"対象の検体と反応物の間の反応生成物の検出によって、対象の検体の存在を判定する方法であって、該方法は、該反応生成物の最大の無視しうる濃度negligibleconcentrationを有する初期反応混合物においてバックグラウンド測定を行うことであって、該初期反応混合物の反応条件が、該無視しうる濃度の測定可能な変化なく、該バックグラウンド測定を行うことができるように、少なくとも、該反応生成物の生成の反応速度を低減することと、該初期反応混合物の反応条件を変更して、該反応速度を加速させることと、該反応生成物の濃度が安定するまで、該反応を継続することと、得られた反応混合物に関する第2の測定を行って、該濃度に相関するシグナルを得ることと、該バックグラウンド測定と該第2の測定の間の相違から対象の検体の存在を判定することとを含む、前記方法。複合試料マトリックスから前記対象の検体を抽出する工程と、該対象の検体を初期反応混合物に移す工程と、をさらに含む、請求項1に記載の方法。前記対象の検体の存在を決定する工程が、前記反応混合物中の対象の検体の濃度を測定することを含む、請求項1または2に記載の方法。前記最大の無視しうる濃度の測定可能な変化なしで、前記バックグラウンド測定を行うことができるように、該バックグラウンド測定を行う前に、前記初期反応混合物の反応条件を制御することをさらに含む、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。前記初期反応混合物の反応条件を制御する工程が、該初期反応混合物のpH、温度、混合割合、および化学組成のうちの少なくとも1つを制御することを含む、請求項4に記載の方法。前記初期反応混合物の化学組成を制御する工程が、該初期反応混合物から、前記対象の検体および前記反応物のうちの1つを除くことを含む、請求項5に記載の方法。前記初期反応混合物の化学組成を制御する工程が、該初期反応混合物に反応阻害剤を加えることを含む、請求項5に記載の方法。第1および第2測定が、光学測定、蛍光測定、吸着測定、比色定量測定、電気化学測定、および重量測定のうちの1つである、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。請求項8に記載の方法であって、前記バックグラウンド測定を行うことが、前記初期反応混合物の吸収スペクトルの少なくとも一部を測定することを含み、かつ、前記第2の測定を行うことが、前記得られた反応混合物の吸収スペクトルの少なくとも一部を測定することを含む、前記方法。前記対象の検体が、プロポフォール2,6‐ジイソプロピルフェノールであり、前記反応物が、活性化ギブズ試薬2,6‐ジクロロキノンイミンである、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。請求項10に記載の方法であって、前記初期反応混合物が、ギブズ試薬2,6‐ジクロロキノン‐4‐クロロイミドを含み、前記初期反応混合物の反応条件が、該ギブズ試薬から前記活性化ギブズ試薬への転化を防止するのに十分に低いpHを含み、かつ、前記初期反応混合物の反応条件を変更して反応速度を加速させる工程が、初期反応混合物のpHを増加させることを含む、前記方法。前記初期反応混合物が、クエン酸緩衝液、ギ酸緩衝液、または重炭酸塩緩衝液などの十分に低いpHを維持する緩衝液を含む、請求項11に記載の方法。前記第1および第2の測定が、400nm~800nmの間隔を含む吸光スペクトルから、前記初期反応混合物および前記得られた反応混合物の吸光度をそれぞれ決定することを含む、請求項10または11に記載の方法。前記第1および第2の測定が、595nmの第1の波長と、800nmの第2の波長で、前記初期反応混合物および前記得られた反応混合物の吸光度をそれぞれ決定することを含む、請求項10または11に記載の方法。前記第1および第2の測定が、595nmのみの波長で、前記初期反応混合物および前記得られた反応混合物の吸光度をそれぞれ決定することを含む、請求項10または11に記載の方法。固相抽出を用いて、前記複合試料マトリックスからプロポフォールを抽出することをさらに含む、請求項10~15のいずれか一項に記載の方法。前記複合試料マトリックスが血液である、請求項16に記載の方法。抽出工程が、血液試料が固相抽出カラムを通過し、該カラムを洗浄し、適切な溶媒を使用して、プロポフォールを溶出することを含む、請求項17に記載の方法。前記溶媒がアセトニトリルである、請求項18に記載の方法。前記血液試料が、前記カラムを通過する前に、水によって、1:1よりも大きい比、好ましくは血液:水の該比が1:2~1:50の範囲に希釈される、請求項18または19に記載の方法。請求項1~20のいずれか一項に記載の方法であって、前記初期反応混合物の反応条件を変更して前記反応速度を加速させる工程の後に、かつ、前記反応生成物の濃度が安定する前に、少なくとも1つの中間測定を行うことをさらに含み、前記バックグラウンド測定と第2の測定の間の相違から対象の検体の存在を判定する工程が、該バックグラウンド測定、該第2の測定、および該少なくとも1つの中間測定の間の相違から、該存在を決定、測定することをさらに含む、前記方法。本発明は、反応段階が、検体特に、プロポフォールの存在を質的または定量的に評価するために、その後検出される反応生成物を発生させるのに必要な状況下で、該検体の検出および/または濃度測定の下限を改善する方法を提供することを試みる。本発明の第1の態様によれば、対象の検体と反応物の間の反応生成物の検出によって、対象の検体の存在を判定する方法であって、該方法は、反応生成物の最大の無視しうる濃度negligibleconcentrationを有する初期反応混合物においてバックグラウンド測定を行うことであって、該初期反応混合物の反応条件が、該無視しうる濃度の測定可能な変化なしで、バックグラウンド測定を行うことができるように、少なくとも、反応生成物の生成の反応速度を低減することと、初期反応混合物の反応条件を変更して、該反応速度を加速させることと、反応生成物の濃度が安定するまで、該反応を継続することと、得られた反応混合物に関する第2の測定を行って、該濃度に相関するシグナルを得ることと、バックグラウンド測定と第2の測定の間の相違から対象の検体の存在を判定することとを含んでなる。本発明によれば、反応生成物、たとえば、ギブズ‐インドフェノール反応生成物、の生成速度は、試料の参照測定を実施できるようにするために、温度、pH、緩やかな混合、1以上の反応物の欠乏もしくは除去、および/または阻害剤の添加を含むが、これらに限定されない適切な測定を用いて、初期に停止させるか、または遅くさせる。反応の欠乏または低い反応速度によって、バックグラウンド非検体シグナルのレベルを測定するのに十分な時間が許容される。参照測定の終了後、反応を進行させる。一旦標的反応生成物の濃度が安定したならば、第2の測定である試料測定を行う。干渉する化学種の存在を考慮するために、参照測定値は、その後、標的検体の濃度の正確な評価を得るために、試料測定値から減じられる。実施形態において、該方法は、複合試料マトリックスから対象の検体を抽出する工程と、対象の検体を初期反応混合物に移す工程とをさらに含む。別の実施形態において、対象の検体の存在を判定する工程は、前記反応混合物中の対象の検体の濃度を測定することを含む。第1および第2の測定は、光学測定、蛍光測定、吸着測定、比色定量測定、電気化学測定、および重量測定のうちの1つから選択されてもよい。好ましくは、バックグラウンド測定を行う工程は、初期反応混合物の少なくとも一部の吸収スペクトルを測定することを含んでなり、また、第2の測定を行う工程は、得られた反応混合物の吸収スペクトルの少なくとも一部を測定することを含んでなる。特に適切な実施形態において、対象の検体は、プロポフォール2,6‐ジ‐イソプロピルフェノールであり、また、反応物は、活性化ギブズ試薬2,6‐ジクロロキノンイミンである。初期反応混合物は、ギブズ試薬2,6‐ジクロロキノン‐4‐クロロイミドを含み得る、初期反応混合物の反応条件は、ギブズ試薬から活性化ギブズ試薬への転化を防止するのに十分に低いpHであって、かつ、初期反応混合物の反応条件を変更して反応速度を加速させる工程が、初期反応混合物のpHを増加させることを含んでなる。初期反応混合物は、クエン酸緩衝液、ギ酸緩衝液、または重炭酸塩緩衝液などの十分に低いpHを維持する緩衝液をさらに含んでなり得る。第1および第2の測定は、400~800nmの間隔を含む吸光スペクトルから、初期反応混合物および得られた反応混合物の吸光度をそれぞれ決定することを含んでなり得る。第1および第2の測定は、595nmの第1の波長と、800nmの第2の波長で、初期反応混合物および得られた反応混合物の吸光度をそれぞれ決定することを含んでなり得る。より具体的には、第1および第2の測定は、595nmのみの波長で、初期反応混合物および得られた反応混合物の吸光度をそれぞれ決定することを含んでなり得る。該方法は、固相抽出を用いて、複合試料マトリックスからプロポフォールを抽出することをさらに含んでなり得る。複合試料マトリックスは、血液であり得る。抽出工程は、前記血液試料が固相抽出カラムを通過し、該カラムを洗浄し、適切な溶媒を使用して、プロポフォールを溶出することを含んでなり得る。溶媒はアセトニトリルが好ましい。実施形態において、血液試料は、前記カラムを該血液試料が通過する前に、水によって、1:1よりも大きい比該比は、1:2~1:50の血液:水の範囲にあることが好ましいに希釈される。該方法は、初期反応混合物の反応条件を変更して前記反応速度を加速させる工程の後に、かつ、反応生成物の濃度が安定する前に、少なくとも1つの中間測定を行うことをさらに含み得るとともに、バックグラウンド測定と第2の測定の間の相違から対象の検体の存在を判定する工程は、バックグラウンド測定、第2の測定、および少なくとも1つの中間測定の間の相違から、該存在を測定、判定することをさらに含んでなる。図面は、模式的なものにすぎず、実寸で描かれていないことが理解されるべきである。また、同じ参照数字が全図面に用いられ、同一のまたは同様の部分を示すことも理解されるべきである。本発明の実施形態は、標的検体の存在を質的または定量的に評価するために、その後検出される反応生成物を発生させるために反応段階が必要な状況に適用することができる。概して、本発明は、次に示す段階下記および図1に要約されるからなる。1.対象の検体を含んでなる複合媒体の抽出物を調製する。抽出方法は、対象の検体に特異的であり、当業者に公知である。この抽出物の組成は、所望の反応およびその後の対象の反応生成物の検出に適合する必要がある。交換たとえば、SPEの方法によって、測定に干渉し得るいずれかの化学種に対する検体の精製は、この段階で達成される。好ましい実施形態において、プロポフォールを含む全血抽出物は、SPEカラムたとえば、適切な逆相材料を含む上の希釈全血試料水によって、1:1よりも大きい比の血液:水、好ましくは、1:2~1:50の血液:水に希釈された血液を通過し、たとえば50メタノール溶液でカラムを洗浄し、最終的にアセトニトリルを使用して溶出することによって、生成される。別の実施形態において、希釈していない血液は、希釈化をせずに、直接SPEカラムに適用でき、同じ方法で洗浄および溶出工程が行われる。2.反応/検体検出モジュールへの対象の検体を含む複合媒体の抽出物の移動。このモジュールは、抽出装置たとえば、SPEカラムとは別に、または、流体連結を介して該抽出装置に直接連結されてもよく、また、反応に適した環境を提供することが必要である。これは当業者に公知である。検出モジュールは、種々の異なる分析法を用いてもよく、たとえば、光学的、蛍光的、吸着的、比色定量アプローチ、電気化学アプローチ、または重量的アプローチに限定されない。プロポフォールの検出のための好ましい実施形態において、検出モジュールは、595nmおよび800nmの波長での吸光分析用装置を含んでなる。3.反応/検出モジュールへの試薬の添加および反応の阻害。その後、一部のまたはすべての公知の容量の反応成分を、反応細胞に加える。これらの試薬は、抽出段工程時にすなわち、SPE溶出剤の一部として導入するか、または、抽出物が反応/検出細胞に移された後、加えてもよい。この段階では、反応は阻害されるか、または、反応速度は、たとえば、温度、pH、緩やかな混合、1以上の反応物の欠乏もしくは除去、および/または阻害剤の添加を含むが、これらに限定されない、適切な方法、例えば、1以上の刺激剤を用いて、低減させる。阻害および/または反応速度低減の他の方法は、当業者に公知である。好ましい実施形態において、アセトニトリルを使用して、全血からプロポフォール抽出物を溶出した後、ギブズ試薬を加え、8未満にpHを維持する。別の実施形態において、適切なpHたとえば、pH8以下の弱い低pH緩衝液を、ギブズ試薬中に含め、分離溶液として加えギブズ試薬の前に、または、SPEカラムからの溶出に使用したアセトニトリル溶液中に導入することができる。低いpHによって、プロポフォールがギブズ試薬と非常にゆっくりと反応することが保証される。弱い緩衝液の例には、低濃度のクエン酸およびギ酸が含まれるが、これらに限定されない。必要な場合、すべての必要な溶液の添加後、反応細胞は、反応細胞の撹拌、磁気撹拌、および/または溶液を通過するガスの通気を含むが、これらに限定されない、方法を用いて、混合することができる。4.参照測定値の取得。本発明の一実施形態において、反応を阻害し/遅くさせ、また、意図した測定法を、所望の反応生成物がない状態の溶液を測定するために適用した。たとえば、好ましい実施形態では、吸光分析法を用いて、pH8未満におけるアセトニトリル中全血プロポフォール抽出物およびギブズ試薬を含む溶液の595nmA595および800nmA800の吸光度を測定する。2つの波長測定たとえば、595nmおよび800nm、または全スペクトルたとえば、400nm~800nmであるが、これに限定されないのいずれかを測定して、これらのデータを収集することができる。低いpHでは、このpHでのギブズ反応の動態は、十分に遅く、このため、反応は、阻害されると考えることができる。ここで、参照シグナルは、595nmの吸光度インドフェノールピーク吸光度マイナス-800nmの吸光度800nmの測定は、バックグラウンド光散乱の補正、および試料における入射光強度変化を提供するために用いられるとして定められる。また、800nm以外の波長0または十分に低いインドフェノール吸光度を有することが知られているも、バックグラウンド散乱のレベルを定量化するのに使用してもよく、これらは、当業者に公知である。別の実施形態において、光強度が試料と参照測定の間で変化しない状況下では、散乱寄与キュベット中の粒子によるが、この低いpH参照時に595nmで測定されるので、A800シグナルを減じる必要はない。この場合、595nmの吸光度を記録する必要があるだけである。AXという用語式中、Xは正の数は、Xnmの波長で測定された吸光度を示す意味があることに留意すべきである。本発明の別の実施形態において、測定の多くは、生成物が徐々に生成されるので、混合してシグナルの発達を監視した後に、様々な時点でなされる。これらの測定から、所望の生成物がない状態の初期非生成物シグナルによるバックグラウンド反応は、たとえば、試薬を反応混合物に加えたときに対する曲線の適合または推定によって、判定することができる。5.試料シグナルの取得。バックグラウンド反応を測定した後、阻害メカニズムを除去して、所望の反応を平衡状態に移行させるまたは完了させる。次いで、工程4に用いるものと同じ検出方法を用いて、バックグラウンド反応と所望の反応生成物からのシグナルを測定する。または、反応は遅すぎて、適切な時間で平衡状態に達することができない場合、種々の時間での測定値を用いて、たとえば、平衡状態に達すると考えられる時間に対する曲線の適合または推定によって、平衡状態における最終生産物の濃度を予測することができる。たとえば、ギブズ/インドフェノール法によって全血中のプロポフォール濃度を検出することを目的とした好ましい実施形態において、塩基性溶液たとえば、適切に高いpHたとえば、pH9.5以上の緩衝液の公知の容量を、アセトニトリル抽出物に加え、試料を完全に混合して、pHを上昇、好ましくは9.5以上のpH値まで上昇させた。緩衝液を先の工程で加えて、pHを低下させ、反応を阻害する場合、この工程で使用される緩衝液は、工程4の溶液組成の低いpH緩衝作用を克服するのに十分に強力である必要がある。好ましい実施形態において、pH9.6の20mM重炭酸塩バッファーを使用して、pHを上昇させ、インドフェノール生成物の生成の速度を増加させる。他の適切な緩衝系、またはpHを増加させる代替方法は、当業者に公知であろう。これによって、ギブズ反応が平衡状態完了に達し、初期のプロポフォール濃度と直接関係のあるインドフェノール生成物の濃度をもたらすことができる。血液試料中のプロポフォールの濃度が測定される場合、反応平衡状態のインドフェノール生成物の濃度がプロポフォール濃度を表すことを保証するのに、ギブズ試薬が抽出物中のプロポフォール濃度に対して十分過剰であることを必要とする。前述と同様に、595nmおよび800nmの吸光度の相違を測定する。2つの波長測定595nmおよび800nm、または全スペクトル400nm~800nmのいずれかを測定して、これらのデータを収集することができる。別の実施形態において、光強度が試料と参照測定の間で変化しない状況下では、散乱寄与キュベット中の粒子によるが、低pH参照測定時に595nmで測定されたので、A800シグナルを測定する必要はない。6.干渉する化学種によって発生したシグナルの減算。この工程において、工程4で得られたバックグラウンド対象の非生成物反応を用いて、工程5で得られたシグナルへ干渉する化学種の寄与を除去することができる。たとえば、ギブズ/インドフェノール法によって全血中のプロポフォール濃度を検出することを目的とした好ましい実施形態において、pH7のA595~A800吸光シグナルは、pH9.6のA595~A800吸光シグナルから減じられる。これは、補正されたインドフェノール吸光シグナルとして知られている。または、別の実施形態において、十分な吸光スペクトルが595nmおよび800nmの2つの波長吸収測定よりも工程4から5の間で得られる状況下で、工程4の参照スペクトルは、工程5の試料スペクトルから減じられる。その後、補正されたインドフェノール吸光シグナルは、595nmおよび800nmの吸光度の相違を測定することにより、この減じられたプロットから算出される。別の実施形態において、入射光強度が試料と参照測定の間で変化しない状況下で、減じられたA800シグナルを補正されたインドフェノール吸光シグナルの算出に用いる必要はない。これは、595nmの散乱オフセットキュベット中の粒子によるが、低pH参照測定時に測定されるからである。本明細書で説明する3つの実施形態のすべてにおいて、非インドフェノール吸光シグナルたとえば、タンパク質、脂質および光散乱が、参照と試料の双方のスペクトル中に存在するために、最終的に補正されたインドフェノール吸光シグナルは、インドフェノールのみの吸光度を表す。試料中のギブズ試薬のモル過剰がある場合、この補正されたインドフェノール吸光シグナルは、分析された血液試料中のプロポフォール薬物濃度に正比例する。薬物の既知濃度を用いて構成された検量線との比較は、試料中の原薬物濃度の的確で正確な評価をもたらす。本発明の方法の実施形態に係る測定技術は、先行技術からみて顕著な利点を有する。これらの利点は、本発明の好ましい実施形態として用いられるプロポフォール測定の場合において、最も容易に実証される。まず、全血中のプロポフォールの低濃度50ng/ml未満の検出における最先端技術は、HPLCである。確立されたギブズ/インドフェノール法は、装置の複雑性、財務コスト、試料調製、および測定時間において、HPLCを超える相当な節約をもたらすが、該ギブズ/インドフェノール法は、比較的不十分な検出限界1μg/mlを有する。本発明は、インドフェノール生成物のない状態で、バックグラウンド測定を導入するための試薬および方法について詳述する。そして、これは、感度の顕著な増加を提供し、また、バックグラウンド吸収/散乱シグナルの可変オフセットを除去することができるので、全血抽出物に適用されるギブズ/インドフェノール法における検出の下限の減少を提供する。また、検出および濃度測定のために、単一の波長の使用先行技術に記載されている全スペクトルの測定よりもを必要とするだけであるので、吸光度測定機器の計測の顕著な単純化をもたらす。したがって、本発明は、ギブズ/インドフェノール法を用いて、測定装置の単純性と、HPLCによって得られた高感度検出の利益とを組み合わせる。100ng/ml未満まで全血中のプロポフォール濃度の一貫性のある測定をすることができる。そして、これによって、単純で迅速かつ低コストの分析が可能になり、本発明は、低濃度のプロポフォールを日常的に測定する状況に対し比類ない程度に適しているたとえば、集中治療室。本発明の方法は、全血中の麻酔薬プロポフォールなどのパラ‐非置換フェノールの検出および濃度測定のための分析に利用されてもよく、該分析は、上述する固相抽出/ギブズ反応分析の新規改良を提供する。好ましい実施形態において、反応細胞への固相後抽出物の移動後、反応のpHは、フェノールとギブズ試薬の間の反応を効果的に阻害するために、最初に制御される。ギブズ試薬図2、Aから活性化形態図2、Bへの転化が、低いpHたとえば、pH8以下で効果的に防止されて、この阻害が達成される。反応は、たとえば、IPallagietalMechanismoftheGibbsReactionPart41IndophenolFormationviaNChlorobenzoquinoneImineRadicalAnionsTheAzaSRN2ChainReactionMechanismChainInitiationwith14BenzoquinonesandCyanideIonTheJournalofOrganicChemistryvol641999pp65306540に開示されるように、代替機構によって進行ことができるが、インドフェノールは、高いpH状況下で約1分未満よりも、1時間を超える平衡状態への時間で、高いpH状況下に対して、非常に遅い速さで生成する。したがって、数分間にわたって、試料中のインドフェノールの濃度は、これらの反応条件下で十分に低く、たとえば、0付近または、着色されたインドフェノール生成物がない状態で、いずれかの汚染する種からのバックグラウンドシグナルを測定するために、吸光スペクトルに顕著な影響を与えず、付加的な吸光度測定を行うことができる程度に少なくとも十分に低い。参照測定が行われた後、抽出物のpHが増加したとえば、pH9.5を超える、図2に示す機構によって、反応を迅速に進行させることができる。系が平衡状態に達した後、試料スペクトルを得、インドフェノール生成物の量は、適切な参考データの減算後に定量化される。ギブズ/インドフェノール法によるプロポフォールの測定のための別の実施形態において、単一の波長参照および試料の測定が行われる全スペクトルよりも。この場合において、595nmの吸光シグナルのみが、いずれかの非インドフェノール吸光度、および最終シグナルへの光散乱の関係を測定するのに必要であるにすぎない。これによって、LMcGaughranらなどによる先行技術に記載されている代替の全スペクトルたとえば、400nm~800nm測定よりも相当に安価なデバイスが可能になる。また、PoC設定における1μg/ml未満の全血中のプロポフォール濃度のリアルタイム分析も可能になり、これによって、ICUなどの臨床設定における分析の有用性を高める。本実施形態における他の用途には、体液、廃水または食品試料中の低濃度のフェノール化合物の分析が含まれるが、これらに限定されない。本発明を、次に示す非限定例によって、さらに詳細に説明する。本実施例において、固相抽出SPE、続いて、ギブズ反応および吸光分析法による検出を用いて、麻酔薬プロポフォールが全血から検出される。低いプロポフォール濃度のために確立されている測定プロトコールは、時間が掛かり、複雑なHPLC系分析に依存する。この実施例に説明される方法の低い複雑性およびコストによって、患者に近い設定で行うことができるプロポフォール分析が可能になる。既知濃度のプロポフォールを含む、血液試料好ましくは1mlを、1:2に水で希釈し、次いで、既知の容量好ましくは1.5mlのこの希釈した試料を、逆相SPEカラムに注入する。カラムを、好ましくは1.5mlの脱イオン水、および好ましくは0.75mlの水とメタノールの1:1混合物で洗浄し、弱く結合した不純物を除去する。その後、プロポフォール抽出物を、既知の容量好ましくは0.75mlのアセトニトリルを使用して、SPEカラムから溶出する。アセトニトリルへのプロポフォールの固相抽出は、LMcGaughranらによって詳述されている。次いで、SPEカラムからの溶離液を光吸収測定セルに移し、メタノール中既知の容量好ましくは100μlおよび既知の濃度好ましくは0.8mmol.l-1のギブズ試薬図2、化合物Aを加え、キュベットを通過する、既知の圧力の窒素ガス15psiの通気によって混合する。ギブズ試薬とプロポフォールの間の反応が十分に遅い場合、インドフェノール生成物の濃度は、この時点では無視できると考えることができる。その後、溶液の光透過率を、既知の光路長の溶液を通して透過光400nm~800nmのスペクトルで分散した強度を測定することによって、決定する。このスペクトルは参照スペクトルである。595nmおよび800nmのシグナルの透過強度を記録するそれぞれ、Iref,595nmおよびIref800nm。その後、pH9.6の20mM重炭酸塩緩衝液の既知の容量好ましくは100μlを、キュベットに加え、上述のように、窒素ガスの通気を用いて混合する。pHの増加によって、ギブズ試薬図2、化合物Aから活性化形態図2、化合物Bへの転化が生じ、その後、試料中の溶出されたプロポフォールと急速に反応して、595nmの最大吸光度を有した着色インドフェノール生成物が生成する。反応が平衡状態および、定常状態に達するインドフェノールの濃度に達することを可能にする、規定された待機時間好ましくは40秒の後に、スペクトルの透過強度を、前述と同様に、同じ既知の光路長の溶液を通した透過光400nm~800nmのスペクトルで分散した強度を記録することによって、測定する。また、595nmおよび800nmのシグナルの透過強度を記録するそれぞれ、Is595nmおよびIs800nm。したがって、インドフェノール生成物の吸光度を、ランベルトベールの法則によって定義する方程式1。この最終吸光度は、非インドフェノール種たとえば、SPE抽出で全血からキャリーオーバーされたタンパク質、脂質の595nmのバックグラウンド吸光度、および試料たとえば、不溶性凝集物から発生するの濁度によるバックグラウンド光散乱で補正された、インドフェノール生成物の吸光度である。したがって、この吸光シグナルは、最終インドフェノール種の濃度に正比例し、試料中の初期の濃度のプロポフォールの干渉によって、反応が定常状態であり、ギブズ試薬が超過していることが想定される。この増強されたバックグラウンド減算スキームの結果を図3に示す。パネルAは、本来のプロポフォール濃度0.8μg/mlを有する全血試料からの固相抽出物における波長に対する吸光度のプロットを示す。メタノール参照に対する低pH参照スペクトルトレース2の検証は、顕著な非インドフェノール吸光度が595nmであることを示す。これによって、インドフェノールに起因しないメタノール参照に対するpH9.6試料のスペクトルトレース1のオフセットが生成する。このオフセットは試料ごとに変化し、このため、補正する必要がある。pH9.6スペクトルからの低pH参照スペクトルの減算によって、インドフェノールのみの吸光度に起因する595nmの吸光度ピークを有した最終スペクトルトレース3が生成する。パネルBは、古いメタノール参照トレース4および新しい低pH参照減算スキームトレース5の予測濃度データに対する吸光度の最終プロットを示す。また、適合のための線形回帰および関連方程式も示す。線形性の改善、および新しい低pH参照スキームから得たオフセットの低減に留意すべきである。McGaughranetalRapidmeasurementofbloodpropofollevelsAproofofconceptstudyJournalofClinicalMonitoringandComputingvol202006pp381381試料スペクトルは、参照図3A、トレース1としてキュベット中でメタノールのみ試料を使用するによって定義された通常の減算法を用い、スペクトルの非インドフェノールバックグラウンドにより、吸光度には顕著なオフセットがある。この非インドフェノールバックグラウンドシグナルは、低いpHでの付加的な参照測定によって、直接測定することができ図3A、トレース2、次いで、試料スペクトルから減じて、インドフェノールのみのスペクトル図3A、トレース3を得ることができる。既知のプロポフォール濃度に対する最終吸光度方程式1のプロットの検証は、この新しい減算スキームが測定された吸光度を効果的に低減し、図3Bに示すように、バックグラウンドシグナルの変化によって導入された可変オフセットの除去により、プロットの線形性を改善することを示す。したがって、インドフェノール生成物の濃度、したがって、本来のプロポフォール濃度によって、これらの非常に低濃度の試料をより正確に判定することができる。そして、最終減算スペクトル図3A、トレース3の800nmにおけるオフセットの低減にも留意すべきである。これは、低pH参照測定が光散乱から生じる吸光シグナルの原因であることを実証する。したがって、595nmの単一の波長測定は、本明細書に説明する全スペクトル400nm~800nmの測定よりも、プロポフォール濃度を測定するのに用いることができる。これは、装置の複雑性の削減およびコストの相当な節約をもたらす。上述の実施形態は、本発明を限定するよりもむしろ説明するものであり、当業者が添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、多数の代替実施態様を設計できることに留意すべきである。特許請求の範囲において、括弧間に配置されたいかなる引用符号も、特許請求の範囲を限定するものとして解釈されないものとする。含んでなるという語は、特許請求の範囲に記載された構成要素または工程以外の構成要素または工程の存在を排除するものではない。構成要素に先行するaまたはanという語は、かかる構成要素が複数存在することを排除するものではない。本発明は、複数の異なる構成要素を含んでなるハードウェアによって実施することができる。複数の手段を列挙するデバイスの特許請求の範囲において、これらの手段の幾つかは、ハードウェアのまったく同一のアイテムによって具体化することができる。特定の測定が相互に異なる従属項に記載されているという事実だけで、これらの測定の組合せが有利に使用できないことを示すものではない。"