"結晶フォームAとして特徴付けられるR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド。フォームAがCuKα照射を用いた粉末X線回折193から197°、215から219°及び169から173°の1つ以上のピークにより特徴付けられる請求項1に記載のフォームA。フォームAが約195、217、及び171°の1つ以上のピークにより特徴付けられる請求項2に記載のフォームA。フォームAが202から206°におけるピークにより特徴付けられる請求項2又は3に記載フォームA。フォームAが約204°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から4のいずれかに記載のフォームA。フォームAが186から190°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から5のいずれかに記載のフォームA。フォームAが約188°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から6のいずれかに記載のフォームA。フォームAが245から249°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から7のいずれかに記載のフォームA。フォームAが約247°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から8のいずれかに記載のフォームA。フォームAが98から102°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から9のいずれかに記載のフォームA。フォームAが約100°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から10のいずれかに記載のフォームA。フォームAが48から52°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から11のいずれかに記載のフォームA。フォームAが約50°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から12のいずれかに記載のフォームA。フォームAが240から244°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から13のいずれかに記載のフォームA。フォームAが約242°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から14のいずれかに記載のフォームA。フォームAが183から187°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から15のいずれかに記載のフォームA。フォームAが約185°におけるピークにより特徴付けられる請求項2から16のいずれかに記載のフォームA。フォームAが図4と実質的に同様の回折パターンであることにより特徴付けられる請求項1から17のいずれかに記載のフォームA。フォームAが図5と実質的に同様の回折パターンであることにより特徴付けられる請求項1から17のいずれかに記載のフォームA。単斜晶系、C2空間群及び以下の単位胞寸法:a=21095216Åα=90°b=662875Åβ=958676°c=17791715Åγ=90°を有する、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの結晶形態。請求項1から20のいずれかに記載のフォームA及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。さらに追加の治療剤を含む請求項21に記載の医薬組成物。追加の治療剤が粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤及び栄養剤から選択される請求項22に記載の医薬組成物。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを溶媒中、有効な時間スラリー化することを含む請求項1から19のいずれかに記載のフォームAの製造方法。溶媒が酢酸エチル、ジクロロメタン、MTBE、酢酸イソプロピル、水/エタノール、水/アセトニトリル、水/メタノール又は水/イソプロピルアルコールである請求項24に記載の方法。有効な時間が24時間から2週間である請求項24又は25に記載の方法。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを溶媒に溶解させること及び溶媒を蒸発させることを含む請求項1から19のいずれかに記載のフォームAの製造方法。溶媒がアセトン、アセトニトリル、メタノール,又はイソプロピルアルコールである請求項27に記載の方法。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを第1溶媒に溶解させ、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドが溶解しない第2溶媒を加えることを含む請求項1から19のいずれかに記載のフォームAの製造方法。第1溶媒が酢酸エチル、エタノール、イソプロピルアルコール,又はアセトンである請求項29に記載の方法。第2溶媒がヘプタン又は水である請求項29又は30に記載の方法。第1溶媒とR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの溶液の攪拌中に第2溶媒が追加される請求項29から31のいずれかに記載の方法。固体が実質的にアモルファスであるR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド。約5より少ない結晶R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを含む、請求項33のアモルファスであるR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド。請求項33又は34のアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。さらに追加の治療剤を含む請求項35に記載の医薬組成物。追加の治療剤が粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤及び栄養剤から選択される請求項36に記載の医薬組成物。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを適切な溶媒に溶解し、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去することを含む請求項33又は34に記載のアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの製造方法。溶媒がメタノールである請求項38に記載の方法。請求項33又は34に記載のアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド及びポリマーを含む固体分散体。ポリマーがヒドロキシプロピルメチルセルロースHPMCである請求項40に記載の固体分散体。ポリマーがヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASである請求項40又は41に記載の固体分散体。ポリマーが10重量から80重量の用量で存在する請求項40から42のいずれかに記載の固体分散体。ポリマーが30重量から60重量の用量で存在する請求項40から43のいずれかに記載の固体分散体。ポリマーが約495重量の用量で存在する請求項40から44のいずれかに記載の固体分散体。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドが10重量から80重量の用量で存在する請求項40から45のいずれかに記載の固体分散体。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドが30重量から60重量の用量で存在する請求項40から46のいずれかに記載の固体分散体。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドが約50重量の用量で存在する請求項40から47のいずれかに記載の固体分散体。さらに界面活性剤を含む請求項40から48のいずれかに記載の固体分散体。界面活性剤がラウリル硫酸ナトリウムである請求項49に記載の固体分散体。界面活性剤が01重量から5重量で存在する請求項49又は50に記載の固体分散体。界面活性剤が約05重量の用量で存在する請求項49から51のいずれかに記載の固体分散体。ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASであるポリマーが495重量の用量で、ラウリル硫酸ナトリウムである界面活性剤が05重量で、及びR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドが50重量の用量で存在する請求項49に記載の固体分散体。請求項40から53のいずれかに記載の固体分散体及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。さらに追加の治療剤を含む請求項54に記載の医薬組成物。追加の治療剤が粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤及び栄養剤から選択される請求項55に記載の医薬組成物。スプレードライしたR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを含む、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの製造方法。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド及び適切な溶媒を組合せ、続いてスプレードライしてアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを含む化合物を得る請求項57に記載の方法。溶媒がアルコールである請求項58に記載の方法。溶媒がメタノールである請求項58又は59に記載の方法。aR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド、ポリマー、及び溶媒を含む混合物を形成すること;及びb固体分散体を形成するために混合物をスプレードライすることを含む請求項57から60のいずれかに記載の方法。ポリマーがヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASである請求項61に記載の方法。ポリマーが固体分散体の10重量から80重量の用量である請求項61又は62に記載の方法。ポリマーが固体分散体の約495重量の用量である請求項61から63のいずれかに記載の方法。溶媒がメタノールである請求項61から64のいずれかに記載の方法。混合物がさらに界面活性剤を含む請求項61から65のいずれかに記載の方法。界面活性剤がラウリル硫酸ナトリウムSLSである請求項66に記載の方法。界面活性剤が固体分散体の01重量から5重量である請求項66又は67に記載の方法。界面活性剤が固体分散体の約05重量である請求項66から68のいずれかに記載の方法。ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASであるポリマーが固体分散体の約495重量の用量で存在し、溶媒がメタノールであり、混合物がさらにラウリル硫酸ナトリウムを固体分散体の約05重量で含む請求項61に記載の方法。請求項1から19のいずれかに記載のフォームA、請求項33又は34に記載のアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド、又は請求項40に記載の固体分散体の有効量を対象に投与することを含むCFTR介在性疾患の処置方法。CFTR介在性疾患が嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性COPD、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、先天性両側精管欠損症CBAVDに起因する男性不妊、軽度肺疾患、突発性膵炎、アレルギー性気管支肺アルペルギルス症ABPA、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性血色素症、血液凝固-線維素溶解欠乏症、プロテインC欠乏症、1型遺伝性血管浮腫、脂質プロセシング欠損症、家族性高コレステロール血症、1型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム性蓄積症、I細胞病/偽ハーラー症、ムコ多糖症、サンドホフ病/テイ-サックス病、クリグラーナジャー症候群II型、多腺性内分泌障害/高インスリン血症、糖尿病、ラロン小人症、ミエロオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能亢進症、メラノーマ、グリカノーシスglycanosisCDG1型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノーゲン血症、ACT欠損症、糖尿病性尿崩症DI、骨端軟骨性DI、腎性DI、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウスメルバッハー病PerlizaeusMerzbacherdisease、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺progressivesupranuclearplasy、ピック病、数種のポリグルタミン神経障害、ハンチントン病、脊髄小脳性運動失調症I型spinocerebullarataxiatypeI、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症dentatorubalpallidoluysian、筋緊張性ジストロフィ、海綿状脳症、遺伝性クロイツフェルトヤコブ病プリオンタンパク質プロセシング欠損による、ファブリー病、シュトロイスラーシャインカー症候群、COPD、眼乾燥疾患、シェーグレン病、骨粗鬆症、骨減少症、ゴーラム症候群、塩素チャネル病、先天性筋強直症トムソン型およびベッカー型、バーター症候群III型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、驚愕過剰症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛ジスキネジアPCD、線毛の構造および/または機能の遺伝性障害、内蔵逆位を伴うPCDカルタゲナー症候群としても公知、内蔵逆位を伴わないPCD及び線毛体無形成から選択される請求項71に記載の方法。CFTR介在性疾患が、嚢胞性線維症、COPD、骨粗鬆症及び肺気腫から選択される請求項71に記載の方法。CFTR介在性疾患が嚢胞性線維症である請求項71に記載の方法。患者がΔF508変異を有する嚢胞性線維症膜貫通型受容体CFTRを有する請求項71から74のいずれかに記載の方法。患者がR117H変異を有する嚢胞性線維症膜貫通型受容体CFTRを有する請求項の71から74いずれかに記載の方法。患者がG551D変異を有する嚢胞性線維症膜貫通型受容体CFTRを有する請求項71から74のいずれかに記載の方法。該方法が追加の治療剤を投与することを含む請求項71から77のいずれかに記載の方法。治療剤が粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤,又は栄養剤である請求項78に記載の方法。請求項1から19のいずれかに記載のフォームA、請求項33又は34のアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド、又は請求項40に記載の固体分散体及びそれらの使用説明書を含むキット。R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドは、米国特許出願公開20090131492号該公報は、そのすべてが引用によりここに組み込まれるにCFTR活性の調節剤、それゆえCFTR介在性疾患、例えば嚢胞性線維症の処置に有用であるとして開示されている。しかし、治療剤として使用するために適切な医薬組成物に容易に用いられる、該化合物の安定な固体形態が必要である。本発明は、以下の構造:を有するR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドここでは以降化合物1と言うの固体形態に関する。化合物1及びそれらの薬学的に許容される組成物は、例えば、嚢胞性線維症のようなCFTR介在性疾患の処置に又は重症度を軽減させるのに有用である。1つの態様としては、化合物1は、本明細書に記載され且つ特徴付けられるフォームAと呼ばれる実質的に結晶性で塩のない形態であるものである。他の態様としては、化合物1は、本明細書に記載され且つ特徴付けられるアモルファス形態にあるものである。薬物としてのその有効性に関連する固体の性質は、固体の形態に依存しうる。例えば、薬物物質において、固体形態の種類は、例えば、融点、溶解速度、経口吸収性、バイオアベイラビリティ、毒性結果、及び更には臨床試験結果に違いを生じさせうる。本明細書において記載される方法は、化合物1のフォームA又はアモルファス形態又は両方を含む本発明の組成物の調製に用いることができる。定義ここで使用される場合、他に示さない限り以下の定義を適用すべきである。用語CFTRとは、ここで使用される場合、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子又は制御因子活性の能力のあるその変異体を意味し、ΔF508CFTRおよびG551DCFTRが含まれるが、これらに限定されないCFTR変異体については、例えば、http://www.genet.sickkids.on.ca/CFTR/を参照のこと。ここで使用される場合、用語アモルファスとは、無秩序な配列の分子からなり、明確な結晶格子を有しない固体の形態を意味する。ここで使用される場合、結晶とは、構造ユニットが固定された幾何学的パターン又は格子に配列され、それにより結晶固体が強固な長距離秩序を有する化合物または組成物を意味する。結晶構造を構成する構造ユニットは、原子、分子又はイオンでありうる。結晶固体は、明確な融点を有する。用語調節とは、ここで使用される場合、例えば活性を測定可能な量で増加または減少させることを意味する。用語化学的に安定なとは、ここで使用される場合、化合物1の固体形態が、例えば40°C/相対湿度75の特定の条件に、1日、2日、3日、1週間、2週間又はそれ以上の一定期間付したときに1種以上の異なる化合物に分解しないことを意味する。ある態様においては、25未満の化合物1の固体形態が分解し、ある態様においては、約20未満、約15未満、約10未満、約5未満、約3未満、約1未満、約05未満の化合物1が特定の条件下で分解する。ある態様においては、検出可能な量の固体形態の化合物1は分解しない。用語物理的に安定なとは、本明細書において使用される場合、例えば40°C/相対湿度75の特定の条件に、例えば1日、2日、3日、1週間、2週間又はそれ以上の一定期間付したときに、化合物1の固体形態が、化合物1の1種以上の異なる物理的形態例えば、XRPD、DSC等により測定して異なる固体形態に変化しないことを意味する。ある態様においては、特定の条件に付したときに、25未満の化合物1の固体形態が1種以上の異なる物理的形態に変化する。ある態様においては、約20未満、約15未満、約10未満、約5未満、約3未満、約1未満、約05未満の化合物1の固体形態は、特定の条件に付したときに、1種以上の異なる物理的形態に変化する。ある態様においては、検出可能な量の固体形態の化合物1は1種以上の物理的に異なる固体形態の化合物1に変化しない。語句実質的にアモルファスの化合物1は、ここで使用される場合、アモルファス化合物1、実質的に結晶性の化合物1を含まないアモルファス化合物1及び実質的にアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドは同義的に使用される。ある態様においては、実質的にアモルファスの化合物1とは、約30未満の結晶性化合物1、例えば、約30未満の結晶性化合物1、例えば、約25未満の結晶性化合物1、約20未満の結晶性化合物1、約15未満の結晶性化合物1、約10未満の結晶性化合物1、約5未満の結晶性化合物1、約2未満の結晶性化合物1を含む。ここで使用される場合、語句実質的に結晶性の化合物1のフォームAとは化合物1のフォームA及び実質的にアモルファス化合物1を含まない結晶性化合物1のフォームAと同義的に使用される。ある態様においては、実質的に結晶性の化合物1のフォームAは、約30未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態、例えば、約30未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態、例えば、約25未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態、約20未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態、約15未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態、約10未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態、約5未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態、約2未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態を有する。ある態様においては、実質的に結晶性の化合物1のフォームAは約1未満のアモルファス化合物1又は他の固体形態を有する。用語実質的に含まない句実質的に形態Xを含まないにおけるようなとは、指定した化合物1の固体形態例えば、本明細書においてアモルファス又は結晶固体形態と記載されるを言うとき、20重量未満の示した形態又は共形態co-form例えば、化合物1の結晶又はアモルファス形態が存在することを意味し、より好ましくは、10重量未満の示した形態が存在すること、より好ましくは5重量未満の示した形態が存在すること、最も好ましくは1重量未満の示した形態が存在することを意味する。用語実質的に純粋なとは、指定した化合物1の固体の形態例えば、本明細書に記載のアモルファス又は結晶性固体形態を言うとき、指定した固体形態が、20重量未満の残りの成分、例えば化合物1の別の多形又は同形結晶形態又は共形態のを含有することを意味する。実質的に純粋な化合物1の固体形態は、10重量未満の化合物1の別の多形又は同形の結晶形態、より好ましくは5重量未満の化合物1の別の多形又は同形の結晶形態、及び最も好ましくは1重量未満の別の化合物1の多形又は同形の結晶形態を含有することが好ましい。ここで使用される場合、分散体は、分散相である1種の物質が、第2の物質連続相又は媒体中に、区別されたユニットとして分散している分散系を言う。分散相の大きさは、大幅に異なりうる例えば、ナノメートル容積のコロイド粒子から、数ミクロンサイズまで。一般には、分散相は、固体、液体又は気体でありうる。固体分散体である場合には、分散相及び連続相はいずれも固体である。薬学的な適用においては、固体分散体はアモルファスポリマー連続相中の結晶性の薬物分散相、あるいはアモルファスポリマー連続相中のアモルファスの薬物分散相を含むことができる。ある態様としては、アモルファス固体分散体は、分散相を構成するポリマー及び連続層を構成する薬物を含む。ある態様においては、分散体はアモルファス化合物1又は実質的にアモルファスの化合物1を含む。用語固体アモルファス分散体は、一般に2以上の成分、通常薬物及びポリマーの固体分散体のことを言うが、化合物1がアモルファス又は実質的にアモルファス例えば、実質的にを含まない結晶化合物1であり、アモルファスの薬物の物理的安定性及び/又は溶解及び/又は溶解性が他の成分、例えば、界面活性剤又は他の薬学的賦形剤により促進されるならば、該他の成分も含むことが可能である。ここで使用される場合、用語約及び大凡が組成物の内容又は組成物の投与形態の用量、量、又は重量割合に関連して用いられる場合、用量、量、又は重量割合は、特定の用量、量、又は重量割合により得られるのと同等の薬理学効果を提供することを当業者により認識されるものを意味する。特に用語約又は大凡は、当業者が特定の値における許容できる誤差を意味し、それはある程度どのようにその値が測定又は決定されたかによる。特定の態様としては、用語約又は大凡は、標準誤差1、2、3又は4の範囲内であることを意味する。特定の態様としては、用語約又は大凡は、ある数値又は範囲の30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、05、01又は005以内を意味する。略語MTBE及びDCMは、それぞれメチルt-ブチルエーテルおよびジクロロメタンを意味する。略語XRPDは粉末X線回折を意味する。略語DSCは示差走査熱量測定を意味する。略語TGAは熱重量分析を意味する。他に示さない限り、本明細書に記載された構造は、また構造のすべての異性体例えば、エナンチオマー的、ジアステレオマー的、及び幾何学的又は配座的形態を含むこと意味する;例えば、各不斉中心におけるR及びS配置、Z及びE二重結合異性体、及びZ及びE配座異性体がある。それゆえ、本化合物の単一の立体異性体並びに、エナンチオマー的、ジアステレオマー的、及び幾何学的又は配座的混合物は本発明の範囲内である。化合物1の全ての互変異性形態が本明細書に含まれる。例えば、化合物1は互変異性体として存在してもよく、ここで、いずれも本明細書に含まれる:加えて、他に示さない限り、本明細書に示した構造は、また1種以上の同位体濃縮原子の存在によってのみ異なる化合物を含む。例えば、1個以上の水素原子が、重水素又はトリチウムで置き換えられた、又は1個以上の炭素原子が13C-又は14C-濃縮原子によって置き換えられた化合物1は本発明の範囲内である。そのような化合物は、例えば、分析ツール、生物学的アッセイにおけるプローブ、又は改善された治療プロファイルを有する化合物として有用である。1つの態様としては、本発明は、結晶フォームAとして特徴付けられるR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドであることを特徴とする。異なる態様としては、フォームAは、CuKα照射を用いて得られた粉末X線回折において、193ないし197°、215ないし219°及び169ないし173°における1個以上のピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約195、217及び171°における1個以上のピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、202ないし206°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約204°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、186ないし190°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約188°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、245ないし249°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約247°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、98ないし102°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約100°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、48ないし52°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約50°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、240ないし244°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約242°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、183ないし187°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、約185°におけるピークにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、実質的に図4に類似する回折パターンにより特徴付けられる。異なる態様としては、フォームAは、実質的に図5に類似する回折パターンにより特徴付けられる。他の態様としては、本発明は、単斜晶系、C2空間群、及び以下の単位胞寸法:a=21095216Å、α=90°、b=662875Å、β=958676°、c=17791715Å、及びγ=90°を有するR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの結晶形態であることを特徴とする。他の態様としては、本発明は、フォームA及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物であることを特徴とする。異なる態様としては、医薬組成物はさらに追加の治療剤を含む。異なる態様としては、追加の治療剤は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤又は栄養剤から選択される。他の態様としては、本発明は、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを溶媒中で有効な時間スラリー化することを含むフォームAを調製する方法を特徴とする。異なる態様としては、溶媒は、酢酸エチル、ジクロロメタン、MTBE、酢酸イソプロピル、水/エタノール、水/アセトニトリル、水/メタノール、又は水/イソプロピルアルコールである。異なる態様としては、有効な時間は、24時間ないし2週間である。異なる態様としては、有効な時間は、24時間ないし1週間である。異なる態様としては、有効な時間は24時間ないし72時間である。他の態様としては、本発明は、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを溶媒に溶解させ、溶媒を蒸発させることを含む、フォームAの調製方法を特徴とする。異なる態様としては、溶媒は、アセトン、アセトニトリル、メタノール又はイソプロピルアルコールである。他の態様としては、本発明は、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを第1溶媒に溶解させ、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドが溶解しない第2溶媒を加えることを含む、フォームAの調製方法を特徴とする。異なる態様としては、第1溶媒は、酢酸エチル、エタノール、イソプロピルアルコール又はアセトンである。異なる態様としては、第2溶媒はヘプタン又は水である。異なる態様としては、第2溶媒の添加は、第1溶媒及びR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの溶液の攪拌中に行われる。他の態様としては、本発明は、実質的にアモルファスであるR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド固体であることを特徴とする。異なる態様としては、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドは、約5未満の結晶性R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを含む。他の態様としては、本発明は、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物であることを特徴とする。異なる態様としては、医薬組成物は、さらに、追加の治療剤を含む。異なる態様としては、追加の治療剤は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤又は栄養剤から選択される。他の態様としては、本発明は、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを適切な溶媒に溶解させ、ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去することを含む、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの調製方法を特徴とする。異なる態様としては、溶媒はメタノールである。他の態様としては、本発明は、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド及びポリマーを含む固体分散体を特徴とする。異なる態様としては、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースHPMCである。異なる態様としては、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASである。異なる態様としては、ポリマーは10重量ないし80重量の量で存在する。異なる態様としては、ポリマーは30重量ないし60重量の量で存在する。異なる態様としては、ポリマーは約495重量の量で存在する。異なる態様としては、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドは10重量ないし80重量の量で存在する。異なる態様としては、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドは30重量ないし60重量の量で存在する。異なる態様としては、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドは約50重量の量で存在する。異なる態様としては、固体分散体は、さらに界面活性剤を含む。異なる態様としては、界面活性剤はラウリル硫酸ナトリウムである。異なる態様としては、界面活性剤は、01重量ないし5重量の量で存在する。異なる態様としては、界面活性剤は、約05重量の量で存在する。異なる態様としては、ポリマーが495重量の量のヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASであり、界面活性剤が05重量の量のラウリル硫酸ナトリウムであり、そしてR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドが50重量の量で存在する。他の態様としては、本発明は、固体分散体及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を特徴とする。異なる態様としては、医薬組成物はさらに追加の治療剤を含む。異なる態様としては、追加の治療剤は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤又は栄養剤から選択される。他の態様としては、本発明は、R-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドをスプレードライすることを含む、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの製造方法を特徴とする。異なる態様としては、本方法はR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド及び適切な溶媒を組合わせ、続いて混合物をスプレードライしてアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを得ることを含む。異なる態様としては、溶媒はアルコールである。異なる態様としては、溶媒はメタノールである。異なる態様としては、以下の方法を含む:aR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド、ポリマー、及び溶媒の混合物を形成すること;そしてb混合物をスプレードライして固体分散体を形成すること。異なる態様としては、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASである。異なる態様としては、ポリマーが固体分散体の10重量ないし80重量の量である。異なる態様としては、ポリマーが固体分散体の約495重量の量である。異なる態様としては、溶媒はメタノールである。異なる態様としては、混合物は更に界面活性剤を含む。異なる態様としては、界面活性剤はラウリル硫酸ナトリウムSLSである。異なる態様としては、界面活性剤は固体分散体の01重量ないし5重量の量である。異なる態様としては、界面活性剤は固体分散体の約05重量の量である。異なる態様としては、ポリマーが、固体分散体の約495重量の量であるヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCASであり、溶媒はメタノールであり、混合物がさらに固体分散体の約05重量の量であるラウリル硫酸ナトリウムを含む。他の態様としては、本発明は、フォームA、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド、又はアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドの固体分散体の有効量を対象に投与することを含む、対象におけるCFTR介在性疾患の処置方法を特徴とする。異なる態様としては、CFTR介在性疾患は嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性COPD、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、先天性両側精管欠損症CBAVDに起因する男性不妊、軽度肺疾患、突発性膵炎、アレルギー性気管支肺アルペルギルス症ABPA、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性血色素症、血液凝固-線維素溶解欠乏症、プロテインC欠乏症、1型遺伝性血管浮腫、脂質プロセシング欠損症、家族性高コレステロール血症、1型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム性蓄積症、I細胞病/偽ハーラー症、ムコ多糖症、サンドホフ病/テイ-サックス病、クリグラーナジャー症候群II型、多腺性内分泌障害/高インスリン血症、糖尿病、ラロン小人症、ミエロオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能亢進症、メラノーマ、グリカノーシスglycanosisCDG1型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノーゲン血症、ACT欠損症、糖尿病性尿崩症DI、骨端軟骨性DI、腎性DI、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウスメルバッハー病PerlizaeusMerzbacherdisease、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺progressivesupranuclearplasy、ピック病、数種のポリグルタミン神経障害、ハンチントン病、脊髄小脳性運動失調症I型spinocerebullarataxiatypeI、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症dentatorubalpallidoluysian、筋緊張性ジストロフィ、海綿状脳症、遺伝性クロイツフェルトヤコブ病プリオンタンパク質プロセシング欠損による、ファブリー病、シュトロイスラーシャインカー症候群、COPD、眼乾燥疾患、シェーグレン病、骨粗鬆症、骨減少症、ゴーラム症候群、塩素チャネル病、先天性筋強直症トムソン型およびベッカー型、バーター症候群III型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、驚愕過剰症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛ジスキネジアPCD、線毛の構造および/または機能の遺伝性障害、内蔵逆位を伴うPCDカルタゲナー症候群としても公知、内蔵逆位を伴わないPCD又は線毛体無形成から選択される。異なる態様としては、CFTR介在性疾患は、嚢胞性線維症である。異なる態様としては、対象は、ΔF508変異を有する嚢胞性線維症膜貫通型受容体CFTRを有する。異なる態様としては、対象は、R117H変異を有する嚢胞性線維症膜貫通型受容体CFTRを有する。異なる態様としては、対象は、G551D変異を有する嚢胞性線維症膜貫通型受容体CFTRを有する。異なる態様としては、方法は、追加の治療剤を投与することを含む。異なる態様としては、治療剤は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、CFTR賦活剤又は栄養剤から選択される。異なる態様としては、本発明は、フォームA、アモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド、又はアモルファスのR-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル-N-1-2,3-ジヒドロキシプロピル-6-フルオロ-2-1-ヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル-1H-インドール-5-イルシクロプロパンカルボキサミドを含む固体分散体及びそれらの使用説明書を含むキットを特徴とする。化合物1のフォームA及びアモルファス形態の調製方法化合物1は出発点であり、ある態様としては、スキーム1-4に従い酸塩化物をアミン部分とカップリングさせることにより調製できる。スキーム1酸塩化物部分の合成スキーム2酸塩化物部分の合成の別法スキーム3アミン部分の合成スキーム4化合物1の形成化合物1のフォームAの形成の方法ある態様としては、フォームAを、化合物1を適切な溶媒において、有効な時間スラリー化することにより調製する。異なる態様としては、適切な溶媒は、酢酸エチル、ジクロロメタン、MTBE、酢酸イソプロピル、種々の割合の水/エタノール溶液、種々の割合の水/アセトニトリル溶液、種々の割合の水/メタノール溶液、又は種々の割合の水/イソプロピルアルコール溶液である。例えば、種々の割合の水/エタノール溶液には、水/エタノール1:9体積/体積、水/エタノール1:1体積/体積及び水/エタノール9:1体積/体積を含む。種々の割合の水/アセトニトリル溶液には、水/アセトニトリル1:9体積/体積、水/アセトニトリル1:1体積/体積及び水/アセトニトリル9:1体積/体積を含む。種々の割合の水/メタノール溶液には、水/メタノール1:9体積/体積、水/メタノール1:1体積/体積及び水/メタノール9:1体積/体積を含む。種々の割合の水/イソプロピルアルコール溶液は、水/イソプロピルアルコール1:9体積/体積、水/イソプロピルアルコール1:1体積/体積および水/イソプロピルアルコール9:1体積/体積を含む。一般に、化合物1約40mgを、適切な溶媒約15mL目標濃度267mg/ml中、室温で有効な時間スラリー化する。ある態様においては、有効な時間は、約24時間ないし2週間である。ある態様においては、有効な時間は、約24時間ないし約1週間である。ある態様においては、有効な時間は、約24時間ないし約72時間である。続いて固体を集める。異なる態様としては、フォームAを、化合物1を適切な溶媒に溶解させ、続いて溶媒を蒸発させることにより調製する。ある態様としては、適切な溶媒は化合物1の溶解性が20mg/mlよりも大きいものである。例えば、溶媒は、アセトニトリル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン等を含む。一般に、化合物1を適切な溶媒に溶解させ、濾過し、続いて低速蒸発又は高速蒸発させる。低速蒸発の例は、1個の穿刺孔を有するパラフィルムで、化合物1溶液を含むコンテナ、例えばバイアルをカバーすることである。高速蒸発の例は、化合物1溶液を含むコンテナ、例えばバイアルを覆わないで放置することである。続いて固体を集める。他の態様としては、本発明は、化合物1を第1溶媒に溶解させ、化合物1が難溶性である第2溶媒溶解性<1mg/mlを加えることを含むフォームAの調製方法を特徴とする。例えば、第1溶媒は、化合物1が20mg/mlより大きい溶解性を有し、例えば、酢酸エチル、エタノール、イソプロピルアルコール又はアセトンがある。第2溶媒は、例えばヘプタン又は水である。一般に、化合物1を第1溶媒に溶解させ、いかなる種結晶をも濾過して除去する。第2溶媒を、攪拌しながらゆっくり加える。固体を沈殿させ、濾過により集める。アモルファス化合物1の調製方法化合物1又は化合物1のフォームAから出発し、化合物1のアモルファス形態をロータリーエバポレーション又はスプレードライ法により調製する。化合物1をメタノールのような適切な溶媒に溶解させ、ロータリーエバポレーションによりメタノールを除去し、泡状生成物を残すことにより化合物1のアモルファス形態を製造する。ある態様においては、蒸発を促進するために温水浴を用いる。化合物1のアモルファス形態はまたスプレードライ法を用いて化合物1のフォームAから調製されうる。スプレードライは、液体試料を乾燥粒子形態に変換する方法である。場合により、例えば流動床乾燥又は真空乾燥のような第二の乾燥方法を用いて、残留溶媒を薬学的に許容されるレベルに減少させてもよい。典型的には、スプレードライは、高度に分散した液体懸濁液又は溶液と液滴の蒸発及び乾燥に十分な用量の熱気を接触させることを含む。スプレードライされる調製物は、選択されたスプレードライ装置を用いて微粒子化されうるあらゆる溶液、粗懸濁液、スラリー、コロイド分散液又はペーストであってもよい。標準的な方法においては、調製物は、溶媒を蒸発させ、乾燥した生成物を収集器例えば、サイクロンに運ぶ、フィルタを通した温気流にスプレーされる。続いて、用いた空気を溶媒と共に排出させるか、又は用いた空気をコンデンサに送り、溶媒を捕捉し、可能であれば再利用する。スプレードライを行うために市販の型の装置を用いてもよい。例えば、市販のスプレードライヤーはブチ社BuchiLtd及びニロ社Niro例えば、ニロ社により製造されたスプレードライヤーのPSDラインにより製造される米国特許出願2004/0105820号;米国特許出願2003/0144257号参照。スプレードライは典型的には、約3ないし約30重量、例えば、約4ないし約20重量、好ましくは約10の固体物質負荷すなわち、薬物及び賦形剤を用いる。一般には、固体負荷の上限は、生成する溶液の粘度例えば、ポンプで押し出すことのできる能力及び溶液中の成分の溶解性に支配される。一般には、溶液の粘度は、生成する粉末生成物の粒子の大きさを決定しうる。スプレードライの技術及び方法は、Perry’sChemicalEngineeringHandbook、6thEd、RHPerry、DWGreenJOMaloney、eds、McGraw-Hillbookco1984;及びMarshallAtomizationandSpray-Drying50、ChemEngProgMonogrSeries21954に記載されている。一般に、スプレードライは、入力口の温度が約60°Cないし約200°C、例えば約95°Cないし約185°C、約110°Cないし約182°C、約96°Cないし約180°C、例えば、約145°Cである。スプレードライは一般に、出力口の温度が約30°Cないし約90°C、例えば約40°Cないし約80°C、約45°Cないし約80°C、例えば、約75°Cで実施される。微粒子化流速は、一般に約4kg/時ないし約12kg/時、例えば約43kg/時ないし約105kg/時、例えば、約6kg/時又は約105kg/時である。流加速度は、一般に約3kg/時ないし約10kg/時、例えば、約35kg/時ないし約90kg/時、例えば、約8kg/時又は約71kg/時である。微粒子化比率は、一般に約03ないし17、例えば約05ないし15、例えば、約08又は約15である。溶媒の除去は、続く乾燥工程、例えば、トレードライ、流動床乾燥例えば室温付近ないし約100°C、真空乾燥、電磁波乾燥、ロータリードラム乾燥又は又はバイコニカル真空乾燥例えば室温付近ないし約200°Cを要しうる。ある態様としては、固体分散体を流動床乾燥させる。ある方法としては、溶媒は揮発性溶媒、例えば約100°C未満の沸点を有する溶媒である。ある態様においては、溶媒は溶媒の混合物を含み、例えば揮発性溶媒又は揮発物及び不揮発性溶媒の混合物を含む。溶媒の混合物が用いられる場合には、、例えば約15未満の、例えば約12未満の、約10未満の、約8未満の、約5未満の、約3未満の又は約2未満の不揮発性溶媒が存在するならば、混合物は1種以上の不揮発性溶媒を含むことができる。好ましい溶媒は、化合物1が少なくとも約10mg/ml、例えば、少なくとも約15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml、50mg/ml又はそれより高いの溶解性を有する溶媒である。より好ましくは、溶媒は、化合物1が少なくとも約20mg/mlの溶解性を有するものを含む。試験しうる溶媒の例としては、アセトン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、N,N-ジメチルアセトアミドDMA、N,N-ジメチルホルムアミドDMF、1,3-ジメチル-2-イミダゾリジノンDMI、ジメチルスルホキシドDMSO、ジオキサン、酢酸エチル、エチルエーテル、氷酢酸HAc、メチルエチルケトンMEK、N-メチル-2-ピロリジノンNMP、tert-ブチルメチルエーテルMTBE、テトラヒドロフランTHF、ペンタン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピル及びトルエンを含む。共溶媒の例としては、アセトン/DMSO、アセトン/DMF、アセトン/水、MEK/水、THF/水、ジオキサン/水を含む。2溶媒系においては、溶媒は約01ないし約999で存在しうる。好ましい態様としては、水を共溶媒としてアセトンと併用し、ここで水は約01ないし約15、例えば約9ないし約11、例えば、約10で存在する。好ましい態様としては、水を共溶媒としてMEKと併用し、ここで水は約01ないし約15、例えば約9ないし約11、例えば、約10で存在する。ある態様としては、溶媒溶液は3種の溶媒を含む。例えば、アセトン及び水を第3の溶媒、例えばDMA、DMF、DMI、DMSO又はHAcと混合できる。アモルファス化合物1が固体アモルファス分散体の成分である場合、好ましい溶媒は、化合物1とポリマーの両方を溶解する。適切な溶媒は上述したものを含み、例えば、MEK、アセトン、水、メタノール、及びそれらの混合物がある。粒子径及び乾燥温度範囲は、最適な固体分散体を調製するために変更されうる。当業者には理解されているであろうが、小粒子径では、溶媒の除去を改善しうる。しかし、出願人は、より小さな粒子は綿毛状粒子となり得て、それはある条件下では、下流のプロセシング、例えば錠剤化において最適な固体分散体を提供しないことを見出した。より高温では、化合物1の結晶化又は化学分解が起こりうる。より低温では、十分な量の溶媒を除去できない。本明細書の方法は、最適な粒子径及び最適な乾燥温度を提供する。一般に、粒子径は、例えばD10μmが約5未満、例えば、約45未満、約40未満又は約35未満、D50μmは一般に約17未満、例えば約16未満、約15未満、約14未満、約13未満であり、そしてD90μmが一般に約175未満、例えば約170未満、約170未満、約150未満、約125未満、約100未満、約90未満、約80未満、約70未満、約60未満、又は約50未満である。一般に、スプレードライした粒子のかさ密度は約008g/ccないし約020g/cc、例えば約010ないし約015g/cc、例えば、約011g/cc又は約014g/ccである。スプレードライした粒子のタップ密度は、一般に10タップで、約008g/ccないし約020g/cc、例えば約010ないし約015g/cc、例えば約011g/cc又は約014g/ccの範囲である;500タップにつき、010g/ccないし約025g/cc、例えば約011ないし約021g/cc、例えば、約015g/cc、約019g/cc又は約021g/ccである;1250タップにつき、015g/ccないし約027g/cc、例えば約018ないし約024g/cc、例えば、約018g/cc、約019g/cc、約020g/cc又は約024g/ccである;及び2500タップで、015g/ccないし約027g/cc、例えば約018ないし約024g/cc、例えば、約018g/cc、約021g/cc、約023g/cc又は約024g/ccである。ポリマーアモルファス化合物1及びポリマー又は固体状態担体を含む固体分散体もまたここに含まれる。例えば、化合物1は固体アモルファス分散体の成分としてのアモルファス化合物として存在する。固体アモルファス分散体は、一般に化合物1及びポリマーを含む。ポリマーの例は、セルロースポリマー、例えば、HPMC又はHPMCAS及びPVP/VAのようなポリマーを含有するピロリドンを含む。ある態様においては、固体アモルファス分散体は、1種以上の追加の賦形剤、例えば界面活性剤を含む。ある態様としては、ポリマーは、水性の媒体に溶解させることができる。ポリマーの溶解性は、pH-非依存性又はpH-依存性でありうる。後者は、1種以上の腸溶性ポリマーを含みうる。用語腸溶性ポリマーは、胃の酸性環境下と比較して、酸性度の低い腸の環境において優先的に溶解するポリマー、例えば、酸性水性媒体には不溶だがpH5-6より高い場合に溶解するポリマーを言う。適切なポリマーは化学的及び生物学的に不活性でなければならない。固体分散体の物理的安定性を改善するため、ポリマーのガラス遷移温度Tgはできるだけ高いべきである。例えば、好ましいポリマーは、薬物すなわち、化合物1と少なくとも等しいか又は高いガラス遷移温度を有する。他の好ましいポリマーは、薬物すなわち、化合物1の約10ないし約15°Cの範囲内のガラス遷移温度を有する。ポリマーの適切なガラス遷移温度の例は、少なくとも約90°C、少なくとも約95°C、少なくとも約100°C、少なくとも約105°C、少なくとも約110°C、少なくとも約115°C、少なくとも約120°C、少なくとも約125°C、少なくとも約130°C、少なくとも約135°C、少なくとも約140°C、少なくとも約145°C、少なくとも約150°C、少なくとも約155°C、少なくとも約160°C、少なくとも約165°C、少なくとも約170°C又は少なくとも約175°C乾燥条件下で測定を含む。理論に束縛されるわけではないが、根底のメカニズムは、Tgの高いポリマーは一般に、アモルファス固体分散体の物理的安定性に重要な因子である室温での分子運動性が低いと考えられる。加えて、ポリマーの吸湿性はできるだけ低い、例えば約10未満でなければならない。この出願における比較のため、ポリマー又は組成物の吸湿性は相対湿度約60において特徴付けられる。好ましい態様としては、ポリマーは約10未満の吸水性であり、例えば約9未満、約8未満、約7未満、約6未満、約5未満、約4未満、約3未満又は約2未満の吸水性である。吸湿性は、また固体分散体の物理的安定性にも影響しうる。一般に、ポリマーに吸収される湿気は、ポリマー並びに生成した固体分散体のTgを大きく低下させ得て、それはさらに上述のとおり固体分散体の物理的安定性を減少させる。ある態様としては、ポリマーは1種以上の水溶性ポリマー又は部分的に水溶性であるポリマーである。水溶性又は部分的に水溶性であるポリマーは、セルロース誘導体例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースHPMC、ヒドロキシプロピルセルロースHPC又はエチルセルロース;ポリビニルピロリドンPVP;ポリエチレングリコールPEG;ポリビニルアルコールPVA;アクリル酸、例えば、ポリメタクリレート例えばオイドラジット登録商標E;シクロデキストリン例えばβ-シクロデキストリン及びそれらの共重合体及び誘導体を含み、例えば、PVP-VAポリビニルピロリドン-ビニルアセテートを含むが、これらに限定されない。ある態様においては、ポリマーはヒドロキシプロピルメチルセルロースHPMC、例えば、HPMCE50、HPMCE15又はHPMC60SH50である。ここに記載するとおり、ポリマーは、pH-依存性腸溶性ポリマーでありうる。そのようなpH-依存性腸溶性ポリマーは、セルロース誘導体例えばセルロースアセテートフタレートCAP、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートHPMCP、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCAS、カルボキシメチルセルロースCMC又はそれらの塩例えばナトリウム塩CMC-Na;セルロースアセテートトリメリテートCAT、ヒドロキシプロピルセルロースアセテートフタレートHPCAP、ヒドロキシプロピルメチル-セルロースアセテートフタレートHPMCAP及びメチルセルロースアセテートフタレートMCAP、又はポリメタクリレート例えばオイドラジット登録商標Sを含むが、これらに限定されない。ある態様においては、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHPMCAS。ある態様においては、ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHGグレードHPMCAS-HGである。更に別の態様としては、ポリマーはポリビニルピロリドン共重合体、例えば、ビニルピロリドン/ビニルアセテート共重合体PVP/VAである。化合物1が例えば、HPMC、HPMCAS又はPVP/VAポリマーのようなポリマーと固体分散体を形成する場合の態様においては、例えば、固体分散体の総重量に対するポリマーの相対的な量は約01~99重量の範囲である。他に特定しない限り、本明細書中に記載した分散体における薬物、ポリマー及び他の賦形剤のパーセンテージは、重量パーセントである。ポリマーの量は、典型的には、少なくとも約20であり、好ましくは少なくとも約30、例えば少なくとも約35、少なくとも約40、少なくとも約45又は約50例えば495である。量は、典型的には約99以下であり、好ましくは約80以下、例えば、約75以下、約70以下、約65以下、約60以下又は約55以下である。ある態様としては、ポリマーは分散体の総重量の約50までの量である及び更に具体的には、約40と50の間、例えば約49、約495又は約50。HPMC及びHPMCASは、信越化学から種々のグレードで入手でき、例えば、HPMCASは、AS-LF、AS-MF、AS-HF、AS-LG、AS-MG、AS-HGを含み、多種を入手できる。これらの各グレードはアセテート及びスクシネートの置換パーセントにより変化する。ある態様においては、化合物1とポリマーはほぼ等量で存在し、例えば、ポリマー及び薬物は、それぞれ分散体の約半分の重量パーセントを構成する。例えば、ポリマーは、約495で存在し、薬物は約50で存在する。ある態様においては、化合物1及びポリマーは合わせて、スプレードライ前の非固体分散体において、総固体成分の1ないし20w/w存在する。ある態様においては、化合物1及びポリマーは合わせて、スプレードライ前の非固体分散体において、総固体成分の5ないし15w/w存在する。ある態様においては、化合物1及びポリマーは合わせて、スプレードライ前の非固体分散体において、総固体成分の約11w/w存在する。ある態様においては、分散体は更に、他の少量の成分、例えば界面活性剤例えばSLSを含む。ある態様においては、界面活性剤は、分散体の約10未満、例えば、約9未満、約8未満、約7未満、約6未満、約5未満、約4未満、約3未満、約2未満、約1又は約05で存在する。ポリマーを含む態様において、ポリマーは固体分散体の安定化に有効な量存在しなければならない。安定化は、化合物1の結晶化の阻害又は防止を含む。そのような安定化は、化合物1のアモルファスから結晶形態への変換を阻害する。例えば、ポリマーは、化合物1がアモルファスから結晶形態へ変換することを少なくとも一部例えば、約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75又はそれより多く防ぐ。安定化は、例えば、固体分散体ガラス遷移温度の測定、アモルファス物質の緩和速度の測定、又は化合物1の溶解性又はバイオアベイラビリティの測定により測定できる。例えば、固体分散体、例えば、アモルファス固体分散体を形成するために化合物1と組み合わせて用いられる適切なポリマーは、、以下の性質の1つ以上を有するべきである:ポリマーのガラス遷移温度は、化合物1のガラス遷移温度より約10-15°C以上低くない。好ましくは、ポリマーのガラス遷移温度は化合物1のガラス遷移温度より高く、一般に所望の医薬品の貯蔵温度よりも少なくとも50°C高い。例えば、少なくとも約100°C、少なくとも約105°C、少なくとも約105°C、少なくとも約110°C、少なくとも約120°C、少なくとも約130°C、少なくとも約140°C、少なくとも約150°C、少なくとも約160°C、少なくとも約160°C、又はそれより高い。ポリマーは比較的非吸湿性でなければならない。例えば、ポリマーは、標準的な条件下で貯蔵した場合に、約10未満の水、例えば約9未満の、約8未満の、約7未満の、約6未満の、又は約5未満の、約4未満の、又は約3未満の水しか吸収してはならない。好ましくは、標準的な条件下で貯蔵したとき、実質的に吸収水を含まない。ポリマーは、スプレードライ工程に適切な溶媒に、化合物1と比較して、同様の又はより良好な溶解性を有しなければならない。好ましい態様としては、ポリマーは、化合物1と同じ1種以上の溶媒又は溶媒系に溶解する。ポリマーは、少なくとも1種の非ヒドロキシ含有溶媒、例えば塩化メチレン、アセトン、又はそれらの混合物に溶解することが好ましい。ポリマーは、例えば、固体分散体又は液体懸濁液で化合物1と組み合わせたとき、ポリマー非存在下の化合物1又は参照ポリマーと組合わせたときの化合物1と比較して、水性及び生理学的に関連する媒体において、化合物1の溶解性を増加させなければならない。例えば、ポリマーは、固体アモルファス分散体又は懸濁液から結晶化合物1に変換するアモルファス化合物1の量を減らすことにより、アモルファス化合物1の溶解性を増加させうる。ポリマーは、アモルファス物質の緩和速度を減少させなければらない。ポリマーは、化合物1の物理的及び/又は化学的安定性を増加させなければならない。ポリマーは、化合物1の製造性を改善しなければならない。ポリマーは、化合物1の取り扱い、投与又は貯蔵性の1つ以上を改善しなければならない。ポリマーは、例えば、賦形剤である他の薬学的成分と好ましくない相互作用をしてはならない。候補ポリマー又は他の成分の適切さは、本明細書に記載したスプレードライ法又は他の方法を用いてアモルファス組成物を形成することにより試験できる。候補組成物は、安定性、結晶形成に対する耐性、又は他の性質の点で比較し、及び例えば、そのままのneatアモルファス化合物1又は結晶性の化合物1の参照化合物の調製物に対して比較できる。例えば、候補組成物は、溶媒媒介性結晶化の開始時間を遅らせるか、又は制御された条件下で一定時間内の変換率が、参照物質と比較して少なくとも50、75、100又は110良いかどうかを決定するために試験でき、又は候補組成物が結晶化合物1と比較して改善されたバイオアベイラビリティ又は溶解性を有するかどうかを決定するために試験できる。界面活性剤固体分散体または他の組成物は、界面活性剤を含んでいてもよい。界面活性剤又は界面活性剤混合物は、固体分散体と水性媒体の間の界面張力を一般に低下させる。適切な界面活性剤又は界面活性剤混合物は、また、固体分散体の化合物1の溶解性及びバイオアベイラビリティを促進しうる。本発明に関連して使用するための界面活性剤は、脂肪酸エステル例えばスパン登録商標、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル例えばツイン登録商標、ラウリル硫酸ナトリウムSLS、ドデシルベンゼン硫酸ナトリウムSDBS、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウムDocusate、ジオキシコール酸ナトリウムDOSS、モノステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムHTAB、N-ラウロイルサルコシンナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ミニステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、ゲルシール44/14、エチレンジアミン四酢酸EDTA、ビタミンEd-アルファトコフェリルポリエチレングリコール1000サクシネートTPGS、レシチン、MW677-692、グルタミン酸一ナトリウム一水和物、ラブラゾール、PEG8カプリル/カプリン酸グリセリル、トランスクトール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ソルトールHS-15、ポリエチレングリコール/ヒドロキシステアレート、タウロコール酸、プルロニックF68、プルロニックF108、及びプルロニックF127又は他のポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレン共重合体プルロニック登録商標又は飽和ポリグリコール化グリセリドゲルシール登録商標を含むが、これらに限定されない。本発明と関連して用いられるそのような界面活性剤の具体例としては、スパン65、スパン25、ツイン20、カプロイル90、プルロニックF108、ラウリル硫酸ナトリウムSLS、ビタミンETPGS、プルロニック類及び共重合体を含むが、これらに限定されない。SLSが一般に好ましい。固体分散体の総重量に対する界面活性剤例えばSLSの量は、01-15でありうる。好ましくは約05ないし約10であり、より好ましくは約05ないし約5であり、例えば約05ないし4、約05ないし3、約05ないし2、約05ないし1又は約05である。特定の態様としては、固体分散体の総重量に対する界面活性剤の量は、少なくとも約01であり、好ましくは約05である。これらの態様において、界面活性剤は約15以下で存在し、好ましくは約12、約11、約10、約9、約8、約7、約6、約5、約4、約3、約2又は約1以下である。界面活性剤が約05重量の量で存在する場合が好ましい。候補界面活性剤又は他の成分は、発明で使用する適切さについてポリマーの試験において述べたのと類似の方法で試験できる。用途、製剤及び投与薬学的に許容される組成物本発明の他の態様としては、本明細書中に記載の化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1を含み、場合により医薬的に許容される担体、補助剤又は媒体を含む薬学的に許容される組成物を提供する。特定の態様としては、これらの組成物は、場合により1つ以上の追加の治療剤を含む。上述したとおり、本発明の薬学的に許容される組成物は、追加的に医薬的に許容される担体、補助剤又は媒体を含み、これは、ここで使用される場合、所望の特定の投与形態に適した、溶媒、希釈剤、又は他の液体担体、分散体又は懸濁液剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤、固形結合剤、滑沢剤等のいずれかおよび全てを含む。Remington’sPharmaceuticalSciences、SixteenthEdition、EWMartinMackPublishingCo、Easton、Pa、1980は、薬学的に許容される組成物の製剤化に用る種々の担体及びそれらの製剤の公知の技術を開示する。従来の担体媒体が本発明の化合物と不適合である、例えば、望ましくない生物学的効果を生じるか、あるいは他の薬学的に許容される組成物のいずれかの成分と有害な方法で相互作用する場合を除いて、その使用は本発明の範囲に含まれる。医薬的に許容される担体として作用できる物質のいくつかの例としては、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、又はソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素ジナトリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三珪酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ろう、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロックポリマー、羊毛脂、糖、例えば乳糖、グルコース及びショ糖;デンプン、例えばトウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン;セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース;トラガント末;麦芽;ゼラチン;タルク;賦形剤、例えばココアバター及び坐剤ろう;油脂、例えば落花生油、綿実油;サフラワー油;ゴマ油;オリーブ油;コーン油及び大豆油;グリコール;例えば、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール;エステル、例えば、オレイン酸エチル及びラウリル酸エチル;寒天;緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム;アルギン酸;発熱性物質除去蒸留水;等張生理食塩水;リンガー溶液;エチルアルコール及びリン酸緩衝溶液、並びに他の非毒性で混合可能な滑沢剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムを含むがこれらに限定されず、同様に着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、風味剤及び芳香剤、保存剤及び抗酸化剤もまた製剤者の判断により組成物中に存在していてもよい。化合物及び薬学的に許容される組成物の用途また別の態様として、本発明は、CFTRに関わる病態、疾患、又は障害の処置方法を提供する。特定の態様としては、本発明は、CFTR活性の不全が関わる病態、疾患、又は障害の処置方法であって、本明細書中に記載の化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1の固相形態を、それを必要とする対象、好ましくは哺乳類に投与することを含む方法を提供する。ここで使用される場合CFTR介在性疾患は、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性COPD、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、先天性両側精管欠損症CBAVDに起因する男性不妊、軽度肺疾患、突発性膵炎、アレルギー性気管支肺アルペルギルス症ABPA、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性血色素症、血液凝固-線維素溶解欠乏症、プロテインC欠乏症、1型遺伝性血管浮腫、脂質プロセシング欠損症、家族性高コレステロール血症、1型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム性蓄積症、I細胞病/偽ハーラー症、ムコ多糖症、サンドホフ病/テイ-サックス病、クリグラーナジャー症候群II型、多腺性内分泌障害/高インスリン血症、糖尿病、ラロン小人症、ミエロオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能亢進症、メラノーマ、グリカノーシスCDG1型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノーゲン血症、ACT欠損症、糖尿病性尿崩症DI、骨端軟骨性DI、腎性DI、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウスメルバッハー病PerlizaeusMerzbacherdisease、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺progressivesupranuclearplasy、ピック病、数種のポリグルタミン神経障害、ハンチントン病、脊髄小脳性運動失調症I型spinocerebullarataxiatypeI、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症dentatorubalpallidoluysian、筋緊張性ジストロフィ、海綿状脳症、遺伝性クロイツフェルトヤコブ病プリオンタンパク質プロセシング欠損による、ファブリー病、シュトロイスラーシャインカー症候群、COPD、眼乾燥疾患、シェーグレン病、骨粗鬆症、骨減少症、ゴーラム症候群、塩素チャネル病、先天性筋強直症トムソン型およびベッカー型、バーター症候群III型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、驚愕過剰症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛ジスキネジアPCD、線毛の構造および/または機能の遺伝性障害、内蔵逆位を伴うPCDカルタゲナー症候群としても公知、内蔵逆位を伴わないPCD又は線毛体無形成から選択される。特定の態様としては、本発明は、本明細書に記載の化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1の有効量をヒトに投与する過程を含む、該ヒトにおけるCFTR介在性疾患の処置方法を提供する。異なる好ましい態様としては、本発明は、本明細書に記載の化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1をヒトに投与する過程を含む、該ヒトにおける嚢胞性線維症を処置する方法を提供する本発明において、化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1又はそれらの薬学的に許容される組成物の有効量は、上記疾患のいずれかを処置するか又は重症度を軽減するのに有効な量を意味する。化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1又はそれらの薬学的に許容される組成物は、上記疾患の1つ以上を処置するか又は重症度を軽減するのに有効な任意の量及び任意の経路を用いて投与してよい。特定の態様としては、本明細書に記載の化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1又はそれらの薬学的に許容される組成物は、呼吸器及び非呼吸器の上皮頂端膜において残存CFTR活性を示す嚢胞性線維症の患者において、疾患を処置するか又は重症度を軽減するのに有効である。上皮表面の残存CFTR活性の存在は、当該分野において知られた方法、例えば標準的な電気生理学的、生化学的又は組織化学的技術を使用して、容易に検出できる。そのような方法は、インビボ又はエクスビボにおける電気生理学的技術、汗又は唾液中におけるCl-濃度の測定、又はエクスビボにおける細胞表面密度をモニターするための生化学的又は組織化学的技術を用いて、CFTR活性を同定する。そのような方法を用いることにより、最も一般的な変異であるΔF508、並びに、他の変異、例えばG551D変異又はR117H変異についてホモ接合又はヘテロ接合である患者を含む、種々の異なる変異についてヘテロ接合又はホモ接合である患者において、残存CFTR活性が容易に検出される。ある態様としては、本明細書中に記載の化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1又はそれらの薬学的に許容される組成物は、残存CFTR活性を示す特定の遺伝子型、例えばクラスIII変異制御又はゲーティング障害、クラスIV変異伝導率変更、又はクラスV変異合成減少LeeRChoo-Kang、PamelaL、Zeitlin、TypeI、II、III、IV、andVcysticfibrosisTansmembraneConductanceRegulatorDefectsandOpportunitiesofTherapy;CurrentOpinioninPulmonaryMedicine6:521-529、2000を示す嚢胞性線維症を処置又は重症度を軽減するのに役立つ。残存CFTR活性を示す他の遺伝子型の患者には、これらのクラスの1種に対してホモ接合性であるか、またはクラスI変異、クラスII変異もしくはそうした分類のない変異を含む任意の他の部類の変異とヘテロ接合性である患者が含まれる。ある態様としては、本明細書に記載の化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1又はそれらの薬学的に許容される組成物は、特定の臨床表現型、例えば典型的に上皮頂端膜における残存CFTR活性の量と相関する軽度から中度の臨床表現型の嚢胞性線維症患者の処置又は重症度の軽減に有効である。そのような表現型は、膵機能不全を示す患者又は突発性膵炎及び先天性両側精管欠損症、又は軽度肺疾患と診断された患者を含む。必要となる正確な量は、患者の種、年齢、及び全身状態、感染の重症度、特定の薬剤、投与方法等に依存し、患者ごとに異なる。本発明の化合物は、投与の簡易化及び用量の統一性のため、投与単位形態に製剤化されることが好ましい。表現投与単位形態はここで使用される場合、処置される患者に適切な、物理的に区別されたユニットをいう。しかし、本発明の化合物及び組成物の一日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で、担当医によって判断されることは理解されるであろう。特定の任意の患者又は生物における、具体的な有効量レベルは、治療される疾患及び疾患の重症度;用いる特定の化合物の活性;用いる特定の組成物;患者の年齢、体重、一般的な健康度、性別及び食習慣;投与時間、投与経路、及び用いる特定の化合物の排泄速度;処置期間;特定の化合物と組み合わせて又は同時に用いる薬物及び医学分野においてよく知られている同様の因子を含む様々な因子に依存する。本明細書において使用される場合、用語患者又は対象は、動物、好ましくは哺乳類、及び最も好ましくはヒトである。本発明の薬学的に許容される組成物は、ヒト及び他の動物に、処置する感染症の重症度に依存して、経口的、直腸的、非経腸的、嚢内、膣内、腹腔内、局所散剤、軟膏剤、又は滴薬として、口腔内、経口又は経鼻スプレー等により投与される。特定の態様としては、本発明の化合物を、所望の治療効果を得るために、対象の体重に応じて1日あたり、約001mg/kgないし約50mg/kg、好ましくは約1mg/kgないし約25mg/kgで、1日1回以上、経口又は非経腸的に投与してよい。特定の態様としては、化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1の投与単位形態は100mgないし1,000mgの用量である。異なる態様としては、化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1の投与用量は、200mgないし900mgである。異なる態様としては、化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1の投与用量は、300mgないし800mgである。異なる態様としては、化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1の用量は、400mgないし700mgである。異なる態様としては、化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1の用量は、500mgないし600mgである。注射用製剤、例えば、滅菌した水溶性又は油性注射用懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて当該分野において知られた技術によって調製されうる。滅菌の注射用製剤は、例えば1,3-ブタンジオール溶液のような、非毒性の非経腸的に許容可能な希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用溶液、懸濁液又は乳濁液でありうる。用いられうる許容可能な担体及び溶媒は、水、リンガー溶液、USP及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、滅菌固定油は、好都合に溶媒又は懸濁媒体として用いられる。この目的で、合成のモノ又はジグリセリドを含む固定油を含むあらゆる無菌の固定油を使用できる。加えて、脂肪酸、例えば、オレイン酸が注射剤の調製に用いられる。注射用製剤は、例えば、バクテリア-保持フィルタで濾過することにより、又は使用前に滅菌水又は他の注射可能な媒体に溶解又は分散させることができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことにより、滅菌される。直腸又は膣内投与用組成物は、好ましくは、本発明の化合物と、周囲温度では固体であるが体温では液体であり、それゆえ直腸又は膣腔内では溶解し、活性化合物を放出する、適切な非刺激性の賦形剤又は担体、例えばココアバター、ポリエチレングリコール又は坐剤蝋を混合することにより調製できる坐剤である。固体投与形態は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤を含む。そのような投与形態においては、活性化合物は、少なくとも1種の不活性な、薬学的に許容される賦形剤又は担体、例えば、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウム及び/又はa充填剤又は増量剤、例えば、デンプン、乳糖、ショ糖、グルコース、マンニトール、及びケイ酸、b結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、ショ糖、及びアカシア、c保湿剤、例えば、グリセロール、d崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム、e遅延剤、例えば、パラフィン、f吸収促進剤、例えば4級アンモニウム化合物、g湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール、h吸収剤、例えば、カオリン及びベントナイトクレイ、及びi滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合、投与形態は、緩衝剤を含んでもよい。類似の型の固体組成物はまた、乳糖又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコール等のような賦形剤を用いた、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル剤の充填剤として用いてもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤の固体投与形態は、コーティング及びシェル、例えば腸溶性コーティング並びに薬学の製剤分野において知られている他のコーティングと共に調製できる。それらは場合により、不透明剤を含み得、また、腸管の特定の部分においてのみ又はそこで優先的に、必要に応じて遅延様式で活性成分を放出する組成物であり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質および蝋が挙げられる。同様の型の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用して、軟質充填ゼラチンカプセル剤および硬質充填ゼラチンカプセル剤において充填剤として使用され得る。活性化合物はまた、上記の1種以上の賦形剤を有するマイクロカプセル化形態でありうる。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体投薬形態は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶性コーティング、放出制御コーティングおよび製剤分野においてよく知られたの他のコーティングとともに調製され得る。このような投与形態において、活性成分をショ糖、乳糖またはデンプンのような少なくとも1種の希釈剤と混合してよい。このような投与形態は、慣行どおり、不活性希釈剤、例えば、錠剤化滑沢剤および他の錠剤化補助剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース以外のさらなる物質を含み得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、その投与形態はまた、緩衝化剤を含み得る。それらは、場合に応じて、不透明剤を含み得、また、腸管の特定の部分においてのみ又はそこで優先的に、場合に応じて、遅延様式で活性成分を放出する組成物であり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質および蝋が挙げられる。本明細書中に記載の化合物1のフォームA又、アモルファス化合物1又はそれらの薬学的に許容される組成物はまた組合せ治療で用いることができ、すなわち、化合物1のフォームA又はアモルファス化合物1を1種以上の他の所望の治療剤または医療的手順と同時に、その前に、またはその後に投与できることも理解されるであろう。組み合わせレジメンにおいて使用する治療治療剤または手順の特定の組み合わせは、所望の治療剤および/または手順の適合性ならびに達成すべき所望の治療効果を考慮する。使用される治療が、同じ障害に対する所望の効果を達成し得る例えば、本発明の化合物を同じ障害を処置するために使用される別の薬剤と同時に投与してよいか、またはそれらが異なる効果を達成し得る例えば、何らかの有害作用の制御こともまた理解されるであろう。ここで使用される場合、特定の疾患又は状態を処置又は予防するために通常投与される追加の治療剤は、処置される治療又は状態に適切であるとして知られている。ある態様としては、追加の薬剤は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染症剤、抗炎症剤、本発明の化合物以外のCFTR調節剤、及び栄養剤から選択される。ある態様としては、追加の薬剤は、3-6-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド-3-メチルピリジン-2-イル安息香酸である。異なる態様としては、追加の薬剤は、N-5-ヒドロキシ-2,4-ジtert-ブチル-フェニル-4-オキソ-1H-キノリン-3-カルボキサミドである。異なる態様としては、追加の薬剤は、表1から選択される。表1異なる態様としては、追加の薬剤は、上述の薬剤の任意の組合せである。例えば、組成物は、化合物1、3-6-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルシクロプロパンカルボキサミド-3-メチルピリジン-2-イル安息香酸及びN-5-ヒドロキシ-2,4-ジtert-ブチル-フェニル-4-オキソ-1H-キノリン-3-カルボキサミドを含んでよい。他の例としては、組成物は、化合物1、N-5-ヒドロキシ-2,4-ジtert-ブチル-フェニル-4-オキソ-1H-キノリン-3-カルボキサミド、表1に記載の化合物のいずれか、すなわち表1の化合物1ないし14、又はそれらの任意の組合せを含んでよい。ある態様としては、追加の治療剤は抗生物質である。有用な抗生物質としては、トブラマイシン吸入パウダーTIPを含むトブラマイシン、アジスロマイシン、アズトレオナムのエアロゾル化形態を含むアズトレオナム、そのリポソーム形態を含むアミカシン、その吸入による適切な形態の製剤を含むシプロフロキサシン、そのエアロゾル化形態を含むレボフラキサシン、及び2種の抗生物質、例えば、ホスホマイシンとトブラマイシンの組み合わせを含む。異なる態様としては、追加の薬剤は粘液溶解剤である。ここで有効な粘液溶解剤の例には、プルモザイム登録商標が含まれる。異なる態様としては、追加の薬剤は気管支拡張剤である。気管支拡張剤の例には、アルブテロール、硫酸メタプロテレノール、酢酸ピルブテロール、サルメテロール又は硫酸テトラブリンが含まれる。異なる態様としては、追加の薬剤は、肺気道表面液の回復に効果的なものである。そうした薬剤は、細胞の内外での塩の動きを向上させ、肺気道中の粘液をより水和し、したがってより容易に浄化されるようにする。そうした薬剤の例には、高張食塩水、デヌホソル四ナトリウム[[3S,5R-5-4-アミノ-2-オキソピリミジン-1-イル-3-ヒドロキシオキソラン-2-イル]メトキシ-ヒドロキシホスホリル][[[2R,3S,4R,5R-5-2,4-ジオキソピリミジン-1-イル-3、4-ジヒドロキシオキソラン-2-イル]メトキシ-ヒドロキシホスホリル]オキシ-ヒドロキシホスホリル]リン酸水素またはブロンキトールbronchitolマンニトールの吸入用製剤が含まれる。異なる態様としては、追加の薬剤は、抗炎症薬、すなわち肺の炎症を軽減できる薬剤である。ここで有用なそうした薬剤の例には、イブプロフェン、ドコサヘキサエン酸DHA、シルデナフィル、吸入用グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキンまたはシンバスタチンが含まれる。異なる態様としては、追加の薬剤は、式Iの化合物以外のCFTR調節剤、すなわち、CFTR活性調節の効果を有する薬剤である。そうした薬剤の例には、アタルレンPTC124登録商標;3-[5-2-フルオロフェニル-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル]安息香酸、シナプルチド、ランコブチドlancovutide、デペレスタットヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤、コビプロストン7-{2R、4aR、5R、7aR-2-[3S-1,1-ジフルオロ-3-メチルペンチル]-2-ヒドロキシ-6-オキソオクタヒドロシクロペンタ[b]ピラン-5-イル}ヘプタン酸または3-6-1-2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルシクロプロパンカルボキシアミド-3-メチルピリジン-2-イル安息香酸が含まれる。異なる態様としては、追加の薬剤は栄養剤である。そうした薬剤の例には、Pancrease登録商標、Pancreacarb登録商標、Ultrase登録商標もしくはCreon登録商標、Liprotomase登録商標以前はTrizytek登録商標、Aquadeks登録商標を含むパンクレリパーゼパンクレアチン酵素補充療法剤pancreatingenzymereplacementまたはグルタチオン吸入剤が含まれる。ある態様では、追加の栄養剤はパンクレリパーゼである。異なる態様としては、追加の薬剤は、ゲンタマイシン、クルクミン、シクロホスファミド、4-酪酸フェニル、ミグルスタット、フェロジピン、ニモジピン、フィロキシンB、ゲニステイン、アピゲニン、cAMP/cGMP修飾因子、例えば、ロリプラム、シルデナフィル、ミルリノン、タダラフィル、アムリノン、イソプロテレノール、アルブテロール、及びサルメテロールalmeterol、デオキシスペルグアリン、HSP90阻害剤、HSP70阻害剤、プロテオソーム阻害剤、例えば、エポキソミシン、ラクタシスチン等から選択される化合物である。異なる態様としては、追加の薬剤は、国際公開第2004028480号、国際公開第2004110352号、国際公開第2005094374号、国際公開第2005120497号又は国際公開第2006101740号に開示される化合物である。異なる態様としては、追加の薬剤は、CFTR調節活性を示すベンゾcキノリジニウム誘導体又はCFTR調節活性を示すベンゾピラン誘導体である。異なる態様としては、追加の薬剤は、米国特許第7202262号、米国特許第6992096号、米国特許出願第20060148864号、米国特許出願第20060148863号、米国特許出願第20060035943号、米国特許出願第20050164973号、国際公開第2006110483号、国際公開第2006044456号、国際公開第2006044682号、国際公開第2006044505号、国際公開第2006044503号、国際公開第2006044502号又は国際公開第2004091502号に開示される化合物である。異なる態様としては、追加の薬剤は、国際公開第2004080972号、国際公開第2004111014号、国際公開第2005035514号、国際公開第2005049018号、国際公開第2006099256号、国際公開第2006127588号又は国際公開第2007044560号に開示される化合物である。これらの組合せは、嚢胞性線維症を含む本明細書に記載の疾患の治療に有用である。これらの組合せはまた本明細書中に記載されたキットにおいて有用である。本発明の組成物中に存在する追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の活性剤として含む組成物で通常投与される量を超えない。好ましくは、本発明で開示する組成物中の追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の治療用活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約50~100の範囲である。本明細書に記載の化合物1のフォームA及びアモルファス形態又はそれらの薬学的に許容される組成物はまた人工装具、人工弁、代用血管、ステントおよびカテーテルなどの埋込み型医療デバイスをコーティングするための組成物中に取り込むこともできる。したがって、本発明は、他の態様では、上記した本発明の化合物1のフォームA及び/又はアモルファス形態又はその薬学的に許容される医薬組成物およびここの分類及び下位の分類のものならびに前記埋込み型デバイスをコーティングするのに適した担体を含む、埋込み型デバイスをコーティングする組成物を含む。さらに他の態様では、本発明は、上記した本発明の化合物1のフォームA及び/又はアモルファス形態またはその薬学的に許容される組成物ならびに埋込み型デバイスをコーティングするのに適した担体を含む組成物でコーティングされた埋込み型デバイスを含む。適切なコーティング、およびコーティングされた埋込み型デバイスの一般的な調製法は、米国特許第6,099,562号、同第5,886,026号および同第5,304,121号に記載されている。コーティングはヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニルおよびその混合物などのような一般に生体適合性重合物質である。そのコーティングを、フルオロシリコーン、多糖、ポリエチレングリコール、リン脂質またはその組合せの適切なトップコートで場合によりさらに被覆して組成物に制御放出の特性を付与することができる。ここに記載する本発明がより完全に理解されるように、以下の実施例を示す。これらの実施例は、例示のためだけのものであり、本発明をいかなる態様においても限定するものと解釈されるものではないことを理解すべきである。方法及び材料変調示差走査熱量測定MDSC及び示差走査熱量測定DSC化合物のアモルファス形態及びスプレードライ分散体のガラス遷移温度の試験に変調示差走査熱量測定MDSCを用いた。示差走査熱量測定DSCを、結晶物質の融点を決定するため及び異なる多形を区別するために用いた。データは、TADSCQ2000示差走査熱量測定計TAInstruments、NewCastle、DEを用いて収集した。装置はインジウムで較正した。約1-5mgの試料をアルミニウム製気密性パンに秤量し、1個の孔を有する蓋を圧着した。MDSCについては、60秒ごとに/-1°Cで調節しながら2°C/分での加熱速度で、-20°Cないし220°Cで試料を走査した。DSCについては、10°C/分の加熱速度で、25°Cないし220°Cで試料を走査した。データをThermalAdvantageQSeries登録商標ソフトウェアversion:270380で収集し、UniversalAnalysisソフトウェアversion:44A、build:4405TAInstruments、NewCastle、DEで分析した。XRPD粉末X線回折粉末X線回折を用いて、これまで製造したロットの物理的形態を特徴づけ、同定された多形を特徴付けた。化合物のXRPDデータは、PANalyticalX’pertPro粉末X線回折計Almelo、theNetherlandsで収集した。XRPDパターンは、室温で銅照射を用いて記録した154060Å。X線を45kV、40mAにおいてニッケルKβ減縮フィルタを有するCu封入管を用いて発生させた。入射ビーム光学は、試料及び分散光側への一定照射波長を確実にするため、種々の発散スリットを含む;走査モードで測定する212°2シータの有効長で、高速直線固相検出器を用いた。粉末試料をゼロバックグラウンドシリコンホルダの意図した領域のに充填し、良好な統計値を達成するためにスピニングを行った。刻み幅0017°及び走査のステップ時間155秒で対称的走査を4-40°2シータで行った。データ収集ソフトは、X’pertDataCollectorversion22eである。データ分析ソフトは、X’pertDataViewerversion12d又はX’pertHighscoreversion:22cである。熱重量分析TGA特徴付けしたロットの残存溶媒を調べるためにTGAを用い、試料の分解が起こった温度を同定した。TGAデータはTAQ500ThermogravimetricAnalyzerTAInstruments、NewCastle、DEによって収集した。約2-5mgの重量の試料を、加熱速度10°C/分で25°Cないし300°Cでスキャンした。データはThermalAdvantageQSeries登録商標ソフトウェアversion250255で収集し、UniversalAnalysisソフトウェアversion44A、build4405TAInstruments、NewCastle、DEで分析した。化合物1のフォームA単結晶構造決定回折データを封入管CuKα線源及びApexIICCD検出器を備えたBrukerApexII回折計で得た。構造をSHELXプログラムSheldrick,GM,ActaCryst、2008A64、112122を用いて解析し、精密化した。強度統計及び消滅則から、構造を解析し、C2空間群に精密化した。絶対配置を異常回折を用いて決定した。00018に精密化されたフラックのパラメータは、本モデルが正しいエナンチオマー[R]を表すことを示唆する。固相NMR固相NMRは、Bruker-Biospin4mMHFXプローブを備えたBruker-Biospin400MHz広口径スペクトロメータで行った。試料を4mmZrO2ロータに充填し、125kHzの回転速度において、マジック角スピニングMAS条件で回転させた。13C交差分極CPMAS試験において適切なリサイクル遅延を設定するために、最初にプロトン緩和時間を1HMAST1飽和回復緩和試験を用いて行った。炭素CPMAS試験のCP接触時間を2秒とした。直線的傾斜50ないし100のCPプロトンパルスを用いた。ハルトマン-ハーンマッチを外部標準試料グリシンで最適化した。フッ素MASスペクトルをプロトンデカップリングで記録した。TPPM15デカップリング配列を、13C及び19Fの両方の収集において磁場強度約100kHzで行った。ビトライド登録商標水素化ビス2-メトキシエトキシアルミニウムナトリウム[又はNaAlH2OCH2CH2OCH32]、65wgtトルエン溶液をAldrichChemicalsから購入した。2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-カルボン酸SaltigoLanxessCorporationの関連会社から購入した。化合物の構造を正確に表現していない可能性のある化合物の名前が本明細書のどこかにあった場合、構造が名前よりも優先的であり、支配的である。化合物1の合成酸部分2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-メタノールの合成市販の2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-カルボン酸10当量をトルエン10体積中でスラリー化する。温度を15-25°Cに保ち、ビトライド登録商標2当量を滴下漏斗で滴下する。添加終了後、40°Cに昇温して2時間攪拌し、続いて10w/wNaOH水溶液40当量を、温度を40-50°Cに保ち、滴下漏斗で注意深く加える。さらに30分攪拌後、40°Cで層を分離させる。有機相を20°Cに冷却し、水2x15体積で洗浄し、乾燥させNa2SO4、濾過し、濃縮し、粗2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-メタノールを得て、それを直接次工程に用いる。5-クロロメチル-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソールの合成2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-メタノール10当量をMTBE5体積に溶解させる。触媒量のDMAP1molを加え、SOCl212当量を滴下漏斗で加える。SOCl2は、反応容器中の温度が15-25°Cに維持される速度で加える。温度を1時間かけて30°Cに上げ、続いて20°Cに冷やし、温度を30°C未満に維持しながら水4体積を滴下漏斗で加える。さらに30分攪拌した後、層を分離させる。有機層を攪拌し、10w/vNaOH水溶液44体積を加える。15ないし20分攪拌後、層を分離させる。続いて有機相を乾燥させNa2SO4、濾過し、濃縮し、粗5-クロロメチル-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソールを得て、それを直接次工程に用いる。2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-アセトニトリル5-クロロメチル-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール1当量のDMSO125体積溶液に、温度を30-40°Cに維持しながら、NaCN14当量のDMSO3体積中のスラリーを加える。混合物を1時間攪拌し、続いて水6体積に続き、MTBE4体積を加える。30分間攪拌後、層を分離させる。水層をMTBE18体積で抽出する。合わせた有機層を水18体積で洗浄し、乾燥させNa2SO4、濾過し、濃縮し、粗2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-アセトニトリル95を得て、それを直接次の工程に用いる。1HNMR500MHz、DMSOδ744brs、1H、743d、J=84Hz、1H、722dd、J=82、18Hz、1H、407s、2H2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-1-エチルアセテート-アセトニトリルの合成反応容器に窒素気流を通し、900mLのトルエンを加えた。窒素散布を16時間以上行い、溶媒を脱気した。続いて反応容器に、Na3PO41557g、9495mmol、続いてビスジベンジリデンアセトンパラジウム0728g、1266mmolを加えた。10w/wtert-ブチルホスフィン5123g、2532mmolのヘキサン溶液を、23°Cにおいて窒素で浄化した添加漏斗で10分かけて加えた。混合物を50分攪拌し、5-ブロモ-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール75g、3165mmolを1分かけて加えた。さらに50分攪拌した後、混合物にシアノ酢酸エチル716g、6330mmolを5分かけて加え、続いて水45mLを一度に加えた。混合物を70°Cに40分かけて加熱し、HPLCで1-2時間ごとに反応物から生成物への変換率を分析した。完全な変換が観測された後典型的には5-8時間後に100変換、混合物を20-25°Cに冷却し、セライトパッドで濾過した。セライトパッドをトルエン2x450mLで濯ぎ、合わせた有機層を真空下、60-65°Cで300mLまで濃縮した。濃縮液に225mLのDMSOを加え、70-80°Cで溶媒の活発な蒸発が止むまで減圧濃縮した。溶液を20-25°Cに冷却し、工程2の準備のため900mLまでDMSOで希釈した。1HNMR500MHz、CDCl3δ716-710m、2H、703d、J=82Hz、1H、463s、1H、419m、2H、123t、J=71Hz、3H2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-アセトニトリルの合成上の2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-1-エチルアセテート-アセトニトリルのDMSO溶液に、<40°Cの内部温度を維持しながら3NHCl6173mL、185molを20分かけて加えた。続いて、混合物を1時間かけて75°Cまで加熱し、HPLCで1-2時間ごとに変換を分析した。>99の変換が観測された後典型的には5-6時間後、反応液を20-25°Cに冷却し、MTBE2x525mLで抽出し、抽出においては完全に相を分離させるために十分な時間をとった。合わせた有機抽出物を5NaCl2x375mLで洗浄した。続いて溶液を、冷却したレシーバーフラスコを備えた15-25Torrの真空蒸留を行うのに適切な容器に移した。溶液を<60°Cで減圧濃縮し、溶媒を除去した。続いて、生成した油状物から2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-アセトニトリルを125-130°Cオーブン温度で15-20Torrで得た。2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-アセトニトリルを、5-ブロモ-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール2工程から66収率で透明な油状物として、HPLC純度915AUCw/wアッセイで95に相当するで得た。1HNMR500MHz、DMSOδ744brs、1H、743d、J=84Hz、1H、722dd、J=82、18Hz、1H、407s、2H2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボニトリルの合成2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-アセトニトリル10当量、50重量KOH水溶液50当量、1-ブロモ-2-クロロエタン15当量及びOct4NBr002当量を70°Cで1時間攪拌した。反応混合物を冷却し、続いてMTBE及び水で後処理した。有機相を水及び食塩水で洗浄し、続いて溶媒を除去して2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボニトリルを得た。1HNMR500MHz、DMSOδ743d、J=84Hz、1H、740d、J=19Hz、1H、730dd、J=84、19Hz、1H、175m、2H、153m、2H1-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボン酸の合成2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボニトリルを6MNaOH8当量のエタノール5体積溶液を用いて80°Cで終夜、加水分解した。混合物を室温に冷却し、エタノールを減圧下蒸発させた。残渣を水及びMTBEに取り込み、1MHClを加えて層を分離させた。続いてMTBE層をジシクロヘキシルアミン097当量で処置した。スラリーを0°Cに冷却し、濾過し、ヘプタンで洗浄し、対応するDCHA塩を得た。塩をMTBE及び10クエン酸に取り込み、すべての固体が溶解するまで攪拌した。層を分離し、MTBE層を水及び食塩水で洗浄した。溶媒をヘプタンに交換し、続いて濾過し、50°Cで終夜真空オーブンで乾燥させ、1-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボン酸を得た。ESI-MSm/z計算値24204、実測値24158M1;1HNMR500MHz、DMSOδ1240s、1H、740d、J=16Hz、1H、730d、J=83Hz、1H、717dd、J=83、17Hz、1H、146m、2H、117m、2Hアミン部分2-ブロモ-5-フルオロ-4-ニトロアニリンの合成フラスコに3-フルオロ-4-ニトロアニリン10当量を加え、続いて酢酸エチル10体積を加え、攪拌してすべての固体を溶解させた。N-ブロモコハク酸イミド10当量を内部温度が22°Cを維持するよう、少しずつ加えた。反応終了後、反応混合物を真空でロータリーエバポレータによって濃縮した。残渣を蒸留水5体積にスラリー化してコハク酸イミドを溶解し、除去したコハク酸イミドは、水による後処理工程でも除去できる。水をデカントし、固体を2-プロパノール5体積で終夜スラリー化した。生成したスラリーを濾過し、湿潤したケーキを2-プロパノールで洗浄し、N2を通気させて、重量が一定になるまで、真空下50°Cで終夜乾燥した。黄色がかった褐色の固体を単離した50収率、975AUC。他の不純物は、ブロモ-位置異性体14AUC及びジ-ブロモ付加体11AUCであった。1HNMR500MHz、DMSOδ8191H、d、J=81Hz、706brs、2H、664d、1H、J=143Hzベンジルグリコール化-4-アンモニウム-2-ブロモ-5-フルオロアニリントシル酸塩の合成N2下、完全に乾燥させたフラスコに以下を添加した:活性化粉末4Åモレキュラーシーブス2-ブロモ-5-フルオロ-4-ニトロアニリンに対して50重量、2-ブロモ-5-フルオロ-4-ニトロアニリン10当量、過塩素酸亜鉛二水和物20mol及びトルエン8体積。混合物を室温で、で30分以下で攪拌した。最後に、R-ベンジルグリシジルエーテル20当量のトルエン2体積溶液を安定した気流の中で加えた。反応混合物は、80°C内部温度に加熱し、約7時間又は2-ブロモ-5-フルオロ-4-ニトロアニリン<5AUCとなるまで攪拌した。反応液を室温に冷まし、セライト50重量を加え、続いて酢酸エチル10体積を加えた。生じた混合物を濾過してセライトを除去し、シーブスを酢酸エチル2体積で洗浄した。濾液を塩化アンモニウム溶液4体積、20w/vで洗浄した。有機層を炭酸水素ナトリウム溶液4体積x25w/vで洗浄した。有機層を真空下ロータリーエバポレータで濃縮した。生成したスラリーを酢酸イソプロピル10体積に溶解させ、この溶液をブチハイドロゲネータBuchihydrogenatorに移した。ハイドロゲネータに5重量PtS/C15molを加え、N2下30°C内部温度で混合物を攪拌した。反応混合物に、N2、続いて水素を通気した。ハイドロゲネータの圧力を1Barの水素に調節し、混合物を急速に攪拌した>1200rpm。反応終了後、触媒をセライトパッドでろ過し、ジクロロメタン10体積で洗浄した。濾液を真空下濃縮した。残った酢酸イソプロピルをジクロロメタン2体積で回収し、ロータリーエバポレータで濃縮し乾燥した。生じた残渣をジクロロメタン10体積に溶解させた。p-トルエンスルホン酸一水和物12当量を加え終夜攪拌した。生成物を濾過し、ジクロロメタン2体積で洗浄し、吸引乾燥した。湿潤したケーキを乾燥トレイに移し、真空オーブンに移し、45°CのN2気流で定常質量となるまで乾燥した。ベンジルグリコール化-4-アンモニウム-2-ブロモ-5-フルオロアニリントシル酸塩は、オフホワイトの固体として単離された。キラル純度は、>97eeであると決定された。3-クロロ-3-メチルブチ-1-イニルトリメチルシランの合成プロパルギルアルコール10当量を容器に加えた。塩酸水溶液37、375体積を加え、攪拌を開始した。固体のアルコールの溶解中、緩やかな吸熱5-6°Cが見られる。生じた混合物を終夜1時間攪拌したところ、ゆっくりと濃赤色となった。30Lのジャケット付き容器に水5体積を加え、続いて10°Cに冷却する。反応混合物の内部温度を25°C未満に維持しながら、吸引によりゆっくりと水の中に移す。ヘキサン3体積を加え、生じた混合物を05時間攪拌する。相を安定させ、水相pH<1を排水し、廃棄した。有機相をロータリーエバポレータを用いて真空下濃縮し、生成物を赤色の油状物として得た。4-ベンジルオキシ-3,3-ジメチルブチ-1-イニルトリメチルシランの合成方法Aこの章におけるすべての当量及び容量の記載は、250g反応に基づく。削り屑状マグネシウム695g、286mol、20当量を3Lの4首反応容器に加え、窒素下、マグネティックスターラで05時間攪拌した。反応容器を氷水浴に浸した。塩化プロパルギル250g、143mol、10当量のTHF18L、72体積溶液を、攪拌しながら、最初の発熱~10°Cが見られるまでゆっくりと反応容器に加えた。グリニャール試薬形成を、1HNMR分光法を用いてIPCにより確認した。発熱が弱まると、残りの溶液をバッチ温度を<15°Cに維持しながらゆっくりと加えた。添加に~35時間要した。生成した暗緑色の混合物を2Lのキャップ付きのボトルにデカントした。この章におけるすべての当量及び容量の記載は、500g反応に基づく。22L反応容器に、ベンジルクロロメチルエーテル95、375g、231mol、08当量のTHF15L、3体積溶液を加えた。反応容器を氷水浴で冷却した。先に調製した4つのうち2つのグリニャール試薬バッチを合わせ、続いて、バッチ温度を25°C未満に維持しながら、ゆっくりとベンジルクロロメチルエーテル溶液に滴下漏斗を用いて加えた。反応混合物を終夜攪拌した16時間。この章におけるすべての当量及び容量の記載は、1kg反応に基づく。15塩化アンモニウム溶液を30Lジャケット付き反応容器で調製した85kg水中、15kg、10体積。溶液を5°Cに冷却した。上述の2つのグリニヤール反応混合物を合わせ、続いて排気管headervesselを用いて塩化アンモニウム溶液中に移した。このクエンチにおいて発熱が見られたので、25°C未満の内部温度を維持する速さで行った。添加が終わると、容器のジャケット温度を25°Cに設定した。ヘキサン8L、8体積を加え、混合物を05時間攪拌した。相が安定した後、水相pH9を排水し、廃棄した。残った有機相を水2L、2体積で洗浄した。有機相を22Lロータリーエバポレータを用いて真空下濃縮し、オレンジ色の油状物として粗生成物を得た。方法B削り屑状マグネシウム106g、435mol、10当量を22L反応容器に加え、続いてTHF760mL、1体積に懸濁させた。容器を氷水浴で冷却し、バッチ温度が2°Cになるようにした。塩化プロパルギル760g、435mol、10当量のTHF45L、6体積溶液をゆっくりと容器に加えた。100mLを加えた後、添加をやめ、グリニャール反応が開始したことを示す、13°Cの発熱が観察されるまで混合物を攪拌した。発熱が弱まると、<20°Cのバッチ温度を維持しながらさらに塩化プロパルギル溶液500mLをゆっくり加えた。グリニャール試薬の形成を1HNMR分光法を用いてIPCにより確認した。残りの塩化プロパルギル溶液を<20°Cのバッチ温度を維持するようにゆっくりと加えた。添加は、~15時間要した。生成した濃緑色の溶液を05時間攪拌した。グリニャール試薬形成を1HNMR分光法を用いてIPCにより確認した。非希釈のベンジルクロロメチルエーテルを反応容器の滴下漏斗に加え、続いて25°C未満のバッチ温度を維持しながら、反応容器に滴下した。添加に10時間要した。反応混合物を終夜攪拌した。方法Aにおけるのと同じ方法および物質の相対量を用いて、水による後処理及び濃縮を行うことにより、オレンジの油状物として生成物を得た。4-ベンジルオキシ-3,3-ジメチルブチ-1-インの合成30Lジャケット付き反応容器にメタノール6体積を加え、続いて5°Cに冷却した。水酸化カリウム85、13当量を反応容器に加えた。水酸化カリウムが溶解すると15-20°Cの発熱が見られた。ジャケット温度を25°Cに設定した。4-ベンジルオキシ-3,3-ジメチル-1-トリメチルシリルブチ-1-イン10当量のメタノール2体積溶液を加え、生じた混合物を、HPLCでモニターして反応が終了するまで攪拌した。25°Cでの典型的な反応時間は3-4時間である。反応混合物を水8体積で希釈し、続いて05時間攪拌した。ヘキサン6体積を加え、生じた混合物を05時間攪拌した。相を安定させ、続いて水層pH10-11を排水し、棄てた廃棄した。有機相をKOH85、04当量の水溶液8体積、続いて水8体積で洗浄した。続いて有機相をロータリーエバポレータを用いて濃縮し、表題物質を黄-橙色の油状物として得た。この物質の典型的な純度は、当初は単一の不純物が存在して80の範囲にある。1HNMR400MHz、C6D6δ728d、2H、J=74Hz、718t、2H、J=72Hz、710d、1H、J=72Hz、435s、2H、324s、2H、191s、1H、125s、6Hベンジルグリコール化4-アミノ-2-4-ベンジルオキシ-3,3-ジメチルブチ-1-イニル-5-フルオロアニリンの合成ベンジルグリコール化4-アンモニウム-2-ブロモ-5-フルオロアニリントシル酸塩の固体をEtOAc5体積及び飽和NaHCO3溶液5体積中で透明な有機層が得られるまで攪拌し、遊離塩基にした。生成した層を分離し、有機層を飽和NaHCO3溶液5体積に続き食塩水で洗浄し、真空下濃縮し、ベンジルグリコール化4-アンモニウム-2-ブロモ-5-フルオロアニリントシル酸塩を油状物として得た。続いて、フラスコにベンジルグリコール化4-アンモニウム-2-ブロモ-5-フルオロアニリントシル酸塩遊離塩基、10当量、PdOAc40mol、dppb60mol及び粉末状K2CO330当量を加え、アセトニトリル6体積と共に室温で攪拌した。生成した反応混合物を、約30分N2で排気しながらバブリングして脱気した。続いて、アセトニトリル2体積に溶解させた4-ベンジルオキシ-3,3-ジメチルブチ-1-イン11当量を速い気流で加え、80°Cに加熱し、4-アンモニウム-2-ブロモ-5-フルオロアニリントシル酸塩が完全に消失するまで攪拌した。反応スラリーを室温に冷却し、セライトパッドで濾過しアセトニトリル2体積で洗浄した。濾液を真空下濃縮し、残渣を再度EtOAc6体積に溶解した。有機層をNH4Cl溶液20w/v、4体積で2回及び食塩水6体積で洗浄した。生成した有機層を濃縮し、褐色の油状物を得て、それをそのまま次の反応に用いた。N-ベンジルグリコール化-5-アミノ-2-2-ベンジルオキシ-1,1-ジメチルエチル-6-フルオロインドールの合成油状の粗ベンジルグリコール化4-アミノ-2-4-ベンジルオキシ-3,3-ジメチルブチ-1-イニル-5-フルオロアニリンをアセトニトリル6体積に溶解し、MeCN2PdCl215molを室温で加えた。生じた混合物を、約30分N2で排気しながら脱気した。続いて反応混合物をN2雰囲気下、80°Cで終夜攪拌した。反応混合物を室温に冷まし、セライトパッドで濾過し、ケーキをアセトニトリル1体積で洗浄した。生成した濾液を真空下濃縮し、再度EtOAc5体積に溶解させた。Deloxane-IITHPN-ベンジルグリコール化-5-アミノ-2-2-ベンジルオキシ-1,1-ジメチルエチル-6-フルオロインドールの理論上の収量に基づき5重量を加え、室温で終夜攪拌した。続いて混合物をシリカのパッドで濾過し25インチの深さ、6インチの直径のフィルタ、EtOAc4体積で洗浄した。濾液を濃縮し、暗褐色残渣を得て、それをそのまま次の反応に用いた。粗N-ベンジルグリコール化-5-アミノ-2-2-ベンジルオキシ-1,1-ジメチルエチル-6-フルオロインドールの再精製:粗N-ベンジルグリコール化-5-アミノ-2-2-ベンジルオキシ-1,1-ジメチルエチル-6-フルオロインドールをジクロロメタン~15体積に溶解し、シリカパッドで最初30EtOAc/ヘプタンで濾過し、不純物を棄てた。続いてシリカパッドを50EtOAc/ヘプタンで、濾液に薄い色が付くまで洗浄し、N-ベンジルグリコール化-5-アミノ-2-2-ベンジルオキシ-1,1-ジメチルエチル-6-フルオロインドールを単離した。この濾液を真空下濃縮し、褐色の油状物を得て、それを真空下室温で静置して結晶化させた。1HNMR400MHz、DMSOδ738-734m、4H、732-723m、6H、721d、1H、J=128Hz、677d、1H、J=90Hz、606s、1H、513d、1H、J=49Hz、454s、2H、446brs、2H、445s、2H、433d、1H、J=124Hz、409-404m、2H、363d、1H、J=92Hz、356d、1H、J=92Hz、349dd、1H、J=98、44Hz、343dd、1H、J=98、57Hz、140s、6H化合物1の合成ベンジル保護された化合物1の合成1-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボン酸13当量をトルエン1-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボン酸に基づき25体積にスラリー化し、混合物を60°Cに加熱した。SOCl217当量を滴下漏斗で加えた。生じた混合物を2時間攪拌した。トルエン及び過量のSOCl2をロータリーエバポレータで留去した。さらにトルエン1-2,2-ジフルオロ-1,3-ベンゾジオキソール-5-イル-シクロプロパンカルボン酸に基づき25体積を加え、再度留去した。粗酸塩化物をジクロロメタン2体積に溶解させ、0-3°C内部温度に保ち、滴下漏斗で、N-ベンジルグリコール化-5-アミノ-2-2-ベンジルオキシ-1,1-ジメチルエチル-6-フルオロインドール10当量及びトリエチルアミン20当量のジクロロメタン7体積中の混合物に滴下した。生じた混合物を0°Cで4時間攪拌し、続いて終夜室温に戻した。反応混合物に蒸留水5体積を加えて30分以上攪拌し、層を分離した。有機相を20重量K2CO34体積x2、続いて食塩水4体積で洗浄し、濃縮し、粗ベンジル保護化合物1を濃い褐色の油状物として得て、シリカパッド濾過を使用して更なに精製した。シリカゲルパッド濾過:活性炭Darco-Gベンジル保護化合物1の理論上の収量に基づき10重量の存在下、粗ベンジル保護化合物1を酢酸エチル3体積に溶解し、室温で終夜攪拌した。この混合物にヘプタン3体積を加え、シリカゲルパッド粗ベンジル保護化合物1の2x重量で濾過した。シリカゲルパッドを酢酸エチル/ヘプタン1:1、6体積で濾液にほとんど色がつかなくなるまで洗浄した。濾液を真空下濃縮し、ベンジル保護化合物1を粘性のある赤褐色の油状物として得て、直接次の反応に用いた。再精製:ベンジル保護化合物1を再度ジクロロメタンベンジル保護化合物1の理論上の収量に基づき1体積に溶解し、シリカゲルパッド粗ベンジル保護化合物1の2x重量に載せた。シリカパッドをジクロロメタンベンジル保護化合物1の理論上の収量に基づき2体積で洗浄し、濾液を棄てた。シリカパッドを30酢酸エチル/ヘプタン5体積で洗浄し、濾液を真空で濃縮し、ベンジル保護化合物1を粘性のある赤橙油状物として得て、次の工程に直接用いた。化合物1の合成方法A20Lオートクレーブに3回、窒素ガスを通気し、続いて、パラジウム炭素EvonikE101NN/W、5Pd、60wet、200g、0075mol、004当量を加えた。オートクレーブに窒素を3回通気した。粗ベンジル保護化合物113kg、~19molのTHF8L、6体積溶液をオートクレーブに、吸引によって加えた。容器に蓋をし、続いて、3回窒素ガスを通気した。穏やかな攪拌下、容器に3回水素ガスを通気し、窒素で希釈することにより大気中に排気した。オートクレーブを水素で加圧して3Barとし、攪拌速度を800rpmとした。急速な水素取り込みが観測された溶解。取り込みが弱まると、容器を50°Cに加熱した。安全性のため、温度調節器は実働日ごとの終わりには切った。容器を水素で4Barとし、続いて水素タンクから離した。丸2日間の反応後、さらなるPd/C60g、0023mol、001当量を反応混合物に加えた。これは窒素ガスを3回通気し、続いて触媒を、固体添加口を通じて加えることにより行った。前のとおりの反応を再開した。丸4日後、反応は、HPLCにより出発物質だけでなく、モノベンジル中間体に対応するピークもが消失したため完了したとみなした。反応混合物をセライトパッドにより濾過した。容器及びフィルタケーキをTHF2L、15体積で洗浄した。続いてセライトパッドを水で湿らせ、ケーキを適宜棄てた。合わせた濾液及びTHF洗浄液を、ロータリーエバポレータを用いて濃縮し、粗生成物を黒色油状物1kgとして得た。以下の精製におけるすべての当量および体積の記載は、粗生成物1kgに基づく。粗黒色油状物を1:1酢酸エチル-ヘプタンに溶解した。混合物を酢酸エチル-ヘプタンで飽和させたシリカゲル15kg、15重量当量を加えた焼結漏斗に載せた。シリカパッドを、まず1:1酢酸エチル-ヘプタン6L、6体積、続いて純酢酸エチル14L、14体積で流した。溶出液は4フラクション集め、HPLCで分析した。以下の精製におけるすべての当量および体積の記載は、粗生成物06kgに基づく。フラクション3をロータリーエバポレーションで濃縮し、褐色泡状物質600gを得て、続いてMTBE18L、3体積に再度溶解させた。暗褐色の溶液を終夜、周囲温度で攪拌し、その間に結晶化が起こった。ヘプタン55mL、01体積を加え、混合物を終夜攪拌した。混合物をブフナー漏斗を用いて濾過し、フィルタケーキを3:1MTBE-ヘプタン900mL、15体積で洗浄した。フィルタケーキは1時間空気乾燥し、続いて周囲温度で16時間真空乾燥させ、VXc-661253gをオフホワイトの固体として得た。以下の精製におけるすべての当量および体積の記載は、粗生成物14kgに基づく。上記のシリカゲル濾過したフラクション2及び3及び前述の反応により得られた物質を合わせて濃縮し、14kgの黒色の油状物を得た。混合物を上述したとおり再度シリカゲル濾過しシリカゲル15kg、35L、23体積の1:1酢酸エチル-ヘプタン、続いて9L、6体積の純酢酸エチルで溶出、濃縮して、淡褐色の泡状固体を得た390g。以下の精製におけるすべての当量および体積の記載は、粗生成物390gに基づく。淡褐色の固体はMTBEに不溶であったため、メタノールに溶解させた12L、3体積。長距離蒸留塔distillationheadを備えた4LMorton反応器を用いて混合物を2体積に蒸留し、戻した。MTBE12L、3体積を加え、混合物を蒸留して2体積に戻した。2回目のMTBE16L、4体積を加え、蒸留して2体積に戻した。3回目のMTBE12L、3体積を加え、蒸留して3体積に戻した。蒸留物をGCで分析したところ、~6のメタノールを含むことを示した。温度調節器を48°Cに設定したMTBE-メタノール共沸化合物の沸点である52°Cよりも低い。混合物を20°Cに2時間以上かけて冷却し、その間に比較的速い結晶化が起こった。混合物を2時間攪拌した後、ヘプタン20mL、005体積を加え、混合物を終夜16時間攪拌した。混合物をブフナー漏斗を用いて濾過し、フィルタケーキを3:1MTBE-ヘプタン800mL、2体積で洗浄した。フィルタケーキを1時間空気乾燥し、続いて真空下周囲温度で16時間乾燥し、化合物1130gをオフホワイトの固体として得た。方法Bベンジル保護化合物1をTHF3体積に溶解させ、残存溶媒を除去した。ベンジル保護化合物1を再びTHF4体積に溶解させ、5重量Pd/C25mol、60wet、DegussaE5E101NN/Wを含有するハイドロゲネータに加えた。反応の内部温度を50°Cとし、N2x5に続き水素x3気流を通気した。ハイドロゲネータの圧力を水素で3Barに調節し、混合物を急速に攪拌した>1100rpm。反応終了時、触媒をセライトパッドで濾過し、THF1体積で洗浄した。濾液を真空下濃縮し、褐色の泡状残渣を得た。生じた残渣をMTBE5体積に溶解させ、05NHCl溶液2体積および蒸留水1体積を加えた。混合物を30分以上攪拌し、生成した層を分離した。有機相10重量K2CO3溶液2体積x2、続いて食塩水で洗浄した。有機層をシリカゲル25重量、DELOXAN-THPII5重量、75wet、及びNa2SO4を含有するフラスコに加え、終夜攪拌した。生じた混合物をセライトパッドで濾過し、10THF/MTBE3体積で洗浄した。濾液を真空下濃縮し、粗化合物1を薄い褐色の泡状物質として得た。母液からの化合物1の回収:オプションAシリカゲルパッド濾過:母液を真空下濃縮して褐色泡状物質を得て、ジクロロメタン2体積に溶解させ、シリカのパッド粗化合物1の3x重量で濾過した。シリカパッドを酢酸エチル/ヘプタン1:1、13体積で洗浄し、濾液を棄てた。シリカパッドを10THF/酢酸エチル10体積で洗浄し、濾液を真空下濃縮し、化合物1を薄い褐色の泡状物質として得た。引き続き上述の結晶化工程を行い、残存化合物1を単離した。母液からの化合物1の回収:オプションBシリカゲルカラムクロマトグラフィー:シリカゲルクロマトグラフィー50酢酸エチル/ヘキサンないし100酢酸エチルの後、所望の化合物を薄い褐色の泡状物質として単離した。引き続き上述の結晶化工程を行い、残存化合物1を単離した。図1は化合物1のX線結晶回折パターンを示す。化合物1のDSCトレースを図2に示す。図2のDSCトレースは、化合物1が純粋な固相でないことを示す。化合物1のフォームAと比較して、余分なピークが119°Cに存在する化合物1のフォームA図6参照。化合物1のTGAトレースを図3に示す。化合物1はまた、ここに参照として引用する米国特許出願公開第20090131492号に開示されたいくつかの合成経路の1つを用いて調製することもできる。化合物1のフォームAの合成スラリー法EtOAc、MTBE、酢酸イソプロピル、又はDCMについては、化合物1約40mgを、上述のいずれかの溶媒1-2mLに加えた。スラリーを室温で24時間ないし2週間攪拌し、化合物1のフォームAを懸濁液の遠心分離フィルタ付きによって得た。図5は、溶媒としてDCMを用いて、この方法により得た化合物1のフォームAのXRPDパターンを記載する。EtOH/水溶液については、化合物1約40mgを3個のバイアルに加えた。第1のバイアルにはEtOH135mL及び水015mLを加えた。第2のバイアルにはEtOH075mL及び水075mLを加えた。第3のバイアルにはEtOH015mL及び水135mLを加えた。3個のすべてのバイアルを室温で24時間攪拌した。続いて各懸濁液を別々に遠心分離しフィルタ付き、化合物1のフォームAを得た。イソプロピルアルコール/水溶液については、化合物1約40mgを3個のバイアルに加えた。第1のバイアルには、イソプロピルアルコール135mL及び水015mLを加えた。第2のバイアルには、イソプロピルアルコール075mL及び水075mLを加えた。第3のバイアルには、イソプロピルアルコール015mL及び水135mLを加えた。3個のすべてのバイアルを室温で24時間攪拌した。続いて各懸濁液を別々に遠心分離しフィルタ付き、化合物1のフォームAを得た。メタノール/水溶液については、化合物1約40mgをバイアルに加えた。メタノール05mL及び水1mLを加え、懸濁液を室温で24時間攪拌した。懸濁液を遠心分離しフィルタ付き、化合物1のフォームAを得た。アセトニトリルについては、化合物1約50mgをアセトニトリル20mLの入ったバイアルに加えた。懸濁液を、室温で24時間攪拌し、化合物1のフォームAを遠心分離フィルタ付きにより得た。アセトニトリル/水溶液については、化合物1約50mgをアセトニトリル25mLに加え、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、バイアルに1mL残した。水225mLを加えて懸濁液とした。懸濁液を室温で24時間攪拌し、化合物1のフォームAを遠心分離フィルタ付きにより得た。低速蒸発法化合物1約55mgをアセトン05mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、02mLをバイアルに取った。バイアルを1個の穴を開けたパラフィルムでカバーし、静置した。再結晶した化合物1のフォームAを濾過によって集めた。高速蒸発法イソプロピルアルコールについては、化合物1約43mgをイソプロピルアルコール21mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液をバイアルに濾過して入れ、カバーなしに静置した。再結晶した化合物1のフォームAを濾過により集めた。メタノールについては、化合物1約58mgをメタノール05mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、02mLをカバーしないバイアルに取り、静置した。再結晶した化合物1のフォームAを濾過によって集めた。アセトニトリルについては、化合物1約51mgをアセトニトリル25mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、溶液の半分をカバーしないバイアルに取り、静置した。再結晶した化合物1のフォームAを濾過によって集めた。図7は、この方法によって調製した化合物1のフォームAのXRPDパターンを示す。貧溶媒法EtOAc/ヘプタンについては、化合物1約30mgをEtOAc15mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、濾液に、ゆっくり攪拌しながらヘプタン20mLを加えた。溶液をさらに10分間攪拌し、静置した。再結晶した化合物1のフォームAを濾過によって集めた。図8は、この方法によって調製した化合物1のフォームAのXRPDパターンを示す。イソプロピルアルコール/水については、化合物1約21mgをイソプロピルアルコール10mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、溶液08mLを得た。ゆっくりと攪拌しながら水18mLを加えた。さらに水02mLを加えて、曇った懸濁液を得た。5分間攪拌を止めて透明な溶液を得た。溶液をさらに2分間攪拌し、静置した。再結晶した化合物1のフォームAを濾過によって集めた。エタノール/水については、化合物1約40mgをエタノール10mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、水10mLを加えた。溶液を1日室温で攪拌した。再結晶した化合物1のフォームAを濾過によって集めた。アセトン/水については、化合物1約55mgをアセトン05mLに溶解させ、超音波により透明な溶液を得た。溶液を濾過し、02mLをバイアルに取った。水15mLを加え、続いてさらに水05mLを加えて曇った懸濁液を得た。懸濁液を1日室温で攪拌した。化合物1のフォームAを濾過によって集めた。以下の表2は、化合物1のフォームAを形成させる種々の技術をまとめたものである。化合物1のフォームAの単結晶構造から計算したX-線回折パターンを図4に示す。表3は図1に示すピークを計算したリストである。図5に化合物1のフォームAの実際のX線結晶回折パターンを示す。表4は図5の実際のピークをリストする。図6に化合物1のフォームAのDSCトレースを示す。化合物1のフォームAの融点は約172-178°Cである。格子の大きさ及び充填を含む結晶構造関するさらなる詳細を提供する、化合物1のフォームAについての単結晶データを得た。結晶調製メタノールの濃縮溶液10mg/mlからの低速蒸発により、化合物1のフォームAを得た。020×005×005mmの寸法の化合物1のフォームAの無色の結晶を選択し、鉱油を用いて浄化し、MicroMountに乗せ、BrukerAPEXII回折装置の中心に置いた。方位行列及び初期セルパラメータを提供するために、逆格子空間において別れた40フレームの3つのバッチを得た。最終セルパラメーラを完全なデータセットに基づいて得て、精密化した。実験項逆格子空間の回折データセットを、各フレームについて083Åの分解能まで05°刻みの30秒暴露により得た。データを室温[2952K]で収集した。強度の積分及びセルパラメーラの精密化をAPEXIIソフトウェアを用いて行った。データ収集後の結晶の観察で分解の兆候は示されなかった。幾何:すべてのエネルギースペクトル密度esd2個の最小二乗ls平面の間の二面対角におけるesdを除くを全共分散行列を用いて見積もった。セルのesdは、距離、角度及びひずみ角のesdの見積もりにそれぞれ考慮される;セルパラメーラにおけるesd間の相関は、結晶対象により定義される場合にのみ用いる。ls平面の関わるesdの見積もりには近似値等方晶系処理を行う。データ収集:ApexII;セルの精密化:ApexII;データ整理:ApexII;構造解析に用いたプログラム:SHELXS97Sheldrick、1990;構造の精密化に用いたプログラム:SHELXL97Sheldrick、1997;分子グラフィックス:Mercury;出版のための材料を調製するために用いたソフトウェア:publCIF。精密化:ALL反射に対するF2の精密化。荷重R因子wR及び適合度SはF2に基づき、通常のR計数RはFに基づくが、負F2の場合Fはゼロとする。F2>2シグマF2の閾値表現は、R係数gt等を計算するためだけに用いられ、精密化のための反射の選択には関連がない。F2に基づくR係数は統計的にはFに対して約2倍であり、ALLデータに基づくR係数は更に大きい。単結晶X線分析に基づく化合物1のフォームAの立体配座図を図9及び10に示す。4つの隣接する分子と4量体クラスタを形成する水素結合ネットワークを介して末端-OH基が結合している図10。もう一方のヒドロキシル基は、隣接する分子からのカルボニル基と水素結合を形成するための水素結合ドナーとして作用する。結晶構造は、本分子の稠密充填結晶構造を示す。化合物1のフォームAは単斜晶系、C2空間群で、以下の単位胞寸法:a=21095216Å、b=662875Å、c=17791715Å、β=958676°、γ=90°を有する。化合物1のフォームAの固体状態13CNMRスペクトルを図11に示す。表8は関連するピークの化学シフトを表す。化合物1のフォームAの固体状態19FNMRスペクトルを図12に示す。アスタリスクの付いたピークはスピニングサイドバンドを示す。表9は関連するピークの化学シフトを示す。化合物1のアモルファス形態の合成ロータリーエバポレーション法化合物1のアモルファス形態は、またロータリーエバポレーションによっても得られる。化合物1約10gをMeOH180mLに溶解させ、50°C浴で泡状物質を形成するまでロータリーエバポレーションを行った。DSC図14及びXRPD図13で化合物1のアモルファス形態を確認した。図15は、この方法により調製した化合物1のアモルファス形態のTGAトレースである。スプレードライ法ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネートHGグレードHPMCAS-HG995gをラウリル硫酸ナトリウムSLS50mgと共に500mLビーカーに測り取った。MeOH200mlを固体と混合した。物質を4時間攪拌した。最大限の溶解を確実にするために、2時間攪拌後溶液を5分間超音波にかけ、続いてさらに2時間攪拌した。非常に細かいHPMCASの懸濁液が溶液中に残った。しかし、視覚的な観察によっては、ガム状部分は容器を傾けても容器の壁面に残っておらず、又は底に固まっていなかった。化合物1のフォームA10gを500mLビーカーに注ぎ、系を継続して攪拌した。溶液を以下のパラメータを用いてスプレードライした:製剤明細:化合物1のフォームA/HPMCAS/SLS50/495/05ブチミニスプレードライヤーT入力口設定値145°CT出力口開始時75°CT出力口終了時55°C窒素圧75psiアスピレータ100ポンプ35ロタメータRotometer40mMフィルタ圧65mbarコンデンサ温度-3°C実行時間1時間化合物1のアモルファス形態約16g80収率を回収した。化合物1のアモルファス形態をXRPD図16及びDSC図17によって確認した。化合物1のアモルファス形態の固体状体13CNMRスペクトルを図18に示す。表10は関連するピークの化学シフトを示す。化合物1のアモルファス形態の固体状態19FNMRスペクトルを図19に示す。アスタリスクの付いたピークはスピニングサイドバンドを示す。表11は関連するピークの化学シフトを示す。以下の表12は、化合物1の追加の分析データを示す。アッセイ化合物によるΔF508-CFTR矯正特性の検出及び測定のためのアッセイ化合物によるΔF508-CFTR調節特性のアッセイのための膜電位光学法電位感受性FRETセンサーを利用する光学膜電位アッセイは、GonzalezおよびTsienによりGonzalezJEandRYTsien1995VoltagesensingbyfluorescenceresonanceenergytransferinsinglecellsBiophysJ694:1272-80andGonzalezJEandRYTsien1997ImprovedindicatorsofcellmembranepotentialthatusefluorescenceresonanceenergytransferChemBiol44:269-77参照、蛍光変化を測定するための機器、例えば電位/イオンプローブリーダーVIPRSeeGonzalezJEKOadesetal1999Cell-basedassaysandinstrumentationforscreeningion-channeltargetsDrugDiscovToday49:431-439参照と組み合わせて記載されている。これらの電位感受性アッセイは、膜可溶性、電位感受性色素であるDiSBAC23と、原形質膜の外側のリーフレットに結合し、FRETドナーとして働く蛍光リン脂質であるCC2-DMPEの間の蛍光共鳴エネルギー移動FRETにおける変化に基づく。膜電位Vmの変化は、負に帯電したDiSBAC23の原形質膜を通す再分配およびそれに応じたCC2-DMPEからのエネルギー伝達量の変化をもたらす。蛍光放出の変化は、96または384ウェルマイクロタイタープレート中の細胞をベースにしたスクリーニングを行うために設計された統合された液体ハンドラーおよび蛍光ディテクターであるVIPR登録商標IIを使用してモニターできる。1矯正化合物の同定ΔF508-CFTRに関連する輸送欠損を矯正する小分子を同定するために、シングルアディションHTSアッセイ形態を開発した。細胞を、無血清培地中、16時間、37°Cで、試験化合物の存在下または非存在下陰性対照インキュベートした。陽性対照として、384ウェルプレートに播種した細胞を、16時間、27°Cでインキュベートして、ΔF508-CFTRを温度補正した。細胞をその後3回クレブスリンゲル液で濯ぎ、電位感受性色素を負荷した。ΔF508-CFTRを活性化するために、10μMフォルスコリン、CFTRポテンシエータ、ゲニステイン20μMを無Cl-培地と共に各ウエルに添加した。無Cl-培地の添加は、ΔF508-CFTR活性化に応答したCl-流出を促進し、得られた膜脱分極をFRETベースの電位センサー色素を使用して光学的にモニターした。2ポテンシエータ化合物の同定ΔF508-CFTRポテンシエータ化合物を同定するため、二重付加doubleadditionHTSアッセイ形式を開発した。最初の付加においては、無Cl-培地を試験化合物あり又はなしで加えた。22秒後、ΔF508-CFTRを活性化するため、2回目の2-10μMフォルスコリン含有無Cl-培地を加えた。両添加後の細胞外Cl-濃度は28mMであり、それがΔF508-CFTR活性化に応答してCl-流出が促進され、得られた膜脱分極を光学的にFRET-ベース電位センサー色素でモニターした。3溶液浴溶液1:mMNaOH中、NaCl160、KCl45、CaCl22、MgCl21、HEPES10、pH74無塩化物浴溶液:浴溶液1における塩化物塩をグルコン酸塩に置き換えるCC2-DMPE:DMSO中で10mMストック溶液を調製し、-20°Cで保存したDiSBAC23:DMSO中で10mMストック溶液を調製し、-20°Cで保存した4細胞培養ΔF508-CFTRを安定的に発現するNIH3T3マウス線維芽細胞を膜電位の光学的な測定において用いる。細胞を175cm2培養フラスコで、2mMグルタミン、10ウシ胎児血清、1xNEAA、β-ME、1xペニシリン/ストレプトマイシン、及び25mMHEPESを添加した、ダルベッコ変法イーグル培地に37°C、5CO2及び湿度90で維持した。すべての光学的アッセイにおいて、細胞を、384-ウエルマトリゲル-コーティングプレートに30,000/ウエルを播種し、37°Cで2時間培養し、続いて24時間27°Cでポテンシエーターアッセイのために培養した。矯正アッセイについては、細胞は、27°C又は37°Cで、化合物あり又はなしで16-24時間時間培養した。ΔF508-CFTR調節特性を有する化合物の電気生理学的アッセイ1ウッシングチャンバーアッセイウッシングチャンバー実験をΔF508-CFTRを発現する分極上皮性細胞で行い、光学アッセイで同定されたΔF508-CFTRモジュレーターをさらに特徴付けした。CostarSnapwell細胞培養インサート上で増殖させたFRTΔF508-CFTR上皮性細胞をウッシングチャンバーPhysiologicInstrumentsIncSanDiegoCAにマウントし、単層をを電圧固定法システムを使用して連続的に短絡short-cicuitedさせたDepartmentofBioengineeringUniversityofIowaIA及びPhysiologicInstrumentsIncSanDiegoCA。経上皮性抵抗を2mVパルスの適用により測定した。これらの条件下、FRT上皮は4KΩ/cm2またはそれ以上の抵抗を証明した。溶液を27°Cに維持し、空気でバブリングした。電極オフセット電位および流体抵抗性を、無細胞インサートを使用して補正した。これらの条件下、電流は、頂端膜に発現されるΔF508-CFTRを通るCl-の流れを反映する。ISCをMP100A-CEインターフェース及びAcqKnowledgeソフトウェアv326BIOPACSystemsSantaBarbaraCAを使用してデジタルで獲得した。2矯正化合物の同定典型的プロトコルは側底から頂端膜Cl-濃度勾配を使用した。この勾配を設定するために、通常のリンゲルを側底膜に使用し、一方頂端NaClを等モル量グルコン酸ナトリウムで置き換えてNaOHでpH74に滴定、上皮を通して大きなCl-濃度勾配を得た。全実験を無傷の単層で行った。ΔF508-CFTRを完全に活性化するために、フォルスコリン10μm、PDE阻害剤、IBMX100μmを適用し、続いてCFTRポテンシエータ、ゲニステイン50μmを添加した。他の細胞型でも観察される通り、ΔF508-CFTRを安定に発現するFRT細胞の低温でのインキュベーションは、原形質膜のCFTRの機能的密度を増加させる。矯正化合物の活性を決定するために、細胞を10μMの試験化合物と24時間、37°Cでインキュベートし、その後3回洗浄して、その後記録した。化合物処理細胞のcAMP-およびゲニステイン仲介ISCを27°Cおよび37°C対照で標準化し、活性パーセントとして示す。細胞の矯正化合物との前インキュベーションは、37°C対照と比較して、cAMP-およびゲニステイン仲介ISCを顕著に増加させた。3ポテンシエータ化合物の同定典型的プロトコルは側底から頂端膜Cl-濃度勾配を使用した。この勾配を設定するために、通常のリンゲルを側底膜に使用し、ニスタチン360μg/mlで透過処理し、一方頂端NaClをを等モル量グルコン酸ナトリウムで置き換えてNaOHでpH74に滴定、上皮を通して大きなCl-濃度勾配を得た。全実験をニスタチン透過処理30分後に行った。フォルスコリン10μm及び全試験化合物を細胞培養インサートの両側に添加した。推定ΔF508-CFTRポテンシエータの効果を、既知ポテンシエータ、ゲニステインと比較した。4溶液基底外側溶液mM:NaCl135、CaCl21.2、MgCl21.2、K2HPO42.4、KHPO40.6、N-2-ヒドロキシエチルピペラジン-N-2-エタンスルホン酸HEPES10、およびデキストロース10。溶液をNaOHでpH74に滴定。頂端溶液mM:NaClをグルコン酸Na135で置き換えた以外側底溶液と同一。5細胞培養ΔF508-CFTRを発現するフィッシャーラット上皮性FRT細胞FRTΔF508-CFTRを、我々の光学アッセイで同定した推定ΔF508-CFTRモジュレーターのウッシングチャンバー実験に使用した。細胞をCostarSnapwell細胞培養インサートで培養し、5日間、37°Cおよび5CO2で5ウシ胎児血清、100U/mlペニシリン、および100μg/mlストレプトマイシン添加クーン変法ハムF-12培地で培養した。化合物のポテンシエータ活性の特徴付けに使用する前に、細胞を27°Cで16-48時間培養して、ΔF508-CFTRを補正した。矯正化合物の活性を決定するために、細胞を27°C又は37°Cで、化合物有りまたは無しで24時間インキュベートした。6全細胞記録ΔF508-CFTRを安定に発現する、温度および試験化合物補正したNIH3T3細胞における巨視的ΔF508-CFTR電流IΔF508を、有孔パッチ、全細胞記録を使用してモニターした。簡単に言うと、IΔF508の電位固定記録を、室温で、Axopatch200Bパッチクランプ増幅器AxonInstrumentsIncFosterCityCAを使用して行った。全記録を10kHzのサンプリング周波数で獲得し、1kHzで低域フィルタ処理した。ピペットは、細胞内溶液で満たしたとき5-6MΩの抵抗性を有した。これらの記録条件下、計算したCl-EClの逆転電位は室温で-28mVであった。全記録は、シール抵抗性>20GΩおよびシリーズ抵抗性<15MΩを有した。パルス発生、データ獲得、および分析を、Clampex8AxonInstrumentsIncと関連したDigidata1320ADインターフェースを備えたPCを使用して行った。浴は<250μlの食塩水を含み、無重力駆動灌流系を使用して2ml/分の速度で連続的に灌流した。7矯正化合物の同定原形質膜における機能的ΔF508-CFTRの密度を増加させる矯正化合物の活性を決定するために、我々は、上記の有孔パッチ記録技術を使用して、矯正化合物で24時間処理後の電流密度を測定した。ΔF508-CFTRを完全に活性化するために、10μMフォルスコリンおよび20μMゲニステインを細胞に添加した。我々の記録条件下で、27°Cで24時間インキュベーション後の電流密度は、37°Cで24時間インキュベーション後に見られるより高かった。これらの結果は、低温インキュベーションの原形質膜におけるΔF508-CFTRの密度に対する既知の効果と一致する。矯正化合物のCFTR電流密度に対する効果を決定するために、細胞を10μMの試験化合物と24時間、37°Cでインキュベートし、電流密度を27°Cおよび37°C対照活性と比較した。記録の前に、細胞を3回細胞外記録培地で洗浄し、何らかの残った試験化合物を除いた。10μMの矯正化合物とのプレインキュベーションは、37°C対照と比較して、顕著にcAMP-およびゲニステイン依存性電流を増加させた。8ポテンシエータ化合物の同定ΔF508-CFTRポテンシエータが、ΔF508-CFTRを安定に発現するNIH3T3細胞における巨視的ΔF508-CFTRCl-電流IΔF508を増加させる能力を、有孔-パッチ-記録技術を使用して試験した。光学アッセイにより同定されたポテンシエータは、光学アッセイにおいて見られたのと同様の強度および効果で、IΔF508の増加を用量依存性に惹起した。試験した全細胞において、ポテンシエータ適用前および適用中の逆転電位は約-30mVであり、それは計算したECl-28mVである。9溶液細胞内溶液mM:Cs-アスパルテート90、CsCl50、MgCl21、HEPES10、及び240μg/mlアンホテリシン-BCsOHで735にpH調節。細胞外溶液mM:N-メチル-D-グルカミンNMDG-Cl150、MgCl22、CaCl22、HEPES10HClで7.35にpH調節。10細胞培養ΔF508-CFTRを安定に発現するNIH3T3マウス線維芽細胞を全細胞記録に使用する。細胞を37°Cで5CO2および90湿度に、2mMグルタミン、10ウシ胎児血清、1×NEAA、β-ME、1×pen/strep、及び25mMHEPESを補ったダルベッコ改変イーグル培地中、175cm2培養フラスコで維持する。全細胞記録のために、2500-5000細胞をポリ-L-リシン被覆ガラスカバースリップに播種し、24-48時間、27°Cで培養し、その後ポテンシエータの活性の試験に使用し;そして矯正化合物有りまたは無しで37°Cでコレクターの活性を測定する。11単一チャネル記録NIH3T3細胞において安定に発現される温度補正ΔF508-CFTRの一チャネル活性およびポテンシエータ化合物の活性を、切断した裏返し膜パッチを使用して観察した。簡単に言うと、一チャネル活性の電位固定記録を、室温で、Axopatch200Bパッチクランプ増幅器AxonInstrumentsIncを使用して行った。全記録を10kHzのサンプリング周波数で獲得し、400Hzで低域フィルタ処理した。パッチピペットをCorningKovarSealing7052グラスWorldPrecisionInstrumentsIncSarasotaFLから製造し、細胞外溶液で満たしたとき5-8MΩの抵抗性を有した。ΔF508-CFTRを切除後、1mMMg-ATP、および75nMのcAMP依存性タンパク質キナーゼ、触媒サブユニットPKA;PromegaCorpMadisonWIの添加により活性化した。チャネル活性が安定した後、パッチを無重力駆動微小灌流系を使用して灌流した。流入をパッチに隣接して置き、1-2秒以内での完全な溶液交換をもたらした。急速な灌流中ΔF508-CFTR活性を維持するために、非特異的ホスファターゼ阻害剤F-10mMNaFを浴溶液に添加した。これらの記録条件下、チャネル活性は、パッチ記録の間60分まで一定のままであった。細胞内から細胞外溶液への正電荷の移動により生じた電流アニオンは逆方向に移動を正電流として示す。ピペット電位Vpは80mVに維持した。チャネル活性を、≦2活性チャネルを含む膜パッチから分析した。同時開放する最大数が、実験中のチャネルの活性の数を決定した。一チャネル電流振幅を決定するために、120秒のΔF508-CFTR活性を記録したデータをオフラインで100Hzでフィルタし、次いでBio-Patch分析ソフトウェアBio-LogicCompFranceを使用してマルチガウス関数で適合させた全点振幅ヒストグラムの構築に使用した。全顕微鏡的電流および開放可能性Poを120秒のチャネル活性から計算した。PoをBio-Patchソフトウェアを使用して、またはPo=I/iNここで、I=平均電流、i=一チャネル電流振幅、およびN=パッチ中の活性チャネル数の相関から決定した。12溶液細胞外溶液mM:NMDG150、アスパラギン酸150、CaCl25、MgCl22、及びHEPES10トリス塩基でpH7.35に調整。細胞内溶液mM:NMDG-Cl150、MgCl22、EGTA5、TES10、及びトリス塩基14HClでpH735に調整。13細胞培養ΔF508-CFTRを安定に発現するNIH3T3マウス線維芽細胞を、切除-膜パッチ-クランプ記録に使用する。細胞を37°Cで、5CO2および90湿度に、2mMグルタミン、10ウシ胎児血清、1×NEAA、β-ME、1×pen/strep、および25mMHEPESを補ったダルベッコ改変イーグル培地で175cm2培養フラスコ中維持する。一チャネル記録のために、2500-5000細胞をポリ-L-リシン被覆カバーガラスに播種し、24-48時間、27°C培養して、その後使用する。上述の方法を用い、化合物1の活性、すなわち、EC50を測定し表13に示す。"