"核酸配列であって、aコード領域であって、好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードし、但し、前記コード領域が、ヒストンタンパク質、EGFPおよびルシフェラーゼから選択されるレポータータンパク質、ならびにαグロビン、ガラクトキナーゼ、およびキサンチン:グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼGPTから選択されるマーカータンパク質または選択タンパク質をコードしないものとする、コード領域、b少なくとも1つのヒストンステムループ、およびcポリA配列またはポリアデニル化シグナルを含むかまたはコードする、核酸配列。前記核酸が、リボザイム好ましくは、自己スプライシングリボザイム、ウイルス核酸配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル特に、マウスヒストンH2A614遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列、Neo遺伝子、不活化プロモーター配列、および不活化エンハンサー配列をコードする配列からなる群の成分の1つ、または2つ、または少なくとも1つ、または1つを除く全て、または全てを含まない、請求項1に記載の核酸。前記核酸が、リボザイム好ましくは、自己スプライシングリボザイムと、Neo遺伝子、不活化プロモーター配列、不活化エンハンサー配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル特に、マウスヒストンH2A614遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列からなる群のうちの1つとを含まない、請求項1または2に記載の核酸。前記核酸がRNA、好ましくはmRNAである、請求項1~3に記載の核酸。前記少なくとも1つのヒストンステムループが、以下の式IまたはII:式Iステム境界エレメントを持たないステムループ配列:式IIステム境界エレメントを有するステムループ配列:から選択され、ここで、ステム1またはステム2境界エレメントN1~6は、1~6個、好ましくは2~6個、より好ましくは2~5個、さらにより好ましくは3~5個、最も好ましくは4~5個または5個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログから選択され、ステム1[N0~2GN3~5]は、エレメントステム2と逆に相補的であるか、または部分的に逆に相補的であり、且つ5~7ヌクレオチドの連続配列であり、N0~2は、0~2個、好ましくは0~1個、より好ましくは1個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、N3~5は、3~5個、好ましくは4~5個、より好ましくは4個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、Gはグアノシンまたはそのアナログであり、シチジンまたはそのアナログによって必要に応じて置換することができ、但し、ステム2中のその相補的ヌクレオチドシチジンがグアノシンによって置換されるものとし、ループ配列[N0~4U/TN0~4]は、エレメントステム1とステム2との間に存在し、3~5個のヌクレオチド、より好ましくは4個のヌクレオチドの連続配列であり、各N0~4は、0~4個、好ましくは1~3個、より好ましくは1~2個のNの別の連続配列とは独立し、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、U/Tはウリジン、または必要に応じてチミジンを示し、ステム2[N3~5CN0~2]は、エレメントステム1と逆に相補的であるか、または部分的に逆に相補的であり、且つ5~7ヌクレオチドの連続配列であり、N3~5は、3~5個、好ましくは4~5個、より好ましくは4個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、N0~2は、0~2個、好ましくは0~1個、より好ましくは1個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、Cはシチジンまたはそのアナログであり、グアノシンまたはそのアナログに必要に応じて置換することができ、但し、ステム1中のその相補的ヌクレオチドグアノシンがシチジンに置換されるものとし、ここで、ステム1およびステム2が互いに塩基対合して、塩基対合がステム1とステム2との間で起こり得る逆相補配列を形成することができるか、または不完全な塩基対合がステム1およびステム2との間で起こり得る部分的に逆相補の配列を形成することができる、請求項1~4のいずれかに記載の核酸。前記少なくとも1つのヒストンステムループが、以下の式IaまたはIIa:式Iaステム境界エレメントを持たないステムループ配列式IIaステム境界エレメントを有するステムループ配列のうちの少なくとも1つから選択される、請求項5に記載の核酸。前記ポリA配列が、約25~約400個のアデノシンヌクレオチドの配列、好ましくは約50~約400個のアデノシンヌクレオチドの配列、より好ましくは約50~約300個のアデノシンヌクレオチドの配列、さらにより好ましくは約50~約250個のアデノシンヌクレオチドの配列、最も好ましくは約60~約250個のアデノシンヌクレオチドの配列を含む、請求項1~6のいずれかに記載の核酸。前記ポリアデニル化シグナルが、コンセンサス配列NNUANA、好ましくはAAUAAAまたはAUUAAAを含む、請求項1~6のいずれかに記載の核酸。前記核酸が、治療的に活性なタンパク質またはペプチド、アジュバントタンパク質、抗原、腫瘍抗原、病原性抗原、動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原、アレルギー性抗原、自己免疫抗原、アレルゲン、抗体、免疫賦活性タンパク質もしくはペプチド、または抗原特異的T細胞受容体をコードする、請求項1~8のいずれかに記載の核酸。前記核酸が、モノシストロン性核酸、バイシストロン性核酸、またはさらにマルチシストロン性核酸である、請求項1~9のいずれかに記載の核酸。コードされたペプチドまたはタンパク質の発現レベルを増加させるための請求項1~10のいずれかに記載の核酸の使用。医薬としての使用のための請求項1~10のいずれかに記載の核酸。請求項1~10のいずれかに記載の核酸および必要に応じて、薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物。抗原をコードするかまたは抗原を含む請求項1~10のいずれかに記載の核酸を含むワクチン。前記抗原が、腫瘍抗原、アレルギー性抗原、自己免疫自己抗原、病原性抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、動物抗原、またはアレルギー性抗原から選択される、請求項14に記載のワクチン。癌または腫瘍疾患、感染症、好ましくはウイルス、細菌、または原生動物感染症、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー疾患、一遺伝子性疾患すなわち、遺伝性疾患、または遺伝病全般遺伝的背景を有し、典型的には、規定された遺伝子欠損によって引き起こされ、メンデルの法則に従って遺伝する疾患、心血管疾患、ニューロン疾患、呼吸器系疾患、消化器系疾患、皮膚疾患、筋骨格系障害、結合組織障害、新生物、免疫欠損、内分泌性、栄養性および代謝性の疾患、眼の疾患、または耳の疾患の処置におけるタンパク質発現の増加のための請求項1~10のいずれかに記載の核酸の使用。タンパク質発現を増加させるためのインビトロまたはエキソビボでの方法であって、a請求項1~10のいずれかに記載の核酸を提供する工程、b該核酸を無細胞発現系、細胞例えば、発現宿主細胞または体細胞、組織、または生物に適用または投与する工程を含む、方法。したがって、本発明の根底にある目的は、治療への適用例えば、遺伝子療法および遺伝子ワクチン接種での使用のための先行技術から公知のかかる核酸に関する、好ましくはmRNAのさらなる安定化および/またはかかるmRNAの翻訳効率の増加を介したコードされたタンパク質の発現を増加させるためのさらなる方法および/または代替的方法を提供することである。この目的は、添付の特許請求の範囲の主題によって解決される。特に、本発明の根底にある目的は、a好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域、b少なくとも1つのヒストンステムループ、およびc任意選択的なポリA配列またはポリアデニル化シグナル好ましくはコードされたタンパク質の発現レベルを増加させるためを含むかまたはコードする本発明の核酸配列であって、コードされたタンパク質が、好ましくは、ヒストンタンパク質、レポータータンパク質例えば、ルシフェラーゼ、GFP、EGFP、β-ガラクトシダーゼ、特にEGFP、およびマーカータンパク質または選択タンパク質例えば、αグロビン、ガラクトキナーゼ、およびキサンチン:グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼGPTを含まない核酸配列によって第1の実施形態にしたがって解決される。この文脈では、本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸がDNA合成またはRNA合成によって少なくとも部分的に産生されるか、単離された核酸であることが特に好ましい。本発明は、ポリA配列またはポリアデニル化シグナルと少なくとも1つのヒストンステムループとの組み合わせが、両者が天然で別の機構を示すにもかかわらず、この組み合わせが個別のエレメントのいずれかで認められるレベルを超える多様なタンパク質発現を増加させるように相乗的に作用するという本発明者らの驚くべき発見に基づく。ポリAおよびヒストンステムループの順序と無関係に、ならびにポリA配列の長さと無関係にポリAと少なくとも1つのヒストンステムループとの組み合わせの相乗効果が認められる。したがって、本発明の核酸分子がa好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域;b少なくとも1つのヒストンステムループ、およびcポリA配列またはポリアデニル化配列好ましくはコードされたタンパク質の発現レベルを増加させるためを含むかまたはコードし、コードされたタンパク質が、好ましくは、ヒストンタンパク質、レポータータンパク質例えば、ルシフェラーゼ、GFP、EGFP、β-ガラクトシダーゼ、特にEGFPおよび/またはマーカータンパク質または選択タンパク質例えば、αグロビン、ガラクトキナーゼ、およびキサンチン:グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼGPTを含まないことが特に好ましい。本発明の第1の実施形態のさらに別の態様では、本発明の核酸はヒストン下流エレメントHDEを含まない。この文脈では、本発明の核酸は、5’→3’方向に、a好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域;b少なくとも1つのヒストンステムループ必要に応じて、ヒストンステムループの3’側にヒストン下流エレメントを持たないcポリA配列またはポリアデニル化シグナルを含むかまたはコードすることが特に好ましい。用語ヒストン下流エレメントHDEは、ヒストンプレmRNAの成熟ヒストンmRNAへのプロセシングに関与するU7snRNAの結合部位を示す、天然に存在するステムループの3’側の約15~20ヌクレオチドのプリンリッチポリヌクレオチドストレッチをいう。例えば、ウニでは、HDEはCAAGAAAGAであるDominski,Z.andW.F.Marzluff2007,Gene3962:373-90。さらに、本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸はイントロンを含まないことが好ましい。別の特定の好ましい実施形態では、本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸配列は、5’→3’方向に、a好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域;cポリA配列、およびb少なくとも1つのヒストンステムループを含むかまたはコードする。本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸配列は、例えば、任意の一本鎖または二本鎖DNA好ましくは、例えば、ゲノムDNA、一本鎖DNA分子、二本鎖DNA分子が含まれるがこれらに限定されないから選択されるか、例えば、任意のPNAペプチド核酸から選択することができるか、例えば、任意の一本鎖または二本鎖RNA好ましくは、伝令RNAmRNAなどから選択することができる任意の適切な核酸を含む。本発明の核酸分子はまた、ウイルスRNAvRNAを含むことができる。しかし、本発明の核酸配列は、ウイルスRNAでなくてもよいか、ウイルスRNAを含まなくてもよい。より具体的には、本発明の核酸配列は、ウイルス配列エレメント例えば、ウイルスエンハンサーまたはウイルスプロモーター例えば、不活化されていないウイルスプロモーターまたは配列エレメント、より具体的には、置換ストラテジーによって不活化されていない、他のウイルス配列エレメント、またはウイルスもしくはレトロウイルス核酸配列を含まなくてよい。より具体的には、本発明の核酸配列は、レトロウイルスベクターもしくはウイルスベクターまたは修飾されたレトロウイルスベクターもしくはウイルスベクターでなくてよい。どのような場合でも、本発明の核酸配列は、エンハンサーおよび/またはプロモーター配列を含んでも含まなくてもよく、これらの配列は、修飾されてもされていなくてもよく、または活性化されていてもいなくてもよい。エンハンサーおよび/またはプロモーターは、植物で発現可能でも可能でなくてもよく、そして/または真核生物で発現可能でも可能でなくてもよく、そして/または原核生物で発現可能でも可能でなくてもよい。本発明の核酸分子は、自己スプライシングリボザイムをコードする配列を含んでも含まなくてもよい。好ましくは、本発明の核酸分子はRNAである。本発明の第1の実施形態の特定の態様では、本発明の核酸は、インビトロ転写に適切な核酸、特に適切なインビトロ転写ベクター例えば、インビトロ転写に特異的なプロモーターT3、T7、またはSp6プロモーターなどを含むプラスミドまたは線状核酸配列中に含まれる核酸配列である。本発明の第1の実施形態のさらに特に好ましい態様では、本発明の核酸は、発現系例えば、発現ベクターまたはプラスミド中、特に原核生物例えば、大腸菌などの細菌または真核生物例えば、CHO細胞などの哺乳動物細胞、酵母細胞、または昆虫細胞、または植物もしくは動物などの生物全体の発現系中での転写および/または翻訳に適切な核酸中に含まれる。用語発現系は、ペプチド、タンパク質、またはRNA特にmRNAの産生に適切な系細胞培養物または生物全体を意味する。本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸配列は、少なくとも1つのヒストンステムループを含むかまたはコードする。本発明の文脈では、かかるヒストンステムループは、典型的にはヒストン遺伝子に由来し、2つの隣接する完全または部分的な逆相補配列の分子内塩基対合、それによるステムループの形成を含む。ステムループは、一本鎖DNA、またはより一般的には、RNAで起こり得る。構造はまた、ヘアピンまたはヘアピンループとして公知であり、通常、連続配列内のステムおよび末端ループからなり、ステムは、ステムループ構造のループを構築するいわばスペーサーのような短い配列によって分離された2つの隣接する完全または部分的な逆相補配列によって形成される。2つの隣接する完全または部分的な逆相補配列を、例えば、ステムループエレメントステム1およびステム2と定義することができる。ステムループは、これらの2つの隣接する完全または部分的な逆相補配列例えば、ステムループエレメントステム1およびステム2が互いに塩基対合する場合に形成され、それにより、その末端に連続配列上のステムループエレメントステム1とステム2との間に存在する短い配列によって形成された不対ループを含む二本鎖核酸配列が得られる。それにより、不対ループは、典型的には、これらのステムループエレメントのいずれかと塩基対合することができない核酸領域を示す。得られたロリポップ形状の構造は、多数のRNA二次構造の重要な基本単位である。したがって、ステムループ構造の形成は、得られたステムおよびループ領域の安定性に依存し、その第1の必要条件は、典型的には、配列自体が折りたたまれて対合した二本鎖を形成することができる配列の存在である。対合したステムループエレメントの安定性は、長さ、ミスマッチ数またはバルジの含有数少数のミスマッチは、典型的には特に長い二本鎖で許容され得る、および対合した領域の塩基組成によって決定される。本発明の文脈では、至適ループ長は、3~10塩基、より好ましくは3~8、3~7、3~6、またはさらにより好ましくは4~5塩基、および最も好ましくは4塩基である。本発明によれば、請求項1の構成要素bのヒストンステムループ配列は、マウスヒストンタンパク質に由来しなくてよい。より具体的には、ヒストンステムループ配列は、マウスヒストン遺伝子H2A614に由来しなくてよい。また、本発明の核酸は、マウスヒストンステムループ配列やマウスヒストン遺伝子H2A614を含まなくてよい。さらに、本発明の核酸配列は、ステムループプロセシングシグナル、より具体的には、マウスヒストンプロセシングシグナルを含まなくてもよく、最も具体的には、マウスステムループプロセシングシグナルH2kA614を含まなくてよい。また、本発明の核酸nuckeicacid分子は、少なくとも1つの哺乳動物ヒストン遺伝子を含むことができる。しかし、少なくとも1つの哺乳動物ヒストン遺伝子はWO01/12824号の配列番号7でなくてよい。第1の本発明の実施形態の1つの好ましい態様によれば、本発明の核酸配列は、好ましくは少なくとも1つの以下の式IまたはII:式Iステム境界エレメントを持たないステムループ配列:式IIステム境界エレメントを有するステムループ配列:の少なくとも1つのヒストンステムループ配列を含むかまたはコードし、ここで、ステム1またはステム2境界エレメントN1~6は、1~6個、好ましくは2~6個、より好ましくは2~5個、さらにより好ましくは3~5個、最も好ましくは4~5個または5個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、ステム1[N0~2GN3~5]は、エレメントステム2と逆に相補的であるか、部分的に逆に相補的であり、且つ5~7ヌクレオチドの連続配列であり、N0~2は、0~2個、好ましくは0~1個、より好ましくは1個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、N3~5は、3~5個、好ましくは4~5個、より好ましくは4個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、Gはグアノシンまたはそのアナログであり、シチジンまたはそのアナログに必要に応じて置換することができ、但し、ステム2中のその相補的ヌクレオチドシチジンがグアノシンに置換されるものとし、ループ配列[N0~4U/TN0~4]は、エレメントステム1とステム2との間に存在し、3~5個のヌクレオチド、より好ましくは4個のヌクレオチドの連続配列であり、各N0~4は、0~4個、好ましくは1~3個、より好ましくは1~2個のNの別の連続配列とは独立し、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、U/Tはウリジン、または必要に応じてチミジンを示し、ステム2[N3~5CN0~2]は、エレメントステム1と逆に相補的であるか、部分的に逆に相補的であり、且つ5~7ヌクレオチドの連続配列であり、N3~5は、3~5個、好ましくは4~5個、より好ましくは4個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、およびCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、N0~2は、0~2個、好ましくは0~1個、より好ましくは1個のNの連続配列であり、各Nは、別のNとは独立して、A、U、T、G、またはCから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、Cはシチジンまたはそのアナログであり、グアノシンまたはそのアナログに必要に応じて置換することができ、但し、ステム1中のその相補的ヌクレオチドグアノシンがシチジンに置換されるものとし、ここで、ステム1およびステム2が互いに塩基対合して逆相補配列を形成することができ、塩基対合が例えば、ヌクレオチドAおよびU/TまたはGおよびCのワトソン-クリック塩基対合によって、または非ワトソン-クリック塩基対合例えば、ゆらぎ塩基対合、逆ワトソン-クリック塩基対合、フーグスティーン塩基対合、逆フーグスティーン塩基対合によってステム1とステム2との間で起こり得るか、互いに塩基対合して部分的に逆相補の配列を形成することができ、不完全な塩基対合は、一方のステム中の1つ以上oneoremoreの塩基が他方のステムの逆相補配列中の相補塩基を持たないことに基づいて、ステム1とステム2との間で起こり得る。上記文脈では、ゆらぎ塩基対合は、典型的には、2ヌクレオチド間の非ワトソン-クリック塩基対合である。使用することができる本文脈における4個の主なゆらぎ塩基対は、グアノシン-ウリジン、イノシン-ウリジン、イノシン-アデノシン、イノシン-シチジンG-U/T、I-U/T、I-A、およびI-Cおよびアデノシン-シチジンA-Cである。したがって、本発明の文脈では、ゆらぎ塩基は、上記のさらなる塩基とゆらぎ塩基対を形成する塩基である。したがって、非ワトソン-クリック塩基対合例えば、ゆらぎ塩基対合は、本発明に従うヒストンステムループ構造のステム中で起こり得る。上記文脈では、部分的に逆相補の配列は、ステム1およびステム2の塩基対合によって形成されたステムループ配列のステム構造中に最大で2個、好ましくはたった1個のミスマッチを含む。換言すれば、ステム1およびステム2は、好ましくは、ステム1およびステム2の全配列を通して相互に完全に塩基対合し100の正確なワトソン-クリック塩基対合または非ワトソン-クリック塩基対合が可能、それにより、逆相補配列を形成することができ、各塩基は相補性結合パートナーとしてその正確なワトソン-クリック塩基側鎖または非ワトソン-クリック塩基側鎖を有する。あるいは、ステム1およびステム2は、好ましくは、ステム1およびステム2の全配列を通して相互に部分的に塩基対合することができ、100のうちの少なくとも約70、75、80、85、90、または95の正確なワトソン-クリック塩基対合または非ワトソン-クリック塩基対合が正確なワトソン-クリック塩基対合または非ワトソン-クリック塩基対合で占められ得、せいぜい約30、25、20、15、10、または5の残存塩基が不対である。第1の本発明の実施形態の好ましい態様によれば、本明細書中に定義の本発明の核酸配列の少なくとも1つのヒストンステムループ配列ステム境界エレメントを有するは、約15~約45ヌクレオチド長、好ましくは約15~約40ヌクレオチド長、好ましくは約15~約35ヌクレオチド長、好ましくは約15~約30ヌクレオチド長、さらにより好ましくは約20~約30の長さ、最も好ましくは約24~約28ヌクレオチド長を含む。第1の本発明の実施形態のさらなる好ましい態様によれば、本明細書中に定義の本発明の核酸配列の少なくとも1つのヒストンステムループ配列ステム境界エレメントを持たないは、約10~約30ヌクレオチド長、好ましくは約10~約20ヌクレオチド長、好ましくは約12~約20ヌクレオチド長、好ましくは約14~約20ヌクレオチド長、さらにより好ましくは約16~約17の長さ、最も好ましくは約16ヌクレオチド長を含む。第1の本発明の実施形態のさらなる好ましい態様によれば、本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸配列は、少なくとも1つの以下の特定の式IaまたはIIa:式Iaステム境界エレメントを持たないステムループ配列:式IIaステム境界エレメントを有するステムループ配列:ここで、N、C、G、T、およびUは上記定義の通りであるの少なくとも1つのヒストンステムループ配列を含むかまたはコードすることができる。第1の実施形態のさらにより特に好ましい態様によれば、本発明の核酸配列は、少なくとも1つの以下の特定の式IbまたはIIbの少なくとも1つのヒストンステムループ配列を含むかまたはコードすることができる:式Ibステム境界エレメントを持たないステムループ配列:式IIbステム境界エレメントを有するステムループ配列:ここで、N、C、G、T、およびUは上記定義の通りである。第1の本発明の実施形態のさらにより好ましい態様によれば、本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸配列は、実施例1に従って生成した少なくとも1つの以下の特定の式Ic~IhまたはIIc~IIhの少なくとも1つのヒストンステムループ配列そのステムループ構造およびヒストンステムループ配列を示す直鎖状配列として交互に示すを含むかまたはコードすることができる:式Ic:ステム境界エレメントを持たない後生動物および原生動物のヒストンステムループコンセンサス配列:式IIc:ステム境界エレメントを有する後生動物および原生動物のヒストンステムループコンセンサス配列:式Id:ステム境界エレメントを持たない式IId:ステム境界エレメントを有する式Ie:ステム境界エレメントを持たない原生動物のヒストンステムループコンセンサス配列式IIe:ステム境界エレメントを有する原生動物のヒストンステムループコンセンサス配列式If:ステム境界エレメントを持たない後生動物のヒストンステムループコンセンサス配列式IIf:ステム境界エレメントを有する後生動物のヒストンステムループコンセンサス配列式Ig:ステム境界エレメントを持たない脊椎動物のヒストンステムループコンセンサス配列式IIg:ステム境界エレメントを有する脊椎動物のヒストンステムループコンセンサス配列式Ih:ステム境界エレメントを持たないヒトのヒストンステムループコンセンサス配列Homosapiens式IIh:ステム境界エレメントを有するヒトのヒストンステムループコンセンサス配列Homosapiensここで、上記の式Ic~IhまたはIIc~IIhのそれぞれにおいて、N、C、G、A、T、およびUは上記定義の通りであり、各UをTに置換することができ、ステムエレメント1および2中のそれぞれの高度に保存されたGまたはCを、その相補ヌクレオチド塩基CまたはGに置換することができ、但し、対応するステム中のその相補ヌクレオチドが並行してその相補ヌクレオチドに置換されるものとし、そして/またはG、A、T、U、C、R、Y、M、K、S、W、H、B、V、D、およびNは、以下の表で定義のヌクレオチド塩基である:この文脈では、本発明の少なくとも1つの式IもしくはIa~IhまたはIIもしくはIIa~IIhのヒストンステムループ配列が、天然に存在するヒストンステムループ配列、より具体的に好ましくは原生動物または後生動物のヒストンステムループ配列、さらにより具体的に好ましくは脊椎動物、最も好ましくは哺乳動物ヒストンステムループ配列、特にヒトのヒストンステムループ配列から選択されることが特に好ましい。第1の実施形態の特に好ましい態様によれば、本発明の少なくとも1つの特定の式IもしくはIa~IhまたはIIもしくはIIa~IIhのヒストンステムループ配列は、図1~5に示すように、後生動物および原生動物図1、原生動物図2、後生動物図3、脊椎動物図4、ならびにヒト図5において各ヌクレオチドの位置に天然に存在するヒストンステムループ配列の最も頻繁に生じるヌクレオチド、または最も頻繁もしくは2番目に最も頻繁に生じるヌクレオチドのいずれかを含むヒストンステムループ配列である。この文脈では、全ヌクレオチドの少なくとも80、好ましくは少なくとも85、または最も好ましくは少なくとも90が天然に存在するヒストンステムループ配列の最も頻繁に生じるヌクレオチドに対応することが特に好ましい。第1の実施形態のさらに特定の態様では、本発明の少なくとも1つの特定の式IまたはIa~Ihのヒストンステムループ配列は、実施例1に従って生成したヒストンステムループ配列を示す以下のヒストンステムループ配列ステム-境界エレメントを持たないから選択される。さらに、この文脈では、特定の式IIまたはIIa~IIhのうちの1つの実施例1に従って生成した以下のヒストンステムループ配列ステム境界エレメントを有するが特に好ましい。第1の本発明の実施形態のさらなる好ましい態様によれば、本発明の核酸配列は、少なくとも1つの特定の式IもしくはIa~IhまたはIIもしくはIIa~IIhのヒストンステムループ配列中または天然に存在するヒストンステムループ配列を有する保存ヌクレオチドと少なくとも約80、好ましくは少なくとも約85、より好ましくは少なくとも約90、またはさらにより好ましくは少なくとも約95の配列同一性100ではないを示す少なくとも1つのヒストンステムループ配列を含むかまたはコードする。本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸配列は、必要に応じて、ポリA配列を含むかまたはコードすることができる。存在する場合、かかるポリA配列は、約25~約400個のアデノシンヌクレオチドの配列、好ましくは約50~約400個のアデノシンヌクレオチドの配列、より好ましくは約50~約300個のアデノシンヌクレオチドの配列、さらにより好ましくは約50~約250個のアデノシンヌクレオチドの配列、最も好ましくは約60~約250個のアデノシンヌクレオチドの配列を含む。この文脈では、用語約は、これが付された値の±10の偏差をいう。好ましくは、本発明の核酸は、リボザイム好ましくは、自己スプライシングリボザイム、ウイルス核酸配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル特に、マウスヒストンH2A614遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列、Neo遺伝子、不活化プロモーター配列、および不活化エンハンサー配列をコードする配列からなる群の成分の1つ、または2つ、または少なくとも1つ、または1つを除く全て、または全てを含まない。さらにより好ましくは、本発明の核酸は、リボザイム好ましくは、自己スプライシングリボザイム、およびNeo遺伝子、不活化プロモーター配列、不活化エンハンサー配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル特に、マウスヒストンH2A614遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列からなる群のうちの1つを含まない。したがって、核酸は、好ましい様式では、リボザイム好ましくは、自己スプライシングリボザイムを含まなくてよく、Neo遺伝子も含まなくてもよいか、またはリボザイム好ましくは、自己スプライシングリボザイムを含まなくてよく、いかなる耐性遺伝子例えば、通常は選択のために適用されるも含まなくてもよい。別の好ましい様式では、本発明の核酸は、リボザイム好ましくは、自己スプライシングリボザイムを含まなくてよく、ヒストンステムループプロセシングシグナル特に、マウスヒストンH2A614遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列も含まなくてもよい。あるいは、本発明の第1の実施形態によれば、本発明の核酸配列nucleicsequenceは、必要に応じて、特異的タンパク質因子例えば、切断ポリアデニル化特異性因子CPSF、切断刺激因子CstF、切断因子IおよびIICFIおよびCFII、ポリAポリメラーゼPAPによってポリアデニル化を転写されたmRNAに輸送するシグナルとして本明細書中で定義されるポリアデニル化シグナルを含む。この文脈では、NNUANAコンセンサス配列を含むコンセンサスポリアデニル化シグナルが好ましい。特に好ましい態様では、ポリアデニル化シグナルは、以下の配列のうちの1つを含む:AAUAAAまたはAUUAAA。本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸配列は、さらに、タンパク質またはペプチド例えば、治療的に活性なタンパク質またはペプチドアジュバントタンパク質が含まれる、抗原例えば、腫瘍抗原、病原性抗原例えば、動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原から選択される、アレルギー性抗原、自己免疫抗原、またはさらなる抗原、アレルゲン、抗体、免疫賦活性タンパク質もしくはペプチド、抗原特異的T細胞受容体、または特異的治療への適用に適切な任意の他のタンパク質またはペプチドから選択することができるが、これらに制限されないをコードし、本発明の核酸を細胞例えば、発現宿主細胞または体細胞、組織、または生物中に輸送することができ、タンパク質を、その後にこの細胞、組織、または生物中で発現させることができる。本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸のコード領域は、モノシストロン性、ジシストロン性、さらにはマルチシストロン性核酸すなわち、1つ、2つ、またはそれを超えるタンパク質またはペプチドのコード配列を保有する核酸として存在することができる。ジシストロン性、またはマルチシストロン性核酸中のかかるコード配列を、少なくとも1つの配列内リボソーム進入部位IRES配列例えば、本明細書中に定義またはいくつかのタンパク質またはペプチドを含む得られたポリペプチドの切断を誘導するシグナルペプチドによって分離することができる。本発明の第1の実施形態の特に好ましい態様では、コードされたペプチドまたはタンパク質は、ヒト、ウイルス、細菌、原生動物のタンパク質またはペプチドから選択される。本発明の文脈では、本発明の核酸分子によってコードされる治療的に活性なタンパク質を、疾患、好ましくは本明細書中に定義の疾患の治癒、予防、または治療的な処置に影響を及ぼすタンパク質制限されないから選択することができるか、個体が必要とするタンパク質である。かかるタンパク質を、先行技術から当業者に公知の任意の天然に存在するか合成的にデザインされた組換えまたは単離されたタンパク質から選択することができる。これらに制限されないが、治療的に活性なタンパク質は、細胞内でシグナル伝達を刺激または阻害することができるタンパク質例えば、サイトカイン、リンホカイン、モノカイン、成長因子、受容体、シグナル伝達分子、転写因子など;抗凝固薬;抗トロンビン;抗アレルギー性タンパク質;アポトーシス因子またはアポトーシス関連タンパク質、治療活性酵素、および任意の後天性疾患または任意の遺伝性疾患に関連する任意のタンパク質を含むことができる。好ましくは、本発明の核酸分子によってコードされ得る治療的に活性なタンパク質はまた、アジュバントタンパク質であり得る。この文脈では、アジュバントタンパク質は、好ましくは、本明細書中に定義の先天性免疫応答を誘発することができる任意のタンパク質と理解される。好ましくは、かかる先天性免疫応答は、パターン認識受容体例えば、Toll様受容体TLRファミリー例えば、ヒトTLR1~TLR10またはマウスToll様受容体TLR1~TLR13から選択されるToll様受容体が含まれるから選択される受容体などの活性化を含む。より好ましくは、アジュバントタンパク質は、ヒトアジュバントタンパク質から選択されるか、細菌タンパク質、原生動物タンパク質、ウイルスタンパク質、または真菌タンパク質、動物タンパク質、特に、細菌アジュバントタンパク質からなる群から選択される病原性アジュバントタンパク質これらに制限されないから選択される。さらに、アジュバント効果に関与するヒトタンパク質例えば、パターン認識受容体のリガンド、パターン認識受容体、シグナル伝達経路のタンパク質、転写因子、またはサイトカインをコードする核酸も使用することができる。本発明の核酸分子は、あるいは、抗原をコードすることができる。本発明によれば、用語抗原は、免疫系によって認識され、例えば、適応免疫応答の一部としての抗体または抗原特異的T細胞の形成によって抗原特異的免疫応答を誘発することができる物質をいう。この文脈では、抗原エピトープタンパク質のフラグメントまたはペプチドは、B細胞、抗体、またはT細胞によってそれぞれ認識され得る、特にB細胞およびT細胞エピトープを意味する。本発明の文脈では、本発明の核酸分子によってコードされ得る抗原は、典型的には、上記定義に分類される任意の抗原、抗原エピトープ、抗原フラグメント、または抗原ペプチド、より好ましくはタンパク質抗原およびペプチド抗原例えば、腫瘍抗原、アレルギー性抗原またはアレルゲン、自己免疫自己抗原、病原性抗原などを含む。特に、本発明の核酸分子によってコードされる抗原は、細胞外で生成された抗原、より典型的には宿主生物例えば、ヒト自体に由来せずすなわち、非自己抗原、むしろ宿主生物外の宿主細胞に由来する抗原例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、動物抗原、アレルギー性抗原などであり得る。アレルギー性抗原アレルギー抗原またはアレルゲンは、典型的には、ヒトにおいてアレルギーを引き起こし、ヒトまたは他の供給源のいずれかに由来し得る抗原である。さらに、本発明の核酸分子によってコードされる抗原は、さらに、細胞内、組織内、または体内で生成される抗原であり得る。かかる抗原には、宿主生物例えば、ヒト自体例えば、腫瘍抗原、自己抗原、または自己抗原auto-antigen例えば、自己免疫自己抗原などに由来する抗原が含まれるが、元は宿主生物外の宿主細胞に由来していたが、例えばプロテアーゼ分解、代謝などによって、体内、組織内、または細胞内で断片化または分解される本明細書中に定義の非自己抗原も含まれる。本発明の核酸分子によってコードされ得る1つの抗原クラスは、腫瘍抗原を含む。腫瘍抗原は、好ましくは、腫瘍細胞の表面上に存在する。腫瘍抗原を、正常細胞と比較して腫瘍細胞中で過剰発現されるタンパク質から選択することもできる。さらに、腫瘍抗原には、それ自体は変性していないしていなかったまたは元はそれ自体ではないが、予想される腫瘍に関連する細胞中で発現される抗原も含まれる。腫瘍を供給する血管またはその再形成に関与する抗原特に、血管新生に関連する抗原例えば、成長因子VEGF、bFGFなども本明細書中に含まれる。腫瘍に関与する抗原には、さらに、典型的には腫瘍が包埋している細胞または組織由来の抗原が含まれる。さらに、いくつかの物質通常、タンパク質またはペプチドは、癌疾患を罹患している既知または未知患者において発現し、これらの物質は、前記患者の体液中で濃度が増加する。これらの物質も腫瘍抗原というが、これらの物質は、免疫応答誘導物質の厳密な意味における抗原ではない。この腫瘍抗原クラスは、腫瘍特異性抗原TSAおよび腫瘍関連抗原TAAにさらに分類することができる。TSAは、腫瘍細胞のみが提示することができ、通常の健康な細胞は決して提示できない。TSAは、典型的には、腫瘍特異的変異に起因する。より一般的なTAAは、通常、腫瘍細胞および健康な細胞の両方によって提示される。これらの抗原が抗原提示細胞によって認識され、細胞傷害性T細胞によって破壊することができる。さらに、腫瘍抗原はまた、例えば、変異受容体の形態で腫瘍の表面上に生じ得る。この場合、これらは抗体によって認識され得る。別の代替法によれば、本発明の核酸分子によってコードされ得る1つのさらなる抗原クラスはアレルギー性抗原を含む。かかるアレルギー性抗原を、異なる供給源例えば、動物、植物、真菌、細菌などに由来する抗原から選択することができる。この文脈におけるアレルゲンには、例えば、草、花粉、カビ、薬物、または多数の環境要因などが含まれる。アレルギー性抗原は、典型的には、異なる化合物クラス核酸およびそのフラグメント、タンパク質またはペプチドおよびそのフラグメント、炭水化物、ポリサッカリド、糖、脂質、リン脂質などに属する。本明細書中に定義の本発明の核酸分子によってコードされ得る抗原すなわち、タンパク質またはペプチド抗原およびそのフラグメントまたはエピトープまたは核酸およびそのフラグメント、特に、かかるタンパク質またはペプチド抗原およびそのフラグメントまたはエピトープをコードする核酸およびそのフラグメントが本発明の文脈で特に興味深い。さらなる代替法によれば、本発明の核酸分子は、抗体または抗体フラグメントをコードすることができる。本発明によれば、かかる抗体を、任意の抗体例えば、当該分野で公知の任意の組換え的に産生されたか天然に存在する抗体、特に、治療目的、診断目的、または科学的な目的に適切な抗体または特定の癌疾患に関して同定された抗体から選択することができる。本明細書中で、用語抗体を、最も広い意味で使用し、具体的には、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体アゴニスト、アンタゴニスト、および遮断抗体または中和抗体が含まれるならびに多エピトープ特異性を有する抗体種を対象とする。本発明によれば、用語抗体は、典型的には、当該分野で公知の任意の抗体例えば、IgM、IgD、IgG、IgA、およびIgE抗体天然に存在する抗体、宿主生物における免疫化によって生成された抗体、天然に存在する抗体から単離されて同定された抗体、または宿主生物における免疫化によって生成され、当該分野で公知の生体分子法によって組換え的に産生された抗体、ならびにキメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、細胞内抗体すなわち、細胞内で発現し、必要に応じて特定の細胞区画内に局在した抗体、ならびに上記抗体のフラグメントおよびバリアントを含む。一般に、抗体は、共に可変ドメインおよび定常ドメインを有する軽鎖および重鎖からなる。軽鎖は、N末端可変ドメインVLおよびC末端定常ドメインCLからなる。対照的に、IgG抗体の重鎖は、例えば、N末端可変ドメインVHおよび3つの定常ドメインCH1、CH2、およびCH3から構成される。本発明の文脈では、本発明の核酸分子によってコードされる抗体は、好ましくは、全長抗体すなわち、上記のように完全な重鎖および完全な軽鎖から構成された抗体を含むことができる。しかし、抗体の誘導体抗体フラグメント、バリアント、または付加物などを、本発明の核酸分子によってコードすることもできる。抗体フラグメントは、好ましくは、上記の全長抗体のFab、Fab’、Fab’2、Fc、Facb、pFc’、Fd、およびFvフラグメントから選択される。一般に、抗体フラグメントは当該分野で公知である。例えば、Fabフラグメント、抗原結合フラグメントは、各重鎖および軽鎖の1つの定常ドメインおよび1つの可変ドメインから構成される。2つの可変ドメインは、特異的抗原上のエピトープに結合する。2つの鎖は、ジスルフィド結合を介して連結している。scFv単鎖可変フラグメントフラグメントは、例えば、典型的には、軽鎖および重鎖の可変ドメインからなる。ドメインは、人工的結合、一般にポリペプチド結合15~25個のグリシン、プロリン、および/またはセリン残基から構成されるペプチドなどによって結合している。本文脈では、抗体または抗体フラグメントの異なる鎖がマルチシストロン性核酸分子によってコードされることが好ましい。あるいは、異なる系統の抗体または抗体フラグメントは、いくつかのモノシストロン性核酸配列によってコードされる。本発明の第1の実施形態によれば、本発明の核酸配列は、好ましくは、ペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域を含む。好ましくは、コードされたタンパク質はヒストンタンパク質を含まない。本発明の文脈では、かかるヒストンタンパク質は、典型的には、ヌクレオソームと呼ばれる構造単位にDNAをパッケージングして規制する、真核細胞の核内に見い出される強アルカリ性タンパク質である。ヒストンタンパク質はクロマチンの主要なタンパク質成分であり、その周囲をDNAが巻き付く糸巻きとして作用し、遺伝子調節で役割を果たす。ヒストンがなければ、染色体内の巻き戻されたDNAは非常に長いであろうヒトDNAにおける長さ:幅の比は、1000万超:1である。例えば、各ヒト細胞は、約1.8メートルのDNAを有するが、ヒストン上に巻き付いて約90ミリメートルのクロマチンとなり、有糸分裂中に分裂して凝縮した場合に、約120マイクロメートルの染色体になる。より好ましくは、本発明の文脈では、かかるヒストンタンパク質を、典型的には、以下の5つの主なヒストンクラス:H1/H5、H2A、H2B、H3、およびH4のうちの1つ、好ましくは哺乳動物ヒストン、より好ましくはヒトのヒストンまたはヒストンタンパク質から選択される高度に保存されたタンパク質と定義する。かかるヒストンまたはヒストンタンパク質は、典型的には、コアヒストンヒストンH2A、H2B、H3、およびH4を含むおよびリンカーヒストンヒストンH1およびH5を含むと定義される2つのスーパークラスに分類される。この文脈では、好ましくは係属中の発明の保護範囲から排除されたリンカーヒストン、好ましくは哺乳動物リンカーヒストン、より好ましくはヒトリンカーヒストンは、典型的には、H1H1Fが含まれ,特にH1F0、H1FNT、H1FOO、H1FX、およびH1H1が含まれ、特にHIST1H1A、HIST1H1B、HIST1H1C、HIST1H1D、HIST1H1E、HIST1H1Tが含まれるから選択される。さらに、好ましくは係属中の発明の保護範囲から排除されたコアヒストン、好ましくは哺乳動物コアヒストン、より好ましくはヒトコアヒストンは、典型的には、H2AH2AF、特にH2AFB1、H2AFB2、H2AFB3、H2AFJ、H2AFV、H2AFX、H2AFY、H2AFY2、H2AFZ、およびH2A1が含まれ、特にHIST1H2AA、HIST1H2AB、HIST1H2AC、HIST1H2AD、HIST1H2AE、HIST1H2AG、HIST1H2AI、HIST1H2AJ、HIST1H2AK、HIST1H2AL、HIST1H2AM、およびH2A2が含まれ、特にHIST2H2AA3、HIST2H2ACが含まれる;H2BH2BFが含まれ、特にH2BFM、H2BFO、H2BFS、H2BFWTH2B1が含まれ、特にHIST1H2BA、HIST1H2BB、HIST1H2BC、HIST1H2BD、HIST1H2BE、HIST1H2BF、HIST1H2BG、HIST1H2BH、HIST1H2BI、HIST1H2BJ、HIST1H2BK、HIST1H2BL、HIST1H2BM、HIST1H2BN、HIST1H2BO、およびH2B2が含まれ、特にHIST2H2BEが含まれる;H3H3A1が含まれ、特にHIST1H3A、HIST1H3B、HIST1H3C、HIST1H3D、HIST1H3E、HIST1H3F、HIST1H3G、HIST1H3H、HIST1H3I、HIST1H3J、およびH3A2が含まれ、特にHIST2H3CおよびH3A3が含まれ、特にHIST3H3が含まれる;H4H41が含まれ、特にHIST1H4A、HIST1H4B、HIST1H4C、HIST1H4D、HIST1H4E、HIST1H4F、HIST1H4G、HIST1H4H、HIST1H4I、HIST1H4J、HIST1H4K、HIST1H4L、およびH44が含まれ、特にHIST4H4が含まれる、ならびにH5から選択される。本発明の第1の実施形態によれば、本発明の核酸配列は、好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域を含む。好ましくは、コードされたタンパク質は、レポータータンパク質例えば、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質GFP、高感度緑色蛍光タンパク質EGFP、β-ガラクトシダーゼ、およびマーカータンパク質または選択タンパク質例えば、αグロビン、ガラクトキナーゼ、およびキサンチン:グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼGPTを含まない。好ましくは、本発明の核酸配列は、細菌Neo遺伝子配列ネオマイシン耐性遺伝子を含まない。上記定義の本発明の核酸は、a好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域;b少なくとも1つのヒストンステムループ、およびc任意選択的なポリA配列またはポリアデニル化シグナル好ましくは、コードされたタンパク質の発現レベルを増加させるためを含むかまたはコードし、コードされたタンパク質は、好ましくは、上記定義のヒストンタンパク質、レポータータンパク質、および/またはマーカータンパク質または選択タンパク質を含まない。本発明の核酸のエレメントb~cは、本発明の核酸において任意の順序で存在することができすなわち、エレメントa、b、およびcは、本発明の核酸配列において5’→3’方向でa、b、およびcまたはa、c、およびbの順序で存在することができる、本明細書中に記載のさらなるエレメント5’-CAP構造、ポリC配列、安定化配列、IRES配列なども含まれ得る。本発明の核酸のa~cの各エレメント、特にジシストロン性またはマルチシストロン性の構築物中のaおよび/またはbおよびcの各エレメント、より好ましくはエレメントbを、本発明の核酸中で少なくとも1回、好ましくは2回以上反復することもできる。例として、本発明の核酸は、例えば、以下の順序でその配列エレメントa、b、および必要に応じてcを示すことができる。5’-コード領域-ヒストンステムループ-3’;または5’-コード領域-コード領域-ヒストンステムループ-3’;または5’-コード領域-IRES-コード領域-ヒストンステムループ-3’;または5’-コード領域-ヒストンステムループ-ポリA配列-3’;または5’-コード領域-ヒストンステムループ-ポリアデニル化シグナル-3’;または5’-コード領域-コード領域-ヒストンステムループ-ポリアデニル化シグナル-3’;または5’-コード領域-ヒストンステムループ-ヒストンステムループ-3’;または5’-コード領域-ヒストンステムループ-ヒストンステムループ-ポリA配列-3’;または5’-コード領域-ヒストンステムループ-ヒストンステムループ-ポリアデニル化シグナル-3’;または5’-コード領域-ヒストンステムループ-ポリA配列-ヒストンステムループ-3’;または5’-コード領域-ポリA配列-ヒストンステムループ-3’;または5’-コード領域-ポリA配列-ヒストンステムループ-ヒストンステムループ-3’など。この文脈では、本発明の核酸分子が、a好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域;b少なくとも1つのヒストンステムループ、およびcポリA配列またはポリアデニル化配列好ましくは、コードされたタンパク質の発現レベルを増加させるためを含むかまたはコードし、コードされたタンパク質は、好ましくは、ヒストンタンパク質、レポータータンパク質例えば、ルシフェラーゼ、GFP、EGFP、β-ガラクトシダーゼ、特にEGFP、および/またはマーカータンパク質または選択タンパク質例えば、αグロビン、ガラクトキナーゼ、およびキサンチン:グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼGPTを含まないことが特に好ましい。第1の実施形態のさらに好ましい態様では、本明細書中に定義の本発明の核酸分子はまた、修飾核酸の形態で生じ得る。第1の実施形態の1つの態様によれば、本明細書中に定義の本発明の核酸分子を、安定化核酸として、好ましくは安定化RNAとして、より好ましくはインビボ分解例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによるに本質的に耐性を示すRNAとして提供することができる。この文脈では、本明細書中に定義の本発明の核酸分子は、ヌクレオチドアナログ/修飾例えば、骨格修飾、糖修飾、または塩基修飾を含むことができる。本発明に関与する骨格修飾は、本明細書中に定義の本発明の核酸分子中に含まれるヌクレオチド骨格のリン酸が化学修飾される修飾である。本発明に関与する糖修飾は、本明細書中に定義の本発明の核酸分子のヌクレオチドの糖の化学修飾である。さらに、本発明に関与する塩基修飾は、本発明の核酸分子の核酸分子のヌクレオチドの塩基部分の化学修飾である。この文脈では、ヌクレオチドアナログまたは修飾は、好ましくは、転写および/または翻訳のために適用可能なヌクレオチドアナログから選択される。本発明の第1の実施形態の特定の好ましい態様では、本明細書中で定義したヌクレオチドアナログ/修飾は、コードされたタンパク質の発現を漸増する塩基修飾から選択され、好ましくは、2-アミノ-6-クロロプリンリボシド-5’-三リン酸、2-アミノアデノシン-5’-三リン酸、2-チオシチジン-5’-三リン酸、2-チオウリジン-5’-三リン酸、4-チオウリジン-5’-三リン酸、5-アミノアリルシチジン-5’-三リン酸、5-アミノアリルウリジン-5’-三リン酸、5-ブロモシチジン-5’-三リン酸、5-ブロモウリジン-5’-三リン酸、5-ヨードシチジン-5’-三リン酸、5-ヨードウリジン-5’-三リン酸、5-メチルシチジン-5’-三リン酸、5-メチルウリジン-5’-三リン酸、6-アザシチジン-5’-三リン酸、6-アザウリジン-5’-三リン酸、6-クロロプリンリボシド-5’-三リン酸、7-デアザアデノシン-5’-三リン酸、7-デアザグアノシン-5’-三リン酸、8-アザアデノシン-5’-三リン酸、8-アジドアデノシン-5’-三リン酸、ベンズイミダゾール-リボシド-5’-三リン酸、N1-メチルアデノシン-5’-三リン酸、N1-メチルグアノシン-5’-三リン酸、N6-メチルアデノシン-5’-三リン酸、O6-メチルグアノシン-5’-三リン酸、プソイドウリジン-5’-三リン酸、またはピューロマイシン-5’-三リン酸、キサントシン-5’-三リン酸から選択される。5-メチルシチジン-5’-三リン酸、7-デアザグアノシン-5’-三リン酸、5-ブロモシチジン-5’-三リン酸、およびプソイドウリジン-5’-三リン酸からなる塩基修飾されたヌクレオチド群から選択される塩基修飾のためのヌクレオチドが特に好ましい。さらなる態様によれば、本明細書中に定義の本発明の核酸分子は、脂質修飾を含むことができる。かかる脂質修飾された核酸は、典型的には、本明細書中に定義の核酸を含む。本明細書中に定義の本発明の核酸分子のかかる脂質修飾された核酸分子は、典型的には、この核酸分子と共有結合した少なくとも1つのリンカーおよび各リンカーと共有結合した少なくとも1つの脂質をさらに含む。あるいは、脂質修飾された核酸分子は、少なくとも1つの本明細書中に定義の核酸分子およびこの核酸分子と共有結合したリンカーなし少なくとも1つの二官能性脂質を含む。第3の代替法によれば、脂質修飾された核酸分子は、本明細書中に定義の核酸分子、この核酸分子に共有結合した少なくとも1つのリンカーおよび各リンカーと共有結合した少なくとも1つの脂質を含み、この核酸分子と共有結合したリンカーなし少なくとも1つの二官能性脂質も含む。この文脈では、脂質修飾が本発明の線状核酸配列の末端に存在することが特に好ましい。したがって、本発明の第1の実施形態の別の好ましい態様によれば、本明細書中に定義の本発明の核酸分子を、特にmRNAとして提供した場合、いわゆる5’CAP構造の付加によってRNアーゼによる分解に対して安定化することができる。本発明の第1の実施形態のさらなる好ましい態様によれば、本明細書中に定義の本発明の核酸分子を、少なくとも10シチジン、好ましくは少なくとも20シチジン、より好ましくは少なくとも30シチジンの配列いわゆるポリC配列によって修飾することができる。特に、本発明の核酸分子は、典型的には約10~200シチジンのヌクレオチド、好ましくは約10~100シチジンのヌクレオチド、より好ましくは約10~70シチジンのヌクレオチド、またはさらにより好ましくは約20~50、またはさらに20~30シチジンのヌクレオチドのポリC配列を含むかまたはコードすることができる。このポリC配列は、本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸に含まれるコード領域の3’側に位置することが好ましい。本発明の第1の実施形態の別の好ましい態様によれば、本明細書中に定義の本発明の核酸分子は、好ましくは、少なくとも1つの5’および/または3’安定化配列を有する。5’および/または3’非翻訳領域中のこれらの安定化配列は、サイトゾル中の核酸の半減期を増加させる効果がある。これらの安定化配列は、ウイルス、細菌、および真核生物中に生じる天然に存在する配列と100の配列同一性を有し得るが、部分的または完全に合成でもあり得る。例えば、HomosapiensまたはXenopuslaevis由来のα-グロビン遺伝子の非翻訳配列UTRを、安定化核酸のために本発明で使用することができる安定化配列の例と言及することができる。安定化配列の別の例は、一般式C/UCCANxCCCU/APyxUCC/UCC配列番号55を有し、これは、α-グロビン、I型コラーゲン、15-リポキシゲナーゼ、またはチロシンヒドロキシラーゼをコードする非常に安定なRNAの3’-UTR中に含まれるHolcikら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA1997,94:2410~2414を参照のこと。かかる安定化配列を、勿論、個別または相互の組み合わせおよび当業者に公知の他の安定化配列との組み合わせで使用することができる。この文脈では、αグロビン遺伝子の3’UTR配列が本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸中に含まれるコード配列の3’側に位置することが特に好ましい。塩基の置換、付加、または排除を、好ましくは、本明細書中に定義の本発明の核酸分子を使用し、周知の部位特異的変異誘発技術によるかオリゴヌクレオチドライゲーションストラテジーを用いた核酸分子調製用のDNAマトリックスを使用して行う例えば、Maniatisら,MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,3rded.,ColdSpringHarbor,NY,2001を参照のこと。かかるプロセスでは、本明細書中に定義の本発明の核酸分子の調製のために、特に核酸がmRNAの形態である場合、対応するDNA分子をインビトロで転写することができる。このDNAマトリックスは、好ましくは、インビトロ転写のための適切なプロモーター例えば、T7またはSP6プロモーターを含み、その後に、調製すべき核酸分子例えば、mRNAのための所望のヌクレオチド配列およびインビトロ転写のための終止シグナルが続く。少なくとも1つの目的のRNAのマトリックスを形成するDNA分子を、細菌中で複製することができるプラスミドの一部としての発酵による増殖およびその後の単離によって調製することができる。本発明に適切であると言及することができるプラスミドは、例えば、プラスミドpT7TsGenBank受入番号U26404;Laiら,Development1995,121:2349~2360、pGEM登録商標シリーズ例えば、pGEM登録商標-1GenBank受入番号X65300;Promegaから入手、およびpSP64GenBank受入番号X65327であるMezeiandStorts,PurificationofPCRProducts,in:GriffinandGriffined.,PCRTechnology:CurrentInnovation,CRCPress,BocaRaton,FL,2001も参照のこと。本明細書中に定義の本発明に従って使用される核酸分子を、当該分野で公知の任意の方法合成法例えば、固相合成などおよびインビトロでの方法インビトロ転写反応などまたはインビボ反応細菌中でのDNAプラスミドのインビボ増殖などが含まれるを使用して調製することができる。上記修飾のいずれかを、本明細書中に定義の本発明の核酸分子に適用することができ、本発明の文脈で使用される任意の核酸にさらに適用することができ、適切であるか必要である場合、任意の組み合わせで相互に組み合わせることができるが、但し、これらの修飾の組み合わせは各核酸において相互に干渉しないものとする。当業者は、しかるべく選択することができるであろう。本明細書中に定義の本発明の核酸分子およびこの核酸分子によってコードされるタンパク質またはペプチドは、これらの配列のフラグメントまたはバリアントを含むことができる。かかるフラグメントまたはバリアントは、典型的には、核酸レベルまたはアミノ酸レベルのいずれかで、上記核酸のうちの1つまたは少なくとも1つの核酸分子によってコードされる場合はタンパク質もしくはペプチドまたは配列のうちの1つと全野生型配列に対して少なくとも5、10、20、30、40、50、60、好ましくは少なくとも70、より好ましくは少なくとも80、同様により好ましくは少なくとも85、さらにより好ましくは少なくとも90、最も好ましくは少なくとも95、さらに97、98、または99の配列同一性を有する配列を含むことができる。本発明の第1の実施形態のさらに好ましい態様では、本発明の核酸配列を、本発明の核酸配列のトランスフェクション効率を増加させるためのビヒクル、トランスフェクション剤、または複合体形成剤と組み合わせる。トランスフェクション効率の増加に適切な本文脈で特に好ましい薬剤は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物プロタミン、ヌクレオリン、スペルミン、もしくはスペルミジンが含まれる、または他のカチオン性のペプチドまたはタンパク質ポリ-L-リジンPLL、ポリ-アルギニン、塩基性ポリペプチド、細胞透過性ペプチドCPPHIV結合ペプチドが含まれる、HIV-1TatHIV、Tat由来ペプチド、ペネトラチン、VP22由来ペプチドまたはアナログペプチド、HSVVP22単純ヘルペス、MAP、KALA、またはタンパク質形質導入ドメインPTD、PpT620、プロリンリッチペプチド、アルギニンリッチペプチド、リジンリッチペプチド、MPG-ペプチド、Pep-1、L-オリゴマー、カルシトニンペプチド、アンテナペディア由来ペプチド特に、ショウジョウバエアンテナペディア由来、pAntp、plsl、FGF、ラクトフェリン、トランスポータン、ブホリン-2、Bac715-24、SynB、SynB1、pVEC、hCT由来ペプチド、SAP、またはヒストンなどである。さらに、好ましいカチオン性またはポリカチオン性のタンパク質またはペプチドは、以下の全式:Argl;Lysm;Hisn;Orno;Xaaxここで、lmnox=8~15、l、m、n、またはoは、相互に独立して0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15から選択される任意の数であり得、但し、Arg、Lys、His、およびOrnの全含有量はオリゴペプチドの全アミノ酸の少なくとも50を表し、XaaはArg、Lys、His、またはOrnを除くネイティブ=天然に存在するまたは非ネイティブアミノ酸から選択される任意のアミノ酸であり得、xは0、1、2、3、または4から選択される任意の数であり得るものとし、但し、Xaaの全含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の50を超えないものとするを有する以下のタンパク質またはペプチドから選択することができる。本文脈における特に好ましいカチオン性ペプチドは、例えば、Arg7、Arg8、Arg9、H3R9、R9H3、H3R9H3、YSSR9SSY、RKH4、YRKH2Rなどである。トランスフェクション剤として使用することができるさらに好ましいカチオン性またはポリカチオン性の化合物には、カチオン性ポリサッカリド例えば、キトサン、ポリブレン、カチオン性ポリマー例えば、ポリエチレンイミンPEI、カチオン性脂質例えば、DOTMA:[1-2,3-シオレイルオキシプロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド、DMRIE、ジ-C14-アミジン、DOTIM、SAINT、DC-Chol、BGTC、CTAP、DOPC、DODAP、DOPE:ジオレイルホスファチジルエタノール-アミン、DOSPA、DODAB、DOIC、DMEPC、DOGS:ジオクタデシルアミドグリシルglicylスペルミン、DIMRI:ジミリスト-オキシプロピルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド、DOTAP:ジオレオイルオキシ-3-トリメチルアンモニオプロパン、DC-6-14:O,O-ジテトラデカノイル-N-α-トリメチルアンモニオアセチルジエタノールアミンクロリド、CLIP1:rac-[2,3-ジオクタデシルオキシプロピル2-ヒドロキシエチル]-ジメチル塩化アンモニウム、CLIP6:rac-[22,3-ジヘキサデシルオキシプロピル-オキシメチルオキシエチル]トリメチルアンモニウム、CLIP9:rac-[22,3-ジヘキサデシルオキシプロピル-オキシスクシニルオキシエチル]-トリメチルアンモニウム、オリゴフェクトアミン、またはカチオン性もしくはポリカチオン性のポリマー例えば、修飾ポリアミノ酸β-アミノ酸-ポリマーまたは逆ポリアミドなど、修飾ポリエチレンPVPポリN-エチル-4-ビニルピリジニウムブロミドなど、修飾アクリラートpDMAEMAポリジメチルアミノエチルメチルアクリラートなど、修飾アミドアミンpAMAMポリアミドアミンなど、修飾ポリβアミノエステルPBAEジアミン末端修飾1,4ブタンジオールジアクリラート-コ-5-アミノ-1-ペンタノールポリマーなど、デンドリマーポリプロピルアミンデンドリマーまたはpAMAMベースのデンドリマーなど、ポリイミンPEI:ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミンなど、ポリアリルアミン、糖骨格ベースのポリマーシクロデキストリンベースのポリマー、デキストランベースのポリマー、キトサンなど、シラン骨格ベースのポリマーPMOXA-PDMSコポリマーなど、1つ以上のカチオン性ブロック例えば、上記のカチオン性ポリマーから選択されると1つ以上の親水性または疎水性ブロック例えば、ポリエチレングリコールとの組み合わせからなるブロックポリマーなどが含まれ得る。本発明の核酸配列は、裸の形態または複合体例えば、任意の化学構造のポリカチオン性化合物、好ましくはポリカチオン性ポリペプチドまたは合成ポリカチオン性化合物によるのいずれかで提供されることが好ましい。好ましくは、核酸配列は、パッケージング細胞と共に提供されない。さらなる実施形態によれば、本発明はまた、例えば、a本明細書中に定義の本発明の核酸を提供する工程、b本明細書中に定義のタンパク質またはペプチドをコードする本発明の核酸を発現系例えば、無細胞発現系、細胞例えば、発現宿主細胞または体細胞、組織、または生物に適用または投与する工程を含む、コードされたタンパク質/ペプチドの発現レベルの増加方法を提供する。本方法を、研究、調査、診断、ペプチドまたはタンパク質の商業的生産、および/または治療目的のために適用することができる。この文脈では、典型的には本明細書中に定義の本発明の核酸の調製後、典型的には、好ましくは裸の形態または本明細書中に記載の薬学的組成物もしくはワクチンとして、好ましくはトランスフェクションによるか本明細書中に記載の投与様式のいずれかの使用によって無細胞発現系、細胞例えば、発現宿主細胞または体細胞、組織、または生物に適用または投与する。本方法を、インビトロ、インビボ、またはエキソビボで行うことができる。本方法を、さらに、好ましくは本明細書中に定義の特定の疾患の処置の文脈で行うことができる。この文脈では、インビトロは、本明細書中で、生物外での培養物中での本発明の核酸の細胞へのトランスフェクションまたは形質導入と定義し、インビボは、本明細書中で、生物または個体の全体への本発明の核酸の適用による細胞への本発明の核酸のトランスフェクションまたは形質導入と定義し、エキソビボは、本明細書中で、生物または個体外での細胞への本発明の核酸のトランスフェクションまたは形質導入およびその後の生物または個体へのトランスフェクトした細胞の適用と定義する。同様に、別の実施形態によれば、本発明はまた、例えば、無細胞発現系、細胞例えば、発現宿主細胞または体細胞、組織、または生物への本明細書中に定義のタンパク質またはペプチドをコードする本発明の核酸の適用または投与による、コードされたタンパク質/ペプチドの発現レベルを増加させるための、好ましくは診断または治療目的の本明細書中に定義の本発明の核酸の使用を提供する。本使用を、研究、調査、診断、ペプチドまたはタンパク質の商業的生産、および/または治療目的のために適用することができる。この文脈では、典型的には本明細書中に定義の本発明の核酸の調製後、典型的には、好ましくは裸の形態もしくは複合体化形態または本明細書中に記載の薬学的組成物もしくはワクチンとして、好ましくはトランスフェクションによるか本明細書中に記載の投与様式のいずれかの使用によって無細胞発現系、細胞例えば、発現宿主細胞または体細胞、組織、または生物に適用または投与する。本使用を、インビトロ、インビボ、またはエキソビボで行うことができる。本使用を、さらに、好ましくは本明細書中に定義の特定の疾患の処置の文脈で行うことができる。さらに別の実施形態では、本発明はまた、本発明の第1の実施形態に従う本発明の核酸、または発現ベクター、またはプラスミドを含む本発明の発現系に関する。この文脈では、発現系は、無細胞発現系例えば、インビトロ転写/翻訳系、細胞発現系例えば、CHO細胞のような哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、大腸菌のような細菌細胞、またはペプチドもしくはタンパク質の発現のために使用される生物例えば、植物またはウシのような動物であり得る。さらに、別の実施形態によれば、本発明はまた、例えば、本明細書中に定義の疾患の処置例えば、細胞例えば、発現宿主細胞または体細胞、組織、または生物への本明細書中に定義の本発明の核酸の適用または投与のための、好ましくは裸の形態もしくは複合体化形態または本明細書中に記載の薬学的組成物もしくはワクチンとして、より好ましくは本明細書中に記載の投与様式のいずれかの使用によるコードされたタンパク質/ペプチドの発現レベルを増加させるための薬学的組成物の調製のための本明細書中に定義の本発明の核酸の使用に関する。したがって、1つの特定の好ましい実施形態では、本発明はまた、本明細書中に定義の本発明の核酸および必要に応じて薬学的に許容され得るキャリアおよび/またはビヒクルを含む薬学的組成物を提供する。第1の成分として、本発明の薬学的組成物は本明細書中に定義の本発明の核酸を含む。第2の成分として、本発明の薬学的組成物は、少なくとも1つのさらなる薬学的に活性な成分を含むことができる。これに関して、薬学的に活性な成分は、本明細書中に記載の特定の適応症または疾患、好ましくは癌疾患、自己免疫疾患、アレルギーまたは感染症、心血管疾患、呼吸器系疾患、消化器系疾患、皮膚疾患、筋骨格系障害、結合組織障害、新生物、免疫欠損、内分泌性、栄養性、および代謝性の疾患、神経疾患、眼の疾患、耳の疾患、および遺伝性疾患を治癒、改善、または防止する治療効果を有する化合物である。かかる化合物には、好ましくは本明細書中に定義のペプチドまたはタンパク質、好ましくは本明細書中に定義の核酸、好ましくは本明細書中に定義の治療的に活性な低分子量の有機化合物または無機化合物分子量5000未満、好ましくは1000未満、糖、抗原または抗体、好ましくは本明細書中に定義の当該分野で既に公知の治療薬、抗原性細胞、抗原性細胞フラグメント、細胞画分;細胞壁成分例えば、ポリサッカリド、修飾、弱毒化、または不活化された例えば、化学的または照射による病原体ウイルス、細菌など、アジュバントなどが含まれるが、これらに限定されない。さらに、本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容され得るキャリアおよび/またはビヒクルを含むことができる。本発明の文脈では、薬学的に許容され得るキャリアには、典型的には、本発明の薬学的組成物の液体または非液体の基剤が含まれる。本発明の薬学的組成物が液体で提供される場合、キャリアは、典型的には、発熱性物質除去水;等張生理食塩水、または緩衝液水溶液例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液などであろう。注射用緩衝液は、特定の基準媒質に関して高張性、等張性、または低張性であり得るすなわち、緩衝液は、特定の基準媒体に関してより高いか、同一か、より低い塩含量であり得、好ましくは、浸透または他の濃度の影響によって細胞が損傷しないような上記塩のかかる濃度を使用することができる。基準媒体は、例えば、インビボでの方法で生じる液体血液、リンパ液、サイトゾル液などまたは他の体液例えば、インビトロでの方法で基準媒質として使用することができる液体一般的な緩衝液または液体などである。かかる一般的な緩衝液または液体は、当業者に公知である。リンゲル-乳酸液は、液体の基剤として特に好ましい。しかし、1つ以上の適合性の固体または液体の充填剤または希釈剤またはカプセル化化合物も、本発明の薬学的組成物のために使用することができ、これらは、処置すべき患者への投与に適切である。用語適合性は、本明細書中で使用する場合、典型的な使用条件下で本発明の薬学的組成物の薬学的有効性を実質的に低下させる相互作用が起こらない様式で、本発明の薬学的組成物のこれらの構成要素が本明細書中に定義の本発明の核酸と混合することができることを意味する。特定の態様によれば、本発明の薬学的組成物は、アジュバントを含むことができる。この文脈では、アジュバントを、先天性免疫系の免疫応答すなわち、非特異的免疫応答を開始または増加させるのに適切な任意の化合物と理解することができる。言い換えれば、投与した場合、本発明の薬学的組成物は、好ましくは、必要に応じて組成物中に含まれるアジュバントによって先天性免疫応答を誘発する。好ましくは、かかるアジュバントを、当業者に公知であり、且つこの場合すなわち、哺乳動物における先天性免疫応答の誘導の支持に適切なアジュバント例えば、上記定義のアジュバントタンパク質または以下に定義のアジュバントから選択することができる。貯蔵および送達に適切な特に好ましいアジュバントは、ビヒクル、トランスフェクション、または複合体化剤としての本発明の核酸配列のための上記定義のカチオン性またはポリカチオン性の化合物である。本発明の薬学的組成物は、さらに、必要に応じてその免疫原性または免疫賦活性能を増加させるための1つ以上の補助物質を含むことができる。本明細書中に定義の本発明の核酸と本発明の薬学的組成物中に必要に応じて含めることができる補助物質との相乗作用は、それにより達成されることが好ましい。種々の補助物質の種類に応じて、これに関する種々の機構を考慮することができる。例えば、樹状細胞DCを成熟させる化合物例えば、リポ多糖、TNF-αまたはCD40リガンドは、第1の適切な補助物質クラスを形成する。一般に、危険信号の様式で免疫系に影響を及ぼす任意の作用因子LPS、GP96などまたは免疫応答を標的様式で増強し、そして/または影響を及ぼすサイトカインGM-CFSなどを補助物質として使用することが可能である。特に好ましい補助物質は、先天性免疫応答をさらに促進するサイトカインモノカイン、リンホカイン、インターロイキン、またはケモカインIL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、LT-βまたはTNF-α、成長因子hGHなどなどなどである。本発明の薬学的組成物中に含めることができるさらなる添加物は、乳化剤例えば、Tween登録商標など;湿潤剤例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど;着色剤;調味剤、薬学的キャリア;錠剤形成剤;安定剤;抗酸化剤;防腐剤である。本発明の薬学的組成物は、さらに、ヒトToll様受容体TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10に対するその結合親和性リガンドとしてまたはマウスToll様受容体TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11、TLR12、またはTLR13に対するその結合親和性リガンドとしてによって免疫刺激性であることが公知の任意のさらなる化合物を含むこともできる。本発明の薬学的組成物を、経口、非経口、吸入噴霧、局所、直腸、鼻腔、口腔内、膣内投与することができるか、インプラント型リザーバによって投与することができる。用語非経口には、本明細書中で使用する場合、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心臓内、動脈内、および舌下への注射または注入技術が含まれる。好ましくは、本発明の薬学的組成物を、非経口注射、より好ましくは皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心臓内、動脈内、および舌下への注射によるか、注入技術によって投与することができる。皮内注射および筋肉内注射が特に好ましい。本発明の薬学的組成物の滅菌注射形態は、水性または油性の懸濁液であり得る。これらの懸濁液を、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、当該分野で公知の技術に従って処方することができる。本明細書中に定義の本発明の薬学的組成物を、任意の経口的に許容され得る投薬形態カプセル、錠剤、水性懸濁液、または水溶液が含まれるが、これらに限定されないで経口投与することもできる。本発明の薬学的組成物を、特に処置標的が局所適用によって容易に接近可能な領域または器官例えば、皮膚または任意の他の接近可能な上皮組織の疾患が含まれるを含む場合、局所投与することもできる。適切な局所処方物は、これらの各領域または器官のために容易に調製される。局所適用のために、本発明の薬学的組成物を、1つ以上のキャリア中に懸濁または溶解された本明細書中に定義の本発明の核酸を含む適切な軟膏に処方することができる。本発明の薬学的組成物は、典型的には、安全且つ有効な量の本発明の薬学的組成物の成分、特に本明細書中に定義の本発明の核酸を含む。本明細書中で使用する場合、安全且つ有効な量は、本明細書中に定義の疾患または障害の正の改変を有意に誘導するのに十分な本明細書中に定義の本発明の核酸の量を意味する。しかし、同時に、安全且つ有効な量は、重篤な副作用を回避し、利点とリスクとの間の分別のある関係を可能にするのに十分に少ない量である。これらの限度の決定は、典型的には、分別のある医学的判断の範囲内にある。本発明の薬学的組成物を、薬学的組成物通常またはワクチンとして、ヒトのためおよび動物に対する医学的目的、好ましくはヒトに対する医学的目的のために使用することができる。別の特に好ましい実施形態によれば、本発明の薬学的組成物または本明細書中に定義の本発明の核酸を提供するか、ワクチンとして使用することができる。典型的には、かかるワクチンは、薬学的組成物について上記定義の通りである。さらに、かかるワクチンは、典型的には、好ましくは上記定義の抗原をコードする本明細書中に定義の本発明の核酸を含む。あるいは、かかるワクチンは、本明細書中に定義の本発明の核酸およびさらなる抗原を、好ましくは例えば本明細書中に定義のタンパク質もしくはペプチドまたは抗原をコードする核酸としてか、本明細書中に定義の任意の抗原性形式または全ての可能なその組み合わせとして含むことができる。本発明のワクチンはまた、本発明の薬学的組成物のための本明細書中に定義の薬学的に許容され得るキャリア、アジュバント、および/またはビヒクルを含むことができる。本発明のワクチンの特定の文脈では、薬学的に許容され得るキャリアの選択は、原則として本発明のワクチンが投与される様式によって決定される。本発明のワクチンを、例えば、全身または局所に投与することができる。通常の全身投与経路には、例えば、経皮、経口、非経口経路皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内および腹腔内注射、ならびに/または鼻腔内投与経路が含まれるが含まれる。通常の局所投与経路には、例えば、局所投与経路が含まれるが、皮内、経皮、皮下、もしくは筋肉内注射または病巣内、頭蓋内、肺内、心臓内、および舌下注射も含まれる。より好ましくは、ワクチンを、皮内、皮下、または筋肉内経路によって投与することができる。したがって、本発明のワクチンを、好ましくは、液体または時折固体に処方する。本発明のワクチンは、さらに、必要に応じてその免疫原性または免疫賦活性能を増加させるために1つ以上の補助物質を含むことができる。薬学的組成物のための定義の補助物質または添加物としてのアジュバントが特に好ましい。本発明は、さらに、本明細書中に定義の本発明の核酸、本発明の薬学的組成物、本発明のワクチン共に本明細書中に定義の本発明の核酸を含むまたはこれらを含むキットのいくつかの適用および使用を提供する。1つの特定の実施形態によれば、本発明は、医薬、好ましくは免疫刺激剤、アジュバント、またはワクチンとしてか、遺伝子療法分野での本明細書中に定義の本発明の核酸の第1の医学的使用に関する。別の実施形態によれば、本発明は、本明細書中に定義の疾患の処置のための本明細書中に定義の核酸の第2の医学的使用、好ましくは、本明細書中に定義の種々の疾患の予防、処置、および/または改善のための医薬の調製のための本明細書中に定義の本発明の核酸、これを含む薬学的組成物またはワクチン、またはこれを含むキットの使用に関する。好ましくは、薬学的組成物またはワクチンを、この目的を必要とする患者に使用するか投与する。好ましくは、本明細書中で言及した疾患は、癌または腫瘍疾患、感染症、好ましくはウイルス、細菌、または原生動物感染症、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー疾患、一遺伝子性疾患すなわち、遺伝性疾患、または遺伝病全般遺伝的背景を有し、典型的には定義された遺伝子欠損に原因し、メンデルの法則に従って遺伝する疾患、心血管疾患、ニューロン疾患、呼吸器系疾患、消化器系疾患、皮膚疾患、筋骨格系障害、結合組織障害、新生物、免疫欠損、内分泌性疾患、栄養性疾患、および代謝性疾患、眼疾患、耳疾患、ならびに本発明によって影響を受け得る任意の疾患から選択される。上記癌または腫瘍疾患には、好ましくは、例えば、結腸癌腫、黒色腫、腎臓癌腫、リンパ腫、急性骨髄白血病AML、急性リンパ性白血病ALL、慢性骨髄性白血病CML、慢性リンパ球性白血病CLL、胃腸管腫瘍、肺癌腫、神経膠腫、甲状腺腫瘍、乳癌腫、前立腺腫瘍、肝細胞癌、種々のウイルス誘導性腫瘍例えば、パピローマウイルス誘導性癌腫例えば、子宮頸癌腫、腺癌、ヘルペスウイルス誘導性腫瘍例えば、バーキットリンパ腫、EBV誘導性B細胞リンパ腫、B型肝炎誘導性腫瘍肝細胞癌腫、HTLV-1およびHTLV-2誘導性リンパ腫など、聴神経腫/神経鞘腫、子宮頸癌、肺癌、咽頭癌、肛門癌腫、膠芽細胞腫、リンパ腫、直腸癌腫、星状細胞腫、脳腫瘍、胃癌、網膜芽細胞腫、基底細胞癌、脳転移、髄芽腫、膣癌、膵臓癌、睾丸癌、黒色腫、甲状腺癌腫、膀胱癌、ホジキン症候群、髄膜腫、シェネーベルガー病、気管支癌腫、下垂体腫瘍、菌状息肉症、食道癌、乳癌、カルチノイド、神経鞘腫、棘細胞癌、バーキットリンパ腫、喉頭癌、腎臓癌、胸腺腫、子宮体部癌腫、骨癌、非ホジキンリンパ腫、尿道癌、CUP症候群、頭頸部腫瘍、乏突起膠腫、外陰癌、腸癌、結腸癌腫、食道癌腫、疣贅併発、小腸腫瘍、頭蓋咽頭腫craniopharyngeoma、卵巣癌腫、軟組織腫瘍/肉腫、卵巣癌、肝臓癌、膵臓癌腫、子宮頸癌腫、子宮内膜癌腫、肝転移、陰茎癌、舌癌、胆嚢癌、白血病、形質細胞腫、子宮癌、眼瞼腫瘍、前立腺癌などが含まれる。さらに、上記文脈では、感染症は、好ましくは、インフルエンザ、マラリア、SARS、黄熱病、AIDS、ライムボレリア症、リーシュマニア症、炭疽病、髄膜炎、ウイルス感染症AIDS、尖圭コンジローマ、中空の疣贅、デング熱、三日熱、エボラウイルス、風邪、初夏髄膜脳炎FSME、インフルエンザ、帯状疱疹、肝炎、単純ヘルペスI型、単純ヘルペスII型、帯状疱疹、インフルエンザ、日本脳炎、ラッサ熱、マールブルグウイルス、麻疹、口蹄疫、単核球症、ムンプス、ノーウォークウイルス感染、プファイファー腺熱、痘瘡、ポリオ小児期跛行、偽性クループ、第五病、狂犬病、疣贅、ウエストナイル熱、水疱、サイトメガロウイルスcytomegalicvirusCMVなど、細菌感染症流産前立腺炎、炭疽病、虫垂炎、ボレリア症、ボツリヌス中毒、カンピロバクターCamphylobacter、トラコーマ病原体尿道炎、結膜炎、コレラ、ジフテリア、ドノバン症donavanosis、喉頭蓋炎、発疹チフス、ガス壊疽、淋病、野兎病、ヘリコバクターピロリHeliobacterpylori、百日咳、気候性横痃、骨髄炎、レジオネラ症、癩病、リステリア症、肺炎、髄膜炎、細菌性髄膜炎、炭疽病、中耳炎、マイコプラズマホミニス、新生児敗血症絨毛羊膜炎、水癌、パラチフス、疫病、ライター症候群、ロッキー山紅斑熱、サルモネラパラチフス、サルモネラチフス、猩紅熱、梅毒、破傷風、トリッパー、ツツガムシ病、結核、チフス、膣炎膣の炎症、軟性下疳など、および寄生虫、原生動物、または真菌に原因する感染症アメーバ症、ビルハルツ住血吸虫症、シャーガス病、足白癬、酵母真菌斑、疥癬、マラリア、回旋糸状虫症河川盲目症、または真菌疾患、トキソプラズマ症、トリコモナス症、トリパソノーマ症眠り病、内臓リーシュマニア症、おむつ皮膚炎、住血吸虫症、魚中毒シガテラ、カンジタ症、皮膚リーシュマニア症、ランブル鞭毛虫症ランブル鞭毛虫症、または眠り病など、またはエキノコッカスに原因する感染症魚類条虫症、キツネ条虫症、イヌ条虫症、シラミ、ウシ条虫症、ブタ条虫症、微小条虫症から選択される。さらに、上記文脈では、アレルギーにより、通常、これらの抗原またはアレルゲンに対する局所性または全身性の炎症応答が生じ、体内でこれらのアレルゲンに対する免疫が生じる。この文脈におけるアレルゲンには、例えば、草、花粉、カビ、薬物、または多数の環境要因などが含まれる。理論に拘束されないが、いくつかの異なる疾患機構が、アレルギーの発症に関与すると予想される。P.GellおよびR.Coombsによる分類スキームによれば、用語アレルギーは、古典的なIgE機構に原因するI型過敏症に制限されていた。I型過敏症は、IgEによる肥満細胞および好塩基球の過剰な活性化、それによる全身性の炎症応答によって特徴づけられ、この炎症反応により、症状は良性の鼻水から始まり、生命を危うくするアナフィラキシーショックおよび死亡に至り得る。周知のアレルギー型には、アレルギー喘息鼻粘膜の腫脹を引き起こす、アレルギー性結膜炎結膜の発赤および掻痒を引き起こす、アレルギー性鼻炎枯草熱、過敏症、血管浮腫angiodema、アトピー性皮膚炎湿疹、蕁麻疹発疹、好酸球増加症,虫刺されに対するアレルギー、皮膚アレルギー種々の発赤湿疹、発疹蕁麻疹および接触皮膚炎などを引き起こし、これらを含む、食物アレルギー、医薬品に対するアレルギーなどが含まれるが、これらに限定されない。本発明に関して、例えば、タンパク質、上記定義の本発明の核酸と組み合わせたそのタンパク質アレルゲンをコードする核酸、または本発明の核酸のいずれかとしてのアレルゲン例えば、ネコアレルゲン、粉塵アレルゲン、ダニ抗原、植物抗原例えば、カバノキ抗原などに由来をコードするか含む本発明の核酸、薬学的組成物、またはワクチンを提供する。本発明の薬学的組成物は、過剰な免疫応答をより強力なTH1応答にシフトさせ、それにより、望ましくないIgE応答を抑制または減弱することができる。さらに、自己免疫疾患を、各疾患の主な臨床病理学的特徴に応じて全身性および器官特異性または局在自己免疫障害に大きく分類することができる。自己免疫疾患を、全身性症候群SLE、シェーグレン症候群、強皮症、関節リウマチ、および多発性筋炎が含まれるまたは局所性症候群内分泌学的DM1型、橋本甲状腺炎、アジソン病など、皮膚科学的尋常性天疱瘡、血液学的自己免疫性溶血性貧血、神経性多発性硬化症であり得るか、実質的に任意の体組織の限局性塊に関与し得るのカテゴリーに分類することができる。処置すべき自己免疫疾患を、I型自己免疫疾患、またはII型自己免疫疾患、またはIII型自己免疫疾患、またはIV型自己免疫疾患例えば、多発性硬化症MS、関節リウマチ、糖尿病、I型糖尿病真性糖尿病、全身性エリテマトーデスSLE、慢性多発性関節炎、バセドウ病、自己免疫形態の慢性肝炎、潰瘍性大腸炎、I型アレルギー疾患、II型アレルギー疾患、III型アレルギー疾患、IV型アレルギー疾患、線維筋痛、脱毛、ベヒテレフ病、クローン病、重症筋無力症、神経皮膚炎、リウマチ性多発筋痛、進行性全身性硬化症PSS、乾癬、ライター症候群、リウマチ性関節炎、乾癬、脈管炎など、またはII型糖尿病などからなる群から選択することができる。免疫系が自己抗原に対して免疫反応を誘導する理由に関する正確な様式は今までのところ解明されていないが、病因学に関するいくつかの所見が存在する。したがって、自己反応はT細胞バイアスに起因し得る。正常な免疫系には、T細胞によるB細胞の活性化が必要であり、その後に前者であるB細胞が抗体を大量に産生することができる。T細胞のこの要件は、稀な場合非特異的様式でのT細胞受容体の1つのサブユニットへの直接結合によってB細胞の、さらにはT細胞のポリクローナル活性化を開始することができるスーパー抗原産生生物による感染などで迂回することができる。別の説明では、分子擬態から自己免疫疾患が推定される。外因性抗原は、一定の宿主抗原と構造が類似し得るので、この抗原自己抗原を模倣するに対して産生された任意の抗体はまた、理論上は、宿主抗原に結合して免疫応答を増幅することができる。最も顕著な分子擬態の形態が、A群β-溶血連鎖球菌で認められており、これは、ヒト心筋層と抗原を共有し、リウマチ熱の心臓の症状を担う。したがって、本発明により、例えば、典型的には免疫系を脱感作させる自己抗原タンパク質、自己抗原タンパク質をコードするmRNAまたはDNAとしてをコードするか含む本明細書中に定義の核酸、または薬学的組成物、またはワクチンが提供される。さらなる実施形態によれば、本発明は、遺伝子療法による本明細書中に定義の疾患の処置のための本明細書中に定義の本発明の核酸の第2の医学的使用に関する。さらに好ましい実施形態では、本発明の核酸を、特に本明細書中に定義の目的のための薬学的組成物またはワクチンの調製のために使用することができる。本発明の薬学的組成物またはワクチンを、さらに本明細書中に定義の疾患または障害の処置のために使用することができる。最後の実施形態によれば、本発明はまた、キット、特にキットオブパーツを提供する。かかるキット、特にキットオブパーツは、典型的には、単独の成分または本明細書中に定義のさらなる成分との組み合わせ、少なくとも1つの本明細書中に定義の本発明の核酸、本発明の核酸を含む本発明の薬学的組成物またはワクチンを含む。必要に応じて本明細書中に定義のさらなる成分と組み合わせた少なくとも1つの本明細書中に定義の本発明の核酸、本発明の薬学的組成物、および/または本発明のワクチンは、キットの1つまたは異なるパーツ中に存在し得る。例として、例えば、キットの少なくとも1つの部分は、少なくとも1つの本明細書中に定義の本発明の核酸およびキットの少なくとも1つのさらなる部分少なくとも1つの本明細書中に定義の他の成分を含むことができる。例えば、キットの少なくとも1つの他の部分は、少なくとも1つの薬学的組成物またはワクチンまたはその一部を含むことができる。例えば、キットの少なくとも1つの部分は、本明細書中に定義の本発明の核酸、キットの少なくとも1つのさらなる部分少なくとも1つの本明細書中に定義の他の成分、キットの少なくとも1つのさらなる部分少なくとも1つの本発明の薬学的組成物もしくはワクチンの成分または全体としての本発明の薬学的組成物もしくはワクチン、および少なくとも1つのキットのさらなる部分例えば、少なくとも1つの抗原、少なくとも1つの薬学的キャリアまたはビヒクルなどを含むことができる。例えば、キットをキットオブパーツとして調製する場合、キットまたはキットオブパーツは、さらに、本発明の核酸、本発明の薬学的組成物、または本発明のワクチン、または任意のその成分もしくは部分の投与および投薬量に関する情報を含む技術指示書を含むことができる。本発明では、他で記載のない限り、代替物および実施形態の異なる特徴を相互に組み合わせることができる。さらに、用語~を含むは、具体的に示さない限り、~からなるを意味すると解釈しないものとする。しかし、本発明の文脈では、必要に応じ、用語~含むを、用語~からなるに置換することができる。図面以下の図面は、本発明をさらに説明することを意図し、本発明が図面に制限されると解釈されないものとする。以下の実施例は、本発明をさらに例証することを意図し、本発明が実施例に制限されると解釈されないものとする。1.ヒストンステムループコンセンサス配列の生成実験前に、ヒストンステムループコンセンサス配列を、後生動物および原生動物のヒストンステムループ配列に基づいて決定した。ゲノム配列および発現配列タグの検索によって多数の天然ヒストンステムループ配列を同定したLopezらDavilaLopez,M.,Samuelsson,T.2008,RNANewYork,N.Y.,141,1-10.doi:10.1261/rna.782308によって提供された付録から配列を取った。第1に、後生動物および原生動物由来の全配列4001配列、または原生動物由来の全配列131配列、あるいは、後生動物由来の全配列3870配列、または脊椎動物由来の全配列1333配列、またはヒト由来の全配列84配列をグループ化し、整列させた。次いで、各位置のヌクレオチドの存在量を決定した。このようにして得た表に基づいて、分析した配列中に存在する全ヌクレオチドを示す5つの異なる配列群のコンセンサス配列を生成した。さらに、保存ヌクレオチドを段階的に強調したより制限のあるコンセンサス配列も得た。2.DNA-テンプレートの調製T7プロモーターにPhotinuspyralisルシフェラーゼppLucGCをコードするGC富化配列、αグロビンagの3’非翻訳領域UTRの中心部分、およびポリA配列が続くインビトロ転写用ベクターを構築した。ポリA配列の直後に、A64ポリA配列で終結するmRNAを得るためのインビトロ転写前のベクターの線状化のために使用される制限部位が続いた。したがって、インビトロ転写によってこのベクターから得たmRNAを、ppLucGC-ag-A64と命名する。インビトロ転写前の別の制限部位でのこのベクターの線状化により、A64のさらなるヌクレオチド3’によって伸長されたかA64を欠くmRNAを得た。さらに、元のベクターを、別の配列を含むように修飾した。要約すれば、インビトロ転写によってこれらのベクターから以下のmRNAを得たmRNA配列を図6~17に示す:3.インビトロ転写実施例2のDNA-テンプレートを線状化し、インビトロでT7-ポリメラーゼを使用して転写した。次いで、DNA-テンプレートを、DNアーゼ処理によって消化した。全mRNA転写物は、過剰なN7-メチル-グアノシン-5’-三リン酸-5’-グアノシンの転写反応物への付加によって得た5’-CAP構造を含んでいた。このようにして得たmRNAを精製し、水に再懸濁した。4.mRNAの酵素的アデニル化以下の2つのmRNAを酵素的にアデニル化した:ppLucGC-ag-A64およびppLucGC-ag-ヒストンSL。この目的を達成するために、製造者の説明書にしたがって、RNAを大腸菌ポリA-ポリメラーゼおよびATPポリAポリメラーゼテーリングキットEpicentre、Madison、USAとインキュベートした。伸長されたポリA配列を有するmRNAを精製し、水に再懸濁した。ポリA配列の長さを、アガロースゲル電気泳動によって決定した。出発mRNAをおよそ250個のアデニル化物によって伸長し、得られたmRNAを、それぞれppLucGC-ag-A300およびppLucGC-ag-ヒストンSL-A250と命名する。5.mRNAエレクトロポレーションによるルシフェラーゼ発現HeLa細胞をトリプシン処理し、opti-MEMで洗浄した。200μlのopti-MEM中の1×105細胞を、それぞれ0.5μgのppLucコードmRNAを使用してエレクトロポレーションした。コントロールとして、ppLucをコードしないmRNAを個別にエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションした細胞を、24ウェルプレート中の1mlのRPMI1640培地に播種した。トランスフェクションから6、24、または48時間後、培地を吸引し、細胞を、200μlの溶解緩衝液25mMTrispH7.5HCl、2mMEDTA、10グリセロール、1TritonX-100、2mMDTT、1mMPMSF中で溶解した。ppLuc活性を測定するまで、溶解物を-20°Cで保存した。6.mRNAリポフェクションによるルシフェラーゼ発現HeLa細胞を、2×104細胞/ウェルの密度で96ウェルプレートに播種した。翌日、細胞をopti-MEMで洗浄し、次いで、150μlのopti-MEM中にて0.25μgのリポフェクチン複合体化ppLucコードmRNAでトランスフェクションした。コントロールとして、ppLucをコードしないmRNAを個別にリポフェクションした。いくつかのウェルでは、opti-MEMを吸引し、トランスフェクション開始から6時間後に細胞を200μlの溶解緩衝液中で溶解した。残りのウェルでは、その時点でopti-MEMをRPMI1640培地と交換した。これらのウェルでは、培地を吸引し、トランスフェクション開始から24時間後または48時間後に細胞を200μlの溶解緩衝液中で溶解した。ppLuc活性を測定するまで、溶解物を-20°Cで保存した。7.ルシフェラーゼ測定ppLuc活性を、50μlの溶解物および200μlのルシフェリン緩衝液25mMグリシルグリシンpH7.8NaOH、15mMMgSO4、2mMATP、75μΜルシフェリンを使用して、測定時間5秒でBioTekSynergyHTプレートリーダーにて相対光単位RLUとして測定した。比RLUを、総RLUからコントロールRNAのRLUを引くことによって計算した。8.皮内mRNA注射によるルシフェラーゼ発現インビボでのルシフェラーゼ発現マウスを、RompunとKetavetとの混合物で麻酔した。各ppLucコードmRNAを皮内注射した0.5μgのmRNAを含む50μl/注射。コントロールとして、ppLucをコードしないmRNAを個別に注射した。注射16時間後、マウスを屠殺し、組織を採取した。組織サンプルを液体窒素中で急速凍結し、組織溶解剤Qiagenを含む800μlの溶解緩衝液25mMTrispH7.5HCI、2mMEDTA、10グリセロール、1TritonX-100、2mMDTT、1mMPMSF中に溶解した。その後、サンプルを、13500rpmにて4°Cで10分間遠心分離した。ppLuc活性を測定するまで、溶解物を-80°Cで保存した7.ルシフェラーゼ測定を参照のこと。9.mRNAエレクトロポレーションによるNY-ESO-1発現HeLa細胞をトリプシン処理し、opti-MEMで洗浄した。200μlのopti-MEM中の2×105細胞を、10μgのNY-ESO-1コードmRNAを使用してエレクトロポレーションした。3つのエレクトロポレーション由来の細胞を合わせ、6ウェルプレート中の2mlのRPMI1640培地に播種した。トランスフェクションから24時間後、細胞を採取し、96ウェルV底プレート2ウェル/mRNAに移した。細胞をリン酸緩衝化生理食塩水PBSで洗浄し、200μl/ウェルのCytofix/CytopermBectonDickinsonBDで透過処理を行った。15分後、細胞をPermWashBDで洗浄した。次いで、細胞を、マウス抗NY-ESO-1IgG1またはアイソタイプコントロール20μg/mlのいずれかと室温で1時間インキュベートした。細胞をPermWashで再度2回洗浄した。次に、細胞を、500倍希釈のAlexa-647カップリングヤギ抗マウスIgGと4°Cで1時間インキュベートした。最後に、細胞をPermWashで2回洗浄した。細胞を、200μlの緩衝液PBS、2FCS、2mMEDTA、0.01アジ化ナトリウムに再懸濁した。NY-ESO-1発現を、フローサイトメトリーによって蛍光強度の中央値MFIとして定量した。10.mRNAでのワクチン接種による抗NY-ESO-1抗体の誘導C57BL/6マウスを、プロタミンと複合体化したNY-ESO-1コードmRNAで皮内にワクチン接種した14日間で5回。コントロールマウスを緩衝液で処置した。ワクチン接種マウスおよびコントロールマウスにおけるNY-ESO-1特異的抗体レベルを、以下のようにELISAによって最後のワクチン接種後8日間分析した。96ウェルELISAプレートNuncを、100μl/ウェルの10μg/ml組換えNY-ESO-1タンパク質にて4°Cで16時間コーティングした。プレートを洗浄緩衝液PBS、0.05Tween-20で2回洗浄した。非特異的結合をブロッキングするために、次いで、プレートをブロッキング緩衝液PBS、0.05Tween-20、1BSAと37°Cで2時間インキュベートした。ブロッキング後、100μl/ウェルの系列希釈したマウス血清を添加し、室温で4時間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄緩衝液で3回洗浄した。次に、100μl/ウェルのビオチン化ラット抗マウスIgG2a[b]検出抗体BDBiosciencesブロッキング緩衝液で600倍希釈を、室温で1時間結合させた。プレートを、洗浄緩衝液で再度3回洗浄し、その後、100μl/ウェルの西洋ワサビペルオキシダーゼカップリングストレプトアビジンと室温で30分間インキュベートした。洗浄緩衝液で4回洗浄後、100μl/ウェルの3,3’,5,5’-テトラメチルベンジジンThermoScientificを添加した。変色の際、100μl/ウェルの20硫酸を添加した。405nmの吸光度を測定した。11.結果11.1ヒストンステムループ配列:ヒストンステムループ配列を特徴づけるために、後生動物および原生動物4001配列、または原生動物131配列または代わりに後生動物3870配列、または脊椎動物1333配列またはヒト84配列由来の配列をグループ分けし、整列させた。次いで、各位置のヌクレオチドの存在量を決定した。このようにして得た表に基づいて、分析した配列中に存在する全ヌクレオチドを示す5つの異なる配列群のコンセンサス配列を生成した。組み合わせた後生動物および原生動物のコンセンサス配列内で、3つのヌクレオチドが保存されループ中の1つのT/Uおよびステム中の1つのGおよび1つのC、塩基対を形成する。構造的に、典型的には、6塩基対ステムおよび4ヌクレオチドのループを形成する。しかし、逸脱した構造が共通している:84のヒトのヒストンステムループのうち、2つが4塩基対および1つのミスマッチを含むたった5ヌクレオチドのステムを含む。別のヒトのヒストンステムループは、たった5塩基対のステムを含む。4つ以上のヒトのヒストンステムループは6ヌクレオチド長のステムを含むが、3つの異なる位置にそれぞれ1つのミスマッチを含む。さらに、4つのヒトヒストンステムループは、2つの異なる位置にそれぞれ1つのゆらぎ塩基対を含む。ループに関して、5ヌクレオチドのループがD.discoideumで同定されているので、4ヌクレオチド長は厳格に必要でないようである。分析した配列中に存在する全ヌクレオチドを示すコンセンサス配列に加えて、保存ヌクレオチドが段階的に強調された、より制限されたコンセンサス配列も得た。まとめると、以下の配列を得た。Cons:全ヌクレオチド存在量を示す。99:全ヌクレオチド存在量の少なくとも99を示す95:全ヌクレオチド存在量の少なくとも95を示す90:全ヌクレオチド存在量の少なくとも90を示すヒストンステムループ配列の分析結果を、以下の表1~5にまとめる図1~5も参照のこと。ここで、使用した略語を以下のように定義した。11.2ポリAとヒストンSLとの組み合わせが相乗様式でmRNAからのタンパク質発現を増大させる。mRNAからのタンパク質発現に及ぼすポリAとヒストンSLとの組み合わせの影響を調査するために、αグロビン3’-UTRの3’側に異なる配列を有するmRNAを合成した。mRNAは、3’-UTRのちょうど3’側で終結しており、それによってポリA配列およびヒストンSLの両方を欠くか、3’-UTRの3’側にA64ポリA配列または代わりにヒストンSLのいずれかを含むか、A64ポリAおよびヒストンSLの両方を含んでいた。ルシフェラーゼコードmRNAまたはコントロールmRNAを、HeLa細胞にエレクトロポレーションした。ルシフェラーゼレベルを、トランスフェクションから6、24、および48時間後に測定した以下の表6および図18を参照のこと。ポリA配列およびヒストンSLのいずれも持たないmRNAからルシフェラーゼはほとんど発現されなかった。ポリA配列またはヒストンSLの両方は、ルシフェラーゼレベルを類似の範囲に増加させた。いずれかのmRNAにより、ポリAおよびヒストンSLの両方を欠くmRNAよりもはるかに高いルシフェラーゼレベルを得た。しかし、顕著には、ポリAとヒストンSLとの組み合わせは、個別のエレメントのいずれかを使用して認められるレベルを超えてルシフェラーゼレベルを種々にさらに強力に増加させた。同一のmRNA中でのポリAとヒストンSLとの組み合わせに起因するルシフェラーゼレベルの上昇規模は、これらが相乗的に作用していることを証明している。ポリAとヒストンSLとの間の相乗作用を、ポリA-ヒストンSLmRNA/由来のシグナルをヒストンSLmRNA-/およびポリAmRNA/-由来のシグナルの和で割ることによって定量した以下の表7を参照のこと。このようにして計算された因子により、ポリAとヒストンSLとを組み合わせたmRNA由来のルシフェラーゼレベルがポリAおよびヒストンSLの効果が純粋に足された場合に予想されるレベルよりもどの程度高いか特定される。ポリAとヒストンSLとを組み合わせたmRNA由来のルシフェラーゼレベルは、これらの効果の純粋な和の16.6倍までであった。この結果により、ポリAとヒストンSLとの組み合わせがタンパク質発現を顕著に相乗的に増加させることが確認される。11.3ポリAとヒストンSLとの組み合わせが、その順序と無関係にmRNAからのタンパク質発現を増加させる。ポリAとヒストンSLとの組み合わせの効果は、ポリA配列の長さならびにポリAおよびヒストンSLの順序に依存し得る。したがって、ポリA配列の長さが増加したmRNAおよび順序が逆のポリAおよびヒストンSLを有するmRNAを合成した。2つのmRNAは、3’-UTRの3’側にA120またはA300ポリA配列のいずれかを含んでいた。1つのさらなるmRNAは、3’-UTRの3’側に最初にヒストンSLを含み、その後にA250ポリA配列を含んでいた。ルシフェラーゼコードmRNAまたはコントロールmRNAを、HeLa細胞にリポフェクションした。ルシフェラーゼレベルを、トランスフェクション開始から6、24、および48時間後に測定した以下の表8および図19を参照のこと。A64ポリA配列またはヒストンSLの両方から類似のルシフェラーゼレベルが得られた。前述の実験と一致して、A64とヒストンSLとの組み合わせが個別のエレメントのいずれかを使用して認められるレベルを超えてルシフェラーゼレベルを種々に強力に増加させた。同一のmRNA中でのポリAとヒストンSLとの組み合わせに起因するルシフェラーゼレベルの上昇規模は、これらが相乗的に作用していることを証明している。A64とヒストンSLとの間の相乗作用を、A64-ヒストンSL、A64、およびヒストンSLmRNAのルシフェラーゼレベルに基づいて前述のように定量した以下の表9を参照のこと。A64とヒストンSLとを組み合わせたmRNA由来のルシフェラーゼレベルは、ポリAおよびヒストンSLの効果が純粋に足された場合の61.7倍までであった。対照的に、A64~A120またはA300までのポリA配列の長さの増加により、ルシフェラーゼレベルを中程度にしか増加させなかった表8および図19を参照のこと。最も長いポリA配列A300を有するmRNAを、類似の長さのポリA配列をヒストンSLヒストンSL-A250と組み合わせたmRNAとも比較した。長いポリA配列を有することに加えて、ヒストンSLおよびポリAの順序は、このmRNA中でA64-ヒストンSLmRNAと比較して逆である。A250とヒストンSLとの組み合わせが、ヒストンSLまたはA300のいずれかを使用して認められるレベルを超えてルシフェラーゼレベルを種々に強力に増加させた。また、A250とヒストンSLとの間の相乗作用を、ヒストンSL-A250mRNA由来のRLUとA300mRNAヒストンSLmRNA由来のRLUとを比較して前述のように定量した以下の表10を参照のこと。A250とヒストンSLとを組み合わせたmRNA由来のルシフェラーゼレベルは、ポリAおよびヒストンSLの効果が純粋に足された場合の17.0倍までであった。まとめると、mRNAからのタンパク質発現に及ぼすヒストンSLとポリAとの組み合わせの高い相乗効果により、ポリAの長さが実質的に異なることおよびポリAおよびヒストンSLの順序が無関係であることを証明した。11.4ポリAとヒストンSLとの組み合わせによるタンパク質発現の上昇は特異的である。mRNAからのタンパク質発現に及ぼすポリAとヒストンSLとの組み合わせの影響が特異的であるかどうかを調査するために、ポリAと組み合わせた別の配列を有するmRNAを合成した。これらのmRNAは、A64の3’側に7つの異なる配列のうちの1つをそれぞれ含んでいた。ルシフェラーゼコードmRNAまたはコントロールmRNAを、HeLa細胞にエレクトロポレーションした。ルシフェラーゼレベルを、トランスフェクションから6、24、および48時間後に測定した以下の表11および図20を参照のこと。ポリA配列またはヒストンSLの両方から類似のルシフェラーゼレベルが得られた。また、ポリAとヒストンSLとの組み合わせは、個別のエレメントのいずれかを使用して認められるレベルを超えてルシフェラーゼレベルを種々に強力に増加させるので、相乗的に作用した。対照的に、ポリAと任意の別の配列との組み合わせは、ポリA配列のみを含むmRNAと比較してルシフェラーゼレベルに影響を及ぼさなかった。したがって、ポリAとヒストンSLとの組み合わせが相乗様式でmRNAからのタンパク質発現を増大させ、この影響は特異的である。11.5ポリAとヒストンSLとの組み合わせがインビボにて相乗様式でmRNAからのタンパク質発現を増大させる。インビボでのmRNAからのタンパク質発現に及ぼすポリAとヒストンSLとの組み合わせの影響を調査するために、αグロビン3’-UTRの3’側に異なる配列を有するルシフェラーゼコードmRNAまたはコントロールmRNAをマウスに皮内注射した。mRNAは、3’-UTRの3’側にA64ポリA配列または代わりにヒストンSLのいずれかを含むか、A64ポリAおよびヒストンSLの両方を含んでいた。ルシフェラーゼレベルを、注射から16時間後に測定した以下の表12および図21を参照のこと。ルシフェラーゼは、ヒストンSLまたはポリA配列のいずれかを有するmRNAから発現された。しかし、顕著には、ポリAとヒストンSLとの組み合わせは、個別のエレメントのいずれかを使用して認められるレベルを超えてルシフェラーゼレベルを種々にさらに強力に増加させた。同一のmRNA中でのポリAとヒストンSLとの組み合わせに起因するルシフェラーゼレベルの上昇規模は、これらが相乗的に作用していることを証明している。ポリAとヒストンSLとの間の相乗作用を、ポリA-ヒストンSLmRNA/由来のシグナルをヒストンSLmRNA-/およびポリAmRNA/-由来のシグナルの和で割ることによって定量した以下の表13を参照のこと。このようにして計算された因子により、ポリAとヒストンSLとを組み合わせたmRNA由来のルシフェラーゼレベルがポリAおよびヒストンSLの効果が純粋に足された場合に予想されるレベルよりもどの程度高いか特定される。ポリAとヒストンSLとを組み合わせたmRNA由来のルシフェラーゼレベルは、これらの効果の純粋な和の8倍であった。この結果により、ポリAとヒストンSLとの組み合わせがインビボでのタンパク質発現を顕著に相乗的に増加させることが確認される。11.6ポリAとヒストンSLとの組み合わせがmRNAからのNY-ESO-1タンパク質発現を増加させる。mRNAからのタンパク質発現に及ぼすポリAとヒストンSLとの組み合わせの影響を調査するために、αグロビン3’-UTRの3’側に異なる配列を有するNY-ESO-1コードmRNAを合成した。mRNAは、3’-UTRの3’側にA64ポリA配列またはA64ポリAおよびヒストンSLの両方のいずれかを含んでいた。NY-ESO-1コードmRNAを、HeLa細胞にエレクトロポレーションした。NY-ESO-1レベルを、トランスフェクションから24時間後にフローサイトメトリーによって測定した以下の表14および図22を参照のこと。NY-ESO-1は、ポリA配列のみを有するmRNAから発現された。しかし、顕著には、ポリAとヒストンSLとの組み合わせは、ポリA配列のみを使用して認められるレベルを超えてNY-ESO-1レベルを種々に強力に増加させた。11.7ポリAとヒストンSLとの組み合わせがmRNAを使用したワクチン接種によって誘発される抗体レベルを増加させる。mRNAを使用したワクチン接種によって誘発される抗体の誘導に及ぼすポリAとヒストンSLとの組み合わせの影響を調査するために、C57BL/6マウスに、プロタミンと複合体化した、αグロビン3’-UTRの3’側に異なる配列を有するNY-ESO-1コードmRNAを皮内にワクチン接種した。mRNAは、3’-UTRの3’側にA64ポリA配列またはA64ポリAおよびヒストンSLの両方のいずれかを含んでいた。ワクチン接種マウスおよびコントロールマウスにおけるNY-ESO-1特異的抗体レベルを、血清の系列希釈を使用したELISAによって分析した以下の表15および図23を参照のこと。抗NY-ESO-1IgG2a[b]は、ポリA配列のみを有するmRNAによって誘導された。しかし、顕著には、ポリAとヒストンSLとの組み合わせは、ポリA配列のみを使用して認められるレベルを超えて抗NY-ESO-1IgG2a[b]レベルを種々に強力に増加させた。"