"酵母様真菌の培養液を有効成分とするアクネ菌のバイオフィルム形成阻害剤。マラセチア属真菌の培養液を有効成分とするアクネ菌のバイオフィルム形成阻害剤。マラセチア属真菌の培養液を有効成分とするニキビ予防又は治療用皮膚外用剤。マラセチア属真菌の培養液及び抗菌剤を含有するアクネ菌に対する抗菌組成物。ニキビの原因の一つであるアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害し、安全性、安定性にも優れている外用剤が望まれていた。本発明は、上記課題の解決に向け鋭意検討を行った結果、マラセチア属真菌培養液がアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害することを見出した。さらに、マラセチア属真菌培養液を含有する外用剤、並びにマラセチア属真菌培養物及び抗菌剤を含有する外用剤は、安全性、安定性にも優れており、本発明を完成するに至った。本発明に用いられるマラセチア属真菌培養液は、Malasseziafurfur、Malasseziasympodialis、Malasseziaglobosa、Malasseziarestricta、又はMalasseziadermatisを培養して作製した。本発明の皮膚外用剤には、その効果を損なわない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することもできる。本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、洗口剤、液体歯磨、練歯磨等が挙げられる。マラセチア属真菌培養液は、アクネ菌のバイオフィルム形成を阻害した。また、本培養液及び抗菌剤を含有する外用剤の抗菌効果は、抗菌剤のみを含有する外用剤と比較して増強した。次に本発明を詳細に説明するため、実施例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。製造例1M.furfur培養液MalasseziafurfurNBRC0656をLeemingNotman培地全量1000mL中、ペプトン10g、ウシ胆汁エキス4g、酵母エキス0.1g、グルコース5g、グリセリン1g、グリセリンモノステアレート0.5g、Tween600.5g、3.25脂肪乳10mL非特許文献2を用いて32°Cにて1週間培養した後、0.45μmのフィルターにて濾過し、M.furfur培養液を作製した。製造例2M.globosa培養液Malasseziaglobosaを製造例1の方法にて培養した後、同様に濾過して、M.globosa培養液を作製した。製造例3M.restricta培養液Malasseziarestrictaを製造例1の方法にて培養した後、同様に濾過して、M.restricta培養液を作製した。製造例4M.sympodialis培養液Malasseziasympodialisを製造例1の方法にて培養した後、同様に濾過して、M.sympodialis培養液を作製した。製造例5M.dermatis培養液Malasseziadermatisを製造例1の方法にて培養した後、同様に濾過して、M.dermatis培養液を作製した。処方例1化粧水処方配合量部1.M.furfur培養液製造例15.02.硫酸カリウムアルミニウム0.33.1,3-ブチレングリコール8.04.グリセリン2.05.キサンタンガム0.026.クエン酸0.017.クエン酸ナトリウム0.18.エタノール5.09.パラオキシ安息香酸メチル0.110.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油40E.O.0.111.香料0.112.精製水にて全量を100とする[製造方法]成分1~7及び12と、成分8~11をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。比較例従来の化粧水処方例1において、成分1を精製水5.0部に置き換えたものを従来の化粧水とした。処方例2クリーム処方配合量部1.M.globosa培養液製造例23.02.サリチル酸0.13.1,3-ブチレングリコール8.54.パラオキシ安息香酸エチル0.055.パラオキシ安息香酸メチル0.26.水酸化ナトリウム0.177.リン酸二水素カリウム0.688.スクワラン6.09.オリーブ油3.010.ステアリン酸2.011.ミツロウ2.012.ミリスチン酸オクチルドデシル3.513.ポリオキシエチレンセチルエーテル20E.O.3.014.ベヘニルアルコール1.515.モノステアリン酸グリセリン2.516.香料0.117.精製水にて全量を100とする[製造方法]成分8~15を加熱溶解して混合した後、70°Cに保ち油相とする。成分2~7及び17を加熱溶解して混合し、75°Cに保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45°Cにて成分1及び16を加え、更に30°Cまで冷却して製品とする。処方例3乳液処方配合量部1.M.restricta培養液製造例33.02.トリクロサン0.053.スクワラン5.04.オリーブ油5.05.ホホバ油5.06.セタノール1.57.モノステアリン酸グリセリン2.08.ポリオキシエチレンセチルエーテル20E.O.3.09.ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート20E.O.2.010.香料0.111.プロピレングリコール1.012.グリセリン2.013.パラオキシ安息香酸メチル0.214.ホウ酸ナトリウム十水和物1.015.塩酸0.1716.精製水にて全量を100とする[製造方法]成分2~9を加熱溶解して混合し、70°Cに保ち油相とする。成分11~16を加熱溶解して混合し、75°Cに保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45°Cにて成分1及び10を加え、更に30°Cまで冷却して製品とする。処方例4ゲル剤処方配合量部1.M.sympodialis培養液製造例44.02.ピオニン0.0013.1,3-ブチレングリコール5.04.グリセリン5.05.キサンタンガム0.16.カルボキシビニルポリマー0.27.水酸化カリウム0.28.トリスヒドロキシメチルアミノメタン0.809.塩酸0.1210.エタノール5.011.パラオキシ安息香酸メチル0.112.ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60E.O.0.113.香料0.114.精製水にて全量を100とする[製造方法]成分1~9及び14と、成分10~13をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。処方例5軟膏処方配合量1.M.dermatis培養液製造例55.02.サリチル酸0.053.トリクロサン0.054.ポリオキシエチレンセチルエーテル30E.O.2.05.モノステアリン酸グリセリン10.06.流動パラフィン5.07.セタノール6.08.パラオキシ安息香酸メチル0.19.プロピレングリコール10.010.精製水にて全量を100とする[製造方法]成分3~7を加熱溶解して混合し、70°Cに保ち油相とする。成分2及び8~10を加熱溶解して混合し、75°Cに保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、45°Cにて成分1を加え、更に30°Cまで冷却して製品とする。実験例1マラセチア属真菌培養液によるアクネ菌のバイオフィルム形成阻害効果強化クロストリジア培地Oxoid80μL、アクネ菌分散液菌数109/mL10μL、製造例1~5で作製したマラセチア属真菌培養液又はLeemingNotman培地ネガティブコントロール10μLを96穴マイクロプレートに加え、35°Cにて嫌気培養した。1週間後、上清を取り除き、リン酸緩衝液にて洗浄した後、0.5クリスタルバイオレットを加えてバイオフィルムを染色した。さらにリン酸緩衝液にて洗浄した後、エタノールを加えて色素を溶出し、950nmにおける吸光度を測定してバイオフィルム形成量とした。JClinMicrobiol.Vol.25,PP.2017-20191987結果を表1に示す。上記の表1から、マラセチア属真菌培養液を含む場合、アクネ菌のバイオフィルム形成は抑制されていることが明らかである。他のマラセチア菌種においても、M.furfurを用いた場合と同様に、アクネ菌のバイオフィルム抑制効果を認めた。実験例2抗菌剤とマラセチア属真菌培養液の併用効果実施例2の方法に準じ、マラセチア培養液又はLeemingNotman培地の存在下でアクネ菌を培養した後、2W/Vの硫酸カリウムアルミニウムを添加し、6時間後のアクネ菌の生菌数を培養法にて測定した。結果を表2に示す。マラセチア属真菌培養液を添加してアクネ菌を培養した場合、マラセチア属真菌培養液を含まない時よりもアクネ菌の生菌数が減少したことから、マラセチア属真菌培養液が硫酸カリウムアルミニウムのアクネ菌に対する抗菌効果を増大させたことが明らかである。他のマラセチア菌種においても、M.furfurを用いた場合と同様に、硫酸カリウムアルミニウムのアクネ菌に対する抗菌効果を増強した。抗菌剤として、ナジフロキサシン、リン酸クリンダマイシン、サリチル酸、トリクロサン又はピオニンを用いた場合においても、マラセチア属真菌培養液は、これらの抗菌剤のアクネ菌に対する抗菌性を増強した。実験例3使用試験処方例1及び比較例の化粧水を用いて、顔面にニキビを有する成人20名男性10名、女性10名を対象に1ヶ月間の使用試験を行った。使用後、アンケート調査によりニキビの改善について判定した。結果を表3に示す。マラセチア属真菌培養液を含有する化粧水は、優れたニキビ症状の改善効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。処方例2~5で得られた化粧品、医薬品についても同様に使用試験を行った結果、いずれもニキビの予防改善効果を示した。"