"第1の抗体、第2の抗体、および第3の抗体を含む抗EGFR抗体のトリオを含む組成物であって、i前記第1の抗体が、ca、cb、およびccからなる群から選択される抗体であるか、またはEGFRへの結合について該抗体と競合するか、または該抗体と同じエピトープに結合し、ii前記第2の抗体が、cd、ce、およびcfからなる群から選択される抗体であるか、またはEGFRへの結合について該抗体と競合するか、または該抗体と同じエピトープに結合し、かつiii前記第3の抗体が、cg、ch、ci、cj、およびckからなる群から選択される抗体であるか、またはEGFRへの結合について該抗体と競合するか、または該抗体と同じエピトープに結合する、前記組成物。i前記第1の抗体が、抗体caSEQIDNO:29、30、および34にそれぞれ記載の重鎖CDR1、2、および3と、SEQIDNO:48、45、および49にそれぞれ記載の軽鎖CDR1、2、および3とを含むであるか、またはEGFRへの結合について該抗体と競合するか、または該抗体と同じエピトープに結合し、ii前記第2の抗体が、抗体cdSEQIDNO:29、30、および31にそれぞれ記載の重鎖CDR1、2、および3と、SEQIDNO:53、54、および55にそれぞれ記載の軽鎖CDR1、2、および3とを含むであるか、またはEGFRへの結合について該抗体と競合するか、または該抗体と同じエピトープに結合し、かつiii前記第3の抗体が、抗体chSEQIDNO:23、24、および26にそれぞれ記載の重鎖CDR1、2、および3と、SEQIDNO:39、40、および42にそれぞれ記載の軽鎖CDR1、2、および3とを含むであるか、またはEGFRへの結合について該抗体と競合するか、または該抗体と同じエピトープに結合する、請求項1に記載の組成物。癌の治療のための薬物の製造のための、請求項1または2に記載の組成物の使用。前記癌の前記治療が、抗癌剤である追加の薬物との併用療法による治療である、請求項3に記載の使用。前記抗癌剤が、トポイソメラーゼ阻害剤を含む、請求項4に記載の使用。EGFR細胞外ドメインに結合し、かつSEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、および11からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、かつSEQIDNO:12、13、14、15、16、17、19、20、21、および22からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む、単離されたモノクローナル抗体。EGFR細胞外ドメインに結合し、かつaそれぞれ、SEQIDNO:9およびSEQIDNO:20、bそれぞれ、SEQIDNO:10およびSEQIDNO:21、cそれぞれ、SEQIDNO:11およびSEQIDNO:22、dそれぞれ、SEQIDNO:1およびSEQIDNO:12、eそれぞれ、SEQIDNO:2およびSEQIDNO:13、fそれぞれ、SEQIDNO:3およびSEQIDNO:14、gそれぞれ、SEQIDNO:4およびSEQIDNO:15、hそれぞれ、SEQIDNO:5およびSEQIDNO:16、iそれぞれ、SEQIDNO:6およびSEQIDNO:17、ならびにjそれぞれ、SEQIDNO:8およびSEQIDNO:19からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体。EGFR細胞外ドメインに結合し、かつ重鎖および軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列を含む、単離されたモノクローナル抗体であって、前記重鎖および軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列が、以下から選択される、前記単離されたモノクローナル抗体:aそれぞれSEQIDNO:34、20、および29の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:49、45、および48の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、bそれぞれSEQIDNO:37、36、および35の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:51、45、および50の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、cそれぞれSEQIDNO:38、36、および35の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:52、45、および48の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、dそれぞれSEQIDNO:31、30、および29の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:55、54、および53の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、eそれぞれSEQIDNO:32、30、および29の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:56、54、および53の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、fそれぞれSEQIDNO:33、30、および29の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:56、54、および53の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、gそれぞれSEQIDNO:25、24、および23の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:41、40、および39の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、hそれぞれSEQIDNO:26、24、および23の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:42、40、および39の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、iそれぞれSEQIDNO:27、24、および23の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:43、40、および39の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、jそれぞれSEQIDNO:28、24、および23の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:46、45、および44の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにkそれぞれSEQIDNO:28、24、および23の重鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列、ならびにそれぞれSEQIDNO:47、45、および44の軽鎖CDR3、CDR2、およびCDR1配列。EGFR細胞外ドメインへの結合について請求項7に記載の抗体のうちのいずれか1つと競合するか、またはそれと同じエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体。ヒト抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体である、請求項5~9のいずれか一項に記載の単離された抗体。二重特異性抗体、イムノコンジュゲート、Fab、Fab2、ScFv、アフィボディ、アビマー、ナノボディ、およびドメイン抗体からなる群から選択される、請求項5~9または5~10のいずれか一項に記載の単離された抗体。表2または表3に記載のペアから選択される抗体のペアを含む組成物であって、各抗体が、請求項5~9または5~11のいずれか一項に記載の抗体である、前記組成物。表4または表5に記載のトリオから選択される抗体のトリオを含む組成物であって、各抗体が、請求項5~9または5~11のいずれか一項に記載の抗体である、前記組成物。前記組成物を構成する前記抗体の各々が、100nmよりも良好なKDでEGFRに結合する、請求項5~9または12または13のいずれか一項に記載の組成物。以下の特性のうちの少なくとも1つを示す、請求項5~9または12、または13、または14のいずれか一項に記載の組成物:a細胞ベースのインビトロアッセイにおいて測定される、AKTリン酸化またはERKリン酸化の阻害、bインビトロでの、EGFRを発現する腫瘍細胞の増殖の阻害、cインビボでの、異種移植片モデルにおけるEGFRを発現する腫瘍細胞の増殖の阻害、dインビトロでの、EGFR細胞外ドメインに結合するリガンドの阻害、eインビトロでの、EGFRの二量体化の阻害、またはfインビトロでの、細胞表面におけるEGFRの下方制御。前記阻害が、前記組成物を構成する個々の抗体を、前記組成物中の合わせた抗体の合計量モルに等しい量モルで含む調製物と比較して、相加的または相乗的である、請求項15に記載の組成物。2つ以上の抗体を含む組成物であって、該2つ以上の抗体のうちの2つが、以下からなる群から選択される、前記組成物:a抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体cd、または、EGFRへの結合について抗体cdと競合するか、もしくは抗体cdと同じエピトープに結合する抗体、b抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体ce、または、EGFRへの結合について抗体ceと競合するか、もしくは抗体ceと同じエピトープに結合する抗体、c抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体cf、または、EGFRへの結合について抗体cfと競合するか、もしくは抗体cfと同じエピトープに結合する抗体、d抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体cg、または、EGFRへの結合について抗体cgと競合するか、もしくは抗体cgと同じエピトープに結合する抗体、e抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体ch、または、EGFRへの結合について抗体chと競合するか、もしくは抗体chと同じエピトープに結合する抗体、f抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体ci、または、EGFRへの結合について抗体ciと競合するか、もしくは抗体ciと同じエピトープに結合する抗体、g抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体cj、または、EGFRへの結合について抗体cjと競合するか、もしくは抗体cjと同じエピトープに結合する抗体、h抗体ca、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体ck、または、EGFRへの結合について抗体ckと競合するか、もしくは抗体ckと同じエピトープに結合する抗体、i抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体cbと競合するか、もしくは抗体cbと同じエピトープに結合する抗体、および抗体cd、または、EGFRへの結合について抗体cdと競合するか、もしくは抗体cdと同じエピトープに結合する抗体、j抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体caと競合するか、もしくは抗体caと同じエピトープに結合する抗体、および抗体ce、または、EGFRへの結合について抗体ceと競合するか、もしくは抗体ceと同じエピトープに結合する抗体、k抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体cbと競合するか、もしくは抗体cbと同じエピトープに結合する抗体、および抗体cf、または、EGFRへの結合について抗体cfと競合するか、もしくは抗体cfと同じエピトープに結合する抗体、l抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体cbと競合する抗体、および抗体cg、または、EGFRへの結合について抗体cgと競合するか、もしくは抗体cgと同じエピトープに結合する抗体、m抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体cbと競合する抗体、および抗体ch、または、EGFRへの結合について抗体chと競合するか、もしくは抗体chと同じエピトープに結合する抗体、n抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体cbと競合する抗体、および抗体ci、または、EGFRへの結合について抗体ciと競合するか、もしくは抗体ciと同じエピトープに結合する抗体、o抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体cbと競合する抗体、および抗体cj、または、EGFRへの結合について抗体cjと競合するか、もしくは抗体cjと同じエピトープに結合する抗体、p抗体cb、または、EGFRへの結合について抗体cbと競合する抗体、および抗体ck、または、EGFRへの結合について抗体ckと競合するか、もしくは抗体ckと同じエピトープに結合する抗体、q抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体cd、または、EGFRへの結合について抗体cdと競合するか、もしくは抗体cdと同じエピトープに結合する抗体、r抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体ce、または、EGFRへの結合について抗体ceと競合するか、もしくは抗体ceと同じエピトープに結合する抗体、s抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体cf、または、EGFRへの結合について抗体cfと競合するか、もしくは抗体cfと同じエピトープに結合する抗体、t抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体cg、または、EGFRへの結合について抗体cgと競合するか、もしくは抗体cgと同じエピトープに結合する抗体、u抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体ch、または、EGFRへの結合について抗体chと競合するか、もしくは抗体chと同じエピトープに結合する抗体、v抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体ci、または、EGFRへの結合について抗体ciと競合するか、もしくは抗体ciと同じエピトープに結合する抗体、w抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体cj、または、EGFRへの結合について抗体cjと競合するか、もしくは抗体cjと同じエピトープに結合する抗体、x抗体cc、または、EGFRへの結合について抗体ccと競合する抗体、および抗体ck、または、EGFRへの結合について抗体ckと競合するか、もしくは抗体ckと同じエピトープに結合する抗体。前記抗体が、a抗体vaおよびvd、ならびに、EGFRへの結合について抗体vaおよびvdと競合するか、もしくは抗体vaおよびvdと同じエピトープに結合する抗体からなる群から選択される、またはb抗体vaおよびve、または、EGFRへの結合について抗体vaおよびveと競合するか、もしくは抗体vaおよびveと同じエピトープに結合する抗体からなる群、またはc抗体vaおよびvf、または、EGFRへの結合について抗体vaおよびvfと競合するか、もしくは抗体vaおよびvfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、d抗体vaおよびvg、または、EGFRへの結合について抗体vaおよびvgと競合するか、もしくは抗体vaおよびvgと同じエピトープに結合する抗体からなる群、e抗体vaおよびvh、または、EGFRへの結合について抗体vaおよびvhと競合するか、もしくは抗体vaおよびvhと同じエピトープに結合する抗体からなる群、f抗体vaおよびvi、または、EGFRへの結合について抗体vaおよびviと競合するか、もしくは抗体vaおよびviと同じエピトープに結合する抗体からなる群、h抗体vaおよびvj、または、EGFRへの結合について抗体vaおよびvjと競合するか、もしくは抗体vaおよびvjと同じエピトープに結合する抗体からなる群、i抗体vbおよびvd、または、EGFRへの結合について抗体vaおよびviと競合するか、もしくは抗体vaおよびviと同じエピトープに結合する抗体からなる群、j抗体vbおよびve、または、EGFRへの結合について抗体vbおよびveと競合するか、もしくは抗体vbおよびveと同じエピトープに結合する抗体からなる群、k抗体vbおよびvf、または、EGFRへの結合について抗体vbおよびvfと競合するか、もしくは抗体vbおよびvfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、l抗体vbおよびvg、または、EGFRへの結合について抗体vbおよびvgと競合するか、もしくは抗体vbおよびvgと同じエピトープに結合する抗体からなる群、m抗体vbおよびvh、または、EGFRへの結合について抗体vbおよびvhと競合するか、もしくは抗体vbおよびvhと同じエピトープに結合する抗体からなる群、n抗体vbおよびvi、または、EGFRへの結合について抗体vbおよびviと競合するか、もしくは抗体vbおよびviと同じエピトープに結合する抗体からなる群、o抗体vbおよびvj、または、EGFRへの結合について抗体vbおよびvjと競合するか、もしくは抗体vbおよびvjと同じエピトープに結合する抗体からなる群、p抗体vcおよびvd、または、EGFRへの結合について抗体vcおよびvdと競合するか、もしくは抗体vcおよびvdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、q抗体vcおよびve、または、EGFRへの結合について抗体vcおよびveと競合するか、もしくは抗体vcおよびveと同じエピトープに結合する抗体からなる群、r抗体vcおよびvf、または、EGFRへの結合について抗体vcおよびvfと競合するか、もしくは抗体vcおよびvfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、s抗体vcおよびvg、または、EGFRへの結合について抗体vcおよびvgと競合するか、もしくは抗体vcおよびvgと同じエピトープに結合する抗体からなる群、t抗体vcおよびvh、または、EGFRへの結合について抗体vcおよびvhと競合するか、もしくは抗体vcおよびvhと同じエピトープに結合する抗体からなる群、u抗体vcおよびvi、または、EGFRへの結合について抗体vcおよびviと競合するか、もしくは抗体vcおよびviと同じエピトープに結合する抗体からなる群、ならびにv抗体vcおよびvj、または、EGFRへの結合について抗体vcおよびvjと競合するか、もしくは抗体vcおよびvjと同じエピトープに結合する抗体からなる群である、請求項12~16のいずれか一項に記載の組成物。第3の抗体をさらに含む、請求項12~18のいずれか一項に記載の組成物。前記抗体が、a抗体ca、cg、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、cg、およびcdと競合するか、または抗体ca、cg、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、b抗体ca、cg、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、cg、およびceと競合するか、または抗体ca、cg、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、c抗体ca、cg、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、cg、およびcfと競合するか、または抗体ca、cg、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、d抗体ca、ch、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ch、およびcdと競合するか、または抗体ca、ch、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、e抗体ca、ch、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ch、およびceと競合するか、または抗体ca、ch、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、f抗体ca、ch、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ch、およびcfと競合するか、または抗体ca、ch、およびcfと同じエピトープに結合する抗体、g抗体ca、ci、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ci、およびcdと競合するか、または抗体ca、ci、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、h抗体ca、ci、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ci、およびceと競合するか、または抗体ca、ci、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、i抗体ca、ci、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ci、およびcfと競合するか、または抗体ca、ci、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、j抗体ca、cj、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、cj、およびcdと競合するか、または抗体ca、cj、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、k抗体ca、cj、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、cj、およびceと競合するか、または抗体ca、cj、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、l抗体ca、cj、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、cj、およびcfと競合するか、または抗体ca、cj、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、m抗体ca、ck、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ck、およびcdと競合するか、または抗体ca、ck、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、n抗体ca、ck、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ck、およびceと競合するか、または抗体ca、ck、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、o抗体ca、ck、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体ca、ck、およびcfと競合するか、または抗体ca、ck、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、p抗体cb、cg、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、cg、およびcdと競合するか、または抗体cb、cg、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、q抗体cb、cg、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、cg、およびceと競合するか、または抗体cb、cg、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、r抗体cb、cg、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、cg、およびcfと競合するか、または抗体cb、cg、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、s抗体cb、ch、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ch、およびcdと競合するか、または抗体cb、ch、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、t抗体cb、ch、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ch、およびceと競合するか、または抗体cb、ch、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、u抗体cb、ch、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ch、およびcfと競合するか、または抗体cb、ch、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、v抗体cb、ci、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ci、およびcdと競合するか、または抗体cb、ci、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、w抗体cb、ci、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ci、およびceと競合するか、または抗体cb、ci、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、x抗体cb、ci、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ci、およびcfと競合するか、または抗体cb、ci、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、y抗体cb、cj、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、cj、およびcdと競合するか、または抗体cb、cj、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、z抗体cb、cj、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、cj、およびceと競合するか、または抗体cb、cj、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、aa抗体cb、cj、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、cj、およびcfと競合するか、または抗体cb、cj、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、bb抗体cb、ck、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ck、およびcdと競合するか、または抗体cb、ck、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、cc抗体cb、ck、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ck、およびceと競合するか、または抗体cb、ck、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、cc抗体cb、ck、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cb、ck、およびcfと競合するか、または抗体cb、ck、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、dd抗体cc、cg、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、cg、およびcdと競合するか、または抗体cc、cg、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、ee抗体cc、cg、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、cg、およびceと競合するか、または抗体cc、cg、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、ff抗体cc、cg、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、cg、およびcfと競合するか、または抗体cc、cg、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、gg抗体cc、ch、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ch、およびcdと競合するか、または抗体cc、ch、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、hh抗体cc、ch、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ch、およびceと競合するか、または抗体cc、ch、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、ii抗体cc、ch、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ch、およびcfと競合するか、または抗体cc、ch、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、jj抗体cc、ci、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ci、およびcdと競合するか、または抗体cc、ci、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、kk抗体cc、ci、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ci、およびceと競合するか、または抗体cc、ci、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、ll抗体cc、ci、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ci、およびcfと競合するか、または抗体cc、ci、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、mm抗体cc、cj、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、cj、およびcdと競合するか、または抗体cc、cj、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、nn抗体cc、cj、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、cj、およびceと競合するか、または抗体cc、cj、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、oo抗体cc、cj、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、cj、およびcfと競合するか、または抗体cc、cj、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群、pp抗体cc、ck、cd、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ck、およびcdと競合するか、または抗体cc、ck、およびcdと同じエピトープに結合する抗体からなる群、qq抗体cc、ck、ce、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ck、およびceと競合するか、または抗体cc、ck、およびceと同じエピトープに結合する抗体からなる群、ならびにrr抗体cc、ck、cf、ならびに、EGFRへの結合について抗体cc、ck、およびcfと競合するか、または抗体cc、ck、およびcfと同じエピトープに結合する抗体からなる群である、請求項19に記載の組成物。前記抗体が、a抗体va、vi、vd、または、EGFRへの結合について抗体va、vi、およびvdと競合するか、もしくは抗体va、vi、およびvdと同じエピトープに結合する抗体、b抗体va、vi、ve、または、EGFRへの結合について抗体va、vi、およびveと競合するか、もしくは抗体va、vi、およびveと同じエピトープに結合する抗体、c抗体va、vi、vf、または、EGFRへの結合について抗体va、vi、およびvfと競合するか、もしくは抗体va、vi、およびvfと同じエピトープに結合する抗体、d抗体va、vj、vg、または、EGFRへの結合について抗体va、vi、およびvgと競合するか、もしくは抗体va、vi、およびvgと同じエピトープに結合する抗体、e抗体va、vj、vh、または、EGFRへの結合について抗体va、vi、およびvhと競合するか、もしくは抗体va、vi、およびvhと同じエピトープに結合する抗体、f抗体va、vj、vd、または、EGFRへの結合について抗体va、vj、およびvdと競合するか、もしくは抗体va、vj、およびvdと同じエピトープに結合する抗体、g抗体va、vj、ve、または、EGFRへの結合について抗体va、vi、およびveと競合するか、もしくは抗体va、vi、およびveと同じエピトープに結合する抗体、h抗体va、vj、vf、または、EGFRへの結合について抗体va、vi、およびvfと競合するか、もしくは抗体va、vi、およびvfと同じエピトープに結合する抗体、i抗体va、vj、vg、または、EGFRへの結合について抗体va、vj、およびvgと競合するか、もしくは抗体va、vj、およびvgと同じエピトープに結合する抗体、j抗体va、vj、vh、または、EGFRへの結合について抗体va、vj、およびvhと競合するか、もしくは抗体va、vj、およびvhと同じエピトープに結合する抗体、k抗体vb、vi、vd、または、EGFRへの結合について抗体vb、vi、およびvdと競合するか、もしくは抗体vb、vi、およびvdと同じエピトープに結合する抗体、l抗体vb、vi、ve、または、EGFRへの結合について抗体vb、vi、およびveと競合するか、もしくは抗体vb、vi、およびveと同じエピトープに結合する抗体、m抗体vb、vi、vf、または、EGFRへの結合について抗体vb、vi、およびvfと競合するか、もしくは抗体vb、vi、およびvfと同じエピトープに結合する抗体、n抗体vb、vi、vg、または、EGFRへの結合について抗体vb、vi、およびvgと競合するか、もしくは抗体vb、vi、およびvgと同じエピトープに結合する抗体、o抗体vb、vi、vh、または、EGFRへの結合について抗体vb、vi、およびvhと競合するか、もしくは抗体vb、vi、およびvhと同じエピトープに結合する抗体、p抗体vb、vj、vd、または、EGFRへの結合について抗体vb、vj、およびvdと競合するか、もしくは抗体vb、vj、およびvdと同じエピトープに結合する抗体、q抗体vb、vj、ve、または、EGFRへの結合について抗体vb、vj、およびveと競合するか、もしくは抗体vb、vj、およびveと同じエピトープに結合する抗体、r抗体vb、vj、vf、または、EGFRへの結合について抗体vb、vj、およびvfと競合するか、もしくは抗体vb、vj、およびvfと同じエピトープに結合する抗体、s抗体vb、vj、vg、または、EGFRへの結合について抗体vb、vj、およびvgと競合するか、もしくは抗体vb、vj、およびvgと同じエピトープに結合する抗体、t抗体vb、vj、vh、または、EGFRへの結合について抗体vb、vj、およびvhと競合するか、もしくは抗体vb、vj、およびvhと同じエピトープに結合する抗体、u抗体vc、vi、vd、または、EGFRへの結合について抗体vc、vi、およびvdと競合するか、もしくは抗体vc、vi、およびvdと同じエピトープに結合する抗体、v抗体vc、vi、ve、または、EGFRへの結合について抗体vc、vi、およびveと競合するか、もしくは抗体vc、vi、およびveと同じエピトープに結合する抗体、w抗体vc、vi、vf、または、EGFRへの結合について抗体vc、vi、およびvfと競合するか、もしくは抗体vc、vi、およびvfと同じエピトープに結合する抗体、x抗体vc、vi、vg、または、EGFRへの結合について抗体vc、vi、およびvgと競合するか、もしくは抗体vc、vi、およびvgと同じエピトープに結合する抗体、y抗体vc、vi、vh、または、EGFRへの結合について抗体vc、vi、およびvhと競合するか、もしくは抗体vc、vi、およびvhと同じエピトープに結合する抗体、z抗体vc、vj、vd、または、EGFRへの結合について抗体vc、vj、およびvdと競合するか、もしくは抗体vc、vj、およびvdと同じエピトープに結合する抗体、aa抗体vc、vj、ve、または、EGFRへの結合について抗体vc、vj、およびveと競合するか、もしくは抗体vc、vj、およびveと同じエピトープに結合する抗体、bb抗体vc、vj、vf、または、EGFRへの結合について抗体vc、vj、およびvfと競合するか、もしくは抗体vc、vj、およびvfと同じエピトープに結合する抗体、cc抗体vc、vj、vg、または、EGFRへの結合について抗体vc、vj、およびvgと競合するか、もしくは抗体vc、vj、およびvgと同じエピトープに結合する抗体、あるいはdd抗体vc、vj、vh、または、EGFRへの結合について抗体vc、vj、およびvhと競合するか、もしくは抗体vc、vj、およびvhと同じエピトープに結合する抗体である、請求項15に記載の組成物。追加の抗癌剤との併用療法による癌の治療のための薬物の製造のための、請求項8~21のいずれか一項に記載の組成物の使用。前記追加の抗癌剤が、トポイソメラーゼ阻害剤を含む、請求項22の組成物。容器中に請求項8~23のいずれか一項に記載の組成物を含む、キット。前記容器が、単一バイアル中に前記組成物を収容している、請求項24に記載のキット。EGFR細胞外ドメインに各々結合するモノクローナル抗体の組み合わせを選択するための方法であって、EGFR媒介性シグナル伝達を阻害するために80nMよりも良好なIC90を各々有し、かつEGFR細胞外ドメインへの結合について互詳細な説明I.定義EGFR、ErbB1、およびEGF受容体という用語は、本明細書において交換可能に使用され、ヒトEGFRタンパク質UniProtKB/Swiss-ProtエントリーP00533SEQIDNO:58を参照を指す。本明細書で使用される阻害という用語は、活性の完全阻止を含む、生物学的活性のあらゆる統計的に有意な減少を指す。例えば、阻害は、生物学的活性の約10、20、30、40、50、60、70、80、90、または約100の統計的に有意な減少を指すことができる。リン酸化の阻害は、本明細書で使用される場合、抗体の非存在下対照でのシグナル伝達と比較して、抗体が基質タンパク質のリン酸化を統計的に有意に減少させる能力を指す。当該技術分野において知られているように、細胞内シグナル伝達経路は、例えば、ホスホイノシチド3′-キナーゼ/AktPI3K/Akt/PTENもしくはAKTおよび/またはマイトジェン活性化タンパク質キナーゼMAPK/ERKもしくはERK経路を含む。当該技術分野において知られているように、EGFR媒介性シグナル伝達は、基質のリン酸化のレベル例えば、AKTおよび/もしくはERKのリン酸化または非リン酸化をアッセイすることによって測定することができる。したがって、一実施形態において、抗EGFR抗体の組み合わせおよび組成物は、そのような抗体の非存在下対照におけるAKTおよび/またはERKのリン酸化レベルと比較して、少なくとも10、または少なくとも20、または少なくとも30、または少なくとも40、または少なくとも50、または少なくとも60、または少なくとも70、または少なくとも80、または少なくとも90、または約100のAKTおよびERKのいずれかまたは両方のリン酸化レベルの統計的に有意な阻害を提供する。そのようなEGFR媒介性シグナル伝達は、EGFRが関与する細胞カスケードのタンパク質を測定する当該技術分野で認識されている技術、例えば、ELISA、ウエスタンブロット、または多重法Luminex登録商標等を用いて測定することができる。EGFRを発現する細胞の増殖の阻害という句は、本明細書で使用される場合、インビボまたはインビトロのいずれかで、抗体の非存在下対照における細胞の増殖と比較して、抗体がEGFRを発現する細胞の増殖を統計的に有意に減少させる能力を指す。一実施形態において、細胞を本明細書に開示される組み合わせの抗体組成物に接触させると、EGFRを発現する細胞例えば、癌細胞の増殖は、組み合わせの抗体組成物の非存在下対照で測定される増殖と比較して、少なくとも10、または少なくとも20、または少なくとも30、または少なくとも40、または少なくとも50、または少なくとも60、または少なくとも70、または少なくとも80、または少なくとも90、または約100減少させることができる。細胞増殖は、細胞分化の速度、細胞分化中の細胞集団における細胞の割合、および/または最終分化もしくは細胞死に起因する細胞集団からの細胞消失の速度を測定する例えば、細胞力価増殖アッセイまたはチミジン取り込みを用いて当該技術分野で認識されている技術を用いてアッセイすることができる。EGFRへのEGFRリガンド結合の阻害という句は、本明細書で使用される場合、抗体の非存在下対照におけるEGFRリガンド結合と比較して、抗体が、EGFRリガンドのその受容体、EGFRへの結合を統計的に有意に減少させる能力を指す。このことは、抗体の存在下において、対照抗体を含まないと比較して、EGFRに結合するEGFRリガンドの量が統計的に有意に減少されることを意味する。EGFRに結合するEGFRリガンドの量は、本明細書に開示される抗体組成物または組み合わせの存在下において、抗体の非存在下対照における量と比較して、少なくとも10、または少なくとも20、または少なくとも30、または少なくとも40、または少なくとも50、または少なくとも60、または少なくとも70、または少なくとも80、または少なくとも90、または約100減少させることができる。EGFRリガンド結合の減少は、抗体の存在下または非存在下対照において、標識されたEGFRリガンド例えば、放射標識したEGFまたは放射標識したベータセルリンとEGFRを発現する細胞との結合レベルを測定する当該技術分野で認識されている技術を用いて測定することができる。EGFRの二量体化の阻害という句は、本明細書で使用される場合、抗体の非存在下対照におけるEGFRの二量体化と比較して、抗体がEGFRの二量体化ホモ二量体、例えばErbB1/ErbB1のペア、またはヘテロ二量体、例えばErbB1/ErbB3のペアを形成するための別のErbB受容体との対形成を統計的に有意に減少させる能力を指す。一実施形態において、EGFRを発現する細胞を本明細書に開示される抗体組成物または組み合わせに接触させると、EGFRの二量体化は、抗体の非存在下対照で測定されるEGFRの二量体化と比較して、少なくとも10、または少なくとも20、または少なくとも30、または少なくとも40、または少なくとも50、または少なくとも60、または少なくとも70、または少なくとも80、または少なくとも90、または約100減少させることができる。EGFRの二量体化の減少は、抗体の存在下または非存在下対照においてEGFRの二量体化のレベルを測定する当該技術分野で認識されている技術を用いて測定することができる。EGFR発現の下方制御という句は、本明細書で使用される場合、例えば、抗体の非存在下対照におけるEGFR発現と比較してEGFRの内部移行を増加させることによって、抗体が細胞表面におけるEGFRの発現を統計的に有意に減少させる能力を指す。一実施形態において、EGFRを発現する細胞を本明細書に開示される組み合わせの抗体組成物に接触させると、EGFRの発現は、抗体の非存在下対照で測定される細胞表面におけるEGFRの発現と比較して、少なくとも10、または少なくとも20、または少なくとも30、または少なくとも40、または少なくとも50、または少なくとも60、または少なくとも70、または少なくとも80、または少なくとも90、または約100減少させることができる。細胞表面におけるEGFRの発現の下方制御は、例えば、受容体の内部移行/再循環の増加、および/または受容体の内部移行/分解の増加を含む。EGFR内部移行の増加は、抗体の存在下または非存在下対照においてEGFR内部移行のレベルを測定する当該技術分野で認識されている技術を用いて測定することができる。EGFR抗体の組み合わせ本明細書に記載されるに関して、相加的または相加性という語は、本明細書で使用される場合、それらの合わせた活性特定の機能、例えば、細胞増殖の阻害に関するがそれらの個々の活性の和に等しい2つ以上の抗体の活性を指す。すなわち、本明細書に提供される2つ以上の抗体の活性EGFRを発現する細胞上で個別に作用する場合の和は、同じ細胞上で一緒に作用する同じ抗体の合わせた効果とほぼ等しいということである。一実施形態において、相加的効果は、上記特性のうちのいずれかに関して測定される例えば、AKTまたはERKのリン酸化の阻害、EGFRを発現する細胞の増殖の阻害等。相乗作用または相乗的という語は、本明細書で使用される場合、それらの合わせた活性特定の機能、例えば、細胞増殖の阻害に関するがそれらの個々の活性の予測される相加的効果よりも大きい2つ以上の抗体の活性を指す。例えば、予測される相加的効果は、Bliss非依存性基準Blissindependencecriteriaに従って定義することができる。Bliss基準によれば、2つ以上の薬剤例えば、抗体の効果は、個々の薬剤の効果の和から個々の薬剤の効果の積を差し引いたものに等しい。E12=E1E2-E1E2式中、E1は薬剤1による阻害率、E2は薬剤2による阻害率、E12は、この組み合わせによって予測される阻害率である。相乗効果は、本明細書で論じられる特性のうちのいずれにも適用することができる例えば、EGFR非依存性AKTまたはERKリン酸化の阻害、EGFRを発現する細胞の増殖の阻害等。特定の実施形態において、それらの個々の活性の相加的効果と比較して、合わせた抗体の活性における少なくとも10、または少なくとも20、または少なくとも30、または少なくとも40、または少なくとも50、または少なくとも60、または少なくとも70、または少なくとも80、または少なくとも90、またはそれより高い増加が達成される。本明細書において交換可能に使用される抗体または免疫グロブリンという用語は、全抗体およびその任意の抗原結合断片抗原結合部分または一本鎖の同族を含む。抗体は、少なくとも1つの重H鎖および1つの軽L鎖を含む。例えば、自然に生じるIgGにおいては、これらの重鎖および軽鎖は、ジスフィルド結合によって相互接続され、2対の重鎖および軽鎖が存在し、これら2つもジスフィルド結合によって相互接続される。各重鎖は、重鎖可変領域本明細書においてVHと略されるおよび重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、CH1、CH2、およびCH3の3つのドメインからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域本明細書においてVLと略されるおよび軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、CLという1つのドメインからなる。VHおよびVL領域は、フレームワーク領域FRまたは連結J領域それぞれ重鎖および軽鎖においてJHまたはJLと称される保存性のより高い領域とともに散在する、相補性決定領域CDRと称される超可変性領域にさらに細分化され得る。各VHおよびVLは、FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、Jの順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される3つのCDR、3つのFR、および1つのJドメインから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原に結合する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞例えば、エフェクター細胞または古典的補体系の第1の成分C1q等の体液性因子を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。したがって抗原例えば、EGFRに特異的に結合する能力を保持する抗体の1つ以上の断片が、本明細書に開示される組み合わせに用いられてもよい。完全長抗体の断片は、抗体の抗原結合機能を行うことができることが示されている。抗体の抗原結合部分または断片と表記される結合断片の例として、iVL、VH、CL、およびCH1ドメインを含む一価断片であるFab断片、iiヒンジ領域でジスフィルド架橋によって連結された2つのFab断片を含む二価断片であるFab2断片、iiiVHおよびCH1ドメインからなるFd断片、iv抗体の1つのアームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、vVHおよびVLドメインを含むdAb、viVHドメインからなるdAb断片Wardetal.1989Nature341,544-546、viiVHまたはVLドメインからなるdAb、ならびにviii単離された相補性決定領域CDR、またはix合成リンカーによって任意選択的に連結され得る2つ以上の単離されたCDRの組み合わせが挙げられる。さらに、Fv断片の2つのドメインであるVLおよびVHは、別々の遺伝子によってコードされるが、VLおよびVH領域が対を形成して一価分子を形成する単一タンパク質鎖一本鎖FvscFvとして知られる免疫グロブリン断片の一本鎖の同族等としてそれらを形成することができる合成リンカーを用いた組換え法によって、それらを連結させることができる。そのような一本鎖抗体も、抗体という用語に包含されることが意図される。抗体断片は、当業者に既知であるコンビナトリアル技術を用いて得られ、断片は、インタクト抗体と同じ一般様式において実用性についてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えDNA技術によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素切断もしくは化学切断によって生成することができる。本明細書で用いられるモノクローナル抗体という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体、すなわち、微量で存在し得る自然に生じる可能性がある変異を除いて、集団を構成する個々の抗体が同一である抗体を指す。そのような免疫グロブリンの抗原結合断片scFvを含むも、本明細書で用いられるモノクローナル抗体という用語に包含される。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一抗原部位に対するものである。さらに、典型的には、異なる決定基エピトープに対する異なる抗体を含む従来のポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に対するものである。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、トランスジェニック動物、組換えDNA法等の任意の当該技術分野で認識されている技術および本明細書に記載される技術を用いて例えば、米国特許第4,816,567号、または、例えば、米国特許第7,388,088号および米国特許出願第09/856,907号PCT国際公開公報第00/31246号に記載される技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーを使用して調製することができる。モノクローナル抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、およびヒト化抗体を含み、自然に生じ得るか、または組換えによって生成することができる。組換え抗体という用語は、a免疫グロブリン遺伝子例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックもしくはトランスクロモソーマルである動物例えば、マウス、またはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、b抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、cファージディスプレイを用いて組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー例えば、ヒト抗体配列を含むから単離された抗体、およびd他のDNA配列への免疫グロブリン遺伝子配列例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子のスプライシングを伴う任意の他の手段によって、調製、発現、作製、または単離された抗体等の、組換え手段によって調製、発現、作製、または単離された抗体を指す。そのような組換え抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有し得る。しかしながら、ある特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発に供され得、したがって、組換え抗体のVHおよびVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列VHおよびVL配列に由来しかつ関連があるが、インビボではヒト抗体生殖系列のレパートリー内に天然には存在しない場合がある配列である。キメラ免疫グロブリンまたはキメラ抗体という用語は、その可変領域が第1の種に由来し、その定常領域が第2の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、例えば遺伝子操作によって、異なる種に属する免疫グロブリンの遺伝子セグメントから構築することができる。ヒト抗体という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、Kabatらによって記載されるような、フレームワークおよびCDR領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する対応する可変領域を有する抗体を含むことが意図されるKabat,etal.1991SequencesofproteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242を参照。さらに、抗体が定常領域を含む場合、その定常領域もヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的な変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異を含んでもよい。しかしながら、ヒト抗体という用語は、本明細書で用いられる場合、マウス等の別の哺乳類種の生殖系列に由来するCDR配列がヒトのフレームワーク配列上にグラフトされている抗体を含むことは意図されない。ヒト抗体は、アミノ酸残基、例えば、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされない活性を増強させるアミノ酸残基で置換された少なくとも1つ以上のアミノ酸を有し得る。典型的には、ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の一部ではないアミノ酸残基で置換された20個までの位置を有することができる。特定の実施形態において、これらの置換は、以下に詳述するようにCDR領域内に存在する。ヒト化抗体という用語は、少なくとも1つのヒト化抗体鎖すなわち、少なくとも1つのヒト化軽鎖または重鎖を含む抗体を指す。ヒト化抗体鎖すなわち、ヒト化免疫グロブリン軽鎖という用語は、ヒト抗体に実質的に由来する可変フレームワーク領域と、非ヒト抗体に実質的に由来する相補性決定領域CDR例えば、少なくとも1つのCDR、2つのCDR、または3つのCDRとを含む可変領域を有し、かつ定常領域例えば、軽鎖の場合は1つの定常領域またはその一部、および重鎖の場合は好ましくは3つの定常領域をさらに含む抗体鎖すなわち、それぞれ軽鎖または重鎖を指す。単離されたとは、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない、抗体または2つ、3つ、もしくは4つの抗体の組み合わせを指すことが意図される例えば、各々がEGFRと特異的に結合する抗体ca、cf、およびchの単離された組成物は、他のEGFR以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない。さらに、単離された抗体は、典型的には他の細胞物質および/または化学物質を実質的に含まない。本発明の一実施形態において、異なるEGFR結合特異性を有する単離されたモノクローナル抗体の組み合わせが、明確に定義された組成物中に組み合わされる。本明細書で使用される場合、アイソタイプは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス例えば、IgMまたはIgG1を指す。いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるモノクローナル抗体組成物は、IgG1アイソタイプの抗体のみを含む。他の実施形態において、本明細書に提供されるモノクローナル抗体組成物は、IgG2アイソタイプの抗体のみを含む。他の実施形態において、本明細書に提供されるモノクローナル抗体組成物は、2つまたは3つの異なるアイソタイプの抗体を含む。抗原は、抗体が結合する実体例えば、タンパク質性実体またはペプチドである。本発明の種々の実施形態において、抗原は、EGFである。本発明に従う特定の実施形態において、抗原はヒトEGFRである。したがって、本明細書に記載される組み合わせの特定の抗体によって認識されるエピトープの全てまたは一部を含むEGFR上のエピトープに結合する抗体の組み合わせも、本発明の開示に包含される。別の実施形態において、EGFRへの結合について本明細書に記載される抗体と競合する抗体が提供される。競合する抗体および同じエピトープまたは重複するエピトープを認識する抗体は、例えば、標的抗原への別の抗体の結合を阻止する1つの抗体の能力を示すことによる免疫アッセイ、すなわち、競合結合アッセイ等の日常的技術を用いて同定することができる。競合結合は、下の実施例に記載されるアッセイを用いて測定することができる。特異的結合、特異的に結合する、選択的結合、および選択的に結合するという用語は、抗体が特定の抗原またはエピトープに対してはっきりと認識できる親和性を示し、一般に、他の抗原およびエピトープとは有意な交差反応を示さないことを意味する。はっきりと認識できるまたは好ましい結合は、106、107、108、109、もしくは1010M-1またはそれよりも良好なKDを有する結合を含む。抗体抗原の相互作用のKD親和性定数は、抗体および抗原分子の50がともに結合する抗体の濃度を意味する。したがって、好適な固定の抗原濃度では、より高いすなわち、より強い親和性の抗体の50は、より親和性の低い抗体と同じ割合の結合を達成するために必要とされる抗体濃度よりも低い抗体濃度で、抗原分子に結合する。したがって、より低いKD値は、より高いより強い親和性を意味する。本明細書で用いられる場合、より良好な親和性は、より強い親和性であり、それらの比較対象よりも数値が低く、KD107M-1は、KD106M-1より低い数値であり、したがってより良好な親和性を示す。107M-1よりも良好なすなわち、より低いKD値を有し、したがってより強い親和性、好ましくは108M-1よりも低い親和性が一般に好ましい。本明細書に記載される値の中間の値も企図され、好ましい結合親和性は親和性の範囲として示すことができ、例えば、本明細書に開示される抗EGFR抗体に対する好ましい結合親和性は、106~1012M-1、好ましくは107~1012M-1、より好ましくは108~1012M-1である。有意な交差反応を示さない抗体は、標的ではない抗原例えば、非EGFRタンパク質に対してはっきりと認識できるようには結合しない抗体である。例えば、一実施形態において、EGFRに特異的に結合する抗体は、ErbB1EGFR以外のErbB分子または非ErbBタンパク質またはペプチドに対してよりも、EGFRに対して、少なくとも2桁、好ましくは3桁または4桁以上より良好な結合すなわち、2桁、3桁、または4桁以上低いKD値を示す結合を示す。特異的または選択的結合は、そのような結合を測定するための任意の当該技術分野において認識されている手段に従って、例えば、スキャッチャード解析および/または本明細書に記載される競合competitive競合competition結合アッセイに従って、測定することができる。KDという用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体-抗原相互作用の解離平衡定数、または抗原に対する抗体の親和性を指すことが意図される。一実施形態において、本発明に従う抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ、細胞結合アッセイ、または平衡透析アッセイによって測定した場合、100nMまたはそれよりも良好なすなわち、低い親和性KD例えば、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、もしくは10nMまたはそれ未満で抗原例えば、EGFRに結合する。特定の実施形態において、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイまたは細胞結合アッセイにより測定した場合、8nMまたはそれよりも良好な例えば、7nM、6nM、5nM、4nM、2nM、1.5nM、1.4nM、1.3nM、1.2nM、1.1nM、1nMまたはそれよりも低い親和性解離定数KDによって表されるでEGFRに結合する。他の実施形態において、抗体は、分析物として組換えEGFR、リガンドとして抗体を使用したBIACORE3000機器における表面プラズモン共鳴SPR技術によって測定した場合、10-7M未満、例えば、およそ10-8M、10-9Mもしくは10-10M未満またはさらにそれよりも低い親和性KDで抗原例えば、EGFRに結合し、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原例えば、BSA、カゼインに対する結合の親和性よりも少なくとも2倍高い親和性で、所定の抗原に結合する。KDを測定するための他の方法は、フローサイトメトリーFACSによるかまたはKinExA登録商標技術を用いた溶液中での、EGFRを発現する生細胞への平衡結合を含む。Koffという用語は、本明細書で使用される場合、抗体/抗原複合体からの抗体の解離のオフ速度定数を指すことが意図される。IC50およびIC90という用語は、本明細書で使用される場合、生物学的または生化学的な機能例えば、EGFRの機能または活性をそれぞれ50および90阻害する際の化合物例えば、抗EGFR抗体の有効性の尺度を指す。例えば、IC50は、EGFRの活性例えば、EGFRを発現する細胞の増殖を半分に阻害するためにどれくらい多くの抗EGFR抗体が必要であるかを意味する。すなわち、これは、抗EGFR抗体の半数50阻害濃度IC50IC、またはIC50である。FDAによれば、IC50は、インビトロで50の阻害に必要な薬剤の濃度を表す。IC50およびIC90は、当該技術分野で既知の技術によって、例えば、用量反応曲線を構築し、異なる濃度のアンタゴニストすなわち、抗EGFR抗体がEGFR活性の逆転に与える影響を調べることによって、測定することができる。本明細書で使用される場合、グリコシル化パターンは、タンパク質、より具体的には免疫グロブリンタンパク質に共有結合される炭水化物単位のパターンとして定義される。核酸分子という用語は、本明細書で使用される場合、DNA分子およびRNA分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよいが、好ましくは二本鎖DNAである。単離された核酸分子という用語は、抗体または抗体断片例えば、VH、VL、CDR3をコードする核酸に関連して本明細書で使用される場合、ヌクレオチド配列が、他のゲノムヌクレオチド配列例えば、EGFR以外の抗原に結合する抗体をコードするもの。ここで、他の配列は、天然ではヒトゲノムDNAの該核酸に隣接していてもよいを本質的に含まない、核酸分子を指すことが意図される。改変することまたは改変という用語は、本明細書で使用される場合、抗体またはその抗原結合部分において1つ以上のアミノ酸を変化させることを指すことが意図される。変化は、1つ以上の位置でアミノ酸を付加、置換、または欠失させることによって生じさせることができる。変化は、PCR変異誘発等の既知の技術を用いて生じさせることができる。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の方法を用いて同定された抗体またはその抗原結合部分を改変することができ、それによって、EGFRに対する抗体またはその抗原結合部分の結合親和性を改変することができる。抗体の配列における保存的アミノ酸置換、すなわち、ヌクレオチド配列によってコードされるかまたはアミノ酸配列を含む抗体の、抗原すなわちEGFRへの結合を無効にしない、ヌクレオチドおよびアミノ酸配列の改変が提供される。保存的アミノ酸置換は、あるクラスのアミノ酸の、同じクラスのアミノ酸による置換を含み、クラスは、例えば、標準的なデイホフ頻度交換マトリクスまたはBLOSUMマトリクスによって測定した場合に自然に見出される、相同なタンパク質に共通の物理化学的なアミノ酸側鎖特性および高い置換頻度によって定義される。アミノ酸側鎖の6つの一般的なクラスが分類されており、それは、クラスICys、クラスIISer、Thr、Pro、Ala、Gly、クラスIIIAsn、Asp、Gln、Glu、クラスIVHis、Arg、Lys、クラスVIle、Leu、Val、Met、およびクラスVIPhe、Tyr、Trpを含む。例えば、AspからAsn、Gln、またはGlu等のクラスIIIの別の残基への置換は、保存的置換である。よって、抗EGFR抗体において予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じクラスの別のアミノ酸残基で置換される。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当該技術分野において周知である。非保存的アミノ酸置換という用語は、あるクラスのアミノ酸の、別のクラスのアミノ酸による置換を指し、例えば、クラスII残基Alaの、Asp、Asn、Glu、またはGln等のクラスIII残基による置換が挙げられる。代替として、別の実施形態において、変異保存的または非保存的は、飽和変異誘発によって等、抗EGFR抗体をコードする配列の全部または一部に沿って無作為に導入することができ、結果として生じる改変された抗EGFR抗体は、結合活性についてスクリーニングすることができる。コンセンサス配列は、関連する配列のファミリーにおいて最も頻繁に発生するアミノ酸またはヌクレオチドから形成される配列である。タンパク質のファミリーにおいて、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリーの中で最も頻繁にその位置で発生するアミノ酸によって占有される。2つのアミノ酸が等しい頻度で発生する場合、いずれかをコンセンサス配列に含むことができる。免疫グロブリンのコンセンサスフレームワークとは、コンセンサス免疫グロブリン配列のフレームワーク領域を指す。同様に、CDRに対するコンセンサス配列は、本発明のEGFR抗体のCDRアミノ酸配列の最適なアライメントによって誘導することができる。核酸に関して、実質的な相同性という用語は、2つの核酸、またはその指定された配列が、最適に整列させて比較したときに、適切なヌクレオチドの挿入または欠失を有し、ヌクレオチドの少なくとも約80、通常、ヌクレオチドの少なくとも約90~95、より好ましくは少なくとも約98~99.5が同一であることを意味する。代替として、実質的な相同性は、セグメントが、鎖の相補体に対して選択的なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする場合に存在する。核酸は、全細胞、細胞溶解物、または部分的に精製されたもしくは実質的に純粋な形態で存在してもよい。核酸は、アルカリ/SDS処理、CsClバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当該技術分野において周知である他の技術を含む標準的な技術によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば他の細胞の核酸またはタンパク質から切り離して精製された場合に、単離されているかまたは実質的に純粋である。核酸組成物は、cDNA、ゲノム、またはそれらの混合物のいずれかに由来する天然の配列改変された制限部位等を除くを含んでいることが多いが、あるいは、変更された遺伝子配列を提供するための標準的な技術に従って変異させることができる。コード配列については、これらの変異は、コードされたアミノ酸配列を所望の通りに改変することができる。具体的には、天然のV、D、J、定常、スイッチ、および本明細書に記載される他のそのような配列と実質的に相同であるDNA配列が企図される。機能的に連結されたという用語は、別の核酸配列と機能的な関係で配置された核酸配列を指す。例えば、プレ配列または分泌リーダーのDNAが、ポリペプチドの分泌に関与するタンパク質前駆体として発現される場合、それはポリペプチドのDNAと機能的に連結されており、プロモーターまたはエンハンサーが配列の転写に影響を与える場合、それはコード配列と機能的に連結されており、またはリボソーム結合部位が翻訳を促進するように配置される場合、それはコード配列と機能的に連結されている。一般的に、機能的に連結されたとは、連結されているDNA配列が隣接していること、分泌リーダーの場合は、隣接し、かつリーディング相にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接していなくてもよい。連結は、都合のよい制限部位におけるライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合は、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の実践法に従って用いられる。核酸は、別の核酸配列と機能的な関係で配置されたときに機能的に連結されている。例えば、プロモーターまたはエンハンサーが配列の転写に影響を与える場合、それはコード配列と機能的に連結されている。転写制御配列に関して、機能的に連結されているとは、連結されているDNA配列が隣接しており、2つのタンパク質のコード領域を結合させることが必要な場合は、隣接しかつリーディングフレームにあることを意味する。スイッチ配列の場合、機能的に連結しているとは、配列がスイッチ組換えをもたらすことができることを意味する。ベクターという用語は、本明細書で使用される場合、そこに連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの一種はプラスミドであり、追加のDNAセグメントが連結され得る環状二本鎖DNAループを指す。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、追加のDNAセグメントがウイルスゲノムに連結され得る。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律複製が可能である例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター。他のベクター例えば、非エピソーム哺乳動物ベクターは、宿主細胞に導入される際に宿主細胞のゲノムに組み込まれてもよく、それによって宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある特定のベクターは、そこに機能的に連結されている遺伝子の発現を誘導することができる。そのようなベクターは、本明細書において、組換え発現ベクターまたは単に発現ベクターと称される。一般に、組換えDNA技術において有用性のある発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドおよびベクターという用語は、互換可能に用いられ得る。しかしながら、同等の機能を供給するウイルスベクター例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス等の、他の形態の発現ベクターも企図される。組換え宿主細胞または、単に宿主細胞という用語は、本明細書で使用される場合、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことが意図される。そのような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことを理解されたい。特定の改変は、変異または環境的影響のいずれかに起因して後続世代において発生する場合があるため、このような子孫は、実際には親細胞と同一でなくてもよいが、それでもなお、本明細書で使用される宿主細胞という用語の範囲内に含まれる。治療する、治療すること、および治療という用語は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される治療的または予防的な手段を指す。治療の方法は、例えば、疾患もしくは障害または再発性の疾患もしくは障害の1つ以上の症状を予防、治癒、遅延、重症度の軽減、または改善するために、あるいは、そのような治療の非存在下で予想される以上に対象の生存を延長するために、例えば、EGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患もしくは障害を患っているか、またはそのような疾患もしくは障害に罹患し易い対象等の対象への、本明細書に開示される抗体または抗体のペアもしくはトリオの投与を用いる。EGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患またはEGFR依存性シグナル伝達と関連する障害という用語は、本明細書で使用される場合、EGFRレベルの上昇および/もしくはEGFRが関与する細胞カスケードの活性化が見られる病態および/または病態と関連する症状を含む。EGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患という用語は、代替のEGFRシグナル経路の活性化と関連する病態および/または症状も含む。一般に、EGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患という用語は、EGFRの関与を必要とする任意の障害、発症、進行、または症状の持続を指す。例示的なEGFR媒介性障害は、例えば、癌を含むが、これに限定されない。癌および癌性という用語は、典型的には制御されない細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を指すかまたは説明する。癌の例として、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられる。そのような癌のより具体的な例として、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫および神経線維腫症等のグリア細胞腫瘍、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、メラノーマ、結腸直腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎臓癌kidneycancer、腎臓癌renalcancer、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、および種々の種類の頭頸部癌が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本明細書に開示される方法を用いて治療または診断される癌は、メラノーマ、乳癌、卵巣癌、腎癌、消化管癌/結腸癌、肺癌、および前立腺癌から選択される。有効量という用語は、本明細書で使用される場合、対象に投与されたときに、本明細書に記載されるようにEGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患の治療、予後予測、または診断を達成させるのに十分な、EGFRに結合する抗体またはその抗原結合部分の量を指す。本明細書に提供される抗体の治療的に有効な量は、単独でまたは組み合わせて使用される場合、抗体および組み合わせの相対的な活性例えば、細胞増殖の阻害における、ならびに、治療を受ける対象および病態、対象の体重および年齢、病態の重症度、投与様式等に応じて変化し、それらは当業者によって容易に判定され得る。投与のための投与量は、例えば、約1ng~約10,000mg、約5ng~約9,500mg、約10ng~約9,000mg、約20ng~約8,500mg、約30ng~約7,500mg、約40ng~約7,000mg、約50ng~約6,500mg、約100ng~約6,000mg、約200ng~約5,500mg、約300ng~約5,000mg、約400ng~約4,500mg、約500ng~約4,000mg、約1μg~約3,500mg、約5μg~約3,000mg、約10μg~約2,600mg、約20μg~約2,575mg、約30μg~約2,550mg、約40μg~約2,500mg、約50μg~約2,475mg、約100μg~約2,450mg、約200μg~約2,425mg、約300μg~約2,000、約400μg~約1,175mg、約500μg~約1,150mg、約0.5mg~約1,125mg、約1mg~約1,100mg、約1.25mg~約1,075mg、約1.5mg~約1,050mg、約2.0mg~約1,025mg、約2.5mg~約1,000mg、約3.0mg~約975mg、約3.5mg~約950mg、約4.0mg~約925mg、約4.5mg~約900mg、約5mg~約875mg、約10mg~約850mg、約20mg~約825mg、約30mg~約800mg、約40mg~約775mg、約50mg~約750mg、約100mg~約725mg、約200mg~約700mg、約300mg~約675mg、約400mg~約650mg、約500mg、または約525mg~約625mgの抗体の範囲であり得る。投与計画は、最適な治療反応を提供するように調節されてもよい。また、有効量は、抗体の任意の毒性または有害な作用すなわち、副作用が最小限に抑えられ、かつ/または有益な効果が上回る量である。治療薬という用語は、疾患もしくは障害の症状の重症度を減少させるかまたは阻害するか、あるいは疾患もしくは障害の無症状期間または症状軽減期間の頻度および/または長さを増加させるか、あるいは疾患もしくは障害の苦痛による機能障害または身体障害を阻害または予防するか、あるいは疾患もしくは障害の進行を阻害するかまたは遅延させるか、あるいは疾患もしくは障害の発症を阻害するかまたは遅延させるか、あるいは感染性の疾患もしくは障害の感染を阻害または予防する能力を有する、ありとあらゆる化合物を包含することが意図される。治療薬の非限定的な例として、有機低分子、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、組換え技術によって作られた生物製剤、RNAi化合物、チロシンキナーゼ阻害剤、および市販の抗体が挙げられる。特定の実施形態において、チロシンキナーゼ阻害剤は、例えば、現在市販されている医薬品であるエルロチニブ、ゲフィチニブ、およびラパチニブのうちの1つ以上を含む。市販の薬学的な抗EGFR抗体は、セツキシマブおよびパニツムマブを含む。他の薬学的な抗EGFR抗体は、現在開発中であるザルツムマブ、ニモツズマブ、およびマツズマブを含む。患者という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物の対象を含む。対象という用語は、任意の哺乳動物、例えば霊長類を含む。例えば、本明細書に開示される方法および組成物は、癌を有する対象を治療するために用いることができる。特定の実施形態において、対象はヒトである。試料という用語は、患者または対象から採取した組織、体液、もしくは細胞または上記のうちのいずれかの画分を指す。通常、組織または細胞が患者から取り出されるが、インビボでの診断も企図される。固形腫瘍の場合、組織試料は、外科的に除去された腫瘍から採取することができ、従来技術によって検査のために調製することができる。リンパ腫および白血病の場合、リンパ球、白血病細胞、またはリンパ組織を得ることができ例えば、血液から白血病細胞、適切に調製することができる。尿、涙、血清、血漿、脳脊髄液、糞便、痰、細胞抽出物等を含む他の試料も、特定の腫瘍の場合には有用であり得る。本開示の種々の態様を、以下の小節に詳述する。II.抗体を生成するための方法iモノクローナル抗体モノクローナル抗体は、標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術、Bリンパ球のウイルス性もしくは発癌性の形質転換、またはヒト抗体遺伝子のライブラリーを用いたファージディスプレイ技術等の様々な既知の技術を用いて生成することができる。特定の実施形態において、抗体は、完全なヒトモノクローナル抗体である。したがって、一実施形態において、EGFRに結合する抗体を生成するためにハイブリドーマ法が用いられる。この方法では、免疫化のために用いられる抗原に特異的に結合する抗体を生成するかまたは生成することができるリンパ球を誘発するために、マウスまたは他の適切な宿主動物を好適な抗原で免疫することができる。代替として、リンパ球は、インビトロで免疫されてもよい。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコール等の好適な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合させることができる。ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の生成についてアッセイする。所望の特異性、親和性、および/または活性の抗体を生成するハイブリドーマ細胞が同定された後、限界希釈法によってクローンをサブクローニングし、標準的な方法によって増殖させることができる。この目的に好適である培地として、例えば、D-MEMまたはRPMI-1640培地が挙げられる。また、ハイブリドーマ細胞は、動物の腹水腫瘍としてインビボで増殖させてもよい。サブクローンから分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインA-セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって、培地、腹水、または血清から分離することができる。別の実施形態において、EGFRに結合する抗体は、例えば、Ladnerらに対する米国特許第5,223,409号、5,403,484号、および5,571,698号、Dowerらに対する米国特許第5,427,908号および5,580,717号、McCaffertyらに対する米国特許第5,969,108号および6,172,197号、ならびにGriffithsらに対する米国特許第5,885,793号、6,521,404号、6,544,731号、6,555,313号、6,582,915号、および6,593,081号に記載されるような周知の技術を用いて産生させた抗体ファージライブラリーから単離することができる。また、チェインシャッフリングによる高親和性nM範囲ヒト抗体の生成、ならびに非常に巨大なファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしてのコンビナトリアルインフェクションおよびインビボでの組換えも用いることができる。例えば、米国特許出願第09/856,907号PCT国際公開公報第00/31246号を参照。特定の実施形態において、EGFRに結合するモノクローナル抗体は、ファージディスプレイを用いて生成される。この技術は、ヒトドナーから単離された免疫グロブリン配列の特有の組み合わせを有し、かつ重鎖CDRにおける合成多様性を有するヒトFabライブラリーの産生を伴う。次いで、ライブラリーは、EGFRに結合するFabについてスクリーニングされる。さらに別の実施形態において、EGFRに対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を担持するトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソミックマウスを用いて産生することができる例えば、米国特許第5,545,806号、5,569,825号、5,625,126号、5,633,425号、5,789,650号、5,877,397号、5,661,016号、5,814,318号、5,874,299号、および5,770,429号全てLonbergandKayに対するもの、Suraniらに対する米国特許第5,545,807号、PCT国際公開公報第92/03918号、第93/12227号、第94/25585号、第97/13852号、第98/24884号、および第99/45962号全てLonbergandKayに対するもの、ならびにKormanらに対するPCT国際公開公報第01/14424号を参照。別の実施形態において、ヒト抗体は、ヒト重鎖トランスジーンおよびヒト軽鎖トランスクロモソームを担持するマウス等の、トランスジーンおよびトランスクロモソームにヒト免疫グロブリン配列を担持するマウスを用いて産生させることができる例えば、Ishidaらに対するPCT国際公開公報第02/43478号を参照。さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスジェニック動物系が当該技術分野において利用可能であり、抗EGFR抗体を産生させるために用いることができる。例えば、XenomouseAbgenix,Inc.と称される代替のトランスジェニック系を用いることができる:そのようなマウスは、例えば、Kucherlapatiらに対する米国特許第5,939,598号、6,075,181号6,114,598号、6,150,584号、および6,162,963号に記載される。また、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスクロモソミック動物系が当該技術分野において利用可能であり、抗EGFR抗体を産生させるために用いることができる。例えば、ヒト重鎖トランスクロモソームおよびヒト軽鎖トランスクロモソームの両方を担持するマウスを用いることができる。さらに、ヒト重鎖および軽鎖トランスクロモソームを担持するウシが、当該技術分野において記載されており、抗EGFR抗体を産生させるために用いることができる。さらに別の実施形態において、抗体は、そのような抗体を生成するトランスジェニック植物および/または培養植物の細胞例えば、タバコ、トウモロコシ、およびアオウキクサを用いて調製することができる。例えば、抗体を発現するトランスジェニックタバコの葉は、例えば、誘導プロモーターを用いることによって、そのような抗体を生成するために用いることができる。また、そのような抗体およびその抗原結合部分を発現させるために、トランスジェニックトウモロコシを用いることができる。また抗体は、例えば、タバコ種子およびジャガイモ塊茎を用いて、一本鎖抗体scFv等の抗体部分を含むトランスジェニック植物の種子から大量に生成することができる。本明細書に開示される技術を含む任意の技術を用いて調製されたEGFRに結合するモノクローナル抗体またはその一部の結合特異性は、免疫沈降によって、または放射免疫アッセイRIAもしくは酵素結合免疫吸着アッセイELISA等のインビトロでの結合アッセイによって、測定することができる。モノクローナル抗体またはその一部の結合親和性は、スキャッチャード解析によって測定することができる。特定の実施形態において、上で論じた方法のうちのいずれかを用いて生成されたEGFR抗体は、本明細書に記載される技術等の当該技術分野で認識されている技術を用いて、所望の結合特異性および/または親和性を達成するためにさらに変更または最適化されてもよい。一実施形態において、EGFR抗体に由来する部分的な抗体配列が、構造的および機能的に関連する抗体を生成するために用いられてもよい。例えば、抗体は、主として6つの重鎖および軽鎖の相補性決定領域CDRに位置するアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。このため、CDR内のアミノ酸配列は、CDR外の配列よりも個々の抗体間においてより多様である。CDR配列は、大部分の抗体-抗原相互作用に寄与するため、異なる特性を有する異なる抗体からフレームワーク配列上にグラフトされた特定の自然に生じる抗体由来のCDR配列を含む発現ベクターを構築することによって、特定の自然に生じる抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である。そのようなフレームワーク配列は、生殖系列の抗体遺伝子配列を含む公的なDNAデータベースから得ることができる。したがって、CDR等の抗EGFR抗体の1つ以上の構造的特徴は、少なくとも1つの所望の機能特性、例えば、EGFRを発現する細胞の増殖の阻害を保持する、構造的に関連する抗EGFR抗体を作製するために用いることができる。特定の実施形態において、さらなる組換え操作された抗EGFR抗体を作製するために、SEQIDNO:23~56から選択される1つ以上のCDR領域が、既知のヒトフレームワーク領域およびCDRと組換えによって組み合わされる。重鎖および軽鎖可変フレームワーク領域は、同じかまたは異なる抗体配列に由来し得る。抗体の重鎖および軽鎖CDR3ドメインが抗原に対する抗体の結合特異性/親和性において特に重要な役割を果たすことは、当該技術分野において周知である。したがって、特定の実施形態において、本明細書に記載される特定の抗体の重鎖および/または軽鎖CDR3を含む抗体が産生される。抗体は、本明細書に記載される抗体の重鎖ならびに/または軽鎖のCDR1および/もしくはCDR2をさらに含むことができる。上述の操作された抗体のCDR1、2、および/または3領域は、本明細書に開示されるものと全く同じアミノ酸配列を含むことができる。しかしながら、当業者は、特に、エピトープ特異性を変更することなく、CDR3配列よりも多くの変動に耐えることができるCDR1およびCDR2配列の場合、全く同じCDR配列からのいくらかのずれがあり得ることを理解するであろうそのようなずれは、例えば、保存的アミノ酸置換である。したがって、別の実施形態において、操作された抗体は、例えば、本明細書において指定される抗体の対応するCDRに90、95、98、99、または99.5同一な1つ以上のCDR1およびCDR2から構成されてもよい。別の実施形態において、より有利な結合のオン速度を達成するために、CDRの1つ以上の残基が、結合を改変するように変更されてもよい。このストラテジーを用いて、例えば1010M-1以上の極めて高い結合親和性を有する抗体を得ることができる。当該技術分野において周知であり、本明細書に記載される親和性成熟技術は、CDR領域を変更し、その後、結果として得られた結合分子を結合における所望の変化についてスクリーニングするために用いることができる。このように、CDRが変更されると、最良の組み合わせの結合および低い免疫原性のために最適化された抗体が得られるように、結合親和性および免疫原性の変化をモニタリングしてスコア化することができる。また、これらの改変後の抗原結合親和性が106M-1よりも良好である限り、抗体の重鎖および/または軽鎖可変領域のフレームワークまたは結合領域のうちの1つ以上において改変を行うこともできる。別の実施形態において、例えば、癌の治療における抗体の有効性を増強するために、抗体は、エフェクター機能に関してさらに改変される。例えば、システイン残基がFc領域に導入されてもよく、それによって、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成が可能になる。このように産生されたホモ二量体抗体は、改善された内部移行能力ならびに/または増加された補体媒介性細胞死および抗体依存性細胞傷害ADCCを有し得る。抗腫瘍活性が増強されたホモ二量体抗体は、ヘテロ二官能性架橋剤を用いて調製されてもよい。代替として、二重のFc領域を有し、それによって増強された補体溶解およびADCC能を有し得る抗体を操作することができる。また、以下に論じるように、二重特異性抗体およびイムノコンジュゲートも提供する。ii二重特異性抗体本明細書において二重特異性抗体は、好ましくは非重複または非競合エピトープに結合する、EGFRに対する少なくとも2つの結合特異性部を含む。そのような二重特異性抗体は、さらなる結合特異性部、例えば、第3のEGFR結合特異性部および/または別のErbB受容体例えば、ErbB3もしくは癌遺伝子の生成物等の別の抗原に対する結合特異性部を含むことができる。二重特異性抗体は、完全長の抗体または抗体断片例えば、Fab2二重特異性抗体として調製することができる。二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野において周知である例えば、国際公開公報第05117973号および国際公開公報第06091209号を参照。例えば、完全長の二重特異性抗体の生成は、2つの対になった免疫グロブリン重鎖-軽鎖の同時発現に基づいてもよく、その場合、2つの鎖は異なる特異性を有する。組換え細胞培養物から直接、二重特異性抗体断片を作製および単離するための種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体が、ロイシンジッパーを用いて生成されている。一本鎖FvsFv二量体の使用によって二重特異性抗体断片を作製するための別のストラテジーも報告されている。特定の実施形態において、二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を産生するように、別の機能性分子、例えば、別のペプチドもしくはタンパク質例えば、別の抗体もしくは受容体のリガンドと誘導体化または連結されたEGFRに結合する第1の抗体またはその結合部分を含む。抗体は、2つより多くの異なる結合部位および/または標的分子に結合する多重特異性分子を産生するように、1つより多くの他の機能性分子と誘導体化または連結させてもよく、そのような多重特異性分子も、本明細書で使用される二重特異性分子という用語に包含されることが意図される。二重特異性分子を作製するために、本明細書に開示される抗体を、結果として二重特異性分子が得られるように、1つ以上の他の結合分子、例えば別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合性模倣物等と例えば、化学的結合、遺伝子融合、非共有結合性会合、または他の方法によって機能的に連結させることができる。したがって、EGFRに対する少なくとも1つの第1の結合特異性部および第2の標的エピトープに対する第2の結合特異性部を含む二重特異性分子が企図される。特定の実施形態において、第2の標的エピトープは、Fc受容体、例えば、ヒトFcγRICD64またはヒトFcα受容体CD89である。したがって、FcγR、FcαR、またはFcεRを発現するエフェクター細胞例えば、単球、マクロファージ、もしくは多形核球細胞PMNおよびEGFRを発現する標的細胞の両方と結合することができる二重特異性分子も提供される。これらの二重特異性分子は、EGFRを発現する細胞をエフェクター細胞に標的化し、EGFRを発現する細胞の食作用、抗体依存性細胞媒介性の細胞傷害作用ADCC、サイトカイン放出、またはスーパーオキシド陰イオンの産生等のFc受容体媒介性のエフェクター細胞活性を誘発する。一実施形態において、二重特異性分子は、結合特異性部として、少なくとも1つの抗体またはその抗体断片、例えば、Fab、Fab、Fab2、Fv、または一本鎖Fv等を含む。また、抗体は、軽鎖もしくは重鎖の二量体、またはその任意の最小断片、例えば、FvまたはLadnerらの米国特許第4,946,778号に記載されるような一本鎖構築物であってもよい。二重特異性分子は、当該技術分野において既知の方法を用いて、成分の結合特異性部、例えば、抗FcR結合特異性部と抗EGFR結合特異性部をコンジュゲートすることによって調製することができる。例えば、二重特異性分子の各結合特異性部を別々に生じさせ、次いで互いにコンジュゲートさせることができる。結合特異性部がタンパク質またはペプチドである場合、共有結合性のコンジュゲーションのために様々なカップリング剤または架橋剤を用いることができる。架橋剤の例として、プロテインA、カルボジイミド、N-スクシンイミジル-S-アセチル-チオアセテートSATA、5,5-ジチオビス2-ニトロ安息香酸DTNB、o-フェニレンジマレイミドoPDM、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオプロピオネートSPDP、およびスルホスクシンイミジル4-N-マレイミドメチルシクロヘキサン-1-カルボキシレートスルホ-SMCCが挙げられる。好ましいコンジュゲート剤は、SATAおよびスルホ-SMCCであり、どちらもPierceChemicalCo.Rockford,ILから入手可能である。結合特異性部が抗体である場合、2つの重鎖のC末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合形成を介してそれらをコンジュゲートすることができる。特に好ましい実施形態において、ヒンジ領域は、コンジュゲーションの前に、奇数の、好ましくは1つのスルフヒドリル残基を含むように改変される。代替として、両方の結合特異性部を同じベクター中でコードし、同じ宿主細胞中で発現および集合させることができる。この方法は、二重特異性分子がmAbxmAb、mAbxFab、FabxFab2、またはリガンドxFab融合タンパク質である場合に特に有用である。二重特異性分子は、1つの一本鎖抗体および1つの結合決定基を含む一本鎖分子であるか、または2つの結合決定基を含む一本鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は、少なくとも2つの一本鎖分子を含むことができる。二重特異性分子を調製するための方法は、例えば、米国特許第5,260,203号、米国特許第5,455,030号、米国特許第4,881,175号、米国特許第5,132,405号、米国特許第5,091,513号、米国特許第5,476,786号、米国特許第5,013,653号、米国特許第5,258,498号、および米国特許第5,482,858号に記載される。二重特異性分子のそれらの特異的標的への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイELISA、放射免疫アッセイRIA、FACS分析、バイオアッセイ例えば、増殖阻害、またはウエスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらのアッセイの各々は、一般に、対象となる複合体に特異的な標識された試薬例えば、抗体を用いることによって、特定の対象となるタンパク質-抗体複合体の存在を検出する。例えば、FcR-抗体複合体は、例えば、抗体-FcR複合体を認識して特異的に結合する酵素と連結した抗体または抗体断片を用いて検出することができる。代替として、様々な他の免疫アッセイのうちのいずれかを用いて複合体を検出することができる。例えば、抗体を放射標識して、放射免疫アッセイRIAに用いることができる。放射性同位体は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用等の手段によって、またはオートラジオグラフィーによって検出することができる。iiiイムノコンジュゲート本明細書に提供されるイムノコンジュゲートは、本明細書に記載される抗体を別の治療薬とコンジュゲートすることによって形成することができる。好適な薬剤として、例えば、細胞傷害性剤例えば、化学療法剤、毒素例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそれらの断片、および/あるいは放射性同位体すなわち、放射性コンジュゲートが挙げられる。そのようなイムノコンジュゲートの生成において有用な化学療法剤を上述した。用いることができる酵素的に活性な毒素およびその断片は、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合性の活性断片、外毒素A鎖緑濃菌から、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデクシンA鎖、αサルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシンタンパク質、ヨシュヤマゴボウタンパク質PAPI、PAPII、およびPAP-S、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンを含む。様々な放射性核種が、放射性コンジュゲート抗EGFR抗体の生成のために利用可能である。その例として、212Bi、131I、131In、90Y、および186Reが挙げられる。イムノコンジュゲートは、N-スクシンイミジル-3-2-ピリジルジチオールプロピオネートSPDP、イミノチオレンIT、イミドエステルの二官能性誘導体アジプイミド酸ジメチルHCL等、活性エステルスベリン酸ジスクシンイミジル等、アルデヒドグルタルアルデヒド等、ビス-アジド化合物ビスp-アジドベンゾイルヘキサンジアミン等、ビス-ジアゾニウム誘導体ビス-p-ジアゾニウムベンゾイル-エチレンジアミン等、ジイソシアネートトルエン2,6-ジイソシアネート等、およびビス-活性フッ素化合物1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼン等等の様々な二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製することができる。炭素14で標識された1-イソチオシアナトベンジル-3-メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸MX-DTPAは、放射性ヌクレオチドと抗体とのコンジュゲーションのための典型的なキレート剤である例えば、国際公開公報第94/11026号を参照。III.抗体をスクリーニングするための方法抗体を生成した後、それらは、当該技術分野において周知である様々なアッセイを用いて、本明細書に記載される種々の特性についてスクリーニングすることができる。一実施形態において、抗体は、例えば、精製したEGFRおよび/またはEGFR発現細胞A431細胞等を用いて、例えば、フローサイトメトリーまたはELISAによってEGFRとの結合についてスクリーニングされる。抗EGFR抗体によって結合されるエピトープは、例えば、非競合抗体例えば、異なるエピトープに結合する抗体、ならびに結合について競合するおよび/または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体を同定するために、さらに同定および比較することができる。競合抗体上の表1および表2中に特定される抗体のうちのいずれかと、EGFRとの競合について競合する抗体等および非競合抗体は、日常的技術を用いて同定することができる。そのような技術は、例えば、別の抗体の標的抗原への結合を阻止するまたは阻止しない1つの抗体の能力を示す免疫アッセイ、すなわち、競合結合アッセイを含む。競合結合は、検査される免疫グロブリンが、EGFR等の共通の抗原への基準抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて測定される。多くの種類の競合結合アッセイが知られており、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイRIA、固相直接または間接酵素免疫アッセイEIA、サンドイッチ競合アッセイ、固相直接ビオチン-アビジンEIA、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ、固相直接125I標識RIA、固相直接ビオチン-アビジンEIA、および直接標識RIAが挙げられる。実施例の材料および方法ならびに下の実施例2に記載される表面プラズモン共鳴技術も、この目的のために有利に用いることができる。典型的には、そのようなアッセイは、非標識試験免疫グロブリンおよび標識基準免疫グロブリンのいずれかを担持する固体表面および細胞に結合する精製抗原の使用を伴う。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を判定することによって測定される。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、該抗体は、基準抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも50~55、55~60、60~65、65~70、70~75またはそれ以上阻害する。本明細書に開示される抗体によって結合されるエピトープを決定するための他のスクリーニング技術として、例えば、エピトープの原子分解を提供する抗原:抗体複合体の結晶のX線分析が挙げられる。他の方法は、抗体と抗原断片または抗原変異体との結合をモニタリングし、その場合、抗原配列内のアミノ酸残基の改変に起因する結合の消失は、エピトープ成分を示唆すると見なされることが多い。また、エピトープマッピングのための計算によるコンビナトリアル法も用いることができる。これらの方法は、抗体がコンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから特異的な短いペプチドを親和性単離する能力に依存する。次いで、ペプチドは、ペプチドライブラリーをスクリーニングするために用いられる抗体に対応するエピトープの決定のための手掛かりと見なされる。エピトープマッピングのために、立体構造的に不連続なエピトープをマッピングすることが示されている計算アルゴリズムも開発されている。別の実施形態において、抗体例えば、非競合抗体、抗EGFR抗体は、リガンド、例えばEGFに結合する際に曝露されるエピトープに結合するすなわち、EGFR結合リガンドのEGFRへの結合を阻害しない能力についてスクリーニングされる。そのような抗体は、例えば、抗EGFR抗体の非存在下対照または存在下で、EGFRを発現する細胞例えば、A431細胞を標識されたEGFRリガンド例えば、放射標識されたかまたはビオチン化されたEGFと接触させることによって同定することができる。抗体が、EGFのEGFRへの結合を阻害しない場合、抗体の不在下における量と比較して、回収された標識の量に統計的に有意な減少は観察されない。一方で、抗体が、EGFのEGFRへの結合を阻害した場合、抗体の不在下における量と比較して、回収された標識の量に統計的に有意な減少が観察される。また、抗体は、それらの結合親和性についてもスクリーニング試験することができる。これは、例えば、プラズモン共鳴アッセイ例えば、後に記載するようなを用いて行うことができる。また、抗体は、本明細書に記載されるシグナル伝達アッセイを用いて、抗体がEGFRを介したシグナル伝達を阻害する能力についてもスクリーニングすることができる。例えば、抗体がEGFRリガンド媒介性のEGFRのリン酸化を阻害する能力は、抗体の非存在下または存在下で、EGFRを発現する細胞をEGFRリガンド例えばEGFで処理することによってアッセイすることができる。次いで、細胞を溶解させ、粗溶解物を遠心分離して不溶性物質を除去し、例えば、ウエスタンブロッティングの後に、抗ホスホチロシン抗体でプローブすることによってEGFRのリン酸化を測定することができる。代替として、抗体がEGFRによる下流のシグナル伝達を阻害する能力は、例えば、AKTおよび/またはERK等のEGFRの既知の基質についてのキナーゼアッセイの後、EGFリガンドによるEGFR刺激を行うことによって測定することができる。例えば、EGFRを発現する細胞をEGFリガンドで刺激し、候補抗体とともにインキュベートすることができる。そのような細胞から続いて調製される細胞溶解物は、抗AKT抗体等のEGFRの基質に対する抗体またはEGFRに関与する細胞経路内のタンパク質で免疫沈降させ、当該技術分野で認識されている技術を用いてキナーゼの活性例えば、AKTキナーゼの活性についてアッセイすることができる。抗体の非存在化におけるレベルまたは活性と比較した、抗体の存在下におけるEGFRに関与する経路内のEGFR基質またはタンパク質のレベルまたは活性例えば、キナーゼの活性の減少または完全な消失は、EGFRのシグナル伝達を阻害する抗体を示唆する。細胞表面におけるEGFRのレベルを減少させる抗体は、それらが腫瘍細胞上でEGFRの発現を下方制御または阻害する能力によって同定することができる。特定の実施形態において、抗体は、EGFRの内部移行を誘導するまたはエンドサイトーシスを増加させることによって細胞表面におけるEGFRを減少させる例えば、受容体の内部移行および再循環による、ならびに/または受容体の内部移行および分解による。このことを調べるために、EGFRをビオチン化することができ、例えば、抗体の存在下または非存在下において培養物中の細胞の単分子層上のビオチン量を測定し、続いて、EGFRの免疫沈降およびストレプトアビジンによるプローブを行うことによって、細胞表面におけるEGFR分子の数を容易に測定することができる。抗体の存在下におけるビオチン化したEGFRの検出量の経時的な減少は、細胞表面におけるEGFRのレベルを減少させる抗体を示唆する。また、抗体および抗体の組み合わせは、下の実施例に記載される細胞力価増殖アッセイまたはトリチウム標識チミジン取り込みアッセイを含む当該技術分野で認識されている技術を用いて、それらが腫瘍細胞等のEGFRを発現する細胞の増殖をインビボまたはインビトロのいずれかで阻害する能力について検査することができる。また抗体は、それらがEGFRを発現する細胞の球状体増殖を阻害する能力についてスクリーニングすることもできる。これは、本明細書に記載される腫瘍増殖を促進する条件に近付けるアッセイを用いて行うことができる。別の実施形態において、抗EGFR抗体の組み合わせが、EGFR媒介性シグナル伝達例えば、ELISA、ウエスタンブロット、または多重法、例えばLuminex登録商標等によって測定される等の特定のEGFRの活性または機能の阻害に対するIC50および/またはIC90値についてスクリーニングされる。次いで、それらの各々が特に望ましいIC50および/またはIC90値例えば、EGFRシグナル伝達の阻害には約80nMのIC90を保持する抗体の組み合わせを選択することができる。一実施形態において、組み合わせは、既知の基準抗体例えば、セツキシマブよりも高いIC50またはIC90値を有する。別の実施形態において、組み合わせは、相加的なIC50またはIC90を有するすなわち、EGFRを発現する細胞に対して個別に作用する場合の抗体の活性の和は、同じ細胞に対して一緒に作用する同じ抗体の効果を合わせたものとほぼ等しい。別の実施形態において、組み合わせは、相乗的なIC50またはIC90を有するすなわち、EGFRを発現する細胞に対して個別に作用する場合の抗体の効果の和は、同じ細胞に対して一緒に作用する同じ抗体の効果を合わせたものよりも低い。IV.医薬組成物別の態様において、薬学的に許容される担体とともに配合される、モノクローナル抗体のうちの1つまたはその組み合わせを含む組成物、例えば、医薬組成物が本明細書において提供される。一実施形態において、組成物は、EGFR上の異なるエピトープに結合する、複数例えば、2つ以上の単離された抗体の組み合わせを含む。そのような抗体は、好ましくは、EGFR媒介性シグナル伝達等の特定のEGFRの活性または機能を阻害することに対して相加的または相乗的な効果を有する。本明細書中で用いられる場合、薬学的に許容される担体は、生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤等を含む。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与例えば、注射または点滴によるに好適である。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、抗体、二重特異性および多重特異性分子は、酸の作用、および化合物を不活性化し得る他の天然の条件から化合物を保護する物質で被覆されてもよい。医薬組成物は、単独で、または併用治療において、すなわち、他の薬剤と組み合わせて、投与することができる。例えば、併用治療は、本明細書に提供される組成物を、少なくとも1つ以上の追加の治療薬、例えば、本明細書に記載される抗癌剤とともに含むことができる。また、組成物は、放射線治療および/または手術と併せて投与することもできる。また、抗EGFR抗体の特定の組み合わせが、追加の治療薬の有無にかかわらず、別々にまたは連続的に投与されてもよい。組成物は、当該技術分野において既知である様々な方法によって投与することができる。当業者には理解されるように、投与経路および/または投与様式は、所望の結果に応じて異なる。抗体は、例えば、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化された送達システムを含む徐放剤等の、急速な放出から抗体を保護する担体とともに調製することができる。例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、およびポリ乳酸等の生分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。そのような配合物の調製のための多くの方法は、特許を取得しているか、または当業者に一般的に知られている。ある特定の投与経路により組成物を投与するために、その失活を防止する物質で成分例えば抗体を被覆するか、または組成物を該成分と同時投与することが必要である場合がある。例えば、組成物は、適切な担体、例えばリポソーム、または希釈剤中で対象に投与されてもよい。許容される希釈剤は、生理食塩水および水性緩衝溶液を含む。リポソームは、水中油中水CGFエマルジョン、および従来のリポソームを含む。許容される担体は、無菌の水溶液または分散液、ならびに無菌の注射液または分散液の即時調製のための無菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野において既知である。任意の従来の媒体または薬剤が抗体と不適合性でない限り、本明細書に提供される組成物におけるその使用が企図される。また、補助的な活性成分も組成物に組み込むことができる。治療組成物は、典型的には、無菌でなければならず、製造および保存条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の秩序構造として配合することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等、ならびにそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒体であってもよい。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散の場合は必要とされる粒子径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、砂糖、多価アルコール類例えばマンニトール、ソルビトール等、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物に含ませることによって、注射用組成物の長期にわたる吸収をもたらすことができる。無菌の注射液は、必要に応じて、上で列挙した成分のうちの1つまたはその組み合わせとともに必要な量のモノクローナル抗体を適切な溶媒に組み込み、その後、滅菌精密濾過を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は、塩基性分散媒体と、上に列挙したもので必要な他の成分とを含む無菌ビヒクルに抗体を組み込むことによって調製される。無菌注射液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製法は、有効成分と、事前に滅菌濾過したその溶液からの任意の追加の所望の成分との粉末を生じる真空乾燥およびフリーズドライ凍結乾燥である。投与計画は、最適な所望の反応例えば、治療反応を提供するように調節される。例えば、単一ボーラスが投与されてもよいか、いくつかに分割された用量が経時的に投与されてもよいか、または、治療状況の危急性によって示されるように用量を比例的に減少もしくは増加させてもよい。例えば、ヒト抗体は、皮下注射によって週に1回もしくは2回、または皮下注射によって月に1回または2回投与されてもよい。投与の簡便性および投与量の均一性のために、非経口組成物を単位剤形に配合することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、治療を受ける対象に対する単一の投与量として適切である物理的に異なった別個の単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体を伴って所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の抗体を含む。本明細書に提供される単位剤形の仕様は、a抗体の固有の特徴および達成されるべき特定の治療効果、ならびにbそのような抗体を個体の治療感受性に合わせて調合する当該技術分野に固有の限界によって決定され、また直接的に依存する。薬学的に許容される抗酸化剤の例として、1水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等、2油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソールBHA、ブチル化ヒドロキシトルエンBHT、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロール等、および3金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸EDTA、ソルビトール、酒石酸、リン酸等が挙げられる。治療組成物の場合、配合物は、経口、鼻腔、局所口腔内および舌下を含む、直腸、および非経口投与に好適なものを含む。非経口投与は、抗体を含む治療組成物の最も一般的な投与経路である。配合物は、都合よく単位剤形で存在してもよく、また薬学の分野において既知である任意の方法によって調製されてもよい。単一剤形を生成するために担体物質と組み合わせることができる抗体の量は、治療を受ける対象および特定の投与様式に応じて異なる。抗体の量は、一般に、治療効果をもたらすのに十分な量である。一般に、100パーセントのうち、この量は、約0.001質量パーセント~約90質量パーセント、好ましくは約0.005パーセント~約70パーセント、最も好ましくは約0.01パーセント~約30パーセントの抗体の範囲である。本明細書で使用される非経口投与および非経口的に投与されるという句は、経腸的および局所投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、および胸骨内注射および点滴が挙げられるが、これらに限定されない。ここで提供される医薬組成物中に用いられてもよい好適な水性および非水性の担体の例として、水、エタノール、多価アルコール類例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油等の植物油、ならびにオレイン酸エチル等の注射用有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング剤の使用によって、分散の場合は必要とされる粒子径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。また、これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳濁剤、および分散剤等のアジュバントを含んでもよい。当該技術分野において周知であるアジュバントの具体的な例として、例えば無機アジュバントアルミニウム塩、例えば、リン酸アルミニウムおよびアルミニウム水酸化物等、有機アジュバント例えば、スクアレン、油性アジュバント、ビロゾーム例えば、インフルエンザウイルス由来の膜結合ヘマグルチニンおよびノイラミニダーゼを含むビロゾームが挙げられる。微生物の存在の予防は、滅菌手順によって、ならびに、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等の種々の抗菌剤および抗真菌剤の含有の両方によって確実にすることができる。また、糖類、塩化ナトリウム等の等張剤を含むことが望ましい場合がある。さらに、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収を遅延させる1つ以上の薬剤の含有によって、注射用組成物の長期にわたる吸収をもたらすことができる。組成物が医薬としてヒトおよび動物に投与される場合、それらは、単独で、または、薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば0.001~90より好ましくは、0.005~70、例えば0.01~30の有効成分を含む医薬組成物として与えることができる。選択した投与経路にかかわらず、本明細書に提供される組成物は、好適な水和物の形態で用いられてもよく、またそれらは、当業者に既知である従来の方法によって、薬学的に許容される剤形に配合されてもよい。本明細書に提供される医薬組成物中の抗体の実際の投与量レベルは、患者に対して毒性を示すことなく、特定の患者、組成物、および投与様式に対する所望の治療反応を達成するために効果的な有効成分の量を得るために異なり得る。選択された投与量レベルは、用いられる特定の組成物、またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、用いられる特定の化合物の排出速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて用いられる他の薬物、化合物および/または物質、治療を受ける患者の年齢、性別、体重、状態、総体的な健康、および以前の医療歴等の、医療の分野において周知である因子を含む様々な薬物動態的因子に依存する。当該技術分野において通常の技術を有する医師または獣医師は、必要とされる組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも少ないレベルで抗体の投与を開始し、所望の効果が得られるまで投与量を次第に増加させることができる。一般に、本明細書に提供される組成物の好適な1日用量は、治療効果をもたらすために効果的な最低用量である抗体の量である。そのような有効用量は、通常、上述の因子に依存する。投与は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下であることが好ましく、好ましくは標的部位の近位に投与される。必要に応じて、治療組成物の有効な1日用量は、任意選択的に単位剤形で、1日を通して適切な間隔で、2つ、3つ、4つ、5つ、6つまたはそれ以上のサブ用量として別々に投与されてもよい。抗体を単独で投与することが可能であるが、抗体を製剤組成物として投与することが好ましい。治療組成物は、例えば、米国特許第5,399,163号、第5,383,851号、第5,312,335号、第5,064,413号、第4,941,880号、第4,790,824号、第4,596,556号、第4,487,603号、第4,486,194号、第4,447,233号、第4,447,224号、第4,439,196号、および第4,475,196号に開示されるような、当該技術分野において既知である医療機器を用いて投与することができる。特定の実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするように配合することができる。例えば、血液脳関門BBBは、多くの高親水性の化合物を排除する。抗体がBBBを横断することを確実にするために所望の場合、それらを例えばリポソーム中に配合することができる。リポソームを製造する方法については、例えば、米国特許第4,522,811号、第5,374,548号、第5,399,331号、第5,891,468号、第6,056,973号、第6,210,707号、第6,224,903号、第6,316,024号、第7,122,202号、第7,135,177号、および第7,507,407号、ならびに米国特許出願第20070116753号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または器官に付着する、および/またはその中に選択的に輸送される、ひいては標的化薬物送達を増強する、1つ以上の部分を含んでもよい。本発明は、抗EGFR抗体のトリオを含む医薬組成物、すなわち、3つの異なる抗EGFR抗体、好ましくは、EGFRへの結合について互いに競合せず、かつ/またはEGFR上で互いに異なるエピトープに結合する3つの異なる抗体を含む組成物を提供する。3つの抗体に加えて、これらの医薬組成物は、上に詳述したような薬学的に許容される担体および/または他の賦形剤を含むことができる。医薬組成物は、3つ全部の抗体を収容する単一容器中に供給されてもよいか、または代替として、医薬組成物は、各々が3つの異なる抗EGFR抗体のうちの1つならびに上に詳述したような薬学的に許容される担体および/または他の賦形剤を収容する3つの異なる容器を含むパッケージを含んでもよい。例えば、本発明は、トリオのうちの1つの抗体が、本明細書に定義されるビン1の抗体と、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合し、トリオのうちの第2の抗体が、本明細書に定義されるビン2の抗体と、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合し、トリオのうちの第3の抗体が、本明細書に定義されるビン3の抗体と、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合する、抗EGFR抗体のトリオ3つの抗体、または3つ組の抗体の医薬組成物を提供する。したがって、一実施形態において、本発明は、第1の抗体、第2の抗体、および第3の抗体を含む抗EGFR抗体のトリオの医薬組成物であって、i第1の抗体が、va、vb、およびvcからなる群から選択される抗体、またはca、cb、およびccからなる群から選択される抗体と、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合し、ii第2の抗体が、vd、ve、vf、vg、およびvhからなる群から選択される抗体、またはcd、ce、およびcfからなる群から選択される抗体と、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合し、iii第3の抗体が、viおよびvjからなる群から選択される抗体、またはcg、ch、ci、cj、およびckからなる群から選択される抗体と、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合する、医薬組成物を提供する。例えば、本発明は、第1の抗体、第2の抗体、および第3の抗体を含む抗EGFR抗体のトリオを含む医薬組成物であって、i第1の抗体が、抗体caSEQIDNO:29、30、および34にそれぞれ記載の重鎖CDR1、2、および3と、SEQIDNO:48、45、および49にそれぞれ記載の軽鎖CDR1、2、および3とを含むと、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合し、ii第2の抗体が、抗体cdSEQIDNO:29、30、および31にそれぞれ記載の重鎖CDR1、2、および3と、SEQIDNO:53、54、および55にそれぞれ記載の軽鎖CDR1、2、および3とを含むと、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合し、iii第3の抗体が、抗体chSEQIDNO:23、24、および26にそれぞれ記載の重鎖CDR1、2、および3と、SEQIDNO:39、40、および42にそれぞれ記載の軽鎖CDR1、2、および3とを含むと、結合について競合するか、またはそれと同じエピトープに結合する、医薬組成物を提供する。抗体ca、cf、およびchのトリオの組み合わせはまた、表4に記載の抗体トリオ4cとして本明細書に記載される。また本発明は、EGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患の治療のための薬物の製造における上記抗EGFR抗体のトリオの使用も提供する。また本発明は、癌、例えば、EGFRを発現する癌、例えば、限定されないが、メラノーマ、乳癌、卵巣癌、腎癌、消化管癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、神経膠芽腫、前立腺癌、ならびに他の固形腫瘍および/または転移性腫瘍を含む癌の治療のための薬物の製造における上記抗EGFR抗体のトリオの使用も提供する。V.抗体の使用方法また、様々な癌を含むEGFRに依存するシグナル伝達が関与する様々なエクスビボおよびインビボの診断用途および治療用途において、EGFRに結合する抗体を使用する方法も提供する。したがって、一実施形態において、疾患を治療するために有効な量の本明細書に提供される抗体、または好ましくは抗体の組み合わせを対象に投与することによって、EGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患を治療するための方法が提供される。好適な疾患として、例えば、限定されないが、メラノーマ、乳癌、卵巣癌、腎癌、消化管癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、神経膠芽腫、前立腺癌、ならびに他の固形腫瘍および/または転移性腫瘍を含むが、これらに限定されない様々な癌が挙げられる。抗体は、EGFR媒介性シグナル伝達と関連する疾患を治療するために、単独で、または抗体と一緒にまたはそれと相乗的に作用する別の治療薬とともに投与することができる。このような治療薬は、本明細書に記載されるもの、例えば、有機低分子、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、組換え操作された生物製剤、RNAi化合物、チロシンキナーゼ阻害剤、および市販の抗体、ならびに抗癌剤例えば、細胞毒、化学療法剤、低分子、および放射線を含む。また、任意選択的に単一バイアル中に収容され、例えば、EGFRの上方制御および/またはEGFR依存性シグナル伝達と関連する疾患の治療または診断において使用するための指示を含む、1つ以上の抗EGFR抗体を含むキットも提供される。キットは、キットの内容物の意図される使用を示すラベルを含んでもよい。ラベルという用語は、キット上にもしくはキットとともに供給されるか、または他の方法でキットに添付される、任意の書面、マーケティング資料または記録資料を含む。他の実施形態を、以下の非限定的な実施例に記載する。実施例1~5の材料および方法別途記載のない限り、実施例1~5を通して以下の材料および方法が用いられる。一般に、別途指定のない限り、化学、分子生物学、組換えDNA技術、免疫学特に、例えば、抗体技術の従来技術、およびポリペプチド調製の標準的な技術が用いられる。細胞株以下に記載される実験で用いられる全ての細胞株は、NationalCancerInstituteまたはATCCより調達する。細胞株:A431-類表皮癌OVCAR-3-卵巣癌Du145-前立腺癌ADRr-乳癌腫瘍細胞の粉砕腫瘍の粉砕のために凍結粉砕機COVARISIncを用いる。特殊な袋腫瘍の添加前に予め計量したに腫瘍を保存し、それらを取り扱う間は液体窒素に入れる。小さな腫瘍の場合、袋からの腫瘍の回収率を向上させるために、腫瘍を収容している袋に200μLの溶解バッファーを初めに添加し、液体窒素中で凍結させ、次いで粉砕する。粉砕した腫瘍は、2mLエッペンドルフチューブに移し、さらなる処理の直前まで液体窒素に入れておく。腫瘍細胞の溶解プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を補充した溶解バッファー中に腫瘍を溶解させる。腫瘍アリコートに溶解バッファーを添加して最終濃度約62.5mg/mLとする。腫瘍試料を30秒間ボルテックスで撹拌して均質化し、氷上で約30分間インキュベートする。試料のさらなる均質化のために、Qiagen社製QIASHREDDERカラム中で溶解物を約10分間回転させる。さらなる処理のために、透明な溶解物を新しいチューブに分注する。BCAアッセイ全ての腫瘍試料について、製造業者のプロトコルに従ってBCAアッセイPierceを行う。各腫瘍試料の合計タンパク質濃度mg/mLは、後に、ELISAの結果の正規化に用いる。ELISAアッセイ完全ELISAおよびホスホ-EGFRELISA用の全てのELISA試薬は、DuosetキットとしてRDSystemsから購入する。96ハーフウェルのGREINER高結合プレートカタログ番号675077、GREINERBIO-ONE、Monroe,NCを50μLの抗体で被覆し、室温で一晩インキュベートする。翌朝、PBST0.05Tween-20を用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで1000μL/ウェルでプレートを3回洗浄する。その後、PBS中の2BSAを用いて、約1時間室温でプレートをブロックする。PBST0.05Tween-20を用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで1000μL/ウェルでプレートを3回洗浄する。50溶解バッファーおよび1BSA中で希釈した50μLの細胞溶解物および標準物質を、さらなる処理のために二連で用いる。振盪させながら4°Cで2時間試料をインキュベートし、PBST0.05Tween-20を含むPBSを用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで1000μL/ウェルでプレートを3回洗浄する。約50μLの検出抗体を2BSAに希釈し、PBSTを添加し、室温で約1時間インキュベートする。ホスホ-EGFRの場合、検出抗体を西洋ワサビペルオキシダーゼHRPと直接結合させ、室温で2時間インキュベートする。PBST0.05Tween-20を用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで1000μL/ウェルでプレートを3回洗浄する。約50μLのストレプトアビジン-HRPを添加し、室温で30分間インキュベートするpErbB3を除く。PBST0.05Tween-20を用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで1000μL/ウェルでプレートを3回洗浄する。約50μLのSUPERSIGNALPICOELISA基質を添加し、Fusionプレートリーダーを用いてプレートを読み取る。EXCELを用いてデータを分析する。二連の試料を平均し、エラーバーを用いて2つの繰り返しの標準偏差を表す。AKTおよび/またはERKシグナル伝達の阻害AKTまたはERKを介したEGFR媒介性シグナル伝達を、そのようなタンパク質のためのキナーゼアッセイを用いる当該技術分野で認識されている技術を用いて測定する。例えば、米国特許出願第2010-0056761を参照されたい。EGFR二量体化アッセイ細胞におけるEGFRのホモ二量体化の程度を測定するために、2種類のエピトープタグ化EGFR構築物、例えば、EGFRのC末端領域にそれぞれFlagおよびMycタグを含むEGFR-flagおよびEGFR-mycが用いられる共沈降アッセイを用いる。EGFR-flagおよびEGFR-mycを細胞、例えば、COS-7細胞に同時導入し、無血清培地中でインキュベートする。細胞溶解物を抗Flag抗体で沈降させ、沈殿物質を抗Myc抗体を用いたウエスタンブロッティングによって分析するか、または逆の場合も同様に行う。抗体の存在下および非存在下対照におけるEGFR-mycの抗Flag抗体による共沈降、および抗Myc抗体によるEGFR-flagの共沈降の量を測定して比較する。EGFR内部移行アッセイEGFRの内部移行すなわち、EGFR発現の減少の程度を測定するために、放射例えば、125I標識したEGFRを発現する細胞を抗体の存在下および非存在下対照でインキュベートする。内部移行した放射活性と表面の放射活性との比率を測定して比較する。結合親和性抗EGFR抗体の解離定数は、2つの独立した技術、例えば、表面プラズモン共鳴アッセイおよびA431細胞を用いた細胞結合アッセイを用いて測定することができる。また、抗体の親和性および交差反応性も、KinExA計測手段SAPIDYNEInstruments、Boise,IDを用いて、組換えEGF受容体を含む溶液中で測定される。手順では、12個の5mLチューブ内に調製したErbB1.6hisの3倍に用量設定した希釈物1000nM、333nM、111nM、37nM、12.3nM、4.1nM、1.37nM、450pM、150pM、50pM、17pMを用いて、各チューブ内の抗体濃度を250pMで一定に維持する。原液2mg/mLの1:1000希釈により、2μg/mLのCy5標識GαヒトIgG二次抗体15mLを調製する。ErbB1.6HIS結合PMMAビーズをSAPIDYNEのKinExAプロトコルに従ってカップリングさせる。PMMAビーズ200mgの予め測定したアリコートに100μgのErbB1-6hisを添加する。次いで、1×PBSを溶液に添加し、最終体積を1mLとする。次いで、この溶液を室温で1時間インキュベートする。次いで、27mLの1×PBSを含むビーズバイアルにビーズを移す。次いで、KinExAProソフトウェアのパラメータを入力することにより、実験を設定する。表面プラズモン共鳴アッセイ表面プラズモン共鳴アッセイを以下のように行う。抗体または抗原300RUのいずれかをアミンカップリングによりCM5チップ上に固定化する。次いで、異なる濃度の抗体または抗原を、固定化タンパク質とそれらの会合および解離を調べるために注入する。異なる注入の間に、好適な再生バッファーpH2.5グリシン等を用いてチップを再生する。Koff解離定数を測定するために、方程式1を用いて解離相を適合させる。R=R0exp-Kofft1Kon会合速度およびKD平衡定数を測定するために、このKoffの値および方程式2を用いて解離相を適合させる。式中、Cは溶液中の抗原または抗体のいずれかの濃度を表し、Rmaxは飽和信号を表し、tは時間を表す。細胞結合アッセイKD値を測定するための細胞結合アッセイを以下の通り行う:37°Cで5分間、3mLのトリプシン-EDTAでA431を剥離させる。トリプシン処理した細胞に完全DMEM10mLをすぐに添加し、穏やかに再懸濁し、Beckman卓上遠心分離機で5分間1100rpmで遠沈させる。1mL当たり2×106細胞の濃度で細胞を染色バッファーPBS0.2BSA0.1アジ化ナトリウムに再懸濁し、50μL1×105細胞アリコートを96ウェルタイタープレートに入れる。染色バッファー中で2000nM抗EGFR抗体の原液300μLを調製し、そのうち100μLを200μLの染色バッファー中で連続的に希釈する。希釈された抗体の濃度は、2000nM~0.1nMの範囲である。次いで、異なるタンパク質希釈物の150μLのアリコートを50μLの細胞懸濁液に直接添加し、1500nM、500nM、166.7nM、55.6nM、18.5nM、6.17nM、2.05nM、0.68nM、0.23nM、および0.076nMの抗体の最終濃度を得る。96ウェルプレートに分注した細胞を、振盪させながら室温で2時間タンパク質希釈物とともにインキュベートし、300μLの染色バッファーで3回洗浄する。次いで、BD染色バッファー中のAlexa647標識化ヤギ抗ヒトIgGの1:750希釈物100μLで、振盪させながら4°Cで45分間細胞とともにインキュベートする。最後に細胞を2回洗浄し、ペレット化し、250μLの染色バッファー0.5μg/mLのヨウ化プロピジウムに再懸濁する。FL4チャネルを用いたFACSCALIBURフローサイトメーターで10,000個の細胞の分析を行う。抗EGFR-抗体のMFI値および対応する濃度を、それぞれY軸およびX軸上にプロットする。非線形回帰曲線のための1部位結合モデルを用いたGRAPHPADPRISMソフトウェアを使用して、分子のKDを決定する。KD値は、式Y=BmaxX/KDXBmax=飽和時の蛍光、X=抗体濃度、Y=結合の程度に基づいて計算する。腫瘍細胞増殖の阻害EGFRを発現する細胞例えば、癌細胞の細胞増殖の阻害を、以下の通りに試験する:Du145、A431、またはOVCAR-3細胞を20,000細胞/ウェルで96ウェル組織培養プレートに播種し、抗生物質、2mMのL-グルタミン、および10ウシ胎仔血清FBSを補充したRPMI-1640培地中、24時間37°Cおよび5二酸化炭素で増殖させる。次いで、200nM、20nM、2nM、0.2nM、0.02nM、および0nMの濃度で抗体を含むかまたは含まないRPMI-1640抗生物質、2mMのL-グルタミン、0.5FBSを含むに培地を交換するアイソタイプ対照として対照IgGを使用。36時間37°Cおよび5二酸化炭素で細胞を増殖させる。次いで、3H-チミジンの1:40希釈物20Ci/mmol、1mCi/mL25μLで細胞をパルスし、一晩18時間インキュベーションし、FILTERMATSに回収し、βカウンター上で読み取る。腫瘍細胞におけるEGFRリン酸化の阻害インビボでのEGFRのリン酸化の阻害を評価するために、試料を溶解し、上述のようにBCAおよびELISAアッセイを行う。EGF誘導性EGFRリン酸化の阻害EGF誘導性EGFRリン酸化の阻害を以下の通り調べる:OVCAR-3およびADRr細胞を35,000細胞/ウェルの密度で96ウェルプレートに播種する。細胞を10血清中で24時間インキュベートし、次いで、14時間血清飢餓させる。次いで、異なる濃度の抗EGFR抗体とともに細胞を40分間プレインキュベートする。プレインキュベーション後、培地を除去し、50nMヒトEGFを用いて5分間37°C、5CO2で細胞を刺激する。EGF対照5分、5nM、10血清、および0血清対照も用いる。1X冷PBSで細胞を洗浄し、氷上で30分間インキュベートすることにより、50μL氷冷溶解バッファー新しく添加したプロテアーゼ阻害剤を含むRDSYSTEMSELISAKitBuffer12中に溶解させる。溶解物は、すぐに分析するか、または後に使用するまで-80°Cで冷蔵する。腫瘍細胞におけるEGF媒介性シグナル伝達の阻害リガンド媒介性腫瘍細胞シグナル伝達の阻害を以下のように調べる:OVCAR-3またはDu145細胞を96ウェル組織培養プレートに播種し、抗生物質、2mMのL-グルタミン、および10ウシ胎仔血清FBSを補充したRPMI-1640培地中、24時間37°Cおよび5二酸化炭素で増殖させる。細胞は、抗生物質および2mMのL-グルタミンを含むRPMI-1640培地中、24時間37°Cおよび5二酸化炭素で血清飢餓させる。細胞を1μM、250nM、63nM、16nM、4.0nM、1.0nM、240pM、および61pMの濃度の抗EGFR抗体を用いるかまたは用いずに30分間前処理し、次いで、10分間37°Cおよび5二酸化炭素で、EGFリガンドを用いて刺激する。冷PBSで細胞を洗浄し、次いで、150mMNaCl、5mMピロリン酸ナトリウム、10mMbpVphen、50mMフェナラルシン、1mMオルトバナジウム酸ナトリウム、およびプロテアーゼインヒビターカクテルSigma、P714を含む哺乳動物タンパク質抽出MPER溶解バッファーPierce、78505を用いて回収する。0.1Tween-20を含むリン酸緩衝化生理食塩水中の4ウシ血清アルブミンで細胞溶解物を2倍に希釈し、次いで、ELISAによりAKTEGFRの下流エフェクターおよびEGFRのリン酸化について分析する。AKTのリン酸化について検査するために、AKTに特異的な捕捉抗体およびAKTのセリン473上のリン酸化部位に特異的なビオチニル化検出抗体を用いて、ELISAプレート上で溶解物を調べた。西洋ワサビペルオキシダーゼに結合させたストレプトアビジンが化学発光基質Pierce、37070と反応すると信号が発生する。実施例1:抗体の生成ヒト抗EGFR抗体を得るために、米国特許公開第20100056386号および第20090181855号に開示される方法に従って発現ライブラリーをスクリーニングする。実施例2:結合親和性/エピトープビニング表面プラズモン共鳴SPRを使用して結合親和性を分析する。具体的には、タンパク質のうちの1つ抗体または標的をチップの表面に本明細書に記載されるように固定化し、他のタンパク質を添加する。2つのタンパク質の会合/解離相互作用を測定する。溶液中のタンパク質が固定化タンパク質と会合すると、屈折率の増加が生じ、共鳴信号によって捕らえられる。タンパク質が解離すると信号の低下が生じる。上述のようにBIACORE解析を用いてエピトープビニングEGFのブロッキングを分析する。抗体のうちの1つをチップの表面に固定化する。EGFRが抗体と会合すると、共鳴信号が増加する。次いで、チップを再生し、EGFRおよび別の抗体例えば、以前にEGFRに結合することが分かった抗体の混合物を注入する。抗体が、注入された抗体と重複するエピトープに結合すると、単独で注入されたEGFRと比較して信号は低い。次いで、チップを再び再生し、EGFリガンドおよびEGFRの混合物を注入する。共鳴信号を測定する。シグナルの減少は、EGFリガンドと重複するエピトープを意味する。最終的にチップを再生し、EGFRとともに注入して抗体の活性を確認する。実施例3:腫瘍細胞におけるEGFRリン酸化の阻害特定の抗EGFR抗体によるADRr、Ovcar3、およびA431細胞におけるEGFRのリン酸化の阻害を上述のように分析する。実施例4:腫瘍細胞におけるAKTリン酸化の阻害抗体の組み合わせについて、Du145およびOvcar3細胞におけるAKTのリン酸化の阻害を上述のように分析する。1ErbB1の高い発現105受容体/細胞超および25倍以上のpAKT誘導の動的範囲という2つのパラメータに基づいて2つの細胞株を検査する。エピトープマッピングとは関係なく、全ての抗EGFR抗体を別の抗EGFR抗体と組み合わせる。6点の阻害曲線を作成する。多くのペアおよびトリオは10X連続希釈して2μMのピーク濃度とし、いくつかは4点希釈曲線を用いてスクリーニングする。相加的または相乗的にpAKTを阻害する全ての抗体を異なるエピトープにマッピングする。いくつかのペアは、セツキシマブよりも強力な阻害剤である。2つの細胞株における結果は互いに酷似しており、変異した受容体またはシグナル伝達経路例えば、kRASの非存在下において、ErbB1の高い発現おそらくはErbB1>ErbB2/3が相乗作用の開始基準であることを示唆している。抗体の40分間のプレインキュベーションにより、抗EGFR抗体の組み合わせを用いて短期間および長期間の阻害試験を行う。40分でアッセイを繰り返し、24時間の抗体のプレインキュベーションと比較する。データは、EGFRの内部移行および分解による変化測定値を示す。実施例5:腫瘍細胞増殖の阻害腫瘍細胞増殖の阻害を上述のように分析する。本明細書に提供されるペアおよびトリオがDU145細胞に与える阻害作用は、好ましくは強力である。また、好ましい抗体のペアおよびトリオは、等モル濃度のセツキシマブよりも高いDu145細胞増殖の阻害を示す。ペアおよびトリオは、pERKアッセイにおいても評価される。好ましいペアおよびトリオは、pERKシグナル伝達の強力な拮抗薬である。実施例6~12の材料および方法別途記載のない限り、実施例6~13を通して以下の材料および方法が用いられる。一般に、別途指定のない限り、本発明の実践は、化学、分子生物学、組換えDNA技術、免疫学特に、例えば抗体技術の従来技術、およびポリペプチド調製の標準的な技術を用いる。例えば、Sambrook,FritschandManiatis,MolecularCloningColdSpringHarborLaboratoryPress1989、AntibodyEngineeringProtocolsMethodsinMolecularBiology,510,Paul,S.,HumanaPr1996、AntibodyEngineering:APracticalApproachPracticalApproachSeries,169,McCafferty,Ed.,IrlPr1996、Antibodies:ALaboratoryManual,Harlowetal.,C.S.H.L.Press,Pub.1999、およびCurrentProtocolsinMolecularBiology,eds.Ausubeletal.,JohnWileySons1992を参照されたい。HCV生物学を評価するためのインビトロおよびインビボのモデル系は、例えば、Cellculturemodelsandanimalmodelsofviralhepatitis.PartII:hepatitisC,Lab.Anim.NY.;342:39-472005およびThechimpanzeemodelofhepatitisCvirusinfections,ILARJ.;422:117-262001に記載される。細胞株以下に記載される実験で用いられる全ての細胞株は、NationalCancerInstituteまたはATCCより調達する。細胞株:A431-類表皮癌Du145-前立腺癌H1975-非小細胞肺癌EGFR細胞外ドメインEGFR-ECD変異体のタンパク質精製mAbエピトープビニングのためにEGFR細胞外ドメインEGFR-ECDの変異体を産生させる。変異体は、セツキシマブLiS.etal.,CancerCell.7:301-311,2005およびH11SpanglerJ.etal.PNAS.107:13252-13257,2010のエピトープ、ならびにEGFR-ECD構造の構造解析ProteinDataBankID:1NQL;FergusonK.M.etal.MolCell.11:507-517,2003に基づいて設計した。この出願に含まれるタンパク質配列に記載されるように残基をアラニンに変異させる。発現構築物のDNA合成は、DNA2.0によって完了するwww.dna20.com。その後のDNAサブクローニング、293F細胞におけるタンパク質の発現、およびタンパク質の精製は、以前に記載されるように完了する。腫瘍細胞におけるEGFRまたはERKのEGF媒介性シグナル伝達の阻害リガンド媒介性腫瘍細胞シグナル伝達の阻害を以下のように調べる:A431またはDu145細胞を35,000細胞/ウェルまたは17,500細胞/ハーフウェルの密度で96ウェル組織培養プレートに播種し、抗生物質、2mMのL-グルタミン、および10ウシ胎仔血清FBSを補充したDMEMまたはRPMI-1640倍地中、24時間37°Cおよび5二酸化炭素で増殖させる。細胞は、抗生物質および2mMのL-グルタミンを含む1FBS培地中、約20時間37°Cおよび5二酸化炭素で血清飢餓させる。次いで、様々な濃度の抗EGFR抗体で細胞を2時間プレインキュベートし、次いで、10分間37°Cおよび5二酸化炭素で、ヒトEGFリガンド50ng/mLPreprotechカタログ番号AF-100-15を用いて刺激する。細胞を氷冷PBSで洗浄し、氷上で30分間インキュベートすることにより、50μLの氷冷溶解バッファー150mMNaClおよびプロテアーゼインヒビターカクテルSigma、P714で改良した哺乳動物タンパク質抽出溶解バッファーMPER-Pierce,78505中に溶解させる。溶解物は、ERKEGFRの下流エフェクターおよびEGFRのリン酸化についてELISAによりすぐに分析するか、または後に使用するまで-80°Cで冷蔵する。ELISAアッセイホスホ-EGFRサンドイッチELISAのために、96ハーフウェルのGREINER高結合プレートカタログ番号675077、GREINERBIO-ONE、Monroe,NCを50μLのEGFR抗体EGFRAb-11、Clone:199.12BSAおよびアジドを含まない、FisherScientificカタログ番号MS396P1ABXで被覆し、室温で一晩インキュベートする。翌朝、BIOTEKプレートウォッシャー上で、100μL/ウェルのPBST0.05Tween-20でプレートを3回洗浄する。その後、PBS中の2BSAを用いて、約1時間室温でプレートをブロックする。BIOTEKプレートウォッシャー上で、100μL/ウェルのPBST0.05Tween-20でプレートを3回洗浄する。50溶解バッファーおよび1BSA-PBS製造業者の推奨に従ってに希釈した細胞溶解物50μLまたは標準物質pEGFRpY1068ELISAキット、RDSystems、カタログ番号DYC3570を2通りプレートに添加し、振盪させながら室温で2時間または4°Cで一晩インキュベートする。次いで、PBST0.05Tween-20を含むPBSを用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで100μL/ウェルでプレートを3回洗浄する。2BSAに希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼHRPpEGFRpY1068ELISAキット、RDSystems、カタログ番号DYC3570と結合された約50μLの検出抗体、PBSを添加し、室温で約2時間インキュベートする。PBST0.05Tween-20を用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで100μL/ウェルでプレートを3回洗浄する。約50μLのSUPERSIGNALPICOELISA基質を添加し、PerkinElmerプレートリーダーを用いてプレートを読み取る。データを分析し、二連の試料を平均し、エラーバーを用いて2つの繰り返しの標準偏差を表す。ホスホ-ERKのELISAは、以下の変更を伴ってホスホ-EGFRのELISAと同様に行う:HumanpERKELISADuosetキットをRDSystemsカタログ番号DYC1018-5から購入し、製造者によって推奨されるように使用する。EGFR-ECD野生型WT、ビン1エピトープ変異体、またはビン3エピトープ変異体を捕捉試薬4μg/mLとして用いて直接ELISAを行う。96ハーフウェルのGREINER高結合プレートカタログ番号675077、GREINERBIO-ONE、Monroe,NCを50μLの捕捉試薬で被覆し、一晩室温でインキュベートした。翌朝、PBST0.05Tween-20を用いて、BIOTEKプレートウォッシャーで100μL/ウェルでプレートを3回洗浄し、PBS中1BSApH7.2を用いて、室温で約1時間プレートをブロックする。PBS中の1BSApH7.2に希釈した様々な濃度1、0.25、0.06、および0.02μg/mLのモノクローナル抗体mAbを捕捉試薬とともに室温で2時間インキュベートした後、PBS中の1BSApH7.2中のPeroxidase-ConjugatedAffiniPureGoatAnti-HumanIgGFcFragmentJacksonImmunoresearchカタログ番号109-035-008の1:50,000希釈物を用いて2時間検出を行った。約50μLのSupersignalPICOELISA基質を添加し、EnvisionPerkinElmerプレートリーダーを用いてプレートを読み取る。データを分析し、二連の試料を平均し、エラーバーを用いて2つの繰り返しの標準偏差を表す。2μM、666.6nM、222.2nM、74nM、24.7nM、8.2nM、2.7nM、914pM、および304pMの濃度の抗EGFR抗体を用いるかまたは用いずに、細胞を2時間前処理する。結合親和性:速度論的排除アッセイKineticExclusionAssayKinExA抗体の親和性および交差反応性も、KinExA計測手段SAPIDYNEInstruments、Boise,IDを用いて、組換えEGF受容体を含む溶液中で測定する。このアッセイに使用される材料は、KinExA3000機器およびソフトウェアSapidyneInstruments、Boise,ID、ポリメタクリル酸メチルPMMAビーズSapidyneInstruments、ヒト抗EGFRIgG、組換えヒトEGFR、Cy5結合ヤギ抗ヒトIgGJacksonImmunoResearch、WestGrove,PA、リン酸緩衝化生理食塩水PBS、およびPBS100mg/mL中のウシ血清アルブミンである。組換えEGF受容体をPMMAビーズにカップリングさせるために、200mgのPMMAビーズの予め測定したアリコートに100μgの組換えEGFRを添加し、PBSを添加して合計体積を1mLとする。ビーズを回転ホイール上、室温で1時間インキュベートする。次いで、ビーズを短時間遠心分離し、上清を除去する。PBS中100μLの100mg/mLBSAをビーズに添加し、PBSをさらに添加して合計体積を1mLとする。再び、ビーズを回転ホイール上、室温で1時間インキュベートする。次いで、ビーズを27mLのPBSを含むガラス瓶に移す。一価抗体の結合親和性を測定するために、一定濃度の抗EGFR抗体を有する5mLのPBS中に組換えEGFRの12段階希釈系列75nM、25nM、8.3nM、2.8nM、0.9nM、0.3nM、100pM、33pM、11pM、4pM、1.3pM、0pMを調製する。正確な親和性の測定のために、全抗体結合部位濃度ABC、原子価に起因して抗体のモル濃度の2倍は、EGFRに対する抗体の一価親和性より低くあるべきである。平衡を達成するために、抗体-受容体混合物を室温で2時間インキュベートする。抗体-受容体複合体の予想される親和性に応じて、この平衡時間を調節してもよい。PBS中の原液2mg/mL抗体の1:1000希釈物を用いて、別のチューブ内に2μg/mLのCy5結合抗ヒトIgG二次抗体15mLを調製する。次いで、KinExA機器ラインを12本の抗体-受容体溶液チューブの各々に取り付ける。充填したEGFRビーズカラムを通して各溶液を注入するKinExA機器は、各注入ごとに新しいビーズカラムを自動的に充填する。洗浄ステップの後、標識化した二次抗体をカラムに通過させる。最後に、異なる受容体濃度の複合体を形成していない受容体の測定量を用いて、平衡滴定データをKinExAソフトウェアの1:1結合モデルに当てはめて親和性値Kdを得る。KinExAの直説法を用いて結合オン速度を測定するために、上記アプローチおよび全抗体結合部位濃度ABCを用いて平衡一価結合親和性KDを決定する。次いで、TheoreticalBindingCurveDemonstrationソフトウェアSapidyneInstrumentsを使用して、速度論実験のための出発抗原濃度L0を決定する。これを行うために、一価結合親和性実験において決定された親和性およびABC値を入力し、平衡状態で抗体の約20が抗原に結合しない濃度として出発抗原濃度を選択する。これにより、実験中、良好なシグナル対ノイズ比を確保する。PBS中の原液2mg/mL抗体の1:1000希釈物を用いて、2μg/mLのCy5結合抗ヒトIgG二次抗体15mLを調製する。別のチューブに、8mLの抗EGFR抗体溶液を2xABCの濃度で調製する。これは、実験前に8mLの抗原溶液と混合されるため、この濃度は実験濃度の2倍である。別のチューブに、8mLの組換えEGFR溶液を2xL0の濃度で調製する。これは、実験前に8mLの抗体溶液と混合されるため、この濃度も実験濃度の2倍である。次いで、EGFRで被覆したビーズおよび二次抗体溶液を、それぞれ適切な容器およびラインに配置する。抗体および抗原溶液を十分に混合し、すぐに適切なラインに接続し、KinExAソフトウェアを使用して、時間の関数として得られた溶液内の遊離抗体の量を測定する。会合定数KonKonを決定するために、KinExAソフトウェアを使用して、可逆性二分子反応速度式に対する時間の関数として遊離抗体の量の欠乏を当てはめる。解離定数KoffKoffは、KonKDKdと等しい。結合親和性:表面プラズモン共鳴アッセイ表面プラズモン共鳴アッセイを以下のように行う。抗体または抗原300RUのいずれかをアミンカップリングによりCM5チップ上に固定化する。次いで、異なる濃度の抗体または抗原を、固定化タンパク質とそれらの会合および解離を調べるために注入する。異なる注入の間に、好適な再生バッファーpH2.5グリシン等を用いてチップを再生する。Koff解離定数を測定するために、方程式1を用いて解離相を適合させる。R=R0exp-Kofft1Kon会合速度およびKD平衡定数を測定するために、このKoffの値および方程式2を用いて解離相を適合させる。式中、Cは溶液中の抗原または抗体のいずれかの濃度を表し、Rmaxは飽和信号を表し、tは時間を表す。細胞結合アッセイKD値を測定するための細胞結合アッセイを以下の通り行う:37°Cで5分間、3mLのトリプシン-EDTAでA431を剥離させる。トリプシン処理した細胞に完全DMEM10mLをすぐに添加し、穏やかに再懸濁し、Beckman卓上遠心分離機で5分間1100rpmで遠沈させる。1mL当たり2×106細胞の濃度で細胞を染色バッファーPBS0.2BSA0.1アジ化ナトリウムに再懸濁し、50μL1×105細胞アリコートを96ウェルタイタープレートに入れる。染色バッファー中で2000nM抗EGFR抗体の原液300μLを調製し、そのうち100μLを200μLの染色バッファー中で連続的に希釈する。希釈された抗体の濃度は、2000nM~0.1nMの範囲である。次いで、異なるタンパク質希釈物の150μLのアリコートを50μLの細胞懸濁液に直接添加し、1500nM、500nM、166.7nM、55.6nM、18.5nM、6.17nM、2.05nM、0.68nM、0.23nM、および0.076nMの抗体の最終濃度を得る。96ウェルプレートに分注した細胞を、振盪させながら室温で2時間タンパク質希釈物とともにインキュベートし、300μLの染色バッファーで3回洗浄する。次いで、BD染色バッファー中のAlexa647標識化ヤギ抗ヒトIgGの1:750希釈物100μLで、振盪させながら4°Cで45分間細胞をインキュベートする。最後に細胞を2回洗浄し、ペレット化し、250μLの染色バッファー0.5μg/mLのヨウ化プロピジウムに再懸濁する。FL4チャネルを用いたFACSCALIBURフローサイトメーターで10,000個の細胞の分析を行う。抗EGFR-抗体のMFI値および対応する濃度を、それぞれY軸およびX軸上にプロットする。非線形回帰曲線のための1部位結合モデルを用いたGRAPHPADPRISMソフトウェアを使用して、分子のKDを決定する。KD値は、式Y=BmaxX/KDXBmax=飽和時の蛍光、X=抗体濃度、Y=結合の程度に基づいて計算する。インビトロでの腫瘍細胞増殖の阻害EGFRを発現する細胞例えば、癌細胞の細胞増殖の阻害を以下のようにインビトロで調べる:H1975またはA431細胞を250、500、1000、または2,000細胞/ウェルで96ウェル組織培養プレートに播種し、抗生物質、2mMのL-グルタミン、および10ウシ胎仔血清FCSを補充したRPMI-1640培地中、24時間37°Cおよび5二酸化炭素で増殖させる。次いで、1μMの抗体最終濃度の存在下または非存在下で50ng/mLのEGFを補充したRPMI-1640抗生物質、2mMのL-グルタミン、1FBSを含むに培地を交換する。37°Cおよび5二酸化炭素で6日間細胞を増殖させる。製造者の指示に従ってCellTiter-Glo登録商標CTGLuminescentCellViabilityAssayPromegaCorporationを用いて、細胞生存率を測定する。CTGアッセイは、代謝的に活性な細胞の指標である、存在するATPの定量化に基づいて培養物中の生存細胞の数を測定する。対照処理は、抗生物質、2mMのL-グルタミン、1FCSを含むが、50ng/mLのEGFは補充されていないRPMI-1640で処理した細胞1FCS処理と称される、ならびに抗生物質、2mMのL-グルタミンを含むが、FCSまたはEGFのいずれも補充されていないRPMI-1640で処理した細胞無血清培地またはSFM処理と称されるを含む。マウス異種移植片インビボ試験Nu/nuマウスCharlesRiverLabsに3.5x106のA431細胞または2.0x106のH1975細胞を皮下注射し、結果として生じる腫瘍を平均サイズ200mmに達するまで増殖させる。次いで、以下のように投薬を開始する。マウスEGFRと交差反応性の抗体を2日毎q2dに与え、非交差反応性の抗体を4日毎q4dに与える。3日間隔で測定を行う。それぞれ、5回および7回投与後に、A431およびH1975の投与を中止する。両方の試験について回復期間を維持する。均一な血清半減期を表すように抗体の用量を正規化した。実施例6:結合親和性/エピトープビニング上述のようにBIACORE解析を用いてエピトープビニングを分析する。抗体のうちの1つをチップの表面に固定化する。EGFRが抗体と会合すると、共鳴信号が増加する。3つのビン1、2、および3に属する抗体の連続注入を行う。抗体が、注入した抗体と重複するエピトープに結合すると、以前の注入と比較して信号は変化しない。抗体が、非重複エピトープに結合すると、チップ上の信号が以前の注入よりも高くなる。最終的に、チップに結合させた抗体を遊離リガンドとして注入し、重複エピトープとの結合がないことを確認する図17D。ビンは、選択された抗体がEGFRの細胞外ドメインECD上の3つの異なる非重複エピトープにまたがるように設計した。これらは、3つのビンにグループ化される:ビン1は、EGFRのドメインIIIにマッピングされ、c225エピトープを表しセツキシマブが結合する部位、ビン2は、ドメインIにマッピングされ、ICR10エピトープを表しAbcamAb231Cochranetal.2004JournalofImmunologicalMethods,287:147-158、ビン3は、ドメインIIIにマッピングされ、クローンH11エピトープを表すSpanglerJ.etal.PNAS.107:13252-13257,2010。EGFR細胞外ドメイン中の、下に太字で示すアミノ酸位置でのエピトープマッピングのために、ビン1B1-7MT-Alaおよびビン3B3-4MT変異体を産生させた。EGFRECDSEQIDNO:59以下の置換変異体は、以下の変異体残基を有するビン1B1およびビン3B3エピトープ変異体を作製するために、標準的な組換えDNA技術を用いて示されるアミノ酸位置で作製した。変異体ビン1B1変異体残基B1-7MT-Ala:Q408A、Q432M、H433E、K467A、K489A、I491A、N497Aビン3B3変異体残基B3-4MT:S380A、F381G、T382A、H383GEGFR-ECD野生型WT、ビン1エピトープ変異体c225エピトープ、またはビン3エピトープ変異体H11エピトープを捕捉試薬として用いて直接ELISAを行った。様々な濃度の1、0.25、0.06、および0.02μg/mLのモノクローナル抗体mAbcaビン1、cdビン2、およびchビン3を捕捉試薬とともに室温で2時間インキュベートした後、HRP結合抗ヒトFcポリクローナル抗体を用いて1時間検出を行った。図17Aに示すように、3つ全ての抗体がEGFRのWT細胞外ドメインに結合した一方で、ビン1の抗体caは、ビン1変異体エピトープに結合せず図17B、ch抗体は、ビン3変異体エピトープに結合しなかった図17C。抗EGFR抗体をさらに特徴付けるために、mAbchビン3をBIACOREチップの表面に結合させた。0.5μMのEGFR細胞外ドメインEGFR-ECDを注入した後、mAbcdビン2、mAbcbビン1、そして最後にチップ表面に結合させたビン3の抗体へのEGFRECDの結合によってブロックされたエピトープに対する負の対照としてmAbchビン3を連続的に注入した。図17Dに示すように、3つのビンからの抗体は、順次EGFRの細胞外ドメインに結合し、ビン1、2、および3に属するmAbのエピトープが、重複しない異なるものであることを示すものであった。ELISAおよびBIACOREによるエピトープマッピングの概要は下の表8に見出され、KinExA登録商標によって測定した結合親和性の概要は、下の表9に見出される。全ての親和性は、0.8nMよりも良好であった。n.d.:決定せず実験を行わなかった。有り:非重複エピトープに対応する結合事象を示す。無し:重複エピトープに対応する結合事象の欠落を示す。実施例7:非重複エピトープの2つの抗EGFR抗体の組み合わせによるホスホ-ERKシグナル伝達の阻害2つまたは3つのビン上述のビン1、ビン2、および3の各々から1つの抗体を選択することにより、非重複抗EGFR抗体の組み合わせが、A431腫瘍細胞中のpERK阻害によって測定されるEGFR媒介性シグナル伝達を阻害する能力について、その組み合わせを試験した。ビン1ビン3図18Aおよび18Bまたはビン1ビン2の抗体図18Cの図示される等モル濃度の組み合わせとともにA431細胞を2時間インキュベートし、ホスホ-ERKのELISAにより細胞溶解物を分析した。結果は、全てのペアの組み合わせがpERKシグナル伝達の完全な阻害を引き起こすが、阻害曲線のIC90で異なる有効性を示すことを示すものである。実施例8:非重複エピトープの2つまたは3つの抗EGFR抗体の組み合わせによるERKリン酸化の阻害抗体の組み合わせが、pERK阻害によって測定されるEGFRシグナル伝達を阻害する能力について、実施例7および上記方法の節に記載されるようにさらなる実験を行い、A431細胞を等モル濃度のビン1/ビン2の抗体図19A、ビン1/ビン2、もしくはビン1/ビン3の抗体のダブルのペアの組み合わせ図19B、またはビン1、ビン2、およびビン3の抗体の3つの組み合わせ図19Aを用いて処理した。ビン1ビン2の抗体、ビン1ビン3の抗体、またはビン1ビン2ビン3の抗体の組み合わせを用いた処理は、全て、pERKの生成における用量依存性の減少を示した。図19Aに示すように、非重複エピトープの等モル濃度の3つの抗体の組み合わせは、ERKの活性化を完全に阻害した。抗EGFR抗体セツキシマブと比較した場合、抗体cbビン1およびcdビン2の2つ組の組み合わせは、阻害曲線のIC50およびIC90でpERKシグナル伝達の減少において100倍および1000倍高い有効性を示した図19B。さらに、2つ組の混合物がpERKシグナル伝達を完全に阻害したのに対し、セツキシマブは、最も多い用量でも最大阻害には達しなかった50のみ。実施例9:非重複エピトープの2つの抗EGFR抗体の等モル濃度および非等モル濃度の組み合わせによるホスホ-ERKシグナル伝達の阻害異なる比率μg/mLの抗体ペアcbおよびcd図20A、cbおよびch図20B、cbおよびci図20C、ならびにcaおよびcd図20Dを用いてA431細胞を処理し、抗体ペアの組み合わせがEGFRシグナル伝達を阻害する能力pERK阻害によって測定されるを測定した。個別に用いた場合第2の抗体を含まず単独で300μg/mL、ビン2cdならびにビン3chおよびciからの抗EGFR抗体は、pERKシグナル伝達の減少において効力を示さなかったのに対し図20A、20B、および20C、ビン1からの抗体cbおよびcaは、有効性の向上を示した。全ての場合において、2つ組の組み合わせは、pERKシグナル伝達の完全な阻害をもたらした。等モル濃度から遠ざかるように比率を推移させた場合、caおよびcdの2つ組を除いて、混合物の効力において等しい推移は見られなかった図20D。これらの結果は、単一抗体成分に対する混合物の強度の向上と、インビトロでのシグナル伝達の完全な阻害に寄与する各成分の少なくとも10の認容性を示している。すなわち、cbchの27030μg/mLの比率は、150150μg/mLの組み合わせに対する強度に等しい。これらのデータの概要を、ヒートマップによって表す図21:X軸列は、抗体の濃度を示し、Y軸行は、示す比率で組み合わされた抗体のペアを示し、Z軸平面内は、ホスホ-ERKの活性比をグレースケールで示す。Z軸のカラーマップは、高いホスホ-ERK活性を白色で、低い活性を黒色で表し、そして中間的な活性をグレーの色調で表す。試料の値は、それらが分析されるELISAプレート上のEGFリガンド対照の平均値に対して独立して正規化し、全プレートにわたるEGFリガンド対照/-の平均値を左上に示す。実施例10:単一によるおよびビン1ビン2またはビン1ビン3の抗体のペアの組み合わせによるホスホ-EGF受容体およびホスホ-ERKのシグナル伝達の阻害、ならびにセツキシマブ、ニモツズマブ、およびザルツムマブ等の他の既知の抗EGFR抗体との比較A431細胞を単一抗体または抗体ペアで処理し、それらがEGFR依存性シグナル伝達を阻害する能力を、既知の抗EGFR抗体であるセツキシマブ、ニモツズマブ、またはザルツムマブの能力と比較した。pERKおよびpEGFRのシグナル伝達について上述のように実験を行い、その結果を図22A~Cに示す。当該技術分野で既知である抗体、ならびに混合物の個々の成分cb、cd、およびchと比較して、ホスホ-ERKシグナル伝達を完全に阻害する上で、ビン1/ビン2の抗体cbおよびcd図22Aならびにビン1/ビン3の抗体cbおよびch図22Cのみが有効であった。ニモツズマブを除いて、混合物を含む全ての抗体は、ホスホ-EGF受容体のシグナル伝達の完全な阻害に有効であった図22B。実施例11:インビトロでの腫瘍細胞増殖の阻害上述の方法またはそれらを若干変更した方法によって、インビトロでの腫瘍細胞増殖の阻害を分析する。A431細胞類表皮またはH1975細胞NSCLCを250、500、1000、または200細胞/ウェルで播種し、1μMの抗体の組み合わせで処理した。図23A~Dは、代謝的に活性な細胞の指標である、存在するATPの定量化に基づいて培養物中の生存細胞の数を測定するCellTiter-Glo登録商標CTGLuminescentCellViabilityAssayPromegaCorporationを用いた細胞増殖の阻害を示す。図23Aは、EGFリガンドの存在下または非存在下において、ビン1および3の抗体ca抗体caで、またはEGFR細胞外ドメインへの結合について抗体caおよびchと競合するが、無血清培地SFMまたはアッセイ培地単独1FCSでは競合しない抗体で処理したH1975細胞の増殖の阻害を示す。図23Bは、図23Aと同様の結果を示すが、ビン1および2の抗体caおよびcdの組み合わせである。図23CH1975細胞および23DA431細胞は、ビン1/2/3の抗体のトリオcacdchで処理した細胞の細胞増殖の阻害を示す。この実施例で用いた全ての組み合わせは、抗体混合物がインビトロで腫瘍細胞の増殖を阻害する能力を明確に示している。実施例12:インビボでの異種移植片モデルにおける腫瘍増殖の阻害インビボでの腫瘍増殖の阻害を評価するために、類表皮腫瘍細胞株A431図24AおよびNSCLC腫瘍細胞株H1975図24Bを用いたマウス異種移植片腫瘍モデルにおいて、抗体ペアを用いる。75匹の4~5週齢のnu/nuマウスに、3.5x106細胞/マウスのA431細胞または2.0x106細胞/マウスのH1975細胞を皮下注射移植する。移植後8日目A431細胞または4日目H1975細胞に開始してマウスに抗体ペアを投与する。前述の方法またはそれらを若干変更した方法を用いたところ、ビン1/2cbcdおよびビン1/3cbch、cachの抗体ペアは、A431細胞において少なくともセツキシマブと同じだけ腫瘍増殖の阻害に効果的であった。全ての処置は、腫瘍の停止状態をもたらし、それは、投与計画を中止した後の回復期間を通じて維持された。しかしながら、H1975細胞では、全ての処置が腫瘍の停止状態をもたらしたが、cachペアで処置したマウスを除く全てのマウスにおいて、投薬中止後に腫瘍が急速に退縮した。実施例13:抗EGFR抗体による、細胞へのEGFの結合の阻害A431細胞を、T-150cm2組織培養フラスコ内の上述のDMEM完全培地中でコンフルエントに増殖させ、10mLの氷冷PBSで洗浄し、細胞表面タンパク質のトリプシン処理を最小限に抑えるために注意深く剥離をモニタリングしながら、5mLの0.25トリプシンで剥離させる約5~7分。細胞が浮き上がり始めたら、すぐに15mLの完全培地を添加してトリプシンを希釈し、懸濁液中の細胞を50mL円錐形遠心分離管に移し、1200rpmで7分間遠心分離する。上清を廃棄し、細胞ペレットをフローサイトメトリー用バッファー2ウシ胎仔血清、1XPBSバッファー中の0.1アジ化ナトリウム、pH7.2に再懸濁させる。100μLの体積中、30,000細胞/ウェルの密度で細胞を96ウェルV底プレートに移す。各技術的複製物のために合計12個のウェルに播種しリガンド希釈曲線用に11個、リガンドのみの対照用に1個、各ウェルに4μMの濃度の抗体反応混合物100μLを添加するがウェル内の最終濃度は2μM、例外として、リガンドのみの対照ウェルにはフローサイトメトリーバッファーのみを添加する。細胞を抗体とともに室温で1時間インキュベートした後、ビオチン-XX-EGFリガンドのフローサイトメトリー用バッファーInvitrogenカタログ番号E3477の3倍希釈物100μLを、600nMから開始して添加しウェル内の最終濃度は200nM~0.003nMの範囲、室温で10分間インキュベートする。次いで、100μLの氷冷フローサイトメトリー用バッファーで細胞を洗浄し、1800rpmで2分間遠心分離し、上清を廃棄する。次いで、フローサイトメトリー用バッファー中のStreptavidin-AlexaFluor647結合体Invitrogenカタログ番号S21374の1:500希釈物100μL中、30分間室温で細胞をインキュベートする。このステップの後、100μLの氷冷フローサイトメトリー用バッファー中で細胞を洗浄し、1800rpmで2分間遠心分離した後、上清を廃棄する。洗浄ステップを繰り返し、80μLの固定バッファー2ウシ胎仔血清、1XPBS中の2パラホルムアルデヒド、pH7.2に細胞を再懸濁し、96ウェルU底プレートに移す。結合したリガンドを有する細胞をフローサイトメトリーにより検出し、生細胞およびFL4チャネルAlexa-Fluor647の信号を測定する陽性細胞をゲートでコントロールするFSC/SSC。本明細書に開示される方法またはそれらを若干変更した方法を用いて得られた結果を図25に示し、成果をその説明で記載する。均等物当業者は、日常的な実験を用いるだけで、本明細書に記載される特定の実施形態の多くの均等物を認識するか、または確認することができる。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが企図される。いずれかの複数の従属請求項に開示される実施形態のいずれの組み合わせも、本開示の範囲内であることが企図される。参照による組み込み上文で言及した全ての特許、係属中の特許出願、および特許公報は、参照により、それらの全体が本明細書に組み込まれる。付表A抗癌剤SEQIDNO:58ヒトEGFR"