exvivoで未刺激T細胞をFoxp3T調節性細胞に変化させることができる誘導寛容原性樹状細胞DCを含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。exvivoでエフェクターT細胞を削除することができる誘導寛容原性DCの集団を含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時に共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持する誘導寛容原性DCを含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの酸素消費速度を一過性に増加させない誘導寛容原性DCを含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoでエフェクターT細胞を削除することができる、請求項1、3、又は4に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、未刺激T細胞をFoxp3T調節性細胞にexvivoで変化させることができる、請求項2、3、又は4に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時に共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持する、請求項1、2、又は4に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの酸素消費速度を一過性に増加させない、請求項1、2、又は4に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoでエフェクターT細胞を削除することができ、exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時に共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持する、請求項1に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時に共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持し、そしてexvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの酸素消費速度を一過性に増加させない、請求項2に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時に共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持し、そしてexvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの酸素消費速度を一過性に増加させない、請求項1に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoでエフェクターT細胞を削除することができ、そしてexvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの酸素消費速度を一過性に増加させない、請求項1に記載の組成物。前記誘導寛容原性DCが、exvivoでエフェクターT細胞を削除することができ、exvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時に共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持し、そしてexvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの酸素消費速度を一過性に増加させない、請求項1に記載の組成物。前記DCがクラスII分子を発現し、但し前記クラスII分子のうちの少なくとも一部分が、T細胞寛容が望まれる相手の抗原を由来とする複数の抗原性ペプチドに結合している、請求項1乃至13のいずれかに記載の組成物。樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団をexvivoでレスピロスタティック寛容を促進する少なくとも一種の作用物質に接触させることにより作製された誘導寛容原性DCを含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβ受容体アゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤及びスタチン;ivmTOR阻害剤、TGFβ受容体アゴニスト、及びスタチン;vプリン性受容体アンタゴニスト;viプリン性受容体アンタゴニスト及びスタチン;viiプリン性受容体アンタゴニスト、及びmTOR阻害剤、viiiプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、及びTGFβ受容体アゴニスト;ixプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、TGFβ受容体アゴニスト及びスタチン;xDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;xiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤;xiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、スタチン;xiiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニスト;xivDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニストと、スタチンから成る群より選択される、請求項15に記載の組成物。樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団をexvivoで10時間未満、プリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、スタチン、及びDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質から成る群より選択される少なくとも一種の作用物質に接触させることにより作製された抗原特異的誘導寛容原性DCを含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。前記少なくとも一つの作用物質が更にTGFβアゴニストを含む、請求項17に記載の組成物。樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団を、exvivoで、少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にDCに対して共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持させるような少なくとも一種の作用物質に接触させることにより作製された誘導寛容原性DCを含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団を、exvivoで、iexvivoで未刺激T細胞のFoxp3発現を誘導する、iiexvivoでエフェクターT細胞を削除する、又はFoxP3エフェクターT細胞をFoxP3エフェクターT細胞に変化させる、から成る群より選択される少なくとも一つの効果をDCに有させる少なくとも一つの作用物質に接触させることにより作製された誘導寛容原性DCを含む組成物であって、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、組成物。開始細胞集団又は誘導寛容原性DCを更に、T細胞寛容が望まれる相手である抗原に接触させる、請求項16乃至20のいずれかに記載の組成物。請求項1乃至21のいずれかに記載の組成物を対象に投与するステップを含む、投与する方法。誘導寛容原性DCを含む細胞集団を作製する方法であって、樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団を、exvivoで、レスピロスタティック寛容を促進する少なくとも一種の作用物質に接触させるステップを含み、前記DCが、抗原特異的寛容誘導を特徴とする、方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβアゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤及びスタチン;ivmTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;vプリン性受容体アンタゴニスト;viプリン性受容体アンタゴニスト及びスタチン;viiプリン性受容体アンタゴニスト、及びmTOR阻害剤、viiiプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、及びTGFβアゴニスト;ixプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、TGFβアゴニスト及びスタチン;xDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;xiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤;xiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、スタチン;xiiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニスト;xivDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニストと、スタチンから成る群より選択される、請求項23に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβアゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;ivプリン性受容体アンタゴニスト;vDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;から成る群より選択される、請求項23に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がmTOR阻害剤及びTGFβアゴニストを含む、請求項23に記載の方法。前記mTOR阻害剤がラパマイシン又はその誘導体もしくは類似体を含む、請求項26に記載の方法。前記TGFβアゴニストが、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、及びこれらの混合物から成る群より選択される、請求項26に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がプリン性受容体アンタゴニストを含む、請求項23に記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが、P1、P2X、P2X7、及びP2Yから成る群より選択されるプリン性受容体に結合する、請求項29に記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが酸化ATPである、請求項29に記載の方法。誘導寛容原性DCを含む細胞集団を作製する方法であって、樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団をexvivoで10時間未満、プリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、TGFβ受容体アンタゴニスト、スタチン、及びDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質から成る群より選択される少なくとも一種の作用物質を含む組成物に接触させるステップを含む、方法。前記細胞を1乃至3時間、接触させる、請求項32に記載の方法。前記細胞を2時間、接触させる、請求項32に記載の方法。前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、請求項32に記載の方法。前記細胞を、レスピロスタティック寛容を促進する少なくとも一種の作用物質に接触させる、請求項32に記載の方法。前記細胞を、少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にDCに対して共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持させるような少なくとも一種の作用物質に接触させる、請求項32に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβ受容体アゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤及びスタチン;ivmTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;vプリン性受容体アンタゴニスト;viプリン性受容体アンタゴニスト及びスタチン;viiプリン性受容体アンタゴニスト、及びmTOR阻害剤、viiiプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、及びTGFβアゴニスト;ixプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、TGFβアゴニスト及びスタチン;xDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;xiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤;xiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、スタチン;xiiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニスト;xivDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニストと、スタチンから成る群より選択される、請求項35乃至37のいずれかに記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβアゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;ivプリン性受容体アンタゴニスト;vDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;から成る群より選択される、請求項35乃至37のいずれかに記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がmTOR阻害剤及びTGFβアゴニストを含む、請求項35乃至37のいずれかに記載の方法。mTOR阻害剤がラパマイシン又はその誘導体もしくは類似体を含む、請求項40に記載の方法。TGFβアゴニストがTGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、及びこれらの混合物から成る群より選択される、請求項40に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がプリン性受容体アンタゴニストを含む、請求項35乃至37のいずれかに記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが、P1、P2X、P2X7、及びP2Yから成る群より選択されるプリン性受容体に結合する、請求項43に記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが酸化ATPである、請求項43に記載の方法。誘導寛容原性DCを含む細胞集団を作製する方法であって、樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団を、exvivoで、前記DCに対して少なくとも一種のTLRアゴニストによるexvivoでの刺激時に共刺激分子の発現は増加させるがそれらの寛容原性表現型は保持させるような少なくとも一種の作用物質に接触させるステップを含み、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβアゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤及びスタチン;ivmTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;vプリン性受容体アンタゴニスト;viプリン性受容体アンタゴニスト及びスタチン;viiプリン性受容体アンタゴニスト、及びmTOR阻害剤;viiiプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、及びTGFβアゴニスト;ixプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、TGFβアゴニスト及びスタチン;xDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;xiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤;xiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、スタチン;xiiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニスト;xivDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニストと、スタチン、から成る群より選択される、請求項46に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβアゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;ivプリン性受容体アンタゴニスト;vDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;から成る群より選択される、請求項46に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がmTOR阻害剤及びTGFβアゴニストを含む、請求項46に記載の方法。前記mTOR阻害剤がラパマイシン又はその誘導体もしくは類似体を含む、請求項49に記載の方法。前記TGFβアゴニストがTGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、及びそれらの混合物から成る群より選択される、請求項49に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がプリン性受容体アンタゴニストを含む、請求項46に記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが、P1、P2X、P2X7、及びP2Yから成る群より選択されるプリン性受容体に結合する、請求項51に記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが酸化ATPである、請求項51に記載の方法。誘導寛容原性DCを含む細胞集団を作製する方法であって、樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団を、exvivoで、i未刺激T細胞のFoxP3発現をexvivoで誘導する、iiexvivoでエフェクターT細胞を削除する、又は、FoxP3エフェクターT細胞をFoxP3エフェクターT細胞に変化させる、から成る群より選択される少なくとも一つの効果を前記DCに有させる少なくとも一種の作用物質に接触させるステップを含み、前記DCが抗原特異的寛容誘導を特徴とする、方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβアゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤及びスタチン;ivmTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;vプリン性受容体アンタゴニスト;viプリン性受容体アンタゴニスト及びスタチン;viiプリン性受容体アンタゴニスト、及びmTOR阻害剤;viiiプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、及びTGFβアゴニスト;ixプリン性受容体アンタゴニスト、mTOR阻害剤、TGFβアゴニスト及びスタチン;xDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;xiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤;xiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、スタチン;xiiiDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニスト;xivDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質と、mTOR阻害剤と、TGFβアゴニストと、スタチン、から成る群より選択される、請求項55に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質が:imTOR阻害剤及びTGFβアゴニスト;iiスタチン;iiimTOR阻害剤、TGFβアゴニスト、及びスタチン;ivプリン性受容体アンタゴニスト;vDCにおいてミトコンドリア電子輸送を中断させる作用物質;から成る群より選択される、請求項55に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がmTOR阻害剤及びTGFβアゴニストを含む、請求項55に記載の方法。前記mTOR阻害剤がラパマイシン又はその誘導体もしくは類似体を含む、請求項58に記載の方法。前記TGFβアゴニストがTGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、及びそれらの混合物から成る群より選択される、請求項58に記載の方法。前記少なくとも一種の作用物質がプリン性受容体アンタゴニストを含む、請求項55に記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが、P1、P2X、P2X7、及びP2Yから成る群より選択されるプリン性受容体に結合する、請求項61に記載の方法。前記プリン性受容体アンタゴニストが酸化ATPである、請求項61に記載の方法。開始細胞集団又は誘導寛容原性DCを、DCの分化を促進する少なくとも一種の作用物質に接触させるステップを含む、請求項23乃至63のいずれかに記載の方法。誘導寛容原性DC又は開始細胞集団を、寛容が望まれる相手である抗原に接触させるステップを更に含む、請求項23乃至63のいずれかに記載の方法。前記抗原が粗抗原である、請求項65に記載の方法。前記抗原が精製済み抗原である、請求項65に記載の方法。前記抗原が:一種以上の短ペプチド;一種以上のポリペプチド;ポリペプチド混合物;及び一種以上のタンパク質、のうちの一種以上を含む、請求項65に記載の方法。前記抗原が細胞ライセート又は組織ライセートを含む、請求項65に記載の方法。前記抗原が、食物を由来とする一種以上のペプチド、ポリペプチド、又はたんぱく質を含む、請求項65に記載の方法。前記抗原が、神経細胞又は組織を由来とする一種以上のペプチド、ポリペプチド、又はたんぱく質を含む、請求項65に記載の方法。前記抗原が、アレルゲン又はアレルゲンの混合物を含む、請求項65に記載の方法。対象に誘導寛容原性DCを投与するステップを更に含む、請求項23乃至72のいずれかに記載の方法。誘導寛容原性樹状細胞をエフェクターT細胞に接触させるステップを更に含む、請求項23乃至73のいずれかに記載の方法。投与するステップの前に、誘導寛容原性DCが未刺激T細胞においてFoxp3発現を誘導する能力を検査するステップを更に含む、請求項73に記載の方法。投与するステップの前に、誘導寛容原性DCがエフェクターT細胞を削除する、又は、FoxP3エフェクターT細胞をFoxP3エフェクターT細胞に変化させる能力を検査するステップを含む、請求項73に記載の方法。投与するステップの前に、少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時に細胞がそれらの寛容原性表現型を保持する能力を検査するステップを含む、請求項73に記載の方法。投与するステップの前に、DCが、少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの酸素消費速度を増加させられないことを検査するステップを含む、請求項73に記載の方法。エフェクターT細胞を、請求項1乃至21のいずれかに記載の誘導寛容原性DCを含む組成物に接触させるステップを含む、抗原に対するTエフェクター細胞応答を低下させる方法。接触させるステップがinvivoで行われる、請求項79に記載の方法。誘導免疫原性樹状細胞を含む組成物を作製する方法であって、樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む開始細胞集団を、exvivoで、樹状細胞の酸素消費を増加させる刺激に接触させることで、誘導免疫原性樹状細胞を含む組成物を作製するステップを含む、方法。前記開始集団は、完全に分化した樹状細胞を含む、請求項81に記載の方法。誘導免疫原性樹状細胞のミトコンドリア活性化を測定するステップを含む、請求項81に記載の方法。前記細胞のミトコンドリア活性化は、少なくとも一種のTLRアゴニストによる処置時の細胞の酸素消費を判定することにより、測定される、請求項83に記載の方法。誘導免疫原性DC又は開始細胞集団を、エフェクターT細胞応答の増加が望まれる相手である抗原に接触させるステップを更に含む、請求項81乃至84のいずれかに記載の方法。前記抗原が病原性生物又は毒素を由来とする、請求項85に記載の方法。前記抗原は癌細胞を由来とする、請求項85に記載の方法。前記抗原が粗抗原である、請求項85に記載の方法。前記抗原が精製済み抗原である、請求項85に記載の方法。前記抗原が:一種以上の短ペプチド;一種以上のポリペプチド;又は一種以上のタンパク質、のうちの一つ以上を含む、請求項85に記載の方法。対象に前記細胞を投与するステップを更に含む、請求項81乃至90に記載の方法。誘導免疫原性樹状細胞をエフェクターT細胞に接触させるステップを更に含む、請求項81乃至90に記載の方法。前記接触させるステップがinvivoで行われる、請求項92に記載の方法。樹状細胞集団を、樹状細胞における酸素消費を増加させる免疫原性刺激に接触させるステップを含む、対象において抗原に対するTエフェクター細胞応答性を増加させる方法であって、この場合、誘導免疫原性DCは抗原特異的Tエフェクター細胞応答性を促進することで、対象において抗原に対するTエフェクター細胞応答性を増加させる、方法。少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激に応答した細胞のミトコンドリア活性化を測定するステップを更に含む、請求項94に記載の方法。誘導免疫原性DC又は開始細胞集団を、Tエフェクター細胞応答性の増加が望まれる相手である抗原に接触させるステップを含む、請求項94又は95に記載の方法。樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む細胞集団を検査作用物質に接触させることで処置済み細胞を得るステップと、ミトコンドリア活性化に対する前記作用物質の効果を測定するステップとを含む、抗原特異的寛容を促進する作用物質を同定する方法であって、この場合、適したコントロールに比較して、処置済み細胞でミトコンドリア活性化を妨げる又は逆行させる作用物質が、抗原特異的T細胞寛容を促進する候補作用物質として選抜される、方法。樹状細胞における酸素消費に対する作用物質の効果を測定し、酸素消費速度を減らす又は増加させない作用物質を選抜する、請求項97に記載の方法。前記処置済み細胞がexvivoで未刺激T細胞をFoxp3T調節性細胞に変化させる能力を検査するステップを更に含む、請求項98に記載の方法。処置済み細胞が、exvivo及び/又はinvivoでエフェクターT細胞を削除する能力を検査するステップを更に含む、請求項98に記載の方法。処置細胞が、exvivo及び/又はinvivoで少なくとも一種のTLRアゴニストによる刺激時にそれらの寛容原性表現型を保持する能力を検査するステップを更に含む、請求項98に記載の方法。抗原特異的Tエフェクター細胞応答を促進する作用物質を同定する方法であって、樹状細胞又は樹状細胞前駆細胞を含む細胞集団を検査作用物質に接触させるステップと、ミトコンドリア活性化に対する前記作用物質の効果を測定するステップとを含み、この場合、適したコントロールに比較してミトコンドリア活性化を増加させる作用物質が、抗原特異的TエフェクターT細胞応答を促進する候補作用物質として選抜される、方法。樹状細胞における酸素消費に対する作用物質の効果を測定し、酸素消費速度を増加させる作用物質を選抜する、請求項102に記載の方法。処置済みの細胞が、exvivo及び/又はinvivoでエフェクターT細胞の数又は活性を増加させる能力を検査するステップを更に含む、請求項102に記載の方法。実施例以下の材料及び方法を本実施例で用いた:マウス及びマウス細胞C57B6、OTIIxRAG1、CX3CR1GFP、Fasリガンド欠損、インドールアミンピロール23ジオキシゲナーゼ欠損、IL6KO、IL10KO及び結節硬化症タンパク質1条件付きノックアウトマウスをJacksonLaboratories又はTaconicFarmsから得た。当業で解説された以下のマウス株を用いた:TCRトランスジェニックFoxp3GFPレポータマウス2358L7TCRトランスジェニックマウスCD274欠損、CD273欠損及びCD274273二重欠損動物CCR2RFPレポータ動物vol5ppe13693及びエプスタインバーウィルス誘導遺伝子3欠損動物vol450pp5669。未刺激CD4T細胞を、様々な遺伝的背景の若いマウス6乃至8週齢のリンパ節LN及び脾臓の単個細胞懸濁液から単離し、磁気陰性選抜MACSMiltenyi用にCD4T細胞濃縮キットを用いて濃縮した。文章又は図面中に示した場合には、Foxp3GFPレポータ動物由来のT細胞はMACS陰性選抜法により精製され、次に、抗CD4APCCy7、抗CD25PerCPCy55、抗CD62LAPCモノクローナル抗体及び抗CD44PECy7で染色してCD4CD25CD62LhighCD44lowFoxp3GFP細胞をACSAriaシステムBDBiosciences社を用いて単離した。代替的には、Tnを、記憶T細胞及び内因性の天然発生型Tregの存在しないRAG1欠損動物から得た。MACS精製済みCD4T細胞野生型、トランスジェニック又はRAG1動物由来に関係なく及びFACSソート済みCD4CD25CD62LhighCD44lowFoxp3GFPをTnと言及する。場合によっては、それらのexvivo及びinvivoと一緒に37°Cで10分間、インキュベートすることにより、TnをCFSEで標識する。ヒト細胞の調製全末梢血単核細胞を健康な個体からインフォームドコンセント後に緑色キャップ付きヘパリン処置済み試験管内にbyFicollHypaque勾配遠心分離によって分離した。未刺激CD4T細胞をPBMCから陰性分離キットで単離した。精製済み細胞のほぼ94はCD4CD25Foxp3GFPCD62LCD44lowだった。単球由来DCを得るために、単球をPBMCから磁気陰性選抜を用いた陰性選抜により精製し、GMCSF及びIL4の存在下で6日間、培養した。この培養後、採集された細胞のほぼ90はCD11cMHCCLIIMoDCだった。寛容原性MoDCを誘導するために、MoDC培養株に、培養の最後の2日間、ラパマイシン及びTGFβを添加した。免疫原性MoDCを得るために、単球培養株には培養の最後に日にLPSを添加した。抗体及び試薬マウス抗原に対する以下の抗体をBDBiosciences社から得た:抗CD3、抗CD103PE、抗CD152PE、抗IL10R、抗IL10、抗IAbPE、抗CD80PE、抗CD86PE、抗CD195、抗CD11cFITC、抗CD317APC、抗CD197PE、抗CD8αAPCCy7、抗CD62LAPC、抗CD4APCCy7及び抗CD25PerCPCy55。マウス抗原に対する以下の抗体をeBiosciences社から得た抗Foxp3Alexa647、抗CD274PE、抗CD273PE、抗CD275PE、抗41BBLPE、抗CD11bPECy7及び抗CD44PECy7。抗GITRPECy7はBiolegend社から得られ、そして抗TGFβはRDシステムズ社から得られた。ヒト抗原に対する以下の抗体をeBioscience社から得た抗HLADR、抗Foxp3、抗CD4、抗CD11c、抗CD14、抗CD25、抗CD40、抗CD45RO抗CD62L、抗CD80及び抗CD83。ヒト抗原に対する以下の抗体をBDBiosciences社から得たHLAABC、抗CD1a、抗CD3、抗CD32、抗CD54、抗CD86、抗CD137L抗CD196、抗CD197、抗CD205、抗CD209、抗CD273及び抗CD274。以下の抗体を、ウェスタンブロット分析に向けてCellSignalingtechnology社から得た:抗Akt、抗p308Akt、抗p473Akt、抗p389S6K、抗S6K、pS6、抗S6、抗4EBP1、抗p4EBP1。アフィジコリン、ラパマイシン、全transレチノイン酸、LPS、アトルバスタチン、プラバスタチン、過ヨウ素酸酸化ATP、5アミノイミダゾール4カルボキサミド1β4リボフラノシド、スラニム、カルボニルシアニドPフェニルヒドラゾン、オリゴミシン2’3OベンゾイルATP及びロテノンはSigma社から得られた。TGFβはRD社から得られ、そして組換えヒトIL2はRoche社から得られた。ジモザン、Pam3Cys、PolyIC、フラゲリン、イミキモド、R848、CL097及びCpGはInvivogen社カリフォルニア州サンディエゴから得られた。酸素消費測定ミトコンドリア酸素消費速度はYSI5300クラーク型電極又はXF24ExtracellularFlux分析器マサチューセッツ州ビレリカ、SeahorseBioscience社をメーカーのプロトコルに従って用いることで測定された。初代培養DCは実験で解説された通りに用いられた。マウス樹状細胞の精製及び処置樹状細胞DCを動物の脾臓から精製した。場合によっては、これらの動物に、DCを展開させるためにFLT3リガンドを産生する黒色腫細胞系を接種した。これらの動物の脾臓を採集し、30分間、37°CでRoche社のリベラーゼCIを用いて消化した。EDTAを添加した低温のHBSS中で解離させた脾臓から細胞懸濁液を得た。細胞を二重磁気陽性選抜法を用いてソートし、約98CD11cの純度に達させた。DCは、様々な時間、組織培養条件下又は氷上で様々な組合せのLPS、ラパマイシン、TGFβ、TGFβ、全transレチノイン酸、プリン性受容体アゴニストATP及びBzATP、プリン性受容体アンタゴニストoATP及びスラニム、アデノシン一リン酸キナーゼ刺激剤AICAR及び、ATPを触媒する酵素アピラーゼ、ミトコンドリア修飾因子であるFCCP及びロテノン、アトルバスタチン及びプラバスタチンと一緒にインキュベートされた。細胞をよく最高6回洗浄し、Tnを活性化させるために用いた。適する場合には、DCにオブアルブミンタンパク質、オブアルブミンペプチド、ミエリン乏突起膠細胞ペプチド又はVSVG415433ペプチドを負荷した。いくつかの実験では、DCを骨髄前駆細胞から得た。骨髄前駆細胞は、メスのマウス8週齢;1回の独立した実験当り1種の遺伝子型当り5匹のマウスの大腿骨及び脛骨プールから、20mMHEPES緩衝液、2mMLグルタミン、25μgmlゲンタマイシンスルフェート、及び8FBSを添加した氷温の完全RPMI1640培養基で洗浄することで採集し、凝集物を、氷温の培養基中に繰り返しピペットすることでやさしく撹拌した。細胞を400xgで10分間、8°Cで遠心分離した後、氷温の二価の無カチオンPBS中で二回、洗浄し、細胞を再懸濁させ、ACK緩衝液150mMNH4Cl、10mMKHCO3及び01mMNa2EDTA、pH74中で3分間、室温で溶解させることで赤血球を取り除いた。この溶解反応を、氷温の培養基の添加と、400xgでの10分間、8°Cでの遠心分離で停止させた。10mMEDTA、01BSA、及び10mMHEPESを含有するPBS中に細胞を再懸濁させ、200xgで10分間、8°Cで2回、遠心分離して血小板を枯渇させた。次に細胞ペレットを培養基に再懸濁させ、6ウェル組織培養株クラスターに、1ウェル当り25x105の密度で、総量4mlになるように播種した。細胞は、37°Cで、5CO295の空気の無菌ろ過雰囲気中と、と完全に加湿したインキュベータ内で培養された。培養株を0日目と48日目毎にIL4及びGMCSFの組合せでパルス負荷して、未熟な骨髄系DCを増殖させた。培養8日後、未熟DCを採集し、洗浄し、8x105個の細胞/mlの密度に12ウェルの培養皿に総量20mlになるように播種した。GMCSFを8日間の代わりにFLT3L100ngmL、ニュージャージー州ロッキーヒル、Peprotech社を9日間、用いたこの手法の変更例も用いた。ExvivoでのTreg分化及び細胞内染色マウス又はヒトTnをDCに、野生型動物由来のポリクローナルTnとヒト細胞を用いた場合には活性化抗CD3マウスには2c11、そしてヒト細胞にはOKT3の存在下で混合することで、細胞培養条件で活性化させた。TCRトランスジェニック動物由来のTnはタンパク質又はペプチド負荷DC上述した通りを用いて活性化させた。この同時培養の様々な時点で、細胞を洗浄し、それらの表現型を評価するために調製した。表面染色に向けて、細胞をPBS及びPBSFCS1又はPBSBSA2洗浄媒質で続けて二回、洗浄し、同じ媒質中で染色した。細胞内染色には、細胞を洗浄し、可透過性化し、BDBiosciences社のキットをメーカーの指示に従って用いて染色した。非特異的染色はFc受容体遮断性Abを用いて遮断した。細胞を染色緩衝液中で二回、洗浄し、データをFACSCantoと用いて取得した。多様な比のitDC対Tnを用いてTreg分化をexvivoで誘導することができる。例えばitDCをTnと一緒に1100、110、11、101、又は1001、及びこれらの範囲で同時培養することができる。例示的な実施態様では、itDCをTnと一緒に1DC10Tnの比で同時培養する。マウス抑制検定トランスジェニックレポータ株CD452xOTIIxFoxp3GFP由来のTnを、前に示した通りにFACSソートし、TGFβ及びIL2を添加したOVA323339負荷CD452itDC又はctrlDCに5日間、混合した。次に、GFPCD11c7AAD及びGFPCD11c7AAD細胞をFACS精製し、単離したばかりのCD451CFSE標識TnにOVA323339負荷した未処置DCの存在下で混合した。4日後に増殖をCFSE希釈検定で評価した。ヒト抑制検定前述した通りにヒトMoDCを単離し、処置し、自己由来又は同種Tn抗CD3の存在下でを活性化するために用いた。5日後に細胞を採集し、7AADCD11cCD4細胞に含まれていたCD25high及びCD25lownegをFACSソートした。自己由来の低温保存されたPBMCを用いて新しいバッチのTn及びctrlMoDCを作製した。マウス実験と同様に、これらのTnをCFSE標識し、ctrlMoDCにより活性化Treg又はTeffの存在下又は非存在下で活性化させた。4日後にTnの増殖をFACSにより、7AADCD11cCD4CFSE細胞上の通門で評価した。混合白血球反応脾臓未処置BalbcDC提供細胞をCFSE標識済みC57BL6Tn応答細胞;各集団、105個の細胞に混合した。示差的に処置したBalbcxC57BL6DCをいくつかのウェルに加えた。4日後、応答側のCD4TCRbH2Db7AADCD11c細胞の増殖をFACSにより分析したCFSE希釈により測定した。トランスウェル実験いくつかの実験では、同時培養をトランスウェル系組織培養トランスウェルプレート、04μmポアサイズ;イタリア、ミラノ、Costar社を用いて反復して、Foxp3上方調節のためには、直接的な接触がitDC及びTn間に必要かどうかを判断した。上述した通りにDCを単離及び処置してTnを活性化させた。様々な組合せのDCT同時培養株を最上部インサート及び最下部の区画で用いた。マウスでの多発性硬化症モデル:EAEプロトコルC57BL6動物を標準的なプロトコルに従ったEAEにより、100μg/マウスのMOG3555をCFAに入れた乳濁液を皮下注射することで誘導し、100ng/マウスの百日咳毒素を0日目及び2日目に静脈内注射した。EAEの採点は以下の指針を含んでいた。スコア1:弛緩性の尾。スコア2:歩行不正、歩行脆弱。スコア3:一本の四肢麻痺。スコア4:二本の四肢麻痺。スコア5:瀕死。スコア6:死亡。OVA誘導性実験的喘息のマウスモデルマウスに、報告された通り51020に、総量05mgの無菌PBSに入れた4mgの水酸化アルミニウムに4°Cで一晩、吸着させた10μgのOVAを腹腔内注射することで感作させた。マウスは5日間あけて2回、そして8日後に連続する三日間、OVApを鼻腔投与することで抗原刺激した。OVAp抗原刺激開始の48時間前に、感作済みマウスをitDCs又はctrlDCで処置した。3回目のOVA刺激から72時間後にマウスをと殺し、気管支肺胞洗浄を前に解説された通り166474に行った。簡単に説明すると、肺を解剖し、気管にポリエチレンチューブをカヌーレ挿入し、肺をPBSで二回、洗浄した。血球計数器を用いて総BAL細胞数を盲検的に判定し、300rpmで2分間の細胞遠心分離Shandon社製でスミアを調製した。BALスミアには、ProtocolHema3染料セットで染色した。BALスミアの示差的な細胞数を、少なくとも300-500個の白血球から標準的な血球学的基準を用いて盲検的に判定すすることで、細胞を好中球、好酸球、又は単核細胞に分類した。BAL細胞は、好酸球及びT細胞の計数のためのフローサイトメトリに向けても染色された。HDM誘導性実験的喘息のマウスモデルマウスをハウスダストダニ抽出物に以前に報告された通り17988に感作させた。HDM抽出物を無菌の生理食塩水に再懸濁させ、10μlを、イソフルラン麻酔したマウスに鼻腔内投与した鼻腔内投与当り25μgの総HMD抽出物タンパク質。マウスを鼻腔内投与を通じて連続5日間、暴露した後に2日間を休止として合計5週間、HDM抽出物に暴露した。DCを採集し、上述した通りにラパマイシン及びTGFβで処置し、HDMで負荷した。静脈内DC療法被処置又はコントロールはHDM暴露の第一週後から24時間後に開始し、合計4回のDC処置期間の実験プロトコル全体にわたって毎週、続行した。肺機能測定はDC処置及び未処置マウスや未刺激コントロールマウスで、5週間のHDM暴露後24時間、以下に記載する通りに行われた。マウスにおける気道反応性亢進AHRの測定肺機能の測定をFlexiventシステムを用いて行って気道の反応性亢進を判定した17988。マウスはキシラジン及びペントバルビタールで麻酔した。麻酔したマウスを気管切開し、カヌーレ挿入し、1分毎に150呼吸で一回呼吸量6mlkgを換気させた。肺機能測定中の自発的呼吸を抑制するために、麻酔後のマウスに臭化パンクロニウムを注射した。増分量の噴霧化メタコリン生理食塩水中0、313、125、25、及び50mgmlを用いて総肺耐性をスナップショット150摂動法によって判定した。各メタコリン用量毎に13のデータ点を採集し、093を超える判定係数のデータのみを解析に含めた。この手法中のマウスの生存を心電図を用いて同時に観察し、解析中に死亡したマウスは解析から省いた。耐性は、噴霧化生理食塩水後に判定された基線耐性測定値を超えた変化のパーセントで表されている。実施例1:exvivoでの誘導寛容原性DCによるFoxp3Tregsの分化寛容原性化合物をスクリーニングして、それらがDCを押印してTnを誘導してTreg表現型及び機能を獲得させる能力について調べた。寛容原性機能を持つDCを選抜する一次的な基準は、適した候補を特定するために、T細胞に対するFoxp3上方調節の表現型読み取り値から成る。ラパマイシン及びTGFβの組合せが、Tn上でFoxp3発現を惹起させる寛容原性DCを誘導する上で著しく優れた能力を有することが見出された。これらのT細胞は、Tregに特徴的な表現型及び機能抑制を有していた。重要なことに、誘導寛容原性DCは、例えば活性化抗CD3など、細胞周期又は強力なTCRアゴニストの阻害剤を用いて増殖が妨げられた場合でも、Tnの投入集団中でFoxp3発現を上方調節することができた。a誘導寛容原性DCを特定するスクリーニング戦略。DCを、通常の動物か、又は、FLT3Lを発現する黒色腫細胞株を接種してDCをinvivoで増殖させるようにした動物から採集した。多様な寛容原性処置後に、これらのDCを用いてTnを多様な時間量、TCR刺激抗原又はポリクローナル活性化抗CD3の存在下でexvivoで刺激した。Foxp3の発現はDCの寛容原性機能の指標である。b化合物のスクリーニング。DCを2乃至16時間、氷上又は組織培養条件下37°C、5CO2で、様々な組合せのレチノイン酸、ラパマイシン及びTGFβと一緒にインキュベートした。TnのドナーTCRトランスジェニック株に応じて、OVAp、OVA323339、MOG3555、VSVG415433材料及び方法で解説した通りをこのインキュベーションで用いた。処置後、DCをよく洗浄した最高6回。Tnは通常のC57BL6動物、Foxp3GFPレポータ動物、OTIIxFoxp3GFP、2D2xFoxp3GFP又はL7xFoxp3GFPトランスジェニック×レポータマウスからMACS及びFACSソーティングにより、前に示された通りに分離された。いくつかの条件では、TGFβ及びIL2をTDC同時培養株に陽性コントロールとして添加した。ポリクローナルTnを用いた場合、抗CD3抗体1μgmlをDCとの関連から活性化刺激として役立てた。CD451又はCD452動物をDC及びTnのドナーとして用いた実験全体にわたって交換した。この手法を図1aに概略して示す。図1bは、DCとの同時培養5日後の細胞内染色及び表面染色によって同定された、又は、CD4CD11c細胞のGFP発現を測定することによって同定されたFoxp3及びCD25発現細胞のパーセンテージを示す。いくつかの実験では、7AAD染色を用いて死亡細胞を特定した。P値は、通常の二方向ANOVA検定のボンフェローニポスト検定を用いて計算された。その結果は、5個の異なる個別の実験を表し、各点は三重試験のうちの一つである。DC条件付けのこのスクリーニングにより、DCをラパマイシン及びTGFβの組合せで処置することは、DCに寛容原性能を押印する上で著しく優れた能力を有することが判明する。このことは、未刺激T細胞上でのFoxp3発現を測定することで評価された。細胞分裂ではなく、コグネートAg又は抗CD3による活性化が、TnでFoxp3が誘導されるのに必要である以下を参照されたい。更に、itDCは、それらがコグネートペプチドでパルスされたか、又は全タンパク質でパルスされたかに関係なく、抗原特異的TnでFoxp3を誘導した。cFoxp3Tregの表現型及び分化動態。DCをCD451遺伝子導入動物の脾臓から前に記載された通りに分離及び精製した。未処置、コントロールDC、リポポリ多糖処置、免疫原性DC、又はラパマイシン及びTGFβitDCの誘導物質例を2時間、組織培養条件下37°C、5CO2でインキュベートした。ポリクローナルTnはCD452マウスからMACS及びFACSにより前に解説された通りに分離され、それらの増殖プロファイルを評価するためにCFSE材料及び方法を参照されたいで標識された。場合によっては、TGFβ及びIL2をTnDC同時培養株に陽性コントロールとして添加した。全てのTnDC同時培養株に1μgmlの活性化抗CD3を添加した。図1cは、提示したマーカーについて染色した後の培養5日目のCD4CD11cCD421細胞を示すFoxp3を検出するために細胞内染色を行った。この図は3つの個別の実験の代表的プロットを示す。これらの結果は、itDC又は陽性コントロールctrlDCTGFIL2の存在下において、Tnは、ctrlDC及びlpsDCに比較したときに著しく低い増殖率と高いFoxp3及びCD25発現率を示す、Tregに似た表現型を獲得することを実証している。dFoxp3誘導体に対するTCRシグナル伝達強度の役割。実施例1cと同じ条件下で細胞を精製し、培養し、採集し、分析した。様々な濃度のαCD3抗体を、それらのTn刺激能及びFoxp3発現惹起能について検査した。同時培養5日目における単個CD4CD11c7AAD細胞中のFoxp3CD25細胞の比率を図1dに示す。各点は、二つの代表である、一個の独立した実験の三重試験の平均に相当する。この実験は、Foxp3発現は、強力なTCR刺激が提供された場合でもitDCによって達成できることを示している。eexvivoにおける寛容原性DCによるFoxp3Tregの誘導の動態。細胞周期遮断剤であるアフィジコリンAphの存在下又は非存在下で、実施例1cと同じ条件下で細胞を精製し、培養し、採集し、分析した。図1eは、2つの独立した実験の代表的結果を含む。プロットは、培養の様々な時点における単個CD4CD11cCD451細胞を示す。これらの結果は、Foxp3発現の誘導なTnの最初の集団内で起きること、そして、5日目の出力はその大部分でFoxp3の上方調節と、そしておそらくはこれらのFoxp3T細胞の増殖とを表すことを示している。fgTregvsnTregの表現型。実施例1cと同じ条件下で細胞を精製し、培養し、採集し、分析した。Tn及び天然発生型TregをFoxp3GFPxCD451レポータx遺伝子導入マウスからFoxp3GFPTn又は既存の天然発生型Foxp3GFPTregのMACS及びFACSソーティングで分離し、様々な種類のDCにより、活性化抗CD3の存在下で活性化させた。培養5日後に、itDC又は陽性コントロールTGFβ及びIL2により誘導されたTregの表現型を活性化Tregに比較した。図1fは、示したDC集団との同時培養後の、CD4CD11cCD4517AAD細胞中のFoxp3CD25細胞のパーセンテージを示す3つの独立した実験の代表的結果。図1gに示されたプロットは、DCで指示されたTreg又はnTregFoxp3CD25CD4CD4517AAD細胞上の、示したマーカーの発現を示す。CD103と例外として、itDCで刺激されたTregは、nTregに比較するとGITR、CD152、CD25、CD127、CD62Lの大変似た発現を示す。hFoxp3細胞のFACSソーティング戦略。CD451動物由来のDCを組織培養媒質のみ、ラパマイシン及びTGFβ、LPS及びOVA323339材料及び方法で解説した通りにを加えた組織培養条件37°C、5CO2下で2時間、インキュベートした。処置後、DCを3回、洗浄した。TnをCD452xOTIIxFoxp3GFP動物からMACS及びFACSにより、前に示した通りに分離した。いくつかの条件では、TGFβ及びIL2両者とも20ngmlをTDC同時培養物に陽性コントロールとして加えたctrlDCTGFIL2。itDC又はctrlDCTGFβIL2との培養5日後に、T細胞を二つの主要な集団にGFPの発現に従って分散させた。これらの細胞をFACSソーティングし、Tnの増殖に対するそれらの抑制能を検査するために用いた。iFoxp3細胞は抑制するがFoxp3細胞は抑制しない。GFPTreg及びGFP活性化エフェクターT細胞を実施例1hで解説した通りに得た。OVAp及びOTIICD451Tnを等しく負荷した二回目のCD451DCをソーティングし、CFSEで染色し、それぞれ抑制検定の読み取り値又はコントロールとして用いた。これらの分離したばかりのCD451Tnを、分化後のCD452Foxp3GFPTreg及びFoxp3GFPTeff細胞と一緒に図1iに示した通りに培養した。TnCFSEのCFSEプロファイルをFACSで評価した。図1iに示す、これらの結果は、itDCによる刺激後にFoxp3を発現するT細胞レポータGFPを用いて同定されるは、exvivoでTnに対して抑制活性を有することを実証するものである。Foxp3を発現しない同じ培養物由来の、分離したばかりのTn図示せず又はTeff細胞はこの抑制活性を有さない。jTregの抑制機能はTn対Treg比に依存する。CD452Foxp3GFPTregを上述したように分離し、分離したばかりのCD452Foxp3GFPnTregに、それらの抑制能について、様々な抑制細胞Treg対応答細胞CD451TnCFSEにして比較した。図1jは、同時培養4日目のCD451CD4TCRVα2CD11c7AADT細胞の2つの実験の代表的プロットを示す。これらの結果は、itDCで刺激されたFoxp3Tregの抑制活性はnTregに匹敵し、部分的にはTreg対Tn細胞の比に依存することを示している。実施例2:ヒト誘導単球由来樹状細胞単球及び未刺激CD4T細胞を、様々なドナーの末梢血単核細胞から磁気陰性選抜によって精製した。単球は、上述した通りの標準的プロトコルを用いてDCに分化させた単球はPBMCから、MACSによる磁気陰性選抜法を用いた磁気選抜により精製され、GMCSF及びIL4の存在下で6日間、培養され、それらの分化中、示した処置で配合された材料及び方法を参照されたい。図2aは、投入Tn細胞及びMoDC左側パネルと、示した通りにMoDCで活性化させた後のT細胞のFoxp3及びCD25の発現プロファイルを示す。図2bは、5つの独立した異なる実験から採った集積データを示す。各ドットは異なるTn細胞ドナーを表す3重試験の平均。MoDC及びTnはそれぞれ5及び21の異なるドナーから分化させた。P値は通常の二方向ANOVA検定のボンフェローニポスト検定を用いて計算された。これらの実験は、ヒトDCをラパマイシン及びTGFβで処置すると、他のDCとは著しく異なるFoxp3誘導能がヒトTnで惹起されることを示している。驚くべきことに、一パネルの共刺激分子に関する、これらの様々なサブセットのDCの表現型は、図2cに示す通り、とても似ていた。抑制機能がitMoDCによって誘導されたのかどうかを検査するために、活性化T細胞及び推定TregをFACSソートし、MoDC及び新鮮なCFSE標識済みTnの、抗CD3との同時培養株に加えた。図2dのヒストグラムは、CD25又はCD25highとの3日間の培養後のTn増殖に対するCFSE希釈度を示す。従って、ヒトitDC誘導性Foxp3T細胞は、同時培養されたTnの増殖を抑制した。実施例3:itDCの表現型itDCの、提示分子及び共刺激分子のそれらの発現における表現型や、サブセット中の組成を調べた。ctrlDCanditDC間には、それらが分離されたばかりのものか、又は、成熟表現型の発現提示分子及び共刺激分子又は機能Foxp3の誘導についてtoll様受容体TLRアゴニストで刺激されたどうかに関係なく、著しい違いは観察できなかった。対照的に、著しい違いがDCサブセット同士の間ではTnでFoxp3を誘導するそれらの基礎能力の間に存在する。しかしながら、全てのDCサブセットは、ラパマイシン及びTGFβ処置には似た応答をするFoxp3誘導能の倍増。分子解析により、itDCはラパマイシンmTOR経路の不活性な哺乳動物標的を有することが判明した。GMCSF及びIL4を用いて骨髄前駆細胞BMDCを分化させて得られたDCは、ラパマイシン及びTGFβで処置したときに乏しい寛容原性機能しか生じなかった。しかしながら、ラパマイシン及びTGFβ処置後のFLT3Lの存在下での分化では、Tn上でFoxp3発現を誘導する能力を持ったBMDCが誘導された。a提示分子及び共刺激分子の発現。マウスDCを実施例1hで解説した通りに精製及び処置したが、通常の組織培養条件で一晩、インキュベートした。細胞を採集し、図3aで示したように染色した。CD11c7AAD細胞上の提示したマーカーの平均蛍光強度の平均を示す結果は、三つの独立した実験の三重試験の平均であり、代表である。p値は、通常の二方向ANOVA検定のボンフェローニポスト検定を用いて計算された。これらの結果は、itDCの表現型は主要組織適合複合体CLII発現及び共刺激分子CD80、CD86及びICOSLの発現については、それらのコントロール相対物に匹敵することを実証ている。同様に、CD40、CD134L、CD137L、CD273及びCD274、CD276、B7H4、ICAM13、LFA1、α4β7インテグリン、CCR2、CCR4、CCR5、CD196、CD197、CCR9、CX3CR1、CXCR3及びCXCR4の発現レベルはitDC及びctrlDCLPSによる成熟前又は成熟後、図示せず間では区別がつかなかった。重要なことに、itDCは、TLRアゴニストの存在下では高レベルの提示及び共刺激分子を獲得することができるようであり、それらが成熟表現型を獲得することができることを示唆している。b成熟及び未熟itDCの機能。実施例1hで解説した通りに、DCを正常な動物から分離し、処置し、OVApを負荷し、OTIIxFoxp3GFP動物由来のTnを刺激するために用いた。提示した場合には、toll様受容体アゴニストをラパマイシン及びTGFβitDCと同時に添加した。ある条件では、ラパマイシン及びTGFβ処置による2時間の処置から2時間前にLPSを添加したLPS2h。ラパマイシン及びTGFβ処置の前及び処置中にitDCを複数のTLRアゴニストに暴露しても、成熟マーカーの上方調節にも係わらず、寛容原性は変わらなかった図3b上を参照されたい。cDCサブセットのためのソーティング戦略。異なるDCサブセットがTn上でFoxp3発現を誘導する能力を検査するために、DCを、黒色腫産生性FLT3Lを接種した動物から分離し、FACSソーティングし、図3cでここに記載した戦略を用いてCD11cB220PDCA1及びCD11cB220PDCA1CD11bCD8α、CD11bCD8α、及びCD11bCD8αを得た。dDCサブセットの相対的寛容原性の比較。DCサブセットを上に記載した通り又は逆に処置及びソーティングし、実施例3bの通りにOTIIFoxp3GFP細胞を活性化するために用いた。TnでFoxp3を誘導するそれらの能力を分析すると図3d、未処置のDCですら、Tregを誘導する特徴的な基礎能力を有し、pDC≧CD8αCD11bCD8αCD11bであることが判明した。しかしながら、ラパマイシン及びTGFβで処置すると、各サブセットの寛容原性は実質的に亢進されたことから、全てのDCはこの条件付けに感受性であることが示された。図3b及び3dの結果は、培養5日目のFoxp3GFPCD25CD4CD11c7AAD細胞のパーセンテージを表す。p値はすべて、一方向もしくは二方向ANOVA検定のボンフェローニポスト検定を用いて計算された。eitDC中のmTOR経路の状態。DCを前の図面の通りに分離及び処置して、itDC、lpsDC及びctrlDCを得た。更なるコントロールとして、分離されたばかりのDCを氷上4°Cに維持したものを含めた。6時間後に細胞を溶解させ、ウェスタンブロットで分析して示した種を調べた左側。図3eの結果は、予想通り、mTORS6、S6K及び4EBP1の顆粒の標的のリン酸化に証左されるように、LPSによる処置でmTOR経路の活性化が増すことを示している。これらの因子の基礎リン酸化及びリン酸化増加は、ラパマイシン及びTGFβによる処置で完全に遮断された。Aktの活性化には影響はほとんど観察できないか、又は全く観察することができない。fitDC中のmTOR経路の状態:動態。DCを前の図面の通りに分離及び処置して、itDC、lpsDC及びctrlDCを得た。更なるコントロールとして、分離されたばかりのDCを氷上4°Cに維持したものを含めた。様々な時点で細胞を溶解し、ウェスタンブロットで分析して示した種を調べた左側。図3fの結果は、予想通り、mTORS6、S6K及び4EBP1の顆粒の標的のリン酸化に証左されるように、LPSによる処置でmTOR経路の活性化が増すことを示している。これらの因子の基礎リン酸化及びリン酸化増加は、ラパマイシン及びTGFβによる処置で完全に遮断された。g由来の異なるDC間の比較:骨髄細胞を8日間、標準的なプロトコルに従ってGMCSF及びIL4又はFLT3Lの存在下で培養して、骨髄由来DCを得た。これらの細胞のいくつかを6日目に更に二日間、ラパマイシン及びTGFβで処置してitDCを得るか、又は、Ecoli由来のリポ多糖と配合した。全ての細胞に採集から24時間前にOVApを与えて、OTIIFoxp3GFPCD451Tnを活性化させた。この同時培養の5日後にVα2CD4CD451細胞中のCD25Foxp3の存在をFACSで評価した。陽性コントロールは、更なるTGFβ及びIL2を添加した細胞培養株ctrlDCT2だった。これらの結果は、FLT3Lの存在下でBM前駆細胞から得られたBMDCは、Tn上でFoxp3を誘導する上で脾臓DCと同様な能力を有するが、GMCSFの存在下で得られたBMDCは有さないことを示している。実施例4:itDCによる寛容誘導の機序itDCがTn上でFoxp3発現を誘導する能力における、複数の寛容原性因子の関与を、遮断抗体を用いてそれらの発現が欠損した動物からDCを得ることで評価した。その結果は、itDC機能は、DCによるIL6、IL10、TGFβ、FasLTSC1、EBI3及びIDO1の産生とは独立であることを示している。実施例1hで前に解説した通りの、様々な種類のOVAp負荷DC及びOTIIFoxp3GFPTnを含有する同様な培養を、10μgmlの遮断性抗IL10及び抗IL10R、及び/又は、遮断性抗TGFβ又はアイソタイプコントロールを添加することで行った。ある条件では、IL10欠損動物をDCのドナーとして用いた。結果を図4aに示すが、同図において各点は独立した実験及び三重試験の平均を表す。これらの結果は、Tn細胞におけるFoxp3の刺激には、itDCによるIL10又はTGFβの分泌は関与しないことを実証している。加えて、IDO1図4b、EBI3図4c、FasL図4d、IL6図4e充分又は欠損DCを上の通りに条件付けしたときには、グループ間で何の有意な違いも観察されなかった。同様に、CD11cCreトランスジェニック動物をTSC1loxlox条件付けノックアウト動物に交配して、mTOR活性を制御する因子であるTSC1を欠失させることで、全てのDCがTSC1発現を欠く、一方のみの機能的アレルを発現する又は両方を発現する動物を得た場合にも、itDCがTn上のFoxp3発現を誘導する能力には何の違いも観察されなかった図4f。動物はすべて同腹仔だった。しかしながら、プログラムされた死1受容体、PDL1、PDL2又は両者の発現を欠く動物由来のDCを用いた場合には、Foxp3発現を惹起する能力の低下が観察された図4g。これらの実験は、itDCは、IL6、IL10、TGFβ、FasLTSC1、EBI3及びIDO1とは独立に、部分的にPD1経路を通じてTn上のFoxp3発現を誘導することを示している。実施例5:exvivoでのT細胞に対するitDCの効果は、接触依存的であり、itDCT細胞比によって影響されるExvivoでのそれらの同時培養中の、Tnに対するitDCの効果をより良好に特徴付けるために、実施例1hのそれと同様な実験を、トランスウェル実験を用いて、又は、itDCを免疫原性lpsDCと配合して、行って、T細胞生存率がこれらの同時培養で影響を受けるかどうか、又は、細胞接触が、itDCによるTn上のFoxp3誘導に必要であるかどうかを判定した。図5aにおいて、正常なCD452動物由来のDCを前の実験通りに分離し、OVApを負荷し、処置してctrlDC、lpsDC及びitDCを作製し、活性化OTIIFoxp3GFPCD451Tnをトランスウェルチャンバー内に作成するために用いた。DCを単独で、又は、Tnと組み合わせて上側/下側チャンバーに入れた。Vα2CD4CD451細胞中のCD25Foxp3の存在を5日後にFACSで評価した。これらの実験は、Foxp3発現の上方調節を達成するためには、itDC及びTn間に直接的な接触が必要であることを示している。更に、免疫原性lpsDCの存在はitDCがFoxp3発現を誘導することの妨げとはならなかった。実際、図5bでは、上と同様のitDC及びTnの同時培養を行ったが、提示するように、DCの異なる組合せ及び比を用いた。Vα2CD4CD451細胞中へのCD25Foxp3の存在を5日後にFACSにより評価した。50itDC対50ctrlDCの比又はlpsDC又はそれより低い比では検出可能な違いはなかった。興味深いことに、これらの実験では、誘導されるTregの比率は、itDCの半分を用いた場合に低くなる。しかしながら、100lpsDC毎に1という少ないitDCでTn上でFoxp3発現を誘導することができたことは図5c、itDCは、完全に免疫原性のDCが大部分であっても寛容原性事象を惹起することができることを示唆している。Foxp3Tregの比率は、itDCを加える量を多くする又は少なくすることで、それぞれ減らす図5c又は増やす図5dことができるため、itDCの寛容原性効果はitDCTn比に依存的である。実施例6:exvivoのitDCによる抗原特異的T細胞の枯渇及びFoxp3発現の誘導未刺激及びエフェクターT細胞上でのitDC効果を更に特徴付けるために、DCにOVApを負荷し、前に記載した通りに示差的に条件付けして、免疫原性又は寛容原性表現型を惹起した。DCを用いてOVA特異的OTIITnを活性化した。lpsDC及びctrlDCを含有する同時培養株では強力なT細胞増殖が3日目に開始し、TGFβ及びIL2をctrlDCctrlDCT2;図6aに添加した場合には更に明白だった。対照的に、itDCに暴露してあったTnの増殖は低かった。興味深いことに、T細胞数も3日目より前に劇的に変化した。用いたDCサブセットに関係なく、最初の二日間にTnに著しい収縮があった。1日目及び2日目中のT細胞数を慎重に比較すると、itDCがあることで、ctrlDCに比較してTnに最高2倍のTn喪失があったことが判明したctrDCに正規化、図6b。更に、細胞を培養物中に単独で放置した場合に生き延びたTn数に比較すると、ctrlDC及びlpsDCの存在は何の効果もなく、他方、itDC及びLPS活性化itDCはT細胞の劇的な更なる喪失を引き起こした図6c。itDCのこの効果は、血小板結合型活性化aCD3プラスaCD28による同時の強力な刺激でも可逆的ではなかったが、更なるIL2でT細胞数が部分的に回復した図6c。重要なことに、活性化TeffをitDCと同時培養した場合にも、著明なT細胞枯渇が観察された。しかしながら、Teff数は2日目にしか影響を受けなかった図6d。更なる実験により、itDCがTnに及ぼすT細胞枯渇効果はT細胞itDC比に依存ずることが判明した図6e。最も低い比我々の標準的な検定に比べて10倍多いDC数を反映する11では、生存Tnは75を超える減少を見せた図4d。対照的に、itDCの、TnでのFoxp3誘導能はTnitDC比実施例5b及び5dの変化の影響をごく僅かにしか受けなかったことから、itDCが従来のT細胞を削除する機序とTregを誘導する機序は別個である可能性が示唆された。図6aexvivoでのTn生存の動態。DCにOVAタンパク質を負荷し、50μgmlのラパマイシン及び20ngmlのTGFβ、又はLPSで処置し、洗浄してそれぞれitDC及びlpsDCを得た。いくつかのDCはRT及びLPSで同時処置した。コントロールは、各試薬に用いた溶媒のみで同一に培養した。陽性コントロールとして、TGFβ及びIL2をTnctrlDC同時培養株に添加してFoxp3を直接誘導した図6a。点線は投入されたTnを表す。図6bitDCにより誘導されるTnの選択的な早期消失。前の図面のデータは、ctrlDCとの同時培養におけるT細胞数に正規化されている。白色の記号は1日目に得られた結果を表し、塗り潰された記号は2日目の比を表す。図6cTCR刺激はitDCの有害な効果を克服しない。OTIIFoxp3GFPTnを、様々な種類のOVAp負荷DCにより前の図面の通りに刺激した図6c。Tnは単独のままとするTnのみか、又は、提示した通りに異なるDC試料と混合された。ある条件では、活性化aCD3及びaCD28MAbsをプレートに結合させることで、itDCの存在下でTnを最大に活性化させた。別の条件では、補助的なIL2を同時培養株に0日目に開始して添加した。図6ditDCはTeff細胞数を減少させる。培養の5日間かけてlpsDCで活性化させた後に、提示したDCサブセットの存在下で同時培養したTnを用いて、前と同様な実験を行った。図6eitDCT比はT細胞の消失に影響を与える。itDCによるT細胞枯渇が培養物中に存在するitDCの数に依存するかどうかを評価するために、Tnを様々な数のOVApパルス負荷itDCと一緒に同時培養した。図面は、1日目及び2日目のTnの総数を示す。標準的な検定における当該比は、1DC対10T細胞を用いた。図6a、6c、6d及び6eに示すのはTGFβCD11cVα27AAD細胞数である。実施例7:invivoにおけるitDCによる抗原特異的T細胞の枯渇及びFoxp3発現の誘導invivoでitDCがどのように抗原特異的Tnに影響を与えるかを評価するために、CD452OTIIRAG1TnをCD451C57BL6レシピエントに静脈内注射した後、OVApを負荷した、示差的に処置したCD452DCを足蹠注射した。Tnは前に解説した通りにRag1xOTII動物から分離された。DCは実施例1hで解説された通りに分離され、OVApの存在下で処置された。様々な種類のDCを後ろ足の足蹠に皮下注射したが、他方、Tn細胞は静脈内注射した。1群当り3匹の動物を提示した時点でと殺し、それらの骨髄BM、膝窩注射部位を排液する及び鼠蹊部リンパ節それぞれpopLN及びingLN並びに脾臓を採集した。導入細胞の存在について細胞懸濁液を分析した。この実験デザインの概略図を図7aに示す。全DC種の泳動能を検査して、invivoで観察されたいずれかの効果がそれらのホーミングの違いで説明できることを除外した。従って、FLT3Lを産生する黒色腫細胞株を接種されたCD451動物由来のDCを前に解説した通りに分離及び処置してctrlDC、itDC及びlpsDCを得た。これらの細胞に異なる染料又は細胞追跡剤で示差的に標識して、静脈内図7b又は足蹠皮下注射図示せず後の提示した臓器におけるそれらの存在を検出した。異なる時点1乃至3日、図示せずでそれらを養子移入した後では、群間で有意な違いは検出できなかった。popLN由来の細胞を示す図7cに初期の時点を示す。左側のパネルはCD47AAD細胞を示し、右側のパネルはCD4Vα27AAD細胞を示す。左側のパネルのパーセンテージは黒い文はCD4CD452Vα27AADを養子移入させたTn細胞のことである。図7cの右側のパネルはCD4Vα27AAD細胞の通門である。パーセンテージは、内因性CD452T細胞灰色及び養子移入したCD452Tnを言う。図7dは、CD4Vα2画分中の移入したCD452細胞のパーセンテージの定量を示す。図7eは、DCを注射してから7日後遅い時点の動物のpopLN、ingLN及びSpl中の内因性CD452灰色及び養子移入したCD452黒色CD4Vα2細胞の三つの個別の実験の代表的プロットを示す。図7c及び7dの集積データを図7fに示す。図7gの定量は内因性細胞中のFoxp3細胞の比率を示す。これらのデータは、itDC注射後のFoxp3の誘導は抗原特異的T細胞に限られること、即ち、Tregのポリクローナル増加はないことを示している。p値はすべて、通常の二方向ANOVA検定のボンフェローニポスト検定を用いて計算された。これらの結果は、itDCの注射は健康な動物においてT細胞レパートリーの構成にとって著名な結果を有することを示している。非itDCを注射すると抗原特異的Tnの強力な活性化及び増殖が起きたが、他方、itDC注射は反対の効果を有し、即ち、これらのTnの量を減らし、残った細胞でFoxp3発現を誘導した。OTII細胞数での低下は2日目に開始した誘導寛容原性DCのレシピエントの組織すべてで明白だった。この効果は、4日目及び7日目という、誘導寛容原性DCではなく、LPS処置細胞及びコントロールDCが強力なOTIIT細胞増殖を誘導した日に、より著明となった。Foxp3発現の誘導はそれより後に起き、5日目に開始した。この効果は、内因性Vα2CD452Tregに変化がないままだったため、抗原特異的であった図7g。実施例8:疾患の経過に対するitDC投与の効果:自己免疫、同種応答及びアレルギー性喘息のマウスモデル。自己免疫のモデル:実験的自己免疫性脳脊髄炎EAEC57BL6動物に、標準的なプロトコルに従って0日目及び2日目に100μg/マウスのMOG3555を溶かしたCFA乳液及び100ng/マウスの注射することでEAEを誘導した。免疫処置より8日前に予防的、-8日目又は12日後治療的、12日目に、動物に図8a上側に示すように107DCを静脈内注射した。107DCは実施例1bで示すように処置され、EAEを誘導するために用いたのと同じペプチドを負荷するか、又は負荷しなかった。いくつかの条件では、細胞の110に注射した、発病率、最大スコア。図8cは、EAE処置群同士の統計上有意差p値を示す。図8d、8e及び8fは、5つの独立した実験の集積データの同じパラメータを示す1群当り5匹の動物、群合計当り24匹の動物。これらの結果は、itDCによる処置には、DCが特異抗原中に存在する必要がある可能性を示している。疾患のピーク時の処置は、このEAEモデルでは予防的介入よりも有効である。EAEに対するitDCの効果を更に調べるために、動物に免疫処置し、前に記載した通りに治療的に処置し、DC注射から5日後に動物をと殺した。頸部のLN及び脾臓を採集し、細胞をMOG3555で一晩、再刺激した。調節性T細胞及びエフェクターT細胞の染色を行った。図8gは、治療用DC注射後のCD4生存単個細胞中のTreg及びTeff細胞のパーセンテージ及び総数を示す。T細胞表現型をEAEスコアと相関させるために、実験の終わりに動物をランダム化してそれらの臓器を採集し、MOG3555で一晩、再刺激した後にTeff細胞又はTreg細胞の存在について調査した。脾臓、中枢神経系CNS、脳及び脊髄、リンパ節頸部、上腕、鼠蹊部、腸間膜、図示せず及び骨髄を採集した。図8hは、動物毎に各点がTreg/Treff比に対して平均EAEスコアの数値をプロットして表す相関プロットを示す。実線はベストフィット線を表し、点線は95信頼帯を示す。これらの結果は、回復中DC注射後、又は注射なしの動物が、高Treg/Teff比と、より低いスコアの疾患との間で著しく高い相関を有することを示している。p値はすべて、通常の二方向ANOVA検定のボンフェローニポスト検定を用いて計算された。まとめると、これらのデータは、itDC処置は、おそらくはこの疾患を誘導及び維持するTeff細胞の消失を通じて、そして自己抗原に対する寛容を確実にするTregを刺激することにより、EAEの進行を有効に制止することを実証するものである。同種反応のモデル:混合型白血球反応脾臓未処置BalbcDC提供細胞をCFSE標識C57BL6T細胞応答細胞;各集団の105個の細胞と混合した。示差的に処置したF1DCをいくつかのウェルに添加した。4日後、応答細胞の増殖をFACSで分析した。C57BL6応答細胞のみ提供細胞なしを陰性刺激無し又は陽性コントロール抗CD3刺激ありとして用いた。図8i中のx軸ラベルは培養物中のF1DCの存在及び状態のことである。itDCは、それらがLPSで活性化されているかいないか、そして更なるLPS成熟化DCの存在下又は非存在下にあるかに関係なく、寛容原性であることに留意されたい。別の実験で図示せず、albc及びC57BL6ドナー由来のitDCもT細胞増殖を減衰したが、その程度はF1ドナー由来のitDCよりも小さかった。アレルギー性喘息のモデルアレルギー性喘息におけるitDCの効果を検査するために、材料及び方法で解説した通りにC57BL6マウスをOVAに感作させて抗原刺激した。D11に、動物を未処置とするctrlか、又は107OVAp負荷ctrlDC又はitDCを静脈内注射した。D18に動物をと殺した図8j。BAL液を好酸球及びCD4T細胞について評価した図8l。最後の抗原刺激から3日後、itDCレシピエントの気管支肺胞液中の気道好酸球及びCD4リンパ球が減少していたことから、itDCは外因性抗原への病的応答を処置するために有用ではないかという発想と合致した。図8nは、マウスにハウスダストダニHDM、材料及び方法を参照されたいを1週間に5日、鼻腔内的に、毎週5週間HDM、感作させ、メタコリン誘導性気道反応亢進AHR、材料及び方法に解説した通りをD25に測定した実験結果を示す図8m。毎回のHDM刺激毎週6日目、合計4回の処置セット後のHDMパルス負荷itDC注射によりAHR応答が減衰したことから、itDcは治療効果を遺伝的背景B6及びBalbcに関係なく、そして炎症及び呼吸機能の両方のレベルで発揮することが示唆された。ここで、HDMはこれらのダニ由来の粗抽出物であり、ペプチド及び精製済みタンパク質で現在まで用いられているプロトコルとは反対に、抗原の複雑な混合物の代表であることに注目することが重要である。ここで提示した結果は、itDCは、このような製剤を用いて寛容原性効果を惹起することができることを示唆しており、これらは、免疫障害の過程で関連する抗原をプロセッシング及び提示することができるという構想と合致するものである。実施例9:invivoのリンパ節においてFoxp3細胞の比率に対してラパマイシンの直接的処置には効果なしTnをOTIIxCD451ドナーから分離してCD452レシピエントに注射した。翌日、動物の後ろ足の足蹠にコントロールの生理食塩水、OVApのみ、ラパマイシンのみ又は両者の組合せを注射した。5日後に排膿性膝窩及び非排膿性上腕リンパ節を抽出し、移入性又は内因性Vα2CD4細胞中のCD25Foxp3にの存在について分析した。図9aに示すように、養子移入した又は内因性T細胞には何の効果も観察できなかった。同様な実験を行って、invivoのリンパ節でのFoxp3T細胞の比率に対するラパマイシンの直接的処置の効果を評価した。TnをCD451ドナーから分離しCD452レシピエントに注射した。翌日、動物の後ろ足の足蹠にコントロールの生理食塩水、活性化抗CD3抗体、Ecoli由来のリポ多糖及びラパマイシンを注射した。提示した時点で排膿性膝窩リンパ節を抽出し、提示した時点のVα2CD4CD451細胞中のCD25Foxp3の存在について分析した。図9bに示すように、Foxp3の量に何の違いも検出できなかった。実施例10:寛容原性DCを誘導するための更なる化合物のスクリーニング。aoATPはDCに寛容原性機能を誘導する。DCを、正常なC57BL6動物、又は、9日前にFLT3L産生性黒色腫を接種した動物の脾臓から得た抗CD11c結合ビーズほぼ98純粋による二重陽性選抜を用いたMACSにより精製した材料及び方法を参照されたい。DCはLPS、ラパマイシン及びTGFβ2ngml、RapaTGF;プリン性受容体アゴニストATP又はBzATP;プリン性受容体アンタゴニスト酸化ATP又はスラニム100μM;又はアデノシン一リン酸キナーゼ刺激剤AICAR、又は、ATPを触媒する酵素アピラーゼと一緒に2時間、組織培養条件下でインキュベートされた。メンドリオブアルブミンタンパク質をこのインキュベーションでDCを負荷するために用いた。処置後、DCをよく最高6回洗浄した。CD4CD62LhighCD44lowCD25Foxp3GFP細胞のFACSソーティングにより、TnをOTIIxFoxp3GFPレポータ×トランスジェニックマウスから分離した。CD451又はCD452動物をDC及びTn実験にわたって交換したのドナーとして用いた。図10aは、処置済みDCと一緒に同時培養してから5日後のCD4CD11c7AAD細胞のGFP発現を測定することにより明らかにされたFoxp3及びCD25発現細胞のパーセンテージを示す。図10aは、5個の異なる独立した実験の結果を要約したものであり、図中、各点は三重試験の平均を表す。このDC条件付けスクリーニングにより、pATPによるDC処置はDCに寛容原性能を著しく押印することが明らかである。この能力は、ラパマイシン及びTGFβの組合せのそれに匹敵するか、又は超えるものである。boATP及びAICARによる成熟の遮断:DCを分離し、6時間、4度又は培養物に維持してctrlDC、lpsDCitDC及びitlpsDCを作製した。同時に、細胞をプリン性受容体アゴニストATP及びBzATP、プリン性受容体アンタゴニスト酸化ATP及びスラニム、アデノシン一リン酸キナーゼ刺激剤AICAR及び、ATPを触媒する酵素アピラーゼで処置した。6時間後に細胞を採集し、提示したマーカーの発現をFACSで評価した。これらの実験は、oATP及びAICARはDC成熟を遮断することを示している。実施例11:ミトコンドリアに対するDC活性化の効果O2消費速度に対するDC活性化の効果を検査することで、OCRの増加と免疫原性増加とを相関づけようと試みた。事実、成熟シグナルを投与された数時間後にはコントロールDCはそれらのOCRを劇的に増加させたが、この増加はRT処置された寛容原性樹状細胞では起きなかった。図1kのパネルaは、コントロール及びLPS刺激樹状細胞での経時的なミトコンドリア呼吸酸素消費速度を示す。基礎及び未結合のOCR比の両者ともLPS後に増加した。一晩の成熟後は、lpsDCのOCRは減少した。パネルBでは、PGC1αの発現動態を、Y1PGC1α転写複合体はミトコンドリア酸化機能を制御するという事実に基づいて測定した。リアルタイムPCRを未処置コントロール及びLPS処置済みDCに行い、GAPDHに正規化した。加えて、ミトコンドリアの透過型電子顕微鏡検査をコントロール及びLPS処置済みDCに行い、パネルCに示す。パネルDは、ImageJソフトウェアを用いてミトコンドリア中のクリステ全長nm:同じミトコンドリアの面積nm2として判定した、活性化DC中のミトコンドリアクリステの密度増加を示す。実施例12:DCのOCR及び免疫原性高濃度の細胞内ATPレベル及びATP放出の両方を制御するmTORと同様に、インフラソームを活性化させる細胞外ATPはTLRアゴニストと同様にDC内のOCRレベルを上昇させた図12a。oATPがitDC機能を惹起し図10a、成熟を遮断する図10b能力を念頭に、次に、この試薬を用いてATP受容体ATPRを遮断するとDCのOCRが減少するかどうかを検査した図12b。oATPで処置した細胞は、それらのコントロールに比較して、それらがLPSと一緒に同時処置されたかどうかに関係なく、OCRの減少を実証している。ミトコンドリア呼吸複合体Iの阻害剤であるロテノンによる、ミトコンドリア呼吸の直接的な阻害の効果を調べた。図12cにしめすように、ミトコンドリア内の電子輸送をロテノンにより阻害すると、DC免疫原性が遮断される。CFSE標識されたOTIIT細胞を、LPSのみ又はLPS1mMのロテノンで成熟させたOVAペプチドパルス負荷DCと一緒にインキュベートした。コントロールDCをLPSで、OVAパルス負荷なしで処置した。T細胞増殖をCFSE希釈によりD3に分析した。ロテノンの存在下でLPSで処置してあった抗原パルス負荷DCは、コントロールDCよりも遥かに小さいT細胞増殖を誘導した。対照的に、トランスウェル化学走性検定図示せずでは、成熟マーカーとCCL21への遊走にDCサブセット間で違いはなかったことから、ロテノンはDCにとって毒性ではないことが示唆された。実施例13:DCのスタチン処置による寛容原性機能の誘導。正常な動物由来のDCを、前の実験の通りでに分離し、OVApを負荷し、処置してctrlDC、lpsDC及びitDCを作製した。加えて、細胞をアトルバスタチンプラバスタチン又はoATPをラパマイシン、TGFβ及びLPSと組み合わせたもの又は組み合わせないもので、提示した通りに処置した。これらの細胞を用いてOTIIFoxp3GFPCD451Tnを活性化し、5日後に培養物中でVα2CD4CD451細胞中のCD25Foxp3の存在をFACSで評価した。陽性コントロールは、付加的なTGFβ及びIL2を加えた細胞培養株だった。これらの実験は、スタチン処置が、TLRアゴニストのLPSの存在に耐性であるラパマイシン及びTGFβの組合せと同様に、DCに対して寛容原性機能を惹起することを示している。均等物本発明は、ここでは特定の実施例及び実施例のみを参照して解説されている。本発明のあらゆる可能な実施例及び実施態様を解説し尽そうという努力はなされていない。実際のところ、当業者であれば、多様な追加、削除、変形及び他の変更を、以下の請求項に限定された通りの本発明の意図された精神及び範囲から逸脱することなく、上述の実施例及び実施態様に行うことができることは理解されよう。このような追加、削除、変形及び他の変更は全て、以下の請求の範囲内に包含されるものと、意図されている。