"抗原に対するpH58でのKDとpH74でのKDの比であるKD/KDの値が2以上である抗原結合分子。KD/KDの値が10以上である請求項1に記載の抗原結合分子。KD/KDの値が40以上である請求項1に記載の抗原結合分子。少なくとも1つのアミノ酸がヒスチジンで置換され又は少なくとも1つのヒスチジンが挿入されていることを特徴とする請求項1~3いずれかに記載の抗原結合分子。アンタゴニスト活性を有することを特徴とする請求項1~4いずれかに記載の抗原結合分子。膜抗原又は可溶型抗原に結合することを特徴とする請求項1~5いずれかに記載の抗原結合分子。抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項1~6いずれかに記載の抗原結合分子。請求項1~7いずれかに記載の抗原結合分子を含む医薬組成物。抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより抗原結合分子の薬物動態を向上させる方法。抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法。抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法。抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法。抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法。抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法。抗原に対するpH58でのKDとpH74でのKDの比であるKD/KDの値を2以上とすることを特徴とする請求項9~14いずれかに記載の方法。KD/KDの値を10以上とすることを特徴とする請求項9~14いずれかに記載の方法。KD/KDの値を40以上とすることを特徴とする請求項9~14いずれかに記載の方法。抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより薬物動態を向上させる方法。抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法。抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法。抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法。抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法。抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法。ヒスチジンへの置換又はヒスチジンの挿入により、pH58での抗原結合活性とpH74での抗原結合活性の比であるKD/KDの値がヒスチジン置換又は挿入前と比較して大きくなることを特徴とする請求項18~23いずれかに記載の方法。抗原結合分子がアンタゴニスト活性を有することを特徴とする請求項9~24いずれかに記載の方法。抗原結合分子が膜抗原又は可溶型抗原に結合することを特徴とする請求項9~25いずれかに記載の方法。抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項9~26いずれかに記載の方法。以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法、pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程。pH67~pH100における抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性の2倍以上である抗体を選択することを特徴とする請求項28に記載のスクリーニング方法。以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法、pH67~pH100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程。以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程。以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法、抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程。第一のpHがpH67~pH100、第二のpHが40~pH65であることを特徴とする請求項31または32に記載のスクリーニング方法。抗原結合分子が、抗原結合分子中の少なくとも1つ以上のアミノ酸がヒスチジンで置換された又は少なくとも1つのヒスチジンが挿入された抗原結合分子である請求項28~33いずれかに記載のスクリーニング方法。血漿中滞留性が優れた抗原結合分子を得ることを目的とする請求項28~33いずれかに記載のスクリーニング方法。抗原に2回以上結合することができる抗原結合分子を得ることを目的とする請求項28~33いずれかに記載のスクリーニング方法。結合可能な抗原の数が抗原結合部位より多い抗原結合分子を得ることを目的とする請求項28~33いずれかに記載のスクリーニング方法。細胞外で結合した抗原を細胞内で解離する抗原結合分子を得ることを目的とする請求項28~33いずれかに記載のスクリーニング方法。抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれ、抗原と結合していない状態で細胞外に放出される抗原結合分子を得ることを目的とする請求項28~33いずれかに記載のスクリーニング方法。血漿中抗原消失能が増加した抗原結合分子を得ることを目的とする請求項28~33いずれかに記載のスクリーニング方法。抗原結合分子が医薬組成物として用いられる抗原結合分子である請求項28~40いずれかに記載のスクリーニング方法。抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項28~41いずれかに記載のスクリーニング方法。以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法、pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程、で選択された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法、pH67~pH100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法、抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。第一のpHがpH67~pH100、第二のpHが40~pH65であることを特徴とする請求項45または46に記載の製造方法。抗原結合分子中の少なくとも1つ以上のアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入する工程をさらに含む請求項43~47いずれかに記載の製造方法。抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項43~48いずれかに記載の製造方法。請求項43~49いずれかに記載の製造方法により製造された抗原結合分子を含む医薬組成物。本発明はこのような状況に鑑みて為されたものであり、その目的は抗原結合分子が抗原に複数回結合する方法、抗原結合分子の薬物動態を向上させる方法、複数回抗原に結合できる抗原結合分子、薬物動態が改善された抗原結合分子、当該抗原結合分子を含む医薬組成物、およびそれらの製造方法を提供することにある。本発明者らは、抗原結合分子などの抗原結合能を有するポリペプチドの抗原に複数回結合する方法、血漿中半減期血中半減期を改善薬物動態を向上する方法について、鋭意研究を行った。その結果、本発明者らは、血漿中血中でのpHにおける抗原結合活性と比較して早期エンドソーム内でのpHにおける抗原結合活性が弱い抗原結合分子は抗原に複数回結合し、血漿中半減期が長いことを見出した。本発明は、抗原結合分子が抗原に複数回結合する方法、抗原結合分子の薬物動態を向上する方法、複数回抗原に結合できる抗原結合分子、薬物動態が向上した抗原結合分子、薬物動態が向上した抗原結合分子の製造方法などに関し、より具体的には、1抗原に対するpH58でのKDとpH74でのKDの比であるKD/KDの値が2以上である抗原結合分子、2KD/KDの値が10以上である1に記載の抗原結合分子、3KD/KDの値が40以上である1に記載の抗原結合分子、4少なくとも1つのアミノ酸がヒスチジンで置換され又は少なくとも1つのヒスチジンが挿入されていることを特徴とする1~3いずれかに記載の抗原結合分子、5アンタゴニスト活性を有することを特徴とする1~4いずれかに記載の抗原結合分子、6膜抗原又は可溶型抗原に結合することを特徴とする1~5いずれかに記載の抗原結合分子、7抗原結合分子が抗体であることを特徴とする1~6いずれかに記載の抗原結合分子、81~7いずれかに記載の抗原結合分子を含む医薬組成物、9抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより抗原結合分子の薬物動態を向上させる方法、10抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法、11抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法、12抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法、13抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法、14抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法、15抗原に対するpH58でのKDとpH74でのKDの比であるKD/KDの値を2以上とすることを特徴とする9~14いずれかに記載の方法、16KD/KDの値を10以上とすることを特徴とする9~14いずれかに記載の方法、17KD/KDの値を40以上とすることを特徴とする9~14いずれかに記載の方法、18抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより薬物動態を向上させる方法、19抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法、20抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法、21抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法、22抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法、23抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法、24ヒスチジンへの置換又はヒスチジンの挿入により、pH58での抗原結合活性とpH74での抗原結合活性の比であるKD/KDの値がヒスチジン置換又は挿入前と比較して大きくなることを特徴とする18~23いずれかに記載の方法、25抗原結合分子がアンタゴニスト活性を有することを特徴とする9~24いずれかに記載の方法、26抗原結合分子が膜抗原又は可溶型抗原に結合することを特徴とする9~25いずれかに記載の方法、27抗原結合分子が抗体であることを特徴とする9~26いずれかに記載の方法、28以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法、pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程、29pH67~pH100における抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性の2倍以上である抗体を選択することを特徴とする28に記載のスクリーニング方法、30以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法、pH67~pH100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程、31以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、32以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法、抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、33第一のpHがpH67~pH100、第二のpHが40~pH65であることを特徴とする31または32に記載のスクリーニング方法、34抗原結合分子が、抗原結合分子中の少なくとも1つ以上のアミノ酸がヒスチジンで置換された又は少なくとも1つのヒスチジンが挿入された抗原結合分子である28~33いずれかに記載のスクリーニング方法、35血漿中滞留性が優れた抗原結合分子を得ることを目的とする28~33いずれかに記載のスクリーニング方法、36抗原に2回以上結合することができる抗原結合分子を得ることを目的とする28~33いずれかに記載のスクリーニング方法、37結合可能な抗原の数が抗原結合部位より多い抗原結合分子を得ることを目的とする28~33いずれかに記載のスクリーニング方法、38細胞外で結合した抗原を細胞内で解離する抗原結合分子を得ることを目的とする28~33いずれかに記載のスクリーニング方法、39抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれ、抗原と結合していない状態で細胞外に放出される抗原結合分子を得ることを目的とする28~33いずれかに記載のスクリーニング方法、40血漿中抗原消失能が増加した抗原結合分子を得ることを目的とする28~33いずれかに記載のスクリーニング方法、41抗原結合分子が医薬組成物として用いられる抗原結合分子である28~40いずれかに記載のスクリーニング方法、42抗原結合分子が抗体であることを特徴とする28~41いずれかに記載のスクリーニング方法、43以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法、pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程、で選択された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程、44以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法、pH67~pH100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程、45以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程、46以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法、抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程、47第一のpHがpH67~pH100、第二のpHが40~pH65であることを特徴とする45または46に記載の製造方法、48抗原結合分子中の少なくとも1つ以上のアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入する工程をさらに含む43~47いずれかに記載の製造方法、49抗原結合分子が抗体であることを特徴とする43~48いずれかに記載の製造方法、5043~49いずれかに記載の製造方法により製造された抗原結合分子を含む医薬組成物、を提供するものである。本発明によって、1分子の抗原結合分子を複数の抗原に繰り返し結合させる方法が提供された。1分子の抗原結合分子が複数の抗原に結合することで抗原結合分子の薬物動態を向上させ、invivoにおいて通常の抗原結合分子よりも優れた効果を発揮させることができる。発明を実施するための形態本発明は、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法を提供する。より具体的には抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することを特徴とする抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法を提供する。さらに本発明は、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域中のアミノ酸を置換、欠失、付加及び/又は挿入することを特徴とする抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法を提供する。又、本発明は、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法を提供する。より具体的には抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することを特徴とする、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法を提供する。さらに本発明は、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域中のアミノ酸を置換、欠失、付加及び/又は挿入することを特徴とする抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法を提供する。又、本発明は、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法を提供する。より具体的には抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することを特徴とする、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法を提供する。さらに本発明は、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域中のアミノ酸を置換、欠失、付加及び/又は挿入することを特徴とする細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法を提供する。又、本発明は、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法を提供する。より具体的には抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することを特徴とする、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法を提供する。さらに本発明は、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域中のアミノ酸を置換、欠失、付加及び/又は挿入することを特徴とする抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法を提供する。又、本発明は、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。より具体的には抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することを特徴とする、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。さらに本発明は、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域中のアミノ酸を置換、欠失、付加及び/又は挿入することを特徴とする抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。さらに、本発明は、抗原結合分子の薬物動態を向上する方法を提供する。より具体的には、抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原結合分子の薬物動態を向上する血漿中滞留性を長くする方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することを特徴とする薬物動態を向上する方法を提供する。さらに本発明は、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域中のアミノ酸を置換、欠失、付加及び/又は挿入することを特徴とする薬物動態を向上する方法を提供する。さらに、本発明は、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。より具体的には、抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入することを特徴とする抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。さらに本発明は、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域中のアミノ酸を置換、欠失、付加及び/又は挿入することを特徴とする抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。本発明において、薬物動態の向上、薬物動態の改善または優れた薬物動態は、血漿中血中滞留性の向上、血漿中血中滞留性の改善、優れた血漿中血中滞留性と言い換えることが可能であり、これらの語句は同じ意味で使用される。本発明において、酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くするとは、抗原結合分子のpH40~pH65での抗原結合活性をpH67~pH100での抗原結合活性より弱くすることを意味する。好ましくは、抗原結合分子のpH55~pH65での抗原結合活性をpH70~pH80での抗原結合活性より弱くすることを意味し、特に好ましくは、抗原結合分子のpH58での抗原結合活性をpH74での抗原結合活性より弱くすることを意味する。従って、本発明において酸性pHとは通常、pH40~pH65であり、好ましくはpH55~pH65であり、特に好ましくはpH58である。又、本発明において中性pHとは通常、pH67~pH100であり、好ましくは、pH70~pH80であり、特に好ましくはpH74である。本発明において、抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能より弱くするという表現は、抗原結合分子の中性での抗原結合能を酸性でのpHにおける抗原結合能よりも高くすると表現することもできる。つまり、本発明においては、抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能と中性pHにおける抗原結合能の差を大きくすればよい例えば、後述のようにKD/KDの値を大きくすればよい。抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能と中性pHにおける抗原結合能の差を大きくするためには、例えば、酸性pHにおける抗原結合能を低くしてもよいし、中性pHにおける抗原結合能を高くしてもよいし、又は、その両方でもよい。抗原の結合活性を測定する際のpH以外の条件は当業者が適宜選択することが可能であり、特に限定されないが、例えば、実施例に記載のようにMESバッファー、37°Cの条件において測定することが可能である。又、抗原結合分子の抗原結合活性の測定は当業者に公知の方法により行うことが可能であり、例えば、実施例に記載のようにBiacoreGEHealthcareなどを用いて測定することが可能である。抗原が可溶型抗原である場合は、抗原結合分子を固定化したチップへの抗原をアナライトとして流すことで可溶型抗原への結合能を評価することが可能であり、抗原が膜型抗原である場合は、抗原を固定化したチップへ抗原結合分子をアナライトとして流すことで膜型抗原への結合能を評価することが可能である。本発明において、酸性pHにおける抗原結合活性が中性pHにおける抗原結合活性よりも弱い限り、酸性pHにおける抗原結合活性と中性pHにおける抗原結合活性の差は特に限定されないが、好ましくは抗原に対するpH58でのKDとpH74でのKDDissociationconstant:解離定数の比であるKD/KDの値が2以上であり、さらに好ましくはKD/KDの値が10以上であり、さらに好ましくはKD/KDの値が40以上である。KD/KDの値の上限は特に限定されず、当業者の技術において作製可能な限り、400、1000、10000等、いかなる値でもよい。抗原結合活性の値として抗原が可溶型抗原の場合はKD解離定数を用いることが可能であるが、抗原が膜型抗原の場合は見かけのKDApparentdissociationconstant:見かけの解離定数を用いることが可能である。KD解離定数、および、見かけのKD見かけの解離定数は、当業者公知の方法で測定することが可能であり、例えばBiacoreGEhealthcare、スキャッチャードプロット、FACS等を用いることが可能である。又、本発明においては、酸性pHにおける抗原結合活性と中性pHにおける抗原結合活性の差を示す他の指標として、例えば、解離速度定数であるkdDissociationrateconstant:解離速度定数を用いることも可能である。結合活性の差を示す指標としてKD解離定数の代わりにkd解離速度定数を用いる場合、抗原に対するpH58でのkd解離速度定数とpH74でのkd解離速度定数の比であるkdkdの値は、好ましくは2以上であり、さらに好ましくは5以上であり、さらに好ましくは10以上であり、より好ましくは30以上である。kdkdの値の上限は特に限定されず、当業者の技術常識において作製可能な限り、50、100、200等、如何なる値でもよい。抗原結合活性の値として抗原が可溶型抗原の場合はkd解離速度定数を用いることが可能であるが、抗原が膜型抗原の場合は見かけのkdApparentdissociationrateconstant:見かけの解離速度定数を用いることが可能である。kd解離速度定数、および、見かけのkd見かけの解離速度定数は、当業者公知の方法で測定することが可能であり、例えばBiacoreGEhealthcare、FACS等を用いることが可能である。なお本発明において異なるpHで抗原結合分子の抗原結合活性を測定する際は、pH以外の条件は同一とすることが好ましい。抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くする方法pH依存的な結合能を付与する方法は特に限定されず、如何なる方法により行われてもよい。例えば抗原結合分子中のアミノ酸をヒスチジンに置換する、又は抗原結合分子中にヒスチジンを挿入することによりpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くする方法を挙げることができる。抗体中のアミノ酸をヒスチジンで置換することによりpH依存性の抗原結合活性を抗体に付与できることは既に知られているFEBSLetter3098588。ヒスチジン変異置換又は挿入が導入される行われる位置は特に限定されず、変異又は挿入前と比較してpH58における抗原結合活性がpH74における抗原結合活性より弱くなるKD/KDの値が大きくなる限り、如何なる部位でもよい。例えば、抗原結合分子が抗体の場合には、抗体の可変領域などを挙げることができる。ヒスチジン変異又は挿入が導入される行われる数は当業者が適宜決定することができ、1箇所のみをヒスチジンで置換してもよいし、又は1箇所のみにヒスチジンを挿入してもよいし、2箇所以上の複数箇所をヒスチジンで置換してもよいし、又は2箇所以上の複数箇所にヒスチジンを挿入してもよい。又、ヒスチジン変異以外の変異ヒスチジン以外のアミノ酸への変異を同時に導入してもよい。さらに、ヒスチジン変異とヒスチジン挿入を同時に行ってもよい。ヒスチジンへの置換又はヒスチジンの挿入は当業者に公知のアラニンscanningのアラニンをヒスチジンに置き換えたヒスチジンscanningなどの方法によりランダムに行ってもよく、ヒスチジン変異又は挿入がランダムに導入された抗原結合分子ライブラリーの中から、変異前と比較してKD/KDの値が大きくなった抗原結合分子を選択してもよい。抗原結合分子のアミノ酸をヒスチジンに置換又は抗原結合分子のアミノ酸にヒスチジンを挿入する場合、特に限定されないが、ヒスチジン置換又は挿入後の抗原結合分子のpH74における抗原結合活性が、ヒスチジン置換又は挿入前の抗原結合分子のpH74における抗原結合活性と同等であることが好ましい。ここで、ヒスチジン置換又は挿入後の抗原結合分子のpH74における抗原結合活性が、ヒスチジン置換又は挿入前の抗原結合分子のpH74における抗原結合活性と同等であるとは、ヒスチジン置換又は挿入後の抗原結合分子が、ヒスチジン置換又は挿入前の抗原結合分子が有する抗原結合活性の10以上、好ましくは50以上、さらに好ましくは80以上、より好ましくは90以上を維持していることを言う。ヒスチジン置換又は挿入により抗原結合分子の抗原結合活性が低くなった場合には、抗原結合分子中の1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、付加及び/又は挿入などにより抗原結合活性をヒスチジン置換又は挿入前の抗原結合活性と同等にしてもよい。本発明においては、そのようなヒスチジン置換又は挿入後に1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、付加及び/又は挿入を行うことにより結合活性が同等となった抗原結合分子も含まれる。又、抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くする他の方法として、抗原結合分子中のアミノ酸を非天然型アミノ酸に置換又は抗原結合分子中のアミノ酸に非天然型アミノ酸を挿入する方法を挙げることができる。非天然アミノ酸は人為的にpKaをコントロールすることができることが知られているAngewChemIntEd20054434、ChemSocRev2004Sep103342230、AminoAcids19991634579。従って、本発明においては上述のヒスチジンの代わりに非天然型アミノ酸を用いることが可能である。又、上述のヒスチジン置換及び/又は挿入と、非天然型アミノ酸の置換及び/又は挿入は、同時に行ってもよい。本発明で用いられる非天然型アミノ酸は如何なる非天然型アミノ酸でもよく、当業者に公知の非天然型アミノ酸等を用いることが可能である。さらに、抗原結合分子が抗体定常領域を含む物質である場合、抗原結合分子のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くする他の方法として、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域を改変する方法を挙げることができる。このような抗体定常領域の改変の具体例としては、例えば実施例に記載の定常領域に置換する方法を挙げることが出来る。また、抗体定常領域の改変方法としては、例えば、定常領域のアイソタイプIgG1、IgG2、IgG3、IgG4を複数検討し、pH58における抗原結合活性が低下するpH58における解離速度が速くなるアイソタイプを選択する方法が挙げられる。さらに野生型アイソタイプのアミノ酸配列野生型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4アミノ酸配列にアミノ酸置換を導入することで、pH58における抗原結合活性を低下させるpH58における解離速度が速くする方法が挙げられる。アイソタイプIgG1、IgG2、IgG3、IgG4によって抗体定常領域のヒンジ領域の配列が大きく異なり、ヒンジ領域のアミノ酸配列の違いは抗原結合活性に大きく影響を与えるため、抗原やエピトープの種類によって適切なアイソタイプを選択することでpH58における抗原結合活性が低下するpH58における解離速度が速くするアイソタイプを選択することが可能である。また、ヒンジ領域のアミノ酸配列の違いは抗原結合活性に大きく影響を与えることから、野生型アイソタイプのアミノ酸配列のアミノ酸置換箇所としては、ヒンジ領域が望ましいと考えられる。上述の方法等により抗原結合物質のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くするKD/KDの値を大きくする場合、特に限定されないが、KD/KDの値が基の抗体と比較して通常、2倍以上、好ましくは5倍以上、さらに好ましくは10倍以上となっていることが好ましい。本発明において薬物動態が向上するとは、抗原結合分子がヒト、マウス、ラット、サル、ウサギ、イヌなどの動物に投与されてから、血漿中から消失するまで例えば、細胞内で分解される等して抗原結合分子が血漿中に戻ることが不可能な状態になるまでの時間が長くなることのみならず、抗原結合分子が投与されてから血漿中から消失するまでの間に抗原に結合可能な状態例えば、抗原結合分子が抗原に結合していない状態で血漿中に滞留する時間が長くなることも含む。抗原結合分子が血漿中に存在していても、その抗原結合分子にすでに抗原が結合している場合は、その抗原結合分子は新たな抗原に結合できない。そのため抗原結合分子が抗原に結合していない時間が長くなれば、新たな抗原に結合できる時間が長くなり新たな抗原に結合できる機会が多くなり、生体内で抗原が抗原結合分子に結合していない時間を減少させることができる言い換えれば、抗原に抗原結合分子が結合している時間を長くすることができる。例えば血漿中などの生体内に存在する抗原抗原結合分子に結合している分子と抗原結合分子に結合していない抗原の総量に対する、抗原結合分子に結合している抗原の割合は、通常、抗原結合分子投与後、一定時間が経過すると減少していく。しかし、抗原結合分子が抗原に結合可能な状態で滞留する時間が長くなれば、その減少を抑制例えば、減少の度合いを少なくする、等することが可能となり、結果として抗体投与から一定期間経過した後の生体内に存在する抗原に対する、抗原結合分子に結合している抗原の割合が高くなる。つまり、本発明の薬物動態の向上は、必ずしも抗原結合分子が投与されてから抗原結合分子が消失するまでの時間が延長される長くなる必要はない。たとえ抗原結合分子が投与されてから消失するまでの時間に変化がなくても、抗原結合分子が抗原に結合できる状態例えば、抗原結合分子が抗原に結合していない状態で血漿中に滞留している時間が長くなっている場合、生体内の抗原が抗原結合分子に結合していない時間が減少している言い換えれば、抗原に抗原結合分子が結合している時間が長くなっている場合、又は生体内に存在する抗原に対する抗原結合分子に結合している抗原の割合が高くなっている場合のいずれの場合も、本発明の薬物動態の向上に含まれる。従って、本発明の薬物動態の向上には少なくとも以下の~が含まれる。抗原結合分子が投与されてから、抗原結合分子が血漿中から消失するまでの時間の延長。抗原結合分子が投与されてから、抗原結合分子が抗原に結合可能な状態で血漿中に存在する時間の延長。抗原結合分子が投与されてから、生体内の抗原が抗原結合分子と結合していない時間の減少生体内の抗原に抗原結合分子が結合している時間の延長。生体内に存在する抗原に対する抗原結合分子に結合した抗原の割合の上昇。又、抗原が血漿中に存在する可溶型抗原の場合、抗原結合分子の薬物動態血漿中からの消失速度が同等であっても、抗原結合分子が結合している抗原の消失が早くなることがある。これは抗原の薬物動態を低下させる血漿中からの消失を早くすることで、抗原に対する相対的な抗原結合分子の薬物動態が向上していることにつながり、すなわち、抗原結合分子が抗原に結合可能な状態で血漿中に存在する時間の延長につながる。従って、本発明の抗原結合分子の薬物動態の向上の一態様として、抗原結合分子が投与されてから、可溶型抗原が血漿中から消失する速さ抗原結合分子の血漿中抗原消失能の上昇も含まれる。本発明において、1分子の抗原結合分子が複数の抗原に結合したかどうかは、抗原が膜型抗原の場合、抗原結合分子の薬物動態が向上したかどうかで判断することが可能である。薬物動態が向上したか否かは、以下のようにして判断することが可能である。例えば抗原結合分子が投与されてから抗原結合分子が消失するまでの時間が延長されたか否かは、抗原結合分子の血漿中半減期、平均血漿中滞留時間、血漿中クリアランス等のいずれかのパラメーターファーマコキネティクス演習による理解南山堂を測定することにより判断することが可能である。例えば、抗原結合分子をマウス、ラット、サル、ウサギ、イヌ、ヒトなどに投与した場合、血漿中半減期が長くなった又は平均血漿中滞留時間が長くなった場合等には抗原結合分子の薬物動態が向上したと言える。これらのパラメーターは当業者に公知の方法により測定することが可能であり、例えば、薬物動態解析ソフトWinNonlinPharsightを用いて、付属の手順書に従いNoncompartmental解析することによって適宜評価することができる。又、抗原結合分子が投与されてから消失するまでの間に抗原に結合可能な状態で血漿中に存在する時間が延長されたか否かは、抗原に結合していない抗原結合分子の血漿中濃度を測定し、抗原に結合していない抗原結合分子の血漿中半減期、平均血漿中滞留時間、血漿中クリアランス等のいずれかのパラメーターを測定することにより判断することが可能である。抗原に結合していない抗原結合分子の血漿中濃度の測定は当業者公知の方法で実施することが可能であり、例えば、ClinPharmacol2008Apr4840617において測定されている。又、抗原結合分子が投与されてから、生体内の抗原が抗原結合分子に結合していない時間が減少した抗原に抗原結合分子が結合している時間が長くなったか否かは、抗原結合分子が結合していない非結合型の抗原の血漿中濃度を測定し、非結合型の抗原の血漿中濃度、あるいは、総抗原量に対する非結合型の抗原量の割合が低く維持されている期間をもとに判断することが可能である。非結合型の抗原の血漿中濃度、あるいは、総抗原量に対する非結合型の抗原の抗原量の割合の測定は当業者公知の方法で実施することが可能であり、例えば、PharmRes2006Jan2395103において測定されている。また、抗原が何らかの機能を生体内で示す場合、抗原が抗原の機能を中和する抗原結合分子アンタゴニスト分子によって結合されているかどうかは、その抗原の機能が中和されているかどうかで評価することも可能である。抗原の機能が中和されているかどうかは、抗原の機能を反映する何らかの生体内のマーカーを測定することで評価することが可能である。抗原が抗原の機能を活性化する抗原結合分子アゴニスト分子によって結合されているかどうかは、抗原の機能を反映する何らかの生体内のマーカーを測定することで評価することが可能である。非結合型の抗原の血漿中濃度の測定、総抗原量に対する非結合型の抗原の抗原量の割合の測定、生体内マーカーの測定などの測定は特に限定されないが、抗原結合物質が投与されてから一定時間が経過した後に行われることが好ましい。本発明において抗原結合物質が投与されてから一定時間が経過した後とは、特に限定されず、投与された抗原結合物質の性質等により当業者が適時決定することが可能であるが、例えば抗原結合物質を投与してから1日経過後、抗原結合物質を投与してから3日経過後、抗原結合物質を投与してから7日経過後、抗原結合物質を投与してから14日経過後、抗原結合物質を投与してから28日経過後などを挙げることができる。本発明においては、ヒトにおける薬物動態が向上することが好ましい。ヒトでの血漿中滞留性を測定することが困難である場合には、マウス例えば、正常マウス、ヒト抗原発現トランスジェニックマウス、ヒトFcRn発現トランスジェニックマウス、等やサル例えば、カニクイザルなどでの血漿中滞留性を基に、ヒトでの血漿中滞留性を予測することができる。血漿中滞留性の測定方法は、特に限定されないが、例えば実施例に記載の方法に従って行うことができる。抗原結合分子が抗原に複数回結合可能であるかどうかは、血漿中と同じ中性条件下で抗原結合分子に結合した抗原がエンドソーム内と同じ酸性条件下で解離し、再び中性条件下でどれだけの抗原に結合できるかどうかを測定することによって評価することが可能である。具体的には、Biacoreのような抗原結合分子-抗原反応を評価する機器を用いて、中性条件下で抗原結合分子-抗原複合体を作らせ、その後一定時間酸性条件下に曝らした後に、再び中性条件下において抗原結合分子が抗原に結合できるかどうかを測定することで評価可能である。改変前の抗原結合分子と比較してpH依存的結合能を付与した抗原結合分子の抗原結合量が2倍向上した場合、改変前の抗原結合分子と比較してpH依存的結合能を付与した抗原結合分子は結合回数が2倍向上していると言える。また、抗原が膜型抗原であって抗原に結合した抗原結合分子が抗原を介して取り込まれライソソームで分解されることで血漿中から消失する場合、改変前の抗原結合分子と比較してpH依存的結合能を付与した抗原結合分子の薬物動態あるいは抗原への結合期間がどれだけ向上したかどうかを評価することによって、改変前の抗原結合分子と比較してpH依存的結合能を付与した抗原結合分子の結合回数が増大しているかどうかを評価することが可能である。例えば、改変前の抗原結合分子と比較してpH依存的結合能を付与した抗原結合分子の抗原への結合期間が2倍向上した場合、改変前の抗原結合分子と比較してpH依存的結合能を付与した抗原結合分子は結合回数が2倍向上していると言える。また、抗原結合分子が結合していない非結合型の抗原の血漿中濃度を測定し、非結合型の抗原の血漿中濃度、あるいは、総抗原量に対する非結合型の抗原の抗原量の割合、が低く維持されている時間が2倍延長した場合、改変前の抗原結合分子と比較してpH依存的結合能を付与した抗原結合分子は結合回数が2倍向上していると言える。又、抗原が可溶型抗原の場合、血漿中の中性条件下で抗原結合分子に結合した抗原がエンドソーム内で解離して抗原結合分子が血漿中に戻れば、抗原結合分子は再び血漿中の中性条件下で抗原に結合できるため、エンドソーム内の酸性条件下で抗原を解離する性質を有する抗原結合分子は抗原に複数回結合可能である。抗原結合分子に結合した抗原がエンドソーム内で解離しない場合抗原は抗原結合分子に結合したまま血漿中に戻ると比較して、抗原結合分子に結合した抗原がエンドソーム内で解離する場合は、抗原はライソソームに運ばれ分解されるため抗原の血漿中からの消失速度は増加する。すなわち、血漿中から抗原が消失する速度を指標として抗原結合分子が抗原に複数回結合可能であるか否かを判断することも可能である。抗原の血漿中からの消失速度の測定は、例えば、抗原例えば、膜抗原と抗原結合分子を生体内に投与し、投与後の血漿中の抗原濃度を測定することにより行うことも可能である。また、抗原例えば、膜抗原が生体内で産生分泌される場合、抗原の血漿中からの消失速度が増加していれば血漿中抗原濃度は低下することから、血漿中抗原濃度を指標として抗原結合分子が抗原に複数回結合可能であるか否かを判断することも可能である。本発明において、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やすとは、抗原結合分子がヒト、マウス、サルなどに投与された際に、抗原結合分子が抗原に結合し、細胞内に取り込まれる工程を1回とし、この工程が増えることを意味する。つまり本発明において、抗原結合分子が抗原に2回結合するとは、抗原結合分子が抗原に結合した状態で細胞内に取り込まれた後に、抗原を解離した状態で細胞外に放出され、放出された抗原結合分子が再度抗原に結合し、細胞内に取り込まれることを意味する。抗原結合分子が細胞に取り込まれる際には、抗原結合分子は1つの抗原を結合した状態で取り込まれてもよいし、2つ若しくはそれ以上の抗原を結合した状態で取り込まれてもよい。本発明において、抗原結合分子の抗原への結合回数が増えるとは、全ての抗原結合分子の抗原結合回数が増える必要はなく、例えば、抗原結合分子組成物に含まれる抗原結合分子のうち、2回以上抗原に結合する抗原結合分子の割合が上昇することや、抗原結合分子組成物に含まれる抗原結合分子の結合回数の平均が上昇すること等でもよい。本発明においては、抗原結合分子をヒトに投与した際の抗原結合分子の抗原への結合回数が増えることが好ましいが、ヒトでの抗原結合回数を測定することが困難である場合には、invitroでの測定結果、マウス例えば、抗原発現トランスジェニックマウス、ヒトFcRn発現トランスジェニックマウス、等やサル例えば、カニクイザルなどなどでの測定結果を基にヒトでの抗原結合回数を予想してもよい。本発明においては、抗原結合分子が2回以上抗原に結合することが好ましく、例えば、抗原結合分子組成物に含まれる抗原結合分子の少なくとも10以上、好ましくは30以上、さらに好ましくは50以上、より好ましくは80以上例えば、90以上、95以上などの抗原結合分子が2回以上抗原に結合することが好ましい。本発明において、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やすとは、抗原結合分子がヒト、マウス、サルなどの動物に投与されてから、細胞内のライソソームで分解されるまでの間に抗原結合分子が結合できる抗原の数を増やすことを意味する。通常、IgGなどの抗体は2つの結合部位を有するので、1つの抗体は最大で2つの抗原に結合し、抗原に結合した抗体は細胞内に取り込まれ、ライソソームで抗原とともに分解される。従って、通常、IgGなどの抗体は最大で2つの抗原に結合することが可能である。本発明の方法により抗体などの抗原結合分子のエンドソーム内でのpHにおける抗原結合活性を血漿中でのpHにおける抗原結合活性よりも弱くすることにより、細胞内に取り込まれた抗体などの抗原結合分子は、細胞内で抗原を解離し、再び細胞外へと放出されて抗原に結合することが可能となる。つまり、本発明の方法により、抗原結合分子の抗原結合部位の数よりも多い数の抗原に結合することが可能となる。具体的には、例えば2つの結合部位を有するIgGの場合、本発明の方法を用いることにより、抗体が投与されてから抗体が分解されるまでの間に3つ以上、好ましくは4つ以上の抗原に結合することが可能となる。例えば、抗体が中和抗体の場合、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やすとは、抗原結合分子が中和可能な抗原の数を増やす、ということもできる。従って、抗体が中和抗体の場合には、結合を中和と置き換えることも可能である。本発明において、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やすとは、全ての抗原結合分子において結合可能な抗原の数が増える必要はなく、例えば、抗原結合分子組成物に含まれる抗原結合分子の結合可能な抗原の数の平均が増えることでもよいし、抗原結合分子の抗原結合部位の数よりも多い抗原に結合することができる抗原結合分子の割合が上昇することなどでもよい。本発明においては、抗原結合分子をヒトに投与した際に抗原結合分子が結合可能な抗原の数が増えることが好ましいが、ヒトでの数を測定することが困難である場合には、invitroでの測定結果、マウス例えば、抗原発現トランスジェニックマウス、ヒトFcRn発現トランスジェニックマウス、等やサル例えば、カニクイザルなどなどでの測定結果を基にヒトでの結合可能な抗原の数を予想してもよい。一般的に、抗体が中和抗体の場合、上述の抗原結合分子の抗原への結合回数は、抗原結合分子が中和可能な抗原の数と相関すると考えられる為、抗原結合分子が中和可能な抗原の数の測定は、上述の抗原結合分子の抗原への結合回数の測定と同様にして行うことが可能である。又、本発明は、酸性pHにおける抗原結合活性が中性pHにおける抗原結合活性より低い抗原結合分子を投与することにより、体内で抗原結合分子を2回以上抗原に結合させる方法を提供する。又、本発明は、中和活性を有する抗原結合分子において、酸性pHにおける抗原結合活性が中性pHにおける抗原結合活性より低い抗原結合分子を投与することにより、抗原結合分子の抗原結合部位の数よりも多い数の抗原を中和する方法に関する。好ましくは、酸性pHにおける抗原結合活性が中性pHにおける抗原結合活性より低いIgGを投与することにより、3つ以上、好ましくは4つ以上の抗原を中和する方法に関する。さらに、本発明は抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法に関する。本発明において抗原が抗原結合分子から解離する箇所は細胞内であれば如何なる箇所でもよいが、好ましくは早期エンドソーム内である。本発明において、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原が細胞内で抗原結合分子から解離するとは、抗原結合分子に結合して細胞内に取り込まれた抗原全てが細胞内で抗原結合分子から解離する必要はなく、細胞内で抗原結合分子から解離する抗原の割合が、抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能を低くする前と比較して高くなっていればよい。さらに、本発明は抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、細胞内での抗原に結合していない抗原結合分子とFcRnの結合を促進する方法に関する。通常、FcRnはエンドソーム内で抗原結合分子と結合するが、抗原結合分子が膜型抗原に結合している場合はFcRnに結合することが出来ないと考えられるので、本発明の好ましい態様として、抗原が膜型抗原の場合、抗原結合分子のエンドソーム内でのpH酸性pHにおける抗原結合能を血漿中でのpH中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、エンドソーム内での抗原結合分子の抗原からの解離を促進し、抗原結合分子とFcRnの結合を促進する方法を挙げることができる。抗原が可溶型抗原の場合、抗原の結合の有無に関わらず抗原結合分子はFcRnに結合することができるが、抗原結合分子のエンドソーム内でのpH酸性pHにおける抗原結合能を血漿中でのpH中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、エンドソーム内で抗原の抗原結合分子からの解離を促進することができれば、抗原に結合していない抗原結合分子とFcRnの結合を促進する方法を挙げることができる。抗原が膜型、可溶型どちらの場合であっても、抗原に結合していない抗原結合分子がFcRnにより血漿中に戻ることが出来れば、再び抗原に結合することが可能であるため、これを繰り返すことで抗原結合分子は抗原に複数回結合することが可能である。本発明において、細胞内での抗原結合分子とFcRnの結合を促進するとは、全ての抗原結合分子がFcRnと結合する必要はなく、細胞内でFcRnと結合する抗原に結合していない抗原結合分子の割合が、抗原結合分子のエンドソーム内でのpHにおける抗原結合能を血漿中でのpHにおける抗原結合能を低くする前と比較して高くなっていればよい。本発明の細胞内での抗原結合分子とFcRnとの結合を促進する方法において好ましい抗原結合分子の例としては、膜タンパク質などの膜型抗原膜抗原に結合する抗原結合分子を挙げることができる。又、他の好ましい抗原結合分子としては、可溶型タンパク質などの可溶型抗原に結合する抗原結合分子を挙げることができる。又、細胞内での抗原結合分子とFcRnの結合を促進する方法は、抗原結合分子の細胞内例えばエンドソーム内でのFcRnとの結合活性を増強する方法ともいえる。さらに本発明は、抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法に関する。本発明において、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させるとは、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子全てが抗原と結合していない状態で細胞外に放出される必要はなく、細胞外に放出される抗原結合分子の割合が抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能より低くする前と比較して高くなっていればよい。好ましくは、細胞外に放出された抗原結合分子は抗原結合能を維持している。又、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法は、抗原と結合して細胞内に取り込まれた場合に抗原と結合していない状態で細胞外に放出されやすくなる性質を抗原結合分子に付与する方法ともいえる。さらに、本発明は抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法に関する。本発明において、血漿中抗原消失能とは、抗原結合分子が生体内に投与されたあるいは生体が分泌した際に、血漿中に存在する抗原を血漿中から消失させる能力のことをいう。従って、本発明において、抗原結合分子の血漿中抗原消失能が増加するとは、抗原結合分子を生体内に投与した際に血漿中から抗原が消失する速さが、抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能より低くする前と比較して速くなっていればよい。抗原結合分子の血漿中抗原消失能が増加したか否かは、例えば、可溶型抗原と抗原結合分子を生体内に投与し、投与後の可溶型抗原の血漿中濃度を測定することにより判断することが可能である。抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能より低くすることにより、可溶型抗原および抗原結合分子投与後の血漿中の可溶型抗原の濃度が低下している場合には、抗原結合分子の血漿中抗原消失能が増加したと判断することができる。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換する、又はヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入することにより、抗原結合分子の薬物動態を向上する方法に関する。又、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換する、又はヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入することにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換する、又はヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入することにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法に関する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換する、又はヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入することにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換する、又はヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入することにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法を提供する。さらに、本発明は抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換する、又はヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入することにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法を提供する。ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異置換、挿入等が導入される位置は特に限定されず、如何なる部位がヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換されてもよく、又は如何なる部位にヒスチジン又は非天然アミノ酸が挿入されてもよい。ヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換又はヒスチジン又は非天然アミノ酸が挿入される部位の好ましい例として、抗原結合分子の抗原結合能に影響を与える領域を挙げることができる。例えば、抗原結合分子が抗体の場合には、抗体の可変領域やCDRなどを挙げることができる。ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異が導入される数は特に限定されず、1箇所のみをヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換してもよく、又は1箇所のみにヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入してもよい。あるいは2箇所以上の複数箇所をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換してもよく、又は複数箇所にヒスチジン又は非天然アミノ酸を挿入してもよい。又、ヒスチジン又は非天然アミノ酸への置換又は挿入以外に他のアミノ酸の欠失、付加、挿入および/または置換などを同時に行ってもよい。本発明においてヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換される箇所の例として、抗原結合分子が抗体の場合には、抗体のCDR配列やCDRの構造を決定する配列が改変箇所として考えられ、例えば以下の箇所を挙げることができる。なお、アミノ酸位置はKabatナンバリングKabatEAetal.1991.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest.NIHで示している。重鎖:H27、H31、H32、H33、H35、H50、H58、H59、H61、H62、H63、H64、H65、H99、H100b、H102軽鎖:L24、L27、L28、L32、L53、L54、L56、L90、L92、L94これらの改変箇所のうち、H32、H61、L53、L90、L94は普遍性の高い改変箇所と考えられる。又、特に限定されないが、抗原がIL6受容体例えば、ヒトIL6受容体の場合の好ましい改変箇所として以下の箇所を挙げることができる。重鎖:H27、H31、H32、H35、H50、H58、H61、H62、H63、H64、H65、H100b、H102軽鎖:L24、L27、L28、L32、L53、L56、L90、L92、L94複数の箇所を組み合わせてヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換する場合の好ましい組み合わせの具体例としては、例えば、H27、H31、H35の組み合わせ、H27、H31、H32、H35、H58、H62、H102の組み合わせ、L32、L53の組み合わせ、L28、L32、L53の組み合わせ等を挙げることができる。さらに、重鎖と軽鎖の置換箇所の好ましい組み合わせの例としては、H27、H31、L32、L53の組み合わせを挙げることができる。又、特に限定されないが、抗原がIL6例えば、ヒトIL6の場合の好ましい改変箇所として以下の箇所を挙げることができる。重鎖:H32、H59、H61、H99軽鎖:L53、L54、L90、L94又、特に限定されないが、抗原がIL31受容体例えば、ヒトIL31受容体の場合の好ましい改変箇所としてH33を挙げることができる。これらの箇所は、1つの箇所のみヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換してもよいし、複数の箇所をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換してもよい。本発明の方法は、標的抗原の種類によらない任意の抗原結合分子に適応可能である。本発明において抗原結合分子は、対象とする抗原への特異的な結合活性を有する物質であれば特に限定されないが、抗原結合分子の好ましい例として、抗体の抗原結合領域を有している物質を挙げることができる。抗体の抗原結合領域の例としては、CDRや可変領域を挙げることができる。抗体の抗原結合領域がCDRである場合、全長抗体に含まれる6つのCDR全てを含んでいてもよいし、1つ若しくは2つ以上のCDRを含んでいてもよい。抗体の結合領域としてCDRを含む場合、含まれるCDRはアミノ酸の欠失、置換、付加及び/又は挿入などが行われていてもよく、又、CDRの一部分であってもよい。さらに、抗原結合分子に抗体定常領域が含まれる場合、本発明は抗原結合分子に含まれる抗体定常領域を改変アミノ酸の置換、欠失、付加および/又は挿入などすることにより、抗原結合分子の薬物動態を向上する方法に関する。さらに、抗原結合分子に抗体定常領域が含まれる場合、本発明は抗原結合分子に含まれる抗体定常領域を改変アミノ酸の置換、欠失、付加および/又は挿入などすることにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法を提供する。さらに、抗原結合分子に抗体定常領域が含まれる場合、本発明は抗原結合分子に含まれる抗体定常領域を改変アミノ酸の置換、欠失、付加および/又は挿入などすることにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法に関する。さらに、抗原結合分子に抗体定常領域が含まれる場合、本発明は抗原結合分子に含まれる抗体定常領域を改変アミノ酸の置換、欠失、付加および/又は挿入などすることにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法に関する。さらに、抗原結合分子に抗体定常領域が含まれる場合、本発明は抗原結合分子に含まれる抗体定常領域を改変アミノ酸の置換、欠失、付加および/又は挿入などすることにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法に関する。さらに、抗原結合分子に抗体定常領域が含まれる場合、本発明は抗原結合分子に含まれる抗体定常領域を改変アミノ酸の置換、欠失、付加および/又は挿入などすることにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法に関する。本発明の抗原結合物質の好ましい態様として、FcRn結合領域を含む抗原結合物質を挙げることができる。FcRn結合領域を含む抗原結合物質は、FcRnのサルベージ経路により細胞内に取り込まれた後に再び血漿中に戻ることが可能である。FcRn結合領域は、直接FcRnと結合する領域であることが好ましい。FcRn結合領域の好ましい例として、抗体のFc領域を挙げることができる。しかしながら、アルブミンやIgGなどのFcRnとの結合能を有するポリペプチドに結合可能な領域は、アルブミンやIgGなどを介して間接的にFcRnと結合することが可能であるので、本発明におけるFcRn結合領域はそのようなFcRnとの結合能を有するポリペプチドに結合する領域であってもよい。本発明の方法が対象とする抗体等の抗原結合分子が認識する抗原は特に限定されず、如何なる抗原を認識する抗体が対象となってもよい。本発明の方法により薬物動態を向上させる抗体の例としては、例えば、受容体蛋白質膜結合型受容体、可溶型受容体や細胞表面マーカーなどの膜抗原を認識する抗体、サイトカインなどの可溶型抗原を認識する抗体などを挙げることができる。本発明において、膜抗原の好ましい例として膜タンパク質を挙げることができる。又、本発明において可溶型抗原の例として可溶型タンパク質を挙げることができる。本発明の方法により薬物動態を向上させる抗体が認識する抗原の具体的な例としては、例えばIL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL10、IL11、IL12、IL15、IL31、IL23、IL2受容体、IL6受容体、OSM受容体、gp130、IL5受容体、CD40、CD4、Fas、オステオポンチン、CRTH2、CD26、PDGFD、CD20、単球走化活性因子、CD23、TNFα、HMGB1、α4インテグリン、ICAM1、CCR2、CD11a、CD3、IFNγ、BLyS、HLADR、TGFβ、CD52、IL31受容体などを挙げることができる。特に好ましい抗原として、IL6受容体を挙げることができる。又、本発明の方法が対象とする抗原結合分子としてはアンタゴニスト活性を有する抗原結合分子アンタゴニスト抗原結合分子、アゴニスト活性を有する抗原結合分子アゴニスト抗原結合分子などを挙げることができるが、好ましい態様として、アンタゴニスト抗原結合分子、特に受容体などの膜抗原やサイトカインなどの可溶型抗原を認識するアンタゴニスト抗原結合分子を挙げることができる。例えば、受容体を認識するアンタゴニスト抗原結合分子は、受容体に結合し、受容体とそのリガンドとの結合を阻害し、受容体を介したシグナル伝達を阻害する抗原結合分子である。本発明において対象となる抗原結合分子は特に限定されず、如何なる抗原結合分子でもよい。本発明で用いられる抗原結合分子は好ましくは、抗原結合活性抗原結合領域とFcRn結合領域を有する。本発明においては、特にヒトFcRnとの結合領域を含む抗原結合分子であることが好ましい。抗原結合活性とFcRn結合領域を有する抗原結合分子の例として、抗体を挙げることができる。本発明の抗体の好ましい例として、IgG抗体を挙げることができる。抗体としてIgG抗体を用いる場合、その種類は限定されず、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4などのアイソタイプサブクラスのIgGを用いることが可能である。また、これらのアイソタイプのIgGの定常領域に対して、M73のように定常領域部分にアミノ酸変異を導入しても良い。導入するアミノ酸変異は、例えば、Fcγレセプターへの結合を増大あるいは低減させたものProcNatlAcadSciUSA2006Mar14103400510、FcRnへの結合を増大あるいは低減させたものJBiolChem2001Mar22766591604等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。また、IgG2などの適切な定常領域を選択することによって、pH依存的な結合を変化させることも可能である。本発明が対象とする抗原結合分子が抗体の場合、抗体はマウス抗体、ヒト抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ラクダ抗体など、どのような動物由来の抗体でもよい。さらに、例えば、キメラ抗体、中でもヒト化抗体などのアミノ酸配列を置換した改変抗体でもよい。また、二種特異性抗体、各種分子を結合させた抗体修飾物、抗体断片を含むポリペプチドなどであってもよい。キメラ抗体とは、異なる動物由来の配列を組合わせて作製される抗体である。キメラ抗体の具体的な例としては、例えば、マウス抗体の重鎖、軽鎖の可変V領域とヒト抗体の重鎖、軽鎖の定常C領域からなる抗体を挙げることができる。ヒト化抗体とは、再構成reshapedヒト抗体とも称される、ヒト以外の哺乳動物由来の抗体、例えばマウス抗体の相補性決定領域CDRcomplementaritydeterminingregionをヒト抗体のCDRへ移植したものである。CDRを同定するための方法は公知であるKabatetalSequenceofProteinsofImmunologicalInterestNationalInstituteofHealthBethesdaMdChothiaetalNature342877。また、その一般的な遺伝子組換え手法も公知である欧州特許出願公開番号EP125023号公報、WO9602576号公報参照。二重特異性抗体は、異なるエピトープを認識する可変領域を同一の抗体分子内に有する抗体をいう。二種特異性抗体は2つ以上の異なる抗原を認識する抗体であってもよいし、同一抗原上の異なる2つ以上のエピトープを認識する抗体であってもよい。又、抗体断片を含むポリペプチドとしては、例えば、Fab断片、F2断片、scFvNatBiotechnol2005Sep23112636domainantibodyWO2004058821WO2003002609、scFvFcWO2005037989、dAbFc、Fc融合タンパク質等が挙げられる。これらの分子のうち、特にFc領域を含んでいる分子はFcRnへの結合活性を有することから、本発明で見出された方法を用いるのに適している。さらに、本発明が適用できる抗原結合分子は、抗体様分子であってもよい。抗体様分子とは、ターゲット分子に結合することで機能を発揮するような分子でありCurrentOpinioninBiotechnology200617653658、CurrentOpinioninBiotechnology200718110、CurrentOpinioninStructuralBiology19977463469、ProteinScience2006151427、例えば、DARPinsWO2002020565、AffibodyWO1995001937、AvimerWO2004044011WO2005040229、AdnectinWO2002032925等が挙げられる。これら抗体様分子であっても、標的分子に対してpH依存的に結合することが出来れば、1分子で複数の標的分子に結合することが可能である。また抗原結合分子は、標的に結合するレセプタータンパク質およびレセプターFc融合タンパク質であっても良く、例えば、TNFRFc融合タンパク、IL1RFc融合タンパク、VEGFRFc融合タンパク、CTLA4Fc融合タンパク等NatMed2003Jan94752、BioDrugs20062015160が挙げられる。これらレセプタータンパク質およびレセプターFc融合タンパク質であっても標的分子に対してpH依存的に結合することが出来れば、1分子で複数の標的分子に結合することが可能である。また抗原結合分子は、標的に結合するが中和効果を有する人工リガンドタンパク質および人工リガンド融合タンパク質であっても良く、例えば、変異IL6EMBOJ1994Dec1513586370等が挙げられる。これら人工リガンドタンパク質および人工リガンド融合タンパク質であっても標的分子に対してpH依存的に結合することが出来れば、1分子で複数の標的分子に結合することが可能である。さらに、本発明の抗体は糖鎖が改変されていてもよい。糖鎖が改変された抗体の例としては、例えば、グリコシル化が修飾された抗体WO9954342など、糖鎖に付加するフコースが欠損した抗体WO0061739、WO0231140、WO2006067847、WO2006067913など、バイセクティングGlcNAcを有する糖鎖を有する抗体WO0279255などなどを挙げることができる。本発明の方法は特定の理論により限定されるものではないが、例えば、酸性pHにおける抗原結合能を中性pHにおける抗原結合能よりも弱くすることと薬物動態の向上、および、複数回の抗原への結合との関連は以下のように説明することが可能である。例えば、抗体が膜抗原に結合する抗体の場合、生体内に投与した抗体は抗原に結合して、その後、抗体は抗原に結合したまま抗原と一緒にインターナライゼーションによって細胞内のエンドソームに取り込まれる。その後、抗体は抗原に結合したままライソソームへ移行し抗体は抗原と一緒にライソソームにより分解される。インターナライゼーションを介した血漿中からの消失は抗原依存的な消失と呼ばれており、多くの抗体分子で報告されているDrugDiscovToday2006Jan11818。1分子のIgG抗体が2価で抗原に結合した場合、1分子の抗体が2分子の抗原に結合した状態でインターナライズされ、そのままライソソームで分解される。従って、通常の抗体の場合、1分子のIgG抗体が3分子以上の抗原に結合することは出来ない。例えば、中和活性を有する1分子のIgG抗体の場合、3分子以上の抗原を中和することはできない。IgG分子の血漿中滞留性が比較的長い消失が遅いのは、IgG分子のサルベージレセプターとして知られているFcRnが機能しているためである。ピノサイトーシスによってエンドソームに取り込まれたIgG分子は、エンドソーム内の酸性条件下においてエンドソーム内に発現しているFcRnに結合する。FcRnに結合できなかったIgG分子はライソソームへと進みそこで分解されるが、FcRnへ結合したIgG分子は細胞表面へ移行し血漿中の中性条件下においてFcRnから解離することで再び血漿中に戻る。又、抗体が可溶型抗原に結合する抗体の場合、生体内に投与した抗体は抗原に結合し、その後、抗体は抗原に結合したまま細胞内に取り込まれる。細胞内に取り込まれた抗体の多くはFcRnにより細胞外に放出されるが、抗原に結合したまま細胞外に放出される為、再度、抗原に結合することはできない。従って、膜抗原に結合する抗体と同様、通常の抗体の場合、1分子のIgG抗体が3分子以上の抗原に結合することはできない。本発明者らは、インターナライゼーションによって膜抗原などの抗原に結合した抗体が細胞内のエンドソームに取り込まれた際に、抗原に結合したままの抗体はライソソームに移行して分解されるのに対して、エンドソーム内において抗原が解離したIgG抗体はエンドソーム内に発現しているFcRnに結合することが出来ると考えた。つまり、血漿中では抗原に強く結合し、エンドソーム内では抗原に弱く結合する抗体は、血漿中で抗原に結合して抗原との複合体を形成したままインターナライゼーションによって細胞内のエンドソーム内に取り込まれ、エンドソーム内で抗原と解離した後に、FcRnに結合して細胞表面に移行し、抗原に結合していない状態で再び血漿中に戻り、複数個の膜型抗原を中和できることを見出した。さらに、血漿中では抗原に強く結合し、エンドソーム内では抗原に弱く結合する性質を有する抗体は、可溶型抗原などの抗原に結合した場合でも、エンドソーム内で抗原と解離することから、抗原に結合していない状態で再び血漿中に放出され、複数個の可溶型抗原を中和できることを見出した。特に、本発明者らは血漿中のpHとエンドソーム内のpHが異なることに着目し、血漿中のpH条件では抗原に強く結合し、エンドソーム内のpH条件では抗原に弱く結合する抗体は1抗体分子が複数の抗原に結合することができ、血漿中滞留性が優れていることを見出した。エンドソームは膜小胞の一つであり、真核細胞から細胞質内にネットワークを形成して細胞膜からリソソームに至る過程で高分子の代謝をつかさどる。エンドソーム内のpHは一般的にpH55~pH60の酸性であることが報告されておりNatRevMolCellBiol2004Feb512132、又、血漿中のpHはほぼ中性通常、pH74であることが知られている。従って、酸性pHにおける抗原結合活性が中性pHにおける抗原結合活性よりも弱い抗原結合分子は、中性pHの血漿中において抗原に結合し、細胞内に取り込まれた後に、酸性pHのエンドソーム内で抗原と解離する。抗原と解離した抗原結合分子はFcRnに結合して細胞表面に移行し、抗原と結合していない状態で再び血漿中に戻り、結果として抗原と複数回結合することができ、薬物動態が向上する。<抗原結合分子物質>さらに、本発明はpH40~pH65での抗原結合活性がpH67~pH100での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子、好ましくはpH50~pH60での抗原結合活性がpH70~80での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子を提供する。pH40~pH65での抗原結合活性がpH67~100での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の具体的な例としては、pH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子を挙げることができる。又、pH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子は、pH74での抗原結合活性がpH58での抗原結合活性よりも高い抗原結合分子ということもできる。本発明のpH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子は、pH58での抗原結合活性がpH74での結合より低い限り、その結合活性の差は限定されず、僅かでもpH58における抗原結合活性が低ければよい。本発明のpH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の好ましい態様として、pH74における抗原結合活性がpH58における抗原結合活性の2倍以上である抗原結合分子を挙げることができ、さらに好ましい態様としてはpH74における抗原結合活性がpH58における抗原結合活性の10倍以上である抗原結合分子を挙げることができ、より好ましい態様としてはpH74における抗原結合活性がpH58における抗原結合活性の40倍以上である抗原結合分子を挙げることができる。具体的には、本発明のpH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の好ましい態様として、抗原に対するpH58でのKDとpH74でのKDの比であるKD/KDの値が2以上であり、さらに好ましくはKD/KDの値が10以上であり、さらに好ましくはKD/KDの値が40以上である。KD/KDの値の上限は特に限定されず、当業者の技術において作製可能な限り、400、1000、10000等、いかなる値でもよい。さらに本発明のpH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の好ましい他の態様として、抗原に対するpH58でのkdとpH74でのkdの比であるkd/kdの値が2以上であり、さらに好ましくはkd/kdの値が5以上であり、さらに好ましくはkd/kdの値が10以上であり、さらに好ましくはkd/kdの値が30以上である。Kd/kdの値の上限は特に限定されず、当業者の技術において作製可能な限り、50、100、200等、いかなる値でもよい。抗原の結合活性を測定する際のpH以外の条件は当業者が適宜選択することが可能であり、特に限定されないが、例えば、実施例に記載のようにMESバッファー、37°Cの条件において測定することが可能である。又、抗原結合分子の抗原結合活性の測定は当業者に公知の方法により行うことが可能であり、例えば、実施例に記載のようにBiacoreT100GEHealthcareなどを用いて測定することが可能である。このような酸性pHにおいて抗原に弱く結合する抗原結合分子は、エンドソーム内の酸性条件下において抗原から容易に解離すると考えられ、細胞内にインターナライズされた後にFcRnと結合して細胞外に放出されやすいと考えられる。細胞内で分解されることなく、細胞外に放出された抗原結合分子は再度、抗原に結合することが可能である。従って、例えば抗原結合分子が中和抗原結合分子である場合には、エンドソーム内の酸性条件下において抗原から解離しやすい抗原結合分子は、複数回、抗原に結合し、抗原を中和することが可能である。結果として、pH40~pH65での抗原結合活性がpH67~pH100での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子は血漿中滞留性において優れた抗原結合分子となる。pH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の好ましい態様として、抗原結合分子中のアミノ酸の少なくとも1つがヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換されている又は少なくとも1つのヒスチジン又は非天然アミノ酸が挿入されている抗原結合分子を挙げることができる。ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異が導入される位置は特に限定されず、置換前と比較してpH58における抗原結合活性がpH74における抗原結合活性より弱くなるKD/KDの値が大きくなる、又はkd/kdの値が大きくなる限り、如何なる部位でもよい。例えば、抗原結合分子が抗体の場合には、抗体の可変領域やCDRなどを挙げることができる。ヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換されるアミノ酸の数、又は挿入されるアミノ酸の数は当業者が適宜決定することができ、1つのアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換してもよいし、1つのアミノ酸を挿入してもよいし、2つ以上の複数のアミノ酸をヒスチジン又は非天然アミノ酸で置換してもよいし、2つ以上のアミノ酸を挿入してもよい。又、ヒスチジン又は非天然アミノ酸への置換又はヒスチジン又は非天然アミノ酸の挿入以外に、他のアミノ酸の欠失、付加、挿入および/または置換などを同時に行ってもよい。ヒスチジン又は非天然アミノ酸への置換又はヒスチジン又は非天然アミノ酸の挿入は、当業者の公知のアラニンscanningのアラニンをヒスチジンに置き換えたヒスチジンscanningなどの方法によりランダムに行ってもよく、ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異がランダムに導入された抗原結合分子の中から、変異前と比較してKD/KD又はkd/kdの値が大きくなった抗原結合分子を選択してもよい。このようにヒスチジン又は非天然アミノ酸への変異が行われ、かつpH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の好ましい例として、例えば、ヒスチジン又は非天然アミノ酸への変異後のpH74での抗原結合活性がヒスチジン又は非天然アミノ酸への変異前のpH74での抗原結合活性と同等である抗原結合分子を挙げることができる。本発明において、ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異後の抗原結合分子が、ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異前の抗原結合分子と同等の抗原結合活性を有するとは、ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異前の抗原結合分子の抗原結合活性を100とした場合に、ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異後の抗原結合分子の抗原結合活性が少なくとも10以上、好ましくは50以上、さらに好ましくは80以上、より好ましくは90以上であることを言う。ヒスチジン又は非天然アミノ酸変異後のpH74での抗原結合活性がヒスチジン又は非天然アミノ酸変異前のpH74での抗原結合活性より高くなってもよい。ヒスチジン又は非天然アミノ酸への置換又は挿入により抗原結合分子の抗原結合活性が低くなった場合には、抗原結合分子中の1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、付加及び/又は挿入などにより抗原結合活性をヒスチジン置換又は挿入前の抗原結合活性と同等にしてもよい。本発明においては、そのようなヒスチジン置換又は挿入後に1又は複数のアミノ酸の置換、欠失、付加及び/又は挿入を行うことにより結合活性が同等となった抗原結合分子も含まれる。さらに、抗原結合分子が抗体定常領域を含む物質である場合、pH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の好ましい他の態様として、抗原結合分子に含まれる抗体定常領域が改変された方法を挙げることができる。改変後の抗体定常領域の具体例としては、例えば実施例に記載の定常領域を挙げることができる。上述の方法等により抗原結合物質のpH58における抗原結合活性をpH74における抗原結合活性より弱くするKD/KDの値を大きくする場合、特に限定されないが、KD/KDの値が基の抗体と比較して通常、2倍以上、好ましくは5倍以上、さらに好ましくは10倍以上となっていることが好ましい。本発明の抗原結合分子はpH40~pH65での抗原結合活性がpH67~100での抗原結合活性よりも低い限り、他にどのような性質を有していてもよく、例えばアゴニスト抗原結合分子やアンタゴニスト抗原結合分子などであってもよい。本発明の好ましい抗原結合分子の例としてアンタゴニスト抗原結合分子を挙げることができる。アンタゴニスト抗原結合分子は通常、リガンドアゴニストと受容体の結合を阻害し、受容体を介した細胞内へのシグナル伝達を阻害する抗原結合分子である。さらに、本発明は以下の少なくとも1つの箇所のアミノ酸がヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換された抗体を提供する。なお、アミノ酸位置はKabatナンバリングKabatEAetal.1991.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest.NIHで示している。重鎖:H27、H31、H32、H33、H35、H50、H58、H59、H61、H62、H63、H64、H65、H99、H100b、H102軽鎖:L24、L27、L28、L32、L53、L54、L56、L90、L92、L94これらの改変箇所のうち、H32、H61、L53、L90、L94は普遍性の高い改変箇所と考えられる。又、特に限定されないが、抗原がIL6受容体例えば、ヒトIL6受容体の場合の好ましい改変箇所として以下の箇所を挙げることができる。重鎖:H27、H31、H32、H35、H50、H58、H61、H62、H63、H64、H65、H100b、H102軽鎖:L24、L27、L28、L32、L53、L56、L90、L92、L94複数の箇所を組み合わせてヒスチジン又は非天然アミノ酸に置換する場合の好ましい組み合わせの具体例としては、例えば、H27、H31、H35の組み合わせ、H27、H31、H32、H35、H58、H62、H102の組み合わせ、L32、L53の組み合わせ、L28、L32、L53の組み合わせ等を挙げることができる。さらに、重鎖と軽鎖の置換箇所の好ましい組み合わせの例としては、H27、H31、L32、L53の組み合わせを挙げることができる。又、特に限定されないが、抗原がIL6例えば、ヒトIL6の場合の好ましい改変箇所として以下の箇所を挙げることができる。重鎖:H32、H59、H61、H99軽鎖:L53、L54、L90、L94又、特に限定されないが、抗原がIL31受容体例えば、ヒトIL31受容体の場合の好ましい改変箇所としてH33を挙げることができる。本発明の抗原結合分子が認識する抗原は如何なる抗原でもよい。本発明の抗体が認識する抗原の具体的な例としては上述の受容体蛋白質膜結合型受容体、可溶型受容体、細胞表面マーカーなどの膜抗原やサイトカインなどの可溶型抗原、例えば、IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL10、IL11、IL12、IL15、IL31、IL23、IL2受容体、IL6受容体、OSM受容体、gp130、IL5受容体、CD40、CD4、Fas、オステオポンチン、CRTH2、CD26、PDGFD、CD20、単球走化活性因子、CD23、TNFα、HMGB1、α4インテグリン、ICAM1、CCR2、CD11a、CD3、IFNγ、BLyS、HLADR、TGFβ、CD52、IL31受容体などを挙げることができる。特に好ましい抗原としては、IL6受容体を挙げることができる。本発明の抗原結合分子については上述の通りである。本発明において抗原結合分子の好ましい態様として、抗体を挙げることができる。抗原結合活性とFcRn結合領域を有する抗体の例として、IgG抗体を挙げることができる。抗体としてIgG抗体を用いる場合、その種類は限定されず、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4などを用いることが可能である。本発明の抗体の由来は特に限定されず、如何なる由来の抗体でもよく、例えば、マウス抗体、ヒト抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ラクダ抗体などを用いることができる。さらに、例えば、上述のキメラ抗体、中でもヒト化抗体などのアミノ酸配列を置換した改変抗体でもよい。また、上述の二種特異性抗体、各種分子を結合させた抗体修飾物、抗体断片を含むポリペプチド、糖鎖改変抗体などであってもよい。キメラ抗体の作製は公知であり、例えば、ヒト-マウスキメラ抗体の場合、抗体V領域をコードするDNAとヒト抗体C領域をコードするDNAと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることによりキメラ抗体を得ることができる。ヒト化抗体とは、再構成reshapedヒト抗体とも称される、ヒト以外の哺乳動物由来の抗体、例えばマウス抗体の相補性決定領域CDRcomplementaritydeterminingregionをヒト抗体のCDRへ移植したものである。CDRを同定するための方法は公知であるKabatetalSequenceofProteinsofImmunologicalInterestNationalInstituteofHealthBethesdaMdChothiaetalNature342877。また、その一般的な遺伝子組換え手法も公知である欧州特許出願公開番号EP125023号公報、WO9602576号公報参照。ヒト化抗体は公知の方法により、例えば、マウス抗体のCDRを決定し、該CDRとヒト抗体のフレームワーク領域frameworkregion;FRとが連結された抗体をコードするDNAを取得し、ヒト化抗体を通常の発現ベクターを用いた系により産生することができる。このようなDNAは、CDR及びFR両方の末端領域にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いてPCR法により合成することができるWO9813388号公報に記載の方法を参照。CDRを介して連結されるヒト抗体のFRは、CDRが良好な抗原結合部位を形成するように選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体のCDRが適切な抗原結合部位を形成するように、抗体の可変領域におけるFRのアミノ酸を改変してもよいSatoetalCancerRes5310016。改変できるFR中のアミノ酸残基には、抗原に直接、非共有結合により結合する部分AmitetalScience23374753、CDR構造に影響または作用する部分ChothiaetalJMolBiol19690117及びVHVL相互作用に関連する部分EP239400号特許公報が含まれる。本発明における抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である場合には、これらの抗体のC領域は、好ましくはヒト抗体由来のものが使用される。例えばH鎖では、Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4などを、L鎖ではCκ、Cλなどを使用することができる。また、FcγレセプターやFcRnへの結合を増大あるいは低減させるために、抗体の安定性または抗体の産生を改善するために、ヒト抗体C領域を必要に応じアミノ酸変異を導入してもよい。本発明におけるキメラ抗体は、好ましくはヒト以外の哺乳動物由来抗体の可変領域とヒト抗体由来の定常領域とからなる。一方、ヒト化抗体は、好ましくはヒト以外の哺乳動物由来抗体のCDRと、ヒト抗体由来のFRおよびC領域とからなる。ヒト抗体由来の定常領域は、FcRn結合領域を含んでいることが好ましく、そのような抗体の例として、IgGIgG1、IgG2、IgG3、IgG4を挙げることができる。本発明におけるヒト化抗体に用いられる定常領域は、どのアイソタイプに属する抗体の定常領域であってもよい。好ましくは、ヒトIgGの定常領域が用いられるが、これに限定されるものではない。また、ヒト化抗体に利用されるヒト抗体由来のFRも特に限定されず、どのアイソタイプに属する抗体のものであってもよい。本発明におけるキメラ抗体及びヒト化抗体の可変領域及び定常領域は、元の抗体の結合特異性を示す限り、欠失、置換、挿入及びまたは付加等により改変されていてもよい。ヒト由来の配列を利用したキメラ抗体及びヒト化抗体は、ヒト体内における免疫原性が低下しているため、治療目的などでヒトに投与する場合に有用と考えられる。本発明の抗体は如何なる方法により得られてもよく、例えば、本来はpH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性より高い抗体又は抗原結合活性が同程度である抗体を、上述のヒスチジンへの置換等により、人為的にpH58での抗原結合活性をpH74での抗原結合活性より低くしてもよいし、又、以下に示す抗体ライブラリーやハイブリドーマから得られる複数の抗体の中からpH58での抗原結合活性がpH74での抗原結合活性より低い抗体をスクリーニングすることで選択してもよい。抗体中のアミノ酸をヒスチジンに置換する場合、ヒスチジン変異導入前の抗体のH鎖又はL鎖のアミノ酸配列は既知の配列を用いることも可能であり、又、当業者に公知の方法で新しく取得した抗体のアミノ酸配列を用いることも可能である。例えば、抗体は、抗体ライブラリーから取得することも可能であるし、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマから抗体をコードする遺伝子をクローニングして取得することも可能である。抗体ライブラリーについては既に多くの抗体ライブラリーが公知になっており、又、抗体ライブラリーの作製方法も公知であるので、当業者は適宜抗体ライブラリーを入手することが可能である。例えば、抗体ファージライブラリーについては、ClacksonetalNature19913526248、MarksetalJMolBiol199122258197、WaterhousesetalNucleicAcidsRes19932122656、GriffithsetalEMBOJ199413324060、VaughanetalNatureBiotechnology19961430914、及び特表平20-504970号公報等の文献を参照することができる。その他、真核細胞をライブラリーとする方法やリボソーム提示法等の公知の方法を用いることが可能である。さらに、ヒト抗体ライブラリーを用いて、パンニングによりヒト抗体を取得する技術も知られている。例えば、ヒト抗体の可変領域を一本鎖抗体scFvとしてファージディスプレイ法によりファージの表面に発現させ、抗原に結合するファージを選択することができる。選択されたファージの遺伝子を解析すれば、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするDNA配列を決定することができる。抗原に結合するscFvのDNA配列が明らかになれば、当該配列を元に適当な発現ベクターを作製し、ヒト抗体を取得することができる。これらの方法は既に周知であり、WO9201047、WO9220791、WO9306213、WO9311236、WO9319172、WO9501438、WO9515388を参考にすることができる。ハイブリドーマから抗体をコードする遺伝子を取得する方法は、基本的には公知技術を使用し、所望の抗原または所望の抗原を発現する細胞を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞ハイブリドーマをスクリーニングし、得られたハイブリドーマのmRNAから逆転写酵素を用いて抗体の可変領域のcDNAを合成し、これを所望の抗体定常領域C領域をコードするDNAと連結することにより得ることができる。より具体的には、特に以下の例示に限定されないが、上記のH鎖及びL鎖をコードする抗体遺伝子を得るための感作抗原は、免疫原性を有する完全抗原と、免疫原性を示さないハプテン等を含む不完全抗原の両方を含む。例えば、目的タンパク質の全長タンパク質、又は部分ペプチドなどを用いることができる。その他、多糖類、核酸、脂質等から構成される物質が抗原となり得ることが知られており、本発明の抗体の抗原は特に限定されるものではない。抗原の調製は、当業者に公知の方法により行うことができ、例えば、バキュロウィルスを用いた方法例えば、WO9846777などなどに準じて行うことができる。ハイブリドーマの作製は、たとえば、ミルステインらの方法GKohlerandCMilsteinMethodsEnzymol198173346等に準じて行うことができる。抗原の免疫原性が低い場合には、アルブミン等の免疫原性を有する巨大分子と結合させ、免疫を行えばよい。また、必要に応じ抗原を他の分子と結合させることにより可溶性抗原とすることもできる。膜抗原例えば、受容体などのような膜貫通分子を抗原として用いる場合、膜抗原の細胞外領域部分を断片として用いたり、膜貫通分子を細胞表面上に発現する細胞を免疫原として使用することも可能である。抗体産生細胞は、上述の適当な感作抗原を用いて動物を免疫化することにより得ることができる。または、抗体を産生し得るリンパ球をinvitroで免疫化して抗体産生細胞とすることもできる。免疫化する動物としては、各種哺乳動物を使用できるが、ゲッ歯目、ウサギ目、霊長目の動物が一般的に用いられる。マウス、ラット、ハムスター等のゲッ歯目、ウサギ等のウサギ目、カニクイザル、アカゲザル、マントヒヒ、チンパンジー等のサル等の霊長目の動物を例示することができる。その他、ヒト抗体遺伝子のレパートリーを有するトランスジェニック動物も知られており、このような動物を使用することによりヒト抗体を得ることもできるWO9634096MendezetalNatGenet19971514656参照。このようなトランスジェニック動物の使用に代えて、例えば、ヒトリンパ球をinvitroで所望の抗原または所望の抗原を発現する細胞で感作し、感作リンパ球をヒトミエローマ細胞、例えばU266と融合させることにより、抗原への結合活性を有する所望のヒト抗体を得ることもできる特公平159878号公報参照。また、ヒト抗体遺伝子の全てのレパートリーを有するトランスジェニック動物を所望の抗原で免疫することで所望のヒト抗体を取得することができるWO9312227、WO9203918、WO9402602、WO9634096、WO9633735参照。動物の免疫化は、例えば、感作抗原をPhosphateBufferedSalinePBSまたは生理食塩水等で適宜希釈、懸濁し、必要に応じてアジュバントを混合して乳化した後、動物の腹腔内または皮下に注射することにより行われる。その後、好ましくは、フロイント不完全アジュバントに混合した感作抗原を4~21日毎に数回投与する。抗体の産生の確認は、動物の血清中の目的とする抗体力価を慣用の方法により測定することにより行われ得る。ハイブリドーマは、所望の抗原で免疫化した動物またはリンパ球より得られた抗体産生細胞を、慣用の融合剤例えば、ポリエチレングリコールを使用してミエローマ細胞と融合して作成することができるGodingMonoclonalAntibodiesPrinciplesandPracticeAcademicPress198659103。必要に応じハイブリドーマ細胞を培養増殖し、免疫沈降、放射免疫分析RIA、酵素結合免疫吸着分析ELISA等の公知の分析法により該ハイブリドーマより産生される抗体の結合特異性を測定する。その後、必要に応じ、目的とする特異性、親和性または活性が測定された抗体を産生するハイブリドーマを限界希釈法等の手法によりサブクローニングすることもできる。続いて、選択された抗体をコードする遺伝子をハイブリドーマまたは抗体産生細胞感作リンパ球等から、抗体に特異的に結合し得るプローブ例えば、抗体定常領域をコードする配列に相補的なオリゴヌクレオチド等を用いてクローニングすることができる。また、mRNAからRTPCRによりクローニングすることも可能である。免疫グロブリンは、IgA、IgD、IgE、IgG及びIgMの5つの異なるクラスに分類される。さらに、これらのクラスは幾つかのサブクラスアイソタイプ例えば、IgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4IgA1及びIgA2等に分けられる。本発明において抗体の製造に使用するH鎖及びL鎖は、これらいずれのクラス及びサブクラスに属する抗体に由来するものであってもよく、特に限定されないが、IgGは特に好ましいものである。ここで、H鎖及びL鎖をコードする遺伝子を遺伝子工学的手法により改変することも可能である。例えば、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ハムスター抗体、ヒツジ抗体、ラクダ抗体等の抗体について、ヒトに対する異種免疫原性を低下させること等を目的として、人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体等を適宜作製することができる。キメラ抗体は、ヒト以外の哺乳動物、例えば、マウス抗体のH鎖、L鎖の可変領域とヒト抗体のH鎖、L鎖の定常領域からなる抗体であり、マウス抗体の可変領域をコードするDNAをヒト抗体の定常領域をコードするDNAと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得ることができる。ヒト化抗体は、再構成reshapedヒト抗体とも称され、ヒト以外の哺乳動物、たとえばマウス抗体の相補性決定領域CDRcomplementarydeterminingregionを連結するように設計したDNA配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからPCR法により合成する。得られたDNAをヒト抗体定常領域をコードするDNAと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得られるEP239400WO9602576参照。CDRを介して連結されるヒト抗体のFRは、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよいKSatoetalCancerRes19935310011006。上述のヒト化以外に、例えば、抗原との結合性等の抗体の生物学的特性を改善するために改変を行うことも考えられる。本発明における改変は、部位特異的突然変異例えば、KunkelProcNatlAcadSciUSA82488参照、PCR変異、カセット変異等の方法により行うことができる。一般に、生物学的特性の改善された抗体変異体は70以上、より好ましくは80以上、さらに好ましくは90以上例えば、95以上、97、98、99等のアミノ酸配列相同性及びまたは類似性を、元となった抗体の可変領域のアミノ酸配列に対して有する。本明細書において、配列の相同性及びまたは類似性は、配列相同性が最大の値を取るように必要に応じ配列を整列化、及びギャップ導入した後、元となった抗体残基と相同同じ残基または類似一般的なアミノ酸の側鎖の特性に基き同じグループに分類されるアミノ酸残基するアミノ酸残基の割合として定義される。通常、天然のアミノ酸残基は、その側鎖の性質に基づいて疎水性:アラニン、イソロイシン、バリン、メチオニン及びロイシン;中性親水性:アスパラギン、グルタミン、システイン、スレオニン及びセリン;酸性:アスパラギン酸及びグルタミン酸;塩基性:アルギニン、ヒスチジン及びリジン;鎖の配向に影響する残基:グリシンおよびプロリン;ならびに芳香族性:チロシン、トリプトファン及びフェニルアラニンのグループに分類される。通常、H鎖及びL鎖の可変領域中に存在する全部で6つの相補性決定領域超可変部CDRが相互作用し、抗体の抗原結合部位を形成している。このうち1つの可変領域であっても全結合部位を含むものよりは低い親和性となるものの、抗原を認識し、結合する能力があることが知られている。従って、本発明のH鎖及びL鎖をコードする抗体遺伝子は、該遺伝子によりコードされるポリペプチドが所望の抗原との結合性を維持していればよく、H鎖及びL鎖の各々の抗原結合部位を含む断片部分をコードしていればよい。重鎖可変領域は、上述のように、通常3つのCDR領域と4つのFR領域によって構成されている。本発明の好ましい態様において改変に供するアミノ酸残基としては、例えば、CDR領域あるいはFR領域に位置するアミノ酸残基の中から適宜選択することができる。一般的にCDR領域のアミノ酸残基の改変は、抗原に対する結合能を低下させる場合がある。従って、本発明において改変に供するアミノ酸残基としては、特に限定されるものではないが、FR領域に位置するアミノ酸残基の中から適宜選択することが好ましい。CDRであっても改変によって結合能が低下しないことが確認された場合は、その箇所を選択することが可能である。また、ヒトもしくはマウス等の生物において、抗体の可変領域のFRとして利用可能な配列を、当業者であれば、公共のデータベース等を利用して適宜取得することができる。さらに、本発明は本発明の抗体をコードする遺伝子を提供する。本発明の抗体をコードする遺伝子は如何なる遺伝子でもよく、DNA、RNA、その他核酸類似体などでもよい。さらに本発明は、上記遺伝子を有する宿主細胞を提供する。該宿主細胞は、特に制限されず、例えば、大腸菌や種々の動物細胞などを挙げることができる。宿主細胞は、例えば、本発明の抗体の製造や発現のための産生系として使用することができる。ポリペプチド製造のための産生系には、invitroおよびinvivoの産生系がある。invitroの産生系としては、真核細胞を使用する産生系及び原核細胞を使用する産生系が挙げられる。宿主細胞として使用できる真核細胞として、例えば、動物細胞、植物細胞、真菌細胞が挙げられる。動物細胞としては、哺乳類細胞、例えば、CHOJExpMed108940、COS、HEK293、3T3、ミエローマ、BHKbabyhamsterkidney、HeLa、Vero等、両生類細胞、例えばアフリカツメガエル卵母細胞ValleetalNature291338340、及び昆虫細胞、例えば、Sf9、Sf21、Tn5が例示される。本発明の抗体の発現においては、CHODG44、CHODX11B、COS7細胞、HEK293細胞、BHK細胞が好適に用いられる。動物細胞において、大量発現を目的とする場合には特にCHO細胞が好ましい。宿主細胞へのベクターの導入は、例えば、リン酸カルシウム法、DEAEデキストラン法、カチオニックリボソームDOTAPBoehringerMannheim製を用いた方法、エレクトロポレーション法、リポフェクションなどの方法で行うことが可能である。植物細胞としては、例えば、ニコチアナタバカムNicotianatabacum由来の細胞およびウキクサLemnaminorが蛋白質生産系として知られており、この細胞をカルス培養する方法により本発明の抗体を産生させることができる。真菌細胞としては、酵母、例えば、サッカロミセスSaccharomyces属の細胞サッカロミセスセレビシエSaccharomycescerevisiae、サッカロミセスポンベSaccharomycespombe等、及び糸状菌、例えば、アスペルギルスAspergillus属の細胞アスペルギルスニガーAspergillusniger等を用いた蛋白質発現系が公知であり、本発明の抗体産生の宿主として利用できる。原核細胞を使用する場合、細菌細胞を用いる産生系がある。細菌細胞としては、上述の大腸菌Ecoliに加えて、枯草菌を用いた産生系が知られており、本発明の抗体産生に利用できる。<スクリーニング方法>本発明は抗原結合分子の酸性pHにおける抗原結合活性が中性pHにおける抗原結合活性よりも低い抗原結合分子をスクリーニングする方法を提供する。又、本発明は1分子で複数の抗原に結合することが可能な抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。又、本発明は血漿中滞留性に優れた抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。又、本発明は細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で解離する抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。又、本発明は抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれ、抗原と結合していない状態で細胞外に放出される抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。又、本発明は血漿中抗原消失能が増加した抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。さらに、本発明は医薬組成物として用いる際に特に有用である抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。具体的には、本発明は以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程。本発明のスクリーニング方法において、pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性はpH67~pH100の間の抗原結合活性であれば特に限定されないが、好ましい抗原結合活性として、pH70~pH80の間の抗原結合活性を挙げることができ、より好ましい抗原結合活性としてpH74における抗原結合活性を挙げることができる。又、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性はpH40~pH65の間の抗原結合活性であれば特に限定されないが、好ましい抗原結合活性としてpH55~pH65の間の抗原結合活性を挙げることができ、より好ましい抗原結合活性としてpH58またはpH55における抗原結合活性を挙げることができる。抗原結合分子の抗原結合活性は当業者に公知の方法により測定することが可能であり、pH以外の条件については当業者が適宜決定することが可能である。抗原結合分子の抗原結合活性は、KDDissociationconstant:解離定数、見かけのKDApparentdissociationconstant:見かけの解離定数、解離速度であるkdDissociationrate:解離速度、又は見かけのkd等として評価することが可能である。これらは当業者公知の方法で測定することが可能であり、例えばBiacore、スキャッチャードプロット、FACS等を用いることが可能である。本発明において、pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程は、pH40~pH65での抗原結合活性がpH67~pH100での抗原結合活性より低い抗原結合分子を選択する工程と同じ意味である。pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い限り、pH67~pH100での抗原結合活性とpH40~pH65での抗原結合活性の差は特に限定されないが、好ましくはpH67~pH100における抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性の2倍以上であり、さらに好ましくは10倍以上であり、より好ましくは40倍以上である。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。pH67~pH100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。pH40~pH65の条件下で抗原に結合しない抗原結合分子を選択する工程、で選択された抗原結合分子をpH67~pH100の条件下で抗原に結合させる工程、pH67~pH100の条件下で抗原に結合した抗原結合分子を取得する工程。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。pH67~pH100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程、解離した抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程。なお、~の工程は2回以上繰り返されてもよい。従って、本発明は上述の方法において、~の工程を2回以上繰り返す工程をさらに含む方法を提供する。~の工程が繰り返される回数は特に限定されないが、通常10回以内である。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。pH40~pH65の条件下で抗原に結合しない抗原結合分子を選択する工程、で選択された抗原結合分子をpH67~pH100の条件下で抗原に結合させる工程、pH67~pH100の条件下で抗原に結合した抗原結合分子を取得する工程、解離した抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程。なお、~の工程は2回以上繰り返されてもよい。従って、本発明は上述の方法において、~の工程を2回以上繰り返す工程をさらに含む方法を提供する。~の工程が繰り返される回数は特に限定されないが、通常10回以内である。本発明のスクリーニング方法において、ファージライブラリーなどが用いられる場合には、抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程は、ファージを増幅する工程とすることも可能である。本発明の方法において抗原と抗原結合分子の結合は如何なる状態で行われてもよく、特に限定されない。例えば、固定化された抗原結合分子に抗原を接触させることにより抗原結合分子と抗原を結合させてもよいし、固定化された抗原に抗原結合分子を接触させることにより抗原結合分子と抗原を結合させてもよい。又、溶液中で抗原結合分子と抗原を接触させることにより抗原結合分子と抗原を結合させてもよい。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子の第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子の第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも低い抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を通過させる工程、の工程でカラムに結合せずに溶出した抗原結合分子を回収する工程、で回収された抗原結合分子を第二のpH条件下でカラムに結合させる工程、の工程においてカラムに結合した抗原結合分子を取得する工程。さらに本発明は以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程。なお、~の工程は2回以上繰り返されてもよい。従って、本発明は上述の方法において、~の工程を2回以上繰り返す工程をさらに含む方法を提供する。~の工程が繰り返される回数は特に限定されないが、通常10回以内である。本発明において、第一のpHと第二のpHはそれぞれが同一のpHでない限り、如何なるpHでもよい。好ましい第一のpHと第二のpHの組み合わせの例として、第一のpHがpH67~100の間のpHであり、第二のpHがpH40~pH65の間のpHである組み合わせを挙げることができ、より好ましい組み合わせの例としては、第一のpHがpH70~pH80の間のpHであり、第二のpHがpH55~pH65の間のpHである組み合わせを挙げることができ、さらに好ましい組み合わせの例としては、第一のpHがpH74であり、第二のpHがpH58またはpH55である組み合わせを挙げることができる。他の好ましい第一のpHと第二のpHの組み合わせの例として、第一のpHがpH40~65の間のpHであり、第二のpHがpH67~pH100の間のpHである組み合わせを挙げることができ、より好ましい組み合わせの例としては、第一のpHがpH55~pH65の間のpHであり、第二のpHがpH70~pH80の間のpHである組み合わせを挙げることができ、さらに好ましい組み合わせの例としては、第一のpHがpH58またはpH55であり、第二のpHがpH74である組み合わせを挙げることができる。本発明の方法によりスクリーニングされる抗原結合分子は如何なる抗原結合分子でもよく、例えば上述の抗原結合分子を本発明のスクリーニングに用いることが可能である。例えば、天然の配列を有する抗原結合分子をスクリーニングしてもよいし、アミノ酸配列が置換された抗原結合分子をスクリーニングしてもよい。本発明においてスクリーニングされる抗原結合分子の好ましい例として、例えば、抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸がヒスチジンで置換された又は少なくとも1つのヒスチジンが挿入された抗原結合分子を挙げることができる。ヒスチジン置換又は挿入が導入される箇所は特に限定されず、如何なる箇所に導入されていてもよい。又、ヒスチジン置換又は挿入は1箇所に導入されてもよいし、2箇所以上の複数の箇所に導入されてもよい。又、本発明においてスクリーニングされる抗原結合分子の好ましい例として、例えば、改変された抗体定常領域を含む抗原結合分子を挙げることができる。本発明の方法によりスクリーニングされる抗原結合分子は、例えば、ヒスチジンスキャンなどの方法により、異なる箇所にヒスチジン置換又は挿入が導入された複数の異なる抗原結合分子であってもよい。従って、本発明のスクリーニング方法は、抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換する又は少なくとも1つのヒスチジンを挿入する工程をさらに含んでもよい。なお、本発明のスクリーニング方法はヒスチジンの代わりに非天然アミノ酸を用いてもよい。従って、上述のヒスチジンを非天然アミノ酸と置き換えて本発明を理解することも可能である。又、本発明のスクリーニング方法は、抗体定常領域のアミノ酸を改変する工程をさらに含んでもよい。本発明のスクリーニング方法でスクリーニングされる抗原結合物質はどのように調製されてもよく、例えば、あらかじめ存在している抗体、あらかじめ存在しているライブラリーファージライブラリー等、動物への免疫から得られたハイブリドーマや免疫動物からのB細胞から作製された抗体又はライブラリー、これらの抗体やライブラリーにヒスチジンや非天然アミノ酸変異を導入した抗体又はライブラリーヒスチジン又は非天然アミノ酸の含有率を高くしたライブラリーや特定箇所にヒスチジン又は非天然アミノ酸変異を導入したライブラリー等などを用いることが可能である。本発明のスクリーニング方法により複数回抗原に結合し血漿中滞留性が優れた抗原結合分子を得ることが可能である。従って、本発明のスクリーニング方法は、血漿中滞留性に優れた抗原結合分子を得る為のスクリーニング方法として利用することができる。又、本発明のスクリーニング方法により、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原に2回以上結合することが可能である抗原結合分子を得ることが可能である。従って、本発明のスクリーニング方法は、抗原に2回以上結合することができる抗原結合分子を得る為のスクリーニング方法として利用することができる。さらに、本発明のスクリーニング方法により、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原結合分子の抗原結合部位の数より多い数の抗原に結合することが可能である抗原結合分子を得ることが可能である。従って、本発明のスクリーニング方法は、抗原結合分子の抗原結合部位の数よりも多い数の抗原に結合することが可能である抗原結合分子を得る為のスクリーニング方法として利用することができる。例えば、抗体が中和抗体の場合には、抗原結合分子の抗原結合部位の数よりも多い数の抗原を中和することが可能である抗原結合分子を得る為のスクリーニング方法として利用することができる。さらに、本発明のスクリーニング方法により、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、細胞外で結合した抗原を細胞内で解離することが可能である抗原結合分子を得ることが可能である。従って、本発明のスクリーニング方法は、細胞外で結合した抗原を細胞内で解離する抗原結合分子を得る為のスクリーニング方法として利用することができる。さらに本発明のスクリーニング方法により、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれ、抗原と結合していない状態で細胞外に放出される抗原結合分子を得ることが可能である。従って、本発明のスクリーニング方法は、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれ、抗原と結合していない状態で細胞外に放出される抗原結合分子を得る為のスクリーニング方法として利用することができる。さらに、本発明のスクリーニング方法により、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原を血漿中から速く消失させることができる抗原結合分子を得ることが可能である。従って、本発明のスクリーニング方法は、血漿中抗原消失能が増加した高い抗原結合分子を得る為のスクリーニング方法として利用することができる。又、これらの抗原結合分子は、患者への投与量や投与頻度を減らすことが可能であり、結果として総投与量を減らすことが可能となる為、医薬品として特に優れていると考えられる。従って、本発明のスクリーニング方法は、医薬組成物として用いる為の抗原結合分子のスクリーニング方法として利用することが可能である。さらに、本発明は元のライブラリーと比較してヒスチジンを含む割合を上昇させたライブラリーを提供する。ライブラリー中に含まれる抗原結合分子が有するヒスチジンの割合が高くなっているライブラリーは上述のスクリーニング方法や後述の製造方法に用いることが可能である。ヒスチジンを含む割合を高めたライブラリーの作製方法は、当業者に公知の方法を用いることにより作製することが可能であり、例えば以下の方法が挙げられる。ライブラリー作製のための核酸を合成する際に、トリヌクレオチド法JMolBiol2008Feb293761182200により、20種類のアミノ酸をコードする20種類の3塩基コドントリヌクレオチドを等しい確率で含有させることによって、ライブラリー化した部位に20種類のアミノ酸が等しい確率で含有させることが可能である。このとき20種類のうちヒスチジンをコードするトリヌクレオチドの割合を他のアミノ酸よりも高くすることによって、ライブラリー化した部位にヒスチジンが出現する可能性を高めることが可能である。<抗原結合分子製造方法>本発明は抗原結合分子のエンドソーム内でのpHにおける抗原結合活性が血漿中でのpHにおける抗原結合活性よりも低い抗原結合分子の製造方法を提供する。又、本発明は血漿中滞留性に優れた抗原結合分子の製造方法を提供する。さらに、本発明は医薬組成物として用いる際に特に有用である抗原結合分子の製造方法を提供する。具体的には、本発明は以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法を提供する。pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程、で選択された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法を提供する。pH67~pH100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法を提供する。pH40~pH65の条件下で抗原に結合しない抗原結合分子を選択する工程、で選択された抗原結合分子をpH67~pH100の条件下で抗原に結合させる工程、pH67~pH100の条件下で抗原に結合した抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。さらに本発明は以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法を提供する。pH67~100の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、の抗原に結合した抗原結合分子をpH40~pH65の条件下に置く工程、pH40~pH65の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程、解離した抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。なお、~の工程は2回以上繰り返されてもよい。従って、本発明は上述の方法において、~の工程を2回以上繰り返す工程をさらに含む方法を提供する。~の工程が繰り返される回数は特に限定されないが、通常10回以内である。さらに本発明は以下の工程を含む、抗原結合分子のスクリーニング方法を提供する。pH40~pH65の条件下で抗原に結合しない抗原結合分子を選択する工程、で選択された抗原結合分子をpH67~pH100の条件下で抗原に結合させる工程、pH67~pH100の条件下で抗原に結合した抗原結合分子を取得する工程、解離した抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。なお、~の工程は2回以上繰り返されてもよい。従って、本発明は上述の方法において、~の工程を2回以上繰り返す工程をさらに含む方法を提供する。~の工程が繰り返される回数は特に限定されないが、通常10回以内である。さらに、本発明は以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法を提供する。抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。さらに、本発明は以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法を提供する。抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、溶出された抗原結合分子を取得する工程、で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。なお、~の工程は2回以上繰り返されてもよい。従って、本発明は上述の方法において、~の工程を2回以上繰り返す工程をさらに含む方法を提供する。~の工程が繰り返される回数は特に限定されないが、通常10回以内である。本発明の製造方法において、ファージライブラリーなどが用いられる場合には、抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程は、ファージを増幅する工程とすることも可能である。本発明の製造方法で用いられる抗原結合物質はどのように調製されてもよく、例えば、あらかじめ存在している抗体、あらかじめ存在しているライブラリーファージライブラリー等、動物への免疫から得られたハイブリドーマや免疫動物からのB細胞から作製された抗体又はライブラリー、これらの抗体やライブラリーにヒスチジンや非天然アミノ酸変異を導入した抗体又はライブラリーヒスチジン又は非天然アミノ酸の含有率を高くしたライブラリーや特定箇所にヒスチジン又は非天然アミノ酸変異を導入したライブラリー等などを用いることが可能である。上述の製造方法において、pH67~pH100における抗原結合分子の抗原結合活性はpH67~pH100の間の抗原結合活性であれば特に限定されないが、好ましい抗原結合活性として、pH70~pH80の間の抗原結合活性を挙げることができ、さらに好ましい抗原結合活性としてpH74における抗原結合活性を挙げることができる。又、pH40~pH65における抗原結合分子の抗原結合活性はpH40~pH65の間の抗原結合活性であれば特に限定されないが、好ましい抗原結合活性としてpH55~pH65の間の抗原結合活性を挙げることができ、さらに好ましい抗原結合活性としてpH58またはpH55における抗原結合活性を挙げることができる。抗原結合分子の抗原結合活性は当業者に公知の方法により測定することが可能であり、pH以外の条件については当業者が適宜決定することが可能である。pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程は、pH40~pH65での抗原結合活性がpH67~pH100での抗原結合活性より低い抗原結合分子を選択する工程と同じ意味である。pH67~pH100での抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性より高い限り、pH67~pH100での抗原結合活性とpH40~pH65での抗原結合活性の差は特に限定されないが、好ましくはpH67~pH100における抗原結合活性がpH40~pH65での抗原結合活性の2倍以上であり、さらに好ましくは10倍以上であり、より好ましくは40倍以上である。上述の製造方法において抗原と抗原結合分子の結合は如何なる状態で行われてもよく、特に限定されない。例えば、固定化された抗原結合分子に抗原を接触させることにより抗原結合分子と抗原を結合させてもよいし、固定化された抗原に抗原結合分子を接触させることにより抗原結合分子と抗原を結合させてもよい。又、溶液中で抗原結合分子と抗原を接触させることにより抗原結合分子と抗原を結合させてもよい。上述の製造方法において、第一のpHと第二のpHはそれぞれが同一のpHでない限り、如何なるpHでもよい。好ましい第一のpHと第二のpHの組み合わせの例として、第一のpHがpH67~100の間のpHであり、第二のpHがpH40~pH65の間のpHである組み合わせを挙げることができ、より好ましい組み合わせの例としては、第一のpHがpH70~pH80の間のpHであり、第二のpHがpH55~pH65の間のpHである組み合わせを挙げることができ、さらに好ましい組み合わせの例として第一のpHがpH74であり、第二のpHがpH58またはpH55である組み合わせを挙げることができる。他の好ましい第一のpHと第二のpHの組み合わせの例として、第一のpHがpH40~pH65の間のpHであり、第二のpHがpH67~pH100の間のpHである組み合わせを挙げることができ、より好ましい組み合わせの例としては、第一のpHがpH55~pH65の間のpHであり、第二のpHがpH70~pH80の間のpHである組み合わせを挙げることができ、さらに好ましい組み合わせの例として第一のpHがpH58またはpH55であり、第二のpHがpH74である組み合わせを挙げることができる。上述の製造方法により製造される抗原結合分子は如何なる抗原結合分子でもよいが、例えば、抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸がヒスチジンで置換された又は少なくとも1つのヒスチジンが挿入された抗原結合分子を好ましい例として挙げることができる。そのようなヒスチジン変異が導入される箇所は特に限定されず、如何なる箇所に導入されていてもよい。又、ヒスチジン変異は1箇所に導入されてもよいし、2箇所以上の複数の箇所に導入されてもよい。従って、本発明の製造方法においては、抗原結合分子の少なくとも1つのアミノ酸をヒスチジンに置換又は挿入する工程をさらに含んでもよい。なお、本発明の製造方法においてはヒスチジンの代わりに非天然アミノ酸を用いてもよい。従って、上述のヒスチジンを非天然アミノ酸と置き換えて本発明を理解することも可能である。又、上述の製造方法により製造される抗原結合分子の他の態様として、例えば、改変された抗体定常領域を含む抗原結合分子を挙げることができる、従って、本発明の製造方法においては、抗体定常領域中のアミノ酸を改変する工程をさらに含んでもよい。本発明の製造方法により製造される抗原結合分子は血漿中滞留性が優れた抗原結合分子である。従って、本発明の製造方法は、血漿中滞留性に優れた抗原結合分子の製造方法として利用することができる。又、製造方法により製造される抗原結合分子は、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原に2回以上結合することが可能であると考えられる。従って、本発明の製造方法は、抗原に2回以上結合することができる抗原結合分子の製造方法として利用することができる。さらに、本発明の製造方法により製造される抗原結合分子は、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原結合分子の抗原結合部位の数より多い数の抗原に結合することが可能であると考えられる。従って、本発明の製造方法は、抗原結合分子の抗原結合部位の数よりも多い数の抗原に結合することが可能である抗原結合分子の製造方法として利用することができる。さらに、本発明の製造方法により製造される抗原結合分子は、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させることが可能であると考えられる。従って、本発明の製造方法は、細胞外で結合した抗原を細胞内で解離することが可能である抗原結合分子の製造方法として利用することができる。さらに、本発明の製造方法により製造される抗原結合分子は、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させることが可能であると考えられる。従って、本発明の製造方法は、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれ、抗原と結合していない状態で細胞外に放出される抗原結合分子の製造方法として利用することができる。さらに、本発明の製造方法により製造される抗原結合分子は、ヒト、マウス、サルなどの動物に投与した際に、抗原を血漿中から速く消失させることができると考えられる。従って、本発明の製造方法は、血漿中抗原消失能が増加した高い抗原結合分子の製造方法として利用することができる。又、これらの抗原結合分子は、患者への投与回数を減らすことが可能であり、医薬品として特に優れていると考えられる。従って、本発明の製造方法は、医薬組成物として用いる為の抗原結合分子の製造方法として利用することが可能である。本発明の製造方法において得られた遺伝子は、通常、適当なベクターへ担持挿入され、宿主細胞へ導入される。該ベクターとしては、挿入した核酸を安定に保持するものであれば特に制限されず、例えば宿主に大腸菌を用いるのであれば、クローニング用ベクターとしてはpBluescriptベクターStratagene社製などが好ましいが、市販の種々のベクターを利用することができる。本発明の抗原結合分子を生産する目的においてベクターを用いる場合には、特に発現ベクターが有用である。発現ベクターとしては、試験管内、大腸菌内、培養細胞内、生物個体内で抗原結合分子を発現するベクターであれば特に制限されないが、例えば、試験管内発現であればpBESTベクタープロメガ社製、大腸菌であればpETベクターInvitrogen社製、培養細胞であればpME18SFL3ベクターGenBankAccessionNoAB009864、生物個体であればpME18SベクターMolCellBiol8466472などが好ましい。ベクターへの本発明のDNAの挿入は、常法により、例えば、制限酵素サイトを用いたリガーゼ反応により行うことができるCurrentprotocolsinMolecularBiologyeditAusubeletalPublishJohnWileySons.Section1141111。上記宿主細胞としては特に制限はなく、目的に応じて種々の宿主細胞が用いられる。抗原結合分子を発現させるための細胞としては、例えば、細菌細胞例:ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸菌、ストレプトミセス、枯草菌、真菌細胞例:酵母、アスペルギルス、昆虫細胞例:ドロソフィラS2、スポドプテラSF9、動物細胞例:CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK293、Bowesメラノーマ細胞および植物細胞を例示することができる。宿主細胞へのベクター導入は、例えば、リン酸カルシウム沈殿法、電気パルス穿孔法CurrentprotocolsinMolecularBiologyeditAusubeletalPublishJohnWileySons.Section9199、リポフェクション法、マイクロインジェクション法などの公知の方法で行うことが可能である。宿主細胞の培養は、公知の方法に従って行うことができる。例えば、動物細胞を宿主とした場合、培養液として、例えば、DMEM、MEM、RPMI1640、IMDMを使用することができる。その際、FBS、牛胎児血清FCS等の血清補液を併用しても、無血清培養により細胞を培養してもよい。培養時のpHは、約6~8とするのが好ましい。培養は、通常、約30~40°Cで約15~200時間行い、必要に応じて培地の交換、通気、攪拌を加える。宿主細胞において発現した抗原結合分子を小胞体の内腔に、細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるために、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込むことができる。これらのシグナルは目的の抗原結合分子に対して内因性であっても、異種シグナルであってもよい。一方、invivoでポリペプチドを産生させる系としては、例えば、動物を使用する産生系や植物を使用する産生系が挙げられる。これらの動物又は植物に目的とするポリヌクレオチドを導入し、動物又は植物の体内でポリペプチドを産生させ、回収する。本発明における宿主とは、これらの動物、植物を包含する。動物を使用する場合、哺乳類動物、昆虫を用いる産生系がある。哺乳類動物としては、ヤギ、ブタ、ヒツジ、マウス、ウシ等を用いることができるVickiGlaserSPECTRUMBiotechnologyApplications。また、哺乳類動物を用いる場合、トランスジェニック動物を用いることができる。例えば、本発明の抗原結合分子をコードするポリヌクレオチドを、ヤギβカゼインのような乳汁中に固有に産生されるポリペプチドをコードする遺伝子との融合遺伝子として調製する。次いで、この融合遺伝子を含むポリヌクレオチド断片をヤギの胚へ注入し、この胚を雌のヤギへ移植する。胚を受容したヤギから生まれるトランスジェニックヤギ又はその子孫が産生する乳汁から、目的の抗原結合分子を得ることができる。トランスジェニックヤギから産生される抗原結合分子を含む乳汁量を増加させるために、適宜ホルモンをトランスジェニックヤギに投与してもよいEbertetalBioTechnology12699702。また、本発明の抗原結合分子を産生させる昆虫としては、例えばカイコを用いることができる。カイコを用いる場合、目的の抗原結合分子をコードするポリヌクレオチドを挿入したバキュロウィルスをカイコに感染させることにより、このカイコの体液から目的の抗原結合分子を得ることができる。さらに、植物を本発明の抗原結合分子産生に使用する場合、例えばタバコを用いることができる。タバコを用いる場合、目的とする抗原結合分子をコードするポリヌクレオチドを植物発現用ベクター、例えばpMON530に挿入し、このベクターをアグロバクテリウムツメファシエンスAgrobacteriumtumefaciensのようなバクテリアに導入する。このバクテリアをタバコ、例えば、ニコチアナタバカムNicotianatabacumに感染させ、本タバコの葉より所望の抗原結合分子を得ることができるMaetalEurJImmunol241318。また、同様のバクテリアをウキクサLemnaminorに感染させ、クローン化した後にウキクサの細胞より所望の抗原結合分子を得ることができるCoxKMetalNatBiotechnol2006Dec2415911597。このようにして得られた抗原結合分子は、宿主細胞内または細胞外培地、乳汁などから単離し、実質的に純粋で均一な抗原結合分子として精製することができる。抗原結合分子の分離、精製は、通常のポリペプチドの精製で使用されている分離、精製方法を使用すればよく、何ら限定されるものではない。例えば、クロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動法、透析、再結晶等を適宜選択、組み合わせて抗原結合分子を分離、精製することができる。クロマトグラフィーとしては、例えばアフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー等が挙げられるStrategiesforProteinPurificationandCharacterizationALaboratoryCourseManualEdDanielRMarshaketalColdSpringHarborLaboratoryPress。これらのクロマトグラフィーは、液相クロマトグラフィー、例えばHPLC、FPLC等の液相クロマトグラフィーを用いて行うことができる。アフィニティクロマトグラフィーに用いるカラムとしては、プロテインAカラム、プロテインGカラムが挙げられる。例えば、プロテインAを用いたカラムとして、HyperDPOROSSepharoseFF等が挙げられる。必要に応じ、抗原結合分子の精製前又は精製後に適当なタンパク質修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えたり、部分的にペプチドを除去することもできる。タンパク質修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キモトリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グルコシダーゼなどが用いられる。<抗IL6受容体抗体>さらに、本発明は以下の~のいずれかに記載の抗IL6受容体抗体を提供する。配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において27番目のTyr、31番目のAsp、32番目のAsp、35番目のTrp、51番目のTyr、59番目のAsn、63番目のSer、106番目のMet、108番目のTyrの少なくとも1つがHisに置換されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体、配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において27番目のTyr、31番目のAspおよび35番目のTrpがHisに置換されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体H3pI、配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において27番目のTyr、31番目のAsp、32番目のAsp、35番目のTrp、59番目のAsn、63番目およびSer、108番目のTyrがHisに置換されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体、配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において27番目のTyr、31番目のAsp、32番目のAsp、35番目のTrp、59番目のAsn、63番目およびSer、108番目のTyrがHisに置換され、かつ99番目のSerがValに、103番目のThrがIleに置換されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体H170、配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において31番目のAsp、51番目のTyr、63番目のSer、106番目のMetおよび108番目のTyrがHisに置換されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体、配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において31番目のAsp、51番目のTyr、63番目のSer、106番目のMetおよび108番目のTyrがHisに置換され、かつ99番目のSerがPheに、103番目のThrがIleに置換されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体CLH5、配列番号:2PF1L可変領域のアミノ酸配列において、28番目のAsp、32番目のTyr、53番目のGlu、56番目のSer、92番目のAsnの少なくとも1つがHisに置換されたアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体、配列番号:2PF1L可変領域のアミノ酸配列において、28番目のAsp、32番目のTyrおよび53番目のGluがHisに置換されたアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体L73、配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において、32番目のTyrおよび53番目のGluがHisに置換されたアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体L82、配列番号:2PF1L可変領域のアミノ酸配列において、32番目のTyr、53番目のGlu、56番目のSerおよび92番目のAsnがHisに置換されたアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体CLL5、の重鎖可変領域およびの軽鎖可変領域を含む抗体、の重鎖可変領域およびの軽鎖可変領域を含む抗体、の重鎖可変領域およびの軽鎖可変領域を含む抗体。配列番号:1H53可変領域のアミノ酸配列において27番目のTyr、31番目のAsp、32番目のAsp、35番目のTrp、51番目のTyr、59番目のAsn、63番目のSer、106番目のMet、108番目のTyrの少なくとも1つがHisに置換されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域の具体的な例としては、例えば、以下の重鎖可変領域を挙げることができる。配列番号:3H3pIのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列番号:4H170のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列番号:5CLH5のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列番号:2PF1L可変領域のアミノ酸配列において、28番目のAsp、32番目のTyr、53番目のGlu、56番目のSer、92番目のAsnの少なくとも1つがHisに置換されたアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域の具体的な例としては、例えば、以下の軽鎖可変領域を挙げることができる。配列番号:6L73のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列番号:7L82のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列番号:8CLL5のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域上述のH3pI、H170、CLH5、L73、L82、およびCLL5の各抗体におけるアミノ酸位置とアミノ酸置換について、以下の表1に示す。アミノ酸位置はKabatナンバリングに基づいて示している。表1H鎖の33番目、および、L鎖の55番目はWTにおいてヒスチジンの配列を有する。本発明は少なくとも上述の~のいずれかに記載のアミノ酸置換を含む抗体及び該抗体の製造方法を提供する。従って本発明の抗体には、上述の~のいずれかに記載のアミノ酸置換に加え、上述の~に記載のアミノ酸置換以外のアミノ酸置換を含む抗体も含まれる。上述の~に記載のアミノ酸置換以外のアミノ酸置換としては、例えば、CDR部分のアミノ酸配列の置換、欠失、付加および/または挿入等や、FRのアミノ酸配列の置換、欠失、付加および/または挿入等が挙げられる。さらに本発明は以下のからのいずれかに記載の抗IL6受容体抗体を提供する。配列番号:21VH1IgG1の1番目から119番目までのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域VH1IgG1可変領域を含む抗体、配列番号:22VH2IgG1の1番目から119番目までのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域VH2IgG1可変領域を含む抗体、配列番号:23VH3IgG1の1番目から119番目までのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域VH3IgG1可変領域を含む抗体、配列番号:24VH4IgG1の1番目から119番目までのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域VH4IgG1可変領域を含む抗体、配列番号:25VL1CKの1番目から107番目までのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域VL1CK可変領域を含む抗体、配列番号:26VL2CKの1番目から107番目までのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域VL2CK可変領域を含む抗体、配列番号:27VL3CKの1番目から107番目までのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域VL3CK可変領域を含む抗体、の重鎖可変領域との軽鎖可変領域を含む抗体Fv1IgG1、の重鎖可変領域と配列番号:7L82に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体Fv2IgG1、の重鎖可変領域との軽鎖可変領域を含む抗体Fv3IgG1、の重鎖可変領域との軽鎖可変領域を含む抗体Fv4IgG1、配列番号:33に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体VH3IgG2ΔGK、配列番号:34に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体VH3M58、配列番号:35に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体VH3M73、の重鎖と配列番号:27VL3CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Fv4IgG2ΔGK、の重鎖と配列番号:27VL3CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Fv4M58、の重鎖と配列番号:27VL3CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体Fv4M73、配列番号:36VH2M71のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体配列番号:37VH2M73のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体配列番号:38VH4M71のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体配列番号:39VH4M73のアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体の重鎖と配列番号:26VL2CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体の重鎖と配列番号:26VL2CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体の重鎖と配列番号:25VL1CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体の重鎖と配列番号:25VL1CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体配列番号:25VL1CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体、配列番号:26VL2CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体、配列番号:27VL3CKのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体。さらに本発明は以下の~いずれかのFRまたはCDRを提供する。配列番号:40に記載の重鎖CDR1VH1234、配列番号:41に記載の重鎖CDR2VH12、配列番号:42に記載の重鎖CDR2VH3、配列番号:43に記載の重鎖CDR2VH4、配列番号:44に記載の重鎖CDR3VH12、配列番号:45に記載の重鎖CDR3VH34、配列番号:46に記載の重鎖FR1VH12、配列番号:47に記載の重鎖FR1VH34、配列番号:48に記載の重鎖FR2VH1234配列番号:49に記載の重鎖FR3VH1、配列番号:50に記載の重鎖FR3VH2、配列番号:51に記載の重鎖FR3VH34、配列番号:52に記載の重鎖FR4VH1234配列番号:53に記載の軽鎖CDR1VL12、配列番号:54に記載の軽鎖CDR1VL3、配列番号:55に記載の軽鎖CDR2VL1VL3、配列番号:56に記載の軽鎖CDR2VL2、配列番号:57に記載の軽鎖CDR3VL123、配列番号:58に記載の軽鎖FR1VL123、配列番号:59に記載の軽鎖FR2VL123、配列番号:60に記載の軽鎖FR3VL123、配列番号:61に記載の軽鎖FR4VL123。上記~の各配列を、図25にまとめて示す。また本発明は、上記~のいずれかのFRまたはCDRを含むポリペプチドを提供する。本発明の抗IL6受容体抗体には、上述のいずれかに記載のアミノ酸置換を含む抗体の断片やその修飾物も含まれる。例えば、抗体の断片としては、Fab、F2、Fv又はH鎖とL鎖のFvを適当なリンカーで連結させたシングルチェインFvscFv、H鎖単独ドメインやL鎖単独ドメイン例えば、NatBiotechnol2005Sep23112636、UnibodyWO2007059782A1、SMIPWO2007014278A2が挙げられる。また抗体の由来としては、特に限定されないが、ヒト抗体、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体などを挙げることができる。又、本発明の抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト化抗体等であってもよい。具体的には、抗体を酵素、例えば、パパイン、ペプシンで処理し抗体断片を生成させるか、又は、これら抗体断片をコードする遺伝子を構築し、これを発現ベクターに導入した後、適当な宿主細胞で発現させる例えば、CoMSetalJImmunol15229682976、BetterMHorwitzAHMethodsinEnzymology178476496、PlueckthunASkerraAMethodsinEnzymology178497515、LamoyiEMethodsinEnzymology121652663、RousseauxJetalMethodsinEnzymology12166366、BirdREetalTIBTECH9132137参照。従って、本発明は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが導入されたベクターを含む宿主細胞を培養する工程を含む、本発明のポリペプチド又は本発明のポリペプチドをコードする遺伝子によりコードされるポリペプチドを製造する方法を提供する。より具体的には、以下の工程を含む本発明のポリペプチドの製造方法を提供する。本発明のポリペプチドをコードする遺伝子が導入されたベクターを含む宿主細胞を培養する工程、当該遺伝子によりコードされるポリペプチドを取得する工程。scFvは、抗体のH鎖V領域とL鎖V領域を連結することにより得られる。このscFvにおいて、H鎖V領域とL鎖V領域はリンカー、好ましくは、ペプチドリンカーを介して連結されるHustonJSetal、ProcNatlAcadSciUSA10058795883。scFvにおけるH鎖V領域およびL鎖V領域は、上記抗体として記載されたもののいずれの由来であってもよい。V領域を連結するペプチドリンカーとしては、例えばアミノ酸1219残基からなる任意の一本鎖ペプチドが用いられる。本発明の抗IL6受容体抗体が定常領域を含む場合、定常領域は如何なるタイプの定常領域でもよく、例えばIgG1、IgG2、IgG4などの定常領域を用いることができる。定常領域はヒト抗体の定常領域であることが好ましい。又、ヒトIgG1、ヒトIgG2、ヒトIgG4などの定常領域に対してアミノ酸配列の置換、欠失、付加および/または挿入等を行った改変体であってもよい。本発明の抗IL6受容体抗体が結合するIL6受容体はヒトIL6受容体であることが好ましい。本発明の抗IL6受容体抗体は、血漿中滞留性に優れている抗体であり、抗IL6受容体抗体が抗原である可溶型IL6受容体および膜型IL6受容体に結合可能な状態で血漿中に存在する時間が延長し、生体内の可溶型IL6受容体および膜型IL6受容体が抗IL6受容体抗体によって結合されている時間が延長した抗体である。又、当該抗IL6受容体抗体は、IL6受容体に2回以上結合することが可能であり、3つ以上のIL6受容体を中和することが可能であると考えられる。<医薬組成物>また本発明は、本発明の抗原結合分子、本発明のスクリーニング方法により単離された抗原結合分子、または本発明の製造方法により製造された抗原結合分子を含む医薬組成物に関する。本発明の抗原結合分子または本発明の製造方法により製造された抗原結合分子は血漿中滞留性に優れており、抗原結合分子の投与頻度を減らせることが期待されるので医薬組成物として有用である。本発明の医薬組成物は医薬的に許容される担体を含むことができる。本発明において医薬組成物とは、通常、疾患の治療もしくは予防、あるいは検査診断のための薬剤を言う。本発明の医薬組成物は、当業者に公知の方法で製剤化することが可能である。例えば、水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、薬理学上許容される担体もしくは媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤などと適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することが考えられる。これら製剤における有効成分量は、指示された範囲の適当な容量が得られるように設定する。注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬例えばDソルビトール、Dマンノース、Dマンニトール、塩化ナトリウムを含む等張液が挙げられる。適当な溶解補助剤、例えばアルコールエタノール等、ポリアルコールプロピレングリコール、ポリエチレングリコール等、非イオン性界面活性剤ポリソルベート80TM、HCO50等を併用してもよい。油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル及び/またはベンジルアルコールを併用してもよい。また、緩衝剤例えば、リン酸塩緩衝液及び酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤例えば、塩酸プロカイン、安定剤例えば、ベンジルアルコール及びフェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填する。本発明の医薬組成物は、好ましくは非経口投与により投与される。例えば、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型の組成物とすることができる。例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などにより全身または局部的に投与することができる。投与方法は、患者の年齢、症状により適宜選択することができる。抗原結合分子含有する医薬組成物の投与量は、例えば、一回につき体重1kgあたり00001mgから1000mgの範囲に設定することが可能である。または、例えば、患者あたり0001~100000mgの投与量とすることもできるが、本発明はこれらの数値に必ずしも制限されるものではない。投与量及び投与方法は、患者の体重、年齢、症状などにより変動するが、当業者であればそれらの条件を考慮し適当な投与量及び投与方法を設定することが可能である。なお、本発明で記載されているアミノ酸配列に含まれるアミノ酸は翻訳後に修飾例えば、N末端のグルタミンのピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾は当業者によく知られた修飾であるを受ける場合もあるが、そのようにアミノ酸が翻訳後修飾された場合であっても当然のことながら本発明で記載されているアミノ酸配列に含まれる。なお本明細書において引用されたすべての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。以下本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。実施例1改変ヒト化PM1抗体の作製組み換え可溶型ヒトIL6レセプターSR344の調製抗原であるヒトIL6レセプターの組み換えヒトIL6レセプターは以下のように調製した。JBiochem108673676で報告されているN末端側1番目から344番目のアミノ酸配列からなる可溶型ヒトIL6レセプター以下、SR344Yamasakiら、Science1988;241:825828のCHO細胞定常発現株を作製した。SR344発現CHO細胞から得られた培養上清から、BlueSepharose6FFカラムクロマトグラフィー、SR344に対する特異抗体を固定したカラムによるアフィニティクロマトグラフィー、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーの3つのカラムクロマトグラフィーにより、SR344を精製した。メインピークとして溶出した画分を最終精製品とした。組み換えカニクイザル可溶型IL6レセプターcIL6Rの調製公開されているアカゲザルIL6レセプター遺伝子配列BirneyetalEnsembl2006NucleicAcidsRes2006Jan134D55661を元にオリゴDNAプライマーRhe6Rf1配列番号:16、Rhe6Rr2配列番号:17を作製した。カニクイザル膵臓から調製されたcDNAを鋳型とし、プライマーRhe6Rf1およびRhe6Rr2を用いて、PCR法によりカニクイザルIL6レセプター遺伝子全長をコードするDNA断片を調製した。得られたDNA断片を鋳型に、オリゴDNAプライマーCynoIL6RNEcoRI配列番号:18およびCynoIL6RCNotIHis配列番号:19を用いて、PCR法によりカニクイザルIL6レセプター遺伝子のシグナル領域を含む可溶型領域のC末端に6xHisが付加されたタンパク質をコードする1131bpのDNA断片配列番号:20を増幅した。得られたDNA断片をEcoRINotIで消化し、動物細胞発現ベクターへ挿入し、これを用いてCHO定常発現株cynosIL6R産生CHO細胞を作製した。cynosIL6R産生CHO細胞の培養液をHisTrapカラムGEヘルスケアバイオサイエンスで精製後、AmiconUltra15Ultracel10kMilliporeを用いて濃縮し、Superdex200pg1660ゲルろ過カラムGEヘルスケアバイオサイエンスでさらに精製を行い、可溶型カニクイザルIL6レセプター以下、cIL6Rの最終精製品とした。組み換えカニクイザルIL6の調製カニクイザルIL6は以下のように調製した。SWISSPROTAccessionNoP79341に登録されている212アミノ酸をコードする塩基配列を作成し、動物細胞発現ベクターにクローニングし、CHO細胞に導入することで定常発現細胞株を作製したcynoIL6産生CHO細胞。cynoIL6産生CHO細胞の培養液をSPSepharoseFFカラムGEヘルスケアバイオサイエンスで精製後、AmiconUltra15Ultracel5kMilliporeを用いて濃縮し、Superdex75pg2660ゲルろ過カラムGEヘルスケアバイオサイエンスでさらに精製を行い、AmiconUltra15Ultracel5kMilliporeを用いて濃縮し、カニクイザルIL6以下、cIL6の最終精製品とした。ヒトgp130発現BaF3細胞株の樹立IL6依存増殖性を示す細胞株を得るために、以下に示すとおり、ヒトgp130を発現したBaF3細胞株の樹立を行った。全長ヒトgp130cDNAHibiら、Cell1990;63:11491157をPCR法により増幅し、pCHOIHirataら、FEBSLetter1994;356:244248のDHFR遺伝子発現部位を除去し、Zeocin耐性遺伝子発現部位を挿入した発現ベクターpCOS2Zeoにクローニングし、pCOS2Zeogp130を構築した。全長ヒトIL6RcDNAをPCR法により増幅し、pcDNA31Invitrogenにクローニングし、hIL6RpcDNA31を構築した。10μgのpCOS2Zeogp130をPBSに懸濁したBaF3細胞08x107cellsに混合し、GenePulserBioRadを用いて033kV950μFDの容量でパルスを加えた。エレクトロポーレーション処理により遺伝子導入したBaF3細胞を02ngmLのmouseinterleukin3Peprotech、10FetalBovineSerum以下FBS、HyCloneを含むRPMI1640培地Invitrogenで一昼夜培養し、100ngmLのhumaninterleukin6RDsystems、100ngmLのhumaninterleukin6solublereceptorRDsystemsおよび10FBSを含むRPMI1640培地を加えて選抜し、ヒトgp130発現BaF3細胞株以下、BaF3gp130を樹立した。このBaFgp130は、humaninterleukin6RDsystemsおよびSR344存在下で増殖することから、抗IL6レセプター抗体の増殖阻害活性すなわちIL6レセプター中和活性の評価に使用することが可能である。ヒト化抗IL6レセプター抗体の作製CancerRes1993Feb15538516においてヒト化されたマウスPM1抗体以降Wildtype、WTと略、H鎖WTをHアミノ酸配列配列番号:9とし、L鎖WTをLアミノ酸配列配列番号:10とするのフレームワーク配列とCDR配列に変異を導入し、改変H鎖としてH53アミノ酸配列配列番号:1、PF1Hアミノ酸配列配列番号:11、改変L鎖としてL28アミノ酸配列配列番号:12、PF1Lアミノ酸配列配列番号:2を作製した。具体的には、QuikChangeSiteDirectedMutagenesisKitStratageneを用いて、添付説明書記載の方法で変異体を作製し、得られたプラスミド断片を動物細胞発現ベクターに挿入し、目的のH鎖発現ベクターおよびL鎖発現ベクターを作製した。得られた発現ベクターの塩基配列は当業者公知の方法で決定した。ヒト化抗IL6レセプター抗体の発現と精製抗体の発現は以下の方法を用いて行った。ヒト胎児腎癌細胞由来HEK293H株Invitrogenを10FetalBovineSerumInvitrogenを含むDMEM培地Invitrogenへ懸濁し、5~6×105個mLの細胞密度で接着細胞用ディッシュ直径10cmCORNINGの各ディッシュへ10mLずつ蒔きこみCO2インキュベーター37°C、5CO2内で一昼夜培養した後に、培地を吸引除去し、CHOSSFMIIInvitrogen培地69mLを添加した。調製したプラスミドをlipofection法により細胞へ導入した。得られた培養上清を回収した後、遠心分離約2000g、5分間、室温して細胞を除去し、さらに022μmフィルターMILLEXGVMilliporeを通して滅菌して培養上清を得た。得られた培養上清にrProteinASepharoseTMFastFlowAmershamBiosciencesを用いて当業者公知の方法で精製した。精製抗体濃度は、分光光度計を用いて280nmでの吸光度を測定した。得られた値からPACE法により算出された吸光係数を用いて抗体濃度を算出したProteinScience1995424112423。実施例2pH依存的結合抗体H3pIL73の作製複数回抗原を中和できる抗体の創製方法IgG分子は2価であるため2ヶ所で抗原に結合した場合、1分子のIgG分子で最大2分子の抗原を中和することが可能であるが、3分子以上の抗原を中和することは出来ない。そのため中和抗体の場合、その中和効果を一定期間持続させるためには、その一定期間に産生される抗原量以上の抗体量が投与される必要があり、抗体の薬物動態向上やアフィニティー向上技術だけでは、必要抗体投与量の低減には限界が存在する。そこで1分子のIgG分子で2分子以上の抗原を中和することができれば、同じ投与量であれば中和効果の持続性が向上し、また、同じ持続性を達成するために必要な投与量を低減することが可能である。中和抗体の場合、ターゲットとなる抗原の種類として、抗原が血漿中に存在する可溶型抗原場合と抗原が細胞表面に発現している膜型抗原の場合の2種類が存在する。抗原が膜型抗原の場合、投与した抗体は細胞表面上の膜抗原に結合して、その後、抗体は膜抗原に結合したまま抗原と一緒にインターナライゼーションによって細胞内のエンドソームに取り込まれ、その後、抗原に結合したままライソソームへ移行し抗体は抗原と一緒にライソソームにより分解される。膜抗原によるインターナライゼーションを介した血漿中から消失は抗原依存的な消失と呼ばれており、多くの抗体分子で報告されているDrugDiscovToday2006Jan11818。1分子のIgG抗体は2価で抗原に結合した場合2分子の抗原に結合し、インターナライズされそのままライソソームで分解されることから、通常の抗体の場合、1分子のIgG抗体が2分子以上の抗原を中和することは出来ない図1。IgG分子の血漿中滞留性が長い消失が遅いのは、IgG分子のサルベージレセプターとして知られているFcRnが機能しているためであるNatRevImmunol2007Sep771525。ピノサイトーシスによってエンドソームに取り込まれたIgG分子は、エンドソーム内の酸性条件下においてエンドソーム内に発現しているFcRnに結合する。FcRnに結合できなかったIgG分子はライソソームへと進みそこで分解されるが、FcRnへ結合したIgG分子は細胞表面へ移行し血漿中の中性条件下においてFcRnから解離することで再び血漿中に戻る図2。膜抗原に結合したIgG分子はインターナライゼーションによって細胞内のエンドソームに取り込まれ、抗原に結合したままライソソームに移行し分解され、IgG抗体が2価で抗原に結合した場合は2分子の抗原を中和して抗原と共に分解される。インターナライゼーションによって細胞内のエンドソームに取り込まれた際に、エンドソーム内の酸性条件下においてIgG抗体が抗原から解離することが出来れば、解離した抗体はエンドソーム内に発現しているFcRnに結合することが出来ると考えられる。抗原から解離しFcRnへ結合したIgG分子は細胞表面へ移行し血漿中の中性条件下においてFcRnから解離することで再び血漿中に戻り、血漿中に戻ったIgG分子は再度新たな膜抗原へ結合することが可能である。これを繰り返すことによって、1分子のIgG分子が繰り返し膜型抗原に結合することが可能になるため、1分子のIgG分子が複数個の抗原を中和することが可能となる図3。抗原が可溶型抗原の場合、投与した抗体は血漿中で抗原に結合し、抗原と抗体の複合体の形で血漿中を滞留する。通常、抗体の血漿中滞留性は上述のとおりFcRnの機能により非常に長い消失速度が非常に遅いのに対して、抗原の血漿中滞留性は短い消失速度が速いため、抗体に結合した抗原は抗体と同程度の血漿中滞留性を有する消失が非常に遅いことになる。抗原は生体内で常に一定の速度で産生されており、抗体非存在下では抗原の産生速度と抗原の消失速度が釣り合った状態の濃度で抗原が血漿中に存在する。抗体存在下では、ほとんどの抗原が抗体に結合し、抗原の消失は非常に遅くなるため血漿中の抗原濃度は抗体非存在下に比べて上昇するKidneyInt200364697703、JNationalCancerInstitute20029414841493、JAllergyandClinicalImmunology1997100110121、EurJImmunol19932320262029。仮に抗体の抗原へのアフィニティーが無限大であったとしても、抗原の濃度が上昇し、抗体が血漿中から徐々に消失し、抗体と抗原の濃度が一致した時間以降、抗体の抗原中和効果が切れてしまう。可溶型抗原に対する中和効果は、解離定数KDが強いほど少ない抗体濃度で中和することが可能であるが、アフィニティーをどれだけ強くしても存在する抗原濃度の12以下の抗体濃度では抗原を中和することができないBiochemBiophysResCommun2005Sep9334100413。抗原が結合していないIgG分子同様、抗原が結合したIgG分子も血漿中においてピノサイトーシスによってエンドソームに取り込まれ、エンドソーム内の酸性条件下においてエンドソーム内に発現しているFcRnに結合する。FcRnへ結合したIgG分子は抗原に結合したまま、細胞表面へ移行し血漿中の中性条件下においてFcRnから解離することでIgG分子は抗原に結合したまま再び血漿中に戻るため、血漿中で新たな抗原に結合することは出来ない。この際、エンドソーム内の酸性条件下においてIgG分子が抗原から解離することが出来れば、解離した抗原はFcRnに結合することが出来ないため、その抗原はライソソームによって分解されると考えられる。一方、IgG分子はFcRnに結合することにより再び血漿中に戻ることが可能である。血漿中に戻ったIgG分子は、すでにエンドソーム内で抗原を解離していることから、血漿中において再度新しい抗原に結合することが可能になる。これを繰り返すことによって、1分子のIgG分子が繰り返し可溶型抗原に結合することが可能になるため、1分子のIgG分子が複数個の抗原を中和することが可能となる図4。このように抗原が膜型抗原、可溶型抗原であるに関わらず、エンドソーム内の酸性条件下においてIgG抗体が抗原から解離することが出来れば、1分子のIgG分子が繰り返し抗原を中和することが達成できると考えられた。エンドソーム内の酸性条件下においてIgG抗体が抗原から解離するためには、酸性条件下において抗原と抗体の結合が中性条件下と比較して大幅に弱くなる必要がある。細胞表面では膜抗原を中和する必要があるため、細胞表面のpHであるpH74においては抗原に強く結合する必要がある。エンドソーム内のpHは一般的にpH55~pH60であることが報告されているNatRevMolCellBiol2004Feb512132ことから、pH55~pH60において抗原に弱く結合する抗体であれば、エンドソーム内の酸性条件下において抗原から抗体は解離すると考えられる。すなわち、細胞表面のpHであるpH74においては抗原に強く結合し、エンドソーム内のpHであるpH55~pH60において抗原に弱く結合する抗体であれば、1分子のIgG分子が複数個の抗原を中和し、薬物動態を向上することが可能であると考えられた。一般的にタンパク質-タンパク質相互作用は疎水相互作用、静電相互作用、水素結合からなり、その結合の強さは一般的に結合定数affinity、あるいは見かけの結合定数avidityで表現される。中性条件下pH74と酸性条件下pH55~pH60とで結合の強さが変化するpH依存的な結合は、天然に存在するタンパク質-タンパク質相互作用に存在する。例えば上述したIgG分子とIgG分子のサルベージレセプターとして知られているFcRnの結合は、酸性条件下pH55~pH60で強く結合し中性条件下pH74で極めて結合が弱い。これら多くのpH依存的に結合が変化するタンパク質-タンパク質相互作用においては、その相互作用にヒスチジン残基が関与している。ヒスチジン残基のpKaは60~65付近に存在するため、中性条件下pH74と酸性条件下pH55~pH60との間でヒスチジン残基のプロトンの解離状態が変化する。すなわち、ヒスチジン残基は中性条件下pH74においては電荷を帯びず中性で水素原子アクセプターとして機能し、酸性条件下pH55~pH60においては正電荷を帯び水素原子ドナーとして機能する。上述のIgGFcRn相互作用においても、IgG側に存在するヒスチジン残基がpH依存的結合に関与していることが報告されているMolCell2001Apr786777。そのためタンパク質-タンパク質相互作用に関与するアミノ酸残基をヒスチジン残基に置換する、あるいは、相互作用する箇所にヒスチジンを導入することによってタンパク質-タンパク質相互作用にpH依存性を付与することは可能である。抗体-抗原間のタンパク質-タンパク質相互作用においてもそのような試みがされており、抗卵白リゾチウム抗体のCDR配列にヒスチジンを導入することによって、酸性条件下で抗原に対する結合性が低下した抗体変異体を取得することに成功しているFEBSLetter。また、CDR配列にヒスチジンを導入することによって、ガン組織の低いpHで特異的に抗原に結合し中性条件下では弱く結合する抗体が報告されているWO2003105757。このように抗原抗体反応にpH依存性を導入する方法は報告されているが、これまでに体液中のpHであるpH74においては抗原に強く結合し、エンドソーム内のpHであるpH55~pH60において抗原に弱く結合することで、1分子のIgG分子が複数個の抗原を中和する抗体は報告されていない。すなわち、中性条件下での結合を維持しつつ酸性条件下での結合のみを大きく低下させる改変を導入することで、改変前の抗体と比較して改変後の抗体が、invivoにおいて抗原に複数回結合することで薬物動態が向上し、同じ投与量で中和効果の持続性が向上した抗体の改変に関する報告は無い。IL6レセプターは生体内に可溶型IL6レセプターおよび膜型IL6レセプターの両方の形で存在するNatClinPractRheumatol2006Nov261926。抗IL6レセプター抗体は可溶型IL6レセプターおよび膜型IL6レセプター両方に結合してそれらの生物学的な作用を中和する。抗IL6レセプター抗体は膜型IL6レセプターに結合後、膜型IL6レセプターに結合したままインターナライゼーションによって細胞内のエンドソームに取り込まれ、その後、抗IL6レセプター抗体は膜型IL6レセプターに結合したままライソソームへ移行し一緒にライソソームにより分解されると考えられている。実際、ヒト化抗IL6レセプター抗体は、非線形なクリアランスを示し、抗原依存的な消失がヒト化抗IL6レセプター抗体の消失に大きく寄与していることが報告されているTheJournalofRheumatology200330714261435。すなわち、1分子のヒト化抗IL6レセプター抗体は1分子ないしは2分子の膜型IL6レセプターに1価ないしは2価で結合し、インターナライズ後、ライソソームで分解されると考えられる。そこで、天然型のヒト化抗IL6レセプター抗体の中性条件下での結合を維持しつつ酸性条件下での結合のみを大きく低下させる改変抗体pH依存的結合抗IL6レセプター抗体を作製することが出来れば、1分子のヒト化抗IL6レセプター抗体で複数分子のIL6レセプターを中和できると考えられ、これにより天然型のヒト化抗IL6レセプター抗体と比較して、pH依存的結合抗IL6レセプター抗体はinvivoにおいて同じ投与量で中和効果の持続性が向上できると考えた。pH依存的結合ヒト化IL6レセプター抗体H3pIL73の作製pH依存的な結合を抗原抗体反応に導入する方法として、CDRにヒスチジンを導入する方法が報告されているFEBSLetter。実施例1で作製したH53PF1Lの可変領域表面に露出するアミノ酸残基および抗原と相互作用していると考えられる残基を確認するために、MOEソフトウェアChemicalComputingGroupInc.を用いて、ホモロジーモデリングによりH53PF1LのFv領域モデルを作製した。H53PF1Lの配列情報を元に作成した立体構造モデルより、ヒスチジン導入により抗原とのpH依存的結合を導入できると考えられる変異箇所をH27、H31、H35、L28、L32、L53Kabatナンバリング、KabatEAetal.1991.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest.NIHに選定した。H27、H31、H35の残基をヒスチジンに置換する変異を実施例1で作成したH53に対して導入したものをH3pIアミノ酸配列配列番号:3とし、L28、L32、L53の残基をヒスチジンに置換する変異を実施例1で作成したPF1Lに対して導入したものをL73アミノ酸配列配列番号:6とした。H3pIL73の発現ベクターの作製発現精製選定された箇所について改変抗体を作製するためのアミノ酸改変を行った。実施例1において作製したH53塩基配列配列番号:13およびPF1L塩基配列配列番号:14に変異を導入して、H3pIアミノ酸配列配列番号:3とL73アミノ酸配列配列番号:6を作製した。具体的には、QuikChangeSiteDirectedMutagenesisKitStratageneを用いて、添付説明書記載の方法で作製し、得られたプラスミド断片を動物細胞発現ベクターに挿入し、目的のH鎖発現ベクターおよびL鎖発現ベクターを作製した。得られた発現ベクターの塩基配列は当業者公知の方法で決定した。H鎖としてH3pI、L鎖としてL73を用いたH3pIL73の発現精製は実施例1に記載した方法で行った。実施例3ファージディスプレイ技術を用いたCDRHis改変によるpH依存的抗原結合能の付与ヒト化PM1抗体のscFv分子の作製ヒト化抗IL6R抗体であるヒト化PM1抗体CancerRes1993Feb15538516のscFv化を行った。VH、VL領域をPCRによって増幅し、リンカー配列GGGGSGGGGSGGGGS配列番号:15をVH、VLの間に持つヒト化PM1HLscFvを作製した。ヒスチジンscanningによるヒスチジン導入可能箇所の選定作製したヒト化PM1HLscFvDNAを鋳型にしたPCRにより、各CDRアミノ酸のうちの一つのアミノ酸がヒスチジンとなるヒスチジンライブラリーを作製した。ライブラリー化したいアミノ酸のコドンをヒスチジンに相当するコドンであるCATとしたプライマーを用いたPCR反応によってライブラリー部分を構築、それ以外の部分を通常のPCRによって作製し、assemblePCR法により連結して構築した。構築したライブラリーをSfiIで消化し、同様にSfiIで消化したphagemideベクターpELBGlacIベクターに挿入し、XL1Bluestratageneにtransformした。得られたコロニーを用い、phageELISAによる抗原結合性評価とHLscFv配列解析を行った。JMolBiol1992227381388に習い、SR344を1μgmLでcoatingしたプレートを用いたphageELISAを行った。SR344への結合性が認められたクローンについて、特異的プライマーを用い、配列解析を行った。antiEtag抗体GEHealthcareとantiM13抗体GEHealthcareによるELISA法により、phagetiterを求めた。この値を用い、SR344に対するphageELISAの結果から、ヒト化PM1HLscFvと比べ、CDRの残基をヒスチジンに置換しても結合能に大きな変化がない箇所を選定した。これらの箇所を表2に示した。各残基のナンバリングはKabatナンバリング29、JImmunolMethods2001Jan1247191203、BiotechnolProg2002MarApr1821220。具体的には、調製したファージライブラリーに40pmolのビオチン標識SR344を加え、37°Cで60分間抗原と接触させた。5MPBS5スキムミルクを含むPBSで洗浄したStreptavidincoatedbeadsDynalM280を加え、37°Cで15分間結合させた。ビーズを05mLのPBST01Tween20を含むPBSpH74とPBSpH74にて5回ずつ洗浄した。1mLのPBSpH55中にビーズを37°Cで懸濁し、即にファージを回収した。回収したファージ溶液に、対数増殖期OD6000405XL1Blue10mLに添加、37°C30分間静置することで感染させた。感染させた大腸菌を、2YT100μgmLアンピシリン2glucoseの225mmx225mmのプレートへプレーティングした。再度この大腸菌から培養を開始し、上記と同様にファージの培養を行いパンニングを8回繰り返した。ファージELISAによる評価上記のシングルコロニーを100μL2YT100μgmLアンピシリン2glucose125μgmLテトラサイクリンに植菌し、30°Cで一晩培養した。この2μLを300μL2YT100μgmLアンピシリン2glucoseに植菌、37°C、4時間培養後、ヘルパーファージM13KO79x108pfuを加え、37°Cで30分間静置培養、37°C30分間攪拌培養をおこない感染させた。この後2YT100μgmLアンピシリン25μgmLカナマイシン05mMIPTG300μLに培地交換を行った。続いて30°Cにて一晩培養し、遠心上清を回収した。遠心上清40μLに50mMPBS360μL加え、ELISAに供した。StreptaWell96マイクロタイタープレートRocheを625ngmLビオチン標識SR344を含むPBS100μLにて一晩コートした。PBSTにて洗浄し抗原を除いた後、2BSAPBS250μLにて1時間以上ブロッキングした。2BSAPBSを除き、ここに調製した培養上清を加え37°Cで1時間静置し抗体を結合させた。洗浄後、50mMPBSpH74もしくは50mMPBSpH55を加え37°Cで30分間静置しインキュベートした。洗浄後、2BSAPBSにて希釈したHRP結合抗M13抗体AmershamParmaciaBiotechとTMBsinglesolutionZYMEDで検出し、硫酸の添加により反応を停止した後、450nmの吸光度を測定した。しかしながらこの磁気ビーズに固定化した抗原を用いたパンニングでは、強いpH依存的結合能を有するクローンは得られなかった。弱いながらpH依存的結合能が認められたクローンについて、特異的プライマーを用い、配列解析を行った。これらのクローンにおいて、高い確率でヒスチジンとなっていた箇所を表3に示した。表3ファージライブラリー磁気ビーズパンニングにより見出されたヒスチジン置換箇所H50H58H61H62H63H64H65H102L24L27L28L32L53L56L90L92L94カラムパンニングによるライブラリーからのpH依存的結合scFvの取得一般的な磁気ビーズに固定化した抗原を用いたパンニングでは強いpH依存的結合能を有するクローンは得られなかった。磁気ビーズに固定化した抗原を用いたパンニングやプレートに固定化した抗原を用いたパンニングの場合は、磁気ビーズあるいはプレートから酸性条件下で解離したファージを全て回収するため、pH依存性が弱いクローンのファージであっても回収されてしまい、最終的に濃縮されるクローンに強いpH依存性を有するクローンが含まれる可能性が低いことが原因と考えられる。そこで、より厳しい条件でのパンニング方法として抗原を固定化したカラムを用いたパンニングを検討した図5。抗原を固定化したカラムを用いたパンニングを用いてpH依存的結合能を有するクローンを取得した報告はこれまでにない。抗原を固定化したカラムを用いたパンニングの場合、中性条件下で結合させたファージを酸性条件で溶出させる際、pH依存性が弱いクローンはカラム内で抗原に再結合することで溶出されにくく、pH依存性が強くカラム内の再結合が起こりにくいクローンが選択的にカラムから溶出されることが考えられる。また、磁気ビーズに固定化した抗原を用いたパンニングやプレートに固定化した抗原を用いたパンニングでは酸性条件下で解離したファージを全て回収することになるが、抗原を固定化したカラムを用いたパンニングではカラムに酸性条件の緩衝液を流すことで溶出を開始し適切なフラクションのみを回収することで、強いpH依存的結合能を有するファージを選択的に回収することが可能と考えられる。まず、抗原であるSR344を固定化したカラムを作製した。200μLStreptavidinSepharoseGEHealthcareを1mLPBSにてwashを行った後、500μLPBSに懸濁し、ビオチン標識SR344400pmolと室温で1時間接触させた。その後、空カラムAmershamPharmciaBiotechへ上記のsepharoseを充填し、約3mLのPBSによりカラムの洗浄を行った。05BSAPBSpH74により上記のPEG沈したlibraryphageを125に希釈し045nmfilterを通した後、カラムに添加した。約6mLのPBSにて洗浄した後、50mMMESNaClpH55を流し、低いpHにすると解離する抗体を溶出した。適切な溶出フラクションを回収し、回収したファージ溶液に、対数増殖期OD6000405XL1Blue10mLに添加、37°C30分間静置することで感染させた。感染させた大腸菌を、2YT100μgmLアンピシリン2glucoseの225mmx225mmのプレートへプレーティングした。再度この大腸菌から培養を開始し、上記と同様にファージの培養を行い、パンニングを6回繰り返し行った。ファージELISAによる評価ファージELISAにより、得られたphageの評価をおこなった。pH依存性が強く認められたクローンについて、特異的プライマーを用い、配列解析を行った。その結果、WTと比較してpH依存的な結合が強く見られたクローンが複数得られた。図6に示すとおり、WTと比較してクローンCL5H鎖CLH5、L鎖CLL5CLH5:アミノ酸配列配列番号:5、CLL5:アミノ酸配列配列番号:8は特に強いpH依存的な結合が確認された。一般的な磁気ビーズに固定化した抗原を用いたパンニングでは取れなかった強いpH依存的結合を示す抗体が、抗原を固定化したカラムを用いたパンニングにより取得できることが分かり、pH依存的結合抗体をライブラリーから取得する方法としては抗原を固定化したカラムを用いたパンニングが非常に有効であることが分かった。pH依存的な結合が見られた複数のクローンのアミノ酸配列解析の結果、濃縮されたクローンにおいて高い確率でヒスチジンとなっていた箇所を表4に示した。表4ファージライブラリーカラムパンニングによるヒスチジン置換箇所H31H50H58H62H63H65H100bH102L24L27L28L32L53L56L90L92L94実施例4ヒト化IL6レセプター抗体のヒスチジン改変体の発現と精製ヒト化IL6レセプター抗体のヒスチジン改変抗体の発現ベクターの作製発現精製ファージELISAにてpH依存性が強く認められたクローンについて、IgG化するために、VH、および、VLをそれぞれPCRによって増幅し、XhoINheI消化およびEcoRI消化により動物細胞発現用ベクターに挿入した。各DNA断片の塩基配列は、当業者公知の方法で決定した。H鎖としてCLH5、L鎖として実施例2で得られたL73を用いたCLH5L73をIgGとして発現精製した。発現精製は実施例1に記載した方法で行った。変異箇所の組み合わせにより、さらに高いpH依存性をもつ抗体作製を行った。ファージライブラリーでHisが濃縮された箇所、構造情報、などから、H鎖として実施例2で得られたH3pIのH32、H58、H62、H102をヒスチジンに置換し、さらにH95をバリンに、H99をイソロイシンに置換し、H170配列番号:4を作製した。改変体の作製は実施例1に記載した方法で行った。また、L鎖として実施例2で作成したL73の28番目のヒスチジンをアスパラギン酸に置換したL82配列番号:7を作製した。改変体の作製は実施例1に記載した方法で行った。実施例1に記載した方法で、H鎖としてH170、L鎖としてL82を用いたH170L82をIgGとして発現精製を行った。実施例5pH依存的結合抗体のIL6R中和活性評価IgG化したクローンのヒトIL6レセプター中和活性評価ヒト化PM1抗体野生型:WT、および、実施例2、4で作製したH3pIL73、CLH5L73、H170L82の4種類についてIL6レセプター中和活性を評価した。具体的にはIL6IL6レセプター依存性増殖を示すBaF3gp130を用いて、IL6レセプター中和活性を評価した。BaF3gp130を10FBSを含むRPMI1640培地で3回洗浄した後に、5x104cellsmLとなるように60ngmLのhumaninterleukin6TORAY、60ngmLの組換え可溶型ヒトIL6レセプターSR344および10FBSを含むRPMI1640培地に懸濁し、96wellplateCORNINGの各wellに50μLずつ分注した。次に、精製した抗体を10FBSを含むRPMI1640に希釈して、各wellに50μLずつ混合した。37°C、5CO2条件下で、3日間培養し、PBSで2倍に希釈したWST8試薬CellCountingKit8、株式会社同仁化学研究所を20μLwellで加え、直後にSUNRISECLASSICTECANを用いて450nmの吸光度参照波長620nmを測定した。2時間培養した後に、再度450nmの吸光度参照波長620nmを測定し、2時間の吸光度変化を指標にIL6レセプター中和活性を評価した。その結果、図7に示すように、ヒト化PM1抗体野生型:WTと比較して、H3pIL73、CLH5L73、H170L82は同等の生物学的中和活性を有することが示された。実施例6pH依存的結合抗体のBiacore解析pH依存的結合クローンの可溶型IL6レセプターへの結合解析ヒト化PM1抗体野生型:WT、および、実施例2、4で作製したH3pIL73、CLH5L73、H170L82の4種類について、BiacoreT100GEHealthcareを用いてpH58とpH74における抗原抗体反応の速度論的解析を実施したバッファーは10mMMESpH74あるいはpH58150mMNaCl005Tween20。アミンカップリング法によりrecombproteinAGPierceを固定化したセンサーチップ上に種々の抗体を結合させ、そこにアナライトとして98400nMの濃度に調製したSR344を注入した。pH依存的結合クローンのSR344への結合および解離をリアルタイムに観測した図8および図9。測定は全て37°Cで実施した。BiacoreT100EvaluationSoftwareGEHealthcareを用い、結合速度定数ka1Ms、および解離速度定数kd1sを算出し、その値をもとに解離定数KDを算出した表5。さらにそれぞれについてpH58とpH74のaffinity比を算出し、pH依存性結合を評価した。測定は全て37°Cで実施した。それぞれについてpH58とpH74のaffinity比を算出した結果、SR344に対するH3pIL73,H170L82,CLH5L73のpH依存性結合affinityはそれぞれ41倍,394倍,66倍であり、いずれのクローンもWTと比較して15倍以上の高いpH依存的結合を示した。これまでに血漿中のpHであるpH74においては抗原に強く結合し、エンドソーム内のpHであるpH55~pH60において抗原に弱く結合する抗IL6レセプター抗体は報告されていない。本検討において、WTのヒト化IL6レセプター抗体と同等の生物学的中和活性およびpH74でのaffinityを維持したまま、pH58でのaffinityのみを特異的に10倍以上低下させた抗体が得られた。表5SR344に対するpH依存的結合クローンの可溶型IL6レセプターへの結合比較pH依存的結合クローンの膜型IL6レセプターへの結合解析作製した上記pH依存的結合クローンについて、BiacoreT100GEHealthcareを用いてpH58pH74における膜型IL6レセプターへの抗原抗体反応を観測した。センサーチップ上に固定化したIL6レセプターへの結合を評価することで、膜型IL6レセプターへの結合を評価した。SR344を当業者公知の方法に従ってビオチン化し、ストレプトアビジンとビオチンの親和性を利用し、ストレプトアビジンを介してビオチン化SR344をセンサーチップ上に固定化した。測定は全て37°Cで実施し、移動相のバッファーは10mMMESpH58150mMNaCl005Tween20とし、そこにpH依存的結合クローンをpH74の条件下で注入してSR344と結合させたのち注入サンプルのバッファーは10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20、移動相のpHである58で各クローンのpH依存的な解離を観測した図10。サンプル濃度を05μgmLとし、10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20で結合させ、10mMMESpH58150mMNaCl005Tween20で解離させたときのpH58における解離相のみBiacoreT100EvaluationSoftwareGEHealthcareを用いフィッティングすることにより、pH58における解離速度kdを算出した。同様にまた、サンプル濃度を05μgmLとし、10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20で結合させ、10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20で解離させたときのpH74における解離相のみBiacoreT100EvaluationSoftwareGEHealthcareを用いフィッティングすることにより、pH74における解離速度定数kdを算出した。各クローンのpH依存的な解離速度定数を表6に示した。表6SR344に対するpH依存的結合クローンの膜型IL6レセプターからの解離速度定数比較解離度のpH依存性が大きい順にH3pIL73,CLH5L73,H170L82であり、いずれのクローンもWTよりも高いpH依存性的な膜型IL6レセプターからの解離を示した。しかし、pH依存的結合解離の順位は可溶型IL6レセプターと膜型IL6レセプターで異なった。可溶型IL6レセプターへの結合解析において最も高いpH依存性結合を示したH170L82は、膜型IL6レセプターへの結合解析においては最も低いpH依存性結合を示すことが明らかとなった。一般に、可溶型の抗原に対してIgG分子は1価affinityで結合するのに対して、膜型の抗原に対しては2価avidityで結合することが知られている。このような可溶型抗原と膜型抗原では結合様式の違いがH170L82のpH依存的結合に影響したと考えられた。実施例7pH依存的結合抗体による抗原への複数回結合の確認実施例2で記したように、pH依存的結合抗体は抗原に複数回結合することが可能になると考えられる。すなわち、抗原が結合したpH依存的結合抗体は非特異的にエンドソーム内に取り込まれるが、エンドソーム内の酸性条件下において可溶型抗原から解離する。抗体はFcRnに結合することによって再び血漿中に戻り、血漿中に戻った抗体には抗原が結合していないことから、再び新たな抗原に結合することが可能である。これを繰り返すことによって、pH依存的結合抗体は抗原に複数回結合することが可能である。しかしながらpH依存的結合を有さないIgG抗体は、エンドソームの酸性条件下で全ての抗原が抗体から解離することは無いため、FcRnにより血漿中に戻った抗体は抗原を結合したままであり、再び新たな抗原に結合することは出来ない。そのため、ほとんどの場合1分子のIgG抗体は2つの抗原しか中和することが出来ない2価で結合した場合。そこで、実施例2、4で作製したH3pIL73、CLH5L73、H170L82の3種類のpH依存的結合抗体が、ヒト化PM1抗体野生型:WTと比較して、抗原であるSR344に複数回結合することが可能になっているかどうかの評価を行った。pH74で結合し、pH58で解離することで抗原に複数回結合可能であることをBiacoreGEHealthcareによって評価した。アミンカップリング法によりrecombproteinAGPierceを固定化したセンサーチップに対して評価する抗体を結合させ、pH74の移動相を流した工程1。pH74に調整したSR344溶液をアナライトとして流し、pH74で抗体にSR344を結合させた工程2。このpH74での結合は血漿中での抗原への結合を模倣している。その後、pH58に調整したバッファーのみSR344を含有しない溶液をアナライトとして流して抗体に結合した抗原を酸性条件下に暴露させた工程3。このpH58での解離はエンドソーム内での抗体抗原複合体の結合状態を模倣している。その後、再び工程2を行った。これはFcRnによって血漿中に戻った抗体が再び新しい抗原に結合することを模倣している。その後、再び工程2を行い、抗体抗原複合体を酸性条件下に暴露させた。このように工程2→工程3を37°Cで複数回繰り返すことによって、抗体が血漿中からピノサイトーシスによってエンドソーム内に取り込まれFcRnによって血漿中に戻ることを繰り返しているNatRevImmunol2007Sep771525生体内の状態を模倣することが可能である。作製した上記pH依存的結合クローンについて、BiacoreT100GEHealthcareを用いてpH58pH74における抗原であるSR344に対する複数回結合能を解析した。具体的には以下の通り行った。測定は全て37°Cで実施し、まずアミンカップリング法によりrecombproteinAGPierceを固定化したセンサーチップ上に、移動相のバッファーは10mMMESpH58150mMNaCl005Tween20とし、上述のサンプルとなる抗体を結合させた工程1。そこにアナライトとして約40nMの濃度に調製したSR344をpH74の条件下で3分間注入して注入SR344のバッファーは10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20結合させた工程2。その後、SR344の注入を停止しpH58の移動相を約70秒間流すことにより抗体SR344複合体を酸性条件下に暴露した工程3。この結合工程2および酸性暴露工程3を1セットとし、これを連続的に10セット繰り返し行い、そのセンサーグラムをリアルタイムに観測し図11に示した。WTは工程3の酸性暴露時のSR344の解離が少ないため、次の工程2で新たに抗原に結合可能な抗体の割合は非常に少ない。それに対して、pH依存的結合クローン、その中でも特にH170L82とCLH5L73は、工程3の酸性暴露時の解離が極めて大きく、結合しているSR344のほとんどが解離することから、次の工程2でほとんどの抗体が新たな抗原に結合可能であることが分かった。H170L82とCLH5L73は結合工程2と酸性暴露工程3を10セット繰り返しても、毎セットほとんどの抗体が新たな抗原に結合可能であることが分かった。得られたセンサーグラムを用いて、BiacoreT100EvaluationSoftwareBiacoreを用い、各サンプルの1セットごとのSR344結合量を算出し、10セットの経時的な積算値を図12に示した。10セット目で得られた積算RU値が10回のサイクルの中で結合した総抗原量に相当する。WTと比較して、pH依存的結合クローン、その中でも特にH170L82とCLH5L73は、結合した総抗原量が最も多く、WTと比較して4倍量程度の抗原に繰り返し結合することが可能であることが示された。これより、WTに対してpH依存的な結合を付与することによって、繰り返し抗原に結合し、複数の抗原を中和することが可能になることが明らかとなった。実施例8pH依存的結合抗体のヒトIL6レセプタートランスジェニックマウスによるPKPD試験IL6レセプターは生体内に可溶型IL6レセプターおよび膜型IL6レセプターの両方の形で存在するNatClinPractRheumatol2006Nov261926。抗IL6レセプター抗体は可溶型IL6レセプターおよび膜型IL6レセプター両方に結合してそれらの生物学的な作用を中和する。抗IL6レセプター抗体は膜型IL6レセプターに結合後、膜型IL6レセプターに結合したままインターナライゼーションによって細胞内のエンドソームに取り込まれ、その後、抗IL6レセプター抗体は膜型IL6レセプターに結合したままライソソームへ移行し一緒にライソソームにより分解されると考えられている。実施例6で評価したpH依存的結合抗IL6レセプター抗体であるH3pIL73、CLH5L73、H170L82が、エンドソーム内の酸性条件下で解離することでFcRnを介して血漿中へ戻ることが出来れば、血漿中に戻った抗体は再度抗原に結合することが可能になり、抗体1分子で複数の膜型IL6レセプターを中和することが可能となる。エンドソーム内の酸性条件下で解離することでFcRnを介して血漿中へ戻ることが作製したpH依存的結合抗IL6レセプター抗体で達成できているかどうかは、これらの抗体の薬物動態がWTと比較して改善しているかどうかを評価することで可能である。そこで、ヒト化PM1抗体野生型:WT、および、実施例2、4で作製したH3pIL73、CLH5L73、H170L82の4種類について、ヒトIL6レセプタートランスジェニックマウスhIL6Rtgマウス、ProcNatlAcadSciUSA1995May239248626における薬物動態を評価した。WTおよびH3pIL73、CLH5L73、H170L82をhIL6Rtgマウスに25mgkgで静脈内に単回投与し、投与前、および、経時的に採血した。採取した血液は直ちに4°C、15000rpmで15分間遠心分離し、血漿を得た。分離した血漿は、測定を実施するまで20°C以下に設定された冷凍庫に保存した。マウス血漿中濃度測定はELISA法にて測定した。血漿中濃度として64、32、16、08、04、02、01μgmLの検量線試料を調整した。検量線試料およびマウス血漿測定試料をAntihumanIgGγchainspecificF2Sigma社製で固相化したイムノプレートNuncImmunoPlateMaxiSorpに分注し、室温で1時間静置後、GoatAntiHumanIgGBIOTSouthernBiotechnologyAssociates社製およびStreptavidinalkalinephosphataseconjugateRocheDiagnostics社製を順次反応させ、BluePhosMicrowellPhosphataseSubstratesSystemKirkegaardPerryLaboratories社製を基質として用い発色反応を行い、マイクロプレートリーダーにて650nmの吸光度を測定した。マウス血漿中濃度は検量線の吸光度から解析ソフトウェアSOFTmaxPROMolecularDevices社製を用いて算出した。WTおよびH3pIL73、CLH5L73、H170L82の血漿中濃度推移を図13に示した。WTと比較してH3pIL73、CLH5L73、H170L82いずれも薬物動態が改善した。中でもH3pIL73およびCLH5L73は薬物動態が大幅に改善した。膜型IL6レセプターに結合した天然型抗IL6レセプター抗体WTはインターナライゼーションによって細胞内のエンドソームに取り込まれ、抗原に結合したままライソソームに移行し分解されるため血漿中滞留性が短い。それに対してpH依存的結合抗IL6レセプター抗体において薬物動態が大幅に改善したことから、pH依存的結合抗IL6レセプター抗体はエンドソーム内の酸性条件下おいて抗原である膜型IL6レセプターから解離することでFcRnを介して再び血漿中に戻っていると考えられた。WTと比較してH3pIL73、CLH5L73、H170L82いずれも薬物動態が改善したが、H170L82の血漿中滞留性延長効果がH3pIL73、CLH5L73と比較して小さかった。通常IgG分子は膜型抗原には2価で結合すると考えられることから、抗IL6レセプター抗体も膜型IL6レセプターには2価avidityで結合してその後インターナライズされると考えられる。実施例6で示したように、Biacoreによる解析においてH170L82は、可溶型IL6レセプターへの結合の際はpH58において速やかにIL6レセプターから解離する図9が、膜型IL6レセプターへの結合の際はpH58においてIL6レセプターからの解離速度が非常に遅い図10ことが分かっている。これよりH170L82の血漿中滞留性延長効果が小さかったのは、膜型IL6レセプターへの結合の際のpH58での解離が遅かったため、インターナライズされた後にエンドソーム内で十分に解離することが出来なかったためと考えられる。すなわち、膜型抗原に対して、1つのIgG分子が複数の膜型抗原を中和するためには、1価での結合affinityでのpH依存性よりも、2価での結合avidityからの解離のpH依存性のほうが重要であることが分かった。実施例9pH依存的結合抗体のカニクイザルによるPKPD試験実施例8において、pH依存的結合抗IL6レセプター抗体において薬物動態が大幅に改善したことから、pH依存的結合抗IL6レセプター抗体はエンドソーム内の酸性条件下において抗原である膜型IL6レセプターから解離することでFcRnを介して再び血漿中に戻っていると考えられた。再び血漿中に戻った抗体が再度膜型IL6レセプターに結合することができれば、天然型抗IL6レセプター抗体と比較して、pH依存的結合抗IL6レセプター抗体は同じ投与量でより長く抗原である膜型IL6レセプターの中和が持続すると考えられる。また、IL6レセプターには可溶型IL6レセプターも存在することから、可溶型IL6レセプターの中和に関しても、同じ投与量でより長く中和が持続することが考えられる。WTおよびH3pIL73について、カニクイザルにおける薬物動態を評価した。WTおよびH3pIL73をカニクイザルに1mgkgで静脈内に単回投与し、投与前および経時的に採血した。採取した血液は直ちに4°C、15000rpmで15分間遠心分離し、血漿を得た。分離した血漿は、測定を実施するまで20°C以下に設定された冷凍庫に保存した。カニクイザル血漿中濃度測定はELISA法にて測定した。まずAntiHumanIgGγchainspecificF2FragmentofAntibodySIGMA社製をNuncImmunoPlateMaxiSoupNalgenuncInternational社製に分注し、4°Cで1晩静置しAntiHumanIgG固相化プレートを作成した。血漿中濃度として32、16、08、04、02、01、005μgmLの検量線試料と100倍以上希釈したカニクイザル血漿測定試料を調製し、これら検量線試料および血漿測定試料100μLに20ngmLのカニクイザルIL6Rを200μL加え、室温で1時間静置した。その後AntiHumanIgG固相化プレートに分注しさらに室温で1時間静置した。その後BiotinylatedAntihumanIL6RAntibodyRD社製を室温で1時間反応させ、さらにStreptavidinPolyHRP80StereospecificDetectionTechnologies社製を室温で1時間反応させ、TMBOneComponentHRPMicrowellSubstrateBioFXLaboratories社製を基質として用い発色反応を行い、1NSulfuricacidShowaChemical社製で反応停止後、マイクロプレートリーダーにて450nmの吸光度を測定した。カニクイザル血漿中濃度は検量線の吸光度から解析ソフトウェアSOFTmaxPROMolecularDevices社製を用いて算出した。WTおよびH3pIL73の静脈内投与後の血漿中濃度推移を図14に示した。その結果、カニクイザルにおいてもヒトIL6レセプタートランスジェニックマウスと同様、WTと比較してH3pIL73は大幅に薬物動態が改善した。pH依存的結合抗IL6レセプター抗体であるH3pIL73において薬物動態が大幅に改善したことから、H3pIL73はエンドソーム内の酸性条件下において抗原である膜型IL6レセプターから解離することでFcRnを介して再び血漿中に戻っていると考えられた。WTおよびH3pIL73の静脈内投与によって、カニクイザル膜型IL6レセプターがどの程度中和されているかを評価するために、カニクイザルIL6で誘導した血漿C反応性蛋白CRPへの検体の影響を検討した。IL6が膜型IL6レセプターに結合するとCRPが分泌されるため、CRPは膜型IL6レセプターの中和の指標となる。WTおよびH3pIL73投与後3日目day3から10日目day10まで、1非働化カニクイザル血漿含有カニクイザルIL6実施例1で作製したcynoIL65μgkgを腰背部に連日皮下投与した。カニクイザルIL6投与開始直前day3から投与後24時間間隔day4~day11で伏在静脈より血液を採取して、血漿に分離した。各個体のCRP濃度はサイアスRCRP関東化学株式会社にて、自動分析装置TBA120FR、東芝メディカルシステムズ株式会社を用いて測定した。WTおよびH3pIL73のカニクイザルIL6で誘導時のCRP濃度推移を図15に示した。その結果、WTと比較してH3pIL73は大幅にCRP抑制の期間が大幅に延長した。このことから、pH依存的結合抗IL6レセプター抗体であるH3pIL73はエンドソーム内の酸性条件下において抗原である膜型IL6レセプターから解離することでFcRnを介して再び血漿中に戻り、再度膜型IL6レセプターに結合して中和することでWTよりも長時間CRPの産生を抑制していると考えられた。すなわちH3pIL73は抗体1分子で複数回、膜型IL6レセプターに結合し中和することが可能であることが示された。H3pIL73はWTと比較して、CRPの産生を抑制している時間が延長していることから、H3pIL73はWTよりも抗原である膜型IL6レセプターが抗体によって結合されている時間が延長していることが示された。WTおよびH3pIL73の静脈内投与によって、カニクイザル可溶型IL6レセプターがどの程度中和されているかを評価するために、カニクイザル血漿中の非結合型のカニクイザル可溶型IL6レセプター濃度を測定した。カニクイザルの血漿30μLを022μmのフィルターカップMilliporeにおいて乾燥させた適量のrProteinASepharoseFastFlowGEHealthcare樹脂に添加することで血漿中に存在する全てのIgG型抗体カニクイザルIgG、抗ヒトIL6レセプター抗体および抗ヒトIL6レセプター抗体カニクイザル可溶型IL6レセプター複合体をProteinAに吸着させた。その後、高速遠心機でスピンダウンし、通過した溶液以下、パス溶液を回収した。パス溶液にはproteinAに結合した抗ヒトIL6レセプター抗体カニクイザル可溶型IL6レセプター複合体は含まれないため、proteinAパス溶液中のカニクイザル可溶型IL6レセプター濃度を測定することによって、非結合型の可溶型IL6レセプター濃度を測定可能である。4000、2000、1000、500、250、125、625pgmLに調製したカニクイザルIL6レセプター検量線試料および上述のProteinA処理した血漿サンプルにSULFOTAGNHSEsterMesoScaleDiscovery社製でルテニウム化したMonoclonalAntihumanIL6RAntibodyRD社製とBiotinylatedAntihumanIL6RAntibodyRD社製を混合し室温で1時間反応させた。その後SAcoatedstandardMA240096wellplateMesoScaleDiscovery社製に分注した。さらに室温で1時間反応させ洗浄後、ReadBufferT2Pierceを固定化したセンサーチップ上に種々の抗体を結合させ、そこにアナライトとして9840nMの濃度に調製したSR344を注入した。pH依存的結合クローンのSR344への結合および解離をリアルタイムに観測した。測定は全て37°Cで実施した。BiacoreT100EvaluationSoftwareGEHealthcareを用い、結合速度定数ka、および解離速度定数kdを算出し、その値をもとに解離定数KDを算出した表7。表7SR344に対するpH依存的結合クローンの可溶型IL6レセプターからの解離速度定数比較それぞれについてpH74のaffinityを算出した結果、SR344に対するWT、H3pIL73IgG1、Fv2IgG1、Fv4IgG1の解離定数affinity、KD値はそれぞれ27nM14nM20nM14nMとほぼ同等の値であり、Fv2IgG1、Fv4IgG1は可溶型IL6レセプターへの結合能はWTと同等以上であることが示された。pH依存的結合クローンの膜型IL6レセプターへの結合解析作製したWT、H3pIL73IgG1、Fv2IgG1、Fv4IgG1の4種類について、BiacoreT100GEHealthcareを用いてpH58pH74における膜型IL6レセプターへの抗原抗体反応を観測した。センサーチップ上に固定化したIL6レセプターへの結合を評価することで、膜型IL6レセプターへの結合を評価した。SR344を当業者公知の方法に従ってビオチン化し、ストレプトアビジンとビオチンの親和性を利用し、ストレプトアビジンを介してビオチン化SR344をセンサーチップ上に固定化した。測定は全て37°Cで実施し、移動相のバッファーは10mMMESpH58150mMNaCl005Tween20とし、そこにpH依存的結合クローンをpH74の条件下で注入してSR344と結合させたのち注入サンプルのバッファーは10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20、移動相のpHである58で各クローンのpH依存的な解離を観測した図17。サンプル濃度を025μgmLとし、10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20で結合させ、10mMMESpH58150mMNaCl005Tween20で解離させたときのpH58における解離相のみBiacoreT100EvaluationSoftwareGEHealthcareを用いフィッティングすることにより、pH58における解離速度定数kdを算出した。同様にまた、サンプル濃度を025μgmLとし、10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20で結合させ、10mMMESpH74150mMNaCl005Tween20で解離させたときのpH74における解離相のみBiacoreT100EvaluationSoftwareGEHealthcareを用いフィッティングすることにより、pH74における解離速度定数kdを算出した。各クローンのpH依存的な解離速度定数を表8に示した。表8SR344に対するpH依存的結合クローンの膜型IL6レセプターからの解離速度定数比較それぞれについてpH依存性を算出した結果SR344に対するWT、H3pIL73IgG1、Fv2IgG1、Fv4IgG1の4種類の膜型IL6レセプターへの結合のpH依存性はそれぞれ10倍259倍718倍556倍であり、Fv2IgG1、Fv4IgG1は、H3pIL73IgG1より高いpH依存的な膜型IL6レセプターからの解離を示した。以上より、Fv2IgG1、Fv4IgG1はWTと同等以上の可溶型IL6レセプターへのaffinityを維持したままH3pIL73IgG1よりも強い膜型IL6レセプターへのpH依存的結合を示すことが明らかとなった。実施例11可変領域を最適化したpH依存的結合抗体のヒトIL6レセプタートランスジェニックマウスによるPKPD試験実施例8で使用したヒトIL6レセプタートランスジェニックマウスを用いて、実施例10で作製評価したFv2IgG1とFv4IgG1およびWTとH3pIL73IgG1の薬物動態を評価した。WTおよびH3pIL73IgG1、Fv2IgG1、Fv4IgG1をhIL6Rtgマウスに25mgkgで静脈内に単回投与し、実施例8と同様に各抗体の血漿中濃度の測定を行った。WTおよびH3pIL73IgG1、Fv2IgG1、Fv4IgG1の血漿中濃度推移を図18に示した。実施例8と同様、WTと比較してH3pIL73IgG1の薬物動態は向上しており、さらにFv2IgG1およびFv4IgG1はH3pIL73IgG1よりもさらに薬物動態が向上した。実施例9においてカニクイザルで測定した非結合型IL6レセプター濃度に関しても同様の方法で本試験のhIL6Rtgマウスにおいて測定したところ、Fv2IgG1およびFv4IgG1はH3pIL73IgG1よりも可溶型IL6レセプターの中和期間の延長が確認されたdatanotshown。実施例10で示したとおり、Fv2IgG1およびFv4IgG1はH3pIL73IgG1と比較して膜型IL6レセプターへのpH依存的結合が向上していることから、膜型IL6レセプターへのpH依存的結合を向上させることにより、H3pIL73IgG1よりさらに薬物動態および可溶型IL6レセプターの中和期間を向上させることが可能であることが示された。実施例12定常領域の最適化による膜型IL6レセプターへのpH依存的結合の向上Fv4IgG1の定常領域の最適化一般的に膜型抗原に対する結合は抗体の定常領域によって変化することが報告されているJImmunolMethods1997Jun232056772。これまで作製したpH依存的結合抗体の定常領域はIgG1アイソタイプであった。そこで膜型IL6レセプターへのpH依存的結合を向上させるために定常領域の最適化を検討した。天然型の定常領域として定常領域IgG2配列番号:28に変異を導入して、定常領域IgG2ΔGK配列番号:29を作製した。定常領域IgG2ΔGKに対してさらに変異を導入し、定常領域M58配列番号:30を作製した。定常領域IgG2および定常領域M58に対してさらに変異を導入し、定常領域M71配列番号:31およびM73配列番号:32を作製した。実施例10で作製したVH3IgG1の定常領域をIgG2ΔGKに置換したVH3IgG2ΔGK配列番号:33、定常領域をM58に置換したVH3M58配列番号:34、定常領域をM73に置換したVH3M73配列番号:35を作製した。具体的には、実施例10で使用しているVH3の定常領域部分をNheINotI消化とligationにより目的の定常領域に置換した発現ベクターを構築した。得られた発現ベクターの塩基配列は当業者公知の方法で決定した。H鎖としてVH3IgG2ΔGK配列番号:33、L鎖としてVL3CK配列番号:27を用いたFv4IgG2、H鎖としてVH3M58配列番号:34、L鎖としてVL3CK配列番号:27を用いたFv4M58、H鎖としてVH3M73配列番号:35、L鎖としてVL3CK配列番号:27を用いたFv4M73の発現精製を行った。発現精製は実施例1に記載した方法で行った。定常領域を最適化したFv4の可溶型IL6レセプターへの結合解析作製したFv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73およびWTに関して、実施例10と同様の方法でSR344への結合および解離をリアルタイムに観測した。同様に解析を行い、結合速度定数ka、および解離速度定数kdを算出し、その値をもとに解離定数KDを算出した表9。表9SR344に対するpH依存的結合クローンの可溶型IL6レセプターからの解離速度定数比較それぞれについてpH74のaffinityを算出した結果、SR344に対するFv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73の解離定数affinity、KD値はそれぞれ14nM13nM14nM14nMとほぼ同等の値であり、SR344に対するpH依存的結合クローンの可溶型IL6レセプターへの結合能は定常領域を改変しても変化しないことが示された。このことから、Fv1、Fv2、Fv3についても同様に定常領域を改変しても可溶型IL6レセプターへの結合能は変化しないと考えられた。定常領域を最適化したFv4の膜型IL6レセプターへの結合解析作製したFv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73およびWTに関して、実施例10と同様の方法でBiacoreT100GEHealthcareを用いてpH58pH74における膜型IL6レセプターへの抗原抗体反応を観測した。pH依存的結合クローンをpH74の条件下で注入してSR344と結合させたのちに、pH58の移動相で各クローンのpH依存的な解離を観測した結果を図19に示す。さらに実施例10と同様の方法で解析を行い、各クローンのpH依存的な解離速度を表10に示した。表10SR344に対するpH依存的結合クローンの膜型IL6レセプターからの解離速度定数比較それぞれについてpH依存性を算出した結果SR344に対するFv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73のpH依存性はそれぞれ56倍170倍176倍101倍であり、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73のいずれもFv4IgG1より高いpH依存性的な膜型IL6レセプターからの解離を示した。Fv4の可変領域を用いた可溶型IL6レセプターへの結合解析結果および膜型IL6レセプターへの結合解析結果より、定常領域をIgG1からIgG2、M58およびM73に置換することにより可溶型IL6レセプターへのaffinityを変化させることなく、膜型IL6レセプターへのpH依存的結合のみを改善可能であることが見出された。また、Fv1、Fv2、Fv3についても同様であると考えられた。実施例13定常領域を最適化したpH依存的結合抗体のヒトIL6レセプタートランスジェニックマウスによるPKPD試験実施例8で使用したヒトIL6レセプタートランスジェニックマウスhIL6Rtgマウスを用いて、実施例13で作成したFv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58の薬物動態を評価し、定常領域の及ぼす薬物動態への影響を検討した。WTおよびFv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58をhIL6Rtgマウスに25mgkgで静脈内に単回投与し、実施例8と同様に各抗体の血漿中濃度の測定を行った。WTおよびFv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58の血漿中濃度推移を図20に示した。実施例11と同様、WTと比較してFv4IgG1の薬物動態は向上しており、さらにFv4IgG2、Fv4M58はFv4IgG1よりも薬物動態は向上した。実施例9においてカニクイザルで測定した非結合型IL6レセプター濃度に関しても同様の方法で本試験のhIL6Rtgマウスにおいて測定したところ、Fv4IgG2、Fv4M58はFv4IgG1よりも可溶型IL6レセプターの中和期間の延長が確認されたdatanotshown。実施例10で示したとおり、Fv4IgG2、Fv4M58はFv4IgG1と比較して膜型IL6レセプターへのpH依存的結合の向上していることから、定常領域をIgG1からIgG2あるいはM58に置換することにより膜型IL6レセプターへのpH依存的結合を向上させ、薬物動態および可溶型IL6レセプターの中和期間を向上させることが可能であることが示された。これより、Fv4のみならずFv1、Fv2、Fv3においても、定常領域をIgG1からIgG2あるいはM58に置換することにより、IgG1よりも薬物動態および可溶型IL6レセプターの中和期間が向上すると考えられた。実施例14可変領域および定常領域を最適化したpH依存的結合抗体の作製これまでと同様の方法を用い、VH2IgG1の定常領域をM71M73としたVH2M71配列番号:36、VH2M73配列番号:37、VH4IgG1の定常領域をM71M73としたVH4M71配列番号:38、VH4M73配列番号:39を作製した。H鎖としてVH2M71、L鎖としてVL2CKを用いたFv1M71、H鎖としてVH2M73、L鎖としてVL2CKを用いたFv1M73、H鎖としてVH4M71、L鎖としてVL1CKを用いたFv3M71、H鎖としてVH4M73、L鎖としてVL1CKを用いたFv3M73の発現精製を行った。発現精製は実施例1に記載した方法で行った。可変領域および定常領域を最適化したpH依存的結合抗体の可溶型IL6レセプターへの結合解析ヒト化PM1抗体野生型:WT、および、これまでに作製したH3pIL73IgG1、Fv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M71、Fv3M73、Fv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73の11種類について、実施例10と同様の方法でSR344への結合および解離をリアルタイムに観測した。同様に解析を行い、結合速度定数ka、および解離速度定数kdを算出し、その値をもとに解離定数KDを算出した表11。表11SR344に対するpH依存的結合クローンの可溶型IL6レセプターからの解離速度定数比較得られた10種類のpH依存的結合クローンは全て可溶型IL6レセプターに対して、WTと比較して同等以上の解離定数affinity、KD値を有していることが見出された。可変領域および定常領域を最適化したpH依存的結合抗体の膜型IL6レセプターへの結合解析ヒト化PM1抗体野生型:WT、および、これまでに作製したH3pIL73IgG1、Fv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M71、Fv3M73、Fv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73の11種類について、実施例10と同様の方法でBiacoreT100GEHealthcareを用いてpH58pH74における膜型IL6レセプターへの抗原抗体反応を観測した。pH依存的結合クローンをpH74の条件下で注入してSR344と結合させたのちに、移動相のpHである58で各クローンのpH依存的な解離を観測した結果を図21に示したFv1M71、Fv1M73、Fv3M71、Fv3M73については図21、他は図17および19に示した。さらに実施例10と同様の方法で解析を行い、全11種類のクローンについて、解離速度定数のpH依存性を表12に示した。表12SR344に対するpH依存的結合クローンの膜型IL6レセプターからの解離速度定数のpH依存性得られた10種類のpH依存的結合クローンは膜型IL6レセプターに対してpH依存的な結合能を示した。さらに実施例9においてカニクイザルにおいてWTと比較して抗体が血漿中から消失するまでの時間、および、生体内の可溶型IL6レセプターおよび膜型IL6レセプターが抗体によって結合されている時間が大幅に延長することが見出されたH3pIL73IgG1と比較して、Fv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M71、Fv3M73、Fv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73のいずれも膜型IL6レセプターへのpH依存的結合が向上していることが見出された。実施例15可変領域と定常領域を最適化したpH依存的結合抗体のカニクイザルによるPKPD試験公知の高親和性抗IL6レセプター抗体の作製公知の高親和性抗IL6レセプター抗体として、US20070280945A1に記載されている高親和性抗IL6レセプター抗体であるVQ8F1121hIgG1US20070280945A1アミノ酸配列19および27を発現させるため、動物細胞発現用ベクターを構築した。抗体可変領域については、合成オリゴDNAを組み合わせたPCR法assemblyPCRにより作製した。定常領域については、実施例1で使用した発現ベクターからPCR法により増幅した。AssemblyPCR法により抗体可変領域と定常領域を結合させ、哺乳動物発現用ベクターへ挿入した。得られたH鎖およびL鎖DNA断片を哺乳動物細胞発現ベクターに挿入し、目的のH鎖発現ベクターおよびL鎖発現ベクターを作製した。得られた発現ベクターの塩基配列は当業者公知の方法で決定した。作製した発現ベクターを用い、発現精製を行った。発現精製は実施例1に記載した方法で行い、高親和性高IL6レセプター抗体highaffinityAbを得た。カニクイザルによるPKPD試験pH依存的結合抗体であるH3pIL73IgG1およびFv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M73、Fv4M73および公知の高親和性抗IL6レセプター抗体highaffinityAbのカニクイザルにおける薬物動態および薬効を評価した。H3pIL73IgG1およびFv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M73、Fv4M73をカニクイザルに05mgkgで静脈内に単回投与し、またhighaffinityAbは10mgkgで静脈内に単回投与し、投与前および経時的に採血した。実施例9と同様に各抗体の血漿中濃度の測定を行った。H3pIL73IgG1およびFv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M73、Fv4M73、highaffinityAbの血漿中濃度推移を図21に示した。カニクイザル膜型IL6レセプターがどの程度中和されているかの薬効を評価するために、実施例9と同様に、抗体投与後3日目から10日目highaffinityAbに関しては6日目から10日目までカニクイザルIL65μgkgを腰背部に連日皮下投与し、24時間後の各個体のCRP濃度を測定した。各抗体投与時のCRP濃度推移を図22に示した。カニクイザル可溶型IL6レセプターがどの程度中和されているかの薬効を評価するために、実施例9と同様に、カニクイザル血漿中の非結合型のカニクイザル可溶型IL6レセプター濃度を測定した。各抗体投与時の非結合型のカニクイザル可溶型IL6レセプター濃度推移を図23に示した。これより、H3pIL73IgG1と比較して、Fv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M73、Fv4M73はいずれも抗体血漿中濃度が高く維持され、CRP濃度および非結合型のカニクイザル可溶型IL6レセプター濃度が低く維持されていることが見出された。すなわち、これらはH3pIL73IgG1と比較して、膜型IL6レセプターおよび可溶型IL6レセプターが抗体によって結合されている時間言い換えれば中和されている時間が延長されていることが示された。また、これらのpH依存的結合抗IL6レセプター抗体は、10mgkgで投与した公知の高親和性抗IL6レセプター抗体highaffinityAbと比較して、半分の投与量である05mgkgで同等以上の中和効果と持続性が確認されたことから、pH依存的結合抗体は公知の高親和性高IL6レセプター抗体と比較して優れた中和効果と持続性を有することが明らかとなった。表12に記した抗体のうち、本試験でカニクイザルによるPKPD試験を実施しなかった抗体についても、H3pIL73IgG1と比較して、膜型IL6レセプターへのpH依存的結合が向上していることが確認されていることから、これらについてもH3pIL73IgG1と比較して膜型IL6レセプターおよび可溶型IL6レセプターが抗体によって結合されている時間言い換えれば中和されている時間、中和効果の持続性が延長されていると考えられる。実施例9において、H3pIL73IgG1はWTと比較して、抗体が血漿中から消失するまでの時間、および、生体内の可溶型IL6レセプターおよび膜型IL6レセプターが抗体によって結合されている時間中和効果の持続性が大幅に延長することが見出されている。H3pIL73IgG1より中和効果の持続性に優れるFv1M71、Fv1M73、Fv2IgG1、Fv3M71、Fv3M73、Fv4IgG1、Fv4IgG2、Fv4M58、Fv4M73はWTと比較した場合、著しく中和効果の持続性が改善されたと考えられる。これらのことから、抗IL6レセプター抗体に対して、血漿中のpHであるpH74において強く抗原に結合し、エンドソーム内のpHであるpH58において抗原への結合を弱くしたpH依存的結合抗IL6レセプター抗体は、抗IL6レセプター抗体の患者への投与量や投与頻度を減らすことが可能であり、結果として総投与量を大幅に減らすことが可能となり、IL6アンタゴニストとしての医薬品として極めて優れていると考えられる。実施例16pH依存的に結合する抗IL6抗体の作製抗IL6抗体の発現と精製実施例1~15におけるヒト化抗IL6レセプター抗体において、ヒト化抗IL6レセプター抗体の可変領域に対して、そのCDR配列を中心にヒスチジン等への置換を導入することによって、ヒト化抗IL6レセプター抗体とIL6レセプターとの結合にpH依存性を付与した抗体を複数創製することに成功し、それらは全てIL6レセプターへ繰り返し結合し、PKPDが大きく改善することが見出された。そこで、抗IL6レセプター抗体とは異なる抗原に結合する抗体において同様の方法により、抗原と抗体との結合にpH依存性を付与できるかどうかを検討した。異なる抗原としてヒトIL6を選択し、WO2004039826に記載されたヒトIL6に結合するH鎖アミノ酸配列配列番号:62とL鎖アミノ酸配列配列番号:63からなる抗IL6抗体antiIL6wildtypeを作製した。当業者公知の方法で目的の抗体アミノ酸配列をコードする遺伝子断片を動物細胞発現ベクターに挿入し、目的のH鎖発現ベクターおよびL鎖発現ベクターを作製した。得られた発現ベクターの塩基配列は当業者公知の方法で決定した。AntiIL6wildtypeの発現と精製は実施例1に記載した方法で行った。pH依存的抗IL6抗体の作製H鎖アミノ酸配列配列番号:62とL鎖アミノ酸配列配列番号:63からなる抗IL6抗体antiIL6wildtypeに対して、CDRのアミノ酸に対してヒスチジンへの置換を導入することで、抗体とIL6の結合にpH依存性を付与する検討を行った。CDRのアミノ酸に対してヒスチジンへの置換を検討し、スクリーニングを行った結果、pH74における結合と比較して、pH55における結合が大幅に低下し、pH依存的な結合を示すクローンがいくつか得られた。pH依存的クローンにおけるヒスチジン置換箇所を表13に示した。そのうち、H鎖アミノ酸配列配列番号:64とL鎖アミノ酸配列配列番号:65からなるantiIL6clone1、および、H鎖アミノ酸配列配列番号:64とL鎖アミノ酸配列配列番号:66からなるantiIL6clone2、が挙げられた。AntiIL6clone1とantiIL6clone2の発現と精製は実施例1に記載した方法で行った。表13pH依存的クローンにおけるヒスチジン置換箇所H32、H59、H61、H99L53、L54、L90、L94pH依存的結合クローンのヒトIL6への結合解析上記で作製したantiIL6wildtype、antiIL6clone1、および、antiIL6clone2の3種類について、BiacoreT100を用いてpH55とpH74における抗原抗体反応の速度論的解析を実施したバッファーはDPBSpH74あるいはpH55150mMNaCl。アミンカップリング法によりrecombproteinAGを固定化したセンサーチップ上に種々の抗体を結合させ、そこにアナライトとして適切な濃度に調製したヒトIL6TORAYを注入した。測定は全て37°Cで実施した。BiacoreT100EvaluationSoftwareを用い、結合速度定数ka、および解離速度定数kdを算出し、その値をもとに解離定数KDを算出した表14。さらにそれぞれについてpH55とpH74のaffinity比を算出し、pH依存性結合を評価した。表14IL6に対するpH依存的結合クローンのIL6への結合比較それぞれについてpH55とpH74のaffinity比KDKDを算出した結果、ヒトIL6に対するantiIL6wildtype、antiIL6clone1、antiIL6clone2のpH依存性結合はそれぞれ08倍、103倍、135倍であり、いずれのクローンもWTと比較して10倍以上の高いpH依存的結合を示した。AntiIL6clone2のpH74とpH55でのセンサーグラムを図26に示した。これより、抗IL6レセプター抗体のみならず、抗IL6抗体においても、CDR配列を中心にヒスチジン等のアミノ酸への置換を導入することによって、血漿中の中性条件下では抗原に強く結合し、エンドソーム中の酸性条件下では抗原との結合が低下するpH依存的な結合を有する抗体を作製することが可能であることが示された。実施例1~15に示したとおり、pH依存的な結合を有する抗IL6レセプター抗体がIL6レセプターに繰り返し結合しPKPDが大きく改善したことから、pH依存的な結合を有するantiIL6clone1、antiIL6clone2は、antiIL6wildtypeと比較して、より多くの抗原に繰り返し結合しPKPDが大きく改善すると考えられた。実施例17pH依存的に結合する抗IL31レセプター抗体の作製抗IL31レセプター抗体の発現と精製実施例1~15において、ヒト化抗IL6レセプター抗体において、ヒト化抗IL6レセプター抗体の可変領域に対して、そのCDR配列を中心にヒスチジン等への置換を導入することによって、ヒト化抗IL6レセプター抗体とIL6レセプターとの結合にpH依存性を付与した抗体を複数創製することに成功し、それらは全てIL6レセプターへ繰り返し結合し、PKPDが大きく改善することが見出された。そこで、抗IL6レセプター抗体とは異なる抗原に結合する抗体において同様の方法により、抗原と抗体との結合にpH依存性を付与できるかどうかを検討した。異なる抗原としてマウスIL31レセプターを選択し、WO2007142325に記載されたマウスIL31レセプターに結合するH鎖アミノ酸配列配列番号:67とL鎖アミノ酸配列配列番号:68からなる抗IL31レセプター抗体antiIL31Rwildtypeを作製した。当業者公知の方法で目的の抗体アミノ酸配列をコードする遺伝子断片を動物細胞発現ベクターに挿入し、目的のH鎖発現ベクターおよびL鎖発現ベクターを作製した。得られた発現ベクターの塩基配列は当業者公知の方法で決定した。AntiIL31Rwildtypeの発現と精製は実施例1に記載した方法で行った。pH依存的抗IL31レセプター抗体の作製H鎖アミノ酸配列配列番号:67とL鎖アミノ酸配列配列番号:68からなる抗IL31レセプター抗体antiIL31Rwildtypeに対して、CDRのアミノ酸に対してヒスチジンへの置換を導入することで、抗体とIL31レセプターの結合にpH依存性を付与する検討を行った。CDRのアミノ酸に対してヒスチジンへの置換を検討し、スクリーニングを行った結果、pH74における結合と比較して、pH55における結合が大幅に低下し、pH依存的な結合を示すクローンがいくつか得られた。pH依存的クローンにおけるヒスチジン置換箇所を表15に示した。そのうちの一つとして、H鎖アミノ酸配列配列番号:69とL鎖からなるantiIL31Rclone1が挙げられた。AntiIL31Rclone1の発現と精製は実施例1に記載した方法で行った。表15pH依存的クローンにおけるヒスチジン置換箇所H33pH依存的結合クローンの可溶型IL31レセプターへの結合解析上記で作製したantiIL31Rwildtype、antiIL31Rclone1の2種類について、BiacoreT100を用いてpH55とpH74における抗原抗体反応の速度論的解析を実施したバッファーはDPBSpH74あるいはpH55150mMNaCl001Tween20002NaN3。アミンカップリング法によりrecombproteinAGを固定化したセンサーチップ上に種々の抗体を結合させ、そこにアナライトとして適切な濃度に調製した可溶型マウスIL31レセプターWO2007142325に記載の方法で調製を注入した。測定は全て25°Cで実施した。BiacoreT100EvaluationSoftwareを用い、結合速度定数ka、および解離速度定数kdを算出し、その値をもとに解離定数KDを算出した表16。さらにそれぞれについてpH55とpH74のaffinity比を算出し、pH依存性結合を評価した。表16マウスIL31レセプターに対するpH依存的結合クローンのマウスIL31レセプターへの結合比較それぞれについてpH55とpH74のaffinity比KDKDを算出した結果、マウスIL31レセプターに対するantiIL31Rwildtype、antiIL31Rclone1のpH依存性結合はそれぞれ32倍、1000倍であり、clone1はWTと比較して300倍程度の高いpH依存的結合を示した。AntiIL31RcloneのpH74とpH55でセンサーグラムを図27に示した。これより、抗IL6レセプター抗体と抗IL6抗体のみならず、抗IL31レセプター抗体においても、CDR配列を中心にヒスチジン等のアミノ酸への置換を導入することによって、血漿中の中性条件下では抗原に強く結合し、エンドソーム中の酸性条件下では抗原との結合が低下するpH依存的な結合を有する抗体を作製することが可能であることが示された。実施例1~15に示したとおり、pH依存的な結合を有する抗IL6レセプター抗体がIL6レセプターに繰り返し結合しPKPDが大きく改善したことから、pH依存的な結合を有するantiIL31Rclone1は、antiIL31Rwildtypeと比較して、より多くの抗原に繰り返し結合しPKPDが大きく改善すると考えられた。実施例18pH依存的結合抗体による抗原への繰り返し結合マウス投与抗体の発現と精製ヒト化IL6レセプター抗体として、以下の4種類を作製した。IL6レセプターに対してpH依存的な結合を示さない通常の抗体としてHアミノ酸配列配列番号:9とLアミノ酸配列配列番号:10からなるWTIgG1、H54アミノ酸配列配列番号:70とL28アミノ酸配列配列番号:12からなるH54L28IgG1を、IL6レセプターに対してpH依存的な結合を示す抗体として実施例3で作製したH170アミノ酸配列配列番号:4とL82アミノ酸配列配列番号:7からなるH170L82IgG1、および、実施例10で作製したVH3IgG1配列番号:23とVL3CK配列番号:27からなるFv4IgG1を実施例1に示した方法で発現と精製を行った。各種抗体の可溶型IL6レセプターへの結合解析調製したWTIgG1、H54L28IgG1、H170L82IgG1、および、Fv4IgG1の4種類について、BiacoreT100を用いてpH74およびpH58における抗原抗体反応の速度論的解析を実施したバッファーは10mMMESpH74、またはpH58150mMNaCl005SurfactantP20。アミンカップリング法によりrecombproteinAGを固定化したセンサーチップ上に種々の抗体を結合させ、そこにアナライトとして適切な濃度に調製したSR344を注入した。各種抗体のSR344への結合および解離をリアルタイムに観測した。測定は全て37°Cで実施した。BiacoreT100EvaluationSoftwareを用い、結合速度定数ka、および解離速度定数kdを算出し、その値をもとに解離定数KDを算出した表17。表17SR344に対する各種抗体の可溶型IL6レセプターからの結合速度ka解離速度kd、解離定数KD比較それぞれについてpH58とpH74のアフィニティーKD値比を算出した結果、SR344に対するWTIgG1、H54L28IgG1、H170L82IgG1、および、Fv4IgG1のpH依存性結合KD値の比はそれぞれ16倍、07倍、619倍および273倍であった。また、それぞれについてpH58とpH74の解離速度kd値比を算出した結果、SR344に対するWTIgG1、H54L28IgG1、H170L82IgG1、および、Fv4IgG1のpH依存性解離速度kd値の比はそれぞれ29倍、20倍、114倍および388倍であった。これより、通常の抗体であるWTIgG1とH54L28IgG1はpH依存的な結合をほとんど示さず、H170L82IgG1とFv4IgG1はpH依存的な結合を示すことが確認された。また、これらの抗体のpH74におけるアフィニティーKD値はほぼ同等であったから、血漿中におけるSR344への結合は同程度であると考えられた。マウスを用いた体内動態試験ヒトIl6レセプターを発現していないマウスC57BL6J;これらの抗ヒトIL6レセプター抗体はマウスのIL6レセプターに結合しないにSR344ヒトIL6レセプター:実施例1で作製を単独投与、もしくはSR344および抗ヒトIL6レセプター抗体を同時投与した後のSR344および抗ヒトIL6レセプター抗体の体内動態を評価した。SR344溶液もしくはSR344および抗ヒトIL6レセプター抗体の混合溶液それぞれ5μgmL、01mgmLを尾静脈に10mLkgで単回投与した。このとき、SR344に対して抗ヒトIL6レセプター抗体は十分量過剰に存在することから、SR344はほぼ全て抗体に結合していると考えられる。投与後15分間、2時間、8時間、1日間、2日間、3日間、4日間、7日間、14日間、21日間、28日間で採血を行った。採取した血液は直ちに4°C、15000rpmで15分間遠心分離し、血漿を得た。分離した血漿は、測定を実施するまで20°C以下に設定された冷凍庫に保存した。抗ヒトIL6レセプター抗体としては、上述のWTIgG1、H54L28IgG1、H170L82IgG1、および、Fv4IgG1を使用した。ELISA法による血漿中抗ヒトIL6レセプター抗体濃度測定マウス血漿中の抗ヒトIL6レセプター抗体濃度はELISA法にて測定した。まずAntiHumanIgGF2FragmentofAntibodyをNuncImmunoPlateMaxiSoupに分注し、4°Cで1晩静置しAntiHumanIgG固相化プレートを作成した。血漿中濃度として08、04、02、01、005、0025、00125μgmLの検量線試料と100倍以上希釈したマウス血漿測定試料を調製し、これら検量線試料および血漿測定試料100μLに20ngmLのSR344を200μL加え、室温で1時間静置した。その後AntiHumanIgG固相化プレートに分注しさらに室温で1時間静置した。その後BiotinylatedAntihumanIL6RAntibodyRDを室温で1時間反応させ、さらにStreptavidinPolyHRP80を室温で1時間反応させ、TMBOneComponentHRPMicrowellSubstrateを基質として用い発色反応を行い、1NSulfuricacidShowaChemicalで反応停止後、マイクロプレートリーダーにて450nmの吸光度を測定した。マウス血漿中濃度は検量線の吸光度から解析ソフトウェアSOFTmaxPROMolecularDevicesを用いて算出した。この方法で測定した静脈内投与後の血漿中抗体濃度推移を図28に示した。電気化学発光法による血漿中SR344濃度測定マウスの血漿中SR344濃度は電気化学発光法にて測定した。2000、1000、500、250、125、625、3125pgmLに調整したSR344検量線試料および50倍以上希釈したマウス血漿測定試料を調製し、SULFOTAGNHSEsterMesoScaleDiscoveryでルテニウム化したMonoclonalAntihumanIL6RAntibodyRDおよびBiotinylatedAntihumanIL6RAntibodyRDおよびWTIgG1溶液を混合し37°Cで1晩反応させた。その際のWTIgG1の終濃度はサンプルに含まれる抗ヒトIL6レセプター抗体濃度より過剰の333μgmLであり、サンプル中のほぼ全てのSR344をWTIgG1と結合した状態にすることを目的とした。その後、MA400PRStreptavidinPlateMesoScaleDiscoveryに分注した。さらに室温で1時間反応させ洗浄後、ReadBufferT×4MesoScaleDiscoveryを分注し、ただちにSECTORPR400readerMesoScaleDiscoveryで測定を行った。SR344濃度は検量線のレスポンスから解析ソフトウェアSOFTmaxPROMolecularDevicesを用いて算出した。この方法で測定した静脈内投与後の血漿中SR344濃度推移を図29に示した。pH依存的結合による効果pH依存的な結合を示さない抗体であるWTIgG1とH54L28IgG1、および、pH依存的な結合を示す抗体であるH170L82IgG1とFv4IgG1の抗体濃度推移に関しては、WTIgG1、H54L28IgG1、および、Fv4IgG1はほぼ同等であり、H170L82IgG1は若干早い消失を示した。血漿中濃度推移のデータを薬物動態解析ソフトWinNonlinPharsightで解析した結果、WTIgG1、H54L28IgG1、Fv4IgG1、H170L82IgG1の血漿中半減期はそれぞれ210、288、262、75dayであった。実施例2に記したとおり、抗原が可溶型抗原の場合、投与した抗体は血漿中で抗原に結合し、抗原と抗体の複合体の形で血漿中を滞留する。通常、抗体の血漿中滞留性はFcRnの機能により非常に長い消失速度が非常に遅いのに対して、抗原の血漿中滞留性は短い消失速度が速いため、抗体に結合した抗原は抗体と同程度の長い血漿中滞留性を有する消失が非常に遅いことになる。ヒト化IL6レセプター抗体の抗原であるSR344可溶型ヒトIL6レセプターを単独で投与した場合も同様にSR344は極めて早い消失を示した血漿中半減期02day。SR344とpH依存的な結合を示さない通常の抗体であるWTIgG1あるいはH54L28IgG1を同時に投与した場合、SR344の消失速度は著しく低下し、長い血漿中滞留性を示した血漿中半減期:WTIgG153day、H54L28IgG163day。これはSR344が同時に投与した抗体にほぼ全て結合していため、上述のとおり抗体に結合したSR344はFcRnの機能により抗体と同程度の長い血漿中滞留性を有するためである。SR344とpH依存的な結合を示す抗体であるH170L82IgG1あるいはFv4IgG1を同時に投与した場合、SR344の消失はWTIgG1あるいはH54L28IgG1を同時に投与した場合と比較して著しく速くなった血漿中半減期:H170L82IgG113day、Fv4IgG106day。その傾向は特にFv4IgG1で顕著であった。Fv4IgG1のpH74におけるアフィニティーはWTIgG1およびH54L28IgG1と同等以上であることから、SR344はほぼ全てFv4IgG1に結合していると考えられる。Fv4IgG1は、WTIgG1とH54L28IgG1と比較して、同等あるいはやや長い血漿中滞留性を示し消失が遅いにもかかわらず、Fv4IgG1に結合したSR344の消失は著しく速くなった。これは図4に示した本技術のコンセプトにより説明可能である。pH依存的な結合を示さない通常の抗体は、抗体-可溶型抗原複合体が血漿中においてピノサイトーシスによってエンドソームに取り込まれ、エンドソーム内の酸性条件下においてエンドソーム内に発現しているFcRnに結合し、FcRnへ結合した抗体-可溶型抗原複合体はそのまま細胞表面へ移行し再び血漿中に戻るため、抗体に結合した抗原は抗体と同程度の長い血漿中滞留性を有する消失が非常に遅い。一方、pH依存的な結合を示す抗体は、エンドソーム内の酸性条件下において抗原を解離するため、抗体のみFcRnに結合し再び血漿中に戻り、抗体から解離した抗原は血漿中に戻ることなくライソソームで分解されるため、抗原の消失は、pH依存的な結合を示さない抗体の場合と比較して消失が著しく速くなる。すなわち、SR344をpH依存的な結合を示さない抗体であるWTIgG1あるいはH54L28IgG1と同時に投与した場合は、血漿中とエンドソーム内においてSR344はWTIgG1あるいはH54L28IgG1と結合しているためSR344の消失は抗体と同程度に遅くなるが、SR344をpH依存的な結合を示す抗体であるH170L82IgG1あるいはFv4IgG1と同時に投与した場合は、エンドソーム内の低pH環境下においてSR344が抗体から解離するためSR344の消失は極めて早くなる。すなわち、pH依存的な結合を示す抗体であるH170L82IgG1あるいはFv4IgG1は、エンドソーム内の低pH環境下においてSR344が解離することから、FcRnによって再び血漿中に戻ったH170L82IgG1あるいはFv4IgG1の多くはSR344が結合していないと考えられる。これよりpH依存的な結合を示す抗体は、図4に示すとおり、エンドソーム内の低pH環境下において抗原を解離し、抗原に結合していない状態でFcRnによって血漿中に戻ることで、血漿中で再度新しい抗原に結合することが可能となり、これを繰り返すことでpH依存的な結合を示す抗体は複数回抗原に繰り返し結合することが可能であることが示された。これは実施例7で示したようにBiacoreにおいて、pH依存的結合クローンが抗原へ繰り返し結合できることを反映しており、抗体の抗原へのpH依存的な結合を増強することで抗原へ繰り返し結合する回数を増大させることが可能である。抗原が可溶型抗原の場合、血漿中の中性条件下で抗体に結合した抗原がエンドソーム内で解離し抗体がFcRnにより血漿中に戻れば、抗体は再び血漿中の中性条件下で抗原に結合できるため、エンドソーム内の酸性条件下で抗原を解離する性質を有する抗体は抗原に複数回結合可能である。抗体に結合した抗原がエンドソーム内で解離しない場合抗原は抗体に結合したまま血漿中に戻ると比較して、抗体に結合した抗原がエンドソーム内で解離する場合は、抗原はライソソームに運ばれ分解されるため抗原の血漿中からの消失速度は増加する。すなわち、血漿中から抗原が消失する速度を指標として抗体が抗原に複数回結合可能であるか否かを判断することも可能である。抗原の血漿中からの消失速度の測定は、例えば、本実施例に示したように抗原と抗体を生体内に投与し、投与後の血漿中の抗原濃度を測定することにより行うことも可能である。pH依存的な結合を示さない通常の抗体と比較して、pH依存的な結合を示す抗体は、一つの抗体が複数回抗原に繰り返し結合することが可能であるため、抗体の投与量の大幅な低減と投与間隔の大幅な延長が可能になると考えられる。本メカニズムによる複数回の抗原への繰り返し結合は、pH依存的な抗原抗体反応に立脚していることから、如何なる抗原であっても血漿中のpH74で結合し、エンドソーム内の酸性pHで抗原から解離するpH依存的な結合を示す抗体を作製することができれば、一つの抗体が複数回抗原に繰り返し結合することが可能である。すなわち、本技術はIL6レセプター、IL6、IL31レセプターのみならず、抗原の種類に依らず、如何なる抗原に対する抗体に対しても一般に適応可能な技術として有用である。"