"式I[式中、Rは水素またはフルオロを表す]の化合物またはその立体化学的異性体、あるいはそれらの付加塩または溶媒和物。Rがフルオロであり、かつ、化合物がラセミ混合物である請求項1に記載の化合物、あるいはそれらの付加塩または溶媒和物。Rがフルオロであり、かつ、化合物が旋光度[α]=-14.4°c=0.3、MeOH,λ=598nm;20°Cを有する請求項1に記載の化合物、あるいはそれらの付加塩または溶媒和物。治療に有効な量の請求項1ないし3のいずれか1項に定める化合物、および製薬学的に許容され得る担体を含んでなる製薬学的組成物。製薬学的に許容され得る担体を、治療に有効な量の請求項1ないし3のいずれか1項に定める化合物と完全に混合することを特徴とする、請求項5に定義する製薬学的組成物の調製方法。肺動脈性高血圧症、肺線維症または過敏性腸症候群の処置または防止に使用するための請求項1ないし3のいずれか1項に定める化合物。治療に有効な量の請求項1ないし3のいずれか1項に定める化合物を必要な個体に投与することを含んでなる、肺動脈性高血圧症、肺線維症または過敏性腸症候群の処置または防止方法。実験の部合成例今後、用語M.P.は融点を意味し、THFはテトラヒドロフランを意味し、DMFはジメチルホルムアミドを意味し、DCMはジクロロメタンを意味し、EtOAcは酢酸エチルを意味し、AcOHは酢酸を意味し、MeOHはメタノールを意味し、racはラセミを意味し、Et2Oはジエチルエーテルを意味し、DMAPはジメチルアミノピリジンを意味し、DMSOはジメチルスルホキシドを意味し、hexはヘキサンを意味し、そしてTFAはトリフルオロ酢酸を意味し、DEAはジエチルアミンを意味する。トランス-4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシ-プロピル]-ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド7の合成シス-1-Boc-3-フルオロ-4-ヒドロキシピペリジン3の合成0.5g2.3mmolのN-Boc-3-フルオロ-4-ピペリジノン2J.Med.Chem.1999,42,2087-2104の溶液10mLの乾燥THF中に、2.8mL2.76mmolの1MLi-セレクトライドselectride溶液THF中を、N2雰囲気下、0°Cで滴下した。溶液を0°Cで4時間攪拌し、次いで10mLの2MNaOHを0°Cで加え、そして混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物をEt2Oで抽出し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そして減圧下で蒸発させた。粗混合物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにかけてhex/EtOAc/Et3N1:1:0.1、0.27g56の純粋なシス-1-Boc-3-フルオロ-4-ヒドロキシピペリジン3を無色の油として得、これは-20°Cに冷凍庫置くと固化した。Mp48°C。1HNMR300MHz,CDCl3:δ1.469H,s,3xCH3,1.67-1.912H,m,CH2,2.40-2.651H,m,OH,2.92-3.352H,m,CH2CHaHbNおよびCHaHbCHF,3.55-3.943H,m,CH2CHaHbNおよびCHOHおよびCHaHbCHF,4.521H,dm,J=48.4Hz,CHF.19FNMR282MHz,CDCl3:δ-201.9および-203.11F,2xm.13CNMR75MHz,CDCl3:δ28.43x,29.2,40.4,44.8,68.0d,J=17.3Hz,80.2,88.6d,J=177.7Hz,155.1.IRKBr:ν3413,1674,1429,1167cm-1.GC-MSEI:m/z:219M,4,16446,14650,57C4H9,100.トランス-4-アジド-1-Boc-3-フルオロピペリジン4の合成0.60g2.74mmolのシス-1-Boc-3-フルオロ-4-ヒドロキシピペリジン3の溶液15mLのDCM中に、0.42g4.11mmolのトリエチルアミンおよび37mg0.3mmolの4-N,N-ジメチルアミノピリジンDMAPを、室温で加えた。次いで0.57g3.01mmolのp-トルエンスルホニルクロライド溶液2mLのDCM中を乾燥雰囲気下CaCl2管、室温で加えた。室温で15時間攪拌した後、溶液をブライン20mLに注ぎ、そしてDCM3x25mLで抽出した。MgSO4で乾燥し、濾過し、そして溶媒を蒸発させた後、粗混合物をさらに精製せずにそのまま次の工程に使用した。得られたトシラートを5mLの乾燥DMSOに溶解し、そして0.36g5.48mmolのNaN3を加えた。混合物をN2雰囲気下で90°Cにて15時間攪拌した。冷却後、混合物をブライン10mLに注ぎ、そしてEtOAcで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そして真空下で蒸発させた。トランス-4-アジド-1-Boc-3-フルオロピペリジン4は、4-ヒドロキシピペリジン3から無色の油として92の収率で得られ、そしてさらに使用するに十分な純度であった。1HMRCDCl3:δ1.439H,s;1.44-1.641H,m;1.971H,ddd,J=4.3Hz,8.4Hz,18.0Hz;2.991H,ddd,J=3.3Hz,10.5Hz,13.8Hz;3.00-3.152H,m;3.57-3.681H,m;3.791H,dt,J=13.8Hz,J=4.4Hz;4.00-4.191H,m;4.33tdd,J=47.9Hz,J=8.3Hz,J=4.4Hz.19FNMRCDCl3:δ-188.1IF,dbr,J=47.4Hz.13CNMRCDCl3:δ28.34x,41.2br,45.5br,61.4d,J=20.7Hz,80.6,88.9d,J=182.3Hz,154.4.IRATR,cm-1:ν=2099,1693,1417,1236,1161,1141.MSESm/z:227MH,100.トランス-4-アミノ-1-Boc-3-フルオロピペリジン5の合成0.59g2.42mmolのトランス-4-アジド-1-Boc-3-フルオロピペリジン4の溶液10mLのMeOH中に、0.61g9.67mmolのギ酸アンモニウムおよび0.25g0.24mmolPdの炭素担持10Pdを加えた。反応混合物はN2雰囲気下で50°Cにて5時間攪拌した。冷却後、混合物を珪藻土で濾過し、そして減圧下で蒸発させた。粗混合物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにかけてEtOAc中の5/Et3N、短路カラム、0.42g80のトランス-4-アミノ-1-Boc-3-フルオロピペリジン5を油として得た。1HNMRCDCl3:δ1.399H,s;1.602H,sbr;1.76-1.861H,m;2.65-2.762H,m;2.78-2.902H,m;3.89-3.971H,m;4.011H,dm,J=48.5Hz;4.15-4.301H,m.19FNMRCDCl3:δ-191.0~-190.31F,m.13CNMRCDCl3:δ28.43x,31.8,41.9br,46.2br,53.5d,J=18.5Hz,80.3,93.0d,J=177.7Hz,154.6.IRATR,cm-1:ν=1685,1415,1244,1152,1028.MSESm/z:204M-CH3H,163M-3CH32H,100.トランス-tert-ブチル-44-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンゾイルアミノ-3-フルオロピペリジンー1-カルボキシレート6の合成0.41g2.02mmolの4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ安息香酸の溶液10mLの乾燥DMF中に、0.29g2.89mmolのトリエチルアミンを室温でN2雰囲気下にて加えた。室温で10分間攪拌した後、0.22g2.02mmolのクロロギ酸エチル溶液2mLのDMF中を室温で滴下し、そして攪拌を30分間続行し、この間、温度を室温に維持した水浴で室温に冷却した。次いで0.27g2.02mmolの固体のヒドロキシベンゾトリアゾールを室温にて1回で加え、そして攪拌を30分間続行した。引き続き0.42g1.93mmolのアミン5の溶液3mLのDMF中を、室温で滴下し、そして反応混合物を室温で一晩攪拌した。その後、混合物を20mLのブラインに注ぎ、そしてEtOAcで抽出した3x25mL。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そして減圧下で蒸発させた。粗混合物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにかけてhex/EtOAc/Et3N1:1:0.1、0.72g93の純粋なトランス-tert-ブチル4-4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンゾイルアミノ-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート6を固体として得た。1HMRCDCl3:δ1.479H,s;2.17-2.281H,m;2.96-3.192H,m;3.741H,dm,J=13.7Hz;3.903H,s;3.92-4.403H,m;4.451H,ddt,J=4.4Hz,8.3Hz,J=48.4Hz;6.301H,s;7.821H,d,J=7.2Hz;8.081H,s.19FMRCDCl3:δ-189.0d,J=44.7Hz.13CNMRCDCl3:δ28.43x,29.1br,41.5br,45.6br,50.1br,56.4,80.4,88.2d,J=182.3Hz,97.9,111.8,112.1,133.2,147.1,154.7,157.6;164.5.IRATR,cm-1:ν=3478,3378,1683,1619,1593,1420,1247,1146.MSESm/z:346/48MH,100;402/404MH,60.トランス-4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピぺリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド7の合成0.14g0.34mmolのtert-ブチル4-4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンゾイルアミノ-3-フルオロピペリジンー1-カルボキシレート6の溶液5mLのDCM中に、0.39g3.4mmolのトリフルオロ酢酸を0°Cで乾燥雰囲気下CaCl2管で加えた。0°Cで5時間攪拌した後、混合物を減圧下で蒸発させた。この油状残渣を10mLの乾燥ジエチルエーテルに溶解し、0°Cに冷却し、そして形成した結晶TFA塩を単離したフィルターまたはEt2Oデカント。乾燥そしてさらに蒸発させた後、4-アミノ-5-クロロ-N-3-フルオロピペリジン-4-イル-2-メトキシベンズアミドの白色の結晶TFA-塩を、5mLの乾燥DMFに溶解した。この溶液に、0.17g1.70mmolのトリエチルアミン、55mg0.34mmolのヨウ化ナトリウムおよび65mg0.34mmolの3-4-フルオロフェノキシプロピル-1-クロライドを室温にて乾燥雰囲気下で加えた。混合物を4時間で110°C~120°Cに加熱した。冷却後、混合物を25mLのEtOAcで希釈し、ブライン25mLに注ぎ、そしてEtOAc3x25mLで抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そして減圧下で蒸発させた。粗混合物を勾配フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにかけてEtOAc/hex/Et3N3:2:0.1~EtOAc中の1Et3N、85mg55のトランス-4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}2-メトキシベンズアミド7を淡い黄色の固体として得た。Mp125°C。任意にEtOAc/EtOHから再結晶化。1HNMRCDCl3:δ1.46-1.591H,m;1.942H,五重線,J=6.6Hz;2.18-2.343H,m;2.582H,t,J=6.6Hz;2.761H,dm,J=11.6Hz;3.131H,tdbr,J=4.4Hz,9.9Hz;3.873H,s;3.962H,t,J=6.6Hz;4.09-4.231H,m;4.471H,ddt,J=4.4Hz,J=9.4Hz,J=49.5Hz;4.482H,sbr;6.021H,s;6.79-6.862H,m;6.92-7.002H,m;7.791H,d,J=7.7Hz,8.091H,s.19FNMRCDCl3:δ-187.6d,J=51.3Hz;-124.0tt,J=3.9Hz,J=9.2Hz.13CNMRCDCl3:δ27.0,29.9d,J=6.9Hz,51.0d,J=18.5Hz,51.5,54.6,56.2,56.3d,J=24.2Hz,66.7,89.0,90.2d,J=178.8Hz,97.9,111.7,112.3,2x115.5d,J=8.0Hz,2x115.8d,J=23.0Hz,133.2,147.0,155.2,157.3d,J=238.9Hz,157.6,164.6.IRATR,cm-1:ν=3453,3370,3317,3194,1631,1584,1537,1508,1250,1200.MSESm/z:454/456MH,100.トランス-4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド7のキラル分離化合物7をそのエナンチオマーに超臨界流体クロマトグラフィーにより分割した。量:80mg添加:10mg/3.00ml条件:カラム:OD20x250mmI移動相:37MeOH0.2iPrNH2を含む、9.00分維持パラメーター:流速=50ml/分カラム温度=40°Cノズル圧=10MPa注入の種類:スタックstacked注入8x回収法:標準的なピーク検出を使用した回収ピーク1は5分20秒に溶出し、そして左旋性エナンチオマー--7[α]=-22.8°c=0.3、MeOH,λ=598nm;20°Cを得た。ピーク2は7分30秒に溶出し、そして右旋性エナンチオマー-7[α]=19.2°c=0.4、MeOH,λ=598nm;20°Cを得た。シスー4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}2-メトキシベンズアミド12の合成シス-N-1-Boc-3-フルオロピペリジン-4-イルアミン10の合成化合物は文献:1J.Med.Chem.1999,42,2087-2104,および2国際公開第2007071965号パンフレットに開示されているように調製した。シス-tert-ブチル4-4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンゾイルアミノ-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート11の合成0.97g4.82mmolの4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ安息香酸の溶液25mLの乾燥DMF中に、0.70g6.88mmolのトリエチルアミンを室温でN2雰囲気下にて加えた。室温で10分間攪拌した後、0.52g4.82mmolのクロロギ酸エチル溶液1mLのDMF中を室温で滴下し、そして攪拌を30分間続行した。次いで0.65g4.82mmolの固体のヒドロキシベンゾトリアゾールを室温にて1回で加え、そして溶液を30分間攪拌した。引き続き1.0g4.59mmolのアミン10の溶液3mLのDMF中を室温で滴下し、そして反応混合物を室温で一晩攪拌した。その後、混合物を100mLのブラインに注ぎ、そしてEtOAcで抽出した4x30mL。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そして減圧下で蒸発させた。粗混合物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにかけてhex/EtOAc/Et3N1:1:0.1;Rf=0.01、1.25g68の純粋なtert-ブチル4-4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンゾイルアミノ-3-フルオロピペリジン-1-カルボキシレート11を固体として得た。Mp198-199°C。1HMRCDCl3:δ1.359H,s;1.44-1.772H,m;2.77-2.981H,m;3.813H,s;4.04-4.324H,m;4.422H,sbr;4.651H,d,J=48.9Hz;6.231H,s;7.951H,sbr;8.011H,s.19FNMRCDCl3:δ-203.5から-204.51F,m.13CNMRCDCl3:δ26.6,28.53x,42.3br,46.5br,48.6d,J=17.3Hz,52.2,80.1,87.9d,J=176.5Hz,97.9,111.6,112.0,133.1,147.1,155.2,157.7,164.0.IRATR,cm-1:ν=3470,3393,3310,1697,1637,1612,1534,1420.MSESm/z:402/404MH,100.シス-4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]-ピぺリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド12の合成。1.00g2.49mmolのtert-ブチル4-4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシベンゾイルアミノ-3-フルオロピペリジンー1-カルボキシレート11の溶液10mLのDCM中に、2.83g24.9mmolのトリフルオロ酢酸を0°Cで乾燥雰囲気下CaCl2管で加えた。0°Cで4時間攪拌した後、混合物を減圧下で蒸発させた。この油状残渣を25mLの乾燥ジエチルエーテルに溶解し、0°Cに冷却し、そして形成した結晶TFA塩を単離したフィルターまたはEt2Oデカント。乾燥そしてさらに真空下で蒸発させた後、0.78gの4-アミノ-5-クロロ-N-3-フルオロピペリジン-4-イル-2-メトキシベンズアミドのTFA-塩を白色固体として得た。得られた塩の0.78gの溶液10mLのDMF中に、1.26g12.45mmolのトリエチルアミン、0.37g2.49mmolのヨウ化ナトリウム、次いで0.47g2.49mmolの3-4-フルオロフェノキシプロピル-1-クロライドを室温にて乾燥雰囲気下で加えた。混合物を2時間で120°Cで加熱した。冷却後、混合物を25mLのEtOAcで希釈し、ブライン25mLに注ぎ、そしてEtOAc3x25mLで抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そして減圧下で蒸発させた。粗混合物を勾配フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーにかけてEtOAc/hex/Et3N3:1:0.1~EtOAc中の1Et3N、49の4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド12を淡い黄色の固体として得た。Mp137°C。任意にEtOAc/EtOHから再結晶化。1HMRCDCl3:δ1.83-1.922H,m;1.942H,五重線,J=6.6Hz;2.10-2.352H,m;2.47-2.612H,m;2.941H,dbr,J=11.6Hz;3.241H,tbr,J=11.3Hz;3.853H,s;3.952H,t,J=6.6Hz;4.08-4.271H,m;4.412H,sbr;4.731H,dbr,J=49.6Hz;6.261H,s,6.76-6.842H,m;6.89-6.972H,m;8.031H,sbr;8.061H,s.19FNMRCDCl3:δ-199.3~-200.01F,m;-124.11F,tt,J=7.9Hz,J=5.3Hz.13CNMRCDCl3:δ26.9,27.4,48.3d,J=18.4Hz,52.0,54.7,56.1d,J=18.3Hz,56.2,66.8,88.8d,J=175.3Hz,97.9Hz,111.6,112.2,2x115.6d,J=8.0Hz,2x115.8d,J=23.1Hz,133.1,147.0,155.2,157.2d,J=237.7Hz,157.7,164.0.IRATR,cm-1:ν=3477,3398,3322,1636,1612,1583,1537,1505,1247,1209.MSESm/z:454/456MH,100.シス-4-アミノ-5-クロロ-N-{3-フルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド12のキラル分離。化合物12をそのエナンチオマーに超臨界流体クロマトグラフィーにより分割した。量:152mg添加:8.5mg/1.250ml条件:カラム:OJ20x250mmI移動相:19MeOH0.2iPrNH2を含む、14.00分維持パラメーター:流速=50ml/分カラム温度=40°Cノズル圧=10MPa注入の種類:スタック注入18x回収法:標準的なピーク検出を使用した回収ピーク1は10分20秒に溶出し、そして左旋性エナンチオマー--12[α]=-45.5°c=0.2、MeOH,λ=598nm;20°Cを得た。ピーク2は11分40秒に溶出し、そして右旋性エナンチオマー-12[α]=39.8°c=0.2、MeOH,λ=598nm;20°Cを得た。4-アミノ-5-クロロ-N-{3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]-ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド17の合成ベンジル-3,3-ジフルオロ-ピペリジン-4-イルアミン14の合成100mLのフラスコ内で、2.00g8.0mmolの3,3-ジフルオロ-4,4-ジヒドロキシ-1-トリフルオロアセチルピペリジン13J.OrgChem.2010,75,929-932、および2.15g20.0mmol;2.5当量のベンジルアミンを50mLのトルエンに溶解した。混合物をディーンスタークトラップで15時間、加熱還流した。室温に冷却後、溶媒を真空下で除去した。生じた油を25mLの無水メタノールに溶解し、そして0.56g8.8mmol;1.1当量のシアノ水素化ホウ素ナトリウムおよび0.48g8.0mmol;1当量の酢酸を室温でゆっくり加えた。この溶液を室温で4時間攪拌した。溶媒を真空下で除去した後、粗油crudeoilを50mLのジクロロメタンに再溶解し、そして50mLの飽和NaHCO3水溶液に注ぎ、そして引き続きジクロロメタンで抽出した3x50mL。合わせた有機層をブラインで洗浄し、そしてMgSO4で乾燥した。固体を濾過し、そして溶媒を蒸発させて粗油を得、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製してEtOAc,Rf=0.03,1.32g5.8mmol;73収率のベンジル-3,3-ジフルオロ-ピペリジン-4-イルアミン14を黄色い油として得た。1HMRCDCl3:δ1.83-1.922H,m;1.942H,五重線,J=6.6Hz;2.10-2.352H,m;2.47-2.612H,m;2.941H,dbr,J=11.6Hz;3.241H,tbr,J=11.3Hz;3.853H,s;3.952H,t,J=6.6Hz;4.08-4.271H,m;4.412H,sbr;4.731H,dbr,J=49.6Hz;6.261H,s,6.76-6.842H,m;6.89-6.972H,m;8.031H,sbr;8.061H,s.19FNMRCDCl3:δ-199.3から-200.01F,m;-124.11F,tt,J=7.9Hz,J=5.3Hz.13CNMRCDCl3:δ26.9,27.4,48.3d,J=18.4Hz,52.0,54.7,56.1d,J=18.3Hz,56.2,66.8,88.8d,J=175.3Hz,97.9Hz,111.6,112.2,2x115.6d,J=8.0Hz,2x115.8d,J=23.1Hz,133.1,147.0,155.2,157.2d,J=237.7Hz,157.7,164.0.IRATR,cm-1:ν=3477,3398,3322,1636,1612,1583,1537,1505,1247,1209.MSESm/z:454/456MH,100.ベンジル-{3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロ-フェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}アミン15の合成100mLのフラスコ内で、1.22g5.4mmolのベンジル-3,3-ジフルオロ-ピペリジン-4-イルアミン14,0.81g5.4mmol;1当量のヨウ化ナトリウム、2.73g27.0mmol;5当量のトリエチルアミンおよび1.05g5.4mmol;1当量の1-3-クロロプロポキシ-4-フルオロベンゼンの混合物70mLを、120°Cで30時間攪拌した。別に27.3g27.0mmol;5当量のトリエチルアミンを加え、そして混合物を120°Cで16時間攪拌した。次いで1.05g5.4mmol;1当量の1-3-クロロプロポキシ-4-フルオロベンゼンを加え、そして混合物を120°Cで54時間、反応が完了するまで攪拌した。溶媒を真空下で除去し、そして粗油を100mLのEtOAcに再溶解し、そしてブラインで洗浄し、そしてMgSO4で乾燥した。固体を濾過し、そして溶媒を蒸発させて粗油を得、これをフラッシュクロマトグラフィーにより精製してヘキサン/EtOAc1:1,Rf=0.19~0.38,1.00g2.6mmol;49収率のベンジル-{3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロ-フェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}アミン15を茶色い油として得た。1HMRCDCl3:δ1.48-1.621H,m,CHaHb;1.581H,s広い,NH;1.80-1.921H,m,CHaHb;1.862H,五重線,J=6.9Hz,CH2;2.091H,t,J=10.7Hz,NCHaHb;2.261H,ddd,J=23.8Hz,12.3Hz,3.4Hz,NCHaHbCF2;2.41-2.572H,m,NCH2;2.68-2.822H,m,NCHおよびNCHaHb;2.991H,td,J=11.3Hz,8.8Hz,NCHaHbCF2;3.841H,d,J=14.0Hz,CHaHbPh;3.892H,t,J=6.9Hz,OCH2;3.911H,d,14.0Hz,CHaHbPh;6.742H,dd,J=9.4Hz,4.4Hz,2×CHar;6.872H,t,J=9.4Hz,2×CHar;7.14-7.305H,m,5×CHar.19FNMRCDCl3:δ-104.91F,d,J=225.6Hz,CFaFb;-116.91F,d広い,J=225.6Hz,CFaFb;-124.01F,tt,J=7.9Hz,4.0Hz,CarF.13CNMRCDCl3:δ26.7CH2,アルキル;29.2d,J=5.8Hz,CH2;50.8NCH2;51.5NCH2Ph;53.9NCH2,アルキル;57.0t,J=20.8Hz,NCH;57.2t,J=27.7Hz,NCH2CF2;66.4OCH2;115.4d,J=8.1Hz,2×CHar;115.7d,J=23.1Hz,2×CHar;120.9t,J=245.2Hz,CF2;127.0CHar;128.02×CHar;128.52×CHar;140.2Car;155.0d,J=2.3Hz,OCar;157.1d,J=238.8Hz,CarF.IRATR,cm-1:ν=3334NH;3062;3028;2953;2823;1682;1602;1505;1470;1454;1388;1346;1292;1247;1205;1152;1118;1097;1064;1028;987;912;828;736;699.MSESm/z:379MH,100.3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-アミン16の合成乾燥した圧力容器内で、0.83g2.2mmolのベンジル-{3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}アミン15を10mLのメタノールに溶解した。0.33g40重量のPd/C10を0°Cで加えた後、この混合物を480kPaの水素圧下で室温にて15時間攪拌した。混合物を珪藻土で濾過した。溶媒を真空下で蒸発させて0.57g2.0mmol;90収率の3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-アミン16を黄色い油として得た。1HMRCDCl3:δ1.541H,dddd,J=24.5Hz,11.3Hz,3.7Hz,1.7Hz,CHaHb;1.80-1.991H,m,CHaHb;1.862H,五重線,J=6.7Hz,CH2;2.111H,t,J=11.6Hz,NCHaHb;2.211H,ddd,J=26.4Hz,12.1Hz,2.2Hz,NCHaHbCF2;1.422H,s広い,NH2;2.44-2.612H,m,NCH2;2.76-2.922H,m,NCHおよびNCHaHb;3.00-3.131H,m,NCHaHbCF2;3.902H,t,J=6.7Hz,OCH2;6.752H,dd,J=9.4Hz,4.4Hz,2×CHar;6.882H,t,J=9.4Hz,2×CHar.19FNMRCDCl3:δ-109.61F,d,J=239.4Hz,CFaFb;-120.51F,d広い,J=239.4Hz,CFaFb;-124.01F,tt,J=7.9Hz,4.0Hz,CarF.13CNMRCDCl3:δ26.8CH2,アルキル;30.6d,J=6.9Hz,CH2;51.4NCH2;52.8t,J=22.5Hz,NCH;53.9NCH2,アルキル;57.0dd,J=29.4Hz,24.8Hz,NCH2CF2;66.4OCH2;115.4d,J=6.9Hz,2×CHar;115.7d,J=21.9Hz,2×CHar;119.6dd,J=245.8Hz,241.1Hz,CF2;155.0OCar;157.2d,J=237.7Hz,CarF.IRATR,cm-1:ν=3384;2952;2821;1601;1505;1470;1390;1348;1294;1247;1204;1146;1078;915;828;757;735.MSESm/z:289MH,100.4-アミノ-5-クロロ-N-{3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド17の合成50mLの乾燥フラスコ内で、0.44g2.2mmol;1.1当量の4-アミノ-5-クロロ-2-メトキシ安息香酸および0.30g3mmol;1.5当量のトリエチルアミンを、25mLのジメチルホルムアミドに溶解し、そして室温で10分間攪拌した。次いで混合物を0°Cに冷却し、そして0.24g2.2mmol;1.1当量のクロロギ酸エチルを加え、そして室温で30分間攪拌した。次いで0.29g2.2mmol;1.1当量の1-ヒドロキシベンゾトリアゾールを加え、そして室温で30分間攪拌した。次いで0.57gの3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-アミン16を加え、そして混合物を室温で15時間攪拌した。溶媒を真空下で蒸発させた後、粗油をEtOAcに再溶解し、そして50mLのブラインに注ぎ、そしてEtOAcで抽出した4x50mL。有機相をブラインで洗浄し、そしてMgSO4で乾燥した。固体を濾過し、そして溶媒を真空下で蒸発させた後、粗油をフラッシュクロマトグラフィーにより精製してヘキサン/EtOAc3:7,Rf=0.35、0.66g1.4mmol;71収率の純粋な4-アミノ-5-クロロ-N-{3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド17を白色結晶として得た。M.p.=125.8°Cヘキサン/EtOH1:1。1HMRCDCl3:δ1.541H,dddd,J=24.5Hz,11.3Hz,3.7Hz,1.7Hz,CHaHb;1.80-1.991H,m,CHaHb;1.862H,五重線,J=6.7Hz,CH2;2.111H,t,J=11.6Hz,NCHaHb;2.211H,ddd,J=26.4Hz,12.1Hz,2.2Hz,NCHaHbCF2;1.422H,s広い,NH2;2.44-2.612H,m,NCH2;2.76-2.922H,m,NCHandNCHaHb;3.00-3.131H,m,NCHaHbCF2;3.902H,t,J=6.7Hz,OCH2;6.752H,dd,J=9.4Hz,4.4Hz,2×CHar;6.882H,t,J=9.4Hz,2×CHar.19FNMRCDCl3:δ-109.61F,d,J=239.4Hz,CFaFb;-120.51F,d広い,J=239.4Hz,CFaFb;-124.01F,tt,J=7.9Hz,4.0Hz,CarF.13CNMRCDCl3:δ26.8CH2,アルキル;30.6d,J=6.9Hz,CH2;51.4NCH2;52.8t,J=22.5Hz,NCH;53.9NCH2,アルキル;57.0dd,J=29.4Hz,24.8Hz,NCH2CF2;66.4OCH2;115.4d,J=6.9Hz,2×CHar;115.7d,J=21.9Hz,2×CHar;119.6dd,J=245.8Hz,241.1Hz,CF2;155.0OCar;157.2d,J=237.7Hz,CarF.IRATR,cm-1:ν=3384;2952;2821;1601;1505;1470;1390;1348;1294;1247;1204;1146;1078;915;828;757;735.MSESm/z:289MH,100.4-アミノ-5-クロロ-N-{3,3-ジフルオロ-1-[3-4-フルオロフェノキシプロピル]ピペリジン-4-イル}-2-メトキシベンズアミド17のキラル分離170mgの17をそのエナンチオマーに超臨界流体クロマトグラフィーによりBergerMultigram商標Mettler,ToledoCo.,Ltdで、IC250mm※50mm、5mmカラムを用いて分割した。移動相:超臨界CO2:0.05DEAを含むMeOH=75:25、160ml/分でカラム温度:38°Cノズル圧:30MPaノズル温度:20°Cエバポレーター温度:20°Cトリマー温度:25°C波長:220nmピーク1は7.4分に溶出し、そして右旋性エナンチオマー-17e.e=100;[α]=14.1°c=0.3、MeOH,λ=598nm;20°Cを得た。ピーク2は8.5分に溶出し、そして左旋性エナンチオマー--17e.e=98.6;[α]=-14.4°c=0.3、MeOH,λ=598nm;20°Cを得た。薬理学的実施例受容体の結合競合的な放射性リガンド結合アッセイを使用して、試験化合物の特定受容体に対する親和性を測定した。様々な濃度の非標識試験化合物を、目的の受容体を含有する膜画分、および固定の低濃度nM放射性リガンドを含むインキュベーション混合物に加えた。このインキュベーション中、放射性リガンドは受容体に結合するが、この結合は非標識試験化合物によりその結合親和性および濃度に比例して阻害される。適切なcDNAでトランスフェクションした後に、調査する条件下で受容体のヒトバリアントを安定に発現する細胞株が樹立された表1。トランスフェクトした細胞を標準的な培養条件下で増殖させ、そして膜画分を細胞の遠心および均一化で得た。結合実験に至適な膜の希釈を決定し、そしてアリコートを使用するまで-70°Cで保存した。96ウェルプレートの形式で、適切な放射性リガンドは、受容体を含有する膜調製物に調査下で加えた。化合物溶液をDMSO中に調製し、そして100倍にマルチウェルプレート中で希釈して、最終試験濃度を10-9~10-5Mとした。試験化合物とインキュベーションした後、非結合の放射性リガンドはFiltermate96を用いてG/Fフィルターで濾過することにより除去した。Microscint商標を洗浄したフィルタープレートに加え、そして受容体に結合した放射活性をTopCountPackard中での液体シンチレーションカウンティングにより測定した。非特異的結合NSBを測定するために、高濃度の非放射性リガンドを、膜画分および放射性リガンドを含有するウェルに加えた。試験化合物により誘導される受容体への放射性リガンドの結合の阻害は、式効果=100-[サンプル-NSB/HC-NSB※100]により算出され、式中、サンプル=薬剤で処理したウェル中の放射能カウント、HC=放射性リガンドのみとインキュベーションした対照ウェル中の放射能カウント。阻害対試験化合物濃度をプロットするために、自家製ソフトウェアを使用して、最適な曲線を最小平方和法によりあてはめた。これからpIC50値特異的結合の50置換を生じる阻害濃度が決定され、ならびにプロットの傾斜も予測されたヒル係数。5-HT2B拮抗作用CHO-K1ECACC細胞は、pCDNA3.1にサブクローン化したヒト5-HT2B受容体のcDNAを用いてリン酸カルシウム法により安定にトランスフェクトした。安定にトランスフェクトした細胞株はG-418を使用して選択し、そしてクローン性細胞株を限界希釈により成長させた。細胞株は10の熱不活性化透析ウシ胎児血清FBS、1ペニシリン-ストレプトマイシン、1L-グルタミンおよび1非必須アミノ酸を含有するダルベッコの改良イーグル培地DMEMで培養した。透明な底の、黒い96ウェルプレートにまかれたコンフルエントな単層に、4μMのFluo-3-AM20mMHEPESおよび2.5mMプロベネシッドprobenecidを補充したハンクスバランス塩溶液中を37°Cで90分間乗せた。洗浄後、試験化合物を細胞に加え、そして0.1nMのセロトニンに応答する最大の蛍光を、蛍光撮像プレートリーダーFLIPRを使用して記録して細胞内のカルシウムレベルの変化を検出した。試験化合物の存在下で記録された最大の蛍光は、アゴニストであるセロトニン0.1nMに対する最大の蛍光応答の割合として表わした。IC50値はヒルの式の曲線あてはめY=D[A-D/1C/C50nH]、式中、Y=特異的応答、D=最小の特異的応答薬剤またはセロトニンは加えず、A=最大の特異的応答0.1nMセロトニン、薬剤なし、C=化合物濃度、およびC50=IC50、そしてnH=傾斜因子SigmaPlot商標4.0、SPSSInc.を使用して、平均反復値meanreplicatevalueで作成した濃度-応答曲線の非線形回帰分析により決定した。見かけの解離定数KBは改良ChengPrusoff式KB=IC50/1A/EC50A、式中、A=セロトニン濃度、そしてEC50A=このアッセイ中のセロトニンのEC50値を使用して算出した。Porteretal.1999,Br.J.Pharmacol.,128:13-20。Patch発現装置を使用したhERG-トランスフェクトHEK293細胞実験は、hERGカリウムチャンネルを安定に発現しているHEK293細胞を使用して行った。細胞は培養フラスコ中、37°Cおよび5CO2で、10の熱不活性化ウシ胎児血清、1のL-グルタミン-ペニシリン-ストレプトマイシン溶液、1非必須アミノ酸100x、1ピルビン酸ナトリウム100mMおよび0.8ジェネティシン50mg/mlを補充したMEM培地中で成長させた。使用前に細胞は、5mLのL-グルタミン-ペニシリン-ストレプトマイシンを含まないMEM培地中で継代培養した。自動化パッチ-クランプシステムのPatchXpress7000AAxonInstrumentsで使用するために、細胞を回収して単一細胞の細胞懸濁液を得た。細胞外溶液は以下を含んだmM:150NaCl、4KCl、1MgCl2、1.8CaCl2、10HEPES、5グルコースpH7.4、NaOHを含む。ピぺット溶液は以下を含んだmM:120KCl、10HEPES、5EGTA、4ATP-Mg2、2MgCl2、0.5CaCl2pH7.2、KOHを含む。パッチ-クランプ実験は、電圧-クランプ様式で行い、そして全細胞電流をPatchXpress7000AシステムAxonInstrumentsを使用した自動化パッチ-クランプアッセイで記録した。電流の信号をMulticlamp増幅器で増幅し、そしてPatchXpress、DataXpressソフトウェアおよびIgor5.0Wavemetricsを使用することによりデジタル化し、保存し、そして分析した。保持電位は-80mVであった。hERG電流K-選択的外側電流は、60mVに対して2秒間脱分極した後に-40mVでの最大テール電流として決定した。パルスサイクル速度は15秒であった。各試験パルスの前に、-60mVに対する保持電位から短いパルス0.5sを与えて、直線状リーク電流を決定した。全細胞の配置を確立し、そして安定性期間の後、賦形剤水性DMSO対照を5分間適用し、続いて試験物質を濃度を上げながら10-7M、3X10-7Mおよび3X10-6M適用した。各試験物質濃度を2回適用した。各濃度の効果は、5分後に3つの連続電圧パルスの平均電流として決定した。遮断の程度を測定するために、残余電流を賦形剤での前処理と比較した。データは表4に示した濃度での遮断として表わす。カッコ内の値は賦形剤による遮断を指す。ラットを対象としたモノクロタリン誘発性肺動脈性高血圧化合物--17を、ラットを対象としてモノクロタリン誘発性肺動脈性高血圧で試験した例えばStenmarketal,2009,AmJPhysiolLungCellMolPhysiol297,L1013-L1032参照。測定には以下を含んだ:インビボでの平均動脈血圧および右室圧、右心室肥大の指数として右心室重量対左心室重量隔膜の比、肺動脈加速時間、および肺動脈の筋層化の組織学的評価。モノクロタリンは1NHClに溶解し、次いで蒸留水に入れ、そしてpHをNaOHで7.4に調整した。60mg/kgのモノクロタリンの単回用量を、0日に3群のオスのSpragueDawleyラットに皮下投与した。試験物質の化合物--17を、発熱物質を含まない水中にNaOH、HClおよびマンニトールと共に含む20ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリンに溶解し、そして1日目から21日間、1日1回、10mg/kgおよび50mg/kgで胃管栄養法により経口投与した10ml/kg。化合物--17の血漿濃度は、21日目の最終投与から2時間後に測定したラットに経口投与した後の近似Cmax。対応する容量の20ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン賦形剤を、第3群の動物に同じプロトコールに従い経口投与した。化合物--17を用いた3週間の、10mgp.o.で1日1回21日目の投与から2時間後の平均血漿濃度~80ng/mlの、および50mgp.o.で1日1回平均血漿濃度~1000ng/mlの処置は非毒性であり、そして平均動脈血圧MAPに影響はなかったが、右室圧RVP、右心室肥大が減少し右心室/左心室隔膜;RV/LVS、そして肺動脈加速時間PAATが上昇した表5。小さい肺動脈の平均壁厚は、モノクロタリン処置により有意に増加し、そしてこの肥厚化は化合物--17を50mg/kgp.o.P=0.0539および10mgp.o.P<0.005で3週間処理することにより減少した。麻酔をかけたモルモットを対象とした心血管効果メスのモルモットにペントバルビタールナトリウム66mg/kgi.p.で、続いて6mg/hでペントバルビタールナトリウムを連続的にi.v.注入して麻酔をかけ、、そして体表面心電図ECG、心拍および平均動脈血圧を測定する準備をしたDeClercketal,Fundam.Clin.Pharm.;2002;16:125-140参照。化合物--17は、発熱物質を含まない水中にNaOH、HClおよびマンニトールを共に含む20ヒドロキシプロピル-シクロデキストリンに溶解し、そして用量を上げながら0.16,0.32,0.64,1.25,2.5および5mg/kg5分間にわたり15分間隔で静脈内投与した0.5ml/kg。化合物--17の血漿濃度は、各注入の終わりに測定した。第二群の動物には対応する容量の賦形剤を同じプロトコールに従い投与した。賦形剤に対して化合物--17は、0.16から5mg/kgまで全用量:9.87mg/kg;Cmax;11,950ng/ml、麻酔をかけたモルモットの心拍、PQ,QRS,QTおよびQTcB間隔の期間に関連する効果が無く、またはECG形態の効果は無かった表6。2.5mg/kgから先に進むとCmax:6,325ng/ml;表7、平均動脈血圧が上がり始めた表6。賦形剤を最後に注入してから15分後に与えた参照化合物ドフェチリド0.02mg/kgi.v.1分間は、心拍を下げ、そしてQTおよびQTcB間隔を延長した。マウスを対象としたブレオマイシン誘導性の肺線維症予想オスのC57BL/6マウスはイソフルラン吸入麻酔下で硫酸ブレオマイシン2.5U/ml水溶液;2ml/kgBWを用いて気管内処置する例えばIshiiYetal,2006.AmJRespirCritCareMed,1745;550-6参照。その後、化合物--17を2週間にわたり1日1回、10mg/kgおよび50mg/kgp.o.で投与する。死後の調査には15日目の肉眼所見、肺重量および肺の組織病理学を含む。肺の組織病理学調査は、ブレオマイシンが未処置マウスの肺に炎症、続いて線維症を引き起こすことを示す。マウスを対象とした薬物動態学的評価静脈内i.v.投与については、化合物--17を20w/vのヒドロキシ-プロピル-ベータ-シクロデキストリンHPbCDを含有する塩溶液に0.25mg/mLの濃度で溶解し、そしてオスのCD1マウスn=3にボーラスとして尾の静脈を介して2.5mg/kgの用量レベルで投与した10mL/kg。経口p.o.投与については、化合物--17を20w/vのHPbCDを含有する水に0.5mg/mLの濃度で溶解し、そしてオスのCD1マウスn=3に胃管栄養として10mg/kgの用量レベルで投与した20mL/kg。血液サンプルは伏在静脈を介して投与から24時間後まで連続する時点で集めた。血漿は遠心により得、そして分析するまで-20°Cで保存した。分析は、陽イオンモードでタンデム質量分析計の検出MS/MSを用いて、液体クロマトグラフィーLCを使用して行った。化合物--17は逆相カラムからアセトニトリルおよび0.1v/vギ酸を含む水の勾配で溶出した。分析の時点で、血漿サンプル20uLを解凍し、そして200uLのアセトニトリルで脱プロトン化し、そして遠心した。上清のアリコートを逆相UPLCカラムに注入し、そしてエレクトロスプレーマススペクトロメトリーを介して分析した。この試験サンプルの前および後に分析するカリブレーション標準および品質対照は、と同時にマウス血漿で調製した。精度独立したQCサンプルからの試験branch間精度は、全濃度範囲にわたり公称値の85から115の間であった。血漿濃度-時間曲線のノンコンパートメント薬物動態学分析non-compartmentalpharmacokineticanalysisはWinNonLinを使用して行って、血漿クリアランスCLp、定常状態分布容積Vss、終末期における消失半減期t1/2および経口バイオアベイラビリティーFの評価を提供し、この結果を表8にまとめる。ラットを対象とした薬物動態学的評価静脈内i.v.投与については、化合物--17を20w/vのヒドロキシ-プロピル-ベータ-シクロデキストリンHPbCDを含有する塩溶液に1mg/mLの濃度で溶解し、そしてオスのSpragueDawleyラットn=1にボーラスとして伏在静脈を介して2.5mg/kgの用量レベルで投与した2.5mL/kg。経口p.o.投与については、化合物--17を20w/vのHPbCDを含有する水に1mg/mLの濃度で溶解し、そしてオスのSpragueDawleyラットn=3に胃管栄養として10mg/kgの用量レベルで投与した10mL/kg。血液サンプルは尾の静脈を介して投与から24時間後まで連続する時点で集めた。血漿は遠心により得、そして分析するまで-20°Cで保存した。分析は、陽イオンモードでタンデム質量分析計の検出MS/MSを用いて、液体クロマトグラフィーLCを使用して行った。化合物--17は逆相カラムからアセトニトリルおよび0.1v/vギ酸を含む水の勾配で溶出した。分析の時点で、血漿サンプル50uLを解凍し、そして少なくとも3容量のアセトニトリルで脱プロトン化し、そして遠心した。上清のアリコートを逆相UPLCカラムに注入し、そしてエレクトロスプレーマススペクトロメトリーを介して分析した。サンプルの前および後に分析するカリブレーション標準および品質対照は、試験サンプルと同時にラット血漿で調製した。精度独立したQCサンプルからの試験間精度は、全濃度範囲にわたり公称値の85から115の間であった。血漿濃度-時間曲線のノンコンパートメント薬物動態学分析はWinNonLinを使用して行って、血漿クリアランスCLp、定常状態分布容積Vss、終末期における消失半減期t1/2および経口バイオアベイラビリティーFの評価を提供し、この結果を表8にまとめる。人工的に通気した麻酔をかけたイヌビーグルを対象とした心臓-血行力学的、心臓-電気生理学的、電気脳波的および肺/呼吸効果動物に、0.015mg/kgi.v.スコポラミンおよび0.075mg/kgi.v.ロフェンタニルの混合物で麻酔をかけ、そしてスクシニルコリン5mg/kgi.v.で弛緩させ、続いて1.5mg/kg/hのエトミデートの連続i.v.注入、そして少量の追加用量のフェンタニル0.025mg/kgi.v.を60分の間隔で与えた。動物に通気し、そして体表面ECG、大動脈-、肺-および左心室血圧、頸動脈血流、単相性活動電位、体温、血中ガスおよびEEGを測定する準備をしたVanDeurenetal,JPharmacolToxicolMethods:2009;60:11-23を参照。化合物--17は、発熱物質を含まない水中にNaOH、HClおよびマンニトールを共に含む20ヒドロキシプロピル-シクロデキストリンに溶解し、そして用量を上げながら0.16,0.32,0.63,1.25,2.5および5mg/kg5分間にわたり30分間隔で静脈内投与した1ml/kg。化合物--17の血漿濃度は、各注入の前および終わりに測定した。第二群の動物には対応する容量の賦形剤を同じプロトコールに従い投与した。賦形剤に対して、化合物--17は0.16から5mg/kgまで全用量:9.86mg/kg;中央値Cmax;20,375ng/ml、麻酔をかけたイヌの心拍HR、肺動脈血圧、左心室拡張終期圧、心拍出量、1回拍出量、ダブルプロダクトpressurerateproduct、PQおよびQRS間隔の期間、肺機能動的コンプライアンス、Cdyn,および気道抵抗、Raw、体温またはEEGNarcotrend商標で測定について関連する効果は無かった。1.25mg/kgから先に進むとCmax:5,205ng/ml;表7、動脈血圧、血管抵抗全身および総頸動脈およびTau弛緩の時間定数が上がり始めた。さらに2.5mg/kgCmax:9,550ng/mlで、LVdp/dtmax/pdが下がり始め、そして5mg/kgCmax:20,375ng/mlで、QTcVDWHRについて補正されたQT間隔およびQTcVcTHRおよび温度について補正されたQT間隔の期間がわずかに低下したことが記録された。"