"目的のポリペプチドをコードするRNAを中に被包しているリポソームであって、ここで該リポソームは、式Iの化合物および式XIの化合物からなる群より選択される少なくとも1種の化合物を含み、ここで式Iは、以下:であり、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;bは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;cは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、存在しないか、もしくは-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;fは、0もしくは1であり;そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドであり、式XIは、Ra-AAz-Rbであり、ここでRaは、N末端アルキルアミドであり;zは、2~10の整数であり;各AAは、アミノ酸であり、ここで、少なくとも1個のヒスチジンが存在すること、および少なくとも1個のカチオン性アミノ酸が存在することを条件とし;Rbは、-Hもしくは-NH2である、リポソーム。請求項1に記載のリポソームであって、80nm~160nmの範囲の直径を有する、リポソーム。前記RNAは、自己複製RNAである、前述の請求項のいずれかに記載のリポソーム。前記自己複製RNA分子は、iRNAを該自己複製RNA分子から転写し得るRNA依存性RNAポリメラーゼ、およびii前記目的のポリペプチドをコードする、請求項3に記載のリポソーム。前記RNA分子は、2個のオープンリーディングフレームを有し、該2個のオープンリーディングフレームのうちの第1のものは、アルファウイルスレプリカーゼをコードし、該2個のオープンリーディングフレームのうちの第2のものは、前記目的のポリペプチドをコードする、請求項4に記載のリポソーム。前記RNA分子は、9000~12000ヌクレオチド長である、前述の請求項のいずれかに記載のリポソーム。前記目的のポリペプチドは、免疫原である、前述の請求項のいずれかに記載のリポソーム。前記免疫原は、細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物に対してインビボで免疫応答を誘発し得る、請求項7に記載のリポソーム。前記免疫原は、RSウイルス糖タンパク質Fに対してインビボで免疫応答を誘発し得る、請求項8に記載のリポソーム。前述の請求項のいずれかに記載のリポソームを含む、薬学的組成物。脊椎動物における防御免疫応答を惹起するための方法であって、該方法は、請求項1~9に記載のリポソームまたは請求項10に記載の薬学的組成物の有効量を、該脊椎動物に投与する工程を包含する、方法。コードされたタンパク質のインビボ発現に関して、動物に核酸を送達するためのさらなる改善された方法が、未だに必要である。発明の開示本発明によれば、RNAは、リポソーム内に被包されて送達される。上記RNAは、目的のポリペプチドをコードする。上記リポソームは、式Iの化合物および式XIの化合物からなる群より選択される少なくとも1種の化合物を含む。これらリポソームは、インビボ発現のために、RNAを効率的に送達し得る。本発明は、免疫化のために特に有用であり、ここで、コードされたポリペプチドは、免疫原である。従って、本発明は、目的のポリペプチドをコードするRNAを中に被包しているリポソームを提供し、ここで上記リポソームは、式Iの化合物および式XIの化合物からなる群より選択される少なくとも1種の化合物を含む。式Iは、以下:であり、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;bは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;cは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、存在しないか、もしくは-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。式XIは、以下:Ra-AAz-Rbであり、ここでRaは、N末端アルキルアミドであり;zは、2~10の整数であり;各AAは、アミノ酸であり、ここで、少なくとも1個のヒスチジンおよび少なくとも1個のカチオン性アミノ酸が存在することを条件とし;Rbは、-Hもしくは-NH2である。本発明はまた、RNA含有リポソームを調製するためのプロセスを提供し、上記プロセスは、RNAと、式Iの化合物および式XIの化合物からなる群より選択される化合物とを、上記化合物が、上記RNAを中に被包しているリポソームを形成するような条件下で混合する工程を包含する。上記RNAおよび上記化合物は、他の化合物例えば、さらなる脂質の存在下で混合され得、他の化合物はまた、上記リポソームに組み込まれる。リポソーム本発明は、ポリペプチドをコードするRNAを中に被包しているリポソームを利用する。従って、上記RNAは、任意の外部の媒体から分離している天然ウイルスにおけるのと同様。上記リポソーム内への被包は、RNAをRNase消化から保護することが見いだされた。上記リポソームは、いくつかの外部RNAを例えば、それらの表面上に含み得るが、上記RNAのうちの少なくとも半分および理想的には、そのうちの全ては、上記リポソームのコア中に被包される。リポソーム内での被包は、例えば、参考文献1に開示される脂質/RNA複合体とは異なるここでRNAは、予め形成されたリポソームと混合される。種々の両親媒性脂質は、水性環境中で二重層を形成して、リポソームとして、RNA含有水性コアを被包し得る。これら脂質は、アニオン性、カチオン性、もしくは両性イオン性の親水性頭部headgroupを有し得る。アニオン性リン脂質からのリポソームの形成は、1960年代にさかのぼり、カチオン性リポソーム形成脂質は、1990年代から研究されてきた。あるリン脂質はアニオン性であるのに対して、他のものは両性イオン性であり、そして他のものはカチオン性である。リン脂質の適切なクラスとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、およびホスファチジルグリセロール。そしていくつかの有用なリン脂質は、表1に列挙される。先行技術における有用なカチオン性脂質としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパンDOTAP、1,2-ジステアリルオキシ-N,N-ジメチル-3-アミノプロパンDSDMA、1,2-ジオレイルオキシ-N,Nジメチル-3-アミノプロパンDODMA、1,2-ジリノレイルオキシ-N,N-ジメチル-3-アミノプロパンDlinDMA、1,2-ジリノレニルオキシ-N,N-ジメチル-3-アミノプロパンDLenDMA。両性イオン性脂質としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:アシル両性イオン性脂質およびエーテル両性イオン性脂質。有用な両性イオン性脂質の例は、以下である:DPPC、DOPC、DSPC、ドデシルホスホコリン、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンDOPE、および1,2-ジフィタノイルdiphytanoyl-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミンDPyPE。本発明のリポソーム中の脂質は、飽和であってもよいし、不飽和であってもよい。リポソームを調製するための少なくとも1種の不飽和脂質の使用が好ましい。不飽和脂質が2つのテールを有する場合、両方のテールが不飽和であり得、またはそれは、1つの飽和テールおよび1つの不飽和テールを有し得る。脂質は、例えば、RV05におけるように、1つのテールにステロイド基を含み得る。本発明のリポソームは、単一の脂質から、またはより通常には、脂質の混合物から形成され得る。混合物は、iカチオン性脂質の混合物、iiアニオン性脂質とカチオン性脂質との混合物、iii両性イオン性脂質とカチオン性脂質との混合物、またはviiアニオン性脂質と、カチオン性脂質と、両性イオン性脂質との混合物を含み得る。同様に、混合物は、飽和脂質および不飽和脂質の両方を含み得る。脂質の混合物が使用される場合、上記混合物中の成分の脂質の全てが、両親媒性である必要はない例えば、1種以上の両親媒性脂質が、コレステロールと混合され得る。本発明のリポソームは、式Iの少なくとも1種の化合物および/もしくは式XIの少なくとも1種の化合物を含む。好ましい本発明のリポソームは、式Iのカチオン性脂質を含む。実施例において示されるように、このようなリポソームは、タンパク質発現のためのRNAのインビボ送達のために特に有用である。他の好ましい本発明のリポソームは、式XIのリポペプチドを含む。リポソームは、式Iのリポソームおよび式XIのリポペプチドの両方を含み得るが、通常は、カチオン性化合物のこれら2つのクラスのうちの一方のみを含み得る。本発明のリポソームが脂質の混合物から形成される場合、式Iもしくは式XIを有する脂質の割合は、好ましくは、脂質の全量のうちの20~80例えば、30~70、もしくは40~60であるべきである。例えば、有用なリポソームは、以下に示され、ここで、全脂質のうちの40もしくは60が、式Iの脂質である。その残りは、例えば、コレステロール例えば、35~50コレステロールおよび/もしくはDMG必要に応じて、PEG化されるおよび/もしくはDSPCから構成され得る。このような混合物は以下で使用される。これらパーセンテージの値は、モルパーセンテージである。リポソームは、両親媒性脂質を含み得、その親水性部分は、PEG化されるすなわち、ポリエチレングリコールの共有結合によって改変される。この改変は、上記リポソームの安定化を増大させ得、かつ非特異的吸着を妨げ得る。例えば、脂質は、参考文献2および3に開示されるもののような技術を使用して、PEGに結合体化され得る。有用なPEG化脂質としては、PEG-DMG、および参考文献8の式XIの脂質が挙げられる。PEGは、上記リポソームに、都合の良い薬物動態特性を付与し得るコーティングを提供する。種々の長さのPEGが使用され得る例えば、0.5~8kDa。本発明のリポソームを形成するための有用な脂質の混合物は、以下を含む:式Iのカチオン性脂質;コレステロール;およびPEG化脂質、例えば、PEG-DMG、すなわち、PEG結合体化1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシポリエチレングリコール。この混合物はまた、中性の両性イオン性脂質、例えば、DSPC1,2-ジアステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリンもしくはDPyPEを含み得る。これらおよび他の混合物は、以下の実施例において使用される。リポソームは、通常、3つの群に分けられる:多層小胞MLV;小さな単層小胞SUV;および大きな単層小胞LUV。MLVは、各小胞において複数の二重層を有し、いくつかの別個の水性区画を形成する。SUVおよびLUVは、水性コアを被包する単一の二重層を有する;SUVは、代表的には、直径≦50nmを有し、LUVは、直径>50nmを有する。本発明のリポソームは、理想的には、60~180nmの範囲、好ましくは、80~160nmの範囲の直径を有するLUVである。本発明のリポソームは、複数のリポソームを含む組成物の一部であり得、上記複数の中のリポソームは、ある範囲の直径を有し得る。異なる直径を有するリポソームの集団を含む組成物に関して:i上記リポソームの数で少なくとも80は、60~180nmの範囲、および好ましくは、80~160nmの範囲の直径を有するべきであり、そして/またはii上記集団の平均直径強度で、例えば、Z平均は、理想的には、60~180nmの範囲、および好ましくは、80~160nmの範囲にある。上記複数において直径は、理想的には、多分散性指数<0.2を有するはずである。参考文献1のリポソーム/RNA複合体は、600~800nmの範囲の直径、および高い多分散性を有すると予測される。集団における直径は、動的光散乱を使用して測定され得る。適切なリポソームを調製するための技術は、当該分野で周知である例えば、参考文献4~6を参照のこと。1つの有用な方法は、参考文献7に記載され、i脂質のエタノール性溶液、ii核酸の水性溶液、およびiii緩衝液を混合する工程、続く、混合、平衡化、希釈および精製を包含する。好ましい本発明のリポソームは、この混合プロセスによって得られ得る。所望の直径を有するリポソームを得るために、混合は、RNA水性溶液の2つの供給ストリームが1つの混合ゾーンにおいて、脂質のエタノール性溶液の1つのストリームと、全て同じ流量において、例えば、以下に記載されるとおりのマイクロ流体チャネルにおいて合わされるプロセスを使用して行われ得る。式I式Iのカチオン性脂質は、以下のとおりである:ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;bは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;cは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、存在しないか、もしくは-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。従って、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、三級アミンを有する環式の頭部を形成する。これらの化合物は、参考文献8その完全な内容が、本明細書に参考として援用されるにより詳細に記載される。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式II:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;bは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;cは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1-4アルキレンであり;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;ここで、Lは1個以上のヘテロ原子を含むことを条件とし、そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式III:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは存在せず;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式IV:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは、存在せず;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;ここで、Lは1個以上のヘテロ原子を含むことを条件とし、そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式V:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは存在せず;X1は、Oであり;X2は、Oであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;ここで、Lは1個以上のヘテロ原子を含むことを条件とし、そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式VI:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは存在せず;X1は、Oであり;X2は、Oであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、-Lc-であり、ここでLcは、必要に応じて置換された、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式VII:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは存在せず;X1は、Oであり;X2は、Oであり;Y1は、必要に応じて置換されたC16-22アルケニル基であり;Lは、-Lc-であり、ここでLcは、必要に応じて置換された、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;そしてY2は、必要に応じて置換されたステロイドである。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式VIII:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは存在せず;X1は、Oであり;X2は、OでありY1は、必要に応じて置換されたC16-22アルケニル基であり;Lは、-Lc-であり、ここでLcは、必要に応じて置換された、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;そしてY2は、Aステロイド環の3位においてヒドロキシ基を介して繋がれたコレステロールであり、上記ヒドロキシ基の水素原子は、存在しない。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式IX:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは存在せず;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;ここで、Lは1個以上のヘテロ原子を含むことを条件とし、Y2は、必要に応じて置換されたステロイドであり;そして上記化合物のpKaは、約5.9~約7である。いくつかの実施形態において、式Iの化合物は、式X:を有し、ここで:R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基を形成し;aは、メチレンであり;bは、メチレンであり;cは存在せず;X1は、OもしくはSであり;X2は、OもしくはSであり;Y1は、必要に応じて置換された、C10-30アルケニル、C10-30アルキニル、C10-30ヘテロアルケニルもしくはC10-30ヘテロアルキニルであり;Lは、-Lad-Lbe-Lcf-であり、ここでLaは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;Lbは、必要に応じて置換された、C6-14アリーレンもしくはC5-13ヘテロアリーレンであり;Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレン、C1-15アルケニレン、C1-15アルキニレン、C1-15ヘテロアルキレン、C1-15ヘテロアルケニレンもしくはC1-15ヘテロアルキニレンであり;dは、0もしくは1であり;eは、0もしくは1であり;そしてfは、0もしくは1であり;ここで、Lは1個以上のヘテロ原子を含むことを条件とし、Y2は、必要に応じて置換されたステロイドであり;そして上記化合物のpKaは、約4.5~約6.2である。a、bおよびc一実施形態において、aは、必要に応じて置換されたC1-2アルキレンである。さらなる実施形態において、aは、必要に応じて置換されたC1アルキレンである。一実施形態において、bは、必要に応じて置換されたC0-2アルキレンである。さらなる実施形態において、bは、必要に応じて置換されたC1アルキレンである。一実施形態において、cは、存在しないか、もしくは必要に応じて置換されたC1アルキレンである。さらなる実施形態において、cは存在しない。一実施形態において、a、bおよびcは、存在する場合、置換されない。頭部一実施形態において、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニル基、C5-ヘテロアリールもしくはC6-ヘテロアリール基を形成する。一実施形態において、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニルもしくはC3-20-ヘテロシクロアルキニル基を形成する。さらなる実施形態において、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換されたC3-20-ヘテロシクロアルキル基を形成する。一実施形態において、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換されたC5-16基を形成する。さらなる実施形態において、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換されたC5-12基を形成する。さらなる実施形態において、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換されたC5基、C6基もしくはC7基を形成する。さらなる実施形態において、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じて置換されたC5基もしくはC6基を形成する。本発明の好ましい実施形態のうちの1つにおいて、R1およびR2は、R1およびR2が結合する窒素原子と一緒になって、少なくとも1個の酸素原子を含む種を形成する。一実施形態において、結合する窒素原子と一緒になったR1およびR2は、表1に提供されるように、H1~H48から選択される。X1およびX2一実施形態において、X1は、Oである。別の実施形態において、X2は、Oである。さらなる実施形態において、X1およびX2はともに、Oである。リンカー好ましい実施形態において、Lは、少なくとも1個のヘテロ原子を含む。これは、X2とY2との間の直接連結を提供する鎖が、少なくとも1個のヘテロ原子を有すること、言い換えると、L上の置換基におけるいかなるヘテロ原子も、これらの目的に関して、数に入れられないことを意味する。さらなる実施形態において、Lは、少なくとも1個のO原子を含む。一実施形態において、Lは、少なくとも2個のヘテロ原子を含む。さらなる実施形態において、Lは、少なくとも2個のO原子を含む。一実施形態において、Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレンもしくはC1-15ヘテロアルキレンである。一実施形態において、Lcは、必要に応じて置換された、C1-15アルキレンもしくはC1-15ヘテロアルキレンであり、dおよびeは、ともに0である。一実施形態において、Lcは、式Lc-i~Lc-xxiiiのうちの1個から選択される。一実施形態において、Lcは、式Lc-i~Lc-xxiiiのうちの1個から選択され、dおよびeは、ともに0である。Lc-xxiii-CH22NHC=OCH側鎖-1NHC=O-ここで側鎖-1は、基:を表し、上記破線は、分子の残りへの結合を表す。Lが少なくとも1個のヘテロ原子を含む基が好ましいので、Lcは、好ましくは、Lc-i、Lc-v~Lc-viiおよびLc-ix~Lc-xxiiiから選択される。一実施形態において、Lcは、必要に応じて置換されたC1-15ヘテロアルキレンである。一実施形態において、Lcは、必要に応じて置換されたC1-11基である。さらなる実施形態において、Lcは、必要に応じて置換されたC1-9基である。さらなる実施形態において、Lcは、必要に応じて置換されたC3-8基である。さらなる実施形態において、Lcは、必要に応じて置換されたC4-7基である。さらなる実施形態において、Lcは、必要に応じて置換されたC5、C6もしくはC7基である。好ましい実施形態において、dは、0であり;eは、0であり、fは、1である。好ましい実施形態において、dは、0であり;eは、0であり、fは、1であり、Lcは、上記に示される鎖長内において、ヘテロアルキレンである。Y1一実施形態において、Y1は、C12-28基である。さらなる実施形態において、Y1は、C14-26基である。さらなる実施形態において、Y1は、C16-24基である。さらなる実施形態において、Y1は、C16-22基である。さらなる実施形態において、上記Y1鎖は、18、19、20もしくは21個の原子長である。上記に示される炭素範囲内で、Y1は、好ましくは、アルケニルもしくはヘテロアルケニルである。一実施形態において、Y1は、少なくとも1個のアルケン基を有する。さらなる実施形態において、Y1は、1個、2個もしくは3個のアルケン基を有する。一実施形態において、Y1は、ω-3位においてアルケン基を有する。別の実施形態において、Y1は、ω-6位においてアルケン基を有する。別の実施形態において、Y1は、ω-9位においてアルケン基を有する。さらなる実施形態において、Y1は、ω-3位、ω-6位およびω-9位のうちの2カ所もしくは3カ所においてアルケン基を有する。一実施形態において、Y1は、ω-6位およびω-9位において不飽和である。別の実施形態において、Y1は、ω-3位、ω-6位およびω-9位において不飽和である。一実施形態において、Y1は、ω-9位において不飽和である。一実施形態において、Y1は、少なくとも1個のcis不飽和アルケン基を有する。さらなる実施形態において、Y1は、少なくとも2個のcis不飽和アルケン基を有する。さらなる実施形態において、Y1は、少なくとも3個のcis不飽和アルケン基を有する。上記少なくとも1個のcis不飽和アルケン基は、ω-3位、ω-6位およびω-9位のうちの1カ所、2カ所もしくは3カ所に存在し得る。脂質鎖における不飽和は、MacLachlanetal.,JournalofControlledRelease1072005276-287において考察されている。一実施形態において、Y1は、表2に提供されるように、Y1-i~Y1-viから選択される。Y2一実施形態において、Y2は、必要に応じて置換されたステロイド上の酸素原子を介して、Lに連結される。さらなる実施形態において、Y2は、Aステロイド環の3位上の酸素原子を介してLに連結される。さらなる実施形態において、Y2は、Aステロイド環の3位におけるヒドロキシ基の水素原子が除去されたステロールであるおよびLへの連結は、上記ヒドロキシ基の酸素原子を介する。一実施形態において、上記ステロールは、以下からなる群より選択される:アナステロールannasterol;アベナステロール;β-シトステロール;ブラシカステロール;カルシフェロール;カンペステロール;カリノステロールchalinosterol;キナステロールchinasterol;コレスタノール;コレステロール;コプロスタノール;シクロアルテノール;デヒドロコレステロール;デスモステロール;ジヒドロカルシフェロール;ジヒドロコレステロール;ジヒドロエルゴステロール;ジノステロール;エピコレステロール;エルゴステロール;フコステロール;ヘキサヒドロルミステロール;ヘキサオール;ヒドロキシコレステロール;ラノステロール;ルミステロール;パルケオール;ポリフェラステロール;サリンゴステロール;シトスタノール;シトステロール;スチグマスタノール;スチグマステロール;ウェインベルステロール;チモステロール;ステロール胆汁酸例えば、コール酸;ケノデオキシコール酸;グリココール酸;タウロコール酸;デオキシコール酸、およびリトコール酸;ならびにこれらの塩。さらなる実施形態において、上記ステロールは、コレステロールである。pKa脂質のpKaは、上記脂質のうちの50が荷電されるpHであり、上記脂質が完全に荷電される点と、上記脂質が完全に荷電されない点との間の中間点にある。それは、種々の方法において測定され得るが、好ましくは、以下で開示される方法を使用して測定される。上記pKaは、代表的には、他の脂質も含む混合物の状況における脂質ではなく例えば、参考文献2において行われるとおりではなくここでは、個々の脂質ではなくSNALPのpKaを調べている、単独の脂質について測定されるべきである。脂質のpKaは、以下の技術を使用して、標準的な温度および圧力において、水の中で測定される:エタノール中の脂質の2mM溶液を、脂質を秤量し、エタノール中に溶解することによって調製する。エタノール:メタノール9:1中の蛍光プローブトルエンニトロスルホン酸TNSの0.3mM溶液を、まず、メタノール中のTNSの3mM溶液を作製し、次いで、エタノールで0.3mMへと希釈することによって調製する。濃度20mM、25mM、20mMおよび150mMにおいて、それぞれ、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムを含む水性緩衝液を調製する。上記緩衝液を8つに分け、そのpHを、12NHClもしくは6NNaOHのいずれかで、4.44~4.52、5.27、6.15~6.21、6.57、7.10~7.20、7.72~7.80、8.27~8.33および10.47~11.12へと調節した。2mM脂質溶液400μLおよび0.3mMTNS溶液800μLを混合する。7.5μLのプローブ/脂質ミックスを、1mL96ウェルプレートにおいて、242.5μLの緩衝液に添加する。これは、8つ全ての緩衝液で行う。混合の後、100μLの各プローブ/脂質/緩衝液混合物を、250μLの黒い透明底の96ウェルプレート例えば、モデルCOSTAR3904,Corningに移す。各プローブ/脂質/緩衝液混合物の蛍光を例えば、SpectraMaxM5分光光度計およびSoftMaxpro5.2ソフトウェアで、322nm励起、431nm発光オートカットオフ420nm測定する。測定後、上記96ウェルプレートの空のウェルのバックグラウンド蛍光値を、各プローブ/脂質/緩衝液混合物から差し引く。次いで、上記蛍光強度値を、最低pHにおける値に対して正規化する。次いで、上記正規化した蛍光強度を、pHに対してプロットし、最良適合の線を提供する。正規化した蛍光強度が0.5に等しい、最良適合の線上の点を見いだす。0.5に等しい正規化した蛍光強度に対応するpHが見いだされ、上記脂質のpKaとみなされる。最良の免疫学的結果は、5.0~7.6の範囲のpKaを有する脂質で認められる。このpKa範囲内で、好ましい脂質は、5.5~6.7のpKa例えば、5.6~6.8、5.6~6.3、5.6~6.0、5.5~6.2、もしくは5.7~5.9を有する。式Iの具体的化合物本発明で有用な式Iの具体的化合物は、参考文献8において開示される。例えば、上記化合物は、であり得る。上記化合物は、RV03~RV12リポソームにおいて、もしくはRV15リポソームにおいて使用された、以下で示される脂質であり得る。好ましい化合物は、E0026、E0069およびE0078である。好ましい化合物は、RV05、RV08およびRV09リポソームにおいて使用された、以下で示される脂質である。代替の実施形態において、本発明のリポソームは、式Iの化合物を使用するのではなく、化合物RV02以下で示される構造を使用する。この置換を除いて、RV02含有リポソームの全ての他の局面は、本明細書中の他の箇所で記載されるとおりである。式XI式XIの化合物は、N末端アルキルアミドおよび2~10個のアミノ酸を含むカチオン性リポペプチドである。式XIは、Ra-AAz-Rbであり、ここでRaは、N-末端アルキルアミドであり、zは、2~10の整数であり;各AAは、アミノ酸であり、ここで、少なくとも1個のヒスチジンおよび少なくとも1個のカチオン性アミノ酸が存在することを条件とし;Rbは、-H、-OHもしくは-NH2である。上記Ra部分は、式Rc-CO-NRd-を有し、ここでRcは、C2~C24アルキルであり、Rdは、-HもしくはC1~C4アルキルである。適切なRc基としては、ラウリルLau;C12およびパルミトイルPal;C16が挙げられる。上記Ra部分のアミドは、2~10アミノ酸例えば、3~8アミノ酸のオリゴペプチド鎖に結合される。この鎖は、少なくとも1個例えば、1個、2個、3個、4個もしくは5個のヒスチジンを含む。それはまた、少なくとも1個のカチオン性アミノ酸例えば、少なくとも1個のアルギニン、リジンもしくはオルニチン残基を含む。少なくとも1個のリジンの包含が好ましく、理想的には、2個もしくは3個のリジンの包含が好ましい。ヒスチジンは、その側鎖が弱塩基性であり、生理学的pHにおいて主に非イオン化状態であるが、エンドソームの弱酸性環境において高度にプロトン化されるので、含まれる。カチオン性アミノ酸例えば、リジンもしくはアルギニンは、中性pHにおいて上記リポペプチド上に単位正電荷を提供する。有用なオリゴペプチドは、アミノ酸配列-C-Ki-Hj-を有する:iは、1、2もしくは3であり;そしてjは、1、2、3、4もしくは5である。上記オリゴペプチド鎖のC末端は、-COOHとして残り得るか、または代わりにアミドを形成し得る。式XIの化合物は、それらのアルキル鎖、それらのアミノ酸配列、およびそれらのC末端基の点から記載され得る。例えば、上記リポペプチドLau-C-K-H-H-NH2は、N末端ラウリル鎖、次いで、システイン、次いで、リジン、次いで2個のヒスチジン、およびC末端アミンを有する。従って、式XIの適切なリポペプチドとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:これらおよび他の化合物は、参考文献9に開示され、以下を含む:RNA本発明のリポソームは、ポリペプチドをコードするRNA分子参考文献2におけるような、siRNAとは異なるを含む。上記粒子のインビボ投与後、RNAは、上記粒子から放出され、上記ポリペプチドをインサイチュで提供するように、細胞の中で翻訳される。上記RNAは、プラス鎖であるので、任意の介在複製工程例えば、逆転写を必要とすることなく、細胞によって翻訳され得る。それは、免疫細胞によって発現されるTLR7レセプターにも結合し得、それによって、免疫化目的に有用なアジュバント効果を開始する。好ましいプラス鎖RNAは、自己複製性である。自己複製RNA分子レプリコンは、いかなるタンパク質もなしに脊椎動物細胞に送達される場合に、それ自体からの転写によってそれ自体から生成するアンチセンスコピーを介して、複数の娘RNAの生成をもたらし得る。自己複製RNA分子は、従って、代表的には、細胞への送達後に直接翻訳され得るプラス鎖分子であり、そしてこの翻訳は、RNA依存性RNAポリメラーゼを提供し、これは次に、上記送達されたRNAからアンチセンスおよびセンス両方の転写物を生成する。従って、上記送達されるRNAは、複数の娘RNAの生成をもたらす。これら娘RNA、ならびに同一線状のcollinearサブゲノム転写物は、コードされた目的のポリペプチドのインサイチュ発現を提供するようにそれら自体が翻訳されてもよいし、上記送達されたRNAと同じセンスを有するさらなる転写物を提供するように転写されてもよいこれは、翻訳されて上記目的のポリペプチドのインサイチュ発現を提供する。この一連の転写の全体的な結果は、上記導入されるレプリコンRNAの非常に多くの増幅であり、よって上記コードされた目的のポリペプチドは、上記細胞の主な生成物になる。自己複製を達成するための1つの適した系は、アルファウイルスベースのRNAレプリコンを使用することである。これらプラス鎖レプリコンは、細胞への送達後に翻訳されて、レプリカーゼもしくはレプリカーゼ-転写酵素をもたらす。上記レプリカーゼは、ポリプロテインとして翻訳され、これは、上記プラス鎖の送達されたRNAのゲノムマイナス鎖コピーを作り出す複製複合体を提供するように自己切断する。これらマイナス鎖転写物は、それ自体、転写されて、上記プラス鎖親RNAのさらなるコピーを与え得、さらに、上記目的のポリペプチドをコードするサブゲノム転写物を与え得る。上記サブゲノム転写物の翻訳は、従って、上記感染細胞による上記ポリペプチドのインサイチュ発現をもたらす。適切なアルファウイルスレプリコンは、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルスなどに由来するレプリカーゼを使用し得る。変異型もしくは野生型のウイルス配列が使用され得、例えば、VEEVの弱毒化TC83変異型は、レプリコンにおいて使用されてきた[10]。好ましい自己複製RNA分子は、従って、iRNAを上記自己複製RNA分子から転写し得るRNA依存性RNAポリメラーゼ、およびii目的のポリペプチドをコードする。上記ポリメラーゼは、例えば、アルファウイルスタンパク質nsP1、nsP2、nsP3およびnsP4のうちの1種以上を含む、アルファウイルスレプリカーゼであり得る。天然のアルファウイルスゲノムは、上記非構造的レプリカーゼポリプロテインに加えて、構造的ビリオンタンパク質をコードするのに対して、本発明の自己複製RNA分子は、アルファウイルス構造タンパク質をコードしないことが好ましい。従って、好ましい自己複製RNAは、細胞においてそれ自体のゲノムRNAコピーの生成をもたらし得るが、RNA含有ビリオンの生成をもたらさない。これらビリオンを生成できないことは、野生型アルファウイルスとは異なり、上記自己複製RNA分子が、感染性形態として永続できないことを意味する。野生型ウイルスとして永続するために必要な上記アルファウイルス構造タンパク質は、本発明の自己複製RNAにおいて存在せず、上記目的のポリペプチドをコードする遺伝子によってそれらの場所が占められている。その結果、上記サブゲノム転写物は、上記構造的アルファウイルスビリオンタンパク質ではなく、そのポリペプチドをコードする。従って、本発明で有用な自己複製RNA分子は、2個のオープンリーディングフレームを有し得る。第1の5’オープンリーディングフレームは、レプリカーゼをコードする;第2の3’オープンリーディングフレームは、目的のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、上記RNAは、例えば、さらなる目的のポリペプチド以下を参照のことをコードするかもしくはアクセサリポリペプチドをコードするために、さらなる例えば、下流のオープンリーディングフレームを有し得る。自己複製RNA分子は、コードされたレプリカーゼと適合性である5’配列を有し得る。自己複製RNA分子は、種々の長さを有し得るが、それらは、代表的には、5000~25000ヌクレオチド長例えば、8000~15000ヌクレオチド、もしくは9000~12000ヌクレオチドである。従って、上記RNAは、siRNA送達において認められるものより長い。本発明で有用なRNA分子は、5’キャップ例えば、7-メチルグアノシンを有し得る。このキャップは、上記RNAのインビボ翻訳を増強し得る。本発明で有用なRNA分子の5’ヌクレオチドは、5’トリホスフェート基を有し得る。キャップされたRNAにおいて、これは、5’から5’への架橋を介して、7-メチルグアノシンに連結され得る。5’トリホスフェートは、RIG-I結合を増強し得るので、アジュバント効果を促進し得る。RNA分子は、3’ポリ-Aテールを有し得る。それはまた、その3’末端付近にポリ-Aポリメラーゼ認識配列例えば、AAUAAAを含み得る。本発明で有用なRNA分子は、代表的には、一本鎖である。一本鎖RNAは、一般に、TLR7、TLR8、RNAヘリカーゼおよび/もしくはPKRへの結合によって、アジュバント効果を開始し得る。二本鎖形態において送達されるRNAdsRNAは、TLR3に結合し得、このレセプターはまた、一本鎖RNAの複製の間もしくは一本鎖RNAの二次構造内のいずれかで形成されるdsRNAによって誘発され得る。本発明で有用RNA分子は、便宜上、インビトロ転写IVTによって調製され得る。IVTは、細菌においてプラスミド形態において作られ、増やされたか、または合成で作製された例えば、遺伝子合成および/もしくはポリメラーゼ連鎖反応PCR操作法によってcDNAテンプレートを使用し得る。例えば、DNA依存性RNAポリメラーゼ例えば、バクテリオファージT7、T3もしくはSP6RNAポリメラーゼは、DNAテンプレートからRNAを転写するために使用され得る。適切なキャッピングおよびポリA付加反応は、必要時に使用され得るしかし、上記レプリコンのポリAは、通常、上記DNAテンプレート内にコードされる。これらRNAポリメラーゼは、転写される5’ヌクレオチドについてストリンジェントな要件を有し得、いくつかの実施形態において、これらの要件は、上記IVT転写RNAが、自己がコードするレプリカーゼの基質として効率的に機能し得ることを確実にするために、上記コードされたレプリカーゼの要件とマッチしなければならない。参考文献11において考察されるように、上記自己複製RNAは、任意の5’キャップ構造に加えて改変された核酸塩基を有する1個以上のヌクレオチドを含み得る。従って、上記RNAは、以下を含み得る:m5C5-メチルシチジン、m5U5-メチルウリジン、m6AN6-メチルアデノシン、s2U2-チオウリジン、Um2’-O-メチルウリジン、m1Al-メチルアデノシン;m2A2-メチルアデノシン;Am2’-O-メチルアデノシン;ms2m6A2-メチルチオ-N6-メチルアデノシン;i6AN6-イソペンテニルアデノシン;ms2i6A2-メチルチオ-N6イソペンテニルアデノシン;io6AN6-cis-ヒドロキシイソペンテニルアデノシン;ms2io6A2-メチルチオ-N6-cis-ヒドロキシイソペンテニルアデノシン;g6AN6-グリシニルカルバモイルアデノシン;t6AN6-スレオニルカルバモイルアデノシン;ms2t6A2-メチルチオ-N6-スレオニルカルバモイルアデノシン;m6t6AN6-メチル-N6-スレオニルカルバモイルアデノシン;hn6AN6.-ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン;ms2hn6A2-メチルチオ-N6-ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン;Arp2’-O-リボシルアデノシンホスフェート;Iイノシン;m111-メチルイノシン;m’Im1,2’-O-ジメチルイノシン;m3C3-メチルシチジン;Cm2T-O-メチルシチジン;s2C2-チオシチジン;ac4CN4-アセチルシチジン;f5C5-ホルミルfonnylシチジン;m5Cm5,2-O-ジメチルシチジン;ac4CmN4アセチル2TOメチルシチジン;k2Cリシジン;m1G1-メチルグアノシン;m2GN2-メチルグアノシン;m7G7-メチルグアノシン;Gm2’-O-メチルグアノシン;m22GN2,N2-ジメチルグアノシン;m2GmN2,2’-O-ジメチルグアノシン;m22GmN2,N2,2’-O-トリメチルグアノシン;Grp2’-O-リボシルグアノシンホスフェート;yWワイブトシン;o2yWペルオキシワイブトシン;OHyWヒドロキシワイブトシン;OHyW改変未満undermodifiedヒドロキシワイブトシン;imGワイオシン;mimGメチルグアノシン;Qキューオシン;oQエポキシキューオシン;galQガラクトシルgaltactosyl-キューオシン;manQマンノシル-キューオシン;preQo7-シアノ-7-デアザグアノシン;preQi7-アミノメチル-7-デアザグアノシン;Gアルカエオシンarchaeosine;Dジヒドロウリジン;m5Um5,2’-O-ジメチルウリジン;s4U4-チオウリジン;m5s2U5-メチル-2-チオウリジン;s2Um2-チオ-2’-O-メチルウリジン;acp3U3-3-アミノ-3-カルボキシプロピルウリジン;ho5U5-ヒドロキシウリジン;mo5U5-メトキシウリジン;cmo5Uウリジン5-オキシ酢酸;mcmo5Uウリジン5-オキシ酢酸メチルエステル;chm5U5-カルボキシヒドロキシメチルウリジン;mchm5U5-カルボキシヒドロキシメチルウリジンメチルエステル;mcm5U5-メトキシカルボニルメチルウリジン;mcm5UmS-メトキシカルボニルメチル-2-O-メチルウリジンmethyluricjine;mcm5s2U5-メトキシカルボニルメチル-2-チオウリジン;nm5s2U5-アミノメチル-2-チオウリジン;mnm5U5-メチルアミノメチルウリジン;mnm5s2U5-メチルアミノメチル-2-チオウリジン;mnm5se2U5-メチルアミノメチル-2-セレノウリジン;ncm5U5-カルバモイルメチルウリジン;ncm5Um5-カルバモイルメチル-2’-O-メチルウリジン;cmnm5U5-カルボキシメチルアミノメチルウリジン;cnmm5Um5-カルボキシメチルアミノメチル-2-L-Oメチルウリジン;cmnm5s2U5-カルボキシメチルアミノメチル-2-チオウリジン;m62AN6,N6-ジメチルアデノシン;Tm2’-O-メチルイノシン;m4CN4-メチルシチジン;m4CmN4,2-O-ジメチルシチジン;hm5C5-ヒドロキシメチルシチジン;m3U3-メチルウリジン;cm5U5-カルボキシメチルウリジン;m6AmN6,T-O-ジメチルアデノシン;rn62AmN6,N6,O-2-トリメチルアデノシン;m2’7GN2,7-ジメチルグアノシン;m2’2’7GN2,N2,7-トリメチルグアノシン;m3Um3,2T-O-ジメチルウリジン;m5D5-メチルジヒドロウリジン;f5Cm5-ホルミル-2’-O-メチルシチジン;m1Gm1,2’-O-ジメチルグアノシン;m’Am1,2-O-ジメチルアデノシンイリノメチルウリジン;tm5s2US-タウリノメチル-2-チオウリジン;imG-144-デメチルグアノシン;imG2イソグアノシン;もしくはac6AN6-アセチルアデノシン、ヒポキサンチン、イノシン、8-オキソ-アデニン、7-置換されたその誘導体、ジヒドロウラシル、シュードウラシル、2-チオウラシル、4-チオウラシル、5-アミノウラシル、5-C1-C6-アルキルウラシル、5-メチルウラシル、5-C2-C6-アルケニルウラシル、5-C2-C6-アルキニルウラシル、5-ヒドロキシメチルウラシル、5-クロロウラシル、5-フルオロウラシル、5-ブロモウラシル、5-ヒドロキシシトシン、5-C1-C6-アルキルシトシン、5-メチルシトシン、5-C2-C6-アルケニルシトシン、5-C2-C6-アルキニルシトシン、5-クロロシトシン、5-フルオロシトシン、5-ブロモシトシン、N2-ジメチルグアニン、7-デアザグアニン、8-アザグアニン、7-デアザ-7-置換グアニン、7-デアザ-7-C2-C6アルキニルグアニン、7-デアザ-8-置換グアニン、8-ヒドロキシグアニン、6-チオグアニン、8-オキソグアニン、2-アミノプリン、2-アミノ-6-クロロプリン、2,4-ジアミノプリン、2,6-ジアミノプリン、8-アザプリン、置換された7-デアザプリン、7-デアザ-7-置換プリン、7-デアザ-8-置換プリン、または無塩基ヌクレオチド。例えば、自己複製RNAは、1つ以上の改変されたピリミジン核酸塩基例えば、シュードウリジンおよび/もしくは5-メチルシトシン残基を含み得る。しかし、いくつかの実施形態において、上記RNAは、改変された核酸塩基を含まず、改変されたヌクレオチドを含まなくてもよいすなわち、上記RNA中のヌクレオチドのすべては、標準的なA、C、GおよびUというリボヌクレオチドである任意の5’キャップ構造を除く。これは、7’-メチルグアノシンを含み得る。他の実施形態において、上記RNAは、7’-メチルグアノシンを含む5’キャップを含み得、最初の1個、2個もしくは3個の5’リボヌクレオチドは、リボースの2’位においてメチル化され得る。本発明で使用されるRNAは、理想的には、ヌクレオチド間にホスホジエステル結合のみを含むが、いくつかの実施形態において、それは、ホスホロアミデート結合、ホスホロチオエート結合、および/もしくはメチルホスホネート結合を含み得る。理想的には、リポソームは、10より少ない種の異なるRNA例えば、5種、4種、3種、もしくは2種の異なる種を含み;最も好ましくは、リポソームは、単一のRNA種を含み、すなわち、上記リポソーム中の全てのRNA分子は、同じ配列および同じ長さを有する。リポソーム1つあたりのRNAの量は、変動し得る。リポソーム1つあたりの個々の自己複製RNA分子の数は、代表的には、リポソーム1つあたり≦50例えば、リポソーム1つあたり<20、<10、<5、もしくは1~4である。コードされた目的のポリペプチド本発明で使用されるRNA分子は、目的のポリペプチドをコードする。上記リポソームの投与後に、上記RNAは、インビボで翻訳され、得られたタンパク質は、その所望の効果を発揮し得る例えば、それは、レシピエントにおいて免疫応答を誘発し得るか、または目的の機能例えば、酵素活性を提供し得る。上記RNA分子は、単一の目的のポリペプチドもしくは複数のポリペプチドをコードし得る。複数のポリペプチドは、単一のポリペプチド融合ポリペプチドとして、もしくは別個のポリペプチドとして、提示され得る。ポリペプチドが、レプリコンから別個のポリペプチドとして発現される場合、これらのうちの1種以上は、上流のIRESもしくはさらなるウイルスプロモーターエレメントと共に提供され得る。あるいは、複数のポリペプチドは、短い自己触媒性プロテアーゼ例えば、口蹄疫ウイルス2Aタンパク質に融合された個々のポリペプチドをコードするポリプロテインから、またはインテインとして発現され得る。参考文献1および12とは異なり、上記RNAは、有用なインビボ機能を有するポリペプチドをコードする。不確かさを避けるために、本発明は、ホタルルシフェラーゼをコードするか、またはE.coliβ-ガラクトシダーゼの融合タンパク質をコードするか、または緑色蛍光タンパク質GFPをコードするRNAを含まない。このようなポリペプチドは、マーカーとして有用であり得るが、本発明は、有用な治療応答もしくは免疫学的応答を提供し得るポリペプチドのインビボ発現のためのRNAの送達に関する。また、上記RNAは、全マウス胸腺RNAではない。免疫原いくつかの実施形態において、上記RNAは、ポリペプチド免疫原をコードする。上記リポソームの投与後に、上記RNAは、インビボで翻訳され、上記免疫原は、レシピエントにおいて免疫応答を誘発し得る。上記免疫原は、細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物に対してまたは、いくつかの実施形態において、アレルゲンに対して;および他の実施形態においては、腫瘍抗原に対して免疫応答を誘発し得る。上記免疫応答は、抗体応答通常は、IgGを含むおよび/もしくは細胞媒介性免疫応答を含み得る。上記ポリペプチド免疫原は、代表的には、その対応する細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物またはアレルゲンもしくは腫瘍のポリペプチドを認識する免疫応答を誘発するが、いくつかの実施形態において、上記ポリペプチドは、細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物のサッカリドを認識する免疫応答を誘発するミモトープとして作用し得る。上記免疫原は、代表的には、表面ポリペプチド例えば、アドヘシン、ヘマグルチニン、エンベロープ糖タンパク質、スパイク糖タンパク質などである。いくつかの実施形態において、上記免疫原は、これら細菌のうちの1種に対して免疫応答を誘発する:Neisseriameningitidis:有用な免疫原としては、膜タンパク質、例えば、アドヘシン、オートトランスポーター、毒素、鉄獲得タンパク質、およびH因子結合タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。3種の有用なポリペプチドの組み合わせが、参考文献13に開示される。Streptococcuspneumoniae:有用なポリペプチド免疫原は、参考文献14に開示される。これらとしては、RrgB線毛サブユニット、β-N-アセチル-ヘキソサミニダーゼ前駆体spr0057、spr0096、一般的なストレスタンパク質generalstressproteinGSP-781spr2021、SP2216、セリン/スレオニンキナーゼStkPSP1732、および肺炎球菌表面アドヘシンPsaAが挙げられるが、これらに限定されない。Streptococcuspyogenes:有用な免疫原としては、参考文献15および16に開示されるポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。MoraxellacatarrhalisBordetellapertussis:有用な百日咳免疫原としては、百日咳毒素もしくはトキソイドPT、線維状ヘマグルチニンFHA、ペルタクチン、ならびに凝集原2および3が挙げられるが、これらに限定されない。Staphylococcusaureus:有用な免疫原としては、参考文献17に開示されるポリペプチド例えば、溶血素、esxA、esxB、フェリクロム結合タンパク質sta006および/もしくはsta011リポプロテインが挙げられるが、これらに限定されない。Clostridiumtetani:代表的な免疫原は、破傷風トキソイドである。Cornynebacteriumdiphtheriae:代表的な免疫原は、ジフテリアトキソイドである。Haemophilusinfluenzae:有用な免疫原としては、参考文献18および19に開示されるポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。PseudomonasaeruginosaStreptococcusagalactiae:有用な免疫原としては、参考文献15に開示されるポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。Chlamydiatrachomatis:有用な免疫原としては、PepA、LcrE、ArtJ、DnaK、CT398、OmpH様、L7/L12、OmcA、AtoS、CT547、Eno、HtrAおよびMurG例えば、参考文献20に開示されるとおりが挙げられるが、これらに限定されない。LcrE[21]およびHtrA[22]は、2つの好ましい免疫原である。Chlamydiapneumoniae:有用な免疫原としては、参考文献23に開示されるポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。Helicobacterpylori:有用な免疫原としては、CagA、VacA、NAP、および/もしくはウレアーゼ[24]が挙げられるが、これらに限定されない。Escherichiacoli:有用な免疫原としては、腸毒素産生性E.coliETEC、腸管凝集性E.coliEAggEC、分散接着性diffuselyadheringE.coliDAEC、腸病原性E.coliEPEC、腸管外病原性E.coliExPECおよび/もしくは腸管出血性E.coliEHECに由来する免疫原が挙げられるが、これらに限定されない。ExPEC株としては、尿路病原性E.coliUPECおよび髄膜炎/敗血症関連E.coliMNECが挙げられる。有用なUPECポリペプチド免疫原は、参考文献25および26に開示される。有用なMNEC免疫原は、参考文献27に開示される。いくつかのE.coliタイプに有用な免疫原は、AcfDである[28]。BacillusanthracisYersiniapestis:有用な免疫原としては、参考文献29および30に開示されるものが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、上記免疫原は、これらウイルスのうちの1種に対して免疫応答を誘発する:オルソミクソウイルス:有用な免疫原は、インフルエンザA、BもしくはCウイルスに由来し得る例えば、ヘマグルチニン、ノイラミニダーゼもしくはマトリクスM2タンパク質。上記免疫原がインフルエンザAウイルスヘマグルチニンである場合、それは、任意のサブタイプ例えば、H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15もしくはH16に由来し得る。パラミクソウイルス科のウイルス:ウイルス免疫原としては、肺炎ウイルス例えば、RSウイルス、RSV、ルブラウイルス例えば、ムンプスウイルス、パラミクソウイルス例えば、パラインフルエンザウイルス、メタニューモウイルスおよびモルビリウイルス例えば、麻疹ウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。ポックスウイルス科:ウイルス免疫原としては、オルトポックスウイルス例えば、真正痘瘡大痘瘡および小痘瘡が挙げられるが、これらに限定されないに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。ピコルナウイルス:ウイルス免疫原としては、ピコルナウイルス例えば、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルスおよびアフトウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、上記エンテロウイルスは、ポリオウイルス例えば、1型、2型、および/もしくは3型のポリオウイルスである。別の実施形態において、上記エンテロウイルスは、EV71エンテロウイルスである。別の実施形態において、上記エンテロウイルスは、コクサッキーAもしくはBウイルスである。ブンヤウイルス:ウイルス免疫原としては、オルソブンヤウイルス例えば、カリフォルニア脳炎ウイルス、フレボウイルス例えば、リフトバレー熱ウイルス、もしくはナイロウイルス例えば、クリミアコンゴ出血熱ウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。ヘパルナウイルス:ウイルス免疫原としては、ヘパルナウイルス例えば、A型肝炎ウイルスHAVに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。フィロウイルス:ウイルス免疫原としては、フィロウイルス例えば、エボラウイルスザイールエボラウイルス、アイボリーコーストエボラウイルス、レストンエボラウイルスもしくはスーダンエボラウイルスを含むまたはマールブルグウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。トガウイルス:ウイルス免疫原としては、トガウイルス例えば、ルビウイルス、アルファウイルス、もしくはアルテリウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。これは、風疹ウイルスを含む。フラビウイルス:ウイルス免疫原としては、フラビウイルス例えば、ダニ媒介脳炎TBEウイルス、デング1、2、3もしくは4型ウイルス、黄熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ウエストナイル脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ロシア春夏脳炎ウイルス、ポワッサン脳炎ウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。ペスチウイルス:ウイルス免疫原としては、ペスチウイルス例えば、牛ウイルス性下痢BVDV、豚コレラCSFVもしくはボーダー病BDVに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。ヘパドナウイルス:ウイルス免疫原としては、ヘパドナウイルス例えば、B型肝炎ウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、B型肝炎ウイルス表面抗原HBsAgを含み得る。他の肝炎ウイルス:組成物は、C型肝炎ウイルス、デルタ型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、もしくはG型肝炎ウイルスに由来する免疫原を含み得る。ラブドウイルス:ウイルス免疫原としては、ラブドウイルス例えば、リッサウイルス例えば、狂犬病ウイルスおよびベシクロウイルスVSVに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。カリシウイルス科:ウイルス免疫原としては、カリシウイルス科例えば、ノーウォークウイルスノロウイルス、およびノーウォーク様ウイルス例えば、ハワイウイルスおよびスノーマウンテンウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。コロナウイルス:ウイルス免疫原は、SARSコロナウイルス、トリ伝染性気管支炎IBV、マウス肝炎ウイルスMHV、およびブタ伝染性胃腸炎ウイルスTGEVに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。上記コロナウイルス免疫原は、スパイクポリペプチドであり得る。レトロウイルス:ウイルス免疫原としては、オンコウイルス、レンチウイルス例えば、HIV-1もしくはHIV-2またはスプマウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。レオウイルス:ウイルス免疫原としては、オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルス、もしくはコルチウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。パルボウイルス:ウイルス免疫原としては、パルボウイルスB19に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。ヘルペスウイルス:ウイルス免疫原としては、ヒトヘルペスウイルス例えば、例示に過ぎないが、単純ヘルペスウイルスHSV例えば、HSV1型および2型、水痘帯状疱疹ウイルスVZV、エプスタインバーウイルスEBV、サイトメガロウイルスCMV、ヒトヘルペスウイルス6HHV6、ヒトヘルペスウイルス7HHV7、およびヒトヘルペスウイルス8HHV8に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。パポバウイルス:ウイルス免疫原としては、パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスに由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。上記ヒトパピローマウイルスは、血清型1、2、4、5、6、8、11、13、16、18、31、33、35、39、41、42、47、51、57、58、63もしくは65のもの例えば、血清型6、11、16および/もしくは18のうちの1種以上に由来するであり得る。アデノウイルス:ウイルス免疫原としては、アデノウイルス血清型36Ad-36に由来するものが挙げられる。いくつかの実施形態において、上記免疫原は、魚類に感染するウイルス例えば:伝染性サケ貧血ウイルスISAV、サケ膵臓病ウイルスSPDV、伝染性膵臓壊死症ウイルスIPNV、アメリカナマズウイルスCCV、魚類リンホシスチス病ウイルスFLDV、伝染性造血器壊死症ウイルスIHNV、コイヘルペスウイルス、サケピコルナ様ウイルス大西洋サケピコルナ様ウイルスとしても公知、ヤマメウイルスLSV、大西洋サケロタウイルスASR、マスイチゴ病ウイルスTSD、銀ザケ腫瘍ウイルスCSTV、もしくはウイルス性出血性敗血症ウイルスVHSVに対する免疫応答を誘発する。真菌免疫原は、皮膚糸状菌類Dermatophytres以下が挙げられる:に由来し得る。いくつかの実施形態において、上記免疫原は、Plasmodium属例えば、P.falciparum、P.vivax、P.malariaeもしくはP.ovaleに由来する寄生生物に対する免疫応答を誘発する。従って、本発明は、マラリアに対して免疫化するために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記免疫原は、Caligidae科に由来する寄生生物、特に、Lepeophtheirus属およびCaligus属に由来する寄生生物例えば、LepeophtheirussalmonisもしくはCaligusrogercresseyiのようなフナムシに対する免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態において、上記免疫原は、以下に対する免疫応答を誘発する:花粉アレルゲン樹木花粉、草本花粉、雑草の花粉、および草の花粉のアレルゲン;昆虫もしくは蛛形類のアレルゲン吸入、唾液および毒液のアレルゲン、例えば、ダニアレルゲン、ゴキブリアレルゲンおよび小虫アレルゲン、膜翅類毒液アレルゲンhymenoptheravenomallergen;動物の毛およびふけのアレルゲン例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ラット、マウスなどに由来する;ならびに食物アレルゲン例えば、グリアジン。樹木、草および草本に由来する重要な花粉アレルゲンは、Fagales、Oleales、Pinalesの分類学上の目およびスズカケノキ科platanaceaeカバノキBetula、ハンノキAlnus、ハシバミCorylus、シデCarpinusおよびオリーブOlea、シーダーCryptomeriaおよびJuniperus、プラタナスPlatanusが挙げられるが、これらに限定されない、Poalesの目属Lolium、Phleum、Poa、Cynodon、Dactylis、Holcus、Phalaris、Secale、およびSorghumの草が挙げられる、AsteralesおよびUrticalesの目属Ambrosia、Artemisia、およびParietariaの草本が挙げられるから由来するそのようなものである。他の重要な吸入アレルゲンは、属DermatophagoidesおよびEuroglyphusのチリダニ類、コナダニ類storagemite例えば、Lepidoglyphys、GlycyphagusおよびTyrophagus、ゴキブリ、小虫およびノミに由来するもの例えば、Blatella、Periplaneta、ChironomusおよびCtenocepphalides、ならびに哺乳動物例えば、ネコ、イヌおよびウマに由来するもの、毒液のアレルゲン刺咬昆虫stingingorbitinginsectに由来するようなもの、例えば、Hymenopteraの分類学上の目蜂Apidae、スズメバチVespidea、およびアリFormicoidaeが挙げられるが挙げられるに由来するものである。いくつかの実施形態において、上記免疫原は、以下から選択される腫瘍抗原である:aがん-精巣cancer-testis抗原、例えば、NY-ESO-1、SSX2、SCP1ならびにRAGE、BAGE、GAGEおよびMAGEファミリーのポリペプチド例えば、GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、およびMAGE-12、これらは、例えば、黒色腫、肺、頭頸部、NSCLC、乳房、胃腸、および膀胱の腫瘍に対処するために使用され得る;b変異した抗原、例えば、p53種々の固形腫瘍例えば、結腸直腸がん、肺がん、頭頸部がんと関連、p21/Ras例えば、黒色腫、膵臓がんおよび結腸直腸がんと関連、CDK4例えば、黒色腫と関連、MUM1例えば、黒色腫と関連、カスパーゼ-8例えば、頭頸部がんと関連、CIA0205例えば、膀胱がんと関連、HLA-A2-R1701、β-カテニン例えば、黒色腫と関連、TCR例えば、T細胞非ホジキンリンパ腫と関連、BCR-abl例えば、慢性骨髄性白血病と関連、トリオースホスフェートイソメラーゼ、KIA0205、CDC-27、およびLDLR-FUT;c過剰発現された抗原、例えば、ガレクチン4例えば、結腸直腸がんと関連、ガレクチン9例えば、ホジキン病と関連、プロテイナーゼ3例えば、慢性骨髄性白血病と関連、WT1例えば、種々の白血病と関連、炭酸脱水酵素例えば、腎がんと関連、アルドラーゼA例えば、肺がんと関連、PRAME例えば、黒色腫と関連、HER-2/neu例えば、乳がん、結腸がん、肺がんおよび卵巣がんと関連、マンマグロビン、α-フェトプロテイン例えば、肝がんと関連、KSA例えば、結腸直腸がんと関連、ガストリン例えば、膵臓がんおよび胃がんと関連、テロメラーゼ触媒タンパク質、MUC-1例えば、乳がんおよび卵巣がんと関連、G-250例えば、腎細胞がんと関連、p53例えば、乳がん、結腸がんと関連、ならびにがん胎児性抗原例えば、乳がん、肺がん、および胃腸管のがん例えば、結腸直腸がんと関連;d共通抗原sharedantigen、例えば、黒色腫-メラノサイト分化抗原、例えば、MART-1/MelanA、gp100、MC1R、メラノサイト刺激ホルモンレセプター、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質-1/TRP1およびチロシナーゼ関連タンパク質-2/TRP2例えば、黒色腫と関連;e前立腺関連抗原例えば、PAP、PSA、PSMA、PSH-P1、PSM-P1、PSM-P2例えば、前立腺がんと関連;fイムノグロブリンイディオタイプ例えば、骨髄腫およびB細胞リンパ腫と関連。特定の実施形態において、腫瘍免疫原としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:p15、Hom/Mel-40、H-Ras、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、エプスタインバーウイルス抗原、EBNA、ヒトパピローマウイルスHPV抗原E6およびE7を含む、B型肝炎ウイルスおよびC型肝炎ウイルスの抗原、ヒトTリンパ球向性ウイルス抗原、Mac-2結合タンパク質/シクロフィリンC関連タンパク質、TAAL6、TAG72、TLP、TPSなど。遺伝子治療いくつかの実施形態において、上記RNAは、遺伝子治療の状況において有用であるポリペプチドをコードする。このコードされるタンパク質は、RNAが自己複製する能力に関してコードされる任意のポリペプチドに加えて、提供される。従って、上記RNAは、酵素例えば、RNAに結合しない酵素、サイトカイン、膜貫通レセプター、イオンチャネル、ホルモン、血液タンパク質、もしくは抗体をコードし得る。上記RNAは、好ましくは、これらカテゴリーの中のヒトポリペプチドをコードする。目的の酵素としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:DNAポリメラーゼα、DNAポリメラーゼδ。目的のサイトカインとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない::インターロイキン1;インターロイキン2;インターロイキン4;インターロイキン6;インターロイキン7;インターロイキン12;インターロイキン17;GM-CSF;G-CSF;TNF-α;インターフェロンα;インターフェロンβ;インターフェロンγ;およびセクレトニューリンsecretoneurin。目的のレセプターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:レプチンレセプター;低密度リポタンパク質レセプター;骨形態形成タンパク質タイプ2レセプター;TNFレセプター;ゴナドトロピン放出ホルモンレセプター;ドパミンレセプター;ソマトスタチンレセプター;ビタミンDレセプター;ウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーターレセプター;トランスフェリンレセプターなど。目的のイオンチャネルとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:HCN2;HCN4;CFTR;Maxi-Kチャネルのα-サブユニット;KCNQ2;KCNQ3;およびKv1.5。目的のホルモンとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:絨毛性ゴナドトロピン;コルチコトロピン;エリスロポエチン;グルカゴン;IGF-1;オキシトシン;血小板由来増殖因子;カルシトニン;卵胞刺激ホルモン;黄体形成ホルモン;甲状腺刺激ホルモン;インスリン;ゴナドトロピン放出ホルモン;バソプレシン;ソマトスタチン;プロラクチン;副腎皮質刺激ホルモン;抗利尿ホルモン;甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン;オクトレオチド;ヒト成長ホルモン;リラキシン;成長ホルモン放出ホルモン;副甲状腺ホルモン;カルシトリオールcalcitrol;カルシフェロール;心房性ナトリウム利尿ペプチド;ガストリン;セクレチン;コレシストキニン;レプチン;神経ペプチドY;グレリン;アンギオテンシノーゲン;ドパミン;およびトロンボポエチン。ホルモンが、活性に複数のポリペプチドサブユニットを要する場合、上記RNAは、このようなサブユニットのうちの1個以上をコードし得る。例えば、上記RNAは、卵胞刺激ホルモンのαサブユニットおよび/もしくはβサブユニットをコードし得る。目的の血液タンパク質としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない:ヘモグロビン;フィブリノゲン;第VII因子;第VIIa因子;第VIII因子;第IX因子;フィブリノゲン;トロンビン;フォンビルブラント因子。薬学的組成物本発明のリポソームは、種々の疾患に対して被験体を免疫化するための薬学的組成物中の成分として有用である。これらの組成物は、代表的には、上記リポソームに加えて、薬学的に受容可能なキャリアを含む。薬学的に受容可能なキャリアの詳細な考察は、参考文献31において入手可能である。本発明の薬学的組成物は、1種以上の低分子免疫強化因子を含み得る。例えば、上記組成物は、TLR2アゴニスト例えば、Pam3CSK4、TLR4アゴニスト例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート例えば、E6020、TLR7アゴニスト例えば、イミキモド、TLR8アゴニスト例えば、レシキモドおよび/もしくはTLR9アゴニスト例えば、IC31を含み得る。任意のこのようなアゴニストは、理想的には、分子量<2000Daを有する。いくつかの実施形態において、このようなアゴニストもまた、リポソーム内に上記RNAと共に被包されるが、他の実施形態において、それらは、被包されない。本発明の薬学的組成物は、上記リポソームを、ただの水plainwater例えば、w.f.i.もしくは緩衝液例えば、リン酸緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、もしくはクエン酸緩衝液中に含み得る。緩衝塩は、代表的には、5~20mM範囲において含まれる。本発明の薬学的組成物は、5.0~9.5例えば、6.0~8.0のpHを有し得る。本発明の組成物は、張度を与えるために、ナトリウム塩例えば、塩化ナトリウムを含み得る。10±2mg/mlNaClの濃度が代表的である例えば、約9mg/ml。本発明の組成物は、金属イオンキレート化剤を含み得る。これらは、ホスホジエステル加水分解を加速し得るイオンを除去することによって、RNA安定性を延長し得る。従って、組成物は、EDTA、EGTA、BAPTA、ペンテト酸などのうちの1種以上を含み得る。このようなキレート化剤は、代表的には、10~500μM例えば、0.1mMで存在する。クエン酸塩例えば、クエン酸ナトリウムはまた、キレート化剤として作用し得るのと同時に、有利なことには、緩衝化活性も提供し得る。本発明の薬学的組成物は、200mOsm/kg~400mOsm/kg例えば、240~360mOsm/kg、もしくは290~310mOsm/kgの重量オスモル濃度を有し得る。本発明の薬学的組成物は、1種以上の保存剤例えば、チオメルサールもしくは2-フェノキシエタノールを含み得る。水銀非含有組成物が好ましく、保存剤非含有ワクチンが調製され得る。本発明の薬学的組成物は、好ましくは、無菌である。本発明の薬学的組成物は、好ましくは、非発熱性である例えば、1用量あたり<1EUエンドトキシンユニット、標準尺度、および好ましくは、1用量あたり<0.1EUを含む。本発明の薬学的組成物は、好ましくは、グルテンを含まない。本発明の薬学的組成物は、単位用量形態において調製され得る。いくつかの実施形態において、単位用量は、0.1~1.0ml例えば、約0.5mlの容積を有し得る。上記組成物は、注射物として調製され得る溶液もしくは懸濁物のいずれかとして。上記組成物は、微細スプレーを使用する、肺投与例えば、吸入器によるのために調製され得る。上記組成物は、鼻、耳もしくは眼への投与例えば、スプレーもしくは滴剤としてのために調製され得る。筋肉内投与のための注射物が、代表的である。組成物は、免疫学的に有効量のリポソーム、ならびに任意の他の成分必要であればを含む。免疫学的に有効な量とは、個体への投与量が、単一用量においてもしくはシリーズのうちの一部としてのいずれかで、処置もしくは予防に有効であることを意味する。この量は、処置されるべき個体の健康状態および身体的状態、処置されるべき個体の年齢、分類学上の群例えば、非ヒト霊長類、霊長類など、上記個体が抗体を合成する免疫系の能力、所望される防御の程度、ワクチンの処方、その処置している医師の医学的状況の評価、および他の関連因子に依存して変動する。上記量は、慣用的な治験を通じて決定され得る比較的広い範囲に入ると予測される。本発明の組成物のリポソームおよびRNA含有量は、一般に、1用量あたりのRNAの量に関して表される。好ましい用量は、≦100μgRNA例えば、10~100μg例えば、約10μg、25μg、50μg、75μgもしくは100μgを有するが、発現は、遙かに低いレベル、例えば、≦1μg/用量、≦100ng/用量、≦10ng/用量、≦1ng/用量などにおいてみられ得る。本発明はまた、本発明の薬学的組成物を含む送達デバイス例えば、シリンジ、ネブライザ、噴霧器、吸入器、皮膚パッチなどを提供する。このデバイスは、上記組成物を脊椎動物被験体に投与するために使用され得る。本発明のリポソームは、リボソームを含まない。処置方法および医学的使用参考文献12において開示される粒子とは対照的に、本発明のリポソームおよび薬学的組成物は、目的の免疫原に対する免疫応答を誘発するために、もしくは遺伝子治療のために、インビボでの使用に関する。本発明は、脊椎動物における免疫応答を惹起するための方法を提供し、上記方法は、本発明のリポソームもしくは薬学的組成物の有効量を投与する工程を包含する。上記免疫応答は、好ましくは、防御的であり、好ましくは、抗体および/もしくは細胞媒介性免疫を伴う。上記方法は、ブースター応答を惹起し得る。本発明はまた、脊椎動物における免疫応答を惹起するための方法において使用するための、本発明のリポソームもしくは薬学的組成物を提供する。本発明はまた、脊椎動物における遺伝子治療の方法において使用するための、本発明のリポソームもしくは薬学的組成物を提供する。本発明はまた、脊椎動物における免疫応答を惹起するための医薬の製造における本発明のリポソームの使用を提供する。これら使用および方法により上記脊椎動物における免疫応答を惹起することによって、上記脊椎動物は、上記で考察されるように、種々の疾患および/もしくは感染から例えば、細菌疾患および/もしくはウイルス疾患から防御され得る。上記リポソームおよび組成物は、免疫原性であり、より好ましくは、ワクチン組成物である。本発明に従うワクチンは、予防的であるすなわち、感染を妨ぐか、もしくは治療的であるすなわち、感染を処置するのいずれかであり得るが、代表的には、予防的である。上記脊椎動物は、好ましくは、哺乳動物、例えば、ヒトもしくは大型の獣医学的哺乳動物例えば、ウマ、ウシ、シカ、ヤギ、ブタである。上記ワクチンが予防的使用のためのものである場合、上記ヒトは、好ましくは、小児例えば、幼児もしくは乳児またはティーンエイジャーである;上記ワクチンが治療的使用のためのものである場合、上記ヒトは、好ましくは、ティーンエイジャーもしくは成人である。小児用に意図されたワクチンはまた、例えば、安全性、投与量、免疫原性などを評価するために、成人に投与され得る。本発明に従って調製されるワクチンは、小児および成人の両方を処置するために使用され得る。従って、ヒト患者は、1歳未満、5歳未満、1~5歳、5~15歳、15~55歳、もしくは少なくとも55歳であってもよい。上記ワクチンを受けるのに好ましい患者は、高齢者例えば、≧50歳、≧60歳、および好ましくは、≧65歳、若年者例えば、≦5歳、入院患者、ヘルスケアワーカー、軍従事者、および軍職員、妊婦、慢性疾患患者、もしくは免疫不全患者である。しかし、上記ワクチンは、これらの群にのみ適切であるわけではなく、より一般に、集団において使用され得る。本発明の組成物は、一般に、患者に直接投与される。直接送達は、非経口注射によって達成され得る例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮内、もしくは組織の間隙空間に;参考文献1とは異なり、舌内intraglossal注射は、代表的には、本発明で使用されない。代替の送達経路としては、直腸、経口例えば、錠剤、スプレー、口内、舌下、膣、局所、経真皮transdermalもしくは経皮transcutaneous、鼻内、眼、耳、肺もしくは他の粘膜投与が挙げられる。皮内および筋肉内投与は、2つの好ましい経路である。注射は、針を介してであってもよい例えば、皮下針が、針なしの注射が、代わりに使用され得る。代表的な筋肉内用量は、0.5mlである。本発明は、全身免疫および/もしくは粘膜免疫を誘発するために、好ましくは、増強された全身免疫および/もしくは粘膜免疫を誘発するために、使用され得る。投与量は、単一用量スケジュールもしくは複数用量スケジュールによってであり得る。複数用量は、一次免疫スケジュールにおいて、および/もしくはブースター免疫スケジュールにおいて使用され得る。複数用量スケジュールにおいて、種々の用量が、同じ経路もしくは異なる経路例えば、非経口の一次と粘膜のブースト、粘膜の一次と非経口のブーストなどによって与えられ得る。複数用量は、代表的には、少なくとも1週間間隔を空けて例えば、約2週間、約3週間、約4週間、約6週間、約8週間、約10週間、約12週間、約16週間など投与される。一実施形態において、複数用量は、生後約6週間、10週間、および14週間で例えば、世界保健機関のExpandedProgramonImmunisationEPIにおいてしばしば使用されるように、6週齢、10週齢および14週齢において投与され得る。代替の実施形態において、2回の一次用量が、約2ヶ月間間隔を空けて例えば、約7週間、8週間もしくは9週間間隔を空けて投与され、続いて、1回以上のブースター用量が、2回目の一次用量の約6ヶ月から1年後に例えば、2回目の一次用量の約6ヶ月後、8ヶ月後、10ヶ月後もしくは12ヶ月後投与される。さらなる実施形態において、3回の一次用量が、約2ヶ月間間隔を空けて例えば、約7週間、8週間もしくは9週間間隔を空けて投与され、続いて、1回以上のブースター用量が、3回目の一次用量の約6ヶ月後から1年後に例えば、3回目の一次用量の約6ヶ月後、8ヶ月後、10ヶ月後もしくは12ヶ月後投与される。化学用語および定義ハロ用語ハロゲンもしくはハロは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を含む。アルキル、アルキレン、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルなど用語アルキル、アルキレン、アルケニルおよびアルキニルとは、直鎖および分枝鎖の両方の非環式形態に言及するために本明細書で使用される。その環式類似体は、シクロアルキルなどといわれる。用語アルキルは、一価の直鎖状もしくは分枝状の、飽和非環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、アルキルは、C1-10アルキルであり、別の実施形態において、C1-6アルキルであり、別の実施形態において、C1-4アルキル例えば、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピルもしくはt-ブチル基である。用語シクロアルキルとは、一価で飽和の環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、シクロアルキルは、C3-10シクロアルキルであり、別の実施形態において、C3-6シクロアルキル例えば、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。用語アルコキシとは、アルキル-O-を意味する。用語アルケニルは、少なくとも1個の炭素-炭素二重結合を有し、そして一実施形態において、炭素-炭素三重結合を有さない、一価で、直鎖状もしくは分枝状の、不飽和の非環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、アルケニルは、C2-10アルケニルであり、別の実施形態において、C2-6アルケニルであり、別の実施形態において、C2-4アルケニルである。用語シクロアルケニルは、少なくとも1個の炭素-炭素二重結合を有し、そして一実施形態において、炭素-炭素三重結合を有さない、一価の、部分不飽和の環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、シクロアルケニルは、C3-10シクロアルケニルであり、別の実施形態において、C5-10シクロアルケニル例えば、シクロヘキセニルもしくはベンゾシクロヘキシルである。用語アルキニルは、少なくとも1個の炭素-炭素三重結合を有し、そして一実施形態において、炭素-炭素二重結合を有さない、一価の、直鎖状もしくは分枝状の、不飽和非環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、アルキニルは、C2-10アルキニルであり、別の実施形態において、C2-6アルキニルであり、別の実施形態において、C2-4アルキニルである。用語シクロアルキニルは、少なくとも1個の炭素-炭素三重結合を有し、そして一実施形態において、炭素-炭素二重結合を有さない、一価の、部分不飽和の環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、シクロアルキニルは、C3-10シクロアルケニルであり、別の実施形態において、C5-10シクロアルキニルである。用語アルキレンは、二価の、直鎖状もしくは分枝状の、飽和非環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、アルキレンは、C1-10アルキレンであり、別の実施形態において、C1-6アルキレンであり、別の実施形態において、C1-4アルキレン例えば、メチレン、エチレン、n-プロピレン、i-プロピレンもしくはt-ブチレン基である。用語アルケニレンは、少なくとも1個の炭素-炭素二重結合を有し、そして一実施形態において、炭素-炭素三重結合を有さない、二価の、直鎖状もしくは分枝状の、不飽和非環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、アルケニレンは、C2-10アルケニレンであり、別の実施形態において、C2-6アルケニレンであり、別の実施形態において、C2-4アルケニレンである。用語アルキニレンは、少なくとも1個の炭素-炭素三重結合を有し、そして一実施形態において、炭素-炭素二重結合を有さない、二価の、直鎖状もしくは分枝状の不飽和非環式ヒドロカルビル基を含む。一実施形態において、アルキニレンは、C2-10アルキニレンであり、別の実施形態において、C2-6アルキニレンであり、別の実施形態において、C2-4アルキニレンである。ヘテロアルキルなど用語ヘテロアルキルは、最大6個までの炭素原子、一実施形態においては、最大5個までの炭素原子、別の実施形態においては、最大4個までの炭素原子、別の実施形態においては、最大3個までの炭素原子、別の実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOq、N、POrもしくはSiそして好ましくは、O、SOqもしくはNで独立して各々置換されているが、アルキル炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、アルキル基を含む。上記ヘテロアルキル基は、C連結もしくはヘテロ連結され得る。すなわち、上記ヘテロアルキル基は、炭素原子を介して、またはO、SOq、N、POrもしくはSiを介して、分子の残りに連結され得る。用語ヘテロシクロアルキルは、最大6個までの炭素原子、一実施形態においては、最大5個までの炭素原子、別の実施形態においては、最大4個までの炭素原子、別の実施形態においては、最大3個までの炭素原子、別の実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、シクロアルキル炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、シクロアルキル基を含む。ヘテロシクロアルキル基の例としては、以下が挙げられる:オキシラニル、チアラニル、アジリジニル、オキセタニル、チアタニル、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジニル、1,4-ジオキサニル、1,4-オキサチアニル、モルホリニル、1,4-ジチアニル、ピペラジニル、1,4-アザチアニル、オキセパニル、チエパニル、アゼパニル、1,4-ジオキセパニル、1,4-オキサチエパニル、1,4-オキサアゼパニル、1,4-ジチエパニル、1,4-チエアゼパニルおよび1,4-ジアゼパニル。上記ヘテロシクロアルキル基は、C連結されてもよいし、N連結されてもよい。すなわち、上記ヘテロシクロアルキル基は、炭素原子を介して、もしくは窒素原子を介して、分子の残りに連結され得る。用語ヘテロアルケニルは、最大3個までの炭素原子、一実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、アルケニル炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、アルケニル基を含む。上記ヘテロアルケニル基は、C連結されてもよいし、ヘテロ連結されてもよい。すなわち、上記ヘテロアルケニル基は、炭素原子を介して、またはO、SOqもしくはNを介して、分子の残りに連結され得る。用語ヘテロシクロアルケニルは、最大3個までの炭素原子、一実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、シクロアルケニル炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、シクロアルケニル基を含む。ヘテロシクロアルケニル基の例としては、以下が挙げられる:3,4-ジヒドロ-2H-ピラニル、5-6-ジヒドロ-2H-ピラニル、2H-ピラニル、1,2,3,4-テトラヒドロピリジニルおよび1,2,5,6-テトラヒドロピリジニル。上記ヘテロシクロアルケニル基は、C連結されてもよいし、N連結されてもよい。すなわち、上記ヘテロシクロアルケニル基は、炭素原子を介して、もしくは窒素原子を介して、分子の残りに連結され得る。用語ヘテロアルキニルは、最大3個までの炭素原子、一実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、アルキニル炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、アルキニル基を含む。上記ヘテロアルキニル基は、C連結されてもよいし、ヘテロ連結されてもよい。すなわち、上記ヘテロアルキニル基は、炭素原子を介して、またはO、SOqもしくはNを介して、分子の残りに連結され得る。用語ヘテロシクロアルキニルは、最大3個までの炭素原子、一実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、シクロアルキニル炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、シクロアルキニル基を含む。上記ヘテロシクロアルケニル基は、C連結されてもよいし、N連結されてもよい。すなわち、上記ヘテロシクロアルケニル基は、炭素原子を介して、もしくは窒素原子を介して、分子の残りに連結され得る。用語ヘテロアルキレンは、最大3個までの炭素原子、一実施形態において、最大2個までの炭素原子、別の実施形態において、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、アルキレン炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、アルキレン基を含む。用語ヘテロアルケニレンは、最大3個までの炭素原子、一実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、アルケニレン炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、アルケニレン基を含む。用語ヘテロアルキニレンは、最大3個までの炭素原子、一実施形態においては、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子が、O、SOqもしくはNで各々独立して置換されているが、アルキニレン炭素原子のうちの少なくとも1個は残っている、アルキニレン基を含む。アリール用語アリールは、一価の芳香族環式ヒドロカルビル基例えば、フェニルもしくはナフチル例えば、1-ナフチルもしくは2-ナフチルを含む。一般に、上記アリール基は、単環式もしくは多環式の縮合環芳香族基であり得る。好ましいアリールは、C6-C14アリールである。アリール基の他の例は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、as-インダセン、s-インダセン、インデン、ナフタレン、オバレン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレンおよびルビセンの一価誘導体である。用語アリールアルキルは、アリール基例えば、ベンジルで置換されたアルキルを意味する。用語アリーレンは、二価の芳香族環式ヒドロカルビル基例えば、フェニレンを含む。一般に、上記アリーレン基は、単環式もしくは多環式の縮合環芳香族基であり得る。好ましいアリーレンは、C6-C14アリーレンである。アリーレン基の他の例は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、as-インダセン、s-インダセン、インデン、ナフタレン、オバレン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレンおよびルビセンの二価誘導体である。ヘテロアリール用語ヘテロアリールは、O、S、NおよびNRNから独立して選択される1個以上のヘテロ原子を追加的に含む、一価ヘテロ芳香族の環式ヒドロカルビル基であって、ここでRNは、以下に定義されるおよび一実施形態においては、Hもしくはアルキル例えば、C1-6アルキルである。一般に、上記ヘテロアリール基は、単環式もしくは多環式例えば、二環式縮合環ヘテロ芳香族基であり得る。一実施形態において、ヘテロアリール基は、5~13個の環員好ましくは、5~10員、ならびにO、S、NおよびNRNから独立して選択される1個、2個、3個もしくは4個の環ヘテロ原子を含む。一実施形態において、ヘテロアリール基は、5員、6員、9員もしくは10員、例えば、5員の単環式、6員の単環式、9員の縮合二環式環もしくは10員の縮合二環式環であり得る。単環式ヘテロ芳香族基は、5~6環員、ならびにO、S、NもしくはNRNから選択される1個、2個、3個もしくは4個のヘテロ原子を含むヘテロ芳香族基を包含する。一実施形態において、5員の単環式ヘテロアリール基は、-NRN-基、-O-原子もしくは-S-原子である1個の環員、および必要に応じて、=N-原子である1~3個の環員例えば、1個もしくは2個の環員を含むここで上記5個の環員のうちの残りは、炭素原子である。5員の単環式ヘテロアリール基の例は、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、1,2,3トリアゾリル、1,2,4トリアゾリル、1,2,3オキサジアゾリル、1,2,4オキサジアゾリル、1,2,5オキサジアゾリル、1,3,4オキサジアゾリル、1,3,4チアジアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、1,3,5トリアジニル、1,2,4トリアジニル、1,2,3トリアジニルおよびテトラゾリルである。6員の単環式ヘテロアリール基の例は、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニルおよびピラジニルである。一実施形態において、6員の単環式ヘテロアリール基は、=N-原子である1個もしくは2個の環員を含むここで上記6個の環員のうちの残りは、炭素原子である。二環式のヘテロ芳香族基としては、9~13個の環員およびO、S、NもしくはNRNから選択される1個、2個、3個もしくは4個以上のヘテロ原子を含む縮合環のヘテロ芳香族基が挙げられる。一実施形態において、9員の二環式ヘテロアリール基は、-NRN-基、-O-原子もしくは-S-原子である1個の環員、および必要に応じて、=N-原子である1~3個の環員例えば、1個もしくは2個の環員を含むここで上記9個の環員のうちの残りは、炭素原子である。9員の縮合環の二環式ヘテロアリール基の例は、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ピロロ[2,3-b]ピリジニル、ピロロ[2,3-c]ピリジニル、ピロロ[3,2-c]ピリジニル、ピロロ[3,2-b]ピリジニル、イミダゾ[4,5-b]ピリジニル、イミダゾ[4,5-c]ピリジニル、ピラゾロ[4,3-d]ピリジニル、ピラゾロ[4,3-c]ピリジニル、ピラゾロ[3,4-c]ピリジニル、ピラゾロ[3,4-b]ピリジニル、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、インドリニニル、イミダゾ[1,2-a]ピリジニル、イミダゾ[1,5-a]ピリジニル、ピラゾロ[1,2-a]ピリジニル、ピロロ[1,2-b]ピリダジニルおよびイミダゾ[1,2-c]ピリミジニルである。一実施形態において、10員の二環式ヘテロアリール基は、=N-原子である1~3個の環員を含むここで上記10個の環員のうちの残りは、炭素原子である。10員の縮合環の二環式ヘテロアリール基の例は、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、1,6-ナフチリジニル、1,7-ナフチリジニル、1,8-ナフチリジニル、1,5-ナフチリジニル、2,6-ナフチリジニル、2,7-ナフチリジニル、ピリド[3,2-d]ピリミジニル、ピリド[4,3-d]ピリミジニル、ピリド[3,4-d]ピリミジニル、ピリド[2,3-d]ピリミジニル、ピリド[2,3-b]ピラジニル、ピリド[3,4-b]ピラジニル、ピリミド[5,4-d]ピリミジニル、ピラジノ[2,3-b]ピラジニルおよびピリミド[4,5-d]ピリミジニルである。用語ヘテロアリールアルキルとは、ヘテロアリール基で置換されたアルキルを意味する。用語ヘテロアリーレンは、O、S、NおよびNRNから独立して選択される1個以上のヘテロ原子を追加的に含む、二価のヘテロ芳香族の環式ヒドロカルビル基を含み、ここでRNは、以下で定義されるおよび一実施形態においては、Hもしくはアルキル例えば、C1-6アルキルである。一般に、上記ヘテロアリーレン基は、単環式もしくは多環式例えば、二環式縮合環ヘテロ芳香族基であり得る。一実施形態において、ヘテロアリーレン基は、5~13個の環員好ましくは、5~10員、ならびにO、S、NおよびNRNから独立して選択される1個、2個、3個もしくは4個の環ヘテロ原子を含む。一実施形態において、ヘテロアリーレン基は、5員、6員、9員もしくは10員、例えば、5員の単環式、6員の単環式、9員の縮合環二環式もしくは10員の縮合環二環式であり得る。用語ヘテロアリーレンは、上記で考察されるヘテロアリール基の各々の二価の誘導体を含む。用語アリール、芳香族、ヘテロアリールおよびヘテロ芳香族はまた、部分的に還元されている基を含む。従って、例えば、ヘテロアリールは、環のうちの1個が、飽和環へと還元された縮合種例えば、1,2,3,4-テトラヒドロ-1,8-ナフチリジン-2-イルを含む。存在しない基式I中の基a、bもしくはcが存在しない場合、単結合が代わりに存在すること、すなわち、基a、bもしくはcのうちのいずれかの側にある2個の基が、互いに直接結合されることを意味する。一般別段明示的に示されなければ、基の組み合わせが、1個の部分として本明細書で言及される場合例えば、アリールアルキル、その最後に言及される基は、上記部分を分子の残りに結合する原子を含む。O、SOq、NもしくはPOrで置換されているアルキル基もしくは他の基の炭素原子に対して言及がなされる場合、が、ここでEは、Hではない場合があるによって置換されているか;-CH=が、-N=もしくは-POr=によって置換されているか;≡C-Hが、≡Nもしくは≡POrによって置換されているか;または-CH2-が、-O-、-SOq-、-NRN-もしくは-POrRN-によって置換されていることが意図され、ここでRNは、H、あるいは必要に応じて置換された、C1-6アルキル、C1-6ヘテロアルキル、C3-6シクロアルキル、C3-6ヘテロシクロアルキル、C2-6アルケニル、C2-6ヘテロアルケニル、C3-6シクロアルケニル、C3-6ヘテロシクロアルケニル、フェニル、または5個もしくは6個の環員を含むヘテロアリールである。RNは、好ましくは、H、C1-6アルキルもしくはC3-6シクロアルキルである。qは、独立して、0、1もしくは2である。一実施形態において、qは、0である。rは、独立して、0もしくは1である。一実施形態において、rは、0である。Siで置換されている炭素原子に対して言及がなされる場合、上記炭素原子が、ケイ素原子で交換されているが、他の点で、結合は同じままであることが意図される。従って、例えば、-CH2-は、-SiH2-で置換され;-CH=は、-SiH=で置換され;そして≡C-Hは、≡Si-Hで置換される。明瞭にするために、上記のヘテロ原子含有基例えば、ヘテロアルキルなどに関して、炭素原子の数が与えられる場合例えば、C3-6ヘテロアルキル、3~6個の鎖炭素原子のうちの1個以上が、O、SOqもしくはNで置換されているC3-6アルキルに基づく基が意図される。よって、C3-6ヘテロアルキル基は、例えば、3~6個未満の鎖炭素原子を含む。別の例として、ピリジル基は、これが5個の炭素原子を含むとしても、C6ヘテロアリール基として分類される。置換本発明の化合物の基例えば、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロシクロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレンアリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルもしくはヘテロアリールヘテロアルキル基などは、置換されていてもよいし、置換されていなくてもよく、一実施形態においては、置換されていない。代表的には、置換は、置換基での水素原子の観念上の置換もしくは=Oによる置換の場合には、2個の水素原子を含む。置換される場合、一般に、各基には、1~5個の置換基が存在し、一実施形態においては、1~3個の置換基、一実施形態においては、1個もしくは2個の置換基、一実施形態においては、1個の置換基が存在する。一実施形態は、同じ原子上に1個超の置換基を含む例えば、アセタール基。一実施形態において、上記置換基は、独立して、Sub1もしくはSub2一実施形態においては、Sub2であり、ここで:Sub1は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、-NO2、-CN、-NRs2O-、-CO2H、-CO2Rs、-SO3H、-SORs、-SO2Rs、-SO3Rs、-OC=OORs、-C=OH、-C=ORs、-OC=ORs、=O、-NRs2、-C=ONH2、-C=ONRs2、-NRsC=OORs、-NRsC=ONRs2、-OC=ONRs2、-NRsC=ORs、-C=SNRs2、-NRsC=SRs、-SO2NRs2、-NRsSO2Rs、-NRsC=SNRs2、-NRsSO2NRs2、-Rsもしくは-ZsRsであり、ここで;Zsは、独立して、O、SもしくはNRsであり;Rsは、独立して、H、またはC1-6アルキル、C1-6ヘテロアルキル、-Alkaf-C3-6シクロアルキル、-Alkaf-C3-6ヘテロシクロアルキル、C2-6アルケニル、C2-6ヘテロアルケニル、-Alkaf-C3-6シクロアルケニル、-Alkaf-C3-6ヘテロシクロアルケニル、C2-6アルキニル、C2-6ヘテロアルキニル、-Alkaf-C6-14アリール、-Alkaf-C6-14アリールもしくは-Alkaf-ヘテロアリールここでヘテロアリールは、5~13個の環員を含むであり、ここでfは、0もしくは1であり;Alkaは、C1-6アルキレンもしくはC1-6ヘテロアルキレンであり;そしてRsは、1~3個の置換基Sub2によってそれ自体が必要に応じて置換され一実施形態においては、置換されていない;Sub2は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、-NO2、-CN、-NC1-6アルキル2O-、-CO2H、-CO2C1-6アルキル、-SO3H、-SOC1-6アルキル、-SO2C1-6アルキル、-SO3C1-6アルキル、-OC=OOC1-6アルキル、-C=OH、-C=OC1-6アルキル、-OC=OC1-6アルキル、=O、-NC1-6アルキル2、-C=ONH2、-C=ONC1-6アルキル2、-NC1-6アルキルC=OOC1-6アルキル、-NC1-6アルキルC=ONC1-6アルキル2、-OC=ONC1-6アルキル2、-NC1-6アルキルC=OC1-6アルキル、-C=SNC1-6アルキル2、-NC1-6アルキルC=SC1-6アルキル、-SO2NC1-6アルキル2、-NC1-6アルキルSO2C1-6アルキル、-NC1-6アルキルC=SNC1-6アルキル2、-NC1-6アルキルSO2NC1-6アルキル2、-C1-6アルキル、-C1-6ヘテロアルキル、-C3-6シクロアルキル、-C3-6ヘテロシクロアルキル、-C2-6アルケニル、-C2-6ヘテロアルケニル、-C3-6シクロアルケニル、-C3-6ヘテロシクロアルケニル、-C2-6アルキニル、-C2-6ヘテロアルキニル、-C6-14アリール、-C5-13ヘテロアリール、-Zt-C1-6アルキル、-Zt-C3-6シクロアルキル、-Zt-C2-6アルケニル、-Zt-C3-6シクロアルケニル、もしくは-Zt-C2-6アルキニルであり;そしてZtは、独立して、O、S、NHもしくはNC1-6アルキルである。Sub1におけるRsは、1~3個の置換基Sub2によって必要に応じて置換され得る一方、Sub2は、置換されない。しかし、一実施形態において、Rsは、置換されない。一実施形態において、Rsは、HもしくはC1-6アルキル1~3個の置換基Sub2で必要に応じて置換されるである。一実施形態において、Sub2は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、-NO2、-CN、-NC1-6アルキル2O-、-CO2H、-SO3H、-SOC1-6アルキル、-SO2C1-6アルキル、-C=OH、-C=OC1-6アルキル、=O、-NC1-6アルキル2、-C=ONH2、-C1-6アルキル、-C3-6シクロアルキル、-C3-6ヘテロシクロアルキル、-Zt-C1-6アルキルもしくは-Zt-C3-6シクロアルキルである。一実施形態において、置換される基が非環式例えば、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニルなどである場合、Sub1は、-Rsではなく、Sub2は、-C1-6アルキル、-C1-6ヘテロアルキル、-C2-6アルケニル、-C2-6ヘテロアルケニル、-C2-6アルキニル、-C2-6ヘテロアルキニルではない。Sub2以外の基が、置換されてもよい少なくとも2個の位置を有する場合、上記基は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレンもしくはヘテロアルキニレン鎖一実施形態において、1~6個の原子、さらなる実施形態においては、3~6個の原子、およびさらなる実施形態においては、3個もしくは4個の原子を含むの両方の末端によって置換されて、環式部分を形成してもよい。その鎖は、1~3個の置換基Sub2で必要に応じて置換される。一実施形態において、その鎖は、置換されない。従って、用語、必要に応じて置換された、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル、ヘテロシクロアルキニル、アリールおよびヘテロアリールは、縮合種を含む。例えば、必要に応じて置換されたシクロアルキルは、2個のシクロアルキル環が縮合している種を含み、必要に応じて置換されたヘテロアリールは、ヘテロシクロアルキル環が上記芳香族環に縮合されている種を含む例えば、5,6,7,8-テトラヒドロ-1,8-ナフチリジン-2-イル。Sub2以外の基が、2回置換され得る原子を有する場合、その原子は、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレンもしくはヘテロアルキニレン鎖一実施形態においては、2~8個の原子、さらなる実施形態においては、3~6個の原子、およびさらなる実施形態においては、4個もしくは5個の原子を含むの両方の末端によって置換されて、環式部分を形成し得る。その鎖は、1~3個の置換基Sub2によって必要に応じて置換される。一実施形態において、その鎖は、置換されない。従って、用語、必要に応じて置換された、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル、ヘテロシクロアルキニル、アリールおよびヘテロアリールは、スピロ種を含む。明瞭さのために、基がヘテロ原子を含む場合、置換基は、上記ヘテロ原子に結合され得る。従って、例えば、必要に応じて置換されたヘテロアルキルは、-CH2-NSub1-CH2-、-CHSub1-NH-CH2-および-CHSub1-NSub1-CH2-などを含む。修飾語句modifierの用語列挙の前に修飾語句が置かれている場合、上記修飾語句は、上記列挙中の項目の各々に適用されると理解されるべきであると解釈される。例えば、語句必要に応じて改変された、C3-20-ヘテロシクロアルキル、C3-20-ヘテロシクロアルケニル、C3-20-ヘテロシクロアルキニルもしくはC5-20-ヘテロアリール基とは、上記列挙中の4つの項目の各々、すなわち、上記C3-20-ヘテロシクロアルキル基、上記C3-20-ヘテロシクロアルケニル基、上記C3-20-ヘテロシクロアルキニル基および上記C6-20-ヘテロアリール基が、必要に応じて置換されていてもよいことを意味する。第1の修飾語句によって基が特徴付けられ、続いて、後ろで、同じ基が、続く修飾語句によって特徴付けられる場合、上記基は、両方の修飾語句によって同時に特徴付けられることが意味される。例えば、基が、C3-20-ヘテロシクロアルキニル第1の修飾語句基として記載され、その後、同じ基が、C5-16続く修飾語句基として記載される場合、C5-16ヘテロシクロアルキニル基であることが意味される。ステロイド本明細書で使用される場合、用語ステロイドとは、以下の構造を含む任意の基に言及するその構造は、ステロイド骨格として本明細書で言及される。単に例示目的で、ステロイド骨格を、完全飽和として上記で描いた。しかし、用語ステロイドはまた、上記ステロイド骨格中に不飽和が存在する場合を包含すると解釈される。例えば、用語ステロイドは、完全不飽和マンキュード基本骨格を含む基を包含する15H-シクロペンタ[a]フェナントレン。用語ステロイドはまた、部分不飽和ステロイド骨格を含む基を包含する。用語ステロイドはまた、上記ステロイド骨格のseco誘導体、すなわち、開環がもたらされた基;それぞれ、環縮小および環拡大を伴う上記ステロイド骨格のノルおよびホモ誘導体D.Hellwinkel,SystemicNomenclatureofOrganicChemistry,Springer発行,2001,ISBN:3-540-41138-0,secoについては203ページ、ならびにノルおよびホモについては204ページを参照のことを包含する。しかし、一実施形態において、このようなseco誘導体は、用語ステロイドによっては包含されない。別の実施形態において、このようなノル誘導体は、用語ステロイドによっては包含されない。別の実施形態において、このようなホモ誘導体は、用語ステロイドによっては包含されない。従って、一実施形態において、このようなseco、ノルおよびホモ誘導体は、用語ステロイドによっては包含されない。用語ステロイドはまた、ステロイド骨格と表示された構造における炭素原子のうちの1個以上が、ヘテロ原子によって置換されている場合を包含する。1つのこのような実施形態において、最大6個までの炭素原子、一実施形態においては、最大5個までの炭素原子、別の実施形態においては、最大4個までの炭素原子、別の実施形態において、最大3個までの炭素原子、別の実施形態において、最大2個までの炭素原子、別の実施形態においては、1個の炭素原子は、各々、O、SOq、N、POrもしくはSiおよび好ましくは、O、SOqもしくはNによって独立して置換されている。しかし、一実施形態において、用語ステロイドは、上記ステロイド基本骨格が、ヘテロ原子を含まない種を包含する。ステロイド環系は、以下に示される慣例に従って番号づけられる。用語ステロイドは、ステロール、ステロイドホルモン、胆汁酸および胆汁酸塩を包含する。ステロールは、A環の3位においてヒドロキシル基を有する任意のステロイドである。不飽和標準的使用によれば、ω-3位とは、鎖のメチル末端からの3番目の結合に言及する;ω-6位とは、鎖のメチル末端からの6番目の結合に言及し、ω-9位は、鎖のメチル末端からの9番目の結合に言及する。一般本発明の粒子は、別段示されなければ、化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の、当該分野の技術内の従来の方法を使用する。このような技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、参考文献32~38などを参照のこと。用語含むcomprisingは、含むincludingならびにからなるconsistingを包含し、例えば、Xを含むcomprising組成物は、Xから専らなってもよいし、何かさらなるものを含んでいてもよい例えば、XY。数値xに関して用語約とは、選択的であり、例えば、x±10を意味する。語句実質的にとは、完全にを排除せず、例えば、Yを実質的に含まない組成物は、Yを完全に含まない場合もある。必要な場合、語句実質的には、本発明の定義から省略され得る。電荷、カチオン、アニオン、両性性イオンなどへの言及は、pH7において取り扱われる。TLR3は、Toll様レセプター3である。これは、先天的免疫系において重要な役割を果たす一回膜貫通レセプターである。既知のTLR3アゴニストは、ポリI:Cを含む。TLR3は、このレセプターをコードする遺伝子の承認されたHGNC名であり、その特有のHGNCIDは、HGNC:11849である。ヒトTLR3遺伝子のRefSeq配列は、GI:2459625である。TLR7は、Toll様レセプター7である。これは、先天的免疫系において重要な役割を果たす一回膜貫通レセプターである。既知のTLR7アゴニストは、例えば、イミキモドを含む。TLR7は、このレセプターをコードする遺伝子の承認されたHGNC名であり、その特有のHGNCIDは、HGNC:15631である。ヒトTLR7遺伝子のRefSeq配列は、GI:67944638である。TLR8は、Toll様レセプター8である。これは、先天的免疫系において重要な役割を果たす一回膜貫通レセプターである。既知のTLR8アゴニストは、例えば、レシキモドを含む。TLR8は、このレセプターをコードする遺伝子の承認されたHGNC名であり、その特有のHGNCIDは、HGNC:15632である。ヒトTLR8遺伝子のRefSeq配列は、GI:20302165である。RIG-I様レセプターRLRファミリーは、先天的免疫系において重要な役割を果たす種々のRNAヘリカーゼを含む[39]。RLR-1RIG-Iもしくはレチノイン酸誘導性遺伝子Iとしても公知は、そのN末端付近にある2つのカスパーゼリクルートドメインを有する。上記RLR-1ヘリカーゼをコードする遺伝子の承認されたHGNC名は、DDX58DEADAsp-Glu-Ala-Aspボックスポリペプチド58DEADAsp-Glu-Ala-Aspboxpolypeptide58についてであり、その特有のHGNCIDは、HGNC:19102である。ヒトRLR-1遺伝子のRefSeq配列は、GI:77732514である。RLR-2MDA5もしくは黒色腫分化関連遺伝子5melanomadifferentiation-associatedgene5としても公知はまた、そのN末端付近にある2つのカスパーゼリクルートドメインを有する。RLR-2ヘリカーゼをコードする遺伝子の承認されたHGNC名は、IFIH1ヘリカーゼCドメイン1で誘導されるインターフェロンinterferoninducedwithhelicaseCdomain1についてであり、特有のHGNCIDは、HGNC:18873である。ヒトRLR-2遺伝子のRefSeq配列は、GI:27886567である。RLR-3LGP2もしくは遺伝学および生理学研究室2laboratoryofgeneticsandphysiology2としても公知は、カスパーゼリクルートドメインを有さない。RLR-3ヘリカーゼをコードする遺伝子の承認されたHGNC名は、DHX58DEXHAsp-Glu-X-Hisボックスポリペプチド58についてであり、特有のHGNCIDは、HGNC:29517である。ヒトRLR-3遺伝子のRefSeq配列は、GI:149408121である。PKRは、二本鎖RNA依存性プロテインキナーゼである。これは、先天的免疫系において重要な役割を果たす。EIF2AK2真核生物翻訳開始因子2-αキナーゼ2eukaryotictranslationinitiationfactor2-alphakinase2については、この酵素をコードする遺伝子の承認されたHGNC名であり、その特有のHGNCIDは、HGNC:9437である。ヒトPKR遺伝子のRefSeq配列は、GI:208431825である。発明を実施するための態様RNAレプリコン種々のレプリコンは、以下で使用される。一般に、これらは、ベネズエラウマ脳炎ウイルスVEEVに由来する非構造タンパク質、シンドビスウイルス由来のパッケージングシグナル、およびシンドビスウイルスもしくはVEEV変異体に由来する3’UTRを有するハイブリッドアルファウイルスゲノムに基づく。上記レプリコンは、約10kb長であり、ポリAテールを有する。アルファウイルスレプリコンをコードするプラスミドDNA名称:pT7-mVEEV-FL.RSVFもしくはA317;pT7-mVEEV-SEAPもしくはA306;pSP6-VCR-GFPもしくはA50を、インビボでのRNA合成のテンプレートとして供した。上記レプリコンは、RNA複製に必要とされるアルファウイルス遺伝的エレメントを含むが、粒子アセンブリに必要な遺伝子産物をコードするエレメントを欠いている;構造タンパク質は、代わりに、目的のタンパク質レポーター例えば、SEAPもしくはGFPまたは免疫原例えば、全長RSVFタンパク質のいずれかによって置き換えられるので、上記レプリコンは、感染性粒子の生成を誘導できない。上記アルファウイルスcDNAの上流にあるバクテリオファージT7もしくはSP6プロモーターは、インビトロで上記レプリコンRNAの合成を促進し、上記ポリAテールの直ぐ下流にあるデルタ型肝炎ウイルスHDVリボザイムは、その自己切断活性を介して正確な3’末端を生成する。適切な制限エンドヌクレアーゼで上記HDVリボザイムの下流で上記プラスミドDNAを直線状にした後に、ランオフ転写物run-offtranscriptを、T7もしくはSP6バクテリオファージ由来DNA依存性RNAポリメラーゼを使用して、インビトロで合成した。転写を、製造業者Ambionによって提供される指示書に従って、ヌクレオシドトリホスフェートATP、CTP、GTPおよびUTPの各々の7.5mMT7RNAポリメラーゼもしくは5mMSP6RNAポリメラーゼの存在下で、37°Cにおいて2時間にわたって行った。転写の後、上記テンプレートDNAを、TURBODNaseAmbionで消化した。上記レプリコンRNAを、LiClで沈殿させ、ヌクレアーゼ非含有水中で再構成した。キャップのないRNAを、ScriptCapm7GキャッピングシステムEpicentreBiotechnologiesを使用して、ユーザーマニュアルに概説されるとおり、ワクシニアキャッピング酵素VCEで転写後にキャップした;このようにキャップしたレプリコンに、vの接頭文字を付ける例えば、vA317は、VCEによってキャップされたA317レプリコンである。転写後キャップされたRNAを、LiClで沈殿させ、ヌクレアーゼ非含有水中で再構成した。上記RNAサンプルの濃度を、OD260nmを測定することによって決定した。上記インビトロ転写物の完全性を、変性アガロースゲル電気泳動によって確認した。DlinDMAベースのリポソームにおける被包RNAを、実質的に、参考文献7および40の方法によって作製したリポソーム中に被包した。上記リポソームを、10DSPC両性イオン性、40DlinDMAカチオン性、48コレステロールおよび2PEG結合体化DMG2kDaPEGから作製した。これら割合は、総リポソーム中のモルに言及する。DlinDMA1,2-ジリノレイルオキシ-N,N-ジメチル-3-アミノプロパンを、参考文献2の手順を使用して合成した。DSPC1,2-ジアステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリンを、Genzymeから購入した。コレステロールを、Sigma-Aldrichから得た。PEG結合体化DMG1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシポリエチレングリコール,アンモニウム塩、DOTAP1,2-ジオレオイル-3-トリメチルアンモニウム-プロパン,塩化物塩およびDC-chol3β-[N-N’,N’-ジメチルアミノエタン-カルバモイル]コレステロールヒドロクロリドは、AvantiPolarLipidsからであった。簡潔には、脂質をエタノール2ml中に溶解し、RNAレプリコンを、緩衝液2ml,100mMクエン酸ナトリウム,pH6中に溶解し、これらを2mlの緩衝液と混合し、続いて、1時間平衡化させた。上記混合物を6mlの緩衝液で希釈し、次いで、濾過した。得られた生成物は、リポソームを含み、約95の被包効率であった。図2は、これらの方法によって調製されるリポソームの例示的な電子顕微鏡写真である。これらリポソームは、全長RSVF抗原をコードする被包化RNAを含む。1つのバッチの動的光散乱は、平均直径141nm強度によるZavもしくは78nm数でを示した。1つの特定の被包の方法において、新鮮な脂質ストック溶液を、エタノール中で調製した。37mgのDlinDMA、11.8mgのDSPC、27.8mgのコレステロールおよび8.07mgのPEG-結合体化DMGを秤量し、7.55mLのエタノール中に溶解した。3種の異なる結合体化PEGを使用した:PEG-1000、PEG-2000、もしくはPEG-3000。新たに調製した脂質ストック溶液を、37°Cにおいて約15分間にわたって穏やかに振盪して、均質な混合物を形成した。次いで、226.7μLの上記ストックを、1.773mLエタノールに添加して、作業脂質ストック溶液2mLを作製した。RNAの2mL作業溶液をまた、100mMクエン酸緩衝液pH6中の約1μg/μLのストック溶液から調製した。3つの20mLガラスバイアル撹拌子有りを、RNaseAway溶液ですすぎ、使用前に多量のMilliQ水で洗浄して、上記バイアルのRNAseの汚染を除去した。上記バイアルのうちの1つを、上記RNA作業溶液に使用し、他のものを脂質およびRNA混合物を集めるために使用した後に記載されるとおり。作業脂質溶液およびRNA溶液を、37°Cにおいて10分間にわたって加熱し、その後、3ccルアーロックシリンジに入れた。2mLクエン酸緩衝液pH6を、別の3ccシリンジに入れた。RNAおよび脂質を含むシリンジを、FEPチューブフッ素化エチレン-プロピレン;使用したすべてのFEPチューブは、2mm内径および3mm外径を有した;IdexHealthScienceから得たを使用して、TミキサーPEEKTM500μmID接合部に接続した。上記Tミキサーからの出口もまた、FEPチューブであった。上記クエン酸緩衝液を含む第3のシリンジを、別個の1つのチューブに接続した。次いで、すべてのシリンジを、流量7mL/分においてシリンジポンプを使用して作動させた。上記チューブ出口を、20mLガラスバイアルに上記混合物を集めるように配置した撹拌しながら。上記撹拌子を取り出し、上記エタノール/水性溶液を、室温へと1時間にわたって平衡化させた。上記混合物のうちの4mlを、5ccシリンジに入れ、これを、FEPチューブの1つに接続し、別の5ccシリンジを、等しい長さのFEPチューブに接続し、等量の100mMクエン酸緩衝液pH6を入れた。上記2本のシリンジを、上記シリンジポンプを使用して7mL/分の流量において作動させ、最終の混合物を、20mLガラスバイアルに集めた撹拌しながら。次に、第2の混合工程リポソームから集めた上記混合物を、MustangQ膜PallCorporationから得られる、結合してアニオン性分子を除去するアニオン交換支持体を通過させた。上記リポソームに関してこの膜を使用する前に、4mLの1MNaOH、4mLの1MNaClおよび10mLの100mMクエン酸緩衝液pH6が、連続してこの膜を通過した。リポソームを、10分間にわたって37°Cにおいて加温し、その後、上記膜を通過させた。次に、接線流濾過を使用することによって、リポソームを2mLに濃縮し、10~15容積の1×PBSに対して透析し、その後、最終生成物を収集した。上記TFFシステムおよび中空ファイバー濾過膜を、SpectrumLabsRanchoDominguezから購入し、上記製造業者のガイドラインに従って使用した。100kD孔サイズカットオフおよび8cm2表面積を有するポリスルホン中空ファイバー濾過膜を使用した。インビトロおよびインビボ実験に関しては、処方物を、1×PBSで、必要とされるRNA濃度へと希釈した。被包されたRNAのパーセンテージおよびRNAの濃度を、Quant-iTRiboGreenRNA試薬キットInvitrogenによって、製造業者の指示書に従って決定した。上記キット中に提供されたリボソームRNA標準を使用して、標準曲線を作成した。リポソームを、1×TE緩衝液キットから中で、10×もしくは100×に希釈し、その後、色素を添加した。別個に、リポソームを、0.5TritonXを含む1×TE緩衝液中で10×もしくは100×に希釈し、その後、色素を添加した上記リポソームを破壊するため。従って、総RNAをアッセイするため。その後、等量の色素を各溶液に添加し、次いで、色素添加後の約180μLの各溶液を、二連において、96ウェル組織培養プレートに入れた。蛍光励起485nm,発光528nmを、マイクロプレートリーダーで読み取った。すべてのリポソーム処方物を、被包されたRNAの量に基づいて、インビボで投与した。より小さなリポソームを得るために、シリンジ/チューブ法は、脂質およびRNA溶液がマイクロ流体チップ上のチャネルにおいて混合される方法によって置き換えられた。エタノール中の新たな脂質ストック溶液を、調製した。37mgのDlinDMA、11.8mgのDSPC、27.8mgのコレステロールおよび8.07mgのPEG-DMGを秤量し、7.55mLのエタノール中に溶解した。上記新たに調製した脂質ストック溶液を、37°Cにおいて約15分間にわたって穏やかに振盪して、均質な混合物を形成した。次いで、226.7μLの上記ストックを、1.773mLエタノールに添加して、作業脂質ストック溶液2mLを作製した。RNAの4mL作業溶液をまた、100mMクエン酸緩衝液pH6中約1μg/μLのストック溶液から調製した。4本の20mLガラスバイアル撹拌子有りを、RNaseAway溶液ですすぎ、使用前に多量のMilliQ水で洗浄して、バイアルのRNAseの汚染を除去した。上記バイアルのうちの2本を、上記RNA作業溶液各バイアル中2mLのために使用し、他を、脂質およびRNA混合物を集めるために使用した。作業脂質溶液およびRNA溶液を、37°Cにおいて10分間にわたって加熱し、その後、3ccルアーロックシリンジに入れた。RNAおよび上記脂質を含むシリンジを、4方向エッジコネクタを使用するPTFEチューブ0.03インチID×1/16インチODSyrrisを使用して、MitosDroplet接合チップSyrrisから得られるガラスマイクロ流体デバイス部品番号3000158に繋いだ。2本のRNAストリームおよび1本の脂質ストリームを、シリンジポンプによって作動させ、上記エタノール相および水相の混合を、上記チップのX接合部100μm×105μmにおいて行った。3本全てのストリームの流量を、1.5mL/分において維持したので、全ての水性の流量対エタノール性の流量の比は、2:1であった。上記チューブの出口を、20mLガラスバイアルに上記混合物を集めるように配置した撹拌しながら。上記撹拌子を取り出し、上記エタノール/水性溶液を、室温へと1時間にわたって平衡化させた。次いで、上記混合物を、5ccシリンジに入れ、これを、PTFEチューブ0.03インチID×1/16インチODの1つに接続し、別の5ccシリンジを等しい長さのPTFEチューブに接続し、等量の100mMクエン酸緩衝液pH6を入れた。上記2本のシリンジを、シリンジポンプを使用して3mL/分の流量において作動させ、最終混合物を、20mLガラスバイアルに集めた撹拌しながら。次に、リポソームを、TFFシステムを使用して、2mLへと濃縮し、10~15容積の1×PBSに対して透析し、その後、最終生成物を収集した。100kDa孔サイズカットオフおよび20cm2表面積を有する中空ファイバー濾過膜を使用した。インビトロ実験およびインビボ実験のために、処方物を、1×PBSで、必要とされるRNA濃度へと希釈した。上記シリンジ/チューブ法を使用して、75μgRNAで調製したリポソームは、Z平均直径148nmおよび多分散性指数0.122を有したのに対して、上記チップ混合は、Z平均直径97nmおよび多分散性指数0.086のリポソームを与えた。被包RNAの割合は、90から87へとわずかに減少した。リポソームにおける被包は、RNase消化からRNAを保護することを示した。実験では、3.8mAUのRNaseA/μgRNAを使用し、30分間にわたって室温においてインキュベートした。RNaseを、プロテイナーゼKで、55°Cにおいて10分間にわたって不活性化した。次いで、サンプル対25:24:1v/v/v,フェノール:クロロホルム:イソアミルアルコールの1:1v/v混合物を添加して、上記RNAを上記脂質から水相へと抽出した。サンプルを、数秒間にわたってボルテックスすることによって混合し、次いで、12kRPMにおける15分間にわたる遠心分離に置いた。上記水相上記RNAを含むを取り出し、上記RNAを分析するために使用した。ローディング前に400ngRNA/ウェル、上記サンプルすべてを、ホルムアルデヒドローディング色素と共にインキュベートし、10分間にわたって65°Cにおいて変性させ、室温へと冷却した。AmbionMillenniumマーカーを使用して、上記RNA構築物の分子量を概算した。上記ゲルを、90Vにおいて泳動した。上記ゲルを、室温において1時間にわたって振盪することによって、製造業者のガイドラインに従って、水中の0.1SYBRゴールドを使用して染色した。図1は、被包の非存在下でRNaseがRNAを完全に消化することを示すレーン3。RNAは、被包後に検出不能でありレーン4、これらリポソームがRNaseで処理されても全く変化が認められないレーン4。RNase処理リポソームをフェノール抽出に供した後、消化されていないRNAが認められるレーン6。4°Cにおいて1週間後ですら、上記RNAを、いかなるフラグメント化もなしに認めることができた図4,矢印。インビボでのタンパク質発現は、4°Cにおいて6週間および1回の凍結融解サイクル後にも変化しなかった。従って、リポソーム被包RNAは安定である。上記RNAのインビボ発現を評価するために、免疫原ではなく、レポーター酵素SEAP;分泌型アルカリホスファターゼを、上記レプリコン中にコードさせた。発現レベルを、化学発光アルカリホスファターゼ基質を使用して、1×Phospha-Light希釈緩衝液中で1:4希釈した血清中で測定した。8~10週齢BALB/cマウス5匹/群に、0日目に、0.1μgもしくは1μgRNA用量で50μl/脚を筋肉内に注射した。同じベクターを、1μgにおいて上記リポソームなしでRNase非含有1×PBS中でも投与した。ビリオンパッケージングされたレプリコンもまた、試験した。本明細書で使用したビリオンパッケージングされたレプリコンVRPと呼ぶを、参考文献41の方法によって得た。ここでアルファウイルスレプリコンは、変異VEEVに由来するか、またはシンドビスウイルスの3’UTRおよびシンドビスウイルスパッケージングシグナルPSを含むように操作されたVEEVのゲノムから得られるキメラであり、シンドビスウイルスキャプシドおよび糖タンパク質遺伝子をコードする欠損性ヘルパーRNAと共にBHK細胞へと共エレクトロポレーションco-electroporatingすることによってパッケージングした。図5に示されるように、被包は、1μg用量においてSEAPレベルを約1/2対数増大させ、6日目において、0.1μg被包用量からの発現は、1μg非被包用量で認められたレベルに匹敵した。3日目までに、発現レベルは、VRPで達成されたものを超えた四角。従って、発現は、裸のRNAコントロールと比較して、10×低用量においてすら、上記RNAが上記リポソーム中に処方された場合に増大された。発現はまた、上記VRPコントロールと比較して高かったが、発現の動態は、非常に異なっていた図5を参照のこと。エレクトロポレーションを用いた上記RNAの送達は、上記裸のRNAコントロールと比較して増大した発現を生じたが、これらレベルは、リポソームでのものより低かった。上記リポソーム群において認められる効果が、上記リポソーム成分にのみ起因するのか、または上記被包に関連するのかを評価するために、上記レプリコンを、被包形態2つの異なる精製プロトコルで、0.1μgRNAにおいて、または形成後に上記リポソームと混合して非被包化リポプレックスlipoplex,0.1μgRNA、または裸のRNA1μgとして投与した。図10は、上記リポプレックスが、最低レベルの発現を与えたことを示し、このことは、被包が、強力な発現に必須であることを示す。さらなるSEAP実験から、インビボで明らかな用量応答が示された。発現は、1ngほどのRNAの送達後にも認められた図6。被包レプリコンからの発現と裸のレプリコンからの発現とを比較するさらなる実験から、0.01μg被包RNAは、1μgの裸のRNAに等しいことが示された。RNAの0.5μg用量において、上記被包物質は、6日目において12倍高い発現を与えた;0.1μg用量レベルでは、6日目において24倍高かった。上記群において平均レベルで調べるだけでなく、個々の動物もまた研究した。いくらかの動物は、裸のレプリコンに対して非応答者であったのに対して、被包は、非応答者を排除した。さらなる実験では、DlinDMAをDOTAPRV13で置換した。DOTAPリポソームは、裸のレプリコンより良好な発現を与えたが、それらは、DlinDMAリポソームより劣っていた1日目において2~3倍の差異。インビボでの免疫原性を評価するために、レプリコンを構築して、RSウイルスRSVに由来する全長Fタンパク質を発現させた。これを、裸1μg、リポソーム中に被包0.1もしくは1μg、またはビリオン中でパッケージング106IU;VRPで、0日目および21日目に送達した。図7は、2回目の用量の2週間後の抗FのIgG力価を示す。上記リポソームは、明らかに免疫原性を増強する。図8は、2週間後の力価を示す。この時点までに、0.1μgの上記被包RNAと、1μgの上記被包RNAと、上記VRP群との間に統計学的差異は何らなかった。中和力価60のプラーク減少として測定,PRNT60は、2回目の用量の2週間後に、これら3群において有意差はなかった図9。図12は、2回目の用量の4週間後のIgG力価およびPRNT力価の両方を示す。図13は、上記RNAが堅調なCD8T細胞応答を誘発することを確認する。さらなる実験において、VRP、0.1μgリポソーム被包RNA、もしくは1μgリポソーム被包RNAを与えられたマウスにおけるF特異的IgG力価を比較した。2回目の用量の後の種々の時点での力価比VRP:リポソームは、以下のとおりであった:従って、上記リポソーム被包RNAは、ビリオン送達で認められるのと本質的に同程度の免疫応答を誘導する。さらなる実験から、優れたF特異的IgG応答が10μg用量で示され、これは、1μgおよび0.1μg用量についての応答と等しく、0.01μg用量ではより低い応答が示された。図11は、3種の異なる用量における裸の形態において、4種の異なる用量におけるリポソームにおいて、もしくはVRP106IUとして、上記レプリコンを与えられた動物におけるIgG力価を示す。1μgリポソーム被包RNAで認められた応答は、VRPと比較した場合に統計的に有意ではなかったANOVAが、10μgリポソーム被包RNAで認められたより高い応答は、これらの群の両方と比較した場合、統計的に有意であったp<0.05。さらなる研究から、上記0.1μgのリポソーム被包RNAは、0.1μgの送達されたDNAより遙かに高い抗FIgG応答を与え2回目の用量の15日後、さらに、エレクトロポレーションElgenTMDNADeliverySystem,Inovioによって送達された、上記F抗原をコードする20μgプラスミドDNAより免疫原性であることが確認された。さらなる研究を、マウスの代わりにコットンラットSigmodonhispidisにおいて行った。1μg用量において、リポソーム被包は、裸のRNAと比較して、F特異的IgG力価を8.3倍増大させ、中和力価PRNT60として測定を9.5倍増大させた。上記抗体応答の大きさは、5×106IUVRPによって誘導されたものに等しかった。裸のRNAおよびリポソーム被包RNAはともに、上記コットンラットをRSVチャレンジ1×105プラーク形成単位から保護することができ、肺のウイルス負荷を少なくとも3.5対数低下させた。被包は、上記低下を約2倍増大させた。大型動物研究を、ウシにおいて行った。雌ウシを、リポソームの内部に処方した、全長RSVFタンパク質をコードする66μgのレプリコンで、0日目および21日目に免疫化した。PBS単独を、陰性コントロールとして使用し、認可されたワクチンを、陽性コントロールとして使用したFortDodge製のTriangle4,死滅ウイルスを含む。図14は、第1の免疫化から始まって63日間の期間にわたる、F特異的IgG力価を示した。上記RNAレプリコンは、上記雌ウシにおいて免疫原性であったが、それは、上記認可されたワクチンより低い力価を与えた。全てのワクチン接種した雌ウシは、第2の用量の後にF特異的抗体を示し、力価は、上記第2の用量後の2~6週の期間、非常に安定であったそして、上記RNAワクチンに関しては、特に安定であった。代替のカチオン性脂質を使用するリポソームにおける被包DlinDMAを使用する代わりとして、参考文献8のカチオン性脂質を使用する。これらの脂質は、参考文献8において開示されるように合成され得る。DlinDMAを使用して上記で形成される上記リポソームを、本明細書において、以降RV01シリーズという。上記DlinDMAを、以下に記載されるように、シリーズRV02~RV12において種々のカチオン性脂質で置換した。各リポソームの2つの異なるタイプを、2PEG2000-DMGと、01上記カチオン性脂質が40、10DSPC、および48コレステロール、または02上記カチオン性脂質が60および38コレステロールのいずれかとを使用して形成した。従って、01リポソームと02リポソームの比較は、中性両性イオン性脂質の効果を示す。RV02リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV03リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV04リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV05リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV06リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV07リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV08リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV09リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV10リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV11リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV12リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:RV13リポソームを、以下のカチオン性脂質比較目的で、DOTAPを使用して作製した:RV14リポソームを、以下のカチオン性脂質比較のために、DC-コレステロールを使用して作製した:RV15リポソームを、以下のカチオン性脂質を使用して作製した:これらリポソームを、上記のSEAPレポーターで試験した。以下の表は、上記リポソームのサイズZ平均および多分散性指数、各リポソームにおけるRNA被包のと共に、注射後1日目および6日目に検出されたSEAP活性を示す。SEAP活性は、DlinDMA、コレステロールおよびPEG-DMGから作製したRV0102リポソームに対する比較である:図3は、6日目において認められたSEAP発現レベルを図示する。最良の結果は、RV04、RV05、RV07、RV08、RV09、およびRV11で認められた。種々のこれらリポソームをまた、全長RSVFタンパク質をコードするレプリコンを送達するために使用した。ある研究は、RV01、RV05およびRV13を比較した;最高のF特異的血清IgG力価はRV01で認められ、最低のものは、RV13で認められた。別の研究は、RV01、RV02、RV04およびRV07を比較した;最良の結果は、再び、RV01で認められ、RV07は、不十分にしか機能しなかった。別の研究は、RV01、RV03、RV08、RV09およびRV14を比較した;最良の結果は、RV01で再び認められ、RV03およびRV14は、不十分にしか機能しなかった。別の研究は、RV01、RV10、RV11およびRV15を比較した;最良の結果は、再び、RV01で認められた。全体として、最良の結果は、RV01、RV05、RV08およびRV09で認められたのに対して、RV13DOTAPおよびRV14DC-コレステロールは、不十分であった。従って、上記リポソームのうちの全てが、免疫応答を誘発するのに有効であるわけではなかった。しかし、一般に、最良の免疫学的効力は、上記リポソーム中のカチオン性脂質が、5.0~7.6の範囲、特に、5.5~6.7の範囲、5.6~6.3、5.6~6.0、もしくは5.7~5.9のpKaを有する場合に認められることが観察された。BHK発現様々な脂質でのリポソームを、BHK細胞と共に一晩インキュベートし、タンパク質発現能力について評価した。RV05脂質でのベースラインから、発現を、101,2-ジフィタノイルdiphytanoyl-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミンDPyPEを上記リポソームに添加することによって18×に増大させることができ、または1018:2cisホスファチジルコリンを添加することによって10×に増大させることができた。一般に、インビボ研究は、不飽和脂質テールが、コードされた抗原に対して惹起されるIgG力価を増強する傾向にあることを示した。RSV免疫原性RSVFタンパク質をコードするvA317自己複製レプリコンを、上記レプリコン1μg単独で、またはRV05でリポソームとして処方して、または比較のためにRV01もしくはRV13でリポソームとして処方して、BALB/cマウス1群あたり4匹もしくは8匹の動物に、両側の筋肉内ワクチン接種50μL/脚によって、0日目および21日目に投与した。上記RV01リポソームは、RNAの量が異なることを除いて、40DlinDMA、10DSPC、48コレステロールおよび2PEG-DMGを有した。上記RV05リポソームは、40RV05、10DSPC、48コレステロールおよび2PEG-DMG、もしくは60RV05、38コレステロールおよび2PEG-DMGのいずれかを有した。上記RV13リポソームは、40DOTAP、10DOPE、48コレステロールおよび2PEG-DMGを有した。上記リポソームを、種々の技術を使用して調製した。比較のために、同じRSV-F抗原を発現する裸のプラスミドDNA20μgを、エレクトロポレーションを使用して、もしくはRV0110リポソーム0.1μgDNAと共にのいずれかで送達した。4匹のマウスを、ナイーブコントロール群として使用した。Z平均粒子直径および多分散性指数は、以下であった:血清を、14日目、36日目および49日目に抗体分析のために集めた。脾臓を、49日目に、T細胞分析のためにマウスから採取した。F特異的血清IgG力価GMTは、以下のとおりであった:サイトカイン陽性であり、かつRSVF51-66ペプチドに対して特異的なT細胞の割合は、以下のとおりであり、統計的に有意にゼロを上回る数字のみを示す:従って、上記リポソーム処方物は、増大したF特異的IgG力価およびT細胞頻度によって決定される場合、上記裸のRNAコントロールと比較して免疫原性を顕著に増大した。リポソームとともに処方したか、またはエレクトロポレーションを使用して裸で送達されたプラスミドDNAは、リポソーム処方された自己複製RNAより顕著に免疫原性が低かった。様々なマウス系統におけるRSV免疫原性レプリコンvA142は、RSVの全長野生型表面融合F糖タンパク質をコードするが、その融合ペプチドは欠失しており、その3’末端は、リボザイム媒介性切断によって形成される。これを、3種の異なるマウス系統において試験した。BALB/cマウスに、0日目および22日目に、両側の筋肉内ワクチン接種50μL/脚を与えた。動物を、8つの試験群1群あたり5匹の動物およびナイーブコントロール2匹の動物へと分けた:群1には、裸のレプリコン1μgを与えた。群2には、40DlinDMA、10DSPC、48Chol、2PEG結合体化DMGを有するリポソームRV0137中で送達した1μgレプリコンを与えた。群3には、群2と同じものを与えたが、0.1μgRNAであった。群4には、RV0511リポソーム40RV05脂質、3018:2PEDLoPE、28コレステロール、2PEG-DMG中、1μgレプリコンであった。群5には、水酸化アルミニウムをアジュバント添加した5μgRSV-Fサブユニットタンパク質を与えた。群6は、ナイーブコントロール2匹の動物であった。血清を、14日目、35日目および49日目に、抗体分析のために集めた。F特異的血清IgGGMTは、以下であった:35日目において、F特異的IgG1力価およびIgG2a力価GMTは、以下のとおりであった:35日目および49日目のRSV血清中和抗体力価は、以下のとおりであったデータは、2~5匹のマウスプール1群あたり1プールの60プラーク減少中和力価である:49日目に、T細胞分析のために脾臓を採取した。平均の正味F特異的サイトカイン陽性T細胞頻度CD4もしくはCD8は、以下のとおりであったこれは、統計的に有意にゼロを上回ったCD4についてはRSVペプチドであるF51-66、F164-178、F309-323、またはCD8についてはペプチドF85-93およびF249-258に対して特異的数字のみを示す:C57BL/6マウスを、同じように免疫化したが、第7の群には、RSVの全長野生型表面融合糖タンパク質融合ペプチド欠失を発現するVRP1×106IUを与えた。血清を、14日目、35日目および49日目に、抗体分析のために集めた。F特異的IgG力価GMTは、以下であった:35日目において、F特異的IgG1力価およびIgG2a力価GMTは、以下のとおりであった:35日目および49日目のRSV血清中和抗体力価は、以下のとおりであったデータは、2~5匹のマウスプール1群あたり1プールの60プラーク減少中和力価である:49日目に、T細胞分析のために脾臓を採取した。平均の正味F特異的サイトカイン陽性T細胞頻度CD8は、以下のとおりであったこれは、統計的に有意にゼロを上回ったRSVペプチドF85-93およびF249-258に対して特異的数字のみを示す:C3H/HeNマウスの9群を、同じようにして免疫化した。F特異的IgG力価GMTは、以下であった:35日目のF特異的IgG1力価およびIgG2a力価GMTは、以下のとおりであった:35日目および49日目のRSV血清中和抗体力価は、以下のとおりであった:従って、異なる脂質RV01およびRV05;pKaは、5.8および5.85を、3種の異なる近交系のマウス系統において試験した。BALB/cおよびC3H系統に関しては、RV05は、RV01よりも有効性が低かったが、B6系統においては、より有効であった。しかし、すべての場合において、上記リポソームは、並行して試験した2種のカチオン性ナノエマルジョンより有効であった。コットンラット上記vA142レプリコンをまた、以下から形成したリポソームを使用して、コットンラットにおいて試験した:a40DlinDMA、10DPSC、48コレステロールおよび2PEGDMG2000。b40RV05、30DLoPE18:2PE、28コレステロールおよび2PEGDMG2000。コットンラット1群あたり4~8匹の動物に、以下を、0日目および21日目に筋肉内にワクチン接種した一方の脚に100μL:群1リポソームa中に処方した自己複製RNAvA142,0.1μg,RSV-F群2リポソームb中に処方した自己複製RNAvA142,0.1μg,RSV-F群3リポソームa中に処方した自己複製RNAvA142,1μg,RSV-F群4リポソームb中に処方した自己複製RNAvA142,1μg,RSV-F群5RSVの全長野生型表面F糖タンパク質を発現するVRP1×106IU群6水酸化アルミニウムをアジュバント添加したRSV-Fサブユニットタンパク質ワクチン5μg群7ナイーブコントロール3匹の動物。全てのコットンラット群7を除くに、49日目第2のワクチン接種の4週間後に5μgFサブユニット水酸化アルミニウムをワクチン接種した。0日目、21日目、35日目、49日目、64日目に、血清を、抗体分析のために集めた。F特異的血清IgG力価GMTは、以下のとおりであった:RSV血清中和抗体力価は、以下のとおりであった:従って、コットンラットに、RV01もしくはRV05で処方したvA142レプリコンをワクチン接種し、上記レプリコンを、2種の用量1.0μgおよび0.1μgにおいて与えた。第1のレプリコンワクチン接種後、F特異的血清IgG力価は、RV05よりRV01で高かったが、中和力価は、ほぼ等しかった。全ての群における力価は、21日目に与えた同種の第2のワクチン接種によってブーストされた。上記第2のレプリコンワクチン接種の後、F特異的血清IgG力価は、再び、RV05よりRV01で高く、RSV中和力価は、概して同じ傾向をたどった。49日目におけるタンパク質ワクチン接種は、以前にタンパク質をワクチン接種したコットンラットにおける抗体力価をブーストしなかったが、RNAを以前にワクチン接種したコットンラットにおける力価の大きなブーストを提供した。上記力価全IgGおよび中和は、RV01を使用した場合より、RV05を使用した場合に、64日目に高かった。vA317RSVレプリコンを有する様々なカチオン性脂質さらなる実験から、4種の異なるカチオン性脂質RV01、RV02、RV04およびRV07を比較した。全てのリポソームは、2PEG-DMG2000を含んだが、残りの脂質組成は、異なった。組成および物理的特徴は、以下のとおりであった:免疫原性の比較のために、さらに、HT、SUVおよびMLVのリポソームを、RV01を用いて、同じ割合の同じ成分を使用して、拡張性がないnon-scalableが、より迅速である製造法で、作製した。簡潔には、37mg/mlDLinDMA、12mg/mlDSPC、28mg/mlコレステロール、および8mg/mlのPEGDMG2000を含むエタノールストック溶液を作製した。上記ストック溶液100μlを、合計1mlのエタノール中に希釈した。リポソームを、150ミリトル圧力において、30分間にわたって、50°Cでロータリーエバポレーターを使用して、上記エタノール溶液を蒸発させることによって調製した。残余エタノールの蒸発を、上記サンプルを、凍結乾燥器の中に減圧下で一晩置いておくことによって確実にした。その脂質フィルムを水和させ、1.0mLの濾過した脱イオン水を添加することによって分散させ、50°Cに置いて、上記脂質をMLVへと完全に懸濁させることを確実にした。上記MLVからアリコートを取り出し、100のパワーにおいて5分間にわたって1秒パルスで、プローブソニケーターで超音波処理して、SUVを形成した。両方の得られた溶液を、レプリコンRNAと複合体化した。上記HTリポソームは、37mg/mlDLinDMA、12mg/mlDSPC、28mg/mlコレステロール、および8mg/mlのPEGDMG2000を含むエタノールストック溶液を使用して作製した。上記ストック溶液100μlを、エタノールで400μlへと希釈した。得られたエタノール溶液を、40μgのRNAを含む10mMクエン酸緩衝液pH6.5600μlへと、絶えず撹拌しながら滴下した。得られた溶液を、10,000MWCO透析膜を使用して、4LのPBS緩衝液に対して一晩透析した。BALB/cマウス8匹/群に、0日目および21日目に、裸のレプリコン1μgもしくは0.1μg被包化RNAを両側の筋肉内ワクチン接種50μL/脚で与えた。これら2種の注射の2週間後のF特異的血清IgG力価GMTは、以下のとおりであった:RV07に関しては、DSPCが無いことによって、免疫原性の大きな低下が引き起こされた。さらなる脂質RV01、RV03、RV08、RV09、RV14を、同じようにして試験した:リポソームNDC-コレステロールありは、不十分にしか機能せず、上記裸のRNAコントロールよりさらに低かった。対照的に、残りのカチオン性脂質は、有用な結果を与えた。リポソームOを、リポソームGとは異なる混合法マイクロ流体チップによって調製したところ、このより小さなリポソームは、ほぼ同じ被包化でより良好な結果を与えた。さらなる脂質RV01、RV10、RV11、RV15を、同じようにして試験した:リポソームQを除いて、これらリポソームの各々は、上記コントロールより良好に機能した。上記リポソームQ中のRV10脂質は、pKa7.86を有する。これは、高すぎて、インビボでは有用でないように思われる。しかし、有用なpKa範囲5.0~7.6内でも、結果は良好であったが、一方がアルキルテールおよび一方がステロイド含有テールを有する脂質はいずれも、RV01ほど良好な結果を与えなかった。さらなるリポソームを、RV05で作製した。上記リポソームは全て、40RV05および2PEG化脂質を有したが、残りの成分は異なったしかし、コレステロールは常に含まれていた。物理的特徴は、以下であった:BALB/cマウスを、前のように試験した:非対称脂質テールアルキルコレステロールを有するカチオン性脂質については、中性脂質をDSPC飽和C18脂質テールから18:2もしくは18:3PCテール1つにつき2個および3個の不飽和二重結合を有するに変更したところ、全IgG力価が増大した。匹敵する結果が、DSPCをDPyPEで置き換えたことで観察された。上記RV05脂質での最終実験において、リポソームを、40RV05、1018:2PC、40DPyPE、8コレステロールおよび2PEGDMG2000で作製した。これらリポソームは、Zav直径124.7nm、pdI0.17およびRNA被包61.5を有した。これらを使用して、裸のRNA1μgもしくはRV01ベースのリポソーム40DlinDMA、10DPSC、48コレステロール、2PEGDMG2000との比較において、前のようにBALB/cマウスにワクチン接種した0.1μgRNA用量。F特異的血清IgG力価GMTは、以下のとおりであった:従って、上記RV05リポソームは、裸のRNAより免疫原性であったが、RV01リポソームより免疫原性は低かった。49日目に、T細胞分析のために、脾臓を採取した。平均の正味F特異的サイトカイン陽性T細胞頻度CD4もしくはCD8は、以下のとおりであった統計的に有意にゼロを上回った数字のみを示すCD4に関しては、RSVペプチドF51-66、F164-178、F309-323に対して特異的、またはCD8に関しては、ペプチドF85-93およびF249-258に対して特異的:従って、T細胞応答の点では、RV05は、RV01より良好な結果を与えた。本発明は、例示によって記載されてきたに過ぎず、本発明の範囲および趣旨内に留まりながら、改変が行われ得ることは、理解される。表1:有用なリン脂質DDPC1,2-ジデカノイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDEPA1,2-ジエルコイル-sn-グリセロ-3-ホスフェートDEPC1,2-エルコイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDEPE1,2-ジエルコイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンDEPG1,2-ジエルコイル-sn-グリセロ-3[ホスファチジル-rac-1-グリセロール...DLOPC1,2-リノレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDLPA1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-ホスフェートDLPC1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDLPE1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンDLPG1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3[ホスファチジル-rac-1-グリセロール...DLPS1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルセリンDMG1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミンDMPA1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスフェートDMPC1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDMPE1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンDMPG1,2-ミリストイル-sn-グリセロ-3[ホスファチジル-rac-1-グリセロール...DMPS1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルセリンDOPA1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスフェートDOPC1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDOPE1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンDOPG1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3[ホスファチジル-rac-1-グリセロール...DOPS1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルセリンDPPA1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスフェートDPPC1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDPPE1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンDPPG1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3[ホスファチジル-rac-1-グリセロール...DPPS1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルセリンDPyPE1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミンDSPA1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスフェートDSPC1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンDSPE1,2-ジステアロイルDiostearpyl-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンDSPG1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3[ホスファチジル-rac-1-グリセロール...DSPS1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルセリンEPC卵-PCHEPC水素化卵PCHSPC高純度水素化ダイズPCHSPC水素化ダイズPCLYSOPCMYRISTIC1-ミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンLYSOPCPALMITIC1-パルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンLYSOPCSTEARIC1-ステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンミルクスフィンゴミエリンMPPC1-ミリストイル,2-パルミトイル-sn-グリセロ3-ホスファチジルコリンMSPC1-ミリストイル,2-ステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンPMPC1-パルミトイル,2-ミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンPOPC1-パルミトイル,2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンPOPE1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルエタノールアミンPOPG1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3[ホスファチジル-rac-1-グリセロール...]PSPC1-パルミトイル,2-ステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンSMPC1-ステアロイル,2-ミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンSOPC1-ステアロイル,2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリンSPPC1-ステアロイル,2-パルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスファチジルコリン"