"B細胞リンパ腫を治療する方法であって、抗CD19抗体と抗CD20抗体とを含んでなる併用療法を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、前記併用療法が、同等の投与計画で単独投与された前記抗CD19抗体または前記抗CD20抗体のいずれよりもより長い持続期間にわたり抗腫瘍活性を提供する、方法。前記B細胞リンパ腫が、急性リンパ芽球性白血病ALL、慢性リンパ球性白血病CLL、または非ホジキンリンパ腫NHLから選択される、請求項1に記載の方法。前記併用療法が相乗的治療効果を提供する、請求項1に記載の方法。前記抗CD19および抗CD20抗体が同時投与される、請求項1に記載の方法。前記抗CD19および抗CD20抗体が逐次投与される、請求項1に記載の方法。前記抗腫瘍活性が腫瘍増殖の阻害である、請求項1に記載の方法。前記抗腫瘍活性が悪性B細胞の枯渇である、請求項1に記載の方法。前記併用療法が、同等の投与計画で単独投与された前記抗CD19抗体または前記抗CD20抗体のいずれよりも少なくとも1ヶ月間長い抗腫瘍活性をもたらす、請求項1に記載の方法。前記併用療法が、同等の投与計画で単独投与された前記抗CD19抗体または前記抗CD20抗体のいずれよりも少なくとも6ヶ月間長い抗腫瘍活性をもたらす、請求項1に記載の方法。前記併用療法が少なくとも6ヶ月間の抗腫瘍活性をもたらす、請求項1に記載の方法。前記患者中の腫瘍体積が、前記併用療法による6ヶ月間の治療期間中に10未満増大する、請求項1に記載の方法。前記抗CD19抗体が、生体外での測定で、改善された抗体依存性細胞媒介性細胞毒性ADCCを有する、請求項1に記載の方法。前記抗CD19抗体が脱フコシル化されている、請求項1に記載の方法。前記抗CD19抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項1に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号2のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR1、配列番号3のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR2、配列番号4のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR3、配列番号6のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR1、配列番号7のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR2、および配列番号8のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR3を含んでなる、請求項1に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号1のアミノ酸配列を含んでなるVHドメインを含んでなる、請求項1に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号5のアミノ酸配列を含んでなるVLドメインを含んでなる、請求項1に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号1のアミノ酸配列を含んでなるVHドメインと、配列番号5のアミノ酸配列を含んでなるVLドメインとを含んでなる、請求項1に記載の方法。前記抗CD20抗体がリツキシマブである、請求項1に記載の方法。B細胞リンパ腫を治療する方法であって、抗CD19抗体と抗CD20抗体を含んでなる併用療法を、それを必要とする患者に投与するステップを含み、ある投与量の前記併用療法が、前記併用療法投与量より少なくとも2倍高い投与量の前記抗CD19抗体よりも高い抗腫瘍活性を有する、方法。前記B細胞リンパ腫が、急性リンパ芽球性白血病ALL、慢性リンパ球性白血病CLL、または非ホジキンリンパ腫NHLから選択される、請求項20に記載の方法。前記併用療法が相乗的治療効果を提供する、請求項20に記載の方法。前記抗CD19および抗CD20抗体が同時投与される、請求項20に記載の方法。前記抗CD19および抗CD20抗体が逐次投与される、請求項20に記載の方法。前記抗腫瘍活性が腫瘍増殖の阻害である、請求項20に記載の方法。前記抗腫瘍活性が悪性B細胞の枯渇である、請求項20に記載の方法。前記抗CD19抗体が、生体外での測定で、改善された抗体依存性細胞媒介性細胞障害ADCCを有する、請求項20に記載の方法。前記抗CD19抗体が脱フコシル化されている、請求項20に記載の方法。前記抗CD19抗体がヒトまたはヒト化抗体である、請求項20に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号2のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR1、配列番号3のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR2、配列番号4のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR3、配列番号6のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR1、配列番号7のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR2、および配列番号8のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR3を含んでなる、請求項20に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号1のアミノ酸配列を含んでなるVHドメインを含んでなる、請求項20に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号5のアミノ酸配列を含んでなるVLドメインを含んでなる、請求項20に記載の方法。前記抗CD19抗体が、配列番号1のアミノ酸配列を含んでなるVHドメインと、配列番号5のアミノ酸配列を含んでなるVLドメインとを含んでなる、請求項20に記載の方法。前記抗CD20抗体がリツキシマブである、請求項20に記載の方法。しかしこの治療法は、全ての患者集団にわたって効果的でない。したがって新しい改善された治療選択肢に対する、大きな必要性が依然として残る。ヒトの分化抗原群CD抗原19は、重鎖転位時から、初期プレB細胞によって発現される、B細胞特異的表面抗原である。CD19は、膜貫通受容体の免疫グロブリンドメイン含有スーパーファミリーに属する。CD19発現が下方制御されている場合、CD19は、それらの系統全体を通じて、B細胞上で、プロB細胞から形質細胞段階まで発現される。Nadleretal.,JImmunol.1983;131:244-250B細胞特異的タンパク質、およびB細胞受容体BCR複合体構成要素として、CD19は、B細胞活性化と体液性免疫の閾値を調節する、B細胞シグナル伝達の正の調節因子である。Satoetal.,ProcNatlAcadSci,1995;92:11558-62;Satoetal.,JImmunol.1997;158:4662-9CD19は、プロB細胞段階前には、造血幹細胞上またはB細胞上で発現されない。Nadleretal.,JImmunol.1983;131:244-250;Lokenetal.,Blood,1987;70:1316-1324。重要なことに、CD19の発現は、B細胞の悪性形質転換に続いて維持され、CD19は、ALL、CLL、およびNHLを含む大部分のB細胞悪性腫瘍上で発現される。Uckunetal.,Blood,1988;71:13-29;D’Arenaetal.,AmJofHematology,2000;64:275-281;Ginaldietal.,JClinPathol,1998;51:364-369;Andersonetal.,Blood,1984;63:1424-1433B細胞悪性腫瘍上におけるCD19の広汎性で比較的安定した発現は、この抗原をmAbベースの治療法の魅力的な標的にする。したがってB細胞悪性腫瘍の治療のために、抗CD19および抗CD20抗体の双方の利点を利用する、併用療法に対する必要性がある。本明細書で提供されるのは、抗CD19抗体と抗CD20抗体を含んでなる併用療法を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、B細胞リンパ腫を治療する方法である。このような併用療法は、同等の投与計画で単独投与される、前記抗CD19抗体または前記抗CD20抗体のいずれよりも、長い持続期間にわたって抗腫瘍活性をもたらす。抗CD19および/または抗CD20抗体の低減用量を利用して、B細胞リンパ腫を治療する方法もまた提供される。特にこのような方法は、抗CD19抗体と抗CD20抗体を含んでなる併用療法を、それを必要とする患者に投与するステップを含んでなり、ある投与量の前記併用療法は、併用療法投与量より少なくとも2倍高い投与量の前記抗CD19抗体よりも高い抗腫瘍活性を有する。A.抗CD19と抗CD20抗体による併用療法本明細書で提供されるのは、抗CD19抗体と抗CD20抗体の組み合わせを投与するステップを含む、B細胞悪性腫瘍を治療する方法である。併用療法は、単一抗体療法例えば抗CD19または抗CD20のいずれかの単独投与と比較して、長期抗腫瘍有効性および/または低投与量での効果的な治療を提供する。抗CD19抗体と抗CD20抗体の組み合わせを、それを必要とする対象例えば細胞悪性病変を患っている対象に投与することによって、対象において腫瘍増殖阻害を長期化する方法もまた提供される。本明細書の用法では治療するまたは治療は、対象に対するまたは対象からの単離組織または細胞系に対する抗CD20抗体またはその抗原結合性断片の投与と組み合わされた、対象に対する抗CD19抗体またはその抗原結合性断片の投与、または対象からの単離組織または細胞系に対する抗CD19抗体またはその断片の投与を指し、対象は、疾患、疾患症状、または疾患素因を有し、目的は、疾患、疾患症状、または疾患素因を治癒し、回復させ、緩和する、軽減し、変化させ、矯正し、向上させ、改善し、または影響を及ぼすことである。治療するまたは治療はまた、単一医薬組成物の一部として、または代案としてはそれぞれ抗CD19抗体またはその抗原結合断片または抗CD20抗体またはその抗原結合性断片のいずれかを含んでなる個々の医薬組成物の一部として、対象に、または対象からの単離組織または細胞系に、これらの抗体またはその抗原結合性断片の組み合わせを投与し得ることも意図し、対象は、疾患、疾患症状、または疾患素因を有し、目的は、疾患、疾患症状、または疾患素因を治癒し、回復させ、緩和する、軽減し、変化させ、矯正し、向上させ、改善し、または影響を及ぼすことである。複数パラメータが、例えば抗腫瘍活性などの治療有効性を示し得る。これらとしては、腫瘤サイズの低下;腫瘍の転移侵襲性の低下;腫瘍増殖速度の低下;悪液質および腹水生成などの腫瘍関連続発症の重症度または発生率の低下;病的骨折、自己免疫溶血性貧血、前リンパ球性形質転換、リヒター症候群などの腫瘍関連合併症の低減および/または予防;化学療法およびその他の治療に対する腫瘍の感作;患者生存率の上昇;腫瘍浸潤性リンパ球増大および腫瘍血管新生低下などの改善された予後の観察された臨床的相関の増大などが挙げられるが、これに限定されるものではない。したがっていくつかの実施形態では、これらの2種類の抗体の組み合わせの投与は、治療を受ける患者例えば被験者に、これらのパラメータの1つまたは複数の改善をもたらす。別の実施形態では、患者における改善は、いくつかのパラメータに関して相乗的であるが、その他に関しては相加的である。特定の実施形態では、CD19およびCD20抗体併用療法の効果は、相加的であってもよい。別の実施形態では、CD19およびCD20抗体併用療法の効果は、相乗的であってもよい。相乗作用という用語は、それぞれの活性薬剤の個々の効果の合計を上回る、2つ以上の活性作用物質の組み合わされた効果を記述するのに使用される。したがって2つ以上の作用物質の組み合わされた効果が、例えば腫瘍増殖などの活性または過程の相乗的阻害をもたらす場合、活性または過程の阻害が、それぞれの活性薬剤の阻害効果の合計を上回ることが意図される。相乗的治療効果という用語は、2つ以上の治療法の組み合わせによって観察される治療効果を指し、いくつかのパラメータのいずれかによって測定される治療効果が、それぞれの個々の治療法で観察される個々の治療効果の合計を上回る。本明細書の目的では、相乗効果は、同等の投与計画または体制で投与されるCD19抗体とCD20抗体の組み合わせを用いた場合に観察される影響が、1そのCD19抗体またはCD20抗体が単独でまたは個々に用いられた場合に達成される影響を上回り、2そのCD19抗体とCD20抗体の加算された相加的効果の合計を超えることを意味する。本明細書の用法では、同等の投与計画とは、少なくとも2つの異なる処置の結果を評価しまたは比較するために使用される投与計画または体制を指し、したがって比較される処置間で同一になるようにデザインされ、すなわち患者には、同様にして例えば日、投与間隔、抗体剤濃度、異なる抗体または併用療法が投与される。投与計画の変数は、治療されるB細胞悪性病変および治療の選択次第で、当業者によって決定される。このような相乗作用または相乗効果は、当業者に知られている多様な手段によって判定され得る。例えばCD19抗体とCD20抗体の相乗的効果は、腫瘍細胞数または腫瘍サイズの低下を調べる生体外または生体内アッセイ形式を使用して、または腫瘍増殖阻害または腫瘍細胞枯渇によって、観察し得る。同様に、個々の構成要素の相乗的有効量は、各構成要素の一連の濃度を試験することで判定されてもよい。本明細書の用法では組み合わせという用語は、その最も広い意味で使用され、対象が少なくとも2種の薬剤投与計画で治療されることを意味する。したがって組み合わせ抗体療法または併用療法は、対象が少なくとも2種の抗体投与計画で、より具体的には、少なくとも1つの抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた、少なくとも1つの抗CD20抗体またはその抗原結合性断片で、治療されることを意味することが意図されるが、これらの抗体の組み合わせの有益な効果が達成されれば、異なる抗体の投与計画のタイミングは多様であり得る。抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた、抗CD20抗体またはその抗原結合性断片による治療は、同時に例えば一斉にまたは併行して、または異なる時点で例えば連続してまたは逐次に、またはその組み合わせであり得る。本開示の目的で、同時に例えば一斉に投与するとは、同一製剤中で、または別個の製剤中で、抗体を一緒に投与することを指し、投与間隔は数分間から数時間であってもよいが、1日を越えない。本明細書の用法では、異なる時間の例えば逐次投与とは、間隔が数時間から数日間、数週間および数ヶ月にさえ至る、併用療法の抗体の投与を指す。したがって特定の実施形態では、治療を受ける対象において、双方の物質の組み合わせの治療効果が生じさえすれば、組み合わせ抗体治療を受ける対象に、同時に例えば一斉にまたは異なる時点で例えばいずれかの順で逐次に、同日に、または異なる日に、双方の抗体が投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体の組み合わせは、同時に1回投与で与えられるが、その他の投与は、いずれかの順で逐次に、同日に、または異なる日に投与することを含む。逐次投与は、対象が1回目のモノクローナル抗体投与に応答するかどうかに関わらず実施されてもよい。2種の抗体が同時に投与される場合、それらはそれぞれ抗CD20抗体またはその抗原結合性断片または抗CD19抗体またはその抗原結合性断片のいずれかを含んでなる別個の医薬組成物として投与し得て、またはこれらの抗体の双方を含んでなる単一医薬組成物として投与し得る。本開示の方法は、B細胞疾患治療のために、それを必要とする対象に陽性治療反応をもたらす、併用療法を使用するステップを含んでなる。抗CD19および抗CD20抗体を使用した併用療法に関する陽性治療反応は、これらの抗体またはその断片の抗腫瘍活性と結びついた疾患の改善、および/または疾患に付随する症状の改善を意味することが意図される。すなわち抗増殖効果、腫瘍のさらなる増殖の予防、腫瘍サイズ低下、がん細胞数低下、および/または新生物B細胞によって媒介される1つまたは複数の症状の低減が観察され得る。したがって例えば疾患の改善は、完全寛解として特徴付けられてもよい。完全寛解は、任意の過去の異常な放射線学的検査、骨髄、および脳脊髄液CSFが正常化された、臨床的に検出可能な疾患の不在が意図される。このような応答は、本開示の方法に従った治療に続いて、少なくとも1ヶ月間持続しなくてはならない。代案としては、疾患の改善は、部分寛解として分類されてもよい。部分寛解は、新しい病変の不在下における、少なくとも1ヶ月間持続する、全ての測定可能腫瘍量例えば対象中に存在する腫瘍細胞数の少なくとも約50の低下が意図される。このような寛解は、測定可能な腫瘍のみに当てはまる。腫瘍寛解は、磁気共鳴画像法MRIスキャン、X線検査造影、コンピュータ断層撮影CTスキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光活性化細胞選別装置FACS分析、例えばルシフェラーゼ造影などの生物発光イメージング、骨スキャン造影、および骨髄吸引BMAを含む腫瘍生検試料採取などのスクリーニング技術を使用して、腫瘍形態例えば全体的腫瘍量、腫瘍サイズなどの変化について評価し得る。これらの陽性治療的応答に加えて、治療を受ける対象が、疾患に付随する症状の改善の有益な効果を経験してもよい。したがってB細胞腫瘍では、対象は、例えば寝汗、発熱、体重減少、および/または蕁麻疹などのいわゆるB症状の低減を経験してもよい。本明細書で開示される併用療法は、治療的有効用量で投与される。治療的有効用量、治療的有効量、または有効量という用語は、一定量の抗CD20抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて投与された場合に、新生物B細胞を含んでなるがんがある対象の治療に陽性治療反応をもたらす、抗CD19抗体またはその抗原結合性断片の量であることが意図される。いくつかの実施形態では、抗CD20抗体またはその抗原結合性断片または抗CD19抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの治療的有効用量は、約1mg/kg~約200mg/kgの範囲である。治療方法は、方法の実施に有用な治療的有効用量の抗体組み合わせの単回投与、または治療的有効用量の抗体組み合わせの複数回投与を含んでなってもよいと認識される。特定の実施形態では、抗CD19抗体と抗CD20抗体による併用療法は、抗CD19抗体単独または抗CD20抗体単独のいずれかを伴う治療と比較して、長期の抗腫瘍活性を提供する。特定の実施形態では、併用療法は、抗CD19抗体単独または抗CD20抗体単独のいずれかによって得られる得る抗腫瘍活性よりも、少なくとも1週間、2週間、3週間、1ヶ月間、2ヶ月間、3ヶ月間、4ヶ月間、5ヶ月間、6ヶ月間、1年間、または2年間にわたり、より長く持続する抗腫瘍活性を提供してもよい。抗腫瘍活性の相対的持続期間は、試験集団の統計学的分析に基づいて決定されてもよい。例えば試験集団において、抗CD19抗体が平均6週間にわたる特定レベルの抗腫瘍活性を呈示し、抗CD20抗体が平均8週間にわたる特定レベルの抗腫瘍活性を呈示して、併用療法が試験集団において、単一抗体療法で見られるものと少なくとも同一レベルの抗腫瘍活性を少なくとも平均12週間呈示する場合、組み合わせは、単独投与された抗体療法のいずれよりも少なくとも4週間長い抗腫瘍活性を呈示する。抗腫瘍活性の持続期間は、治療法が開始された日から、治療法が、例えば腫瘍体積増大を阻止する能力、B細胞を枯渇させる能力などによる測定で所望のレベルの抗腫瘍活性をもはや提供しない時点までとして測定されてもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗腫瘍活性とは、1、2、5、8、10、12、15、20、25または30を超える腫瘍サイズ増大を阻止する能力を指す。本明細書の用法では、腫瘍サイズとは、直径測定または推定腫瘍体積測定を指す。例えば併用療法が、6ヶ月間にわたり、一次元または二次元測定で、腫瘍が10を超えて増大するのを阻止し得る場合、それは6ヶ月間にわたり抗腫瘍活性を呈示する。例えば末梢リンパ節中に存在する腫瘍などのリンパ腫瘍のこれらの寸法測定は、直径測定または推定腫瘍体積測定を提供する上述の装置を使用して、身体スキャンによって得られる。JournalofClinicalOncology,2004ASCOAnnualMeetingProceedingsPost-MeetingEdition.Vol22,No14SJuly15Supplement,2004:6606。したがって本明細書で開示される併用療法は、直径測定または推定腫瘍体積測定増大のいずれかが欠如している場合に、抗腫瘍活性を呈示する。別の実施形態では、抗腫瘍活性は、腫瘍サイズの実際の低下、または一定期間にわたる腫瘍の固定サイズ維持に反映されてもよい。別の実施形態では、抗腫瘍活性は、例えば直径測定または推定腫瘍体積測定などの治療前の腫瘍サイズと比較して、1、2、5、8、10、12、15、20、25または30を超える腫瘍増殖の阻害によって判定されてもよい。特定の実施形態では、抗腫瘍活性は、所定の治療法で得られるB細胞枯渇レベルを測定することによって判定されてもよい。悪性B細胞を含む循環B細胞は、フローサイトメトリーまたは上述のおよび当該技術分野で周知のその他の細胞計数装置によって最も容易に測定され、循環B細胞の計数が得られる。さらに循環B細胞数を提供する任意の方法を使用して、併用療法による治療後のB細胞枯渇を判定し得ることが検討される。循環B細胞枯渇は、組織B細胞枯渇の代理マーカーであることが良く知られている。したがってこのようなB細胞枯渇は、循環B細胞および組織B細胞の双方を含み、そのあるものは悪性であることもある。特定の実施形態では、抗腫瘍活性は、治療前のB細胞レベルと比較して、少なくとも50、60、70、75、80、85、90、95、97、98、99、または100のB細胞枯渇レベルによって判定されてもよい。例えば治療法が、少なくとも6ヶ月間にわたりB細胞枯渇レベルを90に維持できる場合、治療法は、6ヶ月間にわたり抗腫瘍活性を呈示する。臨床有効性を予測する一方法は、例えばマウスがんモデルにおける抗CD20抗体と抗CD19抗体の組み合わせの使用など、適切なモデルにおけるこれらの抗体による併用療法の効果の測定である。これらのモデルとしては、NamalwaおよびDaudiとして知られている、ヒトバーキットリンパ腫細胞系を使用したものなどのヌードマウス異種移植腫瘍モデルが挙げられる。いくつかの実施形態では、抗腫瘍活性は、Daudiヒトリンパ腫細胞系を使用して、ヌードマウス異種移植腫瘍段階モデル中でアッセイされる。段階モデルでは、腫瘍が測定可能サイズに達して初めて抗体投与が開始されるので、ヌードマウス異種移植腫瘍段階モデル細胞系は、所与の抗体の治療効果を識別する上で、概して非段階モデルよりも効果的である。非段階モデルでは、抗体投与は、概して腫瘍接種の約1日以内で触診可能腫瘍が存在する前に開始される。段階モデルにおいて抗腫瘍活性増大を呈示する抗体の能力は、抗体が治療的に有効であることの強力な示唆である。別の実施形態では、抗CD19抗体と抗CD20抗体の組み合わせは、低減された用量で治療抗体を使用して、腫瘍増殖を抑制し、またはB細胞悪性腫瘍がある患者を治療する方法を提供する。特に本明細書で提供される実施例は、併用療法例えば抗CD19抗体と抗CD20抗体の組み合わせの総用量が、併用療法の総用量を超える抗CD19抗体用量よりも効果的であることを示す。したがって本明細書で開示される方法は、単一抗体療法の有効性を高め、それによってより低い投与量で、効果的な治療ができるようにし、高い投与量の抗体療法に付随する望ましくない副作用を潜在的に回避する。特定の実施形態では、併用療法は、同一抗腫瘍活性を与えるのに必要とされる抗CD19抗体または抗CD20抗体のいずれかの用量の少なくとも2分の1、3分の1、4分の1または5分の1の総用量で、同一のまたはそれを超える抗腫瘍効果を提供する例えば単回投与に応えた抗腫瘍活性と同程度、または同等の投与計画を使用した規定期間にわたる抗腫瘍活性と同程度。したがって抗腫瘍活性をもたらす抗CD19抗体の任意の所与の投与量について、併用療法は、抗CD19抗体の投与量よりも低い濃度でより大きな抗腫瘍活性をもたらす。より低い濃度は、CD19抗体濃度の半分であってもよく、またはCD19抗体濃度の半分未満であってもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載される併用療法は、様々な投与手段によって達成されてもよい。例えば抗CD19抗体および抗CD20抗体は、別々に調合されて患者に投与されてもよい。代案としては、抗CD19および抗CD20抗体は、単一製剤中に組み合わせて調合されてもよい。抗CD19および抗CD20抗体が別個の製剤中にある場合、抗体は、同一または異なる投与スケジュールで投与されてもよい。例えば2つの抗体は同一頻度で同時投与されてもよく例えば双方の抗体が毎週1回同時投与される、それらは別個の時点であるが同一投与頻度で投与されてもよく例えば双方の抗体は毎週1回異なる時点で投与される、またはそれらは頻度が異なるスケジュールを使用して投与されてもよい例えば1つの抗体は毎週1回投与され別の抗体は隔週投与されるなど。例示的な実施形態では、抗CD19および抗CD20抗体は組み合わせて調合され、同一投与計画で投与される。B.抗CD19抗体本明細書に記載される併用療法は、抗CD19抗体を含んでなる。CD19またはCD19抗原という用語は、例えばHD237またはB4抗体によって同定される約90kDaの抗原を指す。Kieseletal.,LeukemiaResearchII,12:11191987。CD19は、幹細胞段階から、プレB細胞、未感作B細胞、抗原刺激B細胞、記憶B細胞、血漿細胞、およびBリンパ球を含むB細胞、および濾胞樹枝状細胞を含むが、これに限定されるものではない、血漿細胞への最終分化まで、B系統細胞の分化全体を通じて細胞上に見られる。CD19はまた、ヒト胎児組織のB細胞上に見られる。好ましい実施形態では、本明細書で開示される抗体によって標的とされるCD19抗原は、ヒトCD19抗原である。本明細書に記載される方法および組成物に従って、任意の適切な抗CD19抗体を使用してもよい。適切な抗CD19抗体としては、例えば既知の抗CD19抗体、市販の抗CD19抗体、または当該技術分野で周知の方法を使用して開発された抗CD19抗体が挙げられる。本明細書の用法では、免疫グロブリンとしてもまた知られている抗体および抗体群という用語は、完全長モノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも2つの異なるエピトープ結合断片から形成される多特異性抗体例えば二重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、一本鎖FvscFv、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Fab断片、Fab’2断片、所望の生物学的活性を呈示する抗体断片例えば抗原結合部分、ジスルフィド結合FvdsFv、および例えば本明細書で開示される抗体に対する抗Id抗体を含む抗イディオタイプ抗Id抗体、細胞内抗体、および上のいずれかのエピトープ結合断片を包含する。特に抗体としては、免疫グロブリン分子と、例えば少なくとも1つの抗原結合部位を含有する分子などの免疫グロブリン分子の免疫学的活性断片が挙げられる。本開示のCD19抗体は、モノクローナルヒト、ヒト化またはキメラ抗CD19抗体であってもよい。本開示の組成物および方法で使用される抗CD19抗体は、裸の抗体、免疫複合体または融合タンパク質であり得る。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、循環B細胞を枯渇させるのに十分な量で、ヒト抗体依存性細胞傷害ADCC、補体依存性細胞媒介性細胞障害CDC、および/またはアポトーシスを媒介してもよい。例示的な実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、親抗体と比較して、改善されたADCC活性を有するように改変された抗CD19抗体である。改善されたADCC活性を有する抗体変種を作り出す方法については、さらに下述される。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、改善されたADCC活性を有する脱フコシル化抗体である。特定の実施形態では、本開示の組成物および方法で使用される抗CD19抗体は、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体であってもよく、具体的にはIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4ヒトアイソタイプであるIgGアイソタイプ、またはヒト集団に見られる任意のIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4対立遺伝子を有する。ヒトIgGクラス抗体は、血清中の長い半減期および様々なエフェクター機能を媒介する能力などの機能特性を有するMonoclonalAntibodies:PrinciplesandApplications,Wiley-Liss,Inc.,Chapter11995。ヒトIgGクラス抗体は、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4の4つのサブクラスにさらに分類される。これまでにIgGクラス抗体のエフェクター機能としてのADCCおよびCDCに関する多数の研究がなされており、ヒトIgGクラスの抗体中では、IgG1サブクラスが、ヒトにおいて最大のADCC活性およびCDC活性を有することが報告されている。ChemicalImmunology,65,881997。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、HD37IgG1、κDAKONorthAmerica,Inc.,Carpinteria,Calif.、BU12Callardetal.,J.Immunology,14810:2983-71992、4G7IgG1Meekeretal.,Hybridoma,34:305-201984Winter、J4.119BeckmanCoulter,Krefeld,Germany、B43PharMingen,SanDiego,Calif.、SJ25C1BDPharMingen,SanDiego,Calif.、FMC63IgG2aZolaetal.,Immunol.Cell.Biol.69PT6:411-221991;Nicholsonetal.,Mol.Immunol.,34:1157-11651997;Pieterszetal.,CancerImmunol.Immunotherapy,41:53-601995、89BB4IgG1BeckmanCoulter,Miami,Fla.;Nadleretal.,J.Immunol.,131:244-2501983、および/またはHD237IgG2bFourthInternationalWorkshoponHumanLeukocyteDifferentiationAntigens,Vienna,Austria,1989;およびPezzuttoetal,J.Immunol.,1389:2793-27991987を含むが、これに限定されるものではない、既知の抗CD19抗体である。別の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、米国特許公開第2008/0138336号明細書および米国特許公開第2009/0142349号明細書、および米国特許第7,462,352号明細書および米国特許第7,109,304号明細書に記載される抗CD19抗体のいずれかである。例示的な実施形態では、抗CD19抗体は、米国特許公開第2008/0138336号明細書に記載され、また下述される16C4抗体、またはその抗原結合断片である。特定の実施形態では、抗CD19抗体は、上述のような既知の抗CD19抗体の例えばIgG1またはIgG3ヒトアイソタイプへのアイソタイプスイッチ変種である。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、ヒトCD19に免疫特異的に結合してもよく、当業者に知られている方法例えばBIAcoreアッセイ、ELISABiacoreInternationalAB,Uppsala,Swedenを使用した評価で、3000pM未満、2500pM未満、2000pM未満、1500pM未満、1000pM未満、750pM未満、500pM未満、250pM未満、200pM未満、150pM未満、100pM未満、75pM未満の解離定数Kdを有してもよい。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、ヒトCD19抗原と免疫特異的に結合してもよく、当業者に知られている方法例えばBIAcoreアッセイ、ELISAを使用した評価で、25~3400pM、25~3000pM、25~2500pM、25~2000pM、25~1500pM、25~1000pM、25~750pM、25~500pM、25~250pM、25~100pM、25~75pM、25~50pMの解離定数Kdを有してもよい。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、ヒトCD19と免疫特異的に結合してもよく、当業者に知られている方法例えばBIAcoreアッセイ、ELISAを使用した評価で、500pM、100pM、75pMまたは50pMの解離定数Kdを有してもよい。特定の実施形態では、本開示の組成物および方法で使用される抗CD19抗体は、それで治療されるヒトにおいてB細胞を減少させまたは枯渇させることができてもよい。B細胞枯渇は、循環B細胞における枯渇、または、骨髄、脾臓、胃腸管関連リンパ組織、および/またはリンパ節などであるが、これに限定されるものではない特定組織における枯渇であり得る。一実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、循環B細胞、血液B細胞、脾臓B細胞、辺縁帯B細胞、濾胞性B細胞、腹膜B細胞、および/または骨髄B細胞を枯渇させてもよい。一実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、前駆B細胞、初期プロB細胞、後期プロB細胞、大型プレB細胞、小型プレB細胞、未熟B細胞、成熟B細胞、抗原刺激B細胞、および/または血漿細胞の枯渇を達成してもよい。このような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害ADCC、および/またはCD19とその意図されるリガンドとの相互作用のブロック、および/または補体依存性細胞障害CDC、B細胞の増殖阻害および/またはB細胞死の誘導例えばアポトーシスによるなどの様々な機構により達成されてもよい。B細胞枯渇とは、循環B細胞のおよび/または特定組織中のB細胞の少なくとも約25、40、50、65、75、80、85、90、95以上の低下を意味する。特定の実施形態では、循環および/または特定組織から、実質的に全ての検出可能なB細胞が枯渇される。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体によるB細胞枯渇は、少なくとも1日間、少なくとも2日間、少なくとも3日間、少なくとも4日間、少なくとも5日間、少なくとも6日間、少なくとも7日間、少なくとも8日間、少なくとも9日間、少なくとも10日間、少なくとも15日間、少なくとも20日間、少なくとも25日間、または少なくとも30日間持続してもよい。別の実施形態では、本開示の抗CD19抗体によるB細胞枯渇は、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少なくとも5週間、少なくとも6週間、少なくとも7週間、少なくとも8週間、少なくとも9週間、または少なくとも10週間持続してもよい。さらなる実施形態では、本開示の抗CD19抗体によるB細胞枯渇は、少なくとも1ヶ月間、少なくとも2ヶ月間、少なくとも3ヶ月間、少なくとも4ヶ月間、少なくとも5ヶ月間、少なくとも6ヶ月間、少なくとも7ヶ月間、少なくとも8ヶ月間、少なくとも9ヶ月間、少なくとも10ヶ月間、少なくとも11ヶ月間または少なくとも12ヶ月間持続してもよい。B細胞悪性腫瘍は、特定のB細胞サブセットの病的拡大によって特徴付けられ、例えば前駆B細胞急性リンパ芽球性白血病は、プロB細胞/プレB細胞発達段階に相当するB細胞の異常な拡大によって特徴付けられる。悪性B細胞は、CD19などの正常B細胞マーカーの細胞表面発現を維持する。したがって抗CD19抗体は、ヒト対象中で悪性B細胞を枯渇させてもよい。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、ヒト対象中で、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも95、または少なくとも100の悪性B細胞の枯渇を達成してもよい。エフェクター機能の操作いくつかの実施形態では、抗CD19抗体は、例えばB細胞悪性腫瘍を治療する上で抗体の有効性を高めるように、エフェクター機能に関して改変される。例示的なエフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞障害、またはADCCであり、その中では細胞媒介性反応である非特異的細胞傷害性細胞が、標的細胞上の結合抗体を認識し、引き続いて標的細胞の溶解を引き起こす。細胞傷害性細胞、またはエフェクター細胞は、1つまたは複数のFcRを発現する白血球であってもよい。作動体細胞は、マウス中で、少なくともFcγRI、FCγRII、FcγRIIIおよび/またはFcγRIVを発現する。ADCCを媒介するいくつかのヒト白血球としては、末梢血単核細胞PBMC、ナチュラルキラーNK細胞、単球、細胞毒性T細胞および好中球が挙げられる。これらの細胞の内、ADCCを仲介する主要細胞は、FcγRIIIを発現するNK細胞である。単球はFcγRI、FcγRII、FcγRIIIおよび/またはFcγRIVを発現する。造血性細胞上のFcR発現については、RavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol.,9:457-921991で要約されている。抗体のエフェクター機能を高める一方法は、改変グリコフォーム生成による。改変グリコフォームは、例えば、改変または変種発現株の使用によって、例えばDIN-アセチルグルコサミン転移酵素IIIGnTI11などの1つまたは複数の酵素の同時発現によって、様々な生物中または様々な生物からの細胞系中におけるFc領域を含んでなる分子の発現によって、またはFc領域を含んでなる分子の発現後の炭水化物の修飾によって、当業者に知られている任意の方法によって作成されてもよい。改変グリコフォームを作り出す方法は、当該技術分野で公知であり、Umanaetal,1999,Nat.Biotechnol17:176-180;Daviesetal.,20017BiotechnolBioeng74:288-294;Shieldsetal,2002,JBiolChem277:26733-26740;Shinkawaetal.,2003,JBiolChem278:3466-3473米国特許第6,602,684号明細書;米国特許出願第10/277,370号明細書;米国特許出願第10/113,929号明細書;PCT国際公開第00/61739A1号パンフレット;PCT国際公開第01/292246A1号パンフレット;PCT国際公開第02/311140A1号パンフレット;PCT国際公開第02/30954A1号パンフレット;Potillegent商標technologyBiowa,Inc.Princeton,N.J.;GlycoMAb商標glycosylationengineeringtechnologyGLYCARTbiotechnologyAG,Zurich,Switzerlandに記載されるものが挙げられるが、これに限定されるものではない。例えば国際公開第00061739号パンフレット;ユーラシア特許第01229125号明細書;米国特許第20030115614号明細書;Okazakietal.,2004,JMB,336:1239-49を参照されたい。Fc領域中に存在するグリコシル化部位例えばIgGのアスパラギン297の除去をもたらす、1つまたは複数のアミノ酸置換もまた実施し得る。さらに脱グリコシル化抗体は、必要なグリコシル化機構を欠いている細菌細胞中で作られてもよい。フコシル残基量が低下している低フコシル化抗体、または二分GlcNAc構造が増大されている抗体などの、改変されたタイプのグリコシル化を有する抗体もまた、作成し得る。このような改変グリコシル化パターンは、抗体のADCC能力を増大させることが実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば改変グリコシル化機構がある宿主細胞中における抗体の発現によって達成され得る。改変グリコシル化機構がある細胞については、当該技術分野で記述され、宿主細胞として使用し得て、その中で本開示の組換え抗体を発現させて、それによって改変グリコシル化抗体を生成する。例えばそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に援用する、Shields,R.L.etal.2002J.Biol.Chem.277:26733-26740;Umanaetal.1999Nat.Biotech.17:176-1、ならびに米国特許第6,946,292号明細書;欧州特許第1,176,195号明細書;PCT国際公開第03/035835号パンフレット;PCT国際公開第99/54342号パンフレットを参照されたい。一実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、改善された抗体依存性細胞傷害ADCCを媒介する、変種Fc領域を含んでなる。一実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、Asn297に連結する複合体N-グリコシド結合糖鎖を有するFc領域を含んでなり、その中でフコースは還元末端でN-アセチルグルコサミンに結合せず、前記Fc領域は改善された抗体依存性細胞傷害ADCCを媒介する。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、Fc変種を含んでなり、前記変種Fcドメインは、同等の非変種Fcドメインよりも、少なくとも2倍、または少なくとも3倍、または少なくとも5倍、または少なくとも7倍、または少なくとも10倍、または少なくとも20倍、または少なくとも30倍、または少なくとも40倍、または少なくとも50倍、または少なくとも60倍、または少なくとも70倍、または少なくとも80倍、または少なくとも90倍、または少なくとも100倍、または少なくとも200倍高い、Fcγ受容体IIBに対する親和性を有する。別の実施形態では、エフェクター機能は、抗体のFc領域にシステイン残基を導入し、それによってこの領域中に鎖間ジスルフィド結合を形成できるようにして改変されてもよい。このようにして生成されたホモ二量体抗体は、改善された内部移行能力および/または増大された補体媒介細胞死滅および/または抗体依存性細胞傷害ADCCを有してもよい。Caronetal.,J.ExpMed.,176:1191-11951992およびShopes,B.,J.Immunol.,148:2918-29221992を参照されたい。抗腫瘍活性が改善されたホモ二量体抗体はまた、Wolffetal.,CancerResearch,53:2560-25651993に記載されるように、ヘテロ二機能性架橋剤を使用して調製されてもよい。二重Fc領域を有し、それによって改善された補体溶解およびADCC能力を有してもよい抗体もまた、設計され得る。Stevensonetal.,Anti-CancerDrugDesign,3:219-2301989を参照されたい。エフェクター機能を変化させるように、抗体のFc領域を操作するその他の方法は、当該技術分野で公知である例えばFc領域を変化させ、FCγRIIAとの結合親和力と比較して、FcγRIIBとの結合親和力を高めることを記載する、どちらもKoenigらに付与された米国特許公開第20040185045号明細書およびPCT国際公開第2004/016750号パンフレット;Armouretal.に付与されたPCT国際公開第99/58572号パンフレット、Idusogieetal.に付与されたPCT国際公開第99/51642号パンフレット、およびDeoetal.に付与された米国特許第6,395,272号明細書もまた参照されたい;その開示の内容全体を本明細書に援用する。Fc領域を修飾して、FcγRIIBへの結合親和力を低下させる方法はまた、当該技術分野で公知である例えばその開示の内容全体を本明細書に援用する、どちらもRavetchらに付与された米国特許公開第20010036459号明細書およびPCT国際公開第01/79299号パンフレット。野生型Fc領域と比較して、FcγRIIIAおよび/またはFcγRIIAとの結合親和性が強化されている変種Fc領域を有する修飾抗体についてもまた、記述されている例えばその開示の内容全体を本明細書に援用する、Stavenhagenetal.に付与されたPCT国際公開第2004/063351号パンフレット。本開示で組成物および方法で使用される抗CD19抗体が、ADCCを仲介できるかどうかを判定するのに、当該技術分野で公知の生体外アッセイを使用し得る。例示的なアッセイは、米国特許第5,500,362号明細書または米国特許第5,821,337号明細書に記載される。特にこのようなアッセイで有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞PBMCおよびナチュラルキラーNK細胞が挙げられる。代案としては、またはそれに加えて、対象分子のADCC活性は、例えばClynesetal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:652-6561998で開示される動物モデルなどの生体内で評価されてもよい。アッセイはまた、例えばCytoTox96商標Promegaなどの市販のキットを使用して実施してもよい。例示的な抗CD19抗体特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および組成物は、抗CD19抗体16C4例えば米国特許公開第2008/0138336号明細書を参照されたい、またはその抗原結合断片を利用する。16C4は、強力なADCCエフェクター機能を有することが示されているCD19mAbである。16C4は、HB12bmAbのヒト化および親和性最適化によって開発された、CD19mAb抗CD19-2の脱フコシル化形態である。KansasGSおよびTedderTF.JImmunol,1991;147:4094-4102;Yazawaetal.,ProcNatlAcadSci,2005;10242:15178-15183;Herbstetal.,JPharmacolExpTher,2010,3351:213-222。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号2のアミノ酸配列を含んでなるCDR1、配列番号3のアミノ酸配列を含んでなるCDR2、および配列番号4のアミノ酸配列を含んでなるCDR3を含んでなる、重鎖を含んでなる。別の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号2と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるCDR1、配列番号3と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるCDR2、および配列番号4と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるCDR3を含んでなる、重鎖を含んでなる。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号1のアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる、重鎖を含んでなる。別の実施形態では、抗CD19抗体は、配列番号1と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる、重鎖を含んでなる。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号6のアミノ酸配列を含んでなるCDR1、配列番号7のアミノ酸配列を含んでなるCDR2、および配列番号8のアミノ酸配列を含んでなるCDR3を含んでなる、軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号6と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるCDR1、配列番号7と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるCDR2、および配列番号8と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるCDR3を含んでなる、軽鎖を含んでなる。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号5のアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる、軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、抗CD19抗体は、配列番号5と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる、軽鎖を含んでなる。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番2号のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR1、配列番号3のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR2、配列番号4のアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR3、配列番号6のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR1、配列番号7のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR2、および配列番号8のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR3を含んでなる。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号2と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR1、配列番号3と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR2、配列番号4と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖CDR3、配列番号6と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR1、配列番号7と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR2、および配列番号8と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖CDR3を含んでなる。特定の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号1のアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる重鎖、および配列番号5のアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本開示の抗CD19抗体は、配列番号1と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる重鎖、および配列番号5と少なくとも75、80、85、90、95、97、98、または99の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる可変領域を含んでなる軽鎖を含んでなる。本開示は、ヒトCD19に結合する抗体16C4の誘導体である抗体を包含する。例えば、アミノ酸置換を生じさせるのに慣例的に使用される、部位特異的変異誘発およびPCR媒介変異誘発を含む、当業者に知られている標準的な技術を使用して、抗体をコードするヌクレオチド配列中に、変異例えば付加、欠失、および/または置換を導入し得る。一実施形態では、VHおよび/またはVKCDR誘導体は、16C4抗CD19抗体の元のVHおよび/またはVKCDRと比較して、25個未満のアミノ酸置換、20個未満のアミノ酸置換、15個未満のアミノ酸置換、10個未満のアミノ酸置換、5個未満のアミノ酸置換、4個未満のアミノ酸置換、3個未満のアミノ酸置換、2個未満のアミノ酸置換、または1個のアミノ酸置換を含んでもよい。別の実施形態では、VHおよび/またはVKCDR誘導体は、1つまたは複数の予測された非必須アミノ酸残基例えば抗体が特異的にヒトCD19に結合するのに重要でないアミノ酸残基で生じた保存的アミノ酸置換を有してもよい。変異はまた、飽和変異誘発などによって、VHおよび/またはVKCDRコード配列の全部または一部に沿って無作為に導入し得て、結果として生じた変異体を生物学的活性についてスクリーニングして、活性を保持する変異体を同定し得る。変異誘発に続いて、コードされた抗体を発現させ得て、体活性を測定し得る。2つのアミノ酸配列の同一性は、BLASTタンパク質検索を含むが、これに限定されるものではない、当業者に知られている任意の方法によって判定され得る。C.抗CD20抗体本明細書に記載される併用療法は、抗CD20抗体をさらに含んでなる。CD20抗原ヒトBリンパ球拘束性分化抗原、Bp35とも称されるは、プレBおよび成熟Bリンパ球上に位置する、分子量およそ35kDの疎水性膜貫通タンパク質であるValentineetal.J.Biol.Chem.26419:11282-112871989;Einfeldetal.EMBOJ.73:711-7171988;ClarkandLedbetter,Adv.Can.Res.52:81-1491989;およびValentineetal.J.Biol.Chem.26419:11282-112871989。CD20は初期プレB細胞の発達中に発現されて、形質細胞分化まで残留し;それはヒト幹細胞、リンパ始原細胞または正常血漿細胞上には見られない。CD20は、正常B細胞、ならびに例えばB細胞非ホジキンリンパ腫NHL中の細胞などの悪性B細胞の双方の上に存在し、CD20は90を超えるNHL上で発現される。Andersonetal.Blood636:1424-14331984。CD20は、造血幹細胞、プロB細胞、正常血漿細胞またはその他の正常組織上には見られないTedderetal.J.Immunol.1352:973-9791985。CD20Gは、細胞周期開始および分化の活性化過程の初期段階を調節しTedderetal.、前出、任意選択でカルシウムイオンチャネルとして機能する。Tedderetal.J.Cell.Biochem.14D:1951990。本明細書に記載される方法および組成物に従って、任意の適切な抗CD20抗体を使用してもよい。適切な抗CD20抗体としては、例えば既知の抗CD20抗体、市販の抗CD20抗体、または当該技術分野で周知の方法を使用して開発された抗CD20抗体が挙げられる。本開示のCD20抗体は、モノクローナルヒト、ヒト化またはキメラ抗CD20抗体であってもよい。本開示の組成物および方法で使用される抗CD20抗体は、裸の抗体、免疫複合体または融合タンパク質であり得る。特定の実施形態では、本開示の抗CD20抗体は、循環B細胞を枯渇させるのに十分な量で、ヒト抗体依存性細胞傷害ADCC、補体依存性細胞媒介性細胞障害CDC、および/またはアポトーシスを媒介してもよい。例示的な実施形態では、本開示の抗CD20抗体は、親抗体と比較して、改善されたADCC活性を有するように改変された抗CD20抗体である。改善されたADCC活性を有する抗体変種を作り出す方法については、上に記述される。特定の実施形態では、本開示の抗CD20抗体は、改善されたADCC活性を有する脱フコシル化抗体である。特定の実施形態では、本開示の組成物および方法で使用される抗CD20抗体は、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体であってもよく、具体的にはIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4ヒトアイソタイプであるIgGアイソタイプ、またはヒト集団に見られる任意のIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4対立遺伝子を有する。CD20抗原に結合する抗体の例としては、以下が挙げられる。現在はリツキシマブリツキサン商標と称されるC2B8;Y2B8またはイブリツモマブチウキセタンZEVALIN商標と称されるイットリウム[90]標識B8マウス抗体参照によって本明細書に明示的に援用する、米国特許第5,736,137号明細書;任意選択的に131Iで標識され、131I-B1抗体ヨウ素I131トシツモマブ、BEXXAR商標を生じる、トシツモマブBeckmanCoulterとも称される、マウスIgG2aB1参照によって本明細書に明示的に援用する、米国特許第5,595,721号明細書;マウスモノクローナル抗体1F5Pressetal.Blood692:584-5911987、およびフレームワークパッチまたはヒト化1F5を含むその変種Leung,S.に付与された国際公開第03/002607号パンフレット;ATCC寄託HB-96450;マウス2H7およびキメラ2H7抗体参照によって本明細書に明示的に援用する、米国特許第5,677,180号明細書;ヒト化2H7;huMax-CD20Genmab,Denmark;AME-133AppliedMolecularEvolution;A20抗体またはキメラまたはヒト化A20抗体などのその変種それぞれcA20、hA20Immunomedicsの米国特許第2003/0219433号明細書;およびInternationalLeukocyteTypingWorkshopから入手できるモノクローナル抗体L27、G28-2、93-1B3、B-CIまたはNU-B2Valentineetal.,In:LeukocyteTypingIIIMcMichael,Ed.,p.440,OxfordUniversityPress1987。例示的実施形態では、本開示の方法および組成物は、抗CD19抗体、またはその断片と組み合わせて、リツキシマブ、またはその抗原結合断片が利用される。リツキシマブリツキサン商標は、1998年4月7日にAndersonらに付与された米国特許第5,736,137号明細書では、C2B8と称されている抗体である。リツキサン商標は、再発性または難治性低悪性度または濾胞性CD20-陽性のB細胞非ホジキンリンパ腫がある患者の治療に特効がある。生体外作用機序の研究は、リツキサン商標がヒト補体に結合し、補体依存性細胞障害CDCを通じて、リンパ系B細胞を溶解することを実証しているReffetal.Blood832:435-4451994。さらに、それは抗体依存性細胞傷害ADCCのアッセイにおいて、顕著な活性を有する。より最近では、リツキサン商標は、トリチウム化チミジン組み込みアッセイにおいて抗増殖性効果を有し、アポトーシスを直接誘発することが示されている。Maloneyetal.Blood8810:637a1996。生体内前臨床試験は、リツキサン商標が、恐らくは補体および細胞媒介性のプロセスを通じて、カニクイザルの末梢血、リンパ節、および骨髄からB細胞を枯渇させることを示した。Reffetal.Blood832:435-4451994。リツキシマブは、1997年11月に米国において、毎週4回の375mg/m2の用量で、再発性または難治性低悪性度または濾胞性CD20B細胞非ホジキンリンパ腫NHLがある患者の治療のために認可された。本明細書においてリツキシマブまたはリツキサン商標という用語は、CD20抗原に対する遺伝子改変キメラマウス/ヒトモノクローナル抗体を指し、参照によって本明細書に明示的に援用する米国特許第号5,736,137明細書ではC2B8と称される。軽鎖可変領域および重鎖可変領域またはリツキシマブの完全な核酸およびアミノ酸配列は、米国特許第5,736,137号明細書で開示される。具体的には、リツキシマブの軽鎖可変領域の核酸およびアミノ酸配列が、米国特許第5,736,137号明細書の図4および配列番号6で開示される。リツキシマブの重鎖可変領域の核酸およびアミノ酸配列は、米国特許第5,736,137号明細書の図5および配列番号9で開示される。米国特許第5,736,137号明細書の配列番号6および9、および図4および5の核酸およびアミノ酸配列は、参照によって本明細書に明示的に援用する。リツキシマブは、米国微生物系統保存機関ATCCに受入番号69119の下に寄託された、大腸菌E.coli宿主細胞中に存在するベクターDNAを含んでなるCHO細胞トランスフェクトーマによって生成されてもよい。リツキシマブはまた、ATCCに受入番号HB11388の下に寄託された、ハイブリドーマ2B8によって生成されてもよい。D.B細胞悪性腫瘍本明細書に記載される抗CD19抗体と抗CD20抗体を含んでなる併用療法を使用して、B細胞悪性腫瘍を含むB細胞疾患を治療し得る。B細胞悪性病変という用語は、B細胞系統の細胞に由来する任意の悪性病変を含む。例示的なB細胞悪性腫瘍としては、以下が挙げられるが、これに限定されるものではない。低悪性度/濾胞性NHL、小リンパ球性SLNHL、中悪性度/濾胞性NHL、中悪性度びまん性NHL、高悪性度免疫芽球性NHL、高悪性度リンパ芽球性NHL、高悪性度非切断小細胞性NHLを含む、B細胞サブタイプ非ホジキンリンパ腫NHL;マントル細胞リンパ腫、および巨大腫瘤病変NHL;バーキットリンパ腫;多発性骨髄腫;プレB急性リンパ芽球性白血病、およびその他の初期B細胞前駆体に由来する悪性腫瘍;一般的急性リンパ球性白血病ALL;免疫グロブリン変異性CLLおよび免疫グロブリン非変異性CLLを含む慢性リンパ球性白血病CLL;有毛細胞白血病;Null急性リンパ芽球性白血病;ヴァルデンストレームマクログロブリン血症;胚中心B細胞様GCBDLBCL、活性化B細胞様ABCDLBCL、および3型DLBCLを含む、びまん性大細胞型B細胞性リンパ腫DLBCL;プロリンパ球性白血病;軽鎖病;プラズマ細胞腫;骨硬化性骨髄腫;形質細胞白血病;意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症MGUS;くすぶり型多発性骨髄腫SMM;無痛性多発性骨髄腫IMM;古典的および結節性リンパ球優位型を含むホジキンリンパ腫;リンパ形質細胞性リンパ腫LPL;および胃粘膜関連リンパ系組織MALTリンパ腫を含む辺縁帯リンパ腫。これらのがんの再発の治療もまた検討される。LPHDは、照射または化学療法にも関わらず、頻繁に再発する傾向があるホジキン病の一種であり、CD20陽性悪性細胞によって特徴付けられる。CLLは、白血病の4つの主要な種類の1つである。リンパ球と称される成熟B細胞のがんであるCLLは、血液、骨髄およびリンパ組織中の細胞の進行性蓄積によって顕在化する。無痛性リンパ腫は、進行の遅い不治の疾患であり、患者の平均生存期間は、多数の寛解および再発期間に続いて6~10年である。B細胞枯渇の所望のレベルは、疾患に左右される。B細胞悪性病変の治療では、本開示の抗CD19および抗CD20抗体の標的である、B細胞枯渇を最大化するのが望ましいことがある。したがってB細胞新生物治療のためには、例えば腫瘍増殖サイズ、がん性細胞型の増殖、転移、特定のがんのその他の徴候および症状をモニターすることで、当該技術分野の医師によって評価され得る、疾患の進行を阻止するために、B細胞枯渇が少なくとも十分であることが望ましい。好ましくはB細胞枯渇は、少なくとも2ヶ月、より好ましくは3ヶ月、なおもより好ましくは4ヶ月、より好ましくは5ヶ月、なおもより好ましくは6ヶ月以上にわたり、疾患の進行を阻止するのに十分である。さらにより望ましい実施形態では、B細胞枯渇は、寛解期間を少なくとも6ヶ月、より好ましくは9ヶ月、より好ましくは1年、より好ましくは2年、より好ましくは3年、なおもより好ましくは5年以上増大するのに十分である。最も好ましい実施形態では、B細胞枯渇は疾患を治癒させるのに十分である。好ましい実施形態では、がん患者におけるB細胞枯渇は、治療前ベースラインレベルの少なくとも約75、より好ましくは80、85、90、95、99および100にさえ至る。本開示の組成物の投与後に、症状またはその他の適用可能基準に、治療前と比較して測定可能な改善があれば、本開示の方法によって、患者のB細胞新生物は緩和され、または成功裏に治療される。治療効果は、本開示の組成物の投与後3~10週間以内に明らかになってもよい。各疾患の適用可能基準は、該当技術分野の医師に良く知られている。例えば医師は、疾患の臨床的徴候、または疾患の血清学的マーカー、B細胞計数を含む完全血球算定、および血清免疫グロブリンレベルなどの血清学的徴候について、治療される患者をモニターし得る。患者は、以下の1つまたは複数に、観察可能なおよび/または測定可能な低下または不在を示してもよい。がん細胞数の低下またはがん細胞の不在;腫瘍サイズ低下;臓器へのがん細胞浸潤の阻害例えばある程度遅延させ好ましくは停止させる;腫瘍転移の阻害例えばある程度遅延させ好ましくは停止させる;腫瘍増殖のある程度の阻害;および/または特定のがんに付随する症状の1つまたは複数のある程度の軽減;罹患率および死亡率の低下、および生活の質の問題の改善。好ましくは本開示の組成物の投与後に、本開示の方法による治療前に測定された特定の症状または基準のベースラインからの改善は、少なくとも20、より好ましくは、25~30、なおもより好ましくは30~35、最も好ましくは40以上である。新生物治療の有効性または成功の評価のパラメータは、当該分野の医師に知られている。概して当該分野の医師は、特定疾患の徴候および症状の低下を探す。パラメータとしては、疾患進行までの期間の中央値、寛解および安定期の時間が挙げられる。B細胞新生物では、測定可能な基準としては、例えば疾患進行までの期間、全体的および/または進行なし生存期間の増大が挙げられる。白血病の場合、骨髄生検を行って寛解程度を判定し得る。完全寛解は、治療に続いて30日目に、白血病細胞が、患者の骨髄中に見られる全細胞の5パーセント未満を構成することと定義され得る。以下の参考文献は、リンパ腫およびCLL、それらの診断、治療、および治療有効性を測定する標準医学的手技について記載する。CanellosGP,Lister,TA,SklarJL:TheLymphomas.W.B.SaundersCompany,Philadelphia,1998;vanBesienKandCabanillas,F:ClinicalManifestations,StagingandTreatmentofNon-Hodgkin’sLymphoma,Chap.70,pp1293-1338,in:Hematology,BasicPrinciplesandPractice,3rded.Hoffmanetal.editors.ChurchillLivingstone,Philadelphia,2000;およびRai,KandPatel,D:ChronicLymphocyticLeukemia,Chap.72,pp1350-1362,in:Hematology,BasicPrinciplesandPractice,3rded.Hoffmanetal.editors.ChurchillLivingstone,Philadelphia,2000。E.医薬製剤本発明の特定の態様は、抗CD19抗体、抗CD20抗体、またはその組み合わせ、および薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は薬剤として使用される。特定の実施形態では、抗CD19抗体、抗CD20抗体、またはその組み合わせは、医薬治療的組成物として、薬学的に許容できる担体、賦形剤または安定剤と共に調合されてもよく、当該技術分野で公知の多様な方法によって投与されてもよい。当業者には理解されるように、投与手段および/または様式は、所望の結果次第で変動する。薬学的に許容できる担体という用語は、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉しない、1つまたは複数の無毒の材料を意味する。このような調製品は、塩、緩衝剤、保存料、適合性担体、および任意選択的にその他の治療薬を慣例的に含有してもよい。このような薬学的に許容可能な調製品はまた、ヒトへの投与に適する、適合性固形または液体増量剤、希釈剤または封入物質を慣例的に含有してもよい。本明細書に記載される製剤中で利用してもよい、その他の検討される担体、賦形剤、および/または添加剤、としては、例えば、着香剤、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、帯電防止剤、脂質、血清アルブミンやゼラチンやカゼインなどのタンパク質賦形剤、ナトリウムなどの塩形成対イオンが挙げられる。本明細書に記載される製剤で使用するのに適する、これらのおよび追加的な既知の医薬担体、賦形剤および/または添加剤は、当該技術分野で公知であり、例えばRemington:TheSciencePracticeofPharmacy,21sted.,LippincottWilliamsWilkins,2005、およびPhysician’sDeskReference,60thed.,MedicalEconomics,Montvale,N.J.2005に収載される。当該技術分野で周知のように、または本明細書に記載されるように、投与様式、併用療法抗体の溶解度および/または安定性に適する、薬学的に許容可能な担体を慣例的に選択し得る。本明細書に記載される製剤は、所望の投与に適したw/vがもたらされる濃度で、抗CD19抗体、抗CD20抗体、またはその組み合わせを含んでなる。特定の実施形態では、抗CD19抗体または抗CD20抗体は、約1mg/ml~約200mg/ml、約1mg/ml~約100mg/ml、約1mg/ml~約50mg/ml、または1mg/ml、および約25mg/mlの濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態では、製剤中の抗CD19または抗CD20抗体の濃度は、約0.1~約100重量で変動してもよい。特定の実施形態では、抗CD19または抗CD20抗体の濃度は、0.003~1.0モルの範囲内である。特定の実施形態では、抗CD19抗体または抗CD20抗体は合わせて調合されて、それぞれの抗体は、約1mg/ml~約200mg/ml、約1mg/ml~約100mg/ml、約1mg/ml~約50mg/ml、または1mg/ml、および約25mg/mlの濃度で製剤中に存在する。特定の実施形態では、製剤中の各抗体の濃度は約0.1~約100重量で変動してもよい。特定の実施形態では各抗体の濃度は、0.003~1.0モルの範囲内である。特定の実施形態では、抗CD19抗体は、国際公開第2010102276号パンフレットの処方のいずれかに従って調合される。一実施形態では、本開示の製剤は、実質的に内毒素および/または関連発熱性物質がない、発熱性物質を含まない製剤である。内毒素としては、微生物中に閉じ込められて、微生物が分解または死滅した場合にのみ放出される毒素が挙げられる。発熱性物質としてはまた、細菌およびその他の微生物の外膜からの発熱誘導熱安定性物質糖タンパク質が挙げられる。ヒトに投与した場合、これらの物質はどちらも、発熱、血圧低下、およびショックを引き起こし得る。可能な有害効果のために、少量の内毒素でさえも、静脈内投与される医薬品溶液から除去されなくてはならない。食品医薬品局FDAは、静脈内薬剤用途について、1時間の1期間内のキログラム体重用量あたり5内毒素単位EUという上限を設定しているTheUnitedStatesPharmacopeialConvention,PharmacopeialForum261:2232000。特定の実施形態では、組成物中の内毒素および発熱性物質レベルは、10EU/mg未満、または5EU/mg未満、または1EU/mg未満、または0.1EU/mg未満、または0.01EU/mg未満、または0.001EU/mg未満である。生体内投与のために使用される場合、本開示の製剤は無菌でなくてはならない。本開示の製剤は、滅菌濾過、照射などを含む、様々な滅菌方法によって滅菌されてもよい。一実施形態では、製剤は、滅菌済み0.22ミクロンフィルターによって濾過滅菌される。注射用無菌組成物は、Remington:TheSciencePracticeofPharmacy,21sted.,LippincottWilliamsWilkins,2005に記載されるような、従来の製薬慣行に従って調合し得る。本開示の治療的組成物は、経口、経鼻、肺、バッカルおよび舌下を含む局所、直腸、膣および/または非経口投与などの特定投与経路のために配合し得る。非経口投与および非経口的に投与するという語句は、本明細書の用法では、経腸的および局所投与を除く、通常は注射による投与様式を指し、制限なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内注射および輸液が挙げられる。本開示の処方は、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入剤を含む、局所または経皮投与に適する。抗体は無菌、条件下で、薬学的に許容できる担体と共に、そして必要なこともある、任意の保存料、緩衝液、または噴霧剤と共に混合されてもよい。米国特許第7,378,110号明細書;米国特許第7,258,873号明細書;米国特許第7,135,180号明細書;米国特許公開第2004-0042972号明細書;および米国特許公開第2004-0042971号明細書。製剤は、好都合には単位投与形態で提供されてもよく、薬学技術分野で公知の任意の方法で調製されてもよい。本開示の医薬組成物の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に対する毒性なしに、特定の患者、組成物、および投与様式ついて、所望の治療反応を達成するのに効果的な活性成分の量例えば治療的有効量などを得るように、変動されてもよい。選択される投与量レベルは、用いられる本開示の特定組成物の活性、投与経路、投与時点、用いられる特定化合物の排出速度、治療期間、用いられる特定組成物と組み合わせて使用されるその他の薬剤、化合物および/または材料、治療される患者の年齢、性別、重量、病状、総体的な健康、および以前の病歴などの医療技術分野で周知の要素を含む、多様な薬物動態学的要素に左右される。適切な投与量は、例えば、約0.1、1、10、または50mg/kg体重などの約0.0001~約100mg/kg体重またはそれを上回る範囲であってもよく、約1~約10mg/kg体重が好ましい。特定の実施形態では、方法は、複数用量の抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた、複数用量の抗CD20抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含んでなる。方法は、抗CD20抗体またはその抗原結合性断片または抗CD19抗体またはその抗原結合性断片のいずれか、またはその双方を含んでなる医薬組成物の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40以上の治療的有効用量を投与するステップを含んでなってもよい。複数用量の医薬組成物投与の頻度および長さは、必要以上の実験なしに当業者によって容易に判定され得る。さらに治療的有効量の抗体組み合わせによる対象の治療は、単回治療を含み得て、または好ましくは一連の治療を含み得る。例えば、どちらも約1~約10週間、好ましくは約2~約8週間、より好ましくは約3~約7週間、なおもより好ましくは約4、5、または6週間にわたり、毎週1回、約1~約100mg/kg体重の範囲内の用量で投与される、抗CD20抗体またはその抗原結合性断片と抗CD19抗体またはその抗原結合性断片の組み合わせで、被験者を治療し得る。治療は、再発を阻止するために毎年、または再発の徴候に際して、実施されてもよい。治療のために使用される抗体またはその抗原結合性断片の有効投与量は、特定の治療過程にわたって、増大または低減してもよいこともまた理解される。投与量の変化は、本明細書に記載される診断アッセイ結果に起因して、それから明らかになってもよい。したがって一実施形態では、投与計画は、治療的有効量の抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた、治療的有効量の抗CD20抗体またはその抗原結合性断片の投与を含み、組み合わせは、治療期間の1、8、15、および22日目に投与される。別の実施形態では、投与計画は、治療的有効量の抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた、治療的有効量の抗CD20抗体またはその抗原結合性断片の投与を含み、組み合わせは、治療期間の週の1、2、3、4、5、6、および7日目に投与される。さらなる実施形態は、治療的有効量の抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされて、治療的有効量の抗CD20抗体またはその抗原結合性断片が投与され、組み合わせが、治療期間の週の1、3、5、および7日目に投与される投与計画;治療的有効量の抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた、治療的有効量の抗CD20抗体またはその抗原結合性断片の投与を含み、抗体組み合わせが、治療期間の週の1および3日目に投与される、投与計画;および治療期間の任意の週の1日目における、抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた治療的有効量の抗CD20抗体またはその抗原結合性断片の投与を含む好ましい投与計画を含む。治療期間は、1週間、2週間、3週間、1ヶ月間、3ヶ月間、6ヶ月間、または1年間から構成されてもよい。治療期間は引き続いてもよく、または1日間、1週間、2週間、1ヶ月間、3ヶ月間、6ヶ月間、または1年間互いに離れていてもよい。抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と抗CD20抗体またはその抗原結合性断片の組み合わせを使用した治療は、治療がどこかの時点で抗CD20抗体またはその抗原結合性断片と抗CD19抗体またはその抗原結合性断片の組み合わせを含みさえすれば、同時のまたは併行した片方のまたは双方の抗体の投与を含んでなってもよい。併用療法の効果はまた、抗CD20抗体および/または抗CD19抗体治療のいずれかの投与タイミングを変動させることで、最適化し得る。抗CD19抗体またはその抗原結合性断片と組み合わされた、抗CD20抗体またはその抗原結合性断片による治療は、同時併行、連続的逐次、またはその組み合わせであってもよい。したがって組み合わせ抗体治療を受ける対象には、同時に例えば一斉にまたは異なる時点で例えばいずれかの順で逐次に、同日に、または異なる日に、抗CD20抗体またはその抗原結合性断片と抗CD19またはその抗原結合性断片の双方が投与され得る。したがっていくつかの実施形態では、リツキシマブまたはその抗原結合性断片などの抗CD20抗体は、16C4またはその抗原結合性断片などの抗CD19抗体と共に同時投与される。なおも別の実施形態では、リツキシマブまたはその抗原結合性断片などの抗CD20抗体が最初に投与され、次に16C4またはその抗原結合性断片などの抗CD19抗体が投与される。なおも別の実施形態では、16C4またはその抗原結合性断片などの抗CD19抗体が最初に投与され、次にリツキシマブまたはその抗原結合性断片などの抗CD20抗体が投与される。いくつかの実施形態では、リツキシマブと16C4などの抗CD20抗体と抗CD19抗体の組み合わせは、1回の投与で同時に投与されるが、その他の投与としては、いずれかの順での同日、または異なる日の逐次投与が挙げられる。リツキシマブなどの抗CD20抗体および16C4などの抗CD19抗体が同時投与される場合、それらは、それぞれ抗CD20抗体またはその抗原結合性断片または抗CD19抗体またはその抗原結合性断片のいずれかを含んでなる、別個の医薬組成物として投与され得て、またはこれらの抗がん剤の双方を含んでなる単回医薬組成物として投与され得る。ここで本発明を一般的に記述し、それは、本開示の特定の実施形態および実施形態の単なる例証のみを目的とし、本発明の制限を意図しない、以下の実施例を参照することによって、より容易に理解されるであろう。実施例1:抗CD19mAb16C4-afucは、複数B白血病およびリンパ腫細胞系に対する強力な生体外ADCC活性を有する16C4-afucは、マウスIgG1mAbHB12Bのヒト化および親和性成熟によって作成された、mAb16C4の脱フコシル化形態である。KansasGSandTedderTF.JImmunol,1991;147:4094-4102;Yazawaetal.,ProcNatlAcadSci,2005;10242:15178-15183;Herbstetal.,JPharmacolExpTher,2010,3351:213-222。フコシル化16C4mAbと比較して、16C4-afucは活性化ヒトFcγRIIIAおよびマウスFcγRIVとの親和性が約9倍増大され、ADCCエフェクター機能が改善されている。リツキシマブとは対照的に、16C4はCDCを媒介しない。Herbstetal.,JPharmacolExpTher,2010,3351:213-222B白血病およびリンパ腫細胞系の大きなパネルにおいて、16C4-afucのADCC活性をフコシル化前駆体であるmAb16C4の活性と比較した。陽性対照として、CD20mAbリツキシマブを全てのアッセイに含めた。試験された全ての細胞系で、16C4-afucは、ADCCの仲介について親mAb抗CD19mAbよりも顕著に強力であった図1A-1E。15種の悪性B細胞系の全パネルに対する16C4-afucの活性をリツキシマブの活性と比較すると、3つの異なる活性プロファイルが観察された。1つ目は、中量から高量のCD19を発現する表IKarpas-1106P細胞図1Aによって例示される、それに対して16C4-afucおよびリツキシマブがほぼ等効力であった細胞系;2つ目は、CLL細胞系JVM2図1Bなどの、それに対してリツキシマブが16C4-afucよりも効果的であった細胞系;3つ目は、Oci-LY19細胞図1CおよびDaudi細胞図1Dおよび表Iなどの、それに対して16C4-afucがリツキシマブよりも効果的であった細胞系。細胞系はまた、CD19およびCD20の相対的発現についても分析し、2つの抗原の表面レベルが、それぞれCD19およびCD20mAbに対するそれらの生体外感度を決定するかどうかを判定した表I。図1Bでは、16C4-afucおよびリツキシマブで観察されたADCC機能最大細胞毒性百分率、図1EはCD19mAbおよび図1FはCD20mAb;EC50値、図1GはCD19mAbおよび図1HはCD20mAbが、mAb16C4およびリツキシマブを検出の一次抗体とするフローサイトメトリーにより測定された、CD19およびCD20の相対的表面発現に対してプロットされる。特定の細胞系では、抗CD19および抗CD20mAbに対する感度は、それらの相対的な抗原発現と一致するように見える。例えばOci-LY19細胞は、低濃度のCD20を有するがCD19を高度に発現し、16C4処置にだけ応答する表I。逆はGranta-519細胞で観察され、それはCD20を高レベルで発現し、リツキシマブによって効率的に死滅するが、16C4-afucでは死滅しない。しかし全ての細胞系にわたる比較は、抗原発現と、いずれかのmAbにより媒介されるADCCに対する感度との有意な相関を示さない。この相関の欠如は、CD19およびCD20の双方を低濃度で発現するが、16C4-afucによって効率的に死滅して、リツキシマブによって死滅しないKarpas-422細胞によって例証される。総合して、結果は、16C4-afucが、複数の細胞系に対して、強力な生体外ADCC活性を有することを実証する。試験された15細胞系の内11で、16C4-afucのADCC活性はCD20mAbを凌いだ。しかしこの多様な悪性B細胞系の組では、抗原発現と、CD19またはCD20mAb媒介ADCC感度とに有意な相関はなかった。実施例2:16C4-afucは生体外で患者由来CLLおよびALL細胞に対して効果的であるB細胞系に対する16C4-afucの活性を考慮して、主要白血病細胞に対するCD19mAbの効果もまた調べた。CLLと診断された患者から6個のPBMCサンプルを得て、CD19およびCD20に対する表面抗原密度を判定した。図2Aに示されるように、これらのサンプル中のB細胞は、CD19およびCD20を様々な程度に発現した。これらのサンプルのいくつかでは、CD20抗原性部位の数はCD19部位の数を超えた。生体外FACSベースの細胞毒性アッセイを使用して、リツキシマブを陽性対照として、16C4-afucがCLLサンプル中でB細胞を殺傷する能力を評価した。図2B-2Dは、3つの代表的CLLサンプルCLL106、図2B;CLL104、図2C;CLL107、図2Dに対する、16C4-afucおよびリツキシマブによるADCCアッセイからの結果を示す。16C4-afucのEC50値は、0.007nM~0.063nMの範囲であった。対照的に、リツキシマブのEC50値は、0.639nM~0.682nMの範囲であった。16C4-afucおよびリツキシマブによって媒介されるADCCに対するCLL細胞の感度は、それぞれそれらのCD19およびCD20の表面発現と比較されたそれぞれ図2Eおよび2F。この分析からの結果は、CD19およびCD20の双方について、抗原密度の増大と共に、より効率的な細胞死滅に向かう明らかな傾向を示す。これらの主要CLLサンプルの結果はまた、比較的低濃度の表面抗原発現で、生体外の枯渇を仲介する上で、16C4-afucがリツキシマブよりも効果的であることも示す。16C4-afuc活性はまた、4人のALL患者からのPBMCサンプルを用いたFACSベースのADCCアッセイ中でも試験された。これらのアッセイの内3つでは、健康なドナーからのからのB細胞と比較して、CD19およびCD20の抗原密度を判定するのに十分な細胞数があった図3A。正常末梢血B細胞では、CD19およびCD20の平均密度は、それぞれ細胞あたり約20,000および約200,000抗原性部位と判定された。正常B細胞と比較して、2つのサンプルではCD19発現がいくらか低く、第3のALLサンプルでは2倍に増大していた図3A。しかしCD20抗原性部位数は、より幅広く変動した。ALLがあるドナーからのサンプルのADCCB細胞枯渇アッセイでは図3B-3E、16C4-afucのEC50値は0.002nM~0.131nMの範囲であった。これらの値は、リツキシマブで得られたEC50値の1/6~1/100未満であった。総合して、結果は、16C4-afucが、CLLおよびALL患者からの主要白血病細胞に対するADCCを事実上媒介することを示す。これらの生体外アッセイでは、CD19mAbがCD20mAbリツキシマブよりも効果的であった。これはまた、その中で、CD20発現レベルが、細胞表面CD19レベルよりも顕著に高いサンプルにも当てはまる。前記実験からの結果は、表Iに要約される。実施例3:16C4-afucはFc依存性機序によってSCIDリンパ腫モデル中の腫瘍増殖を抑制する次に、16C4-afucが生体内で腫瘍増殖を阻害する能力を試験した。16C4の抗腫瘍有効性は、SCIDマウス中で増殖させた、複数のヒトCD19リンパ腫異種移植片中で評価した。CD19に対するmAbの全部ではないが一部は、抗増殖性活性を有した。Ghetieetal.,Blood,1994;835:1329-1336以前、mAb16C4は、形質転換B細胞系ならびに健康なドナーからの一次B細胞の増殖を阻害することが示された。Herbstetal.,JPharmacolExpTher,2010,3351:213-222抗腫瘍効果に対するADCCの貢献度を判定するために、16C4-afucの有効性を、Fc-媒介エフェクター機能除去について改変されたCD19mAbのバージョンであるmAb16C4-TMと比較した。Oganesyanetal.,ActaCryst,2008;D64:700-704DaudiおよびRajiSCID-リンパ腫異種移植モデルの双方で、皮下細胞移植に続いて7日目に開始して、毎週2.5mg/kgの投与量で抗体を評価した。どちらも抗体も腫瘍増殖の低下をもたらしたが、脱フコシル化抗CD19mAbの方が、エフェクターなしの変異mAb16C4-TMよりも効果的であった図4。Rajiモデルでは、33日目アイソタイプ対照治療群が、腫瘍サイズのために終了しなくてはならなかった時点において、16C4-afucは腫瘍増殖を84阻害し、16C4-TMは腫瘍増殖を46阻害した図4B。Daudiモデルでは、33日目には、16C4-afucは腫瘍増殖を88阻害し、mAb16C4-TMは腫瘍増殖を39阻害した図4A。これらの結果は、生体内における腫瘍増殖の効果的な阻害のために、Fc依存性エフェクター機能が必要であることを実証する。結果はまた、CD19mAbが、エフェクター機能不在下で程度ははるかにより低いが腫瘍増殖を遅延させ得ることを示し、これは恐らくはmAbの抗増殖活性の結果である。実施例4:16C4-afucはヒトB細胞リンパ腫の複数SCIDマウスモデル中で腫瘍増殖を抑制するマウスモデル中で、腫瘍の増殖を抑制するに必要な16C4-afucの用量を判定した。SCID/Raji皮下異種移植モデルにおいて、一連のmAb用量および投与スケジュールを試験した。mAb投与範囲は、0.3、1、3、および10mg/kgの16C4-afucを含んだ。投与計画バリエーションは、1、3、および5用量を含み、細胞移植後の5日目に1回目の用量を投与した図5。全体的に、16C4-afucの生体内有効性は、用量およびスケジュール依存性であった。ここに提示されるモデルでは、5用量の16C4-afuc図5Bが、3用量図5Aよりも強力な抗腫瘍活性をもたらした。しかし3mg/kgによる処置は、10mg/kgによる処置と同等の有効性を達成した。引き続く研究では、3mg/kgの用量が使用され、毎週2回、合計5用量投与された。この用量を使用して、リツキシマブを陽性対照および評価基準として、複数の皮下SCIDリンパ腫異種移植モデルにおける16C4-afucの効性を評価した。図6は、Namalwa図6A、Daudi図6B、およびToledo細胞図6Cを用いた腫瘍モデルからの結果を示す。これらのモデルでは、16C4は、対照群で得られた結果と比較して、腫瘍増殖をそれぞれ82、91、および88阻害した。Namalwa腫瘍がリツキシマブ処置に対して応答不良であったのに対し、Daudi異種移植片は、16C4-afucよりもCD20mAbによって増殖がいくらかより良く阻害された。Toledo腫瘍モデルでは、2つのmAbは同等の有効性を示した。生存期間または麻痺までの期間を主要エンドポイントとして、IV播種性腫瘍モデル中で、NamalwaおよびDaudi細胞異種移植片を用いて、16C4-afucの抗腫瘍効率をさらに試験した。Namalwa図6EおよびDaudi図6Dモデルにおける16C4-afucの投与は、対照群で観察された生存期間と比較して、生存期間をそれぞれ50および43増大させた。皮下リンパ腫モデルと同様、リツキシマブは、Namalwa細胞を用いた全身性疾患モデルにおいて、軽微な効果のみを有した。Daudiモデルでもまた、mAb16C4-afucおよびリツキシマブで観察された相対的有効性は、皮下モデルで観察された結果を再現した。結果は、16C4-afucが、皮下および全身性モデルの双方でB細胞リンパ腫の複数モデルにおいて、腫瘍増殖を抑制することを示す。実施例5:実施例5:腫瘍増殖の長期抑制をもたらす16C4-afucとリツキシマブの組み合わせCD19およびCD20mAbによる、悪性B細胞の組み合わせ標的化によって媒介される腫瘍増殖阻害と、いずれかのmAb単独での標的化から得られる腫瘍増殖阻害とを比較した。4つの異なる皮下SCIDリンパ腫/白血病モデルRaji、Daudi、Oci-LY19、Ramos、SUP-B15を16C4-afucおよびリツキシマブ単独で、または組み合わせて治療した。これらの実験では、16C4-afucと同一スケジュールに従って同一濃度で、3mg/kgで、合計5用量のリツキシマブが投与された。図5に示されるように、3mg/kgから10mg/kgへの16C4-afucの用量増大は、SCID/Rajiリンパ腫モデルにおいて、腫瘍増殖のより大きな阻害をもたらさなかった。しかし16C4-afucとリツキシマブの組み合わせは、Raji腫瘍増殖の長期抑制をもたらした図7A。同様の結果は、皮下Daudiリンパ腫モデル図7Cでも得られ、2つのmAbの組み合わせは、皮下リンパ腫のより大きな長期抑制をもたらした。Oci-LY19皮下異種移植モデルではmAb組み合わせの効果は、あまりはっきりせず図7B、これはこのモデルにおけるリツキシマブの活性不良の結果かもしれない。しかしCD19mAbは、良好な有効性を示し、CD19mAbとリツキシマブの組み合わせはより大きな腫瘍抑制をもたらした。同様に、Ramos異種移植モデル図7DではmAb組み合わせの効果はあまりはっきりせず、これはこのモデルにおける16C4-afucの比較的不良な活性の結果かもしれない。しかしOci-LY19モデルで見られたように、CD19mAbとリツキシマブの組み合わせは、このモデルでより大きな腫瘍抑制をもたらした。MAb16C4-afucおよびリツキシマブはまた、SUP-B15ALL細胞を用いた皮下モデルにおいて、単独でおよび組み合わせて試験された図7E。16C4-afucとリツキシマブの組み合わせは、単一作用物質よりも明白な腫瘍増殖阻害を有した。これに加えて、我々は、全身性Daudi腫瘍モデルにおいて、CD19/CD20mAb併用療法を試験した。皮下モデルからの結果と同様に、併用療法は、より大きな抗腫瘍有効性を示し、単一mAb処置対照データ示さずを超える生存期間93.5増大がもたらされた。結果は、CD19mAb16C4-afucとCD20mAbリツキシマブの組み合わせが、ヒトB細胞リンパ腫の前臨床モデルにおいて、いずれかのmAb単独より大きな有効性を有することを実証する。実施例6:huCD19/CD20二重遺伝子導入マウスにおける併用療法の薬物動態学および薬物動力学二重遺伝子導入動物は、huCD19遺伝子導入マウスとhuCD20遺伝子導入マウスの交配によって作成された。双方の系統は、先に良く特性解析されており、導入遺伝子をB細胞限定様式で発現し、それぞれCD19およびCD20mAbによるB細胞枯渇研究に成功裏に使用されている。Zhouetal.,1994,MolCellBiol14:3884-3894;Ahujaetal,2007,JImmunol179:3351-3361;Yazawaetal,2005,ProcNatlAcadSciUSA102:15178-15183。リツキシマブサンプルまたは対照が投与され、およそ36時間後に16C4-afuc追加される投与計画後に、CD19/CD20遺伝子導入マウス中で16C4-afucレベルを測定した。マウス血中の16C4-afucレベルは、最長1680時間目まで測定した。4種の別個の投与が考察された。16C4-afuc1mg/kg対照例えばリツキシマブなし;16C4-afuc10mg/kg対照;16C4-afuc1mg/kgリツキシマブ10mg/kg;16C4-afuc10mg/kgリツキシマブ10mg/kg。図8Aは、実験の薬物動態学的結果を示す。単独投与またはリツキシマブと一緒の投与に関わりなく、より高用量の16C4-afuc10mg/kgは、より低用量の16C4-afuc1mg/kgよりも、血中により長時間保持された。実施例7:huCD19/CD20遺伝子導入マウスにおけるB細胞枯渇併用療法によって媒介される生体内B細胞枯渇の程度をリツキシマブ単独の効果と比較した図8B。二重遺伝子導入huCD19/CD20マウスに、iリツキシマブ10mg/kg、ii16C4-afuc1mg/kg;iii16C4-afuc10mg/kg;ivリツキシマブ10mg/kg16C4-afuc1mg/kg;vリツキシマブ10mg/kg16C4-afuc10mg/kgの1つを投与した。様々な用量での投与後、周期的に、フローサイトメトリーによって、残留する血中および脾臓B細胞数を測定した。図9は、リツキシマブ10mg/kg16C4-afuc10mg/kgの併用療法の最大用量が、最長持続期間にわたって血液および脾臓からの最大B細胞枯渇百分率をもたらすことを示す。特に、16C4-afuc1mg/kgの追加的投与のおよそ384時間または16日間後に、B細胞枯渇は急激に低下する。B細胞枯渇の同様の低下は、リツキシマブ10mg/kgまたはリツキシマブ10mg/kg16C4-afuc1mg/kgが追加されたおよそ840時間または35日間後に観察されるが、B細胞枯渇の百分率は、後者の投与量の投与後に上昇するようであった。より高用量の16C4-afuc10mg/kgが追加された場合、B細胞枯渇に対する影響は単独または組み合わせ投与に関わらず、より低用量の16C4-afucと比較して、そしてリツキシマブ10mg/kg単独と比較して、長期である。しかし最強かつ最長の効果は、リツキシマブ10mg/kg16C4-afuc10mg/kgの併用療法で観察される。材料と方法細胞および試薬ヒトB白血病およびリンパ腫細胞系Raji、Daudi、Ramos、Namalwa、Toledo、Farage、およびRLは、米国微生物系統保存機関ATCC,Manassas,VA,USAから得られた。細胞系OCI-LY-19、Granta-519、Karpas-422、Nalm-6、Karpas-1106P、DB、JVM-2、JVM-13、およびMEC2は、DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenDSMZ,Braunschweig,Germanyから得られた。KC1333NK細胞系ヒトCD16発現するは、BioWaInc.Princeton,NJから得られた。全ての細胞系は、RPMI-1640培地Invitrogen,Carlsbad,CA中で維持され、10ウシ胎仔血清FBSが添加された。血液サンプルは、インフォームドコンセントを得た後に、健康なドナーから得た。CLLまたはALLと診断された患者からの凍結フィコールハイパック精製PBMCサンプルは、Cureline,Inc.から得た。ヒト化親和性最適化および脱フコシル化CD19mAb16C4-afuc、mAb16C4fucosylated16C4、ヒトIgG1アイソタイプ対照mAbR347、およびmAb16C4-TMは、MedImmuneAntibodyEngineeringGroupによって提供された。16C4-TMmAbFcは、エフェクター機能を排除するように改変される。Oganesyanetal.,ActaCryst,2008;D64:700-704CD20mAbリツキシマブBiogenIdec,Inc;Cambridge,MAは、生体外および生体内アッセイにおいて陽性対照として使用された。ADCCエフェクター機能が改善されたCD19mAbを作成するために、ヒトCD19を認識するマウスIgG1mAbHB12bKansasandTedder,JImmunol,1991;147:4094-4102をヒト化して親和性を最適化し、mAb16C4をもたらした。均一脱フコシル化抗体作成するためにフコシルトランスフェラーゼ欠損産生CHO細胞系BioWaPotelligent登録商標Technology,BioWaInc.;Princeton,NJ中で、ヒト化IgG1mAb16C4を発現させて、16C4-afucを作成した。B細胞系上の抗原発現の判定mAb16C4またはリツキシマブをそれぞれ一次抗体として、それに続いて蛍光標識ヤギ抗ヒトmAbを使用して、B細胞系上のCD19およびCD20発現のレベルを判定した。誘導結合アッセイでは、B細胞をPBSで洗浄し、FACS緩衝液2FBS含有PBSに再懸濁した。未標識のmAb希釈液と共に、細胞を氷上で20分間インキュベートし、洗浄して二次mAb含有PBSに再懸濁した。氷上で20分間後、細胞を洗浄し、FACS緩衝液に再懸濁して、細胞表面の蛍光強度をフローサイトメトリーによって分析した。全ての細胞系で、mAb16C4とリツキシマブの最大の結合は、濃度1μg/mlで達成された。相対的抗原発現は、表Iで蛍光強度MFIの中央値として報告される。正常および悪性B細胞上の抗原密度判定抗CD19クローンHD37および抗CD20クローン2H7を一次抗体として、QIFIKIT登録商標Dako,Glostrp,Denmark製造会社の使用説明書を使用して、フローサイトメトリーによって、CLLまたはALLがあるドナーからの凍結PBMC、および健康な成人ドナーからのPBMCサンプルからのB細胞上のCD19およびCD20の抗原密度を判定した。抗体依存性細胞傷害アッセイE:T比2.5:1で、標的指向TおよびNK作動体E細胞としてB白血病/リンパ腫細胞系を用いて、ADCCアッセイを実施した。連続希釈mAbと共に細胞を4時間インキュベートし、製造会社の指示に従って実施されるCytoTox96登録商標非放射性細胞毒性アッセイPromegaCorp.,Madison,WIを使用して、乳酸デヒドロゲナーゼLDH放出の検出によって、標的細胞溶解を測定した。全てのアッセイは、三連で行った。多パラメータフローサイトメトリーを使用して、CLLまたはALLと診断されたドナーからの精製PBMCを使用して、生体外ADCC活性を定量化した。全てのサンプルのリンパ球含有量は、90を超えた。健康なドナーからのPBMCサンプルと比較して、CLLまたはALLがあるドナーからのサンプルの大部分は、低濃度のCD56NK細胞を有した。そのためCLLおよびALLPBMCサンプルには、KC1333NK細胞を添加した。凍結PBMCCLLまたはALLサンプルを37°Cの水浴内で解凍し、洗浄して、10熱不活性化FBSおよび2mML-グルタミン添加RPMI1640に再懸濁し、全容積200μLで、NuncU96ウェル丸底マイクロウェルプレートThermoFisherScientific,Rochester,NY内に5×104細胞/ウェルで播種した。KC1333NKエフェクター細胞25×104を添加して、E:T比5:1を達成した。リツキシマブ、16C4-afuc、または脱フコシル化アイソタイプ対照mAbR347の連続希釈を10μlアリコートでウェル三連に添加し、PBMCを5CO2と共に20時間にわたり37°Cでインキュベートした。細胞毒性百分率は、抗CD19フィコエリトリンCy7PE-Cy7、抗CD20PacificBlue、抗CD22アロフィコシアニンAPCまたは抗CD22フィコエリトリンPE、および抗FcεR1αフルオレセインイソチオシアネートFITCを含有する蛍光標識抗体のカクテル中で細胞を染色することで測定された。計数基準として、CountBrightAbsoluteCountingBeadsInvitrogen,LifeTechnologiesCorp.,Carlsbad,CAを添加して、細胞サブセットの細胞濃度を測定した。LSRIIフローサイトメーター上でサンプルを得た。FlowJoFlowJo,Ashland,ORソフトウェア、バージョン7.2.2を用いて、蛍光活性化細胞選別FACSデータを分析した。IgG1脱フコシル化mAbであるR347-aFucを非枯渇治療対照として使用し、ゲートを判定するために使用した。各サンプル中の絶対計数ビーズの数を定量化した。製造会社の使用説明書に従って、標準計数ビーズを使用して、総CD22またはCD20CD22ゲート中の生存B細胞数を細胞濃度に転換した。以下の式に従って、B細胞枯渇百分率細胞毒性を計算した。リツキシマブ:細胞毒性={1-[CD22リツキシマブ処置細胞/mL]÷[CD19CD22対照処置細胞/mL]}×10016C4-afuc:細胞毒性={1-[CD20CD2216C4細胞/mL]÷[CD20CD22対照処置細胞/mL]}×100B細胞細胞毒性の最大半量有効濃度EC50は、GraphPadPrismv5.01GraphPadSoftware,Inc,LaJolla,CAの4変量曲線適合方程式を使用して計算された。SCIDマウスリンパ腫モデル複合免疫不全症SCIDリンパ腫異種移植モデルおいて、腫瘍増殖の阻害生体内を研究した。4~6週齢のメスCB17-SCIDマウスをTaconicFarmsGermantown,NY,USAで繁殖させ、MedImmuneの実験動物資源施設で維持した。全てのマウス実験は、IACUC認可プロトコルに従って行われた。限局性および播種性SCIDリンパ腫異種移植モデルの双方を使用して、研究を実施した。限局性皮下s.c.異種移植マウスモデルでは、0日目に、マウス10匹のコホートに5×106腫瘍細胞を接種した。提示されるように腹腔内i.p.注射によって、5または7日目にマウスをmAbまたはビヒクルで処置した。皮下モデルでは、腫瘍体積を経時的にモニターした。播種性SCIDマウスモデルでは、1×106~5×106個の細胞を尾静脈を介して静脈内i.v.注射した。腫瘍細胞の注射後7日目に、コホート各10匹のマウスを4日毎に1用量の投与で、3mg/kg体重の5用量のmAbで処置した。播種性腫瘍モデルでは、生存期間、または死亡に先行する臨床症状である麻痺までの期間を評価項目として使用した。薬物動態学的/薬力学研究MSD電気化学発光ECL免疫測定法方法を使用して、マウス血清中の16C4およびリツキシマブを定量化した。16C4-afucは、MA6000MSDマイクロタイタープレートに被覆された、可溶性組換えマウス抗イディオタイプ抗体D9により捕捉される。次に、ビオチン化ロバ抗ヒトIgGFcγ特異性抗体、それに続いてスルホ-TAGストレプトアビジンを使用して、いずれかの結合16C4を検出する。これをMSD読み取り緩衝液と反応させ、ECLシグナルの生成と測定のために、プレートをMSDSector商標Imagerモデル6000リーダーにのせる。ECL計数を16C4濃度と関連付ける4パラメータ曲線適合を使用して、標準曲線からの内挿によって、サンプル中の16C4-afuc濃度を判定する。huCD19/CD20遺伝子導入マウスフローサイトメトリーによるB細胞数の解析全てのマウス実験は、IACUC認可プロトコルに従って、MedImmune動物施設の無菌環境で実施された。huCD19遺伝子導入マウスとhuCD20遺伝子導入マウスとの交配によって作成された、huCD19/CD20二重遺伝子導入マウス中において、CD19およびCD20mAbによるB細胞生体内枯渇を評価した。Zhouetal,1994,MolCellBiol14:3884-3894;Ahujaetal,2007,JImmunol179:3351-3361。オスn=105およびメスn=105遺伝子導入マウス9-12週齢;時点/群あたり2匹のオスおよび2匹のメスをPBS、16C4-afuc、および/またはリツキシマブを尾静脈注射投与される6群に無作為化した。所定の時点で眼窩静脈叢から全血を採取し、フローサイトメトリーを使用してさらに分析した。PerCP-Cy5.5コンジュゲートB220CD45RおよびPEコンジュゲートmuCD19で染色して、各サンプル中のB細胞数を判定した。B220muCD19B細胞はまた、PacificBlueコンジュゲートhuCD20と、APC-Cy7コンジュゲートhuCD19抗体の結合についても試験した。最後に、T細胞をFITCコンジュゲートCD3抗体で染色した。サンプルをBDLSRIIフローサイトメーターにかけて、FlowJoでデータを分析した。援用本明細書で言及される全ての刊行物および特許は、あたかも個々の出版物または特許を具体的に個々に参照によって援用すると示されるように、その内容全体を参照によって本明細書に援用する。矛盾がある場合、その中のいずれの定義も含めて本出願が優先される。均等物主題発明の特定の実施形態を考察したが、上の明細書は例示的であり、制限的であることは意図されない。本開示の多くの変形形態が、本明細書および下記の請求項を検討すれば、当業者には明白である。本開示の全範囲は、このような変形形態と共に、その均等物の全範囲および明細書と共に、特許請求の範囲を参照して判断されるベきである。16C4抗体の配列配列番号1、VHドメインGluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGlySerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerSerSerTrpMetAsnTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpValGlyArgIleTyrProGlyAspGlyAspThrAsnTyrAsnValLysPheLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnSerLeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyrTyrCysAlaArgSerGlyPheIleThrThrValArgAspPheAspTyrTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSerSer配列番号2、VHCDR1SSWMN配列番号3、VHCDR2RIYPGDGDTNYNVKFKG配列番号4、VHCDR3SGFITTVRDFDY配列番号5、VKドメインGluIleValLeuThrGlnSerProAspPheGlnSerValThrProLysGluLysValThrIleThrCysArgAlaSerGluSerValAspThrPheGlyIleSerPheIleAsnTrpPheGlnGlnLysProAspGlnSerProLysLeuLeuIleHisGluAlaSerAsnGlnGlySerGlyValProSerArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleAsnSerLeuGluAlaGluAspAlaAlaThrTyrTyrCysGlnGlnThrLysGluValProPheThrPheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLys配列番号6、VKCDR1RASESVDTFGISFMN配列番号7、VKCDR2EASNQGS配列番号8、VKCDR3QQSKEVPFT"