"IκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤。IKKα活性に対し1μM以下のIC50を有し、IKKβ活性に対し10μM以上のIC50を有するIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤。IκBキナーゼα活性化阻害剤がノルアリステロマイシンである請求項1記載の去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤。IκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する男性用避妊薬。IKKα活性に対し1μM以下のIC50を有し、IKKβ活性に対し10μM以上のIC50を有するIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する男性用避妊薬。IκBキナーゼα活性化阻害剤がノルアリステロマイシンである請求項4記載の男性用避妊薬。IκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する重症筋無力症治療剤。IKKα活性に対し1μM以下のIC50を有し、IKKβ活性に対し10μM以上のIC50を有するIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する重症筋無力症治療剤。IκBキナーゼα活性化阻害剤がノルアリステロマイシンである請求項7記載の重症筋無力症治療剤。本発明の目的はIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤、男性用避妊薬及び重症筋無力症治療剤を提供することにある。即ち、本発明はIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤に関する。また、本発明はIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する男性用避妊薬に関する。さらにまた、本発明はIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する重症筋無力症治療剤に関する。次に本発明を詳細に説明する。本発明は、次の治療剤や避妊薬に関する。1IκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤。2IKKα活性に対し1μM以下のIC50を有し、IKKβ活性に対し10μM以上のIC50を有するIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤。3IκBキナーゼα活性化阻害剤がノルアリステロマイシンである1記載の去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤。4IκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する男性用避妊薬。5IKKα活性に対し1μM以下のIC50を有し、IKKβ活性に対し10μM以上のIC50を有するIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する男性用避妊薬。6IκBキナーゼα活性化阻害剤がノルアリステロマイシンである4記載の男性用避妊薬。7IκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する重症筋無力症治療剤。8IKKα活性に対し1μM以下のIC50を有し、IKKβ活性に対し10μM以上のIC50を有するIκBキナーゼα活性化阻害剤を有効成分として含有する重症筋無力症治療剤。9IκBキナーゼα活性化阻害剤がノルアリステロマイシンである7記載の重症筋無力症治療剤。本発明の有効成分であるIκBキナーゼα活性化阻害剤としては、NAMの他、Bioorgmedchemlett171233-12372007のTable1に記載の18a;BioorgMedChemLett173972-39772007のTable1に記載の8p,8q及びTable2に記載の12a,12d;US2008/0064753に記載のNPI-1387;並びにWO2008/32121及びWO2008/10508記載の化合物等が挙げられる。まず、IκBキナーゼα活性化阻害剤の去勢抵抗性再燃前立腺癌に対する薬理試験について述べる。IKKα活性化に対して特異的抑制効果を有するノルアリステロマイシンNAMを用いて去勢抵抗性再燃前立腺癌株であるPC-3及びDU145、去勢非抵抗性前立腺癌株であるLNCaPに対して増殖性、移動性及びApoptosis誘導効果の検討をinvitroで行った。その結果、転移抑制効果を確認したと共に、新たに増殖抑制及びApoptosis誘導効果があることを確認した。また、これらの効果は、先行しているIKKβ特異的阻害薬であるMLN-120Bに比較して、去勢抵抗性再燃前立腺癌株であるPC-3及びDU145において顕著に示されることを確認した。後記実施例1、図1~13従って、IκBキナーゼα活性化阻害剤は、去勢抵抗性再燃前立腺癌治療剤として有用である。次に、IκBキナーゼα活性化阻害剤の男性用避妊薬としての効果に関する試験結果について述べる。IKKα活性化に対して特異的抑制効果を有するノルアリステロマイシンNAMは、II型コラーゲン関節炎モデルマウスで、関節炎抑制効果でED50である0.1mg/kgの1日2回投与から精子形成抑制傾向が認められ、関節炎を100予防する0.3mg/kgの1日2回投与では完全に精子形成が抑制初期の精母細胞の脱落に起因した精子形成障害された。一方、IKKβ特異的阻害薬であるMLN-120Bの投与ではこのような変化は認められなかった。また、休薬期間後の解析によりNAMの経口投与で認められる精子形成障害は組織学的に可逆性の変化であることを確認した。後記実施例2,図14~23従って、IκBキナーゼα活性化阻害剤は、男性用避妊薬として有用である。次に、IκBキナーゼα活性化阻害剤の重症筋無力症に対する薬理試験について述べる。後記実施例3記載のようにNAMのII型コラーゲン関節炎モデルマウスへの反復経口投与から、関節炎を100予防する0.3mg/kgの1日2回投与で、以下に示す効果を発見した。一方、IKKβ特異的阻害薬であるMLN-120Bの投与では以下のような変化は認められなかった。1NAM投与の早期段階から、胸腺の萎縮が観察された10週齢のDBA/1JNCrlj雄性マウスに1mg/kgの1日2回投与で1週間の連続投与を行うと、相対重量が対照群と比較して約38.5の値を示した。2組織学的解析から、リンパ球の減少が確認された。3NAMの休薬により、胸腺重量及びリンパ球数は回復したことから可逆性の変化であることが示唆された休薬後約8週間で、NAM投与により100発症を抑制されていたII型コラーゲン関節炎モデルマウスの2/3の症例で関節炎が発症。以上の結果から、胸腺摘除術を推奨できない症例や抗コリンエステラーゼや免疫抑制薬に抵抗性のある症例に対して、内科的に胸腺の機能を制御することにより重症筋無力症の治療の可能性が示唆された。後記実施例3,図24~31従って、IκBキナーゼα活性化阻害剤は、重症筋無力症治療剤として有用である。本発明の有効成分であるIκBキナーゼα活性化阻害剤は、ヒトに対して一般的な経口投与又は非経口投与のような適当な投与方法によって投与することができる。製剤化するためには、製剤の技術分野における通常の方法で錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、懸濁剤、注射剤、坐薬等の剤型に製造することができる。これらの調製には、通常の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、色素、希釈剤などが用いられる。ここで、賦形剤としては、乳糖、D-マンニトール、結晶セルロース、ブドウ糖などが、崩壊剤としては、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウムCMC-Caなどが、滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどが、結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロースHPC、ゼラチン、ポリビニルピロリドンPVPなどが挙げられる。投与量は通常成人においては、注射剤で有効成分である本発明化合物を1日約0.01mg~100mg,経口投与で1日0.1mg~500mgであるが、年齢、症状等により増減することができる。次に、実施例を挙げ、本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。去勢抵抗性再燃前立腺癌治療薬1被験物質NoraristeromycinNAMMLN-120B2使用細胞ATCCより購入PC-3ATCCNo.CRL-1435、去勢抵抗性DU145ATCCNo.HTB-81、去勢抵抗性LNCaPATCCNo.CRL-1740、去勢非抵抗性3前培養条件各細胞株は、37°C,5CO2条件下でインキュベーションHERACELL150i,ThermoSCIENTIFICした。培養条件を下記の通り。PC-3;F12K培地GIBCO,21127-02210fetalbovineserumGIBCO,12483,LotNo.356833DU145;MEM培地GIBCO,10370-021SodiumPyruvate100mM100XGIBCO,11360-070GlutaMaxIGIBCO,3505006110fetalbovineserumGIBCO,12483,LotNo.356833LNCaP;RPMI-1640培地GIBCO,A10491-0110fetalbovineserumGIBCO,12483,LotNo.3568334実験方法1溶液調整100DimethylsulfoxideDMSO,和光純薬,LotNo.STL3279に溶解した化合物30,10,3,1,0.3,0.1,0.03及び0.01mmol/Lをストック溶液として作製し、使用時まで4°Cで保存SANYO,MPR-411FRSした。2最適な細胞濃度培養日数の決定結果を表1に示す。使用した培養機材は下記の通り。細胞増殖抑制能評価;96wellflatbottomplategrainerbio-one,655180細胞移動抑制能評価;35mmΦtissueculturedishgrainerbio-one,627160Apoptosis誘導能評価;ChamberSlideII8IWAKI,5732-0083細胞増殖抑制能評価;PremixWST-1CellProliferationAssaySystemMK400、タカラバイオ株式会社使用96wellplateの外側のwell全てに培地の蒸発を低減するために、260μLの滅菌PBS-を加えた。表1に示した細胞濃度で細胞を播種し、24時間培養した。ストック溶液を各培地で100倍希釈し、10μL/wellで各well各濃度;n=6に添加した。陰性対照群n=6は、最終濃度0.1DMSO培地とした。WST-1assay用培地対照群細胞未播種には、100μL/wellの0.1DMSO培地n=6もPremixWST-1CellProliferationAssaySystemのマニュアルに従い準備した。72時間培養後、10μL/wellのWST-1を加え、1時間、37°C、5CO2条件下でインキュベーションし、PlateReaderImmunoReaderNJ-2000を用いて、測定波長450nm及び対照波長620nmで測定した。4細胞移動抑制能評価;Wound-healingassay表1に示した細胞数で播種し、24時間培養後、最終濃度が10μmol/LNAM,MLN-120B及び0.1DMSO陰性対照になるようにストック溶液をdishに添加した。72時間培養し、90コンフルエントの状態に細胞数が達した事を顕微鏡下で確認後、200μLの滅菌チップを使用してWoundingを行った。その後、最大72時間培養し、Healingを観察した。5Apoptosis誘導能評価;TUNELassayPromega,G3250DeadEndTMFluorometricTUNELSystem使用表1に示した細胞数で播種した。ただし、LNCaPのみ接着が弱かったため、10μg/mLpoly-L-lysinehydrobromideSigma,P9155-5MGをcoatingし細胞を播種した。24時間培養後、最終濃度が10μmol/LNAM,MLN-120B及び0.1DMSO陰性対照になるようにストック溶液をwellに添加した。その後、表1に示した期間培養し、マニュアルに従いTUNELassayを行った。5結果1細胞濃度及び培養日数表1に各細胞株の播種細胞濃度及び最大培養日数化合物添加後を示す。2細胞増殖抑制能評価結果を図1~3に示す。NAMは、全ての細胞株で有意な増殖抑制効果を示した。一方、IKKβ阻害薬であるMLN-120Bは、PC-3とLNCaP細胞株で、10μmol/Lの濃度でのみ有意な抑制効果を示した。3細胞移動抑制能評価結果を図4~12に示した。NAMは、PC-3とDU145細胞株で、コントロールと比較して顕著な細胞移動抑制効果を示した。LNCaPでは、全ての細胞が変形し、死亡している可能性を示した。一方、MLN-120Bは、全ての細胞株で、コントロールと比較して細胞移動抑制効果を示さなかった。4Apoptosis誘導能評価結果を図13に示す。NAM添加により、DU145細胞株でのみTUNEL-positiveを示したPC-3andLNCaP;datanotshown。一方、MLN-120Bは、全ての細胞株で、TUNEL-negativeであったdatanotshown。6考察IKKα活性化阻害薬であるNAMは、前立腺がん細胞株に対して高い細胞増殖抑制能、細胞移動抑制能及びApoptosis誘導能をinvitroで示すことを明らかにした。特に、去勢抵抗性であるPC-3やDU145への新規メカニズムに基づく単独での高い薬効は、新たな治療薬や治療方法の開発につながる可能性を示唆した。男性用避妊薬1被験物質NoraristeromycinNAMMLN-120B2使用動物日本チャールズリバー株より購入雄性DBA/1JNCrljマウス6週齢;II型コラーゲン関節炎モデル用、性未成熟マウスとして購入時5週令10週齢;Naive,性成熟マウスとして購入時9週令3飼育環境動物は、十字仕切付ポリカーボネート製ケージKN-606:株式会社夏目製作所に床敷きを入れ、個別に飼育した。温度23°C許容範囲:20-26°C、湿度55許容範囲:35-75及び照明時間午前7時-午後7時明暗サイクル12時間の環境下、水道水及び固型飼料CRF-1:オリエンタル酵母工業株式会社を自由摂取させる。約1週間の馴化飼育の後、健康な動物のみを試験に供した。4群分け投与前日に測定した体重をもとに、群分けを行った。5試験系の識別方法動物は尾部に油性フェルトペンを用いて印をつけ、個体を識別した。6実験方法実験1;II型コラーゲン関節炎マウスモデルでの検討NAMは、1メチルセルロースメトローズSM-15、信越化学工業株式会社水溶液MCを用いて1日1回調製0.3及び0.1mg/5mLし、非絶食下、胃ゾンデを用いて1日2回9:00-10:00及び16:00-17:00、5mL/kg/回となるように、II型コラーゲン関節炎モデル作製用の6週齢の雄性DBA/1JNCrljマウスに、尾根部への初回II型コラーゲン免疫日から42日間マウス精巣での精子形成期間;1サイクル反復強制経口投与した。その後、84日間2サイクルの休薬期間を設定し、42日間反復投与及び84日間休薬後に剖検を行い、精巣の組織学的検査を実施した。なお尾根部に高い炎症を確認した個体は、精巣組織への影響が考えられたことから本検討から除外した。実験2;Naiveマウスでの検討NAMは、MCを用いて1日1回調製1mg/5mLし、非絶食下、胃ゾンデを用いて1日2回9:00-10:00及び16:00-17:00、5mL/kg/回となるように反復強制経口投与した。IKKβ阻害剤であるMLN-120Bは、0.5ヒドロキシプロピルメチルセルロースMETOLOSE60SH-50、信越化学工業株式会社/0.2tween80WAKOHPMCを用いて1日1回調製1mg/mLし、10mL/kg/回でNAMと同じ条件で、10週齢の雄性DBA/1JNCrljマウスNaiveに反復強制経口投与した。経口投与開始後7及び14日間後に剖検を行い、精巣の組織学的検査を実施した。7結果実験1図14~16に、6週齢のDBA/1JNCrlj雄性マウスにNAMを42日間反復投与後の精巣の精細管ステージVII、VIIIのHE染色像を示した。0.3mg/kgNAM図14では、精子形成が完全に抑制されていた。0.1mg/kgNAM図15では、精子細胞などの減少が認められた。図17,18に、6週齢のDBA/1JNCrlj雄性マウスにNAMを42日間反復投与し、84日間休薬後の精巣の精細管ステージVII、VIIIのHE染色像を示した。0.3mg/kgNAMの42日間投与後図14に全く認められなかった精子形成が84日間の休薬後には再開していた図17。また、0.1mg/kgNAMで42日間投与後図15参照に減少していた精子細胞数も休薬後には回復していた図18。実験2図19,20に、性成熟した10週齢のDBA/1JNCrlj雄性マウスに1mg/kgNAMを7日間反復投与後の精巣の精細管ステージVII、VIIIのHE染色像を示した。MC投与群図20では観察される、初期の精母細胞プレレプトテン期精母細胞;矢印が、NAM投与群では全く観察されなかった。図21~23に、性成熟した10週齢のDBA/1JNCrlj雄性マウスに10mg/kgMLN-120B及び1mg/kgNAMを14日間反復投与後の精巣の精細管ステージVII、VIIIのHE染色像を示した。10mg/kgMLN-120B図21では、NAMで示された精母細胞の脱落図21は観察されなかった。1mg/kgNAM図22では、図19で示されたプレレプトテン期精母細胞に加えて、パキテン期精母細胞図20参照も全く観察されなかった。8考察NAM投与で認められた精子形成抑制は、初期の精母細胞の脱落に起因するもので、投与開始時の週齢性成熟の有無や抗原の有無に関係なく観察された。また、この変化はIKKβ阻害薬であるMLN-120Bの14日間の反復投与でも認められなかったことから、IKKα活性化抑制に基づいた作用である可能性が示唆された。このNAMによる精子形成障害は組織学的に可逆性を示すことから、女性用経口避妊薬と同様の高い避妊効果を持つ男性用避妊薬としての可能性が示された。重症筋無力症治療薬1被験物質NoraristeromycinNAMMLN-120B2使用動物日本チャールズリバー株より購入雄性DBA/1JNCrljマウス10週齢購入時9週令3飼育環境動物は、十字仕切付ポリカーボネート製ケージKN-606:株式会社夏目製作所に床敷きを入れ、個別に飼育した。温度23°C許容範囲:20-26°C、湿度55許容範囲:35-75及び照明時間午前7時-午後7時明暗サイクル12時間の環境下、水道水及び固型飼料CRF-1:オリエンタル酵母工業株式会社を自由摂取させる。約1週間の馴化飼育の後、健康な動物のみを試験に供した。4群分け投与前日に測定した体重をもとに、群分けを行った。5試験系の識別方法動物は尾部に油性フェルトペンを用いて印をつけ、個体を識別した。6実験方法NAMは、1メチルセルロースメトローズSM-15、信越化学工業株式会社水溶液MCを用いて1日1回調製1mg/5mLし、非絶食下、胃ゾンデを用いて1日2回9:00-10:00及び16:00-17:00、5mL/kg/回となるように10週齢の雄性DBA/1JNCrljマウスに反復強制経口投与した。IKKβ阻害剤であるMLN-120Bは、0.5ヒドロキシプロピルメチルセルロースMETOLOSE60SH-50、信越化学工業株式会社/0.2tween80WAKOHPMCを用いて1日1回調製1mg/mLした。投与は、非絶食下、胃ゾンデを用いて1日2回9:00-10:00及び16:00-17:00、10mL/kg/回となるように、10週齢の雄性DBA/1JNCrljマウスに反復強制経口投与した。投与後7及び14日後に剖検を行い、胸腺重量測定と組織学的検査を実施した。7結果図24~30に、NAM及びMLN-120Bを7日間反復投与後の胸腺におけるHE染色像及び相対重量各群;n=4を示した。図24及び図28に示したように、NAMの反復経口投与により皮質矢印の範囲を中心としたリンパ球の減少が観察されたが、MLN-120B図26では、リンパ球の減少は観察されなかった。NAM投与群の胸腺相対重量図30は、MC群に比較して有意な低値約38.5、p<0.001,t-testを示した。一方、MLN-120B投与群ではHPMC群に比較して有意差は示されなかった。更に、7日間反復経口投与計14日間を行った場合でも、MLN-120B投与群では、HPMC群に比較して特記する胸腺組織及び重量変化は観察されなかった。NAMにおいては、胸腺組織及び重量変化は、7日間反復投与と同程度であったdatanotshown。胸腺組織及び重量変化を示したNAMの14日間投与群に対して、14日間の休薬を行ったところ、胸腺皮質リンパ球数は劇的に回復し図31、重量も対照群並みに回復したdatanotshown。8考察NAM反復経口投与で認められたリンパ球の減少を伴う胸腺萎縮は、IKKα活性化抑制に基づいた作用である可能性が示唆された。また、組織学的に可逆性を示すことから、重症筋無力症において胸腺摘除による様々な弊害を回避し、かつ胸腺摘除と同等の治療効果を示す可能性が示された。"