"細胞膜を染色する蛍光体、および、少なくともその一部が細胞膜に存在する生体物質に結合し、かつ、該蛍光体とは異なる発光波長のピークを有する蛍光体を用いて組織切片を染色し;染色された該切片中の細胞膜の位置を該蛍光体の発光により同定し;同定された細胞膜上の該蛍光体による輝点数および蛍光強度を計測することによって、細胞膜における該生体物質の発現レベルを評価することを特徴とする評価方法。上記の輝点数および蛍光強度を、演算手段による画像処理を行うことによって計測する、請求項1に記載の評価方法。上記画像処理が、下記~の画像処理で得られた画像と下記~の処理で得られた画像とを併せて、細胞膜の輝点をラベルする請求項2に記載の評価方法;顕微鏡の明視野で得られた切片画像に対してグレースケール変換を施す画像処理,で得られた画像に対して2値化を施す画像処理,で得られた画像に対して穴埋めを施す画像処理,およびで得られた画像に対してラベリングを施す画像処理;ならびに顕微鏡の暗視野で得られた切片画像に対してグレースケール変換を施す画像処理,で得られた画像に対して2値化を施す画像処理,で得られた画像に対してノイズを除去する画像処理,およびで得られた画像に対してラベリングを施す画像処理。上記蛍光体が、半導体ナノ粒子、または、蛍光有機色素もしくは半導体ナノ粒子を内包した内包ナノ粒子である請求項1~3のいずれか一項に記載の評価方法。上記蛍光体が、エオジンeosinである請求項1~4のいずれか一項に記載の評価方法。上記生体物質が、膜タンパク質である請求項1~5のいずれか一項に記載の評価方法。上記膜タンパク質が、HER2である請求項6に記載の評価方法。本発明は、上記課題に鑑みなされたものであり、その解決課題は、細胞膜上にある生体物質の評価方法を提供することにある。本発明者らは、上記課題を解決し、本発明の目的を達成すべく鋭意検討した結果、1蛍光物質を内包するナノ粒子蛍光体を用いて細胞膜上にある生体物質を染色する工程と、2細胞膜を、1工程とは別の蛍光波長を有する蛍光有機色素蛍光体で染色する工程により同時染色された組織切片に対し、細胞膜の位置を蛍光有機色素の蛍光により同定し、細胞膜上にある蛍光体のみの蛍光レベルを計測することにより細胞膜上にある生体物質の発現レベルを精度良くかつ簡便に評価できることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の上記目的は、下記の構成により達成される。1.細胞膜を染色する蛍光体、および、少なくともその一部が細胞膜に存在する生体物質に結合し、かつ、該蛍光体とは異なる発光波長のピークを有する蛍光体を用いて同じ組織切片を染色し;染色された該切片中の細胞膜の位置を該蛍光体の発光により同定し;同定された細胞膜上の該蛍光体による輝点数および蛍光強度を計測することによって、細胞膜における該生体物質の発現レベルを評価することを特徴とする評価方法。2.上記の輝点数および蛍光強度を、演算手段による画像処理を行うことによって計測する、上記1に記載の評価方法。3.上記画像処理が、下記~の画像処理で得られた画像と下記~の処理で得られた画像とを併せて、細胞膜の輝点をラベルする上記2に記載の評価方法;顕微鏡の明視野で得られた切片画像に対してグレースケール変換を施す画像処理,で得られた画像に対して2値化を施す画像処理,で得られた画像に対して穴埋めを施す画像処理,およびで得られた画像に対してラベリングを施す画像処理;ならびに顕微鏡の暗視野で得られた切片画像に対してグレースケール変換を施す画像処理,で得られた画像に対して2値化を施す画像処理,で得られた画像に対してノイズを除去する画像処理,およびで得られた画像に対してラベリングを施す画像処理。4.上記蛍光体が、半導体ナノ粒子、または、蛍光有機色素もしくは半導体ナノ粒子を内包した内包ナノ粒子である上記1~3のいずれかに記載の評価方法。5.上記蛍光体が、エオジンeosinである上記1~4のいずれかに記載の評価方法。6.上記生体物質が、膜タンパク質である上記1~5のいずれかに記載の評価方法。7.上記膜タンパク質が、HER2である上記6に記載の評価方法。本発明は、細胞膜の位置を染色に用いる蛍光体蛍光有機色素等の発光を基に同定し、細胞膜にある蛍光体のみの蛍光輝点または蛍光輝度の計測を行うことで、細胞膜外部分に非特異的に吸着した蛍光体の蛍光輝点または蛍光輝度を除くことが可能となり、従来法であるFISH法と高い相関を示す方法を提供できる。また、蛍光体として、半導体ナノ粒子、または、半導体ナノ粒子もしくは蛍光有機色素を内包した内包ナノ粒子を用いることで、従来の蛍光有機色素単独で用いた場合より高輝度での観察が可能となり、精度の向上に寄与する。さらに、本発明の評価方法は、従来病理医の行っている組織染色と共通工程が多く、迅速な診断に寄与することができる。以下、本発明を実施するための形態について説明するが、本発明はこれらに限定されない。<評価方法>本発明の評価方法は、細胞膜を染色する蛍光体、および、少なくともその一部が細胞膜に存在する生体物質に結合し、かつ、該蛍光体とは異なる発光波長のピークを有する蛍光体を用いて同じ組織切片を染色し、染色された該切片中の細胞膜の位置を該蛍光体の発光により同定し、同定された細胞膜上の該蛍光体による輝点数を計測することによって、細胞膜における該生体物質の発現レベルを評価することを特徴とする。蛍光体本発明で用いられる蛍光体は、少なくともその一部が細胞膜に存在する生体物質に結合し、かつ、細胞膜を染色する蛍光体後述とは異なる発光波長のピークを有するものである。このような蛍光体としては、半導体ナノ粒子、または、蛍光有機色素もしくは半導体ナノ粒子を内包した内包ナノ粒子が好ましい。このような蛍光体は、例えば、半導体ナノ粒子内包ナノ粒子と、その表面に固定化された、生体物質と特異的に結合および/または反応する物質とからなる態様が好ましい。また、蛍光体は、波長200~700nmの紫外~近赤外光により蛍光体を励起した場合、波長400~900nmの可視~近赤外光の発光を示すものが好ましい。半導体ナノ粒子半導体ナノ粒子としては、II-VI族化合物、III-V族化合物またはIV族元素を成分として含有する半導体ナノ粒子それぞれ、II-VI族半導体ナノ粒子、III-V族半導体ナノ粒子、IV族半導体ナノ粒子ともいう。のいずれかを用いることができる。半導体ナノ粒子として1種単独で用いても2種以上の複数種を混合したものを用いてもよい。半導体ナノ粒子として、具体的には、セレン化カドミウムCdSe,硫黄化カドミウムCdS,テルル化カドミウムCdTe,セレン化亜鉛ZnSe,硫黄化亜鉛ZnS,テルル化亜鉛ZnTe,リン化インジウムInP,窒化インジウムInN,ヒ素化インジウムInAs,インジウム-ガリウム-リンInGaP,リン化ガリウムGaP,ヒ素化ガリウムGaAs,ケイ素Si,ゲルマニウムGe等が挙げられるが、本発明はこれらに限定されない。半導体ナノ粒子をコアとし、その上にシェルを設けた半導体ナノ粒子を用いることもできる。以下、本明細書中、コア/シェル構造を有する半導体ナノ粒子の表記法として、コアがCdSe、シェルがZnSの場合、CdSe/ZnSと表記する。コア/シェル構造を有する半導体ナノ粒子として、例えば、CdSe/ZnS,CdS/ZnS,InP/ZnS,InGaP/ZnS,Si/SiO2,Si/ZnS,Ge/GeO2,Ge/ZnSなどを用いることができるが、本発明はこれらに限定されない。半導体ナノ粒子は必要に応じて、有機ポリマーなどにより表面処理が施されているものを用いてもよい。このような半導体ナノ粒子としては、例えば、表面カルボキシ基を有するCdSe/ZnSインビトロジェン社製や表面アミノ基を有するCdSe/ZnSインビトロジェン社製等が挙げられる。半導体ナノ粒子として、上記以外に、Qdot655蛍光波長655nm;インビトロジェン社製,Qdot625蛍光波長625nm;インビトロジェン社製,Qdot605蛍光波長605nm;インビトロジェン社製等の市販品も用いることができる。蛍光有機色素蛍光有機色素としては、例えば、フルオレセイン系色素分子,ローダミン系色素分子,AlexaFluorインビトロジェン社製系色素分子,BODIPYインビトロジェン社製系色素分子,カスケード系色素分子,クマリン系色素分子,エオジン系色素分子,NBD系色素分子,ピレン系色素分子,TexasRed系色素分子,シアニン系色素分子等が挙げられる。蛍光有機色素として、具体的には、5-カルボキシ-フルオレセイン、6-カルボキシ-フルオレセイン、56-ジカルボキシ-フルオレセイン、6-カルボキシ-2’44’5’77’-ヘキサクロロフルオレセイン、6-カルボキシ-2’477’-テトラクロロフルオレセイン、6-カルボキシ-4’5’-ジクロロ-2’7’-ジメトキシフルオレセイン、ナフトフルオレセイン、5-カルボキシ-ローダミン、6-カルボキシ-ローダミン、56-ジカルボキシ-ローダミン、ローダミン6G、テトラメチルローダミン、X-ローダミン、およびAlexaFluor350、AlexaFluor405、AlexaFluor430、AlexaFluor488、AlexaFluor500、AlexaFluor514、AlexaFluor532、AlexaFluor546、AlexaFluor555、AlexaFluor568、AlexaFluor594、AlexaFluor610、AlexaFluor633、AlexaFluor635、AlexaFluor647、AlexaFluor660、AlexaFluor680、AlexaFluor700、AlexaFluor750、BODIPYFL、BODIPYTMR、BODIPY493/503、BODIPY530/550、BODIPY558/568、BODIPY564/570、BODIPY576/589、BODIPY581/591、BODIPY630/650、BODIPY650/665以上インビトロジェン社製、メトキシクマリン、エオジンまたはエオシンeosin;励起波長520nm/蛍光波長540nm、NBD、ピレン、Cy5蛍光波長680nm;GEHealthcare社製、Cy55、Cy7、TexasRed蛍光波長615nm;インビトロジェン社製等が挙げられる。このような有機蛍光色素は1種単独で用いても2種以上の複数種を混合したものを用いてもよい。半導体ナノ粒子または蛍光有機色素を内包した内包ナノ粒子本発明において半導体ナノ粒子または蛍光有機色素を内包した内包ナノ粒子以下、単に蛍光物質を内包したナノ粒子ともいう。とは、蛍光物質がナノ粒子内部に分散されたものをいい、ナノ粒子自体と化学的に結合していても、していなくてもよい。ナノ粒子を構成する素材は特に限定されるものではなく、例えば、ポリスチレン、ポリ乳酸、シリカ等が挙げられる。半導体ナノ粒子を内包したシリカナノ粒子は、ニュージャーナルオブケミストリー33巻561ページ2009に記載されているCdTe内包シリカナノ粒子の合成を参考にして作製することができる。半導体ナノ粒子を内包したポリマーナノ粒子は、ネイチャーバイオテクノロジー19巻631ページ2001記載のポリスチレンナノ粒子への量子ドットの含浸法を用いて作製することができる。本発明で用いられる蛍光物質を内包したナノ粒子は、公知の方法により作製することが可能である。例えば、蛍光有機色素を内包したシリカナノ粒子は、ラングミュア8巻2921ページ1992に記載されているFITC内包シリカ粒子の合成を参考にして作製することができる。FITCの代わりに所望する蛍光有機色素を用いることで種々の蛍光有機色素内包シリカナノ粒子が作製できる。蛍光有機色素を内包したポリスチレンナノ粒子は、米国特許第4326008号1982に記載されている重合性官能基をもつ有機色素を用いた共重合法や、米国特許第5326692号1992に記載されているポリスチレンナノ粒子への蛍光有機色素の含浸法を用いて作製することができる。本発明で用いられる蛍光物質を内包したナノ粒子とは、平均粒径は特に限定されないが、30~800nm程度のものを用いることができる。また粒径のばらつきを示す変動係数は特に限定されないが、20のものを用いることができる。本発明において、平均粒径とは、走査型電子顕微鏡SEMを用いて電子顕微鏡写真を撮影し充分な数の粒子について断面積を計測し、その計測値を相当する円の面積としたときの直径を粒径として求めたものを意味する。特に、本発明では、1000個の粒子の粒径の算術平均を平均粒径とした。変動係数も、1000個の粒子の粒径分布から算出した値とした。生体物質と特異的に結合および/または反応する物質の固定化方法本発明に係る蛍光体は、生体物質と特異的に結合および/または反応する物質を、蛍光物質を内包したナノ粒子に固定化させたものを用いるのが好ましい。固定化の態様としては特に限定されず、例えば、共有結合,イオン結合,水素結合,配位結合,物理吸着または化学吸着等が挙げられる。蛍光体として蛍光有機色素を用いる場合、カルボン酸またはその活性エステル基を有する蛍光有機色素を用いると、生体物質と特異的に結合および/または反応する物質中にあるアミノ基へ結合させることができる。また、マレイミド基を有する蛍光有機色素を用いると、生体物質と特異的に結合および/または反応する物質中にあるチオール基へ結合させることができる。蛍光体として、蛍光物質を内包したナノ粒子を用いる場合、蛍光物質が蛍光有機色素の場合であっても、半導体ナノ粒子の場合であっても、同様の手順を適用することができる。例えば、無機物と有機物とを結合させるために広く用いられている化合物であるシランカップリング剤を用いることができる。このシランカップリング剤は、分子の一端に加水分解でシラノール基を与えるアルコキシシリル基を有し、他端に、カルボキシル基,アミノ基,エポキシ基,アルデヒド基などの官能基を有する化合物であり、上記シラノール基の酸素原子を介して無機物と結合する。具体的には、メルカプトプロピルトリエトキシシラン,グリシドキシプロピルトリエトキシシラン,アミノプロピルトリエトキシシラン,ポリエチレングリコール鎖を有するシランカップリング剤例えば、Gelest社製PEG-silaneno.SIM6492.7等が挙げられる。シランカップリング剤を用いる場合、2種以上を併用してもよい。また、この場合、連結する有機分子があってもよい。例えば、生体物質との非特異的吸着を抑制するためポリエチレングリコール鎖を用いることができ、例えば、ThermoScientific社製SMPEG12を用いることができる。蛍光物質を内包したシリカナノ粒子とシランカップリング剤との反応手順は、公知の手法を用いることができる。例えば、得られた蛍光物質を内包したシリカナノ粒子を純水中に分散させ、アミノプロピルトリエトキシシランを添加し、室温で12時間反応させる。反応終了後、遠心分離またはろ過により表面がアミノプロピル基で修飾された蛍光物質を内包したシリカナノ粒子を得ることができる。続いてアミノ基と抗体中のカルボキシル基とを反応させることで、アミド結合を介し抗体を、蛍光物質を内包したシリカナノ粒子と結合させることができる。必要に応じて、EDC1-Ethyl-3-[3-Dimethylaminopropyl]carbodiimideHydrochloride;Pierce社製のような縮合剤を用いることもできる。必要により有機分子修飾された蛍光物質を内包したシリカナノ粒子と直接結合しうる部位と、分子標的物質と結合し得る部位とを有するリンカー化合物を用いることができる。具体例として、アミノ基に選択的に反応する部位とメルカプト基に選択的に反応する部位との両方を有するsulfo-SMCCSulfosuccinimidyl4[N-maleimidomethyl]-cyclohexane-1-carboxylate;Pierce社製を用いると、アミノプロピルトリエトキシシランで修飾した蛍光物質を内包したシリカナノ粒子のアミノ基と、抗体中のメルカプト基とを結合させることで、抗体結合した蛍光物質を内包したシリカナノ粒子が得られる。蛍光物質を内包したポリスチレンナノ粒子に生体物質認識部位を結合させる場合、蛍光物質が蛍光有機色素の場合であっても、半導体ナノ粒子の場合であっても、同様の手順を適用することができる。すなわち、アミノ基など官能基を有するポリスチレンナノ粒子に半導体ナノ粒子または蛍光有機色素を含浸することにより、官能基を有する蛍光物質内包ポリスチレンナノ粒子を得ることができ、以降EDCまたはsulfo-SMCCを用いることで、抗体結合した蛍光物質内包ポリスチレンナノ粒子ができる。また、化学吸着の例として、抗原抗体反応やストレプトアビジンビオチン間結合などが挙げられる。すなわち、生体物質と特異的に結合および/または反応する物質として抗体を用いた場合、その抗体を抗原として認識する物質を蛍光物質に結合させたものを用いることができる。また、生体物質と特異的に結合および/または反応する物質としてストレプトアビジン修飾した抗体を用いた場合、ビオチンを蛍光物質に結合したものを用いることができる。蛍光体本発明で用いられる蛍光体として用いることができる。より具体的には、例えば、蛍光体として、CdSe/ZnSやQdot655,Qdot625,Qdot605などの半導体ナノ粒子またはこれら半導体ナノ粒子を内包したナノ粒子を用いる場合、あるいは、蛍光有機色素Cy5もしくはTexasRedを内包したナノ粒子を用いる場合、蛍光体としてエオジンを用いることができる。また、蛍光体として、例えば、CellVueLavender励起波長420nm/蛍光波長461nm,CellVueMaroon励起波長647nm/蛍光波長667nm,CellVuePlum励起波長652nm/蛍光波長671nm,CellVueClaret励起波長655nm/蛍光波長675nm,CellVueBurgundy励起波長683nm/蛍光波長707nm,CellVueNIR780励起波長743nm/蛍光波長776nm,CellVueNIR815励起波長786nm/蛍光波長814nm以上Polyscience社製等も挙げられる。これらの蛍光体は、各種の蛍光色素と、これに結合した脂質親和性の長い尾部からなり、この尾部が細胞膜に侵入し、蛍光発色部位を細胞の外表面に露出させ留まることにより、細胞膜を染色することができる。なお、CellVueは登録商標である。生体物質と特異的に結合および/または反応する物質の固定化方法は、蛍光体の場合と同様である。生体物質本発明において蛍光体が結合する対象となる生体物質は、少なくともその一部が細胞膜に存在するすなわち、実質的に細胞膜のみに存在していてもよいし、細胞膜とそれ以外の部位、例えば細胞質中との両方に存在していてもよい生体由来の化合物であれば、本発明においては特に限定されるものではないが、代表例としては膜タンパク質が挙げられる。膜タンパク質としては、例えばがんの増殖制御因子または転移制御因子等が好適であり、特にその遺伝子の発現レベルの異常と乳がんとが関与しているHER2が好ましい。他方、本発明に係る生体物質を認識する化合物としては、例えば、抗体,アビジン,ビオチン等が挙げられる。特にがん患者に投与される、抗体を成分として含む医薬品における抗体としては、がんの増殖制御因子または転移制御因子等を標的抗原とし、該標的抗原に結合する抗体を有効成分とし、該抗体ががん細胞に結合することによってがん細胞の増殖を抑える、または、がん細胞を死滅させる抗体医薬品や、抗がん剤,抗ウィルス剤,抗生物質等を有効成分とし、がん細胞へのデリバリー手段として用いられる医薬品等を挙げることができる。上記抗体医薬品としては、例えば、シナジスSynagis,レミケードRemicade,リツキサンRituxan,トラスツズマブTrastuzumab等が挙げられ、これら中でもトラスツズマブを好適に例示することができる。上記がんとしては、例えば、大腸がん,直腸がん,腎がん,乳がん,前立腺がん,子宮がん,卵巣がん,子宮内膜がん,食道がん,血液がん,肝がん,膵がん,皮膚がん,肺がん、乳がん等が挙げられる。また、がんの増殖制御因子または転移制御因子のうち、がんの増殖制御因子としては、例えば、表皮増殖因子EGF;epidermalgrowthfactor,該EGF受容体EGFR,血小板由来増殖因子PDGF;plateletderivedgrowthfactor,該PDGF受容体PDGFR,インスリン様増殖因子IGF;insulinlikegrowthfactor,該IGF受容体IGFR,線維芽細胞増殖因子FGF;fibroblastgrowthfactor,該FGF受容体FGFR,血管内皮増殖因子VEGF;vascularendotherialgrowthfactor,該VEGF受容体VEGFR,肝細胞増殖因子HGF;hepatocytegrowthfactor,該HGF受容体HGFR,神経栄養因子NT;neurotropin,形質転換増殖因子βTGFβ;transforminggrowthfactorβファミリー,HER2等の細胞増殖因子、または、サイクリンcyclin,サイクリン依存性キナーゼCDK;cyclindependentkinase,サイクリンA,サイクリンB,サイクリンD,サイクリンE,CDK1,CDK2,CDK4,CDK6,p16INK,p15,p21,p27,RBretinoblastomaなどの細胞周期を調節する因子などが挙げられる。一方、がんの転移制御因子としては、例えば、マトリックスメタロプロテアーゼ1MMP1,マトリックスメタロプロテアーゼ2MMP2,PAR1proteaseactivatedreceptor1,CXCR4chemokineC-X-Cmotifreceptor4,CCR7chemokineC-Cmotifreceptor7等が挙げられる。これらの中でも細胞膜上にあるHER2を標的とするトラスツズマブが広く用いられているため、HER2を好適に例示することができる。また抗体の種類としてはモノクローナル抗体やポリクローナル抗体を例示することができる。また上記抗体のクラスやサブクラスは特に制限されず、クラスとしては、例えば、IgA,IgG,IgE,IgD,IgM等が挙げられ、サブクラスとしては、例えば、IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA1,IgA2等が挙げられる。また、ここでいう抗体という用語は、任意の抗体断片または誘導体を含む意味で用いられ、例えば、Fab,Fab2,CDR,ヒト化抗体,多機能抗体、単鎖抗体ScFvなどを含む。かかる抗体は、公知の方法で製造することができる例えば、HarlowELaneDAntibodyColdSpringHarborLaboratoryPress等を参照。組織切片の染色方法以下、本発明で用いる染色方法の一例について説明する。この染色方法が適用できる組織切片本明細書において、単に切片ともいい、例えば病理切片等の切片も包含する用語として用いる。の作製法は特に限定されず、公知の手順により作製されたものを用いることができる。1.脱パラフィン工程キシレンを入れた容器に、切片を浸漬させ、パラフィン除去する。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、3分以上30分以下であることが好ましい。また必要により浸漬途中でキシレンを交換してもよい。次いでエタノールを入れた容器に切片を浸漬させ、キシレン除去する。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、3分以上30分以下であることが好ましい。また必要により浸漬途中でエタノールを交換してもよい。水を入れた容器に、切片を浸漬させ、エタノール除去する。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、3分以上30分以下であることが好ましい。また必要により浸漬途中で水を交換してもよい。2.賦活化処理公知の方法に倣い、目的とする生体物質の賦活化処理を行う。賦活化条件に特に定めはないが、賦活液としては、0.01Mのクエン酸緩衝液pH6.0、1mMのEDTA溶液pH8.0、5尿素、0.1Mのトリス塩酸緩衝液などを用いることができる。加熱機器はオートクレーブ、マイクロウェーブ、圧力鍋、ウォーターバスなどを用いることができる。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。温度は50~130°C、時間は5~30分で行うことができる。次いでPBSを入れた容器に、賦活処理後の切片を浸漬させ、洗浄を行う。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、3分以上30分以下であることが好ましい。また必要により浸漬途中でPBSを交換してもよい。3.蛍光体を用いて生体物質を染色する工程生体物質を染色するために、生体物質を認識する部位を有する蛍光体のPBS分散液を調製し、切片に乗せ、目的とする生体物質との反応を行う。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。反応時間は、30分以上24時間以下であることが好ましい。蛍光体による染色を行う前に、BSA含有PBSなど公知のブロッキング剤やTween20などの界面活性剤を滴下することが好ましい。次いでPBSを入れた容器に、染色後の切片を浸漬させ未反応の蛍光体の除去を行う。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。PBSに、Tween20などの界面活性剤を含有させてもよい。浸漬時間は、3分以上30分以下であることが好ましい。また必要により浸漬途中でPBSを交換してもよい。4.蛍光体を用いて細胞膜を染色する工程公知の方法に倣い、細胞膜の染色を行う。蛍光体であるエオジン含有溶液和光純薬製の1EosinYSolutionを切片に乗せる。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。反応時間は、5分以上24時間以下であることが好ましい。次いで脱水エタノールまたは市販の脱水溶液和光純薬製の組織脱水液を入れた容器に、染色後の切片を浸漬させ未反応エオジンの除去および脱水を行う。温度は特に限定されるものではないが、室温で行うことができる。浸漬時間は、3分以上30分以下であることが好ましい。必要により浸漬途中でエタノールを交換してもよい。次いで、キシレンを入れた容器に染色後の切片を浸漬させ、エタノールの除去を行う。浸漬時間は、3分以上30分以下であることが好ましい。また必要により浸漬途中でキシレンを交換してもよい。カバーガラスを切片に乗せ、封入する。必要に応じて市販封入剤を使用してもよい。5.蛍光顕微鏡下の観察染色した切片に対し蛍光顕微鏡を用いて、細胞膜染色に用いた蛍光色素蛍光体の蛍光から細胞膜の位置を同定し、細胞膜上にある蛍光体の輝点数または蛍光輝度を基に目的とする細胞膜上の生体物質の発現レベルを計測することができる。用いた蛍光物質の吸収極大波長および蛍光波長に対応した励起光源および蛍光検出用光学フィルタを選択する。輝点数または発光輝度の計測は、演算手段による画像処理を行うことによって計測することが好ましく、例えば、市販画像解析ソフトであるImageJやジーオングストローム社製の全輝点自動計測ソフトG-Countなどを用いて行うこともできる。本発明においては、図1に示すようなフローチャートに沿って、細胞膜ごとの蛍光粒子重畳数をカウントする方法が好適である。すなわち、下記~の画像処理で得られた画像と下記~の処理で得られた画像とを併せて、細胞膜の輝点をラベルする画像処理する方法である。顕微鏡の明視野で得られた切片画像Aに対してグレースケール変換を施す画像処理,で得られた画像に対して2値化を施す画像処理,で得られた画像に対して穴埋めを施す画像処理,およびで得られた画像に対してラベリングを施す画像処理;ならびに顕微鏡の暗視野で得られた切片画像Bに対してグレースケール変換を施す画像処理,で得られた画像に対して2値化を施す画像処理,で得られた画像に対してノイズを除去する画像処理,およびで得られた画像に対してラベリングを施す画像処理。この方法について、ステップを追いながら順に説明する。《グレースケール変換;》カラー画像RGBは切片ごとに輝度にバラツキがあるため、グレースケール変換する必要がある。図2には、その一例を示す。グレースケール変換の条件は、公知のものを使用することができ、本発明では特に限定されないが、例えば下記式により変換することができる。Y=0.299×R0.587×G0.114×B《2値化処理;》グレースケール変換した画像から、予め設定された上限閾値および下限閾値に基づき2値化画像を作成する。この上限下限閾値は、例えば、図3Cに示す大津の判別分析法大津展之判別及び最小2乗基準に基づく自動しきい値選定法電子通信学会論文誌VolJ63DNo4pp3493561980による2値化などのような統計的閾値決定法を利用してもよい。この2値化処理によって、細胞膜に由来するもの下限閾値以下と生体物質に由来するもの下限閾値以上上限閾値以下とに分けることができる。図3Aを参照。具体的には、図3Bに示すフローチャートに従って、抽出する画素を決定することができる。《Morphology処理による穴埋め処理;》図4Aに示すように、細胞膜が寸断された細胞を、この穴埋め処理によって、細胞膜を一繋がりとすることができる。具体的な処理としては、ピクセル単位で表示した2値化画像において、1とラベルされたピクセルの周囲のピクセルをすべて1とラベル膨張した後、1とラベルされたピクセル一集団の最外周の1ピクセルのみを0とラベルする収縮ものである。図4B《ノイズ除去処理;》図5に示すように、対象オブジェクト図A中のn1n2n4以外のオブジェクト図A中のn3をノイズとして識別して除去する処理である。オブジェクトの面積画素数をカウントし、規定値図5では、noisevalに相当する。以下の面積を有するオブジェクトをノイズとして、背景色と同色に変換する。図5においてAをノイズ除去処理したものをBとして示す。《ラベリング処理;》ピクセル単位で表示された個々のオブジェクト、すなわち1ラベルされたピクセル一集団それぞれに順に番号を振る処理である。図5《細胞膜ごとの蛍光ナノ粒子重畳数のカウント》図6Bに示すようなフローチャートに従って、細胞ごとに細胞膜上の輝点1個ずつラベル図6Aし、輝点数をカウントする。1輝点は、1生体物質にほぼ相当するものである。以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。[製造例1]抗HER2抗体が結合したTexasRed内包シリカナノ粒子の製造:下記工程~によりTexasRed内包シリカナノ粒子を作製し;下記工程~により該粒子表面にアミノ基を導入し;そして、下記工程~により、蛍光体として、抗HER2抗体が結合したTexasRed内包シリカナノ粒子を製造した。工程:蛍光波長615nmをピークとして有するTexasRedのN-ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体インビトロジェン社製1mg000126mモルとテトラエトキシシラン400μL1796mモルとを混合した。工程:エタノール40mLと14アンモニア水10mLとを混合した。工程:工程で得られた混合液を室温で撹拌しつつ、工程で調製した混合液を添加した。添加した後12時間撹拌した。工程:この反応混合物を10000×gで60分間遠心分離し、上澄みを除去した。その後、エタノールを加え沈降物を分散させ、再度遠心分離を行った。同様の手順でエタノールと純水による洗浄を1回ずつ行い、TexasRed内包シリカナノ粒子を得た。このTexasRed内包シリカナノ粒子を走査型電子顕微鏡SEM;日立製S-800型により観察したところ、平均粒径が110nm、変動係数が12であった。工程:工程で得られたTexasRed内包シリカナノ粒子1mgを純水5mLに分散させた。そこにアミノプロピルトリエトキシシラン水分散液100μLを添加し、室温で12時間撹拌した。工程:この反応混合物を10000×gで60分間遠心分離し、上澄みを除去した。工程:これにエタノールを加え、沈降物を分散させ、再度遠心分離を行った。同様の手順でエタノールと純水による洗浄を1回ずつ行い、TexasRed内包シリカナノ粒子表面にアミノ基を導入した。このように得られたアミノ基修飾したTexasRed内包シリカナノ粒子のFT-IR測定を行ったところ、アミノ基に由来する吸収が観測でき、アミノ基修飾できたことを確認できた。工程:工程で得られた粒子をEDTAエチレンジアミン四酢酸を2mM含有したPBSリン酸緩衝液生理的食塩水を用いて3nMに調整した。工程:工程で調整した溶液に、最終濃度が10mMとなるようSMPEG12サーモサイエンティフィック社製;succinimidyldodecaethyleneglycolesterを混合し1時間反応させた。工程:この反応混合液を10000×gで60分間遠心分離し、上澄みを除去した工程:これにEDTAを2mM含有したPBSを加え、沈降物を分散させ、再度遠心分離を行った。同様の手順による洗浄を3回行った。最後に500μLのPBSを用い再分散させた。工程:抗HER2抗体100μgを、100μLのPBSに溶解させたところに、1MジチオスレイトールDTTを添加した、30分間反応させた。工程:この反応混合物について、ゲルろ過カラムにより過剰のDTTを除去し、還元化抗HER2抗体溶液を得た。工程:工程で得られたアミノ基修飾したTexasRed内包シリカナノ粒子の分散液と工程で得られた還元化抗HER2抗体溶液とをPBS中で混合し、1時間反応させた。工程:これに10mMメルカプトエタノール4μLを添加し、反応を停止させた。工程:この反応混合物を10000×gで60分間遠心分離し上澄みを除去した後、EDTAを2mM含有したPBSを加え、沈降物を分散させ、再度遠心分離を行った。同様の手順による洗浄を3回行った。最後に500μLのPBSを用い再分散させて、蛍光体として、抗HER2抗体が結合したTexasRed内包シリカナノ粒子を得た。[製造例2]抗HER2抗体が結合したCdSeZnS内包シリカナノ粒子の製造:下記工程~に従いCdSeZnS内包シリカナノ粒子を作製した。製造例1の工程~において、TexasRed内包シリカナノ粒子の代わりに、得られたCdSeZnS内包シリカナノ粒子を用いた以外は製造例1と同様にして、CdSeZnS内包シリカナノ粒子の表面にアミノ基を導入し、抗HER2抗体を固定化した。その結果、蛍光体として、抗HER2抗体が結合したCdSeZnS内包シリカナノ粒子が製造できた。工程:蛍光波長655nmにピークを有するCdSeZnSデカン分散液インビトロジェン社製のQdot65510μLとテトラエトキシシラン40μLとを混合した。工程:エタノール4mLと14アンモニア水1mLとを混合した。工程:工程で得られた混合液を室温で撹拌しつつ、工程で調製した混合液を添加した。添加した後12時間撹拌した。工程:この反応混合物を10000×gで60分間遠心分離し、上澄みを除去した。これにエタノールを加え、沈降物を分散させ、再度遠心分離を行った。同様の手順でエタノールと純水による洗浄を1回ずつ行うことによって、CdSeZnS内包シリカナノ粒子が作製できた。得られたCdSeZnS内包シリカナノ粒子のSEM観察を行ったところ、平均粒径が130nm、変動係数が13であった。[製造例3]抗HER2抗体が結合したTexasRedの製造:TexasRedのN-ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体インビトロジェン社製を用い、公知の方法に従い抗HER2抗体への結合を行った。[実施例1]製造例1で得られた蛍光体、すなわち抗HER2抗体が結合したTexasRed内包シリカナノ粒子を用いて、下記~に従ってヒト乳房組織の免疫染色を行った。染色切片はコスモバイオ製の組織アレイスライドCBA712を用いた。染色切片はあらかじめパスビジョンHER2DNAプローブキットアボット社製を用いて各スポット当りのFISHスコアを算出した。このFISHスコアは、アボットジャパン社製HER-2遺伝子キットパスビジョンreg;HER-2DNAプローブキットに添付されている文書に記載の手順に従って算出した。キシレンを入れた容器に組織切片を30分間浸漬させた。途中3回キシレンを交換した。エタノールを入れた容器に組織切片を30分間浸漬させた。途中3回エタノールを交換した。水を入れた容器に、組織切片を30分間浸漬させた。途中3回水を交換した。10mMクエン酸緩衝液pH60に組織切片を30分間浸漬させた。121°Cで10分間オートクレーブ処理を行った。PBSを入れた容器に、オートクレーブ処理後の切片を30分間浸漬させた。1BSA含有PBSを組織に乗せて、1時間放置した。1BSA含有PBSで005nMに希釈した蛍光体の分散液10μLを、組織に乗せて3時間放置した。PBSを入れた容器に、染色後の切片をそれぞれ30分間浸漬させた。蛍光体であるエオジン含有溶液和光純薬製の1EosinYSolution10μLを組織に乗せて3時間放置した。脱水溶液和光純薬製の組織脱水液を入れた容器に、染色後の切片を30分間浸漬させた。キシレンを入れた容器に染色後の切片を30分間浸漬させた市販封入剤メルク社製のエントランニューを乗せた後、カバーガラスを切片に乗せた。組織切片はオリンパス製のレーザ共焦点顕微鏡FV1000-Dを用いて画像を取得し、ジーオンオングストロング社製の輝点計測ソフトG-countを用いて輝点の計測を行った。蛍光体の場合の、細胞膜同定法,輝点および蛍光強度の計測法について以下に説明する。なお、蛍光体の場合も、励起波長蛍光波長が蛍光体と異なる以外は同様にして計測した。波長520nmの励起光下、蛍光体であるエオジンに由来する波長540nmの蛍光画像Iを取得し、細胞膜の位置を同定した。次いで、励起波長605nmの励起光下、蛍光体に由来する615nmの蛍光画像IIを取得した。蛍光画像Iと蛍光画像IIとを画像処理ソフトを用いて重ね合わせを行うことで、蛍光体による蛍光の位置が細胞膜上にあるか否かの判別を行った。輝点数は、組織アレイスライド中の8スポットについて蛍光画像Iと蛍光画像IIとの重ね合わせを行い、各30細胞の視野全体の蛍光輝点数および細胞膜上にある蛍光輝点数のそれぞれ計測し、その平均値を求めた。蛍光強度は8スポットそれぞれについて、視野全体の蛍光強度および細胞膜上の蛍光強度を計測し、その平均値を求めた。その結果を表1に示す。[実施例2]実施例1において、製造例1で得られた蛍光体の代わりに、製造例2で得られた蛍光体を用いた以外は、実施例1と同様にして組織切片を染色し、輝点数および蛍光強度を計測した。得られた結果を表1に示す。[比較例1]実施例1において、蛍光体であるエオジンを用いない以外は実施例1と同様にして組織切片を染色し、輝点数および蛍光強度を計測した。得られた結果を表1に示す。[比較例2]実施例2において、蛍光体であるエオジンを用いない以外は実施例2と同様にして組織切片を染色し、輝点数および蛍光強度を計測した。得られた結果を表1に示す。[比較例3]実施例1において、製造例1で得られた蛍光体の代わりに、製造例3で得られた蛍光体を用いた以外は、実施例1と同様にして組織切片を染色し、輝点数および蛍光強度を計測した。得られた結果を表1に示す。表1から、細胞膜染色を行わずに視野全体の蛍光体の輝点数蛍光強度を計測した場合比較例1,2に比べ、細胞膜染色し細胞膜同定を行って細胞膜上のみの蛍光体の輝点数蛍光強度を計測した場合実施例1,2の方が、従来技術であるFISH法との相関係数が高いことがわかる。従来の蛍光有機色素であるTexasRedを用いた場合比較例3は、輝点数蛍光強度が弱く輝点観測ができなかった。"