"配列番号1及び/若しくは配列番号2を有する微生物起源のタンパク質、又はそのバリアントである、活性が増大し毒性が減少した抗がん剤。配列番号1のタンパク質が、ヒト型結核菌、及び/又はウシ型結核菌BCGの分泌タンパク質であり、MPT63と呼ばれる、請求項1に記載の抗がん剤。配列番号2のタンパク質が、寄生虫トキソプラズマ由来の表面タンパク質であり、SAG1と呼ばれる、請求項1に記載の抗がん剤。配列番号1のバリアントが、配列番号3のMB30などのペプチドであり、かつ抗がん活性に影響を与えることなく、前記アミノ酸配列において10~50の変異を有する他の領域由来の他のペプチドである、請求項1に記載の抗がん剤。配列番号2のバリアントが、配列番号4のTG20及び配列番号5のTG23などのペプチドであり、かつ抗がん活性に影響を与えることなく、前記アミノ酸配列において10~50の変異を有する他の領域由来の他のペプチドである、請求項1に記載の抗がん剤。黒色腫、白血病、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、前立腺がん、肝臓がん、腎臓がん又は脳がんからなる群に対して抗がん活性を示す、請求項1に記載の抗がん剤。請求項1又は2に記載の抗がん剤を含む医薬組成物。アジュバント複数可をさらに含む、請求項7に記載の医薬組成物。ペグ化、アセチル化、リン酸化により修飾された、又は合成的に調製された、請求項1又は2に記載の抗がん剤。黒色腫、白血病、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、前立腺がん、肝臓がん、腎臓がん又は脳がんの治療的及び/又は予防的処置のための、アジュバント又は賦形剤の存在下又は非存在下での静脈内iv、筋肉内、経口、皮下又は局所適用に有用である、請求項7又は8に記載の医薬組成物。図面を参照して本明細書に実質的に記載されたような、配列番号1及び/若しくは配列番号2を有する微生物起源のタンパク質又はそのバリアントである、抗がん剤。主な目的は、先行技術の限界を取り除く抗がん剤医薬組成物及びこの適用を提供することである。他の目的は、抗がん剤、特に微生物起源の広域スペクトル抗がん剤、より特定すれば、病原性及び非病原性の両方の細菌、ウイルス並びに/若しくは寄生虫を含むがこれらに限定されない微生物により分泌されるタンパク質、又は該微生物における表面結合タンパク質を提供することである。さらに別の目的は、細菌及び寄生虫から単離された精製タンパク質、詳細には、抗がん剤として有用なウシ型結核菌BCG、及びトキソプラズマから単離されたタンパク質を提供することである。さらに他の目的は、抗がん剤として有用な、このようなタンパク質に由来するペプチド、合成的に調製されたペプチド、及びペグ化、アセチル化、リン酸化等により修飾されたタンパク質又はペプチドを提供することである。さらに別の目的は、向上した有効性及び減少した毒性を有する該タンパク質又はこのさまざまな切断誘導体を含む抗がん剤も提供することである。さらに他の目的は、患者の血流における半減期が延長され、免疫原性immunogenecityが減少した抗がん剤としての精製タンパク質及びペプチドを提供することである。本発明の他の目的はまた、哺乳動物のがんを治療するための治療剤としての組成物、医薬組成物、及びこの適用方法も開示する。医薬組成物は、単独での又は組み合わせた活性成分、すなわち、ペグ化、アセチル化、リン酸化形態を含むタンパク質、ペプチドと、生理学的及び薬学的に許容されるアジュバント又は賦形剤とを含む。本発明は、配列番号1及び/若しくは配列番号2を有する微生物起源のタンパク質又はそのバリアントである、活性が増大し毒性が減少した抗がん剤に関する。配列番号1の抗がん剤は、ヒト型結核菌Mycobacteriumtuberculosis、及び/又はウシ型結核菌BCGの分泌タンパク質であってよく、MPT63と呼ばれ得る。配列番号2の抗がん剤は、寄生虫トキソプラズマ由来の表面タンパク質であってよく、及びSAG1と呼ばれ得る。配列番号1のバリアントは、配列番号3のMB30などのペプチドであり、かつ抗がん活性に影響を与えることなく、前記アミノ酸配列において10~50の変異を有する他の領域由来の他のペプチドである。配列番号2のバリアントは、配列番号4のTG20及び配列番号5のTG23などのペプチドであり、かつ抗がん活性に影響を与えることなく、前記アミノ酸配列において10~50の変異を有する他の領域由来の他のペプチドである。本発明の抗がん剤は、黒色腫、白血病、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、前立腺がん、肝臓がん、腎臓がん及び脳がんからなる群に対して抗がん活性を示す。本発明はまた、本明細書に前に記載されたような抗がん剤を含む医薬組成物にも関する。該医薬組成物は、アジュバント複数可をさらに含んでもよい。抗がん剤は、ペグ化、アセチル化、リン酸化により修飾されてもよく、又は合成的に調製されてもよい。このようになされた修飾は、対象の血流における活性成分の半減期を延長させ、及び/又は免疫原性を減少させる。該医薬組成物は、黒色腫、白血病、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肺がん、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、前立腺がん、肝臓がん、腎臓がん及び脳がんの治療的及び/又は予防的処置のための、アジュバント又は賦形剤の存在下又は非存在下での静脈内iv,intravenous、筋肉内、経口、皮下又は局所適用に有用であり得る。本出願人は、分泌タンパク質MPT63及びこれに由来するMB30と呼ばれるペプチドが、抗がん活性を有し、哺乳動物においてがんを治療するのに使用することができることを発見した。同様に、本出願人らは、SAG1と呼ばれる寄生虫トキソプラズマ由来の表面タンパク質、並びにこれに由来する2つのペプチドTG20及びTG23の抗がん活性も発見した。このようなタンパク質及びペプチドは、さまざまなヒトがんを治療するための優れた候補薬剤であることが証明された。本発明は故に、単離及び精製されたタンパク質又は合成ペプチドを含む抗がん剤及び医薬組成物としての微生物産物、並びにがんの治療にこれらを使用する方法を提供する。現在最も利用されている抗がん療法は、著しい毒性を有する及び/又は耐性を生じる傾向があることから、高活性及び低毒性を有する新たな抗がん生理活性ペプチドを開発することが極めて重要である。長期間にわたり研究を行っている本発明者らは、ヒト病原体ヒト型結核菌及びウシ株ウシ型結核菌の両方により産生される、これまでは未知の機能のマイコバクテリウム特異的分泌タンパク質、MPT63、並びにこれに由来するMB30と呼ばれるペプチドが、膀胱がん及び他のがん治療において効用を示すことを示すことができた。MPT63は、2~3週間の培養後に分泌され、より長期の培養により減少する小さな16kDaタンパク質である。このタンパク質は、免疫原性特性を有することが示されており、病原性に関与している。MPT63のホモログは、マイコバクテリウムスメグマチスMsmegmatis、ウシ型結核菌及びマイコバクテリウムアビウムMaviumのようなマイコバクテリア種で見出されたのみであることから、該タンパク質はマイコバクテリウムに特異的である。MPT63の偽遺伝子は、マイコバクテリウムラプレMlapreゲノム内で見出されたが、タンパク質に翻訳されるとは考えられない。MPT63をコードするDNA配列の分析は、159個のアミノ酸aa,aminoacidのタンパク質をコードするORFを明らかにした。ORFは、130個のaaからなる成熟タンパク質とこれに先行する29個のaaからなるシグナルペプチドからなる。MPT63に関する機能情報をもたらすことを期待して、MPT63のX線結晶構造が、1.5オングストロームの解像度で測定された。MPT63の構造は、免疫グロブリン様フォールドに類似した2つの逆平行βシートからなるβサンドイッチ、及びさらなる小さな逆平行βシートである。免疫グロブリン構造は別として、MPT63は、ホモサピエンスHomosapiensβアダプチン、ウシアレスチン及び仮性結核菌インベイシンなどの細胞表面結合タンパク質と多少の構造的相同性を有する。MPT63はまた、真核生物のフィブロネクチン結合タンパク質、主要組織適合性ドメイン及びT細胞受容体とも構造的類似性を有する。MPT63の機能は、これまで知られておらず、この構造的特徴により予測することができなかった。その理由は、MPT63は極めて一般的な免疫グロブリン様折り畳みを有するProteinDataBankではこの構造は約24の構造に生じるためである。MPT63が類似するβサンドイッチ折り畳みは、多様な機能を有する多くのタンパク質の中心にある。興味深いことに、本発明者は、病原性細菌及びウイルスががんを退縮させることが示されただけでなく、少数の寄生虫もこの過程に関与していることも発見した。例えば、寄生虫である腸内蠕虫、及びヘリコバクターフェリスHelicobacterfelisによるマウスにおける同時感染は、マウスにおける前悪性病変である、胃萎縮を軽減することができる。蠕虫先行感染は、ヘリコバクター胃炎を減少させるが、ヘリコバクターフェリスコロニー形成は減少させないことが示された。これは、恐らくTh1からTh2へ応答のバランスが移行することによるものである。しかし、緑膿菌によるアズリン又はウシ型結核菌によるMPT63の分泌と同様に、蠕虫による抗がん剤複数可の産生は除外することができない。寄生虫による腫瘍退縮の興味深いケースは、トキソプラズマ症の原因病原体である偏性細胞内寄生虫、トキソプラズマによる、マウスにおけるB16黒色腫細胞の退縮である。トキソプラズマ感染の非存在下では、マウスにおけるB16黒色腫細胞による曝露は腫瘍形成をもたらした。しかし、トキソプラズマ感染マウスでは、B16細胞は皮下腫瘍を形成しなかった。トキソプラズマ感染マウスにおける免疫系活性化が、B16黒色腫細胞が腫瘍を形成しないことに関与しているかどうかを判定するため、iNOS又はパーフォリンなどの主な免疫機能を欠如し、リンパ球の細胞溶解機能が重度に低下したさまざまな突然変異マウスが使用された。これらの研究者らは、細胞傷害性Tリンパ球が非存在であり、NK細胞が細胞傷害性を持たないscidbeigeマウスも使用した。リンパ球の細胞溶解機能が重度に損なわれ、免疫機能が大きく低下したscidbeige及びパーフォリンノックアウトマウスにおいてさえ、トキソプラズマの抗がん活性は歴然であった。これは、トキソプラズマにより産生された活性な抗がん剤の存在を示唆している。血管形成を用いるさらなる実験は、トキソプラズマ感染マウスのマトリゲルMatrigel中のヘモグロビンレベルは、トキソプラズマ感染がない対照マウスより50~100倍低く、病理組織学的に観察される脈管vascularchannelがほとんどないことを示した。これは、トキソプラズマ感染は血管新生の系統的な抑制をもたらすが、抗血管新生剤複数可の性質又は起源は判定できないことを示唆した。循環抗血管新生因子は可溶性であり、細胞結合性ではなかったが、このような因子が、マウス細胞又はトキソプラズマにより産生されたかどうかは判定できないという幾つかの証拠があった。本発明者は、トキソプラズマの抗がん活性が、少なくとも一部において、SAG1と呼ばれる表面抗原の存在に起因し得ることも示した。SAG1は、宿主細胞付着に関与する、トキソプラズマでより顕著な表面タンパク質の1つであり、トキソプラズマの主要な病原性因子と考えられている。SAG1は、トキソプラズマ株、特にタキゾイトにおいて高度に保存された30kDaの免疫優性表面抗原糖タンパク質P30としても知られているである。単量体SAG1は、2つのドメイン、N末端130アミノ酸ドメインD1及びC末端120アミノ酸ドメインD2を有する。注目すべきことに、SAG1は、アズリンとの構造的類似性を示し、アズリンと相互作用するが、アズリン様タンパク質Lazとより一層強く相互作用する。SAG1は、Lazに類似して表面結合性であり、抗がん剤アズリン及びLazとの構造的類似性を示すため、Lazに類似しているならば、SAG1が一部のヒトがんに対する抗がん活性を有し得るかどうかを判定することは、本出願人にとって非常に興味があった。ヒト患者において該タンパク質自体の起こり得る毒性を排除するため、2つのペプチドTG20及びTG23が、アズリン及びアズリン様タンパク質LazとSAG1の間の構造的類似性を利用して設計された。これらの2つのペプチドは、既知の抗がん活性を有するアズリンペプチドP28及びP26に多少類似した、SAG1の潜在抗がん活性を有していると考えられた。さらに、SAG1の異なる部分に由来するTG20及びTG23は、膀胱及び結腸がんに対し抗がん活性を示した。比較する目的で、アッセイにアズリン及びシスプラチンも含めた。材料及び方法:ウシ型結核菌由来のMPT63タンパク質配列番号1の完全アミノ酸配列を以下に示す。次のMPT63配列において最初の29個のアミノ酸下線は、分泌シグナルペプチドリーダー配列を形成し、MB30ペプチド成熟タンパク質のアミノ酸44~73配列が太字で強調されている。MPT63タンパク質に由来する30個のアミノ酸のペプチド配列MB30ペプチドと呼ばれるを以下に示す。MB30ペプチド配列配列番号3:GQVWEATATVNAIRGSVTPAVSQFNARTADトキソプラズマ由来のSAG1タンパク質配列番号2の完全アミノ酸配列を以下に示す。MFPKAVRRAVTAGVFAAPTLMSFLRCGVMASDPPLVANQVVTCPDKKSTAAVILTPTENHFTLKCPKTALTEPPTLAYSPNRQICSAGTTSSCTSKAVTLSSLIPEAEDSWWTGDSASLDTAGIKLTVPIEKFPVTTQTFVVGCIKGDDAQSCMVTVTVQARASSVVNNVARCSYGANSTLGPVKLSAEGPTTMTLVCGKDGVKVPQDNNQYCSGTTLTGCNEKSFKDILPKLTENPWQGNASSDKGATLTIKKEAFPAESKSVIIGCTGGSPEKHHCTVKLEFAGAAGPAKSAAGTASHVSIFAMVIGLIGSFAACVAトキソプラズマのSAG1タンパク質に由来する20個のアミノ酸のペプチド配列TG20と呼ばれるを以下に示す。TG20ペプチド配列配列番号4:NHFTLKCPKTALTEPPTLAYSAG1タンパク質トキソプラズマに由来する23個のアミノ酸のペプチド配列TG23と呼ばれるを以下に示す。TG23ペプチド配列配列番号5:TAGIKLTVPIEKFPVTTQTFVVG本発明を例示するため、生理活性ペプチドの抗がん活性を詳述する実験を以下に記載する。次の例は、このような活性を記載することを意図しており、本発明を限定するものではないことに注意すべきである。タンパク質の単離及び精製は、以前に文献に記載されているが、ペプチドは全て営利会社により化学的に合成された。本発明者らは、MPT-63タンパク質をクローン化及び発現させ、この抗がん活性をさまざまながん細胞株において評価した。MPT63タンパク質のクローニング及び発現:MPT63遺伝子を、フォワードプライマー上にNdeI制限部位及びリバースプライマー上にHindIII制限部位を有する次のプライマーを用いてPCRにより増幅した:フォワードプライマー:5’TCGATCCATATGGCCTATCCCATCACCGGA3’、及びリバースプライマー:5’TCGATCAAGCTTCTACGGCTCCCAAATCAG3’。NdeI及びHindIIIPCR産物は、pUC18クローニングベクターにライゲーションする。MPT63遺伝子をpUC18から切除し、予め制限したpET28a発現ベクターにライゲーションし、大腸菌BL21de3に形質転換する。MPT63精製のため、BL21de3の単一コロニーをLBブロスに播種し、ODが0.5に達するまで37°Cで播種inoculateした。培養物は、1mMIPTGを用いて37°Cで一晩誘導した。一晩のインキュベーション期間後、培養物を遠心分離し、細胞ペレットを氷上で15分間インキュベートした。細胞を、ベンゾナーゼ及びリゾチームを含む10ml非変性溶解緩衝液に再懸濁し、氷上で30分間インキュベートし、均一な懸濁を確保するために断続的に混合した。細胞ライセートlysateを30分間、14000g/4°Cで遠心分離して細胞細片debrisをペレット化した。細胞溶解物上清を、Qiagen社により供給されたNi-NTAカラムに添加し、素通り画分を回収した。カラムを洗浄緩衝液で2回洗浄した。結合した6×Hisタグ化タンパク質を、非変性溶出緩衝液である1mlアリコートで2回溶出した。両方の溶出画分は、別々の管に回収した。工程の各ステップで、試料をSDSPAGEにより分析した。この精製タンパク質は、さまざまな細胞株に対する細胞毒性効果を判定するために、1μM、5μM及び10μMの濃度でさらなる実験に使用した。細胞培養:膀胱がん細胞株HTB9[悪性度II膀胱がん]、CRL1749UMUC3[高悪性度膀胱がん]、並びに結腸直腸がん細胞株CCL222COLO205[DukesD型結腸直腸腺がん]、CCL247HCT116、SiHa、CaSki、MDAMB231、U87及びHepG2は、アメリカ培養細胞系統保存機関ATCC,AmericanTypeCultureCollectionから調達した。全ての細胞株は、以前に記載されているようにGargMKanojiaDSethAKumarRGuptaASuroliaAandSuriA2009HeatShockProtein702ExpressioninBladderUrothelialCarcinomaisAssociatedwithTumorProgressionandPromotesMigrationandInvasionEurJCancer46207215;KanojiaDGargMGuptaSGuptaAandSuriA2010SpermAssociatedAntigen9IsaNovelBiomarkerforColorectalCancerandIsInvolvedinTumorGrowthandTumorigenicityAmJPathol17810091020、標準的な条件下である、5CO2、加湿した37°Cインキュベーター内で増殖させた。ATCC:HTB-9:68歳男性患者の膀胱がん悪性度IIから確立された、上皮様特性を有するヒト細胞株。この細胞株は、本来は腫瘍性である。これらの細胞は、機能的網膜芽細胞腫タンパク質Rbretinoblastomaproteinを欠如する。HTB9細胞は、IL2、IL3、G-CSF、GM-CSF、及びM-CSFを含むさまざまな増殖因子に反応して増殖する。Goselinkらは、HTB9細胞の無血清馴化培地conditionedmediumが、半固体培地における造血前駆細胞HPC,hematopoieticprogenitorcellの増殖を支持する血清に取って代わり得ることを示したGoselinkHMvanDammeJHiemstraPSWuytsAStolkJFibbeWEWillemzeRFalkenburgJH1996ColonygrowthofhumanhematopoieticprogenitorcellsintheabsenceofserumissupportedbyaproteinaseinhibitoridentifiedasantileukoproteinaseJExpMed18413051312。ATCC:UM-UC-3:男性患者の高悪性度浸潤性膀胱がんから確立された、上皮様特性を有するヒト細胞株。これは、高3倍体ヒト細胞株であり、IFN非反応性である。この細胞株は、本来は腫瘍性である。ATCCCOLO205:70歳男性患者のDukesD型結腸直腸腺がんに由来するヒト細胞株。該細胞はCSAP陰性である。該細胞は、免疫ペルオキシダーゼ染色においてケラチン陽性である。COLO205細胞は、GA733-2腫瘍関連抗原に関連した36000ダルトンDaの細胞表面糖タンパク質を発現する。ATCCHCT116:成人男性患者由来の結腸直腸がんから確立された、上皮様特性を有するヒト細胞株。該細胞は、免疫ペルオキシダーゼ染色においてケラチン陽性である。HCT116細胞は、形質転換増殖因子TGF,transforminggrowthfactorベータ1TGFベータ1及びベータ2TGFベータ2発現陽性である。この株は、rasプロトオンコジーンのコドン13に変異を有し、このコドンにおける変異のPCRアッセイのための陽性対照として使用することができる。ATCC:SiHa:日本人患者から手術後に得られた一次組織試料の断片から確立されたヒト細胞株。電子顕微鏡観察は、細胞間結合における典型的なデスモソーム及び細胞質中の多数のトノフィラメントの存在を明らかにした。該株は、組み込まれたヒト乳頭腫ウイルスHPV,humanpapillomavirus16型ゲノムHPV-16、1細胞あたり1~2コピーを含有することが報告されている。ATCC:CaSki:40歳白人女性患者に由来するヒト細胞株。該株は、小腸間膜における転移由来の細胞から確立された。該細胞は、組み込まれたヒト乳頭腫ウイルス16型ゲノムHPV-16、1細胞あたり約600コピー及びHPV-18に関連した配列を含有することが報告されている。ATCC:MDA-MB-231:これは、51歳白人女性患者由来の乳腺乳房腺がんから確立された、上皮様特性を有するヒト細胞株である。該細胞は、WNT7Bがん遺伝子を発現する。ATCC:U87:これは、正式にはU-87MGとして知られているヒト神経膠芽腫細胞株である。これは上皮形態を有し、44歳白人女性患者から得られた。ATCC:HepG2:高分化肝細胞がんを有する15歳白人米国人男性の肝臓組織に由来するヒト細胞株。これらの細胞は形態が上皮性であり、ヌードマウスにおいて非腫瘍形成性である。該細胞は、さまざまな主な血漿タンパク質;例えば、アルブミン、トランスフェリン、及び急性期タンパク質フィブリノーゲン、アルファ2マクログロブリン、アルファ1アンチトリプシン、トランスフェリン及びプラスミノーゲンを分泌する。細胞毒性アッセイ:この研究で実施した細胞毒性アッセイは、がん細胞株における表1の生理活性ペプチドの細胞傷害能を任意の濃度で評価するように設計した。MTT[3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド]アッセイを、種々の抗がんペプチドの細胞毒性の測定のために行った。水溶性テトラゾリウム塩、MTT[3-4,5-ジメチルチアゾール-2-イル-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド]は、インタクトなミトコンドリア脱水素酵素により不溶性ホルマザンへ代謝される。ホルマザンを次いで、2-プロパノール40mMHClを添加し4時間インキュベーションして可溶化する。1×104個の細胞を播種し、24時間後、培地を、さまざまな濃度の抗がんペプチドTG20、TG23及びMB30、陽性対照としてのアズリン抗がん活性を有することが知られているChakrabartyAM2010BioengineeredbugsdrugsandcontentiousissuesinpatentingBioengineeredBugs128及び同様に既知の抗がん化合物であるシスプラチンSedletskaYGiraudPanisMJandMalingeJM2005CisplatinisaDNAdamagingantitumourcompoundtriggeringmultifactorialbiochemicalresponsesincancercellsImportanceofapoptoticpathwaysCurrMedChemAnticancerAgents5251265と交換した[表1]。細胞の生存能は、形成されたホルマザンに基づき推定し、ホルマザンは、24時間、48時間及び72時間後に570nmの吸光度により分光測定で検出した。24時間、48時間及び72時間などの時点ごとに、1×104個の細胞を、ペプチドの任意の処理のために3つ組triplicateで各プレートにペプチドなしで播種した。これは、ペプチド処理ごとの細胞毒性のパーセントを計算するために、細胞毒性レベルの対照として使用した。完全長タンパク質MPT-63の細胞毒性もこのアッセイを用いて判定し、タンパク質がペプチドの代わりに使用された。実験は全て3つ組で行われ、3回繰り返された。結果:この研究におけるさまざまなペプチドでの処理は、ペプチドの抗がん特性を明らかにした。インビトロにおける細胞毒性結果の分析は、細胞増殖の減少を明確に明らかにした。実験は全て3つ組で行われ、3回繰り返された。MTTアッセイは、膀胱がん細胞HTB-9において、他の陽性対照であるアズリン及びシスプラチンと共に、1.0及び10.0マイクロモルの濃度で使用した場合、3つのペプチドTG20、TG23、及びMB30、表1全ての細胞毒性活性を示した。3つのペプチドは全て、48及び72時間後それぞれで、アズリン及びシスプラチンに匹敵する最大40及び60の細胞毒性を示した図1。このような結果は、1.0マイクロモルのように低いペプチド濃度で十分であり、より高い濃度は、実質的に細胞毒性を増加させないことを示した。また、細胞毒性レベルは、24時間後では低いものの、72時間までインキュベーションの時間が増えるにしたがって増加した図1。種々の膀胱がん細胞株における全てのこれらのペプチドの細胞毒性を評価するため、膀胱がん細胞株UM-UC-3を、1.0及び10μM濃度のペプチドと共にインキュベートし、細胞毒性cytoxicityを24、48及び72時間後にモニターした。24時間後に、TG23及びMB30ペプチドは、他のペプチドより高い細胞毒性レベルアズリンに匹敵するがシスプラチンより低いを示した。72時間まで曝露が長引くと、3つのペプチドは全て、膀胱がん細胞株UM-UC-3において約45の細胞毒性を示した図2。黒色腫、前立腺又は白血病などのがんの退縮を可能にするウシ型結核菌BCGの生細胞の能力は、過去に報告されているが、このような効果は一貫していなかった。ヒト患者における一貫した有効性は、膀胱がんに対してのみであった。MB30ペプチド又は他のペプチドが、他のがんに対して細胞毒性を示すかどうかを評価するため、3つのペプチド全ての細胞毒性も、COLO205と呼ばれる結腸がん細胞株において72時間までさまざまな濃度で評価した。3つのペプチド全ては、48時間のインキュベーション中、約10~20のさまざまな細胞毒性を示した図3。3つのペプチド全ての抗がん活性も、結腸がん細胞株HCT116及び子宮頸がん細胞株SiHa及びCaSkiにおいて調べた。ペプチドMB30は、24時間までインキュベートした場合、両方の濃度で結腸及び子宮頸がん細胞の約40アズリンより高いがシスプラチンより若干低いを死滅させた。他のペプチドTG20及びTG23は、より低い細胞毒性を示した図4、5及び6。このようなデータは、MB30並びにTG20及びTG23のようなペプチドが、膀胱がん細胞及び他のがん細胞において著しい細胞毒性を示すことを明らかに示している。完全長MPT-63タンパク質を精製し、この細胞毒性をU87、HepG2及びMDA-MB-231細胞株においてMB30ペプチドと比較した。MPT-63タンパク質も、テストした3つの細胞系脳がん、肝臓がん及び乳がん全てにおいて細胞毒性を示した図7。しかし、MB30ペプチドは、24時間後に、3つの細胞系脳がん、肝臓がん及び乳がん全てにおいて、完全長タンパク質MPT-63と比べてより良好な細胞毒性を示した図7。これは、完全長タンパク質及びMB30ペプチドが、さまざまながん細胞系において抗がん活性を示すことを示している。配列表AMRITATHERAPEUTICSLTDANTICANCERAGENTATIN000120112754MUM2010201010015PatentInversion331159PRTMycobacteriumbovis1MetLysLeuThrThrMetIleLysThrAlaValAlaValValAlaMet151015AlaAlaIleAlaThrPheAlaGluProValAlaLeuAlaAlaTyrPro202530IleThrGlyLysLeuGlySerGluLeuThrMetThrAspThrValGly354045GlnValValLeuGlyTrpLysValSerAspLeuLysSerSerThrAla505560ValIleProGlyTyrProValAlaGlyGlnValTrpGluAlaThrAla65707580ThrValAsnAlaIleArgGlySerValThrProAlaValSerGlnPhe859095AsnAlaArgThrAlaAspGlyIleAsnTyrArgValLeuTrpGlnAla100105110AlaGlyProAspThrIleSerGlyAlaThrIleProGlnGlyGluGln115120125SerThrGlyLysIleTyrPheAspValThrGlyProSerProThrIle130135140ValAlaMetAsnAsnGlyMetGlnAspLeuLeuIleTrpGluPro1451501552319PRTToxoplasmagondii2MetPheProLysAlaValArgArgAlaValThrAlaGlyValPheAla151015AlaProThrLeuMetSerPheLeuArgCysGlyValMetAlaSerAsp202530ProProLeuValAlaAsnGlnValValThrCysProAspLysLysSer354045ThrAlaAlaValIleLeuThrProThrGluAsnHisPheThrLeuLys505560CysProLysThrAlaLeuThrGluProProThrLeuAlaTyrSerPro65707580AsnArgGlnIleCysSerAlaGlyThrThrSerSerCysThrSerLys859095AlaValThrLeuSerSerLeuIleProGluAlaGluAspSerTrpTrp100105110ThrGlyAspSerAlaSerLeuAspThrAlaGlyIleLysLeuThrVal115120125ProIleGluLysPheProValThrThrGlnThrPheValValGlyCys130135140IleLysGlyAspAspAlaGlnSerCysMetValThrValThrValGln145150155160AlaArgAlaSerSerValValAsnAsnValAlaArgCysSerTyrGly165170175AlaAsnSerThrLeuGlyProValLysLeuSerAlaGluGlyProThr180185190ThrMetThrLeuValCysGlyLysAspGlyValLysValProGlnAsp195200205AsnAsnGlnTyrCysSerGlyThrThrLeuThrGlyCysAsnGluLys210215220SerPheLysAspIleLeuProLysLeuThrGluAsnProTrpGlnGly225230235240AsnAlaSerSerAspLysGlyAlaThrLeuThrIleLysLysGluAla245250255PheProAlaGluSerLysSerValIleIleGlyCysThrGlyGlySer260265270ProGluLysHisHisCysThrValLysLeuGluPheAlaGlyAlaAla275280285GlyProAlaLysSerAlaAlaGlyThrAlaSerHisValSerIlePhe290295300AlaMetValIleGlyLeuIleGlySerPheAlaAlaCysValAla305310315330PRTMycobacteriumbovis3GlyGlnValTrpGluAlaThrAlaThrValAsnAlaIleArgGlySer151015ValThrProAlaValSerGlnPheAsnAlaArgThrAlaAsp202530420PRTToxoplasmagondii4AsnHisPheThrLeuLysCysProLysThrAlaLeuThrGluProPro151015ThrLeuAlaTyr20523PRTToxoplasmagondii5ThrAlaGlyIleLysLeuThrValProIleGluLysPheProValThr151015ThrGlnThrPheValValGly20参考文献1BasturkBYavascaogluIOralBGoralGandOktayB2006CytokinegenepolymorphismscanaltertheeffectofBacillusCalmetteGuerinimmunotherapyCytokine35152BisiauxAThiounnNTimsitMOEladauiAChangHHetal2009MolecularanalyteprofilingoftheearlyeventsandtissueconditioningfollowingintravesicalbacillusCalmetteGuerintherapyinpatientswithsuperficialbladdercancerJUrol181157115803BohleAJochamDandBockPR2003IntravesicalbacillusCalmetteGuerinversusmitomycinCforsuperficialbladdercancerAformalmetaanalysisofcomparativestudiesonrecurrenceandtoxicityJUrol16990954ChakrabartyAM2010BioengineeredbugsdrugsandcontentiousissuesinpatentingBioengineeredBugs1285ChaudhariAMahfouzMFialhoAMYamadaTGranjaATZhuYHashimotoWSchlarbRidleyBChoWDasGuptaTKandChakrabartyAM2007CupredoxincancerinterrelationshipAzurinbindingwithEphB2interferenceinEphB2tyrosinephosphorylationandinhibitionofcancergrowthBiochemistry46179918106DecobertMLarueHBergeronAHarelFPfisterCRousseauFLacombeLandFradetY2006PolymorphismsofthehumanNRAMP1geneareassociatedwithresponsetobacillusCalmetteGuerinimmunotherapyforsuperficialbladdercancerJUrol175150615117FialhoAMandChakrabartyAM2010aEmergingCancerTherapyMicrobialApproachesandBiotechnologicalToolsJohnWileySonsIncNewYork8FialhoAMandChakrabartyAM2010bPromiscuousanticancerdrugsfrompathogenicbacteriaRationalversusintelligentdrugdesignInEmergingCancerTherapyMicrobialApproachesandBiotechnologicalToolsAMFialhoandAMChakrabartyEdspages181198JohnWileySonsIncNewYork9GargMKanojiaDSethAKumarRGuptaASuroliaAandSuriA2009HeatShockProtein702ExpressioninBladderUrothelialCarcinomaisAssociatedwithTumorProgressionandPromotesMigrationandInvasionEurJCancer4620721510GoselinkHMvanDammeJHiemstraPSWuytsAStolkJFibbeWEWillemzeRFalkenburgJH1996ColonygrowthofhumanhematopoieticprogenitorcellsintheabsenceofserumissupportedbyaproteinaseinhibitoridentifiedasantileukoproteinaseJExpMed1841305131211HerrHWandMoralesA2008HistoryofbacillusCalmetteGuerinandbladdercanceranimmunotherapysuccessstoryJUrol179535612HongCSYamadaTHashimotoWFialhoAMDasGuptaTKandChakrabartyAM2006DisruptingtheentrybarrierandattackingbraintumorsTheroleoftheNeisseriaH8epitopeandtheLazproteinCellCycle51633164113JemalASiegelRWardEHaoYXuJMurrayTThunMJandWardE2008CancerstatisticsCACancerJClin58719614KanojiaDGargMGuptaSGuptaAandSuriA2010SpermAssociatedAntigen9IsaNovelBiomarkerforColorectalCancerandIsInvolvedinTumorGrowthandTumorigenicityAmJPathol1781009102015KresowikTPandGriffithTS2010BacillusCalmetteGuerinforurothelialcarcinomaofthebladderInEmergingCancerTherapyMicrobialApproachesandBiotechnologicalToolsAMFialhoandAMChakrabartyEdspages4970JohnWileySonsIncNewYork16LudwigATMooreJMLuoYChenXSaltsgaverNAO’DonnellMAandGriffithTS2004TumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligandAnovelmechanismforBacillusCalmetteGuerininducedantitumoractivityCancerRes643386339017MahfouzMHashimotoWDasGuptaTKandChakrabartyAM2007BacterialproteinsandCpGrichextrachromosomalDNAinpotentialcancertherapyPlasmid5741718RichardsJMWarsoMAMehtaDChristovKSchaefferCMYamadaTBeattieCWBresslerLRandDasGuptaTK2011AfirstinclassfirstinhumanphaseItrialofp28anonHDM2mediatedpeptideinhibitorofp53ubiquitinationinpatientswithmetastaticrefractorysolidtumorsJClinOncol29251119SedletskaYGiraudPanisMJandMalingeJM2005CisplatinisaDNAdamagingantitumourcompoundtriggeringmultifactorialbiochemicalresponsesincancercellsImportanceofapoptoticpathwaysCurrMedChemAnticancerAgents525126520ShintaniYSawadaYInagakiTKohjimotoYUekadoYandShinkaT2007IntravesicalinstillationtherapywithbacillusCalmetteGuerinforsuperficialbladdercancerStudyofthemechanismofbacillusCalmetteGuerinimmunotherapyIntlJUrol1414014621SylvesterRJvanderMeijdenAPOosterlinckWHoeltlWandBonoAV2003ThesideeffectsofBacillusCalmetteGuerininthetreatmentofTaT1bladdercancerdonotpredictitsefficacyResultsfromaEuropeanOrganisationforResearchandTreatmentofCancerGenitoUrinaryGroupPhaseIIItrialEurUrol4442342822TaylorBNMehtaRRYamadaTLekmineFChristovKChakrabartyAMGreenABratescuLShilkaitisABeattieCWandDasGuptaTK2009NoncationicpeptidesobtainedfromazurinpreferentiallyentercancercellsCancerRes69537546"