"糖鎖を有するウミホタルルシフェラーゼを過ヨウ素酸塩で処理して糖鎖部分にアルデヒド基を導入する工程と、次いでアルデヒド基と選択的に反応するビオチン化試薬と糖鎖を有するウミホタルルシフェラーゼのアルデヒド基を反応させる工程を含む、糖鎖部分をビオチン標識したウミホタルルシフェラーゼの製造法。ビオチン化ウミホタルルシフェラーゼであって、糖鎖を有するウミホタルルシフェラーゼとビオチンを糖鎖を介して連結した構造を有するビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼ。請求項2に記載のビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼと、多価アビジン物質との複合体。多価アビジン物質が標識されている請求項3に記載の複合体。請求項3又は4に記載の複合体と界面活性剤およびアルブミンからなる群から選ばれる少なくとも1種の安定剤を含む前記複合体の安定化組成物。緩衝溶液の形態である、請求項5に記載の組成物。請求項3又は4に記載の複合体と、界面活性剤およびアルブミンからなる群から選ばれる少なくとも1種の安定剤を緩衝溶液に溶解することを特徴とする、前記複合体の安定化方法。界面活性剤を011程度配合することを特徴とする、請求項7に記載の方法。請求項3又は4に記載の複合体と界面活性剤およびアルブミンからなる群から選ばれる安定剤を含む緩衝溶液を包含する免疫測定用キット。ELISA測定用である請求項9に記載のキット。ウミホタルルシフェラーゼのC末あるいはN末にリジン含有タグペプチドを連結し、該タグペプチドに含まれるリジンをBiotinproteinligaseによってビオチン化する、ビオチン標識されたタグ化ウミホタルルシフェラーゼの製造方法。本発明はウミホタルの発光系を活用したウミホタルルシフェラーゼの標識と標識ルシフェラーゼを安定化するための技術を提供することを目的とする。本発明は、以下の発明を提供するものである。1ウミホタルルシフェラーゼにポリアルキレングリコール構造をスペーサーに含むビオチン試薬を反応させることを特徴とするビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼの製造法。2ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールである項1に記載の製造法。3配列番号1のウミホタルルシフェラーゼのリジン残基K180及び又はK203に対応する位置がビオチン化されている、項1に記載の製造法。4糖鎖を有するウミホタルルシフェラーゼを過ヨウ素酸塩で処理して糖鎖部分にアルデヒド基を導入する工程と、次いでアルデヒド基と選択的に反応するビオチン化試薬と糖鎖を有するウミホタルルシフェラーゼのアルデヒド基を反応させる工程を含む、糖鎖部分をビオチン標識したウミホタルルシフェラーゼの製造法。5ビオチン化ウミホタルルシフェラーゼであって、以下のいずれかの構造を有するビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼ:ウミホタルルシフェラーゼとビオチンをポリアルキレングリコール部分を含むスペーサーを介して連結した構造;糖鎖を有するウミホタルルシフェラーゼとビオチンを糖鎖を介して連結した構造。6ポリアルキレングリコールがポリエチレングリコールである項5に記載のルシフェラーゼ。7配列番号1のウミホタルルシフェラーゼのリジン残基K180及び又はK203に対応する位置がビオチン化されている、項5に記載のルシフェラーゼ。8ポリエチレングリコール構造が、下記式CH2CH2On式中、nは2~500の整数を示すで表される項6に記載のビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼ。9nが2~100である項8に記載のビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼ。10項5~9のいずれかに記載のビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼと、多価アビジン物質との複合体。11多価アビジン物質が標識されている項10に記載の複合体。12項10に記載の複合体と界面活性剤およびアルブミンからなる群から選ばれる少なくとも1種の安定剤を含む前記複合体の安定化組成物。13緩衝溶液の形態である、項12に記載の組成物。14項10に記載の複合体と、界面活性剤およびアルブミンからなる群から選ばれる少なくとも1種の安定剤を緩衝溶液に溶解することを特徴とする、前記複合体の安定化方法。15界面活性剤を011程度配合することを特徴とする、項14に記載の方法。16項10に記載の複合体と界面活性剤およびアルブミンからなる群から選ばれる安定剤を含む緩衝溶液を包含する免疫測定用キット。17ELISA測定用である項16に記載のキット。18.ウミホタルルシフェラーゼのC末あるいはN末にリジン含有タグペプチドを連結し、該タグペプチドに含まれるリジンをBiotinproteinligaseによってビオチン化する、ビオチン標識されたタグ化ウミホタルルシフェラーゼの製造方法。本発明によれば、ウミホタルルシフェラーゼの活性をできるだけ保持しつつビオチン標識することが可能である。また、得られたビオチン標識されたウミホタルルシフェラーゼとアビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジンなどの多価アビジン物質との複合体は、十分な程度に安定化することができ、免疫測定法、DNAプローブ法、あるいは受容体、リガンド、糖鎖などの各種アッセイ、特に蛋白質、DNAを定量するためのアッセイに好適に使用することができる。本発明で使用されているウミホタルルシフェラーゼは公知である。本明細書および特許請求の範囲において、ウミホタルルシフェラーゼとは、野生型ウミホタルルシフェラーゼあるいは任意のその改変体を広く包含する。野生型ウミホタルルシフェラーゼのアミノ酸配列はAAB86460AAA30332BAD08210などに記載されている。ウミホタルルシフェラーゼ改変体は、1または複数個、好ましくは1または数個のアミノ酸が置換、付加、欠失、挿入されていてもよく、ウミホタルルシフェリンを基質として発光させる活性を有している限り任意の改変体を包含する。本発明において、ビオチンはウミホタルルシフェラーゼのアミノ基N末端またはLys由来のアミノ基、グアニジノ基、チオール基Cysのいずれを介して結合してもよいが、好ましくはアミノ基を介してウミホタルルシフェラーゼに結合する。ビオチンが結合する好ましいアミノ酸残基は、AAB86460のアミノ酸配列のK180及び又はK203であり、他のウミホタルルシフェラーゼの場合には、これらに対応する位置のLysのアミノ基がビオチン化される。ウミホタルルシフェラーゼの配列を以下に示すK180及び又はK203は下線を引いてあるMRFPSIFTAVLFAASSALAALVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAQDCPYEPDPPNTVPTSCEAKEGECIDSSCGTCTRDILSDGLCENKPGKTCCRMCQYVIECRVEAAGWFRTFYGKRFQFQEPGTYVLGQGTKGGDWKVSITLENLDGTKGAVLTKTRLEVAGDIIDIAQATENPITVNGGADPIIANPYTIGEVTIAVVEMPGFNITVIEFFKLIVIDILGGRSVRIAPDTANKGMISGLCGDLKMMEDTDFTSDPEQLAIQPKINQEFDGCPLYGNPDDVAYCKGLLEPYKDSCRNPINFYYYTISCAFARCMGGDERASHVLLDYRETCAAPETRGTCVLSGHTFYDTFDKARYQFQGPCKEILMAADCFWNTWDVKVSHRNVDSYTEVEKVRIRKQSTVVELIVDGKQILVGGEAVSVPYSSQNTSIYWQDGDILTTAILPEALVVKFNFKQLLVVHIRDPFDGKTCGICGNYNQDFSDDSFDAEGACDLTPNPPGCTEEQKPEAERLCNSLFAGQSDLDQKCNVCHKPDRVERCMYEYCLRGQQGFCDHAWEFKKECYIKHGDTLEVPDECKGSGSGSHHHHHH本発明で使用する多価アビジン物質は、ビオチン化ウミホタルルシフェラーゼとビオチン化抗体、ビオチン化抗原などの他のビオチン含有化合物を連結できるものであればよく、ストレプトアビジンが好ましく例示されるが、それ以外にもニュートラアビジンやアビジンが複数個結合した融合蛋白質などの、複数のビオチンと結合可能な多価アビジン物質は広く包含される。Iウミホタルルシフェラーゼへのビオチンの結合ウミホタルルシフェラーゼとビオチン残基は、ポリアルキレングリコール構造を有するスペーサーを介して結合される。ポリアルキレングリコールとしては、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールPPG、ポリブチレングリコール、ブロック共重合体、ブロック共重合体、ブロック共重合体、ブロック共重合体などがあげられ、好ましくは、PEG、PPG、ブロック共重合体、ブロック共重合体、より好ましくはPEGがあげられる。好ましいPEG構造は、下記式で表される:CH2CH2On式中、nは2~500、好ましくは2~100、より好ましくは2~50、さらに好ましくは4~10の整数を示す。本発明のスペーサーはポリアルキレングリコール構造を有する。該ポリアルキレングリコール構造は、エステル、アミドまたはチオエーテル結合を介して、好ましくはアミド結合を介してビオチンおよびウミホタルルシフェラーゼと各々結合するのが好ましい。ビオチン標識試薬としては、たとえば下記の構造のものが使用できる:X1Ym1m2NH、ポリアルキレングリコール基を導入可能なビオチン標識試薬としては、たとえばPierce製のEZLinkNHSPEO4BiotinylationkitやEZLinkTFPPEOBiotinylationkitなどの各種ビオチン標識試薬が例示される。ビオチン標識反応は、上記のようなビオチン標識試薬とウミホタルルシフェラーゼを1~37°C、好ましくは室温で反応させればよい。本発明の親水性ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼは、ウミホタルルシフェラーゼあたりビオチン残基が1~10個、好ましくは2~5個、より好ましくは2~3個結合している。ビオチン残基が多く結合しすぎると、ウミホタルルシフェラーゼが失活しやすくなり、ビオチン1個あたりのウミホタルルシフェラーゼの比率が低下する。ウミホタルルシフェラーゼは一分子あたり約30のリジン残基を有している。ウミホタルルシフェラーゼのリジン残基とN-ヒドロキシサクシンイミドエステルとの反応を利用して、ビオチンの導入は可能である。しかし、この際に、ルシフェラーゼの失活を避ける条件を確立しなければならない。特に、リジン基は親水性残基であるが、化学修飾後のたんぱく質の表面に疎水性の部分が生成される。その疎水性の部分は酵素の3次元構造への影響があるので、親水性のスペーサーを解してビオチンを導入するのが有効である。親水性のスペーサーは、nで表されるアルキレン残基の炭素数が4以下、好ましくは3以下、特に2または3のものが挙げられる。アルキレン残基は、O、NH,CONH、NHCOなどのヘテロ原子を含む任意の基で連結され得る。IIタグ化ウミホタルルシフェラーゼのへのビオチンの結合上記の化学修飾法によるリジン残基をビオチン化する方法以外に、タグを利用する方法が知られている。ウミホタルルシフェラーゼのC末あるいはN末に、タグを付加し、そのタグに含まれるリジンをビオチンリガーゼにより、特異的にビオチン化する。市販されているこのようなタグはgenecopoeia社AvitagTMLERAPGGLNDIFEAQKIEWHEまたはGLNDIFEAQKIEWHEとInvitrogen社のBioEaseTagTM肺炎桿菌オキサロ酢酸脱炭酸酵素のαサブユニットのC末端配列の一部である72残基アミノ酸残基524595のペプチドが良く知られているが、これらに限定されない。III糖鎖を介したウミホタルルシフェラーゼのビオチン化分泌型糖タンパク質であるウミホタルルシフェラーゼを酵母、動物細胞などで発現させると、糖鎖が結合したウミホタルルシフェラーゼが得られる。この糖鎖にNaIO4などの過ヨウ素酸塩を反応させると、糖鎖中のジオール基が酸化されて糖鎖部分にアルデヒド基が導入される。アルデヒド基と選択的に反応する基を有するビオチン化試薬と反応させることにより、ウミホタルルシフェラーゼのLysの側鎖アミノ基とは反応せず、糖鎖に選択的にビオチンが導入される。アルデヒド基はビオチン化試薬のアミノ基と反応させてイミンとし、これをNaBH3CNで還元して、ビオチンを結合することもできる。糖鎖にビオチンを導入することで、ウミホタルルシフェラーゼの活性を保持しつつビオチン化できるので好ましい。過ヨウ素酸塩としては、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、過ヨウ素酸リチウムなどが挙げられる。糖鎖含有ウミホタルルシフェラーゼ1gあたり10010000当量のNaIO4などの過ヨウ素酸塩で酸化し、糖鎖に含まれるジオール基を酸化開裂する。得られたアルデヒドを利用してウミホタルルシフェラーゼの糖鎖を選択的にビオチン化することができる。糖鎖へのビオチンの導入は、例えば以下のスキーム1に従い行なうことができる。<スキーム1>式中、Rは糖鎖由来の基を表し、Cypridinaluciferaseは、糖鎖の一部を有するなお、上記のビオチン化試薬のほかに、PIERCEから以下2種類ものが市販されている。上記のビオチン化試薬は単なる例示であり、ビオチンとアルデヒド基と選択的に反応する基を有する限り、どのような試薬を使用してもよい。本発明の親水性ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼは、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジンなどと複合体を形成させ、該複合体にさらにビオチンが結合された抗体、抗原、DNA、タンパク質、糖鎖、細胞または受容体を認識可能なリガンドなどの物質とさらに結合させ、ビオチンが結合されたこれら物質を用いて免疫アッセイを含む種々のアッセイ系で使用することができる。本発明の親水性ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼは、ストレプトアビジンなどの多価アビジン物質と複合体を形成させ、この状態で保存することができる。緩衝溶液としては、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、酢酸緩衝液、グッド緩衝液などの緩衝液pH40~80中で保存することができる。親水性ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼと多価アビジン物質の複合体は、安定剤を添加することで、4°Cで7~28日程度十分に安定に保存することができる。安定剤としては、界面活性剤、アルブミンBSA,HSAなど、アミノ酸、糖類ガラクトース、ラクトース、シュクロース、グルコース、フルクトース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリオール、ポリグリセリン、ゼラチン、コラーゲン、デキストランなどが挙げられる。界面活性剤としては、Tween20PolyOxyethylenesorbitanmonolaurate、Tween40PolyOxyethylenesorbitanmonopalmitate、Tween60PolyOxyethylenesorbitanmonostearate、Tween80PolyOxyethylenesorbitanmonooleateなどのTween類、NBis3Dgluconamidopropylcholamide[BIGCHAP]、NNBis3Dgluconamidopropyldeoxycholamide[DeoxyBIGCHAP]、Polyoxyethylene9LaurylEther、OctanoylNmethylglucamide[MEGA8]、NonanoylNmethylglucamide[MEGA9]、DecanoylNmethylglucamide[MEGA10]、Polyoxyethylene8OctylphenylEther[TritonX114]、Polyoxyethylene9OctylphenylEther[NP40]、Polyoxyethylene10OctylphenylEther[TritonX100]、Polyoxyethylene20SorbitanTrioleate、Polyoxyethylene23LaurylEther[Brij35]、Polyoxyethylene20CethylEther[Brij58]、nDodecylβDmaltopyranoside、nHeptylβDthioglucopyranoside、nOctylβDglucopyranoside、nOctylβDthioglucopyranosideなどが挙げられる。前記複合体安定剤の緩衝液中の配合量は、安定剤の種類により変動するが、通常001~5程度、より好ましくは01~1程度が挙げられる。親水性ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼストレプトアビジン複合体の作成により、ウミホタルルシフェラーゼの発光を増感させることができる。すなわち、ストレプトアビジンの1分子あたりに、4つのビオチン分子が結合できるので、ストレプトアビジンとビオチン標識ルシフェラーゼを反応させることにより、大きな複合体を作製することができる。この複合体に複数のルシフェラーゼが含まれているので、光増感することが可能である。ストレプトアビジンとビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼとの反応は、4:1から1:4モル比程度で室温で15分から30分程度室温の溶液中で行われる。本発明の親水性ビオチン標識ルシフェラーゼまたはその複合体は、たとえば二次抗体などの種々の抗体の標識に使用することができ、従来使用されているホースラディッシュペルオキシダーゼHRP標識二次抗体、アルカリホスファターゼAP標識二次抗体などの二次抗体に代えてそのまま使用でき、HRPまたはAPで標識された抗体を含む各種の免疫測定キットにそのまま使用することができる。本発明で使用する複合体の安定剤は、酵素免疫測定への影響が小さく、複合体と安定剤を含む溶液を酵素免疫測定などのアッセイ系に用いられることができる。以下、本発明を実施例に基づきより詳細に説明する。三種類のビオチン試薬による標識ルシフェラーゼの作製実施例1PIERCE社で購入したNHSPEG4Biotin試薬を純水で溶かし、終濃度を1の溶液にした。100mMリン酸ナトリウム、150mMNaCl溶液0018mlの溶液に、1のNHSPEG4Biotin溶液0002mlを添加した。次に、01mgの精製されたルシフェラーゼ相対総発光活性36X108カウントにNHSPEG4Biotinリン酸溶液001mlを添加し、4度で8時間ゆっくり攪拌した。反応液をGEHealth社PD10カラムに載せ、100mMリン酸ナトリウム、150mMNaCl溶液で溶出し、活性分画のみ回収し約2mL、未反応のNHSPEG4Biotinを除去した。1000倍希釈した溶出液001mlと、005mlの0001mMルシフェリンと混合し、ルシフェラーゼの活性を測定し、相対総発光活性57X107カウントが得られた。次に、特許文献1で報告された方法に従い、PIERCE社で購入したNHSLCBiotin試薬を用いて、01mgの精製されたルシフェラーゼと4°Cで8時間で反応させた。反応液をGEHealth社PD10カラムに載せ、100mMリン酸ナトリウム、150mMNaCl溶液で溶出し、活性分画のみ回収し約2mL、未反応のNHSLCBiotinを除去した。1000倍希釈した溶出液001mlと、005mlの0001mMルシフェリンと混合し、ルシフェラーゼの活性を測定し、相対総発光活性58X106カウントが得られた。この活性は修飾前のルシフェラーゼの約16であった。さらに、PIERCE社で購入したTFPPEOBiotin試薬を1mg085mlになるように100mMリン酸ナトリウム、150mMNaCl溶液で溶かした。次に、01mgの精製されたルシフェラーゼにTFPPEOBiotin溶液001mlを加え、4度で8時間で反応させた。反応液をGEHealth社PD10カラムに載せ、溶出し、活性分画のみ回収し約2mL、未反応のTFPPEOBiotinを除去した。1000倍希釈した溶出液001mlと、005mlの0001mMルシフェリンと混合し、ルシフェラーゼの活性を測定し、相対総発光活性10X108カウントが得られた。この結果、今回のルシフェラーゼのビオチン化法は特許文献1で報告された方法に比べて、凡そ17倍の活性の向上が見られた。また、標識法では精製ルシフェラーゼの約28の発光活性が保持されている。実施例2:ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼストレプトアビジン複合体の作製と保存実施例1で作製したビオチン標識ルシフェラーゼと修飾前ルシフェラーゼの分子量を質量分析計で分析したところ、分子量は約1000マス以上のシフトが見られた。このことから、ウミホタルルシフェラーゼ1分子に当たり、平均で約23分子のビオチンが修飾していることがわかった。そこで、ビオチン標識ルシフェラーゼ005mgml0001mlを取り、0099mlの100mMリン酸ナトリウム150mMNaCl溶液と混合した。PIERCE社のストレプトアビジン1mgmlを100mMリン酸ナトリウム150mMNaCl溶液で1250倍希釈したのち、ビオチン標識ルシフェラーゼ溶液に01mlを添加し、15分放置した。反応液004mlを取り、1036mlの100mMリン酸ナトリウム150mMNaCl溶液pH72、201BSAの100mMリン酸ナトリウム150mMNaCl溶液pH72、01Tween20の100mMリン酸ナトリウム150mMNaCl溶液pH74それぞれ三つの溶液に添加し、4度で保存し、その半減期を調べた。その結果、1の溶液の場合、半減期は一日に対して、そのほかの溶液の半減期は28日以上であることがわかった。図2実施例3:ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼストレプトアビジン複合体を用いたIFNのELISA法GEHealthのIFNのELISAassayキットに含まれる抗ヒトIFN抗体固相化96ウエルマイクロプレート、IFN標品、ビオチン標識抗ヒトIFN抗体を使用し、ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼストレプトアビジン複合体を用いたIFNの検出を行った。IFN標品の05mlの0、78、156、312、625、125、250、500pgmlのIFN溶液を作製し、4列の抗ヒトIFN抗体固相化96ウエルマイクロプレートに01mlを加える。1時間軽く振盪したのち、培養液を捨てた。015mlの20mMTrisHClpH7809NaCl01Tweenの液をマイクロプレートに加えて、プレートを4回洗浄した。ビオチン標識抗ヒトIFN抗体を各ウエルに01mlを加え、1時間軽く振盪したのち、培養液を捨てた。015mlの20mMTrisHClpH7809NaCl01Tweenの液をマイクロプレートに加えて、プレートを4回洗浄した。各ウエルに実施例3で作製した2液01mlwellを加え、30分軽く振盪した。培養液を捨て、015mlの20mMTrisHClpH7809NaCl01Tweenの液をマイクロプレートに加えて、プレートを4回洗浄した。96ウエルマイクロプレートに500nMのウミホタルルシフェリン液01mlを加え、発光測定を行った。その結果、IFNの希薄濃度78500pgmlにおいても、直線性が得られた図3。一方、IFNのELISAassayキットに含まれる西洋ワサビペルオキシダーゼストレプトアビジンの検出系は、251000pgml範囲の直線性であるので、今回作製したビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼストレプトアビジン複合体の方がより高感度に測定できることが明らかとなった。実施例4ビオチン化したウミホタルルシフェラーゼをSDS-PAGEで泳動させ、SYPRORubyで染色した。ビオチン化したウミホタルルシフェラーゼのバンドを切り出し、ヨードアセチルアミドでシステインを保護したのちに、トリプシンで37°Cで酵素消化を行った。得られたサンプルをLCMSおよび、MSMSで解析した結果、以下のリジン残基下線が修飾を受けていることが確認された。1.FQFQEPGTYVLGQGTKGGDWK2.GAVLTKTR実施例5.ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼを用いたPGE2のELISA実験ステップ1、PGE2のアビジン化PGE2分子量35246をEtOAcで溶かし1mgml、その溶液0186mlをエッペンチューブに入れた。アルゴン雰囲気下でEtOAcを揮発除去し、DMF005mlを加えた。その溶液に、Nヒドロキシサクシニミド分子量11509の10mMDMF溶液005mlを加えた。同様に1エチル33ジメチルアミノプロピルカルボイミドHCl分子量19170の10mMDMF溶液005mlを加え、アルミホイルで覆って遮光し、室温で185時間静置した。得られたPGE2活性エステル0004mlをエッペンチューブにとり、真空ポンプでDMFを揮発除去した。20mMリン酸カリウム緩衝液002mlを加えてよく混合した後、streptavidin溶液1mg1ml100mMリン酸カリウム緩衝液pH7201mlを加え、室温で30分間反応させた。ゲル濾過用のカラムにてPGE2のアビジン複合体を精製した。ステップ2、PGE2の競合反応ELISA005mlの各PGE2標準液10、20、40、78、156、313、625、1250pgml、005mlの抗PGE2抗体、005mlのPGE2アビジン複合体をイムノプレートに分注した。遮光して4°Cで一晩靜置した。翌日、反応液を捨て、それぞれのウエルに20mMTrisHClpH7809NaCl01Tweenの液を加え、5回洗浄した。そこに1mgmlBSAを含む20mMTrisHCl緩衝液pH78で500倍に希釈したビオチン化ルシフェラーゼ溶液を1つの穴に005mlずつ加え、室温で30分間静置した。30分後、反応液を捨てて、先ほどと同じように5回洗浄した。そしてのルミネッセンサーJNRATT社で、イムノプレートの1つの穴につき0001mMルシフェリン溶液100mMTrisHCl緩衝液pH74、300mMLアスコルビン酸ナトリウム、20mM亜硫酸ナトリウム含む01mlと反応させ、その20秒間の発光積算量RLUを測定した。その結果、IC50が48pgmlであることがわかった。実施例6、ウミホタルルシフェラーゼの糖鎖にビオチン化01mgの精製されたルシフェラーゼ相対総発光活性36X108カウントを005mlの01Macetatebufferに溶解し、同量の20mMNaIO4の01Macetatebuffer溶液と混合し、4°Cで05時間ゆっくり攪拌した。反応液をGEHealth社PD10カラムに載せ、100mMリン酸ナトリウム、150mMNaCl溶液で溶出し、活性分画のみ回収し約2mLした。ミリポア社のBiomax100kで2mL液を約002mlまで濃縮した。10mMbiocytinhydrazidePierce01MacetatebufferpH52溶液002mlと混合し、室温で2時間反応させた。反応液をGEHealth社PD10カラムに載せ、100mMリン酸ナトリウム、150mMNaCl溶液で溶出し、活性分画のみ回収し約2mLした。1000倍希釈した溶出液001mlと、005mlの0001mMルシフェリンと混合し、ルシフェラーゼの活性を測定し、相対総発光活性66X107カウントが得られた。実施例7:糖鎖がビオチン化されたウミホタルルシフェラーゼによるIFNαのELISAassayGEHealthのIFNのELISAassayキットに含まれる抗ヒトIFN抗体固相化96ウエルマイクロプレート、IFN標品、ビオチン標識抗ヒトIFN抗体を使用し、ビオチン標識ウミホタルルシフェラーゼストレプトアビジン複合体を用いたIFNの検出を行った。IFN標品の05mlの0、78、156、312、625、125、250pgmlのIFN溶液を作製し、4列の抗ヒトIFN抗体固相化96ウエルマイクロプレートに01mlを加える。1時間軽く振盪したのち、培養液を捨てた。015mlの20mMTrisHCl09NaCl01Tweenの液をマイクロプレートに加えて、プレートを4回洗浄した。ビオチン標識抗ヒトIFN抗体を各ウエルに01mlを加え、1時間軽く振盪したのち、培養液を捨てた。015mlの20mMTrisHCl09NaCl01Tweenの液をマイクロプレートに加えて、プレートを4回洗浄した。ウミホタルルシフェラーゼ50ngmlとストレプトアビジン30ngmlを同量で混合し、01MTrisHClpH7401MNaCl05BSA溶液で10倍希釈した。各ウエルに01mLの該希釈液を加え、室温で30分軽く振盪した。培養液を捨て、015mlの20mMTrisHCl09NaCl01Tweenの液をマイクロプレートに加えて、プレートを4回洗浄した。96ウエルマイクロプレートに1mMのウミホタルルシフェリン液01mlを加え、発光測定を行った。その結果、IFNの希薄濃度78250pgmlにおいても、直線性が得られた図6。"