SEQIDNO1025および3041から選択したペプチド。SEQIDNO1、1025および3041から選択した配列を有するペプチドおよび医薬的に許容可能なキャリアを含むヒトサイトメガロウイルスに対するワクチン。さらにアジュバントを含む、請求項2に従うワクチン。前記アジュバントがDNAアジュバントである、請求項3に従うワクチン。前記ペプチドが脂質化されない、請求項2に従うワクチン。前記ペプチドが脂質化される、請求項2に従うワクチン。前記ペプチドがモノ脂質化される、請求項6に従うワクチン。前記ペプチドがジ脂質化される、請求項6に従うワクチン。SEQIDNO1、1025および3041のいずれか1つに従うペプチドを提示するためにinvitroで処理された抗原提示細胞を含む、ヒトサイトメガロウイルスに対する細胞性ワクチン。前記抗原提示細胞が自己由来のものである、請求項9に従う細胞性ワクチン。前記抗原提示細胞がアロジェニックである、請求項9に従う細胞性ワクチン。SEQIDNO114、19、2628および30のいずれか1つに従うペプチドをコードする遺伝子を発現する、組換えウイルスベクターワクチン。請求項2、3、4、9あるいは12のいずれか1項に従うワクチンを投与することを含む、ヒトサイトメガロウイスル感染に対する免疫応答をモジュレートする方法。請求項2に従うワクチンを投与することを含む、ヒトサイトメガロウイスル感染に対する免疫応答をモジュレートする方法。請求項9に従うワクチンを投与することを含む、ヒトサイトメガロウイスル感染に対する免疫応答をモジュレートする方法。請求項12に従うワクチンを投与することを含む、ヒトサイトメガロウイスル感染に対する免疫応答をモジュレートする方法。ヒトサイトメガロウイルスの天然にプロセスされたエピトープおよびDNAアジュバントを含む、ヒトサイトメガロウイルスに対するワクチン。SEQIDNO1の配列を有するペプチドおよびDNAアジュバントを含む、ヒトサイトメガロウイルスに対するワクチン。請求項4に従うワクチンを投与することを含む、ヒトサイトメガロウイスル感染に対する免疫応答をモジュレートする方法。実施例1.T細胞クローンの誘導CMV血清陽性個体からT細胞クローンを誘導する方法は、文献に記載されている上記参考文献参照。40から50ミリリットルの全末梢血の試料は、標準的抗体法により検出されたCMV血清陽性のボランティアから得た。白血球WBCは、FicollHyPaqueDuPont密度勾配遠心分離を使用して分離した。全血は最初に卓上遠心機にて1400rpmで10分間遠心分離して、赤血球細胞の数を減少させた。軟膜buffycoatをリン酸緩衝食塩水PBSを用いて12mlに希釈して、6mlを12量のFicollHyPaqueの上に重層した。最上層は、卓上遠心機において2000rpmで1530分間の遠心分離後に除去した。WBCを含有する界面interfaceを除去し、PBSで希釈して812分間1000rpmで再び遠心分離することで、WBCをペレットにした。細胞をPBSに再懸濁してさらにもう1回上記のように洗浄した。4から5百万WBCmlを、プールしたAB血液型CMV血清陰性ドナーHABから得たヒト血清を用いたT細胞培地TCMに再懸濁した。実施例2.LCL抗原提示細胞の誘導同時に、自己抗原提示細胞株をPBLのエプスタインバーウイルス不死化により調製したCurrentProtocolsinImmunologyUnit722WileyLissPress参照。同じ個体からのCTLおよび抗原提示細胞の誘導は、細胞株の間のHLAマッチングを確実にした。実施例3.HCMVによるinvitro刺激WBCのinvitro刺激を開始するため、WBCとして同じボランティアから得た自己由来皮膚線維芽細胞の単層を、DMSO10HAB中にて105細胞mlウェルで12ウェルプレートにおいて細胞を24時間平板培養plateすることにより確立した。培養の24時間後、線維芽細胞をCMVビリオンAD169あるいはTowne株に1および5の間の感染多重度で2時間感染させた。培地およびウイルスを単層から吸引して、1mlの新鮮なDMEMHABを加えた。単層はさらに4時間培地中でインキベートして、その時間の後、培地を吸引した。810百万WBCを含有する培地の2ミリリットルを、CMV感染線維芽細胞を含有するウェル毎に加えた。WBCおよび線維芽細胞は、50Umlペニシリン、50μgmlストレプトマイシン、4mMLグルタミン、25μM2メルカプトエタノール、10mMHEPESおよび10HABTCMHABを含有するRPMI1640IrvineScientific中で培養した。これは最初の刺激と名付けられ、細胞は7日間共インキベートcoincubateした。TCMHABはもし消耗された場合は交換し、培養はもし活発な細胞増殖があった場合は拡張した。WBCは、上記のように調製したHCMV感染自己由来線維芽細胞の新鮮な単層上で平板培養することにより、第7日に再刺激した。さらに、γ放射線照射2500rad自己由来PBL5倍以上のWBCをフィーダー細胞として加え、培地はこの第2の刺激の第2日および第4日に組換えIL210IUmlChironCetusを追加した。急速な細胞増殖を示すウェルは、培地が消耗されたので、IL2含有の新しい培地が必要である。培養の1216日後、細胞はクロム放出アッセイCRAにおけるCMVマトリックスタンパク質の認識のため回収してアッセイされた。CRAは、T細胞クローンに対して自己由来あるいはHLAミスマッチである標的細胞として抗原提示細胞を使用して行った。細胞は、pp28pp28vac、pp65pp65vacおよびppl50ppl50vacなどのHCMVタンパク質のためのDNAを含有する組換えワクシニアウイルスあるいは野生型ウイルス株WRの感染により調製した。一晩の感染後、抗原提示細胞をクロム51と共にインキベートして、洗浄し、CurrentProtocolsinImmunologyWileyLissPressUnit717に記載されるようにアッセイを実行した。CRAにおいて、ワクシニア感染標的細胞はクロム51を用いてロードして、そしてT細胞クローンエフェクター細胞由来の細胞と混合した。細胞は、20:1から1:1に変化する一連のエフェクター:標的細胞比で混合した。4時間のインキベーション期間の後、細胞をインキベートした培地を回収した。培地への放射活性の放出Reは、ガンマシンチレーションカウンターを用いて定量した。抗原提示細胞に感染した程度は自然溶解を示し、CTLの非存在下での放射線の放出Reは各々のウイルスベクターについて確立した。標的細胞に取り込まれて放出可能な放射線の最大量Rmaxは、洗浄1TritonX100Sigma溶液における標的細胞の溶解により確立した。パーセンテージ細胞傷害性は、以下のように表した:100×。アッセイは非許容可能であるとみなされ、自然放出Rsが30以下でない場合は繰り返した。アッセイの解析は記載したようであり、陽性結果はpp65vac感染自己APCの特異的認識により示された。pp65についての陽性結果は、試験したポリクローナル集団において、ウイルスにより発現されるpp65HCMVタンパク質を認識するT細胞があることを示した。実施例4.CTLエピトープの同定のための手順皮膚線維芽細胞上にてHCMVにより2回刺激されたWBCは、以下のように96ウェルU底プレート中での限界希釈法によりクローン化した。2つのHCMV刺激の後、抗CD4抗体に結合する常磁性ビーズを用いたインキベーションを使用して、陰性選択negativeselectionによりWBCからCD4T細胞を取り除いた。結果として生じた集団は、一般に9095がCD8信頼できるT細胞サブセットマーカーであり、および一般に90がCD3大半の末梢血T細胞のマーカーであり、フローサイトメトリーあるいは蛍光顕微鏡のいずれかによりアッセイされる。この最終集団は、終量150μlにおいてウェル毎033細胞の間の濃度で平板培養した。各々のウェルはまた、50100IUml組換えIL2ChironCetusおよび05pgmlPHAMurexを追加したTCMHAB中に、γ放射線照射の1030×105アロジェニック末梢血単核細胞PBMCも含有した。培養の3日後、PHAは75μlとrIL2を追加した新鮮培養培地を交換することで2倍に希釈した。ウェルに34日毎に新鮮rIL2を追加し、培地は必要に応じて交換した。細胞は1214日後に上記のように新鮮アロジェニックPBMCで再刺激して、個々のウェルでの増殖のためにプレートを注意深く観察した。明白な細胞増殖は、拡張したT細胞をより大きなウェルに移す必要があることを示した。T細胞は2週間毎に再刺激して、次第により大きなウェルに移した。数百万の細胞が蓄積する段階で、いくつかは低温保存して、他のはさらにCRAを受けさせた。このCRAでは、標的はHCMV感染線維芽細胞、非感染線維芽細胞、あるいは野生型ワクシニアあるいはpp28、pp65あるいはpp150のいずれかを発現するワクシニアウイルスに感染した自己由来LCLであった。HLAミスマッチ線維芽細胞およびLCLは、対照として使用した。いくつか試験したもののうちの1つのT細胞クローンは、33F4と示されるが、CMVおよびpp65特異性の両方の特徴を有しており、特異的な様式にて自己由来標的のみに対して反応性であった。異なるHLA表現型を有するその他のT細胞クローンは、最初の末梢血試料が異なるボランティア由来であったこと以外は、同じ方法で最初に単離された。pp65に対するT細胞クローン33F4の認識を拘束するHLA成分を同定した。一連のLCLは、33F4細胞株の各々のHLAアリルを有する個々に自己由来である標的として使用した。各々の標的はpp65vac、野生型ワクシニアに別々に感染させた、あるいは全く感染させなかった。結果は、HLAA0201アリルに対して自己由来であるLCLのみが33F4T細胞株により認識および殺されたことを示した。また、33F4はCD8T細胞サブセットに属し、クラスI拘束性ペプチドを認識するCTLの特徴を有することが確立された。細胞株がモノクローナルであるかどうかは、一連の26種のヒトVβ遺伝子セグメントプライマーを使用するPCRレパートリー解析を実行することで試験した。26種のプライマーの一つ、Vβ131プライマーのみが、顕著なシグナルを与え、それにより33F4T細胞クローンの明らかなモノクローナル性が説明された。T細胞クローン33F4により認識される正確なエピトープあるいはペプチドを同定するために、カルボキシ末端からアミノ末端に向かってpp65タンパク質を削除する一連のワクシニアトランケーションを使用した。CRAは、pp65タンパク質のトランケーション産生物を発現するワクシニアウイルスに感染させた自己由来およびHLAミスマッチLCL標的を利用して行った。この実験は、標的を殺すために必要なアミノ酸377および561の間の領域に配置された。アミノ末端削除の小さなサブユニットを使用して、殺傷に必要な領域をアミノ酸477および561の間にさらに配置した。間接的殺傷killingアッセイを利用して、サル腎臓細胞株に分子HLAアリルHLAA0201およびpp65遺伝子の一部をトランスフェクションして、アミノ酸452561を含有する断片にその領域を配置した。HLAA0201により結合される配列に対応して、T細胞クローン33F4により認識されるペプチド配列の最終的な決定は、SynergyAppliedBiosystemsModel432ペプチド合成機にて910アミノ酸ペプチドを産生することにより行った。公開された情報を使用して、HLAA0201の顕著な特徴を有する一連の候補配列を決定して、アミノ酸452561の間の領域に配置させた。これらは以下のものである:これらのペプチドのただ1つのみ495ペプチドあるいはpp65495503として言及されるSEQIDNO1が、自己由来LCLがCD8CTL33F4により認識および殺されるようにプライム化することが可能であること証明した。またHLAA0201モチーフにも従うpp65由来のその他の910アミノ酸ペプチドは、CRAにおいて試験した。いずれか活性を示したものはなかった。全てのペプチドは、移動相としてアセトニトリル/TFAを使用してVydacC18カラムにおけるHPLCによって純度について調べた。それらは平均して7080あるいはそれ以上純粋であり、01酢酸溶液から希釈して使用した。実施例5.細胞溶解を誘導するための495ペプチドの使用495ペプチドの階段希釈は、CRAにおいて自己由来LCLがT細胞クローン33F4により殺されるようにプライム化することにおける、10μMおよび001μMの間の活性では変化を示さなかった。12最大halfmaximal溶解は、05nMペプチドの近くで起きた。ペプチドトランスポーター欠損細胞株T2DBCrumpackeretalJImmunol14830043011は、HLAA0201陽性であり、またCRAにおけるペプチドの認識について33F4T細胞クローンの感受性のより下方限界を試験するために使用した。01nMほどの少ないペプチドが、10nMペプチドの条件と等しく、T2細胞の最大溶解を引き起こすことが見出された。これらの実験は、この最小細胞傷害性エピトープがHLAA0201アリルに対する強力な結合物質binderであることを説明する。表1に示される495ペプチドは、SynergyAppliedBiosystemsModel432ペプチド合成機にて調製した。皮膚線維芽細胞はペプチドでプライム化して、そして2時間、37°Cで10μMの495ペプチドと共に、最後の1時間はクロム51と共にインキベーションすることによりクロム51を用いてロードした。ペプチドおよびクロム51は培地から洗い落とした。T細胞クローン33F4CD8CTLは、HCMV血清陽性個体HLAA0201陽性由来であり、CRAにおいてHCMV感染線維芽細胞ならびにペプチドプライム化線維芽細胞を認識することが可能であった。非感染および非プライム化線維芽細胞は、T細胞クローンにより認識あるいは殺されなかった。さらに、ドナー線維芽細胞上に見出されるHLAA0201アリルのないHLAミスマッチ線維芽細胞は、それがHCMVにより感染されるあるいは495ペプチドによりプライム化されるかのいずれかであるとき、T細胞クローンにより認識あるいは殺されなかった。このように、本発明の495ペプチドは全HCMVウイルスの代替として働くことができ、正常T細胞が、もしそれらがHCMVに感染した場合と同じくらい効果的にあるいはより良く線維芽細胞を認識および殺するようにすることができる。実施例6.T細胞クローンによるTNFαの生成TNFαは、多くの細胞型にとって細胞傷害性であるT細胞リンホカインであり、HCMV感染に対して増加するinvivoでの免疫応答に寄与しうる。33F4T細胞クローンの細胞は、全HCMVビリオンあるいは表1の495ペプチドでプライム化されるかのどちらかでプレインキベートpreincubateした自己由来線維芽細胞と共にインキベートした。24時間後、共インキベートした細胞からの上清を上記したようにバイオアッセイにおいて指示indicator細胞株に適用した。指示細胞株はWEHI誘導体であり、ピコモルレベルでTNFαの細胞傷害作用に対して感受性がある。ペプチドプライム化線維芽細胞は、HCMV感染線維芽細胞と同程度かあるいはそれ以上のレベルのT細胞クローン33F4由来TNFαの産生物を誘導した。SEQIDNO1のペプチドは、T細胞なしでインキベートした自己由来線維芽細胞、あるいはT細胞クローンと共にインキベートした非HLAA0201発現線維芽細胞のいずれかによるTNFα産生物を誘導しなかった。実施例7.ペプチドSEQIDNO1はHCMV血清陽性個体のPBLからCTLを誘導できるHCMV血清陽性個体からのPBLは7日間、SEQIDNO1のペプチドプライム化した自己由来線維芽細胞上での平板培養、あるいはSEQIDNO1ペプチドで感作した放射線照射自己由来PBLと共にインキベートした。一度刺激したPBLは、CD4T細胞の消耗を用いてあるいは用いずに、同様な様式で再刺激した。2週間後、ペプチドプライム化、CMV感染、あるいは未処理自己由来線維芽細胞のいずれかを標的として使用してクロム放出アッセイを行った。CD8T細胞は、ペプチドプライム化およびHCMV感染線維芽細胞あるいはSEQIDNO1でプライム化したEBVLCLの著しいパーセンテージを溶解したが、未処理細胞は溶解しなかった。自己由来線維芽細胞標的は、同じ条件下で新鮮に取られた血液からのCD4消耗PBLによっては溶解されなかった。実験は、15人の健康な成人ボランティア由来のT細胞を用いて繰り返した。1つ以外の全ての場合において、マッチングHLAアリルを保持するドナーはSEQIDNO1に応答するT細胞を有した。同様な実験は、T細胞のinvitro刺激を用いずに、HIV患者で行った。マッチングHLAアリルを有するHIV陽性ドナーの大半はまた、SEQIDNO1でプライム化された自己由来EBVLCLを認識できるT細胞クローンも保持していた。実施例8.A0201以外の分子サブタイプを有する、HLAA2を発現するヒト細胞株は495ペプチドによる溶解に対して感作される12種の細胞株は、それらを495ペプチドpp65495503ノナマーでパルスして、クロム51を用いてロードして、495ペプチドおよびHCMVを認識する2つの異なるHLAA0201拘束性CTLと共にインキベートするクロム放出アッセイに供した。特異的細胞傷害性を計算して、1μMおよび1nM濃度の495ペプチドについて以下の表形式で示した。プラス記号は30以上の細胞傷害性を表し、プラス/マイナス記号は5および30の間の細胞傷害性を表し、マイナス記号は15以下の細胞傷害性を表す。データは、全ての試験をしたサブタイプが1μMでの495ペプチドと機能的に結合し、細胞株はHCMVおよびpp65特異的CTLにより溶解されることを示した。これらのデータはまた、ここに示す細胞株サブタイプが495ペプチドによる溶解について感受性をもたすことができることも示した。データはまた、これらのサブタイプを保持する個体由来の細胞が、たとえHLAA0201について見出されるものよりも大半の場合において高い濃度でも、CTL認識および溶解についてペプチドにより感作されうることも示した。このように、これらのHLAA2サブタイプのいずれかを保持する個体は、ワクチンとして495ペプチドに応答することができる。実施例9.495ペプチドSEQIDNO1を使用した動物研究事前にHCMV暴露がないトランスジェニックマウスモデル、HLAA21マウスEJBernhardetalJExpMed16811571162、を利用して、495ペプチドが事前にウイルス暴露がないCTLを刺激してワクチンとして機能できるかどうかを試験した。これらの実験は、ウイルスにより感染されたかあるいはSEQIDNO1のペプチドあるいは非特異的対照ペプチドでのプライム化されたもののいずれかの、マウスおよびヒト細胞標的を使用するinvitro解析を含む。3尾のマウスは、IFA不完全フロインドアジュバント中で乳化された20μgのポリクローナルヘルパーTリンパ球HTLペプチドPADRESEQIDNO29JAlexanderetalImmunity1751761と共に50μgの495ペブチドpp65495503あるいはp53由来のペプチドp53149157MTheobaldetalProcNatlAcadSciUSA921199311997を尾の基部に皮下的に接種して免疫した。12日後、脾臓を免疫化マウスから取り出し、脾臓懸濁液をつくり、エフェクター細胞をp53149157あるいはp65495503ペプチド感作同系リポ多糖処理脾臓胚細胞splenicblastcellを使用して1週間再刺激したPAWentworthetalEurJImmunol2697101。その後、次のinvitro刺激のため、刺激細胞stimulatorcellはJurkatA21細胞であり、弱酸処理および続くペプチドのローディングにより調製したZYuetalJournalofSurgicalResearch69337343。2回のinvitro再刺激サイクルの後、マウス脾臓エフェクター集団をp53149157あるいはp65495503ペプチドをロードしたT2細胞の認識について試験した。適切に免疫したマウスではp65495503あるいはp53149157ペプチドの実質的な認識があったが、非免疫ペプチドの認識はなかった。マウス脾臓エフェクターが、pp65Vacに感染したヒトHLAA0201EBVLCL標的を用いたクロム放出アッセイにおいて、内因的にプロセスされたpp65を認識することもまた説明されたDJDiamondetalBlood9017511767。p65495503ペプチドがウイルス感染細胞の認識を引き起こすことのさらなる証明は、標的としてHCMV感染ヒト線維芽細胞、およびエフェクター集団としてp65495503ペプチド刺激から誘導されたマウスCTLを使用したクロム放出アッセイによってもたらされた。HCMVに感染したHLAA0201線維芽細胞はCTLによる溶解が可能であるが、一方、非感染およびミスマッチの両方の線維芽細胞は認識されなかったDJDiamondetalBlood9017511767。総合すれば、これらの結果は、p65495503を用いた一次免疫化からの脾臓エフェクター集団がHLAA0201拘束性様式において内因的にプロセスされたpp65およびHCMVを認識することを明らかに示した。さらなる研究により、495ペプチドは動物において長寿命免疫応答を誘導することが説明された。12尾のマウスを495ペプチドSEQIDNO1PADREAKXVAAWTLKAAASEQIDNO29IFAを用いて同時に免疫して、2尾のさらなる対照マウスをPADREIFAのみを用いて免疫した。免疫後2週間、6週間、10週間および14週間目に、2尾の免疫化マウス由来の脾臓を495ペプチドあるいはヒトp53由来の対照ペプチドp53149157に対する免疫について解析した。さらに、2および6週間目に、495ペブチドを用いずに免疫したマウスもまた屠殺して、それらの脾臓細胞を495ペブチドあるいはヒトp53ペプチドに対する免疫応答について解析した。パーセント特異的細胞傷害性495ペブチド標的の細胞傷害性p53標的細胞傷害性は14週間後で依然40レベルであったが、一方、ナイーブ動物はいかなる5以上の特異的細胞傷害性も示さなかった。これは、TheradigmTMリポペプチドBLivingstonetalJImmunol15913831392を用いてヒトボランティアを免疫することから得られた、18週間にわたる4回の免疫の最終の後38週間に平均して最初の応答の60を維持した、という最近の結果と十分に比較した。実施例10.動物におけるIFAアジュバント非依存ワクチンとしてのp65495503SEQIDNO1を取り込む脂質化ペプチド免疫原性を亢進させるためにアジュバントを使用することは動物研究では一般的なストラテジーであるが、ヒトにおけるそれらの使用に関しては重要な制限がある。それゆえ、本発明の1つの態様は、脂質分子を取り込むペプチドを含む。このストラテジーは、動物KDeresetalNature342561564およびヒト臨床的研究AVitielloetalJClinInvest95341349の両方において効果的であり、アジュバントの使用の必要性を回避した。1あるいは2つのいずれかのパルミチン酸部分を、495ペブチドのアミノ末端に接着させ、一連の免疫研究をトランスジェニックHLAA21マウスにて行った。直接的脂質化ペプチドの一次構造は表3に示す。表3.ペプチドはABI432AppliedBiosystemsにて合成して、記載されるように精製して解析したDJDiamondetalBlood9017511767。パルミチン酸Aldrichはジメチルホルムアミドに溶解して、自動的にアミノ末端リジンに結合させた。ペプチドのモノ脂質化monolipidated形態のアミノ末端リジンは、2つの保護基、FmocおよびBocにより保護した。Fmoc基のみ合成中に開裂されて、単一脂質部分を加えることができる。ジ脂質化dilipidated形態のために、アミノ末端リジンは2つのFmoc基で保護され、それゆえ2つの脂質部分を加えることができた。ペプチドはまた、当該技術分野でよく知られる方法によりその他の位置で脂質化されることもあり、ここでの使用が企図される。別々のマウスは、PADREエピトープと共に非修飾pp65495503、およびペプチドのモノ脂質化あるいはジ脂質化形態のいずれか用いて免疫した。脂質化ペプチドがフロインドアジュバントの共投与を用いずに免疫を刺激するであろうということが以前に示されていたのでHSchildetalEurJImmunol2126492654、IFA中のペプチドの乳化を用いるあるいは用いずにマウスを免疫することを比較した。上の実施例9に記載した手順と同様な手順にて、接種後12日にマウスに脾臓摘出術をして、脾臓細胞集団をinvitroで2回再刺激した。そして、脾臓エフェクター細胞はペプチドロードloadedT2細胞、pp65Vvacに感染したEBVLCL標的、およびHCMV感染線維芽細胞を用いてクロム放出アッセイにて試験したDJDiamondetalBlood9017511767。結果は、アジュバントにおける乳化を用いない495ペブチドの脂質化形態は、内因的にプロセスされたpp65およびHCMV感染ヒト細胞を認識することができる免疫応答を誘導することを説明する。モノ脂質化形態は、IFAを用いるあるいは用いないのと比較してより弱い免疫応答を誘導するようであったが、一方、非修飾フリーペプチドはIFAにおいて乳化されなければ活性をもたなかった図13参照。これらのデータは、ヒトを含む温血動物における使用のための都合の良い免疫化/ワクチン接種vaccination手順を説明する。この手順は、液体溶媒系aqueoussolventsystemにおける2つのペプチドの混合物を内包する脂質化495ペブチドPADREあるいは830843アミノ酸破傷風ペプチドのいずれか、表3。混合物は、HCMV血清陽性あるいは血清陰性の被験体のいずれかに皮下あるいは他の許容可能および効果的なルートを介して投与する。ブースター接種のさらなるセットは、一次ワクチン接種により誘導される免疫を亢進させるために利用されうる。実施例11.脂質化ワクチンの製剤化495ペブチドおよびその機能的配列変異体は、共有結合HTLエピトープを有する脂質化ペプチドとしてのワクチンとして製剤化できる。HTLエピトープは、古典的ヘルパー応答を刺激するためのヒトMHCクラスIIに対する広い反応性を有するいずれかのペプチドでありうる。そのような分子は、破傷風毒素由来のアミノ酸830843PPaninaBordignonetalEurJImmun1922372242、HIVエンベロープタンパク質由来のHTLエピトープJABerzofskyetalJClinInvest88876884、あるいは既知のアンカー残基から推測される合成版PADREJAlexanderetalImmunity1751761を含むが、それらには限定されない。HTLCTLエピトープの脂質化は、好ましくはHTLエピトープのアミノ末端で行われ、HTLエピトープはCTLエピトープに対するアミノ末端である。適した脂質部分は、既知であるかあるいは文献中に記載されるHSchildetalEurJImmunol2126492654AVitielloetalJClinInvest95341349KDeresetalNature342561564。あるいは、CTLエピトープ、続いてHTLエピトープをそのアミノ末端で脂質化することができ、あるいは脂質は、続くCTLあるいはHTLエピトープのいずれかで、カルボキシル末端にて見出すことができる。3つのアミノ酸スペーサーあるいは他のいずれかのスペーサーは、HTLおよびCTLエピトープの間に挿入することができ、あるいはエピトープはインフレームで直接融合させることができる。あるいは、アミノ末端上で脂質化されるCTLエピトープは、共有結合接着を用いずに、HTLエピトープと共に投与できる。ワクチンエピトープは、一次構造にかかわらず、一回、標準的な製剤化緩衝液PBSあるいはPBS10DMSOあるいはより高濃度001トリフルオロ酢酸あるいはあるいは同じあるいは異なる濃度のその他の酸あるいはアルコールにて前腕に皮下的に接種されうる。3から6週間後、同じ物質のブースター接種が投与されうる。3から6週間間隔の複数のブースター接種は、必要ならば続けて投与できる。この接種シリーズは、ウイルスについて陽性あるいは陰性のいずれかの、患者あるいはリスクを持つ個体、あるいは骨髄移植のドナーに投与できる。脂質化ワクチンペプチドの具体例は、例えば以下のものを含む:ここでは、Xはシクロヘキシルアラニンあるいはフェニルアラニンである。本ケースをとおして、全てのアミノ酸はそれらの国際一文字コードuniversalonelettercodeにより表す。Pamはパルミチン酸である。3つのAあるいはGスペーサー下線は、ワクチンペプチド間での交換が可能である。上に示されるペプチドのフォーマットはアミノ末端から次のように記載される:脂質KCSSHTLエピトープイタリックアミノ酸スペーサー下線CTLエピトープ。CTLおよびHTLエピトープの位置は交換可能である。CTLエピトープあるいはその機能的配列変異体はさらにリーダー配列を加えることにより修飾されることもあり、および/あるいはアミノ酸KDELはカルボキシル末端に追加して小胞体内での維持および標的化targetingを亢進することができる。パルミチン酸あるいはいずれかの適した脂質が使用されることもあり、ステアリン酸、ミリスチン酸、ラウリン酸、カプリン酸およびデカン酸を含むが、それらには限定されない。実施例12.トランスジェニックマウス研究における単一成分ワクチンとしての、アミノ末端にて脂質化される、結合HTLおよびCTLエピトープの使用各々脂質を含有する2つのさらなる分子、HTLおよびCTLエピトープ、を構築してマウスにて試験した:表5の名称は、表4での凡例に見出すことができる。分子ASEQIDNO37は、マウスおよびヒトにおいて働く能力を有するワクチンであり、一方、分子BSEQIDNO38はマウスでのみ機能的であるべきある。25ヘキサフルオロイソプロパノールを用いたリン酸緩衝生理食塩水中25ジメチルスルホキシド中の100ナノモルの各々のこれらのワクチンペプチドを、別々のトランスジェニックHLAA21マウスに皮下的に接種した。実施例9および10において言及される方法を使用して、pp65およびHCMVに対して特異的な細胞を含有する脾臓細胞集団を誘導した。免疫化マウス由来の脾臓細胞は、特異的および非特異的ペプチド感作された標的、HCMV感染および非感染HLAA0201およびHLAミスマッチ線維芽細胞標的に対する認識および細胞溶解について試験した。495pp65495503ペプチド感作標的は効果的に溶解されたが、一方、HLAA0201p53149157に結合する他のタンパク質ヒトp53由来のペプチドで感作された標的は効果がなかった。さらに、および重要なことに、HCMV感染HLAA0201線維芽細胞は効果的に溶解されたが、非感染線維芽細胞あるいはHLAミスマッチのそれらは、HCMV感染にかかわらず、認識あるいは溶解されなかった。これらの結果は分子AおよびBの両方で得られたが、分子Aは2つのうちでより強力であった。しかし、50nmoleより少ない量でワクチンAを用いて免疫したマウスの2回目の免疫化ブースターは、1回の免疫化が効果的でないときに検出可能な免疫応答を引き起こした表5。ブースターの刺激効果はBに一致するLivingstonetalJImmunol15913831392。これらのデータは、ワクチンの単一分子形態が液体媒介物例えば、PBSDMSOHFIP中のワクチン分子AあるいはB以外のいずれかの追加的分子あるいはアジュバントを用いずに、動物モデルにおいてHCMV免疫を刺激する機能を有することを示した。データはまた、ワクチンがHCMVナイーブマウスにおいてHCMVに対するdenovo免疫応答を刺激できることを説明した。実施例13.HLAAおよびBアリルに特異的なさらなるHCMVpp65CTLエピトープ100以上のAおよびB遺伝子のHLAクラスIアリルがあるJGBodmeretalTissueAntigens49297321。推定するアルゴリズムおよびトランケーション解析を組み合わせて使用することで、MHC拘束性ヒトCTLにより溶解される自己由来およびアロジェニック細胞の両方を感作するpp65由来のさらなるペプチドを同定した。実施例1で考察したように、CTLはHCMV血清陽性なヒトから生じる;それゆえ、pp65由来の明確なエピトープは、内因的HCMV再活性化あるいはウイルス血症を抑制するためにヒトにより使用されるものであった。特異的HLAアリルと組み合わせてHCMVpp65に対するCTL反応を明確にするため、個々のクローン化CTL株は、CTLを誘導するために使用される血液を有する個体に見出されるHLAAあるいはBアリルの1つを含有するpp65vacを用いて感染させたEBVLCLの認識について試験した。少なくとも1つのHLAアリルがEBVLCL標的およびCTLの間で共用される場合は、認識および溶解のための感作が観察された。この実験は、拘束性アリルを含有する少なくとも3つの独立細胞株を用いて繰り返された。表6は、pp65エピトープ、それらのHLA拘束性、感作される同じ拘束性の独立細胞株の数、およびエピトープの描写の方法を示す。決定の方法:A単一HLAアリルがマッチする細胞株を使用するHLA拘束;Bワクシニアウイルスにおけるpp65トランケーション;CTNFαアッセイを使用する活性の検出を用いたプラスミドにおけるpp65トランケーション;D公開されるモチーフを使用するアミノ酸残基のマッチング;E順序づけされた重複エピトープを使用する機能的解析。実施例14.1つ以上のCTLエピトープを含むワクチン分子本明細書中に記載される手順に従って、同じあるいは異なるHLAクラスI拘束成分に特異的である、pp150および/あるいはpp65エピトープの組み合わせを含むワクチンを調製した。ヒトのワクチン接種のため、各々のエピトープは同じMHC拘束を有する必要性はない。2つあるいはそれ以上のMHC拘束成分を標的とするワクチン分子は好ましいことがあり、なぜならそれはより少ないワクチン分子の産生を可能にして、さらに多型集団において大半のHLAアリルが標的とされることを確実にするからである。頻繁に発現するHLAアリル表1および6参照により拘束されるCTLエピトープを有するペプチドは好ましく、およびpp65およびpp150タンパク質の両方からのエピトープならびにHTLエピトープを含有するポリペプチドワクチンは、HCMVに対するヒトワクチン接種にとって特に好ましい。表1および6に示されるHLAアリルは、複数CTLエピトープワクチン分子において含まれる可能性のあるHLAA、B、およびCCTLエピトープのサブセットである。複数CTLエピトープおよびHTLエピトープを含ませることにより、ペプチドを長くするであろう4050アミノ酸の範囲内。あるいは、HCMVポリペプチドワクチンは、共有結合的に接着されるHTLエピトープを用いずに、表3に示されるように、3つのアラニン残基あるいは各々のエピトープの間のアミノ酸の他の組み合わせのスペーサー、および、N末端での2つのパルミチン酸リシルアミドを有する複数CTLエピトープを使用することにより調製されうる。配列の疎水性は重要な因子である。疎水性を低下させるために、脂質修飾は省略されうる。加えて、複数HLAエピトープはカクテルワクチンcocktailvaccine中で製剤化されうる。好ましくは、混合物における各々の個々のCTLエピトープは、上記のようにCD4T細胞エピトープに融合されるであろう。このように、カクテルワクチンは、表6に示される配列を使用して複数人種集団の約75から約90を網羅するのに十分なエピトープを含有するために製剤化することができた。実施例15.BMT患者の免疫化本発明に従う抗原ペプチドの治療的な活性形態は、骨髄移植の前の所定の日数あるいは週数により分割される単一あるいは複数用量にて、十分な時間例えば、6から8週でHCMV血清陽性骨髄移植ドナーに投与されて、抗HCMV細胞性免疫応答の発生を可能にする。抗原ペプチドは、それ自体既知の様式にて例えば、場合によりヘルパーペプチドおよび/あるいはアジュバントと組み合わせて、脂質化ペプチドとして製剤化することができ、好ましくは、複数用量において投与されるであろう。例えば、ヘルパーペプチドおよび抗原ペプチドが1つの配列において一緒に結合されるペプチドは、この目的に適している。さらなるワクチン計画は、ポリヌクレオチドウイルスワクチン、例えば、表6に示される完全長pp65、pp65断片あるいは1つあるいはそれ以上のCTLエピトープ、を含有する修飾ワクシニアアンカラVacciniaAnkaraMVAを用いてドナーをプライム化すること、その後、実施例12および14に記載されるペプチドワクチンを用いてブーストすること、から成る。当業者は、ペプチドおよびウイルス投与の様々な組み合わせを使用するワクチン接種のための計画を十分に考案することができ、これらの変化は本発明を用いた使用のために企図される。もし無操作BMT移植片がレシピエントに与えられるなら、その移植片は25あるいはそれ以上の成熟T細胞を含有するであろう。T細胞はBMTレシピエント患者に活性免疫を与える。あるいは、T細胞消耗BMT移植片を利用するとき、免疫化ドナーからのT細胞のアリコートはBMTの例えば、約21から35日後に患者に投与して、レシピエント患者にHCMV免疫を提供することができる。実施例16.HCMV感染細胞のためのinvitroアッセイ本発明のペプチドをinvitroアッセイに使用して、HCMV状態感染あるいは非感染が未知の患者から得たHCMV感染細胞の有無を検出する。患者から得たTリンパ球は、本発明のペプチドを用いてプライム化された抗原提示細胞と共にインキベートする。CTLあるいはCTLpの活性化により、患者がHCMVに感染したことが明らかになる。実施例17.非脂質化ペプチドを用いたトランスジェニックマウスのワクチン接種による免疫応答の誘導2尾のHLAA21kbトランスジェニックマウスに、1530秒間の音波処理により不完全フロインドアジュバントと11比で乳化した、10DMSO中の100nmoleのA2HCMVpp65ペプチドNLVPMVATVSEQIDNO1、20μgのTヘルパーペプチドを含む01酢酸、PADREAKXVAAWTLKAAA、Xはシクロヘキシルアラニンを表す;SEQIDNO29を接種した。移送中の損失を計上するため、注射に必要とされる以上の300μLあるいはそれ以上の過剰な乳化ワクチンを調製した。ペプチドワクチン上の100μLの全量乳化調製は、外側尾静脈lateraltailvainを避けて、各々の側に50μLずつ、尾の基部に皮下的に注射した。陽性対照動物は、無関係なHLAA21拘束hup531147157ペプチドおよびPADREを用いて同じ様式で注射された。ブースターは7日後に投与した。ブースター免疫の1週間後、脾臓細胞を回収、培養、およびinvitroで刺激した。培養のため、細胞を脾臓から単離して、40mL培地に懸濁させて計数した。赤血球は計数から除外した。そして、細胞を20RatStimCollaborativeBiomedicalCat40115WalthamMAを含有する培地中でミリリットルあたり3百万細胞の濃度にして、24ウェルプレート中にて1mLウェルで平板培養した。細胞を刺激するため、1mLの懸濁抗原提示細胞3免疫化脾臓細胞に対して1抗原提示細胞の割合を培養に加えた。細胞は37°Cで7日間インキベートした。新鮮培地は必要に応じて加えた。刺激は、上のように1mLの懸濁抗原提示細胞を加えることにより、平板培養後7日毎に行った。抗原提示細胞は以下のように調製した。マウスの各々の免疫化群について、3尾のマウスの脾臓を無菌的に取り出して、25μgmLのLPSおよび7μgmLの硫酸デキストランを含有する10FCSを含むRPMI中にて1mLあたり1015×106細胞の濃度で、5CO2中にて37°Cで3日間懸濁した。そして、細胞を集めて、沈降させて、血清なし培地に再懸濁して、計数した。細胞は、15mLの円錐形遠心チューブ中に2千5百万細胞を含有する量で分配して、1200rpmで6分間穏やかに沈降させた。上清を吸引して、チューブに100μLを残した。ペプチドSEQIDNO1100μMをチューブに加えて、よく混合して、37°Cおよび5CO2で4時間インキベートした。細胞は、チューブあたり2mLの完全培地1012mMHEPES、2mMLグルタミン、100UmLペニシリン、100UmLストレプトマイシン、50μMβメルカプトエタノールおよび10熱不活化牛胎児血清を含有するRPMI1640中に再懸濁して、滅菌PBSにて濃縮した。そして、細胞は137Cs源由来の2500ラドで放射線照射して、次に、免疫化脾臓細胞を刺激するときに使用するために完全培地中で1mLあたり百万細胞の濃度にした。invitro刺激の6から7日後、免疫化脾臓細胞エフェクター細胞を集めて、細胞の細胞傷害活性を51Cr放出アッセイを使用してペプチドロードあるいは非処理標的細胞に対してアッセイした。HLAA21kb免疫化マウス由来のpp65495503SEQIDNO1に特異的でありペプチドを用いて毎週刺激される大量の細胞株は、陽性対照株として使用した。T2細胞は、非ロードあるいはSEQIDNO1のペプチドあるいはp53由来のヒト対照ペプチドのどちらかを用いてロードした標的として使用した。実施例9参照。クロム放出アッセイのための標的を調製するために、対数増殖期中のT2細胞を沈降させて、各々の非ロードしあるいはロード群について10mLLCL培地1HEPES、10牛胎児血清、2Lグルタミンおよび抗生物質を含有するRPMI1640に再懸濁した。細胞は計数して、再沈降させて、1mLあるいはより少ないLCL培地に懸濁させた。細胞は、非ロードあるいは抗原提示細胞の刺激のために上記のように適したペプチドの5mM溶液の10μlでロードされるかのどちらかであった。全ての細胞は、10mCimLのNa251CrO4を含有する20μlの51Cr原液を用いてロードした。そして、細胞のチューブを37°Cの水槽中で4560分間インキベートして、15分毎に穏やかに振盪した。次に、細胞を10mLのRPMI中で3回洗浄して、1mLのLCL培地に再懸濁した。標的細胞を再計数して、適量のLCL培地に懸濁して20000細胞mLにし、そして次に、ウェルあたり100μLで96ウェルプレート中で平板培養した。エフェクター細胞免疫化脾臓細胞は、10FCS含有RPMI中で1mLあたり2百万細胞にして、図4に示すように様々なエフェクター:標的比で標的細胞に加えた。培地のみ100μLを陰性対照ウェルに加えて51Crの自発的放出を測定し、および2ドデシル硫酸ナトリウムを含有する培地100μLを陽性対照ウェルに加えて51Crの全可能放出を測定した。プレートは、SorvallRT7遠心機KendroLaboratoryProductsNewtownCTにて休みなく6分間600rpmを受けさせて、37°Cおよび5CO2で4時間インキベートして、次に1200rpmで6分間再沈降させた。次に、上清を回収して放射能をPackardCobraIIγカウンターPackardInstrumentsMeridenCTを用いて測定した。特異的CTL活性は次のように計算した:特異的放出100×実験的放出自発的放出/全放出自発的放出自発的放出が最大全放出の30あるいはそれ以上である実験は放棄した。図4Aは1回のinvitro刺激後の結果を示し、図4Bは2回のinvitro刺激後の結果を示し、および図4Cは4回のinvitro刺激後の結果を示す。この図および続く図では、T2A2パルスはSEQIDNO1のペプチドを提示する細胞を示し、T2p53パルスはヒト対照ペプチドp53149157を提示する細胞を示す。データは、本発明のペプチドワクチンを用いたワクチン接種が適した標的細胞を認識して殺すことができる特異的CTLを確実に生じさせたことを示した。結果は、2回目のinvitro刺激で向上した。実施例18.脂質化ワクチン製剤の比較マウスは実施例17に記載されるように、Xがシクロヘキシルアラニンを表すPam2KSSAKXVAAWTLKAAANLVPMVATVSEQIDNO37を含有するワクチンの4つの異なる製剤を用いてワクチン接種した。脾臓細胞をアッセイした。クロム放出アッセイにおけるエフェクター対標的比は、結果を示す図5に示したとおりである。図5Aは、999DMSOおよび01蟻酸を含有する溶液中での100nmoleのペプチドを用いて接種したマウスについての結果を提供する。図5Bは、50DMSO、499PBSおよび01蟻酸を含有するビヒクル中に懸濁した100nmoleのペプチドを用いてワクチン接種したマウスについての結果を提供する。図5Cは、417DMSO、577PBSおよび06蟻酸に溶解した833nmoleのペプチドを用い注射したマウスについて言及する。図5Dは、667DMSO、267酢酸および67Tween20に懸濁した833nmoleのペプチドを用いて注射したマウスについての結果を提供する。999DMSO溶液ワクチンは、対照に対して最大の細胞傷害を有するマウス脾臓細胞を提供した。実施例19.PADREを含有するモノ脂質化ワクチンを用いたトランスジェニックマウスのワクチン接種マウスは上記されるように、Pam2KSSAKXVAAWTLKAAANLVPMVATVここではXがシクロヘキシルアラニンを表すSEQIDNO37の増加量をワクチン接種およびアッセイをした。ペプチドは、図6に示す量にて80DMSO、20PBSおよび008蟻酸における溶液中に提供された。100あるいは150nmoleのペプチドを用いたワクチン接種は、強力な特異的細胞傷害を引き起こし、150nmoleではより強力な結果であった。実施例20.細胞傷害性の特異性マウスは上記されるように、実施例19におけるように製剤化されたSEQIDNO37のペプチドの150あるいは25nmoleを用いてワクチン接種をした。脾臓細胞は、様々な異なるペプチドによりパルスし、そして提示するT2細胞の細胞傷害性についてアッセイした。図7参照。T2177パルスはSEQIDNO39NLVPMVATVNH2のアミド化amidatedペプチドを提示する細胞を示す;T2118パルスはSEQIDNO40YLVPMVASVNH2のアミド化ペプチドを提示する細胞を示す。T2193パルスはSEQIDNO41YLVPMVATVNH2のアミド化ペプチドを提示する細胞を示す。結果は、高度の特異性を示した。実施例21様々なDMSO製剤におけるモノ脂質化ワクチンについての比較データマウスを免疫して、それらの脾臓細胞を様々なDSMO濃度を含有するビヒクルにおける100あるいは150nmoleのSEQIDNO37を用いて実施例17に記載するようにアッセイした。クロム放出アッセイの結果について図8参照。図8A:80DMSO、20PBSおよび008蟻酸中100nmole。図8B:80DMSO、60PBSおよび004蟻酸中100nmole。図8C:80DMSO、20PBSおよび008蟻酸中150nmole。図8D:40DMSO、60PBSおよび004蟻酸中150nmole。モノ脂質化ワクチンの製剤は、完全にワクチンペプチドを可溶性にするのに十分なDMSO濃度で提供されるときにより効き目があった。理論により縛られることを望まないが、脂質化ペプチドワクチンの完全な可溶性を生じさせるDMSOの濃度は、よりすぐれた結果を提供すると信じられる。実施例22.様々なDMSO濃度を用いたワクチン接種実験マウスを免疫して、それらの脾臓細胞をDSMOの減少量を含有する以下のビヒクルにおける100nmoleのSEQIDNO37を用いて実施例17に記載するようにアッセイした。図9A:80DMSO、20PBSおよび002蟻酸;図9B:70DMSO、30PBSおよび007蟻酸;図9C:60DMSO、40PBSおよび006蟻酸;図9D:50DMSO、50PBSおよび002蟻酸。図9Aについての製剤は溶液であり、より少ないDMSOを含有する残りの製剤は懸濁液であった。図9Dにおける結果はブースターを受けたマウスを反映しており、一方、図9の残りのパネルは1回のワクチン接種のみを受けたマウスからのデータを示す。これらのデータは、ワクチンが最高の結果のために完全に可溶化されるべきであるという仮説を確認にする。実施例23.様々なDMSO濃度を用いたワクチン接種実験実施例22の方法を、以下の製剤を使用して繰り返した。図10A:80DMSO、20PBSおよび002蟻酸;図10B:70DMSO、30PBSおよび002蟻酸;図10C:60DMSO、40PBSおよび002蟻酸;図10D:50DMSO、50PBSおよび002蟻酸。前のように、図10Aにおいてデータを産生するために使用したワクチン調製は溶液であり、一方、残りの製剤は懸濁液であった。図10Dにおいてアッセイされる脾臓細胞を提供するマウスは、ブースター免疫を受けた。実施例24.ブースター免疫の効果マウスを免疫して、それらの脾臓細胞を25あるいは50nmoleのSEQIDNO37の1あるいは2回の免疫を使用して実施例17に記載するようにアッセイした。図11における結果を参照。図11A:50nmole;図11B:25nmole;図11C:50nmole1回のブースター;図11D:50nmole1回のブースター。ブースター注射は、50nmole投与量についての免疫により達成される細胞傷害効果を増加させたが、25nmole投与量について向上の提供は明らかにほとんどないあるいはなかった実施例25.変化可能な蟻酸濃度の効果マウスを免疫して、それらの脾臓細胞を008蟻酸図12Aおよび12Bあるいは002蟻酸図12Cおよび12Dを含有する、80DMSO、20PBS中のSEQIDNO37の1回の免疫を使用して実施例17に記載するようにアッセイした。注射したペプチドの量は、150nmole図12A、100nmole図12B、50nmole図12Cあるいは25nmole図12Dであった。より多量の投与量では明らかに、ワクチン接種後のより高い特異的細胞傷害性を生じた。実施例26.PADREに結合する非脂質化ペプチドを使用するワクチン接種マウスを免疫して、それらの脾臓細胞を、不完全フロインドアジュバントを用いて乳化した1つの配列100nmole;KSSAKXVAAWTLKAAANLVPMVATV、ここではXはシクロヘキシルアラニンである;SEQIDNO37を形成するために直接PADREに結合する、SEQIDNO1のHCMVペプチドの1回の注射を使用して実施例17に記載するようにアッセイした。投与したワクチンは、5DMSO、45通常食塩水および50不完全フロインドアジュバントを含有する100μLの乳濁液であった。10RatStimの存在下で2回刺激したSEQIDNO1のペプチドを提示するT2細胞を使用して試験すると、免疫化脾臓細胞は100のET比では1122および20のET比では318の特異的細胞障害性を示した。免疫化脾臓細胞は、対照p53ペプチドを提示するT2細胞については444および010、SEQIDNO39のペプチドを提示するT2細胞については331および344、および未処理T2細胞については639および181、の平均細胞傷害性を示した。実施例27.DNAアジュバントにおける非脂質化結合ペプチドを使用するワクチン接種2尾のマウスは、CpG配列を含有する50μgDNAアジュバント陽性DNAアジュバントと共に100nmoleのSEQIDNO37のペプチドを用いて1回免疫した。使用したDNA配列は、ZMoldoveanuVaccine1612161224に記載されるように、18265TCCATGACGTTCCTGACGTT3SEQIDNO42であった。これらの免疫化脾臓細胞からのクロム放出アッセイデータは、以下に表7において提供する。実施例28.DNAアジュバントにおける非脂質化結合ペプチドを使用するワクチン接種実施例27は、CpG配列を欠くDNAアジュバント陰性DNAアジュバントを使用して繰り返した。使用したDNA配列は、ZMoldoveanuVaccine1612161224に記載されるように、19825TCCAGGACTTCTCTCAGGTT3SEQIDNO43であった。これらクロム放出アッセイデータは、以下に表7において提供する。本発明の特定の好ましい態様および実施例を記載したが、本発明は限定されない。当業者は、本発明が診断および治療の分野において広く適応可能であり、修飾および変化がその意図および範囲から離れずに本発明に対して行われうることを理解するであろう。