"下記の化学式1で表される複素環化合物。[化学式1]化学式1において、R1は、水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C6-C12アリール、C3-C6シクロアルキル、C6-C12アルC1-C7アルキル、から選択され、R2及びR3は、互いに独立的に水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、C6-C10アルC1-C7アルキル、C1-C7アルコキシカルボニル、C1-C7アルキルアミドC1-C7アルキル、、-NR13R14、から選択され、R11、R12、R13、R14、R15、及びR16は、互いに独立的に水素、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、ヘテロシクロアルキルC6-C12アリール、C3-C12ヘテロアリールであり、R11及びR12、R14及びR15は、互いにアルキレン、オキシアルキレン又はアミノアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよく、nは1~4の整数であり、R2及びR3のC6-C12アリール及びR11とR12から形成された複素環はハロゲン、ヒドロキシ、C1-C7アルキル、C6-C10アリール、C3-C6シクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキルカルボニル、5又は6員のシクロアルキルスルホニル、5又は6員のヘテロアリール、C1-C6アルコキシ、C1-C7アルコキシカルボニル、C1-C7アルキルカルボニル、C3-C6シクロC1-C7アルキルカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルカルボニル、C3-C10ヘテロアリールカルボニル、C6-C10アリールカルボニル、C1-C7アルキルスルホニル、アミノC1-C7アルキルカルボニル、C1-C7アルキルオキシカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルオキシカルボニル、アミノ、C1-C7アルキルアミノ、C1-C7アルキルアミド、C1-C7アルキルカルバモイル、C1-C7アルキルスルホンアミド、又はでさらに置換されてもよく、R21及びR22は互いに独立的にC1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C12アリール、又はR21とR22が互いにアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよい。R1はC1-C7アルキルであり、R2は水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C6-C12アリール、C6-C12アルC1-C7アルキルから選択され、R3は水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C6-C12アリール、C1-C7アルコキシカルボニル、から選択され、R11及びR12は互いに独立的に水素、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、ヘテロシクロアルキルC6-C12アリール、C3-C12ヘテロアリールであり、R11及びR12は互いにアルキレン、オキシアルキレン又はアミノアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよく、nは1~4の整数であり、R2及びR3のC6-C12アリール及びR11とR12から形成された複素環はハロゲン、ヒドロキシ、C1-C7アルキル、C6-C10アリール、C3-C6シクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキルカルボニル、5又は6員のシクロアルキルスルホニル、5又は6員のヘテロアリール、C1-C6アルコキシ、C1-C7アルコキシカルボニル、C1-C7アルキルカルボニル、C3-C6シクロC1-C7アルキルカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルカルボニル、C3-C10ヘテロアリールカルボニル、C6-C10アリールカルボニル、C1-C7アルキルスルホニル、アミノC1-C7アルキルカルボニル、C1-C7アルキルオキシカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルオキシカルボニル、アミノ、C1-C7アルキルアミノ、C1-C7アルキルアミド、C1-C7アルキルカルバモイル、C1-C7アルキルスルホンアミド、又はでさらに置換されてもよく、R21及びR22は互いに独立的にC1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C12アリール、又はR21とR22が互いにアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成することができる請求項1に記載の複素環化合物。R1はメチルであり、R2はベンジル又はフェニルであり、R2のベンジル及びフェニルはハロゲン、C1-C7アルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキルでさらに置換されてもよく、R3は互いに独立的にC1-C7アルコキシカルボニル、から選択され、R11及びR12は互いに独立的に水素、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、ヘテロシクロアルキルC6-C12アリール、C3-C12ヘテロアリールであり、R11及びR12は互いにアルキレン、オキシアルキレン又はアミノアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよく、nは1~4の整数である請求項1に記載の複素環化合物。下記化学式2で表される請求項1に記載の複素環化合物。[化学式2]前記化学式2において、AはCH2又はNR31であり、R31は水素、C1-C7アルキル、C1-C7アルキルカルボニル、C3-C6シクロアルキルカルボニルから選択され、前記R2はベンジル、フェニルであり、R2のベンジル及びフェニルはハロゲン、C1-C7アルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキルでさらに置換される。下記構造から選択される請求項1に記載の複素環化合物。化学式1の複素環化合物、又はこれらの薬学的に許容される塩を含む炎症性皮膚疾患の治療及び予防のための請求項1から請求項5のいずれか一項に記載の医薬組成物。ニキビ、酒さrosacea、脂漏性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、炎症後色素沈着post-inflammatoryhyperpigmentation:PIH、接触性皮膚炎、掻痒症、乾癬、扁平苔蘚Lichenplanus、湿疹、皮膚感染症、NethersonSyndromeなどを含む炎症性皮膚疾患の治療及び予防のための請求項6に記載の医薬組成物。化学式1の複素環化合物、又はこれらの薬学的に許容される塩を含む皮膚損傷治癒のための請求項1から請求項5のいずれか一項に記載の医薬組成物。化学式1の複素環化合物、又はこれらの薬学的に許容される塩を含む癌の転移、胃腸関係の疾患、喘息、肝硬変の治療及び予防のための請求項1から請求項5のいずれか一項に記載の医薬組成物。化学式1の複素環化合物、又はこれらの薬学的に許容される塩を含む請求項1から請求項5のいずれか一項に記載のPAR-2proteaseactivatedreceptor-2阻害剤の組成物。化学式1の複素環化合物を含む請求項1から請求項5のいずれか一項に記載の化粧品組成物。本発明の目的は、新規の複素環化合物として下記の化学式1で表される複素環化合物とを提供することにある。[化学式1]本発明のまた他の目的は、本発明による複素環化合物である化学式1の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を含む炎症性疾患の治療及び予防のための医薬組成物を提供することにあり、また、化学式1の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を含むPAR-2proteaseactivatedreceptor-2阻害剤の組成物を提供することにある。本発明は、新規の複素環化合物である下記の化学式1で表されるベンゾイミダゾール化合物を提供する。[化学式1]化学式1において、R1は、水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C6-C12アリール、C3-C6シクロアルキル、C6-C12アルC1-C7アルキル、から選択され、R2及びR3は、互いに独立的に水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、C6-C10アルC1-C7アルキル、C1-C7アルコキシカルボニル、C1-C7アルキルアミドC1-C7アルキル、、-NR13R14、から選択され、R11、R12、R13、R14、R15、及びR16は、互いに独立的に水素、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、ヘテロシクロアルキルC6-C12アリール、C3-C12ヘテロアリールであり、R11及びR12、R14及びR15は、互いにアルキレン、オキシアルキレン、又はアミノアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよく、nは1~4の整数であり、R2及びR3のC6-C12アリール及びR11とR12から形成された複素環はハロゲン、ヒドロキシ、C1-C7アルキル、C6-C10アリール、C3-C6シクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキルカルボニル、5又は6員のシクロアルキルスルホニル、5又は6員のヘテロアリール、C1-C6アルコキシ、C1-C7アルコキシカルボニル、C1-C7アルキルカルボニル、C3-C6シクロC1-C7アルキルカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルカルボニル、C3-C10ヘテロアリールカルボニル、C6-C10アリールカルボニル、C1-C7アルキルスルホニル、アミノC1-C7アルキルカルボニル、C1-C7アルキルオキシカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルオキシカルボニル、アミノ、C1-C7アルキルアミノ、C1-C7アルキルアミド、C1-C7アルキルカルバモイル、C1-C7アルキルスルホンアミド、又はでさらに置換されてもよく、R21及びR22は互いに独立的にC1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C12アリール、又はR21とR22が互いにアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよい。本発明に記載したアルキル、アルコキシ、及びその他のアルキル部分を含む置換体は、直鎖又は粉砕形態を皆含み、本発明において、C1-C7アルキルは、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル、i-ペンチル、n-ヘキシル、n-ヘプチルを含み、C1-C6アルコキシは、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、i-プロポキシ、n-ブトキシ、i-ブトキシ、t-ブトキシ、n-ペントキシ、i-ペントキシ、n-ヘキシルオキシを含み、C3-C6シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルを含み、また、C6-C12アリールは、フェニル、ナフチル、ビフェニル、アントリルなどを含む。5員又は6員の複素環は、脂肪族複素環とヘテロアリールを皆含み、特にヘテロシクロアルキルは、すなわち脂肪族複素環は、モルホリニル、チオモルホリニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリドニル、ピペリドニル、オキサゾリジノニル、チアゾリジノリルを含み、ヘテロアリールは、フリル、チオフェニル、ピロリル、ピラニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、トリアジニル、テトラジニル、トリアゾリル、テトラゾリル、フラザニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニルなどの単環ヘテロアリール、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾフラニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソキサゾリル、ベンゾオクサゾリル、イソインドリル、インドリル、インダゾリル、ベンゾチアジアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノリジニル、キノキサリニル、カルバゾリル、フェナントリジニル、ベンゾジオキゾリルなどの多環式ヘテロアリールなどを含む。また、本発明は、より具体的に前記化学式1において、R1は、C1-C7アルキルであり、R2は、水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C6-C12アリール、C6-C12アルC1-C7アルキルから選択され、R3は、水素、ハロゲン、C1-C7アルキル、C6-C12アリール、C1-C7アルコキシカルボニル、から選択され、R11及びR12は、互いに独立的に水素、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、ヘテロシクロアルキルC6-C12アリール、C3-C12ヘテロアリールであり、R11及びR12は、互いにアルキレン、オキシアルキレン又はアミノアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよく、nは、1~4の整数であり、R2及びR3のC6-C12アリール及びR11とR12から形成された複素環は、ハロゲン、ヒドロキシ、C1-C7アルキル、C6-C10アリール、C3-C6シクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキルカルボニル、5又は6員のシクロアルキルスルホニル、5又は6員のヘテロアリール、C1-C6アルコキシ、C1-C7アルコキシカルボニル、C1-C7アルキルカルボニル、C3-C6シクロC1-C7アルキルカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルカルボニル、C3-C10ヘテロアリールカルボニル、C6-C10アリールカルボニル、C1-C7アルキルスルホニル、アミノC1-C7アルキルカルボニル、C1-C7アルキルオキシカルボニル、C6-C10アルC1-C7アルキルオキシカルボニル、アミノ、C1-C7アルキルアミノ、C1-C7アルキルアミド、C1-C7アルキルカルバモイル、C1-C7アルキルスルホンアミド、又はでさらに置換されてもよく、R21及びR22は、互いに独立的にC1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C12アリール、又はR21とR22が互いにアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよい。より望ましくは、化学式1で表される複素環化合物は、前記化学式1において、R1はメチルであり、R2はベンジル、フェニルであり、R3は互いに独立的にC1-C7アルコキシカルボニル、から選択され、R11及びR12は互いに独立的に水素、C1-C7アルキル、C3-C6シクロアルキル、C6-C10アリール、ヘテロシクロアルキルC6-C12アリール、C3-C12ヘテロアリールであり、R11及びR12は互いにアルキレン、オキシアルキレン又はアミノアルキレンによって結合し、5員又は6員の複素環を形成してもよく、nは1~4の整数であってもよい。また、本発明による複素環化合物は、下記化学式2を含んでもよい。[化学式2]前記化学式2において、Aは、CH2又はNR31であり、R31は、水素、C1-C7アルキル、C1-C7アルキルカルボニル、C3-C6シクロアルキルカルボニルから選択され、前記R2は、ベンジル、フェニルであり、R2のベンジル及びフェニルは、ハロゲン、C1-C7アルキル、5又は6員のヘテロシクロアルキルでさらに置換される。本発明による複素環化合物の例を幾つか挙げれば、下記構造から選択することができるが、これらに限定されることはない。本発明による化学式1の化合物は、限定されるものではないが、下記の反応式1の経路を介して製造することができる。[反応式1]また、本発明は、本発明による化学式1で表される複素環化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を含む炎症性皮膚疾患の治療及び予防のための医薬組成物を提供し、前記炎症性皮膚疾患は、皮膚バリヤ損傷、皮膚炎症、又は乾癬、アトピー性皮膚炎、皮膚内の色素沈着post-inflammatoryhyperpigmentation:PIH、掻痒症を含むことができるが、これらに限定されることはない。また、本発明は、本発明による化学式1で表される複素環化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を含む癌の転移、胃腸関係の疾患、喘息、肝硬変の治療及び予防のための医薬組成物を含む。また、本発明は、本発明による化学式1で表される複素環化合物、又はこれらの薬学的に許容される塩を含むPAR-2proteaseactivatedreceptor-2阻害剤の組成物を提供する。また、本発明は、本発明による化学式1で表される複素環化合物を含む化粧品組成物を提供する。本発明は、化学式1で表される複素環化合物を提供し、本発明による化学式1の化合物又はこれらの塩は、PAR-2proteaseactivatedreceptor-2阻害剤に高い活性を有する。PAR-2の場合、主に炎症や心血管系疾患、癌、特に癌の転移、炎症性腸疾患inflammatoryBoweldisease;IBDなどを含む胃腸関係の疾患、喘息、肝硬変などの疾患において重要な役割を行うものと知られている。このように、PAR-2が関与する疾患が主に難治性の慢性疾患であるという点において、効果的なPAR-2阻害剤の開発が大きな商業的可能性を有すると言える。特に皮膚において、PAR-2は、炎症以外に皮膚内の色素沈着と掻痒症誘発などの重要な反応に関与すると知られており、以外にも、皮膚のバリヤ機能保持、創傷治癒などにおいてもPAR-2が重要な役割をすると報告されており、PAR-2に対する阻害剤が皮膚疾患の治療においても可能性が高い。このような多様な皮膚疾患が同時に表れる皮膚疾患のアトピー性皮膚炎の場合、難治性慢性炎症性皮膚疾患として、深刻な掻痒症と皮膚バリヤ損傷、炎症後色素沈着post-inflammatoryhyperpigmentation:PIHなどのようにPAR-2の活性化によって表れる多様な症状が同時に表れるという点でPAR-2阻害剤の1次的適用の可能性が最も高い疾患と判断される。また、皮膚損傷部位において、PAR-2の発現が増加していることが報告されており、このような損傷部位にPAR-2阻害効能を有する成分の処置を施す場合、損傷治癒が促進されると報告されている。したがって、本発明による化学式1の化合物又はこれらの塩は、皮膚バリヤ損傷、皮膚炎症、又はアトピー性皮膚炎などの炎症性疾患の治療及び予防をはじめとして、皮膚損傷治癒の目的で使用することができ、医薬品や化粧品組成物として有用である。また、本発明による化学式1の化合物又はこれらの塩を含むPAR-2proteaseactivatedreceptor-2阻害剤として有用である。本発明は、新規の複素環化合物として、前記の化学式1で表されるベンゾイミダゾール化合物を提供する。本発明による化学式1の化合物は、炎症性皮膚疾患の皮膚バリヤ損傷、皮膚炎症、又は乾癬、NethersonSyndrome、アトピー性皮膚炎の治療及び予防に関連がある機転として知られているPAR-2に対する阻害活性を評価するためにインビトロinvitro、インビボinvivo実験評価を実施した結果、本発明化合物は細胞内でPAR-2に対する阻害活性を確認することができた。したがって、本発明は、化学式1の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を含む炎症性皮膚疾患の治療及び予防のための医薬組成物、化粧品組成物、及びPAR-2proteaseactivatedreceptor-2阻害剤の組成物を提供し、前記炎症性皮膚疾患は、皮膚バリヤ損傷、皮膚炎症を伴う乾癬、NethersonSyndrome、アトピー性皮膚炎などを含む。さらに、PAR-2発現抑制が損傷治癒を促進する点を用いて皮膚損傷治癒のための医薬組成物を提供することができる。本発明において、前記医薬組成物又はPAR-2阻害剤は、活性成分として本発明による化学式1の化合物を0.001~90重量、より好ましくは、0.001~50重量を含んでもよい。また、本発明による炎症性皮膚疾患の治療及び予防又は皮膚損傷治癒のための医薬組成物及びPAR-2proteaseactivatedreceptor-2阻害剤の組成物は、外用剤や注射剤、吸入剤、又は経口剤などを含む生体に投与可能なすべての組成物を含む。特に皮膚や粘膜に適用可能な剤形については特に制限されることはないが、液状、乳液状、懸濁液状、クリーム状、軟膏状、ゲル状、ゼリー状、スプレー状に製造されてもよい。以下、下記の実施例と試験例によって、本発明を詳細に説明するが、本発明がこれらの例に限定されることはない。実施例12-メチル-1-m-トリル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イルピペリジン-1-イルメタノンCompound982-methyl-1-m-tolyl-1H-benzo[d]imidazol-5-ylpiperidin-1-ylmethanoneCompound98の製造[段階1]メチル4-フルオロ-3-ニトロ安息香酸メチルmethyl4-fluoro-3-nitrobenzoateの製造4-フルオロ-3-ニトロ安息香酸4-Fluoro-3-nitrobenzoicacid3.00g、16.2mmolをメタノール40mLに溶かして塩化チオニルthionylchloride3.5mL,48.6mmolを0°Cでゆっくり加える。ゆっくり室温で温度を上げた後、1時間の間還流撹拌させた。溶媒を減圧濃縮して除去し、象牙色の固体で標題化合物を得た3.12g,97。1HNMR600MHz,chloroform-d1d=8.73dd,J=2.4Hz,7.5Hz,1H、8.34m,1H、7.42t,J=9.0Hz,1H、3.99s,3H[段階2]メチル3-アミノ-4-m-トリルアミノ安息香酸エステルmethyl3-amino-4-m-tolylaminobenzoateの製造段階1で得た化合物1.30g,6.53mmolとm-トルイジンm-toluidine1.40g,13.1mmol、そして炭酸カリウムpotassiumcarbonate870mg,6.53mmolをアセトニトリルacetonitrileに溶かして、12時間の間還流攪拌した。減圧濃縮して、溶媒を除去した後、ヘキサンhexaneを加えて生成された沈殿を濾過し、ヘキサンで洗って橙色の固体でメチル3-ニトロ-4m-トリルアミノ安息香酸エステルmethyl3-nitro-4-m-tolylaminobenzoateを得た1.37g,73。前記の化合物1.00g,3.49mmolをMeOH50mLに溶かした後、50mgのPd/Cを加えて1気圧の水素下で2時間の間攪拌した。反応混合物をセライトceliteで濾過して濾過液を減圧濃縮し、標題化合物を黄色の固体で得た0.90g,99。1HNMR600MHz,chloroform-d1d=7.46m,2H、7.13-7.15m,2H、6.74m,3H、5.59s,1H、3.85s,3H、3.65s,2H、2.29s,3H[段階3]2-メチル-1-m-トリル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-カルボン酸2-methyl-1-m-tolyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylicacidの製造段階2で得た化合物0.46g,1.80mmolとオルト酢酸トリエチルtriethylorthoacetate1.46g,9.00mmolの混合物を酢酸aceticacid3mLに溶かして12時間の間還流攪拌した。反応混合物を室温で冷ました後、減圧濃縮して酢酸エチルethylacetate20mLで薄めた後、炭酸ナトリウム飽和水溶液30mLで2回、水30mLで1回順番に洗った後、有機層を取って無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮してカラムクロマトグラフィーで精製してメチル2-メチル-1-m-トリル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-カルボン酸methyl2-methyl-1-m-tolyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylateを紫色の固体で得た436mg,86。前記の化合物398mg,1.42mmolを水酸化リチウム水和物300mg,7.10mmol下でTHF/H2O3/1混合溶液8mLに溶かして、常温で12時間の間攪拌した後、減圧濃縮した。1NHCl水溶液を加えて生成された固体を濾過し、2-メチル-1-m-トリル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-カルボン酸2-methyl-1-m-tolyl-1H-benzo[d]imidazole-5-carboxylicacidを紫色の固体で得て、別途錠剤過程なしで次の反応に使用した330mg,88。[段階4]2-メチル-1-m-トリル-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イルピペリジン-1-イルメタノンCompound982-methyl-1-m-tolyl-1H-benzo[d]imidazol-5-ylpiperidin-1-ylmethanoneCompound98の製造段階3で得た化合物80.0mg,0.300mmolをDMFに溶かした後、HOBT81mg,0.6mmol、TEA126uL,1.2mmol、ピペリジン28.1mg0.330mmolを入れて0°CでEDC塩酸塩25mg,0.13mmolを入れた後、常温で12時間攪拌した。反応混合物をエチルアセテート32mLで希釈した後、水32mLで洗った。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した後に減圧濃縮してカラムクロマトグラフィーMC:MeOH=30:1を施行して標題化合物を得た79.4mg,79。1HNMR600MHz,chloroform-d1d=7.72m,1H、7.44t,J=7.2Hz,1H、7.31d,J=7.8Hz,1H、7.26dd,J=1.8Hz,8.4Hz,1H、7.10-7.13m,3H、3.70br,2H、3.39br,2H、2.49s,3H、2.43s,3H、1.51-1.66brm,6H前記実施例1で製造されたCompound98に対してPAR-2阻害効能を評価するためにインビトロinvitro及びインビボinvivo実験を行った。<PAR-2阻害剤のインビトロ活性評価>試験例1:CalciumImmobilizationAssay合成された物質のPAR-2に対する阻害活性を評価するために一次的に細胞内のカルシウムイオンの濃度変化をリアルタイムで測定できる定量法assaysystemを構築し、これを用いて評価を実施した。PAR-2は、GPCRG-proteincoupledreceptorの一種として、PAR-2が細胞内で活性化すれば、PLC-bphospholipaseC-bが活性化しながらPIP2phosphatidylinositol4,5-bisphosphateを各々IP3inositoltriphosphateとDAGdiacylglycerolに分解するようになる。この時、生成されるIP3が細胞内のカルシウムイオンcalciumion格納所のERendoplasmicreticulumでカルシウムイオンの分泌を促進するようになり、細胞内のカルシウムイオンの増加が表れるようになる。既存の研究結果に基づいて、PAR-2の活性化による細胞内のカルシウムイオン濃度増加を抑制できる物質を検索できるinvitroscreeningassaysystemを構築した。実験に用いたPAR-2活性化制としては、活性化ペプチドactivatingpeptide;APを利用し、細胞内のカルシウムイオン濃度を検出するための試薬としては、MolecularProbe社のCalcium-4assaykitを使用した。実験に用いた細胞株はPAR-2が過剰発現した細胞株のHCT-15を利用し、阻害候補物質を5分間処理した後、APを処理してMolecularDevice社のFlexStationIIを用いて、蛍光の変化を2分間リアルタイムで観察した。このようなプロトコルprotocolを用いて合成された物質のPAR-2阻害活性を評価し、実施例1で製造されたCompound98の試験プロファイルassayprofileは、図1に示した。試験例2:β-ArrestinGPCRAssayCalciumimmobilizationassay以外にPAR-2の活性化を検出できるインビトロ試験プロトコルinvitroassayprotocolをさらに導入し、選別された物質に対して活性を測定した。最初にPAR-2の活性化によって、一次的に発生する細胞内の反応のβ-arrestinの蓄積を検出できるDiscoveRx社のPathHunterTMβ-arrestinGPCRassaykitを用いてCompound98に対してPAR-2の阻害活性を測定した。測定の結果、Calciumimmobilizationassayとは若干異なるIC50値を表すと観察された表1。試験例3:ConfocalMicroscopyPAR-2の活性化を視覚的に確認するために、既存の参考文献を参照して次のような構造の細胞株を製作し、共焦点顕微鏡を用いてPAR-2の活性化を観察した。細胞株としては、KNRKcellKirstenMurineSarcomaVirustransformedratkidneyepithelialcellを利用し、通常はPAR-2が発現しない細胞株である。KNRKcellに各々N-terminalには、Flagepitopeをタグ付けtaggingし、C-terminalにはMycepitopeをタグ付けし、stabletransfectedcellを構築した。このように製造したKNRK-PAR-2細胞株に対して各々FlagとMycを二重染色法doublestainingをして、共焦点顕微鏡でPAR-2の活性化有無を観察[trypsin]=1μM、[SLIGKVAP]=100μMした。PAR-2が活性化しない状態では、FlagとMycが二重に染色されて、結合された映像mergedimageで黄色映像が表れることに比べ、PAR-2が活性化する場合、Flagが下がりながら、赤い映像が表れた。KNRK-PAR-2細胞株にトリプシン活性化ペプチドTrypsin,activatingpeptideSLIGKVと共に選別された阻害物質Compound98を同時に処理[trypsin]=1μM,[SLIGKVactivatingpeptide]=100μM,[Compound98]=200μMした結果、黄色がかったyellowish映像が表れることを観察し、PAR-2の活性化が抑制されることを確認した。<PAR-2阻害剤のインビボ活性評価>試験例4:急性皮膚バリヤ回復実験選別された化合物に対して無毛マウスを用いて急性皮膚バリヤ損傷後の回復率を評価した。6-8週齢の無毛マウスSKH-1に対し、両側腹部の皮膚に繰り返しのテープストリッピングによって、硬皮水分損失量が約35~40g/m2/hrの水準になるようにして、各々の試料を塗布した。バリヤ損傷直前、直後、塗布後3時間、6時間で硬皮水分損失量をTEWameterCourageKhazaka,Germanyで測定して下のような式によって硬皮水分損失回復率を計算した。式中、TEWLaはimmidiatelyafterbarrierdisruptionの時のTEWL値であり、TEWLbはbaselineにおけるTEWL値であり、TEWLcはindicatedtimeにおけるTEWL値である。実験結果Compound98では、1.0を処理した群で早い回復が観察された。また、Compound98では、0.1を処置した群で統計学的に有意な差が観察された。既存の研究結果によれば、皮膚バリヤ損傷後損傷された部位の表皮内でタンパク質分解酵素の活性増加が表れ、これは表皮内PAR-2の活性増加として表れる。PAR-2の活性化を抑制する場合、皮膚バリヤ損傷が早く表れると報告されており、本研究でもPAR-2阻害剤が皮膚バリヤ回復を促進する同一の結果を確認することができた。このような研究結果は、Compound98が皮膚バリヤ損傷後回復促進において最も良い活性を表す物質であることを示すことを図3においても知ることが出来る。試験例5:Oxazolonemodel選別された物質に対して慢性皮膚炎動物モデルを用いて効能を評価した。無毛マウスにハプテンhaptenの一種であるオキサゾロンoxazoloneを持続的に塗布して、慢性皮膚炎を誘導した動物モデルを使用した。最近開発されたオキサゾロンのモデルは、多様なアトピー性皮膚炎の症状が比較的正確に表れると報告されており、本発病者などが行った先行研究においても一般的なアトピー性皮膚炎の多様な症状が臨床的に表れる症状と類似して表れることを確認した。慢性皮膚炎動物モデル構築のために、6週齢の無毛マウスSKH-1に5のオキサゾロンを塗布して感作し、1週間後から0.1のオキサゾロンを2日に1回ずつ2週間塗布して、皮膚炎症状を誘発した。誘発が終わった動物に試料を1回/1日の間隔で3日間塗布して、多様な皮膚機能と皮膚厚さの変化を観察した。最終的に皮膚組織を生検して組織学的観察を行った。実験に用いた陽性対照群としては、比較的低い効能potencyのステロイド剤であるデソニドdesonide0.05製剤を使用し、硬皮水分損失量、皮膚角質層内の水分含有量、皮膚厚さの変化を観察した。Compound98に対しオキサゾロンモデルoxazolonemodelを用いて抗炎効能を評価した結果は次の通りである。硬皮水分損失量の回復と角質層内の水分含有量の回復において、Compound98を処置した群で対照群に比べて回復の促進が観察された図4,図5。5日間の処置が終わった組織を生検し、HE染色を施行して皮膚厚さの変化を測定した結果、すべての処置郡で非処置郡に比べて、統計学的に有意な皮膚厚さの減少が表れることを確認した図6。PCNA染色結果対照群に比べてCompound98を処置した部位では、統計的に有意なPCNA陽性ケラチノサイトpositivekeratinocyteの減少が観察された図7。"