"コントローラーを備えるマイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネルの温度を較正する方法であって、a前記マイクロ流体チャネルに1つ又は複数のアンプリコンを含む試薬を導入することと、b前記1つ又は複数のアンプリコンを融解するとともに、該1つ又は複数の各アンプリコンの融解温度を求めることと、c前記1つ又は複数の各アンプリコンの前記求められた融解温度を該1つ又は複数の各アンプリコンのそれぞれの予想融解温度と比較することと、d前記1つ又は複数の各アンプリコンの前記求められた融解温度と該1つ又は複数の各アンプリコンのそれぞれの前記予想融解温度との前記比較に基づいて前記コントローラーを調整することとを含む、コントローラーを備えるマイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネルの温度を較正する方法。前記1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数は合成DNAから生成される、請求項1に記載の方法。前記1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数はゲノムDNAから生成される、請求項1に記載の方法。前記試薬は2つ以上のアンプリコンを含み、前記融解するとともに求めることは、前記2つ以上のアンプリコンを融解するとともに、該2つ以上の各アンプリコンの融解温度を求めることを含み、前記比較することは、前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度を該2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの予想融解温度と比較することを含み、前記調整することは、前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度と該2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの前記予想融解温度との前記比較に基づいて前記コントローラーを調整することを含む、請求項1に記載の方法。前記2つ以上のアンプリコンは5°C以上離れた既知の融解温度を有する、請求項4に記載の方法。前記2つ以上のアンプリコンは10°C以上離れた既知の融解温度を有する、請求項5に記載の方法。前記2つ以上のアンプリコンは15°C以上離れた既知の融解温度を有する、請求項6に記載の方法。前記2つ以上のアンプリコンは20°C以上離れた既知の融解温度を有する、請求項7に記載の方法。前記2つ以上の各アンプリコンは合成アンプリコンである、請求項4に記載の方法。前記2つ以上のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-100である、請求項4に記載の方法。前記2つ以上のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-200である、請求項4に記載の方法。前記2つ以上のアンプリコンのうちの別のものはRFCAL-100である、請求項11に記載の方法。前記1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-100である、請求項1に記載の方法。前記1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-200である、請求項1に記載の方法。前記1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数は超保存エレメントからの配列である、請求項3に記載の方法。前記1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つは、ヒト染色体17UCE配列からの207bp配列から生成される、請求項15に記載の方法。前記コントローラーは前記マイクロ流体チャネルの前記温度を制御及び/又は検出する、請求項1に記載の方法。マイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネル内の熱融解の温度を較正する方法であって、a前記マイクロ流体チャネルにヒトゲノムDNAを含む試験サンプルと、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーと、較正物質のための一対のプライマーとを含む試薬を導入することであって、該較正物質はゲノムDNAにおいて見いだされる、導入することと、b前記ゲノムDNAを増幅することであって、較正用アンプリコンと、対象となる前記1つ又は複数の核酸のアンプリコンとを生成する、増幅することと、c前記アンプリコンを融解するとともに、該各アンプリコンの融解温度を求めることと、d前記較正用アンプリコンの前記求められた融解温度を前記較正用アンプリコンの予想融解温度と比較することと、e前記較正用アンプリコンの前記融解温度に基づいて、前記対象となる1つ又は複数の核酸の前記アンプリコンの前記融解温度を較正することとを含む、マイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネル内の熱融解の温度を較正する方法。前記較正物質は超保存エレメントからの配列である、請求項18に記載の方法。前記較正物質はヒト染色体17配列からの207bp配列である、請求項18に記載の方法。前記較正用アンプリコンの前記融解の融解曲線の導関数は単一のピークを示す、請求項18に記載の方法。行われた増幅を検証する対照として前記較正用アンプリコンの前記融解曲線を用いることを更に含む、請求項18に記載の方法。前記較正物質のための前記一対のプライマーは前記対象となる1つ又は複数の核酸の増幅に影響を及ぼさない、請求項18に記載の方法。前記較正用アンプリコンの前記求められた融解温度と該較正用アンプリコンの前記予想融解温度との前記比較を用いて、前記対象となる1つ又は複数の核酸の増幅を検証することを更に含む、請求項18に記載の方法。前記検証は、前記マイクロ流体チャネル温度が理想的な温度設定値に達したか否かを判断することを更に含む、請求項24に記載の方法。前記各アンプリコンの前記融解温度を前記求めることは、サビツキーゴーレイフィルターを用いて前記各アンプリコンの前記融解の融解曲線の導関数を得ることと、前記融解曲線の前記導関数の最大の負の導関数における温度を見つけることとを含む、請求項18に記載の方法。前記アンプリコン較正物質の前記融解温度を前記求めることは、基準融解曲線の導関数のピークと前記アンプリコン較正物質の前記融解の融解曲線の導関数のピークとの相互相関をとることと、最も高い相関を有する温度を前記アンプリコン較正物質の前記融解温度として選択することとを含む、請求項26に記載の方法。前記アンプリコン較正物質の前記求められた融解温度を前記アンプリコン較正物質のそれぞれの予想融解温度と前記比較することは、前記アンプリコン較正物質の前記予想融解温度を用いて、傾き補正因子及び切片補正因子を計算することを含む、請求項26に記載の方法。マイクロ流体チャネルの温度を較正する方法であって、前記マイクロ流体チャネルにおいて既知の熱融解温度を有する少なくとも1つのアンプリコンの熱融解分析を実行することと、既知の値からの前記熱融解温度の導出に基づいて熱制御素子を調整することとを含む、マイクロ流体チャネルの温度を較正する方法。RFCAL-100を含む熱較正物質。RFCAL-200を含む熱較正物質。RFCAL-100を更に含む、請求項31に記載の熱較正物質。ゲノムDNAを含む試験サンプルと、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーと、較正物質のための一対のプライマーとを含む試薬。前記較正物質は前記ゲノムDNA内に含まれる、請求項33に記載の試薬。前記較正物質は超保存エレメントからの配列である、請求項34に記載の方法。前記超保存エレメントからの前記配列はヒト染色体17UCE配列からの配列である、請求項35に記載の方法。前記較正物質は合成配列である、請求項33に記載の試薬。既知の融解温度を有する第1のアンプリコンと第2の既知の融解温度を有する第2のアンプリコンとを含む熱較正物質システム。マイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネルの温度を較正する方法であって、a1つ又は複数の較正用アンプリコンを融解するとともに、該各アンプリコン較正物質の融解温度を求めることと、b前記1つ又は複数の各アンプリコン較正物質の前記求められた融解温度を該1つ又は複数の各アンプリコン較正物質のそれぞれの予想融解温度と比較することと、c前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度と該2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの前記予想融解温度との前記比較に基づいて、前記マイクロ流体チャネルの温度を較正することとを含む、マイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネルの温度を較正する方法。前記融解するとともに求めることは、2つ以上のアンプリコン較正物質を融解するとともに、該各アンプリコン較正物質の融解温度を求めることを含み、前記比較することは、前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度を該2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの予想融解温度と比較することを含み、前記較正することは、前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度と該2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの前記予想融解温度との前記比較に基づいて前記マイクロ流体チャネルを較正することを含む、請求項39に記載の方法。前記2つ以上の各アンプリコン較正物質の前記融解温度を前記求めることは、サビツキーゴーレイフィルターを用いて前記2つ以上のアンプリコンの前記融解の融解曲線の導関数を得ることと、前記融解曲線の前記導関数の最大の負の導関数における温度を見つけることとを含む、請求項40に記載の方法。前記2つ以上の各アンプリコン較正物質の前記融解温度を前記求めることは、基準融解曲線の導関数のピークと前記2つ以上のアンプリコン較正物質の前記融解の前記融解曲線の導関数のピークとの相互相関をとることと、最も高い相関を有する温度を前記2つ以上のアンプリコン較正物質の前記融解温度として選択することとを含む、請求項41に記載の方法。前記2つ以上の各アンプリコン較正物質の前記求められた融解温度を前記2つ以上の各アンプリコン較正物質のそれぞれの予想融解温度と前記比較することは、前記2つ以上の各アンプリコン較正物質のそれぞれの前記予想融解温度を用いて、傾き補正因子及び切片補正因子を計算することを含む、請求項41に記載の方法。前記較正することは、前記計算された傾き補正因子及び前記計算された切片補正因子を用いて調整済み温度を計算することを含む、請求項43に記載の方法。前記1つ又は複数のアンプリコン較正物質の前記融解の融解曲線の導関数は単一のピークを示す、請求項40に記載の方法。前記1つ又は複数のアンプリコン較正物質を前記融解することは、該1つ又は複数のアンプリコン較正物質の第1の融解と、該1つ又は複数のアンプリコン較正物質の第2の融解とを含み、前記1つ又は複数の各アンプリコン較正物質の前記融解温度を前記求めることは、i前記1つ又は複数のアンプリコン較正物質の前記第1の融解の前記融解曲線の導関数のピークに対応する第1の温度を求めることと、ii前記1つ又は複数のアンプリコン較正物質の前記第2の融解の前記融解曲線の導関数のピークに対応する第2の温度を求めることとを含む、請求項45に記載の方法。前記較正することは、前記第1の温度及び前記第2の温度の線形補間を用いて温度調整を計算することを含む、請求項46に記載の方法。前記マイクロ流体チャネルに、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーと較正物質のための一対のプライマーとを含む試薬を前記導入することは、別々の流体セグメントにおいて導入される前記対象となる1つ又は複数の核酸のための前記少なくとも一対のプライマーと前記較正物質のための一対のプライマーとを用いて行われる、請求項18に記載の方法。したがって、当該技術分野において、マイクロ流体デバイス又はチップ内の1つ又は複数のマイクロ流体チャネルの温度を較正するのに有用である信頼性のある較正物質が必要とされている。同様に、正確であり、ダウンタイムを短縮し、かつ高スループットを保持することができる、熱センサー及び/又はヒーターのロバストな較正が必要とされている。一態様では、本発明は、コントローラーを備えるマイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネルの温度を較正する方法を提供する。該方法は、a前記マイクロ流体チャネルに1つ又は複数のアンプリコンを含む試薬を導入することと、b前記1つ又は複数のアンプリコンを融解するとともに、該1つ又は複数の各アンプリコンの融解温度を求めることと、c前記1つ又は複数の各アンプリコンの前記求められた融解温度を該1つ又は複数の各アンプリコンのそれぞれの予想融解温度と比較することと、d前記1つ又は複数の各アンプリコンの前記求められた融解温度と該1つ又は複数の各アンプリコンのそれぞれの前記予想融解温度との前記比較に基づいて前記コントローラーを調整することとを含むことができる。幾つかの実施の形態において、1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数が合成によって準備され、その後、マイクロ流体チャネル内に導入される。幾つかの実施の形態において、ゲノムDNAから1つ又は複数のアンプリコンを準備することができる。幾つかの実施の形態では、超保存エレメントUCEからアンプリコンを準備することができる。他の実施の形態では、鎌状細胞コード配列のような任意のコード配列からアンプリコンを準備することができる。他の実施の形態では、任意の合成DNAから1つ又は複数のアンプリコンを準備することができる。更なる実施の形態では、ゲノムDNA及び合成DNAの両方から1つ又は複数のアンプリコンを準備することができる。幾つかの実施の形態では、1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-100から準備することができる。他の実施の形態では、1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-200から準備することができる。更なる実施の形態では、アンプリコンはRFCAL-100及びRFCAL-200の両方から準備することができる。コントローラーは、マイクロ流体チャネルの温度を制御及び/又は検出することができる。一実施の形態では、前記試薬は2つ以上のアンプリコンを含むことができ、前記融解するとともに求めることは、前記2つ以上のアンプリコンを融解するとともに、該2つ以上の各アンプリコンの融解温度を求めることとを含むことができ、前記比較することは、前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度を該2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの予想融解温度と比較することを含むことができ、前記調整することは、前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度と該2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの前記予想融解温度との前記比較に基づいて前記コントローラーを調整することを含むことができる。前記2つ以上のアンプリコンは5°C以上離れた既知の融解温度を有することができる。前記2つ以上のアンプリコンは10°C以上離れた既知の融解温度を有することができる。前記2つ以上のアンプリコンは15°C以上離れた既知の融解温度を有することができる。前記2つ以上のアンプリコンは20°C以上離れた既知の融解温度を有することができる。幾つかの実施の形態では、前記2つ以上の各アンプリコンの前記融解温度を前記求めることは、サビツキーゴーレイフィルターを用いて前記2つ以上の各アンプリコンの前記融解の融解曲線の導関数を得ることと、前記融解曲線の前記導関数の最大の負の導関数における温度を見つけることとを含むことができる。前記2つ以上の各アンプリコンの前記融解温度を前記求めることは、基準融解曲線の導関数のピークと前記2つ以上アンプリコンの前記融解の融解曲線の導関数のピークとの相互相関をとることと、最も高い相関を有する温度を前記2つ以上のアンプリコンの前記融解温度として選択することとを含むことができる。前記2つ以上の各アンプリコンの前記求められた融解温度を前記2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの予想融解温度とを前記比較することは、前記2つ以上の各アンプリコンのそれぞれの前記予想融解温度を用いて、傾き補正因子及び切片補正因子を計算することを含むことができる。前記コントローラーを調整することは、前記計算された傾き補正因子及び前記計算された切片補正因子を用いて、調整済み温度を計算することを含むことができる。一実施の形態では、1つ又は複数のアンプリコンの融解の融解曲線の導関数が、例えば、1つのみのアンプリコンが使用された場合、単一のピークを示すことができる。前記1つ又は複数のアンプリコンを前記融解することは、該1つ又は複数のアンプリコンの第1の融解と、該1つ又は複数のアンプリコンの第2の融解とを含むことができる。前記1つ又は複数の各アンプリコンの前記融解温度を前記求めることは、i前記1つ又は複数のアンプリコンの前記第1の融解の前記融解曲線の導関数のピークに対応する第1の温度を求めることと、ii前記1つ又は複数のアンプリコンの前記第2の融解の前記融解曲線の導関数のピークに対応する第2の温度を求めることとを含むことができる。前記コントローラーを調整することは、前記第1の温度及び前記第2の温度の線形補間を用いて温度調整を計算することを含むことができる。別の態様では、本発明は、マイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネル内の熱融解の温度を較正する方法を提供する。該方法は、a前記マイクロ流体チャネルにヒトゲノムDNAを含む試験サンプルと、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーと、較正物質のための一対のプライマーとを含む試薬を導入することであって、該較正物質はゲノムDNAにおいて見いだされる、導入することと、b前記ゲノムDNAを増幅することであって、較正用アンプリコンと、対象となる少なくとも1つの前記核酸のアンプリコンとを生成する、増幅することと、c前記アンプリコンを融解し、前記アンプリコンのそれぞれの融解温度を求めることと、d前記較正用アンプリコンの前記求められた融解温度を前記較正用アンプリコンの予想融解温度と比較することと、e前記較正用アンプリコンの前記融解温度に基づいて、前記対象となる少なくとも1つの核酸の前記アンプリコンの前記融解温度を較正することとを含むことができる。流体のセグメントをマイクロ流体チャネルに順次に追加できることは本発明の範囲内にある。各流体セグメントは、その流体セグメントに直接隣接するセグメントとは異なる組成からなることができる。一実施の形態では、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーアッセイ流体セグメントとは別の流体セグメント較正用流体セグメントにおいてマイクロ流体チャネルに較正物質のためのプライマー対を加えることができる。幾つかの実施の形態では、複数のアッセイ流体セグメントがマイクロ流体チャネルに加えられる前に、マイクロ流体チャネルに1つ又は複数の較正用流体セグメントを加えることができる。他の実施の形態では、複数のアッセイ流体セグメントがマイクロ流体チャネルに加えられる前に、1つ又は複数の較正用流体セグメントをマイクロ流体チャネルに加えることができ、アッセイ流体セグメント後に、1つ又は複数の較正用流体セグメントを加えることができる。他の実施の形態では、各アッセイ流体セグメントの両側に較正用流体セグメントが隣接するように、較正用流体セグメントはアッセイ流体セグメントと交互に配置することができる。それゆえ、本明細書全体を通して、マイクロ流体チャネルへの対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーの導入、及び較正物質のためのプライマー対の導入は、同じ流体セグメント内、又は異なる流体セグメント内で行うことができ、別の流体セグメントは任意の順序で、又は交互に、又は順次に、又は複数の流体セグメントの最初及び最後において導入できることに留意されたい。幾つかの実施の形態では、マイクロ流体チャネル試薬は、対象となる1つの核酸のための一対のプライマーを含む。本明細において用いられるときに、対象となる核酸は、試験サンプル内でその存否が判断されることになる核酸を指している。他の実施の形態では、マイクロ流体チャネル試薬は、対象となる2つ以上の各核酸の一対のプライマーを含む。幾つかの実施の形態では、ゲノムDNA内に見られる較正物質は、ヒトゲノムDNAのような、対象となる全てのゲノムDNA内に存在することが知られているDNAセグメントである。他の実施の形態では、較正物質はUCEである。幾つかの実施の形態では、マイクロ流体チャネル試薬は、較正物質のための一対のプライマーを含むことができる。或る特定の実施の形態では、マイクロ流体試薬の増幅は較正用アンプリコンを生成する。或る特定の実施の形態では、較正物質の増幅は、対象となる1つ又は複数の核酸の増幅に影響を及ぼさない。幾つかの実施の形態では、前記各アンプリコンの前記融解温度を前記求めることは、サビツキーゴーレイフィルターを用いて前記アンプリコンの前記融解の融解曲線の導関数を得ることと、前記融解曲線の前記導関数の最大の負の導関数における温度を見つけることとを含むことができる。前記各アンプリコンの前記融解温度を前記求めることは、基準融解曲線の導関数のピークと、前記アンプリコンの前記融解の融解曲線の導関数のピークとの相互相関をとることと、最も高い相関を有する温度を前記アンプリコンの前記融解温度として選択することとを含むことができる。前記較正用アンプリコンの前記求められた融解温度を前記較正用アンプリコンのそれぞれの予想融解温度と前記比較することは、前記較正用アンプリコンのそれぞれの予想融解温度を用いて、傾き補正因子及び切片補正因子を計算することを含むことができる。前記対象となる核酸の各アンプリコンの前記融解温度を較正することは、前記較正用アンプリコンの前記計算された傾き補正因子及び前記計算された切片補正因子を用いて、調整済み温度を計算することを含むことができる。前記方法は、前記較正用アンプリコンの前記求められた融解温度と該較正用アンプリコンのそれぞれの予想融解温度との前記比較を用いて、前記対象となる1つ又は複数の核酸の前記1つ又は複数のアンプリコンの増幅を検証することを含むことができる。該検証は、前記対象となる核酸の前記アンプリコンの補正済み融解温度を求めることを含むことができる。前記方法は、行われた増幅を検証する対照として前記較正用アンプリコンの前記融解曲線を用いることも含むことができる。較正物質のための融解曲線を得ることは、ゲノムDNAの増幅を妨げることになる、試薬の汚染、又は他の異常が生じていないことを実証するための陽性対照としての役割を果たすことができる。別の態様では、本発明は、マイクロ流体チャネルの温度を較正する方法を提供する。該方法は、前記マイクロ流体チャネルにおいて既知の熱融解温度を有する少なくとも1つのアンプリコンの熱融解分析を実行することと、既知の値からの前記熱融解温度の導出に基づいて熱制御素子を調整することとを含むことができる。更に別の態様では、本発明は、RFCAL-100を含む較正物質を提供することができる。更に別の態様では、本発明は、RFCAL-200を含む較正物質を提供することができる。較正物質は、RFCAL-100を更に含むことができる。別の態様では、本発明は、aヒトゲノムDNA内に存在し、bその増幅が、ヒトゲノムDNA内に存在する場合がある対象となる1つ又は複数の核酸の増幅と干渉しない、既知の融解温度を有するアンプリコンを生成する、較正物質を提供する。本発明の上記の態様及び特徴並びに他の態様及び特徴、並びに本発明の種々の実施形態の構造及び用途を、添付図面を参照して以下で説明する。本明細書に組み込まれて、本明細書の一部をなす添付図面は、本発明の様々な実施形態を示す。図面中、同様の参照符号が同一の要素又は機能が類似する要素を示す。さらに、参照符号の一番左側の数字は、その参照符号が最初に現れた図面を識別する。図1は、本発明の態様を具現化するマイクロ流体デバイス100を示す。本明細書で述べるように、マイクロ流体デバイス100は、反応チップ又はU-チップとして交換可能に呼ばれる場合がある。示す実施形態では、マイクロ流体デバイス100は、基板101にわたって延在する幾つかのマイクロ流体チャネル102を含む。各チャネル102は、1つ又は複数の入口ポート103示す実施形態は、チャネル102について2つの入口ポート103を示す及び1つ又は複数の出口ポート105示す実施形態は、チャネル102について1つの出口ポート105を示すを含む。例示的な実施形態では、各チャネルは、PCR熱ゾーン104以下で述べるを通して延在する第1の部分及び熱融解ゾーン106以下で述べるを通して延在する第2の部分に細分することができる。一実施形態では、マイクロ流体デバイス100は、マイクロ流体チャネル102に関連する薄膜抵抗加熱器112の形態の熱制御素子を更に含む。1つの非限定的な実施形態では、薄膜抵抗加熱器112は、その抵抗が、それらの各温度を制御するために測定されるプラチナ抵抗加熱器とすることができる。図1に示す実施形態では、各加熱器素子112は、2つの加熱器セクション、すなわち、PCRゾーン104内のPCR加熱器112aセクション及び熱融解ゾーン106内の熱融解加熱器セクション112bを備える。一実施形態では、マイクロ流体デバイス100は、種々の薄膜加熱器112a及び112bに接続された複数の加熱器電極110を含む。非限定的な実施形態では、加熱器電極110は、PCRセクションリード線118、1つ又は複数のPCRセクション共通リード線116a、熱融解セクションリード線120、及び1つ又は複数の熱融解セクション共通リード線116bを含むことができる。本発明の一実施形態によれば、別個のPCRセクションリード線118が、薄膜PCR加熱器112aのそれぞれに接続され、別個の熱融解セクション共通リード線120が、薄膜熱融解加熱器112bのそれぞれに接続される。図2は、一実施形態による、マイクロ流体デバイス100を使用するためのシステム200の機能ブロック図を示す。DNAサンプルは、調製ステージ202からマイクロ流体チップ100に注入inputされる。本明細書で述べるように、調製ステージ202は、ピペッターシステム又はプレKステージpreKstageと交換可能に呼ばれる場合がある。調製ステージ202は、サンプル204を調製し、1つ又は複数の試薬206をサンプルに添加するための適切なデバイスを備えることができる。サンプルが、例えば注入ポート103にて、マイクロ流体チップ100内に注入されると、サンプルは、チャネル102を通って、PCRが起こるPCRゾーン104に流入する。すなわち、以下でより詳細に述べるように、サンプルがPCRゾーン104を通ってチャネル102内に流れるため、サンプルは、PCR温度サイクルに複数回暴露されて、PCR増幅をもたらす。次に、サンプルは、高分解能熱融解プロセスが起こる熱融解ゾーン106内に流入する。マイクロ流体チップ100内へのサンプルのフローは、フローコントローラー208によって制御することができる。フローコントローラーは、システム200の制御システム250の一部とすることができる。制御システム250は、フローコントローラー208、PCRゾーン温度コントローラー210、PCRゾーンフローモニター218、熱融解ゾーン温度コントローラー224、及び/又は熱融解ゾーン蛍光測定システム232を備えることができる。PCRゾーン104内の温度は、PCRゾーン温度コントローラー210によって制御され得る。プログラム式コンピューター又は他のマイクロプロセッサとすることができるPCRゾーン温度コントローラー210は、温度センサー214例えば、RTD若しくは薄膜サーミスター又は薄膜熱電対温度計等によって決定された温度に基づいて加熱器デバイス212例えば、PCR加熱器112aに信号を送出する。こうして、PCRゾーン104の温度を、所望のレベルに維持することができる。本発明の幾つかの実施形態によれば、PCRゾーン104はまた、PCRゾーン温度コントローラー210によって同様に制御されることができる冷却デバイス216によって例えば、95°Cから55°Cまでチャネル温度を迅速に下げるために冷却することができる。一実施形態では、冷却デバイス216は、例えば、ペルチエデバイス、ヒートシンク、又は強制対流空気冷却デバイスとすることができる。マイクロ流体チャネル102を通るサンプルのフローは、PCRゾーンフローモニタリングシステム218によって測定することができる。一実施形態では、フローモニタリングシステムは、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする米国特許出願第7,629,124号に示されている蛍光色素拡散画像化及び追跡システムとすることができる。本発明の一実施形態によれば、PCRゾーン内のチャネルは、励起デバイス220によって励起されることができ、サンプルから蛍光として発せられた光は、検出デバイス222によって検出することができる。画像化システムの一部を形成する考えられる1つの励起デバイス及び検出デバイスの例は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする米国特許出願公開第2008/0003593号及び米国特許第7,629,124号に示されている。熱融解ゾーン温度コントローラー224、例えばプログラム式コンピューター又は他のマイクロプロセッサは、熱融解ゾーン106の温度を制御するために使用され得る。PCRゾーン温度コントローラー210の場合と同様に、熱融解ゾーン温度コントローラー224は、例えばRTD若しくは薄膜サーミスターであり得る温度センサー228によって測定される温度に基づいて加熱構成要素226例えば、熱融解加熱器112bに信号を送出する。さらに、熱融解ゾーン106は、冷却デバイス230によって独立に冷却することができる。サンプルの蛍光シグネチャは、熱融解ゾーン蛍光測定システム232によって測定され得る。蛍光測定システム232は、励起デバイス234によってサンプルを励起し、サンプルの蛍光は、検出デバイス236によって検出することができる。考えられる1つの蛍光測定システムの例は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする米国特許出願公開第2008/0003593号及び米国特許第7,629,124号に示されている。本発明の態様によれば、薄膜加熱器112は、加熱器と温度検出器との両方として機能することができる。そのため、本発明の一実施形態では、それらの加熱素子212及び226並びに温度センサー214及び228の機能は、薄膜加熱器112によって達成することができる。一実施形態では、システム200は、PCRゾーン温度コントローラー210又は熱融解ゾーン温度コントローラー224によって送出される制御信号に基づいて薄膜加熱器112a及び/又は112bに電力を送出し、それにより、それらの薄膜加熱器を加熱させる。制御信号は、例えばパルス幅変調PWM制御信号とすることができる。加熱器212を制御するためにPWM信号を使用することの利点は、PWM制御信号によって、加熱器の両端の同じ電位を、必要とされる種々の温度の全てについて用いることができることである。別の実施形態では、制御信号は、振幅変調又は交流を利用することができる。振幅変調された制御信号を用いて加熱器212を制御することが有利とすることができる。その理由は、大きな電圧ステップではなく、電圧の連続した緩やかな変化が、スルーレート限界を回避し、整定時間を改善するからである。振幅変調の更なる論議は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすものとする米国特許出願公開第2011/0048547号に見出すことができる。幾つかの実施形態では、加熱器についての所望の温度は、制御信号のデューティサイクルを変更することによって達せられる。例えば、1つの非限定的な実施形態では、PCR加熱器において95°Cを達成するための制御信号のデューティサイクルは約50とすることができ、PCR加熱器において72°Cを達成するための制御信号のデューティサイクルは約25とすることができ、PCR加熱器において55°Cを達成するための制御信号のデューティサイクルは約10とすることができる。他の実施形態では、当業者であれば明らかであるような他のデューティサイクルを用いることができる。本発明の複数の態様とともにマイクロ流体デバイス100及びシステム200を用いることができる。例えば、システム200は、本発明の態様による、既知の、又は予想される熱融解温度を有するアンプリコンを用いて、マイクロ流体デバイス100の熱制御素子112を較正することができる。しかしながら、既知の、又は予想される熱融解温度を有するアンプリコンを用いて、図1及び図2に示されるマイクロ流体デバイス100及びシステム200以外のマイクロ流体デバイス100及びシステム200内の熱制御素子を較正することもできる。システム200のような高分解能熱融解機器では、温度精度が極めて重要である。例えば、温度に小さな偏り又はシフトがあると、融解曲線を分析する際に、遺伝子型の誤分類が生じる場合がある。蛍光対温度を分析するにしても、温度に対する蛍光の導関数を分析するにしても、単一のヌクレオチド多型及び野生型DNAサンプルを含むホモ接合DNAは、同じ形状を有し、わずかな温度シフトだけ異なる。例えば、図18Aは、ワルファリンCyP2C92の場合の蛍光対温度融解曲線を示し、図18BはワルファリンCyP2C92の場合の温度融解曲線に対する蛍光の導関数を示す。図18Bに示されるように、2つのプロファイルの温度差、すなわち、真の融解温度における平均差はわずか0.4°Cである。同じ形状を示し、或るシフトだけ異なるそのような遺伝子型の場合、遺伝子型を分類するために、導関数のピーク温度によって推定されるDNAの融解温度、Tmが多くの場合に用いられる。測定された温度に小さなドリフト又は偏りがあると、これらの遺伝子型の誤分類が増加する可能性がある。正の温度シフト又はドリフトがある場合には、ホモ接合変異体が野生型として誤分類される可能性がある。逆に、負の温度シフト又はドリフトがある場合には、野生型がホモ接合変異体として誤分類される可能性がある。温度シフトは、ウェルプレート内のような温度の空間差勾配、又は時間シフトドリフトに起因する場合がある。空間又は時間に関して温度シフト又は測定温度の偏りがない理想的なシステムであれば、特定の遺伝子型の場合の融解温度の分散ははるかに小さくなる。しかしながら、現実の機器では、温度勾配及びドリフトが現実的な現象である。本発明の一態様は、マイクロ流体デバイス例えば、デバイス100のマイクロ流体チャネル例えば、チャネル102の温度の較正である。幾つかの実施形態では、その較正は、マイクロ流体チャネルの温度を制御及び/又は検出する1つ又は複数の熱制御素子例えば、薄膜抵抗ヒーター112を較正することによって実行することができる。幾つかの実施形態では、複数のマイクロ流体チャネル例えば、チャネル102の温度を較正することができる。幾つかの実施形態では、その較正は、既知の、又は予想される熱融解温度を有する単一のアンプリコンを較正物質として用いて実行することができる。アンプリコンは、マイクロ流体チャネルの熱融解ゾーンに導入され、融解される。一実施形態では、アンプリコンは、ゲノムDNAに由来することができる。1つの特定の実施形態では、アンプリコンは、超保存エレメントUCEから生成することができる。代替の実施形態では、アンプリコンは、合成DNAから生成することができる。更なる実施形態では、アンプリコンは、鎌状細胞コード配列のようなコード配列から生成することができる。幾つかの実施形態では、較正は、それぞれ既知の、又は予想される熱融解温度を有する2つ以上のアンプリコンを用いて実行することができる。特定の実施形態では、2つ以上のアンプリコンは、ゲノムDNAから、又は合成DNAから、又はゲノムDNAに由来する1つ若しくは複数のアンプリコン及び1つ若しくは複数の合成アンプリコンの組み合わせから生成することができる。さらに、2つ以上のアンプリコンのうちの1つ又は複数はUCEとすることができる。図3Aは、本発明の一実施形態による、マイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネルの温度を較正するためのプロセス300aを示す。プロセス300aはステップ302において開始することができ、そのステップでは、マイクロ流体チャネルの中にアンプリコンが導入される。好ましい実施形態では、1つ又は複数のアンプリコンはそれぞれ既知の熱融解温度を有する。言い換えると、好ましい実施形態では、1つ又は複数の各アンプリコンが融解すると予想される温度が既知である。一実施形態では、1つ又は複数のアンプリコンは任意の合成配列を含む。ステップ304において、増幅産物に関する熱融解分析を実行することができる。言い換えると、アンプリコンを融解することができ、アンプリコンが融解する温度を測定することができる。このようにして、プロセス300aは、マイクロ流体チャネル内の1つ又は複数のアンプリコンがそれぞれ融解した温度を求めることができる。一実施形態では、熱融解分析は、アンプリコンを温度ランプにかけることによって実行することができる。アンプリコンは、マイクロ流体デバイスの熱融解ゾーン例えば、マイクロ流体デバイス100の熱融解ゾーン106において温度ランプにかけることができる例えば、アンプリコンの熱応答プロファイルの特徴に応じた温度を含む温度範囲にわたって、例えば、0.5°C/秒において熱制御素子を加熱する。熱ランプ中に、アンプリコンの従属変数例えば、蛍光強度及び熱制御素子の測定値を監視して、熱応答プロファイルを生成する。その温度は熱融解ゾーン蛍光測定システム例えば、熱融解ゾーン蛍光測定システム232によって測定することができる。しかしながら、熱融解分析を実行するための任意の既知の方法及び/又はデバイスを用いることができる。一実施形態では、熱融解分析は、熱変動を受ける溶液例えば、試薬溶液に関連する従属変数、すなわち、溶液の温度と従属変数との間の関係の分析とすることができる。幾つかの実施形態では、熱応答プロファイルは、蛍光の量と溶液の温度との間の関係を特定する溶液の融解曲線、すなわち蛍光融解分析とすることができる。幾つかの実施形態では、そのような熱応答プロファイルを生成することは、マイクロ流体チップ例えば、マイクロ流体チップ100をマイクロ流体チップ内の反応を制御するためのシステム例えば、システム200に装填することと、1つ又は複数のアンプリコンを含む、試薬の液滴、プラグ、スラグ又は連続流をチップ例えば、マイクロ流体チャネル102に装填することと、熱制御素子の温度を監視しながら、かつ増幅産物の従属変数例えば、融解曲線が得られる場合の蛍光を監視しながら、アンプリコンに熱を伝達する熱制御素子例えば、ヒーター112を制御してアンプリコンを加熱することとを含むことができる。一実施形態では、熱応答プロファイルから、各特徴の見かけのすなわち、測定された温度例えば、各アンプリコンに対応する見かけの融解温度を識別することができる。幾つかの実施形態では、見かけの温度は、ピークピッキングを用いて導関数プロットから求めることができる。他の実施形態では、見かけの温度は、導関数プロットとアンプリコンごとの既知のテンプレートすなわち、予想される熱応答プロファイルとの相互相関をとることによって、又は熱応答プロファイルをシフト及び伸長して、所定のテンプレートと照合することによって求めることができる。ステップ306において、1つ又は複数のアンプリコンのアンプリコンごとに、アンプリコンが融解した測定温度がそのアンプリコンのための既知のすなわち、予想される熱融解温度と比較される。その比較は、例えば、デジタルコンパレーター又はアナログコンパレーターによって実行することができる。そのコンパレーターは、マイクロ流体システムの制御システム例えば、システム200の制御システム250の一部とすることができる。しかしながら、比較を実行するための任意の既知の方法及び/又はデバイスを用いることもできる。ステップ308において、測定融解温度複数の場合もあるとそれぞれの既知の熱融解温度複数の場合もあるとの比較結果複数の場合もあるに基づいて、マイクロ流体チャネルの温度が較正される。その較正は、マイクロ流体チャネル例えば、チャネル102の温度を制御及び/又は検出するコントローラー例えば、制御システム250及び/又は1つ若しくは複数の熱制御素子例えば、ヒーター112を調整することによって実行することができる。幾つかの実施形態では、熱制御素子の較正は、較正式、すなわち、熱制御素子の温度と測定値との間の関係をモデル化する式の係数を求めることを含むことができる。一実施形態では、その測定値は、熱制御素子の電気的特性とすることができる。例えば、抵抗ヒーター112のための較正式は、ヒーター112の温度とヒーター112の抵抗との間の関係をモデル化することができる。この実施形態では、較正式は、式1に示されるように、線形関係をモデル化することができる。この場合、Tは熱制御素子の温度であり、Rは熱制御素子の抵抗であり、k0及びk1は較正によって求められることになる定数すなわち、係数である。2つの較正係数は、例えば、2つの既知の温度T1及びT2において抵抗Rを測定することによって求めることができる。本発明の幾つかの態様では、これらの測定値は、1つ又は複数のアンプリコンを含む試薬の液滴、プラグ、スラグ又は連続流と熱的に接触している熱制御素子例えば、ヒーター112を、例えば、試薬がヒーター112に対応するマイクロ流体チャネル102内にある間に加熱し、アンプリコンの熱応答プロファイルの2つ以上の特徴例えば、融点と一致する温度において熱制御素子の抵抗を測定する例えば、ヒーター112の抵抗を測定することによって得ることができる。他の実施形態では、較正式は、電流、電位、加えられる電力、抵抗率、導電率又は他の関連する量のような他の電気的因子間の関係をモデル化することができる。幾つかの態様では、その測定値は、熱制御素子の温度に関連する熱制御素子の独立制御される態様とすることができる。他の態様では、測定値は、熱制御素子の温度に関連する任意の因子とすることができる。幾つかの実施形態では、較正式は、求められることになる更に多くの係数を含むことができる。例えば、測定値が抵抗である場合に、幾つかの較正式は式2に示されるように二次関係をモデル化することができる。この場合、全ての係数をより正確に求めるために、その熱応答プロファイル内に3つ以上の特徴を有する試薬から生じる増幅産物が好ましい場合がある。さらに、式3を用いて、この手法が、n個以上の特徴を有する複合較正物の場合に拡張できることは当業者には理解されよう。さらに、幾つかの実施形態では、求められることになる係数よりも多くの特徴を有する試薬を利用するすなわち、温度と熱制御素子の抵抗との間において、存在する係数よりも多くの対応を特定することによって、係数のための更に正確な値を得ることができる。結果として生じる過剰決定系は、例えば、最小二乗法を用いて解くことができる。幾つかの実施形態では、熱制御素子は、熱応答プロファイルの特徴例えば、融点に基づいて求められた1つ又は複数の温度に加えて、周囲温度すなわち、室温を用いて較正することができる。例えば、マイクロ流体チャネルの温度の較正は、熱制御素子が既知の周囲温度にある間に、熱制御素子の出力例えば、ヒーター112の抵抗を求めることを含むことができる。幾つかの実施形態では、例えば、高精度RTD又は熱電対のような別の温度測定デバイスを用いて、周囲温度を測定することができる。しかしながら、当業者によって理解されるように、非接触法を含む任意の他の適切な温度測定デバイスも適している。他の実施形態では、マイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネル内の温度を較正するために用いられる1つ又は複数のアンプリコンは合成アンプリコン、すなわち、合成配列から生成されるアンプリコンとすることができる。好ましい実施形態では、合成配列に由来するアンプリコン複数の場合もあるは、臨床サンプルとは干渉せず、ベクターから生成することができる。好ましい実施形態では、合成配列から設計される1つ又は複数の較正物質は、臨床サンプルと干渉せず、ベクターから容易に生成することができる。幾つかの実施形態では、1つ又は複数の配列は、ヒトゲノムDNA内に存在しないように選択される。他の実施形態では、1つ又は複数の配列は、哺乳類ゲノムDNA内に存在しないように選択される。更なる実施形態では、1つ又は複数の配列は、脊椎動物DNA内に存在しないように選択される。一実施形態では、1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-100と呼ばれる。別の実施形態では、1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つはRFCAL-200と呼ばれる。或る特定の実施形態では、1つ又は複数のアンプリコンはベクター内でクローニングされる。その中に合成配列が挿入された、プラスミド、ウイルス等の、当業者に既知の任意の適切なベクターを用いることができる。本発明の幾つかの実施形態では、マイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネル内の温度を較正するために用いられる1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数は、UCEから生成することができる。UCEは転写調節及び発生初期に関与し、科学者はUCEが進化時に全ての生命体に共通の機能的イントロンであったと考えている。ヒトゲノムには、多くの数のUCEが存在し、それらのUCEは200塩基対bpよりも長い配列である場合がある。また、UCEは、脊椎動物のゲノムの中でも保存される。UCEは、Y及び21染色体を除く、全てのヒト染色体内に存在する。UCEは、非常に低い突然変異率を有し、最近3億年以上にわたって全く変化していない。本発明の態様を用いて、抵抗センサー、サーミスター、ダイオード温度センサー、熱電対又は任意の他の適切な温度測定デバイスを較正することができる。本発明は更に、薄膜プラチナ素子又はニッケル、銅又は当業者によって理解されるような任意の他の材料のような、同じく加熱するために用いられる抵抗センサーを較正するために用いることもできる。本発明の別の態様は、観測可能なパターン又は傾向に従う空間及び/又は時間の温度シフトの場合に、温度補正を適用して、温度補正済み融解曲線を再生及び/又は再描画し、かつ融解温度の偏差を低減することである。言い換えると、本発明の態様は、測定された温度がその真の値により近づくように、温度プロファイルを再較正することができる。したがって、本発明の態様を用いて、遺伝子型を同定する際の誤分類率を低減することができる。幾つかの実施形態では、既知の融解温度の隣接する陽性対照DNAサンプル空間及び時間を用いて、温度補正を計算し、その温度補正を未知の遺伝子型のDNA融解曲線に適用することができる。幾つかの実施形態では、陽性対照サンプルすなわち、既知の、又は予想融解温度を有する較正物質又はアンプリコンは、未知のサンプルの前及び/又は後に、及び/又は同時に融解することができ、それらの融解曲線の導関数は1つ又は2つ以上のピークを示すことができる。例えば、図19Aは、ウェルプレートに基づくシステムにおける、本発明の一実施形態による較正物質例えば、以下に更に詳細に説明される207bpUCE配列の場合の蛍光対温度融解曲線を示し、図19Bは、UCE較正物質の場合の温度融解曲線に対する蛍光の導関数が単一のピークを示すことを示す。別の例では、図20Aは、マイクロ流体チャネルに基づくシステムにおける本発明の別の実施形態による較正物質例えば、以下に更に詳細に説明されるRFCAL-100及びRFCAL-200を含む合成較正物質の場合の蛍光対温度融解曲線を示し、図20Bは、その較正物質の場合の温度融解曲線に対する蛍光の導関数が2つのピークすなわち、約70°Cの1つのピーク及び約90°Cの第2のピークを示すことを示す。本発明の態様は、図19B及び図20Bに示されるような、1つ又は2つのピークを示す導関数を有する融解曲線を生成する較正物質を使用して、温度補正を較正し、その補正を未知の遺伝子型のDNA融解曲線に適用することができる。本発明の一態様は、マイクロ流体システム内に存在するマイクロ流体チャネル内の熱融解の温度を較正する方法である。本方法は、aマイクロ流体チャネルにヒトゲノムDNAを含む試験サンプルと、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーと、較正物質のための一対のプライマーとを含む試薬を導入することであって、この較正物質はゲノムDNAにおいて見いだされる、導入することと、bゲノムDNAを増幅することであって、較正用アンプリコンと、対象となる1つ又は複数の核酸のアンプリコンとを生成する、増幅することと、cアンプリコンを融解するとともに、各アンプリコンの融解温度を求めることと、d較正用アンプリコンの求められた融解温度を較正用アンプリコンの予想融解温度と比較することと、e較正用アンプリコンの融解温度に基づいて、対象となる少なくとも1つの核酸のアンプリコンの融解温度を較正することとを含むことができる。図3Bは、本発明の一実施形態による、マイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネル内の熱融解の温度を較正するためのプロセス300bを示す。プロセス300はステップ312において開始することができ、そのステップでは、試薬がマイクロ流体チャネル内に導入される。その試薬は、試験サンプル、対象となる核酸のための一対のプライマー、及び/又は較正物質のための一対のプライマーを含むことができる。幾つかの実施形態では、試薬は、対象となる1つ又は複数の付加的な核酸のための1つ又は複数の付加的なプライマー対も含むことができる。一実施形態では、試験サンプルはヒトゲノムDNAを含むことができる。しかしながら、試験サンプルは、ヒトゲノムDNAに加えて、又はその代わりに、他のタイプのDNAを含むこともできる。幾つかの実施形態では、その較正物質は、例えば、ヒトゲノムDNAのようなゲノムDNAにおいて見られる。1つの非限定的な実施形態では、較正物質はUCEである。しかしながら、他の実施形態では、較正物質は合成較正物質とすることができる。較正物質がUCEである実施形態のような幾つかの実施形態では、較正物質は試験サンプル内に含まれる場合がある。較正物質が合成物である実施形態のような他の実施形態では、その試薬は較正物質を更に含む。幾つかの実施形態では、試薬は1つ又は複数の更なる較正物質のための1つ又は複数の更なるプライマー対を含むことができ、それは試薬に含まれる場合もある。好ましい実施形態では、1つ又は複数の較正物質はそれぞれ既知の熱融解温度を有する。言い換えると、好ましい実施形態では、1つ又は複数の各アンプリコンが融解すると予想される温度は既知である。ステップ312は、対象となる核酸のためのプライマーが較正物質のプライマーとは別の流体セグメント内に存在することができるように、試薬が別の流体セグメント内に導入されることを含むことができる。較正物質のためのプライマーを含む流体セグメントは、対象となる核酸のためのプライマーを含む複数の流体セグメントの前後に導入することができるか、又は、較正物質のためのプライマーを含む流体セグメントが対象となる核酸のためのプライマーを含む各流体セグメントの前後に存在することができるように、較正物質のためのプライマーを含む流体セグメントは対象となる核酸のためのプライマーを含む流体セグメントと交互に導入することができる。ステップ314において、試験サンプルと、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーと、1つ又は複数の較正物質のための少なくとも一対のプライマーとを含むことができる試薬が増幅される。ステップ314における試薬の増幅は、1つ又は複数の較正用アンプリコンと、対象となる1つ又は複数の核酸のアンプリコンとを含む増幅産物を生成することができる。一実施形態では、PCR増幅をもたらすために、試薬を何度もPCR温度サイクルにかけることによって増幅を実行することができる。試薬は、マイクロ流体デバイスのPCRゾーン例えば、マイクロ流体デバイス100のPCRゾーン104においてPCR温度サイクルにかけることができる。しかしながら、試薬を増幅するための任意の既知の方法及び/又はデバイスを用いることができる。ステップ316において、増幅産物に関する熱融解分析を実行することができる。言い換えると、1つの又は複数の較正用アンプリコン及び対象となる1つ又は複数の核酸のアンプリコンが融解することができ、アンプリコンが融解する温度を測定することができる。このようにして、プロセス300bは、マイクロ流体チャネル内の増幅産物の各アンプリコンが融解した温度を求めることができる。一実施形態では、熱融解分析は、アンプリコンを温度ランプにかけることによって実行することができる。アンプリコンは、マイクロ流体デバイスの熱融解ゾーン例えば、マイクロ流体デバイス100の熱融解ゾーン106において温度ランプにかけることができる例えば、アンプリコンの熱応答プロファイルの特徴に応じた温度を含む温度範囲にわたって、例えば、0.5°C/秒において熱制御素子を加熱する。熱ランプ中に、アンプリコンの従属変数例えば、蛍光強度及び熱制御素子の測定値を監視して、熱応答プロファイルを生成する。その温度は熱融解ゾーン蛍光測定システム例えば、熱融解ゾーン蛍光測定システム232によって測定することができる。しかしながら、熱融解分析を実行するための任意の既知の方法及び/又はデバイスを用いることができる。一実施形態では、熱融解分析は、熱変動を受ける溶液例えば、試薬溶液に関連する従属変数、すなわち、溶液の温度と従属変数との間の関係の分析とすることができる。幾つかの実施形態では、熱応答プロファイルは、蛍光の量と溶液の温度との間の関係を特定する溶液の融解曲線、すなわち、蛍光融解分析とすることができる。幾つかの実施形態では、そのような熱応答プロファイルを生成することは、マイクロ流体チップ例えば、マイクロ流体チップ100をマイクロ流体チップ内の反応を制御するためのシステム例えば、システム200に装填することと、1つ又は複数のアンプリコンを含む、試薬の液滴、プラグ、スラグ又は連続流をチップ例えば、マイクロ流体チャネル102に装填することと、熱制御素子の温度を監視しながら、かつ増幅産物の従属変数例えば、融解曲線が得られる場合の蛍光を監視しながら、アンプリコンに熱を伝達する熱制御素子例えば、ヒーター112を制御して、アンプリコンを加熱することとを含むことができる。一実施形態では、熱応答プロファイルから、各特徴の見かけのすなわち、測定された温度例えば、1つ又は複数の較正用アンプリコンのそれぞれに、及び/又は対象となる1つ又は複数の核酸の各アンプリコンに対応する見かけの融解温度を識別することができる。幾つかの実施形態では、見かけの温度は、ピークピッキングを用いて導関数プロットから求めることができる。他の実施形態では、見かけの温度は、導関数プロットとアンプリコンごとの既知のテンプレートすなわち、予想される熱応答プロファイルとの相互相関をとることによって、又は熱応答プロファイルをシフト及び伸長して、所定のテンプレートと照合することによって求めることができる。ステップ318において、1つ又は複数のアンプリコンのアンプリコンごとに、較正用アンプリコンが融解した測定温度が較正用アンプリコンのための既知のすなわち、予想される熱融解温度と比較される。その比較は、例えば、デジタルコンパレーター又はアナログコンパレーターによって実行することができる。そのコンパレーターは、マイクロ流体システムの制御システム例えば、システム200の制御システム250の一部とすることができる。しかしながら、比較を実行するための任意の既知の方法及び/又はデバイスを用いることもできる。ステップ320において、マイクロ流体チャネルの対象となる1つ又は複数の核酸のアンプリコンの融解温度複数の場合もあるが1つ又は複数の較正用アンプリコンの測定された融解温度複数の場合もあるに基づいて較正される。例えば、マイクロ流体チャネルの対象となる1つ又は複数の核酸のアンプリコンの融解温度複数の場合もあるは、1つ又は複数の較正用アンプリコンの測定された融解温度複数の場合もあるとそれぞれの既知の熱融解温度複数の場合もあるとの比較結果複数の場合もあるに基づいて較正される。1つの非限定的な実施形態では、較正は、1つ又は複数の較正用アンプリコンの測定された融解温度複数の場合もあるとそれぞれの既知の熱融解温度複数の場合もあるとの比較結果複数の場合もあるに従って、対象となる1つ又は複数の核酸のアンプリコンの融解温度複数の場合もあるをシフトすることによって実行される。上述したように、幾つかの実施形態では、マイクロ流体チャネル試薬は、対象となる1つの核酸のための一対のプライマーを含む。本明細書において用いられるときに、対象となる核酸は、試験サンプル内でその存否が判断されることになる核酸を指している。他の実施形態では、マイクロ流体チャネル試薬は、対象となる2つ以上の各核酸の一対のプライマーを含む。幾つかの実施形態では、ゲノムDNA内に見られる較正物質は、ヒトゲノムDNAのような、対象となる全てのゲノムDNA内に存在することが知られているDNAセグメントである。他の実施形態では、較正物質はUCEである。幾つかの実施形態では、マイクロ流体チャネル試薬は、較正物質のための一対のプライマーを含むことができる。或る特定の実施形態では、マイクロ流体試薬の増幅は較正用アンプリコンを生成する。或る特定の実施形態では、較正物質の増幅は、対象となる1つ又は複数の核酸の増幅に影響を及ぼさない。幾つかの実施形態では、各アンプリコンの融解温度を求めることは、サビツキーゴーレイフィルターを用いてアンプリコンの融解の融解曲線の導関数を求めることと、融解曲線の導関数の最大の負の導関数における温度を見つけることとを含むことができる。各アンプリコンの融解温度を求めることは、基準融解曲線の導関数のピークとアンプリコンの融解の融解曲線の導関数のピークとの相互相関をとることと、最も高い相関を有する温度をアンプリコンの融解温度として選択することとを含むことができる。較正物質アンプリコンの求められた融解温度を較正物質アンプリコンのそれぞれの予想融解温度と比較することは、較正物質アンプリコンのそれぞれの予想融解温度を用いて、傾き補正因子及び切片補正因子を計算することを含むことができる。対象となる核酸の各アンプリコンの融解温度を較正することは、較正用アンプリコンの計算された傾き補正因子及び計算された切片補正因子を用いて、調整済み温度を計算することを含むことができる。その方法は、較正用アンプリコンの求められた融解温度と較正用アンプリコンのそれぞれの予想融解温度との比較を用いて、対象となる1つ又は複数の核酸の1つ又は複数のアンプリコンの増幅を検証することを含むことができる。その検証は、対象となる核酸のアンプリコンの補正済みの融解温度を求めることを含むことができる。一実施形態では、熱融解分析は、熱変動を受ける溶液例えば、試薬溶液に関連する従属変数、すなわち、溶液の温度と従属変数との間の関係の分析とすることができる。幾つかの実施形態では、熱応答プロファイルは、蛍光の量と溶液の温度との間の関係を特定する溶液の融解曲線、すなわち、蛍光融解分析とすることができる。幾つかの実施形態では、そのような熱応答プロファイルを生成することは、マイクロ流体チップ例えば、マイクロ流体チップ100をマイクロ流体チップ内の反応を制御するためのシステム例えば、システム200に装填することと、試験サンプル及びプライマーを含む、試薬の液滴、プラグ、スラグ又は連続流をチップ例えば、マイクロ流体チャネル102に装填して、較正物質及び対象となる核酸を増幅することと、熱制御素子の温度を監視しながら、かつ増幅産物の従属変数例えば、融解曲線が得られる場合の蛍光を監視しながら、アンプリコンに熱を伝達する熱制御素子例えば、ヒーター112を制御して、アンプリコンを加熱することとを含む。一実施形態では、熱応答プロファイルから、各特徴の見かけのすなわち、測定された温度例えば、各アンプリコンに対応する見かけの融解温度を識別することができる。幾つかの実施形態では、見かけの温度は、ピークピッキングを用いて導関数プロットから求めることができる。他の実施形態では、見かけの温度は、導関数プロットとアンプリコンごとの既知のテンプレートすなわち、予想される熱応答プロファイルとの相互相関をとることによって、又は熱応答プロファイルをシフト及び伸長して、所定のテンプレートと照合することによって求めることができる。本発明の幾つかの実施形態では、マイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネル内の熱融解の温度を較正するために用いられる1つ又は複数の較正物質のうちの1つ又は複数はUCEとすることができる。UCEは全てのゲノムDNA内に存在するので、ゲノムDNAを用いて増幅が行われるときはいつでも、1つ又は複数の特定の超保存エレメントUCEDNA配列も増幅することができる。本発明の幾つかの実施形態では、一対のプライマーを設計して、較正物質として用いられる特定のUCE配列を増幅することができる。PCRのような増幅プロセスを用いるとき、そのプライマー対を用いて、同じUCEアンプリコンを何度も繰り返し形成することができる。UCEアンプリコンは、常に、同じ融解温度TMを示すことになる。UCEアンプリコンが常に同じTMを示すという特徴に基づいて、そのUCEアンプリコンを、例えば、1つ又は複数のマイクロ流体チャネルを有するマイクロ流体システム内の融解温度を較正するために用いることができる。したがって、一態様では、本発明は、較正用アンプリコンを用いて、対象となる核酸のアンプリコンの融解温度を較正するようなPCR及び熱融解分析デバイスにおいてヒトゲノムDNA内に見られる較正物質を増幅するために一対のプライマーを用いるための方法、デバイス及びシステムを提供する。一実施形態では、そのUCEプライマーは、PCR増幅及び融解中に、対象となる1つ又は複数の核酸のための少なくとも一対のプライマーと同時に用いられ、対象となる核酸から生成されたアンプリコンの融解温度TMは正確である。これは、UCEプライマー産物が既知のTMを有することができるので果たすことができる。本発明の実施形態は、種々の機器において用いることができるが、invitro診断を実行するPCR及び熱融解システムにおいて特に有用である。本発明の実施形態を用いて、サンプルを熱融解診断することを意図したセンサー及びヒーター、並びに全く異なる機能を実行する機器例えば、サンプル調製及びPCR内の他のヒーター及びセンサーを較正することができる。別の態様では、本発明は多重アンプリコン較正物システムを提供する。言い換えると、2つ以上のアンプリコンを含む試薬を用いて、マイクロ流体チャネルの温度を較正することができる。例えば、二重アンプリコン較正物を用いて、或る特定のマイクロ流体チップに基づくシステムにおいて正確な高分解能の融解を生成することができる。非限定的な実施形態では、多重アンプリコン較正物システム内の複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数は超保存エレメントUCEである。別の非限定的な実施形態では、多重アンプリコン較正物システム内の複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数は合成である。別の非限定的な実施形態では、複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数はUCEであり、複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数は合成である。上記のように、本発明の一実施形態は2つのアンプリコンを利用することができる。1つの非限定的な例では、一方のアンプリコンは所望のDNA配列に由来することができ、他方のアンプリコンはUCEアンプリコンとすることができる。一実施形態では、そのDNA配列は任意のヒトゲノムの配列又は他の配列に由来することができる。用いることができる遺伝子の一例は、鎌状細胞遺伝子である。鎌状細胞遺伝子の配列の一例は、444bpフラグメントである。別の実施形態では、UCEアンプリコンは415bpUCEアンプリコンである。鎌状配列のための融解温度Tmは約84°Cであり、UCE配列の温度Tmは74°Cである。この非限定的な例では、両方のアンプリコンは、ヒトゲノムDNAを増幅することによって得られた。しかしながら、二重アンプリコン較正物システム内の両方のアンプリコンはヒトゲノムDNAを増幅することによって得られる必要はない。或る特定の実施形態では、上記の、鎌状遺伝子の444bpフラグメント及びUCEの415bpフラグメントに由来するアンプリコンを用いる二重較正物質システムには或る特定の制約が存在する場合がある。第一に、2つの較正物が及ぶ範囲は、予想融解温度の全範囲に及ばない場合がある。第二に、そのアンプリコンはゲノムDNAに由来し、それゆえ、潜在的には、後続の増幅反応にとって汚染物質源となる可能性がある。最後に、これらの較正物質の製造には、コリエールDNAバンクのようなDNAバンクから得られたヒトDNAからの増幅を必要とする場合がある。したがって、これらの較正物質は、材料源として製造又は保証するのが容易である材料を表さない場合がある。本発明の別の態様は、広い温度範囲及び合成配列に由来する2つ以上のアンプリコンを用いる二重アンプリコン較正物システムである。好ましい実施形態では、それらのアンプリコンは、容易に生成することができるような合成配列から設計される。幾つかの実施形態では、ヒトゲノムDNA内に存在しないような配列が選択される。他の実施形態では、哺乳類ゲノムDNA内に存在しないような配列が選択される。更なる実施形態では、脊椎動物DNA内に存在しないような配列が選択される。幾つかの実施形態では、その配列は、5°Cより広く、好ましくは10°Cよりも広く、更に好ましくは20°Cより広いTM範囲を有するアンプリコンを生成するように選択される。一実施形態では、第1のアンプリコンはRFCAL-100と呼ばれる。別の実施形態では、第2のアンプリコンはRFCAL-200と呼ばれる。或る特定の実施形態では、2つ以上のアンプリコンがベクター内でクローニングされる。ウイルス等の、当業者に既知の任意の適切なベクターを用いることができる。非限定的な較正物質例ゲノムUCE配列マイクロ流体デバイスのマイクロチャネルの温度を較正するために用いることができる較正物質の非限定的な例は、207塩基対を有するUCE配列である。開発時に、207bpUCE配列は、bioscienceworldのウェブサイトwwwbioscienceworldcaを用いて見つけられた。その後、その配列は、国立バイオテクノロジー情報センターNCBIBLASTBasicLocalAlignmentToolデータベースに対して照合された。207bp配列配列番号:1はヒト染色体17配列ジェンバンク受入番号AF287967.1の一部であることがわかった。プライマー3ソフトウェアを用いて、1組の2つのプライマーが設計され配列番号:2及び配列番号:3、それらのプライマーは71bp産物配列番号:4を増幅した。UCEプライマー及び異なるゲノムDNAサンプルを用いる実験によれば、全てのサンプルが増幅され、増幅された全てのサンプルが同じTmを示すことがわかった。この実験は、ロシュライトサイクラー商標480LC480サイクラープラットフォーム及びマイクロ流体機器を用いて何度か行われた。実験結果が図4及び図5に示される。図4及び図5は、温度に対する蛍光の導関数を温度の関数として示す例えば、dF/dT対Tを示す、いわゆる導関数プロットを示す。図4は、マイクロ流体機器においてUCEプライマーを用いて生成された増幅産物の熱融解曲線を示しており、3つの異なるゲノムDNAを示す。図5は、LC480サイクラープラットフォームにおいてUCEプライマーを用いて生成された増幅産物の熱融解曲線を示しており、7つの異なるゲノムDNAを示す。その実験結果は、融解温度TMに変動がなかったことを実証する。したがって、その実験によれば、UCEプライマーを用いて、UCEアンプリコンを増幅することができ、それが温度較正物質としての役割を果たすことがわかる。第2の実験も行われた。第2の実験では、対象となる核酸を増幅する一対のプライマーがデバイスに装填され、その後、UCEプライマーがデバイスに装填された。実験はマイクロ流体機器を用いて実行され、その結果が図6及び図7に示される。図6は、調査対象のプライマーの3つの異なる遺伝子型すなわち、野生遺伝子型Wt、ホモ接合遺伝子型Hm及びヘテロ接合遺伝子型Htを示す熱融解曲線を示す。図7は、UCEプライマーのUCEアンプリコンを示す熱融解曲線を示す。UCEプライマーのアンプリコンが融解温度TMの変動を示す場合には、調査対象のプライマーの増幅産物も融解温度TMの変動を示す場合がある。これは、DNAサンプル間の不可能な遺伝子型分化を示す場合がある。DNAサンプル間の不可能な遺伝子型分化を示す結果の一例が図8及び図9に示される。図8は、3つの異なる遺伝子型すなわち、野生遺伝子型Wt、ホモ接合遺伝子型Hm及びヘテロ接合遺伝子型Htを示す熱融解曲線を示す。図9は、UCEプライマーのUCEアンプリコンを示す熱融解曲線を示す。図9に示されるように、UCEプライマーのUCEアンプリコンの融解温度TMは変動を示し、図8に示されるように、対象となる核酸のアンプリコンの融解温度は同じ変動を示した。UCEプライマーは対象となる核酸の増幅と干渉せず、温度較正物としても役立つことを実証するために、以下の実験が実行された。UCEプライマー及び対象となる核酸のためのプライマーが一緒に反応混合物成分すなわち、試薬を加えられ、96ウェルプレートのウェルに装填された。LC480サイクラープラットフォームを用いて、PCR増幅及び融解分析が実行された。その結果が図10及び図11に示される。図10は、調査対象のプライマーに加えられたUCEアンプリコンを示す熱融解曲線を示す。図11は、対象となる核酸のアンプリコンを示す熱融解曲線を示す。図10及び図11に示される結果は、UCEプライマーが対象となる核酸の増幅に影響を及ぼさないことを裏付ける。言い換えると、UCEプライマーが対象となる核酸のプライマーを加えられたか否かにかかわらず、対象となる核酸のアンプリコンの場合に同じ融解温度が得られた。また、その結果は、UCEアンプリコンが温度較正物として使用できることも示す。上記で論じられた実験によって示されるように、幾つかの実施形態では、2つ以上のUCEプライマーを用いて、マイクロ流体デバイス又はチップ内のマイクロ流体チャネル内で温度を調べる簡単で、迅速で、かつ信頼性のある手順を提供することができる。また、実験によれば、幾つかの実施形態では、チップ内の調査対象のプライマーの後又は前に追加されるときに、2つ以上のUCEプライマーが温度較正物として良好に機能できることがわかった。この場合、UCEアンプリコンを用いて、マイクロ流体チャネル温度が理想的な温度設定値に達したか否かを判断することができ、それゆえ、UCEアンプリコンを用いてPCR実行を検証することができる。実験によれば、LC480サイクラープラットフォームのような標準的なPCR機器において用いられるときに、2つの以上のUCEプライマーが同じように良好に機能することが更にわかる。幾つかの実施形態では、UCEプライマーは調査対象の2つ以上のプライマーを加えられる場合があり、調査対象のプライマーの増幅産物と干渉しない場合がある。他の実施形態では、UCEプライマーは、行われた増幅を検証する陽性対照としての役割を果たすことができる。較正物質のための熱応答プロファイル、例えば、融解曲線を得ることは、ゲノムDNAの増幅を妨げることになる、試薬の汚染又は他の異常が生じていないことを実証する陽性対照としての役割を果たすことができる。合成較正物マイクロ流体デバイスのマイクロチャネルの温度を較正するために用いることができる1つ又は複数のアンプリコンの非限定的な実施形態では、1つ又は複数のアンプリコンのうちの1つ又は複数は合成アンプリコンとすることができる。例示的な実施形態では、本発明は二重アンプリコン較正物システムを提供する。その二重アンプリコン較正物システムを用いて、較正物性能及び生成を改善することができる。非限定的な例では、高分解能DNA融解機器において二重アンプリコン較正物システムを用いて、較正物性能及び生成を改善することができる。しかしながら、これは不可欠ではなく、その二重アンプリコン較正物システムは他のシステムにおいて用いることができる。幾つかの実施形態では、二重アンプリコン較正物システムは、二重システムのために設計された個々の較正物を有することができる。一実施形態では、二重アンプリコン較正物システムの試験が、LC480サイクリングプラットフォーム上で実行され、二重較正物システムの実現可能な調製の非限定的な例が開発された。1つの非限定的な例では、マイクロ流体デバイス内のマイクロ流体チャネルの温度を較正するために用いることができる2つのアンプリコンは、本明細書において配列A及び配列Bと呼ばれる。配列Aは長さが100塩基対配列番号:5であり、配列Bは長さが200塩基対配列番号:6である。特定の例が記述されるが、本発明の実施形態において、異なる配列、及び異なる長さを有する配列を用いることもできる。本発明の実施形態による二重較正物の非限定的な一例の開発では、融解温度TMに具体的に目標設定できるようにするために、2つの較正点のための合成DNA構成物が使用された。DNAテンプレートとして機能するように、2つのDNAすなわち、配列A及び配列B配列を生成した。それらの配列は、httpwwwfacultyucredummadurorandomhtmにおいて市販されるRandomDNASequenceGeneratorと呼ばれるウェブベースのプログラムを用いて生成された。2つの配列が、NCBIからのBLASTプログラム、httpblastncbinlmnihgovBlastcgiPAGETYPEBlastSearchPROGDEFblastnBLASTPROGDEFmegaBlastBLASTSPECblast2seqを用いて類似度を調べられた。データベース上ののいずれの配列とも類似性が見いだされなかった後に、プライマーは、較正物配列の最後の20又は22塩基対に絞り込まれた。配列Aのためのプライマーは配列番号:7及び配列番号:8において記述される配列である。配列Bのためのプライマーは配列番号:9及び配列番号:10において記述される配列である。プライマー特異性を調べるために、カリフォルニア大学サンタクルーズ校UCSCゲノムブラウザーhttpgenomeucsceducgibinhgPcrcommandstartにおいて利用可能が使用された。配列A及び配列Bのみを増幅するためにプライマーが検証された。この準備作業が終了した後に、両方の配列を得るために、GeneOracleクローンサービスを用いて配列が構成され、注文された。各構成物はpGOv4ベクター内に別々にクローニングされた。pGOv4はpUC系ベクターであり、そのベクターはアンピシリン及びカナマイシン耐性である。pGOv4マップが図12に示される。それらの配列がベクターに組み込まれた後に、そのベクターは、配列Aを含むRFCAL-100及び配列Bを含むRFCAL-200であった。RFCAL-100のための配列が配列番号:11において示されており、RFCAL-200のための配列が配列番号:12において示される。全てのプライマーが、Invitrogen社から200nM単位で注文され、高性能液体クロマトグラフィーHPLCで精製された。しかしながら、異なる精製及び/又は異なる供給業者からのプライマーを用いることもできる。その後、プライマーは100μMのPCR清浄水内に再懸濁された。ゲノムDNAが対照DNAとして使用された。例えば、ParagonDX社からのVKORCI野生型を対照DNAとして用いることができる。以下の表は、試薬混合物及び試薬カタログ番号に関する更なる詳細を提供する。上記の試薬は、DNA試薬混合物、Taqポリメラーゼ試薬混合物及びプライマー試薬混合物を作製するために以下の表において示される、以下の濃度において使用された。この例では、96ウェルプレートのウェル内に3つ全ての試薬混合物を合わせた合計20μLが加えられた。各プライマーは2つ組に加えられた。各試薬混合物の体積及びパーセンテージが以下の表に示される。3つ全ての試薬群が研究所内の貯蔵供給源から注文された。その後、DNA及びプライマーがそれぞれの混合物に加えられた。この例では、プライマーは2つ組に加えられた。陽性対照例えば、VKORC1プライマー対照DNAVKORC1及び陰性対照例えば、VKORC1プライマー2xCULSバッファーが加えられた。試薬がロシュLC480サイクリングプラットフォーム上で増幅された。使用されたPCRプロトコルが以下の表に示される。両方のプライマーセットの場合に38°Cのアニーリング温度が良好に機能した。図13は、LC480サイクラープラットフォームにおける較正物の産物増幅を示すグラフである。図13に示されるように、サンプルは増幅に成功した。RFCAL-200DNAが非常に強い蛍光値を示した。RFCAL-100は配列サイズ及びGC含有量に起因して予想通りに、RFCAL-200と比べて低い蛍光値を示した。VKORC1がPCR陽性対照として使用された。両方のDNAサンプルの場合の融解ピークを得るのにも成功した。いずれも単一の明確なピークを与え、それらのピークは互いから離れていた。RFCAL-100は約70°Cの融解温度TMを有し、RFCAL-200は約90°Cの融解温度TMを有する。図14は、LC480サイクラープラットフォーム上の較正物融解の増幅産物を示す熱融解曲線を示す。その後、目標サイズを確認するために、PCR産物の一定分量がAligentBioanalyzer2100マイクロ流体ベース分析プラットフォームを用いて調べられた。図15は、RFCAL-100の分析結果を示しており、図16はRFCAL-200の結果を示す。RFCAL-100及びRFCAL-200PCR産物のための予想バンドサイズ及び観測バンドサイズが以下に示される。好ましい実施形態では、RFCAL-100はRFCAL-200よりも低い蛍光値を与えるので、RFCAL-100及びRFCAL-200は2:1の比で加えられる。そうすることによって、RFCAL-100及びRFCAL-200は、最終的な調製において概ね同等の蛍光を達成する。図17は、RFCAL-100対RFCAL-200の比が2:1において調製された較正物を用いるIdahoTechnologiesHR-1高分解能融解装置におけるRFCAL-100及びRFCAL-200の場合のRFCAL融解プロファイルを示す。図17に示されるように、RFCAL-100及びRFCAL-200の蛍光値はこれらの比において実質的に同じである。しかしながら、RFCAL-100及びRFCAL-200は概ね同等の蛍光を達成する必要はなく、他の比が用いられる場合もある。例示的な実施形態では、2つの構成物及びそれぞれのプライマーが所望のように機能した。それらのプライマーは、予想される産物の増幅に成功したことを実証することができた。それらの増幅産物はそれぞれ融解時に高い蛍光値を有する単一のピークを示した。Bioanalyzerマイクロ流体ベース分析プラットフォーム上の予想されるフラグメントサイズの実証によって、産物特異性が確認された。それゆえ、その性能を考えると、RFCAL-100及びRFCAL-200は温度較正のために有用である。UCE及び合成較正物質の具体的な例がこれまで説明されてきたが、本発明の態様によれば、他の較正物質を用いることもできる。本発明の実施形態が添付の図面を参照しながら十分に説明されてきた。本発明はこれらの好ましい実施形態に基づいて説明されてきたが、本発明の趣旨及び範囲内で、上記の実施形態に対して或る特定の変更、変形を加えることができ、かつ代替の構成を形成できることは当業者には明らかであろう。非限定的な温度較正/補正例上記で言及されたように、加熱検知素子の抵抗測定値Rから測定された温度Tmesへの計算は一次式の形をとることができる。項k1又はk0に誤差があると、真の温度に対して測定温度に偏り又はシフトが生じることになる。較正物質すなわち、既知の、又は予想融解温度を有する陽性対照DNAを用いて、温度補償を計算し、測定温度を真の値の近くにシフトすることができる。補間を用いる単一ピーク温度較正較正物質すなわち、陽性対照として単一ピークアンプリコン例えば、207bpUCE配列に由来するが用いられるとき、特定の融解の全ての測定温度の範囲に対して単一の温度シフト切片k0における補正を適用することができる。一実施形態では、このシフト補正値k’0は以下のように未知のDNAサンプルに適用することができる。第一に、UCE融解前のピーク温度TmpreUCE及びUCE融解後のピーク温度TmpostUCEが得られる。第二に、2つのUCEすなわち、較正物質間で実行されるアッセイ融解の調整済み温度が線形補間によって計算される。UCEアンプリコン融解前のピーク温度TmpreUCE及びUCEアンプリコン融解後のピーク温度TmpostUCEは、例えば、図3Aに示されるマイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネルの温度を較正するためのプロセス300aのステップ304において、又は図3Bに示される熱融解の温度を較正するためのプロセス300bのステップ316において求めることができる。他の実施形態では、UCEアンプリコン融解前のピーク温度TmpreUCE及びUCEアンプリコン融解後のピーク温度TmpostUCEは、任意の適切な方法を用いて求めることができる。例えば、1つの適切な手法は、i所定の窓サイズ、多項式及び温度分解能例えば、それぞれ2°C、2次及び0.01°Cを有するサビツキーゴーレイフィルターを用いて、UCEアンプリコン融解前及びUCEアンプリコン融解後の負の導関数を得て、iiUCEアンプリコン融解前及びUCEアンプリコン融解後の最大の負の導関数における温度を見つけることによって、TmpreUCE及びTmpostUCEを求めるピークピッキング手法である。ここで、UCEアンプリコン融解前及びUCEアンプリコン融解後の最大の負の導関数における温度は、TmpreUCE及びTmpostUCEである。別の実施形態では、UCEアンプリコン融解前のピーク温度TmpreUCE及びUCEアンプリコン融解後のピーク温度TmpostUCEは、最大相関手法を用いて求めることができる。最大相関手法では、較正された機器からの較正物質すなわち、陽性対照の融解曲線例えば、図21Aにおいて実線で示されるの導関数を、1つ又は複数の後続の実験からの較正物質の融解曲線例えば、図21Aにおいて点線で示されるの導関数がシフトされる基準として用いることによって、TmpreUCE及びTmpostUCEが求められる。したがって、実験較正物質のためのyxは種々のdxだけシフトされる場合がある。このようにして、図21Aに示されるように、基準較正物質例えば、図21Aにおいて実線で示されるの負の導関数を、後続の実験のシフトされた較正物質y’xに対して相関をとることができる。最適なシフトは、図21Bに示される相関係数を最大にするdxによって与えることができる。図21Aにおいて、最適なシフトの結果として破線が生成される。その後、基準UCEのTmから最適なdxを減算することによって、TmpreUCE及びTmpostUCEを計算することができる。Tmのシフトを計算するこの最大相関手法は、ピーク選択肢をピッキングするよりも雑音に対してロバストとすることができるが、いずれの方法も用いることができる。TmpreUCE及びTmpostUCEが得られると、2つのUCE間において実行されるアッセイ溶解の調整済み温度を、以下のような線形補間によって計算することができる。したがって、シフト補正値k’0の計算は以下の通りである。及び上記の式において、TmreferenceUCEは文献から引用されるか、又は較正済みの機器から測定されたUCEの真の既知のTmであり、TAssayは実験機器によって測定されたアッセイのアッセイ温度ベクトル、又はTmであることに留意されたい。式8を用いるシフト補正値の計算は、例えば、図3Aに示されるマイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネルの温度を較正するためのプロセス300aのステップ306において、又は図3Bに示される熱融解の温度を較正するためのプロセス300bのステップ318において行うことができる。式9に示される調整済み温度の計算は、例えば、図3Aに示されるマイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネルの温度を較正するためのプロセス300aのステップ308において、又は図3Bに示される熱融解の温度を較正するためのプロセス300bのステップ320において行うことができる。図22Aは、7つの異なるチャネルから収集された同じ遺伝子型のアッセイの融解温度Tm白抜きの丸と、織り交ぜられたUCE線で結ばれた点とを示すプロットである。図22Bは、7チャネルにわたる同時に融解したアッセイの標準偏差を示すプロットである。図22Cは、直前のUCE及び直後のUCEを用いて補間されたUCE融解温度Tmに対するアッセイの融解温度の変化ΔTmを示すプロットである。図22Dは、図22Cに示される融解温度の変化ΔTmの対応する標準偏差を示すプロットである。図22Eは、最初のUCE及び最後のUCEのみを用いて補間されたUCETmに対するアッセイの融解温度の変化ΔTmを示すプロットである。図22Fは、図22Eに示されるアッセイの融解温度の変化ΔTmの対応する標準偏差を示すプロットである。図22A~図22Fに示されるように、特定のチャネルの温度にドリフトがあるときUCEのドリフトするTmによって示される、又はチャネル間で測定温度のシフトがある場合には、事前UCE及び事後UCEの補間されたTmに対するアッセイの調整済み測定温度を計算することによって、チャネルにわたるアッセイの同じ遺伝子型のTmの標準偏差を小さくするのを助けることができる。このようにして、事前UCE及び事後UCEの補間されたTmに対するアッセイの調整済み測定温度を計算することによって、遺伝子型同定の精度を改善することができる。上記の単一較正物質/ピークを用いる例示的な方法では、ゲノムUCE例えば、上記の207bpUCE配列を使用する必要はない。代替的には、合成配列例えば、RFCAL-100又はRFCAL-200を較正物質として用いることができる。二重ピーク温度較正二重ピーク較正例えば、RFCAL-100及びRFCAL-200を含む較正物質が陽性対照として用いられるとき、特定の融解の全ての測定温度の範囲に対して、温度スケーリング及びシフト勾配k1及び切片k0の補正を適用することができる。二重ピーク温度較正の説明及び関連する式は、便宜上、用語UCEを使用する。この用語が任意の較正物質を指していることは理解されたい。このため、二重ピーク陽性対照を用いることによって、測定温度値を更に正確に補償できるようになる。一実施形態では、このスケール補正k’1及びシフト補正値k’0を以下のように未知のDNAサンプルに適用することができる。第一に、実験二重ピーク較正物質例えば、UCE及び/又はゲノム及び/又は合成融解の低いピーク温度TmUCElow及び高いピーク温度TmUCEhighが得られる。第二に、実験陽性対照後に実行されるアッセイ融解の調整済み温度が得られる。実験二重ピーク較正物質例えば、UCEの低いピーク温度及び高いピーク温度は、例えば、図3Aに示されるマイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネルの温度を較正するためのプロセス300aのステップ304において、又は図3Bに示される熱融解の温度を較正するためのプロセス300bのステップ316において得ることができる。実験二重ピーク較正物質例えば、UCE融解の低いピーク温度TmUCElow及び高いピーク温度TmUCEhighは任意の適切な手法を用いて得ることができる。例えば、1つの適切な手法は、i所定の窓サイズ、多項式及び温度分解能例えば、それぞれ2°C、2次及び0.01°Cを有するサビツキーゴーレイフィルターを用いることによって、実験較正物質の融解曲線の導関数を得て、ii二重ピーク較正物質の最大の負の導関数における温度低及び高を見つける。ここで、二重ピーク較正物質の最大の負の導関数における温度低及び高は、TmpreUCE及びTmpostUCEである。実験二重ピーク較正物質融解の低いピーク温度TmUCElow及び高いピーク温度TmUCEhighを得るための別の適切な手法は、較正された機器から得られた二重ピーク較正物質すなわち、陽性対照のための融解曲線の導関数を基準として用いることができる。低い温度ピーク及び高い温度ピークは融解曲線の基準導関数から見いだすことができTmUCEreferencelow及びTmUCEreferencehigh、窓例えば、±1.5°Cは各ピークの周囲に配置することができる図23Aの破線の線分によって示される。基準導関数の左側ピーク約70°Cを中心にした図23Aの破線部分の負の導関数を、図23Bに示される実験較正物質の左側ピークの負の導関数に対して相互相関をとることができる。2つの最も高い相互相関点を得ることができ、第1の左側の最も高い相互相関点の温度はTmUCElowと見なすことができる。基準導関数の右側ピーク約90°Cを中心にした図23Aの破線部分を、図23Bに示される実験較正物質の右側ピークの負の導関数に対して相互相関をとることができる。2つの最も高い相互相関点を求めることができ、第2の右側の最も高い相互相関点の温度はTmUCEhighと見なすことができる。TmUCElow及びTmUCEhighが得られると、実験陽性対照の前又は後に実行されるアッセイ融解の調整済み温度は、以下のように、傾き補正因子及び切片補正因子を計算することによって得ることができる。傾き補正因子及び切片補正因子は、例えば、図3Aに示されるマイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネルの温度を較正するためのプロセス300aのステップ306において、又は図3Bに示される熱融解の温度を較正するためのプロセス300bのステップ318において計算することができる。その後、以下のように、傾き補正因子及び切片補正因子から、調整済み温度を計算することができる。代替的には、以下のように、これらの補正因子を抵抗値にリアルタイムに適用して、再較正済みの温度読み値を得ることができる。式12又は式13に示される調整済み温度の計算は、例えば、図3Aに示されるマイクロ流体デバイスのマイクロ流体チャネルの温度を較正するためのプロセス300aのステップ308において、又は図3Bに示される熱融解の温度を較正するためのプロセス300bのステップ320において行うことができる。図23Cに示されるように、較正外れ二重ピーク較正物質例えば、図23Bに示される二重ピーク融解曲線を生成する較正物質を用いるとき、上記の再較正手順は、その低いピーク及び高いピークを、較正物の基準融解例えば、図23Aに示される基準融解からの低いピーク及び高いピークと整列させることができる。図23Dに示されるように、独立した較正検査融解の後続の融解は、この再較正手順が後続の融解において良好に機能することを示す。図23Eは、二重ピーク較正物質を用いる自動較正手順の機能を示す概略図である。上記の温度較正例に示されるように、既知の、又は予想融解温度を有し、単一又は二重のピーク融解曲線を生成する較正物質すなわち、陽性対照DNAを用いて、機器内の較正ドリフトを断続的に相殺することができる。"