配列CQFDLSTRRLKCSEQIDNO1、CQYNLSSRALKCSEQIDNO2、またはその改変体を有するメディトープに結合するマウスヒトキメラ抗体またはその機能性フラグメントのフレームワーク領域を含有するフレームワーク結合インターフェース。メディトープは環状である、請求項1記載のフレームワーク結合インターフェース。メディトープは直鎖状である、請求項1記載のフレームワーク結合インターフェース。結合インターフェースはマウスヒトキメラ抗体またはその機能性フラグメントのFab軽鎖およびFab重鎖の間に位置する、請求項1記載のフレームワーク結合インターフェース。フレームワーク領域はFab部分から構成される、請求項1記載のフレームワーク結合インターフェース。抗体はセツキシマブまたはその機能性フラグメントである、請求項1記載のフレームワーク結合インターフェース。長鎖リンカー、多価スキャホールド、小化学スキャホールド、ビオチンストレプトアビジン、またはIgGFcドメインのいずれか1つを用いて結合している2つまたはそれ以上のメディトープを含有する多価メディトープ連結体。2つまたはそれ以上のメディトープはCQFDLSTRRLKCSEQIDNO1、CQYNLSSRALKCSEQIDNO2、またはその改変体から選択される、請求項7記載の多価メディトープ連結体。多価メディトープ連結体は2価、3価、または4価のメディトープ連結体である、請求項7記載の多価メディトープ連結体。多価メディトープ連結体は2つまたはそれ以上のメディトープ使用可能治療用抗体またはその機能性フラグメントを連結するために使用される、請求項7記載の多価メディトープ連結体。多価メディトープ連結体はメディトープ使用可能モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントの結合安定性および/または有効性を向上する、請求項7記載の多価メディトープ連結体。メディトープ使用可能モノクローナル抗体は、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アレムツズマブ、アトリズマブ、ペンテト酸アルツムマブ、アナツムマブマフェナトックス、アルシツムマブ、バシリキシマブ、ベクツムマブベンラリズマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エタラシズマブエトルマキソマブファノレソマブ、FBTA05、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツシキマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポリズマブ、ムロモナブCD3、ナタリズマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、オレゴモマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、TRBS07、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、またはそれらの機能性フラグメントから選択されるメディトープ使用可能治療用抗体である、請求項11記載の多価メディトープ連結体。イメージング剤、治療剤、またはその両方を更に含有する、請求項7記載の多価メディトープ連結体。イメージング剤、治療剤、またはその両方が金属イオンに結合した金属キレート剤である、請求項13記載の多価メディトープ連結体。1つまたはそれ以上の治療物質、イメージング物質、またはそれらを組み合わせたものと共にメディトープを含有する組成物。メディトープは配列CQFDLSTRRLKCSEQIDNO1またはCQYNLSSRALKCSEQIDNO2を含有する、請求項15記載の組成物。治療物質は1つまたはそれ以上の小分子、化学療法剤、治療用抗体もしくはその機能性フラグメント、毒物、放射性同位体、酵素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、オリゴヌクレオチド、ナノ粒子、RNAi分子、キレート剤、ホウ素化合物、光反応性物質、色素、またはそれらを組み合わせたものである、請求項15記載の組成物。イメージング物質は1つまたはそれ以上の蛍光もしくは発光物質、酵素、造影剤、放射性物質、またはナノ粒子である、請求項15記載の組成物。治療物質はCovXBodyTMを伴う、請求項15記載の組成物。治療用ヒトまたはヒト化抗体を改変する方法であって、Fab中央空洞部分のヒトフレームワーク領域内に位置する1つまたはそれ以上のヒトフレームワーク残基を、配列CQFDLSTRRLKCSEQIDNO1、CQYNLSSRALKCSEQIDNO2、またはその改変体を有するメディトープが1つまたはそれ以上のヒトフレームワーク残基に結合するように、対応する1つまたはそれ以上のマウス残基で置換することを含む、上記方法。1つまたはそれ以上の置換は、軽鎖のP8、V9、I10、S14、E17、Q38、R39、T40、N41、G42、S43、P44、D82、I83、A84、D85、Y86、Y87、G99、A100、G101、T102、K103、L104、E105、K107、R142、S162、V163、T164、E165、Q166、D167、S168、もしくはY173位;または重鎖のQ6、P9、R38、Q39、S40、P41、G42、K43、G44、L45、S87、D89、T90、A91、I92、Y93、Y94、W109、G110、Q111、G112、T113、L114、V115、T116、Y151、E154、P155、V156、T171、F172、P173、A174、V175、Y182、S183、もしくはL184位のフレームワーク残基である、請求項20記載の方法。1つまたはそれ以上の置換は、セツキシマブ軽鎖のS9I、S10L、K39R、P40T、P40S、G41N、K42G、A43S、F83I、F83V、T85N、T85D、もしくはQ100A;または重鎖のA36SもしくはV89Iである、請求項20記載の方法。置換によって、治療用ヒト抗体またはその機能性フラグメントの結合および/または治療効果を向上させる多価メディトープ連結体の結合が可能となる、請求項20記載の方法。フレームワークへの結合は、メディトープとフレームワークとの間に少なくとも1つのジスルフィド結合または少なくとも1つの非天然アミノ酸との結合を伴う、請求項20記載の方法。配列CQFDLSTRRLKCSEQIDNO1、CQYNLSSRALKCSEQIDNO2、またはその改変体を有するメディトープに結合するキメラ化マウス抗体またはその機能性フラグメントのフレームワーク結合インターフェースを有する治療用抗体を含有するメディトープ使用可能モノクローナル抗体。結合インターフェースはキメラ化マウス抗体またはその機能性フラグメントのFab軽鎖とFab重鎖との間に位置する、請求項25記載のメディトープ使用可能モノクローナル抗体。フレームワーク領域はFab部分から構成される、請求項25記載のメディトープ使用可能モノクローナル抗体。抗体は、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アレムツズマブ、アトリズマブ、ペンテト酸アルツムマブ、アナツムマブマフェナトックス、アルシツムマブ、バシリキシマブ、ベクツムマブ、ベンラリズマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セルトリズマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エタラシズマブ、エトルマキソマブ、ファノレソマブ、FBTA05、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツシキマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポリズマブ、ムロモナブCD3、ナタリズマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、オレゴモマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、TRBS07、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、またはそれらの機能性フラグメントである、請求項25記載のメディトープ使用可能モノクローナル抗体。モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントの精製法であって、メディトープまたはメディトープ改変体を固相に結合させ;結合したメディトープまたはメディトープ改変体を、モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントを含有するかまたは含有する疑いのある溶液と接触させて、モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントをメディトープに結合させることを含む、上記方法。モノクローナル抗体は、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アレムツズマブ、アトリズマブ、ペンテト酸アルツムマブ、アナツムマブマフェナトックス、アルシツムマブ、バシリキシマブ、ベクツムマブ、ベンラリズマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エタラシズマブ、エトルマキソマブ、ファノレソマブ、FBTA05、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツシキマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポリズマブ、ムロモナブCD3、ナタリズマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、オレゴモマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、TRBS07、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、またはそれらの機能性フラグメントから選択されるメディトープ使用可能治療用抗体である、請求項29記載の方法。疾病または病態の治療、イメージング、または診断の方法であって、治療的有効量の医薬組成物を被験体に投与することを含み、医薬組成物は、抗体メディトープ複合体;モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントと組み合わせた多価連結剤;またはそれらを組み合わせたものを含有する、上記方法。抗体メディトープ複合体;モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントと組み合わせた多価連結剤;またはそれらを組み合わせたものは、疾病もしくは病態の診断もしくはイメージングのための1つもしくはそれ以上の診断剤もしくはイメージング剤、疾病を治療するための1つもしくはそれ以上の治療剤、またはそれらを組み合わせたものにコンジュゲートされている、請求項31記載の方法。治療剤は、1つまたはそれ以上の小分子、化学療法剤、治療用抗体もしくは機能性フラグメント、毒物、放射性同位体、酵素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、オリゴヌクレオチド、ナノ粒子、RNAi分子、キレート剤、ホウ素化合物、光反応性物質、色素、またはそれらを組み合わせたものである、請求項32記載の方法。診断剤またはイメージング剤は、1つまたはそれ以上の蛍光もしくは発光物質、酵素、造影剤、放射性物質、またはナノ粒子である、請求項32記載の方法。抗体メディトープ複合体;モノクローナル抗体もしくはその機能性フラグメントと組み合わせた多価連結剤;またはそれらを組み合わせたものは、治療用抗体単独での治療、診断、またはイメージングの有効性を向上する、請求項31記載の方法。抗体メディトープ複合体は、メディトープおよびメディトープ使用可能モノクローナル抗体を含有し、メディトープ使用可能モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントは、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アレムツズマブ、アトリズマブ、ペンテト酸アルツムマブ、アナツムマブマフェナトックス、アルシツムマブ、バシリキシマブ、ベクツムマブ、ベンラリズマブ、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エタラシズマブ、エトルマキソマブ、ファノレソマブ、FBTA05、フォントリズマブ、ゲムツズマブ、ギレンツシキマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インフリキシマブ、イピリムマブ、ラベツズマブ、メポリズマブ、ムロモナブCD3、ナタリズマブ、ニモツズマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、オレゴモマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、チウキセタン、トシツモマブ、トラスツズマブ、TRBS07、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、またはそれらの機能性フラグメントから選択される治療用抗体である、請求項31記載の方法。多価連結剤は、治療的有効量のセツキシマブを被験体に投与した後、または治療的有効量のセツキシマブを被験体に投与するのと同時に投与される、請求項31記載の方法。腫瘍バイオマーカーを過剰発現する細胞を標的化する方法であって、治療的有効量のメディトープ使用可能モノクローナル抗体またはその機能性フラグメントを、メディトープ、メディトープ改変体、または多価連結剤と組み合わせて、バイオマーカーを過剰発現する、または過剰発現する疑いのある細胞集団に投与することを含む、上記方法。腫瘍バイオマーカーはEGFRであり、メディトープ使用可能モノクローナル抗体はセツキシマブである、請求項38記載の方法。メディトープ改変体の結合親和性を改変する方法であって、メディトープ改変体を1つまたはそれ以上の位置で改変して、低pHレベルでのメディトープの結合親和性を増加または低下させることを含む、上記方法。リソソーム薬剤送達を行うために、メディトープ改変体は低pHレベルにおいて低下した結合親和性を有する、請求項40記載の方法。腫瘍細胞への特異的結合を行うために、メディトープ改変体は低pHおよび低酸素環境において増加した結合親和性を有する、請求項40記載の方法。メディトープまたはメディトープと同様のフレームワーク結合機能性を有する小分子をスクリーニングする方法であって、推定されるメディトープまたは小分子のライブラリーをメディトープ使用可能抗体と接触させ;推定されるメディトープまたは小分子がメディトープ使用可能抗体にフレームワーク結合インターフェースで結合するか否かを測定し;1つまたはそれ以上の候補となるメディトープまたはメディトープと同様のフレームワーク結合機能性を有する小分子を同定し;1つまたはそれ以上の候補の結合親和性を測定し;そして、結合解離定数が少なくとも070μMである場合に、1つまたはそれ以上の候補をメディトープまたはメディトープと同様のフレームワーク結合機能性を有する小分子であると同定することを含む、上記方法。発明の概要抗体結合ペプチドである、CQFDLSTRRLKCcQFDSEQIDNO1およびCQYNLSSRALKCcQYNSEQIDNO2は、新規のmAb結合特性を有することが明らかにされた。特に、cQFDおよびcQYN別名メディトープmeditopeは、抗EGFRmAbであるセツキシマブのFabフレームワーク領域に結合し、抗原が結合する相補性決定領域CDRには結合しないことが明らかにされた。そのFabフレームワーク上の結合領域は、他のフレームワーク結合抗原例えばスーパー抗原、黄色ブドウ球菌プロテインASpAGrailleら2000およびペプトストレプトコッカスマグヌスPeptostreptococcusmagnusプロテインLPpLGrailleら2001とは異なっており、これまで知られていなかった。従って、第1の態様は、配列CQFDLSTRRLKCSEQIDNO1またはCQYNLSSRALKCSEQIDNO2を有する環状メディトープに結合する、ユニークなマウスヒト抗体またはその機能性フラグメントのフレームワーク領域を含有するフレームワーク結合インターフェースである。表面プラズモン共鳴によるメディトープのキャラクタリゼーションによれば、cQFDおよびcQYNは、それぞれ約070095および25μMの解離定数でFabに結合する。特異的相互作用が破綻するように設計した点変異により、その構造モデルが更に立証されている。FACS分析から、高濃度のcQFDメディトープ60μMによって生ずる、EGFR受容体を過剰発現するMDAMB468細胞へのセツキシマブの結合能の相違は、無視できる程度のものであることが明らかになった。従って、メディトープ結合は、抗原結合に影響しない。更に、メディトープを蛍光基とコンジュゲートさせたところ、セツキシマブで前処理したMDAMB468細胞には結合するが、マウス抗EGFR抗体M425で前処理したMDAMB468細胞には結合しないことが明らかとなった図29。総合すると、これらのデータからFabフレームワーク内のメディトープ結合インターフェースが明確となり、メディトープ結合は抗原結合を阻害しない例えばアロステリック調節剤として作用しないことが明らかとなる。別の態様では、上記の新規結合特性を有するメディトープ例えばcQYNまたはcQFDまたはその改変体を用いて治療用モノクローナル抗体mAbに機能性を付与することができる。更なる態様では、本明細書に記載するメディトープを使用して、治療物質、例えばモノクローナル抗体またはその機能性フラグメント、または他の物質、例えば小分子の有効性に作用を及ぼすことができる。更に別の態様では、タグまたは検出可能標識をメディトープに結合させることによって、診断または治療に使用するために特定のタイプの細胞または組織を同定することができる。別の態様では、メディトープはシステインを含有し、これがFabのメディトープ結合部位のシステインと共有結合を形成する。メディトープを任意の物質、分子、または化合物にコンジュゲートさせる。それらは治療用分子、例えば診断用小分子、例えばマーカーであることができる。Cysメディトープは、コンジュゲートをIgGへ誘導し、共有結合を介して結合する。発明の詳細な説明治療剤またはイメージング剤を標的組織に選択的に送達させる抗体送達システム、およびそれらの使用法を本明細書で提供する。抗体送達システムは、抗体フレームワーク結合インターフェースフレームワーク結合インターフェースまたは結合インターフェースが抗体結合分子またはメディトープに結合して抗体メディトープ複合体を形成したものを含んでもよい。抗体メディトープ複合体は、下記に詳述する方法に使用するための1つまたはそれ以上の更なる抗体メディトープ複合体、治療剤、イメージング剤、またはそれらを組み合わせたものに更にコンジュゲートしていてもよい。ある態様では、メディトープが結合できる抗体フレームワーク結合インターフェースは、抗体またはその機能性フラグメントの相補性決定領域CDRではなく、フレームワーク領域で形成される。本明細書で使用する抗体またはその機能性フラグメントとは、特定の抗原またはエピトープに特異的に結合する、またはそれらと免疫学的に反応する免疫グロブリン分子をいい、それらにはポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方が包含される。抗体という用語は、遺伝子操作または他の改変を行った免疫グロブリン、例えばイントラボディintrabody、ペプチボディpeptibody、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、メディトープ使用可能抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体例えば二重特異性抗体、ディアボディdiabody、トリアボディtriabody、テトラボディtetrabody、タンデムdiscFv、タンデムtriscFvを包含する。機能性抗体フラグメントという用語は抗体の抗原結合フラグメントを包含し、それらには、限定される訳ではないが以下がある:抗原結合Fabフラグメント、F2フラグメント、Fabフラグメント、Fvフラグメント、組換えIgGrIgGフラグメント、1本鎖可変フラグメントscFv、および単一ドメイン抗体例えばsdAb、sdFv、ナノボディnanobodyフラグメント。ある態様では、抗体またはその機能性フラグメントの結合およびイメージングを向上するために、結合インターフェースを開発または最適化することができる。別の態様では、メディトープはシステイン残基を含有し、これがメディトープ結合部位で、Fabに組換え導入したシステインに結合することができる例えばThioMAb。これによって、メディトープを任意の診断および/または治療ための物質、分子、または化合物にコンジュゲートする。例えば、物質は診断用小分子、例えばマーカーであってもよい。Cysメディトープは、コンジュゲートをIgGへ誘導し、共有結合を介して結合する。あるいはまた、メディトープはFabのメディトープ結合部位に導入された1つまたはそれ以上の非天然アミノ酸にコンジュゲートすることができる。非天然アミノ酸と共に形成することができる結合の例として以下がある:ipアセチルフェニルアラニン、mアセチルフェニルアラニン、p3オキソブタノイル1フェニルアラニン、およびp2アミノ3ヒドロキシエチルフェニルアラニンの導入による安定なヒドラゾン結合およびオキシム結合、iiフェニルセレニジルアラニンphenylselenidylalanineの導入による反応性チオール、iiipベンゾイル1フェニルアラニンの導入によるベンゾフェノン含有UV架橋、ivpイソプロピルチオカルボニルまたはpエチルチオカルボニルフェニルアラニンの導入による反応性アミン、vpプロパルギルオキシフェニルアラニンまたはpアジドフェニルアラニンの導入によるアジドアルキンヒュスゲン環化付加、または当該分野で公知の任意の他の好適な非天然アミノ酸。ある態様では、メディトープがFabに導入された非天然アミノ酸例えばpアセチルフェニルアラニンに反応基を誘導してもよい。更に、メディトープのためのフレームワーク結合インターフェースを他のmAbに移植し、メディトープ使用可能mAbを作製することができる。メディトープ結合部位を他のmAbに移植できるため、この結合インターフェースは、EGFRを標的とする場合のセツキシマブとだけでなく、任意のモノクローナル抗体と共に使用することができる、汎用性の高いプラットフォーム技術である。メディトープ使用可能なmeditopeenabled抗体、モノクローナル抗体、または治療用抗体とは、そのフレームワーク結合インターフェースでメディトープと結合することができる任意の抗体例えばセツキシマブをいう。従って、プラットフォームは、治療用抗体を用いて治療または標的化しうる任意の癌、疾病、または他の症状の治療、診断、またはイメージングへの使用まで拡大することができ、それらの癌、疾病、または症状には、限定される訳ではないが以下がある:白血病およびリンパ腫例えばアレムツズマブ、ベクツムマブbectumumab、ゲムツズマブ、FBTA05、イブリツモマブチウキセタン、オファツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブを用いて治療またはイメージングできるもの、乳癌例えばトラスツズマブ、アデカツムマブadecatumumab、エトルマキソマブetrumaxomabを用いて治療またはイメージングできるもの、前立腺癌例えばアデカツムマブ、カプロマブペンデチドcapromabpendetide、エタラシズマブetaracizumabを用いて治療またはイメージングできるもの、結腸直腸癌例えばラベツズマブlabetuzumab、パニツムマブ、ペンテト酸アルツムマブaltumumabpentetate、ボツムマブvotumumabを用いて治療またはイメージングできるもの、消化管癌例えばアルシツムマブarcitumumab、カツマキソマブcatumaxomabを用いて治療またはイメージングできるもの、卵巣癌例えばアバゴボマブabagovomab、カツマキソマブ、エタラシズマブ、イゴボマブigovomab、オレゴモマブoregovomabを用いて治療またはイメージングできるもの、肺癌例えばアナツムマブマフェナトックスanatumumabmafenatoxを用いて治療またはイメージングできるもの、膵臓癌例えばクリバツズマブテトラキセタンclivatuzumabtetraxetanを用いて治療またはイメージングできるもの、腎臓癌例えばギレンツシキマブgirentuximabを用いて治療またはイメージングできるもの、黒色腫例えばエタラシズマブ、イピリムマブ、TRBS07を用いて治療またはイメージングできるもの、神経膠腫例えばニモツズマブを用いて治療またはイメージングできるもの、骨転移例えばデノスマブを用いて治療またはイメージングできるもの、頭頸部癌例えばザルツムマブzalutumumabを用いて治療またはイメージングできるもの、心血管疾患例えばアブシキシマブを用いて治療またはイメージングできるもの、自己免疫疾患例えばアダリムマブ、インフリキシマブを用いて治療またはイメージングできるもの、リウマチ性関節炎例えばアトリズマブatlizumab、ゴリムマブ、インフリキシマブを用いて治療またはイメージングできるもの、移植拒絶反応例えばバシリキシマブ、ダクリズマブ、ムロモナブCD3を用いて治療またはイメージングできるもの、クローン病例えばセルトリズマブ、フォントリズマブ、ナタリズマブ、インフリキシマブ、ビジリズマブvisilizumabを用いて治療またはイメージングできるもの、ヘモグロビン尿症例えばエクリズマブを用いて治療またはイメージングできるもの、乾癬例えばエファリズムマブ、インフリキシマブ、ウステキヌマブを用いて治療またはイメージングできるもの、多発性硬化症例えばナタリズマブ、ウステキヌマブを用いて治療またはイメージングできるもの、喘息例えばベンラリズマブbenralizumab、メポリズマブ、オマリズマブを用いて治療またはイメージングできるもの、呼吸器合胞体ウイルス例えばパリビズマブを用いて治療またはイメージングできるもの、黄斑変性症例えばラニビズマブを用いて治療またはイメージングできるもの、虫垂炎例えばファノレソマブfanolesomabを用いて治療またはイメージングできるもの、および、抗体で標的化targetingまたは治療しうる他の任意の病態。上記の抗体および関連する疾病または障害は単なる実例であり、プラットフォームを制限するものではない。ある態様では、環状抗体結合ペプチドCQFDLSTRRLKCcQFD;SEQIDNO1およびCQYNLSSRALKCcQYN;SEQIDNO2は、非共有結合性相互作用を介して抗体フレームワーク結合インターフェースに結合できる。この結合相互作用の非共有結合性により、フレームワーク結合インターフェース、ペプチド、またはその両方を改変するための新規の代替法が得られ、特異性の高いメディトープ改変体作製の可能性が広がる。ある態様では、cQFDおよびcQYNペプチドは、下記の回折データおよび生物物理学データが示すように、セツキシマブのFab領域のCDR領域ではなくフレームワーク領域に結合する。この結合部位は、他のフレームワーク結合抗原例えばスーパー抗原、黄色ブドウ球菌プロテインASpAおよびペプトストレプトコッカスマグヌスプロテインLPpLの結合部位とは異なる図7。更に、プロテインAおよびプロテインLは、患者中に存在するIgGと結合する。従って、相互作用は特異的である。X線結晶解析により、ペプチドは、重鎖および軽鎖を輪郭とするFab空洞内に700nMの結合定数で結合することが明らかにされている。この相互作用を利用して、特に、ネイキッドmAbの治療有効性の改善、イメージング剤または治療剤の標的化送達の向上、およびmAbに基づくイメージング法の改善を行うことができる。cQFDおよびcQYNメディトープは、セツキシマブ中に存在するような、キメラフレームワーク結合領域に結合する。本明細書で使用するメディトープmeditopemediusラテン語で中間toposギリシャ語で場所という用語は、抗体のFab軽鎖および重鎖の間に結合する抗体結合ペプチド例えばcQFDおよびcQYNペプチドまたはその改変体をいう。他の分子も、メディトープと同様のフレームワーク結合機能性で抗体のFab重鎖および軽鎖の間に結合しうる。それらの分子には、限定される訳ではないが小分子、アプタマー、核酸分子、ペプチボディ、および任意の他の物質で、メディトープと同じ結合インターフェースに結合できるものが包含される。本明細書に記載するフレームワーク結合インターフェースは、抗原エピトープに結合するCDRとは別のもので、離れた位置にある図4。更に、生化学アッセイおよび細胞に基づくアッセイでは、cQFDおよびcQYN環状ペプチドは予めEGFRに結合させたマウスキメラ化セツキシマブと結合できることが明らかになっている図4。セツキシマブはユニークなマウスヒトキメラであり、cQFDおよびcQYNメディトープとセツキシマブFabの間の数種の相互作用は、このマウスヒトキメラIgGフレームワーク残基に特異的であることが、本明細書に記載する原子モデルから明らかになっている。更に、メディトープはヒトIgGフレームワーク例えばトラスツズマブには結合せず、この相互作用はこのマウスキメラ抗体に特異的であって、他のマウスキメラ例えばリツキシマブには特異的でないことを示している図29。これは、セツキシマブフレームワークが高度に特異的であることを立証するものである。セツキシマブ環状ペプチド構造上に複数のヒトおよびマウスFabを重ね合わせることにより、このペプチドとマウスヒトキメラFab間の鍵となる相互作用は、ヒトのみ、およびマウスのみのIgG構造には存在しないことが明らかとなる。環状ペプチド内の主要な残基に点変異を施与するとFabへの結合親和性は低下し、このことは高度な特異性および構造モデルを裏付けているデータ未掲載。従って、相互作用はこの特異的マウスヒトキメラFabの中央空洞部に特異的であると考えられる。これに対し、PpLおよびSpAはマウス特異的ではない。PpLはマウスIgGカッパ軽鎖の~66、ヒトIgGカッパ軽鎖の~50に結合し、SpAはマウス重鎖可変領域の12、ヒト重鎖可変領域の50に結合するGrailleら2002。セツキシマブは現在、EGFRを発現する転移性結腸直腸癌および頭頸部癌の治療に使用されている。セツキシマブは立体構造エピトープ例えば、折りたたまれたEGFRドメインIIIを認識する。小分子抗原、ペプチド、およびタンパク質エピトープを認識する抗体を比較することにより、インターフェースが異なる特性を有する傾向にあることが明らかになっているCollisら2003。小分子は小さなポケットにはめ込まれ;ペプチドは並列してlineargroveフィットし;タンパク質は広い表面と接触する傾向がある。従って、セツキシマブEGFRとの場合と同様のタンパク質抗体相互作用を再現できるペプチドは、一般に、広い接触表面があり、折りたたまれていないドメインを有するタンパク質抗原のものである。例えば、トラスツズマブはタンパク質抗原立体構造エピトープを認識するが、主として、多くの幾何学的に拘束されたループと接触するDuら2007;Choら2003。このタイプの生物学的認識は、ペプチド模倣物との適合性がより高い。cQFDおよびcQYNメディトープは、当初、セツキシマブのCDR領域に結合するペプチド候補として同定された。ファージディスプレーライブラリーが、確立された治療用抗体の相補性決定領域CDRに結合するペプチドを同定するために使用されてきたが、これは、ペプチドが抗原エピトープを模倣して、その抗原への免疫応答を人工的に惹起するという推測に基づいているRiemerら2004;Riemerら2005;Liら2006。これらのペプチド模倣物別名ミモトープまたは抗イディオタイプを化学的に合成し、起こりうる生物学的汚染を回避し、コストを低減することができる。しかしながら、この意図に基づくワクチンで得られるのは部分的な応答であり、多くの場合、その後、腫瘍抗原への免疫応答は消失せず、疾病が再発するSharavら2007。cQFDおよびcQYNメディトープはCDR領域ではなくフレームワークに結合するので、それらのメディトープがワクチン用の特異的セツキシマブ様抗体の免疫原候補となる可能性は低い。Reimerらの知見によれば、KLHを結合させたメディトープで免疫化したマウスから回収した血清から、A431細胞に結合してその増殖を阻害する抗体が産生されたがRiemerら2005、本明細書に記載する研究は、アジュバントに結合した複数コピーのメディトープによって、ワクチンがマウスIgGとの無差別架橋剤となるスーパー抗原と類似することを示している。この態様を裏付けるものとして、BLASTにおいて、類似した生殖細胞系またはB細胞由来フレームワーク配列がマウス軽鎖、並びにマウスおよびヒトの重鎖に見られる。従って、メディトープペプチドをアジュバントに連結させた場合、保存されたフレームワーク領域を有するB細胞集団を活性化し、ワクチンに必要とされる特異的免疫応答ではなく、全身免疫応答を惹起しうる。報告されているELISA競合アッセイでは、EGFRの特異的結合部位も、ポリクローナル血清がEGFR上のセツキシマブエピトープにどの程度特異的であるかも明らかにされていない例えば報告は、血清由来IgGが未標識セツキシマブによって阻害されるか否かを示していない。回折解析および生化学的試験は、ヒトにおけるワクチンとしてのcQYNまたはcQFDメディトープの使用を支持していない。本明細書に記載する態様において使用することができる更なるメディトープには、セツキシマブまたは他の治療用抗体の抗体フレームワーク結合インターフェースすなわちFabの軽鎖および重鎖の間に結合する任意の小ペプチドが含まれる。例えば、環状ペプチドcQFDおよびcQYNの他に、ある態様ではcQFDおよびcQYNの1つまたはそれ以上の改変体が含まれる。構造的および生物物理学的方法または改変を化学合成と併用し、例えばpHの変更下記実施例に記載によってセツキシマブへの親和性が未改変メディトープ、cQFDおよびcQYNに比較して向上または改変されたメディトープ改変体を開発することができる。更に、未改変メディトープまたは改変型メディトープを多価連結体tetherentityまたはスキャホールドにコンジュゲートさせることにより、全体の親和性、および腫瘍関連抗原に結合したメディトープ使用可能mAbへの多価メディトープの標的化が有意に向上されうる。高親和性を有するメディトープ改変体の作製に使用することができるcQFDおよびcQYNメディトープへの改変には、当該分野で公知の任意のペプチド改変法が包含される。各アミノ酸位置は、変性アミノ酸に変更するか、または化学的にフラグメントにコンジュゲートさせてもよい。ある態様では、1つまたはそれ以上のメディトープ、メディトープ改変体、多価メディトープ連結剤、または多価メディトープ改変体連結剤を1つまたはそれ以上のイメージング剤、治療的有効量の治療的有効薬剤もしくは化合物、またはその両方にコンジュゲートさせ、メディトープまたはその改変体が治療的に有効な化合物を有する1つまたはそれ以上のメディトープ使用可能抗体に結合することによって疾病または病態を治療、予防、診断、またはモニタリングできるようにすることができる。そのような高親和性かつ/またはメディトープ使用可能mAbに結合した多価メディトープのコンジュゲーションにより、非常に汎用性の高いプラットフォーム技術が得られ、それによって、疾病の治療および検出のためのmAbに基づく治療法およびイメージング法が著しく向上される図8参照。ある態様では、マウス特異的cQFDおよびcQYNメディトープまたはその誘導体を使用して、2つまたはそれ以上の抗体またはその機能性フラグメントを連結させることができる。後述の連結法に使用する場合、メディトープは多価連結剤別名メディトープスキャホールドまたはスキャホールドの一部であって、癌または腫瘍の治療およびイメージングを向上させることができる。多価連結剤には、2つまたはそれ以上のcQFDおよびcQYNメディトープ、または任意の他の新規メディトープ改変体で、長鎖リンカーおよびビオチンを介してストレプトアビジンに結合し、多価メディトープ連結体を形成しているものがある。ある態様では、多価メディトープ連結体は4価メディトープ連結剤である。表面プラズモン共鳴によれば、4量体連結体は1価ペプチドに比較してIgGへの結合が向上されており、これは多価相互作用と整合性がある。FACS分析によれば、4価メディトープはEGFR陽性細胞におけるセツキシマブの結合親和性も向上する。多価メディトープスキャホールドを腫瘍関連抗原に結合したスキャホールドまたはデイジーチェーンメディトープ使用可能mAbに使用し、リガンド拮抗作用の向上、受容体エンドサイトーシスの改変、および/またはADCCCDCを介する免疫応答の向上を行うことができる図8。モノクローナル抗体mAbは2量体Fcに結合した2つのFabドメインをコードする。そのため、これらの2価IgGは抗原を発現する細胞に高密度で結合する。同じ抗原上の独自のエピトープに結合する第2のmAbにより、受容体のクラスター形成および、より効果的な腫瘍細胞の死滅が可能となることが明らかになっている。このクラスター形成は、多価メディトープの使用によって再現できる。多価メディトープを使用すれば第2のmAbを同定する必要がなく、その開発に伴う多額の費用が回避される。メディトープ、メディトープ改変体、多価メディトープ連結剤、および多価メディトープ改変体連結剤の特性および結合を使用し、1つまたはそれ以上のメディトープ使用可能モノクローナル抗体と併せて投与して、治療剤、診断剤例えばイメージング剤、またはそれらを組み合わせたものを送達し、疾病または病態の治療、診断、またはイメージングを行うことができる。従って、メディトープ使用可能モノクローナル抗体を投与した後にメディトープ、メディトープ改変体、多価メディトープ連結剤、または多価メディトープ改変体連結剤を投与することにより、多価メディトープを使用して事前標的化療法およびイメージングを行うことができる。更に、多価メディトープの使用によって、遺伝子操作によって得たscFvまたは化学的にコンジュゲートさせたmAbで明らかになっているのと同様に選択性を向上し、腫瘍検出を改善しつつ、それらの非ヒト構築物に内在する免疫原性の可能性を回避することができる。ある態様では、メディトープ使用可能抗体と共投与されるメディトープ、抗体メディトープ複合体、メディトープ使用可能抗体と共投与される多価連結剤、またはそれらを組み合わせたものを、1つまたはそれ以上のイメージング剤にコンジュゲートさせることができる。ある観点では、イメージング剤には、限定される訳ではないが、蛍光、発光、または磁性のタンパク質、ペプチド、またはそれらの誘導体例えば遺伝子操作した改変体がある。mRNA要素によって発現させることができる蛍光タンパク質には緑色蛍光タンパク質GFP、改良型GFPEGFP、赤色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、シアン蛍光タンパク質、サファイア蛍光タンパク質、およびサンゴ蛍光タンパク質がある。mRNA要素によって発現させることができる発光タンパク質には、ルシフェラーゼ、エクオリン、およびそれらの誘導体がある。多数の蛍光および発光色素およびタンパク質が当該分野で知られている例えば以下参照:米国特許出願第20040067503号;ValeurBMolecularFluorescencePrinciplesandApplicationsJohnWileyandSons2002;HandbookofFluorescentProbesandResearchProductsMolecularProbes社増補第9版2002;およびTheHandbookAGuidetoFluorescentProbesandLabelingTechnologiesInvitrogen社第10版Invitrogen社ウェブサイトで入手可いずれも、参照により、本明細書に完全に記載されているのと同様に本明細書に組み込まれる。他の観点では、メディトープ使用可能抗体と共投与されるメディトープ、抗体メディトープ複合体、メディトープ使用可能抗体と共投与される多価連結剤、またはそれらを組み合わせたものを、非タンパク質イメージング剤または送達媒体、例えばナノ粒子、放射性物質例えば放射性同位体、放射性核種、放射能標識、または放射性トレーサ、色素、造影剤、蛍光化合物もしくは分子、生物発光化合物もしくは分子、酵素、および増強剤例えば常磁性イオンに更にコンジュゲートまたは結合させることができる。更に、留意すべきことに、一部のナノ粒子、例えば量子ドットおよび金属ナノ粒子後述も、イメージング剤または治療剤として使用するのに好適であり得る例えば高温度療法および光線力学療法を使用して、また、蛍光および/もしくはMRI造影剤によるイメージング剤。本開示の態様において更なるイメージング剤として使用することができる蛍光物質および発光物質には、限定される訳ではないが、一般に色素、標識、または指示薬と呼ばれる多様な有機または無機小分子がある。それらの例として、フルオレセイン、ローダミン、アクリジン色素、Alexa色素、およびシアニン色素がある。本開示の態様において更なるイメージング剤として使用することができる酵素には、限定される訳ではないが、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ、βグルコロニダーゼ、またはβラクトマーゼがある。それらの酵素を色原体、蛍光性化合物、または発光性化合物と併用して検出可能シグナルを生成させてもよい。本開示の態様において更なるイメージング剤として使用することができる放射性物質には、限定される訳ではないが、18F、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、77As、86Y、90Y、89Sr、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、1541581Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra、および225Acがある。本開示の態様において更なるイメージング剤として使用することができる常磁性イオンには、限定される訳ではないが、遷移イオンおよびランタニド金属例えば、原子番号2129、42、43、44、または5771の金属がある。これらの金属には、Cr、V、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、およびLuイオンがある。イメージング剤が放射性金属または常磁性イオンの場合、物質を別の長い尾部を有する物質それらのイオンを結合させるための1つまたはそれ以上のキレート化基が結合した長い尾部を有するものと反応させることができる。長い尾部は、ポリマー、例えばポリリシン、多糖、または、金属もしくはイオンへの結合のためのペンダント基を有する誘導体化された、もしくは誘導体化可能な鎖であってもよい。本開示において使用することができるキレート化基の例には、限定される訳ではないが、エチレンジアミン四酢酸EDTA、ジエチレントリアミン五酢酸DTPA、DOTA、NOTA、NETA、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビスチオセミカルバゾン、ポリオキシムなどの基がある。キレートのPSMA抗体または機能性抗体フラグメントへの結合は、通常、免疫反応性の喪失を最小限に抑え、凝集および/または内部架橋を最小限に抑えて分子との結合形成を可能とするような基によってなされる。同じキレートが、非放射性金属例えばマンガン、鉄、およびガドリニウムと複合体を形成する場合、本明細書に記載する抗体およびキャリアと併用すると、MRIに有用である。大環状キレート例えばNOTA、DOTA、およびTETAは、種々の金属および放射性金属と併用すると有益であり、それらにはそれぞれ、限定される訳ではないが、ガリウム、イットリウム、および銅の放射性核種がある。核種を安定に結合することを目的とする、大環状ポリエーテルのような他の環状キレート例えばRAIT用の223Ra複合体を使用してもよい。ある態様では、キレート部分を用いてPETイメージング剤例えばAI18F複合体を標的分子に結合させ、PET分析に使用してもよい。ある態様では、メディトープ、抗体メディトープ複合体、多価連結剤、またはそれらを組み合わせたものを、1つまたはそれ以上の治療剤にコンジュゲートさせてもよい。本明細書で使用する治療剤とは、本明細書に記載する癌または他の病態の治療に有用な原子、分子、または化合物である。抗体メディトープ複合体、多価連結剤、またはそれらを組み合わせたものにコンジュゲートさせることができる治療剤の例には、限定される訳ではないが、薬物、化学療法剤、治療用抗体および抗体フラグメント、毒物、放射性同位体、酵素例えば腫瘍部位でプロドラッグを開裂して細胞傷害性物質とする酵素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫調節剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、RNAi分子例えばsiRNAまたはshRNA、キレート剤、ホウ素化合物、光反応性物質、および色素がある。また治療剤には、金属、金属合金、金属間化合物、またはコアシェルのナノ粒子をキレート剤に結合させたものがあり、これは放射線増感剤として作用し、標的細胞の放射線治療に対する感受性を健常細胞に比較してより高くする。更に、治療剤にはMRI造影剤用の常磁性ナノ粒子例えばマグネタイトまたはFe3O4があり、これを他のタイプの療法例えば光線力学療法および高温度療法およびイメージング例えば蛍光イメージングAuおよびCdSeと併用してもよい。化学療法剤は多くの場合、細胞傷害性または細胞増殖抑制性を有し、それらには、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、ホルモン療法、標的化療法、および免疫療法がある。本開示の態様において治療剤として使用することができる化学療法剤には、限定される訳ではないが以下がある:13cisレチノイン酸、2クロロデオキシアデノシン、5アザシチジン、5フルオロウラシル、6メルカプトプリン、6チオグアニン、アクチノマイシンD、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アナグレリド、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、三酸化ヒ素、アムサクリン、アミノカンプトテシン、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、アザシチジン、バチルスカルメットゲランbacilluscalmetteguerin、BCG、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ボルテゾミブ、ブレオマイシン、ブスルファン、ロイコボリンカルシウム、シトロボラム因子、カペシタビン、カネルチニブ、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、コルチゾン、シクロホスファミド、シタラビン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、デシタビン、デニロイキンディフティトックス、デキサメタゾン、デキサゾン、デキスラゾキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダカルバジン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキシフルリジン、エニルウラシル、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルロチニブ、エベロリムス、エキセメスタン、エストラムスチン、エトポシド、フィルグラスチム、フルオキシメステロン、フルベストラント、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヘキサメチルメラミン、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ、インターロイキン2、インターロイキン11、イソトレチノイン、イクサベピロン、イダルビシン、イマチニブメシレート、イホスファミド、イリノテカン、ラパチニブ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、リポソーマルAraC、ロムスチン、メクロレタミン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、メチルプレドニゾロン、マイトマイシンC、ミトタン、ミトキサントロン、ネララビン、ニルタミド、オクトレオチド、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペメトレキセド、パニツムマブ、ペグインターフェロン、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペグLアスパラギナーゼ、ペントスタチン、プリカマイシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、リツキシマブ、ロミプロスチム、ラリトレキセドralitrexed、サパシタビン、サルグラモスチム、サトラプラチン、ソラフェニブ、スニチニブ、セムスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テガフール、テガフールウラシル、テムシロリムス、テモゾロミド、テニポシド、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、トリメトレキサート、バルルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、またはゾレドロン酸。本開示の態様において治療剤として使用することができる治療用抗体およびその機能性フラグメントには、限定される訳ではないが、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エドレコロマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびトラスツズマブ、そして、本明細書に記載する特定の疾病に関連する抗体がある。本開示の態様において治療剤として使用することができる毒素には、限定される訳ではないが、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼRNase、DNaseI、ブドウ球菌エンテロトキシンA、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニンgelonin、ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素、および緑膿菌内毒素がある。本開示の態様において治療剤として使用することができる放射性同位体には、限定される訳ではないが、32P、89Sr、90Y、99mTc、99Mo、131I、153Sm、177Lu、186Re、213Bi、223Ra、および225Acがある。メディトープmAb技術により、抗体メディトープ複合体の作製に使用できるシステムが可能となり、その複合体を1つまたはそれ以上のメディトープ使用可能抗体、治療剤、イメージング剤、またはそれらを組み合わせたものに更にコンジュゲートさせることができる。従って、一式のメディトープまたは高親和性メディトープ改変体それぞれ独自の細胞傷害性物質またはイメージング剤にコンジュゲートされているによって、所望のメディトープコンジュゲートおよびメディトープ使用可能mAbを共投与して治療を行うことが可能となる。メディトープコンジュゲートは、化学修飾による特異性の低下またはペイロードの遊離のようなマイナス面を有する現行の抗体薬剤コンジュゲートより優れている。このプラットフォーム技術はmAb送達分野に広範な影響を及ぼすものであり、セツキシマブが適応となるEGFR陽性癌、例えば結腸直腸癌、扁平上皮癌、頭頸部癌の治療および診断に有用な手段となる。更に、フレームワーク結合インターフェースを他の治療用抗体上に移植することにより、このプラットフォーム技術を、いくつかの他の癌、疾病、および他の病態例えば前述のものの治療法および診断法に用いることができる。治療用抗体またはその機能性フラグメントの結合親和性を向上する方法を本明細書で提供する。それらの方法には、治療的有効量の医薬組成物を好適な投与経路で被験体に投与するものがある。医薬組成物は、メディトープ使用可能抗体と組み合わせたメディトープまたはメディトープ改変体、メディトープ使用可能治療用抗体と組み合わせた多価メディトープまたはメディトープ改変体連結体、メディトープ使用可能治療用抗体またはその機能性フラグメント、医薬的に許容されるキャリア、およびそれらを任意に組み合わせたものを含んでもよい。細胞表面に結合したIgGの多価架橋によって多価メディトープの結合親和性を向上することができる。親マウス425抗体を介する、または抗IgGIgMを用いるIgGの架橋により、シグナリング、受容体エンドサイトーシスおよびリサイクリング、そして細胞死に有意な影響が与えられる。従って、多価ペプチドは治療用モノクローナル抗体と相乗的に作用し、その治療効果を向上しうる。ある態様では、メディトープ単独で、または連結体の一部としてはシステイン、または結合部位でFabシステインに結合する他の好適なアルキル化剤を含有し、それによってシステインシステイン相互作用を形成してもよい。あるいはまた、メディトープは非天然アミノ酸例えばpアセチルフェニルアラニンでFabに結合してもよい。Cysメディトープを任意の物質にコンジュゲートさせ、そのコンジュゲートをIgGに結合させてもよい。抗体メディトープ複合体は、治療用抗体が標的としうる疾病または病態における特定のタイプの細胞または細胞集団に対して治療を行うための方法に使用することができる。それらの治療法には、治療的有効量の医薬組成物を疾病または病態に罹患した被験体に好適な投与経路で投与するものがある。医薬組成物は、メディトープ使用可能抗体と組み合わせたメディトープまたはメディトープ改変体、メディトープ使用可能抗体と組み合わせた多価メディトープまたはメディトープ連結体、メディトープ使用可能治療用抗体またはその機能性フラグメントがある。他の態様では、腫瘍または他の組織のイメージング法を提供する。それらの方法では、未改変治療用抗体を、対応する抗原を過剰発現する腫瘍または他の組織を標的として投与することができる。その後、イメージング剤で標識した多価メディトープ連結体を任意の投与経路で投与し、標的腫瘍または組織に結合した治療用抗体に結合させる。図8参照。イメージング剤の例として、限定される訳ではないが、放射性標識例えば3H、14C35S、90Y、99mTc、125I、131I、177Lu、166Ho、および153Sm、金属または磁気標識例えば金、鉄、ガドリニウム、ビオチン、キレート剤例えば14710テトラアザシクロドデカンNNNN四酢酸DOTA、または任意の上記物質がある。ある態様では、本明細書に記載する方法で使用するイメージング剤はDOTAである。上記のイメージング法または治療法には、既知の方法より優れた点がいくつかある。第1に、治療用モノクローナル抗体IgGが2価であることにより、腫瘍への選択性が向上される。以下に詳述するように、この選択性の向上はscFvおよび他のミニボディを使用すると失われ、親和性の向上では創出できないものである。第2に、標識された多価メディトープ連結体の体積は腎臓での濾過閾値未満60kD未満、おそらくは10kDという低さであり、このため容易に体外に排出される。一方、治療用抗体IgGをイメージング剤または他の治療剤で直接標識することは、それが体内で長時間にわたって循環されるため、回避される。従って、腫瘍または他の疾病臓器のイメージングは、多くの場合、選択性のより低いscFvを使用して行われる。更なる態様では、cQFDおよびcQYNメディトープまたはその改変体を使用し、2つまたはそれ以上の治療分子を結合させて医薬品とし、医薬組成物の一部として治療的有効量で被験体に投与して、癌、自己免疫疾患、または他の症状の治療を行うことができる。2つまたはそれ以上の治療分子には、それに限定される訳ではないが、腫瘍または疾病特異的受容体例えば前述のものを標的とする機能性抗体フラグメント例えばF2またはFabフラグメント、ペプチド、または他の小分子がある。治療分子は、2つまたはそれ以上の同じ治療分子であるか、または、同じ腫瘍もしくは疾病罹患組織を標的とする2つまたはそれ以上の異なる分子であってもよい。ある態様では、医薬品は、特許抗体またはその一部例えばCovXBodyTMの使用を含んでもよい。例えば、メディトープをリンカーとして使用して、特異的に設計したCovX抗体の結合インターフェースまたは結合部位に2つまたはそれ以上の治療分子を結合させてもよい。CovX特異的リンカーの機能を果たすメディトープに結合する小分子、ペプチド、またはscFvは、そのフレームワーク結合インターフェースCovX抗体の活性結合部位であるによって認識される。これらの成分が合わさって得られる2価CovXBodyTMは、小分子、ペプチド、またはscFvの生体作用を有しつつ、抗体の延長された半減期も保持する。上記の治療用モノクローナル抗体に関する利点に加え、治療分子に連結または結合するためのリンカーとして使用されるメディトープは、合成可能であり、製造のためのコスト効率がモノクローナル抗体より優れている。例えば、多くの前臨床試験/臨床試験において2つのモノクローナル抗体の共投与が研究されるが、そのような治療の製造コストおよびマーケティングコストは法外な高さとなりうる。セツキシマブFabのscFv1本鎖Fab可変フラグメントフォーマットのEGFRドメインIIIへの結合親和性はFab自体より実質的に低く、これは他の臨床的に興味が持たれているscFvも同様である。これは、少なくとも一部には、Fab定常ドメインの欠如これは、Fvドメインの配向性、構造的揺らぎに直接影響を与えるによるものであり、そしておそらくは、リンカー設計が十分でないことによるものである。従って、ある態様では、scFvの安定性および親和性を向上する方法を提供する。方法は、scFvリンカーにペプチドメディトープを導入してscFvを安定化させることを含む。これによって可変ドメインが適正な配向性となり、それによって親和性が向上する図9。上記の態様は、1つまたはそれ以上のヒトフレームワーク残基を対応するマウス残基で置換するすなわち1つまたはそれ以上の点変異を導入することによって、ヒトまたはヒト化抗体例えばトラスツズマブに適用することができる。対応するマウス残基で置換されるヒト残基はヒトフレームワークのFab中央の空洞内に存在しており、免疫系に暴露されることがない例えば、抗原とならない。更に、抗原性予測アルゴリズムを用いて、点変異を有するヒト配列が抗原性を有さないと考えられることを示してもよい。ある態様では、対応するマウス残基で置換される1つまたはそれ以上のヒトフレームワーク残基は、軽鎖フレームワーク残基10、3943、83、85、100、および104Kabatナンバーおよび/または重鎖フレームワーク残基40、89、111Kabatナンバーから選択することができる図2参照。ある態様では、対応するマウス残基で置換される1つまたはそれ以上のヒトフレームワーク残基には、限定される訳ではないが軽鎖フレームワーク残基40、41、83、および85などがある。特に、ある態様では、軽鎖フレームワークPro40がThrP40TまたはSerP40Sで置換され、軽鎖フレームワークGly41がAsnG41Nで置換され、軽鎖フレームワークPhe83がIleF83IまたはValF83Vで置換され、軽鎖フレームワークThr85がAspT85DまたはAsnT85Nで置換される。このヒトモノクローナル抗体内にあるFab空洞部へのメディトープ部位の移植またはマウス化murinizationもしはマウス様化mousificationを用いて、メディトープ結合のためのユニークなハンドルを作製し、前述の技術と共に使用してもよい。更に、ファーマコフォア結合モデルを作製することによって更なる点変異を作製し、メディトープの親和性を更に向上してもよい。本明細書に記載する態様により、Fabフレームワーク内の新規のインターフェースが同定およびキャラクタライズされ、Fabの抗原への結合を妨害しない、またはEGFR結合のアロステリックなアンタゴニストとして作用しないことが明らかとなる。更に、2つのペプチドはセツキシマブCDRに結合せず、抗原EGFRを模倣しない。治療的有効量、治療的有効濃度、または治療的有効用量とは、被験体において所望の治療効果を生じる例えば、標的病態を予防もしくは治療する、病態に伴う症状を緩和する、所望の生理学的効果を生ずる、または、疾病もしくは病態の治療につながる病態のイメージングもしくは診断を可能とする化合物の量である。正確な治療的有効量は、所定の被験体において、治療有効性の点で最も有効な結果をもたらす組成物の量である。この量は種々の因子によって異なるが、それらの因子には、限定される訳ではないが以下がある:治療化合物の特性活性、薬物動態、薬力学、および生物学的利用能など、被験体の生理学的状態年齢、性別、疾病のタイプおよびステージ、全身的な身体状態、所定の用量に対する反応性、および薬物のタイプなど、製剤中の医薬的に許容されるキャリア単数または複数の性質、および投与経路。医学および薬理学分野の当業者は、慣例的な試験、すなわち、化合物の投与に対する被験体の反応性をモニタリングし、投与量を適宜調整することによって、治療的有効量を決定することができる。更なる指針は、Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy第21版UnivofSciencesinPhiladelphiaLippincottWilliamsWilkinsペンシルバニア州フィラデルフィア2005を参照されたい。医薬的に許容されるキャリアとは、医薬的に許容される物質、組成物、または媒体で、1つの組織、器官、または身体部分から別の組織、器官、または身体部分への目的化合物の送達または輸送に関与するものをいう。例えばキャリアは、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、もしくはカプセル化材料、またはそれらを組み合わせたものであってもよい。キャリアの各成分は、製剤中の他の成分と適合性を有するという点で医薬的に許容されなければならない。また、遭遇しうるいずれの組織、器官、または身体部分との接触にも好適でなければならない。すなわち、その治療効果を過度に上回る毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題のリスクを伴ってはならない。投与経路とは、当該分野で公知の任意の投与経路をいい、それらには、限定される訳ではないがエアロゾル、経腸、経鼻、眼、経口、非経口、直腸、経皮、または経膣がある。経皮投与は、局所クリームまたは軟膏を使用するか、または経皮パッチによって行ってもよい。非経口とは、一般に注射を伴う投与経路をいい、それらには眼窩下、輸液、動脈内、関節包内、心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、脊髄内、胸骨内、髄腔内、子宮内、静脈内、くも膜下、被膜下、皮下、経粘膜、または経気管がある。本明細書で使用する組み合わせてまたは~と組み合わせてとは、被験体における同じ疾病または病態を治療する過程で、2つまたはそれ以上の物質、薬剤、治療計画、治療様式、またはそれらを組み合わせたもの例えばメディトープまたは多価連結剤と組み合わせた抗体を任意の順序で使用することをいう。これには、同時投与または共投与、第1の薬剤の投与前または投与後に第2の薬剤を投与すること、および、第1の薬剤と第2の薬剤を最大で数日間の間隔を開けて投与することが含まれる。それらの併用療法には、任意の1つまたはそれ以上の薬剤、薬物、治療計画、または治療様式の複数回投与も含まれる。更に、2つまたはそれ以上の薬剤、薬物、治療計画、治療様式、またはそれらを組み合わせたものの投与は、同じ投与経路または異なる投与経路によって行ってもよい。治療用抗体とは、癌、自己免疫疾患、移植拒絶反応、心血管疾患、または他の疾病もしくは病態例えば本明細書に記載するものを治療するために使用する任意の抗体またはその機能性フラグメントをいう。本明細書に記載する態様において使用することができる治療用抗体の例として、限定される訳ではないがマウス抗体、マウス化もしくはヒト化キメラ抗体、またはヒト抗体があり、それらには、限定される訳ではないが以下がある:エルビタックスセツキシマブ、レオプロアブシキマブ、シムレクトバシリキシマブ、レミカデRemicadeインフリキシマブ;オルソクローンOKT3ムロモナブCD3;リツキサンリツキシマブ、ベキサーBexxarトシツモマブ、ヒュミラアダリムマブ、キャンパスアレムツズマブ、シムレクトバシリキシマブ、アバスチンベバシズマブ、シムジアセルトリズマブペゴル、ゼナパックスダクリズマブ、ソリリスエクリズマブ、ラプティヴァエファリズマブ、マイロターグゲムツズマブ、ゼヴァリンイブリツモマブチウキセタン、タイサブリナタリズマブ、ゾレアオマリズマブ、シナジスパリビズマブ、ベクティビックスパニツムマブ、ルセンティスラニビズマブ、およびハーセプチントラスツズマブ。病態を治療するまたは病態の治療とは、病態の予防、病態の発症または進行の遅延、病態の発症リスクの低減、病態に伴う症状の発症の予防もしくは遅延、病態に伴う症状の低減もしくは終息、病態の完全もしくは部分的軽減、またはそれらを組み合わせたものをいう。ある態様では、新規のメディトープまたはメディトープと同様のフレームワーク結合機能性を有する小分子のスクリーニング法を提供する。それらの方法には、限定される訳ではないが以下の段階が含まれる:推定されるメディトープまたは小分子のライブラリーをメディトープ使用可能抗体と接触させ;推定されるメディトープまたは小分子がフレームワーク結合インターフェースでメディトープ使用可能抗体に結合するか否かを測定し;1つまたはそれ以上の候補となるメディトープまたはメディトープと同様のフレームワーク結合機能性を有する小分子を同定し;1つまたはそれ以上の候補の結合親和性を測定し;そして、1つまたはそれ以上の候補の結合解離定数が少なくとも070μMであれば、その候補をメディトープまたはメディトープと同様のフレームワーク結合機能性を有する小分子であると同定する。更に、新規のフレームワーク結合インターフェースをスクリーニングする方法も提供し、これについては以下の実施例で更に記述する。本発明について態様および実施例に関連して記載したが、当業者に認識されるように、記載および例証する本発明を、本明細書に開示する本発明の意図および範囲から逸脱することなく改変することができる。実施例は本発明の理解を促すために記載するものであり、その範囲をいかなるようにも制限することを意図せず、また制限するものと解釈されるべきではない。実施例では、慣例的な方法の詳細な説明を行っていない。それらの方法は当業者に公知であり、多くの文献に報告されている。更に、上記および下記の実施例で引用する文献は全て、参照により、本明細書に完全に記載するのと同様に、その全体が本明細書に組み込まれる。実施例1:結晶構造の決定試料と方法試料。セツキシマブの抗原結合フラグメント[F]またはFabを得るため、IgGを固定化パパインPierce社で消化し、その後、プロテインAによる逆相精製およびSuperdex75カラムGEHealthcare社によるサイズ排除クロマトグラフィーSECを行った。セツキシマブの1本鎖結合フラグメントscFvC225を、軽鎖および重鎖の間に20アミノ酸長のリンカーを挿入して合成した。scFvC225および可溶性上皮細胞増殖因子受容体ドメインIIIsEGFRdIIIをSf9細胞で発現させ、過去の報告Donaldsonら2009に従って精製した。過去の報告Riemerら2005でファージディスプレーから単離されたメディトープCQFDLSTRRLKCcQFD;SEQIDNO1およびCQYNLSSRALKCcQYN;SEQIDNO2を、シティオブホープ合成化学/高分子化学コア施設CityofHopeSyntheticandPolymerChemistryCoreFacilityで合成、酸化、および精製した。結晶化および回折データ。セツキシマブのFabフラグメント5mgmLを個々のメディトープと110モル比で混合し、Qiagen社JCSGCoreSuitesIIVを使用し、20°Cにおいてスクリーニングを行った。22A以上の回折を示す共結晶が、100mMリン酸ナトリウム/クエン酸pH45、25Mリン酸ナトリウム/カリウム、および16wvメソエリスリトール中で形成された。結晶を14wvメソエリスリトールを通してウィッキングし、液体窒素中で急速冷凍した。結晶化試験と初期スクリーニングはシティオブホープのX線施設で実施した。StanfordSynchrotronRadiationLabで回折データを得たビームライン91および111。リガンド非結合型セツキシマブpdb1YY8A鎖およびB鎖Liら2005で、PhaserプログラムMcCoyら2007を使用し、分子置換法によって初期位相を求めた。2つのFabを非対称単位に配置したところ、Mathews係数は326、溶媒含有率は624であった。Zスコア平均値に対する解の標準偏差は、ローテショナルサーチでは27および25、トランスレーショナルサーチでは38および71であった。第3のFabフラグメントは配置することができなかった非対称単位セル中のFabを3分子とすると、溶媒43で適正なMathews係数218となる。CootEmsleyら2004およびPhenixAdamsら2002を用いて複数回反復し、手動でメディトープを密度に組み込んだ。結晶化および構造決定セツキシマブ上のメディトープ結合部位を同定するために、Fabフラグメントを作製および精製し、cQFDメディトープと110の割合で混合し、市販の因子factorialsを用いて結晶形成のスクリーニングを行った。20°Cで13日後に結晶が形成された。これらの結晶の初期回折解析から、ユニットセルは、既にProteinDataBankに登録されているセツキシマブFab1YY8pdbLiら2005と同様であることが明らかとなり、結晶パッキング例えば、CDRが除去されたから、ペプチドがCDRループに存在しないことが示唆された。しかしながら、分子置換によって構造が解明され、実験で得られたマップの解析から、メディトープと一致するモデリングされていない電子密度が同定された。初期FoFcマップは、Fabフラグメントの中央部分が可能性のある結合部位であることを明示している図1。Fabモデルだけを用いる初期ラウンドの精密化の後、メディトープと一致するひと続きのモデリングされていない密度が観察された。メディトープを密度に組み込み、それに伴ってRおよびRFreeは低下した。PhenixAdamsら2002を用いた精密化の際に、水分子を付加した。回折データおよび精密化統計値を、以下の表3に示す。これらの知見と比較から、ファージディスプレーで同定された第2のメディトープ、cQYNに結合したセツキシマブFabの結晶を得た。前述同様、明らかなモデリングされていない電子密度が、Fabの中央部分に観察された。第1の構造を用いて、配列の相違を適宜モデリングし、複数回ラウンドの精密化を行った。両メディトープの代表的な電子密度マップを図1BおよびCに示す。実施例2:メディトープはセツキシマブFabのマウスフレームワーク領域に特異的である試料と方法上記実施例1に記載するものに加え、以下の試料および方法を使用した。メディトープおよび点変異。上記のように、CQFDLSTRRLKCcQFD;SEQIDNO1およびCQYNLSSRALKCcQYN;SEQIDNO2の合成、酸化、および精製をシティオブホープ合成化学/高分子化学コア施設で行った。アラニン点変異をcQFDメディトープ中の残基3Phe3をAlaに、残基5Leu5をAlaに、残基8Arg8をAlaに、および残基10Leu10をAlaにに作製し、SMT3のC末端にこのペプチドをコードさせ、細菌を用いて生成したMossessovaら2000。ユビキチン様プロテアーゼUlp1をサンプルに添加してペプチドを遊離させた後、表面プラズモン共鳴SPR分析を行った。メディトープFabインターフェースのキャラクタリゼーション。SPRのアフィニティー分析を、過去の報告Donaldsonら2009;Liら2005に従って実施した。簡潔に記載すると、scFvC225またはFabC225を、アミン化学を用いてCM5チップ上に固定化した。ペプチドまたはsEGFRdIIIの親和性を20°Cにおいて平衡法によって測定し、式RURmaxLLKdRoffsetに適用した。Superdex2001030カラムGEHealthcare社を用いてSECを行った。タンパク質を混合し、室温で20分間インキュベートし、4°Cでカラムに適用した。MDAMB468細胞株を用いて、ペプチドメディトープの存在下で、セツキシマブの結合を試験した。標識したセツキシマブAF488。Invitrogen社を、60μMのcQFDペプチドの存在下または非存在下、4°Cで20分間添加した。標識したMOPS21を同位体コントロールとして使用した。FACSCalibur装置BDBiosciences社を用いて細胞の蛍光を測定した。メディトープ/Fabインターフェースの解析本明細書で同定されたメディトープおよびFab間の結合部位のインターフェースは、IgGの4つのドメイン全てで形成される例えば重鎖および軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメイン。PISAサーバーを用いて、cQFDまたはcQYNメディトープFabインターフェースの埋没した表面領域は、それぞれ904±28A2および787±42A2であり、軽鎖および重鎖に等しく分布していた。図2および4に、メディトープと接触するFabの残基およびループを示す。両メディトープは、セツキシマブFabと複数の水素結合および疎水性接触を成す。図2Aは、セツキシマブFabマウスキメラIgG、ファージディスプレー実験で同位体コントロールとして使用したヒト化モノクローナルIgGch1418、およびヒト化トラスツズマブFabの間のわずかな相違を示している。ヒト化トラスツズマブFabをセツキシマブFabに重ね合わせることにより、cQFDメディトープのArg9はマウス軽鎖可変領域が形成するユニークな空洞に結合することが判明した。特に、マウス軽鎖可変領域のAsp85、Ile83、およびThr40は、cQFDメディトープのArg9残基への結合に重要である図2B。マウスフレームワーク中のAsp85は、cQFDメディトープのArg9のグアニジニウム基と塩橋を形成するdNEOD128AdNH12OD230A。また、Asp85のカルボキシル基はcQFDメディトープのLeu10のバックボーンアミドと水素結合を形成するdOD2HN27A。更に、軽鎖のThr40の水素基はメディトープArg9のグアニジニウム基と水素結合を形成するdOG1NH131A。ヒトFab中のPhe83のフェニル環およびPro40のピロリジン環は、Arg9の側鎖を立体的に遮蔽する。cQFDメディトープ中のArg9側鎖の選択によってマウスおよびヒトFab配列間の相違が明らかとなったが、これだけでなく、cQYNメディトープがcQFDメディトープ中のArg9と同じ位置にアラニンをコードしており、従って、ヒトFabに結合する可能性があることが明らかになった。ファージライブラリーをhu1418抗体で前処理したにも拘わらず、なぜcQYNメディトープが選択されたのかを解明するために、cQFDおよびcQYNメディトープ間の相違およびそれらのセツキシマブFabとの相互作用を測定した。cQFDおよびcQYN構造からの重鎖および軽鎖FabのCa原子の重ね合わせにより、各メディトープのPheTyr3、Leu5、およびLeu10残基の疎水性側鎖がほぼ同じ場所に位置することが明らかである図2B。しかしながら、cQFDおよびcQYNペプチドのバックボーントレースはかなり逸脱する。特に、cQFDメディトープのArg8側鎖構造は伸長されており、Fab重鎖のGln111のバックボーンカルボニルと強力なバックボーン水素結合を形成しているdNH0C28A。一方、cQYNペプチドのTyr3のヒドロキシル基は立体的にArg8側鎖に干渉し図2B、cQYNメディトープのArg8と重鎖のAsn111間の相互作用を阻害する。この知見と一致して、cQYN複合体中の両Arg8側鎖は、電子密度マップ中で不明瞭であり、少なくとも2つの異なる回転体をとる非対称単位中に2つのFabメディトープ複合体が存在する。この変化に伴って、バックボーン水素結合パターンのシフトが観察された。cQFDメディトープ中のThr7のアミドカルボニルは、セツキシマブFab軽鎖中のアミドAsn41と水素結合を形成するdNHOC27A。この水素結合は、cQYNペプチドではAsn41バックボーンのアミドでArg8バックボーンのカルボニルにシフトする。総合すると、cQFDおよびcQYN間の相違例えばR8および重鎖Fab間の塩橋の喪失およびcQFD中のArg9が結合するFab軽鎖中の箇所における配列の相違例えばいずれのメディトープもAsp85とLeu10のアミド間の水素結合が喪失しているは、マウスキメラに結合するように選択されたメディトープが、ヒトFabフレームワークと実質的により弱い相互作用を有し、選択の際の洗浄で除去されたことを示唆している。メディトープはFabに大きなコンフォメーション変化をもたらさないメディトープFabインターフェースの位置に基づいて、メディトープがリガンド非結合型構造および/またはリガンド結合型構造に対するIgGドメインの相対配向を妨害するか否かを確認した。まず、両メディトープ複合体の非対称単位セル内の軽鎖および重鎖を比較した後、各鎖をリガンド非結合型構造およびEGFRリガンド結合型構造と比較した。いずれのメディトープに結合した軽鎖の可変ドメインも、本質的にセツキシマブのリガンド非結合型構造と同一であったrmsd平均:cQFD0231±0014A;cQYN018±001A。しかしながら、重鎖の可変ドメインは、有意に高い相違性を示したrmsd平均:cQFD085±001A;cQYN088±001A。留意すべきことに、この相違は主に、フレームワークループ2残基3946の位置に起因するものであり、これは、このループ中の残基を欠失させてrmsdを再計算すると、かなり低い値となるためであるcQFD018±001A;cQYN031±001A図6。更に、このループはFabC225EGFR共結晶構造中では移動され、その相対Bfactor値は、これがフレキシブルであることを示している図6。最後に、メディトープの存在は、EGFR結合型または非結合型構造関してCDR構造に有意な変化を与えない。EGFRリガンド結合型構造の重鎖CDRループ3中のTyr101のバックボーンは、いずれのメディトープに結合したFab構造と比較しても反転しているが、この反転は、リガンド非結合型セツキシマブFab構造でも観察されるLiら2005。メディトープ残基のインターフェースへの寄与cQFDメディトープFab複合体の構造、並びに、cQYNおよびcQFDの配列同一性に基づき、いくつかの点変異をcQFDメディトープ中に作製しPhe3→Ala、Leu5→Ala、Arg8→Ala、およびLeu10→Ala、メディトープの全体的な結合親和性に対するこれらの残基の役割をキャラクタライズした。結合親和性を評価するために、標準的なアミン化学を用いてFabフラグメントをCM5チップに結合させた。次に、合成cQFDおよびcQYNメディトープのセツキシマブFabに対する親和性を測定した。cQFDメディトープは950±30nMの親和性でFabに結合し、cQYNメディトープの結合親和性は35±01μΜであったn3。結合反応速度も測定した図3。二分子相互作用とした場合の結合定数は、cQFDおよびcQYNでそれぞれ42x104M1s1および18x104M1s1であった。解離定数は、cQFDおよびcQYNでそれぞれ25x102s1および86x102s1であった。それらの測定値に基づくKD値cQFDで430nM、およびcQYNで35μΜは、平衡測定とほぼ一致する。次に、各変異型cQFDメディトープの親和性を測定した。点変異型および野生型cQFDメディトープを、SMT3のC末端融合体として作製し、Ulp1で開裂した後、分析した。生物学的に生成した野生型cQFDメディトープは合成したcQFDと同様、770nMの親和性で結合したが、Phe3→Ala、Leu5→Ala、およびArg8→Ala変異は、Fabに対する親和性を著しく低下させた表4。特に、Arg8→Ala変異では、結合親和性が140倍低下した。最後に、ヒト化治療用モノクローナル抗体、トラスツズマブのFabをCM5チップに結合させ、ヒトフレームワークに対するcQFDおよびcQYNメディトープの親和性をキャラクタライズした。平衡測定により、いずれのメディトープの解離定数も150μMを超えることが明らかになった。実施例3:セツキシマブFabはメディトープおよびEGFRに同時に結合する試料と方法上記実施例1および2に記載するものに加え、以下の試料および方法を使用した。試薬。セツキシマブの1本鎖結合フラグメントscFvC225を、軽鎖および重鎖の間に20アミノ酸長のリンカーを挿入して合成した。ScFvC225および可溶性上皮細胞増殖因子受容体ドメインIIIsEGFRdIIIをSf9細胞中で発現させ、過去の報告Donaldsonら2009に従って精製した。メディトープおよび点変異。上記のように、CQFDLSTRRLKCcQFD;SEQIDNO1およびCQYNLSSRALKCcQYN;SEQIDNO2の合成、酸化、および精製をシティオブホープ合成化学/高分子化学コア施設で行った。アラニン点変異をcQFDメディトープ中の残基3Phe3をAlaに、残基5Leu5をAlaに、残基8Arg8をAlaに、および残基10Leu10をAlaにに作製し、SMT3のC末端にこのペプチドをコードさせ、細菌を用いて生成したMossessovaら2000。ユビキチン様プロテアーゼUlp1をサンプルに添加してペプチドを遊離させた後、表面プラズモン共鳴SPR分析を行った。FabへのEGFRおよびメディトープの同時結合回折データは、これらのペプチドがワクチンとして有効であるという仮説と矛盾する。特に、原子モデルは、メディトープがCDRに直接結合しておらず、そのため、抗原エピトープを模倣しないことを示している。しかしながら、cQYNメディトープを接種したマウスから採取した血清は、細胞増殖を阻害したRiemerら2005。従って、メディトープが抗原結合を遮蔽するか否かを試験するために、セツキシマブFabをEGFRドメインIIIおよびcQFDと共にインキュベートし、SEC分析カラムに施与した。139mLにピークが観察され、このピークの非還元SDSPAGEにより、3つの成分全ての存在が確認された図4B。個々の成分は152mLFabC225、156mLsEGFRdIII、および163mLSMTCQFDLSTRRLKC;SEQIDNO1に溶出された。更に、メディトープがセツキシマブのscFvに結合しうるか否かを確認した。scFvでは、CDRループは無傷のままであるが、Fab可変ドメインは短鎖ペプチドリンカーを介して直接結合しており、Fab定常ドメインは除去されている。すなわち、scFvではメディトープ結合ポケットが除去されており、CDRは最低限の影響しか受けていない。SPRは、EGFRドメインIIIおよびcQFDメディトープがCM5チップに連結されたセツキシマブFabに結合することを示している図4B参照。更に、EGFRドメインIIIは、第2のCM5チップに連結したscFvに、親和性をほとんど喪失せずに結合した。しかしながら、Fab結合に比較して、cQFDメディトープは、100μMという高濃度でもscFvを飽和しなかった。これは、メディトープのCDRへの親和性があったとしても最低限であることを示しており、結晶学的解析と一致している。メディトープはセツキシマブのEGFR発現細胞への結合に影響を与えないFabはメディトープおよびEGFRドメインIIIへ同時に結合できるが、メディトープが完全長IgGとしてのセツキシマブのEGFR発現細胞への結合に影響を与えるか否かを確認した。これを試験するために、FACS分析を用いて、メディトープ濃度の関数として、IgGのMDAMB468細胞EGFRを過剰発現するへの結合を追跡した。細胞を、漸増濃度のcQFDメディトープ存在下でセツキシマブと共にインキュベートした。60μMを超えるメディトープ濃度でも、セツキシマブの細胞への結合に有意な変化は見られなかった図5。この知見は上記のSEC分析と一致しており、メディトープが抗原結合のアロステリック調節剤として作用しないことを示している。EGFRドメインIIIおよびメディトープがFabに同時に結合していることが、メディトープのKdより有意に高い濃度で明らかになっている。cQFDおよびcQYNメディトープと同様、スーパー抗原SpAおよびPpLはFabフレームワーク領域に結合し、抗原結合に影響を与えないGrailleら2000;Grailleら2001;Grailleら2002;Youngら1984。更に、固相に化学結合させたメディトープを用いてマウスキメラ化セツキシマブを精製することができ、これは、マウスキメラIgG、並びに、メディトープを移植したIgGの新規の精製法である。図10参照。この精製法にはいくつかの利点がある。第1に、メディトープは合成が容易であり、一般的な固相例えば磁性ビーズに容易に付加することができる。第2に、メディトープの親和性は点変異によって容易に調節されるため、精製工程の微調整が可能であり、激しい条件例えば、抗体の溶出に一般的に使用される低pHが回避される。最後に、本明細書に記載するように、メディトープを2価または多価とし例えば後述の実施例4に記載するように、これを使用して無傷のマウスまたはマウス化ヒトIgGを抽出することができる。また、ペプチドの使用には、プロテインAまたはプロテインLを使用する現行の精製法に優る利点がある例えば、プロテインAまたはプロテインLの生成に伴う高コスト、ライフサイクルが限られていること、および外来の生体物質例えば細菌性病原体導入の可能性。立体的遮蔽メディトープを、マウスキメラ化またはマウス化ヒトmAbの軽鎖または重鎖N末端に、フレキシブルなリンカーを介して連結することができる図11。mAbIgGのN末端は抗原結合部位と並列しており、フレキシブルリンカーを介するN末端からの伸長によって抗原結合は立体的に妨害される。リンカー内に腫瘍特異的プロテアーゼ部位例えばMMP9、MMP14、前立腺特異的抗原PSAセリンプロテアーゼ、または他の好適な部位をコードさせることにより、分子内遮蔽されたIgG構築物の立体的な制約が腫瘍部位切断され、抗体結合が可能となる。この設計原理では、分子内遮蔽されたIgGの正常組織への結合が阻害され、オフターゲット結合による有害な副作用が回避される。セツキシマブ上のアビジンペプチド遮蔽のオフレート測定を図12に示す。この図は、多価メディトープが1価メディトープより高い親和性で結合するが、遮蔽はしないことを示している。実施例4:多価メディトープの作製同じ抗原例えばEGFR上の独自のエピトープを認識する複数のモノクローナルmAbを組み合わせることにより、細胞死が促進され、腫瘍増殖が阻害されることが明らかになっている。この細胞死促進の正確なメカニズムは議論されているところであるが免疫応答vs受容体の抑制的制御vsリガンド拮抗の促進、過去の研究から、いずれのmAbも、細胞死を促進するためには多価例えば完全長IgGまたはF2である必要があることが示唆されている。そのように、多価メディトープを、後述のように第2の抗体として代用してもよい。従って、本明細書に記載するメディトープをスキャホールドに連結させ、選択性および結合親和性を向上するための多価メディトープ作製してもよい。特異性および親和性は、多くの場合、多価性によって得られる。これは、2価リガンドではΔGTotalΔG1ΔG2ΔGlinkerで表され、KTotalK1K2Klinkerと等しい。リンカーが自由エネルギーに寄与しない場合Klinker~1、2価標的では、2価リガンドの見かけの親和性は単量体結合定数の積である。従って、親和性を有意に増加させることができる例えばKD1μΜのメディトープでは、2価メディトープの親和性の理論値は1pMである。しかしながら、そのような増加が見られるのは稀であり、これは主に、2価/3価/多価受容体の幾何学的構造による。受容体の幾何学的構造によってリンカーは厳しい制約を受けるが、これによって、標的化送達の重要なゴールである特異性が保証される。リンカーに対する受容体の制約に対処するため、未改変メディトープまたは最適化メディトープを多価スキャホールドに結合させることができる。これを行うために、リンカーを最適化する。腫瘍細胞は抗原密度が高いため、多価メディトープを隣接するIgGにはめ込むように結合latchonさせ、デイジーチェーン様アレイを形成させるべきである図8。2価メディトープとIgGの分子内結合が可能であるが、IgGのC2対称性により、それらの相互作用ではリンカーに厳しい幾何学的制約が与えられる。3価またはそれ以上のスキャホールドにより、1つより多い抗体がデイジーチェーンを成すことが保証される。第3のメディトープアームを包含させることにより、3価メディトープの抗原結合抗体への初期接触のライフタイムが延長される。同様に、これにより、近接する抗原結合抗体に更なるアームが結合する可能性が上昇し、複合体全体が安定化される。スキャホールドの合成FITC標識した2価メディトープの合成を、化合物2を用い、クリックケミストリーに基づいて行った図13。テンプレート4および5図13を使用することにより、それぞれから2価および3価メディトープの形成が可能となる。この合成はすばらしい進歩である。なぜなら、この発見は多価メディトープ調製のために開発された化学を表すものであり、最適な結合のために種々の長さのポリエチレングリコールPEGまたは他のリンカーの検討に重点的に取り組むことができる。合成法はまた、放射性核種イメージングのためのDOTA導入にも適している。例えば30AのPEG2価アームが、FITC標識された2価メディトープすなわち化合物13の合成で導入された図13。IgG内でのCDR領域間の距離は~130Aである。このように、PEGリンカーの長さは体系的に多様であり、この方法は確かに最適である。市販のPEGの末端から末端までの距離は90AでありPierce社、IgGの距離より長い。多価性のキャラクタリゼーションそれぞれの多価メディトープのキャラクタリゼーションをSPRおよびITCによって行い、多価スキャホールドへのコンジュゲーションがメディトープIgG相互作用に影響しないことを確認した。しかながらこれらの測定は、IgGが腫瘍表面に結合しないため、多価性の測定における有効性に限界がある。これに代わって、FACS分析および細胞生存率アッセイを使用して、多価メディトープの影響をEGFRを過剰発現する細胞上で直接定量してもよい。FACS分析では、EGFRを過剰発現する細胞株MDAMB468およびA431を、種々の濃度1nMから100nMのセツキシマブと共にインキュベートした。次に、セツキシマブ処理した細胞を漸増濃度01nMから1μMの標識された多価メディトープと共にインキュベートし図17;メディトープFc、CyAnFACSソーターを用いて結合特性を分析した。1価メディトープで観察されたよりかなり低い濃度でのシフト図17および/またはシフトする細胞のパーセンテージの増加が観察される。多価メディトープで期待されるこれ以外の効果を更に確認するために、標識されていない1価メディトープを用いて、抗原が結合したセツキシマブを巡って、標識された多価メディトープと競合させてもよい。細胞生存率アッセイを用いて、セツキシマブ介在型細胞死の向上の際の多価メディトープの有効性を測定することができる。簡潔に記載すると、MDAMB468およびA431細胞を播種し、種々の濃度のセツキシマブおよび多価メディトープで処理する。セツキシマブ単独と同じ結果を生じる1価メディトープをコントロールとして用いる。MTT325ジフェニルテトラゾリウムブロミドを用いて生存細胞数を定量してもよい。活性を示す多価メディトープは、ウエスタンブロット分析を行い、EGFR並びにEGFRシグナリング経路の一部であるAKTおよびMAPのリン酸化状態を追跡してもよい。その後、これらのデータをセツキシマブ単独処理細胞およびチロシンキナーゼ阻害剤処理細胞AG1478からのデータと比較する。総合すると、これによって細胞死が多価メディトープ濃度の関数として増加すると考えられる。MTTアッセイセツキシマブと併用した場合の単量体メディトープまたは2価メディトープFcの細胞死誘導に対する効果を、MTTアッセイを用いて評価した。4000個のMDAMB468細胞を80μlの培養液中、96ウェルプレートの各ウェルに播種した。10μlの1μMセツキシマブを10μlの01、1、または10μMのメディトープまたはメディトープFcと共に添加し、最終濃度を01μMセツキシマブ、および、001、01、および1μMメディトープまたはメディトープFcとする。また、コントロールとして各成分を単独でPBSと共に添加した。48時間のインキュベーション後、10μlのMTT試薬を添加し、更に4時間インキュベートした。その後、培養液上清を除去し、100μlのMTT結晶溶解液を添加し、プレートを630nmで測定した。メディトープまたはメディトープFc単独では細胞増殖は有意に変更されなかったが、メディトープFcだけがセツキシマブとの併用で細胞増殖を阻害した単量体メディトープは阻害しなかった図28A。多価メディトープがセツキシマブへの添加で第2の抗EGFR抗体の効果と同様の細胞死滅促進効果を有することを示すために、セツキシマブメディトープFcまたはセツキシマブM425のいずれかによる腫瘍細胞増殖阻害効果を比較した。4000個のMDAMB468細胞を80μlの培養液中、96ウェルプレートの各ウェルに播種した。10μlの1μMセツキシマブを10μlの2、4、または8μMのメディトープFcまたはM425と共に添加し、最終濃度を01μMセツキシマブ、および、02、04、または08μMメディトープFcまたはM425とする。コントロールとしてセツキシマブをPBSと共に添加した。48時間のインキュベーション後、10μlのMTT試薬を添加し、更に4時間インキュベートした。その後、培養液上清を除去し、100μlのMTT結晶溶解液を添加し、プレートを630nmで測定した。メディトープFcはセツキシマブの細胞死滅能の向上を示したが、M425ほどの有効性はなかったAntibodiesinsinglechainformatagainsttumourassociatedantigenspresentandfutureapplicationsCurrMedChem17173017552AdamsGPSchierRMcCallAMSimmonsHHHorakEMAlpaughRKMarksJDandWeinerLMCancerRes61475047553AdamsJBehnkeMChenSCruickshankAADickLRGrenierLKlunderJMMaYTPlamondonLandSteinRLPotentandselectiveinhibitorsoftheproteasomedipeptidylboronicacidsBioorgMedChemLett83333384AdamsPDGrosseKunstleveRWHungLWIoergerTRMcCoyAJMoriartyNWReadRJSacchettiniJCSauterNKandTerwilligerTCActaCrystallogrDBiolCrystallogr58194819545AdessiCandSotoCConvertingapeptideintoadrugstrategiestoimprovestabilityandbioavailabilityCurrMedChem99639786AkamatsuYPakabuntoKXuZZhangYandTsurushitaNWhole7IgGsurfacedisplayonmammaliancellsApplicationtoisolationofneutralizingchickenmonoclonalantiIL12antibodiesJImmunolMethods32740528AlleySCOkeleyNMandSenterPDAntibodydrugconjugatestargeteddrugdeliveryforcancerCurrOpinChemBiol145295379AuffingerPHaysFAWesthofEandHoPSHalogenbondsinbiologicalmoleculesProcNatlAcadSciUSA101167891679410BeckAWurchTBaillyCandCorvaiaNStrategiesandchallengesforthenextgenerationoftherapeuticantibodiesNatRevImmunol1034535211BeckAWagnerRoussetEBussatMCLokteffMKlinguerHamourCHaeuwJFGoetschLWurchTVanDorsselaerAandCorvaiaNTrendsinglycosylationglycoanalysisandglycoengineeringoftherapeuticantibodiesandFcfusionproteinsCurrPharmBiotechnol948250112BilgicerBMoustakasDTandWhitesidesGMAsynthetictrivalenthaptenthataggregatesanti24DNPIgGintobicyclictrimersJAmChemSoc1293722372813BilgicerBThomasSW3rdShawBFKaufmanGKKrishnamurthyVMEstroffLAYangJWhitesidesGMAnonchromatographicmethodforthepurificationofabivalentlyactivemonoclonalIgGantibodyfrombiologicalfluidsJAMCHEMSOC2009JUL81319361714BilgierBThomasIIISWShawBFKaufmanGKKrishnamurthyVMEstroffLAYangJandWhitesidesGMJAmChemSoc1319361936715BokemeyerCBondarenkoIMakhsonAHartmannJTAparicioJdeBraudFDoneaSLudwigHSchuchGStrohCLoosAHZubelAandKoralewskiPFluorouracilleucovorinandoxaliplatinwithandwithoutcetuximabinthefirstlinetreatmentofmetastaticcolorectalcancerJClinOncol2766367116BretscherLELiHPoulosTLandGriffithOWStructuralcharacterizationandkineticsofnitricoxidesynthaseinhibitionbynovelN5andN5ornithinesJBiolChem278467894679717ButlinNGandMearesCFAntibodieswithinfiniteaffinityoriginsandapplicationsAccChemRes3978078718CardarelliPMQuinnMBuckmanDFangYColcherDKingDJBebbingtonCandYarrantonGBindingtoCD20byantiB1antibodyorFissufficientforinductionofapoptosisinBcelllinesCancerImmunolImmunother51152419CarsonKRFocosiDMajorEOPetriniMRicheyEAWestDPandBennettCLLancetOncol1081682420ChenVBArendallWB3rdHeaddJJKeedyDAImmorminoRMKapralGJMurrayLWRichardsonJSandRichardsonDCMolProbityallatomstructurevalidationformacromolecularcrystallographyActaCrystallogrDBiolCrystallogr66122121ChihHWGikangaBYangYandZhangBIdentificationofaminoacidresiduesresponsibleforthereleaseoffreedrugfromanantibodydrugconjugateutilizinglysinesuccinimidylesterchemistryJPharmSci1002518252522ChmuraAJOrtonMSandMearesCFAntibodieswithinfiniteaffinityProcNatlAcadSciUSA988480848423ChoHSMasonKRamyarKXStanleyAMGabelliSBDenneyDWJrandLeahyDJStructureoftheextracellularregionofHER2aloneandincomplexwiththeHerceptinFabNature42175676024CollisAVBrouwerAPandMartinACJMolBiol32533735425DechantMWeisnerWBergerSPeippMBeyerTSchneiderMerckTLammertsvanBuerenJJBleekerWKParrenPWvandeWinkelJGandValeriusTComplementdependenttumorcelllysistriggeredbycombinationsofepidermalgrowthfactorreceptorantibodiesCancerRes684998500326DemarestSJandGlaserSMAntibodytherapeuticsantibodyengineeringandthemeritsofproteinstabilityCurrOpinDrugDiscovDevel1167568727DeNardoGandDeNardoSDoseintensifiedmoleculartargetedradiotherapyforcancerlymphomaasaparadigmSeminNuclMed4013614428DerksenDJStymiestJLandVederasJCAntimicrobialleucocinanalogueswithadisulfidebridgereplacedbyacarbocycleorbynoncovalentinteractionsofallylglycineresiduesJAmChemSoc128142521425329DonaldsonJMKariCFragosoRCRodeckUandWilliamsJCDesignanddevelopmentofmaskedtherapeuticantibodiestolimitofftargeteffectsapplicationtoantiEGFRantibodiesCancerBiolTher82147215230DoppalapudiVRHuangJLiuDJinPLiuBLiLDesharnaisJHagenCLevinNJShieldsMJParishMMurphyREDelRosarioJOatesBDLaiJYMatinMJAinekuluZBhatABradshawCWWoodnuttGLernerRAandLappeRWChemicalgenerationofbispecificantibodiesProcNatlAcadSciUSA107226112261631DoppalapudiVRTryderNLiLAjaTGriffithDLiaoFFRoxasGRamprasadMPBradshawCandBarbasCF3rdChemicallyprogrammedantibodiesendothelinreceptortargetingCovXBodiesBioorgMedChemLett1750150632DornanDBennettFChenYDennisMEatonDElkinsKFrenchDGoMAJackAJunutulaJRKoeppenHLauJMcBrideJRawstronAShiXYuNYuSFYuePZhengBEbensAandPolsonAGTherapeuticpotentialofanantiCD79bantibodydrugconjugateantiCD79bvcMMAEforthetreatmentofnonHodgkinlymphomaBlood1142721272933DuJWangHZhongCPengBZhangMLiBHuoSGuoYandDingJStructuralbasisforrecognitionofCD20bytherapeuticantibodyRituximabJBiolChem282150731508034EmsleyPandCowtanKActaCrystallogrDBiolCrystallogr602126213235ErlansonDAArndtJWCancillaMTCaoKEllingRAEnglishNFriedmanJHansenSKHessionCJosephIKumaravelGLeeWCLindKEMcDowellRSMiatkowskiKNguyenCNguyenTBParkSPathanNPennyDMRomanowskiMJScottDSilvianLSimmonsRLTangonanBTYangWandSunLDiscoveryofapotentandhighlyselectivePDK1inhibitorviafragmentbaseddrugdiscoveryBioorgMedChemLett213078308336FerenczyGGandKeseruGMThermodynamicsguidedleaddiscoveryandoptimizationDrugDiscovToday1591993237GencoglanGandCeylanCSkinPharmacolPhysiol2026026238GoodwinDAandMearesCFPretargetedpeptideimagingandtherapyCancerBiotherRadiopharm1414515239GrailleMSturaEACorperALSuttonBJTaussigMJCharbonnierJBandSilvermanGJProcNatlAcadSciUSA975399540440GrailleMSturaEAHousdenNGBeckinghamJABottomleySPBealeDTaussigMJSuttonBJGoreMGandCharbonnierJBStructure967968741GrailleMHarrisonSCrumpMPFindlowSCHousdenNGMullerBHBattailPoirotNSibaiGSuttonBJTaussigMJJolivetReynaudCGoreMGandSturaEAJBiolChem277475004750642GreenDJPagelJMPanteliasAHedinNLinYWilburDSGopalAHamlinDKandPressOWPretargetedradioimmunotherapyforBcelllymphomasClinCancerRes135598560343GuayDBeaulieuCandPercivalMDTherapeuticutilityandmedicinalchemistryofcathepsinCinhibitorsCurrTopMedChem1070871644HanselTTKropshoferHSingerTMitchellJAandGeorgeAJThesafetyandsideeffectsofmonoclonalantibodiesNatRevDrugDiscov932533845HardeggerLAKuhnBSpinnlerBAnselmLEcabertRStihleMGsellBThomaRDiezJBenzJPlancherJMHartmannGBannerDWHaapWandDiederichFSystematicinvestigationofhalogenbondinginproteinligandinteractionsAngewChemIntEdEngl5031431846HartmannCMullerNBlaukatAKochJBenharIandWelsWSOncogene294517452747HernandesMZCavalcantiSMMoreiraDRdeAzevedoJuniorWFandLeiteACHalogenatomsinthemodernmedicinalchemistryhintsforthedrugdesignCurrDrugTargets1130331448HughesSJMillanDSKiltyICLewthwaiteRAMathiasJPOReillyMAPanniferAPhelanAStuhmeierFBaldockDAandBrownDGFragmentbaseddiscoveryofanovelandselectivePI3kinaseinhibitorBioorgMedChemLett49HutchinsBMKazaneSAStaflinKForsythJSFeldingHabermannBSchultzPGandSmiderVVSitespecificcouplingandstericallycontrolledformationofmultimericantibodyfabfragmentswithunnaturalaminoacidsJMolBiol40659560350JunutulaJRRaabHClarkSBhaktaSLeipoldDDWeirSChenYSimpsonMTsaiSPDennisMSLuYMengYGNgCYangJLeeCCDuenasEGorrellJKattaVKimAMcDormanKFlagellaKVenookRRossSSpencerSDLeeWongWLowmanHBVandlenRSliwkowskiMXSchellerRHPolakisPandMalletWSitespecificconjugationofacytotoxicdrugtoanantibodyimprovesthetherapeuticindexNatBiotechnol2692593251KamatVDonaldsonJMKariCQuadrosMRLelkesPIChaikenICocklinSWilliamsJCPapazoglouEandRodeckUEnhancedEGFRinhibitionanddistinctepitoperecognitionbyEGFRantagonisticmAbsC225and425CancerBiolTher772673352KiesslingLLandSplainRAChemicalapproachestoglycobiologyAnnuRevBiochem7961965353LadburyJEKlebeGandFreireEAddingcalorimetricdatatodecisionmakinginleaddiscoveryahottipNatRevDrugDiscov9232754LazarGADangWKarkiSVafaOPengJSHyunLChanCChungHSEivaziAYoderSCVielmetterJCarmichaelDFHayesRJandDahiyatBIEngineeredantibodyFcvariantswithenhancedeffectorfunctionProcNatlAcadSciUSA1034005401055LeschHPKaikkonenMUPikkarainenJTandYlaHerttualaSAvidinbiotintechnologyintargetedtherapyExpertOpinDrugDeliv755156456LiMYanZHanWandZhangYCellImmunol23913614357LiSSchmitzKRJeffreyPDWiltziusJJKussiePandFergusonKMStructuralbasisforinhibitionoftheepidermalgrowthfactorreceptorbycetuximabCancerCell730131158LiuCCandSchultzPGAddingnewchemistriestothegeneticcodeAnnuRevBiochem7941344459LoweCRLoweARGuptaGJBiochemBiophMeth4956157460MammenMChoiSKandWhitesidesGMPolyvalentInteractionsinBiologicalSystemsImplicationsforDesignandUseofMultivalentLigandsandInhibitorsAngewChemIntEdEngl372749279861McCoyAJGrosseKunstleveRWAdamsPDWinnMDStoroniLCandReadRJJApplCrystallogr4065867462MearesCFThechemistryofirreversiblecaptureAdvDrugDelivRev601383138863MeiraDDNobregaIdeAlmeidaVHMororoJSCardosoAMSilvaRLAlbanoRMandFerreiraCGEurJCancer451265127364MeloskyBBurkesRRaysonDAlcindorTShearNandLacoutureMCurrOncol16162665MeredithRFandBuchsbaumDJPretargetedradioimmunotherapyIntJRadiatOncolBiolPhys66S575966MiloLJLaiJHWuWLiuYMawHLiYJinZShuYPoplawskiSWuYSanfordDGSudmeierJLandBachovchinBChemicalandBiologicalEvaluationofDipeptidylBoronicAcidProteasomeInhibitorsforUseinProandProsoftDrugsTargetingSolidTumorsJMedChem67MolloyESandCalabreseLHNatRevRheumatol541841968MorseLandCalaresePSeminOncolNurs2215216269MossLSStarbuckMFMayerDKHarwoodEBandGlotzerJOncolNursForum3667668570MossessovaEandLimaCDMolCell586587671MullerDandKontermannREBispecificantibodiesforcancerimmunotherapyCurrentperspectivesBioDrugs24899872MullerSLangeSGautelMandWilmannsMRigidconformationofanimmunoglobulindomaintandemrepeatintheAbandoftheelasticmuscleproteintitinJMolBiol37146948073NicolaGPeddiSStefanovaMNicholasRAGutheilWGandDaviesCCrystalstructureofEscherichiacolipenicillinbindingprotein5boundtoatripeptideboronicacidinhibitoraroleforSer110indeacylationBiochem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