VIII因子ポリペプチド内に含まれるシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合された水溶性ポリマーを含む結合体であって、該VIII因子がVIII因子、VIIIa因子、VIIIC因子、VIIIvWF因子、及びBドメイン欠失VIII因子からなる群から選択され、該水溶性ポリマーがポリ、ポリ、ポリ、ポリオキサゾリン、及びポリからなる群から選択される、結合体。前記VIII因子ポリペプチドが、水溶性ポリマーが共有結合されているシステイン残基に付加するように修飾されている、VIII因子ポリペプチドである、請求項1に記載の結合体。前記VIII因子ポリペプチドが、水溶性ポリマーが共有結合されているシステイン残基に付加するように修飾されたBドメイン欠失VIII因子である、請求項1に記載の結合体。前記水溶性ポリマーが、ポリであり、結合体がモノPEG化されている、請求項1又は3に記載の結合体。前記水溶性ポリマーが、6000ダルトン~90000ダルトンの範囲の見掛け平均分子量を有する、請求項1又は3に記載の結合体。前記水溶性ポリマーが、VIII因子ポリペプチドのA1サブユニット内に位置するシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合される、請求項1又は3に記載の結合体。前記水溶性ポリマーが、VIII因子ポリペプチドのA2サブユニット内に位置するシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合される、請求項1又は3に記載の結合体。前記水溶性ポリマーが、VIII因子ポリペプチドのA3サブユニット内に位置するシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合される、請求項1又は3に記載の結合体。前記水溶性ポリマーが、VIII因子ポリペプチドのC1サブユニット内に位置するシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合される、請求項1又は3に記載の結合体。前記水溶性ポリマーが、VIII因子ポリペプチドのC2サブユニット内に位置するシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合される、請求項1又は3に記載の結合体。マレイミド末端水溶性ポリマーとシステイン残基のチオール基との反応によって形成される、請求項1又は3に記載の結合体。チオエーテル結合を介してVIII因子ポリペプチドに共有結合された水溶性ポリマーを含む結合体であって、該VIII因子がVIII因子、VIIIa因子、VIIIC因子、VIIIvWF因子、及びBドメイン欠失VIII因子からなる群から選択され、該VIII因子ポリペプチドが該水溶性ポリマーが共有結合されるシステイン残基に付加するように修飾され、該水溶性ポリマーがポリである、結合体。前記ポリがポリである、請求項12に記載の結合体。前記VIII因子ポリペプチドがBドメイン欠失VIII因子である、請求項13に記載の結合体。モノPEG化されている、請求項13に記載の結合体。ジPEG化されている、請求項14に記載の結合体。複数のモノPEG化又はジPEG化VIII因子ポリペプチド結合体を含む組成物であって、ポリがVIII因子内に含まれるシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合され、該VIII因子ポリペプチドがVIII因子、VIIIa因子、VIIIC因子、VIIIvWF因子、及びBドメイン欠失VIII因子からなる群から選択される、組成物。VIII因子ポリペプチド内に含まれるシステイン残基のチオール基を介して該VIII因子ポリペプチドに共有結合される水溶性ポルマーを含む結合体を含む組成物であって、該VIII因子ポリペプチドが、VIII因子、VIIIa因子、VIIIC因子、VIIIvWF因子、及びBドメイン欠失VIII因子からなる群から選択され、該結合体の位置異性体を含まず、該水溶性ポリマーはポリである、組成物。前記ポリが、ヒドロキシ、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケノキシ、置換アルケノキシ、アルキノキシ、置換アルキノキシ、アリールオキシ及び置換アリールオキシからなる群から選択される末端キャッピング部分で末端がキャップされている、請求項17又は18に記載の組成物。前記ポリがメトキシで末端がキャップされている、請求項17又は18に記載の組成物。前記ポリがヒドロキシで末端がキャップされている、請求項17又は18に記載の組成物。前記ポリが、100ダルトン~150000ダルトンの範囲の見掛け平均分子量を有する、請求項17又は18に記載の組成物。前記ポリが、6000ダルトン~100000ダルトンの範囲の見掛け平均分子量を有する、請求項22に記載の組成物。前記ポリが、10000ダルトン~85000ダルトンの範囲の見掛け平均分子量を有する、請求項23に記載の組成物。前記ポリが、20000ダルトン~85000ダルトンの範囲の見掛け平均分子量を有する、請求項24に記載の組成物。前記ポリが、53000ダルトン~75000ダルトンの範囲の見掛け平均分子量を有する、請求項25に記載の組成物。前記結合体が線状ポリマーである、請求項17又は18に記載の組成物。前記結合体が分岐ポリマーである、請求項17又は18に記載の組成物。前記結合体が、VIII因子、VIIIa因子、VIIIC因子、及びVIIIvWF因子からなる群から選択される、請求項17又は18に記載の組成物。前記VIII因子部分がBドメイン欠失VIII因子である、請求項17又は18に記載の組成物。前記Bドメイン欠失VIII因子が、ポリが共有結合されているシステイン残基に付加されるように修飾されている、請求項30に記載の組成物。前記結合体が組換えVIII因子ポリペプチドである、請求項17又は18に記載の組成物。前記結合体が血液から得られるVIII因子ポリペプチドを含む、請求項17又は18に記載の組成物。アルブミンを含有しない、請求項17又は18に載の組成物。VIII因子活性を有さないタンパク質を含まない、請求項17又は18に載の組成物。凍結乾燥型である請求項17又は18に記載の組成物。液体の形態である請求項17又は18に記載の組成物。医薬として許容される賦形剤を更に含む、請求項17又は18に記載の組成物。前記結合体がチオエーテル結合を含む、請求項17又は18に記載の組成物。前記結合体がジスルフィド結合を含む、請求項17又は18に記載の組成物。発明の詳細な説明本発明を詳細に説明する前に、本発明は、特定のポリマー、合成法、VIII因子部分などに限定されることなく、変えることができると解すべきである。単数形のa、an及びtheは、本明細書及び目的の特許請求の範囲で使用する場合、特に断らない限り、複数の指示対象を含んでいることに留意すべきである。したがって、例えばapolymerを引用しているときは単一のポリマー及び二つ以上の同じか又は異なるポリマーを含んでおり、anoptionalexcipientを引用しているときは単一の任意の添加剤及び二つ以上の同じか又は異なる任意の添加剤を含んでいるなどである。本発明を記述し特許を請求するとき、下記用語は下記定義に従って使用する。本明細書で用いるPEG、ポリエチレングリコール及びポリは、互換性がありかつ水溶性ポリを含むものである。一般に、本発明で使用するPEG類は、下記構造nは2~4000であるを含んでいる。また用語PEGは、本明細書で使用する場合、末端の酸素が置換されているか又は置換されていないかによって、CH2CH2OnCH2CH2及びnOを含んでいる。本明細書及び特許請求の範囲全体を通じて、用語PEGは、各種の末端基又は末端キャッピング基などの基を有する構造を含んでいると記憶しておくべきである。また用語PEGは、大部分が、50を超えるOCH2CH2繰返しサブユニットを含むポリマーを意味する。具体的な形状のPEGは、以下に詳細に述べるように、多くの各種分子量及び分岐、線状、フォーク型、多官能型などの構造又は形態を取ることができる。本明細書で用いる用語末端をキャップされた又は終端をキャップされたは、互換性があり、末端キャッピング部分を有するポリマーの終端又は末端を意味する。限定されないが、一般に末端キャッピング部分は、ヒドロキシ基又はC120アルコキシ基を含み、より好ましくはC110アルコキシ基そしてさらにより好ましくはC15アルコキシ基を含んでいる。したがって、末端キャッピング部分の例としては、アルコキシ並びにアリール、ヘテロアリール、シクロ、ヘテロシクロなどがある。この末端キャッピング部分はポリマーの終端モノマーの1個以上の原子を含んでいるn中の末端キャッピング部分メトキシと記憶しておくべきである。さらに上記部分各々の飽和型、不飽和型、置換された形態及び未置換型が考えられる。さらに末端キャッピング基はシランであってもよい。また末端キャッピング基は、検出可能な標識を含んでいてもよくこれは有利である。ポリマーが検出可能な標識を含む末端キャッピング基を有しているとき、ポリマー及び又はそのポリマーが結合している部分の量又は位置は、適切な検出器を使って測定できる。このような標識としては、限定されないが、発蛍光体、化学発光体、酵素標識化に使用される部分、比色剤、金属イオン、放射性部分などがある。適切な検出器としては、光度計、フィルム、分光計などがある。また末端キャッピング基はリン脂質を含んでいてもよくこれは有利である。ポリマーが、リン脂質を含有する末端キャッピング基を有しているとき、そのポリマー及び生成する結合体に独特の特性が付与される。代表的なリン脂質としては、限定されないが、ホスファチジルコリンと称されるリン脂質のクラスから選択されるリン脂質がある。具体的なリン脂質としては、限定されないが、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジオレイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステロイルホスファチジルコリン、ベヘノイルホスファチジルコリン、アラキドイルホスファチジルコリン及びレシチンがある。本明細書に記載のポリマーに関する用語天然には存在しないは、その全体が天然には見られないポリマーを意味する。しかし、本発明の天然に存在しないポリマーは、その全ポリマー構造が天然に見られない限り、天然に存在するモノマー又はそのモノマーのセグメントを一つ以上含有していてもよい。用語水溶性ポリマー中の用語水溶性は、室温で水に溶解するポリマーを意味する。一般に、水溶性ポリマーは、濾過後のその溶液を通過する光の少なくとも約75、より好ましくは少なくとも約95を透過する。水溶性ポリマーは、重量ベースで、好ましくは少なくとも約35重量水に溶解し、より好ましくは少なくとも約50重量水に溶解し、さらにより好ましくは少なくとも約70重量水に溶解しそしてさらにより好ましくは少なくとも約85重量水に溶解する。しかし、水溶性ポリマーは、約95重量水に溶解するか又は水に完全に溶解することが好ましい。PEGなどの水溶性の天然には存在しないポリマーに関連する用語見掛け平均分子量は、一般に、サイズ排除クロマトグラフィー、MALDI、光散乱法又は124トリクロロベンゼン中の固有粘度を測定する方法で測定されるポリマーの質量平均分子量を意味する。これらポリマーは、多分散性であり、その多分散性値は小さく、好ましくは約12未満であり、より好ましくは約115未満であり、さらにより好ましくは約110未満であり、一層さらにより好ましくは約105未満であり、そして最も好ましくは約103未満である。用語活性の又は活性化されたは、特定の官能基に関連して使用するとき、他の分子の求電子性基又は求核性基と容易に反応する反応性官能基を意味する。このことは、反応するために、強力な触媒又は著しく非実用的な反応条件を必要とする基とは対照的である。本明細書で用いる用語官能基又はその同義語は、その保護された形態及び保護されていない形態を含むものである。本明細書で用いる用語結合又はリンカーは、ポリマーセグメントとVIII因子部分の末端又はVIII因子部分の求電子性基もしくは求核性基などの、相互に接続する部分を連結するのに任意に使用される原子又は原子の集団を意味する。本発明のリンカーは、加水分解反応に対して安定であるか、又は生理学的に加水分解可能であるかもしくは酵素で分解可能な結合を含んでいてもよい。用語アルキルは、長さが一般に約1個~15個の範囲の原子からなる炭化水素連鎖を意味する。このような炭化水素鎖は、好ましくは限定されないが、飽和された分岐鎖又は直鎖でもよいが、一般に直鎖が好ましい。代表的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、1メチルブチル、1エチルプロピル、3メチルペンチルなどがある。本明細書で用いる用語アルキルは、シクロアルキル及びシクロアルキレン含有アルキルを含む。用語低級アルキルは、1~6個の炭素原子を含有するアルキル基を意味し、直鎖又は分岐鎖でもよく、代表的なものはメチル、エチル、nブチル、iブチル、及びtブチルである。用語シクロアルキルは、飽和又は不飽和の環式炭化水素鎖を意味し、好ましくは3~約12個の炭素原子で形成され、より好ましくは3~約8個の炭素原子で形成された架橋、縮合又はスピロ環式の化合物が含まれている。用語シクロアルキレンは、環式環系中の任意の二つの炭素に鎖を結合することによってアルキル鎖中に挿入されたシクロアルキル基を意味する。用語アルコキシは、OR基を意味する。用語例えば置換されたアルキル中の用語置換されたは、1個以上の非妨害性置換基例えば限定されないがアルキル;C38シクロアルキル例えばシクロプロピル、シクロブチルなど;ハロ例えばフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨード;シアノ;アルコキシ;低級フェニル;置換フェニルなどで置換された部分を意味する。用語置換アリールは、置換基として1個以上の非妨害性基を有するアリールを意味する。フェニル環を置換する場合、その置換基はいずれの位置に位置していてもよい。用語非妨害性置換基は、分子内に存在しているとき、その分子内に含まれている他の官能基に対し一般に非反応性の基である。用語アリールは、各々5個又は6個のコア炭素原子を有する1個以上の芳香族環を意味する。アリールには、ナフチルのように縮合されていてもよく又はビフェニルのように縮合されていなくてもよい複数のアリール環が含まれている。またアリール環は、1個以上の環式炭化水素、ヘテロアリール又はへテロ環式環と縮合されてもよく又は縮合されていなくてもよい。本明細書で用いる用語アリールは、ヘテロアリールが含まれている。用語ヘテロアリールは、1~4個のヘテロ原子好ましくは硫黄、酸素又は窒素又はその組合わせを含むアリール基を意味する。またヘテロアリール環は、1個以上の環式炭化水素、複素環式、アリール又はヘテロアリールの環と縮合してもよい。用語複素環又は複素環式のは、5~12個の原子好ましくは5~7個の原子を有し、不飽和又は芳香族の特性あり又はなしでかつ炭素でない少なくとも一つの環原子を有する1個以上の環を意味する。好ましいヘテロ原子としては硫黄、酸素及び窒素がある。用語置換ヘテロアリールは、置換基として1個以上の非妨害性基を有するヘテロアリールを意味する。用語置換複素環は、非妨害性置換基で形成された一つ以上の側鎖を有する複素環を意味する。用語求電子性物質及び求電子性基は、イオン性であってもよくそして求電子性中心すなわち電子を求める中心を有し求核性物質と反応できるイオン又は原子又は原子の集合体を意味する。用語求核性物質及び求核性基は、イオン性であってもよくそして求核性中心すなわち求電子性中心を求める中心を有し求電子性物質と反応できるイオン又は原子又は原子の集合体を意味する。用語生理学的に開裂可能の又は加水分解可能の又は分解可能の結合は、生理学的条件下で水と反応する結合を意味する。好ましい結合は、pH8で25°Cにおける加水分解の半減期が約30分間未満の結合である。結合が水中で加水分解する傾向は、二つの中心原子を連結する結合の一般的タイプのみならずこれら中心原子に結合している置換基によって決まる。加水分解に対し不安定か又は弱い適当な結合としては、限定されないが、カルボン酸エステル、リン酸エステル、酸無水物類、アセタール類、ケタール類、アシルオキシアルキルエーテル、イミン類、オルトエステル類、ペプチド類及びオリゴヌクレオチド類がある。用語酵素によって分解可能な結合は、一種以上の酵素で分解される結合を意味する。用語加水分解に対し安定な結合は、水中で実質的に安定でありすなわち生理学的条件下長期間にわたって感知される程度には加水分解されない化学結合、一般に共有結合を意味する。加水分解に対して安定な結合の例としては、限定されないが、以下の炭素炭素結合、エーテル、アミド、ウレタンなどがある。一般に、加水分解に対して安定な結合は、生理学的条件下、1日当たり約1~2未満の加水分解速度を示す結合である。代表的な化学結合の加水分解速度は、大部分の標準的化学教科書に見られる。用語医薬として許容できる賦形剤又は担体は、本発明の組成物中に任意に入れてもよくかつ患者に有意に有害な中毒作用を起こさない賦形剤を意味する。用語薬理学的に有効な量、生理学的に有効な量及び治療上有効な量は、本明細書で相互に交換して使用することができ、血中又は標的組織中における所望の濃度の前記結合体を提供するため必要であるポリマーVIII因子部分の結合体の量を意味する。正確な量は、多数の要因、例えば、特定のVIII因子部分、治療用組成物の成分と物理的特性、目的の患者の集団、個々の患者の問題点などによって決まり、当業者は本明細書で提供される情報に基づいて容易に決定できる。用語多官能性のは、中に3個以上の官能基を有するポリマーを意味し、その官能基は同じでも異なっていてもよい。本発明の多官能性ポリマー剤は一般に、ポリマーの骨格中に、約3~100個の官能基又は約3~50個の官能基又は約3~25個の官能基又は約3~15個の官能基又は約3~10個の官能基又は3、4、5、6、7、8、9もしくは10個の官能基を有している。本明細書で用いる用語VIII因子部分は、VIII因子の活性を有する部分を意味する。またそのVIII因子部分は、ポリマー剤と反応するのに適した求電子性基又は求核性基を少なくとも一つ有している。一般にVIII因子部分は、限定されないが、タンパク質である。さらに、用語VIII因子部分には、結合する前のVIII因子部分及び結合後のVIII因子部分の残基の両方が含まれている。以下にさらに詳細に説明するが、当業者は、与えられた部分がVIII因子の活性を有しているかどうかを決定できる。用語患者は、活性薬剤を投与することによって予防又は治療できる症状になっているか又はその症状になりやすい生きている生物を意味し、ヒトと動物の両者が含まれる。用語任意の又は任意には、続けて述べる状況が起こるか又は起こらないかもしれないことを意味し、したがってその記述は、その状況が起こるときの例と起こらないときの例を含んでいる。ペプチド中のアミノ酸残基は下記のように略される。フェニルアラニンはPhe又はF;ロイシンはLeu又はL;イソロイシンはIle又はI;メチオニンはMet又はM;バリンはVal又はV;セリンはSer又はS;プロリンはPro又はP;トレオニンはThr又はT;アラニンはAla又はA;チロシンはTyr又はY;ヒスチジンはHis又はH;グルタミンはGln又はQ;アスパラギンはAsn又はN;リシンはLys又はK;アスパラギン酸はAsp又はD;グルタミン酸はGlu又はE;システインはCys又はC;トリプトファンはTrp又はW;アルギニンはArg又はR;及びグリシンはGly又はGである。本発明の第一の実施態様によって、複数種の結合体を含有する組成物であって、その結合体は各々、好ましくは限定されないが、VIII因子部分に共有結合された1~3個の水溶性ポリマーを有し、そしてその水溶性ポリマーは各々見掛け平均分子量が好ましくは5000ダルトンより大きく約150000ダルトンまでの範囲内である組成物が提供される。天然のVIII因子は、A1A2BA3C1C2として構成された構造を有する2351個のアミノ酸の一本鎖糖タンパク質である。その発現された2351個のアミノ酸の配列は配列番号1として提供してある。しかしその発現されたポリペプチドが小胞体の内腔にトランスロケートされると、19個のアミノ酸のシグナル配列が開裂されて、第二配列が生成する。この第二配列は、本明細書では配列番号2として提供してあるが前記の先行19個のアミノ酸が欠けており、研究者がVIII因子の与えられた残基に番号位置を割り当てるために通常使用する。したがって、特に断らない限り、本明細書で提供されるアミノ酸残基の番号位置の割当てはすべて配列番号2に基づいている。VIII因子は、比較的少量のトロンビンの存在下、Arg372、Arg740及びArg1689においてトロンビンによって開裂されてVIIIa因子を生成する。VIIIa因子は、トロンビンで開裂されて生成した軽鎖A3C1C2に結合されたA1サブユニット及びイオン性相互作用を介してA1に結合された遊離のA2サブユニットからなるヘテロトリマーである。VIII因子部分が単にVIII因子の活性型に限定されず、そして用語VIII因子部分が、前駆体型及び同様のプロコアグラント作用を有する他の物質を含むことは分かるであろう。与えられた部分について、その部分がVIII因子の活性を有するかどうかは確認できる。例えば、血友病になる遺伝的突然変異を有する幾種類かの動物系が意図的に飼育されており、その動物系から産生される動物は、VIII因子のレベルが非常に低くかつ不十分である。このような動物系は、限定されないが、米国ニューヨーク州オールバニー所在のDivisionofLaboratoriesandResearchNewYorkDepartmentofPublicHealth及び米国ノースカロライナ州チャペルヒル所在のtheDepartmentofPathologyUniversityofNorthCarolinaなどの各種供給元から入手できる。これらの両供給元は、例えばイヌ血友病Aに冒されたイヌを提供する。問題の与えられた部分のVIII因子活性を試験するため、その部分を疾患動物に注射し、小さな切り傷を作って、出血時間を健康な対照動物と比較する。VIII因子活性を測定するのに有用な他の方法は、補因子及びプロコアグラントの活性を測定する方法であるBritJHaematol8513342参照。当業者に知られている他の方法も、与えられた部分がVIII因子活性を有しているかどうかを測定するために利用できる。かような方法は、その部分自体及び対応するポリマー部分結合体の両者のVIII因子活性を測定するのに有用である。VIII因子部分の限定されない例としては下記のものがある。VIII因子;VIIIa因子;VIIIC因子;VIIIvWF因子;Bドメイン欠失VIII因子;例えば米国特許第6158888号に記載されているようなハイブリッドタンパク質;例えば米国特許出願公開第US20030077752号に記載されているような、VIII因子活性を有するグリコシル化タンパク質;及びVIII因子活性を有するペプチド類自体である。好ましい端を切り取られたVIII因子の変形は、Arg759とSer1709の間の領域内に少なくとも581個のアミノ酸に相当する欠失を有し、より好ましくはその欠失がPro1000とAsp1582の間の領域、Thr778とPro1659の間の領域及びThr778とGlu1694の間の領域の内の一つの領域内に存在しているヒトVIII因子のアミノ酸配列を有するタンパク質に相当している。VIII因子活性を少なくともいくらか維持している前記変形の生物学的に活性のフラグメント、欠失変異体、置換変異体、又は付加変異体もVIII因子部分として働くことができる。VIII因子活性を有する部分は、ポリマーをアミノ酸の側鎖中の原子に容易に結合させるために、例えばリシン、システイン及び又はアルギニンのようなアミノ酸残基を一つ以上含むように有利に修飾できる。アミノ酸残基を付加する方法は、当業者にとって周知の方法である。VIII因子部分は血液由来起源から得ることができる。例えば、VIII因子は、当業者に知られている沈澱法及び遠心分離法を使って、ヒトの血漿から分画できるTransfusion16345350及びSlichterらTransfusion16616-626参照。VIII因子はヒトの顆粒球からも単離できるHaematologia11177187参照。さらに、VIII因子部分は組換え法でも得ることができる。簡単に述べると、組換え法は、所望のポリペプチド又はフラグメントをコードする核酸を構築し、その核酸を発現ベクターにクローニングし、宿主細胞を形質転換し、次いで核酸に所望のポリペプチド又はフラグメントを発現させて産生することからなっている。生体外で及び宿主の原核細胞と真核細胞中に組換えポリペプチドを産生し発現させる方法は、当業者に知られている。組換えポリペプチドの同定と精製を促進するために、エピトープタグ又は他のアフィニティー結合配列をコードする核酸配列を、コーディング配列を有する読み枠中に挿入又は付加して、所望のポリペプチド及び結合に適切なポリペプチドからなる融合タンパク質を産生してもよい。融合タンパク質は、まず、融合タンパク質を含有する混合物を、融合タンパク質中のエピトープタグ又は結合配列に結合する部分を有するアフィニティーカラムを通過させて、融合タンパク質をカラム内に捕捉することによって、同定し精製することができる。その後、その融合タンパク質は、そのカラムを適当な溶液で洗浄して前記捕捉された融合タンパク質を放出させて回収できる。組換えポリペプチドも、宿主細胞を溶解してポリペプチドを例えばサイズ排除クロマトグラフィーで分離し次いでそのポリペプチドを集めることによって同定し精製できる。組換えポリペプチドを同定し精製するこれらの方法と他の方法は、当業者には知られている。本発明の組成物は、複数種の結合体を含み、その各結合体が同じVIII因子部分で構成されていてもよい。さらに、本発明の組成物は、複数種の結合体を含み、任意の所与の結合体が二種類以上の異なるVIII因子部分からなる群から選択される部分を含んでいてもよい。しかし、組成物中の複数種の結合体の実質的にすべてが各々、同じVIII因子部分で構成されていることが最適である。さらに、本発明の結合体を含有する組成物は、アルブミンを含有していないか又は実質的に含有していないことが好ましい。また本発明の組成物は、VIII因子活性を有していないタンパク質を含有していないか又は実質的に含有していないことが好ましい。したがって、本発明の組成物は、85、好ましくは95、最も好ましくは99がアルブミンを含有していないことが好ましい。さらに、本発明の組成物は、85、好ましくは95、最も好ましくは99がVIII因子活性を持たないタンパク質を含有していないことが好ましい。先に考察したように、各結合体は水溶性ポリマーに結合したVIII因子部分を含んでいる。その水溶性ポリマーについて述べれば、この水溶性ポリマーは、非ペプチド性、非毒性で天然に存在せずそして生体適合性である。その生体適合性について述べれば、ある物質を単独で又は他の物質とともに生組織に対して使用したときに伴う有利な作用が、臨床医例えば内科医が評価したとき、有害な作用より強ければ、その物質は生態適合性であるとみなされる。非免疫原性について述べれば、ある物質を生体内で意図的に使用して望ましくない免疫応答を起こさないか又は免疫応答が起こっても、その応答が、臨床医が評価したとき臨床的に有意又は重大であるとみなされなかったならば、その物質は非免疫原性であるとみなされる。前記水溶性ポリマーは生体適合性でかつ非免疫原性であることが特に好ましい。さらに、前記ポリマーは一般に、2~約300個の末端を有していることを特徴としている。このようなポリマーの例としては、限定されないが、ポリ類、例えばポリエチレングリコール、ポリ、エチレングリコールとプロピレングリコールなどのコポリマー、ポリ、ポリ、ポリビニルピロリドン、ポリ、ポリ、多糖類、ポリ、ポリ、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリ及びこれらポリマーのいずれかの組合わせがある。このポリマーは、特定の構造に限定されず、線状、分岐鎖状もしくはマルチアーム状、樹枝状又は分解性結合を有するものがある。さらに、このポリマーの内部構造はいくつもの異なるパターンで構成されていてもよく、ホモポリマー、交互コポリマー、ランダムコポリマー、ブロックコポリマー、交互トリポリマー、ランダムトリポリマー及びブロックトリポリマーからなる群から選択できる。一般に、PEGなどの水溶性ポリマーは、VIII因子部分の所望の部位に結合するのに適当な適切に活性化する基で活性化される。活性化されるポリマー剤は、VIII因子部分と反応する反応性基を有している。代表的なポリマー剤及びこれらポリマーを活性部分に結合する方法は当該技術分野では公知であり、さらに、ZalipskySらUseofFunctionalizedPolyforModificationofPolypeptidesinPolyethyleneGlycolChemistryBiotechnicalandBiomedicalApplicationssJMHarrisPlenusPressNewYork及びZalipskyAdvancedDrugReviews16157182に記載されている。一般に、本発明の結合体中の与えられたポリマーの見掛け平均分子量は約100ダルトンから約150000ダルトンまでである。しかしながら、見掛け平均分子量の代表的な範囲としては、5000ダルトンより大きく約100000ダルトンまでの範囲、約6000ダルトンから約90000ダルトンまでの範囲、約10000ダルトンから約85000ダルトンまでの範囲、約20000ダルトンから約85000ダルトンまでの範囲及び約53000ダルトンから約85000ダルトンまでの範囲がある。与えられた水溶性ポリマーとしては、これらの範囲の分子量を有するPEGが好ましい。前記水溶性ポリマーのセグメントの代表的な見掛け平均分子量としては、約100ダルトン、約200ダルトン、約300ダルトン、約400ダルトン、約500ダルトン、約600ダルトン、約700ダルトン、約750ダルトン、約800ダルトン、約900ダルトン、約1000ダルトン、約2000ダルトン、約2200ダルトン、約2500ダルトン、約3000ダルトン、約4000ダルトン、約4400ダルトン、約5000ダルトン、約6000ダルトン、約7000ダルトン、約7500ダルトン、約8000ダルトン、約9000ダルトン、約10000ダルトン、約11000ダルトン、約12000ダルトン、約13000ダルトン、約14000ダルトン、約15000ダルトン、約20000ダルトン、約22500ダルトン、約25000ダルトン、約30000ダルトン、約40000ダルトン、約50000ダルトン、約60000ダルトン及び約75000ダルトンがある。PEG類は、前記ポリマーとして使用される場合、一般に多数のモノマーを含有している。繰返し単位の数は、本明細書の説明の全体にわたって使用される場合、式n中の下付添字nで表される。したがって、の値は一般に、以下の範囲:2から約2300まで、約100から約2300まで、約135から約2000まで、約230から約1900まで、約450から約1900まで及び約1200から約1900までの一つ以上の範囲内に入る。与えられたポリマーの分子量が分かっている場合、そのポリマーの全分子量を繰返し単位の分子量で割ることによって繰返し単位の数を決定できる。本発明に使用するのに特に好ましい一つのポリマーは、末端をキャップされたポリマー、すなわち少なくとも一方の末端を、比較的不活性の基例えば低級C16アルコキシ基でキャップされたポリマーである。ポリマーがPEGの場合、例えば、メトキシPEGすなわちポリマーの一方の末端はメトキシ基であるがもう一方の末端は任意に化学的に修飾できるヒドロキシル基などの官能基である線状のPEGを使うことが好ましい。本発明で有用な一形態の遊離の又は未結合のPEGは、各末端がヒドロキシル基で終わる下記式:HOCH2CH2Om’CH2CH2OHは一般にゼロから約4000までの範囲内にあるで表される線状ポリマーである。上記ポリマー:α、ωジヒドロキシルポリは、短縮形のHOPEGOH式中、PEGの記号は以下の構造単位:CH2CH2Om’CH2CH2は前記定義と同じであるを表すことができるものとするで表すことができる。本発明に有用な別のタイプのPEGは、メトキシPEGOHすなわち短縮形で示すとmPEGであり、このタイプのPEGは一方の末端は比較的不活性のメトキシ基であるが、もう一方の末端はヒドロキシル基である。mPEGの構造を以下に示す。CH3OCH2CH2Om’CH2CH2OH上記式中は前記定義と同じである。米国特許第5932462号に記載されているようなマルチアームのPEG又は分岐PEGの分子も、PEGポリマーとして使用できる。例えば、PEGは、下記式:式中、ポリaとポリbはメトキシポリなどのPEG骨格であり、RはH、メチル又はPEG骨格などの非反応性部分であり、そしてPとQは非反応性の結合であるで表される構造を有している。好ましい実施態様の分岐PEGポリマーはメトキシポリ二置換リシンである。使用される特定のVIII因子部分によって、前記二置換リシンの反応性エステル官能基は、さらに修飾して、VIII因子部分内の標的基と反応するのに適した官能基をつくることができる。これらポリマーは線状でもよく又は上記のいずれの形態でもよい。さらに、PEGはフォーク型PEGを含んでいてもよく、フォーク型PEGの例は下記式で表される構造を有している。国際特許願第PCTUS9905333号には、本発明で使用できる各種のフォーク型PEG構造体が開示されている。前記Z官能基を前記分岐炭素原子に連結する原子鎖はつなぎとめる基として働き、例えば、アルキル鎖、エーテル鎖、エステル鎖、アミド鎖及びそれらの組合わせを含んでいてもよい。前記PEGポリマーは、PEG連鎖の末端よりむしろPEGの長さの部分に沿って共有結合されたカルボキシル基などの反応性基を有するペンダントPEG分子を含んでいてもよい。その反応性ペンダント基は、PEGに、直接連結されてもよく又はアルキレン基などのスペーサー基を介して連結されてもよい。上記形態のPEGに加えて、上記どのポリマーも含めて、ポリマー中に一つ以上の弱いか又は分解可能の結合を有するポリマーも製造できる。例えば、加水分解されやすいエステル結合をポリマー中に有するPEGを製造できる。以下に示すように、好ましくはこの加水分解反応によって、ポリマーが低分子量のフラグメントに開裂される。ポリマー骨格中の分解可能な結合として有用なその外の加水分解で分解可能な結合としては、炭酸結合;例えばアミンとアルデヒドの反応から生成するイミン結合PolymerPreprints385823参照;例えば、アルコールとリン酸基を反応させることによって形成されるリン酸エステル結合;一般にヒドラジドとアルデヒドの反応で形成されるヒドラゾン結合;一般にアルデヒドとアルコールの反応で形成されるアセタール結合;例えば、ギ酸塩とアルコールの反応で形成されるオルトエステル結合;例えば、PEGなどのポリマーの末端におけるアミン基と別のPEG連鎖のカルボキシル基とで形成されるアミド結合;例えば、末端にイソシアネート基を有するPEGとPEGアルコールとの反応で形成されるウレタン結合;例えばPEGなどのポリマーの末端におけるアミン基とペプチドのカルボキシル基とで形成されるペプチド結合;及び例えばポリマーの末端におけるホスホロアミダイト基とオリゴヌクレオチドの5’ヒドロキシル基とで形成されるオリゴヌクレオチド結合がある。ポリマー結合体のこのような任意の特徴、すなわちポリマー鎖に一つ以上の分解可能な結合が導入されている特徴によって、投与したときの該結合体の望ましい最終的薬理特性をさらに制御できる。例えば、大きくかつ比較的不活性の結合体を投与してもよく、その結合体は加水分解されて元のPEG鎖の一部を有する生理活性結合体を生成する。このように、結合体の特性は、時間の経過とともに結合体の生理活性を釣り合わせるように、より有効に要求どおりにつくることができる。当業者であれば、実質的に水溶性のポリマーセグメントに関する前記考察は決して網羅的なものではなく例示に過ぎず、そして上記性能を有するポリマー材料はすべて目的とする材料であることが分かるであろう。本明細書で用いる用語ポリマー剤は、一般に、水溶性ポリマーセグメントと官能基を含む分子全体を意味する。上記のように、本発明の結合体は、VIII因子部分に共有結合した水溶性ポリマーを含有している。所定の結合体には、VIII因子活性を有する一つ以上の部分に共有結合した1~3個の水溶性ポリマーが存在している。しかし、場合によって、その結合体は、VIII因子部分に個々に結合された1、2、3、4、5、6、7、8又は9個以上の水溶性ポリマーを有している。VIII因子活性を有する部分のなかの特定の結合及びポリマーは、多数の要因によって決まる。このような要因としては、例えば、利用される特定の結合の化学的性質、VIII因子活性を有する特定の部分、VIII因子活性を有する部分中の利用可能な官能基、VIII因子活性を有する部分中に存在することがある追加の反応性官能基などがある。本発明の結合体は、これには限らないが、プロドラッグであってもよく、これは、ポリマーとVIII因子部分の間の結合が加水分解可能で親の部分を放出できることを意味する。代表的な分解可能な結合としては、カルボン酸エスエル、リン酸エステル、チオールエステル、酸無水物類、アセタール類、ケタール類、アシルオキシアルキルエーテル、イミン類、オルトエステル類、ペプチド類及びオリゴヌクレオチド類がある。このような結合は、VIII因子部分及び又はポリマー剤を、当該技術分野で通常利用されている結合方法を使って適正に修飾することによって容易に作製できる。しかし、最も好ましいのは、適切に活性化されたポリマーとVIII因子活性を有する部分に含まれている未修飾の官能基との反応によって容易に形成される加水分解可能な結合である。あるいは、加水分解に対して安定な結合、例えばアミド、ウレタン、アミン、チオエーテル又は尿素の結合も、VIII因子部分を結合するための結合として利用できる。しかし、場合によっては、その結合は、カルバメート結合やカルバミド結合でない方が好ましく、さらにその結合は、イソシアネートもしくはイソチオシアネートの種を有するポリマー誘導体とVIII因子部分との反応に基づいて形成されない方が好ましい。一方、好ましい加水分解に対して安定な結合はアミド結合である。アミド結合は、VIII因子部分内に含まれているカルボキシル基と末端がアミノ基のポリマーとの反応で容易に作製できる。結合体は、測定可能な程度のVIII因子活性を持っていることがあり又はもっていないこともある。すなわち、本発明のポリマー結合体は、未修飾の親VIII因子部分の生物活性の約01~約100又はそれを超える生物活性を有している。好ましくは、VIII因子活性をほとんどもっていないか又は全くもっていない化合物が、ポリマーにVIII因子部分を接続する加水分解可能な結合を有し、その結果、結合体には活性が欠けていても、その加水分解可能な結合が水によって開裂されて活性の親分子が放出される。かような活性は、適切な生体内又は生体外のモデルを使って、利用されるVIII因子活性を有する特定部分の公知の活性によって測定できる。VIII因子活性を有する部分をポリマーに結合する加水分解に対して安定な結合を有する結合体は、一般に測定可能な程度の特異的活性を有している。例えば、かようなポリマー結合体は、当該技術分野で周知のような適切なモデルで測定した場合、VIII因子活性を有する未修飾の親部分の活性の少なくとも約2、5、10、15、25、30、40、50、60、80、85、90、95、97、100又はそれを超える活性を有することが特徴である。加水分解に対して安定な結合を有する化合物は、好ましくは、VIII因子活性を有する未修飾親部分の生物活性を少なくともある程度有している。VIII因子活性を有する部分がタンパク質である本発明の代表的なポリマー結合体についてここで説明する。一般に、かようなタンパク質は、天然のVIII因子と類似のアミノ酸配列を共有していると考えられる。したがって、当業者は、天然のVIII因子タンパク質内の特定の位置又は原子を参照するが、この参照は便宜上行うだけあり、VIII因子活性を有する他の部分の対応する位置又は原子を容易に決定できる。特に、天然のVIII因子について本願に記載されている説明は、VIIIa因子、VIIIvWF因子及びBドメイン欠失VIII因子の変異体、並びにこれらのフラグメント、欠失変異体、置換変異体又は付加変異体に適用できる。VIII因子部分のアミノ基は、そのVIII因子部分と水溶性ポリマーとの間の結合点を提供する。天然のVIII因子は、アミン含有リシン残基158個と一つのアミノ末端を有している。VIIIa因子には、78個のリシン残基と二つのアミノ末端が存在している。したがって、二次及び三次の構造が考えられるが、VIII因子とVIIIa因子の両者は、結合反応に関連して利用できるいくつものアミンをもっている。VIII因子部分の利用可能なアミンと共有結合を形成するのに有用な適切な水溶性ポリマー剤には多数の例がある。その具体例を対応する結合体とともに下記表1に示す。表1において、変数はモノマー繰返し単位の数を示し、そしてNHF8は水溶性ポリマーに結合した後のVIII因子部分を示す。表1に示す各ポリマー部分はCH3基で終わっているが、代わりに別の基で終わっていてもよい。当業者は、過度の実験をせずに、ポリマー剤をVIII因子部分のアミノ基に結合させることができる。典型的な一方法は、例えば、還元的アミノ化反応を使って、VIII因子部分の第一級アミンと、ケトン、アルデヒド又はそれらの水和型で官能基化されたポリマーとを結合させる方法である。この方法では、VIII因子部分の第一級アミンが、アルデヒドもしくはケトンのカルボニル基と反応して、シッフ塩基を形成する。このシッフ塩基は、次に、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を使って還元して、安定な結合体に変換できる。選択反応が、特に、ケトン又はαメチル分岐アルデヒドで官能基化されたポリマーで及び又は特定の反応条件下で可能である。ポリマーに結合する部位として働くことができるVIII因子の好ましいアミン基としては、以下のリシン残基:Lys493、Lys496、Lys499、Lys1804、Lys1808、Lys1813、Lys1818、Lys2183、Lys2207、Lys2227及びLys2236の中に見られるアミン基がありそしてこれらの中のLys496、Lys1804及びLys1808の中に見られるアミン基が特に好ましい。上記番号は、配列番号2中の配列に付けた番号と同じである。上記のように、ヒトVIII因子以外のタンパク質中のこれらの各リシン残基に対応するアミン基が、結合のために有用な部位として働くことができる。さらに、タンパク質であるいずれのVIII因子部分のN末端も、ポリマーが結合する部位として有用である。カルボキシル基は、VIII因子部分の結合点として働きうるもう一つの官能基を示す。結合体の構造は、下記式:及びSから選択されたヘテロ原子であり、そしてポリは任意に末端キャッピング部分で終わる水溶性ポリマー例えばPEGであるで表される構造を有する。CX結合は、末端官能基を有するポリマー誘導体とカルボキシル含有VIII因子部分との反応で生成する。先に考察したように、この特定の結合は利用される官能基のタイプによって決まる。ポリマーが、末端を官能基化されるか又はヒドロキシル基で活性化されると、生成する結合はカルボン酸エステルになりそしてXはOになる。ポリマーの骨格がチオール基で官能基化されると、生成する結合はチオエステルになりそしてXはSになる。特定の多アームポリマー、分岐ポリマー又はフォークポリマーが使用されると、そのCX部分、特にそのX部分は、比較的一層複雑になりより長い結合構造を有する。ヒドラジド部分を含有する水溶性誘導体も、カルボキシル基において結合させるのに有用である。このような誘導体の例としては、下記構造:を有するポリマーがあり、そのポリマーはVIII因子部分と結合すると、下記構造:になる。VIII因子部分に含有されているチオール基は、水溶性ポリマーと結合する有効な部位として働く。特に、システイン残基は、VIII因子部分がタンパク質であるときチオール基を提供する。かようなシステイン残基のチオール基は、チオール基と反応する特異的な活性化PEG、例えば米国特許第5739208号及び国際特許願公開第WO0162827号に記載されているNマレイミジルポリマー又は他の誘導体と反応できる。対応する結合体とともに具体例を下記表2に提供する。表2において、変数はモノマーの繰返し単位の数を示し、SF8は水溶性ポリマーに結合した後のVIII因子部分を示す。表2に示す各ポリマー部分はCH3基で終わっているが、代わりに別の基で終わってもよい。結合体は、1個以上のマレイミド官能基を有する水溶性ポリマーから形成されるが、対応するマレアミド酸型の水溶性ポリマーもVIII因子部分と反応できる。特定の条件下、前記マレイミドリングが開環して対応するマレアミド酸を形成できる。次にそのマレアミド酸はVIII因子部分のアミン基又はチオール基と反応できる。マレアミド酸に基づいた代表的な反応を以下に図式的に示す。この図式中のPOLYは水溶性ポリマーを示し、F8はVIII因子部分を示す。本発明の代表的な結合体は、下記構造式:ポリL01CZYSSF8で表すことができる。VIII因子部分と反応してこのタイプの結合体を生成できるポリマー剤は、2004年1月6日付けで出願された、標題がThiolSelectiveWaterSolublePolymerDerivativesの同時係属中の米国特許願第10753047号に記載されている。ポリマー剤に結合する部位として働くことができるVIII因子中の好ましいチオール基としては、下記システイン残基:Cys248、Cys310、Cys329、Cys630、Cys692、Cys711、Cys1899、Cys1903及びCys2000の中に見られるチオール基がありそしてこれらの中でもCys630、Cys711及びCys1903の中に見られるチオール基が特に好ましい。上記番号は、配列番号2の中の配列に付けた番号と同じである。本願及びその外の文献に記載されているポリマー剤は、商業的供給元から購入できる。さらに、これらポリマー剤の製造方法は文献に記載されている。一般に、これには限らないが、VIII因子部分とポリマー剤の間の結合としては、1個以上の炭素、窒素、硫黄及びそれらの組合わせなどの1個以上の原子がある。好ましくは、この結合はアミド基、第二級アミン基、カルバメート基、チオエーテル基又はジスルフィド基を含んでいる。任意に、追加の原子によって、前記結合を、ポリマー剤中の繰返しモノマー鎖に接続できる。VIII因子部分を繰返しモノマー鎖に接続する特定の原子系列の例としては、限定されないが、下記のものからなる群から選択されるものがある。すなわちO、S、SS、C、OC、CO、CNH、NHCNH、OCNH、C、CH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2CH2CH2CH2、OCH2、CH2O、OCH2CH2、CH2OCH2、CH2CH2O、OCH2CH2CH2、CH2OCH2CH2、CH2CH2OCH2、CH2CH2CH2O、OCH2CH2CH2CH2、CH2OCH2CH2CH2、CH2CH2OCH2CH2、CH2CH2CH2OCH2、CH2CH2CH2CH2O、CNHCH2、CNHCH2CH2、CH2CNHCH2、CH2CH2CNH、CNHCH2CH2CH2、CH2CNHCH2CH2、CH2CH2CNHCH2、CH2CH2CH2CNH、CNHCH2CH2CH2CH2、CH2CNHCH2CH2CH2、CH2CH2CNHCH2CH2、CH2CH2CH2CNHCH2、CH2CH2CH2CNHCH2CH2、CH2CH2CH2CH2CNH、COCH2、CH2COCH2、CH2CH2COCH2、COCH2CH2、NHCCH2、CH2NHCCH2、CH2CH2NHCCH2、NHCCH2CH2、CH2NHCCH2CH2、CH2CH2NHCCH2CH2、CNHCH2、CNHCH2CH2、OCNHCH2、OCNHCH2CH2、OCNHCH2CH2CH2、NHCH2、NHCH2CH2、CH2NHCH2、CH2CH2NHCH2、CCH2、CCH2CH2、CH2CCH2、CH2CH2CCH2、CH2CH2CCH2CH2、CH2CH2C、CH2CH2CH2CNHCH2CH2NH、CH2CH2CH2CNHCH2CH2NHC、CH2CH2CH2CNHCH2CH2NHCCH2、CH2CH2CH2CNHCH2CH2NHCCH2CH2、OCNHCH20602、CNH16NHC、NHCNH16NHC、OCCH2、OCCH2CH2及びOCCH2CH2CH2からなる群から選択される。結合体は一般に組成物の一部分である。一般に、組成物は、複数種の結合体を含有し、好ましくは限定されないが、これら結合体は各々、1個のVIII因子部分に共有結合した2~3個の水溶性ポリマーを含有している。しかし、これら組成物は、VIII因子活性を有する所定の部分に結合した4、5、6、7、8個又はこれを超える数のポリマーを有する他の結合体を含んでいてもよい。さらに、本発明には、複数種の結合体を含む組成物であって、その結合体が各々1個のVIII因子部分に共有結合した1個の水溶性ポリマーを含む組成物、及び1個のVIII因子部分に共有結合した2、3、4、5、6、7、8個又はこれを超える数の水溶性ポリマーを含む組成物が含まれている。所定の部分に対するポリマーの所望の数は、適正なポリマー剤、ポリマー剤とVIII因子部分の比率、温度、pH条件及び結合反応の他の側面を選択することによって制御できる。さらに、不要の結合体は、精製手段で減らすか又は除くことができる。例えば、ポリマーVIII因子部分結合体は、精製して異なる結合種を入手単離できる。具体的に述べると、生成物の混合物を精製して、1個のVIII因子部分当たり平均して1、2、3、4、5個又はこれを超える個数のPEGを有する結合体、一般に1個のVIII因子部分当たり1、2又は3個のPEGを有する結合体を得ることができる。最終の結合体反応混合物を精製する戦略は、例えば、使用するポリマー剤の分子量、特定のVIII因子部分、所望の投与計画及び個々の結合体複数の残留活性と生体内特性を含む多数の要因によって決まる。必要に応じて、異なる分子量を有する結合体を、ゲル濾過クロマトグラフィー及び又はイオン交換クロマトグラフィーを使って単離できる。すなわち、ゲル濾過クロマトグラフィーは、VIII因子部分に対するポリマーの比率の数値が異なる結合体を、それらの異なる分子量に基づいて、分別するのに使用できる。例えば、100000ダルトンのタンパク質を、分子量が約20000ダルトンのポリマー剤とランダムに結合させる代表的な反応において、生成する反応混合物は、未修飾のタンパク質、モノPEG化タンパク質、ジPEG化タンパク質などを含有している。この方法は、分子量が異なる、PEGなどのポリマーとVIII因子部分との結合体を分離するのに使用できるが、ポリマーが結合するVIII因子部分内の部位が異なる位置異性体を分離するのには一般に有効でない。例えば、ゲル濾過クロマトグラフィーは、PEGの1mer、2mer、3merなどの混合物からそれぞれを分離するのに利用できるが、回収されたPEGmer組成物が各々、VIII因子部分内の異なる反応性アミノ基に結合したPEGを含有していることがある。この種の分離を行うのに適したゲル濾過法のカラムとしては、米国ニュージャージー州ピスカタウエイ所在のAmershamBiosciencesから入手できるSuperdexカラム及びSephadexカラムがある。必要な所望の分画範囲によって特定のカラムが選択される。溶離は、一般に、適切な緩衝液、例えばリン酸塩や酢酸塩などの緩衝液で行う。集めた画分は、多種類の方法、例えばタンパク質含量に関する280nmにおける光学濃度、ウシ血清アルブミンタンパク質分析法、PEG含量に関するヨウ素試験法AnalBiochem1076063、及びドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法と続いて行うヨウ化バリウムによる染色で分析することができる。位置異性体の分離は、逆相高速液体クロマトグラフィーC18カラムを使う逆相クロマトグラフィー又はイオン交換樹脂例えばAmershamBiosciencesから入手できるSepharoseイオン交換カラムを使うイオン交換クロマトグラフィーによって実施する。これら両方法は、分子量が同じポリマー活性剤異性体を分離するのに使用できる。これらの組成物は、好ましくは、VIII因子活性を持っていないタンパク質を実質的に含有していない。さらに、これら組成物は、好ましくは、すべての他の共有結合していない水溶性ポリマーを実質的に含有していない。さらに、組成物中の結合体の少なくとも一つの種は、X因子をXa因子に変換する部分に結合した少なくとも一つの水溶性ポリマーを含んでいる。しかし、場合によって、組成物は、ポリマーVIII因子部分結合体の混合物と未結合VIII因子を含有していることがある。任意に、本発明の組成物は、さらに医薬として許容できる賦形剤を含有している。必要に応じて、前記医薬として許容できる賦形剤を、結合体に添加して組成物を製造できる。代表的な賦形剤としては、限定されないが、炭水化物類、無機塩類、抗菌剤類、抗酸化薬類、界面活性剤類、緩衝剤類、酸類、塩基類およびそれらの組合わせからなる群から選択される賦形剤がある。賦形剤としては、糖、誘導体化された糖例えばアルジトール、アルドン酸、エステル化糖など、及び又は糖ポリマーなどの炭水化物がある。具体的な炭水化物の賦形剤としては、例えば、単糖類例えばフラクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Dマンノース、ソルボースなど;二糖類例えばラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなど;多糖類例えばラフィノース、メレチトース、マルトデキストリン類、デキストラン類、デンプン類など;及びアルジトール類例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトールなどがある。賦形剤としては、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、一塩基リン酸ナトリウム、二塩基リン酸ナトリウムなどの無機塩又は緩衝剤及びそれらの組合わせもある。本発明の組成物は、微生物の増殖を防止又は抑制する抗菌剤を含有していてもよい。本発明に適切な抗菌剤の限定されない例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、セチルピリジニウムクロリド、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメロサール及びそれらの組合わせがある。抗酸化剤も本発明の組成物中に含有されていてもよい。抗酸化剤は、酸化を防止して、製剤の結合体などの成分の分解を防止するために使用される。本発明に使用される適切な抗酸化剤としては、例えば、アスコルビン酸パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム及びそれらの組合わせがある。界面活性剤も賦形剤として含まれていてもよい。代表的な界面活性剤としては、Tween20とTween80などのポリソルベート類及びF68とF88などのプルロニック類;ソルビタンエステル類;脂質類、例えばレシチンなどのホスファチジルコリン類やホスファチジルエタノールアミン類などのリン脂質、脂肪酸類及び脂肪酸エステル;ステロイド類例えばコレステロール;並びにキレート化剤例えばEDTA、亜鉛などの適切なカチオン類がある。本発明の組成物には、酸類又は塩基類が賦形剤として含まれていてもよい。使用できる酸の非限定例としては、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸及びそれらの組合わせからなる群から選択される酸がある。適切な塩基の例としては、限定されないが、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム及びそれらの組合わせからなる群から選択される塩基がある。組成物中の結合体の量は、アクターの数によって変わるが、組成物が単位投与量の容器中に貯蔵される場合は、最適に治療上有効な投与量である。さらに、本発明の医薬製剤は、シリンジに収納できる。治療上有効な投与量は、どの量が臨床上望ましい終点を生ずるかを決定するため、結合体の量を増やしながら投与を繰返すことによって、実験的に決定できる。組成物中の個々の賦形剤の量は、その賦形剤の活性と組成物の特定の用途によって変わる。一般に、個々の賦形剤の最適量は、通常の実験によって、すなわち含有する賦形剤の量を変えて組成物を調製し、安定性などのパラメーターを検査して有意な有害作用無しで最適性能が得られる範囲を決定することによって決定される。しかしながら、一般に賦形剤は、組成物中に、約1~約99重量の量で存在し、好ましくは約5~約98重量の量、より好ましくは約15~約95重量の量、そして最も好ましくは30重量未満の濃度で存在している。上記の医薬添加剤は他の添加剤とともに、RemingtonTheSciencePracticeofPharmacy第19版、WilliamsWilliams;thePhysiansDeskReference第52版、米国ニュージャージー州モントベール所在のMedicalEconomics;及びKibbeAHHandbookofPharmaceuticalExcipients、第3版、米国ワシントンDC所在のAmericanPharmaceuticalAssociation2000に記載されている。本発明の組成物には、すべてのタイプの製剤が含まれ、特に、注射に適した製剤、例えば液剤はもとより、再構成できる粉末剤又は凍結乾燥剤が含まれている。注射する前に固体の組成物を再構成するのに適切な希釈剤の例としては、注射用静菌水、デキストロースの5水溶液、リン酸塩緩衝生理食塩水、リンゲル液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水及びこれらの組合わせがある。液体の医薬組成物としては液剤と懸濁剤が考えられる。本発明の組成物は、限定されないが、一般に注射によって投与されるので、投与される直前は、一般に液体の水剤又は懸濁剤である。また、本発明の医薬製剤は、シロップ剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、散剤などの他の形態にすることができる。他の投与モード、例えば肺、肛門、経皮、経粘膜、経口、脊髄内、皮下、動脈内などの投与モードもある。本発明は、本発明で提供される結合体を、結合体による治療によい反応を示す症状に冒されている患者に投与する方法も提供する。この方法は、治療のために有効な量の結合体を、一般に注射によって投与することを含んでいる。先に述べたように、本発明の結合体は、静脈注射によって、又は余り好ましくないが筋肉内注射もしくは皮下注射によって、非経口で注射投与できる。非経口投与に適した製剤のタイプとしては、とりわけ、直ちに注射できる水剤、使用する前に溶媒と混合する乾燥粉末剤、直ちに注射できる懸濁剤、使用する前に賦形剤と混合する乾燥不溶性組成物及び投与する前に希釈する乳剤と液体濃縮物がある。この投与法を利用して、結合体を投与することによって治療又は予防できるどのような症状も治療できる。当業者は、特定の結合剤がどの症状を有効に治療できるか分かる。例えば、本発明の結合体は、血友病Aに冒されている個体を治療するのに使用できる。さらに、この結合体は、任意に、血友病に冒されていない患者の無制御の出血の予防薬として使うのに適している。したがって、例えば、この結合体は、無制御の出血を起こす危険がある患者に、手術する前に投与できる。実際の投与量は、被験者の年齢、体重及び全身状態、並びに治療される症状の重篤度、医療専門家の判断及び投与される結合体によって変わる。治療のために有効な量は、当業者には分かっており及び又は関連する参照テキストや文献に記載されている。一般に、治療のために有効な量は、約0001mg~100mgの範囲内であり、好ましくは001mg日~75mg日の投与量であり、より好ましくは010mg日~50mg日の投与量である。所定の結合体の単位投与量を、臨床医の判断、患者の要求などによって、各種の投与計画で投与できる。具体的な投与計画は、当業者には分かっているか又は通常の方法を使って実験で決定できる。代表的な投与計画としては、限定されないが、1日に5回、1日に4回、1日に3回、毎日2回、毎日1回、週3回、週2回、週1回、月2回、月1回およびこれらの組合わせがある。臨床の終了点に到達したならば、組成物の投与を停止する。本発明の特定の結合体を投与することの一利点は、個々の水溶性ポリマー部分が開裂して分離できることである。このことは、身体からのクリアランスが、ポリマーの大きさのため問題になる可能性がある場合、有利である。各水溶性ポリマー部分の開裂は、生理的に開裂可能な及び又は酵素で分解可能な結合例えばウレタン、アミド、カーボネート又はエステルを含有する結合を使うことによって最適に促進される。このように、結合体のクリアランスは、所望のクリアランス特性を提供するポリマー分子の大きさとそのタイプの官能基を選択することによって調節できる。当業者は、ポリマーの適正な分子の大きさ及び開裂可能な官能基を決定できる。例えば、当業者は、通常の実験を利用して、先ず、異なるポリマー重量と開裂可能な官能基を有する各種のポリマー誘導体を調製し、次いでそのポリマー誘導体を患者に投与し次に血液及び又は尿を定期的にサンプリングすることによってクリアランスのグラフを得て、適正な分子の大きさと開裂可能な官能基を決定できる。各被検結合体について一連のクリアランスのグラフが得られたならば、適切な結合体を確認できる。本発明を、その好ましい具体的実施態様で説明してきたが、上記説明と下記実施例は、例示することを目的としており本発明の範囲を限定するものではないと解すべきである。本発明の範囲内のその外の側面、利点及び変形は、本発明が関連する当業者には明らかであろう。当業者は、本発明書に引用したすべての論文、書籍、特許などの刊行物を参照することができる。実験本発明を実施するときは、特に断らない限り、当該技術分野の技術に含まれる有機合成法などの通常の方法を採用する。このような方法は、文献に充分説明されている。以下の実施例では、使用される数値に関する精度を保証するため留意してきたが、いくらかの実験誤差と偏差があることは念頭に置いておかなければならない。特に断らない限り、温度は°Cであり圧力は海水面における大気圧であるかその近傍である。略語:DCMジクロロメタンmPEGSPAmPEGスクシンイミジルプロピオネートmPEGSBAmPEGスクシンイミジルブタノエートmPEGOPSSmPEGオルトピリジルジスルフィドmPEGMALmPEGマレイミドCH3OnCH2CH2MALmPEGSMBmPEGスクシンイミジルαメチルブタノエート、CH3OnCH2CH2CHCOスクシンイミドmPEGブチルALDCH3OnCH2CH2OCNH4CH2CH2CH2CHmPEGPIPCH3OnCH2CH2Cピリジン4オンSUCスクシンイミド又はスクシンイミジルNaCNBH3水素化シアノホウ素ナトリウムHCl塩酸HEPES41ピペラジンエタンスルホン酸NMR核磁気共鳴DCC13ジシクロヘキシルカルボジイミドDI脱イオン化されたMW分子量rt室温K又はkDaキロダルトンSECサイズ排除クロマトグラフィーHPLC高速液体クロマトグラフィーFPLC高速タンパク質液体クロマトグラフィーSDSPAGEドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法MALDITOF飛行時間型マトリックス支援レーザー脱離イオン化法材料:付記した実施例に引用したPEG試薬はすべて、特に断らない限り市販されている。mPEGスクシンイミジルプロピオネート、mPEGSPA、分子量、30KmPEGオルトピリジルジスルフィド、mPEGOPSS、分子量、10KmPEGマレイミド、mPEGMAL、分子量、20KmPEGマレイミド、mPEGMAL、分子量、30KmPEGスクシンイミジルαメチルブタノエート、mPEGSMB、分子量、30KmPEGブチルアルデヒド、mPEGブチルALD、分子量、30KLヒスチジン、保証されたバイオオテクノロジーの性能HEPES、保証されたバイオオテクノロジーの性能、995塩化カルシウム二水和物、分子生物学用、99塩化ナトリウム、分子生物学用Tween80SigmaUltraエチルアルコール、USP、絶対200プルーフポリエチレングリコール、MW3350SigmaUltraSlideALyzerDialysisCassette、05~3ml又は3~12mlのキャパシティー酢酸、ACS試薬、9971N酢酸、容積標準1N水酸化ナトリウム、容積標準水素化シアノホウ素ナトリウム、95TrisグリシンSDS、10x、タンパク質電気泳動法の緩衝剤レムリ試料緩衝液SigmaMarker、低範囲SigmaMarker、高範囲75TrisHClレディゲルGelCodeblue染色試薬方法分析SECHPLC分析法サイズ排除クロマトグラフィーを、Agilent1100HPLCsystemで実施した。BIOSECS4000colum並びに45mMヒスチジン、45mM塩化カルシウム、036M塩化ナトリウム、0009Tween80及び10エチルアルコール含有の移動相を使って試料を分析した。カラムに対する流量は03ml分であった。溶離されたタンパク質とPEGタンパク質結合体は、波長280nmのUVで検出した。SDSPAGE分析法MiniPROTEAN3PrecastGelElectrophoresisSystemを使うドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法で試料を分析した。試料を、2xレムリ試料緩衝液と混合し次いで95°Cの湯浴中に約5分間入れた。次いで、その調製した試料を75TrisHClレディゲルに負荷し、TrisグリシンSDS電気泳動緩衝液を使って、200Vで約30分間泳動させた。その他の方法PEGVIII因子結合体の精製Superose6HR1030すなわち24mlのゲル濾過カラムを、FPLCsystem及びAKTAprimesystemとともに使って、実施例611のPEGVIII因子結合体を精製した。流量は03ml分であり、溶離緩衝液は50mMヒスチジン、05MNaCl、40mMCaCl2及び001Tween80からなる緩衝液であった。VIII因子原溶液の緩衝交換SlideALyzerDialysisCassetteを保護パウチから取り出し、MiliQH2O中に15分間浸漬した。VIII因子の原溶液50mMヒスチジン、05MNaCl、40mMCaCl2、01PEG3350、001Tween80中、0398mgmlを、ガスケットの頂部の案内ポートのうち一つを通じて前記カセットのキャビティー内に移した。そのカセットを、その頂部に取り付けた浮遊ブイとともにHEPES緩衝液50mMHEPES、05MNaCl、5mMCaCl2、01PEG3350、0001Tween80、pH70が入っている1Lビーカー内に入れた。次にそのビーカーを攪拌プレート上に置いて4°Cにて透析を開始した。そのHEPES緩衝液を23時間の間隔をあけて4回変えて、低温室に置いて一夜透析を行った。透析を行った後、カセットのチャンバーに空気を注入して、透析された試料をカセットから取り出した。HEPES緩衝液中のVIII因子の濃度を、SPECTRAmaxPLUSSpectrophotometerを使って、UV280nmで測定した。実施例1Bドメイン欠失VIII因子のmPEGSPA、20KによるPEG化分子量が20000ダルトンのmPEGスクシンイミジルプロピオネートをNektarTherapeuticsから入手した。このポリマー剤の基本構造は下記式で表される。Bドメイン欠失VIII因子を脱イオン水に溶解し、その溶液にトリエチルアミンを添加してpHを729まで上げた。上記溶液に、1510倍モルの過剰のPEG剤すなわちmPEGSPAを添加する。生成した混合物を室温で数時間攪拌した。生成した反応混合物をSDSPAGEで分析して、そのタンパク質のPEG化度を測定した。またPEG化度、1mer、2merなどは、この大きさのタンパク質に適した多くのどの分析法でも例えば光角分散法で測定できる。天然の種とモノPEG化された種は、約20000ダルトン異なる。タンパク質に対するPEG剤の比率を増大すると、ポリPEG化度が増大しすなわち2mer、3merなどの生成が増大した。実施例2Bドメイン欠失VIII因子のmPEGSBAによるPEG化分子量が10000ダルトンのmPEGスクシンイミジルブタノエートをNektarTherapeuticsから入手した。このポリマー剤の基本構造は下記式で表される。Bドメイン欠失VIII因子を脱イオン水に溶解し、その溶液にトリエチルアミンを添加してpHを729まで上げた。次いで上記溶液に、15~10倍モルの過剰のmPEGSBAを添加した生成した混合物を室温で数時間攪拌した。生成した反応混合物をSDSPAGEで分析して、そのタンパク質のPEG化度を測定した。実施例3Bドメイン欠失VIII因子のmPEGMAL、30KによるPEG化分子量が20000ダルトンのmPEGマレイミドをNektarTherapeuticsから入手した。このポリマー剤の基本構造は下記式で表される。Bドメイン欠失VIII因子を緩衝液に溶解した。このタンパク質溶液に3~5倍モルの過剰のmPEGMALを添加した。その混合物を室温にて不活性雰囲気下で数時間攪拌した。生成した反応混合物をHPLCで分析し精製して、結合種の混合物を得た。実施例4Bドメイン欠失VIII因子のmPEGOPSS、20KによるPEG化スルフヒドリル選択性ポリマー剤すなわち分子量が20000のmPEGオルトピリジルジスルフィドをNektarTherapeuticsから入手した。5倍モルの過剰のmPEGOPSSを、緩衝溶液中のBドメイン欠失VIII因子に添加した。その反応混合物を室温にて不活性雰囲気下で数時間攪拌して、ポリマーとタンパク質を連結するジスルフィド結合を有する所望の結合体を製造した。実施例5Bドメイン欠失VIII因子のmPEGPIP、5KによるPEG化ケトン及び対応するケタールとして示す上記ポリマー剤を、標題がPolymerDerivativesandConjugatesThereofであるNektarTherapeuticsの米国仮特許願第60437325号に記載されているようにして調製した。上記ポリマー剤を調製するため、重量平均分子量が5000ダルトンのメトキシポリエチレングリコールスクシンイミジルプロピオネートを塩化メチレンに溶解した溶液に、トリエチルアミンと4ピペリドン一水和物塩酸を添加した。生成した反応混合物を室温にて窒素雰囲気下で一夜攪拌し、次いで、結合させる前に精製した。このポリマー剤はNektarTherapeuticsから購入することもできる。結合させるために、Bドメイン欠失VIII因子を水性緩衝液に溶解した溶液に、20倍モルの過剰のmPEGPIP5Kを添加した。生成した溶液を、低速に設定したRotoMixオービタルシェーカーの上に乗せて、室温で反応を促進させた。15分間経過後、Bドメイン欠失VIII因子に対して50倍モルの過剰の量のNaCNBH3の水溶液を添加した。時間間隔を取って反応混合物からアリコートを取り出して、SDSPAGEで分析した。SDSPAGEの分析結果は、結合された1、2および3個のPEG部分を有する、Bドメイン欠失VIII因子のPEG誘導体が存在していることを示した。実施例6Bドメイン欠失VIII因子とmPEGSPA、30Kとの結合結合を行う前に、Bドメイン欠失VIII因子の緩衝交換を行って、ヒスチジンをHEPESで置換した。アルゴン雰囲気下20°Cで貯蔵していたmPEGSPA30Kを周囲温度まで昇温させた。その昇温させたmPEGSPAを、2mMHCl0022mlに溶解してポリマー剤の10溶液を得た。このmPEGSPA溶液を、3mlのVIII因子溶液50mMHEPES、05MNaCl、40mMCaCl2、01PEG3350、001Tween80、pH70中、0412mgmlに迅速に添加して充分に攪拌した。室温で30分間反応させた後、その反応バイアルを低温室に移し次いで別のmPEGSPA溶液0022mlを反応混合物に添加し充分に混合した。pHを測定した。タンパク質に対するmPEGSPAのモル比は201であった。mPEGSPAの最終濃度は1445mgmlであり、そしてVIII因子の最終濃度は0406mgmlであった。この反応を、Rotomix上で4°Cにて一夜進行させた。生成した結合体に、識別名pz041701をつけた。結合体混合物を、ゲル濾過クロマトグラフィーを使って精製した。反応混合物と最終生成物を分析するサイズ排除クロマトグラフィー法を開発した。SDSPAGE分析法も試料の特性を決定するのに利用した。結合体の特性決定。精製する前の生成した結合体混合物は、SECで測定したとき、識別名pz041701、pz041701及びpz041701それぞれに相当するVIII因子PEGモノマー、ダイマー及びトリマーの混合物であった。すなわちpz041701は大部分がVIII因子モノPEG化種すなわち一つのPEG部分が結合したVIII因子に相当し;pz041701は主としてVIII因子ジPEG化種すなわち二つのPEG部分が結合したVIII因子に相当し;そしてpz041701は大部分が三つのPEG部分が結合したVIII因子に相当する。対応するSECグラフを図1と2に示す。図1は、VIII因子反応混合物のSECによって集めた画分に対応するSECグラフを示す。サイズ排除クロマトグラフィーの試験結果によれば、mPEGSPA30KVIII因子のPEG化の収率は約39であった。またmPEG30SPA30KVIII因子のPEG化の収率は約32でありそしてmPEGSPA30KVIII因子のPEG化の収率は約11であった。なおこれらの数値は、生成した反応混合物中に存在するすべての種に対する相対量に基づいた百分率である。この結合体混合物はさらに、FPLCで精製した後、SDSPAGEで分析した。実施例7Bドメイン欠失VIII因子とmPEGMAL、20Kの結合結合を行う前に、Bドメイン欠失VIII因子の緩衝交換を行って、ヒスチジンをHEPESで置換した。アルゴン雰囲気下20°Cで貯蔵していたmPEGMAL20Kを周囲温度まで昇温させた。その昇温させたmPEGMAL試薬を、0044mlのHEPES緩衝液50mMHEPES、015MNaCl、40mMCaCl2、001Tween80、pH70に溶解してmPEGMALの10溶液を作製した。そのmPEGMAL溶液を、4mlのVIII因子溶液50mMHEPES、05MNaCl、4mMCaCl2、01PEG3350、001Tween80、pH70中04324mgmlに迅速に添加して充分に攪拌した。室温で30分間反応させた後、その反応バイアルを低温室に移し、その反応混合物に、別のmPEGMAL溶液0044mlを添加し、続いてmPEGMAL溶液0044mlずつのアリコートをさらに三回、2時間の間に添加した。pHを測定した。mPEGMALのタンパク質に対するモル比は1001であった。mPEGMALの最終濃度は5213mgmlであり、そしてVIII因子の最終濃度は0410mgmlであった。この反応を、Rotomix上で4°Cにて一夜進行させた。生成した結合体に、識別名pz061201をつけた。結合体混合物を、ゲル濾過クロマトグラフィーを使って精製した。反応混合物と最終生成物を分析するサイズ排除クロマトグラフィー法を開発した。SDSPAGE分析法も試料の特性値を決定するのに利用した。結合体の特性決定。サイズ排除クロマトグラフィーの試験結果によれば、モノPEG化結合体のPEG化の収率は約33であった。VIII因子結合体混合物の画分を合してFPLCで精製し次いでさらにゲル濾過クロマトグラフィーで精製した。pz061201の最終生成物をSDSPAGEとSECの両方で分析した結果、pz061201生成物の純度は、VIII因子PEGモノマーが約94であり、一方VIII因子PEGハイマーが約6であった。実施例8Bドメイン欠失VIII因子とmPEGSMB、30Kの結合結合を行う前に、Bドメイン欠失VIII因子の緩衝交換を行って、ヒスチジンをHEPESで置換した。アルゴン雰囲気下20°Cで貯蔵していたmPEGSMB30Kを周囲温度まで昇温させた。その昇温させたmPEGSMBを、2mMHCl0065mlに溶解してmPEGSMBの10溶液を作製した。そのmPEGSMB溶液を、4mlのVIII因子溶液50mMHEPES、05MNaCl、50mMCaCl2、01PEG3350、001Tween80、pH70中、0435mg/ml]に迅速に添加し充分に混合した。室温で30分間反応させた後、その反応バイアルを低温室に移した。pHを測定した。mPEGSMBのタンパク質に対するモル比は201であった。mPEGSMBの最終濃度は1599mgmlでありそしてVIII因子の最終濃度は0428mgmlであった。その反応を、Rotomix上で4°Cにて約48時間進行させ次いで酢酸を添加しpHを60±03まで低下させてクエンチした。その結合体には、識別名pz082501をつけた。その結合体混合物を、ゲル濾過クロマトグラフィーを使って精製した。その反応混合物と最終生成物を分析するサイズ排除クロマトグラフィーを開発した。SDSPAGE分析法も、試料の特性を決定するのに使用した。結合体の特性決定。pz082501と命名された混合物を、pH70±02にて、VIII因子をmPEGSMB30KでPEG化することによって得た。その結合体混合物をSECで精製し分析した。サイズ排除クロマトグラフィーの試験結果に基づいた、pz082501すなわちモノPEG化結合体のPEG化の収率は約41であった。生成物混合物をさらにFPLCで精製し次いでSDSPAGEとSECで分析した。精製したVIII因子PEG結合体生成物すなわちpz082501の特性を決定したところ、モノ結合PEGVIII因子が約95で、ハイマー類が約5であった。実施例9Bドメイン欠失VIII因子とmPEGOPSS、10Kの結合結合を行う前に、Bドメイン欠失VIII因子の緩衝交換を行って、ヒスチジンをHEPESで置換した。アルゴン雰囲気下20°Cで貯蔵していたmPEGOPSS10Kを周囲温度まで昇温させた。mPEGOPSSを水0012mlに溶解してmPEGOPSSの10溶液を作製した。そのmPEGOPSS溶液を、05mlのVIII因子溶液50mMヒスチジン、05MNaCl、40mMCaCl2、01PEG3350、001Tween80、pH67中、0398mg/ml]に迅速に添加し充分に混合した。室温で30分間反応させた後、その反応バイアルを低温室に移した。pHを測定した。mPEGOPSS10Kのタンパク質に対するモル比は1001であった。mPEGOPSSの最終濃度は2344mgmlでありそしてVIII因子の最終濃度は0389mgmlであった。その反応を、Rotomix上で4°Cにて一夜進行させた。その結合体混合物を、ゲル濾過クロマトグラフィーを使って精製した。その反応混合物と最終生成物を分析するサイズ排除クロマトグラフィーを開発した。SDSPAGE分析法も、試料の特性を決定するのに使用した。mPEGOPSS試薬を使って行ったPEG化の試験結果と収率は、分子量が20KのmPEGMAL試薬を使用した実施例7と類似していた。実施例10Bドメイン欠失VIII因子とmPEGMAL、30Kの結合結合を行う前に、Bドメイン欠失VIII因子の緩衝交換を行って、ヒスチジンをHEPESで置換した。アルゴン雰囲気下20°Cで貯蔵していたmPEGMAL30Kを周囲温度まで昇温させた。その昇温させたmPEGMAL試薬を、0010mlのHEPES緩衝液50mMHEPES、015MNaCl、40mMCaCl2、001Tween80、pH70に溶解してmPEGMALの10溶液を作製した。そのmPEGMAL溶液を、05mlのVIII因子溶液50mMHEPES、05MNaCl、4mMCaCl2、01PEG3350、001Tween80、pH70中0447mgmlに迅速に添加して充分に攪拌した。室温で30分間反応させた後、その反応バイアルを低温室に移し、その反応混合物に、別のmPEGMAL溶液0010mlを添加し、続いてmPEGMAL溶液0010mlずつのアリコートをさらに三回、2時間の間に添加した。pHを測定した。mPEGMALのタンパク質に対するモル比は1001であった。mPEGMALの最終濃度は9091mgmlであり、そしてVIII因子の最終濃度は0406mgmlであった。この反応を、Rotomix上で4°Cにて一夜進行させた。結合体混合物を、ゲル濾過クロマトグラフィーを使って精製した。反応混合物と最終生成物を分析するサイズ排除クロマトグラフィー法を開発した。SDSPAGE分析法も試料の特性を決定するのに利用した。分子量が30KのmPEGMAL試薬を使って行ったPEG化の試験結果と収率は、分子量が20KのmPEGMAL試薬を使用した実施例7と類似したものであった。実施例11Bドメイン欠失VIII因子とmPEGブチルALD、30Kの結合結合を行う前に、Bドメイン欠失VIII因子の緩衝交換を行って、ヒスチジンをHEPESで置換した。アルゴン雰囲気下20°Cで貯蔵していたmPEGブチルALD、30Kを周囲温度まで昇温させた。その昇温させたmPEGブチルALDを水0038mlに溶解してmPEGブチルALDの10溶液を作製した。そのmPEGブチルALDの溶液を、05mlのVIII因子溶液50mMHEPES、05MNaCl、5mMCaCl2、01PEG3350、001Tween80、pH70中0400mgmlに迅速に添加して充分に攪拌した。15分後に、水素化シアノホウ素ナトリウムの10mM溶液0066mlを添加した。pHを測定した。mPEGブチルALDのタンパク質に対するモル比率は1001であった。mPEGブチルALDの最終濃度は6355mgmlであった。VIII因子の最終濃度は0334mgmlでありそしてNaCNBH3の最終濃度は1003mMであった。反応は、室温で5時間進行させ、次いでRotomix上で4°Cにて一夜進行させた。結合体混合物はゲル濾過クロマトグラフィーを使って精製した。反応混合物と最終生成物を分析するサイズ排除クロマトグラフィー法を開発した。SDSPAGE分析法も試料の特性決定に使用した。VIII因子モノPEG結合体の収率は約20であった。実施例12代表的なVIII因子PEG結合体の生体外での活性実施例67及び8に記載のVIII因子PEG結合体の生体外での活性を測定した。試験されたVIII因子結合体はすべて生理活性を有していた。