3つのジスルフィド結合を、配列ID番号1の配列に示したアミノ酸位置を参照してそれぞれアミノ酸C8とC119の間、アミノ酸C21とC27の間、アミノ酸C73とC78の間に有する組み換えデルマトファゴイデスプテロニュシヌス2rDerp2タンパク質を産生させる方法であって、arDerp2をコードしている配列であらかじめ形質転換したピキアパストリス酵母株を培養するステップと;bステップaで培養したそのピキアパストリス酵母株からrDerp2タンパク質を単離するステップを含む方法。前記rDerp2タンパク質が天然のDerp2と同じコンホメーションを持つ、請求項1に記載の方法。ピキアパストリス酵母株の選択を、X33株、GS115株、SMD1168株と、その栄養要求誘導体からなるグループの中から行なう、請求項1または2に記載の方法。前記rDerp2コード配列が、配列ID番号1、配列ID番号2、配列ID番号3、配列ID番号4からなるグループの中から選択したアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列である、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。ステップbにおいて前記rDerp2タンパク質を単離する操作が、クロマトグラフィの後に透析と濃縮を含む、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。前記rDerp2タンパク質の沈殿を含まない、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。酵母株から単離された前記rDerp2タンパク質をさらに医薬組成物にする、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。請求項1~6のいずれか1項に記載の方法に従って得られる組み換えDerp2タンパク質。請求項8に記載の組み換えDerp2タンパク質を含む組成物。治療用または診断用である、請求項9に記載の組成物。請求項8に記載の組み換えDerp2タンパク質を用いて室内塵ダニに対するアレルギー患者を減感作する方法。前記患者が、デルマトファゴイデスプテロニュシヌスおよび/またはデルマトファゴイデスファリナエに対してアレルギーである、組み換えDerp2タンパク質を用いて減感作する請求項11に記載の方法。前記患者が、デルマトファゴイデスプテロニュシヌス1Derp1、デルマトファゴイデスプテロニュシヌス2Derp2、デルマトファゴイデスファリナエ1Derf1、デルマトファゴイデスファリナエ2Derf2からなるグループの中から選択した1種類以上のアレルゲンに対してアレルギーである、組み換えDerp2タンパク質を用いて減感作する請求項11または12に記載の方法。a請求項8に記載の組み換えDerp2タンパク質と;b使用指示とを含む診断キット。1種類以上の追加環境アレルゲンをさらに含む、請求項14に記載のキット。Tanyaratsrisakulらの試みが以前にうまくいかなかったにもかかわらず、発明者は、Pパストリスにおいて、元のタンパク質と似た二次構造へと自発的に折り畳まれる組み換えDerp2タンパク質を産生させることが可能であることを見いだした。このようにして産生された組み換えタンパク質も元のタンパク質と似たジスルフィド結合を含んでおり、IgEとTリンパ球によってよく認識される。製造方法室内塵ダニは、世界中で共通するアレルゲン供給源である。特にデルマトファゴイデスプテロニュシヌス2Derp2は、ヨーロッパと北アメリカに広がっている世界規模のダニの一種であるデルマトファゴイデスプテロニュシヌスの主要なアレルゲンの1つである。このタンパク質は臨床で非常に重要である。なぜならダニに対するアレルギー患者の大半は、この分子に対して大きな血清IgE力価を示すからである。したがって天然のDerp2タンパク質に似た組み換えDerp2タンパク質を製造する方法が見いだされると、診断と治療の目的に非常に役立つであろう。実施例2に示してあるように、発明者は、酵母ピキアパストリスPパストリスにおいて、天然様コンホメーションを持つ組み換えDerp2タンパク質を産生させた。特に、組み換えタンパク質の構造を復元させるための沈殿ステップを実施することなく、天然のDerp2に自然状態で存在する3つのジスルフィド結合を持つrDerp2タンパク質が直接得られる。さらに、天然のDerp2と組み換えDerp2を10°Cずつの昇温ステップで加熱してから20°Cまで冷却した後に円二色性によって評価すると、両方のタンパク質が同じ熱的安定性を示すことがわかった実施例2。成熟Derp2141kDaの三次構造は公知でありMueller他、Biochemistry、1998年、第37巻、12707~12714ページ、アミノ酸C8とC119の間と、アミノ酸C21とC27の間と、アミノ酸C73とC78の間に位置する3つのジスルフィド結合を含んでいる。これらの結合は、アレルゲンの免疫原性にとって不可欠であると考えられている。しかしDerp2タンパク質を組み換えで発現させようとする以前の試みは、予期しない一連のジスルフィド結合を示すタンパク質の産生に終わっていた。逆に、発明者は、実施例2に示してあるように、天然様コンホメーションを持つ組み換えDerp2タンパク質の産生に成功した。より詳細には、天然のDerp2に存在する3つのジスルフィド結合を有するrDerp2タンパク質が、この組み換えタンパク質の構造を復元させるための沈殿ステップを実施することなしに直接得られる。そこで本発明により、天然のDerp2に自然状態で存在する3つのジスルフィド結合すなわち、配列ID番号1に示したアミノ酸位置を参照してアミノ酸C8とC119の間と、アミノ酸C21とC27の間と、アミノ酸C73とC78の間にある3つのジスルフィド結合を含む組み換えデルマトファゴイデスプテロニュシヌス2rDerp2タンパク質を産生させる方法が提供される。この方法は、arDerp2をコードする配列であらかじめ形質転換したピキアパストリス酵母株を培養するステップと、bステップaで培養したそのピキアパストリス酵母株からrDerp2タンパク質を単離するステップを含んでいる。本発明の方法によって得られるrDerp2タンパク質の少なくとも90、好ましくは95、より好ましくは98、さらに好ましくは99、さらに好ましくは100が、天然のDerp2に見られる3つのシステイン結合を有することが好ましい。この明細書では、天然のDerp2は、室内塵ダニであるデルマトファゴイデスプテロニュシヌスによって自然に発現していて、デルマトファゴイデスプテロニュシヌスの身体から抽出して精製することによって得られるグループIIのアレルゲンを表わす。天然のDerp2は、40位、47位、127位、114位が特に異なるアイソフォームの混合物である。どの天然のDerp2アイソフォームも同じ長さである。その結果、3つのジスルフィド結合が、システインC21とC27の間と、C73とC78の間と、C8とC119の間に常に見られる。本出願の全体を通じ、114位にアスパラギン酸を持つDerp220101アイソフォーム配列ID番号1を天然のDerp2の参照配列として用いる。好ましいことに、本発明の方法によって天然のコンホメーションを持つrDerp2タンパク質を得ることができる。NMRによるDerp2の三次構造は、Mueller他、Biochemistry、1998年、第37巻、12707~12714ページに記載されている。したがってrDerp2タンパク質は、2つの三重鎖反平行βシートを含むことができる。シート1は、配列ID番号1を参照して主に残基51~58、104~111、118~122を含んでおり、シート2は、主に残基15~17、35~44、84~92を含んでいる。rDerp2タンパク質は、配列ID番号1を参照して主に残基72~75を有するαヘリックスも含むことができる。さらに、Derp2の結晶構造は、DerewendaらJMolBiol、2002年、第318巻、189~197ページが発表しているように、このタンパク質が、配列ID番号1を参照して主に残基13~17、34~42、85~93を有する三重鎖βシートと、主に残基6~8、61~64、51~58、104~112、115~122を有する五重鎖βシートを含むことを示した。要するに、Derp2の結晶構造は、このタンパク質が47のβシートと5のαヘリックスからなることを示していた。1つのタンパク質内のβシートとαヘリックスの割合は、例えば円二色性スペクトルを分析するためのYangのアルゴリズムYangJT、CSWu他、1986年、円二色性からのタンパク質のコンホメーションの計算、MethodsEnzymol、第130巻、208~269ページを用いて遠UVスペクトル領域例えば190~250nmまたは200~260nmで円二色性CDを分析して決定することもできる。通常は、分析するサンプルのタンパク質濃度として、CD分光器のセルのパス長に応じて00005~5mgmlが可能である。βシートとαヘリックスの割合は、分析するタンパク質調製物の濃度に依存して変化する可能性がある。出願人は、JascoJ815CD分光測光器ジャスコ社、ブグネ、フランス国を用い、10mMの酢酸ナトリウムと150mMのNaClを含むpH50の緩衝液の中で300μgmlにて分析すると、室温では天然のDerp2が一般に40~60のβシートと30~40のαヘリックスを含んでいることを観察した。JascoJ815CD分光測光器は、スペクトルを分析するためにYangのアルゴリズムを走らせる。この明細書では、天然のコンホメーションを持つrDerp2タンパク質は、以下のことを特徴とする。i遠UVスペクトル領域におけるその円二色性スペクトルは、同じ分析条件例えば温度、タンパク質の濃度、緩衝液の組成で天然のDerp2の円二色性スペクトルと重ねることができる;および/またはii結晶学または例えばJascoJ815CD分光測光器で好ましくは室温にて円二色性によって分析したとき、40~60、好ましくは43~55、さらに好ましくは45~50のβシートからなる;および/またはiii結晶学によって分析したときには1~10、好ましくは3~8のαヘリックスからなり、例えばJascoJ815CD分光測光器で好ましくは室温にて円二色性によって分析したときには30~40、好ましくは35~40のαヘリックスからなる;および/またはiv結晶学または例えばJascoJ815CD分光測光器で好ましくは室温にて円二色性によって分析したとき、βシートの割合が、同じ分析法結晶学または円二色性で同じ条件例えば温度、タンパク質の濃度、緩衝液の組成円二色性を利用する場合にて決定した天然のDerp2のβシートの割合と、20、好ましくは15、さらに好ましくは10、さらに好ましくは5よりも多くは異なっていない;および/またはv結晶学または例えばJascoJ815CD分光測光器で好ましくは室温にて円二色性によって分析したとき、βシートとαヘリックスの割合が、同じ分析法結晶学または円二色性で同じ条件例えば温度、タンパク質の濃度、緩衝液の組成円二色性を利用する場合にて決定した天然のDerp2のそれぞれβシートとαヘリックスの割合と、20、好ましくは15、さらに好ましくは10、さらに好ましくは5よりも多くは異なっていない。本発明によれば、組み換えタンパク質は、遺伝子操作されたDNAによって産生されたタンパク質を意味する。典型的には、望むタンパク質をコードする核酸を適切な発現ベクターに挿入することができる。ベクターという用語は、Derp2をコードする核酸配列を宿主細胞に入れてその宿主細胞を形質転換し、導入された配列を発現させることすなわち転写と翻訳ができる媒体に関係する。発現ベクターは、一般に、プラスミド、コスミド、エピソーム、人工染色体、ファージ、ウイルスベクターのいずれかである。次に、例えば化学的形質転換などの標準的な任意の技術を利用し、このようなベクターを用いて宿主細胞を形質転換する。形質転換という用語は、外来性遺伝子周辺または細胞外、DNA配列、RNA配列いずれかを宿主細胞に導入し、導入された配列をその細胞が発現することで、導入された配列によってコードされているタンパク質を産生することに関係する。一実施態様によれば、本発明の枠組で用いるrDerp2コード配列は、20101アイソフォームをコードしている配列である。したがってピキアパストリス酵母株は、配列ID番号1からなるポリペプチドか、この配列を含むポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列で形質転換されている可能性がある。Derp2は、2つのメチオニン残基を76位と111位に含んでいる。これらメチオニンは、Derp2タンパク質の表面に露出しているため、酸化される可能性がある。Derp2の他の天然の変異体では、これらメチオニンは他の残基で置換されている。特に、天然の変異体においてDerp2の76位のメチオニンはバリンで置換することができ、111位のメチオニンは、ロイシンまたはイソロイシンで置換することができるPiboonpocanun他、ClinicalandExperimentalAllergy、2006年、第36巻、510~516ページ。したがってより酸化しにくくて安定性が向上した突然変異体を提供するには、76位と111位のメチオニンを突然変異させるとよい。その結果、好ましい一実施態様では、rDerp2をコードしている配列は、Derp2タンパク質特に20101アイソフォームをコードしているヌクレオチド配列である。M76がバリンで置換されていること、および/またはM111がロイシンまたはイソロイシンで置換されていることが好ましい。rDerp2をコードしている配列は、配列ID番号2、配列ID番号3、配列ID番号4のいずれかを含むか、そのいずれかからなるポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列であることがさらに好ましい。本発明によれば、望むDerp2タンパク質の産生に用いる宿主細胞は、Pパストリス酵母細胞である。Pパストリスは、組み換えDNA技術を利用したタンパク質の発現で広く用いられている。Pパストリスは多数の特性を持つためこの作業に適している、Pパストリスは、増殖速度が大きいため、単純で安価な培地で増殖させることができる。また、Pパストリスは振盪フラスコまたは発酵器の中で増殖させることができる。その両方とも、小スケールと大スケールの製造の両方に適している。望むタンパク質は、サッカロミセスセレビジエからのα接合因子の分泌信号への融合産物として産生させることができる。その場合、タンパク質はこのように分泌されることになるため、その後のタンパク質精製が容易である。本発明の枠組では、任意のPパストリス株を使用することができる。Pパストリスのゲノムは、2つのアルコールオキシダーゼ遺伝子AOX1とAOX2を含んでいる。これら遺伝子によってPパストリスはメタノールをエネルギー源として利用することが可能になる。AOXプロモータはメタノールによって強く誘導される。望むタンパク質の遺伝子は、AOX1プロモータの制御下になるように導入できるため、タンパク質の産生は、メタノールの添加によって誘導させることができる。あるいは望むタンパク質の遺伝子は、GAPプロモータなどの構成的プロモータ制御下になるように導入してもよい。一実施態様によれば、ピキアパストリス酵母株は、メタノールを利用する株である。ピキアパストリス酵母株は、X33株、GS115株、SMD1168株と、その栄養要求誘導体からなるグループの中から選択することがより好ましい。ある1つの株は、必須化合物を合成できなくする突然変異の存在が親株と異なっている場合に親株の栄養要求誘導体である。そのような栄養要求株は、この必須成分を合成できないため、その株の環境にこの必須成分が存在している場合にだけ増殖することができる。遺伝学では、栄養要求株をうまく用いて特定の株を選択することができる。一実施態様によれば、ピキアパストリス酵母株は、組み換えDerp2タンパク質の発現を可能にする条件下と期間で培養する。本発明の方法は、ピキアパストリス酵母細胞からrDerp2タンパク質を単離することからなるステップも含んでいる。培養物の上清または細胞抽出液からの単離は、ゲル精製、電気泳動、透析、クロマトグラフィ例えばカラム上でのアフィニティクロマトグラフィ、特異的抗体を用いた免疫アフィニティ技術といったよく知られた精製手続きによって実行できる。ステップbにおけるrDerp2タンパク質の単離は、主として、クロマトグラフィ例えばアフィニティクロマトグラフィの後に透析と濃縮を含むこと、またはこれらの操作からなることが好ましい。タンパク質は、大腸菌の中で組み換え発現させると不溶性封入体を形成する可能性があるため、その場合には変性剤を用いて可溶化した後に構造を復元せねばならない。しかし、特に多数のジスルフィド結合を有するタンパク質の場合には、封入体からアレルゲンの構造を復元させて天然のコンホメーションを得ることは難しい可能性がある。それ以外に、産生させた組み換えタンパク質は、主にランダムな構造を示すため沈殿によって構造を復元する必要がある可能性もある。実施例2に示してあるように、発明者は、本発明の方法により、沈殿ステップの必要なく自発的に折り畳まれて元のタンパク質と似た二次構造になる組み換えDerp2タンパク質を産生させることが可能になった。したがって好ましい一実施態様では、本発明の方法は、rDerp2タンパク質の沈殿をまったく含んでいない。組み換えDerp2タンパク質本発明の方法は、構造的に正しくて生物学的に活性なDerp2タンパク質を酵母Pパストリスの中で産生させることができるという点で注目すべきである。本発明は、本発明の方法によって得ることができる組み換えDerp2タンパク質、または本発明の方法によって得られる組み換えDerp2タンパク質にも関する。一実施態様では、本発明のrDerp2タンパク質は、114位にアスパラギン酸を有する20101アイソフォームである。別の一実施態様では、本発明のrDerp2タンパク質は、M76とM111の一方または両方が置換されたDerp2タンパク質である。特に、rDerp2タンパク質は、M76のバリンによる置換、および/またはM111のロイシンまたはイソロイシンによる置換を含むことができる。rDerp2タンパク質は、配列ID番号2、配列ID番号3、配列ID番号4のいずれかを含むか、そのいずれかからなることがさらに好ましい。本発明の方法によって産生させた組み換えDerp2アレルゲンは純粋であり、天然のコンホメーションと、天然のアレルゲンと比べて保存された抗原性および免疫原性を示す。さらに、rDerp2を用いた舌下免疫療法SLITにより、nDerp2で感作させた動物において、気道過剰反応が低下し、肺好酸球増加症が減り、nDerp2特異的Th2T細胞応答が低下する実施例2。したがってrDerp2を、より収率のよい特異的アレルギーワクチン接種で用いられる複合生物抽出液の代わりに用いることができる。したがって好ましい一実施態様では、本発明の組み換えDerp2タンパク質は医薬組成物にされる。別の一実施態様では、本発明の組み換えDerp2アレルゲンを、室内塵ダニに対するアレルギー患者の減感作に用いることができる。組成物本発明はさらに、本発明による組み換えDerp2タンパク質と、1種類以上の生理学的に許容可能な基剤とを含む組成物に関する。特別な一実施態様では、本発明の組成物は、治療で用いることを想定している。例えばダニアレルギー反応の予防および/または治療、および/または室内塵ダニに対するアレルギー患者の減感作に使用できる。デルマトファゴイデス属のダニによって産生されるアレルゲンは、主として2つの免疫学的に重要なグループに入る。すなわちグループIDerp1、Derf1とグループIIDerp2、Derf2である。Derp1とDerp2は、デルマトファゴイデスプテロニュシヌスからの主要なヨーロッパ室内塵ダニアレルゲンである。Derf1とDerf2は、デルマトファゴイデスファリナエからの主要なアレルゲンである。同じグループに属するアレルゲンは構造的に相同である。現在のところ、ヨーロッパ室内塵ダニに関して少なくとも21種類の異なるアレルゲンのグループが同定されている。しかしグループIとグループIIのダニ抗原は、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎に臨床的に最も関係が深い。なぜなら80を超える室内塵ダニアレルギー患者は、これら2つのアレルゲンに対して高い血清IgE力価を示すからである。本発明の組成物は、Derpダニおよび/またはDerfダニに対するアレルギー患者の治療および/または減感作を目的としていることが好ましく、Derp1ダニおよび/またはDerp2ダニおよび/またはDerf1ダニおよび/またはDerf2ダニに対するアレルギー患者の治療および/または減感作を目的としていることがより好ましい。この明細書では、医薬組成物という用語は、個体に投与したとき、免疫応答を誘導できる組成物、または免疫系の病的反応を予防または治療できる組成物を表わす。本発明の文脈では、治療のための、治療する、治療という用語は、免疫系の病的反応またはその症状の1つ以上の進行を逆転、または緩和、または抑制することを意味する。また、予防するためのまたは予防するという用語は、免疫系が病的反応またはその症状の1つ以上を開始することを意味する。この明細書では、減感作するという用語は、ある物質または刺激に応答して進行する免疫系の病的反応またはその症状の1つ以上を軽減または除去することを意味する。この明細書では、個体という用語は、ヒトを表わすことが好ましいが、より一般に哺乳動物囓歯類、ネコ、イヌ、霊長類でもよい。適切な医薬組成物として、特に、等張性で無菌の生理溶液リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウムなど、またはこれらの塩の混合物、または場合に応じて殺菌水または生理食塩水を添加すると注射可能な溶液を構成できる乾燥組成物特に凍結乾燥組成物が可能である。薬理学的または薬理学的に許容可能なは、場合に応じて動物またはヒトに投与したときに好ましくない反応、アレルギー反応、他の不利な反応を引き起こさない分子種と組成物を表わす。この明細書では、薬理学的に許容可能な基剤に、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤、吸収剤、遅延剤などが含まれる。このような媒体と薬剤を薬理学的に活性な物質のために使用することはこの分野でよく知られている。本発明の医薬組成物でそれを使用することが考えられる。医薬組成物を利用したアレルギー反応の予防または治療という枠組では、本発明の組成物に、従来のあらゆるワクチン接種用アジュバントを含めることができる。その中には、易熱性エンテロトキシンLT、コレラ毒素CT、コレラ毒素BサブユニットCTB、ポリマー化されたリポソーム、突然変異した毒素が含まれる。本発明の枠組では、全身投与を含めてあらゆる投与経路が考えられる。口粘膜投与に関しては、アジュバントは、乳酸菌であるビフィドバクテリウム細胞懸濁液、凍結乾燥細胞、ライセート、精製した下位成分、精製した分子いずれかの形態にしたものにするか、コルチコステロイドと、ビタミンD3またはその任意の代謝産物か類似体との組み合わせが好ましい。粘膜投与を考える場合には、アジュバントは、架橋した多糖が含まれる非液体性の親水性コアを含有する合成した粒子状ベクターであることが好ましい。したがって本発明の組み換えタンパク質は、i架橋した多糖が含まれる非液体性の親水性コアを含有する粒子と、ii本発明の組み換えDerp2タンパク質とを含む合成した粒子状ベクターをベースとした粘膜接着性製剤にすることができる。このような製剤は、免疫寛容を誘導する上で特に有効であることがわかった。使用できる粒子は、国際特許出願PCTIB2007002379に記載されている。簡単に述べるならば、架橋した多糖は、任意の糖モノマーグルコースが好ましいに由来するものが可能である。多糖は、分子量が2000~100000ダルトンであることが好ましく、3000~10000ダルトンであることがより好ましい。好ましい多糖は、デンプングルコースα1~4ポリマーとデキストラン細菌に由来するグルコースα1~6ポリマー、またはその加水分解物例えばデキストリン、マルトデキストリンである。イオン基、すなわちアニオン基例えば硫酸塩またはカルボン酸塩またはカチオン基例えば第四級アンモニウムイオン、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミンを、場合によっては、架橋した多糖1g当たりのイオン電荷は0~3ミリ当量が好ましく、0~2ミリ当量がより好ましいのコアにグラフトする。場合によっては、架橋した多糖コアは、少なくとも一部を両親媒性化合物の層および/または脂質化合物の層で覆う。粒子の直径は10nm~5μmの範囲が可能であり、20~200nmが好ましい。例えば水溶液での非経口投与に関しては、必要な場合には水溶液を適切に緩衝化し、希釈液を十分な生理食塩水またはグルコースで最初に等張化せねばならない。このような特別な水溶液は、筋肉内投与と皮下投与に特に適している。この文脈で本発明に照らして使用可能な無菌水性媒体は、当業者によく知られているであろう。医薬組成物は粘膜経路で投与することが好ましく、口粘膜経路で投与することがより好ましく、舌下経路で投与することが最も好ましい。そのため医薬組成物は、そのような投与経路に適した製剤にされることが好ましい。粘膜投与は、製剤の一部または全体が粘膜と接触するあらゆる投与法を表わす。粘膜は、身体の内腔を覆う上皮組織を表わす。粘膜面は、鼻、頬、口、膣、目、耳、肺管、尿道、消化管、直腸表面からなるグループの中から選択することができる。口粘膜投与は、製剤の一部または全体が患者の口腔および/または咽頭の粘膜と接触するあらゆる投与法を表わす。その中には特に、舌下投与、経舌すなわち舌の粘膜を通じた投与、口内投与が含まれる。投与量は、個別の必要性、望む効果、選択した投与経路に依存する。投与量は、レシピエントの年齢、性別、健康状態、体重と、現在の治療法治療している場合、治療の頻度、望む効果の性質に依存すると考えられる。各治療に必要な合計投与量は、多数回用量または1回用量にして投与することができる。いずれにせよ、投与の責任者が個々の対象にとって適切な投与量を決定することになる。検出/診断の用途本発明はさらに、診断用の組成物に関する。本発明の組み換えDerp2タンパク質は、生体内または試験管内例えば個体からの生物サンプル内のDerp2アレルゲンに対する抗体を検出するのに使用できる。個体は、ヒトでもよいし、ヒト以外の動物、特に人でない哺乳動物例えば囓歯類、ネコ、イヌ、霊長類でもよい。生物サンプルとして、特に、血液や血清などの体液が可能である。個体からの生物サンプル中に抗体が検出されるというのは、その個体が、室内塵ダニに感作されているか、室内塵ダニに対するアレルギーであることを示している可能性がある。好ましい一実施態様では、その個体は、デルマトファゴイデス属からのグループIおよび/またはグループIIのアレルゲンの中から選択した1種類以上のアレルゲンに感作されているか、アレルギーである。抗体として、IgM抗体、IgE抗体、IgG抗体、IgA抗体が可能である。当業者は、抗体を検出するのに従来から知られている適切な任意の定性法または定量法を利用できる。融合タンパク質を固相に固定化して、またはそれとは逆に融合タンパク質を流動相にして、アッセイを実行できる。利用できる典型的な方法として、ELISA、ウエスタンブロッティングなどがある。抗体の濃度が決定されると、抗体反応の定量化を時間内に繰り返し、例えば個体に適用した減感作療法の効果をモニターする。本発明の組み換えDerp2タンパク質はさらに、細胞試験例えばT細胞増殖試験、メディエータ放出試験などにも利用できる。この組み換えタンパク質は、さまざまなタイプの細胞に曝露して測定可能な応答を誘導することができる。そのような応答として、アレルギー性エフェクター細胞例えば好塩基球マスト細胞、好酸球の場合には、ヒスタミンやそれ以外のメディエータ例えばロイコトリエン、セロトニン、ECPの放出がある。別のタイプのアッセイでは、細胞の増殖または死例えばアポトーシスを、例えば3Hチミジンの取り込みや、他の適切な任意のアッセイによって測定することができる。そのような細胞としてT細胞が可能である。さらに、この組み換えタンパク質は、測定可能なサイトカインや他の免疫関連物質例えばT細胞からのものの放出を誘導するのに使用できる。このような細胞試験は、例えば個体から回収したPBMCで実行することができる。組み換えタンパク質は関係のないアレルゲンのエピトープを含んでいる可能性があるため、組み換えタンパク質を診断用スクリーニング試験のために使用し、その組み換えタンパク質の成分のうちの1つに対する個体の感作または非応答性を検出することができる。これにより、感作された患者の迅速なスクリーニングに適した診断試験を医師に提供することができる。したがって本発明の組み換えタンパク質は、診断例えば生体内刺激試験の目的にも使用できる。このような試験には、皮膚テスト例えば皮膚を刺す試験や皮膚内試験、鼻刺激試験、あらゆる形態の食物チャレンジ試験、気管支刺激試験が含まれる。本発明は、特に室内塵ダニに対するアレルギーを診断するため、この明細書に記載した組み換えDerp2タンパク質と使用指示を含むキットにも関する。特に、このキットは、1種類以上の室内塵ダニアレルゲンをさらに含んでいてもよい。例えばこのキットは、デルマトファゴイデス属からのグループIのアレルゲンDerp1とDerf1とグループIIのアレルゲンDerf2の中から選択したアレルゲンをさらに含んでいてもよい。しかしこのキットは、以下に示すように、他の任意の環境アレルゲンも含んでいてよい。アレルゲンは当業者によく知られている。アレルギー性疾患を誘起する一般的な環境アレルゲンは、花粉例えば樹木、草、雑草の花粉アレルゲン、食物、室内塵、ダニ特にダニの糞便、動物例えばイヌ、ネコ、ウマ、ラット、マウスなどの鱗屑および/または毛および/または唾液、カビ、真菌の胞子、毒に見いだされる。したがって、本発明のキットに存在する他のアレルゲンは、花粉からのアレルゲン、食物からのアレルゲン、室内塵からのアレルゲン、ダニからのアレルゲン、カビからのアレルゲン、毒からのアレルゲン、動物の鱗屑からのアレルゲン、動物の毛からのアレルゲン、動物の毛皮からのアレルゲン、動物の唾液からのアレルゲンのいずれかであることが好ましい。草木からの重要な花粉アレルゲンは、分類学上のブナ目、モクセイ目、マツ目、スズカケノキ科特にカバノキベトゥラ属、ハンノキアルヌス属、ハシバミコリュルス属、シデカルピヌス属、オリーブオレア属、ヒマラヤスギクリュプトメリア属とユニペルス属、スズカケノキプラタヌス属に由来するもの、イネ目特にロリウム属、プレウム属、ポア属、キュノドン属、ダクテュリス属、ホルクス属、パラリス属、セカレ属、ソルグム属の草に由来するもの、キク目とイラクサ目特にアンブロシア属、アルテミシア属、パリエタリア属の草に由来するものである。他の重要な吸入アレルゲンは、デルマトファゴイデス属とエウログリュプス属の室内塵ダニ、貯蔵庫ダニ例えばレピドグリュフュス属、グリュキュパグス属、テュロパグス属からのもの、ゴキブリ、ユスリカ、ノミ例えばブラテラ属、ペリプラネタ属、キロノムス属、クテノケパリデス属からのもの、哺乳動物例えばネコ、イヌ、ウマからのもの、毒アレルゲンその中には、刺したり噛んだりする昆虫であるハチ目の昆虫例えばミツバチミツバチ上科、ハチスズメバチ上科、アリアリ上科からのものが含まれるである。真菌からの重要な吸入アレルゲンは、特にアルテルナリア属とクラドスポリウム属に由来する。本発明の特別な一実施態様では、キットに存在する他のアレルゲンの選択は、以下のアレルゲンからなるグループの中から選択される:アカルスシロアシブトコナダニからのアレルゲンである例えばAcas13、ブロミアトロピカリスからのアレルゲンである例えばBlot1、Blot2、Blot3、Blot4、Blot5、Blot6、Blot10、Blot11、Blot12、Blot13、Blot19、Blot21、デルマトファゴイデスファリナエコナヒョウダニからのアレルゲンである例えばDerf1、Derf2、Derf3、Derf6、Derf7、Derf10、Derf11、Derf13、Derf14、Derf15、Derf16、Derf17、Derf18、Derf22、デルマトファゴイデスミクロケラス室内塵ダニからのアレルゲンである例えばDerm1、デルマトファゴイデスプテロニュシヌスヤケヒョウダニからのアレルゲンである例えばDerp1、Derp2、Derp3、Derp4、Derp5、Derp6、Derp7、Derp8、Derp9、Derp10、Derp11、Derp14、Derp20、Derp21、Derp23、エウログリュプスマユネイシワチリダニからのアレルゲンである例えばEurm1、Eurm2、Eurm3、Eurm4、Eurm14、グリュキュパグスドメスティクスイエニクダニからのアレルゲンである例えばGlyd2、レピドグリュプスデストルクトール貯蔵庫ダニからのアレルゲンである例えばLepd2、Lepd5、Lepd7、Lepd10、Lepd13、テュロパグスプトレスケンティアエケナガコダニからのアレルゲンである例えばTyrp2、Tyrp10、Tyrp13、Tyrp24、ブラテラゲルマニカチャバネゴキブリからのアレルゲンである例えばBlag1、Blag2、Blag4、Blag5、Blag6、Blag7、Blag8、ペリプラネタアメリカナワモンゴキブリからのアレルゲンである例えばPera1、Pera3、Pera6、Pera7、Pera9、Pera10、ハルモニアアクスュリディステントウムシからのアレルゲンである例えばHara1、Hara2、アルカエオポタモビウスシビリエンシス甲殻類の種からのアレルゲンである例えばArcs8、アルテミアフランキスカナブラインシュリンプからのアレルゲンである例えばArtfr5、カリュブディスフェリアトゥスカニからのアレルゲンである例えばChaf1、クランゴンクランゴンヨーロッパエビジャコからのアレルゲンである例えばCrac1、Crac2、Crac4、Crac5、Crac6、Crac8、ホマルスアメリカヌスアメリカンロブスターからのアレルゲンである例えばHoma1、Homa3、Homa6、リトペナエウスワンナメイ白いエビからのアレルゲンである例えばLitv1、Litv2、Litv3、Litv4、メタペナエウスエンシスヨシエビからのアレルゲンである例えばMete1、パヌリルススティンプソニトゲのあるロブスターからのアレルゲンである例えばPans1、ペナエウスアズテクスエビからのアレルゲンである例えばPena1、ペナエウスインディクスインドエビからのアレルゲンである例えばPeni1、ペナエウスモノドンウシエビからのアレルゲンである例えばPenm1、Penm2、ポンタスタクスレプトダクテュルスハサミの狭いイセエビからのアレルゲンである例えばPonl4、Ponl7、アエデスアエギュプティネッタイシマカからのアレルゲンである例えばAeda1、Aeda2、Aeda3、キロノムスキイエンシスユスリカからのアレルゲンである例えばChik10、キロノムストゥンミユスリカからのアレルゲンである例えばChit3、Chit4、Chit5、Chit7、Chit8、Chit9、Chit101、Chit102、Chit601、Chit602、Chit20101、Chit20102、フォルキポミュイアタイワナヌカカからのアレルゲンである例えばFort1、Fort2、トリアトマプロトラクタからのアレルゲンである例えばTriap1、アピスケラナニホンミツバチからのアレルゲンである例えばApic1、アピスドルサタオオミツバチからのアレルゲンである例えばApid1、アピスメリフェラヨウシュミツバチからのアレルゲンである例えばApim1、Apim2、Apim3、Apim4、Apim5、Apim6、Apim7、Apim8、Apim9、ボンブスペンシュルワニクスマルハナバチからのアレルゲンである例えばBomp1、Bomp4、ボンブステレストリスマルハナバチからのアレルゲンである例えばBomt1、Bomt4、ドリコウェスプラアレナリアスズメバチからのアレルゲンである例えばDola5、ドリコウェスプラマクラタスズメバチからのアレルゲンである例えばDolm1、Dolm2、Dolm5、ミュルメキアピロスラオーストラリアブルドッグアリからのアレルゲンである例えばMyrp1、Myrp2、Myrp3、ポリステスアンヌラリスハチからのアレルゲンである例えばPola1、Pola2、Pola5、ポリステスドミヌルス地中海アシナガバチからのアレルゲンである例えばPold1、Pold4、Pold5、ポリステスエクスクラマンスハチからのアレルゲンである例えばPole1、Pole4、Pole5、ポリステスフスカトゥスハチからのアレルゲンである例えばPolf5、ポリステスガリクスハチからのアレルゲンである例えばPolg1、Polg5、ポリステスメトリクスハチからのアレルゲンである例えばPolm5、ポリビアパウリスタハチからのアレルゲンである例えばPolyp1、ポリビアスクテラリスハチからのアレルゲンである例えばPolys5、ソレノプシスゲミナタアカカミアリからのアレルゲンである例えばSolg2、Solg3、Solg4、ソレノプシスインウィクタ赤い輸入カミアリからのアレルゲンである例えばSoli1、Soli2、Soli3、Soli4、ソレノプシスリクテリクロカミアリからのアレルゲンである例えばSolr2、Solr3、ソレノプシスサエウィッシマブラジルのカミアリからのアレルゲンである例えばSols2、Sols3、ウェスパクラブロモンスズメバチからのアレルゲンである例えばVespc1、Vespc5、ウェスパマンダリニアオオスズメバチからのアレルゲンである例えばVespm1、Vespm5、ウェスプラフラウェピロサスズメバチからのアレルゲンである例えばVesf5、ウェスプラゲルマニカスズメバチからのアレルゲンである例えばVesg5、ウェスプラマクリフロンススズメバチからのアレルゲンである例えばVesm1、Vesm2、Vesm5、ウェスプラペンシュルワニカスズメバチからのアレルゲンである例えばVesp5、ウェスプラスクアモサスズメバチからのアレルゲンである例えばVess1、Vess5、ウェスプラウィドゥアハチからのアレルゲンである例えばVesvi5、ウェスプラウルガリススズメバチからのアレルゲンである例えばVesv1、Vesv2、Vesv3、Vesv5、アルガスレフレクスハトのヒメダニからのアレルゲンである例えばArgr1、タウメトポエアピテュオカンパオオギョウレツムシガからのアレルゲンである例えばThap1、ピテュオカンパガからのアレルゲンである例えばThap1、クテノケパリデスフェリスフェリスネコノミからのアレルゲンである例えばCtef1、Ctef2、Ctef3、レピスマサッカリナセイヨウシミからのアレルゲンである例えばLeps1、ラナエスクレンタ食用ガエルからのアレルゲンである例えばRane1、Rane2、カニスファミリアリスイヌからのアレルゲンである例えばCanf1、Canf2、Canf3、Canf4、Canf5、フェリスドメスティクスネコからのアレルゲンである例えばFeld1、Feld2、Feld3、Feld4、Feld5w、Feld6w、ボスドメスティクス家畜からのアレルゲンである例えばBosd2、Bosd3、Bosd4、Bosd5、Bosd6、Bosd7、Bosd8、サルディノプスサガクス太平洋マイワシからのアレルゲンである例えばSarsa1、ガドゥスカラリアスバルト海タラからのアレルゲンである例えばGadc1、ガルスドメスティクスニワトリからのアレルゲンである例えばGald1、Gald2、Gald3、Gald4、Gald5、オリュクトラグスクニクルスウサギからのアレルゲンである例えばOryc1、キフィアスグラディウスメカジキからのアレルゲンである例えばXipg1、エクウスカバルスウマからのアレルゲンである例えばEquc1、Equc2、Equc3、Equc4、Equc5、レピドルホンブスホイフィアゴニスメグリム、コケビラメ、ガロからのアレルゲンである例えばLepw1、ホモサピエンスアレルギー性のヒトからのアレルゲンである例えばHoms1、Homs2、Homs3、Homs4、Homs5、カウィアポルケルスモルモットからのアレルゲンである例えばCavp1、Cavp2、ムスムスクルスマウスからのアレルゲンである例えばMusm1、ラトゥスノルウェギウスラットからのアレルゲンである例えばRatn1、サルモサラール大西洋サケからのアレルゲンである例えばSals1、デンドロネプテュアニッポニカアカトゲトサカからのアレルゲンである例えばDenn1、トダロデスパキフィクスイカからのアレルゲンである例えばTodp1、ヘリクスアスペルサブラウンカタツムリからのアレルゲンである例えばHelas1、ハリオティスミダエアワビからのアレルゲンである例えばHalm1、アニサキスシンプレクスセンチュウからのアレルゲンである例えばAnis1、Anis2、Anis3、Anis4、Anis5、Anis6、Anis7、Anis8、Anis9、アスカリススウムブタカイチュウからのアレルゲンである例えばAscs1、アルテルナリアアルテルナタアルテルナリア腐朽菌からのアレルゲンである例えばAlta1、Alta3、Alta4、Alta5、Alta6、Alta7、Alta8、Alta10、Alta12、Alta13、クラドスポリウムクラドスポリオイデスからのアレルゲンである例えばClac9、クラドスポリウムヘルバルムからのアレルゲンである例えばClah2、Clah5、Clah6、Clah7、Clah8、Clah9、Clah10、Clah12、クルウラリアルナタからのアレルゲンである例えばCurl1、Curl2、Curl3、アスペルギルスフラウスからのアレルゲンである例えばAspfl13、アスペルギルスフミガトゥスからのアレルゲンである例えばAspf1、Aspf2、Aspf3、Aspf4、Aspf5、Aspf6、Aspf7、Aspf8、Aspf9、Aspf10、Aspf11、Aspf12、Aspf13、Aspf15、Aspf16、Aspf17、Aspf18、Aspf22、Aspf23、Aspf27、Aspf28、Aspf29、Aspf34、アスペルギルスニゲールからのアレルゲンである例えばAspn14、Aspn18、Aspn25、アスペルギルスオリザエからのアレルゲンである例えばAspo13、Aspo21、ペニキリウムブレウィコンパクトゥムからのアレルゲンである例えばPenb13、Penb26、ペニキリウムクリュソゲヌムからのアレルゲンである例えばPench13、Pench18、Pench20、Pench31、Pench33、ペニキリウムキトリヌムからのアレルゲンである例えばPenc3、Penc13、Penc19、Penc22、Penc24、Penc30、Penc32、ペニキリウムオキサリクムからのアレルゲンである例えばPeno18、フサリウムクルモルムからのアレルゲンである例えばFusc1、Fusc2、トリコフュトンルブルムからのアレルゲンである例えばTrir2、Trir4、トリコフュトントンスランスからのアレルゲンである例えばTrit1、Trit4、カンディダアルビカンス酵母からのアレルゲンである例えばCanda1、Canda3、カンディダボイディニイ酵母からのアレルゲンである例えばCandb2、エピコックムプルプラスケンスからのアレルゲンである例えばEpip1、コプリヌスコマトゥスササクレヒトヨタケからのアレルゲンである例えばCopc1、Copc2、Copc3、Copc5、Copc7、プシロキュベクベンシスシビレタケからのアレルゲンである例えばPsic1、Psic2、ロドトルラムキラギノサ酵母からのアレルゲンである例えばRhom1、Rhom2、マラッセジアフルフルピテュリアシスウェルシコロール感染性媒体からのアレルゲンである例えばMalaf2、Malaf3、Malaf4、マラッセジアシュンポディアリスからのアレルゲンである例えばMalas1、Malas5、Malas6、Malas7、Malas8、Malas9、Malas10、Malas11、Malas12、Malas13、カマエキュパリスオブトゥサヒノキからのアレルゲンである例えばChao1、Chao2、クリュプトメリアヤポニカスギからのアレルゲンである例えばCryj1、Cryj2、クプレッススアリゾニカイトスギからのアレルゲンである例えばCupa1、クプレッススセンペルウィレンス一般的なイトスギからのアレルゲンである例えばCups1、Cups3、ユニペルスアスヘイヒマラヤスギからのアレルゲンである例えばJuna1、Juna2、Juna3、ユニペルスオクシュケドゥルスケードネズからのアレルゲンである例えばJuno4、ユニペルスサビノイデスヒマラヤスギからのアレルゲンである例えばJuns1、ユニペルスウィルジニアナエンピツビャクシンからのアレルゲンである例えばJunv1、Junv3、フォエニクスダクテュリフェラナツメヤシからのアレルゲンである例えばPhod2、アスパラグスオフィキナリスアスパラガスからのアレルゲンである例えばAspao1、クロクスサティウスサフランからのアレルゲンである例えばCros1、Cros2、アナナスコモススパイナップルからのアレルゲンである例えばAnac1、Anac2、アントキサントゥムオドラトゥムハルガヤからのアレルゲンである例えばAnto1、キュノドンダクチュロンギョウギシバからのアレルゲンである例えばCynd1、Cynd7、Cynd12、Cynd15、Cynd22w、Cynd23、Cynd24、ダクテュリスグロメラタカモガヤからのアレルゲンである例えばDacg1、Dacg2、Dacg3、Dacg4、Dacg5、フェストゥカプラテンシスヒロハノウシノケグサからのアレルゲンである例えばFesp4、ホルクスラナトゥスシラゲガヤからのアレルゲンである例えばHoll1、Holl5、ホルデウムウルガレオオムギからのアレルゲンである例えばHorv1、Horv5、Horv12、Horv15、Horv16、Horv17、Horv21、ロリウムペレンネライグラスからのアレルゲンである例えばLolp1、Lolp2、Lolp3、Lolp4、Lolp5、Lolp11、オリザサティワイネからのアレルゲンである例えばOrys1、Orys12、パスパルムノタトゥムバヒアグラスからのアレルゲンである例えばPasn1、ファラリスアクアティカクサヨシからのアレルゲンである例えばPhaa1、Phaa5、フレウムプラテンセオオアワガエリからのアレルゲンである例えばPhlp1、Phlp2、Phlp4、Phlp5、Phlp6、Phlp7、Phlp11、Phlp12、Phlp13、ポアプラテンシスナガハグサからのアレルゲンである例えばPoap1、Poap5、セカレケレアレライムギからのアレルゲンである例えばSecc1、Secc20、ソルグムハレペンセヒメモロコシからのアレルゲンである例えばSorh1、トリティクムアエスティウムコムギからのアレルゲンである例えばTria12、Tria14、Tria18、Tria19、Tria25、Tria26、ゼアマユストウモロコシからのアレルゲンである例えばZeam1、Zeam12、Zeam14、Zeam25、ムサアクミナタバナナからのアレルゲンである例えばMusa1、ムサxパラディシアカバナナからのアレルゲンである例えばMusxp1、アピウムグラウェオレンスセロリからのアレルゲンである例えばApig1、Apig3、Apig4、Apig5、ダウクスカロタニンジンからのアレルゲンである例えばDauc1、Dauc4、アンブロシアアルテミシイフォリアブタクサからのアレルゲンである例えばAmba1、Amba2、Amba3、Amba5、Amba6、Amba7、Amba8、Amba9、Amba10、アンブロシアプシロスタキュアブタクサモドキからのアレルゲンである例えばAmbp5、アンブロシアトリフィダオオブタクサからのアレルゲンである例えばAmbt5、アルテミシアウルガリスヨモギからのアレルゲンである例えばArtv1、Artv2、Artv3、Artv4、Artv5、Artv6、ヘリアントゥスアンヌウスヒマワリからのアレルゲンである例えばHela1、Hela2、Hela3、ラクトゥカサティワレタスからのアレルゲンである例えばLacs1、ブラシカユンケアカラシナからのアレルゲンである例えばBraj1、ブラシカナプスアブラナからのアレルゲンである例えばBran1、ブラシカオレラケアキャベツからのアレルゲンである例えばBrao3、ブラシカラパカブからのアレルゲンである例えばBrar1、Brar2、シナピスアルバシロガラシからのアレルゲンである例えばSina1、Sina2、ベタウルガリステンサイからのアレルゲンである例えばBetav1、Betav2、ケノポディウムアルブムアカザからのアレルゲンである例えばChea1、Chea2、Chea3、サルソラカリノハラヒジキからのアレルゲンである例えばSalk1、Salk2、ククミスメロからのアレルゲンである例えばCucm1、Cucm2、Cucm3、アクティニディアキネンシスゴールドキウイフルーツからのアレルゲンである例えばActc5、Actc8、Actc10、アクティニディアデリキオサキウイフルーツからのアレルゲンである例えばActd1、Actd2、Actd3、Actd4、Actd5、Actd6、Actd7、Actd8、Actd9、Actd10、Actd11、ベルトレティアエクスケルサブラジルナッツからのアレルゲンである例えばBere1、Bere2、アラキスヒュポガエピーナツからのアレルゲンである例えばArah1、Arah2、Arah3、Arah4、Arah5、Arah6、Arah7、Arah8、Arah9、Arah10、Arah11、グリュキネマクスダイズからのアレルゲンである例えばGlym1、Glym2、Glym3、Glym4、Glym5、Glym6、レンスクリナリスレンズマメからのアレルゲンである例えばLenc1、Lenc2、ルピヌスアングスティフォリウスルピナスからのアレルゲンである例えばLupan1、ピスムサティウムエンドウからのアレルゲンである例えばPiss1、Piss2、ウィグナラディアタヤエナリからのアレルゲンである例えばVigr1、アルヌスグルティノサハンノキからのアレルゲンである例えばAlng1、Alng4、ベトゥラウェルコサカバノキからのアレルゲンである例えばBetv1、Betv2、Betv3、Betv4、Betv6、Betv7、カルピヌスベトゥルスシデからのアレルゲンである例えばCarb1、カスタネアサティワクリからのアレルゲンである例えばCass1、Cass5、Cass8、コリュルスアウェラナハシバミからのアレルゲンである例えばCora1、Cora2、Cora8、Cora9、Cora10、Cora11、Cora12、Cora13、Cora14、ユグランスニグラクログルミからのアレルゲンである例えばJugn1、Jugn2、ユグランスレギアイングリッシュクルミからのアレルゲンである例えばJugr1、Jugr2、Jugr3、Jugr4、クエルクスアルバホワイトオークからのアレルゲンである例えばQuea1、カタラントゥスロセウスからのアレルゲンである例えばCatr1、フラクシヌスエクスケルシオールトネリコからのアレルゲンである例えばFrae1、リグストゥルムウルガレヨウシュイボタノキからのアレルゲンである例えばLigv1、オレアエウロペアオリーブからのアレルゲンである例えばOlee1、Olee2、Olee3、Olee4、Olee5、Olee6、Olee7、Olee8、Olee9、Olee10、プランタゴランケオラタヘラオオバコからのアレルゲンである例えばPlal1、セサムムインディクムゴマからのアレルゲンである例えばSesi1、Sesi2、Sesi3、Sesi4、Sesi5、Sesi6、Sesi7、シュリンガウルガリスライラックからのアレルゲンである例えばSyrv1、Syrv3、ペルセアアメリカナからのアレルゲンである例えばPersa1、ヘウェアブラシリエンシスパラゴムノキ、ラテックスからのアレルゲンである例えばHevb1、Hevb2、Hevb3、Hevb4、Hevb5、Hevb6、Hevb7、Hevb8、Hevb9、Hevb10、Hevb11、Hevb12、Hevb13、メルクリアリスアンヌア一年性ヤマアイからのアレルゲンである例えばMera1、リキヌスコンムニスヒマからのアレルゲンである例えばRicc1、プラタヌスアケリフォリアカエデバからのアレルゲンである例えばPlaa1、Plaa2、Plaa3、プラタヌスオリエンタリススズカケノキからのアレルゲンである例えばPlaor1、Plaor2、Plaor3、フラガリアアナナッサイチゴからのアレルゲンである例えばFraa1、Fraa3、Fraa4、フムルスヤポニクスカナムグラからのアレルゲンである例えばHumj1、マルスドメスティカリンゴからのアレルゲンである例えばMald1、Mald2、Mald3、Mald4、モルスニグラクワからのアレルゲンである例えばMorn3、パリエタリアユダイカヒカゲミズからのアレルゲンである例えばParj1、Parj2、Parj3、Parj4、パリエタリアオフィキナリスヒカゲミズからのアレルゲンである例えばParo1、プルヌスアルメニアカアプリコットからのアレルゲンである例えばPruar1、Pruar3、プルヌスアウィウムセイヨウミザクラからのアレルゲンである例えばPruav1、Pruav2、Pruav3、Pruav4、プルヌスドメスティカセイヨウスモモからのアレルゲンである例えばPrud3、プルヌスドゥルキスアーモンドからのアレルゲンである例えばPrudu4、Prudu5、プルヌスペルシカモモからのアレルゲンである例えばPrup1、Prup3、Prup4、ピュルスコンムニスナシからのアレルゲンである例えばPyrc1、Pyrc3、Pyrc4、Pyrc5、ルブスイダエウス赤ラズベリーからのアレルゲンである例えばRubi1、Rubi3、ジジフスマウリティアナナツメからのアレルゲンである例えばZizm1、ウィティスウィニフェラからのアレルゲンである例えばVitv1、アナカルディウムオクキデンタレカシューからのアレルゲンである例えばAnao1、Anao2、Anao3、キトルスリモンレモンからのアレルゲンである例えばCitl3、キトルスレティクラタマンダリンからのアレルゲンである例えばCitr3、キトルスシネンシススウィートオレンジからのアレルゲンである例えばCits1、Cits2、Cits3、リッキキネンシスライチからのアレルゲンである例えばLitc1、ピスタキアウェラピスタチオからのアレルゲンである例えばPisv1、Pisv2、Pisv3、Pisv4、Pisv5、カプシクムアンヌウムピーマンからのアレルゲンである例えばCapa1w、Capa2、リュコペルシコンエスクレントゥムトマトからのアレルゲンである例えばLyce1、Lyce2、Lyce3、ソラヌムテュベロスムジャガイモからのアレルゲンである例えばSolat1、Solat2、Solat3、Solat4。本発明のキットは、1種類以上のアレルゲン、例えば2種類、3種類、4種類、5種類、6種類、7種類、8種類、9種類、10種類、15種類、20種類、25種類、50種類、75種類、100種類までの異なるアレルゲンを含むことができる。このキットは、例えば、同じアレルギー源に由来するか、異なるアレルギー源例えば異なる草種からの草グループ1と草グループ5のアレルゲン、または異なるダニ種からのダニグループ1とダニグループ2のアレルゲンに由来する少なくとも2種類の異なるタイプのアレルゲンを含むことができる。本発明のアレルゲンは、抽出液、精製したアレルゲン、改変したアレルゲン、組み換えアレルゲン、組み換えアレルゲンの突然変異体の形態が可能である。この明細書では、アレルゲンという用語に、天然のアレルゲン抽出したもの、精製したもの、組み換え技術で得られたものと、化学的処理、生物学的処理、遺伝子工学のいずれかによって改変されたアレルゲンの両方が含まれる。アレルゲン抽出液は、同じアレルゲンの1種類以上のアイソフォームを当然含むことができるのに対し、組み換えアレルゲンは、典型的には1つのアレルゲンの1つのアイソフォームだけを代表している。好ましい一実施態様では、アレルゲンは抽出液の形態である。別の好ましい一実施態様では、アレルゲンは組み換えアレルゲンである。さらに好ましい一実施態様では、アレルゲンは、天然の低IgE結合突然変異体、または組み換え低IgE結合突然変異体である。個々のアレルゲンが同じモル量で存在してもよいし、アレルゲンの比が、好ましくは1:20まで変化してもよい。特別な一実施態様では、本発明のキットに存在するアレルゲンは、天然のアレルゲンと比べて改変されている。そのようなアレルゲンは、免疫原性を犠牲にすることなくそのアレルゲン性を小さくする望みを持って改変されているため、より少ない注射回数で改善された免疫療法の結果が実現される。免疫療法用の改変されたアレルゲンは、当業者によく知られている。例えばアレルゲンをポリマー化することができる。アレルゲンは、ホルムアルデヒドで処理したアレルゲンであってもよい。これはアレルゴイドと呼ばれることがしばしばある。ポリエチレングリコールで改変したブタクサ抽出液も、免疫療法で使用するために提案されている。改変されたアレルゲンには、突然変異した配列を持つ組み換えアレルゲンも含まれる。材料と方法Pパストリスにおけるクローニングと発現Derp20101をコードしているDNA配列を、α因子配列シグナルがXhoI部位とNotI部位に一致しているpPICZαとpGAPZαインヴィトロジェン社の中でクローニングした。コンストラクトをDNAシークエンシングによってチェックした。メタノール要求性PパストリスであるGS115酵母株またはX33酵母株の中でタンパク質を製造者インヴィトロジェン社の指示に従って発現させた。プラスミドpPICZαDerp2とpGAPZαDerp2を最初にそれぞれSacIまたはAvrIIで消化させ、電気穿孔によって酵母細胞の形質転換に用いた。陽性クローンをYPDゼオシン100μgmlプレート上で選択し、PCRによってコンストラクトの統合を確認した。選択したクローンを緩衝化グリセロール複合培地BMGYpH6に接種し、OD600nmが2~6になるまで30°Cにて一晩増殖させた。次に細胞を緩衝化メタノール複合培地BMMYpH6に希釈して最初のOD600nmを1にし、30°Cにてさらに1~6日間増殖させた。遠心分離後に培養物の上清を回収し、使用するまで20°Cで保管した。あるいは構成的発現に関しては、細胞をYPDの中で30°Cにて5~6日間増殖させた。培養物の上清を遠心分離によって回収し、使用するまで20°Cで保管した。SPXLカラムGEヘルスケア社上での弱いアニオン交換クロマトグラフィによってDerp2を精製した。簡単に述べるならば、上清を解凍し、10mMのNaClと10mMの酢酸ナトリウムを含む結合緩衝液pH5に対して透析し、20mlのCVSPXLに適用した。Derp2は、500mMのNaClと10mMの酢酸ナトリウムを含む緩衝液pH5の勾配を用いて溶離させた。回収した画分をプールし、5kDaのカットオフ膜ミリポア社を用いたアミコンセルの上で濃縮した。SDSPAGEとウエスタンブロット分析Nupage4~12ビストリスアクリルアミドゲルとMES緩衝液を非還元条件下で用い、SDSPAGEによってタンパク質を分離した後、ニトロセルロース膜の上に移した。そのとき、製造者インヴィトロジェン社の指示に従った。見かけの分子量は、SeeBluePlus2ラダーインヴィトロジェン社を用いて見積もった。膜をQentixウエスタンブロット信号エンハンサーピアス社で処理した後、1の無脂乳を含むTBS緩衝液バイオラド社を用いて非特異的部位をブロックした。02の無脂乳と01のトゥイーン20を補足したTBS緩衝液に特異的抗体を一晩かけて添加した。天然のDerp2またはHDMアレルギー患者からの血清プールに向かう抗Dpx02μgml;インドアバイオテクノロジーズ社とKori221B02μgml;スタレルジェンヌ社マウスモノクローナル抗体を用いて検出した1:30。二次抗体には、必要に応じ、HRPが共役したヒツジ抗マウスIgG1:1000;シグマオールドリッチ社、またはマウス抗ヤギ/ヒツジIgG1:5000;シグマオールドリッチ社、またはウサギ抗ヒトIgE1:1000;ダコ社に続けてHRPが共役したヤギ抗ウサギIgG1:10000;カルバイオケム社が含まれていた。スーパーシグナルウエストピコ化学発光基質ピアス社とケミスマート2000CCDカメラヴィルバートルアマット社を用いて検出した。円二色性Jasco810分光測光器ジャスコ社でCD分析を実施した。Pパストリスの中で産生させた組み換えDerp2rDerp2分子をIEXクロマトグラフィによって精製し、150mMのNaClと10mMの酢酸ナトリウムを含む緩衝液pH5の中に保管した。E9250メタノールで誘導のバッチとE9590構成的発現のバッチの中のrDerp2の濃度は、それぞれ028μMと036μMであった。天然の精製Derp2nDerp2を含むPBS緩衝液779μMをインドアバイオテクノロジーズ社ウォーミンスター、イギリス国から購入した。パス長が01cmのセルを用い、スペクトルを、195~250nmの範囲での10回の走査の平均値として記録した。ベースラインは緩衝液のスペクトルを用いて決定した。好塩基球活性化試験アレルゲン性キットベックマンコールター社を用いて好塩基球の活性化をフローサイトメトリーFC500;ベックマンコールター社によって測定したBurtin他、2009年。簡単に述べるならば、ヘパリン処理した全血サンプルを10人のHDMアレルギー患者から取得し、さまざまな濃度の天然Derp2と組み換えDerp2の不在下または存在下で37°Cにて15分間にわたってインキュベートした。Tリンパ球CD3細胞を除去した後、抗CRTH2抗体と抗CD203c抗体で二重に染色することにより、活性化した好塩基球を検出した。PBSまたは抗IgE抗体とともにインキュベートした全血細胞をそれぞれ陰性の対照および陽性の対照として用いた。質量分析RPRSLCUVMS分析Derp2をHypersilGoldC1821×200mm、19μmカラムサーモサイエンティフィック社に適用し、01のギ酸を含む0~100のアセトニトリル勾配どちらもJTBakerからを用いて15分間かけて分離した。次にMaxis質量分析器ブルーカーダルトニクス社に溶離液を注入した。RPRSLCUVMSMSペプチド地図15mMのヨードアセトアミドを含む75mMの炭酸水素アンモニウムを用いてサンプルを30分間にわたってアルキル化した後、トリプシンシグマ社を含む75mMの炭酸水素アンモニウムで消化させた。そのとき比が125のトリプシン/Derp2を用いた。37°Cで16時間にわたって消化させた後、TFAを05まで添加して反応を停止させた。RSLCUltimate3000クロマトグラフィ装置ディオネクス社を用い、AcquityC18BEH130、100×21mm、17μmカラムウォーターズ社上で消化産物を分離した。01ギ酸JTBakerの0~100勾配を用いて55分間かけてペプチド断片を溶離させた後、Maxis質量分析器ブルーカーダルトニクス社に注入した。結果発明者は、一般的な室内塵ダニアレルギーに対するワクチンを開発するため、Derp2アレルゲンを、酵母Pパストリスの中で分泌分子として、構成的に発現させるか、メタノールを用いた誘導の後に発現させた。この分子は抗Derp2特異的モノクローナル抗体と、HDMアレルギー患者からのIgEによってよく認識される図1。さらに、組み換えDerp2は、好塩基球を天然のDerp2と同程度に活性化させることができる図2と図8。発明者はさらに、組み換え分子のコンホメーションを天然のDerp2と比較して分析した。2つの独立なバッチに関する質量分析から計算したrDerp2の質量は、質量の理論値とよく一致した8ppm未満の差。特に、すべてのシステインがジスルフィド結合に関与していることが示された。ジスルフィド結合は分子の3D構造を安定化させるためのカギとなる要素であってその分子のアレルゲン性に影響を与えるためSmithとChapman、1996年、発明者はLCMSMSによってジスルフィド結合をマッピングした。表1からわかるように、大腸菌封入体から構造が復元されたrDerp2とは異なり、Pパストリスの中で発現したrDerp2は、予想された3つのジスルフィド結合Cys8Cys119、Cys21Cys27、Cys73Cys78だけを示した。表1:ジスルフィド結合のマッピングLCMSMSによってジスルフィド架橋を特定した。6個のシステイン残基がペアになって3つの結合となるCys8Cys119、Cys21Cys27、Cys73Cys78Derewenda他、2002年;Mueller他、1997年。大腸菌の中で生じる組み換え分子で観察された予期しない結合は、試験館内で構造を復元させている間に起こるペア形成の間違いである。その後、二次構造の中身を比較するため、組み換えDerp2と天然のDerp2で円二色性を調べた。両方の分子について得られたスペクトルは、組み換えタンパク質が天然のタンパク質と同じように折り畳まれることを示している図3と図4。さらに、10°Cずつの昇温ステップで加熱してから20°Cまで冷却した後に円二色性によって評価すると、天然のDerp2と組み換えDerp2の両方とも熱安定性を示すことが見いだされた図4。最後に、βシートとαヘリックスの割合は、Yangのアルゴリズムを用いると、表2に示してあるように天然のDerp2と組み換えDerp2で似ていることが見いだされた。表2:天然のDerp2と組み換えDerp2におけるβシートとαヘリックスの割合円二色性スペクトルを分析するためのYangのアルゴリズムYangJT、CSWu他、1986年を利用し、天然のDerp2と組み換えDerp2におけるβシートとαヘリックスの割合を決定した。最後に、発明者は、rDerp2がnDerp2アレルギーマウスを減感作させうることを示した。そのことは、nDerp2感作動物における治療後の気道過敏応答の低下、肺好酸球症の減少、より少ないnDerp2特異的Th2T細胞応答によって判断される図5~図7。まとめると、われわれの結果は、酵母PパストリスにおけるDerp2の組み換え発現によって保存された免疫反応性と天然様コンホメーションの両方を持ったタンパク質が生じることを示している。これらの結果は予想外である。なぜなら、天然のものと似たDerp2分子をPパストリスの中で産生させる試みは今日まで失敗してきており、せいぜい部分的に折り畳まれた分子が得られるだけだったからであるTanyaratsrisakul他、2009年。発明者は、PパストリスにおけるrDerp2分子の発現が免疫療法と診断の目的に適していると結論する。参考文献BurtinD、ChabreH、OlagnierB、DidierlaurentA、CouretMN、ComeauD、WambreE、LaparraH、VanOvertveltL、MontandonF他2009年元のDerp1分子と改変された組み換えDerp1分子のタバコ植物における産生、ClinicalExperimentalAllergy、第39巻、760~770ページ。BussieresL、BordasLeFlochV、BulderI、ChabreH、NonyE、LautretteA、BerrouetC、NguefeuY、HoriotS、BaronBodoV他2010年デルマトファゴイデスプテロニュシヌスからのDerp1アレルゲンとDerp2アレルゲンが組み合わされた組み換え融合タンパク質、InternationalArchivesofAllergyandImmunology、第153巻、141~151ページ。DerewendaU、LiJ、DerewendaZ、DauterZ、MuellerGA、RuleGS、BenjaminDC2002年主要な塵ダニアレルゲンDerp2の結晶構造とその生物学的な意味、JMolBiol、第318巻、189~197ページ。HakkaartGA、HarmsenMM、ChuaKY、ThomasWR、AalberseRC、VanReeR1998年パン酵母サッカロミセスセレビジエにおける室内塵ダニアレルゲンDerp2の発現、ClinExpAllergy、第28巻、45~52ページ。MoingeonP、BatardT、FadelR、FratiF、SieberJ、VanOvertveltL2006年アレルゲン特異的舌下免疫療法の免疫機構、Allergy、第61巻、151~165ページ。MuellerGA、SmithAM、WilliamsDCJr、HakkaartGA、AalberseRC、ChapmanMD、RuleGS、BenjaminDC1997年主要な室内塵ダニアレルゲンDerp2の発現と、NMR法による二次構造の決定、JBiolCem、第272巻、26893~26898ページ。PittnerG、VrtalaS、ThomasWR、WeghoferM、KundiM、HorakF、KraftD、ValentaR2004年精製した天然のダニアレルゲンと組み換えダニアレルゲンを用いた室内ダニアレルギーの成分分解診断、ClinExpAllergy、第34巻、597~603ページ。SmithAM、ChapmanMD1996年部位特異的突然変異誘発によって生成させたアレルゲン変異体へのIgEの結合の低下:主要な室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