Lアミノ酸を生産する能力を有する腸内細菌科の細菌であって、pepA、pepB、及びpepD遺伝子からなる群より選択される1またはそれ以上の遺伝子の発現が弱化されるように改変された、細菌。前記遺伝子の発現が、遺伝子の不活化により弱化された、請求項1記載の細菌。エシェリヒアEscherichia属に属する、請求項1または2に記載の細菌。エシェリヒアコリEscherichiacoliである、請求項3に記載の細菌。パントエアPantoea属に属する、請求項1または2に記載の細菌。前記Lアミノ酸が、Lアルギニン、Lシトルリン、及びLリジンからなる群より選択される、請求項1~5のいずれか1項に記載の細菌。pepA、pepB、及びpepD遺伝子の発現が弱化されるように改変され、且つ、前記Lアミノ酸がLリジンである、請求項1~6のいずれか1項に記載の細菌。Lアミノ酸を製造する方法であって、請求項1~7のいずれか1項に記載の細菌を培地中で培養すること、およびLアミノ酸を培地から回収することを含む、方法。前記Lアミノ酸が、Lアルギニン、Lシトルリン、及びLリジンからなる群より選択される、請求項8に記載の方法。本発明を以下に詳細に説明する。1.細菌ここに開示する主題に基づく細菌は、Lアルギニン、Lシトルリン、又はLリジン等のLアミノ酸を生産する能力を有する腸内細菌科の細菌であって、アミノペプチダーゼをコードするpepA、pepB、及びpepD遺伝子からなる群より選択される1またはそれ以上の遺伝子の発現が弱化されるように改変された細菌である。Lアミノ酸を生産する能力を有する細菌という用語は、培地中で培養した場合に、Lアミノ酸を生産して培地中に分泌することのできる細菌を意味してよい。Lアミノ酸を生産する能力を有する細菌という用語は、EcoliK12等のEcoliの野生株又は親株よりも多い量で、Lアルギニン、Lシトルリン、又はLリジン等のLアミノ酸を生産して培地中への蓄積を引き起こすことのできる細菌を意味してもよく、微生物が、05gL以上、他の例では10gL以上の量で、培地中へのLアミノ酸の蓄積を引き起こすことができることを意味してもよい。Lアミノ酸という用語は、Lアルギニン、Lシトルリン、及びLリジンを包含してよい。腸内細菌科は、エシェリヒアEscherichia属、エンテロバクターEnterobacter属、エルビニアErwinia属、クレブシエラKlebsiella属、パントエアPantoea属、フォトラブダスPhotorhabdus属、プロビデンシアProvidencia属、サルモネラSalmonella属、セラチアSerratia属、シゲラShigella属、モルガネラMorganella属、エルシニアYersinia属等に属する細菌を包含する。特に、NCBINationalCenterforBiotechnologyInformationデータベースhttpwwwncbinlmnihgovTaxonomyBrowserwwwtaxcgiid543で使用される分類により腸内細菌科Enterobacteriaceaeに分類されるものを使用することができる。特定の例は、Escherichia属又はPantoea属に属する細菌である。Escherichia属に属する細菌という記載は、細菌が、微生物学の当業者に公知の分類に従って、Escherichia属に分類されることを意味してよい。Escherichia属に属する細菌としては、限定されるものではないが、エシェリヒアコリEscherichiacoliEcoliが挙げられる。Escherichia属に属する細菌は特に限定されないが、例えば、NeidhardtFCらによって記載された細菌EscherichiacoliandSalmonellatyphimuriumAmericanSocietyforMicrobiologyWashingtonDC1208Table1が包含される。Pantoea属に属する細菌という記載は、細菌が、微生物学の当業者に公知の分類に従って、Pantoea属に分類されることを意味してよい。エンテロバクターアグロメランスEnterobacteragglomeransの幾つかの種は、最近では、16SrRNAの塩基配列解析等に基いて、パントエアアグロメランスPantoeaagglomerans、パントエアアナナティスPantoeaananatis、パントエアスチュアールティPantoeastewartii等に再分類されている。細菌が、アミノペプチダーゼAをコードするpepA遺伝子の発現が弱化されるように改変されたという記載は、細菌が減少した量のアミノペプチダーゼAを含有するように改変されたことを意味してもよく、細菌がアミノペプチダーゼAを合成することができないことを意味してもよい。細菌が、アミノペプチダーゼBをコードするpepB遺伝子の発現が弱化されるように改変されたという記載は、改変された細菌が減少した量のアミノペプチダーゼBを含有するように細菌が改変されたことを意味してもよく、細菌がアミノペプチダーゼBを合成することができないことを意味してもよい。細菌が、ジペプチダーゼDをコードするpepD遺伝子の発現が弱化されるよう改変にされたという記載は、改変された細菌が減少した量のジペプチダーゼDを含有するように細菌が改変されたことを意味してもよく、細菌がジペプチダーゼDを合成することができないことを意味してもよい。遺伝子の不活化という記載は、改変された遺伝子が、完全に非機能的なタンパク質をコードすることを意味してよい。また、遺伝子の一部の欠失、遺伝子のリーディングフレームのシフト、ミスセンス/ナンセンス変異の導入、又は遺伝子の隣接領域プロモーター、エンハンサー、アテニュエーター、リボソーム結合部位等の遺伝子の発現を制御する配列を含むの改変により、改変されたDNA領域が遺伝子を本来の形で発現できないことも可能である。細菌の染色体上の遺伝子の有無は、PCRやサザンブロッティング等を含む周知の方法によって検出することができる。また、遺伝子発現のレベルは、ノーザンブロッティングや定量的RTPCR等を含む種々の周知の方法を使用し、遺伝子から転写されたmRNAの量を測定することによって見積もることができる。遺伝子によってコードされるタンパク質の量は、SDSPAGEとそれに続けてイムノブロッティングアッセイウエスタンブロッティング分析を行うこと等を含む周知の方法によって測定することができる。Escherichiacoli由来のアミノペプチダーゼAをコードするpepA遺伝子carPb4260ECK4253と同義は既に明らかになっているGenBankAccessionNC0009132の配列中のヌクレオチド4482463~4483974に相補的なヌクレオチド。Ecoli由来のpepA遺伝子は、染色体上のholC遺伝子とlptF遺伝子との間に位置する。pepA遺伝子の塩基配列及びpepA遺伝子によってコードされるPepAタンパク質のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号1及び配列番号2に示す。Escherichiacoli由来のアミノペプチダーゼBをコードするpepB遺伝子yfhIb2523ECK2520と同義は既に明らかになっているGenBankAccessionEG12310の配列中のヌクレオチド2653097~2654380に相補的なヌクレオチド。Ecoli由来のpepB遺伝子は、染色体上のiscX遺伝子とsseB遺伝子との間に位置する。pepB遺伝子の塩基配列及びpepB遺伝子によってコードされるPepBタンパク質のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号7及び配列番号8に示す。Escherichiacoli由来のアミノペプチダーゼDをコードするpepD遺伝子pepHb0237ECK0238と同義は既に明らかになっているGenBankAccession10695の配列中のヌクレオチド254259~255716に相補的なヌクレオチド。Ecoli由来のpepD遺伝子は、染色体上のgpt遺伝子とprfH遺伝子との間に位置する。pepD遺伝子の塩基配列及びpepD遺伝子によってコードされるPepDタンパク質のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号9及び配列番号10に示す。腸内細菌科の属又は株の間でDNA配列に幾分かの差異があり得るため、染色体上の不活化される遺伝子は、配列番号1、7、又は9に示す遺伝子には限定されず、配列番号1、7、又は9に相同な遺伝子を含んでいてよい。これら相同な遺伝子は、バリアントタンパク質variantproteinをコードする。バリアントタンパク質という記載は、アミノ酸の欠失、挿入、付加、又は置換のいずれであるかにかかわらず配列中に変異を有するが、タンパク質の活性を依然として維持しているタンパク質を意味してよい。バリアントタンパク質における変異の数は、タンパク質の三次元構造における位置又はアミノ酸残基の種類に依存する。バリアントタンパク質における変異の数は、1~30、他の例では1~15、更に他の例では1~5であってよい。バリアントにおけるこのような変異は、タンパク質の機能に重要ではないタンパク質の領域において生じうる。これは、幾つかのアミノ酸は互いに高い相同性を有しているため、そのような変異によっては三次元構造又は活性は影響を受けないからである。したがって、この遺伝子によってコードされるタンパク質のバリアントは、不活化される前のタンパク質がアミノペプチダーゼ又はジペプチダーゼとして機能することができる限り、配列番号2、8、又は10に示すアミノ酸配列全体に対して、80以上、他の例では90以上、他の例では95以上、他の例では98以上、更に他の例では99以上の相同性を有し得る。この明細書では、相同性という用語は、同一性を意味してよい。2つのアミノ酸配列の間の相同性は、周知の方法、例えば、3つのパラメータスコア、同一性、及び類似性を計算するコンピュータプログラムBLAST20、を使用して決定することができる。更に、pepA、pepB、又はpepD遺伝子は、不活化前に機能的なタンパク質をコードする限り、配列番号1、7、又は9に示す塩基配列又はこの塩基配列から調製することのできるプローブと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするバリアントであってよい。ストリンジェントな条件は、特異的なハイブリッド、例えば、60以上、他の例では70以上、他の例では80以上、他の例では90以上、他の例では95以上、他の例では98以上、更に他の例では99以上の相同性を有するハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッド、例えば、前記より低い相同性を有するハイブリッドが形成されないような条件を含む。例えば、ストリンジェントな条件としては、1×SSC、01SDS、好ましくは01×SSC、01SDSに相当する塩濃度で、60°Cで、1回、他の例では2回又は3回、洗浄することが挙げられる。洗浄時間は、ブロッティングに使用する膜の種類に依存し、原則として、製造業者によって推奨されているものとすべきである。例えば、ストリンジェントな条件下でHybond商標名Nナイロン膜アマシャムについて推奨される洗浄時間は15分である。洗浄は、2~3回行うことができる。プローブの長さは、ハイブリダイゼーション条件に応じて適宜選択することができ、通常は100bp~1kbpである。遺伝子の発現は、遺伝子によってコードされるタンパク質の細胞内の活性が非改変株と比較して減少するよう、染色体上の遺伝子に変異を導入することにより、弱化させることができる。遺伝子の発現の弱化をもたらす変異には、遺伝子によってコードされるタンパク質におけるアミノ酸の置換を引き起こす1以上の塩基の置換ミスセンス変異、終止コドンの導入ノンセンス変異、フレームシフトを引き起こす1又は2塩基の欠失、薬剤耐性遺伝子の挿入、又は遺伝子の一部若しくは遺伝子の全体の欠失が含まれるQiuZandGoodmanMFJBiolChem27286118617KwonDHetalJAntimicrobChemother46793796。pepA遺伝子の発現は、プロモーターやシャインダルガルノSD配列等の発現調節配列を改変することによっても弱化させることができるWO9534672CarrierTAandKeaslingJDBiotechnolProg155864。例えば、遺伝子組換えによって変異を導入するために、以下の方法を用いることができる。活性の低下した変異型タンパク質をコードする変異型遺伝子を調製することができ、その変異型遺伝子を含むDNA断片を用いて、改変すべき細菌を形質転換することができる。その後、相同組換えによって、染色体上の本来のnative遺伝子を変異型遺伝子で置換し、この結果得られる株を選択することができる。相同組換えを使用する遺伝子置換は、直鎖DNAを用いて行うことができ、これはRedドリブンインテグレーションとして知られているDatsenkoKAandWannerBLProcNatlAcadSciUSA9712p66406645。または、相同組換えを使用する遺伝子置換は、温度感受性複製開始点を有するプラスミドを用いて行うことができる米国特許第6303383号又はJP05007491A。更に、宿主中で複製できないプラスミドを使用する上記したような相同組換えを使用して、遺伝子置換による部位特異的変異を組込むこともできる。遺伝子の発現は、遺伝子のコード領域にトランスポゾン又はIS因子ISfactorを挿入することによっても弱化させることができ米国特許第5175107号、又は、従来の方法、例えば、UV照射又はニトロソグアニジンNmethylNnitroNnitrosoguanidineを用いる変異誘発、部位特異的変異誘発、相同組換えを使用する遺伝子破壊、及び/又はRedドリブンインテグレーションとも呼ばれる挿入-欠失変異誘発YuDetalProcNatlAcadSciUSA20009712597883andDatsenkoKAandWannerBLProcNatlAcadSciUSA20009712664045によっても弱化させることができる。プラスミドDNAの調製、DNAの消化及び連結、形質転換、オリゴヌクレオチドのプライマーとしての選択等のための方法は、当業者に周知の通常の方法であってよい。これらの方法は、例えば、SambrookJFritschEFandManiatisTMolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPressに記載されている。Lアミノ酸生産細菌Lアルギニン、Lシトルリン、又はLリジン等のLアミノ酸を生産することのできる細菌を用いることができる。ここに開示する主題に基づく細菌は、Lアミノ酸を生産する生来のnativeorinherent能力を有する細菌において、ペプチダーゼをコードする1またはそれ以上の遺伝子を不活化することにより得られる。あるいは、ここに開示する主題に基づく細菌は、ペプチダーゼをコードする不活化された遺伝子を既に有する細菌に対して、Lアミノ酸を生産する能力を付与することにより得られる。Lアルギニン生産細菌Lアルギニン生産細菌、又はLアルギニン生産細菌を誘導するのに使用することのできる親株としては、限定されるものではないが、Ecoli237株米国特許出願第2002058315A1号及び変異型Nアセチルグルタミン酸合成酵素を保有するその誘導体株ロシア連邦特許出願第2001112869号、Ecoli382株EP1170358A1、ならびにNアセチルグルタミン酸合成酵素をコードするargA遺伝子が導入されたアルギニン生産株EP1170361A1等のEscherichia属に属する株が挙げられる。Lアルギニン生産細菌を誘導するのに使用することのできる親株としては、Lアルギニンの生合成酵素をコードする1またはそれ以上の遺伝子の発現が増強された株も挙げられる。このような遺伝子としては、Nアセチルグルタミン酸合成酵素argA、Nアセチルグルタミン酸キナーゼargB、Nアセチルグルタミルリン酸レダクターゼargC、アセチルオルニチントランスアミナーゼargD、アセチルオルニチンデアセチラーゼargE、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼargFI、アルギノコハク酸合成酵素argG、アルギノコハク酸リアーゼargH、及びカルバモイルリン酸合成酵素carABをコードする遺伝子が挙げられる。酵素名の後の括弧内の省略形は、遺伝子名を表す。Lシトルリン生産細菌Lシトルリン生産細菌、又はEscherichia属に属するLシトルリン生産細菌を誘導するのに使用することのできる親株としては、限定されるものではないが、Ecoli333株両者は、フィードバック耐性の変異型カルバモイルリン酸合成酵素を保有するロシア連邦特許第RU2264459C2号、α‐ケトグルタル酸合成酵素の活性が増加し、さらにフェレドキシンNADPレダクターゼ、ピルビン酸合成酵素、又はα‐ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼの活性が改変されたEcoli株EP2133417A1号、ならびに、コハク酸デヒドロゲナーゼ及びα‐ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼの活性が減少したPananatisNA1sucAsdhA株米国特許出願第2009286290号等が挙げられる。Lシトルリンは、Lアルギニンの生合成経路の中間体であるため、Lシトルリン生産細菌を誘導するのに使用することのできる親株としては、Lアルギニン生合成酵素をコードする1またはそれ以上の遺伝子の発現が増強された株が挙げられる。このような遺伝子としては、限定されるものではないが、Nアセチルグルタミン酸合成酵素argA、Nアセチルグルタミン酸キナーゼargB、Nアセチルグルタミルリン酸レダクターゼargC、アセチルオルニチントランスアミナーゼargD、アセチルオルニチンデアセチラーゼargE、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼargFI、及びカルバモイルリン酸合成酵素carABをコードする遺伝子又はこれらの組合せが挙げられる。本発明のLシトルリン生産細菌を誘導するのに使用することのできる親株としては、LシトルリンからLアルギニンへの変換を触媒するアルギノコハク酸合成酵素ArgGの活性が親株と比較して低下したLアルギニン生産株も挙げられる。アルギノコハク酸合成酵素の活性は、上記したような従来の方法によって、対応する遺伝子であるargGを不活化することにより減少させることができる。Lリジン生産細菌Escherichia属に属するLリジン生産細菌又は親株としては、Lリジンアナログに対する耐性を有する変異体が挙げられる。Lリジンアナログは、Escherichia属に属する細菌の生育を阻害するが、培地中にLリジンが存在する場合、この阻害は完全に又は部分的に脱感作される。Lリジンアナログとしては、限定されるものではないが、オキサリジン、リジンハイドロキサメート、SLシステインAEC、γ‐メチルリジン、α‐クロロカプロラクタム等が挙げられる。これらのリジンアナログに対する耐性を有する変異体は、Escherichia属に属する細菌を従来の人工的な変異誘発処理に供することによって得ることができる。Lリジンを製造するのに有用な細菌株としては、特に、EscherichiacoliAJ1144266406645によって最初に開発されたRedドリブンインテグレーションと呼ばれる方法により欠失させた。この手順に従い、pepA遺伝子に隣接する領域及びテンプレートプラスミド中の抗生物質耐性を与える遺伝子の両者に相同のPCRプライマーP1配列番号3及びP2配列番号4を構築した。プラスミドpMW118attLCmattRWO05010175をPCR反応におけるテンプレートとして使用した。PCRの条件は次の通りである:94°Cで30秒の最初のDNA変性の後;94°Cで30秒の変性、55°Cで30秒のアニーリング、および72°Cで1分30秒の伸長反応、を25サイクル;ならびに72°Cで2分の最後の伸長反応。17kbのPCR産物図1をアガロースゲルから精製し、プラスミドpKD46を有するEcoliMG1655株ATCC700926のエレクトロポーレーションに使用した。pKD46プラスミドDatsenkoKAandWannerBLProcNatlAcadSciUSA20009712664045は、温度感受性の複製開始点、λファージの2154塩基のDNA断片ヌクレオチド位置31088~33241GenBankaccessionnoJ02459、並びにアラビノース誘導性ParaBプロモーターの制御下にあるλRed相同組換え系の遺伝子γ、β、およびエキソexo遺伝子を含む。pKD46プラスミドは、MG1655株の染色体へのPCR産物の組込みに必要である。MG1655株は、アメリカンタイプカルチャーコレクションPOBox1549ManassasVA20108USAから入手することができる。エレクトロコンピテント細胞は次のようにして調製した。EcoliMG1655pKD46細胞を、アンピシリン100mglを含有するLB培地中で30°Cで一夜生育させ、培養液を、アンピシリン及びLアラビノース1mMを含有する5mlのSOB培地Sambrookら、MolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPress1989で100倍に希釈した。細胞を、OD600が約06になるまで30°Cで通気しながら生育させた後、100倍に濃縮し、氷冷した脱イオン水を用いて3回洗浄することによりエレクトロコンピテント化させた。エレクトロポーレーションは、70μlの細胞及び約100ngのPCR産物を使用して行った。エレクトロポーレーション後の細胞を、1mlのSOC培地Sambrookら、MolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPress1989を用いて37°Cで25時間インキュベートした後、クロラムフェニコール30μgmlを含有するL寒天上にプレーティングし、37°Cで生育させてCmR組換え体を選択した。その後、pKD46プラスミドを除去するために、Cmを有するL寒天上で42°Cで2回継代passagesを行い、コロニーのアンピシリン感受性を試験した。2.PCRによるpepA遺伝子欠失の検証pepA遺伝子を欠失した変異体は、Cm耐性遺伝子で標識されており、部位特異的locusspecificプライマーP3配列番号5及びP4配列番号6を使用するPCRによって検証した。この目的のために、新たにfreshly単離したコロニーを20μlの水に懸濁した後、1μlの懸濁液をPCRに使用した。PCRの条件は次の通りである:94°Cで30秒の最初のDNA変性の後;94°Cで30秒の変性、55°Cで30秒のアニーリング、及び72°Cで2分の伸長反応、を30サイクル;ならびに72°Cで2分の最後のエ伸長反応。親のpepA株であるMG1655の細胞をテンプレートとして用いたPCR反応で取得したPCR産物は、165kbの長さであった。変異体であるMG1655ΔpepAcat株の細胞をテンプレートとして用いたPCR反応で取得したPCR産物は、長さ171kbのヌクレオチドであった図2。3.EcoliMG1655ΔpepAcat株の染色体からのCm耐性遺伝子cat遺伝子の除去intxis系を使用し、EcoliMG1655pepAcat株の染色体からCm耐性遺伝子を除去した。この目的のために、pMWtsIntXisプラスミドWO05010175でEcoliMG1655pepAcat株を形質転換した。形質転換体クローンは、100μgmlのアンピシリンを含有するLB培地上で選択した。プレートを30°Cで一夜インキュベートした。単離したコロニーを37°Cこの温度では、リプレッサーCItsは部分的に不活化され、intxis遺伝子の転写は脱抑制derepressされるで塗り広げ、次いでCmSApRなバリアントを選抜することにより、形質転換体クローンのcat遺伝子及びpMWstIntXisプラスミドを除去した。当該株の染色体からのcat遺伝子の除去は、部位特異的プライマーP3配列番号5及びP4配列番号6を用いるPCRによって検証した。PCRの条件は次の通りである:94°Cで30秒の最初のDNA変性の後;94°Cで30秒の変性、55°Cで30秒のアニーリング、及び72°Cで2分の伸長反応、を30サイクル;ならびに72°Cで2分の最後の伸長反応。MG1655ΔpepAcat株の細胞をテンプレートとして用いた反応で得られたPCR産物は、171kbの長さであった。cat遺伝子を有さない細胞をテンプレートとして用いた反応で得られたPCR産物は、160bpの長さであった。こうして、pepA遺伝子が不活化され、cat遺伝子を欠失した株が得られた。実施例2.Ecoli382ΔpepA株によるLアルギニンの生産Lアルギニン生産におけるpepA遺伝子の不活化の効果を試験するために、上記のEcoliMG1655ΔpepA株の染色体由来のDNA断片を、Ecoliアルギニン生産株382にP1トランスダクションMillerJHExperimentsinMolecularGeneticsColdSpringHarborLabPressPlainviewNYによって導入し、Ecoli382ΔpepA株を得た。382株は、RussianNationalCollectionofIndustrialMicroorganismsに2000年4月10日に受託番号VKPMB7926の下で寄託され、その後、2001年5月18日にブダペスト条約に基づく寄託に移管された。Ecoli382株及び382pepA株を、それぞれ、3mlのニュートリエントブロス中で37°Cで18時間振盪しながら培養し、03mlの培養液を20×200mmの試験管中の2mlの発酵培地に接種し、ロータリーシェーカーで32°Cで48時間培養した。培養後、培地中に蓄積したLアルギニンの量を、以下の移動相:ブタノール:酢酸:水=4:1:1vvを用いたペーパークロマトグラフィーにより決定した。ニンヒドリン2のアセトン溶液を、発色試薬として使用した。Lアルギニンを含むスポットを切り出し、CdCl2の05水溶液を用いてLアルギニンを溶出させ、Lアルギニンの量を540nmで分光学的に見積もった。発酵培地の組成glは以下の通りである。グルコース4802SO4350KH2PO420MgSO47H2O10チアミンHCl00002酵母エキス10Lイソロイシン01CaCO350グルコース及び硫酸マグネシウムは別々に滅菌する。CaCO3は、180°Cで2時間乾熱滅菌する。pHは70に調整する。試験管発酵の結果を表1に示す。表1から分かるように、不活化されたpepA遺伝子を有する株は、親のEcoliアルギニン生産株382と比較して、より高い量のLアルギニンを生産することができた。実施例3.Ecoli382ΔpepA株によるシトルリンの生産Lアルギニン生産におけるpepA遺伝子の不活化の効果を試験するために、上記EcoliMG1655ΔpepA株の染色体由来のDNA断片を、Ecoliシトルリン生産株382ΔargGにP1トランスダクションMillerJHExperimentsinMolecularGeneticsColdSpringHarborLabPressPlainviewNYによって導入し、Ecoli382ΔargGΔpepA株を得ることができる。382ΔargG株は、DatsenkoKAとWannerBL66406645によって最初に開発されたRedドリブンインテグレーションと呼ばれる方法によって、382株VKPMB7926の染色体上のargG遺伝子を欠失させることにより取得することができる。この手順に従い、argG遺伝子に隣接する領域及びテンプレートプラスミド中の抗生物質耐性を与える遺伝子の両者に相同なPCRプライマーを構築することができる。プラスミドpMW118attLCmattRWO05010175を、PCR反応におけるテンプレートとして使用することができる。両Ecoli株、すなわち382ΔargG及び382ΔargGΔpepAを、それぞれ、3mlのニュートリエントブロス中で37°Cで18時間振盪しながら培養することができ、03mlの得られた培養液を20×200mmの試験管中の2mlの発酵培地に接種し、ロータリーシェーカーで32°Cで48時間培養した。培養後、培地中に蓄積するシトルリンの量を、以下の移動相:ブタノール:酢酸:水=4:1:1vvを用いたペーパークロマトグラフィーにより決定することができる。ニンヒドリン2のアセトン溶液を、発色試薬として使用することができる。シトルリンを含むスポットを切り出し、CdCl2の05水溶液を用いてシトルリンを溶出させ、シトルリンの量を540nmで分光学的に見積もることができる。発酵培地の組成glは以下の通りであってよい。グルコース4802SO4350KH2PO420MgSO47H2O10チアミンHCl00002酵母エキス10Lイソロイシン01Lアルギニン01CaCO350グルコース及び硫酸マグネシウムは別々に滅菌する。CaCO3は、180°Cで2時間乾熱滅菌する。pHは70に調整する。実施例4:減少したアミノペプチダーゼ活性を有するLリジン生産細菌の構築アミノペプチダーゼA、B、又はDを発現しない株WC196ΔcadAΔldcCΔpepAKmWC196ΔcadAΔldcCΔpepBKm及びWC196ΔcadAΔldcCΔpepDKm株をWC196ΔcadAΔldcC株から構築した。WC196ΔcadAΔldcC株は、Lリジンを生産することができ、目的のpep遺伝子の欠損株を誘導するのに使用した。WC196ΔcadAΔldcCの各pep遺伝子は、実施例1に示したものと同様のやり方で、Redドリブンインテグレーションと呼ばれる方法によって欠失させた。pepA、pepB、又はpepD遺伝子は、pepAについては配列番号11及び12のプライマー、pepBについては配列番号13及び14のプライマー、pepDについては配列番号15及び16のプライマーをそれぞれ使用することにより欠失させた。これにより、各アミノペプチダーゼ遺伝子が欠失したWC196ΔcadAΔldcCΔpepAKm、WC196ΔcadAΔldcCΔpepBKm、及びWC196ΔcadAΔldcCΔpepDKm株を取得した。WC196196ΔcadAΔldcC株におけるcadA遺伝子及びldcC遺伝子も、同様のやり方で欠失させることができる。更に、それぞれの株を、培養液の最終OD600が約06になるまで、37°CでL培地中で培養した。その後、等容量の40グリセリン溶液を培養液に添加し、混合物を攪拌した後、適切な容量に分けて-80°Cで保存した。これらをグリセロールストックと呼ぶ。実施例5:アミノペプチダーゼ活性が減少した株のLリジン生産能の評価各株のグリセロールストックを解凍し、それぞれ100μLをLプレートに均等に塗布し、37°Cで24時間培養した。上記グリセロールストックを解凍し、Lプレートに均一に塗布し、37°Cで24時間培養を行った。得られた細胞懸濁液を101倍に希釈し、希釈した懸濁液のOD620値nを測定し、50nに相当する容量の細胞懸濁液を、500mLの坂口フラスコ中の20mLの発酵培地に接種し、往復振盪培養装置115rpmで37°Cで48時間培養を行った。培養後、培地中に蓄積したLリジンの量を公知の手法で測定したバイオテックアナライザーBiotecAnalyzerAS210、サクラ精機。発酵培地の組成glは以下の通りである。Lリジン発酵培地の組成:グルコース402SO424K2HPO410MgSO47H2O10FeSO47H2O001MnSO45H2O001酵母エキス20CaCO3日本薬局方30蒸留水1Lの最終容量とする培地は、KOHを用いてpH70に調整し、115°Cで10分間オートクレーブした。グルコース及びMgSO47H2Oは別々に180°Cで2時間乾熱滅菌した。結果を表2に示す。収率は、Lリジンの対グルコース収率を示す。表2から分かるように、WC196ΔcadAΔldcCΔpepA、WC196ΔcadAΔldcCΔpepB、WC196ΔcadAΔldcCΔpepD株は、親のEcoliLリジン生産株WC196ΔcadAΔldcCと比較して、より高い量のLリジンを生産することができた。本発明をその好適な態様を参照して詳細に説明したが、本発明の範囲を逸脱することなく、種々の変更を行うことができ、また、等価物を用いることができることは、当業者に明らかであろう。ここに引用した参考文献は全て、参照によりこの出願の一部として組み込まれる。