ペーパークロマトグラフィー法paperchromatographyで高純度の核酸を生物学試料から分離する超高速核酸精製方法であって、1生物学試料から分離した核酸をシリカ膜silicamembraneに吸着させる段階と、2前記核酸が吸着されたシリカ膜からペーパークロマトグラフィー法を用いて汚染物質を分離する段階と、3前記汚染物質が分離されたシリカ膜から緩衝液を用いて高純度の核酸のみを溶出するか、又はシリカ膜に結合された核酸に直接PCR、逆転写PCRRT-PCR、リアルタイムPCR及びリアルタイムRT-PCRから選択される一つ以上を適用する段階と、を含むことを特徴とする超高速核酸精製方法。前記1段階は、細胞溶解緩衝液によって溶解された核酸をペーパークロマトグラフィー法を用いてシリカ膜に吸着させることを特徴とする請求項1に記載の超高速核酸精製方法。前記細胞溶解緩衝液は、カオトロピック塩及びサルコシネートsarcosinateを主成分とすることを特徴とする請求項2に記載の超高速核酸精製方法。前記細胞溶解緩衝液は、界面活性剤、チオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanate、ラウリルサルコシネートナトリウムsodiumlaurylsarcosinateを主成分とすることを特徴とする請求項3に記載の超高速核酸精製方法。前記2段階は、核酸が吸着されたシリカ膜を移動相緩衝液で一次展開させて汚染物質を分離することを特徴とする請求項1に記載の超高速核酸精製方法。前記移動相緩衝液はチオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanateを主成分とすることを特徴とする請求項5に記載の超高速核酸精製方法。前記3段階は、2段階の汚染物質が分離されたシリカ膜を核酸洗浄緩衝液で二次展開させることで高純度の核酸が精製されることを特徴とする請求項1に記載の超高速核酸精製方法。前記シリカ膜に吸着された核酸を、シリカ膜を用いた段階的なペーパークロマトグラフィーの展開方法で分離して、高純度の核酸を得ることを特徴とする請求項1に記載の超高速核酸精製方法。前記段階的なペーパークロマトグラフィーの展開方法において、緩衝液の液体移動相を用いて、シリカ膜上に核酸の吸着、汚染物質の分離、及び核酸の精製が段階的に行われることを特徴とする請求項8に記載の超高速核酸精製方法。本発明者らは、核酸を含有する生体試料から核酸を効率的に分離するために鋭意研究した結果、カオトロピック塩及びサルコシネートsarcosinateを含有する緩衝液が細胞溶解及び溶出された核酸に対するシリカ膜に吸着力を向上させ、血液及び組織試料内の高純度の核酸を高速かつ簡単に分離することができることを見出して、本発明を完成した。本発明の目的は、従来の核酸分離方法より少量の試料から特殊の装備を使用せずに、高速かつ簡単に核酸を分離して核酸分離過程を単純化することで、ポイントオブケア検査のような迅速な診断を下すための超高速の核酸分離方法を提供することにある。前記目的を果たすために、本発明は、ペーパークロマトグラフィー法paperchromatographyで高純度の核酸を生物学試料から分離する超高速核酸精製方法を提供する。本発明による超高速核酸精製方法は、シリカ膜上に試料内の核酸を含有する細胞溶解液を点滴spottingした後、点滴された細胞溶解液からシリカ膜上に核酸の吸着、液体移動相緩衝液による汚染物質の分離及び核酸の精製が段階的に行われることを特徴とする。本発明による超高速核酸精製方法は、3種類の緩衝液システムを順に利用するものであって、より詳細には、シリカ膜をチオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanate、ラウリルサルコシネートナトリウムsodiumlaurylsarcosinateを主成分とする細胞溶解液、チオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanateを主成分とする移動相緩衝液及びアルコール成分の核酸洗浄緩衝液に順に浸漬して行うことで高純度の核酸のみを溶出させることを特徴とする。本発明による超高速核酸精製方法は、前記方法で得られるシリカ膜上に集積した核酸をポリメラーゼ連鎖反応に直接使用することでポイントオブケア検査Point-of-CareTesting;POCTに効率的に利用することができることを特徴とする。以下、本発明を詳細に説明する。本発明は、ペーパークロマトグラフィー法paperchromatographyで高純度の核酸を生物学試料から分離する超高速核酸精製方法であって、1生物学試料から分離した核酸をシリカ膜silicamembraneに吸着させる段階と、2前記核酸が吸着されたシリカ膜からペーパークロマトグラフィー法を用いて汚染物質を分離する段階と、3前記汚染物質が分離されたシリカ膜から緩衝液を用いて高純度の核酸のみを溶出するか、又はシリカ膜に結合された核酸に直接PCR、逆転写PCRRT-PCR、リアルタイムPCR及びリアルタイムRT-PCRから選択される一つ以上を適用する段階と、を含むことを特徴とする超高速核酸精製方法を提供する。本発明において、前記1段階は、細胞溶解緩衝液によって溶解された細胞から溶出された核酸をペーパークロマトグラフィー法を用いてシリカ膜に吸着させることを特徴とする。前記本発明の生物学試料は少量のNa-EDTA又はヘパリンで処理された非凝固血液non-coagulatingblood又は組織試料を使用することができ、核酸はシリカ膜に容易に結合するため、不純物が本発明による緩衝液移動相によって特定の装備を利用しなくても核酸から除去される。従って、超高速で高純度の核酸を分離することができる。本発明において、前記細胞溶解緩衝液は、組織細胞を効果的に溶解lysisして破砕された細胞からDNAを溶出するための緩衝液であって、チオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanate、ラウリルサルコシネートナトリウムsodiumlaurylsarcosinateを主成分とし、RNAを溶出するための緩衝液の場合、抗酸化化学物質、より好ましくは2-メルカプトエタノール2-mercaptoethanol又はジチオトレイトールDithiothreitolをさらに含むことができる。本発明において、前記2段階は、核酸が吸着されたシリカ膜を移動相緩衝液を用いた溶出により一次展開させて汚染物質を分離するものであり、前記移動相緩衝液はチオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanateを主成分とすることを特徴とする。本発明において、前記2段階後に行われる3段階は、2段階の汚染物質が分離されたシリカ膜を核酸洗浄緩衝液で二次展開させることで細胞溶解緩衝液と、2段階の移動相緩衝液に含まれた高濃度の塩を除去して高純度の核酸が精製することができる。より詳細には、高純度の核酸を得るために、組織細胞から効果的に核酸を溶出し、シリカ膜上に核酸を効率的に結合させ、核酸と混合した不純物を効果的に除去し、核酸の純度を高めるために洗浄する段階が必要である。本発明による精製方法は、シリカ膜を用いたペーパークロマトグラフィー法でシリカ膜に吸着された核酸を高純度の核酸で分離することを特徴とし、前記段階的なペーパー展開は、液体移動相の緩衝液を用いて、シリカ膜上に核酸の吸着、汚染物質の分離、及び核酸の精製を段階的に行うことを特徴とする。より詳細には、本発明に使用される3つの緩衝液システムを順に用いることで生物学試料から高純度の核酸を段階的に分離することができ、第一の段階で、細胞溶解緩衝液を用いて組織細胞の効果的な溶解及び今後核酸を効率的に溶出させてシリカ膜上に結合させることができる。前記細胞溶解緩衝液はラウリルサルコシネートナトリウムsodiumlaurylsarcosinateを含んでおり、組織細胞を効果的に溶解させ、核酸を容易に溶出し、また、高濃度のチオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanateを含んでおり、溶出された核酸をシリカ膜に効果的に結合させる。第二の段階において、高濃度のチオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanateを含有する移動相緩衝液を用いてシリカ膜に結合された核酸から水溶性のタンパク質及びその他の不純物を移動相によるクロマトグラフィー法により効果的に除去すると共に、核酸のシリカ膜に対する結合力を高めることができる。前記移動相緩衝液は高濃度のチオシアン酸グアニジンGuanidinethiocyanateを含有する核酸結合緩衝液BindingBufferを使用する。最後に、核酸の純度を高め、脂質成分の不純物を除去するためにエタノール成分の核酸洗浄緩衝液Washingbufferを移動相に使用した。本発明の具体的な実施例で本発明によるペーパークロマトグラフィー法及び従来の遠心分離を用いたスピンカラムspincolumn方式を用いて血液から核酸を分離した後、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応及びリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を用いて標的遺伝子の増幅能を確認した。その結果、従来の核酸分離方法より少量の試料から特殊の装備を使用せずに高速かつ簡単に核酸を分離できることが確認できた。本発明による超高速の核酸の分離方法は、病因の診断や標的遺伝子を検出するために非常に有用な方法であって、複雑で特殊な装備を使用しなければならない従来の核酸分離方法に比べて迅速かつ簡単に病因の分子診断に使用されることができ、特に、ポイントオブケア検査POCTのための最適の核酸分離方法として使用されることができる利点がある。また、本発明による超高速の核酸の分離方法は、熟練した技術を要求しないため、普通の人が直接病因を分析するために核酸を分離することができ、病院、診療所又は医療センターを訪問してのみ病因検査のための核酸分離が可能であった従来の複雑さを解決することができる利点がある。下記実施例を参照して本発明をより具体的に説明する。しかし、下記実施例は本発明を容易に理解するためのものに過ぎず、どのような意味でも本発明の範囲は前記実施例によって限定されるものではない。ここで使用される技術用語及び科学用語において他の定義がない限り、本発明が属する技術分野において通常の知識を有した者が通常理解している意味を有し、下記の説明及び添付図面で本発明の要旨を不明確にする恐れがある公知機能及び構成に対する説明は省略する。[実施例1]シリカ膜silicamembraneを用いて核酸が分離したか否かを確認非凝固血液試料から細胞溶解緩衝液CellLysisBufferを用いて核酸を抽出した後、シリカ膜silicamembraneに対する核酸の結合及び分離が可能であるか否かを実験した。核酸分離の材料として少量のNa-EDTA又はヘパリンで処理されたヒトの非凝固血液non-coagulatingblood試料を使用した。25μl又は50μlの血液試料を下記表1に記載のそれぞれ互いに異なる組成を有した3種類の細胞溶解緩衝液A、B、C500μlに添加して混合し、物理的な力を印加して強く攪拌vortexingした。各細胞溶解液に溶解液に対して0.6倍の体積比を有するイソプロパノール2-propanolを混合した後、シリカ膜横0.5cm×縦0.5cmを細胞溶解液に浸漬した。その後、シリカ膜を80のエタノールで洗浄してから乾燥し、100μlのTE緩衝液10mMTris-Cl、pH8.0、1mMEDTAで満たされたチューブからシリカ膜に結合された核酸を溶出elutionした。この方法によって分離した核酸が分離されたか否かとその量を確認するために残存した細胞溶解液から従来の遠心分離を用いたスピンカラムspincolumn方式で核酸を抽出して比較分析し、下記表2に示した。前記分析は、Nano-DropUV-Spectrophotometer分光光度計を用いて260nmの波長で分離したDNAの波長吸収値による定量法で確認して下記表2に示した。その結果、前記表2から確認できるように、細胞溶解緩衝液から溶出された核酸がシリカ膜に容易に結合し、分離することが確認され、さらに、従来の遠心分離を用いたスピンカラムspincolumn方式で抽出した核酸より多い量の核酸を抽出することができることが確認できた。[実施例2]ペーパークロマトグラフィー法を適用した超高速DNA分離1超高速DNA分離前記実施例1の実験を通じて、非凝固血液試料から溶出された核酸がシリカ膜silicamembraneに容易に結合し、分離することができることを確認した。また、3種類の細胞溶解緩衝液を用いてDNA成分の核酸を分離する際、クエン酸ナトリウムsodiumcitrateを含有したか否かに関係なく全ての緩衝液で核酸抽出及びシリカ膜への吸着による溶出が可能であるため、実験した3種類の細胞溶解緩衝液からpH7.0の緩衝液Aを選択し、前記結果に基づき超高速の核酸分離のためにペーパークロマトグラフィー法を適用して核酸が分離されたか否かを確認し、標的DNAがPCR増幅したか否かを実験した。通常、組織細胞から核酸を分離するために、不純物を除去する過程は非常に重要である。特に、組織細胞の溶解によって生成されたタンパク質成分の不純物を除去することは高純度の核酸を分離するために非常に重要である。従って、多くの核酸分離方法においてタンパク質を効果的に除去するために、核酸分離用緩衝液にタンパク質分解酵素を適用する。タンパク質分解酵素の適用はタンパク質成分の不純物を除去するためには効果的であるが、血液試料のような特定の組織試料では前記酵素を適用せずに高純度の核酸を分離することができる。従って、実施例2で確認した緩衝液Bでタンパク質分解酵素であるプロテイナーゼKProteinaseKを適用した細胞溶解緩衝液A-1と、適用していない細胞溶解緩衝液A-2を用いてペーパークロマトグラフィー法を適用した核酸が分離したか否かを実験した。このために下記表3の組成を有した25μlの細胞溶解緩衝液A-1、A-2で満たされたチューブに5μlの非凝固血液試料を添加して混合した後、物理的な力を印加して強く攪拌vortexingした。その後、細胞溶解液に溶解液に対して0.6倍の体積比を有するイソプロパノールisoproanolを添加して混合し、細胞溶解液lysateを用意した。前記細胞溶解液に溶出された核酸をシリカ膜に結合させてペーパークロマトグラフィー法による移動相溶液の展開により不純物を除去させる方法を用いて核酸を分離するために図1に示した方法で核酸分離を実験した。このために前記細胞溶解液をシリカ膜横0.5cm×縦10cmの下部から0.5cmの部分を浸漬し、溶出された核酸を結合した。細胞溶解液に浸漬されたシリカ膜の端部を100μlの第一の移動相緩衝液である下記表4の組成を有した核酸結合緩衝液Bindingbufferで満たされたチューブに浸漬した後、シリカ膜に結合された核酸はそのまま維持しながら不純物を移動相溶液でペーパークロマトグラフィー法を用いて分離してから除去した。次に、第二の移動相緩衝液である核酸洗浄緩衝液washingbuffer400μl80ethanolで満たされたチューブにシリカ膜の端部を浸漬し、不純物をさらに除去して核酸を洗浄washingした。そして、細胞溶解液に浸漬されたシリカ膜の一部分から直径2mmサイズの断片を打ち抜きにより分離した後、標的DNAのPCR検出テストを行い、残りの部分は100μlのDNA溶出緩衝液elutionbufferであるTE緩衝液に浸漬してDNAを溶出し、Nano-DropUV-Spectrophotometer分光光度計を用いて分離したDNAを定量して下記表5に示した。その結果、表5から確認できるように、二つの細胞溶解緩衝液A-1とA-2からタンパク質分解酵素であるプロテイナーゼKproteinaseKを適用したか否かに関係なく効率的に核酸が抽出されることが確認できた。これは、本発明のペーパークロマトグラフィー法を用いた超高速の核酸分離方法において、タンパク質分解酵素を処理する過程は核酸を分離するために使用される組織試料によって適用されることができることを示す結果でもある。2DNAからの標的DNAのPCR検出前記実施例2の1の方法を用いてシリカ膜に結合された状態で分離したDNAから標的DNAをポリメラーゼ連鎖反応polymerasechainreaction;PCRを通じて検出detectionできるか否かを確認した。そのためにヒトの染色体DNA塩基配列上でβグロビンbeta-globin遺伝子部位からデザインされたプライマーセット、それぞれ10pmolesの順方向プライマーForwardprimer5 ́-GGGATGATAGTCTGACTTTCCTAACCT-3 ́と逆方向プライマーReverseprimer5 ́-GCCTTCAGTCATGCCTAGGCCTGCA-3 ́及び1.25unitsのHelixAmp商標TaqDNApolymerase、最終濃度2.5mMのMgCl2、0.25mMdNTPmixを含有する反応緩衝液Reactionbufferを用いてペーパークロマトグラフィー法によって分離したDNAが結合されている部分から直径2mmサイズのシリカ膜をとり、PCR検出反応を行った。PCR反応は95°C、20秒/68°C1分35cycles条件下で50μl反応体積reactionvolumeで行われ、PCR反応後に10μlのPCR生成物が1のアガロースゲルagarosegelで電気泳動によって分析された。図2から確認できるように、PCR反応結果、DNAが結合されているシリカ膜から目的とする550bpサイズのβグロビンDNA部分が検出されることにより、前記実施例2の核酸の精製方法が高純度の核酸を生物学試料から高速かつ簡単に分離してPCR法を用いた多様な核酸分析に使用することができることが確認できた。[実施例3]ペーパークロマトグラフィー法を活用して血液試料から全体核酸の分離。1血液試料から全体核酸の分離病因診断及び分子検出は病因のDNAだけでなくRNAから行われることができる。これはほとんどの分子的診断において非常に重要である。従って、前記実施例2の方法で分離したDNAとRNAを全て含む全体核酸の分離を実験し、分離した全体核酸から標的RNAに対するRT-PCR検出を実験した。通常組織試料から核酸を分離する過程、特に、RNAを分離する過程において、RNA分解酵素RNaseの汚染によるRNAの分解が標的RNAの検出を困難にし、ポイントオブケア検査においてさらに深刻な問題をもたらす可能性がある。このような核酸分離過程においてRNA分解酵素の汚染を防止し、効果的にDNA及びRNAを分離するために、2-メルカプトエタノールとジチオトレイトールDithiothreitolのような抗酸化化学物質antioxidantchemicalが使用されるが、この化学物質はRNA分解酵素分子内のジスルフィド結合disulfidebondを切断してRNA分解能を不活性化させると知られている。本実施例ではDNAとRNAを含む全体核酸にペーパークロマトグラフィー法を適用して超高速で核酸を分離するために、実施例2の1の細胞溶解緩衝液A-2に対して抗酸化化学物質である2-メルカプトエタノールを適用してDNA及びRNAを含む全体核酸が分離されたか否かを実験した。全体核酸のペーパークロマトグラフィー法による分離を確認するために、下記表6に示した実施例2の1で提示された細胞溶解緩衝液A-2緩衝液A-2と2-メルカプトエタノールを適用した変形された細胞溶解緩衝液変形された緩衝液A-2を用いて、従来の遠心分離を用いたスピンカラムspincolumn方式の核酸分離方法で血液からDNA及びRNA全てが分離されるか否かを確認した。図3で変形された細胞溶解緩衝液変形された緩衝液A-2ではDNA及びRNAが全て分離された反面、2-メルカプトエタノールを含有しない実施例2での細胞溶解緩衝液緩衝液A-2ではDNAのみが分離することが確認できた。前記の結果に基づき、変形された細胞溶解緩衝液変形された緩衝液A-2を使用して前記実施例2の方法を変形して全体核酸を超高速ペーパークロマトグラフィー法を用いて分離した。実施例2の核酸分離過程で細胞溶解液に浸漬したシリカ膜部分は1、2次移動相緩衝液で展開させる過程で一部の不純物が完全に除去されない欠点が確認された。今回の実験では前記問題点を解消するために、図7に示されたようにシリカ膜横0.5cm×縦10cmの端部から1cm上方の部分に細胞溶解液を点滴し、移動相緩衝液にはシリカ膜の端部から0.5cm部分のみ濡らして試料が細胞溶解液が点滴された部分の不純物がより効果的に展開されて除去されるようにし、残りの核酸分離過程は実施例2と同様な方法で行った。前記の結果は、本発明の変形された細胞溶解緩衝液変形された緩衝液A-2と前記実施例2の超高速の核酸の分離及び精製方法において、効率的に全体核酸を分離するだけでなく標的RNATargetRNAも確認可能であることを示す結果でもある。2全体核酸からの標的RNAのRT-PCR検出前記実施例3の1の方法でシリカ膜に結合された状態で分離した全体核酸から標的RNAtargetRNAを逆転写酵素-ポリメラーゼ連鎖反応Reverasetranscriptase-PCR、RT-PCRにより検出detectionできるか否かを確認した。このために、ヒトβグロビンbeta-globin遺伝子に対する転写体塩基配列transcriptsequenceからデザインされたプライマーセット、それぞれ10pmolesの順方向プライマーForwardprimer5 ́-CAAGGTGAACGTGGATGAAG-3 ́と逆方向プライマーReverseprimer5 ́-GGCAGAATCCAGATGCTCAA-3 ́及び1.25unitsのHelixAmp商標Hot-TaqDNApolymeraseNanohelix、韓国と25unitsのHelixCript商標ThermoReversetranscriptaseNanohelix、韓国、最終濃度2.5mMのMgCl2、0.25mMdNTPmixを含有する反応緩衝液Reactionbufferを用いて、50°C40分、1cycle/95°C15分、1cycle/95°C20秒-55°C40秒-72°C1分、35cyclesの条件下で、前記実施例3の1の方法でシリカ膜に結合された状態で分離した全体核酸部分から直径2mmサイズのシリカ膜をとり、標的RNAのRT-PCR検出反応を行った。図4で確認できるように、RT-PCRの結果、全体核酸が結合されているシリカ膜から400bpサイズのβグロビンbeta-globinRNA転写体を検出することができ、標的RNAの検出は、全体細胞溶解液lysateから5μlのみを点滴spottingしたシリカ膜でも確認をすることができた。前記の結果から本発明の超高速の核酸の分離方法は従来の核酸分離方法より少量の試料から特殊な装備を使用せずに高速かつ簡単に核酸を分離することができることが確認できた。3全体核酸のリアルタイムPCR増幅の確認最近の分子診断はポリメラーゼ連鎖反応PCR及び逆転写ポリメラーゼ連鎖反応RT-PCRと共にリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応Real-timePCRが標的DNA又はRNAの検出に使用される。本発明ではペーパークロマトグラフィー方法で分離してシリカ膜に結合された核酸からリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応により標的RNAの検出可能性を実験した。ヒトβグロビンbeta-globin遺伝子に対する転写体塩基配列transcriptsequenceからデザインされたプライマーセット、順方向プライマーForwardprimer5 ́-CAAGGTGAACGTGGATGAAG-3 ́と逆方向プライマーReverseprimer5 ́-ATTAGCCACACCAGCCACCAC-3 ́を用いて、前記実施例3の1の方法でシリカ膜に結合された状態で分離した全体核酸部分から直径2mmサイズのシリカ膜をとり、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応に使用した。リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応は25unitsHelixCript商標ThermoReverseTranscriptase及び1.25unitsHelixAmp商標Hot-TaqDNApolymeraseと0.25mMdNTPmix、SYBRGreen蛍光試薬を含有する反応緩衝液、そしてβグロビンbeta-globin遺伝子の転写体塩基配列からデザインされたそれぞれ10pmolesのプライマーを用いて50°C40分、1cycle/95°C15分、1cycle/95°C20秒-55°C40秒-72°C1分、35cycles条件下でリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を行った。リアルタイム標的DNAが増幅したか否かはサイバーグリーンSYBRGreen蛍光試薬を用いてロータスピンRotor-Spin方式のQiagenRotorGeneQとサーモブロックThermoBlock方式のABI7900HTリアルタイム定量PCR分析器を用いて分析された。図5及び図6から確認できるように、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応の結果、全体核酸が結合されているシリカ膜から350bpサイズのβグロビンbeta-globinRNA転写体を検出することができ、2種類のリアルタイム定量PCR分析器の両方で本発明による超高速の核酸の分離方法を用いて分離した核酸を用いた分析が可能であることが確認できた。