"一般式Iで表される化合物、又はその塩、プロドラッグ、若しくは溶媒和物。[一般式I中、Wは、ポリフェニレンビニレン、ポリフェニレンエチリデン、若しくは両者の混生物、その構造内で二重結合、三重結合、若しくは両方の組成が組み合わされた任意の共役有機化合物、これらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、二重結合、三重結合、若しくは両方の組成と、フェニル、ナフタレン、フェナントレン、アントラセン、ピロール、フラン、チオフェン、ピリジン、例えばシトシン、ウラシル、アデニン、チミン、及びグアニン等の芳香族複素環式塩基の芳香環とが、その構造内で交互に並ぶ任意の共役有機化合物、若しくはこれらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、フェニル、ナフタレン、フェナントレン、アントラセン、ピロール、フラン、チオフェン、ピリジン、例えばシトシン、ウラシル、アデニン、チミン、及びグアニン等の芳香族複素環式塩基の芳香環を含有する任意の非共役有機化合物、若しくはこれらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、又はこれらの任意の組み合わせに由来する任意のポリマー又はデンドリマーによって構成される群から選択され、X1、X2、及びX3は、同一又は異なり、及び任意のヘテロ原子から選択され、Yは、飽和若しくは不飽和アルキル基C2~C12若しくはシクロアルキルC3~C8、シクロアルケニル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、R1及びR2は、同一又は異なり、一級、二級、又は三級アミノ基と結合し、水素、飽和若しくは不飽和アルキルC1~C12、シクロアルキルC3~C8、シクロアルケニル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、nは分岐数を表し、1~10から選択される整数である。]一般式IIで表される、請求項1に記載の化合物、又はその塩、プロドラッグ、若しくは溶媒和物。[一般式II中、Wは、ポリフェニレンビニレン、ポリフェニレンエチリデン、若しくは両者の混生物、その構造内で二重結合、三重結合、若しくは両方の組成が組み合わされた任意の共役有機化合物、これらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、二重結合、三重結合、若しくは両方の組成と、フェニル、ナフタレン、フェナントレン、アントラセン、ピロール、フラン、チオフェン、ピリジン、例えばシトシン、ウラシル、アデニン、チミン、及びグアニン等の芳香族複素環式塩基の芳香環とが、その構造内で交互に並ぶ任意の共役有機化合物、若しくはこれらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、フェニル、ナフタレン、フェナントレン、アントラセン、ピロール、フラン、チオフェン、ピリジン、例えばシトシン、ウラシル、アデニン、チミン、及びグアニン等の芳香族複素環式塩基の芳香環を含有する任意の非共役有機化合物、若しくはこれらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、又はこれらの任意の組み合わせに由来する任意のポリマー又はデンドリマーによって構成される群から選択され、X1、X2、及びX3は、同一又は異なり、任意のヘテロ原子から選択され、Yは、飽和若しくは不飽和アルキル基C2~C12若しくはシクロアルキルC3~C8、シクロアルケニル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、R1及びR2は、同一又は異なり、一級、二級、又は三級アミノ基と結合し、水素、飽和若しくは不飽和アルキルC1~C12、シクロアルキルC3~C8、シクロアルケニル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、nは分岐数を表し、1~10から選択される整数である。]塩の形態であってもよく、トリフルオロ酢酸塩、塩化物イオン、DNA、RNA、siRNA、miRNA、アンタゴmir、任意の薬物、抗体、画像化法により疾患を診断するためのプローブ又はそれらの任意の組み合わせに静電的に結合していてもよい、請求項1又は2に記載の一般式I又はIIの化合物。X1、X2、及びX3が、同一又は異なり、窒素又は酸素から選択される、請求項1~3のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物。Yが、から選択される、請求項1~4のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物。R1及びR2が同一であっても又は異なってもよく、水素原子、任意の置換又は非置換アミン、塩基性アミノ酸、コレステロール誘導体、葉酸、乳酸、デキサメタゾン、糖、リソソーム作用剤、含窒素複素環、ポリエチレングリコール誘導体親水性鎖、任意のジアクリレート、任意の塩基性アミノ酸、及び下記構造、からそれぞれ独立に選択される、請求項1~5のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物。を含むリストから選択される、請求項1~6のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物。1つ又は複数の薬学的に許容される添加剤と共に、請求項1、3、4、5、及び6のいずれか一項に記載の一般式Iの化合物を含むことを特徴とする医薬組成物。1つ又は複数の薬学的に許容される添加剤と共に、請求項2、3、4、5、及び6のいずれか一項に記載の一般式IIの化合物を含むことを特徴とする医薬組成物。1つ又は複数の有効成分をさらに含むことを特徴とする、請求項8又は9に記載の組成物。下記工程a~cを含むことを特徴とする、一般式Iで表される化合物の合成方法。[ここで、Wは、ポリフェニレンビニレン、ポリフェニレンエチリデン、若しくは両者の混生物、その構造内で二重結合、三重結合、若しくは両方の組成が組み合わされた任意の共役有機化合物、これらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、二重結合、三重結合、若しくは両方の組成と、フェニル、ナフタレン、フェナントレン、アントラセン、ピロール、フラン、チオフェン、ピリジン、例えばシトシン、ウラシル、アデニン、チミン、及びグアニン等の芳香族複素環式塩基の芳香環とが、その構造内で交互に並ぶ任意の共役有機化合物、若しくはこれらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、フェニル、ナフタレン、フェナントレン、アントラセン、ピロール、フラン、チオフェン、ピリジン、例えばシトシン、ウラシル、アデニン、チミン、及びグアニン等の芳香族複素環式塩基の芳香環を含有する任意の非共役有機化合物、若しくはこれらの電子供与基若しくは電子誘引基による任意の置換体、又はこれらの任意の組み合わせに由来する任意のポリマー又はデンドリマーによって構成される群から選択され、Aは、X1、X2、及びX3から選択され、X1、X2、及びX3は、同一又は異なり、任意のヘテロ原子から選択され、Yは、飽和若しくは不飽和アルキル基C2~C12若しくはシクロアルキルC3~C8、シクロアルケニル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、R1及びR2は、同一又は異なり、一級、二級、又は三級アミノ基と結合し、水素、飽和若しくは不飽和アルキルC1~C12、シクロアルキルC3~C8、シクロアルケニル、アリール、又はヘテロアリールから選択され、nは分岐数を表し、1~10から選択される整数である。]一般式Iの化合物から開始し、請求項11に記載の全工程a~cを反復する、一般式IIの化合物を得る方法。薬剤の調製のための、請求項1~7のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物の使用。神経系疾患、腫瘍の外観を呈する任意の疾患、骨粗鬆症、糖尿病、腹膜透析、及びヒト免疫不全症候群ウイルスにより引き起こされるものAIDSを含むウイルス感染症等の病的状態を予防及び/又は治療するための薬剤の調製のための、請求項13に記載の一般式I又はIIの化合物の使用。神経細胞、グリア、腫瘍細胞、線維芽細胞、骨芽細胞、及び初代細胞の初代培養におけるsiRNAトランスフェクションキットの調製のための、請求項1~6のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物の使用。遺伝子療法における、非ウイルス性ベクターとしての請求項1~6のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物の使用。画像化法により疾患を診断するためのプローブの調製のための、請求項1~6のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物の使用。薬物、遺伝物質、又は細胞株イメージングプローブの選択的送達のための、請求項1~6のいずれか一項に記載の一般式I又はIIの化合物の使用。[本発明の実施形態の実施例]下記の実施例は、本発明を説明する。但し、これらの実施例は制限的ではない。これら実施例は情報の提供が目的であり、いかなる場合でも用いられる方法を制限するものではなく、類似した結果を実現することを目的として変化し得る。本明細書では、これらのプロセスで用いられる記号や約束事、図や例は、国際システム及び現代科学文献、例えばJournalofMedicinalChemistryで用いられるものと一致している。別途明記しない限り、すべての出発物質は、市販給業者から得られ、さらに精製することなく用いられた。特に、下記の略号が実施例及び本明細書全体を通じて利用可能である:gグラム、mgミリグラム、Kgキログラム、mLミリリットル、μLマイクロリットル、mmolミリモル、mp融点、Hzヘルツ、MHzメガヘルツ、δ化学置換、ppm百万分の一、s一重線、d二重線、t三重線、q四重線、c五重線、m多重線、J結合定数、NMR核磁気共鳴、MS質量分析、ES電子スプレイ、m/z質量/電荷比、Anal.元素分析、Yld収率、TEAトリエチルアミン、CH2Cl2ジクロロメタン、CDCl3重水素化クロロホルム、CD3OD重水素化メタノールDMSOジメチルスルホキシド、i.p.非経口投与。すべての温度は°C摂氏で表される。実施例1PC12細胞株ソースバンクのマニュアル及びこれまでの公表文献JNeurochem.、2007年、第103巻:1396~1407頁に基づき、PC12ラット細胞副腎、クローム親和細胞腫を、10熱失活ウマ血清、5ウシ胎仔血清FBS、2mMグルタミン、100U/mlペニシリン、及び100μg/mlストレプトマイシンが補給されたRPMI培地内で、5CO2雰囲気、37°Cにおいて培養した。SH5YSYSH-SY5Y細胞株は、特徴的な表現型を発現した細胞の群から人工的にクローン化された神経芽細胞腫に由来するCancerRes.、1978年、38:3751~3757頁。原細胞株は、4歳の少女で発症した神経芽細胞腫の骨転移の生検から1970年に確立されたので、この細胞株は、遺伝学的には雌性である。この細胞には第1染色体に異常があり、トリソミー1qが認められる。SH-SY5Y細胞は、ドーパミンβヒドロキシラーゼ活動性、アセチルコリン作動性、グルタミン酸作動性、及びアデノシン作動性として公知である。細胞は、有糸分裂により、及び神経突起により増殖作用を受けて末梢領域まで延在する。当該細胞は、細胞株ソースバンクのマニュアルに基づき、10FBS、2mMグルタミン、0.5mg/mlネオマイシン、100U/mlペニシリン、及び100μg/mlストレプトマイシンが補給されたDMEM培地とHAM’S-F12培地とを1:1で含む混合物内で培養された。LnCaPLnCaP細胞ATCCCRL1740は、ヒト前立腺癌の十分に特徴づけされた細胞株である。同細胞は、細胞株ソースバンクのマニュアル及びこれまでの公表文献LifeSci.、2009年、第85巻:421~430頁に基づき、10FBS、2mMグルタミン、及び抗生物質100UI/mlペニシリン及び100μg/mlストレプトマイシンを含むRPMI-1640培地内で培養された。PC3PC3細胞ATCCCRL1435は、ヒト前立腺癌の十分に特徴づけされた細胞株である。同細胞は、細胞株ソースバンクのマニュアル及びこれまでの公表文献LifeSci.、2009年、第85巻:421~430頁に基づき、10FBS、2mMグルタミン、及び抗生物質100UI/mlペニシリン及び100μg/mlストレプトマイシンを含むRPMI-1640培地内で培養された。ラット腹膜中皮細胞の培養これまでに記載されたプロトコールPeritDialInt.、1989年、第9巻、341~347頁に基づき、ラット腹膜中皮細胞を酵素消化により単離した。要するに、体重が200~400gのSprague-Dawley系統の雌ラットを、RoyalDecree1201/2005年、10月10日付けの、実験及び他の科学目的で用いられる動物の保護に関する規定に従い屠殺した。腹腔を速やかに開き、腹壁腹膜及び平滑筋を無菌条件で取り出した。中皮細胞を酵素消化し、上記表面を199培地Sigma及び1mg/mlコラゲナーゼASigmaを用いて37°Cで30分間インキュベーションすることにより、腹壁の内表面から分離した。インキュベーション後、消化された腹壁表面を削り取って接着した中皮細胞を完全に遊離させた。得られた中皮細胞を増殖及び試験用の培養皿内に播種し、10ウシ胎仔血清、100U/mlペニシリン及び100μg/mlストレプトマイシンが補給された199培地内で、37°C、5CO2雰囲気において維持した。播種後24時間経過時、次に2日毎に培地を取り替えた。それぞれ培養した後、細胞の形態的な外観、及び特異的マーカーの発現により、腹膜中皮細胞の有無を確認した。この試験では、細胞はステップ3~6で用いられる。細胞の泳動を行うために、コンフルエントな培養物を生理食塩水リン酸バッファー溶液で2回洗浄し、次に、細胞が完全にはがれるまで0.05トリプシン-EDTAGibcoに曝露した。トリプシンの効果を、10ウシ胎仔血清が補給された199培地でブロックした。細胞を900r.p.m、20°Cで5分間遠心分離し、これをこれまでに記載された通りに培養した。ヒト骨芽細胞の培養ヒト骨芽細胞を、股関節手術を受けた患者の骨55~83歳の骨梁領域から得た。すべての参加者には手術前に通知を行い、その同意を得た。サンプルは、GeneralUniversitariodeAlbacete病院の手術室から、4°Cのロック溶液に入れられて研究室に到着し、速やかに処理された。大腿骨頭を、L-グルタミン2mM、ペニシリン-ストレプトマイシン1及びFBS15完全培地を含むα-MEMInvitrogen培地、10mLが入ったペトリ皿上に置き、これにファンギゾンを添加した2.5μg/ml。骨梁ゾーンの体外移植片を取り出し、小断片2~4mm2に切断し、当該大腿骨頭を、ファンギゾンを含む完全培地を用いて無菌シリンジで数回洗浄した。培地を、骨梁骨体外移植片と共に無菌状態のファルコン内に配置し、これを機械的に撹拌し、10gで3分間遠心分離した。上清を別のファルコンに移し、1500gで5分間再度遠心分離した。次に、得られたペレットを6mLの完全培地内で再懸濁し、P6皿に細胞を播種した。当該細胞を5CO2雰囲気において37°Cでインキュベーションした。24時間後、培地を取り替え、その後2~3日毎に培地を交換した。コンフルエンスに達したら、スプリッター1:3を実施し、ステップ3に達するまでスプリッターを連続して実施した。この時点で、培地にアスコルビン酸50μg/μl及びβグリセリンリン酸10mMを補給して、骨芽細胞の分化を誘発した。アルカリホスファターゼを測定し、ヒト線維芽細胞の細胞株を陰性対照として用いて、q-PCR法によりRUNX2及びOSXのmRNAの発現レベルを測定することにより、骨芽細胞として細胞を特徴づけた。ウシクローム親和細胞の初代培養副腎髄質のクローム親和細胞は、ウシ副腎から単離され、現地の畜殺場で当該動物から取り出され、50UI/mlペニシリンSigma、St.Louis、MO、50μg/mlストレプトマイシンSigma、及び1mMグルタミンInvitrogen、Carlsbad、CAが補給された4°Cのロック溶液mM単位:NaClは154、KClは5.6、NaHCO3は3.6、グルコースは5.6、Hepesは5、pH7.4に入れて研究室に輸送された。準拠した培養プロトコールは、1984年にLivettらLivett、B.G.、1984年が記載したコラゲナーゼによる副腎髄質の消化のプロトコールに、MoroらMoro、M.A.ら、1990年が1990年に導入した改変を加えたものである。要約すれば、第1に、副腎周囲の脂肪組織を除去し、0.25コラゲナーゼRocheAppliedSciences、Indianapolis、IN及び5ウシ血清アルブミンBSA、Sigmaを含む酵素溶液、3.5mlを腎腰部血管又は延髄中心経由で注射し、37°Cで45分間、当該腺をインキュベーションした。次に、髄質を取り出し、これを細胞への障害が最小となるように小片1mm3未満に切断し、これを37°Cで、30分間、コラゲナーゼ酵素溶液中で再度インキュベーションした。次に、アドレナリン作動性及びノルアドレナリン作動性のクローム親和細胞を、Percoll勾配を用いて精製し、ロック溶液で連続洗浄した後、これらの細胞を10ウシ胎仔血清FBS、Invitrogen、1mMグルタミン、及び抗生物質50UI/mlペニシリン及び50μg/mlストレプトマイシンが補給されたDMEM培地Invitrogen内で再懸濁した。クローム親和細胞を、50μg/mlのポリ-L-リジンポリ-L、Sigmaを用いて事前に処理された皿の中又はガラスプレート上に、100,000個の細胞/cm2の濃度で播種した。細胞を、水で飽和した5CO2雰囲気のインキュベータ内において37°Cで維持した。この実験では、1~5日間培養した細胞が用いられた。ラット小脳顆粒ニューロンの初代培養これまでに記載されたプロトコールJNeurochem.、2007年、第103巻、1396~407頁;BrainResDevBrainRes.、1991年、第63巻、1~12頁に基づき、これに若干の修正を加えて、小脳顆粒ニューロンの培養物を得た。要するに、Spragle-Dawley系統の7日齢ラットを速やかに断頭し、その脳を慎重に取り出した。小脳を無菌的に分離し、髄膜を除去し、脳を約0.4mmの断片に切断した。次に、当該組織をカルシウム及びマグネシウムを含まない培地内でトリプシン及びDNAseに曝露し、これをポリ-リジンで事前に処理された培養皿内に播種した。当該細胞を24.5mMカリウム、2mMグルタミン、10FBS、及び50μg/mlゲンタマイシンが補給されたBME培地内で培養した。24時間後、星状細胞の増殖を抑えるために、Ara-Cシトシンアラビノシドを培地に添加して、最終濃度を10μMまで低下させた。当該細胞は、細胞が完全に分化するのに必要な時間である培養後7日間より前には使用されなかった。ラット皮質ニューロンの初代培養皮質ニューロンの初代培養を、これまでに記載された方法EurJNeurosci.、2001年、第13巻、1469~78頁に基づき実施した。Spragle-Dawley系統の雌ラットの17日胎仔について、前側方の皮質葉を切除し、これをHBSS中で機械的に分離した。パスツールピペットを用い、皮質葉を10回ピペッティング定量分取した。800×gで5分間遠心分離した後、当該細胞を、B27、2mMグルタミン、100U/mLペニシリン、及び100μg/mLストレプトマイシンが補給されたNeuobasal培地内で再懸濁した。当該細胞を、ポリ-リジンで事前に処理された培養皿内に播種したが、細胞が完全に分化し、グルタメート受容体が出現するのに必要な時間である培養後7日間より前には使用されなかった。一般式I-siRNAからなる化合物複合体の形成一般式I-siRNAからなる化合物複合体を、一般式Iで表される化合物を含有する溶液、及びsiRNAOrgBiomolChem.、2007年、第5巻、1886~1893頁;PharmRes.、2009年、第26巻、1181~1191頁を含む溶液を等量混合することにより形成し、当該混合物を、周囲温度で30分間撹拌しながらインキュベーションした。両分子をDEPC水中にRNAseを含まないに溶解した。ゲルシフト実験、ヘパリンによる排除試験、及びRNAse作用に対する一般式I-siRNAからなる化合物複合体のプロテクター効果アガロースゲルにおける移動度シフトが、両分子間で可能な最大結合効果が得られるように構成されたN/P比一般式Iで表される化合物中の含窒素アミン量/siRNA中のリン酸塩量を確認するのに用いられたMolBiolRep.、2009年、第36巻、1083~1093頁;AmJMedGenetBNeuropsychiatrGenet.、2008年、第147巻B、769~777頁。異なる濃度の一般式Iで表される化合物と、siRNA250ngとの混合について試験された。当該混合物を、0.017臭化エチジウムを含む1.2アガロースゲル内で、60Vで15分間泳動する。ゲルを写真撮影し、適する画像分析システムQuantityOneを用いてバンドを定量化した。ヘパリンシフト実験は、一般式Iで表される化合物とsiRNAとの間の結合力を評価するために実施された。siRNAと一般式Iで表される化合物との完全な結合を保証するのに最適と考えられる12:1のN/P比で、複合体を調製した。次に、両者を0.78、1.52、3.04、6.08、12.48、及び24.32μgのヘパラン硫酸と共に37°Cで1時間インキュベーションした。一般式Iで表される化合物-siRNAについて行った上記の比の試験と同一条件で、当該溶液をアガロースゲルにて泳動した。一般式I-siRNAからなる化合物複合体のプロテクター効果を評価する実験では、異なる量のヘパラン硫酸を用いる替わりに、0.25のRNaseAと共に、12:1のN/P比を有する複合体を37°Cで30分間インキュベーションした。次に、複合体からsiRNAが完全に遊離するのを保証するために、このサンプルを過剰のヘパラン硫酸と共にインキュベーションした。インタクトなsiRNAの割合を、これまでに記載した実験と同じ条件で、アガロースゲル電気泳動により分析した。上記試験のそれぞれについて最低2回の実験を行った。細胞毒性試験一般式Iで表される化合物の毒性を評価する試験を異なる細胞型において実施し、乳酸脱水素酵素LDH活性を測定したPharmRes.、2009年、第26巻:1181~1191頁。そのために、細胞を24ウェルプレートに播種し、濃度依存性毒性曲線を得るために、それを異なる濃度の一般式Iで表される化合物の溶液5~80μMに24、48、又は74時間暴露した。毒性効果を、細胞膜の破裂とその後の上清へのLDHの放出をサイトトックス96CytoTox96登録商標キットPromegaを用いて測定することにより評価した。細胞を機械的に取り出し、これをPBSで洗浄し、10,000rpmで10分間遠心分離した。ライセート及び細胞上清の吸収を、マイクロプレート分光光度計を用いて波長490nmで測定した。一般式I-siRNAからなる化合物複合体の処理による毒性を、異なる濃度の一般式Iで表される化合物1~8μMを100nMのsiRNAと組み合わせて用いながら、フローサイトメトリー法により試験した。そのために、処理後、当該細胞を、ヨウ化プロピジウム0.5mg/mLと共に暗光、37°Cで少なくとも1時間インキュベーションした。次に、当該細胞をトリプシン処理し、これをフローサイトメーターFACSCalibur、Becton-Dickinson、FranklinLakes、NJ、米国で分析した。1実験条件当り10,000個の細胞の評価を行い、この評価から細胞膜が障害を受けた細胞の割合を計算したヨウ化プロピジウム陽性WeberNら、2008年;PerumalOPら、2008年。一般式I-siRNAからなる化合物複合体の細胞内への移動割合に関する試験100nMの蛍光siRNAを用いて、一般式I-siRNAからなる化合物複合体の存在下で細胞を24~72時間維持した後、コンディション培地を収集し、当該細胞をトリプシン処理し、PBSで洗浄した。細胞トリプシン処理物及びコンディション培地を混合して得られた懸濁液中に存在するすべての細胞を、生死を含めフローサイトメーターFACSCalibur、Becton-Dickinson、FranklinLakes、NJ、米国で分析した。1実験条件当り10,000個の細胞の評価を行い、蛍光siRNAでトランスフェクションされた細胞の割合を計算したJControlRlease、2008年、第132巻、55~64頁;Biomaterials、2008年、第29巻、3469~76頁。一般式I-siRNAからなる化合物複合体の移動についても、共焦点顕微鏡検査により試験する。そのために、細胞をスライド上に播種し、上記サンプルと同様の方法で処理した。蛍光siRNA単独又は一般式I-siRNAからなる化合物複合体で処理された細胞を、共焦点顕微鏡NikonEclipseTE200内で、siRNAが標識された蛍光体の励起に適する波長を用いて観察及び写真撮影したPharmRes.、2009年、第26巻:577~86頁。結果は、siRNAの細胞内トランスフェクションが陽性の細胞の割合を決定するのに用いた。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応リアルタイムPCRの連鎖反応による遺伝子発現抑制試験全細胞RNAを、グアニジン-フェノール-クロロホルムチオシアネートTriPureIsolationReagent、RocheAppliedSciences、Indianapolis、INを用いて標準法により単離した。RNAをcDNAに形質転換し、リアルタイムPCRを行うのにこれを利用した。異なる濃度の一般式Iで表される化合物により媒介されるvehicularized100nMのsiRNAを用いて、異なる遺伝子の発現抑制を試験するために、リアルタイムPCRを使用した。すべてのリアルタイムPCR実験で、参照遺伝子としてβ-アクチン遺伝子を用いた。反応は、StepOnePlusReal-TimePCRSystemAppliedBiosystemsについて標準的な方法を用いて行われた。各実験では、試験対象遺伝子及び参照に用いられた遺伝子、1種類につき3回の測定を行い、それぞれについて閾値サイクル数CTの平均値を計算したが、こうして異なる処理における遺伝子発現の比較が可能となったPharmRes.、2009年、第26巻、577~86頁;CancerRes.、2007年、第67巻、8156~8163頁。ウェスタンブロットによるタンパク質発現抑制度の評価50mMトリス-HCl、pH7.4、150mMNaCl、1mMEDTA、1トリトンX-100、1デオキシコール酸ナトリウム、及び0.1SDS及びプロテアーゼ阻害剤5μg/mlアプロチニン及び1mMPMSF内で溶解することにより、細胞抽出物を得た。溶解したら、当該細胞を13,000r.p.m.で15分間遠心分離した。上清に存在するタンパク質の濃度を、ウシ血清アルブミンを標準として用いて、Bradford法Pierce、Rockford、IL、米国により求めた。40μgの総タンパク質を含むサンプルを、試験するタンパク質に応じてポリアクリルアミドゲル10~15の各ウェルに適用した。セミドライブロッターを用いて、電気泳動によりニトロセルロース膜に移した。ニトロセルロースに結合したタンパク質をポンソーで観察し、その後5のスキムミルクを含むTTBS50mMトリス、pH7.5、200mMNaCl、0.1ツイーンでブロックキングし、次にこれを対応する一次抗体と共に4°Cで一晩インキュベーションした。TTBS内で洗浄した後、周囲温度で1時間二次抗体を適用した。化学発光により検出を行った。しかるべき画像解析システムQuantityOneを用いてグレーレベルにより、バンド強度を分析したPharmRes.、2009年、第26巻:1181~1191頁。結果ゲルシフト実験、ヘパリンによる排除試験、及びRNAseの作用に対する一般式I-siRNAからなる化合物複合体のプロテクター効果40μMのsiRNA、2.5μlを、全部で6.02×1011個の負電荷を含む最終濃度が2μMの溶液が得られるように、デンドリマーの窒素/siRNAのリン酸塩N/Pの比が6:1とするのに十分なある濃度の一般式Iで表されるデンドリマー化合物と共に、エッペンドルフチューブ内において最終容積50μl、周囲温度で30分間インキュベーションし、P/N比が384:1に到達するまでsiRNAを一定に保ったままデンドリマー量を高める図1。インキュベーション後、サンプルを1アガロースゲルにおいて60Vで15分間電気泳動し、これを臭化エチジウム物と共にインキュベーションし、siRNAを紫外線により観察する。図1で観察可能なように、P/N比が12:1一般式Iで表される化合物の濃度が22μMのとき、すべてのsiRNAはデンドリマーにより固定化され、ゲル内で置換されることはない。実施例2一般式Iで表される化合物の合成不活性雰囲気アルゴンを必要とするすべての反応では、Schlenk標準法が用いられる。不活性雰囲気内で行う反応では、クロマソルブCHROMASOLV登録商標グレードのテトラヒドロフランTHF及びジクロロメタンCH2Cl2の両方Aldrichを、InnovativeTechnology製の溶媒精製システムを用いて事前に精製した。エチレンジアミンを周囲温度、水素化カルシウム上で2時間乾燥させ、これを濾過し、減圧30~40mmHgで蒸留し、モレキュラースクリーン4Å上で保管した。MeOHは、酸化カルシウム上で乾燥させ、これを濾過、蒸留し、モレキュラースクリーン4Å上で保管した。他の溶媒は、事前精製せずに用いた。2.1合成図:化合物1は、Synthesis,Characterization,andOpticalResponseofDipolarandNon-DipolarPolyphenylenevinyleneDendrimers.J.J.Org.Chem.、2001年、第66巻17、5664~5670頁に基づき作製される。2.2化合物2の合成:エチレンジアミン8.6mL、128mmolを、無水CH2Cl250mL中にトリアルデヒド1300mg、0.64mmolを乾燥モレキュラースクリーンと共に含む溶液に、アルゴン雰囲気下で滴下した。当該反応物を30分間撹拌し、モレキュラースクリーンを濾過した。最初に、水素化ホウ素ナトリウム145mg、3.84mmolをアルゴン雰囲気下で当該溶液に添加し、次に無水MeOH、10mLを添加した。反応させるために2時間これを放置した。次に、減圧下で溶媒を除去し、トルエン/MeOHが9:1の比の混合物10mLを、最終回ではMeOH、10mLを用いて溶解-蒸発のサイクルを3回行った。次に、得られた白色固形物を5mLの水3分量で遠心分離し、固形物をCHCl3に溶解し、MgSO4で2時間乾燥させる。濾過及び減圧下で溶媒除去後、当該化合物を、THFを用いた熱洗浄により精製し、白色固形物として所望の化合物、351mg0.58mmol91を得た。1H-NMRCD3OD,500MHzδ:2.73t,6H,J=6Hz,-CH2-NH2、2.83t,6H,J=6Hz,-NH-CH2-、3.79s,6H,-CH2-NH-、7.21ABqのA,3H,J=16.5Hz,3×CH=、7.29ABqのB,3H,J=16.5Hz,3×CH=、7.37ABqのA,6H,J=7.5Hz,6×ArH、7.58ABqのB,6H,J=7.5Hz,6×ArH、7.63s,3H,ArH。13CNMR及びDEPTCD3OD,125MHzδ:140.27C、139.62C、137,85C、129.98CH、129.92CH、129.30CH、127.78CH、124.90CH、53.82-CH2-NH-、50.59-NH-CH2-、41.09-CH2-NH2。2.3化合物3の合成:MeOH20mL中の化合物20.250g、0.416mmolの溶液を氷浴中で0°Cまで冷却した。この温度に達したら、メチルアクリレートを徐々に添加し3.06g、35.53mmol、これを反応させるために周囲温度で4日間放置した。次に、過剰のメチルアクリレートを用いて減圧下で溶媒を除去し、当該化合物を、THFを用いた熱洗浄により精製し、白色固形物として所望の生成物、0.324g57を得た。1H-NMRCDCl3,500MHzδ:2.41t,12H,J=7Hz,-CH2-CO-、2.49t,6H,J=7Hz,-CH2-CO-、2.54s,12H,-N-CH2-CH2-N-、2.74t,12H,J=7Hz,-N-CH2-、3.61s,6H,-CH2-NH-、3.65s,18H,-OCH3、3.67s,9H,-CH2-NH-、7.14ABqのA,3H,J=16.5Hz,3×CH=、7.20ABqのB,3H,J=16.5Hz,3×CH=、7.31ABqのA,6H,J=8.5Hz,6×ArH、7.50ABqのB,6H,J=8Hz,6×ArH、7.55s,3H,3×ArH。13CNMR,DEPT及びgHSQCCDCl3,125MHzδ:173.01-CO-、172.94-CO-、139.16C、138.08C、135.65C、129.053xCH=,6xArH、127.883×CH=、126.426×ArH、123.723×ArH、58.69-CH2-NH-、52.12-N-CH2-CH2-N-、51.93-N-CH2-CH2-N-、51.52CH3、49.50-CH2-NH-、49.63-N-CH2-、32.66-CH2-CO-、32.52-CH2-CO-。IRυ:1734cm-1-CO2-。MALDI-TOFm/e:1375.43MH及び1397.45MNa2.4化合物4の合成:IR8エチレンジアミン10mL中の化合物3324mg、0.236mmolの溶液を周囲温度で48時間撹拌した。次に、減圧内で溶媒を除去し、トルエン/MeOHが9:1の比の混合物10mLを、最終回ではMeOH、10mLを用いて溶解-蒸発のサイクルを3回行った。当該化合物を、THFを用いた熱洗浄により精製し、白色固形物として化合物4、384mg85を得た。"