"BACE1ポリペプチドの活性を低減又は阻害するBACE1に結合する単離された抗体又はその断片。抗体がBACE1の活性部位に結合する請求項1に記載の抗体。抗体がBACE1のエキソサイトに結合する請求項1に記載の抗体。配列番号:7-19、22-26、28-30、35-47、56-79及び118-122から成る群から選択される少なくとも一つの超可変領域配列を含んでなる請求項1に記載の抗体。HVRH1、HVRH2及びHVRH3から成る群から選択される少なくとも一つの配列を含んでなる請求項1に記載の抗体であって、HVRH1がアミノ酸配列GFX30FX31X32X33X34IHを含み;HVRH2がアミノ酸配列X35X36ISPX37X38GX39TX40YADSVKGを含み;そしてHVRH3がアミノ酸配列X41PX42X43X44X45X46X47MDYを含むを含んでいてもよい抗体。HVRH1、HVRH2及びHVRH3から成る群から選択される少なくとも一つの配列を含んでなる請求項1に記載の抗体であって、HVRH1がアミノ酸配列GX71X72X73X74X75X76X77IHを含み;HVRH2がアミノ酸配列X78X79ISPX80X81GX82X83X84YADSVKGを含み;そしてHVRH3がアミノ酸配列X85PX86X87X88X89X90X91MDYを含むを含んでいてもよい抗体。HVRH1、HVRH2及びHVRH3から成る群から選択される少なくとも一つの配列を含んでなる請求項1に記載の抗体であって、HVRH1がアミノ酸配列GX53X54X55X56GYGIHを含み、HVRH2がアミノ酸配列GWISPX57X58GX59X60DYADSVKGを含み、HVRH3配列がアミノ酸配列GPFX61PWVMDY又は配列番号:79のアミノ酸配列を含んでなる抗体。アミノ酸配列GFTFX13GYX14IHを含んでなるHVRH1配列を含んでなる請求項5に記載の抗体。配列番号:22;配列番号:23;配列番号:28及び配列番号:71-73から成る群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRH1配列を含んでなる請求項6に記載の抗体。配列番号:24;配列番号:29及び配列番号:74-78から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRH2配列を含んでなる請求項6に記載の抗体。配列番号:25;配列番号:30及び配列番号:79から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRH3配列を含んでなる請求項6に記載の抗体。図1におけるクローンYW412.8、YW412.8.31、YW412.8.30、YW412.8.2、YW412.8.29及びYW412.8.51又は図24-におけるクローンに記載されるものに対応するHVRH1、HVRH2、及びHVRH3配列を含んでなる請求項6に記載の抗体。図2におけるクローンFab12、LC6、LC9及びLC10に記載されるものに対応するHVRH1、HVRH2、及びHVRH3配列を含んでなる請求項6に記載の抗体。配列番号:22又は23のHVRH1配列、配列番号:24のHVRH2配列及び配列番号:25のHVRH3配列を含んでなる請求項6に記載の抗体。HVRH1配列が配列番号:23である請求項14に記載の抗体。配列番号:28のHVRH1配列、配列番号:29のHVRH2配列及び配列番号:30のHVRH3配列を含んでなる請求項6に記載の抗体。配列番号:20、21、27及び80-98から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するVH鎖を含んでなる請求項6に記載の抗体。VH鎖アミノ酸配列が配列番号:21である請求項16に記載の抗体。HVRL1、HVRL2及びHVRL3の群から選択される少なくとも一つの配列を含んでなる請求項1に記載の抗体であって、HVRL1がアミノ酸配列RASQX17VX18X19X20X21Aを含み、HVRL2がアミノ酸配列X22ASX23LYSを含み、そしてHVRL3がアミノ酸配列QQX24X25X26X27X28X29Tを含む抗体。HVRL1、HVRL2及びHVRL3の群から選択される少なくとも一つの配列を含んでなる請求項1に記載の抗体であって、HVRL1がアミノ酸配列RASQX17VX18X19X20X21Aを含み、HVRL2がアミノ酸配列X62ASX63X64YX65を含み、そしてHVRL3がアミノ酸配列QQX66X67X68X69X70X71Tを含む抗体。HVRL1、HVRL2及びHVRL3から成る群から選択される少なくとも一つの配列を含んでなる請求項1に記載の抗体であって、HVRL1がアミノ酸配列RASQX1VX2X3X4X5Aを含みで、HVRL2がアミノ酸配列X48ASX49X50YX51を含み、そしてHVRL3がアミノ酸配列QQFPTYX52PTを含む抗体。アミノ酸配列RASQX1VX2X3X4X5Aを含んでなるHVRL1配列を含んでなる請求項17に記載の抗体。アミノ酸配列X6ASFLYS又はX15ASX16LYSを含んでなるHVRL2配列を含んでなる請求項19に記載の抗体。アミノ酸配列QQX7X8X9X10X11X12Tを含んでなるHVRL3配列を含んでなる請求項19に記載の抗体。配列番号:7、配列番号:8又は列番号:35から成る群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL1配列を含んでなる請求項19に記載の抗体。配列番号:9、配列番号:10、配列番号:36-39及び配列番号:58-64から成る群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL2配列を含んでなる請求項20に記載の抗体。配列番号:11-16、配列番号:40及び配列番号:65-67から成る群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL3配列を含んでなる請求項20に記載の抗体。図1におけるクローンYW412.8、YW412.8.31、YW412.8.30、YW412.8.2、YW412.8.29及びYW412.8.51及び図23-におけるクローンに記載されるものに対応するHVRL1、HVRL2及びHVRL3配列を含んでなる請求項20に記載の抗体。図2におけるクローンFab12、LC6、LC9及びLC10に記載されるものに対応するHVRL1、HVRL2及びHVRL3配列を含んでなる請求項20に記載の抗体。配列番号:7又は配列番号:8のHVRL1配列;配列番号:9又は配列番号:10のHVRL2配列;及び配列番号:11-16から成る群から選択されるHVRL3配列を含んでなる請求項20に記載の抗体。HVRL1配列が配列番号:7であり、HVRL2配列が配列番号:9であり、そしてHVRL3配列が配列番号:12である請求項30に記載の抗体。配列番号:35のHVRL1配列;配列番号:36-39から成る群から選択されるHVRL2配列及び配列番号:40のHVRL3配列を含んでなる請求項20に記載の抗体。配列番号:1-6、31-34及び99-117から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するVL鎖配列を含んでなる請求項20に記載の抗体。VL鎖アミノ酸配列が配列番号:2である請求項33に記載の抗体。配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1、配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2及び配列番号:12のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を更に含んでなる請求項15に記載の抗体。配列番号:21のアミノ酸配列を含んでなるVH鎖を更に含んでなる請求項34に記載の抗体。配列番号:49の314SER;316GLU;317LYS;327GLN;330CYS;331TRP;332GLN;335THR;及び378ASPから成る群から選択されるBACE1の少なくとも一つのアミノ酸残基を含んでなるエピトープに結合する単離された抗体又はその断片。エピトープが配列番号:49の314SER;316GLU;317LYS;327GLN;330CYS;331TRP;332GLN;335THR;及び378ASPを含む請求項37に記載の抗体。配列番号:49のアミノ酸315-318;配列番号:49のアミノ酸331-335;配列番号:49のアミノ酸370-381;及びその何れかの組合せから成る群から選択されるBACE1の少なくとも一つのアミノ酸領域を含んでなるエピトープに結合する単離された抗体又はその断片。エピトープが配列番号:49のアミノ酸315-318、331-335及び370-381を含む請求項39に記載の抗体。BACE1のエピトープに結合し、結合によりBACE1のP6及びP7部位の構造におけるコンホメーション変化をもたらす単離された抗体又はその断片。BACE1のエピトープに結合し、結合により配列番号:49のアミノ酸218-231がランダムなループ構造を採用するように誘導する単離された抗体又はその断片。BACE1の活性を低減又は阻害する請求項37-42に記載の抗体。モノクローナル抗体である請求項1-43の何れか一項に記載の抗体。ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である請求項1-44の何れか一項に記載の抗体。抗体断片である請求項1-45の何れか一項に記載の抗体。完全長IgG1抗体である請求項1-45の何れか一項に記載の抗体。請求項1-47の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。請求項48の核酸を含んでなる宿主細胞。抗体が生産されるように請求項49の宿主細胞を培養することを含んでなる抗体を生産する方法。請求項1-47の何れか一項に記載の抗体及び細胞傷害性物質を含んでなるイムノコンジュゲート。請求項1-47の何れか一項に記載の抗体及び薬学的に許容可能な担体を含んでなる薬学的製剤。有効量の請求項1-47の何れか一項に記載の抗体を個体に投与することを含んでなる、神経疾患又は傷害を有する個体を治療する方法。神経疾患又は障害を患っているか又は罹患する危険性がある患者におけるアミロイド斑を低減する方法であって、有効量の請求項1-47の何れか一項に記載の抗体を個体に投与することを含んでなる方法。神経疾患又は障害を患っているか又は発症する危険性がある患者におけるアミロイド斑形成を阻害する方法であって、有効量の請求項1-47の何れか一項に記載の抗体を個体に投与することを含んでなる方法。神経疾患又は障害がアルツハイマー病、外傷性脳損傷、脳卒中、緑内障、認知症、筋ジストロフィー、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、嚢胞性線維症、アンジェルマン症候群、リドル症候群、パジェット病、外傷性脳損傷、レビー小体病、ポストポリオ症候群、シャイドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、核上性麻痺、ウシ海綿状脳症、スクレピー、クロイツフェルトヤコブ病、クールー、ゲルストマンシュトロイスラーシャインカー病、慢性消耗病、致死性家族性不眠症、球麻痺、運動ニューロン疾患、カナバン病、ハンチントン病、神経セロイドリポフスチン症、アレキサンダー病、トゥレット症候群、メンケスキンキーヘア症候群、コケイン症候群、HallervordenSpatz症候群、ラフォラ病、レット症候群、肝レンズ核変性症、レッシュナイハン症候群、及びUnverrichtLundborg症候群、ピック病、及び脊髄小脳失調症から成る群から選択される請求項53-55の何れか一項に記載の方法。神経疾患又は障害がアルツハイマー病、脳卒中、脳外傷及び緑内障から成る群から選択される請求項56に記載の方法。患者におけるアミロイドbタンパク質を低減する方法であって、有効量の請求項1-47の何れか一項に記載の抗体を患者に投与することを含んでなる方法。患者が神経疾患又は障害を患っているか又は罹患する危険性がある請求項58に記載の方法。神経疾患又は障害がアルツハイマー病、脳卒中、脳外傷及び緑内障から成る群から選択される請求項59に記載の方法。患者における神経疾患又は障害を診断する方法であって、患者から単離された生体サンプルを、BACE1ポリペプチドへの抗体の結合に適切な条件下で請求項1-47の何れか一項に記載の抗体と接触させる工程、及び抗体及びBACE1ポリペプチド間で複合体が形成されたかを検出する工程を含んでなる方法。患者が抗BACE1抗体での治療に適格かを決定する方法であって、患者から単離された生体サンプルを、BACE1ポリペプチドへの抗体の結合に適切な条件下で請求項1-47の何れか一項に記載の抗体と接触させる工程、抗体及びBACE1ポリペプチド間で複合体が形成されたかを検出する工程を含んでなり、抗体及びBACE1間の複合体の存在が抗BACE1抗体での治療に適格な患者を示す方法。生体サンプルが血清、血漿、唾液、胃液分泌、粘液、脳脊髄液、リンパ液、神経組織、脳組織、心臓組織又は血管組織から成る群から選択される請求項61又は62に記載の方法。医薬としての使用のための請求項1-47の何れか一項に記載の抗体。アルツハイマー病、外傷性脳損傷、脳卒中、緑内障、認知症、筋ジストロフィー、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、嚢胞性線維症、アンジェルマン症候群、リドル症候群、パジェット病、外傷性脳損傷、レビー小体病、ポストポリオ症候群、シャイドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、核上性麻痺、ウシ海綿状脳症、スクレピー、クロイツフェルトヤコブ病、クールー、ゲルストマンシュトロイスラーシャインカー病、慢性消耗病、致死性家族性不眠症、球麻痺、運動ニューロン疾患、カナバン病、ハンチントン病、神経セロイドリポフスチン症、アレキサンダー病、トゥレット症候群、メンケスキンキーヘア症候群、コケイン症候群、HallervordenSpatz症候群、ラフォラ病、レット症候群、肝レンズ核変性症、レッシュナイハン症候群、及びUnverrichtLundborg症候群、ピック病、及び脊髄小脳失調症から成る群から選択される神経障害の治療における使用のための請求項1-47の何れか一項に記載の抗体。アミロイドbタンパク質生産の低下及び/又は阻害における使用のための請求項1-47の何れか一項に記載の抗体。医薬の製造における請求項1-47の何れか一項に記載の抗体の使用。医薬が、アルツハイマー病、外傷性脳損傷、脳卒中、緑内障、認知症、筋ジストロフィー、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、嚢胞性線維症、アンジェルマン症候群、リドル症候群、パジェット病、外傷性脳損傷、レビー小体病、ポストポリオ症候群、シャイドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、核上性麻痺、ウシ海綿状脳症、スクレピー、クロイツフェルトヤコブ病、クールー、ゲルストマンシュトロイスラーシャインカー病、慢性消耗病、致死性家族性不眠症、球麻痺、運動ニューロン疾患、カナバン病、ハンチントン病、神経セロイドリポフスチン症、アレキサンダー病、トゥレット症候群、メンケスキンキーヘア症候群、コケイン症候群、HallervordenSpatz症候群、ラフォラ病、レット症候群、肝レンズ核変性症、レッシュナイハン症候群、及びUnverrichtLundborg症候群、ピック病、及び脊髄小脳失調症から成る群から選択される神経障害の治療のためである請求項67に記載の使用。医薬がアミロイドbタンパク質生産を低減及び/又は阻害するためである請求項67に記載の使用。配列番号:49の314SER;316GLU;317LYS;327GLN;330CYS;331TRP;332GLN;335THR;及び378ASPから成る群から選択されるアミノ酸に対応するBACE1の少なくとも一つのアミノ酸残基を含んでなる、抗体又はその断片によって特異的に認識されるBACE1エピトープ。エピトープが配列番号:49の314SER;316GLU;317LYS;327GLN;330CYS;331TRP;332GLN;335THR;及び378ASPに対応するアミノ酸を含む請求項70に記載のBACE1エピトープ。配列番号:49のアミノ酸315-318;配列番号:40のアミノ酸331-335;配列番号:49のアミノ酸370-381;及びその何れかの組合せから成る群から選択されるBACE1の少なくとも一つのアミノ酸領域を含んでなる、抗体又はその断片によって特異的に認識されるBACE1エピトープ。エピトープが配列番号:49のアミノ酸315-318、331-335及び370-381を含む請求項72に記載のBACE1エピトープ。I.定義ここでの目的のためのアクセプターヒトフレームワークは、下に定義するヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク由来の軽鎖可変ドメインフレームワーク又は重鎖可変ドメインフレームワークのアミノ酸配列を含んでなる。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク由来のアクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、又はアミノ酸配列変化を有してもよい。幾つかの実施態様では、アミノ酸変化の数は、10以下、9以下、8以下、7以下、6以下、5以下、4以下、3以下、又は2以下である。幾つかの実施態様では、VLアクセプターヒトフレームワークは、VLヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列において同一である。親和性とは、分子の単一結合部位とその結合パートナーとの間の非共有結合相互作用の強さの合計を指す。明記なき限り、ここで使用される場合、結合親和性とは結合対のメンバー間の1:1相互作用を反映する内因性結合親和性を指す。分子XのそのパートナーYに対する親和性は一般的に解離定数によって表される。親和性は当分野で知られている一般的な方法によって測定可能であり、ここに記載されるものを含む。結合親和性を測定するための具体的な説明的、例示的実施態様を以下に記載する。親和性成熟抗体とは、そのような変更を持たない親抗体と比較して一又は複数の超可変領域における一又は複数の変更を有する抗体を指し、そのような変更は抗原に対する抗体の親和性における改善をもたらす。抗βセクレターゼ抗体、抗BACE1抗体、βセクレターゼに結合する抗体及びBACE1に結合する抗体なる用語は、十分な親和性でBACE1に結合可能であり、BACE1を標的にすることにおいて診断及び/又は治療剤として有用であるような抗体を指す。一実施態様では、無関係な非BACE1タンパク質への抗BACE1抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイによって測定され、BACE1への抗体の結合の約10未満である。ある実施態様では、BACE1に結合する抗体は、1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM、又は0.001nMの解離定数を有する。ある実施態様では、抗BACE1抗体は、異なる種及びアイソフォームからのBACE1間で保存されたBACE1のエピトープに結合する。ここにおいて抗体なる用語は、最も広い意味で使用され、様々な抗体構造を包含し、限定するものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、及び所望の抗原結合活性を呈する限り抗体断片を含む。抗体断片とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例は、限定するものではないが、Fv、Fab、Fab’、Fab’SH、F2;ダイアボディ;線状抗体;単鎖抗体分子;及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。参照抗体と同じエピトープに結合する抗体とは、競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を50以上阻止する抗体を指し、逆に、競合アッセイにおいて参照抗体は抗体のその抗原への結合を50以上阻止する。例示的な競合アッセイがここに提供される。キメラ抗体なる用語は、重及び/又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重及び/又は軽鎖の残りが異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。抗体のクラスとは、重鎖が持つ定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の5つの主要クラス:IgA、IgD、IgE、IgG、及びIgMがあり、これらの幾つかはIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及びIgA2等のサブクラスに更に分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。細胞傷害剤なる用語は、ここで使用される場合、細胞機能を阻害又は防止する及び/又は細胞死又は破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤は、限定するものではないが放射性同位体;化学療法物質又は薬物、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンC、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤;増殖阻害剤;酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素;抗生物質;細菌、真菌、植物又は動物起源の酵素活性毒素又は小分子毒素などの毒素;及び下に開示される様々な抗腫瘍又は抗癌剤を含む。エフェクター機能とは、抗体アイソタイプによって異なる抗体のFc領域に起因しうるそれらの生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例は:C1q結合及び補体依存性細胞傷害;Fc受容体結合;抗体依存性細胞傷害;食作用;細胞表面受容体の下方制御;及びB細胞活性化を含む。有効な量の物質、例えば薬学的製剤とは、所望の治療又は予防結果を得るための必要な容量及び期間での有効な量を指す。ここでのFc領域なる用語は、定常領域の少なくとも一部を有する免疫グロブリン重鎖のC末端領域を定義するために使用される。該用語は、天然配列Fc領域及び可変Fc領域を含む。一実施態様では、ヒトIgG重鎖Fc領域は、Cys226から、又はPro230から重鎖のカルボキシル末端に延在する。しかしながら、Fc領域のC末端リシンは存在する場合とそうでない場合がありうる。明記しない限り、Fc領域又は定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、EUindexとも呼ばれるEU番号付けシステムに従い、Kabat等SequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthBethesdaMD1991に記載されている。フレームワーク又はFRとは、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのFRは一般的に4つのドメイン:FR1、FR2、FR3、及びFR4から成る。従って、HVR及びFR配列は一般的にVHにおいて次の配列において出現する:FR1H1FR2H2FR3H3FR4。完全長抗体、インタクトな抗体、及び全抗体なる用語は、ここでは交換可能に使用され、天然の抗体構造に実質的に類似した構造を持ち、ここで定義されるFc領域を有する重鎖を持つ抗体を指す。宿主細胞、宿主細胞株、及び宿主細胞培養物なる用語は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、形質転換体及び形質転換細胞を含み、一次形質転換細胞、及び継代の数に関わらずそれらに由来する子孫を含む。子孫は親細胞に対して核酸内容物において完全に同一でない場合があり、変異を含みうる。元の形質転換細胞についてスクリーニング又は選択されたのと同じ機能又は生物学的活性を有する変異体子孫はここに含まれる。ヒト抗体は、ヒト又はヒト細胞によって生産されるか、又はヒト抗体レパートリー又は他のヒト抗体コード配列を利用した非ヒト供給源から得られる抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含んでなるヒト化抗体を特異的に除く。ヒトコンセンサスフレームワークは、ヒト免疫グロブリンVL又はVHフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンVL又はVH配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般的に、配列のサブグループは、Kabat等SequencesofProteinsofImmunologicalInterestFifthEditionNIHPublication913242BethesdaMDvols13におけるサブグループである。一実施態様では、VLでは、サブグループはKabat等supraのサブグループカッパIである。一実施態様では、VHでは、サブグループはKabat等supraのサブグループIIIである。ヒト化抗体は、非ヒトHVRからのアミノ酸残基及びヒトFRからのアミノ酸残基を含んでなるキメラ抗体を指す。ある実施態様では、ヒト化抗体は、実質的に全ての少なくとも一つ、典型的には2つの可変ドメインを含み、全て又は実質的に全てのHVRは非ヒト抗体のものに対応し、全て又は実質的に全てのFRはヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は場合によっては、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含みうる。抗体、例えば非ヒト抗体のヒト化形態は、ヒト化を経た抗体を指す。超可変領域又はHVRなる用語は、ここで使用される場合、配列において超可変である及び/又は構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、天然の4鎖抗体は6つのHVR;VHに3つ、VLに3つを含む。HVRは一般的に超可変ループから及び/又は相補性決定領域からアミノ酸残基を含み、後者は最も高い配列可変性であるか及び/又は抗原認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基26-32、50-52、91-96、26-32、53-55、及び96-101で生じる。。例示的なCDRは、アミノ酸残基L1の24-34、L2の50-56、L3の89-97、H1の31-35B、H2の50-65、及びH3の95-102で生じる。。VHにおけるCDRを除き、CDRは一般的に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。CDRはまた、抗原と接触する残基である特異性決定領域又はSDRを含む。SDRは、abbreviatedCDR、又はaCDRと呼ばれるCDRの残基内に含まれる。例示的なaCDRは、アミノ酸残基L1の31-34、L2の50-55、L3の89-96、H1の31-35B、H2の50-58、及びH3の95-102で生じる。を参照。明記しない限り、可変ドメインにおけるHVR残基及び他の残基は、ここではKabat等supraに従って番号付けされる。イムノコンジュゲートは、限定するものではないが細胞傷害剤を含む一又は複数の異種性分子にコンジュゲートされた抗体である。個体又は被験体とは、哺乳類である。哺乳類は、限定するものではないが家畜、霊長類、ウサギ、及び齧歯類を含む。ある実施態様では、個体又は被験体はヒトである。単離された抗体は、それの天然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様では、抗体は95又は99超の純度に精製され、例えば電気泳動、キャピラリー電気泳動又はクロマトグラフィーで決定される。抗体純度の評価の方法の総説として、例えばFlatman等JChromatogrB8487987を参照のこと。単離された核酸は、それの天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を元々有した細胞に含まれる核酸分子を含むが、核酸分子は染色体外に、又はそれの天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。抗BACE1抗体をコードする単離された核酸とは、抗体重及び軽鎖をコードする一又は複数の核酸分子を指し、単一ベクター又は異なるベクターにおけるこのような核酸分子を含み、このような核酸分子は宿主細胞における一又は複数の位置に存在する。モノクローナル抗体なる用語は、ここで使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、ありうる可変抗体を除き同一であるか及び/又は同じエピトープに結合し、例えば自然に生じる変異又はモノクローナル抗体調製物の生産中に生じるものを含み、このような変異体は一般的に少量で存在する。典型的には異なる決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と比較して、モノクローナル抗体の各モノクローナル抗体調製物は抗原における単一決定基に向けられる。従って、モノクローナルなる修飾詞は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特性を意味し、何れかの特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、様々な技術によって作られ得、限定するのもではないが、ハイブリドーマ法、組換えDNA法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン座の全部又は一部を有するトランスジェニック動物を利用する方法を含み、モノクローナル抗体を作成するためのこのような方法及び他の例示的な方法がここに記載されている。ネイキッド抗体は、異種性部分又は放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在しうる。天然抗体は、様々な構造を有する天然に生じる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然IgG抗体は、ジスルフィド結合された2つの同一な軽鎖及び2つの同一な重鎖から成る約150,000ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。NからC末端へ、各重鎖は可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域、その後に3つの定常ドメインを有する。同様に、NからC末端へ、各軽鎖は可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域、その後に定常軽ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる2つのタイプの内一つに割り当てられうる。パッケージ挿入物なる用語は、治療用製品の商用パッケージに習慣的に含まれている説明書を指すために使用され、適応症、使用法、用量、投与、併用療法、禁忌及び/又はこのような治療用製品の使用に関する警告についての情報を含む。参照ポリペプチド配列に関するパーセントアミノ酸配列同一性とは、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした後の、特定の参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を測定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST2、ALIGN、又はMegalignソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムALIGN2を使用することによって得られる。ALIGN2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作製され、ソースコードは米国著作権庁ワシントンDC20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号TXU510087で登録されている。ALIGN2プログラムはジェネンテック社、サウスサンフランシスコカリフォルニアから公的に入手可能であり、ソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN2プログラムは、デジタルUNIXV4.0Dを含むUNIXオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN2プログラムによって設定され変動しない。アミノ酸配列比較にALIGN2が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Aの、与えられたアミノ酸配列Bとの、又はそれに対するアミノ酸配列同一性は次のように計算される:分率X/Yの100倍ここで、Xは配列アラインメントプログラムALIGN2のA及びBのプログラムアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、YはBの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと異なる場合、AのBに対するアミノ酸配列同一性は、BのAに対するアミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限りは、ここでの全てのアミノ酸配列同一性値は、直ぐ上のパラグラフに示したようにALIGN2コンピュータプログラムを用いて得られる。薬学的製剤なる用語は、そのような形態においてそこに含まれる活性成分の生物学的活性を有効にし、製剤が投与されるであろう被験体に容認し難いほど毒性である更なる成分を含まない調製物を指す。薬学的に許容可能な担体とは、被験体に非毒性である活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容可能な担体は、限定するものではないがバッファー、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。BACE1なる用語は、ここで使用される場合、別段の定めがある場合を除き、哺乳類、例えば霊長類及び齧歯類を含む何れかの脊椎動物供給源からの何れかの天然βセクレターゼ1を指す。用語は完全長の非プロセシングBACE1並びに細胞におけるプロセシングから得られる何れかの形態のBACE1を包含する。用語はまた、BACE1の天然に生じる変異体、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子多型を包含する。例示的BACE1ポリペプチドのアミノ酸配列は下の配列番号:49に示され、Vassar等Science286735741に報告されるヒトBACE1、アイソフォームAの配列であり、出典明記によってその全体をここに援用する。MAQALPWLLLWMGAGVLPAHGTQHGIRLPLRSGLGGAPLGLRLPRETDEEPEEPGRRGSFVEMVDNLRGKSGQGYYVEMTVGSPPQTLNILVDTGSSNFAVGAAPHPFLHRYYQRQLSSTYRDLRKGVYVPYTQGKWEGELGTDLVSIPHGPNVTVRANIAAITESDKFFINGSNWEGILGLAYAEIARPDDSLEPFFDSLVKQTHVPNLFSLQLCGAGFPLNQSEVLASVGGSMIIGGIDHSLYTGSLWYTPIRREWYYEVIIVRVEINGQDLKMDCKEYNYDKSIVDSGTTNLRLPKKVFEAAVKSIKAASSTEKFPDGFWLGEQLVCWQAGTTPWNIFPVISLYLMGEVTNQSFRITILPQQYLRPVEDVATSQDDCYKFAISQSSTGTVMGAVIMEGFYVVFDRARKRIGFAVSACHVHDEFRTAAVEGPFVTLDMEDCGYNIPQTDESTLMTIAYVMAAICALFMLPLCLMVCQWCCLRCLRQQHDDFADDISLLKヒトBACE1の幾つかの他のアイソフォームが存在し、アイソフォームB、C及びDを含む。UniProtKBSwissProtEntryP56817を参照のこと。アイソフォームBは配列番号:50に示され、アミノ酸190-214を欠く点においてアイソフォームAと異なる。アイソフォームCは配列番号:51に示され、アミノ酸146-189を欠く点においてアイソフォームAと異なる。アイソフォームDは配列番号:52に示され、アミノ酸146-189及び190-214を欠く点においてアイソフォームAと異なる。ここで使用される場合、治療又は治療などのその文法的変異とは、治療されている個体の自然の経過を変更する目的での臨床的介入を指し、予防のため又は臨床病理学の経過中に実施されうる。治療の所望される効果は、限定するものではないが、疾患の発生又は再発の防止、症状の軽減、疾患の何れかの直接的又は間接的病理学的結果の縮小、転移の防止、疾患進行の割合の低下、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解予後改善を含む。幾つかの実施態様では、発明の抗体は、疾患の展開を遅延するため又は疾患の進行を遅くするために使用される。可変領域又は可変ドメインなる用語は、抗原への抗体の結合に関与する抗体重又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは一般的に類似した構造を有し、各ドメインは4つの保存フレームワーク領域及び3つの超可変領域を含んでなる。を参照。単一VH又はVLドメインが抗原結合特異性を付与するのに十分でありうる。更に、特定の抗原に結合する抗体は、それぞれ相補VL又はVHドメインのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に結合する抗体からVL又はVHドメインを使用して単離されうる。例えばPortolano等JImmunol150880887Clarkson等Nature352624628を参照のこと。ベクターなる用語は、ここで使用される場合、それが連結される別の核酸を増殖可能な核酸分子を指す。用語は、自己複製核酸構造のベクター並びに導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。あるベクターは、作動的に連結された核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、ここでは発現ベクターと呼ばれる。神経障害又は神経疾患なる用語は、哺乳類における中枢及び/又は末梢神経系の疾患又は障害を指すか又は説明する。神経障害の例は、限定するものではないが以下の疾患及び障害を含む。ニューロパチー障害は不適切な又は非制御的な神経シグナル伝達又はその欠如に特徴付けられる神経系の疾患又は異常であり、限定するものではないが慢性疼痛、神経障害性疼痛、及び心因性疼痛、頭痛、片頭痛、ニューロパチー、及びめまい又は吐き気等のニューロパチー障害をしばしば伴う症状及び症候群を含む。アミロイドーシスはCNSにおける細胞外タンパク質沈着を伴う疾患及び障害のグループであり、限定するものではないが二次性アミロイドーシス、加齢性アミロイドーシス、アルツハイマー病、軽度認知障害、レビー小体型認知症、ダウン症候群、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血;グアム‐パーキンソン認知症、脳アミロイド血管症、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、多発性硬化症;クロイツフェルトヤコブ病、パーキンソン病、伝達性海綿状脳症、HIV関連認知症、筋萎縮性側索硬化症、封入体筋炎、及びβアミロイド沈着に関連する眼疾患を含む。CNSの癌は一又は複数のCNS細胞の異常増殖を特徴とし、限定するものではないが神経膠腫、多形神経膠芽腫、髄膜腫、星状細胞腫、聴神経腫瘍、軟骨腫、乏突起神経膠腫、髄芽腫、神経節膠腫、シュワン腫、神経線維腫、神経芽腫、及び硬膜外、髄内又は硬膜内腫瘍を含む。眼疾患又は障害は眼の疾患又は障害であり、ここでの目的ではBBBに影響されるCNS臓器が考えられる。眼疾患又は障害は、限定するものではないが、強膜、角膜、虹彩及び毛様体の障害、水晶体の障害、脈絡膜及び網膜の障害、網膜上膜、網膜色素変性症及び黄斑浮腫、緑内障、飛蚊症、視神経及び視覚路の障害、眼筋/両眼運動調節/屈折の障害、視覚障害及び盲目症、色覚異常、夜盲症、盲目症、河川盲目症及び小眼球症/コロボーマ、充血、アーガイルロバートソン瞳孔、角膜真菌症、眼球乾燥症及びandaniridiaを含む。CNSのウィルス又は微生物感染は、限定するものではないが、ウィルス、細菌及び他の微生物、例えば真菌、寄生虫又はアメーバによる感染を含み、限定するものではないが、急性又は慢性でありうる髄膜炎、脳炎、脊髄炎、血管炎及び膿瘍を含むCNS病態生理をもたらす。CNSの炎症は、物理的損傷又はCNSの一又は複数の他の疾患又は障害に起因又は関連する損傷でありうるCNSへの損傷により引き起こされる炎症である。CNSの虚血は、ここで使用される場合、脳における異常な血流又は血管挙動又はその要因に関する障害の群を指し、限定するものではないが局所脳虚血、全脳虚血、脳卒中、及び動脈瘤を含む。神経変性疾患は、CNSにおける神経細胞の機能欠如又は死に伴う疾患又は障害の群であり、限定するものではないが副腎白質ジストロフィー、アレキサンダー病、アルパース病、筋萎縮性側索硬化症、毛細血管拡張性運動失調症、バッテン病、コケーン症候群、大脳皮質基底核変性症、アミロイドーシスにより引き起こされるか又はそれに伴う変性、フリードライヒ運動失調症、前頭側頭葉変性症、ケネディー病、多系統萎縮症、多発性硬化症、原発性側索硬化症、進行性核上性麻痺、脊髄性筋萎縮症、横断性脊髄炎、レフサム病、及び脊髄小脳失調症を含む。CNSの発作疾患又は障害はCNSにおける不適切及び/又は異常な電気伝導を含み、限定するものではないがてんかん、月経随伴性てんかん、くず折れ発作、情動性発作、焦点発作、笑い発作、ジャクソン発作、ラフォラ疾患、運動発作、多巣性発作、夜間発作、光過敏性発作、偽発作、感覚発作、微発作、シルヴァン発作、離脱発作、及び視覚反射発作を含む。行動障害は被験体の異常行動を特徴とするCNSの障害であり、限定するものではないが睡眠障害、気分障害、注意欠陥障害、慢性疲労症候群、広場恐怖症、心的外傷後ストレス障害、双極性障害、摂食障害、精神病、発達性行動障害、人格障害及び精神障害を含む。リソソーム蓄積症は、場合によってはCNSに関連するか又はCNS特異的症状を有する代謝障害であり、限定するものではないがテイサックス病、ゴーシェ病、ファブリー病、ムコ多糖症、糖原病、GM1ガングリオシドーシス、異染性白質ジストロフィー、ファーバー病、カナバン白質ジストロフィー、及び神経セロイドリポフスチン症タイプ1及び2、ニーマンピック病、ポンペ病、及びクラッベ病を含む。II.組成物及び方法一態様では、発明は、一つには、BACE1に結合し、BACE1活性を低減及び/又は阻害する抗体に基づく。ある実施態様では、BACE1の活性部位又はエキソサイトに結合する抗体が提供される。A.例示的な抗BACE1抗体一態様では、発明は、配列番号:22、23、26、28、45、68、71、72、73又は120のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:24、29、46、69、74、75、76、77、78又は121のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;配列番号:25、30、47、70、79又は122のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3;配列番号:7、8、17、35又は42のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9、10、18、36-39、41、43、56、58、59、60、61、62、63、64又は118のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:11-16、19、40、44、57、65、66、67又は119のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3から選択される少なくとも1、2、3、4、5、又は6のHVRを含んでなる抗BACE1抗体を提供する。一態様では、発明は、配列番号:22、23、26、28、45、68、71-73又は120のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:24、29、46、69、74-78又は121のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25、30、47、70、79又は122のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3から選択される少なくとも1、少なくとも2、又は全3のVHHVR配列を含んでなる抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:22又は配列番号:23又は配列番号:28又は配列番号:71又は配列番号:72又は配列番号:73を含んでなるHVRH1を含む。別の実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:24又は配列番号:29又は配列番号:74又は配列番号:75又は配列番号:76又は配列番号:77又は配列番号:78を含んでなるHVRH2を含む。更なる実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:25又は配列番号:30又は配列番号:79を含んでなるHVRH3を含む。一実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:28を含んでなるHVRH1を含む。別の実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:29を含んでなるHVRH2を含む。更なる実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:30を含んでなるHVRH3を含む。別の実施態様では、抗体は配列番号:22のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:24のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含むか、又は抗体は配列番号:23のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:24のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含む。更なる実施態様では、抗体は、配列番号:28のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:29のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:30のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含む。更なる実施態様では、抗体は配列番号:23のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:74のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含むか、又は抗体は配列番号:23のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:75のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含むか、又は抗体は配列番号:71のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:24のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含むか、又は抗体は配列番号:72のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:24のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含むか、又は抗体は配列番号:23のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:76のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含むか、又は抗体は配列番号:23のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:77のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:79のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含むか、又は抗体は配列番号:73のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:78のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;及び配列番号:25アミノ酸配列を含んでなるHVRH3を含む。別の態様では、発明は配列番号:7、8、17、35及び42のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9、10、18、36-39、41、43、56、58-64又は118のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:11-16、19、40、44、57、65-67又は119のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3から選択される少なくとも1、少なくとも2、又は全3のVLHVR配列を含んでなる抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:7又は列番号:8を含んでなるHVRL1を含む。別の実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:9又は配列番号:10又は配列番号:58又は配列番号:59又は配列番号:60又は配列番号:61又は配列番号:62又は配列番号:63又は配列番号:64を含んでなるHVRL2を含む。更なる実施態様では、抗体は、配列番号:11又は配列番号:12又は配列番号:13又は配列番号:14又は配列番号:15又は配列番号:16又は配列番号:65又は配列番号:66又は配列番号:67のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含む。別の実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:35を含んでなるHVRL1を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号:36-39から成る群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL2を含む。更なる実施態様では、抗体は、アミノ酸配列配列番号:40を含んでなるHVRL3を含む。別の実施態様では、抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:11のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:12のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:13のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:14のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:16のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:8のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:10のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:15のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含む。更なる実施態様では、抗体は配列番号:35のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:36のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:40アミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:35のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:37のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:40のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:35のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:38のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:40のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:35のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:39のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:40のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含む。別の実施態様では、抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:58のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:12アミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:65のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:59のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:12のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9アミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:66のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:67のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:60のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:67のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:61アミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:65のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:59のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:66のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:62のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:67のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:63のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:12のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含むか、又は抗体は配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:64のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:12のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含む。別の態様では、発明の抗体は、配列番号:22、23、26、28、45、68、71-73又は120から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRH1配列番号:24、29、46、69、74-78又は121から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRH2及び配列番号:25、30、47、70、79又は122から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRH3から選択される少なくとも1、少なくとも2、又は全3のVHHVR配列を含んでなるVHドメイン;及び配列番号:7、8、17、35又は42から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL1、配列番号:9、10、18、36-39、41、43、56、58-64又は118から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL2、及び配列番号:11-16、19、40、44、57、65-67又は119から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL3から選択される少なくとも1、少なくとも2、又は全3のVLHVR配列を含んでなるVLドメインを含む。別の態様では、発明は、配列番号:23のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;配列番号:24のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;配列番号:25のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3;配列番号:7のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:12から選択されるアミノ酸配列を含んでなるHVRL3を含んでなる抗体を提供する。ある実施態様では、抗体はHVRH1、HVRH2、HVRH3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRH1はアミノ酸配列GFX30FX31X32X33X34IHを含み;HVRH2はアミノ酸配列X35X36ISPX37X38GX39TX40YADSVKGを含み;そしてHVRH3は配列X41PX42X43X44X45X46X47MDYを含むを含んでいてもよい。ある実施態様では、抗体はHVRH1、HVRH2及びHVRH3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRH1はアミノ酸配列GX71X72X73X74X75X76X77IHを含み;HVRH2はアミノ酸配列X78X79ISPX80X81GX82X83X84YADSVKGを含み;そしてHVRH3はアミノ酸配列X85PX86X87X88X89X90X91MDYを含むを含んでいてもよい。ある実施態様では、抗体はHVRL1、HVRL2、HVRL3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRL1はアミノ酸配列RASQX17VX18X19X20X21A、を含み、HVRL2はアミノ酸配列X22ASX23LYSを含み、そしてHVRL3はアミノ酸配列QQX24X25X26X27X28X29Tを含む。ある実施態様では、抗体はHVRL1、HVRL2及びHVRL3の群から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRL1はアミノ酸配列RASQX17VX18X19X20X21Aを含み、HVRL2はアミノ酸配列X62ASX63X64YX65を含み、そしてHVRL3はアミノ酸配列QQX66X67X68X69X70X71Tを含む。ある実施態様では、抗体はHVRL1、HVRL2、HVRL3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRL1はアミノ酸配列RASQX1VX2X3X4X5Aを含み、HVRL2はアミノ酸配列X6ASFLYSを含み、そしてHVRL3はアミノ酸配列QQX7X8X9X10X11X12Tを含む。ある実施態様では、抗体はHVRL1、HVRL2、HVRL3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRL1はアミノ酸配列RASQX1VX2X3X4X5Aを含み、HVRL2はアミノ酸配列X48ASX49X50YX51を含み、HVRL3はアミノ酸配列QQFPTYX52PTを含む。ある実施態様では、抗体はHVRH1、HVRH2、HVRH3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRH1はアミノ酸配列GFTFX13GYX14IHを含み、HVRH2はアミノ酸配列GWISPAGGSTDYADSVKGを含み、そしてHVRH3はアミノ酸配列GPFSPWVMDYを含む。ある実施態様では、抗体はHVRH1、HVRH2、HVRH3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRH1はアミノ酸配列GX53X54X55X56GYGIHを含み、HVRH2はアミノ酸配列GWISPX57X58GX59X60DYADSVKGを含み、そしてHVRH3配列はアミノ酸配列GPFX61PWVMDYを含む。ある実施態様では、抗体はHVRL1、HVRL2、HVRL3から選択される少なくとも一つの配列を含み、HVRL1はアミノ酸配列RASQSVSSAVAを含み、HVRL2はアミノ酸配列X15ASX16LYSを含み、そしてHVRL3はアミノ酸配列QQYSYSPFTを含む。ある実施態様では、上記の抗BACE1抗体の何れか一又は複数のアミノ酸は、次のHVR位置で置換される:HVRH1:位置5及び8;HVRL1:位置5、7、8、9及び10;HVRL2:位置1又はHVRL2位置1及び4;及びHVRL3:位置3、4、5、6、7及び8。ある実施態様では、ここに提供されるように置換は保存的置換である。ある実施態様では、何れか一又は複数の次の置換が任意の組合せにおいてなされうる:HVRH1:位置5にセリン又はロイシン及び位置8にアラニン又はグリシン;HVRL1:位置5にアスパラギン酸又はバリン;位置7にセリン又はアラニン;位置8にスレオニン又はアスパラギン;位置9にセリン又はアラニン及び位置10にバリン又はロイシン;HVRL2:位置1にセリン又はロイシン又はHVRL2位置1にセリン、チロシン又はトリプトファン又は位置4にチロシン、セリン又はトリプトファン;及びHVRL3:位置3にセリン、フェニルアラニン、グリシン、アスパラギン酸又はチロシン;位置4にチロシン又はプロリン、位置5にセリン、アラニン、スレオニン又はアスパラギン;位置6にチロシン、スレオニン、アスパラギン酸又はセリン、位置7にアスパラギン酸、セリン、プロリン又はロイシン及び位置8にプロリン又はスレオニン。ある実施態様では、ここに提供されるように置換は保存的置換である。ある実施態様では、何れか一又は複数の次の置換が任意の組合せにおいてなされうる:HVRH1:S5L及びA8G;HVRL1:D5V;S7A;T8N;S9A及びV10L;HVRL2:S1L又はHVRL2位置S1W又はY及びS4W;及びHVRL3:位置S3F、G、D又はYl;Y4P、S又はA;T5N;T6Y、D又はS;P7L及びP8T。ある実施態様では、上記の抗BACE1抗体の何れか一又は複数のアミノ酸は、次のHVR位置で置換される:HVRH1:位置2、3、5、6、7及び8;HVRH2:位置1、2、6、7、9、10、及び11;HVRH3位置1、3、4、5、6、7、及び8HVRL1:位置5、7、8、9及び10;HVRL2:位置1、4、5及び7;及びHVRL3:位置3、4、5、6、7及び8。ある実施態様では、ここに提供されるように置換は保存的置換である。上記置換のありうる組合せは、上記の配列番号:42-47及び118-122のコンセンサス配列に包含される。上記実施態様の何れかでは、抗BACE1抗体はヒト化である。一実施態様では、抗BACE1抗体は上記実施態様の何れかにおけるHVRを含み、更にアクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。別の実施態様では、抗BACE1抗体は上記実施態様の何れかにおけるHVRを含み、配列番号:1-6、20、21、27、31-34、80-98及び99-117のFR1、FR2、FR3、又はFR4配列を含んでなるVH又はVLを更に含む。別の態様では、抗BACE1抗体は、配列番号:20、21、27及び80-98から選択されるアミノ酸配列に少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、又は100の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン配列を含む。ある実施態様では、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、又は99の同一性を有するVH配列は参照配列に対して置換、挿入、又は欠失を有するが、その配列を含んでなる抗BACE1抗体はBACE1に結合する及び/又はBACE1活性を阻害又は低減する能力を保持する。ある実施態様では、配列番号:20、21、27及び80-98において合計で1~10のアミノ酸が置換、挿入及び/又は欠失されている。ある実施態様では、置換、挿入、又は欠失はHVR外の領域において生じる。場合によっては、抗BACE1抗体は配列番号:20、21、27又は80-98においてVH配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施態様では、VHは配列番号:22、23、26、28、45、68、71、72、73又は120のアミノ酸配列を含んでなるHVRH1、配列番号:24、29、46、69、74、75、76、77、78又は121のアミノ酸配列を含んでなるHVRH2、及び配列番号:25、30、47、70、79又は122のアミノ酸配列を含んでなるHVRH3から選択される1、2又は3のHVRを含む。一態様では、発明は、図1、2及び24におけるアミノ酸配列を含んでなるHVRH1;図1、2及び24におけるアミノ酸配列を含んでなるHVRH2;図1、2及び24におけるアミノ酸配列を含んでなるHVRH3;図1、2及び23におけるアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;図1、2及び23におけるアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び図1及び2及び23におけるアミノ酸配列を含んでなるHVRL3から選択される少なくとも1、2、3、4、5、又は6のHVRを含んでなる抗BACE1抗体を提供する。別の態様では、抗BACE1抗体であって、配列番号:1-6、31-34及び99-117から選択されるアミノ酸配列に少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99,又は100配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む抗体が提供される。ある実施態様では、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、又は99の同一性を有するVL配列は参照配列に対して置換、挿入、又は欠失を有するが、その配列を含んでなる抗BACE1抗体はBACE1に結合する及び/又はBACE1活性を阻害又は低減する能力を保持する。ある実施態様では、配列番号:1-6、31-34及び99-117において合計で1~10のアミノ酸が置換、挿入及び/又は欠失されている。ある実施態様では、置換、挿入、又は欠失はHVR外の領域において生じる。場合によっては、抗BACE1抗体は配列番号:1-6、31-34又は99-117においてVL配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施態様では、VLは配列番号:7、8、17、35又は42のアミノ酸配列を含んでなるHVRL1;配列番号:9、10、18、36-39、41、43及び56、58-64又は118のアミノ酸配列を含んでなるHVRL2;及び配列番号:11-16、19、40、44、57、65、66、67又は119のアミノ酸配列を含んでなるHVRL3から選択される1、2又は3のHVRを含む。別の態様では、抗BACE1抗体であって、上記の実施態様の何れかにおけるVH、及び上記の実施態様の何れかにおけるVLを含む抗体が提供される。一実施態様では、抗体は配列番号:21及び配列番号:2においてそれぞれVH及びVL配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。更なる態様では、発明はここに提供される抗BACE1抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある実施態様では、配列番号:20、21、27及び80-98から選択されるVH配列及び配列番号:1-6、31-34及び99-117から選択されるVL配列を含んでなる抗BACE1抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様では、配列番号:21及び配列番号:2においてそれぞれVH及びVL配列を含んでなる抗BACE1抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様では、配列番号:49のアミノ酸314SER、316GLU、317LYS、318PHE、319PRO、327GLN、328LEU、329VAL、330CYS、331TRP、332GLN、333ALA、335THR、337PRO、340ILE、375THR、378ASP、380CYS、426PHEに対応する少なくとも1、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9のアミノ酸を含んでなるBACE1内のエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様では、配列番号:49のアミノ酸314SER;316GLU;317LYS;327GLN;330CYS;331TRP;332GLN;335THR;及び378ASPに対応する少なくとも1、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9のアミノ酸を含んでなるBACE1内のエピトープに結合する抗体が提供される。他の実施態様では、コンホメーションエピトープは、配列番号:49の314SER;316GLU;317LYS;327GLN;330CYS;331TRP;332GLN;335THR;及び378ASPに対応するアミノ酸を含む。BACE1エピトープにおいて同定されるアミノ酸はヒトBACE1アイソフォームAに対応することが理解されるだろう。しかしながら、記載したBACE1コンホメーションエピトープはまた、BACE1の他の変異体及びアイソフォームにおける対応するアミノ酸を包含し、エピトープは記載した残基以外のアミノ酸を含みうる。ある実施態様では、配列番号:49のアミノ酸315-318;配列番号:49のアミノ酸331-335;配列番号:49のアミノ酸370-381;又はその何れかの組合せに対応するBACE1の少なくとも1、少なくとも2又は少なくとも3のアミノ酸領域を含んでなるBACE1内のエピトープに結合する抗体が提供される。一実施態様では、抗体は、配列番号:49のアミノ酸315-318、331-335及び370-381を含んでなるBACE1のエピトープに結合する。別の実施態様では、抗体結合がないBACE1と比較して、結合によりBACE1のP6及び/又はP7部位におけるコンホメーション変化をもたらすBACE1内のエピトープに結合する抗体が提供される。更なる実施態様では、BACE1のエピトープに結合し、BACE1の配列番号:49のアミノ酸218-231にランダムなループ構造を引き起こす抗体が提供される。BACE1の配列番号:49のアミノ酸218-231は、基質結合複合体ではαヘリックス構造において存在する。別の実施態様では、図14及び15に示され、BACE1及び抗BACE1抗体、YW412.8.31の結晶構造に記載されるBACE1内の部位に結合する抗体が提供される。他の実施態様では、BACE1内のエキソサイトに結合する抗体が提供される。一実施態様では、BACE1内のエキソサイトはKornacker等Biochem441156711573によって同定されているのと同じエキソサイトである。一実施態様では、BACE1への結合についてKornacker等Biochem441156711573に記載のペプチドと競合する抗体が提供される。別の実施態様では、ここに記載の何れかの抗BACE1抗体と結合について競合する抗体が提供される。発明の更なる態様では、上記実施態様の何れかによる抗BACE1抗体はキメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様では、抗BACE1抗体は抗体断片、例えばFv、Fab、Fab’、scFv、ダイアボディ、又はF2断片である。別の実施態様では、抗体は完全長抗体、例えばインタクトなIgG1抗体又はここに定義されるほかの抗体クラス又はアイソタイプである。更なる態様では、上記実施態様の何れかによる抗BACE1抗体は、下のセクション1-7に記載されるような何れかの特徴を単独又は組合せにおいて組み入れうる。1.抗体親和性ある実施態様では、ここに提供される抗体は、≦1μM、≦100nM、≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM、又は≦0.001nMの解離定数を有する。一実施態様では、Kdは、次のアッセイによって記載されるように、対象の抗体のFab型とその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイによって測定される。抗原に対するFabの溶液結合親和性は、一連の力価の非標識抗原の存在下で、最小濃度の標識抗原でFabを均衡にし、ついで抗Fab抗体被覆プレートで結合抗原を捕獲することによって測定するを参照。アッセイ条件を確率するために、MICROTITERマルチウェルプレートを5μg/mlの50mM炭酸ナトリウム中の捕獲抗Fab抗体で一晩被覆し、その後PBS中の2のウシ血清アルブミンで室温で2から5時間、ブロックする。非吸着プレートにおいて、100pM又は26pMの[125I]抗原を段階希釈した対象のFabと混合するにおける抗VEGF抗体Fab12の評価と一致する。ついで対象のFabを一晩インキュベートする;しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでより長い時間継続する場合がある。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温でインキュベートする。ついで、溶液を取り除き、プレートをPBS中の0.1ポリソルベート20で8回洗浄した。プレートが乾燥したら、150μl/ウェルの閃光物質を加え、プレートをTOPCOUNTTMγカウンターで10分間計数する。最大結合の20か又はそれ以下を与える各Fabの濃度を選択して競合結合測定に用いる。他の実施態様によれば、~10反応単位の固定した抗原CM5チップで25°CのBIAcore2000又はBIAcore3000を使用して表面プラズモン共鳴アッセイを行ってKdを測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップを、提供者の指示書に従ってNエチルNカルボジイミド塩酸塩及びNヒドロキシスクシンイミドで活性化する。抗原を10mMの酢酸ナトリウムで5μg/mlに希釈した後、結合したタンパク質の反応単位がおよそ10になるように5μl/分の流量で注入する。抗原の注入後、未反応群をブロックするために1Mのエタノールアミンを注入する。動力学的な測定では、2倍の段階希釈したFabを25°C、およそ25μl/分の流量で0.05ポリソルベート20界面活性剤を含むPBSに注入する。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデルを用いて、会合速度と解離速度を算出する。平衡解離定数をkoff/kon比として算出する。例えば、Chen等JMolBiol293865881を参照のこと。上記の表面プラスモン共鳴アッセイにより結合速度が106M-1S-1を上回る場合、分光計、例えば、ストップフロー具備分光光度計又は撹拌キュベットを備えた8000シリーズSLMAminco分光光度計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、PBS、25°Cの、20nMの抗抗原抗体の蛍光放出強度の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。2.抗体断片ある実施態様では、ここに提供される抗体は抗体断片である。抗体断片は、限定しないが、Fab、Fab、FabSH、F2、Fv、及びscFv断片、及び以下に記載の他の断片を含む。所定の抗体断片の概説については、Hudson等NatMed9129134を参照のこと。scFv断片の概説については、例えばPluckthunThePharmacologyofMonoclonalAntibodiesvol113Rosenburg及びMoore編pp269315を参照のこと;また国際公開第93/16185号;及び米国特許第5571894号及び第5587458号を参照のこと。サルベージレセプター結合エピトープ残基を含みインビボ半減期が増加したFab及びF2断片の検討については、米国特許第5869046号を参照のこと。ダイアボディは、二価又は二重特異性でありうる二つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許出願公開第404097号;国際公開第1993/01161号;Hudson等NatMed9129134;及びHollinger等ProcNatlAcadSciUSA9064446448を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディはまたHudson等NatMed9129134に記載されている。単一ドメイン抗体は抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。ある実施態様では、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である。抗体断片は、限定しないが、ここに記載されるようにインタクトな抗体のタンパク質消化並びに組換え宿主細胞による生産を含む様々な技術によって作製されうる。3.キメラ及びヒト化抗体ある実施態様では、ここで提供される抗体はキメラ抗体である。あるキメラ抗体は、例えば米国特許第4816567号;及びMorrison等PNASUSA8168516855に記載されている。一例では、キメラ抗体は非ヒト可変領域とヒト定常領域を含む。更なる例では、キメラ抗体はクラス又はサブクラスが親抗体のものとは変化せられたクラススイッチ抗体である。キメラ抗体はその抗原結合断片を含む。ある種の実施態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。一般的に、ヒト化抗体は、HVR、例えばCDRが非ヒト抗体由来であり、FRがヒト抗体配列由来である一又は複数の可変ドメインを含む。場合によっては、ヒト化抗体は、ヒト定常領域の少なくとも一部を含むであろう。幾つかの実施態様では、ヒト化抗体における幾つかのFR残基は、非ヒト抗体からの対応する残基で置換され、例えば抗体特異性又は親和性が回復又は改善される。ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えばAlmagro及びFranssonFrontBiosci1316191633に概説されており、更に例えば、Riechmann等Nature332323329;Queen等PNASUSA861002910033;米国特許第5821337号、同7527791号、同6982321号、及び同7087409号;Kashmiri等Methods362534グラフトを記載;PadlanMolImmunol28489498を記載;DallAcqua等Methods364360;及びOsbourn等Methods366168及びKlimka等BrJCancer83252260アプローチ法を記載に記載されている。ヒト化に使用されうるヒトフレームワーク領域には、限定されるものではないが、ベストフィット法を使用して選択されるフレームワーク領域を参照;軽鎖又は重鎖可変ドメインの特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導されるフレームワーク領域;及びPresta等JImmunol1512623;ヒト成熟フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域を参照;及びFRライブラリーのスクリーニング由来のフレームワーク領域及びRosok等JBiolChem2712261122618を参照が含まれる。4.ヒト抗体ある実施態様では、ここで提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で知られている様々な技術を使用して産生せしめることができる。ヒト抗体は、一般的に、vanDijk及びvandeWinkelCurrOpinPharmacol536874及びLonbergCurrOpinImmunol20450459に記載されている。ヒト抗体は、抗原投与に反応してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫源を投与することによって調製することができる。このような動物は、ヒト免疫グロブリン座位の全て又は一部を典型的には含み、内在性免疫グロブリン座位を置き換えるか、又は染色体外、又は動物の染色体内にランダムに組み込まれて存在する。このようなトランスジェニックマウスにおいて、内在性免疫グロブリン座位は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の概説は、LonbergNatBiotech2311171125を参照のこと。また、XENOMOUSETM技術を記載する米国特許第6075181号及び同6150584号;HUMAB技術を記載した米国特許第5770429号;KMMOUSE技術を記載した米国特許第7041870号;VELOCIMOUSE技術を記載した米国特許出願公開第2007/0061900号を参照。このような動物により産生されるインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば異なるヒト定常領域と組合せることにより、更に修飾することができる。また、ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法により作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の生産のためのヒトミエローマ及びマウスヒトヘテロミエローマ細胞株が記載されている。;Brodeur等MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplicationspp5163;及びBoerner等JImmunol14786を参照。ヒトB細胞ハイブリドーマ技術を介して産生されるヒト抗体は、Li等PNASUSA10335573562にまた記載されている。付加的な方法には、例えば米国特許第7189826号、及びNiXiandaiMianyixue26265268に記載されている。また、ヒトハイブリドーマ技術は、Vollmers及びBrandleinHistologyandHistopathology20927937及びVollmers及びBrandleinMethodsandFindingsinExperimentalandClinicalPharmacology2718591にも記載されている。ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるFvクローン可変ドメイン配列を単離することにより産生せしめることもできる。ついで、このような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組合せられうる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。5.ライブラリー由来抗体本発明の抗体は、所望の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特性を有する抗体について、そのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で知られている。このような方法は、例えばHoogenboom等MethodsinMolecularBiology178137において概説され、更に例えばMcCafferty等Nature348552554;Clackson等Nature352624628;Marks等JMolBiol222581597;Marks及びBradburyMethodsinMolecularBiology248161175;Sidhu等JMolBiol338299310;Lee等JMolBiol34010731093;FellousePNASUSA1011246712472;及びLee等JImmunolMethods284119132に記載されている。ある種のファージディスプレイ法では、VH及びVL遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応により別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいてランダムに組換えられ、これがついで、Winter等AnnRevImmunol12433455に記載されているように、抗原結合ファージについてスクリーニングされうる。ファージは、典型的には、単鎖Fv断片又はFab断片として、抗体断片をディスプレイする。免疫化されたソースからのライブラリーにより、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対して高親和性の抗体が提供される。あるいは、天然レパートリーを、Griffiths等EMBOJ12725734に記載されているように、免疫化をすることなく、広範囲の非自己、更には自己抗原に対するヒト抗体の単一供給源を提供するためにクローニングすることができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配置されていないV遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むPCRプライマーを使用することで合成的に作製することができ、高頻度可変CDR3領域をコードし、Hoogenboom及びWinterJMolBiol227381388により記載されているような、再配置をインビトロで達成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許文献には、例えば米国特許第5750373号、及び米国特許出願第2005/0079574号、同2005/0119455号、同2005/0266000号、同2007/0117126号、同2007/0160598号、同2007/0237764号、同2007/0292936号、及び同2009/0002360号が含まれる。ヒト抗体ライブラリーから単離される抗体又は抗体断片は、ここでのヒト抗体又はヒト抗体断片と考えられる。6.多重特異性抗体ある実施態様では、ここで提供される抗体は多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある種の実施態様では、結合特異性の一つはBACE1に対してであり、他方は任意の他の抗原に対してである。ある実施態様では、二重特異性抗体は、BACE1の二つの異なるエピトープに結合しうる。また二重特異性抗体はBACE1を発現する細胞に細胞傷害剤を局在化させるために使用することができる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。多重特異性抗体を作製するための技術には、限定されるものではないが、異なる特異性を有する二つの免疫グロブリン重鎖軽鎖対の組換え同時発現を参照、国際公開第93/08829号、及びTraunecker等EMBOJ103655、及びノブインホール技術が含まれる。また、多重特異性抗体は、抗体ヘテロ二量体分子を作製するための静電気操縦効果の設計;2又はそれ以上の抗体又は断片の架橋を参照;二重特性抗体の産生のためのロイシンジッパーの使用15471553;二重特異性抗体断片を作製するためのダイアボディ技術の使用を参照;及び単鎖Fv二量体の使用を参照;及びTutt等JImmunol14760に記載されているような三重特異性抗体の調製により、作製することができる。オクトパス抗体を含む3又はそれ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体もここに含まれる。また、ここでの抗体又は断片は、BACE1並びに他の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む二重作用FAb又はDAFも含む。7.抗体変異体ある実施態様では、ここに提供される抗体のアミノ酸配列変異体が考えられる。例えば、抗体の結合親和性及び/又は他の生物学的性質を改善させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入して、又はペプチド合成により調製されうる。そのような修飾は、抗体のアミノ酸配列内の残基の、例えば、欠失、及び/又は挿入及び/又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば抗原結合性を有している限り、欠失、挿入、及び置換をどのように組合せて、最終コンストラクトに到達してもよい。a置換、挿入、及び欠失変異体ある実施態様では、一又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異誘発のために関心ある部位はHVR及びFRを含む。保存的置換は、保存的置換と題して表1に示す。より実質的な変化は例示的置換との項目で表1に提供され、アミノ酸側鎖クラスを基準にして以下に更に記載される。アミノ酸置換は関心ある抗体に導入され得、生成物が所望の活性、例えば保持された/改善された抗原結合性、低減した免疫原性、改善されたADCC又はCDCについて、スクリーニングされる。アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいて群に分けることができる:疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;酸性:Asp、Glu;塩基性:His、Lys、Arg;鎖配向に影響を及ぼす残基:Gly、Pro;芳香族:Trp、Tyr、Phe。非保存的置換は、これらのクラスの一つのメンバーを他のクラスに交換することを必要とするであろう。一タイプの置換変異体は、親抗体の一又は複数の高頻度可変領域残基を置換することを含む。一般的に、更なる研究のために選択される得られた変異体は、親抗体に対して所定の生物学的性質に修飾を有するか、及び/又は親抗体の実質的に保持された所定の生物学的性質を有しているであろう。例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、これは、例えばここに記載されたもののようなファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に産生せしめることができる。簡潔に言えば、一又は複数のHVR残基を変異させ、変異体抗体をファージにディスプレイさせ、特定の生物学的活性についてスクリーニングされる。改変は、例えば抗体親和性を改善するために、HVRにおいてなされうる。このような改変はHVRホットスポット、つまり体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基を参照、及び/又はSDRsにおいてなされる場合があり、得られる変異体VH又はVLが結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築しそれから再選択することによる親和性成熟は、例えばHoogenboom等MethodsinMolecularBiology178137に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様では、様々な方法の何れかによって成熟のために選択された可変遺伝子中に多様性が導入される。ついで、二次抗体が作製される。ついで、ライブラリーがスクリーニングされ、所望の親和性を有する任意の抗体変異体が同定される。多様性を導入する他の方法は、幾つかのHVR残基が無作為化されるHVR指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するHVR残基が、例えばアラニンスキャン突然変異誘発又はモデリングを使用して、特に同定されうる。特にCDRH3及びCDRL3がしばしば標的とされる。ある実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、一又は複数のHVR内で生じうる。例えば、結合親和性を実質的に減少させない保存的改変をHVRにおいてなすことができる。そのような改変はHVRホットスポット又はSDRの外側でありうる。上に提供された変異VH及びVL配列の所定の実施態様では、何れかの各HVRが改変されず、又は一、二又は三のアミノ酸置換を含む。突然変異誘発の標的とされうる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham及びWellsScience24410811085によって記載されているアラニンスキャンニング突然変異誘発法と呼ばれる。この方法において、残基又は標的残基の群が同定され、中性の又は負に荷電したアミノ酸で置換され、抗体の抗原との相互作用に影響があるかどうかが決定される。最初の置換に対して機能的感受性を示しているアミノ酸位置に更なる置換を導入することができる。あるいは、又は付加的に、抗原抗体複合体の結晶構造が抗体と抗原間の接触点を同定する。そのような接触残基及び近傍の残基は置換のための候補として標的にされるか又は削除されうる。変異体は、それらが所望の性質を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされうる。アミノ酸配列挿入は、長さが1残基から百以上の残基を含むポリペプチドまで及ぶアミノ末端及び/又はカルボキシ末端融合体、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、N末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を増加させる酵素又はポリペプチドへの抗体のN又はC末端の融合を含む。bグリコシル化変異体ある実施態様では、ここで提供される抗体は、抗体がグリコシル化される度合いを増大又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、アミノ酸配列を、一又は複数のグリコシル化部位が作られ又は除去されるように改変させることによって、簡便に達成されうる。抗体がFc領域を含む場合、そこに結合される炭水化物が改変されうる。哺乳動物細胞により産生される天然抗体は、典型的には、Fc領域のCH2ドメインのAsn297に対してN結合により一般的に結合する分枝状で二分岐のオリゴ糖を含む。例えば、Wright等TIBTECH152632を参照。オリゴ糖は様々な炭水化物、例えばマンノース、Nアセチルグルコサミン、ガラクトース、及びシアル酸を含み得、並びにフコースが二分岐オリゴ糖構造の幹のGlcNAcに結合される。幾つかの実施態様では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が、ある改善された特性を有する抗体変異体を生じせしめるために、なされうる。一実施態様では、Fc領域に結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、1から80、1から65、5から65、又は20から40でありうる。フコースの量は、例えば国際公開第2008/077546号に記載されているように、MALDITOF質量分析法によって測定して、Asn297に結合した全ての糖構造の合計に対してAsn297の糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Asn297はFc領域内の約297位に位置したアスパラギン残基を意味する;しかしながら、Asn297は、抗体中のマイナーな配列変異のために、297位から約±3アミノ酸上流又は下流に、つまり294位と300位の間に位置している場合がありうる。そのようなフコシル化変異体は改善されたADCC機能を有しうる。例えば、米国特許出願公開第2003/0157108号;米国特許出願公開第2004/0093621号を参照。脱フコシル化された又はフコース欠損抗体変異体に関連した刊行物の例には、米国特許出願公開第2003/0157108号;国際公開第2000/61739号;国際公開第2001/29246号;米国特許出願公開第2003/0115614号;米国特許出願公開第2002/0164328号;米国特許出願公開第2004/0093621号;米国特許出願公開第2004/0132140号;米国特許出願公開第2004/0110704号;米国特許出願公開第2004/0110282号;米国特許出願公開第2004/0109865号;国際公開第2003/085119号;国際公開第2003/084570号;国際公開第2005/035586号;国際公開第2005/035778号;国際公開第2005/053742号;国際公開第2002/031140号;Okazaki等JMolBiol33612391249;YamaneOhnuki等BiotechBioeng87614が含まれる。脱フコシル化抗体を生産可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化に欠けているLec13CHO細胞;米国特許出願公開第2003/0157108A1号PrestaL;及び国際公開第2004/056312A1号Adams等,特に実施例11、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ16フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、FUT8、ノックアウトCHO細胞;KandaY等BiotechnolBioeng94680688;及び国際公開第2003/085107号を参照が含まれる。例えば抗体のFc領域に結合した二分オリゴ糖がGlcNAcにより二分される二分オリゴ糖を有する抗体変異体が更に提供される。そのような抗体変異体は、フコシル化が低減され、及び/又はADCC機能が改善されている場合がある。そのような抗体変異体の例は、例えば国際公開第2003/011878号;米国特許第6602684号;及び米国特許出願公開第2005/0123546号に記載されている。Fc領域に結合したオリゴ糖に少なくとも一のガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。このような抗体変異体は、改善されたCDC機能を有している場合がある。このような抗体変異体は、例えば国際公開第1997/30087号;国際公開第1998/58964号;及び国際公開第1999/22764号に記載されている。cFc領域変異体ある実施態様では、一又は複数のアミノ酸修飾が、ここに提供される抗体のFc領域に導入され、それによりFc領域変異体を産生せしめてもよい。Fc領域変異体は、一又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾を含んでなるヒトFc領域配列を含みうる。ある実施態様では、本発明は、幾つかであるが全てではないエフェクター機能を持つ抗体変異体を考察し、これは、抗体を、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、あるエフェクター機能は不要か又は有害である用途のために望ましい候補とする。CDC及び/又はADCC活性の減少/喪失を確認するために、インビトロ及び/又はインビボ細胞傷害性アッセイが実施されうる。例えば、Fcレセプター結合アッセイは、抗体がFcγR結合を欠くが、FcRn結合能力を保持していることを確かめるために実施されうる。ADCCを媒介する一次細胞であるNK細胞はFcγRIIIのみを発現するのに対し、単球はFcγI、FcγII及びFcγIIIを発現する。造血細胞上のFcR発現は、Ravetch及びKinetAnnuRevImmunol9457492の464頁の表3に要約されている。対象とする分子のADCC活性を評価するための非限定的なインビトロアッセイが米国特許第5500362号andHellstromI等ProcNatlAcadSciUSA82149915025821337を参照に記載されている。別法では、非放射性アッセイ法が用いられ得る非放射性細胞傷害性アッセイ非放射性細胞傷害性アッセイを参照。このようなアッセイのために有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞及びナチュラルキラー細胞を含む。あるいは、又は付加的に、対象とする分子のADCC活性は、例えばClynes等ProcNatlAcadSciUSA95652656に記載されているような動物モデルにおいてインビボで評価されうる。Clq結合アッセイが、抗体がClqに結合できず、よってCDC活性を欠くことを確認するためにまた実施されうる。例えば、国際公開第2006/029879号及び国際公開第2005/100402号におけるC1q及びC3c結合ELISAを参照。補体活性化を評価するために、CDCアッセイを実施することができる;CraggMS等Blood10110451052;及びCraggMSandMJGlennieBlood10327382743を参照。FcRn結合及びインビボクリアランス/半減期定量も当該技術分野で知られている方法を使用して実施することがまたできる17591769を参照。減少したエフェクター機能を有する抗体は、Fc領域残基238、265、269、270、297、327及び329の一又は複数の置換を有するものを含む。このようなFc変異体は、二又はそれ以上のアミノ酸位265、269、270、297及び327に置換を有するFc変異体を含み、アラニンへの残基265及び297の置換を有するいわゆるDANAFc変異体を含む。FcRへの改良又は減少された結合を有するある種の抗体変異体が記載されている65916604を参照。ある実施態様では、抗体変異体は、ADCCを改善する一又は複数のアミノ酸置換、例えば、Fc領域の位置298、333、及び/又は334での置換を有するFc領域を含む。幾つかの実施態様では、例えば米国特許第6194551号、国際公開第99/51642号、及びIdusogie等JImmunol16441784184に記載されているように、改変されたClq結合及び/又は補体依存性細胞傷害性を生じる改変がFc領域に改変がなされる。増加した半減期及び胎児への母性IgGsの移動に関与する新生児Fcレセプター及びKim等JImmunol24249への改善された結合性を有する抗体が、米国特許出願公開第2005/0014934A1に記載されている。その抗体は、FcRnへのFc領域の結合を改善する一又は複数の置換をそこに有するFc領域を含む。このようなFc変異体は、Fc領域残基:238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424又は434の一又は複数での置換、例えばFc領域残基434の置換を有するものを含む。Fc領域変異体の他の例に関しては、Duncan及びWinterNature32273840;米国特許第5648260号;米国特許第5624821号;及び国際公開第94/29351号も参照のこと。dシステイン操作抗体変異体ある実施態様では、システイン操作抗体、例えば抗体の一又は複数の残基がシステイン残基で置換されるthioMAbsを作ることが望ましいことがある。特定の実施態様では、置換される残基が抗体の接近可能な部位で生じる。これらの残基をシステインと置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能な部位に位置させられ、抗体を他の部分、例えば薬剤部分又はリンカー薬剤部分に結合させ、ここで更に記載されるように免疫コンジュゲートを作るために使用されうる。ある実施態様では、以下の残基の任意の一又は複数がシステインと置換されうる:軽鎖のV205;重鎖のA118;及び重鎖Fc領域のS400。システイン操作抗体は、例えば米国特許第7521541号に記載されるようにして、産生されうる。e抗体誘導体ある実施態様では、ここに提供される抗体は、当該技術分野において知られ直ぐに利用できる更なる非タンパク質性部分を含むように更に修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分は、限定しないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例には、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール、エチレングリコール/プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ13ジオキソラン、ポリ136トリオキサン、エチレン/無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸、及びデキストラン又はポリポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド/エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは水中におけるその安定性のために製造の際に有利でありうる。ポリマーは任意の分子量であってよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に結合するポリマーの数は変化してもよく、一を超えるポリマーが結合する場合、それらは同じでも異なった分子でもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び/又はタイプは、限定されるものではないが、抗体誘導体が定まった条件下での治療に使用されるかどうか等を含む、改善される抗体の特定の性質又は機能を含む考慮事項に基づいて決定することができる。他の実施態様では、放射線への暴露によって選択的に加熱されうる非タンパク質様部分及び抗体のコンジュゲートが提供される。一実施態様では、非タンパク質様部分はカーボンナノチューブである。放射線は任意の波長のものであってよく、限定するものではないが、通常の細胞に害を与えないが、抗体非タンパク質様部分に近位の細胞が死滅させられる温度まで非タンパク質様部分を加熱する波長が含まれる。B.組換え方法及び組成物抗体は、例えば米国特許第4816567号に記載されているように、組換え法及び構成物を使用して製造することができる。一実施態様では、ここに記載の抗BACE1抗体をコードする単離核酸が提供される。このような核酸は、VLを含んでなるアミノ酸配列及び/又は抗体のVHを含んでなるアミノ酸配列をコードしてもよい。更なる実施態様では、このような核酸を含んでなる一又は複数のベクターが提供される。更なる実施態様では、このような核酸を含んでなる宿主細胞が提供される。このような一実施態様では、宿主細胞は、抗体のVLを含んでなるアミノ酸配列及び抗体のVHを含んでなるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなるベクター、又は抗体のVLを含んでなるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる第一ベクター、及び抗体のVHを含んでなるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる第2ベクターを含む。一実施態様では、宿主細胞は真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞又はリンパ球系細胞である。一実施態様では、抗BACE1抗体の作製方法が提供され、該方法は、上に提供された抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で、培養し、場合によっては宿主細胞から抗体を回収することを含む。抗BACE1抗体の組換え生産では、例えば上述のような抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞での更なるクローニング及び/又は発現のために一又は複数のベクターに挿入される。このような核酸は、直ちに単離され、一般的な手順を使用して配列決定されうる。抗体をコードするベクターのクローニング又は発現のために適した宿主細胞は、ここに記載される原核細胞又は真核細胞である。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びFcエフェクター機能が必要でない場合に、細菌で生産されうる。細菌での抗体断片及びポリペプチドの発現については、米国特許第5648237号、米国特許第5789199号、及び米国特許第5840523号を参照のこと。pp245254を参照。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、更に精製されうる。原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物が、抗体をコードするベクターのための適切なクローニング又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路がヒト化された菌及び酵母株を含み、部分的に又は完全にヒト化したグリコシル化パターンを持つ抗体の生産を生じる。GerngrossNatBiotech2214091414及びLi等NatBiotech24210215を参照。グリコシル化抗体の発現のために適した宿主細胞は、多細胞生物からもまた誘導される。無脊椎動物細胞の例は、植物及び昆虫の細胞を含む。特にヨウトガ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併用されうる多くのバキュロウィルス株が同定されている。植物細胞培養もまた宿主として利用することができる。例えば米国特許第5959177号、同第6040498号、同第6420548号、同第7125978号、及び同第6417429号を参照。脊椎動物細胞をまた宿主として使用することができる。例えば、懸濁状態で増殖するよう適合化された哺乳動物細胞株が有用な場合がある。有用な哺乳動物細胞株の他の例は、SV40によって形質転換されたサル腎臓CV1株;ヒト胚腎臓株に記載された293又は293細胞;ベビーハムスター腎細胞;マウスセルトリ細胞に記載されるTM4細胞;サル腎細胞;アフリカミドリザル腎細胞;ヒト子宮頸癌細胞;イヌ腎細胞;バッファローラット肝細胞;ヒト肺細胞;ヒト肝細胞;マウス乳腺腫瘍;Mather等AnnalsNYAcadSci3834468に記載されるTRI細胞;MRC5細胞;及びFS4細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、DHFRCHO細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣細胞;及びY0、NS0、及びSp2/0等のミエローマ細胞株である。抗体生産のために適した哺乳類動物宿主細胞株の概説として、例えばYazaki及びWuMethodsinMolecularBiologyVol248pp255268を参照のこと。C.アッセイここに提供される抗BACE1抗体は、当分野で知られている様々なアッセイによってそれらの物理的/化学的特性について同定、スクリーニング、又は特徴付けされうる。1.結合アッセイ及び他のアッセイ一態様では、発明の抗体は、知られている方法、例えばELISA、ウエスタンブロット等によってその抗原結合活性について試験される。他の態様では、競合アッセイはBACE1に対する結合について、ここに記載の抗体又はFabの何れか、例えばYW412.8、YW412.8.31、YW412.8.30、YW412.8.2、YW412.8.29、YW412.8.51、Fab12、LC6、LC9、LC10と競合する抗体を同定するために使用されうる。ある実施態様では、このような競合抗体は、ここに記載の抗体又はFabの何れか、例えばYW412.8、YW412.8.31、YW412.8.30、YW412.8.2、YW412.8.29、YW412.8.51、Fab12、LC6、LC9、LC10によって結合される同じエピトープに結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、MorrisEpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiologyvol66に提供されている。例示的な競合アッセイでは、固定されたBACE1が、BACE1に結合する第一標識抗体、及びBACE1への結合について第一抗体と競合するその能力について試験されている第二非標識抗体を含んでなる溶液中においてインキュベートされる。第二抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在しうる。コントロールとして、固定されたBACE1が、第一標識抗体を含むが第二非標識抗体を含まない溶液中においてインキュベートされる。BACE1への第一抗体の結合が可能な条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体が除去され、固定されたBACE1に付随するラベルの量が測定される。固定されたBACE1に付随するラベルの量が、コントロールサンプルと比較して試験サンプルにおいて有意に低減された場合、これは、BACE1への結合について第二抗体が第一抗体と競合していることを意味する。HarlowandLaneAntibodiesALaboratoryManualch14を参照のこと。2.活性アッセイ一態様では、生物学的活性を有するその抗BACE1抗体を同定するためのアッセイが提供される。生物学的活性は、例えばBACE1アスパルチルプロテアーゼ活性の阻害又は低減;又はBACE1によるAPP切断の阻害又は低減;又はAβ生産の阻害又は低減を含む。インビボ及び/又はインビトロにおいてこのような生物学的活性を有する抗体も提供される。ある実施態様では、発明の抗体は、このような生物学的活性について試験される。例えば、BACE1プロテアーゼ活性は、合成基質ペプチドを使用して、実施例1及び2に詳細に記載するようにホモジニアス時間分解蛍光HTRFアッセイ又はマイクロ流体キャピラリー電気泳動アッセイにおいて試験できる。簡潔には、ホモジニアス時間分解蛍光アッセイは、アミロイド前駆タンパク質BACE1切断部位ペプチドの使用によりBACE1アスパルチルプロテアーゼ活性を測定するために使用できる。例えば、Bi27ペプチドAmericanPeptideCompanyを、384ウェルプレートにおいてBACE反応バッファー中において抗BACE抗体でプレインキュベートされたBACE1と組み合わせる。タンパク分解性反応混合物を周囲温度で75分間インキュベートし、検出バッファー中において、2nMのストレプトアビジンD2及び150nMのユーロピウムクリプテートで標識された抗アミロイドβ抗体を有する5μLのHTRF検出混合物の添加によってクエンチした。最終反応混合物を周囲温度で60分間インキュベートし、TRFRETシグナルを320nmの励起波長及び615及び665nmの放出波長でEnVisionMultilabelPlateReaderTMを使用して測定する。MCEアッセイ反応は標準的な酵素反応において実施可能であり、ヒトBACE1、アミロイド前駆タンパク質βセクレターゼ活性部位ペプチド、50mMのNaOAcpH4.4及び0.1CHAPSを有する、4x化合物及び酵素に基質を添加することによって開始した。周囲温度で60分間のインキュベーションの後、各反応における産物及び基質をLC3000において分析される12sippermicrofluidicchipを使用して分離した。産物及び基質の分離は、製造者の最適化ソフトウェアを使用して電圧及び圧力を選択することによって最適化される。基質変換はHTSWellAnalyzersoftwareを使用して電気泳動図から算出される。更に、BACE1プロテアーゼ活性は、APP等のBACE1基質を発現する細胞株においてインビボで、又はヒトAPP等のBACE1基質を発現するトランスジェニックマウスにおいて、実施例2及び4に記載のように試験できる。更に、BACE1プロテアーゼ活性は動物モデルにおいて抗BACE1抗体で検査できる。例えば、様々な神経疾患及び障害の動物モデル、及びこれらのモデルに伴う病理学的過程を検査するための関連技術が当分野において容易に利用可能である。様々な神経障害の動物モデルは、非組換え及び組換え動物双方を含む。非組換え動物モデルは、例えば齧歯類、例えばマウスモデルを含む。このようなモデルは、標準的な技術、例えば皮下注射、尾静脈注射、脾臓移植、腹腔内移植、及び腎被膜下移植を使用して同系マウスに細胞を導入することによって生成可能である。インビボモデルは、脳卒中/脳虚血のモデル、神経変性疾患のインビボモデル、例えばパーキンソン病のマウスモデル;アルツハイマー病のマウスモデル;筋萎縮性側索硬化症のマウスモデル;脊髄性筋萎縮症のマウスモデル;局所及び全脳虚血のマウス/ラットモデル、例えば一般的な頸動脈閉塞又は中大脳動脈閉塞モデル;又はエクスビボ全胚培養を含む。一非限定的な例として、アルツハイマー病のための多くの当分野で知られたマウスモデルがある4392402Mouri等FASEBJJul21213548MinkevicieneetalJPharmacolExpTherNov31167782andYuede等BehavPharmacolSep1834763を参照。様々なアッセイが、知られたインビトロ又はインビボアッセイ形態において実施され得、当分野で知られており、文献に記載されている。様々なこのような動物モデルはまた、JacksonLaboratory等の民間ベンダーから入手から入手可能である。更なる動物モデルアッセイを実施例4及び5に記載する。D.イムノコンジュゲート発明はまた、一又は複数の細胞傷害性物質、例えば化学療法物質又は薬物、増殖阻害物質、毒素、又は放射性同位体にコンジュゲートされたここの抗BACE1抗体を含んでなるイムノコンジュゲートを提供する。一実施態様では、イムノコンジュゲートは、限定しないが、メイタンシノイド;アウリスタチン、例えばモノメチルアウリスタチン薬剤部分DE及びDF;ドラスタチン;カリケアマイシン又はその誘導体;及びLode等CancerRes5829252928を参照;アントラサイクリン、例えばダウノマイシン又はドキソルビシン;Jeffrey等BioorganicMedChemLetters16358362;Torgov等BioconjChem16717721;Nagy等ProcNatlAcadSciUSA97829834;Dubowchik等BioorgMedChemLetters1215291532;King等JMedChem4543364343;及び米国特許第6630579号を参照;メトトレキセート;ビンデシン;タキサン、例えばドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル;トリコテシン及びCC1065を含む一又は複数の薬物に抗体がコンジュゲートされる抗体薬剤コンジュゲートである。他の実施態様では、イムノコンジュゲートは、限定しないが、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素A鎖、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデクシンA鎖、アルファサルシン、アレウリテスフォーディタンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカアメリカーナタンパク質、モモルディカチャランチア阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリス阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンを含む、酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートされたここに記載された抗体を含む。他の実施態様では、イムノコンジュゲートは放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートされるここに記載の抗体を含む。様々な放射性同位元素が放射性コンジュゲートの生産のために利用可能である。例は、At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及びLuの放射性同位元素を含む。放射性コンジュゲートが検出に使用される場合、それはシンチグラフィー研究用の放射性原子、例えばTc99m又はI123、又は核磁気共鳴イメージング用のスピン標識、例えばまたヨウ素123、ヨウ素131、インジウム111、フッ素19、炭素13、窒素15、酸素17、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含みうる。抗体と細胞傷害剤のコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えばNスクシンイミジル3プロピオネート、スクシンイミジル4シクロヘキサン1カルボキシレート、イミノチオラン、イミドエステル類の二官能性誘導体、活性エステル類、アルデヒド類、ビスアジド化合物ヘキサンジアミン、ビスジアゾニウム誘導体エチレンジアミン、ジイソシアネート、及び二活性フッ素化合物を使用して作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta等Science2381098に記載されているようにして調製することができる。炭素14標識1イソチオシアナトベンジル3メチルジエチレントリアミン五酢酸が抗体に放射性ヌクレオチドをコンジュゲートするためのキレート剤の例である。国際公開第94/11026号を参照のこと。リンカーは細胞中の細胞傷害剤の放出を容易にするための切断可能リンカーでありうる。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカーが使用され得る;米国特許第5208020号。ここでのイムノコンジュゲート又はADCは、限定するものではないが、市販されているBMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LCSMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、スルホEMCS、スルホGMBS、スルホKMUS、スルホMBS、スルホSIAB、スルホSMCC、及びスルホSMPB、及びSVSB安息香酸塩を含む架橋剤を用いて調製されるコンジュゲートが明示的に考えられる。E.診断及び検出のための方法及び組成物ある実施態様では、ここに提供される何れかの抗BACE1抗体は生物学的サンプルにおけるBACE1の存在の検出に有用である。検出なる用語は、ここで使用される場合、定量的又は定性的検出を包含する。ある実施態様では、生物学的サンプルは細胞又は組織、例えば血清、血漿、唾液、胃液分泌物、粘液、脳脊髄液、リンパ液、神経組織、脳組織、心臓組織又は血管組織を含む。一実施態様では、診断又は検出の方法における使用のための抗BACE1抗体が提供される。更なる態様では、生物学的サンプルにおけるBACE1の存在を検出する方法が提供される。ある実施態様では、方法は、生物学的サンプルを、BACE1への抗BACE1抗体の結合が可能な条件下でここに記載の抗BACE1抗体と接触させる工程、及び抗BACE1抗体及びBACE1間で複合体が形成されているかを検出する抗体を含む。このような方法はインビトロ又はインビボ方法でありうる。一実施態様では、抗BACE1抗体は抗BACE1抗体での治療に適格な被験体を選択するために使用され、例えばBACE1が患者の選択のためのバイオマーカーである場合などである。発明の抗体を使用して診断されうる例示的な障害は、神経変性疾患、例えば非限定的に、レビー小体病、ポリオ後症候群、シャイドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、タウオパチー、、プリオン病、脳卒中、筋ジストロフィー、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アンジェルマン症候群、リドル症候群、パジェット症候群、外傷性脳損傷、球麻痺、運動ニューロン疾患、及び神経系ヘテロ変性疾患、認知症が含まれる。ある実施態様では、標識抗BACE1抗体が提供される。標識には、限定するものではないが、直接検出される標識又は分子、並びに、例えば酵素反応又は分子相互作用によって間接的に検出される酵素ないしはリガンドなどの分子が含まれる。例示的な標識には、限定するものではないが、放射性同位体である32P、14C、125I、3H、及び131I、フルオロフォア、例えば希有土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ、ルシフェリン、23ジヒドロフタルアジネジオン、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リソチーム、サッカライドオキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース6リン酸デヒドロゲナーゼ、複素環のオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、HRP、ラクトペルオキシダーゼ又はマイクロペルオキシダーゼなどの色素前駆体を酸化するために水素ペルオキシダーゼを用いる酵素とカップリングさせたもの、ビオチン/アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離基などが含まれる。F.薬学的製剤ここに記載された抗BACE1抗体の薬学的製剤は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、一又は複数の任意の薬学的に許容される担体と所望の度合いの純度を有する抗体を混合することにより調製される。薬学的に許容される担体は用いられる用量及び濃度でレシピエントに一般に非毒性であり、限定しないが、緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸;抗酸化剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン;保存料;低分子量のポリペプチド;タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン;親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン;アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン;単糖類、二糖類及び他の炭水化物、例えばグルコース、マンノース又はデキストリン;キレート剤、例えばEDTA;糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール;塩形成対イオン、例えばナトリウム;金属錯体;及び/又は非イオン性界面活性剤、例えばポリエチレングリコールを含む。ここでの例示的な薬学的に許容可能な担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばヒト可溶性PH20ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばrHuPH20BaxterInternationalIncのような間質薬剤分散剤を更に含む。rHuPH20を含むある種の例示的sHASEGPs及び使用方法は米国特許出願公開第2005/0260186号及び第2006/0104968号に記載されている。一態様では、sHASEGPは一又は複数のグリコサミノグリカナーゼ、例えばコンドロイチナーゼと組み合わせられる。例示的な凍結乾燥抗体製剤は米国特許第6267958号に記載される。水性抗体製剤は米国特許第6171586号及び国際公開第2006/044908号に記載されたものを含み、後者の製剤はヒスチジンアセテートバッファーを含む。また、ここでの製剤は治療される特定の適応症に必要な一又は複数の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものを含みうる。このような活性成分は意図される目的のために有効である量で組合わせて適切に存在する。活性成分は、例えばコアセルベーション技術あるいは界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリマイクロカプセルに、コロイド状ドラッグデリバリーシステムに、あるいはマクロエマルションに捕捉させてもよい。このような技術は、RemingtonsPharmaceuticalSciences16版OsolA編に開示されている。徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の適切な例は、抗体を含む疎水性固体ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリクスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。インビボ投与に使用される製剤は一般に無菌である。滅菌は、例えば滅菌濾過膜による濾過により、直ぐに達成されうる。G.治療方法及び組成物ここに提供される抗BACE1抗体の何れかは、治療方法において使用されうる。一態様では、医薬としての使用のための抗BACE1抗体が提供される。更なる態様では、神経疾患又は障害の治療における使用のための抗BACE1抗体が提供される。ある実施態様では、治療の方法における使用のための抗BACE1抗体が提供される。ある実施態様では、発明は、有効量の抗BACE1抗体を個体に投与することを含んでなる、神経疾患又は障害を有する個体を治療する方法における使用のための抗BACE1抗体を提供する。一このような実施態様では、方法は、有効量の少なくとも一つの更なる治療剤を個体に投与することを更に含む。更なる実施態様では、発明は、神経疾患又は障害の危険があるか又は患っている患者におけるアミロイド斑形成の低減又は阻害における使用のための抗BACE1抗体を提供する。ある実施態様では、発明は、有効量の抗BACE1抗体を個体に投与することを含んでなる、個体におけるAβ生産の低減又は阻害の方法における使用のための抗BACE1抗体を提供する。上記実施態様の何れかによる個体とは、好ましくはヒトである。ある態様では、発明の方法における使用のための抗BACE1抗体は、BACE1活性を低減又は阻害する。例えば抗BACE1抗体は、APPを切断するBACE1の能力を低減又は阻害する。更なる態様では、発明は、医薬の製造又は調製における抗BACE1抗体の使用を提供する。一実施態様では、医薬は神経疾患又は障害の治療のためである。更なる実施態様では、医薬は、有効量の医薬を神経疾患又は障害を有する個体に投与することを含んでなる、神経疾患又は障害を治療する方法における使用のためである。一このような実施態様では、方法は、有効量の少なくとも一つの更なる治療剤、例えば下記のものを個体に投与することを更に含む。更なる実施態様では、医薬はBACE1活性を阻害するためである。更なる実施態様では、医薬は、Aβ生産又は斑形成を阻害するために、有効量の医薬を個体に投与することを含んでなる、個体におけるAβ生産又は斑形成を阻害する方法における使用のためである。上記実施態様の何れかによる個体は、ヒトでありうる。更なる態様では、発明はアルツハイマー病を治療するための方法を提供する。一実施態様では、方法は、有効量の抗BACE1抗体をADを有する個体に投与することを含む。一このような実施態様では、方法は、有効量の少なくとも一つの更なる治療剤を個体に投与することを更に含む。上記実施態様の何れかによる個体は、ヒトでありうる。更なる態様では、発明は、例えば上記治療方法の何れかにおける使用のための、ここに提供される抗BACE1抗体の何れかを含んでなる薬学的製剤を提供する。一実施態様では、薬学的製剤は、ここに提供される何れかの抗BACE1抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む。他の実施態様では、薬学的製剤は、ここに提供される何れかの抗BACE1抗体及び少なくとも一つの更なる治療剤、例えば下記のものを含む。発明の抗体は、治療において単独で、又は他の薬剤との組合せにおいて使用されうる。例えば、発明の抗体は少なくとも一つの更なる治療剤と共投与されうる。上記のこのような併用療法は、組合せ投与、及び別々の投与を含包含する。発明の抗体は放射線治療と併用して使用されることもできる。本発明の抗体は、非経口、腹腔内、及び鼻腔内、及び局所治療が望まれるならば、病巣内投与を含む任意の適切な手段によって投与されうる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。投薬は、任意の適切な経路、例えば投与が短期か慢性であるかどうかに部分的に依存して、静脈内又は皮下注射のような注射によるものとできる。限定しないが、単一又は様々な時点にわたる複数回の投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む様々な投薬スケジュールがここで考えられる。発明のある実施態様は、血液脳関門を通過するための抗体又はその断片を提供する。ある神経変性疾患は、血液脳関門の透過性の増加を伴い、抗体又はその活性断片は容易に脳に導入可能である。血液脳関門がインタクトなままの場合、それを通過して分子を運ぶための幾つかの当分野で知られた方法が存在し、限定するものではないが、物理的方法、脂質ベース法、及び受容体及びチャンネルベース法を含む。血液脳関門を通過して抗体又はその断片を運ぶ物理的方法は、限定するものではないが、血液脳関門全体を回避するか又は血液脳関門に開口を作ることを含む。回避方法は、限定するものではないが、脳への直接注射を参照及び脳における送達装置移植andGliadelWafersTMGuildfordPharmaceuticalを参照を含む。関門に開口を作る方法は、限定するものではないが、超音波、浸透圧、例えばブラジキニン又は又はpermeabilizerA7による透過処理、及び抗体又はその断片をコードする遺伝子を有するベクターによる血液脳関門をまたがるニューロンの遺伝子導入を含む。血液脳関門を通過して抗体又はその断片を運ぶ脂質ベース方法は、限定するものではないが、血液脳関門の血管内皮上の受容体に結合する抗体結合断片にカップリングされるリポソームへの抗体又はその断片の封入、及び低密度リポタンパク質粒子又はアポリポタンパク質Eにおける抗体又はその断片のコーティングを含む。本発明の抗体は、良好な医療実務に合致した形で製剤化され、用量決定され、投与される。この点で考慮される要因には、治療されている特定の疾患、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療実務家に既知の他の要因が含まれる。抗体は、必要ではないが、場合によっては、問題の疾患を予防又は治療するために現在使用されている一又は複数の薬剤と共に製剤される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在する抗体の量、疾患又は治療のタイプ、及び上で検討した他の要因に依存する。これらは一般にここに記載のものと同じ用量及び投与経路で、あるいはここに記載の用量のおよそ1から99で、又は経験的/臨床的に適切であると判定される任意の用量及び任意の経路で使用される。疾患の防止又は治療について、発明の抗体の適切な投与量は、治療される疾患のタイプ、抗体のタイプ、疾患の重症度及び経過、抗体が予防又は治療目的のために投与されるか、過去の治療、患者の臨床歴及び抗体に対する応答、及び主治医の判断に依存するだろう。抗体は、一度に又は一連の治療にわたって適切に投与される。疾患のタイプ及び重症度に依存し、約1μg/kg~15mg/kgの各抗体が、例えば一又は複数の別々の投与又は連続的な注入によって、患者に投与される初回の候補投与量でありうる。一つの典型的な投与量は約1μg/kg~100mg/kg以上の範囲であり得、上記の要因に依存する。数日又はそれ以上にわたる反復投与の場合、状態に依存し、治療は一般的に疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されうる。抗体の一つの例示的投与量は、約0.05mg/kg~約10mg/kgの範囲でありうる。従って、約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg又は10mg/kgの一又は複数の投与が患者に投与されうる。このような投与は、間欠的に、例えば毎週又は毎三週に投与されうる。最初の高負荷投与量、次いで一又は複数の低投与量が投与されうる。しかしながら、他の投与レジメンが有用でありうる。この治療の進行は、一般的な技術及びアッセイによって容易にモニタされる。任意の上記製剤又は治療方法は、抗BACE1抗体の代わりに又は加えて、発明のイムノコンジュゲートを使用して実施されうることが理解される。H.製品当該発明のもう1つの局面において、前記した障害の治療、予防および/または診断で有用な材料を含有する製品が提供される。該製品は、容器および該容器上の、または該容器に付随するラベルまたは添付文書を含む。適当な容器は、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、IV溶液バッグ等を含む。該容器はガラスまたはプラスチックのような種々の材料から形成することができる。該容器は、単独の、または該疾患を治療し、予防し、および/または診断するのに有効なもう1つの組成物と組み合わされた組成物を保有し、および滅菌アクセスポートを有してもよい。該組成物中の少なくとも1つの活性な剤は当該発明の抗体である。該ラベルまたは添付文書は、該組成物が選択された疾患を治療するのに用いられることを示す。さらに、該製品は、組成物がその中に含有された第一の容器、ここに、該組成物は当該発明の抗体を含み;および組成物がその中に含有された第二の容器、ここに、該組成物はさらなる細胞傷害性またはそうでなければ治療剤を含む、を含むことができる。当該発明のこの実施態様における製品は、さらに、該組成物を用いて、特定の疾患を治療することができることを示す添付文書を含んでもよい。別法として、または加えて、該製品は、さらに、注射用の静菌性水、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液のような医薬上許容される緩衝液を含む第二の容器を含んでもよい。それは、さらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含めた、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。前記した製品のいずれも、抗BACE1抗体の代わりに、またはそれらに加えて、発明のイミュノコンジュゲートを含んでもよいと理解される。III.実施例以下は発明の方法及び組成物の実施例である。上記の一般的な説明のもと、様々な他の実施態様が実施されうることが理解される。実施例1:抗BACE1抗体の生成及び特徴付けBACE1に特異的に結合する抗体を、ヒトBACE1細胞外ドメイン、配列番号:49のアミノ酸1-457に対し2つの異なるタイプのファージディスプレイ抗体ライブラリーを有するものであり、他方は特定のアミノ酸セットに人工的に制限された特定のCDR領域に多様性を有するものをパニングすることによって生成した。A.抗BACE1抗体を同定するための自然多様性ライブラリーソーティング及びスクリーニングファージディスプレイされた抗BACE1クローンの選択ビオチン化ヒトBACE1をライブラリーソーティングの抗原として使用した。天然多様性ファージライブラリーを、交互ニュートラアビジンストレプトアビジンプレートに事前捕獲されたビオチン化BACE1に対して4ラウンドソーティングした。ソーティングの第一ラウンドでは、NUNC96ウェルMaxisorpイムノプレートをまず10μgmLニュートラアビジンでコートし、ファージブロッキングバッファーPBST及び1ウシ血清アルブミン及び005Tween20で一晩ブロッキングした。最初に、10μgmLビオチン化BACE1をイムノプレート上に30分間捕獲した。交代ファージライブラリーVH及びVHVLを、ファージブロッキングバッファーPBSTで事前にブロッキングし、その後プレートに加え、室温で一晩インキュベートした。プレートをPBTで次の日10x洗浄し、結合ファージを1mLの50mMHCl及び500mMのNaClで30分間溶出し、600μLの1MTris塩基で中和した。回収したファージを大腸菌XL1Blue細胞において増幅させた。その後の選択ラウンド中、増殖したファージライブラリーをまずPBSTBSA中において50μlのDynabeadsMyOneTMストレプトアビジンT1でプレ吸収し、室温で30分間インキュベートした。ニュートラアビジンに結合したファージ粒子を、Dynabeadsの除去によりファージストックから取り除いた。次いで非結合ファージをストレプトアビジンプレート上にディスプレイされたBACE1抗原に加え、インキュベーション時間を23時間に低減した。プレート洗浄のストリンジェンシーを徐々に増加させた。5ラウンドのパニング後、有意な濃縮が観察された。96クローンをVH及びVH/VLライブラリーソーティングからとり、それらがヒトBACE1に特異的に結合するか決定した。ユニーク配列クローンを同定するために、これらのクローンの可変領域をPCR配列決定した。バックグラウンドの少なくとも5x超でヒトBACE1に結合する42のユニークファージ抗体を選択し、インビトロ細胞アッセイにおける評価のために完全長IgGに再編成した。個々のクローンのVL及びVH領域をそれぞれLPG3及びLPG4ベクターにクローン化することによって興味のクローンをIgGに再編成し、哺乳類CHO細胞において一過性に発現させ、プロテインAカラムクロマトグラフィーを使用して精製した。抗BACE1阻害クローンの選択BACE1はアミロイド前駆タンパク質を、その膜貫通ドメインに近い、細胞の表面に近接したポイントで通常切断するアスパルチルプロテアーゼである。したがって、特定のBACE1基質に対するBACE1タンパク質分解活性を調節する上記抗体の能力を、ホモジニアス時間分解蛍光HTRFアッセイを使用してインビトロで評価した。HTRFアッセイを次のように実施した。2マイクロリットルの375nMBi27AmericanPeptideCompany、BACE1切断に対する感受性を増加するために置換を有するアミロイド前駆体タンパク質BACE1切断部位ペプチドを、384ウェルプレートにおいてBACE反応バッファーにおいて抗BACE抗体でプレインキュベートされた3μLの125nMBACE1と組み合わせた。タンパク分解性反応混合物を周囲温度で75分間インキュベートし、検出バッファー中において、2nMのストレプトアビジンD2及び150nMのユーロピウムクリプテートで標識された6E10抗アミロイドβ抗体を有する5μLのHTRF検出混合物の添加によってクエンチした。最終反応混合物を周囲温度で60分間インキュベートし、TRFRETシグナルを320nmの励起波長及び615及び665nmの放出波長でEnVisionMultilabelPlateReaderTMを使用して測定した。BACE1酵素を欠く反応及び抗BACE1抗体の欠如を有する反応をコントロールとして使用した。自然多様性ライブラリーから同定された試験された42抗体から、BACE1の最良のインヒビター、YW412.8を親和性成熟について選択した。図4を参照。抗BACE1阻害クローンの親和性成熟ライブラリーを次のようにYW4128抗体を親和性成熟するために構築した。全CDRL3位置に終止コドンを有し、M13バクテリオファージの表面上に一価のFabを提示するファージミドpW0703を、親和性成熟のための天然多様性ライブラリーから興味のクローンの重鎖可変ドメインを移植するためのライブラリー鋳型として使用した。ハード及びソフトランダム化方策の双方を親和性成熟に使用した。ハードランダム化では、選択された位置の3つの軽鎖CDRを有する一軽鎖ライブラリーを、天然ヒト抗体を模倣するために設計されたアミノ酸を使用してランダム化し、設計DNA縮重はLee等に記載される通りであった。ソフトランダム化では、CDRL3の位置9194及び96、CDRH1の2831及び3435、CDRH2の50、52、及び5358、CDRH3の9599及び100Aの残基を標的にした;CDRループの2つの異なる組合せ、L3H1H2及びL3H3をランダム化のために選択した。選択した位置におよそ50の変異率を導入するソフトランダム化条件を得るために、変異誘発DNAを、野生型ヌクレオチドを好む70101010混合物で合成した。親和性改善Fabsの選択を次のように実施した。親和性改善ファージライブラリーを第一ラウンドでプレートソーティングに、その後4又は5ラウンドの溶液ソーティング課した。第一ラウンドのプレートソーティングでは、ライブラリーを、室温で2時間、1BSA及び005Tween20中に約2ODmlのファージ投入により、ニュートラアビジンコートプレートに捕獲された10μgmlビオチン化標的に対してソーティングした。プレートソーティングの第一ラウンド後、選択のストリンジェンシーを増加するために溶液ソーティングを実施した。溶液ソーティングでは、第一ラウンドのプレートソーティングから増殖された1ODmlのファージを、1Superblock及び005Tween20を有する100μlのバッファー中において室温で30分間100nMのビオチン化標的タンパク質でインキュベートした。混合物を1Superblockで10x更に希釈し、100μlウェルをニュートラアビジンコード化ウェルに、ビオチン化標的がファージに結合するように穏やかに振とうさせながら室温で15分間適用した。ウェルを、PBS及び005Tween20で10回洗浄した。バックグラウンド結合を決定するために、ビオチン化されていない標的を伴うファージを有するコントロールウェルをニュートラアビジンコート化プレート上に捕獲した。結合ファージを01NのHClで20分間溶出し、110体積の1MTrispH11で中和し、滴定し、次ラウンドのために増殖させた。次に、選択ストリンジェンシーを増加させながら更に2ラウンドの溶液ソーティングを実施した。第一ラウンドは、100nMから5nMにビオチン化標的タンパク質濃度を低下することによるオンレート選択についてであった。第二ラウンドは、室温で弱い結合を競合オフするために過剰量の非ビオチン化標的タンパク質を加えることによるオフレート選択についてであった。また、バックグラウンドファージ結合を低下させるためにファージ投入を低下させた。コロニーを第4ラウンドスクリーニングから選択し、96ウェルプレートFalconにおいて50μg/mlカルベニシリン及び1E10/mlKO7ファージを有する150μl/ウェルの2YT培地において37°Cで一晩増殖させた。同じプレートから、XL1感染親ファージのコロニーをコントロールとして選択した。96ウェルNuncMaxisorpプレートを、4°Cで一晩又は室温で2時間、PBS中において100μl/ウェルのニュートラアビジン2μg/mlでコートした。ビオチン化標的タンパク質2μg/mlを加える前にプレートを65μlの1BSAで30分間、そして40μlの1Tween20で更に30分間ブロッキングし、室温で15分間インキュベートした。ファージ上澄みを100μlの全体積において10nMの標的タンパク質の有無によりELISAバッファーにおいて110に希釈し、単一スポット競合アッセイにおける使用のためにFプレートにおいて室温で少なくとも1時間インキュベートした。標的タンパク質の有無による75μlの混合物を、ニュートラアビジンコート化プレートに捕獲された標的タンパク質に並列して移した。プレートを15分間穏やかに振とうさせ、ニュートラアビジン捕獲標的タンパク質に非結合ファージを捕獲させた。プレートをPBS005Tween20で少なくとも5回洗浄した。結合をELISAバッファー中における西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート化抗M13抗体の添加によりクエンチし、室温で30分間インキュベートした。プレートを少なくとも5回PBS005Tween20で洗浄した。次に、100μlウェルの11比の3355テトラメチルベンジジンペルオキシダーゼ基質及びPeroxidaseSolutionBをウェルに加え、室温で5分間インキュベートした。反応を100μlの1Mリン酸を各ウェルに加えることによって停止させ、室温で5分間インキュベートさせた。各ウェルにおける黄色のODを450nmで標準のELISAプレートを使用して決定した。ODの低下を次の式によって算出したOD450nmの低下=[競合を有するウェルのOD450nm/競合無しのウェルのOD450nm]100。親ファージ100のウェルのOD450nmの低下と比較して、ヒト及びマウス双方について50未満のOD450nmの低下を有したクローンを配列分析のために選択した。ユニーククローンを、親クローンとの比較により標的に対する結合親和性ファージIC50を決定するためにファージ調製のために選択した。最も親和性改善されたクローンを、抗体生産及びBIAcoreを使用した表面プラズモン共鳴による更なる結合キネティック分析及び他のインビトロ又はインビボアッセイのためにヒトIgG1に再フォーマットした。自然多様性ファージライブラリーから選択されたYW412.8の軽鎖及び重鎖HVR領域の配列を図1A及び1Bに示す。加えて、YW412.8抗体の親和性成熟から得られた5つの抗体をまた配列決定し、軽鎖及び重鎖HVR配列をまた図1A及び1Bに示す。これらの抗体において可変性を提示した軽鎖HVR領域のコンセンサスアミノ酸配列は次の通りであった:HVRL1:ArgAlaSerGlnX1ValX2X3X4X5Ala配列番号:17上式中、はX1アスパラギン酸及びバリンから選択され、X2はセリン及びアラニンから選択され、X3はスレオニン及びアスパラギンから選択され、X4はアラニン及びセリンから選択され、そしてX5はバリン及びロイシンから選択さる;HVRL2:X6AlaSerPheLeuTyrSer配列番号:18上式中、X6はセリン及びロイシンから選択さる;及びHVRL3:GlnGlnX7X8X9X10X11X12Thr配列番号:19上式中、X7はセリン、フェニルアラニン、グリシン、アスパラギン酸及びチロシンから選択され、X8はチロシン、プロリン、セリン及びアラニンから選択され、X9はスレオニン及びアスパラギンから選択され、X10はスレオニン、チロシン、アスパラギン酸及びセリンから選択され、X11はプロリン及びロイシンから選択され、そしてX12はプロリン及びスレオニンから選択さる。重鎖超可変領域H1のみがこれらの抗体間で可変性を提示し、その領域のコンセンサス配列は次の通りであった:HVRH1:GlyPheThrPheX13GlyTyrX14IleHis配列番号:26上式中、X13はセリン及びロイシンから選択され、X14はアラニン及びグリシンから選択される。B.抗BACE1抗体を同定するための合成多様性ライブラリーソーティング及びスクリーニング相補性決定領域CDRに制限化学多様性を有するミニマル合成抗体ライブラリーを構築が構築され、FellouseFAetalJMolBiol373924940に過去に記載されるように、様々なタンパク質に対する高親和性抗体バインダーの獲得に効果的であることが示されている。YSGXライブラリーと命名される合成多様性ライブラリーを、溶液ソーティングによりBACE1に対する阻害抗体を探索するために使用した。結合のパニングを下記のように5回実施した。YSGXライブラリーと命名される一次ソーティングのライブラリーを、Fabファージディスプレイのファージミドを使用して前述のように構築した。ライブラリーの多様性は約2x1010だった。親和性成熟では、一次ソーティングに由来する選択クローンについて全3つのCDRLを固定CDRHでランダム化した。これらのタイプのオリゴヌクレオチドをランダム化のために使用した。タイプIはTyr及びSerのみをコードする縮重コドンTMCを使用する。タイプIIは等モル比でTyr、Ser、Gly及びTrpのコドンを有するカスタム三量体ホスホラミダイトミックスを使用する。タイプIIIは次のモル比:Tyr30、Ser15、Gly15、Trp10及びPhe、Leu、His、Asp、Pro、Ala、各々5において10アミノ酸残基をコードする三量体ホスホラミダイトミックスを使用する。元の鋳型のKpnI部位が変異誘発によってサイレンシングされるようにオリゴヌクレオチドに変異を導入した。長さのバリエーションはCDRL1では3~10アミノ酸、CDRL2では7アミノ酸、CDRL3では2-10アミノ酸だった。最終セットのオリゴヌクレオチドを作成するためにオリゴヌクレオチドを適切に一つにプールし、すなわち、一タイプ内に異なる長さを有する全てのL1、L2及びL3オリゴヌクレオチドを混合し、次いでそれぞれCDRL1、CDRL2及びCDRL3のオリゴヌクレオチドセットとして全3つのタイプを一つに混合する。Kunkel変異誘発を使用し、全CDRLC位置を置換した。Kunkel変異誘発後、DNAを精製し、鋳型DNAを消化するために37°Cで3時間KpnIで処理した。次いで精製DNAを、ライブラリー構築のためにエレクトロポレーションに課した。ファージディスプレイされた抗BACE1クローンの選択ビオチン化ヒトBACE1配列番号:49の1-457をライブラリーソーティングの抗原として使用した。パニングの第一ラウンドでは、20μgのビオチン化BACE1を4°Cで1.5時間1x1013pfu/mlの濃度で1mLのライブラリーでインキュベートした。標的に結合したファージを、ブロッキングバッファーPBS,0.5w/vウシ血清アルブミンで事前にブロックした200μlのDynabeads登録商標MyOneストレプトアビジンで15分間捕獲した。結合したファージを0.1MのHClで溶出し、すぐに1MのTris塩基で中和した。溶出ファージを前述のように標準プロトコルに従って増幅した。第二ラウンドを第一ラウンドと同じように実施し、10μgのビオチン化BACE1を使用し400μlの増幅ファージでインキュベートした。その後の全てのラウンドでは、2μgのビオチン化BACE1を400μlの増幅ファージでインキュベートした。ビオチン化BACE1に結合したファージを、ニュートラアビジン又はストレプトアビジンラウンド間で交互で事前にコートされブロッキングバッファーでブロックされたMaxisorpイムノプレートNUNCを使用して15分間捕獲した。5ラウンドの選択後、ファージを96ウェルフォーマットにおいて増殖された個々のクローンから生産し、ファージスポットELISAにおける使用のために培養上澄みをリン酸緩衝食塩水PBS,0.5w/vウシ血清アルブミンBSA01Tween20に3倍に希釈した。希釈ファージ上澄みを、ニュートラアビジンコート化384ウェルMaxisorpイムノプレートNUNC上に固定化されたビオチン化BACE1で1時間インキュベートした。プレートをPBS,0.05v/vTween20PTバッファーで6回洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ/抗M13抗体コンジュゲートPBTバッファー中に1:5000希釈で30分間インキュベートした。プレートをPTバッファーで6回及びPBSで2回洗浄し、33’55’テトラメチルベンジジン/H2O2ペルオキシダーゼ基質で15分間処理し、1.0MのH3PO4でクエンチし、吸光度を分光光度法で450nmで読んだ。抗BACE1阻害クローンの選択YSGXライブラリーのパニングは、BACE1に結合する18のユニーククローンの同定をもたらした。図3を参照。これらのクローンに対応するFabタンパク質を次のように精製した。終止コドンを、Fabをコードするファージミドの重鎖及び遺伝子3間に導入した。得られたファージミドを大腸菌株34B8に形質転換した。単一コロニーを、50μg/mlのカルベニシリンで補充された30mLのLB培地において37°Cで一晩増殖させた。一晩した培養物5mLをカルベニシリン50μg/mlで補充された500mLの完全C.R.A.P.培地に播種し、24時間30°Cで増殖させた。Fabタンパク質を、標準的な方法によりプロテインAアガロースビーズを使用して精製した。精製Fabを上記のようにHTRF酵素活性アッセイを使用してBACE1に対する阻害活性ついてスクリーニングした。Fab2、5、8、12、14及び19をBACE1のインヒビターとして同定し、Fab23をアクチベーターとして同定した。図5を参照。Fab2、5、8、12、14及び19を、それらの結合エピトープを決定するために更に特徴付けた。全6抗体の精製Fabのパネルを使用して、下記のようにファージ競合ELISAにおいてプレート捕獲BACE1に結合された個々のFabディスプレイファージと競合させた。選択クローンの単一コロニーを選択し、50μg/mlのカルベニシリン、10μg/mlのテトラサイクリン及びM13KO7で補充された1ml2YTブロスにおいて37°Cで2時間増殖させた。カナマイシン25μg/mlを培養物に加え、6時間増殖を続けた。培養物を50μg/mlのカルベニシリン及び25μg/mlのカナマイシンで補充された30mlの2YTブロスに移し、37°Cで一晩増殖させた。ファージを収集し、前述のように精製した。精製されたFabディスプレイファージをPBTバッファーにおいて段階希釈し、プレート上に固定されたBACE1に対する結合について試験した。80の飽和シグナルをもたらす一定ファージ濃度を、その後の競合ELISAのために選択した。競合を、一定亜飽和Fabディスプレイファージを段階希釈のBACE1と1時間インキュベートすることによって実施し、次いで非結合ファージを捕獲するために15分間BACE1固定化プレートに移した。次いでプレートを8回洗浄し、結合ファージを抗M13HRPで検出した。精製Fab5は、ファージディスプレイFab8及び12に対してBACE1の結合で競合したが、Fab2、14及び19とは競合しなかった。このデータと一致して、精製Fab8はファージディスプレイFab5及び12と競合した。まとめると、これらのデータはFab5、8及び12がBACE1上の同じ又は重複エピトープに結合することを示す。Fab14及び19も、これらの精製FabのどちらかがFab14及び19ディスプレイファージのどちらかと競合するという事実に基づき、互いに競合であった。これは、これらの2つの抗体が、Fab5、8及び12のものとは異なる同じ又は重複エピトープに結合することを示唆した。ファージELISAアッセイでは、Fab2ディスプレイファージはFab2自身を含む精製Fabタンパク質の何れかと競合せず、Fab2及びBACE1間の結合が非特異的であることを示す。従って、Fab2を親和性成熟について候補として除外した。抗BACE1阻害クローンの親和性成熟最初のパニングプロセスによって得られた親阻害抗体の結合親和性を改善するために、Fab5、8、12、14及び19の全3つのCDRLCをランダム化して新しいファージライブラリーを設計した。これらの5つの抗体をそれらの異なるエピトープに基づいて2つのサブグループに分けた-Fab5、8及び12をグループ1、Fab14及び19をグループ2とした。個々のクローンの一本鎖DNAssDNAをライブラリー構築の鋳型として精製した。グループ1のssDNA鋳型を親和性成熟ライブラリー1LClib1として設計のために一つにプールし、グループ2をライブラリー2LClib2のためにプールした。化学多様性を、分子認識について天然アミノ酸の機能的能力に基づいてランダム化CDR内に制限した。BirtalanS等MolBiosyst611861194を参照。ミニマル多様性、セミミニマル多様性Tyr,Ser,Gly及びTrp三元コドン及び10アミノ酸を含む更なる多様性を、高親和性を得るために混合した。2つの親和性成熟ライブラリー、LClib1及びLClib2を同セットのオリゴヌクレオチドを使用して構築し、上記のように全3つのCDRLCを同時にランダム化した。親和性成熟では、全3つのCDRLC相補性決定領域軽鎖を、一次ソーティング由来の選択クローンについて固定CDRHC相補性決定領域重鎖とランダム化した。最初に得られた抗体の親和性成熟のためのライブラリーのスクリーニングを上記と同様に実施した。ライブラリーを3ラウンド溶液中においてビオチン化BACE1でソーティングし、これは結合において100倍超の濃縮をもたらした。ラウンド1では、2μgのビオチンBACE1をファージディスプレイFabライブラリーでインキュベートした。ラウンド2及び3では、20nM及び5nMのビオチン化BACE1を増幅ファージでそれぞれインキュベートした。2つのライブラリーの各々からのクローン96をワンポイント競合ELISAにおいてスクリーニングし、下記のように、プレート固定BACE1への結合からファージ粒子と競合するように20nMのBACE1を溶液中において使用した。BACE1で固定化されたプレートを、事前に2μg/mlのニュートラアビジンを4°Cで一晩コーティングし、ブロッキングバッファーでブロックした384ウェルaxisorpImmunoplateを使用して15分間2μg/mlのビオチン化BACE1を捕獲することによって調製した。96ウェルフォーマットにおいて増殖された個々のクローンからの培養上澄みをPBTバッファーにおいて20倍に希釈し、室温で1時間20nMのBACE1の有無によりインキュベートした。Th混合物を固定化BACE1を有するプレートに移し、15分間インキュベートした。プレートをPTバッファーで6回洗浄し、結合ファージを上記のように抗M13HRPで検出した。溶液中におけるBACE1の不在及び存在におけるウェルからのELISAシグナル間の比率はクローンの親和性を示し、高比率は高親和性を示す。LClib1からの5クローンは、BACE1存在におけるウェルからのELISAシグナルに対するBACE1不在におけるウェルからのELISAシグナル間に>4の比率を有し、LClib2からの1クローンは>3の比率であった。LC4及び11と命名する2クローンをFab5から得て;Fab12から3クローンLC6、LC9及びLC10、及びFab14からLC40を得た図6。これらの6クローンの親和性を推定するために、上記のようにファージ競合ELISAを実施し、IC50値を決定した図7。IC50値を、Kaleidagraphを使用してMarquardtによるfourparameterlogisticequationにデータをフィッティングすることによって決定し、下の表2に示す。全LCクローンは確かに、それらのそれぞれの親と比較して改善した親和性を示した。注目すべきは、CDRL2への2つのTrp残基の導入は、親の100倍超、Fab12誘導体の親和性を改善した。6クローンのFabタンパク質を精製し、上記のようにHTRF酵素活性アッセイに課した。BACE1のペプチド阻害剤であるOM992catalog496000をコントロールとして使用した。親としてFab5を有する抗体では、FabLC4が有意な改善された阻害を示し、LC11は阻害活性を失った。Fab14由来のLC40もその阻害活性を失った。Fab12の親和性改善誘導体、FabLC6、LC9及びLC10は一般に、それらの阻害活性においておよそ20倍の改善を示した。このアッセイに基づくと、FabLC6が最良の阻害剤であり、酵素活性のほぼ100の阻害を示し、他のFabは部分阻害剤であり、およそ60-70の阻害範囲を有した。試験された様々なFabのIC50値を下の表3に示す。IC50OM992はこのアッセイにおいて11nMだった。Fab12の軽及び重鎖HVR領域の配列を図2及び2に示す。Fab12の親和性成熟によって生産される3つの抗体の軽及び重鎖HVR配列をまた、図2及び2に示す。軽鎖HVRL2のみがこれらの抗体において可変性を示した:HVRL2:X15AlaSerX16LeuTyrSer。3つの重鎖HVR領域の各々は4つの抗体において同一であった。Fabを次のように他の適用における使用のためにIgG抗体としてクローン化した。293T細胞又はチャイニーズハムスター卵巣細胞における一過性IgG発現のために、選択されたFabの軽鎖及び重鎖の可変ドメインをヒト軽鎖又は重鎖定常ドメインと共にRK5ベースプラスミドにクローン化した。IgGタンパク質を、標準的な方法によりプロテインAアガロースビーズを使用して精製した。実施例2:抗BACE1抗体の更なる特徴付け上記のように、抗体をBACE1への機能及びエピトープ結合について同定した。親及び親和性成熟抗体を、下記のアッセイを使用して更に特徴付けた。A結合キネティクスYW412831の結合キネティクスを評価した。簡潔には、抗BACE1IgGの結合親和性を、BIAcoreTM3000instrumentを使用して表面プラズモン共鳴によって測定した。YW412831抗BACE1ヒトIgGをCM5バイオセンサーチップ上にコートされたマウス抗ヒトFc抗体によって捕獲し、およそ100反応単位を得た。キネティクス測定のために、2倍の段階希釈のヒトBACE1ECD又はマウスBACE1ECDを25°C、30μl分の流量でPBTバッファーに注入した。会合速度及び解離速度を、単純一対一ラングミュア結合モデルを使用して算出した。平衡解離定数を比koffkonとして算出した。pH70でのYW412831結合の結果を表4に示す。BACE1へのYW412.8.31の結合をpH7.0及び5.0双方で確認した。これは重要であり、BACE1は酸性pHで、おそらく細胞内小胞及び/又はトランスゴルジネットワークにおいて最適に活性である。B.インビトロ阻害アッセイ加えて、特定のBACE基質に対するBACE1タンパク質分解活性を調節する抗体の能力を、BACE1のヒト組換え細胞外ドメインを用い2つの活性アッセイ:HTRFアッセイ及びマイクロ流体キャピラリー電気泳動アッセイを使用してインビトロで評価した。親和性成熟YW412831抗BACE1抗体を実施例1に記載のようにHTRFアッセイにおいて試験した。BACE1の合成ペプチド阻害剤、OM992Catalog496000BACE1の小分子阻害剤Catalog5657688及びBACE1に結合しないIgG抗体をコントロールとして使用した。図9を参照。加えて、短FRETペプチドInvitrogenを使用した反応をまた、HTRF反応と同様に実施した。コントロール反応からの得られた蛍光性産物を、545nmの励起波長及び585nmの放出波長以外は上記の通りに測定した。得られたデータをGraphPadPrism5TMを使用して分析した。図9を参照。MCEアッセイ反応を、384ウェルマイクロプレートにおいて20μL/ウェルの最終体積において実施した。標準的な酵素反応を、12nMのヒトBACE1細胞外ドメイン、1mMのアミロイド前駆体タンパク質βセクレターゼ活性部位ペプチド、50mMのNaOAcpH44及び01CHAPSを含む5mLの4x化合物及び5μLの4x酵素に、10μLの2X基質を加えることによって開始した。同じ反応条件をヒトBACE2酵素の細胞外ドメイン及びカテプシンDの細胞外ドメインに使用した。周囲温度で60分間のインキュベーションの後、各反応における産物及び基質をLC3000において分析される12sippermicrofluidicchipを使用して分離した。産物及び基質の分離を、製造者の最適化ソフトウェアを使用して電圧及び圧力を選択することによって最適化した。分離バッファーは、100mMHEPESpH72、0015Brij35、01コーティング試薬3、10mMEDTA及び5DMSOを含んだ。分離条件は、500Vの下流電位、2250Vの上流電位及び12psiのスクリーニング圧力を使用した。産物及び基質蛍光を、488nmの波長で励起させ、530nmの波長で検出した。基質変換をHTSWellAnalyzerソフトウェアを使用して電気泳動図から算出した。YW412.8.31抗体を使用したHTRF及びMCEアッセイからの結果を図9に示す。長ペプチドアッセイにおける抗体の観察されたIC50は1.7nMであり、最大阻害は77に達した。加えて、YW412.8.31抗体は短ペプチドアッセイにおいて17nMのをIC50を有した。更に、YW412.8.31抗BACE1抗体は、マイクロ流体キャピラリー電気泳動アッセイにおいて80pMのIC50でBACE1活性を阻害し、ヒトBACE2又はカテプシンD、リソソームアスパルチルプロテアーゼを阻害しなかった。YW412.8.31抗体のSPR分析はまた、BACE1に最も高く関連するプロテアーゼであるBACE2に抗体が結合しないことを確認した。合わせてこれらのデータは、YW412.8.31抗体が強力で選択的なBACE1アンタゴニストであることを示す。この抗体の更なる特徴付けを、その機能をより理解するために実施した。C.細胞ベース阻害アッセイAPPプロセシングへの抗BACE1抗体の観察されたインビトロ阻害作用がまた細胞状況において存在するか決定するために、インビボ研究を実施した。野生型ヒトアミロイド前駆体タンパク質を安定して発現する293HEK細胞におけるAβ1-40生産を阻害する抗体の能力を以下のように評価した。293APPWT細胞を96ウェルプレートにおいて3x104細胞/ウェルの密度で一晩播種した。抗BACE1抗体又はコントロールIgG1抗体を有する50μlの新鮮な培地を、37oCで24時間細胞と共にインキュベートした。三環系小分子BACE1インヒビターをまたコントロールとして使用した。細胞培地を回収し、製造者の指示に従ってAβ140HTRFアッセイを使用してAβ140の存在についてアッセイした。Aβ140値を細胞生存率について正規化し、CellTiterGloLuminescentCellViabilityAssayを使用して決定した。実験を少なくとも3回実施し、各実験における各ポイントを二つ組において反復した。データをfourparameternonlinearregressioncurvefittingprogramを使用してプロットした。同様な研究をまた、マウスから単離された後根神経節、皮質ニューロン及び海馬ニューロンにおいて実施した。簡潔には、解離ニューロン培養物をE13.5後根神経節、E16.5皮質ニューロン及びE16.5海馬ニューロンから調製した。ニューロンをインビトロにおいて5日間増殖させた。YW412.8.31抗BACE抗体又はコントロールIgG1を有する新鮮な培地を24時間ニューロンと共にインキュベートした。培地を回収し、製造者の指示に従ってMSD齧歯類/ヒトAβ40Ultrasensitiveキットを使用してAβ40の存在についてアッセイした。Aβ40値を細胞生存率について正規化し、CellTiterGloLuminescentCellViabilityAssayを使用して決定した。実験を少なくとも3回実施し、各実験における各ポイントを二つ組において反復した。データをfourparameternonlinearregressioncurvefittingprogramを使用してプロットした。試験した全抗BACE1抗体は、非BACE1IgG抗体阻害剤と比較してAPPを発現する293の細胞においてAβ1-40生産を阻害した。図10を参照。図11に示すように、YW412.8.31抗BACE1抗体はAPPを発現する293の細胞においてBACE1SMIコントロールと類似な程度までAβ1-40生産を阻害し、17nMのIC50及び~90の最大低減だった。類似な結果がDRGニューロンにおいて得られ、最も高い濃度のYW412.8.31でAβ40生産において約50の低減となり、8.4nMのIC50だった。YW412.8.31抗BACE1抗体はまた、2.3-2.6nMのIC50で皮質及び海馬ニューロンにおけるAβ40生産を阻害した。これらの発見は抗BACE1抗体がインビトロにおいて前に観察されたように細胞に同様に機能したことを示す。更に、YW412.8.31抗体はCNSのニューロンにおいて最良の効力を示すと思われる。D.抗BACE1抗体の細胞内内部移行BACE1は細胞内、特にゴルジにおいて発現されることが知られている。YW412.8.31が細胞内環境においてBACE1と相互作用するか否か確かめるために、内部移行研究を実施した。BACE1/又はBACE1-/-マウスから、一セットのニューロン培養物をE13.5後根神経節外植片から調製し、第二セットのニューロン培養物をE16.5解離皮質ニューロンから調製し、37°Cで24又は72時間それぞれ培養した。0.5μMのYW412.8.31抗BACE1抗体を有する培地を30分~2時間の様々な期間で培養物に加え、4°C又は37°Cの何れかでインキュベートした。処理後、非結合抗体をPBSで十分に洗浄した。培養物を4パラホルムアルデヒドで20分間室温で固定し、選択したサンプルをまた0.1TritonX100で透過処理した。結合した抗体を、製造者の指示に従って二次Alexa568コンジュゲート化抗ヒトIgG1抗体を使用して検出した。大部分の抗体シグナルが、高温サンプルにおいて内部移行されたことが分かった。図12に見られるように、二次抗体によるYW412.8.31抗BACE1抗体の検出を可能にするために細胞が透過処理されたとき、BACE1は37oCでDRG軸索において細胞内に検出できた。逆に、DRGが内部移行を防ぐために4oCで冷却インキュベーションされる場合、又は細胞がYW412.8.31の細胞内検出を可能にするために透過処理されない場合、細胞表面では微少のBACE1が検出される。ニューロンへの抗体の内部移行はBACE1結合に依存し、なぜならそれがBACE1/動物からの皮質ニューロンにおいてのみ検出可能であり、BACE1-/-動物からのニューロンでは検出されたなかったからであるの中央及び右パネルを比較。加えて、マウス皮質ニューロンを10分間又は3時間YW412.8.31抗BACE1抗体又はコントロールIgGの存在下において培養し、その後抗体を免疫染色によって検出した。ニューロン培養物をE15.5解離皮質ニューロンから調製し、14DIV培養した。1μMのYW412.8.31を有する培地を10分間~3時間培養物に加え、37°Cでインキュベートした。処理後、非結合抗体をHBSSで十分に洗浄した。培養物を室温で10分間2パラホルムアルデヒドで固定し、次いで0.1TritonX100で透過処理をするか又はしなかった。結合抗体をAlexa568コンジュゲート抗ヒトIgG1二次抗体を使用して検出した。YW412.8.31局在を、どのくらい細胞の表面に結合したか見るために非透過処理細胞において、並びにどのくらい抗体が内部移行したか見るために透過処理細胞において分析した。検出された抗体シグナルの大部分が細胞内に局在し、少量の抗体染色が細胞表面に観察された。内部移行はYW412.8.31処理のわずか10分後に明らかであり、抗体が初期エンドソームによって活発に取り込まれることを示唆する。ほとんどのYW412.8.31シグナルが点状であり、それが小胞内に含まれたであろうことを示す。YW412.8.31が局在化された細胞内区画をより良く同定するために、我々は異なる小胞区画のマーカーで共染色した:初期エンドソーム、トランスゴルジネットワーク、及びリソソーム。細胞を抗TfR、抗VAMP4又は抗LAMP1で共染色した。YW412.8.31免疫反応性は初期エンドソーム及びTGNのマーカーと共局在したが、リソソームとは異なった。このパターンはBACE1が活性である区画に局在する抗体と一致する。実施例3:抗BACE1抗体結合部位の特徴づけヒトBACE1に対する特定の抗BACE1抗体の結合部位を同定するために更なる研究を実施した。一セットの実験では、どの抗体が競合結合を示すか決定するために、BACE1への抗体の結合を既知の活性部位又はエキソサイトBACE1結合ペプチドの有無において評価した。第二セットの実験では、三次元結合部位を決定するために、抗BACE1FabをヒトBACE1細胞外ドメインと共結晶化させた。A.競合結合発明の抗BACE1抗体のBACE1上の結合部位を決定する間接的方法として、競合ELISAを実施した。簡潔には、抗体YW412.8IgGを4°Cで一晩NUNC96ウェルMaxisorpイムノプレートにコートし、ブロッキングバッファーPBSTで1時間室温でブロックした。抗BACE1抗体YW412.8又はhBACE1結合ペプチドの段階希釈を所定量のビオチン化hBACE1でインキュベートし、室温で60分間インキュベートした。次いで段階希釈をYW412.8コート化プレートに加え、室温で30分間インキュベートした。その後、プレートを洗浄バッファーで洗浄し、室温で30分間、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識されたストレプトアビジンを加えて処理した。次いでプレートを洗浄し、テトラメチルベンジジン基質で処理した。捕獲ビオチン化hBACE1に結合したHRPコンジュゲートストレプトアビジンを、標準的な技術を使用して630nmの波長で測定した。上記競合ELISAアッセイに使用されるビオチン化標的タンパク質の最適濃度を決定するために、NUNC96ウェルMaxisorpイムノプレートをコートし、上記のようにブロックした。ビオチン化標的の段階希釈を、抗体コートプレートで30分間室温でインキュベートした。次いでプレートをPBSTで洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートストレプトアビジンで30分間室温でインキュベートした。結合シグナルの検出は上記の通りであった。データをfourparameternonlinearregressioncurvefittingprogramを使用してプロットした。ビオチン化hBACE1の亜飽和濃度をカーブフィッティングから決定し、上記の競合ELISAに適用した。予測した通り、YW412.8は、hBACE1への結合について自身と競合した。YW412.8及び活性部位阻害ペプチドOM992catalog496000間で競合は観察されたなかった。LC6及びYW412.8抗BACE1抗体及び既知のエキソサイト結合ペプチドBMS1間で競合が観察された。まとめると、これらの結果はYW412.8がAPP切断のためのBACE1活性部位と異なるBACE1エキソサイトに結合することを示唆する。図13における曲線の形は、YW412.8、LC6及びBMS1がBACE1において重複する結合部位を有しうることを示唆する。B.血漿構造BACE1とのYW412.8抗体の相互作用をより良く理解するために、YW412.8.31Fabをヒト組換えBACE1細胞外ドメインの細胞外ドメインと共結晶化した。タンパク質発現及び精製C末端His6タグを伴うBACE1DNAのタンパク質発現及び精製をBlueHeronで合成し、pET29aベクターにクローン化し、BL21細胞に形質転換した。発現を、1mMのイソプロピルβD1チオガラクトピラノシド導入により37oCで4時間実施した。細胞をマイクロフルダイザーで溶解し、封入体を単離し、TEバッファーで2回洗浄した。12000rpmで30分間の遠心分離の前に、タンパク質可溶化を75M尿素、100mMAMPSOpH108及び100mMβメルカプトエタノールを使用して室温で2時間実施した。次いで上澄みを75M尿素、100mMAMPSOpH108で希釈し、約1520のOD280を得た。タンパク質リフォールディングを、まず冷却水において可溶化BACE1を120に希釈し、次いでリフォールディングを生じさせるために4oCで3週間サンプルを穏やかに撹拌することによって実施した。リフォールディングしたBACE1の精製は3つのカラムクロマトグラフィー工程を含んだ。まず、BACE1を20mMTrispH80及び04M尿素でプレ平衡化された50mlQsepharoseFastFlowカラムにロードし、005MNaClの塩勾配で溶出した。ピーク画分をプールし、20mMTrispH80バッファーで5倍に希釈し、SourceTM15Qカラムにロードした。BACE1を溶出するために003MNaClの勾配を使用した。BACE1タンパク質を有する画分をプールし、濃縮し、そして25mMHepespH75、150mMNaClにおいてSuperdexTMS75カラムにおいて更に精製した。YW412831Fabを大腸菌において発現させ、細胞ペーストをPBS、25mMEDTA及び1mMPMSFにおいて解凍した。混合物をホモジナイズし、マイクロフルダイザーを2回通過させ、12000rpmで60分間遠心分離した。次いで上澄みをプロテインGカラムに5ml分でロードした。カラムをベースラインまでPBSで洗浄し、タンパク質を058酢酸で溶出した。YW412831Fabを有する画分をプールし、20mMMESpH55で平衡化したSPセファロースカラムにロードし、Fabを0~025MNaClの塩勾配で溶出した。Fabを25mMHepespH75及び150mMNaClにおいてSuperdexTMS75カラムにおいて更に精製した。結晶化精製BACE1タンパク質を115モル比で精製YW412831Fabと混合した。複合体を氷上で1時間インキュベートし、S2002660gelfiltrationcolumnにおいて精製し、過剰Fabからそれを分離した。次いで複合体を15mgmlに濃縮した。結晶化を、20PEG4000、01MのTrispH85及び02Mの酢酸ナトリウムを有する1μlのウェル溶液と混合した1μlのBACE1Fab複合体を用いてsittingdropvapordiffusion法によって実施した。次いで結晶化ドロップを19°Cでインキュベートした。結晶は4日後出現し、更に2日間成長した。次いで結晶を収集し、母液及び20グリセロールを有する凍結保護溶液において急速冷凍させた。データ収集及び構造決定回折データをStanfordSynchrotronRadiationFacilitybeamline71で単色X線ビームを使用して収集した。X線検出装置は、結晶から430mm離して置かれたADSCquantum315CCD検出器だった。完全なデータセットの収集のために回転法を単一結晶に適用し、05°オシレーションフレーム及び180°のトータルウェッジサイズを用いた。次いでデータをインデックス化し、統合し、プログラムHKL2000を使用してスケーリングした。構造をプログラムPhaserを用い分子置換法を使用して解析した。Matthews’coefficientの算出結果は、各非対称ユニットが1つのBACE1Fab及び48溶媒から成ることを示した。従って、MR算出は、FabのN及びCドメイン、及びBACE1細胞外ドメインを含む3サブユニットの一セットを検索することに向けられた。N及びC末端Fabドメインは、柔軟なエルボー角度を可能にするために別個に検索したFabサブユニットの検索モデルは、HGFAFab複合体の結晶構造から得た。BACE1の検索モデルは、公開BACE1構造PDBコード1FKNからである。有意なコンホメーション変化は、BACE1Fab界面で生じる。手動再構築をプログラムCOOTを用いて実施した。構造精密化を、最尤標的機能を使用して、プログラムREFMAC5及びPHENIXを用いて反復的に実施し、0221の最終R因子及び0274のRfreeを得た。構造精密化統計を表5に示す。1Rsym=S|Ihi-Ih|/SIhi、ここでIhiは反射hのi番目の対象関連観察のスケール強度であり、Ihは平均値である。2括弧内の値はである最外郭分解能のものである。3Rcryst=Sh|Foh-Fch|/ShFoh、ここでFoh及びFchは反射hの観察及び算出構造因子振幅である。4Rfreeの値は精密化に含まれていない5のランダムに選択した反射についての算出である。結晶回折及び構造を2.8Å分解能で精密化した。複合体におけるBACE1の全体構造は、その遊離形態に非常に類似し、残基の96のCα原子位置で0.63ÅRMSDでアラインできる。YW412.8.31FabはBACE1分子表面の~840Å2の表面積をカバーし、活性部位の近傍において結合しない。エピトープはループC、D、及びFとしてHong等に示される構造要素を含み、これらは三次元空間において近位に位置する。更に、YW412.8.31結合部位の及び近傍におけるBACE1の部分はコンホメーション変化を採用し、強結合と一致する0.71の形態相補スコアを生じる。コンホメーション変化を誘発された抗体は、セクレターゼ活性のアロステリック阻害に寄与すると考えられる。Fabはアミロイド前駆体タンパク質のBACE1の活性部位に遠位なエキソサイトに結合し、BACE1結合ペプチドのパパネルの結合部位として過去に同定されたエキソサイトと部分的に重複する。重及び軽鎖双方が相互作用に関与した。BACE1エピトープ領域が高温度因子に示されるようにより動的である遊離形態と異なり、抗体結合構造はユニークコンホメーションにおいて安定し、セクレターゼのP6及びP7部位を変形させる。これらの部位に隣接して、基質結合複合体においてαヘリックス構造を採用する配列番号:49のアミノ酸218-231の残基157170は、抗体複合体においてランダムループとなり、これはおそらく触媒能においてAPPがBACE1触媒クレフトと反応するのを防ぐことによりAPPタンパク分解性切断に悪影響を及ぼす。構造エピトープは、結晶構造においてYW412.8.31Fabの何れかの部分から4Åの距離内に位置する一又は複数の原子を有するBACE1のアミノ酸残基を含む。下の表6において、Fab軽鎖残基は鎖Lに属し、Fab重鎖残基は鎖Hに属する。BACE1アミノ酸の残基番号付けは、BACE1の完全長配列に基づく。Fabアミノ酸の残基番号付けはKabat番号付けスキームに基づく。詳細な原子相互作用は、極性相互作用のファンデルワールス接触の形態である。極性相互作用は水素結合及び塩橋を含む。下の表7はBACE1及びYW412.8.31Fab間の対極性相互作用のリストを含む。Fab軽鎖残基は鎖Lに属し、Fab重鎖残基は鎖Hに属する。BACE1アミノ酸の残基番号付けは、BACE1の完全長配列に基づく。Fabアミノ酸の残基番号付けはKabat番号付けスキームに基づく。下に示すように、YW412.8.31抗体BACE1エピトープにおけるアミノ酸組成は、BACE2及びカテプシンDにおける対応する領域間であまり保存されていない。YW412.8.31抗体のエピトープにおけるこのアミノ酸差異は、抗体がBACE1に対して高く選択的であるという観察と一致する。番号付けはBACE1の完全長配列に基づく。BACE2及びカテプシンDの配列は、それらのそれぞれの結晶構造に基づいてBACE1にアラインされる。YW412.8.31BACE1エピトープにおける残基をボックスで囲む。実施例4:インビボ特徴づけマウスインビボでのYW412.8.31の効果を評価した。BACE1特異性阻害剤が達成できる最大Ab1-40低減を得るために、BACE1/コントロールと比較したBACE1-/-マウスの血漿及び前脳におけるAb1-40生産に対するBACE1の寄与を調査した。BACE1-/-マウスにおいて血漿Ab1-40シグナルは45低減し、脳Ab1-40シグナルは80低減した。これらの結果は、BACE1が確かに前脳において主要なbセクレターゼであるが、周辺においてはBACE1は部分的なAb1-40生産のみを占め、残りは他のbセクレターゼから生じるこをを示す。Aβ生産へのBACE1の寄与の理解により、hAPPトランスジェニックマウス及び野生型マウスにおけるアミロイド形成プロセシングを調節する抗BACE1抗体YW412.8.31の能力を評価した。hAPPトランスジェニックマウス簡潔には、5ヶ月のヒトAPP発現マウスを、毎4日、計3投与すなわち1、5、及び9日目の腹腔内注入によって30mg/kg又は100mg/kgYW412.8.31抗体又はビヒクルで処理した。動物を最終投与後2時間で安楽死させた。血清、血漿、及び脳を収集し加工した。血漿、皮質及び海馬を、製造者の指示に従ってアミロイドベータAβELISA試験キットを使用して可溶性Aβ1-40及びAβ1-42のレベルについて分析した。薬物動態分析を血清及び脳ホモジネートにおいて実施した。結果は血漿Aβ1-40及びAβ1-42レベルが、30mg/kg及び100mg/kgのYW412.8.31抗体投与レベル双方でコントロールレベルのおよそ30に低減されたことを示した、上パネル及び図18、パネルA。しかしながら、下で検討される野生型マウスにおいて観察されたものと対照的に、脳におけるAβ1-40及びAβ1-42のレベルは100mg/kg投与量レベルのYW412.8.31抗体では15-22のみ低減された、下パネル及び図18、パネルA。試験された動物の脳におけるYW412.8.31抗体の濃度は用量依存的に増加し、30mg/kgで処置された動物の脳における抗体の観察された濃度は4.8±3.6nMであり、100mg/kgで処置された動物の脳における抗体の観察された濃度は14.0±9.3nMであり、抗体のより高い腹腔内投与用量は確かに、脳におけるより高用量の観察抗体に変換されたことを確認する。個々の薬物動態学対薬力学の結果のプロットは、このモデルにおけるこの抗体についてPK/PD関係が存在することを示唆する。類似な実験をまた実施し、YW412831抗BACE1抗体を持続ICV注入によってhAPPトランスジェニックマウス脳に全身性又は直接的に送達させた。ICV送達では、一側性移植されたAlzetosmoticminipumpによって7日間持続的に抗体を送達させた。送達されたYW412831抗体の量は0041mg日又は041mg日だった;033mg日のコントロールIgGをコントロールグループに送達させた。安楽死では、血漿、皮質、及び海馬を収集し、製造者の指示に従いELISAによって可溶性Aβ140及びAβ142のレベルについて分析した。下の表8は全身性送達によって30mg/kg又は100mg/kg、又はICV送達によって0.041mg/日及び0.41mg/日投与されたマウスの脳におけるYW412.8.31抗体の濃度を示す。しかしながら、注入後の脳における高レベルの抗体にも関わらず、Aβの低下は15-23と中程度であり、全身性送達で観察された低下と類似であった。この観察は、高用量の全身性注入はhAPPトランスジェニックマウスにおいてAβレベルを低下可能でありうるが、しかしながら減少は中程度であることを示唆する。hAPPトランスジェニックマウスにおける低減された効果は動物モデルの結果であると信じられ、なぜなら、全身性送達後の血清における濃度と等しい脳における高濃度は、Ab生産を更に低下させなかったからである。更に、hAPPトランスジェニックマウスの脳における低減は、野生型マウスに観察され下に記載されるものと比較して小さい。このようにトランスジェニックhAPPマウスは、インビボで抗BACE1効果を研究するには理想的ではないかもしれない。野生型マウスは疾患の観点からも抗体についてより適切なモデルであり、なぜなら圧倒的多数のアルツハイマーの患者人口は野生型APP対立遺伝子を保有するからである。野生型マウスアミロイド形成プロセシングを調節する抗BACE1抗体YW412.8.31の能力をまた、野生型マウスにおいて評価した。簡潔には、実験を上記のように実施した。単一用量のコントロールIgG抗体又はYW412.8.31抗BACE1抗体を野生型マウスに静脈内注入によって全身性に送達させた。24又は48時間後、血漿及び脳サンプルを収集し、Aβ1-40レベルを分析した。血漿及び脳における全マウスAβ1-40の濃度を、全抗BACE1抗体濃度を測定する下記の類似な手順に従って、サンドイッチELISAを使用して決定した。簡潔には、Aβ1-40のC末端に特異的なウサギモノクローナル抗体をプレート上にコートし、ビオチン化抗マウスAβモノクローナル抗体M32を検出に使用した。アッセイは血漿において1.96pg/ml、脳において39.1pg/gの定量下限を有した。図16、パネルBに示すように、血漿Aβ1-40は35低減され、皮質Aβ1-40は20低減された。野生型C57Bl6Jマウスによる更なる実験を実施し、100mgkgのYW412831又はコントロールIgGを全身性に投与した。単一腹腔内注入の4時間後の処置動物の血漿及び前脳双方におけるAb140のレベルを決定した。血漿を単離するために、血液を心穿刺によって動物から集めた。PBS灌流後、脳を収集し、一方の半脳からの前脳をPKバッファーにおいて調製し、他方の半脳からの前脳を5MのGuHCL50mMのTrispH80においてホモジナイズし、Ab140分析のために、カゼインブロッキングバッファー中に更に希釈した。図22、パネルAに示すように、100mg/kg用量はコントロールレベルの~50、及び前述のBACE1ノックアウトレベルに類似して血漿Ab1-40を低減できた。しかしながら、投与後4時間では前脳Ab1-40において変化は検出されなかった。この早期の時点は、脳における効果を見るにはYW412.8.31の投与後で早すぎうる。投与後の長い時間が脳における低下Aβを観察するのに必要であり得、なぜなら特に、上記のようにAβの低下が低用量の野生型マウスにおいて24時間で観察されるからである。血清におけるYW412.8.31濃度は非常に高く、投与後4時間で1040±140μg/mLであった。脳におけるYW412.8.31濃度はずっと低く0.7±0.4μg/gであり、これは血清における濃度の~0.07を表し、CNSへの抗体の予測された0.1定常状態浸透に近似する。重要なことには、脳において得られた抗体濃度、4.7±2.7nMは、前に観察された細胞IC50に近い。このように、BACE1ノックアウトマウスにおいて見られるレベルまでの血漿Ab1-40の低減に示されるように、抗BACE1抗体はインビボにおいて非常に効果的である。しかしながら、単一全身性投与はマウスへの投与後4時間では脳低減をもたらさず、おそらく何れかの効果を観察するには時点が早すぎたためだと思われる。反復投与による上昇脳抗体レベルの効果を決定するために、更なる実験を実施した。YW412.8.31抗体、又はコントロールIgGを毎4日、計3投与、30又は100mg/kgIP投与した。この試験では、最終投与後4時間の処置動物の血漿及び前脳双方におけるAb1-40のレベルを測定した。再び、30及び100mg/kg双方でのマルチ投与後、血漿Ab1-40レベルにおける~50の低減が観察された。注目すべきは、高用量の抗BACE1では前脳Ab1-40において42の低減が観察されたが、低用量では低減が観察されなかった。それぞれ毎4日に与えられる30及び100mg/kgでの投与後、血清におけるYW412.8.31抗体濃度は480±210及び1500±440μg/mLであり、脳における濃度は0.9±0.6μg/g及び3.0±1.6μg/gだった。このように、予測された通り、脳における高抗体レベルはAbレベルにおいて頑強な低減をもたらした。注目すべきは、末梢Abレベルにおいて100mg/kg用量と比較して30mg/kg用量での差はなく、30mg/kgでの最大末梢阻害が得られ、従って単純に末梢Abレベルを低減することは脳レベルを低減するには十分でないことを示唆する。加えて、野生型及びBACE1ノックダウンマウスにYW412.8.31抗BACE1抗体を投与した後、PKデータを得た。図19を参照のこと。抗BACE1の単一投与をBALB/CマウスにIV注入によって送達した。血清PKを、投与後21日まで分析した。マウス血清及び脳サンプルにおける全抗BACE1抗体濃度を次のように測定した。マウス血清及び脳サンプルにおける抗体濃度を酵素結合免疫吸着測定法を使用して測定した。NUNC384ウェルMaxisorpイムノプレートをロバ抗ヒトIgGのF2断片、Fc断片特異性ポリクローナル抗体で4oCで一晩コートした。次の日、プレートを05ウシ血清アルブミンを有するリン酸緩衝食塩水で室温で1時間ブロックした。各抗体を、それぞれの抗体濃度を定量化するためにスタンダードとして使用した。マイクロプレートウォッシャーを使用して005Tween20を有するPBSでプレートを洗浄後、05BSA、035MNaCl、025CHAPS、5mMEDTA、005Tween20及び15ppmProclinを有するPBSにおいて希釈したスタンダード及びサンプルを穏やかな攪拌と共に室温で2時間プレートにおいてインキュベートした。結合抗体を西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートF2ヤギ抗ヒトIgG、Fc特異性ポリクローナル抗体で検出した。最後に、プレートを基質3355テトラメチルベンジジンを使用して処理した。吸光度をMultiskanAscentreaderにおいて630nmの基準を用いて450nmの波長で測定した。濃度をfourparameternonlinearregressionprogramを使用して標準曲線から決定した。アッセイは血清において312ngml及び脳において156nggの定量下限を有した。マウスにおける遊離YW412.8.31抗体濃度を、コートとしてBACE1ECD及び検出のために抗ヒトIgG、Fc特異性抗体を使用して上記に類似した手順に従って検出した。遊離抗BACE1マウスELISAは、血清において0.626ng/ml及び脳において3.13ng/gのLLOQ値を有する。2つの別個のPKアッセイを使用した:血清における全YW412.8.31を検出するアッセイ、及び血清における非結合YW412.8.31のみを検出するアッセイ。観察されたPKは非線形であり、YW412.8.31濃度が<10μg/mLであるサンプルの全体対遊離mAb値における差は、標的媒介クリアランスを示唆する。図19、パネルAを参照。更に、全mAb及び非結合mAb間の差異は、血清における幾つかのYW412.8.31が可溶性BACE1に結合し得たことを示す。BACE1/、BACE1/-、及びBACE1-/-マウスにおける単一投与PK分析は、初期研究において観察された非線形を確認し、増強クリアランスが確かに標的媒介であることを示す。BACE1-/-マウスは線形PKを示す。図19を参照。実施例5:インビボ特徴付けサルカニクイザルにIV送達によってコントロールIgG又はYW412.8.31抗BACE1抗体を投与した。個々動物の各々における平均ベースラインAβ1-40レベルを設定するために投与の7日前まで、次いで投与後様々な時点で血漿及びCSFをサンプリングた。サル血清及びCSFサンプルにおける全抗BACE1又はコントロール抗体濃度を、コート及び検出双方としてサル吸着ヤギ抗ヒトIgGポリクローナル抗体を使用して測定した。サルにおける遊離抗BACE1抗体濃度を、コートとしてBACE1ECD及び検出のためにサル吸着ヤギ抗ヒトIgG抗体を使用して決定した。全及び遊離抗BACE1サルアッセイ双方は、血清又はCSFにおいて6.25ng/mlのLLOQ値を有した。PKはサルに投与されたIgG1について予測された通りであり、予測した曝露を示す。試験したカニクイザルからの血漿及びCSFにおけるAβ140レベルも決定した。簡潔には、血漿における全cynoAβ140の濃度を、製造者に説明に従いMSDMA6000HumanAbetaKitを使用して決定した。Aβ140のC末端に特異的な捕獲抗体をプレート上に事前にコートし、SulfoTag抗Aβモノクローナル抗体6E10を検出に使用した。アッセイは血漿において494pgmlの定量下限を有した。CSFにおける全cynoAβ140のの濃度を、サンドイッチELISAを使用して決定した。Aβ140のC末端に特異的なウサギポリクローナル抗体をプレート上にコートし、ビオチン化抗Aβモノクローナル抗体6E10を検出に使用した。アッセイはCSFにおいて156pgmlの定量下限を有した。図21に示すように、血漿Aβ1-40レベルは全個体にわたりベースラインの~50に低減された。Aβにおける50最大血漿低減が、7日の観察期間中持続した。YW412.8.31抗BACE1抗体の血清濃度時間プロファイルは、コントロールIgG抗体について観察されたものと類似し、線形範囲において投与された典型的なIgG1のものに類似する動力学が示唆される。~800μg/mLのピーク血清抗体濃度を投与後15分の最初のサンプル採取の時間に観察し、投与後7日までに232μg/mLに落ちた。注目菅器は、投与後測定した全ての時点で、YW412.8.31の血清濃度は細胞IC50を超えた。。CSFAβ1-40レベルは、図21に示すように、変動はあるが、投与後1及び3日で最大で50までの低下、その後は投与後7日ではベースラインAβへの回帰傾向を示した。ベースライン血漿及びCSFレベルにおける変動を図21に示す。ベースライン血漿レベルは動物を通してかなり均一であったが、CSFAβ1-40レベルはかなり変動した。従って、全Aβ1-40測定を各個々のサルについてベースラインに正規化した。これらのデータは、サルにおける単一投与のYW412.8.31が、血漿及びCSFAβレベルを有意に低減することを示す。CSFでは、この期間にわたり0.2-0.3μg/mlのYW412.8.31濃度が観察され、これは~2nMに変換される。このデータから、YW412.8.31の脳濃度が類似範囲内であることが推測される。PK及びPDデータを比較すると、これらの結果は、血漿における薬物曝露が7日ウィンドウにわたりAβ生産を最大限に阻害するのに十分であり、細胞IC50に近いCSFにおける薬物濃度がそして試験された投与レベルで、脳におけるAβレベルを一過性に低減することを示す。概要すると、これらのデータは、CSFAβ測定によって決定されるように、非ヒト霊長類において、全身性に投与された抗BACE1が脳におけるBACE1活性を低減できることの強力な証拠を提供する。実施例6:YW412.8.31抗体の親和性成熟YW412.8.31抗体を、前に記載した結晶構造に提供される構造データに従って親和性成熟した。BACE1と接触する抗体残基を、YW412.8.31抗体の親和性を増強するために変異させた。この方策によって生成される親和性成熟クローンは、命名法YW412.8.31xSを有する。YW412.8.31親和性成熟クローンはまた、前述したように全CDRのソフトランダム化ターゲティングにより生成され、命名法YW412.8.31xを有する。BACE1に結合したクローンの重鎖可変配列及び軽鎖可変配列を図23β及び24βに記載する。BACE1に結合したクローンを、実施例2Cにおいて前述したように細胞ベースHTRFアッセイにおいてBACE1プロテアーゼ阻害について試験した。アッセイの結果を図25A及び25Bに示す。図25Bは、記載の濃度で様々な親和性成熟抗BACE1抗体により24時間処理された一次皮質ニューロンからのAβ1-40生産の結果を示す。試験された幾つかの抗体が、YW412.8.31で観察されたものと類似なレベルでBACE1を阻害した。前述の発明を、理解を明瞭にするために説明及び実施例によって幾らか詳細に記載したが、説明及び実施例は、発明の範囲を制限するとして解釈されるべきではない。ここに引用される全特許及び化学文献の開示は、出典明記によってその全体を明瞭にここに援用する。"