液体試料中に存在し得る少なくとも第1および第2の標的核酸を同時に増幅するための方法であって、前記方法は、d前記試料由来の核酸と、逆転写酵素活性を有するポリメラーゼを含む1つ以上の増幅試薬を少なくとも2つの反応容器中で接触させる工程、ここで少なくとも第1の反応容器は少なくとも前記第1の標的核酸を含み、少なくとも第2の反応容器は少なくとも前記第2の標的核酸を含み、第2の標的核酸は第1の反応容器中には存在しない;e前記反応容器中、精製された前記核酸と、前記1つ以上の増幅試薬を、前記逆転写酵素活性を有するポリメラーゼによるRNAの転写が起こるのに適切な時間および条件下でインキュベートする工程;f前記反応容器中、精製された前記核酸と、前記1つ以上の増幅試薬を、前記第1および第2の標的核酸の存在または非存在を示す増幅反応が起こるのに充分な時間および条件下でインキュベートする工程の自動化工程を含み、工程d~fにおける転写および増幅の条件が、少なくとも第1および第2の標的核酸について同じである、方法。少なくとも1つの液体試料中に存在し得る少なくとも第1および第2の標的核酸を単離および同時増幅するための方法であって、前記方法は、a固体支持体物質と、液体試料を、標的核酸を含む核酸が固体支持体物質に固定化可能となるのに充分な時間および条件下で一緒に合わせる工程;b分離ステーション中で、固体支持体物質を、液体試料中に存在する他の物質から単離する工程;c固体支持体物質から液体試料を分離して、固体支持体物質を洗浄バッファで1回以上洗浄することにより、分離ステーション中の核酸を精製する工程;d精製された核酸と、逆転写酵素活性を有するポリメラーゼを含む1つ以上の増幅試薬を、少なくとも2つの反応容器中で接触させる工程、ここで少なくとも第1の反応容器は少なくとも前記第1の標的核酸を含み、少なくとも第2の反応容器は少なくとも前記第2の標的核酸を含み、第2の標的核酸は第1の反応容器中には存在しない;e前記反応容器中、精製された前記核酸と、前記1つ以上の増幅試薬を、前記逆転写酵素活性を有するポリメラーゼによるRNAの転写が起こるのに適切な時間および条件下でインキュベートする工程;f前記反応容器中、精製された前記核酸と、前記1つ以上の増幅試薬を、前記第1および第2の標的核酸の存在または非存在を示す増幅反応が起こるのに充分な時間および条件下でインキュベートする工程の自動化工程を含み、工程d~fにおける転写および増幅の条件が、少なくとも第1および第2の標的核酸について同じである、方法。少なくとも2つの標的核酸が同じ反応容器中で増幅される、前記請求項いずれか記載の方法。第1の標的核酸が第2の反応容器中に存在しない、前記請求項いずれか記載の方法。第1の標的核酸および第2の標的核酸が異なる生物由来である、前記請求項いずれか記載の方法。第1およびまたは第2の標的核酸が非ウイルス核酸である、前記請求項いずれか記載の方法。第1およびまたは第2の標的核酸が細菌核酸である、請求項6記載の方法。工程eにおいて、逆転写酵素活性を有するポリメラーゼのインキュベーションが30°C~75°Cの異なる温度で行なわれる、前記請求項いずれか記載の方法。工程eにおいて、該時間が30分までである、前記請求項いずれか記載の方法。逆転写酵素活性を有するポリメラーゼが、それぞれの野生型ポリメラーゼと比較して、核酸伸長速度の向上およびまたは逆転写酵素活性の向上を付与する変異を含むポリメラーゼである、前記請求項いずれか記載の方法。逆転写酵素活性を有し、変異を含むポリメラーゼが、aCS5DNAポリメラーゼbCS6DNAポリメラーゼcサーモトガマリティマDNAポリメラーゼdサーマスアクアチクスDNAポリメラーゼeサーマスサーモフィラスDNAポリメラーゼfサーマスフラバスDNAポリメラーゼgサーマスフィリホルミスDNAポリメラーゼhサーマス属sps17DNAポリメラーゼiサーマス属Z05DNAポリメラーゼjサーモトガネアポリタナDNAポリメラーゼkサーモシフォアフリカヌスDNAポリメラーゼlサーマスカルドフィラスDNAポリメラーゼからなる群より選択される、請求項8記載の方法。少なくとも2つの標的核酸がRNAおよびDNAを含む、前記請求項いずれか記載の方法。増幅された断片が450までの塩基を含む、前記請求項いずれか記載の方法。対照核酸が、いずれかの工程で、液体試料およびまたは精製された核酸に添加される、前記請求項いずれか記載の方法。工程fの後およびまたは工程f中に標的核酸の量を決定する工程をさらに含む、前記請求項いずれか記載の方法。液体試料中に存在し得る少なくとも2つの標的核酸を単離および同時増幅するための分析系であって、以下:固体支持体物質を含む分離ステーション、ここで前記分離ステーションは、液体試料中に含まれる標的核酸を分離および精製するように構築および配列される少なくとも2つの反応容器を含む増幅ステーション、ここで前記反応容器は、増幅試薬、少なくとも第1の反応容器中の少なくとも第1の精製された標的核酸および少なくとも第2の反応容器中の少なくとも第2の精製された核酸、ならびに逆転写酵素活性を有するポリメラーゼを含み、ここで第2の標的核酸は第1の反応容器中には存在せず、前記ポリメラーゼは、それぞれの野生型ポリメラーゼと比較して、核酸伸長速度の向上およびまたは逆転写酵素活性の向上を付与する変異をさらに含むのモジュールを含む、分析系。実施例以下の実施例には、本発明が実効され得る態様を記載する。実施例は限定されず、本発明の精神を逸脱することなく改変され得ることが当業者には明らかである。実施例1:この実施例には、単一の一般的な内部対照核酸を使用した、少なくとも第1および第2の標的核酸を単離および同時増幅するための方法が記載される。簡潔に、示される態様において、リアルタイムPCRは、同時にかつ細菌、ならびにDNAウイルスおよびRNAウイルスを含む数種の異なる標的のパネル上の同一の条件下で行われる。全ての試料は、同じ実験、すなわち同一の深ウェルプレートまたはマルチウェルプレートのそれぞれで処理され、分析された。以下の試料を調製して、続いて分析した:適切な標準または他の種類の標的が当業者には利用可能である。以下の表に列挙する装置は、それぞれの製造業者の指示書に従って使用した:試料調製のために、希釈液として以下の試薬を使用した:以下の希釈物は、予め調製して一晩保存した:それぞれの試料およびそれぞれの検体希釈物を、手動で深ウェルプレートにピペットで移し、それぞれの試料は、三重の分析のために3つの異なるウェルに添加した。HIVまたはHBV試料を含むそれぞれのウェルに、50ulの内部対照核酸を手動で添加した。定量的HIVアッセイのために、定量対照として働くRNAを添加した。定量的HIVアッセイのために、定量標準として働くRNAを添加した。定量的HBVアッセイのために、定量標準として働くDNAを添加した。前記対照核酸の配列は、全ての場合で同一であり、配列番号45~48の群から選択した。それぞれの対照核酸は以下のバッファ中に保存した:試料調製は、図1に示す模式図によるワークフローに従い、以下の試薬を使用して、HamiltonStar上で行なった:最終工程後、HamiltonStar装置のプロセスヘッドにより増幅試薬を含むそれぞれのマスターミックスを、それぞれのウェルに添加し、単離された核酸を含む液体とMmxを混合し、それぞれの得られた混合物を、増幅を実施したマイクロウェルプレートの対応するウェルに移した。以下のマスターミックスを使用した:増幅および検出のために、マイクロウェルプレートを自動プレートシーラーで密封して、プレートをLightCycler480に移した。以下のPCRプロフィールを使用した:プレPCRプログラムは、RNA鋳型の逆転写のための55、60および65°Cでの最初の変性およびインキュベーションを含む。3種類の温度でインキュベートすることは、わずかにミスマッチが生じた標的配列が低い温度でも転写され、RNA二次構造の形成が高い温度で抑制され、より効果的な転写がもたらされるという有利な効果を合わせる。PCRサイクルを2つの測定に分け、両方の測定は、1工程設定が適用される。55°Cでの最初の5サイクルにより、わずかにミスマッチした標的配列を予め増幅することにより包括性の増加が可能になり、第2の測定の45サイクルで、58°Cのアニーリング伸長温度を使用することにより特異性の増加がもたらされる。上述のマイクロウェルプレートに含まれる全ての試料に対してこのプロフィールを使用して、図2に示されるように全ての試料で増幅および検出を達成した。これは、増幅前の試料調製も成功裡に行われたことを示す。定性的および定量的HIV内部対照および定量的HBV内部対照についての結果は、明確さの目的で図2において別々に示される。対照も全ての場合で成功裡に増幅されたことが見られ得る。定量的設定におけるHIVおよびHBV標的の量は、定量標準として働く内部対照核酸との比較により計算した。実施例2:上述の一般的な増幅プロセスは、同一条件下であるが、別々の実験において種々の異なる標的核酸に対して行われた。それぞれの核酸の単離は、実施例1に記載されるように行なった。それぞれの一般的な内部対照核酸は、配列番号45~49から選択され、RNA標的について外装RNAおよびDNA標的についてλパックDNAであった。定性的RNAアッセイのために1試料あたり300粒子を添加し、定量的RNAアッセイのために3000および全DNAアッセイのために500を添加した。全ての標的に対して以下のPCRプロフィールを使用した:詳細に、以下の実験を行った:1HBV、HCVおよびHIVの定量的多重分析aマスターミックス分析感度LODそれぞれの検出されたウイルスについて、EDTA血漿について予想されるLODおよびその周囲で、いくつかの濃度レベル。ウイルスおよび濃度あたり1パネルを、濃度あたり少なくとも20回の妥当な反復実験で試験した。プロビット解析によりLODを決定した。HIVHIV1グループMについてのWHO標準の力価をIUmLに変換した。そのため、IUmLのHIV1グループMLODは、プロビット解析によるLOD:677IUmLプロビット解析によるLODについての95信頼区間:475~154IUmLHIV1グループOについての一次標準の力価を、CBERHIV1グループOパネルに対して再整列した;計算因子は0586である。そのため、HIV1グループOLODは、プロビット解析によるLOD:88cpmLプロビット解析によるLODについての95信頼区間:64~185cpmLHIV2についての一次標準の力価をCBERHIV2パネルに対して再整列した;計算因子は267である。そのため、HIV2LODは、プロビット解析によるLOD:3444cpmLプロビット解析によるLODについての95信頼区間:2189~8304cpmLHBVHCV2WNVの定量的分析マスターミックス分析感度LODウイルスについて、予想されるLODおよびその周辺でいくつかの濃度レベルを含むそれぞれの標準の連続希釈として独立パネルを調製した。ウイルスおよび濃度あたり1つのパネルを、濃度あたり少なくとも20回の妥当な反復実験により試験した。プロビット解析によりLODを決定した。3HBVの定量的分析マスターミックス分析感度LODHBV二次標準により4つの希釈パネル、すなわち200μLおよび500μLの試料インプット容量についてHBV陰性血清中2つ、ならびに200μLおよび500μLの試料インプット容量についてHBV陰性EDTA血漿中2つを調製した。それぞれのパネルは、予想されるLODおよびその周辺で7個の濃度レベルを含んだ。1マトリックス当たりの1つのパネルは、濃度レベルあたり≧21回の反復実験で試験した。妥当であるために少なくとも20回の反復実験が必要であった。95ヒット率でのプロビット解析および≧95ヒット率分析によりLODを決定した。概要LOD:EDTA血漿:95ヒット率でのプロビット解析により、EDTA血漿に対して200μL試料インプット容積につい82IUmLのLODおよび500μL試料インプットについて23IUmLのLODが生じた。これらの濃度についての95信頼区間範囲は、200μL試料インプット容積について48~260IUmLおよび500μL試料インプット容積について16~42IUmLであった。血清:95ヒット率でのプロビット解析により、血清に対して、200μL試料インプット容積について902IUmLおよび500μL試料インプット容積について41IUmLのLODが生じた。これらの濃度についての95信頼区間範囲は、200μL試料インプット容積について62~190IUmLおよび500μL試料インプット容積について24~100IUmLであった。直線性1つのEDTA血漿パネルおよび1つの血清パネルをHBV遺伝子型Aを使用して調製した。アッセイの予想される動的範囲の決定のために、12個の濃度レベルでそれぞれのパネルを分析した。全ての濃度レベルパネルメンバーを21回の反復実験で試験した。この試験は、500μLの試料インプット容積で行なった。濃度レベルは以下のように選択した:予想される量の下限未満で1つのレベル、予想されるLLOQで1つ、予想されるLLOQより上で1つ、中間レベル、量の上限でいくつかの濃度、および予想されるULOQより上で1つ。PM1220E09IUmL予想されるULOQより上PM1110E09IUmL予想されるULOQPM1010E08IUmL予想されるULOQ未満PM910E07IUmL中間濃度レベルPM810E06IUmL中間濃度レベルPM710E05IUmL中間濃度レベルPM610E04IUmL中間濃度レベルPM510E03IUmL中間濃度レベルPM6a20E02IUmL中間濃度レベルPM410E02IUmL中間濃度レベルPM350E01IUmL予想されるLLOQより上PM210E01IUmL予想されるLLOQPM140E00IUmL予想されるLLOQ未満直線性パネルの全ての妥当な試料について、観察されたHBVDNA力価をlog10力価に変換し、濃度レベル当たりの平均log10力価を計算した。この結果のグラフ表示を図13に示す。この結果のグラフ表示を図14に示す。概要直線性:平均log10観察力価のlog10偏差がlog10公称力価の±03内にある濃度範囲として規定される直線範囲はEDTA血漿について35E00IUmL~17E09IUmLおよび血清について33E00IUmL~17E09IUmLと決定された。量の下限はEDTA血漿および血清について40E00IUmLであることが見出された。4HCVの定量的分析マスターミックス分析感度LODHCV陰性EDTA血漿および血清において、200μLおよび500μLの試料インプット容積を使用して、RocheHCV二次標準により希釈パネルを調製した。それぞれの濃度レベルは21回の反復実験で試験した。妥当であるためには少なくとも≧20回の反復実験が必要である。95ヒット率でのプロビット解析および≧95ヒット率解析によりLODを決定した。概要LOD:195ヒット率でのプロビット解析により、EDTA血漿に対して、200μLの試料処理インプット容積について174IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について90IUmLのLODが生じた。これらの濃度についての95信頼区間は、200μL試料処理インプット容積について121~343IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について55~254IUmLである。295ヒット率でのプロビット解析の値は、血清に対して、200μL試料処理インプット容積について202IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について82IUmLである。これらの濃度についての95信頼区間は、200μL試料処理インプット容積について140~393IUmLおよび500μL試料処理インプット容積について58~150IUmLである。直線性HCVWHO標準に対して追跡可能なHCVaRNAのEDTA血漿パネルの1つの調製物および血清パネルの1つの調製物を分析した。連続希釈により直線性パネルを調製し、10個の異なる濃度で分析した。500μL試料処理インプット容積で試験を行った。濃度は以下のように選択した:予想される量の下限未満で1つのレベル、LLoQで1つのレベル、LLOQより上で1つのレベル、中間レベル、予想される量の上限でいくつかの濃度およびULoQまたはそれより上で1つ。全ての濃度について、21回の反復実験を試験した。PM120E08IUmL予想されるULoQより上PM210E08IUmL予想されるULoQPM310E07IUmL予想されるULoQ未満PM410E06IUmL中間濃度レベルPM510E05IUmL中間濃度レベルPM610E04IUmL力価整列のための中間濃度レベルPM710E03IUmL中間濃度レベルPM810E02IUmL予想されるLLoQより上PM910E01IUmL予想されるLLoQPM1080E00IUmL予想されるLLoQ未満この結果のグラフ表示を図15に示す。この結果のグラフ表示を図16に示す。概要直線性:平均log10観察力価のlog10偏差がlog10公称力価の±03以内である濃度範囲として規定した直線範囲は、EDTA血漿について487E00IUmL~122E08IUmLおよび血清について390E00IUmL~992E07IUmLと決定された。5HIVの定量的分析マスターミックス分析感度LODHIV1陰性EDTA血漿においてHIV1M二次標準により、200μLおよび500μLの試料インプット容積についての希釈パネルを調製した。それぞれの濃度レベルは21回の反復実験で試験した。妥当であるためには少なくとも≧20回の反復実験が必要である。95ヒット率でプロビット解析および≧95ヒット率解析によりLODを決定した。概要LOD195ヒット率でのプロビット解析により、200μLインプット容積について418cpmLおよび500μLインプット容積について189cpmLのLODが生じた。2これらの濃度についての95信頼区間範囲は、200μLインプット容積について309~749cpmLおよび500μLインプット容積について149~294cpmLである。直線性直線性動的範囲正確性試験に使用された試料は、HIV1細胞培養上清物質、HIV1グループMサブタイプBの希釈パネルからなった。連続希釈により直線性パネルを調製した。このパネルを10個の濃度レベルで分析した。濃度は以下のように選択した:予想される量の下限未満で1つのレベル、LLoQで1つ、LLoQより上で1つ、中間レベル、予想される量の上限でいくつかの濃度およびULoQより上で1つ。全ての濃度について、21回の反復実験を試験した。この直線性試験は、500μLインプット容積で行った:PM120E07cpmL予想されるULoQより上PM210E07cpmL予想されるULoQPM310E06cpmL予想されるULoQ未満PM410E05cpmL中間濃度レベルPM530E04cpmL力価整列についての中間濃度レベルPM610E04cpmL中間濃度レベルPM710E03cpmL中間濃度レベルPM810E02cpmL中間濃度レベルPM950E01cpmL予想されるLLoQより上PM1020E01cpmL予想されるLLoQPM1115E01cpmL予想されるLLoQ未満この結果のグラフ表示を図17に示す。概要直線性平均log10観察力価のlog10偏差がlog10公称力価の±03以内にある濃度範囲として規定した直線範囲は、15E01cpmL~20E07cpmLと決定された。