"B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に特異的に結合する抗体、および抗ウイルス性サイトカインを含む、融合タンパク質。B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントが、SEQIDNO:01のアミノ酸残基182-190のアミノ酸配列を有するか、あるいはSEQIDNO:02のアミノ酸残基18-27のアミノ酸配列を有する、請求項1に記載の融合タンパク質。抗体が、B型肝炎ウイルスに感染した肝細胞に特異的に結合する、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗ウイルス性サイトカインが、I型および/またはII型インターフェロンから選択される、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。融合タンパク質が、CD8保有T細胞と同じ特異性を有する、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体が、血清中のB型肝炎ウイルス抗原には特異的に結合しない、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体がモノクローナル抗体である、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体が、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体と結合する抗体フラグメントである、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体がaSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むCDR-H3、bSEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むCDR-L3、およびcSEQIDNO:05のアミノ酸配列を含むCDR-H2を含むか、あるいは抗体がaSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むCDR-H3、bSEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むCDR-L3、およびcSEQIDNO:33のアミノ酸配列を含むCDR-H2を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体がaSEQIDNO:04のアミノ酸配列を含むCDR-H1、bSEQIDNO:05のアミノ酸配列を含むCDR-H2、およびcSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むCDR-H3を含むか、あるいは抗体がaSEQIDNO:32のアミノ酸配列を含むCDR-H1、bSEQIDNO:33のアミノ酸配列を含むCDR-H2、およびcSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むCDR-H3を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体がaSEQIDNO:08のアミノ酸配列を含むCDR-L1、bSEQIDNO:09のアミノ酸配列を含むCDR-L2、およびcSEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むCDR-L3を含むか、あるいは抗体がaSEQIDNO:36のアミノ酸配列を含むCDR-L1、bSEQIDNO:37のアミノ酸配列を含むCDR-L2、およびcSEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むCDR-L3を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体がiSEQIDNO:07のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVH配列;SEQIDNO:11のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVL配列;またはSEQIDNO:07のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVH配列、およびSEQIDNO:11のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVL配列;あるいは、iiSEQIDNO:35のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVH配列;SEQIDNO:39のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVL配列;またはSEQIDNO:35のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVH配列、およびSEQIDNO:39のアミノ酸配列もしくはそのヒト化バリアントに対して少なくとも95の配列同一性を有するVL配列;を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体が、SEQIDNO:07の、もしくはSEQIDNO:35のVH配列、またはそのヒト化バリアントを含む、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体が、SEQIDNO:11の、もしくはSEQIDNO:39のVL配列、またはそのヒト化バリアントを含む、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。1または2つの抗体重鎖がSEQIDNO:13のアミノ酸配列を有する、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。1または2つの抗体軽鎖がSEQIDNO:14のアミノ酸配列を有する、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。1または2つの抗体軽鎖がSEQIDNO:15のアミノ酸配列を有する、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗体が、全長ヒトIgG1抗体であるか、あるいはトランケート形ヒトガンマ-1重鎖定常部を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の融合タンパク質。請求項1に記載の融合タンパク質をコードする単離された核酸。請求項16または18に記載の抗体鎖をコードする単離された核酸。請求項17に記載の抗体軽鎖をコードする単離された核酸。請求項20、または21および22のいずれか1項に記載の核酸を含む宿主細胞。請求項23に記載の宿主細胞を、融合タンパク質が産生されるように培養することを含む、融合タンパク質の調製方法。下記の工程:a請求項23に記載の宿主細胞を用意する;b用意した細胞を培養する;c細胞または培地から融合タンパク質を回収し、それにより融合タンパク質を調製する;を含む、請求項24に記載の方法。請求項1~19のいずれか1項に記載の融合タンパク質および医薬的に許容できるキャリヤーを含む医薬配合物。医薬として使用するための、請求項1~19のいずれか1項に記載の融合タンパク質。B型肝炎ウイルス感染症を処置する際に使用するための、請求項1~19のいずれか1項に記載の融合タンパク質。抗ウイルス性サイトカインをB型肝炎ウイルスに感染した肝細胞へ送達する際に使用するための、請求項1~19のいずれか1項に記載の融合タンパク質。医薬の製造における、請求項1~19のいずれか1項に記載の融合タンパク質の使用。医薬がB型肝炎ウイルス感染症の処置のためのものである、請求項30に記載の使用。B型肝炎ウイルス感染症が慢性B型肝炎ウイルス感染症である、請求項31に記載の使用。医薬が、抗ウイルス性サイトカインをB型肝炎ウイルスに感染した肝細胞へ送達するためのものである、請求項30に記載の使用。B型肝炎ウイルス感染症を伴う個体を処置する方法であって、その個体に有効量の請求項1~19のいずれか1項に記載の融合タンパク質を投与することを含む方法。抗ウイルス性サイトカインを個体においてB型肝炎ウイルスに感染した肝細胞へ送達する方法であって、その個体に有効量の請求項1~19のいずれか1項に記載の融合タンパク質を投与して、抗ウイルス性サイトカインをB型肝炎ウイルスに感染した肝細胞へ送達することを含む方法。I.定義アクセプターヒト枠組み構造は、後記に定義するヒト免疫グロブリン枠組み構造またはヒトコンセンサス枠組み構造に由来する軽鎖可変ドメインVL枠組み構造または重鎖可変ドメインVH枠組み構造のアミノ酸配列を含む、ヒト抗体枠組み構造を意味する。ヒト免疫グロブリン枠組み構造またはヒトコンセンサス枠組み構造に由来するアクセプターヒト枠組み構造領域は、それと同じアミノ酸配列を含んでもよく、あるいはそれはアミノ酸配列の変化を含んでもよい。ある態様において、アミノ酸の変化の個数は10以下、9以下、8以下、7以下、6以下、5以下、4以下、3以下、または2以下である。ある態様において、VLアクセプターヒト枠組み構造の配列は、VLヒト免疫グロブリン枠組み構造配列またはヒトコンセンサス枠組み構造配列と同一である。用語親和性アフィニティーは、ある分子たとえば抗体とそれの結合パートナーたとえば抗原の間の非共有結合相互作用の総和を意味する。分子Xの、それのパートナーYに対する親和性は、一般に解離定数KDにより表示できる。親和性は、本明細書に記載するものを含めた当技術分野で既知の一般法により測定できる。アフィニティー成熟抗体は、1以上の超可変部HVRまたは相補性決定領域CDRにおいて、そのような変異をもたない親抗体と比較して1以上の変異をもつ抗体を表わし、そのような変異は抗原に対する抗体の親和性の改善、すなわち抗体の結合部位とそれの結合パートナー抗原の間の解離定数の低下をもたらす。用語アミノ酸は、一群のカルボキシα-アミノ酸を意味し、それらは直接に、または前駆体の形で、核酸によりコードすることができる。個々のアミノ酸は、3つのヌクレオチド、いわゆるコドンまたは塩基トリプレットからなる核酸によりコードされる。各アミノ酸は、少なくとも1つのコドンによりコードされる。これは遺伝子コードの縮重として知られている。本出願内で用いる用語アミノ酸は、下記のものを含む天然のカルボキシα-アミノ酸を意味する:アラニン三文字コード:ala、一文字コード:A、アルギニンarg、R、アスパラギンasn、N、アスパラギン酸asp、D、システインcys、C、グルタミンgln、Q、グルタミン酸glu、E、グリシンgly、G、ヒスチジンhis、H、イソロイシンile、I、ロイシンleu、L、リジンlys、K、メチオニンmet、M、フェニルアラニンphe、F、プロリンpro、P、セリンser、S、トレオニンthr、T、トリプトファンtrp、W、チロシンtyr、Y、およびバリンval、V。用語B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体を十分な親和性で結合することができる抗体を表わし、したがってその抗体は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体をディスプレイしている細胞を標的とする際の診断剤および/または療法剤として有用である。ある態様において、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体は、≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM、または≦0.001nMたとえば、10-8M以下、たとえば、10-8Mから10-13Mまで、たとえば10-9Mから10-13Mまでの解離定数Kdをもつ。本明細書中で用いる用語抗体は、最も広い意味で用いられ、種々の抗体構造体を包含し、それにはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体たとえば、二重特異性抗体、および抗体フラグメントそれらが目的の抗原結合活性を示す限りが含まれるが、これらに限定されない。天然抗体は、多様な構造をもつ分子である。たとえば、天然IgG抗体は約150,000ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、2つの同一の軽鎖および2つの同一の重鎖から構成され、それらがジスルフィド結合している。N末端からC末端へ、それぞれの重鎖は可変ドメインVH可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる、続いて3または4つの定常ドメインCHI、CH2、CH3、および場合によりCH4をもつ。同様に、N末端からC末端へ、それぞれの軽鎖は可変ドメインVL可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる、続いて定常軽鎖CLドメインをもつ。抗体の軽鎖は、それの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパκSEQIDNO:16およびラムダλSEQIDNO:17と呼ばれる2タイプのひとつに割り当てることができる。用語抗体フラグメントは、無傷抗体以外の分子であって無傷抗体の一部分を含むものを表わし、その部分は無傷抗体が結合する抗原を結合する。抗体フラグメントの例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない:Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、Fab’2、ディアボディー、直鎖抗体、一本鎖抗体分子たとえばscFv、および抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体を表わす。基準抗体としての同じエピトープに結合する抗体は、競合アッセイにおいて基準抗体がそれの抗原に結合するのを50以上ブロックする抗体を表わし、逆に基準抗体は、競合アッセイにおいて抗体がそれの抗原に結合するのを50以上ブロックする。競合アッセイの例は本明細書に示されている。用語抗ウイルス性サイトカインは、感染後に抗ウイルス応答の樹立を仲介し、炎症細胞を感染部位へ動員するサイトカインを意味する。抗ウイルス性サイトカインは、I型インターフェロンIFN-αおよびIFN-β、II型IFN-γおよびIII型IFN-λまたはインターロイキンIL-28/29インターフェロンを含む。インターフェロンα、β、γおよびλは、ウイルス感染に対する先天性免疫応答に際して産生される重要なインターフェロンである。用語キメラ抗体は、重鎖および/または軽鎖の一部分が特定の供給源または種から誘導され、一方で重鎖および/または軽鎖の残りの部分が異なる供給源または種から誘導された抗体を意味する。ある態様において、キメラ抗体は第1の供給源または種から誘導された可変ドメインを含み、一方で重鎖および軽鎖の残りの部分は第2の異なる供給源または種から誘導される。抗体のクラスは、それの重鎖がもつ定常ドメインまたは定常部の型を表わす。5つの主要クラスのヒト抗体:IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgMがあり、これらのうち幾つかはさらにサブクラスイソ型、たとえばIgG1SEQIDNO:18および19、IgG2、IgG3、IgG4SEQIDNO:21、IgA1、およびIgA2に分類される。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。エフェクター機能は、抗体のFc領域に起因する生物活性を意味し、それらは抗体のイソ型に伴って異なる。抗体のエフェクター機能の例には下記のものが含まれる:C1q結合性および補体依存性細胞傷害CDC、Fc受容体結合FcRn、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害ADCC、抗体依存性マクロファージ仲介性細胞傷害ADMC、細胞表面受容体たとえば、B細胞受容体のダウンレギュレーション、およびB細胞活性化。ある作用物、たとえば医薬配合物の有効量は、希望する治療または予防の結果または効果を、必要な投与量で必要な時間達成するのに有効な量を意味する。用語Fc領域は、免疫グロブリン重鎖の定常部の少なくとも一部分を含むC末端領域を意味する。この用語には、天然配列Fc領域およびFc領域バリアントが含まれる。1態様において、ヒトIgG重鎖Fc領域は、重鎖のほぼアミノ酸残基226Cysまたはほぼアミノ酸残基230Proからカルボキシ末端にまで及ぶ。ただし、Fc領域のC末端リジン残基Lys447は存在してもよく、存在しなくてもよい。別に特定しない限り、抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸残基のナンバリングはEUナンバリング方式EUインデックスとも呼ばれるに従う;KabatetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thedVols13PublicHealthServiceNationalInstitutesofHealthPublicationNo913242BethesdaMDに記載。用語ヒト由来の定常部は、サブクラスIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のヒト抗体の重鎖定常部たとえば、CH1ドメイン、ヒンジ部、CH2ドメイン、CH3ドメイン、および場合によりCH4ドメインを含む、および/または軽鎖定常部κまたはλ領域CLドメインを意味する。そのような定常部は当技術分野で周知であり、たとえばKabatEAにより記載されている214218KabatEAetalProcNatlAcadSciUSA7227852788を参照。IgG4サブクラスの抗体は低いFc受容体FcγRIIIa結合を示すが、他のIgGサブクラスの抗体は強い結合を示す。しかし、Pro238、Asp265、Asp270、Asn297Fc炭水化物の喪失、Pro329、Leu234、Leu235、Gly236、Gly237、Ile253、Ser254、Lys288、Thr307、Gln311、Asn434、およびHis435は、変異すれば同様に低いFc受容体結合を示す残基である65916604LundJetalFASEBJ9115119MorganAetalImmunology86319324EP0307434。1態様において、融合タンパク質の抗体はヒト由来の定常部をもつ。他の態様において、融合タンパク質の抗体はSEQIDNO:18~SEQIDNO:22から選択される定常部をもつ。同様にある態様において、融合タンパク質の抗体はSEQIDNO:18または19のアミノ酸配列を有する定常部をもつ。枠組み構造またはFRは、超可変部HVR残基または相補性決定領域CDR残基以外の可変ドメイン残基を意味する。可変ドメインのFRは、一般に4つのFRドメインからなる:FR1、FR2、FR3、およびFR4。したがって、HVRCDRおよびFR配列はVHまたはVL中に一般に下記の順序でみられる:FR1-H1L1-FR2-H2L2-FR3-H3L3-FR4。用語全長抗体、無傷抗体、全抗体は、本明細書中で互換性をもって用いられ、天然抗体の構造に実質的に類似する構造をもつか、あるいは本明細書中で定義するFc領域を含む重鎖をもつ抗体を意味する。用語宿主細胞、宿主細胞系、および宿主細胞培養物は、互換性をもって用いられ、外因性核酸が導入された細胞を表わし、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には形質転換体、形質転換された細胞、およびトランスフェクションされた細胞が含まれ、これは初代形質転換細胞、および継代数に関係なくそれに由来する子孫を含む。子孫は核酸内容が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異体を含むことができる。元の形質転換細胞においてスクリーニングまたは選択したものと同じ機能または生物活性をもつ変異子孫は、本発明に含まれる。ヒト抗体は、ヒトもしくはヒト細胞により産生された抗体のもの、またはヒト抗体レパトアもしくは他のヒト抗体コード配列を利用するヒト以外の供給源から誘導された抗体のものに相当するアミノ酸配列をもつ抗体である。ヒト抗体のこの定義は、具体的にはヒト以外の抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒトコンセンサス枠組み構造は、ヒト免疫グロブリンVLまたはVH枠組み構造配列の選択に際して最も共通にみられるアミノ酸残基を示す枠組み構造である。一般に、ヒト免疫グロブリンVLまたはVH枠組み構造配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行なわれる。一般に、その配列サブグループは、KabatetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thedPublicHealthServiceNIHPublication913242BethesdaMDvols13中のサブグループである。1態様において、VLに関して、サブグループは前掲のKabatetal中のサブグループ、カッパIである。1態様において、VHに関して、サブグループは前掲のKabatetal中のサブグループIIIである。用語ヒト化抗体は、ヒト以外のHVR、特にCDR由来のアミノ酸残基、およびヒトFR由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を表わす。ある態様において、ヒト化抗体は少なくとも1つ、一般的には2つの可変ドメインの実質的に全部を含み、その際、HVRCDRの全部または実質的に全部がヒト以外の抗体のものに相当し、FRの全部または実質的に全部がヒト抗体のものに相当する。ヒト化抗体は、場合によりヒトに由来する抗体定常部の少なくとも一部分を含んでもよい。ある抗体、たとえばヒト以外の抗体のヒト化バリアントは、ヒト化操作を受けた抗体を表わす。ヒト化抗体または抗体のヒト化バリアントは、FRおよび定常部にアミノ酸変化を含んでもよい。本明細書中で用いる用語超可変部またはHVRは、配列が超可変性であり、および/または構造的に規定されたループ超可変ループを形成する、抗体可変ドメインの各領域を表わす。一般に、天然の4鎖抗体は6つのHVRを含み、それらのうち3つはVH中にありH1、H2、H3、3つはVL中にあるL1、L2、L3。HVRは、一般に、超可変ループ由来または相補性決定領域CDR由来のアミノ酸残基を含み、最高の配列可変性をもつものであり、および/または抗原認識に関与する。超可変ループは、1態様において、VLドメインの26-32L1、50-52L2、91-96L3、ならびにVHドメインの26-32H1、53-55H2および96-101H3のアミノ酸残基にみられる901917。CDRCDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3は、1態様において、VLドメインについて24-34L1、50-56L2、89-97L3、ならびにVHドメインの31-35BH1、50-65H2および95-102H3のアミノ酸残基にみられる。VH中のCDR1を除いて、CDRは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。CDRは、抗原と接触する残基である特異性決定残基またはSDRをも含む。SDRは、abbreviated-CDR、またはa-CDRと呼ばれるCDR領域に含まれる。a-CDRa-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2、およびa-CDR-H3は、1態様において、VLドメインの31-34L1、50-55L2、89-96L3、ならびにVHドメインの31-35BH1、50-58H2、および95-102H3のアミノ酸残基にみられる16191633を参照。別に指示しない限り、可変ドメインのHVR残基および他の残基たとえば、FR残基は、本明細書中で、前掲のKabatetalに従ってナンバリングされる。イムノコンジュゲートは、細胞毒物これらに限定されないを含めた1以上のヘテロロガス分子にコンジュゲートした抗体である。個体または対象は、哺乳動物である。哺乳動物には霊長類たとえば、ヒト、およびヒト以外の霊長類、たとえばサル、ウサギ、およびげっ歯類たとえば、マウスおよびラットが含まれるが、これらに限定されない。ある態様において、個体または対象はヒトである。単離された抗体は、それの自然環境の構成要素から分離されたものである。ある態様において、抗体は、たとえば電気泳動法たとえば、SDS-PAGE、等電点電気泳動IEF、毛細管電気泳動またはクロマトグラフィー法たとえば、イオン交換または逆相HPLCにより測定して95または99を超える純度にまで精製される。抗体純度の評価方法の総説については、たとえばFlatmanSetalJChromatogrB8487987を参照。単離された核酸は、それの自然環境の構成要素から分離された核酸分子を表わす単離された核酸には、その核酸分子を通常収容している細胞内に収容されている核酸分子ではあるけれどもその核酸分子が染色体外またはそれの自然界での染色体位置とは異なる染色体位置に存在するものが含まれる。B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に特異的に結合する抗体をコードする、単離された核酸は、抗体の重鎖および軽鎖またはそのフラグメントをコードする1以上の核酸分子を表わし、これには単一ベクター中または個別ベクター中にある核酸分子単数または複数、および宿主細胞内の1以上の位置に存在する核酸分子単数または複数が含まれる。本明細書中で用いる用語モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を表わす;すなわち、たとえば自然に起きる変異を含むかまたはモノクローナル抗体調製物の調製に際して生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、その集団を構成する抗体は同一であり、および/または同じエピトープを結合する;そのようなバリアントの存在量は一般にわずかである。一般に異なる決定基エピトープを指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基を指向する。したがって、修飾語モノクローナルは、その抗体の性質が実質的に均一な抗体集団から得られたものであることを示し、いずれか特定の方法による抗体産生を要求すると解釈すべきではない。たとえば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は多様な手法で作製でき、これにはハイブリドーマ法、単一抗体産生細胞を分離する方法、組換えDNA法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部分を含むトランスジェニック動物を使用する方法が含まれるが、これらに限定されない;モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法および他の方法例を本明細書に記載する。裸の抗体は、ヘテロロガス部分たとえば、細胞毒性部分または放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を表わす。裸の抗体は、医薬配合物中に存在する場合もある。天然抗体は、自然界でみられる多様な構造をもつ免疫グロブリン分子を表わす。たとえば、IgG抗体は約150,000ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、2つの同一の軽鎖および2つの同一の重鎖から構成され、それらがジスルフィド結合している。N末端からC末端へ、それぞれの重鎖は可変部VH可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる、続いて3または4つの定常ドメインCHI、CH2、CH3、および場合によりCH4をもつ。同様に、N末端からC末端へ、それぞれの軽鎖は可変部VL可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる、続いて定常軽鎖CLドメインをもつ。抗体の軽鎖は、それの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパκおよびラムダλと呼ばれる2タイプのひとつに割り当てることができる。用語パッケージ挿入物は、療法製剤の市販パッケージに通常装入される指示を表わすために用いられ、それらはそのような療法製剤の使用に関して、適応症、用途、投与量、投与法、併用療法、禁忌および/または警告についての情報を含む。基準ポリペプチド配列に対するアミノ酸配列同一性パーセントは、それらの配列をアラインさせ、最大の配列同一性パーセントを達成するために必要であればギャップを導入した後に、いずれかの保存的置換を配列同一性の一部として考慮せずに、基準ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセントと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定するためのアラインメントは、当業者が容易になしうる多様な方法で、たとえば公に入手できるコンピューターソフトウェア、たとえばBLAST、BLAST-2、ALIGNまたはMegalignDNASTARソフトウェアを用いて達成できる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するのに必要ないずれかのアルゴリズムを含めて、配列をアラインさせるのに適したパラメーターを決定できる。しかし、本発明の目的に関して、アミノ酸配列同一性値は配列比較コンピュータープログラムALIGN-2を用いて得られる。ALIGN-2配列比較コンピュータープログラムはGenentech,Inc.により作成され、ソースコードはユーザードキュメンテーションと共にU.S.CopyrightOfficeワシントンD.C.,20559に提出されており、そこにU.S.Copyright登録No.TXU510087で登録されている。ALIGN-2プログラムはGenentech,Inc.カリフォルニア州サウスサンフランシスコから公に入手でき、あるいはソースコードからコンパイルできる。ALIGN-2プログラムは、デジタルUNIXV4.0Dを含めたUNIXオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルすべきである。すべての配列比較パラメーターがALIGN-2プログラムにより設定され、変動しない。ALIGN-2をアミノ酸配列比較に用いる場合、あるアミノ酸配列Bと、Bとの、またはBに対する、あるアミノ酸配列Aのアミノ酸配列同一性これは、あるアミノ酸配列Bと、Bとの、またはBに対する、特定のアミノ酸配列同一性をもつあるアミノ酸配列Aと言い換えることができるは、下記に従って計算される:分数X/Y×100ここで、Xは配列アラインメントプログラムALIGN-2によりそのプログラムのAとBのアラインメントにおいて同一マッチとして採点されたアミノ酸残基の数であり、YはB中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと等しくない場合、Bに対するAのアミノ酸配列同一性はAに対するBのアミノ酸配列同一性と等しくないことは認識されるであろう。別に明記しない限り、本明細書中で用いるすべてのアミノ酸配列同一性はすぐ上のセクションに記載したようにALIGN-2コンピュータープログラムを用いて得られたものである。用語医薬配合物は、それに含有される有効成分の生物活性が有効であるような形態であり、かつその配合物を投与する予定の対象に対して許容できないほど有毒な他の成分を含有しない製剤を表わす。医薬的に許容できるキャリヤーは、医薬配合物中の有効成分以外の成分であって、対象に対して無毒性のものを表わす。医薬的に許容できるキャリヤーには緩衝剤、賦形剤、安定剤、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。本明細書中で用いる処置およびその文法的変形、たとえば処置するまたは処置することは、処置される個体の自然経過を変異させる目的での臨床介入を表わし、予防のために、または臨床病態の経過中に実施できる。処置の望ましい効果には下記のものが含まれるが、それらに限定されない:疾患の発症または再発の阻止、症状の軽減、疾患のいずれか直接的または間接的な病的結果の低減、転移の阻止、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または一時的緩和、および予後の寛解または改善。ある態様において、本発明の抗体を用いて疾患の発症を遅延させ、または疾患の進行を遅らせる。用語I型インターフェロンは、IFNAR1およびIFNAR2タンパク質鎖IFN-α受容体、IFNARからなる細胞表面受容体複合体に結合するインターフェロン類を意味する。ヒトに存在するI型インターフェロン類には、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンωが含まれる。用語II型インターフェロンは、インターフェロン-ガンマ受容体IFNGRに結合するインターフェロン類を意味する。ヒトに存在するII型インターフェロン類には、インターフェロンγが含まれる。用語III型インターフェロンは、クラスIIサイトカイン受容体CIICRIL10R2およびIFNLR1からなる受容体複合体を介してシグナル伝達するインターフェロン類を意味する。III型インターフェロングループは、IFN-λ1、IFN-λ2およびIFN-λ3それぞれ、インターロイキン-29、インターロイキン-28Aおよびインターロイキン-28Bとも呼ばれると呼ばれる3種類のIFN-λ分子からなる。用語可変部または可変ドメインは、抗体重鎖または軽鎖の、抗原への抗体結合に関与するドメインを表わす。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインそれぞれ、VHおよびVLは、一般に類似の構造をもち、各ドメインは4つの保存された枠組み構造領域FRおよび3つの超可変部HVRを含むを参照。抗原結合特異性をもたらすには単一のVHまたはVLで十分な可能性がある。さらに、特定の抗原を結合する抗体に由来するVHまたはVLドメインを用いてその抗原を結合する抗体を単離し、相補的VHまたはVLドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングすることができる880887ClarksonTetalNature352624628を参照。本明細書中で用いる用語ベクターは、それに連結させた他の核酸を増殖させることができる核酸分子を表わす。この用語には、自己複製核酸構造体としてのベクター、およびそれを導入した宿主細胞のゲノム中に組み込まれたベクターが含まれる。あるベクターは、それらが作動可能な状態で連結した核酸の発現を指令することができる。そのようなベクターを本明細書中で発現ベクターと呼ぶ。II.組成物および方法本明細書中に報告する融合タンパク質は、肝炎が治癒した患者からのHBV特異的CD8T細胞に類似する感受性を示した。それらは、慢性HBV患者に由来するHBV感染した肝細胞をエクスビボでも認識する。この認識は、循環HBV抗原の存在によって影響されなかった。重要なことに、インターフェロン-アルファへの抗体融合は、HBV抗原を発現する細胞に対するその抗体の感受性を変異させず、一方、融合したインターフェロン-アルファのそれ自身の受容体に対する親和性は低下した。HBV抗原を発現する細胞に対するインターフェロン-アルファ活性は顕著に増強されることが見出された。本明細書中に報告するように、MHC/ペプチド部位をTCRLでプレブロッキングすると、融合タンパク質のインターフェロン-アルファ活性は妨げられた図9。HBV感染細胞に対する抗体の特異性を図5に示す。図5Aでは、B型肝炎ウイルスタンパク質のSEQIDNO:31のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体だけが結合を示す;図Bでは、B型肝炎ウイルスタンパク質のSEQIDNO:30のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体だけが結合を示す。感染した肝細胞上のペプチド-MHC複合体の認識を図6および7に示す。図8は、本明細書中に報告する融合タンパク質が、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する非コンジュゲート抗体の特異性を維持することを示す。1観点において、本発明は一部は、たとえば、B型肝炎ウイルスに感染した肝細胞へ抗ウイルス性サイトカインを送達するための、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体、および抗ウイルス性サイトカインを含む、融合タンパク質の開発に基づく。本発明の融合タンパク質は、たとえばB型肝炎ウイルスに感染した対象の処置に有用である。1観点において、HBV感染細胞上に提示されるHBVエンベロープエンベロープ183-191/A201およびHBVコアコア18-27/A201抗原のペプチド/MHC-Iに対する特異性をもつ抗体を含む融合タンパク質を報告する。この抗体は、HBV特異的CD8T細胞のT細胞受容体認識を模倣する。A.B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体、および抗ウイルス性サイトカインを含む、融合タンパク質の例1観点において、本発明は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体、および抗ウイルス性サイトカインを含む、融合タンパク質を提供する。1観点において、本発明は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体を含む融合タンパク質であって、下記のものから選択される少なくとも1、2、3、4、5または6つのHVRを含むものを提供する:aSEQIDNO:04のアミノ酸配列を含むHVR-H1、bSEQIDNO:05のアミノ酸配列を含むHVR-H2、cSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むHVR-H3、dSEQIDNO:08のアミノ酸配列を含むHVR-L1、eSEQIDNO:09のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびfSEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むHVR-L3。1観点において、本発明は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体を含む融合タンパク質であって、下記のものから選択される少なくとも1、2、3、4、5または6つのHVRを含むものを提供する:aSEQIDNO:32のアミノ酸配列を含むHVR-H1、bSEQIDNO:33のアミノ酸配列を含むHVR-H2、cSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むHVR-H3、dSEQIDNO:36のアミノ酸配列を含むHVR-L1、eSEQIDNO:37のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびfSEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むHVR-L3。1観点において、本発明は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体を含む融合タンパク質であって、下記のものから選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVHHVR配列を含むものを提供する:aSEQIDNO:04のアミノ酸配列を含むHVR-H1、bSEQIDNO:05のアミノ酸配列を含むHVR-H2、およびcSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むHVR-H3。1態様において、抗体はSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むHVR-H3を含む。1態様において、抗体はSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むHVR-H3およびSEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むHVR-L3を含む。1態様において、抗体はSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むHVR-H3、SEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むHVR-L3、およびSEQIDNO:05のアミノ酸配列を含むHVR-H2を含む。1観点において、本発明は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体を含む融合タンパク質であって、下記のものから選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVHHVR配列を含むものを提供する:aSEQIDNO:32のアミノ酸配列を含むHVR-H1、bSEQIDNO:33のアミノ酸配列を含むHVR-H2、およびcSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むHVR-H3。1態様において、抗体はSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むHVR-H3を含む。1態様において、抗体はSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むHVR-H3およびSEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むHVR-L3を含む。1態様において、抗体はSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むHVR-H3、SEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むHVR-L3、およびSEQIDNO:33のアミノ酸配列を含むHVR-H2を含む。1観点において、本発明は、下記のものから選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVLHVR配列を含む抗体を含む融合タンパク質を提供する:aSEQIDNO:08のアミノ酸配列を含むHVR-L1、bSEQIDNO:09のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびCSEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むHVR-L3。1観点において、本発明は、下記のものから選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVLHVR配列を含む抗体を含む融合タンパク質を提供する:aSEQIDNO:36のアミノ酸配列を含むHVR-L1、bSEQIDNO:37のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびcSEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むHVR-L3。1観点において、本発明の融合タンパク質は、下記のものを含む抗体を含む:aiSEQIDNO:04のアミノ酸配列を含むHVR-H1、iiSEQIDNO:05のアミノ酸配列を含むHVR-H2、およびiiiSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むHVR-H3から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVHHVR配列を含むVHドメイン、ならびにbiSEQIDNO:08のアミノ酸配列を含むHVR-L1、iiSEQIDNO:09のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびiiiSEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むHVR-L3から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVLHVR配列を含むVLドメイン。1観点において、本発明の融合タンパク質は、下記のものを含む抗体を含む:aiSEQIDNO:32のアミノ酸配列を含むHVR-H1、iiSEQIDNO:33のアミノ酸配列を含むHVR-H2、およびiiiSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むHVR-H3から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVHHVR配列を含むVHドメイン、ならびにbiSEQIDNO:36のアミノ酸配列を含むHVR-L1、iiSEQIDNO:37のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびiiiSEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むHVR-L3から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つすべてのVLHVR配列を含むVLドメイン。1観点において、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体、および抗ウイルス性サイトカインを含む、融合タンパク質は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する下記の抗体を含む:SEQIDNO:07もしくはSEQIDNO:35のアミノ酸配列またはそのヒト化バリアントに対して少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、もしくは100の配列同一性を有する重鎖可変ドメインVHアミノ酸配列を含む抗体。ある態様において、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99の同一性を有するVHアミノ酸配列は、基準配列と比較して置換たとえば保存的置換、挿入または欠失を含むが、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する能力は保持している。特定の態様において、VHは下記のものから選択される1、2または3つのHVRを含む:aSEQIDNO:04のアミノ酸配列を含むHVR-H1、bSEQIDNO:05のアミノ酸配列を含むHVR-H2、およびcSEQIDNO:06のアミノ酸配列を含むHVR-H3。特定の態様において、VHは下記のものから選択される1、2または3つのHVRを含む:aSEQIDNO:32のアミノ酸配列を含むHVR-H1、bSEQIDNO:33のアミノ酸配列を含むHVR-H2、およびcSEQIDNO:34のアミノ酸配列を含むHVR-H3。1観点において、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体、および抗ウイルス性サイトカインを含む、融合タンパク質は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する下記の抗体を含む:SEQIDNO:11もしくはSEQIDNO:39のアミノ酸配列またはそのヒト化バリアントに対して少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、もしくは100の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインVLアミノ酸配列を含む抗体。ある態様において、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99の同一性を有するVL配列は、基準配列と比較して置換たとえば保存的置換、挿入または欠失を含むが、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する能力は保持している。他の特定の態様において、VLは下記のものから選択される1、2または3つのHVRを含む:aSEQIDNO:08のアミノ酸配列を含むHVR-L1、bSEQIDNO:09のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびCSEQIDNO:10のアミノ酸配列を含むHVR-L3。他の特定の態様において、VLは下記のものから選択される1、2または3つのHVRを含む:aSEQIDNO:36のアミノ酸配列を含むHVR-L1、bSEQIDNO:37のアミノ酸配列を含むHVR-L2、およびcSEQIDNO:38のアミノ酸配列を含むHVR-L3。1観点において、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体、および抗ウイルス性サイトカインを含む、融合タンパク質B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体を含むが提供され、その際、抗体は、前記に示したいずれかの態様のVH、および前記に示したいずれかの態様のVLを含む。1態様において、抗体はそれぞれSEQIDNO:07およびSEQIDNO:11のVHおよびVLを含み、これにはこれらの配列の翻訳後修飾体またはそのヒト化バリアントが含まれる。1態様において、抗体はそれぞれSEQIDNO:35およびSEQIDNO:39のVHおよびVLを含み、これにはこれらの配列の翻訳後修飾体またはそのヒト化バリアントが含まれる。1観点において、本発明は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体と同じエピトープに結合するSEQIDNO:07のVHおよびSEQIDNO:11のVLを備えた抗体を含む、融合タンパク質を提供する。1観点において、本発明は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体に結合する抗体と同じエピトープに結合する、SEQIDNO:35のVHおよびSEQIDNO:39のVLを備えた抗体を含む、融合タンパク質を提供する。本発明の1観点において、前記のいずれかの態様および観点による融合タンパク質の抗体はモノクローナル抗体であり、これにはキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体が含まれる。1態様において、抗体は抗体フラグメント、たとえばFv、Fab、Fab’、scFv、ディアボディー、Fab’2フラグメントである。1態様において、抗体は全長抗体、たとえば無傷のIgG1抗体、または本明細書中に定義する他の抗体クラスもしくはイソ型である。1観点において、前記のいずれかの態様および観点による融合タンパク質は、以下のセクションに記載するいずれかの特徴を単独で、または組み合わせて含むことができる。1.親和性特定の態様において、本明細書中に示す融合タンパク質、または本明細書中に示す融合タンパク質に含まれる抗体は、B型肝炎ウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを提示するヒト主要組織適合性複合体からの解離定数Kd≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM、または≦0.001nMたとえば10-8M以下、たとえば10-8Mから10-13Mまで、たとえば10-9Mから10-13Mまでをもつ。1態様において、Kdは表面プラズモン共鳴法により測定される。インターフェロンα-2aの、またはインターフェロンα-2aを含む融合体の、ヒトインターフェロン-アルファ/ベータ受容体ベータ鎖IFNAR2に対する結合親和性は、表面プラズモン共鳴法SPRによりBIAcore登録商標3000計測器GEHealthcareを用いて25°Cで測定できる。IFNAR2は、IFNAR1/2およびリガンドとしてのインターフェロンα-2aから構成されるヘテロ二量体型インターフェロン受容体複合体の高親和性初期結合成分である。BIAcore登録商標システムは、分子相互作用の研究のために十分に確立されている。それによれば、リガンド/被分析体の結合を連続リアルタイムモニタリングし、したがって会合速度定数ka、解離速度定数kd、および平衡解離定数Kdを測定することができる。SPR法は、金コートしたバイオセンサーチップの表面付近の屈折率の測定に基づく。屈折率の変化は、固定化されたリガンドと溶液に注入された被分析体との相互作用により起きる表面の質量変化の指標となる。表面に固定化されているリガンドに分子が結合すれば質量が増加し、解離した場合には質量が減少する。約750共鳴単位RUの捕獲システムたとえば、ヒトIgGに特異的に結合する捕獲モノクローナル抗体,JacksonImmunoresearchのアミンカップリングは、CM5チップ上、pH4.5で、GEHealthcareにより供給されるアミンカップリングキットを用いて実施できる。huFcタグ付きIFNAR2RnDSystems,Cat-Nr.4015-ABは、5μg/mlの濃度で捕獲できる。過剰の結合部位は、1.25μΜ濃度のヒトFc部分huFc混合物Biodesign,Cat-Nr.50175を注入することによりブロックできる。0.1nMから50nMまでの範囲の種々の濃度のインターフェロンまたはインターフェロン融合タンパク質を、流速10μl/分で298Kのフローセルに120~240秒間通して、会合期を記録することができる。解離期を600秒までモニターすることができ、試料溶液から流動緩衝液に切り換えることによって始動することができる。その表面は、流速30μl/分の100mMのリン酸溶液で1分間の洗浄により再生できる。この実験には、GEHealthcareにより供給されるFIBS-P緩衝液10mMHEPES,pH7.4,150mMNaCl,0.05v/vSurfactantP20を選択できる。バルク屈折率差は、ブランクをカップリングさせた表面から得られる共鳴を差し引くことにより補正できる。ブランク注入も差し引く=二重基準化。ka/kdとして定義される平衡解離定数Kdは、幾つか異なる濃度で求めたセンソグラム曲線をBIAevaluation4.1ソフトウェアパッケージで分析することにより決定できる。データのフィッティングは適切な結合モデルに従った。ヒト野生型インターフェロンα-2aのKdを測定するために、0.1nM~50nMのインターフェロンα-2aをIFNAR2コートしたセンサーチップ上に注ぐことができる。対応するセンソグラムを図1aに示す。ヒト由来Fc領域のC末端に融合したヒトインターフェロンα-2aについては、そのような融合タンパク質を0.5nM~50nMの濃度でIFNAR2コートした表面に注ぐことができる。複合体の安定性は、インターフェロンα-2aについての35秒からインターフェロンα-2aFc部分融合タンパク質についての23分にまで増大する。それぞれ、親和性はインターフェロンα-2aについての4nMから融合タンパク質についての0.3nMにまで増大する。活性についてはIFNAR1が必須であるので、初期結合だけを検討することができる。このようなアッセイではインターフェロンシグナル伝達活性を検討することはできない。1態様において、融合タンパク質はIFNAR2に対して1nM以下の親和性をもつ。2.抗体フラグメントある態様において、融合タンパク質の抗体は抗体フラグメントである。抗体フラグメントにはFab、Fab’、Fab’-SH、Fab’2、Fv、およびscFvフラグメント、ならびに以下に記載する他のフラグメントが含まれるが、これらに限定されない。ある抗体フラグメントの総説については、HudsonPJetalNatMed9129134を参照。scFvフラグメントの総説については、PlueckthunThePharmacologyofMonoclonalAntibodiesVol113RosenburgandMooreSpringerVerlagNewYorkpp269315WO9316185US5571894および5587458を参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む延長したインビボ半減期をもつFabおよびFab’2フラグメントの考察については、US5869046を参照。ディアボディーは、2つの抗原結合部位を備えた抗体フラグメントであり、二価または二重特異性の可能性がある。たとえば、EP0404097WO199301161HudsonPJetalNatMed9129134HollingerPetalProcNatlAcadSciUSA9064446448を参照。トリアボディーおよびテトラボディーも、HudsonPJetalNatMed9129134に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部分または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部分を含む抗体フラグメントである。特定の態様において、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体であるDomantis,Inc.,マサチュセッツ州ウォルサムたとえばUS6248516を参照。抗体フラグメントは多様な手法で作製でき、これには本明細書に記載する組換え宿主細胞たとえば、大腸菌またはファージによる産生が含まれるが、これに限定されない。3.キメラ抗体およびヒト化抗体ある態様において、融合タンパク質の抗体はキメラ抗体である。あるキメラ抗体が、たとえばUS4816567およびMorrisonLEetalProcNatlAcadSciUSA8168516855に報告されている。一例において、キメラ抗体はヒト以外の可変部すなわち、マウス由来の可変部およびヒト由来の定常部を含む。他の例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変化したクラススイッチ抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合フラグメントを含む。ある態様において、キメラ抗体はヒト化抗体である。一般に、ヒト以外の抗体はヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化され、一方でヒト以外の親抗体がもつ特異性および親和性は保持される。一般に、ヒト化抗体は1以上の可変ドメインを含み、それらにおいてHVR、たとえばCDRまたはその部分はヒト以外の抗体に由来し、FRまたはその部分はヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、場合によりヒト由来の定常部の少なくとも一部分をも含むであろう。ある態様において、たとえば抗体の特異性または親和性を再構築または改善するために、ヒト化抗体中の若干のFR残基が、ヒト以外の抗体たとえば、HVR残基が由来する抗体に由来する対応する残基で置換されている。ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、たとえばAlmagroJCandFranssonJFrontBiosci1316191633に概説されており、さらにたとえば下記に報告されている:RiechmannLetalNature332323327QueenCetalProcNatlAcadSciUSA861002910033US5821337US7527791US6982321およびUS7087409KashmiriSVetalMethods362534SDRa-CDRグラフティングを報告PadlanMolImmunol28489498を報告DallAcquaWFetalMethods364360を報告およびOsbournJetalMethods366168およびKlimkaAetalBrJCancer83252260法を報告。ヒト化に使用できるヒト枠組み構造領域には下記のものが含まれるが、それらに限定されない:最良適合法を用いて選択した枠組み構造領域22962308を参照、ヒト抗体の特定のサブグループの軽鎖または重鎖可変部のコンセンサス配列に由来する枠組み構造領域42854289PrestaLGetalJImmunol15126232632を参照、ヒト成熟細胞体細胞として成熟したもの枠組み構造領域またはヒト生殖細胞系枠組み構造領域16191633を参照、およびFRライブラリーのスクリーニングにより得られた枠組み構造領域1067810684RosokMJetalJBiolChem2712261122618を参照。4.ヒト抗体ある態様において、融合タンパク質の抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は当技術分野で既知の多様な手法を用いて作製できる。ヒト抗体は、全般的にvanDijkMAandvandeWinkelJGCurrOpinChemBiol5368374LonbergNCurrOpinImmunol20450459に記載されている。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答して無傷ヒト抗体またはヒト可変部を備えた無傷抗体を産生するように改変したトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製できる。そのような動物は、一般にヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部分を含み、それらが内因性の免疫グロブリン遺伝子座に置き換わり、あるいはそれらが染色体外に存在するか、またはランダムにその動物の染色体に組み込まれている。そのようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性の免疫グロブリン遺伝子座は一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、LonbergNNatBiotech2311171125を参照。たとえば、XENOMOUSE商標法について報告したUS6075181およびUS6150584HuMAB登録商標法について報告したUS5770429K-MMOUSE登録商標法について報告したUS7041870;ならびにVELOCIMOUSE登録商標法について報告したUS20070061900も参照。そのような動物により産生された無傷抗体に由来するヒト可変部を、たとえば異なるヒト定常部と組み合わせることにより、さらに修飾することができる。ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法により作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の作製のためのヒト骨髄腫およびネズミ-ヒトヘテロ骨髄腫細胞系が報告されている30013005BrodeuretalMonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplicationsMarcelDekkerIncNewYorkpp5163BoernerPetalJImmunol1478695を参照。ヒトB細胞ハイブリドーマ技術により作製されたヒト抗体も、LiJetalProcNatlAcadSciUSA10335573562に記載されている。他の方法には、たとえばUS7189826ハイブリドーマ細胞系からのモノクローナルヒトIgM抗体の産生について報告およびNiJXiandaiMianyixue26265268ヒト-ヒトハイブリドーマについて報告に記載のものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術トリオーマ技術も、VollmersHPandBrandleinSHistologyandHistopathology20927937VollmersHPandBrandleinSMethodsandFindingsinExperimentalandClinicalPharmacology27185191に報告されている。ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択したFvクローン可変ドメイン配列を単離することによっても作製できる。そのような可変ドメイン配列を次いで希望するヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する方法を以下に記載する。5.ライブラリー由来の抗体本発明の融合タンパク質に含まれる抗体は、コンビナトリアルライブラリーを、希望する活性単数または複数を備えた抗体についてスクリーニングすることにより単離できる。たとえば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、希望する結合特性をもつ抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための多様な方法が当技術分野で知られている。そのような方法は、たとえばHoogenboomHRetalMethodsinMolecularBiology178137に概説され、さらに、たとえばMcCaffertyJetalNature348552554ClacksonTetalNature352624628MarksJDetalJMolBiol222581597MarksJDetalMethodsinMolecularBiology248161176SidhuSSetalJMolBiol338299310LeeCVetalJMolBiol34010731093FellouseFAProcNatlAcadSciUSA1011246712472LeeCVetalJImmunolMethods284119132に報告されている。あるファージディスプレイ法において、VHおよびVL遺伝子のレパトアをポリメラーゼ連鎖反応PCRにより個別にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組み換え、それらを次いで抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる;WinterGetalAnnRevImmunol12433455に記載。ファージは一般に、抗体フラグメントを一本鎖FvscFvフラグメントまたはFabフラグメントとしてディスプレイする。免疫化した供給源に由来するライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブレパトアをクローニングしてたとえばヒトから、免疫化せずに広範な非自己抗原に対して、また自己抗原に対しても、単一の抗体供給源を得ることができる;GriffithsADetalEMBOJ12725734に記載。最後に、ナイーブライブラリーは合成により、幹細胞由来の非-再配列V遺伝子セグメントをクローニングし、高可変性CDR3領域をコードしかつ再配列を達成するランダム配列を含むPCRプライマーを用いることによって、インビトロで作製することもできる;HoogenboomHRandWinterGJMolBiol227381388により報告。ヒト抗体ファージライブラリーについて報告した特許文献には、たとえば下記のものが含まれる:US5750373、US20050079574、US20050119455、US20050266000、US20070117126、US20070160598、US20070237764、US20070292936およびUS20090002360。ヒト抗体ライブラリーから単離した抗体または抗体フラグメントは、本発明においてヒト抗体またはヒト抗体フラグメントとみなされる。6.多重特異性抗体ある態様において、本明細書中に報告する融合タンパク質は、多重特異性抗体、たとえば二重特異性抗体である抗体を含む。多重特異性抗体は、少なくとも2つの異なる部位に対する結合特異性をもつモノクローナル抗体である。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメントとして作製できる。多重特異性抗体を作製する方法には下記のものが含まれるが、それらに限定されない:異なる特異性をもつ2つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の組換え同時発現537540WO9308829およびTrauneckerAetalEMBOJ1036553659、およびノブインホール工学。多重特異性抗体は、下記によっても作製できる:抗体Fc-ヘテロ二量体分子を作製するための工学的静電ステアリング効果2以上の抗体またはフラグメントの架橋8183を参照二重特異性抗体を作製するためのロイシンジッパーの使用15471553を参照二重特異性抗体フラグメントを作製するためのディアボディー技術の使用64446448を参照および一本鎖FvsFv二量体の使用53685374を参照および三重特異性抗体の作製:たとえばTuttAetalJImmunol1476069に記載。オクトパス抗体を含めて、3以上の機能性抗原結合部位を備えた工学的に作製した抗体も本発明に含まれる。抗体またはフラグメントには、第1抗原および他の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む二重作用FabまたはDAFも含まれる。抗体または抗体フラグメントには、WO2009080251、WO2009080252、WO2009080253、WO2009080254、WO2010112193、WO2010115589、WO2010136172、WO2010145792、およびWO2010145793に記載された多重特異性抗体も含まれる。7.抗体バリアント特定の態様において、本明細書中に示す融合タンパク質に含まれる抗体のアミノ酸配列バリアントが考慮される。たとえば、抗体の結合親和性および/または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適宜な修飾を導入することにより、またはペプチド合成により作製できる。そのような修飾には、たとえば抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および/またはアミノ酸配列中への残基の挿入、および/またはアミノ酸配列中の残基の置換が含まれる。欠失、挿入および置換のいずれかの組合わせを行なって、最終構築体に達することができる;ただし、最終構築体は希望する特性、たとえば抗原結合性をもつ。a置換、挿入、および欠失バリアントある態様において、1以上のアミノ酸置換をもつ抗体バリアントを含む融合タンパク質が提供される。置換変異形成のための重要な部位にはHVRおよびFRが含まれる。保存的置換を表1の見出し好ましい置換の下に示す。より多くの実質的な変更は表1の見出し置換例の下に示され、以下にアミノ酸側鎖クラスに関連して記載するものである。アミノ酸置換を抗体に導入し、希望する活性、たとえば抗原結合性の保持/改善、免疫原性の低減、またはADCCもしくはCDCの改善について生成物をスクリーニングすることができる。アミノ酸は共通の側鎖特性に従って分類できる:1疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu;2中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gin;3酸性:Asp、Glu;4塩基性:His、Lys、Arg;5鎖の配向に影響を及ぼす残基:Gly、Pro;6芳香族:Trp、Tyr、Phe。非保存的置換は、これらのクラスのうちのひとつのメンバーを他のクラスと交換することを伴うであろう。置換バリアントの1タイプは、親抗体たとえば、ヒト化抗体またはヒト抗体の1以上の超可変部残基を置換することを伴う。一般に、以後の試験のために選択した生成バリアント単数または複数は、親抗体と対比してある生物学的特性が改変たとえば、改善されたとえば、親和性の増大、免疫原性の低減、および/または親抗体のある生物学的特性を実質的に保持するであろう。置換バリアントの例は、アフィニティー成熟抗体であり、それはたとえばファージディスプレイに基づくアフィニティー成熟法、たとえば本明細書に記載の方法を用いて簡便に作製できる。要約すると、1以上のHVR残基を変異させ、それらのバリアント抗体をファージ上にディスプレイし、特定の生物活性たとえば、結合親和性についてスクリーニングする。変異たとえば、置換は、たとえば抗体の親和性を改善するためにHVR中において行なうことができる。そのような変異は、HVRホットスポット、すなわち体細胞成熟プロセスに際して高頻度で変異を受けるコドンによりコードされる残基179196を参照、および/またはSDRa-CDRにおいて行なうことができ、得られたバリアントVHまたはVLを結合親和性について試験する。二次ライブラリーを構築してそれから選択することによるアフィニティー成熟法は、たとえばHoogenboomHRetalMethodsinMolecularBiology178137に報告されている。アフィニティー成熟法のある態様において、成熟させるために選択する可変部遺伝子に種々の方法たとえば、エラープローンPCR、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異形成のいずれかによって多様性を導入する。次いで二次ライブラリーを作製する。このライブラリーを次いでスクリーニングして、希望する親和性を備えたいずれかの抗体バリアントを同定する。多様性を導入するための他の方法はHVR指向法を伴い、その方法では幾つかのHVR残基たとえば、一度に4~6個の残基をランダム化する。たとえばアラニンスキャニング変異形成またはモデリングを用いて、抗原結合に関与するHVR残基を具体的に同定することができる。特にCDR-H3およびCDR-L3がしばしば標的となる。ある態様において、置換、挿入または欠失を1以上のHVR内に行なうことができる;ただし、そのような変異により抗体がそれの抗原を結合する能力が実質的に低下しない限りにおいてである。たとえば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変異たとえば、本明細書に示す保存的置換をHVR内に行なうことができる。そのような変異はHVRホットスポットまたはSDR以外の箇所にあってもよい。前記に示したバリアントVHおよびVLのある態様において、各HVRは変異していないか、あるいは1、2または3つを超えるアミノ酸置換を含まない。抗体の変異形成の標的となりうる残基または領域の同定に有用な方法は、アラニンスキャニング変異形成と呼ばれる;CunninghamBCandWellsJAScience24410811085により記載。この方法では、標的残基またはグループたとえば、荷電した残基、たとえばarg、asp、his、lys、およびgluを同定し、中性または負に荷電したアミノ酸たとえば、アラニンまたはポリアラニンで交換して、その抗体と抗原の相互作用が影響を受けたかどうかを判定する。初期置換に対して機能感受性を示すアミノ酸位置に、さらに置換を導入してもよい。あるいは、またはそれに加えて、抗原-抗体複合体の結晶構造により、抗体と抗原の接触点を同定する。そのような接触残基および隣接残基を置換のための候補として標的にし、あるいは除外することができる。バリアントをスクリーニングして、それらが希望する特性を含むかどうかを同定することができる。アミノ酸残基の挿入には、長さ1残基から100以上の残基を含むポリペプチドに及ぶアミノ末端および/またはカルボキシ末端融合、ならびに単一または複数アミノ酸残基の配列間挿入が含まれる。末端挿入の例にはN末端メチオニル残基をもつ抗体が含まれる。bグリコシル化バリアントある態様において、本明細書に示す融合タンパク質は、抗体のグリコシル化度を増大または低下させるように変異させた抗体を含む。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、1以上のグリコシル化部位を形成または除去するようにアミノ酸配列を変異させることによって簡便に達成できる。抗体がFc領域を含む場合、それに結合した炭水化物を変異させることができる。哺乳動物細胞により産生される天然抗体は、一般に分岐した二本鎖オリゴ糖を含み、それは一般的にN結合によりFc領域のCH2ドメインのAsn297に結合している2632を参照。オリゴ糖には、多様な炭水化物、たとえばマンノース、N-アセチルグルコサミンGlcNAc、ガラクトース、およびシアル酸NANA、Neu5Ac、ならびにフコース二本鎖オリゴ糖構造体の幹中のGlcNAcに結合を含めることができる。ある態様において、ある改善された特性を備えた抗体バリアントを作製するために、抗体中のオリゴ糖の修飾を行なうことができる。1態様において、抗体はFc領域に結合した直接的または間接的フコースを欠如した炭水化物構造をもつ。たとえば、そのような抗体におけるフコースの量は、1から80まで、1から65まで、5から65まで、5から20まで、または20から40までであってもよい。フコースの量は、MALDI-TOF質量分析により測定して、Asn297に結合したすべての糖構造体たとえば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造体の和に対比した、Asn297の糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより判定される;たとえばWO2008077546に報告。Asn297は、Fc領域のほぼ297の位置Fc領域残基のEuナンバリングにあるアスパラギン残基を表わす。しかしAsn297は、抗体における微小な変動のため、位置297の上流または下流の約±3アミノ酸の位置、すなわち位置294と300の間にある可能性もある。そのようなフコシル化バリアントは改善されたADCC機能をもつ可能性がある。脱フコシル化またはフコース欠損抗体バリアントに関する刊行物の例には、下記のものが含まれるUS20030157108WO200061739WO200129246US20030115614US20020164328US20040093621US20040132140US20040110704US20040110282US20040109865WO2003085119WO2003084570WO2005035586WO2005035778WO2005053742WO2002031140OkazakiAetalJMolBiol33612391249YamaneOhnukiNetalBiotechBioeng87614622。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞系の例には、タンパク質のフコシル化を欠損したLecl3CHO細胞533545US20030157108WO2004056312、特に例11、およびノックアウト細胞系、たとえばアルファ-1,6-脱フコシルトランスフェラーゼ遺伝子FUT8をノックアウトしたCHO細胞614622KandaYetalBiotechnolBioeng94680688WO2003085107を参照が含まれる。bisectedオリゴ糖をもつ抗体を含む、さらに他の融合タンパク質が提供される;たとえば、抗体のFc領域に結合した二本鎖オリゴ糖はGlcNAcにより二分割されている。そのような抗体バリアントは、低いフコシル化および/または改善されたADCC機能をもつ可能性がある。そのような抗体バリアントの例は、たとえばWO2003011878US6602684およびUS20050123546に記載されている。Fc領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも1つのガラクトース残基をもつ抗体を含む融合タンパク質も提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたCDC機能をもつ可能性がある。そのような抗体バリアントは、たとえばWO199730087WO199858964およびWO199922764に記載されている。cFc領域バリアントある態様において、本明細書に示す融合タンパク質の抗体のFc領域に1以上のアミノ酸修飾を導入し、これによりFc領域バリアントを作製することができる。Fc領域バリアントは、1以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾たとえば、置換を含むヒト由来のFc領域配列たとえば、ヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4Fc領域を含むことができる。ある態様において、本発明は、若干の、ただし全部ではないエフェクター機能をもつ抗体バリアントを含む融合タンパク質を考慮する;これによってそれは、インビボでの抗体の半減期は重要であるけれどもあるエフェクター機能たとえば、補体およびADCCは不必要または有害である用途に望ましい候補となる。インビトロおよび/またはインビボ細胞傷害アッセイを実施して、CDCおよび/またはADCC活性の低下/枯渇を確認することができる。たとえば、Fc受容体FcR結合アッセイを実施して、その抗体がFcγR結合を欠如ししたがって、ADCC活性を欠如している可能性があること、ただしFcRn結合活性は保持していることを確認できる。ADCCを仲介する初代細胞であるNK細胞はFcγRIIIだけを発現し、一方、単球はFcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIを発現する。造血細胞におけるFcR発現は、RavetchJVandKinetJP457492の464頁、表3にまとめられている。限定ではないが、目的分子のADCC活性を評価するためのインビトロアッセイ法の例は、US550036270597063を参照、およびHellstromIetalProcNatlAcadSciUSA8214991502US582133713511361に報告されている。あるいは、非放射性アッセイ法を採用できる652656に開示。C1q結合アッセイを実施して、その抗体がC1qを結合できず、したがってCDC活性を欠如するということを確認してもよいたとえば、WO2006029879およびWO2005100402におけるC1qおよびC3c結合ELISAを参照。補体活性化を評価するために、CDCアッセイを実施してもよい163171CraggMSetalBlood10110451052およびCraggMSandMJGlennieBlood10327382743を参照。当技術分野で既知の方法を用いて、FcRn結合およびインビボクリアランス/半減期測定を実施することもできる17591769を参照。エフェクター機能が低下した抗体には、Fc領域残基238、265、269、270、297、327および329のうち1以上が置換されたものが含まれる。そのようなFc変異体には、アミノ酸位置265、269、270、297および327のうち2以上に置換をもつFc変異体が含まれ、これには残基265および297がアラニンに置換されたいわゆるDANAFc変異体が含まれる。FcRへの結合性が改善または低減されたある抗体バリアントが報告されている65916604。ある態様において、抗体はADCCを改善する1以上のアミノ酸置換をもつFc領域、たとえばFc領域の位置298、333、および/または334EUナンバリングの残基における置換を含む。ある態様において、抗体のFc領域に、変異したすなわち、改善または低減されたC1q結合および/または補体依存性細胞傷害CDCを生じる変異がなされる;たとえば、US6194551、WO9951642、およびIdusogieEEetalJImmunol16441784184に報告。半減期が延長され、母体IgGを胎児へ伝達するのに関与する新生児Fc受容体FcRnへの結合587593およびKimJKetalEurJImmunol2424292434が改善された抗体が、US20050014934に報告されている。それらの抗体は、FcRnへのFc領域の結合性を改善する1以上の置換をもつFc領域を含む。そのようなFcバリアントには、Fc領域残基:238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424または434のうち1以上に置換をもつもの、たとえばFc領域残基434の置換が含まれる。Fc領域バリアントの他の例に関するDuncanARandWinterGNature332738740US5648260US5624821およびWO9429351も参照されたい。B.組換えによる方法および組成物融合タンパク質および抗体は、たとえばUS4816567に報告された組換えによる方法および組成物を用いて作製できる。1態様において、本明細書中に報告する融合タンパク質をコードする1以上の単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のVLを含むアミノ酸配列および/またはVHを含むアミノ酸配列たとえば、抗体の軽鎖および/または重鎖をコードすることができる。1態様において、そのような核酸を含む1以上のベクターたとえば、発現ベクターが提供される。1態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような1態様において、宿主細胞は下記のものを含むたとえば、下記のもので形質転換またはトランスフェクションされている:1抗体のVLを含むアミノ酸配列および/または抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、あるいは2抗体のVLを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第1ベクター、および抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第2ベクター。1態様において、宿主細胞は真核細胞、たとえばチャイニーズハムスター卵巣CHO細胞もしくはベビーハムスター腎BHK細胞もしくはヒト胚性腎HEK細胞、またはリンパ球様細胞たとえば、Y0、NS0、Sp2/0細胞である。1態様において、本明細書中に報告する融合タンパク質を作製する方法が提供され、その方法は、前記に示した融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を、その融合タンパク質の発現に適した条件下で培養し、場合により宿主細胞または宿主細胞培養培地から融合タンパク質を回収することを含む。本明細書中に報告する融合タンパク質を組換え製造するために、前記に示した融合タンパク質をコードする核酸を単離し、以後の宿主細胞におけるクローニングおよび/または発現のために1以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、常法を用いて容易に単離および配列決定することができる。融合タンパク質をコードする核酸のクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、本明細書中に報告する原核細胞または真核細胞が含まれる。たとえば、特にグリコシル化およびFcエフェクター機能が必要でない場合は、融合タンパク質を細菌において産生させることができる。細菌におけるフラグメントおよびポリペプチドの発現については、たとえばUS5648237、US5789199、およびUS5840523を参照;大腸菌における抗体フラグメントの発現を報告したCharltonMethodsinMolecularBiologyVol248LoBKCHumanaPressTotowaNJpp245254も参照されたい。発現後、融合タンパク質を細菌細胞ペーストから可溶性画分中に分離し、さらに精製することができる。原核細胞のほかに、真核微生物、たとえば糸状菌または酵母が、融合タンパク質をコードするベクターに適切なクローニングまたは発現の宿主であり、これには、そのグリコシル化経路がヒト化されていて部分的または完全ヒト型グリコシル化パターンをもつ融合タンパク質を産生する真菌および酵母の菌株が含まれる14091414LiHetalNatBiotech24210215。グリコシル化された融合タンパク質の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物無脊椎動物および脊椎動物からも得られる。無脊椎動物細胞の例には、植物および昆虫の細胞が含まれる。昆虫細胞と併せて使用できる多数のバキュロウイルス株、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのためのものが同定されている。植物細胞培養物も宿主として利用できる5974に報告されたもの、ベビーハムスター腎細胞BHK、マウスセルトリ細胞TM4細胞、たとえばMatherJPBiolReprod23243252に報告、サル腎細胞CV1、アフリカミドリザル腎細胞VERO-76、ヒト子宮頚癌細胞HELA、イヌ腎細胞MDCK、バッファローラット肝細胞BRL3A、ヒト肺細胞W138、ヒト肝細胞HepG2、マウス乳腺腫細胞MMT060562、TRI細胞、たとえばMatherJPetalAnnalsNYAcadSci3834468に報告されたもの、MRC5細胞、およびFS4細胞。他の有用な哺乳動物宿主細胞系には、チャイニーズハムスター卵巣CHO細胞が含まれ、これにはDHFR-CHO細胞42164220、および骨髄腫細胞系、たとえばY0、NS0およびSp2/0が含まれる。融合タンパク質の産生に適したある哺乳動物宿主細胞系の総説については、たとえばYazakiPJandWuAMMethodsinMolecularBiologyVol248pp255268を参照されたい。C.医薬配合物本明細書中に報告する融合タンパク質の医薬配合物は、希望する純度をもつ融合タンパク質を1種類以上の医薬的に許容できるキャリヤーと混合することにより、凍結乾燥配合物または水性液剤の形で調製される。医薬的に許容できるキャリヤーは、使用する投与量および濃度でレシピエントに対して一般に無毒性であり、下記のものを含むが、それらに限定されない:緩衝剤、たとえばリン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸、抗酸化剤:アスコルビン酸およびメチオニンを含む;保存剤たとえば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、アルキルパラベン類、たとえばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、3-ペンタノール、およびm-クレゾール、低分子量約10残基未満ポリペプチド、タンパク質、たとえば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン、親水性ポリマー、たとえばポリビニルピロリドン、アミノ酸、たとえばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン、単糖類、二糖類、および他の炭水化物:グルコース、マンノース、またはデキストリン類を含む;キレート化剤、たとえばEDTA、糖類、たとえばショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール、塩形成性の対イオン、たとえばナトリウム、金属錯体たとえば、Zn-タンパク質錯体、および/または非イオン界面活性剤、たとえばポリエチレングリコールPEG。本発明における医薬的に許容できるキャリヤーの例には、さらに侵入型薬物分散剤、たとえば可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質sHASEGP、たとえばヒト可溶性PH-20ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、たとえばrhuPH20HYLENEX登録商標,BaxterInternational,Inc.が含まれる。rhuPH20を含めた、あるsHASEGPおよび使用方法の例は、US20050260186およびUS20060104968に報告されている。1観点において、sHASEGPを1種類以上の追加のグリコサミノグリカン類、たとえばコンドロイチナーゼ類と組み合わせる。凍結乾燥した抗体配合物の例は、US6267958に報告されている。水性の抗体配合物には、US6171586およびWO2006044908に報告されたものが含まれ、後者の配合物は酢酸ヒスチジン緩衝剤を含有する。本明細書中の配合物は、処置される個々の適応症に必要な、1種類より多い有効成分、好ましくは相互に有害作用しない相補的活性をもつものを含有することもできる。そのような有効成分は、合わせて意図する目的に有効な量で存在するのが適切である。有効成分を、たとえばコアセルベーション法または界面重合により調製されたマイクロカプセル、たとえばそれぞれヒドロキシメチルセルロース-またはゼラチン-マイクロカプセルおよびポリ-メタクリル酸メチルマイクロカプセル内に、コロイド薬物送達システムたとえば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル内に、あるいはマクロエマルジョン内に捕捉することができる。そのような手法は、RemingtonsPharmaceuticalSciences16thedOsolAに示されている。持続放出製剤を調製することができる。持続放出製剤の適切な例には、融合タンパク質を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、それらのマトリックスは造形品、たとえばフィルム、またはマイクロカプセルの形態である。インビボ投与に使用するための配合物は、一般に無菌である。無菌性は、たとえば無菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成できる。D.療法および療法用組成物本明細書に示す融合タンパク質のいずれかを療法に使用できる。1観点において、本発明は医薬の製造または調製における融合タンパク質の使用を提供する。1観点において、本発明はB型肝炎ウイルス感染症を処置するための方法を提供する。1観点において、本発明は、たとえば前記のいずれかの療法に使用するための、本明細書に示す融合タンパク質のいずれかを含む医薬配合物を提供する。1態様において、医薬配合物は、本明細書に示す融合タンパク質のいずれか、および医薬的に許容できるキャリヤーを含む。他の態様において、医薬配合物は、本明細書に示す融合タンパク質のいずれか、および少なくとも1種類の追加療法剤、たとえば後記のものを含む。本発明の融合タンパク質は、単独で、または他の作用剤と組み合わせて、療法に使用できる。たとえば、本発明の融合タンパク質は少なくとも1種類の追加療法剤と共投与できる。前記のような併用療法は、組合わせ投与2種類以上の療法剤が同一または別個の配合物に含有されている、および個別投与を包含し、この場合は本発明の融合タンパク質の投与を追加療法剤および/または佐剤の投与前、投与と同時、および/または投与後に行なうことができる。本発明の融合タンパク質およびいずれかの追加療法剤は、いずれか適切な手段により投与でき、これには非経口、肺内、および鼻腔内、ならびに所望により局所処置、病変部内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬はいずれか適切な経路、たとえば注射、たとえば静脈内または皮下注射によることができ、これは一部は、その投与が短期間であるかまたは長期間であるかに依存する。本発明においては多様な投薬計画が考慮され、これには1回投与、または多様な時点にわたる多数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入が含まれるが、これらに限定されない。本発明の融合タンパク質は、適正製造基準に従った様式で配合、投薬、および投与されるであろう。これに関して考慮する要因には、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、および医療専門家に既知である他の要因が含まれる。必要ではないが、場合により、問題となっている障害を予防または治療するために現在用いられている1種類以上の薬剤を融合タンパク質に配合してもよい。そのような他の薬剤の有効量は、配合物中に存在する融合タンパク質の量、障害または処置のタイプ、および前記で考察した他の要因に依存する。これらは一般に、本明細書に記載するものと同じ投与量および投与経路で、または本明細書に記載する投与量の約1から99までで、または経験的/臨床的に適切であると判定されるいずれかの投与量でいずれかの経路により用いられる。疾患の予防または治療について、本発明の融合タンパク質の適切な投与量単独で、または1種類以上の他の追加療法剤と組み合わせて用いる場合は、処置される疾患のタイプ、疾患の重症度および経過、その融合タンパク質を予防または治療のいずれの目的で使用するか、それ以前の療法、患者の病歴およびその融合タンパク質に対する応答、ならびに担当医の自由裁量に依存するであろう。融合タンパク質は、一度に、または一連の処置にわたって、患者に投与するのが適切である。疾患のタイプおよび重症度に応じて、約1μg/kg~15mg/kgたとえば、0.1mg/kg~10mg/kgの融合タンパク質を、たとえば1回以上の分割投与により、または連続注入により患者に投与する初期の候補投与量とすることができる。一般的な日用量は、前記の要因に応じて約1μg/kgから100mg/kgまでの範囲またはそれ以上であってもよい。状態に応じて数日またはそれ以上にわたる反復投与について、処置は一般に希望する疾患症状抑制が起きるまで継続されるであろう。融合タンパク質の投与量の一例は、約0.05mg/kgから約10mg/kgまでの範囲であろう。したがって、約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg、または10mg/kgまたはそのいずれかの組合わせの量を1回以上、患者に投与することができる。そのような投与量を断続的に、たとえば毎週または3週ごとに投与してもよいたとえば、患者が約2回から約20回まで、またはたとえば約6回の抗体投与を受けるように。より高い初期負荷量、続いて1回以上のより低い用量を投与してもよい。E.製品本発明の1観点において、前記の障害の治療、予防および/または診断に有用な物質を収容した製品が提供される。この製品は、容器、およびその容器上のまたは容器に付随するラベルまたはパッケージ挿入物を含む。適切な容器には、たとえばボトル、バイアル、注射器、静注液バッグなどが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど多様な材料から作成できる。容器は、それ自体でまたは他の組成物と組み合わせて、その状態の治療、予防および/または診断に有効な組成物を保持し、無菌的取出口を備えていてもよいたとえば、容器は静注液バッグ、または皮下注射針により穿刺できる栓を備えたバイアルであってもよい。組成物中の少なくとも1種類の有効薬剤は、本明細書中に報告する融合タンパク質である。ラベルまたはパッケージ挿入物は、選択した状態の処置にその組成物を使用することを指示する。さらに、製品は下記のものを含んでもよい:a本明細書中に報告する融合タンパク質を含む組成物を収容した第1容器、およびb他の療法剤を含む組成物を収容した第2容器。本発明のこの態様における製品はさらに、それらの組成物を特定の状態の処置に使用できることを指示するパッケージ挿入物を含んでもよい。あるいは、またはそれに加えて、この製品はさらに、医薬的に許容できる緩衝液、たとえば注射用水WFI、殺菌注射用水BWFI、リン酸緩衝化生理食塩水、リンガー液およびデキストロース溶液を含む組成物を収容した第2または第3容器を含んでもよい。それはさらに、商業的立場および利用者の立場から望ましい他の物質を含んでもよく、これには他の緩衝剤、希釈剤、増量剤、注射針、および注射器が含まれる。III.配列の記載SEQIDNO:01B型肝炎ウイルスエンベロープタンパク質のアミノ酸配列B型肝炎ウイルス遺伝子型Cサブタイプadr分離株日本/A4/1994HBV-CSEQIDNO:02B型肝炎ウイルスコアタンパク質のアミノ酸配列B型肝炎ウイルス遺伝子型Cサブタイプadr分離株日本/A4/1994HBV-CSEQIDNO:03成熟ヒトインターフェロンα-2aのアミノ酸配列SEQIDNO:04c18/A2mAbのCDR-H1のアミノ酸配列SEQIDNO:05c18/A2mAbのCDR-H2のアミノ酸配列SEQIDNO:06c18/A2mAbのCDR-H3のアミノ酸配列SEQIDNO:07ネズミ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列SEQIDNO:08c18/A2mAbのCDR-L1のアミノ酸配列SEQIDNO:09c18/A2mAbのCDR-L2のアミノ酸配列SEQIDNO:10c18/A2mAbのCDR-L3のアミノ酸配列SEQIDNO:11ネズミ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列SEQIDNO:12c18/A2mAbのキメラネズミ-ヒト重鎖のアミノ酸配列SEQIDNO:13C末端c18/A2抗体重鎖のキメラネズミ-ヒトアミノ酸配列インターフェロンα-2a抗体融合体SEQIDNO:14c18/A2mAbのキメラネズミ-ヒト軽鎖のアミノ酸配列SEQIDNO:15C末端c18/A2抗体軽鎖のキメラネズミ-ヒトアミノ酸配列インターフェロンα-2a抗体融合タンパク質SEQIDNO:16ヒトIgカッパ軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列SEQIDNO:17ヒトIgラムダ軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列SEQIDNO:18ヒトIgG1定常部白人アロタイプのアミノ酸配列SEQIDNO:19ヒトIgG1定常部アメリカ黒人アロタイプのアミノ酸配列SEQIDNO:20ヒトIgG1定常部バリアントのアミノ酸配列SEQIDNO:21ヒトIgG4定常部のアミノ酸配列SEQIDNO:22ヒトIgG4定常部バリアントのアミノ酸配列SEQIDNO:23リンカー1のアミノ酸配列SEQIDNO:24リンカー2のアミノ酸配列SEQIDNO:25リンカー3のアミノ酸配列SEQIDNO:26リンカー4のアミノ酸配列SEQIDNO:27リンカー5のアミノ酸配列SEQIDNO:28リンカー6のアミノ酸配列SEQIDNO:29HBV-エンベロープ由来のペプチドフラグメントSEQIDNO:30HBV-コア由来のペプチドフラグメントSEQIDNO:31HBV-エンベロープ由来のペプチドフラグメントSEQIDNO:32e183/A2mAbのCDR-H1のアミノ酸配列SEQIDNO:33e183/A2mAbのCDR-H2のアミノ酸配列SEQIDNO:34e183/A2mAbのCDR-H3のアミノ酸配列SEQIDNO:35SEQIDNO:01のアミノ酸残基182-190のHBVエンベロープペプチドフラグメントに対する抗体のネズミ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列SEQIDNO:36e183/A2mAbのCDR-L1のアミノ酸配列SEQIDNO:37e183/A2mAbのCDR-L2のアミノ酸配列SEQIDNO:38e183/A2mAbのCDR-L3のアミノ酸配列SEQIDNO:39SEQIDNO:01のアミノ酸残基182-190のHBVエンベロープペプチドフラグメントに対する抗体のネズミ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列IV.実施例以下は本発明の方法および組成物の例である。前記の記述を考慮して多様な他の態様を実施できることは理解される。材料および方法ヒト免疫グロブリン軽鎖および重鎖のヌクレオチド配列に関する一般情報は、KabatEAetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thedvols13PublicHealthServiceNIHPublicationNo913242に示されている。抗体鎖のアミノ酸は、EUナンバリング法に従ってナンバリングされる7885KabatEAetalSequencesofProteinsofImmunologicalInterest5thedvols13PublicHealthServiceNIHPublicationNo913242。組換えDNA技術SambrookJetalMolecularcloningAlaboratorymanualColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYorkに記載された標準法を用いてDNAを操作した。分子生物学的試薬を製造業者の指示に従って用いた。DNA配列決定DNA配列はSequiServeGmbHドイツ、ファーテルステッテンで実施した二本鎖配列決定法により決定された。DNAおよびタンパク質の配列分析および配列データ管理GCGGeneticsComputerGroup,ウィスコンシン州マディソンのソフトウェアパッケージバリアント10.2およびInfomaxのVectorNTIAdvanceスイートバリアント8.0を、配列の作製、マッピング、分析、アノテーションおよびイラストレーションに用いた。遺伝子合成マウスc18/A2mAbおよびe183/A2mAbの重鎖および軽鎖可変ドメインをコードする希望する遺伝子セグメントは、GeneartGmbHドイツ、レーゲンスブルクにより作製された。発現構築体のクローニングを容易にするために、後記に示すようにそれらの遺伝子フラグメントを個別の制限エンドヌクレアーゼ開裂部位でフランキングする。サブクローニングした遺伝子フラグメントのDNA配列をDNA配列決定法により確認した。実施例1キメラネズミ-ヒトc18/A2TCR様抗体インターフェロン-α2a融合タンパク質のための発現プラスミドの作製成熟ヒトIFN-α2aおよび2つのGly4Ser反復配列からなるグリシン-セリンリンカーをコードする化学合成したDNAフラグメントを、わずかにトランケートしたヒトガンマ-1重鎖定常部最後の天然アミノ酸Lysを除去をコードするc18/A2TCR様抗体重鎖遺伝子の3’末端に融合させることにより、キメラネズミ-ヒトc18/A2TCR様抗体重鎖インターフェロン-α2a融合遺伝子を組み立てた重鎖...LSPG--GGGSGGGGS--IFNa2a。キメラネズミ-ヒトc18/A2TCR様-親抗体のための発現プラスミドの作製マウスc18/A2TCR様mAbカッパ軽鎖可変部VKおよび重鎖可変部VHをコードする遺伝子セグメントを、それぞれヒトカッパ軽鎖定常部CKまたはヒトガンマ-1重鎖定常部CH1-ヒンジ-CH2-CH3をコードする遺伝子セグメントに結合させた。これらの抗体遺伝子のゲノムエキソン-イントロン構造を含む2つの別個の発現プラスミドから、両方の抗体鎖遺伝子を発現させた。抗体鎖の発現を下記により制御する:ヒトサイトメガロウイルスHCMV由来の短縮イントロン-A欠失極初期エンハンサーおよびプロモーター[ヒト重鎖免疫グロブリン5’側非翻訳領域UTRを含む]、ネズミ免疫グロブリン重鎖シグナル配列、ならびにウシ成長ホルモン由来の強力なポリアデニル化シグナル。これらの発現プラスミドは、大腸菌におけるプラスミド増幅のためのベクターpUC18由来の複製起点およびβ-ラクタマーゼ遺伝子、ならびに場合により、安定トランスフェクションされた哺乳動物細胞系の作製/選択のためのネオマイシン耐性遺伝子も含む。aプラスミド9924プラスミド9924は、キメラネズミ-ヒトc18/A2TCR様抗体γ1-重鎖IFN-α2a融合タンパク質を、HEK293細胞において一過性発現するための発現プラスミドゲノム組織化した発現カセット;エキソン-イントロン組織化である。c18/A2TCR様抗体γ1重鎖IFN-α2a発現カセットのほかに、このベクターは下記のものを含む:-大腸菌におけるこのプラスミドの発現を可能にするベクターpUC18由来の複製起点、および-大腸菌にアンピシリン耐性を付与するβ-ラクタマーゼ遺伝子。SEQIDNO:13に示した成熟c18/A2TCR様抗体γ1-重鎖IFN-α2a融合タンパク質をコードする、c18/A2TCR様抗体γ1-重鎖IFN-α2a融合遺伝子のための転写ユニットは、下記のエレメントを含む:-ヒトサイトメガロウイルスCMV由来の極初期エンハンサーおよびプロモーター-ヒト重鎖免疫グロブリン5’側非翻訳領域UTR-ネズミ免疫グロブリン重鎖シグナル配列;シグナル配列イントロンシグナル配列1、イントロン、シグナル配列2[L1-イントロン-L2]を含む-5’末端のユニークBsml制限部位L2シグナル配列およびスプライスドナー部位および3’末端のユニークXhol制限部位と共に配置された、可変重鎖コードセグメントSEQIDNO:07-トランケート形マウス/ヒト重鎖ハイブリッドイントロン2;マウス重鎖エンハンサーエレメントを含む部分JH3,JH413731378を参照-ゲノム組織化におけるヒトγ1重鎖遺伝子定常部;それからC末端Lysをコードする最後のコドンを欠失させたもの-グリシン-セリンリンカーSEQIDNO:23-成熟ヒトIFNa2a遺伝子SEQIDNO:03、ならびに-ウシ成長ホルモンポリアデニル化BGHpAシグナル配列。重鎖発現プラスミド9924のプラスミド地図を図2に示す。bプラスミド9922プラスミド9922は、キメラネズミ-ヒトc18/A2TCR様抗体軽鎖をHEK293細胞において一過性発現するための発現プラスミドゲノム組織化した発現カセット;エキソン-イントロン組織化である。c18/A2TCR様抗体κ-軽鎖発現カセットのほかに、このベクターは下記のものを含む:-SV40プロモーター-選択マーカーとしてのネオマイシン耐性遺伝子-大腸菌におけるこのプラスミドの発現を可能にするベクターpUC18由来の複製起点-大腸菌にアンピシリン耐性を付与するβ-ラクタマーゼ遺伝子。c18/A2TCR様抗体κ-軽鎖遺伝子SEQIDNO:14に示した成熟c18/A2TCR様抗体κ-軽鎖タンパク質をコードするのための転写ユニットは、下記のエレメントから構成される:-ヒトサイトメガロウイルスCMV由来の極初期エンハンサーおよびプロモーター-ヒト重鎖免疫グロブリン5’側非翻訳領域UTR-ネズミ免疫グロブリン重鎖シグナル配列;シグナル配列イントロンシグナル配列1、イントロン、シグナル配列2[L1-イントロン-L2]を含む-5’末端のユニークBsml制限部位L2シグナル配列およびスプライスドナー部位および3’末端のユニークXhol制限部位と共に配置された、可変軽鎖コードセグメントSEQIDNO:11-トランケート形ヒトカッパ軽鎖イントロン2-ヒトカッパ軽鎖遺伝子定常部、ならびに-ウシ成長ホルモンポリアデニル化BGHpAシグナル配列。軽鎖発現プラスミド9922のプラスミド地図を図3に示す。実施例2キメラネズミ-ヒトe183/A2TCR様抗体インターフェロン-α2a融合タンパク質のための発現プラスミドの作製キメラネズミ-ヒトe183/A2TCR-L抗体インターフェロン-α2a融合遺伝子を、キメラネズミ-ヒトc18/A2TCR様抗体インターフェロン-α2a融合遺伝子について記載したものと同じ方法で組み立てて、発現プラスミド9976抗体重鎖-IFN-α2a融合遺伝子、9977抗体軽鎖遺伝子を得た。実施例3HEK293細胞における免疫グロブリン-インターフェロンアルファ融合タンパク質の一過性発現、精製および分析解明免疫グロブリン-インターフェロンアルファ融合タンパク質を、F17培地InvitrogenCorp.で培養したHEK293細胞ヒト胚性腎細胞293由来の一過性トランスフェクションにより調製した。トランスフェクションのために293-Freeトランスフェクション試薬Novagenを用いた。免疫グロブリン軽鎖および重鎖を2つの異なるプラスミドから、等モル比の軽鎖-対-重鎖コーディングプラスミドを用いて発現させた。トランスフェクションは、293-Free製造業者の指示書の記載に従って実施された。融合タンパク質を含有する細胞培養上清を、トランスフェクションの7日後に収穫した。上清を精製するまで低温に保存した。たとえばHEK293細胞におけるヒト免疫グロブリンの組換え発現に関する一般情報は、MeissnerPetalBiotechnolBioeng75197203に示されている。抗体を含有する培養上清を濾過し、2工程クロマトグラフィーによって精製した。0.1Mリン酸緩衝液、pH7、で平衡化したProteinASepharose商標CL-4BGEHealthcareを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより抗体を捕獲した。結合しなかったタンパク質を平衡化用緩衝液で洗い去り、抗体を0.1Mクエン酸緩衝液、pH3.5、で溶離し、次いで直ちに1MTris塩基でpH6.0に中和した。Superdex200商標GEHealthcare上におけるサイズ排除クロマトグラフィーを第2精製工程として用いた。サイズ排除クロマトグラフィーは、20mMヒスチジン緩衝液、0.14MNaCl、pH6.0、中で実施された。溶出した抗体を、Biomax-SK膜Millipore,マサチュセッツ州ビレリカを備えたUltrafree-CL遠心フィルターユニットで濃縮し、-80°Cで保存した。抗体および抗体融合体のタンパク質濃度を、280nmでの光学濃度ODにより、アミノ酸配列に基づいて計算した分子吸光係数を用いて判定した。抗体および抗体融合体の純度および適正な四量体形成を、還元剤5mM1,4-ジチオトレイトールの存在下または不存在下でのSDS-PAGE、およびクーマシーブリリアントブルーによる染色により分析した。抗体および抗体融合体調製物の凝集物含量を、SK3000SWxl分析用サイズ排除カラムTosohaas,ドイツ、シュツットガルトを用いる高速SECにより分析した。還元した抗体および抗体融合体の軽鎖および重鎖のアミノ酸主鎖の統合性を、ペプチド-N-グリコシダーゼFRocheMolecularBiochemicals処理によりN-グリカン類を除去した後にNanoElectrosprayQTOF質量分析により確認した。実施例4結合親和性の測定約750共鳴単位RUの捕獲システムヒトIgGに対して特異的な捕獲mAb,JacksonImmunoresearchのアミンカップリングを、CM5チップ上、pH4.5で、GEHealthcareが供給するアミンカップリングキットを用いて実施した。HuFcタグ付きIFNAR2RnDSystems,Cat-Nr.4015-ABを5μg/mlの濃度で捕獲した。濃度1.25μΜのhuFc混合物Biodesign,Cat-Nr.50175を注入することにより、過剰の結合部位をブロックした。0.1nMから50nMまでの範囲の種々の濃度のインターフェロンまたはインターフェロン融合体を、流速10μl/分で298Kのフローセルに120~240秒間通して、会合期を記録した。解離期を600秒までモニターし、試料溶液から流動緩衝液へ切り替えることにより始動させた。流速30μl/分の100mMリン酸緩衝液で1分間の洗浄により、表面を再生した。すべての実験に、GEHealthcareにより供給されるHBS-P緩衝液を選択した10mMHEPES4-2-ヒドロキシエチル-1-ピペラジンエタンスルホン酸、pH7.4,150mMNaCl,0.05v/vSurfactantP20。ブランクカップリングした表面から得られた応答を差し引くことにより、バルク屈折率差を補正した。ブランク注入も差し引いた=二重基準法。ka/kdとして定義した平衡解離定数Kdは、幾つかの異なる濃度で得られたセンソグラム曲線をBIAevaluation4.1ソフトウェアパッケージを用いて分析することにより判定された。データのフィッティングは適切な結合モデルに従った。野生型IFNα-2aについては、図1aに示すように、0.1nM~50nMのIFNα-2aをIFNAR2コートしたセンサーチップ上に注いだ。huFcフラグメントにC末端融合したIFNα-2aについては、そのようなタンパク質を0.5~50nMの濃度で、IFNAR2コートした表面に注いだ。二価結合性のため、複合体安定性はIFNα-2aについての35秒から、Fc-IFNα-2a融合体についての23分に増大する。親和性は、それぞれ、IFNα-2aについての4nMから、見掛け親和性0.3nMに増大する。活性についてはIFNAR1が必須であるので初期結合だけを検討することができ、このようなアッセイではインターフェロンシグナル伝達活性を検討することはできない。"