プロスタソームをインビトロで検出し、少なくとも1種の抗原のプロスタソームにおける発現を定量化する工程、ならびに定量化された発現値を健常対象に由来する各抗原についての基準値と比較する工程を含む、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象を診断するためまたはその予後を提供するための方法。前記少なくとも1種の抗原が、CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143、およびMHCIからなる群より選択される、請求項1記載の方法。前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供が、前記基準値と比較した、前立腺癌に罹患している対象における抗原CD10、CD26、CD142、およびMHCIのうちの少なくとも1種のアップレギュレーションに基づく、請求項2記載の方法。前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供が、前記基準値と比較した、前立腺癌に罹患している対象における抗原CD13およびCD59のうちの少なくとも1種のダウンレギュレーションに基づく、請求項2記載の方法。前記抗原のうちの少なくとも2種の間で商が算出され、該商が商の参照値と比較される、請求項1~4のいずれか一項記載の方法。前記抗原のうちの少なくとも1種に特異的に結合することができる少なくとも1種類の抗体が、その発現を検出および定量化するために使用される、請求項1~5のいずれか一項記載の方法。前記少なくとも1種類の抗体が、区別可能な蛍光マーカーにより標識される、請求項6記載の方法。前記抗原のうちの少なくとも1種に結合した前記抗体が、フローサイトメトリーにより検出および定量化される、請求項7記載の方法。前記抗原のうちの少なくとも1種に結合した前記抗体が、ELISAにより検出および定量化される、請求項6記載の方法。CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143、およびMHCIからなる群より選択される少なくとも1種の抗原に特異的に結合する少なくとも1種類の抗体を含む、前立腺癌に罹患していることが疑われる対象の診断またはその予後の提供において使用するための、キット。試料調製PSA値および臨床情報および病歴情報により前立腺癌を有しないことが既知である患者79人ならびに前立腺癌が確認された患者10人由来の精液試料を用意した。室温で約30分間インキュベーションし、精漿から精子を分離するために20°Cで20分間、1000×gで遠心分離した後、ヒト精液から精漿を入手した。それにより、精漿は、下記のフローサイトメトリー分析のための用意ができた。尿、前立腺分泌物、およびヘパリン処理血液試料をそれぞれ、20°Cで10分間、2500×gで遠心分離した。前立腺分泌物、尿、およびヘパリン処理血液それぞれからの上清は、フローサイトメトリーによる分析のための用意ができた。遠心分離により入手した血漿を、プロスタソームに対する特異抗体を用いたELISAおよびニトロセルロース紙上でのドットブロット/免疫ブロットにより、固相上でさらに試験した下記のELISAおよびイムノブロッティングの項を参照のこと。フローサイトメトリーのための試料の調製30μLの希釈された精漿、または各上清各々、リン酸緩衝生理食塩水PBSで25倍希釈を、FITC標識抗体10μLを含有しているポリスチレンチューブに添加した。各抗体を別々のチューブに添加し、従ってその後、各マーカーを別々に分析した。各タンパク質の細胞外ドメインに結合することができる以下のモノクローナル抗体を使用した全ての抗体がSerotecKidlingtonUKから入手された:FITCCD10抗体MCA1556F、01mgmL、FITCCD13抗体MCA1270F、01mgmL、FITCCD26抗体MCA1317F、01mgmL、FITCCD59抗体MCA1054F、01mgmL、FITCCD142抗体MCA2548F、01mgmL、FITCCD143抗体MCA2057F、01mgmL。試料を20°Cで10分間インキュベートし、次いで、フローサイトメトリーにより分析した。洗浄工程は実施しなかった。フローサイトメトリーEpicsProfileXLMCLサイトメーターCoulterElectronicsHialeahFLを利用して、試料を分析した。このフローサイトメーターは、個別の細胞またはオルガネラを検出し、スキャッタープロットにおいて通常の様式でそれらを示す。各試料100μLを、プロスタソームの濃度およびサイズの決定のために分析した。CDマーカーの分析のため、各患者個人についてプロスタソーム5000個のデータ処理を、XLソフトウェアCoulterElectronicsを使用して実施した。光散乱特性に基づき、各プロスタソームを直交座標系で点により表した。ゲートの位置およびサイズは、プロスタソームが高度に精製されていることを考慮に入れて設定した。識別フレームは、前方散乱および側方散乱を使用して、プロスタソームクラスタおよびフローカウントflowcountクラスタの周囲に配置した。フローサイトメーターは、プロスタソームに結合した標識抗体からの蛍光シグナルを測定する。フローサイトメーターは、視野内の陽性染色されたプロスタソームの割合、蛍光強度MFIの中央値および平均値、複雑度直角散乱、ならびにプロスタソーム集団のサイズの中央値および平均値前方散乱を与える。MFIを測定するため、蛍光チャンネルに分析マーカーをセットしたFITCについて波長=225nm。ゲートは研究前にセットされた。精漿に対するフローサイトメトリー前立腺癌患者由来の試料は、対照と比較して相違するタンパク質パターンを示した。マーカーの感度ならびに特異度を、ROC曲線により評価した。マーカーCD13、CD59、ならびに比率CD13CD10およびCD59CD26は、それぞれ、前立腺癌に対する感度および特異度が最も高いマーカーであった。CD13CD10が最も高い特異度911、図1をもたらし、CD59CD26が最も高い感度100をもたらした。プロスタソームに典型的な側方散乱および前方散乱を有する粒子を検出した。血清および尿に対するフローサイトメトリー癌患者および対照由来の精漿10μLを、血清または尿100μLを含有しているポリスチレンチューブに添加し、試料をPBSにより25倍希釈した。希釈試料30μLおよびFITC標識抗体10μLを混合し、混合物を20°Cで10分間インキュベートした後、フローサイトメトリーを使用して分析した。洗浄工程は実施しなかった。高いPSAを有する2人の患者由来の血清100μLもまた、精製プロスタソームの添加なしに、上記のように分析した。プロスタソームに典型的な側方散乱および前方散乱を有する粒子を検出した。フローサイトメトリー結果血清および尿血清または尿に再懸濁させたプロスタソームのCD発現は、妨害されず、元の精漿と比較して変化なしの結果をもたらした。患者試料は、プロスタソームを表す前方散乱および側方散乱を有する、オルガネラを示した。それらの粒子はCD13陽性であり、このことから、該粒子がプロスタソームであることが示された表4を参照のこと。精製プロスタソームの調製フローサイトメーターの識別ゲートを設定するために、精製プロスタソームが必要であった。精漿試料をプールし試料12~15例、可能性のある細胞片を除去するため、4°Cで15分間、10000×gの超遠心分離に供した。次いで、プロスタソームをペレット化するため、上清を、再度、4°Cで2時間、100000×gの超遠心分離に供した。プロスタソームを等張トリスHCl緩衝液pH76に再懸濁させ、SephadexG200ゲルカラムAmershamBiosciencesUppsalaSweden上でさらに精製した。溶出液を260280nmでモニタリングした。UV吸光度が上昇した画分を収集し、プロスタソームに対する強力なマーカー酵素であるCD13について分析した。CD13活性の高い紫外吸光画分をプールし、4°Cで2時間、100000×gの超遠心分離に供した。精製プロスタソームを表すペレットを、等張トリスHCl緩衝液、pH76に再懸濁させ、適当なタンパク質濃度に調整した。イムノブロッティング精製した精液プロスタソーム1μLをニトロセルロース膜上にピペットで移し、1BSAを含む002MNa2HPO4、015MNaCl、pH72PBSにより、1時間、膜をブロッキングした。3回洗浄した後、ビオチン化ポリクローナルニワトリ抗プロスタソーム抗体1BSAを含むPBSで1000倍希釈100μLと共に、20°Cで1時間、膜をインキュベートした。PBST005Tween20を含むPBSにより3回新たに洗浄した後、1BSAを含むPBSで2000倍希釈されたストレプトアビジンアルカリホスファターゼコンジュゲートZymedLaboratoriesIncCAUSA100μLを添加し、20°Cで1時間インキュベートした。3回洗浄した後、ニトロセルロース膜を発色させた。イムノブロッティング結果抗体はニトロセルロース膜上のプロスタソームを認識し、紫色のドットが可視化された。このことは、固相ここではニトロセルロース膜上にプロスタソームを捕捉した後、抗体によって検出することが可能であることを示している。ELISAマイクロタイタープレートF96PolysorpNuncを、4μgmLの精製した精液プロスタソームを含む01MNaHCO3、pH95により、20°Cで2時間コーティングした。プレートを、002MNa2HPO4、015MNaCl、005Tween20、pH72PBSTにより3回洗浄し、プレートを、1BSAを含む002MNa2HPO4、015MNaCl、pH72により2時間ブロッキングした。3回洗浄した後、プレートを、ポリクローナルニワトリ抗プロスタソーム抗体PBSで1000倍希釈100μLと共に、20°Cで2時間インキュベートした。PBSTにより3回新たに洗浄した後、PBSで2000倍希釈されたヤギ抗ニワトリIgG西洋ワサビペルオキシダーゼHRP結合抗体ZymedLaboratoriesIncCAUSA100μLを添加し、20°Cで2時間インキュベートした。プレートを、PBST250μLにより3回洗浄し、遮光しながら20°Cで15分間、基質テトラメチルベンジジン、ZymedLaboratoriesIncと共にインキュベートした。18モルLの硫酸50μLを添加することにより、反応を停止させた。吸光度を、ELISAリーダーシステムSPECTRAMax250MolecularDevicesSunnyvaleCAUSAで450nmで測定した。ELISA結果抗プロスタソーム抗体ImmunsystemABUppsalaSwedenは、>10の吸光度値で、ELISAプレートに結合したプロスタソームとの陽性反応を生じた。これにより、プロスタソームを固相ここではマイクロタイタープレート上で捕捉した後に、抗体によって、ここでは酵素標識抗体によって検出することが可能であることが示される。実験結果以下に、対照と前立腺癌に罹患している患者の間の比較結果を示す表1、2、および3。さらに、表4は、精漿、血清、および尿それぞれに対する測定を示す。ROC分析-本発明による前立腺癌発症の予後判定受信者動作特性ROC曲線とは、決定閾値効果についての単純だが完全な経験的描写であり、これにより、診断決定における様々な種類の正しい決定と誤った決定の相対頻度についての全ての可能な組み合わせが示される。ROC曲線は、識別閾値の変動に伴う、二項分類システムに関する感度すなわち真陽性対すなわち偽陽性についてのグラフ式プロットである。真陽性の画分TPR=真陽性率対偽陽性の画分FPR=偽陽性率をプロットすることによっても同等に、ROCを表すことができる。ROC分析は、コスト情況またはクラス分布とは無関係にかつそれらの特定前に、恐らく最適であるモデルを選択しかつ最適ではないものを廃棄するためのツールを提供する。ROC分析は、診断決定のコスト/利益分析と、直接的かつ自然に関係している。結果表1~3に示されるように、前立腺癌患者由来のプロスタソームは、示された表面抗原の発現に関して異なる。従って、これらの表に示されたマーカー抗原は、前立腺癌対象と対照の対象を識別するために使用可能である。マーカーは、個別に使用されてもよく、アッセイの感度および特異度を改良するために組み合わせられてもよい上記の発明の説明を参照のこと。図1は、ROC曲線の形態で、CD13とCD10の間の比率を示し、図2は、CD59とCD10の間の比率を示している。1種の抗原マーカーのみの使用と比較して、感度および特異度が上昇している。表4は、プロスタソームを様々な体液血清、尿、および精漿において分析したところ、類似の値が得られたことを示している。2人の前立腺癌患者由来の血清におけるプロスタソームのフローサイトメトリー検出は、プロスタソームが血清中にも存在し得ることを示している。引用文献