"生体サンプルからの核酸検体溶液の抽出方法で、前記方法は、生体サンプルを加熱室に入れるステップ;任意に、前記生体サンプルに溶媒を加えるステップ;前記生体サンプルを高圧加熱に曝すステップ;任意に、前記生体サンプルを遠心分離するステップ;および前記核酸検体を得るステップを含んでなる。前記高圧が、110~320kPa、特に115~250kPa、好ましくは120~200kPaの如き105~350kPaである、請求項1の方法。前記高圧加熱の継続時間が、10~90分、特に20~60分の如き5~210分である、先行する請求項の何れかの方法。前記生体サンプルが、生検サンプル、細胞サンプル、腫瘍サンプル、および生体液からなる群から選ばれる、先行する請求項の何れかの方法。前記生体液サンプルが、血液、血清、組織液、尿、糞、痰、脳脊髄液、唾液、涙、および乳頭吸引液からなる群から選ばれる、先行する請求項の何れかの方法。前記生体サンプルがパラフィン埋め込み組織である、先行する請求項の何れかの方法。前記溶媒が、水、DEPC処理水、生理食塩水、アルカリ溶液、および緩衝液からなる群から選ばれる、先行する請求項の何れかの方法。以下のステップ:任意に、遠心分離管の栓に穿孔するステップ;パラフィン埋め込み組織区画を遠心分離管に入れ、サンプルが液体に浸漬するように、純水またはアルカリ溶液を加えるステップ;前記サンプルを140~200kPaの圧力下、25~45分加熱するステップ;および前記サンプルを遠心分離機に掛けて、上澄み液を得るステップを含んでなる、先行する請求項の何れかの方法。生体サンプル中の核酸検体を検出する方法で、以下からなる:請求項1~8の何れか1項の方法によって前記核酸検体の溶液を得、および核酸検体を検出する。前記検出が、ポリメラーゼ連鎖反応によって行なわれる、請求項9の方法。前記核酸がDNAまたはRNAである、請求項9または10の方法。更に前記核酸検体の溶液濃縮することを含む、請求項9~11の何れか1項の方法。本発明は、一つには生体サンプルから核酸検体溶液を抽出する方法を提供し、その方法は、加熱容器に生体サンプルを入れるステップ;任意に、生体サンプルに溶解媒体溶媒とも言うを添加するステップ;生体サンプルを高圧加熱に曝すステップ;任意に、生体サンプルを遠心分離するステップ;および前記核酸検体を含む液体を得るステップからなる。一般的に、核酸検体溶液は、PCR等の引き続く検出に直接用いられ得る。これは、核酸抽出ステップを著しく簡便化する。ここに用いられるように、核酸検体とは、DNAやRNAを含む被分析目標核酸分子を意味する。サンプルの被分析核酸がハウスキーピング遺伝子である場合、こうして得られた溶液は、核酸の大コピー数の故に、高い核酸含有率を有し、引き続くPCR検出を促進する。被分析核酸のコピー数が少ない場合、核酸溶液は本発明の方法を用いて得られたあとで更に濃縮され得、それは核酸濃度を改善するようにクロマトグラフカラムによる濃縮が如き方法である。ここで用いられるように、任意にとは、選択される、または非必須のを意味する。任意にサンプルを遠心分離するとは、遠心分離をするかしないかは、環境にしたがって当業者によって選択し得ることを意味する。ここで用いられるように、高圧とは、標準環境圧力より高い圧力を表す。例えば、標準大気圧状態下の海面レベルの空気圧は、1気圧を表し、概ね101.3kPaと等しい。本発明の高圧は、圧力釜、オートクレーブなどの当業界において通常用いられる高圧装置によって達成され得る。最も一般的に用いられる高圧装置は、蒸気加熱装置である。高圧加熱中の温度は通常、常圧加熱中の温度よりも高いことは当業界においてよく知られている。圧力と温度の高圧加熱中の関係を推定するための幾つかの方法がある例えば、図6に示した飽和蒸気の温度と圧力の関係を示す比較表参照。これらの方法によれば、高圧加熱中の概略の温度を推定できる。例えば、蒸気圧力釜が250kPaのとき、温度は約127°Cである。本発明の高圧は、一般的に105kPa、例えば110kPa、115kPaである。蒸気釜に通常用いられる圧力は、約350kPaである。本発明の方法に用いられる高圧は、105~350kPa、例えば110~320kPa、特に115~250kPa、好ましくは120~200kPaである。異なる生体サンプルは、温度および圧力に対する許容範囲に関して相互に変化する。当業者は、被験サンプルの性質にしたがって、ルーティンの実験によって最適化高圧-温度および時間を見出し得る。例えば、サンプルが可溶性のとき例えば、腫瘍やヴィールスサンプル、加熱圧力および時間は減少する;生体サンプルが難溶性の場合例えばカンジダアルビカンス、加熱圧力および時間は増加する。加熱時間は、異なるサンプル、および異なる圧力の観点から5~210分間の範囲、例えば、10~90分間で変動する。特に、一般に用いられる加熱時間は、20~60分間である。加熱圧が低く、しかもサンプルの核酸が分離し難い上に、長時間の加熱、例えば4時間を要すときは、当業者は本発明の方法を評価する。例えば、パラフィン埋め込み組織区画サンプルが加工されるとき、一般的な加熱条件は、140~170kPaの圧力下で、25~45分間保持することである。カンジダアルビカンスサンプルが加工されるときは、一般的加熱条件は、140~170kPaの圧力下で、45~60分間保持することである。ここで用いられるように、生体サンプルは、動物、植物、微生物、または人体からの生体サンプルを含む被験核酸を含有するものを意味する。生体サンプルは、種々の新鮮な、凍結した、または固定されたサンプルで、例えば、組織生検サンプル、腫瘍サンプル、ホルマリン固定パラフィン埋め込み組織サンプルや、同様にバクテリア、菌類、ヴィールス、マイコプラズマなどのような微生物サンプルであり得る。通常の新鮮な生体サンプルは、血液、血清、組織液、尿、糞、痰、脳脊髄液、唾液、涙、乳頭吸引液、および培養細胞の如き生体液サンプル、患部から取り出した疾病組織の如き腫瘍サンプルなどである。一般的固定生体サンプルは、10ホルマリン固定パラフィン埋め込み組織である。本発明の方法は特に、長期パラフィン塊および保管部位を含むパラフィン埋め込み組織サンプルに適する。生体サンプルの加熱中に、サンプルは加熱容器に入れられる。一般的に用いられる加熱容器は、遠心分離機用チューブまたは管、例えば、栓付きの1.5mLまたは10mL遠心分離機用チューブが含まれる。好ましくは、チューブの栓は、高圧加熱中のガスの膨張による栓外れを防ぐように穿孔される。サンプルは、金網でシールしたエルレンマイヤーフラスコまたはフラスコ、或いはその他の加熱用ガス透過性の容器に入れられる。高圧加熱する前に、必要であれば生体サンプルに溶媒を加えてもよい。例えば、パラフィン埋め込み組織区分または区画を加熱する前に、0.1M苛性ソーダ溶液、例えば、200μlまたは1mlをサンプルが完全に液に漬かるように添加する。一般的に用いられる溶媒には、水、DEPC処理水、生理食塩水、アルカリ溶液、緩衝液などがある。一般的に用いられる緩衝液は、トリス塩酸緩衝液、酢酸-酢酸ソーダ緩衝液、グリシン-塩酸緩衝液、リン酸水素二ナトリウム-クエン酸ソーダ緩衝液等である。当業者は、生体サンプルそれ自体で既に大量の液体、例えば髄液を含み、追加の溶媒添加を要しないので、好んで使用する。高圧加熱ステップの後に、サンプルは任意に遠心分離機に掛けられ、上澄みを収集する。核酸は通常上澄み液に溶解され、続くPCRの如き操作に直接用いられる。遠心分離ステップが不可欠でないのが当業者に好ましい。核酸溶液の遠心分離の省略が引き続く実験PCR等に影響しなければ、遠心分離操作は不要である。本発明の好ましい態様において、以下のステップが含まれる:任意に遠心分離チューブのキャップに穿孔するステップ;パラフィン埋め込み組織区分例えば、1-2区分を、遠心分離チューブに入れるステップ、およびサンプルが液に漬かるように純水またはアルカリ溶液苛性ソーダ水溶液等を添加するステップ;前記サンプルを140~200kPaで25~45分間加熱するステップ;およびサンプルを遠心分離して上澄みを得るステップ。上澄み液は、引き続くPCR反応に直接用いられる。本発明の別の観点は、生体サンプル中の核酸検体を検出する方法の提供に関し、その方法は、上述のような方法によって、核酸検体の溶液を得、核酸検体を検出することからなる。特に好ましい態様において、検出はポリメラーゼ連鎖反応PCRによって行なわれる。本発明は、さらに以下の実施例を参照して例示される。これら実施例は、本願発明の理解を促進するべく提供されるが、本願発明の実施を限定するように解されてはならない。[実施例1]ヒト結腸癌Kラスエクソン2の遺伝子検出1.遠心分離チューブの調製:1.5ml遠心分離チューブのキャップは、アルコールバーナーを用いて加熱された細い針によって細かな穴を開け、高圧下でガスの膨張による栓外れを防ぐ。2.サンプリング:ヒト結腸癌パラフィン埋め込み組織区分5~10μmを1から2切れ、1.5mlの遠心分離用チューブに入れた。500μlの0.1M苛性ソーダ水溶液pH11を加え、サンプルを液に完全に浸漬させた。3.高圧:高圧加熱は、30~45分間実施リレン製電気圧力釜、モデルDYG-5B、操作圧力140-170kPa、圧力限界200kPa4.PCR:高圧プロセスが完了した後で、冷却なしで直ちに遠心分離ステップ13,000rpm,5分間に付された。1-2μlの上澄み液または1:10の上澄み液の希釈を1-2μlが指示書にしたがってPCR分析に用いられた。5.電気泳動法:PCR製品が電気泳動法によって検出された。もし製品の量が少な過ぎれば、ネステッドPCRで実施できる。6.PCR品の配列決定結果:図1Aおよび図1B結果は、高圧加熱法を通してパラフィン埋め込み組織サンプルから得られた核酸サンプルは、PCR品の直接配列決定の要求に適合していることを示した。[実施例2]ヒト結腸癌レーザー顕微解剖された腫瘍細胞のK-ラスエクソン2の遺伝子検出ある量のパラフィン区分のレーザー顕微解剖された腫瘍細胞が、実施例1の方法にしたがって加工されたもし細胞の量が少なければ、溶液量を少なくした。PCRに上澄み液が用いられた。PCR品の配列決定結果が図2に示された。上述の結果は、本発明の高圧加熱法は、遺伝子型分析や診断に用いられ得る信頼できる量の核酸を得るために少量の細胞に適用し得る。少量の細胞または組織の遺伝子型分析および診断微細針吸収腫瘍組織の如きの成功率は増加し、それは治療の薬剤選択をするために外科手術の機会を逸していた癌患者に極めて重要である。[実施例3]パラフィン埋め込み組織中の結核菌の核酸増幅検出結核菌によって感染の疑いのあるパラフィン埋め込み組織区分、1~2切れが実施例1と本質的に同じ方法によって加工され、加熱時間は20-30分であった。上澄み液がリアルタイムPCR蛍光プローブがPCRプレミックス予備混合物に添加されたに用いられた。結果は、許容量のバクテリアDNAが、高圧加熱法によってパラフィン埋め込み組織から得られ、臨床的同定および結核菌の診断を援助することを示した。[実施例4]カンジダアルビカンスの遺伝子検出カンジダアルビカンスの疑いのあるヒト病変部のスワッブ綿棒に分泌物を付けたものを0.1Mの苛性ソーダ水溶液pH11200μlで洗浄し、実施例1と本質的に同じ方法で処理し、加熱時間は35-50分であった。上澄み液が蛍光PCR蛍光プローブがPCRプレミックスに入れられたに用いられ、結果が図3に示された。カンジダアルビカンスは菌類に属し、バクテリアの数倍~数十倍大きい。極めて肉厚の細胞は実験中に一般的アプローチでは分裂させるのが困難で、PCRの感度に影響する。近年、菌類の感染が著しく増加し、それは抗菌剤の濫用、誤用から起こる細菌分解異常、およびホルモンや抗がん剤の投与から起こる免疫不全に関係する。病原性菌類は多くのタイプがあり、その薬剤許容度は互いに異なる。遺伝子配列決定と異なるタイプの菌類間の区別が、最近は益々精密になっている。前記の結果は、肉厚でしっかりした細胞壁を有する菌類にとって、高圧加熱法は、遺伝子配列を区別し、菌類のタイプを直接同定するのに信頼できる量の核酸を容易に得られるから、極めて有利である。[実施例5]HBVヴィールスヒト血清の検出HBV罹患者から採取した血清、5μlを0.1M苛性ソーダ水溶液pH11、200μlと混ぜ、本質的に実施例1と同じ方法によって処理し、加熱時間は25-40分であった。上澄み液をPCRに用いた。電気泳動の結果を図4に示した。前記結果から、高圧加熱法が臨床試験のための血清のトレース量から信頼できる量でヴィールス性核酸を得るのに用い得ることが示された。[実施例6]新鮮な組織、パラフィン埋め込み組織および培養細胞におけるmRNA検出1.サンプリングa.ヒト胃腸基質腫瘍のパラフィン区分5-10μm、1-2切れb.ヒト結腸癌のパラフィン埋め込み組織5-10μm、1-2切れc.ヒト甲状腺癌の新鮮な組織1/2粒子サイズ、みじん切りd.培養細胞サンプルは、1.5ml遠心分離用チューブに入れ、適当量の0.1M苛性ソーダ水溶液pH11をサンプルが溶液に完全に漬かるように加えた。得られた溶液は、徹底的に混ぜた。2.高圧:加熱時間は30-45分間操作圧力;140-170kPa、圧力上限;200kPa3.逆転写:RNA抽出中に、タイムリーに高圧処理が必要で、逆転写プレミックスが予め作られる。高圧プロセスが完了したときに、遠心分離用チューブが即時遠心分離のあとで、2-5μlの上澄み液がRNAの急速な崩壊を防ぐように逆転写のために急いで用いられた。逆転写プレ-ミックス:逆転写緩衝剤、0.2mMのdNTPs、0.2μgのランダムプライマーまたは0.2μMの特定のプライマー、50UM-mLVの逆転写、0.01MDTT、DEPC水を最終容量20μlとなるように加えた。42°Cで60分間、95°Cで5分間。4.PCR:逆転写が完了後即時遠心分離が実施された、1-5μlの上澄み液をPCRプレミックスに添加した1XPCR緩衝液、0.2mMdNTP、0.4-0.5μMの特定のプライマー、水を加えて最終25-50μlとした。PCR:94°Cで1分30秒間94°Cで30秒、55°Cで30秒、72°Cで20秒、30-35サイクル72°Cで2分間。5.GAPDHmRNART-PCR電気泳動図-226bp:図5参照前記結果によれば、高圧加熱法は信頼できる量でDNAおよびRNAを同時に得るために用い得、特定の遺伝子配列フラグメントDNAおよび生体マーカーmRNAの検出のために用い得る。[実施例7]生体サンプルの核酸分離への異なる温度および高圧の効果1.実施例1と同じ方法にしたがって遠心分離用チューブが調製された。2.サンプリング1HBV罹患々者からの血清5μlを0.1M苛性ソーダ水溶液pH11100μlに添加混合された。2HSV罹患々者から採取したスワーブを0.1M苛性ソーダ水溶液pH11100μlで洗浄3腫瘍患者から採取した7μMのパラフィン埋め込み組織区分を2切れ0.1M苛性ソーダ水溶液pH11、500μlに入れた。3.圧力釜のタイプ1リレンブランドの電気圧力釜、モデルDYG-5B2台湾製CIRRUSCR-3560CG-Mオートクレーブ4.方法前記3個の生体サンプルがリレンブランドの電気圧力釜モデルDYG-5Bおよび台湾製CIRRUSCR-3560CG-Mオートクレーブをそれぞれ用いて、異なる温度で異なる時間、高圧処理に付された。5.結果表1に結果を示した。実験結果から、異なる生体サンプルは、高圧処理の時間および圧力の許容範囲において変化することが分かった。"