノ酸配列は、i配列番号5に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号5由来もしくは配列番号5に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第5ポリペプチド;f第6アミノ酸配列を含む第6ポリペプチドであって、ここで、該第6アミノ酸配列は、i配列番号6に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号6由来もしくは配列番号6に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第6ポリペプチド;ならびに/あるいはg第7アミノ酸配列を含む第7ポリペプチドであって、ここで、該第7アミノ酸配列は、i配列番号7に対して少なくとも90の配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号7由来もしくは配列番号7に対して少なくとも90の配列同一性を有する配列由来の少なくとも7個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む、第7ポリペプチドのうちの少なくとも2つを発現する、細菌。GBSに対するタンパク質ベースおよび多糖ベースのワクチンの開発の研究が行われているが、現在、GBSワクチンは、市販されていない。ゆえに、S.agalactiae感染に対する有効なワクチンが必要とされている。そのようなワクチンの開発に使用され得るタンパク質および免疫原性組成物を提供することが、本発明の目的である。発明の開示グラム陽性細菌における線毛構造は、興味深いワクチン候補であると考えられる。GBSは、3つの線毛バリアントを有し、その各々は、異なる病原性アイランドであるPI-1、PI-2aおよびPI-2bによってコードされる[1,2]。各病原性アイランドは、線毛の集合に関わる、線毛骨格タンパク質BP;2つの補助タンパク質AP1およびAP2;および2つのソルターゼタンパク質をコードする5つの遺伝子からなる。すべてのGBS株が、これらの3つの病原性アイランドのうちの少なくとも1つを保有し、これらの病原性アイランドによってコードされる線毛構造タンパク質BP、AP1およびAP2の配列は、一般によく保存されている。しかしながら、本明細書中でGBS59と称される、病原性アイランド2aBP-2aによってコードされる骨格タンパク質の配列は、GBS株間で異なる。そのGBS59線毛サブユニットは、少なくとも7つのクレードを有し、これらのクレード間の配列同一性は、48もの低さである。その7つのGBS59クレードに対する参照アミノ酸配列は、本明細書中において配列番号1GBS株2603由来、配列番号2GBS株515由来、配列番号3GBS株CJB111由来、配列番号4GBS株H36B由来、配列番号5GBS株CJB110由来、配列番号6GBS株DK21由来および配列番号7GBS株NEM316由来である。所与のGBS59クレードに対して産生された血清は、そのクレードを発現するGBSの他の株に対して活性であるが、他の5つのクレードのうちの1つを発現する株に対しては活性ではなく、すなわち、クレード内の交差防御が存在するが、クレード間の交差防御は存在しない。それゆえ、本発明によると、GBS59の少なくとも2つの異なるクレードを含む免疫原性組成物が提供される。GBS59の異なるクレードは、別個のポリペプチドとして免疫原性組成物中に存在してもよいし、単一のポリペプチド鎖として融合されてもよい。ワクチンの構成要素として複数のGBS59クレードを含めることにより、GBSに対する免疫原性組成物の適用できる株の範囲straincoverageが改善される。さらに、本発明者らは、免疫原性応答の誘導に関与するエピトープを含む、GBS59クレード内のドメインを同定した。それゆえ、その免疫原性組成物は、完全長GBS59タンパク質の代わりに、これらのドメインまたはこれらのドメインのサブフラグメントのうちの1つ以上を含むGBS59の少なくとも2つの異なるクレードのフラグメントを含み得る。あるいは、GBS59の少なくとも2つの異なるクレードのこれらのフラグメントは、単一のポリペプチド鎖として融合され得る。完全長タンパク質の代わりにGBS59クレードのフラグメントを使用することによって、GBSに対して適用できる株の範囲が改善されたワクチンの調製が促進される。したがって、本発明は、以下:a第1アミノ酸配列を含む第1ポリペプチドその第1アミノ酸配列は、i配列番号1に対して少なくともaの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号1由来もしくは配列番号1に対して少なくともaの配列同一性を有する配列由来の少なくともt個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;b第2アミノ酸配列を含む第2ポリペプチドその第2アミノ酸配列は、i配列番号2に対して少なくともbの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号2由来もしくは配列番号1に対して少なくともbの配列同一性を有する配列由来の少なくともu個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;c第3アミノ酸配列を含む第3ポリペプチドその第3アミノ酸配列は、i配列番号3に対して少なくともcの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号3由来もしくは配列番号3に対して少なくともcの配列同一性を有する配列由来の少なくともv個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;d第4アミノ酸配列を含む第4ポリペプチドその第4アミノ酸配列は、i配列番号4に対して少なくともdの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号4由来もしくは配列番号4に対して少なくともdの配列同一性を有する配列由来の少なくともw個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;e第5アミノ酸配列を含む第5ポリペプチドその第5アミノ酸配列は、i配列番号5に対して少なくともeの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号5由来もしくは配列番号5に対して少なくともeの配列同一性を有する配列由来の少なくともx個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;ならびに/あるいはf第6アミノ酸配列を含む第6ポリペプチドその第6アミノ酸配列は、i配列番号6に対して少なくともfの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号6由来もしくは配列番号6に対して少なくともfの配列同一性を有する配列由来の少なくともy個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;ならびに/あるいはg第7アミノ酸配列を含む第7ポリペプチドその第7アミノ酸配列は、i配列番号7に対して少なくともgの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号7由来もしくは配列番号7に対して少なくともgの配列同一性を有する配列由来の少なくともz個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含むのうちの少なくとも2つを含む免疫原性組成物を提供する。上記免疫原性組成物は、上記7つのアミノ酸配列のうちの2、3、4、5、6つまたは7つすべてを含み得る。本発明はまた、以下:a第1アミノ酸配列を含む第1ポリペプチドその第1アミノ酸配列は、i配列番号1に対して少なくともaの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号1由来もしくは配列番号1に対して少なくともaの配列同一性を有する配列由来の少なくともt個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;b第2アミノ酸配列を含む第2ポリペプチドその第2アミノ酸配列は、i配列番号2に対して少なくともbの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号2由来もしくは配列番号1に対して少なくともbの配列同一性を有する配列由来の少なくともu個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;c第3アミノ酸配列を含む第3ポリペプチドその第3アミノ酸配列は、i配列番号3に対して少なくともcの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号3由来もしくは配列番号3に対して少なくともcの配列同一性を有する配列由来の少なくともv個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;d第4アミノ酸配列を含む第4ポリペプチドその第4アミノ酸配列は、i配列番号4に対して少なくともdの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号4由来もしくは配列番号4に対して少なくともdの配列同一性を有する配列由来の少なくともw個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;e第5アミノ酸配列を含む第5ポリペプチドその第5アミノ酸配列は、i配列番号5に対して少なくともeの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号5由来もしくは配列番号5に対して少なくともeの配列同一性を有する配列由来の少なくともx個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;ならびに/あるいはf第6アミノ酸配列を含む第6ポリペプチドその第6アミノ酸配列は、i配列番号6に対して少なくともfの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号6由来もしくは配列番号6に対して少なくともfの配列同一性を有する配列由来の少なくともy個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;ならびに/あるいはg第7アミノ酸配列を含む第7ポリペプチドその第7アミノ酸配列は、i配列番号7に対して少なくともgの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号7由来もしくは配列番号7に対して少なくともgの配列同一性を有する配列由来の少なくともz個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含むのうちの少なくとも2つを含むポリペプチドも提供する。上記ポリペプチドは、上記7つのアミノ酸配列のうちの2、3、4、5、6つまたは7つすべてを含み得る。本発明はまた、アミノ酸配列:-A-{-X-L-}n-B-を含むポリペプチドも提供し、ここで:Xは、上で定義されたような、第1ポリペプチド、第2ポリペプチド、第3ポリペプチド、第4ポリペプチド、第5ポリペプチド、第6ポリペプチドまたは第7ポリペプチドのアミノ酸配列であり;Lは、任意のリンカーアミノ酸配列であり;Aは、任意のN末端アミノ酸配列であり;Bは、任意のC末端アミノ酸配列であり;nは、2またはそれ以上の整数である。代表的には、nは、2、3、4、5、6または7である。上記ポリペプチド内のX部分は、下記で論じられるように、異なる。nが2である場合、X部分は、以下から選択される。nが3である場合、X部分は、以下から選択される。nが4である場合、X部分は、以下から選択される。nが5である場合、X部分は、以下から選択される。nが6である場合、X部分は、以下から選択される。nが7である場合、第1、第2、第3、第4、第5、第6および第7ポリペプチドのうちの任意の組み合わせが、nが2、3、4、5または6であるときに上で論じられたように、任意の順序で含められ得る。本発明はまた、以下:a第1アミノ酸配列を含む第1ポリペプチドその第1アミノ酸配列は、i配列番号1に対して少なくともaの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号1由来もしくは配列番号1に対して少なくともaの配列同一性を有する配列由来の少なくともt個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;b第2アミノ酸配列を含む第2ポリペプチドその第2アミノ酸配列は、i配列番号2に対して少なくともbの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号2由来もしくは配列番号1に対して少なくともbの配列同一性を有する配列由来の少なくともu個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;c第3アミノ酸配列を含む第3ポリペプチドその第3アミノ酸配列は、i配列番号3に対して少なくともcの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号3由来もしくは配列番号3に対して少なくともcの配列同一性を有する配列由来の少なくともv個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;d第4アミノ酸配列を含む第4ポリペプチドその第4アミノ酸配列は、i配列番号4に対して少なくともdの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号4由来もしくは配列番号4に対して少なくともdの配列同一性を有する配列由来の少なくともw個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;e第5アミノ酸配列を含む第5ポリペプチドその第5アミノ酸配列は、i配列番号5に対して少なくともeの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号5由来もしくは配列番号5に対して少なくともeの配列同一性を有する配列由来の少なくともx個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;ならびに/あるいはf第6アミノ酸配列を含む第6ポリペプチドその第6アミノ酸配列は、i配列番号6に対して少なくともfの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号6由来もしくは配列番号6に対して少なくともfの配列同一性を有する配列由来の少なくともy個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含む;ならびに/あるいはg第6アミノ酸配列を含む第7ポリペプチドその第6アミノ酸配列は、i配列番号7に対して少なくともgの配列同一性を有し、かつ/またはii配列番号6由来もしくは配列番号7に対して少なくともgの配列同一性を有する配列由来の少なくともz個連続したアミノ酸のフラグメントからなる、アミノ酸配列を含むのうちの少なくとも2つを発現する細胞代表的には、細菌も提供する。上記細胞は、上記7つのアミノ酸配列のうちの2、3、4、5、6つまたは7つすべてを発現し得る。第1、第2、第3、第4、第5、第6および第7アミノ酸配列aの値は、少なくとも75、例えば、80、85、90、92、94、95、96、97、98、99またはそれ以上である。bの値は、少なくとも75、例えば、80、85、90、92、94、95、96、97、98、99またはそれ以上である。cの値は、少なくとも75、例えば、80、85、90、92、94、95、96、97、98、99またはそれ以上である。dの値は、少なくとも75、例えば、80、85、90、92、94、95、96、97、98、99またはそれ以上である。eの値は、少なくとも75、例えば、80、85、90、92、94、95、96、97、98、99またはそれ以上である。fの値は、少なくとも75、例えば、80、85、90、92、94、95、96、97、98、99またはそれ以上である。gの値は、少なくとも75、例えば、80、85、90、92、94、95、96、97、98、99またはそれ以上である。a、b、c、d、e、fおよびgの値は、同じであってもよいし、異なっていてもよい。いくつかの実施形態において、a、b、c、d、eおよびfは、同一である。代表的には、a、b、c、d、e、fおよびgは、少なくとも90、例えば、少なくとも95である。tの値は、少なくとも7、例えば、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250である。uの値は、少なくとも7、例えば、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250である。vの値は、少なくとも7、例えば、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250である。wの値は、少なくとも7、例えば、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250である。xの値は、少なくとも7、例えば、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250である。yの値は、少なくとも7、例えば、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250である。zの値は、少なくとも7、例えば、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250である。t、u、v、w、x、yおよびzの値は、同じであってもよいし、異なっていてもよい。いくつかの実施形態において、t、u、v、w、x、yおよびzは、同一である。フラグメントは、好ましくは、それぞれの配列番号の配列由来のエピトープを含む。他の有用なフラグメントは、その少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、それぞれの配列番号のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。N末端における20~25アミノ酸の切断、例えば、リーダーペプチドを構成する、配列番号1~7のうちのいずれかのアミノ酸1~29の除去、および/またはLPXTGアンカーを構成する、配列番号1~7のうちのいずれかのC末端の35アミノ酸の除去が、好都合である。GBS59タンパク質は、そのリーダーペプチドの終わりとそのLPXTGアンカーの開始との間において、4つのドメインD1~D4に分けることができる。これらの4つのドメインは、配列番号1~7において以下のとおりであり、これらの残基に対応するさらなるGBS59配列における位置は、アラインメントによって容易に同定され得る。防御研究に基づいて、GBS59の有用なフラグメントは、少なくともドメインD3由来のエピトープを保持し得る。それゆえ、本発明の免疫原性組成物およびポリペプチドにおいて使用される第1、第2、第3、第4、第5、第6または第7アミノ酸配列は、上で同定されたようなドメインD3を含む配列番号1、2、3、4、5、6または7のフラグメントからなり得る。GBS59のフラグメントは、ドメインD3由来のエピトープに加えて、ドメインD4、D2および/またはD1を保持し得る。それゆえ、本発明の免疫原性組成物およびポリペプチドにおいて使用される第1、第2、第3、第4、第5、第6または第7アミノ酸配列は、上で同定されたような、iドメインD2およびD3;iiドメインD3およびD4;iiiドメインD1、D2およびD3;またはivドメインD2、D3およびD4を含む、配列番号1、2、3、4、5、6または7のフラグメントからなり得る。免疫原性のために必要とされるエピトープを保持するこれらのドメインのサブフラグメントは、完全なドメインの代わりに使用され得る。ゆえに、本発明の免疫原性組成物およびポリペプチドにおいて使用される第1、第2、第3、第4、第5、第6または第7アミノ酸配列は、免疫原性のために必要とされるエピトープを保持するドメインD3ならびに必要に応じて、ドメインD1、D3および/またはD4のサブフラグメントを含む配列番号1、2、3、4、5、6または7のフラグメントからなり得る。本発明の免疫原性組成物およびポリペプチドにおいて使用される第1、第2、第3、第4、第5、第6または第7アミノ酸配列に存在し得るドメインD3およびD4のサブフラグメントの例は、下記で同定される。下記で同定されるドメインD3のサブフラグメント配列番号36、38、40、42、44、46および48は、表面に露出されるフラグメントである。これらの表面に露出されるフラグメント内のより小さいエピトープは、当業者によって容易に同定され得、本発明の組成物において使用され得る。例えば、2つのモノクローナル抗体17C4/A3および4H11/B7、配列番号262~269は、515クレード由来のD3サブフラグメント配列番号38、配列番号2のフラグメント内のアミノ酸411~436配列番号270を含むエピトープに結合すると見出されている。下記で同定されるドメインD4のサブフラグメントは、ドメインD4のN末端に存在し、かつD4ドメインの残りの部分には存在しない、2つのヘリックス本明細書中でD4Hと称されるを含む。これらのヘリックスは、表面に露出されると予測される。配列番号1の好適なフラグメントは、配列番号50~53である。配列番号2の好適なフラグメントは、配列番号54~57である。配列番号3の好適なフラグメントは、配列番号58~61である。配列番号4の好適なフラグメントは、配列番号62~65である。配列番号5の好適なフラグメントは、配列番号66~69である。配列番号6の好適なフラグメントは、配列番号70~73である。配列番号7の好適なフラグメントは、配列番号74~77である。これらのフラグメントは、下に示されるようなドメインD2、D3およびD4またはD4Hの組み合わせを含む。場合によっては、さらに小さいフラグメントが使用され得る。例えば、本発明の第3アミノ酸配列は、配列番号78配列番号3のアミノ酸411~436を含む配列番号3のフラグメントからなり得る。フラグメントが使用される場合、配列番号1由来の少なくともt個連続したアミノ酸のフラグメントは、配列番号2内にも、配列番号3内にも、配列番号4内にも、配列番号5内にも、配列番号6内にも、配列番号7内にも、存在するべきではない。同様に、配列番号2由来の少なくともu個連続したアミノ酸のフラグメントは、配列番号1内にも、配列番号3内にも、配列番号4内にも、配列番号5内にも、配列番号6内にも、配列番号7内にも、存在するべきではない。同様に、配列番号3由来の少なくともv個連続したアミノ酸のフラグメントは、配列番号1内にも、配列番号2内にも、配列番号4内にも、配列番号5内にも、配列番号6内にも、配列番号7内にも、存在するべきではない。同様に、配列番号4由来の少なくともw個連続したアミノ酸のフラグメントは、配列番号1内にも、配列番号2内にも、配列番号3内にも、配列番号5内にも、配列番号6内にも、配列番号7内にも、存在するべきではない。同様に、配列番号5由来の少なくともx個連続したアミノ酸のフラグメントは、配列番号1内にも、配列番号2内にも、配列番号3内にも、配列番号4内にも、配列番号6内にも、配列番号7内にも、存在するべきではない。同様に、配列番号6由来の少なくともy個連続したアミノ酸のフラグメントは、配列番号1内にも、配列番号2内にも、配列番号3内にも、配列番号4内にも、配列番号5内にも、配列番号7内にも、存在するべきではない。同様に、配列番号7由来の少なくともz個連続したアミノ酸のフラグメントは、配列番号1内にも、配列番号2内にも、配列番号3内にも、配列番号4内にも、配列番号5内にも、配列番号6内にも、存在するべきではない。いくつかの実施形態において、配列番号1~7のうちの1つに由来するフラグメントが、連続した配列として他の6つの配列番号に対してアラインメントされるとき、そのフラグメントと他の6つの配列番号の各々との同一性は、75未満、例えば、60未満、50未満、40未満、30未満である。第1アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与されると、アミノ酸配列配列番号1を有する野生型GBSタンパク質株2603に結合する抗体を含む抗体応答を誘発する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、アミノ酸配列配列番号2を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号3を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号4を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号5を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号6を有する野生型GBSタンパク質またはアミノ酸配列配列番号7を有する野生型GBSタンパク質に結合しない。第2アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与されると、アミノ酸配列配列番号2を有する野生型GBSタンパク質株515に結合する抗体を含む抗体応答を誘発する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、アミノ酸配列配列番号1を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号3を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号4を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号5を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号6を有する野生型GBSタンパク質またはアミノ酸配列配列番号7を有する野生型GBSタンパク質に結合しない。第3アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与されると、アミノ酸配列配列番号3を有する野生型GBSタンパク質株cjb111に結合する抗体を含む抗体応答を誘発する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、アミノ酸配列配列番号1を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号2を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号4を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号5を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号6を有する野生型GBSタンパク質またはアミノ酸配列配列番号7を有する野生型GBSタンパク質に結合しない。第4アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与されると、アミノ酸配列配列番号4を有する野生型GBSタンパク質株h36bに結合する抗体を含む抗体応答を誘発する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、アミノ酸配列配列番号1を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号2を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号3を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号5を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号6を有する野生型GBSタンパク質またはアミノ酸配列配列番号7を有する野生型GBSタンパク質に結合しない。第5アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与されると、アミノ酸配列配列番号5を有する野生型GBSタンパク質株CJB110に結合する抗体を含む抗体応答を誘発する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、アミノ酸配列配列番号1を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号2を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号3を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号4を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号6を有する野生型GBSタンパク質またはアミノ酸配列配列番号7を有する野生型GBSタンパク質に結合しない。第6アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与されると、アミノ酸配列配列番号6を有する野生型GBSタンパク質株DK21に結合する抗体を含む抗体応答を誘発する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、アミノ酸配列配列番号1を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号2を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号3を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号4を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号5を有する野生型GBSタンパク質またはアミノ酸配列配列番号7を有する野生型GBSタンパク質に結合しない。第7アミノ酸配列を含むポリペプチドは、被験体に投与されると、アミノ酸配列配列番号7を有する野生型GBSタンパク質株NEM316に結合する抗体を含む抗体応答を誘発する。いくつかの実施形態において、これらの抗体は、アミノ酸配列配列番号1を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号2を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号3を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号4を有する野生型GBSタンパク質、アミノ酸配列配列番号5を有する野生型GBSタンパク質またはアミノ酸配列配列番号6を有する野生型GBSタンパク質に結合しない。第1、第2、第3、第4、第5、第6および第7アミノ酸配列は、いくつかの配列を共通して共有し得るが、全体的には、それらは、異なるアミノ酸配列を有する。配列番号1、2、3、4、5、6もしくは7、またはそれらのフラグメントと比較して、本発明とともに使用されるアミノ酸配列は、1つ以上の例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個などの保存的アミノ酸置換、すなわち、1つのアミノ酸から、関連する側鎖を有する別のアミノ酸への置換を含み得る。遺伝的にコードされるアミノ酸は、一般に、4つのファミリー:1酸性、すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸;2塩基性、すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン;3非極性、すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン;および4無電荷極性、すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンに分けられる。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、時折、芳香族アミノ酸として一緒に分類される。一般に、これらのファミリー内での単一アミノ酸の置換は、生物学的活性に対して重大な作用を有しない。上記ポリペプチドは、参照配列に対して1つ以上の例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個などの単一アミノ酸欠失を有し得る。上記ポリペプチドは、参照配列に対して1つ以上の例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個などの挿入例えば、1、2、3、4または5個のアミノ酸の各々も含み得る。特に、本発明のアミノ酸配列は、下記の表において同定される、GBS59内のイソペプチド結合の形成に関わる置換アミノ酸残基を含み得る。実施例に提示されるデータは、イソペプチド結合の形成を破壊するこれらの残基の変異が、上記ポリペプチドの免疫原性に悪影響を及ぼさないことを示す。したがって、そのポリペプチドは、上記の表に列挙された1つ以上のリジン残基またはアスパラギン残基において置換を含み得る。いくつかの実施形態において、そのリジン残基は、アラニン残基で置換され得る。本発明とともに使用されるポリペプチドは、a配列番号1、2、3、4、5、6もしくは7と同一すなわち、100同一であるか、または配列番号1、2、3、4、5、6もしくは7と同一であるアミノ酸配列;b配列番号1、2、3、4、5、6もしくは7と配列同一性を共有するか、または配列番号1、2、3、4、5、6もしくは7のフラグメントと同一性を共有するアミノ酸配列;caまたはbの配列と比べて、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個またはそれ以上の単一のアミノ酸の変更欠失、挿入、置換別個の位置に存在してもよいし、連続していてもよいを有するアミノ酸配列;およびdペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号1、2、3、4、5、6または7をアラインメントするとき、N末端からC末端までのx個のアミノ酸の各移動ウインドウしたがって、p個のアミノ酸まで伸長するアラインメントについては、p>xの場合、p-x1個のそのようなウインドウが存在するが、少なくともxy個の同一のアラインメントされたアミノ酸を有するここで:xは、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200から選択され;yは、0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99から選択され;そしてxyが、整数でない場合、最も近い整数に切り上げられる、アミノ酸配列を含み得る。好ましいペアワイズアラインメントアルゴリズムは、デフォルトのパラメータを用いる例えば、EBLOSUM62スコアマトリックスを用いるときのギャップオープニングペナルティGapopeningpenalty=10.0およびギャップ伸長ペナルティ=0.5を用いる、Needleman-Wunschグローバルアラインメントアルゴリズム[3]である。このアルゴリズムは、EMBOSSパッケージ[4]のneedleツールに都合よく実装されている。グループcのうち、欠失または置換は、N末端および/もしくはC末端に存在し得るか、またはその2つの末端の間に存在し得る。したがって、切断は、欠失の例である。切断は、N末端および/またはC末端における最大40個またはそれ以上のアミノ酸の欠失を含み得る。ハイブリッドポリペプチド本発明において使用される種々のGBS59クレードは、別個のポリペプチドとして存在する必要はなく、その代わりに、単一のポリペプチド鎖ハイブリッドポリペプチドまたはキメラとして発現され得る。ハイブリッドポリペプチドは、2つの主要な利点を提供する:第1に、そのままでは不安定であるかまたは不十分にしか発現されない可能性があるポリペプチドが、その問題を克服する好適なハイブリッドパートナーを付加することによって補助され得る;第2に、両方が抗原的に有用である2つのポリペプチドを生成するために、ただ1つの発現および精製だけを用いることで済むように、商業的な製造が単純化される。ハイブリッドポリペプチドは、GBS59抗原だけに由来する配列を含み得るが、他の実施形態では、他の線毛サブユニットなどの非GBS59抗原通常、GBS由来の非GBS59抗原を含み得る。非GBS59抗原が存在する場合、これらは、任意の2、3、4、5、6もしくは7個のGBS59配列のN末端、任意の2、3、4、5、6もしくは7個のGBS59配列のC末端に存在し得るか、または2、3、4、5、6もしくは7個のGBS59配列を含むハイブリッドポリペプチド内の2つのGBS59配列間に存在し得る。種々のハイブリッドポリペプチドが、単一の処方物において一緒に混合され得る。ハイブリッドは、非ハイブリッドGBS59抗原または他の非GBS59抗原と組み合わされ得る。ハイブリッドポリペプチドは、式NH2-A-{-X-L-}n-B-COOHによって表され得る。-X-部分が、その野生型においてリーダーペプチド配列を有する場合、これは、そのハイブリッドタンパク質に含められてもよいし、省略されてもよい。いくつかの実施形態において、ハイブリッドタンパク質のN末端に位置する-X-部分のリーダーペプチド以外のリーダーペプチドは、削除されるすなわち、X1のリーダーペプチドは保持され得るが、X2Xnのリーダーペプチドは省略される。これは、すべてのリーダーペプチドを削除し、かつX1のリーダーペプチドを部分-A-として使用することと等しい。{-X-L-}のn個の場合の各々について、リンカーアミノ酸配列-L-は、存在してもよいし、存在しなくてもよい。例えば、n=2のとき、そのハイブリッドは、NH2-X1-L1-X2-L2-COOH、NH2-X1-X2-COOH、NH2-X1-L1-X2-COOH、NH2-X1-X2-L2-COOHなどであり得る。リンカーアミノ酸配列-L-は、代表的には、短い例えば、20個またはそれ以下のアミノ酸、すなわち、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1。例としては、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカーすなわち、Glynを含むここで、n=2、3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上およびヒスチジンタグすなわち、Hisnここで、n=3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上、例えば、配列番号79が挙げられる。他の好適なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかだろう。有用なリンカーは、GSGS配列番号80、GSGGGG配列番号81またはGSGSGGGG配列番号82であり、そのGly-Serジペプチドは、BamHI制限酵素認識部位から形成されるので、クローニングおよび操作を助け、Gly4テトラペプチドは、代表的なポリ-グリシンリンカーである。他の好適なリンカー、特に、最後のLnとして使用するのに適したリンカーは、Leu-GluジペプチドまたはGly-Serである。リンカーは、通常、少なくとも1つのグリシン残基を含むことにより構造的柔軟性が促され、例えば、-L-部分は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個またはそれ以上のグリシン残基を含み得る。そのようなグリシンは、Gly-Glyジペプチド配列またはそれより長いオリゴGly配列、すなわち、Glynここで、n=2、3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上において少なくとも2つの連続したグリシンを含むように配置され得る。-A-は、任意のN末端アミノ酸配列である。これは、代表的には短い例えば、40個またはそれ以下のアミノ酸、すなわち、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1。例としては、タンパク質輸送を指示するリーダー配列、またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Hisnここで、n=3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上が挙げられる。他の好適なN末端アミノ酸配列は、当業者に明らかだろう。X1が、それ自身のN末端メチオニンを欠く場合、-A-は、好ましくは、N末端メチオニンを提供するオリゴペプチド例えば、1、2、3、4、5、6、7または8個のアミノ酸を有する、例えば、Met-Ala-Serまたは単一のMet残基である。新生ポリペプチドにおいて、-A-部分は、そのポリペプチドのN末端メチオニン細菌ではホルミル-メチオニン,fMetを提供し得る。しかしながら、1つ以上のアミノ酸が、新生-A-部分のN末端から切断され得、したがって、本発明の成熟ポリペプチドにおける-A-部分は、必ずしもN末端メチオニンを含まない。-B-は、任意のC末端アミノ酸配列である。これは、代表的には短い例えば、40個またはそれ以下のアミノ酸、すなわち、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1。例としては、タンパク質輸送を指示する配列、クローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列例えば、ヒスチジンタグ、すなわち、Hisnここで、n=3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上、例えば、配列番号79を含むまたはタンパク質の安定性を高める配列が挙げられる。他の好適なC末端アミノ酸配列は、当業者に明らかだろう例えば、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ、チオレドキシン、S.aureusプロテインAの14kDaフラグメント、ビオチン化されたペプチド、マルトース結合タンパク質、エンテロキナーゼflagなど。-A-、-B-および-L-配列は、ヒトポリペプチド配列と共通の10個またはそれ以上の連続したアミノ酸を共有する配列を、含まないことが好ましい。いくつかの実施形態において、-L-部分は、非GBS59抗原を含む。いくつかの実施形態では、-A-部分が、非GBS59抗原を含み、いくつかでは、-B-部分が、非GBS59抗原を含む。本発明はまた、本発明のハイブリッドポリペプチドをコードする核酸も提供する。様々なXおよびL部分のうち、有用な組み合わせとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。数字は、配列番号を示す。したがって、本発明のハイブリッドの例としては、配列番号83;配列番号84;配列番号85;配列番号86;または配列番号87からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。本発明は、配列番号83、84、85、86または87のうちのいずれか1つに対して少なくともiの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。iの値は、50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99またはそれ以上から選択され得る。いくつかの実施形態において、配列番号83;配列番号84;配列番号85;配列番号86;もしくは配列番号87からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、または配列番号83;配列番号84;配列番号85;配列番号86;もしくは配列番号87のうちのいずれか1つに対して少なくともiの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドは、単一のN末端メチオニン残基を含み得るすなわち、A=Met。ポリペプチド本発明とともに使用されるポリペプチドは、多くの方法において、例えば、化学合成全体としてまたは部分的に、プロテアーゼを用いた長いポリペプチドの消化、RNAからの翻訳、細胞培養物からの精製例えば、組換え発現、生物自体から例えば、細菌培養後または患者から直接などによって、調製され得る。<40アミノ酸長のペプチドを生成するための好ましい方法は、インビトロ化学合成[5,6]を含む。固相ペプチド合成が特に好ましい例えば、tBocまたはFmoc[7]化学に基づく方法。酵素的合成[8]もまた、部分的にまたは全体として使用され得る。化学合成に対する代替として、生物学的合成も使用され得、例えば、ポリペプチドは、翻訳によって生成され得る。これは、インビトロまたはインビボにおいて行われ得る。生物学的方法は、一般に、L-アミノ酸に基づくポリペプチドの生成に限定されるが、翻訳機構の操作を用いることにより例えば、アミノアシルtRNA分子、D-アミノ酸または他の非天然アミノ酸例えば、ヨードチロシンまたはメチルフェニルアラニン、アジドホモアラニンなどの導入が可能であり得る[9]。しかしながらD-アミノ酸が含められる場合、化学合成を使用することが好ましい。ポリペプチドは、C末端および/またはN末端に共有結合性の修飾を有し得る。ポリペプチドは、様々な形態をとり得る例えば、天然のもの、融合物、グリコシル化されたもの、グリコシル化されていないもの、脂質化されたもの、脂質化されていないもの、リン酸化されたもの、リン酸化されていないもの、ミリストイル化されたもの、ミリストイル化されていないもの、単量体、多量体、粒状、変性されたものなど。ポリペプチドは、好ましくは、精製された形態または実質的に精製された形態で提供され、すなわち、他のポリペプチドを実質的に含まず例えば、天然に存在するポリペプチドを含まず、特に、他の肺炎球菌または宿主細胞のポリペプチドを実質的に含まず、一般に、少なくとも約50重量純粋であり、通常、少なくとも約90純粋であるすなわち、組成物の約50未満、より好ましくは、約10未満例えば、5またはそれ以下が、他の発現ポリペプチドから構成されている。ポリペプチドは、固体支持体に付着され得る。ポリペプチドは、検出可能な標識例えば、放射性標識もしくは蛍光標識、またはビオチン標識を含み得る。用語ポリペプチドとは、任意の長さのアミノ酸ポリマーのことを指す。そのポリマーは、直鎖状であってもよいし、分枝状であってもよく、改変されたアミノ酸を含み得、非アミノ酸によって分断され得る。この用語は、天然で改変されたアミノ酸ポリマー、あるいは介入;例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または他の任意の操作もしくは改変例えば、標識する構成要素との結合体化によって改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。例えば、アミノ酸の1つ以上のアナログ例えば、非天然アミノ酸などを含むならびに当該分野で公知の他の改変を含むポリペプチドもまたこの定義の中に含まれる。ポリペプチドは、一本鎖または会合された鎖として生じ得る。ポリペプチドは、天然でまたは非天然でグリコシル化され得るすなわち、ポリペプチドは、対応する天然に存在するポリペプチドに見られるグリコシル化パターンとは異なるグリコシル化パターンを有する。本発明は、本発明のポリペプチドを生成するためのプロセスを提供し、そのプロセスは、ポリペプチド発現を誘導する条件下で本発明の宿主細胞を培養する工程を包含する。そのポリペプチドの発現は、Streptococcusにおいて起き得るが、本発明は、通常、発現のために異種の宿主を使用し得る。その異種の宿主は、原核生物例えば、細菌または真核生物であり得る。それは、通常、大腸菌であり得るが、他の好適な宿主としては、Bacillussubtilis、Vibriocholerae、Salmonellatyphi、Salmonellatyphimurium、Neisserialactamica、Neisseriacinerea、Mycobacteria例えば、M.tuberculosis、酵母などが挙げられる。本発明はまた、本発明のポリペプチドを生成するためのプロセスも提供し、ここで、そのポリペプチドは、化学的手段を用いて部分的にまたは全体として合成される。本発明はまた、本発明の2つ以上のポリペプチドを含む組成物も提供する。核酸本発明はまた、本発明のハイブリッドポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。例えば、本発明は、配列番号83;配列番号84;配列番号85;配列番号86;または配列番号87からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むハイブリッドポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。ゆえに、本発明は、配列番号88配列番号83のポリペプチドをコードする、配列番号89配列番号84のポリペプチドをコードする;配列番号90配列番号85のポリペプチドをコードする;配列番号91配列番号86のポリペプチドをコードする;または配列番号92配列番号87のポリペプチドをコードするからなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本発明はまた、そのようなヌクレオチド配列と配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。そのような核酸には、同じアミノ酸をコードするために代替コドンを使用している核酸が含まれる。特に、核酸は、特定の微生物における発現に対して最適化された代替コドンを含み得る。ゆえに、本発明は、大腸菌における発現のために最適化された、配列番号83;配列番号84;配列番号85;配列番号86;または配列番号87からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むハイブリッドポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を提供する。ゆえに、本発明は、配列番号93配列番号83のポリペプチドをコードする、大腸菌に最適化された配列、配列番号94配列番号84のポリペプチドをコードする、大腸菌に最適化された配列;配列番号95配列番号85のポリペプチドをコードする、大腸菌に最適化された配列;配列番号96配列番号86のポリペプチドをコードする、大腸菌に最適化された配列;または配列番号97配列番号87のポリペプチドをコードする、大腸菌に最適化された配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本発明はまた、これらの核酸にハイブリダイズし得る核酸も提供する。ハイブリダイゼーション反応は、種々のストリンジェンシーの条件下で行われ得る。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを高める条件は、当該分野において広く公知であり、公開されている。関連する条件の例としてはストリンジェンシーが高くなる順序で:25°C、37°C、50°C、55°Cおよび68°Cというインキュベーション温度;10×SSC、6×SSC、1×SSC、0.1×SSCここで、SSCは、0.15MNaClおよび15mMクエン酸緩衝液という緩衝液の濃度および他の緩衝液系を用いたそれらの等価物;0、25、50および75というホルムアミド濃度;5分間~24時間のインキュベーション時間;1、2回またはそれ以上の洗浄工程;1、2または15分間という洗浄のインキュベーション時間;ならびに6×SSC、1×SSC、0.1×SSCまたは脱イオン水の洗浄溶液。ハイブリダイゼーション法およびそれらの最適化は、当該分野で周知である[例えば、参考文献10および223などを参照のこと]。本発明は、これらの配列に相補的な配列を含む核酸例えば、アンチセンス用もしくはプロービング用、またはプライマーとして使用するためを含む。本発明に係る核酸は、様々な形態をとり得る例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プライマー、プローブ、標識されたものなど。本発明の核酸は、環状または分枝状であり得るが、一般に、直鎖状である。別段特定されないかまたは要求されない限り、核酸を使用する本発明のいずれの実施形態も、二本鎖の形態と、その二本鎖の形態を構成する2本の相補的な一本鎖の形態の各々との両方を使用し得る。プライマーおよびプローブは、通常、アンチセンス核酸であるような一本鎖である。本発明の核酸は、好ましくは、精製された形態または実質的に精製された形態で提供され、すなわち、他の核酸を実質的に含まず例えば、天然に存在する核酸を含まず、特に、他のGBSまたは宿主細胞の核酸を実質的に含まず、一般に、少なくとも約50重量純粋であり、通常、少なくとも約90純粋である。本発明の核酸は、好ましくは、GBSの核酸である。本発明の核酸は、多くの方法において、例えば、化学合成例えば、DNAのホスホラミダイト合成全体としてまたは部分的に、ヌクレアーゼ例えば、制限酵素を用いた長い核酸の消化、短い核酸またはヌクレオチドの連結例えば、リガーゼまたはポリメラーゼを用いて、ゲノムライブラリーもしくはcDNAライブラリーから、などによって、調製され得る。本発明の核酸は、固体支持体例えば、ビーズ、プレート、フィルター、フィルム、スライド、マイクロアレイ支持体、レジンなどに付着され得る。本発明の核酸は、例えば、放射性標識もしくは蛍光標識またはビオチン標識で、標識され得る。これは、その核酸が検出法において使用される場合、例えば、その核酸がプライマーまたはプローブである場合に、特に有用である。用語核酸は、一般的な意味において、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチドおよび/またはそれらのアナログを含む任意の長さのヌクレオチドの重合体の形態を含む。それには、DNA、RNA、DNA/RNAハイブリッドが含まれる。それはまた、DNAまたはRNAのアナログ例えば、改変された骨格を含むもの例えば、ペプチド核酸PNAまたはホスホロチオエートまたは改変された塩基を含むものを含む。したがって、本発明は、mRNA、tRNA、rRNA、リボザイム、DNA、cDNA、組換え核酸、分枝状核酸、プラスミド、ベクター、プローブ、プライマーなどを含む。本発明の核酸が、RNAの形態をとる場合、それは、5’キャップを有していてもよいし、有していなくてもよい。本発明の核酸は、ベクターの一部、すなわち、1つ以上の細胞型の形質導入/トランスフェクションのためにデザインされた核酸構築物の一部であり得る。ベクターは、例えば、挿入されるヌクレオチドの単離、増殖および複製のためにデザインされたクローニングベクター、宿主細胞でのヌクレオチド配列の発現のためにデザインされた発現ベクター、組換えウイルスもしくは組換えウイルス様粒子の生成をもたらすようにデザインされたウイルスベクター、または2タイプ以上のベクターの特質を備えるシャトルベクターであり得る。好ましいベクターは、プラスミドである。宿主細胞には、外来性核酸のレシピエントであり得るかまたは外来性核酸のレシピエントである個別の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれるが、その子孫は、天然の、偶発的な、または故意の変異および/または変更に起因して、元の親細胞と必ずしも完全に同一ではない可能性がある形態学的に、または全体のDNA相補体において。宿主細胞には、インビボまたはインビトロにおいて本発明の核酸でトランスフェクトまたは感染された細胞が含まれる。核酸がDNAである場合、RNA配列におけるUが、DNAにおけるTによって置き換えられると認識されるだろう。同様に、核酸がRNAである場合、DNA配列におけるTが、RNAにおけるUによって置き換えられると認識されるだろう。用語相補体または相補的は、核酸に関して使用され得るとき、ワトソン-クリック塩基対形成のことを指す。したがって、Cの相補体はGであり、Gの相補体はCであり、Aの相補体はTまたはUであり、TまたはUの相補体はAである。例えば、ピリミジンCまたはTへの相補体としてIプリンイノシンなどの塩基を使用することも可能である。本発明の核酸は、例えば:インビトロもしくはインビボにおいてポリペプチドを生成するために;生物学的サンプル中の核酸を検出するためのハイブリダイゼーションプローブとして;その核酸の追加のコピーを生成するために;リボザイムもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドを生成するために;一本鎖DNAプライマーもしくはプローブとして;または三重鎖を形成するオリゴヌクレオチドとして、使用され得る。本発明は、本発明の核酸を生成するためのプロセスを提供し、ここで、その核酸は、化学的手段を用いて部分的にまたは全体として合成される。本発明は、本発明のヌクレオチド配列を含むベクター例えば、クローニングベクターまたは発現ベクターおよびそのようなベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。免疫原性組成物本発明の混合物およびハイブリッドポリペプチドは、免疫原性組成物中の活性成分として有用である。そのような免疫原性組成物は、ワクチンとして有用であり得る。これらのワクチンは、予防的なすなわち、感染を予防するためのもの、または治療的なすなわち、感染を処置するためのものであり得るが、代表的には、予防的であり得る。ゆえに、組成物は、薬学的に許容され得るものであり得る。それらは、通常、抗原に加えて構成要素を含み、例えば、それらは、代表的には、1つ以上の薬学的キャリアおよび/または賦形剤を含む。そのような構成要素についての詳細な考察は、参考文献[218]において入手可能である。組成物は、一般に、水性の形態で哺乳動物に投与される。しかしながら、その組成物は、投与前に非水性の形態で存在していてもよい。例えば、いくつかのワクチンは、水性の形態で製造され、次いで、同様に水性の形態で充填され、配布され、投与されるが、他のワクチンは、製造中に凍結乾燥され、使用時に水性の形態に再構成される。したがって、本発明の組成物は、乾燥されていてもよい例えば、凍結乾燥された処方物であってもよい。上記組成物は、チオメルサールまたは2-フェノキシエタノールなどの保存剤を含み得る。しかしながら、そのワクチンは、水銀材料を実質的に含むべきではなくすなわち、5μg/ml未満であるべきである、例えば、チオメルサールフリーであることが好ましい。水銀を含まないワクチンが、より好ましい。保存剤を含まないワクチンが、特に好ましい。張度を調節するために、ナトリウム塩などの生理学的塩を含むことが好ましい。塩化ナトリウムNaClが好ましく、それは、1~20mg/ml、例えば、約10±2mg/mlNaClで存在し得る。存在し得る他の塩としては、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、無水リン酸二ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが挙げられる。組成物は、一般に、200mOsm/kg~400mOsm/kg、好ましくは、240~360mOsm/kgの重量オスモル濃度を有し、より好ましくは、290~310mOsm/kgの範囲内に含まれ得る。組成物は、1つ以上の緩衝液を含み得る。代表的な緩衝液としては:リン酸緩衝液;Tris緩衝液;ホウ酸緩衝液;コハク酸緩衝液;ヒスチジン緩衝液特に、水酸化アルミニウムアジュバントとともに;またはクエン酸緩衝液が挙げられる。緩衝液は、代表的には、5~20mMの範囲で含まれる。組成物のpHは、一般に、5.0~8.1、より代表的には、6.0~8.0、例えば、6.5~7.5または7.0~7.8である。上記組成物は、好ましくは無菌である。上記組成物は、好ましくは、非発熱性であり、例えば、1用量あたり<1EUエンドトキシン単位、標準的な尺度、好ましくは、1用量あたり<0.1EUを含む。上記組成物は、好ましくは、グルテンフリーである。上記組成物は、単回の免疫化のための材料を含んでもよいし、複数回の免疫化のための材料を含んでもよいすなわち、多用量multidoseキット。保存剤を含めることが、多用量の構成において好ましい。多用量組成物に保存剤を含めることに対する代案としてまたはそれに加えて、その組成物は、材料を取り出すための無菌的アダプターを有する容器に含められ得る。ヒト用のワクチンは、代表的には、約0.5mlという投薬容積で投与されるが、小児には半用量すなわち、約0.25mlが投与され得る。本発明の免疫原性組成物は、1つ以上の免疫調節剤も含み得る。好ましくは、その免疫調節剤の1つ以上には、1種以上のアジュバントが含まれる。そのアジュバントには、下記でさらに論述されるTH1アジュバントおよび/またはTH2アジュバントが含まれ得る。本発明の組成物において使用され得るアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。A.ミネラル含有組成物本発明においてアジュバントとして使用するのに適したミネラル含有組成物は、アルミニウム塩およびカルシウム塩などのミネラル塩を含む。本発明は、ミネラル塩例えば、水酸化物例えば、オキシ水酸化物、リン酸塩例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩、硫酸塩など[例えば、参考文献11の第8および9章を参照のこと]または種々のミネラル化合物の混合物を含み、それらの化合物は、任意の好適な形態をとり例えば、ゲル、結晶性、非晶質など、吸着が好ましい。そのミネラル含有組成物は、金属塩の粒子としても処方され得る。水酸化アルミニウムとして公知のアジュバントは代表的には、通常は少なくとも部分的に結晶性であるオキシ水酸化アルミニウム塩である。式AlOOHによって表され得るオキシ水酸化アルミニウムは、赤外IR分光法によって、特に、1070cm-1における吸着帯および3090~3100cm-1における強い肩の存在によって、水酸化アルミニウムAlOH3などの他のアルミニウム化合物と区別され得る[参考文献11の第9章]。水酸化アルミニウムアジュバントの結晶化度の程度は、半分の高さにおける回折バンドの幅widthofthediffractionbandathalfheightWHHによって反映され、結晶性に乏しい粒子は、より小さい晶子サイズに起因して、より大きな線の広がりを示す。WHHが大きくなるほど、表面積は大きくなり、また、より高いWHH値を有するアジュバントは、より抗原吸着能が高いことが判明している。繊維状の形態例えば、透過型電子顕微鏡像に見られるような形態は、水酸化アルミニウムアジュバントに特有である。水酸化アルミニウムアジュバントのpIは、代表的には、約11であり、すなわち、そのアジュバント自体が、生理学的pHにおいて正の表面電荷を有する。pH7.4におけるAl1mgあたり1.8~2.6mgタンパク質という吸着能が、水酸化アルミニウムアジュバントについて報告されている。リン酸アルミニウムとして公知のアジュバントは、代表的には、少量のサルフェートすなわち、ヒドロキシリン酸アルミニウムサルフェートもしばしば含むヒドロキシリン酸アルミニウムである。それらは、沈殿によって得られることがあり、沈殿の際の反応条件および濃度は、その塩におけるホスフェートからヒドロキシルへの置換の程度に影響する。ヒドロキシリン酸塩は、一般に、0.3~1.2のPO4/Alモル比を有する。ヒドロキシリン酸塩は、ヒドロキシル基の存在によって厳密なAlPO4と区別され得る。例えば、3164cm-1におけるIRスペクトルバンド例えば、200°Cに加熱されたときは、構造上のヒドロキシルの存在を示唆する[参考文献11の第9章]。リン酸アルミニウムアジュバントのPO4/Al3モル比は、一般に、0.3~1.2、好ましくは、0.8~1.2、より好ましくは、0.95±0.1である。そのリン酸アルミニウムは、特に、ヒドロキシリン酸塩の場合、一般に非晶質である。代表的なアジュバントは、0.6mgAl3/mlで含まれる、0.84~0.92のPO4/Alモル比を有する非晶質ヒドロキシリン酸アルミニウムである。そのリン酸アルミニウムは、一般に、粒状である例えば、透過型電子顕微鏡像に見られるようなプレート様の形態。その粒子の代表的な直径は、任意の抗原吸着後、0.5~20μm例えば、約5~10μmの範囲である。pH7.4におけるAl1mgあたり0.7~1.5mgのタンパク質という吸着能が、リン酸アルミニウムアジュバントについて報告されている。リン酸アルミニウムのゼロ電荷点PZCは、ホスフェートからヒドロキシルへの置換の程度に反比例し、この置換の程度は、沈殿によって塩を調製するために使用される反応条件、および反応物の濃度に応じて変動し得る。PZCは、溶液中の遊離リン酸イオンの濃度を変更することによってより多いホスフェート=より酸性のPZC、またはヒスチジン緩衝液などの緩衝液を加えることによってもPZCをより塩基性にする、変更される。本発明に従って使用されるリン酸アルミニウムは、一般に、4.0~7.0、より好ましくは、5.0~6.5、例えば、約5.7のPZCを有する。本発明の組成物を調製するために使用されるアルミニウム塩の懸濁物は、緩衝液例えば、リン酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液またはTris緩衝液を含み得るが、これは、必ずしも必要であるとは限らない。その懸濁物は、好ましくは、無菌であり、かつ発熱物質を含まない。懸濁物は、例えば、1.0~20mM、好ましくは、5~15mM、より好ましくは、約10mMの濃度で存在する、遊離水性リン酸イオンを含み得る。その懸濁物は、塩化ナトリウムも含み得る。1つの実施形態において、アジュバント構成要素は、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムの両方の混合物を含む。この場合、水酸化物よりも多くのリン酸アルミニウムが存在し得る例えば、少なくとも2:1、例えば、≧5:1、≧6:1、≧7:1、≧8:1、≧9:1などの重量比。患者に投与するための組成物中のAlの濃度は、好ましくは、10mg/ml未満、例えば、≦5mg/ml、≦4mg/ml、≦3mg/ml、≦2mg/ml、≦1mg/mlなどである。好ましい範囲は、0.3~1mg/mlである。<0.85mg/用量の最大値が、好ましい。B.オイルエマルジョン本発明においてアジュバントとして使用するのに適したオイルエマルジョン組成物は、スクアレン-水エマルジョン、例えば、MF59[参考文献11の第10章;参考文献12もまた参照のこと]5スクアレン、0.5Tween80および0.5Span85、マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロンの粒子に処方されるを含む。フロイント完全アジュバントCFAおよびフロイント不完全アジュバントIFAもまた使用され得る。様々な好適な水中油型エマルジョンが公知であり、それらは、代表的には、少なくとも1つの油および少なくとも1つの界面活性剤を含み、ここで、その油および界面活性剤は、生分解性代謝可能かつ生体適合性である。そのエマルジョン中の油滴は、一般に、直径5μm未満であり、好都合には、そのエマルジョンは、サブミクロンの直径を有する油滴を含み、これらの小さいサイズは、安定なエマルジョンを提供するマイクロフルイダイザーを用いて達成される。220nm未満のサイズを有する液滴は、濾過滅菌に供することができるので、好ましい。本発明は、油例えば、動物例えば、魚供給源または植物供給源の油とともに使用され得る。植物油についての供給源は、堅果、種子および穀物を含む。最も一般的に利用可能な、落花生油、ダイズ油、ココナツ油およびオリーブ油が、堅果油の例示である。例えばホホバ豆から得られる、ホホバ油が使用され得る。種子油としては、ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ種子油などが挙げられる。穀物群では、トウモロコシ油が最も容易に利用可能であるが、他の穀物例えば、コムギ、カラスムギ、ライムギ、イネ、テフ、ライコムギなどの油も使用され得る。グリセロールおよび1,2-プロパンジオールの6~10炭素脂肪酸エステルは、種子油に天然には存在しないが、堅果油および種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離およびエステル化によって調製され得る。哺乳動物の乳汁由来の脂肪および油は、代謝可能であるので、本発明の実施において使用され得る。分離、精製、けん化、および動物供給源から純粋な油を得るために必要な他の手段のための手順は、当該分野で周知である。ほとんどの魚は、容易に回収され得る代謝可能な油を含む。例えば、タラ肝油、サメ肝油および鯨油例えば、鯨ろうは、本明細書中で使用され得る魚油のいくつかの例示である。いくつかの分枝鎖油は、5-炭素イソプレン単位で生化学的に合成され、一般にテルペノイドと称される。サメ肝油は、スクアレンとして公知の分枝状の不飽和テルペノイドである2,6,10,15,19,23-ヘキサメチル-2,6,10,14,18,22-テトラコサヘキサエンを含む。他の好ましい油は、トコフェロール下記を参照のことである。スクアレンsqlaueneを含む水中油型エマルジョンが特に好ましい。油の混合物が使用され得る。界面活性剤は、それらのHLB親水性/親油性バランスによって分類され得る。本発明の好ましい界面活性剤は、少なくとも10、好ましくは、少なくとも15、より好ましくは少なくとも16というHLBを有する。本発明は、界面活性剤とともに使用され得、それらとしては:ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤通常、Tweenと称される、特に、ポリソルベート20およびポリソルベート80;商品名DOWFAXTMとして販売されている、エチレンオキシドEO、プロピレンオキシドPOおよび/またはブチレンオキシドBOの共重合体例えば、直鎖状EO/POブロック共重合体;繰り返しのエトキシオキシ-1,2-エタンジイル基の数が異なり得るオクトキシノールオクトキシノール-9TritonX-100またはt-オクチルフェノキシポリエトキシエタノールが特に興味深い;オクチルフェノキシポリエトキシエタノールIGEPALCA-630/NP-40;ホスファチジルコリンレシチンなどのリン脂質;ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコールおよびオレイルアルコールから得られるポリオキシエチレン脂肪エーテルBrij界面活性剤として公知、例えば、トリエチレングリコールモノラウリルエーテルBrij30;およびソルビタンエステル通常、SPANとして公知例えば、トリオレイン酸ソルビタンSpan85およびソルビタンモノラウレートが挙げられるがこれらに限定されない。上記エマルジョンに含めるのに好ましい界面活性剤は、Tween80モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、Span85トリオレイン酸ソルビタン、レシチンおよびTritonX-100である。上で述べたように、Tween80などの洗剤は、下記の実施例で見られる熱安定性に寄与し得る。界面活性剤の混合物、例えば、Tween80/Span85混合物が使用され得る。ポリオキシエチレンソルビタンエステル例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンTween80とオクトキシノール例えば、t-オクチルフェノキシポリエトキシエタノールTritonX-100との組み合わせも好適である。別の有用な組み合わせは、ラウレス9ポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび/またはオクトキシノールを含む。界面活性剤の好ましい量重量は:ポリオキシエチレンソルビタンエステル例えば、Tween800.01~1、特に約0.1;オクチルフェノキシポリオキシエタノールまたはノニルフェノキシポリオキシエタノール例えば、TritonX-100またはTritonシリーズの他の洗剤0.001~0.1、特に、0.005~0.02;ポリオキシエチレンエーテル例えば、ラウレス90.1~20、好ましくは、0.1~10、特に0.1~1または約0.5である。本発明で有用な特定の水中油型エマルジョンアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない。スクアレン、Tween80およびSpan85のサブミクロンエマルジョン。このエマルジョンの容積組成は、約5スクアレン、約0.5ポリソルベート80および約0.5Span85であり得る。重量の条件では、これらの比は、4.3スクアレン、0.5ポリソルベート80および0.48Span85となる。このアジュバントは、参考文献16の第10章および参考文献17の第12章により詳細に記載されているようなMF59[13~15]として公知である。このMF59エマルジョンは、好都合に、クエン酸イオン、例えば、10mMクエン酸ナトリウム緩衝液を含む。スクアレン、α-トコフェロールおよびポリソルベート80を含むエマルジョン。これらのエマルジョンは、2~10スクアレン、2~10トコフェロールおよび0.3~3Tween80を有し得、スクアレン:トコフェロールの重量比は、より安定なエマルジョンを提供するので好ましくは≦1例えば、0.90である。スクアレンおよびTween80は、約5:2の容積比または約11:5の重量比で存在し得る。そのようなエマルジョンの1つは、Tween80をPBSに溶解して2溶液を得て、次いで、90mlのこの溶液を5gのDL-α-トコフェロールおよび5mlのスクアレンの混合物と混合し、次いで、その混合物をマイクロフルイダイズすることによって、作製され得る。得られたエマルジョンは、サブミクロン油滴を有し得、例えば、100~250nm、好ましくは、約180nmの平均直径を有する。スクアレン、トコフェロールおよびTriton洗剤例えば、TritonX-100のエマルジョン。このエマルジョンは、3d-MPL下記を参照のことも含み得る。このエマルジョンは、リン酸緩衝液も含み得る。ポリソルベート例えば、ポリソルベート80、Triton洗剤例えば、TritonX-100およびトコフェロール例えば、α-トコフェロールスクシナートを含むエマルジョン。このエマルジョンは、これらの3つの構成要素を約75:11:10例えば、750μg/mlポリソルベート80、110μg/mlTritonX-100および100μg/mlα-トコフェロールスクシナートという質量比で含み得、これらの濃度は、抗原からのこれらの構成要素の任意の寄与を含むべきである。このエマルジョンは、スクアレンも含み得る。このエマルジョンは、3d-MPL下記を参照のことも含み得る。その水相は、リン酸緩衝液を含み得る。スクアラン、ポリソルベート80およびポロキサマー401プルロニックTML121のエマルジョン。このエマルジョンは、リン酸緩衝食塩水,pH7.4中で処方され得る。このエマルジョンは、ムラミルジペプチドに対して有用な送達ビヒクルであり、SAF-1アジュバント[18]においてトレオニル-MDPとともに使用されている0.05~1Thr-MDP、5スクアラン、2.5プルロニックL121および0.2ポリソルベート80。これは、AFアジュバント[19]5スクアラン、1.25プルロニックL121および0.2ポリソルベート80におけるようにThr-MDPなしでも使用され得る。マイクロフルイダイゼーションが好ましい。スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤例えば、ポリオキシエチレン12セトステアリルエーテルおよび疎水性非イオン性界面活性剤例えば、ソルビタンエステルまたはマンニドエステル例えば、ソルビタンモノオレエートsorbitanmonoleateまたはSpan80を含むエマルジョン。このエマルジョンは、好ましくは、熱可逆性であり、かつ/または200nm未満のサイズの少なくとも90容積の油滴を有する[20]。このエマルジョンは、アルジトール;凍結保護剤例えば、糖、例えば、ドデシルマルトシドおよび/またはスクロース;および/またはアルキルポリグリコシドのうちの1つ以上も含み得る。このようなエマルジョンは、凍結乾燥され得る。0.5~50の油、0.1~10のリン脂質および0.05~5の非イオン性界面活性剤を有するエマルジョン。参考文献21に記載されているように、好ましいリン脂質の構成要素は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロンの液滴サイズが有益である。代謝可能でない油例えば、軽油および少なくとも1つの界面活性剤例えば、レシチン、Tween80またはSpan80のサブミクロンの水中油型エマルジョン。QuilAサポニン、コレステロール、サポニン-親油性物質結合体例えば、グルクロン酸のカルボキシル基を介して脂肪族アミンをデスアシルサポニンdesacylsaponinに付加することによって生成される、参考文献22に記載されているGPI-0100、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウムdimethyidioctadecylammoniumbromideおよび/またはN,N-ジオクタデシル-N,N-ビス2-ヒドロキシエチルプロパンジアミンなどの添加物が含められ得る。ミネラルオイル、非イオン性親油性エトキシ化脂肪アルコールおよび非イオン性親水性界面活性剤例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび/またはポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンブロック共重合体を含むエマルジョン[23]。ミネラルオイル、非イオン性親水性エトキシ化脂肪アルコールおよび非イオン性親油性界面活性剤例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび/またはポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンブロック共重合体を含むエマルジョン[23]。サポニン例えば、QuilAまたはQS21およびステロール例えば、コレステロールがらせん状ミセルとして会合されているエマルジョン[24]。組成物中の抗原およびアジュバントは、代表的には、患者への送達時に混合され得る。上記エマルジョンは、製造中に、または送達時に即席で、抗原と混合され得る。したがって、アジュバントおよび抗原は、パッケージングされたワクチンまたは配布されるワクチンにおいて、使用時に最終的な処方物となる準備が整った状態で、別々に維持され得る。その抗原は、一般に、水性の形態であり、したがってそのワクチンは、最後に2つの液体を混合することによって調製される。混合用のその2つの液体の容積比は、変動し得る例えば、5:1~1:5が、一般に、約1:1である。C.サポニン処方物[参考文献11の第22章]サポニン処方物もまた、本発明におけるアジュバントとして使用される。サポニンは、幅広い植物種の樹皮、葉、茎、根およびさらに花にも見られるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異質性の群である。QuillaiasaponariaMolinaの木の樹皮由来のサポニンが、アジュバントとして広く研究されている。サポニンはまた、Smilaxornataサルサパリラsarsaprilla、GypsophillapaniculataブライズベールbridesveilおよびSaponariaofficianalisソープルートから商業的に得ることができる。サポニンアジュバント処方物には、QS21などの精製された処方物ならびにISCOMなどの脂質処方物が含まれる。QS21は、StimulonTMとして販売されている。サポニン組成物は、HPLCおよびRP-HPLCを用いて精製されている。これらの手法を用いたときの特定の精製画分QS7、QS17、QS18、QS21、QH-A、QH-BおよびQH-Cを含むが、同定されている。好ましくは、サポニンは、QS21である。QS21を生成する方法は、参考文献25に開示されている。サポニン処方物はまた、コレステロールなどのステロールを含み得る[26]。サポニンとコレステロールとの組み合わせを用いることにより、免疫賦活性複合体ISCOMと呼ばれる独特の粒子を形成することができる[参考文献11の第23章]。ISCOMは、代表的には、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。任意の公知のサポニンが、ISCOMにおいて使用され得る。好ましくは、ISCOMは、QuilA、QHAおよびQHCの1つ以上を含む。ISCOMはさらに、参考文献26~28に記載されている。必要に応じて、ISCOMSは、さらなる洗剤を欠いている場合がある[29]。サポニンベースのアジュバントの開発に関する概説は、参考文献30および31に見ることができる。D.ビロソームおよびウイルス様粒子ビロソームおよびウイルス様粒子VLPもまた、本発明においてアジュバントとして使用され得る。これらの構造物は、一般に、ウイルス由来の1つ以上のタンパク質を含み、必要に応じてリン脂質と組み合わされるか、またはリン脂質とともに処方される。それらは一般に、非病原性、非複製的であり、一般に天然のウイルスゲノムを一切含まない。そのウイルスタンパク質は、組換え的に生成されてもよいし、ウイルス全体から単離されてもよい。ビロソームまたはVLPにおいて使用するのに適したこれらのウイルスタンパク質としては、インフルエンザウイルス例えば、HAまたはNA、B型肝炎ウイルス例えば、コアタンパク質またはキャプシドタンパク質、E型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、HIV、RNA-ファージ、Qβ-ファージ例えば、コートタンパク質、GA-ファージ、fr-ファージ、AP205ファージおよびTy例えば、レトロトランスポゾンTyタンパク質p1に由来するタンパク質が挙げられる。VLPは、参考文献32~37でさらに論じられている。ビロソームは、例えば、参考文献38でさらに論じられている。E.細菌または微生物の誘導体本発明において使用するのに適したアジュバントには、細菌または微生物の誘導体例えば、腸内細菌のリポ多糖LPSの無毒性誘導体、リピドA誘導体、免疫賦活性オリゴヌクレオチドならびにADPリボシル化トキシンおよびその解毒された誘導体が含まれる。LPSの無毒性誘導体としては、モノホスホリルリピドAMPLおよび3-O-脱アシル化MPL3dMPLが挙げられる。3dMPLは、4、5または6のアシル化鎖を有する3脱O-アシル化モノホスホリルリピドAの混合物である。3脱O-アシル化モノホスホリルリピドAの好ましい小粒子の形態は、参考文献39に開示されている。そのような3dMPLの小粒子は、0.22μmの膜で濾過滅菌されることができる程度に十分小さい[39]。他の無毒性LPS誘導体としては、モノホスホリルリピドA模倣物、例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体、例えば、RC-529が挙げられる[40,41]。リピドA誘導体には、OM-174などの大腸菌由来のリピドAの誘導体が含まれる。OM-174は、例えば、参考文献42および43に記載されている。本発明においてアジュバントとして使用するのに適した免疫賦活性オリゴヌクレオチドとしては、CpGモチーフリン酸結合によってグアノシンに連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列が挙げられる。パリンドローム配列またはポリdG配列を含む二本鎖のRNAおよびオリゴヌクレオチドもまた、免疫賦活性であると示されている。CpGは、ヌクレオチド改変/アナログ例えば、ホスホロチオエート改変を含み得、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献44、45および46には、可能性のあるアナログ置換、例えば、2’-デオキシ-7-デアザグアノシンによるグアノシンの置換が開示されている。CpGオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献47~52でさらに論じられている。CpG配列は、TLR9例えば、モチーフGTCGTTまたはTTCGTTに対するものであり得る[53]。そのCpG配列は、Th1免疫応答の誘導に特異的であり得る例えば、CpG-AODNか、またはB細胞応答の誘導により特異的であり得る例えば、CpG-BODN。CpG-AおよびCpG-BODNは、参考文献54~56で論じられている。好ましくは、CpGは、CpG-AODNである。好ましくは、CpGオリゴヌクレオチドは、レセプター認識のために5’末端が接近可能であるように構築される。必要に応じて、2つのCpGオリゴヌクレオチド配列が、それらの3’末端で付着されることにより、イムノマーimmunomerを形成し得る。例えば、参考文献53および57~59を参照のこと。免疫賦活性オリゴヌクレオチドに基づく特に有用なアジュバントは、IC-31TMとして知られる[60]。したがって、本発明とともに使用されるアジュバントは、i少なくとも1つの好ましくは、複数のCpIモチーフすなわち、ジヌクレオチドを形成するようにイノシンに連結されたシトシンを含むオリゴヌクレオチド例えば、15~40ヌクレオチドと、iiポリカチオン性ポリマー、例えば、少なくとも1つの好ましくは、複数のLys-Arg-Lysトリペプチド配列を含むオリゴペプチド例えば、5~20アミノ酸との混合物を含み得る。上記オリゴヌクレオチドは、26merの配列の5’-IC13-3’配列番号98を含むデオキシヌクレオチドであり得る。上記ポリカチオン性ポリマーは、11merのアミノ酸配列KLKLLLLLKLK配列番号99を含むペプチドであり得る。細菌のADPリボシル化トキシンおよびその解毒された誘導体は、本発明においてアジュバントとして使用され得る。好ましくは、そのタンパク質は、大腸菌大腸菌の熱不安定性のエンテロトキシンLT、コレラCTまたは百日咳PTに由来する。解毒されたADPリボシル化トキシンの、粘膜アジュバントとしての使用は、参考文献61に記載されており、非経口アジュバントとしての使用は、参考文献62に記載されている。そのトキシンまたはトキソイドは、好ましくは、AサブユニットとBサブユニットの両方を含むホロトキシンの形態である。好ましくは、Aサブユニットは、解毒性の変異を含み;好ましくは、Bサブユニットは、変異されていない。好ましくは、そのアジュバントは、解毒されたLT変異体例えば、LT-K63、LT-R72およびLT-G192である。ADPリボシル化トキシンおよびその解毒された誘導体、特に、LT-K63およびLT-R72のアジュバントとしての使用は、参考文献63~70に見ることができる。有用なCT変異体は、CT-E29Hである[71]。アミノ酸置換についての数字による言及は、好ましくは、参考文献72明確にその全体が本明細書中で参考として援用されるに示されているADPリボシル化トキシンのAおよびBサブユニットのアラインメントに基づいている。F.ヒト免疫調節剤本発明においてアジュバントとして使用するのに適したヒト免疫調節剤としては、サイトカイン、例えば、インターロイキン例えば、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12[73]など[74]、インターフェロン例えば、インターフェロン-γ、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子が挙げられる。好ましい免疫調節剤は、IL-12である。G.生体接着剤および粘膜接着剤生体接着剤および粘膜接着剤もまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。好適な生体接着剤としては、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェア[75]または粘膜接着剤例えば、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類およびカルボキシメチルセルロースの架橋された誘導体が挙げられる。キトサンおよびその誘導体もまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る[76]。H.微小粒子微小粒子もまた、本発明におけるアジュバントとして使用され得る。微小粒子すなわち、直径が約100nm~約150μmの粒子、より好ましくは、直径が約200nm~約30μm、最も好ましくは、直径が約500nm~約10μmは、生分解性かつ無毒性である材料例えば、ポリα-ヒドロキシ酸、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなどから形成され、ポリラクチド-co-グリコリドが好ましく、必要に応じて、負に帯電した表面例えば、SDSを用いたときまたは正に帯電した表面例えば、CTABなどの陽性洗剤を用いたときを有するように処理される。I.リポソーム参考文献11の第13および14章アジュバントとして使用するのに適したリポソーム処方物の例は、参考文献77~79に記載されている。J.ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物本発明において使用するのに適したアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが挙げられる[80]。そのような処方物としては、さらに、オクトキシノールと組み合わされるポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤[81]、ならびにオクトキシノールなどの少なくとも1つの追加の非イオン性界面活性剤と組み合わされるポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤[82]が挙げられる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される:ポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテルラウレス9、ポリオキシエチレン-9-ステオリルエーテル、ポリオキシエチレンpolyoxytheylene-8-ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン-4-ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン-35-ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン-23-ラウリルエーテル。K.ポリホスファゼンPCPPPCPP処方物は、例えば、参考文献83および84に記載されている。L.ムラミルペプチド本発明においてアジュバントとして使用するのに適したムラミルペプチドの例としては、N-アセチル-ムラミル-L-トレオニル-D-イソグルタミンthr-MDP、N-アセチル-ノルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミンnor-MDPおよびN-アセチルムラミル-L-アラニル-D-イソグルタミニル-L-アラニン-2-1’-2’-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ヒドロキシホスホリルオキシ-エチルアミンMTP-PEが挙げられる。M.イミダゾキノロン化合物本発明においてアジュバントとして使用するのに適したイミダゾキノロン化合物の例としては、参考文献85および86にさらに記載されているImiquamodおよびそのホモログ例えば、Resiquimod3Mが挙げられる。本発明はまた、上で同定されたアジュバントの1つ以上の態様の組み合わせも含み得る。例えば、以下のアジュバント組成物が、本発明において使用され得る:1サポニンおよび水中油型エマルジョン[87];2サポニン例えば、QS21無毒性LPS誘導体例えば、3dMPL[88];3サポニン例えば、QS21無毒性LPS誘導体例えば、3dMPLコレステロール;4サポニン例えば、QS213dMPLIL-12必要に応じてステロール[89];53dMPLと、例えば、QS21および/または水中油型エマルジョンとの組み合わせ[90];6サブミクロンエマルジョンにマイクロフルイダイズされているかまたはそれより大きな粒径のエマルジョンを生成するようにボルテックスされた、10スクアラン、0.4Tween80TM、5プルロニック-ブロックポリマーL121およびthr-MDPを含む、SAF、72スクアレン、0.2Tween80、ならびにモノホスホリルリピドmonophosphorylipidAMPL、トレハロースジミコレートTDMおよび細胞壁骨格CWSからなる群よりの1つ以上の細菌の細胞壁の構成要素好ましくは、MPLCWSDetoxTMを含むRibiTMアジュバント系RASRibiImmunochem;および81つ以上のミネラル塩例えば、アルミニウム塩LPSの無毒性誘導体例えば、3dMPL。免疫賦活性剤として作用する他の物質は、参考文献11の第7章に開示されている。水酸化アルミニウムアジュバントおよび/またはリン酸アルミニウムアジュバントの使用は、特に小児において、有用であり、抗原は通常、これらの塩に吸着される。水中スクアレン型のエマルジョンもまた、特に高齢者において、好ましい。有用なアジュバントの組み合わせとしては、Th1アジュバントとTh2アジュバントとの組み合わせ例えば、CpGおよびアラムまたはレシキモドおよびアラムが挙げられる。リン酸アルミニウムと3dMPLとの組み合わせも使用され得る。本発明の組成物は、細胞媒介性免疫応答と体液性免疫応答の両方を誘発し得る。T細胞の2つのタイプであるCD4細胞およびCD8細胞は、一般に、細胞媒介性免疫および体液性免疫を惹起するため、および/または増強するために必要であると考えられている。CD8T細胞は、CD8コレセプターを発現し得、通常、細胞傷害性Tリンパ球CTLと称される。CD8T細胞は、MHCクラスI分子上に提示された抗原を認識すること、またはその抗原と相互作用することができる。CD4T細胞は、CD4コレセプターを発現し得、通常、Tヘルパー細胞と称される。CD4T細胞は、MHCクラスII分子に結合した抗原ペプチドを認識することができる。CD4細胞は、MHCクラスII分子と相互作用する際、サイトカインなどの因子を分泌し得る。これらの分泌されたサイトカインは、B細胞、細胞傷害性T細胞、マクロファージおよび免疫応答に関与する他の細胞を活性化し得る。ヘルパーT細胞またはCD4細胞は、さらに2つの機能的に異なるサブセット:TH1表現型およびTH2表現型それらのサイトカインおよびエフェクター機能が異なるに分けられ得る。活性化されたTH1細胞は、細胞性免疫を増強する抗原特異的CTL産生の増加を含むので、細胞内の感染に応答する際に特に価値がある。活性化されたTH1細胞は、IL-2、IFN-γおよびTNF-βのうちの1つ以上を分泌し得る。TH1免疫応答は、マクロファージ、NKナチュラルキラー細胞およびCD8細胞傷害性T細胞CTLを活性化することによって、局所的な炎症性反応をもたらし得る。TH1免疫応答はまた、IL-12によってBおよびT細胞の増殖を刺激することによって免疫応答を拡大するように作用し得る。TH1によって刺激されたB細胞は、IgG2aを分泌し得る。活性化されたTH2細胞は、抗体産生を増強するので、細胞外の感染に応答する際に価値がある。活性化されたTH2細胞は、IL-4、IL-5、IL-6およびIL-10のうちの1つ以上を分泌し得る。TH2免疫応答は、IgG1、IgE、IgA、および将来の防御のための記憶B細胞の産生をもたらし得る。増強された免疫応答は、増強されたTH1免疫応答、およびTH2免疫応答のうちの1つ以上を含み得る。TH1免疫応答には、CTLの増加、TH1免疫応答に関連するサイトカイン例えば、IL-2、IFN-γおよびTNF-βの1つ以上の増加、活性化されたマクロファージの増加、NK活性の増加またはIgG2aの産生の増加のうちの1つ以上が含まれ得る。好ましくは、増強されたTH1免疫応答は、IgG2a産生の増加を含む。TH1免疫応答は、TH1アジュバントを用いて誘発され得る。TH1アジュバントは、一般に、アジュバントなしでの抗原での免疫化と比べて、高レベルのIgG2a産生を誘発する。本発明において使用するのに適したTH1アジュバントとしては、例えば、サポニン処方物、ビロソームおよびウイルス様粒子、腸内細菌のリポ多糖LPSの無毒性誘導体、免疫賦活性オリゴヌクレオチドが挙げられ得る。免疫賦活性オリゴヌクレオチド例えば、CpGモチーフを含むオリゴヌクレオチドは、本発明における使用にとって好ましいTH1アジュバントである。TH2免疫応答は、TH2免疫応答に関連するサイトカイン例えば、IL-4、IL-5、IL-6およびIL-10の1つ以上の増加、またはIgG1、IgE、IgAおよび記憶B細胞の産生の増加のうちの1つ以上を含み得る。好ましくは、増強されたTH2免疫応答は、IgG1産生の増加を含む。TH2免疫応答は、TH2アジュバントを用いて誘発され得る。TH2アジュバントは、一般に、アジュバントなしでの抗原での免疫化と比べて、高レベルのIgG1産生を誘発する。本発明において使用するのに適したTH2アジュバントとしては、例えば、ミネラルを含む組成物、オイルエマルジョンならびにADPリボシル化トキシンおよびその解毒された誘導体が挙げられる。アルミニウム塩などのミネラルを含む組成物が、本発明における使用にとって好ましいTH2アジュバントである。組成物は、TH1アジュバントとTH2アジュバントとの組み合わせを含み得る。好ましくは、そのような組成物は、増強されたTH1応答および増強されたTH2応答、すなわち、アジュバントなしでの免疫化と比べたときの、IgG1とIgG2aの両方の産生の増加を誘発する。さらにより好ましくは、TH1アジュバントおよびTH2アジュバントの組み合わせを含む組成物は、単一のアジュバントでの免疫化と比べてすなわち、TH1アジュバント単独での免疫化またはTH2アジュバント単独での免疫化と比べて、高いTH1免疫応答および/または高いTH2免疫応答を誘発する。上記免疫応答は、TH1免疫応答とTH2応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、増強されたTH1応答および増強されたTH2応答の一方または両方を提供する。上記増強された免疫応答は、全身性免疫応答と粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、その免疫応答は、増強された全身性免疫応答および増強された粘膜免疫応答の一方または両方を提供する。好ましくは、その粘膜免疫応答は、TH2免疫応答である。好ましくは、その粘膜免疫応答には、IgAの産生の増加が含まれる。連鎖球菌感染は、身体の様々な領域に影響を及ぼし得るので、本発明の組成物は、様々な形態として調製され得る。例えば、その組成物は、液体溶液または懸濁物としての注射可能物として調製され得る。液体ビヒクルにおける溶液または懸濁物に適した、注射前の固体の形態もまた調製され得る例えば、凍結乾燥された組成物またはスプレーフリーズドライされた組成物。その組成物は、表面投与のために、例えば、軟膏、クリームまたは粉末として、調製され得る。その組成物は、経口投与のために、例えば、錠剤もしくはカプセルとして、スプレーとして、またはシロップ剤必要に応じて矯味矯臭されるとして、調製され得る。その組成物は、肺投与のために、例えば、微粉またはスプレーを用いる吸入薬として、調製され得る。その組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製され得る。その組成物は、経鼻投与、経耳投与または眼球投与のために、例えば、滴剤として調製され得る。その組成物は、組み合わされた組成物が患者への投与の直前に再構成されるようにデザインされたキットの形態であり得る。そのようなキットは、液体の形態の1つ以上の抗原および1つ以上の凍結乾燥された抗原を備え得る。ある組成物が、使用前に即席で調製されることになっており例えば、ある構成要素が、凍結乾燥された形態で提供されている場合、キットとして提供される場合、そのキットは、2つのバイアルを備えてもよいし、事前に満たされた1本の注射器および1つのバイアルその注射器の内容物は、注射前にそのバイアルの内容物を再活性化するように使用されるを備えてもよい。ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的に有効な量の抗原、ならびに必要に応じ、他の任意の構成要素を含む。免疫学的に有効な量とは、単一用量または一連の用量の一部としての個体へのその量の投与が、処置または予防にとって有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康状態および身体的状態、処置される個体の年齢、分類群例えば、非ヒト霊長類、霊長類など、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の防御の程度、ワクチンの処方、処置する医師の医学的状況に関する所見、ならびに他の関連する要因に応じて変動する。その量は、通例の治験によって決定され得る比較的広い範囲内に入ると予想される。核酸による免疫化上に記載された免疫原性組成物は、GBS由来のポリペプチド抗原を含む。しかしながら、すべての場合において、そのポリペプチド抗原は、核酸による免疫化[91~98]に基づく組成物、方法および使用をもたらすために、それらのポリペプチドをコードする核酸代表的には、DNAによって置き換えられ得る。その免疫原をコードする核酸は、患者に送達された後にインビボで発現され、次いで、その発現された免疫原が、免疫系を刺激する。その活性成分は、代表的には、iプロモーター;iiそのプロモーターに作動可能に連結された、免疫原をコードする配列;および必要に応じてiii選択マーカーを含む核酸ベクターの形態をとる。好ましいベクターはさらに、iv複製起点;およびviiの下流であり、かつiiに作動可能に連結された転写ターミネーターを含み得る。一般に、iおよびvは、真核生物のものであり、iiiおよびivは、原核生物のものである。好ましいプロモーターは、例えば、サイトメガロウイルスCMV由来のウイルスのプロモーターである。そのベクターはまた、プロモーターに加えて、そのプロモーターと機能的に相互作用する転写制御配列例えば、エンハンサーも含み得る。好ましいベクターは、前初期CMVエンハンサー/プロモーターを含み、より好ましいベクターは、CMVイントロンAも含む。免疫原をコードする配列の発現がプロモーターの支配下になるように、そのプロモーターは、免疫原をコードしている下流の配列に作動可能に連結される。マーカーが使用される場合、それは、好ましくは、微生物宿主例えば、原核生物、細菌、酵母において機能するものである。そのマーカーは、好ましくは、原核生物の選択マーカーである例えば、原核生物のプロモーターの支配下で転写される。便宜上、代表的なマーカーは、抗生物質耐性遺伝子である。上記ベクターは、好ましくは、自律的に複製するエピソームベクターまたは染色体外ベクター例えば、プラスミドである。上記ベクターは、好ましくは、複製起点を含む。その複製起点は、真核生物ではなく原核生物において活性であることが好ましい。ゆえに、好ましいベクターは、そのベクターを選択するための原核生物のマーカー、原核生物の複製起点、さらに、免疫原をコードする配列の転写を駆動するための真核生物のプロモーターを含む。それゆえ、そのベクターは、aポリペプチドの発現なしに原核生物宿主において増幅され、選択されるが、b増幅されずに真核生物宿主において発現される。この構成は、核酸免疫化ベクターにとって理想的である。上記ベクターは、コード配列の下流に真核生物の転写ターミネーター配列を含み得る。これは、転写レベルを高め得る。そのコード配列がそれ自身のものを有しない場合、そのベクターは、好ましくは、ポリアデニル化配列を含む。好ましいポリアデニル化配列は、ウシ成長ホルモン由来のものである。上記ベクターは、マルチクローニングサイトを含み得る。免疫原およびマーカーをコードする配列に加えて、上記ベクターは、第2の真核生物のコード配列を含み得る。そのベクターは、免疫原として同じ転写物からの第2の真核生物ポリペプチドの翻訳を可能にするために、前記第2配列の上流にIRESも含み得る。あるいは、免疫原をコードする配列は、IRESの下流に存在し得る。上記ベクターは、2つの5’プリンおよび2つの3’ピリミジンに隣接する、非メチル化CpGモチーフ、例えば、グアノシンの前に存在するシトシンを共通して有する非メチル化DNA配列を含み得る。それらの非メチル化型において、これらのDNAモチーフは、いくつかのタイプの免疫細胞の強力な刺激物質であると示されている。ベクターは、標的化法で送達され得る。レセプター媒介性のDNA送達法は、例えば、参考文献99~104に記載されている。核酸を含む治療用組成物は、遺伝子治療プロトコルにおける局所投与のために、約100ng~約200mgという範囲のDNAとして投与される。約500ng~約50mg、約1μg~約2mg、約5μg~約500μgおよび約20μg~約100μgという濃度範囲のDNAもまた、遺伝子治療プロトコルにおいて使用され得る。作用方法例えば、コードされる遺伝子産物のレベルを増強または阻害するためのならびに形質転換および発現の効率などの因子が、最終的な効率にとって必要とされる投与量に影響を及ぼす考慮すべき事柄である。より高い発現が、より広い面積の組織に対して望まれる場合、より多い量のベクターもしくは投与の継続プロトコルにおいて再投与される同じ量か、または隣接もしくは近接する組織の異なる部分への数回の投与が、正の治療成果をもたらすために必要とされ得る。すべての場合において、臨床試験における通例の実験法によって、最適な治療効果についての特定の範囲が決定される。ベクターは、遺伝子送達ビヒクルを用いて送達され得る。その遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源または非ウイルス起源であり得る参考文献105~108を広く参照のこと。所望の核酸を送達するため、および所望の細胞において発現するためのウイルスベースのベクターは、当該分野で周知である。例示的なウイルスベースのビヒクルとしては、組換えレトロウイルス例えば、参考文献109~119、アルファウイルスベースのベクター例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルスATCCVR-67;ATCCVR-1247、ロスリバーウイルスATCCVR-373;ATCCVR-1246およびベネズエラウマ脳炎ウイルスATCCVR-923;ATCCVR-1250;ATCCVR1249;ATCCVR-532;これらのウイルスのハイブリッドまたはキメラもまた使用され得る、ポックスウイルスベクター例えば、ワクシニア、鶏痘、カナリポックスcanarypox、改変ワクシニアAnkaraなど、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスAAVベクター例えば、参考文献120~125を参照のことが挙げられるが、これらに限定されない。死滅アデノウイルスに連結されたDNAの投与[126]もまた使用され得る。非ウイルス性の送達ビヒクルおよび方法もまた使用され得、それらとしては、死滅アデノウイルス単独に連結されたかまたは連結されていないポリカチオン性凝縮DNA[例えば、126]、リガンドに連結されたDNA[127]、真核細胞送達ビヒクル細胞[例えば、参考文献128~132]および核の電荷中和または細胞膜との融合が挙げられるがこれらに限定されない。裸のDNAもまた使用され得る。裸のDNAを導入する例示的な方法は、参考文献133および134に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用し得るリポソーム例えば、免疫リポソームは、参考文献135~139に記載されている。追加のアプローチは、参考文献140および141に記載されている。使用に適したさらなる非ウイルス性送達としては、参考文献141に記載されているアプローチなどの機械的送達系が挙げられる。さらに、コード配列およびその発現産物は、光重合されたヒドロゲル材料の堆積または電離放射線の使用によって送達され得る[例えば、参考文献142および143]。コード配列の送達のために使用され得る遺伝子送達のための他の従来の方法としては、例えば、手持ち式の遺伝子導入パーティクルガンの使用[144]または伝達される遺伝子を活性化するための電離放射線の使用[142および143]が挙げられる。PLG{ポリラクチド-co-グリコリド}微小粒子を使用したDNAの送達例えば、必要に応じて、負に帯電した表面例えば、SDSで処理された表面または正に帯電した表面例えば、CTABなどの陽性洗剤で処理された表面を有するように処理された、微小粒子への吸着による、DNAの送達が、特に好ましい方法である。処置の方法およびワクチンの投与本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を惹起するための方法も提供し、その方法は、有効量の本発明の免疫原性組成物を投与する工程を包含する。その免疫応答は、好ましくは、防御的であり、好ましくは、抗体および/または細胞媒介性免疫が関わる。その方法は、追加免疫応答を惹起し得る。本発明はまた、医薬として組み合わせて使用するための、例えば、哺乳動物において免疫応答を惹起する際に使用するための、少なくとも2つの異なるGBS59クレードも提供する。本発明はまた、哺乳動物において免疫応答を惹起するための医薬を製造する際の、少なくとも2つの異なるGBS59クレードの使用も提供する。これらの使用および方法によって哺乳動物において免疫応答を惹起することによって、その哺乳動物は、GBSによって引き起こされる疾患および/または感染、例えば、髄膜炎から保護され得る。本発明はまた、本発明の免疫原性組成物で事前に満たされた送達デバイスも提供する。上記哺乳動物は、好ましくは、ヒトである。そのヒトは、小児例えば、幼児または乳児、ティーンエージャーまたは成人であり得る。小児を対象としたワクチンは、例えば、安全性、投与量、免疫原性などを評価するために、成人にも投与され得る。治療的処置の有効性を確かめる1つの方法は、本発明の組成物を投与した後に肺炎球菌の感染をモニターする工程を包含する。予防的処置の有効性を確かめる1つの方法は、標準的な検査において免疫後の血清を試験する工程を包含する;例えば、血清は、オプソニン作用死滅アッセイopsonophagocytickillingassayOPKAにおいて試験され得、ここで、細菌をオプソニン化する能力は、防御効率を示す。予防的処置の有効性を確かめる別の方法は、GBS感染の動物モデル、例えば、モルモットまたはマウスにおける、免疫後のチャレンジを含む。そのようなモデルの1つは、参考文献145に記載されている。本発明の組成物の免疫原性を評価する別の方法は、免疫ブロットおよび/またはマイクロアレイによって患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングするためにポリペプチドを組換え的に発現させることである。そのポリペプチドと患者サンプルとの間の陽性の反応は、その患者が、対象のポリペプチドに対して免疫応答を開始していることを示す。この方法はまた、免疫優性抗原および/または抗原内の免疫優性エピトープを同定するためにも使用され得る。本発明の組成物は、通常、患者に直接投与される。直接的な送達は、非経口注射によって例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間質腔に、または粘膜的に例えば、経直腸、経口例えば、錠剤、スプレー、経膣、表面的、経皮的transdermalまたは経皮的transcutaneous、鼻腔内、眼球、経耳、肺または他の粘膜投与によって達成され得る。本発明は、全身性免疫および/または粘膜免疫を誘発するため、好ましくは、増強された全身性免疫および/または粘膜免疫を誘発するために使用され得る。好ましくは、その増強された全身性免疫および/または粘膜免疫は、増強されたTH1および/またはTH2免疫応答において反映される。好ましくは、その増強された免疫応答は、IgG1および/またはIgG2aおよび/またはIgAの産生の増加を含む。投薬は、単回投与スケジュールまたは複数投与スケジュールによるものであり得る。複数投与は、初回免疫化スケジュールおよび/または追加免疫化スケジュールにおいて使用され得る。複数投与スケジュールでは、同じ経路または異なる経路、例えば、初回は非経口および追加は粘膜、初回は粘膜および追加は非経口などによって、様々な用量が与えられ得る。複数投与は、代表的には、少なくとも1週間例えば、約2週間、約3週間、約4週間、約6週間、約8週間、約10週間、約12週間、約16週間など空けて投与される。本発明に従って調製されたワクチンは、小児と成人の両方を処置するために使用され得る。したがって、ヒト患者は、1歳未満、5歳未満、1~5歳、5~15歳、15~55歳、または少なくとも55歳であり得る。ワクチンを受けるのに好ましい患者は、高齢者例えば、≧50歳、≧60歳、好ましくは、≧65歳、若年者例えば、≦5歳、入院患者、医療従事者、軍人および兵士、妊婦、慢性疾患患者または免疫不全患者である。一般に、このワクチンは、妊婦および青年を処置するために使用され得る。しかし、このワクチンは、これらの群に対してだけ好適であるわけではなく、ある集団においてより広く使用される。本発明によって生成されるワクチンは、他のワクチンと実質的に同時に例えば、医療専門家またはワクチンセンターへの同じ医学上の受診または来院中に、例えば、風疹ワクチン、水痘ワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、DTPワクチン、不活性化されたポリオウイルスワクチン、B型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌結合体ワクチン例えば、四価のA-C-W135-Yワクチン、RSウイルスワクチン、ヒトパピローマウイルスワクチン、インフルエンザウイルスワクチンパンデミックインフルエンザウイルスワクチンを含むなどと実質的に同時に、患者に投与され得る。本発明のワクチンはまた、抗ウイルス化合物、特に、インフルエンザウイルスに対して活性な抗ウイルス化合物例えば、オセルタミビルおよび/またはザナミビルと実質的に同時に例えば、医療専門家への同じ医学上の受診または来院中に、患者に投与され得る。これらの抗ウイルス薬としては、ノイラミニダーゼインヒビター例えば、3R,4R,5S-4-アセチルアミノ-5-アミノ-31-エチルプロポキシ-1-シクロヘキセン-1-カルボン酸または5-アセチルアミノ-4-[アミノイミノメチル-アミノ]-2,6-アンヒドロ-3,4,5-トリデオキシ-D-グリセロ-D-ガラクトノン-2-エノン酸そのエステル例えば、エチルエステルおよびその塩例えば、リン酸塩を含むが挙げられる。好ましい抗ウイルス薬は、リン酸オセルタミビルTAMIFLUTMとしても知られる、3R,4R,5S-4-アセチルアミノ-5-アミノ-31-エチルプロポキシ-1-シクロヘキセン-1-カルボン酸,エチルエステル,ホスフェート1:1である。組み合わせ免疫化のために有用な組成物は、少なくとも2つのGBS59クレードを、ハイブリッドポリペプチドとしてまたは別個のポリペプチドとして含む。さらに、組成物は、iGBSタンパク質に対して、特に、GBS59以外のGBSタンパク質に対して抗体応答を誘発する1つ以上のさらなるポリペプチド;iiGBS由来の莢膜糖;および/またはiii非GBS生物上のエピトープを認識する抗体応答を誘発する1つ以上のさらなる免疫原を含み得る。さらなるポリペプチド抗原[146]との組み合わせ2つ以上のクレード由来のGBSポリペプチドが、1GBS80抗原;2GBS67抗原;3GBS1523抗原;4GBS104抗原;5GBS1524抗原;6GBS3抗原;7SAN1483抗原;8GBS147抗原;9GBS328抗原;および/または10GBS84抗原からなる群より選択される1つ以上のすなわち、1、2、3、4、5、6、7、8、9個または10個すべてのポリペプチド抗原と組み合わされ得る。これらのさらなる抗原は、別個のポリペプチドとして加えられ得る。代案として、それらは、ハイブリッド、例えば、GBS80-GBS1523ハイブリッドとして加えられ得る。さらなる代案として、それらは、ハイブリッドポリペプチド、例えば、GBS59-GBS80ハイブリッドをもたらすように、GBS59ポリペプチド配列に融合され得る。これらの任意の組み合わせは、1つ以上のGBS莢膜糖も含み得、その糖は、代表的にはキャリアタンパク質に結合体化される。そのような糖および結合体化に関するさらなる情報は、下記に提供される。GBS80もともと、GBS80SAG0645配列は、細胞壁表面アンカーファミリータンパク質GI:22533660を参照のこととして参考文献147において注釈が付けられた。参照の目的で、2603株に見られるような完全長GBS80のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号177として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS80ポリペプチドは、a配列番号177に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号177の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS80タンパク質は、配列番号177のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号177由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号177の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号177のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。野生型GBS80は、配列番号177のアミノ酸1~37に、N末端のリーダー配列領域またはシグナル配列領域を含む。GBS80のリーダー配列領域またはシグナル配列領域由来の1つ以上のアミノ酸は、除去され得る例えば、配列番号178。野生型配列はまた、配列番号177のアミノ酸526~543にC末端の膜貫通領域を含む。その膜貫通領域および/または細胞質領域から1つ以上のアミノ酸が除去され得る例えば、配列番号179。野生型GBS80は、配列番号177のアミノ酸521~525に、細胞壁アンカーを示すアミノ酸モチーフを含む。いくつかの組換え宿主細胞系では、このモチーフを除去することにより、その宿主細胞からの組換えGBS80ポリペプチドの分泌を促進することが有用であり得る。したがって、その膜貫通領域および/または細胞質領域ならびに細胞壁アンカーモチーフは、GBS80から除去され得る例えば、配列番号180。あるいは、いくつかの組換え宿主細胞系では、組換え的に発現されたポリペプチドを細胞壁につなぎ留めるために細胞壁アンカーモチーフを使用することが有用であり得る。その発現されたポリペプチドの細胞外ドメインは、精製中に切断され得、またはその組換えポリペプチドは、最終的な組成物において、不活性化された宿主細胞もしくは細胞膜に付着したままであり得る例えば、配列番号181。野生型GBS80の特に免疫原性のフラグメントは、そのポリペプチドのN末端の近くに位置しており、それは、配列番号182である。GBS67もともと、GBS67SAG1408配列は、細胞壁表面アンカーファミリータンパク質GI:22534437を参照のこととして参考文献147において注釈が付けられた。参照の目的で、2603株に見られるような完全長GBS67のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号183として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS67ポリペプチドは、a配列番号183に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号183の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS67タンパク質は、配列番号183のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号183由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号183の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号183のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。野生型GBS67は、C末端膜貫通領域を含み、それは、除去されることにより、例えば配列番号184をもたらし得る。それは、細胞壁アンカーを示すアミノ酸モチーフLPXTGおよびIPMTGも含む。いくつかの組換え宿主細胞系では、このモチーフを除去することにより、その宿主細胞からの分泌を促進することが好ましい場合がある。したがって、本発明において使用するためのGBS67の1つの好ましいフラグメントにおいて、その膜貫通および細胞壁アンカーモチーフは除去される配列番号185。あるいは、いくつかの組換え宿主細胞系では、組換え的に発現されたポリペプチドを細胞壁につなぎ留めるために、その細胞壁アンカーモチーフを使用することが好ましい場合がある。その発現されたポリペプチドの細胞外ドメインは、精製中に切断され得、または組換えポリペプチドは、最終的な組成物において、不活性化された宿主細胞もしくは細胞膜に付着したままであり得る。保存されたリジン残基を含む3つのピリンモチーフが、GBS67において同定されている。保存されたリジン残基は、アミノ酸残基478および488、アミノ酸残基340および342、ならびにアミノ酸残基703および717に存在する。そのピリン配列、特に、保存されたリジン残基は、GBS67のオリゴマーの線毛様構造の形成にとって重要であると考えられている。GBS67の好ましいフラグメントは、少なくとも1つの保存されたリジン残基を含む。保存されたグルタミン酸残基を含む2つのEボックスもまた、GBS67において同定されている。GBS67の好ましいフラグメントは、少なくとも1つの保存されたグルタミン酸残基を含む。GBS67は、アルファヘリックス構造を形成すると予測されるいくつかの領域を含む。そのようなアルファヘリックス領域は、コイルドコイル構造を形成する可能性があり、GBS67のオリゴマー化に関わり得る。GBS67は、S.aureusのコラーゲン結合表面タンパク質pfam05738のCna_Bドメインと相同である領域も含む。これは、ベータサンドイッチ構造を形成し得る。GBS67は、フォンビルブラント因子vWFA型ドメインこれも、GBS67のフラグメントにおいて保持され得ると相同である領域を含む。2603株由来の野生型GBS67の特に免疫原性のフラグメントは、そのポリペプチドのN末端の近くに位置し、配列番号186および配列番号187である。GBS67のバリアントSAI1512が、株H36Bに存在する。このバリアントGBS67SAG1408配列は、細胞壁表面アンカーファミリータンパク質として参考文献148において注釈が付けられたGI:77405751を参照のこと。参照の目的で、H36B株に見られるような完全長GBS67のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号188として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS67ポリペプチドは、a配列番号188に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号188の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号188由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号188の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号188のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。本発明は、上で詳細に論じられた2603株由来のGBS67のフラグメントに類似している例えば、C末端の膜貫通領域を欠く、膜貫通領域および/または細胞壁アンカーモチーフLPXTGおよびIPMTGを欠く、保存されたピリンモチーフまたはそのピリンモチーフ内にリジン残基を含む、保存されたグルタミン酸残基、アルファヘリックス領域、Cna_Bドメインおよび/またはvWFA型ドメインを含むH36B株由来のGBS67のフラグメントの使用を含む。H36B株由来の野生型GBS67の特に免疫原性のフラグメントは、そのポリペプチドのN末端の近くに位置し、配列番号189および配列番号190である。GBS67のバリアントは、株CJB111、515、NEM316、DK21およびCJB110にも存在する。参照の目的で、CJB111、515、NEM316、DK21およびCJB110株に見られるような完全長GBS67のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号191、194、197、200および203として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS67ポリペプチドは、a配列番号191、192、193、194または195に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号191、194、197、200および203の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号191、194、197、200または203由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号191、194、197、200または203の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号191、194、197、200または203のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。本発明は、上で詳細に論じられた2603株由来のGBS67のフラグメントに類似している例えば、C末端の膜貫通領域を欠く、膜貫通領域および/または細胞壁アンカーモチーフLPXTGおよびIPMTGを欠く、保存されたピリンモチーフまたはそのピリンモチーフ内にリジン残基を含む、保存されたグルタミン酸残基、アルファヘリックス領域、Cna_Bドメインおよび/またはvWFA型ドメインを含むCJB111、515、NEM316、DK21およびCJB110株由来のGBS67のフラグメントの使用を含む。CJB111、515、NEM316、DK21およびCJB110由来の野生型GBS67の特に免疫原性のフラグメントは、そのポリペプチドのN末端の近くに位置し、配列番号192および配列番号193CJB111、配列番号195および配列番号196515、配列番号198および配列番号199NEM316、配列番号201および配列番号202DK21ならびに配列番号204および配列番号205CJB110である。GBS1523もともと、GBS1523SAN1518;SpbI配列は、細胞壁表面アンカーファミリータンパク質として参考文献148において注釈が付けられたGI:77408651を参照のこと。参照の目的で、COH1株に見られるような完全長GBS1523のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号206として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS1523ポリペプチドは、a配列番号206に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号206の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS1523タンパク質は、配列番号206のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号206由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号206の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号206のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。野生型GBS1523は、配列番号206のアミノ酸1~29にN末端のリーダー配列領域またはシグナル配列領域を含むこれは、フラグメント例えば、配列番号207において除去され得る。その野生型配列は、配列番号206のアミノ酸468~472に、細胞壁アンカーLPSTGを示すアミノ酸モチーフを含む。いくつかの組換え宿主細胞系では、このモチーフを除去することにより、その細胞からの組換えポリペプチドの分泌を促進することが好ましい場合がある。あるいは、組換え的に発現されたポリペプチドを細胞壁につなぎ留めるために、その細胞壁アンカーモチーフを使用することが好ましい場合がある。その発現されたポリペプチドの細胞外ドメインは、精製中に切断され得、またはその組換えポリペプチドは、最終的な組成物において、不活性化された宿主細胞もしくは細胞膜に付着したままであり得る。保存されたグルタミン酸残基を含むEボックスがまた、残基423に保存されたグルタミン酸を有する配列番号206のアミノ酸419~429において同定されている。そのEボックスモチーフは、オリゴマーの線毛様構造の形成にとって重要であり得るので、GBS1523の非常に有用なフラグメントは、保存されたグルタミン酸残基を含み得る。コードしているヌクレオチド配列内のCAAからAAAへのコドンの変異の結果として、配列番号206の41位のグルタミンQがリジンKに置換されているGBS1523の変異体が同定されている。この置換は、GBS1523配列およびGBS1523フラグメント例えば、配列番号208に存在し得る。上記組成物がGBS80とGBS1523の両方を含む場合、ハイブリッドポリペプチドが使用され得る。GBS80-GBS1523ハイブリッドの例は、参考文献149に見られ、配列番号209~212のポリペプチドを含む。GBS104もともと、GBS104SAG0649配列は、細胞壁表面アンカーファミリータンパク質として参考文献147において注釈が付けられたGI:22533664を参照のこと。参照の目的で、2603株に見られるような完全長GBS104のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号213として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS104ポリペプチドは、a配列番号213に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号213の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS104タンパク質は、配列番号213のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号213由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号213の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号213のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。GBS1524参照の目的で、完全長GBS1524のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号214として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS1524ポリペプチドは、a配列番号214に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号214の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS1524タンパク質は、配列番号214のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号214由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号214の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号214のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。GBS3もともと、GBS3SAG2603;BibA配列は、病原性タンパク質として参考文献147において注釈が付けられたGI:22535109を参照のこと。参照の目的で、2603株に見られるような完全長GBS3のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号215として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS3ポリペプチドは、a配列番号215に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号215の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS3タンパク質は、配列番号215のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号215由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号215の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号215のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。野生型GBS3は、配列番号215のアミノ酸1~36にN末端のリーダー配列領域またはシグナル配列領域これは、フラグメント例えば、配列番号216において除去され得るを含む。GBS3は、細胞壁アンカーLPXTG、膜貫通領域および細胞質ドメインを示すアミノ酸モチーフも含む参考文献150を参照のこと。そのリーダー配列領域またはシグナル配列領域、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメイン、ならびに細胞壁アンカーモチーフのすべてがGBS3から除去されることにより、下に示されるようなコイルドコイルセグメントおよびプロリンリッチセグメントを含むフラグメントがもたらされ得る配列番号217。GBS3の代替のフラグメントは:シグナル配列領域およびコイルドコイルセグメント配列番号218;コイルドコイルセグメント配列番号219;またはシグナル配列領域、コイルドコイルセグメントおよびプロリンリッチセグメント配列番号220を含み得る。GBS3のバリアントは、515株SAL2118、CJB111株SAM1974およびCOH1株SAN2207に存在する。515株、CJB111株およびCOH1株における完全長GBS3に対する参照アミノ酸配列は、本明細書中でそれぞれ配列番号221、配列番号222および配列番号223として与えられる。したがって、本発明とともに使用するためのGBS3ポリペプチドは、a配列番号221、配列番号222もしくは配列番号223に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号221、配列番号222もしくは配列番号223の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるも含み得る。これらのGBS3タンパク質は、配列番号221、配列番号222または配列番号223のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号221、配列番号222または配列番号223由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号221、配列番号222または配列番号223の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号221、配列番号222または配列番号223のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。本発明は、上で詳細に論じられた2603株由来のGBS3のフラグメントに類似している例えば、N末端のリーダー配列領域もしくはシグナル配列領域を欠く;コイルドコイルセグメントおよびプロリンリッチセグメントを含む;シグナル配列領域およびコイルドコイルセグメントを含む;コイルドコイルセグメントを含む;またはシグナル配列領域、コイルドコイルセグメントおよびプロリンリッチセグメントを含む515、cjb111およびcoh1株由来のGBS3のフラグメントの使用を含む。SAN1485もともと、SAN1485配列は、細胞壁表面アンカーファミリータンパク質として参考文献148において注釈が付けられたGI:77408233を参照のこと。参照の目的で、COH1株に見られるような完全長SAN1485のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号224として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいSAN1485ポリペプチドは、a配列番号224に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号224の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのSAN1485タンパク質は、配列番号224のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号224由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号224の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号224のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。GBS147もともと、GBS147SAG0416配列は、推定プロテアーゼとして参考文献147において注釈が付けられたGI:22533435を参照のこと。参照の目的で、2603株に見られるような完全長GBS147のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号225として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS147ポリペプチドは、a配列番号225に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号225の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS147タンパク質は、配列番号225のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号225由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号225の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号225のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。GBS328もともと、GBS328SAG1333配列は、5’-ヌクレオチダーゼファミリータンパク質として参考文献147において注釈が付けられたGI:22534359を参照のこと。参照の目的で、2603株に見られるような完全長GBS328のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号226として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS328ポリペプチドは、a配列番号226に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号226の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS328タンパク質は、配列番号226のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号226由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号226の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号226のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。GBS84もともと、GBS84SAG0907配列は、推定リポタンパク質として参考文献147において注釈が付けられたGI:22533929を参照のこと。参照の目的で、2603株に見られるような完全長GBS84のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号227として与えられる。本発明とともに使用するための好ましいGBS84ポリペプチドは、a配列番号227に対して60以上の同一性例えば、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5またはそれ以上を有し;かつ/またはb配列番号227の少なくともn個連続したアミノ酸のフラグメントを含む、アミノ酸配列ここで、nは、7以上例えば、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250またはそれ以上であるを含む。これらのGBS84タンパク質は、配列番号227のバリアントを含む。bの好ましいフラグメントは、配列番号227由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号227の少なくとも1つのエピトープを保持しつつ、配列番号227のC末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上、および/またはそのN末端から1つ以上のアミノ酸例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25個またはそれ以上を欠く。他のフラグメントは、1つ以上のタンパク質ドメインを省略している。GBS糖との組み合わせGBS59ポリペプチドは、代表的にはキャリアタンパク質に結合体化される1つ以上のGBS莢膜糖と組み合わされ得る。したがって、本発明は、1上で論じられたようなGBS59ポリペプチド;と21つ以上のGBS莢膜糖との組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。この組み合わせの構成要素2において使用される糖は、理想的には、糖部分およびキャリアタンパク質部分を含む結合体として存在する。その結合体におけるキャリア部分は、単一のGBS59ポリペプチド、ハイブリッドGBS59ポリペプチド、非GBS59GBSポリペプチドまたは非GBSポリペプチドであり得る。上記糖は、GBSの莢膜糖由来である。その糖は、細菌からその糖を精製する際に生じるサイズを有する多糖であり得、またはそのような多糖の断片化によって得られるオリゴ糖であり得る。組成物は、以下の連鎖球菌血清型:Ia、Ib、Ia/c、II、III、IV、V、VI、VIIおよびVIIIのうちの1つ以上に由来する莢膜糖を含み得る。組成物は、複数の血清型、例えば、2、3、4、5、6、7または8つの血清型を含み得る。血清型Ia、Ib、II、IIIおよびVのうちの1つ以上に由来する糖を含むことが有用である。これらの5つの血清型の各々の莢膜糖は:aすべての場合においてガラクトース残基に2→3結合される、末端のN-アセチル-ノイラミン酸NeuNAc残基一般に、シアル酸と称される;およびb三糖コア内のN-アセチル-グルコサミン残基GlcNAcを含む。本発明に従って使用される糖は、その天然の形態であってもよいし、改変されていてもよい。例えば、その糖は、天然の莢膜糖よりも短くてもよいし、化学的に改変されていてもよい。例えば、その糖は、脱O-アセチル化され得るか部分的または完全に、脱N-アセチル化され得るか部分的または完全に、またはN-プロピオニル化propionatedされ得る部分的または完全になど。脱アセチル化は、結合体化前、結合体化中または結合体化後に起き得るが、好ましくは、結合体化前に起きる。特定の糖に応じて、脱アセチル化は、免疫原性に影響を及ぼすこともあるし、及ぼさないこともある。様々な血清型におけるGBS糖へのO-アセチル化の関連性は、参考文献151で論じられており、いくつかの実施形態において、7、8および/または9位のシアル酸残基のO-アセチル化は、例えば、保護/脱保護、再アセチル化などによって、結合体化前、結合体化中および結合体化後に保持される。しかしながら、代表的には、本発明において使用されるGBS糖は、7、8および/または9位のシアル酸残基のO-アセチル化を実質的に有しない。脱アセチル化などの作用は、通例のアッセイによって評価され得る。別の可能性のある改変は、その糖からのシアル酸残基例えば、側鎖の末端のシアル酸の除去である[152]。特に、血清型Vの莢膜糖が本発明において使用されるとき、その糖は、参考文献[152]に記載されているような脱シアル化によって改変され得る。脱シアル化されたGBS血清型Vの莢膜糖は、参考文献[152]に記載されているように、精製されたGBS血清型Vの莢膜糖を弱酸性条件例えば、60分間にわたる80°Cの0.1M硫酸下で処理することによって、またはノイラミニダーゼで処理することによって、調製され得る。別の例では、完全長の多糖が、例えば、弱酸での加水分解、加熱、サイズクロマトグラフィーなどによって、解重合されることにより、本発明とともに使用するためのより短いフラグメントがもたらされ得る。鎖の長さは、ウサギにおいてGBS糖の免疫原性に影響を及ぼすと報告されている[153]。特に、血清型IIおよび/またはIIIの莢膜糖が本発明において使用されるとき、その糖は、参考文献154に記載されているように解重合され得る。この文書は、還元末端の2,5-アンヒドロ-D-マンノース残基を有する抗原性フラグメントへの、穏やかな脱アミノ性切断による、II型およびIII型の莢膜糖の部分的な解重合を記載している。莢膜糖は、参考文献155などの本明細書中の参考文献に記載されているような公知の手法によって精製され得る。代表的なプロセスは、塩基抽出、遠心分離、濾過、RNase/DNase処理、プロテアーゼ処理、濃縮、サイズ排除クロマトグラフィー、限外濾過、陰イオン交換クロマトグラフィーおよびさらなる限外濾過を含む。代案として、参考文献156に記載されている精製プロセスを使用することができる。このプロセスは、塩基抽出、エタノール/CaCl2処理、CTAB沈殿および再可溶化を含む。本発明は、天然の供給源から精製された糖に限定されず、上記糖は、全合成または部分合成などの他の方法によって得られる場合がある。糖は、代表的には、キャリアタンパク質に結合体化される。一般に、糖とキャリアとの共有結合性の結合体化は、それらをT非依存性抗原からT依存性抗原に変換するので、免疫記憶のための抗原刺激を可能にし、その糖の免疫原性を高める。GBS糖の結合体化は、広く報告されている例えば、参考文献157~164を参照のこと。GBS糖の結合体化のための代表的な従来技術プロセスは、破傷風トキソイドTTまたはCRM197などのキャリアタンパク質への精製された糖の還元的アミノ化を含む[158]。その還元的アミノ化には、そのキャリアにおけるアミノ酸の側鎖上のアミン基およびその糖におけるアルデヒド基が関わる。GBS莢膜糖は、その天然の形態においてアルデヒド基を含まないので、これは、代表的には、その糖のシアル酸残基の一部を酸化例えば、過ヨウ素酸酸化することによって、結合体化前に生成される[158,165]。この様式で調製される結合体ワクチンは、GBSの血清型Ia、Ib、II、IIIおよびVの各々についてヒトにおいて安全かつ免疫原性であると示されている[166]。好ましいキャリアタンパク質は、細菌のトキシン例えば、ジフテリアトキシンまたは破傷風トキシンもしくはトキソイドまたはそれらの変異体である。これらは、結合体ワクチンにおいて通常使用される。結合体におけるキャリアタンパク質は、1のGBS59抗原のうちの1つであってもよいし、そうでなくてもよい。それがGBS59抗原ではない場合、その代わり、それは異なるGBS抗原であり得る。しかし、いくつかの実施形態において、そのキャリアは、GBS抗原ではなく、例えば、細菌のトキシンまたはトキソイドであり得る。代表的なキャリアタンパク質は、ジフテリアトキソイドもしくは破傷風トキソイド、またはそれらの変異体である。トキシンまたはトキソイドのフラグメント、例えば、破傷風トキソイドのフラグメントC[167]も使用され得る。ジフテリアトキシンのCRM197変異体[168~170]は、本発明において特に有用である。他の好適なキャリアタンパク質としては、N.meningitidis外膜タンパク質複合体[171]、合成ペプチド[172,173]、熱ショックタンパク質[174,175]、百日咳タンパク質[176,177]、サイトカイン[178]、リンフォカイン[188]、ホルモン[188]、成長因子、N19[180]などの様々な病原体に由来する抗原由来の複数のヒトCD4T細胞エピトープを含む人工タンパク質[179]、H.influenzae由来のプロテインD[181~183]、鉄取り込みタンパク質[184]、C.difficile由来のトキシンAまたはB[185]、組換えP.aeruginosaエキソプロテインArEPA[186]などが挙げられる。組成物が、2種以上の結合体を含む場合、各結合体は、同じキャリアタンパク質を使用してもよいし、異なるキャリアタンパク質を使用してもよい。いくつかの実施形態において、単一の結合体は、複数の血清型由来の糖を有し得る[187]。しかしながら、通常、各結合体は、単一の血清型由来の糖を含む。結合体は、過剰なキャリアw/wまたは過剰な糖w/wを有し得る。いくつかの実施形態において、結合体は、等重量の各々を含み得る。例えば、1:5~5:1という糖:タンパク質比w/w、特に1:5~2:1の比を有する結合体が使用され得る。上記キャリア分子は、そのキャリアに直接またはリンカーを介して共有結合的に結合体化され得る。上記タンパク質への直接的な結合は、例えば、参考文献188および189に記載されているような、例えば、糖とキャリアとの間の還元的アミノ化によって達成され得る。その糖は、第1に、例えば酸化によって、活性化される必要があり得る。リンカー基を介した結合は、任意の公知の手順、例えば、参考文献190および191に記載されている手順を用いて行われ得る。結合の好ましいタイプは、遊離-NH2基例えば、アミノ化によってグルカンに導入されるとアジピン酸とをカップリングし例えば、ジイミド活性化を用いて、次いで得られた糖アジピン酸中間体にタンパク質をカップリングすることによって形成され得る、アジピン酸リンカーである[192,193]。結合の別の好ましいタイプは、糖CDIの遊離ヒドロキシル基の反応[194,195]に続く、カルバメート結合を形成するタンパク質との反応によって形成され得る、カルボニルリンカーである。他のリンカーとしては、β-プロピオンアミド[196]、ニトロフェニル-エチルアミン[197]、ハロゲン化ハロアシル[198]、グリコシド結合[199]、6-アミノカプロン酸[200]、ADH[201]、C4~C12部分[202]などが挙げられる。カルボジイミド縮合もまた使用され得る[203]。非GBS抗原との組み合わせ上記GBS59クレードの組み合わせは、非GBS抗原と組み合わせて使用され得る。したがって、本発明は、1混合物またはハイブリッドとしての、上で論じられたような少なくとも2つのGBS59クレードの組み合わせ;と2ジフテリアトキソイド;破傷風トキソイド;1つ以上の百日咳抗原;B型肝炎ウイルス表面抗原;不活性化されたポリオウイルス抗原;;Neisseriameningitidisの血清群C由来の莢膜糖抗原の結合体;Neisseriameningitidisの血清群Y由来の莢膜糖抗原の結合体;Neisseriameningitidisの血清群W135由来の莢膜糖抗原の結合体;Neisseriameningitidesの血清群A由来の莢膜糖抗原の結合体;1つ以上のインフルエンザ抗原;および1つ以上のヒトパピローマウイルス抗原からなる群より選択される1つ以上の抗原との組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。ジフテリアトキソイドは、Corynebacteriumdiphtheriae由来のジフテリアトキシンを処理することによって例えば、ホルムアルデヒドを使用して得ることができる。ジフテリアトキソイドは、例えば、参考文献204の第13章に詳細に開示されている。破傷風トキソイドは、Clostridiumtetani由来の破傷風トキシンを処理することによって例えば、ホルムアルデヒドを使用して得ることができる。破傷風トキソイドは、参考文献204の第27章に詳細に開示されている。ワクチンにおける百日咳抗原は、細胞性細胞全体,Pwまたは無細胞性Paである。本発明は、どちらかの種類の百日咳抗原を使用し得る。細胞性百日咳抗原の調製は、十分に記述されており例えば、参考文献204の第21章を参照のこと、例えば、それは、B.pertussisの第I相培養物の熱失活によって得られる場合がある。無細胞性百日咳抗原は、天然の細菌から精製されたか、または組換え宿主における発現後に精製された、特定の精製されたB.pertussis抗原を含む。2つ以上の無細胞性抗原を使用するのが通常であるので、ある組成物は、以下の周知かつ十分に特徴付けられたB.pertussis抗原:1解毒された百日咳トキシン百日咳トキソイド、すなわちPT;2繊維状赤血球凝集素FHA;3パータクチン69キロダルトン外膜タンパク質としても知られるのうちの1、2または3つを含み得る。FHAおよびパータクチンは、本発明に従って使用する前にホルムアルデヒドで処理され得る。PTは、ホルムアルデヒドおよび/またはグルタルアルデヒドでの処理によって解毒され得るが、この化学的な解毒手順の代替として、そのPTは、変異誘発によって酵素活性が低下した変異PTであってもよい[205]。使用され得るさらなる無細胞性百日咳抗原としては、線毛例えば、凝集原2および3が挙げられる。B型肝炎ウイルス表面抗原HBsAgは、B型肝炎ウイルスのキャプシドの主要な構成要素である。それは、Saccharomycescerevisiaeなどの酵母における組換え発現によって便利に生成される。不活性化されたポリオウイルスIPV抗原は、細胞培養において増殖したウイルスから調製され、次いで、不活性化される例えば、ホルムアルデヒドを用いて。参考文献204の第24章に説明されているような3つタイプのポリオウイルスのうちの1つによって灰白髄炎が引き起こされ得るので、組成物は、3つのポリオウイルス抗原:ポリオウイルス1型例えば、Mahoney株、ポリオウイルス2型例えば、MEF-1株およびポリオウイルス3型例えば、Saukett株を含み得る。ある組成物が、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドまたは無細胞性百日咳抗原のうちの1つを構成要素2の中に含むとき、その組成物は、通常、それらの3つすべてを含むすなわち、構成要素2は、D-T-Paの組み合わせを含む。ある組成物が、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドまたは細胞性百日咳抗原のうちの1つを構成要素2の中に含むとき、その組成物は、通常、それらの3つすべてを含むすなわち、構成要素2は、D-T-Pwの組み合わせを含む。ヒトパピローマウイルス抗原には、ウイルス様粒子VLPとして公知の構造を形成するように集合し得るL1キャプシドタンパク質が含まれる。そのVLPは、酵母細胞例えば、S.cerevisiaeまたは昆虫細胞例えば、S.frugiperdaなどのSpodoptera細胞またはDrosophila細胞におけるL1の組換え発現によって産生され得る。酵母細胞の場合、プラスミドベクターが、L1遺伝子を有し得;昆虫細胞の場合、バキュロウイルスベクターが、L1遺伝子を有し得る。より好ましくは、上記組成物は、HPV-16株とHPV-18株の両方に由来するL1VLPを含む。この二価の組み合わせは、高度に有効であると示されている[206]。HPV-16およびHPV-18株に加えて、四価の組み合わせを得るためにHPV-6およびHPV-11株由来のL1VLPを含めることも可能である。インフルエンザ抗原は、現在、インフルエンザウイルスワクチンの形態で存在し得る。様々な形態のインフルエンザウイルスワクチンが、現在利用可能である例えば、参考文献[204]の第17および18章を参照のこと。ワクチンは、一般に、生ウイルス、不活性化されたウイルス、組換え赤血球凝集素またはビロソームに基づく。不活性化されたワクチンは、ホールビリオン、スプリットビリオン、または精製された表面抗原に基づき得る。本発明のワクチン中の抗原は、生ウイルスの形態、またはより好ましくは、不活性化されたウイルスの形態をとり得る。そのワクチンは、例えば、三価のワクチン例えば、A/H1N1株、A/H3N2株およびB株由来の赤血球凝集素を含むであり得る。他の実施形態において、そのワクチンは、一価のワクチン例えば、A/H1N1株またはA/H5N1株由来の赤血球凝集素を含むである。そのワクチンは、アジュバント添加されても例えば、水中油型エマルジョンで、アジュバント添加されなくてもよい。抗体GBS抗原に対する抗体は、受動免疫のために使用され得る[207]。したがって、本発明は、同時の、別個のまたは逐次的な投与のための抗体の組み合わせを提供し、ここで、その組み合わせは、a上で定義されたような第1アミノ酸配列を認識する抗体;b上で定義されたような第2アミノ酸配列を認識する抗体;および/またはc上で定義されたような第3アミノ酸配列を認識する抗体のうちの少なくとも2つを含む。本発明はまた、治療におけるそのような抗体の組み合わせの使用も提供する。本発明はまた、医薬の製造におけるそのような抗体の組み合わせの使用も提供する。本発明はまた、有効量のそのような組み合わせを哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物を処置するための方法も提供する。免疫原性組成物について上に記載されたように、これらの方法および使用によって、哺乳動物をGBS感染から保護することが可能になる。本発明と併せて使用され得るモノクローナル抗体は、アミノ酸411~436配列番号270におけるD3515クレードの表面に露出されるフラグメントに結合する17C4/A3および4H11/B7を含む。4H11/B7の重鎖は、配列番号263に提供されるアミノ酸を含み、配列番号262を含む核酸分子によってコードされる。4H11/B7の軽鎖は、配列番号265に提供されるアミノ酸を含み、配列番号264を含む核酸分子によってコードされる。17C4/A3の重鎖は、配列番号267に提供されるアミノ酸を含み、配列番号266を含む核酸分子によってコードされる。17C4/A3の軽鎖は、配列番号269に提供されるアミノ酸を含み、配列番号268を含む核酸分子によってコードされる。本発明は、17C4/A3および4H11/B7に対して有意な配列同一性を有する抗体ならびにそのような抗体をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、4H11/B7の重鎖配列番号263に対して60、70、80、90、95、96、97、98もしくは99を超える配列同一性を有する重鎖および/または4H11/B7の軽鎖配列番号265に対して60、70、80、90、95、96、97、98もしくは99を超える配列同一性を有する軽鎖を有する抗体を含む。本発明はまた、17C4/A3の重鎖配列番号267に対して60、70、80、90、95、96、97、98もしくは99を超える配列同一性を有する重鎖および/または17C4/A3の軽鎖配列番号269に対して60、70、80、90、95、96、97、98もしくは99を超える配列同一性を有する軽鎖を有する抗体も含む。本発明はまた、配列番号262、264、266または268に対して60、70、80、90、95、96、97、98または99を超える配列同一性を有する核酸分子も含む。これらの抗体配列は、完全長配列である。当業者であれば、これらの抗体の可変ドメインまたはとりわけCDR領域を使用することにより、ヒト化抗体などの代替抗体を作製することができるだろう。本発明は、そのような抗体を包含する。用語抗体は、インタクトな免疫グロブリン分子、ならびに抗原に結合することができるそのフラグメントを含む。これらには、ハイブリッドキメラ抗体分子[208,209];Fab’2およびFabフラグメントおよびFv分子;非共有結合性ヘテロ二量体[210,211];一本鎖Fv分子sFv[212];二量体および三量体の抗体フラグメント構築物;ミニボディminibodies[213,214];ヒト化抗体分子[215~217];ならびにそのような分子から得られる任意の機能的フラグメント、ならびにファージディスプレイなどの非従来的なプロセスによって得られる抗体が含まれる。好ましくは、それらの抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は、当該分野で周知である。ヒト化抗体または完全ヒト抗体が好ましい。通則本発明の実施は、別段示されない限り、当該分野の技術の範囲内の、化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を使用する。そのような手法は、文献に十分に説明されている。例えば、参考文献218~225などを参照のこと。GIナンバリングは、上で使用されている。GI番号またはGenInfoIdentifierは、配列がNCBIのデータベースに加えられたときにNCBIによって処理された各配列レコードに連続して割り当てられるひと続きの数字である。そのGI番号は、配列レコードのアクセッション番号と類似していない。ある配列が更新されたとき例えば、訂正のため、またはより多くのアノテーションもしくは情報を加えるために、それは、新しいGI番号を受ける。したがって、所与のGI番号に関連する配列は、決して変化しない。本発明が、エピトープに関係する場合、このエピトープは、B細胞エピトープおよび/またはT細胞エピトープであり得る。そのようなエピトープは、経験的に同定され得るか例えば、PEPSCAN[226,227]または同様の方法を用いて、または予測され得る例えば、Jameson-Wolf抗原性指標[228]、マトリックスベースのアプローチ[229]、MAPITOPE[230]、TEPITOPE[231,232]、ニューラルネットワーク[233]、OptiMerEpiMer[234,235]、ADEPT[236]、Tsites[237]、親水性[238]、抗原性指標[239]または参考文献240~244に開示されている方法などを用いて。エピトープは、抗体の抗原結合部位またはT細胞レセプターによって認識され、それらに結合する抗原の一部であり、それらは、抗原決定基とも称される場合がある。用語~を含むcomprisingは、~を含むincludingならびに~からなるconsistingを包含し、例えば、Xを含むcomprising組成物は、もっぱらXからなってもよいし、追加のもの、例えば、XYを含んでもよい。単語実質的には、完全にを排除せず、例えば、Yを実質的に含まない組成物は、Yを完全に含まない場合がある。必要に応じて、単語実質的には、本発明の定義から省略され得る。数値xに関する用語約は、任意のものであり、例えば、x±10を意味する。具体的に述べられていない限り、2つ以上の構成要素を混合する工程を包含するプロセスは、混合の任意の特定の順序を要求しない。したがって、構成要素は、任意の順序で混合され得る。3つの構成要素が存在する場合、2つの構成要素が、互いに混合され得、次いで、その混合物が、第3の構成要素と混合され得るなど。抗体は、一般に、その標的に対して特異的である。したがって、それらは、ウシ血清アルブミンなどの無関係なコントロールタンパク質よりも、その標的に対して高い親和性を有する。2つのアミノ酸配列間の配列同一性パーセンテージに対する言及は、それらがアラインメントされたとき、そのパーセンテージのアミノ酸が、その2つの配列の比較において同じであることを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性またはパーセント配列同一性は、当該分野で公知のソフトウェアプログラム、例えば、参考文献245の第7.7.18項に記載されているものを用いて決定され得る。好ましいアラインメントは、12というギャップオープンペナルティおよび2というギャップ伸長ペナルティ、62というBLOSUMマトリックスを用いたアフィンギャップ検索を使用するSmith-Waterman相同性検索アルゴリズムによって決定される。このSmith-Waterman相同性検索アルゴリズムは、参考文献246に開示されている。発明を実施するための形式StreptococcusagalactiaeB群連鎖球菌[GBS]は、新生児における敗血症および髄膜炎の最も一般的な原因であり、健常な女性の肛門生殖器の粘膜の主要なコロニー形成者colonizerでもある。最近、重要な毒性因子としてGBSに3つの線毛タイプが発見された。線毛の集合に関わる遺伝子は、特徴的なゲノム遺伝子座PI-1、PI-2aおよびPI-2bという名称にクラスターを形成しており、その各々が、線毛の構造上の構成要素に相当するLPXTGモチーフ含む3つのタンパク質、およびタンパク質重合を触媒する2つのソルターゼ酵素ををコードする。その3つの線毛タイプの各々は、2つの防御抗原を有する。これらのうち、線毛タイプ2aBP-2aの骨格タンパク質は、最も高い程度の遺伝子変動性を示し、オプソニン作用活性を顕著に媒介することができ、マウスにおいて相同対立遺伝子を発現する株に対してだけ防御をもたらすことができた。BP-2aの対立遺伝子バリアントの免疫優性エピトープおよび防御エピトープをマッピングするために、本発明者らは、比較ホモロジーモデリングによって、かつ、この構造情報に基づいて、そのタンパク質の構造的特徴づけを行い、本発明者らは、同定された4つのIgG様フォールドドメインに対応する主要なバリアントの欠失変異体を作製した。インビトロおよびインビボ研究から、そのタンパク質のC末端の部分だけが、高度に表面に露出され、マウスにおいて防御をもたらすオプソニン作用抗体を誘発することができることが示された。特に、ドメインD3は、分析された主要な4つの対立遺伝子バリアントの防御免疫にとって最も重要であるとみられた。最後に、本発明者らは、GBS感染に対する広範な防御ワクチンが、種々のBP-2aバリアント由来のD3ドメインを含む融合タンパク質を用いて作製され得ることを示した。材料および方法比較ホモロジーモデリングすべての分子シミュレーションを、Accelrys,USA製のDiscoveryStudio2.5ソフトウェアを用いて行った。BP-2a515バリアント,TIGRアノテーションSAL_1486およびH36Bバリアント,TIGRアノテーションSAI_1511のアミノ酸配列を使用して、BLASTプログラムツール[247]を用いてProteinDataBankPDBを検索した。ホモロジーモデリング用の両方のタンパク質配列に対する最良の鋳型構造は、PDBデータベースから得られたS.pneumoniaeの線毛の骨格タンパク質であるRrgBPDBコード:650の結晶部分残基187~627であると帰結した。SAL_1486とRrgBとの間およびSAI_1115とRrgBとの間のペアワイズ配列アラインメントを、DS2.5におけるmultiplesequencealignmentツールを用いて行い、続いて、そのアラインメントの質を改善するために手作業による改変を行った。それらのモデルは、MODELER[248]を用いてDS2.5のproteinmodellingモジュールから生成され、そのタンパク質に対するホモロジーモデリングとループ精密化の両方を行った。10個のモデルが生成され、鋳型の結晶構造のトレースCα原子に関して最も小さいRMS偏差を共有したモデルを、さらなる精密化および検証のために選択した。SAL_1486について得られた精密化された構造の質を、DS2.5におけるverifyProfile-3Dモジュールを用いて確認し、その立体化学的な質を、DS2.5を用いてラマチャンドランプロットによって調べた。SAI_1511について生成された構造における特定のループ領域を最適化するために、DS2.5のCHARMmおよびLooper分子機構に基づくlooprefinementモジュールを使用した。最後に、生成されたモデル構造を、DS2.5のAlignStructuresモジュールを用いて重ね合わせた。タンパク質結晶化結晶化テストを、Orxy8.0結晶化ロボットDouglasInstrumentsを用いる96ウェルマイクロバッチプレートGreinerにおいて設定した。BP-2a-515の結晶は、1:1の比で混合されたシリコンオイルおよびパラフィンで重層された、10mMHEPESpH7.0中の0.3μlのタンパク質180mg/mlおよび0.2μlの結晶化溶液25w/vPEG4000、0.1MHEPESpH7.0および90mM酒石酸カリウムナトリウム四水和物からなる0.5μlの液滴中で20°Cにおいて1~2週間後に成長した。結晶を、高い沈殿剤濃度40w/vPEG4000を含む結晶化溶液において凍結保護した。結晶は、斜方晶系のP212121空間群に属し、非対称ユニットに2つのBP-2a515鎖が存在し、53という推定溶媒含量を有する。構造の解析および精密化EuropeanSynchrotronRadiationFacilityGrenoble,France;ビームラインID23-1において1.75Åという分解能で、単一の結晶から回折データを収集した。CCP4ProgramSuite34から入手可能なimosflm32およびSCALA33を用いてデータを処理した。BP-2a-515の結晶構造を、プログラムMolrep35およびS.pneumoniae由来の線毛骨格タンパク質RrgBの構造15PDB2X9W検索モデルとしてを用いる分子置換によって解析した。最初のMolrep出力モデルを、ARP/wARP36を用いて拡張した。その構造を、REFMAC537を用いて精密化し、Coot38を用いて電子密度マップにモデル化した。後者の精密化の段階は、トランスレーショナル-ライブレーション-スクリューtranslational-libration-screwTLSオプション39を含んだ。モデル構築および精密化の間に、そのタンパク質は、以前にRrgBについて観察されたように15、N末端で切断されており、およそ190残基を欠くことが明らかになった。最終的なモデルは、MolProbityhttp://molprobity.biochem.duke.edu/40,41を用いて行われた検証によると、アウトライアーなしに、ラマチャンドランプロットの最も好ましい領域に残基の99.1を有する最適な立体化学幾何学的パラメータを示す。BP-2a-515の残基190~640に対する原子座標および構造因子は、ProteinDataBank,ResearchCollaboratoryforStructuralBioinformatics,RutgersUniversity,NewBrunswick,NJhttp://www.rcsb.orgにアクセッションコード2XTLとして寄託されているPDBを加えるための参考文献:Berman,H.M.ら、TheProteinDataBank.NucleicAcidsRes,2000.281:p.235-42。細菌の株および増殖条件この研究において使用されたGBS株は、2603V/R血清型V、515Ia、CJB111V、H36B血清型Ib、5401IIおよび3050IIであった。ToddHewittブロスTHB;DifcoLaboratoriesまたはトリプチケースソイ寒天5ヒツジ血液を補充にて37°Cにおいて細菌を増殖させた。クローニング、発現、組換えタンパク質および抗血清の精製BP-2a515およびH36B対立遺伝子バリアントの単一ドメインD1、D2、D3およびD4をコードする配列をクローニングするためのDNAの供給源として、GBS株515およびH36Bを使用した。NucleoSpinTissueキットMacherey-Nagelを製造者の指示書に従って使用し、グラム陽性細菌用の標準的なプロトコルによってゲノムDNAを単離した。まず、各ドメインに対応する遺伝子を、pENTRTM/TEV/D-TOPOベクターInvitrogenにクローニングし、次いで、GATEWAYクローニングシステムInvitrogenを用いてpET54DESTベクターN末端の6×HisタグまたはpET59DESTN末端の6×His-TRXタグNovagenにサブクローニングしたPIPEクローニング法[249]によってpSpeedETベクターにクローニングされたSAI_1511のD3ドメインを除く。使用したオリゴを表1に列挙する。得られた構築物を、配列について確認し、次いで、6His-またはTRX-タグ化融合タンパク質として発現させるために大腸菌BL21DE3Novagenに形質転換した。515、CJB111および2603対立遺伝子バリアントそれぞれTIGRアノテーションSAL1486、SAM1372およびSAG1407に対応する完全長組換えBP-2aタンパク質を、以前に報告されているように[2]生成し、一方、DNAの供給源として株H36Bを用いて完全長H36BバリアントTIGRアノテーションSAI_1511をpET24bNovagenにクローニングした。シグナルペプチドおよびLPXTGモチーフから開始する3’末端配列を有しないコード領域を増幅するためのプライマーをデザインした。BP-2a融合タンパク質、6×D3および4×D3-Hをコードする遺伝子を、GENEARTから合成的に構築した。次いで、大腸菌HK100株におけるPIPEクローニングを用いて、社内で適合させたpET15ベクターに6×D3遺伝子をクローニングした。NdeIおよびXhoI制限酵素を用いて、4×D3-H遺伝子を発現ベクターpColdIN末端6×His-タグ,Takaraにサブクローニングした。最終的な構築物の配列を決定し、その構築物をBL21DE3Novagenに形質転換した。組換えタンパク質発現のために、pETクローンについては1mMIPTGで、またはSpeedETクローンについては0.2アラビノースで誘導した後、培養物を25°Cで5時間維持した。すべての組換えタンパク質をアフィニティークロマトグラフィーおよびゲル濾過によって精製した。簡潔には、細胞を遠心分離によって回収し、PBS中に10mMイミダゾール、1mg/mlリゾチーム、0.5mg/mlDNAseおよびCOMPLETEインヒビターカクテルRocheを含む溶解緩衝液中で溶解した。その溶解産物を遠心分離によって浄化し、10mMイミダゾールを含むPBSで予め平衡化されたHis-TrapHPカラムArmeshamBiosciences上に適用した。20mMおよび50mMイミダゾール緩衝液を用いる2回の洗浄工程の後に、250mMイミダゾールを含む同じ緩衝液を用いて、タンパク質溶出を行った。次いで、溶出されたタンパク質を濃縮し、PBSで予め平衡化されたHiLoad16/60Superdex75AmershamBiosciences上にロードした。4×D3-Hを発現させるために、OD600nmが0.7という値に達するまで37°Cで維持し、1mMIPTGの存在下での誘導後、温度を20°Cに切り替え、その培養物をこの温度で一晩維持した。BCAアッセイPIERCEを用いて、純粋な画分のタンパク質濃度を推定した。以前に記載されたように[250]、精製された組換えタンパク質でCD1マウスを免疫化することによって、各タンパク質に特異的な抗血清を産生させた。プールされた血清中のタンパク質特異的免疫応答全IgをELISAによってモニターした。部位特異的変異誘発アラニンに変異されたリジン残基イソペプチド結合に関わるを含むBP-2a515バリアントの変異型を作製するために、LPXTGモチーフを有する野生型BP-2a515バリアントに変異を導入した。LPXTGモチーフを有するBP-2a515をコードする遺伝子の増幅のために使用されたプライマーを表1に列挙する。PIPE法を用いて部位特異的変異誘発を行い、表1に列挙されるような、各変異に対する順方向および逆方向プライマー対をデザインした。野生型タンパク質および変異型をSpeedETベクターN末端6×Hisタグにクローニングし、大腸菌HK100株において発現させた。得られた構築物の配列を、DNA配列決定によって確かめた。上に記載されたようなアフィニティークロマトグラフィーおよびゲル濾過によってタンパク質を精製した。フローサイトメトリー515およびH36Bバリアントの精製された欠失変異体に対して惹起されたマウス血清を、フローサイトメトリーによって細菌全体に対して分析することにより、対応するドメインの表面露出を評価した。指数関数期の細菌細胞を0.08wt/volパラホルムアルデヒドの存在下において固定し、37°Cにおいて1時間インキュベートした。次いで、固定された細菌をPBSで1回洗浄し、NewbornCalfSerumSigmaに再懸濁し、25°Cで20分間インキュベートした。次いで、その細胞を、希釈緩衝液PBS、20NewbornCalfSerum、0.1BSAで1:200希釈された免疫前血清または免疫血清中、4°Cで1時間インキュベートした。細胞をPBS-01BSAで洗浄し、R-フィコエリトリン結合体化Fab2ヤギ抗マウスIgGJacksonImmunoResearchLaboratories;Inc.の1:100希釈物とともに4°Cでさらに1時間インキュベートした。洗浄後、細胞をPBSに再懸濁し、FlowJoSoftwareTreeStar,Ashland,ORを用いてFACSCalibur装置BectonDickinson,FranklinLakes,NJで分析した。データは、免疫前血清で染色された細胞と免疫血清で染色された細胞との蛍光の差異として表される。免疫ブロット法B群連鎖球菌株を、THBDifcoLaboratories,Detroit,MI中で指数関数期OD600=0.5まで一晩増殖させた。細菌をペレットにし、PBSで洗浄し、400単位のムタノリシンSigma-Aldrichを含む50mMTris-HClに再懸濁した。次いで、細菌懸濁物を37°Cで2時間インキュベートし、凍結および解凍によって溶解した。14000rpmでの10分間の遠心分離によって細胞残屑を除去し、タンパク質濃度をBio-RadProteinアッセイによって測定した。全細胞タンパク質を4~12NuPageNovexプレキャストゲルInvitrogenで分離し、iBlotTMDryBlottingSystemInvitrogenを用いてPVDF膜上にエレクトロブロットした。0.05Tween20および10脱脂乳を含む1×リン酸緩衝食塩水PBS:140mMNaCl、2.7mMKCl、10mMNa2HPO4および1.8mmKH2PO4,pH7.3中において室温で1時間ブロッキングした後、膜を、1:500希釈された1次抗体とともに室温RTで1時間インキュベートした。0.05Tween20を含むPBSPBSTで3回洗浄した後、その膜を、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化2次抗体Dakoとともに1時間インキュベートした。陽性のバンドを、Opti-4CNSubstrateKitBio-Radを用いて可視化した。オプソニン作用アッセイ食細胞として分化型HL-60、ならびに標的細胞として株515、CJB111、3050および5401を用いて、オプソニン作用アッセイを行った。GBS株を、指数関数的増殖相の中期A650nm=0.3までTodd-HewittブロスTHB中で増殖させた。その細菌を遠心分離によって回収し、冷食塩水溶液で2回洗浄し、最後に、約1.2×107CFU/mlの濃度にHBSS緩衝液Invitrogenに再懸濁した。前骨髄球性HL-60細胞ATCC,CCL-240を、10FetalクローンIHyCloneを含むRPMI1640Gibco,Invitrogen中、37°C、5CO2において増やし、その増殖培地に100mMN,NジメチルホルムアミドDMF,Sigmaを加えることによって顆粒球様細胞に分化させた4×105細胞/mlの密度まで。4日後、細胞を遠心分離によって回収し、約4×107細胞/mlの濃度にHBSS緩衝液に再懸濁した。簡潔には、この反応は、600rpmで振盪しつつ、37°Cにおいて1時間、約3×106個の分化したHL-60、約1.5×105CFUのGBS細胞、10仔ウサギ補体Cedarlaneおよび熱失活したマウス抗血清を含む125μlという総容積で行われた。インキュベーションの直前および1時間のインキュベーション後に、25μlのアリコートを滅菌蒸留水に希釈し、5ヒツジ血液を含むトリプチケースソイ寒天プレート上にプレーティングした。各実験に含められたネガティブコントロールのセットは、免疫前の血清を含む反応物、HL-60を含まない反応物、および熱失活した補体を含む反応物からなった。オプソニン作用の死滅の量log死滅は、ゼロ時点におけるCFU数のlogから1時間のアッセイを生き残ったコロニー数のlogを減算することによって算出された。マウスの活性な母体免疫化モデルGBS感染の母体免疫化/新生仔チャレンジモデルを用いることにより、以前に記載されたようにMaioneら、2005、マウスにおいて産生されたタンパク質の防御有効性を確認した。簡潔には、CD-1雌性マウス6~8週齢を1日目CFA中、21日目および35日目IFAに、PBSまたは20mgの組換えタンパク質で免疫化し、次いで、最後の免疫の3日後に採血した。生後48時間以内に、90の死亡率を引き起こすと計算された用量の種々のGBS株を仔の腹腔内に注射した。チャレンジ後の2日間にわたって仔の生存をモニターした。フィッシャーの正確検定を用いて統計分析を行った。すべての動物試験は、IstitutoSuperiorediSanitaeItalyのガイドラインに従って行われた。結果本発明者らは以前に、B群連鎖球菌における線毛の骨格タンパク質2aBP-2aが、マウスの活性な母/仔チャレンジモデルにおいて防御をもたらすことができると示していた[1]。しかしながら、高度に変動性の対立遺伝子バリアントが7つ存在すること、および各バリアントが相同株に対してしか防御をもたらさないという証明は、GBSに対する広スペクトルのワクチンにおいて、この抗原のみを用いる可能性、または他の抗原と組み合わせてこの抗原を用いる可能性を制限する[2]。それにもかかわらず、BP-2aは、特異的抗体の存在下においてオプソニン作用アッセイにおいて試験されたとき、GBSの高レベルのオプソニン死滅を促進することができるので、興味深い抗原である。本発明者らは、この抗原の防御能を調べるため、およびBP-2aの免疫優性エピトープを同定するために、この特異的な特徴を用いた。BP-2a515バリアントの比較ホモロジーモデリングBP-2aの適切な欠失変異体をデザインするために、本発明者らは、まず515バリアントTIGRアノテーションSAL_1486に焦点を当てて、比較ホモロジーモデリングによって、そのタンパク質の構造的特徴づけを行った。BP-2aと有意な配列同一性を共有するタンパク質についてPDBを検索した。見つけ出された最良の鋳型構造は、S.pneumoniaeのRrgB線毛タンパク質に対応するPBDコード650だった。RrgB結晶は、残基187~647の領域を含み、それは、3つの免疫グロブリン様ドメイン内に配置され、その各々は、安定化イソペプチド結合を有する。初めの2つのドメインD2およびD3は、接近して充填され、2つの逆平行ヘリックスおよび第3のドメインD4を突き出している密な構造を形成する。PDB650結晶は、RrgBタンパク質の第1ドメインD1を含まない。BP-2a515バリアントとRrgBのアミノ酸配列とをアラインメントしたところ、43の配列同一性および61の配列類似性を共有すると報告された。配列比較から、ピリンモチーフYPK、E-Boxカセット、LPXTGモチーフ、およびイソペプチド結合に関わるすべての残基が、十分に保存されていることが明らかになった図1A。ホモロジーモデリング手順入力を精密化するために、さらにペアワイズアラインメントを手作業で最適化することにより、二次構造に対応させた。Profile-3DモジュールDiscoveryStudio2.5SoftwareInc.,SanDiego,CAを用いて適合性スコアを計算することによって、そのモデルの質を評価した。その鋳型は、予想される201.7という高スコア値および90.7という低スコア値に対して、168.6というスコアを報告した。BP-2a-515に対する最良のモデルは、Profile-3Dによって算出された154という検証スコアを報告したのに対し、このモデルに対する考えられる最小スコアおよび最大スコアは、それぞれ92.2379および204.973である。その鋳型結晶構造でさえ、正しくフォールディングされたタンパク質についての予想スコアに達しないことを考えると、そのモデルは、結晶のものに匹敵する検証スコアを得た。図1Bに示されるように、アミノ酸残基191~640に対応する本発明者らのタンパク質のモデルは、3つのIgG様フォールドドメインD2、D3およびD4その各々が、安定化イソペプチド結合を特徴とするを明らかにした。生成されたモデルに対して鋳型構造を重ね合わせると、1.2Åもの低いRMSDが得られることから、BP-2aの配列がその鋳型構造に十分にフィットすることが意味される。ループ内のほんの小さい差異すべてが短い残基の挿入または欠失に起因するが同定された。さらに、結晶化されたイソペプチド結合の重ね合わせは、その結合の近傍の領域が比較的保存されていることを示す。特に、結合を触媒するグルタミン酸またはアスパラギン酸が存在する取り囲んでいる疎水性の穴に完全に埋まっている。BP-2a515バリアントにおいて、イソペプチド結合に関わる残基は:触媒残基および安定化残基としてAsp247を有するD2ドメイン内のLys199~Asn325;Glu416を有するD3ドメイン内のLys355~Asn437;およびGlu589を有するD4ドメイン内のLys463~Asn636である。BP-2aタンパク質のN末端部分残基1~190の二次構造およびフォールド予測に基づいて、本発明者らは、この部分が、D2、D3およびD4と同じIgG様フォールドを有すると仮定するデータ示さず。質量分析から、3つの内部イソペプチド結合の存在が確認される組換え完全長SAL_1486を精製し、それを用いることにより、モデリング研究から仮定されたイソペプチド結合の存在を確認した。それらを同定するために選択された方法は、Lys-Cによる多種多様な構築物の完全な消化、および質量分析によるその消化産物の分析に基づいた。結合ペプチドを容易に選別するために、その消化産物を、ホモアルギニンにおけるC末端のリジンを改変するO-メチルイソ尿素で誘導体化したここで、改変された各C末端について質量が42Da増加する。イソペプチド結合されたペプチドは、42D部分的誘導体化および84Da完全な誘導体化の質量のシフトを示すペプチドである。そのタンパク質は、溶液中の酵素消化に抵抗性だったデータ示さず。適用できるペプチドの範囲をより広くするアプローチが、SDS-PAGEで泳動されたポリペプチドのゲル内消化から得られた。図2は、仮定されたイソペプチドの確認を可能にする、完全長組換えSAL_1486から得られた質量分析スペクトルを報告している。そのタンパク質のD4ドメインが保持しているアミノ酸が関わるイソペプチド結合は、イソペプチド結合によってペプチド630DAQQVINKK638予想分子量1761.90Daに連結されたペプチド461FVKTNK466の分子量に対応するm/z1762.05Daの分子イオンによって証明された図2A,上のパネル。そのグアニジン化反応は、それぞれ単一および二重のC末端ペプチド誘導体化に対応する、42および84Daというシグナルのシフトを誘導したことから、それら2つのペプチドの共有結合が確認された。同じように、ドメインD2およびD3におけるイソペプチド結合は、イソペプチド結合によってペプチド139NNK141に連結されたペプチド53ITVNKTWAVDGNEVNK68予想分子量2145.13Daおよびペプチドに連結されたペプチド185ITYSATLNGSAVVEVLETNDVK206予想分子量4040.07Daの分子量にそれぞれ対応するm/z2145.18および4040.85のイオンから割り当てられた図2Bおよび2C。グアニジン化反応から、42および84Daの質量の二重シフトによって、それらのペプチドの共有結合が確認された。完全長組換えタンパク質のドメインD1に対応するN末端部分にイソペプチド結合が同定されなかったことは、注目すべきことだった。ドメインD2、D3およびD4のイソペプチド結合に関わるリジンが、構造モデルによって予測されるK199、K355およびK463に正確に対応したことを確認するために、本発明者らは、これらのリジン残基をアラニン残基に変異させるK199A/K355A/K463A部位特異的変異誘発によってそのタンパク質の組換え型を作製した。同じ酵素消化および質量分析のプロトコルを適用したところ、イソペプチド連結されたペプチドと対応する、上に報告されたシグナルは同定されなかったデータ示さず。BP-2a-515線毛サブユニットのX線結晶構造防御エピトープを有するドメインを同定するために、BP-2a-515の結晶構造を、分子置換によって1.75Åという分解能において解析し精密化した。データ収集および精密化の統計値を表2に示す。結晶非対称ユニットは、2つの独立した鎖A:残基192~640およびB:残基190~641の二量体その各々が、3つの異なるドメイン:D2残基190~332、D3残基333~455およびD4残基456~641から構成されるを含むと確認された図7。観察されたBP-2a-515二量体は、会合界面において広範な分子間相互作用を示さないので、EuropeanBioinformaticsInstituteにおけるProteinInterfaces,SurfacesandAssembliesPISAService[251]http://www.ebi.ac.uk/msd-srv/prot_int/pistart.htmlによって示されるように、その二量体は、溶液中に存在するとは予想されず、それは、結晶充填の考えられる結果である。完全長タンパク質を用いて結晶化を行ったが、N末端のおよそ190アミノ酸D1ドメインが、その結晶中に存在しなかったことから、それらが結晶化の前に切断されたと示唆される。同様の挙動が、肺炎球菌のRrgB線毛タンパク質に対して報告されたその構造は最近、1.6Åという分解能で解析され[252]、BP-2a-515の構造と高度に相同である。結晶化溶液中に存在する酒石酸カリウムナトリウムは、結晶の成長の最適化および回折分解能の改善に関連があった。実際に、3つのカリウム陽イオンが、その構造内の重要かつ安定化位置に結合している。2つの全く同じように配位するカリウム陽イオンが、両方の鎖内のD2ドメインに結合し、ドメインD2、D3由来の寄与残基および水分子を介し、D3ドメインとD4ドメインとを接続する可撓性リンカーを安定化する図7。第3のカリウム陽イオンは、鎖AのD4ドメイン内の可撓性ループを安定化する。3つのドメインの構成を確認することにより、S.pneumoniaeのRrgBについてすでに観察された構造的特徴である、改変されたIgGフォールド[252]が示された。実際に、ペアワイズ構造アラインメントC-アルファマッチプログラムhttp://bioinfo3d.cs.tau.ac.il/c_alpha_match/を用いたBP-2a-515鎖BおよびRrgBのC-アルファ原子の重ね合わせから、280/452残基に対して1.37Åというr.m.s.d値が得られる。それらの2つのタンパク質間の主要な構造上の差異は、D3ドメインの空間的位置、RrgBに存在しない2本のβ-ストランドによってβ-サンドイッチに接続された、D4ドメイン内の2つのα-ヘリックスの動き、および可撓性領域と考えられる。RrgBと同様に、各ドメインは、リジン側鎖のε-アミノ基とアスパラギンのδ-カルボキシアミド基との間に形成される、安定化共有結合性分子内イソペプチド結合によって特徴づけられる。それらの3つのイソペプチド結合は、Lys199とAsn325との間D2ドメイン、Lys437とAsn355との間D3ドメインおよびLys463とAsn636との間D4ドメインに存在し、それらの各々のドメインの二次構造エレメントを安定化する。RrgBと比較したときのD3のコンフォメーションの動きに起因して、最後のイソペプチド結合は、RrgBにおける等価な結合の空間的位置とマッチしない唯一のものである。これらの結合の周りの周辺領域は、いくつかの線毛タンパク質におけるイソペプチド結合について見られる観察結果と一致して、いくつかの芳香族残基を含み、主として疎水性である。4つのドメインD1、D2、D3およびD4の各々が、独立してフォールディングされるとみられる。これは、各ドメインを独立した構築物として発現させその構築物のNおよびC末端は、BP-2a-515の結晶構造において定義されたドメイン境界に基づいて選択した、それを大腸菌から精製することによって示された。4つすべてのドメインが、大腸菌において可溶型として発現され、D2、D3およびD4のトリプシン消化物の質量分析から、それらのドメインが、完全長タンパク質に見られるのと同じイソペプチド結合を有することが明らかになったデータ示さず。このことは、独立して発現されたドメインの全構造的構成が、リジン残基およびアスパラギン残基を好適な反応距離で有するように十分に保存されていることを示唆した。結論として、PI-2a515対立遺伝子の骨格サブユニットの結晶構造は、そのタンパク質が、独立して構築され、安定していると示された4つのドメインに組織化されることを示唆する。分子内イソペプチド結合は防御に不可欠ではない線毛の集合にとって不可欠ではない分子内イソペプチド結合は、線毛の構造安定性およびタンパク分解安定性に寄与することが証明されている。野生型および変異型のBP-2aタンパク質のSDS-PAGEから、イソペプチド結合を有しないタンパク質は、野生型と比べて遅い電気泳動移動度を有することが示された。ナイーブタンパク質内に内部架橋が存在することにより、野生型タンパク質構造は、より密になり得、かつゲルのマトリックスをより通過できるようになり得る一方で、変異型は、より高分子量へと泳動するより大きな構造を有する図3A。これらの内部結合の存在が、タンパク質BP-2aの防御能に影響し得るか否かを評価するため、およびその変異タンパク質が、野生型と同様にインビボにおいて防御免疫を誘導することができるか否かを調査するために、本発明者らは、マウス母体免疫化モデル[250]において両方のタンパク質を試験した。本発明者らは、精製された組換えタンパク質で成体雌性CD1マウスの群を免疫化し、3回の免疫を行った後、マウスを交配し、仔の約90が死滅すると計算されたGBS用量でその子孫をチャレンジした。そのタンパク質の変異型を用いたときに観察された高レベルの防御表3から、イソペプチド結合が無くなっても、そのタンパク質がマウスにおいて防御をもたらす能力およびオプソニン抗体を誘発する能力は妨害されないことが明らかになった図3B。ドメインD3は、高度に表面に露出され、防御にとって必須である上に記載された構造モデルから得られた情報に基づいて、本発明者らは、BP-2a515バリアントの4つの欠失変異体を作製したこのタンパク質は、モデリングによって予測される4つのIgG様ドメインに対応する4つの重複フラグメントに分けられる図4A:D1は、アミノ酸30~162の領域に対応し;D2は、アミノ酸156~338の領域に対応し;D3は、アミノ酸332~499の領域に対応し;D4は、アミノ酸457~640の領域に対応する。それらの欠失フラグメントを、材料および方法に記載されたように、クローニングし、大腸菌において発現させ、HIS-またはTRX-タグ化組換えタンパク質として精製した。興味深いことに、ドメインD2およびD3およびD4に存在するイソペプチド結合が、これらのドメインの単一の組換え型においても同定されたことから、単一ドメインが、この共有結合を形成するためのすべての必要条件を有したことが示唆されるデータ示さず。CD1マウスを免疫化するために上記4つの精製された可溶性ドメインを使用し、タンパク質特異的免疫応答すなわち、全免疫グロブリンレベルをELISAおよびウエスタンブロッティングによってモニターした。また、どのドメインが、細菌表面から突き出ている重合線毛上において露出されているかを評価するために、各フラグメントに対して惹起された血清を、株515の細菌全体を用いるフローサイトメトリーによって分析した。図4Bに示されるように、ドメインD3およびD4は、高度に露出されており、これは、完全長タンパク質に対して惹起された抗血清で観察されたものに匹敵するレベルであった。抗D2抗体を用いたときに、弱いシフトが得られたことから、それは高度には露出されていないことが示唆された一方で、D1は露出されていなかった。どのドメインが、GBS感染に対する防御をもたらすことができるかを調査するために、本発明者らは、免疫化されたマウス由来の血清を用いたインビトロオプソニン作用分析、およびインビボにおける活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルを行った。FACSの結果によると、ドメインD3およびD4ドメインだけが、オプソニン作用抗体を誘発することができ、マウスにおいてGBS感染に対する防御をもたらすことができた図4Cならびに表3および4。特に、ドメインD3は、最高レベルの表面露出およびオプソニン活性を示した。FACS陽性の選択およびD3ドメインにおけるオプソニンmAbマッピングから、そのタンパク質のC末端部分、特にD3が、防御免疫にとって必須であると確認されたデータ示さず。ドメインD3は、BP-2aの主要な対立遺伝子バリアントの免疫優性エピトープである本発明者らは、48~98の範囲の配列相同性を共有するこれまでに報告された対立遺伝子バリアントのすべてが、マウスモデルにおいて防御性であるが、それらは、それぞれの母体を免疫化するために使用された対立遺伝子バリアントを有する株でチャレンジされた仔だけを防御したことを観察した[2]およびデータ示さず。515対立遺伝子を用いて得られた結果が他のバリアントにおいても確認されるか否かを調査するために、本発明者らは、上に記載されたアプローチと同じアプローチを適用して、2つの主要なファミリーに属する最も代表的なバリアント515、CJB111、H36Bおよび2603という名称において免疫優性部分をマッピングした。それらのBP-2aバリアントが、同じ構造的構成を共有したか否かを理解するために、H36B対立遺伝子TIGRアノテーションSAI_1511の新しい構造モデルを作製した。このバリアントは、515バリアントから、配列同一性および配列類似性に関して最も異なっているので48という配列同一性、このバリアントを選択した。S.pneumoniaeのRrgB線毛タンパク質を、鋳型構造として使用したPDBコード:650。SAI_1511およびRrgBのアミノ酸配列をアラインメントしたところ、38配列同一性および56配列類似性を共有すると報告された。図5Aに報告されるようなSAI_1511のモデルから、4つのIgG様フォールドドメインこのうちの3つは、比較的保存された周囲とともに内部Lys-Asnイソペプチドを含むを含む515バリアントと同じモジュラー構造が明らかになった。さらに、H36Bバリアントモデル構造において、主要なタンパク質構造の構成が保存されているにもかかわらずRMSD=0.9Å、RrgB結晶構造には存在しない挿入ループが2つ存在する。その第1のものは、残基200~214に及び、第2のものは、残基402~410に及ぶ図5A。これらの2つの追加のループ領域の機能は、未だ不明である。構造分析から得られた情報に基づいて、本発明者らは、大腸菌において発現され、組換えタンパク質として精製されるH36Bバリアントの欠失変異体を作製したこのバリアントは4つの重複フラグメントに分けられる。D1は、アミノ酸30~158の領域に対応し、D2は、アミノ酸152~350の領域に対応し、D3は、アミノ酸343~493の領域に対応し、D4は、アミノ酸487~658の領域に対応した図5B。精製された可溶性ドメインを用いることによりCD1マウスを免疫し、各フラグメントに対して惹起された血清をインビトロおよびインビボ防御アッセイにおいて試験した。515バリアントについて観察されたように、ドメインD3に対して惹起された抗血清は、細菌細胞全体に対するフローサイトメトリー分析において試験されたとき、最も高い蛍光シフトを示し図5C、ヒト多形核白血球PMNおよび仔ウサギ補体の存在下でのオプソニン作用アッセイにおいて分析されたとき、効率的な細菌の死滅を促進することができた図5D。さらに、H36Bバリアントを十分に発現し、細菌表面上に露出するチャレンジ株に対して、ドメインD3は、有意なレベルの防御をもたらした表5および6。ドメインD3はさらに、公知のすべての対立遺伝子バリアントにおいて、BP-2aについての免疫優性エピトープとして確認されたデータ示さず。例えば、表7に示されるように、CJB111バリアント由来のドメインD3は、CJB111株でのチャレンジに対する有意なレベルの防御をもたらす。さらに、2つのモノクローナル抗体17C4/A3および4H11/B7、配列番号262~269は、515クレード由来のD3サブフラグメント配列番号38,配列番号2のフラグメント内のアミノ酸411~436配列番号270を含むエピトープに結合することが見出されたデータ示さず。防御エピトープを有する融合タンパク質は、種々の対立遺伝子を発現しているGBS株に対して交差防御をもたらす次いで、種々のバリアントの免疫優性かつ防御性の領域としてD3ドメインのマッピングを用いることにより、これらの融合タンパク質が広スペクトルの防御をもたらす能力を評価するために、動物モデルにおいて試験するためのキメラタンパク質のデザインが容易になった。2つの融合タンパク質を作製した。第1のものである融合タンパク質6×D3は、6つの骨格タンパク質バリアント515、CJB111、H36B、DK21、090および2603のドメインD3から構成される図6AおよびB。第2のものである融合タンパク質4×D3Helixは、最も代表的な4つのバリアント515、CJB111、H36Bおよび2603のドメインD3ドメインD4の2つの突出ヘリックスから構成される図6AおよびB。各融合タンパク質は、材料および方法に報告されたように、クローニングされ、大腸菌において発現され、組換えタンパク質として精製された図6C。精製された融合タンパク質を用いることによりCD1マウスを免疫化し、各融合タンパク質に対して惹起された血清をインビトロおよびインビボ防御アッセイにおいて試験した。それらの血清が、BP-2aの種々のバリアントを含む線毛様構造を認識することができたか否かを理解するために、本発明者らは、ウエスタンブロッティングおよびFACS分析を行ったデータ示さずおよび図6D。結果は、その2つの融合タンパク質に対して産生された免疫血清が、全抽出物からの線毛様構造を認識することができることを示した。オプソニン作用実験から、融合タンパク質に対する抗血清が、BP-2aの種々の対立遺伝子バリアントを発現しているGBS株の補体依存性食作用性死滅を媒介することができることが確認された図6E。さらに、インビボ防御モデルからのデータは、両方の融合タンパク質が、そのタンパク質の種々のバリアントを発現している株でチャレンジされたマウスにおいて防御免疫を誘発することができたこと、およびゆえに、GBS感染に対する幅広い防御ワクチンとして使用され得ることを示す表8および9。最後に、表9は、Hisタグを使用した場合に、6×D3融合物の防御作用が維持されることを示している。考察S.agalactiaeGBSを含む多くの細菌病原体は、その宿主の免疫系を免れるかまたは環境変動に適応するための例えば、遺伝子変動および/または異なった遺伝子発現のストラテジーを採用して、広範囲の機構を進化させてきた。これらのストラテジーは、病原体が疾患を引き起こす能力において重大な役割を果たし、さらに、これらの微生物に対するワクチンを開発することが非常に困難である理由も説明する。配列決定技術およびバイオインフォマティクスの進歩によって、ゲノム配列情報が指数関数的に増大しており、現在、多数の病原体について複数の分離菌の全ゲノムが利用可能である。マルチゲノム分析によって、効果的なワクチンおよび創薬プログラムに対する潜在的重要性とともに、単一種の株間での予想外に高い遺伝子バリエーションが明らかになった。連鎖球菌などの種は、比較的小さいゲノムを有し得るが、その集団内の可欠遺伝子の総数のおかげで、それらの種が環境的な困難に適応する十分な柔軟性が許容される。GBSおよび他のグラム陽性病原体において近年発見された線毛アイランドなどの病原性アイランドは、ゲノムアイランドのクラスに属し、これは、水平遺伝子導入によって獲得され、かつ、可欠ゲノムの代表的な例である。それらは、遺伝的変動を促進するので、ゲノムアイランドは、微生物の進化において重要な役割を果たす。GBSにおいて同定された3つの線毛アイランドPI-1、PI-2aおよびPI-2bという名称は、高分子量の構造をコードし、そのサブユニットは、有望なタンパク質ワクチン候補である。しかしながら、ピリン抗原は、普遍的には存在せず、保存されておらず、GBSの大きな部分集団の細菌の表面上では発現されていないので、より多いタンパク質の組み合わせだけしか、広スペクトルのワクチンに適しない可能性がある。線毛の骨格タンパク質2aBP-2aは、線毛の重合に必須である。BP-2aは、マウスにおいて防御をもたらすことができ、莢膜多糖抗原に対する抗体を用いたときに観察される死滅に匹敵するレベルで、生存しているGBS細菌のオプソニン作用性死滅を媒介することができるが、それは、すべてのピリン抗原の間で最高レベルの遺伝子変動性を有する。BP-2aの少なくとも7つの交差防御性ではない対立遺伝子バリアントが存在するために、同定されたすべての対立遺伝子を広スペクトルワクチンに含めることを除いて、広スペクトルワクチンのためにこの抗原を単独で使用する可能性が妨げられる。BP-2aなどの免疫原性マルチバリアント抗原の場合、タンパク質の小さい防御性部分上記タンパク質の高度に表面に露出されるIgG様フォールドドメインD3だけを選択することにより、交差反応しない種々の対立遺伝子由来の単一の免疫優性ドメインの融合によってキメラタンパク質を合理的にデザインすることおよび作製することが可能になった。これらのキメラは、マウスにおいて、すべてのBP-2aバリアントを発現するGBS株による感染に対する広い交差防御をもたらす能力を獲得した。遺伝子操作のツールを使用するとともに、本明細書中に報告される構造分析および機能分析のアプローチを組み合わせて、選択されたドメインの本来の構造的構成を保存しつつ、BP-2aのすべての主要バリアントの免疫優性ドメインを含む融合タンパク質を作製することが可能になった。興味深いことに、本発明者らの結果は、上記ドメインが防御免疫を誘発する能力は、内部イソペプチド結合の存在に依存しなかったことを示している。上記融合タンパク質の交差防御免疫応答は、回避変異体を生成するリスクを下げ、遺伝的に異なるGBS株に対する防御免疫応答の発生を可能にするので、ワクチンの開発において根本的に重要である。表2.BP-2a-515のデータ収集および精密化の統計値分子置換。構造を解析するために1つの結晶を使用した。括弧内の値は、最外殻highestresolutionshellに対する値である。表3:GBS59515バリアントの単一ドメインによってもたらされた、B群連鎖球菌515株に対する防御を測定する、活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルの結果。BP-2a515バリアントの単一ドメインによってもたらされた、GBS515株に対する防御を、活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによって評価した。防御値は、[コントロールにおける死亡-ワクチンにおける死亡/コントロールにおける死亡]100として計算された。表4:活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによって評価された、BP-2a-515対立遺伝子の単一ドメインによってもたらされた、GBS株515に対する防御。防御値は、[コントロールにおける敗血症-ワクチンにおける敗血症/コントロールにおける敗血症]100として計算された。注.雌性マウスの群に、フロイントアジュバントと混合された20μgの抗原または緩衝液PBSを3回1、21および35日目に投与した。次いで、マウスを交配し、仔の90において敗血症を誘導すると計算されたGBS用量でその子孫をチャレンジした。フィッシャーの正確検定によるp値。表5:活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによって評価された、BP-2aH36Bバリアントの単一ドメインによってもたらされた、GBS515株に対する防御。防御値は、[コントロールにおける死亡-ワクチンにおける死亡/コントロールにおける死亡]100として計算された。表6:活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによって評価された、BP-2a-H36Bの単一ドメインによってもたらされた、H36BBP-2aバリアントを発現するGBS株5401に対する新生仔の防御。防御値は、[コントロールにおける敗血症-ワクチンにおける敗血症/コントロールにおける敗血症]100として計算された。注.雌性マウスの群に、フロイントアジュバントと混合された20μgの抗原または緩衝液PBSを3回1、21および35日目に投与した。次いで、マウスを交配し、仔の90において敗血症を誘導すると計算されたGBS用量でその子孫をチャレンジした。フィッシャーの正確検定によるp値。表7:活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによって評価された、BP-2a-CJB111バリアントの単一ドメインによってもたらされた、BP-2aCJB111バリアントを発現するGBSCJB111株に対する防御。防御値は、[コントロールにおける敗血症-ワクチンにおける敗血症/コントロールにおける敗血症]100として計算された。注.雌性マウスの群に、フロイントアジュバントと混合された20μgの抗原または緩衝液PBSを3回1、21および35日目に投与した。次いで、マウスを交配し、仔の90において敗血症を誘導すると計算されたGBS用量でその子孫をチャレンジした。フィッシャーの正確検定によるp値。表8:活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによる、融合タンパク質によってもたらされた、種々のBP-2a対立遺伝子バリアントを発現するGBS株のパネルに対する防御。防御値は、[コントロールにおける死亡-ワクチンにおける死亡/コントロールにおける死亡]100として計算された。表9:活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによる、融合タンパク質6×D3によってもたらされた、種々のBP-2a対立遺伝子バリアントを発現するGBS株のパネルに対する防御。防御値は、[コントロールにおける敗血症-ワクチンにおける敗血症/コントロールにおける敗血症]100として計算された。注.雌性マウスの群に、フロイントアジュバントと混合された20μgの抗原または緩衝液PBSを3回1、21および35日目に投与した。次いで、マウスを交配し、仔の90において敗血症を誘導すると計算されたGBS用量でその子孫をチャレンジした。p値,フィッシャーの正確検定によるp<.0001。表10:活性なマウス母体免疫化/新生仔チャレンジモデルによる、タグありおよびなしの融合タンパク質によってもたらされた、GBS株のパネルに対する防御。配列表配列番号1GBS592603配列番号2GBS59515配列番号3GBS59cjb111配列番号4GBS59h36b配列番号5GBS59CJB110配列番号6GBS59DK21配列番号7GBS59NEM316配列番号8D12603配列番号9D22603配列番号10D32603配列番号11D42603配列番号12D1515配列番号13D2515配列番号14D3515配列番号15D4515配列番号16cjb111D1配列番号17cjb111D2配列番号18cjb111D3配列番号19cjb111D4配列番号20h36bD1配列番号21h36bD2配列番号22h36bD3配列番号23h36bD4配列番号24CJB110D1配列番号25CJB110D2配列番号26CJB110D3配列番号27CJB110D4配列番号28DK21D1配列番号29DK21D2配列番号30DK21D3配列番号31DK21D4配列番号32D1NEM316配列番号33D2NEM316配列番号34D3NEM316配列番号35D4NEM316配列番号362603D3サブフラグメント配列番号372603D4H配列番号38515D3サブフラグメント配列番号39515D4H配列番号40cjb111D3サブフラグメント配列番号41cjb111D4H配列番号42h36bD3サブフラグメント配列番号43h36bD4H配列番号44CJB110D3サブフラグメント配列番号45CJB110D4H配列番号46DK21D3サブフラグメント配列番号47DK21D4H配列番号48NEM316D3サブフラグメント配列番号49DK21D4H配列番号502603D3D4配列番号512603D3D4H配列番号522603D2D3D4配列番号532603D2D3D4H配列番号54515D3D4配列番号55515D3D4H配列番号56515D2D3D4配列番号57515D2D3D4H配列番号58cjb111D3D4配列番号59cjb111D3D4H配列番号60cjb111D2D3D4配列番号61cjb111D2D3D4H配列番号62h36bD3D4配列番号63h36bD3D4H配列番号64h36bD2D3D4配列番号65h36bD2D3D4H配列番号66CJB110D3D4配列番号67CJB110D3D4H配列番号68CJB110D2D3D4配列番号69CJB110D2D3D4H配列番号70DK21D3D4配列番号71DK21D3D4H配列番号72DK21D2D3D4配列番号73DK21D2D3D4H配列番号74NEM316D3D4配列番号75NEM316D3D4H配列番号76NEM316D2D3D4配列番号77NEM316D2D3D4H配列番号78515D3の短フラグメント配列番号79hisタグ配列番号80リンカー配列番号81リンカー配列番号82リンカー配列番号83融合物E配列番号84融合物F配列番号85融合物G配列番号86融合物H配列番号87融合物I配列番号88融合物Eをコードする配列番号89融合物Fをコードする配列番号90融合物Gをコードする配列番号91融合物Hをコードする配列番号92融合物Iをコードする配列番号93融合物Eをコードする-大腸菌に対して最適化されたもの配列番号94融合物Fをコードする-大腸菌に対して最適化されたもの配列番号95融合物Gをコードする-大腸菌に対して最適化されたもの配列番号96融合物Hをコードする-大腸菌に対して最適化されたもの配列番号97融合物Iをコードする-大腸菌に対して最適化されたもの配列番号98ICアジュバント配列番号99ポリカチオンペプチドアジュバント配列番号100GBS592603をコードする配列番号101GBS59515をコードする配列番号102GBS59cjb111をコードする配列番号103GBS59h36bをコードする配列番号104GBS59CJB110をコードする配列番号105GBS59DK21をコードする配列番号106GBS59NEM316をコードする配列番号1072603D1をコードする配列番号1082603D2をコードする配列番号1092603D3をコードする配列番号1102603D4をコードする配列番号111515D1をコードする配列番号112515D2をコードする配列番号113515D3をコードする配列番号114515D4をコードする配列番号115cjb111D1をコードする配列番号116cjb111D2をコードする配列番号117cjb111D3をコードする配列番号118cjb111D4をコードする配列番号119h36bD1をコードする配列番号120h36bD2をコードする配列番号121h36bD3をコードする配列番号122h36bD4をコードする配列番号123CJB110D1をコードする配列番号124CJB110D2をコードする配列番号125CJB110D3をコードする配列番号126CJB110D4をコードする配列番号127DK21D1をコードする配列番号128DK21D2をコードする配列番号129DK21D3をコードする配列番号130DK21D4をコードする配列番号131NEM316D1をコードする配列番号132NEM316D2をコードする配列番号133NEM316D3をコードする配列番号134NEM316D4をコードする配列番号1352603D3サブフラグメントをコードする配列番号1362603D4Hをコードする配列番号137515D3サブフラグメントをコードする配列番号138515D4Hをコードする配列番号139cjb111D3サブフラグメントをコードする配列番号140cjb111D4Hをコードする配列番号141h36bD3サブフラグメントをコードする配列番号142h36bD4Hをコードする配列番号143CJB110D3サブフラグメントをコードする配列番号144CJB110D4Hをコードする配列番号145DK21D3サブフラグメントをコードする配列番号146DK21D4Hをコードする配列番号147NEM316D3サブフラグメントをコードする配列番号148NEM316D4Hをコードする配列番号1492603D3D4をコードする配列番号1502603D3D4Hをコードする配列番号1512603D2D3D4をコードする配列番号1522603D2D3D4Hをコードする配列番号153515D3D4をコードする配列番号154515D3D4Hをコードする配列番号155515D2D3D4をコードする配列番号156515D2D3D4Hをコードする配列番号157cjb111D3D4をコードする配列番号158cjb111D3D4Hをコードする配列番号159cjb111D2D3D4をコードする配列番号160cjb111D2D3D4Hをコードする配列番号161h36bD3D4をコードする配列番号162h36bD3D4Hをコードする配列番号163h36bD2D3D4をコードする配列番号164h36bD2D3D4Hをコードする配列番号165CJB110D3D4をコードする配列番号166CJB110D3D4Hをコードする配列番号167CJB110D2D3D4をコードする配列番号168CJB110D2D3D4Hをコードする配列番号169DK21D3D4をコードする配列番号170DK21D3D4Hをコードする配列番号171DK21D2D3D4をコードする配列番号172DK21D2D3D4Hをコードする配列番号173NEM316D3D4をコードする配列番号174NEMD3D4Hをコードする配列番号175NEM316D2D3D4をコードする配列番号176NEM316D2D3D4Hをコードする配列番号177GBS802603配列番号178リーダーを含まないGBS802603配列番号179膜貫通/細胞質領域を含まないGBS802603配列番号180膜貫通/細胞質領域および細胞壁アンカーを含まないGBS802603配列番号181細胞外ドメインを含まないGBS802603配列番号182GBS802603のN末端の免疫原性フラグメント配列番号183GBS672603配列番号184膜貫通領域を含まないGBS672603配列番号185膜貫通および細胞壁アンカーモチーフを含まないGBS672603配列番号186GBS672603のN末端フラグメント配列番号187GBS672603のN末端フラグメント配列番号188GBS67h36b配列番号189GBS67h36bのN末端フラグメント配列番号190GBS67h36bのN末端フラグメント配列番号191GBS67CJB111配列番号192GBS67CJB111のN末端フラグメント配列番号193GBS67CJB111のN末端フラグメント配列番号194GBS67515配列番号195GBS67515のN末端フラグメント配列番号196GBS67515のN末端フラグメント配列番号197GBS67NEM316配列番号198GBS67NEM316のN末端フラグメント配列番号199GBS67NEM316のN末端フラグメント配列番号200GBS67DK21配列番号201GBS67DK21のN末端フラグメント配列番号202GBS67DK21のN末端フラグメント配列番号203GBS67CJB110配列番号204GBS67CJB110のN末端フラグメント配列番号205GBS67CJB110のN末端フラグメント配列番号206GBS1523COH1配列番号207シグナル配列領域を含まないGBS1523COH1配列番号20841位に変異を有するGBS1523COH1配列番号209GBS80-GBS1523ハイブリッド配列番号210GBS80-GBS1523ハイブリッド配列番号211GBS80-GBS1523ハイブリッド配列番号212GBS80-GBS1523ハイブリッド配列番号213GBS1042603配列番号214GBS1524配列番号215GBS32603配列番号216シグナル配列領域を含まないGBS32603配列番号217GBS32603コイルドコイルおよびプロリンリッチセグメント配列番号218GBS32603シグナル配列およびコイルドコイル配列番号219GBS32603コイルドコイルセグメント配列番号220GBS32603シグナル配列、コイルドコイルおよびプロリンリッチセグメント配列番号221GBS3515配列番号222GBS3cjb111配列番号223GBS3coh1配列番号224SAN1485coh1配列番号225GBS1472603配列番号226GBS3282603配列番号227GBS842603配列番号228~261プライマー配列番号2624H11/B7-VHDNA配列配列番号2634H11/B7-VHアミノ酸配列配列番号2644H11/B7-VLkDNA配列配列番号2654H11/B7-VLkアミノ酸配列配列番号26617C4/A3-VHDNA配列配列番号26717C4/A3-VHアミノ酸配列配列番号26817C4/A3-VLkDNA配列配列番号26917C4/A3-VLkアミノ酸配列配列番号2704H11/B7および17C4/A3に結合されるD3のエピトープ配列番号271RrgB"