"核酸構築物を含む植物をインキュベート又は生育する工程を含む、植物においてアポリポプロテインを製造する方法であって、前記核酸構築物が、アポリポプロテイン融合タンパク質をコードする核酸配列を含むか、該核酸配列からなるか、又は実質的に該核酸配列からなり、前記アポリポプロテイン融合タンパク質が、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導する融合タンパク質パートナーを含んでおり、好ましくは、前記インキュベート又は生育する工程の前に、前記核酸構築物が植物に導入又は浸潤される、前記方法。前記核酸構築物が、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導する融合タンパク質パートナーをコードする第1の核酸配列であり、必要により、1以上の非天然の繰り返し配列モチーフを更に含む第1の核酸配列;必要により、内部でペプチド結合が特異的に切断され得るアミノ酸リンカーをコードする第2の核酸配列;及びアポプロテインをコードする第3の核酸配列を含んでおり、前記第1、第2及び第3の核酸配列が、互いに作動可能に連結されている、請求項1記載の方法。前記核酸配列が、植物細胞の小胞体にタンパク質を誘導する融合タンパク質パートナー、好ましくはシグナルペプチドをコードする核酸配列を更に含む、請求項1又は2記載の方法。前記植物からアポリポプロテイン融合タンパク質を含むタンパク質顆粒を回収する追加の工程を含んでおり、好ましくは、前記工程が、i植物材料をホモジナイズする工程;iiホモジナイズした植物材料を低速、好ましくは約200×gで遠心分離する工程;iiiホモジナイズした植物材料を工程iiよりも高速、好ましくは約6000×gで遠心分離する工程;及びiv融合タンパク質を含むタンパク質顆粒をペレット分画に回収する工程を含む、請求項1~3のいずれかに記載の方法。アポリポプロテイン融合タンパク質を可溶化する更なる工程を含んでおり、好ましくは、前記可溶化工程が、還元剤、好ましくはβ-メルカプトエタノールと、非イオン性界面活性剤、好ましくはTritonX-100と、必要により塩、好ましくは塩化ナトリウムとを含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなる混合物の使用を含む、請求項1~4のいずれかに記載の方法。前記融合タンパク質パートナーからアポリポプロテインを放出する更なる工程を含んでおり、好ましくは、前記工程において、プロテアーゼ、好ましくはTEVプロテアーゼ、又はタンパク質スプライシング手段、好ましくはインテインが、前記融合タンパク質パートナーからアポリポプロテインを放出するために用いられる、請求項1~5のいずれかに記載の方法。放出されたアポリポプロテインを精製する更なる工程を含む、請求項1~6のいずれかに記載の方法。前記工程が、iアポリポプロテイン融合タンパク質を固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーカラムと接触し、プロラミンタンパク質を固定化する工程;iiアポリポプロテインを溶出する工程;及びiii逆相クロマトグラフィー、好ましくは逆相逆相高速タンパク質液体クロマトグラフィーを利用して、溶出したアポリポプロテインを精製する工程を含む、請求項7記載の方法。植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγ-ゼインをコードする第1の核酸配列;必要により、スペーサー、好ましくは切断認識部位をコードする第2の核酸配列;及びアポリポプロテインをコードする第3の核酸配列を含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなる核酸構築物であって、前記第1、第2、及び第3の核酸配列が互いに作動可能に連結している、前記核酸構築物。前記核酸配列の転写を調節する調節ヌクレオチド配列を更に含む、請求項9記載の核酸構築物。請求項9又は請求項10記載の核酸構築物を含むベクター。i植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγ-ゼインをコードするアミノ酸配列であって、必要により、1以上の非天然繰り返し配列モチーフをコードするアミノ酸配列を更に含む、前記アミノ酸配列;ii必要により、内部でペプチド結合が特異的に切断され得るリンカーをコードするアミノ酸配列;及びiiiアポリポプロテインをコードするアミノ酸配列を含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなる融合タンパク質。請求項9記載の核酸配列、又は請求項10記載の核酸構築物、又は請求項11記載のベクター、又は請求項12記載の融合タンパク質を含む、植物又はそれに由来する植物材料。請求項12記載の融合タンパク質を含む、植物タンパク質顆粒。前記アポリポプロテインが、その変異体、好ましくはアポリポプロテインA1Milanoである、請求項1~8のいずれかに記載の方法、請求項9記載の核酸配列、請求項10記載の核酸構築物、請求項11記載のベクター、請求項12記載の融合タンパク質、請求項13記載の植物、又は請求項14記載の植物タンパク質顆粒。発明の要約本発明は、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγ-ゼインをコードする核酸配列を利用する、植物をベースとする発現系でアポリポプロテインを製造する方法を提供する。好適には、プロラミンとの融合タンパク質としてのアポリポプロテインの発現により、植物中でアポリポプロテインの発現が増大する。プロラミンに1以上の非天然nonnaturallyoccuring繰り返し配列モチーフを追加することにより、そのモチーフ単数又は複数を有しないプロラミンの使用に比べて、アポリポプロテインの発現レベルが増大し得る。植物タンパク質顆粒中でのアポリポプロテインの有効な発現により、組換えアポリポプロテイン融合タンパク質の回収が容易となる。本明細書に記載される方法は、工業規模で実質的に精製された形態でアポリポプロテインを得るために利用され得る。従って、前記方法は、実質的に精製されたアポリポプロテインを製造するのに有用であり、タンパク質の大量生産に容易に拡張可能である。第1の態様では、核酸構築物を導入又は浸潤したinfiltrated植物をインキュベート又は生育する工程であって、前記核酸構築物が、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導する融合タンパク質パートナーを含む、アポリポプロテイン融合タンパク質をコードする核酸配列を含むか、該核酸配列からなるか、又は実質的に該核酸配列からなる、前記工程を含む、植物においてアポリポプロテインを製造する方法が提供される。第1の態様では、核酸構築物を含む植物をインキュベート又は生育する工程であって、前記核酸構築物が、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導する融合タンパク質パートナーを含む、アポリポプロテイン融合タンパク質をコードする核酸配列を含むか、該核酸配列からなるか、又は実質的に該核酸配列からなる、前記工程を含む、植物においてアポリポプロテインを製造する方法が提供される。前記方法において、好ましくはインキュベート又は生育工程の前に、前記核酸構築物が植物に導入又は浸潤される。更なる態様では、a植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγゼインをコードする核酸配列とアポリポプロテインをコードする核酸配列とを含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなり、それらが互いに作動可能に連結している核酸構築物を導入した植物をインキュベートする工程;及びb前記植物において融合タンパク質としてアポリポプロテインを発現できる条件下で前記植物をインキュベートする工程を含む、植物においてアポリポプロテインを製造する方法が提供される。更なる態様では、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγゼインをコードする核酸配列とアポリポプロテインをコードする核酸配列とを含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなり、それらが互いに作動可能に連結している核酸構築物の使用を含む、植物においてアポリポプロテインを発現する方法が提供される。更なる態様では、a植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγゼインをコードする核酸配列とアポリポプロテインをコードする核酸配列を含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなり、それらが作動可能に互いに連結している核酸構築物を含む植物を提供する工程;及びb前記植物において融合タンパク質としてアポリポプロテインを発現できる条件下で前記植物をインキュベートする工程を含む、植物においてアポリポプロテインを発現する方法が提供される。一実施態様では、前記植物への導入又は浸潤工程が、インキュベート又は生育工程の前に行われる。一実施態様では、前記方法に使用される核酸構築物は、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質をコードする第1の核酸配列であって、必要により1以上の非天然繰り返し配列モチーフをコードする核酸配列を更に含む第1の核酸配列;必要により、内部でペプチド結合が特異的に切断され得るアミノ酸リンカーをコードする第2の核酸配列;及びアポリポプロテインをコードする第3の核酸配列を含んでおり、前記第1、第2及び第3の核酸配列が互いに作動可能に連結している。前記方法の一実施態様又は上記の実施態様の組み合わせにおいて、核酸配列が、融合タンパク質を植物細胞の小胞体に誘導するペプチド、好ましくはシグナルペプチドをコードする第4の核酸配列を更に含んでいる。一実施態様又は上記の実施態様の組み合わせにおいて、前記方法は、植物から融合タンパク質を含むタンパク質顆粒を回収する工程であって、好ましくはi植物材料をホモジナイズする工程;iiホモジナイズされた植物材料を低速、好ましくは約200×gで遠心する工程;iii必要により、ペレット分画を除去する工程;ivホモジナイズされた植物材料を工程iiよりも高速、好ましくは約6000×gで遠心する工程;及びv融合タンパク質を含むタンパク質顆粒をペレット分画に回収する工程で構成される追加の工程を含んでいる。一実施態様又は上記の実施態様の組み合わせにおいて、前記方法は、融合タンパク質を可溶化する更なる工程を含んでおり、好ましくは、前記可溶化工程が、還元剤好ましくはβ-メルカプトエタノールと非イオン性界面活性剤好ましくはTritonX-100と必要により塩好ましくは塩化ナトリウムとを含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなる混合物の使用を含んでいる。一実施態様又は上記の実施態様の組み合わせにおいて、前記方法は、前記融合タンパク質からアポリポプロテインを放出する更なる工程を含んでおり、前記工程において、好ましくは、プロテアーゼ好ましくはTEVプロテアーゼ又はタンパク質スプライシング手段好ましくはインテインが、前記融合タンパク質からアポリポプロテインを放出するために用いられる。一実施態様又は上記の実施態様の組み合わせにおいて、前記方法は、放出されたアポリポプロテインを精製する更なる工程を含んでいる。一実施態様又は上記の実施態様の組み合わせにおいて、前記精製工程は、i融合タンパク質を固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーカラムと接触し、プロラミンタンパク質を固定化する工程;iiアポリポプロテインを溶出する工程;及びiii逆相クロマトグラフィー、好ましくは逆相逆相高速タンパク質液体クロマトグラフィーを用いて、溶出されたアポリポプロテインを更に精製する工程を含んでいる。更なる態様では、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質をコードする第1の核酸配列であり、必要により1以上の非天然繰り返し配列モチーフをコードする核酸配列を更に含む第1の核酸配列;必要により、内部でペプチド結合が特異的に切断され得るアミノ酸リンカーをコードする第2の核酸配列;及びアポリポプロテインをコードする第3の核酸配列を含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなり、前記第1、第2及び第3の核酸配列は互いに作動可能に連結している核酸構築物が提供される。一実施態様又は上記の実施態様の組み合わせにおいて、核酸構築物は、核酸配列の転写を調節する調節ヌクレオチド配列を更に含んでいる。更なる態様では、i植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγ-ゼインをコードするアミノ酸配列;ii必要により、切断認識部位をコードするアミノ酸配列;及びiiiアポリポプロテインをコードするアミノ酸配列を含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなる融合タンパク質が提供される。更なる態様では、前記核酸配列、又は前記核酸構築物、又は前記ベクター、又は前記融合タンパク質を含む、植物又はそれ由来の植物材料が提供される。適切には、植物又は植物材料は、形質転換又は浸潤された植物又は植物材料である。更なる態様では、融合タンパク質を含む植物タンパク質顆粒が提供される。更なる態様では、植物細胞においてアポリポプロテインを発現及び/又は製造するための核酸配列、又は核酸構築物、又はベクターの使用が提供される。植物においてアポリポプロテインを製造する方法単数又は複数に関連する上記の実施態様及びその組み合わせもまた、上記の更なる側面の実施態様として記載される。本明細書に記載の方法を用いると、アポリポプロテインが、プロラミンタンパク質、好ましくはγ-ゼインをコードする核酸配列に融合するとき、増大したレベルで、植物中で発現でき、植物中でタンパク質顆粒の形成を誘導する。プロラミン中に1以上の非天然繰り返し配列モチーフが存在すると、アポリポプロテインの発現レベルを更に増大させることができる。タンパク質顆粒中の再構成アポリポプロテインの高度な発現により、植物に存在し得るタンパク質分解活性及び酵素活性からタンパク質を保護する。再構成アポリポプロテイン融合タンパク質を含むタンパク質顆粒は、高密度を保持し、アポリポプロテインタンパク質の回収を単純化し得る。前記方法の下流の回収及び精製プロトコールは、現在の再構成アポリポプロテインを調製するための手法よりも単純で、安価であり得る。前記方法は、実質的に精製されたアポリポプロテインを工業規模で製造するために利用され得る。定義本願の範囲内で使用される技術用語及び表現には、一般的に植物学及び分子生物学の関連技術で共通に適用される意味が付与される。以下の用語の全ての定義が、本願の完全な内容に適用する。語含むcomprisingは、他の要素又は工程を排除しておらず、不定冠詞あるa又はあるanは、複数を排除していない。単一の工程により、特許請求の範囲に記載された幾つかの特徴を有する機能を実現し得る。特性attribute又は数値と結びつく用語実質的に約およそ等は、特に特性又は数値を正確に定義する。所定の数値又は範囲に関連する用語約は、その所定の数値又は範囲の20以内、10以内、又は5以内にある数値又は範囲を意味する。相同性、同一性又は類似性は、配列アラインメントにより比較された2つのポリペプチド間又は2つのポリヌクレオチド分子間の配列類似度を意味する。比較される2つの別々のポリヌクレオチド配列間の類似度は、相当する位置で同一である又は一致するヌクレオチドの数の関数である。同一性の単位で表される類似度は、目視検査及び数学的計算によって決定し得る。或いは、2つのポリヌクレオチド配列の同一性は、DevereuxらNuclAcidsRes123871984によって開示され、ウィスコンシン大学遺伝学コンピュータグループUWGCGから利用できるGAPコンピュータプログラムバージョン6.0を用いて、配列情報を比較することによって決定し得る。GAPプログラムの典型的な初期パラメータは、1ヌクレオチドの単項比較マトリックス同一の場合の1と非同一の場合の0を含む、並びに編者Schwartz及びDayhoff、AtlasofProteinSequenceandStructureNationalBiomedicalResearchFoundationpp3533581979によって開示されるようなGibskov及びBurgessNuclAcidsRes1467451986の重み付き比較マトリックス;2各ギャップに対する3.0のペナルティー及び各ギャップ中の各記号に対する0.10のペナルティーを含んでおり;3末端ギャップには何らのペナルティーも含まない。配列比較の当業者に既知の様々なプログラムが、代替的に利用できる。用語上流は、線状ポリヌクレオチド配列に沿った参照要素に関する相対的な方向/位置を意味し、ポリヌクレオチド配列の5’末端に向かう方向/位置を意味する。上流を参照要素の5’末端に置き換えて使用してもよい。用語下流は、線状ポリヌクレオチド配列に沿った参照要素に関する相対的な方向/位置を意味し、ポリヌクレオチド配列の3’末端に向かう方向/位置を意味する。下流を参照要素の3’末端に置き換えて使用してもよい。断片又は欠損例えば、欠損タンパク質は、ポリペプチドのアミノ酸配列の任意の部分を包含し、対象の翻訳後の酵素又はポリペプチドの少なくとも1つの構造的又は機能的特徴を保持する。融合タンパク質には、異なるタンパク質由来のペプチド配列が、1以上のペプチド結合によって互いに共有結合したタンパク質が含まれる。融合タンパク質パートナーは、植物中でタンパク質顆粒の形成を誘導する融合タンパク質の一部分を意味する。用語作動可能に連結されるとは、機能的な転写単位を製造するための、異なるDNA要素、断片、又は配列の結合を意味する。用語精製及び単離及びそれらの文法的なバリエーションは、完全であれ部分的であれ、混合物から少なくとも1つの不純物を分離又は除去し、それにより組成物中のアポリポプロテインの純度を向上することを意味する。用語形質転換は、細胞に外因性の遺伝材料を導入することにより生ずる、細胞の遺伝材料の変化を意味する。当該分野において多くの方法が植物を形質転換するために利用でき、その全てが本明細書に包含され、例えば、微粒子銃法、遺伝子銃法、アグロバクテリウム媒介形質転換、ウィルスベクター媒介形質転換、電気穿孔法エレクトロポレーションが挙げられる。トランスジェニック植物は、遺伝的に形質転換した植物細胞を再生することにより作製し得る。アグロ浸潤アグロインフィルトレーション又は浸潤インフィルトレーションは、植物中で一過性の遺伝子発現を誘導するか、所望のタンパク質を製造する方法である。一態様では、その技術は、植物の葉の下面へのアグロバクテリウム細胞の懸濁液の注入に関し、所望の遺伝子を植物細胞に輸送する。真空の浸潤は、非常に多くのアグロバクテリウム細胞を植物組織に導入する別の方法である。この方法において、葉片、葉又は植物全体が、懸濁液を含む容器に沈められ、その容器が真空チャンバに置かれる。このようにして真空が適用され、それにより空気が気孔を介して排出する。真空が解除されると、圧力差により、懸濁液が気孔を介して植物組織中に強制的に取り込まれる。用語植物は、ライフサイクル又は成長の任意の段階の任意の植物及びその子孫を意味する。植物は、天然物、変異体、非天然物又はトランスジェニック植物であってもよく、それらに由来してもよい。用語植物細胞は、植物の構造的及び生理的な単位を意味する。植物細胞は、細胞壁のないプロトプラスト、単離された単一細胞、培養細胞、2以上の細胞集団の形態であってもよく、限定されないが、植物組織、植物器官又は植物全体などの高度に組織化された単位の一部であってもよい。用語植物材料は、植物から入手される又は入手できる任意の固体又は液体の組成物、又はそれらの組み合わせを意味し、例えば、葉、幹、根、花又は花の部分、果実、花粉、卵細胞、接合子、種子、挿し木、分泌物、抽出物、細胞又は組織培養物、又は植物の他の任意の部分又は産生物などが挙げられる。一実施態様では、植物材料は、葉、例えば、緑葉であるか、又はそれに由来する。植物においてアポリポプロテインを製造する方法は、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質であって、プロラミン、好ましくはγ-ゼインである前記タンパク質をコードする核酸配列;及びアポリポプロテインをコードする核酸配列を含んでおり、前記核酸配列が互いに作動可能に連結している核酸構築物を導入した植物をインキュベートする第1の工程を含んでいる。アポリポプロテインをコードする核酸配列は、任意の哺乳類例えば、ヒトのアポリポプロテインを含むアポリポプロテインの核酸配列と実質的な相同性すなわち、配列類似性又は実質的な同一性を有する核酸配列を包含し、プロ-アポリポプロテイン及びプレ-プロ-アポリポプロテインをコードする任意の核酸配列も包含する。本明細書では、用語プロ-アポリポプロテインは、翻訳後に切断されるポリペプチドを含むアポリポプロテインポリペプチドを意味する。用語プレ-プロ-アポリポプロテインは、ポリペプチド鎖の細胞内輸送を容易にするN-末端シグナル配列を付加的に含む、プロ-アポリポプロテイン分子を意味する。アポリポプロテインの種類も本発明に包含され、その種類としては、例えば、アポリポプロテインA、アポリポプロテインAI、アポリポプロテインAII、アポリポプロテインA-IV、アポリポプロテインA-V、アポリポプロテインB、アポリポプロテインB-100、アポリポプロテインB-48、アポリポプロテインC-I、アポリポプロテインC-II、アポリポプロテインC-III、アポリポプロテインC-IV、アポリポプロテインD、アポリポプロテインE、アポリポプロテインF、アポリポプロテインH及びアポリポプロテインLが挙げられる。アポリポプロテインをコードする例示的な核酸配列は、当該分野で周知であり、一般的に多様な哺乳類源ヒト、ブタ、ウシ、ヒツジなどから容易に入手できる。好ましい実施態様では、アポリポプロテインは、アポリポプロテインA1、好ましくはヒトアポリポプロテインA1である。別の好ましい実施態様では、アポリポプロテインは、アポリポプロテインA1-Milanoである。これらのアポリポプロテインの核酸配列及びアミノ酸配列は、Genbankなどのデータベースで広く入手できる。一実施態様では、アポリポプロテインA1-Milanoの成熟ペプチドの核酸配列は、植物での発現に最適化されたコード配列であり、配列番号1に記載の配列を含むか、該配列からなるか、実質的に該配列からなるか、又はその変異体、断片若しくは相同体である。一実施態様では、アポリポプロテインA1-Milanoの成熟ペプチドの核酸配列は、配列番号2に記載の配列を含むか、該配列からなるか、実質的に該配列からなるか、又はその変異体、断片又は相同体である。アポリポプロテイン変異体も本発明に包含され、例えば、種々の天然及び/又は合成の変異及び改変、例えば、限定されないが、点変異、欠失変異、フレームシフト変異及び化学改変が見出されているヒトアポリポプロテインが挙げられる。本発明では、好ましい実施態様において、アポリポプロテイン変異体が、植物において製造された変異アポリポプロテイン、好ましくはアポリポプロテインAI-Milanoである。遺伝的多型を含むアポリポプロテインの他の変異体も知られており、本発明の範囲に包含される。発現されるアポリポプロテインは、モノマー、ダイマー又はトリマーの形態であってもよい。アポリポプロテインの変異体は、アミノ酸残基の欠失、挿入又は置換を有していてもよく、それにより静的変異サイレント変異が生じ、機能的に等価なタンパク質を生成する。二次的な基質の結合活性が保持される限り、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性及び/又は両親媒性における類似性に基づいて、意図的なアミノ酸置換をなし得る。例えば、負に荷電されたアミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が挙げられ;正に荷電されたアミノン酸としては、リシン及びアルギニンが挙げられ;類似の親水性値を有する非荷電の極性頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン及びチロシンが挙げられる。例えば、以下の表に従って同類置換を行ってもよい。2列目の同じブロックのアミノ酸、好ましくは3列目の同じ行のアミノ酸は、互いに置換し得る。アポリポプロテイン変異体を作製するための、アポリポプロテインをコードする核酸配列への変異は、当業者に既知の種々の核酸改変技術を用いて行ってもよく、例えば、部位特異的変異誘発法、標的変異誘発法、ランダム変異誘発法、有機溶剤の添加、遺伝子シャッフリング又はこれらの組み合わせ並びに当業者に既知の他の手段などが挙げられる。アポリポプロテインの変異体は、その変異体が由来するアポリポプロテインの天然又は野生型に対して、少なくとも約60、65、70、71、72、73、74、75、80、85、90、95、96、97、98、99又は100の配列同一性を有し得る。アポリポプロテインの変異体は、天然又は野生型アポリポプロテインの生物学的及び/又は免疫学的活性を示すアポリポプロテインの変異体であってもよい。本明細書では、語句アポリポプロテインの生物学的活性は、アポリポプロテイン様ポリペプチドが、天然又は野生型アポリポプロテインと実質的に同じか、又は類似である、少なくとも1つの生物学的活性を有することを意味する。本明細書では、語句アポリポプロテインの免疫学的活性は、アポリポプロテイン変異体の天然又は野生型アポリポプロテインに対する特異的な抗体との交差反応能を意味する。このような抗体の例は、US6,828,114に記載され、そこには、ApoA1と特異的に反応するモノクローナル抗体が記載されており、US6,096,516には、アポリポプロテインB-100に拮抗するマウス抗体が記載されている。アポリポプロテインの活性は、当該分野で知られた方法を用いて好適に測定され得る。具体例として、哺乳類でのコレステロール逆輸送の改善能が測定され得る。コレステロール逆輸送能力の測定は、ジミリストイルホスファジンコリンDMPCとアポリポプロテインとの会合動態の計算によって決定し得るBiochemBiophysActa1344139を参照。簡単にいえば、DMPCを、100mMNaCl、50mMTris-HClpH8.0及び0.25mMEDTAに0.5mg/mlの濃度で再懸濁する。アポリポプロテイン、2mM5’-5’ジチオビスニトロベンゾエートNbS含有緩衝液、及びDMPC懸濁液を24°Cで10分インキュベートし、0.4mg/mlのDMPC終濃度及び5.2mMのタンパク質濃度を有するように混合する。混合物の濁度吸光性の変化は、脂質-タンパク質の会合の変化を反映しており、その変化後、325nmでの吸光性を測定する。対照として、20mM2-メルカプトエタノール又は10mMジチオトレイトールDTTを含む還元緩衝液を用いて、同じ試験を繰り返し得る。また、本発明は、アポリポプロテイン又はその断片をコードする核酸配列の使用を包含する。核酸配列は、アポリポプロテイン又はその変異体をコードする限り、天然アポリポプロテインと同一でなくてもよい。従って、核酸配列は、アポリポプロテインの天然コード配列と比較して、少なくとも80、85、90、85、96、97、98、99又は100の配列同一性を有していてもよい。好ましい実施態様では、本発明で使用されるアポリポプロテインをコードする核酸配列は、植物でのコドンの用法に従って、あるコドンを代替的なコドンに置換することにより、植物での発現を最適化している。また、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質をコードする核酸配列は、本発明の方法で使用される。タンパク質顆粒は、正しいフォールディング及び生物学的活性を保持しつつ、貯蔵タンパク質を真核細胞内に濃縮するように進化した植物の種子の天然構造である。タンパク質顆粒は、バクテリア由来の封入体の幾つかの特性を共有する。タンパク質顆粒は、高密度であり、疎水性相互作用によって密にパッキングされた多量の凝集タンパク質を含んでいる。貯蔵タンパク質は、シグナルペプチドを介して、小胞体の内腔に挿入し得、小胞体由来のタンパク質顆粒と呼ばれる特定の細胞小器官を発達する小胞体中、又はタンパク質貯蔵液胞中のいずれかで組み立てられる。植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質はプロラミンであり、それは改変プロラミン又は1以上のプロラミンドメインを包含する。適切には、プロラミンは、トウモロコシプロラミンである。α及びγ-ゼインは、トウモロコシプロラミンの2つの非限定的な例である。α-及びγ-ゼインは、粗面小胞体の細胞質側の膜結合ポリソームで生合成され、内腔で組み立てられ、小胞体由来のタンパク質顆粒に捕捉される。適切なプロラミンとしては、限定されないが、α-ゼイン例えば、トウモロコシα-ゼインの22kDaのN-末端断片、γ-ゼイン、αグリアジン及びコメrP13タンパク質が挙げられる。好ましい実施態様では、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質は、γゼイン、好ましくはトウモロコシγ-ゼインであり、4つの特徴的なドメイン:i19アミノ酸のペプチドシグナル、ii8単位のヘキサペプチドPPPVHLを含む繰り返しドメイン53aa、iiiプロリン残基が他のアミノ酸に置換されたProXドメイン29aa、iv疎水性システインリッチの疎水性システインに富むC-末端ドメインで構成される。1以上の天然繰り返し配列モチーフは、植物細胞中のアポリポプロテインの発現レベルを改善し得るγ-ゼインに組み込んでもよく、それに置換してもよい。天然繰り返し配列モチーフの一例として、PPPVHL以外のモチーフが挙げられる。非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数が置換される場合、繰り返しドメイン又はProXドメイン又はこれらのドメインの両方が、非天然配列モチーフを作製するために変異される。繰り返し配列は、非天然配列モチーフであるため、天然γ-ゼイン例えば、天然トウモロコシγゼイン配列中に存在しないだろう。一実施態様では、非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数は、γ-ゼインの繰り返しドメインに組み込まれるか、それに置換される。他の実施態様では、非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数は、γ-ゼインのProXドメインに組み込まれる。他の実施態様では、非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数は、γ-ゼインの繰り返しドメイン及びProXドメインに組み込まれる。好ましい実施態様では、非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数は、γ-ゼインの繰り返しドメイン及びProXドメインを実質的に構成する断片に置換される。このような断片の例としては、γ-ゼインの少なくともアミノ酸残基22~109、22~110、22~111、22~112、22~113、22~114又は22~115を含むか、該アミノ酸残基からなるか、又は実質的に該アミノ酸残基からなる断片が挙げられる。すなわち、融合タンパク質パートナーのN末端は、γ-ゼインのシグナルペプチド、すなわち、第一にγ-ゼインの105~115アミノ酸を含んでおり、それは、前記のとおり様々な置換を有する。非天然繰り返し配列モチーフの非限定的な例としては、n又はn;n又はn;n又はn;及びn又はn又はこれらの2以上の組み合わせ式中n=1~5、1~6、1~7、1~8、1~9、1~10、1~15、1~20又は1~25などが挙げられる。好ましい実施態様では、n=7又は8である。アラニン及びグルタミン酸に加えて、他のアミノ酸例えば、限定されないが、スレオニンもプロリンリッチの非天然繰り返し配列に使用し得る例えば、PPPVTL。別の実施態様では、2以上の異なる非天然繰り返し配列モチーフの組み合わせ、例えば、nとn;又はnとn;又はnとnとn;又はnとnとn;又はnとnとnとnは、繰り返しドメイン、ProXドメイン又はその両方に使用し得る。一実施態様では、γゼインの繰り返しドメイン中のn配列は、配列番号6に記載の配列を含むか、該配列からなるか、又は実質的に該配列からなる。一実施態様では、γゼインの繰り返しドメイン中のn配列は、配列番号7に記載の配列を含むか、該配列からなるか、又は実質的に該配列からなる。一実施態様では、γゼインの繰り返しドメイン中のn配列は、配列番号8に記載の配列を含むか、該配列からなるか、又は実質的に該配列からなる。一実施態様では、γゼインの繰り返しドメイン中のn配列は、配列番号9に記載の配列を含むか、該配列からなるか、又は実質的に該配列からなる。一実施態様では、γゼインの繰り返しドメイン中のn配列は、配列番号10に記載の配列を含むか、該配列からなるか、又は実質的に該配列からなる。一実施態様では、γゼインのProXドメイン中のn配列は、配列番号11に記載の配列を含むか、該配列からなるか、又は実質的に該配列からなる。一実施態様では、γゼインのProXドメイン中のn配列は、配列番号12に記載の配列を含むか、該配列からなるか、又は実質的に該配列からなる。非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数は、γ-ゼインの繰り返しドメイン及び/又はProXドメインの5’又は3’-末端に位置してもよい。非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数は、γ-ゼインの繰り返しドメイン及び/又はProXドメインの5’及び3’-末端に位置してもよい。適切な実施態様では、非天然繰り返し配列モチーフ単数又は複数は、γ-ゼインの繰り返しドメイン及び/又はProXドメイン内に位置してもよい。適切には、前記植物細胞は、融合タンパク質をコードする核酸の非存在下ではタンパク質顆粒を産生しない。一実施態様では、トウモロコシγゼインは、配列番号3に記載の核酸配列又は配列番号4に記載のアミノ酸配列を含んでいる。他の実施態様では、γゼインの断片のアミノ酸配列は、配列番号5に記載の配列を含むか、又はその変異体、断片又は相同体である。これらの配列の突然変異体mutant、変異体variant、断片及び相同体は、本発明に包含される。適切には、前記植物細胞は、融合タンパク質をコードする核酸の非存在下ではタンパク質顆粒を産生しない。適切には、タンパク質顆粒誘導配列は、植物細胞の小胞体にタンパク質を誘導する配列を更に含んでいる。その配列は、しばしばリーダー配列又はシグナルペプチドと称され、融合タンパク質が発現される同じ植物か、異なる植物に由来し得る。シグナルペプチドの例としては、19残基のγ-ゼインシグナルペプチド配列WO2004003207参照;19残基のα-グリアジンのシグナルペプチド配列又は21残基のγ-グリアジンのシグナルペプチド配列例えば、PlantCell5443450及びEMBOJ3140911415参照が挙げられる。同様に、他の植物由来の機能的シグナルペプチドも文献に報告されている。シグナルペプチドは、γゼイン及び/又はアポリポプロテインに元々備わるシグナルペプチドであってもよい。シグナルペプチドをコードする核酸は、シグナルペプチドがタンパク質のN-又はC-末端で発現されるように、核酸構築物中に位置してもよい。一実施態様では、シグナルペプチドは、N-末端で発現される。従って、一実施態様では、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質例えば、プロラミン、トウモロコシプロラミン、γ-ゼイン又はトウロモロコシγ-ゼインをコードする核酸配列;アポリポプロテイン例えば、ApoA1又はApoA1Milanoをコードする核酸配列;必要により、γ-ゼインシグナルペプチド配列をコードする核酸配列;及び必要により、スペーサーをコードする核酸配列を含む核酸分子が、本明細書に記載される。適切には、前記核酸配列が互いに作動可能に連結している。γ-ゼインとの実質的な相同性すなわち、配列同一性又は実質的な同一性を有する変異体も本明細書に包含される。γ-ゼインポリヌクレオチドの変異体は、Genbank登録番号NM_001111884に報告された配列に対して、少なくとも60、65、70、71、72、73、74、75、80、85、90、95、96、97、98、99又は100の配列同一性を有し得る。また、この用語は、γ-ゼインとの実質的な相同性すなわち、配列同一性又はその実質的な同一性を有するγ-ゼイン断片も包含する。γ-ゼイン変異体は、γ-ゼインの生物学的活性及び/又は免疫学的活性を示す変異体であってもよい。本明細書では、語句γ-ゼインの生物学的活性は、γ-ゼイン変異体が、天然γ-ゼインと実質的に同一又は類似の、少なくとも1つの生物活性を有することを意味する。本明細書では、語句γ-ゼインの免疫学的活性は、γ-ゼイン変異体の天然γ-ゼインに対する特異的な抗体との交差反応能を意味する。γ-ゼインの変異体は、天然γ-ゼインタンパク質のアミノ酸に加えてアミノ酸を含んでいてもよく、必ずしも天然アミノ酸の全アミノ酸を含んでいなくてもよい。γ-ゼインは、γ-ゼインタンパク質の断片であってもよく、前記断片は、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質をコードする核酸配列を含んでいる。従って、具体例として、γ-ゼインは、タンパク質γ-ゼインの繰り返しドメインの全部若しくは一部、又はProXドメインの全部若しくは一部をコードしてもよい。γゼインの変異体は、アミノ酸残基の欠失、挿入又は置換を有していてもよく、それによりサイレント変異静的変異が生じ、機能的に等価なタンパク質を生成する。二次的な基質の結合活性が保持される限り、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性及び/又は両親媒性における類似性に基づいて、意図的なアミノ酸置換をなし得る。例えば、負に荷電されたアミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が挙げられ;正に荷電されたアミノン酸としては、リシン及びアルギニンが挙げられ;類似の親水性値を有する非荷電の極性頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン及びチロシンが挙げられる。例えば、以下の表に従って同類置換を行ってもよい。2列目の同じブロックのアミノ酸、好ましくは3列目の同じ行のアミノ酸は、互いに置換し得る。適切には、アポリポプロテイン及びγ-ゼインを含む融合タンパク質が植物細胞で発現されるように、核酸配列が互いに作動可能に連結されている。一実施態様では、核酸配列は、5’末端にアポリポプロテインを含み、3’末端にγ-ゼインを含んでいる。他の実施態様では、核酸配列は、3’末端にアポリポプロテインを含み、5’末端にγ-ゼインを含んでいる。適切には、核酸分子は、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導する核酸配列とアポリポプロテインをコードする核酸配列との間に、リンカー配列を含んでいる。前記リンカー配列は、作動可能に連結してもよい。一実施態様では、リンカー配列は、内部で1以上のペプチド結合が特異的に切断され得るアミノ酸リンカーをコードする。従って、リンカー配列は、2つのタンパク質を互いに分離し得るような、酵素又はインテインに対する認識部位などとして機能し得る。リンカーは、1以上のペプチド結合を特異的に切断し得る任意の物質によって切断され得る。有利には、リンカーは、融合タンパク質からアポリポプロテインを分離でき、次に必要ならばアポリポプロテインを精製し、それにより実質的に相同的な組換えアポリポプロテインタンパク質を提供できる。適切には、アポリポプロテインは、内部で切断されておらず、そのため、アポリポプロテインの断片は生成していない。適切には、アポリポプロテインは、そのN-末端又はC-末端に余分なアミノ酸を残すことなく切断される。一実施態様では、エンテロキナーゼはアポリポプロテインを内部で切断するため、融合タンパク質をエンテロキナーゼで切断しない。融合タンパク質を切断し、アポリポプロテインを放出する好ましい方法は、内部でペプチド結合が特異的に切断され得るアミノ酸リンカーを介して、融合パートナーのN-末端が、アポリポプロテインのC-末端と連結されるように、融合タンパク質を設計する方法であり、前記アミノ酸リンカーは、融合タンパク質の他の部位には存在しない。この方法は、特定のアミノ酸配列、例えば、特定の認識配列を参照することにより、切断手段を選択し得るという利点を有する。リンカーは、1以上のペプチド結合の直接的かつ特異的な切断に絶対的に必要な最小限の配列以上を包含してもよい。リンカーは、2つの核酸配列の結合の結果として生じてもよい。この実施態様では、各配列は、ライゲーションが開始されて切断可能なリンカー、例えば、切断可能な認識部位を形成できる多くのヌクレオチドを含んでいる。一実施態様では、エンテロキナーゼがアポリポプロテインを内部で切断するため、融合タンパク質をエンテロキナーゼで切断しない。しかし、この切断部位は、特にプロテアーゼを切断に使用せず、化学物質やインテインなどで代用する場合、アポリポプロテインの発現を改善するために使用され得る。他の実施態様では、黄色ブドウ球菌プロテアーゼV8としても知られるGlu-Cエンドプロテアーゼで融合タンパク質を切断しない。このプロテアーゼは、セリンプロテアーゼであり、ペプチド結合のC-末端をグルタミン酸残基に選択的に切断する。また、このプロテアーゼは、グルタミン酸残基よりも100~300倍遅い速度でアルパラギン酸残基を切断する。しかし、このプロテアーゼの切断認識部位の存在により、γ-ゼイン単独の使用に比べて、アポリポプロテインの発現レベルが低減し得る。融合タンパク質を切断し、アポリポプロテインを放出する好ましい方法は、融合タンパク質の他の部位では生じない酵素切断に対する特異的な認識部位を含むアミノ酸配列を介して、融合パートナーのN-末端が、アポリポプロテインのC-末端と連結されるように、融合タンパク質を設計する方法である。この方法は、認識配列を参照することにより、切断酵素を選択し得るという利点を有する。認識部位は、直接的な切断に絶対的に必要な最小限度の配列以上を包含してもよい。認識部位は、2つの核酸配列の結合の結果として生じてもよい。この実施態様では、各配列は、連結が開始されて切断可能な認識部位を形成できる多くのヌクレオチドを含んでいる。本明細書に記載される核酸配列は、植物に最適化された配列であってもよい。プロテアーゼは、リンカー中の1以上のペプチド結合を特異的に切断するために使用してもよい。プロテアーゼは、Ala-Cエンドプロテアーゼであってもよい。他の実施態様では、プロテアーゼは、Glu-Cエンドプロテアーゼであり、黄色ブドウ球菌プロテアーゼV8としても知られる。このプロテアーゼは、セリンプロテアーゼであり、ペプチド結合のC-末端をグルタミン酸残基に選択的に切断する。また、このプロテアーゼは、グルタミン酸残基よりも100~300倍遅い速度でアスパラギン酸残基で切断する。更なる実施態様では、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質をコードする核酸配列と切断認識部位との間にリンカー配列を追加してもよい。他の実施態様では、切断認識部位及びアポリポプロテインとの間にリンカー配列を追加してもよい。リンカーは、切断効率を向上するために機能し得る。リンカー配列の非限定的な例としては、アミノ酸リンカー5又は3が挙げられる。他の実施態様では、プロテアーゼはTEVプロテアーゼである。TEVプロテアーゼは、高度に部位特異的なシステインプロテアーゼであり、タバコエッチウィルスで見出される。このプロテアーゼに対する最適な切断認識部位は、配列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-であり、切断はGln残基とGly/Ser残基の間で生じる。従って、適切なリンカーの非限定的な例としては、Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-、x式中、xは2、3、4、5、6、7、8、9又は10又はそれ以上である、又はy式中、yは2、3、4、5、6、7、8、9又は10又はそれ以上であるが挙げられる。一実施態様では、リンカーは4である。他の実施態様では、リンカーは3である。更なる実施態様では、アポリポプロテインをコードする配列は、前記リンカーの3’末端に位置する。好ましい実施態様では、切断認識部位を切断するために使用されるプロテアーゼは、TEVプロテアーゼである。TEVプロテアーゼは高度に部位特異的なシステインプロテアーゼであり、タバコエッチウィルスで見出される。このプロテアーゼに対する最適な切断認識部位は、配列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-ENLYFQであり、切断はGln残基とGly/Ser残基の間で生じる。一実施態様では、Glu-Cエンドプロテアーゼ又はペプスタチン感受性アスパルチルPAPAプロテアーゼに対する切断認識部位が、TEVプロテアーゼと共に使用される。一実施態様では、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質と切断認識部位との間にリンカー、例えば、5又は3が存在し得る。他の実施態様では、2つのタンパク質を分離するために非タンパク質分解性手段を使用してもよい。従って、例えば、インテインを使用してもよい。種々の異なるインテインが当該分野で知られており、所定の条件下、例えば、還元条件下で切断を生じさせることができる。従って、一実施態様では、アミノ酸リンカーはインテインをコードしてもよい。インテインは、種々のバクテリア種-例えば、シネコシスティス種又はマイコバクテリウム種-例えば、マイコバクテリウムゼノピなどに由来してもよい。インテインは、サッカロミセス種-例えば、出芽酵母などに由来してもよく、出芽酵母液胞膜ATPアーゼインテインであってもよい。一実施態様では、インテインは、マイコバクテリウムゼノピジャイレースAインテインである。アミノ酸リンカーが必要でなくてもよい場合、融合タンパク質からアポリポプロテインを分離するため、化学物質を使用してもよい。本明細書に記載される核酸配列は、植物に最適化された配列であってもよい。更なる実施態様では、本発明の方法に使用される核酸構築物は、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質をコードする第1の核酸配列であり、必要により1以上の非天然繰り返し配列モチーフをコードする核酸配列を更に含む第1の核酸配列;必要により、内部のペプチド結合が特異的に切断され得るアミノ酸リンカーをコードする第2の核酸配列;及びアポリポプロテインをコードする第3の核酸配列を含んでおり、前記第1、第2、及び第3の核酸配列が互いに作動可能に連結している。必要により、前記核酸配列の転写を調節する調節ヌクレオチド配列も含まれる。従って、前記核酸配列の転写を調節する種々の調節ヌクレオチド配列も含まれ得る。これらとしては、転写調節因子が挙げられ、それは、植物の成長過程の特定の時期の特定の細胞又は組織、例えば、栄養組織又は生殖組織でしか活性でない。このような一例は、プロモーターであり、それは、典型的には上流に位置し、二重鎖DNA断片に作動可能に連結するポリヌクレオチド要素/配列を意味する。適切なプロモーターは、RNAポリメラーゼ及び様々な因子を含む転写複合体を誘致することにより、核酸配列の転写を活性化し、RNA合成を開始できる。プロモーターは、天然遺伝子に近接の領域に完全に由来してもよく、異なる天然プロモーター又は合成DNAセグメントに由来する異なる要素で構成してもよい。一実施態様では、ある組織で1以上のポリヌクレオチドの発現が好ましい場合、組織特異的な発現を利用でき、有利であり得る。成長制御下の組織特異的プロモーターの例としては、ある組織、例えば、栄養組織例えば、根、葉又は生殖組織例えば、果実、胚珠、種子、花粉、雌しべピストル、花又は任意の胚組織などで転写のみ又は専ら転写のみを開始できるプロモーターが挙げられる。生殖組織特異的プロモーターの例としては、例えば、葯特異的、胚珠特異的、胚特異的、胚乳特異的、外皮特異的、種子及び種皮特異的、花粉特異的、花弁特異的、又はこれらの組み合わせであってもよい。適切な葉特異的プロモーターとしては、C4植物トウモロコシ由来のピルベートオルトホスフェートジキナーゼPPDKプロモーター、トウモロコシ由来のcab-m1Ca2プロモーター、シロイヌナズナmyb関連遺伝子プロモーターAtmyb5、リブロースビホスフェートカルボキシラーゼRBCSプロモーター例えば、葉及び光環境下で生育した苗で発現されるトマトRBCS1、RBCS2及びRBCS3A遺伝子、トマト果実の成長過程で発現されるRBCS1及びRBCS2、又は葉身及び葉鞘の葉肉細胞で殆ど排他的に高レベルで発現されるリブロースビホスフェートカルボキシラーゼプロモーターが挙げられる。適切な老化特異的プロモーターとしては、果実の熟成、葉の老化及び落葉の間に活性であるトマトプロモーター、システインプロテアーゼをコードする遺伝子のトウモロコシプロモーターが挙げられる。適切な葯特異的プロモーターを使用し得る。当業者に既知の適切な根優先プロモーターを選択してもよい。適切な種子優先プロモーターとしては、種子特異的プロモーター種子の成長の間活性であるプロモーター、例えば、種子の貯蔵タンパク質のプロモーター及び種子-発芽プロモーター種子の発芽の間活性であるプロモーターが挙げられる。このような種子優先プロモーターとしては、限定されないが、Cim1サイトカイニン誘導メッセージ;milpsミオ-イノシトール-1-ホスフェートシンターゼ;Zm-40としても知られるmZE40-2;nuclc;及びcelAセルロースシンターゼなどが挙げられる。Glob-1は、胚特異的プロモーターである。双子葉植物の場合、種子特異的プロモーターとしては、限定されないが、マメβ-ファセオリン、ナピンnapin、β-コングリシニン、ダイズレクチン、クルシフェリンなどが挙げられる。単子葉植物の場合、種子特異的プロモーターとしては、限定されないが、トウモロコシ15kDaゼインプロモーター、22kDaゼインプロモーター、27kDaゼインプロモーター、g-ゼインプロモーター、27kDaγ-ゼインプロモーター例えば、gzw64Aプロモーター、Genbank登録番号S78780参照、ワキシープロモーター、シュランケン1プロモーター、シュランケン2プロモーター、グロブリン1プロモーターGenbank登録番号L22344参照、Ltp2プロモーター、cimプロモーター、トウモロコシend1及びend2プロモーター、nuc1プロモーター、Zm40プロモーター、eep1及びeep2;lec1、チオレドキシンHプロモーター;mlip15プロモーター、PCNA2プロモーター;及びシュランケン-2プロモーターが挙げられる。誘導プロモーターの例としては、病原菌の攻撃、嫌気条件、上昇した温度、光、乾燥、低温、又は高い塩濃度に応答するプロモーターが挙げられる。病原菌誘導プロモーターとしては、病原菌の感染後に誘導される病原菌関連タンパク質PRタンパク質例えば、PRタンパク質、SARタンパク質、β-1,3-グルカナーゼ、キチナーゼ由来のプロモーターが挙げられる。植物プロモーターに加えて、他の適切なプロモーターは、バクテリア起源に由来してもよく、例えば、オクトピンシンターゼプロモーター、ノパリンシンターゼプロモーター及びTiプラスミドに由来する他のプロモーターであってもよく、ウィルスプロモーター例えば、カリフラワーモザイクウィルスCaMVの35S及び19SRNAプロモーター、タバコモザイクウィルスの構成プロモーター、カリフラワーモザイクウィルスCaMV19S及び35Sプロモーター、ゴマノハグサモザイクウィルス35Sプロモーターに由来してもよい。調節配列は、植物において機能的である転写終結配列を含んでいてもよい。また、調節配列は、植物において機能的である翻訳エンハンサーを含んでいてもよい。エンハンサーは、転写活性化因子などの転写調節タンパク質を誘致できる核酸配列であり、プロモーター活性を増大することにより、転写活性を増大する。適切なエンハンサーは、対象の天然プロモーター同種起源に近接の領域に由来してもよく、非天然構造異種起源に由来してもよく、対象の任意のプロモーターに作動可能に連結し、プロモーターの活性又は組織特異性を増大し得る。転写単位の配向に関し、任意の配向で作動するエンハンサーもある。例えば、エンハンサーは、プロモーター及び核酸構築物を含む転写単位の上流又は下流に位置してもよい。組換えアポリポプロテインの発現に使用される植物宿主細胞は、植物から抽出される又は抽出可能な細胞であってもよく、植物外で培養される培養植物細胞であってもよい。従って、一実施態様では、植物は、植物細胞、例えば、培地又は植物外で成長された植物細胞例えば、インビトロで成長された植物細胞又は細胞塊などである。植物の非限定的な例としては、単子葉植物及び双子葉植物、例えば、作物、観賞植物、非栽培植物又は野生植物が挙げられる。更なる例としては、商用又は農業用の植物、例えば、作物特に、ヒトの食料又は動物の餌に用いられる作物、木材-又はパルプ-製造用樹木、野菜植物、果実植物及び観賞植物が挙げられる。1以上の核酸分子を植物、例えば、単子葉植物及び双子葉植物に導入例えば、形質転換又は浸潤する手法が、当該分野で知られている。核酸分子単数又は複数、ベクター、構築物などを植物に導入するために、いかなる方法を使用してもよい。具体例として、構築物単数又は複数でコートされた微粒子を利用する微粒子銃法又は遺伝子銃法、アグロバクテリウム媒介形質転換[例えば、Aラジオバクター、Aリゾゲネス、Aルビ又はAツメファシエンス]、ウィルスベクター媒介形質転換、電気穿孔法及びアグロバクテリウム細胞による浸潤アグロ浸潤とも称されるによって植物に導入してもよい。一実施態様では、植物細胞のアグロバクテリウム媒介形質転換が使用される。他の実施態様では、アグロ浸潤を使用し、核酸を植物全体、無傷植物、又はその一部に導入する。アグロ浸潤は、当該分野で知られた方法及び装置により、減圧下又は真空下で実行され得る。核酸を植物に導入することにより、核酸によってコードされるタンパク質が安定に発現し得る。典型的には、安定な発現により、核酸が宿主ゲノムに組み込まれ、トランスジェニック植物を作り出すであろうし、核酸は次世代へと伝えられるだろう。核酸を植物に導入することにより、核酸によってコードされるタンパク質が一時的に発現し得る。一時的な発現は、必ずしも宿主ゲノムへの核酸の組み込みに依存しない。典型的には、アグロバクテリウム細胞を浸潤したタバコ植物を5日、10日、15日又は20日又はそれ以上インキュベートした後、植物の一部分を採取し、組換え産生タンパク質を回収する。両方の形式の発現が、本発明では想定される。核酸が導入された植物はインキュベートされ、選択的マーカー遺伝子が使用されているなら、必要により選択して子孫が得られる。これらの子孫は、トランスジェニック種子を製造するために使用してもよく、或いは他の植物とともに繁殖してもよい。このような子孫から得られる種子は、発芽し、栽培し、当初導入した核酸を含む子孫の次世代を調製するために使用してもよい。植物由来の未成熟の胚又は胚発生カルスを、出発材料として使用してもよい。これらの方法は、ありふれたものであり、当業者に公知である。一旦、植物が成長したら、ヌクレオチド配列が発現される組織を採取し、本明細書に記載の方法を用いて回収する。幾つかの実施態様では、生存を延長しようとする条件下で植物をインキュベートすることが望まれ得る場合、核酸を植物に導入する方法により、植物が健康的でなくなるかもしれない。幾つかの実施態様では、核酸を導入してから5日、10日、15日又は20日後又はそれ以降に植物組織を採取することが望まれ得る。更なる実施態様では、核酸配列、核酸構築物、又はベクターなどは、ウィルス起源などの遺伝子サイレンシングサプレッサーをコードする核酸配列を含んでいる。一実施態様では、遺伝子サイレンシングサプレッサーは、ハヴェルリバーウィルス、ピアーラテントウィルス、リシアンサスネクローシスウィルス、ブドウヴァインアルジェリアンラテントウィルス、ペラルゴニウムネクロティックスポットウィルス、シンビジウムリングスポットウィルス、アーチチョークモトルドクリンクルウィルス、カーネーションイタリアンリングスポットウィルス、レタスネクロティックスタントウィルス、ライスイエローモトルウィルス、ジャガイモウィルスX、キュウリモザイクウィルス、キュウリネクロティックウィルス、ジャガイモウィルスY、及びトマトブッシースタントウィルス又はこれらの2以上の組み合わせから選択されるウィルスの遺伝子サイレンシングサプレッサーである。本発明に使用し得る遺伝子サイレンシングサプレッサーの例としては、限定されないが、ライスイエローモトルウィルスのp1タンパク質、ジャガイモウィルスXのp25タンパク質、アフリカンキャッサバモザイクウィルスのAC2タンパク質、キュウリモザイクウィルスの2bタンパク質、19kDaのキュウリネクローシスウィルスのp19タンパク質、ジャガイモウィルスY、タバコエッチウィルス及びトマトブッシースタントウィルスのヘルパーコンポーネントプロテアーゼが挙げられる。一実施態様では、遺伝子サイレンシングサプレッサーは、タバコエッチウィルスのHcProである。他の実施態様では、遺伝子サイレンシングサプレッサーは、トマトブッシースタントウィルスのp19タンパク質である。従って、更なる実施態様では、植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するタンパク質をコードする第1の核酸配列であり、必要により非天然繰り返し配列モチーフをコードする核酸配列を更に含む第1の核酸配列;アポリポプロテインをコードする第2の核酸配列;及び必要により、内部のペプチド結合が特異的に切断され得るアミノ酸リンカーをコードする第3の核酸配列を含んでおり;前記第1、第2及び第3の核酸配列が、お互い、及び必要により、前記核酸配列単数又は複数の転写を調節する調節ヌクレオチド配列、及び必要により、適切にはウィルス起源の遺伝子サイレンシングサプレッサーをコードする発現可能な核酸に作動可能に連結している、核酸構築物が提供される。代替的な実施態様では、遺伝子サイレンシングサプレッサーをコードする発現可能な核酸は、植物又は植物細胞に導入される別個の第2の核酸分子又は第2の核酸の一部であり得、アポリポプロテインを産生する植物又は植物細胞において共発現される。例えば、安定な植物の形質転換を以下のように実行し得る。ベクターをアグロバクテリウムツメファシエンスに輸送する。Draperら1988の方法InPlantGeneticTransformationandGeneExpressionALaboratoryManual編者DraperJScottRArmitageP及びWaldenR、BlackwellScientificPublicationsに従って、タバコ[ニコチアナベンサミアナ又はNタバカム]葉片を形質転換する。再生植物を、200mg/Lのカナマイシンを含む培地上で選択し、温室に移す。最も高い導入遺伝子産物レベルを有する形質転換タバコ植物を培養し、T1世代を得る。生育した葉約12cm長を採取し、直ぐに液体窒素で凍結し、更なる実験のため-80°Cで貯蔵する。植物宿主細胞は、穀類作物例えば、小麦、燕麦、大麦、トウモロコシ、ライ麦、ライ小麦、米、粟、モロコシ、キノア、アマランス、ソバ;飼料作物例えば、アルファルファ、ベッチ、クローバーなどを含む飼料草及び飼料双子葉植物;油糧種子作物例えば、綿花、紅花、ヒマワリ、大豆、キャノーラ、菜種、亜麻、ピーナッツ及び油やし;木の実例えば、クルミ、カシュー、ヘーゼルナッツ、ピーカン、アーモンドなど;サトウキビ、ココナッツ、ナツメヤシ、オリーブ、テンサイ、茶及びコーヒー;木材-又はパルプ-製造用樹木;野菜作物、例えば、マメ科植物例えば、豆、エンドウ豆、レンズ豆、アルファルファ、ピーナッツ、レタス、アスパラガス、アーチチョーク、セロリ、ニンジン、ダイコン、アブラナ属例えば、キャベツ、ケール、マスタード及び他の葉状アブラナ属、ブロッコリー、カリフラワー、芽キャベツ、カブ、コールラビ、ウリ科植物例えば、キュウリメロン、夏カボチャ、冬カボチャ、アリウム属例えば、タマネギ、ニンニク、リーキleek、シャロット、チャイブ、ナス科の構成物例えば、トマト、ナス、ジャガイモ、ペッパー、ホオズキ及びアカザ科の構成物例えば、ビート、チャード、ホウレンソウ、キノア、アマランス;果物、例えば、リンゴ、ナシ、柑橘類例えば、オレンジ、ライム、レモン、グレープフルーツなど、核果例えば、アプリコット、ピーチ、プラム、ネクタリン、バナナ、パイナップル、ブドウ、キウイフルーツ、パパイヤ、アボカド、及びベリー;並びに観賞植物、例えば、観賞顕花植物、観賞樹木及び低木、観賞地被植物、及び観賞草であってもよい。さらに、双子葉植物の例としては、限定されないが、キャノーラ、綿花、ジャガイモ、キノア、アマランス、ソバ、紅花、大豆、テンサイ及びヒマワリ亜が挙げられ、より適切には、大豆、キャノーラ及び綿花である。さらに、単子葉植物の例としては、限定されないが、小麦、燕麦、大麦、トウモロコシ、ライ麦、ライ小麦、米、観賞草及び飼料草、モロコシ、粟、サトウキビが挙げられる。植物宿主細胞は、以下の科の1つからの種を含む、単子葉植物又は双子葉植物又は植物細胞系であることもできるし、それに由来することもできる:キツネノマゴ科、ネギ科、ユリズイセン科、ヒガンバナ科、キョウチクトウ科、ヤシ科、キク科、メギ科、ベニノキ科、アブラナ科、パイナップル科、アサ科、ナデシコ科、イヌガヤ科、アカザ科、イヌサフラン科、Cucurbitaceae、ヤマノイモ科、マオウ科、コカノキ科、トウダイグサ科、マメ科、シソ科、アマ科、ヒカゲノカズラ科、アオイ科、メランチウム科、バショウ科、フトモモ科、ヌマミズキ科、ケシ科、マツ科、オオバコ科、イネ科、バラ科、アカネ科、ヤナギ科、ムクロジ科、ナス科、イチイ科、ツバキ科またはブドウ科。適切な種としては、アベルモスクス属、アビエス属、アセル属、アグロスチス属、アリウム属、アルストロメリア属、アナナス属、アンドログラフィス属、アンドロポゴン属、アルテアポリポプロテイニア属、アルンド属、アトローパ属、ベルベリス属、ベタ属、ビクサ属、ブラシカ属、カレンデュラ属、カメリア属、カンプトテカ属、カンナビス属、カプシクム属、カルタムス属、カタランサス属、ケファロタクスス属、クリサンセマム属、シンコナ属、キトルルス属、コフィア属、コルチカム属、コリウス属、ククアポリポプロテイン属、ククルビタ属、キノドン属、ダツラ属、ダイアンサス属、ジギタリス属、ディオスコレア属、エラエイス属、エフェドラ属、エリアンサス属、エリスロキシルム属、ユーカリプタス属、フェスツカ属、フラガリア属、ガランツス属、グリシン属、ゴシピウム属、ヘリアンサス属、ヘベア属、ホルデウム属、ヒヨスチアムス属、ジャトロファ属、ラクツカ属、リナム属、ロリウム属、ルピナス属、リコペルシコン属、リコポディウム属、マニホット属、メディカゴ属、メンタ属、アポリポプロテインカンツス属、ムサ属、ニコチアナ属、オリザ属、パニクム属、パパベル属、パルテニウム属、ペンニセツム属、ペチュニア属、ファラリス属、フレウム属、ピヌス属、ポア属、ポインセチア属、ポプルス属、ラウオルフィア属、リシヌス属、ロサ属、サッカルム属、サリクス属、サンギナリア属、スコポリア属、セカレ属、ソラヌム属、ソルガム属、スパルティナ属、スピナキア属、タナセタム属、タクサス属、テオブロマ属、トリチコセカレ属、トリチクム属、ウニオラ属、ベラトルム属、ビンカ属、ヴィティス属およびゼア属のメンバーが例示できる。他の適切な種としては、パニクム種、ソルガム種、アポリポプロテインカンサス種、サッカルム種、エリアンサス種、ポプルス種、アンドロポゴンゲラルディイ、ペンニセツムプルプレウム、ファラリスアルンディナケア、キノドンダクティロン、フェスツカアルンディナケア、スパルティナペクティナタ、メディカゴサティウァ、アルンドドナックス、セカレケレアレ、サリクス種、ユーカリプタス種、トリチコセカレ小麦タイムライ麦、タケ、ヘリアンサスアンヌス、カルタムスティンクトリウス、ジャトロファクルカス、リキヌスコムムニス、エラエイスギネエンシス、リヌムウシタティッシムム、ブラッシカユンケア、ベタブルガリス、マニホットエスクレンタ、リコペルシコンエクスレンタム、ラクツカサティバ、ムサパラディシアカ、ソラヌムツベロスム、ブラシカオレラシア、カメリアシネンシス、フラガリアアナナッサ、テオブロマカカオ、コフィアアラビカ、ヴィティスヴィニフェラ、アナナスコモサス、カプシクムアンヌウム、アリウムセパ、ククアポリポプロテインメロ、ククアポリポプロテインサティウス、ククルビタマクシマ、ククルビタモスカータ、スピナキアオレラケア、シトルルスラナタス、アベルモスクスエスクレンツス、Solanummelongena、ロサ種、ディアンツスカリオフィルス、ペチュニア種、ポインセチアプルケリマ、ルピナスアルブス、ウニオラパニクラータ、ベントグラス、ポプルストレムロイデス、ピヌス種、アビエス種、アセル種、ホルデウムウルガレ、ポアプラテンシス、ロリウム種及びフレウムプラテンセ、パニクムウィルガツム、ソルガムビカラー、アポリポプロテインカンサスギガンテウス、サッカルム種、ポプルスバルサミフェラ、ゼアマイス、グリシンマックス、ブラッシカナプス、トリチクムアエスチウム、ゴシピウムヒルスツム、オリザサティバ、ヘリアンサスアンヌス、メディカゴサティウァ、ベタブルガリス又はペンニセツムグラウクムが例示できる。特に適切な実施態様では、植物宿主細胞は、天然タバコ植物、変異タバコ植物、非天然タバコ植物又はトランスジェニックタバコ植物であってもよく、それらに由来してもよい。タバコ植物は、ニコチアナ属の植物であって、Nルスチカ及び又はNタバカムを含むニコチアナ属の種々の種を含む。他の種としては、Nアカウリス、Nアクミナタ、Nアクミナタ変種マルチフロラ、Nアフリカナ、Nアラタ、Nアムプレキシカウリス、Nアレントシ、Nアテヌアタ、Nベナビデシ、Nベンサミアナ、Nビゲロビ、Nボナリエンシス、Nカビコラ、Nクレベランジ、Nコルジフォリア、Nコリンボサ、Nデブネイ、Nエクセルシオル、Nフォルゲチア、Nフラグランス、Nグラウカ、Nグルチノサ、Nグッドスピーディ、Nゴセイ、Nハイブリッド、Nイングルバ、Nカワカミ、Nナイチアナ、Nラングスドルフィ、Nリネアリス、Nロンギフロラ、Nマリチマ、Nメガロシホン、Nミエルシ、Nノクチフロラ、Nヌジカウリス、Nオブツシフォリア、Nオシデンタリス、Nオシデンタリス亜種ヘスペリス、Nオトホラ、Nパニクラータ、Nパウシフロラ、Nペツニオイデス、Nプルムバギニフォリア、Nクアドリバルビス、Nライモンジ、Nレパンダ、Nロスラタ、Nロスラタ亜種イングルバ、Nロツンジホリア、Nセトケリ、Nシムランス、Nソラニフォリア、Nスペガジニ、Nストクトニ、Nスアベオレンス、Nシルベストリス、Nタバカム、Nチルシフロラ、Nトメントサ、Nトメントシホルアポリポプロテイン、Nトリゴノフィラ、Nアンブラチカ、Nアンドゥラタ、Nベルチナ、Nウィガンジオイデス及びNxサンデラエが挙げられる。栽培品種若しくは優良栽培品種であるか、又はそれらに由来する植物宿主細胞の使用も考えられる。変種または栽培品種の非限定的な例は、BD64、CC101、CC200、CC27、CC301、CC400、CC500、CC600、CC700、CC800、CC900、Coker176、Coker319、Coker371Gold、Coker48、CD263、Denzizli、DF911、Galpaoタバコ、GL26H、GL350、GL600、GL737、GL939、GL973、HB04P、K149、K326、K346、K358、K394、K399、K730、KDH959、KT200、KT204LC、KY10、KY14、KY160、KY17、KY171、KY907、KY907LC、KTY14xL8LC、Karabaglar、LittleCrittenden、McNair373、McNair944、msKY14xL8、NarrowLeafMadole、NC100、NC102、NC2000、NC291、NC297、NC299、NC3、NC4、NC5、NC6、NC7、NC606、NC71、NC72、NC810、NCBH129、NC2002、NealSmithMadole、OXFORD207、Periqueタバコ、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R610、R630、R711、R712、RG17、RG81、RGH51、RGH4、RGH51、RS1410、Speight168、Speight172、Speight179、Speight210、Speight220、Speight225、Speight227、Speight234、SpeightG28、SpeightG70、SpeightH6、SpeightH20、SpeightNF3、TI1406、TI1269、TN86、TN86LC、TN90、TN97、TN97LC、TND94、TND950、TRMadole、TurkishSamson、VA309、VA359、DAC、Mata、Fina、PO2、BY64、AS44、RG17、RG8、HB04P、BasmaXanthiBX2A、Coker319、Hicks、McNair944、Burley21、K149、YakaJB1253、KasturiMawar、NC297、Coker371Gold、PO2、Wislica、Simmaba、TurkishSamsun、AA371、B13P、交配種BU21xHojaParado97株からのF4、Samsun、PO1、LAB21、LNKY171、TI1406、Basma、Galpao、Perique、Beinhart10001又はPeticoである。Nタバカム栽培品種の非限定的な例は、AA371、B13P、Xanthi、KTRD3ハイブリッド107、BelW3、79615、SamsunHolmesNN、KTRDC2ハイブリッド49、KTRDC4ハイブリッド110、Burley21、BY64、KTRDC5KY160SI、KTRDC7FCA、KTRDC6TN86SI、Coker371Gold、K149、K326、K346、K358、K394、K399、K730、KY10、KY14、KY160、KY17、KY8959、KY9、KY907、MD609、McNair373、NC2000、PG01、PG04、M066、PO1、PO2、PO3、RG11、RG17、RG8、SpeightG28、TN86、TN90、VA509、AS44、BanketA1、BasmaDramaB8431、BasmaIZichnaZP4B、BasmaXanthiBX2A、Batek、BesukiJember、C104、Coker319、Coker347、CriolloApolipoproteinionero、DACMataFina、Delcrest、Djebel81、DVH405、GalpaoComum、HB04P、HicksBroadleaf、KabakulakElassona、KasturiMawar、KutsageE1、KY14xL8、KY171、LABU21、McNair944、NC2326、NC71、NC297、NC3、PVH03、PVH09、PVH19、PVH2110、RedRussian、Samsun、Saplak、Simmaba、Talgar28、TurkishSamsun、Wislica、Yayaldag、NC4、TRMadole、PrilepHC72、PrilepP23、PrilepPB1561、PrilepP1221、YakaJK48、YakaJB1253、TI1068、KDH960、TI1070、TW136、SamsunNN、Izmir、Basma、TKF4028、L8、TKF2002、TN90、GR141、Basmaxanthi、GR149、GR153、PetitHavana又はXanthiNNである。植物宿主細胞は、組換えアポリポプロテインの発現及び/又は活性を改善するために改変してもよい。宿主細胞は、例えば、アポリポプロテインの形成を更に促進するシャペロンタンパク質を含むように改変してもよい。宿主細胞は、アポリポプロテインの発現をより効率的に制御するためにリプレッサータンパク質を含むように、又は更に発現レベルを改善するためにエンハンサータンパク質を含むように改変してもよい。植物においてアポリポプロテインを製造する方法は、前記植物において、融合タンパク質としてアポリポプロテインを発現できる条件下で前記植物を生育する第2の工程を含んでいる。従って、アポリポプロテインポリペプチドは、融合タンパク質として該ポリペプチドを発現させるのに適切な培養条件下で形質転換された植物細胞をインキュベートすることによって調製される。得られたポリペプチドは、タンパク質顆粒の形態で植物細胞の小胞体に発現される。アポリポプロテインの発現は、細胞中のアポリポプロテインポリペプチドをコードするmRNAの量を検出することによって測定してもよく、それは、例えば、PCR又はノーザンブロットによって定量することができる。試料中のアポリポプロテインポリペプチドの量の変化を測定する場合、公知の技術を用いて細胞中のアポリポプロテインポリペプチドを定量するため、抗アポリポプロテイン抗体の使用によるアポリポプロテインの検出を利用できる。或いは、アポリポプロテインの生物学的活性を測定することができる。融合タンパク質を含むタンパク質顆粒を回収するために、種々の方法を使用してもよい。組換えタンパク質顆粒様集積体は、特定の融合タンパク質に関する所定の密度を有する。所定の密度は、典型的には、ホモジネート中に存在する実質的に全部の内因性宿主細胞タンパク質の密度を超え、典型的には約1.1~約1.35g/mlである。この高密度のタンパク質顆粒は、多量体として集積し、蓄積する組換え融合タンパク質の一般的な能力に起因し得る。タンパク質顆粒は、植物において発現する場合、典型的には約1ミクロンの直径を有する球形の形状であり、周囲の膜を有する。密度によるタンパク質顆粒の回収は、典型的には、遠心機を用いて行われる。遠心分離は、密度勾配を与える溶質[例えば塩例えば塩化セシウム又は糖例えばショ糖]の存在下で行ってもよい。ホモジネート中に異なる密度の領域を形成し、比較的高い濃度のタンパク質顆粒を含む領域と、比較的低い濃度のタンパク質顆粒を含む領域とを提供してもよい。タンパク質顆粒の少ない領域を比較的高い濃度のタンパク質顆粒を含む領域から分離することにより、前記融合タンパク質を回収してもよい。本明細書に記載されるように、融合タンパク質を含むタンパク質顆粒の単離の前に、タンパク質顆粒を回収するか、又は1以上の試薬で処理するか、又は1以上の手順に供することができる。幾つかの実施態様では、回収したタンパク質顆粒は、融合タンパク質の単離を必要とすることなく、そのまま用いられる。幾つかの実施態様では、1回の低速遠心分離工程で、ペレットの形態でタンパク質顆粒を十分に回収し得る。従って、具体例として、4°C、200×gで10分間の遠心分離で十分であり得る。他の実施態様では、低速遠心分離工程を1以上の高速遠心分離工程と組み合わせた2以上の遠心分離工程を行ってもよい。従って、具体例として、固形物及び細胞の破片を除去するための4°C、約200×g、10分間の遠心分離工程と、融合タンパク質をペレットに回収するための、例えば4°C、約6000×g、10分間の高速遠心分離工程とを組み合わせてもよい。この遠心分離工程に続いて、必要により、タンパク質顆粒の可溶化の前に、タンパク質顆粒を濃縮及び富化するための更なる任意の遠心分離工程と共に、界面活性剤例えば、非イオン性界面活性剤を含む溶液での1以上の洗浄工程を行ってもよい。更なる任意の遠心分離工程は、洗浄の合間に行ってもよい。一実施態様では、使用される界面活性剤はトリトンX-100であり、適切には1トリトンX-100である。他の実施態様では、更なる遠心分離工程が4°C、約6000×gで10分間行われ、これは洗浄の合間に行ってもよい。従って、本発明の一実施態様では、本方法は、植物又は植物材料から融合タンパク質を含むタンパク質顆粒を回収する追加の工程cであって、前記工程cは、好ましくは、i植物材料をホモジナイズする工程;iiホモジナイズした植物材料を、低速、好ましくは約200×gで遠心分離する工程;iiiホモジナイズした植物材料を工程iiよりも高速、好ましくは約6000×gで遠心分離する工程;及びiv融合タンパク質を含むタンパク質顆粒をペレット分画に回収する工程を含む。ペレット分画に含まれる融合タンパク質を可溶化するため、種々の緩衝液及び試薬を使用してもよい。具体例として、洗剤及び/又は還元剤を含む水性緩衝液に周囲の膜を溶出することによって、回収したタンパク質顆粒からアポリポプロテインを含む融合タンパク質を得てもよい。還元剤の例としては、2-メルカプトエタノール、チオグリコール酸、チオグリコール酸塩、ジチオトレイトールDTT、亜硫酸塩又は亜硫酸水素イオンが挙げられる。洗剤の例としては、ドデシル硫酸ナトリウムSDS、イオン性洗剤例えば、デオキシコール酸塩及びラウロイルサルコシン、非イオン性洗剤例えば、ツイーン20、NonidetP40及びオクチルグルコシド及び双性イオン洗剤例えばCHAPSが挙げられる。結合したアポリポプロテインを破壊しアンフォールドしないように条件が選択される。適切な可溶化条件を同定するために試験され得る変数としては、pH、塩、洗剤、還元剤並びに他の変数、例えば、成分比、時間及び温度が挙げられる。一実施態様では、尿素、ジチオトレイトール及びトリス2-カルボキシエチルホスフィンを含む緩衝液を用い、適切には1:10w/vのタンパク質顆粒:緩衝液比で可溶化を行うことができる。タンパク質顆粒は、終夜室温で緩衝液と共にインキュベートしてもよく、及び/又は細胞破砕機と共にインキュベートしてもよい。緩衝液の所望のpHに応じて、種々の緩衝液を用いることができる。pH範囲を調節するために使用できる緩衝液成分の非限定的な例としては、アセテート、シトレート、ヒスチジン、ホスフェート、アンモニウム緩衝液、例えば、酢酸アンモニウム、スクシナート、MES、CHAPS、MOPS、MOPSO、HEPES、トリスなど、並びにこれらのトリス-リンゴ酸-NaOHの組み合わせ、マレエート、クロロアセテート、ホルメート、ベンゾエート、プロピオナート、ピリジン、ピペラジン、ADA、PIPES、ACES、BES、TES、トリシン、ビシン、TAPS、エタノールアミン、CHES、CAPS、メチルアミン、ピペリジン、ホウ酸、炭酸、乳酸、ブタネアン二酸、ジエチルマロン酸、グリシルグリシン、HEPPS、HEPPSO、イミダゾール、フェノール、POPSO、コハク酸、TAPS、アミン系のベンジルアミン、トリメチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、フェニルアミン、エチレンジアミン又はモホリンが挙げられる。一実施態様では、緩衝液のpHは約8である。他の実施態様では、緩衝液は、還元剤好ましくはβメルカプトエタノールと、非イオン性界面活性剤好ましくはTritonX100と、必要により塩好ましくは塩化ナトリウムとを含む、50mMトリスpH9である。他の実施態様では、緩衝液は、約20mMのβ-メルカプトエタノールと、約1のTritonX100と、約500mMの塩化ナトリウムとを含む、約50mMトリスpH9である。従って、本発明の方法は、融合タンパク質を可溶化する更なる工程dであって、前記可溶化工程が、好ましくは、還元剤、非イオン性界面活性剤及び必要により塩を含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなる混合物の使用を含む、前記工程を含んでいてもよい。必要により、次の方法工程の前に、例えば、4°C、約16000×gで10分間、調製物を遠心分離してもよい。アポリポプロテインタンパク質を含む分離可溶化融合タンパク質を回収する。この工程で、アポリポプロテインタンパク質は、そのまま用いてもよい。好ましくは、アポリポプロテインタンパク質は、さらに処理される。従って、一実施態様では、本方法は前記融合タンパク質からアポリポプロテインを放出する更なる工程を含んでいる。融合タンパク質からのアポリポプロテインの切断は、本明細書に記載される。更なる実施態様では、本方法は、切断工程に続いて、切断/放出されたアポリポプロテインを精製する追加の工程fを含んでいる。従って、一実施態様では、このように精製された組換えアポリポプロテインは、例えばSDSPAGE又はELISAによって測定される他のポリペプチドを実質的に含まない。他の実施態様では、精製されたアポリポプロテインは、例えばSDSPAGEまたはELISAによって測定されるとおり、100ppm未満の宿主タンパク質、適切には90ppm未満、80ppm未満、70ppm未満、60ppm未満、50ppm未満、40ppm未満、30ppm未満、20ppm未満、10ppm未満又は5ppm未満の宿主タンパク質を含むアポリポプロテイン組成物であるとみなされる。本発明によって製造される又は製造可能なアポリポプロテインは、その配列が由来する天然タンパク質の比活性の少なくとも50、60又は70、最も適切には少なくとも80、90、95又は100の比活性を有し得る。タンパク質精製には、負に荷電し、吸着剤又は固相を横切る又は通過する水溶液中のカチオンとの交換のための遊離カチオンを有する陽イオン交換樹脂を用いてもよい。下記のように、陽イオン交換樹脂を形成するのに適切な任意の負に荷電したリガンド、例えば、カルボキシレート、スルホネートなどを用いることができる。市販の陽イオン交換樹脂としては、限定されないが、例えば、スルホネート系の基を有する樹脂例えば、GEヘルスケア社製のMonoS、MiniS、Source15S及び3OS、SPSepharoseFastFlow登録商標、SPSepharoseHighPerformance、Tosoh社製のToyopearlSP650S及びSP650M、BioRad社製のMacroPrepHighS、PallTechnologies社製のCeramicHyperDS、TrisacrylM及びLSSP及びSpherodexLSSP;スルホエチル系の基を有する樹脂例えば、EMD社製のFractogelSE、AppliedBiosystems社製のPorosS10及びS20;スルホプロピル系の基を有する樹脂例えば、Tosoh社製のTSKGelSP5PW及びSP5PWHR、AppliedBiosystems社製のPorosHS20及びHS50;スルホイソブチル系の基を有する樹脂例えば、EMD社製のFractogelEMDSO3;スルホキシエチル系の基を有する樹脂例えば、Whatman社のSE52、SE53及びExpressIonS、カルボキシメチル系の基を有する樹脂例えば、GEヘルスケア社製のCMSepharoseFastFlow、BiochromLabs社製のHydrocellCM、BioRad社製のMacroPrepCM、PallTechnologies社製のCeramicHyperDCM、TrisacrylMCM、TrisacrylLSCM、ミリポア社製のMatrxCellufmeC500及びC200、Whatman社製のCM52、CM32、CM23及びExpressIonC、Tosoh社製のToyopearlCM650S、CM650M及びCM650C;スルホン酸及びカルボン酸系の基を有する樹脂例えば、JTBaker社製のBAKEPVBONDCarbpxySulfon;カルボン酸系の基を有する樹脂例えば、JTBaker社製のWPCBX、DowLiquidSepations社製のDOWEXMAC3、SigmaAldrich社製のAmberliteWeakCationExchangers、DOWEXWeakCationExchanger及びDiaionWeakCationExchangers並びにEMD社製のFractogelEMDCOO;スルホン酸系の基を有する樹脂例えば、BiochromLabs社製のHydrocellSP、DowLiquidSepations社製のDOWEXFineMeshStrongCationResin、JTBaker社製のUNOsphereS、WPSulfonic、Sartorius社製のSartobindS膜、SigmaAldrich社製のAmberliteStrongCationExchangers、DOWEXStrongCation及びDiaionStrongCationExchanger;並びにオルトホスフェート系の基を有する樹脂例えば、Whatman社製のPl1を含む。タンパク質精製には、正に荷電し、従って1以上の正に荷電した結合リガンドを有する陰イオン交換樹脂を用いることができる。吸着剤又は固相に結合した、陰イオン交換樹脂を形成するのに適切な任意の正に荷電したリガンド、例えば、第四級アミノ基を用いることができる。市販の陰イオン交換樹脂としては、AppliedBiosystems社製のDEAEセルロース、PorosPI20、PI50、HQ10、HQ20、HQ50、D50、Sartorius社製のSartobindQ、GEヘルスケア社製のMonoQ、MiniQ、Source15Q及び3OQ、Q、DEAE及びANXSepharoseFastFlow、QSepharosehighPerformance、QAEHADEX登録商標及びFASTQSepharose登録商標、JTBaker社製のWPPEI、WPDEAM、WPQUAT、BiochromLabs社製のHydrocellDEAE及びHydrocellQA、Biorad社製のUNOsphereQ、MacroPrepDEAE及びMacroPrepHighQ、PallTechnologies社製のCeramicHyperDQ、ceramicHyperDDEAE、TrisacrylM及びLSDEAE、SpherodexLSDEAE、QMASpherosilLS、QMASpherosilM及びMustangQ、DowLiquidSeparations社製のDOWEXFineMeshStrongBaseTypeIandTypeIIAnionResins及びDOWEXMONOSPHERE77、弱塩基アニオン、ミリポア社製のInterceptQ膜、MatrexCellufmeA200、A500、Q500及びQ800、EMD社製のFractogelEMDTMAE、FractogelEMDDEAE及びFractogelEMDDMAE、SigmaAldrich社製のAmberiiteweakstronganionexchangerstypeIandII、DOWEXweakandstronganionexchangerstypeIandII、DiaionweakandstronganionexchangerstypeIandII、Duolite、Tosoh社製のTSKゲルQ及びDEAE5PW及び5PWHR、ToyopearlSuperQ650S、650M及び650C、QAE550C及び650S、DEAE650M及び650C、Whatman社製のQA52、DE23、DE32、DE51、DE52、DE53、ExpressIonD及びExpressIonQが挙げられる。アフィニティークロマトグラフィーは、タンパク質精製の別の方法であり、通常、空間的相補性と、結合部位における1種以上の化学的相互作用、例えば、静電力、水素結合、疎水性力及びファンデルワールス力との組み合わせでタンパク質が生物学的に特異的なリガンドに可逆的かつ特異的に結合する分離方法を意味する。これらの相互作用は、例えば、等電点、疎水性又はサイズなどの分子の一般的特性によるのではなく、タンパク質とリガンドとの間の特異的相互作用、例えば、エピトープに対する免疫グロブリン結合、免疫グロブリンに対するプロテインA結合、生物学的反応修飾剤とその細胞表面受容体との間の相互作用の結果による。多くの場合、生物学的に特異的なリガンドも、タンパク質又はポリペプチドであり、固相、例えばビーズに固定できる。混合モードイオン交換樹脂は、タンパク質精製の別の方法であり、陽イオン部分、陰イオン部分又は疎水性部分で共有結合的に改変された固相を意味する。混合モードイオン交換樹脂の例としては、BAKERBONDABXJTBaker社;ニュージャージー州フィリップスバーグ、セラミックヒドロキシアパタイトタイプI及びII並びにフルオリドヒドロキシアパタイトBioRad社;カリフォルニア州ハーキュリーズ並びにMEP及びMBIHyperCelPallCorporation社;ニューヨーク州イーストヒルズが挙げられる。疎水性電荷誘導クロマトグラフィー又はHCICは、混合モードクロマトグラフィープロセスの一種であり、混合物中のタンパク質が、添加塩例えば、離液性塩の非存在下で弱い疎水性相互作用によって、イオン化可能なリガンドに結合する。混合モードは、結合のためのあるモード及び溶離のためのもう1つのモードを意味する。例えば、HCICに有用な固相は、その分離能力のために、チオフィリック作用の特性を組み合わせたすなわち、チオフィリッククロマトグラフィーの特性を利用するリガンドである疎水性基及びイオン化可能基を含む。従って、本発明の方法に用いる吸着剤は、中性生理学的又は弱酸性のpH、例えばpH約5~10、好ましくはpH約6~9.5でイオン化可能であり、弱い疎水性のリガンドを含む。このpHでは、リガンドは主に非荷電であり、弱い非特異的疎水性相互作用によってタンパク質に結合する。pHが低下すると、そのpHシフトにより、リガンドは電荷を獲得し、溶質に対する帯電反発によって、疎水性結合は破壊される。HCICに使用するための適切なリガンドの例としては、任意のイオン化可能な芳香族又は複素環構造例えば、ピリジン構造、例えば、2-アミノメチルピリジン、3-アミノメチルピリジン及び4-アミノメチルピリジン、2-メルカプトピリジン、4-メルカプトピリジン又は4-メルカプトエチルピリジン、メルカプト酸、メルカプトアルコール、イミダゾリル系、メルカプトメチルイミダゾール、2-メルカプトベンゾイミダゾール、アミノメチルベンゾイミダゾール、ヒスタミン、メルカプトベンゾイミダゾール、ジエチルアンモプロピルアミン、アミノプロピーノルホリン、アミノプロピルイミダゾール、アミノカプロン酸、ニトロヒドロキシ安息香酸、ニトロチロシン/エタノールアミン、ジクロロサリチル酸、ジブロモチラミン、クロロヒドロキシフェニル酢酸、ヒドロキシフェニル酢酸、チラミン、チオフェノール、グルタチオン、ビスルフェート及び色素並びにそれらの誘導体が挙げられる。一実施態様では、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーを使用する。これは、タンパク質と金属イオンとの配位共有結合に基づく分離方法である。タンパク質は、実質的に金属イオンに対する異なるアフィニティー範囲をもたらす幅広い種類のアミノ酸組成を有する。様々なタンパク質を分離するために、幾つかの異なる種類の固定化金属イオンカラムが開発されている例えば、Fe、Co、Cd、Ni又はZn。従って、一実施態様では、プロラミン、好ましくはγ-ゼインタンパク質が、金属イオンカラムに固定化される。他の実施態様では、固定化ニッケルカラムが使用される。他の実施態様では、逆相クロマトグラフィーが使用されるが、それは、非極性固定相を用いるクロマトグラフ法を意味する。他の実施態様では、高速逆相タンパク質液体クロマトグラフィーが使用される。他の実施態様では、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーと逆相クロマトグラフィーとの組み合わせが使用される。適切には、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィーが最初に使用され、続いて、逆相クロマトグラフィーが使用される。また、当該分野で開示されるアポリポプロテインの精製方法を、本明細書に記載の方法の代わりに使用してもよく、本明細書に記載の方法に加えて使用してもよい。具体例として、WO9811140には、アポリポプロテインを精製するための主要な水溶液に用いられる組成物であって、第1及び第2のポリマー材料を含み、前記第1及び第2のポリマー材料が前記主要な水溶液に固定化可能であり、前記第2のポリマー材料が両親媒性かつ水溶性である、前記組成物が開示されている。アポリポプロテインを精製する方法は、アポリポプロテインと前記組成物と水とを混合する工程と、得られた主要な水溶液を、形成された相を実質的に分離するのに十分な期間、維持する工程と、前記第2のポリマー材料及びアポリポプロテインの大部分を含む相を取り出す工程と、その後、アポリポプロテインから前記第2のポリマー材料を分離する工程とを含んでいる。一実施態様では、植物においてアポリポプロテインを製造する方法は、a植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγ-ゼインをコードする核酸配列とアポリポプロテインをコードする核酸配列とを含むか、それらからなるか、又は実質的にそれらからなり、前記核酸配列が互いに作動可能に連結している核酸構築物で植物を形質転換する工程;b前記植物において融合タンパク質としてアポリポプロテインを発現できる条件下で前記植物を生育する工程;c前記植物から前記融合タンパク質を含むタンパク質顆粒を回収する工程;d前記融合タンパク質を可溶化する工程;e前記融合タンパク質からアポリポプロテインを放出する工程;及びf放出されたアポリポプロテインを精製する工程を含んでいる。更なる態様は、本明細書に記載のように、前記核酸配列と、前記核酸配列の転写を調節する調節ヌクレオチド配列とを含む核酸構築物に関する。この構築物は、1以上のアポリポプロテイン核酸を含む、二重鎖の組換えDNA断片であってもよい。更なる態様は、前記核酸配列又は核酸構築物を含むベクターに関する。適切なベクターとしては、限定されないが、染色体外複製可能なエピソーム、例えば、環状二重鎖DNAプラスミド;線状化二重鎖DNAプラスミド;及び他の任意の起源のベクターなどが挙げられる。ベクターとしては、細菌及び/又は植物の形質転換に適したベクターが挙げられる。本明細書に記載の核酸配列又は構築物を含むベクターは、細胞に導入されるとき、前記細胞のゲノムに組み込まれ、それが組み込まれた染色体単数又は複数と共に複製されるプラスミド、コスミド又は植物ベクターであってもよい。基本的な細菌又は植物ベクターは、適切には、広宿主域複製起点;選択マーカー;及び、アグロバクテリウム形質転換のため、アグロバクテリウムを媒介して植物染色体へ輸送するためのTDNA配列を含む。異種配列の植物ゲノムへの組み込みを可能にするのに適した配列も使用し得る。これらとしては、トランスポゾン配列等、Cre/lox配列、相同組換えのための宿主ゲノム断片、及び植物ゲノムへのランダム挿入を可能にするTi配列が挙げられる。本明細書に記載の融合タンパク質を発現するのに特に有用であり得る発現ベクターを作るため、プロモーターをベクターに組み込んでもよい。適切な発現ベクターとしては、染色体外複製が可能なエピソーム、例えば、環状二重鎖DNAプラスミド;線状化二重鎖DNAプラスミド;及び他の機能的に同等な任意の起源の発現ベクターが挙げられる。発現ベクターは、アポリポプロテイン核酸又はアポリポプロテイン核酸構築物などに作動可能に連結されるプロモーターを少なくとも含む。プロモーターは、アポリポプロテイン核酸に直接的に連結してもよく、核酸、例えば、融合タンパク質の1以上の成分をコードする核酸が中間に介在してもよい。核酸配列、核酸構築物、核酸ベクターなどの製造において、それらの種々の断片を、種々の処理条件、例えば、ライゲーション、制限酵素消化、PCR、インビトロ変異誘発、リンカー及びアダプター付加などに供してもよい。従って、アポリポプロテイン発現のための構築物に用いられるDNAに、ヌクレオチド移行、転換、挿入、欠失などを行ってもよい。制限酵素消化、クレノウ平滑末端処理、ライゲーションなどのための方法は、当業者に公知であり、例えば、ManiatisらMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNYに記載されている。他の態様では、i植物においてタンパク質顆粒の形成を誘導するプロラミンタンパク質、好ましくはγ-ゼインをコードするアミノ酸配列;ii切断認識部位をコードするアミノ酸配列;及びiiiアポリポプロテインをコードするアミノ酸配列を含んでおり、前記第1、第2及び第3のアミノ酸配列が互いに作動可能に連結している融合タンパク質が開示される。融合タンパク質は、植物細胞における安定な小胞体由来のタンパク質顆粒に蓄積される。更なる態様では、本明細書に記載の核酸配列、核酸構築物、ベクター又は融合タンパク質を含む植物又は植物材料が開示される。更なる態様では、本発明の方法によって製造される又は製造可能なアポリポプロテインが開示される。本発明によって製造される又は製造可能な組換えアポリポプロテイン又はアポリポプロテインを含み、かつ所望の純度を有するタンパク質顆粒の凍結乾燥製剤又は水溶液の形態の製剤は、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤RemingtonsPharmaceuticalSciences16theditionOsolAEdを参照と混合することによって、貯蔵のために調製してもよい。許容される担体、賦形剤又は安定剤としては、用いられる量及び濃度でレシピエントに毒性がなく、緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸;アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤;防腐剤例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチル又はベンジルアルコール;アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;及びm-クレゾール;低分子量約10残基未満ポリペプチド;タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン;親水性ポリマー、例えば、オリビニルピロリドン;アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン;グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖、二糖及び他の炭水化物;キレート剤、例えば、EDTA;糖、例えば、ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトール;塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム;金属錯体;又は非イオン性界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコールPEGが挙げられる。また、組換えアポリポプロテインは、公知の方法を用いてPEG化又はポリエチレングリコールに結合させることができる。PEG化アポリポプロテインは、インビボでより安定であり得、治療を必要とする哺乳動物に投与されるとき、体内でより長い半減期をもたらす。一般的に、他の薬学的に重要なポリペプチドに用いる方法と同様な方法を用いて医薬組成物を処方し、投与してもよい。組換えアポリポプロテインは、凍結乾燥形態で保存し、投与の直前に滅菌水で再構成し、静脈内に投与してもよい。好ましくは、医薬製剤は、治療される特定の疾患のための所定用量滴定実験によって測定される用量で投与される。以下の実施例は例として提供されるものであり、限定のために提供されるものではない。特記しない限り、本発明は、分子生物学、植物生物学及び植物育種の慣用の手法及び方法を用いる。実施例1-材料及び方法クローニング及び浸潤γ-ゼイン野生型遺伝子、その断片及び変異体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸構築物を、それぞれアポリポプロテインA1Milanoをコードする合成配列にライゲーションする。γ-ゼインの断片又は変異体が用いられる場合、その断片又は変異体に天然γ-ゼインシグナルペプチドが存在するとき、核酸構築物は、更に5’末端に天然γ-ゼインシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実験では、プロテアーゼ切断部位を含むリンカーをコードする合成核酸配列も、γ-ゼインコード配列とアポリポプロテインA1Milanoコード配列との間に位置して、構築物中に含まれる。アポリポプロテインA1Milanoのコード配列は、植物での発現に最適化されている。タバコ植物細胞における核酸構築物の発現をmin35Sプロモーターが促進する部位で、核酸構築物をベクターにクローニングする。クローニングした核酸構築物を含むベクターを、アグロバクテリウムツメファシエンスAgl1株に導入する。アグロバクテリウム細胞を、ロータリーシェーカー上でOD600が1.6を超えるまで、28°C、250rpmで増殖する。増殖後、細菌を、4°C、8,000gで15分遠心分離することによって回収し、10mMMgCl2及び5mM2-n-モルホリノ-エタンスルホン酸、MESを含む浸潤溶液に再懸濁し、最終的にpHを5.6、OD600を2にする。植物[ニコチアナベンサミアナn;γ-ゼイン-n;γ-ゼイン-n;及びγ-ゼイン-n。アグロバクテリウムによるアグロ浸潤を用いて、種々のタバコ植物に構築物を別々に形質転換する。総タンパク質を抽出し、γ-ゼイン-特異的抗体を用いるウェスタンブロットによって定量する。4回のアグロ浸潤事象の平均の発現レベルは次のとおりである。結果は、アポリポプロテインA1Milanoを含まないγ-ゼインに対する相対的な定量化として表される。試験した4つの非天然繰り返し配列モチーフのうち、3つγ-ゼイン-n、γ-ゼイン-n及びγ-ゼイン-nは、γ-ゼイン-wt単独と比べて、アポリポプロテインA1Milanoの発現レベルを顕著に増大する。γ-ゼイン-n及びγ-ゼイン-nの融合タンパク質の可溶性抽出物をトランスジェニックタバコ植物の葉から得て、低速約1500×gで遠心分離する。沈殿したタンパク質を緩衝液に再懸濁し、可溶化する。2回の試行にわたる可溶化後の収量は次のとおりである。γ-ゼイン-n及びγ-ゼイン-nの使用は、γ-ゼイン-wtの使用と比べて、アポリポプロテインA1Milanoの可溶化収量を顕著に増大し、γ-ゼイン-nは、アポリポプロテインA1Milanoの可溶化収量を約7倍まで増大する。試験した全てのγゼインペプチドは、上清のタンパク質の明らかな損失を伴わない低速遠心分離後のペレットタンパク質の回収に見られるような、高密度構造での融合タンパク質の蓄積を可能にする。実施例5-融合タンパク質を含むタンパク質顆粒の回収アポリポプロテインA1Milano融合タンパク質顆粒を回収するため、以下の方法を用いる。タバコ葉を液体窒素中で粉砕し、抽出緩衝液新鮮葉材料1g当たり、50mMトリス-HClpH8、200mMジチオトレイトールDTT及び任意のプロテアーゼインヒビターアプロチニン、ペプスタチン、ロイペプチン、フッ化フェニルメチルスルホニル及びE64[N-N-L-3-トランス-カルボキシオキシラン-2-カルボニル-Lロイシル-アグマチン]を用いてホモジナイズする。ホモジネートを20分撹拌し、20分遠心分離し24000rpm、4°C、20分撹拌する。この混合物を、Miraclothの1層を介して、重力によって濾過する。更なる遠心分離工程4°C、200×gで10分で固形物及び細胞の破片を除去し、第2の遠心分離工程4°C、6000×gで10分によってペレットに融合タンパク質を回収する。続いて、1トリトンX-100で1回洗浄し、20分撹拌し、更なる遠心分離工程4°C、1500×gで10分を行う。この方法も、タンパク質顆粒の濃縮及び富化を可能にする。実施例6-タンパク質顆粒中に蓄積された融合タンパク質の可溶化融合タンパク質を可溶化するため、種々の緩衝液を試験する。試験される変数としては、pH、塩、洗剤、尿素、還元剤、比率、時間及び温度が挙げられる。融合タンパク質を可溶化するために本実験で見出される一連の条件は、タンパク質顆粒:緩衝液比が1:2w/vで50mMトリスpH8、20mMβ-メルカプトエタノール、1トリトンX-100及び500mMNaClを含む緩衝液である。タンパク質顆粒を、終夜室温で緩衝液と共にインキュベートする。この条件での可溶化収量は約95である。実施例7-融合タンパク質の切断アポリポプロテインA1MilanoのN末端で余分なアミノ酸を残すことなくアポリポプロテインA1Milanoを融合タンパク質から切断するため、種々様々な切断剤を分析する。50mMトリスpH8.0、0.5mMEDTA、10mMDTT中、終夜室温で切断を行う。非タンパク質分解性の切断剤を使用する場合、緩衝液は、1×プロテアーゼインヒビターカクテル、EDTAフリーRoche社を含んでいてもよい。種々の融合タンパク質と組み合わせて試験される切断剤としては、エンテロキナーゼ、Xa因子、TEVプロテアーゼ及びインテインが挙げられる。5リンカーを含むγ-ゼイン-Gluは、TEVプロテアーゼで切断され、良好な切断が生じる。5リンカーを含むγ-ゼイン-PAPAは、TEVプロテアーゼで切断され、良好な切断が生じる。3リンカーを含むγ-ゼインは、インテインで切断され、良好な切断が生じる。×5リンカーとγ-ゼインn又はγ-ゼイン-nとを含む核酸構築物と共にTEVプロテアーゼを使用する場合、TEVプロテアーゼは融合タンパク質からアポリポプロテインA1Milanoを切断する。更なる分析により、リンカーの存在は、TEVプロテアーゼを利用する良好な切断に重要ではないことが示される。3リンカーとγ-ゼインとを含む核酸構築物と共にインテインを使用する場合、インテインの使用により、融合タンパク質からアポリポプロテインA1Milanoが切断される。実施例8-切断されたアポリポプロテインA1Milanoタンパク質の精製アポリポプロテインA1Milanoの所望の純度をもたらす方法を同定するため、種々のクロマトグラフ法を試験する。固定化金属アフィニティークロマトグラフィーの使用を含む第1の工程の後、以下の条件での高速逆相タンパク質液体クロマトグラフィーの使用を含む第2の工程を行う。本明細書に引用又は記載した全ての文献は、本願の出願日以前に開示された関連情報を提供する。ここでの記載は、本発明者が、そのような開示に先行しないものと認めるものとして解釈してはならない。上記の明細書に記載のすべての公報は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、本発明の種々の改変及び変形が可能であることは当業者に明らかであろう。特定の好ましい実施態様と関連して本発明を詳細に説明してきたが、特許請求される本発明が、このような特定の実施態様に過度に限定されるべきではないことを理解すべきである。実際、本発明を実施するための記載されたモードの種々の改変は、細胞生物学、分子生物学及び植物生物学又は関連分野の当業者には明らかであり、以下の請求項の範囲内であるものとする。配列の概要配列番号1植物における発現に最適化されたヒトアポリポプロテインAIMilano成熟ペプチドのDNA配列gatgaaccaccacaatctccttgggatagggttaaggatcttgctactgtgtacgtggatgtgcttaaggattctggaagggattacgtttctcagtttgagggatctgctcttggaaagcagcttaaccttaagcttctcgataactgggattctgtgacttctactttctctaagctcagagagcaacttggaccagttactcaagagttctgggataacctcgaaaaagagactgaaggactcagacaagagatgtctaaggatctcgaagaggttaaggctaaggttcagccatacctcgatgatttccagaagaagtggcaagaagagatggaactctaccgtcaaaaggttgaaccacttagggctgaacttcaagaaggtgctaggcaaaagcttcatgagcttcaagagaagctttctccacttggagaagaaatgagagatagggctagggctcatgttgatgctcttaggactcatcttgctccatactctgatgaacttaggcaatgtcttgctgctagacttgaggctcttaaagaaaatggtggagctaggcttgctgaatatcacgctaaggctactgagcatctttctacactttccgagaaggctaaaccagctcttgaagatcttaggcagggacttcttccagttcttgagtctttcaaggtgtccttcttgtctgctcttgaagagtacactaagaagctcaacactcagtaa配列番号2植物における発現に最適化されたヒトアポリポプロテインAIMilano成熟ペプチドのアミノ酸配列DEPPQSPWDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQFEGSALGKQLNLKLLDNWDSVTSTFSKLREQLGPVTQEFWDNLEKETEGLRQEMSKDLEEVKAKVQPYLDDFQKKWQEEMELYRQKVEPLRAELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEMRDRARAHVDALRTHLAPYSDELRQCLAARLEALKENGGARLAEYHAKATEHLSTLSEKAKPALEDLRQGLLPVLESFKVSFLSALEEYTKKLNTQ配列番号3ZeamaysγゼインのDNA配列Genbank登録番号NM0011118841gcaccagtttcaacgatcgtcccgcgtcaatattattaaaaaactcttacatttctttat61aatcaacccgcactcttataatctcttctctactactataataagagagtttatgtacaa121aataaggtgaaattatgtataagtgttctggatattggttgttggctccatattcacaca181acctaatcaatagaaaacatatgttttattaaaacaaaatttatcatatatcatatatat241atatatacatatatatatatatatataaaccgtagcaatgcacgggcatataactagtgc301aacttaatacatgtgtgtattaagatgaataagagggtatccaaataaaaaacttgttcg361cttacgtctggatcgaaaggggttggaaacgattaaatctcttcctagtcaaaattgaat421agaaggagatttaatctctcccaatccccttcgatcatccaggtgcaaccgtataagtcc481taaagtggtgaggaacacgaaacaaccatgcattggcatgtaaagctccaagaatttgtt541gtatccttaacaactcacagaacatcaaccaaaattgcacgtcaagggtattgggtaaga601aacaatcaaacaaatcctctctgtgtgcaaagaaacacggtgagtcatgccgagatcata661ctcatctgatatacatgcttacagctcacaagacattacaaacaactcatattgcattac721aaagatcgtttcatgaaaaataaaataggccggacaggacaaaaatccttgacgtgtaaa781gtaaatttacaacaaaaaaaaagccatatgtcaagctaaatctaattcgttttacgtaga841tcaacaacctgtagaaggcaacaaaactgagccacgcagaagtacagaatgattccagat901gaaccatcgacgtgctacgtaaagagagtgacgagtcatatacatttggcaagaaaccat961gaagctgcctacagccgtctcggtggcataagaacacaagaaattgtgttaattaatcaa1021agctataaataacgctcgcatgcctgtgcacttctccatcaccaccactgggtcttcaga1081ccattagctttatctactccagagcgcagaagaacccgatcgacaccatgagggtgttgc1141tcgttgccctcgctctcctggctctcgctgcgagcgccacctccacgcatacaagcggcg1201gctgcggctgccagccaccgccgccggttcatctaccgccgccggtgcatctgccacctc1261cggttcacctgccacctccggtgcatctcccaccgccggtccacctgccgccgccggtcc1321acctgccaccgccggtccatgtgccgccgccggttcatctgccgccgccaccatgccact1381accctactcaaccgccccggcctcagcctcatccccagccacacccatgcccgtgccaac1441agccgcatccaagcccgtgccagctgcagggaacctgcggcgttggcagcaccccgatcc1501tgggccagtgcgtcgagttcctgaggcatcagtgcagcccgacggcgacgccctactgct1561cgcctcagtgccagtcgttgcggcagcagtgttgccagcagctcaggcaggtggagccgc1621agcaccggtaccaggcgatcttcggcttggtcctccagtccatcctgcagcagcagccgc1681aaagcggccaggtcgcggggctgttggcggcgcagatagcgcagcaactgacggcgatgt1741gcggcctgcagcagccgactccatgcccctacgctgctgccggcggtgtcccccactgaa1801gaaactatgtgctgtagtatagccgctggctagctagctagttgagtcatttagcggcga1861tgattgagtaataatgtgtcacgcatcac配列番号4配列番号3の翻訳アミノ酸配列MRVLLVALALLALAASATSTHTSGGCGCQPPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHVPPPVHLPPPPCHYPTQPPRPQPHPQPHPCPCQQPHPSPCQLQGTCGVGSTPILGQCVEFLRHQCSPTATPYCSPQCQSLRQQCCQQLRQVEPQHRYQAIFGLVLQSILQQQPQSGQVAGLLAAQIAQQLTAMCGLQQPTPCPYAAAGGVPH配列番号5γ-ゼインの断片のアミノ酸配列MRVLLVALALLALAASATSTHTSGGCGCQPPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHVPPPVHLPPPPCHYPTQPPRPQPHPQPHPCPCQQPHPSPCQ配列番号6nのアミノ酸配列MRVLLVALALLALAASATSTHTSGGCGCQPPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHLPPPVHVPPPVHLPPPPCHYPTQPPRPQPHPQPHPCPCQQPHPSPCQ配列番号7nのアミノ酸配列EPAPPPEPEPPPEPEPPPEPEPPPEPEPPPEPEPPPEPEPPPE配列番号8nのアミノ酸配列VELPPPVELPPPVELPPPVELPPPVELPPPVELPPPVEVPPPVE配列番号9nのアミノ酸配列VALPPPVALPPPVALPPPVALPPPVALPPPVALPPPVAVPPPVA配列番号10nのアミノ酸配列VTLPPPVTLPPPVTLPPPVTLPPPVTLPPPVTLPPPVTVPPPVT配列番号11nのアミノ酸配列PPPAPAPPPAPAPPPAPCPCPAPAPPPCP配列番号12nのアミノ酸配列PPPEPEPPPEPEPPPEPCPCPEPEPPPCP"