式の化合物又はその医薬として許容し得る塩若しくは溶媒和物を含む医薬組成物式中、HetBは、O、N、又はSから選択される1~3個のヘテロ原子を含む5員の複素環系を表し、式中、前記環系は1個以上のさらなる環に縮合して、最大4個の環を含む多環系を形成しZは、結合、C、2、O、S、CH2O、2O、NR6b、NC、N2、N3、CH2N2、NCO、CH2NHCO2、NCOCH2、N、NCH、C、C、CHCCO、CH、NCH、NC、CCH、NHCOC、C、CHCHCON、CHCCONHCH2、CHCNHCO、CHCCOOCH2、CSSCH2、NHCSNH、NHCSNHCH2、NHCSNH2、CH2NCH2、SC、S2O、SO2、NHSO2、CH2NHSO2、CO、CH2CO、2CO、OCH2CO、2CO、COO、COOCCO、CHCCONHCH2、COCH2NCO、COCH2CCH2CO、COCH2NCH2、CONHNC、SCH2CO、SCH2CON、SCH2CONCH2、SO2NCCONH、SO2NCHCONHCH2、CHC、CH2C、CCH2、CCH2、CHNHCOCH2、CONCH2、CCONCH2、CONCH2CH2、CONCH2CH2CONHCH2、CONHCCH、CONHCHCH2、CH2CCH2S、OCH2CONH、CH2NCOCH2O、NCOCH2O、C、C、CNNCH、CNNCH、NHCOCH2N、NHNC、NHNCCO、NHCNH2、CNNCH、NHCNCONH、CCONHCH2、CHCCONH、CHNHCO、又はCHを表し、式中、Zの前記アリール又はヘテロアリール基は、1個以上のハロゲン、C16アルキル、C16アルコキシ、NO2、又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよくR5bは、水素、C16アルキル、又はシアノを表しR6bは、水素、C16アルキル、C16アルコキシ、シアノ、COOH、COOC16アルキル、C38シクロアルキル、CH2C38シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、C16アルキレンアリール、COアリール、OCOヘテロアリール、COヘテロアリール、又はCヘテロアリールを表し、式中、R6bの前記アリール基は、1個以上のハロゲン又はC16アルコキシ基により任意に置換されていてよくR7b及びR8bは、独立に、水素又はC16アルキルを表しR1bは、アリール、C38シクロアルキル、単環式若しくは二環式ヘテロシクリル、又は単環式若しくは二環式ヘテロアリール環系を表し、式中、R1bは、1個以上のR4b基により置換されていてよくR4bは、ハロゲン、C16アルキル、C16アルケニル、C16アルキニル、C38シクロアルキル、ハロC16アルキル、ヒドロキシル、C16アルコキシ、OC16アルケニル、ハロC16アルコキシ、COOH、COC16アルキル、COOC16アルキル、CONH2、CH2CONH2、NHC16アルキル、NHC26アルケニル、NHCOC16アルキル、CONHC16アルキル、OCH2CONHC16アルキル、CH2CH2CONHC16アルキル、SC16アルキル、SOC16アルキル、SO2C16アルキル、SO2NH2、SO2NHC16アルキル、SCH2COC26アルケニル、SO2OH、アミノ、シアノ、NO2、O、CONH2OMe、NHC38シクロアルキル、CH2CONHC38シクロアルキル、COヘテロシクリル、COヘテロアリール、COO2ヘテロシクリル、CH2アリール、OCH2アリール、OCH2ヘテロアリール、CH2OCOアリール、Oアリール、NHCOアリール、NHCOヘテロアリール、NHCOCH2アリール、NHアリール、アリール、又はヘテロアリール基を表し、式中、R4bの前記アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリール基は、1個以上のハロゲン、C16アルキル、C16アルコキシ、S、又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよく、式中、R4bの前記C16アルキル又はC26アルケニル基は、1個以上のヒドロキシル、アミノ、シアノ、C16アルコキシ、CONH2、又はCOOC16アルキル基により任意に置換されていてよくmは、0~3の整数を表しR2bは、ハロゲン、ハロC16アルキル、C16アルキル、C38シクロアルキル、ヒドロキシル、C16アルコキシ、SC16アルキル、CH2SC16アルキル、SC26アルキニル、アミノ、シアノ、NO2、O、S、SO2C16アルキル、CONH2、COC16アルキル、COOC16アルキル、NHC16アルキル、NHCOC16アルキル、NHCOCHCHCH2N2、C16アルキル、CONHC16アルキル、CONHCHCOOH、SCH2CON2、NH2OH、NH3OH、NHCHCH2OH、CONH3OH、CH2、又はSCH2CONHCONHC16アルキルを表し、式中R2bの前記C16アルキル基は、1個以上のシアノ又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよく但し、該化合物が、化合物番号54、373、458、496、585、590、594、596597、601602、649、703、778、877、891、910、912、926、及び962963以外であることを条件とする。HetBが、O、N、又はSから選択される1~3個のヘテロ原子を含む5員の複素環系であり、式中、前記環系が6員環に縮合して、二環式複素環系を形成しZが、結合、C、O、S、CH2O、NC、N2、N3、NCO、NCOCH2、NCH、CH、NCH、CCH、C、SO2、CH2NHSO2、CO、OCH2CO、SO2NCCONH、SO2NCHCONHCH2、CHC、CCONCH2、OCH2CONH、NCOCH2O、C、CNNCH、NHCOCH2N、NHNC、NHCNH2、CCONHCH2、又はCHNHCOを表し、式中、Zの前記アリール又はヘテロアリール基が、1個以上のハロゲン、C16アルキル、C16アルコキシ、NO2、又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよくR5bが水素を表しR6bが、水素、メチル、C16アルコキシ、COOH、COアリール、OCOヘテロアリール、又はCOヘテロアリールを表し、式中、R6bの前記アリール基が、1個以上のハロゲン又はC16アルコキシ基により任意に置換されていてよくR7b及びR8bが、独立に、水素又はC16アルキルを表しR1bが、単環式アリール又はヘテロアリール環系を表し、式中、R1bが1個以上のR4b基により置換されていてよくR4bが、ハロゲン、ヒドロキシル、OC16アルケニル、COOC16アルキル、NHC16アルキル、SO2NH2、アミノ、シアノ、O、CH2CONHC38シクロアルキル、CH2アリール、OCH2ヘテロアリール、Oアリール、NHCOアリール、NHアリール、又はヘテロアリール基を表し、式中、R4bの前記アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリール基が、1個以上のハロゲン、C16アルキル、C16アルコキシ、S、又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよく、式中、R4bの前記C16アルキル又はC26アルケニル基が、1個以上のヒドロキシル、アミノ、シアノ、C16アルコキシ、CONH2、又はCOOC16アルキル基により任意に置換されていてよくmが、0~2の整数を表しかつR2bが、ハロゲン、ハロC16アルキル、C16アルキル、C38シクロアルキル、ヒドロキシル、C16アルコキシ、SC16アルキル、アミノ、シアノ、NO2、O、CONH2、COC16アルキル、COOC16アルキル、C16アルキル、CONHC16アルキル、又はCONHCHCOOHを表し、式中、R2bの前記C16アルキル基が、1個以上のシアノ又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよい、請求項1記載の医薬組成物。HetBが、O、N、又はSから選択される1~3個のヘテロ原子を含む5員の複素環系を表し、式中、前記環系が6員環に縮合して、二環式複素環系を形成する、請求項1又は請求項2記載の医薬組成物。HetBが、ベンゾオキサゾリル、インドリル、又はインドリジニルを表す、請求項3記載の医薬組成物。R1bが、単環式アリール又はヘテロアリール環系を表し、式中、R1bが、1個以上のR4b基により置換されていてよい、請求項1~4のいずれか一項記載の医薬組成物。R1bが、1個以上のR4b基により任意に置換されているフェニルなどの単環式アリール基、又は1個以上のR4b基により任意に置換されているチエニル、ピリミジニル、又はピラゾリニルなどの単環式ヘテロアリール基を表す、請求項5記載の医薬組成物。R4bが、ハロゲン、ヒドロキシル、OC16アルケニル、COOC16アルキル、NHC16アルキル、SO2NH2、アミノ、シアノ、O、CH2CONHC38シクロアルキル、CH2アリール、OCH2ヘテロアリール、Oアリール、NHCOアリール、NHアリール、又はヘテロアリール基を表し、式中、R4bの前記アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリール基が、1個以上のハロゲン、C16アルキル、C16アルコキシ、S、又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよく、式中、R4bの前記C16アルキル又はC26アルケニル基が、1個以上のヒドロキシル、アミノ、シアノ、C16アルコキシ、CONH2、又はCOOC16アルキル基により任意に置換されていてよい、請求項1~6のいずれか一項記載の医薬組成物。R4bが、ハロゲン、アミノ、又はヘテロアリールを表す、請求項7記載の医薬組成物。Zが、結合、C、O、S、CH2O、NC、N2、N3、NCO、NCOCH2、NCH、CH、NCH、CCH、C、SO2、CH2NHSO2、CO、OCH2CO、SO2NCCONH、SO2NCHCONHCH2、CHC、CCONCH2、OCH2CONH、NCOCH2O、C、CNNCH、NHCOCH2N、NHNC、NHCNH2、CCONHCH2、又はCHNHCOを表し、式中、Zの前記アリール又はヘテロアリール基が、1個以上のハロゲン、C16アルキル、C16アルコキシ、NO2、又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよい、請求項1~8のいずれか一項記載の医薬組成物。Zが結合又はCOを表す、請求項9記載の医薬組成物。mが、0又は2などの0~2の整数を表す、請求項1~10のいずれか一項記載の医薬組成物。R2bが、ハロゲン、ハロC16アルキル、C16アルキル、C38シクロアルキル、ヒドロキシル、C16アルコキシ、SC16アルキル、アミノ、シアノ、NO2、O、CONH2、COC16アルキル、COOC16アルキル、C16アルキル、CONHC16アルキル、又はCONHCHCOOHを表し、式中、R2bの前記C16アルキル基が、1個以上のシアノ又はヒドロキシル基により任意に置換されていてよい、請求項1~11のいずれか一項記載の医薬組成物。R2bがアミノ又はCONH2を表す、請求項12記載の医薬組成物。式の化合物が、本明細書に記載される化合物のいずれか又はその医薬として許容し得る塩若しくは溶媒和物から選択される、請求項1記載の医薬組成物。式の化合物が、化合物54ピリミジン2アミン231Hピラゾール4イル13ベンゾオキサゾール2アミノ3カルボニルインドリジン1カルボキサミド及び2アミノ1カルボニル1Hインドール3カルボキサミドのいずれか又はその医薬として許容し得る塩若しくは溶媒和物から選択される、請求項14記載の医薬組成物。療法に使用するための、請求項1~15のいずれか一項記載の式の化合物。タウオパチーなどの神経変性疾患の治療におけるカゼインキナーゼデルタ阻害剤として使用するための、請求項1~15のいずれか一項記載の式の化合物。前記タウオパチーが、アルツハイマー病、第17番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、ピック病、大脳皮質基底核変性症、多系統萎縮症、鉄蓄積を伴う神経基底変性、1型、嗜銀顆粒性認知症、ダウン症候群、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ボクサー認知症、ゲルストマンシュトロイスラーシャインカー病、筋強直性ジストロフィー、ニーマンピック病C型、進行性皮質下グリオーシス、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、神経原線維変化型認知症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、クロイツフェルトヤコブ病、筋萎縮性側索硬化症パーキンソン認知症複合、神経原線維変化認知症を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、及びパーキンソン病から選択される、請求項17記載の化合物。前記タウオパチーがアルツハイマー病を含む、請求項17又は18記載の化合物。式の代表的な化合物には、以下に表される化合物がある。本発明のさらなる態様によると、タウオパチーなどの神経変性疾患の治療におけるカゼインキナーゼ1デルタ阻害剤として使用するための式の化合物が提供される。式の化合物は、市販されているか、或いは公知の合成手順により製造できるかのいずれかである。本発明のさらなる態様によると、タウオパチーなどの神経変性疾患の治療に使用するための、式の化合物を含む医薬組成物が提供される。本発明の医薬組成物は、上記物質の1種に加えて、医薬として許容し得る賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、又は当業者に周知である他の物質を含み得る。そのような物質は非毒性でなくてはならず、有効成分の効能に干渉してはいけない。担体又は他の物質の正確な性質は、投与経路、例えば、経口、静脈内、皮膚又は皮下、鼻腔内、筋肉内、腹腔内経路に依存し得る。経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、又は液剤形態でよい。錠剤は、ゼラチンなどの固体担体又は補助剤を含み得る。液体医薬組成物は、一般的に、水、石油、動物性又は植物性の油、鉱油、又は合成油などの液体担体を含む。生理食塩水、デキストロース、若しくは他の糖類溶液、又はエチレングリコール、プロピレングリコール、若しくはポリエチレングリコールなどのグリコールが含まれてよい。静脈内、皮膚、若しくは皮下の注射又は病気の部位での注射用には、有効成分は、発熱性物質が除去され、好適なpH、等張性、及び安定性を有する非経口的に許容し得る水溶液の形態にあるだろう。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、乳酸リンゲル液などの等張性ビヒクルを使用して好適な溶液を十分に製造することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤、及び又は他の添加剤を、必要に応じて含むこともできる。式の化合物はカゼインキナーゼ1デルタ阻害剤であると考えられる。式の特定の化合物は、5を超える、特に10を超える、より特に25を超える、さらにより特に50を超える、特に75を超える、例えば90を超えるなどの阻害活性を有する。そのような化合物は、タウオパチーなどの神経変性疾患の治療に有用になり得る。タウオパチーは、神経原線維濃縮体又はタウタンパク質の凝集により特徴付けられる病態である。タウオパチーは、当業者に公知である認識されたクラスの病態であり、アルツハイマー病、第17番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、ピック病、大脳皮質基底核変性症、多系統萎縮症、鉄蓄積を伴う神経基底変性、1型、嗜銀顆粒性認知症、ダウン症候群、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ボクサー認知症、ゲルストマンシュトロイスラーシャインカー病、筋強直性ジストロフィー、ニーマンピック病C型、進行性皮質下グリオーシス、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、神経原線維変化型認知症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、クロイツフェルトヤコブ病、筋萎縮性側索硬化症パーキンソン認知症複合、神経原線維変化認知症を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、及びパーキンソン病がある。細胞内のタウの沈着は、通常ニューロン又はグリアであり、線維状であるが、一般的には対照のヒトの脳内のタウのリン酸化のレベルに比較して過剰リン酸化状態にある。ADの場合、この過剰リン酸化されたタウは、PHFから誘導されるので、対らせん状細線維タウタウと呼ばれることが多い。一実施態様において、タウオパチーはアルツハイマー病を含む。本発明のさらなる態様によると、治療上有効な量の式IBの化合物を投与することを含む、タウオパチーなどの神経変性疾患を治療する方法が提供される。生物学的データCK1δ阻害アッセイ本発明の化合物は、US20100152157、EP1636375、又はHangerらの文献JBiolChem2822364523654に記載のアッセイプロトコルに従って、カゼインキナーゼ1デルタの阻害に関して試験できる。具体的には、アッセイは、下記のプロトコルに従って実施した。反応緩衝液基本反応緩衝液20mMHepes、10mMMgCl2、1mMEGTA、002Brij35、002mgmlBSA、01mMNa3VO4、2mMDTT、1DMSO要求される補足因子が、個別に各キナーゼ反応に加えられることに留意されたい。反応手順1示される基質を、上述の新しく調製した基本反応緩衝液に調製する2必要な補足因子を基質溶液に与える3示されるキナーゼを基質溶液に与え、穏やかに混合する4DMSO中の化合物をキナーゼ反応混合物に与える533PATPを反応混合物に与えて、反応を開始する6キナーゼ反応物を120分間室温でインキュベートする7反応物をP81イオン交換紙にスポットする8フィルターを075リン酸中で徹底的に洗浄するは、ヒトPHFタウにおける37のリン酸化部位を特定し、リコンビナントタウ及び種々の精製したキナーゼ調製物を使用してインビトロでこれらを再現できた。これらの研究は、特定の部位がCK1δによりユニークにリン酸化され、特定の他の部位がCK1δ及びCK1δと共に他のキナーゼを必要として、上流のリン酸化を与えて目標とする部位を第2のキナーゼが利用できるようにすることを特定した。そのため、候補化合物がCK1δ活性を選択的に阻害するのが、直接なのか、又は他のキナーゼのための下準備を阻害することによるのかを評価するために、いくつかの異なるスクリーンが開発された。これらのスクリーンの全般的な概念は、WO2005001114に与えられている。CK1δ媒介性リン酸化のレベルに対する推定上のCK1δ阻害剤の効果を測定するために、トランスジェニックヒト及び内因性ネズミ形態のタウにおける特異的部位でのホスフェート基占有率の定量的相対測定を与える選択反応モニタリングアッセイを実施した。PhosphoTauSRMV2アッセイは、総タウ及びタウ上の最も普通に研究される部位の5つでの相対リン酸化レベルを測定し、ProteomeSciences社から得た。V2アッセイにおける部位のどれもCK1δによりユニークにリン酸化されず、この方法により測定された、化合物誘発性のリン酸化の阻害が、GSK3b及び又はCDK5などの他のキナーゼの無差別な阻害により達成され得る可能性がある。この限界に対処するため、ProteomeSciences社は、総タウ及び、CK1δに加えて少なくとも1種の他のタウキナーゼによりインビトロでリン酸化されることが示された4部位に加えて、CK1δによりもっぱらリン酸化される2つの部位を測定するV3アッセイを開発した。表1は、扱われた種々の部位及びHangerらの文献に報告された候補タウキナーゼを列記する。は、タウオパチーのインビトロモデルの代表である。該細胞系は、ヒト神経芽細胞腫由来SHSY5Y細胞系を、2つの共通な疾病関連変異を運搬する全長ヒト2N4Rタウアイソフォームを含むベクターにより安定にトランスフェクトして作製される。最近の研究において、SHSY5YTMHT細胞系と、同じヒト導入遺伝子を運搬するトランスジェニックマウス系の両方が、アルツハイマー病を含む種々のヒトのタウオパチーにおいてリン酸化されることが先に示されている複数のエピトープで過剰リン酸化される高レベルのヒトのタウを発現することが示された。さらに、JNK阻害剤SP600125及びCK1阻害剤IC261を含む異なるキナーゼ阻害剤に曝されたSHSY5YTMHT細胞において、重要な病原部位でのタウのリン酸化のレベルは、標的キナーゼの公知の部位特異性に一致するパターンで低下した。このように、SHSY5YTMHT細胞系は、新規のタウキナーゼ阻害剤のスクリーニングに理想的に適している。SHSY5YTMHT細胞における化合物スクリーニングSHSY5YTMHT細胞を、培地中で2日間、80~90のコンフルエンシーまで維持する。次いで、2、3日ごとに培地を替えながら、10μMレチノイン酸を補った培地中で7日間分化させる。分化した細胞を、それぞれプレートあたり125×106及び8×105細胞の細胞密度で、6ウェルプレート及び96ウェルプレートに播種する。分化後第8日に、被験化合物、基準化合物、及びビヒクル対照を培地に加えた。6時間の化合物曝露の後、1プレートの細胞をMTTアッセイに付して、細胞生存率に対する被験化合物及び基準化合物の効果を評価する。残りのウェルを冷PBSで1回洗浄し、300μlのRIPA緩衝液新しく加えたプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤カクテルを補った、50mMTrispH74、1NonidentP40、025デオキシコール酸ナトリウム、150mMNaCl、1mMEDTA、1μMNaF、1μMオルトバナジウム酸ナトリウム、80mMグリセロホスフェートに採取する。細胞懸濁液を15mlチューブに移し、氷上での超音波処理によりさらに溶解させる。20μlのアリコートをタンパク質濃度の決定のために採取する。次いで、溶解物を急速冷凍し、発送まで80°Cで保存する。3回4回の技術的反復における2つの独立した実験を、表2に示されるとおり実施する。細胞生存率試験化合物活性を決定するために、全ての分子に対して潜在的な細胞毒性を補正することが必要である。培養物の生存率は、MTTアッセイにより決定する。このアッセイにより、黄色のMTTを濃紺のホルマザン結晶に還元する、ミトコンドリアデヒドロゲナーゼ活性の測定が可能である。この反応は生きている細胞においてのみ触媒されるので、このアッセイは細胞生存率の決定に利用される。MTT溶液を最終濃度05mgmlで各ウェルに加える。2時間後、MTT含有培地を吸引する。細胞を3SDS中で溶解させ、ホルマザン結晶をイソプロパノールHClに溶解させる。光学濃度をプレートリーダーにより波長570nmで測定する。細胞生存率を光学濃度として表す。値を、対照値のパーセントとして計算する。総タンパク質含量の定量決定具体的なタウリン酸化状態の評価の前に、各細胞溶解物における総タンパク質の濃度を、標準的なBCAアッセイを利用して決定する。簡単に言うと、20μlの細胞溶解物を、製造業者の指示に従ってアッセイに使用した。総タウ及びリン酸化されたタウの定量決定質量分析アッセイそれぞれ化合物324、化合物987、PF670462、及び関連するビヒクル対照により処理されたTMHT細胞系からの全細胞溶解物を、最初に1次元SDSPAGEに付し、タンパク質分画を精製した。濃縮ゲルを、BCAアッセイ結果に基づいておよそ100μg総タンパク質でロードする。総タンパク質含量が濃縮ゲル中で単一の分かれたバンドを形成するまでゲルを流す。次いで、各タンパク質バンドをゲルから切りだし、トリプシン又はAspNのいずれかで消化させ、それぞれPhosphoTauSRMアッセイV2又はV3を利用して分析する。各アッセイ方法は、三連四重極質量分析計を利用して前臨床物質におけるリン酸化を定量化する。SRM分析の前に、ホスホペプチド及び前臨床試料を、RPクロマトグラフィーにより、9分の勾配030ACNで分離した。各ペプチドの軽いバージョン及び重いバージョン並びにホスホペプチドを、最適化されたSレンズ値及び衝突エネルギー設定を使用して、いくつかのSRMトランジションによりモニターした。SRMLCピーク下の面積を使用して、重いペプチドスパイクのシグナルに対して、単一点基準として各細胞溶解物に存在する分析物の量を定量化した。曲線中の各点が100fmolの重いホスホペプチドによりスパイクされている軽いホスホペプチドの11点の較正曲線も作成して、アッセイの特性を決定した。特定されたタウ集団のそれぞれで、各タウホスホペプチドの内因性レベルを、その較正曲線に対して定量化した。LCSRM分析の前に、各タウ集団を、100fmolの重いホスホペプチド標準でスパイクした。データは全てPinpointソフトウェアを利用して処理し、結果をpgホスホペプチドμg総タンパク質で報告した。ウェスタンブロッティング処理された細胞の溶解物を、Laemmli緩衝液に調製し、10μgを10NuPAGEゲルの各レーンにロードした。クマシーブルー染料がゲルの底部1cm内になるまで、試料を流した。分離したタンパク質をニトロセルロースに移し、それぞれ総タウ及びホスホスレオニン231Antibody、SignalwayAntibody社製、アメリカ合衆国に特異的な抗体を使用してブロットを展開した。各場合で、結合した抗体をECLRabbitIgG、HRP結合を使用して検出した。結果SHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対する被験化合物及び基準化合物の効果細胞生存率を、MTTアッセイにより、分化したSHSY5YTMHT細胞において決定した。被験化合物及び基準化合物を、それぞれ005μM~10μM及び01μM~1μMの濃度範囲で適用した。6時間の処理と同時に細胞生存率を評価した。図1は、SHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対する化合物324の効果を示し、グラフはビヒクル対照VC、白いバーに対するでSHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対する化合物324の効果を表す。統計的有意性は、一元分散分析により決定した<005、<001、<0001により示す。データを、2つの独立した実験から、群の平均±SEMとして示す。図1から、化合物324が、用量依存的にSHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対して保護的効果を示すが、その効果が濃度10μMでのみ統計的に有意であったことが分かる。図2は、SHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対する化合物987の効果を示し、グラフはビヒクル対照VC、白いバーに対するでSHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対する化合物987の効果を表す。統計的有意性は、一元分散分析により決定した<005、<001、<0001により示す。データを、2つの独立した実験から、群の平均±SEMとして示す。図2から、化合物987が、低濃度範囲及び高濃度範囲において細胞生存率を低下させたことが分かる。1及び05μMの濃度では、細胞毒性効果は全く見られなかった。図3は、SHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対するPF670462の効果を示し、グラフはビヒクル対照VC、白いバーに対するでSHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対するPF670462の効果を表す。統計的有意性は、一元分散分析により決定した<005、<001、<0001により示す。データを、2つの独立した実験から、群の平均±SEMとして示す。図3から、基準化合物PF670462が、濃度05μMでのみSHSY5YTMHT細胞の細胞生存率に対する有意な保護効果を示したことが分かる。処理後のSHSY5YTMHT細胞のタンパク質決定処理されたSHSY5YTMHT細胞の細胞溶解物のタンパク質濃度を、標準的なBCAアッセイを利用して決定した。タンパク質の量は、全ての試料から二連で決定した。試料のタンパク質濃度は、150~350μgmlの範囲で12ウェルプレートあたり播種された細胞の量により予測される範囲であった。特異的なリン酸化部位に対する化合物処理効果の決定質量分析アッセイSHSY5YTMHT細胞溶解物の試験は、PhosphoTauSRMアッセイV2及びV3を利用して実施した。各部位でのリン酸化の相対レベルを、ビヒクル処理対照における比と比べる場合、化合物324及び化合物987により処理された細胞中のホスホペプチドのレベルは明確に低減した。セリン396でのリン酸化の低減を示す例を図4に示す。この図は、SHSY5YTMHT細胞中のセリン396のリン酸化に対するCK1d選択的化合物の質量分析的決定を示す。パネルAは、ビヒクル対照又は化合物324により処理された細胞を示し、パネルBは、ビヒクル対照又は化合物987により処理された細胞を示す。ビヒクル対照に曝露された細胞において、およそ83のタウがS396でリン酸化される。10μMの化合物324で処理すると、これが38に低下し、10μMの化合物987はpS396レベルを24に低下させた。これらの結果は、CK1d選択的試薬によるpS396の阻害を確認する。ウェスタンブロットアッセイビヒクル対照、化合物394、化合物987、及びPF670462により処理されたSHSY5YTMHT細胞溶解物における総タウ及びスレオニン231でリン酸化されたタウのレベルを、ウェスタンブロッティングにより定量化した。図5は、選択的CK1d阻害剤により処理されたSHSY5YTMHT細胞中のpT231及び総タウレベルのウェスタンブロット測定を示す。図5に示されるとおり、3種の化合物は全てタウタンパク質におけるpT231の検出可能なレベルを低下させた一方で、このエピトープはビヒクル処理細胞において強く存在していた。PF670462処理溶解物以外の調製物の間で総タウの検出可能なレベルに有意な差は無かったが、PF670462処理溶解物は、他のものよりわずかに少ない総タウを含むようであった。これらの結果は、CK1d選択的試薬によるpT231の阻害を確認する。