"Aベータの第一のエピトープと特異的に結合する第一の免疫グロブリン単一可変ドメイン、および、Aベータの第二のエピトープと特異的に結合する第二の免疫グロブリン単一可変ドメイン、を含むポリペプチドであって、Aベータの前記第一および前記第二のエピトープが同一のエピトープではない、前記ポリペプチド。第一および前記第二の免疫グロブリン単一可変ドメインが各々、本質的に4つのフレームワーク領域それぞれFR1からFR4および3つの相補性決定領域それぞれCDR1からCDR3から成り、前記第一および前記第二の免疫グロブリン単一可変ドメインがリンカーペプチドによって共有結合されてあり、前記リンカーペプチドが場合によって第三の免疫グロブリンドメインを含むかまたは前記から成る、請求項1に記載のポリペプチド。第一および前記第二の免疫グロブリン単一可変ドメインが、抗体ドメイン、好ましくはVHHドメイン、より好ましくはヒト化VHHドメインである、請求項1または請求項2に記載のポリペプチド。Aベータの第一のエピトープが配列番号:3によって規定されるエピトープであり、さらにAベータの第二のエピトープが配列番号:4によって規定されるエピトープであるか、またはAベータの前記第一のエピトープが配列番号:4によって規定されるエピトープであり、さらにAベータの前記第二のエピトープが配列番号:3によって規定されるエピトープである、請求項1から3のいずれかに記載のポリペプチド。ヒトAベータペプチド配列番号:1の少なくともアミノ酸1アスパルテート、3グルタメート、19フェニルアラニン、20フェニルアラニンおよび23アスパルテートと接触する、請求項1から4のいずれかに記載のポリペプチド。TRFRET結合アッセイ競合物質としてABII002=配列番号:62およびABII050=配列番号:100を用いるで測定されるIC50値が109モルリットル以下の範囲、好ましくは5x1010モルリットルから1012モルリットルの範囲である、請求項1から5のいずれかに記載のポリペプチド。2つのAベータ結合免疫グロブリン単一可変ドメインを含み、前記免疫グロブリン単一可変ドメインが、それぞれ構造FR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4およびFR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4を有し、さらにCDR3が、配列番号:13および配列番号:16のアミノ酸配列、および、配列番号:13または配列番号:16の前記アミノ酸配列とそれぞれ比較したとき3つまで、好ましくは2つまで、より好ましくは1つのアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列、から成る群から選択され、CDR3が、配列番号:19のアミノ酸配列、および、配列番号:19の前記アミノ酸配列と比較したとき3つまで、好ましくは2つまで、より好ましくは1つのアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列、から成る群から選択されるか、またはCDR3が、配列番号:19のアミノ酸配列、および、配列番号:19の前記アミノ酸配列と比較したとき3つまで、好ましくは2つまで、より好ましくは1つのアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列、から成る群から選択され、CDR3が、配列番号:13および配列番号:16のアミノ酸配列、および、配列番号:13または配列番号:16の前記アミノ酸配列とそれぞれ比較したとき3つまで、好ましくは2つまで、より好ましくは1つのアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列、から成る群から選択される、請求項2から6のいずれかに記載のポリペプチド。第一の免疫グロブリン可変ドメインのCDR配列CDR配列および第二の免疫グロブリン可変ドメインのCDR配列CDR配列が以下のように規定される、請求項2から7のいずれかに記載のポリペプチド:-CDR1:配列番号:11-CDR2:配列番号:12-CDR3:配列番号:13-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19または-CDR1:配列番号:14-CDR2:配列番号:15-CDR3:配列番号:16-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19または-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19-CDR1:配列番号:11-CDR2:配列番号:12-CDR3:配列番号:13または-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19-CDR1:配列番号:14-CDR2:配列番号:15-CDR3:配列番号:16。第一の免疫グロブリン単一可変ドメインおよび第二の免疫グロブリン単一可変ドメインを含み、前記第一の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII035配列番号:44であり、前記第二の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII059配列番号:45であるか、または前記第一の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII059配列番号:45であり、前記第二の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII035配列番号:44である、請求項1から8のいずれかに記載のポリペプチド。さらに半減期延長成分を含む、請求項1から9のいずれかに記載のポリペプチド。半減期延長成分がポリペプチドに共有結合しており、さらに前記成分が、アルブミン結合成分例えば抗アルブミン免疫グロブリンドメイン、トランスフェリン結合成分例えば抗トランスフェリン免疫グロブリンドメイン、ポリエチレングリコール分子、組換えポリエチレングリコール分子、ヒト血清アルブミン、ヒト血清アルブミンのフラグメントおよびアルブミン結合ペプチから成る群から選択される、請求項10に記載のポリペプチド。配列番号:26から32、34から43、142、143および145から152を有するポリペプチドから成る群から選択される、請求項10および11のいずれかに記載のポリペプチド。本質的に4つのフレームワーク領域それぞれFR1からFR4および3つの相補性決定領域それぞれCDR1からCDR3から成る免疫グロブリン単一可変ドメインを含むか、または前記から成るポリペプチドであって、前記CDR配列が以下のように規定される前記ポリペプチド:-CDR1:配列番号:11-CDR2:配列番号:12-CDR3:配列番号:13または-CDR1:配列番号:14-CDR2:配列番号:15-CDR3:配列番号:16または-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19。配列番号:47から111から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するVHHドメインを含むかまたは前記から成るポリペプチド。請求項1から12のいずれかに記載の二パラトープ性Aベータ結合ポリペプチドの構築で使用される、請求項13または請求項14に記載のポリペプチド。請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドをコードする領域を含む、好ましくは単離された形態の核酸分子。請求項16に記載の核酸分子を含む発現ベクター。請求項17に記載の発現ベクターを保有する宿主細胞であって、前記宿主細胞が、請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドを発現する能力を有し、さらに前記宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、前記宿主細胞。i活性成分として、請求項1から15のいずれかに記載の1つまたは2つ以上のポリペプチド、およびii医薬的に許容できる担体、および場合によってiii希釈剤、賦形剤、アジュバントおよび/または安定化剤を含む医薬組成物。以下の工程を含む、請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドを製造する方法:-請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドの発現を許容する条件下で請求項18に記載の宿主細胞を培養する工程;-前記ポリペプチドを回収する工程;および-前記ポリペプチドを精製する工程。ヒトの疾患、異常または症状の治療、予防または緩和のための医薬として使用される、請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドまたは請求項19に記載の医薬組成物。ヒトの疾患、異常または症状の治療的処置、予防または緩和のための医薬として使用される、請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドまたは請求項19に記載の医薬組成物であって、前記疾患、異常または症状が、神経変性疾患または異常、アルツハイマー病、アルツハイマー型痴呆、乾燥性AMD、緑内障、脳アミロイドアンギオパチー、トリソミー21ダウン症候群、成人ダウン症候群、オランダ人型アミロイド症随伴遺伝性脳出血HCHWAD、レーヴィ小体随伴痴呆、前頭側頭葉委縮、緑内障、筋委縮性側索硬化症、散発性封入体筋炎および高齢ヒト対象者の不安症から成る群から選択される、前記ポリペプチドまたは医薬組成物。ヒトに静脈内または皮下注射によって投与するために調製される、請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドまたは請求項19に記載の医薬組成物。Aベータ沈着と密接に関係する疾患または異常を予防および/または治療する方法であって、請求項1から15のいずれかに記載の少なくとも1つのポリペプチドまたは請求項19に記載の医薬組成物の医薬的に活性な量を投与する工程を含む、前記方法。ELND005、カプロスピノール、NRM8499、PBT2、ポシフェン、EHT0202、CTS21166、セマガセスト、BMS708163、BMS299897、BMS433796、ELND006、ELN475516、ELN318463、ELN475513、ベガセスタート、E2012、CHF5074、ディメボリンおよびPF4494700から成る群から選択される治療薬との併用投与のために調製される、請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドまたは請求項19に記載の医薬組成物。患者への請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドまたは請求項19に記載の医薬組成物との併用投与のために調製される、ELND005、カプロスピノール、NRM8499、PBT2、ポシフェン、EHT0202、CTS21166、セマガセスト、BMS708163、BMS299897、BMS433796、ELND006、ELN475516、ELN318463、ELN475513、ベガセスタート、E2012、CHF5074、ディメボリンおよびPF4494700から成る群から選択される治療薬。i請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチドの1つまたは2つ以上、ii1つまたは2つ以上のさらに別の治療薬であって、好ましくはELND005、カプロスピノール、NRM8499、PBT2、ポシフェン、EHT0202、CTS21166、セマガセスト、BMS708163、BMS299897、BMS433796、ELND006、ELN475516、ELN318463、ELN475513、ベガセスタート、E2012、CHF5074、ディメボリンおよびPF4494700から成る群から選択される治療薬、iii医薬的に許容できる担体、並びに場合によってiv希釈剤、賦形剤、アジュバントおよび/または安定化剤を含む医薬組成物。体液中のAベータレベルを低下させるため、および好ましくは血中の可溶性Aベータレベルを低下させるための請求項1から15のいずれかに記載のポリペプチド。第一の免疫グロブリン単一可変ドメインおよび第二の免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチドであって、前記第一の免疫グロブリン可変ドメインのCDR配列CDR配列および前記第二の免疫グロブリン可変ドメインのCDR配列CDR配列が以下のように規定される、前記ポリペプチド:-CDR1:配列番号:11-CDR2:配列番号:12-CDR3:配列番号:13-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19または-CDR1:配列番号:14-CDR2:配列番号:15-CDR3:配列番号:16-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19または-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19-CDR1:配列番号:11-CDR2:配列番号:12-CDR3:配列番号:13または-CDR1:配列番号:17-CDR2:配列番号:18-CDR3:配列番号:19-CDR1:配列番号:14-CDR2:配列番号:15-CDR3:配列番号:16。第一の免疫グロブリン単一可変ドメインおよび第二の免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチドであって、前記第一の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII035配列番号:44であり、前記第二の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII059配列番号:45であるか、または前記第一の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII059配列番号:45であり、前記第二の免疫グロブリン単一可変ドメインがVHHドメインABII035配列番号:44である、前記ポリペプチド。さらに半減期延長成分を含み、前記半減期延長成分が、好ましくはアルブミン結合成分例えば抗アルブミン免疫グロブリンドメイン、トランスフェリン結合成分例えば抗トランスフェリン免疫グロブリンドメイン、ポリエチレングリコール分子、組換えポリエチレングリコール分子、ヒト血清アルブミン、ヒト血清アルブミンのフラグメントおよびアルブミン結合ペプチから成る群から選択される、請求項29または請求項30に記載のポリペプチド。配列番号:26から32、34から43、142、143および145から152のいずれかを有するポリペプチドから成る群から選択されるポリペプチド。発明の詳細な説明定義:本発明の上記および他の特徴並びに実施態様はこの更なる説明から明白となろう:a特段の指示または規定がなければ、使用される全ての用語は、当業界におけるそれらの通常の意味それらは当業者には明白であろうを有する。例えば以下の標準的な手引書Sambrooketal,MolecularCloningALaboratoryManual,VoIs13,ColdSpringHarborLaboratoryPress;Lewin,GenesIV,OxfordUniversityPress,NewYork,およびRoittetal,Immunology,GowerMedicalPublishing,London,NewYork,1989、とともに本明細書に引用した一般的な背景技術を参照できる。さらにまた、特段の指示がなければ、具体的に詳しく記載されていない全ての方法、工程、技術および操作は、それ自体公知の態様で実施できかつこれまで実施されており、したがって当業者には明白であろう。繰り返せば、標準的な手引書、上記で参照した一般的な背景技術、および本明細書に引用したさらに別の参考文献を参照できる。b特段の指示がなければ、免疫グロブリンおよび免疫グロブリン配列という用語本明細書において、それらが重鎖抗体を指す、あるいは、通常の4鎖抗体を指す場合であれは一般的な用語として用いられ、前記には完全サイズの抗体、その個々の鎖の両方とともに、それらの全ての部分、ドメインまたはフラグメント抗原結合ドメインまたはフラグメント例えばそれぞれVHHドメインまたはVHVLドメインを含むがただしこれらに限定されないを含むが含まれる。さらにまた、本明細書で用いられる配列という用語例えば免疫グロブリン配列、抗体配列、一可変ドメイン配列、VHH配列またはタンパク質配列のような用語としては、文脈がより限定された解釈を要求していない場合は、一般的には、対応するアミノ酸配列とともにそれらをコードする核酸配列またはヌクレオチド配列を含むと理解されるべきである。c本明細書で用いられるポリペプチドまたはタンパク質のドメインという用語は折り畳まれたタンパク質構造を指し、前記構造は当該タンパク質の残余とは別個にその三次元構造を維持する能力を有する。一般的には、ドメインはタンパク質の明瞭に区別される機能的特性をもたらし、多くの事例でドメインは、タンパク質および/またはドメインの残余部分の機能を低下させることなく他のタンパク質に付加することも、タンパク質から除去することも他のタンパク質に移すこともできる。d本明細書で用いられる免疫グロブリンドメインという用語は、抗体鎖例えば通常の4鎖抗体または重鎖抗体の鎖の球状領域、または本質的にそのような球状領域から成るポリペプチドを指す。免疫グロブリンドメインは、抗体分子に特徴的な免疫グロブリンのフォールディングをそれらが保持していることを特徴とする。前記フォールディングは、場合によって保存されたジスルフィド結合によって安定化された、2つのベータシート内に配置された約7つのアンチパラレルなベータ鎖の2層のサンドイッチから成る。e本明細書で用いられる免疫グロブリン可変ドメインという用語は、本質的に4つのフレームワーク領域から成る免疫グロブリンドメインを意味する。前記フレームワーク領域は、当業界および下記で、フレームワーク領域1またはFR1、フレームワーク領域2またはFR2、フレームワーク領域3またはFR3、およびフレームワーク領域4またはFR4とそれぞれ称される。これらフレームワーク領域は、3つの相補性決定領域またはCDRによって分断され、前記は当業界および下記で相補性決定領域1またはCDR1、相補性決定領域2またはCDR2、および相補性決定領域3またはCDR3とそれぞれ称される。したがって、免疫グロブリン可変ドメインの一般構造または配列は、以下のように示すことができる:FR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4。抗原結合部位を保持することにより抗原に対する特異性を抗体に付与するのはこの免疫グロブリン可変ドメインである。f本明細書で用いられる免疫グロブリン単一可変ドメインは、さらに別の可変性免疫グロブリンドメインと対を形成することなく抗原のエピトープと特異的に結合することができる免疫グロブリン可変ドメインを意味する。本発明の意味する免疫グロブリン単一可変ドメインの一例は、ドメイン抗体、例えば免疫グロブリン単一可変ドメインVHおよびVLVHドメインおよびVLドメインである。免疫グロブリン単一可変ドメインの別の例は、以下で定義する、ラクダ科の動物に由来するVHHドメインまたは単にVHHである。上記の定義に鑑みて、通常の4鎖抗体例えばIgG、IgM、IgA、IgDまたはIgE分子;当業界で公知である、またはそのような通常の4鎖抗体に由来するFabフラグメント、F2フラグメント、Fvフラグメント例えばジスルフィド連結FvまたはscFvフラグメントもしくは二重特異性抗体いずれも当業界で公知であるの抗原結合ドメインは、通常は免疫グロブリン単一可変ドメインとはみなされないであろう。なぜならば、これらの事例では、対応するエピトープと抗原の結合は、通常は1つの単一の免疫グロブリンドメインでは発生せず、一対の結合している免疫グロブリンドメイン例えば軽鎖および重鎖可変ドメインによって、すなわち免疫グロブリンドメインのVH‐VL対前記は対応する抗原のエピトープに一緒に結合するによって発生するからである。f1VHHドメインVHH、VHHドメイン、VHH抗体フラグメントおよびVHH抗体としても知られているは、最初重鎖抗体すなわち軽鎖を欠く抗体:HamersCastermanC,AtarhouchT,MuyldermansS,RobinsonG,HamersC,SongaEB,BendahmanN,HamersRNaturallyoccurringantibodiesdevoidoflightchainsNature363,446448の抗原結合免疫グロブリン可変ドメインとして記載されている。VHHドメインという用語は、これらの可変ドメインを通常の4鎖抗体に存在する重鎖可変ドメイン本明細書ではVHドメインまたはVHドメインと称されるおよび通常の4鎖抗体に存在する軽鎖可変ドメイン本明細書ではVLドメインまたはVLドメインと称されると区別するために選択された。VHHドメインは、さらに別の抗原結合ドメインの非存在下でエピトープと特異的に結合することができる通常の4鎖抗体のVHまたはVLドメインとは対照的であり、前記の場合には、エピトープはVHドメインと一緒になってVLドメインによって認識される。VHHドメインは、ただ1つの免疫グロブリンドメインによって形成される、小さく強力で効率的な抗原認識ユニットである。本発明の関係では、VHHドメイン、VHH、VHHドメイン、VHH抗体フラグメント、VHH抗体という用語は、NanobodyおよびNanobodyドメインNanobodyはAblynxNV社Ghent,Belgiumの商標であると同様に互換的に用いられ、免疫グロブリン単一可変ドメイン構造FR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4を有し、第二の免疫グロブリン可変ドメインの存在を必要とせずにエピトープと特異的に結合するの代表であり、例えばWO2009109635図1で規定されているとおり、いわゆる認証残基によってVHドメインとは区別される。VHHドメインのアミノ酸残基は、KabatらSequenceofproteinsofimmunologicalinterest,USPublicHealthServices,NIHBethesda,MD,PublicationNo91によって与えられ、例えば文献RiechmannandMuyldermans,JImmunolMethods231,2538,1999の図2に示されるようにラクダ科動物のVHHドメインに適用されるVHドメインのための一般的な番号付けにしたがって番号が付与される。この番号付けにしたがえば、-FR1は1-30位のアミノ酸残基を含み、-CDR1は31-35位のアミノ酸残基を含み、-FR2は36-49位のアミノ酸残基を含み、-CDR2は50-65位のアミノ酸残基を含み、-FR3は66-94位のアミノ酸残基を含み、-CDR3は95-102位のアミノ酸残基を含み、-FR4は103-113位のアミノ酸残基を含む。しかしながら、VHドメインおよびVHHドメインに関する分野では周知のように、CDRの各々に存在するアミノ酸残基の総数は変動することがあり、Kabatの番号付けによって示されたアミノ酸残基の総数と一致しないことがあるすなわち、Kabatの番号付けの1つまたは2つ以上の位置が実際の配列によって埋められないことがあり、実際の配列がKabatの番号付けによって許容される数よりも多いアミノ酸残基を含むこともあるということは留意されるべきである。これは、一般的には、Kabatの番号付けは、実際の配列のアミノ酸残基の実際の番号付けと一致することもあり、一致しないこともあることを意味している。VHドメインのアミノ酸残基に番号を付与するまた別の方法前記方法はまた類似の態様でVHHドメインに適用できるも当業界では公知である。しかしながら、本明細書、特許請求の範囲および図では、特段の指示がなければ、Kabatにより与えられ、さらに上記に記載したようにVHHドメインに適用された番号付けにしたがうであろう。VHHドメインのアミノ酸残基総数は通常は110から120、しばしば112から115の範囲にある。しかしながら、それよりも短い配列および長い配列もまた本明細書に記載した目的に適切であることは留意されるべきである。VHHドメインおよび前記を含むポリペプチドの更なる特徴および機能的特性は以下ように要約できる:VHHドメイン前記は軽鎖可変ドメインの非存在下でさらに軽鎖可変ドメインの一切の相互作用の非存在下で本質的に抗原と機能的に結合するように設計されているは、単一の比較的小さく機能的な抗原結合性構造ユニット、ドメインまたはポリペプチドとして機能し得る。このことは、VHHドメインを通常の4鎖抗体のVHおよびVLドメインと峻別する。後者は、一般的には単一の抗原結合タンパク質としてまたは免疫グロブリン単一可変ドメインとして単独で実際に利用するにはふさわしくなく、何らかの形態または別の形態で合体させて、機能的な抗原結合ユニットを提供する必要がある例えば通常の抗体フラグメント例えばFabフラグメントのように、或いはVLドメインと共有結合させたVHドメインから成るscFvのように。これらの固有の特性のために、VHHドメインの使用は単独であれより大きなポリペプチドの部分としてであれ、通常のVHおよびVLドメイン、scFv、または通常の抗体フラグメント例えばFabフラグメントまたはF2フラグメントの使用を凌駕する、以下のような多数の顕著な利点を提供する:-抗原との高い親和性および高い特異性での結合のためにただ1つのドメインが要求されるだけで、したがって2つの別々のドメインが存在する必要もなくこれら2つのドメインが正しい空間的コンフォーメーションおよび立体配置で存在することを担保する必要もないすなわちscFvの場合のように特別に設計されたリンカーの使用を介する必要がない;-VHHドメインは単一遺伝子から発現ができ、翻訳後フォールディングまたは改変を必要としない;-VHHドメインは、本明細書でさらに考察するとおり多重特異性および多価形式に向けて容易に操作できる;-VHHドメインは高度に可溶性で、凝集傾向をもたないWardらNature341544546,1989が記載したマウス由来抗原結合ドメインの場合のように;-VHHドメインは、熱、pH、プロテアーゼおよび他の変性剤または変性条件に高度に安定であり、したがって冷蔵装置を使用することなく、輸送経費、時間および環境的節約無しに調製、保存または輸送が可能である;-VHHドメインは生産に必要な規模においてさえ調製が容易で比較的安価である。例えば、VHHドメインおよび前記を含むポリペプチドは、例えば下記でさらに述べるように細菌の発酵を用いて製造でき、例えば通常の抗体フラグメントの場合のように哺乳動物の発現系の使用を必要としない;-VHHドメインは、通常の4鎖抗体およびその抗原結合フラグメントと比較して相対的に小さく約15kDa、または通常のIgGの110、したがって通常の4鎖抗体およびその抗原結合フラグメントよりもより強い組織への浸透性を示し、さらにより高用量で投与することができ;-VHHはとりわけ通常のVHドメインと比較してVHHの伸長CDR3ループのゆえにいわゆる腔結合特性を示すことができ、したがってまた通常の4鎖抗体およびその抗原結合フラグメントが接近できない標的およびエピトープに接近することができる。特異的抗原またはエピトープに結合するVHHドメインを入手する方法は、以前に例えばWO2006040153およびWO2006122786で述べられている。それらにもまた詳細に記載されているように、本来のVHH配列のアミノ酸配列中の1つまたは2つ以上のアミノ酸残基を、ヒト由来の通常の4鎖抗体のVHドメイン中の対応する位置に存在する1つまたは2つ以上のアミノ酸残基で置き換えることによって、ラクダ科の動物に由来するVHHドメインをヒト化することができる。ヒト化VHHドメインは1つまたは2つ以上の完全にヒトのフレームワーク領域配列を含むことができ、さらにより具体的な実施態様では、DP29、DP47、DP51またはその部分前記は場合によってJH配列例えばJH5と結合されるに由来するヒトフレームワーク領域配列を含むことができる。f2ドメイン抗体Dab、DomainAntibodyおよびdAbとしても知られているDomainAntibodyおよびdAbはGlaxoSmithKlineのグループ会社が商標として用いているは、例えば以下に記載されている:Ward,ES,etalBindingactivitiesofarepertoireofsingleimmunoglobulinvariabledomainssecretedfromEscherichiacoliNature341544546;Holt,LJetalDomainantibodiesproteinsfortherapyTRENDSinBiotechnology21484490;およびWO2003002609。ドメイン抗体は非ラクダ科哺乳動物のVHまたはVLドメイン特にヒトの4鎖抗体と本質的に一致する。単一の抗原結合ドメインとしてすなわちそれぞれVLまたはVHドメインと対を形成することなくエピトープと結合するために、例えばヒトの単一VHまたはVLドメイン配列のライブラリーを用いることによって、そのような抗原結合特性のために特別な選別が要求される。VHHのように、ドメイン抗体は約13から約16kDaの分子量を有し、完全にヒトの配列から誘導される場合は、ヒトでの治療的使用のためにヒト化することを要しない。VHHドメインの場合のように、それらは原核細胞発現系でもまた良好に発現され、全体的製造コストの顕著な削減を提供する。ドメイン抗体は、VHHドメインと同様に、1つまたは2つ以上のCDRのアミノ酸配列に1つまたは2つ以上の変更を導入することによって親和性成熟に付すことができる前記変更は、得られた免疫グロブリン単一可変ドメインのその対応する抗原に対する親和性を対応する親分子と比較して改善する。本発明の親和性成熟免疫グロブリン単一可変ドメイン分子は、当業界で公知の方法によって調製することができる。前記方法は例えば以下に記載されている:Marksetal,1992,Biotechnology10779783;またはBarbas,etal,1994,ProcNatAcadSci,USA913809‐3813;Shieretal,1995,Gene169147155;Yeltonetal,1995,Immunol15519942004;Jacksonetal,1995,JImmunol15433109;およびHawkinsetal,1992,JMoIBiol226889896;KSJohnsonandREHawkins,Affinitymaturationofantibodiesusingphagedisplay,OxfordUniversityPress1996。f3さらにまた、上記に記載したCDRの1つまたは2つ以上を他の土台ヒト土台または非免疫グロブリン土台を含むがただしこれらに限定されないに移植することもまた可能であることは当業者には明白であろう。適切な土台およびそのようなCDR移植技術は当業者には公知である。gエピトープおよび抗原性決定基前記は互換的に用いることができるという用語は、抗原結合分子例えば通常の抗体または本発明のポリペプチドによって認識される、より具体的には前記分子の抗原結合部位によって認識される巨大分子例えばポリペプチドの部分を指す。エピトープは免疫グロブリンのための最小結合部位を規定し、したがって免疫グロブリンの特異性の標的を示す。エピトープを認識する、抗原結合分子例えば通常の抗体または本発明のポリペプチドの部分はパラトープと呼ばれる。h本明細書で用いられる二パラトープ性抗原結合分子または二パラトープ性ポリペプチドという用語は、本明細書に規定する第一の免疫グロブリン単一可変ドメインおよび第二の免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチドを意味し、ここで、これら2つの可変ドメインは1つの抗原の2つの別個のエピトープと結合することができ、エピトープは、通常は一特異的免疫グロブリン例えば通常の抗体または1つの免疫グロブリン単一可変ドメインによって同時に結合されることはない。本発明の二パラトープ性ポリペプチドは複数の可変ドメインを含み、それら可変ドメインは異なるエピトープ特異性を有し、さらに同じエピトープと結合する相互に相補的な可変ドメイン対を含まない。したがってそれらはAベータとの結合について互いに競合しない。i一定のエピトープ、抗原またはタンパク質または少なくともその1つの部分、フラグメントまたはエピトープと結合または特異的に結合することができ、それらに対して親和性を有しおよび/または特異性を有するポリペプチド例えば免疫グロブリン、抗体、免疫グロブリン単一可変ドメイン、本発明のポリペプチドまたは一般的に抗原結合分子またはそのフラグメントは、前記エピトープ、抗原もしくはタンパク質に対するまたは対抗すると称されるか、またはそのようなエピトープ、抗原もしくはタンパク質に対する結合分子である。k一般的には、特異性という用語は、特定の抗原結合分子または抗原結合タンパク質例えば免疫グロブリン、抗体、免疫グロブリン単一可変ドメインまたは本発明のポリペプチドが結合することができる、異なるタイプの抗原またはエピトープの数に該当する。抗原結合タンパク質の特異性は、その親和性またはアビジチーを基準にして決定することができる。親和性抗原と抗原結合タンパク質との解離の平衡定数KDによって表されるは、エピトープと抗原結合タンパク質の抗原結合部位との間の結合強度の測定値であり、KD値が低ければ低いほど、エピトープと抗原結合分子との間の結合強度は強い或いは親和性はまた親和性定数KAとして表すことができ、KAは1KDである。当業者には明瞭であろうが例えば本明細書の更なる開示を基にして、親和性は、問題の具体的な抗原に応じて、それ自体公知の態様で決定することができる。アビジチーは、抗原結合分子例えば免疫グロブリン、抗体、免疫グロブリン単一可変ドメインまたは本発明のポリペプチドと関連する抗原との間の結合強度の測定値である。アビジチーは、エピトープと抗原結合タンパク質のその抗原結合部位との間の親和性および抗原結合分子に存在する関連結合部位の数の両方に関係する。典型的には、抗原結合タンパク質例えば本発明のポリペプチドは、10E5から10E14モルリットルM以下、好ましくは10E7から10E14モルリットルM以下、より好ましくは10E8から10E14モルリットル、さらに好ましくは10E11から10E13の解離定数KD実施例97に記載するようにKinexaアッセイで測定で、および/または少なくとも10E7ME1、好ましくは少なくとも10E8ME1、より好ましくは少なくとも10E9ME1、例えば少なくとも10E11ME1の結合定数KAで結合するであろう。10E4Mを超えるいずれのKD値も、一般的には非特異的結合とみなされる。好ましくは、本発明のポリペプチドは、500nM未満、好ましくは200nM未満、より好ましくは10nM未満、例えば500pM未満のKDで所望の抗原と結合するであろう。抗原結合タンパク質と抗原またはエピトープとの特異的結合は、それ自体公知の任意の適切な態様で決定することができる。前記には、例えば本明細書に記載したアッセイ、スキャチャード解析および/または競合結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイRIA、酵素免疫アッセイEIAおよびサンドイッチ競合アッセイ、並びに前記のそれ自体当業界で公知の種々の変型が含まれる。lアミノ酸残基は、標準的な三文字または一文字アミノ酸コード当業界で一般的に公知で認容されているにしたがって示されるであろう。2つのアミノ酸配列と比較するとき、アミノ酸の相違という用語は、第二の配列と比較して参照配列の位置のアミノ酸残基の表示の数の挿入、欠失または置換を指す。置換の場合には、そのような置換は好ましくは保存的アミノ酸置換であろう保存的アミノ酸置換は、あるアミノ酸残基が類似の化学的構造の別のアミノ酸残基により置換されることを意味し、前記は当該ポリペプチドの機能、活性または他の生物学的特性にほとんどまたは本質的に影響を与えない。そのような保存的アミノ酸置換は当業界で例えばWO9849185で周知であり、この場合、保存的アミノ酸置換は、好ましくは下記グループi-v内のあるアミノ酸が同じグループ内の別のアミノ酸残基によって置換される置換である:i小さな脂肪族非極性またはわずかに極性の残基:Ala、Ser、Thr、ProおよびGIy;ii極性、陰性荷電残基およびそれらの非荷電アミド:Asp、Asn、GIuおよびGin;iii極性、陽性荷電残基:His、Arg、Lys;iv大きな脂肪族非極性残基:Met、Leu、Ile、VaIおよびCys;並びにv芳香族残基:Phe、TyrおよびTrp。特に好ましい保存的アミノ酸置換は以下のとおりである:AlaからGIyまたはSerに;ArgからLysに;AsnからGinまたはHisに;AspからGIuに;CysからSerに;GinからAsnに;GIuからAspに;GIyからAlaまたProに;HisからAsnまたはGinに;IleからLeuまたはVaIに;LeuからIleまたはVaIに;LysからArg、GlnまたはGIuに;MetからLeu、TyrまたはIleに;PheからMet、LeuまたはTyrに;SerからThrに;ThrからSerに;TrpからTyrに;TyrからTrpまたはPheに;VaIからIleまたはLeuに。m核酸またはポリペプチド分子は、例えばその天然の供給源および/または核酸またはポリペプチドを入手した反応媒体または培養媒体と比較して、前記供給源または媒体中で前記核酸またはポリペプチドが通常結合している少なくとも1つの他の成分例えば別の核酸、別のタンパク質/ポリペプチド、別の生物学的成分もしくは巨大分子、または少なくとも1つの夾雑物質、不純物もしくは微量成分から分離されているとき、本質的に単離されている単離された形態にあるとみなされる。特に、核酸またはポリペプチド分子は、それらが少なくとも2倍、特に少なくとも10倍、より具体的には少なくとも100倍、さらに1000倍以上精製されてあるとき本質的に単離されているとみなされる。本質的に単離された形態である核酸またはポリペプチド分子は、適切な技術例えば適切なクロマトグラフィー技術、例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いて決定したとき好ましくは本質的に均質である。n例えば2つの免疫グロブリン単一可変ドメイン配列間の配列同一性は、これら2つの配列間で同一であるアミノ酸のパーセンテージを示す。前記は、WO08020079の49および50ページのパラグラフfに記載されているように計算または決定することができる。配列類似性は、同一であるかまたは保存的アミノ酸置換であるアミノ酸のパーセンテージを示す。標的特異性:本発明のポリペプチドは、それらが1つまたは2つ以上のAベータ分子と、より厳密にはAベータ分子内のエピトープと特異的に結合する免疫グロブリン単一可変ドメインを含むという点でAベータに対して特異性を有する。Aベータは例えばヒトの体内で種々の形態を採ることができ、さらに種々の形態で、例えば、モノマー形、オリゴマー形およびマルチマー形、可溶性および不溶性凝集物形、原線維形、プロトフィブリル形、アミロイド斑およびアミロイド沈着の形態で存在でき、前記は中枢神経系、骨格筋、血小板、血管系、膵臓、腎臓、脾臓、心臓、肝臓、精巣、大動脈、肺臓、腸,皮膚、副腎、唾液腺および甲状腺に存在するRoheretalAlzheimer’sDementia5p1829。本発明のポリペプチドが、Aベータの存在し得る任意の形態、特に生物学的および/または治療的観点からもっとも関係の深い形態と結合することは本発明の範囲内である。本発明のポリペプチドは、例えば以下の種々の長さのAベータペプチド分子と結合することができる:Aベータ、Aベータ、Aベータ、Aベータ、Aベータなど。本発明のポリペプチドの結合は、N末端、C末端またはその間のどこかで発生し得る。さらにまた、本発明は種によるAベータ形に限定されない。したがって、本発明のポリペプチドは、治療目的を意図するならば好ましくはヒトAベータ配列番号:1と結合し得る。しかしながら、他の温血動物または好ましくは哺乳動物のAベータ形とのポリペプチド結合も同様に本発明の範囲内である。1つの種のAベータ形と結合する本発明のポリペプチドは、1つまたは2つ以上の他の種のAベータと交差反応し得る。例えば、ヒトAベータと結合する本発明のポリペプチドは、他の霊長類の1つまたは2つ以上の種由来のAベータ、および/または疾患の動物モデル、特にAベータ関連疾患および異常のための動物モデルでしばしば用いられる動物例えばマウス配列番号:2参照、ラット、ウサギ、ブタまたはイヌの1つまたは2つ以上の種例えば本明細書で述べた種および動物由来のAベータとの交差活性を示すことも示さないこともある。そのような交差反応性を示す本発明のポリペプチドは、研究および/または薬剤開発の観点から利点を有し得る。なぜならば交差反応性は、重要な疾患モデル例えばマウスまたはラットで本発明のポリペプチドとヒトAベータとの結合を試験することを可能にするからである。さらにまた、本発明は、本発明のポリペプチドが向けられている、Aベータの特定の抗原決定基、エピトープ、部分、ドメイン、サブユニットまたはコンフォーメーション適応可能な場合にはに限定されず、範囲を制限されることもない。本発明のポリペプチドが標的とし得るAベータの好ましいエピトープのいくつかは免疫療法、特にADの受動免疫療法に用いられるエピトープである。例えば文献WekslerM,ImmunityandAgeing1,2,2004および本明細で参照した背景技術で述べられているように、Aベータには3つの主要なエピトープが存在することが知られている。すなわち、N末端エピトープアミノ酸1-16:DAEFRHDSGYEVHHQK、配列番号:3、中心部エピトープアミノ酸16-28:KLVFFAEDVGSNK、配列番号:4およびC末端エピトープアミノ酸28-42:KGAIIGLMVGGVVIA、配列番号:5である。本発明のポリペプチドはこれらのエピトープのいずれかを標的とし得る。特に好ましいものは、少なくとも2つの免疫グロブリン単一可変ドメインを含む本発明のポリペプチドであり、ここで1つの免疫グロブリン単一可変ドメインはN末端エピトープと結合し、第二の免疫グロブリン単一可変ドメインは中心部エピトープと結合する。本発明のポリペプチド:そのもっとも広い意味で、本発明は、Aベータ関連疾患、異常または症状、および特にADの予防、治療、緩和および/または診断のために医薬的に活性な新規な薬剤を提供する。本発明の薬剤は、新規な種類のAベータ結合分子、すなわち抗原Aベータと異なるエピトープで結合する2つまたは3つ以上の免疫グロブリン単一可変ドメインを含む二パラトープ性ポリペプチドに属する。より具体的には、本発明のそのようなポリペプチドは本質的に、iAベータの第一のエピトープと特異的に結合する第一の免疫グロブリン単一可変ドメイン、およびiiAベータの第二のエピトープと特異的に結合する第二の免疫グロブリン単一可変ドメインから成り、ここでAベータの第一のエピトープおよびAベータの第二のエピトープは同一のエピトープではない。換言すれば、本発明のそのようなポリペプチドは、Aベータに存在する少なくとも2つの異なるエピトープに対抗する2つまたは3つ以上の免疫グロブリン単一可変ドメインを含むか、または本質的に前記から成り、ここで前記免疫グロブリン単一可変ドメインは、それらがAベータと同時に結合することができる態様で互いに連結される。この意味では、本発明のポリペプチドはまた、全ポリペプチドがAベータに対して少なくとも2つの結合部位を含むという点で、多価免疫グロブリン構築物、特に多価免疫グロブリン単一可変ドメイン構築物とみなすことができる。本発明のポリペプチドは少なくとも2つの抗Aベータ免疫グロブリン単一可変ドメインを含み、ここで前記2つの免疫グロブリン単一可変ドメインはAベータ分子内の異なるエピトープに対抗する。したがって、これら2つの免疫グロブリン単一可変ドメインは異なるエピトープ特異性、したがって異なるCDR配列を有するであろう。この理由のために、2つの免疫グロブリン単一可変ドメインが2つの異なるパラトープを含むとき、本発明のポリペプチドは本明細書ではまた、二パラトープ性ポリペプチド、または二パラトープ性ドメイン抗体構築物免疫グロブリン単一可変ドメインがドメイン抗体から成るかまたは本質的に前記から成る場合、または二パラトープ性ナノボディ構築物もしくは二パラトープ性VHHドメイン構築物もしくは二パラトープ性VHH構築物免疫グロブリン単一可変ドメインがナノボディまたはVHHドメインから成るかまたは本質的に前記から成る場合とそれぞれ呼ばれるであろう。本発明の具体的な実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドが3つ以上の抗Aベータ免疫グロブリン単一可変ドメインすなわち3つ、4つまたはそれより多い抗Aベータ免疫グロブリン単一可変ドメインを含む場合には、少なくとも2つの抗Aベータ免疫グロブリン単一可変ドメインはAベータ分子内の異なるエピトープに対抗し、ここでさらに別の免疫グロブリン単一可変ドメインのいずれもこれら2つの異なるエピトープのいずれかと結合するか、および/またはAベータ分子内に存在するさらに別のエピトープと結合することができる。本発明の別の具体的な実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドは、上記に記載した2つの抗Aベータ免疫グロブリン単一可変ドメインに加えて、任意の他の追加成分、例えばリンカー下記でさらに詳細に記述および/または追加のタンパク質ドメイン下記でさらに詳細に記述を、そのAベータとの結合がそのような追加の成分によって妨げられないかぎり含む。本発明のポリペプチドはさらに別に改変例えばグリコシル残基、改変アミノ酸側鎖などを含むことができる。先に説明したように、本発明の1つのポリペプチド内の2つの免疫グロブリン単一可変ドメインはAベータの異なるエピトープと結合する。これは以下の態様の1つで達成され得る。すなわち、2つの免疫グロブリン単一可変ドメインは1つの同じAベータ分子内の2つのエピトープと結合するか分子内結合、或いはそれらは、2つの別個のAベータ分子内に存在するエピトープと結合することができるすなわち1つの免疫グロブリン単一可変ドメインは1つのAベータ分子上の1つのエピトープと結合し、一方、他の免疫グロブリン単一可変ドメインは別のAベータ分子上の他のエピトープと結合し、したがって2つのAベータ分子を架橋分子間結合する。好ましい実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドは1つの同じAベータ分子内の2つのエピトープと結合し、したがって架橋は発生せず、さらに本発明のポリペプチド‐Aベータ複合体は1:1の相対量で形成されるであろう。したがって、分子間結合優勢よりも分子内結合優勢が好ましいが、小さな割合の分子間結合も生じ得ることは理解されよう。分子内結合と分子間結合との識別は、バイアコアまたはサイズ排除クロマトグラフィーアッセイ以下に記載されている:Santoraetal,AnalBiochem,299119129下記実施例82を参照を用いて実施できる。しかしながら、別々のAベータの分子間結合を介して機能するポリペプチドもまた本発明の範囲内であることは留意されるべきである。本発明の別の好ましい実施態様では、本発明のポリペプチドに含まれる第一および第二の抗Aベータ免疫グロブリン単一可変ドメインは、各々本質的に4つのフレームワーク領域それぞれFR1からFR4および3つの相補性決定領域それぞれCDR1からCDR3から成る。本発明のポリペプチドでは、前記第一および第二の免疫グロブリン単一可変ドメインは共有結合されてあり、場合によって下記に記載するようにリンカーペプチドによって共有結合されてあり、この場合、そのようなリンカーは、少なくとも2つの免疫グロブリン単一可変ドメインと対応するAベータエピトープとの最適な結合を立体的に可能にする。ヒトでの医薬的使用のためには、本発明のポリペプチドは好ましくはヒトAベータに対抗し、一方、獣医の目的のためには本発明のポリペプチドは好ましくは処置されるべき種のAベータに対抗することは当業者には明白であろう。さらに、ヒトでの治療薬として用いられるとき、本発明のポリペプチドに含まれる免疫グロブリン単一可変ドメインは好ましくはヒト化された免疫グロブリン単一可変ドメインであることもまた当業者には明白であろう。本発明にしたがえば、2つまたは3つ以上の免疫グロブリン単一可変ドメインは、互いに独立してドメイン抗体すなわち上記に記載のVLまたはVH抗体ドメイン、および/または上記に記載のVHHドメイン、および/または免疫グロブリン単一可変ドメインの任意の他の種類であり得るが、ただし、これらの免疫グロブリン単一可変ドメインが、例えば通常抗体のVL‐VHドメインの場合のように同じエピトープと一緒に結合する相互に相補的な可変ドメイン対を形成せずに、異なるエピトープとそれぞれ別個に結合することによってすなわち上記に規定した二パラトープ性抗原結合分子のように抗原すなわちAベータと結合することを条件とする。本発明の好ましい実施態様にしたがえば、第一および第二の免疫グロブリン単一可変ドメインは、本質的にドメイン抗体配列または上記に記載のVHHドメイン配列から成る。特に好ましい実施態様にしたがえば、第一および第二の免疫グロブリン単一可変ドメインは、本質的にVHHドメイン配列から成る。したがって、本発明は、本明細書および特に実験部分では、Aベータの2つの異なるエピトープと結合する2つの場合によってヒト化された抗AベータVHHドメイン配列VHH、すなわち二パラトープ性VHHドメイン構築物に関してより詳細に記述されるであろう。しかしながら、本明細書の教示は、他の抗Aベータ免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチド例えばドメイン抗体にも同様に適用できることは当業者には明白であろう。本発明のポリペプチドは、従来の抗体の有益な特徴例えば低い毒性および高い特異性を有するだけでなく、それらはさらに別の特性もまた示す。本発明のポリペプチドはより可溶性であり、このことは従来の抗体と比較してより高濃度でそれらを保存および/または投与できることを意味する。それらは室温で安定であり、このことは、冷蔵設備を使用することなく、輸送経費、時間および環境的節約無しにそれらを製造、保存および/または輸送できることを意味する。本発明のポリペプチドはまた極端なpHで長時間の安定性を示し、このことは経口投与によるデリバリーにそれらが適していることを意味する。さらにまた、本発明のポリペプチドは、古典的抗体に存在するFc部分を含むことを必要とせず、したがってFcエフェクター機能によって引き起こされる副作用例えば補体依存細胞傷害CDCまたは抗体依存細胞性細胞傷害ADCCを回避することができる。抗Aベータ受動免疫で用いるとき、通常抗体Fc部分を有するは、ヒトおよび動物モデルで観察される微細出血の誘発の原因となると思われる前記は脳血管のAベータ沈着脳アミロイドアンギオパチーを標的とすることと密接に関係し、ADCCおよび/またはCDCによる微細出血をもたらすWilcock,DM,Colton,CA,CNSNeurolDisordDrugTargetsVol85064。本発明の別の実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドに存在する少なくとも2つの免疫グロブリン単一可変ドメインは、互いに直接連結されるかすなわちリンカーを使用しないまたはリンカーを介して連結され得る。リンカーは好ましくはリンカーペプチドであり、さらに本発明にしたがえば、少なくとも2つの異なる免疫グロブリン単一可変ドメインとそれらの少なくとも2つの異なるAベータエピトープの各々との結合を1つの同じAベータ内でまたは2つの異なる分子内で可能にするように、前記リンカーは選択されるであろう。適切なリンカーはとりわけエピトープに左右され、具体的には免疫グロブリン単一可変ドメインが結合するAベータ上のエピトープ間の距離に左右され、それらは、本明細書の開示を基にして、場合によってある程度の日常的な実験の後で当業者には明白となろう。さらに、Aベータと結合する2つまたは3つ以上の免疫グロブリン単一可変ドメインがドメイン抗体またはVHHドメインであるとき、それらはまた第三のドメイン抗体またはVHHドメインを介して互いに連結され得るこの場合、2つまたは3つ以上の免疫グロブリン単一可変ドメインは第三のドメイン抗体またはVHHドメインと直接連結されるか、または適切なリンカーを介して連結され得る。そのような第三のドメイン抗体またはVHHドメインは、例えば、本明細書でさらに記述するように半減期の延長を提供するドメイン抗体またはVHHドメインであり得る。例えば後者のドメイン抗体またはVHHドメインは、さらに本明細書で記述するように、ヒト血清蛋白質、例えばヒト血清アルブミンまたはヒトトランスフェリンと結合できるドメイン抗体またはVHHドメインであり得る。或いは、Aベータと結合する2つまたは3つ以上の免疫グロブリン単一可変ドメインは連続して連結され直接または適切なリンカーを介して、第三の単一ドメイン抗体またはVHHドメイン上記に記載したように半減期の延長を提供できるは、これら2つまたは3つ以上の上述の免疫グロブリン配列の1つと直接またはリンカーを介して連結され得る。適切なリンカーは本発明の具体的なポリペプチドに関連して本明細書に記載されているが、例示として、ただしこれに限定されないが以下のようなアミノ酸配列が含まれる:好ましくは長さが、9以上のアミノ酸、より好ましくは少なくとも17のアミノ酸、例えば約20から40のアミノ酸。しかしながら上限は重大ではないが、例えばそのようなポリペプチドの生物薬の製造に関して便利であるという理由から選択される。リンカー配列は天然に存在する配列でも天然に存在しない配列でもよい。治療薬の目的で使用される場合は、リンカーは、好ましくは本発明の抗Aベータポリペプチドが投与される対象者で非免疫原性である。ある有用なリンカー配列群は、WO9634103およびWO9404678に記載された重鎖抗体のヒンジ領域から誘導されたリンカーである。他の例はポリアラニンリンカー配列、例えばAlaAlaAlaである。リンカー配列のさらに好ましい例は、異なる長さのGlySerリンカー、例えばzリンカーであり、3、4、、、Gly3および3が含まれる。本発明のポリペプチドがポリマーの付加、例えばポリエチレングリコールPEG成分の付加によって改変される場合、リンカー配列は好ましくは、そのような改変例えばPEG化を可能にするアミノ酸残基、例えばシステインまたはリジンをリンカー領域に含む。そのようなリンカーの好ましい例は以下のとおりである:GGGGCGGGSGS9C5、配列番号:6GGGGCGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGS25C5、配列番号:7GGGSGGGGSGGGGCGGGGSGGGGSGGGGS27C14、配列番号:8GGGGSGGGGSGGGGCGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGS35C15、配列番号:9およびGGGGCGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGS35C5、配列番号:10そのようなリンカーを含む本発明のPEG化ポリペプチドのいくつかの非限定的な例は配列番号:40から43,142および143に示されている。さらにまた、リンカーは、例えばWO04081026で示されているポリ成分でもよい。別の実施態様では、本発明のポリペプチドの少なくとも2つの免疫グロブリン単一可変ドメインは、別の成分、例えば別のポリペプチドにより互いに連結される場合によって1つまたは2つのリンカーを介する。前記ポリペプチドは、好ましい実施態様ただしこれに限定されないでは、上記で既に述べたさらに別の免疫グロブリン単一可変ドメインであり得る。そのような成分は、本質的に活性がなくても、生物学的作用例えばポリペプチドの所望の特性を改善する作用を有していても、または1つもしくは2つ以上のさらに追加の所望の特性をポリペプチドに付与してもよい。例えばただしこれに限定されないが、前記成分はタンパク質またはポリペプチドの半減期を改善し得るか、および/またはその免疫原性を低下させ得るかまたは他の任意の所望の特性を改善し得る。そのような構築物のいくつかの非限定的な例は配列番号:34から39の構築物である。好ましい実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドは、配列番号:3によって規定されるエピトープと結合する第一の免疫グロブリン単一可変ドメインおよび配列番号:4によって規定されるエピトープと結合する第二の免疫グロブリン単一可変ドメイン、または配列番号:4によって規定されるエピトープと結合する第一の免疫グロブリン単一可変ドメインおよび配列番号:3によって規定されるエピトープと結合する第二の免疫グロブリン単一可変ドメインを含む。さらに好ましくは、免疫グロブリン単一可変ドメインとAベータ分子との間の接触は、実施例82および83に記載したように生じる。すなわち、本発明のポリペプチドは、ヒトまたはマウスAベータペプチドの少なくともアミノ酸1、3、13、20および23に接触する。好ましくは、本発明のポリペプチドは、実施例97に記載するKinexaアッセイで測定したとき、106モルリットル以下、より好ましくは109モルリットル以下の範囲、さらに好ましくは1011から1013モルリットルの範囲の解離定数KD値を有するか、または実施例93で説明するTRFRET結合アッセイで測定したとき109モルリットル以下、および好ましくは5x1010モルリットルから1012モルリットルの範囲のIC50値を有する。本発明のさらに好ましい実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドのCDR配列は以下に規定されるとおりで、さらにまた前記CDR配列は、本発明のポリペプチドが、上記パラグラフで説明したような解離定数KDでAベータと結合するか、または上記に説明したようなIC50値を有するようなものである。本発明の具体的な実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドは、以下の構造配列番号は下記の表1に示されるを有する、2つのAベータ結合免疫グロブリン単一可変ドメインを含み:免疫グロブリン単一可変ドメイン1:FR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4;免疫グロブリン単一可変ドメイン2:FR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4;ここで、CDR3は以下から成る群から選択され:-配列番号:13および配列番号:16のアミノ酸配列;および-配列番号:13または配列番号:16の前記アミノ酸配列とそれぞれ比較したとき3つまで、好ましくは2つまで、より好ましくは1つのアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列;さらにCDR3は以下から成る群から選択され:-配列番号:19のアミノ酸配列;および-配列番号:19の前記アミノ酸配列と比較したとき3つまで、好ましくは2つまで、より好ましくは1つのアミノ酸の相違を有するアミノ酸配列;さらにここで、他のCDR配列およびフレームワーク領域配列は特に限定されないが、前記は特定の要求にしたがって当業者により選択され、例えばヒトでの使用を意図されるポリペプチドの場合には、本発明のポリペプチドの免疫原性を低下させるためにヒト化されたフレームワーク領域であろう。免疫グロブリン単一可変ドメイン1と2の順序は特に限定されず、それゆえ、本発明のポリペプチド内では免疫グロブリン単一可変ドメイン1はN末端に位置し免疫グロブリン単一可変ドメイン2はC末端に位置するか、またはその逆であり得る。好ましくはCDR3は配列番号:13および配列番号:16のアミノ酸配列から成る群から選択され、CDR3は配列番号:19のアミノ酸配列である。さらにより好ましくは、本発明のポリペプチドは、以下の構造配列番号は下記の表1に示されるを有する、2つのAベータ結合免疫グロブリン単一可変ドメインを含み:免疫グロブリン単一可変ドメイン1:FR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4;免疫グロブリン単一可変ドメイン2:FR1‐CDR1‐FR2‐CDR2‐FR3‐CDR3‐FR4;ここで、CDR1は配列番号:11のアミノ酸配列前記は配列番号:14のアミノ酸配列と同じであるであり;CDR2は配列番号:12および配列番号:15のアミノ酸配列から成る群から選択され;CDR3は配列番号:13および配列番号:16のアミノ酸配列から成る群から選択され;CDR1は配列番号:17のアミノ酸配列であり;CDR2は配列番号:18のアミノ酸配列であり;CDR3は配列番号:19のアミノ酸配列であり;さらにここで他のフレームワーク領域配列は特に限定されないが、特定の要求にしたがって当業者により選択され、例えばヒトでの使用を意図されるポリペプチドの場合には、本発明のポリペプチドの免疫原性を低下させるためにヒト化されたフレームワーク領域であろう。上記に記載した本発明のポリペプチドでは、上記に示した免疫グロブリン単一可変ドメイン1および2の本ポリペプチド内の具体的な順序は重大ではなく、それゆえ、上述の免疫グロブリン単一可変ドメイン1は本発明のポリペプチドのN末端に位置し、上述の免疫グロブリン単一可変ドメイン2がその後に続いてもよく;或いは上述の免疫グロブリン単一可変ドメイン2がポリペプチドのN末端に位置し、上述の免疫グロブリン単一可変ドメイン1がその後に続いてもよい。両方の場合において、本明細書でさらに詳しく説明するように、本発明のポリペプチド内、例えばN末端、C末端または2つの免疫グロブリン単一可変ドメインの間に追加の配列および成分が存在することができる。上記のCDR配列および本発明のポリペプチドに存在し上記に概略した6CDR配列セットは以下の表IおよびIIにそれぞれ要約されている。表Iおよび表II:2つの異なるAベータ結合免疫グロブリン単一可変ドメインを含む本発明のポリペプチドにおける好ましいCDRの組合せ表I:CDR配列表II:好ましいCDR配列セット/CDR組合せ配列は上記表Iに示すそれらの配列番号によって規定される上記に記載した免疫グロブリン単一可変ドメインのためのフレームワーク領域配列として用いることができるヒト免疫グロブリンフレームワーク領域配列FRは当業界で知られている。ヒト以外の種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインのフレームワーク領域をヒト化する方法もまた当業界で知られている。好ましい実施態様では、本発明のポリペプチドは、以下のフレームワーク領域アミノ酸配列1から4FR1からFR4;下記表IIIに示す配列番号を含む:FR1は、配列番号:20および配列番号:21のアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であるか、または前記を含み;FR2は、配列番号:22のアミノ酸配列であるか、または前記を含み;FR3は、配列番号:23および配列番号:24のアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列であるか、または前記を含み;FR4は、配列番号:25のアミノ酸配列であるか、または前記を含む。表III:FRアミノ酸配列上記に示すFRおよびCDR配列を有する免疫グロブリン単一可変ドメインの具体的な例は以下のとおりである:免疫グロブリン単一可変ドメイン1最初のアミノ酸すなわちグルタメートは場合によって失われていてもよい:evqllesggglvqpggslrlscvhsgptfrtdtmgwfrqapgkgrefvaavtwnsgrinyadsvkgrftisrdnskntaylqmnslrpedtavyycaahrfvvggnrvedwrywgqgtlvtvssABII035;配列番号:44免疫グロブリン単一可変ドメイン2最初のアミノ酸すなわちグルタメートは場合によって失われていてもよい:evqllesggglvqpggslrlscaasgrtfnnynmgwfrqapgkgrefvaavsrsgvstyyadsvkgrftisrdnskntvylqmnslrpedtavyycaaayrgtainvrrsysswgqgtlvtvssABII059;配列番号:45。1つの単一ポリペプチド鎖内に上記に示す2つの免疫グロブリン単一可変ドメインおよび場合によって前記2つの免疫グロブリン単一可変ドメインを連結するリンカーを含む本発明のポリペプチドの具体的な例はさらにまた下記で与えられる。好ましい実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドは、特に治療薬として用いられるとき、患者の血清中または他の体液中で本発明のポリペプチドの半減期を延長する成分を含む。半減期という用語は、前記改変ポリペプチドの血中濃度を例えば天然のメカニズムによる前記ポリペプチドの分解および/または除去および/または不活化のためにinvivoで50低下させるために要する時間を意味する。より具体的には、そのような半減期延長成分は前記ポリペプチドに共有結合させるかまたは融合させることができる。前記は、Fc部分、アルブミン成分、アルブミン成分のフラグメント、アルブミン結合成分例えば抗アルブミン免疫グロブリン単一可変ドメイン、トランスフェリン結合成分例えば抗トランスフェリン免疫グロブリン単一可変ドメイン、ポリオキシアルキレン分子例えばポリエチレングリコール分子、アルブミン結合ペプチド、またはヒドロキシエチルデンプンHES誘導体であるが、ただし前記に限定されない。ある実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドは、1つまたは2つ以上のエフェクター機能を本発明のポリペプチドに付与するか、および/または1つまたは2つ以上のFcレセプターと結合する能力を付与できる、1つまたは2つ以上の抗体部分、フラグメントまたはドメインと連結させることができる。例えばこの目的前記に限定されないがのために、前記抗体部分は抗体のCH2および/またはCH3ドメインであるか、または前記を含むことができる。前記ドメインは、例えば重鎖抗体上記に記載およびより好ましくは通常のヒト4鎖抗体に由来する。具体的には、本発明のポリペプチドは、例えばヒトIgG由来、ヒトIgE由来、または別のヒトIg由来Fc領域と連結できる。例えば、WO9404678は、ラクダ科動物のVHHドメインまたはそのヒト化誘導体を含む重鎖抗体を述べている。前記では、ラクダ科動物のCH2および/またはCH3ドメインはヒトCH2および/またはCH3ドメインによって置き換えれ、したがって各々がVHHドメイン場合によってヒト化されてある並びにヒトCH2およびCH3ドメインを含むただしCH1ドメインは含まない、2つの重鎖から成る免疫グロブリンを提供する。この免疫グロブリンはCH2およびCH3ドメインによって提供されるエフェクター機能を有し、軽鎖が全く存在しない状態で機能することができ、そのような改変をもたない対応するVHHドメインと比較して半減期の延長を示す。Fc部分を含む本発明のポリペプチドの具体的な例エフェクター機能を有するものまたは有さないものは、以下に示すポリペプチドである:evqllesggglvqpggslrlscvhsgptfrtdtmgwfrqapgkgrefvaavtwnsgrinyadsvkgrftisrdnskntaylqmnslrpedtavyycaahrfvvggnrvedwrywgqgtlvtvssggggsgggsevqllesggglvqpggslrlscaasgrtfnnynmgwfrqapgkgrefvaavsrsgvstyyadsvkgrftisrdnskntvylqmnslrpedtavyycaaayrgtainvrrsysswgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk配列番号:26evqllesggglvqpggslrlscaasgrtfnnynmgwfrqapgkgrefvaavsrsgvstyyadsvkgrftisrdnskntvylqmnslrpedtavyycaaayrgtainvrrsysswgqgtlvtvssgggsggggsggggsggggsggggsgggevqllesggglvqpggslrlscvhsgptfrtdtmgwfrqapgkgrefvaavtwnsgrinyadsvkgrftisrdnskntaylqmnslrpedtavyycaahrfvvggnrvedwrywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk配列番号:27evqllesggglvqpggslrlscaasgrtfnnynmgwfrqapgkgrefvaavsrsgvstyyadsvkgrftisrdnskntvylqmnslrpedtavyycaaayrgtainvrrsysswgqgtlvtvssggggsggggsggggcggggsggggsggggsggggsevqllesggglvqpggslrlscvhsgptfrtdtmgwfrqapgkgrefvaavtwnsgrinyadsvkgrftisrdnskntaylqmnslrpedtavyycaahrfvvggnrvedwrywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk配列番号:28evqllesggglvqpggslrlscvhsgptfrtdtmgwfrqapgkgrefvaavtwnsgrinyadsvkgrftisrdnskntaylqmnslrpedtavyycaahrfvvggnrvedwrywgqgtlvtvssggggsgggsevqllesggglvqpggslrlscaasgrtfnnynmgwfrqapgkgrefvaavsrsgvstyyadsvkgrftisrdnskntvylqmnslrpedtavyycaaayrgtainvrrsysswgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk配列番号:29evqllesggglvqpggslrlscaasgrtfnnynmgwfrqapgkgrefvaavsrsgvstyyadsvkgrftisrdnskntvylqmnslrpedtavyycaaayrgtainvrrsysswgqgtlvtvssgggsggggsggggsggggsggggsgggevqllesggglvqpggslrlscvhsgptfrtdtmgwfrqapgkgrefvaavtwnsgrinyadsvkgrftisrdnskntaylqmnslrpedtavyycaahrfvvggnrvedwrywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk配列番号:30evqllesggglvqpggslrlscaasgrtfnnynmgwfrqapgkgrefvaavsrsgvstyyadsvkgrftisrdnskntvylqmnslrpedtavyycaaayrgtainvrrsysswgqgtlvtvssggggsggggsggggcggggsggggsggggsggggsevqllesggglvqpggslrlscvhsgptfrtdtmgwfrqapgkgrefvaavtwnsgrinyadsvkgrftisrdnskntaylqmnslrpedtavyycaahrfvvggnrvedwrywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk配列番号:31本発明のさらに別の実施態様にしたがえば、2つの免疫グロブリン単一可変ドメインは血清アルブミン分子と、例えばWO0179271およびWO0359934に記載されたように融合させることができる。ヒト血清アルブミン成分を含む本発明の二パラトープ性Aベータ結合ポリペプチドの例は表IVに示される。表IV:HAS融合タンパク質別の好ましい実施態様では、本発明のポリペプチドは、血液中で見出される抗原、例えば血清アルブミン、血清免疫グロブリン、サイロキシン結合タンパク質、フィブリノゲンまたはトランスフェリンと結合し、それによって半減期の延長を本発明の生成ポリペプチドに付与する成分を含む。特に好ましい実施態様にしたがえば、そのような成分は、アルブミン結合免疫グロブリンおよび特に好ましくはアルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメイン例えばアルブミン結合VHHドメインである。ヒトでの使用が意図される場合、そのようなアルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインは、好ましくはヒト血清アルブミンと結合し、前記は好ましくはヒト化アルブミン結合VHHドメインであろう。ヒト血清アルブミンと結合する免疫グロブリン単一可変ドメインは当業界で公知であり、例えばWO2006122786にさらに詳細に記載されている。特に有用なアルブミン結合VHHドメインは、以下のアミノ酸配列から成るか、または以下のアミノ酸配列を含む:evqlvesggglvqpgnslrlscaasgftfssfgmswvrqapgkglewvssisgsgsdtlyadsvkgrftisrdnakttlylqmnslrpedtavyyctiggslsrssqgtlvtvss配列番号:33。アルブミン結合VHHドメインを含む本発明のポリペプチドの具体的な例は表Vに示される:表V:2つの抗AベータVHHドメインおよび1つの抗HASVHHドメインを含む、本発明の二パラトープ性ポリペプチドさらに別の好ましい実施態様では、本発明のポリペプチドは血清アルブミンと結合する成分を含み、そのような成分は、例えば国際特許出願公開公報WO2008068280およびWO2009127691に記載されているアルブミン結合ペプチドである。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドの半減期延長改変そのような改変はまた前記ポリペプチドの免疫原性を低下させるは、薬理学的に許容できる適切なポリマー、例えば直鎖または分枝鎖のポリPEGまたはその誘導体例えばメトキシポリまたはmPEGの付加を含む。一般的には、任意の適切なPEG化形態例えば当業界で抗体および抗体フラグメントドメイン抗体およびscFvが含まれるが、ただしこれらに限定されないのために用いられるPEG化を用いることができる例えば以下を参照できる:Chapman,NatBiotechnol,54,531545;VeroneseandHarris,AdvDrugDelivRev54,453456;HarrisandChess,NatRevDrugDiscov2;WO04060965およびUS6875841。ポリペプチドのPEG化のための種々の試薬もまた市場で、例えばNektarTherapeuticsUSAまたはNOFCorporation日本から入手できる。前記は、例えば、SunbrightEAシリーズ、SHシリーズ、MAシリーズ、CAシリーズおよびMEシリーズ、例えばSunbrightME100MA、SunbrightME200MAおよびSunbrightME400MAである。好ましくは、位置特異的PEG化が、具体的にはシステイン残基を介して用いられる。例えばこの目的のために、本発明のポリペプチド内に天然に存在するシステイン残基にPEGを付加してもよく、1つまたは2つ以上のPEG付加用システイン残基を導入できるように本発明のポリペプチドを改変してもよく、または1つまたは2つ以上のPEG付加用システイン残基を含むアミノ酸配列を、Nおよび/またはC末端、および/または本発明のポリペプチドの2つまたは3つ以上の機能的ドメインを架橋するリンカー領域に融合させてもよい。タンパク質操作技術を用いるいずれの技術もそれ自体は当業者に公知である。好ましくは、本発明のポリペプチドのためには5kDaを超える分子量、例えば10kDaを超え200kDa未満、例えば100kDa未満、例えば20kDaから80kDaの範囲の分子量のPEGが用いられる。PEG化に関しては、一般的に本発明は、PEG化が、好ましくは1invivoでの半減期を延長するように;2免疫原性を低下させるように;3PEG化についてそれ自体公知のさらに別の1つまたは2つ以上の有益な特性を提供するように;4Aベータに対するポリペプチドの親和性に影響を及ぼさないように適切なアッセイ例えば下記実施例に記載したものによって測定したとき、前記親和性を例えば50以上好ましくは10を超えない低下させないように;および/または4本発明のポリペプチドの他の所望の特性のいずれにも影響を及ぼさないように、1つまたは2つ以上のアミノ酸の位置でPEG化された本発明の任意のポリペプチドを包含することは留意されるべきである。適切なPEG群およびそれらを付加する方法特異的であれ非特異的であれは当業者には明白であろう。特に好ましい本発明の実施態様にしたがえば、本発明のPEG化ポリペプチドは、分子量40kDaまたは60kDaを有する線状PEGの1つのPEG成分を含み、前記PEG成分は前記ポリペプチドにリンカー領域で、具体的には配列番号:6に示すGS9リンカーペプチドの5位のCys残基で;配列番号:8に示すGS27リンカーペプチドの14位のCys残基で;配列番号:9に示すGS35リンカーペプチドの15位のCys残基で;または配列番号:10に示す35GSリンカーペプチドの5位のCys残基で付加される。本発明のポリペプチドの好ましい例は下記の表VIに示されている。前記ポリペプチドは、好ましくは上述のPEG試薬の1つ、例えば下記化学式で示される、40kDaの平均分子量を有するSunbrightME400MAでPEG化される:表VI:本発明のPEG化ポリペプチド;CはPEG成分を保持するCys残基を示すさらに別の実施態様にしたがえば、本発明のポリペプチドは、前記ポリペプチドの血液脳関門通過を可能にする成分をさらに別に含む。具体的には、得られた本発明のポリペプチドの血液脳関門通過を可能にする前記成分は、1つまたは2つ以上例えば2つ、好ましくは1つの免疫グロブリン単一可変ドメイン、例えばWO02057445に記載された脳標的抗体フラグメントVHHFC44およびFC5であり得る。前記の例は下記の表XIXに示されている。したがって、本発明のポリペプチドはまた下記一般式で記載することができる:A‐ISVD1‐B‐ISVD2‐C式中、ISVD1およびISVD2は、Aベータの異なるエピトープに結合する、上述のAベータ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン、例えばそれぞれ配列番号:44および45の免疫グロブリン単一可変ドメインであり、さらにA、BおよびCは互いに独立して:-追加されない成分すなわち、AはISVD1のN末端、BはISVD1およびISVD2を連結するペプチド結合、並びにCはISVD2のC末端;-ヒトIgG、IgM、IgD、IgEなどのCH1、CH2およびCH3ドメインの群から選択される1つまたは2つ以上のドメインで、好ましくは、CはCH2‐CH3;-アルブミンおよびそのフラグメントで、好ましくはヒト血清アルブミンまたはそのフラグメント;-アルブミン結合成分で、好ましくはアルブミン結合免疫グロブリン単一可変ドメインまたはアルブミン結合ペプチド;-リンカーペプチド場合によってPEG化されるで、好ましくは、Bは3から45アミノ酸を有するリンカーペプチドを指し、これらペプチドは少なくとも1つのシステイン残基を含み、前記システイン残基は好ましくはPEG40またはPEG60成分でPEG化されるもの;-1つまたは2つ以上のAベータ結合成分、好ましくは追加の抗Aベータ免疫グロブリン可変ドメインであってISVD1またはISVD2と同一であるかまたは同一ではないもの;-ポリペプチド、好ましくは免疫グロブリン単一可変ドメインであって、当該ポリペプチドに血液脳関門通過特性を付与するもの、例えばWO02057445に記載のFC44およびFC5;以下を指すか、または式中、ISVD1、ISVD2、BおよびCは上記のような意味を有し、さらに-Aは、N末端の、場合によってホルミル化されたMet残基例えば異種宿主生物での発現の結果として;および/または合成時に宿主細胞から本発明のポリペプチドの分泌を指令するシグナルまたはリーダー配列;および/または適切な宿主細胞での当該ポリペプチドの発現後に場合によって除去されるプロ配列を指すか;または式中、ISVD1、ISVD2、AおよびBは上記のような意味を有し、さらに-Cは、タグ、例えば、本発明のポリペプチドの精製を可能にするかまたは促進するアミノ酸配列または残基例えば前記配列または残基に対抗するアフィニティ技術が用いられるを指し;そのようなタグは、例えば化学的または酵素的切断によって、そのような精製工程後に場合によって除去して当該ポリペプチドの成熟配列を提供でき;この目的のために、タグは場合によって切断可能リンカー配列を介して当該ポリペプチドに連結されるか、または切断可能モチーフを含むことができる。そのような残基のいくつかの好ましいただしこれらに限定されない例は、マルチヒスチジン残基、グルタチオン残基およびmycタグ、例えばAAAEQKLISEEDLNGAA配列番号:46である。治療的使用:さらに別の重要な特徴にしたがえば、本発明のポリペプチドは例えば以下のように治療目的に用いられる:-下記に示す、特にヒトの異常、疾患または症状、例えばアルツハイマー病AD、乾燥性AMD、または緑内障の予防、治療および/または緩和のため;-そのような治療を必要とする患者の治療方法のため、前記方法は、その必要がある対象者に本発明の少なくとも1つのポリペプチドまたは本発明のそのようなポリペプチドを含む医薬組成物下記で詳細に説明するの治療的に活性な量を投与する工程を含み、そのような治療を必要とするそのような対象者は、下記で説明する異常、疾患または症状のいずれか、例えばAD、乾燥性AMDまたは緑内障に罹患するヒトであり得る;-下記で説明する異常、疾患または症状、例えばヒトのAD、乾燥性AMDまたは緑内障を予防、治療または緩和する医薬の調製のため;-上述の目的のために用いられる医薬組成物または医薬の活性成分として。上述の異常、疾患または症状以下の疾患におけるものは、患者または生物ヒトに本発明のポリペプチドを投与することによって予防および/または治療および/または緩和することができる疾患、より具体的には、Aベータ機能不全例えばAベータ産生不全、沈着もしくは除去の欠陥によって媒介される疾患、および/またはアミロイド斑形性、Aベータオリゴマーの形成などによって媒介される疾患である。さらに具体的には、前記疾患は、患者のAベータおよび/またはアミロイド斑および/またはAベータオリゴマーの望ましくない形性または構築を調節、低下および/または逆戻りさせることによって予防および/または治療および/または緩和することができる疾患であり、そのような疾患は例えば神経変性疾患を含み、最も有力なAベータ関連神経変性疾患はADである。本発明のポリペプチドは、例えば以下の疾患を予防、治療または緩和する方法で用いることができる:-アルツハイマー病AD;全てのタイプおよび病期前臨床期および前駆症状期を含む、アルツハイマー型痴呆としてもまた知られている;-年齢性黄斑変性の乾燥型乾燥性AMD;中心性地図状委縮;-緑内障;-脳アミロイドアンギオパチーCAA;-トリソミー21ダウン症候群、成人ダウン症候群を含む;-オランダ人型アミロイド症随伴遺伝性脳出血HCHWAD;-レーヴィ小体随伴痴呆;-前頭側頭葉変性;-緑内障;-筋委縮性側索硬化症;-散発性封入体筋炎;および-高齢例えば少なくとも55歳ヒト対象者の不安症で、前記は、強迫性障害、恐慌性障害、恐慌性発作、広場恐怖症、外傷後ストレス障害、対人恐怖症、破壊性行動異常および慢性疲労症候群から成る群から選択されるこの場合、前記高齢ヒト対象者は、症状出現または症状出現前AD、慢性アミロイドアンギオパチーおよびダウン症候群から選択されるAベータ関連症状と診断されていても診断されてなくてもよい;ここで、そのような方法は、その必要がある対象者に、本発明のポリペプチドおよび/または前記を含む医薬組成物の医薬的に活性な量を投与する工程を含む。本発明の関係では、予防、治療および/または緩和という用語は、疾患の阻止および/または治療および/または緩和を含むだけでなく、一般的に発症を阻止し、疾患の執行を遅らすかまたは逆戻りさせ、当該疾患に付随する1つまたは2つ以上の徴候の開始を阻止または遅らせ、当該疾患に付随する1つまたは2つ以上の徴候を軽減および/または緩和し、当該疾患の重症度および/または期間および/または前記に付随する1つまたは2つ以上の徴候を軽減し、および/または当該疾患および/または前記に付随する任意の徴候の重症度の更なる進行を阻止し、前記疾患によって引き起こされる任意の生理学的損傷を軽減すること、および一般的に治療される患者に有益な薬理学的作用の一切もまた含む。具体的には、ADの場合に本発明のポリペプチド、組成物および方法は、ADの認定リスク因子を有するかおよび/またはAベータ沈着が証明された患者でAD開始の予防または遅延を促進するために、軽度の認知障害MCIを有する患者ADに転換するリスクを有するを治療するために、および前臨床的または前駆的な病期から痴呆へと進行することが予想される患者でADの開始を予防または遅らせるために用いることができる。ADの遺伝的リスク因子には、APP遺伝子の固有の変異特に670位および671位の変異並びに717位の変異、プレセニリン遺伝子PS1およびPS2におけるもの、並びにApoE4におけるものが含まれる。他のリスク因子には、ADの家族歴、高コレステロール血症、アテローム性硬化症、糖尿病および/または高齢が含まれる。ADの傾向は、CSF中のAベータおよびタウの濃度を解析することによって早期に診断できる。神経画像化技術例えばPETおよびMRIはAD転換リスクを有する患者を同定することができる。一般的には、いくつかのバイオマーカーの使用は、非常に早期に高い感受性および特異性でADの診断を可能にし得る。ダウン症候群、オランダ人型アミロイド症による遺伝性脳出血、および脳ベータアミロイドアンギオパチーの素因がある場合には、それらの潜在的結果例えば単発性および再発性脳葉内出血を予防するために本発明のポリペプチド、組成物および方法をまた用いることができる。治療されるべき対象動物は哺乳動物、より具体的にはヒトであろう。当業者には明瞭なところであるが、治療されるべき対象者は特に、本明細書で述べた疾患、異常または症状を有するか、またはそれらのリスクを有する者であろう。疾患を治療する上記方法は前記疾患の治療用医薬の調製を含むことは当業者にはまた明白であろう。さらにまた、本発明のポリペプチドを上記疾患の治療のために意図される医薬または医薬組成物中の活性成分として用いることができることは明瞭である。したがって、本発明はまた、上述の疾患、異常または症状のいずれかの予防、治療および/または緩和用医薬組成物の調製における本発明のポリペプチドの使用にも関する。本発明はさらに、治療的または予防的使用のための本発明のポリペプチド、および具体的には上述の疾患、異常または症状のいずれかの予防、治療および/または緩和用の本発明のポリペプチドに関する。本発明はさらに、上述の疾患、異常または症状の予防、治療および/または緩和用医薬組成物に関し、そのような組成物は本発明の少なくとも1つのポリペプチドを含む。具体的な理論に拘束されることを望まないが、上記の治療的または予防的作用は以下のメカニズムによって達成され得る:本発明のポリペプチドはAベータと結合し、それによって他の1つまたは2つ以上のAベータ分子とのその相互作用、またはAベータとレセプターとの相互作用、またはAベータと可溶性生物分子との相互作用、またはAベータと不溶性生物分子との相互作用を阻害する。標的Aベータは斑または懸濁物もしくは溶液の一部分またはそれらの1つもしくは2つ以上であり、他のAベータ分子は斑の一部分、懸濁物もしくは溶液またはそれらの1つもしくは2つ以上に存在し得る。身体の脳、血管または他の部分から種々のAベータ形例えばモノマー形、オリゴマーおよびマルチマー形、可溶性および不溶性凝集形、原線維形、プロトフィブリル形並びにアミロイド斑を除去する工程は、本発明のポリペプチドとAベータとの結合に依拠し得る。体液中のAベータレベルの低下、および好ましくは血中の可溶性Aベータレベルの低下Aベータ分子と別の分子例えば別のAベータ分子との間の相互作用によるは、神経変性疾患の徴候を緩和し、これら疾患の進行を遅らせるかまたは停止させ、および/または脳の損傷、記憶および認知を回復させるであろう。さらに別のより一般的な特徴にしたがえば、本発明は、免疫療法、より具体的には受動免疫療法のための方法に関する。前記方法は、本明細書に記載する疾患に罹患した対象者または前記疾患のリスクがある対象者に、本発明のポリペプチドおよび/または本発明のポリペプチドを含む医薬組成物の医薬として活性な量を投与する工程を含む。さらに別の特徴にしたがえば、本発明は、i認知低下の予防、治療および/または緩和の方法、および/またはii認知機能の回復および/または認知機能の改善の方法に関し、前記方法は、その必要がある対象者に本発明のポリペプチドおよび/または本発明のポリペプチドを含む医薬組成物の医薬として活性な量を投与する工程を含む。本発明のポリペプチドおよび/または前記を含む組成物は、用いられるべき具体的な医薬処方物または組成物に応じて任意の適切な態様でその必要がある対象者に投与できる。したがって、本発明のポリペプチドおよび/または前記を含む組成物は、例えば静脈内に、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、経皮的に、経口的に、舌下に例えば舌下錠、スプレーまたはドロップの形態で、前記は舌下に配置され粘膜から舌下の毛細血管ネットワークに吸収される、鼻内に例えば鼻スプレーおよび/またはエーロゾルの形態で、局所的に、座薬の手段により、吸入により、硝子体内に特に乾燥性AMDまたは緑内障の治療のため、または任意の他の適切な態様で有効量または用量で投与することができる。本発明のポリペプチドおよび/または前記を含む組成物は、予防、治療または緩和されるべき疾患、異常または症状を予防、治療および/または緩和するために適した治療の投薬計画にしたがって投与される。臨床医は一般的には複数の要件に応じて適切な治療の投薬計画を決定できよう。前記要件は、例えば予防、治療または緩和されるべき疾患、異常または症状、疾患の重症度、その徴候の重症度、用いられる具体的な本発明のポリペプチド、用いられる具体的な投与経路および医薬処方物または組成物、患者の年齢、性別、体重、食事、一般的状態、並びに臨床医が周知する類似の要件である。一般的には、治療の投薬計画は、本発明の1つまた2つ以上のポリペプチド、または本発明のポリペプチドを含む1つまたは2つ以上の組成物を治療的および/または予防的に有効な量または用量で投与することを含むであろう。一般的に、本明細書に記載した疾患、異常または症状の予防、治療および/または緩和のために、さらには治療されるべき具体的疾患、異常または症状、用いられるべき本発明の具体的ポリペプチドの能力、具体的投与ルート、および使用される具体的医薬処方物または組成物に応じて、本発明のポリペプチドは一般的には、0005から200mgkg体重および用量の間の量で、好ましくは005から100mgkg用量、より好ましくは05から10mgkg用量で、持続的に例えば輸液によってまたは単回投薬として例えば毎日、毎週または毎月の投薬下記を参照されたい投与されるが、特に前述のパラメータにしたがって大きく変動させることができる。予防的適用のためには、本発明のポリペプチドを含む組成物はまた、同様な投薬量でまたはわずかに低い投薬量で投与できる。投薬量はまた任意の合併症の発生にしたがい個々の医師が調節できる。本発明の具体的なポリペプチド並びにその固有の薬理学的および他の特性に応じて、本発明のポリペプチドは、毎日、1日おき、2日おき、3日おき、4日おきもしくは5日おきに、毎週、毎月などに投与することができる。投薬計画は長期治療、1週間治療を含むことができよう。長期とは少なくとも2週間、好ましくは数カ月または数年の期間を意味する。本発明のポリペプチドおよび前記を含む組成物の有効性は、関与する具体的な疾患に応じて、任意の適切なinvitroアッセイ、細胞系アッセイ、invivoアッセイおよび/またはそれ自体公知の動物モデルまたは前記の組合せを用いて試験することができる。適切なアッセイおよび動物モデルは当業者には明白であり、例えば下記実施例で用いられるアッセイおよび動物モデルが含まれよう。したがって、適切なアッセイは、抗Aベータポリペプチドと被覆したモノマーもしくは凝集Aベータペプチドまたは捕捉したビオチン化Aベータとの結合を測定するELISA結合アッセイ、被覆したモノマーもしくは凝集Aベータペプチドまたは捕捉したビオチン化Aベータとの結合を測定するSPR表面プラズモン共鳴表面プラズモン共鳴SurfacePlasmonResonanceアッセイMalmqvistMSurfaceplasmonresonancefordetectionandmeasurementofantibodyantigenaffinityandkineticsCurrOpinImmunol5282,1993、AベータペプチドN末端領域特異的結合物質の相互作用との競合またはAベータ中心部領域特異的結合物質の相互作用との競合を測定する競合TRFRET時間分解蛍光共鳴エネルギー伝達TimeResolvedFluorescenceResonanceEnergyTransfer、凝集の阻止または脱凝集を測定するinvitroAベータ凝集アッセイ、分子とアミロイド斑の結合を測定するTAPIR組織アミロイド斑免疫反応性TissueAmyloidPlaqueImmunoreactivity前記はアルツハイマー病患者またはAPPトランスジェニック動物由来の脳での免疫組織化学的解析を用いるおよびinvivo機構モデルであるが、ただしこれらに限定されない。好ましくは、本発明のポリペプチドは、これらのアッセイまたはモデルの少なくとも1つおよび好ましくはinvivoモデルの1つまたは2つ以上において、当業界で知られている通常の抗体例えばm266および3D6抗AベータIgG抗体またはNanobodyWO200640153に記載されているよりも良好な特徴を有している。医薬的な使用のために、本発明のポリペプチドは、i本発明の少なくとも1つのポリペプチドおよびii少なくとも1つの医薬的に許容できる担体、希釈剤、賦形剤、アジュバントおよび/または安定化剤、並びにiii場合によって1つまたは2つ以上のさらに別の医薬として活性なポリペプチドおよび/または化合物を含む、医薬調製物として処方できる。医薬的に許容できるとは、対応する物質が、個体に投与されたとき生物学的な或いは望ましくない作用を全く示さず、さらに当該医薬組成物中に含まれている他の成分例えば医薬として活性な成分のいずれとも有害な態様で相互作用しないことを意味する。具体的な例は、例えば以下の標準的な手引書で見出すことができるRemingtonsPharmaceuticalSciences,18thEd,MackPublishingCompany,USA,1990。例えば、本発明のポリペプチドは、通常の抗体および抗体フラグメント並びに他の医薬として活性なタンパク質についてそれ自体公知の任意の態様で処方し投与することができる。したがって、さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、本発明の少なくとも1つのポリペプチドおよび少なくとも1つの医薬的に許容できる担体、希釈剤、賦形剤、アジュバントおよび/または安定化剤、並びに場合によって1つまたは2つ以上のさらに別の医薬として活性な物質を含む医薬組成物または調製物に関する。非限定的な例によれば、そのような処方物は、経口投与用、非経口投与用例えば静脈内、筋肉内、皮下、クモ膜下腔内、鼻洞内または腹腔内注射または静脈内輸液による、局所投与用、舌下投与用、吸入、皮膚絆創膏、移植、座薬による投与用、経皮、鼻、硝子体内、直腸または膣投与用などに適した形態であり得る。そのような適切な投与形投与態様にしたがって固体、半固体または液体であり得るは、その調製において使用される方法および担体と同様に当業者には明白であろう。非経口投与例えば静脈内、筋肉内、皮下注射または静脈内輸液のための医薬調製物は活性成分を含み、さらに場合によって更なる溶解または希釈工程の後で輸液または注射に適切な、例えば無菌的溶液、懸濁液、分散液、乳液または散剤であり得る。そのような調製物のための適切な担体または希釈剤には例えば以下が含まれるただしこれらに限定されない:無菌的な水および医薬的に許容できる水性バッファーおよび溶液、例えば生理学的なリン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液およびハンクス溶液;水油;グリセロール;エタノール;グリコール、例えばプロピレングリコール、並びに鉱物油、動物油および植物油、例えばピーナツ油、ダイズ油とともに適切な前記の混合物。活性化合物またはその塩の溶液はまた、微生物の増殖を防止するために保存料、例えば抗菌および抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールチメルサールなどを含むことができる。多くの場合、等張剤、例えば砂糖、バッファーまたは塩化ナトリウムを含むことが好ましい。適切な流動性は、例えばリポソームの形成によって、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持によって、または界面活性剤の使用によって維持することができる。吸収を遅らせる他の薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンもまた添加できる。全ての場合に、最終的投薬形は、製造および保存条件下で無菌的であり、流動性を有しさらに安定でなければならない。無菌的な注射可能溶液は、必要な量の活性化合物を適切な溶媒に上記に列挙した他の種々の成分とともに取り込み、続いて必要に応じてろ過滅菌することによって調製される。無菌的注射可能溶液を調製するための無菌的散剤の場合には、好ましい調製方法は真空乾燥および凍結乾燥技術であり、前記技術によって活性成分プラス以前にろ過滅菌した溶液に存在する任意の追加所望成分を含む散剤が得られる。通常は水溶液または水性懸濁液が好ましいであろう。一般的には、治療用タンパク質例えば本発明のポリペプチドのための適切な処方物は緩衝タンパク質溶液であり、例えば適切な濃度のタンパク質例えば0001から400mgmL、好ましくは0005から200mgmL、より好ましくは001から200mgmL、より好ましくは10-100mgmL、例えば10mgmL静脈内投与または100mgmL皮下投与、および水性バッファー、例えば-リン酸緩衝食塩水、pH74-他のリン酸緩衝液、pH62から82-ヒスチジン緩衝液、pH55から70-コハク酸緩衝液、pH32から66、および-クエン酸緩衝液、pH21から62、並びに場合によって溶液の等張性を提供するために塩例えばNaClおよび/または砂糖またはポリアルコール例えばトレハロース、マンニトールまたはグリセロールを含む溶液である。好ましい緩衝タンパク質溶液は、リン酸緩衝液25mM、pH65中に溶解させた本発明のポリペプチド約005mgmLを含み、220mMのトレハロースの添加によって等張に調節した溶液である。さらにまた、他の薬剤例えば洗剤、例えば002のトゥイーン20またはトゥイーン80をそのような溶液に含むことができる。皮下適用のための処方物は、顕著に高濃度の本発明のポリペプチド、例えば100mgmLまでまたは100mgmLを超えて含むことができる。しかしながら、上記に示した成分およびその量は、単に1つの好ましい選択肢であることは当業者には明白であろう。代替案およびその変型は当業者には即刻明らかであるか、または上記の開示から出発して容易に思いつき得るであろう。本発明のポリペプチドはまた、適切なデポー製剤、徐放性または持続放出処方物例えば注入に適切を用いて、皮膚下の移植用制御放出装置を用いて、および/または用量計測ポンプまたは医薬として活性な物質または成分の投与にそれ自体公知の他の装置を用いて投与できる。さらにまた、本発明のポリペプチドは、ゲル、クリーム、スプレー、ドロップ、絆創膏、またはフィルム皮膚上に置いたとき皮膚を通過するの形態で処方できる。さらにまた、通常の抗体または抗体フラグメントと比較して、本発明のポリペプチドを使用する主要な1つの利点は、それらはまた非経口投与以外のルートで容易に投与でき、そのような投与のために容易に処方できるということである。例えば、国際特許出願WO2004041867に記載されているように、そのようなポリペプチドは、経口、鼻内、肺内および皮内投与用に処方できる。本発明の別の実施態様にしたがえば、本明細書に開示した少なくとも1つの本発明の抗Aベータポリペプチドおよび以下から成る群から選択される少なくとも1つの他の治療薬剤を含む医薬の組合せが提供される:コリンエステラーゼ阻害剤、例えばドネペジル、リバスチグミン、ガランタミンおよびタクリン;NMDAアンタゴニスト、例えばメマンチン;Aベータ減少剤、例えばAベータの生成に必要な1つまたは2つ以上の酵素を阻害することができる薬剤、例えばベータセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼ阻害剤およびガンマセクレターゼ調節物質;Aベータ斑の構築を予防または低下させる薬剤;Aベータ凝集阻害剤;RAGEアンタゴニスト;および神経変性疾患および/または認知機能低下を予防、治療または緩和する他の薬剤。そのような他の治療薬剤の例は、ELND005、カプロスピノール、NRM8499、PBT2、ポスフェン、EHT0202、CTS21166、セマガセスト、BMS708163、BMS299897、BMS433796、ELND006、ELN475516、ELN318463、ELN475513、ベガセスタート、E2012、CHF5074、ジメボリンラトレピリジンおよびPF4494700である。そのような医薬の組合せは場合によって追加の希釈剤、賦形剤、アジュバントおよび/または安定化剤を含むことができる。併用治療の投薬計画の部分として2つまたは3つ以上の物質または成分が用いられるとき、それらは同じ投与ルートにより、または異なる投与ルートにより、本質的には同時にまたは異なる時間に例えば本質的に同時、連続的に、または互い違いの投薬計画にしたがって投与することができる。物質または成分が同時に同じ投与ルートにより投与されるとき、それらは異なる医薬処方物もしくは組成物として、または組合せ医薬処方物もしくは組成物の部分として投与できる。さらにまた、2つまたは3つ以上の活性物質または成分が併用療法の投薬計画の部分として投与されるとき、前記物質または成分の各々は、前記化合物または成分がその物だけで用いられるときに用いられるのと同じ量および同じ投薬計画にしたがって投与することができ、そのような組合せ使用は協調作用をもたらすことももたらさないこともある。しかしながら、2つまたは3つ以上の活性物質または成分の組合せ使用が協調作用をもたらすとき、投与される物質または成分の1つ、2つ以上または全部の量を減少させ、一方、所望の治療効果をなお達し得ることもまた可能である。このことは例えば、1つまたは2つ以上の物質または成分の使用に付随する望ましくない何らかの副作用を回避、限定または減少させ、一方で、所望の医薬的または治療的効果をなお得るために有用であり得る。本発明のさらに別の実施態様は、上記に説明する疾患および異常を治療する方法である。前記方法は、少なくとも1つの本発明の抗Aベータポリペプチドの有効量および以下から成る群から選択される少なくとも1つの薬剤を個体に同時に、別々に、または連続して投与する工程を含む:コリンエステラーゼ阻害剤、例えばドネペジル、リバスチグミン、ガランタミンおよびタクリン;NMDAアンタゴニスト、例えばメマンチン;Aベータ減少剤、例えばAベータの生成に必要な1つまたは2つ以上の酵素を阻害することができる薬剤、例えばベータセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼ阻害剤およびガンマセクレターゼ調節物質;Aベータ斑の構築を予防または低下させる薬剤;Aベータ凝集阻害剤;RAGEアンタゴニスト;および神経変性疾患および/または認知機能低下を予防、治療または緩和する他の薬剤上記に説明した具体的な例を含む。本発明のさらに別の特徴にしたがえば、本発明のAベータ結合ポリペプチドは、上記に示した疾患及び以上の治療のために用いられる医薬と組み合わせて投与できるように調製される。そのような他の薬剤は以下から成る群から選択される:コリンエステラーゼ阻害剤、例えばドネペジル、リバスチグミン、ガランタミンおよびタクリン;NMDAアンタゴニスト、例えばメマンチン;Aベータ減少剤、例えばAベータの生成に必要な1つまたは2つ以上の酵素を阻害することができる薬剤、例えばベータセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼ阻害剤およびガンマセクレターゼ調節物質;Aベータ斑の構築を予防または低下させる薬剤;Aベータ凝集阻害剤;RAGEアンタゴニスト;および神経変性疾患および/または認知機能低下を予防、治療または緩和する他の薬剤上記に説明した具体的な例を含む。本発明のなお別の特徴にしたがえば、上記に示した疾患および異常の治療に用いられる医薬そのような医薬は、コリンエステラーゼ阻害剤、例えばドネペジル、リバスチグミン、ガランタミンおよびタクリン;NMDAアンタゴニスト、例えばメマンチン;Aベータ減少剤、例えばAベータの生成に必要な1つまたは2つ以上の酵素を阻害することができる薬剤、例えばベータセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼ阻害剤およびガンマセクレターゼ調節物質;Aベータ斑の構築を予防または低下させる薬剤;Aベータ凝集阻害剤;RAGEアンタゴニスト;および神経変性疾患および/または認知機能低下を予防、治療または緩和する他の薬剤上記に説明した具体的な例を含むから成る群から選択されるは、本発明のAベータ結合ポリペプチドと組み合わせて投与できるように調製される。本発明のさらに別の特徴にしたがえば、本発明のAベータ結合ポリペプチドは、前記ポリペプチドの投与に有用な装置例えば注射筒、注入ペンまたは他の装置と組み合わせて用いられる。本発明のさらに別の実施態様にしたがえば、以下の工程を含む、Aベータ機能不全および/またはアミロイド斑形性によって媒介される疾患、異常または症状を診断する方法が提供される:a対象者からサンプルを入手する工程;およびbサンプルを上記に規定した本発明のポリペプチドとinvitroで接触させる工程;およびc前記ポリペプチドと前記サンプルとの結合を検出する工程;およびd工程cで検出された結合を標準物と比較する工程、ここで前記サンプルに対応する結合の相違は、Aベータ機能不全および/またはアミロイド斑形性を特徴とする疾患、異常または症状の診断的特徴となる。本発明の別の実施態様にしたがえば、以下の工程を含む、Aベータ機能不全および/またはアミロイド斑形性によって媒介される疾患、異常または症状を診断する方法が提供される:a対象者からサンプルを入手する工程;およびbサンプルを上記に規定した本発明のポリペプチドと接触させる工程;およびcサンプル中のAベータの量を決定する工程;およびd工程cで決定された量を標準物と比較する工程、ここで前記サンプルに対応する量の相違は、Aベータ機能不全および/またはアミロイド斑形性を特徴とする疾患、異常または症状の診断的特徴となる。前記サンプルは例えば対象者の体液、例えば血液または脳脊髄液CSFであり得る。本発明のポリペプチドとAベータとの結合を検出する工程またはサンプル中のAベータの量を決定する工程は、一般的にはポリペプチドとAベータとの間での複合体形成の測定を必要とするであろう。この方法の異なる実施態様にしたがえば、複合体形成は溶液中でまたは基質上での1つの成分の固定化後に生じ、続いてそのような複合体が検出されるであろう。この目的のために、例えば特異的結合対例えばビオチンアビジン結合対の一部分である官能基を導入することによって、本発明のポリペプチドをさらに改変することが有用であり得る。そのような官能基を用いて、本発明のポリペプチドを別のタンパク質、ポリペプチドまたは化合物前記は結合対の他の半分と、すなわち結合対の形成を介して結合すると連結することができる。例えば、本発明のポリペプチドをビオチンと結合させ、さらにアビジンまたはストレプトアビジンと結合させた別のタンパク質、ポリペプチド、化合物または担体と連結させることができる。例えばそのような結合させた本発明のポリペプチドを、例えば検出可能なシグナルを生成する薬剤をアビジンまたはストレプトアビジンに結合させた診断系でレポーターとして用いることができる。上記診断方法はまた、対象者の治療的処置の有効性をモニターするために用いることができる。本発明の別の実施態様にしたがえば、上記で規定した方法で使用される、Aベータ機能不全によって媒介される疾患、異常または症状、および特にアミロイド斑形性および/またはADを診断するキットが提供される。そのようなキットは、少なくとも1つの本発明のポリペプチドおよび場合によって1つまたは2つ以上の媒体、検出手段および/またはinvitroもしくはinvivoの画像化剤、さらに場合によって使用の指示を含む。適切なinvivo画像化剤には99mTc、111インジウム、123ヨウ素が、磁性共鳴画像化のためには常磁性化合物が含まれる。SPECT、PETまたはMRIと本発明の標識抗Aベータポリペプチドとの組合せは‘Aベータ脳スキャン’および各患者についての個々のリスク評価を可能にするであろう。本発明のさらに別の実施態様にしたがえば、本発明のある種のAベータ結合ポリペプチドは、ヒトだけでなくマウスのAベータまたは他の動物由来Aベータの特異的検出のため、およびそのような検出に依拠する検査およびアッセイのための研究用ツールとして用いることができる。これは、動物モデルを利用する検査およびアッセイに特に有用である。本発明はさらに、少なくとも1つの本発明のAベータ結合ポリペプチド、およびさらに別の1つまたは2つ以上の成分上記に記載の疾患および異常の治療に用いられる他の薬剤から成る群から選択される、および上記に記載の装置を含むキットを提供する。本発明はさらに本発明のA結合ポリペプチドを製造する方法を提供し、そのような方法は一般的に以下の工程を含む:-本発明のポリペプチドの発現を可能にする条件下で本発明のポリペプチドをコードすることができる核酸以下では本発明の核酸を含む宿主細胞を培養する工程;および-宿主細胞によって発現されたポリペプチドを培養から回収または単離する工程;および-本発明のポリペプチドを場合によってさらに精製および/または改変および/または処方する工程。本発明の核酸はゲノムDNA、cDNAまたは合成DNAであり得る合成DNAは例えば目的の宿主細胞または宿主生物での発現に特に適応させたコドン使用頻度を有するDNA。本発明のある実施態様にしたがえば、本発明の核酸は上記に定義したように本質的に単離された形態である。本発明の核酸はまた、ベクター中に存在するのであれおよび/またはベクターの部分であれ、例えばプラスミド、コスミドまたはYACの形態であってもよく、前記は繰り返せば本質的に単離された形態である。前記ベクターは特に発現ベクター、すなわちinvitroおよび/またはinvivoで例えば適切な宿主細胞、宿主生物および/または発現系でポリペプチドの発現を提供できるベクターであり得る。そのような発現ベクターは一般的に少なくとも1つの本発明の核酸を含み、前記核酸は、稼動できるように1つまたは2つ以上の適切な調節エレメント例えばプロモーター、エンハンサー、ターミネーターなどに連結される。そのような調節エレメントおよび本発明のポリペプチドの発現に有用または必要な他のエレメント例えば組み込み因子、選別マーカー、シグナルおよびリーダー配列、レポーター遺伝子などの具体的な例は、例えばWO2006040153の131から133ページに開示されている。本発明の核酸は、本明細書で提供した本発明のポリペプチドのアミノ酸配列に関する情報を基に、それ自体公知の態様で例えば自動化DNA合成および/または組換えDNA技術により調製または入手するか、および/または適切な天然の供給源から単離することができる。別の実施態様にしたがえば、本発明は、本発明のポリペプチドを発現するかまたは発現する能力を有する宿主または宿主細胞、および/または本発明のポリペプチドをコードする核酸を含む宿主または宿主細胞に関する。特に好ましい実施態様にしたがえば、前記宿主細胞は細菌細胞、酵母細胞、菌類細胞または哺乳動物細胞である。適切な細菌細胞には、グラム陰性細菌細胞株例えば大腸菌Escherichiacoli、プロテウスProteus、シュードモナスPseudomonasの株およびグラム陽性細菌株例えばバシルスBacillus、ストレプトミセスStreptomyces、スタフィロコッカスStaphylococcusおよびラクトコッカスLactococcusの株が含まれる。適切な菌類細胞にはトリコデルマTrichoderma、ニューロスポラNeurosporaおよびアスペルギルスAspergillusの種に由来する細胞が含まれる。適切な酵母細胞には、サッカロミセスSaccharomyces例えばサッカロミセスセレビシアエSaccharomycescerevisiae、シゾサッカロミセスSchizosaccharomyces例えばシゾサッカロミセスポンベSchizosaccharomycespombe、ピキアPichia例えばピキアパストリスPichiapastorisおよびピキアメタノリカPichiamethanolicaおよびハンセヌラHansenulaの種由来の細胞が含まれる。適切な哺乳動物細胞には、例えばCHO細胞、BHK細胞、HeLa細胞、COS細胞などが含まれる。しかしながら、両性動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、および異種タンパク質の発現のために当業界で用いられる任意の他の細胞も同様に用いることができる。工業規模での生産のために、免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドおよび前記を含むタンパク質治療薬の工業的生産のための好ましい異種宿主には、大腸菌、ピキアパストリスおよびSセレビシアエの株が含まれる。前記は、大規模発現、生産および発酵、特に大規模生物医薬の発現、生産および発酵に適切である。具体的な発現系の選択は、部分的にはある種の翻訳後改変より具体的にはグリコシル化の必要性に左右されるであろう。グリコシル化が望ましいかまたは要求される本発明のポリペプチドの生産には、発現されたタンパク質をグリコシル化する能力を有する哺乳動物発現宿主の使用が必要となろう。これに関しては、得られるグリコシル化パターンすなわち付加される残基の種類、数および位置は、発現に使用される細胞または細胞株に左右されることは当業者には明白であろう。上記に示した細胞で生成される本発明のポリペプチドは、細胞内で例えばサイトゾル、ペリプラズムまたは封入体中で産生され続いて宿主細胞から単離され、場合によってさらに精製されるか、またはそれらは細胞外に生産され宿主細胞が培養されている媒体中に分泌され、続いて培養液から単離され場合によってさらに精製され得る。ポリペプチドの組換え体生産に用いられるさらに別の方法および試薬、例えば適切な発現ベクター、形質転換またはトランスフェクションの方法、選別マーカー、タンパク質発現の誘発方法、培養条件などは当業界では公知である。同様に、本発明のポリペプチドの製造方法で有用なタンパク質の単離および精製技術も当業者には周知である。便利な組換え宿主生物例えば大腸菌および酵母での発酵による本発明のポリペプチドの生産は、高価な哺乳動物細胞の培養設備も要求される通常の抗体と比較して費用効率がよい。さらにまた達成可能な発現レベルも高く、本発明のポリペプチドの収量は1から10gL大腸菌の範囲および10gL以上酵母である。本発明のさらに別の特徴にしたがえば、下記表VIIに列挙する免疫グロブリン単一可変ドメインが提供され、前記は本発明のAベータ結合ポリペプチドの構築に有用である。したがって、表VIIに列挙した免疫グロブリン単一可変ドメインのいずれかを場合によってヒト化した後で、1つまたは2つ以上の他のAベータ結合免疫グロブリン単一可変ドメインそのような他の免疫グロブリン単一可変ドメインはAベータの異なるエピトープと結合すると結合させるならば好ましくは1つの連続したポリペプチド鎖の形で、本発明の二パラトープ性Aベータ結合分子が得られるであろう前記結合分子は下記実施例9から11に詳細に示すように有用な結合の特徴を有する。表VII:Aベータ結合免疫グロブリン単一可変ドメイン実施例1:液性免疫応答誘発のためのAベータによるラマの免疫モノマーAベータペプチドBAMの生成:モノマーAベータペプチドBAMをトリフルオロ酢酸TFA;Sigma/111333ヘキサフルオロ2プロパノールHFIP;Fluka処理により調製する。凍結乾燥Aベータペプチドをその元のバイアル中にて100のTFA中で最終濃度1mgmLに溶解する。この溶液を続いて室温にてスピードヴァックspeedvac中で蒸発させる。この工程およびこの後の全蒸発工程の後で残存するペレットを氷上に置く。ペレットをHFIPに再懸濁し、室温にて再びスピードヴァックで蒸発させ、続いてもう1回HFIP溶解を実施し、その後、溶液を適切な体積のアリコットに分割する。前記アリコットを室温にてスピードヴァックで蒸発させ、ペレットを80°Cで保存する。使用直前に、TFAHFIP処理Aベータペプチドのアリコットをピペットの反復吸引吹出し操作により100のDMSOに溶解させる。Aベータペプチド溶液を14000rpmで10分遠心分離して存在し得る凝集物を除去し、上清を種々のアッセイに用いる。ラマの免疫:凝集AベータペプチドBAAおよびオリゴマーAベータペプチドBAOを用い、低い用量を首の領域の筋肉内に前記免疫原を所定期間注射することによってラマを免疫する。BAAは、本質的にSchenkらSchenketal,1999,Nature400173177が記載したように調製した合成AベータおよびAベータペプチドの混合物から成る。BAOは、本質的にKayedらScience300486489,2003が記載したように調製される。最初の2回の抗原注射は各回100μg抗原ラマから成り、その後に続く全ての投与について用量を50μgラマに減少させる。ラマ144および145を新しく調製したBAAでワクチン接種する。フロイントの完全アジュバント初回注射またはスチミューンStimune以下の全ての免疫原の追加免疫を用いエマルジョンとして最大16日の間隔で合計9回BAA抗原用量を注射する。ラマ129、130、177および178はBAOでワクチン接種する。フロイントの完全アジュバント初回注射およびフロイントの不完全アジュバントまたはスチミューンStimune以下の全ての免疫原の追加免疫を用いエマルジョンとして最大18日の間隔で合計6から9回BAO抗原用量を注射する。ラマはまた、ウシ血清アルブミンBSA;ラマ181および186を結合させたAベータペプチドフラグメント116、またはBSA結合Aベータペプチドフラグメント130ラマ185および187で免疫される。フロイントの完全アジュバントまたはフロイントの不完全アジュバントを用い、ラマ当たり抗原用量を100μg最初の2回の注射から50μgその後の2回の注射に減少させながら4回の抗原注射を14日間隔で実施する。各免疫計画の開始直前に免疫前血清サンプルおよび免疫実験中の定期的時点の免疫血清サンプルを収集し、個々の動物のAベータペプチド特異的液性応答を評価する。Aベータペプチド特異的血清力価をELISAによりモニターするために、C末端でビオチン化した2μgmLのAベータAnaspecをニュートラビジン被覆02-05μgウェル96ウェルマキシソープMaxisorpプレートNuncに室温で2時間固定する。ウェルをカゼイン溶液PBSにて1でブロッキングする。免疫前および免疫血清サンプルの連続希釈を添加した後、特異的に結合したラマ免疫グロブリンをヤギ抗ラマセイヨウワサビペルオキシダーゼ複合物BethylLabIncを用いて検出し、通常抗体および重鎖のみ抗体の両方により媒介される液性応答の検出を可能にする。ある種の事例では、連続ELISAを実施し、重鎖のみのラマIgG2およびIgG3抗体を特異的に認識するマウスmAbDaleyetal,2005,ClinDiagnLabImm12380386、続いてウサギ抗マウスHRP複合物DAKOを用いる検出により特異的に重鎖抗体媒介応答を評価する。ELISAは色素原基質としてTMBPromegaを用いて発色させ、吸収は450nmで測定する。4つの全ての免疫原形式BAA、BAO、AベータBSAおよびAベータBSAについて、ビオチン化モノマーAベータに特異的な、通常抗体および重鎖抗体媒介免疫応答の両方が検出される。モノマーAベータに対して陽性を示す血清サンプルはまた、マキシソーププレートに直接被覆したBAAに対して試験したときもまた陽性であり、用いたモノマーAベータとBAA調製物に少なくとも部分的に共通エピトープが存在することを物語っている。実施例2:免疫ラマからのAベータ結合VHHドメインVHHの単離重鎖のみ抗体フラグメントレパートリーのクローニング:最後の免疫原注射に続いて、重鎖抗体を産生するB細胞供給源として免疫組織を免疫ラマから収集する。典型的には、2つの150mL血液サンプルを最後の抗原注射から4日後および8日後に収集し、さらに1つのリンパ節最後の抗原注射から4日後に収集を各動物から収集する。血液サンプルから末梢血単核細胞PBMCを、フィコールハイパークFicollHypaqueを製造業者AmershamBiosciencesの指示にしたがって用いて調製する。PBMCおよびリンパ節生検から全RNAを抽出し、前記をRTPCRのための出発材料として用いてVHHコード遺伝子セグメントを増幅する以前にWO2005044858に記載。各免疫ラマについて、前記動物の全ての収集免疫組織から単離した全RNAをプールすることによってライブラリーを構築する。簡単に記せば、PCR増幅VHHレパートリーを固有の制限部位によりベクターでクローニングする前記ベクターはVHHライブラリーのファージディスプレーを促進するように設計されている。前記ベクターはpUC119から誘導され、LacZプロモーター、M13ファージgIIIタンパク質コード配列、アンピシリンまたはカルベニシリン耐性遺伝子、マルチクローニング部位およびハイブリッドgIIIpelBリーダー配列pAX050を含む。VHHコード配列とインフレームの状態で、前記ベクターはC末端cmycタグおよび6タグをコードする。ファージは標準的プロトコルにしたがって調製され、更なる使用のためにろ過滅菌後4°Cで保存される。ファージディスプレーによるAベータ特異的VHHの選別:全ラマから入手し、ファージライブラリーとしてクローニングしたVHHレパートリーを、多重選別条件を適用する種々の選別手法で用いる。可変因子は以下を含む:iAベータペプチド形式AベータC末端もしくはN末端ビオチン化、AベータC末端ビオチン化、AベータN末端ビオチン化およびグルタチオンSトランスフェラーゼGST融合、例えばAベータGST、AベータGSTまたはGSTAベータ、iiAベータペプチド凝集状態モノマーAベータ、BAOまたはBAA、iii抗原提示方法固相:ニュートラビジン被覆プレートに直接被覆またはビオチンタグを介して;溶液相:溶液中でインキュベーション、続いてニュートラビジン被覆プレート上で捕捉、iv抗原濃度、およびv異なる溶出方法トリプシンまたはTEA選別は以下のように実施される:固相および溶液相選別形式のための抗原調製物は複数の濃度で上記のように提示される。ファージライブラリーと2時間インキュベートし続いて十分に洗浄した後、結合ファージをトリプシン1mgmLまたはTEAで15分溶出させる。ファージ溶出にトリプシンを用いる場合、プロテアーゼ活性は、08mMのプロテアーゼ阻害剤ABSFを適用して直ちに中和する。コントロールとして、抗原無しの選別を並行して実施する。バックグラウンド抗原無しコントロールを超える濃縮を示すファージ産出物を用いて大腸菌に感染させる。感染大腸菌細胞を次の選別ラウンドファージレスキューのためのファージの調製に用いるか、または個々のVHHクローンの解析のために寒天プレートLBAmp2グルコースにプレートするために用いる。特異的結合物について選別産出物をスクリーニングするために、寒天プレートから単一コロニーを採取し、1mLの96深ウェルプレートで増殖させる。グルコース非存在下でIPTG最終01-1mMを添加することによってplacZ制御VHH発現を誘発する。約80μLの体積でのペリプラズム抽出物は標準的方法にしたがって調製する。Aベータ結合についてのペリプラズム抽出物のスクリーニング:C末端でビオチン化した2μgmLのAベータAnaspecをニュートラビジン被覆02-05μgウェル96ウェルマキシソーププレートNuncで室温にて2時間捕捉する。ウェルをカゼイン溶液PBSで1でブロッキングする。典型的には10倍希釈のペリプラズム抽出物を添加した後、マウス抗mycおよび抗マウスHRP複合物DAKOを用いてVHH結合を検出する。最低限バックグラウンドの2倍を超えるELISAシグナルを生じるクローンを配列解析のために保持する。ビオチン化モノマーAベータと結合することができるVHHは、16の異なるB細胞系列に割り当てることができる。同じB細胞系列に由来するクローンは高度の類似するCDR3を共有し、したがって同じエピトープを認識しそうである。表VIIIは、16のB細胞系列の各々の典型的VHHの同定をもたらす選別パラメータの要旨である。表IXでは、表VIIIに列挙するVHHのアミノ酸配列を示す。表VIII:Aベータ特異的VHHB細胞系列の同定に用いられる選別パラメータ表IX:得られた代表的VHHのアミノ酸配列各B細胞系列について見出される変種の総数最低限1つのアミノ酸相違は、1ABII5D2、195ABII42D4、1ABII42G10、1ABII60D2、1ABII60H5、23ABII1E11、3ABII14D4、3ABII35C7、6ABII35G2、1ABII35D2、7ABII42B10、2ABII42F5、3ABII42E10、2ABII60A10、2ABII60G11、および15ABII61F6である。最良の結合特性を有するB細胞系列変種を同定するために、全てのVHH変種のペリプラズム抽出物を用いてオフ速度を決定したBiacoreT100,GEHealthcare。モノマーAベータC末端でビオチン化;Anaspec、モノマーAベータC末端でビオチン化;BachemおよびモノマーAベータN末端でビオチン化;Bachemを実施例1に記載したように調製し、同じSAセンサーチップGEHealthcareの3つの別個のチャネル上にストレプトアビジンを介して不可逆的に捕捉する。表面を最初に表面洗浄緩衝液50mMのNaOH中の1MNaClの1分注入により3回洗浄し、続いてビオチン化Aベータ50nMを100RUの標的レベルまで注入する。捕捉後、過剰のdビオチン200μgmLを5μL分で180秒間注入することによって表面をブロッキングする。参照表面はdビオチンで洗浄およびブロッキングする。HB緩衝液を泳動緩衝液として用い、実験は25°Cで実施する。オフ速度スクリーニングのために、VHHのペリプラズム抽出物を10倍希釈で2分間45μL分で注入し、10分間解離させる。精製参照結合物100nMのVHH、10nMの3D6Fabを陽性コントロールとして注入し、各実験の少なくとも開始と終了時に判定する。別個のVHHサンプル間において、表面を再生緩衝液50mMのNaOHで25秒間45μL分で、続いて再生が不完全な場合は6MのGuHClで10秒間45μL分で再生する。オフ速度は、捕捉されたビオチン化Aベータによりチャネルから得られたセンサーグラムから計算される。2つのVHHB細胞系列ABII42D4およびABII60G11の変種のみが単相の結合パターンを示し、1:1相互反応モデルによるオフ速度の計算を可能にしたすなわちそれぞれ61E3s1および27E2s1。他の全てのVHHB細胞系列については、解離曲線の2つの異なる区画が別々に適合し、kd1125から160秒間の解離枠から計算およびkd2400秒-700秒を提示した。データは、参照チャネルの曲線およびブランク泳動緩衝液注入を差し引くことによって二重に照合する。センサーグラムは、バイアコアBiacore評価ソフトウェアバージョン111を用い、1:1解離モデルを適合することによって評価する。VHHABII60D2およびABII60H5のAベータとの結合はELISAスクリーニングで観察されるが、これらのVHHはセンサーチップと低い結合を示す。一価の非VHH結合物の結合特徴を調べるために、モノクローナル抗体m266および3D6のFabフラグメントを用いる。モノクローナル抗体3D6は以下の文献に記載されてありJohnsonWoodetal,1997,ProcNatlAcadSci9415501555およびBardetal,2000,NatureMedicine6916919、特にAベータのアミノ酸残基1から5N末端エピトープと結合する。モノクローナル抗体m266は以下の文献Seubertetal,1992,Nature359325327に記載されてあり、特にAベータのアミノ酸残基16から24Aベータの中心部エピトープと結合する。Fabフラグメントそれぞれの抗体の可変軽鎖VLおよび可変重鎖VH、定常軽鎖CLおよび重鎖の定常ドメイン1CH1配列は下記に示す、並びにさらに別にC末端cmycタグおよびヘキサヒスチジン6タグを含むを通常的技術にしたがってクローニング、発現および精製し、宿主生物として大腸菌を用い、精製には固定金属アフィニティIMACおよびサイズ排除クロマトグラフィーSECを用いる。m266および3D6の精製Fabフラグメントは、上記に記載の結合実験ではそれぞれ40E5s1および47E4s1のオフ速度を示す。3D6のFabフラグメントのVLおよびVH配列:VL:YVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRIEAEDLGLYYCWQGTHFPRTFGGGTKLEIK配列番号:128VH:EVKLVESGGGLVKPGASLKLSCAASGFTFSNYGMSWVRQNSDKRLEWVASIRSGGGRTYYSDNVKGRFTISRENAKNTLYLQMSSLKSEDTALYYCVRYDHYSGSSDYWGQGTTVTVSS配列番号:129m266のFabフラグメントのVLおよびVH配列:VL:DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLIYSDGNAYLHWFLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVETEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIK配列番号:130VH:EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCAVSGFTFSRYSMSWVRQTPEKRLELVAQINSVGNSTYYPDTVKGRFTISRDNAEYTLSLQMSGLRSDDTATYYCASGDYWGQGTTLTVSS配列番号:131実施例3:精製VHHの性状決定各B細胞系列について最も遅い解離速度を有するVHH変種をpUC119由来の発現ベクターで再クローニングする。前記発現ベクターは、LacZプロモーター、アンピシリンまたはカナマイシン耐性遺伝子、マルチクローニング部位およびハイブリッドgIIIpelBリーダー配列を含む。VHHコード配列とインフレームの状態で、前記ベクターはC末端cmycタグおよび6タグをコードする。VHHは大腸菌で生成し、固定化金属アフィニティIMACおよびサイズ排除クロマトグラフィーSECで精製し、SDSPAGEで判定したとき純度95が得られる。31固定AベータとのVHHの結合ELISA:VHHとモノマーAベータペプチドBAMとの結合を定量するために、実施例2に記載したものと同じ設定を用いVHHを連続希釈としてELISAに適用する。VHHABII60D2およびABII60H5を除き、EC50値を計算し表Xに要約する。AベータのN末端エピトープアミノ酸1から16またはAベータの中心部エピトープアミノ酸12から28と相互反応するもっとも強力なVHHは、それぞれABII42D4EC50は142nMおよびABII60A10EC50は49nMであると決定される。BAMに対して検出可能なシグナルを生じるVHHをAベータペプチド凝集物BAAとの結合についてELISA実施例2に記載したものと同じ設定を適用で試験する。文献Bohrmannetal,1999,JBiolChem2741599015995にしたがって抗原を調製し固定する。簡単に記せば、TBS緩衝液50mMトリス、150mMNaClpH74および005アジ化ナトリウムで希釈した10μgmLのAベータ2mgmLの合成AベータBachemのDMSOストック溶液からの100μLを37°Cで60時間凝集させる。BAMを認識するVHHは全てBAAを認識する。対応するEC50は表Xに要約される。表X:BAMおよびBAAELISAにおける精製VHHのEC50ND:実施せず;:IC50は外挿曲線から計算される32溶液中でのAベータとのVHHの結合TRFRET:溶液中での抗AベータVHHとAベータペプチドとの相互反応を時間分解蛍光共鳴エネルギー伝達TimeResolvedFluorescenceResonanceEnergyTransferTRFRET競合アッセイを用いて評価する。2つの異なる設定で、Aベータペプチド‐ABII42D4相互反応N末端領域特異的またはAベータペプチド‐ABII60A10相互反応中心部領域特異的との競合を試験する。このアッセイのために、ストレプトアビジン‐ユーロピウムキレートで標識したモノマーAベータおよびAlexaFluor647で標識したVHHABII42D4またはABII60A1を種々の濃度の非標識競合物VHH、IgGまたはFabとともに1時間インキュベートする。それぞれ以下の濃度02nM、50nMおよび10nMの標識化合物を用い、結合反応時に放出される蛍光シグナルを665nmで検出する。IC50をABII42D4およびABII60A10TRFRETアッセイで決定し、検査したN末端領域特異的結合物について以下の能力ランキングが得られた:モノクローナル抗体3D625nM>Fabフラグメント3D634nM>ABII42D4468nM>ABII5D2=42G10>1000nM。このアッセイで認定されたもっとも強力な中心部領域特異的VHHはABII60A10で、111nMのIC50を示し、一方、ベンチマーク抗体のIC50は050nMモノクローナル抗体m266および052nMm266のFabフラグメントであった。比較のために、以前に開示された抗AベータVHH参照VHHを下記に示す国際特許出願公開公報から入手できる配列情報を用いて上記のように作製し精製する:VHHs2D2および2G6:WO200640153;VHHs3A、1B、11G、4Dおよび8B:WO200735092;およびVHH311:WO200444204。そのアミノ酸配列は表XIに示される。表XI:参照VHHのアミノ酸配列参照VHH2G6N末端領域特異的および2D2中心部領域特異的と比較して、VHH42D4および60A10は、それぞれ21倍以上および36倍以上改善されたIC50を示す表X参照。33Aベータペプチド‐VHH相互作用の親和性の決定:Aベータペプチド‐VHH/Fab相互作用の親和性を、以前実施例2に記載したようにストレプトアビジンセンサーチップ上に捕捉したC末端ビオチン化Aベータを用い表面プラズモン共鳴Biacoreにより決定する。精製VHHまたはFabフラグメントを異なる5つの濃度ABII42D4およびABII60A10について25から300nMで2分間注入し、10分間解離させる。ABII42D4については結合および解離曲線は1:1相互反応モデルラングミュア結合を用いて適合させることができただしABII60A10では適合しない、正確なKD値を決定できる。親和性は、それぞれVHHABII42D4については16nM、3D6のFabフラグメントについては51nM、およびm266のFabフラグメントについては03nMであることが見出される。34表面プラズモン共鳴によるエピトープマッピング:AベータC末端でビオチン化;BachemおよびAベータN末端でビオチン化;Bachemペプチドを用いて表面プラズモン共鳴BiacoreによりVHHの結合特異性を決定するこれらペプチドは上記に記載したようにストレプトアビジンセンサーチップ上で捕捉される。上記の表IXに列挙したVHHのうち5つABII5D2、ABII42D4、ABII42G10、ABII60D2およびABII60H5がAベータペプチドのN末端領域と相互反応し、11VHHABII1E11、ABII14D4、ABII35C7、ABII35G2、ABII35D2、ABII42B10、ABII42F5、ABII42E10、ABII60A10、ABII60G11およびABII61F6;表X参照が中心部領域と相互反応することが見出される。35invitroAベータ凝集アッセイ:VHHをinvitroAベータ凝集アッセイで試験し、凝集を阻害または低下させることができるか否かを判定する。invitroAベータ凝集はチオフラビンTThT蛍光を用いて測定する。ThTはAベータ原線維形成時に典型的な赤色シフトを受けるLevine,H1993ProteinScience404410アッセイのために、100DMSO中の合成AbetaBachemのストック溶液および25mMグリシン‐NaOHpH85中のThTを調製し20°Cで保存する。使用前に、Abetaストック溶液を凝集緩衝液50mMリン酸ナトリウム、100mMのNaClpH5、002のNaN3で56μMに希釈する。FabフラグメントおよびVHHを、56および7μMの間の濃度を用いてDPBS中の連続希釈として試験する。56μMのAbeta溶液および抗体/VHHサンプルまたは適切な陰性コントロールの等しい体積20μLを混合しトリプリケート、混合物を吸着性の低いマイクロ遠心分離管で37°Cにて48時間暗環境でインキュベートする。このインキュベートサンプルの30μLを黒色の96ウェル平底ポリプロピレンプレートGreinerBioOneに移した後、25μMのThTストック溶液を25mMグリシン‐NaOHで稀釈250μLを加え、蛍光シグナルを測定するEnvision,PerkinElmer。競合物質の非存在下で測定されたAbetaの最大蛍光シグナルを100凝集または0阻害と設定する。試験した最高のVHH濃度28μMにおける最大阻害を少なくとも2つの独立した実験の平均として計算する。無関係の非Aベータ特異的VHHについて約25の定常的バックグラウンド阻害が検出されるが、一価のFabフラグメント3D6およびm266は、再現性のある用量依存阻害それぞれ79および85の最大阻害を示す。試験したVHHパネルのうちで、14D4、35C7、35G2、35D2、42B10、42F5、42E10および60A10がそれぞれ78、82、76、73、77、79、75および80のペプチド凝集定常阻害を示す非特異的コントロールVHHで誘発される25のバックグラウンド阻害よりも高い。実施例4:VHHの親和性成熟VHHABII42D4を2サイクルの親和性成熟に付す。最初のサイクルでは、個々のCDRを他の全ての19アミノ酸に変異させる。以下の残基を標的にする:CDR1:G26-G35;CDR2:V51-N58;およびCDR3:H95-Y102番号付与はKabatによる。変異導入は、変異位置にNNSコドンを含む縮退オリゴヌクレオチドを用いるPCR系手法で実施する。PCR生成物を各CDRについてプールし、固有の制限部位を用いてABII42D4遺伝子鋳型に挿入する。pUC119から誘導した発現ベクターを用いて組換えタンパク質として個々の変異体を生成する。前記発現ベクターは、LacZプロモーター、カナマイシン耐性遺伝子、マルチクローニング部位およびompAリーダー配列を含むpAX100。大腸菌TG1細胞をこの発現ベクターライブラリーで形質転換し、寒天プレートLBAmp2グルコースにプレートする。寒天プレートから単一コロニーを採取し、1mLの96深ウェルプレートで増殖させる。VHH発現はIPTG1mMを添加することによって誘発する。ペリプラズム抽出物約80μLの体積は標準的方法にしたがって調製し、上記実施例2に記載したようにELISAおよびバイアコアオフ速度アッセイでAベータとの結合についてスクリーニングする。6位での変異S30、T57、L97、T100b、S100c、G100eはわずかに約2倍改善されたオフ速度をもたらす。2回目のサイクルでは、サイクル1で同定した6つの感受性位置を同時にランダム化することによってコンビナトリアルライブラリーが作製される。この目的のために、前記ランダム化位置で縮退させたオリゴヌクレオチドNNSを用いてオーバーラップPCRを実施することによって完全長ABII42D4遺伝子を合成し、さらにレスキューPCRを実施する。ランダム化ABII42D4遺伝子をファージディスプレーベクターpAX50に挿入し、6x10E7の機能的ライブラリーサイズを生成する。ファージは標準的プロトコルにしたがって調製する。捕捉工程のためにストレプトアビジン被覆磁性ビーズDynalを用い、前記ファージライブラリーをビオチン化モノマーAベータに対して3巡の溶液相選別に付す。1巡目の抗原濃度50nMから始めて各ラウンドで10倍ずつ抗原濃度を減少させる。結合ファージはトリプシン1mgmLで30分間溶出させ、個々のVHHクローンのペリプラズム抽出物の調製のために産出ファージを大腸菌に感染させる。ELISAおよびバイアコアオフ速度アッセイ実施例2でのAベータとの結合についてのスクリーニングによってオフ速度が10倍まで改善されたクローンが同定される。最良のABII42D4変種をC末端cmycタグおよび6タグとインフレームの状態で、発現ベクターpAX100でクローニングする。VHHはHis6タグ付きタンパク質として大腸菌で増殖させ、固定金属アフィニティクロマトグラフィーIMACおよびサイズ排除クロマトグラフィーSECによって精製する。精製VHHの親和性は表面プラズモン共鳴Biacoreにより決定し、IC50値はABII42D4TRFRET競合アッセイ実施例32で決定する。結合親和性のさらなる改善のために、変種ABIIPMP111B5を鋳型として用い、クローンABIIPMP111E4およびABIIPMP111B4で見出された多様な変異を1つずつ導入する。得られた変種を大腸菌で生産し、上記に記載したように性状を決定する。ABII111B5M107R、ABII111B5M107EおよびABII111B5E109Qが最良の変種として同定され、IC50およびKDは両方とも本来のABII42D4より10倍以上改善されている。上記に記載した変種の配列情報および生物学的データは上記の表VIIに要約されている一列目:42D4;2から9列目:親和性成熟の最初の2サイクルから得られた有用なクローン;10から18列目:さらに別の標的変異導入から得られた有用なクローン。実施例5:VHHのヒト化抗AベータVHHABII111B5M107RABII002;配列番号:62および抗AベータVHHABII60A10ABII050;配列番号:100のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列のVH配列データベースに対してブラスト検索する。JH5と組み合わせたヒト生殖細胞系列VH323配列DP47;配列番号:140は両VHH配列に対して最高の配列同一性を示した。配列DP47VH323:EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK配列番号:140配列JH5:NWFDSWGQGTLVTVSS配列番号:153ヒト化の目的のためにABII002およびABII050のそれぞれ17および10アミノ酸残基を置換し、各VHHの多数の種々の変種を作製した。全変種を、PCRオーバーラップ伸長法を用いてオリゴヌクレオチドからアッセンブリングし、発現ベクターpAX100でクローニングし、大腸菌で増殖させた。得られたABII002の変種すなわちABII003からABII037および得られたABII0050の変種すなわちABII051からABII061についての配列情報および結合データは上記表VIIに要約されているそれぞれ列19から53および列55から最後の列65まで。表XIIはさらに別にABII002からABII036およびABII050からABII060のヒト化の程度を列挙している。表XII:ABII002およびABII050のヒト化変種上記の表VIIおよびXIIに要約した生物学的データにしたがえば、そこに列挙したVHH変種のいずれも、少なくとも中間体として本発明のポリペプチドの構築に使用できる。特にヒトでの使用については、ヒト化VHH変種ABII003からABII037およびABII051からABII061は好ましいであろう。高度なヒト化を示すがそれらの結合特性を温存している、具体的に有用な変種は、原型クローン42D4に由来するABII035および原型クローン60A10に由来するABII059である。ABII035はAベータのN末端と結合し、配列番号:14から16のCDR配列を含む。ABII059は中心部エピトープと結合し、配列番号:17から19のCDR配列を含む。実施例6:ヒト化VHHと参照VHHとの比較精製抗Aベータ参照VHH実施例32、表XIを、C末端ビオチン化モノマーAベータで被覆したSAセンサーチップとの結合実施例について3に記載について試験する。ABII035およびABII059は、それぞれ11および3nMの注入濃度で50を超えるRUレベルを示したが、VHH1B、11G、8B、4D、3AおよびVHH311はいずれも、試験した条件下では1000nMの濃度でもセンサーチップと結合しない。同じ実験で、参照VHH2G6および2D2は、それぞれ1000および100nMの注入濃度で50を超えるRUレベルを示し、したがってABII035およびABII059より能力ははるかに低い。表面分解の徴候は実験中には検出されなかった。続いて、この参照VHHセットの結合もまた、以下の別個のペプチド形式を用いる多重ELISAセットアップ実施例3に記載の検出でのモノマーAベータとの結合について立証される前記ペプチド形式は例えば以下の通り:捕捉AベータCまたはN末端ビオチン化、直接固定のAベータおよびAベータ、GSTAベータまたはAベータGST1μgmLの濃度で捕捉。参照VHH1B、11G、8B、4D、3Aについては、モノマーAベータとの結合は検出されない。BAAELISAでは、参照VHH8Bだけが1000nMを超えるVHH濃度で凝集Aベータとの結合を示す。2D2および2G6VHHと比較して、ABII035およびABII059VHHは50倍を超える高いEC50値を示す。結果は表XIIaに要約する。表XIIa:42D4および60A10由来VHHの結合特徴と参照抗AベータVHHの結合特徴との比較ND:実施せず;:IC50は外挿曲線により計算実施例7:抗ヒトAベータVHHとげっ歯類Aベータとの結合ELISAおよびバイアコア上記で得たVHHとげっ歯類Aベータとの結合をELISAで評価する。マウスBachemまたはヒトAベータAnaspecをマキシソーププレートに2μgmLで被覆し、VHHとの結合、および比較のためにFabフラグメントとの結合をマウス抗myc抗体および抗マウスHRP複合体DAKOにより検出する。EC50値を3D6のFabフラグメント、VHHABII002およびVHHABII035について決定する。結果は下記の表XIIIに列挙する最低限2つの別個の実験の平均である。表XIII:ヒトおよびマウスAベータとの結合についてのEC503D6FabフラグメントはヒトAベータよりも有意に低く26倍の相違マウスAベータと結合する。ABII002およびABII035は、両Aベータと等しく良好に結合しそれぞれ18および22倍の相違、ABII002およびそのヒト化誘導体ABII035は、3D6によって認識されるエピトープとは別個のエピトープを認識することを示唆する。VHHとマウスおよびヒトAベータとの結合を、チップに直接被覆した非ビオチン化エピトープを用いるバイアコアでさらに評価する。ヒトおよびげっ歯類Aベータとの親和性における相違はヒト化前およびヒト化後のVHHについて検出されない。実施例8:二パラトープ性抗AベータVHH構築物の作製および性状決定VHHABII42D4AベータペプチドのN末端領域を認識するおよびVHHABII60A10中心部領域を認識を可撓性グリシン‐セリンリンカー例えば9GS:GGGGSGGGG、配列番号:141を介して融合させ、二価VHH構築物を作製する。リンカーの長さおよび向きが異なる、以下の4つの二パラトープ性構築物ABII42D425GSABII60A10、ABII60A1025GSABII42D4、ABII42D435GSABII60A10およびABII60A1035GSABII42D4異なるエピトープ特異性を有する2つのVHHドメインを含むをさらに詳細に調べ、対応するVHHダイマー2つの同一のVHHドメインを含む例えば二価ABII42D49GSABII42D4構築物と比較する。二パラトープ性およびダイマー性または二価VHHを大腸菌G1細胞で生成し、アフィニティクロマトグラフィーIMACまたはプロテインAおよびサイズ排除クロマトグラフィースーパーデックスSuperdex75またはセファクリルSephacrylS100を用いて精製し、SDSPAGEで判定したとき純度95以上を得た。81TRFRET結合アッセイ:二パラトープ性VHH構築物とAベータとの結合をABII42D4およびABII60A10TRFRETアッセイ実施例32を用いて判定する。二価ABII42D49GSABII42D4構築物はわずかに改善されたIC50を示すだけで一価ABII42D4に対して32倍の改善、一方、二パラトープ性VHHは、一価構築ブロック並びに3D6およびm266Fabフラグメント表XIVさらには3D6およびm266IgG3D6およびm266完全長モノクローナル抗体よりも顕著に強く結合することが見出された。リンカーの長さおよび向きが異なる構築物間で能力の相違は見出されない。表XIV:ABII42D4およびABII60A10TRFRETアッセイにおける二パラトープ性抗AベータVHH構築物と比較例のIC5082結合様式の決定:二パラトープ性構築物の結合様式を調べるために、両VHH構築ブロックが同じペプチド分子に同時に結合できるか否かを判定する。サンドイッチELISAでは、タグ無しABII60A10またはhisタグABII42Dでマキシソーププレートを被覆し、Aベータペプチドとともにインキュベートする。続いて、得られたVHH‐ペプチド複合体を、N末端または中心部Aベータペプチドエピトープを認識するcmycタグVHHとともにインキュベートする。以前実施例2に記載したようにcmycによる検出を実施する。両設定について結合が認められ、N末端または中心部エピトープを認識する2つのVHHは同時にAベータペプチドに結合できることを示唆した。SPR系アッセイによる結合様式の決定:以前実施例2に記載したようにC末端ビオチン化Aベータをセンサーチップに固定する。ABII60A10を500nMの飽和濃度で注入し、Aベータとの結合を観察する。120秒後に、200nMのABII42D4および500nMのABII60A10を同時注入し、更なる結合がもたらされる。500nMの60A10のコントロール注入単独では更なる結合は全く発生せず、観察された更なる結合はABII42D4‐Aベータ相互作用によることを物語っている。サイズ排除クロマトグラフィーを用いる結合様式の決定:サイズ排除クロマトグラフィーSECは、カラムに充填されたゲルろ過媒体を分子が通過するときにサイズの相違にしたがって分子を分離する。二パラトープ性VHH構築物とそれらの標的との結合様式は、1:2のモル比の対応するVHH構築物および標的タンパク質をインキュベートした後で、タンパク複合体を解析することによって確認することができる。したがって、混合物をSECによって分離し、得られたピークの内容物をタンパク質ゲル電気泳動によって解析する。Aベータp38融合タンパク質計算分子量46kDaを有するをモノマーとしてSECで泳動させる。ヒト血清アルブミンと融合させた二パラトープ性VHH60A1027GS42D4Albは計算分子量95kDaを有する。二パラトープ性VHHが1つ=分子内結合または2つの=分子間結合Aベータp38融合タンパク質と結合するかどうかを確認するために、1:2のモル比のVHHおよび標的タンパク質を混合し、4°Cで一晩インキュベートし、調製用サイズ排除カラムHiLoad2660Superdex200調製用グレード、GEHealthcare,USAとAKTAエクスプローラーAKTAexplorer,GEHealthcare,USAを組み合わせて用いるSECに適用し、単独タンパク質からタンパク複合体を分離する。ゲルろ過は2つのピークを生じ、これらピークをさらに、自動化電気泳動ステーションエクスペリオンExperion,BioRad,USAおよび適切なチップPro260Chip,BioRad,USAを用いるSDSPAGEによって解析する。エクスペリオンでの解析は、主要ピークはVHHおよびAベータp38融合タンパク質を含むが、より小さいピークはAベータp38融合タンパク質のみを含むことを明らかにした。複合体中のVHHおよびAベータp38融合タンパク質の量を、エクスペリオンデータ解析ソフトウェアを用いて決定する。エクスペリオンで測定されるタンパク質の分子量は、Aベータp38融合タンパク質については53kDaおよび60A1027GS42D4Albタンパク質については101kDaである。測定濃度、したがって計算モル濃度は、Abetap38融合タンパク質および60A1027GS42D4Albタンパク質についてそれぞれ087μMおよび086μMである。したがって、解析タンパク複合体中のAbetap38対60A1027GS42D4Albの比率は約1:1であるが、ただし前記は1:2のモル比で混合されている。この結果から、1つの二パラトープ性VHHは、1つのおよび同じAベータ分子内でAベータペプチド分子の2つのエピトープと結合し、したがって二価VHH構築物によりAベータ分子を架橋することにより作用するわけではない少なくとももっぱら作用するわけではないと結論することができる。83結晶化実験:結晶化のために、ABII035およびABII059各々160μMを3倍モル過剰のヒトAベータペプチド残基1-24とともに16時間インキュベートし、複合体をサイズ排除クロマトグラフィーによって精製する。透析ろ過により前記複合体を4mgmLの濃度に濃縮する。結晶化試験は、200nLのタンパク質を貯留槽体積100μLに対し200nLの貯留液と混合することによって静置液滴気化拡散sittingdropvapourdiffusion実験として設定される。結晶は、種々の多様な条件下で数日後に出現する。これらの条件のうちで以下を用いて構造を決定する:100mMMMT緩衝液pH5、25PEG1500。結晶を凍結保護剤85mMMMT緩衝液pH5、35PEG1500で処理し、液体窒素で瞬間凍結する。データは、スイス光源PaulScherrerInstitute,Villigen,Switzerlandの6SAビームラインで収集する。結晶構造では、ABII035、ABII059およびヒトAベータペプチド残基1-24から誘導されたペプチドの1つの分子が三元複合体を形成する。この複合体は、Aベータペプチドの2つの分子によって形成されるアンチパラレルなベータシートによりダイマーを形成する。結晶の不整ユニットはこれらの構造の2つによって占められ、前記ユニットは合計して、各Aベータペプチド、ABII035およびABII059で構成される分子4つ分である。Aベータの残基1から9はアルファヘリックスコンフォーメーションを採り、残基10から20はベータ鎖を形成する。Aベータの残基1から14はABII035に近接し、前記のうちAsp1、Ala2、Glu3、Phe4、Asp7およびHis14は直接ABII035と接触する。Aベータの残基15から24はABII059と近接し、前記のうちGln15、Lys16、Val18、Phe19、Phe20、Glu22およびAsp23は直接ABII059と接触する。上記に加えて、ABII035およびABII059はAベータの1つの同じ分子と同時に結合できることが結晶構造から明瞭になり、上記の実施例82で得られた結果が確認できる。さらにまた、上記結晶構造データによって立証される、ABII035とAベータ誘導ペプチドとの相互作用の態様は、上記実施例7に記載した観察ABII035はげっ歯類Aベータペプチドに関して良好な種間交差反応性を示すと一致する。ヒトとげっ歯類のAベータとの間の配列相違はR5G、Y10FおよびH13Rだけである。上記データにしたがえば、これら残基のいずれもVHHと接触しない。したがって、げっ歯類のAベータは、ヒトAベータと同じコンフォーメーションでABII035と結合すると推定され、このことは、前記を例えばマウスまたはラットのようなげっ歯類動物モデルげっ歯類Aベータペプチドを生成するを必要とするアッセイのためのツール試薬として研究ツールとして特に有用なものにする。実施例9:半減期延長ヒト化二パラトープ性抗AベータVHH構築物の作製および性状決定91構築物ABII314からABII323の作製:ヒト化二パラトープ性VHH構築物に関するinvivo立証実験のために、以下の異なる半減期延長HLE方法を調べる:1アルブミン結合VHHとの遺伝的融合例えばWO2004041865に記載、2VHH間リンカーまたはVHHのC末端に位置するCys残基のPEG化WO2008142164および3ヒトまたはマウス血清アルブミンとの遺伝的融合。種々のHLE方法を、ABII035およびABII059VHHドメイン/構築ブロックを含む二パラトープ性VHH構築物を用い調べる。適切なオーバーラップオリゴヌクレオチドセットを用い遺伝子アッセンブリーにより構築物ABII314からABII323を作製する。ABII314からABII323の配列番号およびアミノ酸配列は表XVに列挙されている。構築物ABII314、ABII315、ABII322およびABII323で、構築ブロックABII059を種々の長さ表XVに表示のGlySerリンカーによりABII035と融合させる前記リンカーはPEGとの複合体形成のためのシステイン残基を表XVに表示した位置に含む。構築物ABII316からABII321は、遺伝的に連結されたVHHABII035、ABII059およびALB8マウスアルブミンと交差反応性を有するヒト化抗ヒトアルブミンVHHから成り、前記は異なる向きを有しさらに9GSまたは35GSリンカーによって分離されている。下記表XVに示す構築物は場合によってさらに6ヒスチジンタグおよび/または他のタグ例えば得られたポリペプチドの精製促進のためのタグを追加で含むことができる。表XV:二パラトープ性VHH構築物ABII314からABII32392ヒト化半減期延長二パラトープ性VHH構築物の製造、精製およびPEG化:His6タグ付き二パラトープ性VHH構築物ABII314、ABII315、ABII322およびABII323を、アフィニティクロマトグラフィーIMACまたはプロテインA、陽イオン交換クロマトグラフィーSPセファロース、ソース30SまたはPOROS50HSおよびサイズ排除クロマトグラフィースーパーデックス75またはセファクリルS100により精製する。、PEG化は、最低限90SDSPAGEおよびその後のクーマシーブリリアントブルー染色により決定のタンパク質純度レベルで実施する。まず初めにDLジチオスレイトール溶液DTTを最終濃度10mMで添加し、続いて室温で2から3時間または4°Cで一晩インキュベートすることによって、VHHの分子間S‐S結合を還元する。その後、DPBS泳動緩衝液中でのサイズ排除クロマトグラフィースーパーデックス75200により還元剤を除去し、主要ピークを収集する。還元剤の除去後ただちに、二パラトープ性ポリペプチド構築物を5倍のモル過剰のPEGとともに室温で1時間または4°Cで一晩インキュベートする。PEG化ポリペプチドを遊離PEGおよび非PEG化ポリペプチドから陽イオン交換クロマトグラフィーMacroCapSPにより分離する。最終仕上げ工程およびDPBSへの緩衝液交換は、スーパーデックス200またはセファクリルS200での調製用サイズ排除クロマトグラフィーにより実施する。精製PEG化ポリペプチドの品質は、SDSPAGとそれに続くCBBおよびPEG染色以前にNatarajanらNatarajanetal,Bioconjugatechemistry16113121が記載により実証する。93半減期延長ヒト化二パラトープ性抗AベータVHH構築物のTRFRETによる性状決定:上記に記載した半減期延長二パラトープ性VHH構築物の結合特性をモノクローナル抗体IgG3D6およびm266の結合特性と比較するために、ABII315からABII320、ABII322およびABII323をABII002およびABII050競合TRFRETアッセイで試験する実施例81および32を参照されたい。少なくとも2つの別個の実験に由来する平均IC50は表XVIに要約されている。表XVI:アルブミン非存在下/存在下における半減期延長抗Aベータ二パラトープ性VHHのIC50値NC:競合は検出されないMSA:マウス血清アルブミンMSAD3:マウス血清アルブミンのドメインIIIABII002TRFRET競合アッセイでは、試験した全ての半減期延長VHH構築物が、3D6IgGIC50は19nMと比較して65倍から146倍ABII315PEG20の大きく改善された能力を示す。IgGm266と比較したとき、全てのVHH構築物がABII050TRFRET競合アッセイで顕著に良好なIC50値を示し、VHHABII320がもっとも低いIC50021nM、IgG266より25倍の改善を示す。一価VHHABII035と比較して、もっとも高い能力を有する、誂えVHH構築物ABII315PEG20は、ABII002TRFRET競合アッセイで27倍の改善されたIC50を示す。VHH構築物ABII320は、ABII050TRFRET競合アッセイで一価のABII059より61倍改善された能力を示す。モノマー構築ブロックABII035およびABII059を凌ぐ二パラトープ性構築物の向上能力は、非ヒト化非成熟構築物により得られた結果実施例81を確認し、1つの二パラトープ性VHH構築物と1つのAベータペプチドとが分子内結合するという仮説上記実施例82参照を支持する。さらにまた、これらの実験は、上記に記載したVHH構築物に適用した半減期延長技術は構築物とAベータペプチドとの結合に干渉しないことを示している。ALB8含有VHH構築物とAベータペプチドとの結合がHSA血流中に存在するによって影響を受けるか否かを判定するために、ABII316ABII320と等価であるが非ヒト化VHH構築ブロックを含む二パラトープ性構築物を、両方の競合TRFRETアッセイにおいてμM量のアルブミンの存在下および非存在下で試験する。両アッセイ形式で、65-10μMのヒト、イヌまたはウシアルブミンによる予備インキュベーションはTRFRETアッセイでの能力に影響を及ぼさない後者の2アルブミン変種は検出可能なALB8相互作用を示さない。ALB8が二パラトープ性VHH構築物の環境においてなおアルブミンと結合できるか否かを試験するために、HSA被覆チップとの結合についてVHH構築物のカイネティクス解析を実施するBiacore。試験した一価ALB8およびALB8融合構築物について類似する親和性が測定され、ALB8構築ブロックのHAS結合は影響を及ぼさないことを示唆する。94Aベータ原線維形成の阻害:更なる実験では、二パラトープ性VHH構築物ABII320の連続希釈を、実施例35で述べたAベータ原線維形成をinvitroで阻害するその能力について評価し、さらにその一価構築ブロックABII035およびABII059並びにコントロール抗体の活性と比較する。試験したVHH構築物の最高濃度26μMでの最大阻害を2つの別個の実験の平均として計算する。非関連Aベータ非特異的VHHをコントロールとして用いたとき、約17の定常的なバックグラウンド阻害が検出され、一方、一価3D6およびm266Fabフラグメントは、最大阻害が82の再現性のある用量依存性阻害を示す。完全なIgG3D6およびm266はそれぞれ75および83の阻害をもたらす。一価VHHABII035およびABII059はそれぞれ54および80の最大阻害を示し、一方、半減期延長二パラトープ性VHH構築物ABII320は26μMで最大阻害能力84を示す。95可溶性APPアルファとの結合:可溶性APPアルファsAPPアルファは、アルファセクレターゼ活性によってその細胞結合前駆体タンパク質APPから遊離する。sAPPアルファのアミノ酸配列はAベータペプチドの最初の16アミノ酸残基を含むが、正確な3D6エピトープは含まないなぜならば、Aベータペプチドの遊離N末端アミノ酸残基が完全な3D6相互作用に必須だからである。エピトープマッピングは、N末端領域特異的VHHABII001およびその誘導体は、モノクローナル抗体3D6と比較して全く異なるエピトープと相互作用することを示す。Aベータと比較してsAPPアルファとVHH結合をTRFRET系アッセイ設定を用いて試験する。最終濃度082nMのビオチン化sAPPアルファSigmaを同じ濃度のストレプトアビジンユーロピウム標識ビーズおよび44nMのAlexaFluor647標識ABII320と混合する。以下の非標識化合物を競合について試験する:ABII320、sAPPアルファ、IgGm266、IgG3D6、ABII035およびAbeta。競合化合物の連続希釈を用いて2つの別個の実験を実施する。平均IC50は、非標識ABII320、ABII035、AベータおよびsAPPアルファについてそれぞれ072nM、256nM、023nMおよび14nMである。期待したように、競合はIgGm266およびIgG3D6については認められない。このアッセイ設定では、ABII320はsAPPアルファとの相互作用よりも63倍良好にAベータと相互作用する。ビオチン化sAPPアルファの代わりにビオチン化Aベータを用いるパラレル設定では、ABII320は、sAPPアルファの場合よりも少なくとも20000倍良好にAベータと相互反応しより高濃度での外挿データにより概算したIC50、ABII320はsAPPアルファよりもAベータとの結合を好むことを示唆する。96二パラトープ性VHH構築物のエピトープマッピング:ペプチドマイクロアレイPepStarTMとして提示されるAベータ誘導ペプチドを用いてVHHのエピトープを決定する。PepStarTMペプチドマイクロアレイJPTPeptideTechnologies,Germanyは、ガラススライドに提示された抗体VHHペプチド相互作用の迅速スクリーニング用の特注ペプチドマイクロアレイセットである。マイクロアレイのペプチドは、AベータのN末端を介して固定したAベータの一次構造から誘導した1211スキャンを表す。さらにまた、Aベータの最初の16から最初の7アミノ酸を表すN末端の切端ペプチドがそれらのC末端を介して固定されている。VHHとのインキュベーション時に、VHHに対抗する標識二次抗体の蛍光強度を読み取ることによって結合事象を検出できる。マイクロアレイをブロッキング緩衝液PBS、1BSA、01Tween20により4°Cで一晩ブロッキングした後、前記を洗浄緩衝液ソフトウェアPerkinElmerを用いて解析する。結果として、直径420μmを有するペプチドスポットが得られ、前記を蛍光強度について解析し、それによってVHHとペプチドとの相互作用を半定量的態様で評価することができる。したがって、二パラトープ性VHH構築物ABII320とペプチドマイクロアレイとのインキュベーションは、ABII320がAベータペプチドの残基1‐11および15-24と相互作用することを明示する。アラニンスキャンは、Aベータペプチドの残基Asp1、Glu3、Phe19、Phe20およびAsp23が二パラトープ性VHHの結合に必須であることを示し、このことは結晶構造解析から得られたデータと一致する。同じ結果が2つの他の二パラトープ性VHH構築物ABII035およびABII059VHHドメインを含むを用いて得られる。97動力学的排除アッセイKinExAを用いる結合定数の決定:Aベータペプチドに対する3つの二パラトープ性VHH構築物の親和性を、KinExA動力学的排除アッセイを用いて決定する。KinExAは、溶液相で未改変分子を測定する能力をもつ技術であるDarling,RJandBrault,PAKineticexclusionassaytechnologyCharacterizationofMolecularInteractionsAssayandDrugDevelopmentTechnologies2647,2004。KinExA方法は、VHH、抗原およびVHH抗原複合体の混合物中で複合体を形成していないVHH分子の濃度を測定する。複合体非形成VHHは溶液相混合物を固相固定抗原に極めて短時間曝露することによって測定される。溶液相混合物と固相固定抗原との間の接触時間は、VHH抗原複合体の解離が些少であるように十分に短い時間維持される。VHH抗原複合体の有意な解離の可能性が動力学的に排除されるとき、複合体非形成遊離VHHのみが固相と結合できる。固相と結合する遊離VHHの量二次標識の蛍光放出によって測定されるは、溶液相サンプル中の遊離VHHの濃度と正比例する。AベータペプチドAnaspec,USAが二パラトープ性VHHとのインキュベーション用抗原として用いられる。融合タンパク質HisXaAベータ128GSp38を用いて、複合体非形成VHHと結合する固相を調製する。融合タンパク質の構造は、Hisタグ、Xa因子切断部位、Aベータペプチド、GSリンカー、ネズミp38であり、以下の配列を有する:MHHHHHHIEGRDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGGSGGSQERPTFYRQELNKTIWEVPERYQNLSPVGSGAYGSVCAAFDTKTGHRVAVKKLSRPFQSIIHAKRTYRELRLLKHMKHENVIGLLDVFTPARSLEEFNDVYLVTHLMGADLNNIVKCQKLTDDHVQFLIYQILRGLKYIHSADIIHRDLKPSNLAVNEDCELKILDFGLARHTDDEMTGYVATRWYRAPEIMLNWMHYNQTVDIWSVGCIMAELLTGRTLFPGTDHIDQLKLILRLVGTPGAELLKKISSESARNYIQSLAQMPKMNFANVFIGANPLAVDLLEKMLVLDSDKRITAAQALAHAYFAQYHDPDDEPVADPYDQSFESRDLLIDEWKSLTYDEVISFVPPPLDQEEMES配列番号144融合タンパク質は大腸菌で発現させ、NiNTAQiagen,Germanyで精製し、さらにヨードアセトアミドSigma,USAでアルキル化する。ポリメチルメタクリレートビーズSapidyneInstrumentsInc,USAを002のNaN3を含むPBS中の前記融合タンパク質で被覆し、同じ緩衝液中の1BSAでブロッキングし、前記を全ての実験で固相として用いる。KinExA実験は、KinExA3000およびKinExAProソフトウェアSapidyneInstrumentsInc,USAを用い室温約21°Cで実施する。002のNaN3を含むPBSを泳動緩衝液として用いる。全実験について、定常的VHH濃度を有する、01BSAおよび002のNaN3を含むPBSで抗原を連続希釈する。抗原およびVHHの混合物を測定前に室温で24時間インキュベートする。サンプルおよび標識抗体の流速は全実験について025mL分である。ABII320VHH構築物第一のVHH構築物の測定のための二次蛍光標識抗体は、上記96に記載したAlexa647複合体化ヤギ抗G6G6抗VHH抗体である。前記抗体を500μLの体積および01BSAおよび002のNaN3を含むPBS中の05μgmLの濃度で用いる。ABII320はさらに別に、記載したように組換えヒトアルブミンalbcultTM,novozymes,USAの存在下でも測定する。PEG化ABII320VHH構築物第二のVHH構築物の固相への結合は、01BSAおよび002のNaN3を含むPBS中で01μgmLの濃度のウサギ抗PEGEpitomicsInc,USA500μLを装置のライン13で、同じ緩衝液中で025μgmLの濃度のAlexa647複合体化ヤギ抗ウサギ抗体MolecularProbesInc,USA250μLと組み合わせて用いて決定する。上記表IVに示すHAS二パラトープ性VHH構築物融合タンパク質配列番号:32、第三のVHH構築物の固相への結合は、01BSAおよび002のNaN3を含むPBS中で05μgmLの濃度のヤギ抗HSABethylLaboratoriesInc,USA500μLを装置のライン13で、同じ緩衝液中で05μgmLの濃度のAlexa647複合体化ウサギ抗ヤギ抗体MolecularProbesInc,USA500μLと組み合わせて用いて決定する。平衡力価測定データは、KinExAProソフトウェアバージョン103SapidyneInstrumentsInc,USAを用い1:1結合モデルに適合させる。第一のVHH構築物二パラトープ性VHHABII320は3、5および10pMの濃度で測定される。サンプル体積は各々5mLである。測定KDは、11±03pMおよび1の組換えヒトアルブミンの存在下では04±01pMである。第二のVHH構築物二パラトープ性PEG化VHHABII322は3、4、5および6pMの濃度で測定される。サンプル体積は各々11mLである。測定KDは06±02pMである。第三のVHH構築物HSAVHH融合タンパク質は2、3および4pMの濃度で測定される。サンプル体積は各々5mLである。測定KDは05±03pMである。98ピログルタミルAベータとの結合:ピログルタミルAベータはアルツハイマー病の神経炎斑の主要成分である。前記は、グルタミニルシクラーゼQCによって触媒される3位でのN末端グルタメートの環化によって形成され、Aベータの極めてアミロイド原性変種を生じる。pGluAベータのアミノ酸配列はAベータペプチドのアミノ酸残基3-42を含む。最初の2つのN末端アミノ酸抗体3D6との完全な相互反応に必須であるは失われている。pGluAベータABII320ABII322m2663D6相互反応に対する親和性が、上記実施例2に記載したようにストレプトアビジンセンサーチップに捕捉したC末端ビオチン化pGluAベータを用い、表面プラズモン共鳴Biacoreにより決定される。精製ポリペプチドABII320もしくはABII322または抗体m266もしくは3D6を9種の異なる濃度ABII320については0195および50nM、ABII322については039-100nM並びに3D6およびm266については0782-200nMで3分間注入し、10分間解離させる。結合解離曲線は1:1相互反応モデルを用いて適合させ、正確なKD値を決定できる。親和性は、ABII320については2nM、ABII322ついては1nM、抗体m266については224pMであることが分かる。実施例10:抗AベータVHHとアミロイド斑との結合VHHのプロファイルを、Tg2576マウス脳スライスのアミロイド斑との結合能力にしたがって組織アミロイド斑免疫反応性TAPIRアッセイで明らかにする。TAPIRアッセイは、VHHの定性的評価中心部濃密および/またはびまん性アミロイド斑だけでなく定量的評価最少有効用量決定も可能にする。本アッセイのために、斑陽性マウスのクリオスタットによる冠切片を調製し、76x26mmのスーパーフロストSuperfrostスライドRothにマウントし、20°Cで保存する。凍結切片を20分間溶解させ、3パラホルムアルデヒドPFAで氷上にて10分間固定する。続いて切片を03の過酸化水素中で30分間インキュベートし、25ウシ血清アルブミンBSAおよび2マウス血清を含むPBSで15時間ブロッキングし、さらに25BSA含有PBSに溶解させた種々の濃度30mgmLから411ngmLのmycタグ付きVHHまたはFabとともにインキュベートする。続いて、前記スライスを25BSA含有PBSに溶解した10mgmLのビオチン化マウス抗cmycモノクローナル抗体9E10と15時間インキュベートするただしビオチン化ABII320とインキュベートしたスライスは除く。これらの切片をベクタステインVectastainABCELITEキット溶液VectorLaboratories製造業者の指示に従って調製とともに15時間インキュベートし、ベクターVIPSK4600溶液VectorLaboratories前記もまた製造業者の指示に従って調製を用いて可視化する。切片を60、80、および100エタノール並びに100イソプロパノールで5分間インキュベートすることによって漸進的に脱水し、さらに5分間キシレン中で透明化する。続いて切片をエンテランEntellan新マウントメジウムMerckによりマウントし、24x50mmのカバースリップMenzelGlaeserで覆う。結果は下記の表に要約される。上記に記載したABII320およびモノクローナル抗体m266のFabフラグメントに加えて、いくつかの他のmycタグ付き二パラトープ性VHH構築物を上記TAPIRアッセイで解析した。VHH構築物ABII300からABII305の構造は下記表XVIIに示され、全ての事例で、VHHドメインABII002配列番号:62およびABII050配列番号:100を異なる順序で含み、さらにアルブミン結合VHHドメインABII300からABII304またはPEG40成分ABII305のどちらかが組み合わされている。これらの結果から、TAPIRアッセイでは、二パラトープ性VHHABII300、ABII301、ABII302、ABII303およびABII304は、ABII305PEG40と同様に組織アミロイド斑中心部濃密およびびまん性型斑に対して全く同じ親和性を示すと認めることができる。リンカーの特定の順序またはPEG40との複合体形成は斑への親和性に対して有意な影響をもつようには思われない。表XVII:二パラトープ性VHH構築物ABII300から305の構造およびTAPIRアッセイで得られた結果実施例11:半減期延長二パラトープ性抗AベータVHH構築物の薬力学VHHの薬物速度論的および薬力学的特性を決定するために、サンプルをAPPトランスジェニックマウスに静脈内または筋肉内注射する。伏在静脈採血により血漿サンプルを採取する。プレドースサンプルはVHH、IgGまたはビヒクル適用前並びに4時間および24時間後に採取する。VHHおよびIgGの結合がELISAでの検出に干渉するので、血漿Aベータの全量を検出するためにAベータ:VHHまたはAベータ:IgG複合体をアッセイ前に変性させる。簡単に記せば、サンプルを6MのGuHClSigmaAldrichで変性させ、固相の抽出カラムで精製する。60mgオアシスOasisHLB96ウェルプレートWatersを、家庭用真空乾燥機に連結させた抽出プレート多岐管Watersにセットする。カラムを1mLのメタノールMeOH、続いて1mLのH2Oで活性化する。GuHCl抽出サンプルをロードし、1mLの5および30のMeOHで連続して洗浄し、続いて90MeOH中の2NH4OHでAベータを溶出させる。溶出サンプルを収集し、1400rpm、60°C、90分真空遠心分離するEppendorfVacufuge。いったんサンプルが完全に乾燥したら、それらをブロッキング緩衝液で再構成し、解析まで20°Cで保存する。Aベータの総血漿レベルを製造業者の指示にしたがいサンドイッチELISA4G8抗Abeta、mesoscalediscoveriesにより決定する。APPトランスジェニックマウスのプレドース総Aベータレベルは血漿中で約125nMである。15nmolkgの二パラトープ性VHHまたはIgG同じ用量、結合部位について標準化を注射したこれらのマウスでは、血漿中の総Aベータレベルは静脈内適用後4時間頃にピークを示した。データは‘プレドースを超える増加倍数’として表され、この表示では注射後4時間および24時間に測定されたAベータ血漿濃度をプレドースレベルで割っている。結果は表XVIIIに示されている。表XVIII:抗Aベータ抗体3D6およびm266と比較した、抗AベータVHHの静脈内注射後の血漿Aベータの増加倍数およびAUD15nmolkg:結合部位について算出2ヶ所IgG分子したがって、当業界で公知のIgG分子と比較して、二パラトープ性VHH構築物は、総血漿Aベータについて50高いピークレベルおよび2倍を超えるAUD値の増加を示す潜在能力を有し、Aベータ捕捉においてこれらVHH構築物はIgGよりも優れていることを示唆している。遊離/未結合血漿AベータのレベルがVHH構築物の投与に続いて減少することを確認するために、競合ELISAを開発する。簡単に記せば、AベータをECLELISAプレートMesoscaleDiscoveriesに結合させたAベータ特異的抗体により捕捉する。受動免疫療法で動物を処置するために用いられるVHHまたはIgG分子にMSDSulfoTagNHSEsterMesoscaleDiscoveriesを製造業者のマニュアルにしたがって用いてタグを付加し、このサンドイッチELISA形式での検出ツールとして用いる。VHHまたはIgGと結合するAベータはこれらの設定では検出できず、一方、遊離/未結合Aベータは検出できる。異なるアッセイから得られたデータを比較するために、全ての値をビヒクル処置グループのデータに対して標準化する。APPトランスジェニックマウスを表示したようにVHHまたはIgGで処置し、血漿を収集し、遊離/未結合Aベータについて解析する。132nmolkgの抗AベータVHHそれぞれABII320およびABII322の腹腔内注射後2時間で、遊離/未結合Aベータのレベルは大きくおよび極めて有意に基準レベル約2nMから2pMの検出限界以下へ減少した。等価用量の3D6IgG10mgkg、132nmolkg結合部位=66nmolkgIgGは、血漿中の未結合Aベータを52pMのレベルに減少することができただけである図1。この比較では、二パラトープ性VHH構築物ABII320およびABII322は、3D6IgGと比較して同じ用量で、予想を超える血漿中の遊離/未結合Aベータの大きな減少を示し、これもまた前記がIgG3D6よりもAベータ捕捉に優れていることを示している。このことは、VHHの治療的有効性に関してそのようなVHHを特に有用ならしめる。特に、血漿Aベータのより効率的な枯渇は、血漿から脳へのAベータの輸入を完全に阻止し、それによって脳および血漿Aベータプール間のより急激な濃度勾配が生じ、それによって脳から血漿へのAベータの流出が加速すると期待される。実施例12:BBB通過VHHVHH構築物の血液脳関門BBB通過特性をさらに改善するために、二パラトープ性VHHおよびBBB通過VHH、FC44およびFC5を含む二特異性VHHを構築するWO2002057445に詳細に記載されている。これらのVHHは、BBB上に発現された標的タンパク質と結合し、その後VHHは内皮細胞の細胞質を貫通し脳実質内に放出されることによってBBB通過性を改善する。したがって、FC44およびFC5VHHに遺伝的に融合されたVHHは脳への活発な輸送を受け、より高い脳レベルをもたらし治療効果を改善すると期待される。構築物ABII400-ABII407FC44またはFC5VHHを含むは、オーバーラップするオリゴヌクレオチドの適切なセットを用いて遺伝的アッセンブリーによって作製する。配列番号およびアミノ酸配列は下記の表XIXに列挙される。要約すれば、ABII035とABII059VHH構築ブロックとの間、またはHSA結合VHHとABII035またはABII059構築ブロックとの間、または分子のアミノ末端もしくはカルボキシ末端にFC5またはFC44VHHを含むVHHが作製される表XIX参照。VHHは大腸菌またはピキアパストリスで発現され、実施例92の記載にしたがって精製される。精製VHHはinvitroBBB通過アッセイWO2002057445およびその中のさらに別の参考文献に記載で評価される。さらにまた、FC5およびFC44構築ブロックを含む放射性標識または非放射性標識VHHをinvivo投与し、液体シンチレーション計測またはELISAを用いて脳内レベルを決定する。表XIX:さらに別にFC5およびFC44成分を含む二パラトープ性AベータVHH構築物実施例13:本発明のPEG化二パラトープ性ポリペプチドの工業的製造プロセス131発酵:ポリペプチドABII305、ABII306、ABII314、ABII315、ABII322およびABII323のいずれかを、種々の大腸菌株、例えばW3110、TG1、BL21、BL21、HMS174、HMS174、MM294の細胞質で誘導性プロモーターの制御下で発現させることができる。このプロモーターはlacUV5、tac、T7、trp、T5、araBから選択できる。培養液は、Wilmsら2001Wilms,B,Hauck,A,Reuss,M,Syldatk,C,Mattes,R,Siemann,M,andAltenbuchner,JHighCellDensityFermentationforProductionofLNCarbamoylaseUsinganExpressionSystemBasedontheEscherichiacolirhaBADPromoterBiotechnologyandBioengineering,7395103,2001、DeLisaら1999DeLisa,MP,Li,JC,Rao,G,Weigand,WA,andBentley,WEMonitoringGFPoperonfusionproteinexpressionduringhighcelldensitycultivationofEscherichiacoliusinganonlineopticalsensorBiotechnologyandBioengineering,6554‐64,1999または等価の文献にしたがって好ましくは完全に規定されている。しかしながら、アミノ酸例えばイソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファンおよびバリン、または複雑な培地成分例えば大豆ペプトンまたは酵母抽出物による培地の補充は有益であり得る。発酵プロセスはバッチ式供給態様で実施される。条件:温度は30-40°C、pHは6-75、溶解酸素は20より高く維持する。最初のC供給源の消費後、上記に記載のまたは等価のフィード培地を供給する。ファーメンター内の乾燥細胞質量が40から90gLに達したら、使用プロモーター系に対応する適切な誘導物質例えばIPTG、ラクトース、アラビノースで培養を誘導する。誘導はパルス的な完全誘発としてまたは部分的誘発として対応する誘導物質を長時間にわたってファーメンターに供給することによる実施できる。生産相は少なくとも4時間持続するはずである。細胞は、ボール遠心分離機、管状ボール遠心分離機またはディスクスタック遠心分離機での遠心分離によって回収され、培養上清は廃棄する。132精製:大腸菌細胞塊を6から8倍量の溶解緩衝液リン酸緩衝液またはトリス緩衝液、pH7-85に再懸濁する。細胞溶解は、好ましくは高圧均質化とそれに続くボール、管状ボールまたはディスクスタック遠心分離機の遠心分離による細胞屑の除去によって実施される。標的タンパク質を含む上清は、場合によって022-10μmフィルターを用いてろ過し、陽イオン交換クロマトグラフィー例えばトーヨーパールToyopearlMegaCapIISP550EC、トーヨーパールGigaCapS650M、SPセファロースBB、SPセファロースFFまたはSHyperCelTMによりpH7-85で分離する。溶出は、NaCl連続増加グラディエントによりpH7-85で実施する。標的タンパク質を含む分画をプールし、続いて5-10mMのDTTとともにインキュベートし、遊離システイン残基によって媒介されるダイマー化または凝集を防止する。08-1Mの硫酸アンモニウムまたは2-3MのNaClをさらに添加した後、溶液を親水性相互反応クロマトグラフィー例えばフェニルセファロースHP、フェニルセファロースFF、ブチルセファロースHP、ブチルセファロースFF、ブチルトヨパール650SMC、フェニルトーヨーパール650SMCによりpH7-85で分離する。溶出は、硫酸アンモニウムまたはNaClの連続減少グラディエントにより5mMのDTTの存在下にてpH7-85で実施する。標的タンパク質を含む、最低限90の純度レベルを有する分画をプールし、5mMのDTTの存在下で透析により脱塩し、続いて約5mgmLに濃縮する。その後のリフォールディングは、50mMトリス、150mMNaCl、4mMシスタミン、10mMCHAPSpH85を用いて前記タンパク質溶液を1:5-1:20に希釈し、最終タンパク質濃度を025-1mgmLにすることによって実施される。リフォールディング溶液を室温で12-36時間攪拌しながらインキュベートし、続いて陽イオン交換クロマトグラフィー例えばSPセファロースFF、SPセファロースHP、トーヨーパールSP650SMCによってpH7-85で分離する。溶出は、NaCl連続増加グラディエントによりpH7-85で実施する。モノマーの標的タンパク質を含む分画をプールし、還元剤例えばDTT、DTEまたはTCEPの添加によってPEG化のために活性化する。続いてこの溶液を室温で2時間インキュベートする。リン酸ナトリウム緩衝液pH65-75または20mMHEPES緩衝液pH65-75またはトリス緩衝液pH80に対して透析し、さらに5-10mgmLに濃縮した後、40kDaのマレイミドポリエチレングリコールPEGを添加する1:2から1:10のタンパク質:PEG比。攪拌しながら溶液を3-18時間室温でインキュベートし、続いて022μmフィルターを用いてろ過する。陽イオン交換クロマトグラフィー例えばSPセファロースHP、トーヨーパールSP650M、MacroCapTMSP、SourceTM30SまたはFractogelEMDMによりpH5-7でPEG化標的タンパク質を遊離PEGおよび非PEG化標的タンパク質から分離する。溶出は、NaCl連続増加グラディエントにより実施する。モノPEG化標的物を含む分画をプールし,25mMリン酸ナトリウム、220mMエンドトキシンフリートレハロースpH75中で透析により処方する。実施例14:医薬処方物および使用141医薬処方物:本発明のヒト化二パラトープ性ポリペプチド構築物のいずれか、例えばABII314からAbII323を、以下の組成を有する皮下適用用医薬処方物の製造のために選択できる:薬剤物質:100mgmL1から3nmolmLリン酸緩衝液:25mMトレハロース220mMトゥイーン20002薬剤物質は上記組成を有する溶液中で処方し、滅菌して2から8°Cで保存する。142医薬的使用:上記141のように調製した溶液をその必要がある患者例えばADに罹患したヒトに、2から4週間毎に1から2mLの体積で腹部に皮下注射によって適用する。"