自己免疫疾患を処置するための方法であって、かかる処置を必要とする対象に、インターロイキン15受容体IL‐15Rアゴニストを、自己免疫疾患の症状を改善するために有効な量で投与することを含む、前記方法。自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、慢性移植片対宿主病、関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、シェーグレン症候群、グレーブス病、クローン病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、過粘稠度症候群、原因不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症、POEMS症候群、ミエローマ、マクログロブリン血症および寒冷擬集素病からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。自己免疫疾患が自己抗原に対する抗体を伴い、かつ、対象が自己抗原に対する抗体を有する、請求項1に記載の方法。アゴニストが、配列番号1IL‐15のアミノ酸配列と少なくとも90同一の配列を含み、かつ、IL‐15Rに結合するIL‐15ポリペプチドである、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。アゴニストが、抗IL‐15R抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。アゴニストが、GSリンカーを介して可溶性IL‐15受容体アルファ鎖に結合したIL‐15のヘテロ複合体である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。対象における自己免疫疾患を処置するための方法であって、a.かかる処置を必要とする対象からT細胞を単離することここで単離されたT細胞は多数のCD44CD122HeliosCD8制御性T細胞を含むb.単離された細胞を、IL‐15およびIL‐21を含む培養培地中、コンカナバリンAで活性化され、かつ照射された同系CD4T細胞の存在下で、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞の数が少なくとも5増加するまで生育させ、それによって、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞で富化された細胞集団を製造すること、c.対象に、該細胞集団からのCD44CD122HeliosCD8制御性T細胞を、自己免疫疾患の症状を改善するのに有効な量で投与することを含む、前記方法。CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞がKirである、請求項7に記載の方法。CD8T細胞が対象から単離されたものである、請求項7または請求項8に記載の方法。細胞集団からのCD44CD122HeliosCD8制御性T細胞またはCD44CD122HeliosKirCD8制御性T細胞が、静脈内注射によって投与される、請求項7または請求項8に記載の方法。単離された細胞を、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞の数またはCD44CD122HeliosKirCD8制御性T細胞の数が少なくとも10増加するまで生育させる、請求項7または請求項8に記載の方法。CD44CD122KirCD8制御性T細胞またはCD44CD122KirHeliosCD8制御性T細胞で富化された細胞集団が、非CD44CD122KirCD8制御性T細胞または、非CD44CD122KirHeliosCD8制御性T細胞の集団を除去することによってさらに富化される、請求項7または請求項8に記載の方法。対象における自己免疫疾患を処置するための方法であって、a.かかる処置を必要とする対象からT細胞を単離することここで、単離されたT細胞は多数のCD44CD122KirCD8制御性T細胞を含む、b.単離された細胞を、IL‐15およびIL‐21を含む培養培地中、コンカナバリンAで活性化され、かつ照射された同系CD4T細胞の存在下で、CD44CD122KirCD8制御性T細胞の数が少なくとも5増加するまで生育させ、それによって、CD44CD122KirCD8制御性T細胞で富化された細胞集団を製造すること、c.対象に、該細胞集団からのCD44CD122KirCD8制御性T細胞を、自己免疫疾患の症状を改善するのに有効な量で投与することを含む、前記方法。CD8T細胞が対象から単離されたものである、請求項13に記載の方法。細胞集団からのCD44CD122KirCD8制御性T細胞が、静脈内注射によって投与される、請求項13に記載の方法。単離された細胞を、CD44CD122KirCD8制御性T細胞の数が少なくとも10増加するまで生育させる、請求項13に記載の方法。CD44CD122KirCD8制御性T細胞で富化された細胞集団が、非CD44CD122KirCD8制御性T細胞の集団を除去することによってさらに富化される、請求項13に記載の方法。CD8細胞を含む組成物であって、該組成物におけるCD8細胞の少なくとも5がCD44CD122HeliosCD8制御性T細胞である、前記組成物。CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞がKirである、請求項18に記載の組成物。CD8細胞を含む組成物であって、該組成物におけるCD8細胞の少なくとも5がCD44CD122KirCD8制御性T細胞である、前記組成物。組成物におけるCD8細胞の少なくとも10がCD44CD122HeliosCD8制御性T細胞またはCD44CD122HeliosKirCD8制御性T細胞である、請求項18または19に記載の組成物。組成物におけるCD8細胞の少なくとも10がCD44CD122KirCD8制御性T細胞である、請求項20に記載の組成物。請求項18~22のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物。免疫抑制剤をさらに含む、請求項23に記載の医薬組成物。抗原に対する免疫反応を刺激するための方法であって、前記抗原を有し、かつ、前記抗原に対する免疫刺激を必要とする対象に、CD44CD122CD8制御性T細胞の増殖および/または活性を阻害する剤を、対象において前記抗原に対する免疫反応を刺激するのに有効な量で投与することを含み、ここで、CD44CD122CD8制御性T細胞がHeliosおよび/またはKirである、前記方法。対象が病原体による感染を有し、該病原体が抗原を含む、請求項25に記載の方法。対象ががんを有し、該がんが抗原を含み、および該抗原が腫瘍抗原である、請求項25に記載の方法。抗原がワクチンにて対象に投与される、請求項25に記載の方法。剤が抗IL‐15抗体である、請求項25~28のいずれか一項に記載の方法。CD44CD122CD8制御性T細胞がKirであり、剤がCD44CD122KirCD8制御性T細胞に結合する抗体である、請求項25~28のいずれか一項に記載の方法。CD44CD122CD8制御性T細胞がHeliosであり、剤がHeliosの発現および/または活性を阻害する、請求項25~28のいずれか一項に記載の方法。抗体が、CD44CD122KirCD8制御性T細胞上に存在する第1の表面マーカーに結合する第1の抗原結合ドメイン、およびCD44CD122KirCD8制御性T細胞上に存在する第2の表面マーカーに結合する第2の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体である、請求項30に記載の方法。CD44CD122KirCD8制御性T細胞上にある第1および第2の表面マーカーが、CD44、CD122、KirおよびCD8からなる群から選択される、請求項32に記載の方法。剤が抗CD8抗体である、請求項25~28のいずれか一項に記載の方法。剤が、CD44CD122CD8制御性T細胞上に存在する第1の表面抗原に結合する第1の抗体の最適下用量、およびCD44CD122CD8制御性T細胞上に存在する第2の表面抗原に結合する第2の抗体の最適下用量、を含む組成物であり、ここで、第1の表面抗原は第2の表面抗原とは異なる、請求項25~28のいずれか一項に記載の方法。第1の抗体が、CD44、CD122、KirおよびCD8からなる群から選択される抗原に結合し、第2の抗体が、CD44、CD122、KirおよびCD8からなる群から選択される抗原に結合する、請求項35に記載の方法。抗体が抗Kir抗体である、請求項30に記載の方法。発明の詳細な説明一側面において、本発明は、自己寛容の維持および自己免疫疾患の予防に対して不可欠なCD8制御性T細胞の亜集団の発見に関する。これらのCD8T細胞は、免疫を活性化するよりはむしろ抑制するようにプログラムされており、免疫反応の不可欠な制御的要素であり、かつ、自己寛容を保証するものである。特殊化したspecialized制御性CD8T細胞は、CD4濾胞性ヘルパーT細胞TFHの活性を、TFH細胞の表面に発現するクラスIMHCペプチドQa‐1ヒト白血球抗原EHLA‐Eのマウスホモログの認識を介して選択的に抑制し、自己抗体反応を弱める。これらのCD8制御性TTreg細胞の表面表現型の分析は、これらが高いレベルのCD44およびCD122、比較的低いレベルのCXCR5およびICOSLを発現し、Kir受容体免疫グロブリン様キラー細胞抑制受容体、マウスではLy49と称されるも発現することを示した。マウスLy49およびLy49-CD8T細胞から調製したcDNAによるDNAマイクロアレイはまた、CD8制御性T細胞の発達および機能にとって重要な遺伝子に対する有力な主要転写因子として、転写因子Heliosを同定した。Heliosは、ジンクフィンガー調節因子のイカロスIkarosファミリーの一員である。Heliosは、T細胞発達の初期段階で高く発現し、FoxP3CD4制御性T細胞のサブセット≒70でも発現される。しかしながら、Heliosの発現は、FoxP3の発現に依存しない。成熟B細胞、樹状細胞およびミエロイド細胞は、Heliosを発現しない。CD8T細胞プールにおけるHelios発現および機能は報告されていない。本発明者らは、Heliosが、CD8T細胞プール内のLy49CD8制御性T細胞によって専ら発現され、Ly49T細胞におけるこの転写因子の発現が、その抑制的な機能に関係することを示した。Heliosタンパク質およびmRNAの存在は、抗体を用いたHeliosの細胞内染色、および定量的PCRによって検出することができるExpressionofHeliosanIkarosTranscriptionFactorFamilyMemberDifferentiatesThymicDerivedfromPeripherallyInducedFoxp3TRegulatoryCellsThorntonetalJImmunol201018434333441。細胞内でのHelios発現は、例えば、一定量の細胞を、Heliosタンパク質またはmRNAの存在について試験することによって検出することができる。Heliosタンパク質の発現は、例えば、表面マーカーCD3、CD8、CD44、CD122およびLy49ヒトにおけるKIRで、マウスからの脾臓細胞またはヒトからのPBMCを染色することによって検出することができる。次いで、細胞を固定バッファーリン酸緩衝食塩水中の4パラホルムアルデヒドで固定し、透過バッファーリン酸緩衝食塩水中の0.1サポニンおよび0.009アジ化ナトリウムで洗浄する。その後の透過バッファー中での抗Helios抗体による染色により、このサブセットのCD8T細胞におけるHeliosの発現としてを検出することができ、マウスおよびヒトにおけるHeliosCD8細胞により発現される付加的表面マーカーを明らかにすることができる。それらの表面におけるCD122の発現は、発達および機能の両方についてのIL‐15への依存性と一致する。CD8細胞によるクラスIMHC受容体Ly49の発現は、IL‐15に対する増強された応答性にも関係していたColesetal2000、Judgeetal2002、Anfossietal2004。CD8T細胞の3~5を占めるCD44CD122KirHeliosCD8T細胞は、このT細胞サブセットにおける、実質的にすべてのQa‐1拘束性の抑制活性の原因である。特殊化した制御性CD8T細胞は、本発明に従い、自己免疫疾患を処置することに使用される。ここで用いる場合、特殊化した制御性CD8T細胞は、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞、CD44CD122HeliosKirCD8制御性T細胞、および/またはCD44CD122KirCD8制御性T細胞を含む。本発明の側面は、かかる処置を必要とする対象からT細胞を単離すること、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞の集団が、数のうえで少なくとも5増加するように、コンカナバリンAで活性化され、かつ照射された同系CD4T細胞の存在の下、IL‐15およびIL‐21で富化された培養培地で細胞を生育させること、それによって、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞で富化された細胞集団を製造すること、により自己免疫疾患を処置する方法を含む。次いで、前記集団からのCD44CD122HeliosCD8制御性T細胞は、自己免疫疾患の症状を改善するのに有効な量で対象に投与される。一部の態様において、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞はKirも発現し、前記集団からのCD44CD122HeliosKirCD8制御性T細胞は、自己免疫疾患の症状を改善するのに十分な量でヒト対象に投与することができる。一部の態様において、対象から単離されたT細胞は、単離された細胞を培養培地中で生育させる前に、CD8細胞について富化される。一部の態様において、CD8T細胞は、それらを培養培地中で生育させる前に単離される。本明細書で用いる場合、単離されるという用語は、対象からT細胞を含むサンプルを採取すること、および、さらに他の非T細胞からT細胞を分離することを指す。一部の態様において、細胞は、10FCS、β-メルカプトエタノール、1Mピルビン酸ナトリウム、10mMHepesバッファー、2mML‐グルタミン、50単位/mlペニシリンおよび50μg/mlストレプトマイシン添加RPMI培地で生育させる。一部の態様において、単離された細胞は、単離された細胞における特殊化した制御性CD8T細胞の集団が数のうえで少なくとも5、10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも50、少なくとも75、少なくとも90、少なくとも100、または、少なくとも200まで増加するまで生育させる。一部の態様において、単離されたT細胞を生育させた後、特殊化した制御性CD8T細胞は、CD44CD122HeliosCD8制御性T細胞、CD44CD122HeliosKirCD8制御性T細胞およびCD44CD122KirCD8制御性T細胞以外の1または2以上の細胞種を除去することにより、さらに富化される。一部の態様において、特殊化した制御性CD8T細胞は、静脈内注射により対象に投与される。特殊化した制御性CD8T細胞は、対象への投与前に、培養培地から分離される。特殊化した制御性CD8T細胞は、自己免疫疾患の症状を改善するのに有効な量で対象に投与される。一部の態様において、特殊化した制御性CD8T細胞は、自己免疫薬剤と組み合せて投与される。かかる薬剤の非限定例は、メソトレキセート、シクロホスファミド、イムランアザチオプリン、シクロスポリン、およびプレドニゾンおよびメチルプレドニゾロンなどのステロイド化合物を含む。特殊化した制御性CD8T細胞は、抑制活性の活性化をIL‐15に依存している。したがって、本発明の複数の側面は、自己免疫疾患の症状を改善するのに有効な量でインターロイキン15受容体IL‐15Rアゴニストを用いて、特殊化した制御性CD8T細胞の活性を増強することにより、自己免疫疾患を処置する方法を含む。一部の態様において、自己免疫疾患の処置を必要とする対象は、自己免疫疾患を有すると同定された対象であり、すなわち、当該対象は、医師により例えば、当該技術分野で周知の方法を用いて自己免疫疾患を有すると診断されている。一部の態様において、処置を必要とする対象は、自己免疫疾患を有する疑い、または発症する疑いのある対象、例えば、自己免疫疾患を示唆する1または2以上の症状を呈している対象などである。一部の態様において、自己免疫疾患を有する疑いのある対象は、自己抗体の異常な力価を示すことがある。自己抗体の異常な力価を有する対象は、自己免疫疾患の少なくとも1つの他の症状を有することがあり、または自己免疫疾患に関係する他の症状を有しないことがある。処置を必要とする対象という用語は、かつて自己免疫疾患を有していたが、症状が改善した者をさらに含む。対象は、動物、典型的には、哺乳動物である。一側面において、対象は、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、またはげっ歯動物である。重要な態様において、対象はヒトである。ヒトとマウスは、多くの場合同様に称される、同様のT細胞マーカーを共有することが理解される。例えば、ヒトおよびマウスの両方は、CD44、CD122およびCD8を有する。本発明の主題にとって重要な1つのマーカーの場合、名称は異なる。マウスにおけるマーカーLy49は、ヒトではKir免疫グロブリン様キラー細胞抑制受容体と称される。特許請求の範囲および明細書がヒトの処置に言及し、マーカーおよび抗体が論じられる範囲において、マーカーはヒトのものであり、抗体はヒトマーカーに結合するものとする。本明細書で用いる場合、化合物は、IL‐15にように、それがIL‐15Rに結合し、特殊化した制御性CD8T細胞の増殖/活性化を誘導する場合、IL‐15Rアゴニストである。一部の態様においては、アゴニストは、本来のnativeIL‐15によって誘導されるレベルと同様か、またはそれより高いレベルの生物学的反応を誘導する。一部のアゴニストは、いっそう高いレベルの生物学的反応を誘導するスーパーアゴニスト。IL‐15Rアゴニストは、典型的には、本来のIL‐15のものと同様の、IL‐15受容体アルファおよび/またはIL‐15受容体ベータ/ガンマに対する結合のための親和性を有する。かかるアゴニストの例は、配列番号1IL‐15のアミノ酸配列を有するIL‐15ポリペプチド、および配列番号1IL‐15のアミノ酸配列と少なくとも90、少なくとも95、少なくとも98または少なくとも99同一の配列を含むポリペプチド、アゴニスト的抗IL‐15R抗体、またはその抗原結合フラグメント、GSリンカーを介して可溶性IL‐15受容体アルファ鎖スシドメインに結合したIL‐15のヘテロ複合体組換えIL‐15/IL‐15RA複合体例えば、その全体の内容が参照により本明細書に組み込まれる米国出願No12090930を参照を含むが、これらに限定されない。いずれの態様においても、IL‐15Rは、ヒトIL‐15Rであってよく、IL‐15R受容体アゴニストはヒトIL‐15Rのアゴニストである。ヒトIL‐15のアミノ酸配列は、NCBI参照配列:NP0005761配列番号1により表される。IL‐15ポリペプチドは、IL‐15のフラグメント、例えば、配列番号1のポリペプチドからリーダー配列のタンパク質分解による切断により得られる、IL‐15の成熟型として以前キャラクタライズされた配列番号1のアミノ酸49~162なども含み、IL‐15の生物学的活性を保持する他のフラグメントは、IL‐15という用語に包含される。1または2以上の置換アミノ酸を有するIL‐15の誘導体または変異体を含む、IL‐15の生物学的活性を示すIL‐15アナログも、IL‐15Rアゴニストという用語の意味に含まれる。例示的なアナログは、参照により本明細書に組み込まれる米国出願No11639877、米国特許No5552303およびBernardetalJBiolChem27924313243222004に記載されている。IL‐15の用語は、ヒト以外の種、例えば、非ヒト霊長動物、マウス、ラット、ブタ、ウマ、ウシ、イヌ等のIL‐15も包含する。自身の抗原または自己抗原は、それに対して対象が望まない免疫反応を起こす、対象の自己産生構成物である。自己抗体は、1または2以上の対象自身の構成物または自身の抗原に結合する、対象によって産生される抗体である。自己免疫疾患の用語は、患者の免疫反応が患者自身の構成物に向けられ、望まない、そしてしばしばひどい消耗性の状態conditionをもたらす、疾患状況および状態を指す。本明細書で用いる場合、自己免疫疾患は自己免疫状態、症候群等をさらに含むものとする。自己免疫疾患の例は、全身性エリテマトーデス、慢性移植片対宿主病、関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、シェーグレン症候群、グレーブス病、クローン病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、過粘稠度症候群、原因不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症、POEMS症候群、ミエローマ、マクログロブリン血症および寒冷擬集素病を含むが、これらに限定されない。一部の態様において、自己免疫疾患は、自身の抗原に対する抗体を伴い、対象は自身の抗原に対する抗体を有する。特殊化した制御性CD8T細胞、またはIL‐15Rアゴニストは、有効な量で投与される。有効な量は、医学的に所望の結果をもたらすのに十分な用量であり、当業者によって、ルーチンの方法を用いて決定され得る。一部の態様において、有効な量は、処置されている状態においてあらゆる改善をもたらす量である。一部の態様において、有効な量は、自己免疫疾患のタイプおよび程度、または処置されている状態、および/または1または2以上の追加の治療剤の使用に依存し得る。しかしながら、当業者は、例えば、インビトロおよび/またはインビボ試験、および/または化合物投与量の他の知識に基づいて、使用する治療剤の適切な用量および範囲を決定することができる。対象に投与される場合、治療剤の有効な量は、当然のことながら、処置されている特定の疾患、疾患の重篤度、年齢、健康状態、サイズおよび体重を含む個々の患者のパラメーター、併用処置、処置の頻度および投与の方式に依存する。それらの要因は、当業者によく知られており、ルーチン程度の実験で対応することができる。一部の態様においては、最大用量、すなわち、正当な医学的判断に従った最大安全用量が用いられる。自己免疫疾患の処置において、有効な量は、疾患の進行を遅延させる、疾患の進行を停止させる、または、疾患の進行を逆転させる量である。有効な量は、自己免疫疾患に関係する1または2以上の症状を遅延させる、低減する、阻止する、改善する、または逆転させるのに必要な量を含む。一部の態様において、かかる用語は、1または2以上の関節の腫脹の低減または、自己免疫障害に関係する痛み、疲労および/または発熱の低減を指す。一部の態様において、かかる用語は、自己免疫疾患に関係する循環自己抗体レベルの低減を指す。一部の態様において、かかる用語は、ヒトのPASIスコアの低減を指す。一部の態様において、かかる用語は、ヒトの総合評価スコアの改善を指す。化合物の有効な量は、典型的には、1日または数日の間の1回または2回以上の投与で、約0.001mg/kgから約1000mg/kgの範囲である当然のことながら、上記で論じた投与の方式および要因に依存する。治療剤の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物および投与方式に対し、所望の治療反応を達成するのに有効な量を得るために変えることができる。選択される投与量レベルは、特定の化合物の活性、投与の経路、処置される組織および処置される患者の以前の病歴に依存する。しかしながら、所望の治療成果を達成するのに必要とされるよりも低いレベルで、化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで、徐々に投与量を増加させることは、当該技術分野の技能の範囲内である。本発明の一部の側面によると、組成物が提供される。組成物は、CD44CD122KirCD8制御性T細胞を含み、ここで、組成物中のCD8細胞の少なくとも5は、CD44CD122KirCD8制御性T細胞である。一部の態様において、組成物中のCD8細胞の少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも50、少なくとも75、少なくとも90、少なくとも95または少なくとも100は、CD44CD122KirCD8制御性T細胞である。本発明の一部の側面によると、CD8細胞の組成物ここで、組成物中のCD8細胞の少なくとも5はCD44CD122KirCD8制御性T細胞であると、薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物が提供される。一部の態様において、医薬組成物は、免疫抑制薬剤を含む。免疫抑制薬剤の例は、非ステロイド抗炎症剤、シクロスポリンA、FK506、抗CD4抗体およびラパマイシンを含むが、これらに限定されない。本発明の一部の側面は、抗原に対する免疫反応を刺激するための方法を含む。前記方法には、抗原を有し、かつ抗原に対する免疫刺激を必要とする対象に、CD44CD122KirCD8制御性T細胞の増殖および/または活性を阻害する剤を、対象における抗原に対する免疫反応を刺激するのに有効な量で投与することを含む。一部の態様において、対象は病原体による感染を有し、病原体は抗原を含む。本明細書で用いる場合、感染とは、疾患を引き起こす能力を有する生物による対象の身体への侵入を指す。かかる生物は、限定されないが、ウイルス、バクテリア、菌類および寄生生物を含む。ウイルスの例は、ヒト免疫不全ウイルスHIV‐1およびHIV‐2、ヒトTリンパ好性ウイルスI型HTLV‐I、ヒトTリンパ好性ウイルスII型HTLV‐II、単純ヘルペスウイルスI型HSV‐1、単純ヘルペスウイルス2型HSV‐2、ヒトパピローマウイルス様々な型、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、CおよびD型肝炎ウイルス、エプスタイン‐バーウイルスEBV、サイトメガロウイルスおよび伝染性軟属腫ウイルスを含むが、これらに限定されない。バクテリアの例は、Pasteurellaspecies、Staphylococcispecies、Streptococcusspecies、Escherichiacoli、Pseudomonasspecies、およびSalmonellaspeciesを含むが、これらに限定されない。感染性バクテリアの具体的な例は、Helicobacterpyloris、Boreliaburgdorferi、Legionellapneumophilia、Mycobacteriasps例えばMtuberculosis、Mavium、Mintracellular、Mkansaii、Mgordonae、Staphylococcusaureus、Neisseriagonorrhoeae、Neisseriameningitidis、Listeriamonocytogenes、StreptococcuspyogenesGroupAStreptococcus、StreptococcusagalactiaeGroupBStreptococcus、Streptococcusviridansgroup、Streptococcusfaecalis、Streptococcusbovis、Streptococcusanaerobicsps、Streptococcuspneumoniae、病原性Campylobactersp、Enterococcussp、Haemophilusinfluenzae、Bacillusantracis、corynebacteriumdiphtheriae、corynebacteriumsp、Erysipelothrixrhusiopathiae、Clostridiumperfringens、Clostridiumtetani、Enterobacteraerogenes、Klebsiellapneumoniae、Pasturellamultocida、Bacteroidessp、Fusobacteriumnucleatum、Streptobacillusmoniliformis、Treponemapalladium、Treponemapertenue、Leptospira、Rickettsia、およびActinomycesisraeliiを含むが、これらに限定されない。菌類の例は、Cryptococcusneoformans、Histoplasmacapsulatum、Coccidioidesimmitis、Blastomycesdermatitidis、Chlamydiatrachomatis、Candidaalbicansを含むが、これらに限定されない。他の感染性生物すなわち、原生生物は、Plasmodiumfalciparum、Plasmodiummalariae、Plasmodiumovale、およびPlasmodiumvivaxなどのPlasmodiumsppおよびToxoplasmagondiiを含む。血液感染性および/または組織寄生生物は、Plasmodiumspp、Babesiamicroti、Babesiadivergens、Leishmaniatropica、Leishmaniaspp、Leishmaniabraziliensis、Leishmaniadonovani、Trypanosomagambiense、およびTrypanosomarhodesienseアフリカ睡眠病、Trypanosomacruziシャーガス病およびToxoplasmagondiiを含む。寄生生物の例は、Plasmodiumspp、BabesiamicrotiBabesiadivergens、Leishmaniatropica、Leishmaniaspp、Leishmaniabraziliensis、Leishmaniadonovani、Trypanosomagambienseおよび60Trypanosomarhodesienseアフリカ睡眠病、Trypanosomacruziシャーガス病、およびToxoplasmagondiiを含むが、これらに限定されない。一部の態様において、対象はがんを有し、がんは抗原を含み、抗原は腫瘍抗原である。がんはいずれのがんであってもよい。がんは、胆管がん、骨がん、脳およびCNSがん、乳がん、子宮頸がん、絨毛癌、大腸がん、結合組織がん、子宮内膜がん、食道がん、眼がん、胃がん、ホジキンリンパ腫、上皮内腫瘍、喉頭がん、リンパ腫、肝臓がん、肺がん、メラノーマ、神経芽細胞腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、皮膚がん、精巣がん、甲状腺がん、および腎臓がんを含むが、これらに限定されない。腫瘍抗原は、いずれの腫瘍抗原であってもよい。例えば、腫瘍抗原は、ヒト上皮細胞ムチンMuc‐1、乳がん細胞および膵臓がん細胞上に存在するMuc‐1糖タンパク質の20アミノ酸コアリピート、Ha‐rasがん遺伝子産物、p53、癌胎児抗原CEA、rafがん遺伝子産物、GD2、GD3、GM2、TF、sTn、MAGE‐1、MAGE‐3、チロシナーゼ、gp75、Melan‐A/Mart1、gp100、HER2/neu、EBV‐LMP12、HPV‐F4、6、7、前立腺特異抗原PSA、前立腺特異的膜抗原PSMA、アルファフェトプロテインAFP、CO17‐1A、GA733、gp72、P53、rasがん遺伝子産物、HPVE7およびメラノーマガングリオシドであってもよいが、これらに限定されない。一部の態様において、抗原は、ワクチンにて対象に投与される。この投与は、感染または腫瘍の存在による対象における抗原の存在を補充することができる。ワクチンは、対象への抗原の初めての導入を含んでもよい。本明細書で用いる場合、ワクチンは、無害な形で抗原を含む生物または物質を意味する。ワクチンは、組換えワクチンであっても、または非組換えワクチンであってもよい。ワクチンは、例えば、解毒されているが、依然その主要な免疫原性決定因子を保持する毒素として定義されるトキソイドの形態、または腸チフス、コレラおよびポリオなどの死菌の形態、または生存しているが非病原性の病原体の形態の弱毒化生物の形態をとってもよく、または、それはかかる生物によりコードされる抗原でもよく、または、それは死腫瘍細胞、または腫瘍細胞上に存在する抗原であってもよい。抗原は、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖類、多糖結合体、多糖類および他の分子のペプチドおよび非ペプチド模倣物、低分子、脂質、糖脂質、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物および寄生生物などの多細胞生物およびアレルゲン例えば、米国特許No7576066参照を含むが、これらに限定されない。特殊化した制御性CD8T細胞の増殖および/または活性を阻害する剤は、抗IL‐15抗体、または特殊化した制御性CD8T細胞に結合する抗体を含むが、これらに限定されない。剤は、抗CD8抗体、またはKirに対する抗体であってもよい。一部の態様において、CD44CD122KirCD8制御性T細胞に結合する抗体は、CD44CD122KirCD8制御性T細胞上に存在する第1の表面マーカーに結合する第1の抗原結合ドメインと、CD44CD122KirCD8制御性T細胞上に存在する第2の表面マーカーに結合する第2の抗原結合ドメインとを含む、二重特異性抗体である。CD44CD122KirCD8制御性T細胞上の第1および第2の表面マーカーは、CD44、CD122、KirおよびCD8を含むが、これらに限定されない。一部の態様において、剤は、CD44CD122KirCD8制御性T細胞上に存在する第1の表面抗原に結合する第1の抗体の最適下量と、CD44CD122KirCD8制御性T細胞上に存在する第2の表面抗原に結合する第2の抗体の最適下量とを含む組成物ここで、第1の表面抗原は第2の表面抗原とは異なるである。第1の抗体は、CD44、CD122、KirおよびCD8からなる群から選択される抗原に結合し、第2の抗体は、CD44、CD122、KirおよびCD8からなる群から選択される抗原に結合する。一部の態様において、特殊化した制御性CD8T細胞の増殖および/または活性を阻害する剤は、細胞におけるHeliosの発現レベルおよび/または活性を低減する剤である。Heliosのレベルおよび/または活性を阻害する剤は、Heliosに結合し、その活性例えば、DNA結合活性、核内移行活性、ホモまたはヘテロ二量体化活性、または転写活性化活性を阻害するHelios結合タンパク質、Heliosタンパク質に特異的に結合する抗体例えば、Heliosの、DNAまたは別の転写因子に結合する能力、核に移行する能力、またはDNAに結合する能力を妨げる抗体、例えば、Helios結合パートナー例えば、DNAまたは別の転写因子例えば、IkarosまたはAiolos因子に結合するが、Heliosの活性例えば核内移行活性または転写活性化活性を妨げる、突然変異した不活性Heliosまたはそのフラグメント、細胞のHelios核酸配列例えばmRNAに結合し、タンパク質の発現を阻害し得るHelios核酸分子例えばアンチセンス分子、siRNA、Helios遺伝子発現を減少させる剤例えば、Heliosのプロモーターに結合し、Helios遺伝子発現を減少させる低分子の1または2以上であってよい。一部の態様において、剤は、毒素に結合した、特殊化した制御性CD8T細胞上に存在するマーカーの1つを認識する剤である。CD44CD122KirCD8制御性T細胞上に存在するマーカーの1つを認識する剤は、マーカーの1つに特異的なリガンド、またはマーカーの1つに対する抗体であってよい。毒素の例は、生物毒素、化学毒素、合成毒素および放射性核種を含むが、これらに限定されない。放射性核種は、ベータ放出金属放射性核種、アルファ放射体およびガンマ放射体からなる群から選択され得る。放射性核種の例は、123I、125I、130I、131I、133I、135I、128Ba、13N、15O、および18Fを含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、抗体の最適下量は、単独で使用した場合には、特殊化した制御性CD8T細胞の活性を阻害して状態を処置するのに有効なおよび/または最適な量ではないが、第2の抗体を組み合わせて使用した場合に、状態を処置するために特殊化した制御性CD8T細胞の活性を阻害して状態を処置するのに有効なおよび/または最適となる量である。最適下用量の治療剤の使用は、それにより、抗体のあらゆる可能な副作用の低下が可能となるため、有用である。特殊化した制御性CD8T細胞の増殖および/または活性を阻害する剤は、対象における抗原に対する免疫反応を刺激するのに有効な量で投与される。本明細書で用いる有効な量の用語は、免疫学的反応と、対応する治療効果とをもたらすのに十分な剤の量を指す。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、一般的な状態、処置されている状態の重篤度および具体的な剤、投与の方式等に依存して、対象ごとに異なる。任意の個々の場合における適切な有効な量は、ルーチンの実験を用いて、当業者により決定され得る。医薬製剤および化合物は、任意の適した経路により対象に投与される。例えば、組成物は経口的に舌下を含む、直腸に、非経口的に、嚢内に、膣内に、腹腔内に、局所および経皮的に粉末、軟膏剤または滴下剤により、頬側または経鼻的に投与することができる。本発明の医薬製剤は、薬学的に許容し得る担体を含んでも、その中に希釈されてもよい。本明細書に用いる場合、薬学的に許容し得る担体の用語は、ヒト、またはイヌ、ネコもしくはウマなどの他の哺乳動物への投与に適した1または2以上の適合性の賦形剤、希釈剤などの物質を意味する。担体という用語は、有効成分が適用を促進するために組み合わせられる、天然もしくは合成の、有機成分または無機成分を意味する。担体は、所望の薬学的な有効性または安定性を実質的に損なう相互作用がないような様式で、本発明の製剤と混合することができ、かつ相互に混合することができる。経口剤形、皮下剤形、静脈内剤形、筋肉内剤形などの剤形に適した担体は、RemingtonのPharmaceuticalSciencesMackPublishingCompanyEastonPaにおいて見出すことができる。本発明は次の例によりさらに説明されるが、それは決してさらに限定するものとして解釈されるべきではない。この出願の全体にわたって引用される参考文献参照文献、登録特許、公開された特許出願および同時係属特許出願を含むのすべての全体の内容は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。例材料および方法マウスC57BL/6JB6、Rag2-/-、IL‐15-/-およびB6.Qa‐1D227Kマウス11世代戻し交配したものは、病原体フリーの条件で飼育した。すべての実験は、連邦法およびダナファーバー癌研究所の動物管理使用委員会により承認された施設内ガイドラインに従って行った。試薬およびフローサイトメトリー単細胞懸濁液を調製し、免疫蛍光分析のために暗所で4°Cにて維持し、氷冷FACSバッファーPBS中の2のウシ胎仔血清、0.1のNaN3で洗浄し、それぞれの抗体とともに30分間インキュベートし、分析前にFACSバッファーで洗浄した。抗CD4、抗CD8、抗B220、抗CD44、抗CD62L、抗Fas、抗ICOS、抗IgM、抗CD200BDBioscienceまたは抗CD8β、抗Ly49C/I/F/H、抗Ly49A、Ly‐49G2、Ly49C/I、Ly49D、Ly49F、Ly49HeBioscienceを用いた後に、FACSCantoBDBiosciencesおよびFlowJosoftwareTriStarを用いて細胞の分析を行った。細胞精製および養子移植ナイーブB細胞は、Qa‐1WTおよび変異型マウスBDBioscienceの脾臓から単離した。ナイーブCD4CD25-細胞は、Qa‐1WTおよび変異マウスの脾臓から、CD4細胞富化キットBDBioscienceおよびビオチン化抗CD25Abを用いて精製した。B細胞およびCD4細胞の純度は>95であった。免疫CD8細胞を生成するために、WTB6マウスを、CFA中の100μgのKLHで腹腔免疫し、7~10日後に脾臓CD8細胞を得BDBioscience、CD44CD122Ly49CD8T細胞についてソートした。これらの細胞を、Rag2-/-レシピエントに静脈内移植した。細胞移植後すぐに、Rag2-/-マウスをCFA中の100μgのNP19‐KLHで腹腔内免疫し、IFA中の50μgのNP19‐KLHで再度腹腔内免疫した。ELISANP特異的抗体を検出するために、ELISAプレートを、0.5μg/mlのNP4‐BSAまたは1μg/mlのNP23‐BSABiosearchTechnologiesでコートし、CFA中のNP19‐KLHによる免疫およびIFA中のNP19‐KLHによる再免疫の14日後に採取した血清を、スタンダードとして用いた。この免疫血清を1:4000希釈したものを、100単位/mlとして定義した。全IgG、IgG1およびIgG2aは、ビオチン化抗マウスIgG、IgG1または、IgG2aとともにプレートをインキュベートした後、スレトプトアジビン‐ペルオキシダーゼにより検出した。自己抗体の検出については、ブタサイログロブリンSigmaおよび、ブタインスリンSigmaを、関連Abを検出するのに用いた。統計統計分析は、2条件の比較についてはウィルコクソン‐マン‐ホイットニー順位和検定を、2条件を超える比較についてはクラスカル‐ワリス検定を用いて行った。P値<0.05を統計学的に有意であるとみなした=<0.05、=<0.01、=<0.001。結果CD8Tregは抑制活性の獲得に関してIL‐15に依存しているCD44CD8細胞は、CD122IL‐15依存性画分およびCD122-IL‐15非依存性画分で構成される図1A。WTおよびIL‐15-/-マウスからのCD8CD44CD122細胞の分析は、WTマウスが、IL‐15-/-マウスに比べて、5倍多いCD8CD44CD122細胞を示すことを明らかにした。CFA中のKLHによるWTマウスの免疫は、CD44CD122CD8T細胞の≒50の増加を誘導したが、IL‐15-/-マウスでは、検出可能な増加を誘導しなかった図1。IL‐15-/-マウスのCD44CD122CD8T細胞の残り集団のさらなる分析は、それらの細胞が、顕著に低いレベルのCD122を発現することを示した図1A、左パネル。これらのデータは、IL‐15-/-ドナーからのCD44CD8T細胞の不良な抑制活性が、CD122CD44CD8T細胞を生成できないことを反映している可能性を示すものである。CD44CD122CD8細胞のQa‐1依存性の抑制活性を試験するために、我々は、WTB6マウスからCD44CD122CD8細胞>98の純度または、CD44CD122-CD8細胞>98の純度をソートし、Qa‐1WTまたはQa‐1D277KドナーからのCD25-CD4細胞およびB細胞とともに、それらをRag2-/-宿主に移植した。NP19‐KLHでチャレンジ後、CD44CD122-細胞ではなく、CD44CD122CD8細胞のレシピエントは、NP特異的なAb反応のQa‐1拘束性の抑制を示した図1B。対照的に、CD44CD122-CD8細胞は抑制しなかった。高親和性Ab反応の発生は、TFH細胞による胚中心GCB細胞の活性化に依存する、正確に調整されたプロセスである。Qa‐1のD227K変異体は、CD8TregとQa‐1標的TH細胞との間の阻害性の相互作用を妨げる。この不良な相互作用は、多数のCD8Tregの存在下ですら、サイログロブリンおよびインスリンに対する強固な自己抗体反応を可能にする図1C。CD8TregによるLy49の発現CD44CD122CD8T細胞は、Ly49の発現に応じて2つのサブセットに分けることができる。Ly49CD8細胞は、インビトロにおいてIL‐15による活性化に対して特に敏感であり、インビボでの有効な発達および年齢依存性の増加についてはCD4T細胞に依存するColesetal2000、Anfossietal2004。KLH/CFAによるWTB6マウスの免疫は、CD44CD122CD8T細胞の数を倍加させ、またそれらの細胞の≒25は、Ly49も発現する。これらのCD44CD122Ly49細胞はまた、CD8ααではなく、CD8αβも発現し、高レベルのCD62Lも発現する。追加の分析は、Ly49CD8サブセットが、次の阻害性受容体:Ly49A24.8、Ly49C/I13.1、Ly49F90およびLy49G233を発現することを明らかにし、活性化させるLy49受容体Ly49D、Hはこれらの細胞によって検出できるレベルで発現していなかった図2a。ソートされたCD44CD122Ly49-ではなく、CD44CD122Ly49のCD8T細胞は、Qa‐1変異体D277KCD4T細胞ではなく、Qa‐1WTCD4T細胞を効果的に抑制した。すなわち、抑制活性は、標的CD4細胞上のQa‐1の認識に依存した図2b。これらの所見は、Ly49発現によりCD8Tregを通常のCD8記憶T細胞から区別できることを示すものであり、CD8Tregの発達がクラスIMHCによるLy49の結合にある程度依存し得る可能性を開くものである。B6‐Yaaにおける不良なCD8Treg機能は、狼瘡様疾患の発症に寄与し得るQa‐1リガンドのCD8/TCR複合体との相互作用を妨げる点突然変異Luetal2008の発現は、TFHの無調節な増加と関係する、B6.Qa‐1D227Kマウスにおける狼瘡様自己免疫障害の発症をもたらすKimetal2010。不良なCD8Treg活性はまた、BXSB‐YaaマウスとB6.β2m-/-マウスとの交雑種が狼瘡様疾患の急速な発病および強度intensityを示すという知見Bubieretal2007に基けば、BXSB‐Yaaマウスにおける疾患の病因に寄与している可能性がある。SB/Le系統に由来するY染色体座に主に起因するとされる、オスのBXSB‐Yaa自己免疫障害は、実際にY染色体上に転座した余分なTLR7のコピーを示す。このY染色体に連鎖したTLR7の余分なコピーは、多数の狼瘡になりやすい系統において疾患を悪化させIzuietal1988、Moreletal2000、Pisitkunetal2006、非自己免疫性のC57BL/6バックグラウンドB6‐Yaaにおいて疾患を促進する。B6‐Yaaマウスの予備分析は、2および8月齢マウスの両方が、B6.Qa‐1D227Kの表現型によく似た、脾臓におけるTFHおよびGCB細胞のおよそ3倍の増加を有することを示した図3。我々は、B6‐Yaaマウスにおける自己免疫性の表現型がCD8Tregによる不良な制御に関係するかどうかを検討した。B6‐YaaマウスにおけるCD44CD122Ly49CD8T細胞の数は、KLH/CFA免疫の7日後のB6WTマウスにおいて見出された数の2倍であったデータは示してない。しかしながら、Rag2-/-宿主への、B6WTCD4細胞およびB細胞に加え、B6‐YaaマウスからのCD44CD122CD8Tregの移植は、B6‐YaaCD8Tregが標的CD4T細胞を抑制できないことを明らかにした。WTマウスからのCD8細胞は、同じ実験において強い抑制を移したことから図4、この所見は、B6‐Yaaマウスにおける自己免疫に関係するTFH細胞の増加が、不良なCD8Treg機能を反映している可能性を開くものである。照射されたB16-GM-CSF形質導入細胞の最適下レベルによるワクチン接種は、不良なCD8Treg活性を有するマウスにおいてB16腫瘍接種後の生存を増大させたC57BL/6Qa‐1D227Kノックインマウスおよび野生型C57BL/6マウスに対し、0日に2×105個のGM-CSF-照射3500ラドB16細胞で一方の脇腹に皮下でワクチン接種した。ワクチン接種の1週間後、マウスに、反対の脇腹に5×106個のB16メラノーマ細胞を皮下接種したDranoffetalProcNatlAcadSciUSA1993Apr1590353943、SampsonetalProcNatlAcadSciUSA1996Sep179310399404。不良なCD8Treg活性を有するC57BL/6Qa‐1D227Kノックインマウスは、野生型C57BL/6マウスより長く生存した図7。CD4濾胞性ヘルパーT細胞TFHの活性を、TFH細胞の表面に発現するQa‐1の認識を介して調節するようにプログラムされたCD8T細胞の亜集団は、自己抗体反応を弱めるKimetal2010、この全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。これらのCD8制御性Treg細胞の表面表現型の以前の分析は、これらが、高いレベルのCD44およびCD122、ならびに比較的低いレベルのCXCR5およびICOSLを発現することを示した。それらの表面におけるCD122の発現は、発達および機能の両方についてのIL‐15へのそれらの依存性Kimetal2010と一致する。制御性活性は、Kirレセプターも発現するCD44CD122CD8細胞の亜集団に付与される。CD8細胞によるクラスIMHC受容体Ly49の発現は、IL‐15に対する増強された応答性に関係していたColesetal2000、Judgeetal2002、Anfossietal2004。これらの知見は、CD8T細胞の3~5を占めるCD44CD122KirCD8T細胞が、このT細胞サブセットに付与される、実質的にすべてのQa‐1拘束性の抑制活性の原因であることを示している。Qa‐1リガンドのCD8/TCR複合体との相互作用を妨げる227位におけるアミノ酸置換変異D→Kを発現するQa‐1ノックインマウスの分析は、TFHおよびGCB細胞の増加に関係する不良なCD8Treg活性を明らかにした。これらの細胞異常は、組織特異的自己抗体、非リンパ系器官のリンパ球浸潤および重篤な糸球体腎炎といった、BXSB‐YaaおよびC57BL/6‐Yaaマウスによって示される症候群に類似する一連の病理学的な変化を特徴とする狼瘡様自己免疫障害の発症と関連していた。BXSB‐Yaa疾患がβ2mに関連するクラスIa/Ibタンパク質の欠如によって悪化するという知見Kimetal2010もまた、不良なCD8Treg活性がBXSB‐Yaa疾患に寄与し得るという仮説に矛盾しない。我々は、B6‐Yaaマウスが、生後数カ月以内で増加した数のTFHおよびGCB細胞を含んでおり、そしてこれらのマウスからのCD8Tregが、養子宿主におけるWTCD4T細胞を抑制できないことを見出す。CD8制御性T細胞の発達の不良/異常は、この狼瘡マウスモデルにおける疾患の病因に寄与している可能性がある。制御性CD8T細胞は、自己寛容の維持およびSLE様自己免疫疾患の阻止にとって不可欠である。本明細書で提示するデータは、発達および機能についてのIL‐15サイトカインへのそれらの依存性を基にCD8Tregの表面表現型を確立する。結果は、CD8T細胞のQa‐1拘束性の抑制活性が、それらの表面にCD44、CD122およびLy49を発現する小さい亜集団に付与されることを明らかにした。加えて、我々は、B6.Yaa自己免疫易発生マウスにおけるSLE様疾患の発症がQa‐1拘束性CD8Tregの不良な制御活性に関係していることを見出した。ヒト白血球抗原EHLA‐EのマウスホモログであるQa‐1は、意図的deliberateな免疫または感染後、自己または外来タンパク質に由来するペプチドに結合し、これを提示するβ2ミクログロブリンとヘテロダイマーを形成するLoetal1999、Loetal2000、Sullivanetal2002。Qa‐1をコードするmRNAは多くの細胞種において検出できるがTransyetal1987、Qa‐1-β2ミクログロブリンヘテロダイマーの表面発現は、正確な集合および輸送のための要件によって、活性化TおよびBリンパ球および樹状細胞の表面に制限されている可能性があるSullivanetal2002、Soloskietal1995。ペプチドを含むQa‐1複合体は2つの広範なクラスの受容体を結合する。QdmQa‐1決定修飾因子と呼ばれる、MHCクラスIaリーダー配列に由来するペプチドを含むQa‐1ヘテロダイマーは、ナチュラルキラーNK細胞およびCD8T細胞の亜集団によって発現される非クローン性に分布するCD94‐NKG2A受容体に結合する。Qa‐1/Qdm‐NKG2A相互作用の機能的結果は、一般的にNKまたはCD8の細胞溶解活性の阻害であるMoseretal2002。Qa‐1リガンドの第2のクラスは、増え続けるペプチドのリストを含むQa‐1-β2ミクログロブリンヘテロダイマーを含むTompkinsetal1998、Loetal2000、Jiangetal2003、Daviesetal2003。このQa‐1リガンドのセットとCD8T細胞上のTCRとの間の相互作用は、CD8Tregの誘導、集団の増加およびエフェクター細胞活性の発現を促進し得る。Qa‐1変異マウスの最近の分析は、自己免疫疾患の阻止におけるCD8Tregの不可欠な寄与を明らかにした。CD8Tregの優先的な標的は、その表面に高い定常状態レベルのQa‐1を発現するTFHのサブセットである。CD8Tregと標的Qa‐1濾胞性ヘルパーT細胞との間の阻害性の相互作用の遺伝的な妨害は、SLE様自己免疫疾患の発症をもたらし、それはタンパク質またはウイルス抗原での刺激によって促進されたKimetal2010。パーフォリンおよびIL‐15は、CD8Tregの完全な活性に必要であることが示されている。IL‐15依存性トランス細胞傷害メカニズムは、活性化TFH細胞によって発現される標準的なサイトカインであるIL‐21によって効果的に増強されることが示されているZengetal2005。我々の分析は、CD8Tregは、阻害性のLy49受容体Ly49A、Ly49G2、Ly49C/I、Ly49F、特にLy49Fを発現するが図2A、活性化させる受容体は発現しないことを明らかにした。先の研究は、阻害性のLy49ファミリーメンバーを発現するCD8T細胞は、年齢とともにCD4依存性の増加を示めすが、STAT1欠損が、このLy49CD8亜集団のサイズを低減することを示したColesetal2000、Anfossietal2004。Ly49の結合はCD8T細胞の活性化を阻害できるがColesetal2000、阻害性Ly49分子の発現はまた、活性化誘導細胞死AICDを低減し、それによりこの記憶集団を早期の除去から保護することができるUgolinietal2001、Youngetal2001、Rogeretal2001、Chwaeetal2002、Gatietal2003。これらの考察は、CD8Tregの表面上のLy49受容体の阻害性の発現は、初期活性化のレベルを制限し得るが、記憶プールおけるそれらの寿命を延ばし得ることを示している。興味深いことに、CD8Tregによって発現される主要なLy49ファミリーメンバーであるLy49F受容体に結合するリガンドは同定されていない。通常のMHCクラスI分子に対するLy49Fの結合活性の欠如は、このLy49ファミリーメンバーが非古典的なMHCクラスI分子と相互作用し得るという憶測を呼んだKronenbergJI2010。ヒトCD8T細胞はまた、マウスLy49に類似した阻害性のKIR受容体を発現する細胞の小サブセットを含む。Ly49およびKIRは、マウスおよびヒトのMHCクラスIをそれぞれ認識する。Ly49タンパク質は、C型レクチン様ドメインをその細胞外ドメインに有するが、ヒトのNK阻害性受容体としてのKIRファミリーは、イムノグロブリンドメインを有する。両タンパク質とも、細胞質内免疫受容抑制性チロシンモチーフITIMという構造的相同性を共有しており、これは、その各々のKIRまたはLy49受容体によるMHCクラスIへの結合の際に、阻害性のシグナルを伝達するVivierandAnfossi2004。KIRCD8αβ-TCRT細胞は、記憶表現型を発現するが、一般的にCCR7および細胞表面CD28/CD27を発現しないMingarietal1996、Speiseretal1999、Anfossietal2001。興味深いことに、パーフォリンの細胞内発現は、正常成体からのCD8T細胞プールの≒4~5を占めるKIRヒトCD8T細胞に限定されているAnfossietal2004。以前の研究は、KIRCD8αβTCRT細胞プール全CD8T細胞の≒4~5の小画分から単離されたヒトCD8T細胞クローンがHLA‐EQa‐1bのヒトホモログを認識することを示したが、これは、マウスにおけるLy49CD8T細胞がQa‐1依存性の免疫抑制を発揮するという我々の所見と一致するPietraetal2001、Morettaetal2003、MestasandHughes2004。ビーズ依存性富化Kimetal2010およびFACS依存性セルソーティング図5により、我々はCD44CD122細胞がCXCR5およびICOSLを発現することに気付いた。この表面表現型は、CD8Tregの抑制活性に寄与する可能性があるため興味深い。CXCR5の発現は、CD8TregのB/CD4T細胞濾胞へのナビゲーションを可能にすることができる一方、活性化した移入CD8TregによるICOSLの発現は、濾胞の微細環境内でのICOSLTFH細胞とのその相互作用を増強することができる。しかしながら、入手可能な抗体によるそれらの2つの表面タンパク質の検出は比較的非効率であるが、CD44、CD122、およびLy49に特異的な抗体は、CD8Tregの、雑多なheterogeneous細胞集団からの効率的な単離に好ましい。CD8細胞を、CD44、CD122およびLy49の三つ組の発現を基にソートすることは、抑制の分子メカニズムのさらなる分析およびB6マウスにおけるこの制御性系統の遺伝子シグネチャーの定義づけを容易にする。雄性マウスにおけるSLEの重篤度を高める遺伝的修飾因子Yaaは、BXSB雑種系統を生み出した、C57BL/6メスとSB/Leオスとの交雑種から最初に同定された。BXSB系統に加え、YaaのY染色体は、多くの狼瘡易発症性の系統において疾患を悪化させるKikuchietal2005、Subramanianetal2006。非自己免疫性のB6バックグラウンドへのYaaの遺伝子移入B6‐Yaaは、Yaaが、ループス腎炎を特徴とするSLE様疾患を8~12ヶ月齢に引き起こし得ることを明らかにした。末端器官の自己免疫疾患は8~12ヶ月までB6‐Yaaマウスにおいて発症しないが、我々は、生後2ヶ月までにTFHおよびGCB細胞の増加が明らかであることを見出す図5。この早期の段階におけるTFHおよびGCB細胞の蓄積は、CD8T細胞の不良な制御性活性に関係していた。活性化TLR7hiDCによるCD8記憶細胞の慢性的な活性化は、CD8制御性T細胞よりむしろサイトカインを分泌するCD8記憶細胞の発達を優先的に支持する可能性がある。Qa‐1拘束性のCD8制御性T細胞のIL‐15依存性は、CD122およびKirの共発現、および、CD44CD122Ly49CD8細胞がQa‐1依存性の抑制活性を媒介することに反映されている。CD8Tregと標的CD4T細胞との間の相互作用の妨害は、自己抗体生成およびSLE様疾患をもたらす。これらの所見は、CD8Treg活性の増強が自己免疫疾患の処置への新しいアプローチであることを示す。転写因子Heliosの発現は、Ly49CD8Tregの表現型および抑制活性を決定づけるLy49およびLy49-CD8T細胞から調製したcDNAによるDNAマイクロアレイは、CD8Tregの発達および機能にとって重要である遺伝子に対する有力な主要転写因子として転写因子Heliosを同定した。Heliosは、ジンクフィンガー調節因子のイカロスファミリーの一員である。Heliosは、T細胞発達の初期段階で高く発現し、FoxP3CD4制御性T細胞のサブセット≒70でも発現される。しかしながら、Heliosの発現は、FoxP3の発現に依存しない。成熟B細胞、樹状細胞およびミエロイド細胞は、Heliosを発現しない。CD8T細胞プールにおけるHeliosの発現および機能は報告されていない。我々の分析は、Heliosが、CD8T細胞プール内のLy49CD8制御性T細胞によって専ら発現され、Ly49T細胞におけるこの転写因子の発現が、その抑制的な機能に関係することを示す図8。Heliosを発現するLy49CD8T細胞の表現型キャラクタリゼーションHeliosLy49マウスCD8Tregの追加のキャラクタリゼーションは、ヒトにおけるKIRCD8制御性T細胞の将来の同定に対し役立つ。図9で実証するとおり、Heliosを発現するLy49CD8T細胞は、より高いレベルのVLA‐2およびVLA‐4細胞‐細胞相互作用に関与するインテグリンを発現する。加えて、IL‐15KOマウスは、HeliosLy49CD8細胞を欠くことから、HeliosLy49CD8T細胞の発達は、IL‐15依存性である。決定的な転写因子であるHeliosの、マウスにおけるCD8Treg活性に関する分析は、ヒトにおけるCD8Treg細胞の同定およびその遺伝的性質の理解のためのもう1つの重要な因子を追加する。自己免疫疾患におけるCD8Tregを介した免疫治療:CIAモデル器官特異的な自己免疫疾患に関係する病原性CD4T細胞は、これらの標的CD4細胞によって発現されるQa‐1の、CD8Tregによる認識を介して効果的に抑制することができる。これらの自己免疫疾患モデルは、I型糖尿病T1D、実験的自己免疫性脳脊髄炎EAEおよび、通常のTH1および/またはTH17型CD4細胞が病因的役割を果たすことが知られているコラーゲン誘導関節炎CIAを含む。我々は、コラーゲン誘導関節炎モデルを用いて、自己免疫疾患の予防および処置におけるCD8Tregの有効性を試験した。疾患の発症は、記憶表現型CD8T細胞によってではなく、Qa‐1拘束性CD8Tregの注入によって遅延させることができる。インビトロでのIL‐15によるCD8Tregの刺激は、これらの細胞の強い増加ならびに表面表現型および機能活性の維持をもたらす。図10では、インビトロで増加させたCD8TregがCIAの発症を効果的に予防している。がんにおけるCD8Tregを介する免疫療法CD8Treg活性のブロックは、B16メラノーマモデルにおける腫瘍免疫の増強をもたらした:GM-CSF産生B16メラノーマによるマウスへのワクチン接種は、WTマウスにおける急速な腫瘍成長と比べ、Qa‐1D227Kマウスにおける腫瘍成長の進行を遅らせた。Qa‐1D227Kマウスにおける腫瘍成長の阻害は、腫瘍内へのCD8エフェクターT細胞の浸潤の数の増加と相関した。それ故、CD8Treg依存性抑制のブロックは、腫瘍環境におけるエフェクターT細胞の増強された増加および活性をもたらす。CD8Tregを除去するために、90を超えるLy49CD8TregによるLy49Fサブタイプの発現を利用することができる。実際に、予備データは、抗Ly49F抗体によるLy49F細胞の除去が、B16メラノーマモデルにおける抗腫瘍免疫を増強することを示している。この所見は、抗KIRX抗体ヒトにおけるCD8T細胞の主要なKIRサブタイプを標的にする抗体の投与が、ヒトにおいてがんに対する免疫反応を増強するための実行可能な介入であることを示すものである。本発明は、この出願において、上記の説明に記載された、または図面で例示された構造の詳細および構成要素の配置に限定されない。本発明は、他の態様が可能であり、種々の方法で実施または実行することが可能である。また、本明細書で使用される表現および用語は説明のためであり、限定するものとして見なされるべきではない。本明細書における包括する、含む、または有する、含有する、包含する、およびそれらの変形表現の使用は、その後にリストされる項目およびそれらの均等物ならびに追加の項目を包含することを意味する。参考文献