"配列番号1、3、および5で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。配列番号1、3、および5で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列から構成される単離核酸分子。下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子:a配列番号1、配列番号3、または配列番号5で示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子:a配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドと少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子:a配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の置換を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;b配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の挿入を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;c配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の内部欠失を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;d配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25のアミノ酸のCおよび/またはN末端トランケーションを有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;e配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、C末端トランケーション、またはN末端トランケーションから選択される1~25のアミノ酸の修飾を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;ならびにfa-eのいずれかに相補的なヌクレオチド配列。配列番号7、9、および11で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。配列番号7、9、および11で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列から構成される単離核酸分子。下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子:a配列番号7、配列番号9、または配列番号11で示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子:a配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドと少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子:a配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の置換を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;b配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の挿入を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;c配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の内部欠失を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;d配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25のアミノ酸のCおよび/またはN末端トランケーションを有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;e配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、C末端トランケーション、またはN末端トランケーションから選択される1~25のアミノ酸の修飾を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;ならびにfa-eのいずれかに相補的なヌクレオチド配列。請求項1~10のいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクター。請求項11に記載のベクターを含む宿主細胞。真核細胞である、請求項12に記載の宿主細胞。原核細胞である、請求項12に記載の宿主細胞。請求項12に記載の宿主細胞を、ポリペプチドを発現させるのに好適な条件下で培養し、任意で前記ポリペプチドを培養物から単離することを含む、ポリペプチドを生成させるプロセス。請求項1~10のいずれか一項に記載の核酸分子または請求項11に記載のベクター、および薬学的に許容される担体を含む組成物。請求項1~10のいずれか一項に記載の核酸分子の少なくとも2つおよび薬学的に許容される担体を含み、前記核酸分子は異なるヌクレオチド配列を有する組成物。配列番号1、3、および5で示されるヌクレオチド配列の組み合わせを含む、請求項17に記載の組成物。配列番号2、4、および6で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。配列番号2、4、および6で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列から構成される単離ポリペプチド。少なくとも200のアミノ酸残基を有し、配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対し少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。配列番号8、10、および12で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。配列番号8、10、および12で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列から構成される単離ポリペプチド。少なくとも200のアミノ酸残基を有し、配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対し少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。請求項19~24のいずれか一項に記載のポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む組成物。請求項19~24のいずれか一項に記載のポリペプチドの少なくとも2つおよび薬学的に許容される担体を含み、前記ポリペプチドは異なる配列を有する組成物。配列番号2、4、および6で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの組み合わせを含む、請求項26に記載の組成物。請求項16~18および25~27のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容される担体を含む免疫原性組成物。請求項16~18および25~27のいずれか一項に記載の組成物および医薬担体を含み、細胞表層タンパク質OspAタンパク質に特異的に結合する抗体の産生を誘導する、免疫原性組成物。請求項16~18および25~27のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容される担体を含み、ボレリアに特異的に結合する抗体の産生を誘導する、免疫原性組成物。請求項16~18および25~27のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容される担体を含み、ボレリアを中和する抗体の産生を誘導する、免疫原性組成物。ボレリアは、ボレリアブルグドルフェリセンスラトである、請求項30または31に記載の組成物。ボレリアは、ボレリアアフゼリ、ボレリアガリニまたはボレリアブルグドルフェリセンスストリクトである、請求項30または31に記載の組成物。ボレリアは、ボレリアジャポニカ、ボレリアアンダーソニ、ボレリアビセッティ、ボレリアシニカ、ボレリアツルジ、ボレリアタヌキイ、ボレリアバライシアナ、ボレリアルジタニエ、ボレリアスピエルマニ、ボレリアミヤマトイまたはボレリアロネスタルである、請求項30または31に記載の組成物。請求項28~34のいずれか一項に記載の免疫原性組成物および薬学的に許容される担体を含む、ワクチン組成物。請求項35に記載のワクチン組成物を少なくとも第2のワクチン組成物と共に含む、混合ワクチン。前記第2のワクチン組成物は、マダニ媒介疾患に対して防御する、請求項36に記載の混合ワクチン。前記マダニ媒介疾患は、ロッキー山紅斑熱、バベシア症、回帰熱、コロラドダニ熱、ヒト単球エーリキア症HME、ヒト顆粒球エーリキア症HGE、南部ダニ関連発疹病STARI、野兎病、ダニ麻痺、ポワッサン脳炎、Q熱、クリミアコンゴ出血熱、キタウクゾーン病、ボタン熱、またはダニ媒介脳炎である、請求項37に記載の混合ワクチン。前記第2のワクチン組成物は下記からなる群より選択されるワクチンである、請求項37に記載の混合ワクチン:ダニ媒介脳炎ワクチン、日本脳炎ワクチン、およびロッキー山紅斑熱ワクチン。前記第2のワクチン組成物は、ボレリア感染またはライム病に対する免疫化に適合する季節的免疫化スケジュールを有する、請求項36に記載の混合ワクチン。被験体において免疫学的応答を誘導するための方法であって、請求項28~34のいずれか一項に記載の組成物を被験体に、免疫学的応答を誘導するのに有効な量で投与する工程を含む、方法。前記免疫学的応答は、抗OspA抗体の産生を含む、請求項41に記載の方法。被験体においてボレリア感染またはライム病を防止または治療するための方法であって、請求項35または36に記載のワクチン組成物を前記被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止または治療するのに有効な量で投与する工程を含む、方法。請求項19~24のいずれか一項に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体またはそのフラグメント。被験体においてボレリア感染またはライム病を防止または治療するための方法であって、請求項44に記載の抗体またはそのフラグメントを前記被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止または治療するのに有効な量で投与する工程を含む、方法。被験体においてボレリア感染またはライム病を防止または治療するための方法であって、請求項28~34のいずれか一項に記載のワクチン組成物で哺乳類を免疫化することにより生成された抗体またはそのフラグメントを前記被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止または治療するのに有効な量で投与する工程を含む、方法。前記抗体またはそのフラグメントは、過免疫血清、過免疫血漿、またはその精製免疫グロブリン画分である、請求項46に記載の方法。被験体においてボレリア感染またはライム病を受動的に防止するための方法であって、請求項28~34のいずれか一項に記載のワクチン組成物で哺乳類を免疫化することにより生成された抗OspA抗体またはそのフラグメントを前記被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止するのに有効な量で投与する工程を含み、前記抗体またはそのフラグメントは精製免疫グロブリン調製物または免疫グロブリンフラグメント調製物である、方法。被験体においてボレリア感染またはライム病を防止ための方法であって、請求項28~34のいずれか一項に記載のワクチン組成物で被験体を免疫化した後生成された抗OspAモノクローナル抗体またはそのフラグメントを前記被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止するのに有効な量で投与する工程を含む、方法。前記モノクローナル抗体またはそのフラグメントはヒト化される、請求項49に記載の方法。前記モノクローナル抗体はF237/BK2である、請求項49に記載の方法。本発明は、ライム病またはライムボレリア症の防止および治療に関連する当技術分野における1つ以上の要求に対処する。本発明は、配列番号1、3、および5で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子を含む。いくつかの態様では、本発明は、配列番号1、3、および5で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列から構成される単離核酸分子を含む。他の態様では、本発明は、下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子を含む:a配列番号1、配列番号3、または配列番号5で示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。さらなる態様では、本発明は下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子を含む:a配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドと少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。さらに別の態様では、本発明は、下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子を含む:a配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の置換を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;b配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の挿入を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;c配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の内部欠失を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;d配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、1~25のアミノ酸のCおよび/またはN末端トランケーションを有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;e配列番号2、配列番号4、または配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、C末端トランケーション、またはN末端トランケーションから選択される1~25のアミノ酸の修飾を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;ならびにfa-eのいずれかに相補的なヌクレオチド配列。本発明は、配列番号7、9、および11で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子を含む。いくつかの態様では、本発明は、配列番号7、9、および11で示される配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列から構成される単離核酸分子を含む。追加の態様では、本発明は、下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子を含む:a配列番号7、配列番号9、または配列番号11で示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。さらなる態様では、本発明は、下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子を含む:a配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドと少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;およびbaに相補的なヌクレオチド配列。さらに別の態様では、本発明は下記からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む単離核酸分子を含む:a配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の置換を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;b配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の挿入を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;c配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25の保存的アミノ酸の内部欠失を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;d配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、1~25のアミノ酸のCおよび/またはN末端トランケーションを有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;e配列番号8、配列番号10、または配列番号12で示されるアミノ酸配列を含み、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、C末端トランケーション、またはN末端トランケーションから選択される1~25のアミノ酸の修飾を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列;ならびにfa-eのいずれかに相補的なヌクレオチド配列。本発明は、本明細書で記載される宿主細胞を培養することによりポリペプチドを生成させるベクター、宿主細胞、およびプロセスを含む。いくつかの態様では、本発明は、本明細書で記載される核酸分子のいずれかを含むベクターを含む。他の態様では、本発明は、そのようなベクターを含む宿主細胞を含む。いくつかの態様では、宿主細胞は、真核細胞である。他の態様では、宿主細胞は原核細胞である。様々な態様では、ポリペプチドを生成させるプロセスは、本明細書で記載される宿主細胞を、ポリペプチドを発現させるのに好適な条件下で培養することおよび任意でポリペプチドを培養物から単離することを含む。様々な態様では、本発明は、これらのキメラ核酸分子のいずれかまたはそのような核酸分子を含む任意のベクターおよび薬学的に許容される1つまたは複数の担体を含む組成物を含む。本発明は、本明細書で記載される核酸分子のいずれか、または本明細書で記載されるベクターのいずれか、および薬学的に許容される担体を含む組成物を含む。いくつかの態様では、本発明は、本明細書で記載される核酸分子の少なくとも2つおよび薬学的に許容される担体を含み、核酸分子は異なるヌクレオチド配列を有する組成物を含む。特定の態様では、本発明は、配列番号1、3、および5で示されるヌクレオチド配列の組み合わせを含む組成物を含む。本発明は、配列番号2、4、および6で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドを含む。いくつかの態様では、本発明は配列番号2、4、および6で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列から構成される単離ポリペプチドを含む。追加の態様では、本発明は、少なくとも200のアミノ酸残基を有し、配列番号2、4、および6で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対し少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有する単離ポリペプチドを含む。さらなる態様では、本発明は配列番号8、10、および12で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドを含む。さらに別の態様では、本発明は、配列番号8、10、および12で示される配列からなる群より選択されるアミノ酸配列から構成される単離ポリペプチドを含む。いくつかの態様では、本発明は、少なくとも200のアミノ酸残基を有し、配列番号8、10、および12で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対し少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99パーセントの配列相同性を有する単離ポリペプチドを含む。本発明は、本明細書で記載されるポリペプチドのいずれかおよび薬学的に許容される担体を含む組成物を含む。いくつかの態様では、本発明は、本明細書で記載されるポリペプチドの少なくとも2つおよび薬学的に許容される担体を含み、ポリペプチドは異なるアミノ酸配列を有する組成物を含む。特定の態様では、本発明は、配列番号2、4、および6で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの組み合わせを含む組成物を含む。本発明は、免疫原性組成物を含む。いくつかの態様では、本発明の免疫原性組成物は、本明細書で記載されるいずれかの組成物および薬学的に許容される担体を含む。様々な態様では、免疫原性組成物は、細胞表層タンパク質AOspAタンパク質に特異的に結合する抗体の産生を誘導する特性を有する。一定の態様では、免疫原性組成物は、ボレリアに特異的に結合する抗体の産生を誘導する特性を有する。特定の態様では、免疫原性組成物は、ボレリアを中和する抗体の産生を誘導する特性を有する。一定の態様では、ボレリアは、ボレリアブルグドルフェリセンスラトである。特定の態様では、ボレリアは、ボレリアアフゼリ、ボレリアガリニまたはボレリアブルグドルフェリセンスストリクトである。さらなる態様では、ボレリアは、ボレリアジャポニカ、ボレリアアンダーソニ、ボレリアビセッティ、ボレリアシニカ、ボレリアツルジ、ボレリアタヌキイ、ボレリアバライシアナ、ボレリアルジタニエ、ボレリアスピエルマニ、ボレリアミヤマトイまたはボレリアロネスタルである。いくつかの態様では、抗体は動物により産生される。さらなる態様では、動物は哺乳類である。さらに別の態様では、哺乳類はヒトである。本発明は、ワクチン組成物を含む。いくつかの態様では、本発明のワクチン組成物は、本明細書で記載されるいずれかの免疫原性組成物および薬学的に許容される担体を含む。様々な態様では、本発明は混合ワクチンを含む。一定の態様では、本発明の混合ワクチンは、本明細書で記載されるいずれかのワクチン組成物を少なくとも第2のワクチン組成物と共に含む。いくつかの態様では、第2のワクチン組成物は、マダニ媒介疾患に対して防御する。様々な態様では、マダニ媒介疾患は、ロッキー山紅斑熱、バベシア症、回帰熱、コロラドダニ熱、ヒト単球エーリキア症HME、ヒト顆粒球エーリキア症HGE、南部ダニ関連発疹病STARI、野兎病、ダニ麻痺、ポワッサン脳炎、Q熱、クリミアコンゴ出血熱、キタウクゾーン病、ボタン熱、またはダニ媒介脳炎である。他の態様では、第2のワクチン組成物は下記からなる群より選択されるワクチンである:ダニ媒介脳炎ワクチン、日本脳炎ワクチン、およびロッキー山紅斑熱ワクチン。様々な態様では、第2のワクチン組成物は、ボレリア感染またはライム病に対する免疫化に適合する季節的免疫化スケジュールを有する。本発明は、被験体において免疫学的応答を誘導するための方法を含む。様々な態様では、そのような方法は、本明細書で記載される免疫原性組成物またはワクチン組成物のいずれかを被験体に、免疫学的応答を誘導するのに有効な量で投与する工程を含む。一定の態様では、免疫学的応答は、抗OspA抗体の産生を含む。本発明は、本明細書で記載されるポリペプチドのいずれかに特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを含む。本発明は、被験体においてボレリア感染またはライム病を防止または治療するための方法を含む。様々な態様では、そのような方法は、本明細書で記載されるワクチン組成物のいずれかまたは本明細書で記載される混合ワクチンのいずれかを被験体にボレリア感染またはライム病を防止または治療するのに有効な量で投与する工程を含む。他の態様では、そのような方法は、本明細書で記載される抗体のいずれかを前記被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止または治療するのに有効な量で投与する工程を含む。一定の態様では、そのような方法は、請求項28~34のいずれか一項に記載のワクチン組成物で哺乳類を免疫化することにより生成された抗体またはそのフラグメントを被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止または治療するのに有効な量で投与する工程を含む。いくつかの態様では、抗体またはそのフラグメントは、過免疫血清、過免疫血漿、またはその精製免疫グロブリン画分である。本発明は、被験体においてボレリア感染またはライム病を受動的に防止するための方法であって、本明細書で記載されるワクチン組成物のいずれかで哺乳類を免疫化することにより生成された抗OspA抗体またはそのフラグメントを被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止するのに有効な量で投与する工程を含み、抗体またはそのフラグメントは精製免疫グロブリン調製物または免疫グロブリンフラグメント調製物である、方法を含む。本発明は、被験体においてボレリア感染またはライム病を防止するための方法であって、本明細書で記載されるワクチン組成物のいずれかで被験体を免疫化した後生成された抗OspAモノクローナル抗体またはそのフラグメントを被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止するのに有効な量で投与する工程を含む、方法を含む。いくつかの態様では、モノクローナル抗体またはそのフラグメントはヒト化される。特定の態様では、モノクローナル抗体はF237/BK2である。本発明は、薬剤の調製のための本発明の組成物の使用を含む。他の関連する態様もまた、本発明において提供される。前記概要は、本発明の全ての態様を規定することを意図せず、追加の態様は、他のセクション、例えば下記詳細な説明で記載される。文書全体は統合された開示として関連することが意図され、本明細書で記載される特徴の全ての組み合わせが、例えその特徴の組み合わせがこの文書の同じ文章、段落、またはセクションにおいて一緒に見られなくても、企図されることが理解されるべきである。本発明の他の特徴および利点は、下記詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、詳細な説明および特定の実施例は、本発明の特定の実施形態を示しているが、例示により示されるにすぎないことが理解されるべきであり、というのも、本発明の精神および範囲内にある様々な変更および改変は、この詳細な記載から当業者に明らかになるであろうからである。本発明は、ライム病またはボレリア感染のための免疫原性組成物またはワクチン組成物として送達させることができる抗原として有用なキメラOspA分子を提供する。本発明の実施形態が詳細に説明される前に、本発明は、その適用において下記説明で示される、または図および実施例で示される成分の構成および配列の詳細に限定されないことが理解されるべきである。本明細書で使用されるセクション見出しは、組織的目的にすぎず、記載された対象に限定するものと解釈されるべきではない。本出願において引用された参考文献は明確に参照により本明細書に組み込まれる。本発明は他の実施形態を含み、様々な様式で実施または実行される。また、本明細書で使用される表現および専門用語は説明のためのものであり、限定するものとみなすべきではないことが理解されるべきである。含む、備えるまたは有するという用語およびその変形は、その後に列挙されたアイテムまたはその等価物ならびに追加のアイテムを包含することを意味する。本発明の実施形態は、3つの異なる脂質付加されたOspA分子をコードする3つのキメラOspAコード配列の設計および合成において例示され、これらは全て共通の特徴を共有する。各キメラコード配列は、2つのOspA血清型を表し、キメラコード配列は、安全で著しく免疫原性で、B.ブルグドルフェリセンスラトs.l.による感染に対する被験体防御を可能にする安定なキメラOspA分子をコードするように設計された。1つの態様では、キメラOspA分子は、1つのOspA血清型由来の近位部を、別のOspA血清型由来の遠位部と共に含み、両方の親ポリペプチドの防御特性を維持したままである。キメラOspA核酸分子は、大腸菌E.coli中で発現され、抗原を提供し、これは、混合ワクチンとして製剤化することができ、欧州におけるライム病またはボレリア感染と関連する6つ全ての流行性血清型血清型1-6に対する、および北米におけるライム病またはボレリア感染と関連する単一のOspA血清型に対する防御が提供される。血清型1-6を含むワクチンは、B.アフゼリ、B.ガリニ、およびB.ブルグドルフェリに対する防御を提供するので、ワクチンは世界的利用のために設計される。本発明はまた、1つの態様では、脂質付加されたOspA分子を生成するのに必要とされるリーダー配列をコードする核酸配列を除去することにより、3つの遺伝子の第1の組から誘導されるキメラOspAコード配列の第2の組の調製を含む。2つの組のコンストラクト脂質付加されたおよび脂質付加されていないポリペプチドを生じさせるは、発酵槽における生成の容易さを評価するためにバイオマス、安定性、生成収率など、異なる型の抗原がどれだけ容易に精製することができるかを評価するために、およびそれらの生物学的特性を比較するために安全性プロファイルおよび防御能力必要とされた。本発明は、本発明のキメラOspA分子を含む免疫原性組成物を含む。本発明は同様に、そのようなOspA分子を含むワクチンおよびワクチンキット、免疫原性組成物およびワクチンを製造するためのプロセスおよびヒトおよび獣医学的医学療法および防止における免疫原性組成物およびワクチンの使用を含む。本発明はさらに、本明細書で記載されるOspA組成物を使用してライム病またはボレリア感染に対して免疫化する方法およびライム病またはボレリア感染の防止のための薬剤の製造におけるOspA組成物の使用を含む。定義別記されない限り、本明細書で使用される技術および科学用語は全て、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。下記参考文献は、当業者に本発明で使用される用語の多くの一般的な定義を提供する:SingletonetalDICTIONARYOFMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGYTHECAMBRIDGEDICTIONARYOFSCIENCEANDTECHNOLOGYTHEGLOSSARYOFGENETICS5THEDRRiegeretalSpringerVerlagおよびHaleandMarhamTHEHARPERCOLLINSDICTIONARYOFBIOLOGY。下記略称が全体にわたって使用される。AAアミノ酸Ampアンピシリンbp塩基対B.アフゼリボレリアアフゼリB.ブルグドルフェリボレリアブルグドルフェリB.ガリニボレリアガリニDNAデオキシリボ核酸dNTPデオキシヌクレオチド三リン酸E.coli大腸菌GC含量グアニンおよびシトシン塩基を含む配列のパーセンテージhLFA-1ヒト白血球機能関連抗原-1HPLC高速液体クロマトグラフィーIP知的所有権IPTGイソプロピル-β-D-チオガラクトピラノシドKanカナマイシンkDaキロダルトンLBルリアブロスLipB細胞表層タンパク質B由来のリーダー配列Mabモノクローナル抗体OD光学密度OspA細胞表層タンパク質AOspB細胞表層タンパク質BPCRポリメラーゼ連鎖反応RNAリボ核酸s.l.センスラトs.s.センスストリクトSDSドデシル硫酸ナトリウムSMK大腸菌のための増殖培地ケトグルタル酸ソルビトール培地tRNA転移リボ核酸WCBワーキングセルバンク本明細書および添付の特許請求の範囲では、単数形1つのa、anおよびそのtheは、文脈上明確に別記されない限り、複数の言及を含むことがここでは留意されるべきである。本明細書では、下記用語は、別記されない限り、それらに属する意味を有する。遺伝子という用語は、1つ以上のポリペプチド、タンパク質または酵素の全てまたは一部を含むアミノ酸の配列をコードし、イントロン、および制御DNA配列、例えばプロモーターまたはエンハンサー配列、5’-非翻訳領域、または3’-非翻訳領域例えば、遺伝子が発現される条件に影響するを含むかまたは含まない可能性のあるDNA配列を示す。本開示では、OspA遺伝子は細菌性であり、よって、イントロンはない。コード配列という用語は、アミノ酸の配列をコードするが、イントロンまたは制御配列を含まないDNA配列を示す。同様に、本開示では、OspAコード配列は制御配列を含まない。核酸または核酸配列または核酸分子は一本鎖または二本鎖形態のいずれかのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマを示す。この用語は、周知のヌクレオチド類似体または修飾バックボーン残基または結合を含む核酸を含み、これらは合成、天然由来、および非天然由来であり、参照核酸と同様の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと同様に代謝される。そのような類似体としては、ホスホロチオエート、ホスホラミデート、メチルホスホネート、キラル-メチルホスホネート、2-O-メチルリボヌクレオチド、ペプチド-核酸PNAが挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、DNAおよびRNAの周知の塩基類似体、例えば、限定はされないが4-アセチルシトシン、8-ヒドロキシ-N6-メチルアデニン、アジリジニル-シトシン、プソイドイソシトシン、5-カルボキシヒドロキシルメチルウラシル、5-フルオロウラシル、5-ブロモウラシル、5-カルボキシメチルアミノメチル-2-チオウラシル、5-カルボキシ-メチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、N6-イソ-ペンテニルアデニン、1-メチルアデニン、1-メチルプソイドウラシル、1-メチルグアニン、1-メチルイノシン、2,2-ジメチル-グアニン、2-メチルアデニン、2-メチルグアニン、3-メチルシトシン、5-メチルシトシン、N6-メチルアデニン、7-メチルグアニン、5-メチルアミノメチルウラシル、5-メトキシアミノ-メチル-2-チオウラシル、β-D-マンノシルキューオシン、5’-メトキシカルボニル-メチルウラシル、5-メトキシウラシル、2-メチルチオ-N6-イソペンテニルアデニン、ウラシル-5-オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル-5-オキシ酢酸、オキシブトキソシン、プソイドウラシル、キューオシン、2-チオシトシン、5-メチル-2-チオウラシル、2-チオウラシル、4-チオウラシル、5-メチルウラシル、N-ウラシル-5-オキシ酢酸チルエステル、ウラシル-5-オキシ酢酸、プソイドウラシル、キューオシン、2-チオシトシン、および2,6-ジアミノプリンのいずれかから形成された分子を含む。別記されない限り、特定の核酸配列はまた、暗にその保存的修飾変異体例えば、縮重コドン置換および相補的配列、ならびに明確に示された配列を含む。具体的には、縮重コドン置換は、いくつかの態様では、1つ以上の選択されたまたは全てのコドンの第3位が、混合塩基および/またはデオキシイノシン残基により置換された配列を生成させることにより達成されるOhtsukaetalJBiolChem26026052608RossolinietalMolCellProbes89198。核酸という用語は、遺伝子、cDNA、mRNA、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと同じ意味で使用される。ポリペプチド、ペプチドおよびタンパク質という用語は本明細書では、ペプチド結合を介して結合されたアミノ酸残基のポリマを表すために、同じ意味で使用される。この用語は、1つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然由来アミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマ、ならびに天然由来アミノ酸ポリマおよび非天然由来アミノ酸ポリマに当てはまる。タンパク質という用語は、典型的には大きなポリペプチドを示す。ペプチドという用語は、典型的には短いポリペプチドを示す。合成ポリペプチドは、例えば、自動ポリペプチド合成機を用いて合成することができる。OspA分子またはキメラOspA分子という用語は、1つの態様では、SEQIDNO:1lipBsOspA1/2251、配列番号3lipBsOspA6/4、配列番号5lipBsOspA5/3、配列番号7sOspA1/2251、配列番号9sOspA6/4、配列番号11sOspA5/3、配列番号168origsOspA1/2、配列番号170origsOspA6/4、または配列番号172origsOspA5/3のヌクレオチド配列を含むOspA核酸、あるいは、別の態様では、配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3のアミノ酸配列を含むOspAポリペプチドを示す。lipBsOspA分子という用語は、1つの態様では、配列番号1lipBsOspA1/2251、配列番号3lipBsOspA6/4、または配列番号5lipBsOspA5/3のヌクレオチド配列を含むOspA核酸、あるいは、別の態様では配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、または配列番号6lipBsOspA5/3のアミノ酸配列を含むOspAポリペプチドを示す。配列番号7、9、および11の核酸配列はlipBリーダー配列MRLLIGFALALALIG配列番号13をコードする核酸配列を欠いている。加えて、配列番号7、9、および11の核酸配列は、配列番号2、4および6におけるlipBリーダー配列のカルボキシ末端に存在するシステイン残基の代わりに、配列番号8、10、および12のアミノ末端のメチオニン残基をコードする。origsOspA分子またはオリジナルsOspA分子という用語は、1つの態様では、配列番号168origsOspA1/2、配列番号170origsOspA6/4、または配列番号172origsOspA5/3のヌクレオチド配列を含むOspA核酸、あるいは、別の態様では、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3のアミノ酸配列を含むOspAポリペプチドを示す。これらのオリジナル分子は、突然変異およびコドン最適化を有さないキメラコンストラクトである。本発明は脂質付加されたOspAおよび脂質付加されていないOspAキメラ分子を含む。様々な態様では、脂質付加は、OspAにアジュバント特性を与える。本発明のいくつかの態様では、脂質付加されたOspA分子はOspBリーダー配列を含む。本発明のいくつかの態様では、OspBリーダー配列は、アミノ酸MRLLIGFALALALIG配列番号13を含む。他の態様では、OspBリーダー配列は他のアミノ酸を含む。当技術分野で知られているように同一またはパーセント同一性という用語は、配列を比較することにより決定される2つ以上のポリペプチド分子または2つ以上の核酸分子の配列間の関係を示す。当技術分野では、同一性はまた、場合によっては、2つ以上のヌクレオチドまたは2つ以上のアミノ酸配列の列間の対応により決定される、核酸分子またはポリペプチド間の配列関連性の程度を意味する。同一性は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラムすなわち、アルゴリズムにより対処されるギャップアライメントもしあればによるより小さな2つ以上の配列間の同一対応パーセントを測定する。実質的同一性は、特定の配列にわたり、少なくとも約70、約71、約72、約73、約74、約75、約76、約77、約78、約79、約80、約81、約82、約83、約84、約85、約86、約87、約88、約89、約90、約91、約92、約93、約94、約95、約96、約97、約98、または約99の配列相同性を有する配列を示す。いくつかの態様では、同一性は、少なくとも約50-100アミノ酸またはヌクレオチド長の領域にわたって存在する。他の態様では、同一性は、少なくとも約100-200アミノ酸またはヌクレオチド長の領域にわたって存在する。他の態様では、同一性は、少なくとも約200-500アミノ酸またはヌクレオチド長の領域にわたって存在する。一定の態様では、パーセント配列相同性は、GAP、BLASTP、BLASTN、FASTA、BLASTA、BLASTX、BestFitおよびSmith-Watermanアルゴリズムからなる群より選択されるコンピュータプログラムを使用して決定される。本明細書で列挙されるいずれの数値も、下の値から上の値までの全ての値を含むこと、すなわち、列挙された最低値および最高値間の数値の全ての可能な組み合わせは本出願において明確に記載されていると考えられるべきであることもまた具体的に理解される。例えば、濃度範囲が約1~50として記載される場合、2~40、10~30、または1~3、などの値は、明確に本明細書で列挙されることが意図される。上記で列挙された値は、具体的に意図されるものの例にすぎない。範囲は、様々な態様では、本明細書では約またはおよそ1つの特定の値からおよび/または約またはおよそ別の特定の値までとして表現される。値が先行する約を使用して近似として表される場合、いくらかの量の変動が範囲内に含まれることが理解されるであろう。類似性という用語は関連概念であるが、同一性とは対照的に、類似性の尺度を表し、同一対応および保存的置換対応の両方を含む。2つのポリペプチド配列が、例えば、10/20同一アミノ酸を有し、残りは全て非保存的置換である場合、パーセント同一性および類似性はどちらも50である。同じ例において、保存的置換が存在する位置がさらに5つ存在する場合、パーセント同一性は50のままであるが、パーセント類似性は7515/20となる。よって、保存的置換が存在する場合、2つのポリペプチド間のパーセント類似性の程度は、2つのポリペプチド間のパーセント同一性よりも高くなる。単離された核酸分子という用語は、1タンパク質、脂質、炭水化物または、総DNAが起源細胞から単離された場合、自然に見られる他の材料から任意の程度まで分離された、2単離された核酸分子が自然界で結合されるポリヌクレオチドの全てまたは一部に結合されていない、3自然界で結合されていないポリヌクレオチドに動作可能に結合されている、または4より大きなポリヌクレオチド配列の一部として自然界で起こらない本発明の核酸分子を示す。本明細書では実質的に含まないは、その自然環境で見いだされ、ポリペプチド生成における使用またはその治療、診断、予防または研究的使用を妨害するいずれの他の汚染核酸分子複数可または他の汚染物質も含まないことを示す。単離されたポリペプチドという用語は、1ポリヌクレオチド、脂質、炭水化物または、源細胞から単離された場合、自然に見られる他の材料から任意の程度まで分離された、2単離されたポリペプチドが自然界で結合されるポリペプチドの全てまたは一部に共有または非共有相互作用により結合されていない、3自然界で結合されていないポリペプチドに動作可能に共有または非共有相互作用により結合されている、または4自然界で起こらない本発明のポリペプチドを示す。1つの態様では、単離されたポリペプチドは、その自然環境で見いだされ、その治療、診断、予防または研究的使用を妨害するいずれの他の汚染ポリペプチドまたは他の汚染物質も実質的には含まない。本明細書では、ポリペプチドのフラグメントは、全長ポリペプチドまたはタンパク質発現産物よりも小さなポリペプチドの任意の部分を示す。フラグメントは、典型的には、1つ以上のアミノ酸残基が全長ポリペプチドのアミノ末端および/またはカルボキシ末端から除去されている全長ポリペプチドの欠失類似体である。したがって、フラグメントは、下記で記載される欠失類似体のサブセットである。本明細書では、類似体は、場合によっては異なる程度までであるが、天然由来分子と構造が実質的に類似し、同じ生物活性を有するポリペプチドを示す。類似体は、類似体が誘導される天然由来ポリペプチドに比べ、下記を含む1つ以上の突然変異に基づき、そのアミノ酸配列の組成が異なっている:iポリペプチド上記フラグメントを含むの1つ以上の末端および/または天然由来ポリペプチド配列の1つ以上の内部領域での1つ以上のアミノ酸残基の欠失、iiポリペプチドの1つ以上の末端での典型的には付加類似体および/または天然由来ポリペプチド配列の1つ以上の内部領域での1つ以上のアミノ酸の挿入または付加典型的には挿入類似体、またはiii天然由来ポリペプチド配列における他のアミノ酸の代わりの1つ以上のアミノ酸の置換。置換は、置換されるアミノ酸と置換するアミノ酸の物理化学または機能的関連性に基づき保存的または非保存的である。保存的に修飾された類似体は、アミノ酸および核酸配列の両方に当てはまる。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された核酸は、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードするそれらの核酸、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を示す。遺伝コードの縮重のために、多くの機能的に同一の核酸が任意の一定のタンパク質をコードする。例えば、コドンGCA、GCC、GCGおよびGCUは全て、アミノ酸アラニンをコードする。よって、アラニンがコドンにより特定される全ての位置で、コドンは、コードされたポリペプチドを変化させることなく記載される対応するコドンのいずれかに変化され得る。そのような核酸変異はサイレント変異であり、これは保存的に修飾された類似体の1つの種である。ポリペプチドをコードする本明細書における全ての核酸配列はまた、核酸の全ての可能なサイレント変異を記載する。当業者は、核酸中の各コドンAUGこれは通常、メチオニンに対する唯一のコドンであるおよびTGGこれは通常、トリプトファンに対する唯一のコドンであるを除くは修飾することができ、機能的に同一の分子が得られることを認識する。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は各記載される配列において、潜在している。アミノ酸配列に関しては、当業者であれば、コードされる配列中の単一のアミノ酸または小さいパーセンテージのアミノ酸を変化、付加または欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、挿入、欠失、付加、またはトランケーションは、この変化によりアミノ酸の化学的に同様なアミノ酸との置換が得られる場合保存的に修飾された類似体であることを認識するであろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野ではよく知られている。そのような保存的に修飾された変異体は、本発明の多形変異体、種間相同体、およびアレルに追加され、それらを排除しない。下記8つの群はそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含む:1アラニンA、グリシンG;2アスパラギン酸D、グルタミン酸E;3アスパラギンN、グルタミンQ;4アルギニンR、リシンK;5イソロイシンI、ロイシンL、メチオニンM、バリンV;6フェニルアラニンF、チロシンY、トリプトファンW;7セリンS、スレオニンT;および8システインC、メチオニンMを参照されたい。本明細書では、変異体は、少なくとも1つのアミノ酸置換、欠失、挿入、または修飾を含むポリペプチド、タンパク質またはその類似体を示し、ただし、変異体が天然ポリペプチドの生物活性を保持することを条件とする。本明細書では、アレル変異体は、同じ遺伝子座を占める遺伝子の2つ以上の多形のいずれかを示す。アレル変異は、突然変異により自然に生じ、いくつかの態様では、集団内での表現型多形となる。一定の態様では、遺伝子突然変異はサイレントでありコードされたポリペプチドにおける変化なし、または、他の態様では、変化したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。アレル変異体はまた、遺伝子アレル変異体のmRNA転写物由来のcDNA、ならびにそれらによりコードされたタンパク質を示す。誘導体という用語は、治療または診断薬への結合、ラベリング例えば、放射性核種または様々な酵素による、ポリマ共有結合例えばペグ化ポリエチレングリコールを用いた誘導体化および非天然アミノ酸の化学合成による挿入または置換により、共有結合により修飾されたポリペプチドを示す。いくつかの態様では、誘導体は、通常、分子の一部ではない追加の化学的部分を含むように修飾される。そのような部分は、様々な態様では、分子の溶解度、吸収、および/または生物学的半減期を調節する。その部分は、様々な他の態様では、また、分子の毒性を減少させ、分子のいずれの望ましくない副作用なども排除または減弱させる。そのような効果を媒介することができる部分はRemingtonsPharmaceuticalSciencesにおいて開示される。そのような部分を分子に結合するための手順は、当技術分野ではよく知られている。例えば、いくつかの態様では、OspA誘導体はインビボでタンパク質により長い半減期を与える化学修飾を有するOspA分子である。1つの実施形態では、ポリペプチドは、当技術分野で知られている水溶性ポリマの付加により修飾される。関連する実施形態では、ポリペプチドはグリコシル化、ペグ化、および/またはポリシアリル化により修飾される。組換えという用語は、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターに関連して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種核酸またはタンパク質の導入または天然核酸またはタンパク質の変化により修飾されていること、または細胞がそのように修飾された細胞から誘導されることを示す。よって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然非組換え形態内では見られない遺伝子を発現し、またはそうでなければ異常に発現され、低発現され、または全く発現されない天然遺伝子を発現する。本明細書では、選択可能なマーカーは、遺伝子が発現される細胞または生物に同定可能な表現型変化、例えば薬物、抗生物質または他の作用物質に対する抵抗性を与える酵素または他のタンパク質をコードする遺伝子を示し、よって、マーカーの発現または活性は、賛成例えば、限定はされないが、陽性マーカー、例えばネオ遺伝子または反対例えば、限定はされないが、陰性マーカー、例えばジフテリア遺伝子に対して選択される。異種の選択可能なマーカーは、通常は見い出されない動物のゲノム中に挿入された選択可能なマーカー遺伝子を示す。選択可能なマーカーの例としては、抗生物質抵抗性遺伝子、例えばネオマイシンneo、ピューロマイシンPuro、ジフテリア毒素、ホスホトランスフェラーゼ、ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ、キサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、単純ヘルペスウイルス1型チミジンキナーゼ、アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼおよびヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。当業者であれば、当技術分野で知られている任意の選択可能なマーカーが本明細書で記載される方法において有用であることを理解するであろう。異種という用語は、核酸の部分に関連して使用される場合、核酸が自然界で互いに同じ関係で見いだされない2つ以上のサブ配列を含むことを示す。例えば、核酸は典型的には組換えで生成され、新規機能性核酸を生成するように配列された非関連遺伝子由来の2つ以上の配列、例えば、1つの起源由来のプロモーターおよび別の起源由来のコード領域を有する。同様に、異種タンパク質は、タンパク質が自然界で互いに同じ関係で見いだされない2つ以上のサブ配列を含むことを示す例えば、融合タンパク質。本明細書では、相同という用語は、共通の進化上の起源を有するタンパク質、例えばスーパーファミリー例えば、免疫グロブリンスーパーファミリー由来のタンパク質および異なる種由来の相同タンパク質例えば、ミオシン軽鎖、などの関係を示す。そのようなタンパク質およびそれらのコード遺伝子は、それらの配列類似性により反映されるように、パーセント類似性または保存位置での特定の残基かそれともモチーフの存在の観点で、配列相同性を有する。比較のための配列の最適アライメントは、例えば、限定はされないが、下記により実施される:SmithetalAdvApplMath24821981の局地的相同性アルゴリズムNeedlemanetalJMolBiol484431970の相同性アライメントアルゴリズムPearsonetalProcNatlAcadSciUSA8524441988の類似法の調査これらのアルゴリズムのコンピュータによる実行、または目視検査。パーセント配列相同性および配列類似性を決定するために好適なアルゴリズムの別の例は、BLASTアルゴリズムであり、これはAltschuletalJMolBiol2154034101990に記載される。BLAST分析を実施するためのソフトウェアは、全米バイオテクノロジー情報センターから公的に入手可能である。パーセント配列相同性の計算に加えて、BLASTアルゴリズムはまた、2つの配列間の類似性の統計分析を実施する例えば、KarlinetalProcNatlAcadSciUSA90587357871993を参照されたい。ベクターという用語は、コーディング情報を宿主細胞に伝達するのに使用される任意の分子例えば、核酸、プラスミドまたはウイルスを示すために使用される。クローニングベクターは、外来DNAフラグメントを挿入することができるDNAの小片である。フラグメントのクローニングベクターへの挿入は、媒体と外来DNAを同じ制限酵素で処理し、その後、フラグメントを共に連結することにより実施される。多くの型のクローニングベクターが存在し、全ての型のクローニングベクターが本発明で使用される。遺伝子操作されたプラスミドおよびバクテリオファージ例えばファージλがおそらく最も一般にこの目的のために使用される。他の型のクローニングベクターとしては、細菌人工染色体BACおよび酵母人工染色体YACが挙げられる。発現ベクターは、組換えでまたは合成的に、宿主細胞において特定の核酸の転写を可能にする一連の特定の核酸要素と共に作成された核酸コンストラクトである。発現ベクターは、プラスミド、ウイルス、または核酸フラグメントの一部とすることができる。一定の態様では、発現ベクターは、プロモーターに動作可能に結合され転写される核酸を含む。コード配列という用語は、本明細書では、mRNAに転写され、適切な制御配列の制御下に置かれるとポリペプチドに翻訳される核酸配列として規定される。コード配列の境界は、一般的にはATG開始コドンにより決定され、これは通常、mRNAの5’端のオープンリーディングフレームの開始およびmRNAの3’端のオープンリーディングフレームのすぐ下流に位置する転写終結配列である。コード配列としては、ゲノムDNA、cDNA、半合成、合成、および組換え核酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。1つの態様では、プロモーターDNA配列は、これに関連するコード配列の上流に位置するDNA配列であること、またはこのコード配列の発現を制御することができることにより規定される。プロモーターは、核酸の転写を誘導する核酸制御配列のアレイとして規定される。本明細書では、プロモーターは、転写の開始点付近の必要な核酸配列、例えば、ポリメラーゼII型プロモーターの場合、TATA要素を含む。プロモーターはまた、任意で遠位エンハンサーまたはリプレッサ要素を含み、これらは転写開始点から数千もの塩基対離れて位置することができる。構成的プロモーターは、ほとんどの環境および発生条件下で活性であるプロモーターである。誘導性プロモーターは、環境または発生制御下で活性であるプロモーターである。動作可能に結合されたという用語は、核酸発現制御配列例えば、プロモーター、または転写因子結合部位のアレイと第2の核酸配列の間の機能的結合を示し、ここで、発現制御配列は、第2の配列に対応する核酸の転写を誘導する。形質導入という用語は、通常ファージによる1つの細菌から別の細菌への核酸の伝達を示すために使用される。形質導入はまた、レトロウイルスによる真核細胞配列の獲得および伝達を示す。トランスフェクションという用語は、外来または外因性DNAの細胞による取り込みを示すために使用され、細胞は外因性DNAが細胞膜の内側に導入された時にトランスフェクトされる。多くのトランスフェクション技術が当技術分野でよく知られており、本明細書で開示される。例えば、Grahametal、Virology、52456Sambrooketal、MolecularCloning、aLaboratoryManual、ColdSpringHarborLaboratories、NewYork、Davisetal、BasicMethodsinMolecularBiology、Elsevier、およびChuetal、Gene、13197を参照されたい。そのような技術は、1つ以上の外因性DNA部分を好適な宿主細胞に導入するために使用することができる。本明細書では、形質転換という用語は、細胞の遺伝的特徴の変化を示し、細胞は、新規DNAを含むように修飾された場合、トランスフォームされた。例えば、細胞は、その天然状態から遺伝的に修飾された場合、トランスフォームされた。トランスフェクションまたは形質導入後、トランスフォームするDNAは、細胞の染色体に物理的に組み込むことにより、細胞のそれと再結合し得る。場合によっては、DNAは、複製されずにエピソーム要素として一時的に維持され、またはプラスミドとして独立して複製する。細胞は、DNAが、細胞分裂と共に複製されると、安定にトランスフォームされたと考えられる。内因性という用語は、自然に宿主生物において発現される、または細胞、組織または生物内で生じるポリペプチドもしくはポリヌクレオチドまたは他の化合物を示す。外因性は、細胞、組織または生物外で生じるポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは他の化合物を示す。作用物質または化合物という用語は、本発明における生物学的パラメータに影響する能力を有する任意の分子、例えば、タンパク質または医薬品を表す。本明細書では、対照は、活性、陽性、陰性またはビヒクル対照を示すことができる。当業者により理解されるように、対照は、実験結果の関連性を確立し、試験された条件に対する比較を提供するために使用される。重症度を減少させるという用語は、ライムまたはライム病の症状に関する場合、症状が、発症の遅延、重症度の減少を有し、または被験体への損傷の減少を引き起こすことを意味する。一般的には、症状の重症度は、例えば、活性予防または治療組成物を受理しない対照と比較される。その場合、組成物は、症状が、対照の症状レベルに比べ、10、25、30、50、80、または100すなわち、本質的に排除されるだけ減少された場合、ライムの症状の重症度を減少させるということができる。抗原という用語は、選択的結合作用物質、例えば抗体により結合され、さらに各抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生させるのに被験体において使用することができる分子または分子の一部を示す。抗原は、様々な態様では、1つ以上のエピトープを有する。抗体という用語は、OspAポリペプチドに対し特異性を有する1つまたは複数の分子を示す。本明細書では、特異的、特異性および特異的に結合するという用語は、抗体の、OspAポリペプチドに結合するが、非OspAポリペプチドには結合しない能力を示す。一定の態様では、抗体は中和抗体であり、ここで、抗体は、感染病原体と反応し、その感染性または病原性を破壊または阻害する。本発明は、ボレリアを中和する抗体を含む免疫原性組成物を含む。本明細書では、薬学的に許容される担体または生理学的に許容される担体という用語は、医薬組成物としてのOspAポリペプチド、OspA核酸分子またはOspA抗体の送達を達成または増強するのに好適な1つ以上の製剤材料を示す。安定剤という用語は、物質またはワクチン賦形剤を示し、これは、ワクチンの免疫原性組成物を、例えば加熱または凍結中に起こる悪条件から保護する、および/または安定な免疫原性条件または状態における免疫原性組成物の安定性または有効期間を長くする。安定剤の例としては、糖、例えばスクロース、ラクトースおよびマンノース;糖アルコール、例えばマンニトール;アミノ酸、例えばグリシンまたはグルタミン酸;およびタンパク質、例えばヒト血清アルブミンまたはゼラチンが挙げられるが、これらに限定されない。抗菌性保存剤という用語は、免疫原性組成物またはワクチンに添加され、複数回投与バイアルの繰り返し穿刺でそのような容器が使用される場合導入され得る微生物の増殖を阻害する任意の物質を示す。抗菌性保存剤の例としては、チメロサール、2-フェノキシエタノール、塩化ベンゼトニウム、およびフェノールなどの物質が挙げられるが、これらに限定されない。免疫原性組成物という用語は、抗原例えば、キメラOspA分子これに対し抗原特異性抗体が産生される、被験体宿主の免疫応答を刺激するアジュバント、および好適な免疫学的に不活性な、薬学的に許容される担体を含む組成物を示す。任意で、免疫原性組成物は、1つ以上の安定剤を含む。任意で、免疫原性組成物は、1つ以上の抗菌性保存剤を含む。ワクチンまたはワクチン組成物という用語は、特定の疾患例えば、ライム病またはボレリア感染に対する免疫を改善する生物学的製剤を示す。ワクチンは、典型的には疾患を引き起こす微生物に似た作用物質例えば、ボレリアのキメラOspA分子抗原を含む。作用物質は身体の免疫系を刺激し、作用物質を外来と認識させ、これを破壊させ、これを記憶させ、よって、免疫系は後に遭遇するこれらの微生物のいずれをもさらに容易に認識し、破壊することができるようになる。ワクチンは、様々な態様では、予防的任意の天然または野生病原体による将来の感染の効果を防止または寛解させる、または治療的現在の感染に対するワクチンである。上記のように、そのようなワクチン組成物としては、薬学的に許容される担体を含む製剤が挙げられる。任意で、ワクチンはまた、1つ以上の安定剤および/または1つ以上の抗菌性保存剤を含む。有効量および治療的有効量という用語はそれぞれ、本明細書で記載されるOspAポリペプチドの1つ以上の生物活性の観察可能なレベルを支持するために使用される核酸分子、ポリペプチド、組成物、または抗体の量を示す。例えば、有効量は、本発明のいくつかの態様では、ボレリア感染を防止する、中和する、または減少させるのに必要な量である。組み合わせという用語は、本発明の2つ以上の核酸分子、または本発明の2つ以上のポリペプチドを示す。いくつかの態様では、本発明の分子の組み合わせが、本明細書で記載されるボレリアの6つの血清型1-6のうちの少なくとも4つに対して免疫を提供し、これらに起因する感染と闘うように投与される。様々な態様では、本発明の2つまたは3つの分子またはポリペプチドの組み合わせが使用される。一定の態様では、本発明の分子の組み合わせが被験体に投与され、本明細書で記載されるボレリアの6つ全ての血清型1-6に対して免疫が提供される。後者の組み合わせは、核酸分子またはポリペプチドの組み合わせにおいて存在しないOspA型を発現するボレリアの異種株に対する免疫を提供することが示されている。混合ワクチンという用語は、1つ以上の疾患に対する1を超えるワクチン組成物または1を超える防御抗原を含むワクチン製剤を示す。本発明は、1つ以上の他の疾患に対する抗原に加えて、ライム病またはボレリアに対するOspAキメラ抗原を含む混合ワクチンを含む。様々な態様では、1つ以上の他の疾患はマダニ媒介疾患である。一定の態様では、他のマダニ媒介疾患はロッキー山紅斑熱、バベシア症、回帰熱、コロラドダニ熱、ヒト単球エーリキア症HME、ヒト顆粒球エーリキア症HGE、南部ダニ関連発疹病STARI、野兎病、ダニ麻痺、ポワッサン脳炎、Q熱、クリミアコンゴ出血熱、キタウクゾーン病、ボタン熱、またはダニ媒介脳炎である。特定の態様では、本発明は、1つ以上のワクチン、例えばダニ媒介脳炎ワクチン、日本脳炎ワクチン、およびロッキー山紅斑熱ワクチンを含む混合ワクチンを含む。いくつかの態様では、混合ワクチンは、ボレリア感染またはライム病に対する免疫化と適合する季節的免疫スケジュールを有するワクチン組成物を含む。さらに特定的な態様では、混合ワクチンは、これらの疾患が流行している地理的位置で使用するための複数疾患の防止に有用である。ボレリアという用語は、ボレリア属のスピロヘータクラスのグラム陰性菌の種を示す。1つの態様では、ボレリアブルグドルフェリセンスラトs.l.は、より広義にボレリアブルグドルフェリを示す。ライム病またはボレリア症のほとんど全ての症例が、3つの遺伝種、ボレリアアフゼリ、ボレリアガリニおよびボレリアブルグドルフェリセンスストリクトs.s.より厳密にB.ブルグドルフェリを示すの1つにより引き起こされる。ボレリアのOspA血清型は種と相関し;血清型1はB.ブルグドルフェリs.s.に対応し、血清型2はB.アフゼリに対応し、および血清型3~7はB.ガリニに対応する。様々な態様では、本発明の免疫原性またはワクチン組成物はまた、ボレリアの他の種、例えば、限定はされないが、ボレリアジャポニカ、ボレリアアンダーソニ、ボレリアビセッティ、ボレリアシニカ、ボレリアツルジ、ボレリアタヌキイ、ボレリアバライシアナ、ボレリアルジタニエ、ボレリアスピエルマニ、ボレリアミヤマトイまたはボレリアロネスタルに対する防御を提供する。被験体には、植物でなく、原生生物でない生物のその従来の意味が与えられる。ほとんどの態様では、被験体は動物である。特定の態様では、動物は哺乳類である。さらに特定的な態様では、哺乳類はヒトである。他の態様では、哺乳類はペットまたはコンパニオンアニマル、家畜、または動物園動物である。一定の態様では、哺乳類は、ネコ、イヌ、、ウマ、またはウシである。様々な他の態様では、哺乳類はシカ、マウス、シマリス、リス、オポッサム、またはアライグマである。ライム病いくつかの態様では、本発明は、ライム病またはボレリア感染の防止におけるキメラOspA分子およびこれらの分子を含む組成物を含む。ライム病はまた、ボレリア症またはライムボレリア症として当技術分野で知られており、よって、これらの用語は全て本発明に含まれる。同様に、本発明は、本明細書で記載されるキメラOspA分子を投与することを含むライム病を防止または治療する方法を含む。ライム病、またはボレリア症はボレリア属に属する少なくとも3つの種のグラム陰性スピロヘータ細菌により引き起こされる感染症である。少なくとも13のボレリア種が発見されており、そのうちの3つがライム関連であることが知られている。ライム病を引き起こすボレリア種はまとめてボレリアブルグドルフェリセンスラトとして知られており、多大な遺伝的多様性を示す。ボレリアブルグドルフェリセンスラト群は、おそらく大多数の症例の原因である3つの密接に関連する種から構成される。ボレリアブルグドルフェリセンスストリクトは、米国におけるライム病の主因であるしかし、欧州でも存在するが、ボレリアアフゼリおよびボレリアガリニがほとんどの欧州の症例を引き起こす。いくつかの研究はまた、ボレリア種例えば、ボレリアビセッティ、ボレリアスピエルマニ、ボレリアルジタニエ、およびボレリアバライシアナが時として、ヒトに感染し得ることを提示している。これらの種は疾患の重要な原因であると考えられないが、これらの種に対する免疫原性防御もまた、本発明に含まれる。ライム病は、北半球で最も一般的なマダニ媒介疾患である。疾患は、多くの症例が1975に同定されたコネティカット州ライム村にちなんで命名されたものである。ボレリアはイクソデス属の数種に属する感染したマダニカタダニの咬傷によりヒトに伝染する。初期症状としては、場合によっては、熱、頭痛、疲労、抑うつ、および遊走性紅斑と呼ばれる特徴的な円形皮疹が挙げられる。治療せずに放置すると、後期症状はしばしば、関節、心臓、および中枢神経系と関係する可能性がある。ほとんどの場合、感染およびその症状は、とりわけ病気が早期に治療された場合抗生物質により排除される。しかしながら、遅い、遅延した、または不十分な治療によって、より重篤な症状に至る可能性があり、これは身体障害性および治療困難となり得る。時折、関節炎などの症状が、感染が抗生物質により排除された後に持続する。いくつかのグループは慢性ライム病は遅発ライム病の認識された症状を超えるある範囲の医学的に説明されていない症状の原因であり、追加の、長期抗生物質治療が必要とされることを主張している。しかしながら、長期治療は議論の余地があり、そのような治療に関する論争は、治療ガイドラインに対する法的行為に至っている。ライム病は、齧歯類および鳥類を含む自然宿主からヒトへ、両方の組の宿主上で摂食するマダニによって伝染されるので人畜共通感染症として分類される。イクソデス属の硬い体のマダニが、ライム病の主ベクターである。ほとんどのヒト感染は、幼虫マダニは非常に小さく、長期間検出されずに摂食し得るので、幼虫段階のマダニにより引き起こされる。ダニ咬傷はしばしば、幼虫段階のマダニのサイズが小さいため、ならびに、宿主が咬傷によるいずれの痒みまたは疼痛も感じないようにするマダニ分泌物のために気付かれない。ライム病は、症状、客観的な身体所見例えば、遊走性紅斑、顔面神経麻痺、関節炎、感染したマダニへの暴露可能性歴、ならびに血清学的血液検査に基づき臨床的に診断される。ライム病患者の約半数が特徴的な慢性遊走性紅斑を発症するが、多くがダニ咬傷を思い出せない。ライム病の症状を有さない人には、臨床試験は推奨されない。研究室でボレリア細菌を培養するのは難しいので、ライム病の診断は典型的には臨床検査所見および流行ライム領域への暴露歴に基づく。遊走性紅斑EM発疹は、全ての症例の約50でしかおきないが、血清学的血液検査が陰性である場合であっても、ライム病の診断を確立するのに十分であると考えられる。血清学的試験は、臨床的に疑われる症例を支持するために使用することができるが、それ自体診断的ではない。後期ライム病の診断は、多くの他の疾患の症状によく似ている多くの多面的な外観のために、しばしば困難である。こういうわけで、評論家はライムを新規グレートイミテーターと呼んだ。ライム病は、場合によっては、多発性硬化症、関節リウマチ、線維筋痛症、慢性疲労症候群CFS、ループス、または他の自己免疫および神経変性疾患として誤診されている。よって、当技術分野ではライム病を防止または治療するためのワクチンが非常に必要とされている。ボレリアの細胞表層タンパク質AOspA様々な態様では、本発明は、ライム病またはボレリア感染の防止および治療におけるボレリアのキメラOspA分子およびこれらの分子を含む組成物を含む。このスピロヘータはマダニから哺乳類に伝染されるので、温度および/または哺乳類宿主特異シグナルにより上方制御されるいくつかのボレリア細胞表層タンパク質が、過去10年にわたって同定されている。ボレリアブルグドルフェリの主な細胞表層タンパク質、OspAは、ワクチン候補としてのその可能性のために特に興味深いリポタンパク質である。ボレリアの欧州および北米株両方由来のOspAの血清型および遺伝子解析は、抗原および構造異種性を証明した。OspAは、公開PCT特許出願WO92/14488号、Jiangetalにおいて記載され、当技術分野で知られている。OspAは、マウス、ハムスターおよびイヌ誘発試験において防御免疫を誘導することが示されている。ヒトでの治験はOspA製剤がヒトにおいて安全であり、免疫原性であることを示す27117641768。OspAは、北米からのボレリアブルグドルフェリの臨床分離株の大部分において発現されるが、欧州の臨床ボレリア分離株の検査からは異なる像が現れた。欧州では、ライム病は主に、ボレリアの3つの遺伝種、すなわちB.ブルグドルフェリ、B.ガリニおよびB.アフゼリにより引き起こされる。本発明は、ボレリアの全ての遺伝種に対して防御免疫を提供するキメラOspA分子に関する。本発明は、共通の特徴を共有する3つの異なる脂質付加されたOspA分子をコードする3つのキメラOspA遺伝子の設計および合成を記載する。各遺伝子は、2つのOspA血清型を表し、遺伝子は安全で高免疫原性であり、被験体にB.ブルグドルフェリセンスラトs.l.による感染に対する防御を提供する安定なOspA分子をコードするように設計された。本発明はまた、共通の特徴を共有する3つの異なる脂質付加されたOspA分子をコードする、突然変異を有さず、コドン最適化を有さない3つのオリジナルキメラOspA遺伝子を記載する。各遺伝子は、2つのOspA血清型を表し、被験体にB.ブルグドルフェリセンスラトs.l.による感染に対する防御を提供する分子をコードする。7つの主要なOspA血清型は、欧州分離株間で認識されている指定された血清型1~7、WilskeetalJClinMicrobiol31340501993。OspA血清型は種と相関し;血清型1は、B.ブルグドルフェリs.sに対応し、血清型2はB.アフゼリに対応し、血清型3~7はB.ガリニに対応する。欧州ボレリア分離株の疫学調査は、OspA型1、2、3、4、5および6に基づくワクチンが欧州においてライム病の98.1eの理論的カバレッジを提供し、96.7の侵襲性疾患分離株をカバーすることを示す。本発明は、6つのキメラOspA核酸分子配列番号1、3、および5、ならびに配列番号168、170、および172および6つのキメラOspAポリペプチド分子配列番号2、4、および6、ならびに配列番号169、171、および173を提供し、これらは、6つの全ての血清型1-6に対して防御免疫を提供することができる。6つの合成OSPA遺伝子は、OspA血清型1および2lipBsOspA1/2251配列番号1核酸および2アミノ酸ならびにorigsOspA1/2配列番号168核酸および169アミノ酸;OspA血清型6および4lipBsOspA6/4配列番号3核酸および4アミノ酸ならびにorigsOspA6/4配列番号170核酸および171アミノ酸;ならびにOspA血清型5および3lipBsOspA5/3配列番号5核酸および6アミノ酸ならびにorigsOspA5/3配列番号172核酸および173アミノ酸由来の防御エピトープを有するOspA分子をコードするように設計された。キメラOspA遺伝子は合成オーバーラップオリゴヌクレオチドを用いて作成された。これらの組換えタンパク質は、一定の態様では、高収率および純度で生成され、様々な態様では、所望の活性を最大化し、望ましくない活性を最小化するように操作される。キメラOspA核酸分子およびポリペプチド分子様々な態様では、本発明は、ボレリアのキメラOspA核酸およびポリペプチド分子を含む。本発明のOspA核酸は、配列番号1lipBsOspA1/2251、配列番号3lipBsOspA6/4、配列番号5lipBsOspA5/3、配列番号7sOspA1/2251、配列番号9sOspA6/4、配列番号11sOspA5/3、配列番号168origsOspA1/2、配列番号170origsOspA6/4、または配列番号172origsOspA5/3で示されるヌクレオチド配列、または配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3で示されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、から本質的に構成され、またはから構成される核酸分子を含む。配列番号7、9、および11の核酸配列は、lipBリーダー配列MRLLIGFALALALIG配列番号13をコードする核酸配列を欠いている。加えて、配列番号7、9、および11の核酸配列は、配列番号2、4、および6におけるlipBリーダー配列のカルボキシ末端に存在するシステイン残基の代わりに、配列番号8、10、および12のアミノ末端のメチオニン残基をコードする。配列番号1、3、および5はlipBsOspAポリヌクレオチドであり、配列番号2、4、および6はlipBsOspAポリペプチドである。いくつかの態様では、本発明は突然変異を有さず、コドン最適化を有さないボレリアのオリジナルorigキメラOspA核酸およびポリペプチド分子を含む。よって、本発明のOspA核酸は、配列番号168origsOspA1/2、配列番号170origsOspA6/4、もしくは配列番号172origsOspA5/3で示されるヌクレオチド配列、または配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3で示されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、から本質的に構成され、またはから構成される核酸分子を含む。キメラOspA分子に対するDNAおよびアミノ酸配列に対する配列識別番号は、下記表1で示される。lipBsOspA12251lipBsOspA64lipBsOspA53sOspA12251sOspA64sOspA53OrigsOspA12OrigsOspA64OrigsOspA53本発明のOspAポリペプチドは配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3のアミノ酸配列を含み、から本質的に構成され、またはから構成されるポリペプチドおよび関連ポリペプチドを含む。関連ポリペプチドは、OspAポリペプチド類似体、OspAポリペプチド変異体およびOspAポリペプチド誘導体を含む。いくつかの態様では、OspAポリペプチドは、それらが調製される方法によってアミノ末端メチオニン残基を有する。関連する態様では、本発明のOspAポリペプチドはOspA活性を含む。1つの実施形態では、関連核酸分子は、配列番号1lipBsOspA1/2251、配列番号3lipBsOspA6/4、配列番号5lipBsOspA5/3、配列番号7sOspA1/2251、配列番号9sOspA6/4、配列番号11sOspA5/3、配列番号168origsOspA1/2、配列番号170origsOspA6/4、または配列番号172origsOspA5/3で示されるヌクレオチド配列と約70パーセント70同一または類似するヌクレオチド配列を含み、またはから構成され、一定の態様では、配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3で示されるポリペプチドと約70パーセント70同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、から本質的に構成され、またはから構成される。様々な実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号1lipBsOspA1/2251、配列番号3lipBsOspA6/4、配列番号5lipBsOspA5/3、配列番号7sOspA1/2251、配列番号9sOspA6/4、配列番号11sOspA5/3、配列番号168origsOspA1/2、配列番号170origsOspA6/4、または配列番号172origsOspA5/3で示されるヌクレオチド配列と約70パーセント、または約71、72、73、74、75、76、77、78、もしくは79パーセント、または約80パーセント、または約81、82、83、84、85、86、87、88、もしくは89パーセント、または約90パーセント、または約91、92、93、94、95、96、97、98、もしくは99パーセント同一であり、またはヌクレオチド配列は、配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3で示されるポリペプチド配列と約70パーセント、または約71、72、73、74、75、76、77、78、もしくは79パーセント、または約80パーセント、または約81、82、83、84、85、86、87、88、もしくは89パーセント、または約90パーセント、または約91、92、93、94、95、96、97、98、もしくは99パーセント同一であるポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、配列相同性および/または類似性を決定するための方法は、試験される配列間で最大の対応を与えるように設計される。同一性および類似性を決定する方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムで記載される。いくつかの態様では、2つの配列間の同一性および類似性を決定するコンピュータプログラム方法としては、GCGプログラムパッケージ、例えばGAPGeneticsComputerGroupUniversityofWisconsinMadisonWIBLASTP,BLASTNおよびFASTAが挙げられるが、これらに限定されない。BLASTXプログラムは全米バイオテクノロジー情報センターNCBI、および他の供給元BLASTManualAltschuletalNCBNLMNIHBethesdaMD20894;Altschuletal上記から公的に入手可能である。よく知られているSmithWatermanアルゴリズムもまた、同一性を決定するために使用される。いくつかの態様では、2つのアミノ酸配列を整列させるための一定のアライメントスキームにより、2つの配列の短い領域のみの対応が得られ、この小さな整列された領域は、2つの全長配列間で著しい関係がない場合であっても、非常に高い配列相同性を有し得る。したがって、1つの実施形態では、選択されたアライメント方法GAPプログラムにより、標的ポリペプチドの少なくとも50の近接アミノ酸におよぶアライメントが得られる。例えば、コンピュータアルゴリズムGAPGeneticsComputerGroup、UniversityofWisconsin、Madison、WIを用いると、パーセント配列相同性が決定される2つのポリペプチドは、それらの個々のアミノ酸の最適な対応アルゴリズムにより決定される対応スパンのために整列される。ギャップオープニングペナルティこれは平均ダイアゴナルの3倍として計算される;平均ダイアゴナルは、用いられる比較マトリクスのダイアゴナルの平均である;ダイアゴナルとは、特定の比較マトリクスにより、各々の完全アミノ酸対応に対して割り当てられるスコアまたは数のことであるおよびギャップエクステンションペナルティこれは通常、ギャップオープニングペナルティの10分の1である、ならびにPAM250またはBLOSUM62などの比較マトリクスが、このアルゴリズムと共に使用される。標準比較マトリクスPAM250比較マトリクスに関してはDayhoffetalAtlasofProteinSequenceandStructure5;BLOSUM62比較マトリクスに関してはHenikoffetalProcNatlAcadSciUSA891091510919を参照されたいもまた、アルゴリズムよって使用される。様々な態様ではポリペプチド配列比較のためのパラメータには以下が含まれる:アルゴリズムNeedlemanetalJMolBiol48443453比較マトリクス:BLOSUM62、Henikoffetal上記ギャップペナルティ:12ギャップ長ペナルティ:4類似性の閾値:0GAPプログラムは、以上のパラメータを用いると有用である。前述のパラメータは、GAPアルゴリズムを用いるポリペプチド比較のためのデフォルトパラメータであるこのほか、末端ギャップに関してはペナルティなしとする。いくつかの態様では、核酸分子配列比較のためのパラメータには以下が含まれるアルゴリズムNeedlemanetal上記比較マトリクス:対応=10、非対応=0ギャップペナルティ:50ギャップ長ペナルティ:3GAPプログラムはまたは、以上のパラメータを用いると有用である。前述のパラメータは、核酸分子比較のためのデフォルトパラメータである。他の例示的なアルゴリズム、ギャップオープニングペナルティ、ギャップエクステンションペナルティ、比較マトリクス、類似性の閾値、など、例えば、ProgramManual、WisconsinPackage、Version9、September、1997で示されるものが当業者によって使用される。特定の選択は当業者に明らかであり、実施される特定の比較、例えばDNA対DNA、タンパク質対タンパク質、タンパク質-対DNA;さらに、比較がある配列対間かこの場合、GAPまたはBestFitが一般的に好ましい、1つの配列と大きな配列データベース間かこの場合、FASTAまたはBLASTAが好ましいに依存する。核酸配列の差は、いくつかの態様では、配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列の保存的および/または非保存的修飾となる。配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3のアミノ酸配列への保存的修飾およびコードするヌクレオチドへの対応する修飾は、天然由来OspAポリペプチドのものと類似する機能および化学特性を有するOspAポリペプチドを生成させる。対照的に、OspAポリペプチドの機能および/または化学特性における実質的な修飾は、a置換領域での分子バックボーンの構造、例えば、シートまたはらせん形構造、b標的部位での分子の電荷または疎水性、あるいはc側鎖の嵩の維持に対する効果が著しく異なる配列番号2lipBsOspA1/2251、配列番号4lipBsOspA6/4、配列番号6lipBsOspA5/3、配列番号8sOspA1/2251、配列番号10sOspA6/4、配列番号12sOspA5/3、配列番号169origsOspA1/2、配列番号171origsOspA6/4、または配列番号173origsOspA5/3のアミノ酸配列の置換を選択することにより達成される。例えば、保存的アミノ酸置換は、いくつかの態様では、天然アミノ酸残基の非天然残基との置換を含み、よってその位置のアミノ酸残基の極性または電荷にほとんど、あるいは全く影響がない。さらに、ポリペプチド中のいずれの天然残基も、一定の態様では、アラニン系統的変異導入法に対して前に記載されるように、アラニンと置換される。保存的アミノ酸置換はまた、非天然由来のアミノ酸残基を含み、これらは典型的には、生体システムにおける合成ではなく、ペプチド化学合成によって組み入れられる。これには、ペプチド模倣物、およびその他の逆転型または逆方向型のアミノ酸部分が含まれる。天然由来の残基は、様々な態様では、共通の側鎖特性に基づいて複数のクラスに分類される:1疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;2中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;3酸性:Asp、Glu;4塩基性:His、Lys、Arg;5鎖の方向に影響を与える残基:Gly、Pro;および6芳香族:Trp、Tyr、Phe。例えば、非保存的置換には、いくつかの態様では、これらのクラスの1つのメンバーと別のクラスのメンバーとの交換が含まれる。そのような置換残基は、様々な態様では、OspAポリペプチドオルソログと相同または類似するOspAポリペプチドの領域に、または該分子の非相同領域内に導入される。このような変化を加える際に、アミノ酸の疎水性親水性指標がしばしば考慮される。それぞれのアミノ酸には、その疎水性および荷電特性に基づいて、疎水性親水性指標が割り当てられている。それらは以下の通りである:イソロイシン4.5;バリン4.2;ロイシン3.8;フェニルアラニン2.8;システイン/シスチン2.5;メチオニン1.9;アラニン1.8;グリシン-0.4;スレオニン-0.7;セリン-0.8;トリプトファン-0.9;チロシン-1.3;プロリン-1.6;ヒスチジン-3.2;グルタミン酸-3.5;グルタミン-3.5;アスパラギン酸-3.5;アスパラギン-3.5;リシン-3.9;およびアルギニン-4.5。相互作用性の生物機能をタンパク質に付与する際のアミノ酸の疎水性親水性指標の重要性は、当技術分野では理解されている。Kyteetal1982JMolBiol157105131。一定のアミノ酸で、類似した疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸を置換してもよく、これは類似した生物活性を保持し続けることが知られている。疎水性親水性指標に基づいて変化を加える際、一定の態様では、疎水性親水性指標が±2以内であるアミノ酸の置換が好ましく、他の態様では、±1以内であるものが特に好ましく、様々な態様では、±0.5以内であるものが特により好ましい。また、それによって作製される生物学的に機能性等価のタンパク質またはペプチドを本明細書の場合のように、免疫学的実施形態において使用することがある程度意図される場合には特に、親水性に基づいて、類似のアミノ酸の置換を効果的に行うことができることが、当技術分野では理解されている。それに隣接するアミノ酸の親水性に左右される、あるタンパク質の最大局所平均親水性は、その免疫原性および抗原性と、すなわちそのタンパク質の生物学的特性と相関する。下記親水性値が、これらのアミノ酸残基に割り当てられている:アルギニン3.0;リシン3.0;アスパラギン酸3.0±1;グルタミン酸3.0±1;セリン0.3;アスパラギン0.2;グルタミン0.2;グリシン0;スレオニン-0.4;プロリン-0.5±1;アラニン-0.5;ヒスチジン-0.5;システイン-1.0;メチオニン-1.3;バリン-1.5;ロイシン-1.8;イソロイシン-1.8;チロシン-2.3;フェニルアラニン-2.5およびトリプトファン-3.4。類似の親水性値に基づいて変化を加える際、ある態様では、親水性値が±2以内であるアミノ酸の置換が好ましく、他の態様では、±1以内であるものが特に好ましく、様々な態様では、±0.5以内であるものが特により好ましい。当業者はまた、親水性に基づき一次アミノ酸配列からエピトープを同定する。これらの領域はまた、エピトープ性コア領域とも呼ばれる。所望のアミノ酸置換保存的か非保存的に関係なくは、そのような置換が要求される時に当業者により決定され得る。例えば、OspAポリペプチドの重要な残基を同定するために、または本明細書で記載されるそれらの基質に対するOspAポリペプチドの親和性を増加または減少させるために、アミノ酸置換を使用することができる。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列におけるヌクレオチドおよびアミノ酸配列におけるアミノ酸の置換は本発明に含められる。置換は1~5、1~10、1~15、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、1~100、1~150、および1~200ヌクレオチドを含む。同様に、置換は1~5、1~10、1~15、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、および1~100アミノ酸を含む。置換は、様々な態様では、保存的または非保存的である。例示的なアミノ酸置換が表2で示される。当業者は、よく知られている技術を用いて配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、または173で示されるポリペプチドの好適な類似体または変異体を決定することができる。活性を破壊せずに変化させることができる分子の好適な領域を同定するために、当業者は、活性に対し重要でないと考えられる領域を標的とすることができる。例えば、同じ種または他の種由来の類似の活性を有する類似のポリペプチドがわかっている場合、当業者はOspAポリペプチドのアミノ酸配列をそのような類似のポリペプチドと比較することができる。そのような比較を用いて、類似ポリペプチド間で保存される分子の残基および部分を同定することができる。そのような類似ポリペプチドに対し保存されないOspAポリペプチドの領域の変化は、OspAポリペプチドの生物活性および/または構造に悪影響を与える可能性が低いことは認識されるであろう。当業者はまた、比較的保存されている領域であっても、活性を保持しながら天然由来の残基を化学的に類似するアミノ酸と置換することができる保存的アミノ酸残基置換。いくつかの実施形態では、OspAポリペプチド変異体は、グリコシル化部位の数および/または型が配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、または173で示されるアミノ酸配列に比べ変化しているグリコシル化変異体を含む。1つの実施形態では、OspAポリペプチド変異体は、配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、または173で示されるアミノ酸配列よりも多くのまたは少ない数のN結合グリコシル化部位を含む。N結合グリコシル化部位は、配列:Asn-X-SerまたはAsn-X-Thrにより特徴付けられ、ここで、Xと表されるアミノ酸残基はプロリン以外の任意のアミノ酸残基とすることができる。この配列を作製するためのアミノ酸残基の置換は、N結合炭水化物鎖の付加のための潜在的新規部位を提供する。その代わりに、この配列を排除する置換は、既存のN結合炭水化物鎖を除去する。1つ以上のN結合グリコシル化部位典型的には、天然由来が排除され、1つ以上の新規N結合部位が作製されるN結合炭水化物鎖の再配列もまた、提供される。追加のOspA変異体としては、システイン変異体が挙げられ、この場合、配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、または173で示されるアミノ酸配列に比べ、1つ以上のシステイン残基が、欠失され、または別のアミノ酸例えば、セリンに置換されている。例えば不溶性封入体の単離後、OspAポリペプチドが生物学的に活性なコンホメーションにリフォールディングされなければならない場合、システイン変異体が有用である。システイン変異体は、一般的には天然タンパク質よりも少ないシステイン残基を有し、典型的には不対システインに起因する相互作用を最小にするように偶数有する。本発明はさらに、配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、または173で示されるタンパク質のエピトープを有する部分を含むポリペプチドを提供する。エピトープという用語は、抗体が結合できるタンパク質の領域を示す。例えば、GeysenetalProcNatlAcadSciUSA8139984002を参照されたい。エピトープは線形またはコンホメーションとすることができ、後者は、タンパク質のフォールディングでエピトープを形成するタンパク質の不連続領域から構成される。線形エピトープは、一般的には少なくとも6アミノ酸残基長である。タンパク質配列の一部を模倣する比較的短い合成ペプチドは、通常、部分的に模倣されたタンパク質と反応する抗血清を誘発することができる。SutcliffeetalScience219660666を参照されたい。短い、線形エピトープを認識する抗体は、変性タンパク質を使用する分析および診断用途、例えばWesternブロッティングにおいて特に有用である。TobinProcNatlAcadSciUSA7643504356を参照されたい。短いペプチドに対する抗体は、場合によっては、天然コンホメーションのタンパク質も認識し、よって、例えば、ELISAにより、または免疫沈降研究において、タンパク質発現およびタンパク質単離をモニタリングするのに、溶液中のOspAタンパク質を検出する際に有用である。キメラOspA核酸分子およびポリペプチド分子の合成核酸分子は、OspAポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードし、限定はされないが、組換えDNA方法および化学合成を含む様々な方法で容易に得ることができる。組換えDNA方法は一般的にはSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNYandorAusubeletaledsCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenPublishersIncandWileyandSonsNYで示されるものである。以下で示される説明に従い実施される組換え発現技術は、様々な態様では、これらのポリヌクレオチドを生成させ、コードされたポリペプチドを発現するために従われる。例えば、OspAポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列を適切なベクターに挿入することにより、当業者は容易に大量の所望のヌクレオチド配列を生成させることができる。配列はその後、検出プローブまたは増幅プライマーを作製するために使用され得る。その代わりに、OspAポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを発現ベクター挿入することができる。発現ベクターを適切な宿主に導入することにより、コードされた1つまたは複数のOspAポリペプチドまたはOspAポリペプチドが、いくつかの態様では、大量に生成される。同様に、核酸およびポリペプチドの化学合成は当技術分野ではよく知られており、例えば、EngelsetalAngewChemIntlEd28716734により記載されるものである。これらの方法としては、とりわけ、核酸合成のためのホスホトリエステル、ホスホラミダイトおよびH-ホスホネート方法が挙げられる。1つの態様では、そのような化学合成のための方法は、標準ホスホラミダイト化学を使用するポリマ担持合成である。典型的には、OspAポリペプチドのアミノ酸配列をコードするDNAは、数百ヌクレオチド長である。約100ヌクレオチドより大きな核酸は、これらの方法を使用していくつかのフラグメントとして合成される。その後、フラグメントは共に連結され、本発明の全長ヌクレオチド配列が形成される。特定の態様では、ポリペプチドのアミノ末端をコードするDNAフラグメントはATGを有し、これはメチオニン残基をコードする。本発明の特定の態様では、キメラOspAコード配列は、合成オーバーラップオリゴヌクレオチドを使用して作製される。ボレリア細胞由来のDNAは使用されないので、合成アプローチのさらなる利点は、ボレリア培地中に存在する動物起源の材料すなわち血清または血清アルブミンに含まれる外来病原体による汚染の回避である。この戦略はまた、実質的に、キメラ遺伝子を作製するのに必要とされる操作数を減少させる。というのも、配列変化、例えば発現の最適化OspBリーダー配列、クローニングを促進するための制限部位の導入、または潜在的な知的所有権問題の回避のための修飾は単一工程で実施されるからである。コドン使用頻度を大腸菌宿主に対し最適化させることも可能であり、というのも、大腸菌でめったに使用されないコドンの存在が、外来遺伝子の高レベル発現に対する潜在的妨害を示すことが知られているからである。当業者に知られている他の方法が同様に使用される。ある実施形態では、核酸変異体は、ある宿主細胞でのOspAポリペプチドの最適発現のために変化されたコドンを含む。特定のコドン変化は、OspAポリペプチド複数可および発現のために選択された宿主細胞複数可に依存する。そのようなコドン最適化は、様々な方法により、例えば、ある宿主細胞において高度に発現した遺伝子で使用するために好ましいコドンを選択することにより、実施することができる。コドン出現頻度表、例えば高度に発現した細菌遺伝子のコドン優先度のためのEcohigh.codを組み入れるコンピュータアルゴリズムが、場合によっては使用され、UniversityofWisconsinPackageVersion9.0,GeneticsComputerGroup,Madison,WIにより提供される。他の有用なコドン出現頻度表としては、Celegans_high.cod、Celegans_low.cod、Drosophila_high.cod、Human_high.cod、Maize_high.codおよびYeast_high.codが挙げられる。OspAポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、一定の態様では、適切な発現ベクター中に、標準連結技術を用いて挿入される。ベクターは、典型的には使用される特定の宿主細胞中で機能するように選択されるすなわち、ベクターは宿主細胞機構と適合し、そのため、遺伝子の増幅および/または遺伝子の発現が起こり得る。OspAポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、様々な態様では、原核、酵母、昆虫バキュロウイルス系、および/または真核宿主細胞において増幅/発現される。宿主細胞の選択は、一つには、OspAポリペプチドが翻訳後修飾例えば、グリコシル化および/またはリン酸化されるかどうかに依存する。そうであれば、酵母、昆虫、または哺乳類宿主細胞が好ましい。発現ベクターの説明については、MethEnzvol185DVGoeddeledAcademicPressIncSanDiegoCAを参照されたい。クローニングベクターは、当技術分野で知られているもの全てを含む。例えば、SambrookFritschManiatisMolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborNYColdSpringHarborLaboratoryPress1989を参照されたい。1つの態様では、pUC18は全ての中間工程のためのクローニングベクターとして使用され、というのも、ベクターpET30aよりもこのプラスミドを使用した方が遺伝子操作および配列決定がより容易になるからである。主要特徴は特に、塩基対149~469のLacZαペプチドをコードするlacZ遺伝子フラグメント塩基対507でのlacプロモーター、塩基対1629~2486のアンピシリン耐性決定基をコードするbla遺伝子塩基対2521でのblaプロモーター、塩基対867での複製開始点および塩基対185~451の複数のクローニング部位である図12。発現ベクターは、当技術分野で知られているものすべてを含み、例えば、限定はされないがコスミド、プラスミド例えば、ネイキッドまたはリポソームに含まれるおよびウイルスが挙げられ、これらは組換えポリヌクレオチドを組み込む。発現ベクターは、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現のために、当技術分野で知られている技術を使用して形質転換またはトランスフェクションを介して、適切な宿主細胞に例えば、形質転換または形質導入を介して挿入される。例えば、SambrookFritschManiatisMolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborNYColdSpringHarborLaboratoryPress1989を参照されたい。1つの態様では、pET30aNovagenが最終の完全OspA遺伝子インサートのための発現ベクターとして使用される。pETベクターでは、遺伝子は、T7プロモーターの制御下でクローニングされ、発現は宿主細胞にT7RNAポリメラーゼ源を提供することにより誘導されるT7RNAポリメラーゼ源が供給されるまで発現は起こらない。主要特徴は、塩基対4048~4860でのカナマイシン耐性をコードする遺伝子kan、826-1905のlacI遺伝子塩基対、塩基対4956-5411でのF1複製開始点および塩基対158~346の複数のクローニング部位である図13。ベクターが構築され、ベクターの適切な部位にOspAポリペプチドをコードする核酸分子が挿入された後に、完成したベクターは、増幅および/またはポリペプチド発現用の好適な宿主細胞に挿入される。選択した宿主細胞へのOspAポリペプチドのための発現ベクターの形質転換は、様々な態様では、よく知られている方法、例えばトランスフェクション、感染、塩化カルシウム媒介形質転換、電気穿孔法、微量注入法、リポフェクション法、もしくはDEAE-デキストラン法、またはその他の公知の技術によって達成される。選択される方法は、一部、使用される宿主細胞の型の機能である。これら方法および他の好適な方法は当業者によく知られており、例えば、Sambrooketal上記に記載されている。宿主細胞は、いくつかの態様では原核宿主細胞例えば大腸菌または真核宿主細胞例えば酵母、昆虫、または脊椎動物細胞である。適切な条件下で培養された場合、宿主細胞はOspAポリペプチドを合成し、次にこれを、宿主細胞が培地中に分泌する場合培地からまたは分泌されない場合産生している宿主細胞から直接、採取することができる。適切な宿主細胞の選択は、望ましい発現レベル、活性のために望ましいまたは必要なポリペプチドの修飾例えばグリコシル化またはリン酸化、およびフォールディングして生物活性分子となることが容易かといった、さまざまな要素に依存する。そのような宿主細胞としては、細菌、酵母、真菌、ウイルス、無脊椎動物、および哺乳類源の宿主細胞が挙げられるが、これらに限定されない。そのような宿主細胞の例として、ManiatisetalMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborNYを参照されたい。追加の態様では、Maniatis上記マニュアルの公開から当技術分野で使用される宿主細胞もまた本発明で使用される。1つの態様では、宿主細胞は大腸菌細胞である。大腸菌の好適な株としては、BL21、DH5α、HMS174DE3、DH10B、またはE.CLONI10GLucigen,Middleton,Wis.が挙げられるが、これらに限定されない、いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ベクターの形質転換効率および/または維持を増強するように操作される。1つの態様では、大腸菌株DH5α[遺伝子型:endA1hsdR17rK-mKsupE44thi-1recA1gyrANalrrelA1DlacZYA-argFU169deoRF80dlacDlacZM15]GibcoBRLが中間クローニング工程全てに対して使用される。この株は大腸菌株K12、遺伝子工学において最も広く使用される宿主の1つに由来する。株は、アンピシリン耐性遺伝子ampを含むベクターを有する形質転換体の選択を可能にするamp-である。別の態様では、大腸菌株HMS174DE3が、発現のための宿主として使用される。大腸菌HMS174DE3宿主細胞[遺伝子型:F-recA1hsdRrk12-mk12RifRDE3]Novagenが、本明細書で記載される様々な実施例で、最終クローニング工程のために使用される。株は、カナマイシン耐性遺伝子kanを含むベクターを有する形質転換体の選択を可能にするkan-である。OspAポリペプチド発現ベクターを含む宿主細胞は、当業者によく知られている標準培地を使用して培養される。培地は通常、細胞の増殖および生存に必要な栄養分を全て含む。大腸菌細胞を培養するのに好適な培地としては、例えば、ルリアブロスLBおよび/またはテリフィックブロスTBが挙げられる。真核細胞を培養するのに好適な培地としては、RoswellParkMemorialInstitute培地1640RPMI1640、基礎培地MEMおよび/またはDulbecco変法イーグル培地DMEMが挙げられ、これらはすべて、場合によっては、培養される特定の細胞株により示される血清および/または増殖因子が補充される。昆虫培養物に対し好適な培地は、イーストレート、ラクトアルブミン加水分解物および/またはウシ胎仔血清が、必要に応じて補充されたGrace培地である。典型的には、抗生物質または形質転換細胞の選択的増殖に有用な他の化合物が、培地への補充物として添加される。使用される化合物は、宿主細胞がこれによりトランスフォームされたプラスミド上に存在する選択可能なマーカー要素により指示されるであろう。例えば、選択可能なマーカー要素がカナマイシン耐性である場合、培地に添加される化合物はカナマイシンである。選択的増殖のための他の化合物としては、アンピシリン、テトラサイクリンおよびネオマイシンが挙げられる。宿主細胞により産生されるOspAポリペプチドの量は、当技術分野で知られている標準方法を使用して評価することができる。そのような方法としては、Westernブロット解析、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動、非変性ゲル電気泳動、クロマトグラフィー分離例えば高速液体クロマトグラフィーHPLC、免疫検出、例えば免疫沈降、および/または活性アッセイ、例えばDNA結合ゲルシフトアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、OspAポリペプチドは、単離されると生物学的に活性でなくなる。リフォールディングまたはポリペプチドをその三次構造に変換するおよびジスルフィド結合を生成させるための様々な方法が、生物活性を回復させるために使用される。そのような方法は、可溶化ポリペプチドを、通常7を超えるpHに、特定の濃度のカオトロープの存在下で暴露することを含む。カオトロープの選択は、封入体可溶化のために使用される選択と非常に類似するが、通常、カオトロープは可溶化のために使用されるカオトロープより低い濃度で使用され、必ずしも同じではない。場合によっては、リフォールディング/酸化溶液はまた、還元剤または還元剤その酸化形態を特定の比率で含み、特定の酸化還元電位が生じ、タンパク質のシステイン架橋複数可の形成においてジスルフィドシャッフリングが起こり得る。一般に使用される酸化還元対のいくつかとしては、システイン/シスタミン、グルタチオンGSH/ジチオビスGSH、塩化第一銅、ジチオスレイトールDTT/ジチアンDTT、および2-2メルカプトエタノールbME/ジチオ-bMEが挙げられる。共溶媒がしばしば、リフォールディングの効率を増加させるために使用され、この目的のために使用されるより一般的な試薬としては、グリセロール、様々な分子量のポリエチレングリコール、アルギニンなどが挙げられる。封入体がOspAポリペプチドの発現時にかなりの程度まで形成されない場合、ポリペプチドは細胞ホモジネートの遠心分離後、上清中で主に見られる。ポリペプチドはさらに、本明細書で記載される、またはそうでなければ当技術分野で知られているものなどの方法を用いて上清から単離される。OspAポリペプチドの溶液からの精製は、当技術分野で知られている様々な技術を用いて達成することができる。ポリペプチドが、HexaヒスチジンOspAポリペプチド/hexaHisなどのタグまたは他の小ペプチド、例えばFLAGEastmanKodakCo.,NewHaven,CTまたはmycInvitrogen,Carlsbad,CAを、そのカルボキシルまたはアミノ末端のいずれかに含むように合成される場合、ポリペプチドはしばしば、1工程プロセスで、カラムマトリクスがタグに対して高い親和性を有するアフィニティーカラムに溶液を通過させることにより精製される。例えば、ポリヒスチジンは大きな親和性および特異性で、ニッケルに結合し;よって、ニッケルのアフィニティーカラム例えばQiagen登録商標ニッケルカラムがOspAポリペプチド/polyHisの精製のために使用され得る。例えば、AusubeletaledsCurrentProtocolsinMolecularBiologySection10118JohnWileySonsNewYorkを参照されたい。さらに、OspAポリペプチドは、OspAポリペプチドを特異的に認識し、結合することができるモノクローナル抗体の使用により精製され得る。よって、精製のための好適な手順としては、アフィニティークロマトグラフィー、イムノアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーHPLC、電気泳動天然ゲル電気泳動を含む、その後のゲル溶出、および分取等電点電気泳動Isoprime機械/技術、HoeferScientific、SanFrancisco、CAが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、2つ以上の精製技術が組み合わされ、純度の増大が達成される。OspAポリペプチドはまた、化学合成法例えば、固相ペプチド合成により、当技術分野で知られている技術、例えば、MerrifieldetalJAmChemSoc852149HoughtenetalProcNatlAcadSciUSA825132andStewartandYoungSolidPhasePeptideSynthesisPierceChemicalCoRockfordILにおいて記載されているものを用いて調製される。そのようなポリペプチドはアミノ末端のメチオニンと共に、またはなしで合成される。化学的に合成されたOspAポリペプチドは、いくつかの態様では、ジスルフィド架橋を形成するためのこれらの参考文献において示される方法を用いて酸化される。化学的に合成されたOspAポリペプチドは組換えで生成された、または天然起源から精製された対応するOspAポリペプチドに匹敵する生物活性を有することが予測され、よって、組換えOspAポリペプチドと同じ意味で使用される。核酸およびポリペプチドを生成するための多くの追加の方法が当技術分野で知られており、それらの方法は、OspAポリペプチドを生成させるために使用することができることは認識される。OspAポリペプチド分子の化学誘導体OspAポリペプチドの化学修飾誘導体は、本明細書において下記で説明される開示が与えられれば、当業者により調製される。OspAポリペプチド誘導体は、ポリペプチドに自然に付着された分子の型または位置のいずれかが異なるように修飾される。誘導体は、いくつかの態様では、1つ以上の自然に付着された化学基の欠失により形成される分子を含む。配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、または173のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはOspAポリペプチド変異体は、1つの態様では、1つ以上のポリマの共有結合により修飾される。例えば、選択されるポリマは、典型的には水溶性であり、よって、これが付着されたタンパク質は、水性環境、例えば生理環境で沈殿しない。ポリマの混合物は好適なポリマの範囲に含まれる。一定の態様では、最終製品調製物の治療用途のために、ポリマは薬学的に許容される。ポリマはそれぞれ、様々な態様では、任意の分子量を有し分枝または非分枝である。ポリマはそれぞれ、典型的には約2kDa~約100kDaの平均分子量を有する約という用語は、水溶性ポリマの調製において、いくつかの分子が定められた分子量より大きい、幾分少ない重量を有することを示す。各ポリマの平均分子量は、様々な態様では、約5kDa~約50kDa、約12kDa~約40kDa、および約20kDa~約35kDaである。好適な水溶性ポリマまたはそれらの混合物としては、下記が挙げられるが、これらに限定されない:N結合またはO結合炭水化物;糖;ホスフェート;ポリエチレングリコールPEGタンパク質を誘導するために使用されたPEGの形態を含む、例えばモノ-C1-C10アルコキシ-またはアリールオキシ-ポリエチレングリコール;モノメトキシ-ポリエチレングリコール;デキストラン例えば、約6kDaの低分子量デキストランなど;セルロース;または他の炭水化物系ポリマ、ポリ-N-ビニルピロリドンポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマ、ポリプロピレンオキシド/エチレンオキシドコポリマ、ポリオキシエチル化ポリオール例えば、グリセロールおよびポリビニルアルコール。配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、もしくは173のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはOspAポリペプチド変異体の共有結合により付着されたマルチマーを調製するために時として使用される二官能性架橋分子もまた本発明により含まれる。いくつかの態様では、化学誘導体化はタンパク質を活性化ポリマ分子と反応させるのに使用される任意の好適な条件下で実施される。ポリペプチドの化学誘導体を調製するための方法は、一般的にはaポリペプチドを活性化ポリマ分子例えば、ポリマ分子の反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と、配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、もしくは173のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはOspAポリペプチド変異体が、1つ以上のポリマ分子に付着される条件下で反応させる工程、およびb反応生成物複数可を得る工程を含む。最適反応条件は、周知のパラメータおよび所望の結果に基づき決定される。例えば、ポリマ分子:タンパク質の比が大きいほど、付着されるポリマ分子のパーセンテージが大きくなる。1つの実施形態では、OspAポリペプチド誘導体は、単一のポリマ分子部分をアミノ末端に有する例えば、米国特許第5,234,784号を参照されたい。ポリペプチドのペグ化は、一定の態様では、例えば、下記参考文献において記載されるように、当技術分野で知られているペグ化反応のいずれかにより特定的に実施されるFrancisetalFocusonGrowthFactors3410;EP0154316号;EP0401384および米国特許第4,179,337号。例えば、ペグ化は、本明細書で記載されるように、反応性ポリエチレングリコール分子または類似の反応性水溶性ポリマとのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実施される。アシル化反応では、選択されるポリマ複数可は、単一の反応性エステル基を有しなければならない。還元的アルキル化では、選択されるポリマ複数可は、単一の反応性アルデヒド基を有しなければならない。反応性アルデヒドは、例えば、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド耐水性である、またはそのモノC1-C10アルコキシもしくはアリールオキシ誘導体である米国特許第5,252,714号を参照されたい。別の実施形態では、OspAポリペプチドは、ビオチンに化学的に結合され、結合されたビオチン/OspAポリペプチド分子はその後、アビジンに結合することができ、四価アビジン/ビオチン/OspAポリペプチド分子が得られる。OspAポリペプチドはまた、共有結合によりジニトロフェノールDNPまたはトリニトロフェノールTNPに結合され、得られた複合物は、抗DNPまたは抗TNP-IgMにより沈殿し、結合価10を有する十量体複合物が形成される。本明細書で開示されるOspAポリペプチド誘導体は、一定の態様では、非誘導体化分子に比べ、追加の活性、増強または減少された生物活性または他の特性、例えば増加または減少した半減期を有する。免疫原性組成物、ワクチン、および抗体本発明のいくつかの態様は、免疫原性組成物およびワクチンを含む。本発明の免疫原性キメラOspA分子は組み合わされて抗原複数可として使用され、被験体において抗OspA免疫応答を誘発するすなわち、ワクチンとして作用する。例示的な免疫原性OspAポリペプチド配列番号2、4、6、169、171、および173は、組み合わされて送達され、ボレリアの血清型1-6のいずれか1つ以上に対し、より一般的には、本明細書で記載されるボレリアの多くの他の種に対し免疫応答を誘発する。免疫応答はまた、本発明のOspAポリペプチドをコードするプラスミドベクターの送達すなわち、ネイキッドDNAの投与により上昇させることができる。いくつかの態様では、OspA核酸分子配列番号1、3、5、168、170、および172は注射により、リポソームを介して、または本明細書で記載される他の投与手段により送達される。免疫化されるとすぐに、被験体は、ボレリアの血清型1-6のOspAタンパク質に対し、およびボレリアの他の種に対し増大した免疫応答を誘発する。よって、上記で提示されるように、OspAポリペプチドおよびOspA核酸分子はどちらも本発明の免疫原性および/またはワクチン組成物において使用するための抗原として含められる。一定の態様では、核酸およびタンパク質はどちらも被験体に送達される。特定の態様では、核酸ワクチンに対する免疫応答は、同族タンパク質の同時投与により増強されることが提示されているWO99/30733号を参照されたい。核酸およびタンパク質は、同じ組成物中で投与される必要はない。どちらも単にタンパク質による免疫応答の誘導期中に投与されなければならず、いくつかの態様では、核酸が免疫系を刺激するまでマスクされ、または制止される。特定の態様では、ワクチンは、核酸およびタンパク質抗原を抗原提示細胞中に送達するように意図されるWO97/28818号を参照されたい。様々な態様では、核酸およびタンパク質は、例えば、共有結合により複合体化される。さらなる態様では、リポソーム製剤がワクチン抗原の免疫原性を増強させるために含められる。一定の態様では、本発明の免疫原性組成物は、本明細書で記載されるOspA分子のいずれか1つ以上を医薬担体と組み合わせて含み、ここで、組成物は、細胞表層タンパク質AOspAタンパク質に特異的に結合する抗体の産生を誘導する。いくつかの態様では、免疫原性組成物はまた、安定剤または抗菌性保存剤を含む。特定の態様では、免疫原性組成物は、ボレリアに特異的に結合する抗体の産生を誘導する。他の態様では、組成物は、ボレリアを中和する抗体の産生を誘導する。いくつかの態様では、本発明は、本明細書で記載されるキメラOspA分子抗原を含む免疫原性組成物におけるアジュバントの使用を含む。一定の態様では、抗原がアジュバントと同時投与される場合、免疫原性は著しく改善される。いくつかの態様では、アジュバントは、リン酸緩衝生理食塩水PBS中の0.001~50溶液として使用される。アジュバントは、抗原の免疫原性を増強するが、必ずしもそれ自体免疫原性ではない。アジュバントは、様々な態様では、ワクチン接種に対し多くのプラス効果を有する。場合によっては、アジュバントは、被験体において強い免疫応答の発生を促進する。アジュバントは、他の場合には、免疫応答のレベルを増加させ、その期間を引き延ばし、免疫記憶を改善する。アジュバントはしばしば、特定の被験体群の弱った免疫を克服し、または特定の危険群の免疫原性を改善するために使用される。アジュバントの免疫増強効果は、様々な場合において、防御反応を与える最終製剤中で必要とされる抗原の量の減少につながる。一般に、アジュバントは、その主要な作用機序に基づき、2つの主な群に分類され:第1の群は、自然免疫系受容体またはセンサのアゴニスト、例えば、Toll様受容体TLRアゴニスト、C型レクチン受容体アゴニスト、レチノイン酸誘導性遺伝子1RIG-1様受容体RLRアゴニスト、およびヌクレオチド結合ドメインおよびロイシンリッチリピート含有受容体NLRアゴニストである。第2の群はTLR非依存性アジュバントとしても知られている、送達系として機能する物質である。TLRアゴニストアジュバントの例は下記である:ASO4GlaxoSmithKline、市販のB型肝炎およびパピローマウイルスワクチンにおいてアジュバントとして使用される、TLR-4アゴニスト;Vaxinate、フラゲリン融合タンパク質TLR-5アゴニスト;および多くのTLR-9アゴニストアジュバント、例えば二本鎖DNAdsDNAおよびオリゴヌクレオチドCpGまたはODN1aを使用するもの。アジュバントのこのカテゴリに含まれる他のTLR-アゴニストとしては、糖脂質TLR-1、リポテイコ酸およびリポタンパク質TLR-1/TLR-2およびTLR-2/TLR-6リポ多糖、リポオリゴ糖およびモノホスホリル脂質AMPLTLR-4、二本鎖RNATLR-3;ペプチドグリカンTLR-6、一本鎖RNATLR-7が挙げられる。2つのC型レクチン受容体アゴニストアジュバントの例としては、β-グルカンデクチン-1およびマンナンデクチン-2が挙げられ、どちらも真菌細胞壁に由来する。RLR受容体アゴニストアジュバントは一本鎖ウイルスRNAおよび二本鎖ウイルスDNAを含み、NLRアゴニストアジュバントは、ペプチドグリカン分解生成物、微生物産物、および非感染性結晶粒子を含む。全ての場合において、アゴニストは自然免疫系受容体を直接活性化し、免疫増強炎症反応を引き起こすことにより作用する。第2の群のアジュバント、TLR非依存性アジュバントはほとんど、送達系として作用し、抗原提示細胞による抗原取込みおよび提示を増強させる。場合によっては、これらのアジュバントはまた、抗原を投与部位の近くに局所的に保持することにより、抗原の免疫系細胞への遅い持続放出を促進するデポー効果を生成させるように作用することができる。アジュバントはまた、免疫系細胞を抗原デポーに引きつけ、そのような細胞を刺激して、免疫応答を誘発する。TLR非依存性アジュバントの例としては、無機塩、例えば水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムまとめてalumと呼ばれるおよびリン酸カルシウム;水中油型エマルジョン例えば、MF59、AS03およびProVax;油中水型エマルジョンMontanide、TiterMax;バイオポリマAdvax;植物誘導体、とりわけサポニンの画分、SouthAmericanMolinaソープツリーキラヤサポナリアQuillajasaponariaの皮由来のトリテルペノイド抽出物SFA-1、QS21、QuilA;サポニン画分、ステロールおよび、任意で、リン脂質から構成される免疫刺激複合体ISCOMおよびISCOMマトリクス;様々なサイズおよび電荷を有するリン脂質球であるリポソームVaxfectinおよびVaxisome;ウイルス表面抗原、例えばインフルエンザ赤血球凝集素およびノイラミニダーゼを含むリポソームであるウイルス様粒子およびビロソーム;様々な組成物のナノ粒子;キトサン、ポリアルギニンなどのペプチドおよびKLKペプチドとして知られるペプチドが挙げられる。本明細書において上記で列挙されるアジュバントは、単独でまたは組み合わされて使用される。TLR依存性およびTLK非依存性アジュバントの組み合わせがしばしば好ましく、というのは、抗原およびTLR依存性アジュバントは、TLR非依存性アジュバントにより抗原提示細胞へ輸送されると考えられるからであり、TLR非依存性アジュバントはまた、取込みおよび安定性を刺激し、一方、TLR依存性アジュバントは直接、TLRシグナリングの活性化により免疫を増強させる。TLR依存性およびTLR非依存性アジュバントの組み合わせの例としては、AS01:MPLTLR-4アゴニスト、リポソームおよびQS-21どちらもTLR非依存性アジュバントの混合物;AS04:MPLTLR-4アゴニストおよび水酸化/リン酸アルミニウム;IC31:ODN1aTLR-9アゴニストおよびKLKペプチドTLR非依存性アジュバント;およびFreund完全アジュバント、マイコバクテリウムツベルクローシスの膜抽出物TLR-4アゴニストおよび水中油型エマルジョンTLR非依存性アジュバントが挙げられる。複数のTLR依存性アジュバントからなる組み合わせもまた、アジュバント処理されるワクチン製剤の免疫増強効果を最大にするために使用される。異なるアダプタータンパク質を使用するTLRのアゴニストがしばしば組み合わされる例えば、TRIFINF-βを誘導するToll/インターロイキン1受容体ドメイン含有アダプタータンパク質アダプター経路を使用する細胞膜結合TLR-3またはTLR-4受容体に対するアゴニストのTLRTLR-7、TLR-8およびTLR-9エンドソームまたはリソソームオルガネラにおいて発現され、MyD88一次応答タンパク質を分化させるミエロイドアダプタータンパク質経路を使用するのアゴニストとの組み合わせ。これらの免疫刺激薬またはアジュバントは、その上、ワクチンにおける宿主免疫応答を改善する。場合によっては、リポ多糖などの物質は、内因性アジュバントとして作用することができ、というのも、それらは、通常、ワクチンとして使用される死滅または減弱された細菌の成分であるからである。外因性アジュバント、例えば上記本明細書で列挙されるものは免疫調節物質であり、これらは典型的には非共有結合により抗原に結合され、宿主免疫応答を増強させるように製剤化される。広範囲の外因性アジュバントは、抗原に対し強力な免疫応答を誘発することができる。これらには、膜タンパク質抗原に複合体化されたサポニン免疫刺激複合体、鉱物油を有するプルロニックポリマ、鉱物油中の死滅させたマイコバクテリア、Freund完全アジュバント、細菌産物、例えばムラミルジペプチドMDPおよびリポ多糖LPS、ならびに脂質A、およびリポソームが含まれる。体液性免疫応答HIRおよび細胞免疫CMIを効率的に誘導するために、免疫源は、一定の態様では、アジュバント中で乳化される。理想的なアジュバントの望ましい特性としては、下記のいくつかまたは全てが挙げられる:毒性の欠如;長期にわたる免疫応答を刺激する能力;製造の容易さおよび長期貯蔵における安定性;様々な経路により投与される抗原へのCMIおよびHIRの両方を誘発する能力;他のアジュバントとの相乗作用;抗原提示細胞APCの集団と選択的に相互作用することができる能力;適切なTH1またはTH2細胞特異的免疫応答を特異的に誘発する能力;および抗原に対して適切な抗体アイソタイプレベル例えばIgAを選択的に増加させる能力。米国特許第4,855,283号参照により本明細書に組み込まれるは、免疫調節物質またはアジュバントとして、N-グリコシルアミド、N-グリコシル尿素およびN-グリコシルカルバメートを含む糖脂質類似体その各々は、糖残基においてアミノ酸により置換されるを教示する。米国特許第4,855,283号は、天然由来糖脂質に対し構造類似性を示すN-糖脂質類似体、例えばスフィンゴ糖脂質およびグリセロ糖脂質は、単純ヘルペスウイルスワクチンおよび仮性狂犬病ウイルスワクチンの両方において強い免疫応答を誘発することができることを報告した。いくつかの糖脂質は、長鎖アルキルアミンおよびアノマー炭素原子を介して糖と直接結合された脂肪酸から合成され、天然由来脂質残基の機能を模倣する。いくつかの態様では、免疫原性組成物は、免疫源に対する免疫応答を増強するのに十分な量のアジュバントを含む。好適なアジュバントとしては、アルミニウム塩リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム、スクアレン混合物SAF-1、ムラミルペプチド、サポニン誘導体、マイコバクテリア細胞壁調製物、モノホスホリル脂質A、ミコール酸誘導体、非イオン性ブロックコポリマ界面活性剤、QuilA、コレラ毒素Bサブユニット、ポリホスファゼンおよび誘導体、ならびに免疫刺激複合体ISCOM、例えばTakahashietalにより記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、アジュバントは合成アジュバントである。特定の態様では、合成アジュバントは、グルコピラノシル脂質アジュバントGLAである。本発明のさらなる態様は、本発明の免疫原性組成物および薬学的に許容される担体を含むワクチンである。上記本明細書で記載されるように、ワクチンは、一定の態様では、1つ以上の安定剤および/または1つ以上の保存剤を含む。1つの態様では、抗原をコードする核酸配列本明細書で記載されるキメラOspAポリペプチドに動作可能に結合されたプロモーターを含む少なくとも1つの組換え発現コンストラクトおよびアジュバントを含むワクチンが提供される。1つの実施形態では、組換え発現コンストラクトOspAポリヌクレオチドを含む発現ベクターはウイルスベクター中に存在し、これは一定のさらなる実施形態ではアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、およびレトロウイルスから選択されるウイルス中に存在する。本発明のさらなる態様は、本明細書で記載されるキメラOspA分子に対する抗体を含む。様々な態様では、本発明は、抗OspA抗体を製造し、ボレリア感染に対して免疫を提供するキメラOspA分子を含む。いくつかの態様では、これらの抗OspA抗体、例えば、マウス、ヒト、またはヒト化モノクローナル抗体または単鎖抗体は、被験体に投与され例えば、受動免疫化、ボレリアの血清型1-6のいずれか1つ以上のOspAタンパク質に対し免疫応答を実施させる。本明細書では、抗体という用語は1つ以上のOspAポリペプチドに対し特異性を有する分子を示す。好適な抗体は、当技術分野で知られている方法を用いて調製される。一定の態様では、OspA抗体は、OspAポリペプチドのある部分に結合することができ、よって、ポリペプチドのOspAポリペプチド受容体複数可への結合が阻害される。本発明のキメラOspAポリペプチドに結合する抗体および抗体フラグメントは、本発明の範囲内にある。いくつかの態様では、本発明の抗体には、配列番号2、4、6、8、10、12、169、171、および173からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドで動物を免疫化することにより生成される1つ以上のOspAポリペプチドに特異的に結合する抗体またはそのフラグメントが含まれる。他の態様では、本発明は、配列番号1、3、5、7、9、11、168、170、および172からなる群より選択される核酸配列によりコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを含む。様々な態様では、抗体またはそのフラグメントはヒト、ヒト化、ポリクローナル、またはモノクローナルである。さらなる態様では、抗体はFabまたはFab’抗体である。特定の態様では、抗体は検出可能な標識を含む。いくつかの態様では、抗体は、抗体の化学修飾誘導体である。本発明によるキメラOspA分子の投与は、ヒトまたは動物において免疫または抗体応答を刺激する。いくつかの態様では、3つのキメラOspA分子例えば、脂質付加されたOspA1/2251、脂質付加されたOspA6/4OspA、および脂質付加されたOspA5/3;またはオリジナルOspA1/2、オリジナルOspA6/4、およびオリジナルOspA5/3は、本明細書で記載される6つ全ての血清型1-6に対して抗体応答を誘発するために一緒に投与される。この抗体応答は、本発明の方法が、様々な態様では、単に免疫応答を刺激するために防御反応でもあることとは対照的に使用されることを意味し、というのも得られた抗体防御なしはそれにもかかわらず有用であるからである。誘発する抗体から、当技術分野ではよく知られている技術により、モノクローナル抗体が調製され;それらのモノクローナル抗体はよく知られている抗体結合アッセイ、診断キットまたは試験において、ボレリアブルグドルフェリs.l.の有無を決定するためまたはスピロヘータへの免疫応答が単に刺激されただけかどうかを決定するために使用される。モノクローナル抗体は、一定の態様では、ボレリア抗原、例えばOspAを回収または単離するために免疫吸着クロマトグラフィーにおいて使用される。本発明のOspA抗体は、様々な態様では、ポリクローナル、例えば単一特異性ポリクローナル、モノクローナルMAb、組換え、キメラ、ヒト化、例えばCDRグラフト化、ヒト、単鎖、および/または二重特異性、ならびにそのフラグメント、変異体または誘導体である。抗体フラグメントは、OspAポリペプチド上のエピトープに結合する抗体のそれらの部分を含む。そのようなフラグメントの例としては全長抗体の酵素切断により生成されるFabおよびFab’フラグメントが挙げられる。他の結合フラグメントとしては組換えDNA技術、例えば抗体可変領域をコードする核酸配列を含む組換えプラスミドの発現により作製されたものが挙げられる。OspAポリペプチドに対して作られるポリクローナル抗体は、一般的には被験体ウサギ、マウス、または他の動物もしくは哺乳類を含むにおいて、OspAポリペプチドおよびアジュバントの複数の皮下、筋肉内または腹腔内注射により生成される。一定の態様では、本発明のOspAポリペプチドを免疫化される種において免疫原性である担体タンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシアニンシ、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、または大豆トリプシンインヒビターに結合させることは有用である。また、アジュバント、例えばalumが、免疫応答を増強させるために使用される。免疫化後、血液試料が免疫化された被験体から引き出され、血清が抗OspAポリペプチド抗体力価に対しアッセイされる。OspAポリペプチドに対して作られるモノクローナル抗体は、培養下の連続細胞株による抗体分子の産生を提供する任意の方法により生成される。モノクローナル抗体を調製するための好適な方法の例としては、KohleretalNature256495497のハイブリドーマ法およびヒトB-細胞ハイブリドーマ方法、KozborJImmunol1333001およびBrodeuretalMonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplicationspp5163が挙げられる。本発明により、OspAポリペプチドと反応するモノクローナル抗体性を産生するハイブリドーマ細胞株もまた提供される。本発明のモノクローナル抗体は、場合によっては、治療薬として使用するために修飾される。1つの実施形態は、重および/または軽鎖の一部が特定の種に由来する、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるが、鎖複数可の残りは別の種に由来する、または別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるキメラ抗体である。そのような抗体のフラグメントもまた、所望の生物活性を示す限り含まれる。米国特許第4,816,567号およびMorrisonetalProcNatlAcadSciUSA8168516855を参照されたい。別の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は、ヒト化抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法は当技術分野ではよく知られている米国特許第5,585,089号および5,693,762号を参照されたい。一般的には、ヒト化抗体は、非ヒトである起源からこれに導入された1つ以上のアミノ酸残基を有する。ヒト化は、例えば、当技術分野で記載される方法JonesetalNature321522525RiechmannetalNature332323327VerhoeyenetalScience23915341536を用いて、ヒト抗体の対応する領域に対して齧歯類相補性決定領域CDRの少なくとも一部を置換することにより実施することができる。別の実施形態では、ヒト抗体はファージディスプレイライブラリから生成されるandMarksetalJMolBiol222581。これらのプロセスは、糸状バクテリオファージの表面上の抗体レパートリーのディスプレイおよびその後の最適抗原へのそれらの結合によるファージの選択を介する免疫同定を模倣する。1つのそのような技術は、PCT出願第PCT/US98/17364号Adamsらに記載されており、これは、そのようなアプローチを使用するMPL-およびmsk-受容体に対する高親和性および機能的アゴニスト抗体の単離を記載する。キメラ、CDRグラフト化、およびヒト化抗体は、典型的には組換え方法により生成される。抗体をコードする核酸が、本明細書で記載されるまたは当技術分野で知られている材料および手順を用いて、宿主細胞に導入され、発現される。1つの実施形態では、抗体は哺乳類宿主細胞、例えばCHO細胞において生成される。モノクローナル例えば、ヒト抗体は、様々な態様では、本明細書で記載されるように、宿主細胞における組換えDNAの発現またはハイブリドーマ細胞における発現により生成される。いくつかの態様では、モノクローナル抗体またはフラグメントはヒト化される。特定の態様では、モノクローナル抗体は、本明細書で記載されるF237/BK2である。一定の態様では、本発明は、被験体においてボレリア感染またはライム病を防止または治療するための方法を含み、方法は、本明細書で記載される抗体またはそのフラグメントを被験体に、ボレリア感染またはライム病を防止または治療するのに有効な量で投与する工程を含む。特定の態様では、抗体またはそのフラグメントは、過免疫血清、過免疫血漿、またはその精製免疫グロブリン画分である。他の態様では、抗体またはそのフラグメントは、精製免疫グロブリン調製物または免疫グロブリンフラグメント調製物である。本発明の抗OspA抗体は、様々な態様では、OspAポリペプチドの検出および定量のための任意の周知のアッセイ方法、例えば競合的結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、および免疫沈降アッセイにおいて使用される。抗体は、使用されるアッセイ方法に適切な親和性でOspAポリペプチドに結合する。診断または臨床適用のために、ある実施形態では、抗OspA抗体は、検出可能な部分により標識される。検出可能な部分は、直接または間接的に、検出可能なシグナルを生成させることができるいずれかにすることができる。例えば、一定の態様では、検出可能な部分は、放射性同位体、例えば3H、14C、32P、35S、または125I;蛍光または化学発光化合物、例えばフルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、またはルシフェリン;あるいは酵素、例えばアルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、または西洋ワサビペルオキシダーゼである。競合的結合アッセイは、標識された標準例えば、OspAポリペプチド、またはその免疫学的反応性部分の、限定された量の抗OspA抗体との結合に対し、試験試料分析物OspAポリペプチドと競合する能力に依存する。試験試料中のOspAポリペプチドの量は、抗体に結合する標準の量に逆比例する。結合する標準の量の決定を促進するために、抗体は、典型的には競合前または後に可溶化され、そのため、抗体に結合される標準および分析物は、結合されないままの標準および分析物から都合良く分離される。サンドイッチアッセイは、典型的には、各々が検出および/または定量されるタンパク質の異なる免疫原性部分、またはエピトープに結合することができる2つの抗体の使用を含む。サンドイッチアッセイでは、試験試料分析物は、典型的には固体サポートに固定された第1の抗体により結合され、その後、第2の抗体が分析物に結合し、よって不溶性三部分複合体が形成する。例えば、米国特許第4,376,110号を参照されたい。第2の抗体はそれ自体、場合によっては、検出可能な部分によって標識され直接サンドイッチアッセイ、または検出可能な部分で標識された抗免疫グロブリン抗体を用いて測定される間接サンドイッチアッセイ。例えば、1つの型のサンドイッチアッセイは酵素結合免疫吸着測定法ELISAであり、この場合、検出可能な部分は酵素である。抗OspA抗体はまた、インビボイメージングにとって有用である。検出可能な部分で標識された抗体は、一定の態様では、動物の血流に投与され、宿主中の標識された抗体の存在および位置がアッセイされる。抗体は、様々な態様では、核磁気共鳴、放射線学、または他の当技術分野で知られている検出手段に関係なく、動物において検出可能な任意の部分で標識される。本発明のいくつかの態様では、OspA抗体は治療薬として使用される。キメラOspA組成物および投与本明細書で記載されるOspAキメラポリペプチドを被験体に投与するために、OspAポリペプチドは、1つ以上の薬学的に許容される担体を含む組成物中で製剤化される。薬学的にまたは薬理学的に許容されるという句は、以下で記載されるように、当技術分野でよく知られている経路を用いて投与された場合、アレルギーまたは他の有害反応を生成させない分子部分および組成物を示す。薬学的に許容される担体は、任意のおよび全ての臨床的に有用な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。いくつかの態様では、組成物は、水または一般的な有機溶媒と溶媒和物を形成する。そのような溶媒和物もまた、含まれる。本発明の免疫原性組成物またはワクチン組成物は、様々な態様では、経口、局所、経皮、非経口、吸入噴霧、経膣、経直腸、または頭蓋内注射により投与される。本明細書では、非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、大槽内注射、または注入技術を含む。静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、くも膜下腔内、眼球後、肺内注射およびまたは特定の部位での外科的移植による投与が同様に企図される。一般的には、組成物は、本質的に発熱物質、ならびにレシピエントにとって有害となり得る他の不純物を含まない。医薬組成物の製剤は、選択される投与経路によって変動する例えば、溶液、エマルジョン。投与される組成物を含む適切な組成物は、生理学的に許容されるビヒクルまたは担体中で調製される。溶液またはエマルジョンでは、好適な担体としては、例えば、水性またはアルコール性/水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液、例えば生理食塩水および緩衝媒質が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、いくつかの態様では、塩化ナトリウム溶液、Ringerデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加Ringerまたは固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルは、一定の態様では、様々な添加物、保存剤、または流体、栄養分または電解質補給物を含む。活性成分としてOspAポリペプチドを含む本発明の化合物および方法において有用な医薬組成物は、様々な態様では、投与経路によって薬学的に許容される担体または添加物を含む。そのような担体または添加物の例としては水、薬学的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンゴム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミンHSA、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、薬学的に許容される界面活性剤などが挙げられる。使用される添加物は、限定はされないが上記またはそれらの組み合わせから、必要に応じて、本発明の剤形によって選択される。様々な水性担体、例えば、水、緩衝水、0.4生理食塩水、0.3グリシン、または水性懸濁液は、様々な態様では、活性化合物を水性懸濁液の製造に好適な賦形剤との混合物で含む。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴム;分散または湿潤剤であり、場合によっては、天然由来ホスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドの脂肪酸との縮合生成物、例えばステアリン酸ポリオキシエチレン、エチレンオキシドの長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドの、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート、またはエチレンオキシドの脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレアートである。水性懸濁液は、いくつかの態様では、1つ以上の保存剤、例えばエチル、またはn-プロピル、p-ヒドロキシベンゾエートを含む。いくつかの態様では、OspA組成物は、貯蔵のために凍結乾燥され、使用前に好適な担体中で再構成される。この技術は、従来の免疫グロブリンでは有効であることが示されている。当技術分野で知られている任意の好適な凍結乾燥および再構成技術が使用される。凍結乾燥および再構成によって、様々な程度の抗体活性損失が引き起こされること、使用レベルが補償するためにしばしば調整されることが、当業者には認識される。水の添加による水性懸濁液の調製に好適な分散性粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、懸濁剤および1つ以上の保存剤との混合物中で活性化合物を提供する。好適な分散または湿潤剤および懸濁剤は、以上ですでに言及されたものにより例示される。一定の態様では、これらの製剤中のOspA濃度は広く、例えば約0.5重量未満から、通常約1重量または少なくとも約1重量から15または20重量まで変動し、主に液量、粘度、などに基づき、選択される特定の投与方法に従い選択される。よって、例えば、限定はされないが、非経口注射のための典型的な医薬組成物は、1mlの滅菌緩衝水、および50mgの血液凝固因子を含むように構成される。静脈内注入のための典型的な組成物は、250mlの滅菌Ringer溶液、および150mgの血液凝固因子を含むように構成することができる。非経口投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に知られており、あるいは明らかであり、例えば、RemingtonsPharmaceuticalScience15thedMackPublishingCompanyEastonPaにおいてより詳細に記載される。有効用量は通常、1回の投与あたり0.01mg~1000mg/kg体重の範囲内にある。様々な態様では、医薬組成物は滅菌された注射可能な水性、油性懸濁液、分散物または滅菌された注射可能な溶液または分散物の即時調製のための滅菌粉末の形態である。懸濁液は、いくつかの態様では、周知の技術に従い、上記で言及されているそれらの好適な分散または湿潤剤および懸濁剤を用いて、製剤化される。滅菌された注射可能な調製物は、一定の態様では、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌された注射可能な溶液または懸濁液、例えば1,3-ブタンジオール中の溶液である。いくつかの実施形態では、担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール、など、それらの好適な混合物、植物油、Ringer溶液および等張塩化ナトリウム溶液を含む溶媒または分散媒である。加えて、滅菌された固定油は、従来溶媒または懸濁媒として使用される。この目的のために、任意の無刺激固定油が使用され、様々な態様では、合成モノまたはジグリセリドが挙げられる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸は注射液の調製において用途が見いだされる。全ての場合において形態は滅菌されなくてはならず、容易に注入できる程度まで流動性がなければならない。適正な流動性が、例えば、コーティング、例えばレシチンの使用により、分散物の場合要求される粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤を使用することにより維持される。製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、微生物、例えば細菌および真菌の汚染作用に対して保存されなければならない。微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール、などによりもたらされる。多くの場合、等張作用物質、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが望ましい。一定の態様では、注射可能な組成物の長期吸収は、組成物における吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によりもたらされる。投与に有用な組成物は、一定の態様では、それらの有効性を増加させるための取込みまたは吸収エンハンサーと共に製剤化される。そのようなエンハンサーとしては、例えば、サリチレート、グリココレート/リノレート、グリコレート、アプロチニン、バシトラシン、SDS、カプラートなどが挙げられる。例えば、FixおよびOliyaietalを参照されたい。加えて、本発明の化合物および方法において使用される組成物の親水性および疎水性の特性はうまくバランスがとられ、よって、インビトロおよびとりわけインビボでの使用の両方に対しそれらの有用性が増強され、そのようなバランスを欠く他の組成物は、実質的には有用性が低くなる。特定的には、本発明の組成物は、水性培地中で適切な溶解度を有し、これにより、体内での吸収およびバイオアベイラビリティを可能にし、一方、脂質中である程度の溶解度を有し、これによって化合物は、細胞膜を横切り、推定上の作用部位まで移動することができる。特定の態様では、本明細書で記載されるOspAポリペプチドは、アジュバントを含むワクチン組成物中で製剤化される。当技術分野で知られている任意のアジュバントはワクチン組成物の様々な態様で使用され、例えば、油系アジュバント、例えばFreund完全アジュバントおよびFreund不完全アジュバント、ミコレート系アジュバント例えば、トレハロースジミコール酸、細菌リポ多糖LPS、ペプチドグリカンすなわち、ムレイン、ムコペプチド、または糖タンパク質、例えばN-Opaca、ムラミルジペプチド[MDP]、またはMDP類似体、プロテオグリカン例えば、肺炎桿菌Klebsiellapneumoniaeから抽出、連鎖球菌調製物例えば、OK432、Biostim商標例えば、01K2、EP109942号、EP180564号およびEP231039号のIscoms、水酸化アルミニウム、サポニン、DEAE-デキストラン、中性油例えばミグリオール、植物油例えば落花生油、リポソーム、プルロニック登録商標ポリオール、Ribiアジュバント系例えばGB-A-2189141を参照されたい、またはインターロイキン、特に細胞免疫を刺激するものが挙げられる。アミコラ-タAmycolata、放線菌目内の細菌属の抽出物からなる別の天然アジュバントが、米国特許第4,877,612号において記載されている。さらに、専売アジュバント混合物が市販されている。使用されるアジュバントは、一部分において、レシピエント被験体に依存する。投与するアジュバントの量は、被験体の型およびサイズに依存する。最適用量は、ルーチン方法により容易に決定される。ワクチン組成物は、任意で医薬ビヒクル、賦形剤、媒質として機能するワクチン適合性の薬学的に許容されるすなわち、滅菌および無毒の液体、半固体、または固体希釈剤を含む。当技術分野で知られている任意の希釈剤が使用される。例示的な希釈剤としては、、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ステアリン酸マグネシウム、メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、アルギナート、デンプン、ラクトース、スクロース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、アカシアゴム、リン酸カルシウム、鉱物油、カカオバター、およびカカオ脂が挙げられるが、これらに限定されない。ワクチン組成物は、送達に好都合な形態にパッケージされる。組成物は、カプセル、カプレット、サシェ、カシェ、ゼラチン、紙、または他の容器内に封入される。これらの送達形態は、免疫原性組成物のレシピエント生物へのエントリと適合する場合、特に、免疫原性組成物が単位用量形態で送達される場合好ましい。用量単位が、例えば、錠剤、カプセル、坐剤、バイアル、またはカシェ中にパッケージされる。本発明は、哺乳類宿主におけるOspA抗体を含む、被験体において免疫学的応答を誘導するための方法を含み、有効量の本明細書で記載されるOspA組成物を投与することを含む。同様に、本発明は、被験体においてボレリア感染またはライム病を防止または治療するための方法を含み、方法は、有効量の、本明細書で記載されるワクチン組成物を被験体に投与する工程を含む。ワクチン組成物は、本明細書で詳細に上記で記載される任意の従来の方法により免疫化される被験体に導入される。一定の態様では、組成物は、単回投与または複数回投与で、一定の期間にわたり投与される下記でより詳細に記載される。免疫学的応答を誘導するためのキメラOspA組成物の投与/方法投与される免疫原性組成物またはワクチン組成物の有用な用量は、薬物の作用を調節する様々な因子、例えば、被験体の年齢、状態、体重、性別および食餌、全ての感染の重症度、投与時間、投与方法、および他の臨床学的因子によって変動する。いくつかの態様では、本発明の製剤または組成物は、最初のボーラス、続いて一定期間が経過した後に、ブースター送達により投与される。一定の態様では、本発明の製剤は、最初のボーラス、続いて製剤の治療的循環レベルを維持する連続注入により、投与される。特定の態様では、本発明の免疫原性組成物またはワクチン組成物は、様々な期間後、ワクチン接種スキームで投与される。いくつかの態様では、ワクチン接種は、ボレリア感染の傾向のある領域への旅行者に対し迅速免疫化スキームで送達される。別の例として、本発明の組成物または製剤は、1回投与として投与される。当業者は容易に、適正な医療行為および個々の被験体の臨床状態により決定される有効用量および投与レジメンを最適化する。投与回数は、作用物質の薬物動態パラメータおよび投与経路に依存する。医薬製剤は、当業者により、投与経路および所望の用量によって決定される。例えば、RemingtonsPharmaceuticalSciences18thEdpages14351712その開示は、参照により本明細書に組み込まれるを参照されたい。そのような製剤は、場合によっては、投与される組成物の物理的状態、安定性、インビボでの放出速度、インビボでのクリアランス速度に影響する。投与経路によって、好適な用量が、特定の態様では、体重、体表面積または器官サイズに従い計算される。いくつかの態様では、適切な用量は、適切な用量応答データと共に血液レベル用量を決定するための確立されたアッセイを使用することより確認される。一定の態様では、個体の抗体力価が、最適用量および投与レジメンを決定するために測定される。最終投与レジメンは、主治医または医者により、医薬組成物の作用を修正する様々な因子、例えば組成物の特異的活性、被験体の応答性、被験体の年齢、状態、体重、性別および食餌、全ての感染または悪性状態の重症度、投与時間および他の臨床学的因子を考慮して決定される。研究が実施されるにつれ、さらなる情報が、関連状態の防止および/または治療のための適切な用量レベルおよび治療期間に関して現れてくるであろう。一定の態様では、OspA免疫原性またはワクチン組成物は、被験体において免疫応答を誘起するのに十分な、任意の用量のOspA核酸分子複数可またはポリペプチド複数可を含む。治療的に使用されるOspA免疫原性またはワクチン組成物の有効量は、例えば、治療背景および目的に依存する。当業者であば、よって、ワクチン接種または治療に対する適切な用量レベルは、一部には、送達される分子、OspA分子複数可が使用される適応、投与経路、ならびに患者のサイズ体重、体表面または器官サイズおよび状態年齢および全体的な健康によって変動することを認識するであろう。したがって、臨床医は、場合によっては、用量を滴定し、投与経路を修正して、最適治療効果が得られるようにする。典型的な用量は、様々な態様では、上記因子によって、約0.1μg/kg~約100mg/kg以上の範囲である。他の実施形態では、用量は、0.1μg/kg~約100mg/kg;または1μg/kg~約100mg/kg;または5μg/kg~約100mg/kgの範囲とすることができる。例として、本発明において有用なOspAポリペプチドの用量は、約10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、90μg/ml、100μg/ml、110μg/ml、120μg/ml、130μg/ml、140μg/ml、150μg/ml、160μg/ml、170μg/ml、180μg/ml、190μg/ml、200μg/ml、210μg/ml、220μg/ml、230μg/ml、240μg/ml、250μg/ml、260μg/ml、270μg/ml、280μg/ml、290μg/ml、300μg/ml、320μg/ml、340μg/ml、360μg/ml、380μg/ml、400μg/ml、420μg/ml、440μg/ml、460μg/ml、480μg/ml、500μg/ml、520μg/ml、540μg/ml、560μg/ml、580μg/ml、600μg/ml、620μg/ml、640μg/mlである。特定の態様では、典型的な用量は、1被験体あたり0.1~5.0mlを含む。さらに特定的な態様では、典型的な用量は、1被験体あたり0.2~2.0mlを含む。一定の態様では、用量は1被験体あたり0.5~1.0mlを含む。投与回数は、使用される製剤中のOspA分子の薬物動態パラメータに依存する。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する用量に到達するまで組成物を投与する。よって、組成物は、様々な態様では、単回投与として、または時間をかけて2回以上の投与同じ量の所望の分子を含んでも、含まなくてもよいとして、または移植装置またはカテーテルを介する連続注入として投与される。適切な用量のさらなる精密化は、ルーチン的に当業者によりなされ、彼等によりルーチン的に実施されるタスクの範囲内にある。適切な用量はしばしば、ルーチン的に入手される適切な用量応答データの使用により確認される。キット追加の態様として、本発明は、被験体への投与のための使用を容易にするようにパッケージされた、被験体にOspAポリペプチド複数可を投与するための1つ以上の医薬製剤を含むキットを含む。特定の実施形態では、本発明は単回用量投与単位を生成させるためのキットを含む。キットは、様々な態様では、それぞれ、乾燥タンパク質を有する第1の容器および水性製剤を有する第2の容器の両方を含む。単一および複数チャンバを有する予め充填されたシリンジ例えば、液体シリンジおよび分散シリンジlyosyringeを含むキットもまた、本発明の範囲に含まれる。別の実施形態では、そのようなキットは、密閉ボトルまたはベッセルなどの容器にパッケージされた本明細書で記載される医薬製剤例えば、治療タンパク質またはペプチドを含む組成物を、容器に添付された、またはパッケージに含まれる、方法を実施する際の化合物または組成物の使用を記載するラベルと共に含む。1つの実施形態では、医薬製剤は容器内のヘッドスペースの量例えば、液体製剤と容器の上面との間の空気の量が非常に小さくなるように容器にパッケージされる。好ましくは、ヘッドスペースの量は無視できるすなわち、ほとんどない。1つの態様では、キットは、治療タンパク質またはペプチド組成物を有する第1の容器および組成物のための生理学的に許容される再構成溶液を有する第2の容器を含む。1つの態様では、医薬製剤は、単位剤形でパッケージされる。キットは任意でさらに、特定の投与経路にしたがって医薬製剤を投与するのに好適な装置を含む。いくつかの態様では、キットは、医薬製剤の使用を説明するラベルを含む。本明細書で引用される各出版物、特許出願、特許および他の参考文献は、本開示と矛盾することのない程度まで、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書で記載される実施例および実施形態は、例示目的のためのものにすぎず、これらを考慮すると様々な改変および変更が、当業者に示唆され、それらは本出願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲に含まれることは理解される。本明細書で引用される出版物、特許、特許出願はすべて、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。実施例本発明の追加の態様および詳細は、下記実施例から明らかになるであろう。これらの実施例は、制限するものではなく、むしろ例示であることが意図される。実施例1:OSPAワクチン製剤の決定のための欧州ボレリアブルグドルフェリセンスラト株由来のOSPAの配列解析分子疫学研究の目的は、欧州用のライム病OspAワクチンのための好適な製剤を決定することがであった。研究は、B.ブルグドルフェリセンスラトの大きな様々な株コレクション由来のOspA遺伝子の配列解析分子疫学これは十分に欧州の広い地理的カバレッジを表す、疾患と関連する様々な臨床症候群、およびライム病と関連する3つ病原性遺伝種B.アフゼリ、B.ガリニおよびB.ブルグドルフェリssの各々を基本とした。ライム病は、ボレリアブルグドルフェリセンスラトにより引き起こされ、これは、総計13遺伝種を含み、そのうちの3つB.アフゼリ、B.ガリニおよびB.ブルグドルフェリssがヒトにおいて病原体であると認識されている。最初に、大規模な疫学調査下記表3を参照されたいを実施し、欧州の21の国からの、マダニ由来ライム病患者由来のボレリアブルグドルフェリセンスラト株を評価した。16の欧州国から収集した総計553欧州ボレリア分離株を研究した。各種をPCRにより各種の16srRNA遺伝子に特異的なプライマーセットを使用して決定した。欧州においてヒトライム病を引き起こすことが知られている3つのボレリア種の各々由来の分離株が十分表された:B.アフゼリn=309、55.9、B.ブルグドルフェリセンスストリクトn=67、12.1、およびB.ガリニn=173、31.3。359のヒト分離株のうち、56.8がB.アフゼリであり、B.アフゼリは、ほとんどの場所においてヒト分離株から決定された主な種であった。同様に、B.アフゼリは、54.1のマダニ分離株から単離された。B.ブルグドルフェリs.s.は11.7のヒト株および12.9のマダニ分離株から単離された。B.ブルグドルフェリs.s.は、東南欧州、特にイタリア、ハンガリー、スロベニアおよびオーストリア由来のヒト分離株から単離された。B.ガリニ株は、30.4のヒト分離株から単離され、マダニ分離株の33を占めた。ヒトおよびマダニから単離されたB.ガリニ株は、欧州全体の地理的領域のほとんどから得られた。この研究からのデータは他の欧州研究から示されたデータとよく相関し、研究した分離株のコレクションは、欧州におけるライム病の正確な状況を表すことが示唆される。欧州に対する最適ワクチン製剤を決定するためにOspA配列決定を実施した。このデータに基づき、OspA型1~6を含むワクチンは、98.1の株および96.7の侵襲性疾患症例をカバーする。欧州ボレリア分離株の疫学調査結果は、OspA型1、2、3、4、5および6に基づくワクチンは、98のライム病および96.7の侵襲性神経ボレリア症分離株の欧州での理論的カバレッジを提供することを示す。よって、それぞれ2つのOspA血清型を表す、3つの新規組換えOspA1/2、6/4、および5/3を含むワクチンは、欧州のライムボレリア症と関連する6つの流行性OspA血清型1-6全てに対し、および米国のライムボレリア症に関連する単一OspA血清型に対する防御に必要な主構造要素を保持する。B.ガリニOspA血清型5および3を表すOspA5/3コンストラクトの包含OspA血清型1/2および6/4と共には、98.1の疾患および96.7の侵襲性分離株に対し防御しなければならない。OspA5/3のないワクチンは、約88.9のみの疾患、約73.4のみの侵襲性疾患に対し防御することが予測される。よって、6つの血清型全てを含むワクチンは、4つの血清型しか有さないワクチンよりもライム病防止においてより有効である。実施例2:脂質付加されたOSPAをコードする合成OSPA遺伝子の構築のための戦略研究の目的は、レシピエントをこれらのいくつかのボレリア株のいずれかにより引き起こされるライム病から防御するワクチンを製造するために、ボレリアのいくつかの株から脂質付加されたOspAキメラコンストラクトを調製することであった。一般的な戦略を図1にまとめて示し、下記で説明する。各新規OspA遺伝子に対し、4つの組の30-60塩基のオリゴヌクレオチドを合成した。各オリゴヌクレオチドは、8-12の相補的なオーバーラップオリゴヌクレオチドから構成された。各組からのオリゴヌクレオチドを、別々の実験で、共にアニールさせ、いずれかの端に特異的な制限酵素認識部位を有する二本鎖DNAフラグメント、すなわちフラグメントN-HNdeI-HindIII、H-KHindIII-KpnI、K-EKpnI-EcoRIおよびE-BEcoRI-BamHIを生成させた。4つのフラグメントの各々を、独立してpUC18にクローニングさせ、対応する制限酵素で切断し、大腸菌宿主DH5α中にトランスフォームさせ、その後、クローニングされたフラグメントの配列を確認した。大腸菌株DH5α[遺伝子型:endA1hsdR17rK-mKsupE44thi-1recA1gyrANalrrelA1DlacZYA-argFU169deoRF80dlacDlacZM15]GibcoBRLを、全ての中間クローニング工程に対して使用した。この株は、大腸菌株K12、遺伝子工学で最も広く使用される宿主に由来する。株はamp-であり、アンピシリン耐性遺伝子ampを含むベクターにより形質転換体の選択が可能である。大腸菌HMS174DE3を発現のための宿主として選択した。大腸菌HMS174DE3宿主細胞[遺伝子型:F-recA1hsdRrk12-mk12RifRDE3]Novagenを、最終クローニング工程のために使用した。株はkan-であり、カナマイシン耐性遺伝子kanを含むベクターにより形質転換体の選択が可能である。pUC18GibcoBRL、Basel、スイスを全ての中間工程のためのクローニングベクターとして使用した。というのも、遺伝子操作および配列決定が、このプラスミドを用いた場合にpET30aよりも容易であったからである。主要特徴は特に、塩基対149~469のLacZαペプチドをコードするlacZ遺伝子フラグメント塩基対507のlacプロモーター、塩基対1629~2486のアンピシリン耐性決定基をコードするbla遺伝子塩基対2521のblaプロモーター、塩基対867の複製開始点および塩基対185~451の複数のクローニング部位である図12。pET30aNovagenを、最終完全OspA遺伝子インサートのための発現ベクターとして使用した。pETベクターでは、遺伝子は、T7プロモーターの制御下でクローニングさせ、発現は、宿主細胞にT7RNAポリメラーゼ源を提供することにより誘導させたT7RNAポリメラーゼ源が提供されるまで発現は起こらない。主要特徴は、塩基対4048~4860のカナマイシン耐性kanをコードする遺伝子、lacl遺伝子塩基対826-1905、塩基対4956-5411のF1複製開始点および塩基対158~346の複数のクローニング部位である図13。全長OspA遺伝子を作製するために必要とされる4つのフラグメントをDNAミニプレップから切除した。DNAを、オリジナルクローニング工程のために使用された同じ制限酵素を使用して4つのクローンの各々から単離した。DNAフラグメントを精製し、NdeIおよびBamHIで切断したpUC18DNAと共に連結し、大腸菌DH5αコンピテント細胞にトランスフォームさせた。pUC18でクローニングさせた全長OspA遺伝子を配列決定し、この工程で誤差が導入されていないことを確認した。OspA遺伝子をその後、制限酵素NdeIおよびBamHIを用いてpET-30a発現ベクターにサブクローニングさせ、大腸菌宿主HMS174DE3にトランスフォームさせた。pET30aベクターでは、OspA遺伝子は、バクテリオファージT7プロモーターにより制御される。3つの合成OSPA遺伝子を、ボレリアの血清型1および2OspAlipBsOspA1/2251、血清型6および4OspAlipBsOspA6/4ならびに血清型5および3OspAlipBsOspA5/3由来の防御エピトープを有するOspA分子をコードするように設計した。これらの分子の一次アミノ酸配列それぞれ、配列番号2、4、および6を、図2-8で示し、それらの設計に組み込まれた主特徴の詳細な説明と共に、本明細書で説明する。lipBsOspA1/2コンストラクトに対するオリゴヌクレオチドを社内で、ABI394DNA/RNA合成機において合成した。lipBsOspA5/3およびlipBsOspA6/4コンストラクトに対するオリゴヌクレオチドは、GenXpressWienerNeudorf、オーストリアから購入し、HPLC精製した。大腸菌コンピテント細胞の調製単一コロニーを使用して、5ml改変LBブロス5.5gNaCl、5g酵母抽出物、10g大豆ペプトン動物または遺伝的に修飾された植物源から入手されなかった-1lの水あたりに播種した。培養物を濁るまでインキュベートし、その後、培養物を予熱改変LBブロスで希釈して、25mlの体積とした。培養物を、0.2~0.6のOD600nmに到達するまで40-60分さらにインキュベートし、希釈して125mlの体積とし、500mlフラスコに移し、0.6のOD600nmに到達するまでインキュベートした。培養物を5分間、氷浴中穏やかに振盪させることにより直ちに冷却し、細胞を直接ペレット化しBeckman遠心機、4000rpmで10分、TfBI緩衝液TeknovaHollister、CA30mMK-アセテート、50mMMnCl2、100mMKCL、10mMCaCl215グリセロールで注意深く洗浄し、5mlのTfBII10mMNa-MOPS、75mMCaCl2、10mMKCL、15グリセロールに再懸濁させ、氷上で15分間保持した。細胞をその後、ピペットでとり100μlアリコートとし、直接ドライアイス中で急速凍結させた。OspA遺伝子フラグメントを形成させるためのオリゴヌクレオチド混合物のアニーリングdenovo合成3つの合成OSPA遺伝子を血清型1および2OspAlipBsOspA1/2、血清型6および4OspAlipBsOspA6/4ならびに血清型5および3OspAlipBsOspA5/3由来の防御エピトープを有するOspA分子をコードするように設計した。各新規OspA遺伝子脂質付加に対し、4つの組の30-60塩基対のオリゴヌクレオチドを合成した表4-6を参照されたい。図16-18は、公開された配列から予測されたヌクレオチド配列と整列させたコンストラクトの各々に対するコドン最適化配列を示す。各オリゴヌクレオチド組は、8-12の相補的なオーバーラップオリゴヌクレオチドから構成された。各組からのオリゴヌクレオチドを、別々の実験で、共にアニールさせ、いずれかの端に特異的な制限酵素認識部位を有する二本鎖DNAフラグメント、すなわちフラグメントN-HNdeI-HindIII、H-KHindIII-KpnI、K-EKpnI-EcoRIおよびE-BEcoRI-BamHIを生成させた。凍結乾燥させたオリゴヌクレオチドを蒸留水で再構成させ、OD260nmを測定し、濃度を10μMに調節した。各OspAフラグメントに対し、2μlの各オリゴヌクレオチドを1μlのT4ポリヌクレオチドキナーゼおよびT4DNAリガーゼ緩衝液10xと共に混合し、混合物を室温で30分間インキュベートし、オリゴをリン酸化させたlipBsOspA6/4コンストラクトでは、オリゴはすでにリン酸化されているので、この工程は省略された。混合物を95°Cまで1分間加熱し変性工程、その後、混合物を室温まで徐々に冷却させることによりオリゴをアニールさせた。アニールさせた混合物を直接連結に使用し、または、-20°Cでさらに必要とされるまで貯蔵した。OspA遺伝子フラグメントのクローニング個々の合成OspA遺伝子を構成するのに必要とされる4つのフラグメントの各々を、独立してpUC18にクローニングさせ、大腸菌宿主DH5αにトランスフォームさせた図1を参照されたい。各新規OspA遺伝子に対し、4つの組の30-60塩基のオリゴヌクレオチドを合成した。各オリゴヌクレオチド組は、8-12の相補的なオーバーラップオリゴヌクレオチドから構成された。各組からのオリゴヌクレオチドを、別々の実験で、共にアニールさせ、いずれかの端に特異的な制限酵素認識部位を有する二本鎖DNAフラグメント、すなわちフラグメントN-HNdeI-HindIII、H-KHindIII-KpnI、K-EKpnI-EcoRIおよびE-BEcoRI-BamHIを生成させた。4つの4フラグメントの各々を、独立して、対応する制限酵素で切断されたpUC18にクローニングさせ、大腸菌宿主DH5αにトランスフォームさせ、その後、クローニングされたフラグメントの配列を確認した。プラスミドDNApUC18を、一晩中、大腸菌培養物LBブロスから、QIAGENプラスミド精製系により、製造者プロトコルに従い精製した。ベクターDNAをその後、製造者プロトコルに従い制限酵素対で消化させた;NdeIHindIII、HindIIIKpnI、KpnIEcoRI、EcoRIBamHI。消化させた試料を0.8アガロースゲルに適用し、電気泳動的に分離した。直線化されたベクターDNAを切除し、市販のゲル溶出キットQIAquickGel抽出キット、Qiagenを用いて製造者プロトコルに従い溶出させ、T4DNAリガーゼを用いて、アニールさせたオリゴヌクレオチド混合物に連結させた。連結生成物を大腸菌DH5αのコンピテント細胞にトランスフォームさせ、プラスミドを含む形質転換体を、アンピシリン100μg/mlを含むLB寒天上で選択した。クローニングベクター、pUC18中の予測されるサイズのインサートの存在を、プラスミドDNAを精製し、DNAをクローニングのために使用された酵素により消化させ、DNAフラグメントをアガロースゲル電気泳動により、前に記載された手順を使用して分析することにより確認した。クローニングされたDNAフラグメントは、精製プラスミドDNAをDNA鋳型としておよび配列決定プライマー5’-TCGGGGCTGGCTTAACTATG-3配列番号14および5’-GCTTCCGGCTCGTAT配列番号15pUC18ベクター中、複数のクローニング部位の外側に存在し、それぞれ、bp130-150およびbp530-515であるを使用して配列決定した。配列決定反応を自動配列決定装置ABI310上で実施した。配列は、配列エディタを用いて編集させ、配列を分析のためにベクターNTIに移入した。正確な配列を有するクローンのみを、全長OspA遺伝子を構成するための構成単位として使用した。lipBsOspA5/3遺伝子のために、異なる戦略を使用した。というのも、好適なユニークな内部部位が、KpnI-BamHIフラグメント内で見いだされず、アミノ酸配列は内部EcoRI部位の使用を認めなかったからである図14を参照されたい。PvuII部位はKpnI-BamHIフラグメント内に存在するが、しかしながらpUC18ベクターには2つのPvuII部位が存在し、これは、フラグメントのpUC18への直接クローニングが可能ではないことを意味する。よって、コンストラクトのためのオリゴは、PvuII部位の外側に、これに近接されて挿入されたEcoRI部位を有するように設計され、KpnI-EcoRIおよびEcoRI-BamHIフラグメントのpUC18へのクローニングが可能になった。その後の、挿入フラグメントのKpnI、EcoRIおよびBamHIによる消化により、フラグメントが生成し、これらはその後、PvuIIにより消化された。PvuII消化フラグメントKpnI-PvuIIおよびPvuII-BamHIをその後、KpnIおよびBamHIで切断されたpUC18ベクターDNAとのトリプル連結で使用され、KpnI-BamHIフラグメントが生成した。全長OSPA遺伝子の構築次の工程では、個々の合成OspA遺伝子を構築するのに必要とされる4つのフラグメントの各々を、pUC18ベクターから切除し、単一工程で、pUC18ベクターに再クローニングし、全長OspA遺伝子を作製した図1を参照されたい。全長遺伝子を作製するために必要とされる4つのフラグメントをミニプレップから切除した。DNAをオリジナルクローニング工程のために使用された同じ制限酵素を使用して単離した。消化された試料をアガロースゲルに適用し、電気泳動的に分離した。個々の4つのインサートフラグメントのそれぞれに対するDNAを切除し、市販のゲル溶出キットQiaQuickGel抽出キットを用いて製造者プロトコルに従い溶出させ、T4DNAリガーゼを用いて、NdeIおよびBamHIで消化された直線化されたベクターDNAに連結させ、QIAquickGel抽出キットを用いて精製した。連結DNAを大腸菌DH5αのコンピテント細胞にトランスフォームさせ、プラスミドを含むクローンを、アンピシリン100μg/mlを含むLB寒天上で選択した。コロニーを、予測されるサイズ約830bpのインサートの存在に対しPCRによりスクリーニングした。単一コロニーを、10X緩衝液15mMTris-HClpH8.0、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200μMdNTP、1.25UAmplitaqDNAポリメーゼ、400nM順方向プライマー5’-TCGGGGCTGGCTTAACTATG-3配列番号14および400nM逆方向プライマー5’-GCTTCCGGCTCGTAT配列番号15を含むPCR反応において鋳型DNAとして使用した。PCR反応条件は下記の通りとした;94°Cで5分、35x94°Cで30秒、48°Cで30秒、72°Cで1分30秒、続いて72°Cで5分の浸漬および4°Cで維持。PCR産物を直接使用し、またはさらなる使用まで≦15°Cで貯蔵した。PCR産物を、アガロースゲル電気泳動により、正しいサイズ約980bpのインサートの存在に対し分析した。正しいサイズのインサートの配列決定を実施し、誤差が導入されていないことを確認し、すなわち配列決定反応を一晩培養物LBampブロス由来の単離されたプラスミドDNAQIAGENプラスミド精製キットを用いて、およびクローニング部位に隣接する配列決定プライマーそれぞれ、5’-TCGGGGCTGGCTTAACTATG-3’配列番号14および5’-GCTTCCGGCTCGTATGTTGT-3’配列番号16、bp130-150および530-510を用いて設定した。配列決定反応を自動配列決定装置ABI310上で実施した。配列は、配列エディタを用いて編集させ、配列を分析のためにベクターNTIに移入した。新規OspA遺伝子のpET30a発現ベクターへのサブクローニング全長OspA遺伝子がpUC18において確認された時点で、OspA遺伝子をその後、制限酵素NdeIおよびBamHIを用いてpET-30a発現ベクターにサブクローニングし、大腸菌宿主HMS174DE3にトランスフォームさせた。正しい配列を有するpUC18クローン由来のミニプレップDNAを、NdeIおよびBamHIで消化させた。同様にpET30aベクターDNAを、NdeIおよびBamHIで消化させた。消化させたDNAをアガロースゲル上で移動させ、電気泳動的に分離した。約830bpのインサートフラグメントおよび直線化されたベクターDNAを前に記載されるように切除し、精製した。ベクターおよびインサートDNAを、T4DNAリガーゼを用いて連結させ、連結生成物を、大腸菌HMS174DE3Novagenのコンピテント細胞にトランスフォームさせた。形質転換体をカナマイシン30μg/mlを含むLBプレート上に蒔いた。単一コロニーをPCRにより、プライマー5’-TTATGCTAGTTATTGCTCAGCG-3’配列番号17および5’-TTCCCCTCTAGAAATAATTTTGT-3’配列番号18を用いてスクリーニングした。PCR産物を、アガロースゲルに適用し、電気泳動的に分離した。正確なサイズ約1kbの生成物を産生したコロニーをその後一晩中培養物を設定するために使用し、これからミニプレップDNAを、QIAGENプラスミド精製キットを用い、製造者プロトコルに従い単離した。配列を再び、プライマー5’-TTATGCTAGTTATTGCTCAGCG-3’配列番号17および5’-TTCCCCTCTAGAAATAATTTTGT-3’配列番号18、それぞれ、bp65-86および395-373を使用して確認し、コロニーを発現試験のために選択した。lipBsOspA1/2からのlipBsOspA1/2251の作製単一のアミノ酸をlipBsOspA1/2コンストラクトにおいて変化させ、すなわち251位のアミノ酸アラニンを、アスパラギン残基に変化させ、免疫原性を増強させた。アミノ酸変化は、PCRにより導入した。最初に、PCRを外部順方向プライマーおよび内部逆方向プライマーを用いて設定し、導入されたアミノ酸変化を有する約730bpの生成物を産生させた図15を参照されたい。第2に、PCRを、内部順方向プライマーおよび外部逆方向プライマーを用いて設定し、導入されたアミノ酸変化を有する100bpの生成物を産生させた。2つのPCR産物は、配列がオーバーラップしており、その後、外部順方向および外部逆方向プライマーによる最終PCR反応において鋳型DNAとして使用され、導入されたアミノ酸変化を含む最終全長OspA生成物が産生された。pET30aコンストラクトを鋳型DNA源として使用した。10X緩衝液[15mMTris-HClpH8.0、50mMKCl、1.5mMMgCl2]、200μMdNTP、1.25UAmplitaqDNAポリメーゼ、および400nMの各プライマー対プライマー対5’-GGAATTCCATATGCGTCTGTTGATCGGCT配列番号195’-TTGGTGCCTGCGGAGTCG配列番号20およびプライマー対5’-AATACGACTCCGCAGGCACC配列番号215’-CTG-GGATCCGCTCAGCTTATTTCA配列番号22を含むPCR反応を設定した。PCR反応を、下記条件を用いて設定した;94°Cで5分、35x94°Cで30秒、48°Cで30秒、72°Cで1分30秒、続いて72°Cで5分の浸漬および4°Cで維持。反応により2つの別個のオーバーラップ生成物が産生し、2つの生成物を、外部プライマー5’-GGAATTCCATATGCGTCTGTTGATCGGCT配列番号19および5’-CTG-GGATCCGCTCAGCTTATTTCA配列番号22NdeIおよびBamHIに対する制限部位を組み入れたを使用する、第3のPCR反応において鋳型DNAとして使用した。反応条件は、94°Cで60秒、続いて35サイクル30秒94°C、60秒49°C、90秒72°C、続いて72°Cで5分とした。増幅産物を、QiaQuick精製キットQiagenを用いて製造者の仕様書に従い精製し、生成物をNdeIおよびBamHIで消化させ、NdeIおよびBamHIで切断されたpET30aベクターDNAに連結させた。連結生成物を、大腸菌DH5αのコンピテント細胞にトランスフォームさせた。形質転換体をカナマイシン30μg/mlを含むLBプレート上に蒔いた。単一コロニーを、PCRにより、プライマー5’-TTATGCTAGTTATTGCTCAGCG-3’配列番号17および5’-TTCCCCTCTAGAAATAATTTTGT-3’配列番号18を用いてスクリーニングした。PCR産物をアガロースゲルに適用し、電気泳動的に分離した。正しいサイズ約1kbの生成物を産生したコロニーをその後一晩中培養物を設定するために使用し、これからミニプレップDNAを、QIAGENプラスミド精製系を用い、製造者プロトコルに従い単離した。配列をプライマー5’-TTATGCTAGTTATTGCTCAGCG-3’配列番号17および5’-TTCCCCTCTAGAAATAATTTTGT-3’配列番号18を使用して確認し、得られたコンストラクトを、大腸菌HMS174DE3コンピテント細胞にトランスフォームさせ、得られた陽性形質転換体を、lipBsOspA1/2251と命名した。リーダー配列を有さないコンストラクトの作製コンストラクトを、lipBリーダー配列を用いて調製したが、これには脂質部分が典型的にはアミノ末端システイン残基で付着されている。組換え脂質付加OspAの実験的試験は、脂質部分の存在を確認した。しかしながら、lipBリーダー配列を含まないコンストラクトもまた調製した。lipBリーダー配列を含まないコンストラクトは、PCR増幅により、3つのlipBコンストラクトpET30a中の各々から、リーダー配列をコードする核酸配列を有さず、システイン残基のためのコドンがメチオニン残基のためのコドンと置換されている、769-771bpの最終生成物を作製するように選択されたプライマーを使用して作製させた。PCR反応は、10X緩衝液[15mMTris-HClpH8.0、50mMKCl、1.5mMMgCl2]、200μMdNTP、1.25UAmplitaqDNAポリメーゼ、400nM順方向プライマー5’-CGTGCGTACCATATGGCACAGAAAGGTGCTGAGTCT-3’配列番号23および400nM逆方向プライマー5’-CTGGGATCCGCTCAGCTTATTTCA-3’配列番号22および鋳型DNAを含んだ。PCR条件は下記の通りとした;94°Cで5分、35x94°Cで30秒、48°Cで30秒、72°Cで1分30秒、続いて72°Cで5分の浸漬および4°Cで維持。PCR反応物を直接使用し、またはさらなる使用まで≦15°Cで貯蔵した。PCR産物を、QiaQuickPCR精製キットQiagenを使用して精製し、NdeIおよびBamHIで消化し、NdeIおよびBamHIで消化させたpET30aベクターDNAに連結させた。連結混合物を使用して、大腸菌HMS174DE3をトランスフォームし、組換えプラスミドを含むコロニーを、そのカナマイシン耐性により選択し、配列をPCR産物から確認した。大腸菌HMS174DE3における発現の評価選択したコロニーを、それらの個々の新規OspAタンパク質を発現する能力に対して試験した。各場合において、単一コロニーを使用してカナマイシン30μg/mlを含むLBブロスに播種し、37°Cで1~5時間、OD600nm値が0.6超、1未満に到達するまで、インキュベートした。この時点で、培養物の1試料を保持し誘導されていない試料を表す、培養物の残りを1mMの最終濃度となるまでIPTGを添加することにより誘導させた。誘導されていない試料1mlを遠心分離し、ペレットを保持し、-20°Cで貯蔵した。誘導された培養物を、さらに3時間増殖させ、その後、1mlの試料を取り、OD600nmを測定し、試料を遠心分離し、ペレットを保持し、-20°Cで貯蔵した。初代細胞の調製初代細胞を3つの脂質付加されたコンストラクトの各々および3つの脂質付加されていないコンストラクトの各々に対し調製した。初代細胞は、個々のOspAを発現するpET30aプラスミドを有する大腸菌細胞HMS174DE3を含んだ。初代細胞の調製では、個々のストック由来の単一のコロニーをカナマイシン30μg/mlおよびリファンピシン200μg/mlを含むプレートから採取し、これを使用して500μlのSMK培地SOP8114に播種し、一晩中インキュベートした。100μlのこの培養物をその後使用して、100mlのSMK培地に播種し2通り、培養物を17~20時間、37°Cで振盪しながらインキュベートした。滅菌グリセロールをその後、培養物に、最終濃度15で添加し、材料を500μl量のアリコートでピペットでとり、60アンプルとし、よって、60アンプルの初代細胞を得、これを直接-80°Cで貯蔵した。3つの合成OspA遺伝子を、血清型1および2OspAlipBsOspA1/2251、血清型6および4OspAlipBsOspA6/4ならびに血清型5および3OspAlipBsOspA5/3由来の防御エピトープを有するOspA分子をコードするように設計した。これらの分子の一次アミノ酸配列およびそれらの設計に組み込まれる主特徴は、下記実施例において記載する。実施例3:脂質付加された1/2251OSPAlipBsOSPA1/2251の説明この研究の目的は、血清型1および2を含む新規OspA抗原、脂質付加された1/2251OspAlipBsOspA1/2251を設計することであった。LipBsOspA1/2251は、血清型2配列株Pko、GenBankAccessionNo.S48322の遠位部に融合された血清型1OspA配列株B31、GenBankAccessionNo.X14407の近位部を含む。2型血清型にユニークな配列の開始は、216位のリシンK残基である。コンストラクトは、元々、251位のアミノ酸アラニンAをコードするように設計された。しかしながら、コンストラクトはその後、PCRにより、アスパラギンN残基Pkoから公表された配列中の実際の残基をコードするように変化され、免疫原性が増強され、lipBsOspA1/2251と命名された。lipBsOspA1/2251の二次特徴を図2のlipBsOspA1/2251のアノテートされたアミノ酸配列において示し、これは下記を含む:●分子の近位部アミノ酸161~185における、推定関節炎誘発性エピトープ、hLFA-1YVLEGTLTA配列番号24の、血清型2OspA配列株Pko;GenBankAccessionNo.S48322由来の等価配列イタリック体およびフランキング配列で示される:hLFA-1エピトープとは異なる配列による置換;●OspBリーダー配列図2のアミノ酸1~15および先行技術を回避するための様々な置換。44および46位のアスパラギンNおよびアスパラギン酸D残基は、それぞれ、アスパラギン酸DおよびアスパラギンNで置換され、配列KEKDKN配列番号25が生成された。78および79位のアラニンAおよびアスパラギン酸D残基は、それぞれ、スレオニンTおよびアスパラギンNにより置換され、配列KTNKSK配列番号26が生成された;●国際特許公開第WO02/16421A2号LuftDunnに記載される安定化突然変異。例えば、メチオニンMがアミノ酸136でアルギニンRに取って代わりR139M;チロシンYがアミノ酸157でグルタミン酸Eに取って代わりE160Y;メチオニンMがアミノ酸186でリシンKに取って代わったK189M;ならびに●追加の安定化突然変異。例えば、スレオニンTがアミノ酸173でバリンVに取って代わった開示のaa176。推定関節炎誘発性エピトープ161-185位の、B.ブルグドルフェリ配列をB.アフゼリ配列で置換することによる除去は、アミノ酸173と174の間の水素結合を妨害した開示のaa176と177。これは、防御モノクローナル抗体への結合を減少させた105.5およびLA-2。173位で、バリンVの代わりに、スレオニンTが導入されると水素結合が回復し、防御モノクローナル抗体105.5およびLA2への反応性が増加した。加えて、アミノ酸16-25成熟タンパク質の開始は、OspB配列GenBankAccessionNo.X74810と同一である。lipBsOspA1/2251のヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列を図3に示す。リーダー配列緑は、タンパク質分泌中に切断される。成熟OspAタンパク質の配列は、システイン残基下線で開始し、これはタンパク質の脂質アンカーのための付着部位を形成する。実施例4:脂質付加された6/4OspAlipBsOSPA6/4の説明この研究の目的は、血清型4および6を含む新規OspA抗原、脂質付加されたsOspA6/4OspAlipBsOspA6/4を設計することであった。LipBsOspA6/4は、血清型4配列株pTroB;GenBankAccessionNo.I40089の遠位部に融合された血清型6OspA配列株K48、GenBankAccessionNo.I40098の近位部を含む。型4血清型にユニークな配列の開始は、217位のアスパラギンN残基である。二次特徴を、図4でのlipBsOspA6/4のアノテートされたアミノ酸配列において示し、下記を含む:●国際特許出願第WO02/16421A2号で記載される安定化突然変異:アミノ酸136でのアルギニンRの代わりのメチオニンM、アミノ酸157でのグルタミン酸Eの代わりのチロシンY、およびアミノ酸187でのリシンKの代わりのメチオニンM;ならびに●上記lipBsOspA1/2251のように、OspBリーダー配列が使用され図4のアミノ酸1~15、アミノ酸16-25は、OspBGenBankAccessionNo.X74810由来の配列と同一である。ペプチド配列KEKNKD配列番号27は、親OspA6型配列KEKDKD配列番号28にはなかったが、46位のアスパラギン酸D残基は、lipBsOspA1/2251コンストラクトにおいて生成された等価変化に従ってアスパラギン残基Nと置換され、配列KEKDKN配列番号25が生成された。ペプチド配列KADKSK配列番号29は親OspA6型配列KTDKSK配列番号30にはなかったが、79位のアスパラギン酸D残基は、lipBsOspA1/2251コンストラクトにおいて生成された等価変化に従ってアスパラギン残基Nと置換され、配列KTNKSK配列番号26が生成された。アミノ酸37は、親配列株K48;GenBankAccessionNo.I40098に存在するように、グルタミン酸EからバリンVに変化された。というのも、ほとんど全ての6型配列はこの位置にバリンを有するからである。lipBsOspA6/4のヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列を図5に示す。リーダー配列緑は、タンパク質分泌中に切断される。成熟OspAタンパク質の配列は、システイン残基下線、図5を参照されたいで開始し、これはタンパク質の脂質アンカーのための付着部位を形成する。実施例5.脂質付加された5/3OspAlipBsOspA5/3の説明この研究の目的は、血清型3および5を含む新規OspA抗原、脂質付加されたsOspA5/3OspAlipBsOspA5/3を設計することであった。LipBsOspA5/3は、配列番号5および6で示されるように修飾を有する、血清型3配列株PBr;GenbankAccessionNo.X80256、B.ガリニOspA遺伝子の遠位部に融合された血清型5OspA配列[DatabaseAccessionNo.emb|X85441|BGWABOSPA、B.ガリニOspA遺伝子WABSousub株]の近位部を含む。型3血清型にユニークな配列の開始は、216位のアスパラギンD残基である。二次特徴を、図6でのlipBsOspA5/3のアノテートされたアミノ酸配列において示し、これは下記を含む:●国際特許出願第WO02/16421A2LuftおよびDunn号で記載される安定化突然変異:アミノ酸136でのアルギニンRの代わりのメチオニンM、アミノ酸157でのグルタミン酸Eの代わりのチロシンY、およびアミノ酸187でのリシンKの代わりのメチオニンM;ならびに●上記lipBsOspA1/2251およびlipBsOspA6/4のように、OspBリーダー配列が使用され図6のアミノ酸1~15、アミノ酸16-25は、OspBGenBankAccessionNo.X74810由来の配列と同一である。ペプチド配列KEKNKD配列番号27は、親OspA型5配列KEKDKD配列番号28にはなかったが、46位のアスパラギン酸D残基は、lipBsOspA1/2251コンストラクトにおいて生成された等価変化に従ってアスパラギン残基Nと置換され、配列KEKDKN配列番号25が生成された。ペプチド配列KADKSK配列番号29は親OspA型5配列KTDKSK配列番号30にはなかったが、79位のアスパラギン酸D残基は、lipBsOspA1/2251コンストラクトにおいて生成された等価変化に従ってアスパラギン残基Nと置換され、配列KTNKSK配列番号26が生成された。lipBsOspA5/3のヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列を図7に示す。リーダー配列緑は、タンパク質分泌中に切断される。成熟OspAタンパク質の配列は、システインコドン下線、図7を参照されたいで開始し、これはタンパク質の脂質アンカーのための付着部位を形成する。実施例6:大腸菌における高レベル発現のためのコドン使用頻度の最適化大腸菌においてめったに使用されないコドンの存在が、外来遺伝子の高レベル発現を妨げる可能性があることが知られているので、使用率の低いコドンは、大腸菌において高度に発現される遺伝子により使用されるコドンと置換させた。新規OspA遺伝子のヌクレオチド配列は、高度に発現されたクラスII、大腸菌遺伝子の中で最もしばしば見いだされるコドン好ましいコドンを使用するように設計された。新規OspA遺伝子間のコドン使用頻度、および高度に発現したクラスII大腸菌遺伝子に対するデータを表7および8にまとめて示す。tRNA分子が律速となる可能性が低い、より頻度の低いアミノ酸に対するデータ表7を、最もしばしば起こるアミノ酸に対するデータ表8と別々に示す。新規OspA遺伝子一般的なアミノ酸のみに対して選択されるコドン使用頻度および大腸菌クラスII遺伝子間の高い一致度は明らかであるすなわち、クラスII遺伝子に対する表8からのパーセンテージ値の個々の新規OspA遺伝子に対するプロット;図8を参照されたい。3つの脂質付加されたコンストラクトでは、オリジナル配列は32.8~33.8の範囲のGC含量を有したが、コドン-最適化配列は、43.8~46.8の範囲のGC含量を有し、これは、大腸菌の50GC含量に類似する。実施例7:合成による脂質付加されていないOSPA遺伝子の構築lipBリーダー配列を含まないコンストラクトもまた調製した。2組のコンストラクト脂質付加された、および脂質付加されていないが、発酵槽における生成の容易さを評価するためにバイオマス、安定性、生成収率、など、どれくらい容易に異なる型の抗原を精製することができるか評価するために、それらの生物学的特性安全性プロファイルおよび防御能力を比較するために、必要である。コンストラクト配列番号7、9、および11を、3つのlipBOspAコンストラクト配列番号1、3、および5の各々から制限部位が組み込まれたPCRプライマーを用いて作製した。PCR産物を精製し、NdeIおよびBamHIで消化し、消化させたpET30aベクターDNAに連結させた。連結混合物を使用して、大腸菌DH5αをトランスフォームし、OspA配列を確認した。ミニプレップDNAを調製し、単離し、HMS174DE3宿主細胞をトランスフォームするために使用した。脂質付加されていない誘導体の配列は、リーダー配列をコードする最初の45塩基対を欠き、脂質付加されたバージョンにおけるシステインコドンにとって代わるメチオニンコドンを含むNdeI部位を含むことを除き、脂質付加されたバージョンと同一である図9を参照されたい。実施例8:新規組換えOSPA抗原の発現抗原目的のための新規組換えOspA遺伝子の発現/生成のために、バクテリオファージT7RNAポリメラーゼにより制御された大腸菌発現系を使用した。この発現系では、新規OspA遺伝子を、pETシリーズプラスミドの1つ例えば、pET30a中の複数のクローニング部位にクローニングさせた。外来遺伝子の発現は、バクテリオファージT7プロモーター大腸菌RNAポリメラーゼにより認識されないの制御下にあるので、発現はT7RNAポリメラーゼ源に依存する。この酵素は、組換えプラスミドが適切な発現宿主、例えば大腸菌HMS174DE3T7RNAポリメラーゼ遺伝子の染色体コピーを含む中に移行された時に提供される。染色体に取り込まれたT7RNAポリメラーゼ遺伝子の発現は、lacUV5プロモーターの制御下にあり、これはイソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシドIPTGまたはラクトースの付加によりスイッチオンすることができるすなわち、誘導される図10を参照されたい。結果として、外来遺伝子の発現はまた、インデューサー分子の付加により調節される。細胞を後期対数期に誘導し、誘導後3-4時間で収集した。誘導された細胞において、キメラOspA抗原は細胞可溶化物のSDS-PAGEにより決定されるように、最も高度に発現したタンパク質であった。OspAキメラのほとんどが上清中で見いだされた。混入する大腸菌タンパク質をアニオン交換クロマトグラフィーにより除去し、空隙容量に溶出したキメラOspAタンパク質を限外濾過により濃縮した。コンストラクトの各々からの新規組換えOspAタンパク質の発現を試験し、誘導されたおよび誘導されていない培養物からの試料をSDSポリアクリルアミドゲル上で移動させた図11。脂質付加された配列番号2、4、および6および脂質付加されていない配列番号8、10、および12抗原では、約31kDaのバンドがそれぞれの場合に観察された図11を参照されたい。タンパク質を特徴づけし、決定した分子量は末端メチオニンが切断されたと推定する理論分子量と相関/-0.5ダルトンした。図11は、発現された組換えの脂質付加されたOspAタンパク質は、少なくとも10の総タンパク質収率を含むことを示し、コンストラクトは、それらの本来の目的に有用であることが確認される。実施例9:単一の組換えOspA抗原ROSPA1/2は、B.ブルグドルフェリs.s.およびB.アフゼリによる感染に対し防御するこの研究の目的は、OspA血清型1および2の防御特性を保持するように設計された単一の組換え抗原rOspA1/2;配列番号2lipBsOspA1/2251を含むポリペプチドが、マウスをB.ブルグドルフェリs.s.OspA血清型1またはB.アフゼリOspA血清型2のいずれかによる感染に対し防御する抗体応答を誘導することができるかを決定することであった。追加のrOspA抗原の含有は、rOspA1/2抗原により提供される防御免疫に対し拮抗効果を有さなかったこを示す証拠が提供される。rOspA1/2の設計および構築外来病原体の導入の危険を排除するために、相補的なオーバーラップ合成オリゴヌクレオチドを使用して、共に連結されベクターpET30aにクローニングされたDNAフラグメントを作製し、配列を確認した。このアプローチにより、コドン使用頻度を、OspA遺伝子を発現するために使用される大腸菌宿主HMS174DE3に対し最適化させることが可能になった。新規遺伝子は、血清型-2配列アミノ酸219~273、株PKo;AccessionNumberS48322の遠位部に融合された血清型-1OspA配列アミノ酸29~218、株B31;GenBankAccessionNumberX14407の近位部に基づく。B.ブルグドルフェリ株B31由来の25アミノ酸フラグメントaa164~188を、B.アフゼリ株PKo由来の配列aa164~188と置換した。というのは、B31OspAaa165-173のこの領域は、hLFA-1エピトープaa332-340を含む領域に高度に関連するからである。脂質付加されたタンパク質の発現を最適化するために、リーダー配列および最初の11アミノ酸を含むN末端配列を、OspB株B31;GenBankAccessionNumberX74810から誘導した。rOspA1/2分子の免疫原性およびコンホメーション安定性を改善するために他の特定のアミノ酸変化を実施し、rOspA1/2lipBsOspA1/2251の配列を配列番号2で設定する。動物試験異なるOspA抗原を発現する、ボレリアの2つの種による感染を防止する単一の組換えOspA抗原rOspA1/2の能力を、0.2w/v水酸化アルミニウムをアジュバントとして用いて製剤化した精製OspA抗原0.1μgまたは0.03μg用量により皮下に0および28日免疫化したC3H/HeJマウスにおいて評価した。マウスをブースター免疫化後2週間で、皮内注射針誘発;7x104細胞または感染の自然経路マダニ誘発のいずれかにより誘発した。後者の実験では、8匹の幼虫マダニを、マウス1匹あたりに適用し、5日まで摂食させた。幼虫は、ライム病がよく見られる地域であるBudweisチェコ共和国近辺で収集した。これらのマダニの大多数が、PCRにより摂食させていないマダニを試験することにより決定されるようにB.アフゼリに感染した。マウスの感染状態を4週間後に決定した。マダニ誘発実験では、ボレリアの存在は、培養膀胱により、およびリアルタイムPCR心臓によるボレリアDNAの検出により確認した。動物実験を動物実験に関するオーストリアの法律および国際ガイドラインAAALACおよびOLAWに従い実施し、動物実験委員会InstitutionalAnimalCareandUseCommitteeによる再調査を受け、オーストリア規制当局による承認を受けた。免疫原性。rOspA1/2抗原に対する抗体応答μgIgG/mlをELISAにより、rOspA1/2をコーティング抗原として、規定されたIgG含量を有するOspA特異的モノクローナル抗体室内調製を標準として使用して決定した。診断手順針誘発実験では、表面露出リポタンパク質VlsEタンパク質中の保存エピトープC6ELISA;Immunetics登録商標C6LymeELISA商標からのコートプレートまたはOspA免疫源以外のボレリア抗原Westernブロッティングに対する抗体の存在を、感染の診断に使用した。Westernブロッティングは、B.ブルグドルフェリs.s.株ZS7から調製した細胞可溶化物を使用した。というのも、これが誘発生物であったからである。動物は、両方のアッセイにおいて陽性であった場合、感染したと見なした。マダニ誘発実験では、C6ELISAおよびWesternブロッティングをまた実施した。しかしながら、Westernブロッティングは、B.ブルグドルフェリs.s.ZS7、B.アフゼリACA1およびB.ガリニKL11由来の可溶化物を使用した。というのも、感染生物の同一性がわかっていなかったからである。動物は、どちらのアッセイも陽性であった場合にのみ、セロコンバージョンを受けたと考えた。加えて、ボレリア感染を、膀胱由来の培養およびOspAの5’-領域を標的とするリアルタイムPCRアッセイおよび16SrRNA遺伝子に基づくアッセイを用いた、心臓組織から抽出したゲノムDNA中のB.ブルグドルフェリs.l.核酸の検出により評価した。動物は、両方のアッセイによりPCR産物が検出された場合にのみ、PCR-陽性としてスコア化した。全体として、動物を感染したと判断するためには、マウス培養、PCRまたは血清学のいずれかにより陽性である必要があった。感染ボレリアのキャラクタリゼーション可能であれば、感染生物を培養し、OspA配列および推定アミノ酸配列を、OspA残基38-262B.アフゼリVS461、GenBankAccessionNumberZ29087に対して決定した。この情報を、OspA参照配列と比較し、よって、OspA型およびボレリア種を推測することができる。単一のOspA血清型を発現する種では、種に対する株型に対するOspA配列を、参照、例えば、B.アフゼリVS461またはB.バライシアナVS116GenBankAccessionNumberZ29087;AF095940として選択した。B.ガリニは複数のOspA型を有するので、OspA遺伝子型3-7に対するOspA配列を使用したすなわち、株PBr、PTrob、WABSou、TlsIおよびT25;それぞれ、GenBankAccessionNumberX80256、X80186、X85441、X85440およびX80254。リアルタイムPCRに基づくタイピングでは、GenBankに預けられた124B.ブルグドルフェリs.l.種のOspA遺伝子の配列アライメントを血清型特異的配列に対して検査し、好適なプライマー-プローブ組み合わせを、PrimerExpress3.0AppliedBiosystemsを用いて設計した。全てのアッセイはABIPrism登録商標7900HT配列決定ユニットで、普遍的サイクリング条件を用いて実施した。rOspA1/2による免疫化によるB.ブルグドルフェリs.sOspA血清型-1感染の防止低用量の2つの異なるロットのrOspA1/2抗原で免疫化したマウスはすべて、ELISAにより決定されるように免疫源に特異的なIgG抗体を発現した。水酸化アルミニウムを含むワクチン製剤緩衝液で処理した対照マウスでは抗体は検出されなかった。この免疫応答のB.ブルグドルフェリs.s.、血清型-1OspAをコードする種による感染を防止する能力を評価するために、マウスに、B.ブルグドルフェリs.s.株ZS7の7x104細胞を皮内注射した。アジュバントを含む緩衝液で処理した対照マウスは全て、C6ELISAおよびWesternブロッティングにより示されるように、感染の血清学的証拠を示した。rOspA1/2抗原で免疫化したマウスは感染せず、これらのマウス由来の血清はどちらのアッセイでも陰性であった。アジュバントとして水酸化アルミニウムと共に製剤化し、2つの用量免疫化レジメンで投与した場合、0.03μgという少量のrOspA1/2抗原が病原性B.ブルグドルフェリs.s.株ZS7による針誘発に対し100防御を与えたP<0.0001、Fisher直接両側検定。rOspA1/2による免疫化によるB.アフゼリOspA血清型2感染の防止rOspA1/2抗原による免疫化の、B.アフゼリ、血清型2OspAをコードする種による感染を防止する能力を評価するために、マウスを、2つの別々の実験で、同じ上記針誘発実験で使用したのと抗原ロットおよび研究設計を用いて免疫化した。しかしながら、この場合、免疫化マウスは、主にB.アフゼリに感染したことが知られている野生マダニ幼虫により誘発した。これらの野生マダニのB.ブルグドルフェリs.l.をマウスに伝染させる能力は、非免疫化対照動物を誘発することにより確認した。対照マウスのほとんど総計11/14、79が感染した。感染した対照動物は、2つの非依存性リアルタイムPCRアッセイ16SrRNAおよびOspA遺伝子によりボレリアDNAに対し陽性であった。10/11の場合、膀胱の培養によりボレリアを単離することが可能であった。残りのマウスは血清学およびPCRにより陽性であった。10の培養分離株のうち9で、OspA配列が回収され、全てがB.アフゼリとして分類された>99OspA配列相同性。さらに、全ての感染生物は、特異的に血清型2OspA遺伝子を標的とするリアルタイムPCRアッセイを用いた心臓から抽出したDNAのPCR分析により、B.アフゼリとして分類された。これらのデータにより、B.アフゼリは、感染した野生マダニからそれらのマウス宿主に伝染される主なボレリア種であることが確認された。rOspA1/2総計3/32、9で免疫化したマウスはほとんど感染しなかった。これらの3匹のマウスのうち、1匹は3つ全ての診断基準血清学、PCRおよび培養により決定されるように感染し、配列解析により、感染生物はB.ガリニ血清型6>99OspA配列相同性であることが明らかになった。感染したとみなされた残りの2匹の動物は、3つの基準のうち2つのみで陽性であった。1匹のマウスは、血清学およびPCRにより陽性であった。しかしながら、感染生物は、培養において回収できなかった。それにもかかわらず、この生物は、血清型7OspA遺伝子に特異的なPCRを使用する、心臓から抽出したDNAのPCR解析によりB.ガリニ血清型7として分類することができる。第3のマウスはPCRおよび培養陽性であったが、血清学的に陰性であった。このマウスから培養した分離株は、配列決定により決定されるようにB.バライシアナであったB.バライシアナ株VS116とのOspA配列相同性。重要なことに免疫化マウスのいずれも0/32B.アフゼリに感染しなかった。アジュバントとして水酸化アルミニウムと共に製剤化し、2つの用量免疫化レジメンで投与した場合、0.03μgという少量のrOspA1/2抗原が野生マダニにより伝染されるB.アフゼリに対し完全防御を与えた。結論2つの異なるOspA血清型1および2由来の防御要素を含むように設計された単一の組換え細胞表層タンパク質AOspA抗原は、マウスを、B.ブルグドルフェリセンスストリクトOspA血清型1またはB.アフゼリOspA血清型2のいずれかによる感染に対して防御する抗体応答を誘導することができた。B.ブルグドルフェリs.s.株ZS7による感染に対する防御は、針誘発モデルにおいて証明された。B.アフゼリ種に対する防御は、野生マダニを使用するマダニ誘発モデルで見られた。両方のモデルにおいて、0.03μgという少量の抗原が、水酸化アルミニウムをアジュバントとして用いる2つの用量免疫スケジュールで投与すると、標的とされる種に対する完全防御を提供するのに十分であった。予想されるように、この新規抗原により認められる防御は、抗原がB.ガリニおよびB.バライシアナ株による感染に対し防御を提供することができないことから証明されるように、他のボレリア種に及ばなかった。この原理研究の証拠は、防御エピトープの情報は、より少ないOspA抗原を必要とする有効な遺伝子組換えワクチンの合理的設計のために使用することができることを証明し、このアプローチが、世界的利用のためのOspAワクチンの開発を促進し得ることを示唆する。実施例10:マウス抗OSPA抗体が生ボレリアの表面に結合するまたはその増殖を阻害する効率は、B.ブルグドルフェリs.s.型1株を使用する針誘発に対する防御と相関するこの研究の目的は、ボレリアブルグドルフェリセンスストリクトOspA型1株を使用する針誘発モデルにおいて、rOspA1/2抗原により免疫化されたマウスに対する防御の関連要因を確立することであった。分析したパラメータは、生ボレリアの表面に結合する、またはボレリアの増殖を阻害する抗OspA抗体の効力であった。98匹のマウスを、刺激-ブースターレジメンで、準最適3ng用量のrOspA1/2抗原で、0.2AIOH3をアジュバントとして使用して、計画的に免疫化し実施例9で使用した低用量よりも10倍低かった、よって、誘発されると、防御および感染動物の両方が観察された。ワクチン接種を、皮下で0、14および28日に100μlの用量体積を用いて実施した。38日に、誘発前血清試料sを96匹のマウスから取り、動物を10日後、19.4xID50の培養増殖されたB.ブルグドルフェリs.s.ZS7で誘発し、感染状態を4週間後に決定した。96匹のマウスのうち7172が、この低用量の抗原による免疫化後防御されることが見いだされた。誘発後4週間の血液を採り、B.ブルグドルフェリs.s.株ZS7の膜画分に対し、それらの血清をWesternブロッティングすることにより感染したマウスを同定した。使用した誘発用量では、感染したマウスのみがOspA以外の株ZS7の膜抗原に対する抗体応答を有したワクチンにより誘導されたOspAに対する応答はスコア化しなかった。生ボレリアの表面へ結合するOspA抗体の定量このアッセイでは、OspA型1を発現するB.ブルグドルフェリs.s.株B31を、補体活性化を防止するためにEDTAの存在下、室温で誘発前マウス血清と共に固定希釈1:100でインキュベートした。洗浄して非結合抗体を除去した後、細胞表面に特異的に結合した抗体を、処理細胞をr-フィコエリトリン結合抗マウスIgポリクローナル抗体とインキュベートすることにより標識した。その後、赤色蛍光を発し、よって、検出を増強するDNA染色LDS-751を使用し、細菌をその後、フローサイトメトリーFACSCalibur、Beckton-Dickinsonにより分析した。細胞表面に付着された抗体分子の数と相関する蛍光強度を、少なくとも2,000個体ボレリアに対し記録し、蛍光強度MFIの平均を計算した。正常マウス血清は抗体の非特異的表面結合の程度を評価するための陰性対照として機能し、OspA血清型1特異的mAbは、OspA型の同一性を確認し、細菌培養における細胞のOspA発現レベルを確認するための陽性対照として機能した。細菌増殖阻害アッセイ誘発前血清の、ボレリアの増殖を阻害する効力を測定するために、OspA型1を発現するB.ブルグドルフェリs.s.株B31を33°Cで段階希釈の熱不活性化誘発前または非免疫マウス血清陰性対照の存在下、補体正常モルモット血清の存在下培養した。非免疫血清と共にインキュベートした対照培養物中の細菌を十分増殖させた場合、顕微鏡的に決定されるように、正確な細胞カウントは、フローサイトメトリー分析により実施した。細胞培養物を、明確な数の蛍光標識ビーズを含む溶液と混合し、DNA染料をボレリア細胞を蛍光標識するために添加した。試料を、100ビーズがカウントされるまでFACSCaliburフローサイトメーターを用いて処理し、ビーズを規定するゲートにおけるイベント数を、ボレリアを規定するゲートにおけるものと比較することにより絶対細胞濃度を計算した細胞/ml。細菌増殖を50阻害した血清希釈を、NMS対照と比較して計算し、GI-50力価として報告した。標準血清調製物を使用して異なるアッセイ間で力価を正規化した。測定した血清パラメータの分布を感染および防御動物間で、ノンパラメトリックマンホイットニーU検定GraphpadPrismVers.5.0により比較した。この研究の結果図19を参照されたいにより、誘発時の免疫血清の機能的抗体含量とB.ブルグドルフェリs.s.ZS7の高用量19.4xID50針誘発による感染に対する防御との間には極めて大きな相関があることが明確に証明される。OspA型1を発現する生ボレリアのFACSに基づく蛍光強度測定は、細胞表面に付着された抗OspA抗体分子の数を反映し、固定希釈での誘発前血清との細菌のインキュベーション後に実施されたが、これは防御と最もよく相関したp<0.0001マンホイットニーU検定。しかしながら、増殖阻害力価もまた、極めて大きく防御と相関したp=0.0002マンホイットニーU検定、図19。実施例11:マウス抗OSPA抗体が生ボレリアの表面に結合するまたはその増殖を阻害する効率は、B.アフゼリ型2株を使用するマダニ誘発に対する防御と相関するこの研究の目的は、マダニ誘発モデルにおいてキメラOspA1/2抗原で免疫化したマウスの防御の関連要因を確立することであったが、この場合、マウスに感染させるためにチェコ共和国のBudweisから収集した野生マダニを使用することによる自然感染経路を使用する。この流行地由来の幼虫マダニは、主にB.アフゼリに感染するので、B.アフゼリOspA型2株誘発を提供すると考えられる。実施例10で示されるように、分析したパラメータは、生ボレリアの表面に結合する、またはボレリアの増殖を阻害する抗OspA抗体の効力であり、これらはどちらもボレリアブルグドルフェリs.s.による針誘発に対しよく相関することが示された。よって、この研究は、B.アフゼリ、欧州において最も顕著なヒト疾患関連遺伝種の自然感染に対する防御の関連要因として2つのパラメータを使用する適用性を拡大するように機能する。40匹のマウスを、刺激-ブースターレジメンで、準最適3ng用量のrOspA1/2抗原で、0.2AlOH3をアジュバントとして使用して、免疫化した実施例9で使用した低用量よりも10倍低かった。実施例10のように、この準最適用量は、防御および感染動物の両方が誘発後に確実に観察されるように選択した。ワクチン接種を、皮下で0、14および28日に100μlの注射体積を用いて実施した。40日に、個々の血液試料をマウスから取り誘発前血清を生成させた。入手可能なマダニの数は限られており、40匹全てのマウスを誘発することはできなかったので、広範囲の応答をカバーするために表面結合および抗2型IgG濃度に基づいて20匹のマウスを選択した。8匹のマダニを各マウスに適用し、マウス上で5日間摂食させた。誘発4週間後、マウスを屠殺し、免疫化および対照マウスの感染状態をB.ブルグドルフェリs.s.、B.アフゼリおよびB.ガリニ由来の膜抗原に対する血清のWesternブロッティング;膀胱由来のボレリア生物の培養;および膀胱から抽出したDNAからのボレリアのリアルタイムPCR検出により決定した。生ボレリアの表面へ結合するOspA抗体の定量このアッセイでは、OspA型2を発現するB.アフゼリ株Arconを、補体活性化を防止するためにEDTAの存在下、室温で誘発前マウス血清と共に固定希釈1:100でインキュベートした。洗浄して非結合抗体を除去した後、細胞表面に特異的に結合した抗体を、処理細胞をr-フィコエリトリン結合抗マウスIgポリクローナル抗体とインキュベートすることにより標識した。アッセイにおけるその後の工程はすべて、実施例10で記載されるものと類似した。正常マウス血清は非特異的抗体結合のための陰性対照として機能した。高力価マウス血清は3成分rOspAワクチン製剤に対し産生され、OspA血清型2特異的mAbsと共に、陽性対照として機能し、OspA血清型特異性および細菌培養物における細胞のOspA発現レベルが確認された。細菌増殖阻害アッセイ誘発前血清の、ボレリアの増殖を阻害する効力を測定するために、OspA型2を発現するボレリア、B.アフゼリ株Arconを33°Cで段階希釈の熱不活性化誘発前または非免疫マウス血清陰性対照の存在下、補体なしで培養した。非免疫血清と共にインキュベートした対照培養物中の細菌を十分増殖させた場合、顕微鏡的に決定されるように、正確な細胞カウントは、フローサイトメトリー分析により実施した。細菌をカウントするために使用する手順は、実施例10において増殖阻害アッセイにおいて前に記載したものに類似した。細菌増殖を50阻害した血清希釈を、NMS対照と比較して計算し、GI-50力価として報告した。標準血清調製物を使用して異なるアッセイ間で力価を正規化した。統計分析測定した血清パラメータの分布を感染および防御動物間で、ノンパラメトリックマンホイットニーU検定GraphpadPrismVersion5.0により比較した。結果0.003pgのrOspA1/2で3回免疫化し、8匹の野生マダニで誘発させた20匹の動物のうち、7/2035が感染したことが見いだされた。マダニ入手可能性が制限されているため、非免疫化マウスの対照群を誘発することによる、誘発の正確な感染率を決定することができなかった。しかしながら、この誘発は本研究の目的のために要求されず、典型的には70-80の感染率が、Budweisからの野生マダニによる誘発実験において達成されている。表面結合p=0.007および増殖阻害p=0.03アッセイの結果について、防御および感染群の間で著しい差が検出された図20。結論この研究では、誘発時のマウス血清中の機能的抗体含量と1匹のマウスあたり8匹のマダニを適用する野生マダニ誘発による感染に対する防御の間には統計学的に有意の相関が存在することが示される。OspA型2を発現する生ボレリアのFACSに基づく蛍光強度測定は、細菌を誘発前血清と固定希釈でインキュベートした後に実施した細胞表面に付着された抗OspA抗体分子の数を反映し、防御と最もよく相関した。増殖阻害力価もまた、防御とよく相関した。効率的な死滅のために補体が必要とされるボレリアブルグドルフェリs.s.株とは対照的に、rOspA1/2抗原は、補体が存在しなくても、ボレリア増殖を効果的に阻害する抗体を誘導した。実施例10および11で示される研究の結果は、まとめると、生ボレリアへの表面結合抗体の平均蛍光強度MFIおよび免疫マウス血清GI-50力価のインビトロパラメータを、能動的マウス防御モデルが現在利用できる両方の例例えば、すなわち、B.ブルグドルフェリs.s.OspA型1株のための針誘発モデルおよびB.アフゼリOspA型2株のためのマダニ誘発モデルにおける防御の関連要因として確立させる。さらに、OspA型3-6を発現する相同B.ガリニ株に対する防御を評価するための信頼できる能動的防御モデルがない場合、推論によって、前述のモデルをワクチン相同OspA型全てを発現する株のため、さらに異種OspA型を発現するもののための様々なワクチン製剤の防御可能性および交差株カバレッジを評価するためのインビトロ防御の代替マーカーとして使用することができる。実際、機能的免疫応答アッセイを使用する研究を3成分キメラrOspAワクチン製剤で免疫化したマウス由来の免疫血清に対し実施した場合、同等なMFIおよびGI-50力価がB.ガリニOspA型3、4、5、6が得られ実施例13を参照されたい、よって、これらの防御の代替マーカーにより、防御反応が、現在能動的マウス防御モデルが存在しない株に対しても達成されたことが示される。さらにa個々のキメラrOspA抗原;b可能な2-成分キメラrOspA抗原ワクチン製剤組み合わせのいずれか1つ;またはc3成分キメラrOspA抗原製剤のいずれかで免疫化したマウスの免疫応答を比較することにより、後者の3成分ワクチンがOspA型1-6を発現する株を最適にカバーするのに要求されることを示すことが可能であった実施例14。さらに、これらのインビトロ代替マーカーアッセイの使用により、3成分キメラrOspAワクチン製剤rOspA1/2、rOspA6/4およびrOspA5/3でマウスを免疫化した後に生成される免疫応答は、ワクチン内に存在する相同OspA型1-6実施例16を参照されたい以外に、今まで試験された型1、2、3、5、および6の型内変異体またはサブタイプ全てに実施例15を参照されたいおよびさらに異種OspA型に対する機能的免疫応答を誘導することを示すことが可能であった。実施例12:3つの抗原1/2、6/4、および5/3を含む多価組換えOSPA製剤はマウスにおいて高度に免疫原性である多価OspAワクチンrOspA1/2、rOspA5/3、およびrOspA6/4をマダニ誘発モデルにおいて評価した。OspA血清型1および2配列番号2、OspA血清型6および4配列番号4、ならびにOspA血清型5および3配列番号6由来の防御エピトープを含む3つの組換えOspA抗原を1つのワクチン内で組み合わせた。10匹の雌C3H/HeJマウス免疫化年齢:11週の群を、0および28日に、一定用量の0.3μgの多価ワクチン0.1μgの各rOspA1/2、rOspA5/3、およびrOspA6/4で皮下に免疫化した。マダニ誘発を、上記本明細書で記載されるように、Budweis、チェコ共和国由来のマダニを用いて実施した。野生マダニのB.ブルグドルフェリs.l.をマウスに伝染させる能力は、非免疫化対照動物を誘発することにより確認した。誘発させたマウスの感染状態は、Westernブロッティング、リアルタイムPCR、および培養により決定した。中間血液試料を41日に眼窩穿刺により採った。最終血液試料70/71日を心臓穿刺により収集した。個々の血清を全血から遠心分離10分;1000-2000xG;RTにより調製した。血清を£-20°Cで使用するまで貯蔵した。この実験では、マウスを誘発するために使用された同じバッチからとった摂食させていないマダニを特徴付けし、全体の感染率を決定し、感染生物の種を確認した。80匹の幼虫マダニを、16SrRNAリアルタイムPCRにより、B.ブルグドルフェリs.l.DNAの存在について試験し、32.526/80が感染したことが見いだされた。OspA-血清型は26匹の感染した幼虫のうち22匹に対しPCR-ELISAにより決定することができ;8619/22は、B.アフゼリとして、143/22はB.ブルグドルフェリs.s.として分類した。非免疫化対照マウスはすべて100;10/10感染し、一方、多価rOspAワクチンで免疫化したマウスの1匹だけが感染した10;1/10。感染したマウスを同定するために使用した異なる方法間で100一致した。多価rOspAワクチンでは、対照群に比べ、統計的に極めて大きな防御が得られたp=0.00012;Fisher直接両側検定。これらのデータは、rOspA1/2抗原を含む多価rOspAワクチンによる免疫化は、B.アフゼリ、血清型2OspAを発現するボレリア種による感染を防止することができることを示す。さらに、追加のrOspA抗原を含んでも、rOspA1/2抗原により与えられる防御免疫に拮抗作用を有する証拠はない。このワクチンは、OspA1/2抗原により見られるものと等価であるB.アフゼリによるマダニ媒介性感染に対する防御を提供した;0.2AlOH3と共に製剤化され、2つの用量スケジュールで投与された0.3μgのワクチン0.1μgの各抗原は、Westernブロット、ボレリアの培養およびPCRによるボレリアDNAの検出により決定されるように、90防御を提供した。実施例13:3成分ワクチンOSPA1/2、OSPA6/4、およびOSPA5/3を含むワクチンは、OSPA型1-6を発現するボレリア株に結合し、その増殖を阻害する高レベルの機能的抗OspA抗体を誘導する表面結合MFIおよび増殖阻害GI-50力価はどちらも、針誘発B.ブルグドルフェリs.s.モデル実施例10およびマダニ誘発B.アフゼリマウスモデル実施例11において良好な防御の関連要因であることが示されているので、本研究は、ワクチンの有効性を調査するために有効なインビボ防御モデルがない、B.ガリニOspA血清型3-6に対する3成分キメラrOspA抗原ワクチン製剤により等価な機能的免疫応答が誘導されるかどうかを決定するために着手した。マウス免疫化10匹の雌C3H/HeJマウスの群を皮下に3回0日、14日、28日、rOspA-1/2、rOspA-6/4およびrOspA-5/3の1:1:1混合物により、3つの異なる用量で1用量あたり1、0.1、0.03μgタンパク質、0.2AlOH3をアジュバントとして併用して免疫化した。血清を40日に採った血液試料から生成させた。生ボレリアの表面へ結合するOspA抗体の定量このアッセイでは、OspA型1-6を発現する6つの代表的なボレリア株B.ブルグドルフェリセンスストリクトB31/OspA-1;B.アフゼリArcon/OspA-2;B.ガリニPBr/OspA-3;B.ガリニDK6/OspA-4;B.ガリニW/OspA-5;およびB.ガリニKL11/0spA-6のインビトロで増殖させた培養物を、ピーク力価マウス血清のプールによる固定希釈1:100で、室温で、補体活性化を防止するためにEDTAの存在下でインキュベートした。その後の洗浄、ラベリング、検出および分析手順は、実施例10で記載されるものと類似した。正常マウス血清は、抗体の非特異的結合のための陰性対照として機能した。細菌増殖阻害アッセイ誘発前血清がボレリアの増殖を阻害する効力を測定するために、OspA型1-6を発現する6つの代表的な株B31、Arcon、PBr、DK6、W、およびKL11を、33°Cで、熱不活性化ピーク力価血清プールまたは非免疫マウス血清陰性対照の段階希釈の存在下培養した。B31を補体モルモット血清の存在下で培養し、他の5つの株は補体なしで試験した。再び、増殖阻害アッセイを実施例10で記載されるように実施した。標準血清調製物を使用して、異なるアッセイ間の力価を正規化した。抗OspA抗体応答の表面結合および増殖阻害効率3成分ワクチンの1:100希釈での異なる免疫化用量群1用量あたり1.0、0.1および0.03μgタンパク質由来の3つの血清プールを用いて試験した場合、50~200の範囲のMFI値を有する強い蛍光染色が、6つ全てのボレリア株に対し観察された図21。3つの用量群由来の血清プールをそれらの細菌増殖を阻害する能力に対して試験した場合、3成分ワクチンはまた、6つ全てのOspA型株に対し、1000型4株、0.03μg用量~20,000型6株の範囲の強いGI-50力価を誘導したことが見いだされた。結論まとめると、これらの結果はrOspA抗原が高度に免疫原性であり、大量の機能的抗体を誘導し、これは生ボレリアの表面に結合し、ボレリアの増殖を阻害することができることを証明する。試験した6つの株の間のカバレッジは、高い蛍光強度および高い増殖阻害力価が検出され、OspA型1および2で観察されたレベルに匹敵するので完全であった。要するに、この研究で示される結果は、3成分rOspAワクチン1/25/36/4により誘導された抗体応答は、AlOH3と製剤化された場合、OspA型1-6を発現する株による感染を防止し、これは、疫学調査が示しているように、理論的には欧州および北米においてヒト疾患を引き起こす分離株の99をカバーし、よって、ライムボレリア症を防止するのに非常に有効である。実施例14:3成分ワクチンOSPA1/2、OSPA6/4、およびOSPA5/3を含むワクチンは、OspA型1-6を発現するボレリアを最適にカバーするために要求されるこの研究の目的は、rOspAライムボレリア症ワクチンの単一および多成分製剤により誘導された機能的表面結合および/または増殖阻害抗体の免疫原性および交差株カバレッジを、再び、抗OspA抗体の生ボレリアの表面に結合するおよびインビトロでのボレリアの増殖を阻害する効率を防御の関連要因として使用して、調査、比較することであった。マウスの免疫化1群あたり10匹の雌マウスC3Hを、0.1μgの、rOspA1/2抗原、rOspA6/4抗原、またはrOspA5/3抗原を含む単一成分ワクチン;0.1μgの、1/25/3抗原、1/26/4抗原、または5/36/4抗原両方を含む2成分ワクチン;または0.1μgの、3つ全ての1/25/36/4抗原の組み合わせをアジュバントととして0.2AIOH3と共に含む3成分ワクチンにより、刺激-ブースターレジメンで免疫化した。ワクチン接種を、200μlの用量体積を使用して、0、14および28日に皮下に実施した。42日に、個々の血液試料をマウスから取り、血清を生成させた。抗体表面結合および増殖阻害アッセイ表面結合アッセイのわずかに修正したバージョンを使用して、抗OspAIgGの生ボレリアの表面に結合する効率を決定した。明確なMFI力価を有する血清プールの段階希釈を分析で含み、標準曲線を作製し、これから、試験血清の相対力価を、非線形回帰曲線を用いて補間した後に読み取った。OspA型1-6を発現する個々の株に対する標準血清のMFI力価は、ボレリアの蛍光強度が正常マウス血清で観察される蛍光強度を少なくとも3倍超える最高希釈として規定された。全ての定量は2通りで実施した。図22で示される散布図は、単一rOspA抗原またはrOspA抗原組み合わせのいずれかで免疫化した後の個々のC3Hマウスの免疫血清に対し観察される相同OspA型を発現する6つの株に対するMFI力価を比較する。結果から、3つ全てのrOspA抗原1/2、5/3および6/4を含む製剤は、OspA型1-6を発現する6つ全てのボレリア株に対して高MFI力価を誘導するのに必要であったこと、2つのrOspA抗原からなる製剤すなわち4つの株をカバーするは、製剤中に存在しない2つのOspA型を発現する株を完全にはカバーしなかったことが示された。様々なワクチン組み合わせの、増殖阻害抗体を誘導する効力を決定するために、それぞれ、OspA型1-6を発現する6つの代表的なボレリア株B31、Arcon、PBr、DK6、W、KL11を、33°Cで、熱不活性化免疫または非免疫マウス血清プールの存在下で培養した。全ての血清を単一希釈で試験した。下記希釈を使用した:B31、PBrおよびKL111:200、Arcon、DK6およびW1:100。PBrを20補体なしで培養したが、他の5つの株は補体存在下で試験した。仔ウサギ補体をDK6、WおよびKL11で使用したが、モルモット血清をB31およびArconでは使用した。顕微鏡によって決定されるように、非免疫血清と共にインキュベートした対照培養物中の細菌が十分増殖した時に、正確な細胞カウントを前に記載したように実施した実施例10を参照されたい。細菌増殖阻害のパーセンテージを、正常マウス血清対照に対して試験血清で観察された細胞カウントから計算した。試験した異なる製剤に対して観察される全体の増殖阻害をその後、50を超える増殖阻害を示した10匹のC3Hマウスの異なる群間の動物の数として示した図23。結果から、3成分製剤が、OspA型1-6を発現する6つ全ての代表的な株に対して高力価の増殖阻害抗体を誘導することができる唯一の製剤であることが証明された図23。全ての場合において、3成分ワクチン製剤は、>90の免疫化動物において>50増殖阻害を提供した。2成分ワクチン製剤は、ワクチン中に存在しないOspA型を発現する2つの株を完全にはカバーしなかった。rOspA1/26/4を含む製剤は、型3株をカバーせず;rOspA1/25/3製剤を含む製剤は、型4または6をカバーせず;rOspA5/36/4を含む製剤は型1をカバーしなかった。実施例15:多価OSPAワクチン製剤は、OSPA型1-6の型内変異体またはサブタイプを発現するボレリアをカバーするボレリアOspA型1-6を、多価rOspAワクチンの設計および構築のための基礎として選択したが、型1、2、3、5、および6のOspAタンパク質変異体を発現するボレリアもまた単離されている。これらの変異体は、同じ型内にあると分類されるが、わずかに変化したヌクレオチド遺伝子配列およびアミノ酸タンパク質配列を有する。よって、型内変異体またはサブタイプがOspA型1、2、3、5、および6の間に存在する図24を参照されたい。OspA型4では、型内変異体またはサブタイプがまだ観察されていない。この研究の目的は、3成分多価rOspAワクチンでマウスを免疫化することにより生成された免疫血清が、これらの型内変異体またはサブタイプを発現する生ボレリアの表面に結合することができる機能的抗体を含むことを確認することであった。この研究のために、プールしたマウス免疫血清を、70匹の雌C3Hマウスを3回、0.3μgの3成分多価rOspAワクチンで、0、14および28日日に免疫化することにより生成させた。42日に、マウスを出血させ、血清を採取し、プールした。プールした免疫血清をその後使用して、生ボレリア表面への抗体の結合について試験した。ボレリア培養物を、免疫血清プールまたは対照正常マウス血清と1:100で2通り、インキュベートし、細菌への抗OspA抗体の結合を測定するボレリアの蛍光強度を、上記本明細書で記載されるようにFACS分析によりモニタした。1:100の血清希釈での高レベルの表面結合抗体非免疫化マウス対照血清に対して観察されるものの10倍超の蛍光強度として規定されるが、OspAサブタイプ1-6を発現する株のほとんどに対して検出された。特に、高レベルの抗体結合が、OspAサブタイプ1a、1b、1c、1d、1f、1h、1J、1k、および1l;2a、2b、2e、2g、2k、2l、および2n;3a、3c、3d、および3e;5aおよび5c;ならびに6a、6e、6f、6g、および6kを発現するボレリア株で観察された図24。より弱い結合非免疫化マウス対照血清に対して観察されるものの2-10倍の蛍光強度として規定されるが、OspAサブタイプ1g、2j、2m、3b、5d、および6lを発現するボレリア株で観察された図24が、このより弱い結合は、主に使用した増殖条件下でのOspAタンパク質の低い発現によるものであった。結論3成分キメラrOspAワクチンは、C3Hマウスにおいて、OspA型1、2、3、5、および6の全ての型内変異体またはサブタイプに対して機能的、表面結合抗体を誘導する。実施例16:多価OSPAワクチン製剤は、OSPA型1-6を発現するものに加えてボレリアの他の型に対する防御を提供するこの研究の目的は、3成分キメラrOspA抗原ワクチン製剤3つ全てのキメラ抗原1/2、6/4、および3/5を含むが相同OspA型1-6以外のOspA型を発現するボレリアに対しても防御を提供することができるかを決定することであった。40C3Hマウスを3回、0.3μgの3成分ワクチンで、0、14および28日に免疫化した。42日に、マウスを出血させ、血清プールを作製し、これを使用して、異種OspA型を発現する株に対する表面結合および増殖阻害の効率を評価した。この研究の結果は、3成分キメラrOspAワクチンが、ボレリアの表面に結合し、ボレリアの他の型、例えばB.スピエルマニ、B.バライシアナ、B.ルジタニエおよびB.ジャポニカの株表9を参照されたいの増殖を阻害する抗体を誘導することを示した。OspA型7を発現するB.ガリニの場合、弱い表面結合のみが観察され、増殖阻害はほとんどまたは全く観察されなかった;しかしながら、この弱い結合および少量の増殖阻害は、免疫血清抗体の結合の欠如よりも、使用されるインビトロ培養条件下でのOspAの低い発現レベルによるものであり得る。実施例17:多価OSPAワクチン製剤は、全てのOspAを発現するボレリア株に対する防御に寄与することができる、OSPA分子のN末端の共通エピトープに対する抗体を誘導する多価キメラrOspA製剤の防御効率を調査する過程中、モノクローナル抗体がF237/BK2が、rOspA-1/2およびrOspA-6/4を含む2成分rOspAワクチンに対して生成された。F237/BK2は、抗OspAELISAにより、これまで調査した全てのOspA型OspA型1-7、ならびに3つのキメラrOspA抗原rOspA-1/2、rOspA-5/3およびrOspA-6/4に結合することが示された。そのような結果から、F237/BK2が全てのOspA分子上で見られる共通エピトープを認識することが示される。さらに、予備的エピトープマッピング研究は、この共通エピトープは分子のより可変性の低いN末端半分すなわち、アミノ酸130のN末端に位置し、そこではOspA配列相同性が最も普通に観察されることを示す。興味深いことに、F237/BK2はまた、C末端型特異的エピトープに対して作られるモノクローナル抗体よりも効率が低いが、相同OspA型1-6および異種OspA型、例えばB.スピエルマニ、B.バライシアナおよびB.ジャポニカにより発現されるものを発現するボレリアの表面に結合することが示された。前の実施例で記載されるものと同様の方法を用いて、F237/BK2はまた、OspA型1、2、4、5および6を発現する代表的な株の増殖を阻害することが見いだされた。F237/BK2をマウスにおいてインビボ受動防御モデルで試験した場合、F237/BK2は、B.アフゼリ型2誘発に対応する野生マダニ誘発に対して防御を与えることが観察された。マダニは、WundschuhStyria、オーストリアにおいて収集し、これは、主にB.アフゼリにより感染されていることが知られている。10匹の雌C3Hマウスに、500μgのアフィニティ精製mAbF237/BK2を腹腔内注射した。2時間後、1匹の動物あたり8匹のマダニを、10匹の受動免疫化マウスならびに10匹の偽免疫化動物に適用した。4日後、摂食させたマダニを除去した。90日に、上記本明細書で記載されるように、マウスを屠殺し、血清学的試験、PCR解析およびボレリア培養により感染について分析した。F237/BK2で処理した群では、動物は感染していなかったが、対照群では5匹の動物50がB.アフゼリに感染した。よって、モノクローナル抗体F237/BK2は、偽免疫化対照マウスに比べ、マダニ誘発に対し統計学的に有意のp=0.0325受動防御を提供した。分子のN末端半分上の共通エピトープに結合するモノクローナル抗体が、防御に関与していることが報告されたのはこれが初めてである。さらに、ワクチンがこの共通エピトープを認識する抗体を誘導することができる場合、そのような抗体はワクチンの交差防御効率に確実に寄与するであろう。そのような抗体が実際に3成分キメラrOspAワクチン製剤により誘導されたか試験するために、ペルオキシダーゼ標識F237/BK2を使用してモノクローナル抗体阻害ELISAを実施した。これらの実験では、GST-OspA型3タンパク質をコーティング抗原として使用し、正常マウス血清または3回、3成分キメラrOspAワクチンで免疫化したC3Hマウス由来の血清プールのいずれかをウェルに1:100の希釈で添加した。60分後、ペルオキシダーゼ標識F237/BK2を、予め最適化した濃度で添加し、最終的には非阻害正常マウス血清対照に対し約1の光学密度OD値を与え、インキュベーションをさらに60分続けた。最後に、ELISAプレートを洗浄し、TMB基質で発現させた。このモノクローナル抗体阻害ELISAアッセイを使用して、3成分キメラrOspA製剤が実際、mAbF237/BK2により認識されるエピトープと同一のまたはすぐ近くのエピトープに結合する抗体を誘導することが証明されるであろう。OD値は、非阻害正常マウス血清対照に比べ、抗OspA免疫血清により著しく減少した例えば、典型的には20-30。結論この研究は、3成分キメラrOspAワクチンが型特異的および広い交差防御免疫応答の両方を誘導することができることを示す。実施例18:追加の合成OSPA核酸およびポリペプチド分子この研究の目的は、それぞれ、血清型1および2、6および4、ならびに5および3を含む追加の新規OspA抗原を設計することであった。3つの合成OspA遺伝子配列番号168origsOspA1/2、170origsOspA6/4、および172origsOspA5/3を、ボレリアのOspA血清型1および2origsOspA1/2、OspA血清型6および4origsOspA6/4ならびにOspA血清型5および3origsOspA5/3に由来する防御エピトープを有するOspAポリペプチド分子をコードするように設計した。これらの分子の一次アミノ酸配列それぞれ、配列番号169、171、および173を表1で提供する。これらの配列はオリジナルキメラコンストラクトを含み、すなわち変異およびコドン最適化を有さない。実施例19:3つの抗原1/2、6/4、および5/3を含む多価組換えOSPA製剤は、マウスにおいて免疫原性であるコドン最適化および変異を有さないオリジナルコンストラクト製剤origOspA1/2、origOspA5/3、およびorigOspA6/4を含む多価OspAワクチンを、マダニ誘発モデルにおいて評価する。OspA血清型1および2配列番号169、OspA血清型6および4配列番号171、ならびにOspA血清型5および3配列番号173由来の防御エピトープを含む3つの組換えOspA抗原を1つのワクチン内で組み合わせる。10匹の雌C3H/HeJマウス免疫化年齢:11週の群を、0および28日に、一定用量の0.3μgの多価ワクチン0.1μgの各origOspA1/2、origOspA5/3、およびorigOspA6/4で皮下に免疫化する。マダニ誘発を、上記本明細書で記載されるように、Budweis、チェコ共和国由来のマダニを用いて実施する。野生マダニのB.ブルグドルフェリs.l.をマウスに伝染させる能力は、非免疫化対照動物を誘発することにより確認する。誘発させたマウスの感染状態は、Westernブロッティング、リアルタイムPCR、および培養により決定する。中間血液試料を41日に眼窩穿刺により採る。最終血液試料70/71日を心臓穿刺により収集する。個々の血清を全血から遠心分離10分;1000-2000xG;RTにより調製する。血清を£-20°Cで使用するまで貯蔵する。この実験では、マウスを誘発するために使用した同じバッチからとった摂食させていないマダニを特徴付けし、全体の感染率を決定し、感染生物の種を確認する。実施例20:3成分ワクチンORIGOSPA1/2、ORIGOSPA6/4、およびORIGOSPA5/3を含むワクチンは、OSPA型1-6を発現するボレリア株に結合し、その増殖を阻害する高レベルの機能的抗OspA抗体を誘導する実施例13で示される結果は、3成分rOspAワクチンlipBsOspA1/2lipBsOspA5/3lipBsOspA6/4により誘導される抗体応答は、AlOH3と共に製剤化された場合、OspA型1-6を発現する株による感染を阻害し、よって、ライムボレリア症を防止するのに有効である。よって、本研究は、等価な機能的免疫応答がキメラオリジナルorigOspA抗原OrigsOspA1/2OrigsOspA5/3OrigsOspA6/4を含む3成分OspAワクチンにより誘導されるかを決定するために実施される。マウス免疫化10匹の雌C3H/HeJマウスの群を皮下に3回0日、14日、28日、OrigsOspA1/2OrigsOspA5/3OrigsOspA6/4の1:1:1混合物により、3つの異なる用量で1用量あたり1、0.1、0.03μgタンパク質、0.2AlOH3をアジュバントとして併用して免疫化する。血清を40日に採った血液試料から生成させる。生ボレリアの表面へ結合するOspA抗体の定量このアッセイでは、OspA型1-6を発現する6つの代表的なボレリア株B.ブルグドルフェリセンスストリクトB31/OspA-1;B.アフゼリArcon/OspA-2;B.ガリニPBr/OspA-3;B.ガリニDK6/OspA-4;B.ガリニW/OspA-5;およびB.ガリニKL11/0spA-6のインビトロで増殖させた培養物を、ピーク力価マウス血清のプールによる固定希釈1:100で、室温で、補体活性化を防止するためにEDTAの存在下でインキュベートする。その後の洗浄、ラベリング、検出および分析手順は、実施例10および13で記載されるものと類似する。正常マウス血清は、抗体の非特異的結合のための陰性対照として機能する。細菌増殖阻害アッセイ誘発前血清がボレリアの増殖を阻害する効力を測定するために、OspA型1-6を発現する6つの代表的な株B31、Arcon、PBr、DK6、W、およびKL11を、33°Cで、熱不活性化ピーク力価血清プールまたは非免疫マウス血清陰性対照の段階希釈の存在下培養する。B31を補体モルモット血清の存在下で培養し、他の5つの株は補体なしで試験する。増殖阻害アッセイを実施例10および13で記載されるように実施する。標準血清調製物を使用して、異なるアッセイ間の力価を正規化する。抗OspA抗体応答の表面結合および増殖阻害効率3成分ワクチンの1:100希釈での異なる免疫化用量群1用量あたり1.0、0.1および0.03μgタンパク質由来の3つの血清プールを用いて試験した場合、蛍光染色を6つ全てのボレリア株に対し測定する。実施例21:3成分ワクチンOSPA1/2、OSPA6/4、およびOSPA5/3を含むワクチンは、OSPA型1-6を発現するボレリアを最適にカバーするために要求されるこの研究の目的は、OrigsOspAライムボレリア症ワクチンの単一および多成分製剤により誘導された機能的表面結合および/または増殖阻害抗体の免疫原性および交差株カバレッジを、抗OspA抗体の生ボレリアの表面に結合するおよびインビトロでのボレリアの増殖を阻害する効率を防御の関連要因として使用して、調査、比較することである。マウスの免疫化1群あたり10匹の雌マウスC3Hを、0.1μgの、OrigsOspA1/2抗原、OrigsOspA5/3抗原、またはOrigsOspA6/4抗原を含む単一成分ワクチン;0.1μgの、1/25/3抗原、1/26/4抗原、または5/36/4抗原両方を含む2成分ワクチン;または0.1μgの、3つ全ての1/25/36/4抗原の組み合わせをアジュバントとして0.2AIOH3と共に含む3成分ワクチンにより、刺激-ブースターレジメンで免疫化する。ワクチン接種を、200μlの用量体積を使用して、0、14および28日で皮下に実施する。42日に、個々の血液試料をマウスから取り、血清を生成させる。抗体表面結合および増殖阻害アッセイ上記表面結合アッセイのわずかに修正したバージョンを使用して、抗OspAIgGの生ボレリアの表面に結合する効率を決定する。明確なMFI力価を有する血清プールの段階希釈を分析で含み、標準曲線を作製し、これから、試験血清の相対力価を、非線形回帰曲線を用いて補間した後に読み取る。OspA型1-6を発現する個々の株に対する標準血清のMFI力価は、ボレリアの蛍光強度が正常マウス血清で観察される蛍光強度を少なくとも3倍超えると決定される最高希釈として規定される。全ての定量は2通りで実施する。様々なワクチン組み合わせの、増殖阻害抗体を誘導する効力を決定するために、それぞれ、OspA型1-6を発現する6つの代表的なボレリア株B31、Arcon、PBr、DK6、W、KL11を、33°Cで、熱不活性化免疫または非免疫マウス血清プールの存在下で培養する。全ての血清を単一希釈で試験する。下記希釈を使用する:B31、PBrおよびKL111:200、Arcon、DK6およびW1:100。PBrを20補体なしで培養するが、他の5つの株は補体存在下で試験する。仔ウサギ補体をDK6、WおよびKL11で使用するが、モルモット血清をB31およびArconでは使用する。顕微鏡によって決定されるように、非免疫血清と共にインキュベートした対照培養物中の細菌が十分増殖した時に、正確な細胞カウントを前に記載したように実施する実施例10を参照されたい。細菌増殖阻害のパーセンテージを、正常マウス血清対照に対して試験血清で観察された細胞カウントから計算する。試験した異なる製剤に対して観察される全体の増殖阻害をその後、50を超える増殖阻害を示した10匹のC3Hマウスの異なる群間の動物の数として示す図23。実施例22:多価OSPAワクチン製剤は、OSPA型1-6の型内変異体またはサブタイプを発現するボレリアをカバーするこの研究の目的は、3成分多価origOspAワクチンorigsOspA1/2、origsOspA6/4、およびorigsOspA5/3でマウスを免疫化することにより生成された免疫血清が、これらの型内変異体またはサブタイプを発現する生ボレリアの表面に結合することができる機能的抗体を含むことを確認することであった。この研究のために、プールマウス免疫血清を、70匹の雌C3Hマウスを3回、0.3μgの3成分多価origOspAワクチンで、0、14および28日日に免疫化することにより生成させる。42日に、マウスを出血させ、血清を採取し、プールする。プールした免疫血清をその後使用して、生ボレリア表面への抗体の結合について試験する。ボレリア培養物を、免疫血清プールまたは対照正常マウス血清と1:100で2通り、インキュベートし、細菌への抗OspA抗体の結合を測定するボレリアの蛍光強度を、上記本明細書で記載されるようにFACS分析によりモニタする。本発明について、本発明の実施のための特定の様式を含むことが見いだされた、またはそのように提案された特定の実施形態の観点から説明してきた。記載した発明の様々な改変および変更が本発明の範囲および精神から逸脱せずに、当業者には明らかであろう。本発明を特定の実施形態と関連させて説明してきたが、主張される本発明は、そのような特定の実施形態に過度に制限されるべきではないことが理解されるべきである。実際、本発明を実施するための記載された様式の様々な改変は、関連分野の当業者には明らかであり、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図される。"