"治療または予防によるヒトまたは動物の体の処置方法において用いられる、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物。微生物による対象中またはその上での感染症の治療または予防方法において用いられる、請求項1に記載の組成物。医薬的に許容可能な担体または希釈剤をさらに含む、請求項1または請求項2に記載の組成物。キレート剤をさらに含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物。前記対象が易感染性免疫系を有する、または重篤である、前記方法において用いられる、請求項1~4のいずれか1項に記載の組成物。ヒトまたは動物の体上またはその中ではない場所でヒトまたは動物に対して病原性である微生物を殺滅する、またはその成長を阻害するための、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物の使用。前記組成物が、ヒトまたは動物病原性微生物に関して、ヒトもしくは動物が摂取する、もしくは直接その上もしくは中に配置する物品、またはその必要がある表面を消毒するために用いられる、請求項6に記載の使用。前記物品が食品または医療装置もしくは器具である、請求項7に記載の使用。前記表面がa健康診断、診察もしくは治療が行われる;b食品が調理、取扱もしくは保存される;c個人的な洗浄および/もしくは衛生が行われる;ならびに/またはdi微生物による感染症に罹患する;および/またはii医療介入なしに微生物感染症を撃退することができないという特定のリスクを有する個人がいる環境内にある、請求項7に記載の使用。前記組成物がキレート剤をさらに含む、請求項6~9のいずれか1項に記載の使用。前記微生物が細菌または真菌である、請求項2~5のいずれか1項に記載の組成物、または請求項6~10のいずれか1項に記載の使用。前記細菌が以下の属:シュードモナス、リステリア、バチルス、スタフィロコッカスおよびサルモネラの1つからの病原性種である、請求項11に記載の組成物または使用。前記真菌が以下の属:カンジダ、アスペルギルス、アルテルナリア、フザリウム、クリプトコッカスおよびトリコスポロンの1つからの病原性種である、請求項11に記載の組成物または使用。前記真菌、とくにカンジダアルビカンス、アスペルギルスフミガタスまたはアルテルナリアアルテルナタが侵襲性真菌感染症を引き起こし得る、請求項13に記載の組成物または使用。それを必要とする対象に治療効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む、ヒトまたは動物の治療方法。それを必要とする対象に治療効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む、微生物による感染症の予防または治療方法。ヒトまたは動物の体上またはその中ではない場所でのヒトまたは動物に病原性である微生物の殺滅、またはその増殖の阻害方法であって、該場所に治療効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む、方法。BladBladbandadeLupinusalbusdoce―スイートL.アルバスからのバンドは、β-コングルチン、ルピナス属の種中に存在する主要な貯蔵タンパク質の、安定した中間分解生成物に与えられた名称である。173個のアミノ酸残基からなり、ルピナスからのβ-コングルチンの前駆体をエンコードする遺伝子GenBankにおいてアクセッション番号AAS97865で公表される、1791個のヌクレオチドの内部断片GenBankにおいてアクセッション番号ABB13526で登録される、519個のヌクレオチドによりエンコードされる20kDのポリペプチドとして特徴づけられる。Blad末端配列をエンコードするプライマーを用いてゲノムルピナスDNAからの配列を増幅する場合、~620bpの生成物が得られ、Bladをエンコードする遺伝子断片中のイントロンの存在を示す。自然発生Bladは、発芽の開始後4~12日の間、ルピナス種の子葉のみにβ-コングルチンの集中的かつ限定的なタンパク質分解の後蓄積する、210kDのグリコオリゴマーの主成分である。前記オリゴマーはグリコシル化しているが、自然発生Bladはグルコシル化していない。Blad含有グリコオリゴマーは、いくつかのポリペプチドを含み、主なものは14、17、20、32、36、48および50kDの分子量を示す。20kDのポリペプチド、Bladは、オリゴマー中でもっとも豊富なポリペプチドであり、レクチン活性を有する唯一のものであると考えられる。自然発生Bladは8日齢の植物体中の総子葉タンパク質の約80を占める。L.アルバスβ-コングルチン前駆体をエンコードする配列SEQIDNO:1を図10に示す。β-コングルチン親サブユニットをコードする配列は残基70~1668に位置する。エンコードされた、533個のアミノ酸残基のβ-コングルチン親サブユニットSEQIDNO:2は:である。Bladに対応するβ-コングルチン前駆体をエンコードする配列SEQIDNO:3の内部断片を図11に示す。BladポリペプチドSEQIDNO:4は:である。本発明は、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物に関する。従って、SEQIDNO:4のポリペプチド配列またはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物に関する。代替実施形態では、組成物は本質的にBladもしくはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドからなる、および/または抗微生物ポリペプチドは本質的にBladもしくはその活性変異体からなる。さらなる実施形態では、Bladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれらからなる抗微生物ポリペプチドは分離形態で用いることができる。Bladの活性変異体は、抗微生物剤として作用する能力を保持するすなわち、抗微生物活性を有する―こうした活性のレベルおよびどのように測定するかの説明は以下参照Bladの変異体である。Bladの活性変異体は、その範囲内に、SEQIDNO:4の断片を含む。好適な実施形態では、SEQIDNO:4の断片は、SEQIDNO:4の長さの少なくとも10、好適には少なくとも20、好適には少なくとも30、好適には少なくとも40、好適には少なくとも50、好適には少なくとも60、好適には少なくとも70、好適には少なくとも80、好適には少なくとも90、もっとも好適にはSEQIDNO:4の長さの少なくとも95であるものが選択される。Bladまたはその変異体は一般的には、少なくとも10個のアミノ酸残基、例えば少なくとも20、25、30、40、50、60、80、100、120、140、160または173個のアミノ酸残基の長さを有する。Bladの活性変異体は、その範囲内に、例えば全配列について、または少なくとも20個、好適には少なくとも30個、好適には少なくとも40個、好適には少なくとも50個、好適には少なくとも60個、好適には少なくとも80個、好適には少なくとも100個、好適には少なくとも120個、好適には少なくとも140個、もっとも好適には少なくとも160個以上の隣接するアミノ酸残基の領域について、SEQIDNO:4との相同性、例えば少なくとも40の同一性、好適には少なくとも60、好適には少なくとも70、好適には少なくとも80、好適には少なくとも85、好適には少なくとも90、好適には少なくとも95、好適には少なくとも97、もっとも好適には少なくとも99同一性を有するポリペプチド配列も含む。タンパク質相同性の測定方法は当技術分野において周知であり、当業者であれば、本文脈では相同性はアミノ酸同一性ハード相同性と称されることもあるに基づいて計算されることを理解するだろう。相同活性Blad変異体は一般的には、置換、挿入または削除、例えば1、2、3、4、5~8個以上の置換、挿入または削除によりSEQIDNO:4のポリペプチド配列とは異なる。置換は好適には保守的である、すなわちアミノ酸を同様のアミノ酸で置換することができ、それによって同様のアミノ酸は以下の群:芳香族残基F/H/W/Y、非極性脂肪族残基G/A/P/I/L/V、極性非荷電脂肪族C/S/T/M/N/Qおよび極性荷電脂肪族D/E/K/Rの1つを共有する。好適な亜群は:G/A/P;I/L/V;C/S/T/M;N/Q;D/E;およびK/Rを含む。上述のようなBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドは、N末端および/またはC末端にいずれかの数のアミノ酸残基を付加したBladまたはその活性変異体からなり得るが、ただしポリペプチドは抗微生物活性を保持する同様に、こうした活性のレベルおよびこれをどのように測定するかの説明は以下参照。好適には、300個以下のアミノ酸残基、より好適には200個以下のアミノ酸残基、好適には150個以下のアミノ酸残基、好適には100個以下のアミノ酸残基、好適には80個、60個または40個以下のアミノ酸残基、もっとも好適には20個以下のアミノ酸残基をBladまたはその活性変異体の一端または両端に付加する。上述のようなBladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドは、本発明において例えば植物、動物または微生物供給源から取り出した精製および/または組換えタンパク質の形態で用いることができる。組換え形態の製造はBladの活性変異体の製造を可能にする。自然発生Bladの精製方法は当技術分野においてすでに説明されている例えばRamosetal.1997Planta2031:26-34およびMonteiroetal.2010PLoSONE51:e8542。自然発生Bladの適切な供給源は、好適には発芽の開始後約4~約14日の間に採取された、より好適には発芽の開始後約6~約12日の間例えば発芽の開始から8日後に採取された、ルピナスアルバスのようなルピナス属の植物、好適には該植物の子葉である。当技術分野では、Bladを含む粗抽出物をもたらす総タンパク質抽出方法、およびこうした抽出物の、例えばBladを含むBlad含有グリコオリゴマーを含む部分精製抽出物をもたらすタンパク質精製方法が開示されている。Bladそのものを分離するには、SDS-PAGEおよび/または、好適にはC-18カラム上での逆相RP-HPLCを用いることができる。Bladを含むグリコオリゴマーを含む部分精製抽出物を得る代替方法は、Bladのキチン結合活性を用いることである。グリコオリゴマーは、キチン親和性クロマトグラフィー精製の一部として、キチンカラムと非常に強く結合し、0.05NのHClで溶離される。この精製方法の一例の詳細は以下のとおりである:8日齢のルピナス属植物から子葉を採取し、10mMのCaCl2およびMgCl2を含有するMilli-Qplus水pHは8.0に調節中に均質化する。そのホモジェネートをチーズクロスに通してろ過し、4°Cで、1時間30,000gで遠心分離する。ペレットをその後、10w/vのNaCl、10mMのEDTAおよび10mMのEGTAを含有するpH7.5の100mMのトリス-HCl緩衝剤中に懸濁させ、4°Cで1時間撹拌し、4°Cで、1時間30,000gで遠心分離する。浮遊物に含まれる総グロブリン画分を硫酸アンモニウム561g/lで沈殿させ、冷却しながら1時間撹拌しつづけ、4°Cで、30分間30,000gで遠心分離する。得られたペレットを、pH7.5の50mMのトリス-HCl緩衝剤に溶解し、同じ緩衝剤で平衡化したPD-10カラム中で脱塩し、同じ緩衝剤で予め平衡化したキチン親和性クロマトグラフィーカラムに通す。カラムをpH7.5の50mMのトリス-HCl緩衝剤で洗浄し、結合タンパク質を0.05NのHClで溶離する。溶離した画分をすぐに2Mのトリスで中和し、ピーク画分を溜め、凍結乾燥させ、SDS-PAGEにより分析する。キチンカラムの製造について、粗キチンをSigmaから入手し、以下のとおり処理する:キチン試料をMilli-Qplus水のみで、その後0.05NのHClで洗浄する。次に1w/vの炭酸ナトリウムで、次にエタノールで、洗浄剤の吸収度が0.05未満になるまで洗浄する。キチンを次にピペット先端に充填し、pH7.5の50mMのトリス-HCl緩衝剤で平衡化する。組換えタンパク質の製造方法は当技術分野において周知である。ここで適用されるこうした方法は、Bladまたはその活性変異体を含むポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチドを適切な発現ベクターに挿入するステップ、該ポリヌクレオチドの1つ以上のプロモーター例えばT7lacのような誘導性プロモーターとの、および対象の他のポリヌクレオチドまたは遺伝子との並置を可能にするステップ、発現ベクターを適切な細胞または有機体例えばエシェリキアコリ中に導入するステップ、形質転換細胞または有機体においてポリペプチドを発現するステップ、ならびに発現した組換えポリペプチドをその細胞または有機体から取り出すステップを含む。こうした精製を補助するため、発現ベクターは、ポリヌクレオチドが、例えば精製を補助することができる末端タグ:例えば、親和性精製のためのヒスチジン残基のタグをさらにエンコードするように構成することができる。組換えポリペプチドを精製した後、精製タグは、例えばタンパク質分解開裂により、ポリペプチドから取り出すことができる。Bladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを含む組成物では、該ポリペプチドは好適には部分精製形態、より好適には精製形態である。前記ポリペプチドは、これに自然と関連する1つ以上の他のポリペプチドを有さない環境中に存在する、および/または存在する総タンパク質の少なくとも約10に相当する場合、部分精製である。前記ポリペプチドは、これに自然と関連する他のポリペプチドをすべて、またはほとんどの有さない環境中に存在する場合、精製である。例えば、精製Bladとは、Bladが組成物中の総タンパク質の少なくとも約50、少なくとも約60、少なくとも約70、少なくとも約75、少なくとも約80、少なくとも約85、少なくとも約90、少なくとも約95、少なくとも約97、少なくとも約98、または少なくとも約99に相当することを意味する。Bladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを含む組成物では、ルピナスタンパク質分は本質的にBladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなるポリペプチドを含むBlad含有グリコオリゴマーからなり得る。Bladを含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを含む組成物は、当業者により組成物に添加された別の化合物を含む製剤とすることもできる。好適な実施形態では、こうした製剤は、Bladおよび医薬的に許容可能な担体または希釈剤を含むまたは本質的にこれらからなる抗微生物ポリペプチドを含む医薬品製剤である。微生物標的本発明は、抗微生物化合物としての、すなわちヒトまたは動物に病原性である微生物の増殖を阻害する、またはこれを殺滅するための、Bladの使用に関する。こうした微生物としては、とくに細菌および真菌が挙げられる。こうした病原性微生物は、ヒトおよび/または動物において感染症またはその他の健康障害例えば食中毒、アレルギーを引き起こし得、例えば、目、皮膚、熱傷、創傷、上気道管、肺、胃腸管、尿生殖器管、腎臓、肝臓、神経系および/または心血管系例えば血流に影響を及ぼし、またはこれらを感染させ得る。こうした病原性微生物は本来病原性であり得、または日和見性であり得るすなわち健康な宿主では疾患を引き起こさないが、易感染性免疫系を有する宿主では疾患を引き起こし得る。こうした病原性微生物は、ヒトまたは動物に毒性である化合物を放出することにより、追加で、または代わりに健康障害を引き起こし得る。Bladは、グラム陽性およびグラム陰性細菌病原体の両方に対する抗微生物剤として用いることができる。とくに好適な細菌標的としては、病原性シュードモナス種、例えばP.アエルギノサ、シュードモナスオリジハビタンスPseudomonasoryzihabitansおよびシュードモナスプレコグロシシダPseudomonasplecoglossicidaもっとも好適にはP.アエルギノサ、病原性リステリア種、例えばL.モノサイトゲネスおよびリステリアイバノビListeriaivanoviiもっとも好適にはL.モノサイトゲネス、病原性バチルス種、例えばB.サブチリス、バチルスアントラシスBacillusanthracisおよびバチルスセレウスBacilluscereusもっとも好適にはB.サブチリス、病原性スタフィロコッカス種、例えばS.アウレウスメチシリン耐性スタフィロコッカスアウレウス[MRSA]を含む、スタフィロコッカスシュードインテルメジウスStaphylococcuspseudintermedius、スタフィロコッカスエピデルミディスStaphylococcusepidermidis、スタフィロコッカスサプロフィチカスStaphylococcussaprophyticus、スタフィロコッカスルグドゥネンシスStaphylococcuslugdunensis、スタフィロコッカスシュライフェリStaphylococcusschleiferiおよびスタフィロコッカスカプラエStaphylococcuscapraeもっとも好適にはS.アウレウス、病原性サルモネラ種、例えばサルモネラエンテリカSalmonellaenterica亜種、例えばサルモネラアリゾナエSalmonellaarizonaeサルモネラコレラスイスSalmonellacholeraesuis、サルモネラエンテリティディスSalmonellaenteritidis、サルモネラパラチフィASalmonellaparatyphiA、サルモネラパラチフィBSalmonellaparatyphiB、サルモネラチフィSalmonellatyphi、サルモネラチフィムリウムSalmonellatyphimurium、サルモネラダブリンSalmonelladublin、サルモネラチフフィスイスSalmonellatyphisuisおよびサルモネラブランデンブルグSalmonellabrandenburgもっとも好適にはS.エンテリティディスまたはS.チフィスイス、ならびに病原性カンピロバクター種、例えばカンピロバクタージェジュニCampylobacterjejuniおよびカンピロバクターコリCampylobactercoliもっとも好適にはC.ジェジュニが挙げられる。好適な実施形態では、Bladは、全身性炎症および敗血症例えばP.アエルギノサ、コレラ例えばV.コレラエ、髄膜炎例えばL.モノサイトゲネス、ヘモフィルスインフルエンザエb型、ナイセリアメニンギティディス、またはストレプトコッカスニューモニエ、肺炎例えばS.ニューモニエ、ストレプトコッカスアガラクチエStreptococcusagalactiaeまたはS.アウレウス、細菌性赤痢例えばシゲラボイディShigellaboydii、シゲラディセンテリエShigelladysenteriae、シゲラフレクスネリShigellaflexneri、シゲラソネイShigellasonnei、連鎖球菌性咽頭炎例えばストレプトコッカスピオゲネスStreptococcuspyogenes、結核例えばマイコバクテリウムツベルクローシス、マイコバクテリウムボビスMycobacteriumbovis、マイコバクテリウムアフリカヌムMycobacteriumafricanum、マイコバクテリウムカネッティMycobacteriumcanettiおよびマイコバクテリウムミクロティMycobacteriummicroti、チフスS.チフィ、または食中毒例えば以下の属:リステリア、スタフィロコッカスおよびサルモネラの1つからの病原性種を引き起こし得る病原体に対して用いられる。Bladは、単細胞酵母および多細胞糸状真菌病原体の両方に対する抗微生物剤として用いることができる。とくに好適な真菌標的としては、病原性カンジダ種、例えばC.アルビカンス、カンジダグラブラタ、カンジダルシタニエCandidalusitaneae、カンジダパラプシローシス、カンジダトロピカリス、カンジダクルセイおよびカンジダドゥブリニエンシスCandidadubliniensis、病原性アルテルナリア種、例えばA.アルテルナタおよびアルテルナリアモレスタAlternariamolesta、病原性アスペルギルス種、例えばA.フミガタス、アスペルギルスニガーAspergillusniger、アスペルギルスフラバスAspergillusflavusおよびアスペルギルスクラバタスAspergillusclavatus、病原性フザリウム種、例えばフザリウムソラニFusariumsolani、フザリウムオキシスポラムFusariumoxysporum、フザリウムベルチシリオイデスFusariumverticillioides、およびフザリウムプロリフェラツムFusariumproliferatum、病原性クリプトコッカス種、例えばクリプトコッカスネオフォルマンス、クリプトコッカスラウレンティCryptococcuslaurentii、クリプトコッカスアルビダスCryptococcusalbidusおよびクリプトコッカスガッティCryptococcusgattii、ならびに病原性トリコスポロン種、例えばトリコスポロンオボイデスTrichosporonovoides、トリコスポロンインキンTrichosporoninkin、トリコスポロンアサヒTrichosporonasahii、トリコスポロンムコイデスTrichosporonmucoides、トリコスポロンアステロイデスTrichosporonasteroides、およびトリコスポロンクタネウムTrichosporoncutaneumすべて以前はトリコスポロンベイゲリTrichosporonbeigeliiの一般名で認識されていた、トリコスポロンデルマチスTrichosporondermatis、トリコスポロンドハエンセTrichosporondohaenseおよびトリコスポロンロウビエリTrichosporonloubieriが挙げられる。好適な実施形態では、Bladは、表層、局所、良性、自己限定性真菌性疾患とは対照的に重篤である、および/または命にかかわる場合の多い全身性および内臓真菌感染症と通常定義される、侵襲性真菌感染症IFIを引き起こし得る病原体に対して用いられる。とくに好適なIFIを引き起こす真菌としては、上記で定義したような病原性カンジダ、アスペルギルスまたはアルテルナリア種、好適にはC.アルビカンス、A.フミガタスまたはA.アルテルナタ、もっとも好適にはC.アルビカンスまたはA.フミガタスが挙げられる。当業者であれば、日常的な方法によって、いずれかの特定の背景において抗微生物剤としてBladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを用いるのに適した濃度を識別することができるだろう。好適には、例えば、Bladは少なくとも1μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも50μg/ml、または少なくとも100μg/ml、および500μg/mlまで、600μg/mlまで、1mg/mlまで、2.5mg/mlまで、5mg/mlまでまたは10mg/mlまでの濃度で用いられる。好適には、選択されるBladの濃度は10μg/ml~5mg/ml、より好適には50μg/ml~2.5mg/ml、より好適には100μg/ml~1mg/ml、さらにより好適には100μg/ml~600μg/ml例えば約250μg/mlである。本発明者らは、Bladが少なくとも400μg/mlまでは宿主に非毒性である証拠実施例4および5を参照を提供した。本発明者らは、驚くべきことに、Bladのキレート剤例えばEDTAとの組み合わせが相乗的な抗微生物効果を生むことを見出した。従って、好適には、キレート剤はBladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなるポリペプチドの抗微生物活性を向上させるのに用いられ、こうしたキレート剤の使用は特定のレベルの抗微生物活性を達成するのに必要な前記抗微生物ポリペプチドの濃度を低下させることができる。キレート剤別名、金属イオン封鎖剤は、金属イオンと結合し、非共有複合体を形成し、イオンの活性を低減するいずれかの化合物である。適切なキレート剤としては、EDTAエチレンジアミンテトラ酢酸およびEGTAエチレングリコールビスβ-アミノエチルエーテル-N,N,N’,N’-テトラ酢酸のようなポリアミノカルボキシレートが挙げられる。好適には、EDTAはキレート剤として、好適には少なくとも10μg/ml、少なくとも50μg/ml、または少なくとも100μg/ml、および500μg/mlまで、1mg/mlまで、5mg/mlまで、10mg/mlまで、または20mg/mlまでの濃度で用いられる。好適には、EDTAは0.1mg/ml~1mg/mlの濃度で用いられる。成果Bladまたはその活性変異体を含むまたは本質的にこれからなる抗微生物ポリペプチドを用い、ヒト/動物病原性微生物の増殖を阻害する静微生物活性を有することを意味する、および/または該微生物を殺滅する殺微生物活性を有することを意味することができる。当業者であれば、微生物のとくに所望の増殖阻害または殺滅を達成するのに適した用量および/または濃度を識別することができる。好適には、静微生物剤として用いる場合、抗微生物ポリペプチドは、抗微生物ポリペプチドが存在しない同等の条件と比べて、増殖率を10、より好適には50、より好適には75、より好適には90、より好適には95、より好適には98、より好適には99、さらにより好適には99.9低減する。もっとも好適には、抗微生物ポリペプチドは微生物のいかなる増殖も予防する。好適には、殺微生物剤として用いる場合、抗微生物ポリペプチドは、抗微生物ポリペプチドが存在しない同等の条件と比べて、微生物の集団の10、より好適には該集団の50、より好適には該集団の75、より好適には該集団の90、より好適には該集団の95、より好適には該集団の98、より好適には該集団の99、さらにより好適には該集団の99.9を殺滅する。もっとも好適には、抗微生物ポリペプチドは微生物の集団のすべてを殺滅する。ヒトまたは動物中またはその上で感染症を予防または治療するのに用いる場合、抗微生物ポリペプチドは好適には治療効果的な量、すなわち、臨床的に検出可能なレベルの感染症予防または撲滅が達成されるようなレベルの増殖阻害および/または殺滅をもたらす量で用いられる。好適には、治療効果的な量の抗微生物ポリペプチドはヒトまたは動物の対象に非毒性である。前記治療効果的な量の抗微生物ポリペプチドは、抗微生物ポリペプチドを含む組成物の一部として投与される場合に治療効果的であることを意図している。本発明者らは、驚くべきことに、同様の濃度質量によるで、Bladが殺真菌および静真菌活性に関してC.アルビカンスおよびA.フミガタスに対してほぼアムホテリシンBと同様に強力であり、フルコナゾールより強力であることを見出した。これは、iBladがアムホテリシンBおよびフルコナゾールの比較的小さい有機分子と比べてかなり大きな分子量を有すること、ならびにiiBladの性質がヒトおよび他の動物に非毒性であり、食用であることを考えると、顕著な結果である。医療使用および方法本発明者らは、治療または予防によるヒトまたは動物の体の処置方法において用いられる、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を提供する。この目的のため、彼らは、それを必要とする対象に治療効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む、ヒトまたは動物の治療方法も提供する。本発明者らは、微生物によるヒトまたは動物の対象中またはその上での感染症の予防または治療方法において用いられる、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物も提供する。この目的のため、彼らは;―それを必要とする対象に治療効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む、微生物による感染症の予防または治療方法;ならびに―Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物の、微生物によるヒトまたは動物の対象中またはその上での感染症の予防または治療のための薬剤の製造における使用も提供する。前記組成物は、注射例えば皮内、皮下、筋肉内、静脈内、骨内、および腹腔内、経皮粒子送達、吸引、局所、経口、または経粘膜例えば鼻、舌、膣または腸投与することができる。好適には、前記組成物は医薬的に許容可能な担体または希釈剤を含む。こうした医薬組成物は従来の医薬製剤として製剤することができる。これは、当業者に利用可能な標準的な医薬製剤化学および方法を用いて行うことができる。例えば、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを1つ以上の医薬的に許容可能な担体または希釈剤と組み合わせ、液体製剤をもたらすことができる。湿潤または乳化剤、pH緩衝物質等のような、補助物質も存在し得る。担体、希釈剤および補助物質は一般的には、過度の毒性なしに投与することができ、そのものとしては組成物を受け入れる個体において免疫応答を誘発しない医薬品である。医薬的に許容可能な担体としては、これらに限定されないが、水、食塩水、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、グリセロールおよびエタノールのような液体が挙げられる。医薬的に許容可能な塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、等のような鉱酸塩;および酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩、等のような有機酸の塩もその中に含むことができる。必要ではないが、製剤は、安定剤として作用し、とくにBladのようなポリペプチドを含む組成物について有利な、医薬的に許容可能な担体を含有することも好ましい。ポリペプチドの安定剤としても作用する適切な担体の例としては、限定なしに、医薬品グレードのデキストロース、スクロース、ラクトース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストラン、等が挙げられる。他の適切な担体としては、同様に限定なしに、デンプン、セルロース、リン酸ナトリウムまたはカルシウム、クエン酸、酒石酸、グリシン、高分子量ポリエチレングリコールPEG、およびこれらの組み合わせが挙げられる。製剤後、組成物は、さまざまな既知の経路および技術を用いて対象に生体内で送達させることができる。例えば、液体製剤は注射溶液、懸濁液またはエマルジョンとして提供し、従来の針および注射器を用いる、または液体ジェット注射システムを用いる、非経口、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、骨内または腹腔内注射によって投与することができる。液体製剤は、目、皮膚、毛髪もしくは粘膜組織例えば鼻、舌、膣もしくは腸に局所投与する、または経呼吸器もしくは経肺投与に適した微細噴霧として提供することもできる。他の投与形態としては、経口投与、坐剤、および活性または不活性経皮送達技術が挙げられる。好適な実施形態では、抗微生物ポリペプチドは局所ローション、ハンドクリーム、目薬、シャンプーまたはコンディショナーとして適した組成物に製剤される。抗微生物ポリペプチドを必要とする対象は、いずれかのヒトまたは動物の個体とすることができる。好適な実施形態では、抗微生物ポリペプチドを用い、若者例えば年齢が5歳、3歳、2歳、1歳、6か月または1か月未満の個人のような、年齢が16歳未満の個人、高齢者例えば年齢が80歳または90歳超の個人のような、年齢が70歳超の個人、易感染性免疫系を有する人々先天性免疫不全を有する人々、後天性免疫不全を有する人々例えばエイズを有する人々および化学療法または免疫抑制薬剤の投与のような治療の結果として抑制された免疫系を有する人々、重篤な人々、または病原性微生物への曝露の可能性がとくに高い人々例えば医療専門家のような、微生物による感染症に罹患するという特定のリスクを有する対象における感染症を予防すること、および/または医療介入なしに微生物感染症を撃退することができないという特定のリスクを有する対象における感染症を治療することができる。他の抗微生物剤の使用および方法本発明者らは、ヒトまたは動物の体上またはその中ではない場所でヒトまたは動物に病原性である微生物を殺滅する、またはその増殖を阻害するための、Bladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物の使用も提供する。この目的のため、彼らは、ヒトまたは動物の体上またはその中ではない場所でのヒトまたは動物に病原性である微生物の殺滅、またはその増殖の阻害方法も提供するが、該方法は該場所に効果的な量のBladまたはその活性変異体を含む抗微生物ポリペプチドを含む組成物を投与するステップを含む。前記効果的な量は、検出可能なレベルの微生物の保菌の予防または撲滅が達成されるようなレベルの微生物の増殖阻害および/または殺滅をもたらす量である。好適には、効果的な量の抗微生物ポリペプチドはヒトまたは動物の対象に非毒性である。前記効果的な量の抗微生物ポリペプチドは抗微生物ポリペプチドを含む組成物の一部として投与される場合に効果的であることを意図している。これらの実施形態では、ヒトもしくは動物が摂取する、もしくはその上もしくはその中に直接配置する物品上、またはそれを必要とする表面例えばヒトまたは動物と直接または間接的に接触し得る表面上での病原性微生物の増殖を予防する、および/またはこれを殺滅するため、iヒトもしくは動物が該病原性微生物に感染する;またはiiヒトまたは動物が病原性微生物により放出される毒素と接触するリスクを低減するように、抗微生物ポリペプチドを消毒剤として用いることを意図している。好適な実施形態では、抗微生物ポリペプチドは、食品上もしくはその中のヒト/動物病原性微生物の増殖を予防する、または食品上もしくはその中にすでに存在するヒト/動物病原性微生物を殺滅するため、食品中またはその上で用いられる。この場合、抗微生物ポリペプチドを用い、ヒトもしくは動物が病原性微生物に感染する、またはヒトもしくは動物が食品を摂取した結果として病原性微生物から放出される毒素を摂取するリスクを低減することができる。これらの実施形態では、前記病原性微生物が例えば直接または放出毒素によって食中毒を引き起こし得ることがとくに好適である。食品の語により、栄養または楽しみを理由に消費されるいずれかの液体または固体物質を意味することを意図している。抗微生物ポリペプチドを含む組成物は、例えば、食品の調理中に食品の他の成分と混合することができ、または例えば、食品の表面に例えば液体膜または噴霧として用いてもよい。これらの実施形態において考慮される特定の食品としては、水、フルーツジュースのようなソフトドリンク、アルコールドリンク、生肉、調理鳥肉、卵、ミルク、クリーム、アイスクリーム、チーズ、生野菜および果物、加工食品とくに例えばL.モノサイトゲネス、V.コレラエ、病原性スタフィロコッカス種、病原性サルモネラ種および病原性カンピロバクター種に関する、ナッツ、ならびにパン、米および芋のようなデンプン質食品とくに病原性アスペルギルス種に関するが挙げられる。代替の好適な実施形態では、抗微生物ポリペプチドは医療装置または器具―診断、治療または手術機能を行うために体の上またはその中に配置するいずれかの装置―例えば人工生体組織、ペースメーカー、ステント、スカフォード、弁、温度計、注射器、皮下注射針、モニター装置、人工呼吸器、除細動器、人工心肺、EEGおよびECGユニット、超音波装置、ドリル、ノコギリ、ナイフ、外科用メス、トング、ハサミ、クリップ、ステッチ等内またはその上に用いられる。こうした方法では、抗微生物ポリペプチドを用い、医療手順中に装置または器具と接触する体の感染症を予防することができる。代替の好適な実施形態では、抗微生物ポリペプチドはそれを必要とする表面例えばヒトまたは動物と直接または間接的に接触し得る表面上に用いられる。抗微生物ポリペプチドを用いることができる表面は:a健康診断、診察もしくは治療が行われる;b食品が調理、取扱もしくは保存される;c個人的な洗浄および/もしくは衛生が行われる;ならびに/またはdi微生物による感染症に罹患する;および/もしくはii医療介入なしに微生物感染症を撃退することができないという特定のリスクを有する個人こうした人々の例は上述したがいる環境中にあり得る。こうした表面の例としては、食品工場内のいずれかおよび食品スーパーマーケット内の棚/ベンチが挙げられる。抗微生物ポリペプチドを用いることができる表面は、建物またはその部屋の床もしくは壁または該部屋または建物内の物品の表面とすることができる。想定される特定の建物としては、病院および他の医療施設、学校および他の保育施設、介護施設、レストランおよび他の飲食店、食品調理、加工および/または保存場所例えば市場、食品店、スーパーマーケット、および食品工場、ならびに個人の住所が挙げられる。想定される特定の部屋としては、医療現場内のものすべて、とくに手術室、事故および救急部、集中治療および患者病棟、ならびに台所、浴室、トイレ、レストランおよび食品調理/加工ホールが挙げられる。以下の実施例では、BLADは、Ramosetal.1997Planta2031:26-34:文献のMaterialsandMethodsセクションのPlantmaterialandgrowthconditionsおよびPurificationofproteins部分参照、に従って精製した20kDのBladポリペプチドを含む自然発生Blad含有グリコオリゴマーを示す。定義:MIC―最小阻害濃度:微生物の目に見える増殖を阻害するもっとも低い抗微生物剤の濃度MFC/MBC―最小殺真菌/殺細菌濃度または最小致死濃度:標準の条件下、24時間後に初期接種の99.9を殺滅するのに必要なもっとも低い抗微生物剤の濃度時間-殺滅曲線:制御された条件下での一定の時間にわたる1つ以上の抗微生物剤による分離株の殺滅の測定は、時間-殺滅方法として知られる。これは、固定接種の殺滅の速度を、特定の時間間隔で、対照有機体、薬剤なしおよび抗微生物剤含有チューブまたはフラスコをサンプリングし、各サンプルを寒天板上に分散させ、生存コロニー数cfu/mlを測定することにより測定する、ブイヨン培地の方法である。BLADの殺細菌活性[各種細菌種についてのBLADのMICおよびMBCミューラーヒントン培地を用いる]AリステリアモノサイトゲネスおよびBシュードモナスアエルギノサでのBLADの時間-殺滅曲線:図1を参照されたい。L.モノサイトゲネスおよびP.アエルギノサに対して、BLADは100μg/mlで静細菌性であり、250μg/mlで殺細菌性である。Aスタフィロコッカスアウレウス、Bバチルスサブチリス、Cシュードモナスアエルギノサ、およびDリステリアモノサイトゲネスに対するBLADの阻害ハロデータ:図2を参照されたい。PCA上でのすべての試験した細菌種の増殖は、処理ディスク上のBLAD量を20μg右下のディスクから100μg左下のディスクまで、および200μg上のディスクまで増加させることによりますます阻害された24時間培養―効果は数日間見られた。BLADの殺真菌活性[カンジダ種についてのBLADのMICおよびMFCRPMI培地を用いる][カンジダ種についてのBLADのMICおよびMFCpH7.5のPDB培地を用いる][各種糸状菌についてのBLADのMICおよびMFCRPMI培地を用いる]備考―クリプトコッカスネオフォルマンスのMICは0.25~1.0μg/mlと測定された。PDB培地におけるカンジダアルビカンスでのBLADの時間-殺滅曲線Aおよび増殖曲線B:図3を参照されたい。C.アルビカンスに対して、BLADは10μg/mlで静真菌性であり、100μg/mlで殺真菌性である。pH7のPDB培地におけるカンジダアルビカンスでのBLADの増殖曲線:図4を参照されたい。C.アルビカンスに対して、BLADおよびアムホテリシンBは10μg/mlで静真菌性である。100μg/mlではフルコナゾールはほとんど増殖を遅延しない。カンジダアルビカンスに対するAおよびBBLADならびにCアムホテリシンBまたはフルコナゾールの阻害ハロデータ:図5を参照されたい。pH7.5のポテトデキストロース寒天PDA3日培養上でのC.アルビカンスの増殖は、処理ディスク上のBLAD量を20μgA、下のディスクから50μgB、下のディスクまで、100μgB、上のディスクまでおよび200μgA、上のディスクまで増加させることにより阻害された。これは20μgのアムホテリシンBC、上のディスクおよび25μgのフルコナゾールC、下のディスクで達成される阻害よりも非常に好ましい。APDAおよびBpH7.5のPDA3日培養上のクリプトコッカスネオフォルマンスに対するBLADの阻害ハロデータ:図6を参照されたい。C.ネオフォルマンスの増殖は、PDA上ではより効果が大きいが、両方の培地上で処理ディスク上のBLAD量を増加させることにより阻害された。I―上のディスク200μg、下のディスク10μg;II―左上のディスク50μg、右上のディスク20μg、下のディスク100μg。Aミューラーヒントン培地ruleM44-A、BPDAまたはCpH7.5のPDA3日培養上でのアスペルギルスフミガタスに対するBLADの阻害ハロデータ:図7を参照されたい。左のパネルは上から見たプレートを示し;右のパネルは下から見たプレートを示す。A.フミガタスの増殖は、pH7.5のPDA上ではより効果が大きいが、処理ディスク上のBLAD量を増加させることにより、すべての培地上で阻害された。I―上のディスク200μg、下のディスク10μg;II―左上のディスク50μg、右上のディスク20μg、下のディスク100μg。pH7.5のPDA6日培養上でのアスペルギルスフミガタスに対するAおよびBBLADならびにCアムホテリシンBまたはフルコナゾールの阻害ハロデータ:図8を参照されたい。pH7.5のPDA上でのA.フミガタスの増殖は、処理ディスク上のBLAD量を20μgA、下のディスクから50μgB、下のディスクまで、100μgB、上のディスクまで、および200μgA、上のディスクまで増加させることにより阻害された。これは10mgのアムホテリシンBC、上のディスクおよび100mgのフルコナゾールC、下のディスクで達成される阻害よりも非常に好ましい。非常に似た結果がトリコスポロンクタネウムについて見られたデータは図示せず。ヒト病原体に対する殺細菌/殺真菌活性に関するEDTAのBLADとの相同効果Aリステリアモノサイトゲネス、BシュードモナスアエルギノサおよびCカンジダアルビカンスでのBLADおよび/またはEDTAの時間-殺滅曲線:図9を参照されたい。Lモノサイトゲネスに対して、10μg/mlのBLADも0.1mg/mlのEDTAのいずれも増殖を阻害しないが、2つの組み合わせは静細菌性である。P.アエルギノサに対して、50μg/mlのBLADまたは1mg/mlのEDTAは増殖を阻害するすなわち両方とも静細菌性であるが、2つの組み合わせは殺細菌性である。C.アルビカンスに対して、10μg/mlのBLADまたは0.1mg/mlのEDTAは増殖を阻害するすなわち両方とも静真菌性であるが、2つの組み合わせは殺真菌性である。モルモットにおけるBLADの経皮毒性実験化学物質の試験のためのOECDガイドライン、No.402、急性経皮毒性を用いて、InstitutoSuperiordeAgronomiaによりリスボン工科大学獣医学部で行われた機密実験2006年7月18日~2006年8月1日。実験は優良実験室規範および動物福祉に従って行われた。BLADの急性経皮毒性は、経皮毒性実験に適した動物として広く受け入れられている、モルモットへの単回投与後に評価された。BLADを、各10匹の2群の無毛皮膚に、それぞれ200μg/mlおよび400μg/ml投与した。投与後、動物を15日間観察し続け、その間の体重、罹患率および死亡率を記録した。材料および方法1.材料試験項目:BLADを5mg/mlで用意し黄色がかった不透明な液体、0~4°C、-80°Cで保存した。動物:アルビノモルモット;系統:バルセロナのHarlanIbericaによるダンキンハートレイHsdPoc:DH用いた動物の数:30;体重:400~449g;齢:6週ハウス:動物を消毒した木粉リグノセルが入ったポリエチレンの箱に個別に入れた。周囲条件:a光周期:12時間毎の明/暗のサイクルb制御環境:19/22°Cの平均温度および60の平均湿度適応:動物は試験の開始前の7日間、試験の環境条件下に置いた。食糧:バルセロナのHarlanIbericaにより供給されるGlobalDiet2014、RodentMaintenanceDiet;水、適宜2.方法投与:動物を試験の48時間前に剃毛し、病変のない皮膚を持つ動物のみに実験を行った。1mlのアリコート200μg/mlまたは400μg/mlを各動物の剃毛した皮膚に投与した。実験デザイン:実験の30匹の動物を4つの群、各10匹の2群および各5匹の2群に分けた。1つの群の10匹には200μg/mlでBLADを投与し試験群1、もう1つの群の10匹にはBLADを400μg/mlで投与した試験群2。5匹の2群は対照とした:1つの群には水1mlアリコートを投与し、もう1つの群はすべての他の群と同様に扱ったが、いずれの投与も行わなかった。成果:投与後、動物を15日間毎日観察し、罹患のいずれかの兆候、または死亡を記録した。罹患に関して、投与部位での皮膚病変の発症および正常な行動パターンの変化のような一般的な毒性の兆候にとくに注意を払った。体重は投与前および試験期間の終わりに個別に測定した。結果どちらの濃度のBLADでも、経皮投与領域におけるいずれかの物理的な変化または飲水/摂食もしくは一般行動の変化の兆候は見られなかった。BLAD投与後、副作用も死亡も起こらなかった。体重の増加はすべての群において同様だったこうした幼齢の動物の成長から予想される増加と一致していた。結論400μg/mlまでのあるいはこれより高い濃度のBLADは経皮毒性を示さない。アルビノラットにおけるBLADの経口毒性実験化学物質の試験のためのOECDガイドライン、No.401、急性経口毒性を用いて、InstitutoSuperiordeAgronomiaによりリスボン工科大学獣医学部で行われた機密実験。実験は優良実験室規範および動物福祉に従って行われた。BLADの急性経口毒性は、経口毒性実験に適した動物として広く受け入れられている、ラットへの単回投与後に評価された。BLADは強制給餌により、各10匹の2群に、それぞれ200μg/mlおよび400μg/mlで投与した。投与後、動物を15日間観察し続け、その間の体重、罹患率および死亡率を記録した。観察期間後、動物は安楽死させ、剖検を行った。材料および方法1.材料試験項目:BLADを5mg/mlで用意し黄色がかった不透明な液体、0~4°C、-80°Cで保存した。動物:ラタスノルベジカスRattusnorvegicus;系統:バルセロナのHarlanIbericaからリスボンの獣医学部の動物飼育場が入手したウィスターハノーバー用いた動物の数:30;体重:250~300g;齢:10週ハウス:動物は消毒した木粉リグノセルが入ったポリエチレンの箱に個別に入れた。周囲条件:a光周期:12時間毎の明/暗のサイクルb制御環境:19/22°Cの平均温度および60の平均湿度適応:動物は試験の開始前の7日間、試験の環境条件下に置いた。食糧:バルセロナのHarlanIbericaより供給されるGlobalDiet2014、RodentMaintenanceDiet;水、適宜2.方法投与:1mlのアリコート200μg/mlまたは400μg/mlを各動物に、胃一般的には強制給餌として知られる経口経口腔食道挿管法により投与した。投与は用いた動物の種に適した金属プローブで行った。動物は投与前の18時間は絶食させ、投与の3時間後に給餌した。実験デザイン:実験の30匹の動物を4つの群、各10匹の2群および各5匹の2群に分けた。1つの群の10匹には200μg/mlでBLADを投与し試験群1、もう1つの群の10匹にはBLADを400μg/mlで投与した試験群2。5匹の2群は対照とした:1つの群には水1mlアリコートを投与し、もう1つの群はすべての他の群と同様に扱ったが、いずれの投与も行わなかった。成果:投与後、動物を15日間毎日観察し、罹患の兆候、または死亡を記録した。体重は投与前および試験期間の終わりに個別に測定した。観察期間後、動物は、その後の剖検のため、二酸化炭素で飽和した雰囲気下での窒息により安楽死させた。結果どちらの濃度のBLADでも、いずれかの物理的な変化または飲水/摂食もしくは一般行動の変化の兆候も見られなかった。BLAD投与後、副作用も死亡も起こらなかった。体重の増加はすべての群において同様だったこうした幼齢の動物の成長から予想される増加と一致していた。剖検/胸腔および腹腔の器官の肉眼観察でそれに変化がないことがわかった。結論400μg/mlまでのあるいはこれより高い濃度のBLADは経口毒性を示さない。"