被験体においてヘプシジン発現または活性を制御するための方法であって、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節する化合物の有効量を被験体に投与し、それにより被験体においてヘプシジン発現または活性を制御する段階を含む、方法。少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーがTGFβまたはBMPである、請求項1記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、BMPのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項2記載の方法。作用物質が、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、DLNFc融合タンパク質、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項3記載の方法。作用物質が、変異型HJVFc融合タンパク質、変異型DragonFc融合タンパク質、および変異型DLNFc融合タンパク質からなる群より選択される融合タンパク質を含み、融合タンパク質はタンパク分解性切断が不可能である、請求項3記載の方法。被験体が鉄欠乏と関連した状態を有する、または有する危険性がある、請求項2記載の方法。鉄欠乏と関連した状態が、慢性疾患の貧血、鉄欠乏性貧血、機能性鉄欠乏、および小球性貧血からなる群より選択される、請求項6記載の方法。被験体が鉄過剰と関連した状態を有する、または有する危険性がある、請求項2記載の方法。鉄過剰と関連した状態が、成人性ヘモクロマトーシスおよび若年性ヘモクロマトーシスからなる群より選択される、請求項8記載の方法。被験体が鉄過剰と関連した状態を有する、または有する危険性があり、かつ被験体においてヘプシジン発現または活性を制御することが、被験体においてヘプシジン発現または活性を増強することを含む、請求項2記載の方法。化合物が、BMPのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項10記載の方法。TGFβのアンタゴニストが、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項11記載の方法。鉄過剰と関連した状態が、成人性ヘモクロマトーシスおよび若年性ヘモクロマトーシスからなる群より選択される、請求項10記載の方法。被験体が鉄欠乏と関連した状態を有する、または有する危険性があり、かつ被験体においてヘプシジン発現または活性を制御することが、被験体においてヘプシジン発現または活性を抑制することを含む、請求項2記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項14記載の方法。BMPのアンタゴニストが、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、およびDLNFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項15記載の方法。BMPのアンタゴニストが、変異型HJVFc融合タンパク質、変異型DragonFc融合タンパク質、および変異型DLNFc融合タンパク質からなる群より選択される融合タンパク質を含み、融合タンパク質はタンパク分解性切断が不可能である、請求項15記載の方法。鉄欠乏と関連した状態が、慢性疾患の貧血、鉄欠乏性貧血、機能性鉄欠乏、および小球性貧血からなる群より選択される、請求項10記載の方法。生体系においてヘプシジン発現または活性を制御するための方法であって、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節する化合物の有効量と生体系を接触させ、それにより生体系においてヘプシジン発現または活性を制御する段階を含む、方法。少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーがTGFβまたはBMPである、請求項19記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、BMPのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項20記載の方法。作用物質が、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、DLNFc融合タンパク質、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項21記載の方法。生体系が、細胞、生体液、生体組織、および動物からなる群より選択される、請求項19記載の方法。生体系が鉄過剰を示し、かつ生体系においてヘプシジン発現または活性を制御することが、生体系においてヘプシジン発現または活性を増強することを含む、請求項19記載の方法。化合物が、BMPのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項24記載の方法。TGFβのアンタゴニストが、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項25記載の方法。生体系が鉄欠乏を示し、かつ生体系においてヘプシジン発現または活性を制御することが、生体系においてヘプシジン発現または活性を抑制することを含む、請求項19記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項27記載の方法。BMPのアンタゴニストが、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、およびDLNFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項28記載の方法。BMPのアンタゴニストが、変異型HJVFc融合タンパク質、変異型DragonFc融合タンパク質、および変異型DLNFc融合タンパク質からなる群より選択される融合タンパク質を含み、融合タンパク質はタンパク分解性切断が不可能である、請求項28記載の方法。被験体において鉄代謝または鉄代謝過程を制御するための方法であって、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節する化合物の有効量を被験体に投与し、それにより被験体において鉄代謝または鉄代謝過程を制御する段階を含む、方法。化合物を投与することが結果として、被験体におけるヘプシジン発現または活性の制御を生じる、請求項31記載の方法。少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーがTGFβまたはBMPである、請求項31記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、BMPのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項33記載の方法。作用物質が、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、DLNFc融合タンパク質、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項34記載の方法。鉄代謝過程が、鉄取り込み、鉄吸収、鉄運搬、鉄貯蔵、鉄プロセッシング、鉄動員、および鉄利用からなる群より選択される、請求項31記載の方法。被験体が鉄過剰と関連した状態を有する、または有する危険性があり、かつ鉄代謝または鉄代謝過程を制御することが、被験体において鉄代謝または鉄代謝過程を阻害することを含む、請求項31記載の方法。化合物が、BMPのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項37記載の方法。TGFβのアンタゴニストが、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項38記載の方法。鉄過剰と関連した状態が、成人性ヘモクロマトーシスおよび若年性ヘモクロマトーシスからなる群より選択される、請求項37記載の方法。被験体が鉄欠乏と関連した状態を有する、または有する危険性があり、かつ鉄代謝または鉄代謝過程を制御することが、被験体において鉄代謝または鉄代謝過程を亢進することを含む、請求項31記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項41記載の方法。BMPのアンタゴニストが、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、およびDLNFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項42記載の方法。BMPのアンタゴニストが、変異型HJVFc融合タンパク質、変異型DragonFc融合タンパク質、および変異型DLNFc融合タンパク質からなる群より選択される融合タンパク質を含み、融合タンパク質はタンパク分解性切断が不可能である、請求項42記載の方法。鉄欠乏と関連した状態が、慢性疾患の貧血、鉄欠乏性貧血、機能性鉄欠乏、および小球性貧血からなる群より選択される、請求項41記載の方法。生体系において鉄代謝または鉄代謝過程を制御するための方法であって、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節する化合物の有効量と生体系を接触させ、それにより生体系において鉄代謝または鉄代謝過程を制御する段階を含む、方法。少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーがTGFβまたはBMPである、請求項46記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、BMPのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項47記載の方法。作用物質が、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、DLNFc融合タンパク質、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項48記載の方法。生体系が、細胞、生体液、生体組織、および動物からなる群より選択される、請求項46記載の方法。鉄代謝過程が、鉄取り込み、鉄吸収、鉄運搬、鉄貯蔵、鉄プロセッシング、鉄動員、および鉄利用からなる群より選択される、請求項46記載の方法。生体系が鉄過剰を示し、かつ鉄代謝または鉄代謝過程を制御することが、生体系において鉄代謝または鉄代謝過程を阻害することを含む、請求項44記載の方法。化合物が、BMPのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項52記載の方法。TGFβのアンタゴニストが、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質である、請求項53記載の方法。生体系が鉄欠乏を示し、かつ鉄代謝または鉄代謝過程を制御することが、生体系において鉄代謝または鉄代謝過程を亢進することを含む、請求項43記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項55記載の方法。BMPのアンタゴニストが、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、およびDLNFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項56記載の方法。BMPのアンタゴニストが、変異型HJVFc融合タンパク質、変異型DragonFc融合タンパク質、および変異型DLNFc融合タンパク質からなる群より選択される融合タンパク質を含み、融合タンパク質はタンパク分解性切断が不可能である、請求項56記載の方法。被験体において鉄代謝もしくは鉄代謝過程における撹乱と関連した状態を処置または予防するための方法であって、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節する化合物の有効量を被験体に投与し、それにより被験体の状態を処置または予防する段階を含む、方法。鉄代謝過程が、鉄取り込み、鉄吸収、鉄運搬、鉄貯蔵、鉄プロセッシング、鉄動員、および鉄利用からなる群より選択される、請求項59記載の方法。少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーがTGFβまたはBMPである、請求項60記載の方法。化合物を投与することが結果として、被験体におけるヘプシジン発現または活性の制御を生じる、請求項59記載の方法。化合物が、TGFβのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、BMPのアゴニスト、BMPのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項61記載の方法。作用物質が、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、DLNFc融合タンパク質、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項63記載の方法。被験体が鉄欠乏と関連した状態を有する、または有する危険性があり、化合物が、BMPのアンタゴニスト、TGFβのアゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項59記載の方法。BMPのアンタゴニストが、HJVFc融合タンパク質、DragonFc融合タンパク質、およびDLNFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項65記載の方法。BMPのアンタゴニストが、変異型HJVFc融合タンパク質、変異型DragonFc融合タンパク質、および変異型DLNFc融合タンパク質からなる群より選択される融合タンパク質を含み、融合タンパク質はタンパク分解性切断が不可能である、請求項65記載の方法。鉄欠乏と関連した状態が、慢性疾患の貧血、鉄欠乏性貧血、機能性鉄欠乏、および小球性貧血からなる群より選択される、請求項65記載の方法。慢性疾患が、炎症、感染症、免疫不全症、および腫瘍性疾患からなる群より選択される障害である、請求項68記載の方法。鉄補充処置を被験体に施す段階をさらに含む、請求項65記載の方法。鉄補充処置が、フマル酸第一鉄、グルコン酸第一鉄、硫酸第一鉄、鉄デキストラン、鉄多糖、鉄ソルビトール、グルコン酸第二鉄ナトリウム、および鉄スクロースからなる群より選択される、請求項70記載の方法。被験体が鉄過剰と関連した状態を有する、または有する危険性があり、化合物が、BMPのアゴニスト、TGFβのアンタゴニスト、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される作用物質を含む、請求項59記載の方法。TGFβのアンタゴニストが、sTβRIIFc融合タンパク質、sTβRIIBFc融合タンパク質、およびsTβRIIIΔFc融合タンパク質からなる群より選択される、請求項72記載の方法。鉄過剰と関連した状態が、成人性ヘモクロマトーシスおよび若年性ヘモクロマトーシスからなる群より選択される、請求項72記載の方法。鉄キレート化処置を被験体に施す段階をさらに含む、請求項72記載の方法。鉄キレート化処置が、デスフェリオキサミン、バソフェナントロリン、およびクリオキノールからなる群より選択される、請求項75記載の方法。瀉血を被験体に行う段階をさらに含む、請求項72記載の方法。以下の段階を含む、系においてヘプシジン発現または活性を制御する化合物を同定するための方法であって、系が少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーを発現する、方法:系を候補化合物と、候補化合物が少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節するのに十分な条件下および時間、インキュベートして、試験系を得る段階;試験系において少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を代表する少なくとも1つの因子を測定する段階;候補化合物無しで同じ条件下で同じ時間、系をインキュベートして、対照系を得る段階;対照系において因子を測定する段階;試験系および対照系において測定された因子を比較する段階;ならびに試験系で測定された因子が対照系で測定された因子より少ないまたは多い場合には、候補化合物が系においてヘプシジン発現または活性を制御すると決定する段階。少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーがTGFβまたはBMPである、請求項78記載の方法。系が、細胞、生体液、生体組織、または動物である、請求項79記載の方法。系がTGFβを発現する、請求項78記載の方法。候補化合物がTGFβのシグナル伝達活性を増強し、系においてヘプシジン発現または活性を抑制する化合物であると同定される、請求項81記載の方法。候補化合物がTGFβのシグナル伝達活性を抑制し、系においてヘプシジン発現または活性を増強する化合物であると同定される、請求項81記載の方法。系がBMPを発現する、請求項78記載の方法。候補化合物がBMPのシグナル伝達活性を増強し、系においてヘプシジン発現または活性を増強する化合物であると同定される、請求項84記載の方法。候補化合物がBMPのシグナル伝達活性を抑制し、系においてヘプシジン発現または活性を抑制する化合物であると同定される、請求項84記載の方法。以下の段階を含む、系において鉄代謝または鉄代謝過程を制御する化合物を同定するための方法であって、系が少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーを発現する、方法:系を候補化合物と、候補化合物が少なくともTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節するのに十分な条件下および時間、インキュベートして、試験系を得る段階;試験系において少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を代表する少なくとも1つの因子を測定する段階;候補化合物無しで同じ条件下で同じ時間、系をインキュベートして、対照系を得る段階;対照系において因子を測定する段階;試験系および対照系において測定された因子を比較する段階;ならびに試験系で測定された因子が対照系で測定された因子より少ないまたは多い場合には、候補化合物が鉄代謝または鉄代謝過程を制御すると決定する段階。少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーがTGFβまたはBMPである、請求項87記載の方法。系が、細胞、生体液、生体組織、または動物である、請求項88記載の方法。鉄代謝過程が、鉄取り込み、鉄吸収、鉄運搬、鉄貯蔵、鉄プロセッシング、鉄動員、および鉄利用からなる群より選択される、請求項88記載の方法。系がTGFβを発現する、請求項88記載の方法。候補化合物がTGFβのシグナル伝達活性を増強し、系において鉄代謝または鉄代謝過程を亢進する化合物であると同定される、請求項91記載の方法。候補化合物がTGFβのシグナル伝達活性を抑制し、系において鉄代謝または鉄代謝過程を阻害する化合物であると同定される、請求項91記載の方法。系がBMPを発現する、請求項88記載の方法。候補化合物がBMPのシグナル伝達活性を増強し、系において鉄代謝または鉄代謝過程を阻害する化合物であると同定される、請求項94記載の方法。候補化合物がBMPのシグナル伝達活性を抑制し、鉄代謝または鉄代謝過程を亢進する化合物であると同定される、請求項94記載の方法。請求項87記載の方法により同定されるヘプシジン発現または活性のレギュレーター。請求項87記載の方法により同定される鉄代謝または鉄代謝過程のレギュレーター。請求項87記載の方法により同定されたヘプシジン発現または活性の少なくとも1つのレギュレーターの有効量、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。請求項87記載の方法により同定された鉄代謝または鉄代謝過程の少なくとも1つのレギュレーターの有効量、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。被験体において鉄代謝もしくは鉄代謝過程における撹乱と関連した状態を処置または予防する方法であって、請求項87記載の方法により同定されたヘプシジン発現または活性の少なくとも1つのレギュレーターの有効量を被験体に投与する段階を含む、方法。被験体において鉄代謝もしくは鉄代謝過程における撹乱と関連した状態を処置または予防する方法であって、請求項87記載の方法により同定された鉄代謝または鉄代謝過程の少なくとも1つのレギュレーターの有効量を被験体に投与する段階を含む、方法。定義本明細書中を通して、以下の段落に定義されるいくつかの用語が用いられる。本明細書に用いられる場合、TGFβスーパーファミリーという用語は、TGFβスーパーファミリーの任意のメンバーを指し、とりわけ、アクチビン、インヒビン、トランスフォーミング増殖因子β、増殖分化因子、骨形成タンパク質、およびミュラー管抑制物質を含む。本発明の文脈において、特定の好ましいTGFβスーパーファミリーメンバーは、TGFβおよびBMPを含む。鉄代謝または鉄代謝過程に適用される場合の撹乱という用語は、正常な状態、機能、およびもしくは活性のレベルからの任意の妨害、調節不全、ならびにまたは逸脱を指す。鉄代謝過程は、鉄取り込み、鉄吸収、鉄運搬、鉄貯蔵、鉄プロセッシング、鉄動員、および鉄利用を含む。一般的に、鉄代謝における撹乱は、結果として、鉄過剰または鉄欠乏を生じる。本明細書に用いられる場合、鉄過剰という用語は、特定の組織または特定の生体系における正常レベルを有意に上回る、被験体の組織または生体系に存在する鉄の量を指す。鉄欠乏という用語は、特定の組織または特定の生体系における正常レベルを有意に下回る、被験体の組織または生体系に存在する鉄の量を指す。正常レベルより有意に下回るまたは有意に上回る鉄の量は、生理学的に望ましくない、およびまたは被験体もしくは生体系に有害である、もしくは有害になる可能性がある、鉄の任意の量に対応する。鉄レベルの測定のための方法は当技術分野において公知である。本明細書に用いられる場合、鉄代謝または鉄代謝過程の撹乱と関連した状態という用語は、鉄過剰または鉄欠乏により特徴付けられる任意の疾患、障害、症候群、または状態を指す。予防という用語は、鉄代謝における撹乱と関連した病態生理学的状態の発症を遅らせる、または防ぐことに向けられる方法を特徴付けるために本明細書に用いられる。処置という用語は、鉄代謝における撹乱と関連した状態の発症を遅らせる、もしくは防ぐこと;または状態の症状の進行、重症化、もしくは悪化を遅らせる、もしくは止めること;または状態の症状の緩解をもたらすこと;または状態を治癒させることに向けられる方法を特徴付けるために本明細書に用いられる。処置は、予防的または防止的行為として疾患の発症前に施されてもよい。それはまた、治療的行為として疾患の開始後施されてもよい。化合物および作用物質という用語は、本明細書で交換可能に用いられる。それらは、生体高分子、有機もしくは無機分子、または細菌、植物、真菌、もしくは動物の細胞もしくは組織のような生物学的物質から作製された抽出物のような、任意の天然または非天然分子を指す。化合物は、単一分子、2つもしくはそれ以上の分子の混合物、または少なくとも2つの分子の複合体でありうる。候補化合物という用語は、対象となる活性について試験されることになっている化合物または作用物質を指す。本発明の特定のスクリーニング方法において、候補化合物は、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性の調節を通して、ヘプシジン発現を制御する、およびまたは鉄代謝を制御する能力について評価される。生物学的現象に適用される場合の制御という用語は、生物学的現象の調節を可能にする過程を指す。制御という用語はまた、生物学的現象を調節する化合物の能力を指す。例えば、鉄代謝を制御する過程または化合物は、鉄過剰を示す被験体もしくは生体系において鉄レベルを減少させる能力;およびまたは鉄欠乏を示す被験体もしくは生体系において鉄レベルを増加させる能力を有する。本発明の文脈において、生物学的現象の制御が起こる機構は、好ましくは、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性の調節を介する。本発明のスクリーニング方法において、候補化合物がヘプシジン発現または活性を制御することが見出された場合、それは、ヘプシジン発現または活性のレギュレーターであると同定される。本明細書に用いられる場合、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性の調節という用語は、TGFβスーパーファミリーメンバーの効果の持続時間を増加もしくは延長させる、または減少もしくは低減させる化合物の能力を指す。本発明のスクリーニング方法において、候補化合物がそのような増強または抑制を誘導することが見出された場合、それは、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性のモジュレーターであると同定される。アゴニストという用語は、当技術分野において認められているように用いられる。一般的に、その用語は、ポリペプチドもしくは核酸の効果の持続時間を増加または延長させる化合物を指す。アゴニストは、直接的アゴニストであってよく、その場合、それはポリペプチドもしくは核酸と相互作用することによりその効果を発揮する分子であるか、または間接的アゴニストであってよく、その場合、それは、ポリペプチドもしくは核酸との相互作用による以外の機構によってその効果を発揮する。アンタゴニストという用語は、当技術分野において認められているように用いられることを意図される。一般的に、その用語は、ポリペプチドもしくは核酸の効果の持続時間を減少または低減させる化合物を指す。アンタゴニストは、直接的アンタゴニストであることができ、その場合、それはポリペプチドもしくは核酸と相互作用することによりその効果を発揮する分子である、または間接的アゴニストであることができ、その場合、それは、ポリペプチドもしくは核酸との相互作用による以外の機構によってその効果を発揮する。本明細書に用いられる場合、有効量という用語は、意図された目的を果たすのに十分である化合物または作用物質の任意の量を指す。本発明の文脈において、目的は、例えば、以下でありうる:TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節すること;およびまたはヘプシジン発現もしくは活性を制御すること;およびまたは鉄代謝もしくは鉄代謝過程を制御すること;およびまたは鉄代謝における撹乱と関連した状態の発症を遅らせる、もしくは防ぐこと;およびまたは状態の症状の進行、重症化、もしくは悪化を遅らせる、もしくは止めること;およびまたは状態の症状の緩解をもたらすこと;およびまたは状態を治癒させること。被験体という用語は、鉄代謝における撹乱と関連した病態生理学的状態に冒される可能性があるが、そのような状態を有する場合も有しない場合もある、ヒトまたは別の哺乳動物を指す。系および生体系という用語は、本明細書で交換可能に用いられる。系は、鉄過剰または鉄欠乏を示しうる任意の生物学的実体でありうる。生体系は、好ましくは、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーを発現するものである。いくつかの好ましい系はTGFβおよびまたはBMPを発現する。生体系はまた、好ましくは、ヘプシジンを発現しうる、またはヘプシジンを含みうる。本発明の文脈において、インビトロ、インビボ、およびエクスビボの系が考えられる;および系は、細胞、生体液、生体組織、または動物でありうる。系は、例えば、生きている被験体、または死んだ被験体が起源であってよい。本明細書に用いられる場合、生体液という用語は、被験体により生成される、および被験体から得られる液体を指す。生体液の例は、限定されるわけではないが、尿、血清、および血漿を含む。本発明において、生体液は、精製により、例えば、限外濾過またはクロマトグラフィーにより、引き出されたそのような液体の全画分または任意の画分を含む。本明細書に用いられる場合、生体組織という用語は、被験体から得られる組織を指す。生体組織は、身体における任意の器官もしくは系の全体または部分でありうる。薬学的組成物は、本発明の少なくとも1つの化合物および少なくとも1つの薬学的に許容される担体を含むと本明細書で定義される。本明細書に用いられる場合、薬学的に許容される担体という用語は、活性成分の生物活性の効果に干渉しない、かつそれが投与される濃度で宿主に対して過度に毒性であるということはない担体媒質を指す。その用語は、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などを含む。薬学的活性物質の製剤のためのそのような媒質および剤の使用は当技術分野において周知である。特定の好ましい態様の詳細な説明上で述べられているように、本発明は、哺乳動物において鉄代謝を制御するための改善された系およびストラテジーを提供する。特に、本発明の化合物および方法は、現行の治療より望ましくない副作用を誘導する可能性が低い。I鉄代謝のレギュレーターとしてのTGFβスーパーファミリーメンバーのアゴニストおよびアンタゴニスト本発明は、TGFβスーパーファミリーの特定のメンバーが、哺乳動物における鉄代謝の重要なレギュレーターであるヘプシジンの発現を制御することができるという発見を含む。実施例1に記載されているように、本出願人らは、BMPシグナル伝達がHepG2肝臓ヘパトーマ細胞においてヘプシジン発現を誘導するが、TGFβシグナル伝達はヘプシジンの発現を抑制することを認識している。さらに、周知のBMPアンタゴニストであるノギンを用いて、出願人らは、BMPシグナル伝達の阻害がヘプシジン発現の低下を生じることを示している。従って、本発明は、TGFβスーパーファミリーのメンバーのアゴニストおよびまたはアンタゴニストを用いて、ヘプシジン発現または活性を制御し、それが次に鉄代謝を制御する方法を提供する。Aヘプシジンヘプシジンは、ごく最近になってヒト尿および血漿限外濾過液から精製された抗菌性質を有する小さなシステインに富む陽イオン性ペプチドである。アミノ酸末端切り詰めにより異なる、20個、22個、または25個のアミノ酸のこのペプチドは、はしご型様式で4つのジスルフィド架橋により連結された2つのアームを有する短いヘアピンを形成する。ヘプシジンは、種間で保存されている8個のシステイン残基を含む。ペプチドは最初、尿および血液から単離されたが、ヘプシジンはマウスおよびヒトの両方において肝臓で大部分は発現する。発現はまた、心臓および脳で検出可能であるが、非常に低い程度である。最近、ヘプシジンはまた、腎臓で発現していることが見出されている。ヒトにおいてその遺伝子の1個のコピーのみが存在するが、マウスにおいては2個のヘプシジン遺伝子が報告されている。ヒトおよびマウスの両方のヘプシジン遺伝子は、3つのエクソンおよび2つのイントロンからなり、第三エクソンは尿に見出される成熟ペプチドをコードしている。ヒトおよびラットにおいて、エクソンは、推定上の24アミノ酸のシグナルペプチドを含む84アミノ酸の前駆体をコードする。ヘプシジンと鉄代謝の間の関係は、最初、Pigeonetalにより、鉄過剰に対する肝臓応答を研究中に見出された。他の研究は、ヘプシジンmRNAを欠損するマウスが、肝臓および膵臓を冒す鉄過剰を、マクロファージに富む脾臓における欠乏と共に起こしたことを示している。ヘプシジンを過剰発現するトランスジェニックマウスは、生まれた時に重度の鉄欠乏で死んだことが観察された。これらの研究は、ヘプシジンが、小腸における鉄吸収、マクロファージからの再循環される鉄の放出、および胎盤を通しての鉄の運搬を抑制することを示唆した。動物研究に一致して、大きな肝細胞腺腫およびそうでなければ原因不明の鉄不応性貧血を有する患者は、肝臓においてヘプシジンmRNAの過剰発現を示す。最近の研究は、ヘモクロマトーシス遺伝子関連ヘモクロマトーシスにおける異常なヘプシジン発現および乱されたヘプシジン制御、ならびにヘプシジン変異の重症若年性ヘモクロマトーシスとの関連を見出している。これらおよび他の観察に基づいて、ヘプシジンが鉄代謝の負のレギュレーターとして働く鉄恒常性の重要な成分であることを示唆している。BTGFβスーパーファミリーメンバーリガンドのTGFβスーパーファミリーは、現在、30より多いメンバーを含み、とりわけ、アクチビン、インヒビン、トランスフォーミング増殖因子β、増殖分化因子、骨形成タンパク質、およびミュラー管抑制物質を含む。これらの分子のすべては、TGFβと構造的に関連しているペプチド増殖因子である。それらはすべて、剛構造に組織化されている7個の特に保存されたシステイン残基により構成される、システインノットと呼ばれる共通のモチーフを共有する。古典的なホルモンと違い、TGFβスーパーファミリーのメンバーは、効果が増殖因子自身と同じくらい標的細胞の型および時期に依存する多機能性タンパク質である。本発明の方法の実施における使用に適したTGFβスーパーファミリーメンバーは、シグナル伝達活性がヘプシジンの発現または活性を制御することができるTGFβスーパーファミリーの任意のメンバーを含む。好ましいTGFβスーパーファミリーメンバーは、限定されるわけではないが、TGFβおよびBMPを含む。トランスフォーミング増殖因子β本発明の特定の態様において、TGFβスーパーファミリーメンバーはTGFβである。TGFβは、広範囲の生物学的過程に関与し、胚形成、成体組織修復、および免疫抑制中の重要事象において中心的役割を果たす細胞外ポリペプチドである。哺乳動物において、TGFβは生物体のほとんどすべての細胞により産生され、ほとんどすべての細胞はその効果の標的としての役割を果たすことができる。TGFβは、細胞増殖、細胞分化、アポトーシス、および細胞外マトリックス産生の強力なレギュレーターである。哺乳動物細胞は、TGFβの3つの異なるアイソフォーム:TGFβ1、TGFβ2、およびTGFβ3を産生できる。これらのアイソフォームは同じ基本構造を示し、それらのアミノ酸配列は高度の相同性を示す。しかしながら、各アイソフォームは、別々の遺伝子によりコードされ、それぞれが、組織特異的な、および発生学的に制御された、両方の様式で発現する。最新の概念によれば、TGFβは、最初に標的細胞上の膜受容体に結合し、それにより下流シグナル伝達事象を惹起することによりその効果を発揮する。架橋結合研究は、TGFβが主に、I型、II型、およびIII型のTGFβ受容体と呼ばれる3つの高親和性細胞表面タンパク質に結合することを示している。本発明の方法による鉄代謝の制御は、抑制または増強が結果としてヘプシジン発現または活性の制御を生じる限り、TGFβのアイソフォームのいずれか1つのシグナル伝達活性の抑制または増強により達成されうる。骨形成タンパク質本発明の他の態様において、TGFβスーパーファミリーメンバーはBMPである。BMPはもともとは、異所性部位で骨形成を誘導するタンパク質であると同定された。しかしながら、骨および軟骨形態形成におけるそれらの役割に加えて、BMPはまた、目、心臓、血液、肺、腎臓、筋肉、皮膚、および他の組織の生前発育ならびに生後の成長およびまたは修復に関与している。研究は、BMPが、間葉細胞、上皮細胞、造血細胞、および神経細胞を含む様々な細胞型の増殖、アポトーシス、分化、および走化性を制御するにおいて重要な役割を果たすことを示している。。TGFβスーパーファミリーの他のメンバーと類似した様式で、BMPは、膜貫通セリントレオニンキナーゼ受容体の2つの異なる型:I型およびII型の複合体を形成することによりそれらの効果を媒介する。3つの異なるBMPI型受容体および3つのBMPII型受容体;アクチビンIIA型受容体;およびアクチビンIIB型受容体が同定されている。BMP結合は、細胞質受容体活性化Smadのリン酸化へと導く、I型受容体のII型受容体によるリン酸化を誘導する。今まで、20個近くのBMPアイソフォームが哺乳動物において同定かつ特徴付けられており、より新しいものが発見されつつある。BMPファミリーメンバーは、それらがお互いに構造的にどれくらい密接に関連しているかによりサブグループに分類されている。インビボで、BMPアイソフォームは、発現の異なるプロファイル、受容体に対する異なる親和性、およびそれゆえに、固有の生物活性を有する。本発明の方法による鉄代謝の制御は、抑制または増強が結果としてヘプシジン発現または活性の制御を生じる限り、BMPのアイソフォームのいずれか1つのシグナル伝達活性の抑制または増強により達成されうる。CTGFβスーパーファミリーメンバーのアゴニストおよびアンタゴニスト本発明の方法における使用に適したTGFβスーパーファミリーメンバーのアゴニストおよびアンタゴニストは、調節が結果としてヘプシジン発現または活性の制御を生じるように、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節する能力を有する任意の化合物または作用物質を含む。適したアゴニストおよびアンタゴニストは、TGFβスーパーファミリーメンバーの天然のアゴニストおよびアンタゴニストを含む。適したアゴニストおよびアンタゴニストはまた、合成またはヒト組換え化合物を含む。アゴニストとして機能することができる分子のクラスは、限定されるわけではないが、小分子、抗体、およびペプチド模倣体を含む。アンタゴニストとして機能することができる分子のクラスは、限定されるわけではないが、小分子、抗体、融合タンパク質、アンチセンス、ポリヌクレオチド、リボザイム、低分子干渉RNA、およびペプチド模倣体を含む。当業者により認識されているように、例えば、本発明のスクリーニングアッセイにより、TGFβスーパーファミリーメンバーのモジュレーターであると同定される任意の化合物または作用物質は、本発明の方法の実施における使用に適している。特に、高特異性を示す小分子モジュレーターはこれらの方法において価値がありうる。BMPのアゴニストおよびアンタゴニストBMPの様々なアンタゴニストは当技術分野において公知である。特に、BMPの効果は、BMPを結合し、それによりそれらの特異的な細胞表面受容体への結合を排除することによりBMPシグナル伝達を妨げる1群の分泌ポリペプチドにより調節されうる。本発明の実施における使用に適したBMPアンタゴニストは、限定されるわけではないが、ノギン、コーディン、ベントロプチン、フォリスタチン、およびフォリスタチン関連遺伝子を含む。他の適したBMPアンタゴニストは、集合的にDANファミリーと名付けられている、セルベルス、グレムリン、カロンテ、DAN、Dante、およびスクレロスチン、ならびに他の構造的に関連したタンパク質を含む。DANファミリーのタンパク質は、TGFβ様因子を含む他の増殖因子にも見出されている、保存されたシステインノットモチーフを有する。しかしながら、他のBMPアンタゴニストは、お互いとの配列類似性を欠く。インビボで、これらのBMPアンタゴニストは、別個の発現プロファイル、様々なBMPアイソフォームに対する異なる親和性を有し、異なる生物学的応答を制御する。本発明はまた、他のBMPアンタゴニストを提供する。実施例2に報告されているように、ヘモジュベリンは、タンパク質の反発性誘導分子ファミリーのメンバーである。HJV変異を有する個体は、ヘプシジンのレベルの低下を示すことが知られている。本出願人らは、HJVがBMPを増強するが、TGFβシグナル伝達を増強しないことを示している。彼らが得た結果は、HJVがBMP2へ直接的に結合すること、およびHJVのBMPシグナル伝達への増強効果がノギンの投与により低下することを実証しており、HJVの作用がリガンド依存性であることを示している。従って、可溶性HJVFc融合タンパク質のファミリーは、本発明の実施における使用に適したBMPアンタゴニストとして本明細書に提供される。本出願人らは近年、発達中の神経系において初期に発現する、RGMファミリーの436アミノ酸のグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー型メンバーであるDRAGONは、BMPを増強するが、TGFβシグナル伝達を増強せず、BMP補助受容体として作用することを報告した。従って、本発明は、本発明の方法における使用に適したBMPアンタゴニストとして可溶性DRAGONFc融合タンパク質のファミリーを提供する。本発明の実施で用いられうるDRAGONFc融合タンパク質の例は、本出願人らにより記載されている。可溶性DRAGONFc融合タンパク質は、BMP2およびBMP4へ選択的に結合するが、BMP7またはリガンドのTGFβスーパーファミリーの他のメンバーに結合しないことが見出されている。本発明の実施における使用に適したBMPアンタゴニストとしてRGMaFc融合タンパク質のファミリーもまた本明細書に提供される。DRAGONと同様に、RGMaは遺伝子の反発性誘導分子ファミリーのメンバーである。RGMaおよびDRAGONは中枢神経系において相補的様式で発現しており、RGMaは反発的軸索誘導および神経管閉鎖を媒介し、一方、DRAGONは同種親和性相互作用を通して神経細胞接着に寄与する。本出願人らは、RGMaが細胞培養においてリガンド依存性様式でBMPシグナルを増強するが、TGFβシグナルを増強しないこと、ならびにヒトFcに融合したRGMaの可溶性細胞外ドメインがBMP1型受容体と複合体を形成し、放射標識されたBMP2およびBMP4へ直接的かつ選択的に結合することを示しているaDRAGONhomologueisabonemorphogeneticproteincoreceptorJBiolChem20052802982029827。本発明はまた、変異型HJV、RGMa、およびDRAGON融合タンパク質を提供する。特に、対応する野生型バージョンよりタンパク分解性切断に対して安定している、変異型HJV、RGMa、およびDRAGON融合タンパク質が提供される。HJV、RMGa、およびDRAGONがコンセンサスタンパク分解性切断部位を共有することは、当技術分野において公知である。ヒトHJVについて、切断部位はアスパラギン酸残基172位の後に;ヒトDRAGONについて、アスパラギン酸残基168位の後に;およびヒトRGMaについて、アスパラギン酸残基168位の後に、位置している。本発明の変異型HJV、RGMa、およびDRAGON融合タンパク質は、融合タンパク質へ安定性、特にタンパク分解性切断に対する安定性を与える、1つの変異、または複数の変異を含む。例えば、切断部位に近接して位置するアスパラギン酸残基は、異なる残基に置換されうる、または除去されうる。代わりとして、または追加として、切断部位の近くの残基が、異なる残基に置換されうる、または除去されうる。変種を提供するために単離されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の特定の部分において特異的変異を可能にする方法は、当技術分野において公知である。本出願人らは、タンパク分解性に切断されない変異型HJV、RGMa、およびDRAGONタンパク質を産生する可能性を、実施例4に報告されているように、実証している。TGFβのアゴニストおよびアンタゴニストTGFβシグナル伝達を増強または抑制する複数の天然のモジュレーターが同定されている。TGFβリガンドの受容体へのアクセスは、リガンドを結合して隔離する可溶性タンパク質LAP、デコリン、およびα2マクログロブリンにより阻害される。TGFβリガンドの受容体へのアクセスはまた、膜結合型受容体により調節される。BAMBIはI型受容体と競合するデコイ受容体として働く;βグリカンはTGFβのII型受容体への結合を増強する;およびエンドグリンは内皮細胞においてTGFβのALK1への結合を増強する。クリプト、EGFCFCGPIアンカー型膜タンパク質はTGFβリガンド、ノーダル、Vg1、およびGDF1のアクチビン受容体への結合を増加させる補助受容体として働くが、同時にアクチビンシグナル伝達を遮断する。従って、本発明の実施における使用に適したTGFβシグナル伝達のアゴニストおよびアンタゴニストは、天然のTGFβアンタゴニスト;天然のTGFβアゴニストの可溶型;および天然のTGFβアンタゴニストのインヒビターを含む。他の適したTGFβアンタゴニストは、治療目的としてTGFβの望ましくない効果を抑制するために開発されているアンタゴニストを含む。例えば、解離定数がナノモル範囲であると報告されている抗TGFβ抗体が記載されている。これらの抗TGFβ抗体は、多様な病理学的状態を有する動物へ投与することに成功している。他のTGFβインヒビターはインビトロ研究に基づいて開発されており、切り詰められたTGFβII型受容体のアデノウイルス媒介型移入が多様なTGFβシグナル伝達を完全にかつ特異的に消失させることを示した。これらの切り詰められた受容体のいくつかは、ドミナントネガティブ変異体として働くことによりそれらのリガンドに対する強力なアンタゴニスト活性を有する。TGFβII型受容体およびIII型受容体の可溶型はまた、融合タンパク質として産生されており、動物モデルにおいてTGFβ関連病態生理学的状態を予防または処置するために用いることに成功している。II鉄代謝のレギュレーターの同定もう一つの局面において、本発明は、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節することにより鉄代謝を制御する化合物の同定のための方法を提供する。本発明はまた、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節することによりヘプシジン発現または活性を制御する化合物の同定のための方法を提供する。好ましくは、これらの方法は、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーを発現する生体系を候補化合物と、候補化合物がTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節するのに十分な条件下および時間、インキュベートし、それにより試験系を得る段階;候補化合物無しで同じ条件下で同じ時間、生体系をインキュベートし、それにより対照系を得る段階;試験系においてTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を代表する少なくとも1つの因子を測定する段階;対照系において因子を測定する段階;試験系および対照系において測定された因子を比較する段階;ならびに、試験系で測定された因子が対照系で測定された因子より少ないまたは多い場合には、候補化合物がヘプシジン発現を制御すると決定する段階を含む。本明細書に提供されたスクリーニング方法は、1つまたは複数のTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節することによりそれらの効果を発揮する鉄代謝のレギュレーターおよびヘプシジン発現または活性のレギュレーターの発見ならびに開発へと導く。これらのレギュレーターは、鉄代謝における撹乱と関連した状態の処置において有用である可能性がある。A生体系本発明のアッセイおよびスクリーニング方法は、任意の型の生体系、すなわち、細胞、生体液、生体組織、または動物を用いて行われうる。特定の態様において、系は、鉄欠乏もしくは鉄過剰を示すことができる生物学的実体;およびまたは少なくとも1つのTGFβファミリーメンバーを発現する生物学的実体;およびまたはヘプシジンを発現する、もしくはヘプシジンを含む生物学的実体である。特定の態様において、本発明のアッセイおよびスクリーニング方法は、標準組織培養プラスチック製器において増殖されうる細胞を用いて行われる。そのような細胞は、任意の認められている源由来のすべての正常および形質転換された細胞を含む。好ましくは、細胞は哺乳動物起源である。より好ましくは、細胞はヒト起源である。哺乳動物細胞は、任意の器官または組織起源で、かつ任意の細胞型でありうる。適した細胞型は、限定されるわけではないが、上皮細胞、血小板、リンパ球、単球、筋細胞、マクロファージ、肝細胞、心筋細胞、内皮細胞、腫瘍細胞などを含む。本発明のアッセイおよびスクリーニング方法の実施において用いられうる細胞は、一次細胞、二次細胞、または不死化細胞でありうる。それらは、当技術分野において周知の技術により調製されうる、または免疫学的および微生物学的な商業用供給源から購入されうる。代わりとして、または追加として、細胞は、例えば、増殖因子または受容体を発現する遺伝子のような対象となる遺伝子を含むように遺伝子操作されうる。本発明に従ってアッセイを行うための特定の細胞型およびまたは細胞系の選択は、シグナル伝達活性が調節されることになっているTGFβスーパーファミリーメンバーの性質およびアッセイの意図される目的のようないくつかの因子により支配される。例えば、一次薬物スクリーニングのために開発されたアッセイは、好ましくは、市販されており、かつ通常、増殖させるのが比較的容易である樹立細胞系を用いて行われうるが、薬物開発過程において後で用いられうるアッセイは、好ましくは、しばしば、獲得する、維持する、およびまたは増殖させるのが不死化細胞より困難であるが、インビボ状況としてより良い実験モデルを表す一次または二次細胞を用いて行われうる。本発明のアッセイおよびスクリーニング方法の実施において用いられうる樹立細胞系の例は、HepG2肝臓ヘパトーマ細胞、Hep3B肝臓ヘパトーマ細胞、一次肝細胞、および不死化肝細胞を含む。本発明のスクリーニング方法に用いられうる一次および二次細胞は、限定されるわけではないが、上皮細胞、血小板、リンパ球、単球、筋細胞、マクロファージ、肝細胞、心筋細胞、内皮細胞、および腫瘍細胞を含む。本発明のアッセイに用いられうる細胞は、標準細胞培養技術により培養されてもよい。例えば、細胞を、しばしば、加湿された95空気5CO2雰囲気を含むインキュベーターにおいて37°C、無菌環境下、適した容器で増殖させる。容器は撹拌培養または静置培養を含みうる。ウシ胎児血清のような未定義の生体液を含む培地を含む、様々な細胞培地が用いられうる。細胞培養技術は当技術分野において周知であり、多様な細胞型の培養について確立されたプロトコールが利用できる。特定の態様において、スクリーニング方法は、マルチウェルアッセイプレートの複数のウェルに含まれる細胞を用いて行われる。そのようなアッセイプレートは、例えば、StratageneCorpおよびCorningIncから、市販されており、例えば、48ウェル、96ウェル、384ウェル、および1536ウェルプレートを含む。B候補化合物当業者により認識されているように、どんな種類の化合物または作用物質でも本発明の方法を用いて試験されうる。候補化合物は合成または天然の化合物でありうる;それは単一分子、または異なる分子の混合物もしくは複合体でありうる。特定の態様において、本発明の方法は、1つまたは複数の化合物を試験するために用いられる。他の態様において、本発明の方法は、化合物の収集物またはライブラリーをスクリーニングするために用いられる。本明細書に用いられる場合、収集物という用語は、化合物、分子、または作用物質の任意のセットを指し、一方、ライブラリーという用語は、構造的類似体である化合物、分子、または作用物質の任意のセットを指す。新規かつ有用な薬物候補の同定および特徴付けへの伝統的なアプローチは、一般的に、化合物の大きな収集物およびまたはライブラリーの作製、続いて、既知または未知の標的に対して試験することを含む。天然産物および化学化合物の両方が本発明の方法により試験されうる。天然産物収集物は、一般的に、微生物、動物、植物、または海洋生物に由来する;それらは、ポリケチド、非リボソームペプチド、およびまたはそれらの変種を含む。化学ライブラリーは、しばしば、天然産物スクリーニングによりヒットまたはリードとして同定される既知の化合物の構造的類似体からなる。化学ライブラリーは、伝統的な自動化合成、PCR、クローニング、または所有権をもった合成方法により調製するのが比較的容易である。細菌、真菌、植物、および動物の抽出物の形をとる天然化合物の収集物は、例えば、PanLaboratoriesまたはMycoSearchから入手できる。本発明の方法を用いてスクリーニングされうる候補化合物のライブラリーは、調製されうるか、またはいくつかの会社から購入されうる。合成化合物ライブラリーは、例えば、Comgenex、BrandonAssociates、Microsource、およびAldrichから、市販されている。候補化合物のライブラリーはまた、例えば、Merck、GlaxoWelcome、BristolMeyersSquibb、Novartis、MonsantoSearle、およびPharmaciaUpJohnを含む大きな化学会社により開発され、市販されている。加えて、天然収集物、合成によって作製されたライブラリーおよび化合物は、通常の化学的、物理的、および生化学的手段を通して容易に修飾される。鉄代謝の、およびヘプシジン発現の有用なレギュレーターは、複素環、ペプチド、糖類、ステロイドなどを含む多数の化学物質群内に見出されうる。特定の態様において、本発明のスクリーニング方法は、小分子である化合物または作用物質を同定するために用いられる。本発明の方法によるライブラリーのスクリーニングは、ヒットまたはリード、すなわち、所望の生物活性であるが、最適化されていない生物活性を有する化合物を提供する。有用な薬物候補の開発における次の段階は、通常、ヒット化合物の化学構造とその生物学的または薬理学的活性の間の関係の分析である。分子構造および生物活性は、定義された生物学的評価項目に関する体系的構造改変の結果を観察することにより相互に関連づけられる。スクリーニングの最初のラウンドから入手できる構造活性の関係情報はその後、より高い親和性を有する化合物についてその次にスクリーニングされる小さな二次ライブラリーを作製するために用いられうる。臨床有用性に必要とされる、立体電子的、物理化学的、薬物動態学的、および毒物学的因子を満たすために生物活性化合物の合成的改変を行う過程は、リード最適化と呼ばれる。本発明のスクリーニング方法により同定された候補化合物は、同様に、構造活性の関係分析に供せられ、改善された薬物候補を提供するために化学修飾されうる。本発明はまた、これらの改善された薬物候補を含む。C鉄代謝のレギュレーターおよびヘプシジン発現のレギュレーターの同定本発明のスクリーニング方法に従って、鉄代謝を制御する、またはヘプシジン発現を制御する候補化合物の能力の決定は、試験系および対照系において測定されたTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を代表する少なくとも1つの因子の比較を含む。本発明のスクリーニング方法において、候補化合物は、試験系において測定された因子が対照系において測定された因子より少ないまたは多い場合には、ヘプシジン発現もしくは活性のレギュレーター、およびまたは鉄代謝のレギュレーターであると同定される。より具体的には、候補化合物がTGFβのアゴニスト、またはBMPのアンタゴニストであることが見出された場合には、それは、ヘプシジン発現もしくは活性のインヒビター、およびまたは鉄代謝のエンハンサーであると同定される。または、候補化合物がTGFβのアンタゴニスト、またはBMPのアゴニストであることが見出された場合には、それは、ヘプシジン発現もしくは活性のエンハンサー、およびまたは鉄代謝のインヒビターであると同定される。TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を代表する因子は、レポーターアッセイシグナル伝達、および標的遺伝子発現を含む。TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を代表する他の因子は、Smadリン酸化、リン酸化されたSmadタンパク質の核への移行、および細胞増殖速度における変化を含む。特定の態様において、本発明のスクリーニング方法において測定される因子は、系に存在する鉄の量である。他の態様において、測定される因子は、系におけるヘプシジンmRNAのレベルである。さらに他の態様において、測定される因子は系におけるヘプシジンアクチン比である。本発明のスクリーニング方法において得られた結果の再現性は、同じ候補化合物の同じ濃度で1回より多く分析を行うことにより試験されうる。追加として、候補化合物は、化合物の性質およびその作用機構の性質に依存して様々な濃度で有効でありうるため、候補化合物の様々な濃度が試験されうる。一般的に、1fMから約10mMまでの候補化合物濃度がスクリーニングに用いられる。好ましいスクリーニング濃度は一般的に、約10pMと約100μMの間である。特定の態様において、本発明の方法はさらに、1つもしくは複数の陰性およびまたは陽性対照化合物の使用を含む。陽性対照化合物は、スクリーニングアッセイにおいて研究されるTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節することが知られている任意の分子または作用物質でありうる。陰性対照化合物は、スクリーニングアッセイにおいて研究されるTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性に効果を生じないことが知られている任意の分子または作用物質でありうる。これらの態様において、本発明の方法はさらに、候補化合物の調節効果を陽性または陰性対照化合物の調節効果と比較する段階を含む。例えば、ノギンおよびデコリンは、それぞれ、BMPシグナル伝達およびTGFβシグナル伝達の阻害について陽性対照として用いられうる。D候補化合物の特徴付け当業者に認識されているように、本発明のスクリーニング方法により同定されたレギュレーターをさらに特徴付けることが一般的に望ましい。例えば、候補化合物が所定の細胞培養系において所定のTGFβスーパーファミリーメンバーにおけるシグナル伝達活性のモジュレーターであると同定されている場合には、異なる細胞培養系においてこの能力を試験することが望ましい場合がある。代わりとして、または追加として、例えば、リアルタイムの定量的RTPCRを用いてヘプシジンmRNA発現を定量化することにより、候補化合物のヘプシジン発現への効果を直接的に評価することが望ましい場合がある。候補化合物の特異性を、TGFβスーパーファミリーメンバーの他のメンバーのシグナル伝達活性を調節するその能力を試験することにより、評価することが望ましい場合もある。薬物動態学および毒物学研究を行うことが望ましい場合もある。本発明のスクリーニング方法により同定された候補化合物はまた、さらに、インビボでの化合物の性質の決定を可能にするアッセイにおいて試験されうる。適した動物モデルは、鉄欠乏もしくは鉄過剰を示すことができる、またはヘプシジン発現の上方制御もしくはヘプシジン発現の下方制御を示すことが決定されている動物モデルを含む。鉄過剰についての動物モデルの例は、限定されるわけではないが、カルボニル鉄で処理されたマウス、β2ミクログロブリンノックアウトマウス、USF2ノックアウトマウス、およびHFEノックアウトマウスを含む。鉄欠乏についての動物モデルの例は、限定されるわけではないが、フェニルヒドラジンにより誘発される急性溶血を有するマウス、および繰り返される瀉血により誘発される出血を有するマウスにおける貧血のモデルを含む。ヘプシジンmRNA発現の増加を示す動物モデルの例は、部分的肝切除により、リポ多糖、およびテレペンチンにより処理されたマウスを含む。E同定されたレギュレーターの薬学的組成物本発明はまた、活性成分として、本発明のスクリーニングアッセイにより同定された、鉄代謝の少なくとも1つのレギュレーター、またはヘプシジン発現もしくは活性の少なくとも1つのレギュレーターの有効量を含む薬学的組成物を提供する。本発明の薬学的組成物は、当技術分野において周知の通常の方法を用いて製剤化されうる。そのような組成物は、活性成分に加えて、薬学的媒体、賦形剤、もしくは媒質として働き、本明細書で薬学的に許容される担体と呼ばれる、少なくとも1つの薬学的に許容される液体、半流動体、または固体希釈剤を含む。本発明により、薬学的組成物は、活性成分として本発明の1つまたは複数のレギュレーターを含みうる。または、1つの本発明のレギュレーターの有効量を含む薬学的組成物は、異なる本発明のレギュレーターを含む薬学的組成物と組み合わせて、または逐次的に患者へ投与されうる。しかしながら、両方の場合において、レギュレーターは、好ましくは、鉄代謝およびまたはヘプシジン発現もしくは活性への同じ制御効果を有する。例えば、どちらもヘプシジン発現を増強し、鉄代謝を抑制する、BMPのアゴニストおよびTGFβのアンタゴニストが、単一の薬学的組成物で、または2つの異なる薬学的組成物で、被験体に投与されうる。当業者により認識されているように、ヘプシジン発現のレギュレーターもしくは鉄代謝レギュレーター、またはそれらの薬学的組成物は、鉄代謝障害の処置に用いられる通常の治療用物質と連続的に、または組み合わせて、投与されうる。そのような治療用物質は、鉄サプリメントおよび鉄キレート剤を含む。鉄サプリメントは、限定されるわけではないが、フマル酸第一鉄、グルコン酸第一鉄、硫酸第一鉄、鉄デキストラン、鉄多糖、鉄ソルビトール、グルコン酸第二鉄ナトリウム、および鉄スクロースを含む。鉄キレート剤は、例えば、デスフェリオキサミン、バソフェナントロリン、およびクリオキノールを含む。鉄サプリメントまたは鉄キレート剤は、本発明の薬学的組成物に含まれてもよい。または、それらは、別々の薬学的組成物で投与されてもよい。代わりとして、または追加として、ヘプシジン発現のレギュレーターもしくは鉄代謝レギュレーター、またはそれらの薬学的組成物は、鉄代謝障害の処置のための通常の治療計画と連続的に、または組み合わせて、施されうる。これらは、鉄過剰と関連した状態の場合、例えば、瀉血を含む。III処置の方法もう一つの局面において、本発明は、鉄過剰と関連した状態および鉄欠乏と関連した状態を含む、鉄代謝における撹乱に関連した状態の処置およびまたは予防のための方法を提供する。これらの方法は、そのような状態を有する、または有する危険性がある被験体に、少なくとも1つのTGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性を調節する化合物の有効量を投与する段階であって、TGFβスーパーファミリーメンバーのシグナル伝達活性の調節が結果として、被験体においてヘプシジン発現または活性の制御を生じる段階を含む。化合物は、TGFβスーパーファミリーメンバーの既知のアゴニストまたはアンタゴニストでありうる。または、化合物は、例えば、本発明の方法により提供されたスクリーニング方法により、同定された鉄代謝のレギュレーターまたはヘプシジン発現のレギュレーターでありうる。A鉄代謝疾患本発明の方法を用いて処置およびまたは予防されうる状態は、鉄代謝における撹乱と関連した任意の疾患、障害、または症候群を含む。鉄代謝における撹乱は、鉄取り込み、鉄吸収、鉄運搬、鉄貯蔵、鉄プロセッシング、鉄動員、鉄利用の1つまたは複数における撹乱と関連しうる。一般的に、鉄代謝における撹乱は、結果として、鉄過剰または鉄欠乏を生じる。鉄過剰と関連した状態は、限定されるわけではないが、遺伝性ヘモクロマトーシス、晩発性皮膚ポルフィリン症、遺伝性球状赤血球症、低色素性貧血、赤血球異形成貧血、顔面性器形成不全、アールスコグ症候群、無トランスフェリン血症、鉄芽球性貧血、ピリドキシン応答性鉄芽球性貧血、およびサラセミアおよび鎌状細胞のような異常血色素症を含む。いくつかの研究は、サラセミアおよびヘモクロマトーシスのような鉄代謝障害と、II型糖尿病およびアテローム性動脈硬化症のようないくつかの疾患状態の間の関連を示唆している。鉄欠乏に関連した疾患は、限定されるわけではないが、慢性疾患の貧血、鉄欠乏性貧血、機能性鉄欠乏、および小球性貧血を含む。慢性疾患の貧血という用語は、例えば、長引く感染症、炎症、腫瘍性疾患などの結果として発症する任意の貧血を指す。発症する貧血は、しばしば、短縮された赤血球寿命、および結果として新しい赤血球を生成するのに利用可能な鉄の量の減少を生じる、マクロファージにおける鉄の隔離により特徴付けられる。慢性疾患の貧血に関連した状態は、限定されるわけではないが、慢性細菌性心内膜炎、骨髄炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、および腫瘍性疾患を含む。さらなる状態は、例えば、炎症性感染症、炎症性非感染性疾患、ならびに様々な癌、腫瘍、および悪性腫瘍を含む、感染症、炎症、および新生物と関連した他の疾患ならびに障害を含む。鉄欠乏性貧血は、妊娠、月経、幼年期および小児期、負傷による血液喪失などのような状態に起因しうる。鉄代謝は、循環器疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、および結腸直腸癌の特定の型を含むいくつかの他の病状において役割を果たすことも示唆されている。B被験体選択本発明の方法による処置を受けるのに適した被験体は、限定されるわけではないが、上で列挙された疾患および障害を含む、鉄代謝における撹乱と関連した状態と診断されている個体、ならびに鉄代謝における撹乱と関連した状態になりやすい個体を含む。適した被験体は、以前にその状態についての伝統的な処置を受けたことがあってもなかってもよい。他の適した被験体は、鉄欠乏または鉄過剰を示す個体である。鉄過剰および鉄欠乏は、総鉄結合能、血清鉄、フェリチン、ヘモグロビン、ヘマトクリット、および尿中クレアチニンのレベルの測定を可能にする当技術分野において利用可能ないくつかの実験室試験を用いて検出されうる。C投与本発明の方法による処置は、単回投与またはある期間に渡っての複数回投与からなりうる。ヘプシジン発現のレギュレーターもしくは鉄代謝のモジュレーター、またはそれらの薬学的組成物はまた、処置あたりデポー型から放出されうる。投与は、注射、経口投与、または舌下投与によるような任意の都合の良い様式で行われうる。有効量および投与計画は、優れた医療行為および個々の患者の臨床症状により容易に決定されうる。投与の頻度は、化合物の薬物動態学的パラメーターおよび投与経路に依存する。最適な薬学的製剤は、投与経路および望ましい用量に依存して決定されうる。そのような製剤は、投与される化合物の、物理的状態、安定性、インビボの放出の速度、およびインビボのクリアランスの速度に影響を及ぼしうる。投与経路に依存して、適した用量は、体重、体表面積、または器官サイズにより計算されうる。適切な用量の最適化は、ヒト臨床試験において観察された薬物動態学的データに照らして当業者により容易になされる。最終投与計画は、薬物の作用を改変する様々な因子、例えば、薬物の特異的活性、損傷の重症度および患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別、および食事、任意の存在する感染症の重症度、投与時期、ならびに他の臨床学的因子を考慮して、担当医により決定されうる。研究が行われるにつれて、鉄過剰および鉄欠乏に関連した様々な状態に対する適切な用量レベルおよび処置の期間に関するさらなる情報が現れるものと思われる。以下の実施例は、本発明を設定かつ実施する好ましい様式の一部を記載する。しかしながら、これらの実施例は例証のみを目的とし、本発明の範囲を限定することを意図されないことは理解されるべきである。さらになお、実施例における記載は過去時制で示されない限り、文章は、本明細書の他の部分と同様に、実験が実際に行われた、またはデータが実際に得られたことを示唆するものではない。このセクションにおいて提示された結果の一部は、最近の科学原稿に本出願人らにより記載されている。この原稿はその全体が参照により本明細書に組み入れられている。実施例1:肝細胞におけるヘプシジン転写へのBMPおよびTGFβの効果研究プロコトールHepG2肝臓ヘパトーマ細胞におけるヘプシジンmRNA発現へのBMP2、ノギン、およびTGFβ1の効果を、リアルタイム定量的RTPCRを用いて研究および定量化した。HepG2細胞を、6cm組織培養プレート上でαMEMにおいて60集密まで増殖させた。細胞を、その後、低血清状態において1μgmLノギンFcと37°Cで48時間インキュベートした、または6時間血清飢餓にして、続いて、50ngmlBMP2と37°Cで16時間、もしくは1ngmlTGFβ1と37°Cで16時間、インキュベートした。または、細胞を、非トランスフェリン結合型鉄と37°Cで72時間、インキュベートした。FeNTAは、前に記載されているように、20mMHepespH75を追加したαMEM培地において01モルHCl中の11モル比のFeCl3六水和物をニトリロ三酢酸と化合させることにより生成された。全RNAを、製造会社の使用説明書に従って、RNAsefreeDNAseSetでのDNアーゼ消化を含め、RNAeasyMiniKitを用いて上記のように処理されたHepG2細胞から単離した。mRNA転写産物のリアルタイム定量化は、ABIPrism7900HTSequenceDetectionSystemおよびSDSソフトウェアバージョン20を用いる2段階逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応を用いて行われた。まず、鎖cDNA合成を、試料あたり2μgの全RNA鋳型を用い、製造会社の使用説明書に従ってiScriptcDNASynthesisKitを用いて行った。第二段階において、ヘプシジンの転写産物を、センスプライマーHepcFおよびアンチセンスプライマーHepcRを用いて増幅し、iTAqSYBRGreenSupermixwithROXを用いて検出した。並行して、βアクチンの転写産物を、センスプライマーBactFおよびアンチセンスプライマーBactRを用いて増幅し、内部対照としての役割を果たすように同様の様式で検出した。ヘプシジンおよびβアクチンについての標準曲線は、鋳型としてヘプシジンおよびβアクチンのcDNAクローンの正確に測定された希釈溶液から作成された。試料は3連で分析され、結果は、ヘプシジンのβアクチンに対する平均値の比として報告されている。結果図1に示されているように、HepG2細胞のFeNTAとのインキュベーションは、ヘプシジンアクチン比発現を約6分の1に減少させたが、以前に報告された、HepG2細胞においてFeNTAにより引き起こされたヘプシジン発現における減少と良く相関する結果である。重要なことには、50ngmLBMP2とのインキュベーションは、ヘプシジンアクチン比発現をベースラインより上に10倍、増加させた。対照的に、1μgmLノギンFcとのインキュベーションは、ヘプシジンアクチン比発現をベースラインより下に50分の1に減少させた。図2に示されているように、HepG2細胞の50ngmLBMP2とのインキュベーションは、ヘプシジンアクチン比発現をベースラインより上に15倍、増加させた。対照的に、1μgmLノギンFcとのインキュベーションは、ヘプシジンアクチン比発現をベースラインより下に6分の1に減少させた。加えて、1ngmlTGFβ1とのインキュベーションは、ヘプシジンアクチン比発現をベースラインより下に6分の1に減少させた。実施例2:ヘプシジン発現のモジュレーターとしてのHJVFcタンパク質若年性ヘモクロマトーシスは、識別不可能な表現型を与える2つの遺伝子における変異により引き起こされるヘモクロマトーシスの重症の変種である。1つの遺伝子はヘプシジンをコードする。2つ目の遺伝子は、最近、ヘモジュベリンであると同定されている。HJVの機能は未知であるが、ヘプシジンレベルが、HJV変異を有する人において抑制されており、HJVがヘプシジン発現のモジュレーターである可能性があることを示している。すでの本明細書に述べられているように、HJVもまた、RGMaおよびDRAGON、BMP補助受容体として機能することが本出願人らにより最近示されたニューロン接着分子を含む、タンパク質の反発性誘導分子ファミリーのメンバーである。下に示された研究は、HJVが同様にBMPシグナル伝達を媒介することができるかどうかを調べるために企てられた。材料および方法cDNAサブクローニングアミノ酸313位におけるグリシンからバリンへの置換を有する変異型マウスHJVをコードするcDNAを、重複PCRストラテジーにより作製した。2つのプライマーおよびを用いて、アミノ酸313位においてグリシンの代わりにバリンへの置換を組み込むmHJVのN末端断片を作製した。プライマーおよびを用いて、同一の置換を有するHJVのC末端断片を作製した。外側プライマーを用いてPCRの最終ラウンドを行い、変異型mHJVG313Vを作製し、その後、発現ベクターpCDNA31へサブクローニングした。可溶性mHJVFc融合タンパク質をコードするcDNAを、プライマー:およびを用いる野生型マウスHJVの細胞外ドメインのPCRにより作製し、続いて、ヒトIgGのFc部分とインフレームで哺乳動物発現ベクターpIgplusへサブクローニングした。フラグ標識付きヒトHJVをコードするcDNAを、ATCCから購入された、エクソン2を含まないヒトHJV転写産物変種Bから作製した。完全長HJVアイソフォームのシグナルペプチドをコードするエクソン2を、フォワードプライマー:およびリバースプライマー:を用いてヒトゲノムDNAからのPCRにより増幅した。コード配列の残部に対応する下流cDNA断片を、フォワードプライマーおよびリバースプライマーとしてを用いるIMAGEクローンからのPCRにより増幅した。2つの重複断片を、PCRによりいっしょに融合させ、完全長cDNA産物を、その後、EcoRIおよびXhoIで切断し、pCDNA31へクローニングし、pCDNA31hHJVを作製した。N末端フラグ標識付きhHJVを作製するために、エクソン3の最初に対応する上流断片を、フォワードプライマー:およびリバースプライマー:を用いるPCRにより作製した。NotISacII消化後、断片を、pCDNA31hHJVから切り出した下流SacIIXbaIhHJV断片と共に、p3XFLAGCMV9のNotIXbaI部位へライゲーションした。アミノ酸99位におけるバリンからグリシンへの置換を有する変異型フラグ標識付きhHJVG99VをコードするcDNAを、QuikChangeキットを用いる部位特異的変異誘発によりhHJVから作製した。ヘプシジンプロモータールシフェラーゼ構築物をコードするcDNAを、pGL2Bsicベクターにおいてホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流にヒトヘプシジンプロモーター46の2649位~45位領域をサブクローニングすることにより作製した。すべてのcDNAは、構築物の忠実度を検証するためにシーケンシングされた。細胞培養およびトランスフェクションCHO細胞を、10ウシ胎児血清を追加したF12KNutrientMixtureKaighnsModificationにおいて培養した。HepG2細胞およびHep3B細胞を、10FBSを含むLグルタミンを有するMinimalEssentialAlphaMediumにおいて培養した。HEK293細胞を、10FBSを追加したダルベッコ改変イーグル培地において培養した。すべてのプラスミドトランスフェクションは、Lipofectamine2000またはEffecteneトランスフェクション試薬で製造会社の使用説明書に従って行われた。安定的にトランスフェクションされた細胞を選択し、1mgmlGeneticinにおいて培養した。ルシフェラーゼアッセイHepG2またはHep3B細胞に、25μgBMP応答性ルシフェラーゼレポーター、25μgTGFβ応答性ルシフェラーゼレポーター、12MPLLuc、または25μgヘプシジンプロモータールシフェラーゼレポーター構築物を、トランスフェクション効率について管理するために025μgpRLTKウミシイタケルシフェラーゼベクターと組み合わせて、野生型もしくは変異型HJVcDNAでの同時トランスフェクションの有りまたは無しで、一過性にトランスフェクションした。トランスフェクションから48時間後、細胞を、1FBSを追加したαMEMにおいて6時間、血清飢餓にさせ、1μgmlノギンもしくは20μgml中和抗BMP24抗体の非存在または存在下で、様々な量のTGFβ1またはBMPリガンドで16時間、処理した。細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性を、DualReporterAssayを用いて製造会社の使用説明書に従って測定した。実験は2連または3連のウェルにおいて行われた。相対ルシフェラーゼ活性は、ホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼ値の比として計算され、レポーター単独をトランスフェクションされた非刺激細胞に対する倍増加として表されている。mHJVFcの精製mHJVFcを安定的に発現するCHO細胞を、5超低IgGFBSを追加したF12KNutrientMixtureKaighnsModificationにおいて175cm2マルチフロアフラスコを用いて培養した。mHJVFcを、前に記載されているように、HiTraprProteinAFFカラムを用いる1段階プロテインAアフィニティークロマトグラフィーによって安定的にトランスフェクションされた細胞の培地から精製した。精製されたタンパク質を、前に記載されているように、100mMグリシンHCl、pH32で溶出し、03MTrisHCl、pH9で中和した。mHJVFcを、還元ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、ゲルを、BiosafeCoomassieblueで染色して、純度を測定し、かつタンパク質濃度を定量化した。HJV抗体の作製およびイムノブロット分析親和性精製されたウサギポリクローナル抗マウスHJV抗体は、ペプチド、マウスHJVのC末端におけるその疎水性尾部の上流のアミノ酸292位~310位に対して産生された。129S6SvEvTac野生型もしくはHjvマウス由来の肝臓、または野生型もしくは変異型HJVをトランスフェクションされた細胞を、前に記載されているように、プロテアーゼインヒビターの混合物を含む溶解緩衝液においてホモジナイズ超音波処理した。リン酸化Smad発現を調べるアッセイについて、1mMオルトバナジウム酸ナトリウムおよび1mMフッ化ナトリウムをホスファターゼインヒビターとして溶解緩衝液へ添加した。精製されたmHJVFc、トランスフェクションされた細胞可溶化物、または肝臓可溶化物を、前に記載されているように、還元ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動、および4°Cで一晩、HJV抗体、室温で1時間、ヤギ抗ヒトFc抗体、または4°Cで一晩、ウサギポリクローナル抗ホスホsmad158抗体を用いるウェスタンブロットに供した。ブロットを取り出し、4°Cで一晩、マウスモノクローナル抗βアクチン抗体、ウサギポリクローナル抗Smad1抗体、または負荷対照として室温で1時間、ウサギポリクローナル抗アクチン抗体で再探索した。HJV抗体は、完全長HJVおよび前に記載されたタンパク分解性切断部位で切断されているHJVの予測サイズに対応する、肝臓における~49kDaおよび~30kDaでの主要なバンドを認識する。~62kDaバンドは高次型を表している可能性が高い。抗体の競合ペプチドとのプレインキュベーション後、バンドは見られなかった。同様の結果はトランスフェクションされたCHO細胞において見られ、サイズにおける差は、異なったグリコシル化またはプロセシングの変化による可能性が高い。HJVの細胞外ドメインをヒトFcと融合することにより作製されたHJVFccDNAを、CHO細胞へ安定的にトランスフェクションし、HJVFcタンパク質を、1段階プロテインAクロマトグラフィーにより培地から精製した。精製されたタンパク質の抗HJV抗体、または抗Fc抗体でのウェスタンブロットは、精製されたタンパク質において両方のドメインの存在を確認し、抗HJV抗体のさらなる確証を提供した。両方の抗体は、完全長およびタンパク分解性に切断されたタンパク質の予測サイズに対応する~7075kDaおよび~60kDaバンドを認識した。~4045kDaにおけるより低いバンドは、もう一つの可能性のあるタンパク分解性切断部位を示唆している。リガンドヨウ素化および架橋反応あたり2μgの担体を含まないヒトBMP2またはBMP4リガンドを、前に記載されているように、改変されたクロラミンT方法により125Iでヨウ素化した。125IBMP2を、01BSAおよびプロテアーゼインヒビターの混合物を含む、または緩衝液のみを含む20mMHEPESにおいて60ngmHJVFcまたはALK5Fcとインキュベートした。ビーズを、リン酸緩衝食塩水で洗浄し、タンパク質を非還元Laemmli試料緩衝液により溶出した。溶出されたタンパク質をSDSPAGEにより分離し、オートラジオグラフィーにより分析した。定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応HepG2またはHep3B細胞を、6cm組織培養プレート上で60集密まで増殖させた。示された所で、細胞に、hHJVまたはhG99VcDNAの様々な量をトランスフェクションした。トランスフェクションから24時間後、細胞を、1FBSを含むαMEMにおいて血清飢餓にし、続いて、37°Cで様々な時間、50ngmLBMP2と、または37°Cで48時間、1μgmLノギンとインキュベートした。シクロヘキシミド実験について、BMP2の添加前の30分間、10μgmlシクロヘキシミドを加えた。全RNAを、RNaseFreeDNaseSetでのDNアーゼ消化を含め、RNeasyMiniKitを用いて、製造会社の使用説明書に従って単離した。mRNAの転写産物のリアルタイム定量化は、ABIPrism7900HTSequenceDetectionSystemおよびSDSソフトウェアバージョン20を用いる2段階逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応を用いて行われた。まず、鎖cDNA合成を、試料あたり2μgの全RNA鋳型を用い、製造会社の使用説明書に従ってiScriptcDNASynthesisKitを用いて行った。第二段階において、ヘプシジンの転写産物を、センスプライマーおよびアンチセンスプライマーを用いて増幅し、iTAqSYBRGreenSupermixwithROXを用いて製造会社の使用説明書に従って検出した。並行して、βアクチンの転写産物を、センスプライマーおよびアンチセンスプライマーを用いて増幅し、内部対照としての役割を果たすように同様の様式で検出した。ヘプシジンおよびβアクチンについての標準曲線は、鋳型としてヘプシジンおよびβアクチンのcDNA配列を含むプラスミドの正確に測定された希釈溶液から作成された。試料は3連で分析され、結果は、ヘプシジンのβアクチンに対する平均値の比として報告されている。BMP2およびBMP4についての転写産物を、上で作製されたHepG2cDNAからフォワードプライマー:およびリバースプライマー:ならびにフォワードプライマー:およびリバースプライマー:を用いて増幅した。一次肝細胞単離および培養一次肝細胞を、前に記載された方法を用いて、8~10週齢の129S6SvEvTac野生型またはHjvマウス由来の肝臓のコラゲナーゼ消化により単離した。簡単には、マウスを、05mMEDTAおよび167mM重炭酸ナトリウムを追加したカルシウムを含まないハンクスの平衡塩類溶液で下大静脈を通して~15mL分の速度で4分間、灌流した。マウスをその後、005コラゲナーゼ、1ウシ血清アルブミン、および167mM重炭酸ナトリウムを含むカルシウム含有HBSSで8分間、灌流した。酵素消化後、肝細胞を培養液100IUmlペニシリン、100μgmlストレプトマイシン、18mMHEPES、1mMピルビン酸ナトリウム、10μgmlインスリン、55μgmlトランスフェリン、および5ngmlセレニウム、2mMLグルタミン、01mM非必須アミノ酸、10FBSを追加した11ダルベッコ改変イーグル培地HamsF12培地GrandIslandNY中へ遊離させ、100μmBDFalconメッシュ細胞濾過器を通過させ、遠心分離し、培養液で穏やかに洗浄し、計数した。細胞を、コラーゲンコーティングプレート上に5×105細胞60mm皿で播種した。2~3時間後、細胞を、PBSで洗浄し、1FBSを含む培地で6時間、血清飢餓にさせ、様々な濃度における組換えヒトBMP2で12時間、刺激した。RNAを、RNeasyキットを用いて製造会社の使用法に従って単離した。ノーザンブロット分析一次肝細胞由来の全RNAを、1ホルムアルデヒドアガロースゲル上で分離させ、HybondN膜上へ転写した。膜を、80°Cで真空下、2時間、ベーキングし、プライマーおよびでソアレスマウスp3NMF195ハツカネズミcDNAIMAGEクローン:317863から増幅したマウスヘプシジン1およびβアクチンに特異的な放射標識プローブとハイブリダイズさせた。発現を、リン光画像化装置を用いて定量化し、負荷対照としてのβアクチンまたは28SRNAに対して標準化した。統計学的解析両側スチューデントt検定が、統計学的有意性を決定するために005のP値で用いられた。結果1:HJVはBMPシグナルを誘導するが、TGFβシグナルを誘導しないHepG2細胞に、BMP応答性ルシフェラーゼレポーターまたはTGFβ応答性ルシフェラーゼレポーターを単独か、またはHJVをコードするcDNAと組み合わせてかのいずれかで、トランスフェクションした。トランスフェクションされた細胞を、その後、05nMBMP2、BMP4、もしくは40pMTGFβ1の有りまたは無しで16時間インキュベートし、続いて、ルシフェラーゼ活性の測定を行った。BMPまたはTGFβでの刺激は、刺激されていない細胞と比較して、それらの応答性レポーターについての相対ルシフェラーゼ活性を増加させた。HJVとの同時トランスフェクションも同様に、外因性BMP刺激の非存在下でさえもBREルシフェラーゼ活性を増加させた。HJV媒介性BMPシグナル伝達は用量依存性であり、HJVの存在は外因性BMPにより生じるシグナル伝達を増強した。対照的に、HJVとの同時トランスフェクションは、ベースラインより上にCAGAルシフェラーゼ活性を増加させなかった。総合すれば、これらの結果は、HJVがBMPシグナル伝達を媒介できるが、TGFβシグナル伝達を媒介できないこと、およびHJVがBMP2についての可能性のあるアクセサリー受容体と一致した様式で行動することを実証している。結果2:HJV媒介性BMPシグナル伝達はノギンにより阻害される外因性BMPリガンドの非存在下でさえもBMPシグナル伝達を媒介するHJVの能力は、HJVがリガンド非依存性様式で作用しているのかどうか、またはそれは内因性BMPリガンドによりシグナル伝達を増強させているのかどうかという問題を提起する。それゆえに、研究は、HJV媒介性シグナル伝達がノギン、BMPリガンドに結合し、BMP受容体に対する結合エピトープをブロックすることにより機能するBMPシグナル伝達の可溶性インヒビターにより阻害されうるかどうかを決定するために行った。HepG2細胞に、BRELucおよびHJVcDNA、または空のベクターを同時トランスフェクションした。トランスフェクションされた細胞を、1μgノギンの存在下または非存在下で05nM外因性BMP2有りまたは無しで16時間、インキュベートし、続いて、ルシフェラーゼ活性の測定を行った。得られた結果は図5に報告されている。ノギンの非存在下において、HJVcDNAでの同時トランスフェクションは、BREルシフェラーゼ活性をベースラインより上に10倍、増加させた。同様に、外因性BMP2とのインキュベーションは、BREルシフェラーゼ活性をベースラインより上に12倍、増加させた。HJVかまたは外因性BMPのいずれかによるこの刺激は、ノギンタンパク質の存在により遮断されることができた。対照的に、ノギンは、TGFβ1誘導性CAGAルシフェラーゼ活性に影響を及ぼさなかった。このデータは、HJVが、おそらく内因的に発現したBMPリガンドを介して、リガンド依存性様式でBMPシグナルを発生することを示唆している。結果3:HJVFcはBMP2を選択的に結合するHJVFcを、過剰非放射性BMP2、BMP4、BMP7、またはTGFβ1の有りまたは無しで125I標識BMP2と一晩、インキュベートし、続いて、プロテインAコーティングプレート上でのインキュベーションおよび放射能の測定を行ったおよび図7。または、HJVFcの125I標識BMP2との化学架橋を、無細胞系においてDSSを用いて行った。図6に示されているように、HJVFcは、用量依存性様式で125IBMP2に結合することができた。HJVFcの125IBMP2への結合は、過剰非放射性BMP2により競合的に阻害されたが、BMP4、BMP7、またはTGFβ1により阻害されなかった。125IBMP2は、DSSの存在下でHJVFcと化学架橋されることができ、レーン4、これは過剰非放射性BMP2により阻害されうる。陰性対照として、DSSの非存在下において、または緩衝液単独もしくはALK5FcがHJVFcの代わりに用いられた場合、バンドは見られなかった。結果4:HJV媒介性BMPシグナル伝達は、ドミナントネガティブI型受容体ALD3およびALK6により、ならびにドミナントネガティブSmad1により、阻害されるHepG2細胞に、BRELucおよびHJVを、単独か、またはドミナントネガティブなBMPI型受容体ALK3もしくはALK6と組み合わせて、または野生型対ドミナントネガティブなRSmad1と組み合わせてかのいずれかで、同時トランスフェクションした。トランスフェクションされた細胞を、その後、05nMBMP2の存在下または非存在下で16時間、インキュベートし、その後、ルシフェラーゼ活性の測定を行った。図8に示されているように、HJVでのトランスフェクションまたは細胞の外因性BMP2とのインキュベーションは、ベースラインより上に~1520倍、BREルシフェラーゼ活性を増加させた。HJVかまたは外因性BMP2のいずれかによるこの刺激は、ドミナントネガティブなALK3またはドミナントネガティブなALK6での同時トランスフェクションにより遮断されることができた。図8に示されているように、WTSmad1単独でのトランスフェクションは、BREルシフェラーゼ活性をベースラインより上に~12倍、増加させた。対照的に、DNSmad1単独でのトランスフェクションは、BREルシフェラーゼ活性をベースラインより下に減少させた。これは、外因的に添加されるリガンドの非存在下でこれらの細胞においてBMP経路を介する基底のシグナル伝達があるというさらなる支持を提供しており、このシグナル伝達は追加のWTSamd1の存在により増強され、かつDNSamd1により阻害されうる。HJVでのトランスフェクションは、BREルシフェラーゼ活性をベースラインより上に~12倍、増加させた。WTSmad1のHJVとの同時トランスフェクションは、WTSmad1かまたはHJVのいずれかの単独により誘導されるシグナル伝達をさらに増強した。DNSmad1のHJVとの同時トランスフェクションは、HJV単独で見られたシグナルにおける増加を遮断した。同様の結果は、WTSmad1およびDNSmad1の外因性BMP2刺激への効果についても見られた。従って、HJV媒介性BMPシグナル伝達は、BMPI型受容体ALK3およびALK6、加えてRSmad1による古典的BMPシグナル伝達経路を介して起こる。結果5:変異型HJVG313VおよびHJVG313VFc融合タンパク質の産生および特徴付け結果として若年性ヘモクロマトーシスを生じるHJVにおける最も多く見られる変異は、アミノ酸320位においてグリシンをバリンに置換する点変異である。変異型HJVG313Vおよび可溶性HJVG313VFccDNAを、上記のように、PCRおよびサブクローニング技術を用いて作製し、CHO細胞へトランスフェクションし、還元SDSPAGE、続いて、抗HJV抗体および、左パネルまたは抗Fc抗体、右パネルでのウェスタンブロットにより分析した。または、非透過処理のトランスフェクションされた細胞を、抗HJV抗体を用いて免疫蛍光顕微鏡により分析した。図9に示されているように、変異型HJVG313VがCHO細胞に発現しているが、野生型HJVとは異なるパターンで移動し、それが、少なくともこの細胞型において、異なってプロセシングされていることを示唆する。変異型HJVG313VFcもまた、野生型HJVFcとは異なってプロセシングされているように思われ、~60kDaバンドの喪失がある参照。図10に示されているように、野生型HJVおよび変異型HJVG313Vの両方が、点状の分布で細胞表面上に発現している。結果6:変異型HJVG313Vは野生型HJVと比較してBMPシグナル伝達能力を減少させるHepG2細胞に、BRELucを単独で、または増加性濃度の野生型HJVもしくは変異型HJVG13VcDNAと組み合わせて、トランスフェクションした。トランスフェクションされた細胞を、05nMBMP2の存在下または非存在下で16時間、インキュベートし、続いて、ルシフェラーゼ活性の測定を行った。図11に示されているように、外因性リガンドの非存在下において、野生型HJVはBREルシフェラーゼ活性をベースラインに対して23倍まで増加させた。この刺激は、05nM外因性BMP2で見られたものと類似していた。対照的に、変異型HJVG313Vは、BREルシフェラーゼ活性を最大9倍までのみ、増加させた。これは、ヒトにおいて結果として若年性ヘモクロマトーシスを生じうる変異型HJVG313Vが、肝細胞においてBMPシグナル伝達能力を減少させていることを示唆し、BMPシグナル伝達が鉄代謝において役割を果たしているかどうかという問題を提起する。結論上で報告されているように、本出願人らは、HJVはBMPシグナル伝達を誘導するが、TGFβシグナル伝達を誘導しないこと;HJVシグナル伝達はノギン、周知のBMPインヒビターにより阻害されること;HJVは放射標識BMP2リガンドへ直接的に結合すること;HJVはBMPI型受容体、ALK3およびALK6を介してシグナル伝達すること;HJVはBMPRSmad、Smad1を介してシグナル伝達すること;若年性ヘモクロマトーシスを引き起こすことが知られているHJV変異体はBMPシグナル伝達能力を減少させること;ならびにBMPは肝細胞においてヘプシジン発現を増加させるが、ノギンは減少させることを示している。これらの結果は、HJVが、BMPシグナル伝達能力が鉄代謝を制御するにおいて重要である、新規のBMP補助受容体である。HJVにおける変異は、肝細胞においてBMPシグナル伝達の減少へと導き、その後、ヘプシジン発現を減少させることができ、それにより、なぜHJV変異体を有する人がヘプシジンレベルを抑制し、それに従って鉄過剰になっているかを説明できる。HJVの新規な作用機構に関する本所見は、これまで発見されていないBMPシグナル伝達と鉄代謝の間の関連を明らかにし、ヘモクロマトーシスおよび慢性疾患の貧血のような鉄代謝の障害の新規な処置ストラテジーへと導くことができた。実施例3:インビボでの鉄結合能へのBMP2の効果研究プロトコール正常なマウスに、18μgのBMP2、または対照として担体溶液を眼窩内に注射した。4時間後、血液を採取し、血清中鉄レベルおよび総鉄結合能を比色アッセイを用いて測定した。図12に示されているように、BMP2の注射は、血清鉄および総鉄結合能の両方における有意な減少へと導いた。この結果は、BMPリガンドおよびBMPインヒビターが、ヒトを含む動物全体において鉄レベルを制御する治療剤として有用であろうことを示している。実施例4:タンパク分解性に安定なHJV、RGMa、およびDragon変異体対応する野生型タンパク質とは対照的に、タンパク分解性切断を受けない変異体HJV、RGMa、およびDragonタンパク質を産生する可能性を実証するために実験を企てた。マウスRGMaD169AFc変異体cDNAを作製し、HEK細胞上清に発現させた。図13は、得られた精製タンパク質が野生型マウスRMGaFcタンパク質と比較してタンパク分解性に切断されないことを示している。同様に、マウスDragonD171AFc変異体cDNAを作製し、HEK細胞上清に発現させた。得られた精製変異体タンパク質は、野生型マウスDragonFcタンパク質と比較してタンパク分解性切断に対して安定であることが示された。第三実験において、ヒトHJVD172A変異体cDNAを作製し、HEK細胞上清に発現させた。図15に示されているように、野生型ヒトHJVタンパク質と対照的に、変異型HJVタンパク質はタンパク分解性切断を受けなかった。野生型バージョンよりタンパク分解性切断に対してより安定である変異型HJV、RGMa、およびDragon融合タンパク質は、本発明の方法において有利に用いられうるように思われる。他の態様本発明の他の態様は、本明細書に開示された本発明の詳述または実施の考慮から当業者にとって明らかであると思われる。詳述および実施例は例示するものとのみ、みなされ、本発明の真の範囲は特許請求の範囲により示されることが意図される。