"B7-H3の細胞外ドメインと特異的に結合する可変ドメインを含み、該B7-H3との結合に関して抗体:BRCA69D、BRCA84DまたはPRCA157のいずれかと競合する単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。ABRCA69Dの軽鎖のCDR1配列番号21、CDR2配列番号23およびCDR3配列番号25と、BRCA69Dの重鎖のCDR1配列番号29、CDR2配列番号31およびCDR3配列番号33;BBRCA84Dの軽鎖のCDR1配列番号5、CDR2配列番号7およびCDR3配列番号9と、BRCA84Dの重鎖のCDR1配列番号13、CDR2配列番号15およびCDR3配列番号17;またはCPRCA157の軽鎖のCDR1配列番号37、CDR2配列番号39およびCDR3配列番号41と、PRCA157の重鎖のCDR1配列番号45、CDR2配列番号47およびCDR3配列番号49を含む可変ドメインを含む、請求項1に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。癌細胞の表面で内因的に発現されたB7-H3と結合する、請求項1又は2に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。癌細胞の表面で発現されたB7-H3と結合した際に内部移行を受けるB7-H3と結合する、請求項1又は2に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。ヒト化モノクローナル抗体である、請求項1ないし4のいずれか一項に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。変異型ヒトIgG1Fc領域を含む改変抗体であり、前記変異型ヒトIgG1Fc領域が前記抗体の親のFc領域に関して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、前記アミノ酸改変が、FcγRとの結合に関する該変異型Fc領域の親和性または結合力を変更するアミノ酸改変を含み、その結果、前記改変抗体が前記親抗体に関してエフェクター機能の増強を示す、請求項1ないし5のいずれか一項に記載の単離された抗体。前記Fc領域改変が、A1F243L;2D270E;3R292P;4S298N;5Y300L;6V305I;7A330V;および8P396Lからなる群から選択される少なくとも1つの置換;B1F243LとP396L;2F243LとR292P;および3R292PとV305Iからなる群から選択される少なくとも1つの、2つのアミノ酸残基の置換;C1F243LとR292PとY300L;2F243LとR292PとV305I;3F243LとR292PとP396L;および4R292PとV305IとP396Lからなる群から選択される少なくとも1つの、3つのアミノ酸残基の置換;D1F243LとR292PとY300LとP396L;および2F243LとR292PとV305IとP396Lからなる群から選択される少なくとも1つの、4つのアミノ酸残基の置換;またはE少なくとも、5つのアミノ酸残基:F243LとR292PとY300LとV305IとP396の置換を含む、請求項6に記載の抗体。AF243LとR292PとY300L;BL235VとF243LとR292PとY300LとP396L;またはCF243LとR292PとY300LとV305IとP396Lの置換を含む、請求項7に記載の抗体。ABRCA84Dの軽鎖のCDR1配列番号5、CDR2配列番号7およびCDR3配列番号9と、BRCA84Dの重鎖のCDR1配列番号13、CDR2配列番号15およびCDR3配列番号17とを含む可変ドメイン、ならびにB置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを含むFc領域改変を含む、請求項8に記載の抗体。キメラ抗体である、請求項9に記載の抗体。ヒト化抗体である、請求項9に記載の抗体。AhBRCA84D-2VLの前記アミノ酸配列配列番号89を有する可変軽鎖と、BhBRCA84D-2VHの前記アミノ酸配列配列番号99を有する可変重鎖と、C置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを有するFc領域とを含む、請求項1に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。B7-H3の細胞外ドメインと特異的に結合し、前記B7-H3との結合に関して抗体:BRCA69D、BRCA84DまたはPRCA157のいずれかと競合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ。請求項1ないし12のいずれか一項に記載の前記単離された抗体、または請求項1~5のいずれか一項に記載の前記免疫反応性フラグメントをコードする核酸分子。AB7-H3との結合に特異的な免疫グロブリンVLエピトープ結合ドメイン、およびB7-H3以外の分子との結合に特異的なVHエピトープ結合ドメインを含む、ポリペプチド鎖Iと、BB7-H3との結合に特異的な免疫グロブリンVHエピトープ結合ドメイン、および前記B7-H3以外の分子との結合に特異的なVLエピトープ結合ドメインを含む、ポリペプチド鎖IIとを含み、前記ポリペプチド鎖IとIIがともに会合して、B7-H3および前記B7-H3以外の分子と結合可能な機能的エピトープ結合ドメインを形成する、二重親和性再標的化試薬DART商標。前記DART商標が結合し得る前記B7-H3以外の分子がハプテンである、請求項15に記載の二重親和性再標的化試薬DART商標。前記ハプテンがフルオレセインイソチオシアネートである、請求項16に記載の二重親和性再標的化試薬DART商標。前記DART商標が結合し得る前記B7-H3以外の分子がT細胞受容体またはNKG2D受容体である、請求項15に記載の二重親和性再標的化試薬DART商標。前記DART商標が結合し得る前記B7-H3以外の分子が腫瘍関連抗原である、請求項15に記載の二重親和性再標的化試薬DART商標。前記腫瘍関連抗原がA33;ADAM-9;ALCAM;BAGE;β-カテニン;CA125;カルボキシペプチダーゼM;CD103;CD19;CD20;CD22;CD23;CD25;CD27;CD28;CD36;CD40/CD154;CD45;CD46;CD5;CD56;CD79a/CD79b;CDK4;CEA;CTLA4;サイトケラチン8;EGF-R;EphA2;ErbB1;ErbB3;ErbB4;GAGE-1;GAGE-2;GD2/GD3/GM2;gp100;HER-2/neu;ヒト乳頭腫ウイルス-E6;ヒト乳頭腫ウイルス-E7;インテグリンα-V-Β-6;JAM-3;KID3;KID31;KSA17-1A;LUCA-2;MAGE-1;MAGE-3;MART;MUC-1;MUM-1;N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ;オンコスタチンM;p15;PIPA;PSA;PSMA;ROR1;sTn;TNF-β受容体;TNF-α受容体;TNF-γ受容体;トランスフェリン受容体;およびVEGF受容体からなる群から選択される、請求項19に記載の二重親和性再標的化試薬DART商標。請求項15ないし20のいずれか一項に記載の前記二重親和性再標的化試薬DART商標のポリペプチド鎖をコードする核酸分子。i治療上有効な量の請求項1~12のいずれか一項に記載の前記単離された抗体、または請求項1~5のいずれか一項に記載の前記免疫反応性フラグメント、または請求項15~20のいずれか一項に記載の前記二重親和性再標的化試薬DART商標と、ii薬学上許容される担体とを含む、医薬組成物。前記抗体が、ABRCA84Dの軽鎖のCDR1配列番号5、CDR2配列番号7およびCDR3配列番号9と、BRCA84Dの重鎖のCDR1配列番号13、CDR2配列番号15およびCDR3配列番号17とを含む可変ドメイン、ならびにB置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを含むFc領域改変を含むヒト化抗体である、請求項21に記載の医薬組成物。前記抗体が、AhBRCA84D-2VLの前記アミノ酸配列配列番号89を有する可変軽鎖と、BhBRCA84D-2VHの前記アミノ酸配列配列番号99を有する可変重鎖と、C置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを有するFc領域とを含むヒト化抗体である、請求項21に記載の医薬組成物。1種以上の付加的抗癌薬をさらに含む、請求項22ないし24のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記付加的抗癌薬が化学療法薬、放射線療法薬、ホルモン療法薬、毒素または免疫療法薬である、請求項22ないし24のいずれか一項に記載の医薬組成物。前記付加的抗癌薬がタキサン、メイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアマイシン、アントラサイクリン、CC-1065類似体、ドセタキセル、カテプシン、リシン、ゲロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、RNアーゼおよび有毒放射性同位元素からなる群から選択される毒素である、請求項22ないし24のいずれか一項に記載の医薬組成物。癌の診断における請求項1ないし12のいずれか一項に記載の前記単離された抗体、または請求項1~5のいずれか一項に記載の前記免疫反応性フラグメント、または請求項15~20のいずれか一項に記載の前記二重親和性再標的化試薬DART商標の使用であって、前記単離された抗体、免疫反応性フラグメントまたはDART商標が検出可能に標識されている、使用。前記癌が、副腎腫瘍、AIDS関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫/良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫/悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる群から選択される癌細胞の存在を特徴とする、請求項28に記載の使用。患者の癌治療のための薬剤の製造における、請求項1ないし12のいずれか一項に記載の前記単離された抗体、または請求項1ないし5のいずれか一項に記載の前記免疫反応性フラグメント、または請求項15ないし20のいずれか一項に記載の前記二重親和性再標的化試薬DART商標、または請求項22ないし27のいずれか一項に記載の前記医薬組成物の使用。前記癌が、副腎腫瘍、AIDS関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞性癌腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫/良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫/悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる群から選択される癌細胞の存在を特徴とする、請求項29ないし30のいずれか一項に記載の使用。化学療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法および手術からなる群から選択される1以上の付加的癌療法の投与をさらに含む、請求項29ないし31のいずれか一項に記載の使用。従って、これまでのあらゆる進展にもかかわらず、癌細胞に結合し、癌細胞に対する免疫応答を助長または媒介することができる改良された組成物の必要が依然としてある。このような組成物はこのような癌を診断および治療するために使用可能である。本明細書に開示されている発見に基づけば、細胞表面の二重の標的を特異的に認識し、それにより、B7-H3の、T細胞活性化を媒介する能力を低減もしくは増強するか、またはB7-H3を発現する癌細胞を認識して死に至らせるかのいずれかによって調節を行うことができる新規組成物のさらなる必要性が存在する。本発明の1つの目的はこのような組成物を特定することである。もう1つの目的は、B7-H3発現のアッセイに用いるための新規化合物を提供することである。以下に詳細に記載されるように、本発明は、T細胞の活性化に影響を与え得る、B7-H3T細胞活性化のモジュレーターを含む新規な抗体特に、二重親和性再標的化試薬DART:dualaffinityretargetingreagent商標を含む、ならびに癌細胞のB7-H3受容体と結合し、このような細胞の細胞死を助長または媒介する新規な抗体に関する。本発明は、このような組成物、ならびに癌などの疾患の診断および治療におけるそれらの使用を対象とする。本発明は、哺乳類、より詳しくはヒト、B7-H3受容体と免疫反応性のある抗体およびそれらのフラグメント、ならびに特に癌および炎症の治療におけるその使用に関する。よって、本発明は、特に、様々なヒト癌に関連する癌細胞に対する免疫系の活性化を媒介し得る、より好ましくは増強し得るヒト化B7-H3反応性抗体およびそれらの免疫反応性フラグメントに関する。詳しくは、本発明は、B7-H3の細胞外ドメインと特異的に結合する可変ドメインを含み、該B7-H3との結合に関して抗体:BRCA69D、BRCA84DまたはPRCA157のいずれかと競合する、単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントに関する。本発明はさらに、ABRCA69Dの軽鎖のCDR1配列番号21、CDR2配列番号23およびCDR3配列番号25と、BRCA69Dの重鎖のCDR1配列番号29、CDR2配列番号31およびCDR3配列番号33;BBRCA84Dの軽鎖のCDR1配列番号5、CDR2配列番号7およびCDR3配列番号9と、BRCA84Dの重鎖のCDR1配列番号13、CDR2配列番号15およびCDR3配列番号17;またはCPRCA157の軽鎖のCDR1配列番号37、CDR2配列番号39およびCDR3配列番号41と、PRCA157の重鎖のCDR1配列番号45、CDR2配列番号47およびCDR3配列番号49を含む可変ドメインを含む、上記の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントに関する。本発明はさらに、癌細胞の表面で内因的に発現されたB7-H3と結合する、上記の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。本発明はさらに、癌細胞の表面で発現されたB7-H3と結合した際に内部移行を受けるB7-H3と結合する、上記の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。本発明はさらに、ヒト化モノクローナル抗体である、上記の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。本発明はさらに、変異型ヒトIgG1Fc領域を含む改変抗体であり、前記変異型ヒトIgG1Fc領域が前記抗体の親のFc領域に比べて少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、該アミノ酸改変が、FcγRとの結合に関する該変異型Fc領域の親和性または結合力を変更するアミノ酸改変を含み、その結果、前記改変抗体が前記親抗体に比べてエフェクター機能の増強を示す、上記の単離された抗体、または免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。本発明はさらに、前記Fc領域改変が、A1F243L;2D270E;3R292P;4S298N;5Y300L;6V305I;7A330V;および8P396Lからなる群から選択される少なくとも1つの置換;B1F243LとP396L;2F243LとR292P;および3R292PとV305Iからなる群から選択される少なくとも1つの、2つのアミノ酸残基の置換;C1F243LとR292PとY300L;2F243LとR292PとV305I;3F243LとR292PとP396L;および4R292PとV305IとP396Lからなる群から選択される少なくとも1つの、3つのアミノ酸残基の置換;D1F243LとR292PとY300LとP396L;および2F243LとR292PとV305IとP396Lからなる群から選択される少なくとも1つの、4つのアミノ酸残基の置換;またはE少なくとも、5つのアミノ酸残基:F243LとR292PとY300LとV305IとP396の置換を含む、上記の単離された抗体、または免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。本発明はさらに、AF243LとR292PとY300L;BL235VとF243LとR292PとY300LとP396L;またはCF243LとR292PとY300LとV305IとP396Lの置換を含む、上記の抗体に関する。本発明はさらに、ABRCA84Dの軽鎖のCDR1配列番号5、CDR2配列番号7およびCDR3配列番号9と、BRCA84Dの重鎖のCDR1配列番号13、CDR2配列番号15およびCDR3配列番号17とを含む可変ドメイン、ならびにB置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを含むFc領域改変を含む、上記の抗体に関する。本発明はさらに、キメラ抗体またはヒト化抗体である、上記の抗体に関する。本発明はさらに、AhBRCA84D-2VLのアミノ酸配列配列番号89を有する可変軽鎖と、BhBRCA84D-2VHのアミノ酸配列配列番号99を有する可変重鎖と、C置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを有するFc領域とを含む、上記の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントに関する。本発明はさらに、B7-H3の細胞外ドメインと特異的に結合し、B7-H3との結合に関して抗体:BRCA69D、BRCA84DまたはPRCA157のいずれかと競合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマに関する。本発明はさらに、上記の単離された抗体または免疫反応性フラグメントのいずれかをコードする核酸分子に関する。本発明はさらに、AB7-H3との結合に特異的な免疫グロブリンVLエピトープ結合ドメイン、およびB7-H3以外の分子との結合に特異的なVHエピトープ結合ドメインを含む、ポリペプチド鎖Iと、BB7-H3との結合に特異的な免疫グロブリンVHエピトープ結合ドメイン、およびB7-H3以外の分子との結合に特異的なVLエピトープ結合ドメインを含む、ポリペプチド鎖IIとを含み、ポリペプチド鎖IとIIがともに会合して、B7-H3およびB7-H3以外の分子と結合可能な機能的エピトープ結合ドメインを形成する、二重親和性再標的化試薬DART商標に関する。本発明はさらに、DART商標が結合し得るB7-H3以外の分子がハプテンである、特に、ハプテンがフルオレセインイソチオシアネートである、上記の二重親和性再標的化試薬DART商標に関する。本発明はさらに、DART商標が結合し得るB7-H3以外の分子がT細胞受容体またはNKG2D受容体である、上記の二重親和性再標的化試薬DART商標に関する。本発明はさらに、DART商標が結合し得るB7-H3以外の分子が腫瘍関連抗原であり、特に、腫瘍関連抗原がA33;ADAM-9;ALCAM;BAGE;β-カテニン;CA125;カルボキシペプチダーゼM;CD103;CD19;CD20;CD22;CD23;CD25;CD27;CD28;CD36;CD40/CD154;CD45;CD46;CD5;CD56;CD79a/CD79b;CDK4;CEA;CTLA4;サイトケラチン8;EGF-R;EphA2;ErbB1;ErbB3;ErbB4;GAGE-1;GAGE-2;GD2/GD3/GM2;gp100;HER-2/neu;ヒト乳頭腫ウイルス-E6;ヒト乳頭腫ウイルス-E7;インテグリンα-V-Β-6;JAM-3;KID3;KID31;KSA17-1A;LUCA-2;MAGE-1;MAGE-3;MART;MUC-1;MUM-1;N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ;オンコスタチンM;p15;PIPA;PSA;PSMA;ROR1;sTn;TNF-β受容体;TNF-α受容体;TNF-γ受容体;トランスフェリン受容体;およびVEGF受容体からなる群から選択される、上記の二重親和性再標的化試薬DART商標に関する。本発明はさらに、上記の二重親和性再標的化試薬DART商標のいずれかのポリペプチド鎖をコードする核酸分子に関する。本発明はさらに、i治療上有効な量の上記の単離された抗体または免疫反応性フラグメントまたは二重親和性再標的化試薬DART商標のいずれかと、ii薬学上許容される担体とを含む医薬組成物に関する。本発明はさらに、抗体が、ABRCA84Dの軽鎖のCDR1配列番号5、CDR2配列番号7およびCDR3配列番号9と、BRCA84Dの重鎖のCDR1配列番号13、CDR2配列番号15およびCDR3配列番号17とを含む可変ドメイン、ならびにB置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを含むFc領域改変を含むヒト化抗体である、上記の医薬組成物に関する。本発明はさらに、抗体が、AhBRCA84D-2VLのアミノ酸配列配列番号89を有する可変軽鎖と、BhBRCA84D-2VHのアミノ酸配列配列番号99を有する可変重鎖と、C置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを有するFc領域とを含むヒト化抗体である、上記の医薬組成物に関する。本発明はさらに、1以上の付加的抗癌薬をさらに含み、特に、付加的抗癌薬が化学療法薬、放射線療法薬、ホルモン療法薬または免疫療法薬である、上記の医薬組成物のいずれかに関する。本発明はさらに、癌の診断における上記の抗体または免疫反応性フラグメントまたは二重親和性再標的化試薬DART商標のいずれかの使用であって、該単離された抗体、免疫反応性フラグメントまたはDART商標が検出可能に標識されている使用に関する。本発明はさらに、癌が副腎腫瘍、AIDS関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫/良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫/悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる群から選択される癌細胞の存在を特徴とすることを特徴とする上記の使用に関する。本発明はさらに、患者の癌の治療または予防のための薬剤の製造における、上記の抗体または免疫反応性フラグメントまたは二重親和性再標的化試薬DART商標のいずれかの使用に関する。本発明はさらに、癌が副腎腫瘍、AIDS関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫/良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫/悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる群から選択される癌細胞の存在を特徴とすることを特徴とするこのような使用に関する。本発明はさらに、使用が化学療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法および手術からなる群から選択される1以上の付加的癌療法の投与をさらに含むことを特徴とする上記の使用に関する。本発明は、哺乳類、より詳しくは、ヒトB7-H3受容体と免疫反応性のある抗体およびそれらのフラグメント、ならびに特に癌および炎症の治療におけるそれらの使用に関する。よって、本発明は特に、様々なヒト癌に関連する癌細胞に対する免疫系の活性化を媒介し得る、より好ましくは増強し得る、ヒト化B7-H3反応性抗体およびそれらの免疫反応性フラグメントに関する。I.一般技術本発明の実施は、特に断りのない限り、当業者の技術の範囲内である分子生物学組換え技術を含む、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技術を使用する。このような技術はMolecularCloningALaboratoryManualThirdEditionColdSpringHarborPressColdSpringHarborNYOligonucleotideSynthesisMethodsandApplicationsHerdewijnPEdHumanaPressTotowaNJOligonucleotideSynthesisMethodsinMolecularBiologyHumanaPressTotowaNJCellBiologyALaboratoryNotebookAcademicPressNewYorkNYAnimalCellCultureIntroductiontoCellandTissueCulturePlenumPressNewYorkNYCellandTissueCultureLaboratoryProceduresJohnWileyandSonsHobokenNJMethodsinEnzymologyNewYorkNYWeir’sHandbookofExperimentalImmunologyWileyBlackwellPublishersNewYorkNYGeneTransferVectorsforMammalianCellsColdSpringHarborPressColdSpringHarborNYCurrentProtocolsinMolecularBiologyGreenePubAssociatesNewYorkNYPCRThePolymeraseChainReactionBirkhauserBostonMACurrentProtocolsinImmunologyJohnWileyandSonsHobokenNJShortProtocolsinMolecularBiologyHobokenNJImmunobiology7GarlandScienceLondonUKAntibodiesStridePublicationsDevoranUKAntibodiesAPracticalApproachOxfordUniversityPressUSANewYorkNYMonoclonalAntibodiesAPracticalApproachOxfordUniversityPressUSANewYorkNYUsingAntibodiesALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNYTheAntibodiesHarwoodAcademicPublishersLondonUKおよびDeVitaHellmanandRosenbergsCancerPrinciplesPracticeofOncologyEighthEditionDeVitaVetalEds2008LippincottWilliamsWilkinsPhiladelphiaPAなどの文献に十分に記載されている。II.定義本明細書において、B7-H3とは、CD276としても知られるIg様ドメインを有するI型膜タンパク質である、ヒトB7ファミリータンパク質のメンバーを意味する。2Ig-B7-H3とは、Ig様ドメインを2つだけ含むB7-H3を表し;4Ig-B7-H3とは、4つのIg様ドメインを含むB7-H3を表すSunMetalCharacterizationofMouseandHumanB7H3GenesJImmunol16862946297SteinbergeretalMolecularCharacterizationOfHuman4IgB7H3AMemberOfTheB7FamilyWithFourIgLikeDomainsJImmunol200417223522359およびCastriconietalIdentificationOf4IgB7H3AsANeuroblastomaAssociatedMoleculeThatExertsAProtectiveRoleFromAnNKCellMediatedLysisProcNatlAcadSci1011264012645参照。抗原TES7国際公開第2008/066691号は、4Ig-B7-H3と共有する特性の抗原である。よって、TES7と特異的に結合する抗体は、4Ig-B7-H3と結合する。TES7抗原は2以上の異なるエピトープを持つ場合もあり、エピトープは非線形である場合もある。いくつかの抗B7-H3抗体は非線形エピトープ4Ig-B7-H3アイソフォームにのみ存在するいくつかのものを含むと結合することが知られている。現在のところ、TES7はある種の癌細胞で、それらの対応する正常な組織に比べて過剰発現される可能性があると考えられている。B7-H3機能のアゴニスト、アンタゴニストおよびその他のモジュレーターは、本発明の範囲に明確に含まれる。これらのアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターは、B7-H3の1以上の抗原決定基部位を含むか、このような部位のフラグメント、このような部位の変異体、もしくはこのような部位のペプチドミメティクスの1以上を含むポリペプチドである。これらのアゴニスト、アンタゴニストおよびB7-H37モジュレーター化合物は直鎖または環状形態で提供され、場合により、自然界には一般に見られない少なくとも1つのアミノ酸残基、または少なくとも1つのアミド同配体を含む。これらの化合物はグリコシル化されていてもよい。より具体的には、本明細書においてB7-H3モジュレーターとは、1ヒトB7-H3とその天然リガンドまたは抗B7-H3抗体の間の相互作用を攪乱または遮断することができる化合物;2ヒトB7-H3およびその天然リガンドまたは抗B7-H3抗体と結合することができる化合物;3ヒトB7-H3およびその天然リガンドまたは抗B7-H3抗体と結合することができる抗体の作製に使用可能な抗原部位を含む化合物;4ヒトB7-H3およびその天然リガンドまたは抗B7-H3抗体と結合することができる抗体のスクリーニングに使用可能な抗原部位を含む化合物;5ヒトB7-H3とその天然リガンドまたは抗B7-H3抗体の間の相互作用を攪乱または遮断することができる抗体の作製に使用可能な抗原部位を含む化合物;6ヒトB7-H3とその天然リガンドまたは抗B7-H3抗体の間の相互作用を攪乱または遮断することができる抗体のスクリーニングに使用可能な抗原部位を含む化合物として定義される。B7-H3モジュレーターは、それらの活性がT細胞の活性化を促進するか、T細胞の活性化を阻害するかによってそれぞれB7-H3アゴニストまたはB7-H3アンタゴニストとなり得る。B7-H3アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターは、B7-H3変異体、B7-H3ペプチドアンタゴニスト、ペプチドミメティクス、および小分子、抗B7-H3抗体および免疫グロブリン変異体、ヒトB7-H3のアミノ酸変異体アミノ酸置換、欠失および付加変異体を含む、またはその任意の組合せ、およびキメラ免疫グロブリンを含む。本発明のB7-H3アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターは、ヒトB7-H3の、その天然リガンドまたは抗B7-H3抗体との結合に関与するB7-H3ドメインの同定に基づく。よって、本発明は、ヒトB7-H3の1以上の抗B7-H3結合ドメインを2つ持つまたは模倣する分子構造を有するB7-H3アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターを提供する。本明細書においてB7-H3変異体とは、アミノ酸置換、欠失および付加変異体、またはその任意の組合せを含む、ヒトB7-H3のアミノ酸変異体を表す。この定義はヒトB7-H3/非ヒトキメラなどのキメラ分子および他のハイブリッド分子を包含する。また、この定義には前記分子の変異体またはハイブリッド領域を含むB7-H3変異体分子の任意のフラグメントも含まれる。本明細書において抗体とは、免疫グロブリン分子の可変領域に存在する少なくとも1つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどのような標的と特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書において、この用語は、完全なポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、そのフラグメントFab、Fab’、Fab’2Fv、一本鎖ScFv、その変異体、天然変異体、抗体部分を、必要な特異性の抗原認識部位とともに含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、BiTE登録商標、DART商標分子および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変構成も包含する。BiTE二重特異性T細胞エンゲージャーとは、1つはT細胞抗原と結合し、もう1つは標的の表面に存在する抗原と結合する、2つの抗原結合ドメインを有する単一のポリペプチド鎖分子を意味する国際公開第05/061547号BaeuerlePetalBiTE登録商標ANewClassOfAntibodiesThatRecruitTCellsDrugsoftheFuture33137147Bargouetal2008TumorRegressioninCancerPatientsbyVeryLowDosesofaTCellEngagingAntibodyScience321974977。DART商標二重親和性再標的化試薬とは、特に共有結合的相互作用を介して会合して同じまたは異なるエピトープを認識し得る少なくとも2つのエピトープ結合部位を形成する、少なくとも2つのポリペプチドを含む免疫グロブリン分子を意味する。DART商標のこれらの各ポリペプチドは免疫グロブリン軽鎖可変領域と免疫グロブリン重鎖可変領域を含むが、これらの領域は相互作用してエピトープ結合部位を形成しない。そうではなく、DART商標ポリペプチド鎖の一方例えば、第1の免疫グロブリン重鎖可変領域は、異なる例えば、第2のDART商標ポリペプチド鎖の免疫グロブリン軽鎖可変領域と相互作用してエピトープ結合部位を形成する。同様に、DART商標ポリペプチド鎖の一方例えば、第1の免疫グロブリン軽鎖可変領域は、異なる例えば、第2のDART商標ポリペプチド鎖の免疫グロブリン重鎖可変領域と相互作用してエピトープ結合部位を形成する。DART商標は単一特異性、二重特異性、三重特異性などであり得、従って、1つ、2つ、3つまたはそれを越える異なるエピトープ同じ抗原のものであっても異なる抗原のものであってもよいと同時に結合することができる。DART商標はさらに一価、二価、三価、四価、五価、六価などであり得、従って、1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つまたはそれを越える分子と同時に結合することができる。DART商標のこれらの2つの特徴すなわち、特異性の程度と価数を合わせて、例えば、四価のすなわち、4組のエピトープと結合することができる二重特異性すなわち、2種類のエピトープと結合することができる抗体などを作製することができる。DART商標分子は国際公開第2006/113665号、同第2008/157379号および同第2010/080538号に開示されている。モノクローナル抗体は均質な抗体集団を意味し、モノクローナル抗体はある抗原の選択的結合に関与するアミノ酸天然型および非天然型を含む。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一の抗原部位に向けられる。モノクローナル抗体は、完全なモノクローナル抗体および全長モノクローナル抗体だけではなく、そのフラグメントFab、Fab’、Fab’2Fvなど、一本鎖ScFv、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要な特異性の抗原認識部位およびある抗原と結合する能力を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変構成も包含する。抗体の供給源または抗体が作製される方法例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物などによるに関して制限はない。この用語は、抗体の定義として上記された完全な免疫グロブリンならびにそのフラグメントなどを含む。ヒト化抗体とは、一般に組換え技術を用いて作製される、非ヒト種の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位と、ヒト免疫グロブリンの構造および/または配列に基づくその分子の残りの免疫グロブリン構造を有するキメラ分子を意味する。この抗原結合部位は、定常ドメインに融合された完全可変ドメインか、または可変ドメイン内の適当なフレームワーク領域にグラフトされた相補性決定領域CDRのみかのいずれかを含み得る。抗原結合部位は野生型であっても、または1以上のアミノ酸置換により改変されていてもよい。これによりヒト個体における免疫原としての定常領域は除去されるが、外来可変領域に対する免疫応答の可能性は残るMouseHumanChimericMonoclonalAntibodyInManKineticsAndImmuneResponseProcNatlAcadSci8642204224。別のアプローチでは、ヒト由来定常領域を提供するだけでなく、その上に可変領域を改変してヒト型にできる限り近く再成形することに焦点を当てる。重鎖および軽鎖の可変領域は3つの相補性決定領域CDRを含み、これらの相補性決定領域は所与の種において比較的保存されており、CDRの足場を提供すると思われる4つのフレームワーク領域FRが隣接することが知られている。非ヒト抗体が特定の抗原に対して作製される場合、可変領域は、非ヒト抗体由来のCDRを、改変されるヒト抗体に存在するFRにグラフトすることによって再形成またはヒト化することができる。様々な抗体に対するこのアプローチの適用はSatoKetalCancerRes53851856RiechmannLetalReshapingHumanAntibodiesforTherapyNature332323327VerhoeyenMetalReshapingHumanAntibodiesGraftingAnAntilysozymeActivityScience23915341536KettleboroughCAetalHumanizationOfAMouseMonoclonalAntibodyByCDRGraftingTheImportanceOfFrameworkResiduesOnLoopConformationProteinEngineering47733783MaedaHetalConstructionOfReshapedHumanAntibodiesWithHIVNeutralizingActivityHumanAntibodiesHybridoma2124134GormanSDetalReshapingATherapeuticCD4AntibodyProcNatlAcadSci8841814185TempestPRetalReshapingAHumanMonoclonalAntibodyToInhibitHumanRespiratorySyncytialVirusInfectioninvivoBioTechnology9266271CoMSetalHumanizedAntibodiesForAntiviralTherapyProcNatlAcadSci8828692873CarterPetalHumanizationOfAnAntip185her2AntibodyForHumanCancerTherapyProcNatlAcadSci8942854289およびCoMSetalChimericAndHumanizedAntibodiesWithSpecificityForTheCD33AntigenJImmunol14811491154により報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は全てのCDR配列を保持している例えば、マウス抗体由来の6つのCDRを全て含むヒト化マウス抗体。他の実施形態では、ヒト化抗体は、元の抗体に対して変更された1以上1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つのCDRを有し、これらはまた元の抗体の1以上のCDRに由来する1以上のCDRとも呼ばれる。本明細書において、抗体またはポリペプチドは、別のエピトープよりもそのエピトープと、より高頻度に、より迅速に、より長い期間、かつ/またはより大きな親和性で反応または会合するならば、それは別の分子の領域すなわちエピトープと特異的に結合すると言われる。例えば、B7-H3エピトープと特異的に結合する抗体は、それが他のB7-H3エピトープまたは非B7-H3エピトープと結合するよりも、このB7-H3エピトープとより大きな親和性、結合力で、より迅速に、かつ/またはより長い期間結合する抗体である。この定義を読めば、例えば、第1の標的と特異的に結合する抗体または部分もしくはエピトープは第2の標的と特異的にまたは優先的に結合してもしなくてもよいということも理解される。従って、特異的結合は排他的結合を含み得るが必ずしも必要としない。必ずしもではないが、一般に、結合という場合には特異的結合を意味する。本明細書においてエピトープが免疫学的に活性である、または免疫学的に活性を維持するという場合の免疫学的に活性とは、抗体例えば、抗B7-H3抗体の、種々の条件下例えば、エピトープが還元および変性条件を受けた後でエピトープと結合する能力を意味する。種々の生体機能が抗B7-H3抗体と関連しており、これらの機能には、限定されるものではないが、B7-H3および特に、限定されるものではないが腎臓、前立腺または肺癌細胞を含む癌細胞の表面で発現されるB7-H3分子と特異的に結合する能力;既知の抗B7-H3抗体とB7-H3との優先的結合を競合的に阻害する能力元の抗体が優先的に結合する、同じB7-H3エピトープと優先的に結合する能力を含む;invitroまたはinvivoにおいて生細胞の表面に露出しているB7-H3の部分と結合する能力;限定されるものではないが、前立腺、肺または腎臓癌細胞などの生癌細胞の表面に露出しているB7-H3の部分と結合する能力;それらの表面でB7-H3を発現する癌性細胞腎臓、前立腺または肺癌細胞に化学療法薬を送達する能力;および/またはそれらの表面にB7-H3を発現する癌細胞に治療薬または検出可能なマーカーを送達する能力の1以上が含まれる。本明細書に述べられるように、本発明のポリペプチド抗体を含むはこれらの特徴のいずれか1以上を持ち得る。抗B7-H3等価抗体または抗B7-H3等価ポリペプチドとは、抗B7-H3抗体と関連する1以上の生体機能例えば、結合特異性を有する抗体またはポリペプチドを意味する。本明細書において薬剤とは、生物学的化合物、医薬化合物または化学化合物を意味する。限定されない例として、単純または複雑な有機または無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素または化学療法化合物が含まれる。例えば、小分子およびオリゴマー例えば、オリゴペプチドおよびオリゴヌクレオチド、ならびに種々のコア構造に基づく合成有機化合物など、種々の化合物が合成可能である。さらに、植物または動物抽出物などのように種々の天然源がスクリーニングのための化合物を提供することができる。本発明の方法で使用される薬剤はランダム選択または合理的選択または設計が可能である。本明細書において、薬剤は、その分子とその天然結合相手または既知の抗体との会合に関与する特定のアミノ酸またはその他の化学部分に関して事前の考察および知見なしに薬剤が選択される場合にランダムに選択されると言われる。ランダム選択される薬剤の一例が、化学ライブラリーまたはペプチドコンビナトリアルライブラリーの使用およびスクリーニングによって同定される薬剤である。本明細書において、薬剤は、薬剤が標的部位の配列および/または薬剤の作用に関連するそのコンフォメーションを考慮して非ランダムに選択される場合に合理的に選択される、または設計されると言われる。抗B7-H3薬剤に関して、現在のところ、B7-H3上には抗体が生成され得るエピトープが少なくとも3つあり、従って、B7-H3/抗B7-H3の相互作用を遮断する薬剤の作用部位は少なくとも3つであると考えられている。本発明はまた、B7-H3とその天然結合相手の間の相互作用部位で作用する薬剤を包含するが、現在既知のものであれ以後同定されるものであれ、その他のリガンドおよびそれらの活性B7-H3相互作用部位も本発明の範囲内に包含される。薬剤はランダムに選択することもできるし、または受容体/リガンドおよび/またはB7-H3/抗B7-H3抗体複合体の染色部位を構成するペプチド配列を用いることにより合理的に設計することもできる。例えば、合理的に選択されたペプチド薬剤は、そのアミノ酸配列がB7-H3上に見られるエピトープと同一であるペプチドであってもよく、それはその天然環境で生細胞の表面に露出しているからである。このような薬剤は、抗B7-H3抗体とB7-H3との会合、または所望によりB7-H3とその天然リガンドとの会合を、抗B7-H3抗体または天然リガンドと結合することによって還元または遮断する。本明細書において、抗体に関して標識されたとは、放射性薬剤または蛍光団例えばフィコエリトリンPEまたはフルオレセインイソチオシアネートフルオロイソチオシアネートまたはFITCとしても知られるなどの検出可能な物質と抗体とのカップリングすなわち、物理的結合による抗体の直接標識、ならびに検出可能な物質との反応によるプローブまたは抗体の直接標識を包含するものとする。本明細書において、抗体に関して会合とは、薬剤例えば、化学療法薬と抗体との共有結合的および非共有結合的付着または結合を含む。抗体は直接的結合または共通のプラットフォームへの付着による間接的結合によって薬剤例えば、化学療法薬と会合させることができ、その結果、抗体は抗体が結合する癌性細胞へと薬剤の局在を導き、そこではこの抗体と薬剤は生理学的条件下では実質的に解離せず、これにより薬剤は抗体が結合する同じ癌性細胞を標的としないか、または薬剤の効力が低下しない。生体サンプルとは、個体から得られる様々なサンプル種を包含し、診断アッセイまたはモニタリングアッセイにおいて使用可能である。この定義には、唾液、血液および生物起源のその他の液体サンプル、固体組織サンプル、例えば、生検または組織培養物またはそれに由来する細胞、およびその後代、例えば、癌を有する疑いのある個体から採取された組織サンプルから得られた細胞好ましい実施形態では卵巣、肺、前立腺、膵臓、結腸および乳房組織由来が包含される。この定義にはまた、それらの獲得後に、例えば試薬による処置、可溶化、またはタンパク質もしくはポリヌクレオチドなどのある特定の成分の富化、または切片化目的での半固体または固体マトリックスへの包理といった何らかの方法で操作されたサンプルも含まれる。生体サンプルには臨床サンプルが包含され、また、培養細胞、細胞上清、細胞溶解液、血清、血漿、体液および組織サンプルも含まれる。宿主細胞とは、ポリヌクレオチドインサートの組み込みのためのベクターのレシピエントであり得る、またはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は単一の宿主細胞の後代を含み、この後代は、自然的、偶発的または意図的突然変異のために元の親細胞と形態またはゲノムDNA相補物が必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞には、invivoにおいて本発明のポリヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞が含まれる。本明細書において転移の発生の遅延とは、転移の発生を引き延ばす、妨げる、遅くする、遅滞させる、安定化する、および/または延期することを意味する。この遅延は、癌の履歴および/または治療される個体によって時間の長さが異なり得る。当業者には明らかなように、十分なまたは有意な遅延は実質的に、個体が転移を発生しない予防を包含する。本明細書において医薬組成物の有効量とは、一実施形態においては、限定されるものではないが、腫瘍サイズの縮小癌に関しては、例えば、乳癌または前立腺癌、癌性細胞増殖の遅滞、転移発生の遅延、その疾病から起こる症状の軽減、疾病罹患者の生活の質の向上、疾病の治療に必要な他の投薬量の低減、標的化および/または内部移行を介するものなどの他の投薬の効果の増強、疾病進行の遅延、および/または個体の生存期間の延長といった臨床結果を含む、有益または望まれる結果を果たすのに十分な量である。有効量は1回以上の投与で投与することができる。本発明の目的では、有効量の薬物、化合物または医薬組成物は直接的または間接的に癌性細胞の増殖を低減するまたは癌性細胞を破壊する、および癌性細胞の転移の発生または増殖を低減し、かつ/または遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、薬物、化合物または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物または医薬組成物と組み合わせて達成されても、そうでなくてもよい。よって、有効量は、1以上の化学療法薬の投与に関して考えてもよいし、1以上の他の薬剤と組み合わせて所望の結果が達成され得るまたは達成される場合には、単一の薬剤が有効量で与えられると考えられる。個体によって要求が異なっても、各成分の有効量の至適範囲の決定は当業者の技術の範囲内である。典型的な用量は0.1~100mg/kg/体重を含む。好ましい用量は1~100mg/kg/体重を含む。最も好ましい用量は10~100mg/kg/体重を含む。本明細書において核酸分子、薬剤、抗体、組成物または細胞などは、その核酸分子、薬剤、抗体、組成物または細胞などが、その元の供給源に本来存在する夾雑核酸分子、抗体、薬剤、組成物または細胞などから実質的に分離されている場合に単離されているという。個体とは、脊椎動物、好ましくは哺乳類を意味する。哺乳類には、限定されるものではないが、ヒト、農用動物、競技動物、ペット、霊長類、マウスおよびラットが含まれる。最も好ましい実施形態では、個体とはヒトを表す。ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチドおよびタンパク質という用語は、本明細書では、任意の長さのアミノ酸のポリマーを意味して互換的に用いられる。ポリマーは直鎖であっても分岐していてもよく、改変アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸が挿入されていてもよい。これらの用語はまた、自然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化もしくは他の任意の操作、または標識成分とのコンジュゲーションなどの改変によって改変されたアミノ酸ポリマーを包含する。また、例えば、アミノ酸の1以上の類似体例えば、非天然アミノ酸などを含む、ならびに当技術分野で公知の他の改変を含むポリペプチドもこの定義に含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づくことから、これらのポリペプチドは一本鎖または会合鎖として存在し得ると理解される。また、本発明の範囲内には、本明細書に記載のB7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターのペプチドミメティクス抗B7-H3抗体を含むも包含される。このようなペプチドミメティクスには、少なくとも1つのアミノ酸残基が、そのアミノ酸のD異性体またはアミノ酸Nアルキル化種など、自然界には一般に見られないアミノ酸残基で置換されているペプチドが含まれる。他の実施形態では、ペプチドミメティクスは、B7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーターの少なくとも1つのアミド結合-C=O-NH-をアミド同配体で置換することにより構築される。好適なアミド同配体には、-CH2-NH-、-CH2-S-、-CH2-SO-、-CH2-SO2-、-CH2-CH2-、-CH=CH-EまたはZ型、-C=O-CH2-、-CHCN-NH-、-COH-CH2-および-O-C=O-NH-が含まれる。アミド同配体での置換の好適な候補である、B7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター中のアミド結合には、B7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター処置の意図される被験体の内因性エステラーゼまたはプロテアーゼにより加水分解され得る結合が含まれる。本明細書において実質的に純粋とは、少なくとも50純度すなわち、夾雑物不含、より好ましくは少なくとも90純度、より好ましくは少なくとも95純度、より好ましくは少なくとも98純度、より好ましくは少なくとも99純度、最も好ましくは99を越える純度である材料を意味する。本明細書において毒素とは、細胞内で不利な応答を果たす任意の物質を意味する。例えば、癌性細胞に向けられる毒素は、癌性細胞に対して不利な、時には有害な作用を持つ。毒素の例としては、限定されるものではないが、タキサン、メイタンシノイド、オーリスタチン例えば、モノメチルオーリスタチンMMAE、モノメチルオーリスタチンFMMAF、オーリスタチンEAEなど米国特許第5,208,020号;同第5,416,064号;同第6,333,410号;同第6,340,701号;同第6,372,738号;同第6,436,931号;同第6,441,163号;同第6,596,757号;同第7,276,497号;同第7,585,857号;または同第7,851,432号に開示されているものなど;カリケアマイシン、アントラサイクリン例えば、ドキソルビシン、CC-1065類似体、ドセタキセル;カテプシンBまたはE;リシン、ゲロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、およびRNアーゼ;放射性標識抗体例えば、チウキセタンコンジュゲートまたは有毒放射性同位元素例えば、90Y、131I、177Lu、186Re、188Re、211At、212Bi、213Bi、225Acなど標識体が挙げられる。本明細書において治療とは、好ましくは有益なまたは所望の臨床結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチを表す。このような有益なまたは所望の臨床結果には、限定されるものではないが、下記:癌性細胞または他の罹患細胞の増殖の軽減または破壊、癌に見られる癌性細胞の転移の軽減、腫瘍サイズの縮小、その疾病から起こる症状の軽減、疾病罹患者の生活の質の向上、疾病の治療に必要な他の投薬量の低減、疾病進行の遅延、および/または個体の生存期間の延長のうち1以上が含まれる。本明細書において、癌とは、副腎腫瘍、AIDS関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱扁平上皮癌および移行上皮癌癌、骨癌アダマンチノーマ、脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌腎芽細胞腫、乳頭状腎細胞癌、白血病、脂肪腫/良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫/悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌肝芽細胞腫、肝細胞癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌子宮頚癌、子宮内膜癌および平滑筋腫の細胞からなる群から選択される癌細胞の存在を特徴とする癌を包含するものとする。III.抗体およびポリペプチドの作製方法モノクローナル抗体の作製方法は当技術分野で公知である。使用可能な1つの方法は、KohlerGetalContinuousCulturesOfFusedCellsSecretingAntibodyOfPredefinedSpecificityNature256495497の方法またはその改変法である。典型的には、モノクローナル抗体は、マウスなどの非ヒト種で生成される。一般に、免疫誘導にはマウスまたはラットが用いられるが、他の動物も使用可能である。これらの抗体は、マウスを、ヒトB7-H3を含む免疫原性量の細胞、細胞抽出物またはタンパク質調製物で免疫誘導することにより生産される。免疫原は限定されるものではないが、一次細胞、培養細胞系統、癌性細胞、核酸または組織であり得る。一実施形態では、ヒト肺癌細胞が使用される。免疫誘導に使用される細胞、例えば、ヒト精巣または膵臓腺癌または胃細胞は、免疫原として用いる前に一定時間例えば、少なくとも24時間培養してもよい。細胞例えば、ヒト精巣、胃または膵臓腺癌細胞は、それ自体で用いてもよいし、またはRibiなどの非変性アジュバントとともに用いてもよい。一般に、細胞は、免疫原として用いる場合には無傷な状態で、好ましくは生存状態で維持するべきである。無傷な細胞は破砕された細胞よりも免疫動物によって抗原をより良く検出させる。例えばフロイントのアジュバントなどの変性性の、または作用の強いアジュバントを使用すると細胞が破砕される場合があるので支障がある。免疫原は隔週もしくは毎週など、周期的に複数回投与してもよいし、または動物の生存力を維持するような方法例えば、組織組換えで投与してもよい。一実施形態では、B7-H3と結合するモノクローナル抗体は、B7-H3を過剰発現する宿主細胞を免疫原として使用することによって得られる。このような細胞には、限定されるものではないが一例として、ヒト肺癌細胞およびヒト結腸癌細胞が含まれる。抗体応答をモニタリングするために、少量の生体サンプル例えば血液を動物から得て、免疫原に対する抗体力価を調べることができる。脾臓および/またはいくつかの大リンパ節を摘出し、解離させて単細胞を得ることができる。所望により、脾細胞は非特異的に付着した細胞を除去した後、抗原をコーティングしたプレートまたはウェルに細胞懸濁液を適用することによりスクリーニングしてもよい。抗原に特異的な膜結合免疫グロブリンを発現するB細胞は前記プレートに結合し、残りの懸濁液とともに洗い流されない。得られたB細胞、または全解離脾細は、次に、骨髄腫細胞例えば、X63-Ag8.653およびSaIkInstitute、CellDistributionCenterカリフォルニア州サンディエゴから入手されるものと融合させることができる。ポリエチレングリコールPEGを用いて脾臓またはリンパ球を骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマを形成することができる。次に、ハイブリドーマを選択培地例えば、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン培地、他にはHAT培地として知られるもので培養する。得られたハイブリドーマを、次に、制限希釈によりプレーティングし、免疫原と特異的に結合する抗体の生産に関して、例えば、FACS:fluorescenceactivatedcellsorting蛍光活性化細胞選別または免疫組織化学IHC:immunohistochemistryスクリーニングを用いてアッセイする。選択されたモノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを、次に、invitro例えば、組織培養瓶または中空繊維反応器またはinvivo例えば、マウスの腹水としてのいずれかで培養する。この細胞融合技術の別法として、エプスタイン-バーウイルスEBV不死化B細胞を本発明のモノクローナル抗体の生産に用いてもよい。ハイブリドーマは所望により増殖およびサブクローニングし、上清の抗免疫原活性を従来のアッセイ手法例えば、FACS、IHC、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、蛍光イムノアッセイなどによりアッセイする。別法では、抗B7-H3モノクローナル抗体および他の任意の等価抗体の配列決定を行い、当技術分野で公知の任意の手段例えば、ヒト化、完全ヒト抗体を生産するためのトランスジェニックマウスの使用、ファージディスプレー技術などにより組換え生産することができる。一実施形態では、抗B7-H3モノクローナル抗体の配列決定を行い、次に、そのポリヌクレオチド配列を発現または増殖のためのベクターにクローニングする。目的の抗体をコードする配列は宿主細胞内のベクターに保持させることができ、次に、この宿主細胞を増殖させ、その後の使用のために冷凍することができる。抗B7-H3モノクローナル抗体のポリヌクレオチド配列および他の任意の等価抗体を、ヒト化抗体を作製するため、親和性または抗体の他の特徴を改善するための遺伝子操作に使用することができる。抗体をヒト化する一般原理は、抗体の抗原結合部分の塩基配列を保持しつつ、抗体の残りの非ヒト部分をヒト抗体配列と入れ替えることを含む。モノクローナル抗体のヒト化には4つの一般工程がある。これらは、1開始抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列と推定アミノ酸配列の決定、2ヒト化抗体の設計、すなわち、ヒト化プロセス中にどの抗体フレームワーク領域を用いるかの決定、3実際のヒト化方法論/技術、および4ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。例えば、米国特許第4,816,567号;同第5,807,715号;同第5,866,692号;および同第6,331,415号参照。齧歯類または改変型齧歯類V領域と、ヒト定常ドメインと融合されたそれらの会合相補性決定領域CDRとを有するキメラ抗体例えば、WinteretalManmadeAnditbodiesNature349293299LobuglioetalMouseHumanChimericMonoclonalAntibodyInManKineticsAndImmuneResponseProcNatlAcadSci8642204224ShawetalCharacterizationOfAMouseHumanChimericMonoclonalAntibodyToAColonCancerTumorAssociatedAntigenJImmunol13845344538およびBrownetalTumorSpecificGeneticallyEngineeredMurineHumanChimericMonoclonalAntibodyCancerRes4735773583参照をはじめ、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含む多くのヒト化抗体分子が記載されている。他の参照文献には、適当なヒト抗体定常ドメインと融合する前にヒト支持フレームワーク領域FRにグラフトされた齧歯類CDRが記載されている例えば、RiechmannLetalReshapingHumanAntibodiesforTherapyNature332323327VerhoeyenMetalReshapingHumanAntibodiesGraftingAnAntilysozymeActivityScience23915341536およびJonesetalReplacingTheComplementarityDeterminingRegionsInAHumanAntibodyWithThoseFromAMouseNature321522525参照。また別の参照文献には、組換え的ベニア化齧歯類フレームワーク領域により支持される齧歯類CDRが記載されている。例えば、欧州特許公報第519,596号参照。これらのヒト化分子は、齧歯類抗ヒト抗体分子に対する望ましくない免疫応答を最小とするように設計されるこの望ましくない免疫応答は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分の治療適用の持続時間および有効性を限定する。抗体をヒト化する使用可能な他の方法はDaughertyetalPolymeraseChainReactionFacilitatesTheCloningCDRGraftingAndRapidExpressionOfAMurineMonoclonalAntibodyDirectedAgainstTheCD18ComponentOfLeukocyteIntegrinsNuclAcidsRes1924712476、ならびに米国特許第6,180,377号;同第6,054,297号;同第5,997,867号;および同第5,866,692号に開示されている。本発明はまた、本発明の抗体の一本鎖可変領域フラグメントscFv、例えば、mu-抗B7-H3を包含する。一本鎖可変領域フラグメントは、短い架橋ペプチドを用いて軽鎖および/または重鎖可変領域を連結することにより作製される。Birdetalは、一方の可変領域のカルボキシ末端と他方の可変領域のアミノ末端の間のおよそ3.5nmを架橋する架橋ペプチドの例を記載している。他の配列のリンカーも設計および使用されているSingleChainAntigenBindingProteinsScience242423426。次に、リンカーを薬物の接着または固相支持体への接着などの付加的機能に向けて改変することができる。一本鎖変異体は組換えまたは合成のいずれかによって生産することができる。scFvの合成生産には、自動合成装置を使用することができる。scFvの組換え生産では、scFvをコードするポリヌクレオチドを含む好適なプラスミドを、酵母、植物、昆虫または哺乳類細胞などの真核生物、または大腸菌などの原核生物のいずれかの好適な宿主細胞に導入することができる。目的のscFvをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどの慣例の操作により作製することができる。得られたscFvは、当技術分野で公知の標準的タンパク質精製技術を用いて単離することができる。本発明は、B7-H3ならびにそのアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターと結合する抗体およびポリペプチドに対する改変それらの特性に有意に影響を及ぼさない機能的に等価な抗体およびポリペプチド、ならびに活性の増強または低下を示す変異体を含むを含む。ポリペプチドの改変は当技術分野の常法であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。改変ポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換、機能活性に有意に有害な変化を及ぼさないアミノ酸の1以上の欠失もしくは付加を有するポリペプチド、または化学類似体の使用が含まれる。互いに保存的置換が可能なアミノ酸残基としては、限定されるものではないが、グリシン/アラニン;バリン/イソロイシン/ロイシン;アスパラギン/グルタミン;アスパラギン酸/グルタミン酸;セリン/トレオニン;リシン/アルギニン;およびフェニルアラニン/チロシンが含まれる。これらのポリペプチドにはまた、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに例えば、種々の糖によるグリコシル化、アセチル化およびリン酸化などの、他の翻訳後修飾を有するポリペプチドも含まれる。好ましくは、アミノ酸置換は保存的であり、すなわち、置換されたアミノ酸は元のアミノ酸と類似の化学特性を持つ。このような保存的置換は当技術分野で公知であり、例は上記に示されている。アミノ酸改変は1以上のアミノ酸の変更または改変から、可変領域などの領域の完全な再設計にまで及ぶ。可変領域の変更は結合親和性および/または特異性を変化させ得る。他の改変方法としては、限定されるものではないが、酵素的手段、酸化的置換およびキレート化を含む、当技術分野で公知のカップリング技術が含まれる。例えば、イムノアッセイのための標識の付着、例えば、ラジオイムノアッセイのための放射性部分の付着のための改変が使用可能である。改変型ポリペプチドは当技術分野で確立された手順を用いて作製され、当技術分野で公知の標準的アッセイを用いてスクリーニングすることができる。本発明はまた、本発明のポリペプチドおよび抗体由来の1以上のフラグメントまたは領域を含む融合タンパク質を包含する。一実施形態では、可変軽鎖領域の少なくとも10個の連続するアミノ酸と可変重鎖領域の少なくとも10個のアミノ酸とを含む融合ポリペプチドが提供される。別の実施形態では、融合ポリペプチドは異種免疫グロブリン定常領域を含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、公的に寄託されたハイブリドーマから生産された抗体の軽鎖可変領域と重鎖可変領域を含む。本発明の目的では、抗体融合タンパク質は、B7-H3と特異的に結合する1以上のポリペプチドドメインと、天然分子において、それが付着しない別のアミノ酸配列、例えば、異種配列または別の領域由来の相同配列とを含む。抗B7-H3ポリペプチド、および他のB7-H3アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターは、当技術分野で公知の方法により、例えば、合成または組換えにより作出することができる。B7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターを生産する1つの方法は、ポリペプチドの化学の合成と、その後の天然コンフォメーション、すなわち、適切なジスルフィド結合を得るの適当な参加条件下での処理を含む。これは当業者に周知の方法論を用いて達成することができる例えば、KelleyRFetalInGeneticEngineeringPrinciplesandMethodsSetlowJKEdPlenumPressNYvol12pp119StewartJMetalSolidPhasePeptideSynthesisPierceChemicalCoRockfordIL参照;米国特許第4,105,603号;同第3,972,859号;同第3,842,067号;および同第3,862,925号参照。本発明のポリペプチドは好都合には固相ペプチド合成を用いて作製することができるSolidPhaseSynthesisScience232341347HoughtenRAGeneralMethodForTheRapidSolidPhaseSynthesisOfLargeNumbersOfPeptidesSpecificityOfAntigenAntibodyInteractionAtTheLevelOfIndividualAminoAcidsProcNatlAcadSci8251315135GanesanASolidPhaseSynthesisInTheTwentyFirstCenturyMiniRevMedChem6310。さらに別法として、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスに使用によって完全ヒト抗体を得ることもできる。より望ましい例えば、完全ヒト抗体またはよりロバストな免疫応答をもたらすように設計されたトランスジェニック動物も、ヒト化またはヒト抗体の作製に使用可能である。このような技術の例としては、Xenomouse商標Abgenix,Inc.,カリフォルニア州フリーモントおよびHuMAb-Mouse登録商標およびTCMouse商標双方ともMedarex,Inc.,ニュージャージー州プリンストン製がある。あるいは、抗体は当技術分野で公知の任意の方法を用いて、組換えにより作製し、発現させることができる。抗体は、まず、作製された抗体を宿主動物から単離し、遺伝子配列を得、その遺伝子配列を用いて宿主細胞例えば、CHO細胞でその抗体を組換え発現させることによって組換えにより作製することができる。使用可能な別法は、植物例えば、タバコまたはトランスジェニック乳汁中でその抗体配列を発現させることである。抗体を植物または乳汁中で組換え発現させる好適な方法が開示されている例えば、PeetersetalProductionOfAntibodiesAndAntibodyFragmentsInPlantsVaccine192756LonbergNetalHumanAntibodiesFromTransgenicMiceIntRevImmunol136593およびPollocketalTransgenicMilkAsAMethodForTheProductionOfRecombinantAntibodiesJImmunolMethods231147157参照。抗体の誘導体、例えば、ヒト化抗体、一本鎖抗体などを作製するのに好適な方法は当技術分野で公知である。別法として、抗体はファージディスプレー技術により組換えにより作製することもできる例えば、米国特許第5,565,332号;同第5,580,717号;同第5,733,743号;同第6,265,150号;およびWinterGetalMakingAntibodiesByPhageDisplayTechnologyAnnuRevImmunol12433455参照。目的の抗体またはタンパク質に、当業者に周知であるエドマン分解による配列決定を行うことができる。質量分析またはエドマン分解から作成されたペプチド情報を用いて、目的のタンパク質をクローニングするために使用されるプローブまたはプライマーを設計することができる。目的のタンパク質をクローニングする別法は、精製されたB7-H3またはその一部を用い、目的の抗体またはタンパク質を発現する細胞に関してパンニングすることによるものである。B7-H3は2Ig型中、また、4Ig型として存在する。ヒトB7-H3の2Ig型のアミノ酸配列は以下のとおりである配列番号1:MLRRRGSPGMGVHVGAALGALWFCLTGALEVQVPEDPVVALVGTDATLCCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDTKQLVHSFAEGQDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFVSIRDFGSAAVSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYRGYPEAEVFWQDGQGVPLTGNVTTSQMANEQGLFDVHSVLRVVLGANGTYSCLVRNPVLQQDAHGSVTITGQPMTFPPEALWVTVGLSVCLIALLVALAFVCWRKIKQSCEEENAGAEDQDGEGEGSKTALQPLKHSDSKEDDGQEIAヒトB7-H3の2Ig型をコードするcDNA配列は以下のとおりである配列番号2:atgctgcgtcggcggggcagccctggcatgggtgtgcatgtgggtgcagccctgggagcactgtggttctgcctcacaggagccctggaggtccaggtccctgaagacccagtggtggcactggtgggcaccgatgccaccctgtgctgctccttctcccctgagcctggcttcagcctggcacagctcaacctcatctggcagctgacagataccaaacagctggtgcacagctttgctgagggccaggaccagggcagcgcctatgccaaccgcacggccctcttcccggacctgctggcacagggcaacgcatccctgaggctgcagcgcgtgcgtgtggcggacgagggcagcttcacctgcttcgtgagcatccgggatttcggcagcgctgccgtcagcctgcaggtggccgctccctactcgaagcccagcatgaccctggagcccaacaaggacctgcggccaggggacacggtgaccatcacgtgctccagctaccggggctaccctgaggctgaggtgttctggcaggatgggcagggtgtgcccctgactggcaacgtgaccacgtcgcagatggccaacgagcagggcttgtttgatgtgcacagcgtcctgcgggtggtgctgggtgcgaatggcacctacagctgcctggtgcgcaaccccgtgctgcagcaggatgcgcacggctctgtcaccatcacagggcagcctatgacattccccccagaggccctgtgggtgaccgtggggctgtctgtctgtctcattgcactgctggtggccctggctttcgtgtgctggagaaagatcaaacagagctgtgaggaggagaatgcaggagctgaggaccaggatggggagggagaaggctccaagacagccctgcagcctctgaaacactctgacagcaaagaagatgatggacaagaaatagccヒトB7-H3の2Ig型のアミノ酸配列配列番号1下記に太字と下線で示されるは、ヒトB7-H3の4Ig型配列番号76内に完全に包含される:ヒトB7-H3の4Ig型をコードするcDNA配列は以下のとおりである配列番号77。B-H3の2Ig型をコードする残基は太字と下線で示される。パンニング法は、B7-H3を発現する組織または細胞からcDNAライブラリーを得ること、第2の細胞種において前記cDNAを過剰発現させること、および前記第2の細胞種のトランスフェクト細胞をB7-H3との特異的結合に関してスクリーニングすることによって行うことができる。細胞表面タンパク質をコードする哺乳類遺伝子をパンニングによりクローニングする際に用いる方法の詳細な説明は、当技術分野に見出せる例えば、AruffoAetalMolecularCloningOfACD28cDNAByAHighEfficiencyCOSCellExpressionSystemProcNatlAcadSci8485738577andStephanJetalSelectiveCloningOfCellSurfaceProteinsInvolvedInOrganDevelopmentEpithelialGlycoproteinIsInvolvedInNormalEpithelialDifferentiationEndocrinol14058415854参照。抗B7-H3抗体、ならびに他のB7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターをコードするcDNAは、当技術分野の標準法に従って特定の細胞種由来のmRNAを逆転写することにより得ることができる。具体的には、mRNAは、Sambrookら前掲に示されている手順に従って、様々な溶解酵素または化学溶液を用いて単離するか、または製造者例えば、Qiagen、Invitrogen、Promegaが提供している添付の説明書に従って市販の核酸結合樹脂により抽出することができる。次に、合成されたcDNAを発現ベクターに導入し、第2の種の細胞で目的の抗体またはタンパク質を生産する。発現ベクターはエピソームとしてか、または染色体DNAの組み込む部分として宿主細胞内で複製可能でなければならないということが意味される。好適な発現ベクターとしては、限定されるものではないが、プラスミド、ウイルスベクターアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含む、およびコスミドが挙げられる。目的のポリヌクレオチドを含むベクターは、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、DEAE-デキストランまたはその他の物質を用いたトランスフェクション;微粒子銃;リポフェクション;ならびに感染例えば、ベクターがワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合を含むいくつかの適当な手段のいずれかにより宿主細胞に導入することができる。ベクターを導入するかポリヌクレオチドを導入するかの選択は、宿主細胞の特徴による場合が多い。異種DNAを過剰発現し得るいずれの宿主細胞でも、目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的で使用可能である。好適な哺乳類宿主細胞の限定されない例としては、限定されるものではないが、COS、HeLaおよびCHO細胞が挙げられる。好ましくは、これらの宿主細胞はcDNAを、前記宿主細胞に存在する場合には、目的の対応する内因性抗体またはタンパク質のレベルよりも約5倍高い、より好ましくは10倍高い、いっそうより好ましくは20倍高いレベルで発現する。B7-H3との特異的結合に関する宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはFACSによって達成される。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞を同定することができる。親B7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター分子に比べて、得られたタンパク質のアミノ酸配列における付加、欠失または変異をコードする変異型B7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターを作出するために現在利用可能な様々な技術も使用可能である。本発明は、本発明の抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。本発明のポリペプチドは当技術分野で公知の手順により作製可能である。これらのポリペプチドは抗体のタンパク質加水分解もしくはその他の分解によるか、上記のような組換え法すなわち、単一または融合ポリペプチドによるか、または化学合成によって生産することができる。抗体のポリペプチド、特に約50アミノ酸までの短いポリペプチドは化学合成より好都合に作製することができる。化学合成の方法は当技術分野で公知であり、市販されている。例えば、抗B7-H3ポリペプチドは、固相法を用いた自動ポリペプチド合成装置により生産可能である。IV.ポリペプチドおよびモノクローナル抗体のスクリーニング方法B7-H3と結合するポリペプチドおよびモノクローナル抗体をスクリーニングするには、いくつかの方法を使用することができる。結合は生物学的または免疫学的に関連のある特異的結合を意味し、例えば、免疫グロブリンを非特異的標的に対して極めて高い濃度で用いる場合に起こり得る非特異的結合を意味しないと理解される。一実施形態では、モノクローナル抗体は、標準的スクリーニング技術を用いてB7-H3との結合に関してスクリーニングされる。このようにして、抗B7-H3モノクローナル抗体が得られる。本発明の好ましいハイブリドーマは抗体BRCA69D、BRCA84DまたはPRCA157を産生するものである。B7-H3と結合するさらなるモノクローナル抗体も同定可能である。この目的で、モノクローナル抗体を癌性組織と結合するが非癌性細胞とは結合しないそれらの示差的能力に関してスクリーニングする。一実施形態では、B7-H3と結合し、かつ、ヒト癌性細胞または組織と交差反応性もあるが、正常な細胞または組織とは同程度までの交差反応性がない、モノクローナル抗体が選択される。スクリーニングに使用可能な1つの方法は、免疫組織化学IHCである。標準的免疫組織化学的技術は平均的技量を持つ当業者には既知である。例えば、AnimalCellCultureMethods参照。生体サンプル例えば、組織は生検、剖検または屍検から得ることができる。B7-H3が癌性細胞のみに存在するかどうかを確認するには、抗B7-H3抗体を用いて、癌を持つ個体からの組織においてB7-H3の存在を検出することができ、一方、癌罹患個体からの他の非癌性組織癌または癌を持たない個体からの組織を対照として用いる。組織は、冷凍中の損傷を防ぐ固体または半固体物質例えば、アガロースゲルまたはOCT中に包埋した後、染色向けに切片化することができる。種々の器官および種々の病期からの癌を用いてモノクローナル抗体をスクリーニングすることができる。スクリーニング目的に使用可能な組織の例としては、限定されるものではないが、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨、上部消化管および膵臓が挙げられる。スクリーニング目的に使用可能な種々の癌種の例としては、限定されるものではないが、癌腫、腺癌、肉腫、腺肉腫、リンパ腫および白血病が挙げられる。さらなる別法では、HMECBioWhittakerCC-2251、HUVEC初代内皮細胞、BT-474ATCCHTB-20、MCF7ATCCHTB22、MDA-MB-175-VIIATCCHB-25、MDA-MB-361ATCCHB-27、SKBR3ATCCHTB-30、A549ATCCCCL-185、Calu-3ATCCHTB-55、SKMES-IATCCHTB-58、ES-2ATCCCRL-1978、SKOV3ATCCHTB-77、Panc-1ATCCCRL-1469、AsPC-IATCCCRL-1682、HPAF-IIATCCCRL-1997、Hs700TATCCHTB-174、Colo205ATCCCCL-222、HT-29ATCCHTB-38、SW480ATCCCCL-228、SW948ATCCCCL-237、293ATCCCRL-1573、786-OATCCCRL-1932、A498ATCCHTB-44、Caki-2ATCCHTB-47、COS-7ATCCCRL-1651、RL-65ATCCCRL-10345、SV-T2ATCCCCL-163.1、22RV1ATCCCRL-2505、DU145ATCCHTB-81、LNCaPATCCCRL-1740、PC-3ATCCCRL-1435、HT29ATCCHTB-38、Hs746TATCCHTB-135、NCI-N87ATCCCRL-5822などの癌性細胞系統、およびそれらの個々の組織からの正常細胞が、癌性組織に特異的なモノクローナル抗体のスクリーニングに使用可能である。限定されるものではないが、腎臓、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、皮膚、甲状腺、大動脈平滑筋および内皮細胞を含む種々の器官からの正常組織に由来する初代または低継代の細胞培養物を陰性対照として使用することができる。癌性または非癌性細胞はスライドガラスまたはカバーガラス上、またはプラスチック表面で増殖させるか、国際公開第01/43869号に記載されているようにCellArray商標デバイスで調製し、組織に関して上記したようにIHCを用いて抗体の結合に関してスクリーニングすることができる。あるいは、非タンパク質加水分解的手段を用いて増殖面から細胞を取り出し、回転させてペレットとし、その後、これを包埋し、上記のようにIHC分析用の組織として処理することができる。細胞は免疫不全動物に摂取してもよく、腫瘍を増殖させ、その後、この腫瘍を採取し、包埋し、IHC分析用の組織源として使用してもよい。別法では、単細胞を、一次抗体、蛍光分子と連結した二次的リポーター抗体とともにインキュベートし、その後、蛍光活性化細胞選別FACS装置を用いて分析することができる。いくつかの異なる検出系のいずれかを用いて、組織切片に対する抗体の結合を検出することができる。典型的には、免疫組織化学は一次抗体の組織への結合を含み、その後、その一次抗体由来の種に対して反応性のある二次抗体を作製し、検出可能なマーカー例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼHRP:horseradishperoxidaseまたはジアミノベンジジンDAB:diaminobenzedineとコンジュゲートさせた。使用可能な1つの別法は、ポリクローナル鏡像相補的抗体またはpolyMICA商標ANovelImmunohistochemicalDetectionSystemUsingMirrorImageComplementaryAntibodiesHistopathology3512933である。このPolyMICA商標技術は、正常組織および癌性組織に対する一次抗体例えば、抗B7-H3抗体の結合を試験するために使用することができる。数種のpolyMICA商標検出キットが市販されており、製品番号HK004.Dはクロマゲンを用いるpolyMICA商標検出キットであり;製品番号HK004.AはAECクロマゲンを用いるpolyMICA商標検出キットである。あるいは、一次抗体は検出可能なマーカーで直接標識してもよい。IHCスクリーニングにおける、適当な抗体を選択するための第一工程は、マウスにおいて生成された一次抗体例えば、抗B7-H3抗体の、1以上の免疫原例えば、細胞または組織サンプルへの結合である。一実施形態では、組織サンプルは種々の器官由来の凍結組織の切片である。細胞または組織サンプルは癌性または非癌性のいずれかであり得る。凍結組織を調製し、固定を伴ってまたは伴わずに切片化し、当業者に知られたいくつかの方法のいずれかによってIHCを行うことができる例えば、StephanetalDistributionAndFunctionOfTheAdhesionMoleculeBENDuringRatDevelopmentDevBiol212264277andStephanetalSelectiveCloningOfCellSurfaceProteinsInvolvedInOrganDevelopmentEpithelialGlycoproteinIsInvolvedInNormalEpithelialDifferentiationEndocrinology14058415854参照。V.抗B7-H3抗体の同定方法いくつかの方法のいずれかを用いて抗B7-H3抗体を同定することができる。1つの方法は、それが結合するエピトープを同定することである。エピトープマッピングは、例えばPepscanSystemsオランダ、レリスタットなどの種々の供給者から市販されている。エピトープマッピングは抗B7-H3抗体が結合する配列を決定するために使用することができる。エピトープは直鎖エピトープ、すなわち単一のアミノ酸ストレッチに含まれるエピトープであっても、または必ずしも単一のストレッチに含まれなくともよいアミノ酸の三次元相互作用によって形成される立体配座エピトープであってもよい。種々の長さ例えば、好ましくは少なくとも4~6アミノ酸長のペプチドが単離または合成例えば、組換えによる可能であり、抗B7-H3抗体との結合アッセイに使用可能である。抗B7-H3抗体が結合するエピトープは、細胞外配列に由来する重複ペプチドを用い、抗B7-H3抗体による結合を判定することによる体系的スクリーニングで決定することができる。抗B7-H3抗体を同定するのに使用可能なさらに別の方法は、同じ抗原、すなわちB7-H3と結合することが知られている他の抗体との競合アッセイを用いて、抗B7-H3抗体が他の抗体と同じエピトープと結合するかどうかを判定することである。B7-H3に対する市販の抗体例を利用することができ、本明細書で教示される結合アッセイを用いて同定することができる。競合アッセイは当業者によく知られ、このような手法およびデータ例は実施例で詳説する。抗B7-H3抗体は、それらが結合する組織、癌のタイプまたは腫瘍のタイプによってさらに特徴付けることができる。抗B7-H3抗体を同定するもう1つの方法は、それが結合する抗原によるものである。抗B7-H3抗体を、様々なヒト癌からの細胞溶解液とともにウエスタンブロットに用いた。当業者に知られているように、ウエスタンブロット法は、変性または非変性ゲル上で細胞溶解液および/または細胞画分を泳動させ、それらのタンパク質をニトロセルロース紙に転写した後、そのブロットを抗体例えば、抗B7-H3抗体でプロービングし、抗体がどのタンパク質に結合しているかを調べることを含み得る。B7-H3は、限定されるものではないが、結腸、乳房、卵巣、膵臓および肺を含む種々の組織の様々なヒト癌と関連している。VI.抗B7-H3抗体およびB7-H3モジュレーターを用いた癌の診断方法本明細書に開示される方法により作製されたB7-H3に対するモノクローナル抗体は、診断目的で、限定されるものではないが、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、膵臓、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨および上部消化管を含む様々な組織における癌性細胞の有無を特定するために使用可能である。本明細書に開示される方法により作製されたB7-H3に対するモノクローナル抗体はまた、固形腫瘍から遊離した後に血中に循環している癌性細胞の有無、またはそのレベルを特定するためにも使用可能である。このような循環抗原は、完全なB7-H3抗原、または本明細書で教示される方法に従って検出され得る能力を保持するそのフラグメントであり得る。このような検出は当技術分野で慣用される標準法を用いたFACS分析によって達成することができる。これらの使用は、B7-H3と、B7-H3と特異的に結合する抗体との間の複合体の形成を含み得る。このような抗体の例としては、限定されるものではないが、ハイブリドーマBRCA84D、BRCA69DおよびPRCA157により産生された抗B7-H3モノクローナル抗体が挙げられる。このような複合体の形成はinvitroにおけるものであっても、invivoにおけるものであってもよい。特定の理論に縛られるものではないが、モノクローナル抗体抗B7-H3は、B7-H3の細胞外ドメインを介してB7-H3と結合することができ、その後、内部移行され得る。本発明の診断方法の好ましい実施形態では、抗体は検出可能な標識を担持する。使用可能な標識の例としては、放射性薬剤または蛍光団、例えば、フィコエリトリンまたはフルオレセインイソチオシアネートフルオロイソチオシアネートまたはFITCとしても知られるが挙げられる。診断および治療目的で商業的に用いられている他の既知の抗体の場合と同様に、本発明の標的抗原は正常組織で広く発現される。それはまた、いくつかの腫瘍ではアップレギュレートされている。従って、診断薬または療法薬は用いる場合の本発明の抗体の特定の用量および送達経路は、当面の特定の腫瘍または病態、ならびに治療される特定の個体に合わせる。診断のために抗体を用いる1つの方法は、抗体を放射性薬剤または放射線不透過性薬剤に連結し、その抗体を個体に投与し、X線または他の撮像機を用いて、その抗原を発現する癌細胞の表面における標識抗体の局在を可視化することによるinvivo腫瘍撮像法である。抗体は、生理学的条件で結合を促進する濃度で投与される。B7-H3の検出のためのinvitro技術は当技術分野においては慣例であり、酵素結合免疫吸着検定法ELISA、免疫沈降、免疫蛍光、酵素イムノアッセイEIA、ラジオイムノアッセイRIAおよびウエスタンブロット解析を含む。本発明の態様において、腫瘍または新生物の放射線撮像法、または放射性標識抗体で処理する方法の有効性を評価する方法は、本発明の実施に従って放射性標識された腫瘍特異的抗体を個体に投与する工程を含む。放射性標識抗体は、好ましくはテクネチウム-99m、インジウム-111、ヨウ素-131、レニウム-186、レニウム-188、サマリウム-153、ルテチウム-177、銅-64、スカンジウム-47、イットリウム-90からなる群から選択される放射性標識を含むモノクローナルまたはポリクローナル抗体であってよい。抗体の免疫反応性を損なわず、invivoにおいては分解されないヨウ素-131、レニウム-188、ホルミウム-166、サマリウム-153およびスカンジウム-47などの治療用放射性核種で標識されたモノクローナル抗体が特に好ましい。当業者ならば、他の放射性同位体も知られ、特定の適用に好適な場合があることが分かるであろう。この放射線撮像法は単光子放射コンピュータ断層撮影法SPECT:SinglePhotonEmissionComputerTomography、陽電子放射断層撮影法PET、コンピュータ断層撮影法CT:ComputerTomographyまたは磁気共鳴画像法MRI:MagneticResonanceImagingを用いて行うことができる。放射免疫撮像法により位置決定された転移の位置のより良い解剖学的定義を可能とする相関的撮像法も意図される。他の方法では、癌性細胞を摘出し、その組織を当技術分野で周知の方法例えば、凍結化合物中への包理、凍結、および固定を伴ったまたは伴わない切片化;抗原賦活および対比染色の様々な方法を伴ったまたは伴わない固定およびパラフィン包理により免疫組織化学向けに調製する。モノクローナル抗体はまた、種々の発達段階で癌性細胞を同定するために使用可能である。これらの抗体はまた、どの個体の腫瘍がそれらの表面で所定のレベルで抗原を発現するか、従って、前記抗原に対する抗体を用いた免疫療法の候補となるかを判定するために使用することもできる。これらの抗体は、B7-H3を発現する原発癌と転移癌の双方を認識することができる。本明細書において、検出は定性的検出および/または定量的検出を含み、癌性細胞におけるB7-H3の発現レベルの上昇を、正常細胞に対して測定されたレベルと比較することを含み得る。本発明はまた、ある個体においてB7-H3を発現する癌細胞を特徴とする癌の診断を、B7-H3と結合する任意の抗体、およびB7-H3の発現レベルを測定するために使用可能な他の任意の方法を用いて補助する方法を提供する。本明細書において、診断を補助する方法とは、これらの方法が癌の分類または性質に関して臨床的判定を行う助けとなることを意味し、最終的な診断については決定的であってもなくてもよい。よって、癌の診断を補助する方法は、個体由来の生体サンプルにおいてB7-H3レベルを測定し、かつ/またはそのサンプルにおいてB7-H3発現レベルを測定する工程を含み得る。抗原またはその一部を認識する抗体はまた、限定されるものではないが、血液、唾液、尿、肺液または腹水を含む体液において生きているまたは死滅した癌細胞から放出または分泌された抗原を検出するための診断イムノアッセイを創出するためにも使用することができる。対象とする特定の腫瘍中の細胞は全てがB7-H3を発現するわけではなく、また、他の組織の癌性細胞もB7-H3を発現する可能性があるので、個体は、その個体での免疫療法の有効性を判定するために癌性細胞におけるB7-H3の有無に関してスクリーニングすべきである。本明細書に開示されている方法によって作製された抗B7-H3抗体は、癌を有すると診断された個体が、B7-H3に対する抗体を用いた免疫療法の候補と考えられるかどうかを判定するために使用可能である。一実施形態では、癌性腫瘍または生検サンプルは、B7-H3に対する抗体を用いてB7-H3の発現に関して試験することができる。B7-H3を発現する癌細胞は、B7-H3に対する抗体を用いた免疫療法の好適な候補である。抗B7-H3抗体による染色もまた、正常組織から癌性組織を識別するために使用可能である。診断目的で抗B7-H3抗体を用いる方法は、任意の形態の抗癌治療、例えば化学療法または放射線療法の前でも後でも、どの腫瘍が所与の処置に奏功する可能性が最も高いか、癌を有する個体の予後、腫瘍サブタイプまたは転移性疾患の起源、および疾患の進行または処置に対する奏功を決定するのに有用である。本発明の組成物はまた、他の罹患非癌性細胞を用いる適用において、一般に上記された方法を用い、癌以外の病態の診断にも好適である。本発明の方法に用いるのに好適な病態は、限定されるものではないが、個体における炎症応答または自己免疫応答に関連する疾患または障害が挙げられる。上記の方法は個体における炎症応答または自己免疫応答を調節するために使用可能である。本発明の組成物および方法を用いて診断および/または治療を受け得る炎症および自己免疫障害から起こる疾患および症状としては、限定されるものではないが例を挙げれば、多発性硬化症、髄膜炎、脳炎、卒中、その他の脳外傷、炎症性腸疾患潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む、重症筋無力症、狼瘡、関節リウマチ、喘息、急性若年発症性糖尿病、AIDS性痴呆、アテローム性動脈硬化症、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および急性白血球媒介肺損傷が含まれる。本発明の抗体およびその他の治療薬の診断的および/または治療的使用のためのさらに他の適応としては、臓器または移植片拒絶のリスクがある個体への投与が含まれる。近年、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓および骨髄などの組織および臓器を移植するための外科技術の有効性に著しい改善がなされた。主要な未解決の問題はおそらく、レシピエントにおいて移植された同種移植片または臓器に対する免疫寛容を誘導するのに満足のいく薬剤が無いことである。宿主に同種異系細胞または臓器が移植されるすなわち、提供者と非提供者が同じ種の異なる個体である場合、宿主免疫系は移植片の外来抗原に対して免疫応答を誘導し宿主対移植片病、移植組織の崩壊に至るおそれがある。抗B7-H3抗体に関して本出願のいずれの箇所に記載されている使用も、本明細書に記載されるような他のB7-H3アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターの使用を包含する。このような実施形態では、記載されている工程においてB7-H3が抗体B7-H3アゴニスト、アンタゴニストまたはその他の非抗体モジュレーターで置換され、本方法を置換されたB7-H3調節組成物に適合させるために当業者の範囲内の変更がなされる。本明細書に開示されている方法によって作製されたB7-H3に対するモノクローナル抗体は、様々な組織においてヒト癌幹細胞の有無を特定するために使用可能である。癌幹細胞CSC:cancerstemcellsは、腫瘍増殖および転移に役割を果たすと仮定されているTheCancerStemCellMicroenvironmentAndAntiCancerTherapyIntJRadiatBiol85955962GuptaPBetalCancerStemCellsMirageOrRealityNatMed1510101012LawsonJCetalCancerStemCellsInBreastCancerAndMetastasisBreastCancerResTreat118241254HermannPCetalPancreaticCancerStemCellsInsightsAndPerspectivesExpertOpinBiolTher912711278SchattonTetalIdentificationAndTargetingOfCancerStemCellsBioessays3110381049MittalSetalCancerStemCellsTheOtherFaceOfJanusAmerJMedSci338107112AlisonMRetalStemCellsAndLungCancerFutureTherapeuticTargetsExpertOpinBiolTher911271141CharafeJauffretEetalBreastCancerStemCellsToolsAndModelsToRelyOnBMCCancer9202ScopellitiAetalTherapeuticImplicationsOfCancerInitiatingCellsExpertOpinBiolTher910051016国際公開第2008/091908号。この仮定の下、CSCは各腫瘍内で、無限自己複製能があり、複製能が比較的制限されるより成熟した腫瘍細胞へと発達し得る明確に異なる少数の細胞セットを提供する。これらの癌幹細胞は化学療法薬、放射線またはその他の有毒条件に対して耐性が高い可能性があり、従って、臨床治療後も存続し、後に二次的な腫瘍、転移へと成長するか、または再発の原因となるとの仮説が立てられている。CSCは正常組織幹細胞か、またはより分化した組織始原細胞のいずれかを生じ得ることが示唆されている。ヒト癌幹細胞はいくつかの顕著な特徴を有する。このような特徴は国際公開第2008/091908号に記載されており、参照により本明細書に組み入れる。癌幹細胞上の細胞表面標的に対するモノクローナル抗体は、様々な組織中の癌幹細胞の有無を特定するために使用可能である。本明細書に開示される方法により作製されたB7-H3に対するモノクローナル抗体はまた、サンプルもしくは組織中、またはそれらが固形腫瘍から遊離した後に循環中の癌幹細胞の有無、または癌幹細胞のレベルを特定するためにも使用可能である。このような循環抗原は完全なB7-H3抗原、または本明細書で教示される方法に従って検出され得る能力を保持するそのフラグメントであり得る。このような検出は当技術分野で慣用される標準法を用いた組織サンプルの免疫組織化学分析によって達成することができる。これらの使用は、B7-H3と、癌幹細胞上のB7-H3と特異的に結合する抗体との間の複合体の形成を含み得る。このような抗体の例としては、限定されるものではないが、ハイブリドーマBRCA84D、BRCA69DおよびPRCA157により産生される抗B7-H3モノクローナル抗体が挙げられる。このような複合体の形成はinvitroにおけるものであっても、invivoにおけるものであってもよい。抗B7-H3抗体に関してそれらの使用を列挙する本出願に記載の使用にはまた、癌幹細胞の同定および処置の使用に関して本明細書に記載されるような他のB7-H3アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターの使用も包含される。このような実施形態では、抗B7-H3抗体およびその他のB7-H3アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターは、記載されている類似の方法を用いた癌幹細胞の同定、診断または治療的処置に用いられ、その方法を癌幹細胞の同定/診断または処置に適合させるために当業者の範囲内にある変更もなされる。VII.本発明の好ましい組成物本発明は、抗B7-H3抗体、抗B7-H3抗体に由来するポリペプチド、抗B7-H3抗体をコードする配列を含むポリヌクレオチド、および本明細書に記載されるようなその他の薬剤を含む組成物医薬組成物を含むを包含する。本明細書において、組成物はB7-H3と結合する1以上の抗体、ポリペプチドおよび/もしくはタンパク質、B7-H3アゴニスト、アンタゴニスト、モジュレーター、ならびに/またはB7-H3と結合する1以上の抗体、ポリペプチドおよびタンパク質をコードする配列を含む1以上のポリヌクレオチドをさらに含む。本発明はさらに、任意のB7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーターと、特定のB7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストもしくはモジュレーターの意図する機能単一または複数を助ける付加的化学構造とのコンジュゲートを提供する。これらのコンジュゲートとしては、本明細書で述べられる診断、スクリーニングまたは精製手順において用いられる任意の不溶性固相支持体マトリックスなどの高分子に共有結合されたB7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーターが含まれる。好適なマトリックス材料としては、化学的に不活性な任意の物質を含み、ペプチドリガンドと共有結合を形成し得る多数の官能基を有する。マトリックス材料の例およびマトリックス-リガンドコンジュゲートの作製方法は、DeanetalAffinityChromatographyAPracticalApproachIRLPressLoweAnIntroductiontoAffinityChromatographyinWorketalLaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiologyVol7PartIINorthHollandPorathetalBiospecificAffinityChromatographyinNeurathHetalTheProteins3rdedVol1pp95178およびSchottHAffinityChromatographyMacelDekkerIncNYに記載されている。また、B7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーターと、本明細書に述べられる診断手順に用いられる任意のリポーター部分とのコンジュゲートも提供される。抗B7-H3抗体をはじめとする本発明のB7-H3ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター薬剤、ポリペプチドおよびタンパク質は、以下の基準のいずれか1以上によってさらに特定され、特徴付けられる:aB7-H3特に、限定されるものではないが、腎臓、前立腺または肺癌細胞をはじめとする癌細胞の表面で発現されるB7-H3分子と特異的に結合する能力;b既知の抗B7-H3抗体の、B7-H3への優先的結合を競合的に阻害する能力元の抗体が優先的に結合する同じB7-H3エピトープと優先的に結合する能力を含む;cinvitroまたはinvivoにおいて生細胞の表面で発現されるB7-H3の一部と結合する能力;dB7-H3を発現する生癌細胞の表面で発現されるB7-H3の一部と結合する能力;e表面にB7-H3を発現する癌性細胞腎臓、前立腺または肺癌細胞などに化学療法薬を送達する能力;および/またはf表面にB7-H3を発現する癌細胞限定されるものではないが、前立腺癌細胞などに治療薬または検出可能なマーカーそ送達する能力。本発明の好ましい抗体は、正常な非癌性組織とは異なる、腫瘍組織のIHC染色を示し、しかも、抗体有効性の霊長類特に、カニクイザルモデルで試験することができる。本発明の好ましい抗体はさらに、望ましいレベルの親和性および抗原特異性を示す。本発明の好ましい抗体はさらに、望ましいレベルの免疫調節活性および細胞内部移行を示す。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ハイブリドーマBRCA84D、BRCA69DもしくはPRCA157、またはその後代により産生される抗体である。本発明はまた、これらの寄託されたハイブリドーマにより産生された抗体、および等価抗体またはポリペプチドフラグメント例えば、Fab、Fab’、Fab’2Fv、Fcなど、キメラ抗体、一本鎖scFv、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、および必要とされる特異性の認識部位である抗原B7-H3を含むこれらまたは等価な抗体のいずれかの他の任意の改変構成の種々の製剤を包含する。本発明はまた、抗B7-H3ファミリーメンバーの1以上の生物学的特徴を示すヒト抗体を提供する。抗B7-H3ファミリーの等価抗体ヒト化抗体およびヒト抗体を含む、ポリペプチドフラグメント、およびこれらのフラグメントのいずれかを含むポリペプチドは上記の5つの基準のいずれか1以上のによって特定され、特徴付けられる。抗B7-H3抗体のマウスおよび例示的ヒト化可変ドメイン配列は国際公開第2008/066691号に示されている。このような配列は限定ではなく例として示されるものであり、異なる配列ならびに示されている配列のフラグメントおよび変異体も本発明の範囲内に包含される。BRCA84D、BRCA69DおよびPRCA157は、それらのより鮮明な正常組織IHC特性、より強い腫瘍/正常IHC示差、中程度から強い結合BIACORE商標/IHC、カニクイザルのB7-H3との交差反応性、および他の抗体に比べてユニバーザルDART商標分子UDART商標に対する強力な活性のために、本発明の好ましいB7-H3抗体である。特に好ましい実施形態では、本発明は、これらの好ましい抗体のキメラおよびヒト化変異体、ならびに下記のように改変されたFc領域を有するこれらの好ましい抗体の天然およびキメラおよびヒト化変異体を包含する。本発明はさらに、このような抗体のエピトープ結合領域、特に、T細胞受容体、NKG2D受容体、または腫瘍関連抗原またはハプテン、例えばフルオレセイン例えば、フルオレセインイソチオシアネートフルオロイソチオシアネートまたはFITCとしても知られると結合するエピトープ結合領域と協調するエピトープ結合領域を有するDART商標分子を包含する。いくつかの実施形態では、B7-H3と結合する本発明の抗体、ポリペプチドおよびタンパク質は、本明細書で明示される抗B7-H3抗体の、B7-H3への優先的結合を競合的に阻害する抗体、ポリペプチドおよびタンパク質である。いくつかの実施形態では、これらの抗体、ポリペプチドおよびタンパク質は、B7-H3上の、抗体mu-抗B7-H3が優先的に結合するのと同じエピトープと優先的に結合する。よって、本発明は、下記のいずれかまたは下記のいずれかを含む組成物、例えば医薬組成物:a上記に特定さる受託番号を有する宿主細胞またはその後代により産生される抗体;bこのような抗体のヒト化型;cこのような抗体の軽鎖および/または重鎖可変領域の1以上を含む抗体;dこのような抗体の重鎖および軽鎖可変領域に相同な、または由来する可変領域と、ヒト抗体の重鎖および軽鎖定常領域に相同なまたは由来する定常領域とを含むキメラ抗体;eこのような抗体の軽鎖および/または重鎖CDRの1以上の少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つまたは6つを含む抗体;fこのような抗体の重鎖および/または軽鎖を含む抗体;gこのような抗体と等価なヒト抗体。前記抗体のヒト化型は、元の抗体、または上記で特定される受託番号を有する宿主細胞により産生される抗体と同一のCDRを有していても有していなくてもよい。CDR領域の同定は十分に当技術分野の範囲内にある。いくつかの実施形態では、本発明は、上記に特定されるハイブリドーマ寄託物の1つにより産生される抗体の少なくとも1つのCDR、少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つのCDRと実質的に相同なまたはいくつかの実施形態では、これらの抗体の1つの6つ全てのCDRと実質的に相同なまたはこれらの抗体の1つに由来する少なくとも1つのCDRを含む抗体、または上記に特定される受託番号を有する宿主細胞により産生される抗体を提供する。他の実施形態は、本明細書で特定されるように寄託されたハイブリドーマから産生される、またはこのような抗体に由来する抗体の少なくとも2つ、3つ、4つ、5つまたは6つのCDRと実質的に相同な少なくとも2つ、3つ、4つ、5つまたは6つのCDRを有する抗体を含む。本発明の目的では、結合特異性および/または総体的な活性化学療法薬を癌性細胞にまたは癌性細胞中に送達して、癌細胞の成長および/または増殖を軽減する、癌細胞においてアポトーシス性細胞死を誘導する、転移の発生を遅延させる、および/または待期的処置を行うことに関するものであり得るは一般に保持されるが、その活性の程度は寄託されたハイブリドーマにより産生される抗体に比べて異なり得る高い場合も低い場合もあると理解される。本発明はまた、これらの抗体のいずれかの作製方法を提供する。抗体の作製方法は当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている。本発明はまた、本発明の抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは本抗体の軽鎖および/または重鎖可変領域の1以上を含む。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは本抗体の軽鎖および/または重鎖CDRの1以上を含む。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは本抗体の軽鎖および/または重鎖の3つのCDRを含む。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは以下:元の抗体の配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸、少なくとも8個の連続するアミノ酸、少なくとも約10個の連続するアミノ酸、少なくとも約15個の連続するアミノ酸、少なくとも約20個の連続するアミノ酸、少なくとも約25個の連続するアミノ酸、少なくとも約30個の連続するアミノ酸のうちのいずれかを有する抗体のアミノ酸配列を含み、これらのアミノ酸の少なくとも3つが抗体の可変領域に由来する。一実施形態では、可変領域は元の抗体の軽鎖に由来する。別の実施形態では、可変領域は抗体の重鎖に由来する。別の実施形態では、5またはそれを越える連続するアミノ酸が抗体の相補性決定領域CDRに由来する。本発明のいくつかの実施形態では、B7-H3、B7-H3の一部、抗B7-H3抗体または本発明のその他のB7-H3結合ポリペプチドを発現する本発明の細胞は、invivoにおいてB7-H3生物活性を調節するために個体に直接投与される。本発明の好ましい抗B7-H3抗体は、BRCA84D、BRCA69DおよびPRCA157であり、これらの抗体は全て、ヒトB7-H3分子に反応性のあるマウス抗体である。BRCA84D、BRCA69DおよびPRCA157の可変軽鎖および可変重鎖のアミノ酸配列およびコードされるポリヌクレオチド配列を、このような各差の個々のCDR1、CDR2およびCDR3ドメインとともに以下に示す。よって、当業者は、BRCA84D、BRCA69DおよびPRCA157により認識されるエピトープと結合し得る、このようなCDRを有する抗体、ならびにその誘導体を構築することができるであろう。A.BRCA84Dの配列1BRCA84D軽鎖配列BRCA84D可変軽鎖のアミノ酸配列配列番号3:DIAMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVDTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTINNVQSEDLAEYFCQQYNNYPFTFGSGTKLEIKBRCA84D可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号4:gacattgcgatgacccagtctcaaaaattcatgtccacatcagタグagacagggtcagcgtcacctgcaaggccagtcagaatgtggatactaatgtagcctggtatcaacagaaaccagggcaatctcctaaagcactgatttactcggcatcctaccggtacagtggagtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacaatgtgcagtctgaagacttggcagagtatttctgtcagcaatataacaactatccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaaBRCA84D可変軽鎖CDR1配列番号5:KASQNVDTNVABRCA84D可変軽鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号6:aaggccagtcagaatgtggatactaatgtagccBRCA84D可変軽鎖CDR2配列番号7:SASYRYSBRCA84D可変軽鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号8:tcggcatcctaccggtacagtBRCA84D可変軽鎖CDR3配列番号9:QQYNNYPFTBRCA84D可変軽鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号10:cagcaatataacaactatccattcacg2BRCA84D重鎖配列BRCA84D可変重鎖のアミノ酸配列配列番号11:DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCGRGRENIYYGSRLDYWGQGTTLTVSSBRCA84D可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号12:gatgtgcagctggtggagtctgggggaggcttagtgcagcctggagggtcccggaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctttggaatgcactgggttcgtcaggctccagagaaggggctggagtgggtcgcatacattagtagtgacagtagtgccatctactatgcagacacagtgaagggccgattcaccatctccagagacaatcccaagaacaccctgttcctgcaaatgaccagtctaaggtctgaggacacggccatgtattactgtggaagagggagggaaaacatttactacggtagタグcttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcaBRCA84D可変重鎖CDR1配列番号13:FGMHBRCA84D可変重鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号14:tttggaatgcacBRCA84D可変重鎖CDR2配列番号15:YISSDSSAIYYADTVKBRCA84D可変重鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号16:tacattagtagtgacagtagtgccatctactatgcagacacagtgaagBRCA84D可変重鎖CDR3配列番号17:GRENIYYGSRLDYBRCA84D可変重鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号18:gggagggaaaacatttactacggtagtaggcttgactacB.BRCA69Dの配列1BRCA69D軽鎖配列BRCA69D可変軽鎖のアミノ酸配列配列番号19:DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTIDNLEQEDIATYFCQQGNTLPPTFGGGTKLEIKBRCA69D可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号20:gatatccagatgacacagactacatcctccctgtctgcctctctgggagacagagtcaccatcagttgcagggcaagtcaggacattagtaattatttaaactggtatcagcagaaaccagatggaactgttaaactcctgatctactacacatcacgattacactcaggagtcccatcaaggttcagtggcagtgggtctggaacagattattctctcaccattgacaacctggagcaagaagatattgccacttacttttgccaacagggtaatacgcttcctccgacgttcggtggaggcaccaaactggaaatcaaaBRCA69D可変軽鎖CDR1配列番号21:RASQDISNYLNBRCA69D可変軽鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号22:agggcaagtcaggacattagtaattatttaaacBRCA69D可変軽鎖CDR2配列番号23:YTSRLHSBRCA69D可変軽鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号24:tacacatcacgattacactcaBRCA69D可変軽鎖CDR3配列番号25:QQGNTLPPTBRCA69D可変軽鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号26:caacagggtaatacgcttcctccgacg2BRCA69D重鎖配列BRCA69D可変重鎖のアミノ酸配列配列番号27:QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQRPGQGLEWIGTIYPGDGDTRYTQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCARRGIPRLWYFDVWGAGTTVTVSSBRCA69D可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号28:caggttcagctccagcagtctggggctgagctggcaagacctggggcttcagtgaagttgtcctgcaaggcttctggctacacctttactagctactggatgcagtgggtaaaacagaggcctggacagggtctggaatggattgggactatttatcctggagatggtgatactaggtacactcagaagttcaagggcaaggccacattgactgcagataaatcctccagcacagcctacatgcaactcagcagcttggcatctgaggactctgcggtctattactgtgcaagaagagggattccacggctttggtacttcgatgtctggggcgcagggaccacggtcaccgtctcctcaBRCA69D可変重鎖CDR1配列番号29:SYWMQBRCA69D可変重鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号30:agctactggatgcagBRCA69D可変重鎖CDR2配列番号31:TIYPGDGDTRYTQKFKGBRCA69D可変重鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号32:actatttatcctggagatggtgatactaggtacactcagaagttcaagggcBRCA69D可変重鎖CDR3配列番号33:RGIPRLWYFDVBRCA69D可変重鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号34:agagggattccacggctttggtacttcgatgtcC.PRCA157の配列1PRCA157軽鎖配列PRCA157可変軽鎖のアミノ酸配列配列番号35:DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASESIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNTKTLPEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGRYYCQHHYGTPPWTFGGGTNLEIKPRCA157可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号36:gacatccagatgactcagtctccagcctccctatctgtatctgtgggagaaactgtcaccattacatgtcgagcaagtgagagtatttacagttatttagcatggtatcagcagaaacagggaaaatctcctcagctcctggtctataatacaaaaaccttaccagagggtgtgccatcaaggttcagtggcagtggatcaggcacacagttttctctgaagatcaacagcctgcagcctgaagattttgggagatattactgtcaacatcattatggtactcctccgtggacgttcggtggaggcaccaacctggaaatcaaaPRCA157可変軽鎖CDR1配列番号37:RASESIYSYLAPRCA157可変軽鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号38:cgagcaagtgagagtatttacagttatttagcaPRCA157可変軽鎖CDR2配列番号39:NTKTLPEPRCA157可変軽鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号40:aatacaaaaaccttaccagagPRCA157可変軽鎖CDR3配列番号41:QHHYGTPPWPRCA157可変軽鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号42:caacatcattatggtactcctccgtgg2PRCA157重鎖配列PRCA157可変重鎖のアミノ酸配列配列番号43:EVQQVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATINSGGSNTYYPDSLKGRFTISRDNAKNTLYLQMRSLKSEDTAMYYCARHDGGAMDYWGQGTSVTVSSPRCA157可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号44:gaggtgcagcaggtggagtcggggggagacttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagttcctatggcatgtcttgggttcgccagactccagacaagaggctggagtgggtcgcaaccattaatagtggtggaagtaacacctactatccagacagtttgaaggggcgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaccctttacctgcaaatgcgcagtctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgcaagacatgacgggggagctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcaPRCA157可変重鎖CDR1配列番号45:SYGMSPRCA157可変重鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号46:tcctatggcatgtctPRCA157可変重鎖CDR2配列番号47:VATINSGGSNTYYPDSLKGPRCA157可変重鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号48:gtcgcaaccattaatagtggtggaagtaacacctactatccagacagtttgaaggggPRCA157可変重鎖CDR3配列番号49:HDGGAMDYPRCA157可変重鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号50:catgacgggggagctatggactacD.Fc操作B7-H3抗体従来の免疫機能において、抗体抗原複合体と免疫系細胞との相互作用は、抗体依存性細胞傷害、肥満細胞脱顆粒および食作用などのエフェクター機能から、リンパ球増殖および抗体分泌の調節などの免疫調節シグナルまでの広範囲の応答をもたらす。これらの相互作用は全て、抗体または免疫複合体のFcドメインと、造血細胞上の特化した細胞表面受容体との結合によって誘導される。抗体および免疫複合体により誘発される細胞応答の多様性は、3つのFc受容体:FcγRICD64、FcγRIICD32およびFcγRIIICD16の構造的ヘテロ性によるものである。FcγRICD64、FcγRIIACD32AおよびFcγRIIICD16は活性化すなわち、免疫系増強型受容体であり;FcγRIIBCD32Bは阻害すなわち、免疫系低下型受容体である。IgG1Fc領域のアミノ酸配列を以下に示す配列番号51、参照により本明細書に明らかに組み入れられ、以下、KabatEUと呼称する、KabatetalSequenceofProteinsofImmunologicalInterest5thEdPublicHealthServiceNIHMDに従って符番した。配列番号51PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV230240250260270DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALP280290300310320APIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV330340350360370EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMH380390400410420EALHNHYTQKSLSLSPGK430440残基230~341はFcCH2領域である。残基342~447はFcCH3領域である。本発明は、B7-H3と特異的に結合し、1以上の部分に1以上のアミノ酸改変例えば、置換、欠失、挿入を有する変異型Fc領域を含む抗体を含み、この改変はFcγR活性化型および阻害型FcγRを含むに対する変異型Fc領域の親和性および結合力を増強する。いくつかの実施形態では、前記の1以上のアミノ酸改変は、FcγRIIIAおよび/またはFcγRIIAに対する変異型Fc領域の親和性を増強する。別の実施形態では、変異型Fc領域はさらに、対応する親抗体すなわち、Fc領域における1以上のアミノ酸改変以外は本発明の抗体と同じアミノ酸配列を有する抗体のFc領域の場合よりも低い親和性でFcγRIIBと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、このような改変はFcγRIIIAおよび/またはFcγRIIAに対する変異型Fc領域の親和性を増強し、また、親抗体に比べて、FcγRIIBに対する変異型Fc領域の親和性も増強する。他の実施形態では、前記の1以上のアミノ酸改変は、FcγRIIIAおよび/またはFcγRIIAに対する変異型Fc領域の親和性を増強するが、親抗体のFc領域に比べて、FcγRIIBに対する変異型Fc領域の親和性を変化させない。別の実施形態では、前記の1以上のアミノ酸改変は、FcγRIIIAおよびFcγRIIAに対する変異型Fc領域の親和性を増強するが、親抗体に比べて、FcγRIIBに対する親和性を低下させる。親和性および/または結合力の増強は、親分子改変型のFc領域を持たないの結合活性が細胞において検出できない場合に、低レベルのFcγRを発現する細胞において、FcγRに対する検出可能な結合またはFcγR関連活性をもたらす。他の実施形態では、前記改変分子は、30,000~20,000分子/細胞の密度、20,000~10,000分子/細胞の密度、10,000~5,000分子/細胞の密度、5,000~1,000分子/細胞の密度、1,000~200分子/細胞の密度または200分子/細胞以下の密度ただし、少なくとも10、50、100または150分子/細胞で、非FcγR受容体標的抗原を発現する細胞において検出可能な結合を示す。別の実施形態では、Fc領域のアミノ酸に対する前記の1以上の改変は、1以上のFcγR受容体に対する本抗体の親和性および結合力を低減する。特定の実施形態では、本発明は、変異型Fc領域を含む抗体を包含し、前記変異型Fc領域は野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、前記変異型Fc領域は1つのFcγRとのみ結合し、ここで前記FcγRはFcγRIIIAである。別の特定の実施形態では、本発明は、変異型Fc領域を含む抗体を包含し、前記変異型Fc領域は野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、前記変異型Fc領域は1つのFcγRとのみ結合し、ここで、前記FcγRはFcγRIIAである。好ましくは、本発明の分子の結合特性は、1以上のFcγRメディエーターエフェクター細胞機能を決定するためのinvitro機能アッセイにより同定される第5.2.7節参照。FcγRに対する本発明の分子、例えば抗体の親和性および結合特性は、抗体-抗原またはFc-FcγR相互作用、すなわち、それぞれ抗原と抗体の特異的、またはFc領域とFcγRの特異的結合を決定するための当技術分野で公知のinvitroアッセイ生化学的または免疫学的アッセイ、例えば限定されるものではないが、ELISAアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、免疫沈降アッセイを用いて決定することができる。最も好ましい実施形態では、本発明の分子は、invivoモデル例えば、本明細書に記載および開示されているものなどにおいて、invitroに基づくアッセイの場合と同等の結合特性を有する。しかしながら、本発明は、invitroに基づくアッセイでは所望の表現型を示さないがinvivoにおいては所望の表現型を示す本発明の分子を排除しない。いくつかの実施形態では、変異型Fc領域を含む本発明の分子は、そのFc領域のCH3ドメインアミノ酸342~447に及ぶと定義されるに少なくとも1つのアミノ酸改変を含む例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9またはそれを越えるアミノ酸改変を有する。他の実施形態では、変異型Fc領域を含む本発明の分子は、Fc領域のCH2ドメインアミノ酸231~341に及ぶと定義されるに少なくとも1つのアミノ酸改変を含む例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9またはそれを越えるアミノ酸改変を有する。いくつかの実施形態では、本発明の分子は、少なくとも2つのアミノ酸改変を含み例えば、2、3、4、5、6、7、8、9またはそれを越えるアミノ酸改変を有する、このような改変の少なくとも1つがCH3領域にあり、このような改変の少なくとも1つがCH2領域にある。本発明はさらにヒンジ領域のアミノ酸改変も包含する。特定の実施形態では、本発明はFc領域のCH1ドメインアミノ酸216~230に及ぶと定義されるのアミノ酸改変を包含する。特に好ましい実施形態では、本発明は変異型Fc領域を含む分子を包含し、前記変異型は、当業者に公知であり、本明細書に例示される方法を用いて測定した際にADCC活性の増強および/またはFcγRIIACD32Aに対する結合の増強を付与するまたは示す。本発明に従って使用されるADCCアッセイは、NK依存的であってもマクロファージ依存的であってもよい。特に好ましい実施形態では、本発明は変異型Fc領域を含む分子を包含し、前記変異型は、当業者に公知であり、本明細書に例示される方法を用いて測定した際にADCC活性の増強および/またはFcγRIIIACD16Aに対する結合の増強を付与するまたは示す。本発明に従って使用されるADCCアッセイは、NK依存的であってもマクロファージ依存的であってもよい。本発明のFc変異体は、他のFc改変、例えば、米国特許第7,632,497号;同第7,521,542号;同第7,425,619号;同第7,416,727号;同第7,371,826号;同第7,355,008号;同第7,335,742号;同第7,332,581号;同第7,183,387号;同第7,122,637号;および同第6,737,056号;国際公開第2008/105886号;同第2008/002933号;同第2007/021841号;同第2007/106707号;同第06/088494号;同第05/115452号;同第05/110474号;同第04/1032269号;および同第04/063351号;ならびにPrestaLGetalEngineeringtherapeuticantibodiesforimprovedfunctionBiochemSocTrans30487490ShieldsRLetalLackoffucoseonhumanIgG1NlinkedoligosaccharideimprovesbindingtohumanFcgammaRIIIandantibodydependentcellulartoxicityJBiolChem262772673326740andShieldsRLetalHighresolutionmappingofthebindingsiteonhumanIgG1forFcgammaRIFcgammaRIIFcgammaRIIIおよびFcRnanddesignofIgG1variantswithimprovedbindingtotheFcgammaRJBiolChem27665916604に開示されているものと組み合わせてもよい。本発明は、改変抗体に相加的、相乗的または新規な特性を与えるための本発明のFc変異体と他のFc改変との組合せを包含する。好ましくは、本発明のFc変異体は、組み合わせられる改変の表現型を増強する。例えば、本発明のFc変異体を、対応する野生型Fc領域よりも高い親和性でFcγRIIIAと結合することが知られている変異体と組み合わせる場合には、本発明の変異体との組合せはFcγRIIIA親和性により高い倍率の増強をもたらす。本発明は、B7-H3と特異的に結合し、変異型Fc領域を含む抗体であって、前記変異型Fc領域が野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9またはそれを越えるアミノ酸改変を有する、その結果、前記分子が野生型Fc領域を含む分子に比べてエフェクター機能の増強を示すようになり、ただし、前記変異型Fc領域は243、255、256、258、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、300、301、303、305、307、309、312、320、322、326、329、330、332、331、333、334、335、337、338、339、340、359、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438、439位のいずれか1以上に置換を持たないか、または単独で前記の置換ではない、前記抗体を包含する。特定の実施形態では、本発明は、変異型Fc領域を含む抗体であって、前記変異型Fc領域が野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9またはそれを越えるアミノ酸改変を有する、その結果、前記分子が野生型Fc領域を含む分子に比べて変更された親和性でFcγRと結合するようになり、ただし、前記変異型Fc領域は243、255、258、267、269、270、276、278、280、283、285、289、292、293、294、295、296、300、303、305、307、309、320、322、329、332、331、337、338、340、373、376、416、419、434、435、437、438、439位のいずれか1以上に置換を持たないか、または単独で前記の置換ではなく、また、256、290、298、312、326、333、334、359、360または430位のいずれかにアラニンを;268位にアスパラギンを;272位にグルタミンを;286位にグルタミン、セリンまたはアスパラギン酸を;290位にセリンを;301位にメチオニンを;320位にメチオニン、グルタミン、グルタミン酸またはアルギニンを;322位にグルタミン酸を;326位にアスパラギン、セリン、グルタミン酸またはアスパラギン酸を;330位にリシンを;334位にグルタミンを;334位にグルタミン酸を;334位にメチオニンを;334位にヒスチジンを;334位にバリンを;334位にロイシンを;335位にグルタミンを;335位にリシンを;または339位にトレオニンを持たない、前記抗体を包含する。本発明はまた、B7-H3と特異的に結合し、変異型Fc領域を含む抗体であって、前記変異型Fc領域が変異型Fc領域を含むかかる抗体を含み、前記変異型Fc領域は268、269、270、272、276、278、283、285、286、289、292、293、301、303、305、307、309、320、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438または439のいずれか1以上に置換を持たないか、または単独で前記の置換ではなく、また、280位にヒスチジン、グルタミンまたはチロシンを;290位にセリン、グリシン、トレオニンまたはチロシンを;294位にアスパラギンを;295位にリシンを;296位にプロリンを;298位にプロリン、アスパラギン、アスパラギン酸またはバリンを;または300位にロイシンもしくはイソロイシンを持たない、前記抗体を包含する。別の実施形態では、本発明は、変異型Fc領域を含むかかる抗体であって、前記変異型Fc領域が野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、その結果、前記分子が野生型Fc領域を含む分子に比べて低減された親和でFcγRと結合するようになり、ただし、変異型Fc領域は243、252、254、265、268、269、270、278、289、292、293、294、295、296、298、300、301、303、322、324、327、329、333、335、338、340、373、376、382、388、389、414、416、419、434、435、437、438または439位のいずれか1以上に置換を持たないか、または単独で前記の置換ではない、前記抗体を包含する。さらに別の実施形態では、本発明は、変異型Fc領域を含む抗体であって、前記変異型Fc領域が野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、その結果、前記分子が野生型Fc領域を含む分子に比べて増強された親和性でFcγRと結合するようになり、ただし、前記変異型Fc領域は280、283、285、286、290、294、295、298、300、301、305、307、309、312、315、331、333、334、337、340、360、378、398または430のいずれか1以上に置換を持たないか、または単独で前記の置換ではない、前記抗体を包含する。本発明はまた、B7-H3と特異的に結合し、変異型Fc領域を含む抗体であって、前記変異型Fc領域は330、243、247、298、241、240、244、263、262、235、269または328位のいずれか1以上に置換を含まないか、または単独で前記の置換ではなく、また、243位にロイシンを、298位にアスパラギンを、241位にロイシン、および240位にイソロイシンまたはアラニンを、244位にヒスチジンを、330位にバリンを、または328位にイソロイシンを持たない、前記抗体を包含する。本発明は特に、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が増強され、かつ/または活性型受容体および/または阻害型受容体に対する親和性が変更された変異型Fc領域を含み、前記変異型Fc領域が:a下記の置換:S239D、S298A、A330L、I332E、E333A,またはK334Aのうちいずれか1つ、2つ、3つ、4つ、5つまたは6つ;またはb1S298AとE333AとK334A;2S239DとI332E;または3S239DとA330LとI332Eの置換の組合せのうちのいずれかを含む、前記抗体を包含する。本発明は特に、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が増強され、かつ/または活性型受容体および/または阻害型受容体に対する親和性が変更された変異型Fc領域を含み、前記変異型Fc領域が、1288位でのアスパラギンによる置換、330位でのセリンによる置換、および396位でのロイシンによる置換;2334位でのグルタミン酸による置換、359位でのアスパラギンによる置換、および366位でのセリンによる置換;3316位でのアスパラギン酸による置換、378位でのバリンによる置換、および399位でのグルタミン酸による置換;4247位でのロイシンによる置換、および421位でのリシンによる置換;5392位でのトレオニンによる置換、および396位でのロイシンによる置換;6221位でのグルタミン酸による置換、270位でのグルタミン酸による置換、308位でのアラニンによる置換、311位でのヒスチジンによる置換、396位でのロイシンによる置換、および402位でのアスパラギン酸による置換;7419位でのヒスチジンによる置換、および396位でのロイシンによる置換;8240位でのアラニンによる置換、および396位でのロイシンによる置換;9410位でのヒスチジンによる置換、および396位でのロイシンによる置換;10243位でのロイシンによる置換、305位でのイソロイシンによる置換、378位でのアスパラギン酸による置換、404位でのセリンによる置換、および396位でのロイシンによる置換;11255位でのイソロイシンによる置換、および396位でのロイシンによる置換;12370位でのグルタミン酸による置換、および396位でのロイシンによる置換;13270位でのグルタミン酸による置換;または14前期1~12の置換の任意の組合せを含む、前記抗体を包含する。特定の実施形態では、本発明は、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、置換:F243L、R292PおよびY300Lを含む変異型Fc領域を含む抗体を包含する。さらなる特定の実施形態では、本発明は、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、置換:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを含む変異型Fc領域を含む抗体を包含する。なおさらなる特定の実施形態では、本発明は、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、置換:F243L、R292P、Y300L、V305IおよびP396Lを含む変異型Fc領域を含む抗体を包含する。さらなる特定の実施形態では、本発明は、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、396位でのロイシンによる置換、270位でのグルタミン酸による置換および243位でのロイシンによる置換を含む変異型Fc領域を含む抗体を包含する。別の特定の実施形態では、前記分子は本明細書に開示されているものなどの1以上のアミノ酸改変をさらに含む。本発明は特に、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が増強され、かつ/または活性型受容体および/または阻害型受容体に対する親和性が変更され、下記の位置:119、125、132、133、141、142、147、149、162、166、185、192、202、205、210、214、215、216、217、218、219、221、222、223、224、225、227、229、231、232、233、235、240、241、242、243、244、246、247、248、250、251、252、253、254、255、256、258、261、262、263、268、269、270、272、274、275、276、279、280、281、282、284、287、288、289、290、291、292、293、295、298、301、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、315、316、317、318、319、320、323、326、327、328、330、333、334、335、337、339、340、343、344、345、347、348、352、353、354、355、358、359、360、361、362、365、366、367、369、370、371、372、375、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、404、406、407、408、409、410、411、412、414、415、416、417、419、420、421、422、423、424、427、428、431、433、435、436、438、440、441、442、443、446または447の1以上にアミノ酸改変を有する変異型Fc領域を含む、前記抗体を包含する。好ましくは、このような突然変異は、エフェクター細胞により媒介される機能が付与され、場合により、本明細書に開示および例示され、当業者に公知の方法を用いて測定した際にFcγRに対する親和性が変更された分子をもたらす。本発明は特に、B7-H3と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が変更され、かつ/または活性型受容体および/または阻害型受容体に対する親和性が変更され、I下記の位置:235、240、241、243、244、247、262、263、269、298、328または330のうちの1以上でのアミノ酸改変、より好ましくは、下記の改変:V240A、V240I、F241L、F243L、P244H、S298N、L328I、A330Vのうちの1以上このような抗体は、このような改変のない野生型Fc領域を有する抗体に比べて変更されたエフェクター機能を示す;II下記の位置:268、269、270、272、276、278、283、285、286、289、292、293、301、303、305、307、309、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438または439のうちの1以上でのアミノ酸改変、より好ましくは、下記の改変:D280H、D280Q、D280Y、K290G、K290S、K290T、K290Y、E294N、Q295K、Y296P、S298D、S298N、S298P、S298V、Y300I、Y300Lのうちの1以上このような抗体は、このような改変のない野生型Fc領域を有する抗体に比べて変更されたエフェクター機能を示す;III下記の位置:255、256、258、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、300、301、303、305、307、309、312、320、322、326、329、330、332、331、333、334、335、337、338、339、340、359、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438、439のうちの1以上でのアミノ酸改変、より好ましくは、下記の改変:T256A、H268N、E272Q、N286D、N286Q、N286S、K290A、K290S、S298A、R301M、D312A、K320E、K320M、K320Q、K320R、K322E、K326A、K326D、K326E、K326N、K326S、A330K、A339T、E333A、K334A、K334E、K334H、K334L、K334M、K334Q、K334V、T335K、T335Q、T359A、K360A、E430Aのうちの1以上このような抗体は、このような改変のない野生型Fc領域を有する抗体に比べて変更されたエフェクター機能を示す;IV下記の位置:252、254、265、268、269、270、278、289、292、293、294、295、296、298、300、301、303、322、324、327、329、333、335、338、340、373、376、382、388、389、414、416、419、434、435、437、438または439のうちの1以上でのアミノ酸改変このような抗体は、このような改変のない野生型Fc領域を有する抗体に比べて低減されたエフェクター機能を示す;V下記の位置:280、283、285、286、290、294、295、298、300、301、305、307、309、312、315、331、333、334、337、340、360、378、398または430のうちの1以上でのアミノ酸改変このような抗体は、このような改変のない野生型Fc領域を有する抗体に比べて増強されたエフェクター機能を示す;またはVI下記の位置:R255A、T256A、E258A、S267A、H268A、H268N、E272A、E272Q、N276A、D280A、E283A、H285A、N286A、N286D、N286Q、N286S、K290A、K290S、R301M、K320E、K320M、K320Q、K320R、K322E、K326A、K326D、K326E、K326S、A330K、P331A、T335Q、S337A、E430Aのうちの1以上でのアミノ酸改変このような抗体は、このような改変のない野生型Fc領域を有する抗体に比べて増強されたエフェクター機能を示すを有する変異型Fc領域を含む、前記抗体を包含する。他の実施形態では、本発明は、JefferisBJetalInteractionSitesOnHumanIgGFcForFcgammaRCurrentModelsImmunolLett825765PrestaLGetalEngineeringTherapeuticAntibodiesForImprovedFunctionBiochemSocTrans3048790IdusogieEEetalEngineeredAntibodiesWithIncreasedActivityToRecruitComplementJImmunol166257175ShieldsRLetalHighResolutionMappingOfTheBindingSiteOnHumanIgG1ForFcGammaRIFcGammaRIIFcGammaRIIIAndFcRnAndDesignOfIgG1VariantsWithImprovedBindingToTheFcgammaRJBiolChem27665916604IdusogieEEetalMappingOfTheC1qBindingSiteOnRituxanAChimericAntibodyWithAHumanIgGFcJImmunol164417884ReddyMPetalEliminationOfFcReceptorDependentEffectorFunctionsOfAModifiedIgG4MonoclonalAntibodyToHumanCD4JImmunol16419251933XuDetalInVitroCharacterizationofFiveHumanizedOKT3EffectorFunctionVariantAntibodiesCellImmunol2001626ArmourKLetalRecombinanthumanIgGMoleculesLackingFcgammaReceptorIBindingAndMonocyteTriggeringActivitiesEurJImmunol29261324JefferisRetalModulationOfFcRAndHumanComplementActivationByIgG3CoreOligosaccharideInteractionsImmunolLett5410104LundJetalMultipleInteractionsOfIgGWithItsCoreOligosaccharideCanModulateRecognitionByComplementAndHumanFcGammaReceptorIAndInfluenceTheSynthesisOfItsOligosaccharideChainsJImmunol15749634969HutchinsetalImprovedBiodistributionTumorTargetingAndReducedImmunogenicityInMiceWithAGamma4VariantOfCampath1HProcNatlAcadSci921198084JefferisRetalRecognitionSitesOnHumanIgGForFcGammaReceptorsTheRoleOfGlycosylationImmunolLett4411117LundJetalOligosaccharideProteinInteractionsInIgGCanModulateRecognitionByFcGammaReceptorsFASEBJ911519AlegreMLetalANonActivatingHumanizedAntiCD3MonoclonalAntibodyRetainsImmunosuppressivePropertiesInVivoTransplantation5715371543LundetalMultipleBindingSitesOnTheCH2DomainOfIgGForMouseFcGammaR11MolImmunol295359LundetalHumanFcGammaRIAndFcGammaRIIInteractWithDistinctButOverlappingSitesOnHumanIgGJImmunol14726572662DuncanARetalLocalizationOfTheBindingSiteForTheHumanHighAffinityFcReceptorOnIgGNature332563564米国特許第5,624,821号;同第5,885,573号;同第6,194,551号;同第7,276,586号;および同第7,317,091号;ならびに国際公開第00/42072号および同第99/58572号に開示されているものなどの当技術分野で公知の任意のFc変異体の使用を包含する。本発明は、下表1に挙げられる突然変異のいずれかからなる、またはいずれかを含む変異型Fc領域を含む分子を包含する。特定の実施形態では、このような抗B7-H3抗体の変異型Fc領域は、1247位にロイシン、421位にリシンおよび270位にグルタミン酸;2392位にトレオニン、396位にロイシン、270位にグルタミン酸、および243位にロイシン;3419位にヒスチジン、396位にロイシン、および270位にグルタミン酸;4419位にヒスチジン、396位にロイシン、270位にグルタミン酸、および243位にロイシン;5240位にアラニン、396位にロイシン、および270位にグルタミン酸;6255位にリシン、および396位にロイシン;7255位にリシン、396位にロイシン、および270位にグルタミン酸;8255位にリシン、396位にロイシン、270位にグルタミン酸、および300位にリシン;9255位にリシン、396位にロイシン、270位にグルタミン酸、および292位にグリシン;10255位にリシン、396位にロイシン、270位にグルタミン酸、および243位にロイシン;11370位にグルタミン酸、396位にロイシン、および270位にグルタミン酸;12270位にグルタミン酸、316位にアスパラギン酸、および416位にグリシン;13243位にロイシン、292位にプロリン、305位にイソロイシン、および396位にロイシン;14243位にロイシン、270位にグルタミン酸、392位にアスパラギン、および396位にロイシン;15243位にロイシン、255位にロイシン、270位にグルタミン酸、および39位にロイシン;16297位にグルタミン;または17前記1~16の置換の任意の組合せを有する。いくつかの実施形態では、本発明の分子はさらに1以上のグリコシル化部位を含み、従って、1以上の炭水化物部分がこの分子と共有結合される。好ましくは、Fc領域に1以上のグリコシル化部位および/または1以上の改変を有する本発明の分子は、親抗体に比べて抗体媒介エフェクター機能の増強、例えば、ADCC活性の増強を付与するまたは示す。いくつかの実施形態では、本発明はさらに、抗体の炭水化物部分と相互作用することが直接的または間接的に知られているアミノ酸、例えば、限定されるものではないが、241、243、244、245、245、249、256、258、260、262、264、265、296、299および301位のアミノ酸の1以上の改変を含む分子を含む。抗体の炭水化物部分と直接的または間接的に相互作用するアミノ酸は当技術分野で公知である例えば、参照によりその全内容を本発明に組み入れるefferisetal1995ImmunologyLetters441117参照。別の実施形態では、本発明は、1以上のグリコシル化部位をその分子の1以上の部位に、好ましくはその分子の機能性、例えば、標的抗原またはFcγRに対する結合活性を変更することなく導入することによって改変された分子を包含する。グリコシル化部位は本発明の分子の可変領域および/または定常領域に導入することができる。本明細書においてグリコシル化部位は、オリゴ糖すなわち、互いに連結された2以上の単純な糖類含む炭水化物が特異的かつ共有結合的に結合する抗体中の任意の特定のアミノ酸配列を含む。オリゴ糖側鎖は典型的にはN結合かO結合のいずれかを介して抗体の骨格に連結される。N結合グリコシル化は、オリゴ糖部分の、アスパラギン残基の側鎖への結合を意味する。O結合グリコシル化は、オリゴ糖部分の、ヒドロキシアミノ酸、例えば、セリン、トレオニンへの結合を意味する。本発明の分子は、N結合およびO結合グリコシル化部位を含む1以上のグリコシル化部位を含み得る。当技術分野で公知のN結合またはO結合グリコシル化のためのグリコシル化部位はいずれも、本発明に従って使用可能である。本発明の方法に従う有用なN結合グリコシル化部位の例はアミノ酸配列:Asn-X-Thr/Serであり、ここで、Xは任意のアミノ酸であってよく、Thr/Serはトレオニンまたはセリンを示す。このような部位単一または複数は、本発明が属する当技術分野で周知の方法を用いて本発明の分子に導入することができる例えば、参照によりその全内容を本発明に組み入れるInvitroMutagenesisRecombinantDNAAShortCourseJDWatsonetalWHFreemanandCompanyNewYork1983chapter8pp106116参照。グリコシル化部位を本発明の分子に導入するための方法の例は、所望のAsn-X-Thr/Ser配列が得られるようにその分子のアミノ酸配列を改変するまたは変異させることを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明は、グリコシル化部位を付加するまたは欠失させることによって本発明の分子の炭水化物含量を改変する方法を包含する。抗体の炭水化物含量を改変する方法は当技術分野で周知であり、本発明の範囲内に包含される例えば、米国特許第6,218,149号;欧州特許第0359096B1号;米国特許出願公開第2002/0028486号;国際公開第03/035835号;米国特許出願公開第2003/0115614号;米国特許第6,218,149号;同第6,472,511号参照;これらは全て、参照によりその全内容を本明細書に組み入れる。他の実施形態では、本発明は、その分子の1以上の内在炭水化物部分を欠失させることによって本発明の分子の炭水化物含量を改変する方法を包含する。特定の実施形態では、本発明は、297の隣の位置を改変することによって抗体のFc領域のグリコシル化部位をシフトさせることを包含する。特定の実施形態では、本発明は、296位を改変して、296位はグリコシル化されるが297位はされないようにすることを包含する。また、エフェクター機能も、Fc領域に1以上のシステイン残基を導入し、それによりこの領域内の鎖内ジスルフィド結合形成を可能とし、内部移行能の向上ならびに/または補体媒介細胞死およびADCCの増強を示し得るホモ二量体抗体の生成を得るなどの技術によって改変可能であるEngineeredHumanizedDimericFormsOfIgGAreMoreEffectiveAntibodiesJExpMed17611911195ShopesBAGeneticallyEngineeredHumanIgGMutantWithEnhancedCytolyticActivityJImmunol14829182922。また、抗腫瘍活性が増強されたホモ二量体抗体も、WolffEAetalMonoclonalAntibodyHomodimersEnhancedAntitumorActivityInNudeMiceCancerResearch5325602565に記載されているようなヘテロ二官能性架橋剤を用いて作製可能である。あるいは、二重Fc領域を有し、それにより増強された補体溶解能とADCC能を示し得る抗体を工作することができるAChimericAntibodyWithDualFcRegionsPreparedByManipulationsAtTheIgGHingeAntiCancerDrugDesign3219230。E.B7-H3DART商標二重親和性再標的化試薬上述のように、本発明はさらに、少なくとも2つのエピトープ結合部位を形成する少なくとも2つのポリペプチドそのうちの少なくとも1つがB7-H3と特異的に結合するを含むDART商標二重親和性再標的化試薬分子を包含する。好ましい実施形態では、DART商標の第1のポリペプチド鎖は、iエピトープ1に特異的な第1の免疫グロブリンVL1の軽鎖可変ドメインの結合領域を含むドメインA;iiエピトープ2に特異的な第2の免疫グロブリンVH2の重鎖可変ドメインの結合領域を含むドメインB;およびiiiドメインCを含む。このようなDART商標第2のポリペプチド鎖は、iエピトープ2に特異的な第2の免疫グロブリンVL2の軽鎖可変ドメインの結合領域を含むドメインD;iiエピトープ1に特異的な第1の免疫グロブリンVH1の重鎖可変ドメインの結合領域を含むドメインE;およびiiiドメインFを含む。このDART商標ドメインAとBは、互いに会合して1つのエピトープ結合部位を形成することはない。同様に、DART商標ドメインDとEも、互いに会合して1つのエピトープ結合部位を形成することはない。むしろ、DART商標ドメインAとEは会合してエピトープ1と結合する結合部位を形成し、前記DART商標ドメインBとDは会合して前記エピトープ2と結合する結合部位を形成する。ドメインCとFは共有結合により会合される。DART商標分子の各ポリペプチド鎖はVLドメインとVHドメインを含み、これらは共有結合され、その結果、これらのドメインは拘束され自己アセンブリができない。これら2つのポリペプチド鎖の相互作用は2つのVL-VH対合を作り出し、2つのエピトープ結合部位、すなわち二価分子を形成する。VHまたはVLドメインはそのポリペプチド鎖内のいずれの位置にも拘束されずすなわち、アミノN末端またはカルボキシC末端に制限され、しかも、互いに関連する位置に制限されるドメインでもないすなわち、VLドメインはVHドメインのN末端にあってもよいしその逆でもよい。唯一の制限は、機能的DART商標を形成するために相補的ポリペプチド鎖が利用可能であるということである。VLドメインとVHドメインが同じ抗体に由来する場合、この2つの相補的ポリペプチド鎖は同一であってもよい。例えば、結合ドメインがエピトープAに特異的な抗体に由来する場合すなわち、結合ドメインがVLA-VHAの相互作用から形成される場合、各ポリペプチドはVHAおよびVLAを含む。この抗体の2つのポリペプチド鎖のホモ二量体形成は2つのVLA-VHA結合部位の形成をもたらし、二価単一特異性抗体となる。VLドメインとVHドメインが異なる抗原に特異的な抗体に由来する場合、機能的な二重特異性DART商標の形成には、2つの異なるポリペプチド鎖の相互作用、すなわち、ヘテロ二量体の形成が必要である。例えば、二重特異性DART商標の場合、1つのポリペプチド鎖がVLAおよびVLBを含み、前記の鎖のホモ二量体形成の結果、結合が見られないか、または結合が予測できない2つのVLA-VHB結合部位が形成される。これに対し、例えば組換え発現系において、2つの異なるポリペプチド鎖が相互作用を受けない場合、一方はVLAとVHBを含み、他方はVLBとVHAを含む、2つの異なる結合部位、すなわちVLA-VHAとVLB-VHBが形成される。全てのDART商標ポリペプチド鎖対に関して、これらの2鎖のアライメントの誤りまたは結合の誤りの可能性、すなわち、VL-VLまたはVH-VHドメインの相互作用の可能性があるが、機能的ダイアボディーの精製は、当技術分野で公知の、または本明細書に例示される親和性に基づく任意の方法、例えばアフィニティークロマトグラフィーを用い、適切に二量体化された結合部位の免疫特異性に基づいて容易に管理される。DART商標の1以上のポリペプチド鎖は場合によりFcドメインまたはその一部例えば、CH2ドメインまたはCH3ドメインを含む。Fcドメインまたはその一部は、限定されるものではないが、IgA、IgD、IgG、IgEおよびIgMを含む、任意の免疫グロブリンアイソタイプまたはアロタイプに由来してもよい。好ましい実施形態では、Fcドメインまたはその一部はIgGに由来する。特定の実施形態では、IgGアイソタイプはIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4またはそのアロタイプである。一実施形態では、ダイアボディー分子はFcドメインを含み、Fcドメインは、任意の免疫グロブリンアイソタイプから独立に選択されるCH2ドメインおよびCH3ドメインを含むすなわち、FcドメインはIgGに由来するCH2ドメインとIgEに由来するCH3ドメイン、またはIgG1に由来するCH2ドメインとIgG2に由来するCH3ドメインなどを含む。Fcドメインは、そのポリペプチド鎖の他方のドメインまたは一部に対していずれの位置に本発明のダイアボディー分子を含んでいてもよいポリペプチド鎖となるように操作することができる例えば、Fcドメインまたはその一部は前記鎖のポリペプチドのVLドメインおよびVHドメイン双方のC末端にあってもよく、VLドメインおよびVHドメイン双方のN末端にあってもよく、または一方のドメインのN末端でもう一方のドメインのC末端すなわち、前記ポリペプチド鎖の2つのドメインの間にあってもよい。DART商標分子のポリペプチド鎖のFcドメインは優先的に二量体を形成し、免疫グロブリン様特性、例えばFc-FcγR相互作用を示すDART商標分子の形成をもたらす。ダイアボディーを含むFcは、例えばそれぞれがVHドメインとVLドメインとFcドメインを含む2つのポリペプチド鎖からなる二量体であり得る。前記ポリペプチド鎖の二量体形成の結果、非改変型の二価抗体とは異なる構造ではあるがFcドメインを含む二価DART商標が生じる。このようなDART商標分子は野生型免疫グロブリンに対して変更された表現型、例えば変更された血清半減期、結合特性などを示す。他の実施形態では、Fcドメインを含むDART商標分子は四量体であり得る。このような四量体は、2本のより重いポリペプチド鎖、すなわち、VLとVHとFcドメインを含むポリペプチド鎖と、2本のより軽いポリペプチド鎖、すなわち、VLとVHを含むポリペプチド鎖とを含む。このより軽い鎖とより重い鎖は相互作用して単量体を形成し、これらの単量体はそれらの対合していないFcドメインを介して相互作用してIg様分子を形成する。このようなIg様DART商標は四価であり、単一特異性、二重特異性または四重特異性であり得る。上記のような四重特異性ダイアボディー分子の形成には、4つの異なるポリペプチド鎖の相互作用が必要である。このような相互作用は、潜在的な鎖の誤対合の多くの変異体のために、単細胞組換え生産系の効率では達成が困難である。誤対合の確率の上昇に対する1つの対策が、所望のポリペプチド鎖対にノブと穴KnobsIntoHolesEngineeringOfAntibodyCH3DomainsForHeavyChainHeterodimerizationProteinEngr9617621AtwelletalStableHeterodimersFromRemodelingTheDomainInterfaceOfAHomodimerUsingAPhageDisplayLibraryJMolBiol2702635およびXieetalANewFormatOfBispecificAntibodyHighlyEfficientHeterodimerizationExpressionAndTumorCellLysisJImmunolMethods29695101参照。本発明はまた、変異型Fcまたは変異型ヒンジ-Fcドメインまたはその一部を含むダイアボディー分子を包含し、この変異型Fcドメインは対応する野生型Fcドメインまたはヒンジ-Fcドメインまたはその一部に対して少なくとも1つのアミノ酸改変例えば、置換、挿入、欠失を含む。変異型Fcドメインまたはヒンジ-Fcドメインまたはその一部を含む分子例えば抗体は通常、野生型Fcドメインsまたはヒンジ-Fcドメインまたはその一部を含む分子に対して変更された表現型を示す。変異型表現型はNK依存性またはマクロファージ依存性アッセイにおいてアッセイされるような血清半減期の変更、安定性の変更、細胞酵素に対する感受性の変更またはエフェクター機能の変更として発現され得る。エフェクター機能の変更として確認されるFcドメイン改変は上記に開示されている。本発明はまた、ヒンジドメインを含む分子を包含する。ヒンジドメインは、IgA、IgD、IgG、IgEおよびIgMを含む免疫グロブリンアイソタイプまたはアロタイプに由来する。好ましい実施形態では、ヒンジドメインはIgGに由来し、IgGアイソタイプはIgG1、IgG2、IgG3もしくはIgG4、またはそのアロタイプである。前記ヒンジドメインは、ダイアボディー分子をFcドメインとともに含み、その結果、ダイアボディー分子がヒンジ-Fcドメインを含むようになるポリペプチド鎖とするように操作することができる。特定の実施形態では、ヒンジおよびFcドメインは当技術分野で公知の、または本明細書で例示される免疫グロブリンアイソタイプから独立に選択される。他の実施形態では、ヒンジおよびFcドメインは、そのポリペプチド鎖の少なくとも1つの他のドメイン、例えばVLドメインによって分離されている。ヒンジドメイン、または場合によりヒンジ-Fcドメインは、前記ポリペプチド鎖の他のドメインまたは一部に対していずれの位置にある本発明のポリペプチドも操作により作出することができる。特定の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジドメインを含みヒンジドメインはポリペプチド鎖のC末端にあり、前記ポリペプチド鎖はFcドメインを含まない。さらに他の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジ-Fcドメインを含み、ヒンジ-Fcドメインはポリペプチド鎖のC末端にある。さらなる実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジ-Fcドメインを含み、ヒンジ-Fcドメインはポリペプチド鎖のN末端にある。DART商標のポリペプチド鎖の各ドメイン、すなわち、VL、VHおよびFcドメインはペプチドリンカーによって分離されていてもよい。このペプチドリンカーは0、1、2、3、4、5、6、7、8または9アミノ酸長であり得る。特定の実施形態では、アミノ酸リンカー配列は、核酸配列ggaggcggatccggaggcggaggc配列番号53よりコードされるGGGSGGGG配列番号52である。DART商標分子のポリペプチド鎖は、DART商標の第2のポリペプチド鎖上の対応システイン残基と相互作用して鎖内ジスルフィド結合を形成する少なくとも1つのシステイン残基を含むように操作することができる。このような分子内ジスルフィド結合は、DART商標分子を安定化し、それにより組換え系での発現および回収を改善し、安定かつ一貫した製剤を得、この単離および/または精製された産物のinvivoでの安定性を改善する働きをする。システイン残基は単一のアミノ酸として、またはより大きなアミノ酸配列部分、例えばヒンジドメインとして、ポリペプチド鎖のいずれの部分に導入してもよい。特定の実施形態では、システイン残基はポリペプチド鎖のC末端に存在するように操作することができる。いくつかの実施形態では、システイン残基はポリペプチド鎖のアミノ酸配列LGGC内に導入される。特定の実施形態では、本発明のDART商標分子を含むポリペプチド鎖のC末端はアミノ酸配列LGGC配列番号54を含む。別の実施形態では、システイン残基は、ポリペプチドのヒンジドメイン、例えばEPKSCDKTHTCPP配列番号55またはESKYGPPCPS配列番号56を含むアミノ酸配列内に導入される。特定の実施形態では、本発明のDART商標分子のポリペプチド鎖のC末端は、IgGヒンジドメインのアミノ酸配列、例えば配列番号55または配列番号56を含む。別の実施形態では、本発明のDART商標分子のポリペプチド鎖のC末端は、アミノ酸配列VEPKSC配列番号57を含み、これはヌクレオチド配列gttgagcccaaatcttgt配列番号58によりコードされ得る。他の実施形態では、システイン残基はポリペプチド鎖のアミノ酸配列LGGCFNRGEC配列番号59内に導入され、これはヌクレオチド配列ctgggaggctgcttcaacaggggagagtgt配列番号60によりコードされ得る。特定の実施形態では、本発明のDART商標を含むポリペプチド鎖のC末端は、アミノ酸配列LGGCFNRGEC配列番号59を含む。さらに他の実施形態では、システイン残基はポリペプチド鎖のアミノ酸配列FNRGEC配列番号61内に導入され、これはヌクレオチド配列ttcaacaggggagagtgt配列番号62のよりコードされ得る。特定の実施形態では、本発明のDART商標を含むポリペプチド鎖のC末端はアミノ酸配列FNRGEC配列番号61を含む。特定の実施形態では、ダイアボディー分子は、それぞれがアミノ酸配列LGGC配列番号54を含み、LGGC配列番号54配列内のシステイン残基間でジスルフィド結合のにより共有結合されている少なくとも2つのポリペプチド鎖を含む。別の特定の実施形態では、ダイアボディー分子は少なくとも2つのポリペプチド鎖を含み、その一方は配列FNRGEC配列番号61を含み、他方はヒンジドメイン少なくとも1つのシステイン残基を含むを含み、前記の少なくとも2つのポリペプチド鎖は、FNRGEC配列番号61のシステイン残基とヒンジドメインのシステイン残基の間でジスルフィド結合で共有結合されている。特定の態様では、ヒンジドメインに存在するジスルフィド結合を担うシステイン残基はCys-128KabatEUに従って符番;非改変型の完全IgG重鎖のヒンジドメインに位置するであり、配列番号23における対応システイン残基はCys-214KabatEUに従って符番;非改変型の完全IgG軽鎖のC末端に位置するであるCysteinesInCH1UnderlieRetentionOfUnassembledIgHeavyChainsJBiolChem2801440214412。さらに他の実施形態では、少なくとも1つのシステイン残基が、アミノ酸鎖のN末端に存在するように操作される。さらに他の実施形態では、少なくとも1つのシステイン残基が、ダイアボディー分子のポリペプチド鎖のリンカー部分に存在するように操作される。さらなる実施形態では、VHまたはVLドメインは、親VHまたはVLドメインに対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含むように操作され、その結果、前記アミノ酸改変は親アミノ酸の、システインでの置換を含む。この実施形態のさらに別の態様では、第1のポリペプチド鎖のドメインCは、アミノ酸配列VEPKSC配列番号57を含み、このアミノ酸配列はヒトIgGのヒンジドメインに由良し、ヌクレオチド配列gttgagcccaaatcttgt配列番号58によりコードされ得る。この実施形態の別の態様では、第2のポリペプチド鎖のドメインFはアミノ酸配列VEPKSC配列番号57を含む。この実施形態のある特定の態様では、第1のポリペプチド鎖のドメインCは、ヒトκ軽鎖のC末端の6つのアミノ酸FNRGEC配列番号61を含み;第2のポリペプチド鎖のドメインFは、アミノ酸配列VEPKSC配列番号57またはヒンジドメインを含む。この実施形態の別の態様では、第2のポリペプチド鎖のドメインFは、ヒトκ軽鎖のC末端の6つのアミノ酸FNRGEC配列番号61を含み;第1のポリペプチド鎖のドメインCは、アミノ酸配列VEPKSC配列番号57またはヒンジドメインを含む。以上の点から分かるように、二重特異性DART商標の個々のポリペプチドは、2種類のホモ二量体と1種類のヘテロ二量体を形成し得る。本発明の一実施形態では、荷電ポリペプチドは一方の、またはより好ましくは両方のDART商標ポリペプチドのC末端に付加することができる。二重特異性DART商標の個々のポリペプチドに対して反対の電荷を有する荷電ポリペプチドを選択することにより、このような荷電ポリペプチドの包摂はヘテロ二量体の形成に有利であり、ホモ二量体の形成を減らす。好ましくは、正電荷を有するポリペプチドは実質的含量のアルギニン、グルタミン、ヒスチジンおよび/またはリシンまたはこのようなアミノ酸の混合物を含み、負電荷を有するポリペプチドは、実質的含量のアスパラギン酸またはグルタミン酸またはこのようなアミノ酸の混合物を含む。実質的含量のリシンを含む正電荷ポリペプチドおよび実質的含量のグルタミン酸を含む負電荷ポリペプチドが特に好ましい。このような反対の電荷を有するポリペプチド間の静電引力を最大にするには、らせんコンフォメーションを自発的に採り得るポリペプチドを使用するのが好ましい。よって、好ましい実施形態では、正電荷を有するE-コイルが、二重特異性DART商標の形成に用いられるポリペプチドの一方に付加され、負電荷を有するK-コイルが、DART商標のポリペプチドのもう一方に付加される。特に好ましいE-コイルは配列:4[すなわち、配列番号63EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK]を有する。特に好ましいK-コイルは配列:4[すなわち、配列番号64KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE]を有する。このようなE-コイルを有する好ましいDART商標ポリペプチドは一般配列:[VLドメイン][GGGSGGGG][VHドメイン][4]-GGGNSを有し、ここで、VLはDART商標の軽鎖可変Igドメインであり、GGGSGGGGは配列番号52であり、VHはDART商標の重鎖可変Igドメインであり、4は配列番号63であり、GGGNSは配列番号65である。このようなK-コイルを有する好ましいDART商標ポリペプチドは、一般配列:[VLドメイン][GGGSGGGG][VHドメイン][4]-GGGNSを有し、ここで、VLはDART商標の軽鎖可変Igドメインであり、GGGSGGGGは配列番号52であり、VHはDART商標の重鎖可変Igドメインであり、4は配列番号64であり、GGGNSは配列番号65である。さらなる実施形態では、Fc領域はE-コイルまたはK-コイルDART商標のEコイルおよび/またはKコイルと連結することができる。さらに、Fc含有DART商標のFc領域とDART商標VHドメインの間の分離は、このようなドメインの分離配置が不十分であるとこのようなドメインとそれらの結合リガンドの間の相互作用が減少するか、あるいはそうでなければDART商標のアセンブリが妨害される場合に望ましい。いずれのアミノ酸配列のセパレーターも使用可能であるが、Fcドメインを可変ドメインから遠ざけて最大限延ばし、突き出るようにαヘリックスコイルを形成するセパレーターを使用するのが好ましい。反対の電荷を有する上記コイルポリペプチドはさらにヘテロ二量体形成を促進する働きをするので、このような分子は特に好ましいセパレーターである。このようなコイル含有Fc-DART商標分子は、血清半減期の改善およびエフェクター機能の動員を含む、Fc-DART商標と同様の利益をもたらす。上記E-コイルおよびK-コイルポリペプチドはこの目的に特に好ましい。よって、好ましい実施形態では、E-コイルFc含有DART商標は一般配列:D234Kabatナンバリングで始まる[VLドメイン][GGGSGGGG][VHドメイン][4]-GGG-Fcドメインを有し、ここで、VLはDART商標の軽鎖可変Igドメインであり、GGGSGGGGは配列番号52であり、VHはDART商標の重鎖可変Igドメインであり、4は配列番号63である。同様に、好ましい実施形態では、K-コイルFc含有DART商標は一般配列:D234Kabatナンバリングで始まる[VLドメイン][GGGSGGGG][VHドメイン][4]-GGG-Fcドメインを有し、ここで、VLはDART商標の軽鎖可変Igドメインであり、GGGSGGGGは配列番号51であり、VHはDART商標の重鎖可変Igドメインであり、4は配列番号64である。上記で示したように、コイル含有DART商標分子またはコイル含有Fc含有DART商標分子はこのようなコイルセパレーターを1個だけ分でもよいし、または2以上のこのようなセパレーターを含んでもよく、例えば、好ましくは反対の電荷を有する2個のセパレーターであって、そのうち1つはDART商標のポリペプチドの各VHドメインと連結されている。Fc領域をこのようなセパレーター分子を連結することにより、鎖交換によるFc-DART商標分子の二価型、四価型などを作出する能力が増強される。従って、FcドメインがDART商標VHドメインの一方に連結されるか両方に連結されるかによって単量体または二量体を形成するFc-DART商標分子が生産できる。1.B7-H3DART商標分子の多用途性本発明の二重特異性DART商標は2つの別個の、異なるエピトープを同時に結合させることができる。特定の実施形態では、これらのエピトープは同じ抗原に由来する。他の実施形態では、これらのエピトープは異なる抗原に由来する。好ましい実施形態では、少なくとも1つのエピトープ結合部位が、免疫エフェクター細胞上で発現される決定基例えば、Tリンパ球、ナチュラルキラーNK細胞またはその他の単核細胞上で発現されるCD3、CD16、CD32、CD64、T細胞受容体などに特異的である。一実施形態では、DART商標分子は前記エフェクター細胞決定基と結合し、また、前記エフェクター細胞を活性化する。これに関して、本発明のDART商標分子は、それらがFcドメインをさらに含むかどうかに関わらず、Ig様機能を示し得る例えば、当技術分野で公知の、または本明細書で例示される任意のエフェクター機能アッセイ例えば、ADCCアッセイでアッセイされる。特定の実施形態では、本発明の二重特異性DART商標は腫瘍細胞上の癌抗原とエフェクター細胞決定基の双方に結合するとともに該細胞を活性化する。別の実施形態では、本発明の二重特異性DART商標またはDART商標分子は、上記のように、同じ細胞上の活性化型受容体と阻害型受容体と同時に結合し例えば、CD32AとCD32B、BCRとCD32B、またはIgERIとCD32Bの双方に結合し、従って連結することによって標的細胞、例えばエフェクター細胞の活性化を阻害し得る背景の節を参照。この実施形態のさらなる態様において、二重特異性DART商標は、ウイルス例えば、RSVエピトープ;E16およびE53などのWNVエピトープ上の2つの中和型エピトープに同時に結合することにより、抗ウイルス特性を示し得る。2.万能B7-H3DART商標分子一実施形態では、本発明の二重特異性DART商標分子は、B7-H3と特異的に結合する1つのエピトープ結合ドメインと、ハプテン、例えばフルオレセインイソチオシアネートフルオロイソチオシアネートまたはFITCとしても知られると特異的に結合する第2のエピトープ結合ドメインとを含むように構築することができる。このようなDART商標は、B7-H3と、フルオレセインと結合した結合相手と相互作用する分子との同時ライゲーションを行うことができるユニバーサルアダプターUDART商標として機能する。例えば、DART商標のFITC反応性アームを用いて、細胞間クラスタリング、細胞間動員、細胞不含動員、多重標的などに関与する非B7-H3標的に結合されるFITC標識抗体と結合させることができる。抗フルオレセインMAbのキメラマウスFv/ヒトFc型である4420をFITC特異的CDRドメインの供給源として用いることができるEfficientTumorCellLysisMediatedByABispecificSingleChainAntibodyExpressedInEscherichiacoliJImmunol15253685374。3.細胞標的特異的B7-H3DART商標分子本発明の二重特異性DART商標分子は標的特異的細胞種に独特な機会を与える。例えば、二重特異性DART商標またはDART商標分子は、標的細胞または組織種に独特な抗原セットを認識するエピトープ結合部位の組合せを含むように操作することができる。さらに、各抗原のいずれかまたは双方が他の組織および/または細胞種においてそれぞれかなり一般的である場合には、低親和性結合ドメインを用いてDART商標またはDART商標分子を構築することができる。このような低親和性結合ドメインは、各エピトープまたは抗原と、治療目的に十分な結合力では結合することができない。しかしながら、双方のエピトープまたは抗原が単一の標的細胞または組織に存在する場合には、該細胞または組織に対するDART商標またはDART商標分子の結合力は、該抗原のうち1つだけを発現する細胞または組織よりも増大し、その結果、前記細胞または組織は本発明によって効果的に標的化され得る。このような二重特異性分子は、前記抗原の双方を発現する細胞上では、単一特異性DART商標またはその抗原の1つだけに特異性を有する抗体に比べて、その標的抗原の一方または双方との結合の増強を示し得る。例えば、本発明のB7-H3特異的DART商標は、ナチュラルキラーグループ2DNKG2D受容体の結合リガンドであるドメインを含むように構築することができる。NKG2D受容体は全てのヒトおよび他の哺乳類ナチュラルキラー細胞ActivationOfNKCellsAndTCellsByNKG2DAReceptorForStressInducibleMICAScience285727729JamiesonAMetalTheRoleOfTheNKG2DImmunoreceptorInImmuneCellActivationAndNaturalKillingImmunity171929ならびに全てのCD8T細胞CostimulationOfCD8αβTCellsByNKG2DViaEngagementByMICInducedOnVirusInfectedCellsNatImmunol2255260JamiesonAMetalTheRoleOfTheNKG2DImmunoreceptorInImmuneCellActivationAndNaturalKillingImmunity171929で発現される。このような結合リガンド、特に、正常な細胞上では発現されないものとしては、組織結合性60H60分子、レチノイン酸初期誘導性遺伝子-1RAE-1の産物、およびマウスUL16-結合タンパク質様転写物1MULT1RolesOfTheNKG2DImmunoreceptorAndItsLigandsNatureRevImmunol3781790CoudertJDetalAlteredNKG2DFunctionInNKCellsInducedByChronicExposureToAlteredNKG2DLigandExpressingTumorCellsBlood10617111717が含まれる。ヒトNKG2Dと反応性のあるさらなるリガンドとしては、多型MHCクラスI鎖関連分子MICAおよびMICBが含まれるNaturalKillerCellsStressOutTurnOnTuneInCurrBiol9R851R8533BauerSetalActivationOfNKCellsAndTCellsByNKG2DAReceptorForStressInducibleMICAScience285727729StephensHAMICAAndMICBGenesCanTheEnigmaOfTheirPolymorphismBeResolvedTrendsImmunol22378385。MICAの配列は配列番号66である。MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGAMICBの配列は配列番号67である。PHSLRYNLMVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAEDVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQLPPMVNVICSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPあるいは、本発明のDART商標分子は、T細胞受容体TCRまたはCD3T細胞共受容体の結合リガンドであるドメインを含むように構築することができる。TCRはCD4またはCD8T細胞により本来発現され、このような細胞に、抗原提示細胞のクラスIまたはクラスIIMHCタンパク質により結合され、提示される抗原ペプチドを認識させる。TCRによるpMHCペプチド-MHC複合体の認識は、サイトカインの産生および抗原提示細胞の溶解をもたらす細胞性免疫応答の伝達を誘導する例えば、ArmstrongKMetalConformationalChangesAndFlexibilityInTCellReceptorRecognitionOfPeptideMHCComplexesBiochemJ415183196WillemsenRSelectionOfHumanAntibodyFragmentsDirectedAgainstTumorTCellEpitopesForAdoptiveTCellTherapyCytometryA7310931099BeierKCetalMasterSwitchesOfTCellActivationAndDifferentiationEurRespirJ29804812MalloneRetalTargetingTLymphocytesForImmuneMonitoringAndInterventionInAutoimmuneDiabetesAmJTher12534550参照。CD3はTCRと結合する受容体であるMolecularImmunologyLessonsFromTherapeuticTCellReceptorGeneTransferImmunology129170177GuyCSetalOrganizationOfProximalSignalInitiationAtTheTCRCD3ComplexImmunolRev232721StClairEWNovelTargetedTherapiesForAutoimmunityCurrOpinImmunol21648657BaeuerlePAetalBispecificTCellEngagingAntibodiesForCancerTherapyCancerRes6949414944SmithGarvinJEetalTCellActivationAnnuRevImmunol27591619RendersLetalEngineeredCD3AntibodiesForImmunosuppressionClinExpImmunol133307309。例えば標的細胞の表面に存在する受容体と結合し得る少なくとも1つのエピトープ結合ドメインをさらに含むようにこのようなDART商標分子を構築することにより、このようなDART商標分子は、標的細胞と結合し、それにより、標的細胞にナチュラルキラーグループ2DNKG2D受容体またはTCRの結合リガンドどちらも標的細胞が結合したDART商標上に存在するを提示させることができるDART商標分子となる例えば、GermainCetalRedirectingNKCellsMediatedTumorCellLysisByANewRecombinantBifunctionalProteinProtEngineerDesignSelection21665672参照。このようなDART商標はいかなる所望の標的細胞をも、NK細胞により媒介される細胞溶解またはT細胞媒介性細胞傷害性の標的である細胞へ再指向するために使用することができる。一実施形態では、標的細胞の表面に存在する受容体に結合することができるDART商標のエピトープ結合ドメインは、腫瘍関連抗原と結合して、このような癌細胞からNK細胞により媒介される細胞溶解またはT細胞媒介性細胞傷害性の基質へ再指向するエピトープである。乳癌抗原、卵巣癌抗原、前立腺癌抗原、子宮頚癌抗原、膵臓癌抗原、肺癌抗原、膀胱癌抗原、結腸癌抗原、精巣癌抗原、膠芽腫癌抗原、B細胞悪性腫瘍関連抗原、多発性骨髄腫関連抗原、非ホジキンリンパ腫関連抗原または慢性リンパ性白血病関連抗原である腫瘍関連抗原が特に注目される。このような使用に好適な腫瘍関連抗原としては、A33結腸直腸癌抗原;AlmqvistY2006NuclMedBiolNov33991998;B169;BAGE57784;β-カテニン2509;CA125;CD516773;CD1913948;CD20112536;CD22E53251;CD23;CD2513948;CD27123440;CD28123440;CD36317;CD40/CD154;CD4533946;CD56123440;CD79a/CD79b13948ChuPGetal2001ApplImmunohistochemMolMorphol997106;CD10313948;CDK421104;CEA癌胎児性抗原;MathelinC2006GynecolObstetFertil3463846TellezAvilaFIetal2005RevInvestClin578149;CTLA420613;EGF-R上皮細胞増殖因子受容体;AdenisAetal2003BullCancer90SpecNoS22832;ErbErbB1;ErbB3;ErbB4;ZhouHetal2002Oncogene21873240RimonEetal2004IntJOncol24132538;GAGEGAGE-1;GAGE-2;AkcakanatAetal2006IntJCancer1181238;GD2/GD3/GM2101825;gp10061627;HER-2/neu38691;ヒト乳頭腫ウイルス-E6/ヒト乳頭腫ウイルス-E7;KSA17-1A;MAGEMAGE-1;MAGE-3;57784;MART37782;MUC-1MathelinC2006GynecolObstetFertil3463846C;MUM-132331;N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ2134;p1566777;PSA前立腺特異的抗原;CraccoCMetal2005MinervaUrolNefrol5730111;PSMA;sTn88191;TNF受容体TNF-α受容体、TNF-β受容体;またはTNF-γ受容体;vanHorssenRetal2006Oncologist11397408GardnerovaMetal2000CurrDrugTargets132764;またはVEGF受容体9928が含まれる。このような使用のためのさらなる腫瘍関連抗原およびこのような抗原に対する反応性抗体を具体的に開示している刊行物としては、ADAM-9米国特許出願公開第2006/0172350号;国際公開第06/084075号;ALCAM国際公開第03/093443号;カルボキシペプチダーゼM米国特許出願公開第2006/0166291号;CD46米国特許第7,148,038号;国際公開第03/032814号;サイトケラチン8国際公開第03/024191号;エフリン受容体特に、EphA2米国特許第7,569,672号;国際公開第06/084226号;インテグリンα-V-Β-6国際公開第03/087340号;JAM-3国際公開第06/084078号;KID3国際公開第05/028498号;KID31国際公開第06/076584号;LUCA-2米国特許出願公開第2006/0172349号;国際公開第06/083852号;オンコスタチンMオンコスタチン受容体Β米国特許第7,572,896号;国際公開第06/084092号;PIPA米国特許第7,405,061号;国際公開第04/043239号;ROR1米国特許第5,843,749号;およびトランスフェリン受容体米国特許第号7,572,895号;国際公開第05/121179号が含まれる。また、特定の病原体、例えば、限定されるものではないが、ヒト免疫不全ウイルスHIV、B型肝炎ウイルスHBV、インフルエンザ、ヒトパピローマウイルスHPV、手足口病ウイルスコクサッキーウイルス、狂犬病ウイルス、単純ヘルペスウイルスHSV、および胃腸炎の病原体ロタウイルス、アデノウイルス、カリシウイルス、アストロウイルスおよびノーウォークウイルスを含むをはじめとするウイルス薬;限定されるものではないが、大腸菌、ネズミチフス菌、緑膿菌、コレラ菌、淋菌、ピロリ菌、インフルエンザ菌、志賀赤痢菌、黄色ブドウ球菌、結核菌および肺炎球菌をはじめとする細菌薬、真菌薬ならびにジアルジア属などの寄生虫に特異的な抗原も注目される。いくつかの実施形態では、本発明の分子は、鋳型分子の対応する部分に対して変更されたグリコシル化パターンまたは変更されたグリコフォームを含むように操作される。操作グリコフォームは、限定されるものではないがエフェクター機能の増強をはじめとする様々な目的に有用であり得る。操作グリコフォームは当業者に公知のいずれの方法によって作製してもよいが、例えば、操作されたもしくは変異型発現株の使用によるか、例えばDIN-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIIIGnTI11などの1以上の酵素との同時発現によるか、種々の生物もしくは種々の生物由来の細胞系統での本発明のDART商標の発現によるか、またはDART商標が発現および精製された後に糖鎖を改変することによる。操作グリコフォームを作製する方法は、当技術分野で公知であり、限定されるものではないが、UmanaetalEngineeredGlycoformsOfAnAntineuroblastomaIgG1WithOptimizedAntibodyDependentCellularCytotoxicActivityNatBiotechnol17176180DaviesetalExpressionOfGnTIIIInARecombinantAntiCD20CHOProductionCellLineExpressionOfAntibodiesWithAlteredGlycoformsLeadsToAnIncreaseInAdccThroughHigherAffinityForFcGammaRIIIBiotechnolBioeng74288294ShieldsetalLackOfFucoseOnHumanIgG1NLinkedOligosaccharideImprovesBindingToHumanFcgammaRIIIAndAntibodyDependentCellularToxicityJBiolChem2772673326740ShinkawaetalTheAbsenceOfFucoseButNotThePresenceOfGalactoseOrBisectingNAcetylglucosamineOfHumanIgG1ComplexTypeOligosaccharidesShowsTheCriticalRoleOfEnhancingAntibodyDependentCellularCytotoxicityJBiolChem27834663473;米国特許第6,602,684号USSN10/277,370;USSN10/113,929;国際公開第00/61739A1号;国際公開第01/292246A1号;国際公開02/311140A1号;国際公開第02/30954A1号;Potillegent商標技術BiowaIncニュージャージー州プリンストン;GlycoMAb商標グリコシル化操作技術GLYCARTbiotechnologyAGスイスチューリッヒそれぞれ参照によりその全内容を本明細書に組み入れるに記載されているものが挙げられる。本発明はさらに、非天然アミノ酸の組み込みによる本発明のDART商標の作製を包含する。このような方法は当業者に公知であり、例えば、タンパク質への非天然アミノ酸の組み込みを可能とする天然の生合成機構を用いるものがある例えば、参照によりその全内容を本明細書に組み入れるWangetalExpandingTheGeneticCodeChemComm1111WangetalExpandingTheGeneticCodeOfEscherichiacoliScience292498500vanHestetalProteinBasedMaterialsTowardANewLevelOfStructuralControlChemComm1918971904参照。別法としては、アミノアシル-tRNAの生合成を担う酵素の着目するものがある例えば、それぞれ参照によりその全内容を本明細書に組み入れるTangetalBiosynthesisOfAHighlyStableCoiledCoilProteinContainingHexafluoroleucineInAnEngineeredBacterialHostJAmChemSoc1231108911090KiicketalIdentificationOfAnExpandedSetOfTranslationallyActiveMethionineAnaloguesInEscherichiacoliFEBSLett5022530参照。いくつかの実施形態では、本発明は、グリコシル化部位の付加または欠失により本発明の分子のVL、VHまたはFcドメインを改変する方法を包含する。タンパク質の糖鎖を改変する方法は当技術分野で周知であり、本発明の範囲内に包含される例えば、参照によりその全内容を本明細書に組み入れる米国特許第6,218,149号;欧州特許第0359096B1号;米国特許出願公開第2002/0028486号;国際公開第03/035835号;米国特許出願公開第2003/0115614号;米国特許第6,218,149号;米国特許第6,472,511号参照;これらは全て参照によりその全内容を本明細書に組み入れる。VIII.治療目的でB7-H3モジュレーターおよび抗B7-H3抗体を使用する方法B7-H3に対するモノクローナル抗体は癌または他の疾患を有する個体に治療目的で使用することができる。抗B7-H3抗による治療は、上記のようにinvitroおよびinvivoの双方における複合体の形成を含み得る。一実施形態では、モノクローナル抗体の抗B7-H3は癌性細胞と結合してその増殖を低下させることができる。抗体は生理的例えばinvivo条件で結合を促進する濃度で投与されると理解される。別の実施形態では、B7-H3に対するモノクローナル抗体は、結腸、肺、乳房、前立腺、卵巣、膵臓、腎臓などの種々の組織の癌性細胞、および肉腫などの他の種類の癌に向けた免疫療法に使用可能である。別の実施形態では、モノクローナル抗体の抗B7-H3は単独で癌細胞に結合して、癌細胞の細胞分裂を低下させることができる。別の実施形態では、モノクローナル抗体の抗B7-H3は、癌性細胞と結合し、転移の発生を遅延させることができる。さらに別の実施形態では、癌を有する個体に抗B7-H3抗体による待期療法が施される。癌個体の待期療法には、疾患の有害な症状、または癌の進行に直接影響を及ぼさずにその疾患に施された他の処置に起因する医原性症状を治療することもしくは軽減することが含まれる。これには、疼痛、栄養補助、性的問題、精神的苦痛、鬱病、疲労、精神障害、悪心、嘔吐などの緩和のための処置が含まれる。このような状況において、抗B7-H3抗体は、個体固有の免疫応答を増強または指令する薬剤、例えばADCCを強化する薬剤とともに投与することができる。さらに別の実施形態では、抗B7-H3抗体は、放射性分子、毒素例えば、カリケアマイシン、化学療法薬分子、化学療法化合物を含有するリポソームまたはその他の小胞とコンジュゲートまたは会合され、このような処置を必要とする個体に、これらの化合物を、前記抗体により認識される抗原を含む癌細胞に標的化し、癌性細胞または罹患細胞を除去するために投与される。特定の理論に縛られるものではないが、抗B7-H3抗体はその表面にB7-H3を有する細胞によって内部移行され、そのコンジュゲートされた部分を細胞に送達して治療効果を誘導する。さらに別の実施形態では、前記抗体は、前記抗原を発現する癌の外科的除去の際に転移の発生を遅延させるためにアジュバント療法として使用することもできる。前記抗体はまた、抗原を発現する腫瘍を有する個体において、腫瘍のサイズを小さくし、手術を可能にするまたは簡単にするため、手術の際に組織を温存するため、および/または結果として起こる美観的問題を軽減するために手術前に投与することもできるネオアジュバント療法。本発明の実施においては細胞周期投与が意図される。このような実施形態では、化学療法薬は腫瘍または他の標的罹患細胞の細胞周期を所定の段階に同調させるために用いられる。その後、本発明の抗B7-H3抗体の投与単独で、または付加的治療用成分とともにを行う。別の実施形態では、抗B7-H3抗体は、2回目の処置を施す前に細胞周期を同調させ、細胞分裂を低下させるために用いられ、2回目に抗B7-H3抗体および/または付加的治療用成分の投与を行うことができる。化学療法薬としては、放射性分子、毒素細胞毒素または細胞傷害性薬剤とも呼ばれるが含まれ、癌性細胞、病原体の生存に有害な薬剤、ならびに化学療法化合物を含有するリポソームまたはその他の小胞が含まれる。好適な化学療法薬の例としては、限定されるものではないが、1-デヒドロテストステロン、5-フルオロウラシルデカルバジン、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、アクチノマイシンD、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アルキル化剤、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミフォスチン、アナストロゾール、アントラマイシンAMC、抗有糸分裂薬、シス-ジクロロジアミン白金IIDDPシスプラチン、ジアミノジクロロ白金、アントラサイクリン、抗生物質、代謝拮抗物質、アスパラギナーゼ、生BCG小胞内、ベタメタゾンリン酸ナトリウムおよび酢酸ベタメタゾン、ビカルタミド、硫酸ブレオマイシン、ブスルファン、ロイコボリンカルシウム、カリケアマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、ロムスチンCCNU、カルムスチンBSNU、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルヒチン、結合型エストロゲン、シクロホスファミド、シクロトスファミド、シタラビン、シタラビン、サイトカラシンB、サイトキサン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダクチノマイシン以前はアクチノマイシン、ダウノルビシンHCL、クエン酸ダウノルビシン、デニロイキンジフチトックス、デクスラゾキサン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ドセタキセル、ドラセトロンメシレート、ドキソルビシンHCL、ドロナビノール、大腸菌L-アスパラギナーゼ、エメチン、エポエチンアルファ、エルウィニアL-アスパラギナーゼ、エステル化エストロゲン、エストラジオール、エストラムスチンリン酸ナトリウム、臭化エチジウム、エチニルエストラジオール、エチドロン酸、エトポシドシトロボラム因子、リン酸エトポシド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルコナゾール、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、ゲムシタビンHCL、グルココルチコイド、酢酸ゴセレリン、グラミシジンD、グラニセトロンHCL、ヒドロキシ尿素、イダルビシンHCL、イフォスファミド、インターフェロンα-2b、イリノテカンHCL、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、レバミゾールHCL、リドカイン、ロムスチン、メイタンシノイド、メクロレタミンHCL、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファランHCL、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メチルテストステロン、ミトラマイシン、マイトマイシンC、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、酢酸オクトレオチド、オンダンセトロンHCL、パクリタキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ペントスタチン、ピロカルピンHCL、プリマイシン、ポリフェプロサン20カルムスチンインプラントを伴う、ポルフィマーナトリウム、プロカイン、プロカルバジンHCL、プロプラノロール、リツキシマブ、サルグラモスチン、ストレプトゾトシン、タモキシフェン、タキソール、テニポシド、テノポシド、テストラクトン、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、チオグアニン、チオテパ、トポテカンHCL、クエン酸トレミフェン、トラスツズマブ、トレチノイン、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチンおよび酒石酸ビノレルビンが挙げられる。好ましい実施形態では、細胞毒素は特に分裂中、または急速に分裂している細胞に有効であり、そのため、非分裂細胞はその有毒作用を比較的逃れる。本発明の抗体は、それらが結合する罹患細胞または癌腫細胞に内部移行され得るので、それらの有毒な活性のために内部移行させる必要のある毒素を細胞に送達するなどの治療適用に特に有用である。このような毒素の例としては、限定されるものではないが、サポリン、カリケアマイシン、オーリスタチンおよびメイタンシノイドが挙げられる。本発明の抗体またはポリペプチドは放射性分子、毒素または他の治療薬、または治療薬を含有するリポソームもしくは他の小胞に、共有結合的にまたは非共有結合的に、直接的にまたは間接的に会合コンジュゲートまたは連結を含むさせることができる。この抗体は、抗体がその標的B7-H3と結合できる限り、抗体のいずれの位置で放射性分子、毒素または化学療法薬分子と連結してもよい。毒素または化学療法薬は好適なモノクローナル抗体とともに投与前、投与後または投与中に投与するか、あるいは好適なモノクローナル抗体と直接的または間接的例えば、リンカー基により、あるいはまた適当な付着部位を有する連結分子、例えば、米国特許第5,552,391号に記載されているようなプラットフォーム分子によりのいずれかでカップリングさせることができる。本発明の毒素および化学療法薬は当技術分野で公知の方法を用いて、特定の標的化タンパク質に直接カップリングさせることもできる。例えば、薬剤と抗体がそれぞれ互いに反応することができる置換基を有する場合には、薬剤と抗体の間の直接的反応が可能である。例えば、一方の求核基アミノ基またはスルフヒドリル基などを、他方のカルボニル含有基無水基または酸ハロゲン化物基と、または良好な脱離基例えば、ハロゲン化物基を含有するアルキル基と反応させることができる。該抗体またはポリペプチドはまた化学療法薬にマイクロ担体により連結させることもできる。マイクロ担体とは、水に不溶であり、約150μm、120μmまたは100μm未満の大きさ、より一般的には約50~60μm未満、好ましくは約10μm、5、2.5、2または1.5μm未満の大きさを有する生分解性または非生分解性粒子を意味する。マイクロ担体としてはナノ担体が挙げられ、これは、約1μm未満、好ましくは約500nm未満の大きさを有するマイクロ担体である。このような粒子は、当技術分野で公知である。固相マイクロ担体は、生体適合性の天然ポリマー、合成ポリマーまたは合成コポリマーから形成される粒子であり得、これには、アガロースまたは架橋アガロースならびに当技術分野で公知の他の生分解性材料から形成されるマイクロ担体を含んでも含まなくてもよい。生分解性固相マイクロ担体は、哺乳類の生理学的条件下で分解性であるポリマー例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびそのコポリマーか、または腐食性であるポリマー例えば、ポリオルトエステル、例えば、3,9-ジエチリデン-2,4,8,10-テトラオキサスピロ[5.5]ウンデカンDETOSUなど、もしくはポリ無水物、例えばセバシン酸のポリ無水物などから形成され得る。マイクロ担体はまた、リポソーム、iscom免疫刺激性複合体などの液相例えば、油もしくは脂質系であってよく、これは、抗原を含まないコレステロールとリン脂質、アジュバント活性サポニンとの安定な複合体であるか、または水中油型もしくは油中水型エマルションに見られる液滴もしくはミセルであるただし、液相マイクロ担体は生分解性である。生分解性液相マイクロ担体には、典型的には、生分解性油例えば、スクアレンおよび植物油など、そのいくつかが当技術分野で公知であるが配合される。マイクロ担体は、典型的には、球形であるが、球状から外れたマイクロ担体もまた許容され得る例えば、楕円、棒状など。水に対してのその不溶性のために、マイクロ担体は、水および水系水性溶液から濾過可能である。本発明の抗体またはポリペプチドコンジュゲートとしては、有毒薬剤または化学療法薬にカップリングすることができる基と、抗体にカップリングすることできる基の両方を含有する二官能性リンカーを含み得る。リンカーは、結合能力の障害を回避するために抗体を薬剤から離隔するスペーサーとしての機能を果たし得る。リンカーは、切断可能であっても切断不能であってもよい。リンカーはまた、薬剤または抗体上の置換基の化学的反応性を増大させ、従って、カップリング効率を増大させる機能を果たし得る。また、化学的反応性の増大は、そうでなければ可能とはならない薬剤または薬剤上の官能基の使用を容易にすることができる。二官能性リンカーは抗体に、当技術分野で公知の手段によってカップリングさせることができる。例えば、活性なエステル部分例えば、N-ヒドロキシスクシンイミドエステルなどを含有するリンカーが、アミド結合による抗体内のリシン残基へのカップリングに使用され得る。別の例において、求核性アミンまたはヒドラジン残基を含有するリンカーを、抗体糖鎖残基の解糖酸化によって生成されるアルデヒド基にカップリングさせることができる。これらの直接的カップリング法に加え、リンカーは抗体に、アミノデキストランなどの中間担体によって間接的にカップリングさせることもできる。これらの実施形態において、連結の修飾はリシン、糖鎖または中間担体のいずれかによるものである。一実施形態において、リンカーは、タンパク質内の遊離チオール残基に部位選択的にカップリングさせる。タンパク質上のチオール基への選択的カップリングに適した部分は、当技術分野でよく知られている。例としては、ジスルフィド化合物、α-ハロカルボニルおよびα-ハロカルボキシル化合物ならびにマレイミドが挙げられる。求核性アミン官能基が945;-ハロカルボニルまたはカルボキシル基と同じ分子内に存在する場合、アミンの分子内アルキル化により環化が起こる可能性がある。この問題を防ぐ方法は当業者によく知られており、例えば、アミンと945;-ハロカルボニル官能基が、アリール基またはトランス-アルケンなどの非柔軟性基によって分離され、所望でない環化を立体化学的に不利にした分子の作製による。例えば、ジスルフィド部分によるメイタンシノイドと抗体のコンジュゲートの作製については、米国特許第6,441,163号参照。抗体-薬物コンジュゲートの作製に使用され得る切断可能なリンカーの1つは、シス-アコニット酸に基づく酸不安定性リンカーであり、これはレセプターにより媒介されるエンドサイトーシスの際に見られるエンドソームおよびリソソームなど、種々の細胞内コンパートメントの酸性環境を利用するものである。例えば、ダウノルビシンと高分子担体とのコンジュゲートの作製については、ShenWCetal;ダウノルビシンと抗黒色腫抗体とのコンジュゲートの作製については、Yangetal;ダウノルビシンと抗T細胞抗体とのコンジュゲートを作製するための同様の酸不安定性リンカーの使用については、Dillmanetal;およびペプチドスペーサーアームによる抗体へのダウノルビシンの連結については、TrouetetalACovalentLinkageBetweenDaunorubicinAndProteinsThatIsStableInSerumAndReversibleByLysosomalHydrolasesAsRequiredForALysosomotropicDrugCarrierConjugateInVitroAndInVivoStudiesProcNatlAcadSci79626629参照。本発明の抗体またはポリペプチドは当技術分野で公知の任意の方法によって放射性分子にコンジュゲート連結させることができる。抗体の放射能標識法に関する考察としては、CancerTherapywithMonoclonalAntibodiesDMGoldenbergCRCPressBocaRaton1995を参照。好適な毒素としては、タキサン、メイタンシノイド、オーリスタチン例えば、モノメチルオーリスタチンMMAE、モノメチルオーリスタチンFMMAF、オーリスタチンEAEなどが挙げられる例えば、米国特許第5,208,020号;同第5,416,064号;同第6,333,410号;同第6,340,701号;同第6,372,738号;同第6,436,931号;同第6,441,163号;同第6,596,757号;同第7,276,497号;同第7,585,857号;または同第7,851,432号に開示されているものなど、カリケアマイシン、アントラサイクリン例えば、ドキソルビシン、CC-1065類似体、ドセタキセル;カテプシンBまたはE;リシン、ゲロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、およびRNアーゼ;チウキセタンまたは有毒放射性同位元素例えば、90Y;131I、177Lu、186Re、188Re、211At、212Bi、213Bi、225Acなど。あるいは、抗体を第2の抗体にコンジュゲートさせて米国特許第4,676,980号に記載されているような抗体ヘテロコンジュゲートを形成させることもできる。架橋抗体の形成により、免疫系を、特定の細胞種、例えば、B7-H3を発現する癌または罹患細胞に標的化することができる。本発明はまた、抗B7-H3抗体またはB7-H3と結合する他の実施形態を化学療法薬と組み合わせて、または化学療法薬と連結させて用いて、癌限定されるものではないが、前立腺癌、肺癌または腎臓癌を含むを有する個体において転移の発生を遅延させる方法も提供する。いくつかの実施形態では、抗体は非ヒト抗B7-H3抗体のヒト化またはキメラ型である。さらに別の実施形態では、抗体は、その抗原を発現する癌の外科的除去の際に転移の発生を遅延させるためにアジュバント療法として使用することができる。抗体または化学療法薬と会合された抗体はまた、抗原を発現する腫瘍を有する個体において、腫瘍のサイズを小さくし、手術を可能にするまたは簡単にするため、手術の際に組織を温存するため、および/または結果として起こる美観的問題を軽減するために手術前に投与することもできるネオアジュバント療法。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のB7-H3結合組成物のいずれかはB7-H3発現癌性細胞と結合して、B7-H3を発現する癌性細胞に対して能動免疫応答を誘導することができる。場合によっては、能動免疫応答は癌性細胞の死をもたらし得る例えば、癌細胞に結合する抗体結合はアポトーシス細胞死を誘導するか、または癌性細胞の増殖を阻害し得る例えば、細胞周期の進行を遮断する。他の場合では、本明細書に記載の新規な抗体のいずれかは癌性細胞と結合し、抗体依存性細胞傷害性ADCCが抗B7-H3が結合する癌性細胞を排除することができる。よって、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを投与することを含む、免疫応答の刺激方法を提供する。BAAによっては、抗体の結合はまた細胞性免疫応答と体液性免疫応答の双方を活性化し、より多くのナチュラルキラー細胞を動員するか、または癌性細胞を破壊するために個体の免疫系をさらに活性化させるサイトカイン例えば、IL-2、IFN-γ、IL-12、TNF-α、TNF-βなどの産生を増大させることができる。さらに別の実施形態では、抗B7-H3抗体は癌性細胞と結合することができ、マクロファージまたは他の食細胞が癌性細胞にオプソニンを作用させることができる。抗B7-H3抗体またはそのフラグメントの種々の製剤を投与に使用することができる。いくつかの実施形態では、抗B7-H3抗体またはそのフラグメントはそのまま投与することができる。本発明の組成物は、薬理学的に活性な薬剤の他、当技術分野で周知であって、薬理学的に有効な物質の投与を助ける、またはその作用部位に送達するための薬学的に使用可能な製剤へと活性化合物を加工する助けをする比較的不活性な物質である賦形剤および補助剤を含む好適な薬学上許容される担体を含み得る。例えば、賦形剤は形態もしくは粘稠度を与え得るか、または希釈剤として働くことができる。好適な賦形剤としては、限定されるものではないが、分解防止剤、湿潤剤および乳化剤、浸透圧を変更するための塩、封入剤、バッファー、および皮膚浸透増強剤が挙げられる。非経口投与に好適な製剤としては、水溶性形態、例えば、水溶性塩の該活性化合物の水溶液が挙げられる。また、適当であれば、油性注射懸濁液用の該活性化合物の懸濁液を投与することができる。好適な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えば、ゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリドが挙げられる。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増大させる物質を含有してもよく、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび/またはデキストランが挙げられる。任意選択で、該懸濁液は安定化剤も含み得る。また、リポソームも細胞送達のために該薬剤をカプセル化するために使用可能である。本発明による全身投与のための医薬製剤は、経腸的、非経口または局所投与用に製剤化することができる。実際には、3種類の製剤は全て、該活性成分の全身投与を達成するために同時に使用してもよい。非経口および経口薬物送達のための賦形剤ならびに製剤は、RemingtonTheScienceAndPracticeOfPharmacy21stEditionLippincottWilliamsWilkinsPublishingに示されている。経口投与に好適な製剤としては、硬質もしくは軟質ゼラチンカプセル剤、丸剤、錠剤被覆錠を含む、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤または吸入剤およびその徐放性形態が挙げられる。一般的に、これらの薬剤は、注射例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内などによる投与のために製剤化されるが、他の投与形態例えば、経口、経粘膜などもまた使用可能である。従って、抗B7-H3抗体は、好ましくは、薬学的に許容されるビヒクル、例えば、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液などと組み合わされる。特定の投薬レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体およびその個体の病歴に依存する。一般に、少なくとも約100μg/kg体重、より好ましくは少なくとも約250μg/kg体重、さらにより好ましくは少なくとも約750μg/kg体重、さらにより好ましくは少なくとも約3mg/kg体重、さらにより好ましくは少なくとも約5mg/kg体重、さらにより好ましくは少なくとも約10mg/kg体重の用量が投与される。半減期などの経験的考慮事項は、一般的に、用量の決定に寄与する。ヒト化抗体または完全なヒト抗体などのヒト免疫系に適合する抗体は、抗体の半減期延長するため、および該抗体が宿主の免疫系に攻撃されるのを防ぐために使用することができる。投与の頻度は、治療過程で決定および調整することができ、癌性細胞の数の減少、癌性細胞の減少の維持、癌性細胞の増殖の低減、または転移の発生の遅延に基づく。あるいは、抗B7-H3抗体の徐放性持続的放出製剤が適切であり得る。徐放を達成するための種々の製剤およびデバイスは、当技術分野で公知である。一実施形態では、抗B7-H3抗体の用量は1回以上の投与を受けている個体において経験的に決定され得る。個体には、漸増的用量の抗B7-H3抗体が投与される。抗OB7-H3抗体の有効性を評価するためには、特異的癌病態のマーカーを追跡することができる。これらとしては、触診もしくは視覚的検査による腫瘍サイズの直接的測定、x線もしくは撮像法による腫瘍サイズの間接的測定;腫瘍サンプルの直接腫瘍生検および顕微鏡検査によって評価される改善;間接的腫瘍マーカー例えば、前立腺癌ではPSAの測定、痛みもしくは麻痺の減少;腫瘍に関連する発話、視力、呼吸もしくは他の障害の改善;食欲の増進;または認められた試験もしくは生存の延長によって測定される生活の質の向上が挙げられる。当業者には、用量が、個体、癌の種類、癌の病期、個体において癌が他の位置に転移し始めているかどうか、および使用された過去および併用処理によって異なることは明白である。他の製剤としては、限定されるものではないが、リポソームなどの担体をはじめとする当技術分野で公知の好適な送達形態が含まれる。例えば、MahatoetalCationicLipidBasedGeneDeliverySystemsPharmaceuticalPerspectivesPharmRes14853859参照。リポソーム製剤としては、限定されるものではないが、サイトフェクチン、多重ラメラ小胞および単層小胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、2以上の抗体が存在し得る。該抗体は、モノクローナルであってもポリクローナルであってもよい。このような組成物は、癌腫、腺癌、肉腫または腺肉腫に対して反応性のある少なくとも1種類、少なくとも2種類、少なくとも3種類、少なくとも4種類、少なくとも5種類の異なる抗体を含有し得る。抗B7-H3抗体は、限定されるものではないが、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、皮膚、甲状腺、骨、上部消化管および膵臓をはじめとする器官などの癌腫、腺癌、肉腫または腺肉腫に対して反応性のある1以上の抗体と混合してもよい。一実施形態では、種々の抗B7-H3抗体の混合物が使用される。抗体の混合物は、多くの場合、当技術分野において表されているとおり、より広範な個体集団の処置に特に有用であり得る。以上、本発明を全般的に記載してきたが、本発明は以下の実施例を参照すればより容易に理解される。なお、これらの実施例は例として示され、明示されない限り、本発明を限定することを意図するものではない。免疫組織適合性の検討腫瘍細胞/胎児始原細胞免疫誘導から49mAbのパネルを作製した。抗体の、正常な非癌性組織に対する腫瘍組織の示差的IHC染色を示す能力、抗体有効性の霊長類特にカニクイザルモデルにおける使用可能性、親和性および抗原特異性のレベル、ならびに免疫調節活性および細胞内部移行のレベルを評価した。これらのmAbのうち21をまず、MS分析および/またはB7-H3-CHO細胞に対する結合により同定した。残りの28のmAbを、B7-H3タンパク質を用いたELISAによるライブラリーの再スクリーニングによって同定した。このパネルの49のメンバーのうち46の特徴を表2に示す。IHC染色により、このパネルが、同定された抗体の多くにおいて強い腫瘍/正常組織結合差を惹起し、BIACORE商標分析により一定範囲の結合特性を示し、一定範囲の重複エピトープおよび非重複エピトープに対して反応性を示し、4Igと2IgB7-H3に対して一定範囲の特異性を示した抗体からなったことが確認された。9つの最良の候補の特徴を表3および表4に示す。表5はこれらの抗体の活性特性の概要を示す。表6に示される抗体の活性を分析したところ、それらの個々の特性が異なること、および各抗体は互いに対して有利と不利の双方に関連していたことが明らかになった表6。BRCA84D、BRCA68D、BRCA69DおよびPRCA157は、より明らかな正常組織IHC特性、より強い腫瘍/正常IHC差、中程度から強い結合BIACORE商標/IHC、カニクイザルのB7-H3に対する交差反応性、および強力なUDART商標活性を示したことから、これらの抗体種をさらなる開発のために選択した。これらの抗体は、低い親和性を示しBIACORE商標アッセイ、カニクイザルのB7-H3に対する交差反応性を全く示さなかったTES7およびOVCA2とは異なっていた。これらの抗体は、低い親和BIACORE商標アッセイ、不十分なIHC性能弱い結合および低いUDART商標活性を示したSG27とは異なっていた。これらの抗体は、低い親和性BIACORE商標アッセイ、不十分な腫瘍/正常IHC差、および低UDART商標活性を示したGB8とは異なっていた。Caki-2およびHs700T陽性対照細胞を用い、IHC検討を行ったところ、各抗体は種々の至適濃度と互いに対して種々の示差的濃度を示すことが明らかになった表7。表7に示されている至適濃度および示差的濃度を用い、ヒト組織におけるB7-H3抗体のIHC応答を決定した。副腎、肝臓、膵臓、腎臓、肺および結腸に関するこれらの分析の結果を表8A~8Bおよび表9A~9Bに示す全ての抗体が心臓組織に対しては陰性のIHC応答を示した。癌検体を用いて行ったIHC検討では、本発明のB7-H3抗体が複数の組織源において癌の同定および診断に使用可能であることが示された表10。表10において、数字はのサインの数を示す1=、2=、3=;各数字は異なる供試サンプルを指す。B7-H3抗体BRCA84Dで処理した前立腺、乳房、結腸および肺癌細胞に関しては、腫瘍細胞および間質細胞腫瘍血管系を含む腫瘍サンプル染色が存在した。いくつかの腫瘍サンプルでは、腫瘍細胞よりも間質の染色がはるかに強かった。BRCA84DmAbをより低濃度に用量設定した際、腫瘍細胞の染色の低下が示された場合があるが、やはり強い間質染色を維持していた。0.625μg/mlのBRCA84Dで染色した際には、前立腺癌細胞は3/3のIHCを示し、乳癌細胞は4/4のIHCを示し、結腸癌細胞は4/4のIHCを示し、肺癌細胞は4/4のIHCを示した。0.078μg/mlのBRCA84Dで染色した際には、前立腺癌細胞は3/4のIHCを示し、乳癌細胞は5/5のIHCを示し、結腸癌細胞は4/4のIHCを示し、肺癌細胞は3/4のIHCを示した。正常な肝臓をB7-H3抗体BRCA68Dで処理したところ、肝細胞および類洞壁細胞に染色が見られた。B7-H3抗体BRCA68Dで染色された正常な膵臓は、コラーゲン線維と上皮に多局染色を示した。B7-H3抗体BRCA68Dで処理した正常な副腎細胞は、皮質に染色を示した。0.156μg/mlのBRCA68Dで染色した際、胃癌、腎臓癌および卵巣癌の細胞は全て5/5のIHCを示した。胃癌、腎臓癌および卵巣癌組織のサンプルでさらなるIHC染色を行った。このような分析の結果を表12に示す。表11では、数字はのサインの数を示す1=、2=、3=;各数字は異なる供試サンプルを指す。まとめると、試験したmAbは全て、正常な肝臓、膵臓、結腸および肺において様々な染色強度を示した。図1Aは、0.625μg/mlおよび0.078μg/mlのBRCA84Dとともに正常な膵臓、肝臓、肺および結腸組織検体を用いて行ったIHC検討の結果を示す。BRCA84DおよびTES7を用いた場合、肝臓染色は比較的類洞壁細胞繊維芽細胞およびクップファー細胞に限定された。OVCA22は、至適濃度で類洞壁細胞の他、膜肝細胞染色を示した。しかしながら、この肝細胞の染色は示差的濃度では消失した。他のmAbは全て、至適濃度と示差的濃度の双方で膜または細胞質染色のいずれかを含む肝細胞の染色を示した。膵臓染色は主としてコラーゲン線維で見られ、また、割合は小さいが上皮腺房細胞または/および介在部細胞でも見られた。上皮の染色は示差的濃度では減少または消失した。結腸染色は陰窩上皮の頂端膜および粘膜の繊維芽細胞に比較的限定された。結腸のリンパ節には結合は見られなかった。肺はBRCA84D、BRCA68D、BRCA69DおよびGB8で上皮に極めて弱い、パッチ状の染色を示した。しかしながら、この染色は示差的濃度では消失した。肺では、TES7、OVCA22およびPRCA157の場合、どちらの濃度でも染色は見られなかった。副腎皮質染色はBRCA84Dを除くほとんど全てのmAbの至適濃度で見られた。この副腎の染色は示差的濃度のTES7およびOVCA22では明らかに消失した。心臓および腎臓は全てのmAbで明らかな染色を示さなかった図1B。これらの特性によれば、BRCA84Dが最良のmAbであると考えられ、次いで、2TES7、3OVCA22、4BRCA68D、BRCA69DおよびPRCA157の群、そして最後に5GB8の順であった。本試験に含まれた全てのmAbは、至適濃度で4種類の癌に陽性染色を示した。示差的濃度では、BRCA84Dが、前立腺癌、乳癌および結腸癌においてなお良好な染色を維持した。TES7は4種類の供試癌で良好な染色を維持した。残りのmAbは、種々の腫瘍種で様々な染色強度を示した。腫瘍サンプル染色は腫瘍細胞および間質細胞血管系を含むで見られた。いくつかの腫瘍サンプル、すなわち、BRCA84D、BRCA69D、TES7およびPRCA157は、血管系にのみ陽性染色を示した。いくつかの腫瘍は腫瘍細胞染色よりも強い間質染色を示した。これらのサンプルでmAbをより低濃度に用量設定した場合、いくつかの場合では腫瘍細胞の染色の低下または非染色を示したが、間質染色はなお維持されていた。一般に、ヒト正常組織における発現および正常組織と腫瘍組織との差次的発現に関して、mAbの順序は、最良のIHC性能から最低の性能まで次の通りである:1BRCA84D、2TES7、3OVCA22、4BRCA68D、BRCA69DおよびPRCA157の群、そして最後に5GB8。表12および図2は抗体BRCA84Dに関する結果を示す。カニクイザルB7-H3の交差反応性カニクイザルB7-H3の配列はそのヒト対応物とおよそ90の相同性を有し、カニクイザルがヒトB7-H3相互作用に関する優れたモデルであることを示唆する。B7H3候補としてのBRCA84D、BRCA68D、BRCA69D、TES7、OVCA22およびPRCA157の、カニクイザルの副腎、肝臓、腎臓、膵臓および肺、ならびに満期胎盤1例との交差反応性を評価するための検討を行い、ヒト組織で見られた染色強度および染色パターンとの交差反応性を比較した。各試験Mabの染色濃度は、Caki-2およびHs700T陽性対照細胞で決定された至適濃度とする表8参照。市販のヤギ抗ヒトB7-H3カニクイザルと交差反応するを、カニクイザル胎盤組織を染色するための陽性対照抗体として選択した。各実験ごとに対応するアイソタイプ対照を適用した。これらの検討の結果を表13に示す。カニクイザル胎盤におけるBRCA84D0.625μg/mlのIHC染色を検討したところ、脱落膜細胞の染色は見られたが、絨毛の染色は見られなかった。カニクイザルの肝臓および膵臓には染色は見られなかったが、ヒト肝臓では類洞壁細胞の染色が見られ、ヒト膵臓組織では線維および上皮染色の局在が見られた。カニクイザル胎盤におけるBRCA68D0.156μg/mlのIHC染色を検討したところ、脱落膜細胞、間葉細胞内皮および繊維芽細胞ならびに絨毛の染色が見られた。染色は、肝細胞の膜および肝繊維芽細胞の細胞質、ならびに膵臓線維および膵臓上皮の細胞質に存在した。よって、ヒトおよびカニクイザル肝臓および膵臓組織はBRCA68Dにより類似の染色パターンを示す。まとめると、BRCA84D、BRCA68D、BRCA69DおよびPRCA157は全て、カニクイザル組織において交差反応性を示した。BRCA84Dはサルの肝臓および膵臓では染色を示さず、ヒト肝臓および膵臓組織ではその染色が見られた。BRCA68DおよびBRCA69Dは、サル組織でも類似の染色強度および染色パターンを示した。BRCA68D、BRCA69DおよびPRCA157はヒト組織に対応する染色パターンを示したが、至適濃度での染色強度はヒト組織と同じではなかった。TES7およびOVCA22は至適濃度で、サル組織において染色を示さなかった。カニクイザル組織およびヒト組織におけるIHC染色の比較結果の概要を表14に示す。B7-H3mAbは複数のATCC癌細胞系統に結合する本発明の抗体は、アメリカンタイプカルチャーコレクションのコレクションに含まれる複数の癌細胞系統と結合し得ることが分かった。表15および表16に結合結果をまとめる。B7-H3mAbは致死を再指向する本発明の抗体は、癌細胞の表面に存在するB7-H3と結合する。従来の方法を用い、このような抗体を上記のようにフルオレセインで標識することができる。このような標識分子を、T細胞受容体と結合するエピトープ結合ドメインとフルオレセインと結合するエピトープ結合ドメインを備えたUDART商標分子TCR-UDART商標の存在下でインキュベートすると、それらはDART商標分子と結合し、それにより、それらを、B7-H3を発現する細胞の表面に局在させ、再指向致死に至らせることができる。A.A498腎癌細胞の再指向致死このような再指向致死を実証するために、フルオレセイン標識B7-H3抗体を前記TCR-UDART商標分子とともにインキュベートし、これらの分子の、A498腎癌細胞の細胞傷害性を媒介する能力を評価した表17。得られた結果に基づき、上位候補をRECA13、BRCA68D、BRCA69DおよびTDH6と結論付けた。抗体により媒介される用量依存的な再指向致死を調べるために、A498腎癌細胞をB7-H3に対して反応性のある種々の濃度のモノクローナル抗体とともにインキュベートした。これらの実験結果図3A~3Bは、再指向致死が用量依存的であることを示した。B.A549肺癌細胞の再指向致死このような再指向致死をさらに実証するために、フルオレセイン標識B7-H3抗体を、上記のTCR-UDART商標分子またはCD16と結合するエピトープ結合ドメインとフルオレセインと結合するエピトープ結合ドメインを備えたUDART商標分子CD16-UDART商標とともにインキュベートし、これらの分子の、A549肺癌細胞の細胞傷害性を媒介する能力を評価した表18。これらの実験の結果図3C~3Dは、再指向致死が用量依存的であったことを示す。得られた結果に基づき、上位候補をBLA8、BRCA68D、BRCA69DおよびBRCA84Dと結論付けた。C.LNcap前立腺癌細胞の再指向致死このような再指向致死をさらに実証するために、フルオレセイン標識B7-H3抗体を、上記のTCR-UDART商標分子またはCD16と結合するエピトープ結合ドメインとフルオレセインと結合するエピトープ結合ドメインを備えたUDART商標分子CD16-UDART商標とともにインキュベートし、これらの分子の、LNcap前立腺癌細胞の細胞傷害性を媒介する能力を評価した表19。得られた結果に基づき、上位候補をBRCA68D、BRCA69D、BRCA84DおよびPRCA157と結論付けた。B7-H3mAbの、可溶性B7H3-2Igおよび可溶性B7H3-4Igと結合する能力上述のように、B7-H3は4つのIgドメイン含有型B7H3-4Igと2つのIgドメイン含有型B7H3-2Igの双方で存在する。本発明の抗B7-H3抗体の、可溶性B7H3-2Ig図4Aおよび可溶性B7H3-4IgB7-H3図4Bと結合する能力を調べた。これらの抗体は広範な結合特徴を示すことが分かった。抗体PRCA123、TDH5、BLA8、BRCA68DおよびSG24は可溶性B7H3-2Igと最も強い結合を示すことが分かり、抗体TES7、LUCA50、BRCA165、OVCA22、STO9およびPA20は可溶性B7H3-2Igと最も弱い結合を示すことが分かった。抗体PRCA123、BRCA69A、BLA8およびBRCA68Dは可溶性B7H3-4Igと最も強い結合し示すことが分かり、抗体TES7、OVCA21、BRCA165およびSTO9は可溶性B7H3-4Igと最も弱い結合を示すことが分かった。捕捉されたモノクローナル抗体に対する溶液中の抗原の親和性結合溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体の間の結合親和性を実証するために、抗体を固定化IgGFc特異的Fab2フラグメントに100~200RUのレベルで捕捉した。抗原B7-H3およびB7-H34Igをこの捕捉抗体に100nMの濃度で注入し流速20μl/分で120秒間、結合を測定した。結合応答を同レベルの捕捉mAbに対してノーマライズし、m2B6抗体mIgG1対照に対する結合応答をブランクとして差し引いた。この分析の結果図5A~5S;実線;B7-H34Ig100nM;破線;B7-H3、100nMは、本発明の抗体がB7-H34Igに対して強い結合を示すことを実証する。BIACORE商標分析:固定化B7-H3に対するB7-H3mAbの滴定本発明の抗体に対するB7-H3-2IgおよびB7-H3-4Igの相対的結合親和性を実証するために、BIACORE商標分析を行った。本発明のB7-H3抗体は固定化B7-H3-2IgまたはB7-H3-4Igとの結合を可能とし、結合の滴定を経時的に評価した図6A~6I。TDH5、PRCA123、BLA8、BRCA69はB7-H3-2IgおよびB7-H3-4Igの双方に対して高い親和性を有することが分かった。しかしながら、それらのエピトープはB7-H3-4Ig分子中にほとんど閉じ込められており、少量だけが利用可能であることが分かった。OVCA22はB7-H3-2IgおよびB7-H3-4Igの双方に対して極めて低い親和性を有するが、両分子ともそのエピトープは同等に利用可能であることが分かった。しかしながら、B7-H3-4Igだけが抗体二価結合にとって十分な近接性を与え低解離速度と思われ、一方、B7-H3-2Igは一価でのみ結合し得る。TDH6はこの形式ではほとんど親和性を持たないことが分かり、2Igに対する結合は非特異的であると思われる。TES7およびPA20は低親和性のB7-H4-4Ig特異的抗体であることが分かった。TES7はおそらく低い結合速度と、PA20よりも高い解離速度を有すると思われる。BRCA84Dは、B7-H3-2IgとB7-H3-4Igの双方に複数の結合部位を持つ可能性のある中間的親和性の抗体であることが分かった。BIACORE商標分析に基づき、BRCA84Dはその特異な結合部位のために好ましい抗体であると考えられた。TES7およびPA20は高密度抗原表面に対する特異的結合の候補、および高親和性-低特異性抗体例えば、BRCA69D他の1つであると考えられた。図7は、抗体PRCA157、BRCA69D、BLA8、PA20、BRCA84D、GB8およびSG27の比較BIACORE商標分析を示し、本発明の抗B7-H3抗体が一定の範囲の結合特性を示し得ること示している。図8は、本発明の抗B7-H3抗体のいくつかの非競合的特異性を示す。この実験では、ヒトB7-H3分子を抗体BRCA84Dの存在下でインキュベートし、BIACORE商標分析を行った。およそ3分後にこの反応物に第2の抗B7-H3抗体を加えた。この第2の抗体がBRCA84Dと競合するならば、B7-H3部位が占有され、結合不能であることが見て取れる。これらの結果は、抗体BRCA68D、BRCA69DおよびPRCA157はヒトB7-H3との結合に関してBRCA84Dと競合しないことを示す。CSCおよびATCC細胞系統での抗B7-H3mAbの内部移行本発明の抗B7-H3抗体の、癌細胞との結合時の内部移行能を検討した。前立腺CSC細胞およびHs700t膵臓細胞を抗B7-H3抗体とともにインキュベートした。一次抗体と結合して内部移行された際に細胞に有毒となるサポリンコンジュゲート抗マウス二次抗体の存在下でインキュベートした後の細胞の生存率を測定した。前立腺CSC細胞図9AおよびHs700t膵臓細胞図9Bに関するこの検討の結果は、本発明の抗体の、細胞への内部移行能を実証する。ELISAによるB7-H3mAbの結合および交差遮断分析本発明の抗体の交差反応性とこのような抗体により認識されるエピトープを探るため、競合的B7-H3抗体の存在下で生じる結合の程度を測定した。この分析の結果を図10A~10Fに示し、その結果はBRCA68DがBRCA69Dと競合することを示す。TES7およびOVCA22もまた互いに競合することが分かったが、TES7はBRCA68DおよびBRCA69Dとも競合するが、OVCA22はBRCA68DおよびBRCA69Dと競合しないことが分かった。GB8はB7-H3-2Igとの結合に関してSG27と競合するが、B7-H3-4Igとの結合に関しては競合しないことが分かった。これらのデータを表20にまとめたが、B7-H3-4Igに関しては少なくとも4つの異なるエピトープすなわち、SG27により認識されるエピトープ、GB8により認識されるエピトープ、OVCA22およびTES7により認識されるエピトープ、ならびにBRCA68D、BRCA69DおよびTES7により認識されるエピトープとB7-H3-2Igに関しては少なくとも2つのエピトープすなわち、SG27およびGB8により認識されるエピトープ、ならびにBRCA68DおよびBRCA69Dにより認識されるエピトープが示される。本発明の重要な抗B7-H3抗体の属性を表21に示す。示されたそれらの正常組織および癌組織の示差的染色、それらのB7-H3-4IgならびにB7-H3-2Igとの結合能、上記のBIACORE商標分析により測定されるそれらの結合親和性、およびそれらのカニクイザルB7H3抗体との結合能に基づき、BRCA68D、BRCA69D、BRCA84DおよびPRCA157が最も好ましい抗体であると判断された。ヒト化抗B7-H3抗体モノクローナル抗体BRCA84Dは、ヒトにおける治療能を改善する抗体を作製するためにヒト化した本明細書では一般にhBRCA84Dと呼ぶ。得られたヒト化抗体本明細書ではhBRCA84D-1と呼ぶの可変軽鎖および可変重鎖の配列、ならびにそれらの個々のアミノ酸配列およびポリヌクレオチド配列を以下に示す。ヒト化BRCA84D-1可変軽鎖配列番号68:DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIKヒト化BRCA84D-1可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号69:gacatccagctgacccagtccccctccttcctgtctgcctccgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggcctcccagaacgtggacaccaacgtggcctggtatcagcagaagcctggcaaggcccctaagctgctgatctactccgcctcctaccggtactccggcgtgccttccaggttctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagcctgaggacttcgccacctactactgccagcagtacaacaactaccctttcaccttcggccagggcaccaagctggaaatcaagヒト化BRCA84D-1可変軽鎖CDR1配列番号70:KASQNVDTNVAヒト化BRCA84D-1可変軽鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号71:aaggccagtcagaatgtggatactaatgtagccヒト化BRCA84D-1可変軽鎖CDR2配列番号72:SASYRYSヒト化BRCA84D-1可変軽鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号73:tcggcatcctaccggtacagtヒト化BRCA84D-1可変軽鎖CDR3配列番号74:QQYNNYPFTヒト化BRCA84D-1可変軽鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号75:cagcaatataacaactatccattcacgヒト化BRCA84D-1可変重鎖のアミノ酸配列配列番号80:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARGRENIYYGSRLDYWGQGTTVTVSSヒト化BRCA84D-1可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列配列番号81:gaggtgcagctggtcgagtctggcggaggactggtgcagcctggcggctccctgagactgtcttgcgccgcctccggcttcaccttctccagcttcggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaagggactggaatgggtggcctacatctcctccgactcctccgccatctactacgccgacaccgtgaagggcaggttcaccatctcccgggacaacgccaagaactccctgtacctgcagatgaactccctgcgggacgaggacaccgccgtgtactactgcgccagaggccgggagaatatctactacggctcccggctggattattggggccagggcaccaccgtgaccgtgtcctctヒト化BRCA84D-1可変重鎖CDR1配列番号82:FGMHヒト化BRCA84D-1可変重鎖CDR1をコードするポリヌクレオチド配列配列番号83:tttggaatgcacヒト化BRCA84D可変重鎖CDR2配列番号84:YISSDSSAIYYADTVKヒト化BRCA84D-1可変重鎖CDR2をコードするポリヌクレオチド配列配列番号85:tacattagtagtgacagtagtgccatctactatgcagacacagtgaagヒト化BRCA84D-1可変重鎖CDR3配列番号86:GRENIYYGSRLDYヒト化BRCA84D-1可変重鎖CDR3をコードするポリヌクレオチド配列配列番号87:gggagggaaaacatttactacggtagtaggcttgactac図11A~11BはBRCA84Dおよびそのヒト化誘導体hBRCA84Dの可変軽鎖図11Aまたは可変重鎖図11Bのアミノ酸残基のアライメントを示す。ヒトB7-H3に対する親和性の改善を示すhBRCA84D種を得るために、hBRCA84D-1の軽鎖または重鎖すなわち、それぞれhBRCA84D-1VLまたはhBRCA84D-1VHをコードするポリヌクレオチドに突然変異誘発を施し、変異したhBRCA84D-1軽鎖誘導体hBRCA84D-2VL、hBRCA84D-3VL、hBRCA84D-4VL、hBRCA84D-5VLおよびhBRCA84D-6VLと、変異したhBRCA84D-1重鎖誘導体hBRCA84D-2VH、hBRCA84D-3VHおよびhBRCA84D-4VHを単離し、同定した。これらの抗体の可変軽鎖および重鎖のアミノ酸配列およびポリヌクレオチド配列を以下に示す。hBRCA84D-2VL配列番号89:DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGKAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIKhBRCA84D-2VLをコードするポリヌクレオチド配列番号90:gacatccagctgacccagtccccctccttcctgtctgcctccgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggcctcccagaacgtggacaccaacgtggcctggtatcagcagaagcctggcaaggcccctaaggcgctgatctactccgcctcctaccggtactccggcgtgccttccaggttctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagcctgaggacttcgccacctactactgccagcagtacaacaactaccctttcaccttcggccagggcaccaagctggaaatcaaghBRCA84D-3VL配列番号91:DIQLTQSPSFLSASVGDRVSVTCKASQNVDTNVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIKhBRCA84D-3VLをコードするポリヌクレオチド配列番号92:gacatccagctgacccagtccccctccttcctgtctgcctccgtgggcgacagagtgtccgtcacatgcaaggcctcccagaacgtggacaccaacgtggcctggtatcagcagaagcctggcaaggcccctaagctgctgatctactccgcctcctaccggtactccggcgtgccttccaggttctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagcctgaggacttcgccacctactactgccagcagtacaacaactaccctttcaccttcggccagggcaccaagctggaaatcaaghBRCA84D-4VL配列番号93:DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIKhBRCA84D-4VLをコードするポリヌクレオチド配列番号94:gacatccagctgacccagtccccctccttcctgtctgcctccgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggcctcccagaacgtggacaccaacgtggcctggtatcagcagaagcctggccaggcccctaagctgctgatctactccgcctcctaccggtactccggcgtgccttccaggttctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagcctgaggacttcgccacctactactgccagcagtacaacaactaccctttcaccttcggccagggcaccaagctggaaatcaaghBRCA84D-5VL配列番号95:DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGQAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIKhBRCA84D-5VLをコードするポリヌクレオチド配列番号96:gacatccagctgacccagtccccctccttcctgtctgcctccgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggcctcccagaacgtggacaccaacgtggcctggtatcagcagaagcctggccaggcccctaaggcgctgatctactccgcctcctaccggtactccggcgtgccttccaggttctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagcctgaggacttcgccacctactactgccagcagtacaacaactaccctttcaccttcggccagggcaccaagctggaaatcaaghBRCA84D-6VL配列番号97:DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAEYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIKhBRCA84D-6VLをコードするポリヌクレオチド配列番号98:gacatccagctgacccagtccccctccttcctgtctgcctccgtgggcgacagagtgaccatcacatgcaaggcctcccagaacgtggacaccaacgtggcctggtatcagcagaagcctggcaaggcccctaagctgctgatctactccgcctcctaccggtactccggcgtgccttccaggttctccggctccggctctggcaccgacttcaccctgaccatctccagcctgcagcctgaggacttcgccgagtactactgccagcagtacaacaactaccctttcaccttcggccagggcaccaagctggaaatcaaghBRCA84D-2VH配列番号99:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCGRGRENIYYGSRLDYWGQGTTVTVSShBRCA84D-2VHをコードするポリヌクレオチド配列番号100:gaggtgcagctggtcgagtctggcggaggactggtgcagcctggcggctccctgagactgtcttgcgccgcctccggcttcaccttctccagcttcggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaagggactggaatgggtggcctacatctcctccgactcctccgccatctactacgccgacaccgtgaagggcaggttcaccatctcccgggacaacgccaagaactccctgtacctgcagatgaactccctgcgggacgaggacaccgccgtgtactactgcggcagaggccgggagaatatctactacggctcccggctggattattggggccagggcaccaccgtgaccgtgtcctcthBRCA84D-3VH配列番号101:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAMYYCGRGRENIYYGSRLDYWGQGTTVTVSShBRCA84D-3VHをコードするポリヌクレオチド配列番号102:gaggtgcagctggtcgagtctggcggaggactggtgcagcctggcggctccctgagactgtcttgcgccgcctccggcttcaccttctccagcttcggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaagggactggaatgggtggcctacatctcctccgactcctccgccatctactacgccgacaccgtgaagggcaggttcaccatctcccgggacaacgccaagaactccctgtacctgcagatgaactccctgcgggacgaggacaccgccatgtactactgcggcagaggccgggagaatatctactacggctcccggctggattattggggccagggcaccaccgtgaccgtgtcctcthBRCA84D-4VH配列番号103:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRSEDTAVYYCARGRENIYYGSRLDYWGQGTTVTVSShBRCA84D-4VHをコードするポリヌクレオチド配列番号104:gaggtgcagctggtcgagtctggcggaggactggtgcagcctggcggctccctgagactgtcttgcgccgcctccggcttcaccttctccagcttcggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaagggactggaatgggtggcctacatctcctccgactcctccgccatctactacgccgacaccgtgaagggcaggttcaccatctcccgggacaacgccaagaactccctgtacctgcagatgaactccctgcggagcgaggacaccgccgtgtactactgcgccagaggccgggagaatatctactacggctcccggctggattattggggccagggcaccaccgtgaccgtgtcctct表22に供試したhBRCA84D可変軽鎖および可変重鎖突然変異を列挙する。数字は図11Aおよび11Bで用いたKabatナンバリングシステムに相当する。ヒトB7-H3に対するhBRCA84D軽鎖誘導体hBRCA84D-3VL、hBRCA84D-4VLおよびhBRCA84D-5VLの相対的結合親和性を、これらの軽鎖可変領域とキメラBRCA84D-1VH重鎖を含む抗体を形成することにより調べた図12。BRCA84D-5VLK42Q、L46Aは、試験したhBRCA84D-VLのうち最高の結合親和性を有することが分かった。従って、BRCA84D-5VLを軽鎖として用いて、hBRCA84D重鎖hBRCA84D-1VH、hBRCA84D-2VH、hBRCA84D-3VHおよびhBRCA84D-4VHのヒトB7-H3に対する相対的結合親和性を検討した図13。hBRCA84D-2VHA93Gは、試験したhBRCA84D-VHのうち最高の結合親和性を有することが分かった。キメラBRCA84D-1のアミノ酸配列およびコードポリヌクレオチド配列は次の通りである。chBRCA84D軽鎖配列番号105:DIAMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVDTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTINNVQSEDLAEYFCQQYNNYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECchBRCA84D軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列番号106:gacattgcgatgacccagtctcaaaaattcatgtccacatcagtaggagacagggtcagcgtcacctgcaaggccagtcagaatgtggatactaatgtagcctggtatcaacagaaaccagggcaatctcctaaagcactgatttactcggcatcctaccggtacagtggagtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcaacaatgtgcagtctgaagacttggcagagtatttctgtcagcaatataacaactatccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttagchBRCA84D重鎖配列番号107:DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCGRGRENIYYGSRLDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKchBRCA84D重鎖をコードするポリヌクレオチド配列番号108:gatgtgcagctggtggagtctgggggaggcttagtgcagcctggagggtcccggaaactctcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctttggaatgcactgggttcgtcaggctccagagaaggggctggagtgggtcgcatacattagtagtgacagtagtgccatctactatgcagacacagtgaagggccgattcaccatctccagagacaatcccaagaacaccctgttcctgcaaatgaccagtctaaggtctgaggacacggccatgtattactgtggaagagggagggaaaacatttactacggtagtaggcttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatga1hBRCA84D-2VLとhBRCA84D-2VHを含む抗体二試験、2キメラBRCA84D、3hBRCA84D-5VLとキメラBRCA84D-HCを含む抗体、および4hBRCA84D-5VLとhBRCA84D-2VHを含む抗体の相対的結合親和性を比較した。結果を図14に示す。ヒト化抗B7-H3抗体は異種移植片において腫瘍増殖を阻害するヒト化抗B7-H3抗体の、invivo腫瘍増殖を阻害する能力を実証するために、マウス異種移植片においてHT-1197膀胱癌細胞およびA498腎癌細胞の腫瘍増殖を調べた。ヒト化抗体hBRCA84D-2hBRCA84D-2VL鎖/hBRCA84D-2VL鎖を、置換L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396Lを有するFc領域を含むように改変した。このFc改変型hBRCA84D-2抗体を癌細胞移植から7日、14日、21日および28日後にマウスに投与した用量1μg/kg、10μg/kgまたは20μg/kg。これらの結果は、全ての用量で投与したFc改変型hBRCA84D-2抗体がHT-1197膀胱癌細胞図15およびA498腎癌細胞図16の腫瘍増殖を阻害することができたことを示す。B7-H3およびT細胞受容体に特異的な二重親和性再標的化試薬DART商標はT細胞致死の有効な再指向を媒介するB7-H3と、T細胞受容体TCR、またナチュラルキラーグループ2DNKG2D受容体に特異的な二重親和性再標的化試薬DART商標を作製した。このようなDART商標は、癌細胞の位置にこのような癌細胞がDART商標のB7-H3結合部分に結合することによる、T細胞を局在させる能力このようなT細胞がTCR結合DART商標のTCR結合部分に結合することによるまたはNK細胞を局在させる能力このようなNK細胞がNKG2D結合DART商標のNKG2D結合部分に結合することによるを有する。次に、前記の局在したT細胞またはNK細胞は、本明細書で再指向致死と呼ばれるプロセスにおいて癌細胞の致死を媒介する。B7-H3およびT細胞受容体TCRに特異的な二重親和性再標的化試薬DART商標は、hBRCA84D-2の抗B7-H3可変ドメインと抗TCR可変ドメインを有するように構築した。TCRVL×hBRCA84DVH-2-EコイルDART商標鎖配列番号109:TCRVL×hBRCA84DVH-2-EコイルDART商標鎖をコードするポリヌクレオチド配列番号110:hBRCA84DVL-2×TCRVH-Kコイル鎖配列番号111:hBRCA84DVL-2×TCRVH-Kコイル鎖をコードするポリヌクレオチド配列番号112:B7-H3およびナチュラルキラーグループ2DNKG2D受容体に特異的な二重親和性再標的化試薬DART商標は、hBRCA84D-2の抗B7-H3可変ドメインと抗TCR可変ドメインを有するように構築した。NKG2DVL×hBRCA84DVH-2-EコイルDART商標鎖配列番号113:NKG2DVL×hBRCA84DVH-2-EコイルDART商標鎖をコードするポリヌクレオチド配列番号114:hBRCA84DVL-2×NKG2DVH-Kコイル鎖配列番号115:hBRCA84DVL-2×NKG2DVH-Kコイル鎖をコードするポリヌクレオチド配列番号116:DART商標の、このような癌細胞の再指向致死を媒介する能力を実証するために、上記のhBRCA84D-2/抗TCRDART商標TDART商標、hBRCA84D-2、hBRCA84D-2Fc改変:L235V、F243L、R292P、Y300LおよびP396L、およびTCR-DART商標対照を種々の濃度で標的癌細胞SK-MES-1肺癌細胞、A498腎癌細胞、LNCaP前立腺癌細胞またはUACC-62黒色腫細胞およびエフェクターとしての休止期PBMCE:T比=30:1とともにインキュベートし、細胞傷害性を測定したLDHアッセイ。これらの検討の結果を図17A~17Dに示すが、これらの結果は、hBRCA84D-2/抗TCRDART商標TDART商標の、癌細胞の再指向致死を媒介する能力を実証する。腫瘍不含マウスにおける薬物動態特性抗B7-H3抗体Mab1を雄mCD16-/-、hCD16A_FOXN1マウスに注射し5mg/kg;IV、注射の2、15、30分後、および1、2、4、6時間後、および1、2、3、6、8、14、21、28日後に血清をアッセイいた投与前も。この抗体のT1/2は10.54日であり、Cmaxは43.493μg/mlであることが分かった。抗体の経時的濃度は二成分モデルに当てはまる二相系であることが分かった図18A~18B。2-コンパートメントモデルを5mg/kg用量から得られたパラメーターとともに用いて作成した推定薬物動態特性を図18Cに示す。マウス異種移植モデルにおける抗B7-H3抗体の、HT-1197膀胱癌細胞と結合し、腫瘍発達を抑制または阻害する能力上記の抗B7-H3抗体Mab1の、ヒトB7-H3発現膀胱癌細胞系統であるHT-1197と結合する能力を評価した。図19に示されるように、このような細胞はHER2よりもPRCA135の高い発現を示し、従って、HT-1197腫瘍の改善における本発明の抗体の治療能を評価するのに特に好適である。この結論によれば、抗B7-H3抗体hBRCA84D変異体はHT-1197細胞と結合し得ることが分かった。図20はHT-1197細胞に対するMab1抗体の結合親和性を示す。マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に8×106のHT-1197細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は、移植7日以内に、0.1、0.5、1、5または10mg/kgの用量を用い各用量につき雌マウス8匹、ivQ7D×5で開始した。対照マウス群にはセツキシマブ抗EGRF抗体を1、5または15mg/kgの用量で投与した各用量につき雌マウス8匹。また、8匹の雌マウスの全てにビヒクルかまたは10mg/kgのIgG対照を注射した。腫瘍測定は3~4日おきに行った。この試験の結果図21Aは、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて膀胱腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。図21Bは、セツキシマブを用いて得られた結果を示す。図21Aと21Bを比較すると、本発明の抗体はマウス異種移植モデルにおける膀胱腫瘍発達の抑制または阻害においてセツキシマブよりも効果的であることが示される。図21Cは試験した最大試験用量で得られた結果を比較したものである。マウス異種移植モデルにおける、抗B7-H3抗体の、HT-1376膀胱癌細胞と結合し、腫瘍発達を抑制または阻害する能力上記の抗B7-H3抗体Mab1の、ヒトB7-H3発現膀胱癌細胞系統であるHT-1376と結合する能力を評価した。図22A~22Bに示されるように、このような細胞はHER2またはPMSAよりもPRCA135の高い発現を示し、従って、HT-1376腫瘍の改善における本発明の抗体の治療能を評価するのに特に好適である。この結論によれば、抗B7-H3抗体hBRCA84D変異体はHT-1376細胞と結合し得ることが分かった。図22A~22BはHT-1376細胞に対するMab1抗体の結合親和性を示す。マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に5×106のHT-1376細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は、移植7日以内に1mg/kgの用量にてivQ7D×4で開始した。この試験の結果図23は、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて膀胱腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。抗B7-H3抗体の、癌細胞と結合する能力抗B7-H3抗体BRCA84Dの、SW480およびSW620結腸直腸癌細胞;AGS胃癌細胞;M-14およびLOXIMVI黒色腫細胞;22rv前立腺癌細胞;AsPC-1およびBxPc-3膵臓癌細胞;A498および786-0腎癌細胞と結合する能力をFACS分析により評価した。該抗体はこのような細胞の全てと結合し得ることが分かった。マウス異種移植モデルにおける抗B7-H3抗体の、胃腫瘍発達を抑制または阻害する能力マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に5×106のAGS細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は、移植7日以内に、0.5、1、5または10mg/kgの用量を用いてivQ7D×5で開始した。この試験の結果図24は、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて胃腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。マウス異種移植モデルにおける抗B7-H3抗体の、肺癌細胞と結合し、腫瘍発達を抑制または阻害する能力A549肺癌細胞をhBRCA84D、chBRCA84DおよびhBRCA840264Fc変異体の存在下でインキュベートし、これらの抗体の細胞傷害作用を測定した。この試験の結果を図25に示すが、それらの結果はこの3種類の抗体が全てA549細胞に対して細胞傷害性であったことを示す。マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に8×106のA549細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は、移植7日以内に、1mg/kgの用量を用いてivQ7D×4で開始した。この試験の結果図26は、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて肺癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。CaLu3肺癌細胞において、このような細胞が抗B7-H3抗体と結合するかどうかを判定するためにFACS分析を行った。この試験から、このような細胞がB7-H3を発現し、本発明の抗体と結合することが確認された。本発明の抗体が肺癌腫瘍発達の抑制または阻害に効果的であるかどうかを判定するために、マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に5×106のCaLu3細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は、移植7日以内に、0.5、1または5mg/kgの用量を用いてivQ7D×4で開始した。この試験の結果図27は、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて肺癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。マウス異種移植モデルにおける抗B7-H3抗体の、LOX黒色腫腫瘍発達を抑制または阻害する能力マウス8匹の雌mCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部にLOX-IMVI黒色腫癌細胞を皮下移植した後、PBS対照、IgG対照5/mg/kg、Mab10.5、1、5または10mg/kgまたはip/BIWx2をドキセタキセル5、10または20mg/kgとともに、iv/Q7D×3にて接種した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は移植7日以内に開始した。この試験の結果図28A~28Cは、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて黒色腫腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。マウス異種移植モデルにおける抗B7-H3抗体の、UACC-62黒色腫腫瘍発達を抑制または阻害する能力マウス8匹の雌mCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部にUACC-62黒色腫癌細胞を皮下移植した後、PBS対照、IgG対照5/mg/kgまたはMab10.5、1、5または10mg/kgをiv/Q7D×5で接種した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は移植7日以内に開始した。この試験の結果図29は、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて黒色腫腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。マウス異種移植モデルにおける抗B7-H3抗体の、22rv前立腺腫瘍発達を抑制または阻害する能力マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に6×106の22rv前立腺癌細胞を皮下移植した後、PBS対照、IgG10mg/kg、Mab10.5、1、5または10mg/kg;Q7D×5またはトラスツズマブ1.7または15mg/kgをiv/Q7D×4で接種した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は移植7日以内に開始した。この試験の結果図30A~30Cは、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて前立腺癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。マウス異種移植モデルにおける抗B7-H3抗体の、腎癌細胞と結合し、腫瘍発達を抑制または阻害する能力A498腎癌細胞をhBRCA84D、chBRCA84DおよびhBRCA840264Fc変異体の存在下でインキュベートし、これらの抗体の細胞傷害作用を測定した。この試験の結果を図31に示すが、それらの結果はこの3種類の抗体が全てA498細胞に対して細胞傷害性であったことを示す。A498異種移植腫瘍組織のIHC分析を、ビオチン化BRCA84D抗体20μg/ml、BRCA69D5μg/mlおよび抗Her2抗体20μg/mlを用いて行った。BRCA84D抗体は腫瘍組織の20~40と結合することが分かり弱~中程度:または;BRCA69Dは腫瘍組織の80~100と結合することが分かった中程度~強:または。BRCA84D抗体はUMUC-3腫瘍組織の40と弱い結合を示すことが分かり;BRCA69Dは該腫瘍組織の70と中程度~強い結合を示すことが分かりまたは;抗Her2抗体は該腫瘍組織の20と変動のある結合を示すことが分かった~。対照としての抗Her2抗体はSKBR-3細胞と結合することが分かり、BRCA84DおよびBRCA69DはHs700T細胞と結合可能であることが分かった。マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に5×106のA498腎癌細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は、移植7日以内に、0.1、0.5、1、5または10mg/kgの用量を用いてivQ7D×5で開始した。対照マウス群にはセツキシマブ抗EGRF抗体を1、7または15mg/kgの用量で投与した。さらなる対照マウスにはビヒクルまたは10mg/kgのIgG対照を注射した。この試験の結果図32は、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて腎癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。あるいは、マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1の側腹部に5×106の786-0腎癌細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル商標で1:1希釈したハムのF12培地200μlとして移植した。Mab1による処置は、移植7日以内に、0.1、0.5、1、5または10mg/kgの用量を用いてivQ7D×5で開始した。対照マウス群にはセツキシマブ抗EGRF抗体を1、7または15mg/kgの用量で投与した。さらなる対照マウスにはビヒクルまたは10mg/kgのIgG対照を注射した。この試験の結果図33A~33Bは、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて腎癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。Mab1の活性は、癌の化学療法に用いられている有糸分裂阻害剤であるパクリタキセルに匹敵していた。8匹の雌マウスmCD16-/-、hCD16A_FoxN1群の側腹部に786-0腎癌細胞を皮下移植した後、0.1、0.5、1、5または10mg/kgの用量にてMab1をivQ7Dで与えた。このようなマウス8匹の対照群にはパクリタキセルを2.5mg/kgの用量で、試験21日目、28日目および35日目に投与した。さらなる対照マウス各群につき雌7匹にビヒクルまたは5mg/kgのIgG対照を注射した。この試験の結果図34は、Mab1がマウス異種移植モデルにおいて腎癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。カニクイザル毒性試験Mab1の単回用量後の急性毒性特性を評価するため、Mab1の薬物動態特性を求めるため、エフェクター細胞の活性化に関連するサイトカイン誘導の時間と用量の関係を確定するため、および循環白血球例えば、NK細胞およびT細胞のレベルに対する薬物処置の効果を評価するために、カニクイザル毒性試験を行う。このような試験は6匹雄3匹と雌3匹からなる4群を含み、最初の処置から最終の剖検まで7週間にわたるように設計することができる。群1は1週目と2週目にビヒクルのみを施す対照群である。群1のうち4匹雄2匹と雌2匹は3週目に犠牲にする。群1の残りのメンバーは3週目にさらなるビヒクルを施し、7週目に犠牲にして剖検にかける。群2~4は、1週目にビヒクル、2週目にB7-H3抗体それぞれ1、30または100mg/kgを施す試験群である。各群のうち4匹雄2匹と雌2匹は3週目に犠牲にする。各群の残りのメンバーは3週目にさらなるビヒクルを施し、7週目に犠牲にして剖検にかける。注入は全て十分な耐用性があり、死亡はなく、または体重、臨床徴候もしくは血清検査値に有意な変化は見られない。循環NK細胞には用量依存的な減少が見られるが、循環B細胞およびT細胞には用量依存的な減少は見られない。この試験により、カニクイザルが適切な毒物学的種であるという確証が得られる。正常なヒト組織と接触させた場合、抗体BRCA84Dは肝臓、膵臓、結腸、肺および副腎皮質において様々な程度の染色強度を示した。肝臓染色は比較的類洞壁細胞繊維芽細胞およびクップファー細胞に限定されていた。膵臓染色は主としてコラーゲン線維で見られ、また、割合は小さいが上皮腺房細胞および/または介在部細胞でも見られた。結腸染色は陰窩上皮の頂端膜および粘膜の繊維芽細胞に比較的限定された。肺は、上皮に極めて弱い、パッチ状の染色を示した。BRCA84Dは、肝臓および膵臓の染色の欠如とカニクイザル下垂体細胞におけるB7-H3発現の可能性を除き、ヒト組織特性と比較してカニクイザル組織において良好な交差反応性を示した。本明細書に記載される全ての刊行物および特許は、個々の各刊行物または特許出願が参照によりその全内容が本明細書に組み入れられることが具体的かつ個々に示される場合と同程度に、参照により本明細書に組み入れられる。本発明をその具体的実施形態に関して記載したが、さらなる改変が可能であると理解され、本出願は、一般に本発明の原理に従い、本発明が属する技術分野で公知のまたは慣例的な実施の範囲内に入るような、また、以上に示される本質的特徴に当てはまり得るような、本開示からの逸脱を含む、本発明のいずれの変形、使用または適合も包含するものとする。"