対象において血圧を低下および/または血管拡張を増大させることによって、該対象における肝臓または心臓または脳の虚血再かん流傷害、肺高血圧症、または脳動脈痙攣から選択される状態を処置または改善する方法であって、亜硝酸ナトリウムを該対象に投与して該対象において血圧を低下および/または血管拡張を増大させ、それによって該状態を処置または改善することを含む方法。肝臓または心臓または脳の虚血再かん流傷害を処置または改善する、請求項1記載の方法。対象への亜硝酸ナトリウムの投与が静脈内投与である、請求項2記載の方法。亜硝酸ナトリウムを約06~240μMの循環濃度まで投与する、請求項2または3記載の方法。肺高血圧症を処置または改善する、請求項1記載の方法。肺高血圧症が新生児肺高血圧症である、請求項5記載の方法。対象への亜硝酸ナトリウムの投与が吸入による投与である、請求項5または6記載の方法。亜硝酸ナトリウムを噴霧する、請求項7記載の方法。亜硝酸ナトリウムを270μmolminの速度で投与する、請求項5~8のいずれか一項記載の方法。脳動脈痙攣を処置または改善する、請求項1記載の方法。対象への亜硝酸ナトリウムの投与が静脈内投与である、請求項10記載の方法。亜硝酸ナトリウムを約45~60mgkgの割合で投与する、請求項10または11記載の方法。亜硝酸ナトリウムを少なくとも一つのさらなる薬剤と組み合わせて投与する、請求項1~12のいずれか一項記載の方法。対象が哺乳動物である、請求項1~13のいずれか一項記載の方法。対象がヒトである、請求項14記載の方法。開示の詳細な説明I.略号ANOVA分散分析カルボキシPTIO24455テトラメチルイミダゾリン1オキシル3オキシドカリウム塩DCV遅延性脳血管痙攣デオキシRBC脱酸素化赤血球eNOS内皮NO合成酵素FiO2吸気酸素の分画濃度FBF前腕血流iNO吸入一酸化窒素IR虚血再かん流LCA主冠状動脈LNMMALNGモノメチルアルギニンLV左心室NO一酸化窒素NOS一酸化窒素合成酵素MAP平均動脈圧MetHbメトヘモグロビンオキシRBC酸素化赤血球PBSリン酸緩衝食塩水pO2酸素分圧SAHクモ膜下出血SNOSニトロソヘモグロビンII用語特に断りがない限り、本明細書で使用する用語は、その標準的な定義および一般的な用法に準じる。たとえば、当業者は、本明細書で使用される用語の定義を辞書ならびに参考書、たとえばStedmansMedicalDictionaryTheNewOxfordAmericanDictionaryMolecularCloningALaboratoryManualandHawleysCondensedChemicalDictionary11thEdMolecularBiologyandBiotechnologyaComprehensiveDeskReferenceで得ることができる。様々な態様の検討を容易にするため、以下に特定の用語の説明を提供する。動物:生きた多細胞脊椎生物、すなわち、たとえば哺乳動物およびトリを含むカテゴリー。哺乳動物とは、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含む。脳虚血または虚血性脳卒中:脳への動脈または脳内の動脈が部分的または完全に閉塞されて、組織の酸素要求量が酸素供給量を超える場合に起こる状態。脳は、虚血性脳卒中ののち酸素および他の栄養素を奪われると、脳卒中の結果として損傷を受ける。虚血性脳卒中は、いくつかの異なる種類の疾病によって生じる。もっとも一般的な問題は、頚部または頭部の動脈の狭小化である。これは、非常に多くの場合、アテローム性硬化症または徐々に起こるコレステロール付着によって生じる。動脈が狭くなりすぎると、血液細胞がその中で凝集し、血餅血栓を形成する。これらの血餅が、それが形成したところで動脈を閉塞することもあるし血栓症、遊離して脳により近い動脈中に捕らえられることもある塞栓症。脳卒中のもう一つの原因は心臓内の血餅であり、これは不規則な心拍たとえば心房細動、心臓発作、または心臓弁の異常の結果として生じうる。これらが虚血性脳卒中のもっとも一般的な原因であるが、他にも多くの原因がある。例としては、麻薬の使用、頚部の血管への外傷、または血液凝固の異常がある。虚血性脳卒中は、すべての脳卒中の約80を占め、断然もっとも一般的な種類の脳卒中である。脳卒中は、子供を含む全年齢の人に影響するおそれがある。虚血性脳卒中を起こす多くの人は高齢者60歳以上であり、脳卒中の危険は加齢とともに増大する。各年齢で、脳卒中は女性よりも男性に一般的であり、白人アメリカ人よりもアフリカ系アメリカ人に一般的である。脳卒中を起こす多くの人は、脳卒中の危険を高める他の問題または状態、たとえば高血圧高血圧症、心臓病、喫煙、または糖尿病をかかえている。胎児性:器官系が機能的であり、心臓、脳、および肺などの重要な中心的器官への血流パターンが確立されている妊娠後期の時期を意味する語。低酸素症:体の組織に達する酸素量の欠乏。注射用組成物:少なくとも一つの有効成分、たとえば亜硝酸塩を含む薬学的に許容される流体組成物。有効成分は通常、生理学的に許容される担体に溶解または懸濁され、組成物は、少量の一つまたは複数の非毒性補助物質、たとえば乳化剤、保存料、pH緩衝剤などをさらに含むことができる。本開示の組成物と共に使用するのに有用なそのような注射用組成物は従来のものであり、適切な処方は当技術分野において周知である。虚血:たとえば一つまたは複数の血管の狭窄または閉塞によって体の器官、組織、または部位への血液供給の低下が生じる血管の現象。虚血は、ときには、血管狭窄または血栓症または塞栓症から生じる。虚血は、直接的な虚血性損傷、すなわち酸素供給の低下によって生じる細胞死による組織損傷を招くことがある。虚血/再かん流傷害:虚血/再かん流傷害は、血流の欠乏の際に起こる直接的な傷害に加えて、血流が回復した後に起こる組織傷害をも含む。現在この傷害の多くは、虚血性組織中に放出される化学的産物およびフリーラジカルによって生じると理解されている。組織が虚血を受けると、最終的に細胞機能不全および壊死を招くおそれのある一連の化学的事象が始まる。血流の回復によって虚血が終了したとしても、第二の一連の傷害性事象が続発してさらなる傷害を生じさせる。したがって、対象の血流に一過性の低下または中断がある場合は常に、結果的な傷害は、二つの成分、すなわち、虚血期間中に起こる直接的な傷害およびそれに続く間接的または再かん流傷害を伴う。長期間の虚血がある場合、低酸素症から生じる直接的な虚血性損傷が支配的である。比較的短時間の虚血の場合、間接的または再かん流媒介損傷がますます重大になる。場合によっては、再かん流によって生じる傷害が、虚血そのものによって誘発される傷害よりも重篤になることがある。この直接的機序からの傷害と間接的機序からの傷害との相対的寄与のパターンは、すべての器官で起こることが示されている。メトヘモグロビン:ヘム成分中の鉄が二価鉄2状態から三価鉄3状態に酸化されているヘモグロビンの酸化形態。これは、ヘモグロビン分子が効果的に酸素を輸送し、組織に放出することを不可能にする。通常、総ヘモグロビン中の約1がメトヘモグロビン形態である。メトヘモグロビン血症:対象の血液中のヘモグロビンの実質的部分がメトヘモグロビン形態にあり、酸素を効果的に組織に運ぶことができなくなった状態。メトヘモグロビン血症は遺伝性障害であるが、硝酸塩硝酸塩汚染水、アニリン染料、および塩素酸カリウムのような化学物質への暴露によって後天的に獲得されることもある。臨床状況で重大なのは、メトヘモグロビンの存在ではなく、その量である。以下、血液中の様々なレベルのメトへモグロビンに関連する症候のおおよその指標を提供する。35、低酸素症の症候、たとえば呼吸困難および眠気;50~60、アシドーシス、不整脈、昏睡、痙攣、徐脈、重篤な低酸素症、発作;70、通常は死に至る。新生児:出生後であって、胎児から新生児の生活への調整が完了するまでの時期のヒトまたは動物を意味する語。亜硝酸塩:無機アニオンNO2または亜硝酸の塩NO2。亜硝酸塩は多くの場合、可溶性が高く、酸化されて硝酸塩を形成することもできるし、還元されて一酸化窒素またはアンモニアを形成することもできる。亜硝酸塩は、アルカリ金属、たとえばナトリウムNaNO2、亜硝酸ナトリウム塩としても知られる、カリウムおよびリチウム、アルカリ土類金属、たとえばカルシウム、マグネシウムおよびバリウム、有機塩基、たとえばアミン塩基、たとえばジシクロヘキシルアミン、ピリジン、アルギニン、リシンなどと塩を形成することもできる。多様な有機および無機塩基から他の亜硝酸塩を形成することもできる。特定の態様では、亜硝酸塩は、ナトリウム、カリウム、およびアルギニンから選択されるカチオンと送達される亜硝酸アニオンの塩である。多くの亜硝酸塩が市販されており、従来の技術を使用して容易に製造することもできる。非経口的:腸管外で投与される、たとえば、消化管を介さずに投与されること。一般に、非経口製剤は、経口摂取以外の任意の可能な形態を介して投与される製剤である。この語は特に、静脈、鞘内、筋肉、腹腔内、または皮下を問わない注射、およびたとえば鼻腔内、皮内、および外用局所塗布をはじめとする様々な表面塗布に関していう。薬学的に許容される担体:本開示で有用な薬学的に許容される担体は従来のものである。EWMartinによるRemingtonsPharmaceuticalSciencesMackPublishingCoEastonPA15thEditionに、本明細書で開示する化合物の薬学的送達に適した組成物および製剤が記載されている。一般に担体の性質は、使用される特定の投与形態に依存する。たとえば、非経口製剤は通常、薬学的かつ生理学的に許容される流体、たとえば水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなどを溶媒として含む注射用流体を含む。固形組成物たとえば粉末、ピル、錠剤、またはカプセル形の場合、従来的な非毒性固形担体として、たとえば、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムがある。投与される薬学的組成物は、生物学的に中性の担体に加えて、少量の非毒性補助物質、たとえば湿潤剤または乳化剤、保存料、およびpH緩衝剤など、たとえば酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含有することができる。末梢血管疾患PVD:腕または脚に血液を運ぶ動脈が狭小化または閉塞する状態。これは正常な血流を妨害し、ときには痛みを生じさせるが、多くの場合、容易に検知可能な症候をまったく生じない。もっとも一般的なPVDの原因は、アテローム硬化症、すなわち、コレステロールおよび瘢痕組織が蓄積して、血管を閉塞させるプラークを形成する緩やかな過程である。場合によってはPVDは、動脈中にとどまり、血流を制限する血餅によって生じることもある。PVDは、50歳を超える20人に約1人、または合衆国内で800万人に影響を及ぼしている。PVDをもつ人の半数超が脚の痛み、しびれ感または他の症候を経験するが、多くの人はこれらの徴候を正常な加齢の一部として片づけ、医学的支援を求めようとしない。PVDのもっとも一般的な症候は、特に歩行時の、脚または股関節の痛みを伴う痙攣である。跛行とも知られるこの症候は、運動中に十分な血液が脚部筋肉中を流れず、結果として虚血が起こる場合に発生する。通常、筋肉を休息させると痛みは消える。他の症候として、脚のしびれ感、刺痛または脱力感がある。重篤な場合には、PVDをもつ人は、休息中に末端、たとえば足または足指に灼熱痛またはうずく痛みを感じたり、癒えることのない脚または足の痛みを発したりすることもある。また、PVDをもつ人は、脚もしく足の皮膚の冷えもしくは変色または脚の毛の抜けを経験することもある。極端な場合には、未処置のPVDは、壊疽、すなわち、脚、足または足指の切断を免れない深刻な状態につながるおそれもある。PVDをもつ人はまた、心臓病および脳卒中の危険が高い。薬剤または薬物とは、対象に正しく投与されると所望の治療または予防効果を誘発することができる化合物または他の組成物をいう。胎盤:哺乳動物において母体と胎児との間の代謝交換を提供するための血管器官。母体の血液から酸素、水、および栄養素を胎児に送達し、正常な妊娠に必要なホルモンを分泌する。加えて、胎児から不要物を運び出し、これは母体内で処理される。子癇前症:妊娠中の女性における原因不明の疾病であって、高血圧、胎盤中の異常血管、およびタンパク尿を特徴とする疾病。常にではないが、妊娠糖尿病および糖尿病患者に起こることが多い。さらなる症候としては、顔、手足のむくみを招く水分貯留および体重増がある。妊娠中毒症とも呼ばれる。子癇前症は放置されると、子癇につながるおそれがある。子癇前症の唯一知られている治癒法は、子を分娩してしまうことである。疾病の予防または治療:疾病の予防とは、疾病の完全な発症を阻止することをいう。処置とは、疾病または病的状態が発症し始めた後に、その徴候または症候を改善する治療的介入をいう。精製された:この語は絶対的な純度を要求するものではない。むしろ、相対的な語として解釈される。したがって、たとえば、精製された亜硝酸塩調製物とは、特定の亜硝酸塩がその生成環境、たとえば生化学的反応チャンバー内よりも濃縮されている調製物である。好ましくは、特定の亜硝酸塩の調製物は、その亜硝酸塩が調製物中の総亜硝酸塩含量の少なくとも50を占めるように精製されている。一部の態様では、精製された調製物は、特定の化合物、たとえば特定の亜硝酸塩を少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95またはそれを超える濃度で含有する。再かん流:血液供給が低下して虚血を起こした組織への血液供給の回復。再かん流は、生存可能な虚血性組織を回復させ、それによってさらなる壊死を抑制することによって梗塞または他の虚血を処置するための手法である。しかし、再かん流そのものが虚血性組織をさらに損傷し、再かん流傷害を生じさせるおそれもあると考えられている。対象:脊椎生物、すなわち、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含むカテゴリーを含む、生きた多細胞生物。治療:診断および処置の両方を含む総称。[血管拡張剤]の治療有効量:処置される対象において所望の効果を達成するのに十分な化合物、たとえば亜硝酸塩の量。たとえば、対象において比較的高い血圧を処置もしくは改善する、またはある期間にわたって血圧を計測可能な程度に低下させる、または血圧の上昇を計測可能な程度に抑止するのに必要な量でありうる。血管拡張剤の有効量は、単一用量で投与することもできるし、いくつかの用量で、たとえば処置の過程で日毎に投与することもできる。しかし、有効量は、適用される化合物、処置を受ける対象、病気の重篤度およびタイプ、ならびに化合物の投与法に依存する。たとえば、有効成分の治療有効量は、効果を生じさせる、血液中インビボまたは緩衝剤中インビトロの有効成分たとえば薬学的に許容される亜硝酸塩の濃度1リットルあたりのモル数またはモル濃度Mで計測されうる。例として、本明細書に記載するように、ここで、薬学的に許容される亜硝酸塩たとえば亜硝酸ナトリウムが、対象の循環血中で約06~約200μMの最終濃度の計算用量で血管拡張剤として有効であることが示されており、このレベルは経験的または計算によって測定することができる。特定のレベルには、たとえば、単一用量またはある期間にわたって提供される用量で約200mg以下の亜硝酸塩を提供することによってたとえば注入または吸入によって達することができる。たとえば、他の用量は、150mg、100mg、75mg、50mgまたはそれ未満であることもできる。本明細書では亜硝酸塩の用量の具体例が提供されるが、これらの例は限定的であることを意図しない。正確な用量は、処置される対象のサイズ、処置の期間、投与形態などによって異なる。血管拡張剤、たとえば薬学的に許容される亜硝酸塩たとえば亜硝酸ナトリウムの特に有益な治療有効量は、血管拡張または血流の増大に有効な量であるが、血管拡張剤が投与される対象中で有意なレベルまたは毒性レベルのメトヘモグロビンが生成されるほど高くはない。具体的な態様では、たとえば、対象中で約25以下のメトヘモグロビンしか生成されない。より好ましくは、血管拡張剤での処置に応答して、20以下、15以下、10以下、8以下またはそれ未満のメトヘモグロビン、たとえば5または3またはそれ未満のメトヘモグロビンしか生成されない。本明細書で論じる化合物は、医学および獣医学の状況で等しく適用される。したがって、総称処置される対象とは、血圧の異常、たとえば高血圧症に病んでいる、または病んでいるおそれのあるすべての動物たとえばヒト、類人猿、実験動物、愛玩動物などを含むものと理解される。血管狭窄:血管の口径または断面積の減少、たとえば身体部分への血流の低下につながる細動脈の狭窄。これは、特定の血管狭窄剤、すなわち血管の狭窄を直接的または間接的に生じさせる薬剤たとえば化学物質または生化学的化合物によって生じることがある。このような薬剤はまた、血管緊張剤と呼ばれることもあり、血管狭窄活性を有するといわれる。血管狭窄剤の代表的なカテゴリーは、毛細血管および動脈の筋組織の収縮を刺激する薬剤をさして一般に使用される、昇圧剤昇圧という語から、血圧を高める傾向を有するである。血管狭窄はまた、血管痙攣、不十分な血管拡張、血管壁の肥厚化、または内壁面もしくは壁そのものの中の流れを制限する物質の蓄積によって起こりうる。血管狭窄は、加齢、ならびにとりわけ進行性全身性アテローム発生、心筋梗塞、脳卒中、高血圧症、緑内障、黄斑変性症、片頭痛、高血圧症および糖尿病をはじめとする様々な臨床状態における、主要な推定要因または立証済みの要因である。血管拡張:血管の口径が増大した状態または血管を拡張する行為、たとえば身体部分への血流の増大につながる細動脈の拡張。これは、特定の血管拡張剤、すなわち血管の拡張を直接的または間接的に生じさせる薬剤たとえば化学物質または生化学的化合物によって生じうる。このような薬剤はまた、血管弛緩剤とも呼ばれることがあり、血管拡張活性を有するといわれる。血管痙攣:脳卒中のもう一つの原因は、脳に供給する血管の痙攣に続発して起こる。このタイプの脳卒中は通常、くも膜下動脈瘤出血に続いて起こり、出血事象から2~3週以内に血管痙攣の遅延発症を伴う。類似したタイプの脳卒中は、鎌状赤血球病を併発するおそれがある。特に断りがない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。単数形の語は、文脈により明らかに示されていない限り、複数の指示対象も包含する。同様に、またはという語は、文脈により明らかに示されていない限り、およびも含むと解釈される。したがって、AまたはBを含むとは、AもしくはB、またはAおよびBを含むことを意味する。さらには、核酸またはポリペプチドに関して記す、すべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量または分子質量の値は概算値であり、説明のために提供されていることが理解されるべきである。本明細書に記載されたものと類似の、または同等な方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、適当な方法および材料を以下に記す。本明細書で言及するすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、全体が参照として本明細書に組み入れられる。矛盾がある場合、用語の説明を含めて本明細書が優先する。加えて、材料、方法、および例は例示目的に過ぎず、限定的であることを意図しない。III.いくつかの態様の概説驚くべきことに、薬学的に許容される亜硝酸塩の投与が心臓血管系の調整に有用であるということが見出された。また、驚くべきことに、亜硝酸塩がインビボで一酸化窒素に還元され、それによって生成される一酸化窒素が有効な血管拡張剤であるということが見出された。これらの効果は、驚くべきことに、臨床的に有意なメトヘモグロビン血症を生じさせない用量で発揮される。これらの発見により、心臓血管系に関連する状態、たとえば高血圧、肺高血圧症、脳血管痙攣および組織虚血再かん流傷害を予防し、処置する方法がここで可能となる。これらの発見はまた、組織、たとえば低酸素圧領域の組織への血流を増大させる方法を提供する。亜硝酸塩が、心臓血管系を調整する効果を示すために、より具体的にはインビボで血管拡張剤として作用するために、酸性化状態で適用されなくてもよいということは特に驚くべきことである。したがって、本開示は、一つの態様において、対象の血圧を下げる方法であって、対象に対し、毎分約36μmol以下の亜硝酸ナトリウムを前腕上腕動脈または静脈内に投与することを含む方法を提供する。本開示はまた、対象の血圧を下げる方法であって、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量を対象に投与して、対象の血圧を下げるまたは低くする、または減少させることを含む方法を提供する。もう一つの態様は、高血圧に関連する状態を有する対象を処置する方法であって、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量を対象に投与して、高血圧に関連する少なくとも一つの血管性合併症を処置することを含む方法である。同じく提供されるものは、溶血性状態を有する対象を処置する方法であって、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量を対象に投与して、溶血性状態に関連する少なくとも一つの血管性合併症を処置することを含む方法である。本開示はさらに、対象の組織への血流を増大させる方法であって、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量を対象に投与して、対象の組織への血流を増大させることを含む方法を提供する。同じく提供されるものは、対象の血圧を下げるのに有効な量のNOを対象中で生成する方法であって、薬学的に許容される亜硝酸塩を対象に投与することを含む方法である。本開示はさらに、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量および担体を含む薬学的組成物を提供する。一部の態様では、血管性合併症は、肺高血圧症新生児肺高血圧症、原発性肺高血圧症、および続発性肺高血圧症を含む、全身性高血圧症、皮膚潰瘍、急性腎不全、慢性腎不全、血管内血栓、虚血性中枢神経系事象、および死からなる群より選択される一つまたは複数である。一部の態様では、亜硝酸塩は、肺高血圧症を処置するために新生児に投与される。一部の態様では、溶血性状態は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ヘモグロビンC症、ヘモグロビンSC症、鎌状赤血球サラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、遺伝性オーバルサイトーシス、グルコース6リン酸欠乏症および他の赤血球酵素欠乏症、発作性夜間ヘモグロビン尿症PNH、発作性寒冷ヘモグロビン尿症PCH、血栓性血小板減少性紫斑病/溶血性尿毒性症候群TTP/HUS、特発性自己免疫性溶血性貧血、薬物誘発免疫溶血性貧血、続発性免疫溶血性貧血、化学的または物理的因子によって生じる非免疫溶血性貧血、マラリア、熱帯熱マラリア、バルトネラ症、バベシア病、クロストリジウム感染症、重度ヘモフィルスインフルエンザタイプb感染症、広範な熱傷、輸血副作用、横紋筋融解症ミオグロブリン血症、高齢血agedbloodの輸血、心肺バイパス、および血液透析から選択される一つまたは複数を含む。一部の態様では、組織への血流の低下は、以下の状態の少なくとも一つによって直接的または間接的に生じる。鎌状赤血球貧血、サラセミア、ヘモグロビンC症、ヘモグロビンSC症、鎌状赤血球サラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、遺伝性オーバルサイトーシス、グルコース6リン酸欠乏症および他の赤血球酵素欠乏症、発作性夜間ヘモグロビン尿症PNH、発作性寒冷ヘモグロビン尿症PCH、血栓性血小板減少性紫斑病/溶血性尿毒性症候群TTP/HUS、特発性自己免疫性溶血性貧血、薬物誘発免疫溶血性貧血、続発性免疫溶血性貧血、化学的または物理的因子によって生じる非免疫溶血性貧血、マラリア、熱帯熱マラリア、バルトネラ症、バベシア病、クロストリジウム感染症、重度ヘモフィルスインフルエンザタイプb感染症、広範な熱傷、輸血副作用、横紋筋融解症ミオグロブリン血症、高齢血の輸血、ヘモグロビンの輸血、赤血球の輸血、心肺バイパス、冠状動脈疾患、心臓虚血症候群、狭心症、医原性溶血、血管形成、心筋虚血、組織虚血、血管内装置によって生じる溶血、血液透析、肺高血圧症、全身性高血圧症、皮膚潰瘍、急性腎不全、慢性腎不全、血管内血栓、および虚血性中枢神経系事象。一部の態様では、組織は虚血性組織である。一部の態様では、投与は、非経口、経口、口腔、直腸、エクスビボ、または眼内投与である。一部の態様では、投与は、腹膜内、静脈内、動脈内、皮下、吸入、または筋内投与である。一部の態様では、亜硝酸塩は、低酸素圧の環境で対象に投与されるか、比較的低い酸素圧を示す対象の身体区域で作用する。一部の態様では、亜硝酸塩は、薬学的に許容される亜硝酸塩、たとえば亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウム、または亜硝酸アルギニンとして投与される。一部の態様では、亜硝酸塩は、少なくとも一つのさらなる有効薬剤と組み合わせて投与される。特定の態様では、具体的には、対象は哺乳動物、たとえばヒトであることが想定される。本開示はさらに、肺における高血圧に関連する状態、たとえば肺高血圧症を有する対象を処置する方法であって、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、新生児肺高血圧症を有する対象を処置することを含む。一部の態様では、原発性および/または続発性肺高血圧症を有する対象を処置することを含む。肺における高血圧に関連する状態を有する対象を処理するための一部の態様では、亜硝酸塩は噴霧される。本開示はまた、妊娠中の女性における高血圧症および/または子癇前症を処置する手段の示唆を提供する。このような療法は、胎盤内の痙攣性および患部血管に対する亜硝酸塩の作用を含むであろう。本開示はまた、心臓血管異常、高血圧症、および/または異常な方向への血流のある胎児を子宮内で処置するための示唆を提供する。このような手法では、亜硝酸塩は、直接的または浸透圧性ミニポンプを用いての羊膜腔への導入によって投与することができ、浸透圧性ミニポンプは、妊娠中の何日間か、および何週間かにわたって徐放を達成するために用いられる。このように本明細書では、対象において血管拡張を誘発および/または血流を増大させる方法であって、対象において血管拡張を誘発および/または血流を増大させるのに十分な期間、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量を対象に投与することを含む方法が提供される。薬学的に許容される亜硝酸塩の非限定的な例として、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウム、および亜硝酸アルギニンが挙げられる。提供される方法の例として、薬学的に許容される亜硝酸塩は、対象中のヘモグロビンの存在下で反応し、一酸化窒素を放出する。本明細書で提供する方法の具体的な利点は、対象に投与される薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量が毒性レベルのメトヘモグロビンを誘発せず、多くの態様で、対象において臨床的に有意な量のメトヘモグロビンの形成を誘発しないということである。したがって、本明細書で考慮するものは、薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量が対象に投与されると、対象において約25以下のメトヘモグロビン、約20以下のメトヘモグロビン、約10以下のメトヘモグロビン、約8以下のメトヘモグロビン、または約5以下のメトヘモグロビンの生成を誘発する方法である。有利には、提供される方法の例は、5未満のメトヘモグロビン、たとえば約3以下のメトヘモグロビン、3未満のメトヘモグロビン、2未満のメトヘモグロビン、または1未満のメトヘモグロビンの生成しか誘発しない。対象において血管拡張を誘発および/または血流を増大させる方法の一つの具体例では、亜硝酸ナトリウムを注射によって毎分約36μmolで少なくとも5分間、対象の前腕上腕動脈に投与する。薬学的に許容される亜硝酸塩の有効量は、様々な態様において、投与部位で局所的または対象内で全体的に計測して、対象中で約06~240μMの循環濃度まで投与される。なお、亜硝酸塩の局所レベルは、特に短期送達計画では一般的な循環レベルよりも高いと予想される。長期送達計画では、たとえばポンプもしくはインジェクタを使用する送達または吸入による送達では、全システム的または全体的な亜硝酸塩レベルは、投与部位の近くで計測されるレベルに近いと予想される。薬学的に許容される亜硝酸塩の投与は、特定の態様では、たとえば、非経口、経口、口腔、直腸、エクスビボ、または眼内投与であることができる。様々な態様では、亜硝酸塩の投与は、腹膜内、静脈内、動脈内、皮下、吸入、筋内、または心肺バイパス回路への投与でありうることが想定される。また、二つ以上の投与経路の組み合わせも考えられる。対象において血管拡張を誘発および/または血流を増大させる方法の様々な態様では、対象は哺乳動物である。特に、対象はヒトでありうることが想定される。亜硝酸塩を少なくとも一つのさらなる薬剤と組み合わせて投与する組み合わせ療法が考えられる。非限定的な例として、さらなる薬剤は、ペニシリン、ヒドロキシ尿素、酪酸塩、クロトリマゾール、アルギニン、またはホスホジエステラーゼ阻害薬たとえばシルデナフィルからなるリストより選択される一つまたは複数である。対象において血管拡張を誘発および/または血流を増大させる方法のもう一つの態様において、対象は高血圧を有し、方法は、高血圧に関連する少なくとも一つの血管性合併症を処置する方法であり、あるいは、対象は溶血性状態を有し、方法は、溶血性状態に関連する少なくとも一つの血管性合併症を処置する方法である。場合によっては、対象は高血圧および溶血性状態の両方を有することもある。本明細書で提供する方法の例では、少なくとも一つの血管性合併症は、肺高血圧症、全身性高血圧症、末梢血管疾患、外傷、心停止、一般的な手術、臓器移植、皮膚潰瘍、急性腎不全、慢性腎不全、血管内血栓、狭心症、虚血再かん流事象、虚血性中枢神経系事象、および死からなる群より選択される一つまたは複数である。対象が溶血性状態を有する場合の方法の例では、溶血性状態は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ヘモグロビンC症、ヘモグロビンSC症、鎌状赤血球サラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、遺伝性オーバルサイトーシス、グルコース6リン酸欠乏症および他の赤血球酵素欠乏症、発作性夜間ヘモグロビン尿症PNH、発作性寒冷ヘモグロビン尿症PCH、血栓性血小板減少性紫斑病/溶血性尿毒性症候群TTP/HUS、特発性自己免疫性溶血性貧血、薬物誘発免疫溶血性貧血、続発性免疫溶血性貧血、化学的または物理的因子によって生じる非免疫溶血性貧血、マラリア、熱帯熱マラリア、バルトネラ症、バベシア病、クロストリジウム感染症、重度ヘモフィルスインフルエンザタイプb感染症、広範な熱傷、輸血副作用、横紋筋融解症ミオグロブリン血症、高齢血の輸血、ヘモグロビンの輸血、赤血球の輸血、心肺バイパス、冠状動脈疾患、心臓虚血症候群、狭心症、医原性溶血、血管形成、心筋虚血、組織虚血、血管内装置によって生じる溶血、および血液透析からなる群より選択される一つまたは複数である。対象において血管拡張を誘発および/または血流を増大させる方法のさらに別の態様では、対象は、組織への血流の低下に関連する状態を有し、方法は、対象の組織への血流を増大させる方法である。たとえば、この方法の例では、組織への血流の低下は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ヘモグロビンC症、ヘモグロビンSC症、鎌状赤血球サラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、遺伝性オーバルサイトーシス、グルコース6リン酸欠乏症および他の赤血球酵素欠乏症、発作性夜間ヘモグロビン尿症PNH、発作性寒冷ヘモグロビン尿症PCH、血栓性血小板減少性紫斑病/溶血性尿毒性症候群TTP/HUS、特発性自己免疫性溶血性貧血、薬物誘発免疫溶血性貧血、続発性免疫溶血性貧血、化学的または物理的因子によって生じる非免疫溶血性貧血、マラリア、熱帯熱マラリア、バルトネラ症、バベシア病、クロストリジウム感染症、重度ヘモフィルスインフルエンザタイプb感染症、広範な熱傷、輸血副作用、横紋筋融解症ミオグロブリン血症、高齢血の輸血、ヘモグロビンの輸血、赤血球の輸血、心肺バイパス、冠状動脈疾患、心臓虚血症候群、狭心症、医原性溶血、血管形成、心筋虚血、組織虚血、血管内装置によって生じる溶血、血液透析、肺高血圧症、全身性高血圧症、皮膚潰瘍、急性腎不全、慢性腎不全、血管内血栓、および虚血性中枢神経系事象からなる群より選択される少なくとも一つの状態によって直接的または間接的に生じる。この方法の例では、具体的には、組織は、虚血性組織、たとえば神経細胞組織、腸組織、腸管組織、四肢組織、肺組織、中枢神経組織、または心組織からなる群より選択される一つまたは複数の組織であることが想定される。同じく提供されるものは、高血圧を有する対象において血管拡張を誘発および/または血流を増大させる方法であって、高血圧が肺における高血圧を含む方法である。例として、このような対象は場合によっては、新生児肺高血圧症、または原発性および/もしくは続発性肺高血圧症を有することが想定される。対象における高血圧または血流を増大させる必要性が、肺における高血圧または血流を増大させる必要性を含む態様の例では、薬学的に許容される亜硝酸塩は噴霧される。例として、様々な態様において、薬学的に許容される亜硝酸塩は、対象中で約100μM以下、約50μM以下、約20μM以下、約16μM以下、または約16μM未満の循環濃度まで投与される。もう一つの態様は、対象において血圧を低下および/または血管拡張を増大させることによって、対象における肝臓または心臓または脳の虚血再かん流傷害、肺高血圧症、または脳動脈痙攣、から選択される状態を処置または改善する方法であって、亜硝酸ナトリウムを対象に投与して対象において血圧を低下および/または血管拡張を増大させ、それによって状態を処置または改善することを含む方法である。この態様の具体例では、方法は、肝臓または心臓または脳の虚血再かん流傷害を処置または改善する方法である。場合によっては、亜硝酸ナトリウムは、注射、たとえば静脈注射によって対象に投与される。特定の例では、亜硝酸ナトリウムは、約06~240μMの循環濃度まで投与される。この態様の他の具体例では、方法は、肺高血圧症、たとえば新生児肺高血圧症を処置または改善する方法である。有利には、このような方法において、亜硝酸ナトリウムは、吸入によって対象に投与することができ、たとえば噴霧することができる。場合によっては、これらの方法のうち任意のものにおいて、亜硝酸ナトリウムは270μmolminの速度で投与されるが、他の速度および循環レベルが考慮される。この態様の他の例で同じく提供されるものは、脳動脈痙攣を処置または改善する方法である。場合によっては、亜硝酸ナトリウムは、注射、たとえば静脈注射によって対象に投与される。このような方法の例では、亜硝酸ナトリウムは、約45~60mgkgの割合で投与される。前記方法の例では、場合によっては、亜硝酸ナトリウムは、少なくとも一つのさらなる薬剤と組み合わせて投与されうる。前記方法のいずれにおいても、対象は哺乳動物であってよく、たとえばヒトでありうることが考慮される。IV.インビボ血管拡張剤としての亜硝酸ナトリウム亜硝酸アニオンは、血漿中で約150~1000nMの濃度、大動脈組織中で約10μMの濃度で存在する。亜硝酸塩をNOに還元するための生理学的機序が存在するとすると、これは一酸化窒素NOの最大血管プールに相当する。ヒト前腕における亜硝酸塩の血管拡張特性およびその生体活性化のために現存する機序が調査され、結果が本明細書で報告されている。亜硝酸ナトリウムを毎分約36μmolで健常なボランティア18名の前腕上腕動脈に注入すると、安静時の前腕血流中に約222μMの局所亜硝酸塩濃度および約175の即座の増大が得られた。血流の増大は、安静時、NO合成酵素阻害中および運動時に認められ、静脈ヘモグロビン酸素飽和度、酸素分圧、およびpHの増大によって実証されるように、組織かん流の増大を生じさせた。亜硝酸塩の全身濃度は約16μMに増大し、平均動脈血圧を有意に低下させた。さらに6名の対象で、亜硝酸塩用量を約2対数減らし、毎分360nmolで注入すると、約2μMの前腕亜硝酸塩濃度および約22の血流増が生じた。亜硝酸塩注入は、前腕血管系にかけて、赤血球鉄ニトロシルヘモグロビンの形成と関連し、程度は低めであるが、Sニトロソヘモグロビンの形成とも関連していた。NO修飾ヘモグロビンの形成は、デオキシヘモグロビンの亜硝酸塩還元酵素活性から生じるようであり、組織低酸素症と亜硝酸塩生体活性化とをリンクさせる。これらの結果は、血液および組織亜硝酸塩の生理学的レベルが血管調節に寄与し、血管亜硝酸塩と脱酸素化ヘムタンパク質との反応を介して低酸素血管拡張の機序を提供する生物学的に利用可能な主要なNOプールに相当するということを示す。健常なヒト対象の上腕動脈への亜硝酸塩注入の実質的な血流効果は、約09μMという低い前腕亜硝酸塩濃度から生じる。例として、本明細書に記載するように、薬学的に許容される亜硝酸塩たとえば亜硝酸ナトリウムが、対象の循環血中で約06~約200μMの最終亜硝酸塩濃度の計算用量で、血管拡張剤として有効であることがここで示される。たとえば、単一用量またはある期間にわたって提供される用量たとえば注入または吸入によってで約200mg以下の亜硝酸塩を提供することにより、特定の循環レベル対象中で局所的または全身的を実現することができる。たとえば、他の用量は、150mg、100mg、75mg、50mgまたはそれ未満であってもよい。亜硝酸塩の具体的な用量の例が本明細書で提供されるが、それらの例は限定的であることを意図しない。正確な用量は、処置される対象のサイズ、処置の期間、投与形態などによって異なる。所与の目標循環濃度が望まれる場合の注入速度は、以下の式を使用することによって計算することができる。注入速度μMmin=目標濃度μmolL、すなわちμM×除去率Lminただし、除去率Lmin=0015922087×対象の体重kg↑08354除去率は、本明細書で報告するものを含め、経験的結果に基づいて計算したものである。たとえば、亜硝酸ナトリウムが毎分36マイクロモルμMolでヒト前腕に注入される場合、15分間の注入ののち、前腕から得られる計測濃度は約222μMであり、全身では約16μMである。哺乳動物中で循環する亜硝酸塩のバックグラウンドレベルは低く、約150~500ナノMである。薬学的に許容される亜硝酸塩たとえば亜硝酸ナトリウムのような血管拡張剤の特に有利な治療有効量は、血管拡張または血流の増大に有効な量であるが、血管拡張剤が投与される対象中で有意なレベルまたは毒性レベルのメトヘモグロビンが生成されるほど高くはない。具体的な態様では、たとえば、対象中で約25以下のメトヘモグロビンしか生成されない。より好ましくは、血管拡張剤での処置に応答して、20以下、15以下、10以下、8以下またはそれ未満のメトヘモグロビン、たとえば5または3またはそれ未満のメトヘモグロビンしか生成されない。具体例として、亜硝酸塩は、毎分40μMol未満の濃度で静脈内または動脈内に注入することもできるし、経口的に与えることもできる。重要なことに、用量は、臨床的に有意なメトヘモグロビン血症を誘発するように設計されているシアン化物中毒の処置に使用される量よりも少ない。驚くべきことに、心臓血管状態の処置/予防のために本明細書で記載される用量は、臨床的に有意なメトヘモグロビン生成なしで、有意で有益な臨床効果を発揮する。狭心症をはじめとする障害を処置するために、比較的複雑な無機/有機亜硝酸化合物および硝酸化合物が臨床的に使用されてきた。これらの薬物たとえばグリセリルトリニトレートは耐性の問題をかかえる同じ効果を維持するためには用量を増やさなければならないが、亜硝酸塩とは明らかに異なる血管拡張剤である。たとえば、前者は、代謝のための細胞チオールを要するが、本明細書で論じる亜硝酸イオンまたは亜硝酸塩たとえば亜硝酸ナトリウムは要しない。V.鉄ニトロシルおよびSニトロソヘモグロビンのインビボ形成の機序この実験でインビボで形成される鉄ニトロシルおよびSニトロソヘモグロビンのレベルは特筆すべきである。注入された亜硝酸塩局所濃度200μMは、運動時に前腕を循環する10秒未満の通過時間中、約750nMの鉄ニトロシルヘモグロビンおよび200nMのSNOHbを生成した。両NOヘモグロビンアダクトの形成は、ヘモグロビン酸素飽和度と逆相関していた。ヘモグロビン酸素飽和度は、コオキシメトリーcooxymetryによる肘窩静脈からの計測によると、運動ストレス下で低下していた鉄ニトロシルヘモグロビンの場合、r07、P120mgdL、LDLコレステロール130mgdL、血圧14595mmHg、過去2年間の喫煙、心臓血管疾患、末梢血管疾患、凝固障害、または血管炎もしくはレイノー現象の素因となる他の疾患をもたない優秀な健康状態であった。G6PD欠乏症、既知のチトクロームB5欠乏症またはベースラインメトヘモグロビンレベル1の対象は除外したスクリーニングした対象のうち、これらの除外規準に該当したものはいなかった。授乳中および妊娠中の女性は除外したHCGレベル陽性の対象1名を除外した。ボランティア対象には、実験前の少なくとも1ヶ月間、いかなる薬物経口避妊薬は許可、ビタミンサプリメント、生薬、栄養補助食品または他の代替療法をも摂取させず、実験前の1週間はアスピリンの摂取も許可しなかった。前腕血流計測上腕動脈および肘窩静脈カテーテルを腕に挿入し、動脈内カテーテルを血圧計測のための圧力変換器および生理食塩水を1mLminで送達する注入ポンプに接続した。20分間の安静ののち、ベースライン動脈血および静脈血サンプルを採取し、以前に報告されているひずみゲージ静脈閉塞プレチスモグラフィーPanzaetalCirculation871468741993によって前腕血流計測を実施した。血流測定ごとに7回の血流計測値を平均した。亜硝酸塩注入の間の前腕血流応答に対する時間の影響を最小限にするため、パートIおよびIIと呼ぶ一連の計測を無作為な順序で実施した。NO遮断および反復運動中の血流および前腕亜硝酸塩抽出の計測パートI09NaCl食塩水溶液を1mLminで20分間、上腕動脈に注入したのち、以下に記すアッセイのために動脈血および静脈血のサンプルを採取し、前腕血流を計測した。握力計TechnicalProducts社を使用して、予め定めた最大握力の3分の1の力での反復把握動により、運動を実施したGladwinetalProcNatlAcadSciUSA97994382000GladwinetalProcNatlAcadSciUSA9711482114872000CannonetalJClinInvest108279872001。各収縮を10秒間継続させたのち、5秒間弛緩させた。5分間の運動ののち、運動の弛緩段階中に前腕血流計測値を得、動脈および静脈のサンプルを採取した。食塩水を上腕動脈に連続的に注入しながら20分の安静期間ののち、反復ベースライン血液サンプルおよび前腕血流計測値を得た。次に、LNMMAを1mLmin8μmolminの速度で上腕動脈に注入した。5分間のLNMMA注入ののち、前腕血流を計測し、動脈血および静脈血のサンプルを得た。そしてその腕でLNMMA注入を続けながら、前腕の運動を開始した。LNMMA注入を続けながら5分間の運動ののち、前腕血流を計測し、血液サンプルを得た図1。パートII食塩水を注入しながら30分間の安静ののち、ベースライン計測値を得、そこで食塩水注入を止め、亜硝酸塩NaNO2、09食塩水中36μmolmlの注入を1mlminで開始した。ヒト用の亜硝酸ナトリウムは、HopePharmaceuticalsから得たものであり水10ml中300mg、286mgを、PharmaceuticalDevelopmentServiceの09食塩水100ml中で最終濃度36μmolmlまで希釈した。実験した最後の9名の対象の場合、001~003mM重炭酸ナトリウムを生理食塩水に加えてpHを70~74に滴定した。亜硝酸塩溶液は遮光し、すべての実験ののち、溶液中の亜硝酸塩レベルおよび遊離NOガスを還元的化学発光によって計測したGladwinetalJBiolChem21212002。亜硝酸塩溶液中には505±405nMのNOしか存在せず、重炭酸緩衝による影響を受けていなかった。亜硝酸塩溶液中のNOレベルと亜硝酸塩の血流効果との間に相関関係は見られなかったr023、P055。5分間の亜硝酸塩注入ののち、前腕血流計測値および血液サンプルを得るとともに、亜硝酸塩注入を短く中断して動脈サンプルを得た。亜硝酸塩注入を続けるとともに、前記のように運動を実施し、上記のように前腕血流計測値および血液サンプルを得た。亜硝酸塩注入を止め、その後30分の安静期間中、食塩水注入を再開した。2回目のベースライン計測ののち、LNMMAを8μmolminで注入しながら亜硝酸塩注入を再開した。5分後、前腕血流計測を実施し、血液サンプルを得たのち、亜硝酸塩およびLNMMAの注入を続けながら5分間の運動を実施した。最終的な前腕血流計測値および血液サンプルを得た。パートII中のすべての時点で、メトヘモグロビンおよびNO修飾ヘモグロビンの全身レベルの測定のために、反対の腕の肘窩静脈から血液サンプルを得た図2、3、および4。亜硝酸ナトリウムの合計注入量は、36μmolmin×15分×注入2回108mmol75mgMWNaNO269であった。さらなる実験において、対象10名に、パートIおよびIIのプロトコルの同じ段階を踏襲したが、低用量の亜硝酸塩を注入した09食塩水中036μmolmlのNaNO2を1mlminで注入。iSTATシステムiSTATCorporationEastWindsorNJを使用して、動脈および静脈pH、pO2、およびpCO2をベッドサイドで計測し、メトヘモグロビン濃度およびヘモグロビン酸素飽和度をコオキシメトリーによって計測した。赤血球Sニトロソヘモグロビンおよび鉄ニトロシルヘモグロビンの計測Sニトロソヘモグロビンは還元性赤血球環境では不安定であり、酸素圧には依存せずに温度および酸化還元依存的に急速に崩壊するGladwinetalJBiolChem21212002。計測に備えてSニトロソヘモグロビンを安定化するためには、赤血球をフェリシアン化物で速やかに酸化させなければならない。亜硝酸塩注入の前および最中、上腕動脈および肘窩静脈から血液を抜き取り、全血をただちに処理時間を省くためにベッドサイドで1NP40膜を可溶化するため、8mMNEM遊離チオールと結合し、人為的Sニトロソ化を防ぐため、01mMDTPA極微量の銅をキレート化するため、ならびに4mMフェリシアン化物およびシアン化物Sニトロソヘモグロビンを安定化し、処理中の人為的なエクスビボ鉄ニトロシル化を防ぐためを含有するPBSのNOヘモグロビン安定化溶液中で110に溶解した。サンプルを総容積95mLのSephadexG25カラムに通して脱塩して、亜硝酸塩および過剰な試薬を除去し、ヘモグロビンを部分的に精製した99ヘモグロビン調製物。Drabkinの方法によってヘモグロビン画分を定量し、ヘモグロビン画分を、塩化第二水銀を用いた場合と用いない場合で反応させ15のHgCl2ヘム比、水銀不安定なSニトロソチオールと水銀安定な鉄ニトロシルとを区別するために使用、さらに01MHCL05スルファニルアミド中で反応させた残留亜硝酸塩を除去するため。MarleyetalFreeRadicRes32192000。そしてサンプルを、化学発光一酸化窒素分析装置Sievers、モデル280NO分析装置、BoulderCOと直列に配した三ヨウ化物I3の溶液に注入した。水銀安定なピークが鉄ニトロシルヘモグロビンを表す。このアッセイは、全血中5nMヘムあたりSNO000005までのSニトロソヘモグロビンおよび鉄ニトロシルヘモグロビンの両方に対して感度および特異性を示すGladwinetalJBiolChem21212002。分析は、まず赤血球ペレットを使用して実施したが、サンプルを氷に入れ、ただちに赤血球ペレットから血漿を分離したにもかかわらず、NOが静脈血中エクスビボで形成した。真のインビボレベルを計測するため、全血をベッドサイドでNOヘモグロビン安定化溶液中110に混合した。亜硝酸塩注入中、血漿Sニトロソアルブミン形成は無視しうる程度であったため、このベッドサイド全血アッセイを使用して処理時間を制限し、インビボ化学作用をより正確に特徴づけた。一連の立証実験で、Sニトロソヘモグロビンおよび鉄ニトロシルヘモグロビンは両方とも、室温で20分間NOヘモグロビン安定化溶液中で安定であり、NO修飾種の人為的形成または崩壊はなかったn6。亜硝酸塩添加ののちデオキシヘモグロビンおよび脱酸素化赤血球から放出されるNOガスの化学発光検出亜硝酸塩とデオキシヘモグロビンとの反応からフリーNOラジカルが形成しうるかどうかを判定するため、化学発光NO分析装置SeiversBoulderCOと直列に配した、ヘリウムまたは酸素いずれも21および100でパージした遮光反応容器中、100および200μM亜硝酸塩を660および1000μM脱酸素化赤血球5mLと混合した。5分間平衡させたのち亜硝酸塩を注入し、NO生成の速度を計測した。亜硝酸塩を、対照としてのPBSおよび100μMヘモグロビンに注入して、660および1000μM脱酸素化赤血球溶液中の溶血を制御した。すべての実験の最後に、上澄みおよび赤血球反応混合物の可視吸収スペクトルを解析し、最小二乗アルゴリズムを使用してヘモグロビン組成を逆重畳積分した。系中には100μM未満の溶血しかなく、ヘモグロビンの変性はなく、鉄ニトロシルヘモグロビンの有意な形成があった。赤血球懸濁液からのNO生成は、溶血産物対照から生成されるものを超え、赤血球からのNO排出と合致していた。統計解析前腕NO合成がLNMMAによって阻害される場合、生理食塩水注入対照値と比較して亜硝酸塩注入中の前腕血流の25改善を検出するための実験には18名の対象が必要であろうことが先験的サンプルサイズ計算により決定されたアルファ=005、パワー=080。実験の比較しうる時点でのベースライン値とLNMMA注入値との間、ベースライン値と運動値との間、および亜硝酸塩値と食塩水対照値との間の対単位の比較のために、対応t検定によって両側P値を計算した。ベース、LNMMA注入、および運動条件の間のNO種の動脈から静脈への勾配に関して反復測定ANOVAを実施した。示す計測値は平均±標準誤差である。結果および考察亜硝酸塩が血管拡張剤であるかどうかを判定し、亜硝酸塩のインビボ化学作用を試験するため、健常な対象18名男性9名、女性9名、年齢21~50歳を生理学的実験に参加させた。プロトコルのパートIは、運動およびNO合成阻害に対する前腕内での正常な血行動態的および代謝的応答を計測するために、亜硝酸塩注入中にこれらの介入を実施したプロトコルのパートIIの対照として設計されたものであった。初期ベースライン計測値は、856±37mmHgの平均血圧および組織100mLあたり40±03mlminの前腕血流を含んだ図1A。反復把握前腕運動が血流を安静時の値に対して約600増大させ、同側の静脈ヘモグロビン酸素飽和度、pO2、およびpHを有意に低下させ、これは酸素消費およびCO2生成の増大と合致するものであった。20分の安静期間ののち、初期ベースライン値と比較して、反復血行動態的計測は約10高い前腕血流を示したが、全身血圧または前腕静脈ヘモグロビン酸素飽和度、pO2およびpH値に変化は見られなかった図1B。次に、NO合成酵素阻害薬LNMMAを8μmolminで5分間、上腕動脈に注入すると、前腕血流が有意に約30低下し、静脈ヘモグロビン酸素飽和度、pO2およびpH値が有意に低下した。LNMMA注入を継続しながらの反復前腕運動が血流を増大させたが、運動のみの場合に比べると有意に低いピーク値であったP95、PaO290~150Torr、およびPaCO235~45Torrを維持した。カテーテルを右上腕動脈に配置して、ガスおよび化学分析のための管前血をサンプリングした。小児用温度希釈カテーテルを大腿静脈に通して肺動脈まで到達させて、心拍出量、肺動脈および肺毛細管楔入圧を計測した50PediatricSwanGanz登録商標温度希釈カテーテル、BaxterHealthcareCorporationIrvineCAUSA。血圧、心拍数をモニタし、流体および薬物を投与するために、カテーテルを大腿動脈および静脈に配置した。熱電対を大腿静脈に配置して、実験を通じて加温ブランケットおよび加熱灯を使用して39°Cに維持した中心体温をモニタした。実験の完了後、専売安楽死溶液EuthasolWesternMedicalSupplyArcadiaCAUSAでヒツジを安楽死させた。選択した実験で、検死解剖を実施してカテーテルの位置を確認し全ケースで正しい位置にあった、動脈管が閉じていることを判定した全ケースで閉じていた。血行動態計測胸郭中央レベルでゼロに合わせて較正した圧力変換器COBELaboratoriesLakewoodCOを使用して、平均動脈圧、平均肺動脈圧、および中心静脈圧を連続的に計測し、肺毛細管楔入圧を断続的に計測した。Com2温度希釈モジュールBaxterMedicalIrvineCAUSAを使用する温度希釈により、実験を通じて心拍出量を15分間隔で計測した。氷冷食塩水の5ml注入を使用した。測定は三重反復で実施し、サンプリング時点ごとに結果を平均した。標準式を使用して肺血管抵抗および全身血管抵抗を計算した。血液ガスおよびメトヘモグロビン分析実験中に間隔をおいて収集した血液サンプル03ml中で動脈および混合静脈pH、PCO2、およびPO2を計測した。血液ガスを計測しABL3RadiometerCopenhagenDenmark、ヘモオキシメータOSM2HemoximeterRadiometerCopenhagenDenmarkを使用してオキシヘモグロビン飽和度およびヘモグロビン濃度を計測した。OSM2ヘモオキシメータを用いる光覚計測により、血液ガス測定の場合と同じ動脈サンプルを使用して、動脈および混合静脈メトヘモグロビン濃度を分析した。エアロゾル化亜硝酸塩、食塩水、またはNOガスの送達すべての実験で、亜硝酸ナトリウム水溶液1mM溶液または食塩水のいずれか5ミリリットルをジェット噴霧器HudsonRCIMicroMistNebulizerHudsonRespiratoryCareTemuculaCAに入れ、8Lminの定流量で駆動した。亜硝酸ナトリウム溶液は270μmolminの速度で噴霧した。エアロゾルを人工呼吸器の吸気ループに送達した。ジェット噴霧器を使用すると、噴霧した薬物の10しか肺の中に付着しないと一般に考えられているCoatesetalChest1191123302001。これは、噴霧器の無駄な容積および呼気段階中の薬物の損失の結果である。肺付着は、気流、充填容量、薬物溶液、および周囲温度の影響を受ける粒度分布に依存するFlavinetalPediatrPulmonol23591986SuarezHickeyRespirCare45652662000ClayetalThorax3875591983ClayetalLancet259241983。これは簡単で廉価で広く利用可能な臨床噴霧システムであるが、他のシステムを使用してもよい。NOガスを呼吸回路の吸気縁に導入した。NOの吸入濃度は、人工呼吸器ループの吸気縁中で化学発光CLD700ALEcoPhysicsIncAnnArborMIによって連続的に計測した。低酸素誘発肺血管狭窄における亜硝酸塩または食塩水エアロゾルの吸入噴霧亜硝酸塩が低酸素新生仔ヒツジにおいて選択的肺血管拡張剤であることを実証するため、7頭のヒツジで実験した。麻酔および器具処置ののち、ヒツジを30~90分間回復させ、その間に適切な血行動態パラメータをモニタした。ベースライン計測値を得たのち、吸気のFiO2を30分間012まで減らすことにより、30分間の肺高血圧症を誘発した。低酸素状態の開始から10分後、低酸素期間の残りの期間、食塩水または亜硝酸ナトリウムのエアロゾルを投与した。1時間の回復期間ののち、再び30分間の低酸素状態を誘導し、その最後の20分間に食塩水または亜硝酸ナトリウムのエアロゾルを投与した。血液ガスおよび分析アッセイのための動脈血サンプルを採取し、規則的な間隔で心拍出量計測を実施した。酸素正常状態におけるU46619誘発肺高血圧症中の亜硝酸塩の吸入酸素正常状態肺高血圧症に対する亜硝酸塩噴霧の効果を評価するため、さらに6頭のヒツジで実験した。トロンボキサンの安定なエンドペルオキシド類似体U46619-911ジデオキシ11αエポキシメタノプロスタグランジンF2α、CaymanChemicalsAnnArborMIの注入により、安定な酸素正常状態肺高血圧症を誘発した。この薬物は食塩水に溶解し、2μgkgminの速度で30分間、大腿静脈カテーテル中に投与した。注入の最後の20分間、亜硝酸塩を噴霧して吸入させた図11。低酸素誘発肺血管狭窄における吸入亜硝酸塩とNOガスとの比較:効能および効果の持続期間このプロトコルは、亜硝酸塩の効能を臨床標準、すなわち20ppm吸入NOガスと比較するために設計されたものである。このNOガス濃度は、原発性肺高血圧症の小児に与えられる治療量の上限でありKinsellaAbmanSeminPerinatol24387952000KinsellaetalLancet340819201992、また、新生仔ヒツジの低酸素血管狭窄を好転させるのに効果的であることが示されているFrostelletalCirculation832038471991。第二の目的は、長期低酸素誘発肺血管狭窄における血行動態的および生理学的計測において短い亜硝酸塩噴霧の効果の持続期間をNOガス吸入に対して決定することであった。ベースライン計測を実施したのち、上記のようにして35分間ヒツジを低酸素状態にした。低酸素状態の発生から10分後、20分間のNOガス吸入20ppmを開始し、NOガス送達を止めた後も5分間、低酸素状態を継続した。その後1時間ヒツジを回復させた。再び、ベースライン計測を実施し、2回目の90分間の低酸素状態を開始した。低酸素状態の発生から10分後、亜硝酸ナトリウムエアロゾルを20分間投与し、亜硝酸塩エアロゾル化を止めた後も60分間、低酸素状態を継続した図13。呼気NOの計測化学発光NO分析装置NOA280SieversInstrumentsIncBoulderCOを用いて呼気NO濃度を計測した。化学発光分析装置は、NOを含まない空気およびNOガス45ppmを使用して、製造元が推奨するやり方にしたがって較正した。NOは、250mlminの流れが分析装置まで通過する気管内チューブの近位端でサンプリングポートに取り付けたTeflonサイドアームを通してサンプリングした。選択した早期の実験において、亜硝酸塩を、ヒツジに接続していない人工呼吸器回路中に噴霧し、その間、化学発光NO分析装置でNOを計測した。どの実験でも、非接続回路中への亜硝酸塩噴霧は、換気中のNO濃度の上昇を生じさせなかった。血漿亜硝酸塩および鉄ニトロシルヘモグロビンの計測上腕動脈および中心静脈カテーテルから血液を抜き取り、速やかに処理した。遠心分離後に血漿を分離し、すぐにドライアイスで凍結させたのち、以前に記載されたようにCosbyetalNatMed914985052003GladwinetalJBiolChem27727818282002YangetalFreeRadicRes371102003化学発光法Sieversモデル280NO分析装置を使用して亜硝酸塩をアッセイするまで70°Cで貯蔵した。凍結した赤血球ペレットを解凍し、8mMNEM、100μMDTPA、および4mMフェリシアン化物中で反応させ、5分間インキュベートし、SephadexG25カラムに通したYangetalFreeRadicRes371102003XuetalProcNatlAcadSciUSA1001130382003。G25カラムからのヘモグロビン画分をDrabkinの方法JBiolChem11251651935によって定量し、01MHCl05スルファニルアミド中で反応させて残留亜硝酸塩を除去した。そして、サンプルを化学発光一酸化窒素分析装置Sievers、モデル280NO分析装置、BoulderCOと直列に配した三ヨウ化物I3の溶液に注入した。三ヨウ化物溶液中で鉄ニトロシルヘモグロビンからNOガスを化学量論的に除いたYangetalFreeRadicRes371102003。全血の電子常磁性共鳴分光法これは、94GHz、10mW、5G変調、008s時定数および600Gで84sの走査時間にセットしたEMX1012EPR分光システム上、Bruker4131VT温度制御装置を使用して110Kで実施した。各曲線が一つの84秒走査を表す。ピーク間高さを標準サンプルと比較することによって鉄ニトロシルヘモグロビン濃度を計算した。データ取得および解析平均動脈圧、肺動脈圧、中心静脈圧、心拍数、呼気NO濃度、および中心体温を連続的に計測した。アナログ信号を100Hzでデジタル化し、アナログデジタル変換器PowerLabSPADInstrumentsColoradoSpringsCOおよびデータ取得ソフトウェアChartv502forMacintoshADInstrumentsColoradoSpringsCOを使用して記録した。実験ののち、動脈血圧、中心静脈圧、心拍数、および呼気NO計測値を60秒ブロックに平均化した。統計的解析生理学的変数の連続計測値を、反復測定をグループおよび時間とともに因数として用いる二方向ANOVAによって比較した。差の有意性をダネット事後試験で評価した。ベースライン期間からの有意差は、反復測定を個々の動物および時間とともに因数として用いる一方向ANOVAを使用して評価した。差の有意性をさらにNewmanKeulの事後試験で評価した。計算は、GraphPadPrismGraphPadSoftwareIncSanDiegoCAUSAを使用して実施した。統計的有意性をP005で仮定した。データは平均±SEMとして提示する。結果低酸素誘発肺血管狭窄におけるエアロゾル化亜硝酸塩の肺血管拡張性低酸素肺高血圧症に対する噴霧亜硝酸塩の効果を判定するため、7頭の新生仔ヒツジ2~10日齢を全身麻酔下で器具処置し、人工呼吸器およびモルヒネ注入で維持した。ベースライン安定化ののち、FiO2を012に減らすことによってヒツジを30分間の低酸素状態に供した。低酸素期間の最後の20分間、噴霧亜硝酸塩または食塩水を投与した。低酸素状態動脈HbO2約55の開始は、平均肺動脈圧の急速な増大21±1から34±2mmHgへ、P001図10A、10Bおよび肺血管抵抗の急速な増大20、ならびに全身血管抵抗の低下約20と関連していた。食塩水とは違って図10A、10B、噴霧亜硝酸塩の吸入は肺動脈圧を選択的に約60低下させP001図10A、10C、肺動脈抵抗を約70低下させたがP005、対照動物と比較した場合、平均動脈血圧図10A、10Cまたは全身血管抵抗に対する計測しうる効果はなかった。亜硝酸塩噴霧による肺動脈圧の低下は、呼気NOの3±1ppbから15±4ppbへの漸増を伴った図10A、10C。心拍出量、動脈オキシヘモグロビン飽和度、およびメトヘモグロビンレベルは、亜硝酸塩吸入ののち、直前の10分間の低酸素状態中の値と比較して、計測しうる変化はなかった図10A。動脈Po2は、実験的に鉗子で締め付けたため、我々のシステムでは認めうるほどの変化はなかった。酸素正常薬物誘発肺血管狭窄におけるエアロゾル化亜硝酸塩の肺血管拡張性正常なデオキシヘモグロビンの存在下における肺動脈圧に対する噴霧亜硝酸塩の効果を、低下した酸素化ヘモグロビンの存在下における効果と対比させるため、酸素正常条件下で肺高血圧症に供したヒツジ6頭の別々のグループで噴霧亜硝酸塩の効果を実験した。トロンボキサンのエンドペルオキシド類似体U46619の注入により、安定な酸素正常SaO2約98肺高血圧症を誘発した。2μgkgminで30分間のU46619の静脈内注入は、肺動脈圧の24±1mmHgから51±4mmHgへの急増を伴ったP0001図11。注入を開始してから10分後、噴霧亜硝酸塩の吸入添加の結果、肺動脈圧の23±6の選択的低下注入ベースラインに比較してP005が生じたが、平均動脈血圧または全身血管抵抗に対する効果はなかった図11。亜硝酸塩噴霧による肺動脈圧の低下は、呼気NOの48±12ppbから101±20ppbへの漸増と関連していたベースラインに比較してP005、図11。図2は、低酸素誘発肺血管狭窄および薬物誘発酸素正常肺血管狭窄に対する20分後の亜硝酸塩吸入の効果の比較を示す。平均肺動脈圧および呼気NOの変化は、低酸素状態における亜硝酸塩処置の場合で有意に大きかった。総じて、酸素正常トロンボキサン誘発肺高血圧症に対する亜硝酸塩吸入の効果は、低酸素肺高血圧症で観察された効果よりも低く図10、11、12A、亜硝酸塩の血管活性の低酸素血、およびおそらくは酸血の増強作用のモデルと合致していた。デオキシヘモグロビンの亜硝酸還元酵素活性のpHおよび酸素依存性我々は、亜硝酸塩からNOへの生化学的転換がデオキシヘモグロビンおよびプロトン化の両方を要すると仮説を立てた。そして、酸素正常状態実験および低酸素状態実験の両方からのデータを使用して、亜硝酸塩からのNO生成に対するヘモグロビン飽和度およびpHの影響を研究した。呼気NOガスおよびNO修飾ヘモグロビン鉄ニトロシルヘモグロビンの計測値を、NO生成の用量計として、また、NOを生成する亜硝酸塩とヘモグロビンとの亜硝酸還元酵素反応の直接的副生成物の尺度として使用した。図12は、三ヨウ化物ベースの還元化学発光図12Bおよび電子常磁性共鳴図12Cによる計測で、鉄ニトロシルヘモグロビンが、低酸素状態では亜硝酸塩吸入によって顕著に増大したが、薬物誘発酸素正常肺血管狭窄ではそうはならなかったことを示す。図12Dに示すように、噴霧亜硝酸ナトリウムの吸入後の低酸素状態における平均肺動脈圧の変化は血液pHと相関し、血管拡張の増大はpHの低下を伴ったr057P0055。吸入NOおよび効果の持続期間との比較次に、亜硝酸塩の効能を、現在の治療標準、すなわち吸入NOガスと比較した。低酸素状態の開始ののち、ヒツジを20ppm吸入NOガスまたは噴霧亜硝酸塩に20分間供した。図13のデータは、低酸素状態における血行動態および代謝計測値に対するNOガス吸入図13Aまたは亜硝酸塩噴霧図13B、13Cの効果の持続期間および大きさを示す。両処置とも低酸素肺高血圧症の顕著な軽減を生じさせたが、吸入NOに対する反応のほうがわずかに速く、肺圧は、亜硝酸塩によって誘発された60~70の圧力修正と対比すると、ベースラインにより近くなった。全身的には、平均動脈血圧および抵抗は、低酸素状態における両方の処置で同程度に低下した。しかし、NOガスと比較した場合の亜硝酸アニオンの相対的な化学的安定性により、亜硝酸塩吸入を停止した後でも60分低酸素負荷の期間を超える持続的な血管拡張が得られたが、NOガス送達の停止は、数秒のうちに血管拡張効果を消滅させた図13A、13B。亜硝酸塩噴霧の相対的に持続性の効果は、βアドレナリン作用薬を計量吸入器によって用いるぜん息の治療に類似した断続的な治療を可能にすることにより、治療的に有利である可能性がある。亜硝酸塩吸入誘発肺血管拡張の時間経過および血漿亜硝酸塩レベルを示す図13C、13D。図10の場合よりも長い期間で生化学的変化を追跡したこの実験では、メトヘモグロビンMetHb濃度は、ベースライン時の21±01から亜硝酸塩噴霧後の28±02まで上昇したP005。考察この実施例の主要な発見は、噴霧亜硝酸ナトリウム溶液の短期間の吸入が、新生仔ヒツジにおける低酸素誘発肺高血圧症において急速かつ選択的な肺血管拡張を生じさせるということである。亜硝酸塩噴霧後の肺動脈圧の有意な低下は、亜硝酸塩噴霧の停止ののち低酸素状態が1時間を超えて続いた場合でも持続した。いずれの実験でも、亜硝酸塩吸入が全身性低血圧症を生じさせることはなく、メトヘモグロビン上昇は最小限に抑えられた。機序的観点から、亜硝酸塩投与は、呼気NOガスおよびNO修飾ヘモグロビンによって計測されるNO生成と関連し、応答は、ヘモグロビン酸素不飽和化のレベルおよび血液pHの低下と比例していた。これらのデータは、亜硝酸塩が、その生体活性化がヘモグロビン脱酸素化およびプロトン化と連結するNO依存性血管拡張剤であるというパラダイムを支持する。吸入NOガスは、肺高血圧症の処置のための現在の標準である。図13は、20ppmのNOガスの効果とエアロゾル化亜硝酸塩の効果との比較を提供する。約5分で、NOガスは低酸素誘発肺高血圧症の約80を効果的に軽減し、これは、短期的ではあるが、20分後に再び投与されたときに再現することができる効果である。エアロゾル化亜硝酸ナトリウムは、低酸素誘発肺高血圧症の約60を除いた。この応答は、実験したヒツジそれぞれで一貫して認められ、亜硝酸塩エアロゾルを中止した後も維持した1時間の低酸素期間を通じて持続した。肺血流の変化は、肺中の血流に対する計算上の抵抗の対応する変化を伴い、変化が、かん流圧を変化させたかもしれない心拍出量または全身性効果の変化に二次的なものではなく、肺血管系におけるものであることを示した。我々は、本明細書で、エアロゾル化亜硝酸塩が、新生仔ヒツジにおいて、噴霧によって容易に投与することができ、幅広い治療安全性マージンを示し、全身の血行動態変化およびメトヘモグロビン生成が抑えられたNO生成剤であることを実証する。これは、吸入NOに対して魅力的な治療オプションを提示する。亜硝酸塩は、1血液、肺胞を覆う液、および組織中で天然に存在する化合物であり、2ヒト疾患に転用する前には広範な毒物学的研究を要する親化合物脱離基、たとえばジアゼニウムジオレートを有さず、3シアン化物解毒キットにおいてヒトへの使用がすでに認可されている、という点において理想的なNO生成剤である。これらの利点は、より長期の送達によって起こりうる問題、たとえば肺胞亜硝酸塩蓄積、全身性血管拡張、およびメトヘモグロビン血症の発症に関して、バランスをとるようにすべきものである。結論として、この実施例で提示するデータは、吸入亜硝酸塩が新生仔ヒツジの肺循環における強力かつ選択的な血管拡張剤であることを示唆し、さらに、亜硝酸イオン、特に亜硝酸ナトリウムのような塩が、その生体活性化がヘモグロビン脱酸素化およびプロトン化と連結するNO依存性血管拡張剤であるというパラダイムを支持する。我々の実験のいずれでも、亜硝酸塩の吸入が全身性低血圧症を生じさせたり、メトヘモグロビンレベルを上昇させたりすることはなかった。実施例4クモ膜下出血後の脳動脈痙攣の予防のための亜硝酸塩注入の使用この実施例は、脳内出血後の脳動脈痙攣を予防するために亜硝酸塩注入を使用する方法を詳細に説明する。脳内動脈瘤の破裂によるクモ膜下出血SAHは毎年28000人のアメリカ人に影響している。動脈瘤性SAHの患者の約70は、SAH後7日目に脳動脈の重篤な痙攣を起こす。積極的な医学的治療にもかかわらず、血管痙攣の結果として生じる神経性欠損は、罹患率および死亡率の主要な原因であり続けている。脳血管痙攣の病因はほとんど解明されていないが、脳脊髄液中の赤血球溶血および一酸化窒素NO、すなわち強力な血管拡張物質の利用能の低下が重要な役割を演じているという証拠が増大している。NOまたはNOプロドラッグによる血管痙攣の好転がいくつかの動物モデルで報告されている。半世紀もの研究および臨床試験にもかかわらず、遅延性脳血管痙攣DCVが、破裂した脳内動脈瘤の血管内または外科的処置が成功した患者の少なくとも15における、永久的な神経性欠損または死の唯一の原因であり続けている。一酸化窒素NOの生物学的利用能の低下がDCVの発症と機序的に関連している。この実験は、亜硝酸塩、すなわちデオキシヘモグロビンと反応してNOおよびSニトロソチオールを形成する天然のアニオンの注入が、血管周囲ヘモグロビンとの反応によってDCVを予防するかどうかを判定するために実施した。方法0日目に、麻酔を施した14匹のカニクイザルの右中大脳動脈RMCAの周囲に自己由来動脈血餅を配置した。亜硝酸ナトリウムの09食塩水溶液NaNO2、1日135mgおよび1日180mg、およそ1日あたり45mgkgおよび60mgkgに相当n6または食塩水のみn8を、着装携行式MiniMed注入ポンプを介して、覚醒中の動物に14日間2μlminで静脈内注入した。DCVの評価のため、血餅配置前ならびに7日目および14日目に脳動脈造影を実施した。脳動脈造影のAP投影で計測した場合のRMCA面積の近位14mmでの25以上の減少を動脈造影血管痙攣と定義した盲評価。0日目から毎日、平均動脈血圧を計測し、血液サンプルを採集した。脳脊髄液サンプルを0日目、7日目、および14日目に採集した。結果対照動物では、脳脊髄液亜硝酸塩レベルは、31±15μMから、7日目に04±01μMまで減少し、14日目に04±04μMまで減少し図14、8匹の動物すべてがRMCAで有意な血管痙攣を発症し図15および16、1匹は脳卒中を併発し、死に至った。亜硝酸塩注入は、全身性低血圧症なしで血漿脳脊髄液亜硝酸塩および血中メトヘモグロビン濃度の増大を伴い図14、血管痙攣の重篤度を有意に低下させた図15および16、有意な血管痙攣を発した動物はなかった。SAH後7日目のRMCA面積の平均減少率は、8±9対45±5であった。P0001。亜硝酸塩注入の薬理学的効果は、脳脊髄液亜硝酸塩のSニトロソチオール、すなわち、亜硝酸塩生体活性化の強力な血管拡張性NOドナー中間体への生体転換と関連していた。亜硝酸塩毒性の臨床的または病理学的証拠は見られなかった。結論亜急性亜硝酸ナトリウム注入は、SAHの霊長類モデルでDCVを予防し、毒性なしで予防する。これらのデータは、現在予防的療法が存在しない疾病であるDCVのための新規で安全で廉価で合理的に設計された療法を明示する。前記明細書では、本発明をその特定の好ましい態様に関して記載し、例示のために多くの詳細を述べたが、当業者には、本発明がさらなる態様をとることができ、本発明の基本原理を逸することなく本明細書に記載した特定の詳細を大幅に変更できることが自明であろう。