"イミュノグロブリン結合能を有するペプチドであって、Pro-Gly-Leu-X4-X5-Pheここで、X4およびX5は同時にTyrでないアミノ酸であるで表されるアミノ酸配列を有するペプチド。X4およびX5の両方が親水性アミノ酸である、請求項1のペプチド。X4およびX5が独立してLys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、SerおよびThrからなる群より選択されるアミノ酸である、請求項1のペプチド。配列番号9~15のいずれかのアミノ酸配列を有する請求項1のペプチド。式Iのアミノ酸配列中の1つまたは複数のアミノ酸Glyを除くが対応するD-アミノ酸で置換されている、請求項1~4のいずれかのペプチド。式Iのアミノ酸配列中の全てのアミノ酸Glyを除くが対応するD-アミノ酸で置換されている、請求項1~4のいずれかのペプチド。請求項1~6のいずれかのペプチドが目的のタンパク質のN末端および/またはC末端に付加されている融合タンパク質。請求項1~4のいずれかのペプチドをコードする核酸。請求項1~4のいずれかのペプチドがN末端および/またはC末端に付加されている融合タンパク質をコードする核酸。請求項1~6のいずれかのペプチド、請求項7の融合タンパク質、請求項8または9の核酸、あるいは請求項8または9の核酸を含むベクターを有効成分として含む、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患の治療または予防用医薬組成物。疾患が関節リウマチである、請求項10の医薬組成物。疾患が、全身性エリテマトーデスSLE、糸球体腎炎、血管炎、関節炎からなる群より選択されるものである、請求項10の医薬組成物。有効成分が請求項4~6のいずれかのペプチドである、請求項10~12のいずれかの医薬組成物。本発明の解決課題は、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドおよびかかるペプチドを含む融合タンパク質、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドまたはかかるペプチドとの融合タンパク質を含む、およびC1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患を治療または予防するための、有効で安全な医薬組成物などを提供することである。本発明者は、C1q由来のアミノ酸配列を有するペプチドが、関節リウマチなどのC1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患において治療および予防効果を示すことを見出したが国際公開第2009/025300号パンフレットおよび国際公開第2010/084851号パンフレットを参照のこと、さらにペプチドの水溶性を高めるために鋭意研究を重ねた結果、上記ペプチド中の特定位置のアミノ酸を置換することによって、ペプチドの水溶性が改善され、しかもイミュノグロブリン結合能といった生物学的活性が有意に低下しないことを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、以下のものを提供するものである:1イミュノグロブリン結合能を有するペプチドであって、Pro-Gly-Leu-X4-X5-PheIここで、X4およびX5は同時にTyrでないアミノ酸であるで表されるアミノ酸配列を有するペプチド;2X4およびX5の一方または両方が親水性アミノ酸である、1のペプチド;3X4およびX5の両方が親水性アミノ酸である、1のペプチド;4X4およびX5が独立してLys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、SerおよびThrからなる群より選択されるアミノ酸である、3のペプチド;5配列番号9~15のいずれかのアミノ酸配列を有する1のペプチド;6配列番号12のアミノ酸配列を有する1のペプチド;7式Iのアミノ酸配列中の1つまたは複数のアミノ酸Glyを除くが対応するD-アミノ酸で置換されている、1~6のいずれかのペプチド;8式Iのアミノ酸配列中の全てのアミノ酸Glyを除くが対応するD-アミノ酸で置換されている、1~6のいずれかのペプチド;9D-Pro-Gly-D-Leu-D-Glu-D-Lys-D-Pheであるアミノ酸配列を有する8のペプチド;10イミュノグロブリン結合能を有するペプチドをコードする核酸であって、1~6のいずれかのペプチドをコードする核酸;115のペプチドをコードする、10の核酸;126のペプチドをコードする、10の核酸;1310~12のいずれかの核酸を含むベクター;141~6のいずれかのペプチドが目的のタンパク質のN末端および/またはC末端に付加されている融合タンパク質;157~9のいずれかのペプチドが目的のタンパク質のN末端および/またはC末端に付加されている融合タンパク質;1614の融合タンパク質をコードする核酸;1716の核酸を含むベクター;1810~12のいずれかの核酸、16の核酸、あるいは13または17のベクターを含む、細胞;19イミュノグロブリン結合能を有するペプチドの製造方法であって、a13のベクターを用いて細胞を形質転換する工程、およびb該細胞を培養して、ペプチドを産生させる工程を含む、方法;2019の方法により得ることのできる、イミュノグロブリン結合能を有するペプチド;21イミュノグロブリン結合能を有するペプチドが目的のタンパク質のN末端および/またはC末端に付加した融合タンパク質の製造方法であって、a17のベクターを用いて細胞を形質転換する工程、およびb該細胞を培養して、融合タンパク質を産生させる工程を含む、方法;22融合タンパク質から目的タンパク質を取り出す工程をさらに含む、21の方法;2321または22の方法により得ることのできる、融合タンパク質;241~9のいずれかのペプチド、または14もしくは15の融合タンパク質を含む、イミュノグロブリンを結合させるための組成物;25イミュノグロブリンの存在もしくは量を決定するためかまたはイミュノグロブリンを単離するためのものである、24の組成物;261~9のいずれかのペプチド、または14もしくは15の融合タンパク質を固定化した、イミュノグロブリンを結合させるための手段;27イミュノグロブリンの存在もしくは量を決定するためであるかまたはイミュノグロブリンを単離するためのものである、26の手段;28イミュノグロブリンを結合させる方法であって、a1~9のいずれかのペプチド、または14もしくは15の融合タンパク質を試料に添加する工程、およびbペプチドまたは融合タンパク質とイミュノグロブリンとの結合体を調べる工程を含む、方法;2928の方法に用いるための、1~9のいずれかのペプチドまたは14もしくは15の融合タンパク質を含む融合タンパク質を含むキット;30標識されている1~9のいずれかのペプチドまたは14もしくは15の融合タンパク質;3130の標識されているペプチドまたは融合タンパク質を試料中の抗体と反応させ、次いで抗体と結合した該ペプチドまたは融合タンパク質を検出することを特徴とする、試料中の抗体の検出方法;321~9のいずれかのペプチド、14もしくは15の融合タンパク質、10~12のいずれかの核酸、16の核酸、あるいは13または17のベクターを有効成分として含む、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患の治療または予防用医薬組成物;33疾患が関節リウマチである、32の医薬組成物;34疾患が全身性エリテマトーデスSLE、糸球体腎炎、血管炎、関節炎などの免疫複合体病である、32の医薬組成物。本発明によれば、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドおよびかかるペプチドを含む融合タンパク質、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患の治療または予防においてより有用な医薬組成物などの提供が可能になる。また、水溶性が改善された本発明のペプチドを上記医薬組成物に用いることで、従来と比べて実質的な投与量が高められた医薬組成物を提供することもできる。本発明は、1つの態様において、Pro-Gly-Leu-Tyr-Tyr-Pheaで表されるアミノ酸配列配列番号1を有するペプチドとほぼ同等かそれ以上のイミュノグロブリン結合能などの生物学的活性を有し、かつ水溶性が改善されたペプチドに関するものである。本発明のペプチドの生物学的活性は、当該技術分野において公知の方法により調べることができる。例えば、ペプチドをイミュノグロブリン存在下でインキュベートし、結合量を調べてもよい。本発明のペプチドは、配列番号1のアミノ酸配列aにおいて、1つまたは複数例えば、2、3、4または5個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を有するペプチドに関する。本発明のペプチドにおいて、置換されるアミノ酸はいずれのアミノ酸でもよいが、好ましくは上記アミノ酸配列aのN末端から4番目および/または5番目のアミノ酸であり、さらに好ましくは上記配列aのN末端から4番目および5番目の両方のアミノ酸である。なお、本明細書において、アミノ酸を名称ではなく、3文字表記または1文字表記で表すことがあるが、3文字表記または1文字表記は当業者によく知られている。本発明のペプチドは、イミュノグロブリン結合能を有し、かつ良好な水溶性を示す限り、上記アミノ酸配列aのいずれのアミノ酸が他のアミノ酸で置換されてもよく、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、システイン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジンまたはプロリンなどの天然タンパク質を構成しているアミノ酸、あるいはβ-アラニン、γ-アミノ酪酸GABA、5-アミノレブリン酸、5-アミノ吉草酸、ホモシステイン、オルニチン、5-ヒドロキシトリプトファン、3,4-ジヒドロキシフェニルアラニンドーパ、トリヨードチロニン、チロキシン、ホモリジン、ノルロイシン、クレアチン、デスモシン、ノルバリンまたはヨードチロシンなどの天然タンパク質を構成していないアミノ酸に置換されてもよい。上記アミノ酸配列aにおいて1つまたは複数のアミノ酸を、親水性アミノ酸に、あるいはペプチドの水溶性を高めるようなアミノ酸誘導体または修飾体などに置換することによって、該アミノ酸配列を有するペプチドの水溶性を改善することができる。したがって、本発明の好ましい態様において、式aのアミノ酸配列中のアミノ酸は親水性アミノ酸あるいはペプチドの水溶性を高めるようなアミノ酸誘導体または修飾体などで置換されている。親水性アミノ酸の例としてはセリンSer、トレオニンThr、アスパラギン酸Asp、グルタミン酸Glu、アスパラギンAsn、グルタミンGln、リシンLys、アルギニンArgまたはヒスチジンHisが挙げられるが、これらのアミノ酸に限定されない。一般に、ペプチド医薬においては、消化管での易分解性を考慮して、静脈注射や皮下注射による投与方法を用いるケースが多い。そのため、水溶性が低いペプチドは臨床適用が難しくなる。しかし経口投与を選択しても、ペプチドが分解されやすいという問題がある。本発明の水溶性を改善されたペプチドは、上記欠点が解消され、静脈注射や皮下注射の場合に優れた効果を発揮する。さらに、本発明の水溶性を改善されたペプチドは、素材として取り扱いやすいという利点を有している。好ましい態様において、本発明は、Pro-Gly-Leu-X4-X5-PheIここで、X4およびX5は同時にTyrでないアミノ酸であるで表されるアミノ酸配列を有するペプチドに関するものである。すなわち、本発明のペプチドは、上記アミノ酸配列I中のアミノ酸残基X4、X5のうち一方または両方がTyr以外のアミノ酸残基であるアミノ酸配列を有するものである。好ましくは、本発明のペプチドは、上記アミノ酸配列I中のアミノ酸残基X4、X5の両方がTyr以外のアミノ酸残基であるアミノ酸配列を有するものである。Tyr以外のアミノ酸X4、X5としては、上で列挙したアミノ酸が挙げられるが、好ましくは、親水性アミノ酸であり、さらに好ましくは、セリンSer、トレオニンThr、アスパラギン酸Asp、グルタミン酸Glu、アスパラギンAsn、グルタミンGln、リシンLys、アルギニンArgまたはヒスチジンHisなどの親水性アミノ酸である。Tyr以外のアミノ酸X4、X5として好ましいものとして、ペプチドの水溶性を高めるようなアミノ酸誘導体または修飾体であってもよい。X4、X5は同じ種類のアミノ酸であってもよく、互いに異なる種類のアミノ酸であってもよい。いずれのアミノ酸配列を有する場合であっても、本発明のペプチドはイミュノグロブリン結合能を有するものであって、かつ配列番号1のアミノ酸配列aを有するペプチドより高い水溶性を有するものである。好ましい本発明のペプチドとして、配列番号9~15のいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。これらのペプチドもイミュノグロブリン結合能を有する。さらに、本発明のペプチドは、アミノ酸配列I中の1つまたは複数例えば、2、3、4、5または6個のアミノ酸が対応するD-アミノ酸でさらに置換されているアミノ酸配列を有するものであってもよい。本発明の好ましい態様において、式Iのアミノ酸配列中の全てのアミノ酸は、対応するD-アミノ酸で置換されてもよい。なお、いずれのアミノ酸配列を有する場合であっても、本発明のペプチドはイミュノグロブリン結合能を有するものである。式Iのアミノ酸配列中のアミノ酸を対応するD-アミノ酸に置換することによって、本発明のペプチドはタンパク質分解を受けにくくなり、投与した対象の体内において高い安定性および長い半減期を有するようになる。本発明のペプチドは、上記アミノ酸配列Iからなるものであってもよく、あるいは、上記アミノ酸配列Iをコア配列として含み、かつ、かかるアミノ酸配列のN末端および/またはC末端に、あるいはかかるアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸残基に、ペプチドまたはアミノ酸、それらのアナログ、ポリエチレングリコール、糖、多糖、ヌクレオチドなどの種々の物質これらに限定されないが結合したものであってもよい。N/C末端あるいはいずれかのアミノ酸残基に、アミノ酸またはペプチドを介して、あるいは利用可能な官能基を用いてアミノ酸配列の内部に、蛍光標識、ビオチン、ストレプトアビジン、ジコキシゲニンDIG、磁気ビーズ、ラテックスビーズ、金コロイドなどの物質これらに限定されないが結合していてもよい。例えば、本発明のペプチドに別のペプチドが結合する場合、かかるペプチドは、1個~50個、例えば、1~20個、1~15個または1~9個のアミノ酸からなるものであってもよい上記アミノ酸の個数は例示であり、限定するものではない。また、かかるペプチドが、ヒスチジンタグ、GSTタグ、Sタグ、Mycタグ、HAタグまたはEタグとしての機能を有するものこれらに限定されないであってもよい。本発明のペプチドはまた、上記したペプチドに加えて、上記ペプチドのアミノ酸配列において、1個または数個、例えば、2、3、4または5個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列を有するペプチド、および上記ペプチドのアミノ酸配列と50以上、好ましくは60以上、さらに好ましくは70以上、より好ましくは80以上、さらにより好ましくは90以上例えば、95、97、98または99以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するペプチドも包含する。アミノ酸配列の相同性は、例えば、FASTA、BLAST、DNASIS日立ソフトウェアエンジニアリング株製、GENETYX株ジェネティクス製を用いて測定することができる。あるいは、短鎖ペプチドの場合は単純に配列を比較し、計算することもできる。さらに、これらのアミノ酸のいずれかが適宜修飾されたものであってもよい。いずれのアミノ酸配列を有する場合であっても、本発明のペプチドはイミュノグロブリン結合能を有するものであって、配列番号1のアミノ酸配列aを有するペプチドより高い水溶性を有するものである。本発明のペプチドは、当業者に既知の種々の方法により製造および取得することができる。例えば、本発明のペプチドをペプチド固相合成法などに従って化学的に合成してもよく、本発明のペプチドコードするヌクレオチド配列に基づき遺伝子工学的に製造してもよく、あるいはこれらの方法を組み合わせて得てもよい。本発明は、さらなる態様において、イミュノグロブリン結合能を有する本発明のペプチドをコードする核酸に関するものである。本明細書において核酸とは、1本鎖または2本鎖のDNAまたはRNAを意味する。本発明の核酸は、当業者に公知の種々の方法により製造および取得され得る。本発明はまた、ある態様において、配列番号9~15のアミノ酸配列のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する核酸に関する。本発明において、配列番号9~15のアミノ酸配列のいずれかをコードするヌクレオチド配列としては、配列番号16~22のヌクレオチド配列が例示される。そのため、本発明はまた、配列番号16~22のヌクレオチド配列のいずれかを有する核酸に関する。また、配列番号9~15のアミノ酸配列のいずれかをコードする上記以外のヌクレオチド配列例えば、縮重配列を有する核酸もまた本発明に含まれる。本発明の核酸はまた、上記核酸以外に、a上記核酸のヌクレオチド配列において、1または数個、例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16または17個のヌクレオチドが欠失、置換もしくは付加されたヌクレオチド配列を有する核酸、b上記核酸またはその相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリッド形成し得る核酸、あるいはc上記核酸のヌクレオチド配列と50以上例えば、60、70、80、90、95、97、98または99以上の相同性を有するヌクレオチド配列を有する核酸などである。さらに、本発明の核酸は、上記核酸中のヌクレオチドのいずれかが適宜修飾されたものであってもよい。いずれのヌクレオチド配列を有する場合であっても、本発明の核酸は、イミュノグロブリン結合能を有し、配列番号1のアミノ酸配列aを有するペプチドより高い水溶性を有するペプチドをコードするものである。上記ストリンジェントな条件としては、例えば、JSambrooketalMolecularCloningALaboratoryManualSecondEdition1989ColdSpringHarborLaboratoryPressに記載されるような条件が挙げられる。例えば、6×SSC、5×デンハルト溶液Denhardtssolution、0.5SDS、100μg/ml変性サケ精子DNAを含む溶液中68°Cでプローブとハイブリッド形成させた後、洗浄条件を2×SSC、0.1SDS中室温から0.1×SSC、0.5SDS中68°Cまで変化させる条件、65°Cで、2×SSPEFrederickMAusubeletalCurrentProtocolsinMolecularBiology1987JohnWileySonsHobokenNJに記載および0.1SDSを含む溶液中で15分を2回、0.5×SSPEおよび0.1SDSを含む溶液中でさらに15分を2回、次に、0.1×SSPEおよび0.1SDSを含む溶液中で15分を2回の条件、または65°Cで、2×SSPE、0.1SDSおよびホルムアミド5~50を含む溶液中で15分を2回、0.5×SSPE、0.1SDSおよびホルムアミド5~50を含む溶液中でさらに15分を2回、次に、0.1×SSPE、0.1SDSおよびホルムアミド5~50を含む溶液中で15分を2回の条件などである。上記ヌクレオチド配列の相同性は、例えば、FASTA、BLAST、DNASIS日立ソフトウェアエンジニアリング株製、GENETYX株ジェネティクス製を用いて測定することができる。本発明の核酸は、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドをコードするヌクレオチド配列を有するものであればいずれのものであってもよい。また、上記ヌクレオチド配列からなる核酸であってもよく、あるいは上記ヌクレオチド配列をコア配列として含み、かつかかる配列の5’末端および/または3’末端に、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、またはそれらのアナログなどの種々の物質が結合したものであってもよい。例えば、本発明の核酸にポリヌクレオチドが結合する場合、かかるポリヌクレオチドは、1~150個、例えば、1~60個、1~45個または1~18個のヌクレオチドからなるものであってもよい上記ヌクレオチドの個数は例示であって限定するものではない。本発明は、さらなる態様において、上記核酸を含むベクターに関するものである。本発明のベクターは、上記核酸を含んでいればいずれのものであってもよい。ベクターを導入する宿主の種類、必要とされる産物、使用目的などの種々の条件に応じてベクターを適宜選択あるいは設計し、得ることができる。本発明のベクターは、例えば、配列番号16~22のいずれかで示すヌクレオチド配列の5’末端または3’末端にインフレームで目的のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を挿入することにより、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドが目的のタンパク質のN末端またはC末端に付加された融合タンパク質の発現用ベクターとして用いることもできる。融合タンパク質からの目的のタンパク質の単離を容易にするために、本発明のベクターは、上記ヌクレオチド配列と目的のタンパク質のヌクレオチド配列挿入部の間に、例えば、HRV3C、トロンビン、FactorXa、エンテロキナーゼなどのプロテーゼにより認識される配列を含んでいてもよい。本発明のベクターを細胞に導入して、本発明のペプチドや融合蛋白を産生させることができる。本発明は、別の態様において、本発明のイミュノグロブリン結合能を有するペプチドが目的のタンパク質のN末端および/またはC末端に付加された融合タンパク質に関するものである。本発明の融合タンパク質は、当業者に既知の種々の方法により製造および取得することができる。本発明の融合タンパク質はイミュノグロブリン結合能を有するペプチドを含むので、かかるペプチドをタグ配列として用い、目的のタンパク質を単離および/または精製することなどが可能になる。また、本発明のペプチドはProteinAまたはProteinGほどイミュノグロブリンとの結合能が高くないので、本発明の融合タンパク質は、例えば、精製用カラムに固定された場合、ProteinAまたはProteinGと比較して、マイルドな条件下でのイミュノグロブリンの精製およびかかるカラムの繰り返し使用劣化が抑えられるを可能にし、例えば、イミュノグロブリンの検出用プローブとして用いた場合、リプローブが容易であるなどの利点を有する。本発明の融合タンパク質に含まれる目的のタンパク質は、いずれのタンパク質であってもよい。本発明の融合タンパク質が、例えば、アルカリホスファターゼALP、パーオキシデースHRP、ルシフェラーゼおよびグリーンフルオレッセンスプロテインGFPなどの蛍光タンパク質、β-ガラクトシダーゼ、グルタチオンSトランスフェラーゼ、マルトース結合タンパク質などの酵素を目的のタンパク質として含む場合、本発明の融合タンパク質に含まれるイミュノグロブリン結合能を有するペプチドとイミュノグロブリンとの結合を検出することなどが容易になる。本発明の融合タンパク質はまた、例えば、ヒスチジンタグ、GSTタグ、Sタグ、Mycタグ、HAタグ、またはEタグなどのタグ配列、核移行シグナル、シリカ結合タンパク質、ProteinAなどを含んでいてもよい。本発明の融合タンパク質は、本発明のペプチドと目的のタンパク質との間にプロテアーゼにより認識されるペプチドを含んでいてもよい。かかるペプチドを含むことにより、融合タンパク質から目的のタンパク質を容易に単離することができる。本発明は、さらなる態様において、上記融合タンパク質をコードする核酸に関するものである。さらに、本発明は、上記融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターに関するものである。かかるベクターを細胞に導入し、タンパク質を産生させることにより、本発明の融合タンパク質を得てもよい。本発明は、1つの態様において、上記イミュノグロブリン結合能を有するペプチドをコードする核酸、上記融合タンパク質をコードする核酸、またはそれらの核酸を含むベクターを含む細胞に関するものである。本発明の細胞は、例えば、大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などの宿主細胞を上記核酸またはベクターを用いて形質転換することにより製造することができる。本発明の細胞を培養し、産生されたイミュノグロブリン結合能を有するペプチド、またはイミュノグロブリン結合能を有するペプチドを含む融合タンパク質を回収することにより、本発明のペプチドまたは融合タンパク質を製造することもできる。本発明は、さらなる態様において、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドの製造方法であって、aイミュノグロブリン結合能を有するペプチドをコードする核酸を含むベクターを用いて細胞を形質転換する工程、およびb該細胞を培養して、ペプチドを産生させる工程を含む方法に関するものである。細胞の形質転換は、当業者に既知の手段および/または方法により行われ得る。そのため、本発明は、上記ペプチドの製造方法により得ることのできる、イミュノグロブリン結合能を有し、かつ水溶性が改善されたペプチドに関するものである。本発明は、別の態様において、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドが目的のタンパク質のN末端および/またはC末端に付加した融合タンパク質の製造方法であって、aイミュノグロブリン結合能を有するペプチドが目的のタンパク質のN末端またはC末端に付加した融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターを用いて細胞を形質転換する工程、およびb該細胞を培養して、融合タンパク質を産生させる工程を含む方法に関するものである。本発明の融合タンパク質の製造方法は、融合タンパク質から目的タンパク質を取り出す工程をさらに含んでいてもよい。そのため、本発明は、上記融合タンパク質の製造方法により得ることのできる、イミュノグロブリン結合能を有し、かつ水溶性が改善されたペプチドが目的のタンパク質のN末端および/またはC末端に付加された融合タンパク質に関するものである。本発明は、さらなる態様において、イミュノグロブリン結合能を有するペプチド、またはかかるペプチドを含む融合タンパク質を含む、イミュノグロブリンを結合させるための組成物に関するものである。上記ペプチドまたは融合タンパク質以外の成分は、本発明の組成物が用いられる目的など種々の条件に応じて適宜選択され得る。上述の通り、本発明の組成物はイミュノグロブリン結合能を有するペプチドを含むものであるので、本発明の組成物は、例えば、イミュノグロブリンの存在または量を決定するための組成物であってもよく、イミュノグロブリンを単離するための組成物であってもよい。本発明の組成物により、試料中のイミュノグロブリンの量を決定すること、試料からイミュノグロブリンを単離することなどが可能になる。本発明は、もう1つの態様において、イミュノグロブリン結合能を有するペプチド、またはかかるペプチドを含む融合タンパク質を固定化した、イミュノグロブリンを結合させるための手段に関するものである。本発明の手段は、例えば、プレート、樹脂、カラム、ビーズ、アガロース、セファロースなどの糖を含むレジン、シリカ基板、ガラススライドガラスなど、金属金など、アパタイトなどの担体に上記ペプチドまたは融合タンパク質が固定されたものである。固定化は、ペプチド、またはタンパク質のアミノ基もしくはカルボキシル基を介した方法、アミノ酸側鎖のSH基を介した方法、イオン的な結合による方法、疎水的な結合による方法などの当業者に既知の手段方法により行われ得る。上述の通り、本発明の手段はイミュノグロブリン結合能を有するペプチドが固定化されたものであるので、本発明の手段は、イミュノグロブリンの存在もしくは量を決定するための手段、およびイミュノグロブリンを単離するための手段を含むものである。本発明の手段を、例えば、ELISA用プレート、イミュノグロブリン精製用カラム、検出用ガラスアレイ、マイクロ流路系、SPR用センサーチップ、検出用シリカ基板、抗体医薬品精製システムなどとして用いることもできる。本発明は、さらなる態様において、イミュノグロブリンを結合させる方法であって、aイミュノグロブリン結合能を有するペプチド、またはかかるペプチドを含む融合タンパク質を試料に添加する工程、およびbペプチドまたは融合タンパク質とイミュノグロブリンとの結合体を調べる工程を含む方法に関するものである。試料は、イミュノグロブリンが含まれている可能性があればいずれのものであってもよい。イミュノグロブリンとの結合体の存在および/または量を調べることにより、試料中にイミュノグロブリンが存在するかどうか、さらには、試料中に存在するイミュノグロブリンの量を決定することなどが可能になる。本発明の方法に用いるペプチドまたは融合タンパク質は標識されたものであってもよい。標識としては、ビオチン化、蛍光標識、RI標識、酵素標識など当業者に既知の種々のものが挙げられる。かかる標識を付すことにより、ペプチドまたは融合タンパク質との結合体を調べることが容易になる。さらに、本発明の方法は、結合体からイミュノグロブリンを単離する工程を含んでいてもよい。従って、本発明は、イミュノグロブリンを結合させる方法に用いるための、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドまたはかかるペプチドを含む融合タンパク質を含むキットに関するものである。本発明のキットには、上記ペプチドまたは融合タンパク質以外に、例えば、標識、結合体を調べる手段などを含み得る。本発明は、別の態様において、イミュノグロブリン結合能を有する本発明のペプチド、かかるペプチドを含む融合タンパク質、かかるペプチドまたは融合蛋白をコードする核酸、あるいはかかる核酸を含むベクターを有効成分として含む、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患の治療または予防用医薬組成物に関するものである。C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患とは、かかる結合により直接的または間接的に生じる疾患をいい、例えば、関節リウマチ、関節炎、全身性エリテマトーデスSLE、血管炎症群、腎炎などの免疫複合体病、その他の炎症性疾患、乾癬症、および悪性腫瘍などが挙げられる。本発明の医薬組成物は、含まれるイミュノグロブリン結合能を有するペプチドがC1qとイミュノグロブリンとの結合を阻害することにより、上記疾患を治療および予防することができる。なお、本発明のペプチドは、元々ヒトの体内に存在するC1qに由来するものであるので、本発明のペプチドをヒトに投与することで生じる副作用は生じないか、あったとしても少ない。さらに、本発明のペプチドは、天然のタンパク質由来のアミノ酸配列を改変することによって水溶性が改善されており、医薬組成物として対象に投与した場合、実質的な投与量が高められる等の利点を有する。また、D-体アミノ酸を構成成分に含むことでタンパク質分解への抵抗性が高まるので、本発明のペプチドは、投与した対象の体内において高い安定性および長い半減期を有する。本発明の医薬組成物の有効成分として使用可能な本発明のペプチドは、イミュノグロブリン結合能を有するペプチドであって、Pro-Gly-Leu-X4-X5-PheIここで、X4およびX5は同時にTyrでないアミノ酸であるで表されるアミノ酸配列を有するペプチドである。本発明の医薬組成物の有効成分として好ましい本発明のペプチドの例は、上記アミノ酸配列IにおいてX4、X5がともに親水性アミノ酸であるものである。かかる親水性アミノ酸としてはLys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、SerおよびThrなどが挙げられる。本発明の医薬組成物の有効成分として、より好ましい本発明のペプチドの例は、配列番号9~15のいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドである。さらに好ましくは、式Iのアミノ酸配列中の1つまたは複数のアミノ酸Glyを除く、あるいはすべてのアミノ酸Glyを除くが対応するD-アミノ酸で置換されているアミノ酸配列を有するペプチドである。本発明の医薬組成物の投与方法は、疾患の種類、対象の状態、および/または標的部位などの条件に応じて適宜選択することができる。当該方法としては、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経鼻投与、経口投与、経肺投与、座剤などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の医薬組成物に含まれるペプチドの量、医薬組成物の剤形、投与頻度などは、疾患の種類、対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択できる。例えば、1回あたりのペプチド投与量を0.01~100mg/kg、好ましくは0.1~10mg/kgとしてもよいが、本発明のペプチドの投与量はこれらに限定されるものではない。本発明は、さらなる態様において、有効量のイミュノグロブリン結合能を有するペプチド、かかるペプチドを含む融合タンパク質、かかるペプチドまたは融合蛋白をコードする核酸、あるいはかかる核酸を含むベクターを対象に投与することを含む、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患の治療または予防方法に関するものである。本発明は、さらに別の態様において、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患の治療または予防に用いられる、イミュノグロブリン結合能を有するペプチド、かかるペプチドを含む融合タンパク質、かかるペプチドまたは融合蛋白をコードする核酸、あるいはかかる核酸を含むベクターに関するものである。本発明は、さらなる態様において、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患の治療または予防に用いられる医薬の製造のための、イミュノグロブリン結合能を有するペプチド、かかるペプチドを含む融合タンパク質、かかるペプチドまたは融合蛋白をコードする核酸、あるいはかかる核酸を含むベクターの使用を提供する。以下に実施例を示して本発明を具体的かつ詳細に説明するが、実施例は本発明を限定するものと解してはならない。ペプチドの水溶性の検討本発明者は、C1q由来のアミノ酸配列を有するペプチドについて検討し、配列番号1で示すアミノ酸配列Pro-Gly-Leu-Tyr-Tyr-Pheを有するペプチドまたはその修飾物が、関節リウマチ、および全身性エリテマトーデスSLE、糸球体腎炎、血管炎、関節炎などの免疫複合体病などの、C1qとイミュノグロブリンとの結合により引き起こされる疾患において治療および予防効果を示すことを見出したが国際公開第2009/025300号パンフレットおよび国際公開第2010/084851号パンフレットを参照のこと、上記ペプチドの水溶性をさらに高めるために、以下の検討を行った。1変異導入部位の検討イミュノグロブリン結合能を有するペプチドを有し、種々の治療および予防効果を示す、配列番号1で示すアミノ酸配列を有するペプチドについて、上記結合能に関与せず、変異を導入し得る部位をアラニンスクリーニングにより探索した。表1に示すアミノ酸配列を有するペプチドをGLBiochem社上海に委託して作製した。ヒトC1qタンパク質Carbiochem社製を10mMHEPES、300mMNaCl、40グリセロールpH7.2に溶解し、200μg/mlヒトC1qタンパク質溶液を調製した。ヒトC1qタンパク質溶液を5mm×15mmの大きさのニトロセルロース膜HybondC;アマシャム社製に2μl400ngずつスポットし、室温にて約1時間風乾した。ニトロセルロース膜をTBSに浸し、5分間インキュベートし、5ブロッキング剤AmershamECLblockingreagent;GEHealthcare社製を含むTBS20mMTris-HClpH7.5,150mMNaClを用いて室温にて1時間ブロッキングを行った。TBSにて軽く洗浄した後、アルカリホスファターゼALP標識ヒトイミュノグロブリンIgGBECKMANCOULTER社製をTBSにて1000倍希釈し、各ペプチドの濃度が500μg/mlとなるように混合した溶液20μlに浸し、室温で1時間反応させた。TTBS溶液TBSに最終濃度0.05でTween20を加えたものにて軽く洗浄した後、同液にて10分間、3回振盪しながら洗浄した。ALP標識イミュノグロブリンIgGを用いて、ヒトC1qタンパク質とIgGとの結合体を検出した。ニトロセルロース膜をALP発色バッファー100mMNaCl,5mMMgCl2入りTris-HClpH9.5で軽く洗浄後、BCIP/NBT溶液プロメガ社製を含むALP発色バッファー30μlに浸し、室温で10分間発色させた。染色像が得られたところでニトロセルロース膜を十分量の蒸留水に浸し、発色バッファーを洗い流した。洗浄後、ニトロセルロース膜を風乾してMultiGaugeFUJIFILMを用いて染色像の取り込みを行った。結果を図1に示す。配列番号1で示すアミノ酸配列において、3~5番目のアミノ酸をアラニンに置換したペプチドにおいて、イミュノグロブリン結合能は保持されていた。特に、4番目または5番目のアミノ酸を元のアミノ酸と異なる種類のものに置換しても、イミュノグロブリン結合能にはほとんど影響がないことが示された。2ペプチドへの親水性アミノ酸導入の検討1で変異を導入し得ることが確認された4番目および5番目のアミノ酸を種々の親水性アミノ酸に置換したペプチドの水溶性を検討した。表2に示すアミノ酸をGLBiochem社上海に委託して作製した。表2に記載のペプチドのうち、SP1~7は4番目および5番目のアミノ酸を種々の親水性アミノ酸に置換したペプチドである。結果を表3に示す。表3において、10mg/ml以上の濃度でも溶媒PBSまたは生理食塩水に溶けたペプチドには○を付し、1mg/mlの濃度で溶媒に溶けなかったペプチドに×を付している。配列番号1で示すアミノ酸配列において、元の配列を有するペプチドR1では1mg/mlの濃度で溶媒に溶けなかったが、N末端から4番目および5番目のアミノ酸を親水性アミノ酸に置換したペプチドでは10mg/ml以上の濃度でも十分溶媒に溶けた。以降の実験では、4番目および5番目のアミノ酸を親水性アミノ酸に置換したペプチドを用いた。一般に、ペプチド医薬においては、消化管での易分解性を考慮して、静脈注射や皮下注射による投与方法を用いるケースが多い。そのため、水溶性が低いペプチドは臨床適用が難しくなる。経口投与を選択しても、ペプチドが分解されやすいという問題がある。一方、本発明のペプチドは水溶性が高いので、高用量で静脈注射や皮下注射を行うことができる。さらに本発明のペプチドは水溶性が高いので、素材として取り扱いやすいという利点も有している。水溶性を付与したペプチドのイミュノグロブリン結合能の確認実施例12で得られたペプチドについて、イミュノグロブリン結合能の確認を行った。SP1~7のペプチドをそれぞれ10mg/mlとなるようにDMSOに溶解した。また、国際公開第2009/025300号および国際公開第2010/084851号にてイミュノグロブリン結合能が確認されているSTGKFTCKVPGLYYFのアミノ酸配列を有するペプチドR8、dPGdLdYdYdFおよびdSdKdVdPGdLdYdYdFのアミノ酸配列配列中、dL、dP、dA、dY、dF、dS、dK、dVおよびdTは、それぞれロイシン、プロリン、アラニン、チロシン、フェニルアラニン、セリン、リシン、バリンおよびトレオニンのD体をそれぞれ意味するを有するペプチドそれぞれR9および10についても同様に溶液を調製し、以下の実験に供した。ヒトC1qタンパク質Carbiochem社製を10mMHEPES、300mMNaCl、40グリセロールpH7.2に溶解し、200μg/mlヒトC1qタンパク質溶液を調製した。ヒトC1qタンパク質溶液を5mm×15mmの大きさのニトロセルロース膜HybondC;アマシャム社製に2μl400ngずつスポットし、室温にて約1時間風乾した。ニトロセルロース膜をTBSに浸し、5分間インキュベートし、5ブロッキング剤AmershamECLblockingreagent;GEHealthcare社製を含むTBS20mMTris-HClpH7.5,150mMNaClを用いて室温にて1時間ブロッキングを行った。TBSにて軽く洗浄した後、アルカリホスファターゼALP標識ヒトイミュノグロブリンIgGBECKMANCOULTER社製をTBSにて1000倍希釈し、各ペプチドの濃度が500μg/mlとなるように混合した溶液20μlに浸し、室温で1時間反応させた。TTBS溶液TBSに最終濃度0.05でTween20を加えたものにて軽く洗浄した後、同液にて10分間、3回振盪しながら洗浄した。ALP標識イミュノグロブリンIgGを用いて、ヒトC1qタンパク質とIgGとの結合体を検出した。ニトロセルロース膜をALP発色バッファー100mMNaCl,5mMMgCl2入りTris-HClpH9.5で軽く洗浄後、BCIP/NBT溶液プロメガ社製を含むALP発色バッファー30μlに浸し、室温で10分間発色させた。染色像が得られたところでニトロセルロース膜を十分量の蒸留水に浸し、発色バッファーを洗い流した。洗浄後、ニトロセルロース膜を風乾してMultiGaugeFUJIFILMを用いて染色像の取り込みを行い、数値化した。結果を図2に示す。図中、NCはペプチドを含まないDMSOを、アルカリホスファターゼALP標識ヒトイミュノグロブリンIgGを含まない反応液に添加したサンプルの結果であって、PCはペプチドを含まないDMSOを、アルカリホスファターゼALP標識ヒトイミュノグロブリンIgGを含む反応液に添加したサンプルの結果を示す。配列番号1で示すアミノ酸配列において、4番目および5番目のアミノ酸を親水性アミノ酸に置換したアミノ酸配列を有する各ペプチドは、C1qとイミュノグロブリンとの結合を阻害した。TNF-α刺激により誘導される炎症関連蛋白の産生に対する本発明のペプチドの抑制効果ヒトRA患者から採取した滑膜細胞をTNF-αにより刺激することで産生されるサイトカインや細胞外プロテアーゼなどの炎症関連蛋白が、本発明のペプチドを添加することにより減少するかどうか、リアルタイムPCR法を用いて検討した。10FBS、1L-Gluおよび1P/Sを含むDMEMGIBCOを用いて、滑膜細胞Passage35を10cm径の培養ディッシュで80~90のコンフルエントになるまで培養した。培養した細胞を24ウェルプレートに5×105細胞/ウェルの割合で播種し、24時間インキュベーションした。10μg/mlのrhTNF-αRDRecombinantHumanTNFαTNFSF1A210TAを10倍希釈したものを10μl/ウェルで添加し、滑膜細胞を刺激した。それぞれのペプチド添加量が1、10または100μgとなるように、生理食塩水大塚製薬社製で各濃度に調製した本発明のペプチド溶液を10μl/ウェルで添加し、24時間インキュベーションした。培地を除去し、PBS-で洗浄した。TRIzolinvitrogenTRIzolReagent15596018を1ml/ウェルで添加し、セルスクレーパーで細胞を掻き取り、1.5mlエッペンチューブに回収した。RNAを抽出した後で、HighCapacitycDNAReverseTranscriptionKitsを用いてcDNAを調製し、リアルタイムPCRABIPRISM7900HTで各遺伝子の発現量を半定量化し評価した。結果を図3に示す。SP3およびSP4などの本発明のペプチドは、TNF-αで刺激することにより誘導されるIL-1β、TNF-α、MMP-1およびMMP-3などの各種炎症関連蛋白の産生を抑制することが示された。モノクローナル抗体カクテル関節炎マウスモデルにおける本発明のペプチドの関節炎抑制作用1.材料および方法1-1マウスBALB/cCrSlcSPFを用い、モノクローナル抗体カクテル誘発関節炎に対する発明のペプチドの関節炎抑制作用を検討した。通常飼料を与えて6日間馴化してから試験に使用した。1-2試験に用いたペプチドのアミノ酸配列ペプチドR1:PGLYYF被験物質aペプチドR9:dPGdLdYdYdF被験物質αペプチドSP4:PGLEKF被験物質VII-1D-アミノ酸グリシン以外で構成されたペプチドSP4:dPGdLdEdKdF被験物質VII-21-3実験概略関節炎惹起用モノクローナル抗体カクテル2mg/個体を静脈内投与し、その3日後にリポ多糖LPSを50μg/個体で腹腔内投与し、関節炎を惹起した。ペプチドR1およびR9を、LPS投与翌日4日目より14日目まで、1日1回、10mg/kgで腹腔内投与、およびペプチドSP4およびD-アミノ酸グリシン以外で構成されたペプチドSP4を、LPS投与翌日4日目より14日目まで、1日1回、10mg/kgまたは100mg/kgで腹腔内投与した。陽性対照薬のメトトレキセートMTXを、4日目より1日1回、0.15mg/kgで腹腔内投与した。コントロール群には生理食塩水を、4日目より1日1回、10mL/kg投与した。0日目より14日目までの偶数日に四肢の臨床スコアを観察し、後肢容積を測定した。また、以下のようにして関節組織標本作製および軟X線写真撮影を行った。麻酔下にてヘパリン含有生理食塩液で脱血を行い、氷冷4パラホルムアルデヒド液を持続注入して全身灌流固定した。灌流固定後、両後肢の膝関節大腿骨中心部および脛骨中心部を切断し、皮膚および筋肉を除去および踵関節脛骨中心部から指先までを摘出し、さらに4パラホルムアルデヒド液で一晩浸漬固定4°Cした。その後、両膝および両踵関節を50mMPBS4°Cに移した後、踵関節の軟X線写真撮影を2方向内側面方向および上面方向から行った。1-4ペプチド溶液の調製ペプチドR1およびR9を秤量してメノウ乳鉢に入れ、乳棒で粉砕した後に生理食塩液を徐々に加えて懸濁し、1mg/mlとなるように調製し、使用するまで調製物を冷蔵保存した。またペプチドSP4およびD-アミノ酸グリシン以外で構成されたペプチドSP4は生理食塩液を1.0ml添加し溶解させ、10mg/mlおよび1mg/mlとなるように調製し、使用するまで調製物を冷蔵保存した。1-5メトトレキセート溶液の調製メトトレキセートを、1mg秤量し、0.1M水酸化ナトリウム溶液1mlを加え溶解した。作製した1mg/ml液を0.15ml分取し、これに生理食塩液を9.85ml加え、0.015mg/mlとなるように調製した。使用するまで調製物を冷蔵保存した。1-6体重測定、一般症状観察および群分け動物の体重測定は、試験期間中、関節炎惹起用モノクローナル抗体カクテル投与日を0日目とし、0、3、6、9、12および14日目に測定した。一般状態観察は、毎日実施した。1-7関節炎モデルの作製0日目に7週齢のマウス40匹に関節炎惹起用モノクローナル抗体カクテル2mg/個体を静脈内投与し、3日目にLPSを50μg/個体で腹腔内投与した。1-8ペプチド溶液の投与ペプチド溶液は、4日目より1日1回10mg/kgあるいは100mg/kg腹腔内投与した。対照として、4日目より生理食塩液を1日1回腹腔内投与した。投与量は、10ml/kgとした。メトトレキセートは、4日目より1日1回0.15mg/kg腹腔内投与した。投与量は、10ml/kgとした。投与には注射針26G;テルモおよび注射筒1.0ml容量;テルモを用いた。1-9臨床スコア観察臨床スコアの観察は、0日目より14日目までの偶数日に以下に従って観察した。四肢の合計で最大12スコアとした。足の腫れを肉眼で観察した。<臨床スコア>0:正常な関節1:わずかな炎症および赤み2:手足全体に及び、手足の使用を妨げる重篤な紅斑および腫れ3:強直、関節硬直、機能喪失を伴う、手足または関節の変形1-10試験群試験群は以下のとおりであった。1-11統計学的解析処理方法試験成績は平均値±標準誤差で表示し、EXSASVersion716,株式会社アームシステックスを用いて解析を行った。臨床スコアはWilcoxon検定を行った。体重および足容積などの定量的データは、Bartlett検定を行い、分散が均一であればDunnettの多重比較検定を行い、分散が不均一であればSteelの多重比較検定を行った。有意水準は両側5とした。2.結果2-1動物の体重変化および一般的状態コントロール群の体重は、0日目で22.5±0.2gであり、LPS投与後の6日目で18.1±0.2gと低下した。9日目で19.6±0.3g、12日目で21.1±0.4g、14日目で22.2±0.4gと徐々に体重が回復した。他の被験物質投与群の体重もコントロール群と同様に推移し、有意差は認められなかった。また、試験期間中すべての動物について副作用と思われる症状は認められなかった。2-2臨床スコア結果を図4~7に示す。コントロール群の臨床スコアは、0日目で0.0±0.0、2日目で0.6±0.2であり、LPS投与後である4日目で3.0±0.3、6日目で6.6±0.7、8日目で6.8±0.6、10日目で8.4±0.5、12日目で11.0±0.3、14日目で11.2±0.4と経時的に増加した。14日目のスコアは、前肢および後肢のスコアが5例とも2ないし3であり、総スコアは10~12であった図4~図7。被験物質a10mg/kg投与群の臨床スコアは、最大値の14日目で9.6±0.8とコントロール群と比較して低値で推移し、スコア0を認めた例数が2例であり、総スコアは7~12であった図4。被験物質α10mg/kg投与群の臨床スコアは、12日目で7.0±0.7、14日目で7.4±0.9であり、コントロール群と比較して有意な低値を示した。14日目では、スコア0を認めた例数が3例であり、総スコアは5~10であった図5。被験物質VII-110mg/kg投与群の臨床スコアは、12日目で7.2±1.0、14日目で7.4±1.1であり、コントロール群と比較して有意な低値を示した。14日目では、スコア0を認めた例数が3例であり、総スコアは5~10であった図6。被験物質VII-1100mg/kg投与群の臨床スコアは、12日目で7.2±0.9、14日目で8.0±0.9であり、コントロール群と比較して有意な低値を示した。14日目では、スコア0を認めた例数が2例であり、総スコアは5~10であった図6。被験物質VII-210mg/kg投与群の臨床スコアは、10日目で5.0±0.8、12日目で5.8±0.9、14日目で6.0±1.0であり、コントロール群と比較して有意な低値を示した。14日目では、スコア0を認めた例数が4例であり、総スコアは4~10であった図7。被験物質VII-2100mg/kg投与群の臨床スコアは、10日目で5.8±0.5、12日目で6.8±0.7、14日目で7.2±0.8であり、コントロール群と比較して有意な低値を示した。14日目では、スコア0を認めた例数が4例であり、総スコアは4~8であった図7。MTX0.15mg/kg投与群の臨床スコアは、12日目で8.2±0.9、14日目で8.6±0.9であり、コントロール群と比較して有意な低値を示した。14日目では、スコア0を認めた例数が1例であり、総スコアは6~11であった図4~図7。2-3後肢容積結果を図8~11、図12~15に示す。コントロール群の後肢容積は、0日目0.212cm3であり、LPS投与後である4日目よりも6日目で後肢容積は著しい増加を示した。後肢容積は4日目で0.287cm3、6日目で0.419cm3、8日目で0.460cm3と最大値に達し、その後低下し、14日目では0.331cm3であった図8~図11。0日目の容積を100とした時の増加率は、4日目で136.0、6日目で198.3、8日目で217.8と最大の増加率を示し、14日目では156.8に低下した図12~図15。被験物質a10mg/kg投与群の後肢容積は、0日目で0.213cm3であり、6日目で0.403cm3増加率190.2、8日目で0.452cm3増加率213.2と最大値に達し、その後徐々に低下し、14日目では0.343cm3増加率161.8であり、コントロール群と比較して有意差は認められなかった図8、図12。被験物質α10mg/kg投与群の後肢容積は、0日目で0.212cm3であり、6日目で0.367cm3増加率173.7、8日目で0.455cm3増加率215.1と最大値に達し、その後徐々に低下し、14日目では0.328cm3増加率155.1であった。コントロール群と比較して6日目の容積で有意な低下が認められた図9、図13。被験物質VII-110mg/kg投与群の後肢容積は、0日目で0.223cm3であり、6日目で0.368cm3増加率165.2、8日目で0.438cm3増加率196.6と最大値に達し、その後徐々に低下し、14日目では0.332cm3増加率149.1であった。コントロール群と比較して6日目の容積および増加率で有意な低下が認められた図10、図14。被験物質VII-1100mg/kg投与群の後肢容積は、0日目で0.219cm3であり、6日目で0.362cm3増加率165.5、8日目で0.418cm3増加率191.4と最大値に達し、その後徐々に低下し、14日目では0.329cm3増加率150.3であった。コントロール群と比較して6日目の容積および増加率で有意な低下が認められた図10、図14。被験物質VII-210mg/kg投与群の後肢容積は、0日目で0.211cm3であり、6日目で0.363cm3増加率172.0、8日目で0.429cm3増加率204.0と最大値に達し、その後徐々に低下し、14日目では0.340cm3増加率161.8であった。コントロール群と比較して6日目の容積の有意な低下と増加率で低下傾向P=0.0753が認められた図11、図15。被験物質VII-2100mg/kg投与群の後肢容積は、0日目で0.223cm3であり、6日目で0.373cm3増加率167.4、8日目で0.420cm3増加率188.5と最大値に達し、その後徐々に低下し、14日目では0.356cm3増加率159.6であった。コントロール群と比較して6日目の容積の低下傾向P=0.0876と有意な増加率の低下が認められた図11、図15。MTX0.15mg/kg投与群の後肢容積は、0日目で0.216cm3であり、6日目で0.381cm3増加率176.2、8日目で0.441cm3増加率204.2と最大値に達し、その後徐々に低下し、14日目では0.356cm3増加率165.4であった。コントロール群と比較して有意差は認められなかった図8~図11、図12~図15。3.考察コントロール群の後肢容積は、2日目より増加し始め、8日目LPS投与5日後に最大値に達し、その後徐々に低下した。コントロール群の後肢容積の著しい増加は4日目から6日目で認められた。コントロール群と比較して、6日目で被験物質α10mg/kg投与群、被験物質VII-110mg/kg投与群および100mg/kg投与群、VII-210mg/kg投与群および100mg/kg投与群に後肢容積および増加率で有意な低下作用が認められた。これらの結果は、最も浮腫が増悪する時にこれらの被験物質が抑制的に効果を発揮したことを示す。また、容積が最大値に達した8日目において、コントロール群との容積率の差は、陽性対照群のMTX投与群で-13.6、被験物質VII-110mg/kg投与群および100mg/kg投与群でそれぞれ-21.2および-26.4、被験物質VII-210mg/kg投与群および100mg/kg投与群でそれぞれ-13.8および-29.3であり、コントロール群と比較して有意差は認められなかったものの浮腫に対する抑制効果が認められた。コントロール群の臨床スコアは、2日目より悪化し始め、4日目から6日目の浮腫を伴うスコアの増加、その後8日目から14日目までの関節の硬化に伴う2相性のスコアの増加が認められた。4日目から6日目までの1相目ではスコアの有意差は認められなかったが、被験物質α10mg/kg投与群、被験物質VII-210mg/kg投与群および100mg/kg投与群でコントロール群と比較してスコアの低下が認められた。8日目から14日目までの2相目では、被験物質α10mg/kg投与群、被験物質VII-110mg/kg投与群、100mg/kg投与群および陽性対照群のMTX投与群で12日目および14日目で有意なスコアの改善効果が認められた。被験物質VII-210mg/kg投与群および100mg/kg投与群では、10日目、12日目および14日目で有意なスコアの改善効果が認められた。コントロール群の14日目のスコアは、前肢および後肢のスコアが5例とも2ないし3であり、総スコアは10~12であったのに対し、被験物質VII-210mg/kg投与群および100mg/kg投与群ではスコア0を認めた例数がそれぞれ4例であり、総スコアはそれぞれ4~10および4~8であった。以上の結果より、この動物モデルにおける被験物質の関節炎抑制効果は、VII-2≧VII-1≧α>aの順であった。また、これらの被験物質の関節炎抑制効果はメトトレキセートと同程度かそれよりも大きく、特にVII-2およびVII-1の関節炎抑制効果が大きかった。この理由としては、被験物質VII-2およびVII-1の水溶性が高いことが関連していると考えられた。これらの結果から、本発明のペプチドは、臨床において既に用いられている医薬品メトトレキセートより優れた関節炎抑制作用を有しており、関節炎および関連する疾患の処置および予防に有用であることが明らかになった。なお、メトトレキセートは微量の使用であっても重大な副作用をもたらすことが知られている。一方で、本発明のペプチドは天然由来のものであり、上記試験において副作用は一切認められなかった。従って、本発明のペプチドは、安全性の面からも従来用いられている医薬と比べて有利であるといえる。アジュバント関節炎ラットモデルにおける本発明のペプチドの関節炎抑制作用モノクローナル抗体カクテル関節炎マウスモデルにおいて本発明のペプチドが良好な炎症抑制効果を示したので、アジュバント関節炎ラットモデルにおける本発明のペプチドの炎症抑制効果についても調べた。アジュバント関節炎モデルは、全身性の炎症を評価するモデルであり、ヒト関節リウウマチの病態に最も近いモデルであるといわれている。1.材料および方法1-1ラットオスのLewis/CrlCrljSPFを用い、アジュバント誘発関節炎に対する発明のペプチドの関節炎抑制作用を検討した。ラット45匹を日本チャールスリバー株式会社から購入し、通常飼料を与えて7日間馴化してから使用した使用開始時の体重範囲は193.3g~218.3g。1-2被験物質試験に用いたペプチドのアミノ酸配列は以下のものであった。D-アミノ酸グリシン以外で構成されたペプチドSP4:dPGdLdEdKdF被験物質VII-21-3アジュバント関節炎モデルの作成メノウ乳鉢上において結核死菌MycobacteriumbutyricumLotNo0260570Difcoを微粉化後、流動パラフィンを少量ずつ加えて馴染ませながら1.0mg/mLとなるよう乳化させた。得られた乳化液はNKMICRONIZER日本精機を用いて確実に微細に乳化できたことを確認後に使用した。ラットの右の後肢を露出させ、右後肢足蹠皮内に25G注射針付きシリンジを用いて上記乳化液100μLを注射1回して関節炎を惹起した惹起0日。陰性対照群には流動パラフィンを同様に接種した。1-4試験群および投与方法被験物質の調製および試験群は表5に説明するとおりであった。各群5匹とした。動物は各群5匹とし、投与液量はすべて5ml/kgで投与した。メトトレキセート前投与群を除き、アジュバント投与後10日目惹起10日から21日目惹起21日まで毎日、被験物質を投与した11回。メトトレキセート前投与群には惹起前にメトトレキセートを予防的に1回投与し、惹起日から毎日、メトトレキセートを投与した21回。試験日数の表示方法はアジュバント接種日惹起0日を起算日とした。1-5観察および測定方法i体重測定惹起0、3、7、10、14、17、21日の午前中に全生存例について体重測定した。ii関節炎スコアの測定後肢のみを対象に、以下に示す基準に従って評価した。指関節の腫脹について0点:腫脹なし1点:2指以下の腫脹2点:3指の腫脹3点:4指の腫脹4点:全指の腫脹後肢の甲の腫脹について0点:腫脹なし1点:軽度の腫脹2点:中程度の腫脹3点:やや重度の腫脹4点:重度の腫脹発赤の程度0点:発赤なし1点:軽度の発赤2点:中程度の発赤3点:やや重度の発赤4点:重度の発赤iii左右後肢の足容積の測定プレシスモメーターUNICOMTK105を用いて測定した。足容積の増加率足蹠腫脹率pawswellingは以下の計算式により算出した。足蹠腫脹率=[Vt-Vo/Vo]x100Vt:アジュバント接種後の足容積mLVo:アジュバント接種前の足容積mL惹起0日に測定なお、本試験では、被験物質により治療的効果を評価するために、惹起10日に対する浮腫の変化率も計算した。iv血漿中のTNF-αならびにIL-1βの測定TNF-αELISAキットレビス登録商標TNF-α-ラットならびにIL-1βELISAキットQuantikine登録商標RatIL1βIL1F2を用いてダブルポイント法にて測定した。1-6統計学的解析統計学的解析データは平均±標準偏差で示し、陰性対照群と陽性対照群との検定では分散に一様性が認められなかったため、AspinWelchのt-検定による有意差検定を行った。陽性対象群に対する各投与群の有意差検定には分散に一様性が認められなかったため、ノンパラメトリック手法を用いてKruskalWallis検定後のDunnett型多重比較検定で評価した。p<0.05を有意差ありとした。2.結果2-1動物の体重および状態陰性対照群に比べて各惹起群で若干の体重の増加抑制が見られたが、どの群も有意な抑制ではなかった。試験期間中に死亡、異常および副作用と見られる症状を呈した動物はなかった。2-2足容積増加率表6a、6b、7a、7b陰性対照群では左右後肢とも成長に伴う自然な足容積の増加が認められ、惹起21日での足容積増加率は左後肢で9.20、右後肢で7.65となった。関節炎対照群では、左右後肢ともアジュバントによる惹起による経日的で、顕著な足容積の増加が認められ、ともに惹起3日以降、対照群と比較して有意であり、惹起21日での足容積増加率は左後肢で22.03、右後肢で53.04となった。メトトレキセート前投与群では、左後肢で惹起14日までは陰性対照群と同様の推移を示し、惹起14日のみ有意な増加抑制効果がみとめられたが、惹起17および21日では足容積が急に増加し、後者での足容積増加率は12.47と陰性対照群との差が開いた。また、右後肢の増加率においては経日的な増加が認められたが、その増加率は関節炎対照群のそれの最大でも7割以下であり、惹起14日においては有意な増加抑制効果が確認された。惹起10日から投与を開始したメトトレキセート投与群では、惹起10日に対する左後肢の足容積増加率が惹起14日では全く増加しなかったが、惹起17日では増加に転じ、惹起21日では関節炎対照群のそれと同等となった。右後肢では惹起10から21日の期間において惹起14日では有意な低下を示したが、その他の日では惹起10日に対する足容積増加率には大きな変化は認められなかった。レフルミド群では惹起10日に対する左右後肢の足容積増加率には大きな変化は認められなかったが、惹起21日では惹起10日に対してともに負の値となった。被験物質VII-2の10mg/kg群においては、両後肢で惹起14日から顕著かつ有意な足容積増加抑制が認められ、惹起10日に対する左後肢の足容積増加率は惹起14日、17日、21日ではそれぞれ、マイナス4.0、マイナス7.2ならびにマイナス6.8となり、右後肢の惹起10日に対する足容積増加率は惹起14日、17日、21日ではそれぞれ、マイナス6.4、マイナス9.9ならびにマイナス9.7となった。被験物質VII-2の100mg/kg群は、その10mg/kg群と、両後肢でほぼ同様の推移を示したが、惹起14日から顕著かつ有意な足容積増加抑制が認められ、惹起10日に対する左後肢の足容積増加率は惹起14日、17日、21日ではそれぞれ、マイナス5.0、マイナス7.0ならびにマイナス7.0となり、右後肢の惹起10日に対する足容積増加率は惹起14日、17日、21日ではそれぞれ、マイナス6.6、マイナス6.3ならびにマイナス4.8と、惹起14日でのみ有意となった。2-3指関節の腫脹のスコア表8a、8b陰性対照群では左右後肢とも異常は認められなかった。関節炎対照群では、左右後肢とも惹起7日からスコア変化が認められ、左後肢では惹起7日と惹起14から21日までに陰性対照群と比較して有意で経日的なスコア上昇が認められた。右後肢では惹起14および17日に有意なスコア上昇が認められた。メトトレキセート前投与群では、左右後肢ともに関節炎対照群より小さなスコアを示したが、有意となる観察時点は無かった。惹起10日から投与を開始したメトトレキセート投与群では、左右後肢ともに関節炎対照群より小さなスコアを示したが、有意となる観察時点は無く、メトトレキセート前投与群より低いスコアが確認できたのは左右後肢の惹起17日だけであった。レフルミド群では惹起10日の投与前に認められた左および右後肢でのスコア1.4ならびに1.6を経日的に低下させ、惹起21日でのスコアは前者で0.4、後者で0.6となった。被験物質VII-2の10mg/kg群においても、惹起10日の左および右後肢でのスコア0.8ならびに1.0を経日的に低下させ、左後肢では惹起17日以降のスコアは0と有意な指関節の腫脹減退作用を示した。右後肢においては、惹起21日でのスコアは0.2と指関節の腫脹を減退させた。被験物質VII-2の100mg/kg群においては惹起10日の左および右後肢でのスコア0.6ならびに1.0を経日的に低下させ、左後肢では惹起17日以降スコアは0と有意な指関節の腫脹減退作用を示し、右後肢においては、惹起21日でのスコアは0.2と指関節の腫脹を減退させた。2-4甲の腫脹スコア表9a、9b陰性対照群では左右後肢とも異常は認められなかった。関節炎対照群では、左右後肢とも惹起7日からスコア変化が認められ、左後肢では惹起10から21日まで、陰性対照群と比較して有意で経日的なスコア上昇が認められた。右後肢では惹起7日以降、有意なスコア上昇が認められた。メトトレキセート前投与群では、左右後肢ともに関節炎対照群より小さなスコアを示し、左後肢では惹起10および14日に関節炎対照群と比較して有意なスコア低下が認められた。右後肢では惹起7日から14日まで有意なスコア低下が認められたが、両後肢とも惹起17日および21日のスコアは急に大きくなった。惹起10日から投与を開始したメトトレキセート投与群では、惹起14日の左後肢のみでスコアの改善傾向を示した以外は、関節炎対照群とは差が無かった。レフルミド群では、左後肢において惹起10日のスコア0.6より低いスコアが惹起14日以降認められたが、右後肢では惹起10日のスコアを惹起14日以降悪化させることはないという程度であった。被験物質VII-2の10mg/kg群においては、左後肢の惹起10日のスコアが0.2と低かったが、惹起14日以降にはスコアが0となる有意な作用を示し、右後肢では惹起10日のスコア0.8を惹起14日以降悪化させることはなかった。被験物質VII-2の100mg/kg群においては、左後肢の惹起10日のスコア0であったが、惹起21日に甲の腫脹を示す1例が認められ、スコアは0.2となった。右後肢では惹起10日のスコア1.0を惹起14日以降悪化させることはなく、惹起17日までは有意であった。2-5発赤のスコア表10a、10b陰性対照群では左右後肢とも異常は認められなかった。関節炎対照群では、左後肢では惹起10日からスコア変化が認められ、惹起14日に陰性対照群と比較して有意なスコア上昇が認められた。右後肢では惹起7日からスコア変化が認められ、惹起10および14日に有意なスコア上昇が認められた。メトトレキセート前投与群では、左右後肢ともに関節炎対照群より小さなスコアを示したが、左後肢では惹起14日に関節炎対照群と比較して有意なスコア低下が、右後肢では惹起10および14日に有意なスコア低下が認められた。惹起10日から投与を開始したメトトレキセート投与群では、左後肢では関節炎対照群より小さなスコアを示したのは惹起14日だけで、右後肢では惹起14日以降に関節炎対照群よりスコアは小さくかったが、ともに有意なスコア低下ではなかった。レフルミド群では惹起10日の投与前に認められた左および右後肢でのスコア0.8ならびに1.2を、左後肢では若干低下させる傾向を示したが、惹起21日の右後肢でのスコアは1.4と上昇した。被験物質VII-2の10mg/kg群においては、惹起10日の左肢でのスコア0.2を惹起14日以降には0とする有意な発赤減退作用を示したが、右後肢では惹起17日までスコアは変化せず、惹起21日において0.6と僅かに低下した。被験物質VII-2の100mg/kg群においては、左後肢の惹起10日のスコア0であったが、惹起17日および21日に発赤を示す各1例が認められ、ともにスコアは0.2と上昇した。右後肢では惹起10日のスコア1.0を惹起14日以降悪化させることはなかった。2-6スコア合計表11a、11b陰性対照群では左右後肢とも異常は認められなかった。関節炎対照群では、左右後肢ともに惹起7日からスコア変化が認められ、陰性対照群と比較して有意なスコア上昇が認められた。左後肢のスコアは惹起14日に最大2.8に達し、その後ほぼ変化しなかった。また、右後肢の最大スコアは惹起17日の5.8であった。メトトレキセート前投与群では、左右後肢ともに関節炎対照群より小さなスコアを示したが、左後肢では惹起10日と14日に関節炎対照群と比較して有意なスコア低下が、右後肢では惹起7日および10日に有意なスコア低下が認められた。しかし、左後肢では惹起17日および21日にはそれぞれ1.4、0.8と高いスコアを示して有意とはならなかった。右後肢においても、同様に惹起14、17および21日にはそれぞれ1.8、3.2および2.8と高いスコアを示して有意とはならなかった。惹起10日から投与を開始したメトトレキセート投与群では、左後肢でのスコアは惹起14、17および21日にはそれぞれ1.2、1.8および1.8と高いスコアを示して有意とはならなかった。右後肢でのスコアも惹起14、17および21日にはそれぞれ3.6、3.8および4.2と高いスコアを示して有意とはならなかった。レフルミド群では惹起10日の投与前に認められた左および右後肢でのスコア2.8ならびに4.2を、左後肢では惹起14日以降半分以下に低下させる傾向を示したが、有意とはならなかった。一方、右後肢においては惹起17日のスコアは2.0と有意に低下した。被験物質VII-2の10mg/kg群においては、両後肢とも惹起14日以降には有意なスコア低下を示した。被験物質VII-2の100mg/kg群においては、左後肢の惹起14日以降には有意なスコア低下を示し、右後肢では惹起14以降でスコアの低減作用を示し、惹起14日および21日では有意となった。2-7血漿中IL-1βおよびTNF-α表12惹起21日に動物を剖検し、血漿を調製し、血漿中IL-1βおよびTNF-α濃度を測定した。測定した全ての群で、TNF-α濃度は検出限界8pg/mL以下であった。一方、IL-1β濃度は陰性対照群で20.6pg/mLで、関節炎対照群では15.1pg/mLと低くなった。メトトレキセート前投与群および惹起10日から投与を開始したメトトレキセート投与群ではそれぞれ、18.4pg/mL、22.6pg/mLであった。レフルミド群では13.0pg/mLと低い値を示した。被験物質VII-2は10mg/kg群および100mg/kg群の値はそれぞれ、10.5pg/mL、13.9pg/mLであった。3.考察被験物質VII-2の抗炎症作用を確認するため、ラットを用いたアジュバント関節炎モデルにおける関節炎スコア、後肢浮腫量ならびに、アジュバント接種21日後の動物から得た血漿中TNF-αおよびIL-1β量を指標に陽性対照薬のそれらと比較検討した。陰性対照群では左右後肢とも成長に伴う自然な足容積の増加が認められ、惹起21日での足容積増加率は左後肢で9.20‰、右後肢で7.65であった。関節炎対照群では、左右後肢ともアジュバントによる惹起により、顕著な足容積の増加が認められ、ともに惹起3日以降、経日的かつ有意に増加した。また、全てのスコア増加は惹起10日には左後肢にも認められ、後肢容積の増加だけでなく、リウマチ様の免疫反応に伴う炎症が良く再現した結果となった。メトトレキセートを惹起0日の惹起前から投与したメトトレキセート前投与群では、左後肢で惹起14日までは陰性対照群と同様の推移を示し、惹起14日では有意な増加抑制効果がみとめられたが、その後、惹起17および21日では足容積ならびに各スコアが急に増加した。本モデルやコラーゲン関節炎モデルで、通常確認されるメトトレキセートが完全に炎症を抑えられないという結果を良く再現した結果となった。惹起10日から投与を開始したメトトレキセートの治療的投与群では、後肢容積は惹起17日以降に増加に転じ、惹起21日では関節炎対照群のそれと同等となった。スコアにおいても、今回使用した被験物質の中で一番高く、ほぼ関節炎対照群の値に近いことから、メトトレキセートの治療的投与は無効とのデータを再現できたと考えられた。レフルミド群では惹起10日に対する左右後肢の足容積増加率には大きな変化は認められなかったが、惹起21日では惹起10日に対してともに僅かに負の値となるという増加抑制を示すのみで、強い足浮腫量減少作用は確認出来ず、また、スコアにおいても有意となったのは右後肢においては惹起17日の合計スコアのみであった。しかし、惹起21日の時点で悪化したとの評価は右後肢の発赤スコアのみで、それも惹起10日の投与前に認められた右後肢でのスコア1.2が1.4と上昇した程度であり、その他は全て減少傾向を示していることから、本実験での浮腫抑制効果は弱いが薬効は充分発現されているものと考えられた。被験物質VII-2の10mg/kg群、及び、被験物質VII-2の100mg/kgでは、両後肢で惹起14日から顕著かつ有意な足容積増加抑制を示し、その効果は同様かつ同程度の抗炎症作用であったことから、10mg/kgの投与でも十分な抗炎症作用を有するものと考えられた。特に右後肢の足容積増加抑制の傾向から、アジュバントや薬剤の投与足に代表される急性炎症と免疫性炎症の複合例にも抗炎症作用を有することが考えられた。関節破壊の指標としての指関節の腫脹では被験物質VII-2の10mg/kgおよび100mg/kgの抑制効果は強力で、惹起14日目以降はメトトレキセート前投与群、メトトレキセート投与群およびレフルミド投与群の抑制効果と同等かそれを上回る効果が得られた。甲の腫脹に代表される浮腫の軽減効果でも被験物質VII-2の効果は強く、惹起14日目以降はメトトレキセート前投与群、メトトレキセート投与群およびレフルミド投与群の抑制効果と同等かそれを上回る効果が得られた。陰性対照群を除く、各社を惹起21日でのIL-1β濃度の低いものから並べると、被験物質VII-2の10mg/kg群、レフルミド群、被験物質VII-2の100mg/kg群、関節炎対照群、メトトレキセート前投与群およびメトトレキセート群となり、これは今回の試験において惹起21日での抗炎症効果の発現状況をそのまま反映するものであった。一方、惹起21日での血漿中TNF-α濃度は全群で検出限界8pg/mL以下であった。これらの結果を総合すると、被験物質VII-2は、10mg/kgの投与で、100mg/kgと同様の強い抗炎症作用を示すことがわかった。この結果は被験物質VII-2の水溶性の高さが寄与している可能性がある。そして被験物質VII-2は、惹起14日以降はメトレキセート前投与群と同等またはそれ以上の関節炎抑制効果を示すことがわかった。また、被験物質VII-2は、抗リウマチ薬であるレフルミドよりも強力な関節炎抑制効果を示すことも確認された。これらの試験結果より、被験物質VII-2は、メトトレキセートやレフルミドと同等あるいはそれらを上回る強い関節炎抑制効果を有し、特にリウマチなどの免疫性の炎症に対して有効であると結論づけられた。なお、メトトレキセートは微量の使用であっても重大な副作用をもたらすことが知られている。一方で、本発明のペプチドは天然由来のものであり、上記試験においても副作用は一切認められなかった。従って、本発明のペプチドは、安全面からも従来用いられている医薬品と比べて有利であるといえる。また、被験物質VII-2は、10mg/kgの投与量でも100mg/kgの投与量と遜色ない関節炎抑制効果を有していた。これらの結果は、被験物質VII-2自体が高い有効性有するだけでなく、その水溶性が高いことによるものと考えられた。本発明のペプチドの免疫複合体病抑制作用の検証III型アレルギーアルサス反応誘発ラットモデルにおける本発明のペプチドの免疫複合体病抑制作用1.材料および方法1-1動物および実験操作7週齢のSlc:Wistar系ラットの雄42匹を用いて、被験物質VII-2について、腹腔内投与と尾静脈内投与の各々にて試験を行った。馴化は、固形通常飼料CRF-1を与えて6日以上行った。投与前日に動物の背部を剪毛し、投与当日、卵白OvalbuminMPBiomedicals製以下、OVAエバンスブルー色素混合溶液を尾静脈内投与した。腹腔内投与する際はOVAエバンスブルー色素混合溶液の投与30分後に、尾静脈内投与する際は50分後に、被験物質溶液をそれぞれ投与した。抗OVANordicimmunologicalLaboratories製溶液の皮内投与については、被験物質を腹腔内投与する場合は被験物質投与30分後に、被験物質を静脈内投与する場合は10分後に、動物の背部に0.1ml/部位の用量で皮内投与し、局所的にアルサス反応を惹起させた。惹起4時間後、動物を安楽死させ十分に脱血した後に、背部皮膚を剥離した。剥離した皮膚のアルサス反応部位を打ち抜き、その皮膚よりエバンスブルー色素を一晩かけて抽出した。漏出色素量は、分光光度計でエバンスブルー色素に関する吸光度を測定し、検量線を用いて定量化した。1-2対象物質および被験物質陰性対照物質は生理食塩水、陽性対照物質はヒドロコルチゾン溶液とした。ヒドロコルチゾン溶液は、所定量秤量したヒドロコルチゾンを乳鉢に入れて乳棒で破砕した後、最終濃度が10mg/mLとなるように生理食塩液を加えることにより調製し、これを陽性対照物質投与液とした。被験物質溶液は以下のようにして調製した。所定量秤量した被験物質VII-2を生理食塩液に溶解し、20mg/mL溶液とし、これを100mg/kg腹腔内投与群の投与液とした。10mg/kg腹腔内投与群の投与液は、上記投与液を生理食塩液で10倍希釈することで2mg/mL溶液として調製した。100mg/kg尾静脈内投与群の投与液は、所定量秤量した被験物質VII-2を生理食塩液にて溶解し、50mg/mL溶液としたものを投与液とした。1-3アルサス反応OVAエバンスブルー色素混合溶液を2ml/kg尾静脈内投与した。腹腔内投与する場合はOVAエバンスブルー色素混合溶液の投与30分後に、尾静脈内投与する場合は50分後に、各ペプチド溶液をそれぞれ投与した。抗OVA溶液の皮内投与については、腹腔内投与の場合は被験物質投与30分後に、静脈内投与の場合は10分後に、動物の背部に0.1mL/部位の用量で被験物質溶液を皮内投与し、局所的にアルサス反応を惹起させた。皮内投与は動物1匹に対して、PBS2ヵ所PBS1、PBS2、抗OVA溶液2ヵ所抗OVA1、抗OVA2とした。惹起4時間後に、動物をエーテル麻酔下の断頭により安楽死させ、十分に脱血させた後に背部皮膚を剥離した。剥離した皮膚のアルサス反応部位をポンチで打ち抜き、色素抽出に使用した。1-4色素抽出および測定ポンチで打ち抜いた皮膚片短冊上に数ヶ所の切れ込みをいれ、2mlの色素抽出液中に浸漬して10分間振とう攪拌した。その後、室温で一晩静置した。一晩静置した後、再度10分間振とう攪拌し、遠心分離1500rpm,15分を行い、その上清を色素測定用試料とした。測定にはUV-1600株式会社島津製作所を使用し、OD620nmの波長で測定した。漏出色素量は、色素量標準曲線から算出した。1-5試験群試験群は以下のとおりであった。1-6データの処理および統計処理体重測定値および漏出色素量について、群平均値mean±標準偏差SDを算出した。漏出色素量については、抗OVA溶液投与2ヵ所の平均値からPBS投与2ヵ所の平均値を差し引いたものを各動物の値とした。漏出色素量について以下の統計解析を行った。被験物質の腹腔内投与試験では、各群間でBartlettの等分散検定を行った結果、分散に違いがなかったため、Dunnettの多重比較検定で、陰性対照群とその他の各群の間の平均値の差を検定した。陰性対照群と陽性対照群の間ではF検定を行った結果、分散に違いがあったため、AspinWelchのt検定で2群間の平均値の差を検定した。被験物質の尾静脈内投与試験では、陰性対照群と被験物質投与群の間でF検定を行い、分散に違いがなかったためStudentのt検定で、2群間の平均値の差を検定した。有意水準はBartlettの等分散検定では5、その他の検定では両側5とした。2.結果2-1動物の体重変化および一般的状態試験期間中すべての群の動物において順調な体重増加が見られた。群間での体重変化に有意差は認められなかった。また、試験期間中すべての動物について一般状態に異常は認められず、副作用と思われる症状も見られなかった。2-2漏出色素量測定結果および統計処理結果動物の各アルサス反応惹起部皮内投与部位における漏出色素濃度μg/mLを算出した。算出した各部位の漏出色素濃度を以下の計算式に代入し、動物1匹あたりの漏出色素量μg/動物を算出した。計算式:抗OVA2PBS2×22-2-1腹腔内投与試験結果図16a参照各群における漏出色素量平均値mean±標準偏差SDは、陰性対照物質投与群:11.099±3.071μg/動物、被験物質VII-210mg/kg投与群:8.705±1.116μg/動物、被験物質VII-2100mg/kg投与群:6.991±0.918μg/動物、陽性対照物質50mg/kg投与群:5.665±0.674μg/動物であった。陰性対照物質投与群と陽性対照物質投与群の間に有意差が認められたP=0.0157。また陰性対照物質投与群と被験物質VII-2100mg/kg投与群との間に有意差が認められたP=0.0094。2-2-2尾静脈内投与試験結果図16b参照各群における漏出色素量平均値mean±標準偏差SDは、陰性対照物質投与群:10.816±2.093μg/動物、被験物質VII-2100mg/kg投与群:8.308±2.050μg/動物であった。統計処理の結果、陰性対照物質投与群と被験物質VII-2100mg/kg投与群の間に有意差は認められなかったが、平均値について若干の低値が認められた。3.考察腹腔内投与試験では、陽性対照物質Hydrocortisone50mg/kg投与群と陰性対照物質投与群の間に有意な抑制効果が認められたP=0.0157ことから、動物モデルを用いた本試験の妥当性に問題はないと考えられた。被験物質VII-210mg/kg投与群ではアルサス反応に対する抑制効果に有意差は認められなかったがP=0.1765、平均値に差異が見られた。被験物質VII-2100mg/kg投与群では有意な抑制効果が認められたP=0.0094。尾静脈内投与試験では、被験物質VII-2100mg/kg投与群ではアルサス反応に対する抑制効果に統計学的な有意差は認められなかったがP=0.0920、漏出色素量は対照群と比較してその平均値よりも低値を示し、アルサス反応に対する抑制傾向が認められた。以上より、被験物質VII-2は、III型アレルギーアルサス反応に対して抑制効果を示すことが明らかとなった。従って、本発明のペプチドは、明確かつ十分な免疫複合体病抑制作用を有しており、SLE、糸球体腎炎、関節炎、血管炎などの免疫複合体病の処置および予防に有用であることが明らかになった。また、この試験において、本発明のペプチドを投与したことによる異常や副作用は、すべての試験動物において見られなかった。関節リウマチ患者の滑膜細胞を用いたB細胞との共培養によるIgG産生に対する本発明のペプチドの抑制効果の検証リウマチ関節において、滑膜細胞とB細胞が共存して刺激し合って炎症性物質であるIgGが産生されることが知られている。そこで、モデル系を用いて本発明のペプチドのIgG産生抑制効果について調べた。1.実験方法関節リウマチ患者の滑膜細胞Passage3-7を24ウェルプレートに撒き3x104個/ウェル、一晩培養した。被験物質VII-2を10μg/mlとなるよう添加し、30分間前処理を行った。次に、B細胞を添加して1x106個ウェル、滑膜細胞との共培養を行った。5日間培養し、上清を回収し、ELISAにてIgG量を測定したHumanIgGEIAKitを使用。被験物質VII-2を添加せずに同様の操作を行った系をコントロール系として用いた。2.結果結果を図17に示す。被験物質VII-2は10μg/mlという低濃度でもIgGの産生をコントロールの約4分の3にまで抑制することがわかった。なおかつ、本発明のペプチドが滑膜細胞だけではなく、B細胞系の活性化抑制にも効果を示すことがわかった。この結果は、被験物質VII-2が実際の関節リウマチにおいても炎症を抑制しうることを示すものであり、上記の実施例の結果とも矛盾しない。"