"aインターフェロン-βIFN-β;bIFN-βの発現を増加させる薬剤;又はca又はbを発現できるポリヌクレオチドから選択される、確定的なILIの間又は後に発症する下気道疾患を有する個体の治療に使用するための薬剤であって、治療が前記医薬の気道送達による、薬剤。薬剤がIFN-βである、請求項1記載の薬剤。IFN-βが、aヒトIFN-β1a配列番号2又はbヒトIFN-β1b配列番号4の配列を含む、請求項2記載の薬剤。ノイラミニダーゼ阻害剤と組み合わされる、請求項1~3のいずれか一項に記載の薬剤。ノイラミニダーゼ阻害剤が局所的に活性である、請求項4記載の薬剤。ノイラミニダーゼ阻害剤がザナミビルである、請求項4又は5記載の薬剤。下気道疾患が喘息又はCOPDである、請求項1~6のいずれか一項に記載の薬剤。個体が高齢者、例えば60歳超の高齢者である、請求項1~7のいずれか一項に記載の薬剤。確定的なILIの間又は後に発症する下気道疾患と診断された個体の治療方法であって、aインターフェロン-βIFN-β;bIFN-βの発現を増加させる薬剤;ca又はbを発現できるポリヌクレオチドからなる群から選択される薬剤を個体の気道に投与することを含む、方法。薬剤がIFN-βである、請求項9記載の方法。IFN-βが、aヒトIFN-β配列番号2又はbヒトIFN-β1b配列番号4の配列を含む、請求項10記載の方法。薬剤が、同時に、別々に又は逐次的に投与するためのノイラミニダーゼ阻害剤と組み合わされる、請求項9~11のいずれか一項に記載の方法。下気道疾患が喘息又はCOPDである、請求項9~12のいずれか一項に記載の方法。個体が高齢者、例えば60歳超の高齢者である、請求項9~13のいずれか一項に記載の方法。i請求項1で定義したとおりのa~cから選択される第1の薬剤と、ii吸入ノイラミニダーゼ阻害剤とを、同時に、別々に又は逐次的に気道に投与するために含む、インフルエンザ様疾患を治療するための製品。気道、特に下気道にエアロゾル送達するための医薬組成物である、請求項15記載の製品。第1の薬剤がIFN-βである、請求項15又は16に記載の製品。薬剤が、ILI症状が現れてから少なくとも48時間後にエアロゾルにより下気道に送達される、請求項1~8のいずれか一項に記載の薬剤、又は請求項9~14のいずれか一項に記載の方法。我々は、現在、ILIの間又は後に発症する下気道疾患を有する個体、特に入院患者の新規治療方法を発見した。発明の概要従って、本発明は、aインターフェロン-βIFN-β;bIFN-βの発現を増加させる薬剤;又はca又はbを発現できるポリヌクレオチドから選択される、確定的なILIの間又は後に発症する下気道疾患を有する個体の治療に使用するための薬剤であって、治療が薬剤の下気道へのエアロゾル送達による、薬剤を提供する。本発明はさらに、確定的なILIの間又は後に発症する下気道疾患と診断された個体の治療方法であって、個体の下気道に、aインターフェロン-βIFN-β;bIFN-βの発現を増加させる薬剤;ca又はbを発現できるポリヌクレオチドからなる群から選択される薬剤をエアロゾル送達することを含む、方法を提供する。さらに、確定的なILIの間又は後に発症する下気道疾患の治療のための医薬の製造における、aインターフェロン-βIFN-β;bIFN-βの発現を増加させる薬剤;又はca又はbを発現できるポリヌクレオチドから選択される薬剤の使用であって、治療が薬剤の下気道へのエアロゾル送達による、使用も提供する。実施例1確定的な下気道感染のinvitroモデルにおける、インフルエンザA感染を抑制する外因性IFN-βの能力を以下の実施例で例証する。概要インフルエンザ様疾患ILIの間又は後に発症する下気道疾患又は症状は、多くの場合、上気道から下気道へのウイルス感染の広がりにより引き起こされる。さらに、症状の持続、及び特に入院患者における入院期間の延長は、下気道における持続的なウイルス排出を伴う。ヒトにおけるインフルエンザ複製の重要部位であるヒト肺気管支上皮細胞を用いて、我々は、確定的な下気道インフルエンザA感染のモデルを開発した。このモデルにおいて、IFN-βの効果を調べた。方法細胞培養及び感染プロトコルグルタマックスglutamaxInvitrogen、10ウシ胎児血清FBSInvitrogen、ペニシリン50U/mL及びストレプトマイシン50μg/mLInvitrogenを含む最小必須培地MEMでヒト肺気管支上皮HBE細胞を培養した。24ウェルプレート中、HBE細胞を1.5×105/ウェルで蒔き、41~49回継代passageした。およそ60~70コンフルエントで、細胞を血清低減培地グルタマックスInvitrogen及び0.75~1FBSInvitrogenを含むMEMで24時間培養した。活性化インフルエンザ株インフルエンザA/WSN/33H1N1Retroscreenを0.0001MOI、37°Cで細胞に感染させた。1時間後に、非結合ウイルスを洗浄により除去した。血清低減培地を添加し、細胞をさらに4日間37°Cでインキュベートした。ウイルス感染48時間後に、1000IU/mLのヒトIFN-β1aRentschlerで細胞を処理した。IFN-β処理を開始したら、24時間毎に投与を繰り返した。インフルエンザ陽性細胞パーセンテージを決定するためのフローサイトメトリー感染24時間後、48時間後、72時間後及び96時間後に細胞培地を集め、-80°Cで保存した。感染24時間後、48時間後、72時間後及び96時間後において、細胞をトリプシン処理し、計測し、リン酸緩衝生理食塩水PBSで洗浄した。フローサイトメトリーによる分析のために、最大2×105細胞を得た。細胞を400gで遠心分離し、上清を捨てた。生/死細胞染色剤live/deadcellstain:MolecularProbesは、ジメチルスルホキシドDMSO500μLで再構成し、PBSで1:100に希釈した。希釈した生/死細胞染色剤100μLを細胞とともに、室温で30分間インキュベートした。細胞をPBSで洗浄し、400gで遠心分離し、上清を捨てた。チューブ当たり250μLのCytofix/CytopermBDBiosciencesを添加し、細胞を4°Cで20分間置いた。500gでの遠心分離により、2mLのPerm/WashBDBiosciences溶液で細胞を2回洗浄した。2回目の洗浄後、100μLのPerm/Wash溶液に細胞を再懸濁し、室温で15分間置いた。抗インフルエンザAマトリックスタンパク質抗体SerotecをPerm/Wash溶液で2.5μg/mLに希釈し、100μLを細胞に室温で30分間添加した。500gでの遠心分離により、2mLのPerm/Wash溶液で細胞を2回洗浄した。抗マウスIgG-FITCSigmaを、Perm/Wash溶液で5μg/mLに希釈し、100μLを細胞に遮光下、室温で30分間添加した。500gでの遠心分離により、2mLのPerm/Wash溶液で細胞を2回洗浄した。細胞をPerm/Wash溶液に再懸濁し、FACSCaliburBDBiosciences及びCellQuestProソフトウェアを用いて、フローサイトメトリーにより分析した。その後、WinMDIソフトウェアを用いてデータを分析した。ウイルス排出を決定するためのプラークアッセイグルタマックスInvitrogen、10FBSInvitrogen、非必須アミノ酸Invitrogen及びペニシリン/ストレプトマイシンInvitorgenを含むMEM中でメイディンダービーイヌ腎臓MadinDarbycaninekidney:MDCK細胞を培養した。12ウェルプレート中、MDCK細胞を1×105/ウェルで蒔き、25~30回継代した。100コンフルエントに達した時点で、細胞をPBSで2回洗浄した。感染実験の間に集めた細胞培地を、無血清培地DMEMInvitrogen、ペニシリン/ストレプトマイシンInvitrogen、L-グルタミンInvitrogen、非必須アミノ酸Invitrogen、及びピルビン酸ナトリウムInvitrogenで1:10~1:106の10倍希釈の希釈範囲となるように希釈した。希釈した細胞培地200μLを2連のウェルに添加した。プレートを37°Cで1時間インキュベートした。ウイルスを吸引し、細胞をPBSで洗浄した。重層培地100mLの10倍濃縮MEMInvitrogen、20mLの7.5重炭酸ナトリウムSigma、10mLの1MHEPESFluka、28mLの7.5ウシ血清アルブミンBSAフラクションVSigma、5mLの1DEAE-デキストランSigma、20mLのペニシリン/ストレプトマイシンInvitrogen、10mLの200mMグルタミンInvitrogen、507mLのd.H2Oを調製し、L-トシルアミド-2-フェニルエチルクロロメチルケトンで処理した1mg/mLトリプシンTRTPCKトリプシンWorthingtonBiochemicalCorp.12.5μL、及び7.5mLのAvicel懸濁液186mLのd.H20中、4.8gのAvicelFMCBiopolymerに17.5mLを添加した。反転させることにより重層培地を混合し、1ウェル当たり1mL添加した。移動又は振盪させることなく、プレートを2日間インキュベートした。重層培地を吸引し、細胞をPBSで2回洗浄した。クリスタルバイオレット溶液0.5mL0.65gのクリスタルバイオレットSigma、25mLのホルムアルデヒドSigma、25mLの100エタノールSigma、450mLの1×PBS5DulAPBSタブレットSigma500mLのd.H20を室温で30分間添加した。クリスタルバイオレットを除去し、プレートを水で洗浄した。プレートを乾燥させ、プラークを計測した。3つの独立した実験を実施した。最初の実験データ及び要約データを示す。データ分析GraphpadPrismソフトウェアを用いてデータを分析した。結果このモデルにおいて、フローサイトメトリーによる分析により、5~40の細胞が48~96時間の間に感染し図1a及び1bを参照されたい、これは、感染ピーク時に臨床条件で報告された生産的に感染された細胞レベルと同様であることが示唆されるBaccametal.2006JournalofVirology,80:7590-7599。それに応じて、この期間はまた、我々のモデルにおいて、最も高いレベルのウイルス排出とも関連する図2a及び2b。感染48時間後にIFN-βで細胞を処理すると確定的な感染の治療モデル、感染細胞の割合及びウイルス排出において大幅な減少がもたらされた図1a、1b、2a及び2b。10倍超のウイルス負荷の減少は、臨床的に意義があると考えられるBarnettetal.2000Antimicrob.AgentsChemother44:78-87。結論これらの結果は、IFN-β治療が、肺における確定的なインフルエンザ感染の経過を変化させ、それ故、確定的なインフルエンザ様疾患ILIの間又は後に発症する気道疾患を減少させる可能性があることを示す。高齢患者、並びに喘息及び/又はCOPD罹患者は、必要な時にIFN-βを産生することが困難である可能性が高いので、本明細書に記載の使用及び方法は、このような脆弱なグループに特に適用される。Invivo研究:イントロダクションインフルエンザ様疾患の主要な合併症は、ウイルスが下気道へと広がった後に発症するウイルス性肺炎である。ヒトIFN-βは、その生物学的活性において、高度に種特異的である。カニクイマカクザルcynomolgusmacaquemonkeyは、ヒトIFN-βの効果を研究するのに適切な種である。ヒトIFN-βは、インターフェロン感受性抗ウイルス遺伝子ミクソウイルス耐性タンパク質1MxA図3及び2’-5’オリゴアデニル酸合成酵素2’-5’OAS図4をカニクイザルマカク血液細胞及びヒト血液細胞において同程度に上方制御することが示された。さらに、invitro研究において、ヒトIFN-βは、インフルエンザ感染からカニクイザルマカク細胞を保護する図5。高病原性インフルエンザAH5N1Rimmelzwaanetal.2001JVirol.75:6687-91及び汎発性2009インフルエンザAH1N1Herfstetal.2010Vet.Pathol.47:1040-7ウイルスについて、カニクイマカクザルを用いて下気道疾患の前臨床モデルが開発されている。これらのモデルは、感染前に投与された場合の、インフルエンザに対するノイラミニダー阻害剤の臨床的有効性を予測していた。この研究では、インフルエンザにより誘起される下気道疾患の類似したカニクイマカクザルモデルにおける、肺に送達されるIFN-βの効果を調べる。チャレンジウイルス株は、A/インドネシア/5/05H5N1及びA/ネーデルラント/602/2009汎発性H1N1であり、これらはいずれも、下気道で複製し、顕著な肺の病変lungpathologyをもたらすことが示されているHerfstetal.2010Vet.Pathol.47:1040-7;Rimmelzwaanetal.2001JVirol.75:6687-91。本研究は2つの段階を含む。第一段階では、気管支肺胞洗浄BALにより得られた肺細胞において、IFN-β依存性抗ウイルスマーカーの上方制御が示されることにより、吸入IFN-βの良好な送達が実証される。臨床研究における類似のデータにより、抗ウイルス療法としての吸入IFN-βのさらなる開発が支持される。第二段階では、インフルエンザにより誘起される肺の病変及び肺ウイルス負荷に対する、肺送達IFN-βでの予防的及び治療的処置の効果を調べる。第一段階:IFN-βの肺への良好な送達の確認簡単に述べると、溶液中のIFN-βを、カニクイマカクザルの肺に2回ネブライザーにより投与する。各投与の前後にBALを集める。BAL細胞中のIFN-β依存性抗ウイルスマーカーMxA、2’-5’OAS、及びインターフェロンガンマ誘導タンパク質10kDaIP-10の遺伝子発現を、定量的PCR法を用いて決定する。上方制御レベルを、臨床研究で得られたデータと比較して、次の段階の投与量を選択する。研究スケジュール及びより詳細な方法を以下に記載する。吸入IFN-βの投与7日前、およそ3歳の5匹のオスカニクイマカクザルを、ケタミン-ドミトールdormitorで麻酔し、血液及び気管支肺胞洗浄BALを集め、体重を測定する。BALは、10mLのリン酸緩衝生理食塩水での肺のフラッシングflushingを伴い、想定される回収量はおよそ5mLである。BALサンプルは、そのたびごとに、上清と細胞フラクションとに分離する。細胞フラクションはRLTバッファーQiagenに溶解し、定量的PCR法を用いて、IFN-β依存性抗ウイルスバイオマーカーMxA、2’-5’OAS、及びIP-10について分析する。0日目において、麻酔下で血液を集め、体重を測定し、3mLの吸入IFN-βRentschlerを各マカクに送達する。IFN-βネブライザー溶液は、小児用フェイスマスクPhilipsRespironics、partnumberHS81110EU-001を付けたI-neb装置PhilipsRespironicsを用いて吸入により送達する。I-neb装置は、スイッチを入れた際に、連続したエアロゾル流を生じるようにプログラムする。1日目において、麻酔下で血液及びBALを集め、体重を測定する。8日目において、麻酔下で血液を集め、体重を測定し、1.5mL又は4.5mLの吸入IFN-βを各マカクに送達する。選択されるIFN-βの投与量は、投与1から得られた結果に依存するだろう。9日目において、麻酔下で血液及びBALを集め、体重を測定する。第二段階:インフルエンザにより誘起される肺の病変及び肺ウイルス負荷に対する、肺送達IFN-βでの予防的及び治療的処置の効果研究の第二段階は、3つの処置グループを含む:グループ1はプラセボを投与される;グループ2は、チャレンジウイルスでの感染24時間前に吸入IFN-β処置を受けさせ、その後毎日IFN-βで処置する;グループ3は、チャレンジウイルスの感染4時間後に吸入IFN-β処置を受けさせ、その後毎日IFN-βで処置する。このモデルでは、比較的高いウイルス量を下気道に直接投与して、確定的な下気道疾患のモデルを作製しているので、治療的処置は感染4時間後に投与する。サンプルサイズの計算は、処置動物とコントロール未処置動物との間に1.5logのウイルス力価の差の治療効果を見るためには、グループ当たり9匹の動物が必要であることを示した。これは、ノイラミニダーゼ阻害剤を用いた臨床研究の結果に基づき、臨床的に有意であると考えられるBarnettetal.2000Antimicrob.AgentsChemother.44:78-87。研究スケジュールを以下に示す:本研究に含まれる動物数のために、ブロック計画blockdesignを使用する。本研究は3つのブロックで実施し、各ブロックは9匹の動物からなり、各処置グループ由来の3種の動物で実施する。ウイルスチャレンジ14日前に、循環インフルエンザに対して血清反応陰性であると確認された9匹のカニクイザルマカクの腹腔中に、予めプログラムした温度センサーを備え付け、ケタミン及びドルミトールdormitor麻酔下で血液を集める。-1日目において、手術から完全に回復した後、全ての動物に麻酔をかけ、体重を測定し、サンプル血清のための全血、及び鼻腔/咽頭スワブを集める。グループ1及び2に属する動物には、麻酔下、ネブライザーによりプラセボ又はIFN-β第一段階で決定した投与量を投与する。0日目において、グループ1及び2の動物は、上述のとおり、ネブライザーによりプラセボ又はIFN-βで処置する。次いで、全ての動物に対し、インフルエンザウイルス105TCID50H5N1又は107TCID50H1N1を気管内にチャレンジする。気管内にチャレンジしてから4時間後に、グループ3の動物に、上述のとおり、ネブライザーによりIFN-βを投与する。1日目、2日目、3日目及び4日目において、全ての動物に麻酔をかけ、体重を測定し、サンプルを集め血清のための全血、及び鼻腔/咽頭スワブ、上述のとおり、ネブライザーによりプラセボ又はIFN-βで処置する。チャレンジから5日後に、全ての動物に麻酔をかけ、体重を測定し、放血により安楽死させる。完全な肉眼的病理学fullgrosspathologyを実施し、全ての主要な臓器を検査し、肺病変を記載する。全ての動物から、以下を含むサンプルを集める:血清のための全血、鼻腔/咽頭スワブ、及び右肺の組織。実験を通じて集めたスワブ、及び右肺部分を定量PCR、及びウイルス負荷を決定するためのウイルス力価測定に供する。左肺は、その後の組織病理学的評価のために、10ホルマリンで膨張させる。主なエンドポイントは、肺のウイルス負荷及び肺の病変スコアである。毎日採取した咽頭スワブは、ウイルス感染の時間経過の指標となり得る。特にIFN-βでの治療的処置後の、肺のウイルス負荷又は肺の病変の減少というポジティブなデータは、インフルエンザによりもたらされる下気道疾患を治療するための、吸入IFN-βの開発を支持する。"