"増幅反応試薬として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、標的核酸と、核酸ポリメラーゼと、一種又は二種以上のマグネシウム塩とが含まれる増幅反応において標的核酸の増幅特異性を高めるための方法であって、a一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと担体核酸とを含むプライマー/担体混合物を調製し、そしてb前記プライマー/担体混合物に、標的核酸、一種又は二種以上のマグネシウム塩及び核酸ポリメラーゼを接触させることを特徴とする方法。前記担体核酸が、DNA、RNA及びペプチド核酸PNAからなる群より選択される、請求項1に記載の方法。前記DNAがウシ胸腺DNAである、請求項2に記載の方法。前記担体核酸の前記増幅反応における存在濃度が1mL当たり1~100μgの範囲である、請求項1に記載の方法。前記担体核酸の前記増幅反応における存在濃度が1mL当たり5~75μgの範囲である、請求項4に記載の方法。前記混合物を、前記増幅反応の開始前に90~100°C未満の温度で維持する、請求項1に記載の方法。前記温度を熱サイクルの開始前に維持する、請求項6に記載の方法。前記ポリメラーゼがTaqポリメラーゼを含む、請求項1に記載の方法。前記マグネシウム塩が塩化マグネシウムを含む、請求項1に記載の方法。前記混合物がさらに、抗ポリメラーゼ抗体、エキソヌクレアーゼ及びグリコシラーゼからなる群より選択された成分又はこれらの任意の組合せを含む、請求項1に記載の方法。増幅反応試薬として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、Taqポリメラーゼと、塩化マグネシウムとが含まれる増幅反応において標的核酸の増幅特異性を高めるための方法であって、a一種又は二種以上のプライマーとウシ胸腺DNAを含む担体核酸とを含むプライマー/担体混合物を調製し、そしてb前記プライマー/担体混合物に、標的核酸、Taqポリメラーゼ及び塩化マグネシウムを接触させ、さらに、前記増幅反応における担体核酸の濃度を増幅反応体積1mL当たり1~100μgの範囲とすることを特徴とする方法。増幅反応試薬として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、ポリメラーゼと、一種又は二種以上のマグネシウム塩とが含まれる、標的核酸を増幅するための反応において非標的核酸のポリメラーゼ伸長を抑制するための方法であって、a一種又は二種以上の増幅プライマーと担体核酸とを含むオリゴヌクレオチドプライマー/担体核酸混合物を調製し、そしてb前記プライマー/担体混合物に、標的核酸、ポリメラーゼ及び一種又は二種以上のマグネシウム塩を接触させることを特徴とする方法。前記担体核酸が、DNA、RNA及びペプチド核酸PNAからなる群より選択される、請求項12に記載の方法。前記DNAがウシ胸腺DNAである、請求項13に記載の方法。前記担体核酸の前記増幅反応における存在濃度が1mL当たり1~100μgの範囲である、請求項12に記載の方法。前記担体核酸の前記増幅反応における存在濃度が1mL当たり5~75μgの範囲である、請求項15に記載の方法。前記混合物を、前記増幅反応の開始前に90~100°C未満の温度で維持する、請求項16に記載の方法。前記温度を熱サイクルの開始前に維持する、請求項17に記載の方法。前記ポリメラーゼがTaqポリメラーゼを含む、請求項12に記載の方法。前記マグネシウム塩が塩化マグネシウムを含む、請求項12に記載の方法。前記混合物がさらに、抗ポリメラーゼ抗体、エキソヌクレアーゼ及びグリコシラーゼからなる群より選択された成分又はこれらの任意の組合せを含む、請求項12に記載の方法。増幅反応試薬として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、ポリメラーゼと、一種又は二種以上のマグネシウム塩とが含まれる、標的核酸を増幅するための反応においてプライマー二量体その他の非特異的核酸増幅産物の形成を抑制するための方法であって、a一種又は二種以上のプライマーと担体核酸とを含むプライマー/担体核酸混合物を調製し、そしてb前記プライマー/担体混合物に前記標的核酸を接触させ、さらに前記プライマー/担体混合物の調製後に、前記プライマーと、ポリメラーゼ、一種又は二種以上のマグネシウム塩及びこれらの混合物からなる群より選ばれた成分とを接触させることを特徴とする方法。前記担体核酸が、DNA、RNA及びペプチド核酸PNAからなる群より選択される、請求項22に記載の方法。前記担体核酸がDNAである、請求項23に記載の方法。前記DNAがウシ胸腺DNAである、請求項24に記載の方法。前記担体核酸の前記増幅反応における存在濃度が1mL当たり1~100μgの範囲である、請求項22に記載の方法。前記担体核酸の前記増幅反応における存在濃度が1mL当たり5~75μgの範囲である、請求項26に記載の方法。前記混合物を、前記増幅反応の開始前に90~100°C未満の温度で維持する、請求項22に記載の方法。前記温度を熱サイクルの開始前に維持する、請求項28に記載の方法。前記ポリメラーゼがTaqポリメラーゼを含む、請求項22に記載の方法。前記マグネシウム塩が塩化マグネシウムを含む、請求項22に記載の方法。前記混合物がさらに、抗ポリメラーゼ抗体、緩衝剤、デオキシヌクレオチドトリホスフェート、エキソヌクレアーゼ及びグリコシラーゼからなる群より選択された成分又はこれらの任意の組合せを含む、請求項22に記載の方法。前記温度が室温である、請求項6に記載の方法。前記温度が室温である、請求項17に記載の方法。前記温度が室温である、請求項28に記載の方法。これらの方法の中に、プライマー二量体の形成を成功裏に排除することが予測できるものはない。プライマーを慎重に設計し、Taqポリメラーゼとの組合せで引き金抗体又はAmpliTaqGoldを使用することで、プライマー二量体の形成を抑制することはできても、これを排除することはない。このように、当該技術分野では、PCR反応、特に多重反応において、プライマー二量体の形成を一層抑制し、或いは排除するための改良法が必要とされている。本発明は、標的核酸の増幅の特異性を高めるための方法を提供するものである。本発明は、標的に特異的なオリゴヌクレオチド増幅プライマーと核酸ポリメラーゼを要する反応のすべてに適用可能である。本発明は、一側面として、増幅反応混合物として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、核酸ポリメラーゼと、一種又は二種以上のマグネシウム塩とが含まれる増幅反応において標的核酸の増幅特異性を高めるための方法であって、一種又は二種以上のプライマーと担体核酸とを含むプライマー/担体混合物を調製し、そして当該プライマー/担体混合物に、標的核酸、一種又は二種以上のマグネシウム塩及びポリメラーゼを接触させることを特徴とする方法に関する。別の側面として、本発明は、増幅反応混合物として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、Taqポリメラーゼと、塩化マグネシウムとが含まれる増幅反応において標的核酸の増幅特異性を高めるための方法であって、一種又は二種以上のプライマーとウシ胸腺DNAを含む担体核酸とを含むプライマー/担体混合物を調製し、その際に当該担体核酸の濃度を増幅反応混合物1mL当たり約1~約100μgの範囲とし、そして当該プライマー/担体混合物に、約100°C未満の温度で、標的核酸、Taqポリメラーゼ及び塩化マグネシウムを接触させることを特徴とする方法に関する。また別の側面として、本発明は、増幅反応混合物として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、ポリメラーゼと、一種又は二種以上のマグネシウム塩とが含まれる、標的核酸を増幅するための反応において非標的核酸のポリメラーゼ伸長を抑制するための方法であって、一種又は二種以上の増幅プライマーと担体核酸とを含むオリゴヌクレオチドプライマー/担体核酸混合物を調製し、そして当該プライマー/担体混合物に、標的核酸、ポリメラーゼ及びマグネシウム塩を接触させることを特徴とする方法に関する。第四の側面として、本発明は、増幅反応混合物として標的核酸に特異的な一種又は二種以上のオリゴヌクレオチド増幅プライマーと、ポリメラーゼと、一種又は二種以上のマグネシウム塩とが含まれる、標的核酸を増幅するための反応においてプライマー二量体その他の非特異的核酸増幅産物の形成を抑制するための方法であって、一種又は二種以上のプライマーと担体核酸とを含むプライマー/担体核酸混合物を調製し、そして当該プライマー/担体混合物に標的核酸、ポリメラーゼ及びマグネシウム塩を接触させることを特徴とする方法に関する。担体核酸としては、DNA、RNA及びタンパク核酸をはじめとし、どのような核酸でも使用することができる。当該担体をDNAとすることが好ましく、そしてこれをウシ胸腺DNAとすることが最も好ましい。典型的には、最終増幅反応混合物中での濃度が約1~約100μg/mL、好ましくは約5~約75μg/mL、最も好ましくは約25~約50μg/mLの範囲となるように、担体を添加する。本発明の方法は、増幅アッセイ中の非標的核酸のポリメラーゼ伸長を抑制する点で特に有利である。本法は、特に、増幅反応混合物を、増幅反応の開始前に、標的核酸を変性させるのに要する温度よりも低い温度すなわち、100°C未満において維持する場合に適用することができる。このような条件には、例えば、増幅反応混合物を、室温又は室温よりも若干低い温度において約1~約24時間維持するという場合が含まれる。本発明は、核酸増幅混合物に担体核酸を添加すると、標的核酸の増幅の効率及び特異性が相当に高くなるという発見に基づくものである。具体的には、本発明の方法は、熱サイクル工程において増幅混合物の温度を高める前のプライマー二量体の形成量を減少させることにより、増幅アッセイに際して非標的核酸のポリメラーゼ伸長を抑制することとなる。本発明の実施には、分子生物学、微生物学、組換えDNA及びタンパク生化学における多くの技術が使用され、例えば、Sambrooketal1989MolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYorkDNACloningAPracticalApproachVolumesIandII1985OligonucleotideSynthesis1984TranscriptionandTranslation1984APracticalGuidetoMolecularCloningtheseriesMethodsinEnzymology及びProteinPurificationPrinciplesandPracticeSecondEditionに説明がある。本明細書中の用語増幅反応混合物は、少なくとも増幅プライマーと、標的核酸と、デオキシヌクレオチドと、ポリメラーゼと、一種又は二種以上のマグネシウム塩と、緩衝液とを、核酸増幅反応を進行させるに十分な量で含む増幅に十分な混合物をさす。本明細書中の用語核酸又はポリヌクレオチドは、ポリリボヌクレオチドもしくはポリデオキシリボヌクレオチド又はポリリボ/ポリデオキシリボ混合型ヌクレオチドからなる任意の長さのプリン及びピリミジン含有ポリマーをさす。これには一本鎖及び二本鎖の分子、例えば、DNA-DNA、DNA-RNA及びRNA-RNAの各バイブリッド、並びにアミノ酸骨格に塩基を複合化して形成されるタンパク核酸PNAが含まれる。また、変性塩基を含有する核酸も含まれる。本明細書中の用語である相補的な核酸配列は、元の配列とのワトソン-クリック型塩基対合に関与するアンチセンス配列をさす。本明細書中の用語プライマーは、目的の一本鎖核酸配列と二本鎖を形成し且つ、例えば、逆転写酵素又はDNAポリメラーゼの使用により相補鎖の重合を可能ならしめるオリゴヌクレオチドであって、長さがヌクレオチド数で約6~約50、好ましくは約12~約25、最も好ましくは約12~約18の範囲にあるものをさす。本明細書中の用語増幅は、核酸を複製するための反復工程をさす。好適な増幅法には、ポリメラーゼ連鎖反応、リガーゼ連鎖反応、鎖置換増幅法、核酸単一塩基増幅法及び転写介在型増幅法が含まれるが、これらに限定されない。本明細書中の用語標的核酸は、そのサブ配列がPCR反応において増幅される核酸鋳型をさす。内部陽性対照IPC標的核酸は、プラスミドベクター中にクローン化され、その後典型的には制限エンドヌクレアーゼの作用で線状化された合成核酸配列である。IPCは、典型的には、ジェネリックなプローブ結合領域を取り囲む複数のプライマー結合配列を有し、核酸増幅反応において偽陰性結果に対するジェネリックな対照として働く。好適な内部陽性対照標的DNAの配列は以下の通りである。本発明は、標的核酸にハイブリダイズし、標的核酸の酵素的複製を開始するために標的核酸と共に一種又は二種以上のオリゴヌクレオチドをインキュベートする反応であればいずれのものに対しても適用することができる。このような反応には、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応PCR、リガーゼ連鎖反応、鎖置換増幅法、核酸単一塩基増幅法及び転写介在型増幅法が含まれる。これらの反応では、オリゴヌクレオチドプライマー、緩衝液及び塩、デオキシヌクレオチド並びにその他の任意成分を含有するアッセイ特異的マスター混合物を処方する。次いで、標的核酸を添加し、その後、反応を触媒する酵素、例えば、Taqポリメラーゼ、及び/又は反応の進行に必要なマグネシウム塩、例えば、塩化マグネシウム、を添加する。本発明の方法に用いるのに適した他の成分として、低温においてポリメラーゼに結合しこれを不活化するが、高温では自身が不活化されてポリメラーゼを活性化させることになる抗ポリメラーゼ抗体が含まれるが、これに限定されない。また、反応混合物にエキソヌクレアーゼやグリコシラーゼを含めてもよい。本発明を実施する際、標的核酸、ポリメラーゼ又はマグネシウム塩との混合前に、オリゴヌクレオチドプライマーと担体核酸とを接触させる。本発明による担体核酸は、原核生物又は真核生物のDNA及び/又はRNA、合成DNA及び/又はRNA、又はランダム及び/又は特異的なPNAペプチド核酸をはじめとするこれらに限定されない任意の核酸を含むことができる。好ましくは、担体はDNA、最も好ましくはウシ胸腺DNAを含む。本発明で使用するための担体核酸は常用方法により調製することができる。例えば、DNA又はRNAは除タンパク処理により単離することができる。DNAは、例えば、Matteuccietal1981JAmChemSoc1033185に記載のホスホルアミダイト固相担体法、Yooetal1989JBiolChem76417078に記載の方法、その他の周知方法を用いて化学合成することができる。本発明に用いられる核酸は、当該技術分野で知られている任意の手段により修飾することもできる。このような修飾の例として、メチル化、キャップ、天然ヌクレオチドの一又は二以上を類似体で置換すること、ヌクレオチド間修飾、例えば、無荷電結合例、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロアミデート、カルバメート、等又は荷電結合例、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、等で修飾したもの、が挙げられるが、これらに限定されない。核酸は、一又は二以上の追加的な共有結合された部分、例えば、タンパク質例、ヌクレアーゼ、トキシン、抗体、シグナルペプチド、ポリ-L-リジン、等、挿入体例、アクリジン、プソラレン、等、キレート剤例、金属、放射性金属、鉄、酸化性金属、等及びアルキル化剤を含むことができる。核酸は、メチルもしくはエチルホスホトリエステル又はアルキルホスホルアミデート結合の形成により誘導体化されることができる。リン酸基の酸素原子の一又は二以上を硫黄原子に置き換えたチオール化増幅プライマーを、例えば、EcksteinetalAnnRevBiochem54367ZonetalAnticancerDrugDesign6539及びOlsonetalPNAS831451に記載の方法により合成することができる。増幅反応体積における担体核酸の最終濃度が約1~約100μg/mL、好ましくは約5~約75μg/mL、最も好ましくは約25~約50μg/mLの範囲となるに十分な量の担体核酸をプライマー含有マスター混合物に添加する。当該反応におけるプライマーの典型量は約0.1M~約1Mの範囲の濃度である。担体の最適量は具体的なアッセイについて個別に決定することができる。この決定は、標準化されたマスター混合物への担体核酸の添加量を増加させていき、標的核酸及び酵素を添加し、そして反応に引き続き、特異的増幅産物と非特異的増幅産物の量を監視することにより行うことができる例えば、後述の例1を参照のこと。担体核酸は、標的核酸の添加前にオリゴヌクレオチドプライマーと混合することが好ましい。次いで、そのプライマー/担体混合物を標的核酸、当該増幅反応を触媒するポリメラーゼ及び当該ポリメラーゼの効率的作用に欠かせないマグネシウム塩と混合する。典型的には、その反応混合物を、増幅反応の開始前に約90~約100°C未満の温度に維持する。好ましくは、増幅を熱サイクルにより行い、そして混合物の温度を熱サイクルの開始前に約90~約100°C未満の温度に維持する。最も好ましくは、当該反応混合物を増幅反応の開始前にほぼ室温において維持する。理論に拘束されることを望むものではないが、プライマー二量体の形成が抑制されるメカニズムとして異なるいくつかのものが考えられる。第一は、ポリメラーゼが担体核酸に結合するというものである。このことは、混合物にさらに抗ポリメラーゼ抗体を存在させる場合に特に有益である。抗ポリメラーゼ抗体が結合していないポリメラーゼ分子が担体核酸に結合されることにより、存在するかもしれない対合したプライマーが伸長する可能性を一層低くするからである。第二に、担体核酸は混合物中の対合したプライマーの数を減らすと考えられる。プライマーは担体DNAにも弱くアニールするためである。プライマーが担体核酸に結合することにより形成された非特異的伸長産物は、これらの非特異的部位のための対合プライマーが存在しないため、PCRの標的増幅段階において増幅されない。このため、プライマー二量体の形成その他の非特異的核酸産物の形成が抑制される。以下の実施例は本発明を限定することなく説明するものである。実施例1:HIV配列のPCR増幅に対する担体核酸の効果HIV増幅反応に担体核酸を添加した効果を監視するために以下の実験を実施した。表1に示した11種のプライマー、トリス緩衝液、dNTP、AmpliTaq、及び二種のAmpliTaq引き金抗体米国特許第5,338,671号及び同第5,587,287号;欧州特許第0592035号を含有するマスター混合物を配合した。マスター混合物は、ウシ胸腺DNAを含まないものと含むものとを調製したそれぞれ第Iグループ、第IIグループ。第Iグループ、第IIグループのアリコート各50μLに、25μLの16mMMgCl2を添加し、続いて25μLの標的混合物20mMNaOHに13.3コピーの内部陽性対照標的核酸を含むを添加した。各グループにつき、3種類の実験プロトコルを採用した。これを以下の表2に示す。Ia,b,c=マスター混合物中に担体DNAは含まないIIa,b,c=マスター混合物中に担体ウシ胸腺DNAを含む反応混合物の一組記号Aで表すでは、IPCプライマーはチオール化されていないが、第二の組記号Bで表すでは、IPCプライマーはチオール化されている。すべての反応は2回繰り返した。混合物の75μLのアリコートをブランクの核酸パウチOrthoClinicalDiagnosticsRochesterNYに添加した。PCR増幅反応の条件は以下の通りとした。1DNA及びAmpliTaq引き金抗体を完全変性させるため96°C3分間;296°C5秒間に続く62°C40秒間を5サイクル;396°C5秒間に続く68°C40秒間を35サイクル。増幅産物をパウチから取り出し、トリス-ホウ酸緩衝液中で4アガロースゲル電気泳動法により分離した。増幅DNA産物を臭化エチジウム染色法により検出した。実験結果は、ゲルの写真において特異的IPC産物及び非特異的産物プライマー二量体その他の正しくないプライミング産物の強度を目視検査することにより評価した表3。特異的及び非特異的な産物のバンド強度を0~10のスケールで目視評価した。ここで0は検出できるバンドが存在しないことを、そして10は最大強度をそれぞれ表す。NAは評価されなかったことを表す。3種のサブセットa~cのすべてにおいて、第IIグループの増幅反応は、第Iグループと比較して、特異的産物のバンドは強く、非特異的産物のバンドは弱くなった。このことは、実験のA部非チオール化IPCプライマーを使用についても、実験のB部チオール化IPCプライマーを使用についても当てはまった。4種類のグループのすべてにおいて、熱サイクル工程の前に約4時間室温で混合物をインキュベーションすることを含み、プライマー二量体の形成により有利な条件を混合物に適用するほどa~c、プライマー二量体産物の量は増加し、そして特異的産物の量は減少した。I-cでは、唯一の可視ゲルバンドは強いプライマー二量体のバンドであった。対照的に、II-cの反応では、強い産物バンドが認められ、これに釣り合うようにプライマー二量体産物は非常に少なくなった。最後に、IPCプライマーのチオール化B部は、特異的産物の合成を若干増加させることとなったが、これは担体核酸を含むマスター混合物の配合によるほどの利益ではなかった。全ての特許、出願、論文、刊行物、及び本明細書で記載の試験方法は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。当業者は、上記の詳細な説明に関して、本発明の多くの変形を提案するはずである。かかる明確な変形は、添付の特許請求の範囲で十分意図される範囲内である。"