"下記1及び2の両タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子が宿主細胞内に導入されて得られることを特徴とする形質転換体1Gm1タンパク質2p27タンパク質前記外来遺伝子が、前記両タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有するプラスミドの形態である核酸であることを特徴とする請求項1記載の形質転換体請求項1又は2記載の形質転換体が、前記1及び2の両タンパク質をその細胞内で共発現していることを特徴とする形質転換体a被験物質と、請求項1、2又は3記載の形質転換体とを接触させる第一工程と、b第一工程後に得られる形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を測定する第二工程と、c第二工程で測定されたp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を、対照と比較して、前記形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を変動させる被験物質を選択する第三工程とを含むことを特徴とするGm1タンパク質を介したp27タンパク質発現制御因子のスクリーニング方法第三工程における対照が、被験物質を接触させていない請求項1、2又は3記載の形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値であることを特徴とする前項4記載のスクリーニング方法請求項4又は5記載のスクリーニング方法により得られるGm1タンパク質を介したp27タンパク質発現制御因子請求項6記載のGm1タンパク質を介したp27タンパク質発現制御因子を有効成分として含有することを特徴とする、p27タンパク質発現制御異常に起因する疾患の治療又は予防剤p27タンパク質の発現異常に起因すると思われる疾患、例えば、癌、アルツハイマー病などの神経変性疾患、精神疾患等の疾患症状を改善させるために有用な知識技術の蓄積開発が急務であり、これに関連する試験ツール等の開発が期待されている。本発明者らは、このような状況を鑑み鋭意検討した結果、Gm1タンパク質がCDK2やCSN5依存的にp27タンパク質の発現量を低下させることを新たに見出し、当該知見を利用することにより、本発明に至った。即ち、本発明は1.下記1及び2の両タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子が宿主細胞内に導入されて得られることを特徴とする形質転換体以下、本発明形質転換体と記すこともある。;1Gm1タンパク質2p27タンパク質2.前記外来遺伝子が、前記両タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有するプラスミドの形態である核酸であることを特徴とする前項1記載の形質転換体;3.前項1又は2記載の形質転換体が、前記1及び2の両タンパク質をその細胞内で共発現していることを特徴とする形質転換体;4.a被験物質と、前項1、2又は3記載の形質転換体とを接触させる第一工程と、b第一工程後に得られる形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を測定する第二工程と、c第二工程で測定されたp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を、対照と比較して、前記形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を変動させる被験物質を選択する第三工程とを含むことを特徴とするGm1タンパク質を介したp27タンパク質発現制御因子のスクリーニング方法以下、本発明スクリーニング方法と記すこともある。;5.第三工程における対照が、被験物質を接触させていない前項1、2又は3記載の形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値であることを特徴とする前項4記載のスクリーニング方法;6.前項4又は5記載のスクリーニング方法により得られるGm1タンパク質を介したp27タンパク質発現制御因子;7.前項6記載のGm1タンパク質を介したp27発現制御因子を有効成分として含有することを特徴とする、p27タンパク質発現制御異常に起因する疾患の治療又は予防剤以下、本発明薬剤と記すこともある。;本発明により、Gm1タンパク質を介したp27発現制御因子のスクリーニング方法及び、それに利用する形質転換体を含む試験ツール等を提供することが可能となる。本明細書において、DNAの調製やプラスミドの調製等の遺伝子工学的な手法、タンパク質の抽出やウエスタンブロッティング等のタンパク質工学的な手法は、特に明記しない限り、MolecularCloningALaboratoryManualTManiatisetalColdSpringHarborLaboratory1982、新生化学実験講座日本生化学会編;東京化学同人等の実験書に記載される方法又はそれに準じた方法により行うことができる。本発明におけるGm1タンパク質とは、背景技術に記載されるように、G-タンパク質共役受容体GPCR刺激による細胞内シグナル伝達に関与していることが知られている、G-タンパク質αサブユニットの一種である。当該タンパク質は、例えば、特許第4583007号公報等に記載された公知なタンパク質である。当該タンパク質が有するアミノ酸配列としては、例えば、前記公開公報に記載される配列番号1や特開2006-320201号公報に記載される配列番号1で示されるアミノ酸配列を挙げることができる。尚、当該タンパク質は、NCBIデータベースにおいてNM_182978で示されるG-タンパク質αサブユニットの一種であり、guaninenucleotidebindingproteinGprotein、alphaactivatingactivitypolypeptide、olfactorytypeGNAL、transcriptvariant1とも呼ばれることもあり、他のGタンパク質と比較してN末端領域が約80アミノ酸長い特徴的な構造を有している。Gm1遺伝子は、Golf遺伝子のスプライシングバリアントであり、第1エクソン領域のみ固有の塩基配列を有しており、第2エクソン領域以降はGolf遺伝子と塩基配列を共有している。Gm1タンパク質が有するアミノ酸配列をコードする塩基配列としては、例えば、前記公開公報特許第4583007号公報に記載される配列番号2で示される塩基配列等を挙げることができる。本発明におけるGm1タンパク質は、当該タンパク質の生物学的機能を維持する限り、その一部からなるものを含む。例えば、前記公開公報特許第4583007号公報に記載される配列番号1で示されるアミノ酸配列は、Gタンパク質αサブユニット間で保存されているGTP結合部位及びGTPase活性化部位のアミノ酸配列と配列同一性が高いアミノ酸配列部分を有する。これらの部分は、前記公開公報特許第4583007号公報に記載される配列番号1で示されるアミノ酸配列におけるアミノ酸番号126~133、287~292、353~359、428~435の各領域である。これらのアミノ酸領域は、既にGタンパク質αサブユニットとして同定されているGs及びGolfにおけるGTP結合部位及びGTPase活性化部位のアミノ酸配列NATURE117-127vol349と一致している。また、配列番号1で示されるアミノ酸配列は、Gタンパク質αサブユニット間で特にGsファミリーに属するGs及びGolfで高く保存されている特徴的配列と同じ配列配列番号1で示されるアミノ酸番号119~126を有し、しかもGタンパク質αサブユニット間で保存されているαヘリックス構造をとりうる配列である。更に、Gm1タンパク質の生物学的機能を喪失すること無く、Gm1タンパク質が有する如何なるアミノ酸残基を何個置換、欠失又は付加できるかの指標は、特開2004-350672に記載された方法等により見出すことができる。前記生物学的機能を喪失しない改変は、例えば、既に同定されている各種のGタンパク質αサブユニットのアミノ酸配列との配列同一性が低い部分について行えばよい。本発明におけるp27タンパク質とは、背景技術に記載されるように、サイクリンECDK2複合体に結合してその活性を阻害する約27kDのタンパク質として同定されたタンパク質である。当該タンパク質は、例えば、PolyakらGenesDev89-22等に記載された公知なタンパク質である。当該タンパク質は、NCBIデータベースにおいてNP_004055で示されるタンパク質であり、CDKN1B、Kip1、p27Kip1とも呼ばれることもある。本発明形質転換体は、下記1及び2の両方のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子が宿主細胞内に導入されて得られる。1Gm1タンパク質2p27タンパク質本発明形質転換体の宿主細胞としては、公知のいかなる宿主細胞でも用いることができ、例えば、大腸菌例えば、K12等、バチルス属細菌例えば、MI114等等の細菌、酵母例えば、AH22等、昆虫細胞例えば、Sf細胞等、動物細胞例えば、COS7細胞等等を挙げることができる。なかでも、哺乳動物由来の培養細胞例えば、COS7細胞、CHO細胞、HEK293細胞、HEK293FT細胞、Hela細胞、PC12細胞、N1E115細胞、SHSY5Y細胞等を好ましく挙げることができる。本発明形質転換体は、このような宿主細胞に対して、Gm1タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有するプラスミドの形態である核酸、及び、p27タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有するプラスミドの形態である核酸、の両方を外来的に導入するような人為的操作を施すことにより作製することができる。好ましくは、Gm1タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列、及び、p27タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列の両方を含有するプラスミドの形態である核酸を外来的に導入するような人為的操作を施すことにより作製することができる。前記人為的操作としては、用いられる宿主細胞に応じた通常の遺伝子工学的手法を利用すればよい。具体的には例えば、市販のトランスフェクション試薬を用いて、当該試薬に添付された説明書に記載される方法に従い行う方法を挙げることができる。また、外来遺伝子としてプラスミドの形態である核酸を利用する場合には、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法、リポフェクション法、DEAEデキストラン法等を挙げることができる。ここでプラスミドとしては、Gm1タンパク質、及びp27タンパク質の両方のタンパク質を宿主細胞内で共発現させることが可能なプラスミドを挙げることができる。このようなプラスミドは、通常の遺伝子工学的手法に従い、Gm1タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸、及び、p27タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸、の両方を、公知の発現プラスミドのプロモーター下流の発現可能な位置に連結することにより作製することができる。ここで発現プラスミドとしては、例えば、大腸菌を宿主細胞とする場合には、pBR322、pUC12、pUC119、pBluescript等、バチルス属細菌を宿主細胞とする場合には、pUB110、pC194等、酵母を宿主細胞とする場合には、Yip5、Yep24等、昆虫細胞を宿主細胞とする場合には、AcNPV等、動物細胞を宿主細胞とする場合には、pUC18、pcDNA31、pcDNA62、p3XFLAGCMV10等の公知のプラスミドを挙げることができる。本発明形質転換体における、Gm1タンパク質、及びp27タンパク質の両方のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有する外来遺伝子の宿主細胞内での保持は、一過的に保持されたものであってもよいし、また安定的に保持させたものであってもよい。安定的に保持された形質転換体は、当該外来遺伝子と同時に宿主細胞内に導入された薬剤耐性マーカー等例えば、発現プラスミドに含有された薬剤耐性マーカー等を指標にして選択すればよい。本発明形質転換体の細胞内で、Gm1タンパク質、及びp27タンパク質の両方のタンパク質を共発現させるには、例えば、本発明形質転換体を培養液の中で培養すればよい。本発明形質転換体の培養条件は、本発明形質転換体の種類に応じた条件を適宜選択すればよい。例えば、本発明形質転換体が微生物である場合には、微生物の培養に通常使用される液体培地又は平板培地を用いて培養すればよい。培養温度は、微生物の生育可能温度内であればよく、例えば、15~40°C程度を挙げることができる。培地のpHも、微生物の生育可能範囲であればよく、例えば、pH6~8程度を挙げることができる。培養時間は、その他の培養条件により異なるが、通常、1~5日間程度、特に1~2日間程度にすればよい。温度シフト型やIPTG誘導型等の誘導型の発現プラスミドを用いる場合には、誘導時間は1日間以内、特に数時間程度とすればよい。また形質転換体が昆虫細胞の場合には、昆虫細胞の種類に応じて適した培養条件とすればよい。例えば、FBS及びYeastlateを含むGracesmedium等の昆虫細胞用培地を用いて培養すればよい。培養温度は、25~35°C程度を挙げることができる。培地のpHも、昆虫細胞の生育可能範囲であればよく、例えば、pH6~8程度を挙げることができる。培養時間は、その他の培養条件により異なるが、通常、1~5日間程度、特に2~3日間程度にすればよい。発現プラスミドとしてBaculovirus等のウィルスを含む形質転換体の場合は、培養時間は細胞質効果が現れて細胞が死滅する前まで例えば3~7日間程度、特に4~6日間程度とするのが好ましい。また形質転換体が哺乳動物細胞の場合には、哺乳動物細胞の種類に応じて適した培養条件とすればよい。例えば、FBSを添加したDMEM培地ニッスイ社製等を用いて5CO2存在下、数日毎に新しい培地に交換しながら培養すればよい。哺乳動物細胞がコンフルエントになるまで増殖したら、例えば、トリプシン溶液を加えて個々の細胞に分散させ、得られた細胞の懸濁液を数倍に希釈して新しいシャーレに播種し継代を続ければよい。培養温度は、36~38°C程度を挙げることができる。培地のpHも、哺乳動物細胞の生育可能範囲であればよく、例えば、pH6~8程度を挙げることができる。培養時間は、その他の培養条件により異なるが、通常、2~5日間程度、特に2~3日間程度にすればよい。本発明形質転換体の細胞内で、Gm1タンパク質、及びp27タンパク質の両方のタンパク質が共発現していることを確認する方法としては、通常のタンパク質工学的方法を利用すればよい。具体的には例えば、本発明形質転換体より調製されたタンパク質抽出液を、抗Gm1タンパク質抗体、及び抗p27タンパク質抗体を用いてウエスタンブロットを行う方法等を挙げることができる。またタグ標識を付加したGm1タンパク質、及びp27タンパク質を細胞に導入した場合には抗タグ抗体を利用することが可能である。例えば、FLAG、Myc、GFP、HA等の公知のタグ標識が利用可能である。本発明スクリーニング方法は、a被験物質と、前項1、2又は3記載の形質転換体とを接触させる第一工程と、b第一工程後に得られる形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を測定する第二工程と、c第二工程で測定されたp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を、対照と比較して、前記形質転換体におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を変動させる被験物質を選択する第三工程とを含む。本発明スクリーニング方法において被験物質としては、特に限定は無く、例えば、タンパク質抗体を含む、ペプチド、非ペプチド性化合物ヌクレオチド、アミン、糖質、脂質等、有機低分子化合物、無機低分子化合物、醗酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液等を挙げることができる。被験物質の形態としては、特に限定は無く、固体、液体、基剤との混合物、縣濁液又は溶液等を挙げることができる。縣濁液若しくは溶液とする場合、水、pH緩衝液、メチルセルロース溶液、生理食塩水、有機溶媒水溶液有機溶媒としては通常エタノールやジメチルスルホキシドが用いられる。等を用いればよい。被験物質の接触量、接触回数及び接触時間は、例えば、本発明形質転換体に重篤な影響を及ぼさない範囲内とすればよい。被験物質の接触は通常はGm1タンパク質とp27タンパク質を宿主細胞に導入した後に実施するが、導入前または導入時から実施しておくことも可能である。本発明スクリーニング方法の第一工程における接触は、当業者に汎用されている方法で実施することができる。被験物質を本発明形質転換体に接触する場合、その接触方法には特に限定はなく、例えば、本発明形質転換体を含む培養液寒天培地等の中に、0001~100μM程度の濃度となるように被験物質を添加すればよい。本発明スクリーニング方法の第二工程におけるp27タンパク質量又はそれと相関する指標値を測定する方法では、タンパク質抽出液の調製、電気泳動法、メンブレンの上への転写、p27タンパク質の検出方法等を用いることができる。これらの方法では、通常の生化学的手法タンパク質工学的手法等を用いて分析すればよい。例えば、電気泳動SDSPAGEとウエスタンブロット法とを組み合わることにより行えばよい。具体的には例えば、まず被験物質を接触させた本発明形質転換体からタンパク質抽出液を調製する。調製されたタンパク質抽出液を電気泳動し、分離されたp27タンパク質を適当なメンブレンの上に転写する。次いで、当該メンブレンの上に転写されたp27タンパク質を抗p27タンパク質抗体等で検出する。またタグ標識を付加したp27タンパク質を細胞に導入した場合には抗タグ抗体を利用することが可能である。例えば、FLAG、Myc、GFP、HA等の公知のタグ標識が利用可能である。また、p27タンパク質量を定量する方法としては、公知の定量化法を用いればよいが、例えば、ウエスタンブロットにより検出されたシグナルをイメージアナライザー等にて定量化すればよい。具体的には例えば、本発明形質転換体において電気泳動後のウエスタンブロットにより検出されたp27のバンドの強度を測定し、同様に、対照におけるp27のバンドの強度も測定する。次いで、対照におけるp27のバンドを100とし、被検物質を接触させた本発明形質転換体で検出されたp27のバンドの強度のパーセンテージを算出する。被検物質を接触させた本発明形質転換体において検出されたp27のバンドの強度のパーセンテージが、例えば120以上、好ましくは150以上、更に好ましくは200以上になる被検物質を、シグナル伝達調節物質の候補物質として選択すればよい。また単に目視によりバンド強度を識別してp27タンパク質量を増加させる被検物質を選抜することも可能である。p27のタンパク質量は細胞内で内部標準となるタンパク質と比較した値として求めることも可能であり、内部標準を使用することで細胞間のバラツキを補正することが出来る。内部標準となるタンパク質とは例えば、Tubulin、Actin、GAPDHなどが挙げられる。本発明スクリーニング方法の第三工程における対照との比較では、例えば、被験物質を接触させた本発明形質転換体におけるp27タンパク質の第二工程で測定されたタンパク質量又はそれと相関する指標値を、被験物質を接触させていない本発明形質転換体におけるp27タンパク質の第二工程で測定されたタンパク質量又はそれと相関する指標値と比較すればよい。ここで被験物質を接触させていない本発明形質転換体とは、例えば、溶媒のみを接触させた本発明形質転換体であってもよい。かかる対照は、対照とするp27タンパク質のタンパク質量又はそれと相関する指標値を、本発明形質転換体におけるp27タンパク質のタンパク質量又はそれと相関する指標値と併行して測定して求めてもよいし、別途測定して求めてもよい。例えば、被験物質と接触させた本発明形質転換体におけるp27タンパク質のタンパク質量又はそれと相関する指標値の測定値が、対照とする本発明形質転換体におけるp27タンパク質のタンパク質量又はそれと相関する指標値の測定値よりも高ければ、前記被験物質との接触は、p27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果を有することを意味し、そして当該被験物質はGm1を介したp27発現制御因子として選択することができる。尚、被験物質の代わりに対照物質となり得るポジティブコントロール又はネガティブコントロールを用いて本発明スクリーニング方法を実施することにより、場合に応じて上記の対照とすることもできる。ここでポジティブコントロールとは、p27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果を有する任意の物質を表し、またネガティブコントロールとしては、被験物質に含まれる溶媒、バックグランドとなる試験系溶液等が挙げられる。対照物質をネガティブコントロールとする場合、被験物質が有するp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果が、対照物質が有するp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果よりも大きければ、当該被験物質はp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果を有すると評価すればよい。一方、被験物質が有するp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果が、対照物質が有するp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果と同程度若しくは小さければ、当該被験物質はp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果を有さないと評価することができる。また、対照物質をポジティブコントロールとする場合、被験物質が有するp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果と、対照物質が有するp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果とを比較することにより、被験物質が有するp27タンパク質のタンパク質量を増加させる効果を評価すればよい。このようにして効果を有すると評価された場合には、当該被験物質を、Gm1を介したp27発現制御因子として選択することができる。本発明薬剤は、例えば、上記のようにして選択されたGm1タンパク質を介したp27発現制御因子を有効成分として含有する。本発明薬剤は、p27タンパク質の発現を制御するシグナル伝達異常に起因する疾患の治療又は予防剤として有用である。以下、本発明の実施例を示してより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。実施例1Gm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞の作成1Gm1遺伝子の取得文献特開2004-350672号記載の方法に準じた方法を用いて、ヒト脳由来cDNAライブラリー宝酒造社製20ngを鋳型に用いて且つ10μMのフォワードプライマーprGm1ATG5’-ATGGGTCTGTGCTACAGTCTGCGG;配列番号1、10μMのリバースプライマーprGNAL3’5’-TCACAAGAGCTCATACTGCTT;配列番号2及びTAKARALATaqポリメラーゼTAKARALATaqwithGCBuffer,宝酒造社製を用いてPCRを行った。PCR条件は、95°Cで30秒間、次いで60°Cで30秒間、次いで72°Cで2分間の保温を1サイクルとしてこれを35サイクル行った。得られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動後、当該ゲル上で検出された約1.5kbのバンドを切り出し、pCR21TOPOベクターインビトロジェン社製へクローニングしpCRGm1を作製した。2pcDNAGm1の構築文献特開2004-350672号記載の方法に準じた方法を用いて、実施例1で作製されたプラスミドpCRGm1を制限酵素XbaI及びKpnIで二重消化した後、このDNA断片をアガロースゲル電気泳動し、当該ゲル上で検出された約1.5kbのバンドを切り出し、インサートDNAとした。pcDNA31インビトロジェン社製をXbaI及びKpnIで二重消化したものをベクターとして用い、これにインサートDNAをライゲースを用いて連結することにより、プラスミドpcDNAGm1を作製した。3pcDNAGm1Mycの構築実施例1で作成されたプラスミドpcDNAGm1、100ngを鋳型に用いて且つ10μMのフォワードプライマーGm15’5’-AGAGGTACCATGGGTCTGTGCTACAGTC;配列番号3、10μMのリバースプライマーGm13’5’-AGTCTCGAGCAAGAGCTCATACTGCTTG;配列番号4及びKODDNAポリメラーゼ東洋紡製を用いてPCRを行った。PCR条件は、95°Cで30秒間、次いで60°Cで30秒間、次いで68°Cで2分間の保温を1サイクルとしてこれを35サイクル行った。得られたDNAをアガロースゲル電気泳動後、当該ゲル上で検出された約1.2kbのバンドを切り出し、制限酵素KpnI及びXhoIで二重消化した後、このDNA断片をアガロースゲル電気泳動し、当該ゲル上で検出された約1.2kbのバンドを切り出し、インサートDNAとした。pcDNA31mycHisインビトロジェン社製をKpnI及びXhoIで二重消化したものをベクターとして用い、これにインサートDNAをライゲースを用いて連結することにより、プラスミドpcDNAGm1Mycを作製した。4cDNAの作成HEK293FT細胞インビトロジェン社製からRNA精製キットRNeasyMiniKitQIAGEN社製を用い、当該キットに添付された説明書に従ってTotalRNAを回収、精製した。次いでこのTotalRNAを鋳型にし、SuperScriptIII逆転写酵素インビトロジェン社製を用いて、55°Cで50分間、次いで75°Cで15分間保温し、逆転写反応を行い、cDNAを得た。5p3XFLAGCMV10p27の構築得られたcDNA2μlを鋳型に用いて且つ10μMのフォワードプライマーp275’5’-ATTGAATTCTATGTCAAACGTGCGAGTGTCTAAC;配列番号5、10μMのリバースプライマーp273’5’-ACTGGATCCTTACGTTTGACGTCTTCTG;配列番号6及びKODDNAポリメラーゼ東洋紡製を用いてPCRを行った。PCR条件は、95°Cで30秒間、次いで60°Cで30秒間、次いで68°Cで1分間の保温を1サイクルとしてこれを35サイクル行った。得られたDNAをアガロースゲル電気泳動後、当該ゲル上で検出された約600bのバンドを切り出し、制限酵素EcoRI及びBamHIで二重消化した後、このDNA断片をアガロースゲル電気泳動し、当該ゲル上で検出された約600bのバンドを切り出し、インサートDNAとした。p3XFLAGCMV10ベクターSigma社製をEcoRI及びBamHIで二重消化したものをベクターとして用い、これにインサートDNAをライゲースを用いて連結することにより、プラスミドp3XFLAGCMV10p27を作製した。6pcDNA31の調製pcDNA31は、インビトロジェン社から販売されている市販品を購入し、これを用いた。7pcDNA31mycHisの調製pcDNA31mycHisは、インビトロジェン社から販売されている市販品を購入し、これを用いた。8pcDNAGm1Mycとp3XFLAGCMV10p27の細胞への導入293FT細胞を6wellシャーレに4×105cells/wellで播種し、10FBSを含むDMEM培地ナカライテスク社製中で、37°C、5CO2条件下にて約24時間培養した。次いで、当該細胞に、上記3で構築して得られたGm1発現プラスミドpcDNAGm1Myc1μg、及び、上記5で構築して得られたp27発現プラスミドp3XFLAGCMV10p2702μgの両方またはp27発現プラスミドp3XFLAGCMV10p2702μgのみを、4μlのリポフェクトアミン2000インビトロジェン社製と混合し、20分間保持したものをトランスフェクションした。トランスフェクション4時間後に培地を交換し、更に20時間培養した。次いで、得られた細胞をPBSで2回洗浄した後、Lysisbuffer50mMHEPESNaOHpH74150mMNaCland05NonidetP40を用いて溶解することにより細胞抽出液を調製し、得られた細胞抽出液を電気泳動SDSPAGEに供した。更に電気泳動後のゲルを、Hybond-PGEヘルスサイエンスへ転写した。次いで、当該メンブレンの上に転写されたp27タンパク質を抗FLAG抗体Sigma社製、Gm1タンパク質を抗Myc抗体SantaCruz社製、Tubulinタンパク質を抗Tubulin抗体Calbiochem社製を用いてウエスタンブロッティングにより検出した図1参照。図1でGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞lane2のp27タンパク質のバンドFLAG抗体によるバンドはp27タンパク質だけを導入した細胞lane1のp27タンパク質のバンドFLAGよりも薄くなっており、Gm1タンパク質の導入によりp27タンパク質量が減少していることが確認できる。実施例2本発明スクリーニング方法:Gm1タンパク質を介したp27発現制御因子のスクリーニングその1実施例18に記載のGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞作成時において、Gm1発現プラスミドpcDNAGm1Myc1μg、及び、p27発現プラスミドp3XFLAGCMV10p2702μgの両方またはp27発現プラスミドp3XFLAGCMV10p2702μgのみを導入する際に被験物質としてCSN5やCDK2に対するsiRNA、またはどのような遺伝子の発現も抑制しないcontrolsiRNAいずれもambion社から購入それぞれ100pmolを8μlのリポフェクトアミン2000インビトロジェン社製及び、100μlのOPTIMEMインビトロジェン社製と混合し、20分間保持したものをトランスフェクションした。トランスフェクション4時間後に培地を交換し、更に20時間培養した。次いで、得られた細胞をPBSで2回洗浄した後、Lysisbuffer50mMHEPESNaOHpH74150mMNaCl05NonidetP40にプロテアーゼ阻害剤カクテル動物細胞抽出用ナカライテスク社製を加えた溶液を用いて溶解することにより細胞抽出液を調製し、得られた細胞抽出液を電気泳動SDSPAGEに供した。更に電気泳動後のゲルを、Hybond-PGEヘルスサイエンスへ転写した。次いで、当該メンブレンの上に転写されたp27タンパク質を抗FLAG抗体Sigma社製、Gm1タンパク質を抗Myc抗体SantaCruz社製、Tubulinタンパク質を抗Tubulin抗体Calbiochem社製を用いてウエスタンブロッティングにより検出した図2参照。図2AでGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞lane2、4、6においてCSN5に対するsiRNAを添加した場合lane4、6にcontrolsiRNAを添加した場合lane2と比較して顕著なp27タンパク質量の増加が確認できる。また図2BにおいてGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞lane2、4、6においてCDK2に対するsiRNAを添加した場合lane4、6にcontrolsiRNAを添加した場合lane2と比較して顕著なp27タンパク質量の増加が確認できる。使用したsiRNAの配列は以下のとおりである。CSN5siRNA15’-GCAAUCGGGUGGUAUCAUATT配列番号7、CSN5siRNA25’-GGAUUGAUGUUAGUACUCATT配列番号8、CDK2siRNA15’-GAGUCCCUGUUCGUACUUATT配列番号9、CDK2siRNA25’-CAAGAUCUCAAGAAAUUCATT;配列番号10。実施例3本発明スクリーニング方法:Gm1タンパク質を介したp27発現制御因子のスクリーニングその2実施例18に記載のGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞に被検物質として10μMのRoscovitin、または10μMのCDK4inhibitorいずれもCalbiochem社製を前記細胞の培養液中に添加した後、得られた培養物を37°Cで24間静置する。次いで、得られた細胞をPBSで2回洗浄した後、Lysisbuffer50mMHEPESNaOHpH74150mMNaCl05NonidetP40にプロテアーゼ阻害剤カクテル動物細胞抽出用ナカライテスク社製を加えた溶液を用いて溶解することにより細胞抽出液を調製し、得られた細胞抽出液を電気泳動SDSPAGEに供した。更に電気泳動後のゲルを、Hybond-PGEヘルスサイエンスへ転写した。次いで、当該メンブレンの上に転写されたp27タンパク質を抗FLAG抗体Sigma社製、Gm1タンパク質を抗Myc抗体SantaCruz社製、Tubulinタンパク質を抗Tubulin抗体Calbiochem社製を用いてウエスタンブロッティングにより検出した図3参照。図3においてGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞lane2、4、6においてRoscovitineを添加した場合lane4に対照物質としてジメチルスルホキシドを添加した場合lane2と比較して顕著なp27タンパク質量の増加が確認できる。一方で、CDK4inhibitorを添加した場合lane6には対照物質としてジメチルスルホキシドを添加した場合lane2と比較してp27タンパク質量の増加は観察されない。以上の結果より、RoscovitineがGm1タンパク質を介するp27発現制御因子であることが判明した。実施例4本発明スクリーニング方法:Gm1タンパク質を介したp27発現制御因子のスクリーニングその3実施例18に記載のGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞に被検物質として10μMのPD150606Calbiochem社製、20μMのCalpaininhibitorIIICalbiochem社製、10mMの3MethyladenineSigma社製、または20μMのMG132ペプチド研究所社製を前記細胞の培養液中に添加した後、得られた培養物を37°Cで24間静置する。次いで、得られた細胞をPBSで2回洗浄した後、Lysisbuffer50mMHEPESNaOHpH74150mMNaCl05NonidetP40にプロテアーゼ阻害剤カクテル動物細胞抽出用ナカライテスク社製を加えた溶液を用いて溶解することにより細胞抽出液を調製し、得られた細胞抽出液を電気泳動SDSPAGEに供した。更に電気泳動後のゲルを、Hybond-PGEヘルスサイエンスへ転写した。次いで、当該メンブレンの上に転写されたp27タンパク質を抗FLAG抗体Sigma社製、Gm1タンパク質を抗Myc抗体SantaCruz社製、Tubulinタンパク質を抗Tubulin抗体Calbiochem社製を用いてウエスタンブロッティングにより検出した図4参照。図4AにおいてGm1タンパク質とp27タンパク質の両方を導入した細胞lane2、4、6、8、10において3Methyladenineを添加した場合lane8に対照物質としてジメチルスルホキシドを添加した場合lane2と比較して顕著なp27タンパク質量の増加が確認できる。一方で、その他の被検物質を添加した場合lane4、6、10には対照物質としてジメチルスルホキシドを添加した場合lane2と比較して顕著なp27タンパク質量の増加は目視では観察されない。次に、図4Aに示したウエスタンブロットにより検出されたそれぞれのバンドのシグナル強度を、LAS-4000富士フィルムを用い測定した。p27タンパク質のみを導入した細胞に対照物質としてジメチルスルホキシドを添加した場合lane1のp27タンパク質のバンドの強度を1とした時のそれぞれのp27タンパク質のバンドの強度を算出した図4B参照。その結果、対照物質としてジメチルスルホキシドを添加した場合lane2と比較してPD150606を添加した場合lane4には約28、CalpaininhibitorIIIを添加した場合lane6には約78、3Methyladenineを添加した場合lane8には約166のp27タンパク質量の増加が観察された。p27タンパク質量は内部標準タンパク質であるTubulinタンパク質のバンド強度に対する相対値として算出した。以上の結果より、PD150606、CalpaininhibitorIII、3MethyladenineをがGm1タンパク質を介するp27発現制御因子であることが判明した。"