"ヒト抗体が中和抗体である、ヒトIL-12に結合する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。ヒトIL-12に結合するように、好ましい選択的変異位置、接触位置、または過剰変異位置において活性を向上させるアミノ酸残基により選択的に変異させた、ヒト抗体またはその抗体結合部分を含む、選択的変異ヒトIL-12抗体。ヒトIL-12に結合するように、好ましい選択的変異位置において活性を向上させるアミノ酸残基により選択的に変異させたヒト抗体またはその抗体結合部分を含む、選択的変異ヒトIL-12抗体。前記ヒト抗体またはその抗原結合部分が、1つを超える好ましい選択的変異位置、接触位置、または過剰変異位置で活性を向上させるアミノ酸残基により選択的に変異された、請求項2に記載の選択的変異ヒトIL-12抗体。前記ヒト抗体またはその抗原結合部分が、3箇所以下の好ましい選択的変異位置、接触位置、または過剰変異位置において選択的に変異された、請求項4に記載の選択的変異ヒトIL-12抗体。前記ヒト抗体またはその抗原結合部分が、2箇所以下の好ましい選択的変異位置、接触位置、または過剰変異位置で選択的に変異された、請求項4に記載の選択的変異ヒトIL-12抗体。前記ヒト抗体またはその抗原結合部分が、ファージディスプレイ技術を用いて同一の抗原に対して抗体を選択した場合に達成可能なレベルを超えるように目標特異性親和性レベルを達成するように選択的に変異される、請求項2に記載の選択的変異ヒトIL-12抗体。前記選択的変異ヒト抗体が、少なくとも1つの所望の特性または特徴をさらに保持する、請求項7に記載の選択的変異ヒトIL-12抗体。ヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。表面プラスモン共鳴で測定すると1×10-2s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-7M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、請求項9に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。表面プラスモン共鳴で測定すると1×10-3s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-8M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、請求項9に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。表面プラスモン共鳴で測定すると1×10-4s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、請求項9に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。表面プラスモン共鳴で測定すると1×10-5s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-10M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、請求項9に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。表面プラスモン共鳴で測定すると1×10-5s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-11M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、請求項9に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。以下の特徴:ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2をさらに有する、請求項15に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1をさらに有する、請求項15に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号7のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。以下の特徴:ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2をさらに有する、請求項19に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1をさらに有する、請求項19に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号15のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する、請求項19に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2をさらに有する、請求項23に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1をさらに有する、請求項23に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号23のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号24のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、およびIgE定常部からなる群から選択される重鎖定常部を含む、請求項26に記載の単離ヒト抗体。前記抗体重鎖定常部がIgG1である、請求項27に記載の単離ヒト抗体。Fabフラグメントである、請求項26に記載の単離ヒト抗体。Fab’2フラグメントである、請求項26に記載の単離ヒト抗体。短鎖Fvフラグメントである、請求項26に記載の単離ヒト抗体。ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害するか、b配列番号404~配列番号469からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有するか、c配列番号534~配列番号579からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号335~配列番号403からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2または配列番号506~配列番号533からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2をさらに有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号288~配列番号334からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1または配列番号470~配列番号505からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1をさらに有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号23のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号24のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、およびIgE定常部からなる群から選択される重鎖定常部を含む、請求項35に記載の単離ヒト抗体。前記抗体重鎖定常部がIgG1である、請求項36に記載の単離ヒト抗体。Fabフラグメントである、請求項35に記載の単離ヒト抗体。Fab’2フラグメントである、請求項35に記載の単離ヒト抗体。短鎖Fvフラグメントである、請求項35に記載の単離ヒト抗体。ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2をさらに有する、請求項41に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1をさらに有する、請求項41記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号32のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、およびIgE定常部からなる群から選択される重鎖定常部を含む、請求項44に記載の単離ヒト抗体。前記抗体重鎖定常部がIgG1である、請求項45に記載の単離ヒト抗体。Fabフラグメントである、請求項44に記載の単離ヒト抗体。Fab’2フラグメントである、請求項44に記載の単離ヒト抗体。短鎖Fvフラグメントである、請求項44に記載の単離ヒト抗体。ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置に1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR4、配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR4、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3をコードする単離核酸。抗体重鎖可変部をコードする、請求項53に記載の単離核酸。前記抗体重鎖可変部のCDR2が配列番号19のアミノ酸配列を含む、請求項54に記載の単離核酸。前記抗体重鎖可変部のCDR1が配列番号21のアミノ酸配列を含む、請求項54に記載の単離核酸。配列番号23のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部をコードする、請求項56に記載の単離核酸。配列番号18のアミノ酸を含む軽鎖CDR3をコードする単離核酸。抗体軽鎖可変部をコードする、請求項58に記載の単離核酸。前記抗体軽鎖可変部のCDR2が配列番号20のアミノ酸配列を含む、請求項59に記載の単離核酸。前記抗体軽鎖可変部のCDR1が配列番号22のアミノ酸配列を含む、請求項59に記載の単離核酸。配列番号24のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部をコードする、請求項61に記載の単離核酸。ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3をコードする単離核酸。抗体重鎖可変部をコードする、請求項64に記載の単離核酸。前記抗体重鎖可変部のCDR2が配列番号27のアミノ酸配列を含む、請求項65に記載の単離核酸。前記抗体重鎖可変部のCDR1が配列番号29のアミノ酸配列を含む、請求項65に記載の単離核酸。配列番号31のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部をコードする、請求項67に記載の単離核酸。配列番号26のアミノ酸を含む軽鎖CDR3をコードする単離核酸。抗体軽鎖可変部をコードする、請求項69に記載の単離核酸。前記抗体軽鎖可変部のCDR2が配列番号28のアミノ酸配列を含む、請求項70に記載の単離核酸。前記抗体軽鎖可変部のCDR1が配列番号30のアミノ酸配列を含む、請求項70に記載の単離核酸。配列番号32のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部をコードする、請求項72に記載の単離核酸。以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bVH3生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有し、cVλ1生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号595~667からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は接触または過剰変異位置における活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有し、c配列番号669~675からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bCOS-3生殖系列アミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有し、cDPL8生殖系列アミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bVH3生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は他のVH3生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR2に構造的に類似したCDR2および他のVH3生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR1に構造的に類似したCDR1を含み、前記重鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有し、cVλ1生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は他のVλ1生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR2に構造的に類似したCDR2および他のVλ1生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR1に構造的に類似したCDR1を含み、前記軽鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。前記変異が前記重鎖CDR3中に存在する、請求項74、請求項75、請求項76、または請求項77に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。前記変異が前記軽鎖CDR3中に存在する、請求項74、請求項75、請求項76、または請求項77に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。前記変異が前記重鎖CDR2中に存在する、請求項74、請求項75、請求項76、または請求項77に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。前記変異が前記軽鎖CDR2中に存在する、請求項74、請求項75、請求項76、または請求項77に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。前記変異が前記重鎖CDR1中に存在する、請求項74、請求項75、請求項76、または請求項77に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。前記変異が前記軽鎖CDR1中に存在する、請求項74、請求項75、請求項76、または請求項77に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。a配列番号31のアミノ酸配列を含む可変部を有する抗体重鎖およびb配列番号32のアミノ酸配列を含む可変部を有する抗体軽鎖を含む、組換え発現ベクター。請求項84に記載の組換え発現ベクターが移入されている、宿主細胞。ヒトIL-12に結合するヒト抗体が細胞によって合成されるまで、培養培地中で請求項85に記載の宿主細胞を培養する工程を包含する、ヒトIL-12に結合するヒト抗体の合成法。ヒトIL-12ならびにヒヒIL-12、マーモセットIL-12、チンパンジーIL-12、カニクイザルIL-12、およびアカゲザルIL-12からなる群から選択される少なくとも1つのさらなる霊長類IL-12の活性を中和するがマウスIL-12の活性を中和しない、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。請求項1~52、請求項74~83、および請求項87のいずれか1項に記載の抗体またはその抗原結合部分および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。請求項1~52、請求項74~83、および請求項87のいずれか1項に記載の抗体またはその抗原結合部分およびさらなる薬剤を含む組成物。前記さらなる薬剤が治療薬である、請求項89に記載の組成物。前記治療薬が、ブデノシド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファラジン、アミノサリチレート、6-メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼインヒビター、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化薬、トロンボキサンインヒビター、IL-1レセプタアンタゴニスト、抗IL-1βモノクローナル抗体、抗IL-6モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼインヒビター、ピリジニル-イミダゾール化合物、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF,およびPDGFの抗体またはアゴニスト、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90の抗体またはそのリガンド、メトトレキセート、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノマイド、NSAID、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、捕体インヒビター、アドレナリン作用薬、IRAK、NIK、IKK,p38、MAPキナーゼインヒビター、IL-1β変換酵素インヒビター、TNFα変換酵素インヒビター、T細胞シグナル伝達インヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカインレセプタ、可溶性p55TNFレセプタ、可溶性p75TNFレセプタ、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、抗炎症性サイトカイン、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13、およびTGFβからなる群から選択される、請求項90に記載の組成物。前記治療薬が、抗TNF抗体およびその抗体フラグメント、TNFR-Ig構築物、TACEインヒビター、PDE4インヒビター、コルチコステロイド、ブデノシド、デキサメタゾン、スルファサラジン、5-アミノサリチル酸、オルサラジン、IL-1β変換酵素インヒビター、IL-1ra、チロシンキナーゼインヒビター、6-メルカプトプリン、ならびにIL-11からなる群から選択される、請求項90に記載の治療組成物。前記治療薬が、コルチコステロイド、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキセート、4-アミノピリジン、チザニジン、インターフェロンβ1a、インターフェロンβ1b、コポリマー1、高圧酸素、静脈内免疫グロブリン、クラブリビンclabribine、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF、およびPDGFの抗体またはアゴニスト、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45,CD69、CD80、CD86、CD90の抗体またはそのリガンド、メトトレキセート、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノマイド、NSAID、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、捕体インヒビター、アドレナリン作用薬、IRAK、NIK、IKK、p38またはMAPキナーゼインヒビター、IL-1β変換酵素インヒビター、TACEインヒビター、T細胞シグナル伝達インヒビター、キナーゼインヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカインレセプタ、可溶性p55TNFレセプタ、可溶性p75TNFレセプタ、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、sIL-13R、抗P7、p-セレクチン糖タンパク質リガンドPSGL、抗炎症性サイトカイン、IL-4、IL-10、IL-13、およびTGFβからなる群から選択される、請求項90に記載の治療組成物。ヒトIL-12活性を阻害するようにヒトIL-12と請求項44に記載の抗体とを接触させる工程を包含する、ヒトIL-12活性の阻害法。ヒト対象におけるヒトIL-12活性が阻害されるようにヒト対象に請求項44に記載の抗体を投与する工程を包含する、IL-12活性が有害な障害を有するヒト被験体におけるヒトIL-12活性の阻害法。前記障害が、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、若年型慢性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、強直性脊椎炎、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、甲状腺炎、移植片対宿主疾患、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性もしくは慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、結節性多発性動脈炎、ヴェグナー肉芽腫症、ヘーノホ-シェーンライン紫斑病、腎臓の微視的脈管炎、慢性滑動性肝炎、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、敗血症、敗血症性ショック、敗血症症候群、成人呼吸窮迫症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、重症筋無力症、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、線維性肺疾患、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、および心筋梗塞からなる群から選択される、請求項95に記載の方法。前記障害がクローン病である、請求項95に記載の方法。前記障害が多発性硬化症である、請求項95に記載の方法。前記障害が慢性関節リウマチである、請求項95に記載の方法。a親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、bH30、H31、H31B、H32、H33、H53、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、およびL94からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置を選択する工程と、c前記選択された好ましい選択的変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異することによって変異抗体またはその抗原結合物の第1のパネルを作製する工程と、d1つの選択的変異位置の変異により予め同定した目標活性または部分的目標活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるかどうかを決定するために、前記変異抗体またはその抗原結合部分の第1のパネルの活性を評価する工程と、e前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す各変異を段階的に組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、f前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分が予め同定した目標活性または部分的目標活性を有するかどうかを決定するために、前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程と、g工程dまたは工程fで予め同定した目標活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られないか部分的活性のみを有する抗体が得られる場合、前記方法はH35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A、およびL96からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にさらに変異して、変異抗体またはその抗原結合部分の第2のパネルを作製する工程をさらに包含し、hH35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A、およびL96からなる群から選択される1つのアミノ酸残基の変異により予め同定した目標活性またはその部分的活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるかどうかを決定するために、前記変異抗体またはその抗原結合部分の第2のパネルの活性を評価する工程と、i前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す工程gの各変異を段階的に組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、j前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分が予め同定した目標活性または部分的標的活性を有するかどうかを決定するために、前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程と、k工程hまたは工程jで予め同定した目標活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られないか部分的活性のみを有する抗体が得られる場合、前記方法はH33B、H52B、およびL31Aからなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にさらに変異することによって変異抗体またはその抗原結合部分の第3のパネルを作製する工程をさらに包含し、lH33B、H52B、およびL31Aからなる群から選択される1つのアミノ酸残基の変異により予め同定した目標活性またはその部分的活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるかどうかを決定するために、前記変異抗体またはその抗原結合部分の第3のパネルの活性を評価する工程と、m前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す工程kの各変異を段階的に組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、n前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分が予め同定した目標活性または部分的標的活性を有し、それによって予め同定した目標活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるのかどうかを決定するために、前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程と、を包含する、予め同定した目標活性を達成するための抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法。a親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、相補性決定領域CDR内で好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を選択することによって選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を同定する工程と、c前記好ましい選択的変異誘発位置または接触位置または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製する工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価する工程と、e前記所望の抗体活性が得られない場合、少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置について工程b~dを繰り返す工程と、f前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す各変異を段階的に組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程と、を包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法。前記接触位置が、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96からなる群から選択される、請求項101に記載の方法。前記過剰変異位置が、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53、およびL93からなる群から選択される本発明は、ヒトIL-12に結合するヒト抗体を提供する。本発明はまた、本発明のヒト抗IL-12抗体を用いた、その病理学がIL-12に関連する急性または慢性疾患の治療または予防に関する。1つの態様では、本発明は、ヒトIL-12に結合する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。1つの実施形態では、本発明は、ヒトIL-12に結合するように、好ましい選択的変異位置、接触位置、または過剰変異位置において活性を向上させるアミノ酸残基により選択的に変異させたヒト抗体またはその抗体結合部分を含む、選択的変異ヒトIL-12抗体を提供する。好ましい実施形態では、本発明は、ヒトIL-12に結合するように、好ましい選択的変異位置において活性を向上させるアミノ酸残基により選択的に変異させたヒト抗体またはその抗体結合部分を含む、選択的変異ヒトIL-12抗体を提供する。別の好ましい実施形態では、選択的変異ヒト抗体またはその抗原結合部分は、1つを超える好ましい選択的変異位置、接触位置、または過剰変異位置においてで活性を向上させるアミノ酸残基により選択的に変異されている。別の好ましい実施形態では、選択的変異ヒト抗体またはその抗原結合部分は、3箇所以下の好ましい選択的変異位置、接触位置、または過剰変異位置において選択的に変異されている。別の好ましい実施形態では、選択的変異ヒト抗体またはその抗原結合部分は2箇所以下の好ましい選択的変異、接触位置、または過剰変異位置で選択的に変異されている。さらに別の好ましい実施形態では、選択的変異ヒト抗体またはその抗原結合部分は、ファージディスプレイ技術を用いて同一の抗原に対して抗体を選択した場合に、達成可能なレベルを超えるような、目標特異性親和性レベルを達成するように選択的に変異され、別の好ましい実施形態では、選択的変異ヒト抗体は、少なくとも1つの所望の特性または特徴例えば、他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の保存、エピトープ認識、生殖系列免疫グロブリン配列に隣接する抗体の産生をさらに保持している。他の実施形態では、本発明は、ヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイphytohemaggltininblastproliferationassayPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。より好ましくは、1×10-2s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-7M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。より好ましくは、1×10-3s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-8M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単フィトヘムアグルチニン離ヒト抗体またはその抗原結合部分。より好ましくは、1×10-4s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。より好ましくは、1×10-5s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-10M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。さらにより好ましくは、1×10-5s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-11M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。別の実施形態では、本発明は以下の特徴:ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号7のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する。別の実施形態では、本発明は、以下の特徴:ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号15のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する。別の実施形態では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号23のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号24のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、Kabatetal.Kabat,E.A.etal.、1991、免疫学上目的のタンパク質配列、第5版、米国保健福祉省、NIH発行番号91-3242本明細書中で参考として援用されるで考察されているように、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、およびIgE定常部またはその任意の対立遺伝子変異体からなる群から選択される重鎖定常部を含む。より好ましい実施形態では、抗体重鎖定常部はIgG1である。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体はFabフラグメント、Fab’2フラグメント、または短鎖Fvフラグメントである。別の実施形態では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号404~配列番号469からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号534~配列番号579からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号335~配列番号403からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号506~配列番号533からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号288~配列番号334からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号470~配列番号505からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号23のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号24のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、上記のように重鎖定常部、Fabフラグメント、Fab’2フラグメント、または短鎖Fvフラグメントを含む。別の実施形態では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号32のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、上記のように重鎖定常部、Fabフラグメント、Fab’2フラグメント、または短鎖Fvフラグメントを含む。別の実施形態では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置に1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR4、配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。別の実施形態では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。別の実施形態では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR4、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。本発明はまた、本発明の抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。好ましい単離核酸は、配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3をコードする。抗体重鎖可変部をコードする単離核酸。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号19のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部のCDR2をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号21のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部のCDR1をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号23のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号18のアミノ酸を含む軽鎖CDR3をコードする。抗体軽鎖可変部をコード単離核酸。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号20のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部のCDR2をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号22のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部のCDR1をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号24のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部をコードする。別の実施形態では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい単離核酸は、配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3をコードする。抗体重鎖可変部をコードする単離核酸。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号27のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部のCDR2をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号29のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部のCDR1をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号31のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変部をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号26のアミノ酸を含む軽鎖CDR3をコードする。抗体軽鎖可変部をコードする単離核酸。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号28のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部のCDR2をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号30のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部のCDR1をコードする。別の実施形態では、単離核酸は、配列番号32のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変部をコードする。別の態様では、本発明は、以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bVH3生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有し、cVλ1生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。別の実施形態では、本発明は、以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号595~667からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有し、c配列番号669~675からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。別の実施形態では、本発明は、以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bCOS-3生殖系列アミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有し、cDPL8生殖系列アミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。別の実施形態では、本発明は、以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定すると0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bVH3生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は他のVH3生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR2に構造的に類似したCDR2および他のVH3生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR1に構造的に類似したCDR1を含み、前記重鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有し、cVλ1生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は他のVλ1生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR2に構造的に類似したCDR2および他のVλ1生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR1に構造的に類似したCDR1を含み、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基による変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、重鎖CDR3中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖CDR3中に変異を有する。別の実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、重鎖CDR2中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖CDR2中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、重鎖CDR1中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖CDR1中に変異を有する。別の態様では、本発明は、本発明の抗体コード核酸を保有する組換え発現ベクターを提供し、本発明の宿主細胞の培養による本発明の抗体の作製法と同様に、このようなベクターが移入された宿主細胞もまた本発明の範囲内である。別の態様では、本発明は、ヒトIL-12ならびにヒヒIL-12、マーモセットIL-12、チンパンジーIL-12、カニクイザルIL-12、およびアカゲザルIL-12からなる群から選択される少なくとも1つのさらなる霊長類IL-12の活性を中和するがマウスIL-12の活性を中和しない、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。別の態様では、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合部分および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を提供する。別の態様では、本発明は、抗体またはその抗原結合部分およびさらなる薬剤例えば、治療薬を含む組成物を提供する。別の態様では、本発明は、ヒトIL-12活性を阻害するようにヒトIL-12と本発明の抗体例えば、J695とを接触させる工程を包含する、ヒトIL-12活性の阻害法を提供する。別の態様では、本発明は、ヒト対象におけるヒトIL-12活性が阻害されるようにヒト被験体に本発明の抗体例えば、J695を投与する工程を包含する、IL-12活性が有害な障害を有するヒト対象におけるヒトIL-12活性の阻害法を提供する。障害は、例えば、クローン病、多発性硬化症、または慢性関節リウマチであり得る。別の態様では、本発明は、a親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、bH30、H31、H31B、H32、H33、H53、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、およびL94からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置を選択する工程と、c前記選択された好ましい選択的変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異することによって変異抗体またはその抗原結合物の第1のパネルを作製する工程と、d1つの選択的変異位置の変異により予め同定した目標活性または部分的標的活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるかどうかを決定するために、前記変異抗体またはその抗原結合部分の第1のパネルの活性を評価する工程と、e前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す各変異を段階的に組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、f前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分が予め同定した目標活性または部分的標的活性を有するかどうかを決定するために、前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程と、g工程dまたは工程fで予め同定した目標活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られないか部分的活性のみを有する抗体が得られる場合、H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A、およびL96からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にさらに変異して、変異抗体またはその抗原結合部分の第2のパネルを作製する工程をさらに包含し、hH35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30A、およびL96からなる群から選択される1つのアミノ酸残基の変異により予め同定した目標活性またはその部分的活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるかどうかを決定するために、前記変異抗体またはその抗原結合部分の第2のパネルの活性を評価する工程と、i前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す工程gの各変異を段階的に組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、j前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分が予め同定した目標活性または部分的標的活性を有するかどうかを決定するために、前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程と、k工程hまたは工程jで予め同定した目標活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られないか部分的活性のみを有する抗体が得られる場合、前記方法はH33B、H52B、およびL31Aからなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にさらに変異することによって変異抗体またはその抗原結合部分の第3のパネルを作製する工程をさらに包含し、lH33B、H52B、およびL31Aからなる群から選択される1つのアミノ酸残基の変異により予め同定した目標活性またはその部分的活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるかどうかを決定するために、前記変異抗体またはその抗原結合部分の第3のパネルの活性を評価する工程と、m前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す工程kの各変異を段階的に組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、n前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分が予め同定した目標活性または部分的標的活性を有することによって予め同定した目標活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるのかどうかを決定するために、前記組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程とを包含する、予め同定した目標活性を達成するための抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を特徴とする。別の態様では、本発明は、a親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、相補性決定領域CDR内で好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を選択することによって選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を同定する工程と、c前記好ましい選択的変異誘発位置または接触位置または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製する工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価する工程と、e少なくとも1つの接触位置または過剰変異位置について工程b~dを繰り返す工程と、f前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す各変異を組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。1つの実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない組換え親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、相補性決定領域CDR内で好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を選択することによって選択された接触位置または過剰変異位置を同定する工程と、c前記好ましい選択的変異誘発位置または接触位置または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、前記非ファージディスプレイ系におけるパネルを発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価する工程と、e少なくとも1つの他の接触位置または過剰変異位置について工程b~dを繰り返す工程と、f前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す各変異を組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましい実施形態では、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96からなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、過剰変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53、およびL93からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、選択的変異誘発位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、およびL94からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、a組換え親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、相補性決定領域CDR内で好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を選択することによって選択された接触位置または過剰変異位置を同定する工程と、c前記好ましい選択的変異誘発位置または接触位置または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、前記適切な発現系におけるパネルを発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分を評価する工程とを包含し、前記特性または特徴は抗体中での維持されなければならないものである、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましい実施形態では、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、過剰変異位置が、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53、およびL93からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、選択的変異誘発についての残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、相補性決定領域CDR内で好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を選択することによって選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を同定する工程と、c前記選択された好ましい変異誘発位置または接触位置または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、前記非ファージディスプレイ系におけるパネルを発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分を評価する工程であって、前記特性または特徴は維持されなければならないものである、f少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置について工程a~eを繰り返す工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有することを示す少なくとも2つの各活性を向上させるアミノ酸残基を組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、h前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましい実施形態では、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、過剰変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53、およびL93からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、選択的変異誘発の残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない組換え親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、相補性決定領域CDR内で接触または過剰変異位置を選択することによって選択した接触位置または過剰変異位置を同定する工程と、c前記接触または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、前記非ファージディスプレイ系におけるパネルを発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分を評価する工程とを包含し、前記特性または特徴は維持されなければならないものである、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましい実施形態では、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、過剰変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53、およびL93からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、選択的変異誘発の残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない組換え親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b相補性決定領域CDR内で好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を変異について選択することによって選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置を同定する工程と、c前記選択された好ましい変異誘発位置または接触位置または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、前記非ファージディスプレイ系におけるパネルを発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分を評価する工程であって、前記特性または特徴は維持されなければならないものである、f少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置について工程a~eを繰り返す工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有することを示す少なくとも2つの各活性を向上させるアミノ酸残基を組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、h前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましい実施形態では、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の好ましい実施形態では、過剰変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53、およびL93からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、選択的変異誘発の残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、a親親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製する工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴の変化について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましくは、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、a親親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製する工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e工程bで選択された位置でもH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96での位置でもないCDR内の少なくとも1つの他の位置について工程b~工程dを繰り返す工程と、f前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す少なくとも2つの各活性を向上させるアミノ酸残基を組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して、活性を向上させるアミノ酸残基を有する組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。別の実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない組換え抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、およびL94以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択した接触または過剰変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、前記非ファージディスプレイ系におけるパネルを発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴の変化について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましくは、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、非ファージディスプレイ系で発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e工程bで選択された位置でもH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、およびL94での位置でもないCDR内の少なくとも1つの他の位置について工程b~工程dを繰り返す工程と、f前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示す少なくとも2つの各活性を向上させるアミノ酸残基を組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記組換え抗体またはその抗原結合部分と比較して、2つの活性を向上させるアミノ酸残基を有する組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性および他の特性または特徴を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましくは、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、a親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を変異について選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製する工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e少なくとも1つの他の特性または特徴の変化について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分を評価する工程と、f工程bで選択された位置でもH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96での位置でもない少なくとも1つのCDR位置について工程b~工程eを繰り返す工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示すが少なくとも1つの特性または特徴に影響を与えない少なくとも2つの各活性を向上させるアミノ酸残基を組み合わせて、少なくとも1つの特性または特徴を保持した組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、h前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して、2つの活性を向上させるアミノ酸残基を有する組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性および少なくとも1つの特性または特徴を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。別の実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、非ファージディスプレイ系で発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴の変化について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを評価する工程とを包含する、他の特性に影響を与えない抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。別の実施形態では、本発明は、a親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製する工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e少なくとも1つの他の特性または特徴の変化について、前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを評価する工程と、f工程bで選択された位置でもH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96での位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置について工程b~工程dを繰り返す工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示すが少なくとも1つの他の特性または特徴に影響を与えない少なくとも2つの各活性を向上させるアミノ酸残基を組み合わせて、少なくとも1つの保持された特性または特徴を有する組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、h前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの他の保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記組換え抗体またはその抗原結合部分と比較して、活性を向上させる2つのアミノ酸残基を有する組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性および少なくとも1つの他の特性または特徴の保持を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましくは、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。別の実施形態では、本発明は、a親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製する工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、少なくとも1つの他の特性または特徴の変化について親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを評価する工程とを包含する、他の特徴に影響を与えない抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。別の実施形態では、本発明は、aファージディスプレイ系での選択によって得られたがその活性を前記ファージディスプレイ系における変異誘発によってさらに改良することができない親抗体またはその抗原結合部分を得る工程と、b変異のために、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94、およびL96以外の位置で相補性決定領域CDR内でアミノ酸残基を選択する工程と、c前記選択位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基にそれぞれ変異させることによって変異抗体またはその抗原結合部分のパネルを作製し、非ファージディスプレイ系で発現させる工程と、d前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して前記変異抗体またはその抗原結合部分のパネルの活性および少なくとも1つの他の特性または特徴の保持を評価することによって活性を向上させるアミノ酸残基を同定する工程と、e工程bで選択された位置でもH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、およびL94での位置でもない少なくとも1つの他のCDR位置について工程b~工程dを繰り返す工程と、f前記親抗体またはその抗原結合部分中に改良された活性を有することを示し、且つ少なくとも1つの他の特性または特徴に影響を与えない少なくとも2つの各活性を向上させるアミノ酸残基を組み合わせて、組み合わせ抗体またはその抗原結合部分を形成させる工程と、g前記親抗体またはその抗原結合部分と比較して改良された活性および少なくとも1つの他の保持された特性または特徴を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、前記組換え抗体またはその抗原結合部分と比較して、活性を向上させる2つのアミノ酸残基を有する組み合わせ抗体またはその抗原結合部分の活性および少なくとも1つの他の特性または特徴の保持を評価する工程とを包含する、抗体またはその抗原結合部分の活性の改良法を提供する。好ましくは、他の特性または特徴は、1他のタンパク質またはヒト組織との非相互反応性の保存、2エピトープ認識すなわち、好ましくは遊離の可溶性p40由来の結合干渉を防止するP70p40/p35ヘテロ二量体との関連におけるp40エピトープの認識の保存、および/または3生殖系列免疫グロブリン配列に密接な配列を有する抗体の産生からなる群から選択される。図1A~図1Bは生殖系列配列Cos-3/JH3およびDp118Lv1042と比較した、ヒトIL-12に結合する一連のヒト抗体の重鎖可変部アミノ酸アラインメントを示す図である。カバットナンバリングを使用して、アミノ酸位置を同定する。Joe9野生型については、全配列を示す。他の抗体については、Joe9野生型と異なるアミノ酸位置のみを示す。図1C~図1DはヒトIL-12に結合する一連のヒト抗体の軽鎖可変部アミノ酸アラインメントを示す図である。カバットナンバリングを使用して、アミノ酸位置を同定する。Joe9野生型については、全配列を示す。他の抗体については、Joe9野生型と異なるアミノ酸位置のみを示す。図2A~図2Eは部位特異的変異誘発および各位置での各アミノ酸置換によって変異されたY61抗体の重鎖におけるCDR位置を示す図である。図の右側のグラフは、変異Y61白抜きのバーと比較した置換抗体黒塗りのバーについてのoff-速度を示す。図2F~図2Hは部位特異的変異誘発および各位置での各アミノ酸置換によって変異されたY61抗体の軽鎖におけるCDR位置を示す図である。図の右側のグラフは、変異Y61白抜きのバーと比較した置換抗体黒塗りのバーについてのoff-速度を示す。図3はカニクイザルにおける血漿ネオプテリンに対するヒト抗IL-12抗体J695のinvivoでの効果を示す図である。図4はコラーゲンでのマウスの免疫化後に対する平均関節炎スコアのグラフを示す図であり、これは、C17.15での治療によりラットIgGでの治療と比較して関節炎関連症状が有意に減少することを示す。発明の詳細な説明本発明をより容易に理解するために、最初に一定の用語を定義する。用語活性を向上させるアミノ酸残基には、抗体の活性を改良するアミノ酸残基が含まれる。活性を向上させるアミノ酸残基は、接触位置、過剰変異位置、または好ましい選択的変異誘発位置においてアミノ酸残基と置換することができ、さらに、1つまたは複数のCDR内に1つを超える活性を向上させるアミノ酸残基が存在することができることを理解すべきである。活性を向上させるアミノ酸残基には、抗体例えば、ヒトIL-12に結合する抗ヒトIL-12抗体の結合特異性/親和性を改良するアミノ酸残基が含まれる。活性を向上させるアミノ酸残基は、抗体例えば、ヒトIL-12を阻害するヒトIL-12抗体の中和能力を改良するアミノ酸残基が含まれることも意図される。用語抗体には、ジスルフィド結合によって相互連結された4つのポリペプチド鎖、2つの重H鎖、および2つの軽L鎖から構成される免疫グロブリン分子が含まれる。各重鎖は、重鎖可変部本明細書中ではHCVRまたはVHと略すおよび重鎖定常部から構成される。重鎖定常部は、3つのドメインCH1、CH2、およびCH3から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変部本明細書中ではLCVRまたはVLと略すおよび重鎖定常部からなる。軽鎖定常部は1つのドメインCLからなる。VHおよびVL領域は、さらに、より保存された領域フレームワーク領域FRというに点在する超可変部相補性決定領域CDRというに分けることができる。各VHおよびLHは、3つのCDRおよび4つのFRから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端まで、以下の順番:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で配置している。用語、抗体の抗原結合部分または抗体部分には、抗原例えば、hIL-12に特異的に結合する能力を保持している抗体のフラグメントが含まれる。抗体の抗原結合を、全長抗体のフラグメントによって機能させることができることが示されている。用語、抗体の抗原結合部分に含まれる結合フラグメントの例には、iFabVL、VH、CL、およびCH1ドメインからなる1価のフラグメント、iiFab2フラグメントヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結した2つのFab領域を含む2価のフラグメント、iiiVHおよびCH1ドメインからなるFdフラグメント、iv抗体の1つのアームからなるVLおよびVHドメインからなるFvフラグメント、vVHドメインからなるdAbフラグメントWardetal.、1989、Nature、341、544~546、およびvi単離した相補性決定領域CDRが含まれる。さらに、Fvフラグメントの2つのドメインVLおよびVHは、別の遺伝子これらは、組換え法を用いて、1価の分子単鎖FvscFvとして公知を形成するためにVLとVH領域が対になって1つのタンパク質鎖として作製することができる合成リンカーによって連結することができるにコードされる例えば、Birdetal.、1988、Science、242、423~426;およびHustonetal.、1988、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、85、5879~5883を参照のこと。このような単鎖抗体はまた、用語抗体の抗原結合部分の範囲内であることが意図される。単鎖抗体の他の形態ジアボディなどもまた範囲内である。ジアボディは、短すぎて同一の鎖上の2つのドメイン間で対を形成することができないリンカーを使用しないでVHおよびVLドメインが1つのポリペプチド鎖上で発現されることにより、ドメインを別の鎖の相補ドメインと対合させて2つの抗原結合部位を作製する2価で二重特異性の抗体である例えば、Holliger,P.etal.、1993、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、90、6444~6448;Poljak,R.J.,etal.、1994、Structure、2、1121~1123を参照のこと。さらに、抗体またはその抗原結合部分は、抗体または抗体の一部と1つまたは複数の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合によって形成されたより大きな免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例には、四量体scFv分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用Kipriyanov,S.M.,etal.、1995、HumanAntibodiesandHygridomas、6、93~101および2価のビオチン化scFv分子を作製するためのシステイン残基、マーカーペプチド、およびC末端ポリヒスチジンタグの使用Kipriyanov,S.M.,etal.、1994、Mol.Immunol.、31、1047~1058が含まれる。FabおよびFab’2フラグメントなどの抗体の一部を、全抗体のそれぞれパパインまたはペプシン消化などの従来技術を用いて完全な抗体から調製することができる。さらに、抗体、抗体の一部、および免疫接着分子を、本明細書中に記載の標準的な組換えDNA技術を用いて得ることができる。好ましい抗原結合部分は、完全なドメインまたは完全なドメインの対である。用語復帰突然変異は、ヒト抗体のいくつかまたは全ての体細胞変異アミノ酸が相同な生殖系列抗体配列由来の対応する生殖系列残基に置換されるプロセスをいう。本発明のヒト抗体の重鎖および軽鎖配列を、VBASEデータベース中の生殖系列配列と個別に整列させて、相同性の高い配列を同定する。本発明のヒト抗体における相違は、このような異なるアミノ酸をコードする定義されたヌクレオチド位置の変異によって生殖系列配列に戻る。復帰突然変異の候補としてこのように同定された各アミノ酸の役割は抗原結合における直接的または間接的役割について調査すべきであり、ヒト抗体のいずれかの所望の特徴に影響を与えるための変異後に認められるいずれのアミノ酸も最終的な抗体に含まれるべきではない例として、選択的変異誘発アプローチによって同定された活性を向上させるアミノ酸を復帰突然変異に供さない。第2の生殖系列配列が本発明のヒト抗体配列の少なくとも10個、好ましくは12個のアミノ酸と問題の両アミノ酸部位で同一であり、かつ共直線性である場合、復帰突然変異に供されるアミノ酸数を最小化するために、最も密接な生殖系列配列と異なるが第2の生殖系列配列中の対応するアミノ酸に同一であると認められたこれらのアミノ酸位置は存続し得る。復帰突然変異は、抗体最適化の任意の段階で起こり得る。好ましくは、復帰突然変異は、選択的変異誘発アプローチの直前または直後に起こる。より好ましくは、復帰突然変異は、選択的変異誘発アプローチの直前に起こる。本明細書中で使用される、句ヒトインターロイキン12本明細書中ではhIL-12またはIL-12と略すには、主にマクロファージおよび樹状細胞によって分泌されるヒトサイトカインが含まれる。この用語には、ジスルフィド結合で互いに結合している35kDサブユニットp35および40kDサブユニットp40を含むヘテロ二量体が含まれる。ヘテロ二量体タンパク質を、p70サブユニットという。ヒトIL-12の構造は、例えば、Kobayashietal.、1989、J.Exp.Med.、170、827~845;Seder,etal.、993、Proc.Natl.Acad.Sci.、90、10188~10192;Ling,etal.、1995、J.Exp.Med.、154、116~127;Podlaski,etal.、1992、Arch.Biochem.Biophys.、294、230~237にさらに記載されている。用語ヒトIL-12には、標準的な組換え発現法によって調製することができる組換えヒトIL-12rhIL-12を含むことが意図される。用語カバットナンバリングKabatnumbering、カバット定義Kabatdefinitions、およびカバット標識Kabatlaberingを、本明細書中では交換的に使用できる。当該分野で認識されるこれらの用語は、抗体または抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変部中の他のアミノ酸残基よりも変化するすなわち、超可変アミノ酸残基のナンバリングシステムをいうKabatetal.、1971、Ann.NYAcad.Sci.、190、382~391およびKabat,E.A.etal.,1991、免疫学上目的のタンパク質配列、第5版、米国保健福祉省、NIH発行番号91-3242。重鎖可変部について、超可変部は、CDR1のアミノ酸31~35、CDR2のアミノ酸50~65、およびCDR3のアミノ酸95~102の範囲である。軽鎖可変部について、超可変部は、CDR1のアミノ酸24~34、CDR2のアミノ酸50~56、およびCDR3のアミノ酸89~97の範囲である。本明細書中でカバットナンバリングを使用して、本発明の抗体中に作製されたアミノ酸修飾の位置を示す。例えば、Y61抗IL-12抗体を重鎖CDR1の第31位でセリンSからグルタミン酸Eに変異するかH31S→E、または軽鎖CDR3の第94位でグリシンGをチロシンYに変異するL94G→Yことができる。用語ヒト抗体には、Kabatetal.Kabat,etal.,1991、免疫学上目的のタンパク質配列、第5版、米国保健福祉省、NIH発行番号91-3242を参照のことに記載のヒト生殖系列免疫グロブリン配列に対応する可変部または定常部を有する抗体が含まれる。本発明のヒト抗体には、例えばCDR特に、CDR3中のヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされるアミノ酸残基例えば、invitroでの無作為もしくは部位特異的変異誘発またはinvivoでの体細胞変異によって移入される変異を含み得る。本明細書中に記載の選択的変異誘発アプローチを用いて変異を導入することが好ましい。ヒト抗体は、アミノ酸残基例えば、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされる活性を向上させるアミノ酸残基と置換された少なくとも1つの位置を有し得る。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の一部ではないアミノ酸残基を用いて20個までの位置で置換することができる。他の実施形態では、10個まで、5個まで、または2個までの位置で置換される。より好ましい実施形態では、これらの置換は、以下に詳述のCDR領域の範囲内である。しかし、本明細書中で使用される、用語ヒト抗体は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列由来のCDR配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことは意図しない。句組換えヒト抗体には、組換え技術によって調製、発現、作製、または単離されたヒト抗体宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体以下の第II章にさらに記載、組換え、結合抗体ライブラリーから単離された抗体下記第III章にさらに記載、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックな動物例えば、マウスから単離した抗体例えば、Taylor,L.D.,etal.、1992、Nucl.AcidsRes.、20、6287~6295を参照のこと、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のDNA配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調整、発現、作製、または単離された抗体などが含まれる。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変部および定常部を有するKabat,E.A.etal.,1991、免疫学上目的のタンパク質配列、第5版、米国保健福祉省、NIH発行番号91-3242を参照のこと。しかし、ある実施形態では、このような組換えヒト抗体を、invitro変異誘発またはヒトIg配列についてトランスジェニック動物を使用する場合はinvivo体細胞変異誘発に供するので、組換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、関連のVHおよびVL配列から由来するが、invivoでのヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在し得ない配列であろう。しかし、ある実施形態では、このような組換え抗体は、選択的変異誘発アプローチまたは復帰突然変異またはその両方の結果である。単離抗体には、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体が含まれる例えば、hIL-12に特異的に結合する単離抗体は、hIL-12以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。hIL-12に特異的に結合する単離抗体は、他の種由来のIL-12分子に結合し得ない以下にさらに詳細に考察する。さらに、単離抗体は、他の細胞物質および/または化学薬品を実質的に含み得ない。中和抗体またはhIL-12活性を中和した抗体には、hIL-12への結合によってhIL-12の生物活性が阻害される抗体が含まれる。このhIL-12の生物活性の阻害は、hIL-12生物活性の1つまたは複数のインヒビターの測定フィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAにおけるヒトフィトヘマグルチニン芽細胞増殖の阻害またはヒトIL-12レセプタ結合アッセイ実施例3-インターフェロンγ誘導アッセイを参照のことにおけるレセプタ結合の阻害などによって評価することができる。これらのhIL-12生物活性の指標を、1つまたは複数の当業者に既知のいくつかのinvitroまたはinvivoアッセイによって評価することができる実施例3を参照のこと。用語活性には、抗原に対する抗体例えば、IL-12抗原に結合する抗hIL-12抗体の結合特異性/親和性および/または抗体の中和能力例えば、hIL-12への結合はhIL-12の生物活性を阻害する例えば、PHA芽細胞増殖の阻害またはヒトIL-12レセプタ結合アッセイにおけるレセプタ結合の阻害実施例3を参照のことなどの抗hIL-12抗体などが含まれる。句表面プラスモン共鳴には、例えば、BIAcoreシステムPharmaciaBiosensorAB、Uppsala、SwedenandPiscataway、NJを使用した、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出による実時間での生体特異的相互作用の分析を可能にする光学現象が含まれる。さらなる説明のためには、実施例5およびJonsson,U.etal.、1993、Ann.Biol.Clin.、51、19~26;Josson,U.etal.、1991、Biotechniques、11、620~627;Josson,B.etal.、1995、J.Mol.Recognit.、8、125~131;およびJohnson,B.etal.、1991、Anal.Biochem.、198、268~277を参照のこと。本明細書中で使用される、用語Koffは、抗体/抗原複合体からの抗体の解離についての解離速度定数をいうことが意図される。本明細書中で使用される、用語Kdは、特定の抗体-抗原相互作用の解離定数をいうことが意図される。句核酸分子には、DNA分子およびRNA分子が含まれる。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得るが、二本鎖DNAが好ましい。本明細書において使用される、hIL12に結合する抗体または抗体部分たとえばVH、VL、CDR3単離抗体を含むについての句単離核酸分子は、前記抗体または抗体部分をコードするヌクレオチド配列がhIL-12以外の抗原に結合する抗体または抗体部分をコードする他の核酸配列この他の配列はヒトゲノムDNAにおいて天然において当該核酸に隣接して存在し得るを含まない核酸分子を含む。したがって、例えば、抗IL-12抗体のVH領域をコードする本発明の単離核酸は、IL-12以外の抗原に結合する他のVH領域をコードする他の配列を含まない。句単離核酸分子はまた、2価の二重特異性抗体VHおよびVL領域が当該diabody配列以外の他の配列を含まないdiabodyなどをコードする配列を含むことが意図される。用語ベクターには、結合している別の核酸を輸送することができる核酸分子が含まれる。ベクターの1つの型は、プラスミドであり、これは、さらなるDNAセグメントを連結することができる環状二本鎖DNAループをいう。ベクターの別の型は、さらなるDNAセグメントをウイルスゲノムに連結することができるウイルスベクターである。あるベクターは、導入された宿主細胞中で自己複製することができる例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター。他のベクター例えば、非エピソーム哺乳動物ベクターを、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込むことによって、宿主ゲノムと共に複製することができる。さらに、あるベクターは、作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターを、本明細書中では、組換え発現ベクターまたは、単に発現ベクターという。一般に、組換えDNA技術に使用される発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。プラスミドはベクターの最も一般的に使用される形態であるので、本明細書では、プラスミドおよびベクターを、交換可能に使用することができる。しかし、本発明は、等価に機能するこのような発現ベクターの他の形態ウイルスベクター例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスなどを含むことが意図される。句組換え宿主細胞または単に宿主細胞には、組換え発現ベクターが導入された細胞が含まれる。このような用語は、特定の細胞だけでなく、このような細胞の子孫も含むことが意図されることを理解すべきである。変異または環境の影響のいずれかによって継代で一定の修飾が起こり得るので、このような子孫は実際には親細胞と同一ではないが、本明細書中で使用される、用語宿主細胞の範囲内に含まれる。本明細書中で使用される、用語修飾は、抗体またはその抗原結合部分中の1つまたは複数のアミノ酸の変化をいうことが意図される。1つまたは複数の位置でのアミノ酸の付加、置換、または欠失によって変化することができる。公知の技術PCR変異誘発を用いて変化させることができる。句接触位置には、26の既知の抗体-抗原構造の1つに抗体と接触するアミノ酸によって占められた抗体の重鎖可変部または軽鎖可変部のCDR1、CDR2、またはCDR3のアミノ酸位置が含まれる。抗体-抗原複合体の26の任意の既知の解析された構造中のCDRアミノ酸が抗原に接触する場合、アミノ酸は接触位置を占めると考えることができる。接触位置は、非接触位置よりも抗原に接触するアミノ酸で占められる可能性が高い。好ましくは、接触位置は、26個のうち3個を超える>11.5構造中で抗原と接触するアミノ酸を含むCDR位置である。最も好ましくは、接触位置は、25個のうち8個を超える>32構造中で抗原と接触するアミノ酸を含むCDR位置である。用語過剰変異位置には、抗体のinvivo親和性成熟中の体細胞過剰変異の頻度または可能性が高いと考えられる抗体の重鎖可変部または軽鎖可変部のCDR1、CDR2、またはCDR3領域中の位置を占めるアミノ酸残基が含まれる。体細胞過剰変異の高い頻度または可能性には、上記残基が抗体のinvivo親和性成熟中の体細胞過剰変異を受ける頻度または可能性が5~40であることが含まれる。記載したこの範囲内の全ての範囲はまた、本発明の一部であることが意図されることが理解されるべきである例えば、5~約30、5~約15、15~約30。用語好ましい選択的変異誘発位置には、接触および過剰変異位置であると考えることができる重鎖可変領域または軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、またはCDR3中の位置を占めるアミノ酸残基が含まれる。句選択的変異誘発アプローチには、少なくとも1つの好ましい選択的変異誘発位置、過剰変異位位置、および/または接触位置での、CDRアミノ酸の選択およびそれぞれの変異による、抗体活性の改良法が含まれる。選択的に変異したヒト抗体は、選択的変異誘発アプローチを用いて選択された位置での変異を含む抗体である。別の実施形態では、選択的変異誘発アプローチは、好ましくは抗体の重鎖可変部のCDR1、CDR2、もしくはCDR3以下それぞれH1、H2、およびH3または軽鎖可変部のCDR1、CDR2、もしくはCDR3以下それぞれL1、L2、およびL3中の選択された各アミノ酸残基の変異法を提供することが意図される。アミノ酸残基を、好ましい選択的変異誘発位置、接触位置、または過剰変異位置から選択することができる。軽鎖および重鎖可変部中の位置に基づいて各アミノ酸を選択する。過剰変異位置はまたは接触位置であり得ることが理解されるべきである。用語目標アプローチは、好ましくは目標方式例えば、群様式目標アプローチまたはCDR様式目標アプローチにおける抗体の重鎖可変部のCDR1、CDR2、もしくはCDR3以下それぞれH1、H2、およびH3または軽鎖可変部のCDR1、CDR2、もしくはCDR3以下それぞれL1、L2、およびL3中の選択された各アミノ酸残基の変異法を含むことが意図される。群様式の目標アプローチでは、特定の群群IL3およびH2を含む、群IIH2およびL1を含む、および群IIIL2およびH1を含む群は目標として好ましい順に列挙しているを含むの各アミノ酸残基を、選択的変異誘発用に目標化する。CDR様式目標アプローチでは、特定のCDR中の各アミノ酸残基を、選択的変異用にH3、L3、H2、L1、H1、およびL2目標として好ましい順に列挙で目標化する。選択されたアミノ酸残基を、例えば少なくとも2つの他のアミノ酸残基に変異させ、抗体活性に対する変異の効果を同定する。活性を、抗体の結合特異性/親和性および/または抗体の中和能力の変化として測定する。選択的変異誘発アプローチを、任意の供給源ファージディスプレイ、ヒトIgG生殖系列遺伝子を用いたトランスジェニック動物、ヒトB細胞から単離したヒト抗体を含む由来の任意の抗体の最適化に使用することができることが理解されるべきである。好ましくは、選択的変異誘発アプローチを、ファージディスプレイ技術をさらに用いて最適化することができない抗体について使用することが理解されるべきである。ファージディスプレイ、ヒトIgG生殖系列遺伝子を用いたトランスジェニック動物、ヒトB細胞から単離したヒト抗体を含む任意の供給源由来の抗体を、選択的変異誘発アプローチの前または後の復帰特全変異に供することができる。用語活性を向上させるアミノ酸残基には、抗体の活性を改良するアミノ酸残基が含まれる。活性を向上させるアミノ酸残基を、好ましい選択的変異誘発位置、接触位置、または過剰変異位置においてアミノ酸残基と置換することができ、さらに、1つを超える活性を向上させるアミノ酸残基は1つまたは複数のCDR内に存在し得ることが理解されるべきである。活性を向上させるアミノ酸残基には、抗体例えば、ヒトIL-12に結合する抗ヒトIL-12抗体の結合特異性/親和性を向上させるアミノ酸残基が含まれる。活性を向上させるアミノ酸残基はまた、抗体例えば、ヒトIL-12を阻害するヒトIL-12抗体の中和能力を改良するアミノ酸残基を含むことが意図される。本発明の種々の態様を、以下の節でさらに詳細に説明する。I.ヒトIL-12に結合するヒト抗体本発明は、ヒトIL-12に結合するヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましくは、本発明のヒト抗体は、組換え中和ヒト抗hIL-12抗体である。ヒトIL-12に結合する本発明の抗体を、例えば、hIL-12を用いた1つまたは複数のVLおよびVHcDNAライブラリーのスクリーニング実施例1に記載のファージディスプレイ技術などによって選択することができる。ヒトVLおよびVHcDNAライブラリーのスクリーニングにより、一連の抗IL-12抗体をまず同定し、本明細書中でJoe9Joe9野生型という抗体をさらなる展開のために選択した。Joe9は、比較的低親和性のヒトIL-12抗体例えば、約0.1秒-1のKoffであるが、hIL-12の特異的結合および検出に有用である。Joe9抗体の親和性を、重鎖および軽鎖CDRの変異誘発の誘導、混合および適合ならびにさらに変異させた軽鎖および重鎖可変部パネルの作製によって改良し、hIL-12の親和性が増加した多数のさらなる抗hIL-12抗体を誘導した実施例1、表2添付物Aを参照のこと、および図1A~図Dの配列アラインメントを参照のこと。これらの抗体のうち、本明細書中でY61というヒト抗hIL-12抗体は、有意な結合親和性の改良を示した例えば、約2×10-4sec-1のKoff。Y61抗hIL-12抗体を、重鎖および軽鎖CDR内の特異的アミノ酸残基のそれぞれの変異によってさらなる親和性成熟について選択した。Y61のアミノ酸残基を、好ましい選択的変異誘発位置、接触および/または過剰変異位置を占めるアミノ酸残基に基づいた部位特異的変異選択的変異誘発アプローチについて選択した。重鎖および軽鎖CDR中の選択した位置での置換のまとめを、図2A~図2Hに示す。Y61の軽鎖CDR2の第50位でのGlyからTyrへの置換およびY61の軽鎖CDR3の第94位でのGlyからTyrへの置換により、本発明の好ましい組換え中和抗体本明細書中でJ695というを得た。Joe9野生型からJ695までの系列における本発明の抗IL-12抗体パネルの重鎖および軽鎖可変部のアミノ酸配列アラインメントを、図1A~図1Dに示す。これらの配列アラインメントにより、Joe9野生型からJ695までの系列におけるhIL-12に結合する本発明の抗体の好ましい重鎖および軽鎖可変部のコンセンサス配列ならびにCDR3、CDR2、およびCDR1のコンセンサス配列の同定が可能となった。さらに、図2A~図2HにまとめたY61変異誘発分析により、良好なhIL-12結合特性を未だ保持するY61由来の修飾を有する配列を含むY61からJ695までの系列におけるhIL-12に結合する重鎖および軽鎖可変領域のコンセンサス配列ならびにhIL-12に結合するCDR3、CDR2、およびCDR1のコンセンサス配列の同定が可能となった。添付の配列表における配列決定によって同定された本発明の好ましいCDR、VH、およびVL配列コンセンサス配列を含むを、以下にまとめる。KdおよびKoff速度を測定するために、Joe9の親和性成熟から作製した抗体を、表面プラスモン共鳴分析によって機能的に特徴づけた。約0.1s-1~約10-5s-1の範囲内のKoff、より好ましくは1×10-4s-1~1×10-5s-1以下のKoffを有する一連の抗体を作製した。実施例3に記載のように、抗体を、フィトヘマグルチニンPHA芽細胞増殖の阻害能力についてinvitroで特徴づけた。約1×10-6M~約1×10-11Mの範囲内、より好ましくは約1×10-10M~約1×10-11M以下のIC50を有する一連の抗体を作製した。したがって、1つの態様では、本発明は、ヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定したところ0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、表面プラスモン共鳴で測定したところ1×10-2s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-7M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。より好ましい実施形態では、表面プラスモン共鳴で測定したところ1×10-3s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-8M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。より好ましい実施形態では、表面プラスモン共鳴で測定したところ1×10-4s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。さらにより好ましい実施形態では、表面プラスモン共鳴で測定したところ1×10-5s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-10M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。さらにより好ましい実施形態では、表面プラスモン共鳴で測定したところ1×10-5s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroPHAアッセイにおいて1×10-11M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害する、請求項9に記載の単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。IL-12抗体の解離速度定数Koffを、表面プラスモン共鳴によって同定することができる実施例5を参照のこと。全般に、表面プラスモン共鳴分析によって、BIAcoreシステムPharmaciaBiosensor、Piscataway、NJを使用した、表面プラスモン共鳴SPRによるリガンドバイオセンサーマトリックス上に固定された組換えヒトIL-12抗体と分析物溶液中の抗体との間の実時間での結合相互作用を測定する。表面プラスモン分析を、分析物バイオセンサーマトリックス上の抗体の固定およびリガンド溶液中の組換えIL-12の提示によっても行うことができる。IL-12抗体またはその抗原結合部分の中和活性を、いくつかの適切なinvitroアッセイの1つまたは複数を用いて評価することができる実施例3。抗体重鎖および軽鎖CDRは、抗体の抗原との結合特異性/親和性に重要な役割を果たすことが当該分野で周知である。したがって、本発明は、Joe9の軽鎖および重鎖CDRを有するヒト抗体ならびに抗体の結合特異性/親和性を改良するように修飾されているCDRを有する他の抗体を含む。実施例1に示すように、軽鎖および重鎖CDRに対する一連の修飾により、ヒト抗hIL-12抗体が親和性成熟される。ヒトIL-12に結合するJoe9野生型からJ695までの範囲の一連のヒト抗体の重鎖および軽鎖可変部アミノ酸配列アラインメントを、図1A~図1Dに示す。抗体のCDRについてのコンセンサス配列モチーフを、配列アラインメント上記の表にまとめたようにから同定することができる。例えば、Joe9からJ695までの系列のVHCDR3についてのコンセンサスモチーフは、アミノ酸配列H/S-G-S-H/Y-D-N/T/Y配列番号1配列番号7に示したコンセンサスHCVRの95位~102位の位置のアミノ酸を含むを含む。VLCDR3についてのコンセンサスモチーフは、アミノ酸配列Q-S/T-Y-D/E-S/R/K-S/G/Y-L/F/T/S-R/S/T/W/H-G/P-S/T/A/L-R/S/M/T/L-V/I/T/M/L配列番号2配列番号8に示したコンセンサスLCVRの89位~97位の位置のアミノ酸を含むを含む。したがって、別の態様では、本発明は、以下の特徴:ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態では、抗体は、アミノ酸配列F-I-R-Y-D-G-S-N-K-Y-Y-A-D-S-V-K-G配列番号3配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVRの50位~65位の位置のアミノ酸を含むをさらに含み、アミノ酸配列G/Y-N-D/S-Q/N-R-P-S配列番号4配列番号8のアミノ酸配列を含むLCVRの50位~65位の位置のアミノ酸を含むをさらに含む。別の好ましい実施形態では、抗体は、アミノ酸配列F-T-F-S-S/E-Y-G-M-H配列番号5配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVRの27位~35位の位置のアミノ酸を含むをさらに含み、アミノ酸配列S/T-G-G/S-r/S-S-N-I-G/V-S/A-N/G/Y-T/D-V-K/H配列番号6配列番号8のアミノ酸配列を含むLCVRの24位~34位の位置のアミノ酸を含むをさらに含む。さらに別の好ましい実施形態では、本発明の抗体は、配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVRおよび配列番号8のアミノ酸配列を含むLCVRを含む。さらなるコンセンサスモチーフを、J695抗体を誘導するY61について行った変異分析に基づいて同定することができる図2A~図2Hにまとめる。図2A~図2Hに示したグラフによって示されたように、Y61の重鎖および軽鎖CDRの一定の残基は、抗体のhIL-12の結合特性を有意に減少させること無く置換を行うことができた。例えば、20個の異なるアミノ酸残基でのCDRH1中の第30位での各置換により、抗体のKoff速度は有意に減少せず、これは、この位置で種々の異なるアミノ酸残基を置換することができることを示す。したがって、変異分析すなわち、他のアミノ酸残基での置換が可能なY61内の位置に基づいて、コンセンサスモチーフを同定した。重鎖および軽鎖CDR3のコンセンサスモチーフをそれぞれ配列番号9および10に示し、重鎖および軽鎖CDR2のコンセンサスモチーフをそれぞれ配列番号11および12に示し、重鎖および軽鎖CDR1のコンセンサスモチーフをそれぞれ配列番号13および14に示す。VHおよびVL領域のコンセンサスモチーフを、それぞれ配列番号15および16に示す。したがって、1つの態様では、本発明は、以下の特徴:ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。好ましい実施形態では、抗体は、配列番号11のアミノ酸配列を含むVHCDR2および配列番号12のアミノ酸配列を含むVLCDR2をさらに含む。別の好ましい実施形態では、抗体は、配列番号13のアミノ酸配列を含むVHCDR1および配列番号14のアミノ酸配列を含むLHCDR1をさらに含む。さらに好ましい実施形態では、本発明の抗体は、配列番号15のアミノ酸配列を含むHCVRおよび配列番号16のアミノ酸配列を含むLCVRを含む。本発明の好ましい抗体であるヒト抗hIL-12抗体Y61を、CDR3のPCR変異誘発によってJoe9野生型の親和性成熟によって作製した実施例1に記載。Y61は、表面プラスモン共鳴およびinvitro中和アッセイで同定された改良特異性/結合親和性を有していた。Y61の重鎖および軽鎖CDR3をそれぞれ配列番号17および18に示し、Y61の重鎖および軽鎖CDR2をそれぞれ配列番号19および20に示し、Y61の重鎖および軽鎖CDR3をそれぞれ配列番号21および22に示す。Y61のVHは配列番号23のアミノ酸配列を有し、Y61のLHは配列番号24のアミノ酸配列を有するこれらの配列はまた、Joe9と整列させて図1A~図1Dに示されている。したがって、別の態様では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2をさらに有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1をさらに有する。さらに別の好ましい実施形態では、配列番号23のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号24のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。ある実施形態では、全長抗体は、重鎖定常部IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、およびIgE定常部などおよびKabatKabat,E.A.etal.、1991、免疫学上目的のタンパク質配列SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国保健福祉省、NIH発行番号91-3242に記載の任意のアロタイプ変異体を含む。好ましくは、抗体重鎖定常部は、IgG1重鎖定常部である。あるいは、抗体の一部は、Fabフラグメント、Fab’2フラグメント、または短鎖Fvフラグメントであり得る。抗体パネルを作製するためのY61の各残基の修飾を、図2A~図2Hに示す。各抗体の特異性/結合親和性を、表面プラスモン共鳴および/またはinvitro中和アッセイによって同定した。したがって、別の態様では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害するか、b配列番号404~配列番号469からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有するか、c配列番号534~配列番号579からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号335~配列番号403からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2または配列番号506~配列番号533からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号288~配列番号334からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR1または配列番号470~配列番号505からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を有する。さらに別の好ましい実施形態では、配列番号23のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号24のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を含む単離ヒト抗体またはその抗原結合部分。ある実施形態では、重鎖定常部IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、およびIgE定常部などおよびKabatKabat,E.A.etal.、1991、免疫学上目的のタンパク質配列SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国保健福祉省、NIH発行番号91-3242に記載の任意のアロタイプの変異体を含む全長抗体。好ましくは、抗体重鎖定常部は、IgG1重鎖定常部である。あるいは、抗体の一部は、Fabフラグメント、Fab’2フラグメント、または短鎖Fvフラグメントであり得る。本発明の特に好ましい組換えられた中和抗体であるJ695を、抗体Y61の接触および過剰変異アミノ酸残基の部位特異的変異誘発によって作製した実施例2におよび以下の第II節に記載。J695は、軽鎖CDR2の第50位でのGlyからTyrへの置換および軽鎖CDR3の第94位でのGlyからTyrへの置換という点でY61と異なる。J695の重鎖および軽鎖CDR3をそれぞれ配列番号25および26に示し、J695の重鎖および軽鎖CDR2をそれぞれ配列番号27および28に示し、J695の重鎖および軽鎖CDR3をそれぞれ配列番号29および30に示す。J695のVHは配列番号31のアミノ酸配列を有し、J695のLHは配列番号32のアミノ酸配列を有するこれらの配列はまた、Joe9と整列させて図1A~図1Dに示されている。したがって、別の態様では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を有し、c配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2および配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を有する。さらに別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖可変部および配列番号32のアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有する。ある実施形態では、全長抗体は、重鎖定常部IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、およびIgE定常部などおよびKabatKabat,E.A.etal.、1991、免疫学上目的のタンパク質配列SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国保健福祉省、NIH発行番号91-3242に記載の任意のアロタイプの変異体を含む。好ましくは、抗体重鎖定常部は、IgG1重鎖定常部である。あるいは、抗体の一部は、Fabフラグメント、Fab’2フラグメント、または短鎖Fvフラグメントであり得る。本発明のさらなる抗IL-12抗体を得るために、Joe9からJ695までの系列またはY61からJ695までの系列由来の抗体のCDR3、CDR2、およびCDR1の好ましいコンセンサス配列におけるさらなる変異を作製することができる。このような修飾法を、標準的な分子生物学技術PCR変異誘発、軽鎖および/または重鎖CDR中の各接触または過剰変異アミノ酸残基の目標化、その後の本明細書中に記載の修飾抗体の速度および機能的分析例えば、実施例3に記載の中和アッセイおよび実施例5に記載のBIAコア分析などを用いて行うことができる。したがって、別の態様では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置または過剰変異位置に1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号1のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号3のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号5のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号2のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR4、配列番号3のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号6のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。別の態様では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号9のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号10のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号14のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。当業者はまた、本発明の抗体例えば、Y61またはJ695のCDR領域に対するさらなる変異を作製して本発明のさらなる抗IL-12を得ることができることを認識する。このような変異法を、上記の標準的な分子生物学的技術を使用して行うことができる。修飾抗体の機能的および速度分析を、それぞれ実施例3および実施例5に記載のように行うことができる。J695を同定するY61の各残基の修飾を、図2A~図2Hに示し、実施例2で説明する。したがって、別の態様では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号17のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号19のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号21のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR4、配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。別の態様では、本発明は、ainvitroPHAアッセイにおいて1×10-9M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、b配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有し、c配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、または好ましい選択的変異誘発位置または過剰変異位置で1つまたは複数のアミノ酸置換を有するその変異体を含み、前記変異体が配列番号26のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、配列番号28のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および配列番号30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1を含む抗体より10倍以下高いkoff速度を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。さらに別の実施形態では、本発明は、ヒトIL-12ならびにヒヒIL-12、マーモセットIL-12、チンパンジーIL-12、カニクイザルIL-12、およびアカゲザルIL-12からなる群から選択される少なくとも1つのさらなる霊長類IL-12の活性を中和するがマウスIL-12の活性を中和しない、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。II.組換えヒト抗体の選択本発明の組換えヒト抗体を、ヒトリンパ球由来のmRNAから調製したヒトVLおよびVHcDNAを使用して調製した組換え組み合わせ抗体ライブラリー好ましくはscFvファージディスプレイライブラリーのスクリーニングによって単離することができる。このようなライブラリーの調製法およびスクリーニング法は、当業者に既知である。市販のファージディスプレイライブラリー作製用キット例えば、Pharmacia組換えファージ抗体系、カタログ番号27-9400-01およびStratageneSurfZAPTMファージディスプレイキット、カタログ番号240612に加えて、抗体ディスプレイライブラリーの作製およびスクリーニングに特に利用することができる方法および試薬の例は、例えば、Kangetal.のPCT公開番号WO92/18619;Winteretal.のPCT公開番号WO92/20791;Breitlingetal.のPCT公開番号WO93/01288;McCaffertyetal.のPCT公開番号WO92/01047;Garrardetal.のPCT公開番号WO92/09690;Fuchsetal.、1991、Bio/Technology、9、1370~1372;Hayetal.、1992、HumAntibod.Hybridomas、3、81~85;Huseetal.、1989、Science、246、1275~1281;McCaffertyetal.、Nature、1990、348、552~554、Griffithsetal.、1993、EMBOJ.、12、725~734;Hawkinsetal.、1992、J.Mol.Biol.、226、889~896;Clacksonetal.、1991、Nature、352、624~628;Grametal.、1992、PNAS、89、3576~3580;Garradetal.、1991、Bio/Technology、9、1373~1377;Hoogenboometal.、1991、Nuc.AcidRes.、19、4133~4137;およびBarbasetal.、1991、PNAS、88、7978~7982に見出すことができる。本方法で使用した抗体ライブラリーは、ヒトVLおよびVHcDNAから調製したscFvライブラリーであることが好ましい。IL-12に対する結合活性を有するヒト重鎖および軽鎖配列を選択するために、抗原として組換えヒトIL-12を用いてscFv抗体ライブラリーをスクリーニングすることが好ましい。IL-12のp35サブユニットまたはp70へテロ二量体に特異的な抗体を選択するために、過剰な遊離p40サブユニットの存在下でスクリーニングアッセイを行った。実施例1に記載のように、サブユニットの優先度を、例えばミクロフリケット滴定によって同定することができる。一旦最初のヒトVLおよびVHセグメントが選択されると、好ましいVL/VH対の組み合わせを選択するために混合および適合実験を行い、IL-12結合について選択されたVLおよびVHセグメントの異なる対をスクリーニングする。さらに、hIL-12結合の親和性および/または低い解離速度定数をさらに改良するために、好ましいVL/VH対のVLおよびVHセグメントを、天然の免疫応答中の抗体の親和性成熟を担うinvivo体細胞変異プロセスに類似のプロセスで無作為に好ましくは、VHおよび/またはVLのCDR3領域内で変異することができる。このinvitro親和性成熟を、それぞれVHCDR3またはVLCDR3に相補的なPCRプライマーこのプライマーは、得られるPCR産物がVHおよび/またはVLCDR3領域に無作為変異が導入されているVHおよびVLセグメントをコードするように一定の位置で4個のヌクレオチド塩基の無作為な混合物でスパイクされているを用いたVHおよびVL領域の増幅によって行うことができる。これらの無作為に変異させたVHおよびVLセグメントを、hIL-12への結合について再選択および再スクリーニングすることができ、IL-12結合について高い親和性および低い分離速度を示す配列を選択することができる。表2添付物Aを参照のことは、invitro親和性成熟の結果として結合特異性/親和性の変化を示す抗体を示す。組換え免疫グロブリンディスプレイライブラリーからの本発明の抗hIL-12抗体の選択、単離、およびスクリーニング後、選択された抗体をコードする核酸を、ファージ粒子から例えば、ファージゲノムから回収し、標準的な組換えDNA技術によって他の発現ベクターにサブクローン化する。所望ならば、本発明の他の抗体形態を作製するために、核酸をさらに操作することができるさらなる定常部などのさらなる免疫グロブリンドメインをコードする核酸に結合する核酸。組換えライブラリーのスクリーニングによって単離された組換えヒト抗体を発現させるために、抗体をコードするDNAを、組換え発現ベクターにクローン化して、哺乳動物宿主細胞に導入する以下の第IV節にさらに詳述。ファージディスプレイ技術およびCDR領域の無作為または部位特異的変異誘発によって選択された抗体の親和性成熟によるヒトIL-12結合抗体の選択法を、実施例1にさらに詳述する。実施例1に記載のように、ヒトVLおよびVHcDNAライブラリーのスクリーニングによって、一連の抗IL-12抗体を同定し、Joe9抗体をさらなる展開のために選択した。Joe9の重鎖可変領域とVBASEデータベース由来の重鎖生殖系列配列との比較により、Joe9がCOS-3生殖系列配列と類似することが明らかとなった。COS-3は、生殖系列配列のVH3ファミリーに属する。VH3ファミリーは、ヌクレオチド配列相同性に基づいてVH1~VH7の7つのファミリーに分類されるヒトVH生殖系列レパートリーの一部であるTomlinsonetal.、1992、J.Mol.Biol.、227、776~798およびCooketal.、1995、ImmunologyToday、16、237~242。VH3ファミリーは、最も多数のメンバーを含み、生殖系列レパートリーに最も寄与する。任意の所与のヒトVH3生殖系列抗体配列について、VH3ファミリー内のアミノ酸配列同一性は高い例えば、Tomlinsonetal.、1992、J.Mol.Biol.、227、776~798およびCooketal.、1995、ImmunologyToday、16、237~242を参照のこと。VH3ファミリーの任意の2つの生殖系列VH配列間のアミノ酸同一性範囲は、約100個のVH残基中69~98個の残基で変化するすなわち、任意の2つの生殖系列VH配列間で69~98のアミノ酸配列相同性。ほとんどの生殖系列配列について、少なくとも80個以上の同一のアミノ酸残基が存在するすなわち、少なくとも80のアミノ酸配列相補性。VH3ファミリーメンバー間の高い程度のアミノ酸配列相同性によって、VH鎖のCDRおよびフレームワーク領域中の重要な部位に存在する一定のアミノ酸残基が存在する。これらのアミノ酸残基は、CDRに構造的特徴を付与する。抗体構造の研究により、CDRの高次構造を、CDRおよびフレームワーク領域中の一定の位置を占める重要なアミノ酸残基に基づいて、標準CDR構造のファミリーに分類することができることが示されている。したがって、同一の重要なアミノ酸残基を有する標準構造を有する異なる抗体中の類似の局所的CDR高次構造が存在するChothiaetal.、1987、J.Mol.Biol.、1996、901~917およびChothiaetal.、1989、Nature、342、877~883。VH3ファミリー内に、CDR1およびCDR2標準構造について重要な部位にアミノ酸残基の同一性が保存されているChothiaetal.、1987、J.Mol.Biol.、1996、227、799~817。COS-3生殖系列VH遺伝子は、VH3ファミリーメンバーであり、3~30DP-49生殖系列VH対立遺伝子の変異体である。COS-3は、Joe9VHアミノ酸配列と5つの位置のみで異なる。Joe9VHとCOS-3との間およびJoe9VHと他のVH3ファミリーメンバーとの間の高度なアミノ酸配列相同性はまた、高度なCDR構造の相同性を付与するChothiaetal.、1987、J.Mol.Biol.、1996、901~917;Chothiaetal.、1987、J.Mol.Biol.、1996、901~917;およびChothiaetal.、1989、Nature、342、877~883。当業者は、Joe9とのアミノ酸配列および標準構造の高い類似性に基づいて、他のVH3ファミリーメンバーを使用してヒトIL-12に結合する抗体を作製することができることを認識する。これを、例えば、鎖シャフリング技術による適切なVLの選択Winteretal.、1994、AnnualRev.Immunol.、12、433~55または本発明の抗体由来のCDRを含む齧歯類または他のヒト抗体由来のCDRのVH3ファミリーフレームワークへの移植によって行うことができる。ヒトVλ生殖系列レパートリーは、ヌクレオチド配列相同性に基づいて10ファミリーに分類されるWilliamsetal.、1996、J.Mol.Biol.、264、220~232。Joe9の軽鎖可変領域とVBASEデータベースから選択された軽鎖生殖系列配列との比較によって、Joe9はDPL8λ生殖系列に類似することが明らかとなった。Joe9VLは、DPL8配列とフレームワーク位置のみが異なり、他のVλ1ファミリーメンバーのフレームワーク配列と相同性が高い。Joe9とのアミノ酸配列および標準構造の高い類似性に基づいて、他のVλ1ファミリーメンバーを使用してヒトIL-12に結合する抗体を作製することができる。これを、例えば、鎖シャフリング技術による適切なVLの選択Winteretal.、前出または本発明の抗体由来のCDRを含む齧歯類または他のヒト抗体由来のCDRのVλ1ファミリーフレームワークへの移植によって行うことができる。本発明の方法は、生殖系列配列のVH3ファミリーメンバー由来の重鎖可変部および生殖系列配列のVλ1ファミリーメンバー由来の軽鎖可変部を含むことが意図される。さらに、当業者は、任意のVH3ファミリー重鎖配列メンバーを任意のVλ1ファミリー軽鎖配列と組み合わせることができることを認識する。当業者はまた、生殖系列のアミノ酸配列を変化させるDNA配列多形が集団例えば、ヒト集団内に存在し得ることを認識する。このような生殖系列配列中の遺伝的多形性は、天然の対立遺伝子の変異によって、集団内の個体間に存在し得る。このような天然の対立遺伝子の変異により、典型的には、遺伝子のヌクレオチド配列の1~5が変異し得る。天然の対立遺伝子変異の結果である任意のおよび全てのこのようなヌクレオチド変異および得られた生殖系列配列中のアミノ酸多形は、本発明の範囲内であることが意図される。したがって、1つの態様では、本発明は、以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定したところ0.1s-1のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bVH3生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は接触または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有し、cVλ1生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、重鎖CDR3中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖CDR3中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、重鎖CDR2中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖CDR2中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、重鎖CDR1中に変異を有する。別の好ましい実施形態では、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖CDR1中に変異を有する。当業者は、VH3生殖系列ファミリーメンバー間および軽鎖Vλ1生殖系列ファミリーメンバー間の高いアミノ酸配列の類似性に基づいて、生殖系列配列の変異によりヒトIL-12に結合するさらなる抗体を得ることができることを認識する。表1添付物Aを参照のことは、VH3ファミリーメンバーの生殖系列配列を示し、ファミリーメンバー内に有意な配列相同性を示す。表1はまた、Vλ1ファミリーメンバーの生殖系列配列を示す。比較のために、Joe9の重鎖および軽鎖配列を示す例えばJoe9における変異。生殖系列配列のVH3またはVλ1ファミリーメンバーへの変異を、例えば、本発明の抗体中で作製した同一のアミノ酸位置で作製することができる。このような修飾法を、標準的な分子生物学技術PCR変異誘発、軽鎖および/または重鎖CDR中の各接触または過剰変異アミノ酸残基の標的化、その後の本明細書中に記載の修飾抗体の速度および機能的分析例えば、実施例3に記載の中和アッセイおよび実施例5に記載のBIAコア分析などを用いて行うことができる。したがって、1つの態様では、本発明は、以下の特徴:a配列番号595~667からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有し、b配列番号669~675からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。当業者は、Joe9とCOS-3重鎖生殖系列配列との間およびJoe9とDPL8λ生殖系列配列との間の高いアミノ酸配列の類似性に基づいて、これらの生殖系列配列のCDR領域への変異によりヒトIL-12に結合するさらなる抗体を得ることができることを認識する。このような修飾法を、上記の標準的な分子生物学技術を用いて行うことができる。したがって、1つの態様では、本発明は、以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定したところ0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bCOS-3生殖系列アミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有し、cDPL8生殖系列アミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。軽鎖および重鎖可変領域中のCDRおよびフレームワーク領域中に重要な部位を示す一定のアミノ酸残基により、これらの領域に構造的特徴が付与される。特に、CDR2およびCDR1領域を、標準構造分類に供する。ファミリーメンバー間のアミノ酸配列の相同性が高いので、これらの標準構造の特徴は、ファミリーメンバー間に存在する。当業者は、これらの標準構造を付与するアミノ酸残基での修飾により、IL-12に結合するさらなる抗体が得られることを認識する。上記の標準的な分子生物学的技術を用いて修飾を行うことができる。したがって、1つの態様では、本発明は、以下の特徴:aヒトIL-12に結合し、表面プラスモン共鳴で測定したところ0.1s-1以下のkoff速度定数でヒトIL-12から解離するか、invitroフィトヘマグルチニン芽細胞増殖アッセイPHAアッセイにおいて1×10-6M以下のIC50でフィトヘマグルチニン芽細胞増殖を阻害し、bVH3生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変部を有し、前記重鎖可変部は他のVH3生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR2に構造的に類似したCDR2および他のVH3生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR1に構造的に類似したCDR1を含み、前記重鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有し、cVλ1生殖系列ファミリーメンバーから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変部を有し、前記軽鎖可変部は他のVλ1生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR2に構造的に類似したCDR2および他のVλ1生殖系列ファミリーメンバー由来のCDR1に構造的に類似したCDR1を含み、前記軽鎖可変部は好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過剰変異位置での活性を向上させるアミノ酸残基との変異を有する、単離ヒト抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。本発明の組換えヒト抗体は、VBASEデータベースから選択されたヒト生殖系列免疫グロブリン配列である可変部および定常部を有する。組換えヒト抗体への変異例えば、無作為変異誘発またはPCR変異誘発によるにより、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸が得られる。また、ヒトドナー由来の組換え抗体ライブラリーは、B細胞の発達の間に起こる体細胞変異の正常な工程による対応する生殖系列配列と異なる抗体配列を含む。PCR増幅によって得られた生殖系列配列が真の生殖配列構成由来のフレームワーク領域中の異なるアミノ酸すなわち、真の生殖系列配列と比較して異なる増幅配列をコードする場合、これらのアミノ酸の相違を真の生殖系列配列に戻すように変化させるすなわち、フレームワーク残基の生殖系列構成への復帰突然変異ことが望ましいことに留意すべきである。したがって、本発明は、任意選択的に復帰突然変異工程を含み得る。これを行うために、最初に生殖系列によってコードされる軽鎖および重鎖のアミノ酸配列例として、VBASEデータベースに見出されるを、変異した免疫グロブリン重鎖および軽鎖フレームワークアミノ酸配列と比較して、最も密接な生殖系列配列と異なる変異免疫グロブリンフレームワーク配列中のアミノ酸残基を同定する。次いで、どのヌクレオチドを変化させるべきであるかどうかを決定するために、変異免疫グロブリン配列の適切なヌクレオチドを、遺伝コードを用いて生殖系列配列に対応するように復帰変異させる。変異免疫グロブリンフレームワーク配列の変異誘発を、標準的な方法PCR媒介変異誘発PCR産物が変異を含むように変異ヌクレオチドをPCRプライマーに組み込むまたは部位特異的変異誘発などによって行う。復帰突然変異の候補として同定された各アミノ酸の役割を抗原結合における直接的または間接的役割について調査すべきであり、ヒト抗体の任意の所望の特徴に影響を与える変異後に見出されるいかなるアミノ酸も最終ヒト抗体に含まれるべきではない例として、選択的変異誘発アプローチによって同定された活性を向上させるアミノ酸を復帰突然変異に供さない。変異誘発に起因する抗体の特徴の同定アッセイには、ELISA、競合ELISA、invitroおよびinvivo中和アッセイ、および/または種々の供給源ヒト、霊長類、および/または他の種を含む由来の組織片を用いた免疫組織化学例えば、実施例3を参照のことを含み得る。復帰突然変異に供されるアミノ酸数を最小化するために、第2の生殖系列配列が本発明のヒト抗体配列の少なくとも10個、好ましくは20個のアミノ酸と問題の両アミノ酸部位で同一であり、かつ共直線性である場合、最も密接な生殖系列配列と異なるが第2の生殖系列配列中の対応するアミノ酸に同一であると認められたアミノ酸位置を存続させ得る。これにより、本発明のヒト抗体で治療された対象中の専門的抗原提示細胞により免疫系に提示された任意のエピトープは外来でなく、自己抗原すなわち、第2の生殖系列配列によってコードされる免疫グロブリンとは同一であることを確実にするであろう。復帰突然変異は、抗体最適化の任意の段階で起こり得る。好ましくは、復帰突然変異は、選択的変異誘発アプローチの直前または直後に起こる。より好ましくは、復帰突然変異は、選択的変異誘発アプローチの直前に起こる。III.好ましい選択的変異誘発位置、接触位置および/または過変異位置に対する修飾典型的には、親和性が改善された抗体の選択は、上記の第II節に記載されているようにファージディスプレー法を使用して行うことができる。これは、CDR残基の組合せをランダムに変異させて、異なる配列の抗体を含む大きなライブラリーを作製することによって達成することができる。しかし、これらの選択法が機能するためには、抗体抗原反応が、より大きな親和性を有する抗体の抗原に対する優先的な結合が、時間経過にわたって可能にする平衡になるようにならなければならない。平衡を達成させるための選択条件は、ファージディスプレー法が、達成された特定の親和性レベルすなわち、抗体Y61の親和性レベルを得る際に、選択された抗IL-12抗体の親和性を改善するために使用された場合、おそらくは、抗原とファージ粒子との間でのさらなる非特異的な相互作用のために決定することができない。従って、さらにより大きな親和性を有する抗体は、ファージディスプレー法によって選択することができない。このため、少なくともある種の抗体または抗原の場合、ファージディスプレー法は、大きく改善された結合特異性/親和性を有する抗体を選択するその能力に限界がある。従って、抗体のファージディスプレー親和性成熟化を必要としない選択的変異誘発法と名付けられた方法が、このような限界を克服するために確立されており、本発明により提供される。この選択的変異誘発法は、ファージディスプレーシステムを使用する限界を克服するために開発されたが、この方法はまたファージディスプレーシステムとともに使用できることに留意しなければならない。さらに、選択的変異誘発法は、任意の抗体の活性を改善するために使用することができる。抗体の活性例えば、親和性または中和活性を改善するために、理想的には、重鎖および軽鎖の両方におけるすべてのCDR位置をすべての他の可能なアミノ酸残基に変異させることが考えられる。しかし、平均して70個のCDR位置が抗体内に存在するために、そのような方法は、非常に時間がかかり、かつ手間のかかるものである。従って、本発明の方法は、重鎖および/または軽鎖のCDRにおいて特定の選択された残基のみを変異させることによって抗体の活性を改善することができる。さらに、本発明の方法は、抗体の他の望ましい性質に影響を及ぼすことなく抗体の活性を改善することができる。抗体可変領域のどのアミノ酸残基が抗原と接触しているかを決定することは、一次配列または可変領域内のその位置に基づいて正確に予測することができない。それにもかかわらず、種々の特異性を有する抗体に由来する配列のKabatらによって行われた配列比較により、様々なCDRが、抗体間で著しく異なる可変領域内の局所領域として同定されたKabatら1971、Ann.NYAcad.Sci.190:382~393;Kabat,E.A.ら1991、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国保健社会福祉省、NIH刊行物番号91-3242。構造的研究により、抗原結合表面が、CDRに存在にするアミノ酸残基によって形成されることが明らかにされている。CDRの外側に位置する他のアミノ酸残基もまた、構造的役割を果たしていること、または抗原結合に直接関わっていることが知られている。従って、それぞれの抗原-抗体ペアについて、CDR内またはCDR外に存在するアミノ酸残基が重要であり得る。Tomlisonらによる配列比較研究により、体細胞変異の頻発部位である多数の位置が、重鎖および軽鎖のCDR1およびCDR2において、そしてκ鎖CDR3の一部において同定されたTomlisonら1996、J.Mol.Biol.256:813~817。特に、H31、H31B、H33、H33B、H52B、H56、H58、L30、L31、L31A、L50、L53、L91、L92、L93およびL94の位置が体細胞変異の頻発部位として同定された。しかし、この分析は、重要な重鎖のCDR3領域、および抗体結合部位の中心に位置することが知られ、そして抗原との重要な相互作用を潜在的にもたらす軽鎖CDR3の選択が含まれていない。さらに、Tomlisonらは、体細胞の多様性のみから抗原結合における特定のアミノ酸の役割は必ずしも予測されないことを提案し、そして抗原と接触する保存されたアミノ酸残基、および抗原と接触しない種々のアミノ酸残基を示唆している。この結論は、抗体親和性に対する体細胞変異の役割に関する変異研究によってさらに裏付けられているSharon1990、PNAS、87:4814~7。高親和性の抗p-アゾフェニルアルソナートArs抗体における19個の体細胞変異が、その対応する生殖細胞残基と同時に置換された。これにより、活性が200分の1に低下した生殖細胞型の抗Ars抗体が作製された。抗Ars抗体の完全な親和性は、19個の体細胞変異のうちの3つのみを元に戻すことによって回復させることができる。このことは、抗原結合活性に寄与していない多くの体細胞変異が可能であり得ることを示している。この結果は、抗体多様性自身の性質によって一部が説明され得る。未成熟なB細胞は、多数の自己抗原または非自己抗原を認識する低親和性の抗体を最初に産生し得る。さらに、抗体は、自己反応性を生じさせ得る配列変化を親和性成熟化の途中で受けることがある。そのような低親和性抗体の過変異は、自己反応性の破棄ネガティブ選択をもたらし、外来抗原に対する親和性を増大させるために役立ち得る。従って、非常に多数の抗体の一次構造データを分析することにより、1望ましくない抗原に対する親和性を低下させるプロセスに対する親和性成熟化プロセスにおける体細胞の過変異部位の役割、または2特定のアミノ酸が特異的な抗原-抗体ペアの性質にどのように寄与しているか、のいずれかを予測する方法は得られない。抗原認識における特定のアミノ酸残基の役割を明らかにする他の試みが、抗原抗体複合体の多数の結晶構造を分析することによって行われたMacCallumら1996、J.Mol.Biol.262:732~745。CDR内およびCDR外に存在する位置の潜在的な役割が示された。26個の分析された構造のうち10個を越える構造において抗原結合に関与するCDR内の位置は、重鎖内のH31、H33、H50、H52、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98およびH100、ならびに軽鎖内のL30A、L32、L91、L92、L93、L94、L96を含んでいた。しかし、著者らは、これらおよび他の構造データを使用する抗原接触部の予測は接触位置を過大または過少に予測し得ることを認めた。これにより、異なる方法が種々の抗原に対して適用され得なければならないという考えに至った。Piniらは、抗体の親和性を迅速に増大させるために、大きなファージディスプレーライブラリーにおいて抗体CDR配列内の多数の残基をランダム化することを記載しているPiniら1998、J.Biol.Chem.273:21769~21776。しかし、Piniらにより議論された高親和性抗体は、合計で8カ所の位置に変異を有していたが、どの変化が抗体の親和性を改善するために絶対的に必要とされるかに関する還元的分析は、必要とされる最小数のアミノ酸について試験しなければならない可能な組合せが非常に多いために実施可能になっていない。さらに、多数の残基をランダム化することにより、抗体の他の所望する性質は必ずしも維持され得ない。抗体の望ましい性質または特性は当分野では認識されており、これには、例えば、非交差反応性例えば、他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、およびヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に近い抗体配列の維持、中和能の改善が含まれる。他の望ましい性質または特性には、種間反応性を維持する能力、エピトープ特異性を維持する能力、および哺乳動物細胞におけるタンパク質の高発現レベルを維持する能力が挙げられる。これらの望ましい性質または特性は、ELISA、競合的ELISA、invitro中和アッセイおよびinvivo中和アッセイ例えば、実施例3を参照のこと、ヒト、霊長類または必要とされ得る場合には他の供給源を含む種々の供給源に由来する組織切片を用いた免疫組織化学、および一過性発現または安定発現を使用する哺乳動物細胞における発現に対する研究これらに限定されないを含む当分野で認識されている技術を使用して観測または測定することができる。さらに、Piniらの方法は、親和性を改善するために実際に必要とされる最小数よりも多くの変化が導入されることがあり、そしてヒト対象における抗体誘発抗ヒト抗体HAMA形成をもたらし得る。さらに、随所に議論されているように、本明細書中で明らかにされているファージディスプレー、またはリボソームディスプレーを含む他の関連する方法は、抗体と抗原との間におけるある種の親和性に達する際には適切に機能しないことがあり、そして平衡に達するために必要とされる条件は、他のファージ成分またはリボソーム成分と抗原との相互作用を含むさらなる相互作用のために合理的な時間枠で確立することができない。当業者は、上記に議論された参考の教示から、抗体多様性の起源に関する注目される科学的情報を少しずつ集めることができる。しかし、本発明は、特異的な抗原-抗体ペアの抗体親和性を、抗体の他の関連する特徴または望ましい特性を維持しながら増大させる方法を提供する。これは、抗原結合性を含む特定の抗体に関する多数の種々の特性が付与されるという望ましさを考慮する場合には特に重要である。出発抗体が、保持しなければならない望ましい性質または特性を有する場合、選択的変異誘発法は、抗体の活性を改善しながら、これらの望ましい性質を維持させるための最良の方法であり得る。例えば、Y61の変異誘発において、その目的は、hIL-12に対する親和性を増大させることであり、そして所望する性質を維持しながら抗体の中和能を改善することであった。Y61の所望される性質には下記が含まれる:1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2細かいエピトープ特異性の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識し、それにより、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること;および3その個々の生殖系列の免疫グロブリン配列にできる限り近い重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を有する抗体の生成。1つの実施形態において、本発明の方法は、抗体の望ましい性質または特性を維持し、同時にその親和性および/または中和能を改善するための方法としての選択的変異誘発法を提供する。用語選択的変異誘発法は、上記に定義されている通りであり、選択されたアミノ酸残基を個々に変異させる方法を含む。変異させるアミノ酸残基は、好ましい選択的変異誘発位置から最初に選択され、次いで接触位置から選択され、次いで過変異位置から選択され得る。個々の選択された位置は少なくとも2つの他のアミノ酸残基に変異させることができ、そして抗体の所望する性質と抗体活性における改善との両方に対する変異の影響が明らかにされる。この選択変異誘発法は下記の工程を含む:候補位置を、1好ましい選択的変異誘発位置;2接触位置;3過変異位置の順で選択して、その位置を抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域における位置の場所CDR1よりもCDR2が好ましく、CDR2よりもCDR3が好ましいに基づいて評価する工程;活性増強アミノ酸残基を決定するために、候補の好ましい選択的変異誘発位置、過変異位置および/または接触位置を、評価した順にすべての可能な他のアミノ酸残基に個々に変異させ、そして抗体の活性について個々の変異の影響を分析する工程;必要な場合には、個々の活性増強アミノ酸残基の段階的な組合せを行い、抗体の活性に対する様々な組合せの影響を分析する工程;活性増強アミノ酸残基を有する変異型抗体を選択して、その免疫原能に関してアミノ酸置換の存在位置および正体に基づいて変異型抗体を評価する工程。最も大きな評価付けが、生殖系列データベースに記載されている可変領域配列にほぼ一致するアミノ酸配列を含む変異型抗体、あるいは他のヒト抗体に匹敵し得るアミノ酸配列を有する変異型抗体に与えられる。低い評価付けが、生殖系列配列または他のヒト抗体の配列のいずれかにおいて稀にしか見出されないアミノ酸置換を含有する変異型抗体に与えられる。最も低い評価付けが、生殖系列配列または他のヒト抗体の配列において見出されないアミノ酸置換を有する変異型抗体に与えられる。上記に示されているように、CDR3内に存在する活性増強アミノ酸残基を少なくとも1つ含む変異型抗体はCDR2よりも好ましく、CDR2はCDR1よりも好ましい。重鎖可変領域のCDRは、軽鎖可変領域のCDRよりも好ましい。変異型抗体はまた、例えば、その対応する元の抗体と比較した場合、活性の改善について調べることができる。変異型抗体の活性の改善は、例えば、中和アッセイによって、あるいは表面プラズモン共鳴分析実施例3を参照のことによる結合特異性/親和性によって測定することができる。好ましくは、活性の改善は、元の抗体よりも少なくとも2倍~20倍大きくなり得る。活性の改善は、元の抗体よりも少なくともx1倍~x2倍大きくなり得るが、この場合、x1およびx2は、2~20の間および2~20を含む整数であり、定められた範囲内の様々な範囲例えば2~15、例えば5~10を含む。活性増強アミノ酸残基を有する変異型抗体はまた、少なくとも1つの他の望ましい性質が変異後に保持されているかどうかを明らかにするために調べることができる。例えば、抗hIL-12抗体を用いて、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識し、それにより、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること;および3その個々の生殖系列の免疫グロブリン配列にできる限り近い重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を有する抗体の生成について、そして生殖系列配列との差の数に基づいて、どれがヒト免疫応答を引き出す可能性が最も低いかを決定するために調べられる。同じ観察を、望ましい性質または特性の保持が生じているかどうかを明らかにするために、2つ以上の活性増強アミノ酸残基、例えば、少なくとも2つまたは少なくとも3つの活性増強アミノ酸残基を有する抗体について行うことができる。Y61の変異誘発における選択的変異誘発法の使用例が下記に記載されている。H31S→E、L50→YまたはL94G→Yのそれぞれの変異は、抗体の中和活性をそれぞれ改善した。しかし、混合クローンを調べた場合、H31S→EL50→YL94G→Yの混合クローンの活性は、L50→YL94G→YJ965と同じくらいにすぎなかった。従って、CDR1の31位における生殖系列アミノ酸残基をSerからGluに変化させることは、Y61を越えるJ965の改善された活性には必要なかった。従って、選択的変異誘発法により、最終的な活性に寄与し、それにより最終的な抗体の免疫原能を低下させ、かつ抗体の他の所望する性質を維持する変化の最小数が確認された。選択的変異誘発法によって得られるVHおよびVLをコードする単離されたDNAは、第IV節に記載されているように、全長の抗体鎖遺伝子に、Fabフラグメント遺伝子に、またはscFV遺伝子に変換することができる。選択的変異誘発法によって得られるVH領域およびVL領域を発現させるために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターを、第IV節に詳しく記載されているように様々な宿主細胞にトランスフェクションすることができる。好ましい宿主細胞には、原核生物宿主細胞例えば、大腸菌または真核生物宿主細胞例えば、酵母細胞、例えば、S.cerevisaeのいずれかが含まれる。最も好ましい真核生物宿主細胞は、第IV節に詳しく記載される哺乳動物宿主細胞である。選択的変異誘発法は、他の手段による抗体の事前の親和性成熟化を伴うことなく改善された活性を有する抗体の産生方法を提供する。選択的変異誘発法は、活性が改善され、かつ復帰変異にさらされた抗体の産生方法を提供する。選択的変異誘発法はまた、親和性が成熟した抗体の活性を改善する方法を提供する。当業者は、選択的変異誘発法が、当分野で知られている標準的な抗体操作技術において使用できることを認識している。例として、CDRグラフト化抗体、キメラ抗体、scFVフラグメント、全長抗体のFabフラグメント、および他の供給源例えば、トランスジェニックマウスに由来するヒト抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の迅速で大規模な変異分析には、リボソームディスプレー技術を使用するinvitroでの転写および翻訳が含まれる例えば、Hanesら1997Proc.Natl.Acad.Sci.94:4937~4942;DallAcquaら1998、Curr.Opin.Struc.Biol.8:443~450;Heら1997、NucleicAcidRes.25:5132~5134;ならびに米国特許第5,643,768号および同第5,658,754号ともにKawasakiを参照のこと。選択的変異誘発法はまた、リボソームディスプレー技術を使用して選択することができる改善された活性を有する抗体の産生方法を提供する。本発明の方法において、抗体またはその抗原結合部分は、HCVRおよび/またはLCVRのCDRにおいて個々の位置を変化させることによってさらに改変される。このような改変はファージディスプレー抗体において行うことができるが、この方法は、細菌発現系、酵母発現系または哺乳動物細胞発現系などの他のタイプの宿主系において発現される抗体を用いて実施され得るという点で好都合である。改変のために選択されるCDR内の個々の位置は、接触位置および/または過変異位置である位置に基づく。好ましい接触位置および過変異位置は、本明細書中に定義されているが、表3付録A参照に示されており、本発明の方法によるその改変は実施例2に詳しく記載される。好ましい接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択される。好ましい過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群から選択される。より好ましいアミノ酸残基これは好ましい選択的変異誘発位置と呼ばれるは、接触位置および過変異位置の両方であり、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、L50およびL94からなる群から選択される。好ましい活性増強アミノ酸残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択される位置に存在するアミノ酸残基と置換される。より好ましい活性増強アミノ酸残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94の位置に存在するアミノ酸残基と置換される。特に、好ましい活性増強アミノ酸残基は、L50およびL94からなる群から選択される位置に存在するアミノ酸残基と置換される。一般に、本発明の方法は、目的とする元の抗体の重鎖もしくは軽鎖のCDRまたはその抗原結合部分の内部における特に好ましい選択変異誘発位置、接触位置および/または過変異位置を選択すること、活性増強アミノ酸残基の発現を同定するために、そのような個々の位置を例えば、改変された抗体のミニライブラリーを作製するために変異誘発オリゴヌクレオチドを使用する遺伝子手段によってランダムに変異させるか、または位置を特定の所望するアミノ酸に変異させること、および改変された抗体を例えば、非ファージディスプレー宿主系において精製すること、抗原に対する改変された抗体の活性を例えば、BIAcore分析によるkoff速度を測定することによって測定すること、必要な場合には他のCDR位置についてこれらの工程を繰り返すこと、および改善された活性を有することが明らかにされた個々の変異を組み合わせること、およびこの組合せにより、元の抗体またはその抗原結合部分よりもさらに大きな活性例えば、親和性または中和能を有する抗体が得られるかどうかを調べることを含む。従って、1つの実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の、1好ましい選択的変異誘発位置、2接触位置、または3過変異位置を変異のためにこの順で選択し、それにより、選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を同定するすること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製すること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価すること;e必要な場合には、少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置について工程a~dを繰り返すこと;f改善された活性を有することが明らかにされた個々の変異を元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびg混合抗体またはその抗原結合部分の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましくは、選択された抗体1つまたは2つ以上は、上記に記載されているように、元の抗体の少なくとも1つの望ましい特性または性質を失っていないか、または元の抗体の少なくとも1つの望ましい特性または性質を保持している改善された活性を有する。そのような望ましい特性または性質は、当分野で認識されている技術を使用して当業者によって測定または観察され得る。好ましい接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択される。好ましい過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群から選択される。より好ましい選択的変異誘発位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93およびL94からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、L50およびL94からなる群から選択される。別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を変異のために選択すること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製すること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e必要な場合には、少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置について工程a~dを繰り返すこと;f改善された活性を有することが明らかにされた2つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびg2つの活性増強アミノ酸残基を有する混合抗体またはその抗原結合部分の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましい接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択される。好ましい過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群から選択される。より好ましい選択的変異誘発位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93およびL94からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、L50およびL94からなる群から選択される。別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を変異のために選択すること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製すること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e必要な場合には、少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置について工程a~dを繰り返すこと;f改善された活性を有することが明らかにされた3つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびg2つの活性増強アミノ酸残基を有する混合抗体またはその抗原結合部分活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましくは、活性増強アミノ酸残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択される位置に存在するアミノ酸残基と置換される。個々の選択された位置を変異誘発させた後、変異クローンは、どのアミノ酸残基がそれぞれのクローンにおいて選択された位置に導入されているかを同定するために配列決定することができる。少数のクローン例えば、約24個が配列決定のために選択され得るが、これにより10個~15個の重複しない抗体が統計学的に得られるはずであり、これに対して、より多くの数のクローン例えば、60個を越えるが、選択された位置にすべての可能な置換を有する抗体を確実に同定するために配列決定され得る。1つの実施形態において、重鎖および/または軽鎖のCDR3領域内の接触位置および/または過変異位置が変異誘発のために最初に選択される。しかし、ファージディスプレー選択によるCDR3領域のランダム変異誘発によって既にinvitroで親和性の成熟化が生じた抗体の場合には、重鎖および/または軽鎖のCDR1内またはCDR2内の接触位置および/または過変異位置を最初に選択することが好ましいと考えられる。より好ましい実施形態において、重鎖および/または軽鎖のCDR3領域内の好ましい選択的変異誘発位置が変異誘発のために最初に選択される。しかし、ファージディスプレー選択によるCDR3領域のランダム変異誘発によって既にinvitroで親和性の成熟化が生じた抗体の場合には、重鎖および/または軽鎖のCDR1内またはCDR2内の好ましい選択的変異誘発位置を最初に選択することが好ましいと考えられる。別の実施形態において、選択的変異誘発法による選択された抗体の最適化が、下記のように連続的に行われる:H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置が、それぞれが少なくとも2つの他のアミノ酸好ましくは、5個~14個の他のアミノ酸に最初に変異させられ、得られた抗体は、増大した親和性、中和能についてそして可能であれば、本明細書中で議論されている少なくとも1つの他の保持された特性または性質についても特徴付けが行われる。1つの好ましい選択変異誘発位置の変異により、親和性または中和能が全くかまたは十分に増大しない場合、そして好ましい選択的変異誘発位置においてアミノ酸を置換する多数の活性増強アミノ酸を組合せることによってさえも、目標とする活性親和性および/または中和能を含むを満たす混合抗体が得られない場合には、さらなるアミノ酸残基が、選択的変異誘発のために、H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30AおよびL96からなる群から選択され、それぞれが少なくとも2つの他のアミノ酸好ましくは、5個~14個の他のアミノ酸に変異させられ、そして得られた抗体は、増大した親和性、中和能についてそして可能であれば、本明細書中で議論されている少なくとも1つの他の保持された特性または性質についても特徴付けが行われる。H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30AおよびL96からなる群から選択される1個のアミノ酸残基の変異により、活性親和性および/または中和能を含むが全くかまたは十分に増大しない場合、そしてそのような位置においてアミノ酸を置換する多数の活性増強アミノ酸を組合せることによってさえも、目標とする活性親和性および/または目標中和能を含むを満たす混合抗体が得られない場合には、さらなるアミノ酸残基が、選択的変異誘発のために、H33B、H52B、L31Aからなる群から選択され、それぞれが少なくとも2つの他のアミノ酸好ましくは、5個~14個の他のアミノ酸に変異させられ、そして得られた抗体は、増大した親和性、中和能についてそして可能であれば、本明細書中で議論されている少なくとも1つの他の保持されている特性または性質についても特徴付けが行われる。連続した選択的変異誘発法は、所望する活性親和性および中和能を含むを有する抗体が同定されると、上記に概略された任意の工程で終了してもよいことを理解しなければならない。予め選択された位置の変異誘発により、活性増強アミノ酸残基が同定され、しかし混合抗体が、活性親和性および中和能を含むについて示された目標を依然として満たさない場合、および/または同定された活性増強アミノ酸もまた他の所望する特性に影響を及ぼし、従って同定された活性増強アミノ酸が受け入れられない場合には、残ったCDR残基を変異誘発に供することができる第IV節を参照のこと。本発明の方法は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善して、所定の目標とする活性例えば、所定の親和性および/もしくは中和能、ならびに/または所望する性質もしくは特性を得るために使用することができる。従って、本発明は、所定の目標とする活性を得るために抗体またはその抗原結合部分の活性を改善する方法であって、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群から選択される好ましい選択的変異誘発位置を選択すること;c選択された選択的変異誘発位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、これにより変異抗体またはその抗原結合部分の第1の集団を作製すること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記第1の集団の活性を評価して、1個の選択的変異誘発位置の変異により、所定の目標とする活性または部分的な目標とする活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られているかどうかを明らかにすること;e改善された活性を有することが明らかにされた個々の変異を段階的な様式で元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;f混合抗体またはその抗原結合部分の活性を評価して、混合抗体またはその抗原結合部分が所定の目標とする活性または部分的な目標とする活性を有するかどうかを明らかにすること;g工程dまたはfにより、所定の目標とする活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られない場合、または部分的な活性のみを有する抗体が得られる場合には、H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30AおよびL96からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の第2の集団を作製すること;h変異抗体またはその抗原結合部分の前記第2の集団の活性を評価して、H35、H50、H53、H54、H95、H96、H97、H98、L30AおよびL96からなる群から選択される1個のアミノ酸残基の変異により、所定の目標とする活性または部分的な活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られているかどうかを明らかにすること;i改善された活性を有することが明らかにされた工程gの個々の変異を段階的な様式で元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;j混合抗体またはその抗原結合部分の活性を評価して、混合抗体またはその抗原結合部分が所定の目標とする活性または部分的な目標とする活性を有するかどうかを明らかにすること;k工程hまたはjにより、所定の目標とする活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られない場合、または部分的な活性のみを有する抗体が得られる場合には、H33B、H52BおよびL31Aからなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の第3の集団を作製すること;l変異抗体またはその抗原結合部分の前記第3の集団の活性を評価して、H33B、H52BおよびL31Aからなる群から選択される1個のアミノ酸残基の変異により、所定の目標とする活性または部分的な活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られたかどうかを明らかにすること;m改善された活性を有することが明らかにされた工程kの個々の変異を段階的な様式で元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;n混合抗体またはその抗原結合部分の活性を評価して、混合抗体またはその抗原結合部分が所定の目標とする活性を有するかどうかを明らかにし、それにより、所定の目標とする活性を有する抗体またはその抗原結合部分を作製することを含む方法を提供する。多数の変異誘発方法を使用することができ、これには、PCRアセンブリー、Kunkeldut-ung-およびチオホスファートAmershamSculptorキットオリゴヌクレオチド特異的変異誘発が含まれる。広範囲の宿主発現系を、変異抗体を発現させるために使用することができ、これには、細菌発現系、酵母発現系、バキュロウイルス発現系および哺乳動物発現系ならびにファージディスプレー発現系が含まれる。好適な細菌発現ベクターの例として、pUC119Sfiが挙げられる。他の抗体発現系が、当分野では知られており、かつ/または下記の第IV節に記載されている。本発明の方法によって作製された改変抗体またはその抗原結合部分は、選択のためにファージディスプレー法に頼ることなく同定することができる。従って、本発明の方法は、ファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性をファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の組換え抗体またはその抗原結合部分の活性を改善することに関して特に好都合である。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の親和性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の組換え抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を変異のために選択し、それにより、選択された接触位置または過変異位置を同定すること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして前記集団を非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価すること;e必要な場合には、少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置について工程b~dを繰り返すこと;f改善された活性を有することが明らかにされた個々の変異を元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびe混合抗体またはその抗原結合部分の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましい接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択される。好ましい過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群から選択される。より好ましい選択的変異誘発位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93およびL94からなる群から選択される。特に好ましい接触位置は、L50およびL94からなる群から選択される。利用可能な方法の場合、増大した結合親和性および中和能を有し、同時に上記で議論されているような抗体の他の性質または特性を保持した抗体を得ることは不可能であるか、または極めて手間のかかることである。しかし、本発明の方法は、そのような抗体を容易に同定することができる。本発明の方法に供される抗体は任意の供給源から得ることができる。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の組換え抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を変異のために選択し、それにより、選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を同定すること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして前記集団を適切な発現系において発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団を、抗体において保持されなければならない少なくとも1つの他の性質または特性について元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましい実施形態において、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。別の好ましい実施形態において、過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群からの選択的変異誘発位置から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。従って、特定の抗原に対する抗体の親和性を改善しなければならない場合、しかし、ファージディスプレー法またはリボソームディスプレーを含む関連した系がもはや適用することができず、そして他の望ましい性質または特性を保持しなければならない場合に、本発明の方法を使用することができる。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の組換え抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を変異のために選択し、それにより、選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を同定すること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして前記集団を非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を、保持されなければならない少なくとも1つの他の性質または特性について元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価すること;f必要な場合には、工程a~eを、少なくとも1つの他の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置について繰り返すこと;g改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されたことが明らかにされた少なくとも2つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびh混合抗体またはその抗原結合部分の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましい実施形態において、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群の好ましい選択的変異誘発位置から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。別の好ましい実施形態において、過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群からの好ましい選択的変異誘発位置から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群からの好ましい選択的変異誘発位置から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の組換え抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を変異のために選択し、それにより、選択された接触位置または過変異位置を同定すること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして前記集団を非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団を、保持されなければならない少なくとも1つの他の性質または特性について元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価すること;を含む方法を提供する。好ましい実施形態において、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。別の好ましい実施形態において、過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の組換え抗体またはその抗原結合部分を提供すること;b相補性決定領域CDR内の好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を変異のために選択し、それにより、選択された接触位置または過変異位置を同定すること;c前記の選択された好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして前記集団を非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団を、保持されなければならない少なくとも1つの他の性質または特性について元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価すること;f必要な場合には、工程a~eを、少なくとも1つの他の選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置について繰り返すこと;g改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの性質または特性が保持されたことが明らかにされた少なくとも2つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組み合わせて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびh混合抗体またはその抗原結合部分の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましい実施形態において、接触位置は、H30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。別の好ましい実施形態において、過変異位置は、H30、H31、H31B、H32、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L53およびL93からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、選択的変異誘発のための残基は、H30、H31、H31B、H32、H33、H52、H56、H58、L30、L31、L32、L50、L91、L92、L93、L94からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。より好ましい実施形態において、接触位置は、L50およびL94からなる群から選択され、そして他の特性は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。IV.他のCDR残基の改変最後には、所与の抗体抗原ペアにおけるすべてのCDR残基が、活性増強アミノ酸残基として必要であり、かつ/または抗原に対する結合のために、直接的または間接的に必要であり、および/または抗体の他の望ましい性質もしくは特性の保持のために必要であるいずれかの手段により同定される。そのようなCDR残基は好ましい選択的変異誘発位置として示される。特定の状況では、そのような好ましい選択的変異誘発残基はまた、抗体と抗原との同時結晶化および分子モデル化を含む他の手段によって同定できることに留意しなければならない。上記に記載されている好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置に注目して活性増強アミノ酸を同定する好ましい試みが検討し尽された場合、またはさらなる改善が必要とされる場合には、残ったCDR残基を下記に記載されているように改変することができる。抗体は、上記に議論されている実施形態に従って任意の1つまたは2つ以上の接触位置または過変異位置において既に改変されていてもよいが、さらなる改善が必要とされ得ることを理解しなければならない。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された位置を、例えば、少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより、変異抗体、または変異抗体もしくはその抗原結合部分の集団を作製すること;d前記変異抗体の活性、または変異抗体もしくはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e前記変異抗体、または変異抗体もしくはその抗原結合部分の前記集団を、少なくとも1つの他の性質または特性における変化について元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましくは、他の特性または性質は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。1個の残基の変異誘発が十分でない場合、他の残基を含めることができる。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製すること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e工程bで選択された位置、またはH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96における位置のいずれでもない少なくとも1つの他のCDR位置について工程b~dを繰り返すこと;f改善された活性を有することが明らかにされた少なくとも2つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組合せて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびg2つの活性増強アミノ酸残基を有する混合抗体またはその抗原結合部分の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。上記に記載されている接触位置または過変異位置に注目して活性増強アミノ酸を同定する好ましい試みが検討し尽された場合、またはさらなる改善が必要とされ、そして問題とする抗体が変異誘発およびファージディスプレーまたは関連したリボソームディスプレー法によってさらに最適化できない場合には、残ったCDR残基を下記に記載されているように改変することができる。抗体は、上記に議論されている実施形態に従って任意の1つまたは2つ以上の好ましい変異誘発位置、接触位置または過変異位置において既に改変されていてもよいが、さらなる改善が必要とされ得ることを理解しなければならない。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善できない元の組換え抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された接触位置または過変異位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして前記集団を非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団を、少なくとも1つの他の性質または特性における変化について元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましくは、他の特性または性質は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。1個の変異誘発が抗体の親和性を増大させるために十分でない場合には、他の残基を変異誘発に含めることができる。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e工程bで選択された位置、またはH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94における位置のいずれでもない少なくとも1つの他の位置について工程b~dを繰り返すこと;f改善された活性を有することが明らかにされた少なくとも2つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組合せて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびg2つの活性増強アミノ酸残基を有する混合抗体またはその抗原結合部分の活性および他の性質または特性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましくは、他の特性または性質は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。記載されている好ましい選択的変異誘発位置、接触位置または過変異位置に注目して活性増強アミノ酸を同定する好ましい試みを徹底的に検討することができるか、あるいはさらなる改善が必要とされ得るが、抗体の他の性質または特性を保持することが重要である。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を、他の特性に影響を及ぼすことなく改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ他の性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製すること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団を、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、少なくとも1つの他の性質または特性における変化について評価することを含む方法を提供する。好ましくは、他の特性または性質は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。1残基の変異誘発が十分でない場合には、他の残基を含めることができる。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの他の性質または特性が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、a元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製すること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団を、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、少なくとも1つの他の性質または特性における変化について評価することe工程bで選択された位置、またはH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96における位置のいずれでもない少なくとも1つの他のCDR位置について工程b~eを繰り返すこと;f改善された活性を有することが明らかにされ、かつ少なくとも1つの他の性質または特性に影響を及ぼさない少なくとも2つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組合せて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびg2つの活性増強アミノ酸残基を有する混合抗体またはその抗原結合部分の活性および少なくとも1つの他の性質または特性の保持を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。好ましい選択的変異誘発位置、接触残基および過変異残基の変異誘発は、抗体の親和性を十分に増大させることができず、従って変異誘発およびファージディスプレー法または関連するリボソームディスプレー法はもはや有用ではあり得ず、そして抗体の少なくとも1つの他の特性または性質は保持されなければならない。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の親和性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して改善された活性を有する抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団を、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、少なくとも1つの他の性質または特性における変化について評価することを含む方法を提供する。好ましくは、他の特性または性質は、1他のタンパク質またはヒト組織との非交差反応性の維持、2エピトープ認識の維持、すなわち、p40エピトープを、好ましくはp70p40/p35ヘテロダイマーの状況下で認識して、遊離している可溶型p40からの結合妨害を防止すること、および/または3生殖系列の免疫グロブリン配列に類似した抗体を生成することから選択される。1残基の変異誘発が十分でない場合には、他の残基を含めることができる。従って、別の実施形態において、本発明は、抗体またはその抗原結合部分の活性を改善するための方法であって、元の抗体またはその抗原結合部分に対して、改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの他の特性または性質が保持されている抗体またはその抗原結合部分が得られるまで、aファージディスプレーシステムにおける選択によって得られたが、その活性を前記ファージディスプレーシステムにおける変異誘発によってさらに改善することができない元の抗体またはその抗原結合部分を提供すること;bH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96とは異なる相補性決定領域CDR内のアミノ酸残基を変異のために選択すること;c前記の選択された位置を少なくとも2つの他のアミノ酸残基に個々に変異させ、それにより変異抗体またはその抗原結合部分の集団を作製し、そして非ファージディスプレーシステムにおいて発現させること;d変異抗体またはその抗原結合部分の前記集団の活性および少なくとも1つの他の性質または特性の保持を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価し、それにより活性増強アミノ酸残基を同定すること;e工程bで選択された位置、またはH30、H31、H31B、H32、H33、H35、H50、H52、H52A、H53、H54、H56、H58、H95、H96、H97、H98、H101、L30、L31、L32、L34、L50、L52、L53、L55、L91、L92、L93、L94およびL96における位置のいずれでもない少なくとも1つの他のCDR位置について工程b~dを繰り返すこと;f改善された活性を有し、かつ少なくとも1つの他の性質または特性に影響を及ぼさないことが明らかにされた少なくとも2つの個々の活性増強アミノ酸残基を元の抗体またはその抗原結合部分において組合せて、混合抗体またはその抗原結合部分を作製すること;およびg2つの活性増強アミノ酸残基を有する混合抗体またはその抗原結合部分の活性および少なくとも1つの性質または特性の保持を元の抗体またはその抗原結合部分に対して評価することを含む方法を提供する。V.抗体の発現本発明の抗体または抗体の一部は、免疫グロブリンの軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子の宿主細胞における組換え発現によって調製することができる。抗体を組換え発現させるために、宿主細胞は、抗体の免疫グロブリン軽鎖および免疫グロブリン重鎖をコードするDNAフラグメントを有する1つまたは2つ以上の組換え発現ベクターでトランスフェクションされ、その結果、軽鎖および重鎖が宿主細胞において発現され、好ましくは宿主細胞が培養される培地に分泌され、そしてそのような培地から抗体を回収することができる。標準的な組換えDNA方法論を使用して、抗体の重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子が得られ、これらの遺伝子が組換え発現ベクターに組み込まれ、そしてベクターが宿主細胞に導入される。そのような方法論は、例えば、Sambrook、FritschおよびManiatis編、MolecularCloning;ALaboratoryManual、第2版、ColdSpringHarbor、N.Y.1989;Ausubel,F.M.編、CurrentProtocolsinMolecularBiology、GreenePublishingAssociates1989;および米国特許第4,816,397号Bossらに記載されている。Joe9wt抗体またはJoe9wt関連抗体の重鎖可変領域をコードするDNAフラグメントを得るために、ヒトIL-12に特異的な抗体が、第II節に記載されているように、ヒトライブラリーからスクリーニングされ、そして変異されられた。Joe9wtまたはJoe9wt関連のVHセグメントおよびVLセグメントをコードするDNAフラグメントが一旦得られると、これらの配列の変異誘発が、PCR部位特異的変異誘発PCR産物が変異を含有するように変異ヌクレオチドがPCRプライマーに取り込まれているPCR媒介変異誘発または他の部位特異的な変異誘発法などの標準的な方法によって行われる。望ましい一定レベルの活性および結合特異性/親和性を示したヒトIL-12抗体、例えばJ695は、標準的な組換えDNA技術によって、例えば、可変領域遺伝子を全長の抗体鎖遺伝子またはFabフラグメント遺伝子またはscFv遺伝子に変換するためにさらに操作された。これらの操作において、VLまたはVHをコードするDNAフラグメントは、抗体定常領域または柔軟なリンカーなどの別のタンパク質をコードする別のDNAフラグメントに機能的に連結される。これに関連して使用されている用語機能的に連結されるは、2つのDNAフラグメントによってコードされるアミノ酸配列の読み枠が合い続けるように2つのDNAフラグメントが結合されることを意味するものである。VH領域をコードする単離されたDNAは、VHをコードするDNAを、重鎖の定常領域CH1、CH2およびCH3をコードする別のDNA分子に機能的に連結することによって全長の重鎖遺伝子に変換することができる。ヒトの重鎖定常領域遺伝子の配列は当分野では知られている例えば、Kabat,E.A.他1991、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国保健社会福祉省、NIH刊行物番号91-3242を参照のこと。また、これらの領域を含むDNAフラグメントは標準的なPCR増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、KabatKabat,E.A.他1991、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国保健社会福祉省、NIH刊行物番号91-3242に記載されているように、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgMまたはIgDの定常領域およびその任意のアロタイプ変化体であり得るが、最も好ましくはIgG1またはIgG4の定常領域である。Fabフラグメントの重鎖遺伝子の場合、VHをコードするDNAは、重鎖CH1定常領域のみをコードする別のDNA分子に機能的に連結することができる。VL領域をコードする単離されたDNAは、VLをコードするDNAを、軽鎖定常領域CLをコードする別のDNA分子に機能的に連結することによって全長の軽鎖遺伝子ならびにFab軽鎖遺伝子に変換することができる。ヒトの軽鎖定常領域遺伝子の配列は当分野では知られている例えば、Kabat,E.A.ら1991、SequencesofProteinsofImmunologicalInterest、第5版、米国保健社会福祉省、NIH刊行物番号91-3242を参照のこと。また、これらの領域を含むDNAフラグメントは標準的なPCR増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、κ定常領域またはλ定常領域であり得るが、最も好ましくはλ定常領域である。scFv遺伝子を作製するために、VHおよびVLをコードするDNAフラグメントは、VH配列およびVL配列が、柔軟なリンカーにより結合されたVL領域およびVH領域を有する連続した単一鎖タンパク質として発現され得るように、柔軟なリンカー、例えば、アミノ酸配列Gly4-Ser3をコードする別のフラグメントに機能的に連結される例えば、Birdら1988、Science、242:423~426;Hustonら1988、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、85:5879~5883;McCaffertyら、Nature1990、348:552~554を参照のこと。本発明の抗体または抗体の一部を発現させるために、上記に記載されているようにして得られた部分長または全長の軽鎖および重鎖をコードするDNAは、それらの遺伝子が転写制御配列および翻訳制御配列に機能的に連結されるように発現ベクターに挿入される。これに関連して、用語機能的に連結されるは、ベクター内の転写制御配列および翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するその意図された機能を果たすように抗体遺伝子がベクター内に連結されることを意味するものとする。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選ばれる。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は別々のベクターに挿入することができる。あるいは、より典型的には、両方の遺伝子は同じ発現ベクターに挿入される。抗体遺伝子は、標準的な方法例えば、抗体遺伝子フラグメントとベクターにおける相補的な制限部位の連結、または制限部位が存在しない場合には平滑端連結によって発現ベクターに挿入される。J695またはJ695関連の軽鎖配列または重鎖配列を挿入する前に、発現ベクターは抗体の定常領域配列を既に有していてもよい。例えば、J695またはJ695関連のVH配列およびVL配列を全長の抗体遺伝子に変換する1つの方法は、そのような配列を、重鎖定常領域および軽鎖定常領域をそれぞれ既にコードする発現ベクターに、VHセグメントがベクター内のCHセグメントに機能的に連結され、かつVLセグメントがベクター内のCLセグメントに機能的に連結されるように挿入することである。さらにあるいは代替として、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードすることができる。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが、抗体鎖遺伝子のアミノ末端に読み枠を合わせて連結されるようにベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンのシグナルペプチドまたは異種のシグナルペプチドすなわち、免疫グロブリンでないタンパク質に由来するシグナルペプチドであり得る。抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、抗体鎖遺伝子の宿主細胞における発現を制御する調節配列を有する。用語調節配列は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント例えば、ポリアデニル化シグナルを含むものとする。そのような調節配列は、例えば、Goeddel;GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185、AcademicPress、SanDiego、CA、1990年に記載されている。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望するタンパク質の発現レベルなどのような要因に依存し得ることを当業者は理解している。哺乳動物宿主細胞での発現に好ましい調節配列には、哺乳動物細胞での高レベルのタンパク質発現をもたらすウイルスエレメントが含まれ、例えば、サイトメガロウイルスCMVに由来するプロモーターおよび/またはエンハンサーCMVプロモーター/エンハンサーなど、シミアンウイルス40SV40に由来するプロモーターおよび/またはエンハンサーSV40プロモーター/エンハンサーなど、アデノウイルスに由来するプロモーターおよび/またはエンハンサー例えば、アデノウイルス主要後期プロモーターAdMLP、およびポリオーマに由来するプロモーターおよび/またはエンハンサーなどが挙げられる。ウイルスの調節エレメントのさらなる説明およびその配列については、例えば、米国特許第5,168,062号Stinski、米国特許第4,510,245号Bellら、および米国特許第4,968,615号Schaffnerら、米国特許第5,464,758号Bujardらおよび米国特許第5,654,168号Bujardらを参照のこと。抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列例えば、複製起点および選択マーカー遺伝子などのさらなる配列を含むことができる。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする例えば、米国特許第4,399,216号、同第4,634,665号および同第5,179,017号、これらはすべてAxelらによるを参照のこと。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、G418、ヒグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を、ベクターが導入されている宿主細胞に付与する。好ましい選択マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼDHFR遺伝子メトトレキサートによる選択/増幅とともにdhfr-宿主細胞において使用される、およびneo遺伝子G418選択の場合が含まれる。軽鎖および重鎖を発現させる場合、軽鎖および重鎖をコードする発現ベクター1つまたは2つ以上は標準的な方法で宿主細胞にトランスフェクションされる。用語トランスフェクションの様々な形態は、原核生物または真核生物の宿主細胞に外来DNAを導入するために広く使用されている広範囲の技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、DEAE-デキストラントランスフェクションなどの技術を包含するものとする。本発明の抗体を原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞のいずれかで発現させることは理論的には可能であるが、真核生物細胞最も好ましくは哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が最も好ましい。これは、そのような真核生物細胞特に、哺乳動物細胞は、正しく折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立てて分泌する可能性が原核生物細胞よりも大きいからである。本発明の組換え抗体を発現させるために好ましい哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞例えば、R.J.KaufmanおよびP.A.Sharp1982、Mol.Biol.159:601~621に記載されているようにDHFR選択マーカーとともに使用される、UrlaubおよびChasin、1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA、77:4216~4220に記載されたdhfr-CHO細胞を含む、NS0ミエローマ細胞、COS細胞、およびSP2細胞が含まれる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入された場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現、より好ましくは、宿主細胞が増殖している培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたって宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を使用して培養培地から回収することができる。宿主細胞はまた、FabフラグメントまたはscFv分子などの完全な抗体の一部を産生させるために使用することができる。上記手順における様々な変化は本発明の範囲に含まれることが理解される。例えば、宿主細胞を、本発明の抗体の軽鎖または重鎖の両方ではなくいずれかをコードするDNAでトランスフェクションすることが望ましい。組換えDNA技術はまた、hIL-12への結合に対して必要でない軽鎖および重鎖の一方または両方をコードするDNAの一部またはすべてを除くために使用することもできる。そのような短縮型DNA分子から発現された分子もまた、本発明の抗体によって包含される。さらに、1つの重鎖および1つの軽鎖が本発明の抗体であり、それ以外の重鎖および軽鎖がhIL-12以外の抗原に対して特異的である二官能性抗体を、標準的な化学的架橋法により本発明の抗体を別の抗体に架橋することによって作製することができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分の組換え発現に好ましい系において、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによってdhfr-CHO細胞に導入される。組換え発現ベクター内において、抗体重鎖遺伝子および抗体軽鎖遺伝子はそれぞれ、遺伝子の高レベルの転写をもたらすエンハンサー/プロモーター調節エレメント例えば、SV40、CMV、アデノウイルスなどに由来し、例えば、CMVエンハンサー/AdMLPプロモーターの調節エレメント、またはSV40エンハンサー/AdMLPプロモーターの調節エレメントに機能的に連結される。組換え発現ベクターはまた、ベクターでトランスフェクションされたCHO細胞の選択を、メトトレキサートによる選択/増幅を使用して可能にするDHFR遺伝子を有する。選択された形質転換体の宿主細胞は、抗体の重鎖および軽鎖が発現されるように培養され、そして完全な抗体が培養培地から回収される。標準的な分子生物学的技術を使用して、組換え発現ベクターが調製され、宿主細胞がトランスフェクションされ、形質転換体が選択され、宿主細胞が培養され、そして抗体が培養培地から回収される。本発明の抗体またはその抗原結合部分を、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関して遺伝子組換えである動物例えば、マウスにおいて発現させることができる例えば、Taylor,L.D.ら1992、Nucl.AcidsRes.20:6287~6295を参照のこと。植物細胞もまた、本発明の抗体またはその抗原結合部分を発現するトランスジェニック植物を作製するために改変することができる。上記を考慮すれば、本発明の別の態様は、本発明の抗体または抗体の一部を組換え発現させるために使用され得る核酸、ベクターおよび宿主細胞の組成物に関する。好ましくは、本発明は、J695のCDRをコードするか、あるいはJ695の完全な重鎖可変領域および/または軽鎖可変領域をコードする単離された核酸を特徴とする。従って、1つの実施形態において、本発明は、配列番号25のアミノ酸配列を含むJ695の重鎖CDR3をコードする抗体重鎖可変領域をコードする単離された核酸を特徴とする。好ましくは、抗体重鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号27のアミノ酸配列を含むJ695重鎖CDR2をさらにコードする。より好ましくは、抗体重鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号29のアミノ酸配列を含むJ695重鎖CDR1をさらにコードする。さらにより好ましくは、単離された核酸は、配列番号31のアミノ酸配列J695の全VH領域を含む抗体重鎖可変領域をコードする。他の実施形態において、本発明は、配列番号26のアミノ酸配列を含むJ695軽鎖CDR3をコードする抗体軽鎖可変領域をコードする単離された核酸を特徴とする。好ましくは、抗体軽鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号28のアミノ酸配列を含むJ695軽鎖CDR2をさらにコードする。より好ましくは、抗体軽鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号30のアミノ酸配列を含むJ695軽鎖CDR1をさらにコードする。さらにより好ましくは、単離された核酸は、配列番号32のアミノ酸配列J695の全VL領域を含む抗体軽鎖可変領域をコードする。本発明はまた、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを提供する。例えば、1つの実施形態において、本発明は、a配列番号31のアミノ酸配列を含む可変領域を有する抗体重鎖;およびb配列番号32のアミノ酸配列を含む可変領域を有する抗体軽鎖をコードする組換え発現ベクターを提供する。本発明はまた、本発明の組換え発現ベクターの1つまたは2つ以上が導入されている宿主細胞を提供する。好ましくは、宿主細胞は哺乳動物宿主細胞であり、より好ましくは、宿主細胞はCHO細胞、NS0細胞またはCOS細胞である。なおさらに、本発明は、本発明の組換えヒト抗体を、本発明の組換えヒト抗体が合成されるまで本発明の宿主細胞を好適な培養培地で培養することによって合成する方法を提供する。この方法は、組換えヒト抗体を培養培地から単離することをさらに含むことができる。VI.薬学的組成物および薬学的投与本発明の抗体および抗体の一部は、患者への投与に好適な薬学的組成物に配合することができる。典型的には、薬学的組成物は、本発明の抗体または抗体の一部と、薬学的に許容可能なキャリアとを含む。本明細書中で使用されている薬学的に許容可能なキャリアには、生理学的に適合し得る任意のすべての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に許容可能なキャリアの例には、水、生理食塩水、リン酸塩緩衝化生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの1つまたは2つ以上、ならびにそれらの組合せが含まれる。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、マンニトールなどのポリアルコール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを組成物に含めることは好ましい。薬学的に許容可能なキャリアはさらに、抗体または抗体の一部の保存寿命または有効性を高める、湿潤化剤または乳化剤、保存剤または緩衝剤などの補助物質を微量含むことができる。本発明の抗体および抗体の一部は、非経口投与に好適な薬学的組成物に配合することができる。好ましくは、抗体または抗体の一部は、0.1mg/ml~250mg/mlの抗体を含む注射可能な溶液として調製される。注射可能な溶液は、フリントガラスまたはアンバー色のバイアル、アンプルあるいは充填済みシリンジにおける液体投薬形態または凍結乾燥投薬形態のいずれかから構成され得る。緩衝剤は、pHが5.0~7.0最適にはpH6.0であるL-ヒスチジン1mM~50mM、最適には5mM~10mMであり得る。他の好適な緩衝剤には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。塩化ナトリウムが、溶液の毒性を改変するために、0mM~300mMの濃度最適には、液体投薬形態の場合には150mMで使用され得る。凍結保護剤、主として0~10のスクロース最適には0.5~1.0を凍結乾燥投薬形態の場合には含めることができる。他の好適な凍結保護剤には、トレハロースおよびラクトースが含まれる。増量剤、主として1~10のマンニトール最適には2~4を凍結乾燥投薬形態の場合には含めることができる。安定化剤、主として1mM~50mMのL-メチオニン最適には5mM~10mMを液体投薬形態または凍結乾燥投薬形態の両方において使用することができる。他の好適な増量剤には、グリセリン、アルギニンが含まれ、好適な増量剤は0~0.05のポリソルベート-80最適には0.005~0.01として含まれ得る。さらなる界面活性剤には、ポリソルベート20界面活性剤およびBRIJ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、薬学的組成物は抗体を約0.01mg/kg~10mg/kgの投薬量で含む。抗体のより好ましい投薬量には、隔週毎に投与される場合には1mg/kgが含まれ、あるいは毎週投与される場合には0.3mg/kgが含まれる。本発明の組成物は様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体および固体の形態が含まれ、例えば、液体溶液剤例えば、注射可能な溶液剤および注入可能な溶液剤、分散剤または懸濁剤、錠剤、ピル剤、粉末剤、リポソーム剤および坐薬などが含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療的適用に依存する。典型的な好ましい組成物は、他の抗体を用いてヒトの受動免疫化のために使用される組成物に類似する組成物などの注射可能な溶液剤または注入可能な溶液剤の形態である。好ましい投与様式は、非経口的例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内である。好ましい実施形態において、抗体は静脈内への注入または注射によって投与される。別の好ましい実施形態において、抗体は筋肉内注射または皮下注射によって投与される。治療用組成物は、典型的には、製造条件および保存条件で無菌で安定でなければならない。組成物は、大きな薬物濃度に対して好適な溶液剤、マイクロエマルション剤、分散剤、リポソーム剤または他の指示された構造体として配合することができる。無菌の注射可能な溶液剤は、必要量の活性化合物すなわち、抗体または抗体の一部を適切な溶媒に、必要な場合には上記に列記された成分の1つまたは組合せとともに配合し、その後、ろ過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散剤は、活性化合物を、分散媒体基剤と、上記に列記された成分に由来する必要とされる他の成分とを含有する無菌のビヒクルに配合することによって調製される。無菌の注射可能な溶液剤を調製するための無菌の凍結乾燥粉末の場合、好ましい調製方法は、有効成分と、事前に無菌ろ過されたその溶液に由来するその任意のさらなる所望成分との粉末を作製する真空乾燥および噴霧乾燥である。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することによって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズを維持することによって、そして界面活性剤を使用することによって維持され得る。注射可能な組成物の持続した吸収が、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物に含ませることによってもたらされ得る。本発明の抗体および抗体の一部は、当分野で知られている様々な方法で投与することができるが、多くの治療的適用の場合、好ましい投与経路/様式は、皮下注射、静脈内注射または静脈内注入である。当業者は理解しているように、投与経路および/または投与様式は、所望する結果に依存して変化する。ある種の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出配合物などの、迅速な放出から化合物を保護するキャリアとともに調製することができる。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセタート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などを使用することができる。そのような配合物を調製するための多くの方法が特許化され、あるいは当業者には一般に知られている。例えば、SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystemsJ.R.Robinson編、MarcelDekker,Inc.、NewYork、1978を参照のこと。ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗体の一部は、例えば、不活性な希釈剤または吸収可能な食用キャリアとともに経口投与することができる。化合物および所望する場合には他の成分はまた、硬殻ゼラチンカプセルまたは軟殻ゼラチンカプセルに充填することができ、あるいは錠剤に圧縮成型することができ、あるいは患者の食事に直接加えることができる。経口的な治療投与の場合、化合物は、賦形剤とともに配合され、そして摂取可能な錠剤、頬錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤などの形態で使用することができる。本発明の化合物を非経口投与以外で投与するためには、化合物をその不活化を防止する物質でコーティングすること、または化合物をその不活化を防止する物質とともに同時投与することが必要であり得る。補助的な活性化合物もまた組成物に配合することができる。ある種の実施形態において、本発明の抗体または抗体の一部は、IL-12活性が有害である疾患を処置するために有用である1つまたは2つ以上のさらなる治療剤とともに同時に配合され、かつ/または同時に投与される。例えば、本発明の抗IL-12抗体またはその抗体の一は、他の標的と結合する1つまたは2つ以上のさらなる抗体例えば、他のサイトカインと結合する抗体、または細胞表面分子と結合する抗体とともに同時に配合され、かつ/または同時に投与され得る。さらに、本発明の1つまたは2つ以上の抗体は2つ以上の上記の治療剤との組合せで使用することができる。そのような組合せ治療は、投与された治療剤のより少ない投薬量を都合良く利用することができ、従って、様々な単独療法に伴う考えられる毒性または合併症を避けることができる。本発明の抗体が組合せ療法の一部として使用された場合、抗体が単独で患者に投与されるときよりも少ない用量の抗体が望ましいと考えられると当業者は理解している例えば、所望する治療効果を達成するために、相乗的な治療効果が、より少ない用量の抗体の使用を可能にする組合せ療法の使用によって達成され得る。インターロイキン12は、様々な免疫因子および炎症性因子を含む様々な疾患に伴う病理学において重要な役割を果たしている。このような疾患を下記に挙げるが、それらに限定されない:慢性関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー疾患、乾癬、硬皮性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性または慢性の免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、汎発性血管内凝固、川崎病、グレーヴズ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、ヘノッホ-スエーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的脈管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫病、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散在性のI型多腺性欠損症およびII型多腺性欠損症、シュミット症候群、成人急性呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、セロネガティブ関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、腸性滑膜炎、クラミジア菌、エルシニア菌およびサルモネラ菌が関連する関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患/アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状IgA病、自己免疫性溶血性貧血、クームズ陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎/ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全病症候群、後天性免疫不全関連疾患、C型肝炎、分類不能型免疫不全分類不能型低ガンマグロブリン血症、拡張型心筋症、雌性不妊症、卵巣不全、早期の卵巣不全、線維性肺疾患、突発性線維性肺胞炎、後炎症性間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患に関連する間質性肺疾患、混合型結合組織疾患に関連する肺疾患、全身性硬化症に関連する間質性肺疾患、慢性関節リウマチに関連する間質性肺疾患、全身性エリテマトーデスに関連する肺疾患、皮膚筋炎/多発性筋症に関連する肺疾患、シェーグレン病に関連する肺疾患、強直性脊椎炎に関連する肺疾患、血管炎性散在性肺疾患、ヘモジデリン沈着症に関連する肺疾患、薬物誘導の間質性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後の間質性肺疾患、痛風、自己免疫性肝炎、1型自己免疫性肝炎古典的な自己免疫性肝炎またはルポイド肝炎、2型自己免疫性肝炎抗LKM抗体肝炎、自己免疫媒介の低血糖症、黒色表皮肥厚症を伴うB型インスリン耐性、上皮小体低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患NOS、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的脈管炎、ライム病、円盤状エリテマトーデス、雄性不妊症特発性またはNOS、精子自己免疫性、多発性硬化症すべてのサブタイプ、インスリン依存性糖尿病、交感性眼炎、結合組織疾患に対して二次的な肺性高血圧症、グッドパスチャー症候群、多発性動脈炎の肺発現、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、高安病/動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症橋本病、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液浮腫、水晶体近因性ブドウ膜炎、原発性の脈管炎および白斑。本発明のヒト抗体および抗体の一部は、リウマチ様脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎を含む自己免疫疾患を処置するために、特に、炎症を伴う自己免疫疾患を処置するために使用することができる。好ましくは、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、第VII節にさらに詳しく記載されているように、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病および乾癬を処置するために使用される。本発明のヒト抗体または抗体の一部は、自己免疫性疾患および炎症性疾患の処置において有用な1つまたは2つ以上のさらなる治療剤とともに投与することができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、そのような疾患を処置するために、単独で、あるいは組み合わせて使用することができる。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、単独で、あるいはさらなる薬剤、例えば治療剤と組合せて使用できることを理解しなければならない。そのようなさらなる薬剤は、意図された目的のために当業者によって選択される。例えば、さらなる治療剤は、本発明の抗体によって処置される疾患または状態を処置するために有用であるとして当分野で認識されている治療剤であり得る。さらなる薬剤はまた、有益な属性を治療組成物に付与する薬剤であり、例えば、組成物の粘性をもたらす薬剤であり得る。本発明に含まれ得る組合せ物は、意図された目的に関して有用であるそのような組合せ物であることをさらに理解しなければならない。下記に示される薬剤は例示目的のためであり、限定することを意図していない。本発明の一部である組合せ物は、本発明の抗体、および下記の列記から選択される少なくとも1つのさらなる薬剤であり得る。本発明の組合せ物はまた、形成された組成物がその意図された機能を発揮し得るように組合せがなされている場合には2つ以上のさらなる薬剤、例えば、2つまたは3つのさらなる薬剤を含むことができる。好ましい組合せ物は、イブプロフェンのような薬物を含む、NSAIDSと呼ばれることもある非ステロイド性抗炎症薬である。他の好ましい組合せ物は、プレドニソロンを含むコルチコステロイド類である;本発明の抗IL-12抗体と組み合わせて患者を処置した場合、必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによってステロイド使用のよく知られた副作用を低下させることができ、あるいは除去することさえできる。本発明の抗体または抗体の一部と組み合わることができる慢性関節リウマチに対する治療剤の非限定的な実施例を下記に挙げる:サイトカイン抑制抗炎症薬CSAID;他のヒトサイトカインまたは成長因子例えば、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSFおよびPDGFに対する抗体またはアンタゴニスト。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD45、CD69、CD80B7.1、CD86B7.2、CD90またはそれらのリガンドCD154gp39またはCD40Lを含むなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。治療薬の好ましい組合せは、様々な点で自己免疫及びその後の炎症カスケードに干渉しうる;好ましい例は、キメラ、ヒューマナイズ又はヒトTNF抗体、D2E71996年2月9日出願の米国特許出願番号第08/599,226号、cA2RemicadeTM、CDP571、抗TNF抗体断片例えばCDP870、及び可溶性p55又はp75TNFレセプタのようなTNF拮抗物質、それらの誘導体p75TNFRIgGEnbrelTM又はp55TNFRIgGLenercept、可溶性IL-13レセプタsIL-13、そしてTNFα変換酵素TACE阻害因子も含む;同様にIL-1阻害因子例えばVx740のようなインターロイキン-1-変換酵素阻害因子、又はIL-IRA等も同じ理由から有効と考えられる。他の好ましい組合せは、インターロイキン11、抗P7s及びp-セレクチン糖タンパクリガンドPSGLを含む。さらにもう1つの好ましい組合せは、IL-12機能と平行して、依存して又は協力して作用しうる、自己免疫応答の他のキープレイヤーである;特に好ましいのは、IL-18抗体又は可溶性IL-18レセプタを含むIL-18拮抗物質、あるいはIL-18結合タンパクである。IL-12とIL-18はオーバーラップするが異なる機能を持つことが示されており、両者に対する拮抗物質の組合せが最も有効であると考えられる。さらにもう1つの好ましい組合せは、非枯渇性non-depleting抗CD4阻害因子である。さらなる他の好ましい組合せは、抗体、可溶性レセプタ又は拮抗性リガンドを含む共同刺激経路、CD80B7.1又はCD86B7.2を包含する。本発明の抗体、又はその抗原結合部分は、メトトレキセート、6-MP、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジンクロロキニン/ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、金チオマレート筋肉内及び経口、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド経口、吸入及び局所注入、β-2アドレナリン作動性レセプタ左様物質サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール、キサンチンテオフィリン、アミノフィリン、クロモグリケート、ネドクロミル、ケトティフェン、イプラトロピウム及びオキシトロピウム、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノレートモフェチル、レフルノミド、NSAID、例えばイブプロフェン、プレドニゾロンのようなコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害因子、アデノシン作用物質、抗血栓薬、補体阻害因子、アドレナリン作動薬、TNFα又はIL-1例えばIRAK、NIK、IKK、p38又はMAPキナーゼ阻害因子のような前炎症性サイトカインによりシグナル伝達に干渉する物質、IL-1β変換酵素阻害因子例えばVx740、抗P7s、p-セレクチン糖タンパクリガンドPSGL、TNFα変換酵素TACE阻害因子、キナーゼ阻害因子のようなT細胞シグナル伝達阻害因子、メタロプロテイナーゼ阻害因子、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害因子、可溶性サイトカインレセプタ及びその誘導体例えば可溶性p55又はp75TNFレセプタ及びその誘導体、P75TNFRIgGEnbrelTM又はp55TNFRIgGLenercept、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、可溶性IL-13レセプタsIL-13、及び抗炎症性サイトカイン例えばIL-4、IL-10、IL-11、IL-13及びTGFβのような物質とも組み合わせることができる。好ましい組合せは、メトトレキセート又はレフルノミド、そして中等度又は重度の慢性関節リウマチの症例ではシクロスポリンを含む。本発明の抗体又は抗体部分と組み合わせることができる炎症性腸疾患のための治療薬の非制限的な例は次のものを含む:ブデノシド;表皮成長因子;コルチコステロイド;シクロスポリン、スルファサラジン;アミノサリシレート;6-メルカプトプリン;アザチオプリン;メトロニダゾール;リポオキシゲナーゼ阻害因子;メサラミン;オルサラジン;バルサラジド;抗酸化薬;トロンボキサン阻害因子;IL-1レセプタ拮抗物質;抗IL-1βモノクローナル抗体;抗IL-6モノクローナル抗体;成長因子;エラスターゼ阻害因子;ピリジニル-イミダゾール化合物;他のヒトサイトカイン又は成長因子に対する抗体又は拮抗物質、例えばTNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF、及びPDGF。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90又はそれらのリガンドのような細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はまた、メトトレキセート、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノレートモフェチル、レフルノミド、NSAID、例えばイブプロフェン、プレドニゾロンのようなコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害因子、アデノシン作用物質、抗血栓薬、補体阻害因子、アドレナリン作動薬、TNFα又はIL-1例えばIRAK、NIK、IKK、p38又はMAPキナーゼ阻害因子のような前炎症性サイトカインによりシグナル伝達に干渉する物質、IL-1β変換酵素阻害因子例えばVx740、抗P7s、p-セレクチン糖タンパクリガンドPSGL、TNFα変換酵素阻害因子、キナーゼ阻害因子のようなT細胞シグナル伝達阻害因子、メタロプロテイナーゼ阻害因子、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害因子、可溶性サイトカインレセプタ及びその誘導体例えば可溶性p55又はp75TNFレセプタ、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、可溶性IL-13レセプタsIL-13、及び抗炎症性サイトカイン例えばIL-4、IL-10、IL-11、IL-13及びTGFβのような物質とも組み合わせることができる。抗体又は抗原結合部分と組み合わせることができるクローン病のための治療薬の好ましい例は次のものを含む:TNF拮抗物質、例えば抗TNF抗体、D2E71996年2月9日出願の米国特許出願番号第08/599,226号、cA2RemicadeTM、CDP571、抗TNF抗体断片例えばCDP870、TNFR-Ig構築物p75TNFRIgGEnbrelTM及びp55TNFRIgGLenercept、抗P7s、p-セレクチン糖タンパクリガンドPSGL、可溶性IL-13レセプタsIL-13、及びPDE4阻害因子。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えばブデノシド及びデキサメタゾンと組み合わせることができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はまた、スルファサラジン、5-アミノサリチル酸及びオルサラジン、及びIL-1のような前炎症性サイトカインの合成又は作用に干渉する物質、例えばIL-1β変換酵素阻害因子例えばVx740及びIL-1raのような物質と組み合わせることもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はまた、T細胞シグナル伝達阻害因子、例えばチロシンキナーゼ阻害因子、6-メルカプトプリンと共に使用することもできる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はIL-11と組み合わせることができる。本発明の抗体又は抗体部分と組み合わせることができる多発性硬化症のための治療薬の非制限的な例は次のものを含む:コルチコステロイド;プレドニゾロン;メチルプレドニゾロン;アザチオプリン;シクロホスファミド;シクロスポリン;メトトレキセート;4-アミノピリジン;チザニジン;インターフェロン-β1aAvonex;Biogen;インターフェロン-β1bBetaseron;Chiron/Berlex;コポリマー1Cop-1;Copaxone;TevaPharmaceuticalIndustries,Inc.;高圧酸素;静脈内免疫グロブリン;クラブリビン;TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF、及びPDGF。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90又はそれらのリガンドのような細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。本発明の抗体又はその抗原結合部分はまた、メトトレキセート、シクロスポリン、FK506、ラパマイシン、ミコフェノレートモフェチル、レフルノミド、NSAID、例えばイブプロフェン、プレドニゾロンのようなコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害因子、アデノシン作用物質、抗血栓薬、補体阻害因子、アドレナリン作動薬、TNFα又はIL-1例えばIRAK、NIK、IKK、p38又はMAPキナーゼ阻害因子のような前炎症性サイトカインによりシグナル伝達に干渉する物質、IL-1β変換酵素阻害因子例えばVx740、抗P7s、p-セレクチン糖タンパクリガンドPSGL、TACE阻害因子、キナーゼ阻害因子のようなT細胞シグナル伝達阻害因子、メタロプロテイナーゼ阻害因子、スルファサラジン、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害因子、可溶性サイトカインレセプタ及びその誘導体例えば可溶性p55又はp75TNFレセプタ、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、可溶性IL-13レセプタsIL-13、及び抗炎症性サイトカイン例えばIL-4、IL-10、IL-13及びTGFβのような物質とも組み合わせることができる。当該抗体又は抗体部分と組み合わせることができる多発性硬化症のための治療薬の好ましい例は、インターフェロン-β、例えばIFNβ1a及びIFN-β1b;コパキソン、コルチコステロイド、IL-1阻害因子、TNF阻害因子、及びCD40リガンド及びCD80に対する抗体を含む。本発明の製薬組成物は、本発明の抗体又は抗体部分の治療上の有効量又は予防上の有効量を含みうる。治療上の有効量は、所望する治療成績を達成するための、必要な用量と期間での有効量をさす。抗体又は抗体部分の治療上の有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別及び体重、ならびに抗体又は抗体部分が個体において所望する応答を誘発する能力のような因子に従って変化しうる。治療上の有効量はまた、抗体又は抗体部分の治療上の有益な作用が毒性又は有害作用に勝る量である。予防上の有効量は、所望する予防成績を達成するための、必要な用量と期間での有効量をさす。典型的には、予防用量は疾患の発症前又は疾患の早期に被験者において使用されるので、予防上の有効量は治療上の有効量よりも低いであろう。用量レジメンは至適所望応答例えば治療又は予防応答を提供するように調節することができる。例えば、単回のボーラスで投与するか、経時的に数回の分割用量を投与するか、又は治療状況の緊急性によって求められるように比例的に減少又は増加することができる。投与の容易さと用量の均一性のために投与単位形態の非経口組成物を製剤することは特に好都合である。ここで使用するとき投与単位形態は、治療する哺乳類被験者の単位投与として適した物理的に分離したユニットを指す;各々のユニットは、必要な製薬担体と結合して所望する治療効果を生じるように計算された、あらかじめ定められた量の活性化合物を含む。本発明の投与ユニット形態についての規格は、a活性化合物の独自特性と達成すべき特定の治療又は予防効果、及びb個体における感受性の治療のためにそのような活性化合物を調合する技術に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。本発明の抗体又は抗体部分の治療上又は予防上の有効量の例示としての非制限的な範囲、0.01-20mg/kg、より好ましくは1-10mg/kg、さらにより好ましくは0.3-1mg/kgである。用量の数値は、軽減すべき状態の種類と重症度によって変化しうることに留意しなければならない。さらに、個々の被験者について、個体の必要性及び組成物の投与を行う又は投与を監視する者の専門的判断に従って時間の経過と共に個々の用量レジメンを調節すべきであること、またここに示す用量範囲は単なる例示であり、特許請求される組成物の範囲又は実施を制限することを意図しないことは明白である。VII.本発明の抗体の使用hIL-12に結合する能力を考慮すると、本発明の抗hIL-12抗体又はその部分は、酵素結合イムノソルベント検定法ELISA、放射免疫測定法RIA又は免疫組織化学のような従来の免疫測定法を使用して、hIL-12を検出する例えば血清又は血漿のような生物学的サンプルにおいてために使用できる。本発明は、生物学的サンプルを本発明の抗体又は抗体部分に接触させ、hIL-12に結合した抗体又は抗体部分又は結合していない抗体又は抗体部分のいずれかを検出し、それによって生物学的サンプル中のhIL-12を検出することを含む、生物学的サンプルにおいてhIL-12を検出するための方法を提供する。結合又は非結合抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質で抗体を直接又は間接的に標識する。適当な検出可能物質は、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光材料、及び放射性物質を含む。適当な酵素の例は、ホースラディシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼを含む;適当な補欠分子族複合体の例は、ストレプタビジン/ビオチン及びアビジン/ビオチンを含む;適当な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリトリンを含む;発光材料の例はルミノールを含む;そして適当な放射性物質の例は、125I、131I、35S又は3Hを含む。抗体を標識する代わりに、検出可能な物質で標識したrhIL-12標準と標識していない抗hIL-12抗体を使用する競合免疫測定法により、hIL-12を生物学的液体中で検定することができる。このアッセイでは、生物学的サンプル、標識rhIL-12標準及び抗hIL-12抗体を一緒にして、非標識抗体に結合した標識rhIL-12標準の量を測定する。生物学的サンプル中のhIL-12の量は、抗hIL-12抗体に結合した標識rhIL-12標準の量に反比例する。本発明のY61及びJ695抗体もヒト以外の種から、特に霊長類からIL-12を検出するために使用できる。例えば、Y61は、カニクイザルcynomolgusザル及びアカゲザルにおいてIL-12を検出するために使用できる。J695は、カニクイザルザル、アカゲザル及びヒヒにおいてIL-12を検出するために使用できる。しかし、いずれの抗体もマウスあるいはラットのIL-12とは交叉反応しない実施例3、F項参照。本発明の抗体及び抗体部分は、invitro実施例3参照及びinvivo実施例4参照でhIL-12活性を中和することができる。従って、本発明の抗体及び抗体部分は、例えばhIL-12を含む細胞培養において、本発明の抗体が交叉反応するIL-12を持つヒト被験者あるいは他の哺乳類被験者例えばヒヒ、カニクイザル及びアカゲザルのような霊長類において、IL-12活性を阻害するために使用することができる。好ましい実施形態では、本発明は、ヒトIL-12、及びヒヒIL-12、マルモセットキヌザルIL-12、チンパンジーIL-12、カニクイザルIL-12及びアカゲザルIL-12から成る群から選択される少なくとも1つのさらなる霊長類IL-12の活性を中和するが、マウスIL-12の活性は中和しない、単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分を提供する。例えば、hIL-12を含む又は含むことが疑われる細胞培養において、本発明の抗体又は抗体部分を細胞培地に加えて、培地中のhIL-12活性を阻害することができる。もう1つの実施形態では、本発明は、IL-12活性が有害である疾患に罹病している被験者においてIL-12活性を抑制するための方法を提供する。IL-12は極めて多様な疾患の病態生理に関係づけられてきたWindhagenら1995J.Exp.Med.182:1985-1996;Moritaら1998ArthritisandRheumatism41:306-314;Buchtら1996Clin.Exp.Immunol.103:347-367;Faisら1994J.InterferonRes.14:235-238;Parronchiら1997Am.J.Path.150:823-832;Monteleoneら1997Gastroenterology112:1169-1178、及びBerrebiら1998Am.J.Path.152:667-672;Parronchiら1997Am.J.Path.150:823-832。本発明は、そのような疾患に罹病している被験者においてIL-12活性を抑制するための方法を提供し、かかる方法は、被験者においてIL-12活性が抑制されるように本発明の抗体又は抗体部分を被験者に投与することを含む。好ましくは、IL-12はヒトIL-12であり、被験者はヒト被験者である。その代わりに、被験者は、本発明の抗体と交叉反応するIL-12を発現する哺乳類でもありうる。さらに被験者は、hIL-12を導入されたhIL-12の投与によって又はhIL-12トランスジーンの発現によって哺乳類でもありうる。本発明の抗体は治療のためにヒト被験者に投与することができる下記でさらに論じる。さらに、本発明の抗体は、獣医学的目的のため又はヒト疾患の動物モデルとして、抗体と交叉反応するIL-12を発現するヒト以外の哺乳類に投与することができる。後者に関しては、そのような動物モデルは本発明の抗体の治療効果を評価するために有用であると考えられる例えば用量の試験及び投与の時間的経過。ここで使用するとき、IL-12活性が有害である疾患の語句は、疾患に罹病している被験者におけるIL-12の存在が、疾患の病態生理の原因である又は疾患の悪化に寄与する因子であることが示されているか若しくは疑われる疾病及び他の障害を含むことが意図されている。従って、IL-12活性が有害である疾患は、IL-12活性の抑制が疾患の症状及び/又は進行を軽減することが期待される疾患である。そのような疾患は、例えば、上述したような抗IL-12抗体を用いて検出することができる、疾患に罹病している被験者の生体液中のIL-12の濃度上昇例えば被験者の血清、血漿、滑液等におけるIL-12の濃度上昇によって明らかにされうる。IL-12活性が有害である疾患の数多くの例が存在する。1つの実施形態では、当該抗体又はその抗原結合部分は、ここで述べる疾病又は障害を治療するために使用できる。もう1つの実施形態では、当該抗体又はその抗原結合部分は、ここで述べる疾病又は障害を治療するための薬剤の製造のために使用できる。いくつかの非制限的特定疾患の治療における本発明の抗体及び抗体部分の使用を下記でさらに論じる:A.慢性関節リウマチインターロイキン-12は、慢性関節リウマチのような炎症性疾患において役割を果たすことが示唆されてきた。誘導性IL-12p40メッセージが慢性関節リウマチ患者からの滑液において検出され、IL-12が慢性関節リウマチ患者の滑液中に存在することが示された例えば、Moritaら1998ArthritisandRheumatism41:306-314参照。IL-12陽性細胞が慢性関節リウマチ滑膜の下内層に存在することが認められた。本発明のヒト抗体及び抗体部分は、例えば、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、ライム関節炎、リウマチ様脊椎炎、変形性関節症及び痛風性関節炎を治療するために使用できる。典型的には、当該抗体又は抗体部分は全身的に投与されるが、一部の疾患については抗体又は抗体部分の局所投与が有益であると考えられる。本発明の抗体又は抗体部分は、自己免疫疾患の治療において有用な1つ又はそれ以上の追加治療薬と共に投与することもできる。慢性関節リウマチのためのコラーゲン誘発の関節炎CIAマウスモデルにおいて、関節炎に先立って抗IL-12mAbラット抗マウスIL-12モノクローナル抗体、C17.15でマウスを処置すると、発症が強く抑制され、疾患の発生率と重症度が低下した。関節炎発症後早期に抗IL-12mAbで処置すると重症度が低下したが、疾患の発症後、より後期に抗IL-12mAbでマウスを処置した場合には、ごくわずかしか疾患の重症度に作用を及ぼさなかった。B.クローン病インターロイキン-12は、炎症性腸疾患であるクローン病においても役割を果たす。クローン病の患者の腸粘膜ではIFN-γ及びIL-12の発現上昇が起こる例えばFaisら1994J.InterferonRes.14:235-238;Parronchiら1997Amer.J.Pathol.150:823-832;Monteleoneら1997Gastroenterology112:1169-1178;Berrebiら1998Amer.J.Pathol.152:667-672参照。抗IL-12抗体は、大腸炎のマウスモデル、例えばTNBS誘発大腸炎のIL-2ノックアウトマウスにおいて、また最近ではIL-10ノックアウトマウスにおいて疾患を抑制することが示された。それ故、本発明の抗体及び抗体部分は炎症性腸疾患の治療において使用することができる。C.多発性硬化症インターロイキン-12は、多発性硬化症の鍵となるメディエイタとして示唆されてきた。誘導性IL-12p40メッセージ又はIL-12自体の発現を多発性硬化症の患者の病巣において明らかにすることができるWindhagenら1995J.Exp.Med.182:1985-1996、Drulovicら1997J.Neurol.Sci.147:145-150。多発性硬化症の慢性進行性患者はIL-12の高い循環レベルを有している。多発性硬化症の患者からのT細胞と抗原呈示細胞APCを検討すると、Th1型免疫応答を導く進行性多発性硬化症の基礎として、自己永続系の免疫相互作用が明らかになった。T細胞からのINF-γの分泌上昇がAPCによるIL-12産生の上昇を導き、それがTh1型免疫の活性化と疾患の慢性状態へと導くサイクルを永続化させたBalashovら1997Proc.Natl.Acad.Sci.94:599-603。多発性硬化症におけるIL-12の役割は、多発性硬化症のマウス及びラットの実験的アレルギー性脳脊髄炎EAEモデルを使用して検討されてきた。マウスにおける多発性硬化症の再発性-弛張性EAEモデルにおいて、抗IL-12mAbによる前処置は麻痺を遅延させ、臨床スコアを低下させた。麻痺のピーク時又はその後の寛解期の間に抗IL-12mAbで処置すると、臨床スコアを低下させた。従って、本発明の抗体又はその抗原結合部分は、ヒトにおける多発性硬化症に関連する症状を軽減するのに役立つと考えられる。D.インスリン依存性糖尿病インターロイキン-12は、インスリン依存性糖尿病IDDMの重要なメディエイタとして示唆されてきた。IDDMはIL-12の投与によりNODマウスにおいて誘発され、抗IL-12抗体はIDDMの養子免疫伝達モデルにおいて保護的であった。早期発症のIDDM患者はしばしば、ある程度の残存膵島細胞機能が維持される、いわゆるハネムーン期間を経験する。これらの残存膵島細胞はインスリンを産生し、投与されるインスリンよりも良好に血中グルコースレベルを調節する。抗IL-12抗体でこれらの早期発症患者を治療することは、膵島細胞のさらなる破壊を予防し、それによってインスリンの内因性ソースを維持すると考えられる。E.乾癬インターロイキン-12は乾癬の鍵となるメディエイタとして示唆されてきた。乾癬は、TH1型サイトカイン発現プロフィールに関連する急性及び慢性皮膚病変を含む。Hamidら1996J.AllergyClin.Immunol.1:225-231;Turkaら1995Mol.Med.1:690-699。罹病ヒト皮膚サンプルにおいてIL-12p35及びp40mRNAが検出された。それ故、本発明の抗体又はその抗原結合部分は、乾癬のような慢性皮膚疾患を軽減するのに役立つと考えられる。下記の実施例により本発明をさらに説明するが、かかる実施例はいかなる意味においても制限と解釈されるべきではない。本明細書全体を通して引用される、文献参照、発行済特許、及び公開特許願を含めたすべての引用参考文献の内容は、明白に参照してここに組み込まれる。さらに、ここに添付するすべての表付属物A参照の内容が参照して組み込まれることは明白であろう。実施例1:抗IL-12抗体単離ヒト扁桃scFv1と称される、扁桃と末梢血リンパ球PBLscFv2と称される、及び骨髄由来リンパ球BMDLと称されるから誘導されるmRNAからのヒトVL及びVHcDNAを使用して調製した3つの別個のファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることによってhIL-12に対する抗体を単離した。ライブラリーの構築と選択のための方法は、Vaughanら1996NatureBiotech.14:309-314に記述されている。抗原、ヒトIL-12p70サブユニット、ヒトIL-12p40サブユニット、キメラIL-12マウスp40/ヒトp35、マウスIL-12、ビオチニル化ヒトIL-12及びビオチニル化キメラIL-12を使用して、ライブラリーをスクリーニングした。標準的な手順を用いてMarksら1991J.Mol.Biol.222:581-597抗原をイムノチューブ上に被覆することにより、IL-12特異性抗体を選択した。IL-12又はビオチニル化IL-12を用いてscFvライブラリー2をスクリーニングし、有意の数のIL-12特異性結合剤を生成した。5つの異なるクローン型を選択し、BstN1酵素消化パターンによって測定して、DNA塩基配列決定によって確認した。主要なクローン型は、VHDP58/VLDPL11、VHDP77/VLDPK31、VHDP47/VL及びVHDP77/VLDPK31でり、これらすべてがIL-12のp40サブユニットを認識した。IL-12p70によるBMDLライブラリーのスクリーニングは3つの異なるクローン型を生じた。これらのうち2つは交叉反応性クローンであることが認められた。支配的なクローンを配列決定すると、VHDP35/VLDPで構成されていた。このクローンはIL-12のp40サブユニットを認識する。IL-12p70を用いたscFvライブラリー1のスクリーニングは特異的IL-12抗体を生じなかった。p40サブユニットではなく、IL-12のp70ヘテロダイマー又はp35サブユニットに選択的に結合するIL-12抗体を同定するため、結合scFv12ライブラリー及びBMDLライブラリーを使用した。p70ヘテロダイマー又はp35サブユニットを認識するIL-12抗体を選択するため、ファージライブラリーを遊離p40の存在下で予備インキュベーションして、選択した。単離したクローンを配列決定すると、9種類の異なる抗体系列を明らかにした。サブユニットの選択性をmicro-Friguet滴定によってさらに分析した。scFvを含む上清をELISAにおいてビオチン捕獲IL-12上で滴定し、ED50を決定した。50EDを生じるscFvの濃度を、遊離p70又はp40阻害因子の濃度を上昇させながら予備インキュベーションした。ビオチン-IL-12被覆したプレート上のELISAシグナルの低下を測定し、遊離p70又はp40の濃度に対してプロットした。これは、p70とp40に関して各々のクローンについてのIC50を提供した。両者のサブユニットについての滴定がオーバーラップする場合は、scFvはp40とp70の両方に結合する。これからの何らかの変位は、p40に対するp70の選択性の度合を示す。B.IL-12に特異的な抗体系列Joe9の親和性成熟クローンを、IL-12レセプタ結合アッセイRBAと称するにおいてIL-12がそのレセプタに結合するのを阻害する能力に関して試験し、また実施例3で述べるように、IL-12が誘発する、PHA刺激ヒト芽細胞の増殖を阻害する能力に関して試験したPHAアッセイ。クローンJoe9はRBA及びPHAアッセイの両方でIC50値が最も低く、両方のアッセイにおいてIC50値は1×10-6Mであった。さらに、Joe9のH鎖可変領域VHは、VBASEデータベースから同定された最も近い生殖細胞系配列、COS-3と比べて最小の変化を有していた。表1付属物A参照は、COS-3がそのメンバーである生殖細胞系配列のVH3ファミリー、ならびに生殖細胞系配列のVλ1ファミリーのメンバーを示している。それ故、Joe9を親和性成熟のために選択した。Joe9野生型Joe9wt抗体のVH及びVLのアミノ酸配列を図1A-1Dに示す。Joe9の親和性を高めるため、H鎖とL鎖の両方の相補性決定領域3CDR3の様々な突然変異を誘起した。H鎖CDR3H3と称する又はL鎖CDR3L3と称するのいずれかに特異的な縮重オリゴヌクレオチドを使用し、各々のCDR3中平均3個の塩基置換スパイクと称するで、部位特定PCR突然変異導入法によってCDR3変異体を作製した。H鎖CDR3のPCR突然変異導入は、4個のヌクレオチドすべてのランダム混合物、を含む縮重H鎖オリゴヌクレオチドと、オリゴヌクレオチドpUCリバースタグを使用して実施し、H鎖CDR3突然変異体のリストを作製した。親L鎖をJoe9逆向きオリゴヌクレオチド及びfdteteseq2421オリゴヌクレオチドを使用して増幅した。2つのPCR産物を相補性を用いて、PCR構築反応における2個の断片のアニーリングを推進し、完全長の組換えscFvライブラリーをpUCリバースタグ配列番号581とfdタグで増幅した。4個のヌクレオチドすべてのランダム混合物、を含むL鎖オリゴヌクレオチドと、Joe9逆向きオリゴヌクレオチドを使用してL鎖のPCR突然変異導入を実施し、L鎖CDR3突然変異体のリストを作製した。親H鎖をpUCリバースタグ配列番号581及びHuJH3FORオリゴヌクレオチドで増幅した。2つのPCR産物を相補性を用いて、PCR構築反応における2個の断片のアニーリングを推進し、完全長の組換えscFvライブラリーをリバースタグ及びHuJλ2-3FORNOTオリゴヌクレオチドで増幅した。1nMビオチニル化IL-12を用いてH鎖CDR3突然変異体を選択し、遊離IL-12又はp40を7nMの濃度で含むPBS中、室温で1時間洗浄した。クローンをファージELISAによって分析し、IL-12に結合したものを、低密度IL-12チップを使用してBIAコア反応速度結合試験において検討した実施例5のBIAコア分析の手順参照。一般にBIAコア分析は、BIAコアシステムPharmaciaBiosensor,Piscataway,NJを用いて、表面プラスモン共鳴SPRによりリガンドバイオセンサーマトリックス上に固定された組換えヒトIL-12と分析物溶液中の抗体間のリアルタイムの結合相互作用を測定する。このシステムは、デキストランバイオセンサーマトリックス内のタンパク濃度の変化を検出するためにSPRの光学特性を利用する。タンパクを既知の濃度でデキストランマトリックスに共有結合させる。デキストランマトリックスを通して抗体を注入すると、注入した抗体と固定されたリガンド間の特異結合によりマトリックスのタンパク濃度が上昇し、SPRシグナルの変化を生じさせる。これらのSPRシグナルの変化を共鳴単位RUとして記録し、センサーグラムのy軸に沿って経時的に表示する。オフ速度koff、オン速度kon、結合速度Ka及び解離速度Kd定数を測定するため、BIAコア反応速度評価ソフトウエア2.1バージョンを使用した。koff速度の改善を示したクローンを中和アッセイによって分析した。中和アッセイは、抗体によるIL-12のレセプタへの結合の阻害RBAアッセイ、PHA刺激ヒト芽細胞におけるIL-12誘導の増殖の阻害PHAアッセイ、及びヒト芽細胞によるIL-12誘導のインターフェロンγ産生の阻害IFNγアッセイを含んだ。H鎖CDR3のスパイククローン、70-1から70-13までについての、中和アッセイからの解離速度及び/又はIC50値の要約を表2に示す付属物A参照。クローン70-1は、親であるJoe9クローンよりも良好なkoff速度を示し、2.0×10-7Mという最も低いIC50値を有していた。それ故、クローン70-1を完全なIgG1への変換のために選択した。1nMビオチン-IL-12を用いてL鎖CDR3突然変異体を選択し、7nMの遊離p40を含むPBSで洗浄した。クローンをファージELISAでスクリーニングし、IL-12に結合したものを、低密度IL-12チップを使用してBIAコア結合分析において試験した。親Joe9クローンよりも良好なオフ速度を示したクローンを、IL-12レセプタ結合の阻害又はPHA芽細胞増殖の阻害のいずれかを測定する中和アッセイにおいて試験した。L鎖CDR3の突然変異体クローン、78-34から79-1までについての、中和アッセイからの解離速度及び/又はIC50値の要約を表2に示す付属物A参照。koff速度に基づくと、クローン78-34と78-35は親Joe9クローンと比較して改善されたkoff速度を示した。これらのクローンの両方をH鎖突然変異体との組合せ分析のために選択した。C.組合せクローン最良の結合特性を示した突然変異体L鎖及びH鎖クローンを、組合せとscFvの構築のために使用した。改善された効力特性を持つ突然変異体クローンを、上述したような突然変異を生じたVH及びVLセグメントのPCRオーバーラップ伸長とプルスルーpull-throughによって組み合わせた。表2付属物A参照に示すクローン101-14から26-1までが、H鎖突然変異体70-2、70-13及び70-1とL鎖突然変異体78-34、78-35及び79-1の組合せから生成された。これらのクローンに関する中和アッセイからのkoff速度及び/又はIC50を表2に示す。BIAコア結合分析により、H鎖CDR3突然変異体クローン70-1とL鎖CDR3突然変異体クローン78-34の組合せから生成されたクローン101-11は、0.0045s-1のオフ速度を持つと同定された。このkoff速度は、H鎖CDR3突然変異体クローン70-10.0134s-1あるいはL鎖CDR3突然変異体クローン78-340.0164s-1単独についてのkoff速度に比べて有意の改善であった。さらに、クローン101-11は中和アッセイにおいて有意の改善を示した。それ故、クローン101-11を下記に述べるような親和性成熟のために選択した。D.クローン101-11の親和性成熟クローン101-11のさらなる親和性成熟は、スパイクオリゴヌクレオチドプライマーを使用した101-11のH鎖及びL鎖CDR3の両方のPCR突然変異導入のサイクルの繰り返しから成るものであった。ビオチニル化IL-12bio-IL-12の濃度が低いクローンを選択した。突然変異を生じたクローンの結合特性をBIAコア結合アッセイ及びRBA、PHA中和アッセイによって評価した。クローン136-9から170-25までについてのkoff速度及び/又はIC50値を表2に示す付属物A参照。クローン103-14は、レセプタ結合アッセイとPHA芽細胞アッセイの両方で改善されたIC50値を示した。クローン103-14は低いkoff速度も示し、それ故、さらなる親和性成熟のための選択した。E.クローン103-14のL鎖CDR3のランダム化ライブラリーの作製と選択クローン103-14のL鎖CDR3QSYDRGFTGSMV配列番号590を、下記に概説する3つの異なるライブラリーを使用して系統的にランダム化した。Xは、配列NNS配列のランダム化コドンによってコードされ、Nは何らかのヌクレオチド、Sはデオキシシトシン又はデオキシグアニジンのいずれかである。L3.1=XXXXXXFTGSMV配列番号591L3.2=QSYXXXXXXSMV配列番号592L3.3=QSYDRGXXXXXX配列番号593クローン103-14の3つのL鎖CDRL3.1、L3.2及びL3.3と称するすべてのランダム化突然変異誘発を実施した。クローン103-14のH鎖CDR3H3と称するは突然変異を起こさなかった。クローン103-14に基づく4つのランダム化ライブラリーH3及びL3.1、L3.2L3.3を構築し、抗原濃度の制限及び過剰の遊離抗原p40及びp70の存在又は不在を使用することを含む、幅広い選択条件に供した。選択からの産物クローン73-B1から99-G11までを主としてBIAコアによって、また場合によってはRBAでスクリーニングして、表2に示している付属物A参照。103-14のL鎖CDRのランダム突然変異誘発はクローンY61を生じ、かかるクローンは、親クローン103-14に比べてIC50値の有意の改善を示した。Y61を全体的IgG1への変換のために選択した。全体的Y61-IgG1は、PHAアッセイにより約130pMと測定されたIC50値を持つ。IC50値は50倍モル過剰の遊離p40によっても影響されず、遊離p40がY61抗IL-12抗体と交叉反応せず、ヘテロダイマーへの抗体結合を低下させないことを明らかにした。Y61H鎖可変領域とL鎖可変領域の完全長配列を下記に示す。Y61H鎖可変領域ペプチド配列Y61L鎖可変領域ペプチド配列CDR残基はKabatの定義に従って割り当てている。実施例2:過突然変異及び接触位置におけるY61の突然変異典型的には、改善された親和性を持つ組換え抗体の選択はファージディスプレイ法を用いて実施できる。これは、CDR残基の組合せをランダムに突然変異させて、異なる配列の一本鎖抗体を含む大きなライブラリーを作製することによって実現される。典型的には、抗体-抗原反応において平衡に達する能力に基づいて、改善された親和性を持つ抗体を選択する。しかし、Y61scFVがファージ表面に発現されて、IL-12と共にインキュベーションしたとき、系が正常な抗体-抗原平衡に達することを可能にする選択条件を見出すことができなかった。精製Y61scFvは正常な解離動態を示すので、scFV-ファージは、おそらく非特異的相互作用のためにIL-12に結合したままであった。Y61へのファージディスプレイ親和性成熟の通常の方法すなわち多数のCDR残基の突然変異誘発によるライブラリーの作製と選択が使用できなかったため、個々のCDR位置を突然変異させる新しい戦略を開発した。この戦略は、突然変異のための適切なCDR位置の選択を含み、好ましい選択突然変異位置、接触位置、及び/又は過突然変異位置であるアミノ酸の同定と選択に基づく。接触位置は、抗原が抗体と相互作用するとき抗原と接触する確率の高い残基と定義され、一方過突然変異位置は、invivoでの抗体の親和性成熟の間に体細胞過突然変異を起こす確率が高いとみなされる残基と定義される。好ましい選択突然変異誘発位置は、接触と過突然変異の両方の位置にあたるCDR位置である。Y61抗体は実施例1で述べた手順を用いてCDR3領域で既に至適化されており、それ故、ファージディスプレイ選択法を使用して抗体結合部位の中心にある領域をさらに改善することは困難であった。有害な抗原-抗体接触を取り除くことによって、又は新しい接触を設計することによって、CDR3領域の外側の潜在的接触位置の突然変異によって活性のより大きな改善を得た。抗原との接触点とみなされるY61のアミノ酸残基及びinvivo親和性成熟の間の体細胞過突然変異の部位であるそれらのCDR位置を表3に示す付属物A参照。Y61親和性成熟のために、CDR3の外側の15残基、L3ループ内の3残基、及びH3ループの5残基をPCR突然変異誘発のために選択した。Y61scFv遺伝子を突然変異誘発のためにpUC119Sfiプラスミドベクターにクローニングした。各々の選択位置に突然変異を生じさせるためにランダム化コドンでオリゴヌクレオチドを設計し、合成した。PCR突然変異誘発後、少数のクローン~24個を配列決定し、宿主細胞、例えば細菌、酵母又は哺乳類宿主細胞において発現した。発現された抗体を精製し、BIAコアシステムを用いてkoffを測定した。次にY61と比較して改善されたオフ速度を持つクローンを中和アッセイにおいて試験した。この手順を他のCDR位置についても繰り返した。改善された中和活性を持つことを示す個々の突然変異を組み合わせて、さらに一層大きな中和潜在能を持つ抗体を作製した。中和効力を改善するために突然変異させたY61のCDR位置、及び各位置でのそれぞれのアミノ酸置換を図2A-2Hに示す。BIAコア分析によって測定したオフ速度を示している。これらのオフ速度は各々の表の右側のヒストグラムにも示している。H30、H32、H33、H50、H53、H54、H58、H95、H97、H101、L50、L92、L93の位置でのこれらの置換の結果は、検討したすべてのアミノ酸置換がY61よりも低いオフ速度を持つ抗体を生じたことを明らかにした。H52、L32、及びL50の位置で、1個のアミノ酸置換だけがY61のオフ速度を改善することが認められ、他の変化はすべて活性に好ましくない作用を及ぼした。L50については、この1個のGly→Tyr変化はY61の中和効力を有意に5-10倍改善した。結果はY61活性へのこれらの位置の重要性を明らかにしており、ほとんどの場合にファージディスプレイが至適残基を選択できたことを示唆している。しかし、H31、H56、L30、及びL94の位置では、いくつかの置換がY61のオフ速度を改善することが認められ、ファージディスプレイアプローチでは至適残基を選択できなかったが、これらの位置も抗原結合にとって重要であることを示唆した。Y61の接触位置及び過突然変異位置の選択突然変異は、Y61の中和能力を改善する、L鎖CDR2のアミノ酸残基L50、及びL鎖CDR3の残基L94を同定した。これらの突然変異の組合せは付加的な効果を生み出し、中和能力の有意の上昇を示す抗体、J695を生じた。J695のH鎖及びL鎖可変領域配列の完全長配列を下記に示す。J695のH鎖可変領域ペプチド配列J695のL鎖可変領域ペプチド配列CDR残基はKabatの定義に従って割り当てている。Joe9からJ695までの経路にあるクローンの系列発生を示すH鎖及びL鎖可変領域配列の整列の要約を図1A-1Dに示す。CDR及び残基の番号付けはKabatに従っている。実施例3:抗hIL-12抗体の機能的活性本発明のヒト抗ヒトIL-12抗体の機能的活性を調べるため、抗体がIL-12活性を阻害する能力を測定するいくつかのアッセイにおいて抗体を使用した。A.ヒトPHA活性化リンパ芽球の調製CurrentProtocolsinImmunology,Unit7.1に述べられているように1500rpmで45分間のフィコール-ハイパック比重差遠心によって健常ドナーから採集したロイコパックから、ヒト末梢血単核細胞PBMCを単離した。水性血液溶液とリンパ球分離媒質の界面でPBMCを採集し、1500rpmで15分間の遠心分離によりリン酸緩衝生理食塩水PBSで3回洗浄してフィコール-パック粒子を除去した。次にCurrentProtocolsinImmunology,Unit6.16に述べられているようにPBMCを活性化してリンパ芽球を形成した。洗浄したPBMCを、0.2v/vPHA-PDifco,Detroit,MIを補足したRPMI完全培地RPMI1640培地、10胎児ウシ血清FBS、100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシン中に0.5-1×106細胞/mlで再懸濁し、5CO2大気中37°Cで4日間培養した。4日後、細胞培養を、RPMI完全培地プラス0.2v/vPHA-P及び50U/ml組換えヒトIL-2中、容量ベースで1:1に分けた。組換えヒトIL-2は、ヒトIL-2cDNAを担う発現ベクターをCOS細胞にトランスフェクションすることによって生成しKaufmanら1991NucleicAcidsRes.19,4484-4490参照、PCT/US96/01382号に述べられているように精製した。次に細胞培養をさらに1-3日間インキュベーションした。PHA芽細胞を採集し、RPMI完全培地で2回洗浄して、95FBS、5DMSO中10×106細胞/mlで冷凍した。IL-12レセプタ結合アッセイB項参照に使用するPHA芽細胞は、IL-2の存在下で1日培養したあと採集し、一方PHA芽細胞増殖アッセイC項参照及びインターフェロン-γ誘導アッセイD項参照に使用するPHA芽細胞は、IL-2の存在下で3日間の培養後に採集した。B.IL-12レセプタ結合アッセイ抗IL-12抗体が、PHA芽細胞上のIL-12レセプタへの放射標識IL-12の結合を阻害する能力を次のように分析した。種々の濃度の抗IL-12抗体を、結合緩衝液RPMI1640、5FBS、25mMHepespH7.4中で50-100pMの125I-hIL-12Bolton-Hunter標識法を使用してNEN-Dupontからヨウ素標識hIL-12を20-40mCi/mgの比活性で調製したと共に37°Cで1時間プレインキュベーションした。上述したように分離したPHA芽細胞を1回洗浄して、結合緩衝液中に2×107細胞/mlの細胞密度で再懸濁した。PHA芽細胞1×106細胞を抗体/125I-hIL-12混合物に加え、室温で2時間インキュベーションした。アッセイ混合物を室温で30秒間遠心分離にかけ、液体を吸引して、0.1ml結合緩衝液で洗ったあと、10,000×gで4分間、4°Cで遠心分離して、細胞結合放射能を遊離125I-hIL-12から分離した。ガンマカウンターを使用して、細胞ペレットを細胞結合放射能に関して検査した。抗体不在下で総結合を測定し、アッセイに25nM非標識IL-12を含めることによって非特異的結合を測定した。インキュベーションは2回実施した。Y61及びJ695ヒト抗IL-12抗体を用いたIL-12レセプタ結合アッセイでは、両方の抗体がIL-12レセプタ結合の同等の阻害を示した。Y61は約1.6×10-11MのIC50値でIL-12レセプタ結合を阻害し、J695は約1.1×10-11MのIC50値であった。C.ヒトPHA芽細胞増殖アッセイ抗IL-12抗体を、PHA芽細胞増殖かかる増殖はIL-12によって刺激されるを阻害する能力に関して評価した。抗IL-12抗体の連続希釈を、マイクロタイタープレートU底、96穴、Costar,Cambridge,MAの100mlRPMI完全培地中で、230pg/mlのhIL-12と共に5CO2、37°Cで1時間プレインキュベーションした。上述したように分離したPHA芽細胞を1回洗浄し、RPMI完全培地中に3×105細胞/mlの細胞密度で再懸濁した。PHA芽細胞100ml、3×104細胞を抗体/hIL-12混合物に加え、5CO2、37°Cで3日間インキュベーションし、0.5mCi/穴3H-チミジンAmersham,ArlingtonHeights,ILで4-6時間標識した。培養内容物をセルハーベスターTomtec,Orange,CTによってガラス繊維フィルター上に採集し、細胞DNAへの3H-チミジンの取込みを液体シンチレーションカウンターで測定した。すべてのサンプルを2回検定した。種々の濃度のp70:p40すなわちIL-12ヘテロダイマー対遊離p40サブユニットの比率の存在下での中和の結果を表4に示す付属物A参照。PHA芽細胞増殖アッセイにおけるY61ヒト抗IL-12抗体の分析は、過剰のp40を含まないIL-12p70だけの存在下でp70:p40の比率は1:0、抗体が約1.8×10-10MのIC50値でPHA芽細胞増殖を阻害したことを明らかにした。50倍過剰の遊離p40の存在下ではp70:p40の比率は1:50、Y61抗体は約1.8×10-10MのIC50値でPHA芽細胞増殖を阻害した。この結果は、Y61が芽細胞増殖を阻害する能力は過剰のp40の存在によって損なわれないことを示している。ヒト抗IL-12抗体、J695は、1:0の比率のp70:p40の存在下で、約1.0×10-11MのIC50値でPHA芽細胞増殖を阻害した。1:50の比率のp70:p40の存在下では、この抗体は約5.8±2.8×10-12Mn=2のIC50値でPHA芽細胞増殖を阻害し、過剰のp40が抗体に対してごくわずかな阻害作用を及ぼすことを明らかにした。全体的な結果は、L50及びL94での突然変異により、Y61と比較してJ695の改善された中和活性を示している。D.インターフェロン-γ誘導アッセイ抗IL-12抗体が、PHA芽細胞によるIFNγの産生かかる産生はIL-12によって刺激されるを阻害する能力を次のように分析した。種々の濃度の抗IL-12抗体を、マイクロタイタープレートU底、96穴、Costarの100mlRPMI完全培地中で、200-400pg/mlのhIL-12と共に5CO2、37°Cで1時間プレインキュベーションした。上述したように単離したPHA芽細胞を1回洗浄し、RPMI完全培地中に1×107細胞/mlの細胞密度で再懸濁した。PHA芽細胞1×106細胞100μlを抗体/hIL-12混合物に加え、5CO2、37°Cで18時間インキュベーションした。インキュベーション後、細胞不含上清150μlを各穴から取り出し、産生されたヒトIFNγのレベルをELISAEndogenInterferongammaELISA,Endogen,Cambridge,MAによって測定した。このアッセイにおけるヒト抗hIL-12抗体、Y61の分析は、Y61が約1.6×10-10MのIC50値でヒトIFNγの産生を阻害したことを明らかにし、一方ヒト抗IL-12抗体、J695は約5.0±2.3×10-12Mn=3のIC50値でヒトIFNγの産生を阻害した。この結果は、L50とL94における修飾の結果としてJ695の親和性の実質的な改善を示している。E.分離したPBMCからの非ヒトIL-12の誘導ヒト抗hIL-12抗体と他の種からのIL-12の交叉反応性を調べるため、非ヒトIL-12を次のように生成した。カニクイザル、ヒヒ及びイヌ、PBMCについてはリンホプレップNycomed,Oslo,Norway、イヌPBMCについてはAccu-paqueAccurateChemicalSci.Corp.,Westbury,NY、あるいはラットPBMCについてはLympholyte-ratAccurateChemcialSci.Corp.,Westbury,NYを使用して、上述したような密度勾配遠心分離によって新鮮ヘパリン化血からPBMCを分離した。次にPBMCを上述したように誘導してIL-12を生成したD’Andreaら1992J.Exp.Med176,1387-1398、Villingerら1995J.Immunol.155,3946-3954、Buettnerら1998Cytokine10,241-248。洗浄したPBMCを、0.0075w/vのSACPansorbin;Calbiochem-BehringCo.,LaJolla,CA又は1-5mg/mlConASigmaChemicalCo.,St.Louis,MOプラス0.0075SACを補足したRPMI完全培地に1×106細胞/mlで再懸濁し、5CO2大気中37°Cで18時間インキュベーションした。細胞不含でSAC不含の培地を、遠心分離と0.2mmフィルターを通して濾過することによって採集した。アカゲザルからのIL-12は、EmoryUniversitySchoolofMedicine,Atlanta,GAから組換えアカゲザルIL-12として入手した。F.マウス2D6細胞増殖アッセイマウスT細胞クローン2D6はマウスIL-2、IL-4、IL-7及びIL-12に応答して増殖するMaruoら1997J.LeukocyteBiol.61,346-352。ラットIL-12を含むラットPBMC上清に応答した有意の増殖も検出された。かかる細胞はイヌ、カニクイザル、ヒヒ又はヒトIL-12には応答しない。50mMβ-メルカプトエタノールβMEと30ng/mlのマウスIL-12を補足したRPMI完全培地中でマウス2D6細胞を増殖させた。アッセイの1日前に、マウスIL-12を洗い出し、細胞をRPMI完全培地プラスβME中でひと晩インキュベーションした。抗IL-12抗体の連続希釈を、マイクロタイタープレートU底、96穴、Costarにおいて100mlRPMI完全培地プラスβME中で、40pg/mlのマウスIL-12と共に5CO2、37°Cで1時間プレインキュベーションした。2D6細胞を1回洗浄し、βMEを含むRPMI完全培地に1×105細胞/mlの細胞密度で再懸濁した。2D6細胞100μl、1×104細胞を抗体/hIL-12混合物に加え、5CO2、37°Cで3日間インキュベーションし、0.5mCi/穴3H-チミジンで4-6時間標識した。培養内容物を採集し、液体シンチレーションカウンターで計数した。すべてのサンプルを2回検定した。G.非ヒトIL-12とJ695の種交叉反応性いくつかのヒト以外の種から分離したPBMCを使用して非ヒトIL-12とJ695の種交叉反応性を分析した。ラット、イヌ、カニクイザル及びヒヒPBMC上清中の非ヒトIL-12活性の存在を、マウス2D6細胞増殖アッセイ、ヒトPHA芽細胞増殖アッセイ、及びマウス及び/又はヒトIL-12に対するウサギ及び/又はヒツジポリクローナル抗体で非ヒトPBMC誘導の応答を遮断することによるインターフェロン-γ誘導アッセイのような、上述したいくつかのバイオアッセイを用いて確認した。ヒト抗hIL-12抗体Y61及びJ695と、PBMC上清中の非ヒトIL-12又は精製マウス及びアカゲザルIL-12の交叉反応性を、応答の50阻害が認められるJ695抗体の独活を測定することにより、同じバイオアッセイにおいて評価した。種交叉反応性の結果を表5に要約する。結果は、Y61とJ695がそれぞれサルからのIL-12例えばY61についてはカニクイザル及びアカゲザルIL-12、J695についてはカニクイザル、アカゲザル及びヒヒを認識することができ、J695はイヌIL-12に対して約35倍活性が低く、Y61及びJ695のいずれもがマウス又はラットIL-12と交叉反応しないことを示している。H.J695のヒトサイトカイン特異性ヒトサイトカインのパネルを、可溶性J695の固定ヒトIL-12への結合に干渉する能力に関して試験する、競合ELISAにおいてJ695の特異性を検討した。ヒトサイトカインのパネルは、IL-1α及びIL-1βGenzyme,Boston,MA、IL-2Endogen、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ、及びTGF-β1RD,Minneapolis,MN、IL-8Calbiochem、PDGF、IGF-I及びIGF-IIBoehringerMannheimCorp.,Indianapolis,IN、TNFα及びリンホトキシン、IL-6、可溶性IL-6レセプタ、IL-11、IL-12p70、IL-12p40、M-CSF、及びLIFを含む。Bリンパ球においてエプスタイン-バーウイルス感染によって誘導されるIL-12p40関連タンパクであるEBI-3Devergneら1996J.Virol.70,1143-1153は、ヒトIgG-FcキメラEBI-3/Fcとして発現された。一本鎖サケ精子DNASigmaも試験した。平底ELISA免疫測定マイクロタイタープレート96穴、高度結合、Costarを、0.1mlヒトIL-120.1Mカーボネート被覆緩衝液4容の0.1MNaHCO3プラス8.5容の0.1MNaHCO3中2μg/mlにより4°Cでひと晩被覆した。0.05Tween20を含むPBSPBS-Tでプレートを2回洗浄し、PBS-T中1mg/mlのウシ血清アルブミンBSA,Sigma200μlにより室温で1時間遮断して、再びPBS-Tで2回洗浄した。50μg/mlBSAを含むPBS-TPBS-T/BSA中にIL-12抗体J695100ng/mlと各サイトカイン2nMを含むサンプル100μlを加えて、室温2時間インキュベーションした。プレートを4回洗浄し、100μlのマウス抗ヒトλ-HRPPBS-T/BSA中1:500、SouthernBiotech.Ass.Inc.,Birmingham,ALと共に室温で1時間インキュベーションした。プレートを4回洗浄し、暗所において20-30分間、ABTSKirkegaardPerryLab.,Gaithersburg,MDで展開した。マイクロプレートリーダーMolecularDevices,MenloPark,CAを用いてOD450nmを読み取った。可溶性サイトカインが全く存在しない状態でのIL-12被覆プレートへのJ695結合と比較して、パーセント結合を測定した。結果は、固定ヒトIL-12へのJ695結合がヒトIL-12p70、そしてより低い度合でヒトIL-12p40によってのみ遮断され、試験した他のいずれのサイトカインによっても遮断されないことを明らかにした。I.新規IL-12分子への結合p35サブユニットが新規p19分子で置換された代替的なIL-12ヘテロダイマーが記述されている。p19は、IL-6/IL-12ファミリーメンバーに関する3D相同性検索を用いて同定されたもので、活性化樹状細胞によって合成される。p19はp40に結合して、IL-12様活性を持つp19/p40ダイマーを形成するが、IFNγ誘導におけるp35/p40ヘテロダイマーほど強力ではない。p40だけを認識する抗体であるが、好ましくはp70分子例えばJ695及びY61、実施例3H参照に関連して、p35/p40分子とp19/p40分子の両方を中和することも予想される。実施例4:抗hIL-12抗体のinvivo活性カニクイザルにおける末梢血液学へのヒトIL-12の作用を調べるため、Breeらが使用したものから改変したモデルにおいてIL-12誘導応答へのIL-12抗体のinvivo作用を検討したBreeら1994BiochemBiophysRes.Comm.204:1150-1157。それらこれまでの試験では、1μg/kg/日のヒトIL-12の5日間にわたる投与は、24時間後に白血球数WBC、特にリンパ球と単球のサブセットの低下を生じた。IFN-γに応答した単球活性化のマーカーである血漿ネオプテリンのレベルが24時間目に上昇し始め、72時間目に最も高くなった。ヒト抗hIL-12抗体に関する最初の試験では、平均体重5kgの15匹の健康なカニクイザルザルを鎮静させ、5群n=3に分けた。第1群は、10mg/kgのヒト静脈内免疫グロブリンIVIG,Miles,Eckhart,IN,プロテインAセファロースを用いて精製の静脈内IV投与を受けた。第2群は、1mg/kgのC8.6.2マウス抗ヒトIL-12モノクローナル抗体を中和するの静脈内投与を受けた。第3群は、10mg/kgのC8.6.2の静脈内投与を受けた。第4群は、1mg/kgのY61ヒト抗ヒトIL-12抗体、CHO細胞順化培地から精製の静脈内投与を受けた。第5群は、10mg/kgのY61の静脈内投与を受けた。抗体投与の1時間後、全動物にヒトIL-121μg/kgの単回皮下SC注射を実施した。次の時点で血液サンプルを採取し:基線、8、24、48、96及び216時間、白血球分画を伴う完全血球算定と血清化学に関して分析した。血清ヒトIL-12、C8.6.2抗体、Y61抗体、サルIFN-γ、サルIL-10、サルIL-6及び血漿ネオプテリンレベルも測定した。IL-12プラスIVIG対照抗体で処置した動物第1群は、WBC、血小板、リンパ球数及び単球数の低下を含めて、予想された血液学的変化の多くを示した。これらの低下は、1又は10mg/kgのC8.6.2又はY61抗体で処置した動物第2-5群では見られないか、若しくは度合がより低かった。サルIFN-γ及びサルIL-10BiosourceInternational,Camarillo,CA、サルIL-6Endogen及び血漿ネオプテリンICNPharmaceuticals,Orangeburg,NYに特異的なELISAにより、血清又は血漿サンプルを分析した。IFN-γ、IL-10あるいはIL-6は、IL-12プラスIVIGで処置した対照動物を含めて、IL-12処置動物のいずれにおいても検出されなかった。これはおそらくIL-12への接触レベルが低い1μg/kgの1回投与のみことによるものであった。それにもかかわらず、血漿ネオプテリンレベルは、IL-12プラスIVIG処置動物では約3倍上昇したが、より低用量1mg/kgのY61処置動物を含めてすべてのC8.6.2又はY61処置動物において変化がなく、Y61がinvivoでIL-12に対するこの感受性応答を遮断する上で有効であることを示した。第二の試験では、カニクイザルにおけるJ695のinvivo活性と薬力学PDを、外因性rhIL-12を投与し、通常rhIL-12投与に結びつくを応答をJ695が遮断又は低減しうるかどうかを判定することによって検討した。雄性カニクイザル群当りn=3に0.05、0.2、又は1.0mg/kgのJ695あるいは1mg/kgの静脈内免疫グロブリンIVIGの1回用量を、伏在静脈を通してボーラス静脈内IV注入として又は背側皮膚への皮下SC注射によって投与した。J695又はIVIGの投与から1時間後、すべての動物に背側皮膚への1μg/kgrhIL-12の単回SC投与を実施した。J695投与後28日目まで、大腿静脈を通して血液サンプルを採取した。各血液サンプルから血清を分離し、IL-12、J695、IFN-γ、及び抗J695抗体に関してELISAで検定した。ネオプテリンは逆相高速液体クロマトグラフィーによって検定した。J695又はrhIL-12の投与前に測定したネオプテリンレベルに対して基準化したネオプテリンのレベルを図3に示す。群間でのネオプテリンの抑制を比較するために、ネオプテリンレベルに関して基準化した曲線下面積AUCを各動物について計算した表6。ネオプテリン接触AUCは、IVIG対照群と比較してIV群では約71-93、SC群では71-100、用量依存的に抑制された。これらの結果は、ネオプテリン応答の50抑制に必要なJ695の用量ED50が、IV又はSC経路で投与したときには0.05mg/kg未満であったことを示唆している。J695による処置は、通常rhIL-12投与に結びつく血液学的変化白血球減少及び血小板減少も予防若しくは軽減した。rhIL-12投与後24時間目に、対照IV及びSCIVIG処置群では基線値と比較して約50リンパ球数が減少した。SC又はIVによるJ695投与は3つの用量レベルすべてでこの減少を予防し、24時間目のリンパ球数は基線値とほぼ同じであった。IL-12投与後48時間目には、IV及びSCIVIGで処置した群における血小板数は基線値と比較して約25減少した。血清レベルを90有効レベル以上に維持することを目標とした例示的な投与スケジュールは、ほぼ1週間おきに1mg/kgのIV及びSC投与、又はほぼ毎週0.3mg/kgの投与であり、反復投与期間中わずかに蓄積が推定される。この試験は、抗体がそのような用量でサルに安全に投与しうることを明らかにしている。独立した毒性試験では、さらに100mg/kgまでの抗体がサルに安全に投与しうることが認められた。J695はまた、マウスp35サブユニットをヒトIL-12p40サブユニットと結合した分子である、キメラIL-12で処置したマウスにおいてIFN-γの産生を予防する上でも有効であった。マウスでは生物学的に不活性なヒトIL-12と異なって、このキメラIL-12はIFN-γの誘導を含めてマウスにおいて生物学的機能を保持する。さらに、ヒトp40サブユニットは、この分子がJ695によって結合され、中和されることを可能にする。0.05mg/kgi.p.の用量のキメラIL-12を雌性C3H/HeJマウス10匹/実験群に、1日1回ずつ5回にわたって0、1、2、3及び4日目に投与した。J695は、0、2及び4日目にIL-12注射の30分前に、0.05、0.01、0.002、0.0004、0.00008、及び0.000016mg/kgi.p.の用量で投与した。対照huIgG1γは、0、2、及び4日目に0.05mg/kgの用量でIP投与した。5日目にマウスから採血し、ELISAによって血清IFN-γレベルを測定した。結果は、J695が約0.001mg/kgのED50でIFN-γの産生を用量依存的に阻害したことを明らかにした。全体として、これらの結果は、J695がinvivoでIL-12活性の強力な阻害因子であることを示している。実施例5:組換えヒトIL-12rhIL-12へのヒト抗体の結合の反応速度分析捕獲したリガンドヒト抗rhIL-12抗体J695、バイオセンサーマトリックス上で捕獲と分析物溶液中のrhIL-12間のリアルタイムでの結合相互作用を、BIAコアシステムBiacoreAB,Uppsala,Swedenを用いた表面プラスモン共鳴SPRによって測定した。このシステムは、SPRの光学特性を利用してデキストランバイオセンサーマトリックス内のタンパク濃度の変化を検出する。デキストランマトリックスを通して抗体を注入すると、注入した抗体と固定されたリガンド間の特異結合がマトリックスタンパク濃度の上昇をもたらし、SPRシグナルの変化を生じさせる。SPRシグナルのこれらの変化は共鳴ユニットRUとして記録され、センサーグラムのy軸に沿って経時的に表示される。バイオセンサーマトリックスへのヤギ抗ヒトIgGSouthernBiotechnologyAssociates,カタログ番号2040-01、Birmingham,ALの固定を容易にするため、最初にマトリックス上のカルボキシル基を100mMN-ヒドロキシスクシニミドNHS及び400mMN-エチル-N’-3-ジメチルアミノプロピル-塩酸カルボジイミドEDCで活性化することにより、遊離アミン基を通してヤギ抗ヒトIgGをデキストランマトリックスに共有結合する。次に、ヤギ抗ヒトIgGを活性化マトリックスを越えて注入する。酢酸ナトリウム中で希釈した35μlのヤギ抗ヒトIgG25μg/ml、pH4.5を、活性化バイオセンサーを越えて注入し、タンパク上の遊離アミンを活性化カルボキシル基に直接結合する。1Mエタノールアミンを注入して未反応マトリックスEDC-エステルを不活性化する。標準アミンカップリングキットは市販のものを使用したBiacoreAB,カタログ番号BR-1000-50,Uppsala,Sweden。ヤギ抗ヒトIgGを通してマトリックス上に捕獲するため、J695を流動HBS緩衝液BiacoreABカタログ番号BR-1001-88,Uppsala,Sweden中で希釈した。rhIL12-特異性抗体が固定ヤギ抗ヒトIgGに結合する能力を調べるため、次のように結合アッセイを実施した。J695のアリコート25μl/ml;25μlアリコートを、ヤギ抗ヒトIgGポリクローナル抗体結合デキストランマトリックスを通して5μl/分の流速で注入した。タンパクの注入前と注入直後に、HBS緩衝液だけを各フローセルに通過させた。基線とJ695注入終了後約30秒に相当する時点とのシグナルの正味差を、結合IgG1J695の量を表すものとみなした約1200RU。可溶性rhIL-12へのrhIL-12特異性抗体の直接結合を測定した。サイトカインを流動HBS緩衝液中で希釈し、50μlアリコートを固定タンパクマトリックスを通して5μl/分の流速で注入した。使用したrhIL-12の濃度は、10、20、25、40、50、80、100、150及び200nMであった。rhIL-12の注入前と注入直後に、HBS緩衝液だけを各フローセルに通過させた。基線シグナルとサイトカイン注入終了後のシグナルとの正味差を、個々のサンプルの結合値を表すものとみなした。次のサンプルの注入前に100mMHClを用いてバイオセンサーマトリックスを再生した。解離定数オフ速度、結合定数オン速度を調べるため、BIAコア反応速度評価ソフトウエア2.1バージョンを使用した。COS由来のJ695と比較したCHO由来J695のrhIL-12への結合の代表的結果を表7に示す。捕獲J695と可溶性rhIL-12間の分子反応速度相互作用をBIAコアテクノロジーを用いて定量的に分析した。いくつかの独立した実験を実施し、表8に示すような、反応速度定数を引き出すために使用可能なBIAコア数理分析ソフトウエアによって結果を解析した。CHO由来J695Kd=1.34-10M-1とCOS由来J695Kd=9.74×10-11M-1抗体間の相互作用に関する算定見かけ定数Kdには小さな差があった。J695とrhIL-12間の見かけ解離定数Kdは、認められた速度定数から次の式によって推定した:Kd=オフ速度/オン速度。J695とrhIL-12間の相互作用についての見かけ結合及び解離速度定数を調べるため、固定量のJ6952μg/mlと種々の濃度のrhIL-12を使用していくつかの結合反応を実施した。捕獲J695と可溶性rhIL-12間のリアルタイム結合相互作用センサーグラムは、2つの形態の抗体が結合と解離期の両方について非常に類似していることを示した。捕獲IgG1J695mAbが可溶性組換えサイトカインに結合する能力をさらに評価するため、直接BIAコア法を使用した。この方法では、ヤギ抗ヒトIgG25μg/ml結合カルボキシメチルデキストランセンサー表面をIgG1J6952μg/mlで被覆し、その後組換えサイトカインを加えた。CHO又はCOS由来のIgG1J695で捕獲されたバイオセンサー表面を通して可溶性rhIL-12を注入したとき、溶液中のサイトカインの濃度が上昇すると共にシグナルの量も増大した。1000nMまでの試験濃度ではrmIL12RDSystems,カタログ番号419-ML,Minneapolis,MNあるいはrhIL12との結合を認めなかった。これらの結果は、IgG1J695抗体がrhIL-12上の別個の決定基を認識するという結論を裏付けている。表9は、ヒトIgG1J695mAbが可溶性rhIL12だけと結合し、他のいずれの組換えサイトカインとも結合しないことを明らかにするためのBIAコアを用いた実験の結果を示している。実施例6:IL-12に対するJ695の親和性についてのさらなる試験J695抗体とヒトIL-12間の分子反応速度相互作用をBIAコアプラスモン共鳴テクノロジーを用いて定量的に分析し、見かけ反応速度定数を推定した。BIAコアテクノロジーを使用して、固相捕獲J695への可溶性rhIL-12の結合を測定した。ヤギ抗ヒトIgG抗体をバイオセンサーチップ上に固定し、次に固定量のJ695を注入して表面に捕獲した。種々の濃度のrhIL-12を適用し、種々の濃度のIL-12のJ695への結合を時間の関数として測定した。ゼロ次数解離と一次次数結合反応速度、ならびにJ695とIL-12間の単純な1:1分子相互作用を仮定して、見かけ解離及び結合速度定数を算定した。3回の独立した実験を行い、3回の実験の平均値を示している。これらの測定から、見かけ解離kd及び結合ka速度定数を推定し、相互作用についてのKdを算定するために使用した表10参照。結果は、J695がrhIL-12に高い親和性を持つことを示した。実施例7:マウスインターロイキン-12に対するラットモノクローナル抗体C17.15の特性と中和活性マウスIL-12に特異的なモノクローナル抗体を使用した炎症と自己免疫のマウスモデルにおけるIL-12処置試験の、ヒト疾患での同様のアプローチとの関連性を評価するため、ラット抗マウスIL-12モノクローナル抗体、C17.15とマウスIL-12の相互作用を検討した。PHA芽細胞増殖アッセイにおいてC17.15がマウスIL-12活性を中和し、マウスIL-12が細胞表面レセプタに結合するのを遮断する能力を、C17.15-マウスIL-12結合相互作用の動態として評価した。ヒトPHA芽細胞増殖アッセイ実施例3参照では、C17.15又はラットIgG2a対照抗体の連続希釈を230pg/mLのマウスIL-12と共に37°Cで1時間プレインキュベーションした。PHA刺激芽細胞を抗体-IL-12混合物に加え、37°Cで3日間インキュベーションした。その後細胞を1μCi/穴[3H]-チミジンで6時間標識した。培養を採集し、[3H]チミジンの取込みを測定した。マウスIL-12を加えずにバックグラウンドの非特異的増殖を測定した。すべてのサンプルを2回検定した。このアッセイにおける組換えマウスIL-12についてのC17.15のIC50Mは1.4×10-11であることが認められ、これに比して、同じ条件下で組換えヒトIL-12についてJ695で認められたIC50値は5.8×10-12であった表11参照。C17.15が、マウスIL-12の細胞レセプタへの結合を阻害する応力も測定した。C17.15の連続希釈を結合緩衝液中で100pM[125I]-マウスIL-12と共に37°Cで1時間プレインキュベーションした。2D6細胞2×106を抗体/[125I]-マウスIL-12混合物に加え、室温で2時間インキュベーションした。細胞結合放射能を遊離[125I]-IL-12から分離し、残りの細胞結合放射能を測定した。2D6細胞上のレセプタへの標識マウスIL-12の総結合を抗体不在下で測定し、25nM非標識マウスIL-12をアッセイに含めることによって非特異的結合を測定した。総結合から非特異的結合を差し引いて特異的結合を算定した。インキュベーションは2回実施した。結果は、C17.15が、マウスIL-12の細胞レセプタへの結合阻害に関して1.5×10-10のIC50Mを持つことを示した。組換えマウスIL-12に対するC17.15の親和性を生体分子相互作用分析によって評価した。ヤギ抗ラットIgG抗体をバイオセンサーチップに固定し、次に固定量のC17.15を注入して、チップの表面にC17.15を捕獲した。種々の濃度の組換えマウスIL-12をC17.15表面に適用し、固定C17.15へのマウスIL-12の結合を時間の関数として測定した。ゼロ次数解離と一次次数結合反応速度、ならびに固定C17.15とマウスIL-12間の単純な1:1分子相互作用を仮定して、見かけ解離及び結合速度定数を算定した。これらの測定から、見かけ解離kd、オフ速度及び結合ka、オン速度速度定数を算定した。これらの結果を使用して相互作用についてのKd値を算定した。組換えマウスIL-12-C17.15相互作用に関して、2.8×105M-1s-1のオン速度、1.84×10-4s-1のオフ速度、そして4.8×10-10のKdを認めた。マウスIL-12の活性及び細胞表面レセプタへの結合を中和する上でのC17.15の観察された活性、ならびにマウスIL-12へのC17.15の結合の動態は、J695-rhIL-12相互作用についての同様の測定と相関する。これは、オン速度、オフ速度、Kd、IC50及びPHA芽細胞アッセイに基づくと、ラット抗マウスIL-12抗体C17.15と抗ヒトIL-12抗体J695の作用機序がほとんど同じであることを示唆している。それ故、炎症と自己免疫疾患のマウスモデルにおいて、これらのモデル動物における疾患の初発と進行へのIL-12の遮断作用を検討するために、C17.15をJ696の相同抗体として使用した実施例8参照。実施例8:α-マウスIL-12抗体の投与によるマウスでの自己免疫又は炎症に基づく疾患の治療A.α-IL-12抗体C17.15によるマウスでの膠原誘発関節炎の抑制IL-12レベルと慢性関節リウマチRAの相関が明らかにされている。例えば、健常対照と比較してRA患者の滑液におけるIL-12p70レベルの上昇が検出されたMoritaら1998ArthritisandRheumatism41:306-314。それ故、ラット抗マウスIL-12抗体、C17.15がマウスにおいて膠原誘発関節炎を抑制する能力を評価した。雄性DBA/1マウス10匹/群を0日目にII型コラーゲンで免疫し、-1日目コラーゲン免疫の1日前から12日目まで1日おきに10mg/kgのC17.15又は対照ラットIgGを腹腔内投与した。90日目まで足における関節炎の発現に関して動物を臨床的に監視した。関節炎を次のように等級づけた:0-正常;1-1関節に限局された関節炎;2-1関節以上を含むが足全体には及ばない;3-足全体を含む;4-足の変形;5-罹患関節の強直。マウスの関節炎スコアは、マウスの個別の足における関節炎等級の合計とした最大値=20。結果は各群について平均±SEMで表わしている。図4に示す結果は、関節炎スコアがC17.15処置マウスでは処置後50日目から初めて測定可能になったこと、そしてC17.15処置マウスで得られたピーク平均関節炎スコアはIgG処置マウスで測定されたものよりも少なくとも5倍低かったことを示している。これは、ラット抗マウスIL-12抗体C17.15がマウスにおいて膠原誘発関節炎の発現を予防したことを明らかにしている。B.ラットα-マウスIL-12抗体C17.15によるマウスでの大腸炎の抑制IL-12が大腸炎の発症/病理において役割を果たすことも明らかにされた。例えば、抗IL-12抗体は、大腸炎のマウスモデルにおける疾患、例えばIL-2ノックアウトマウスにおけるTNBS誘発の大腸炎を抑制することが示されているSimpsonら1998J.Exp.Med.1878:1225-34。同様に、抗IL-2抗体はIL-10ノックアウトマウスにおける大腸炎を抑制することが明らかにされている。ラット抗マウスIL-12抗体、C17.15がマウスにおいてTNBS大腸炎を抑制する能力を2つの試験で評価したDavidら1998J.Immunol.1616:3143-9。最初の試験では、小児科用臍動脈カテーテルを通して直腸に送達した、TNBS2.0mgを含む50エタノール溶液150μLの投与により、病原体不含のSJLマウスにおいて大腸炎を誘発した。対照動物は50エタノール溶液150μLだけで処置した。11日目に尾静脈を通して0.75、0.5、0.25、又は0.1mgのC17.15又は0.75mgの対照ラットIgG2aを静脈内投与し、11日目と17日目に動物の体重を測定し、17日目に組織学的スコアリングを実施して、処置の治療効果を評価した。C17.15で処置したマウスの体重は抗体処置後48時間以内に上昇し、処置後6日目に正常化した。C17.15による処置の効果が組織学的に確認された。さらに、処置マウスの脾及び結腸からのCD4T細胞によるIFN-γの分泌、ならびに処置マウスの脾又は結腸由来マクロファージからのIL-12レベルの評価も行った表12参照。第二の試験では、投与を至適化し、0.1mg又は0.5mgのC17.15又は0.1mgの対照IgG2aの総用量で、それぞれ12日目と14日目に分割してマウスを処置した。0.1mg/マウス又は0.25mg/マウスの用量の単回投与において、C17.15の投与はTNBS誘発の大腸炎の部分的改善だけを導き、未処置対照と比較して、invitroでのCD4T細胞によるIFN-γ産生の有意の低下は生じなかったが、IL-12分泌の有意の低下をもたらした。0.5mg/マウス又はそれ以上の単回投与で応答が認められた。試験した抗体の最小用量を採用し、それを2回の分割注入12日目と14日目で投与すると、投与レジメンが改善され、低用量の多回投与が単回のボーラス投与よりも有効でありうることを示唆した。得られたデータを表12に示す。C17.15モノクローナル抗IL-12を、総量0.1mg/マウス又は0.05mg/マウスを1日の間隔をおいて2回の分割用量で投与すると、結腸の消耗と肉眼的外観によって評価したとき、大腸炎の完全な逆転を導いた。さらに、この投与スケジュールは、固有層T細胞のIFN-γ産生及びマクロファージのIL-12産生の有意の下方調節を導き、後者はTNBS-大腸炎のない対照エタノール処置マウスで見られたレベルと同等であった。従って、TNBS大腸炎に関するマウスモデルへのC17.15の投与は用量依存的に疾患の進行を逆転した。C.α-IL-12抗体によるマウスでの実験的自己免疫性脳脊髄炎EAEの抑制IL-12は多発性硬化症MSの病因において役割を果たすと一般的に信じられている。誘導性IL-12p40メッセージがMS患者の急性斑において発現されるが、炎症性脳梗塞病巣では発現されないことが示されたWindhagen,A.ら1995J.Exp.Med.182:1985-1996。MS患者からのT細胞は、調節されないCD40L発現を通して抗原呈示細胞からのIL-12産生を刺激する対照T細胞は刺激しないBalashov,K.E.ら1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:599-603。MS患者は、invitroでα-IL-12抗体によって遮断されうる高いIFN-γ分泌を有するBalashov,K.E.ら1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:599-603。MS患者では高いレベルの血清IL-12が検出されるが、これは他の神経学的疾患では見られないNicoletti,F.ら1996J.Neuroimmunol.70:87-90。MS患者ではIL-12産生の上昇は疾患の活動と相関することが示されたCormabella,M.ら1998J.Clin.Invest.102:671-678。多発性硬化症のマウスモデル、実験的自己免疫性脳脊髄炎EAEの病因におけるIL-12の役割が検討されているLeonard,J.P.ら1995J.Exp.Med.181:281-386;Banerjee,S.ら1998ArthritisRheum.199841:S33;及びSegal,B.M.ら1998J.Exp.Med.187:537-546。このモデルにおける疾患は、TH1サブセットのT細胞によって誘発されることが知られている。それ故、α-IL-12抗体が急性EAEの発症を予防する能力を評価した。α-IL-12抗体は、自己抗原であるミエリン塩基性タンパクBanerjee,S.ら1998ArthritisRheum.199841:S33で免疫したマウスにおいて急性EAEの発症を阻害し、発症後の疾患を抑制し、再発の重症度を低下させうることが認められた。マウスにおけるα-IL-抗体処置の有益な作用は、治療停止後2ヵ月以上持続した。また抗IL-12抗体が、養子免疫伝達による脳炎誘発性T細胞のレシピエントであるマウスにおいて疾患を抑制することも明らかにされたLeonard,J.P.ら1995J.Exp.Med.181:281-386。実施例9:J695の臨床薬理二重盲検交叉試験試験において、ヒト男性被験者に漸増用量のJ695又はプラセボを投与した。投与前と15分後の補体断片C3aの測定は補体系の活性化を示さなかった。併発感染の症状が認められた被験者においてのみCRPとフィブリノーゲンレベルが上昇した。すべの被験者が生存し、J695の全体的な耐容性は非常に良好であった。有害事象AEのために治療を中止しなければならない症例はなかった。最も一般的に認められたAEは頭痛と普通の風邪/気管支炎で、どちらも重度とは分類されなかった。試験被験者のうちの1名、33歳の独身男性が試験開始時に滴状乾癬に罹患した。無作為化試験デザインに従って、この被験者は偶然に、SC投与により5mg/kgのJ695を摂取した。抗体投与の10日前に、被験者は両腕と両脚に小さな散在性丘疹状病変だけを示した。抗体投与の時点で、被験者は発赤の増大、紅斑性プラークの肥厚、及び角質増殖の増大を示した。J695投与の1週間後、被験者は、病巣の平坦化と板状鱗屑の減少を含めた皮膚状態の改善を報告した。J695の2回目の投与5mg/kgIV後まもなく、局所治療を全く行わずに、被験者の皮膚から乾癬病巣が完全に消失した。抗体の2回目の投与後、予想されたJ695のクリアランスに付随して、白色鱗屑でおおわれた紅斑性プラークが再発現した。実施例10:2つのCHO細胞系統によって産生されたJ695の比較J695の組換え発現のために、抗体H鎖と抗体L鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウムを介したトランスフェクションによってdhfr-CHO細胞Urlaub,G.とChasin,L.A.1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-4220に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体H鎖とL鎖の遺伝子を各々エンハンサー/プロモーター調節要素例えば、CMVエンハンサー/AdMLPプロモーター調節要素又はSV40エンハンサー/AdMLPプロモーター調節要素のような、SV40、CMV、アデノウイルス等から誘導したに作動可能に連結して、高いレベルの遺伝子転写を駆動する。組換え発現ベクターはDHFR遺伝子も担い、かかる遺伝子は、メトトレキセート選択/増幅を用いてベクターでトランスフェクションされたCHO細胞の選択を可能にする。ヒト抗体J695のペプチド配列をコードする発現ベクター150μgを、50ml円錐管において水2.7mlに溶解した。2.5MCaCl2300μLを加え、このDNA混合物を50ml円錐管中の2×HEPES緩衝食塩水3mlに滴下して加えた。5秒間渦動撹拌し、室温で20分間インキュベーションしたあと、1mLを各プレートに均一に分配しまだF12培地中で、プレートを37°Cで4時間インキュベーションした。吸引によって液体を除去し、F12中10DMSO2mlを各プレートに加えた。DMSOショックを1時間継続し、その後各プレートにPBS5mlを加えてDMSOを希釈した。プレートをPBS中で2回洗浄し、H/Tと5FBSDHFRを発現する細胞に対して選択性を補足したαMEM10mlを加えて37°Cでひと晩インキュベーションした。100細胞/穴の密度で96穴プレートに細胞を接種し、プレートを37°C、5CO2で、週に1回培地を交換して2週間インキュベーションした。最後の培地交換から5日後、培養上清を1:50に希釈し、ヒトIgGγ鎖に特異的なELISAを用いて試験した。最も高いELISAシグナルを生じたクローンを96穴プレートから12穴プレートの1.5ml/穴のαMEM5透析血清中に移した。3日後、もう1つ別のヒトgGγ鎖に特異的なELISAを実施して、最大活性を持つ12クローンをαMEM5透析血清と20nMMTXに分割した。細胞系統031898218は20nMMTXの存在下で、見かけ上の細胞死又は増殖率の低下を伴わずに増殖し、3日間のアッセイで1.8μg/mlhIgGを産生した。MTXを含む培地で増殖した031898218のT-25培養は平均11.9μg/mlのJ695を産生した。ALP903と称される系統を無血清条件下の懸濁液中での増殖に適合させ、かかる系統は7.5pgJ695/細胞/24時間を産生した。αMEM/5FBS/20nMMTX中での初期選択後、ALP903細胞を再び20nMMTX中で継代した。100nMMTX選択下で細胞を培養し、その後の30日間に2回500nMMTX中で継代した。その時点で細胞は32μgのJ695/mL/24時間を産生していた。細胞を限界希釈によってサブクローニングした。サブクローン218-22は、96穴プレートにおいて2日間で16.5μg/mL、12穴プレートでは2日間で50.3μg/mLのJ695を産生した。クローン218-22をαMEM/5透析FBS/500nMMTX中で38日間培養し、次いで上述したように無血清スピナー培養に適応させた。ALP905と称される、無血清懸濁液培養の細胞特異的生産能の平均は58pg/細胞/24時間であった。J695を生成するために使用した最初の細胞系統ALP903は、第二の細胞系統、ALP905よりも低い収量の培養からの抗体を生じた。ALP905産生J695がALP903から生成されるものと機能的に同じであることを確認するために、両方のバッチの抗体を、IL-12親和性、細胞レセプタへのIL-12結合を遮断する能力、IL-12によるIFN-γ誘発を阻害する能力、及びIL-12が仲介するPHA芽細胞増殖を阻害する能力に関して評価した。J695のバッチALP903とALP905のIL-12に対する親和性を、表面プラスモン共鳴試験BIAコア分析によりIL-12への結合速度反応定数を測定して検討した。rhIL-12への結合に関する抗体バッチALP903とALOP905のオフ速度定数kdとオン速度定数kaを3つの実験実施例3で述べたようなにおいて測定した。IL-12への結合の親和性、Kdは、オフ速度定数をオン速度定数で割って算定した。Kdを各々別々の実験について算定し、それらを平均した。その結果は、測定した反応速度パラメータとrhIL-12への結合の親和性が、J695バッチALP903とALP905について非常に類似していることを示した:算定したKdは、バッチALP903については1.19±0.22×10-10M、バッチALP905については1.49±0.47×10-10Mであった表13参照。ALP903とALP905から誘導したJ695が、ヒトPHA活性化Tリンパ芽球上のIL-12レセプタへのrhIL-12の結合を遮断する能力を評価した実施例3参照。J695の各々のサンプルを、出発濃度を1×10-8として10倍の連続希釈で試験した。抗体を結合緩衝液中で50pM[125I]-ヒトIL-12と共に37°Cで1時間プレインキュベーションした。PHA芽細胞を抗体/[125I]-ヒトIL-12混合物に加えて室温で2時間インキュベーションした。遠心分離と洗浄ステップによって細胞結合放射能を遊離[125I]-IL-12から分離し、阻害を計算した。4-パラメータ曲線適合を用いて阻害曲線からJ695のIC50値を推定し、2つの独立した実験によって確認した。インキュベーションは2回実施した。J695の2つのバッチに関する結果は非常に類似していた表13参照。ALP903とALP905細胞からのJ695が、invitroでヒトPHA活性化Tリンパ芽球によるrhIL-12誘発のIFN-γ産生を阻害する能力を評価した。J695の連続希釈を200pg/mLのrhIL-12と共に37°Cで1時間プレインキュベーションした。PHAリンパ芽球を加えて37°Cで18時間インキュベーションした。インキュベーション後、無血清上清を採取し、ELISAによってヒトIFN-γのレベルを測定した。4-パラメータ曲線適合を用いて阻害曲線からのIC50値を抗体濃度に対してプロットした。結果は、2つのバッチのIFN-γ産生を阻害する能力が極めて類似することを明らかにしている。invitroでのPHA芽細胞増殖アッセイを使用して、rhIL-12に関するALP903とALP905J695の中和能力を測定した。各々のタイプのJ695の連続希釈を230pg/mLのヒトIL-12と共に37°Cで1時間プレインキュベーションした。次にPHA芽細胞を加えて37°Cで3日間インキュベーションした。次に細胞を1γCi/穴[3H]-チミジンで6時間標識した。培養物を回収し[3H]-チミジン取り込みを測定した。rhIL-12の不在下で非特異的増殖バックグラウンドを測定した。ALP903とALP905J695に関するIC50値は非常に類似することが認められ、表13に示している。rhIL-12活性を中和し、細胞表面レセプタへのIL-12結合を遮断し、rhIL-12に結合する上でのJ695抗体の活性は、バッチALP903とバッチALP905で有意に異ならず、従ってこれら2つの異なる細胞型から産生される抗体は等価であった。等価物当業者は、常套的な実験だけを用いてここで述べた本発明の特定実施形態の多くの等価物を認識する、若しくは確認できるであろう。そのような等価物は特許請求の範囲に包含されることが意図されている。"