"式Iによる化合物、式中、各Rは、独立して、Hまたは任意で置換されたアルキルであり、各R1は、独立して、Hまたは任意で置換されたアルキルであり、各R2は、独立して、H、任意で置換されたアルキル、またはCORであり、各R3は、独立して、H、任意で置換されたアルキル、COOR、またはCONRRであり、各R4は、独立して、H、任意で置換されたアルキル、COOR、またはCONRRであるおよび、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物。R3およびR4が、Hである、請求項1に記載の化合物。R1が、イソプロピルである、請求項2に記載の化合物。前記化合物が、表Aにおける化合物1~8のうちのいずれかである、請求項1に記載の化合物。前記化合物が、ラルガゾールlargazoleである、請求項1に記載の化合物。R2が、アルキルである、請求項1に記載の化合物。R2が、アルキルCO-である、請求項6に記載の化合物。請求項1に記載の前記化合物、および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。請求項1記載の前記化合物が、化合物1~8のうちのいずれかであり、および薬学的に許容可能な担体である、請求項8に記載の医薬組成物。さらなる治療剤をさらに含む、請求項9に記載の医薬組成物。前記さらなる治療剤が、抗骨粗鬆症剤である、請求項10記載の医薬組成物。骨障害を患う、または影響を受けやすい対象に前記化合物を投与するための説明書とともに、単位剤形の、請求項1に記載の化合物の有効量を含むキット。対象において破骨細胞活性の活性を調節する方法であって、前記対象において破骨細胞の活性を調節するのに十分な量および条件下で、請求項1に記載の化合物または請求項8に記載の医薬組成物と前記対象を接触させることを含む方法。対象において骨芽細胞活性の活性を調節する方法であって、前記対象において骨芽細胞の活性を調節するのに十分な量および条件下で、請求項1に記載の化合物または請求項8に記載の医薬組成物と前記対象を接触させることを含む方法。前記化合物が、アナボリック活性および抗骨吸収活性を有する、請求項13に記載の方法。前記調節が、阻害である、請求項13に記載の方法。骨障害もしくは疾患を患う、または影響を受けやすい対象を治療する方法であって、前記対象が、骨障害または疾患の治療を必要とするとして認定され、前記対象が前記障害の治療がされるよう、それを必要とする前記対象に請求項1に記載の化合物または請求項8に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む方法。請求項1に記載の前記化合物が、化合物1~8のうちの1つである、請求項13または17に記載の方法。前記障害が、骨粗鬆症である、請求項13または17に記載の方法。前記障害が、骨組織の再生である、請求項13または17に記載の方法。前記障害が、骨組織の設計である、請求項13または17に記載の方法。前記対象が、哺乳類である、請求項13または17に記載の方法。前記対象が、霊長類またはヒトである、請求項13または17に記載の方法。請求項1に記載の前記化合物の有効量が、約0.005μg/kg~約200mg/kgの範囲である、請求項13または17に記載の方法。請求項1に記載の前記化合物の前記有効量が、約0.1mg/kg~約200mg/kgの範囲である、請求項24に記載の方法。請求項1に記載の前記化合物の前記有効量が、約10mg/kg~100mg/kgの範囲である、請求項25に記載の方法。請求項1に記載の前記化合物の有効量が、約1.0pM~約500nMの範囲である、請求項13または17に記載の方法。請求項1に記載の前記化合物が、静脈内、筋肉内、皮下、脳室内、経口的、または局所的に投与される、請求項13または17に記載の方法。請求項1に記載の前記化合物が、単独で、または1つまたはそれ以上のその他の治療薬と組み合わせて投与される、請求項13または17に記載の方法。さらなる前記治療剤が、抗骨粗鬆症剤である、請求項29に記載の方法。対象における骨疾患を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に、化合物1~8のうちのいずれか、およびその薬学的に許容されるその塩の有効量を投与することを含む方法。対象における骨形成、骨修復、または骨再生を誘導する方法であって、それを必要とする前記対象に、請求項1に記載の化合物の有効量を投与し、それによって前記骨形成、骨修復、または骨再生が、対象において発生することを含む方法。対象における骨形成を刺激する、および骨吸収を抑制する方法であって、それを必要とする前記対象に、請求項1に記載の化合物の有効量を投与することを含む方法。本発明は、大環状化合物、ならびに、本明細書中の化合物および組成物を使用することにより、破骨細胞または骨芽細胞形成の疾患および障害を含む、骨疾患および障害を治療する方法に関する。本発明は、大環状化合物、骨を調節するプロセスにおける方法、ならびに、それらの骨関連疾患、障害、およびその症状の治療方法に関する。一実施形態において、本発明は、式Iに記載の化合物式中、各Rは、独立して、Hまたは任意で置換されたアルキルであり、各R1は、独立して、Hまたは任意で置換されたアルキルであり、各R2は、独立して、H、任意で置換されたアルキル、またはCORであり、各R3は、独立して、H、任意で置換されたアルキル、COORまたは、CONRRであり、各R4は、独立して、H、任意で置換されたアルキル、COORまたは、CONRRであるおよび、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物を提供する。さらに別の態様は、式Iaおよび、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物の化合物式中、R、R1、R2、R3、およびR4は式Iで定義されている通りであるである。その他の実施形態において、明細書中の任意の式の化合物を含む式中、R3およびR4はHである、R1はイソプロピルである、R2はアルキルである、R2はアルキルCO-である、R2はHである、化合物は表A中の化合物1-8のいずれかである、または、化合物はラルガゾールlargazoleである。特定の例において、本発明の化合物は、下記の構造を有する式I式Iaを含むから選択される。別の態様において、本発明は、式Iの化合物および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。その他の態様において、本発明は、本明細書中の任意の式例えば、式I、式Iaにおける化合物を対象に投与することを含む、対象における骨疾患、障害、またはその症状を治療する方法を提供する。別の態様において、化合物は、対象における骨疾患、障害、またはその症状を改善するのに十分な量および条件下で投与される。その他の態様において、本発明は、破骨細胞形成の活性を調節するのに十分な量および条件下で、本明細書中の任意の式例えば、式I、式Iaにおける化合物を被験に接触させることを含む、対象における破骨細胞形成の活性を調節する方法を提供する。別の態様において、調節は阻害である。その他の態様において、本発明は、骨芽細胞形成の活性を調節するのに十分な量および条件下で、式Iの化合物と対象を接触させることを含む、対象において骨芽細胞形成の活性を調節する方法を提供する。その他の態様において、本発明は、対象に式Iの化合物または医薬組成物の有効量を投与することを含む、骨関連障害もしくは疾患を患う、または影響を受けやすい対象を治療する方法を提供する。別の態様において、本発明は、対象が破骨細胞関連障害または疾患の治療を必要とするとして認定され、前述の対象が前述の障害が治療されるよう、それを必要とする前述の対象に式Iの化合物または医薬組成物の有効量を投与することを含む、破骨細胞関連障害もしくは疾患を患う、または影響を受けやすい対象を治療する方法を提供する。別の態様において、本発明は、対象が破骨細胞関連障害または疾患の治療を必要とするとして特定され、前述の対象における細胞増殖が調節例えば、下方制御されるよう、それを必要とする前述の対象に式Iの化合物または医薬組成物の有効量を投与することを含む、破骨細胞関連障害もしくは疾患を患う、または影響を受けやすい対象を治療する方法を提供する。特定の態様において、本発明は、骨粗しょう症、骨形成、骨吸収、骨再生、骨組織設計、骨折、歯周病、骨の成長障害を治療する方法を提供する。従って、本明細書中の特定の化合物は、破骨細胞形成を阻害するのに有用である。別の態様において、本明細書中の特定のものは、特定の骨芽細胞形成を促進するのに有用である。別の態様において、本明細書中の特定の化合物は、それらの二重の活性例えば、同化作用活性および骨吸収抑制活性に対し有用である。別の態様において、本明細書中の特定の化合物は、骨形成を刺激し、骨吸収を阻害するそれらの二重の活性に対し有用である。別の態様において、本発明は、本明細書に示される化合物例えば、式Iおよび薬学的に許容されるその塩の有効量を、前述の対象に投与することを含む、それを必要とする対象における疾患、障害、または症状を治療する方法を提供する。上記方法は、本明細書に記載される骨関連障害の治療に有用である。本明細書に示される方法は、対象が特定の記載された治療を必要とするとして認定される者を含む。上記治療を必要とする対象の認定は、対象または医療専門家の判断においてなされ得、および、主観的例えば意見などまたは客観的例えば試験または診断法により測定可能などであり得る。本発明は、以下の非限定的な実施例の参照とともに、および、以下の図の参照とともに、以下にてさらに説明される。定義本発明がより容易に理解されるよう、まず特定の用語を便宜のためにここで定義する。本明細書で使用されるように、障害を治療するという用語は、障害、および/または障害を引き起こし得る状態を予防、改善、軽減、および/または管理することを含む。用語治療するおよび治療は、疾患および/またはそれに付随する症状を緩和するまたは和らげる方法を指す。本発明による場合、治療するは、障害における影響を予防する、防止する、抑制する、弱める、防御する、調節する、逆戻りさせる、および、例えば、障害における有害な影響などの発生を低減させることを含む。本明細書において用いられる場合、抑制するは、進行の予防、低減および停止含む。用語調節するは、本発明の化合物への曝露に応答して、細胞の活性が増加するまたは減少することを指す。用語単離された、精製された、または生物学的に純粋は、その本来の状態で見られる場合に通常それに付随する成分から実質的または本質的に自由である物質を指す。純度および均質性は、一般的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を用いて同定される。特に、実施形態において、化合物は、少なくとも純度85、より好ましくは少なくとも純度90、より好ましくは少なくとも純度95、および、最も好ましくは少なくとも99純度である。用語ポリペプチド、ペプチド、およびタンパク質は、アミノ酸残基のポリマーを指すよう本明細書中にて互換的に使用される。用語は、1つまたはそれ以上のアミノ酸残基が、天然に存在するアミノ酸のポリマーおよび天然に存在しないアミノ酸のポリマーだけでなく、天然に存在するアミノ酸対応する人工的な化学擬態である、アミノ酸のポリマーにも適用される。ペプチドは、少なくとも2つのアミノ酸の配列である。ペプチドは、タンパク質を含む、長いアミノ酸配列だけでなく、短いものからもなることができる。用語アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸、および合成アミノ酸、さらに天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣物も指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝コードによってコードされるものだけでなく、例えば、ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタミン酸、およびO-ホスホセリンなどの、後に修飾されるアミノ酸ものもある。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびR基に結合している炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムなどと同じ基本的な化学構造を有する化合物を指す。上記類似体は、修飾されたR基例えば、ノルロイシンまたは修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化学化合物を指す。用語タンパク質は、隣接する残基のα-アミノ基およびカルボキシ基間のペプチド結合によって一方が他方に接続されたアミノ酸残基の一つながりを指す。アミノ酸は、IUPAC-IUB生化学命名委員会が推奨する、一般的に知られているそれらの3文字の記号、または、1文字記号のいずれかによって、本明細書中で指すことができる。アミノ酸配列としては、当業者には、エンコードされた配列における単一アミノ酸または小さな割合のアミノ酸を、改変、追加、または削除する、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失または付加は、保存的に修飾された変異体であることが理解されるであろう。ここで、改変は、化学的に類似のアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらす。機能的に類似のアミノ酸を提供する同類置換表は、当該分野において周知である。ポリペプチド構造などの巨大分子構造は、組織の様々なレベルの観点から記載することができる。この組織における一般的な議論については、例えば、Albertsetal、MolecularBiologyoftheCell、ならびに、CantornandSchimmel、BiophysicalChemistryPartITheConformationofBiologicalMacromoleculesを参照されたい。一次構造は、特定のペプチドのアミノ酸配列を指す。二次構造は、ポリペプチド内で局所的に順序付けられた、三次元構造を指す。これらの構造は、一般的にドメインとして知られている。ドメインは、ポリペプチドの密なユニットを形成するポリペプチドの一部であり、一般的には50~350の長さのアミノ酸である。一般的なドメインは、βシートとαヘリックスによる一続きなどのより少ない組織の区分で構成される。三次構造は、ポリペプチドモノマーの完全な三次元構造を指す。四次構造は、独立した三次元ユニットの非共有結合によって形成される三次元構造を指す。異方性の観点からもエネルギー項として知られている。用語投与または投与するは、それらの意図された機能を実行するために、被験体に化合物を導入する経路を含む。使用できる投与経路の例としては、注射皮下、静脈内、経口、腹腔内、髄腔内、局所、経口、吸入、直腸、および経皮が含まれる。用語有効量は、必要な用量および期間で、所望の結果を達成するために有効な量を含む。化合物の有効量は、対象の疾患の状態、年齢、および体重、ならびに対象において所望の応答を誘発する化合物能などの要因によって異なり得る。投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するように調整することができる。有効量はまた、エラスターゼ阻害剤化合物の任意の毒性または有害な効果例えば、副作用より、治療上有益な効果が上回るものである。本明細書で使用されるように、語句全身投与、全身に投与される、末梢投与、および末梢に投与されるは、それが患者の身体に入り、それにより、代謝およびその他のプロセスのようなものに従うような、化合物複数可、薬物、または他の物質の投与を意味する。用語治療有効量は、治療される状態または障害による症状の1つまたはそれ以上を、ある程度まで進行を予防するまたは軽減するために十分な投与される化合物の量を指す。化合物の治療有効量すなわち、有効投与量は、体重に対して約0.005μg/kg~約200mg/kgとすることができ、好ましくは約0.1mg/kg~約200mg/kg、より好ましくは約10mg/kg~約100mg/kgとすることができる。他の実施形態において、治療有効量は、約1.0pM~約500nMとすることができる。当業者には、疾患または障害の重症度、以前の治療、被験体の一般的な健康および/または年齢、およびその他の疾患を含むがこれらに限定されない特定の要因が、効果的に対象を治療するのに必要な投与量に影響を及ぼすことが理解されるであろう。さらに、化合物の治療有効量による対象の処置は、単一の治療を含むことができ、または、好ましくは、一連の治療を含むことができる。一例では、対象は、体重に対して約0.005μg/kg~約200mg/kgの範囲における化合物により、週に1回を約1~10週間、好ましくは2~8週間、より好ましくは約3~7週間、より一層好ましくは約4、5、または6週間治療される。治療に使用される化合物の有効投与量は、特定の一連の治療より増加するまたは減少し得ることがまた、理解されるであろう。用語キラルは、鏡像相手に非重ね合わせである特性を有する分子を指し、一方、用語アキラルは、それらの鏡像相手に重ねることができる分子を指す。用語ジアステレオマーは、2つまたはそれ以上の非対称の中心を備え、その分子が互いの鏡像ではない立体異性体を指す。用語エナンチオマーは、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の2つの立体異性体を指す。2つの鏡像異性体の等モル混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と呼ばれる。用語異性体または立体異性体は、同一の化学的構成を有するが、空間中の原子または基の配置に関して異なる化合物を指す。用語プロドラッグは、invivoで代謝することができる部分を有する化合物を含む。一般的に、プロドラッグは、薬物を活性させるため、エステラーゼにより、またはその他のメカニズムにより、invivoで代謝される。プロドラッグおよびその使用方法の例は、当技術分野においては周知である例えば、BergeetalPharmaceuticalSaltsJPharmSci66119を参照。プロドラッグは、化合物の最終的な単離および精製中に、または、その遊離酸の形態での精製化合物もしくは水酸基を適切なエステル化剤と個別に反応させることによって、原位置において、調製することができる。水酸基は、カルボン酸による処理を介してエステルへと変換することができる。プロドラッグ部分の例としては、置換ならびに非置換の、分岐鎖または非分枝鎖の、低級アルキルエステル部分例えば、プロピオン酸エステル、低級アルケニルエステル、ジ低級アルキルアミノ低級アルキルエステル例えば、ジメチルアミノエチルエステル、アシルアミノ低級アルキルエステル例えば、アセチルオキシメチルエステル、アシルオキシ低級アルキルエステル例えば、ピバロイルオキシメチルエステル、アリールエステルフェニルエステル、アリール低級アルキルエステル例えば、ベンジルエステル、例えば、メチル、ハロ、またはメトキシ置換基による置換、アリールおよびアリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ低級アルキルアミド、ならびにヒドロキシアミドがあげられる。好ましいプロドラッグ部分は、プロピオン酸エステルおよびアシルエステルである。invivoでのその他のメカニズムを介して活性型に変換されるプロドラッグも含まれる。態様において、本発明の化合物は、本明細書中の任意の式のプロドラッグである。用語対象は、これらに限定されないが、霊長類例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含む、哺乳動物などの動物を指す。特定の実施形態において、対象はヒトである。さらに、本発明の化合物は、以下のいずれかの形状を有するオレフィン類を含み、Zはシス同じ側の立体配座と呼ばれるものを指し、一方Eはトランス反対側の立体配座と呼ばれるものを指す。キラル中心における学名に関して、用語dおよびlの構成は、IUPAC勧告によって定義されている。用語ジアステレオマー、ラセミ体、エピマー、および鏡像異性体の使用に関して、これらは、調製物の立体化学を記述するため、通常の文脈において使用される。本明細書において用いられる場合、用語アルキルは、1~12個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖炭化水素基を指す。用語低級アルキルは、C1~C6アルキル鎖を指す。アルキル基の例としては、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、tert-ブチル基、およびn-ペンチル基が挙げられる。アルキル基は、任意で1つまたはそれ以上の置換基で置換することができる。用語アルケニルは、2~12個の炭素原子および少なくとも1個の炭素-炭素二重結合を含む、直鎖または分枝鎖であり得る不飽和炭化水素鎖を指す。アルケニル基は、任意で1つまたはそれ以上の置換基で置換されてもよい。用語アルキニルは、2~12個の炭素原子および少なくとも1個の炭素-炭素三重結合を含む、直鎖または分枝鎖であり得る不飽和炭化水素鎖を指す。アルキニル基は、任意で1つまたはそれ以上の置換基で置換されてもよい。アルケニル基およびアルキニル基のsp2またはsp炭素は、それぞれ、任意でアルケニル基またはアルキニル基の結合点であり得る。用語アルコキシは、-O-アルキル基を指す。本明細書で使用されるように、用語ハロゲン、hal、またはhaloは、-F、-Cl、-Br、または-Iを意味する。用語シクロアルキルは、3~8員環の単環系、または少なくとも1つの飽和環もしくは少なくとも一つの非芳香環を有する7~14員環の二環系炭化水素を指し、非芳香環は、不飽和をある程度有することができる。シクロアルキル基は、任意で1つまたはそれ以上の置換基で置換することができる。一実施形態において、シクロアルキル基の各環の0、1、2、3、または4個の原子は、置換基により置換することができる。シクロアルキル基の代表例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロブチル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、などが挙げられる。用語アリールは、単環、二環または三環系芳香族炭化水素を指す。アリール基は、任意で1つまたはそれ以上の置換基で置換することができる。一実施形態において、アリール基の各環の0、1、2、3、4、5、または6個の原子は、置換基により置換することができる。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、などが挙げられる。用語ヘテロアリールは、単環の場合1~4環のヘテロ原子を、二環の場合1~6環のヘテロ原子を、三環の場合1~9環のヘテロ原子を有し、前述のヘテロ原子は、O、N、またはSから選択され、剰余環の原子が特に断らない限り、適切な水素原子を有する炭素である、5~8員環の単環系、8~12員環の二環系、または11~14員環の三環系芳香族を指す。ヘテロアリール基は、任意で1つまたはそれ以上の置換基で置換することができる。一実施形態において、ヘテロアリール基の各環の0、1、2、3、または4個の原子は、置換基により置換することができる。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、イソキノリニル、インダゾリル、などが挙げられる。用語ヘテロシクロアルキルは、単環の場合1~3環のヘテロ原子を、二環の場合1~6環のヘテロ原子を、三環の場合1~9環のヘテロ原子を含み、前述のヘテロ原子は、O、N、S、B、P、またはSiから選択され、非芳香族環系は完全に飽和している、3~8員環の単環系、7~12員環の二環系、または10~14員環の三環系非芳香族を指す。ヘテロシクロアルキル基は、任意で1つまたはそれ以上の置換基で置換することができる。一実施形態において、ヘテロシクロアルキル基の各環の0、1、2、3、または4個の原子は、置換基で置換することができる。代表的なヘテロシクロアルキル基は、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、1,3-ジオキソラン、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、チイレニルthiirenyl、などが挙げられる。用語アルキルアミノは、1つまたは2つのアルキル基でさらに置換されたアミノ置換基を指す。用語アミノアルキルは、1つまたはそれ以上のアミノ基でさらに置換されたアルキル置換基を指す。用語ヒドロキシアルキルまたはヒドロキシルアルキルは、1つまたはそれ以上のヒドロキシル基でさらに置換されたアルキル置換基を指す。アルキルアミノ、アミノアルキル、メルカプトアルキル、ヒドロキシアルキル、メルカプトアルコキシ、スルホニルアルキル、スルホニルアリール、アルキルカルボニル、およびアルキルカルボニルアルキルのアルキルまたはアリール部分は、任意で1つまたはそれ以上の置換基により置換することができる。本明細書中の方法において有用な酸および塩基は、当技術分野で既知である。酸触媒は、天然において無機例えば、塩酸、硫酸、硝酸、塩化アルミニウム、または有機例えば、カンファースルホン酸、p-トルエンスルホン酸、酢酸、イッテルビウムトリフレートであり得る、任意の酸性の化学物質である。酸は、化学反応を促進するため、触媒または化学量論量のいずれにおいても有用である。塩基は、天然において無機例えば、重炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、または有機例えば、トリエチルアミン、ピリジンであり得る、任意の塩基性の化学物質である。塩基は、化学反応を促進する触媒または化学量論量のいずれにおいても有用である。アルキル化剤としては、問題となる官能基例えば、アルコールの酸素原子、アミノ基の窒素原子のアルキル化をもたらすことが可能な任意の試薬である。アルキル化剤は、本明細書に引用した文献を含む、当該技術分野において既知であり、ハロゲン化アルキル例えば、ヨウ化メチル、臭化ベンジル、または塩化ベンジル、アルキル硫酸塩例えば、硫酸メチル、または当該技術分野において既知のその他のアルキル基の脱離基の組み合わせを含む。脱離基は、反応例えば、脱離反応、置換反応中に分子から切り離すことができ、本明細書に引用した文献を含む、当該技術分野において既知である、任意の安定した種類のものであり、ハロゲン化物例えば、I-、Cl、Br-、F-、ヒドロキシ、アルコキシ例えば、-OMe、-O-t-Bu、アシルオキシアニオン例えば、-OAc、-OCOCF3、スルホン酸塩例えば、メシル、トシル、アセトアミド例えば、-NHCOMeで、カルバメート例えば、NMeCOOt-Bu、ホスホン酸塩例えば、-OP0OEt2、水またはアルコールプロトン性の状態などがあげられる。特定の実施形態において、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロアリール基、ヘテロアラルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基などの任意の基上の置換基は、その基の任意の原子であり得、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロアリール基、ヘテロアラルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基などの置換することができる任意の基は、それぞれ水素原子を置換する、同一または異なっていてもよい1つまたはそれ以上の置換基で、任意で置換することができる。適切な置換基の例としては、これらに限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロゲン、ハロアルキル、シアノ、ニトロ、アルコキシ、アリール、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、オキソすなわち、カルボニル、カルボキシル、ホルミル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルアルキル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールオキシカルボニル、チオ、メルカプト、メルカプトアルキル、アリールスルホニル、アミノ、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、アルキルカルボニル、またはアリールアミノで置換されたアリール、アリールアルキルアミノ、アラルキルアミノカルボニル、アミド、アルキルアミノ、スルホニル、アリールアミノスルホニル、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、イミノ、カルバミド、カルバミル、チオウレイド、チオシアナート、スルホアミド、スルホニルアリール、またはメルカプトアルコキシ、などがあげられる。本発明の化合物本発明の化合物は、有機合成の分野において既知の手段により作成することができる。必要に応じて副産物の競合を最小限に抑え、反応条件を最適化するための方法は、当該技術分野で既知である。反応の最適化およびスケールアップは、有利には、高速パラレル合成装置およびコンピュータ制御マイクロリアクターを利用することができる例えば、DesignAndOptimizationinOrganicSynthesis2ndEditionCarlsonREd2005ElsevierScienceLtdJahnischKetalAngewChemIntEdEngl200443406および本明細書中の参考文献。さらなる反応スキームおよびプロトコルを、市販の構造検索データベースソフトウェア、例えば、SciFinder登録商標AmericanChemicalSocietyのCASの部門、およびCrossFireBeilstein登録商標エルゼビアMDLの使用による熟練した掘り抜きartesianにより、または例えばGoogle登録商標などのインターネット検索エンジン、もしくは米国特許商標庁テキストデータベースなどのキーワードデータベースを使用して適切なキーワード検索により、決定することができる。本明細書中の化合物はまた、結合例えば、炭素-炭素結合を含むことができ、結合の回転は、例えば、環または二重結合の存在に由来する制限などの、その特定の結合などについて制限される。従って、全てのシス/トランスおよびE/Z異性体は、明らかに本発明に含まれる。本明細書中の化合物はまた、複数の互変異性型で表すことができ、そのような例において、単一の互変異性型のみが表されていても、本発明は、本明細書に記載される化合物のすべての互変異性型を明らかに含むといえる。本明細書中のそのような化合物の全てのこのような異性体形態は、明らかに本発明に含まれる。本明細書中に記載される化合物のすべての結晶形および多形は、明らかに本発明に含まれる。また、本発明の化合物を含む抽出物および画分が具現化される。異性体という用語は、ジアステレオ異性体、鏡像異性体、位置異性体、構造異性体、回転異性体、互変異性体などが挙げられることを意図する。1つまたはそれ以上の立体中心、例えば、キラル化合物を含む化合物について、本発明の方法は、鏡像異性的に富む化合物、ラセミ体、またはジアステレオマーの混合物を用いて行うことができる。好ましい鏡像異性的に富む化合物が50以上の鏡像体過剰率を有し、より好ましくは、化合物は、60、70、80、90、95、98、または99以上の鏡像体過剰率を有する。好ましい実施形態において、本発明のキラル化合物の一方のエナンチオマーまたはジアステレオマーのみが、細胞または対象に投与される。治療方法本発明は、大環状化合物、ならびに本明細書中に記載されるそれらの化合物または組成物を用いた疾患および障害を治療する方法に関する。その他の態様において、本発明は、対象が骨障害または疾患の治療を必要とするとして認定されており、前述の対象が前述の障害を治療するように、それを必要とする前述の対象に、式Iの化合物または医薬組成物の有効量を投与することを含む、骨障害もしくは疾患を患う、または影響を受けやすい対象を治療する方法を提供する。このような治療を必要とする被験体を認定することは、対象または医療専門家の判断ですることができ、主観的例えば、意見または客観的例えば、試験または診断法により測定可能などであり得る。一態様において、本発明は、破骨細胞活性を調節するために十分な量および条件下で、式Iの化合物を対象に接触させることを含む、破骨細胞活性を調節する方法を提供する。一実施形態において、調節は阻害である。別の態様において、本発明は、式Iの化合物または医薬組成物の有効量を被験体に投与することを含む、または破骨細胞関連障害もしくは疾患を患う、もしくは影響を受けやすい対象を治療する方法を提供する。その他の態様において、本発明は、対象が破骨細胞媒介障害または疾患の治療が必要として認定され、前述の対象が前述の障害を治療するように、それを必要とする前述の対象に、式Iの化合物または医薬組成物の有効量を投与することを含む、破骨細胞媒介障害もしくは疾患を患う、または影響を受けやすい対象を治療する方法を提供する。その他の態様において、本発明は、対象が骨芽細胞媒介障害または疾患の治療が必要として認定され、前述の対象が前述の障害を治療するように、それを必要とする前述の対象に、式Iの化合物または医薬組成物の有効量を投与することを含む、骨芽細胞媒介障害もしくは疾患を患う、または影響を受けやすい対象を治療する方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、式Iの化合物がラルガゾールlargazoleである、上記に記載されるような方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、障害が骨粗しょう症、骨組織工学、骨組織再生、または他の骨障害である、障害を治療する方法を提供する。本明細書中の化合物および方法は、対象の骨形成、骨の修復、および骨再生に有用である。特定の実施形態において、対象は哺乳動物、好ましくは霊長類またはヒトである。別の実施形態において、本発明は、上記に記載される方法を提供し、式Iの化合物の有効量は、約0.005μg/kg~約200mg/kgの範囲である。特定の実施態様において、式Iの化合物の有効量は、約0.1mg/kg~約200mg/kgの範囲である。さらなる実施形態において、式Iの化合物の有効量は、約10mg/kg~100mg/kgの範囲である。その他の実施形態において、本発明は、上記に記載される方法を提供し、式Iの化合物の有効量は、約1.0pM~約500nMの範囲である。特定の実施態様において、有効量は、約10.0pM~約1000pMの範囲である。別の実施形態において、有効量は、約1.0nM~約10nMの範囲である。別の実施形態において、本発明は、上記に記載される方法を提供し、式Iの化合物は、静脈内、筋肉内、皮下、脳室内、経口的、または局所的に投与される。その他の実施形態において、本発明は、上記に記載される方法を提供し、式Iの化合物は、単独で、または1つまたはそれ以上のその他の治療薬と組み合わせて投与される。さらなる実施形態において、さらなる治療薬は、抗骨粗鬆症剤、骨吸収に関連する疾患の治療剤、骨折治癒剤、骨形成剤である。本発明の別の目的は、骨障害または疾患の治療における使用のための薬剤の製造において、本明細書中に記載される例えば、本明細書中の任意の式の化合物を使用することである。本発明の別の目的は、骨障害または疾患の治療に使用するための、本明細書に記載される例えば、明細書中の任意の式の化合物の使用である。医薬組成物一態様において、本発明は、式Iの化合物および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。一態様において、本発明は、式Iの化合物がラルガゾールlargazoleである医薬組成物、および薬学的に許容される担体を提供する。別の実施形態において、本発明は、さらなる治療剤をさらに含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態において、さらなる治療剤は、抗骨粗鬆症剤である。一態様において、本発明は、破骨細胞媒介性障害、または骨芽細胞媒介性障害を含む、骨疾患もしくは障害を患う、または影響を受けやすい対象に化合物を投与するための説明書とともに、単位剤形で、式Iの化合物の有効量を含むキットを提供する。一態様において、本発明は、破骨細胞媒介性障害、または骨芽細胞媒介性障害を含む、骨疾患もしくは障害を患う、または影響を受けやすい対象に化合物を投与するための説明書とともに、単位剤形で、式Iの化合物の有効量を含むキットを提供する。用語薬学的に許容される塩または薬学的に許容される担体は、本明細書中に記載される化合物に見られる特定の置換基に応じて、比較的無毒の酸または塩基を用いて調製される活性化合物の塩を含むことを意味する。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、塩基付加塩は、ニート、または適当な不活性溶媒中のいずれかで、十分な量の所望の塩基と上記化合物の中性形を接触させることによって得ることができる。薬学的に許容可能な塩基付加塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩、もしくはマグネシウム塩、または類似の塩が挙げられる。本発明の化合物が、比較的塩基的な官能基を含む場合、酸付加塩は、ニート、または適当な不活性溶媒中のいずれかで、十分な量の所望の酸と上記化合物の中性形を接触させることによって得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の例としては、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フタル酸、乳酸、マンデル酸、フマル酸、ベンゼンスルホン酸、p-トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、などの比較的無毒の有機酸由来の塩に加え、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素monohydrogencarbonic、リン酸、リン酸一水素monohydrogenphosphoric、リン酸二水素dihydrogenphosphoric、硫酸、硫酸一水素monohydrogensulfuric、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などの無機酸から由来するものが挙げられる。また、アルギン酸などのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツロン酸などのような有機酸の塩も含まれる例えば、BergeetalJournalofPharmaceuticalScience66119参照。本発明のある特定の化合物は、化合物が塩基または酸付加塩のいずれかに変換することができるよう、塩基性および酸性の両方の官能基を含む。当業者に既知のその他の薬学的に許容可能な担体が、本発明に適する。化合物の中性形は、塩基または酸と塩を接触させ、ならびに従来の方法で親化合物を単離することによって再生することができる。化合物の親の形態は、極性溶媒における溶解度などの特定の物理的特性において種々の塩の形態とは異なるが、それ以外の塩は、本発明の目的に対する化合物における親の形態と同等である。塩の形態に加えて、本発明はプロドラッグの形態である化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、本発明の化合物を提供することで、生理的条件下で化学変化を容易に受ける化合物である。さらに、プロドラッグは、exvivo環境において化学的または生化学的方法によって、本発明の化合物に変換することができる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬と共に経皮パッチリザーバーに入れることで、本発明の化合物へとゆっくりと変換することができる。本発明の特定の化合物は、水和形態を含む、溶媒和形態だけでなく非溶媒和形態においても存在することができる。一般に、溶媒和形態は、非溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に包含されることが意図される。本発明の特定の化合物は、複数の結晶または非晶質形態で存在することができる。一般に、すべての物理的形態は、本発明によって企図される用途対して同意義であり、本発明の範囲内であることを意図する。本発明はまた、本明細書中に記載の化合物の有効量および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。実施形態において、化合物が、例えば、薬学的に許容される製剤が対象に投与された後、少なくとも12時間、24時間、36時間、48時間、1週間、2週間、3週間、4週間、対象に化合物の持続的な配送を提供する薬学的に許容可能な製剤などの、薬学的に許容可能な製剤を用いて対象に投与される。本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルおよび投与の時間経過は、患者への毒性または許容できない毒性なくして、特定の患者、組成、および投与方法に対する所望の治療応答を達成するために有効な活性成分量を得るために変化させることができる。使用において、本発明による少なくとも1つの化合物は、静脈内、筋肉内、皮下、もしくは脳室内注射により、または、経口投与、もしくは局所適用により、医薬担体においてそれを必要とする対象に薬学的に有効な量で投与される。本発明によれば、本発明の化合物は、単独で、または第二の異なる治療薬と合わせて投与することができる。と合わせることによりとは、実質的に同時に、または連続して一緒であることを意味する。一実施形態において、本発明の化合物は、急性投与される。したがって、本発明の化合物は、約1日~約1週間などの、短期の一連の治療に対して投与することができる。別の実施形態において、本発明の化合物は、治療すべき症状に応じて、例えば、約1週間~数ヶ月間などの慢性疾患を改善するために、より長い期間にわたって投与することができる。本明細書で使用される薬学的有効量によりとは、健全な医学的判断の範囲内で、治療すべき症状を非常に積極的に修正するのに十分に多いが重篤な副作用防ぐのに十分に少ない合理的な利益/リスク比である、本発明の化合物量を意味する。本発明の化合物の薬学的有効量は、達成すべき特定の目標、治療を受けている患者の年齢および体調、基礎疾患の重症度、治療期間、併用療法の性質、ならびに用いられる特定の有機亜鉛化合物により異なるであろう。例えば、子供や新生児に投与される本発明の化合物の治療有効量は、健全な医学的判断に従って比例して低減される。したがって、本発明の化合物の有効量は、所望の効果を提供する最小量であろう。本発明の明らかに実用的な利点は、化合物が、クリームまたはゲルなどにおいて、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、口腔内、もしくは脳室注入経路により、または局所適用により、便利な方法で投与することができることである。投与経路に応じて、本発明の化合物を含む活性成分は、化合物を不活性化し得る、酵素、酸、およびその他の自然条件の作用から化合物を保護する物質で被覆することが必要となり得る。非経口投与以外により本発明の化合物を投与するために、化合物は、不活性化を防止する物質により被覆される、または共に投与することができる。化合物は、非経口または腹腔内投与をすることができる。分散体はまた、例えば、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物などの油中で、調製することができる。注射用に適した薬学的形態として、滅菌注射用溶液または分散液の即時調製のための、電子滅菌水溶液水溶性または分散液、および滅菌粉末を含む。全ての場合において、形態は無菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動的でなければならない。それは、製造および貯蔵の状態下で安定でなければならない。担体としては、例えば、水、DMSO、エタノール、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど、適切なそれらの混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することにより、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持により、維持することができる。多くの場合、例えば、糖または塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが好ましいであろう。注射用組成物の長期吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を組成物中に使用することによってもたらすことができる。滅菌注射用溶液は、濾過滅菌した後、必要に応じて、上記に列挙した様々なその他の成分と共に適切な溶媒中に必要な量の本発明の化合物を組み込むことによって調製される。一般的に、分散液は、塩基分散媒および上記に列挙したものから必要とされるその他の成分を含む滅菌ビヒクル中に種々の滅菌物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥し、その予め濾過滅菌した溶液からの任意のさらなる所望の成分を加えた活性成分の粉末を得る凍結乾燥技術である。経口治療投与の場合、化合物は、賦形剤に組み込むことができ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハーなどの形態で使用することができる。本発明に係る組成物または製剤は、経口投与単位形態は、被験体における生涯を治療するのに十分な化合物の濃度を含むように調製される。医薬担体として機能することができる物質のいくつかの例は、例えば、ビタミンC、エストロゲン、およびエキナセアなどの医薬製剤に使用されるその他の非毒性適合性物だけでなく、乳糖、ブドウ糖、およびショ糖などの糖、トウモロコシデンプン、およびジャガイモデンプンなどのデンプン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースならびにその誘導体、粉末トラガント、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびカカオの油などの植物油、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール類、寒天、アルギン酸類、パイロジェンフリー水、生理食塩水等張、ならびにリン酸緩衝液、脱脂粉乳である。着色剤、香料、潤滑剤、賦形剤、錠剤化剤、安定剤、抗酸化剤、および防腐剤だけでなく、ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤および潤滑剤もまた存在することができる。本明細書中の任意の変化するものの定義における化学基の一覧の列挙は、任意の単独の基または記載された基の組み合わせとして、その変化するものの定義を含む。本明細書中の変数に対する実施例の列挙は、任意の単独の実施形態として、またはそれらの任意のその他の実施形態または一部の組み合わせとして、その実施例を含む。実施例以下、本発明を、限定するものとして解釈されるべきではない特定の例を用いて実証する。一般的な実験手順1Hおよび13CNMRデータを、それぞれ600および150MHzで動作する5mmのプローブによりBrukerAvance600MHz分光計で取得した。2DNMRデータは、内部標準として残留溶媒シグナルδH7.26ppm、δC77.0ppmを使用して、低温プローブを超伝導させる高温1mm三重共鳴を備えたBrukerAvanceII600MHz上で記録した。HSQC実験を1JCH=145Hzに、HMBC実験をnJCH=7または3.5Hzに最適化した。LC-MSデータは、ESIポジティブモードによるThermoFinniganLCQを備えたAgilent1100を使用して得た。HRMSデータを、ESI/APCIマルチモードイオン源検出器を備えたAgilentLC-TOF質量分析計を使用して得た。実施例1:化合物1物理化学的データラルガゾールlargazole1:無色、アモルファス固体;[α]20D22c0.1、MeOH;UVMeOHloge2104.07、260sh3.61;IRfilmvmax2924、2853、1725、1694、1611、1659、1641、1630、1596、1512、1249、1117、1067、1034、894cm-1;1HNMR、13CNMR、およびHMBCデータ、表を参照;HR-ESI/APCI-MSm/z[MH]623.2397C29H43N4O5S3623.2396に対する計算値実施例2:骨芽細胞の分化試験化合物のアナボリック活性は、骨芽細胞分化のマーカーの1つであるALP染色によって行った。図1AおよびBに示すように、試験化合物の低用量は、BMP-2の存在下でもALPの発現を誘導した。最大50nMまで、これらの化合物は、有意な細胞毒性は示されなかった図1C。興味深いことに、化合物1は、骨芽細胞における間葉系幹細胞のコミットメントにおいて重要な調節因子であるRUNX2の活性を強力に誘導した図1D。最も重要なことには、化合物1は、invivoの骨再生モデルでの活性を形成する骨同化作用を示した図2。化合物1および8は、破骨細胞形成を阻害する可能性を有する。実施例3:骨再生すべてのウサギを、0.1ml/kgZoletilビルバック社、フランスの筋肉内投与で麻酔にかける。頭の毛を剃り、皮膚の表面を実施前にポビドンヨード液で消毒する。頭蓋冠の骨を、長さ~4cmの皮膚切開により露出させる。4つの同様な円形のバイコーティカルな穴3mm径を、0.9生理食塩水灌漑を適用して、低速電動ハンドピースにおけるトレパンを使用し、頭頂骨に作成する。穴を、10mgの骨補填材50μlのPBSまたはLA-1に浸したMBCPBiomatlante社、フランスで充填する。骨膜および皮下組織の閉鎖を、lactomerSyneture社で行い、一方、皮膚を、nylon:polyamideSyneture社で再配置する。術後の抗生物質、例えばゲンタマイシンなどを投与する。ウサギを、手術後4週目に屠殺する。実施例4:破骨細胞/骨芽細胞分化破骨細胞/骨芽細胞分化プロトコルは、当該技術分野で既知である。本明細書中の化合物を評価するのに適用可能な代表的な例として、KimJMLeeSUKimYSMinYKKimSHBaicaleinstimulatesosteoblastdifferentiationviacoordinatingactivationofMAPkinasesandtranscriptionfactorsJCellBiochem2008Aug1104190617、KimMHRyuSYBaeMAChoiJSMinYKKimSHBaicaleininhibitsosteoclastdifferentiationandinducesmatureosteoclastapoptosisFoodChemToxicol2008Nov46337582が挙げられる。実施例5:アルカリホスファターゼ染色および活性アッセイC2C12細胞を、96ウェルプレートに5×103細胞/ウェルで播種し、1日インキュベートした後、5FBSおよびラルガゾールlargazoleを含む培地を交換した。培地は3日ごとに交換し、分化6日目に、細胞をPBSで2回洗浄し、30秒間10ホルマリンPBS中におき、脱イオン水ですすぎ、直接光からの保護の下でアルカリホスファターゼALPキットSigma社を使用して染色した。染色された細胞の画像は、DP70デジタルカメラオリンパス光学工業、日本を備えた顕微鏡下で取得した。ALP活性を測定するために、細胞を、PBSで2回洗浄し、溶解緩衝液10mMのTris-HCl、pH7.5、0.5mMのMgCl2の、および0.1TritonX-100中で超音波処理した。4°Cで20分間10,000×gで遠心分離した後、上清中のALP活性を、LabAssayALPキット和光純薬工業を使用して、三連で測定した。タンパク質濃度は、BCAプロテインアッセイキットPierceを使用して測定した。有意差は、スチューデントt-検定により決定し、P<0.05の場合、差が有意であるとみなした。実施例6:mRNA発現レベルの評価プライマーは、オンラインプライマー設計プログラム表1を使用して設計した。SRozenHJSkaletskyMethodsMolBiol2000132365386総RNAを、メーカーのプロトコルに従ってTRIzol試薬LifeTechnologies社、MDを使用して単離した。総RNAの濃度と純度は、260nmおよび280nmにおける吸光度を測定することにより算出した。第一鎖cDNAは、2μgの総RNA、ならびに1μΜのオリゴdT18プライマーおよびOmniscript逆転写酵素Qiagen社、カリフォルニア州を使用して合成した。SYBRグリーンベースの定量PCRは、メーカーのプロトコルに従って、の1:50に希釈されたプライマーの第一鎖cDNA3μl、およびプライマー20pmolにより、ストラタMx3000PリアルタイムPCRシステム、およびブリリアントのSYBRGreenマスターミックスStratagene社、カリフォルニア州を使用して行った。PCR反応を、3つのセグメントで構成した。第一セグメント10分間、95°Cでは、ポリメラーゼを活性化し、第二セグメントでは、94°Cで40秒間変性、60°Cで40秒間アニーリング、および72°Cで1分間伸長の3ステップの繰り返し40サイクルを含み、第三セグメントでは、95°Cで1分間、55°Cで30秒間、95°Cで30秒間、PCR産物温度解離曲線融解曲線の生成を行った。全ての反応を三連で実行し、データを、2-ΔΔCT法KJLivakTDSchmittgenMethods200125402408によって分析した。GAPDHを対照の遺伝子として使用した。有意差は、GAPDH正規化2-△△CT値のスチューデントのt-検定によって決定した。P<0.05の場合、差が有意であるとみなした。BMPのmRNA発現レベルでラルガゾールlargazoleの効果を評価した。予想されたように、ラルガゾールlargazoleは、ラルガゾールlargazoleの骨形成活性がRunx2およびBMPの発現および/または活性の増加を介して媒介されることを確認し、BMP-2、4、6、7、および9の発現を顕著に誘導した。したがって、BMPの発現またはBMP-シグナル伝達経路を刺激するラルガゾールlargazoleなどの同化剤は、骨の形成または再生によって骨芽細胞関連疾患の治療のために有用であろう。したがって、ラルガゾールlargazoleの骨形成活性は、BMPの発現/活性を増加させるその可能性から少なくとも部分的にもたらされる可能性がある。実施例7:Runx2のルシフェラーゼレポーターアッセイRunx2の活性を測定するために、p6×骨芽細胞特有シス作用性エレメントOSEの2-lucリポーターベクターを、前述のように5×103細胞/ウェルで96ウェルプレートに播種したC2C12細胞へと一過的にトランスフェクトした。24時間後、培地を、タンシノンIIAおよび/またはBMP-2の有無にかかわらず、5FBSを含むDMEMと交換した。24時間後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性をルシフェラーゼレポーターアッセイシステムPromegaおよびワラックエンビジョンマイクロプレートリーダーを用いて測定した。Runx2は、骨形成において重要であり、ALPおよびOPNなどの骨特異的遺伝子の発現を調節することが示されているJCellBiochem200388446454ため、我々は、p6×骨芽細胞特異的シス作用性エレメントの2-ルシフェラーゼレポーターJCellBiochem2004912391247およびリアルタイムPCRを使用して、活性化およびRunx2のmRNA発現のそれぞれにおけるラルガゾールlargazoleの効果を調べた。DMSO対照と比較して、ラルガゾールlargazole50nMは、活性およびRunx2のmRNAレベルがそれぞれ29倍および3倍へと大幅に増加した詳細についてはサポートの情報を参照。HDAC複数可は、Runx2の活性に影響を与える共リプレッサーco-repressorタンパク質として同定されているのでCellBiochem2006985464、これらの結果により、ラルガゾールlargazoleによるHDACの阻害が、Runx2の活性を増加させ、骨芽細胞の分化を増強し、骨形成を増加させることが示唆された。実施例8:invivoでのマウス頭蓋冠骨形成アッセイinvivoで、ラルガゾールlargazoleの骨形成活性を、前述したように凍結乾燥したコラーゲンスポンジを使用して評価した。簡単に言うと、ビヒカルまたはラルガゾールlargazole5μlを装填したコラーゲンのスポンジを、マウス各群n=5の頭蓋冠骨上に移植した。三週間の薬剤注入後、頭蓋冠を、4パラホルムアルデヒド中におき、EDTA12で脱灰し、パラフィンに包埋し、切片化した。セクションを、傾斜キシレンの洗浄を通して脱パラフィン化し、一連の段階的なエタノール洗浄で脱水し、ヘマトキシリンおよびエオシンHEで染色した。マウス頭蓋冠骨形成アッセイにおいて、ラルガゾールlargazoleを浸したコラーゲンスポンジを頭蓋冠骨中に移植すると、ラルガゾールlargazoleは、頭蓋冠骨の骨膜上に織られた骨形成を誘導した。より低い濃度50μΜで織られた骨形成は、より高い濃度100μΜのものより有意であった。このデータは、ラルガゾールlargazoleがその他の骨形成化合物により観察されている二相性の効果を示す可能性が示唆された。実施例9:多核破骨細胞の誘導RAW264.7細胞をATCCから購入し、37°Cで、空気中5CO2の加湿大気下にて3日ごとの培地交換により、10FBS、100U/mlのペニシリン、および100μg/mlのストレプトマイシンが添加されたDMEM中で培養した。破骨細胞の分化については、RAW264.7細胞を、10FBSおよび100ng/mlのRANKLRDSystems社、MNを添加した最小必須培地α-MEMに懸濁し、1×103細胞/ウェルで96ウェルプレートに播種した。翌日、細胞をラルガゾールlargazoleで処理した後、さらに3日後、多核破骨細胞が観察された。実施例10:酒石酸耐性酸性ホスファターゼTRAP染色および活性多核破骨細胞を、10分間10ホルマリンで、および1分間エタノール/アセトン1:1中においた後、白血球酸性ホスファターゼキット387-Aシグマ社、ミズーリ州で染色した。TRAP陽性多核細胞の画像は、DPコントローラオリンパス光学工業、日本を用いて顕微鏡下で取得した。TRAP活性を測定するために、多核破骨細胞は、その後、10分間10ホルマリン中に、および1分間95エタノール中に、さらにその後10mMの酒石酸ナトリウムを含むクエン酸塩緩衝液100μl50mM、pH4.6中におき、5mMのp-ニトロフェニルリン酸Sigma社を乾燥させた細胞に添加した。1時間のインキュベートの後、ウェル中の酵素反応混合物を、NaOH0.1N等量を含む新しいプレートに移した。吸光度を410nmで測定し、TRAP活性を対照に対するとして示した。実験は三連で行った。参考文献参照による組み込み本願の全体にわたって参照される参考文献、発行された特許、公開特許出願、および同時係属特許出願を含むすべての参考文献の内容は、ここでその全体が参照として本明細書中に明らかに組み込まれる。均等物当業者には、通常の実験以上のものを使用していないこと、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態における多くの等価物が、理解される、または確認することができるであろう。上記同等物は、以下の特許請求の範囲に包含されると意図される。"