"以下の式Iの置換フェナントレン化合物、またはその塩、溶媒和物、若しくは生理学的に機能性の誘導体を有効成分として含む、がんを予防および/または治療するための医薬組成物。前記がんは、膵臓がん、胃がん、大腸がん、腎臓がん、肝臓がん、骨髄がん、副腎がん、皮膚がん、メラノーマ、肺がん、小腸がん、前立腺がん、精巣がん、子宮がん、乳がんまたは卵巣がんである、請求項1に記載の医薬組成物。前記がんは膵臓がんである、請求項2に記載の医薬組成物。本発明は、上記した問題点を解決することを解決すべき課題とした。より詳しくは、本発明は、公知のがん細胞増殖抑制効果を有する置換フェナントレン化合物と比較して、優れたがん細胞増殖抑制効果を有する置換フェナントレン化合物を含む医薬組成物を提供することである。本発明者らは、候補置換フェナントレン化合物が、公知のがん細胞増殖抑制効果を有する置換フェナントレン化合物と比較して、優れたがん細胞増殖抑制効果、さらには副作用を有さないことを見出したことを基にして、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の通りである。1.以下の式Iの置換フェナントレン化合物、またはその塩、溶媒和物、若しくは生理学的に機能性の誘導体を有効成分として含む、がんを予防および/または治療するための医薬組成物。2.前記がんは、膵臓がん、胃がん、大腸がん、腎臓がん、肝臓がん、骨髄がん、副腎がん、皮膚がん、メラノーマ、肺がん、小腸がん、前立腺がん、精巣がん、子宮がん、乳がんまたは卵巣がんである、前項1に記載の医薬組成物。3.前記がんは膵臓がんである、前項2に記載の医薬組成物。本発明では、公知の置換フェナントレン化合物を含む医薬組成物と比較して、優れたがん細胞増殖抑制効果、さらには副作用を有さない置換フェナントレン化合物を含む医薬組成物を提供することができた。本発明は、以下の式Iで表される置換フェナントレン化合物3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチル、T26と称する場合がある、またはその塩、溶媒和物、若しくは生理学的に機能性の誘導体を有効成分として含む、がんを予防および/または治療するための医薬組成物に関する。置換フェナントレン化合物の合成方法置換フェナントレン化合物は、公知の方法で製造可能である。例えば、PandeHBhakuniDSJCSPerkinI19762197、ならびにBremmerMLKhatriNAWeinrebSMJOrgChem1983483661に記載される方法、特開201116754特許文献1で開示されている置換フェナントレン化合物No5、T19、T1912の合成方法により合成することができる。各置換フェナントレン化合物の構造式は、以下の通りである。{式Iの化合物の合成方法}本発明の式Iで表される置換フェナントレン化合物である3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチルは、公知の方法で製造可能である。例えば、CuiMWangQEurJOrgChem200954455451、並びにGoksuSKazazCSutbeyazYSecenHHelvChimActa2003863310331を参照することができる。本発明の置換フェナントレン化合物の特性本発明の式Iで表される置換フェナントレン化合物は、下記実施例7により、公知の置換フェナントレン化合物と比較して、優れたがん細胞増殖抑制効果を示す参照:図2。さらに、本発明の式Iで表される置換フェナントレン化合物は、下記実施例9により、副作用を有さないことを確認している参照:図7~10。加えて、本発明の式Iで表される置換フェナントレン化合物は、下記実施例8により、がん細胞のG2Mアレストの誘導及び/又はアポトーシスの誘導によりがん細胞増殖抑制効果を示すことを確認している参照:図3。。本発明の置換フェナントレン化合物の形態本発明の置換フェナントレン化合物は、1以上の形態で結晶化するこれは多型として知られることがあり、かかる多型形態は本発明の範囲内にある。多型は一般に、温度、圧力またはその両方の変化に応じて生じる。多型は、当技術分野で既知の物理的特性、例えばX線回折パターン、溶解性、および融点により識別することができる。さらに、本発明の置換フェナントレン化合物は、1以上のキラル中心を有する、または多数の立体異性体として存在することができる。本発明の範囲は、異性体例えば、立体異性体、位置異性体、幾何異性体又は光学異性体の混合物ならびに精製された異性体を包含する。本発明の置換フェナントレン化合物の塩本発明の置換フェナントレン化合物の塩は、通常、製薬上許容される塩である。製薬上許容される塩とは、本発明の化合物の無毒性の塩をさす。本発明の化合物の塩には、酸付加塩が含まれる。代表的な塩としては、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、ホウ酸塩、エデト酸カルシウム塩、カンシル酸塩、クラブラン酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、マレイン酸一カリウム塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩二リン酸塩、カリウム塩、サリチル酸塩、ナトリウム塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、トシル酸塩、三ヨウ化エチル塩、トリメチルアンモニウム塩、および吉草酸塩が挙げられる。溶媒和物本明細書において溶媒和物とは、溶質本発明の置換フェナントレン化合物、またはその塩もしくは生理学的に機能性の誘導体および溶媒により形成される錯体をさす。溶媒の例としては、限定するものではないが、水、メタノール、エタノール、および酢酸が挙げられる。生理学的に機能性の誘導体本明細書において生理学的に機能性の誘導体とは、哺乳動物への投与時に、本発明の置換フェナントレン化合物またはその活性な代謝産物を直接または間接的に提供することのできる本発明の置換フェナントレン化合物のあらゆる製薬上許容される誘導体を言う。かかる誘導体、例えばエステルおよびアミド類は、過度の実験を要することなく当業者には自明であるBurgersMedicinalChemistryAndDrugDiscovery第5版Vol1PrinciplesandPractice。がんを予防および/または治療本発明の置換フェナントレン化合物、またはその塩、溶媒和物、もしくは生理学的に機能性の誘導体は、がんの予防および/または治療において有効である。本発明の置換フェナントレン化合物、またはその塩、溶媒和物、もしくは生理学的に機能性の誘導体の有効量をそれを必要とする患者に投与することにより、がんを予防および/または治療することができる。有効量本明細書において有効量とは、例えば研究者または臨床医の望む、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する化合物の量を意味する。本発明の置換フェナントレン化合物の有効量は、例えば、患者の年齢、体重、重症度、製剤の性質、および投与経路に依存する。哺乳動物、特にヒトの治療のための式Iの化合物の有効量は、通常、01~100mgkg日、例えば01~10mgkg日の範囲である。本発明の医薬組成物が対象とするがん本発明において、がんには、膵臓がん、胃がん、大腸がん、腎臓がん、肝臓がん、骨髄がん、副腎がん、皮膚がん、メラノーマ、肺がん、小腸がん、前立腺がん、精巣がん、子宮がん、乳がんまたは卵巣がんが包含される。本発明のがんを予防および/または治療するための医薬組成物は、特に膵臓がんの予防および/または治療に有効である。本発明の置換フェナントレン化合物は、Pim1、Pim2およびPim3のすべての活性を阻害する作用を有することから、本発明のがんを予防および/または治療するための医薬組成物は、Pim1、Pim2および/またはPim3の発現亢進が認められるがんにおいて特に有効である。本発明の置換フェナントレン化合物は、Pim1、Pim2およびPim3の活性阻害剤としても使用できる。本発明の医薬組成物における予防本発明において疾患の予防には、疾患の発症を抑えることおよび遅延させることが含まれ、疾患になる前の予防だけではなく、治療後の疾患の再発に対する予防も含まれる。本発明において疾患の治療には、疾患を治癒すること、症状を改善することおよび症状の進行を抑えることが包含される。本発明の医薬組成物の投与対象本発明の医薬組成物の投与対象は、好ましくは、哺乳動物である。本明細書において哺乳動物は、温血脊椎動物をさし、例えば、ヒトおよびサルなどの霊長類、マウス、ラットおよびウサギなどの齧歯類、イヌおよびネコなどの愛玩動物、ならびにウシ、ウマおよびブタなどの家畜が挙げられる。本発明の医薬組成物は、霊長類、特にヒトへの投与に好適である。担体本発明の医薬組成物は、式Iで表される化合物、またはその塩、溶媒和物、もしくは生理学的に機能性の誘導体と、1以上の製薬上許容される担体を含む。製薬上許容される担体とは、一般的に、本発明の有効成分とは反応しない、不活性の、無毒の、固体または液体の、増量剤、希釈剤またはカプセル化材料等をいい、例えば、水、エタノール、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど、適切なそれらの混合物、植物性油などの溶媒または分散媒体などが挙げられる。本発明の医薬組成物の形態本発明の医薬組成物は、経口により、非経口により、例えば、皮膚に、皮下に、粘膜に、静脈内に、動脈内に、筋肉内に、腹腔内に、膣内に、肺に、脳内に、眼に、および鼻腔内に投与される。経口投与製剤としては、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、チュアブル剤、ペレット剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤および吸入剤などが挙げられる。非経口投与製剤としては、坐剤、保持型浣腸剤、点滴剤、点眼剤、点鼻剤、ペッサリー剤、注射剤、口腔洗浄剤ならびに軟膏、クリーム剤、ゲル剤、制御放出パッチ剤および貼付剤などの皮膚外用剤などが挙げられる。本発明の医薬組成物は、徐放性皮下インプラントの形態で、または標的送達系例えば、モノクローナル抗体、ベクター送達、イオン注入、ポリマーマトリックス、リポソームおよびミクロスフェアの形態で、非経口で投与してもよい。添加剤本発明の医薬組成物はさらに医薬分野において慣用の添加剤を含んでいてもよい。そのような添加剤には、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、抗酸化剤、着色剤、矯味剤などがあり、必要に応じて使用できる。長時間作用できるように徐放化するためには、既知の遅延剤等でコーティングすることもできる。賦形剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、寒天、軽質無水ケイ酸、ゼラチン、結晶セルロース、ソルビトール、タルク、デキストリン、デンプン、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム等が使用できる。結合剤としては、例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、エタノール、エチルセルロース、カゼインナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、寒天、精製水、ゼラチン、デンプン、トラガント、乳糖、ヒドロキシセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、結晶セルロース、デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ロウ類等が挙げられる。抗酸化剤としては、トコフェロール、没食子酸エステル、ジブチルヒドロキシトルエンBHT、ブチルヒドロキシアニソールBHA、アスコルビン酸等が挙げられる。必要に応じてその他の添加剤や薬剤、例えば制酸剤炭酸水素ナトリウム、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、合成ヒドロタルサイト等、胃粘膜保護剤合成ケイ酸アルミニウム、スクラルファート、銅クロロフィリンナトリウム等を加えてもよい。以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されるものではない。なお、以下の全ての動物実験は、金沢大学動物実験規定に従って実施した。{3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチルT26の合成}本発明の式Iで表される置換フェナントレン化合物である3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチルT26化合物5の合成方法以下の通りである。{32acrylicacid:32アクリル酸化合物3}バニリン305g200mmol、4メトキシフェニル酢酸334g201mmol、トリエチルアミン70mL502mmolおよび無水酢酸110mL1163mmolの混合物を24時間加熱還流した。反応溶液を室温まで冷却後、水100mLをゆっくり加えた。次いで、20水酸化ナトリウム水溶液500mLを加えた後、全ての固体が溶解するまで加熱還流を行った。反応溶液を室温まで冷却後、ジエチルエーテルで二回洗浄し、水層に濃塩酸を加えてpH1にした。生じた沈殿を酢酸エチルから再結晶を行い、32acrylicacid409g68を白色固体として得た。{Methyl32acrylate:2アクリル酸メチル化合物4}32acrylicacid240g800mmolのメタノール溶液650mLに濃硫酸20mLを加え、14時間加熱還流した。メタノールを減圧下で留去して得られた固体をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ―石油エーテル―酢酸エチル21で精製し、methyl32acrylate245g97を白色固体として得た。{Methyl3hydroxy26dimethoxyphenanthrene9carboxylate:3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチル}Methyl32acrylate200g637mmolのジクロロメタン溶液1300mLに無水塩化鉄369g223mmolを0°Cで加えた後、同じ温度で2時間撹拌した。反応溶液を水で三回洗浄した後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィージクロロメタンで精製し、3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチル161g81を白色固体として得た。なお、NMRデータにより目的の化合物が合成できていることを確認した。{67ジメトキシナフタレン2カルボン酸化合物9及び67ジヒドロキシナフタレン2カルボン酸の合成}67ジメトキシナフタレン2カルボン酸化合物9T26及び67ジヒドロキシナフタレン2カルボン酸の合成方法以下の通りである。{23Dimethoxynaphthalene23ジメトキシナフタレン}23Dihydroxynaphtalene200g125mmLのアセトン溶液30mLに炭酸カリウム380g275mmolを加え、次いで硫酸ジメチル346g275mmolをゆっくり滴下し、22時間還流した。反応液を室温まで冷却した後にろ過し、減圧下で溶媒を留去した。残渣に水を加え、ジクロロメタンで三回抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。得られた固体に対してヘキサン―酢酸エチル混合溶媒から再結晶を行い、23dimethoxynaphthalene145g62を白色固体として得た。2Acetyl67dimethoxynaphthalene:2アセチル67ジメトキシナフタレン23Dimethoxynaphthalene145g772mmolのジクロロエタン溶液23mLに塩化アセチル727mg926mmolを0°Cで加えた後、塩化アルミニウム278g208mmolを少しずつ加え、同じ温度で75時間撹拌した。反応液に10塩酸を加え、ジクロロメタンで三回抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーヘキサン―酢酸エチル,41で精製し、1acetyl67dimethoxynaphthalene472mg27と2acetyl67dimethoxynaphthalene831mg47をそれぞれ無色結晶として得た。{67Dimethoxynaphthalene2carboxylicacid:67ジメトキシナフタレン2カルボン酸}水酸化ナトリウム408mg102mmolの水溶液15mLに臭素506mg316mmolを0°Cでゆっくり加えた後、2acetyl67dimethoxynaphthalene235mg121mmolのテトラヒドロフラン溶液2mLを加え、室温で8時間撹拌した。水層を有機層と分離し、水層に氷と亜硫酸ナトリウム200mgを加えた後、15塩酸を加えてpHを3以下にした。生じた沈殿をろ取して、水で洗浄して67dimethoxynaphthalene2carboxylicacid化合物9119mg51を白色固体として得た。なお、NMRデータにより目的の化合物が合成できていることを確認した。{67Dihydroxynaphthalene2carboxylicacid:67ジヒドロキシナフタレン2カルボン酸}67dimethoxynaphthalene2carboxylicacid化合物9100mg0431mmolのジクロロメタン溶液7mLに三臭化ホウ素を-78°Cで加えた後、室温で2時間撹拌した。反応液に水30mg172mmolを加えて撹拌した後、減圧下で溶媒を留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィージクロロメタン―メタノール101で精製し、67dihydroxynaphthalene2carboxylicacidを白色固体として得た。なお、NMRデータにより目的の化合物が合成できていることを確認した。{236トリメトキシフェナントレン9カルボン酸T19の合成}236トリメトキシフェナントレン9カルボン酸T19化合物16の合成方法以下の通りである。32アクリル酸の合成4メトキシフェニル酢酸のテトラヒドロフラン50ml溶液にカリウムtertブトキシドを加え、混合物を室温で3時間撹拌し化合物11を調製した。溶媒を留去し、2ブロモ45ジメトキシベンズアルデヒドと酢酸無水物を加え、混合物を105°Cで15時間加熱した。熱水を加え、混合物を室温で一晩撹拌し、結晶をろ取した。ろ液をクロロホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、乾燥したのち溶媒を留去した。残さと結晶を合わせ、エタノール/ヘキサンから再結晶すると化合物13が得られた。メチル32アクリレートの合成化合物13のアセトニトリル溶液に18ジアザビシクロ5407ウンデセンとヨードメタンを室温で加え、混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で薄め、エチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥後、溶媒を留去した。残さをヘキサン/酢酸エチルで再結晶すると化合物14が得られた。メチル236トリメトキシフェナントレン9カルボキシレートの合成化合物14の還流トルエン溶液に、水素化トリブチルスズと11アゾビスのトルエン溶液を1時間かけて滴下した。混合物を更に3時間加熱還流したのち、溶媒を留去し、残さを10のフッ化カリウムを含むシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物15が得られた。236トリメトキシフェナントレン9カルボン酸の合成化合物15をメタノールとテトラヒドロフランに溶解し、10水酸化ナトリウム水溶液を加え、60°Cで1時間撹拌した。放冷後、反応液に10塩酸を加え酸性とし、塩化メチレンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、乾燥し、溶媒を留去した。残渣をヘキサン/酢酸エチルから再結晶すると化合物16が得られた。なお、NMRデータにより目的の化合物が合成できていることを確認した。{236トリメトキシフェナントレン10カルボン酸T191の合成}236トリメトキシフェナントレン10カルボン酸T191化合物22の合成方法は以下の通りである。23アクリル酸の合成pアニスアルデヒドと2ブロモ45ジメトキシフェニル酢酸を無水酢酸とトリエチルアミンの混液に室温で加え、混合物を110°Cで9時間加熱した。水を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をクロロホルムで抽出し、有機層を乾燥させ、溶媒を留去した。残さを10水酸化ナトリウム水溶液に溶かし、エチルエーテルで抽出した。水層を10塩酸で酸性にし、クロロホルムで抽出した。有機層を乾燥させ、溶媒を留去すると化合物19が得られた。メチル23アクリレートの合成化合物19のアセトニトリル溶液に18ジアザビシクロ5407ウンデセンとヨードメタンを室温で加え、混合物を室温で3時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で薄め、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥したのち、溶媒を留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーを通したのち、溶媒を留去し、ヘキサン/酢酸エチルで再結晶すると化合物20が得られた。メチル236トリメトキシフェナントレン10カルボキシレートの合成化合物20と11アゾビスの還流クロロベンゼン溶液に、水素化トリブチルスズと11アゾビスのクロロベンゼン溶液を2時間かけて滴下した。混合物を更に1時間加熱還流したのち、溶媒を留去し、残さを10のフッ化カリウムを含むシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物21が得られた。236トリメトキシフェナントレン10カルボン酸の合成化合物21をメタノールとテトラヒドロフランに溶解し、10水酸化ナトリウム水溶液を加え、60°Cで1時間撹拌した。放冷後、反応液に10塩酸を加え酸性とし、塩化メチレンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、乾燥し、溶媒を留去した。残渣をヘキサン/酢酸エチルから再結晶すると化合物22が得られた。なお、NMRデータにより目的の化合物が合成できていることを確認した。{238トリメトキシフェナントレン10カルボン酸T192の合成}238トリメトキシフェナントレン10カルボン酸T192化合物27の合成方法以下の通りである。23アクリル酸の合成oアニスアルデヒドと2ブロモ45ジメトキシフェニル酢酸を無水酢酸とトリエチルアミンの混液に室温で加え、混合物を110°Cで4時間加熱した。水を加え、混合物を50°Cで1時間撹拌した。反応混合物を塩化メチレンで抽出し、有機層を乾燥させ、溶媒を留去した。残さを10水酸化ナトリウム水溶液に溶かし、エチルエーテルで抽出した。水層を10塩酸で酸性にし、塩化メチレンで抽出した。有機層を乾燥させ、溶媒を留去した。残さをヘキサン/酢酸エチルで再結晶すると化合物24が得られた。メチル23アクリレートの合成化合物24のアセトニトリル溶液に18ジアザビシクロ5407ウンデセン0570ml381mmolとヨードメタンを室温で加え、混合物を室温で1時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、エチルエーテルで抽出した。有機層を乾燥したのち、溶媒を留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーを通したのち、溶媒を留去し、ヘキサン/酢酸エチルで再結晶すると化合物25が得られた。メチル238トリメトキシフェナントレン10カルボキシレートの合成化合物25と11アゾビスの還流クロロベンゼン溶液に、水素化トリブチルスズと11アゾビスのクロロベンゼン溶液を3時間かけて滴下した。溶媒を留去し、残さを10のフッ化カリウムを含むシリカゲルカラムクロマトグラフィーに通し、ヘキサン/酢酸エチルで再結晶すると化合物26が得られた。238トリメトキシフェナントレン10カルボン酸の合成化合物26180mg0552mmolをメタノール28mlとテトラヒドロフラン70mlに溶解し、10水酸化ナトリウム水溶液14mlを加え、60°Cで1時間撹拌した。放冷後、反応液に10塩酸を加え酸性とし、塩化メチレンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、乾燥し、溶媒を留去した。残渣をヘキサン/酢酸エチルから再結晶する化合物27130mg76が得られた。なお、NMRデータにより目的の化合物が合成できていることを確認した。材料及び方法以下の細胞、抗体、並びに統計分析手法を使用して実施例を行った。詳細は、以下の通りである。細胞系および抗体ヒト膵臓癌細胞系であるPCI35、PCI55、PCI66、PANC1及びMiapaca2をRPMI1640培地SigmaAldrich,ミズーリ州セントルイスで培養した。L3.6pl細胞は、最小必須培地InvitrogenJapan、日本国東京都で維持した。全ての培地には、10ウシ胎仔血清Biowest、50U/mlのペニシリンおよび50U/mlのストレプトマイシンSigmaAldrichを補充した。ウェスタンブロッティング分析には以下の抗体を使用した。マウス抗ヒトBadおよびウサギ抗サイクリンB1抗体SantaCruzBiotechnology、カリフォルニア州サンタクルーズ、ウサギ抗phosphoSer112Bad、抗カスパーゼ3、抗切断カスパーゼ3、抗Cdc25c、抗phosphoSer216Cdc25c、抗切断カスパーゼ9Asp330、抗phosphoAuroraAThr288/AuroraBThr232/AuroraCThr198、抗AuroraB/AIM1CellSignalingTechnology、マサチューセッツ州ビバリー、抗BclXLMedicalandBiologicalLaboratories、日本国名古屋市、抗βアクチン抗体SigmaAldrich、マウス抗phosphoSer10HistoneH3CellSignalingTechnology及びマウス抗チトクロムCBDBiosciences、カリフォルニア州サンホゼ抗体。統計分析得られた全データを計算し、別段の指示が無い限り平均±SDとして表した。差異は、一元配置分散分析を使用し、続いてTukeyKramer試験を使用し、統計学的に分析した。p<0.05は、統計上有意と考えた。細胞増殖アッセイ3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチルが、他の置換フェナントレン化合物と比較して、優れた癌細胞株の成長阻害効果を示すかを確認した。詳細は、以下の通りである。96穴細胞培養用マイクロテストプレートBectonDickinsonに各穴細胞数3000のヒト膵癌細胞株PCI55MiaPaCa2PANC1を培地量100μLで分注した。16~18時間培養後培地を除き、被検化合物を含む培地[01DMSOT19T191T192T26T20T21T27及びT28各化合物の濃度は、510152025μM]を100μL穴で加えた。0、24、48、72、96時間培養を続け、経過後、被検化合物含有培地を除き、10WST1Roche培地を100μL穴で加えた。さらに1時間培養後、マイクロプレートリーダーモデル550、バイオラッドにて波長450nmの吸光度を測定した。なお培地としては、RPMI1640培地SIGMAを用い、10仔牛血清Invitrogen、50UmLペニシリンGSIGMA、50μgmLストレプトマイシンSIGMAを加えた上で使用した。細胞株は、37°C、二酸化炭素濃度5の炭酸ガス細胞培養装置ESPEC内で培養した。なお、IC50値は、ロジスティック回帰分析を使用して計算した。細胞増殖アッセイの結果図1より、T26は濃度依存的にヒト膵癌細胞株PCI55MiaPaCa2PANC1の増殖を阻害した。図2より、T26は、他の置換フェナントレン化合物であるT19T191T192T20T21T27及びT28と比較して、優れた癌細胞株の阻害効果を示した。{3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチルT26の抗がん作用の確認}T26は、どのような機構によりがん細胞の増殖を阻害していることを確認するために、細胞周期分析、細胞アポトーシス分析及びウェスタンブロッティング分析を行った。詳細は、以下の通りである。細胞周期分析6cmプレートに細胞懸濁液5×105/5mlを加え、37°Cで18時間インキュベートした。次いで、所定の濃度の薬剤で細胞を処理し、さらに所定の時間間隔でインキュベートした。浮揚細胞と接着細胞を回収し、4°Cの70エタノールで固定した。固定した細胞を50μg/mlのヨウ化プロピジウムPI、MolecularProbesおよび5μg/mlのRNaseAと共に37°Cで30分間インキュベートした。次いで、CellQuest分析ソフトウェアを使用し、DNA含有量をFACSCantoIIシステムBDBiosciencesで分析した。細胞アポトーシス分析薬剤で処理後、所定の時間間隔で、細胞を回収し、ヒトAnnexinVFITCアポトーシスキットBenderMedSsytemsGmbH、オーストリア国ウィーンとプロピジウムヨウ素PI:propidiumiodineで染色した。各定量については、FACSCantoIIシステムBDBiosciencesにより少なくとも20,000個の染色細胞を分析した。ウェスタンブロッティング分析100mMの培養プレートに1.5×106個のMiapaca2またはPCI66細胞を分注し、18時間インキュベートした。薬剤を終濃度20μMでプレートに加えた。所定の時間間隔で、完全プロテイナーゼ阻害薬混合物RocheDiagnosticsAG、スイス国Rotkreutzを含むCellLyticTM細胞溶解試薬SigmaAldrich50μlに、浮揚細胞と接着細胞を懸濁し、超音波処理を使用し破砕した。遠心分離後、得られた上清40~60μgを免疫ブロットにかけた。抗βアクチン抗体を使用し、等量のタンパク質が分析に使用されたことを確認した。LAS4000miniCDDカメラGEHealthcareBiosciencesを使用しシグナルを検出した。T26の抗がん作用の確認結果図3により、T26添加用量依存的に、ヒト膵臓癌細胞系であるMiapaca2およびPCI66中のG2/M期中にある細胞の比率が増加し、そして交換的にG0/G1期の細胞の比率が減少したことを確認した。図4により、時間経過と共に、Cdc25Cの減少とリン酸化Cdc25Cの増加という、G2/M期の細胞進行に関わる分子の量の変動をみた。加えて、処理から24時間後には、リン酸化BadならびにBclXLを減少させたが、全カスパーゼ3にほとんど影響を与えることなく、チトクロムCおよび切断カスパーゼ3を増加したことを確認した。図5により、T26処理から時間経過と共に、初期アポトーシス細胞AnnexinV陽性及びPI陰性と後期アポトーシス細胞AnnexinV陽性及びPI陽性の比率が増加したことを確認した。以上により、T26は、がん細胞のG2Mアレストの誘導及び/又はアポトーシスの誘導によりがん細胞増殖抑制効果を示すことを確認した。より詳しくは、T26は、Badのリン酸化を防止できること、BclXLを減少できること、ならびにチトクロムCおよびカスパーゼ3依存方式で最終的にアポトーシスを誘発できると考えられる。{3ヒドロキシ26ジメトキシフェナントレン9カルボン酸メチルT26の抗がん作用の確認}T26の生体内腫瘍増殖に及ぼす影響を確認するために、T26が投与された担ガンマウスの体重及び腫瘍量、各陽性細胞を測定した。さらに、T26投与による副作用の有無について確認するために、T26が投与された担癌マウスの血液パラメーター及び生化学的パラメーターを測定した。詳細は、以下の通りである。動物実験ヒト膵臓癌細胞系であるPCI66細胞を2×107細胞/mlの濃度でハンク平衡塩類溶液に懸濁し、細胞懸濁液100μlをBALB/cnU/nuマウスSLC、日本国静岡県の背に皮下注射した。腫瘍の注射から14日後、20mg/kgの用量の薬剤またはビヒクルを5日間1日1度、続いて2日おきに腹腔内注射した。このサイクルを延べ3回繰り返した参照:図6。3、4日毎にノギスを使用し腫瘍サイズを測定しつつ、腫瘍量を以下のように計算した。腫瘍量mM3=最大径mM×最小径2mM/2腫瘍の注射から36日後、腫瘍を除去すると同時に採血した。そして、公知の装置により、生化学的パラメーターであるアラニンアミノトランスフェラーゼALT活性、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼAST活性、クレアチニンCre濃度、血液尿素窒素BUN濃度、血糖値GLU濃度及び電解質NaClK濃度、並びに血液パラメーターである血球数RBC、血小板数Platelets、白血球数WBC、好中球濃度Neutrophil、好酸球濃度Eosinophils、好塩基球濃度Basophil、リンパ球濃度Lymphocytes及び単球濃度Monocytesを測定した。さらに、別の一連の実験では、腫瘍の注射から36日後に腫瘍組織を除去し、抗増殖性細胞核抗原PCNA抗体BDBiosciences、抗切断カスパーゼ3CellSignalingTechnology、または抗CD31抗体BDBiosciencesを使用して、PCNA3陽性細胞数、切断カスパーゼ3陽性細胞数、及びCD31陽性postive血管野を定量した。動物実験結果図71により、T26が投与された担ガンマウスは、体重減少及び食欲不振が存在しないことを確認した。図72により、ビヒクル処理されたDMSOが投与された担ガンマウスは、進行性腫瘍増殖を示したことを確認した。一方、T26が投与された担ガンマウスの腫瘍増殖は顕著に遅延したことを確認した。図8により、T26投与36日目では、腫瘍中のPCNA陽性増殖性細胞数は著しく減少したが、交換的に切断カスパーゼ3陽性アポトーシス細胞数が増加したことを確認した。また、CD31陽性血管野は、ビヒクル処理と比較して著しく減少したことを確認した。図9及び図10により、血液パラメーターの一つである白血球数に関し、T26が投与された担ガンマウスは、ビヒクル処理された担ガンマウスと比較して、低い値を示しているが有意差は認められない上に、T26が投与された担ガンマウスの血中の白血球数は、正常範囲内である。なお、白血球数以外の血液パラメーターでは、T26が投与された担ガンマウスは、ビヒクル処理された担ガンマウスと比較して有意な差異はなかった。同様に、生化学的パラメーターに関し、T26が投与された担ガンマウスは、ビヒクル処理された担ガンマウスと比較して有意な差異はなかった。以上により、T26は、副作用特に、肝機能及び血球数を誘発することなく、生体内腫瘍増殖を抑制することができた。総論本発明の医薬組成物は、公知の置換フェナントレン化合物を含む医薬組成物と比較して、優れたがん細胞増殖抑制効果、さらには副作用を有さない。加えて、本発明の医薬組成物は、G2Mアレストの誘導及び/又はアポトーシスの誘導によりがん細胞増殖抑制効果を示すという特有の効果を有する。"