活動性結核または潜伏結核に関してMycobacteriumtuberculosis感染の感染状況を全血から迅速判定するためのinvitro法であって、以下のステップを含む方法。全血の第1試料中に存在する抗原特異的T細胞を、抗CD28抗体、または抗CD28抗体および抗CD49d抗体の存在下で精製ツベルクリンpurifiedproteinderivativePPDを用いて刺激するステップ;1.5時間~2.5時間、特に2時間、35°C~39°C、特に37°Cで、任意にCO2を添加してインキュベートすることによって、抗原提示細胞APCによりPPDをプロセシングするステップ;次いで分泌阻害剤を添加するステップ;強く攪拌するステップ;および少なくとも2.5時間、35°C~39°Cの温度でさらにインキュベートするステップ、ならびに抗原特異的T細胞の細胞内INF-γ産生および細胞内IL-2産生の両者からサイトカインプロファイルを決定するステップであって;活動性結核の存在が、IFN-γ/IL-2二重陽性T細胞の減少を伴う、前記サイトカインプロファイルのIFN-γ単独陽性細胞側へのシフトによって示されるステップ。PPDによる前記刺激に加え、SEB、ESAT-6およびCFP-10、ならびに/またはワクチン抗原によりさらに刺激を行う、請求項1に記載の方法。前記第1試料とオーセンティックな第2試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞にPBS0.9NaClまたは5グルコースなどの生理緩衝液を添加することによって陰性対照が行われる、請求項1または請求項2に記載の方法。前記第1試料とオーセンティックな第3試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞にSEBを添加することによって陽性対照が行われる、請求項1~3のうち少なくとも1項に記載の方法。前記第1試料とオーセンティックな第4試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞にワクチン抗原を添加することによってワクチン対照が行われる、請求項1~4のうち少なくとも1項に記載の方法。前記第1試料とオーセンティックな第4試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞にESAT-6earlysecretedantigenictargetおよびCFP-10culturefiltrateproteinを添加することによってBCGワクチン対照が行われる、請求項1~5のうち少なくとも1項に記載の方法。前記第1試料とオーセンティックな第5試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞にESAT-6earlysecretedantigenictargetおよびCFP-10culturefiltrateproteinを添加することによって、該全血ドナーにおいて非結核性マイコバクテリアとの接触が起こったか否かについての対照が行われる、請求項1~6のうち少なくとも1項に記載の方法。前記分泌阻害剤が、ブレフェルジンAまたはモネンシンなどからなる群より選択される、請求項1~7のうち少なくとも1項に記載の方法。前記サイトカインプロファイルの決定がフローサイトメトリーによって行われる、請求項1~8のうち少なくとも1項に記載の方法。前記試料の全血がヒトまたは動物に由来する、請求項1~9のうち少なくとも1項に記載の方法。活動性TB患者と密接な接触のある個人または活動性TB患者と密接な接触を持ったことが疑われる個人から全血が採取される、接触者追跡調査に適用される、請求項1~10のうち少なくとも1項に記載の方法。以下のように治療決定される、請求項11に記載の方法。a.前記サイトカインプロファイルにおいて、IFN-γ/IL-2二重陽性細胞の減少を伴う、IFN-γ単独陽性細胞側へのシフトが検出された場合、INHなどの予防、または4剤併用などの積極的治療が適応される。b1.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、以前の検査に関する情報が得られない場合、緊急の治療は不要であり、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。b2.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、Mycobacteriumtuberculosisの潜伏感染に対する以前の検査でMycobacteriumtuberculosisとこれまでに接触していないことが明らかになっていた場合、INH療法などの予防が適応される。c1.患者が応答を示さない場合、緊急の治療は不要である。c2.患者が何らかの臨床症状を示す場合、再検査が適応される。免疫抑制剤を投与される前の個人またはHIV感染などの免疫機能不全状態にある個人から全血が採取される、請求項1~10に記載の方法。以下のように治療決定される、請求項13記載の方法。a.前記サイトカインプロファイルにおいて、IFN-γ/IL-2二重陽性細胞の減少を伴う、IFN-γ単独陽性細胞側へのシフトが検出された場合、INHなどの予防、または4剤併用などの積極的治療、および任意に免疫抑制療法の先送りが適応される。b1.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、以前の検査に関する情報が得られない場合、免疫抑制療法が可能であり、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。b2.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、Mycobacteriumtuberculosisの潜伏感染に対する以前の検査でMycobacteriumtuberculosisとこれまでに接触していないことが明らかになっていた場合、INH療法などの予防、および任意に免疫抑制療法の先送りが適応され、さらに2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。c1.患者が応答を示さない場合、免疫療法の開始が予定される。c2.患者が何らかの臨床症状を示す場合、再検査が適応される。活動性TB感染が疑われる個人から全血が採取される、請求項1~10記載の方法。以下のように治療決定される、請求項15に記載の方法。a.前記サイトカインプロファイルにおいて、IFN-γ/IL-2二重陽性細胞の減少を伴う、IFN-γ単独陽性細胞側へのシフトが検出された場合、4剤併用などの積極的治療が適応される。b1.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、以前の検査に関する情報が得られない場合、急性感染の疑いは少なく、別の診断が考慮されるべきであり、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。b2.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、Mycobacteriumtuberculosisの潜伏感染に対する以前の検査でMycobacteriumtuberculosisとこれまでに接触していないことが明らかになっていた場合、INHなどの予防、または4剤併用などの積極的治療が適応され、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。c1.患者が応答を示さない場合、緊急の治療は不要である。c2.患者が何らかの臨床症状を示す場合、再検査が適応される。本発明の目的は、従来技術の欠点を回避する方法であって、迅速で信頼性があり、さらに急性感染と潜伏感染との区別を可能とする診断法を提供することである。この目的は、活動性結核または潜伏結核に関してMycobacteriumtuberculosis感染の感染状況を全血から迅速判定するためのinvitro法によって達成され、該方法は以下のステップを含む。全血の第1試料中に存在する抗原特異的T細胞を、抗CD28抗体、または抗CD28抗体および抗CD49d抗体の存在下で精製ツベルクリンpurifiedproteinderivativePPDを用いて刺激するステップ;1.5時間~2.5時間、特に2時間、35°C~39°C、特に37°Cで、任意にCO2を添加してインキュベートすることによって、抗原提示細胞APCによりPPDをプロセシングするステップ;次いで分泌阻害剤を添加するステップ;強く攪拌するステップ;および少なくとも2.5時間、35°C~39°Cの温度でさらにインキュベートするステップ、ならびに抗原特異的T細胞の細胞内INF-γ産生および細胞内IL-2産生の両者からサイトカインプロファイルを決定するステップであって;活動性結核の存在が、IFN-γ/IL-2二重陽性T細胞の減少を伴う、前記サイトカインプロファイルのIFN-γ単独陽性細胞側へのシフトによって示されるステップ。本発明の方法のある実施形態においては、PPDによる前記刺激に加え、PBS、SEB、ESAT-6、CFP-10および/またはワクチン抗原によりさらに刺激を行ってよい。これは、抗原特異的細胞が存在する場合、これらがMycobacteriumtuberculosisとの接触によるものであるのか、非結核性マイコバクテリアとの接触によるものであるのか、またはワクチン応答によるものであるのかを決定するために行うことができる。本発明の別の実施形態においては、バッファー、特に、例えばPBS0.9NaClまたは5グルコースなどの生理学的に許容されるバッファーを、前記第1試料とオーセンティックな~とオーセンティックとは、~と同一の供給源に由来することを意味する第2試料の全血中に存在する抗原特異的細胞に添加することによって、陰性対照が行われる。本発明の別の実施形態においては、前記第1試料とオーセンティックな第3試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞にSEBを添加することによって、陽性対照を行うことができる。ある実施形態においては、前記第1試料とオーセンティックな第4試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞に、ESAT-6earlysecretedantigenictargetおよびCFP-10culturefiltrateproteinを添加することによって、ワクチン対照、具体的には、BCGワクチン対照を行うことができる。あるいは、前記第1試料とオーセンティックな第4試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞に、ESAT-6earlysecretedantigenictargetおよびCFP-10culturefiltrateproteinを添加することによって、全血ドナーにおいて非結核性マイコバクテリアとの接触が起こったか否かについての対照を行うことが出来る。別の実施形態においては、前記第1試料とオーセンティックな第5試料の全血中に存在する抗原特異的T細胞にワクチン抗原を添加することによって、ワクチン対照を行うことができる。本発明の方法のさらに別の実施形態においては、前記分泌阻害剤は、ブレフェルジンAまたはモネンシンなどからなる群より選択される。本発明によれば、前記サイトカインプロファイルの決定は、フローサイトメトリーなどの適切な方法によって行われる。本発明の方法は、ヒト全血試料または動物全血試料に適用することができる。本発明の方法は、特に、活動性TB患者と密接な接触のある個人または活動性TB患者と密接な接触を持ったことが疑われる個人から全血が採取される、接触者追跡調査に適用される。さらに、本発明の診断検査の結果に応じ、以下のように治療決定または治療計画が定められる。a.前記サイトカインプロファイルにおいて、IFN-γ/IL-2二重陽性細胞の減少を伴う、IFN-γ単独陽性細胞側へのシフトが検出された場合、INHなどの予防、または4剤併用などの積極的治療が適応される。b1.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、以前の検査に関する情報が得られない場合、緊急の治療は不要であり、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。b2.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、Mycobacteriumtuberculosisの潜伏感染に対する以前の検査でMycobacteriumtuberculosisとこれまでに接触していないことが明らかになっていた場合、INH療法などの予防が適応される。c1.患者が応答を示さない場合、緊急の治療は不要である。c2.患者が何らかの臨床症状を示す場合、再検査が適応される。本発明の方法はさらに、免疫抑制剤を投与される前の個人またはHIV感染などの免疫機能不全状態にある個人から採取された全血を検査するために用いることができる。本発明の診断検査の結果に応じ、以下のように治療決定または治療計画が定められる。a.前記サイトカインプロファイルにおいて、IFN-γ/IL-2二重陽性細胞の減少を伴う、IFN-γ単独陽性細胞側へのシフトが検出された場合、INHなどの予防、または4剤併用などの積極的治療、および任意に免疫抑制療法の先送りが適応される。b1.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、以前の検査に関する情報が得られない場合、免疫抑制療法が可能であり、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。b2.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、Mycobacteriumtuberculosisの潜伏感染に対する以前の検査でMycobacteriumtuberculosisとこれまでに接触していないことが明らかになっていた場合、INH療法などの予防、および任意に免疫抑制療法の先送りが適応され、さらに2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。c1.患者が応答を示さない場合、免疫療法の開始が予定される。c2.患者が何らかの臨床症状を示す場合、再検査が適応される。本発明の方法はさらに、活動性TB感染が疑われる個人から採取された全血を検査するために用いることができる。本発明の診断検査の結果に応じ、以下のように治療決定または治療計画が定められる。a.前記サイトカインプロファイルにおいて、IFN-γ/IL-2二重陽性細胞の減少を伴う、IFN-γ単独陽性細胞側へのシフトが検出された場合、4剤併用などの積極的治療が適応される。b1.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、以前の検査に関する情報が得られない場合、急性感染の疑いは少なく、別の診断が考慮されるべきであり、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。b2.診断検査においてIFN-γ/IL-2二重陽性細胞によりMycobacteriumtuberculosisの潜伏感染が明らかになり、且つ、Mycobacteriumtuberculosisの潜伏感染に対する以前の検査でMycobacteriumtuberculosisとこれまでに接触していないことが明らかになっていた場合、INHなどの予防、または4剤併用などの積極的治療が適応され、2~4週間以内に患者を再検査する必要がある。c1.患者が応答を示さない場合、緊急の治療は不要である。c2.患者が何らかの臨床症状を示す場合、再検査が適応される。本発明を以下の実施例によりさらに説明する。有利には、本発明の方法において、抗原特異的細胞のINF-γ産生は、細胞内で測定される。したがって、抗原特異的T細胞を結核抗原PPDpurifiedproteinderivative、ESAT-6earlysecretedantigenictargetおよびCFP-10culturefiltrateproteinで刺激する時間を、これまでの試験では20時間であったところを、6時間に短縮することができる図2。INF-γ発現PPD応答性T細胞は、活動性結核に罹患している患者において、潜伏結核に罹患している患者または結核の治療に成功した患者と比較して、有意に高い頻度で既に測定されているが、範囲の重なりが極めて大きいため、個々の患者について、疾患のこれら2つのステージを互いに区別することができない図3。ESAT-6およびCFP-10により、M.tuberculosisと接触のあった患者ESAT-6陽性またはCFP-10陽性と純粋なBCGワクチン応答を示す患者ESAT-6陰性およびCFP-10陰性、図示せずとの区別のみが可能になる。しかし、活動性結核と、潜伏結核に罹患している患者または結核の治療に成功した患者との区別は、PPD特異的T細胞におけるCD69を介した活性化、ならびにIFN-γおよびインターロイキン-2IL-2の同時測定によって可能である。大部分のPPD応答性T細胞は、潜伏結核または治療に成功した結核においてINF-γおよびIL-2をいずれも発現するが図4、活動性結核においては、サイトカインプロファイルはIFN-γ単独陽性細胞側へシフトする図5。受信者動作特性ROC分析により、IFN-γ/IL-2二重陽性PPD応答性T細胞の上限が確定され、これを下回る場合に100の特異性で活動性結核の診断が可能である。ここに示した集団では、この上限は56のIFN-γ/IL-2二重陽性T細胞であり、それによって、活動性結核に罹患している患者A-TBを結核の治療に成功した患者T-TBと70の感度で区別することができる図6。他の実施形態では、サイトカインプロファイルの決定は、標識抗体を用いたフローサイトメトリーによって行われる。したがって、INF-γの測定に加え、PD-1programmeddeath-1、CTLA-4cytotoxicT-lymphocyteantigen4、TIM-3T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain3などの別の機能的に関連する表面分子、あるいはインターロイキン-2、TNF-αtumornecrosisfactorαまたはIP-10chemokineC-X-Cmotifligand10などの別のサイトカイン類を同時に定量することも可能である。抗原特異的CD4T細胞をフローサイトメトリーによって分析するため、特異的T細胞の活性化およびサイトカイン産生のための抗原刺激によって刺激し、次いで刺激された細胞の数を特異的抗体によって検出する。MycobacteriumtuberculosisMTB特異的T細胞の検査には、抗原であるPPD、ESAT-6およびCFP-10が用いられる。活動性結核を潜伏性結核/治療に成功した結核と区別するためには、PPDを用いた試験が行われ、潜伏性結核感染/治療に成功した結核感染を以前のワクチン接種と区別するためには、ESAT-6およびCFP-10を用いた試験が行われる。PBSは陰性対照となり、これにより、非特異的に反応するT細胞などのバックグラウンドシグナルを定めることができる。SEBは、陽性対照となる。前記刺激は、全血から直接行うことが出来る。まず、全血を各1μg/mLの濃度のCD28特異的抗体およびCD49d特異的抗体と混合し、各抗原PPD:7.32μg/mL、ツベルクリンRT-50;StatensSerumInstitute、コペンハーゲン、デンマークと混合する。ESAT-6およびCFP-10をカバーするMtb由来ペプチドプールを用いて刺激を行った。CFP-10ペプチドおよびESAT-6ペプチドのプールは、11アミノ酸が重複する15アミノ酸長からなっており、全ペプチドがHPLC精製されている[純度>80、Haririら、NatureMedicine2011;17;372-376]。2時間のインキュベーション時間37°C、6CO2の後、サイトカインを細胞内に蓄積させるため、10μg/mLのブレフェルジンABFAの添加によって刺激により誘導されたサイトカインのエキソサイト-シスを停止させる。続いて、さらに4時間インキュベートする37°C、6CO2。この刺激を6時間後に中断し、細胞を固定する。まず、2mMEDTAを各試料に添加し、10秒間攪拌した後、室温で15分間インキュベートする。1mLの全血あたり9mLのBectonDickinson溶解溶液を用いて、室温で10分間インキュベーションすることにより、白血球の固定および赤血球溶解を行う。遠心分離および上清の吸引後、得られた細胞ペレットを2mLのFACSバッファーPBS-5FCS-0.5BSA-0.07NaN3で洗浄する。洗浄は、FACSバッファーを添加し、続いて遠心分離および上清を吸引することにより行われる。最後に、固定した細胞をFACSバッファー中に集める。ここで、細胞を直接染色するか、または冷蔵庫内に4°Cにて1晩保存することができる。刺激された細胞を特異的な蛍光色素標識抗体で染色するため、細胞をFACSチューブに再分配する。各染色混合物あたり、約225~300μLの全血からの白血球を使用する。まず、各試料あたり2mLのサポニンバッファーFACSバッファー/0.1サポニンを10分間添加する。遠心分離およびSAPバッファーの吸引後、各試料あたりそれぞれ全量50μLのFACSバッファー/0.1サポニン中に抗体混合物を添加する抗CD4クローンSK3、抗IFN-γクローン4S.B3、抗IL-2クローンMQ1-17H12、および抗CD69クローンL78。前記抗体は光感受性であるため、暗所にて室温で30分間インキュベートする。次いで、細胞を3mLのFACSバッファーで洗浄し、未結合の抗体を除去する。最後に、細胞ペレットを150μLの1パラホルムアルデヒド溶液中に集め、フローサイトメトリーによって分析する。治療に成功した結核では、PPDによる特異的刺激によって、大部分の抗原特異的T細胞がIFN-γおよびIL-2をいずれも発現することが分かる。驚くべきことに、活動性結核が存在する場合、サイトカインプロファイルは、IFN-γ単独陽性細胞側へシフトし、同時にIFN-γ/IL-2二重陽性T細胞の減少を伴うことになる。潜伏結核感染または治療に成功した結核感染は、ESAT-6およびCFP-10による刺激によってワクチン応答と判別可能である。ESAT-6およびCFP-10により、M.tuberculosisと接触のあった患者ESAT-6陽性および/またはCFP-10陽性と純粋なBCGワクチン応答を示す患者ESAT-6陰性およびCFP-10陰性との区別が可能である。