"配列番号1に示すアミノ酸配列の領域に特異的に結合する抗ヒトC4.4Aタンパク質抗体。ポリクローナル抗体である、請求項1に記載の抗体。モノクローナル抗体である、請求項1に記載の抗体受託番号:NITEBP1090で特定されるハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体である、請求項3に記載のモノクローナル抗体。癌患者の予後を判定する方法であって、1癌患者から採取した癌組織において、請求項1から4のいずれかに記載の抗体でヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出する工程、2前記工程1の検出結果に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の局在を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の発現量を比較する工程、および3前記工程2の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質が前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が前記癌浸潤先進部の細胞において、前記癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程、を含む方法。予後が、癌再発リスクに基づく予後である、請求項5に記載の方法。癌再発が、血行性転移に起因する癌再発である、請求項6に記載の方法。癌患者が消化器系の癌の患者である請求項5~7のいずれか1項に記載の方法。癌患者の予後を判定するためのキットであって、請求項1から4のいずれかに記載の抗体を含んでなるキット。予後が、癌再発リスクに基づく予後である、請求項9に記載のキット。癌再発が、血行性転移に起因する癌再発である、請求項10に記載のキット。癌患者が消化器系の癌の患者である、請求項9~11のいずれか1項に記載のキット。請求項1から4のいずれかに記載の抗体を含む、癌再発リスクの診断試薬。癌再発が、血行性転移に起因する癌再発である、請求項13に記載の診断試薬。癌が消化器系の癌の患である、請求項13または14に記載の診断試薬。上記のように、従来技術では、癌の浸潤細胞を特異的に検出することができないのが現状である。そこで、本発明は、上記従来技術の課題を解決することを目的とする。具体的には、癌の浸潤細胞を特異的に検出することで癌患者の予後を簡便かつ信頼性よく判定するために使用可能な抗体、ならびに癌患者の予後を簡便かつ信頼性よく判定する方法、キット、および診断薬を提供することを主な目的とする。本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討したところ、ヒトC4.4Aタンパク質のアミノ末端N末端部位を認識する抗体は癌細胞においてヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出することができないが、ヒトC4.4Aタンパク質のカルボキシル末端C末端部位の特定配列を認識する抗体は癌細胞においてヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出可能であることを見出した。さらに、前記ヒトC4.4Aタンパク質のC末端部位の特定配列を認識する抗体を用いて、ヒトC4.4Aタンパク質が癌の浸潤細胞に特異的に発現する様子を検出することが可能であり、かつヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンが癌患者の予後と高く相関することを見出した。本発明は、かかる知見に基づいてさらに改良を重ねることによって完成したものである。すなわち、本発明は。下記態様の発明を包含する:項1.配列番号1に示すアミノ酸配列の領域に特異的に結合する抗ヒトC4.4Aタンパク質抗体。項2.ポリクローナル抗体である、項1に記載の抗体。項3.モノクローナル抗体である、項1に記載の抗体項4.受託番号:NITEBP1090で特定されるハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体である、項3に記載のモノクローナル抗体。項5-1.癌患者の予後を判定する方法であって、1癌患者から採取した癌組織において、項1から4のいずれかに記載の抗体でヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出する工程、2前記工程1の検出結果に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の局在を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の発現量を比較する工程、および3前記工程2の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質が前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が前記癌浸潤先進部の細胞において、前記癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程、を含む方法。項5-2.癌患者の予後を判定する方法であって、1癌患者から採取した癌組織において、項1から4のいずれかに記載の抗体を用いて免疫染色を行なう工程、2前記工程1の免疫染色に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の染色強度を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度を比較する工程、および3前記工程2の染色強度の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜において、前記癌浸潤先進部の細胞の細胞質と比べて亢進、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が前記癌浸潤先進部の細胞において、前記癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程、を含む方法。項5-3.癌患者の予後を判定する方法であって、1癌患者から採取した癌組織を、前記抗体でヒトC4.4Aタンパク質について免疫測定を行う工程、2前記工程1の免疫測定の結果について、癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、測定結果を比較する工程、および3前記工程2の測定結果の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質が前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が前記癌浸潤先進部の細胞において前記癌病巣の表層部または中層部の細胞と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程、を含む方法。項5-4.癌患者の癌再発リスクを判定する方法であって、1癌患者から採取した癌組織において、項1から4のいずれかに記載の抗体でヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出する工程、2前記工程1の検出結果に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の局在を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の発現量を比較する工程、および3前記工程2の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質が前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が前記癌浸潤先進部の細胞において、前記癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程、を含む方法。項6.予後が、癌再発リスクに基づく予後である、項5-1、項5-2または項5-3のいずれか1項に記載の方法。項7.癌再発が、血行性転移に起因する癌再発である、項5-4または項6に記載の方法。項8-1.癌患者が消化器系の癌の患者である、項5-1項、項5-2、項5-3、項5-4、項6または項7のいずれか1項に記載の方法。項8-2.癌患者が大腸癌患者である、項5-1項、項5-2、項5-3、項5-4、項6または項7のいずれか1項に記載の方法。項9―1.癌患者の予後を判定するためのキットであって、項1から4のいずれかに記載の抗体を含んでなるキット。項9―2.癌患者の癌再発リスクを判定するためのキットであって、項1から4のいずれかに記載の抗体を含んでなるキット。項10.予後が、癌再発リスクに基づく予後である、項9―1に記載のキット。項11.癌再発が、血行性転移に起因する癌再発である、項9―2または項10に記載のキット。項12-1.癌患者が消化器系の癌の患者である、項9-1、項9-2、項10または項11のいずれか1項に記載のキット。項12-2.癌患者が大腸癌患者である、項9-1、項9-2、項10または項11のいずれか1項に記載のキット。項13-1.項1から4のいずれかに記載の抗体を含む、癌再発リスクの診断試薬。項13-2.項1から4のいずれかに記載の抗体を含む、癌診断試薬。項14.癌再発が、血行性転移に起因する癌再発である、項13-1または項13-2に記載の診断試薬。項15-1.癌が消化器系の癌の患である、項13-1、項13-2または項14のいずれか1項に記載の診断試薬項15-2.癌が大腸癌である、項13-1、項13-2または項14のいずれか1項に記載の診断試薬。本発明の抗体は、癌浸潤細胞において特異的に発現するヒトC4.4Aタンパク質を検出することができる。また、本発明の抗体を用いて癌検体におけるヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンを測定することで、癌患者の予後判定を簡便かつ信頼性よく行うことができる。かかる予後判定に基づいて、個々の癌患者に適した個々の患者に適したアフターケアを行っていくことができる。さらに、本発明のキットまたは癌診断試薬を用いて、前記の判定方法を容易に行うことが可能となる。本発明を用いることで、特に大腸がんなどの患者において、抗癌剤投与などの必要なアフターケアの要否について、精度が高い判定が可能となる。その結果、患者への負担となる治療を抑制し、ひいては社会保障費の削減へとつながることが期待される。本発明は、癌患者の予後を簡便かつ信頼性よく判定するための抗体、方法、およびキットを提供することを主な目的とする。以下、抗体、方法、キット、診断薬の順に説明する。1.抗体本発明の抗体は、配列番号1に示すアミノ酸配列の領域に特異的に結合する抗体である。配列番号1に示すアミノ酸配列は、配列番号3に示すヒトC4.4Aタンパク質全長配列のうち、301~316番目の領域である。ここで、ヒトC4.4Aタンパク質とは、配列番号3に示すアミノ酸配列を有するタンパク質、または配列番号1に示すアミノ酸配列の少なくとも1~8番目のアミノ酸配列を含む、配列番号3の一部分のアミノ酸配列を有するタンパク質のいずれをも指すものとする。本抗体が配列番号1に示すアミノ酸配列の領域に特異的に結合することは、公知の方法で可視化することができる。例えば、試験管内の試料を対象とするイムノアッセイ法例えば、ELISA法、免疫電気泳動法例えばウェスタンブロット法、および組織または細胞を対象とする免疫組織化学などが例として挙げられるが、これらに限定されるものではない。可視化にあたっては、本発明の抗体が蛍光物質例えば、フルオレセインイソチアネート、放射性同位体例えば、ヨウ素125、酵素例えば、アルカリフォスファターゼ、西洋ワサビペルオキシターゼ、その他のタンパク質例えば、アビジンなどの分子によって標識化されていてもよい。あるいは、本発明の抗体を特異的に認識する二次抗体を用いてもよい。本発明の抗体は、上記配列番号1に示すアミノ酸配列の領域と特異的に結合できる限りその免疫グロブリンクラスについては限定されるものではなく、例えばIgG、IgM、IgA、IgD、IgE、IgYなどが挙げられる。さらに、そのサブクラスも制限されない。好ましくは、IgGである。本発明の抗体は、抗体を産生しうる哺乳類例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギまたは鳥類例えば、ニワトリ、ダチョウ由来である。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であってもよいし、モノクローナル抗体であってもよい。さらには、モノクローナル抗体のうち、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であってもよい。ここで、キメラ抗体およびヒト化抗体とは、免疫グロブリンタンパク質のうち、抗原と結合可能な部位以外がヒト由来である抗体を指す。ヒト抗体は、ヒト由来の抗体、または完全なヒト由来の免疫グロブリン遺伝子を有するヒト抗体産生マウス由来である抗体を指す。キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体は、ヒトにおける免疫原性が低く、抗体を医療製剤などに用いるに当たって有用である。従って、本発明の抗体を医療製剤などに用いる場合にあっては、モノクローナル抗体が好ましく、ヒト化抗体またはヒト抗体が特に好ましい。本発明の抗体は、免疫グロブリンタンパク質全長であっても、抗原と結合可能な部位を含むそれらの断片フラグメントであってもよい。また、抗体を含む組成物、例えば抗血清などであってもよい。本発明の抗体は、抗原を免疫動物に投与することで作製することができる。抗原としては、配列番号1に示すアミノ酸配列を含むペプチドを用いることができる。抗原を免疫動物に投与する場合にあっては、ペプチドは分子量が小さく、免疫応答を十分に起こせない場合があるため、ペプチドを適当なタンパク質例えば、アルブミン、サイログロブリンに結合させて抗原として用いてもよい。好ましくは、抗原は配列番号1に示すアミノ酸配列を付加したサイログロブリンである。あるいは、多様な抗体またはその断片を産出しうる細胞またはファージなどのライブラリから、抗原と結合する抗体またはその断片を産出するものを探索することで、本発明の抗体を入手することもできる。この場合、抗原としては、配列番号1に示すアミノ酸配列の全長または6アミノ酸以上の一部を含むペプチドを用いることができる。好ましくは、配列番号1に示すアミノ酸配列のペプチドである。抗原として用いるペプチドの入手方法は、特に制限されず公知の方法によることができ、例えば天然由来、化学合成、無細胞系合成、組換えペプチドであってもよい。一般的な抗体の作製方法については、例えば、HarlowらのUsingAntibodiesAlaboratorymanualなどにも記載されているが、以下、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、およびヒト化抗体の各抗体の作製方法について簡単に説明する。1ポリクローナル抗体ポリクローナル抗体の作製に際しては、免疫動物例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリに、通常の方法、例えば、免原溶液を等量のフロイントの完全アジュバント又は不完全アジュバントと乳化混合したものを接種初回免疫し、以後2~4週間の間隔で数回免疫することによって行うことができる。その後、免疫した動物から血液を採取し、ポリクローナル抗体を含む抗血清を調製する。その後、DEAEイオン交換クロマトグラフィー又はプロテインGアフィニティークロマトグラフィー等により、抗血清からポリクローナル抗体を精製することができる。2モノクローナル抗体モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマモノクローナル抗体産生細胞を分離することで作製できる。または、ファージディスプレイ法、すなわち、多様な抗体または抗体断片を発現するファージライブラリより、抗原に対して特異的に結合する抗体または抗体断片を探索する方法によって作製することもできる。ハイブリドーマを分離する方法は、KohlerらNature256495などに記載されており公知であるが、以下に簡単に説明する。最終免疫して数日後の免疫動物例えば、マウスから脾臓を無菌的に摘出し、脾臓から脾臓細胞を調製する。脾臓細胞は、ミエローマ細胞骨髄腫細胞とともに、細胞融合工程に用いる。ミエローマ細胞としては例えば、NS-1、P3U1、SP2/0などを使用することができ、細胞融合の方法としては、例えば融合促進剤ポリエチレングリコールなどを含む培地中で、脾臓細胞とミエローマ細胞とを、常法の混合比率約1/5~1/10程度の割合で混合することにより行うことができる。融合後、選択用培地例えば、HAT培地を用いて、ハイブリドーマのみを増殖させる。それらの内、培養上清中に目的のモノクローナル抗体を分泌しているハイブリドーマは、例えば、培養上清と配列番号1のアミノ酸配列のペプチドとの反応性を酵素結合免疫測定法ELISAでスクリーニングすることによって確認し、選択することができる。ハイブリドーマの産生するモノクローナル抗体は、これを培養することにより、容易に調製することができる。培養は適切な培地中例えば、10ウシ胎児血清を追加したダルベッコ変法イーグル培地DMEMで、あるいは生体内例えば、マウスの腹腔中で行うことができる。培養上清、あるいは腹水などを出発材料として、抗体を精製することもできる。抗体の精製には、タンパク質の精製に一般的な方法、例えば硫安塩析、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、プロテインAもしくはプロテインG結合ポリマー等を用いるアフィニティークロマトグラフィー、または透析等の方法を適宜組み合わせて用いることができる。ファージディスプレイ法は、ClacksonらNature3526248に記載され公知であるが、以下に簡単に説明する。あらかじめ作製した多様な抗体の抗原認識部位を提示するファージライブラリから、配列表1に示すアミノ酸配列のペプチドと結合する抗原認識部位を提示するファージを選択する。選択されたファージが提示する抗原認識部位をそのまま用いても良いし、遺伝子工学的手法によって完全長の抗体を産出可能なCHO細胞などに組み込むことで、完全長の抗体を得ることもできる。3ヒト化抗体、ヒト抗体ヒト化抗体とは、抗体タンパク質のうち、抗原認識のために必要最小限な領域相補性決定領域、complementaritydeterminingregionCDR以外がヒト由来のものである。ヒト化抗体の製造方法は、例えば、EP0239400、US5585089号などに記載され公知である。ヒト抗体は、完全なヒト由来の免疫グロブリン遺伝子を有するヒト抗体産生マウスから得ることができる。ヒト抗体産生マウスについては、WO97/07671などに記載され公知である。本発明の抗体がモノクローナル抗体である場合、後述の実施例で得たハイブリドーマ受託者が付した識別のための表示:CA44AHybridoma11A1が産生するモノクローナル抗体が好適な例として挙げられる。該ハイブリドーマは、2011年4月27日原寄託日に、日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8に住所を有する独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託され、2011年5月31日に原寄託よりブダペスト条約に基づく寄託への移管請求が受領されたハイブリドーマである。その受託番号は、NITEBP1090である。換言すると、本発明の抗体がモノクローナル抗体である場合、好適な例として受託番号:NITEBP1090で特定されるハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体が挙げられるが、これに限定されるものではない。なお、該ハイブリドーマは、配列番号1に示すアミノ酸配列を有するポリペプチドを免疫したマウスの脾臓細胞から作製された、IgGサブタイプのモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマである。本発明の抗体は、配列番号1に示すアミノ酸配列の領域と特異的に結合し、ヒトC4.4Aタンパク質を特異的に検出することができる。その用途は限定されないが、癌患者の予後判定例えば、癌再発のリスクに基づく予後、特に血行性転移に起因する癌再発のリスクに基づく予後の判定や医薬製剤例えば、癌再発リスクの診断薬、特に血行性転移に起因する癌再発リスクの診断薬などに用いることができる。癌患者の予後判定については、下記に詳述する。本発明はまた、上記抗体の癌患者の予後を判定するための使用、上記抗体の医薬製剤の製造のための使用をも提供するものである。2.判定方法本発明は、癌患者の予後を簡便かつ信頼性よく判定する方法を提供する。本発明の好ましい態様の1つにおいて、判定される癌患者の予後は、癌再発に基づく予後であり、特に血行性転移に起因する癌再発に基づく予後である。本発明はまた、癌再発のリスク、特に血行性転移に起因する癌再発リスクの判定方法でもある。ここで、本発明の方法が対象とする癌患者が患う癌は、その種類は限定されるものではなく、あらゆる種類の癌対象となり得る。特に、例えば、胃、大腸、肺、肝、前立腺、膵、食道、膀胱、胆嚢胆管、乳房、子宮、甲状腺、卵巣等における固形癌が対象として好ましく、胃、大腸、食道などの消化器系の癌が特に好ましい。精度高い判定が可能な大腸癌が、対象としてより好ましい。なお、大腸癌とは、盲腸、結腸上行結腸、横行結腸、下行結腸、S状結腸、直腸S状部、直腸上部直腸、下部直腸、肛門管など、大腸のあらゆる部位の癌を含む。本発明の方法が対象とする癌患者として、予後の判定の必要性が高いとの観点から、TMN分類に基づく、ステージII期およびステージIII期の癌患者が特に好ましい。TMN分類とは、国際対がん連合UICCによって定められた、公知の癌の進行度分類の指標である。当業者例えば、医師。であれば、癌患者のTMN分類に基づく癌の進行度を診断することができる。TMN分類においては、癌の原発巣の大きさTumor、リンパ節転移の有無および個数Node、および遠隔転移のMetastasis遠隔転移の有無Metastasisに基づき、癌の進行がステージI~IVに分類される。一般に、癌例えば、大腸癌の進行度がステージII期以上、特にステージII期およびIII期である患者においては、癌腫瘍を外科的手術により除去する治療が施される。従って、本発明が対象とする癌患者は、好ましくは外科的手術などの治療処置が既に施された患者であるが、これに限定されるものではない。また、癌患者の予後とは、ある時点、例えば癌診断時または治療時、から見て、癌の将来の状態についての予測を指し、癌の病状進行再発転移のリスク可能性が高いときは予後不良、癌の病状進行再発転移のリスク可能性が高くないときは予後良好という。なお、癌再発のリスクがあるとは、特に限定されるものではないが、例えば大腸癌の進行度ステージI期の患者の場合は約1粘膜下層まで浸潤した場合もしくは約6筋層以降へ浸潤した場合、ステージII期の場合は約13、ステージIII期の場合は約30など、統計的に知られる再発率以上の確率で癌再発のおそれがある状態を指すことができる。予測の指標については特定されないが、例えば全生存率overallsurvival;OSや無病生存率diseasefreesurvival;DFSが好適である。ここで、全生存率とは、一般に、観察症例のうち、特定の観察開始時点から特定の期間経過の後に生存していることが確認できる割合を意味する。無病生存率とは、一般に、観察症例のうち、観察開始時点から特定の期間経過の後に癌の再発なく生存していることが確認できる割合を意味する。本発明の判定方法は、下記1~3の工程からなる:1癌患者から採取した癌組織において、前記抗体でヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出する工程、2前記工程1の検出結果に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の局在を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の発現量を比較する工程、および3前記工程2の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質が前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が前記癌浸潤先進部の細胞において、前記癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程。上記の1~3の工程は、下記のように換言することもできる。1癌患者から採取した癌組織において、前記抗体を用いて免疫染色を行なう工程、2前記工程1の免疫染色に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の染色強度を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度を比較する工程、および3前記工程2の染色強度の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜において、前記癌浸潤先進部の細胞の細胞質と比べて亢進、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が前記癌浸潤先進部の細胞において、前記癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程。さらに、上記の1~3の工程は、下記の通り換言することもできる。1癌患者から採取した癌組織を、前記抗体でヒトC4.4Aタンパク質について免疫測定を行う工程、2前記工程1の免疫測定の結果について、癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、測定結果を比較する工程、および3前記工程2の測定結果の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質が前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が前記癌浸潤先進部の細胞において前記癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部の細胞と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程。以下、各工程について説明する。1癌患者から採取した癌組織において、前記抗体でヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出する工程、について。癌患者から採取した癌組織においてヒトC4.4Aタンパク質の発現を検出、すなわち前記抗体を用いて免疫染色免疫組織化学を行なう方法は、公知の手法を用いて行なうことができる。例えば、免疫染色免疫組織化学を行う場合にあっては、組織検体を固定する場合もある。具体的には、検体をホルマリン溶液による固定、およびエタノール溶液による脱水を行うことが好適であるが、これに限定されない。さらに、固定化された検体は、パラフィンに包埋し、最終的にパラフィンブロックから試料切片を調製することができる。続いて、検体と抗体を接触させるが、この方法も公知である。例えば、0.1~100mg/mlで抗体を含むPBS溶液と検体を接触させ、温度4~37°Cにて、60分~一晩反応させてもよい。続いて、抗体とヒトC4.4Aタンパク質の結合の可視化を行なうが、この方法も公知である。方法の簡便性を考慮すると、標識化された二次抗体を用いることが好ましい。可視化を行うにあたり標識に用いた蛍光を検出する場合などにおいては、CCDカメラを備えた蛍光顕微鏡システムによって可視化を行うことができる。あるいは、現像写真を得ることもできる。かくして、工程1により、ヒトC4.4Aタンパク質の発現が検出される。2前記工程1の検出結果に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の局在を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の局在および発現量を比較する工程、について。工程1の結果を評価する。評価は、ヒトC4.4Aタンパク質が検出される細胞内の箇所および検出される相対物質量について行う。具体的には、工程1で得られるヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンに基づき、ヒトC4.4Aタンパク質の局在および発現量を比較する。換言すると、工程2では、前記工程1の免疫染色に基づいて、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間でヒトC4.4Aタンパク質の染色強度を比較し、かつ癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で、ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度を比較するヒトC4.4Aタンパク質の局在および発現量を比較するための評価方法、すなわちヒトC4.4Aタンパク質の染色強度の評価方法は、当業者が適宜選択すればよい。ここで、癌浸潤先進部とは、病理学的所見により癌が癌化した組織の表層部から深部に向かって成長する最深部を指し、癌病巣の表層部または中層部中間部は、先進部以外の部位全体を指す。癌浸潤先進部の細胞の細胞膜および細胞質は、当業者が通常の手段例えば、形態に基づく識別により識別することができる。しばしば、消化器系などの組織においては、癌は器官の表層部例えば、上皮、粘膜などで生じる。当初癌化した箇所が原病巣である。その後、生じた癌は、細胞数を増大させながら、周辺部位へ向かって成長すなわち、浸潤。をしていく。周辺とは、例えば大腸においては、表層に近い順に、粘膜下層、筋層などを指す。成長をする癌病巣部において、粘膜下層、筋層などの癌化していない周辺部位と接する、癌病巣部の最深部を癌浸潤先進部という。さらに癌が成長をしていくと、以前には周辺部位と接していた部位が、もはや最深部ではなくなると、中層部中間部となる。比較に際して、癌病巣の表層部または中層部としては、表層部および中層部のいずれであってもよい。前述の通り、癌浸潤先進部と中層部とが位置関係が近い場合が多い。そのため、実用性の観点から、癌浸潤先進部と、癌病巣の中層部との間で比較を行なうことが好ましい。工程1の結果を、癌浸潤先進部の細胞において、細胞膜と細胞質との間、および、癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で比較すると、比較結果は下記の4つのパターンに分類できる後述の実施例2および図4参照:AヒトC4.4Aタンパク質が癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつヒトC4.4Aタンパク質の発現量が癌浸潤先進部の細胞において、癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している、B1ヒトC4.4Aタンパク質が癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積しているが、ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で同程度であるB2ヒトC4.4Aタンパク質が癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積していないが、ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が癌浸潤先進部の細胞において、癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している、CヒトC4.4Aタンパク質が癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積しておらず、ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で同程度である。比較結果は、以下のように換言することができる。AヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部の細胞の細胞膜において、癌浸潤先進部の細胞の細胞質と比べて亢進、かつヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部の細胞において、癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している、B1ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上において、癌浸潤先進部の細胞の細胞質と比べて亢進しているが、ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で同程度であるB2ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上において癌浸潤先進部の細胞の細胞質と比べて亢進していないが、ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部の細胞において、癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している、CヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上において、癌浸潤先進部の細胞の細胞質と比べて亢進しておらず、ヒトC4.4Aタンパク質の染色強度が、癌浸潤先進部と癌病巣の表層部または中層部との間で同程度である。なお、ヒトC4.4Aタンパク質が癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積とは、癌浸潤先進部の細胞の細胞膜において、癌浸潤先進部の細胞の細胞質と比べてヒトC4.4Aタンパク質の発現量が亢進している状態を指す。かくして、工程1の結果が評価され、ヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンが比較される。3前記工程2の比較に基づいて、前記ヒトC4.4Aタンパク質が前記癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ前記ヒトC4.4Aタンパク質の発現量が前記癌浸潤先進部の細胞において、癌病巣の表層部または中層部と比べて亢進している場合は、予後不良と判定する工程、について。上記工程2で分類される4パターンのうち、A型の発現パターンであった検体が由来した患者について、癌の予後が不良である、すなわち癌再発のリスクがある、と判定する。このことは、後述の実施例2、図6および図7において示すように、A型の発現パターンであることは、悪性浸潤の指標である腫瘍蔟出tumorbuddingが高頻度に検出されることとは統計学的に有意に相関すること、ならびに5年間全生存率OSおよび5年間無病生存率DFSについてB1B2C型の発現パターンである場合と比べて統計学的に有意な予後不良が認められることに基づく。予後不良と判定された患者については、アフターケア主に、手術後のアフターケアとして、慎重な経過観察および重点的な予防的措置を行うことが好ましい。慎重な経過観察および重点的な予防的措置の具体例として、フルオロウラシル5-FU、レボホリナートLV;商品名:アイソボリン、ファイザーインコーポレーテッド、オキサリプラチンL-OHP;商品名:エルプラット/Eloxatin、ヤクルト本社などの抗癌剤を投与する等の措置が挙げられるが、これに限定されるものではない。発現パターンがB1型またはB2型であった場合には、ただちに予後不良とは判定されないものの、慎重な経過観察が望ましい。C型の発現パターンで合った場合は、ただちに予後不良であるとは判定されない。適度な経過観察や予防的措置のみを行い、経過に応じた措置を行っていくことが好ましい。また、本発明の判定方法の他の公知の、あるいは将来的に見出される癌の予後判定方法と組み合わせてもよい。例えば、癌検体の病理組織学的所見具体的には、リンパ節転移の有無などが挙げられる。、癌患者の遺伝的要因の検出などとの組み合わせが挙げられるが、これに限定されない。かくして、癌患者の予後不良が判定される。本発明の方法が、癌再発リスクの判定方法である場合は、癌再発のリスクの有無が判定される。3.キット本発明のキットは、癌患者の予後を判定するためのキットであって、上記の抗体を含んでなるキットである。また、本発明のキットには、上記抗体以外に、必要に応じて他の成分を含めることができる。他の成分は、例えば免疫測定を行うために必要な試薬または器具であってもよい。具体的には、免疫組織化学を行う際の検体固定に用いる試薬例えば、ホルマリン、エタノール、検出に用いる試薬例えば、2次抗体、使用する器具例えば、スライドガラス、カバーカラス、もしくはポジティブコントロール試料およびネガティブコントロール試料などが挙げられるが、これに制限されない。さらに、上記判定方法を行うための手順を書き記した書面などを含むことができる。本発明のキットは、常法に従い、必要に応じて上記成分を備えることで作製することができる。キットの使用形態は特に限定されないが、上記判定方法に用いることが好ましい。上記判定方法に用いた場合、判定を容易に行うことが可能となる。本発明のキットの好ましい態様において、判定される癌患者の予後は、癌再発リスクに基づく予後であり、特に血行性転移に起因する癌再発リスクに基づく予後である。4.診断薬本発明の癌診断薬は、上記の抗体を含んでなる。本発明の癌診断薬の好ましい態様の1つとして、癌再発リスクの診断薬が挙げられる。特に好ましい態様は、血行性転移に起因する癌再発リスクの診断薬である。また、本発明の診断薬には、抗体を不活性化させず、上記判定方法を行うに当たって支障がない限り、他の成分を含めることができる。具体的には、生理食塩水、緩衝液などが挙げられるが、これに限定されるものではない。本発明の診断薬は、常法に従い、必要に応じて上記成分を備えることで調製することができる。実施例以下に、実施例等に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。[実施例1]ポリクローナル抗体の作製と特異性の検定<I.実験材料と実験方法>1.ポリクローナル抗体の作製ウサギを、標的ペプチドを結合したサイログロブリンで免疫した。標的ペプチドは、ヒトC4.4Aタンパク質のN末端近傍の83~97番目のアミノ酸配列に相当する配列番号2に示すアミノ酸配列を有するペプチド、およびヒトC4.4Aタンパク質のC末端の301~316番目のアミノ酸配列に相当する、GPI付加シグナル配列の一部を含む配列番号1に示すアミノ酸配列を有するペプチドを用いた。図1。それぞれのウサギから採取した抗血清を、標的ペプチドが担体ビーズに結合されたカラムに通過させることで、ヒトC4.4Aタンパク質に対して特異的に結合するIgGを精製した。得られたN末端およびC末端に対する抗体を、それぞれ抗C4.4A-1抗体および抗C4.4A-2抗体と命名した。2.細胞株ヒト大腸癌由来細胞株HCT116は、米国アメリカンセルタイプコレクション米国バージニア州マナサスより入手した。ヒト大腸癌由来細胞株KM12SMは、金沢大学癌研究所の源利成教授から分与されたものを用いた。これらの細胞株は、10のウシ胎児血清FBS、100ユニット/mLのペニシリン、および100マイクログラム/mLのストレプトマイシンを追加したダルベッコ変法イーグル培地DMEM中、ならびに温度37°Cおよび空気中の二酸化炭素濃度5の恒温恒湿槽中にて培養を行った。3.大腸癌組織検体大腸癌組織検体は、インフォームドコンセントを行った大腸癌患者より、大阪大学外科学講座n=122,1995~2005および九州大学生体防御医学研究所n=108,1993~1999における手術時に採取されたものを使用した。採取された組織検体は、緩衝ホルマリン液で一晩、4°Cにて固定した後、エタノール系列で脱水処理をし、パラフィンに包埋した。4.ウェスタンブロット法ウェスタンブロット解析は常法に従って行った。以下にその概略を示す。タンパク質試料20マイクログラムを、12.5ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、その後ポリフッ化ビニリデンPVDFメンブラン上に電気ブロッテイングした。メンブランは各々の抗体の至適濃度で1時間インキュベートした。タンパク質のバンドは、ECLウェスタンブロッティング検出システムアマシャム社、米国ニュージャージー州を用いて検出した。5.免疫組織化学4マイクロミリメートル厚の組織切片を、パラフィン包埋ブロックより調製した。抗原賦活化処理を10mMクエン酸緩衝液中にて、温度95°C下で40分間行った後に、抗体染色をVetastainABCperoxidasekitVectorLabs社、米国カリフォルニア州を用いて行った。スライドグラスを、50μg/mlの抗体原液を1:200に希釈した抗C4.4A-1抗体または抗C4.4-2抗体中で、一晩4°Cにてインキュベートした。非免疫ウサギ由来IgGVectorLaboratories社をネガティブコントロールとして利用し、1次抗体の代わりに用いることで、2次抗体またはIgGの非特異的結合による偽陽性反応の可能性を排除した。<II.実験結果>1.抗C4.4Aポリクローナル抗体の反応性:ウェスタンブロット法作製した2種類の抗体についてウェスタンブロット解析を行ったところ、ポジティブコントロールの食道上皮検体については、両方の抗C4.4A抗体は、分子量67kDa近傍に明確なバンドを示した図2。しかし、大腸癌由来細胞株および大腸組織検体については、抗C4.4A-2ポリクローナル抗体のみが約40kDaの位置に顕著なバンドを示し、一方で抗C4.4A-1抗体はバンドを示さなかった図2。なお、ローディングコントロールとして用いたウサギ由来の抗ヒトアクチン抗体は、シグマアルドリッチ社米国ミズーリ州セントルイスから購入した。2.抗C4.4Aポリクローナル抗体の反応性:免疫組織化学上記と一致した結果が、免疫組織化学によっても得られた。すなわち、両方の抗体について、基底上の扁平上皮において染色が観察された図3A、B。大腸癌組織検体においては、抗C4.4A-1抗体は何らシグナルが検出されなかったものの、抗C4.4A-2抗体では染色シグナルが得られた図3C、D。ネガティブコントロール検定を行ったところ、非免疫ウサギ由来IgGおよび過剰量のヒトC4.4A-2抗原ペプチドにあらかじめ吸着させた抗体の何れもが、食道上皮組織検体を染色しなかった。データは示さない。<III.考察>このように、配列番号1に示すアミノ酸配列の領域に特異的に結合する抗C4.4A-2抗体は、大腸癌由来の試料において、ヒトC4.4Aタンパク質を特異的に検出することができた。一方、抗C4.4A-1抗体はヒトC4.4Aタンパク質の検出ができなかった。また、ヒトC4.4Aタンパク質は、配列番号3に示す全長配列の308番目と309番目とのアミノ酸残基の間で切断されて、GPIアンカーが付加されると予想されている。従って、本発明の抗体は配列番号3に示す全長配列の301~308番目のアミノ酸配列の領域を認識していると推定される。[実施例2]大腸癌組織検体におけるヒトC4.4Aタンパク質の検出、および生存率との相関<I.実験方法>1.大腸癌組織検体におけるヒトC4.4Aタンパク質の検出実施例1に準じた方法で、大腸癌組織検体におけるヒトC4.4Aタンパク質の検出を、抗C4.4Aー2ポリクローナル抗体を用いて行った。2.腫瘍蔟出の測定腫瘍蔟出は、腫瘍の悪性浸潤性の指標である。そこで、腫瘍蔟出のヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンと腫瘍蔟出の関係を調べるために、腫瘍蔟出の測定を行った。腫瘍蔟出の評価は、ShintoらDisColonRectum4914221430に記載の方法に従った。以下にその概略を記す。単一の孤立した癌細胞、または4以内の癌細胞からなる細胞集団を、腫瘍蔟出と定義した。20倍の対物レンズ下で観察したときに、最も高密度に腫瘍蔟出が観察される領域における腫瘍蔟出の出現頻度に応じて、癌組織を2つのグループに分類した。腫瘍蔟出の出現頻度が0から9である場合を低頻度蔟出とし、腫瘍蔟出の現頻度が10以上である場合を高頻度蔟出と定義した。3.統計解析大腸癌組織検体におけるヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンと生存率との相関を統計解析によって評価した。統計解析は、StatViewJ-5.0プログラムアバカスコンセプツ社、米国カリフォルニア州バークレーを用いて行った。大腸癌再発率の推定を行うためにはカプランマイヤー法を用い、統計的有意性の検定のためにはログランク検定を用いた。離散変数間の関連性は、カイ2乗検定を用いて評価した。平均値の比較は、マンホイットニー検定を用いて行った。スピアマンの順位相関検定を用いて、2因子間の相関関係を解析した。データは、中央値をもって表記した。P値が<0.05の場合を、統計的有意差があるとした。<II.実験結果>1.大腸癌組織および浸潤部位におけるヒトC4.4Aタンパク質の発現パターン正常な大腸粘膜検体においては、ヒトC4.4Aタンパク質は大腸上皮の底部において検出される場合があった。一方、癌組織検体においては、大腸癌である大半の場合122例中96例、78.7において、ヒトC4.4Aタンパク質の発現が検出された。癌病巣の表層部または中層部においては、ヒトC4.4Aタンパク質の弱い発現がほとんどの場合は細胞質において検出され、一方浸潤先進部においては高頻度で細胞膜上にC4.4Aタンパク質の発現が検出された図4A。注目すべき事実として、膨大な数の癌組織検体のうちで、新生の間質に向かって面した細胞のみがヒトC4.4Aタンパク質を発現していた図4A、左下パネル。リンパ節または肺への転移においても、ヒトC4.4Aタンパク質が浸潤周縁部において発現するという同様の発現パターンを示した。図5癌病巣の表層部または中層部における場合比較とした、癌浸潤先進部における染色パターンに基づいて、大腸癌の122症例を、次の4つのカテゴリに分類した:AヒトC4.4Aタンパク質が癌浸潤先進部の細胞の細胞膜上に集積し、かつ癌浸潤先進部の細胞において癌病巣の表層部または中層部と比べて発現量が亢進しているn=31、B1集積しているが、発現量の亢進なしn=11、B2集積していないが、発現量が亢進しているn=14、C集積、発現量の亢進のいずれもないn=66。表1。A型の発現パターンと、他の型B1B2Cとにおいて、表2に列挙する種々の臨床的および病理学的パラメーターについて比較したところ、A型はより高い腫瘍浸潤深度、リンパ節転移、および血行性転移血管浸潤と相関していたそれぞれについてP=0.049、P=0.036、P=0.002。癌のステージがII期およびIII期の患者群n=82について性別、年齢、腫瘍サイズ、分化度、浸潤深度、リンパ節転移、および血行性転移血管浸潤について解析したところ、A型は血行性転移血管浸潤とのみ相関していたP=0.0027。2.腫瘍蔟出とヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンとの関係腫瘍蔟出は、腫瘍の悪性浸潤性の指標であり、腫瘍蔟出が高頻度に観察される場合蔟出点数≧10は、腫瘍蔟出が低頻度である場合蔟出点数0~9と比べて、顕著に予後が不良である全生存率についてはP=0.002[ステージI期~IV期、n=122]、無病生存率についてはP=0.004[ステージII期およびIII期、n=82]ことは前出の報告の通りである。免疫染色を行ったところ、蔟出細胞においてヒトC4.4Aが細胞膜上で濃く染色されることが高頻度で観察された図4B。蔟出頻度と浸潤先進部におけるヒトC4.4Aの発現パターンの相関関係を調べたところ、2つの因子の間で顕著な相関関係が認められたP<0.0001、図4C、表3。3.生存率解析前述の大阪大学外科学講座における手術時に、大腸癌患者より採取した122症例のヒトC4.4Aタンパク質の局在の変化AB1または発現強度の変化AB2のいずれとも、より短い5年間全生存率OSと相関するP=0.014およびP=0.006、図6ことを、生存率解析は示している。より顕著な差が、A型と他の型B1B2Cの間で認められたP=0.0009、図6。B1型およびB2型は、C型との間に顕著な差は認められなかった図6。癌のステージがII期およびIII期の患者群について、外科治療後の5年間無病生存率DFSについて解析したところ、同様の結果が得られた図7。一変量解析の結果は、腫瘍サイズが大きいこと、ならびにリンパ節転移、遠隔転移、および腹膜播種の存在、ならびに高頻度蔟出が、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンに加えて、不良な5年間OSの前兆であることを示した。最も顕著な予後因子を判定するために多変量解析を行ったところ、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターン、腫瘍サイズが大きいこと、リンパ節転移、遠隔転移、および腹膜転移は独立した予後因子であると同定されたが、高頻度蔟出は保持されなかった表4、5。癌のステージがII期およびIII期の患者群n=82において、一変量解析によるヒトとC4.4Aタンパク質のA型発現パターン、高頻度蔟出、およびリンパ節転移の存在が短いDFSの前兆であった。多変量解析の結果によると、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンのみが独立した予後因子であることが保持された表6、7。<III.考察>このように、大腸癌患者の予後観察を行ったところ、癌組織献体においてヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンが見られた患者においては、統計学的に有意に予後不良であった。すなわち、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンを予後不良の判定基準として用いることができることがここに示されている。[実施例3]標的ペプチドと染色パターンとの関係の検証<I.実験材料と実験方法>実施例1と同様にして、配列番号1に示すアミノ酸配列のペプチドを標的ペプチドとして、抗C4.4A-2抗体とは異なる2羽のウサギから、ポリクローナル抗体を得た。それぞれ、抗C4.4A-2-2ポリクローナル抗体および抗C4.4A-2-3ポリクローナル抗体と命名した。また、ヒトC4.4Aタンパク質の別の部位である、配列番号4に示すアミノ酸配列C4.4A119ペプチド:ヒトC4.4Aタンパク質の119~140番目のアミノ酸配列に相当のペプチド、および配列番号5に示すアミノ酸配列C4.4A277ペプチド:ヒトC4.4Aタンパク質の277~297番目のアミノ酸配列に相当のペプチドを標的ペプチドとしたポリクローナル抗体を得た。それぞれ、抗C4.4A119ポリクローナル抗体および抗C4.4A277ポリクローナル抗体と命名した。図8に、ヒトC4.4Aタンパク質における各々の標的ペプチドの部位を示す。得られた各々の抗体について、大腸癌患者由来の試料における免疫組織化学による染色パターンを、実施例1で取得した抗C4.4A-2抗体との染色パターンと比較した。免疫組織化学は、実施例1および2と同様にして行なった。<II.実験結果と考察>図9に示すように、抗C4.4A-2-2ポリクローナル抗体および抗C4.4A-2-3ポリクローナル抗体については、浸潤先進部においては細胞膜上に染色が観察された。これは、抗C4.4A-2ポリクローナル抗体と同様の染色パターンであった。一方、図10に示すように、抗C4.4A119ポリクローナル抗体および抗C4.4A277ポリクローナル抗体を用いた場合は、癌浸潤先進部における特徴的な染色パターンは、観察されなかった。以上の結果は、実施例2で観察された癌浸潤先進部における染色パターンは、ヒトC4.4Aタンパク質の特定の部位を標的とする抗体において、特異的に観察されることを示している。[実施例4]モノクローナル抗体の作製と特異性の検証<I.実験材料と実験方法>1.モノクローナル抗体の作製下記の手順に従い、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得た。1標的ペプチドとして、配列番号1に示すアミノ酸配列を有するペプチドのN末端にシステインと1残基付した配列を有するペプチドを合成した。2上記ペプチドをウシサイログロブリンへ結合し、これをマウスへ免疫した。免疫動物は、以下の通りであるSPFVAFB6D2F1Crlj雄、6週齢日本チャールスリバーより取得を2匹、およびSPFVAFBALBcAnNCrlCrlj雄、6週齢日本チャールスリバーより取得を2匹、である。免疫条件は、50μg匹回を腹部と背部の皮下および皮内へ7日毎に1回、計4回の免疫として行なった。3試験採血を抗原固相ELISA及び免疫組織染色で評価し、抗体力価の亢進が見られた個体を選抜した。4選抜したマウス個体から脾臓細胞およびリンパ節を調製し、ミエローマP3X63Ag8653と融合し、融合細胞ハイブリドーマを得た。5得られた融合細胞を限界希釈法による細胞播種を行った。ついで、培養上清を、標的ペプチドを固定した抗原固相プレートに対してELISA法を行い、標的力価に対する抗原力価が高い抗体を産生するハイブリドーマを選択した。得られたハイブリドーマの一つを11A1と命名し、以下の解析に用いた。なお、ハイブリドーマの作製およびモノクローナル抗体の精製は、株式会社免疫生物研究所に委託して行なった。作製したハイブリドーマ11A1は、2011年4月27日原寄託日に、日本国日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8に住所を有する独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託され、2011年5月31日に原寄託よりブダペスト条約に基づく寄託への移管請求が受託された。その受託番号は、NITEBP1090であり、受託者が付した識別のための表示はCA44AHybridoma11A1である。2.免疫組織化学上記で得たハイブリドーマ11A1が産生するモノクローナル抗体以下、抗C4.4A-2モノクローナル抗体と記載する。を用いて、大腸癌患者由来の試料における免疫組織化学による染色パターンを、実施例1で取得した抗C4.4A-2抗体との染色パターンと比較した。また、下記の手法により、過剰量のヒトC4.4A-2抗原ペプチドにあらかじめ吸着させた抗C4.4A-2モノクローナル抗体を用いた染色パターンも得た。1抗体希釈バッファー1BSAinPBSへ抗体およびペプチドを、抗体ペプチドが1mol20molとなるように添加。対照として、ペプチドに代えて精製水を添加したものを用いる。24°Cで一晩、転倒混和。3.ウェスタンブロット法実施例1と同様にして、1抗C4.4A-2ポリクローナル抗体、2過剰量のヒトC4.4A-2抗原ペプチドにあらかじめ吸着させた抗C4.4A-2ポリクローナル抗体、3抗C4.4A-2モノクローナル抗体、および4過剰量のヒトC4.4A-2抗原ペプチドにあらかじめ吸着させた抗C4.4A-2モノクローナル抗体を用いて、ウェスタンブロットを行なった。試料として、大腸癌由来細胞株HCT116を用いた。<II.実験結果>図11に、大腸癌患者由来の試料の連続切片における、抗C4.4A-2モノクローナル抗体と抗C4.4A-2ポリクローナル抗体の染色パターンを示す。抗C4.4A-2モノクローナル抗体により得られる染色パターンは、抗C4.4A-2ポリクローナル抗体の場合と同様に、癌浸潤先進部においては高頻度で細胞膜上に染色が観察された。図12に、過剰量のヒトC4.4A-2抗原ペプチドにあらかじめ吸着させた抗C4.4A-2モノクローナル抗体を用いた染色パターンを示す。癌浸潤先進部における特異的な染色パターンが、観察されなかった。図13に、ウェスタンブロット解析の結果を示す。抗C4.4A-2モノクローナル抗体を用いて、抗C4.4A-2ポリクローナル抗体と同様に約40kDaの位置にバンド図中、矢印で指し示すバンドを検出することができた。また、約40kDaの位置のバンドは、過剰量のヒトC4.4A-2抗原ペプチドにあらかじめ吸着させた抗C4.4A-2ポリクローナル抗体および過剰量のヒトC4.4A-2抗原ペプチドにあらかじめ吸着させた抗C4.4A-2モノクローナル抗体を用いた場合においては、検出されなかった。<III.考察>以上の結果は、CA44AHybridoma11A1が産生するモノクローナル抗体が、配列番号1に示すアミノ酸配列のペプチドを特異的に認識する抗体であり、免疫組織化学およびウェスタンブロット解析において実施例1で得た抗C4.4A-2ポリクローナル抗体と同様の反応性を有する抗体である。すなわち、CA44AHybridoma11A1が産生するモノクローナル抗体は、本発明の予後判定方法において好適に使用することができる。[実施例5]ヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンと、リンパ節転移および血行性転移との相関ヒトC4.4Aタンパク質の発現パターンと、リンパ節転移および血行性転移との相関をより詳細に検証するために、実施例3で用いた122症例の大腸癌組織検体に加えて、遠隔転移を生じた10症例大阪大学外科学講座の大腸癌組織検体を加えた計132症例について、実施例2と同様に統計解析をおこなった。統計解析の結果を、表8~13に示す。特に着目すべき点として、遠隔転移を生じた10症例大阪大学外科学講座を加えた症例群の解析からは、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンとリンパ節転移とは相関しないことが明らかとなった表9、P値=0133。一方で、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンと血行性転移との相関は保持された表9、P値=0003。<総合考察>以上の実施例により、癌組織献体においてヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンが見られた患者においては、統計学的に有意に予後不良であった実施例2。また、詳細な解析の結果、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンは、血行性転移とは相関するものの、リンパ節転移とは相関が小さいことが示唆された実施例5。また、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンは、リンパ節転移と比べて、癌再発のリスクをより顕著に示す因子であることも示唆された。これらの結果は、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンを予後不良の判定基準として用いることを示しており、さらには、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンは血行性転移に起因する癌再発リスクの指標であることを示している。従来、リンパ節転移の有無が、外科手術後に抗癌剤投与などの癌再発を予防するためのアフターケアを行なうか否かの目安となっている。リンパ性転移陰性の場合は、予防的アフターケアを行なわないことが一般的であるが、リンパ性転移陰性において10~20程度の患者において癌が再発するに過ぎない。一方、リンパ性転移陽性の場合は、抗癌剤投与などの予防的アフターケアを行なっているものの、リンパ性転移陽性において癌が再発する割合は25~40程度である。これは、リンパ節転移の有無を指標とした場合には、本来予防的アフターケアを必要としない患者に、身体的、精神的および経済的な負担を強いていることを意味する。本発明の抗体を用いた方法は、ヒトC4.4Aタンパク質のA型発現パターンにより、血行性転移のリスクを検出できると考えられる。そのため、従来のリンパ節転移の有無を指標とした場合には検出することができなかった、血行性転移に起因する癌再発を予見できると考えられる。本発明の抗体を用いた方法により、癌手術後に癌再発のリスクが高い患者を、高い精度で予期することができる。すなわち、予防的アフターケアが必要でない患者においてはアフターケアを行なわず、真に予防的アフターケアを必要とする患者において重点的にアフターケアを行うことが容易となる。"