"明細書に記載された態様の発明。リポキシン類似化合物の合成化合物1のメチルエステル前駆体の製造:ベンゼン1.5mL中の3-メチル-3-トリメチルシロキシ-1-ブロモ-1-オクテン130mg、0.44ミリモルの溶液に、n-プロピルアミン0.05mL、0.61ミリモル及びPdPPh3420mg、0.02ミリモルを加え、溶液を光から保護した。次いでそれを凍結-解凍法により脱ガスし、室温で45分間撹拌した。7E,9E,5S,6Rメチル5,6-ジtert-ブチルジメチルシロキシ-ドデカ-7,9-ジエン-11-イノエート183mg、0.44ミリモル化合物12及びヨウ化銅14mg、0.07ミリモルを加え、溶液をもう一度凍結-解凍法により脱ガスした。混合物を室温で3時間撹拌し、NH4Clの飽和水溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。次いでそれをブラインで洗浄し、MgSO4上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィーシリカ、3エーテルヘキサンは、純粋な化合物を無色の液体として与えた171mg、収率57。THF0.5mL中の化合物171mg、0.25ミリモルの溶液に、n-BuN4F0.9mL、0.90ミリモルを加え、混合物を室温で撹拌した。反応は2時間で完了し、その時点でそれを水中に注ぎ、エーテルで抽出した。エーテル抽出物をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィーシリカ、4MeOH/CH2Cl2はメチルエステル24mgをいくらかの対応するラクトンと共に与えた。HPLC保持時間:9:39分ミクロソルブmicrosorb逆相、4.6mmX25cm、C-18カラム、MeOH/H2O70:30、流量1ml/分、300nmにおけるUV検出器。MeOH中におけるUV:λmax283,294,311nm、1HNMR500MHzCDCl3δ6.53dd,15.210.9Hz,1H,6.32dd,J=15.1,11.0Hz,1H,6.17d,J=15.9Hz,1H,5.83dd,J=17.5,2.1Hz,1H,5.80dd,J=15.2,6.7Hz,1H,5.72dd,J=17.0,2.1Hz,1H,4.17m,1H,3.68-3.64m,4H,2.35-2.31m,2H,1.51-.48m,1H,1.43-1.42m,2H,1.30-1.23m,15H,0.85t,3H。13CNMR126MHz.CDCl3δ150.01,140.18,132.95,132.26,112.43,107.50,75.23,73.76,42.49,33.67,32.17,31.36,27.96,23.56,22.58,21.03,14.03。化合物2のメチルエステル前駆体の製造:化合物1のメチルエステル前駆体の溶液3mg、CH2Cl21ml中をLindlar触媒1mgと混合し、水素雰囲気下に置いた。混合物を暗所において室温で、約80変換まで1時間、撹拌及び続くHPLCを行った。セライト上の濾過、溶媒の蒸発及びHPLCによる分離は純粋なメチルエステルを与えた。HPLC保持時間:10:02分ミクロソルブ逆相。10mmX25cmC-18カラム、MeOH/H2O70:30流量4ml/分。300nmにおけるUV検出器。MeOH中におけるUV:ηmax287,315nm。化合物3のメチルエステル前駆体の製造:この化合物は化合物1のメチルエステル前駆体の製造と同様にして3-シクロヘキシル-3-トリメチルシロキシ-1-ブロモ-1-オクテンから製造した。この化合物の脱シリル化も同様の方法で行い、メチルエステルを得た。HPLC保持時間8:02分ミクロソルブ逆相、4.6mmX25cm。C-18カラム、MeOH/H2O70:30。流量1ml/分、300nmにおけるUV検出器。MeOH中におけるUV:λmax282,293,311nm。1HNMR360MHz,CDCl3δ6.56dd,15.4,10.9Hz,1H,6.33dd,J=15.2,10.9Hz,1H,6.13dd,J=15.8,6.5Hz,1H,5.81dd,J=15.2,6.4Hz,1H,5.80d,J=15.6Hz,1H,5.73dd,J=15.4,2.1Hz,1H,4.15br,1H,3.93-3.90m,1H,3.67br,1H,3.65s,3H,2.34t,2H,1.82-1.65m,10H,1.46-1.38m,3H,1.26-1.01m,5H。化合物4のメチルエステル前駆体の製造:化合物3のメチルエステル前駆体の選択的水素化、続くHPLC精製は、化合物4のメチルエステル前駆体を与えた。HPLC保持時間9.72分ミクロソルブ逆相、10mmX25cm。C-18カラム、MeOH/H2O70:30。流量4ml/分、300nmにおけるUV検出器。MeOH中におけるUV:λmax288,301,315nm。1HNMR250MHz,C6D6δ6.66-6.89m,2H,5.95-6.24m,4H,5.55-5.66m,2H,3.82m,1H,3.73m,1H,3.41m,1H,3.31s,3H,OCH3,2.08t,2H,CH2COO,1.00-1.81m,18H。メチルエステル類は標準的方法を用いて対応するアルコール類に変換することができる。15R-15-メチル-LXA4及び15±メチル-LXA4の合成ヘキサノイルクロリドを用いたビストリメチルシリルアセチレンのFriedel-Craftsアシル化を用い、約1グラムのアセチレン性ケトンaを製造し、Webber,S.E.etal.1988Adv.Exp.Med.Biol.229:61;NicolaouK.C.etal.1991Angew.Chem.Int.Ed.Engl.30:1100;及びVorbrueggen,H.etal.:In:Chemistry,Biochemistry,andPharmacologicalActivityofProstanoidsRoberts,S.M.,Scheinmann,F.eds..Oxford:PergamonPressにおける通りに、--ピナニル-9-BBNを用いて還元し、CH3N2中でSアルコールを得、C-15におけるメチルを生成する。別の場合、Vorbrueggen,H.etal.:In:Chemistry,Biochemistry,andPharmacologicalActivityofProstanoidsRoberts,S.M.,Scheinmann,F.eds..Oxford:PergamonPressにおける通りにケト基をCH3MgBr60→70°Cで処理し、2,6-ルチジン5.2ml及びtert-ブチルジメチルシリルトリフレート6.9mlを連続的に添加し、0°Cにおいて乾燥CH2Cl2~20ml中でbの15±メチル2~5gを得ることができる。この反応物を1時間撹拌し、次いで水性抽出のために100mlのエーテルで希釈し、MgSO4を用いて乾燥する。次いで生成物cを、Nicolaou,K.C.etal.1991Angew.Chem.Int.Ed.Engl.30:1100;NicolaouK.C.etal.1989J.Org.Chem.54:5527及びWebber.S.E.etal.1988Adv.Exp.Med.Biol.229:61におけると同様にして生成されるdとカップリングさせる。案Iの断片Aからの構造dを、0~25°CにおいてEtOH:THF:H2O1:1:1を含む4.0当量のAgNO3、次いで7.0当量のKCN中に2時間懸濁させ、C-メチルエステル保護15-メチル-LXA4類似体を生成し、それを濃縮し、THF中でLiOH2滴、0.1Mを用い、4°Cで12~24時間けん化し、対応する遊離の酸を得る。16-ジメチル-LXA4の合成この化合物は類似の戦略を用い、上記dをeとカップリングさせることにより、上記参照、又はfとカップリングさせ、15-フェニル-LXA4類似体を生成する、あるいはgとカップリングさせて17-m-クロロフェノキシ-LXA4類似体を生成することにより生成される。案Iにおける適宜のC断片すなわちe、f、g、hはそれぞれ、Raduechel,B.andVorbrueggen,H.1985Adv.ProstaglandinThromboxaneLeukotrieneRes.14:263において既知の対応するプロスタグランディン類似体に関して考察されている通りに製造される。hにおいて、R=H;Cl、メトキシ又はハロゲンである。13,14-アセチレン性-LXA4及びハロゲン-含有類似体の合成案IIからのA2B2生成断片を用い、対応するC2断片をカップリングのために製造する。構造j及びkはNicolaou,K.C.etal.1989J.Org.Chem.54:5527における通りに生成され、Raduechel,B.andVorbrueggen,H.1985Adv.ProstaglandinThromboxaneLeukotrieneRes.14:263における通りにメチル化され、7にカップリングされ、これらのLX類似体を与える。材料は精製のためにRP-HPLCに供することができる、上記参照。14,15-アセチレン性-LXA4の合成明示されている組み合わされたA2B2断片は、断片C2へのカップリングのために、7又は4、上記参照、の構造を有する経路IIに示される、断片A1及びB1のカップリングから製造することができる。C2断片lのための前駆体は、プロスタグランディン類似体の場合のRaduechel,B.andVorbrueggen,H.1985Adv.ProstaglandinThromboxaneLeukotrieneRes.14:263におけると同様にして製造することができる。前に製造された前駆体mNicolaou,K.C.1989J.Org.Chem.54:5527を1.2当量において、ベンゼン中の0.05当量のPdPPh34、0.16当量のCuI、n-PrNH2に、Me2Al-保有lと共に加え、室温で2~3時間後、nを得る。アルコール保護基TBDMS=Rを、10当量のHF-pyr、THFを用い、0~25°C4時間において除去し、続いて3.0当量のEt3N、MeOHに25°Cで15分間暴露し、リポキシン類において通常C-1-カルボキシとC-5アルコールの間に生成される酸-誘導δ-ラクトンを開環するSerhan,C.N.1990Meth.Enzymol.187:167及びNicolaou,K.C.1989J.Org.Chem.54:5527。5重量のLindlar触媒で穏やかに処理した後、抽出した材料をTHF中のLiOHけん化に供し、目的分子の遊離の酸を生成することができ、それをさらにSerhan.C.N.etal.1990Meth.Enzymol.187:167における通りにRP-HPLC勾配可動相により精製することができる。15±メチル-シクロ-LXA4の合成SiMe3誘導体としての化合物oを、アルゴンを濃縮した雰囲気下における100mlの丸底フラスコ中で脱ガスしたベンゼン20ml中に入れる~1グラムことができる。これに、3.0当量のビニルブロミド断片、上記参照、を加える。このカップリング反応は、触媒量のPdPPh34及びCuI中で行われ、この懸濁液のアリコートをRP-HPLC中に注入し、急速走査ダイオードを用いてUV吸収により監視することにより、監視することができる。23°Cにおいて1~3時間の進行の後、材料を酢酸エチル:H2O4:1v/vを用いて抽出し、回転蒸発により濃縮する。メチルエステルはLiOH/THF中でけん化することができ、定量的収量の遊離のカルボン酸を得る。他の誘導体は、断片Aを置換された種々の断片B部分と共に用い、上記の通りに製造することができ、例えばジメチル又は他の誘導体を得ることができる。これは容易に入手可能なケトンpを用い、それをCH3MgBr60°Cで処理し、qを生成し、それをPd0-CuIカップリングなどの従来の方法を用いて上記の通りに断片Aにカップリングさせることにより得ることができる。C-15からの鎖長の増加も得ることができる。5-メチル-LXB4及び4,4-ジメチル-LXB4の合成5-メチル-LXB4は5-オキソ-LXB4生成を妨げるか、又は遅延させる。上記に概述した一般的案を用い、ビニルブロミド前駆体において5-メチルを有するようにA断片を構築することができ、それを、結合したBC断片に、Pd0-CuIカップリングによりカップリングさせる。ビニルブロミドrは、ジメチル又は水素置換をそのC-4位に含むsから得ることができる。断片BCを含む保護前駆体tは、参照文献に報告されている通りに生成されるNicolaouK.C.etal.1991Angew.Chem.Int.Ed.Engl.30:1100-16。化合物tは、指示されているビニルブロミドとのカップリングによりs又は28に変換される。かくしてrを1.0当量約1グラムで、脱ガスされ、溶媒としてEt2NHを含む丸底フラスコに加え、tを1.2当量でEt2NHに注入し、PdPPh34を0.02当量で加え、sの89-含有アセチレン性前駆体メチルエステルを得ることにより、目的分子を生成することができる。材料を抽出し、回転蒸発させ、CH2Cl2中のキノリン0.5当量中に懸濁させ、10;25°CでLindlar触媒及びH2ガス流を用いて水素化し、選択的に8位におけるアセチレン性二重結合を還元する。5-メチル-LXB4のメチルエステル又は4-ジメチル-LXB4メチルエステルのテトラエン成分の生成は、還元の完了を評価するRP-HPLCにより監視することができるすなわち1~3時間。次に生成物を25μlのH2Oを加えたTHF中で、0→24oにおいてLiOHを用い、8~24時間処理することにより、メチルエステルを対応する遊離の酸にけん化する。ヒト前骨髄球性白血病細胞及び単球によるリポキシンA4代謝:半減期アッセイHL-60細胞はAmericanTypeCultureCollectionRockville,MDから購入し、他の細胞培養試薬はGIBCOGrandIsland,NYから購入した。ベルセンEDTAはWhittakerBioproductsWalkersville,MDから購入した。合成11,12-アセチレン性LXA4メチルエステル及びリポキシン類はCascadeBiochemicalReading,U.K.から購入した。15S-15-m-PGE1、PGE1及び5-HETEはCaymanChemicalCo.Ann.Arbor,MIから購入した。[11,12-3H]LXA4は、11,12-アセチレン性LXA4からLindlar触媒を用い、通常のトリチウム化として製造したNET-259、ロット02793-275、NewEnglandNuclear,Boston.MA。トリチウム化された生成物はRP-HPLCを用いて単離したFioreetal.1992J.Biol.Chem.267:16168;Serhan,C.N.1990Meth.Enzymol.187:167。メトキシアミン及びNADはSigmaChemicalCompanySt.Louis,MOから購入した。二酸化マンガン及びアダムス試薬AdamsreagentはAldrichChemicalCo.Milwaukee,WIから購入した。ヒト多形核細胞PMNは、健康なボランティアから、新しいヘパリン添加静脈血の勾配遠心により得たBoeyum,A.1986Scand.J.Clin.Lab.Invest.21:77。HL-60細胞は、ペニシリン100U/ml、ストレプトマイシン100μ/ml、牛胎児血清10Hycone,Logan,UTを補足したRPMI中に播種し、プラスチックの250mlフラスコ中でインキュベートした5CO2雰囲気で37°C。5x10-7HL-60細胞/mlを含むそれぞれのフラスコをホルボール12-ミリステート13ホアセテートPMA10又は16nM、24~27時間の存在下又は不在下でインキュベートし、Collins,S.J.1987Blood70:1233における通りにマクロファージ-様表現型の誘導に関して付着adherenceを監視した。新しい単核細胞をグルコース1mg/mlと共にPBSを含むプラスチックペトリ皿上に37°Cで1時間平板培養した後、末梢血単球を得たGoldyne,M.E.etal.1984J.Biol.Chem.259:8815。非-付着細胞を除去し、付着単核細胞をベルセン7ml/プレートを用いて穏やかに懸濁させ、PBS中で洗浄した。PMN>98、付着単球>95及びHL-60細胞を光学顕微鏡により計数し、インキュベーションのためにPBS中に懸濁させ、それぞれの場合に<2~3がトリパンブルーに透過性であった。いくつかの実験の場合、PMA16nMで24~72時間処理したHL-60細胞から無細胞上澄み液を調製した。収穫後、分化細胞を洗浄し、次いで凍結-解凍リシス3回繰り返すに供し、超遠心100,000g、1時間した。エイコサノイドを用いたインキュベーションは、PGB2又は5-HETEを内部標準として含む冷メタノールを用いて停止した5-HETEは、15-オキソ-ETEの定量の場合に用いた。生成物はSep-pakC18を用いて抽出し、Serhan,C.N.1990Meth.Enzymol.187:167における通りに、慣例的にクロマトグラフィーにかけた。RPHPLC系は、AltexUltrasphere-ODS4.6mmx25cmカラムを備えたLKB勾配デュアルポンプdualpompを含み、流量は1ml/分であり、メタノール/H2O/酢酸65:35:0.01を用いて0~20分、及びメタノール/酢酸99.99/0.1を直線勾配で用いて20~45分溶離し、それをLTB4のω-代謝物すなわち20-COOH及び20-OH-LTB4、ならびにLXA4の定量に用いた。内部標準の回収率は82.2、7.9平均S.D.n=13であった。化合物I-IVはAltexUltrasphere-ODSカラム10mmx25cmを用いて分離し、3.0ml/分の流量でメタノール/H2O/酢酸60:40:0.01,v/v/vを用いて溶離した。100,000g上澄み液による15-オキソ-ETEの生成Agins,A.P.etal.1987AgentsActions21:397;Xun,C-Q.etal1991Biochem.J.279:553;及びSok,D-E.etal.1988Biochem.Biophys.Res.Commun.156:524を参照は、ODSカラム4.6mmx25cmを用い、メタノール/H2O/酢酸70:30:0.01,v/v/vを用いて1ml/分の流量で溶離し、280nmにおいて監視されたRP-HPLCの後に定量した。単球-誘導生成物も、Hypersilカラム5IL、4mmx300mmを用いてクロマトグラフィーにかけ、メタノール/H2O/酢酸60:40:0.01,v/v/vを用いて1ml/分の流量で溶離した。オン-ラインスペクトルを、HPLC3DChemStationソフトウェアDOSシリーズを備えたダイオードアレー検出器Hewlett-Packard1040MシリーズIIを用いて記録した。スペクトルはステップ4nm、BW=10nm、領域=235~360nmを用い、1.28秒のサンプリング間隔で得た。GC/MSは、HPG1030Aワークステーション及びGC5890を備えたHewlett-Packard5971A質量選択的四極検出器massselectivedetectorquadrupoleを用いて行った。カラムはHPUltra2架橋5フェニルメチルシリコンゴム相;25mx0.2mmx0.33μmであり、注入はビスTMSトリフルオロアセトアミドBSTFA中において、スプリットレスモードsplitlessmodeで行った。温度プログラムは150°Cで開始し、10分で250°Cに達し、20分で325°Cに達するものであった。標準的飽和脂肪酸メチルエステルC16-C26は以下の保持時間を与え分:秒;n=6の平均C16,8.03;C18,9.77;C20,12.22;C22,16.11;C24,20.72;C26,23.62、それをSerhan,C.N.1990Meth.Enzymol.187:167におけると同様にLX-誘導代謝物のそれぞれのC値の算出に用いた。ジアゾメタンを製造し、メチルエステル生成物をBSTFAPierceChemcalCo.,Rockville,ILで処理してMe3Si誘導体を得た。メチルエステルO-メトキシム誘導体は、Kelly,R.W.andAbel,M.H.1983Biomed.MassSpectrom.10:276におけると同様に製造した。接触水添はメタノール1ml中でAdams試薬Aldrich,Milwaukee,WIを用い、酸化白金IV1~2mgを発泡水素流で飽和させることにより20分間、室温行った。抽出後、材料をジアゾメタン、続いてBSTFAで処理した終夜、室温。結果LXA4の代謝:健康なドナーの末梢血からの無損傷の好中球は、外因性LXA4を有意に代謝しなかったが、同一のドナーからの細胞はω-酸化を介してLXA4を急速に変換した。対照的に、単球/マクロファージ-様特性を示すPMA-処理HL-60細胞は、急速にLXA4を変換した。暴露の最初の60秒以内に、LXA4の>70が代謝された。PMA処理をしないと、無損傷のHL-60細胞未分化もそれらの無細胞上澄み液100,000xgもLXA4を不明n=3。LXA4と共にインキュベートされた分化HL-60細胞は、このエイコサノイドを数種の生成物に変換した。標識LXA4は、トリチウムを有する4つの主生成物に変換され化合物I-IVと表す、それをさらに分析するために集めた。化合物I-IVの構造構造研究できる量のこれらの化合物を得るために、RP-HPLCにおける保持時間を3H-標識溶離プロファイルを用いて確定し、境界を記し、数回のインキュベーションからプールした非標識試料をクロマトグラフィーにかけ、それぞれこれらの領域からGC/MS分析用に集めた。ジアゾメタン及びBSTFAで処理した後に得た生成物の選択的イオン監視は、化合物I-IVがそれぞれm/z203[-CHOSiMe3-CH23-COOCH3]において突出したイオンを示し、LXA4の炭素1から5カルボキシル炭素が1番が変更されなかったことを示したが、それぞれの生成物はLXA4と異なる保持時間を与えた。LXA4のメチルエステル、トリメチルシリル誘導体は、その電子衝撃スペクトルにおいて、m/z203ベースピーク及び173において突出したイオン、及び582M4においてその分子量を示した。このLXA4の誘導体における診断的価値を有する他のイオンは、m/z171203-32、406M-173、379M-203、482M-100及び492M-90において観察されるSerhan,C.N.etal.1984Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:5335;及びSerhan,C.N.1990Meth.Enzymol187:167。一般にリポキシン類は非常に弱い分子イオンピークを与えることが知られていることは、注目に値するSerhan,C.N.etal.1984Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:5335。それにもかかわらず、標識化合物I及びIIはm/z173Me3SiO=CH-CH24-CH3においても突出したイオンを有し、これらのLXA4-誘導生成物の炭素15~20断片が無損傷であることを示しているが、化合物III及びIVにおいてはm/z173におけるイオンは明確でなかった。かくして化合物I-IVがLXA4の代謝物であるという結論は、それらの物理的性質HPLC及びGC/MS、それらがトリチウム標識を有するという発見、ならびにPMAを用いて処理しなかったHL-60細胞を用いたインキュベーションにおけるこれらの生成物の不在に基づいた。次に、化合物III及びIVがLXA4の炭素15~20断片において構造的修飾を有する代謝物を示すと思われるので、それらに焦点を当てた。可能性はω-酸化炭素20におけるヒドロキシル化であったので、誘導の後のそれぞれLXA4の20-OH及び20-COOH形態から生じ得るイオン、すなわちm/z261及び217Me3SiO=CH-CH24-CH2OSiMe3及びMe3SiO=CH-CH24-CO2Meを、得られたGC-MSデータプロファイルにおいて走査した。III又はIVのいずれもm/z261又は217において突出したイオンを示さず、これらの生成物がω-酸化の結果でないらしいことを示した。]Me3Si誘導体、化合物IIIのメチルエステルの質量スペクトルC値24.3を得た。そのスペクトルにおける突出イオンはm/z203ベースピーク、CHOSiMe3-CH23-COOCH3、171203-32;CH3OHの脱離、215[M-203-90、トリメチルシラノールMe3SiOHの脱離]及び99O=C-CH24-CH3において観察された。強度が比較的低いイオンはm/z508M及び418M-90;Me3SiOHの消失であった。これらのイオンの存在は、3H-標識化合物IIIと共溶離された材料がLXA4の15-オキソ-誘導体であったことを示唆した。これはいくつかの証拠、すなわちm/z173Me3SiO=CH-CH24-CH3における突出したイオンの事実上の消失、m/z99O=C-CH24-CH3の存在、テトラエン発色団の不在及び335~340nmのUVλmaxにおける新しい発色団の出現により支持される。テトラエン発色団は、プロスタグランディン変換の場合に用いられる通り、クロロホルム中においてLXA4をMnO2で処理することにより確証されたAenggard,E.andSamuelsson,B.1964J.Biol.Chem.239:4097。又、接触水添生成物の質量スペクトルもm/z203ベースピーク、m/z9966、m/z313M-203又はM-CHOSiMe3-CH23-COOCH3;35及びm/z17136において突出したイオンを有し、m/z173において突出したイオンのない25.1のC値を与えた。比較的弱いイオンはm/z516M及びm/z426M-90においてあった。かくして8amuの上方への移動及びこの飽和誘導体の分裂は、対応する15-オキソ-誘導体の生成と一致した。このLXA4-誘導生成物をさらに調べるために、標識IIIのピークの下で溶離する材料のアリコートをジアゾメタンで処理し、続いてメトキシム化しBergholte,J.M.etal.1987Arch.Biochem.Biophys.257:444におけると同様に、BSTFAで処理した。C値が25.4のそのスペクトルはm/z203ベースピーク、171203-32;CH3OHの消失及び229[M-128又はCH3O-N=C-CH24CH3-2x90]における突出したイオンを示した。比較的強度が低いイオンはm/z537M、466M-71、αt-分裂イオンM-CH2CH23CH3、481M-56又はM-CH2=CH-CH2-CH3、McLafferty転位イオン、431[M-106おそらくC7H5Nの消失]、401[M-136Me3SiOHCH3OCH3の脱離]及び460M-77、NOCH3とMeOHの消失においてあった。この場合も、アルコール-含有C-15断片を起源とするm/z173におけるイオンMe3SiO-CH-CH24-CH3はそのスペクトル中に事実上不在であった。かくして存在するイオンはLXA4の15-オキソ-含有誘導体から生成されるメチルエステル、O-メトキシム誘導体と一致した。これらの種々の誘導体の場合に観察される突出したイオンが一緒になって、標識IIIのピークの下で溶離する材料がLXA4の15-オキソ-生成物すなわち15-オキソ-LXA4であったことを示唆している。化合物IVのメチルエステルMe3Si誘導体C値26.0の質量スペクトルは、m/z203ベースピーク、CHOSiMe3-CH23COOCH3、171203-32;CH3OHの消失、99O=C-CH24-CH3及び307M-203又はMCHOSiMe3-CH23-COOCH3において突出したイオンを示した。比較的低い強度のイオンはm/z510M、420M-90、トリメチルシラノールの消失及び208M-99203においてあった。そのUVスペクトルは、259、269及び280nmにおいて最大を有する吸収のトリプレットを示し、共役トリエン発色団と一致した。これらのイオンの存在及びUVスペクトルは、IVがLXA4のジヒドロ-15-オキソ-代謝物であったことを示す。この基本的構造は、炭素15位におけるケト基と一致するm/z99におけるイオンの存在、及び炭素5及び6におけるアルコール基が無損傷のままであることを明らかにするベースピークとしてのm/z203の存在により支持された。さらにトリエンオン発色団λcal=310nmの不在は、二重結合の消失が△13-14位においてであり、観察されたトリエン発色団を与えることを示す。これらの結果が一緒になって、化合物IVが13,14-ジヒドロ-15-オキソ-LXA4であったことを示している。化合物IIのメチルエステル、Me3SiO誘導体C値-25.4は、m/z203ベースピーク;CHOSiMe3-CH23COOCH3、173Me3SiO-CH-CH24-CH3、171203-32及び584Mにおいてイオンを与えた。その分子イオンはLXA4誘導体より2質量単位高かった。これらのイオン及びλmaxMeOH259nm、269nm及び282nmにおける吸収のトリプレットバンドは、化合物IIがLXA4のジヒドロ-誘導体であったことを示す。HL-60細胞からの化合物Iのメチルエステル、Me3SiO誘導体はGCにおいて2つの生成物を与えた。主要な生成物C値=25.0は、その質量スペクトルにおいてLXA4と類似のイオンを与えたが、その分子イオンはm/z586においてであり、m/z555M-31及び496M-90におけるイオンも存在し、4つの二重結合の2つが還元された示されていないことを示している。しかし末梢血単球上記参照の場合に同一の生成物は観察されず、かくしてピークIからのHL-60細胞-誘導材料は本実験においてこれ以上特性化しなかった。I-IVの構造及び図1からの結果は、LXA4が無損傷の白血球によるω-酸化により代謝されず、代わりに炭素15アルコールにおいて脱水素され、共役テトラエンからトリエン構造にも変換されることを示す。これらの観察を一緒にして、LXA4は、プロスタノイドを基質として類似の反応を行うことが知られている酵素であるNAD-依存性15-プロスタグランディンデヒドロゲナーゼ5-PGDHにより攻撃され得ることが示唆されるAenggard,E.andSamuensson,B.1964J.Biol.Chem.239:4097及びHansen,H.S.1976Prostaglandins12:647において考察。15-PGDH活性は最近、HL-60細胞において誘導されることが示されXun,C-Q.etal.1991Biochem.J.279:553、それはPGE2と比較して92の効率で基質として15-HETEを用いると思われるAgins,A.P.etal.1987AgentsAction21:397。実際に、PMA-処理HL-60細胞から調製された100,000g上澄み液は、15-HETEを15-オキソ-ETEに変換し、分化の後のデヒドロゲナーゼ活性の存在を示している。LXA4は15-HETEの触媒作用に関して競合し、Lineweaver-Burkeプロットから算出されるKi=8.2±2.6μMS.E.M.,n=6を与えた。等モル濃度のLXA4及び15-HETEにおいて、LXA4は15-オキソ-ETE生成を約50妨害した。PGE1と比較したLXに関する、100,000g上澄み液による相対的変換率図5は、LXA4、11-トランス-LXA4及びLXB4が変換されるが15-メチル-PGE1は変換されないことを示した。これらの結果は一緒になって、LXA4>11-トランス-LXA4>LXB4が15-PGDH又は同等の酵素系に関する基質であることを示す。PMAはHL-60細胞の単球-マクロファージ-様整列lineageを誘導するのでCollins,S.J.1987Blood70:1233、末梢血単球をインキュベートし、それらがリポキシンを代謝するか否かを決定した。リポキシン類は単球との有力な作用を示しStenke,L.etal.1991bBiochem.Biophys.Res.Commun.180:255、これらの細胞はエイコサノイド類をω-酸化しないWoldyne,M.E.etal.1984J.Biol.Chem.259:8815。無損傷の単球n=5及び透過化細胞凍結-解凍又はサポニン-処理、n=5の両方の懸濁液をLXA4に暴露すると、LXA4は15-オキソ-LXA4ならびに共役トリエン含有生成物、13,14-ジヒドロ-LXA4及び13,14-ジヒドロ-15-オキソ-LXA4に変換される表1を参照。分化HL-60細胞の場合と同様に、単球は30秒以内に急速にLXA4を変換した>60図6。無損傷の、及び透過化単球の両方におけるこれらの代謝物の生成に関する時間的temporal関連性は類似であり、15-オキソ-LXA4代謝物が遷移的中間体であることを示唆している。又、3H-LXA4d=33と共にインキュベートされた各単球懸濁液において、13,14-ジヒドロ-15-オキソ-LXA4及び13,14-ジヒドロ-LXA4が放射性標識を有する主要な生成物であった。15.5~17分において13,14-ジヒドロ-LXA4より前に溶離する生成物が観察され、それもトリエン発色団を示し、仕上げの間に遭遇するシス-トランス異性化から生ずる13,14-ジヒドロ-LXA4の11-トランス異性体であると思われたことは、注意するに値する。本来のLXA4の11-シス二重結合は不安定であり、抽出及び単離の間に全-トランスに容易に異性化するRomano,M.andSerhan,C.N.1992Biochemistry31:8269。リポキシンレセプター類似体への結合親和力ヒト前骨髄球性白血病細胞HL-60はAmericanTypeCultureCollectionRockville,MDらか購入した。RPMI培地及び細胞培養試薬はGIBCOGrandIslandNYから購入した。合成LXA4.トリヒドロキシヘプタン酸メチルエステル、LXB4、LTD4、LTC4及びLTB4はBiomolPlymouthMeeting,PAから、及びSKF104353はSmithKlineandFrenchLaboratoriesから購入した。ONO4057はONOPharmaceuticalCol,LtdOsaka,Japanから購入した。[14,15-3H]LTB432.8mCi/ミリモル、[1-14C]アラキドン酸50.2mCi/ミリモル、32PγATP3,000Ci/ミリモル、[9,10-3HN]パルミチン酸30.0mCi/ミリモル及び[9,10-3HN]ミリスチン酸30.7Ci/ミリモルはNewEnglandNuclearDuPontCo.,Boston,MAから購入した。11,12-アセチレン性LXA4はCascadeBiochemicalsOxford,UKから購入した。微量遠心管フィルター0.45μm酢酸セルロースはPGCScientificGaithersburg,MDから、及びシリコン油はHarwickChemicalCorp.Akron,OHd=1.05及びThomasScientificSwedesboro,NJd=0.963からそれぞれ購入した。ニトロブルーテトラゾリウム、PMA、DMSO、プロテアーゼ、レチノイン酸及びアクチノマイシンDはSigmaSt.Louis,MOから購入した。インスリン分泌活性タンパク質isletactivatingproteinIAPはLISTBiologicalLab.,Inc.Campbell,CAから購入した。プラスチックウェア、WhatmanLK6DTLCプレート及び溶媒HPLC等級はFisherSpringfield,NJから購入した。[11,12-3H]LXA4の製造11,12-アセチレン性LXA4メチルエステルのトリチウム化は、NewEnglandNuclearBoston,MAによる通常のトリチウム化サービスNET-259:92-2326下で行った。簡単に言うと、11,12-アセチレン性メチルエステルをNicolaou,K.C.etal.1985J.Am.Chem.Soc.107:7515におけると同様にUV吸収及び逆相HPLCにより特性化し、室温においてメチレンクロリド中でトリチウム雰囲気に暴露した。このインキュベーション物をLindlar触媒FlukaChemicalsからの1.0mgの存在下で約1時間撹拌した。得られた混合物をメタノール中に保存し、RP-HPLCを用いて単離した。トリチウム化生成物を、光ダイオードアレー急速スペクトル検出器photodiodearrayrapidspectraldetectorを備えた勾配HPLC系を用いてメチルエステルとしてクロマトグラフィーにかけたSerhan,C.N.,MethodsinEnzymology:ArachidonateRelatedLipidMediators,inMurphyR.C.,Fitzpatrick,F.eds.vol.187,Orlando,FL.Academic,1990,p.167。この混合物は[11,12-3H]LXA4及び[11,12-3H]-11-トランス-LXA4メチルエステル~1:3の比率の両方を含むことが合成標準との共溶離により決定された。RP-HPLCの後、[11,12-3H]LXA4を含む画分を集め、酢酸エチル中に抽出した。LiOHけん化により遊離の酸を製造したFiore,S.etal.1992J.Biol.Chem.267:16168。これらの画分からの材料は、UV-電気化学的検出HPLC中に注入すると、合成LXA4と共溶離したテトラエン-含有生成物に伴う90以上の放射性を与えた。2つのHPLC系において基準LXA4の保持時間を有して溶離した材料を結合実験に採用した。[11,12-3H]LXA4に関して算出された比活性は40.5Ci/ミリモルであった。細胞培養及び分化HL-60細胞を100U/mlのペニシリン、100μg/mlのストレプトマイシン及び10の牛胎児血清Hyclone,Logan,UTを補足したRPMI培地に播種し、250mlのフラスコにおいて5CO2雰囲気を用い、37°Cでインキュベートした。次に~50x106細胞/mlを含むそれぞれのフラスコにジメチルスルホキシドDMSO1.12v/v、120時間又はレチノイン酸RA1μM、120時間又はホルボールミリステートアセテートPMA20nM、48時間を与えた。結合アッセイを開始する前に、細胞をCa2及びMg2を含まないリン酸塩緩衝食塩水PBS中で2回洗浄し、計数し、Tris緩衝液10mM、pH7.4中に20x106細胞/mlで懸濁したFiore,S.etal.1992J.Biol.Chem.267:16168。ニトロブルーテトラゾリウム還元を行い、Imaizumi,M.andBreitman,T.R.1986Blood67:1273におけると同様に多形核表現型の誘導を監視し、マクロファージ-様表現型の誘導に関して細胞付着を決定したCollinsS.J.1987Blood70:1273。第3継代培養に保持されたヒト臍静脈内皮細胞HUVECをDr.M.GimbroneBrighamandWomen’sHospitalDepartmentofPatholohyから得た。末梢血からのPMN、血小板及びRBCの単離ヒトPMNは、健康で正常なボランティアの静脈穿刺の後に、新しいヘパリン血から修正Boeyum法Boeyum,A.1968Scan.J.Clin.Lab.Invest.21:77により得た。PBS中の懸濁液を細胞数に関して、及びトリパンブルーを排除する能力により生存率に関して監視し、両者は98を越えた。10mlのヘパリン血から、PBS中で3回遠心した後、赤血球を得た2,500rpm、20°Cにおいて10分間。酸性クエン酸塩デキストロース9:1v/v中に採血した血液を用い、前記の通りに血小板を単離したSerhan,C.N.andSheppard,K.-A.1990J.Clin.Invest.85:772。リガンド結合3H-LXA4及び3H-LTB4結合を本質的にFiore.S.etal.1992J.Biol.Chem.267:16168におけると同様にして行った。Tris緩衝液10mMpH7.4、Ca22.5mM、Mg21.2mM中に細胞を懸濁させた後、アリコート0.5mlを3H-リガンドのみ0.3nMと、又は濃度を増加させたホモリガンド又は他の化合物3~300nMの存在下でインキュベートした4°Cにおいて20分間。インキュベーション物をシリコン油上d=1.028で急速に遠心し60秒間、12,000g、細胞-付随放射性を液体シンチレーションカウントWallac1409,Pharmacia,Piscataway,NJにより決定した。HUVEC細胞との結合実験は、3.5x105細胞/ウェルを有する12ウェルプレートにおいて行った。10分後、ウェルをPBSで2回洗浄し、氷酢酸0.5mlを加えることにより細胞-付随標識を回収した。これらのアッセイから得た結果から、リガンドプログラムを用いた実験をさらに行うこととなった。PLD活性上記の通りに調製されたヒトPMN及びHL-60細胞50x106細胞/mlを3H-ミリスチン酸又は3H-パルミチン酸8μCi/50x106細胞と共にPBS中で37°Cにおいて40~60分間インキュベートした。細胞吸収は加えられた標識の60~80の範囲であり、7.1±4.2n=10;平均±S.D.及び32.6±10.3n=6;平均±S.D.がそれぞれPMN及びHL-60細胞の全リン脂質中に吸収された。インキュベーションは37°Cにおいて行った10x106細胞/mlPBS。Billah.M.M.etal.1989J.Biol.Chem.264:17069におけると同様に、拮抗剤を50μLのPBS中で、又はホスファチジルエタノール生成のために1:10v/vEtOH:PBSを用いて加えた。指示された時間に、ここでは抽出回収物を定量するための内部標準として用いられる1-14C-アラキドン酸5,000cpmを含む3.5mlの氷冷CHCl3/MeOH2/5v/vを加えることによりインキュベーションを停止した。試料を、Serhan,C.N.andSheppard,K.-A.1990J.Clin.Invest.85:772におけると同様に修正BlighandDyer抽出を用いて抽出した。50μLのCHCl3/MeOH8/2v/v中で濃縮された有機相を線状linearK6DTLCプレート上にスポットし、酢酸エチル/イソオクタン/酢酸/水110/50/20/100,v/v/v/vの有機相を用いて50分間展開したBillah.M.M.etal.1989J.Biol.Chem.264:17069。この系において、ホスファチジン酸PAはRf=0.1±0.04を与え、PEtはRf=0.56±0.04を与え;n=38±S.D.、それらは他のリン脂質起点に残った又は天然の脂質Rf=0.75~0.90から明確に分離された。脂質をヨウ素蒸気を用いて視覚化し、やはり各TLCプレートにおいてスポットされてクロマトグラフィーにかけられた基準標準試料と共溶離することにより同定した。PA、PEt及び内部標準に相当する領域をこすり落とし、液体シンチレーションカウントにより定量した。3H-ミリステート又は3H-パルミテート標識の他に、[1-14C]アラキドネート0.25μCi/30x106PMN及び32PγATP20μCi/50x106PMN標識細胞の両方を用い、PA及びPEt生成のLXA4-刺激生成を監視した。これらの実験において、PAは酢酸エチル/イソオクタン/酢酸45/15/10、v/v/vを溶媒系として用いて分離されBocckino,S.B.etal.1989Anal.Biochem.180:24、Rf=0.46±0.03n=15を与えた。表4及び5におけるPEt生成に関して報告されているすべての値は、拮抗剤のみの存在下で得たdpmを拮抗剤及び0.5EtOHの存在下で測定されたdpmから引き去ることにより算出した。LXA4-誘導PLD活性へのIAP及びスタウロスポリンの影響上記の通りに行われたPLD活性アッセイ上記参照の前に、IAP又はスタウロスポリンのいずれかへの細胞暴露を行った。PMNのIAP処理は、以前に記載された通りに行いNigam.S.etal.1990J.CellPhysiol.143:512、HL-50はIAP300ng/mlの存在下又は不在下で37°Cにおいて2時間インキュベートしたKanaho,Y.etal.1992J.Biol.Chem.267:23554。アリコート107細胞/0.5mlを0.4mlの緩衝液に加えた。次に、インキュベートされた細胞を100μlのビヒクルPBS、EtOH0.04又はLXA410-7M及び10-9Mのいずれかに、0.5EtOHの存在下で暴露した。スタウロスポリン100nMは、LXA4を加える前に37°Cで5分間細胞懸濁液に加えた。結果合成[11,12-3H]LXA4の製造の後、その前骨髄球性白血病細胞HL-60への特異的結合を特性化し、[14,15-3H]LTB4の特異的結合との直接的比較を行った。慣例的表現型マーカーを監視すると、未処理HL-60細胞は3H-LXA4及び3H-LTB4リガンドの両方に関して低い程度の特異的結合を示した。DMSO1.12又はレチノイン酸1μMに5日間暴露することにより誘導された分化は、両方の放射性リガンドに関する特異的結合の3~5倍の増加を伴った。マクロファージ-様表現型の特性を示すPMA-処理細胞20nM、48時間、すなわちプラスチックに付着するNBT陰性細胞Imaizumi,M.andBreitman,T.R.1986Blood67:1273;Collins,S.J.1987Blood70:1233を参照も3H-LXA4及び3H-LTB4の両方との特異的結合の出現に導いた。4°Cにおいて10分で3H-LXA4との平衡結合に達し、次の20分間、事実上変化しないままであった。両3H-リガンドに関する特異的結合の誘導が始めからの合成denovosynthesisを必要とするか否かを評価するために、アクチノマイシンD2μg/mlをPMNインキュベーション物と共に加えた。アクチノマイシンDは、両標識エイコサノイド類に関する特異的結合におけるPMA-誘導増大を妨害し、始めからのタンパク質生合成の阻害が特異的結合部位の出現も妨害することを示唆した。プロテアーゼ及びグリコシダーゼ処理の影響を、3H-LXA4特異的結合に関して分化HL-60細胞及びヒトPMNの両方を用いて評価した。プロテアーゼ処理は特異的結合を減少させ、LXA4特異的結合部位のタンパク質成分を支持する証拠を追加した。分化HL-60細胞及び[11,12-3H]LXA40.1~30nMを用いた等温結合アッセイ4°C、10分間からの結果は、[11,12-3H]LXA4特異的結合部位がKd=0.6±0.3nMを与えることを示した。ヒトPMNとのLXA4特異的結合の場合に観察された濃度に関し、Scatchardプロットの非直線状部分が観察されたFiore,S.etal.1992J.Biol.Chem.267:16168。HL-60細胞とのLTB4特異的結合の場合にここで得た結果、Kd=0.12nMは本質的に、HaradaXie,M.etal.1991J.Clin.Invest.88:45により最近報告された値、すなわちKd=0.23nMと一致する。3H-LXA4のその特異的結合部位との相互作用をさらに特性化するために、分化HL-60細胞を用いて競合結合実験を行った。LXA4、LXB4、LTB4、LTC4及びロイコトリエンレセプター拮抗剤SKF104353LTD4拮抗剤;Harada.Y.1990HiroshimaJ.Med.Sci.39:89及びONO-4057LTB4拮抗剤;Gleason.J.G.etal.1987J.Med.Chem.30:959を、可能性のある競合リガンドとして評価した。LXB4、LTB4又はトリヒドロキシヘプタン酸メチルエステル300nMのいずれも分化HL-60細胞との3H-LXA4特異的結合を置換することができなかったが、LTC4は3対数モル過剰3logmolarexcessで加えると特異的結合を約30減少させた。LXA4300nMが、分化HL-60細胞への3H-LTB0.3nM結合と競合できないという発見は、LXA4及びLTB4が別の種類の特異的結合部位と相互作用することを示唆している。ロイコトリエンレセプター拮抗剤SKF104353及びONO-4057は、分化HL-60細胞との3H-LXA4結合を置換しなかったが、SKF104353及びLTD4はHUVECとの特異的3H-LXA4結合との競合において有効であった。HUVECは3H-LXA4に関して11.0±2.6nMのKd及び2.5x10-10MのBmaxを示し、LTD4競合に関して事実上同一の値が算出された。3H-LTB4の場合、HUVECはLTB4に特異的に結合しなかったが、この3H-リガンドとの非特異的細胞会合が明白であったn=3;示されていない。3H-LXA4の特異的会合は、調査されたいくつかの他の細胞型の中で明らかではなかった。ここで、洗浄された血小板、RBC、β-細胞Raji又はT-細胞Jurkat培養細胞系のいずれも3H-LXA4に関する特異的結合を示さなかった。これらの結果を一緒にすると、LXA4は、ロイコトリエンレセプター拮抗剤SKF104353又はONO-4057に感受性でない、分化HL-60細胞における独特の結合部位と相互作用することが示されている。HUVECにおいて、3H-LXA4特異的結合部位はLTD4及びSKF104353の両方に感受性であったが、ONO-4057に感受性でなく、この細胞型における3H-LXA4特異的結合が推定LTD4レセプターとのその相互作用を反映し得ることを示唆している。LXA4はヒト好中球におけるホスファチジン酸生成を急速に刺激するNigam.S.etal.1990J.Cell.Physiol.143:512。3H-LXA4結合がPLD活性化を与えるか否かの決定のために、PEt及びPAをPMN及びHL-60細胞の両方において監視した。結果は、これらの細胞型においてLXA4は、類似の時間的応答でPLD活性を刺激することを示した。LXA410-10Mに暴露されたPMNは、60秒以内に急速にエタノール捕獲生成物PEtを生成し、それは5分までにベースライン量まで減少した。EtOHを加えない場合、PEtは統計的に有意な量では生成されなかった。PMN及び分化HL-60細胞の両方において、PEt生成に関する2相濃度依存性biphasicconcentrationdependenceが得られた。見掛けの最大応答は、約10-9~10-10MのLXA4の濃度範囲の場合に見られ、活性の第2のピークは10-7MのLXA4において観察された。10-8M以下では、化学走性ペプチドFMLP及びLXA4の両方が類似の大きさの結果を与え、FMLPが何人かのドナーからのPMNの場合にわずかに、より効力があると思われる。他の生合成経路の寄与の可能性を評価するために、LXA4-誘導PA生成を32PγATP及び[1-14C]-アラキドネート-標識PMNの両方においても調べた。32P-標識PAは、LAX410-7Mへの暴露の30分後に初めて統計的に有意な量で明らかとなった。14C-アラキドネート-標識前駆体から誘導される14C-標識PA生成の場合、類似の結果が得られた。これらの発見は、LXA4がPMNにおけるPA生成の他の経路も刺激することができるが、暴露のやっと30分後であることを示した。LXA4と共にインキュベートされた分化HL-60細胞のみ3H-LXA4に関する特異的結合部位を発現するがPEtを急速に生成し、それは30秒以内に明らかとなった。LXA410-9Mと共にインキュベートされた未分化HL-60細胞は、急速にPEtを生成しなかった。これらの細胞の場合の濃度依存性もLXA4との2相応答を与え、10-9Mにおいて見掛けの最大値を与えた。LXA4-媒介PLD活性化に含まれる可能な信号導入事象signaltransductioneventsを調べるために、次にPMN及びHL-60細胞をIAP又はスタウロスポリンのいずれかに暴露した。結果は、低濃度範囲10-9~10-10M内で引き出されたLXA4-媒介PLD活性は、両細胞型においてIAP処理に感受性であり、同様にLXA4の高濃度10-7Mにおいて刺激されたPLD活性はスタウロスポリンにより阻害されたことを示す。かくして10-8Mより低い濃度における両細胞系の場合、LXA4は急速に特異的結合部位と相互作用し、それがPLD活性の引金を引き、従って機能的応答を与えるが、LXA4のマイクロモル以下の濃度の範囲内でそれは、やはりPLDの活性化に導くことができる別の過程を刺激することができる。リポキシン生物活性アッセイ好ましいリポキシン類似体のいくつか上記の化合物1~8として構造を示したを実施例1に記載の通り、全合成により製造した。製造及びHPLCを介したこれらの化合物の単離の後に、最初にそれらが生物活性を保持しているか否かを決定するために、好中球付着アッセイ及び上皮細胞移行アッセイにより化合物を評価したNash,Setal.1987J.Clin.Invest.80:1104-1113;Nash,Setal.,1991J.Clin.Invest.87:1474-1477;Parkos,C.A.etal.,1991J.Clin.Invest.88:1605-1612;Parkos,C.A.etal.1992J.Cell.Biol.117:757-764;MadaraJ.L.etal.,1992J.Tiss.Cult.Meth.14:209-216に記載の通り。化合物1~810-7~10-10Mは、内皮細胞への好中球付着及び上皮細胞上におけるそれらの移行を阻害することが見いだされた。アセチレン性前駆体化合物1、3、5及び7は、それらに対応するテトラエンより物理的に安定であることが見いだされた。C15位におけるアルコール基又は系列における他の修飾を有していない化合物7は、アッセイにおいて生物活性を示さなかった。従ってリポキシンのC15位における置換基が、少なくともリポキシンA4類似体の生物活性のために必要であると思われる。15-メチル-リポキシンA4化合物2も、ロイコトリエンB4LTB4により引金を引かれるヒト内皮細胞への多形核PMN付着を、約1nMのIC50で阻害することが証明された。リポキシン類似体1~8は、合成リポキシンA4より大きいか、又は等しい力価において移動を妨害することが見いだされた。化合物7は、LXA4又は他の類似体により誘導される阻害の場合の濃度範囲内で、本質的に不活性であることが見いだされた。これらの好中球-含有バイオアッセイの結果は、C15~20位に修飾を有するリポキシンA4類似体がそれらの生物学的作用を保持しており、PMN移行及び付着事象を阻害することができることを示している。化合物1~8の生物学的半減期bio-half-lifeを、実施例2に記載の通りにホルボールエステル-処理ヒト前脊髄球性白血病HL-60細胞を用いて評価した。これらの細胞は、細胞インキュベーション物へのその添加の5分以内にリポキシンA4の95以上を変換する。この系におけるリポキシンA4は急速に15-オキソ-リポキシンA4に変換される。しかし同一のアッセイにおいて、15-メチル-リポキシンA4化合物2及びシクロヘキシル-リポキシンA4化合物4は、最高2時間の時点でインキュベーション培地において定量的に回収された。これらの結果は、炭素20~炭素15位における修飾が、白血球によるリポキシンA4のさらなる代謝を予防することを例示している。さらに、アセチレン性メチルエステルリポキシンA4化合物1の安定性は、抽出及び逆相HPLCの後に評価すると、生体外にける全血37°C中で60分間インキュベートした後、本質的に無損傷で回収された。これらの結果を一緒にすると、リポキシン類似体は生物学的作用を保持しており、試験管内におけるさらなる代謝に抵抗性であることを示している。本発明の主たる態様または特徴は次のとおりである。態様1:構造式:[式中、XはR1、OR1又はSR1であり、ここでR1はi水素;ii炭素数が1~8の直鎖状もしくは分枝状のアルキル;iii炭素数が3~10のシクロアルキル;iv炭素数が7~12のアラルキル;vフェニル;vi置換フェニル[式中、Zi、Ziii及びZvはそれぞれ独立して-NO2、-CN、-C=O-R1、水素及び-SO3Hから成る群より選ばれ;Zii及びZivはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれる];vii蛍光標識のような検出可能な標識分子;あるいはviii炭素数が2~8の直鎖状もしくは分枝状のアルケニル;であり、Q1はC=O、SO2又はC=Nであり、Q3はO、S又はNHであり、R2及びR3の一方は水素であり、他方はaH;b直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~8のアルキル;c炭素数が3~6のシクロアルキル;d直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が2~8のアルケニル;又はeRaQ2Rb[ここでQ2は-O-又は-S-であり;Raは原子価結合または直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~6のアルキレンであり;Rbは直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~8のアルキルである];であり、R4はaH;またはb直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~6のアルキル;であり、Y1又はY2は一方が-OH、メチル、-H又は-SHであり、他方はaH;bCHaZb[ここでab=3、a=0~3、b=0~3であり;Zはシアノ、ニトロ又はF、Cl、Br、Iを含むハロゲンである];c直鎖状もしくは分枝状の炭素数が2~4のアルキル;またはd炭素数が1~4のアルコキシ;であるか、あるいはY1及びY2は一緒になってa=N;又はb=O;であり、R5はa直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~9のアルキル;b-CH2n-Ri[ここでn=0~4であり、Riはi炭素数が3~10のシクロアルキル;iiフェニル;又はiii置換フェニル[式中、Zi、Ziii及びZvはそれぞれ独立して水素、-NO2、-CN、-C=O-R1、メトキシ及び-SO3Hから成る群より選択され;Zii及びZivはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれる];である];c-RaQaRb[ここでQaは-O-又は-S-であり;そしてRaは原子価結合または直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~6のアルキレンであり;Rbは直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~8のアルキルである];d-CRiiiRiv-Ri[ここでRiii及びRivは独立してiH;およびiiCHaZb[ここでab=3、a=0~3、b=0~3であり、Zはハロゲンから成る群より選択される];から成る群より選択される];またはe1~6個のハロゲン原子を含む炭素数が1~8の直鎖状もしくは分枝状のハロアルキル;である]で表されるリポキシン。態様2:構造式:[式中、XはR1、OR1又はSR1であり、ここでR1はi水素;ii炭素数が1~8の直鎖状もしくは分枝状のアルキル;iii炭素数が3~10のシクロアルキル;iv炭素数が7~12のアラルキル;vフェニル;vi置換フェニル[式中、Zi、Ziii及びZvはそれぞれ独立して-NO2、-CN、-C=O-R1、水素及び-SO3Hから成る群より選ばれ;ここでZii及びZivはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれる];vii検出可能な標識分子;或いはviii炭素数が2~8の直鎖状もしくは分枝状のアルケニル;であり、Q1はC=O、SO2又はC=Nであり、Q3はO、S又はNHであり、R2及びR3の一方は水素であり、他方はaH;b直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~8のアルキル;c炭素数が3~6のシクロアルキル;d直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が2~8のアルケニル;又はeRaQ2Rb[ここでQ2は-O-又は-S-であり;Raは原子価結合または直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~6のアルキレンであり;Rbは直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~8のアルキルである];であり、R4はaH;もしくはb直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~6のアルキル;であり、Y1もしくはY2の一方はヒドロキシ、メチル、水素又はチオールであり、他方はaH;bCHaZb[ここでab=3、a=0~3、b=0~3であり;Zはシアノ、ニトロ又はハロゲンである];c直鎖状もしくは分枝状の炭素数が2~4のアルキル;d炭素数が1~4のアルコキシ;であるか、あるいはY1及びY2は一緒になってa=N;又はb=O;であり、R5はa直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~9のアルキル;またはb-CH2n-Ri[ここでn=0~4であり、Riはi炭素数が3~10のシクロアルキル;iiフェニル;iii置換フェニル[式中、Zi、Ziii及びZvはそれぞれ独立して水素、-NO2、-CN、-C=O-R1、メトキシ及び-SO3Hから成る群より選ばれ;Zii及びZivはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれる];である];c-RaQaRb[ここでQaは-O-又は-S-であり;Raは原子価結合または直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~6のアルキレンであり;Rbは直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が0~8のアルキルである];またはd-CRiiiRiv-Ri[ここでRiii及びRivは独立してiH;およびiiCHaZb[ここでab=3、a=0~3、b=0~3であり、Zはハロゲンから成る群より選択される];から成る群より選択される];である]で表されるリポキシン類似体態様3:構造式:[式中、RaはaH;およびb炭素数が1~8のアルキル;から成る群より選択され、Rbはから成る群より選択される]で表されるリポキシン類似体。態様4:構造式:[式中、RaはaH;およびb炭素数が1~8のアルキル;から成る群より選択され、RbおよびRcは独立にaH;bヒドロキシルもしくはチオール;cCF3を含むハロメチル;dハロゲン:e直鎖状もしくは分枝状の炭素数が1~3のアルキル;およびf炭素数が1~3のアルコキシ;から成る群より選択され、RdおよびReは独立にaH;bヒドロキシルもしくはチオール;cメチルもしくは-CF3および-CH2Fを含むハロメチル;dハロゲン:eメトキシを含む炭素数が1~3のアルコキシ;およびf直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が2~4のアルキルもしくはハロアルキル;から成る群より選択される]で表されるリポキシン類似体。態様5:構造式:[式中、RaはaH;およびb炭素数が1~8のアルキル;から成る群より選択され、RbおよびRcは独立にaH;bヒドロキシルもしくはチオール;cCF3およびCH2Fを含むハロメチル;dハロゲン:e直鎖状もしくは分枝状の炭素数が1~3のアルキル;およびf炭素数が1~3のアルコキシ;から成る群より選択され、R5はa直鎖状もしくは分枝状であることができる炭素数が1~9のアルキル;またはb-CH2n-Ri[ここでn=0~4であり、Riはi炭素数が3~10のシクロアルキル;iiフェニル;又はiii置換フェニル[式中、Zi、Ziii及びZvはそれぞれ独立して水素、-NO2、-CN、-C=O-R1及び-SO3Hから成る群より選ばれ;Zii及びZivはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素、メトキシ及びヒドロキシルから成る群より選ばれる];である]で表されるリポキシン類似体。"