"ニューロン保護薬を製造するための5α-アンドロスタン-3β,5,6β-トリオールの使用。前記ニューロン保護薬は、脳虚血の治療薬であることを特徴とする、請求項1に記載のニューロン保護薬を製造するための5α-アンドロスタン-3β,5,6β-トリオールの使用。前記ニューロン保護薬は、脊髄虚血の治療薬であることを特徴とする、請求項1に記載のニューロン保護薬を製造するための5α-アンドロスタン-3β,5,6β-トリオールの使用。前記ニューロン保護薬は、低酸素によるニューロン損傷の治療薬であることを特徴とする、請求項1に記載のニューロン保護薬を製造するための5α-アンドロスタン-3β,5,6β-トリオールの使用。本発明は、上述の問題に鑑みてなされたものであり、ニューロン保護薬の製造のための5α-アンドロスタン-3β,5,6β-トリオールの使用を提供することを目的とする。これによって、本発明は、ニューロン疾患の治療に新たな医薬品を提供することができる。本発明は、ニューロン保護薬の製造のための5α-アンドロスタン-3β,5,6β-トリオールの使用である。5α-アンドロスタン-3β,5,6β-トリオール以下、YC-6と略称するは、グルタミン酸により誘導される小脳顆粒ニューロン、皮質ニューロン及び脊髄運動ニューロンの興奮性毒損傷を抑制することができ、ニューロンの生存率を向上させることができ、乳酸脱水素酵素LDHの放出を低減することができ、且つ用量依存的な関係が示されており、最小有効濃度が1μMである。また、YC-6は、低酸素による大脳皮質ニューロンの損傷を抑制することができる。なお、YC-6の効果と使用量とは、依存的な関係を有する。最小有効濃度が2.5μMである。本発明による一実施形態を図面に基づいて説明する。一実施形態図1は、YC-6が、グルタミン酸により誘導される、小脳顆粒ニューロン、脊髄運動ニューロン、および大脳皮質ニューロンの興奮性損傷に対する保護作用を示す特性図である。ここで、Aは小脳顆粒ニューロンに対する保護作用を示す図であり、Bは脊髄運動ニューロンに対する保護作用を示す図であり、Cは大脳皮質ニューロンに対する保護作用を示す図である。また、DはLDH放出率を示す図であり、Eはニューロンの生存率を示す図である。およびは、小脳顆粒ニューロンのYC-6群とグルタミン酸Glu群とを比較するとき、著しい差異が存在することを示すP<0.05,P<0.01。およびは、脊髄運動ニューロンのYC-6群とグルタミン酸Glu群とを比較するとき、著しい差異が存在することを示すP<0.05,P<0.01。およびは、大脳皮質ニューロンのYC-6群とグルタミン酸Glu群とを比較するとき、著しい差異が存在することを示すP<0.05,P<0.01。図2は、YC-6が、低酸素により誘導される皮質ニューロン損傷を保護する作用を示す図である。ここで、Aは位相差顕微鏡による観察結果を示す図であり、Bはニューロン生存率を示す図である。また、CはLDH放出値を示す図である。は、低酸素群とControl群とを比較するとき、著しい差異が存在することを示すP<0.01。およびは、YC-6群と低酸素群とを比較するとき、著しい差異が存在することを示すP<0.05,P<0.01。図3は、YC-6が、腹部大動脈閉塞によるウサギ脊髄虚血モデルに対する神経保護作用を示す図である。ここで、Aは神経機能評価値を示す図であり、Bは組織病理切片を示す図であり、Cは正常な脊髄運動ニューロンの数を示す図である。図4は、YC-6は局所ラット大脳虚血モデルに対する神経保護作用図である。ここで、Aは神経機能評価値であり、Bは大脳梗塞切片図であり、Cは大脳梗塞面積比較図である。本実施形態のYC-6の神経保護作用を確認するために、1局所大脳虚血モデル及び2腹部大動脈を遮断することにより作成される脊髓損傷モデルを用い、YC-6のラット大脳虚血及びウサギ脊髄虚血によるニューロン損傷に対する保護作用を検討する。YC-6群は、ラット脳虚血の30分間前に、尾静脈注射により、YC-6が1mg.Kg1投与される。YC-6群の神経機能評価値は、処理されていない対照群の神経機能評価値より著しく高い。YC-6群の脳梗塞面積は、処理されていない対照群の脳梗塞面積より著しく低い。以上の結果より、YC-6は、脳ニューロン損傷に対する優れた保護作用を有することが明らかである。脊髄虚血の30分間前に、注射によりYC-6を2mg.Kg1投与する。YC-6群の神経機能評価値は、処理されていない対照群の神経機能評価値により著しく高い。YC-6群には、麻痺動物がいない。一方で、対照群の動物は、全て麻痺する。組織病理学的結果としては、YC-6群の正常脊髓前角運動ニューロンの数量が、対照群の正常脊髓前角運動ニューロンの数量よりも著しく多かい。以上の結果より、YC-6は、脊髓ニューロン損傷に対する優れた保護作用を有することが明らかである。よって、YC-6は、脳虚血、脊髄虚血及び低酸素によるニューロン損傷に対する保護作用を有する。これまで、YC-6が神経組織に対する活性又は神経保護作用を有するという報告はない。ニューロンの培養1ラット小脳顆粒ニューロン生後7~8日齢のラット体重約15~20gの脳膜および血管が除去された小脳は、0.25g/Lの膵酵素により消化処理された後、0.05g/LのDNaseIの分散液により処理される。得られた単細胞懸濁液は遠心分離され、分離された細胞は10v/vのFBS及び25mMのKCLを含むBME培地で希釈される。希釈された細胞は、ポリリジンコートの培養容器で培養される。24時間後に、10μMのAra-Cを添加することで非神経細胞の生長と増殖を抑制し、小脳顆粒ニューロンの純度を95以上にする。培養時、葡萄糖を添加し、細胞代謝の必要なエネルギーを補充する。小脳顆粒ニューロンは、培養8日目から試験に用いられる。2ラット脊髄運動ニューロン妊娠15日目のSDラットの胎児脊髓を分離する。髄膜と血管が除去された胎児脊髓組織は、0.125の膵酵素により消化処理された後、遠心分離される。運動ニューロンの濃度が最も高い中間層を取り、遠心分離により、細胞残屑を除去する。得られた脊髄運動ニューロンに対して、張り付き易さで分離を行い1時間貼りつく、速度が最も遅い脊髄運動ニューロンを取って培養する。24h経ってから、シタラビンを添加し、3日目に全部の培地をL-15無血清培地に交換する。以降、2~3日おきに半分のL-15無血清培地を交換する。脊髄運動ニューロンは、培養L-15無血清培地使用3~5日目から試験に用いられる。3ラット皮質ニューロン生後1日齢のラットの脳膜および血管が除去された皮質は、0.25g/Lの膵酵素により消化処理された後、0.05g/LのDNaseIの分散液により処理される。得られた単細胞懸濁液は遠心分離され、分離された細胞は5v/vのFBSと2のB27を含むDMEM-F12培地で希釈される。希釈された細胞は、ポリリジンコートの培養容器で培養される。24時間後に、10μMのAra-Cを添加することで非神経細胞の生長と増殖を抑制する。その後、毎週2~3回、半分の培地を交換する。皮質ニューロンは、培養10日目から試験に用いられる。実施例1初代培養ニューロン細胞に対するYC-6の保護作用1グルタミン酸により誘導される小脳顆粒ニューロン興奮性損傷に対するYC-6の保護作用8日間培養された小脳顆粒ニューロンは、それぞれ正常対照群、グルタミン酸群、MK801グルタミン酸群、YC-6グルタミン酸群に分けられる。正常対照群に対しては、何らの処理も行わない。グルタミン酸群は、200μMのグルタミン酸が添加される。そのほかの群は、MK80110μM及び異なる濃度のYC-6があらかじめ添加され、37°Cにて30分間インキュベートされた後、グルタミン酸が添加される。24h後に、位相差顕微鏡で神経細胞の形態を観察する。FDAで神経細胞を染色し、倒立蛍光顕微鏡で観察し、細胞計数を行い、ニューロンの生存率を計算する。各群の乳酸脱水素酵素の活性を測定する。生存率=各群の生細胞数/対照群の生細胞数×100。結果、図1-A、D、Eに示すように、グルタミン酸群と比較する場合、YC-6グルタミン酸群およびMK801グルタミン酸群では、大部分の小脳顆粒ニューロンの細胞体及び細胞突起の完全が維持され、細胞生存率が高く、LDHの放出値が低く、著しい差を有する。また、YC-6の効果は、濃度を依存している。また、上記濃度範囲内に、YC-6は、正常神経細胞の生存率に影響がないことが明らかである。2グルタミン酸により誘導される脊髄運動ニューロンの興奮性損傷に対するYC-6の保護作用5日間培養された脊髄運動ニューロンは、それぞれ正常対照群、グルタミン酸群、MK801グルタミン酸群、およびYC-6グルタミン酸群に分けられる。正常対照群に対しては、何らの処理も行わない。グルタミン酸群は、200μMのグルタミン酸が添加される。そのほかの群は、MK80110μM及び異なる濃度のYC-6があらかじめ添加され、37°Cにて30分間インキュベートされた後、グルタミン酸が添加される。24h後に、位相差顕微鏡で神経細胞の形態を観察する。FDAで神経細胞を染色し、倒立蛍光顕微鏡で観察し、細胞計数を行い、ニューロンの生存率を計算する。各群の乳酸脱水素酵素の活性を測定する。生存率=各群の生細胞数/対照群の生細胞数×100。倒立位相差顕微鏡下で観察した結果、対照群では、生存している脊髄運動ニューロンの数が多く、細胞体が、飽満であり、三角形や多角形を呈し、立体感およびハレーションを有し、分岐および細胞突起を有する。グルタミン酸群では、生存されている脊髄運動ニューロンの数が少なく、細胞突起が形成され、細胞の損傷が著しい。一方、YC-6グルタミン酸群及びMK801グルタミン酸群では、脊髄運動ニューロンの数が明らかに増加しており、細胞突起が多かったが、少ない死細胞が観察される。図1-B,D,Eを示すように、対照群と比較する場合、他の群では何れも脊髄運動ニューロンの生存率が低い。また、グルタミン酸群とする場合、YC-6グルタミン酸群の生存率が著しく高い。また、YC-6の効果は、濃度を依存している。上記濃度範囲内に、YC-6は、正常神経細胞の生存率に影響がないことが明らかである。3グルタミン酸により誘導される皮質ニューロンの興奮性損傷に対するYC-6の保護作用10日間培養された皮質ニューロンは、それぞれ正常対照群、グルタミン酸群、MK801グルタミン酸群、およびYC-6グルタミン酸群に分けられる。正常対照群に対しては、何らの処理も行わない。グルタミン酸群は、200μMのグルタミン酸は添加される。そのほかの群は、溶剤、MK80110μM及び異なる濃度のYC-6があらかじめ添加され、37°Cにて30分間インキュベートされた後、グルタミン酸が添加される。24h後に、位相差顕微鏡で神経細胞の形態を観察する。FDAで神経細胞を染色し、倒立蛍光顕微鏡で観察し、細胞計数を行い、ニューロンの生存率を計算する。各群の乳酸脱水素酵素の活性を測定する。生存率=各群の生細胞数/対照群の生細胞数×100。結果として、図1-C,D,Eを示すように、グルタミン酸群と比較する場合、YC-6グルタミン酸群およびMK801グルタミン酸群では、大部分の皮質ニューロンの細胞体及び細胞突起の完全が維持され、細胞生存率が高く、LDHの放出値が低く、著しい差を有する。また、YC-6の効果は、濃度を依存している。また、上記濃度範囲内に、YC-6は、正常神経細胞の生存率に影響がないことが明らかである。4低酸素により誘導される皮質ニューロン興奮性損傷に対するYC-6の保護作用10日間培養された初代皮質ニューロンは、それぞれ正常対照群、低酸素群、MK801低酸素群、YC-6低酸素群に分けられる。各群に、三つの補助ウェルを設置する。正常対照群は、CO2インキュベーターで正常インキュベートされる。低酸素群は、低酸素環境下に置かれる酸素濃度は1である。MK801低酸素群およびYC-6低酸素群に対しては、低酸素環境下酸素濃度は1であるに置かれる30分間前に、MK80110μM及び異なる濃度のYC-6で前処理を行う。12時間後に、位相差顕微鏡により観察し、写真を撮る。96ウェルマイクロプレートに対して、上記のように群分け及び処理を行う。その後、MTT貯蔵液200μLを添加し、4時間作用させ、生存の細胞中に青紫色の結晶体を形成させる。各ウェル内の液体を除去し、150μLのDMSOを添加し、青紫色の結晶体を溶解させる。半時間後、結晶体が完全に溶解した後、マイクロプレートリーダーにより570nmの波長でOD値を測定する。損傷群および対照群に対しては、各時間点で50μLの培養液をそれぞれ取り、キットの説明書に基づいて、各ウェル内の培養液のLDH含有量を測定する。各群の測定データは、mean±SDで示す。複数サンプルの平均値間の分散分析及び多重比較するt-testを用いて統計処理を行う。参考文献は[1]および[2]である。[1]BrewerG.J.Isolationandcultureofaldutrathippocampalneurons.J.Neurosci.Meth.1997,71:143-155.[2]LeeM.M.,HseihM.T.Magnololprotectscorticalneuronalcellsfromchemicalhypoxiainrats.Neuroreport1998,9:3451-3456.結果、ラットの皮質ニューロンは、10日間培養された後、細胞体がテーパ状または多極形を呈し、細胞体の境界が鮮明となり、屈折性が高くなり、ニューロン細胞の突起が網に織りなし、細胞核が明晰となる。低酸素により処理された皮質ニューロンは、完全性が破壊され、屈折性が低くなり、シナプスが裂けかつ消失し、細胞質顆粒が変性し、一部の細胞体が腫れて消失する細胞体もある。MK801前処理群およびYC-6前処理群は、正常対照群と比較する場合、皮質ニューロンの形態差がほとんどない。YC-6のニューロン保護作用とYC-6の濃度とは、依存的な関係を有する図2A。MTT法の結果により、低酸素処理はニューロンの生存率を著しく低下させたがP<0.05、低酸素により損害されたニューロンの生存率の向上は、YC-6の濃度に依存している図2B。LDH放出結果は、MTT法と一致である。YC-6前処理群では、低酸素によるニューロン損傷の低下が濃度に依存している図2-C、P<0.05。実施例2腹部大動脈閉塞によるウサギ脊髄虚血モデルに対するYC-6の神経保護作用40匹の雄性ニュージーランドホワイトウサギは、4群に分けられるn=10。Control群は、ウサギ脊髄虚血モデルに作成される。YC-6群は、脊髄虚血が発生する30分間前に、耳翼辺縁静脈注射により2mg.Kg1のステロイドYC-6が投与される。Vehicle群は、脊髄虚血が発生する30分間前に、同様に、同等容量のヒドロキシプロピルシクロデキストリン1mlKg1が注射される。Sham群は、腹部大動脈のみ暴露され、腹部大動脈が遮断されない。ウサギ脊髄虚血モデルの制作方法は、文献[3,4]及び本発明者の前の研究[5]を参照する。[3]CelikM.,etal.Erythropoietinpreventsmotorneuronapoptosisandneurologicdisabilityinexperimentalspinalcordischemicinjury.ProcNatlAcadSciUSA,2002,99:2258-2263.[4]JohnsonSH,KraimerJ.M.,GraeberG.M.Effectsofflunarizineonneurologicalrecoveryandspinalcordbloodflowinexperimentalspinalcordischemiainrabbits.Stroke,1993,24:1547-1553.[5]SangH.,CaoL.,QiuP.,XiongL.,WangR.,YanG.Isofluraneproducesdelayedpreconditioningagainstspinalcordischemicinjuryviareleaseoffreeradicalsinrabbits.Anesthesiology,2006,105:953-960.虚血が発生する直前、虚血が発生した10分後、及び、再潅流した20分後に、各群間の生理学パラメーターをそれぞれ測定する。Talov評価法[5]により、各群のウサギの機能について評価を行う。ここで、0分は後肢が全く麻痺した状態を表し、1分は後肢の関節運動が観察される状態を表し、2分は後肢が自由に運動できるが直立できない状態を表し、3分は直立できるが、歩くことができない状態を表し、4分は後肢の運動機能が完全に回復し、正常に歩くことができる状態を表す。神経機能の評価が終了した後、麻酔された状態で、パラフィン包埋された腰部脊髄組織L5-L7を、切片し、HE染色する。特定観察者により、光学顕微鏡で、脊髓の病理学の変化を観察し、脊髓前角の正常な運動ニューロンを計数する。ここで、特定観察者とは、群分け状態を承知している観察者を言う。動物個体の脊髓前角の正常なニューロンの数は、3つの切片で数えられた数の平均値である。結果、虚血が発生する直前、虚血が発生した10後、及び再潅流20分後に測定した各群間の生理学パラメーターは、著しく異なるP>0.05ことが明らかである。各群動物神経機能評価値の結果を、図3-Aに示す。偽手術群のウサギの後肢の神経機能は、観察期間において完全に正常である4分。一方、Control群及びVehicle群では、直立できるウサギはいない。YC-6群では、7匹のウサギが直立できる3分以上。YC-6群及びSham群の神経機能評価値は、Control群及びVehicle群の神経機能評価値より、正常であるP<0.05。図3-Bに示すように、Control群及びVehicle群では、正常な運動ニューロンが基本的に消失し、大量の空胞変性が生じ、腰部脊髄の損傷が厳重である。一方、YC-6群では、正常の運動ニューロンが確認され、腰部脊髄の損傷が大幅に軽減されている。図3-Cに示すように、YC-6群及びSham群では、脊髓前角の正常な神経細胞が著しく増えているP<0.05。上述したように、YC-6は脊髄虚血に対して優れた保護作用を有する。実施例3ラット局所脳虚血モデルMCAOに対するYC-6の神経保護作用30匹の雄性SDラットは、ランダムに3群n=10に分けられる。Control群は、ラット局所脳虚血モデルに作成される。YC-6群は、脳虚血が発生する30分間前に、尾静脈注射により1mg.Kg1のYC-6が投与される。Vehicle群は、脊髄虚血が発生する30分間前に、同様に、同等容量のヒドロキシプロピルシクロデキストリン2mlKg1が注射される。ラットは、手術前12時間から絶食させ、水を自由に摂取させる。塞栓糸法により中大脳動脈閉塞MCAOモデルを作成する[6]。[6]WangQ.,PengY.,ChenS.,GouX.,HuB.,DuJ.,LuY.,XiongL.Pretreatmentwithelectroacupunctureinducesrapidtolerancetofocalcerebralischemiathroughregulationofendocannabinoidsystem.Stroke,2009,406:2157-2164.遮断120分間後に、塞栓糸を取り出し、再灌流させる。レーザードップラー型血流計により局所脳血流を測定する。手術が終了した後、動物が覚醒した後、動物をメッシュケージに置く、飼料を自由に摂取させる。再灌流された72h後、群分けを承知していない観察者は、Longa評価法[7]により神経機能を評価し、記録する。[7]LongaE.Z.,WeinsteinP.R.,CarlsonS.,CumminsR.Reversiblemiddlecerebralarteryocclusionwithoutcraniectomyinrats.Stroke,1989,201:84-91.ここで、0級は機能障害がない状態を表し、1級は左側前肢が伸びることができない状態を表し、2級は左側に回転する状態を表し、3級は左側に傾斜する状態を表し、4級は自律神経活動がない同時に意識抑制状態となる状態を表し、5級は死亡した状態を表す。神経機能評価が終了した後、ラットを断頭屠殺し、ラットの脳を取り出す。取り出された脳は、切片された後、TTC溶液で30分間染色され、パラホルムアルデヒド緩衝剤で固定される。24h後に、デジタルカメラにより写真を撮り、コンピューターに記録し、画像処理ソフトウェアADOBE登録商標,PHOTOSHOP8.0で梗塞面積ピンク部分は正常脳組織であり、白色部分は梗塞部分であるを計算する。脳水腫による梗塞面積の偏差を校正するために、反対側の正常面積を占める百分率で梗塞面積を示す。梗塞面積百分率=反対側正常組織面積-同側正常組織面積/反対側正常組織面積×100神経行為学評価NBSは、クラスカルワリスKruskal-Wallis検定を用いる。群間差異が存在する場合、マンホイットニイMann-WhitneyのU検定及びBonferroniの校正を行い、両群間の差異を比較する。梗塞面積及び生理学パラメーターは、平均値±標準誤差mean±SDで示す。統計処理について、一元配置分散分析ANOVAを用い、複数群間の比較は、SNKPosthocStudeng-Newman-Keulsを用いる。P<0.05は、統計学上著しく異なるということを意味する。各群の動物の神経機能評価結果を、図5に示す。Control群及びVehicle群と比較する場合、YC-6群は、神経機能が著しく改善され、脳梗塞面積が著しく減少したP<0.05。"