"かご状タンパク質をコードする遺伝子、前記かご状タンパク質をコードする遺伝子の発現を制御するプロモーター、シャインダルガノ配列、及び、前記プロモーターの機能を抑制するラクトースリプレッサー遺伝子を含み、前記シャインダルガノ配列が前記プロモーターと前記かご状タンパク質をコードする遺伝子との間に配置されているプラスミドを、大腸菌に導入する工程と、前記大腸菌を培養し、前記かご状タンパク質を産生させる工程と、産生した前記かご状タンパク質を精製する工程と、を備える、かご状タンパク質の製造方法。前記プロモーターがtacプロモーターである、請求項1に記載の製造方法。前記ラクトースリプレッサー遺伝子が、lacIq遺伝子である、請求項1又は2に記載の製造方法。前記シャインダルガノ配列が、AGGAGGである、請求項1~3のいずれか一項に記載の製造方法。前記かご状タンパク質が、フェリチン、Dps、又はウイルスのコートタンパク質である、請求項1~4のいずれか一項に記載の製造方法。前記かご状タンパク質がフェリチン又はDpsであるとき、産生した前記かご状タンパク質を精製する前記工程が、前記かご状タンパク質を含む無細胞抽出液若しくは培養上清の熱処理、及び/又は、陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製を含み、前記かご状タンパク質がウイルスのコートタンパク質であるとき、産生した前記かご状タンパク質を精製する前記工程が、塩析による精製を含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の製造方法。前記大腸菌が、ラクトースオペロンに欠損のない大腸菌である、請求項1~6のいずれか一項に記載の製造方法。非特許文献1に記載の方法では、リステリア菌を培養することによって、Dpsを製造している。しかし、50Lの培養液から精製Dpsが11mgしか得られないこと、精製操作に4つの工程を要すること等、工業的な生産には向いておらず、改善の余地が残されている。非特許文献2及び特許文献2に記載の方法では、大腸菌の発現系を用いてウマ由来のLアポフェリチンが生産される。これらの方法では、IPTGを用いて発現誘導を行っているが、発現の制御は困難である。また、精製操作に4つの工程を要すること等、改善の余地が残されている。非特許文献3に記載の方法では、無細胞タンパク質合成系invitrotranslationsystemを用いて、植物由来のフェリチン及びヒト由来のフェリチンを合成している。しかしながら、合成反応のスケールアップは困難であり、工業的にフェリチンを製造する方法としては不向きである。非特許文献4及び5に記載の方法では、CCMVのコートタンパク質をシュードモナス属細菌Pseudomonasfluorescensや酵母Pichiapastorisを用いて発現させている。しかしながら、シュードモナス属細菌を用いた方法では、精製にPEG沈殿法及びショ糖密度勾配遠心法を用いており、一度に大量の精製をするには不向きである。一方、酵母を用いた方法では、酵母の細胞壁を破砕するのに時間がかかる傾向があり改善の余地がある。本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、高純度のかご状タンパク質を効率良く大量に製造できる方法を提供することを目的とする。本発明に係るかご状タンパク質の製造方法は、かご状タンパク質をコードする遺伝子、かご状タンパク質をコードする遺伝子の発現を制御するプロモーター、シャインダルガノ配列SD配列、及び、プロモーターの機能を抑制するラクトースリプレッサー遺伝子を含み、SD配列がプロモーターとかご状タンパク質をコードする遺伝子との間に配置されているプラスミドを、大腸菌に導入する工程と、大腸菌を培養し、かご状タンパク質を産生させる工程と、産生した上記かご状タンパク質を精製する工程と、を備える。上記本発明に係る製造方法によれば、高純度のかご状タンパク質を効率良く大量に製造することができる。プロモーターは、好ましくはtacプロモーターである。ラクトースリプレッサー遺伝子は、好ましくはlacIq遺伝子である。SD配列は、好ましくはAGGAGGである。これら構成を備えることにより、より効率的にかご状タンパク質を製造することができる。lacIq遺伝子は、lacIリプレッサータンパク質を過剰に発現するように変異された制御プロモーター部位に接続されたlacI遺伝子である。本発明に係る製造方法は、フェリチン、Dps、又はウイルスのコートタンパク質を製造するために特に有用である。かご状タンパク質がフェリチン又はDpsであるとき、産生したかご状タンパク質を精製する工程は、かご状タンパク質を含む無細胞抽出液若しくは培養上清の熱処理、及び/又は、陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製を含むことが好ましい。かご状タンパク質がウイルスのコートタンパク質であるとき、産生したかご状タンパク質を精製する工程は、塩析による精製を含むことが好ましい。これらの方法でかご状タンパク質を精製することにより、より高純度のかご状タンパク質を効率的に得ることができる。大腸菌は、好ましくはラクトースオペロンに欠損のない菌株である。これにより、例えば安価なラクトースを誘導因子として用いて、効率的にかご状タンパク質を製造することができる。本発明によれば、高純度のかご状タンパク質を、効率良く、簡単な方法で大量に製造することができる。また、可溶性の状態のかご状タンパク質を容易に得ることができるため、かご状タンパク質の各種用途への適用に有利である。以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。本実施形態に係るかご状タンパク質の製造方法は、かご状タンパク質をコードする遺伝子を含むプラスミドを、大腸菌に導入し形質転換体を作成する工程と、形質転換体である大腸菌を培養し、かご状タンパク質を産生させる工程と、産生したかご状タンパク質を精製する工程と、を備える。かご状タンパク質は、例えば、フェリチン、Dps、又はウイルスのコートタンパク質であり得る。フェリチンは、微生物由来、動物由来若しくは植物由来のフェリチン、又はこれらの変異体を含む。微生物由来のフェリチンとしては、ヘリコバクター菌由来のフェリチン等が挙げられる。動物由来のフェリチンとしては、ヒト由来のフェリチン、マウス由来のフェリチン、及びウマ由来のフェリチン等が挙げられる。植物由来のフェリチンとしては、大豆フェリチン等が挙げられる。フェリチンの変異体は、フェリチン本来の構造及び機能を有する変異体であれば特に制限されない。フェリチンの変異体は、通常の遺伝子工学的手法、例えば部位特異的変異導入法によってフェリチンをコードする遺伝子に人為的に変異を導入する方法により作製することができる。Dpsはフェリチン様タンパク質であり、例えば、リステリア菌由来のDps、及びスルホロバス菌由来のDpsが挙げられる。ウイルスのコートタンパク質としては、CCMVcowpeachloroticmottlevirusのコートタンパク質等が挙げられる。かご状タンパク質の産生のために大腸菌を形質転換するために用いるプラスミドは、かご状タンパク質をコードする遺伝子の他に、好ましくは、かご状タンパク質をコードする遺伝子の発現を制御するプロモーター、SD配列、複製起点、及び、プロモーターの機能を抑制するラクトースリプレッサー遺伝子を含む。このプラスミドは、pBR系、pUC系、pACYC系、pCDF系、pCOLA系、及びpRSF系プラスミド等の大腸菌を宿主とするプラスミドを基に構築することができる。例えば、pUC118、pUC119、pBR322、pETkmS2Mishima,N.ら、Biotechnol.Prog.、第13巻、864-868頁、1997年、pMALNewEnglandBiolabs、及びpET-28aノバジェン社製、pCDF-2ノバジェン社製、pRSF-2ノバジェン社製、pKK223-3GEヘルスケアジャパン社製及びpACYC177ニッポンジーン社製等が挙げられる。好ましくは、pKK223-3を基にプラスミドが構築される。かご状タンパク質をコードする遺伝子は、かご状タンパク質を産生する細胞から通常のクローニング法によって得ることができる。あるいは、GenBankのデータベースhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/等に登録されているタンパク質の構造遺伝子を基に、通常行われる方法により、かご状タンパク質の遺伝子に対応するDNA断片を人工的に合成してもよい。プロモーターは、好ましくは、かご状タンパク質をコードする遺伝子の5’側上流に配置される。プロモーターは、例えば、lacプロモーター、trpプロモーター、並びに、tacプロモーター及びtrcプロモーター等のlacプロモーターとtrpプロモーターとが融合したプロモーターから選ばれる。発現効率の観点から、tacプロモーターが好ましい。ラクトースリプレッサー遺伝子は、プロモーターの機能を抑制する。プロモーターを制御する効率の観点から、このラクトースリプレッサーは、好ましくはlacIq遺伝子である。SD配列は、アデニン及びグアニンに富んだ、4塩基~6塩基の配列であれば特に制限はない。SD配列は、好ましくはAGGA又はAGGAGGであり、より好ましくはAGGAGGである。複製起点は、大腸菌内において、プラスミドのDNAの複製を開始する起点として機能するものであれば、特に制限されない。複製起点は、例えば、pBR322ori及びp15Aoriから選択される。プラスミドは、ターミネーター、抗生物質の耐性遺伝子等の他の配列を更に含んでいてもよい。ターミネーターは、好ましくは、サブユニットをコードする遺伝子の3’側下流に配置される。ターミネーターは、宿主として利用する大腸菌において機能することが知られているものから選ばれる。好適なターミネーターとしては、trpA由来、ファージ由来、rrnBリボソーマルRNA由来のターミネーター等が挙げられる。抗生物質の耐性遺伝子としては、アンピシリン耐性遺伝子Ampr、テトラサイクリン耐性遺伝子Tetr、クロラムフェニコール耐性遺伝子Cmr、ストレプトマイシン耐性遺伝子Smr、及びカナマイシン耐性遺伝子Kmr等が挙げられる。プラスミドの構築は、分子生物学、生物工学、遺伝子工学の分野において慣用されている技術に準じて行うことができる。プラスミドの調製に用いられる宿主菌は、例えば、当該技術分野で通常用いられる大腸菌から適宜選択することができる。大腸菌としては、DH5α、HB101、及びJM109等が挙げられる。これらのうち、精製の容易化、大量調製、及び安全性等の観点から、JM109が好ましい。以上のようなプラスミドを大腸菌に導入することによって、かご状タンパク質を産生する形質転換体としての大腸菌を得ることができる。本実施形態において、形質転換体とは、かご状タンパク質のサブユニットをコードする遺伝子が導入され、当該遺伝子が発現した組換え微生物大腸菌のことを指す。大腸菌の形質転換は、例えば、リン酸カルシウム法、及びエレクトロポレーション法等、当業者に周知の方法により行うことができる。形質転換用の大腸菌としては、ラクトースオペロンに欠損のないものが好ましい。大腸菌は、好ましくは、W3110株、RB791株、BL21株又はSCS1株であり、より好ましくはW3110株である。プラスミドを大腸菌に導入して得られた形質転換体としての大腸菌を培養することにより、大腸菌が増殖して、かご状タンパク質が産生される。産生されるかご状タンパク質は、遺伝子工学的に容易に精製することができる。したがって、本実施形態に係る方法によれば、高純度のかご状タンパク質の工業的な製造に容易に適用することができる。大腸菌の培養は、培地の組成、培地のpH、培養温度、培養時間の他、インデューサー誘導因子の使用量、及び使用時間等の条件について、かご状タンパク質が効率的に発現するように適宜調整される。大腸菌の培養に使用される培地は、当業者に知られる固体培地及び液体培地のどちらでもよい。好ましくは、液体培地が用いられる。培地の炭素源及び窒素源として、培養される大腸菌が利用できる任意の炭素源及び窒素源を用いることができる。炭素源は、好ましくは、デンプン、スクロース及びグルコース等の糖類、グリセロール等のアルコール類、並びに、有機酸例えば、酢酸及びクエン酸又はその塩例えば、ナトリウム塩から選ばれる。窒素源は、好ましくは、酵母エキス、カゼイン、コーンスチープリカー、ペプトン、及び肉エキス等の天然窒素源、並びに、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム及び尿素等の無機窒素化合物から選ばれる。炭素源の濃度は好ましくは1~20w/v、より好ましくは1~5w/vである。窒素源の濃度は好ましくは1~20w/v、より好ましくは1~5w/vである。好適な培地の具体例としては、LB培地、TB培地、及び2×YT培地が挙げられる。培養温度は、培養される微生物が十分に生育できる温度であり、好ましくは20~37°Cである。培養時間は、かご状タンパク質が十分に産生されるように適宜調整され、好ましくは16~48時間程度である。培養は、好ましくは、好気的な条件下で、例えば、通気攪拌又は振盪を用いて行うことができる。大腸菌がアンピシリン及びカナマイシン等の抗生物質の耐性遺伝子を有している場合、対応する抗生物質を加えた培地を使用してもよい。誘導因子は、好ましくはラクトースである。かご状タンパク質を精製する工程は、培養終了後の大腸菌及び/又は培養上清から、精製されたかご状タンパク質を回収することを含む。典型的には、培養終了後、大腸菌から得た無細胞抽出液を各種精製法により処理して、精製された高純度のかご状タンパク質を得ることができる。無細胞抽出液は、例えば、遠心分離によって形質転換体大腸菌を集め、得られた細胞を超音波処理等によって破砕した後、遠心分離等によって破砕された細胞を除去する方法により、得ることができる。発現した組換えかご状タンパク質が、細胞外に分泌される場合がある。この場合、培養上清から、無細胞抽出液と同様の方法により精製を行えばよい。精製法は、例えば、無細胞抽出液又は培養上清の熱処理、塩析、並びに、陰イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びアフィニティークロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィーから少なくとも1つが選択される。無細胞抽出液又は培養上清を熱処理する温度は、好ましくは60~80°Cである。熱処理の時間は、好ましくは20~60分である。これら温度及び時間で熱処理を行うことにより、特に効率的にかご状タンパク質を精製することができる。かご状タンパク質がフェリチン又はDpsであるとき、かご状タンパク質を精製する工程は、無細胞抽出液を熱処理すること、及び/又は、陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製を含むことが好ましい。特に、無細胞抽出液又は培養上清を熱処理して夾雑タンパク質を除去した後、陰イオン交換クロマトグラフィーによりかご状タンパク質を精製することが好ましい。この場合、陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製の後、更に、ゲル濾過クロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー又は疎水クロマトグラフィーによる精製が好ましく行われる。このような方法によれば、大量のかご状タンパク質を容易に精製できることから、工業的な生産に適している。より好ましくは、陰イオン交換クロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーの順に精製が行われる。以下、実施例を挙げて本発明についてより具体的に説明する。ただし、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。特に明記しない限り、各種操作は、モレキュラークローニングアラボラトリーマニュアルMolecularCloningALaboratoryManual第2版ザンブルークSambrook,Jら、1989年に従って行った。は、特に明記しない限り、w/vを表す。精製されたかご状タンパク質の純度は、ゲルろ過カラムTSK-GELG4000SWXL東ソー株式会社製、商品名を用いたHPLC分析法により求めた。実施例1:プラスミドpKL223の構築プラスミドpTrcHisインビトロジェン社製、商品名を鋳型にして、プライマーBsa-lacI-forward配列番号1及びBam-lacI-reverse配列番号2を用いてPCRを行い、lacIq遺伝子とその制御プロモーターを含む領域を増幅した。PCRはKOD-plus-東洋紡社製、商品名を用いて次の反応条件で行った。ステップ1:94°C、2分;ステップ2:94°C、15秒;ステップ3:62°C、30秒;ステップ4:68°C、1分;ステップ5:4°C、∞;ステップ2からステップ4を30サイクル繰り返した。得られた約1400bpの増幅断片を、BsaAI及びBamHIで二重消化し、プラスミドpKK223-3GEヘルスケアジャパン社製、商品名のtacプロモーターの上流に位置するBsaAI-BamHIギャップに挿入して、図1に示すプラスミドpKL223を得た。用いたプライマーの配列を以下に示す。Bsa-lacI-forward:5’-TATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCT-3’配列番号1Bam-lacI-reverse:5’-CGGGATCCTCGCGCTAACTCACATTAATTGCGTTGC-3’配列番号2実施例2:リステリア菌由来Dpsの生産生産菌の構築論文TheJournalofBiologicalChemistry,1997年,272巻,p.3259-3265に記載の、リステリアイノキュアListeriainnocua由来Dpsのアミノ酸配列UniProtKB/Swiss-ProtAccessionNo.P80725を基に、データベースに登録されているこれに対応するDNA配列Dps遺伝子、GenBankAccessionNo.AJ244014、配列番号3を検索した。開始コドンのすぐ上流にWSD配列AGGAGGTATTAT、配列番号4を付加したPCR用プライマーFLP-Forward-MfeI配列番号5及びFLP-Reverse-PstI配列番号6を設計した。設計した2つのプライマーを用いて、QIAGENGenomic-tip及びGenomicDNABufferSetQiagen製を用いて調製したリステリアイノキュアListeriainnocuaATCCBAA-680株の染色体DNAを鋳型として、Dps遺伝子をPCRによって増幅した。PCRは、KOD-plus-東洋紡社製、商品名を用いて次の反応条件で行った。ステップ1:94°C、2分;ステップ2:94°C、15秒;ステップ3:60°C、30秒;ステップ4:68°C、40秒;ステップ5:4°C、∞;ステップ2からステップ4を30サイクル繰り返した。得られたDNA断片を、MfeI及びPstIで消化し、プラスミドpKL223のtacプロモーターの下流に位置するEcoRI-PstIギャップに挿入して、プラスミドpWKLFを構築した。続いて、プラスミドpWKLFを大腸菌W3110株に導入して、形質転換された大腸菌組換え大腸菌と呼ぶ場合がある。W3110pWKLFを得た。用いたプライマーの塩基配列を以下に示す。FLP-Forward-MfeI配列番号5:5’-AAAAGTTCAATTGAGGAGGTATTATATGAAAACAATCAACTCAGTAGACACAAAGG-3’FLP-Reverse-PstI配列番号6:5’-ATTCTGCAGCTTATTCTAATGGAGCTTTTCCAAGGAATGC-3’組換え大腸菌W3110pWKLFの培養組換え大腸菌W3110pWKLFを、終濃度50μg/mlのアンピシリンを添加した5mlのLB培地ペプトン1、酵母エキス0.5、塩化ナトリウム1、pH7.2中で、37°Cに加温しながら、200rpmで一夜振とうすることにより培養して、シード培養液を調製した。続いて、3L容ミニジャーファーメンターBiott製を用いて、1.5Lのラクトース1を含む2×YT培地ペプトン2、酵母エキス1、塩化ナトリウム2、pH7.2にシード培養液1.5mlを添加し、37°C、通気量1vvm、撹拌数400rpmで培養を開始した。24又は48時間後、遠心分離10,000×g、15分間、4°Cにより培養液から菌体を集めた。菌体を50mMのトリスヒドロキシメチルアミノメタン塩酸塩Tris-HCl緩衝液pH8.0500mlに懸濁してから、再度遠心分離により菌体を集めて、洗浄菌体を調製した。組換えタンパク質であるリステリア菌由来Dps組換えリステリアDpsの精製洗浄菌体を湿重量の5倍量の50mMTris-HCl緩衝液pH8.0に再懸濁し、超音波破砕器によって菌体を破砕した。破砕された菌体を含む懸濁液を遠心分離13,000×g、30分間、4°Cし、上清を集めて、組換えリステリアDpsを含む無細胞抽出液を得た。次に、無細胞抽出液を60°Cで20分間加熱した。これを遠心分離13,000×g、30分間、4°Cにより、熱変性によって生成した夾雑タンパク質の沈殿物を除去した。このときの組換えリステリアDpsの純度は62であり、培養液1L当たりで換算した収量は1.3gであった。続いて、組換えリステリアDpsを、50mMTris-HCl緩衝液pH8.0で予め平衡化した陰イオン交換カラムHiload26/10QSepharoseHPGEヘルスケアジャパン社製に添加した。同緩衝液でカラムを洗浄した後、塩化ナトリウムの0Mから0.4Mまでのリニアグラジェントにより、組換えリステリアDpsを溶出させた。このときの純度は95.8であり、培養液1L当たりで換算した収量は0.9gであった。さらに純度を上げるために、以下のカラム精製の工程を追加した。ゲルろ過カラムによる精製陰イオン交換カラムで溶出した組換えリステリアDpsの画分について、限外ろ過による脱塩濃縮と、0.15Mの塩化ナトリウムを含む50mMTris-HCl緩衝液pH8.0への溶媒交換を行った。続いて、組換えリステリアDpsを含む溶液を、同緩衝液で平衡化したゲルろ過カラムSuperdex200HRGEヘルスケアジャパン社製に添加した。同緩衝液で溶出された組換えリステリアDpsの純度99以上の画分を集めた。このときの純度は99.5であり、培養液1L当たりで換算した収量は0.4gであった。ハイドロキシアパタイトカラムによる精製陰イオン交換カラムで溶出した組換えリステリアDpsの画分について、限外ろ過による脱塩濃縮と、10mMリン酸カリウム緩衝液pH7.0への溶媒交換を行った。続いて、組換えリステリアDpsを含む溶液を、同緩衝液で平衡化したハイドロキシアパタイトカラムCHT2-Iバイオラッド社製に添加した。同緩衝液でカラムを洗浄した後、リン酸カリウムの10mMから500mMまでのリニアグラジェントにより、組換えリステリアDpsを溶出させた。得られた組換えリステリアDpsの純度は99.6であり、培養液1L当たりで換算した収量は0.6gであった。実施例3:ウマ由来のL-アポフェリチンの生産生産菌の構築天然型のウマ由来のL-アポフェリチンを製造するために、論文BiochimicaetBiophysicaActa,1993年,1174巻,p.218-220に記載の構造遺伝子GenBankAccessionNo.D14523から、N末端の8アミノ酸残基をコードする24塩基を削除し、メチオニン1残基をコードする3塩基を付加した構成を有する、ウマ由来のL-アポフェリチンをコードする遺伝子を人工合成した配列番号7。開始コドンのすぐ上流に、WSD配列AGGAGGTATTAT、配列番号4を付加したPCR用プライマーLSFT-forward-EcoRI配列番号8及びLFT-reverse-HindIII配列番号9を設計した。設計した2つのプライマーを用いて、ウマ由来のL-アポフェリチンをコードする合成した遺伝子を鋳型として、ウマ由来のL-アポフェリチンをコードする遺伝子をPCRによって増幅した。PCRは、KOD-plus-Neo東洋紡社製、商品名を用いて次の反応条件で行った。ステップ1:94°C、2分;ステップ2:98°C、10秒;ステップ3:68°C、30秒;ステップ4:4°C、∞;ステップ2からステップ3を30サイクル繰り返した。得られたDNA断片を、EcoRI及びHindIIIで消化し、プラスミドpKL223のtacプロモーターの下流に位置するEcoRI-HindIIIギャップに挿入することによりプラスミドpWKLSを構築した。作製されたプラスミドを大腸菌W3110株に導入し、組換え大腸菌W3110pWKLSを得た。用いたプライマーの塩基配列を以下に示す。LSFT-forward-EcoRI配列番号8:5’-GTTGAATTCAGGAGGTATTATATGTATTCTACTGAAGTGGAGGCCGCCGT-3’LFT-reverse-HindIII配列番号9:5’-ACAGAAGCTTCTTAGTCGTGCTTGAGGGTGAGCCTTTCAAAG-3’組換え大腸菌W3110pWKLSの培養実施例2と同様の手順により、組換え大腸菌W3110pWKLSの培養、菌体の収集及び無細胞抽出液の調製を行った。組換えタンパク質であるウマ由来のL-アポフェリチン組換えウマL-アポフェリチンの精製75°C、40分の熱処理により、無細胞抽出液から夾雑タンパク質を除去した。このときの組換えウマL-アポフェリチンの純度は、48であり、培養液1L当たりで換算した収量は0.3gであった。続いて、陰イオン交換カラムHiload26/10QSepharoseHPGEヘルスケアジャパン社製による精製を実施例2と同様に行い、純度92.5の組換えウマL-アポフェリチンが得られ、その培養液1L当たりで換算した収量は0.1gであった。実施例4:ウマ由来のH-アポフェリチンの生産生産菌の構築データベースに登録されているウマ由来のH-アポフェリチンの構造遺伝子GenBankAccessionNo.AY112742を定法により人工合成した配列番号10。開始コドンのすぐ上流にWSD配列AGGAGGTATTAT、配列番号4を付加したPCR用プライマーHFT-forward-EcoRI配列番号11及びHFT-reverse-HindIII配列番号12を設計した。設計した2つのプライマーを用いて、人工合成したウマ由来のH-アポフェリチンの構造遺伝子を鋳型として、ウマ由来のH-アポフェリチンをコードする遺伝子をPCRによって増幅した。PCRは、実施例3に記載したpWKLSの構築と同様の条件で行った。得られたDNA断片をEcoRI及びHindIIIで消化し、プラスミドpKL223のtacプロモーターの下流に位置するEcoRI―HindIIIギャップに挿入することによりプラスミドpWKLHを構築した。続いて、作製されたプラスミドを大腸菌W3110株に導入し、組換え大腸菌W3110pWKLHを得た。用いたプライマーの塩基配列を以下に示す。HFT-forward-EcoRI配列番号11:5’-GTTGAATTCAGGAGGTATTATATGACGACCGCGTTCCCCTCGCAGGT-3’HFT-reverse-HindIII配列番号12:5’-ACAGAAGCTTCTTAGCTCTCGTCACACTCTCCCAGGGTGTG-3’組換え大腸菌W3110pWKLHの培養組換え大腸菌W3110pWKLHの培養及び菌体の収集は、実施例2と同様に行った。組換えタンパク質であるウマ由来のH-アポフェリチン組換えウマH-アポフェリチンの精製菌体破砕して得られた無細胞抽出液の調製及び熱処理による夾雑タンパク質の除去を、実施例3と同様に行った。このときの純度は、45であり、培養液1L当たりで換算した収量は0.4gであった。続いて、陰イオン交換カラムHiload26/10QSepharoseHPGEヘルスケアジャパン社製による精製を実施例2と同様に行い、純度91.1の組換えウマH-アポフェリチンが得られ、その培養液1L当たりで換算した収量は0.2gであった。実施例5:大豆由来のアポフェリチンの生産生産菌の構築論文ProteinExpressionandPurification,2007年,56巻,p.237-246に記載のSFER1の成熟タンパク質のアミノ酸配列の情報を基に、データベースに登録されている大豆由来のフェリチンSFER1の構造遺伝子GenBankAccessionNo.BT097359から、N末端の48アミノ酸残基をコードする144塩基を削除し、メチオニン1残基をコードする3塩基を付加した構成を有する、大豆由来のアポフェリチンSFER1をコードする遺伝子を定法により人工合成した配列番号13。開始コドンのすぐ上流に、WSD配列を付加したPCR用プライマーSFT-forward-EcoRI配列番号14及びSFT-reverse-HindIII配列番号15を設計した。設計した2つのプライマーを用い、大豆由来のアポフェリチンSFER1をコードする合成した遺伝子を鋳型として、大豆由来のアポフェリチンSFER1をコードする遺伝子をPCRによって増幅した。PCRは、実施例3に記載したpWKLSの構築と同様の条件で行った。得られたDNA断片を、EcoRI及びHindIIIで消化し、プラスミドpKL223のtacプロモーターの下流に位置するEcoRI-HindIIIギャップに挿入することによりプラスミドpWKLSF1を構築した。作製されたプラスミドを大腸菌W3110株に導入し、組換え大腸菌W3110pWKLSF1を得た。用いたプライマーの塩基配列を以下に示す。SFT-forward-EcoRI配列番号14:5’-GTTGAATTCAGGAGGTATTATATGGCCTCAACGGTGCCTCTCTCAG-3’SFT-reverse-HindIII配列番号15:5’-ACAGAAGCTTCTAATCAAGAAGTCTTTGATCAAAGTGCCAAACACCG-3’組換え大腸菌W3110pWKLSF1の培養組換え大腸菌W3110pWKLSF1の培養及び菌体の収集は、実施例2と同様に行った。組換えタンパク質である大豆由来のアポフェリチンSFER1組換え大豆アポフェリチンSFER1の精製菌体破砕して得られた無細胞抽出液の調製及び熱処理による夾雑タンパク質の除去を実施例3と同様に行った。このときのSFER1の純度は、26であり、培養液1L当たりで換算した収量は0.4gであった。続いて、陰イオン交換カラムHiload26/10QSepharoseHPGEヘルスケアジャパン社製による精製を実施例2と同様に行い、純度94.3の組換え大豆アポフェリチンSFER1が得られ、その培養液1L当たりで換算した収量は0.2gであった。実施例6:cowpeachloroticmottlevirusCCMVのコートタンパク質の生産生産菌の構築データベースに登録されているCCMVのコートタンパク質の構造遺伝子GenBankAccessionNo.M28818を定法により人工合成した配列番号16。開始コドンのすぐ上流にWSD配列を付加したPCR用プライマーCCMV-forward-EcoRI配列番号17及びCCMV-reverse-HindIII配列番号18を設計した。設計した2つのプライマーを用いて、人工合成したCCMVコートタンパク質の構造遺伝子を鋳型として、CCMVコートタンパク質をコードする遺伝子をPCRによって増幅した。PCRは、実施例3に記載したpWKLSの構築と同様の条件で行った。得られたDNA断片を、EcoRI及びHindIIIで消化し、プラスミドpKL223のtacプロモーターの下流に位置するEcoRI―HindIIIギャップに挿入することによりプラスミドpKL-WCCMVを構築した。作製されたプラスミドを大腸菌W3110株に導入し、組換え大腸菌W3110pKL-WCCMVを得た。用いたプライマーの塩基配列を以下に示す。CCMV-forward-EcoRI配列番号17:5’-GTTGAATTCAGGAGGTATTATATGTCTACAGTCGGAACAGGGAAGT-3’CCMV-reverse-HindIII配列番号18:5’-ACAGAAGCTTCTAATACACCGGAGTGAAAGAGTCG-3’組換え大腸菌W3110pKL-WCCMVの培養組換え大腸菌W3110pKL-WCCMVを、終濃度50μg/mlのアンピシリンを添加した5mlのLB培地中、25°C、200rpmで一夜振とうすることにより培養し、シード培養液を調製した。シード培養液1.5mlを、3L容ミニジャーファーメンターBiott製を用いて、1.5Lのラクトース1を含む2×YT培地に添加し、25°C、通気量1vvm、撹拌数700rpmで培養を開始した。48時間後、遠心分離10,000×g、15分間、4°Cにより培養液から菌体を集め、500mlの50mMTris-HCl緩衝液pH8.0に菌体を懸濁した。再度遠心分離により菌体を集めて、洗浄菌体を調製した。組換えタンパク質であるコートタンパク質の精製実施例2と同様にして、洗浄菌体から無細胞抽出液を調製した。得られた無細胞抽出液に硫酸アンモニウムを終濃度1.4Mとなるように添加し、氷上で20分間撹拌することにより夾雑タンパク質を沈澱させ、遠心分離13,000×g、30分間、4°Cにより除去した。続いて、得られた上清に硫酸アンモニウムを終濃度2.1Mになるまで更に添加し、氷上で20分間撹拌することによって、組換えタンパク質であるCCMVのコートタンパク質を沈澱させた。遠心分離13,000×g、30分間、4°Cにより沈澱画分を集め、0.15M塩化ナトリウムを含む50mMTris-HCl緩衝液pH8.0に溶解した。限外ろ過膜VIVASPIN20、50,000cut、ザルトリウス社製で硫酸アンモニウムの除去と0.15M塩化ナトリウムを含む50mMTris-HCl緩衝液pH8.0への溶媒交換を行った。得られたコートタンパク質の純度は78であり、培養液1L当たりで換算した収量は0.2gであった。プラスミド及び大腸菌株の影響リステリアイノキュアListeriainnocuaのDpsをコードする塩基配列を、実施例2と同様にリステリアイノキュアListeriainnocuaATCCBAA-680株の染色体DNAを鋳型として、PCR用プライマーFLP-Forward-NdeI配列番号19及びFLP-reverse-BamHI配列番号20を用いてPCRによって増幅した。PCRは、実施例2に記載したpWKLFの構築と同様の条件で行った。得られたDNA断片を、NdeI及びBamHIで消化し、大腸菌発現用プラスミドpET20bNovagen社製のT7プロモーターの下流に位置するNdeI-BamHIギャップに挿入することにより、プラスミドpET20-flpを構築した。作製されたプラスミドを大腸菌BL21DE3株に導入し、組換え大腸菌BL21を得た。用いたプライマーの塩基配列を以下に示す。FLP-Forward-NdeI配列番号19:5’-GGAATTCCATATGAAAACAATCAACTCAGTAGACACAAAGG-3’FLP-Reverse-BamHI配列番号20:5’-CGCGGATCCCTTATTCTAATGGAGCTTTTCCAAGGAATGC-3’組換え大腸菌BL21を、終濃度50μg/mlのアンピシリンを添加した5mlのLB培地中で、37°Cに加温しながら、200rpmで一夜振とうすることにより培養し、シード培養液を調製した。このシード培養液25μlを、ラクトース系プロモーターの発現誘導試薬であるOverightExpressionKitNovagen製を添加した5mlの2×YT培地に移植して、37°Cに加温しながら、200rpmで培養した。実施例2で調製した組換え大腸菌W3110pWKLFも、同様に培養した。どちらの菌株も培養48時間でDpsの生産性が最大となったので、菌体破砕液無細胞抽出液を段階的に希釈して、SDS-PAGEによりその生産量を比較した。その結果を図2に示す。組換え大腸菌W3110pWKLFの生産性は、組換え大腸菌BL21の約20倍と推測された。熱処理による精製法の検討実施例2で調製した組換え大腸菌W3110pWKLFを、終濃度50μg/mlのアンピシリンを添加した5mlのLB培地中で、37°Cに加温しながら、200rpmで一夜振とうすることにより培養し、シード培養液を調製した。このシード培養液1.5mlを、3L容ミニジャーファーメンターBiott社製を用いて、1.5Lのラクトース1を含む2×YT培地に添加し、37°C、通気量1vvm、撹拌数400rpmの条件で培養を開始した。48時間後、遠心分離10,000×g、15分間、4°Cにより培養液から集めた菌体を、500mlの50mMTris-HCl緩衝液pH8.0に懸濁し、再度遠心分離により菌体を集めて、洗浄菌体を調製した。洗浄菌体を湿重量の5倍量の50mMTris-HCl緩衝液pH8.0に再懸濁し、超音波破砕器にて菌体を破砕した。破砕された菌体を含む懸濁液を遠心分離13,000×g、30分間、4°Cし、得られた上清を集めて、組換えリステリアDpsを含む無細胞抽出液を得た。この無細胞抽出液を60°C、70°C、又は80°Cで、20、40、又は60分間加熱した。続いて、遠心分離13,000×g、30分間、4°Cにより、熱変性によって生成した夾雑タンパク質の沈殿物を除去した。得られた精製DpsをSDS-PAGEにより解析した結果を図3に示す。培地の種類の検討組換え大腸菌W3110pWKLFを、終濃度50μg/mlのアンピシリンを添加した5mlのLB培地中で、37°Cに加温しながら、200rpmで一夜振とうすることにより培養し、シード培養液を調製した。LB培地、2×YT培地、及びTB培地ペプトン1.2、酵母エキス2.4、グリセロール0.04、KH2PO40.231、K2HPO41.254を準備した。各培地に、誘導因子として、ラクトース系プロモーターの発現誘導試薬であるOverightExpressionKitOE、Novagen製、又はラクトースを1若しくは2添加した。誘導因子未添加の培地も培養に用いた。上記のシード培養液25μlを、5mlの各培地に移植して、37°Cに加温しながら、200rpmで培養した。48時間培養して得られた菌体の無細胞抽出液をSDS-PAGEで解析した結果を図4に示す。ラクトース添加によりDpsの発現量が増大する傾向があり、なかでもLB培地及び2×YT培地、特に2×YT培地において、顕著な発現量が認められた。"