"リンカーを介して輸送タンパク質にペプチドホルモンを融合することによって得られる融合タンパク質であって、前記ペプチドホルモンはエキセンジン-4またはエキセンジン-4の類似体であり、前記ペプチドホルモンは血糖を下げることができ、前記輸送タンパク質は免疫グロブリンIgG2のFc部分であり、前記融合タンパク質は血糖を下げることができ、前記ペプチドホルモンは式Iで示す配列を含む融合タンパク質。His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa10-Ser-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Glu-Glu-Glu-Ala-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Phe-Ile-Xaa24-Trp-Leu-Xaa27-Xaa28-Gly-Xaa30-Xaa31-Xaa32-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39式I[式中、Xaa2は、Gly、Thr、Ala、Ser、Leu、IleまたはLysであり、Xaa10は、Leu、Ala、Ser、Leu、Ile、GluまたはLysであり、Xaa12は、Lys、Leu、Thr、Ser、Leu、IleまたはCysであり、Xaa13は、Gln、Thr、Ala、Val、Leu、IleまたはLysであり、Xaa14は、Met、Tyr、Thr、Ala、Ser、IleまたはLysであり、Xaa19は、Val、Cys、Ala、Ser、Leu、IleまたはLysであり、Xaa20は、Arg、Thr、Tyr、Ser、Leu、IleまたはLysであり、Xaa21は、Leu、Thr、Ala、Asp、Glu、HisまたはLysであり、Xaa24は、Glu、Leu、Thr、Ala、Ser、LysまたはIleであり、Xaa27は、Lys、Ala、Ser、Leu、Thr、IleまたはLysであり、Xaa28は、Asp、Thr、Ala、Ser、Leu、IleまたはLysであり、Xaa30は、Gly、Thr、Ala、Ser、Leu、IleまたはArgであり、Xaa31は、Pro、Val、Ser、Ala、Leu、IleまたはLysであり、Xaa32は、Ser、Thr、Glu、Ser、Asp、LysまたはIleであり、Xaa33は、Thr、Ser、Ala、Met、Leu、IleまたはLysであり、Xaa34は、Gly、Thr、Met、Ser、Ile、LeuまたはLysであり、Xaa35は、Ala、Thr、Ala、Glu、Leu、IleまたはPheであり、Xaa36は、Pro、Ala、Thr、Ser、Leu、IleまたはCysであり、Xaa37は、Pro、Thr、Ser、Ala、His、LysまたはIleであり、Xaa38は、Pro、Thr、Val、Ser、Leu、LysまたはIleであり、Xaa39は、Ser、Tyr、Ala、Leu、Ser、IleまたはLysである。]前記ペプチドホルモンは、配列番号1で示すアミノ酸配列を有するエキセンジン-4である請求項1に記載の融合タンパク質。前記リンカーは、Glym-Xaa-Glynで示す配列を有するペプチドであり、mは3~8の整数であり、nは3~8の整数であり、XaaはGly、Ser、AlaおよびThrからなる群から選択されるいずれか1つである請求項1に記載の融合タンパク質。mは4~6の整数であり、nは4~6の整数である請求項3に記載の融合タンパク質。前記リンカーは、配列番号3で示すアミノ酸配列を有する請求項4に記載の融合タンパク質。前記免疫グロブリンIgG2のFc部分は、ヒト由来である請求項1に記載の融合タンパク質。配列番号4で示すアミノ酸配列を有する請求項1に記載の融合タンパク質。請求項1~7のいずれか1項に記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列。請求項8に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。請求項9に記載のベクターが受容細胞をトランスフェクトすることによって生成される宿主細胞。前記受容細胞はCHO細胞である請求項10に記載の宿主細胞。前記受容細胞はNS0細胞である請求項10に記載の宿主細胞。請求項1に記載の融合タンパク質の製造方法であって、1請求項8に記載のポリヌクレオチド配列を転写して変換する工程と、2プロテインA法を用いて請求項8に記載のポリヌクレオチド配列の翻訳生成物を精製する工程とを含む方法。請求項1~7のいずれか1項に記載の融合タンパク質と、薬理学的に許容できる賦型剤とを含む医薬組成物。局所投与、エアロゾルまたは注射として投与される請求項14に記載の医薬組成物。腹腔注射、皮下注射、筋肉注射および静脈注射で投与されることを特徴とする請求項15に記載の医薬組成物。糖尿病および肥満症に対する薬剤の製造における請求項1~7のいずれか1項に記載の融合タンパク質の使用。本発明は、invivoでの有効性が安定したエキセンジン-4の長時間作用型融合タンパク質およびその類似体、対応するヌクレオチド配列、ベクター、宿主細胞、医薬組成物、その調製方法および使用を提供することを目的とする。本発明におけるエキセンジン-4およびその類似体の融合タンパク質は、リンカーを介して免疫グロブリンIgG2のFc部分にエキセンジン-4およびその類似体を融合することによって得られ、糖尿病および肥満症と、血漿グルコース値を下げ、胃腸運動および胃排出能を阻害することから便益が得られると考えられる他のあらゆる疾患の治療に使用される。半減期が短かいため、エキセンジン-4およびその類似体は、効果を維持するために毎日注射する必要があることから、臨床診療の制限がある程度存在する。この薬剤の治療効果を高めるために、出願人は、さらに研究を行い、本発明におけるエキセンジン-4の融合タンパク質およびその類似体を開発した。この融合タンパク質は、invivoでは安定性が高く、半減期がさらに長いことから、invivoでのグルコース値に従って膵島β細胞の再生および修復を容易にし、膵島β細胞の量を増加することが可能である。このため、インスリンの分泌を促進して、インスリンに対する身体の感受性を高めることから、さらに良好な抗糖尿病効果が得られ、低血糖リスクを最小限に抑えられる。さらにこの融合タンパク質は、体重を減少させることが可能であり、脂質低下作用および血圧低下作用を及ぼしうることから、心血管系を保護するとともに、中枢神経系に作用することによって安息機能および記憶機能を高めて神経系を保護する。本発明は、リンカーを介して輸送タンパク質にペプチドホルモンを融合することによって得られ、ペプチドホルモンは、エキセンジン-4またはエキセンジン-4の類似体であり、ペプチドホルモンは、血糖を下げることができ、輸送タンパク質は免疫グロブリンIgG2のFc部分であり、融合タンパク質は血糖を下げることができる融合タンパク質を提供する。本発明で提供するエキセンジン-4およびその類似体の融合タンパク質は、リンカーを介して免疫グロブリンIgG2のFc部分にエキセンジン-4およびその類似体を融合することによって得られる。エキセンジン-4は、配列番号1で示すアミノ酸配列を有し、エキセンジン-4の類似体は、配列番号1で示すアミノ酸配列の誘導配列、配列番号2で示すアミノ酸配列、配列番号2で示すアミノ酸配列の誘導配列、DPP-IVに対して抗原性のあるGLP-1のアミノ酸配列およびDPP-IVに対して抗原性のあるGLP-1のアミノ酸配列の誘導配列からなる群から選択されるいずれか1つを有する。融合タンパク質の一部として、エキセンジン-4またはその類似体は、エキセンジン-4[配列番号1]、GLP-17-36NH2[配列番号2]、DPP-IVに対して抗原性のあるGLP-1ならびにそれらの誘導体および断片からなる群から選択されるいずれか1つである。本発明では、エキセンジン-4およびその類似体は、エキセンジン-4、GLP-17-36NH2、DPP-IVに対して抗原性のあるGLP-1のあらゆる誘導体またはその断片を含み、その原体と同じような生物学的作用すなわち血糖降下作用があるものとして理解すべきであることに留意する必要がある。誘導体は通常のアミノ酸置換、アミノ酸の直接置換および化学修飾などを含むが、これらに限定されない。エキセンジン-4およびその類似体は、配列番号1で示すエキセンジン-4配列ならびにその誘導体および断片であってよい。エキセンジン-4の誘導体は通常、配列番号1で示す配列との差が6箇所以下のペプチドであるのが好ましく、配列番号1で示す配列との差が5箇所以下のペプチドであるのがさらに好ましく、配列番号1で示す配列との差が4、3、2または1箇所のペプチドであるのが最も好ましい。すなわち、配列番号1で示すアミノ酸配列の誘導配列と、配列番号1で示すアミノ酸配列とのアミノ酸部位の差が、6箇所以下であるのが好ましく、5箇所以下であるのがさらに好ましく、これよりも4箇所以下であるのがさらに好ましく、これよりも3箇所以下であるのがさらに好ましく、これよりも2箇所以下であるのがさらに好ましく、1箇所以下であるのが最も好ましい。配列番号1で示すアミノ酸配列の誘導配列は、配列番号1で示すアミノ酸配列の断片であるのが好ましく、配列番号1で示すアミノ酸配列のN末端でアミノ酸1からアミノ酸20まで続くポリペプチドのアミノ酸配列であるのがさらに好ましい。エキセンジン-4の断片は、配列番号1で示すアミノ酸配列のN末端でアミノ酸1からアミノ酸20まで続くポリペプチドであるのが好ましい。エキセンジン-4およびその類似体は、配列番号1で示すアミノ酸配列を有するエキセンジン-4である。エキセンジン-4およびその類似体は、配列番号2で示すGLP-17-36NH2配列、その断片および誘導体であってよい。DPP-IVに対して抗原性のあるGLP-1はGLP-1A8Gである。すなわち、ペプチドホルモンは次の式Iで示す配列を含む。His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa10-Ser-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Glu-Glu-Glu-Ala-Xaa19-Xaa20-Xaa21-Phe-Ile-Xaa24-Trp-Leu-Xaa27-Xaa28-Gly-Xaa30-Xaa31-Xaa32-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39式I式中、Xaa2は、Gly、Thr、Ala、Ser、Leu、IleまたはLysであってよく、Xaa10は、Leu、Ala、Ser、Leu、Ile、GluまたはLysであってよく、Xaa12は、Lys、Leu、Thr、Ser、Leu、IleまたはCysであってよく、Xaa13は、Gln、Thr、Ala、Val、Leu、IleまたはLysであってよく、Xaa14は、Met、Tyr、Thr、Ala、Ser、IleまたはLysであってよく、Xaa19は、Val、Cys、Ala、Ser、Leu、IleまたはLysであってよく、Xaa20は、Arg、Thr、Tyr、Ser、Leu、IleまたはLysであってよく、Xaa21は、Leu、Thr、Ala、Asp、Glu、HisまたはLysであってよく、Xaa24は、Glu、Leu、Thr、Ala、Ser、LysまたはIleであってよく、Xaa27は、Lys、Ala、Ser、Leu、Thr、IleまたはLysであってよく、Xaa28は、Asp、Thr、Ala、Ser、Leu、IleまたはLysであってよく、Xaa30は、Gly、Thr、Ala、Ser、Leu、IleまたはArgであってよく、Xaa31は、Pro、Val、Ser、Ala、Leu、IleまたはLysであってよく、Xaa32は、Ser、Thr、Glu、Ser、Asp、LysまたはIleであってよく、Xaa33は、Thr、Ser、Ala、Met、Leu、IleまたはLysであってよく、Xaa34は、Gly、Thr、Met、Ser、Ile、LeuまたはLysであってよく、Xaa35は、Ala、Thr、Ala、Glu、Leu、IleまたはPheであってよく、Xaa36は、Pro、Ala、Thr、Ser、Leu、IleまたはCysであってよく、Xaa37は、Pro、Thr、Ser、Ala、His、LysまたはIleであってよく、Xaa38は、Pro、Thr、Val、Ser、Leu、LysまたはIleであってよく、Xaa39は、Ser、Tyr、Ala、Leu、Ser、IleまたはLysであってよい。リンカーは、Glym-Xaa-Glynで示す配列を有するペプチドであり、mは3~8の整数であり、nは3~8の整数であり、Xaaは、Gly、Ser、AlaおよびThrからなる群から選択されるいずれか1つである。式Iで示す配列は、配列番号23で示す配列である。mは4~6の整数であるのが好ましく、nは4~6の整数であるのが好ましい。リンカーは、配列番号3で示すアミノ酸配列を有するのが好ましい。融合タンパク質は、配列番号4で示すアミノ酸配列を有するのが最も好ましい。融合タンパク質の一部としてのIgG2のFc部分は、ヒト由来である。IgGは、IgGのFc部分またはFcの断片もしくは誘導体を含む。また、本発明は上記の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を提供する。また、本発明はポリヌクレオチド配列を含むベクターを提供する。また、本発明は上に記載するベクターによってトランスフェクトされた宿主細胞を提供し、記載する宿主細胞は、CHO細胞であってもNS0細胞であってもよい。本発明によって提供する宿主細胞によれば、宿主細胞は、上に記載するベクターが受容細胞をトランスフェクトすることによって生成する。本発明によって提供する宿主細胞によれば、受容細胞はCHO細胞である。本発明によって提供する宿主細胞によれば、受容細胞はNS0細胞である。また、本発明は、エキセンジン-4の融合タンパク質およびその類似体の調製方法を提供し、ポリヌクレオチドを転写して翻訳する工程と、プロテインA法を使用して精製する工程とを含む。また、本発明は上に記載する融合タンパク質の調製方法を提供し、1上に示すポリヌクレオチド配列を転写して変換する工程と、2プロテインA法を用いて上に示すポリヌクレオチド配列の翻訳生成物を精製する工程とを含む。本発明における融合タンパク質が宿主細胞に発現した後にいくつかのタンパク質精製方法を使用してもよく、さらにこれらの精製方法は当該技術分野では周知のことであり、精製方法の選択は生成方法および生成する特定のタンパク質に依存する。例えば、Fc部分を含む融合タンパク質を効率的に精製するために、プロテインAアフィニティーマトリックスまたはプロテインGアフィニティーマトリックスを使用してもよい。アフィニティーマトリックスから融合タンパク質を溶出させるのに低pH緩衝液または高pH緩衝液を使用することが可能である。本発明におけるエキセンジン-4の融合タンパク質を特徴付ける方法には、SDS-PAGE、ウェスタンブロット、等電点電気泳動、ゲル浸透クロマトグラフィ、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析MALDI-TOF、液体クロマトグラフ質量分析LC-MSが挙げられる。また、本発明は医薬組成物を提供し、エキセンジン-4の融合タンパク質およびその類似体ならびに薬理学的に許容できる賦型剤を含む。記載する医薬組成物は、上に記載する融合タンパク質と薬理学的に許容できる賦型剤とを含む。本出願で使用される薬理学的に許容できるという用語は、動物およびヒトに適切に投与した際に望ましくないアレルギーも他の有害事象も引き起こさない分子およびその組成物と定義する。本出願で使用される賦型剤は、本発明における融合タンパク質に適合する必要があり、すなわち通常、融合タンパク質に混合しても医薬組成物の効果を大幅に低下しない。本発明における融合タンパク質は、1または複数の賦型剤とともに製剤化することが可能である。本発明における融合タンパク質は、溶液製剤に、あるいは適切な希釈剤によって再構成できる注射可能な凍結乾燥粉末製剤に製剤化することが可能である。本発明における活性融合タンパク質は、医薬用緩衝液と混合してpHを調整し、非経口投薬に適した許容可能な安定性およびpHを得ることが可能である。1または複数の医薬用抗生物質製剤を添加することが可能である。1または複数の医薬用の食塩水を添加してイオン強度またはイオン張力を調整することが可能である。グリセリンなどの1または複数の賦型剤を添加してさらに等張性を調整することが可能である。製剤の賦型剤に関して、増量剤には、乳糖、グルコースおよびスクロースなどの糖類と、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプンと、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体と、トラガント粉と、麦芽と、ゼラチンと、タルクと、ステアリン酸およびステアリン酸マグネシウムなどの固体潤滑剤と、硫酸カルシウムと、落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油などの植物油と、プロピレングリコール、グリセロール、ソルビトールアルコール、マンノースアルコール、ポリエチレングリコールなどのポリオールと、アルギン酸と、Tweenなどの乳化剤と、ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤と、着色剤と、香味剤と、安定剤と、酸化防止剤と、防腐剤と、発熱物質非含有水と、等張塩溶液と、リン酸緩衝液などがありうる。本発明における融合タンパク質の医薬塩形態は、本発明の範囲内である。酸付加塩の調製によく使用される酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ素酸水素、硫酸、リン酸などの無機酸と、p‐トルエンスルホン酸、シュウ酸、クエン酸、コハク酸、酢酸などの有機酸などである。アルカリ付加塩には、アンモニウム、水酸化アルカリ金属または水酸化アルカリ土類金属などの無機塩から得られる塩が挙げられる。また、本発明における食塩水の調製に使用されるアルカリには、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウムなどが挙げられる。また、本発明は、医薬組成物の投与経路を提供し、局所投与、エアロゾルまたは注射として投与可能であり、注射は、腹腔注射、皮下注射、筋肉注射および静脈注射で投与してもよい。医薬組成物は、局所投与、エアロゾルまたは注射として投与される。注射は、腹腔注射、皮下注射、筋肉注射および静脈注射で投与される。この融合タンパク質の効果的な血糖降下剤の用量は、多くの因子に依存する。因子には、被検者の性別、体重、年齢、投与経路およびバイオアベイラビリティが含まれるが、これらに限定されない。また、本発明は、糖尿病および肥満症に対する薬剤の製造における記載する融合タンパク質の使用を提供する。本発明における融合タンパク質には生物学的活性がある。生物学的活性は、この融合タンパク質がGLP-1受容体を結合して活性化し、応答を引き起こすinvivo能と定義する。この応答には、インスリンの分泌、膵グルカゴンの抑制、食欲の抑制、体重の減少、満腹感の誘発、膵β細胞のアポトーシスの抑制、膵β細胞の増殖および再生の誘発が含まれるが、これらに限定されない。実施例41では、融合タンパク質がヒトGLP1受容体と相互作用して活性化し、小島細胞がインスリンを分泌する誘発能に関するinvitro実験を設けている。実施例42では、糖尿病およびインスリン抵抗性モデルの肥満ob/obマウスのinvivoでの血糖降下作用に関するデータが得られる。本発明におけるエキセンジン-4およびその類似体の融合タンパク質は、有意な抗糖尿作用を示し、膵島β細胞の再生および修復を促進することによって、膵島β細胞量を増大させ、インスリンの分泌を刺激し、インスリンに対する身体の感受性を増大させ、これにより、2型糖尿病患者さらには1型糖尿病患者の血糖値を効果的に抑制し、長期治療効果をもたらす。本発明における融合タンパク質は、GLP-1受容体に作用することによって生物学的活性に影響を及ぼし、糖尿病および肥満症の治療に使用することが可能である。本発明の実施形態を以下の実施例に記載する。ただし、他の変形例が、直接開示する内容および本願特許請求の範囲に基づいて当業者にとって周知であるか、あるいは明らかであることから、実施形態はこれらの実施例の特定の詳細に限定されないことに留意する必要がある。したがって、本発明の上記の内容に従って開発されるあらゆる技術は、本発明の範囲内である。本願明細書に引用する文献は、その全体が本願明細書の一部をなす。特に明記しない限り、以下の実施例に記載する実験方法は、すべてよく知られた技術であり、記載する試薬および生物製剤はすべて市販されている。発現遺伝子の合成とエキセンジン-4の融合タンパク質のベクター構築エキセンジン-4の融合タンパク質のDNA構築は、リガーゼ連鎖反応を利用して遺伝子合成することによって達成され、そのタンパク質配列は以下の通りである。HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSGGGGAGGGGVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK[配列番号4]配列番号4で示すアミノ酸配列では、ペプチドホルモンは1~39アミノ酸、すなわちエキセンジン-4であり、配列番号1で示す配列を有する。リンカーは40~48アミノ酸であり、配列番号3で示す配列を有するXaaはAlaである。輸送タンパク質は49~271アミノ酸、すなわちIgG2のFc部分である。最初に、この融合タンパク質のために、エキセンジン-4とヒトIgG2-Fcの融合タンパク質とをコードするベクターを構築する。IgG2-Fcドメインは、IgG2の重鎖定常領域のCH2部分およびCH3部分からなる。IgGの主なペプチド配列SP-IgGHをエキセンジン-4と融合し、分泌によって培地に合成した融合タンパク質を添加する。SP-IgGH/エキセンジン-4/IgG2融合タンパク質をコードするcDNAリンカーのアミノ酸配列はエキセンジン-4とIgG2との間に存在するをPCRおよびDNA自動合成機で合成し、pHT112ベクターYihuBiopharmaceutical社から購入のHindIII部位とNotI部位との間に挿入して、pHT112-SP-IgGH/エキセンジン-4/IgG2-Fベクターを構築する。分泌能を有するエキセンジン-4/IgG2-FcはIgG2の重鎖定常領域CH2およびCH3を含む。SP-IgGHの分泌を指示するペプチド配列は、エキセンジン-4配列を融合し、合成したタンパク質を細胞栄養液に分泌するのを誘発する。図1は、1対のエンドヌクレアーゼHindIIIおよびNotIによって消化された後のアガロースゲル電気泳動に反映されたpHT112-SP-IgGH/エキセンジン-4/IgG2-Fcベクターの結果を示す。エンドヌクレアーゼ、HindIIIおよびNotIは、SP-IgGH/Exendin-4/IgG2-Fcを含み、挿入したDNA880の塩基対を除去する。エキセンジン-4の融合タンパク質に生成するために遺伝子操作した細胞株の構築、発現および精製1.エキセンジン-4の融合タンパク質を生成するために遺伝子操作した細胞株の構築牛胎児血清FCSを添加したDMEMInvitrogenから購入全培養液10体積百分率でチャイニーズハムスター卵巣細胞CHOを培養し、トランスフェクション前に、1ウェル当り3×105個の細胞で6ウェルプレートに均等に分散させる。トランスフェクションに関しては、LIPOFECTAMINE2000の取扱指示を参照する。トランスフェクション48時間後、細胞を選択的基質メチオニンスルホキシミンMSX25μmで約1週間加圧培養すると、空細胞はすべて壊死する。生存細胞を96ウェルプレート50細胞/ウェルに播種してさらに加圧培養する。細胞をクローン化後に、培養上清中のタンパク質発現量を定量するELISA試験を行い、高発現発現量が200mg/L超のウェルを選別し、増幅培養のために24ウェルプレートに移す。再度ELISAを実施して上澄中のタンパク質発現量を定量し、参照文献CellExperimentalManual、SciencePress、2003に従って、高発現発現量が200mg/L超の細胞株を選別して増幅培養を継続する。懸濁培養液を徐々に熟成することによって、シードセルバンクを作製し、サブクローン化を実施してワーキングセルバンク遺伝子操作したCHO細胞株からなるを作製する。2.エキセンジン-4の融合タンパク質の精製上記で得た遺伝子操作したCHO細胞株を解凍して、容量が25cm2のT型培養瓶に5mLの細胞懸濁液で播種し、4~5日間培養液を振とうさせた後、内容物を三角フラスコに入れて増幅し、7~10日間さらに培養する。参照文献MolecularCloning、SciencePress、2002に記載の手順に従って、融合タンパク質を含む細胞培養液を分離し、タンパク質Aアフィニティークロマトグラフィー培地MabSuRe商標、GE社、アニオンクロマトグラフィー培地QSepheroseFF、GE社、カチオンクロマトグラフィー培地SPSepheroseFF、GE社によって連続精製する。その後、精製した融合タンパク質をG-25ゲル濾過カラムによって製剤緩衝液に置換して得る。エキセンジン-4の融合タンパク質の構造分析1.ウェスタンブロット分析精製した融合タンパク質を非還元条件下で電気泳動すると、転送装置GE社電流:25mA、時間:2時間によって、電気泳動バンドが、メタノールで活性したPVDF膜に転写される。PVDF膜を脱脂乳5wtに入れて2時間密閉し、予め希釈したアルカリホスファターゼの添加によって標識した抗IgG2抗体を1時間培養し、TBSTで洗浄する。洗浄時では、TBSTを5分に1回新しいものに交換する必要がある。洗浄が終了した後に、ルミネセンス測定法用の基質CDP-star登録商標を添加し、フィルムを押圧し、露出させて撮像する。結果を図2に示す。融合タンパク質はIgG2抗体に対して陽性を示す。2.等電点電気泳動分析精製した融合タンパク質は、高速電気泳動システムPhastSystem、GEを用い、等電点電気泳動によって分析する。分析には、pH3~10に予め調製したゲルを使用した。焦点電気泳動を実施する場合は、予め調製したゲルをクマシー溶液で染色する。結果を図3に示す。融合タンパク質のメインバンドの等電点は5.8であり、期待値6.2に近い。3.ゲルクロマトグラフィー精製分析精製した融合タンパク質は、参照文献MolecularCloning、SciencePress、2002に記載の手順に従って、ゲルクロマトグラフィークロマトグラフ用カラムTSK3000swにより、負荷量10μgで分析する。結果を図4に示す。融合タンパク質は、ゲルクロマトグラフィーで単一の対称ピークを示し、保持時間は8.5分である。エキセンジン-4の融合タンパク質の生物学的活性1.エキセンジン-4の融合タンパク質のinvitro活性:A.ヒトGLP1受容体発現CHO細胞におけるエキセンジン-4の融合タンパク質のcAMP分泌試験GLP-1受容体発現CHO-hGLP1R細胞を用いて、融合タンパク質の生物学的活性を国際公開第2007/017892号パンフレットに記載されるように細胞レベルで試験し、下流効果のある産物セカンドメッセンジャーcAMPのモル濃度と、本発明のLAX09すなわち、上に記載するようにして得られ、配列番号4で示すエキセンジン-4の融合タンパク質であり、以下同じであるのinvitroでの性能とを定量する。DMEM基質10体積を含有するFBSを黒色透明の96ウェルプレートに添加し、薬剤濃度が0.01~1000nMのエキセンジン-4およびLAX09をそれぞれ基質に添加する。30分培養すると細胞は崩壊することから、市販キットCisbioによって細胞内のcAMP濃度を測定する。結果を表1に示す。LAX90のEC50は約4.5nMであり、エキセンジン-4のEC50は約2.5nMであり、この2つは近似している。したがって、本発明におけるLAX09は、エキセンジン-4と同じような活性度のGLP1受容体を産生することができた。図5に示す。B.LAX09とヒトGLP-1Rを発現する遺伝子操作したCHO細胞株との結合試験LAX09とヒトGLP-1受容体の持続発現が可能な遺伝子操作したCHO細胞株CHO-hGLP1R、以下同じとの結合活性を試験し、本発明のLAX09の精製試料の生物学的活性を定量する。CHO-hGLP1R細胞株結合試験:ヒトGLP-1Rを安定発現する遺伝子操作したCHO株を単個細胞浮遊液にし、細胞密度をPBSで10,000,000細胞/mLに調整する。LAX09試料はさまざまな濃度勾配に希釈される。各バイラルでは、細胞懸濁液20μLをさまざまな濃度の試料20μLとそれぞれ混合し、4°Cで30分間培養した。PBS洗浄後に、フルオレセインFITCで標識したヒト免疫グロブリンγ鎖抗体を添加し、4°Cで30分間培養する。PBS洗浄後に、1パラホルムアルデヒドPBS溶液を添加し、十分に混合し、試料を添加し、フローサイトメトリーで選択領域内の各濃度の試料の平均蛍光強度を読み取る。結果を表2に示す。2.エキセンジン-4の融合タンパク質のinvivo活性:A.肥満糖尿病モデルのKK-Ayマウス単回注射による低血糖試験糖尿病モデルのKK-AyマウスBeijingHFKBioscience社北京から購入、以下同じを無作為化により、PBS対照群1群とさまざまな勾配のエキセンジン-4の融合タンパク質LAX09実験群3群とを含む4群に割り付ける。2時間絶食させた後に、尾静脈から薬剤を200μl/動物の用量で注射する。その後、0分、30分、60分、120分、180分および240分後のマウスの血糖値を測定する。結果を図6に示す。LAX09は、1mg/kgで血糖降下作用が最良となり、マウスの血糖値が10mmol/L未満に抑制されている。経口ブドウ糖負荷試験:糖尿病モデルのKK-Ayマウスを無作為化により、PBS対照群1群とさまざまな勾配のエキセンジン-4の融合タンパク質LAX09実験群3群とを含む4群に割り付ける。16時間絶食させた後に、薬剤を200μl/動物の用量で皮下注射する。6時間後に、体重1mg/gに応じて胃管からグルコースを与える。その後、0分、30分、60分、120分、180分および240分後のマウスの血糖値を測定する。結果を図7に示す。1mg/kg群および0.1mg/kg群のマウスは、正常な血糖値を維持する良好な能力が同じようにある。長期投与実験:糖尿病モデルのKK-Ayマウスを無作為化により、PBS対照群とエキセンジン-4の融合タンパク質LAX091mg/Kgの実験群とを含む2群に割り付ける。薬剤を週に2回与える。マウスを毎週水曜日に6時間絶食させ、空腹時血糖値を検査し、摂餌量と体重の変化とを記録する。結果を図8に示す。実験群のマウスの空腹時血糖値はPBS群と有意差がある。摂餌量は、図9に示すように低下する。体重は、図10に示すように大幅に減少する。投薬24時間後の経口ブドウ糖負荷試験の結果は、図11に示す通りである。投薬48時間後の経口ブドウ糖負荷試験の結果は、図12に示す通りである。これらすべての結果は、エキセンジン-4の融合タンパク質の有意な効果を示している。B.肥満糖尿病モデルのdb-dbマウス単回注射による低血糖試験5~6週齢の糖尿病モデルのdb-dbマウスを無作為化により、PBS対照群1群とさまざまな勾配のエキセンジン-4の融合タンパク質LAX09実験群3群とを含む4群に割り付ける。2時間絶食させた後に、尾静脈から薬剤を200μl/動物の用量で注射する。その後、0分、30分、60分、120分、180分および240分後のマウスの血糖値を測定する。結果を図13に示す。1mg/kg群および0.1mg/kg群は、血糖降下作用が最良である。実施例1~4で用いたサンプル手順に従って、表3の融合タンパク質を調製し、invivo活性およびinvitro活性を判断する。相対生物学的活性は、肥満糖尿病モデルのKK-Ayマウスのうち長期投与実験糖尿病モデルのKK-Ayマウスで測定した融合タンパク質の空腹時血糖値減少量空白対照群と比較と実施例2で精製して得られた融合タンパク質の換算値との間の相対比と定義する。具体的には、以下のプロトコールに従って長期投与を行う。糖尿病モデルのKK-Ayマウスを無作為化により、空白対照群PBSのみ注射と実験群表3の融合タンパク質1mg/kgを注射に割り付ける。薬剤を週に2回投与する。2週間後に、マウスを6時間絶食させてから空腹時血糖値を測定する。実験群の血糖減少量は、空白対照群の空腹時血糖値から実験群の空腹時血糖値を差し引くことによって算出する。表中、配列番号6は、配列番号1と2箇所のアミノ酸部位で異なり、式Iの配列を有する。配列番号8は、配列番号1と3箇所のアミノ酸部位で異なり、式Iの配列を有する。配列番号10は、配列番号1と4箇所のアミノ酸部位で異なり、式Iの配列を有する。配列番号12は、配列番号1と6箇所のアミノ酸部位で異なり、式Iの配列を有する。配列番号14はGLP-1A8Gのアミノ酸配列である。配列番号16は、配列番号2と3箇所のアミノ酸部位で異なる。配列番号18は、配列番号2と3箇所のアミノ酸部位で異なる。配列番号20は、配列番号2と2箇所のアミノ酸部位で異なる。上に示す結果は、本発明で提供する融合タンパク質が血糖値を減少させる効果があることを示す。ペプチドホルモンが配列番号1で示すアミノ酸配列であり、輸送タンパク質がIgG2-Fcである場合、薬剤のinvivo半減期を大幅に延長させ、インスリンに対する身体の感受性を増大させると同時にエキセンジン-4の血糖降下作用を維持することが可能である。しかし、輸送タンパク質がIgG4-Fcである場合は、融合タンパク質の相対生物学的活性は低い。"