配列番号1で示されるアミノ酸配列又はその断片若しくは誘導体を含む、エンドリシン活性を有するポリペプチド。前記断片が、配列番号3及び/又は5で示されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のポリペプチド。前記誘導体が、配列番号1、3及び/又は5で示されるアミノ酸配列において欠失、付加、挿入及び又は置換を有するものである、請求項1又は2に記載のポリペプチド。前記ポリペプチドが、N又はC末端で、膜又はLPS破壊活性を有するペプチドストレッチに融合されている、請求項1~3に記載のポリペプチド。タグ、好ましくはHis6タグを更に含む、請求項1~4のいずれか1項に記載のポリペプチド。前記ポリペプチドが、配列番号7で示されるアミノ酸配列を含む、請求項5に記載のポリペプチド。請求項1~6のいずれか1項に記載のポリペプチドと、該ポリペプチドにN又はC末端で結合されたペプチドストレッチとを含む融合タンパク質であって、該ペプチドストレッチが、カチオン性ペプチド、ポリカチオン性ペプチド、両親媒性ペプチド、スシペプチド、ディフェンシン、疎水性ペプチド、及び/又は、抗微生物ペプチドであることを特徴とする、融合タンパク質。前記ペプチドストレッチが、約5~約100のアミノ酸残基、特に約5~50のアミノ酸残基、特に約5~30アミノ酸残基を含む、請求項7に記載の融合タンパク質。前記カチオン性及び/又はポリカチオン性ペプチドストレッチが、アルギニン、ヒスチジン及びリシン残基からなる群から選出される少なくとも1種のアミノ酸残基を含み、特に該ペプチドストレッチを構成するアミノ酸残基の少なくとも70が、アルギニン、ヒスチジン及び/又はリシン残基、特にアルギニン及び/又はリシン残基であることを特徴とする、請求項7又は8に記載の融合タンパク質。前記両親媒性ペプチドが、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、トレオニン、セリン、プロリン及びグリシン残基からなる群から選出される少なくとも1種の疎水性アミノ酸残基に結合された、リシン、アルギニン及びヒスチジン残基からなる群から選出される少なくとも1種の正電荷を帯びたアミノ酸残基を含み、特に両親媒性ペプチド中の少なくとも約70のアミノ酸残基が、アルギニン又はリシン残基のどちらかであり、両親媒性ペプチド中の少なくとも30のアミノ酸残基が、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、トレオニン、セリン、プロリン又はグリシン残基である、請求項7に記載の融合タンパク質。前記ペプチドストレッチが、配列番号14~19で示されるアミノ酸配列を含む、請求項7に記載の融合タンパク質。前記融合タンパク質が、配列番号13で示されるアミノ酸配列を含む、請求項7に記載の融合タンパク質。請求項1~6のいずれか1項に記載のポリペプチド、又は、請求項7~12のいずれか1項に記載の融合タンパク質をコードする、単離された核酸分子。請求項13に記載の核酸分子を含むベクター。請求項13に記載の核酸分子又は請求項14に記載のベクターを含む宿主細胞。ヒトの医療用、獣医学用医療用若しくは診断用物質としての、食品若しくは化粧料の抗菌剤としての、殺菌剤としての、又は、環境分野における使用のための、請求項1~6のいずれか1項に記載のポリペプチド、又は、請求項7~12のいずれか1項に記載の融合タンパク質。グラム陰性細菌の感染症を処置又は予防するための薬剤として使用するための、請求項1~6のいずれか1項に記載のポリペプチド、又は、請求項7~12のいずれか1項に記載の融合タンパク質。グラム陰性細菌による食材の汚染、食品加工装置の汚染、食品加工工場の汚染、食材と接触する表面の汚染、医療機器の汚染、病院や手術室における表面の汚染を処置又は予防するための、請求項1~6のいずれか1項に記載のポリペプチド、又は、請求項7~12のいずれか1項に記載の融合タンパク質の使用。請求項1~6のいずれか1項に記載のポリペプチド、又は、請求項7~12のいずれか1項に記載の融合タンパク質を含む、医薬組成物。本発明は、サルモネラエンテリティスSalmonellaenteritisファージPVPSE1から単離され、グラム陰性細菌に対する新規抗菌剤の調製に有用な、エンドリシン活性を有する新規ポリペプチドに関連する。本発明の第1の目的は、配列番号1で示されるアミノ酸配列又はその断片若しくは誘導体を含む、エンドリシン活性を有するポリペプチドを提供することである。配列番号1で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドは、好ましくは配列番号2で示される核酸配列によってコードされる。好ましい態様では、前記断片は、配列番号3及び/又は5で示されるアミノ酸配列を含み、これは好ましくは配列番号4及び/又は配列番号6で示される核酸配列によってそれぞれコードされる。もうひとつの好ましい態様では、前記誘導体は、配列番号1、3及び/又は5で示されるアミノ酸配列において欠失、付加、挿入及び又は置換を有する。もうひとつの好ましい態様では、本発明に係るポリペプチド又はその断片若しくは誘導体は、N又はC末端で、膜又はLPS破壊活性を有するペプチドストレッチ、特にカチオン性又はポリカチオン性ペプチドに融合されている。前記ポリペプチド、その断片若しくは誘導体、又は融合タンパク質は、タグ、好ましくはHis6タグを追加で含んでもよい。本発明の好ましい態様では、ポリペプチドは、配列番号7で示されるアミノ酸配列を含む。本発明のさらなる目的は、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、及び、該ポリペプチドにN又はC末端で結合されたペプチドストレッチを含む融合タンパク質であって、該ペプチドストレッチが、カチオン性ペプチド、ポリカチオン性ペプチド、両親媒性ペプチド、スシペプチド、ディフェンシン、疎水性ペプチド、及び/又は、抗微生物ペプチドであることを特徴とする、融合タンパク質に関連している。本発明の好ましい態様では、前記ペプチドストレッチが、約5~約100のアミノ酸残基、特に約5~50のアミノ酸残基、特に約5~30アミノ酸残基を含む。本発明のさらに好ましい態様では、前記カチオン性及び/又はポリカチオン性ペプチドストレッチが、アルギニン、ヒスチジン及びリシン残基からなる群から選出される少なくとも1種のアミノ酸残基を含み、特に該ペプチドストレッチ中のアミノ酸残基の少なくとも70が、アルギニン、ヒスチジン及び/又はリシン、特にアルギニン及び/又はリシン残基である。本発明の好ましい態様では、前記両親媒性ペプチドが、リシン、アルギニン及びヒスチジン残基からなる群から選出される少なくとも1種の正電荷を帯びたアミノ酸残基を含み、これはバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、トレオニン、セリン、プロリン及びグリシン残基からなる群から選出される少なくとも1種の疎水性アミノ酸残基に結合されており、特に両親媒性ペプチド中の少なくとも約70のアミノ酸残基が、アルギニン又はリシン残基のどちらかであり、両親媒性ペプチド中の少なくとも30のアミノ酸残基が、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、システイン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、トレオニン、セリン、プロリン又はグリシン残基である。本発明のさらに好ましい態様では、前記ペプチドストレッチが、配列番号14~19で示されるアミノ酸配列を含む。本発明の特に好ましい態様では、前記融合タンパク質が、配列番号13で示されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする。本発明のさらなる目的は、請求項13に記載の核酸分子を含むベクターに関連する。本発明のさらなる目的は、本発明に係るポリペプチド、その断片若しくは誘導体、又は融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供することである。本発明のさらなる目的は、本発明に係る核酸分子を含むベクターに関連する。本発明のさらなる目的は、本発明に係る核酸分子又は本発明に係るベクターを含む宿主細胞に関連する。本発明のさらなる目的は、ヒトの医療用、獣医学用医療用若しくは診断用物質として、食品若しくは化粧料の抗菌剤として、殺菌剤として、又は、環境分野において使用するための、本発明に係るポリペプチド、その断片若しくは誘導体、又は、本発明に係る融合タンパク質に関連する。好ましい態様では、本発明に係るポリペプチド、その断片若しくは誘導体、又は融合タンパク質は、グラム陰性細菌の感染症を処置又は予防するための薬剤の製造において使用される。他の好ましい態様は、グラム陰性細菌による食材の汚染、食品加工装置の汚染、食品加工工場の汚染、食材と接触する表面の汚染、医療機器の汚染、病院や手術室における表面の汚染を処置又は予防するための、本発明に係るポリペプチド、その断片若しくは誘導体、又は融合タンパク質の使用に関連する。本発明のさらに好ましい態様は、本発明に係るポリペプチド又は本発明に係る融合タンパク質を含む医薬組成物に関連する。説明定義:本明細書に表示されている場合には、次の用語は以下に設定される定義を有すべきものである。本明細書で用いられる用語タンパク質は、同義的にポリペプチドという用語を指す。本明細書で用いられている用語タンパク質は、特定の配列でペプチド結合により連結されたアミノ酸残基の直線状ポリマーを指す。該アミノ酸残基は、例えば、糖やリン酸などの種々の基の共有結合によって改変されてもよい。ヘム又は脂質のような他の物質がより緩やかにポリペプチド鎖と会合してもよく、そうすると、本明細書で用いられる用語タンパク質にまた包含される複合タンパク質を生じる。ポリペプチド鎖が折り畳む種々の様式、とりわけαヘリックス及びβプリーツシートに関して明らかにされている。本明細書で用いられる用語タンパク質は、全α、全β、α/β及びαプラスβの4つのすべての種類のタンパク質を指す。本明細書で用いられている用語融合タンパク質は、2つの核酸配列の融合によって生じる発現産物を指す。そのようなタンパク質は、例えば組換えDNA発現システムにおいて、生産されてもよい。さらに、本明細書において用いられる用語融合タンパク質は、例えばエンドリシンのような第一のアミノ酸配列と第二の又はさらなるアミノ酸配列との融合物を指す。該第二の又はさらなるアミノ酸配列は、好ましくはペプチドストレッチ、特にカチオン性ペプチド又はポリカチオン性ペプチドである。好ましくは、該第二の及び/又はさらなるアミノ酸配列は、第一のアミノ酸配列のどのドメインに対しても異質であり、実質的に相同でない。本明細書で用いられる用語ペプチドストレッチは、エンドリシンのようなタンパク質に連結される任意の種類のペプチドを指す。しかしながら、本発明の意味におけるペプチドストレッチは、His6タグ、Strepタグ、Aviタグ、Mycタグ、Gstタグ、JSタグ、システインタグ、FLAGタグ、若しくは、当技術分野において公知の他のタグ、チオレドキシン又はマルトース結合タンパク質MBPを指さない。本明細書で用いられる用語ペプチドストレッチと対照的に、用語タグは、ポリペプチドの発現及び/又はアフィニティー精製の手助け、ポリペプチドの表面への固定、又は、例えば、タグを上に列挙される用途のうちの1つに有用なものとする機能がペプチドの正電荷によって引き起こされるものではない限りは、種々のELISA解析形式における抗体結合によって検出されるようなポリペプチドのマーカー若しくは標識部分としての役割において有用であり得るようなペプチドを指す。しかしながら、His6タグは、個別のpHに依存して正に荷電されることもあるが、固定化された二価カチオンに結合することから、アフィニティー精製の手段として利用され、本発明によるペプチドストレッチとしては使用されない。本明細書で用いられる用語ペプチドは、約2~約100アミノ酸残基、より好ましくは約4~約50アミノ酸残基、さらに好ましくは約5~約30アミノ酸残基からなる短いポリペプチドを指し、一方のアミノ酸残基のアミノ基は他方のアミノ酸残基のカルボキシル基とペプチド結合で連結する。ペプチドは特定の機能を有していてもよい。ペプチドは、天然に存在するペプチド、又は、合成的に設計され生産されるペプチドであり得る。該ペプチドは、例えば、酵素的又は化学的切断によって天然タンパク質から由来又は除去され得るか、従来のペプチド合成技術例えば、固相合成又は分子生物学的技術SambrookJetalMolecularCloningALaboratoryManualColdSpringHarborPressColdSpringHarborNYを参照を用いて調製され得る。本明細書で用いられる用語エンドリシンは、細菌細胞壁を加水分解するのに適している酵素を指す。エンドリシンは、少なくとも1つの酵素的活性ドメインEADを含み、これは次の活性、すなわち、エンドペプチダーゼ、NアセチルムラモイルLアラニンアミダーゼアミダーゼ、Nアセチルムラミダーゼ、Nアセチルグルコサミニダーゼリゾチーム又はトランスグリコシラーゼのうち少なくとも1つの活性を有する。加えて、エンドリシンはまた、酵素的に不活性で宿主細菌の細胞壁に結合する領域、いわゆるCBD細胞壁結合ドメインを含んでもよい。該エンドリシンは、2又はそれ以上のCBDを含んでもよい。しかしながら、本明細書で用いられる用語エンドリシンはまた、少なくとも1つのEADを有するがCBDを有さない酵素も指す。一般に、細胞壁結合ドメインは、細菌表面の様々な構成要素に結合することができる。好ましくは、細胞壁結合ドメインは、ペプチドグリカン結合ドメインであり、細菌のペプチドグリカン構造に結合する。エンドリシンの異なるドメインは、ドメインリンカーによって連結され得る。本明細書で用いられる用語ドメインリンカーは、単独のタンパク質ドメインを互いに連結するように機能するアミノ酸配列を指す。通例、ドメインリンカーは、αヘリックス又はβシートのような規則的な二次構造を形成しないか、わずかしか形成せず、それぞれの構造コンテクストとは異なる立体配座を占める。ドメインリンカーを検出する方法およびリンカー配列の特性は、例えば、Baeetal2005Bioinformatics2122642270又はGeorgeHeringa2003ProteinEngineering15871879に記載されているように、当技術分野において周知である。本明細書で用いられる用語野生型又はwtは、配列番号1で示されるエンドリシンPVPSE1gp146のアミノ酸配列を指す。野生型エンドリシンPVPSE1gp146をコードする核酸配列は、配列番号2で示される。本明細書で用いられる用語欠失は、1、2、3、4、5又はそれ以上のアミノ酸若しくは核酸残基を、それぞれの当初の配列から除去することを指す。本明細書で用いられる用語挿入又は付加は、1、2、3、4、5又はそれ以上のアミノ酸若しくは核酸残基を、それぞれの当初の配列に挿入又は付加することを指す。本明細書で用いられる用語置換は、ある部位に配置されたアミノ酸残基を他のものと交換することを指す。本明細書で用いられる用語細胞壁は、グラム陰性細菌の細胞の外の囲いを形成しそれらの完全性を保証するすべての構成要素を指す。特に、本明細書で用いられる用語細胞壁は、ペプチドグリカン、リポポリ多糖を有するグラム陰性細菌の外膜、細菌細胞膜を指すが、例えば莢膜、外側のタンパク質層又は粘液のような、ペプチドグリカンの上にある追加的な層も指す。本明細書で用いられる用語EADは、エンドリシンの酵素的活性ドメインを指す。該EADは、細菌のペプチドグリカンの加水分解に関与している。これは、エンドリシンの少なくとも1つの酵素活性を呈する。EADはまた、1つより多い酵素学的活性モジュールを含み得る。本明細書で用いられる用語EADは、触媒ドメインと同義である。本発明は、サルモネラエンテリティスファージPVPSE1から単離され、グラム陰性細菌に対する新規抗菌剤の調製に有用な、新しいモジュールのエンドリシンに関連する。特に本発明は、配列番号1で示されるアミノ酸配列又はその断片若しくは誘導体に関連する。配列番号1で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドは、好ましくは配列番号2で示される核酸配列によってコードされる。配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するエンドリシンPVPSE1gp146は、236アミノ酸の鎖長を有する。それは、N末端細胞壁結合ドメインCBD及びC末端酵素的活性ドメインEADを含む。N末端CBDは、配列番号3で示されるアミノ酸配列及び配列番号4で示される核酸配列を有するペプチドグリカン結合ドメインPGB、aa3~39。C末端EADは、リゾチーム様スーパーファミリーの触媒ドメインに適応しており配列番号5で示されるアミノ酸配列及び配列番号6で示される塩基配列を有する触媒ドメインaa81~234である。PGB及びエンドリシンPVPSE1gp146の触媒ドメインは、ドメインリンカーにより連結される。そして、本発明に係るポリペプチドの好ましい断片は、配列番号3及び/又は配列番号5で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。本発明に係る誘導体は、配列番号1、3及び/又は5で示されるアミノ酸配列を含むが追加の改変及び/又は変更も有するポリペプチドである。本発明に係るエンドリシンの誘導体の前記改変及び/又は変更のある態様は、変異、特に欠失、挿入、付加、置換若しくはそれらの組み合わせ、及び/又は、例えばビオチン化、アセチル化、ペグ化、若しくは、アミノ基、SH基、カルボキシル基の化学変化のような残基の化学変化である。本発明に係る該誘導体は、PVPSE1gp146配列番号1の溶解活性及び/又は本発明の断片の活性を示す。該活性は、PVPSE1gp146の活性及び/又は本発明の断片の活性の、約10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190又は約200であり得る。該活性は、例えば、BriersetalJBiochemBiophysMethods70531533に記載されているようなプレート溶解アッセイや液体溶解アッセイなどの、当技術分野において当業者に周知の解析法によって測定され得る。本発明のある好ましい態様では、本発明に係るポリペプチド、断片及び/又は誘導体は、His6タグ、Strepタグ、Aviタグ、Mycタグ、Gstタグ、JSタグ、システインタグ、FLAGタグ又は他の当技術分野で公知のタグ、のようなタグをN末端又はC末端に追加で含む。本発明のある好ましい態様では、該タグは、本発明のポリペプチド、断片及び/又は誘導体にC末端で連結される。該タグは、追加のアミノ酸残基の向こうで、前記ポリペプチド、断片及び/又は誘導体に連結されてもよい。該追加のアミノ酸残基は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個の追加のアミノ酸残基からなってもよい。本発明のある好ましい態様では、該タグは、LeuGlu又はLysGlyという追加のアミノ酸残基によって、本発明のポリペプチド、断片及び/又は誘導体にC末端で連結される。本発明のある好ましい態様は、配列番号7で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドに関連する。配列番号7で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドは、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドとそれぞれ比較すると、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドのC末端に、追加のアミノ酸残基であるリシン及びグリシンLysGlyによって連結された追加のC末端His6タグを含む。加えて、BamHI制限酵素部位が、部位2及び3に導入された。配列番号7で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドは、好ましくは配列番号8で示される塩基配列にコードされる。本発明のさらなる側面は、本発明に係るポリペプチド、断片及び/又は誘導体、並びに、それらのN又はC末端に前記エンドリシンのグラム陰性細菌に対する活性を増強するために融合された、膜破壊又はLPS破壊活性有するペプチドストレッチを含む融合タンパク質である。好ましくは、該ペプチドストレッチは、参照することにより全体として本明細書に組み込まれるWO2010023207に示されるカチオン性ペプチド及び/又はポリカチオン性ペプチドである。本発明に係る融合タンパク質のペプチドストレッチは、本発明に係るポリペプチド、断片及び/又は誘導体に好ましくは共有結合で連結される。好ましくは、該ペプチドストレッチは少なくとも5、より好ましくは少なくとも6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99又は少なくとも100個のアミノ酸残基からなる。特に好ましいものとしては、約5~約100個のアミノ酸残基、約5~約50個又は約5~約30個のアミノ酸残基を含むペプチドストレッチである。より好ましいものとしては、約6~約42個のアミノ酸残基、約6~約39個のアミノ酸残基、約6~約38個のアミノ酸残基、約6~約31個のアミノ酸残基、約6~約25個のアミノ酸残基、約6~約24個のアミノ酸残基、約6~約22個のアミノ酸残基、約6~約21個のアミノ酸残基、約6~約20個のアミノ酸残基、約6~約19個のアミノ酸残基、約6~約16個のアミノ酸残基、約6~約14個のアミノ酸残基、約6~約12個のアミノ酸残基、約6~約10個のアミノ酸残基、又は約6~約9個のアミノ酸残基を含むペプチドストレッチである。好ましくは、ペプチドストレッチは、His6タグ、Strepタグ、Aviタグ、Mycタグ、Gstタグ、JSタグ、システインタグ、FLAGタグ、又は、当技術分野で公知の他のタグではなく、チオレドキシンやマルトース結合タンパク質MBPでもない。しかしながら、ペプチドストレッチは、そのようなタグ又は複数のタグなどを追加で含んでもよく、それらはタンパク質の精製又は場所の特定のために利用される。本発明はさらに、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質をコードする単離された核酸分子に関連する。本発明に係る特に好ましい単離された核酸分子は、配列番号2、4、6又は8で示される核酸配列を含む。本発明はさらに、本発明に係る核酸分子を含むベクターに関連する。該ベクターは、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質の構成的又は誘導性発現を与える。本発明はまた、該ポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質を発現する遺伝的に改変された適切な宿主細胞のような微生物から、該ポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質を得る方法に関連する。該宿主細胞は、細菌若しくは酵母のような微生物、又は、例えば哺乳類細胞、特にヒト細胞のような動物細胞であってもよい。本発明のある態様では、宿主細胞は大腸菌細胞である。宿主は、例えば収量、溶解性、コストなどの単なる生物工学的理由によって選ばれてもよいが、例えば非病原性細菌若しくは酵母又はヒト細胞などの医学的見地から選ばれてもよい。本発明の他の側面は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質の発現を達成するために適切な宿主細胞に遺伝的に形質変換する方法に関連し、ここで宿主細胞は、該ポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質をコードする遺伝物質を該宿主細胞に導入することで遺伝的に改変され、当業者に周知の遺伝子工学的手法によって、それらの翻訳及び発現が達成される。本発明のさらなる側面は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/又は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸分子若しくはベクターで形質変換された宿主を含む、組成物、好ましくは医薬組成物に関連する。本発明の好ましい態様では、該組成物は、例えばEDTA、TRIS、酪酸、ラクトフェリン、ポリミキシン、クエン酸のような金属キレート剤、及び/又は、例えばVaaraによって記述されている他の物質AgentsthatincreasethepermeabilityoftheoutermembraneVaaraMMicrobiolRev1992Sep56395441のような、グラム陰性細菌の外膜を透過処理する薬剤を追加で含む。同様に好ましいのは、上述の透過処理剤を組み合わせて含む組成物である。特に好ましいのは、約10μM~約100mMEDTA、よりこの好ましくは約50μM~約10mMEDTA、より好ましくは約05mM~約10mMEDTA、より好ましくは約05mM~約2mMEDTA、より好ましくは約05mM~約1mMEDTAを含む組成物である。同様に好ましいのは、約05mM~約2mMEDTA、より好ましくは約1mMEDTA及び追加で約10~約100mMTRISを含む組成物である。本発明はまた、薬剤として使用するための、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/又は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸分子で形質転換された宿主に関連する。さらなる側面では、本発明は、グラム陰性細菌と関連する障害、疾患又は状態の処置及び/又は予防のための薬剤の製造における、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/又は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換された宿主の使用に関連する。とりわけ、エンテロバクター科エシュリキア属Escherichia、特に大腸菌、サルモネラ属Salmonella、シゲラ属Shigella、シトロバクター属Citrobacter、エドワードシエラ属Edwardsiella、エンテロバクター属Enterobacter、ハフニア属Hafnia、クレブシエラ属Klebsiella、特にKニューモニエKpneumoniae、モルガネラ属Morganella、プロテウス属Proteus、プロビデンシア属Providencia、セラチア属Serratia、エルシニア属Yersinia、シュードモナス科Pseudomonadaceaeシュードモナス属Pseudomonas、特にPエルギノーサ、バークホルデリア属Burkholderia、ステノトロホモナス属Stenotrophomonas、シェワネラ属Shewanella、スフィンゴモナス属Sphingomonas、コマモナス属Comamonas、ナイセリア属Neisseria、モラクセラ属Moraxella、ビブリオ属Vibrio、アエロモナス属Aeromonas、ブルセラ属Brucella、フランシセラ属Francisella、ボルデテラ属Bordetella、レジオネラ属Legionella、バルトネラ属Bartonella、コクシエラ属Coxiella、ヘモフィルス属Haemophilus、パスツレラ属Pasteurella、マンヘミア属Mannheimia、アクチノバチルス属Actinobacillus、ガードネレラ属Gardnerella、スピロヘータ科Spirochaetaceaeトレポネーマ属Treponema及びボレリア属Borrelia、レプトスピラ科Leptospiraceae、カンピロバクター属Campylobacter、ヘリコバクター属Helicobacter、スピリルム属Spirillum、ストレプトバチルス属Streptobacillus、バクテロイデス科Bacteroidaceaeバクテロイデス属Bacteroides、フゾバクテリウム属Fusobacterium、プレボテラ属Prevotella、ポルフィロモナス属Porphyromonas、アシネトバクター属Acinetobacter、特にAバウマニAbaumaniiのようなヒトまたは動物にとって病原性である株を含むグラム陰性細菌の細菌群、科、属又は種によって引き起こされ得る障害、疾患又は状態の処置及び/又は予防のためのものであってもよい。特に、シュードモナスエルギノーサ、シュードモナスプチダputida、バークホルデリアシュードマレイpseudomallei、大腸菌及び/又はネズミチフス菌によって引き起こされ得る障害、疾患又は状態の処置及び/又は予防のためのものであってもよい。本発明はさらに、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/又は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸分子で形質転換された宿主を含む薬剤に関連する。本発明のさらなる側面は、処置及び/又は予防が必要な対象において障害、疾患又は状態を処置する方法に関連し、該方法は、有効量の本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/又は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸で形質転換された有効量の宿主を、前記対象に投与することを含むことを特徴とする。対象はヒト又は動物であってもよい。特に、処置の方法は、グラム陰性細菌、特に上に列挙したグラム陰性細菌によって引き起こされた、皮膚、軟組織、呼吸器系、肺、消化管、眼、耳、歯、鼻咽頭、口、骨、膣の感染症、菌血症の創傷、及び/又は心内膜炎の処置及び/又は予防のためのものであってもよい。本発明に係る処置又は予防の方法において用いられる投与量及び投与経路は、処置される感染の特定の疾患/部位に依存する。投与経路は、例えば、経口的、局所的、鼻咽頭内、非経口的、静脈内、直腸内、又は任意の他の投与の経路であってもよい。本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/又は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸で形質転換された有効量の宿主を、感染部位又は感染する危険にさらされた部位に適用するために、活性化合物が感染部位に到達するまで、それをプロテアーゼ、酸化、免疫応答などの環境の影響から保護する製剤が用いられてもよい。したがって、製剤は、カプセル、糖衣錠、丸剤、坐剤、注射可能な溶液、又は任意の他の医学的に妥当なガレノス製剤であってもよい。好ましくは、ガレノス製剤は、適当な担体、安定剤、着香料、緩衝剤、又は他の適当な試薬を含んでもよい。例えば、局所適用のために、製剤は、ローション又は硬膏であってもよく、鼻咽頭適用のために、製剤は、噴霧器を介して鼻に適用される生理食塩水溶液であってもよい。好ましくは、処置又は予防される感染症が、多剤耐性細菌株、特に1つ又は複数の以下の抗生物質、ストレプトマイシン、テトラサイクリン、セファロチン、ゲンタマイシン、セフォタキシム、セファロスポリン、セフタジジム、又はイミペネムに対して耐性の株によって引き起こされる場合、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質は、医学的処置のために用いられる。さらに、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質は、抗生物質、ランチビオティック、バクテリオシン、又はエンドリシンなどの従来の抗細菌剤と組み合わせて投与することによって、処置の方法において使用され得る。本発明はまた、1又はそれ以上の区画を含む医薬包装物に関連しており、少なくとも1つの該区画は、1若しくはそれ以上の本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/若しくは、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸で形質転換された1若しくはそれ以上の宿主、又は、本発明に係る組成物を含む。他の側面では、本発明は、医薬組成物を調製する工程に関連しており、該工程は、1若しくはそれ以上の本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質、並びに/又は、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/若しくは融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸で形質転換された1若しくはそれ以上の宿主を、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又は担体と混合することを含む。またさらなる側面では、本発明に係る組成物は、化粧料組成物である。いくつかの細菌種は、皮膚などの患者の身体の環境に曝露される表面上に刺激を引き起こし得る。そのような刺激を予防するため、又は、細菌性病原体の軽微な症状発現を排除するために、既に存在するか又は新しく定着する病原性グラム陰性細菌を分解するのに十分な量の本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質を含む、特別な化粧料組成物が用いられてもよい。さらなる側面では、本発明は、医薬、食品若しくは飼料における診断手段又は環境診断器、とりわけグラム陰性細菌によって引き起こされる細菌感染の診断手段として特に使用するための、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質に関連する。この点においては、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質は、病原性細菌、特にグラム陰性病原性細菌を特異的に分解するための手段として用いられてもよい。本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質による細菌細胞の分解は、TritonX100のような界面活性剤、又は、ポリミキシンBのような細菌細胞のエンベロープを弱める他の添加剤を加えることによって支援され得る。特異的な細胞分解は、PCR、核酸ハイブリダイゼーション、若しくはNASBA核酸配列ベース増幅NucleicAcidSequenceBasedAmplificationのような核酸に基づく方法、IMS、免疫蛍光法、若しくはELISA技術のような免疫学的方法、又は、別個の細菌群若しくは種に特異的なタンパク質例えば、エンテロバクテリアについてβガラクトシダーゼ、コアグラーゼ陽性株についてコアグラーゼを使用する酵素学的解析法のような細菌細胞の細胞内容物に依存する他の方法を用いてその後に細菌を特異的に検出するための初期段階として、必要とされる。さらなる側面では、グラム陰性細菌による食材の汚染、食品加工装置の汚染、食品加工工場の汚染、棚及び食品貯蔵領域、並びに病原性、条件的病原性、又は他の望ましくない細菌が潜在的に食材に感染する他のすべての場所のような食材と接触する表面の汚染、医療機器の汚染、病院や手術室における表面の汚染を処置又は予防するための、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質の使用に関連する。特に、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質は、殺菌剤とし予防的に用いられてもよい。該殺菌剤は、手術の前若しくは後、又は、例えば血液透析の間に使用されてもよい。さらに、早産児及び免疫不全者又は補綴装置を必要とする対象が、本発明に係る融合タンパク質で処置されてもよい。該処置は、予防的又は急性感染の間であってもよい。同じ事情で、特に、シュードモナスエルギノーサFQRP、アシネトバクター属の種、並びに、大腸菌、サルモネラ属、シゲラ属、シトロバクター属、エドワードシエラ属、エンテロバクター属、ハフニア属、クレブシエラ属、モルガネラ属、プロテウス属、プロビデンシア属、セラチア属、及びエルシニア属などのエンテロバクター科の種のような抗生物質耐性株による院内感染が、本発明のポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質で、予防的又は急性感染の間に処置されてもよい。したがって、本発明に係るポリペプチド、断片、誘導体及び/又は融合タンパク質は、界面活性剤、テンシドtensids、溶媒、抗生物質、ランチビオティクス、又はバクテリオシンのような消毒溶液として有用な他の成分と組み合わせて、消毒剤としても用いられてもよい。以下の実施例は、本発明を説明するが、本開示又は添付の特許請求の範囲を限定するものとは見なされない。異なって示されない限りは、例えば、Sambrocketal1989MolecularCloningALaboratoryManual2ndeditionColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYorkに記載されているような、分子生物学の標準の方法が用いられた。実施例1:PVPSE1gp146及びそのN末端PK融合型変異体PKPVPSE1gp146サルモネラエンテリティディスSalmonellaenteritidisファージPVPSE1及びそのN末端PK融合型変異体PKPVPSE1gp146のモジュールのエンドリシンPVPSE1gp146のクローニング、発現、及び精製PVPSE1gp146236アミノ酸長、MW=25325Daは、サルモネラエンテリティディスファージPVPSE1に由来するモジュールのエンドリシンであり、N末端ペプチドグリカン結合ドメインアミノ酸3~39及びリゾチーム様スーパーファミリーのC末端触媒キチナーゼドメインアミノ酸81~234を有していると推定される図1参照。ファージPVPSE1SSantos博士、UniversidadedoMinho、Braga、Portugal、より取得の精製されたゲノムDNAが、PfuポリメラーゼFermentas、Ontario、Canadaによる標準的なPCR反応において、エンドリシンPVPSE1gp146をコードするオープンリーディングフレームORF146を増幅するための鋳型として用いられた。以下のPCRパラメーターが用いられた。このPCRのためのフォワードプライマープライマー1及びリバースプライマープライマー2は、表1に示されている。表1-ORF146標準的なPCR増幅及びORF146へのN末端PKタグの付加のための尾部tailPCRにおいて用いられたプライマーポリカチオン性9merペプチドLysArgLysLysArgLysLysArgLysをコードする遺伝子断片でORF146の5末端を伸長するために、伸長された5プライマープライマー3、配列番号11、表1及び標準の3プライマープライマー2、配列番号10、表1を用いた尾部PCR上述の標準的なPCRと同じパラメーターに従ってが行われた。そして、得られた両PCR産物は、メーカーから提供されているTAクローニングプロトコールに従って、市販のpEXP5CTTOPO登録商標発現ベクターInvitrogen、Carlsbad、CA、USAに連結され、エンドリシンORFタンパク質の3C末端側と精製に必要な6xヒスチジンタグとが融合された。組換え型PVPSE1gp146及びPKPVPSE1gp146エンドリシンについて、得られたDNA及びアミノ酸配列は、配列番号7組換え型PVPSE1gp146のアミノ酸配列、配列番号8組換え型PVPSE1gp146のヌクレオチド配列、配列番号12組換え型PKPVPSE1gp146のDNA配列、及び配列番号13組換え型PKPVPSE1gp146のアミノ酸配列に示されている。PVPSE1gp146PKPVPSE1gp146の組換え体の発現は、1mMIPTGイソプロピルチオガラクトシドを用いて16°Cで一晩誘導した後に、指数関数的に増殖している大腸菌BL21λDE3pLysS細胞において行われた。そして、エンドリシンは、pEXP5CTTOPO登録商標発現ベクターにコードされたC末端の6xHisタグを利用したNi2アフィニティークロマトグラフィーAktaFPLC、GEHealthcareによって精製された。Ni2アフィニティークロマトグラフィーは、すべて室温で次の4段階により行われた。1HistrapHP1mlカラムGEHealthcareを、10カラム容量の洗浄バッファー70mMイミダゾール、05mMNaCl及び20mMNaH2P04NaOH、pH74により05ml分の流速で平衡化。2全溶解物所望のエンドリシンを含むを、HistrapHP1mlカラムに05ml分の流速で添加。315カラム容量の洗浄バッファーにより1ml分の流速で洗浄。4結合したエンドリシンを、10カラム容量の溶出バッファー500mMイミダゾール、5mMNaCl及び20mMNaH2P04NaOH、pH74により05ml分の流速でカラムから溶出。組換え型PVPSE1gp146PKPVPSE1gp146の精製における収量は、表2に示されている。タンパク質の濃度は、280nmの波長での分光光度法により決定された。溶出バッファー20mMNaH2P04NaOHpH74、05MNaCl、500mMイミダゾール中の両タンパク質の精製されたストック溶液は、SDSPAGEゲル上で視覚的に判定されたところによると、純度90以上であった図2。表2-280nmでの分光光度測定によって決定された、大腸菌発現培養液1リットルあたりの精製された組換え型PVPSE1gp146PKPVPSE1gp146エンドリシンの収量。PK改変型変異体の収量は、非改変型PVPSE1gp146の約2倍高く、タンパク質発現におけるPKタグの安定化効果が明らかにされる。実施例2:サルモネラエンテリティスファージのエンドリシンPVPSE1gp146の生物化学的ムラリティック活性の特性評価及び定量ムラリティック活性の定量のため、エンドリシン活性に増感するように、外膜を透過処理されたPエルギノーサPAO1krylovVKrylov教授、theStateInstituteforGeneticsofIndustrialMicroorganisms、1stDorozhniiproezd1、113545Moscow、Russia、より取得したPAO1Krylovの細胞基質が用いられた。この基質の接近の存在下で、溶出バッファー中でのPVPSE1gp146の酵素活性の飽和曲線が作成され、異なるエンドリシン濃度nMで表現されるの範囲における機能としてペプチドグリカン分解活性1分あたりのOD655nmの低下で表現されるが示されている図3。測定は、73のpH及び80mMのイオン強度における酵素活性に最適なKH2PO4K2HPO4緩衝液中に溶解された基質を用いて、トリプリケートで行われた。この飽和曲線の直線部分に最適な線形回帰の傾きが、Chengetal及びBriersetalによる酵素活性の定義の適合バージョンである次式に従ったムラリティック活性値の決定のために用いられた。前記式を用いると、溶出バッファー中に溶解された場合に、PVPSE1gp146は15005330単位mMのムラリティック活性値を有している。実施例3:サルモネラエンテリティディスファージPVPSE1のエンドリシンへのN末端抗菌ペプチドの融合1抗菌タグ融合PVPSE1gp146構成物のクローニング、発現及び精製抗グラム陰性活性を高め、細菌宿主の範囲を広げるために、PVPSE1gp146は、一連の天然抗菌ペプチドタグ表3に示されるにN末端で融合された。これらのタグは、両親媒性、疎水性又はポリカチオン性特性及び短い長さに基づいて、選定又は開発された。このリストは、昆虫、両生類又は魚由来でグラム陰性株に効果的に作用することが証明されている文献公知の多数の選ばれた抗菌ペプチドを含んでおり、3つは設計された抗菌タグである。図4は、改変型tagPVPSE1gp146変異体の推定二次元モジュラー構造を説明している。表3-PVPSE1gp146に融合される抗菌ペプチドタグのリストペンタペプチドPPタグを除き、すべての抗菌ペプチドタグは、ライゲーション非依存性クローニングLIC技術Berrowetal2007Aversatileligationindependentcloningmethodsuitableforhighthroughputexpressionscreeningapplicationsの適合バージョンを利用して、PVPSE1gp146をコードするORFに融合された。したがって、唯一のEcl136II制限酵素部位が、ファージOBPの純粋なゲノムDNA上において、特異的である設計された5’フォワードプライマーGGAATGGGGAGCTCCTCCAATGCTGCAATTGCGGAGAT、配列番号30及び標準のPVPSE1gp146リバースプライマーCGAGGTTAGAACAGATTTTGCCT、配列番号10を用いて尾部PCRを行うことによって、PVPSE1gp146をコードする遺伝子の前に挿入された。そして、この伸長断片は、メーカーのTAクローニングプロトコールに従って、pEXP5CTTOPO登録商標発現ベクターInvitrogen、Carlsbad、CA、USAに連結された。純粋なプラスミドは、Ecl136II制限酵素消化により一度切断され、ハイブリッド形成されたペプチドカセットプライマーペアのハイブリダイゼーションにより作製されたもの、表4参照が、ライゲーション段階を要さずに該切断プラスミド中に挿入された。N末端ペンタペプチドタグの融合のためには、このペンタペプチドをコードする伸長された5プライマーATGGGATCCTTCTTCGTAGCACCGGGCTCCTCCAATGCTGCAAT、配列番号31、下線部はペンタペプチドを用いた尾部PCRが、精製pEXP5CTPKOBPgpLysプラスミドDNAに対して適用された。発現ベクターに断片が正確に挿入されていることは、構成物を適切な大腸菌BL21pLysS発現株中に導入する前に、配列解析によって検証された。表4-PVPSE1gp146への融合前の抗菌ペプチドタグのハイブリダイゼーションのために用いられたプライマー標準的な発現が、溶原培地LB中、1mMイソプロピルβDチオガラクトピラノシドで誘導された指数関数的に増殖している細胞OD600nm=06において行われた。改変型エンドリシンの可溶性発現レベルを最適化するために、温度、時間及び発現株のような発現パラメーターは、タンパク質特異的な基準で変化した表5参照。精製のために、発現培養液500~600mlの細胞は収集され4500rpm、30分、4°C、125容量の溶解バッファー10mMイミダゾール、20mMNaH2PO4、05MNaCl、pH74中に再懸濁された。この懸濁液は、超音波処理VibraCellTM、Sonics、Dandurry、CT、USAにより、8x30s、振幅40の前に3回凍結/誘拐され、045及び022μmDuraporeメンブレンフィルターMillipore、Billerica、MA、USAを通してろ過された。Hisタグ付加癒合タンパク質の精製は、メーカーの説明書に従い、Ni2アフィニティークロマトグラフィーHisTrapHP1mlカラム、GEHealthcare、Buckinghamshire、UKを利用したワンステッププロトコールによって行われた。Ni2アフィニティークロマトグラフィーは、すべて室温で次の4段階により行われた。1HistrapHP1mlカラムGEHealthcareを、10カラム容量の洗浄バッファータンパク質に依存的な量のイミダゾール60~70mM、05mMNaCl及び20mMNaH2P04NaOH、pH74により05ml分の流速で平衡化。2全溶解物所望のエンドリシンを含むを、HistrapHP1mlカラムに05ml分の流速で添加。315カラム容量の洗浄バッファーにより1ml分の流速で洗浄。4結合したエンドリシンを、10カラム容量の溶出バッファー500mMイミダゾール、5mMNaCl及び20mMNaH2P04NaOH、pH74により05ml分の流速でカラムから溶出。洗浄バッファーは、タンパク質のより高い純度を確保するために、タンパク質特異的な基準で変化する低濃度のイミダゾールを含んだ表5参照。大腸菌発現培養液1リットルあたりの組換えタンパク質の全収量もまた、表5に示されている。値は、精製されたストック溶液のタンパク質濃度及び総容積の波長280nmでの分光光度測定によって決定された。精製されたストック溶液は、SDSPAGEゲル上で視覚的に判定されたところによると、少なくとも90の純度であったデータは示さず。2N末端タグ融合型PVPSE1gp146変異体のinvitroでの抗菌活性抗菌タグの融合によってPVPSE1gp146のinvitro抗菌活性に対してプラスの効果がもたらされるか決定するために、いくつかのN末端タグ融合型PVPSE1gp146変異体が、2種類の異なるグラム陰性細菌に対して試験された。すなわち、Artilys2PVPSE1gp146及びLycotox1PVPSE1gp146について、大腸菌XL1blue及び食品病原体であるネズミチフス菌LT2に対する効果が試験された。それらの抗菌特性を最適化するために、外膜透過処理剤であるエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムEDTANa2が少量添加された。指数関数的に増殖しているグラム陰性細菌細胞OD600nm=06は、最終濃度が約106細胞mlとなるように100倍希釈され、05mMのEDTANa2あり又はなしで、5μMの異なる改変型PVPSE1gp146変異体と共に、震盪せずに室温で30分間インキュベートされた。インキュベーション後、細胞懸濁液は、106細胞ml~105細胞mlから始めて、次に104細胞mlの濃度へ、そして最終的には103細胞mlの濃度へと3回希釈され、各希釈液100μlがLB培地にプレーティングされた。37°Cで一晩インキュベートした後、残留コロニーが計数された。計数された細胞数に基づいて、対数単位の相対的不活性化度=log10、N0=未処理細胞数、及び、Ni=処理細胞数、両者ともインキュベーション後に計数されたとして、抗菌活性が計算された表6。表6-非改変型PVPSE1gp146と比較した、05mMEDTANa2ありA又はなしBでの、5μMのN末端タグ融合型PVPSE1gp146変異体のグラム陰性細菌に対するinvitro抗菌活性。該抗菌活性は、対数単位の相対的不活性化度=log10、N0=未処理細胞数、及び、Ni=処理細胞数、両者ともインキュベーション後に計数されたとして定量化された。すべての試料は3回繰り返された。平均値標準偏差が示される。観測された最大の減少は、10細胞mlの検出レベル及び初期細胞密度に依存する。外膜透過処理剤であるEDTAがない場合は、ネズミチフス菌及び大腸菌においては低い抗菌活性しか検出されない。試料がEDTAを含んでいる場合には、より強い抗菌活性が観察され得る。Artilysin2による改変を受けた融合タンパク質は、ネズミチフス菌に対して良好な抗菌活性を有する。しかしながら、該活性は、非改変型変異体PVPSE1gp146の範囲内のものである。リコトキシン1による改変を受けた融合タンパク質を用いると、ネズミチフス菌に対する抗菌活性はもっと向上される。ネズミチフス菌に対する抗菌活性と比較すると低いレベルのものではあるが、リコトキシン融合タンパク質もArtilysin2融合タンパク質も、大腸菌について抗菌活性を発揮する。実施例4:組換え型PVPSE1gp146及びそのPK融合型変異体PKPVPSE1gp146の熱安定性温度は、PVPSE1gp146PKPVPSE1gp146の安定性ひいては酵素的又はムラリティック活性に、大きな役割を果たしている。温度が上昇すると、水素結合及びタンパク質の三次元構造内の非極性疎水性相互作用が容易に切断され、タンパク質の変性及びその酵素機能の部分的喪失が引き起こされる。PVPSE1gp146及びPKPVPSE1gp146の熱安定性を調査するために、両組換え型エンドリシンは、BiometraT3000サーモサイクラーゲッティンゲン、ドイツの中で、種々の温度42、50、60、70、80、90及び100°Cで、種々の時間42及び50°Cで1、2、3、4、8及び24時間、50~100°Cで1時間の間10分ずつの間インキュベートされる。熱インキュベーション後に、各インキュベートされた試料の各30μlずつに、外膜透過処理されたPエルギノーサPAO1VKrylov教授、theStateInstituteforGeneticsofIndustrialMicroorganisms、1stDorozhniiproezd1、113545Moscow、Russia、より取得したPAO1Krylovの細胞基質を270μl添加しLavigneetal2004、最適な密度はOD655nmは時間関数に従う。各試料はインキュベートされ、トリプリケートで試験される。各試料の酵素的又はムラリティック活性は、Briersetalの論文に従ったOD655nm時間の曲線に基づいて定量化され、時間0の時点での非加熱対照試料=100活性と比較したパーセンテージで表現される。図5では、24時間の時間間隔中における42°C及び50°Cでのインキュベーションの結果が示される。42°Cという値は、発熱した体温状態と似ているので選択され、50°Cは、熱不安定性タンパク質が変性する臨界温度である。PVPSE1gp146及びPKPVPSE1gp146はどちらも、24時間のインキュベーション後であっても、42°Cで熱に安定である図5A。50°C図5Bであっても、PVPSE1gp146のムラリティック活性は、24時間を超えても大きくは変わらない。これに反して、PKPVPSEg1gp146は、おそらくはPKタグの存在のために、8及び24時間の時点の間で初期活性の30を失う。42°Cで2時間及び50°Cで3時間のインキュベーションの後に、PKPVPSE1gp146のムラリティック活性はむしろ有意に上昇する。PK改変によって起こる活性の低下は、高温では当初は抑制されるが、これはインキュベーション時間が延びるにつれて小さくなる効果である。PVPSE1gp146は、50°Cで24時間後でも完全な活性を示しているので、PVPSE1gp146PKPVPSE1gp146の熱安定性は、それぞれ1時間及び40分のインキュベーション時間で、より高い温度、50と100°Cの間でも決定された図6。活性は、PVPSE1gp146については0、20、40及び60分の時点において図6A、並びに、PKPVPSE1gp146については0、20、30及び40分の時点において図6B測定された。図6Aは、PVPSE1gp146が、80°Cで1時間のインキュベーション後には、まだその最大活性を維持しているが、100°Cになると、20分という短いインキュベーションでも、80以上の活性を低下させるのに十分であることを示している。上述の図5に記載されているように、PKPVPSE1gp146の活性は、50°C以上の温度で徐々に減少する。80°Cでインキュベーションすると、30分後にはエンドリシンはその完全な活性をほとんど失っている。これらの結果は、非改変型PVPSE1gp146の強い熱安定性を強調しており、それを食品保存の障害のための取り組みhurdleappproachにおいて使用する興味深い候補としている。PVPSE1gp146と組み合わせて軽度の加熱処理を行うことは、食品生産物の質を失うことなく食品病原体を効率的に低減させるために利用されるだろう。引用された参考文献ChengXZhangXPflugrathJWandStudierFWThestructureofbacteriophageT7lysozymeazincamidaseandaninhibitorofT7RNApolymeraseProcNatlAcadSciUSA9140344038BriersYLavigneRVolckaertGandHertveldtKAstandardizedapproachforaccuratequantificationofmureinhydrolaseactivityinhighthroughputassaysJournalofBiochemicalandBiophysicalMethods70531533本発明の他の態様は、ここに開示されている本発明の明細書及び実施例を考慮すれば、当業者にとって明らかであろう。本明細書及び実施例は例示的なものにすぎず、添付の特許請求の範囲に示されている発明の真の範囲及び真意と共に考慮されるべきであることが意図される。