"患者の神経変性疾患または神経損傷を治療する方法であって、治療的有効量のCTX0E03細胞を患者へ投与する工程を含み、前記投与は静脈内或いは動脈内に行われる方法。前記CTX0E03細胞は約1.0×104細胞から約1.0×109細胞が投与される請求項1の方法。前記CTX0E03細胞は約1×105から約1×107細胞が投与される請求項2の方法。1×107のCTX0E03細胞が投与される請求項1の方法。更にハンクス液およびN-アセチルシステインを更に含む治療的組成物内の前記CTX0E03細胞を投与する工程を更に含む請求項1の方法。前記CTX0E03細胞は冷凍保存されたCTX0E03細胞である請求項1の方法。前記CTX0E03細胞は前記患者へ投与される前に継代される請求項6の方法。前記神経変性疾患は脳卒中である請求項1の方法。前記CTX0E03細胞は前記脳卒中の最初の7日以内に投与される請求項8の方法。前記CTX0E03細胞は前記脳卒中の2日以内に投与される請求項9の方法。患者の神経変性疾患を治療する方法であって、1×107のCTX0E03細胞を患者へ投与する工程を含み、前記投与は静脈内または動脈内に行われる方法。ハンクス液およびN-アセチルシステインを更に含む治療的組成物内のCTX0E03細胞を投与する工程を更に含む請求項11の方法。前記CTX0E03細胞は冷凍保存されたCTX0E03細胞である請求項11の方法。前記CTX0E03細胞は前記患者へ投与される前に継代される請求項13の方法。前記神経変性疾患は脳卒中である請求項11の方法。前記CTX0E03細胞は前記脳卒中の7日以内に投与される請求項15の方法。前記CTX0E03細胞は前記脳卒中の2日以内に投与される請求項16の方法。疾患または障害によって引き起こされる神経損傷を修復する方法であって、1×107のCTX0E03細胞を患者へ投与する工程を含み、前記投与は静脈内または動脈内に行われる方法。前記CTX0E03細胞は冷凍保存されたCTX0E03細胞である請求項18の方法。前記CTX0E03細胞は前記患者へ投与される前に継代される請求項19の方法。前記神経変性疾患は脳卒中である請求項18の方法。前記CTX0E03細胞は前記脳卒中の7日以内に投与される請求項21の方法。前記CTX0E03細胞は前記脳卒中の2日以内に投与される請求項22の方法。本発明は、従来技術に関連する問題または欠陥の一つまたはそれより多くを克服し、或いは少なくとも軽減するように意図されている。この点において、本発明は、様々な疾患および障害の細胞療法または薬物療法の治療効果を高める方法を提供する。好適には、障害は脳卒中である。この点に関して、本発明は、新規であり且つ特有の脳卒中治療法を特定するという必要性を部分的に満たす。従って、治療有効量のCTX0E03細胞を患者に投与することにより、患者の神経変性疾患を治療し、或いは疾患または障害によって生じた神経の損傷を修復する方法が提供され、投与は静脈内投与IVまたは動脈内投与IAで行われる。治療は、脳卒中などの神経変性疾患に有用である。CTX0E03細胞は、約1.0×104細胞から約1.0×109細胞で投与されてよく、より好適には、約1×105細胞から約1×107細胞で投与される。特定の実施形態において、CTX0E03細胞は、1×107で投与される。細胞は任意で、治療用組成物、例えばハンクス液およびN-アセチルシステインを含む組成物内で投与されてよい。CTX0E03細胞は任意で、使用前に凍結保存され、また、幾つかの変形例では、患者への投与前に継代されてよい。CTX0E03細胞の投与は、任意の治療効果のある時間に行われてよいが、脳卒中の2日以内に、より好適には脳卒中後48時間以内に、CTX0E03細胞を静脈内または動脈内投与すると、虚血の神経細胞に、統計学的に顕著な脳卒中からの保護を予想外にもたらすことが分かっている。運動非対称性のマーカーとしての持ち上げスウィングボディ試験EBSTが、移植時の神経行動的状況の指標として使用され、且つ、梗塞体積の指標としてのトリフェニルテトラゾリウムクロライドTTC染色と共に、細胞移植後3日間繰り返された。短期間生存もまた、細胞移植の安全性を示すものとして研究された。本発明をより完全に理解するために、以下の詳細な説明を、添付の図面と併せて参照する。本発明は、以下の発明の好適な実施形態の詳細な説明、およびそこに含まれる実施例を参照することにより、より容易に理解される。しかしながら、当該化合物、組成物、および方法が開示および説明される前に、本発明は、特定の核酸、特定のポリペプチド、特定の細胞型、特定の宿主細胞、特定の条件、或いは特定の方法などに限定されないと認識されるものであり、そのため、当然のことながら変更してもよく、また、そのうちの多くの変更および変形が、当該技術分野における通常の知識を有する者には明らかである。また当然のことながら、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定を目的として意図されていない。DNAリガーゼ、DNAポリメラーゼ、制限エンドヌクレアーゼなど、酵素反応のためのクローン作成、DNA単離、増幅、精製の標準的な技術、および種々の分離技術は、当該技術分野において通常の知識を有する者によって周知であるとともに一般的に使用されるものである。多くの標準的な技術は、Sambrooketal1989MolecularCloningSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPlainviewNewYork、Maniatisetal1982MolecularCloningColdSpringHarborLaboratoryPlainviewNewYork、Wu1993MethEnzymol218PartI、Wu1979MethEnzymol68、Wuetal1983MethEnzymol100and101、GrossmanandMoldave1980MethEnzymol65、Miller1972ExperimentsinMolecularGeneticsColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarborNewYork、OldandPrimrose1981PrinciplesofGeneManipulationUniversityofCaliforniaPressBerkeley、SchleifandWensink1982PracticalMethodsinMolecularBiology、Glover1985DNACloningVolIandIIIRLPressOxfordUK、HamesandHiggins1985NucleicAcidHybridizationIRLPressOxfordUK、およびSetlowandHollaender1979GeneticEngineeringPrinciplesandMethodsVols14PlenumPressNewYorkに記載されている。使用される省略形および述語体系は、本分野において標準的であると考えられるとともに、本明細書において引用される文献などの専門誌で一般的に使用されている。神経変性疾患という用語は、中枢神経系への損傷によって生じる疾患を説明するために、本明細書で使用されており、またその損傷は、本発明に係る神経細胞を、患者の脳および/または脊髄の破損部分へ移植することにより、軽減および/または緩和される。本発明に係る神経細胞および方法を使用して治療され得る神経変性疾患の例には、例えば、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症ルーゲーリック病、リソソーム蓄積症白質疾患即ち、例えばFolkerthRDAbnormalitiesofdevelopingwhitematterinlysosomalstoragediseasesJNeuropatholExpNeurol58887902Reviewに記載されるような神経膠/脱髄疾患、多発性硬化症、脳損傷、虚血によって生じる外傷、事故、環境障害などを含む。また本発明は、患者の脳卒中または心臓発作の中枢神経系への影響を低減および/または除去するために使用されてよく、これらは、さもなければ患者の脳の所定部位への血流の欠如即ち虚血によって生じるものであり、或いは脳および/または脊髄への物理的損傷から生じている。神経変性疾患はまた、例えば自閉症、および多くの中からとりわけ統合失調症などの関連する神経疾患を含んだ神経発達障害を含む。本発明の生成細胞におけるCTX0E03細胞株の単離、産生および試験は、シンデンSinden等米国特許第7,416,888号に詳細に説明されている。細胞の一用途において、脳卒中後6ヶ月から5年後の安定した運動障害者を治療するためのCTX0E03薬剤の定位脳内投与の臨床試験は、スコットランドのグラスゴーにおいて実施中であるClinicalTrialsgovNationalInstitutesofHealthIdentifierNCT01151124。本発明の神経幹細胞は、動物非ヒト動物患者を含む患者へ投与され得、細胞療法が適用可能な多様な病状の症状を緩和する。例えば、本発明の細胞は、脳卒中例えば脳虚血、低酸素虚血のような神経障害、ハンチントン病のような神経変性疾患、外傷的脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症MSおよび他の脱髄性疾患の症状を軽減させるために、患者に投与されてよい。本発明の好適な実施形態において、細胞は、脳卒中の症状を軽減させるために投与される。患者という用語は、本明細書では、本発明に係る予防的治療を含む細胞治療が提供される動物、好適には人間を説明するために使用される。人間の患者のような特定の動物に特有の上記の感染、病気、および疾患状態の治療に対して、患者という用語は、その特定の動物について言及する。ドナーという用語は、患者に使用する臍帯血または胎児の神経幹細胞を提供する個体人間を含む動物を説明するために使用される。有効量という用語は、本明細書では、分化剤、胎児の神経幹細胞、前駆細胞、始原細胞、特異性細胞、例えば神経系細胞および/または神経細胞またはグリア細胞、血液脳関門透過剤、および/または幹細胞および/または始原細胞の特異性細胞、例えば神経系細胞、神経細胞および/またはグリア細胞への分化を含む意図された結果を作り出すのに、或いは、神経疾患または脳卒中、心臓発作、または事故の被害者などの患者の中枢神経系の損傷を含む、他の病状を治療するのに、或いは治療される患者へのそれらの細胞の移植を達成するのに有効な他の物質などの化合物の濃度または量を説明するために使用される。本発明に係る組成物は、脳または脊髄において、或いは治療される疾患または病気において好ましい変化を生じさせるために、組成物内の胎児の神経幹細胞を移植させるために使用されてよく、この変化は、治療される疾患または病気の改善疾患または病気の悪化の停止または反転、神経障害の低減、または神経応答の改善などまたは完治である。幹細胞または始原細胞という用語は、本明細書では、臍帯血から得られた幹細胞および始原細胞について言及するために、相互に入れ替え可能に使用される。幹細胞および始原細胞という用語は、当該技術分野において周知である例えば幹細胞ScientificProgressandFutureResearchDirectionsreportpreparedbytheNationalInstitutesofHealthJune2001。神経系細胞という用語は、1個またはそれよりも多くの神経細胞マーカーまたはグリア細胞マーカーの染色などの神経細胞またはグリア細胞の表現型の指標を少なくとも有し、或いは神経細胞マーカーまたはグリア細胞マーカーを示す細胞へ分化させる細胞である。本発明に係り、神経細胞を特定するために使用されてよい神経細胞マーカーの例には、例えば、とりわけニューロン特異的な核たんぱく質、チロシンヒドロキシラーゼ、微小管結合たんぱく質、およびカルビンジンを含む。神経細胞という用語はまた、神経前駆細胞、すなわち神経系細胞または最終的には神経細胞マーカーまたはグリア細胞マーカーを示す細胞に分化し或いはそのような細胞になる幹細胞および/または始原細胞である細胞を含み、この用語には、最終的に神経細胞および/またはグリア細胞に分化する多能性幹細胞および/または始原細胞を含む。上記細胞およびその子孫は全て、本発明を目的とした神経系細胞として構成される。神経幹細胞は、有機体の生存期間に増殖し、自己保全または更新を示し、またクローンに関連する神経子孫を産生する能力を備えた細胞である。神経幹細胞は、成長の間に神経細胞、星状膠細胞、および乏突起膠細胞を生じさせるとともに、成人の脳において、多数の神経系細胞を置き換えることが可能である。神経幹細胞は、本発明を目的とした神経系細胞である。神経系細胞および神経細胞という用語は、本発明の多くの態様において、相互に入れ替え可能に使用されている。本発明に係る特定の態様において使用するのに好適な神経系細胞は、とりわけ、Musashi-1、ネスチン、NeuN、クラスIIIβ-チューブリン、GFAP、NF-L、NF-M、微小管結合たんぱく質MAP2、S100、CNPase、グリピカン特にグリピカン4、神経ペントラキシンII、神経PAS1、神経細胞成長関連たんぱく質43、神経突起伸長たんぱく質、ビメンチン、Hu、インターネキシン、O4、ミエリン塩基性たんぱく質、およびプレイオトロフィンなどの1またはそれより多くの神経系/神経細胞の表現型マーカーを表す細胞を含む。投与または投与することという用語は、本明細書全体において、臍帯血から得られた胎児の神経幹細胞、またはそこから得られるより分化した細胞などの本発明の細胞が、治療を目的として、患者に供給される過程を説明するために使用される。本発明の細胞は、非経口投与この用語は、静脈内および動脈内、ならびに他の適当な非経口経路について言及しているおよび髄腔内投与などの多くの方法で投与されるが、これらに限定されるものではなく、とりわけこの用語は、本発明の細胞を、必要とされる最終目的部位へ移動させることである。本発明の細胞は、無傷CTX0E03不死化胎児神経幹細胞の形態で投与されてよい。本発明に係る組成物は、細胞の増殖、即ち継代を伴うことなく、動員剤または分化剤と共に使用されてよい。投与は、治療される疾患または病気に左右されることが多く、また好適には、非経口経路を介して、例えば静脈内投与であってよい。脳卒中の場合には、好適な投与経路は、脳卒中の部位に左右されるが、頚動脈に直接的であってもよく、或いは、全身に投与されてもよい。本発明の好適な実施形態において、個々の脳卒中後治療の投与経路は、静脈内または動脈内を介する全身投与である。任意で、胎児の神経幹細胞は、シクロスポリンAまたはタクロリムスなどの免疫抑制剤と併せて投与される。本発明の胎児の神経幹細胞は、患者個人の病態、投与の部位および方法、投与のスケジュール、患者の年齢、性別、体重、および医療従事者に周知の他の要素を考慮して、良好な医療行為に従い投与および投薬されてよい。従って、本明細書を目的とした製剤的有効量は、当該技術分野において周知のこのような留意事項によって決定される。量は、生存率の改善またはより迅速な回復、或いは症状および当該技術分野において通常の知識を有する者によって適当な指標として選択された他の適応症の改善または除去を達成するのに有効でなければならないがこれらに限定されるものではない。医薬製剤組成物は更に、製剤的に受容可能なキャリアを含んでもよい。医薬製剤組成物は、有効な数の細胞を、任意で製剤的に受容可能なキャリア、添加剤または賦形剤と組み合わせて含む。本発明の特定の態様において、細胞は、無菌食塩水での移植を必要とする患者に投与される。本発明の他の態様において、細胞はハンクス液HBSSまたはIsolyteS、pH7.4内で投与される。無血清細胞培地の使用を含む他の方法が使用されてもよい。患者への細胞の全身投与は、特定の適応症において好適であり、罹患および/または破損した組織の部位へ、またはその付近への直接投与は、他の適応症において好適である。幾つかの実施形態において、CTX0E03細胞はホープHope等国際特許出願公開2010/064054によって説明される培地に凍結保存されてよく、洗浄または別の重要な操作を行うことなく、安定的に産生、保存、および治療部位へ運ばれ、解凍および使用され得る凍結細胞生成物質が生成される。本発明に係る医薬製剤的組成物は、好適には、約1.0×104細胞から約1.0×109細胞、より好適には約1×105から約1×107細胞、更に好適には約2×105から約8×106細胞の範囲にある有効数を、任意で製剤的に受容可能なキャリア、添加剤、または賦形剤と組み合わせて概ね溶媒中に含む。非発ガン性という用語は、細胞が新生物または腫瘍を引き起こさないという事実を言う。本発明で使用する幹細胞および/または始原細胞は、好適には、新生組織形成および悪性腫瘍が存在しない。従って、胎児の神経幹細胞または始原細胞は、神経細胞表現型への分化前または分化後のいずれかに、遺伝子導入のターゲットである。本発明の臍帯血幹細胞または始原細胞は、異種ヌクレオチド配列、および異種ヌクレオチド配列の発現を促す操作結合された促進剤と遺伝子操作されてよい。ヌクレオチド配列は、多様なたんぱく質または関心のあるペプチドをコードしてよい。遺伝子操作が行われた細胞によって産生される遺伝子産物は、インビトロで採取されてよく、或いは、遺伝子産物のインビボ供給のためのビークルとして使用されてもよい即ち遺伝子治療。以下の記述は、本発明の様々な態様の多くを実現するための例証的な手順および助言を提供する。当該技術分野において周知であり、特に記載されていない標準的な分子生物学的技術は概ね、サムブルックSambrook等のMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringsHarborLaboratoryNewYorkおよびオーズベルAusubel等のCurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileyandSonsBaltimoreMarylandに従う。ポリメラーゼ鎖反応PCRは、PCRプロトコールのように概ね実行される:AGuidetoMethodsandApplicationsAcademicPressSanDiegoCalifornia。他の核酸技術を含む反応および操作は、特に明記しない限り、サムブロックSambrook等のMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringsHarborLaboratoryPressに記載されるように、また米国特許第4,666,828、4,683,202、4,801,531、5,192,659、5,272,057に記載される方法論で概ね行われ、これらの文献は、参照により本明細書に援用される。インサイチュピーシーアールは、フローサイトメトリと組み合わせて、特定のDNAおよびmRNA配列を含む細胞の検出に使用され得る例えばテストニ等のBlood1996873822を参照。当該技術分野において免疫学的に周知であるとともに特に記載されていない標準的な方法は、スタイツ等のBasicAndClinicalImmunology8thEdAppletonLangeNorwalkCTおよびミシェルおよびシギのSelectedMethodsinCellularImmunologyWHFreemanandCoNewYorkに概ね従う。CTX0E03細胞リニューロンリミテッド、英国ギルフォードは先述のように成長させられたポロックK等のAconditionallyimmortalclonalstemcelllinefromhumancorticalneuroepitheliumforthetreatmentofischemicstrokeExpNeurol199143155、ホッジスH等のMakingstemcelllinessuitablefortransplantationCellTransplant16101115。簡潔にいうと、細胞は継代33で蘇生されるとともに、ラミニンインビトロゲン、カリフォルニア州カールスバッド上に、T175フラスコ毎につき35mlの培地に2×107の細胞密度で置かれたK等のAconditionallyimmortalclonalstemcelllinefromhumancorticalneuroepitheliumforthetreatmentofischemicstrokeExpNeurol199143155、ホッジスH等のMakingstemcelllinessuitablefortransplantationCellTransplant16101115。細胞は、採取、ならびにハンクス液インビトロジェンInvitrogenおよびN-アセチルシステインシグマSigma、ミズーリ州セントルイスのビークルに5×104細胞/μLの濃度で再懸濁する前に、4日間または80パーセントのコンフルエンスまで成長させられた。全ての実験は、国立衛生研究所のガイドラインに従って行われており、また、サウスフロリダユニバーシティ医学部の動物実験委員会によって承認された。体重が225~250gのオスの成体SDSpragueDawleyラットハーランは、温度が調節された部屋に、12時間の明暗周期で入れられるとともに、食べ物および水分は自由に摂取できるようにされた。ヤスハラT等のIntravenousgraftsrecapitulatetheneurorestorationaffordedbyintracerebrallydeliveredmultipotentadultprogenitorcellsinneonatalhypoxicischemicratsJCerebBloodFlowMetab28180410Epub2008Jul2によって先述された過渡的腔内閉塞脳卒中モデルが、本研究で用いられた。ラットは5のイソフルレン3維持で麻酔がかけられ、且つ、フィラメント塞栓が右側MCAOに導入されるとともにそこに1時間固定された。最初の8分間、梗塞を妨げかねない側副再灌流を減少させるために、左側MCAOは結紮された。損傷を確認するために、脳血流のレーザドップラ測定法が用いられ、70未満の低下は除外基準とした。脳の検視解剖に際して、かなりの損傷または瘢痕組織、特に蓑胞形成が観察されるならば、或いは動物が研究の結論前に死亡するならば、または例えば頭位傾斜のような異常行動を示すならば、動物はまた、レトロスペクティブスタディから除外された。一時間後、麻酔状態下で、フィラメント塞栓は右側MCAOから取り除かれ、切開が縫合され、且つ、ラットは適切な術後救命処置により回復した。MCAOの2日後、動物は2つのグループに分けられ、細胞またはビークルのいずれかで治療が施された。動物は5イソフルレン3維持で麻酔がかけられ、右側頚静脈が露出させられた。動物は無作為に、0.5mlのビークルハンクス液;HBSS0.5mMN-アセチルシステイン;NAC或いは同じビークルに1×107のCTX0E03細胞のいずれかが1分間注射されるように割り当てられた。切開は縫合され、且つラットは適切な観察の下で回復した。冷凍保存されたCTX0E03細胞は解凍され、ポロック等のAconditionallyimmortalclonalstemcelllinefromhumancorticalneuroepitheliumforthetreatmentofischemicstrokeExpNeurol199に先述されるように、ラミニンが塗布されたフラスコ上において培地内に置かれ、且つ、TrypZean/EDTAキャンブレックスおよび粉末溶液DMEM:F12内に0.55mg/mlのトリプシン阻害剤シグマ、1のHSA、25U/mlのベンゾナーゼメルクとの結合の前に、37°Cで5のCO2および80のコンフルエンスで成長させられ、TrypZeanおよびダイジェスト裸DNAを中和させた。遠心分離およびDMEM:F12インビトロゲンでの洗浄に続き、細胞は2×104細胞/mlの濃度で、ビークルに再懸濁された。4匹の動物に細胞が注入され、8匹がビークルを受けいれた。移植3日後、図1に示すように、ビークル治療された動物の半分が死亡したのに比べて、細胞治療された動物はいずれも死亡しておらず、カイ二乗分析によって明らかにされるように、統計的に顕著であった。移植前および移植3日後の運動非対称性は、図2に示すように、細胞治療が行われたラットで著しく減少したことが分かった。治療3日後、ラットは終末的に麻酔がかけられるとともに、冷生理食塩水が灌流された。次に、脳が取り出されるとともに、2mmの冠状塊に薄く切断された。次に、塊は暗室で10分間、2のトリフェニルテトラゾリウムクロライドTTC染色が入ったPBSで染色された。次に、脳のスライスは4のパラホルムアルデヒドで色留めされた。翌日、線条体を含む脳の6箇所が撮影され、ImageJNIHを用いて、治療に関して盲検化された2名の観察者によって、閉塞の領域が測定されたTTC染色の欠如。閉塞面積は対側大脳半球で正常化されるとともに、脳全体で計算された。ビークルおよび細胞の間において、灌流治療からの生存動物は、カイ二乗検定によって比較された。図3に示すように、細胞およびビークル治療されたラットの間において、梗塞面積は大きく差がなかった。これは、サンプルの寸法に起因している。しかしながら、運動制御検査は、細胞内における運動非対称率および平均梗塞面積率の間における顕著な相関関係を示した。MCAO2日後、生存するラットは、運動非対称性を判定するために、持ち上げスウィングボディ試験EBSTを用いて行動的に検査された。ラットは高く囲まれた箱内のベッド上に、その尻尾により保持され、動物の回転方向が20回監視された。損傷していない動物は、左右に均等に回転することが予期され、従って、その運動非対称性は50となる。これは、治療に盲検化された人物によって、治療後3日繰り返され、値がt-検定によって比較された。図4に示すように、梗塞面積が増大するにつれて、非対称性の割合は直線関係的に増加することが分かった。この結果は、ビークル治療された動物では示されなかったデータ図示なし。従って、MCAO2日後の細胞治療の後で、EBSTによって測定された運動行動および動物の生存で著しい改善があった。しかしながら、EBSTとの相関関係は存在するしかしビークル治療動物では存在しないが、梗塞面積の同様の重要な変化は観察されておらず、著しい差が存在し得ることを示唆している。CTX0E03細胞で治療された動物の死亡率の減少はまた、これら細胞の移植が安全であるだけでなく、細胞は結果の改善をももたらすことを示唆している。実験的な脳梗塞の2日後に、CTX0E03細胞の点滴移植を行うと、有効な神経学的な影響を及ぼす。移植細胞は損傷部位へ移され、且つ宿主細胞に組み込まれ、或いは成長因子の分泌が促されて、再生プロセスを誘発し、観察される機能回復を仲介した。12匹のオスの22ヶ月のフィッシャーFisherF344ラットNIAにイソフルレンで麻酔がかけられるとともに、定位装置に置かれた。ハミルトン製シリンジを用いて、ビークルn=6またはCTX0E03細胞n=6;4.5μlに4.5×105細胞のいずれかが、各ラットへ、脳室内のブレグマに対して-1mm前方、1.6mm内方、-4.5mm背方の座標へゆっくりと移植された。翌日、ラットには2回、腹腔内に50mg/kgのブロモデオキシウリジン5-ブロモ-2-デオキシオリジン、BrdU、シグマが8時間あけて注射され、一日後に、パラホルムアルデヒドが経心灌流された。次に、脳が取り出されるとともに、ミクロムMicromクライオスタットリチャード-アランサイエンティフィック、ミシガン州カラマズーを用いて、40μの矢状断面に切断される前に冷凍保存された。各グループから6匹にビークルまたは細胞のいずれかが移植された。BrdU増殖マーカー、ダブルコルチンDCX;幼若神経細胞、イオン化カルシウム結合アダプタ分子IIBA-1、ミクログリア、グリア細胞繊維性酸性たんぱく質、GFAP、星状膠細胞、人間の核抗原HuNu;移植された人間の胎児の皮質細胞の免疫組織化学的染色が、先述バックステッターAD等Peripheralinjectionofhumanumbilicalcordboldstimulatesneurogenesisintheagedratbrain.BMCNeurosci.922のように浮遊部位に行われた。簡潔に言うと、BrdU染色では、海馬を囲む連続の6箇所全てが、65°Cの50のフォルムアルデヒド/2のSSCで2時間前処理され、続いて、抗原回復のために、37°Cの2NHClおよびホウ酸塩緩衝剤pH8.5で洗浄された。メタノールに0.3の過酸化水素を含む内因性ペルオキシダーゼクエンチが、1時間のブロッキング溶液0.1MPBSに3の正常ウマ血清および0.25のトリトンX-100の後に行われ、続いて、マウス抗ラットBrdUで一晩培養された1:50;ロシェRoche、インディアナ州インディアナポリス。この後、ジアミノベンジジン基質の可視化に先立ち、ビオチン化二次抗体1:200;ベクターラボラトリーズVectorlaboratories、カリフォルニア州バーリンゲームおよびアビジン-ビオチン基質ABUキット;ベクターラボラトリーズが続いた。次に、上記部位はペルマウントPermount商標名マウント培地フィシャーケミカルス、ニュージャージー州を用いて、マウントおよびカバースリップされた。DCXは新しい細胞の産生から3週間までの間発現するとともに、信頼できる神経細胞新生の指標であることが以前から分かっているので、DCXは神経細胞移動のマーカーとして使用することができるラオMSおよびシェティAKEfficacyofdoublecortinasamarkertoanalysetheabsolutenumberanddendriticgrowthofnewlygeneratedneuronsintheadultdentategyrusEurJNeurosci19234246、コラード‐デプレS等DoublecortinexpressionlevelsinadultbrainreflectneurogenesisEurJNeurosci21114DCXの免疫組織化学は抗原回復がなく、ウマ血清および多クローン性ヤギ抗原1:150;サンタクルズバイオタックSantaCruzBiotuch、カリフォルニア州、および適当な二次抗原を用いて行われた。BrdUおよびIBA-1、或いはBrdUおよびGFAPの共局在化を比較するとともに、BrdUおよびDCXの共局在化を明示するために、免疫蛍光法が使用された。室温の2NHClが抗原回復に用いられ、且つ、一次培養は、ラット抗BrdU1:400;アキュレートケミカルAccurateChemical、ニューヨーク州ウェストバリーおよび表現型定義一次抗体ウサギ抗GFAP1:500、ダコ、カリフォルニア州カーピンテリア、またはウサギ抗IBA11:1,000、ワコ、バージニア州リッチモンドまたはDCX1:150、サンタクルズバイオテックSantaCruzBiotech、カリフォルニア州から、4°Cで一晩で構成された。可視化は、適当なアレクサフルオロ共役二次抗体モレクラープローブス、カリフォルニア州を二時間使用して達成され、次に上記部位は、ヴェクタシールドベクターラボズVectorLabsを用いてマウントおよびカバースリップされた。移植細胞の存在は、人間の核に対して特異的なマウスモノクローナルHuNu抗体1:50;ケミコン、カリフォルニア州を用いて検出された。可視化は、アレクサフルオロ共役二次抗体モレクラープローブスを用いて達成された。SGZ領域内における標識化された細胞の数量化およびイメージ化は、不偏立体細胞計数の光学分留装置法を使用して、ニコンエクリプス600BrdU細胞用またはオリンパスBX60DCX細胞用マイクロスコープ、およびステレオインヴェスティゲータソフトフェアマイクロブライトフィールド、バーモント州を用いて行われたウェストMJ等UnbiasedstereologicalestimationofthetotalnumberofneuronsinthesubdivisionsoftherathippocampususingtheopticalfractionatorAnatRec231482497。老齢の動物では少数のBrdU細胞が観察されることから、増殖の研究に対して、部位に存在する細胞全てを計数できるように、125μm×125μmの寸法を有する同一の仮想グリッドおよび計数フレームが用いられた。解剖学的構造は、10X/0.45対物レンズを用いて輪郭が描かれた一方、細胞の数量化のために、60X/1.40対物レンズが用いられた。DCX細胞については、仮想グリッドおよび計数フレームは両方とも150μm×150μmであった。解剖学的構造の輪郭形成は、10X/0.30対物レンズを用いて行われた一方、細胞の数量化について、40X/0.75対物レンズが用いられた。歯状回のSGZを顆粒細胞層GCLの両側にある2細胞の直径として定義して、SGZ内のBrdU細胞の数が計数された。DCX細胞の計数は、予期される細胞移動に起因して、SGZ/GCL内で行われた。BrdU細胞内で共発現する細胞の型特異性マーカを特定するために、10X/0.30、20X/0.40または40X/0.60対物レンズおよびDPマネージャと連結されたオリンパスDP71カメラを備えたオリンパスIX70マイクロスコープオリンパス、日本を用いて、免疫蛍光共局在化が評価された。これらの細胞の計数は、SGZ/GCL内で行われた。データは平均±SEMを表しており、統計的検定は、有意としてP<0.05を用いて、対応のない両側t検定によるものであった。12匹の老齢のラットにCTX0E03細胞またはビークルのいずれかが移植され、24時間後に、BrdUで治療が行われた。最初の移植から48時間、動物にはパラホルムアルデヒドが灌流され、動物の脳が取り出されるとともに、40μmで矢状薄片にされる前に冷凍保存された。それらの部位には、歯状回のSGZでの細胞増殖、表現型、および生存を判定するために、多様な抗体で標識が付された。増殖細胞の存在は、核BrdU標識を用いて判定された。これは、ビークル218.0±31.00および細胞治療694.9±130.0の両方の動物において、歯状回のSGXで明らかであった。図5に示すように、細胞治療が行われたラットでは、細胞数で3倍の有意な増加が見られたt=3.894;df=9;P=0.0037;n=6。神経前駆細胞の存在は、SGZのDCX標識を用いて判定された。標識細胞は、ビークル動物970±32.7および細胞治療動物1,202.4±61.9の両方で見られたが、この場合も、図6に示すように、細胞数が、ビークルt=4.29;df=8;P=0.002;n=5と比べて、細胞治療動物において著しく増加した。DCX細胞はBrdU陽性でもあることの確認は、図7に示すように、共局在化染色および共焦点像化によって示された。増殖細胞の可能な表現型の更なる特定は、BrdUの局在化を伴い、ミクログリアおよび星状膠細胞のIBA-1およびGFAP染色夫々を使用することによって判定された。免疫蛍光IBA-1およびGFAP陽性染色細胞は豊富であったが、核BrdU陽性細胞は少なかった。それ故、BrdUおよびIBA-1の共局在化は非常に限られており、BrdUおよびGFAPの共発現はSGZ内で見られなかった。ビークル治療動物および細胞治療動物の染色の間では、著しい差は観察されなかったデータ表示なし。注射部位およびSGZ内での移植細胞の存在は、HuNu染色を用いて判定された。人間の核染色は、SGZ内にHuNu陽性細胞を示しておらず、BrdU標識細胞は移植細胞ではなく、内因性のものであることを証明した。図8A~cに示すように、幾つかのHuNu染色は針穿刺経路に沿って、また脳室内で見られた。しかしながら、HuNu陽性細胞は、ビークル移植ラットまたは細胞移植ラットのいずれもSGZ内で見られておらず、SGZ内のBrdU標識細胞のいずれもが移植細胞ではなく、内因性のものであることを明らかにした。SGZ内でのHuNu染色の欠如は、注射2日後に、移植細胞は、幼若神経細胞となるように作用させ、或いは分化させるために原発部位に移動しておらず、代わりに、直接的に細胞増殖を誘発し、或いは間接的に炎症を低減させて、注射部位からの細胞増殖を促進させるなどの影響を作用させている。おそらく細胞は、IL-10などの抗炎症サイトカイン、或いは脳由来神経栄養因子、神経成長因子、ニューロトロフィン3などの神経栄養因子の迅速な分泌を介して作用しており、これらは新しい神経細胞の成長および分化を促すことで知られている。CTX0E03細胞はインビトロでVEGFおよび他の因子を分泌することをこれまでに示したエバDJ,等ReleaseofVEGFbyReN001corticalstemcellsCellTransplant17464465。パルマー等VascularnicheforadulthippocampalneurogenesisJCompNeurol425479494によれば、成年ラットのSGZにおいて、神経発生は血管のすぐ近くで起きており、そこではVEGFの発現が高く、また血管形成が開始していることが報告された。この証拠または他のものに基づいて、パルマー等PalmerTDetalVascularnicheforadulthippocampalneurogenesisJCompNeurol425479494は、神経新生および血管形成はメカニズム的に関連している可能性があると論じており、VEGFをこのような関連をもたらし得る因子と言及している。また、VEGFの脳室内注射は、SGZおよびSVZでの神経前駆細胞の増殖を、インビトロおよびインビボの両方で促進させたことが分かっているジンK,等VascularendothelialgrowthfactorstimulatesneurogenesisinvitroandinvivoProcNatlAcadSciUSA991194611950、サンSunY等VascularendothelialgrowthfactorBstimulatesneurogenesisevidencefromknockoutmiceandgrowthfactoradministrationDevBiol289329335。いかなる理論に束縛されるつもりはないが、上記の観察から、内因性神経増殖へのCTX0E03細胞の影響は、VEGFによって調節され得る。これには、細胞がVEGFなどの因子を分泌する馴化培地、および移植に適するように減弱化された細胞の使用を含んでおり、例えば、細胞は凍結溶解作用または熱不活化によって減弱化される。これによれば、効果は細胞によって分泌される因子に起因しており、細胞自体に起因するのではないことが分かる。ラットの脳へのCTX0E03細胞の脳室内移植は、結果的に、脳の内因性幹細胞保有宿主の少なくとも一つの内での増殖の増加をもたらす。この増殖は、DCX染色の増加によって示すように、幼若神経細胞でのものであるが、IBA-1およびGFAPのBrdUとの著しい共局在化の欠如である。DCX染色によって表された神経前駆細胞はBrdU共局在化によって示すように増殖性であることの確証も得られた。CTX0E03細胞は、内因性神経細胞増殖へ影響を及ぼすように考えられる一方、どのようにしてこれが生じるのかについては正確に明らかではない。これまでの研究によれば、酵素カスパーゼ1の変換抑制によるプロインターロイキンIL-1βからIL-1βへの変換を阻止しているラットでの神経炎症の減少が、幾匹かのラットを年齢に関連する神経発生の減少から救い出しゲンマC,等Blockadeofcaspase1increasesneurogenesisintheagedhippocampusEurJNeurosci2627952803、その結果、認知機能の改善がもたらされたことが分かっており、この認知機能は、脳卒中に関連する脳の損傷によって影響を受けることが多いゲンマC,等Improvementofmemoryforcontextbyinhibitionofcaspase1inagedratsEurJNeurosci2217511756。また、hUCBCを伴い、外因性幹細胞は内因性神経始原細胞を促し、増殖を増加させるとともに、活性化ミクログリアの数の減少によって明らかなように、神経炎症を低下させるバステッターAD,等PeripheralinjectionofhumanumbilicalcordbloodstimulatesneurogenesisintheagedratbrainBMCNeurosci922。増殖部位において、ビークルおよび細胞の間では、ごくわずかな共局在化されたBrdUおよびIBA陽性細胞の顕著な増加は観察されておらず、細胞および注射のいずれもが、新しいミクログリア細胞の免疫反応を誘発していないことが示唆されている。また、先の研究によれば、人間の臍帯血供給細胞の作用を制御するためのヒト末梢血単核細胞の投与は、神経細胞の増殖または海馬神経新生を変えないことが分かっている。バステッターAD,等PeripheralinjectionofhumanumbilicalcordbloodstimulatesneurogenesisintheagedratbrainBMCNeurosci922。hUCBC移植後の歯状回内での神経細胞増殖の増加の観察バステッターAD,等PeripheralinjectionofhumanumbilicalcordbloodstimulatesneurogenesisintheagedratbrainBMCNeurosci922と同様に、ラットおよびマウスからのグリア拘束始原細胞またはNSCは、より若いラット22ヶ月と比べて12ヶ月において、内因性NSCの数およびより長期にわたる研究での生存を促すことが示されており、細胞移植動物では、細胞数が3倍に増加したハッチアンガディB,等IncreaseddentateneurogenesisaftergraftingofglialrestrictedprogenitorsorneuralstemcellsintheaginghippocampusStemcells2521042117。クローンヒトNSC株、CTX0E03細胞は、4‐ヒドロキシ‐タモキシフェンが存在する状態で培養されたときに、制御された増殖を可能にするために、融合導入遺伝子c-mycERTAMを使用して、条件付きで不死化している。安全性または毒性の問題について、この細胞株ではインビボ研究で特定されていない。本明細書に提示されるデータは、脳の内因性回復特性を促進させるために、CTX0E03細胞の付加的な使用を証明している。先の明細書において、開示される全文献、作用および情報は、それらの文献、作用、またはそれらの任意を組み合わせた情報が、公的に入手でき、周知であり、当該技術分野の一般的知識の一部であり、また、優先時に任意の問題を解決することと関連性があると知られていたことを承認していない。上記で引用された全ての発行物の開示は、各々が個々に参照により援用されたような範囲で、夫々の全体が、参照により本明細書へ明白に援用される。神経変性疾患の静脈内治療または動脈内治療の特定の実施形態が説明および例証されているが、当該技術分野に属する者には当然のことながら、本発明の広範な精神および原則から逸脱することなく、変更および変形が可能である。前述の説明に含まれ、或いは添付の図面に示す全ての事項は、例証的なものとして解釈されるべきであって、限定的なものとみなされるべきではない。また当然のことながら、以下の請求の範囲は、本明細書に記載される発明の包括的および具体的な特徴全て、ならびに言語上それに当てはまると言える本発明の範囲の全ての声明を網羅することが理解されよう。"