"薬学的組成物であって、aプレパンデミック世界的流行前またはパンデミック世界的に流行しているインフルエンザウイルスからの組換え赤血球凝集素rHAと、bアジュバントであって、前記アジュバントは、グルコシルおよびアミノ置換グルコシルからそれぞれ独立して選択される還元末端および非還元末端を有する二糖を含有し、前記非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-基またはアミノ-NH-基のいずれかを介して、前記還元末端の6’位の炭素に結合され、前記二糖は、前記非還元末端の4’炭素を介してリン酸基へ、かつ、アミド-NH-CO-および/またはエステル-O-CO-結合を介して、複数の脂質基へ結合され、前記エステルまたはアミド結合のカルボニル-CO-基は、前記脂質基に直接結合され、各脂質基は、少なくとも8つの炭素を含有する、アジュバントと、を含有し、前記薬学的組成物の一回の注射によって、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対する予防接種を必要としている対象に、予防接種を行う方法で使用するための、薬学的組成物。前記組成物の投与は、前記一回の注射後に集団の少なくとも50に血清転換を実現する、請求項1に記載のプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、集団に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。前記組成物は乳剤を含まない、先行する請求項のいずれか1項に記載の、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、集団に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。前記組成物は油分を含まない、先行する請求項のいずれか1項に記載の、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、集団に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。前記アジュバントはGLAである、先行する請求項のいずれか1項に記載の、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、集団に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対する予防接種を必要としている対象に、予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物であって、前記組成物は、aプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスからの組換え赤血球凝集素rHAと、bアジュバントであって、前記アジュバントは、グルコシルおよびアミノ置換グルコシルからそれぞれ独立して選択される還元末端および非還元末端を有する二糖を含有し、前記非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-基またはアミノ-NH-基のいずれかを介して、前記還元末端の6’位の炭素に結合され、前記二糖は、前記非還元末端の4’炭素を介してリン酸基へ、かつ、アミド-NH-CO-および/またはエステル-O-CO-結合を介して、複数の脂質基へ結合され、前記エステルまたはアミド結合のカルボニル-CO-基は、前記脂質基に直接結合され、各脂質基は、少なくとも8つの炭素を含有し、前記組成物は、投与量を節約する、アジュバントと、を含有する、薬学的組成物。前記rHAは、用量を節約する量で存在する、請求項6に記載のプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、対象に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。前記rHAは、アジュバントがない場合は防御免疫を提供しない濃度で存在する、請求項6に記載のプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、対象に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。前記組成物は、単一の組換えタンパク質を含有する、請求項6~8のいずれか1項に記載のプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、対象に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。一用量当たりの前記rHA量は、約15~約1μgの範囲である、請求項6に記載のプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、対象に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。前記アジュバントはGLAであり、前記rH5はH5N1インフルエンザの病原性株に由来する、請求項6に記載のプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対して、対象に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物。本発明は、ワクチンとして使用するための組成物、および対象にワクチンを予防接種する方法に関し、該ワクチンは、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスおよびアジュバント由来の組換え赤血球凝集素を含有する。一実施形態では、アジュバントは、グルコシルおよびアミノ置換グルコシルからそれぞれ独立して選択される還元末端および非還元末端を有する二糖として記述される合成物DSLP合成物であり、ここで、非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-またはアミノ-NH-基のいずれかによって還元末端の6’位で炭素へ結合され、二糖は、非還元末端の4’炭素によってリン酸基へ、かつ、アミド-NH-CO-および/またはエステル-O-CO-結合によって複数の脂質基へ結合され、ここで、エステルまたはアミド結合のカルボニル-CO-基は脂質基へ直接結合され、各脂質基は、少なくとも8つの炭素を含有する。特定の組成物および方法では、アジュバントは、種々の実施形態において、水中油型乳剤として処方されるまたはカリ明礬、アルミニウム塩等の他のアジュバントで処方される、オイルフリーであり得る、GLAである例えば、米国特許出願公開第2008/0131466号を参照。特定の目的のための赤血球凝集素は、非常に病原性の強いH5N1ウイルス由来のH5およびH1N1豚インフルエンザパンデミックインフルエンザ由来のH1を含む。組成物は用量を節約するものであり得る、および/または組換え赤血球凝集素は、用量を節約する量で存在し得る。方法は、組成物の複数の注射ではなく一回の注射で対象に予防接種を行うことを含み得る。例えば、組成物は、以下の、rHAは用量を節約する量で存在する、rHAは免疫アジュバントがない予防免疫を提供しない濃度で存在する、rHAは鳥インフルエンザの病原性株に由来する、rHAはH5N1インフルエンザの病原性株に由来する、rHAはクレード1またはクレード2に由来する、rHAはパンデミック豚インフルエンザウイルス株に由来する、rHAはパンデミックH1N1株に由来する、組成物は、単一の、つまり一つ以下の明確な組換えタンパク質を含有する、一用量のrHAの量は約15~約0.1μgの範囲である、rHAは、好適なレベルの糖鎖を実現するために昆虫または哺乳類細胞のいずれかから発現される、rHAは融合タンパク質として表される、アジュバントはGLAにすぎないまたはGLAを含む、アジュバントは3D-MPLにすぎないまたは3D-MPLを含む、組成物はオイルフリーである、組成物は、約1v/v未満の油または約0.1v/v未満の油を含有する、アジュバントは抗原と組み合わせる前に、水溶液として処方される、アジュバントは、抗原と組み合わせる前に、リポゾーム含有組成物中に処方される、組成物はさらに、アルミニウム塩またはサポニンを含有する、の1つ以上つまりいずれかの組み合わせによって定義され得る。一実施形態では、本発明は、aプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスからの組換え赤血球凝集素rHAと、bアジュバントであって、アジュバントは、グルコシルおよびアミノ置換グルコシルからそれぞれ独立して選択される還元末端および非還元末端を有する二糖を含有し、非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-基またはアミノ-NH-基のいずれかを介して、還元末端の6’位の炭素に結合され、二糖は、非還元末端の4’炭素を介してリン酸基へ、かつ、アミド-NH-CO-および/またはエステル-O-CO-結合を介して、複数の脂質基へ結合され、エステルまたはアミド結合のカルボニル-CO-基は、脂質基に直接結合され、各脂質基は、少なくとも8つの炭素を含有する、アジュバントと、を含有し、投与は、一回の注射後に血清変換を実現する、薬学的組成物の一回の注射によって、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザのウイルスに対する予防接種を必要としている対象に、予防接種を行う方法を提供する。個別にまたはいずれかの組み合わせにおいて発明をさらに定義し得る種々の実施形態において、組成物は、乳剤を含まず、アジュバントはGLAであり、アジュバントは3D-MPLである。例えば、発明は、一実施形態では、薬学的組成物の一回の注射によって、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対する予防接種を必要としている対象に、予防接種を行う方法で使用するために、aプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスからの組換え赤血球凝集素rHAと、bアジュバントであって、アジュバントは、グルコシルおよびアミノ置換グルコシルからそれぞれ独立して選択される還元末端および非還元末端を有する二糖を含有し、非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-基またはアミノ-NH-基のいずれかを介して、還元末端の6’位の炭素に結合され、二糖は、非還元末端の4’炭素を介してリン酸基へ、かつ、アミド-NH-CO-および/またはエステル-O-CO-結合を介して、複数の脂質基へ結合され、エステルまたはアミド結合のカルボニル-CO-基は、脂質基に直接結合され、各脂質基は、少なくとも8つの炭素を含有する、薬学的組成物を提供する。薬学的組成物は、組成物の投与により、一回の注射後に集団の少なくとも50、または少なくとも60以上において血清変換を実現する、集団に、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスの予防接種を行う方法で使用し得る。一態様では、薬学的組成物は油分を含まない、つまりオイルフリーである、または組成物の血清変換有効性に影響しない最小限の油分量を含有し、油分含有乳剤は含まない。これらの実施形態のいずれかとの組み合わせにおいて、発明の一態様は、アジュバントとしてGLAを使用することである。別の態様では、3D-MPLは、アジュバントとして使用し得る。別の実施例として、発明は、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対する予防接種を必要としている対象に予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物を提供し、aプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスからの組換え赤血球凝集素rHAと、bアジュバントであって、アジュバントは、グルコシルおよびアミノ置換グルコシルからそれぞれ独立して選択される還元末端および非還元末端を有する二糖を含有し、非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-基またはアミノ-NH-基のいずれかを介して、還元末端の6’位の炭素に結合され、二糖は、非還元末端の4’炭素を介してリン酸基へ、かつ、アミド-NH-CO-および/またはエステル-O-CO-結合を介して、複数の脂質基へ結合され、エステルまたはアミド結合のカルボニル-CO-基は、脂質基に直接結合され、各脂質基は、少なくとも8つの炭素を含有し、組成物は、用量を節約する、アジュバントと、を含有する。対象者にプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスの予防接種を行う方法で使用するための薬学的組成物、rHAは、用量を節約する量で存在する。個別にまたはいずれかの組み合わせで発明をさらに定義する種々の実施形態において、rHAは、アジュバントがない予防免疫を提供しない濃度で存在し、単一の、つまり1つ以下の組換えタンパク質を含有し、一用量のrHA量は約15~約1μgの範囲であり、アジュバントはGLAであり、rH5はH5N1インフルエンザの病原性株に由来する。これらおよび他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照により、明らかになる。本開示は、ワクチンとして使用するための組成物およびワクチンを対象に予防接種する方法を提供し、ワクチンは、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスによる組換え赤血球凝集素を含有し、アジュバントワクチンは、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスを予防し、概して、体液性および細胞性免疫の両方をもたらし、記憶免疫細胞を生じさせる。本明細書に記載されるワクチンおよび薬学的組成物は、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスからの赤血球凝集素HAおよびDSLPアジュバント、例えば、GLAであり得る、化学式1に従うアジュバントを含有しプレパンデミックおよびパンデミックの段階においてヒトがこのウイルスに罹患することを予防することを目的とする。さらに、組成物は、アジュバント用量または抗原を節約するがない場合に必要であるよりもより少ないワクチン接種用量を節約するおよび/またはより低いHA投与量で、関連するウイルスに対する免疫反応を増強させ、関連するウイルスに対する交差再活性をもたらすという利点を提供する。A.赤血球凝集素の調製1.HA源少なくとも4つの異なるインフルエンザAウイルス、H5N1、H1N1、H7N7、およびH9N2について、現在、プレパンデミックまたはパンデミックの懸念がある。インフルエンザAウイルス亜型H5N1は、ヒトおよび多くの他の動物の種において病気を引き起こし得るインフルエンザウイルスの亜型である。H5N1HPAIH5N1の非常に病原性の強い株は、鳥類インフルエンザまたは鳥インフルエンザの原因となる。現在では鳥類の疾患であるが、感染した鳥と広範囲に物理的に接触したほとんどまたは全てのヒトに感染する可能性がある。パンデミックの全ての条件が満たされているわけではないため、H5N1はプレパンデミックウイルスとして分類され、最も留意すべき点として、ウイルスはヒト同士で容易にかつ持続的に拡大しない。H5N1型の鳥類インフルエンザ本明細書ではH5N1と称するは、アジアで最初に発生し、世界中に広まった。H5N1ウイルスは進化しつつあり、それらのHA分子の抗原および配列特性に基づいて、明確なクレードおよびサブクレードに分類できる。クレードは、共通の祖先に由来する関連する有機体を指す。ヒトにおいてH5N1感染が2003年の再出現以来、いくつかの異なるクレードが、ヒト疾患の300ケースよりも多くから、分離されている。WHO世界保健機関は、非常に病原性の強いH5N1鳥類インフルエンザウイルスの命名法システムの統一化に着手したBrownetal.,InfluenzaOtherRespiViruses3:59-62,2009、Donisetal.,EmergInfectDis.14:e1,2008、さらに、ContinuingprogresstowardsaunifiednomenclaturesystemforthehighlypathogenicH5N1avianinfluenzaviruseswww.who.intも参照。2009年3月の時点で、10の明確なウイルスクレード0~9番が特定された。主に東南アジアおよびアジアで分離されてきたクレード1およびクレード2ウイルスは、最も多く、ワクチン開発の対象となっている。最初のFDA認可H5N1ワクチンは、H5クレード1ウイルスに基づく従来のワクチンであったが、研究参加者の約半分のみにおいては、予防レベルの中和力価を誘導し、さらに、大量のHAを二用量、必要とした。試験における組換えワクチンは、同様の結果をもたらしたTreanoretal.,Vaccine19:1732-1737。パンデミックに対処可能なワクチンは、より多くの個人を予防するだけでなく、用量節約および投与量節約の両方の改善点を必要とする。NCBIのInfluenzaVirusResource2010年1月14日アクセスにおいて、およそ1335の独自の全長H5配列が存在する。これらのH5配列のいずれも使用可能である。HA配列は、いずれのクレードまたはサブクレードに由来してもよい。最も多いものとして、HAは、クレード1または2に由来する。WHOの参照H5HA抗原は、主にクレード2であるが、さらに、クレード1、4、および7のHAを含むwww.who.intでアクセスされる、AntigenicandgeneticcharacteristicsofH5N1virusesandcandidatevaccinevirusesdevelopedforpotentialuseinhumanvaccines2009年2月。参照抗原は、以下の表に示される抗原を含む。全てのGenBank受託番号および参照における配列は、それらの全体が組み込まれる。パンデミックが懸念されている別の亜型は、H1N1パンデミックウイルス豚インフルエンザウイルス、つまり2009年のインフルエンザパンデミックおよび1918年のスペイン型インフルエンザの元になった型である。2009年のパンデミックを引き起こした株は、パンデミックH1N12009ウイルスと呼ばれる。2010年2月18日現在、900を超えるHAの非冗長タンパク質配列が、NCBIおよびインフルエンザ研究データベースfludb.orgにおいて利用可能である。米国では、A/カリフォルニア/4/2009その全体が組み込まれる、受託番号ACP41105およびA/カリフォルニア/7/2009その全体が組み込まれる、受託番号ACQ55359は、ワクチンを作成するために使用される株である。他の株によるHAも適している。他の可能性のあるインフルエンザのパンデミックウイルスは、オランダで発生したH7N7および中国で発生したH9N2を含む。2003年以来、オランダは、鳥類における別の非常に病原性の強い鳥インフルエンザウイルスH7N7の発生を報告している。仕事で鳥類を扱う人および家族の間で、約90人のヒトの感染が確認されており、ウイルスの抗体は、感染した鳥類と接触しなくても、感染した個人との家庭内の近接した接触によって、ヒト同士で広範囲に広がっていることがわかり、これにより高レベルのヒト間感染が示唆されている。H9N2は、中国におけるヒト疾患を生じさせたことがわかった別の鳥インフルエンザウイルスである。米国立アレルギー感染病研究所は、パンデミックの可能性のあるウイルスとしてH9N2を特定している。いくつかの適した株には、A/香港/1073/99H9N2およびA/NL/209/07H7N7を含む。薬学的組成物およびワクチン用の赤血球凝集素タンパク質は全長であり得るが、前駆タンパク質、断片、融合タンパク質の一部、またはペプチドでもあり得る。全長タンパク質は成熟タンパク質を指し、例えば、赤血球凝集素タンパク質の場合、成熟タンパク質は、ビリオンでみられる形態である例えば、リーダーペプチドが欠けている、HA0からHA1およびHA2へ開裂され得る。前駆体タンパク質プレタンパク質は、処理が生じる前の発生期の翻訳されたタンパク質、または部分的に処理されたタンパク質である。融合タンパク質の一部として、HAタンパク質は、前駆または全長タンパク質あるいはタンパク質断片またはペプチドとして存在し得る。タンパク質の断片またはペプチドは免疫的であることが必要であり、免疫反応をもたらす1つ以上のエピトープを含有する。ペプチドは、T細胞受容体への結合のためにMHC分子と複合するように選択され、概して最大で約30のアミノ酸長さ、または最大で約25のアミノ酸長さ、または最大で約20のアミノ酸長さ、または最大で約15のアミノ酸長さ、最大で約12のアミノ酸長さ、最大で約9のアミノ酸長さ、最大で約8のアミノ酸長さである。概して、より短いペプチドは、MHCクラスI分子と結合するまたはこれを関連付け、より長いペプチドは、MHCクラスII分子に結合するまたはこれを関連付ける。適したペプチドは、多数の生物情報プログラムのいずれかを使用して予測でき、公知の方法を用いて試験できる。本明細書に記載されるように、適したタンパク質は、前駆タンパク質、成熟タンパク質、断片、融合タンパク質およびペプチドを含む。1つよりも多いHAは、組成物に存在し得る。複数のHAタンパク質が使用される場合、HAタンパク質は、同じウイルス、または異なるウイルスに由来し得る。さらに、複数のタンパク質は、同じ形態またはこれらの形態の混合物として存在し得る。例えば、HAタンパク質は、成熟タンパク質としておよび断片としての両方で、存在し得る。典型的には、薬学的またはワクチン組成物におけるHAは、リーダー配列を有する糖タンパク質の真核生物の発現によって、典型的には、リーダー配列が存在しない成熟タンパク質シグナルペプチドとしても公知であるが生じるため、前駆タンパク質以外になる。HAの疎水性リーダー配列の長さは、分離株同士でいくらか異なり得るが、典型的には約18のアミノ酸長さである。しかしながら、組換え発現のために、シグナルペプチドは、前駆タンパク質の一部であってもよい。シグナルペプチドは、HAの天然配列または当該技術で公知の他の配列を含む。タンパク質断片は、免疫原性である必要がある。いくつかのケースにおいて、断片は、免疫優勢ペプチド配列を含有する。免疫原性ペプチド配列は、BまたはT細胞例えば、CD4またはCD8T細胞によって識別されるものである。ペプチド配列は、概して一連の重複するペプチドを使用して、完全な配列に由来するペプチドのスクリーニングによって識別できる。種々のアッセイを、BまたはT細胞がペプチドに識別および反応するかどうかを決定するために使用できる。例えば、クロム放出細胞毒性法アッセイの方法のために、本方法に組み込まれるKimetal.,JImmunol181:6604-6615、2008、ELISPOTアッセイ、細胞内サイトカイン染色法およびMHC多量体染色Novaketal.JClinInvest104:R63-R67,1999,Altmanetal.,Science274:94-96、1996、ELISアッセイ、キャリアに結合されたペプチドによるマウスの予防接種後の他の種類の抗体測定が、適したアッセイである。免疫原性ペプチドも、生物情報ソフトウェアMolecularBiologyvol.409,2007のImmunoinformatics:Predictingimmunogenicityinsilico方法によって予測できる。いくつかの例示的なプログラムおよびデータベースは、FREDFeldghahnetal.Bioinformatics15:2758-9,2009、SVMHCDonnesおよびKohlbacher,NucleicAcidsRes34:W1940197,2006、AntigenDBAnsarietal.,NucleicAcidsRes38:D847-853,2010、TEPITOPEBianandHammerMethods34:468-475,2004を含む。HAは、融合タンパク質の一部として組み込み可能である。他の融合パートナーまたはパートナーは、インフルエンザノイラミニダーゼ等の別のHAタンパク質または非HAタンパク質にすることができる。融合タンパク質を使用するためのいくつかの共通の理由は、発現を向上させるまたは生成されたタンパク質の精製を支援することである。例えば、発現システムの宿主細胞に調整されたシグナルペプチド配列は、HAタンパク質に結合できる、またはタンパク質精製で使用するためのタグ配列を結合でき、従って、切断配列も組み込まれる場合に開裂できる。タンパク質のうちの1つ以上からの複数のペプチドエピトープを融合することができる、またはタンパク質のうちの1つ以上からの断片を融合することができる。複数のペプチドエピトープは、いずれかの順序にできる。組成物におけるHAの他の適した源は、HAを含有するウイルス様粒子VLPその全体が組み込まれる、米国特許第2005009008号、核酸エンコーディングHA全て、その全体が組み込まれる、米国特許第2003045492号、米国特許第7537768号、国際公開第WO09092038号、Smithetal.VaccineJan29,2010、さらに、弱毒化および不活性化ウイルス全て、その全体が組み込まれる、米国特許第6022726号、米国特許第7316813号、米国特許第2009010962号、国際公開第WO99/57284号、米国特許第2008254060号を含む。2.組換合成ベクター構成前駆タンパク質、断片、融合タンパク質およびペプチドを含むHAタンパク質は、インキュベート細胞において製造され得る、または化学的に合成され得る。HAタンパク質は、これらの全ての形態を含むために、本明細書において使用されている。ペプチドは、特に、機械多くが市販されているを使用してまたは手で、化学的に便利に合成され得る。あるいは、多様な適した発現システム、原核細胞および真核性システムの両方が公知であり、使用され得る。よく使用され、タンパク質製造に適している宿主細胞は、大腸菌、酵母、昆虫、および哺乳類を含む。発現ベクターおよび宿主細胞が、市販されている例えば、InvitrogenCorp.,Carlsbad,CA,USAまたは構成され得る。例示的なベクターは、プロモーターおよび配列が手術的にOperatively結合されるように、対象のタンパク質をエンコーディングする配列のプロモーターおよびクローニング部位を含有する。分泌シグナル配列リーダー配列と呼ばれることもある、タグ配列例えば、hexa-His、転写終結シグナル、特に、ベクターが染色体外で複製される場合の複製源、および選択可能な生成物をエンコーディングする配列等の、他の要素が存在し得る。選択的な要素が、それらの目的に従ってベクター内に配置される。宿主細胞に核酸を導入するための方法および手順も公知である。HAは糖鎖タンパク質であるため、最も多くの場合、選択した発現システムは、酵母例えば、米国特許第5856123号、米国再発行特許第RE35749号、米国特許第4925791号、さらに、PichiaPink登録商標Invitrogen、CAUSA、クルイベロミセスラクチスタンパク質発現キット、NEB,MA,USA、哺乳類細胞およびバキュロウイルス米国特許第4745051号、米国特許第5762939号、米国特許第5858368号、米国特許第6103526号、本明細書において識別される全ての米国特許参照は、その全体が本明細書中に組み込まれる等のタンパク質を糖化する真核性システムである。HAのコーディング配列を含むバキュロウイルスが昆虫細胞に感染し、HAを発現させる昆虫発現システムは、特に適した発現システムである。昆虫細胞内の発現は、概して、高い濃度および量のタンパク質を生じさせ、真核性翻訳後修飾例えば、糖鎖を有するタンパク質を作り出し、プレパンデミックワクチンで充分なタンパク質を生成する製造レベルまでスケールを拡大することができる。発現システムおよび方法が当該技術で公知であり、例えば、多くの市販のシステムおよびサービスプロバイダーが存在している例えば、Invitrogen,CarlsbadCA、ProteinSciencesMeriden,CT,Clontech,MountainView,CA、baculovirus.comにてベンダーおよびサービスプロバイダーのリストも参照。例示的な昆虫発現システムにおいて、主要な遺伝子生成物は、加工されておらず例えば、全長赤血球凝集素、分泌されておらず、感染した細胞の表在性膜に関連付けられたままである米国特許第5762939号。感染後数日目に、組換えHArHAを表在性膜から抽出できる米国特許第5858368号、rHAの抽出および精製について組み込まれた参照文献。適した一抽出方法は、非変性、非イオン性洗浄剤または他の公知の技術の使用を伴う。出現されたタンパク質は、そのまま使用してもよい、またはより典型的には、分析およびさらに精製してもよい。さらなる精製を、例えば、親和性クロマトグラフィ、ゲルクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィまたは当業者に公知の他の同等の方法によって行うことができる。rHAは、少なくとも80、85、90、95、98、または99の純度に精製される。純度または数量を決定するための典型的な手順は、ゲル電気泳動、ウェスタンブロット法、質量分析法、およびELISAを含む。タンパク質の活性は、概して、実施例に記載されているもの等の生物学的アッセイで査定される。必要な場合または所望の場合には、タンパク質は、さらに精製してもよい。多くの精製方法が公知であり、サイズクロマトグラフィ、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィ、親和性クロマトグラフィ、析出、免疫析出等を含む。タンパク質の意図的な使用は、典型的には、最も高いレベルの純度を必要とする可能性のあるヒトにおける使用について、精製の程度を決定する。B.アジュバント本発明は、アジュバントを含むおよび/または利用する組成物、キット、方法等を提供する。アジュバントは、DSLPとして示される群から選択される1つ以上の合成物である。DSLP合成物は、グルコースおよびアミノ置換グルコースから選択される2つの単糖群の結合によって形成される二糖DS基を含有するという特徴を共有し、ここで、二糖は、リン酸P基および複数の脂質L基の両方に化学的に結合する。特に、二糖は、それぞれ、6つの炭素を有する2つの単糖ユニットから形成されるものとして視覚化され得る。二糖において、単糖のうちの1つは還元端を形成し、他の単糖は、非還元端を形成する。便宜上、還元末端を形成する単糖の炭素は、従来の炭水化物番号指定命名法に従う、1、2、3、4、5、および6位に位置するものとして示されるが、非還元末端を形成する単糖の対応する炭素は、1’、2’、3’、4’、5’、および6’位に位置するものとして示される。DSLPにおいて、非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-またはアミノ-NH-基のいずれかを介して、還元末端の6’位の炭素に結合される。リン酸基は、好適には非還元末端の4’炭素を介して、二糖に結合される。脂質基のそれぞれは、アミド-NH-CO-またはエステル-O-CO-のいずれかを介して二糖と結合し、ここで、カルボニル基は脂質基と結合する。二糖は、アミドまたはエステル基、すなわち、非還元末端の2’、3’、および6’位、ならびに還元末端の1、2、3、および4位に結合され得る、7つの位置を有する。脂質基は、少なくとも6つの炭素、好適には少なくとも8つの炭素、およびより好適には少なくとも10の炭素を有し、ここで、各ケースにおいて、脂質基は、好適には24以下の炭素、好適には22以下の炭素、およびより好適には20以下の炭素を有する。一態様において、共に取られる脂質基は、60~100の炭素、好適には70~90の炭素を提供する。脂質基は、炭素および水素原子のみで構成されていてもよい、つまり、ヒドロカルビル脂質基であってもよい、または1つのヒドロキシル基を含有してもよい、つまりヒドロキシル置換脂質基であってもよい、あるいは、エステル基のカルボニル-CO-、つまりエステル置換脂質を介して、ヒドロカルビル脂質またはヒドロキシル置換脂質基に結合される、エステル基を含有してもよい。ヒドロカルビル脂質基は飽和または不飽和であってもよく、不飽和ヒドロカルビル脂質基は、隣接する炭素原子の間の1つの二重結合を有する。DSLPは、3、または4、または5、または6または7つの脂質を含有する。一態様では、DSLPは、3つから7つの脂質を含有し、一方で、別の態様では、DSLPは、4~6つの脂質を含有する。一態様では、脂質は、ヒドロカルビル脂質、ヒドロキシル置換脂質、およびエステル置換脂質から独立して選択される。一態様では、1、4’および6’位はヒドロキシルによって置換される。一態様では、単糖ユニットはそれぞれグルコサミンである。DSLPは、自由酸の形態、または塩の形態であってもよい例えば、アンモニウム塩。一態様では、DSLP上の脂質は、次のように記述できる。つまり、3’位は-O-CO-CH2-CHRa-O-CO-Rbによって置換され、2’位は、-NH-CO-CH2-CHRa-O-CO-Rbによって置換され、3位は、-O-CO-CH2-CHOHRaによって置換され、2位は、-NH-CO-CH2-CHOHRaによって置換される。ここで、RaおよびRbのそれぞれは、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシルから選択され、ここで、これらの用語はそれぞれ、飽和ヒドロカルビル基を指す。一実施形態では、Raは、ウンデシルであり、Rbはトリデシルであり、ここで、このアジュバントは、例えば米国特許出願公開第2008/0131466号においてGLAと記述される。RaがウンデシルでありRbがトリデシルである合成物は、例えばPHAD登録商標アジュバントとしてAvantiPolarから利用可能なものとして、立体化学的に定義された形態で使用され得る。別の態様では、DSLPは、3D-MPLとして公知の天然由来の合成物の混合物である。3D-MPLアジュバントは、それらのMPL登録商標アジュバントとしてGaxoSmithKlineCompanyによる薬学的グレード形態で商業的に製造される。3D-MPLは、科学文献および特許文献において広範囲に記載されており、例えば、VaccineDesign:thesubunitandadjuvantapproach、PowellM.F.andNewman,M.J.eds.,Chapter21MonophosphorylLipidasanadjuvant:pastexperiencesandnewdirectionsbyUlrich,J.T.andMyers、K.R.,PlenumPress,NewYork1995および米国特許第4,912,094号を参照されたい。別の態様では、DSLPアジュバントは、i非還元末端グルコサミンのヘキソサミン1位および還元末端グルコサミンのヘキソサミン6位の間のエーテル結合を介して、非還元末端グルコサミンに結合される還元末端グルコサミンを有するジグルコサミン主鎖、ii非還元末端グルコサミンのヘキソサミン4位に結合するO-ホスホリル基、およびiii最大で6つの脂肪アシル鎖を含有するものとして記載され得る。ここで、脂肪アシル鎖のうちの1つがエステル結合を介して還元末端グルコサミンの3-ヒドロキシに結合し、脂肪アシル鎖のうちの1つがアミド結合を介して非還元末端グルコサミンの2-アミノに結合し、エステル結合を介して12よりも多い炭素原子のアルカノイル鎖に結合するテトラデカノイル鎖を含有し、脂肪アシル鎖のうちの1つがエステル結合を介して非還元末端グルコサミンの3-ヒドロキシに結合し、エステル結合を介して、12よりも多い炭素原子のアルカノイル鎖に結合するテトラデカノイル鎖を含有する。例として、米国特許出願公開第2008/0131466号を参照されたい。別の態様では、本発明に記載されるアジュバントは、米国特許出願公開第2010/0310602号に記載されるように、6つの脂質基を有する合成二糖であってもよい。別の態様では、本発明で使用されるアジュバントは、化学式1によって識別され得る。化学式1において、部分A1およびA2は、水素、リン酸、およびリン酸塩の基から独立して選択される。ナトリウムおよびカリウムは、リン酸塩の例示的な対イオンである。好適にはリン酸基であるA1O-基は、非還元末端の4’位で二糖に結合する。非還元末端は、その1位を介してエーテル基に結合され、これは、次に、還元末端の6’位に結合される。化学式1の合成物は、それぞれ、部分R1、R2、R3、R4、R5、およびR6のうちの1つを組み込む6つの脂質基を有し、ここで、これらのR基は、C3~C23によって表される、3~23の炭素を有するヒドロカルビル基から独立して選択される。さらなる理解のために、部分が複数のメンバーを有する特定の基から独立して選択される場合に、最初の部分に選択されたメンバーは、第2の部分について選択されたメンバーの選択に全く影響しないまたは制限しないことを理解されたい。R1、R3、R5およびR6が結合される炭素原子は非対称であり、このため、RまたはSの立体化学のいずれかで存在し得る。一実施形態では、これらの炭素原子の全てはR立体化学であり、一方で、別の実施形態において、これらの炭素原子の全てはS立体化学である。ヒドロカルビルは、全て水素および炭素によって形成される化学部分を指し、ここで、炭素原子の構成は直鎖または分岐した、非環状または環状であってもよく、隣接する炭素原子の間の結合は、飽和ヒドロカルビルを提供するために完全に単一の結合であってもよく、または、不飽和ヒドロカルビルを提供するためにいずれか2つの隣接する炭素原子の間に存在する二重または三重の結合であってもよく、ヒドロカルビル基内の炭素原子数は3~24の炭素原子である。ヒドロカルビルはアルキルであってもよく、ここで、代表的な直鎖アルキルは、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等を含む、メチル、エチル、n-プロピル、n-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル等を含み、一方で、分岐したアルキルは、イソプロピル、sec-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、イソペンチル等を含む。代表的な飽和環状ヒドロカルビルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等を含み、一方で、不飽和環状ヒドロカルビルは、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニル等を含む。不飽和ヒドロカルビルは、隣接する炭素原子の間の少なくとも1つの二重または三重結合を含有するヒドロカルビルが非環状である場合、それぞれ、アルケニルまたはアルキニルと称され、ヒドロカルビルが少なくとも部分的に環状である場合、それぞれ、シクロアルケニルおよびシクロアルキニルと称される。代表的な直鎖および分岐したアルケニルは、エチレニル、プロピレニル、1-ブテニル、2-ブテニル、イソブチレニル、1-ペンテニル、2-ペンテニル、3-メチル-1-ブテニル、2-メチル-2-ブテニル、2、3-ジメチル-2-ブテニル等を含み、一方で、代表的な直鎖および分岐したアルキニルは、アセチレニル、プロピニル、1-ブチニル、2-ブチニル、1-ペンチニル、2-ペンチニル、3-メチル-1-ブチニル等を含む。DSLPアジュバントは、当該技術で公知の合成方法、例えば、参照により本明細書に組み込まれるPCT国際公開第WO2009/035528号、並びに同第WO2009/035528号において特定される公報に開示される合成方法によって取得することができ、これらの公報もそれぞれ、参照により本明細書に組み込まれる。化学的に合成されたDSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントは、存在するDSLP分子、つまり化学式1の合成物に対して、少なくとも80、好適には少なくとも85、より好適には少なくとも90、より好適には少なくとも95であり、さらにより好適には少なくとも96、97、98または99純粋である調製を指す、実質的に均質な形態で調製できる。所与のアジュバント調製の純度の決定は、ガスクロマトグラフィ、液体クロマトグラフィ、質量分析および/または核磁気共鳴分析法等の適正な分析用化学的方法を専門とする者により、容易に行うことができる。天然材料から得られるDSLPアジュバントは、典型的には化学的に純粋な形態での製造が容易ではなく、このため合成的に製造されたアジュバントが、本発明の好適なアジュバントである。前述のように、アジュバントの特定のものは、商業的に取得し得る市販されている。好適なアジュバントは、AlabasterALのAvantiPolarLipidsのカタログにおいて識別される製品番号699800であり、以下の、E10と組み合わせたE1を参照されたい。発明の種々の実施形態において、アジュバントは化学式1の化学構造を有するが、部分A1、A2、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、これらの部分について以前に提供されるオプションのサブセットから選択され、ここで、これらのサブセットは、E1、E2等によって、以下に識別される。E1:A1はリン酸またはリン酸塩であり、A2は水素である。E2:R1、R3、R5およびR6はC3-C21アルキルであり、R2およびR4はC5-C23ヒドロカルビルである。E3:R1、R3、R5およびR6はC5-C17アルキルであり、R2およびR4はC7-C19ヒドロカルビルである。E4:R1、R3、R5およびR6はC7-C15アルキルであり、R2およびR4はC9-C17ヒドロカルビルである。E5:R1、R3、R5およびR6はC9-C13アルキルであり、R2およびR4はC11-C15ヒドロカルビルである。E6:R1、R3、R5およびR6はC9-C15アルキルであり、R2およびR4はC11-C17ヒドロカルビルである。E7:R1、R3、R5およびR6はC7-C13アルキルであり、R2およびR4はC9-C15ヒドロカルビルである。E8:R1、R3、R5およびR6はC11-C20アルキルであり、R2およびR4はC12-C20ヒドロカルビルである。E9:R1、R3、R5およびR6はC11アルキルであり、R2およびR4はC13ヒドロカルビルである。E10:R1、R3、R5およびR6はウンデシルであり、R2およびR4はトリデシルである。特定のオプションでは、E2~E10のそれぞれは実施形態E1に組み合わせられ、および/またはE2~E9のヒドロカルビル基はアルキル基、好適には直鎖アルキル基である。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントは、それぞれ後述のように、選択的にコアジュバントを有する薬学的組成物に処方し得る。これに関し、製剤、例えばGLAアジュバントのための水性製剤AFおよび安定乳剤製剤SEを提供する米国特許公開第2008/0131466号が参照され、化学式1のアジュバントを含む、DSLPアジュバントのうちのいずれかに、これらの製剤を利用し得る。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントを提供する本発明は、本明細書でコアジュバントと称される第2のアジュバントとの組み合わせで利用され得る。発明の3つの実施形態において、コアジュバントは送達システムであってもよく、または免疫増強物質であってもよく、あるいは送達システムおよび免疫増強物質の両方として機能する組成物であってもよい例えば、O‘HaganDTandRappuoliR.,Novelapproachestovaccinedelivery,Pharm.Res.219:1519-302004を参照されたい。コアジュバントは、Toll様受容体ファミリー生体分子のメンバーによって作動する免疫増強物質であり得る。例えば、コアジュバントは、TLR4作動薬、またはTLR8作動薬あるいはTLR9作動薬として、その主要な作用モードのために選択され得る。あるいは、または補足として、コアジュバントは、そのキャリアの性質について選択し得る例えば乳剤、リポゾーム、微粒子、またはカリ明礬にし得る。一態様では、コアジュバントはカリ明礬であり、ここで、この用語は、アルミニウムリン酸AlPO4および水酸化アルミニウムAlOH3等のアルミニウム塩を指す。コアジュバントとしてカリ明礬が使用される場合、カリ明礬は、約100~1、000μg、または200~800μg、または300~700μgまたは400~600μgの量のワクチン用量で存在し得る。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントは、典型的には、カリ明礬未満の量で存在し、種々の態様において、DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントは、重量ベースで、カリ明礬重量に対して0.1~1、または1~5、または1~10、または1~100で存在する。一態様では、コアジュバントは、ワクチンアジュバント性質を有する乳剤である。かかる乳剤は、水中油型乳剤を含む。完全なアジュバントIFA内のフロイントは、あるかかるアジュバントである。別の適した水中油型乳剤は、スクアレン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートTween登録商標80界面活性剤としても公知のおよびソルビタントリオレエートを含有するMF-59登録商標アジュバントである。スクアレンは、アマランサス種子、米ぬか、小麦胚芽、およびオリーブを含む、植物源主に植物油からも利用可能であるが、もともとサメ肝油から得られる天然の有機合成物である。他の適したアジュバントは、好物油ベースのアジュバントであるMontanide登録商標ISA50V、Montanide登録商標ISA206、およびMontanide登録商標IMS1312を含むMontanide登録商標アジュバントSeppicInc.、FairfieldNJである。鉱物油は、コアジュバントに存在し得るが、一実施形態では、本発明のワクチン組成物の油分成分は、全ての代謝可能な油である。コアジュバントとしての本発明の実施において利用され得る免疫増強物質の実施例は、3D-MPLまたはMPL登録商標アジュバント、MDPおよび誘導体、オリゴヌクレオチド、二重らせんRNA、代替病原菌に関連する分子パターンPAMPS、サポニン、小分子免疫増強剤SMIP、サイトカイン、およびケモカインを含む。一実施形態では、コアジュバントは3D-MPLまたはMPL登録商標アジュバントであり、MPL登録商標アジュバントは、RibiImmunoChemResearch,Inc.Hamilton,Montanaが開発元であるが、GlaxoSmithKlineによって市販されている。例えば、UlrichandMyers、Chapter21fromVaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach、PowellandNewman、eds.PlenumPress,NewYork1995を参照されたい。MPL登録商標アジュバントに関連し、本発明のコアジュバントとして適しているのは、AS02登録商標アジュバントおよびAS04登録商標アジュバントである。AS02登録商標アジュバントは、MPL登録商標アジュバントおよびQS-21登録商標アジュバント本明細書の他の部分にて記載されるサポニンアジュバントの両方を含有する水中油型乳剤である。AS04登録商標アジュバントは、MPL登録商標アジュバントおよびカリ明礬を含有する。MPL登録商標アジュバントは、UlrichおよびMyersによる記事によってより完全に記載されているように、弱酸性のLPSの処理および変性LPSの精製後の塩基加水分解によって、サルモネラミネソタR595のリポ多糖LPSから調製される。一実施形態では、コアジュバントは、キラヤサポナリア樹木種の木の皮に由来するもの等のサポニン、または変性サポニンであり、例えば、米国特許番号第5,057,540号、5,273,965号、第5,352,449号、第5,443,829号、および第5,560,398号を参照されたい。Antigenics,Inc.Lexington、MAによって販売される製品の、QS-21登録商標アジュバントは、DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントと共に使用し得る例示的なサポニン含有コアジュバントである。サポニンに関連するものは、Iscotecスウェーデンが開発元であるアジュバントのISCOM登録商標ファミリー、および典型的には、全てハニカム状構造に形成された、キラヤサポナリアまたは合成類似化合物、コレステロール、およびリン脂質に由来するサポニンから形成される。一実施形態では、コアジュバントは、コアジュバントとして機能するサイトカインであり、例えば、LinR.etal.Clin.Infec。Dis.216:1439-14491995、Taylor,C.E.,Infect.Immun.639:3241~32441995、およびEgilmez,N.K.,Chap.14inVaccineAdjuvantandDeliverySystems,JohnWileySons,Inc.2007を参照されたい。種々の実施形態において、サイトカインは、例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子GM-CSFであってもよく例えば、ChangeD.Z.etal.Hematology93:207-2152004、Dranoff,G.Immunol.Rev.188:147-1542002、および米国特許第5,679,356号を参照、またはタイプIインターフェロン例えばインターフェロン-αIFN-αまたはインターフェロン-βIFN-βあるいはタイプIIインターフェロン例えばインターフェロン-γIFN-γ等のインターフェロン例えば、Boehm,U.etal.Ann.Rev.Immunol.15:749-7951997およびTheofilopoulos,A.N.etal.Ann.Rev.Immunol.23:307-3362005を参照、インターロイキン-1αIL-1α、インターロイキン-1βIL-1β、インターロイキン-2IL-2を特に含むインターロイキン例えばNelson,B.H.,J.Immunol.1727:3983-39882004を参照、インターロイキン-4IL-4、インターロイキン-7IL-7、インターロイキン-12IL-12例えば、Portielje,J.E.,etal.,CancerImmunol.Immunother.523:133-1442003およびTrinchieri.G.Nat.Rev.Immunol.32:133-1462003を参照、インターロイキン-15Il-15、インターロイキン-18IL-18、胎児肝臓チロシンキナーゼ3リガンドFlt3L、または腫瘍壊死因子αTNFαであってもよい。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントは、ワクチン抗原、または抗原との組み合わせ前にサイトカインによって共処方されてもよく、DSLPアジュバント、例えば、化学式1のアジュバントおよびサイトカインのコアジュバントは、別々に処方され、次いで、組み合わせてもよい。一実施形態では、コアジュバントは、本明細書に記載されるインフルエンザ抗原に選択的共役される非メチル化CpGジヌクレオチドである。コアジュバントがDSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントとの組み合わせで利用される場合、2つのアジュバントの相対的量は、抗原のみに対するアジュバントを含有するワクチン組成物の所望のパフォーマンスの性質を実現するように選択され得る。例えば、アジュバントの組み合わせは、抗原の抗体反応を高める、および/または対象の先天性免疫システム反応を高めるために選択し得る。ケモカインおよびサイトカインの製造における先天性免疫システム結果の活性化により、次に、適応獲得された免疫反応が活性化される。適応免疫反応の活性化の重要な結果は、宿主が抗原に再び遭遇する場合に、より迅速かつ概してより良い質で免疫反応が起こるようにする、記憶免疫細胞の形成である。ワクチンアジュバントの組み合わせは、プレパンデミックおよびパンデミックインフルエンザの制御に必要な免疫反応の数量および質の両方を調整するために戦略的に使用可能である。水および油分乳剤ベースのアジュバントによって、Th2T細胞免疫が誘導される。それらの使用は、ウイルス感染の予防を行う中和抗体の製造を実行する上で重要であるが、これらの乳剤は、細胞媒介免疫の刺激において効果的ではない。パンデミックの発生のために、Th1T細胞の誘発は、宿主内の病状の進行を制限し、集団内のウイルス感染を減らすために重要である。Th1T細胞は、IFN-γおよびTNFαの製造によって、ヒトインフルエンザウイルスの直接の抗ウイルス性の役割を果たすKannaganatetal.,I81:8468-8476,2007。これらは、さらに、マウスのIgG2a高いウイルス中和活性がない場合でも、インフルエンザを予防する抗体のサブクラスの製造を刺激すると共に、ウイルス排除に重要な抗ウイルス性CD8細胞傷害T-リンパ球の拡大、維持、および復活を調整するHuberetal.ClinVaccineImmunol13:981-990,2006。Th1反応を誘発するための最も直接的な方法は、病原菌由来の糖、タンパク質、脂質、および核酸を認識および結合するToll様受容体TLRの活性化を伴う。Toll様受容体は、樹状細胞成熟を刺激し、通常の先天性および適応性の免疫に必要とされる。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントのみがこれらの種々の目標のそれぞれを実現し得るが、本発明は、一実施形態において、アジュバント組み合わせは、これらの目標を実現するために、パンデミックインフルエンザ抗原と組み合わせて利用し得ることを規定する。しかしながら、別の実施形態では、ワクチン内に存在するアジュバントのみが、その種々の実施形態を含むDSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントであり、ここで、GLAは、化学式1の好適なDSLPアジュバントである。さらに、水中油型乳剤内のGLAは、抗原特異的抗体およびHAI力価の増加によって計測される際に、マウス内のFluzoneワクチンの免疫原性を大幅に向上させ、用量を節約し、インフルエンザの抗原泳動株antigen-driftedstrainに対する交差再活性を広げた。これらの同じ実験では、抗原特異的IgG2a力価およびIFNγ製造における劇的な増加によって示されるように、GLAは、Th1T細胞反応を誘導した。C.薬学的組成物、ワクチン、およびそれらの利用1.製剤薬学的組成物は、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザおよびDSLPアジュバント、例えばGLA等の化学式1のアジュバントからの組換え赤血球凝集素HAを含有する。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントは、3つの例として、水中油型乳剤内に、水性溶液として、またはリポゾーム内に処方され得る。組成物は、さらに、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザのノイラミニダーゼ等の他のタンパク質、アルミニウム塩例えば、カリ明礬またはサポニンおよびサポニン誘導体等の他のアジュバント、α-トコフェロールまたは誘導体等の賦形剤、キャリア、緩衝液、安定剤、結合剤、チメロサール等の保存剤、界面活性剤等を含有する。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントは、それのみで使用できる、または、2つの選択肢として、アジュバントが油相に組み込まれる水中油型乳剤に処方できる。それのみで使用される場合、つまり乳剤と組み合わせる利点がない場合、アジュバントは、典型的には完全にオイルフリーである、または約1v/v未満の油分を含有する組成物内に存在する。オイルフリーの組成物、水、アジュバント例えば、GLAは好適なアジュバントであるおよび界面活性剤を調製するために、例えばリン脂質、例えば1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-ホスフォコリンPOPCを組み合わせてもよい。組成物は、GLAの事前重量測定された量に、エタノールおよびPOPCの溶液を添加することで、調製され得る。この湿潤GLAは、できる限りGLAを拡散させるために、10分間、超音波分解される。次いで、GLAは窒素ガスによって乾燥される。乾燥したGLAおよびPOPCは、分量を修正するために、WFI水-for-注射で再構成される。この溶液は、全てのGLAおよびPOPCが溶解するまで、15~30分間、60°Cで超音波分解される。長期保存のためには、GLA-AF製剤を凍結乾燥する必要がある。凍結乾燥プロセスは、全量の2になるまで、グリセロールを溶液に添加することで構成される。次いで、溶液は、1~10ml量のバイアルに入れられる。バイアルは、溶液を凍結させ、および次いで、昇華によって凍結水をなくすために、真空下にされることで構成される、凍結乾燥プロセスが行われる。アジュバントが油と組み合わせられる場合、ヒトでの使用のため、油分は好適には代謝可能である。油分は、植物油、魚油、動物油または合成油であってもよく、油分は、摂取対象にとって有毒であるべきではなく、代謝による形態変換が可能である。ナッツピーナツオイル等、種、および穀物は、植物油の通常の原料である。特に適した代謝可能な油は、多くの異なる油に見られ、サメ肝油に多く見られる不飽和油であるスクアレン2,6,10,15,19,23-ヘキサメチル-2,6,10,14,18,22-テトラコサヘキサミンを含む。スクアレンは、コレステロールの生体合成の中間体である。さらに、水中油型乳剤は、典型的には、α-トコフェロールビタミンE、米国特許第5,650,155号、米国特許第6,623,739号等の抗酸化剤を含有する。また、トリグリセリド等の安定剤、等張性をもたらす材料、および他の材料を追加し得る。油の液滴の平均の大きさは、典型的には1ミクロン未満であり、30~600nmの範囲、および通常は約80~約120nmまたは約150nm未満であり得る。油の液滴の大きさは、光子相関分光法によって計測し得る。典型的には、油の液滴の少なくとも約80は、所望の範囲内、または少なくとも約90あるいは少なくとも約95にすべきである。乳剤の油分の一部は、概して2~10の範囲であり例えば、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9および約10、約2~約10のα-トコフェロール、および約0.3~3の界面活性剤等の抗酸化剤の一部である。好適には、より適した乳剤を提供するため、油:αトコフェロールの比率は1以下である。ソルビタントリオレエート例えば、Span登録商標85は、約1のレベルでも存在し得る。いくつかのケースでは、本発明のワクチンはさらに安定剤を含有することが有利であり得る。水中乳剤内の油分を製造する方法が、当該技術の業者に公知である。通常、方法は、ホスファチジルコリン、ブロック共ポリマー、またはTWEEN80登録商標溶液等の界面活性剤と油相を混合し、ホモジナイザーを用いて均質化を行うことを含む。例えば、注射器針によって一度、二度またはより多くの回数、混合物を排出させることを含む方法は、少量の液体を均質化するために適している。同様に、マイクロフルイダイザーによる入荷プロセスM110Sマイクロ流体力学装置、最大で50回排出、最大圧力入力6バール出力圧力約850バールにおいて2分間は、より少量またはより多量の乳剤を製造するように適合できる。この適合は、必要な直径の油の液滴によって調製が実現されるまで、生成された乳剤の測定を含むルーティンの実験によって実現できる。乳剤を生成するために、他の装置またはパラメータも使用し得る。スクアレンを使った例示的な水中油型乳剤が、SEとして公知であり、α-トセラフォールtocerapholを有するアンモニウムリン酸緩衝液pH5.1内の界面活性剤として、スクアレン、グリセロール、ホスファチジルコリンまたはレシチンまたは他のブロック共ポリマーを含有する。DSLPとしてGLAが使用される場合、生成される組成物は、GLA-SEとも称される。かかる組成物を作製するために、GLA100マイクログラム、AvantiPolarLipids,Inc.,Alabaster,AL、製品番号699800は、抗酸化剤として0.5mgD,L-α-トコフェロールを選択的に使用する25ミリモルアンモニウムリン酸緩衝液中にpH=5.1、グリセロール22.7mg、ホスファチジルコリンまたはレシチン7.64mg、Pluronic登録商標F-68BASFCorp.、MountOlive,NJまたは同様のブロック共ポリマー0.364mgにより、スクアレン34.3mgにおいて乳化される。混合物は、分離しない、180nm未満の平均粒子サイズを有する乳剤が形成されるまで、高圧で処理される。次いで、乳剤は、ガラス製の単回用量バイアルへと殺菌過され、より長期間の保存のために密閉されるcapped。2~8°Cで保存される場合、少なくとも3年間、この調製を使用し得る。本明細書に記載されるように、DSLPおよびタンパク質を含む他の油分含有組成物は、米国特許第5,650,155号、第5,667,784号、第5,718,904号、第5,961,970号、第5,976,538号、第6,630,161号、および第6,572,861号に記載されるように調製されたこれらの組成物と同様に調製し得る。いくつかの特定の組成物およびワクチンは、プレパンデミックH5N1ウイルス由来のrH5を含有する。ワクチンに適したrHAの種々の形態が前述されているが、簡潔に言うと、これらは、全長rHA、rHAの断片、rHAを含有する融合タンパク質、またはペプチドを含む。さらに、1つよりも多いrHAを共に使用可能である、またはノイラミニダーゼ等の他のタンパク質と共に、組成物およびワクチン内にあってもよい。1つよりも多いrHA形態、またはrHA配列、あるいはその両方は、本発明の組成物に組み込まれてもよい。ワクチン内のrHAタンパク質の量は、典型的には、例えば約0.1μg~約15μgの低用量である。この低用量は、0.1μg、0.5μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、8μg、9μg、10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、または15μgのいずれかのrHAタンパク質であり得る。rHAタンパク質の低用量は、以下に詳述するように、有効性の国際的例えば、EUまたはFDA基準に適合するワクチン製剤を可能にするならば、実際にできる限り低用量にし得る。用量は、典型的には、活性、意図される投与数、およびサイズならびに対象条件によって決定される。タンパク質は溶液として提供し得るが、乾燥した例えば、水分除去したで形態提供することもでき、この場合、使用者は、必要な液体を添加する。典型的には、緩衝液、安定剤、保存剤、賦形剤、キャリア、および他の非活性材料等の添加剤も存在する。添加剤は、典型的には、薬学的に受容可能かつ生体適合可能である。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントを、溶液として提供する、水分除去または乳化する、適した水中油型乳剤として便利な方法で提供し得る。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバントに加えて、アジュバント含有組成物は、緩衝液、安定剤、賦形剤、保存剤、キャリア、または他の非活性材料も含有し得る。添加剤は、典型的には薬学的に受容可能および生体適合可能である。本明細書の他の部分により詳細に記載されるように、さらなるアジュバントも存在し得る。これらのコアジュバントは、2’-5’オリゴA、細菌内毒素、RNA二本鎖、単一のらせんRNA、リポタンパク質、ペプチドグリカン、フラジェリン、CpGDNA、リポ多糖、MPAモノホスホリル脂質A、3-O-脱アシル化MPL、リポ多糖、QS21サポニン、水酸化カリ明礬物カリ明礬および他の鉱物塩、油分乳剤例えば、MF59登録商標、R848および他のイミダゾキノリン、ウィロゾームおよび他の微粒子アジュバントその全体が組み込まれる、VogelandPowell,AcompendiumofVvaccuneadjuvantsandexcipientsPharmBiotechnol6:141-228,1995を参照を含む。量DSLPアジュバント、例えば、化学式1のアジュバント、例えば、ワクチンとして有用な抗原も含有する、本発明の組成物の用量に使用されるGLA用量は、その必要とされる対象に投与される組成物の量は、一実施形態では、約0.5μg~約50μgであり、別の実施形態では、約1.0μg~25μgであり、本発明の種々の他の実施形態では、約1μg、約2μg、約2.5μg、約5μg、約7.5μg、約10μg、約15μg、約20μgまたは約25μgであり得る。用量内の組成物の全量は、典型的には、0.5ml~1.0mlの範囲である。SE等の乳剤は、組成物に存在してもよく、種々の実施形態において、乳剤の油分成分は、組成物の全量の約0.1、約0.5、約1.0、約1.5、約2、約2.5、約3、約4、約5、約7.5または約10を構成する。DSLPアジュバント、例えば化学式1のアジュバント、およびタンパク質は、別の容器で提供され、その場で混合されるまたは事前に混合され得る。加えて、タンパク質は、別の容器に存在し得る、または単一の容器に組み合わせ得る。容器は、バイアル、アンプル、管、または多重ウェル型装置のウェル、保有宿主、注射器またはいずれかの他の種類の容器にすることができる。容器または容器は、キットとして提供し得る。容器のうちの1つ以上が、水分除去材料を含有する場合、再構成のための液体は、キット内にも提供され得る、または使用者によって提供され得る。各容器内の溶液量または各容器に追加される量は、投与の経路および各容器内の用量に相応する。注射によって与えられるワクチンは、典型的には約0.1ml~約1.0mlであり、一方で、経口投与によるワクチンは、例えば、約1ml~約10mlのより多い分量にし得る。適した分量は、対象の大きさおよび年齢に従って変動し得る。組成物は、概して殺菌して提供される。典型的な殺菌方法は、ろ過、照射およびガス処理を含む。2.投与ワクチンは、皮内、粘膜例えば、経鼻投与、経口投与、筋肉内、皮下、舌下、直腸、膣内等の適した送達経路によって投与できる。他の送達経路も当該技術で公知である。筋肉内投与経路は、ワクチン組成物の適した一経路である。適したi.m.送達デバイスは、インシュリンまたはエピネフリンの送達のために自宅で自己注射で使用されるもの等の針および注射器、針のない注射デバイス例えばBiojector,Bioject,ORUSA、またはペンインジェクタデバイスを含む。皮内および皮下送達が、他の適した経路である。適したデバイスは、注射器および針、短い針の注射器、およびジェット注射デバイスを含む。ワクチンは、粘膜経路によって、例えば経鼻投与的に投与され得る。多くの経鼻投与送達デバイスが利用可能であり、当該技術で公知である。噴霧デバイスが、かかるデバイスの一つである。経口投与は、対象に、飲み込むための溶液を提供するだけの簡単なものである。単一の部位または複数の部位にワクチンを投与し得る。複数の部位における場合、投与の経路は各部位において同じであり得る例えば異なる筋肉内の注射、または異なり得る例えば筋肉および鼻内噴霧内の注射。さらに、単一の時点または複数の時点においてワクチンを投与し得る。概して、複数の時点で投与する場合、投与間の時間は、免疫反応を向上させるために決定されている。病気または感染の症状を予防または低減させるために、有利な免疫反応に効果を及ぼすために十分な用量でワクチンが投与される。有利な反応の一指針は、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスの抗体の開発、特に、中和抗体の開発である。他の指針は、ウイルスに対するCD8またはCD4T細胞の増加した分量または機能あるいは頻度、およびウイルス感染の低減を含む。ELISAおよびウイルス感染中和アッセイの阻害を含む抗体を検出および定量化するために、多くの公知の手順が利用可能である。一実施例では、ELISAアッセイは、HAタンパク質で多重ウェルプレートのウェルをコーティングし、血清からプレートへHA特異的抗体を捕捉する、標識が付けられる抗ヒト抗体を有するHA特異的抗体を検出し、次に、標識の読み出しを行うことによって実施される。標識は放射性にすることができるが、より普通には、物質を比色分析で検出可能なものに変換する、ホースラディッシュのペルオキシダーゼ等の酵素である。例示的なインフルエンザ中和アッセイは、感染性の阻害によって中和抗体が検出されるプラークアッセイに基づく。ウイルス中和試験は、非常に繊細なものであり、動物およびヒト内のインフルエンザウイルス特異的抗体を識別するための特定のアッセイである。中和試験は、次の2つの段階、つまり、1ウイルスが血清の希釈と混合され、ウイルスへの抗体結合を可能にするためにインキュベートされるウイルス抗体反応ステップ、および2混合物は、適正な宿主システムに接種される例えば、MDCK細胞、孵化した卵、または動物等の細胞培養接種ステップで実行される。細胞が使用される場合、ウイルス感染した細胞は、ミクロン中立化アッセイで次の日に検出される。細胞が固定され、感染した細胞内のインフルエンザAウイルス核酸タンパク質NPの存在がELISAによって検出される。NPの検出は、その血清希釈における中和抗体の欠如を示す。感染性がないということは、陽性の中和反応を構成し、血清サンプル内のウイルス特異的抗体の存在を示す。InfluenzaVirusMicroneutralizationAssay,CDCpublication,LP-004,R-2KHancock2009年10月19日に有効インフルエンザウイルスの他の中和試験は、MDCK細胞培養の細胞変性効果CPE形成の阻害に基づくSidwellandSmee,AntiviralRes.48:1-16、2000を参照。別の公知のアッセイは、インフルエンザウイルスHAに対する免疫反応を査定する血球凝集阻害アッセイである。ウイルス表面上のHAタンパク質は、赤血球赤血球、RBCを凝集させる。HAの抗体がHAに結合する場合、凝集は阻害される。概して、HA抗原の標準化された分量が連続的に希釈された血清サンプルと混合され、赤血球が添加され、凝集の程度が査定される。血清内の凝集の非特定の阻害因子は、最初にRBC上の血清の吸収によって除去されるSerologicDetectionofHumanInfluenzaVirusInfectionsbyHemagglutination-InhibitionAssayUsingTurkeyRBCs,CDCpublication,LP-003,R-1KHancock2009年10月2日に有効。製造された抗体の型および亜型も、決定し得る。IgM、IgGおよびIgG亜型、ならびにIgAを決定するためのアッセイが当該技術で公知である。通常使用されているアッセイは、ELISAである。簡潔に言うと、マイクロタイタープレートは、抗原、例えばrHAまたは活性化されていない完全ウイルスによってコーティングされる。タンパク質を含有する溶液内でのブロック後に例えば、1ウシ血清アルブミン、血清サンプルの連続希釈がウェルに添加され、次に、免疫グロブリンイソ型特異の二次抗体で処理される。抗イソ型抗体は標識が付けられる、または標識抗体結合分子が添加される。標識の量が決定される。プレパンデミックワクチンについてのFDAに対する基準は、交差反応性である免疫を誘導するための能力であり、ワクチンが異なるクレードおよびサブ-クレードからの遺伝的に明確なウイルスに対する免疫を誘導することを意味する。交差再活性は、本明細書に記載される抗体アッセイのいずれかまたは当該技術で公知の他のアッセイによって試験できる。例示的なアッセイでは、血清は、免疫HAを含有するウイルスを含む、多様なウイルスからのHAへの抗体について試験される。これらのアッセイについて、HAタンパク質または完全ウイルス好適には不活性化されたを使用可能である。T細胞機能のアッセイは、IFN-γELISPOTおよびICS細胞内サイトカイン染色を含む。いくつかのサイトカインのためにサイトカイン製造を計測することにより、Th1/Th2プロファイルを確立できる特に、望ましいパターンは、IFN-γおよびIL-2製造が増加し、IL-5およびIL-4製造が減少することである。インターフェロン-γを検出するELISPOTアッセイは、候補ワクチンへのCD4およびCD8T細胞反応を量子化するために幅広く使用される。ELISPOTアッセイは、固定化した抗体によって捕捉され、かつ、酵素結合された第2の抗体によって視覚化されるサイトカインのELISA検出抗原誘導分泌の法則に基づく。ICSは、T細胞表面分子の抗体またはMHCクラス分子を結合させるペプチド等の、作動薬による刺激後にサイトカイン発現によって細胞傷害T細胞による定量化のために通常使用される方法である。ICSおよびELISPOTの例示的な手順を、以下の実施例に記載する。抗原特異的T細胞機能も計測可能である。共にIFNγ、IL-2およびTNFを発現させるインフルエンザ特異的CD4T細胞は、単一のサイトカインを製造する細胞に対して可能性のあるより良い機能活性および共刺激を有する。このため、複数のサイトカイン製造CD4T細胞の誘導が望ましい。抗原特異的T細胞刺激アッセイは、IFNγ、IL-2、TNFα、およびフローサイトメトリーによるその組み合わせを製造するCD4T細胞の頻度を推定するために使用し得る。このアッセイへのIL-5の追加は、Th2CD4細胞に対してTh1を区別するために使用できる。予防接種後3、6、12、および24週の経時変化による実験が、長期にわたるT細胞反応を決定するために実施される。フローサイトメトリーは、エフェクター記憶CD4T細胞TEM:CD4CD62L-CCR7-IFNγおよび中央記憶CD4TTCM:CD4CD62LCCR7IL2IFNγ/-細胞の生成を計測および区別するために使用することもできる。IFNγ、TNFおよびIL-2の製造を誘導し、CD4CMを増加させるワクチン製剤が望ましい。細胞傷害CD8T細胞は、さらに、ウイルス負荷を除去し、病気の進行を制限する役目を果たす。抗原特異的CD8T細胞を引き出すワクチンが望ましい。一態様において、本発明は、ウイルスに接触する可能性があるヒト集団にプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスの予防接種を行う方法を提供する。本方法は、薬学的組成物の一回の注射を投与することを含み、ここで、この一回の注射により、一回の注射を受ける集団の少なくとも50に血清変換が実施される。薬学的組成物は、aプレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザのウイルスからの組換え赤血球凝集素rHAと、bDSLPアジュバントであって、該アジュバントは、例えば、グルコシルおよびアミノ置換グルコシルからそれぞれ独立して選択される還元末端および非還元末端を有する二糖を含有する、DSLPアジュバントと、を含有し、非還元末端の1位の炭素は、エーテル-O-基またはアミノ-NH-基のいずれかを介して、還元末端の6’位の炭素に結合され、二糖は、非還元末端の4’炭素を介してリン酸基へ、かつ、アミド-NH-CO-および/またはエステル-O-CO-結合を介して、複数の脂質基へ結合され、エステルまたはアミド結合のカルボニル-CO-基は、脂質基に直接結合され、各脂質基は、少なくとも8つの炭素を含有する。種々の実施形態において、組成物は乳剤を含まない、または油、例えばスクアレンを含まない。オイルフリーの組成物は、医療従事者から、副作用を引き起こしにくいと考えられている。例えば、乳剤は、油分が存在する場合、ワクチンは、注射を受ける対象に刺激および痛みを生じさせる可能性があるという点で、ワクチン組成物を反応原性にする傾向があることに懸念が高まっている。乳剤フリーの組成物の別の利点は、典型的な使用において、ワクチン組成物は2つの成分、つまり、抗原含有組成物およびアジュバント含有組成物から作成され、最終的なワクチンを調製するためにこれらの2つの組成物が混合される。組成物のそれぞれの安定性は、好適には、長期にわたって高い。アジュバントまたは抗原のキャリアとしての乳剤の一つの問題は、乳剤が、長期にわたり安定しない傾向がある、またはそれらの安定性を維持するために特別な条件または化学物質を必要とするということである。本発明は、一実施形態では、良好な安定性および良好な有効性をもたらす、オイルフリーの例えば乳剤を含有しない組成物を提供する。好適な実施形態において、DSLPアジュバントはGLAであり、より好適には、ある期間において保存可能な、オイルフリーのキャリア内のGLAまたは他のDSLPアジュバント例えば、アジュバントおよび界面活性剤のみで構成される凍結乾燥された形態、例えば、リン脂質であり、次いで、効果的なワクチンを提供するためにキャリアおよび抗原と混合される。ワクチンの他の望ましい態様は、用量および投与量を節約する性質を含む。投与量の節約とは、所望のまたは効果的な免疫反応をさらに上げるために人に投与され得る通常よりも少ない用量である。用量の節約は、そうでなければ所望のまたは効果的な免疫反応を上げるためにより少ない量の抗原が必要であることを意味する。用量および投与量の節約は、ヒトにおいて鳥類または豚ウイルスのHAをもたらす弱い免疫反応等の、プレパンデミックまたはパンデミックインフルエンザウイルスに対するワクチンの開発に関連付けられる技術的な問題を克服することを意味する。以前のパンデミックインフルエンザワクチンの開発中に、大きな多中心トライアルにより、ヒトの54のみが予防されていれば、28日の間隔で、90μgのH5の注射を二回行うべきであることがわかっているTreanoretal.,NewEnglandJournalofMedicine354:1343-1351,2006。世界中において、現在、所望の期間内に、90μgの注射を二回投与されるパンデミックインフルエンザのワクチンは、7千万分の用量のみを製造可能であると推定されているPoland,G.A.,NewEnglandJournalofMedicine,354:1411-1413,2006。好適なワクチン製剤は、用量または投与量の節約によって血清変換を実行するためのワクチン接種に必要なタンパク質量を減少させる。本明細書に記載されるアッセイのいずれかを、用量および/または投与量節約を検証するために使用可能である。用量および投与量の節約を検証するための例示的なアッセイは、ワクチン接種に対する血清抗体反応を測定する血球凝集阻害HAIアッセイである。FDAは、40以上のHAI力価が、自然の感染からの防御を予測するための適した免疫学的パラメータであることを述べるパンデミックインフルエンザワクチンの評価ガイドラインを確立しているFoodandDrugAdministration2007Guidanceforindustry:季節性不活性化インフルエンザワクチンの免許下付のサポートに必要な臨床データを参照。本明細書に記載されるように、40以上のHAI力価を有するヒトは、血清変換を実行したヒトと考えられる。抗原の例示的な用量は、一回、つまり一度だけ、抗原製剤がワクチン投与された個人の約50における、約40のHAI力価を実現するために効果のあるワクチン製剤内の抗原の量である。抗原の別の例示的な用量は、抗原製剤で一回ワクチン投与された個人の約70における、約40のHAI力価を実現するために効果的なワクチン製剤内の抗原の量である。抗原の別の例示的な用量は、抗原製剤で一回ワクチン投与された個人の約80において約40のHAI力価を実現するために効果的なワクチン製剤内の抗原の量である。本明細書に記載される薬学的組成物、ワクチン組成物、およびキットは、インフルエンザ感染を防止または予防する、または感染後の病気の治療のために、個人に投与され得る。投与は、プレパンデミックの段階またはパンデミック時に実施され得る。本組成物を受ける対象は、病気または死んだ動物例えば鳥H5N1ウイルスと身近に接触するまたは身近に接触する可能性がある人々、パンデミックの対処のために選択された集団、子供、年配者、妊婦、特定の慢性病または免疫抑制症状を抱える人々等の高リスクの個人、および理想的には世界人口を含む。インフルエンザは、単一の用量例えば、注射としてまたは複数の用量としての組成物の投与によって回避し得る。複数の用量が投与される場合、ある時間間隔後に、概して、二回目および以降の用量が投与される。多くの場合、初期の用量の投与は、免疫反応の準備刺激と呼ばれ、以降の用量の投与は、免疫反応の追加免疫と呼ばれる。より短いまたはより長い期間も使用し得るが、典型的には、第1および第2の投与の間の期間は少なくとも2週間である。前の投与後少なくとも2-4週間でさらなる用量が投与され得る、また、いくつかのケースでは、前の用量後、長期間の後例えば、1年で、投与され得る。インフルエンザ感染後の用量の投与は、疾患の治療上、役立つ。パンデミックウイルスのHA配列は泳動することができるため、および、プレパンデミック段階において、可能性のあるウイルスのどれがパンデミックかがわかっていないため、関連するウイルスに対して幅広い範囲を提供するワクチンを投与することが望ましい。本明細書に示すように、関連するウイルスの抗体は、あるrHAタンパク質の投与から得られた。幅広い範囲を得るための別の方法は、あるrHAで刺激し、異なるrHAで追加免疫することであってもよい。組成物は、他の抗ウイルス性薬剤と共に投与し得る。抗ウイルス性薬剤は、ウイルスの増殖阻止に直接作用する薬、ドラッグ、ハーブ等である。いくつかの公知の抗ウイルス性薬剤は、タミフル登録商標オセルタミビル、アマンタジンシンメトレル登録商標、リマンタジンフルマジン登録商標、ザナミビルリレンザ登録商標、ペラミビル、ラニナミビルを含む。他のノイラミニダーゼ阻害因子およびM2阻害因子も利用可能であり得る。組成物と共に中国漢方も投与され得る。他の薬剤は、咳用シロップ等の症状を治療するものを含み、アスピリン、イブプロフェン等のNSAIDも提供され得る。例示として以下の実施例を示すが、これらに制限されない。実施例1マウスにおける一回の注射のRH5/GLA-SEインフルエンザワクチンの有効性この実施例は、組換えインフルエンザH5rH5タンパク質による一回のワクチン接種により、H5N1ウイルスの高い力価で攻撃されたマウスの予防的抗ウイルス免疫反応を効果的に刺激できることを示す。Balb/cマウス5/群を、rH5タンパク質H5N1ベトナム1203由来、ProteinSciences,Meriden、CTから販売されているのみ、またはGLA-SEアジュバントで処方した、増加する量0、50、150、450、900、または2700ngのrH5タンパク質20μgの2SEのGLAを、一回、筋肉内にIM注射した。マウスを、14日後に、H5N1ベトナム12031000×LD50の経鼻投与により攻撃した。毎日、マウスの体重減少をモニターし、体重の減少が20~30よりも多い場合には安楽死させた。アジュバントがないrH5を接種された全てのマウスは、ウイルス攻撃後に自然に死んだか25匹中18匹、または高い疾病率を示し、安楽死させられた25匹中7匹ため、rH5タンパク質のみによるワクチン接種は予防免疫を提供しなかった。しかしながら、最も低用量のrH5タンパク質の投与であっても、rH5GLA-SEアジュバントでワクチン投与された全てのマウスは生き残った25匹中25匹。これらの結果から、GLA-SEアジュバントが処方されている場合、組換えサブユニットインフルエンザワクチンの一回の注射で、マウスに予防免疫をもたらし得ることがわかる。この予防免疫は、抗原用量を50倍低下させた場合でも観察された。rH5ワクチンにGLAアジュバントを添加する利点は、ウイルス攻撃後にワクチン投与されたマウスの体重減少を精査することにより、さらに高まった。Balb/cマウス5/群に、rH5タンパク質のみの増加する量0、50、150、450、900、または2700ng、または、20μgのGLA-SEアジュバントまたはSE乳剤のみ100μLの2溶液で処方されたrH5タンパク質を、一回、注射した。マウスは、14日後にH5N1ベトナム12031000×LD50で攻撃され、攻撃後14日目に体重を測定した。rH5タンパク質のみでワクチン投与されたマウスはウイルス攻撃後に大きく体重が減少し、最も高用量をワクチン投与したものであっても、回復することなく死んだ。対照的に、GLA-SEアジュバントが処方されたrH5タンパク質をワクチン投与した全てのマウスは、ウイルス攻撃後も生き残り、以前の体重まで増加した。SE乳剤のみで処方されたrH5タンパク質がワクチン投与されたマウスも、ウイルス攻撃から回復し、体重が増加した。これらの2つの群の間の回復の差を定量化するために、全ての群における、14日間の試験期間にわたる平均体重変化割合を、2週間の試験期間における毎日の体重変化を表す曲線下の領域を計測することにより、計算した。図1Aにこれらの値を表す棒グラフが示され、これは、GLA-SEが処方されたrH5が接種されたマウスが、SE乳剤のみが処方されたrH5処方が接種されたマウスよりも、体重減少が大幅に小さいことを示す。これらの結果は、GLAアジュバントが処方されたrH5が、全ての抗原用量において優れた予防効果を誘導することを示す。このため、rH5タンパク質へのGLAアジュバントの添加によって、マウスの一回の低用量注射として投与される場合に予防免疫を確立する、大幅に改善したワクチンが得られる。これらの結果は、GLAアジュバントの処方が、組換えタンパク質ベースのパンデミックインフルエンザのワクチン開発に関連付けられた攻撃のうちのいくつかに対する効果の高い可能性のある溶液を提供する、すなわち、一回のワクチン注射のみで予防免疫が確立される、抗原免疫原性の増強を示唆する。ワクチンの用量節約は、考えられるインフルエンザパンデミックの備えにおける、公的医療機関の緊急の優先事項である。GLAアジュバントで構成されるrH5ワクチンの改善した性質が、ウイルス攻撃後のワクチン投与されたマウスにおける動態学的体重変化を計測することにより、さらに精査された。上記のように、Balb/cマウス5/群に、GLA-SEアジュバントまたはSE乳剤のみに処方された50ngのrH5タンパク質が、一回、注射され、次いで、14日後に、H5N1ベトナム12031000×LD50で攻撃された。対照として、マウスに、rH5タンパク質がない、GLA-SEアジュバントまたはSE乳剤がワクチン投与された。マウスについて、ウイルス攻撃の翌日以降、毎日、体重測定をし、攻撃前のマウスの体重に対する体重減少が決定された。この攻撃モデルにおいて、予防接種を行っていない、無処置のマウスは、急速な体重減少が見られた後で死亡することによって裏付けられるように、ウイルス攻撃から回復していない。図1Bに示されるように、それらの体重は、最初に、予防接種を行っていない、対照群で観察されるものと同一の割合で減少したため、ウイルス攻撃で生き残った全てのマウスは感染の症状を示していた。しかしながら、ウイルス攻撃後10~12日目に、ワクチン接種前レベルに戻った体重増加によって示されるように、GLA-SEが処方されたrH5を予防接種されたマウスはウイルス攻撃から回復した。SE乳剤のみが処方されたrH5を予防接種去れたマウスも回復したが、それらの回復率は、GLA-SEアジュバントで処方されたrH5がワクチン投与されたマウスで観察されるものに対して、大幅に遅かった。GLA-SEアジュバントまたはSE乳剤のみが予防接種されたマウスは、無処置のマウスのものと同様にウイルス性攻撃に反応したことから、この予防効果はrH5タンパク質に依存していた。重要な点として、これらのデータは、一回の注射の有効性の向上、低用量rH5ワクチンが、rH5タンパク質およびGLAアジュバントの組み合わせられた活性に依存することを示す。GLAアジュバント注に処方されたrH5ワクチンの改善した有効性に必要な要素をさらに定義するために、GLA-SEアジュバントのみ、rH5タンパク質SEのみ、rH5GLAのみ、またはrH5GLA-SEをワクチン投与したマウスにおいて、体重変化の動態を測定した。図1Cに示されるように、予防接種をしていない対照マウスおよびrH5タンパク質がないGLA-SEの予防接種が行われたマウスは、体重が劇的に減少し、上述のように、ウイルス攻撃後に死んだ。対照的に、rH5およびGLA-SEの組み合わせで予防接種を行ったマウスは、ウイルス攻撃から回復し、完全に体重が戻った。SEのみまたはGLAのみが処方されたrH5の予防接種を行ったマウスも回復したが、これらの2つの群で観察される回復率は、rH5GLA-SEワクチンを接種されたマウスの回復率に対して大きな遅れがある。これらのデータは、SE乳剤内のrH5およびGLAアジュバントの組み合わせが、いずれかの個々の成分の性質に対し、優れた性質を示すことを示す。実施例2一回の注射として投与される場合に、RH5/GLA-SEインフルエンザワクチンはマウスにおける均質免疫をもたらすこの実施例では、不均質なウイルス攻撃に対する、GLAアジュバントが処方された組換えワクチンの予防有効性が示された。これらの実験で、マウスは、H5N1インドネシアクレード2.3から分離されたrH5タンパク質分離株の一回の注射によって予防接種が行われ、次に、上記のようにH5N1VNウイルスの攻撃が行われた。陽性対照として、マウスは、H5N1ベトナムからの同種のrH5タンパク質がワクチン投与され、一方で、陰性対照として、マウスは、HSV-2ウイルス性タンパク質rG013でワクチン投与された。表1に示されるように、タンパク質/アジュバントの処方に関係なく、HSV-2タンパク質がワクチン投与されたマウスは全て死んだ。50ngの同種のrH5VNタンパク質のみがワクチン投与されたマウスは全て死んだが、一方で、以前の所見と同様に、GLA-SEアジュバントが処方されたrH5VNをワクチン投与されたマウスは、全て生き残った。重要な点として、GLA-SEが処方された50ngまたは200ngの不均質rH5Indoタンパク質を接種されたマウスは全て生き残り、GLA-SEが交差クレード予防免疫を効果的に増大させることが示された。興味深いことに、投与された最低量の用量のrH5Indo50ngにおいて、SEのみを有するタンパク質の処方は、ウイルス攻撃からマウスを保護できずマウスは一匹も生存しなかった、一方で、SE乳剤がないGLAの処方は、マウス2/5の40において防御を示した。図2に示されるように、さらに、ウイルス攻撃後に、体重減少の回復がモニターされた場合に、GLAアジュバントを処方された場合の改善した有効性rH5Indoワクチンが観察された。以前の実験で観察されるように、rH5タンパク質のみがワクチン投与されたマウスはウイルス攻撃から回復せず、一方で、GLA-SEアジュバントが処方されたrH5を接種されたマウスは、急速に回復し、攻撃前のレベルに体重が戻った。GLA-SEアジュバント中に処方された不均質rH5Indoタンパク質がワクチン投与されたマウスは、さらに、組換えタンパク質の用量に依存した動態で、迅速に回復した。こうして、GLA-SEは、同種および不均質組換えインフルエンザワクチンの両方の有効性を向上させる。用量および投与量を節約するワクチンによる交差クレード予防免疫の確立は、候補パンデミックインフルエンザワクチンの特に有利な性質である。実施例3GLA-SEがマウスの抗原特異的免疫の確立を促進するこの実施例は、予防接種後、毎日、インフルエンザウイルスでマウスを攻撃することにより、マウス予防モデルの免疫を確立させるための一時的な要件を示す。上述のように、マウスは、SEのみまたはGLA-SEアジュバントが処方された低用量のrH5タンパク質の一回の注射でワクチン投与された。対照として、マウスは、rH5タンパク質またはGLA-SEのみがワクチン投与された。マウスは、ワクチン接種後の、様々な日数後0、2、4、6、8、10、または12日目に攻撃され、14日目後に生存率が判断された。図3Aに示されるように、GLAアジュバントで処方されたrH5タンパク質は、ワクチン接種後4~6日目以内に予防免疫を確立した。予想されたように、これらの成分のいずれも持たないワクチンを接種されたマウスは全て死んだことから、この効果は、組換えタンパク質およびGLA-SEの両方に依存していた。この群における予防免疫の獲得は、rH5GLA-SE群で観察されたものに対して、一日以上遅れがあったが、SEのみに処方されたrH5を接種されたマウスは、ウイルス攻撃からの予防効果を示した。以下に記載するように、体重減少の動態が、予防接種後6日目または14日目のいずれかにウイルスによって攻撃されたマウスにおいて、計測された。図3Bに示されるように、予防接種後6日目にマウスが攻撃された場合、rH5SE乳剤のみの群は、rH5GLA-SEアジュバントを接種された群と比べて、より体重減少が大きかった。群の間で観察されるこの差は、ワクチン接種後14日目に対する攻撃の遅れについて、小さくならなかった図3Bを参照。これらのデータは、GLAアジュバント内に処方されたrH5によるワクチン接種がウイルス攻撃後の体重減少の低下につながるだけではなく、マウスの回復を大幅に短縮させる。全体的な健康において同様の傾向が、臨床スコア方法図3Cを参照を用いて観察された。rH5GLA-SEで治療されたマウスは、ワクチン接種の時期に関わらず、rH5SEのみの群よりも病状が軽く、より早く回復したようであった。このように、GLA-SEアジュバントは、SE乳剤のみに対する抗原特異的免疫の確立を促進する。予防免疫を迅速に誘発するための用量および投与量を節約する組換えワクチンの能力は、パンデミックインフルエンザワクチンの非常に望ましい性質であり、予期しなかった幅広く迅速なウイルス性感染に対して効果的である。実施例4GLA-SE内に処方されたRH5タンパク質によるワクチン接種により、マウスについて非常に恒久的な防御免疫を確立するこの実施例では、低用量の同種rH5VNまたは不均質rH5Indo抗原で一回、マウスに予防接種を行い、46日目にH5N1VNでウイルス攻撃を行うことにより、アジュバント依存防御の永続性が評価された。表2に示されるように、GLAアジュバントが処方された組換えH5抗原をワクチン投与された全てのマウスが、ワクチン接種が同種または不均質のどちらのrH5タンパク質に由来するかに関わらず、ワクチン接種後46日目において、ウイルス攻撃後も生き残っていた。さらに、図4およびBに示されるように、この群のマウスは、ウイルス攻撃から非常に迅速に回復し、体重減少はほとんどなかった。図4Cは、これらの群のウイルス負荷量も低下していることを示す。重要な点として、これらの結果は、低用量のrH5タンパク質およびGLAアジュバントの組み合わせで構成されたワクチンが、マウスのインフルエンザウイルスに対する効果的かつ恒久的な交差クレード防御をもたらすことを示す。実施例5フェレットにおけるRH5/GLA-SEインフルエンザワクチンの一回の注射の有効性この実施例に記載されている実験は、インフルエンザワクチン開発の適した臨床前宿主である、フェレットの低用量rH5ワクチンの一回の注射によって、予防免疫が確立されるかどうかを説明する。6~12か月のオスのケナガイタチTripleFFarms,Sayre,PAを、全ての実験で使用した。接種前、全てのフェレットは、ヘマグルチニン阻害HIアッセイにより、流行している季節性インフルエンザインフルエンザH1N1、H3N2、およびインフルエンザBについて血清学的に陰性であることが確認された。全ての実験で、フェレットは、Duo-FloBioclean移動式クリーンルーム内に閉じ込められたケージに収容されたLabProducts,Seaford,DE。感染前のおよそ3日間、毎日、基礎血清、体温および体重のデータが取られた。体温は、皮下移植可能体温トランスポンダーBioMedicDataSystems,SeafordDEを使用して計測された。フェレット群につき4匹に、それのみまたはアジュバントと共に、0.5μgのrH5VNが一回、ワクチン投与され、次いで、ワクチン接種後28日目にH5N1VNで攻撃された。全量1mlの、A/VN/1203/05H5N1ウイルスの7.5×105PFUが、フェレットに対し、鼻腔内に接種された。感染後1日目に開始し、7日間継続して、24時間毎に、全てのフェレットから鼻腔器具Nasalwashが回収された。神経的症状がみられる、または瀕死の状態であると判断される、0日目に体重の25以上が減少したフェレットは、人道的に安楽死させられた。表3に示されるように、rH5、さらにSE、GLA、またはGLA-SEを接種された全てのフェレットはウイルス攻撃に対して生き残り、一方でアジュバントがないrH5タンパク質またはインフルエンザ抗原がないのGLA-SEアジュバントのワクチン接種は、全てのフェレットをウイルスから保護することができなかった。ウイルス攻撃後の体重減少の動態が計測された際、rH5のみまたはSE乳剤中に処方されたrH5図A5を参照がワクチン投与されたフェレットとは対照的に、GLAアジュバントが処方されたrH5ワクチンがワクチン投与されたフェレットでは体重の減少はほとんどないことが観察された。この動物モデルにおいて、フェレットにおけるrH5GLAワクチンの最適な有効性のために、SE乳剤は不要であるように考えられる。この傾向は、図5Bに示されるように、各群の臨床スコアが決定された際に要約された。GLAアジュバント内に処方されたrH5を接種されたフェレットは、rH5のみを接種されたフェレットとは対照的に、臨床観察に基づいて正常であると考えられる。総じて、これらの結果から、GLAアジュバントを含有する低用量rH5ワクチンの一回の注射が、フェレットのH5N1感染を効果的に予防していることが示される。このように、一回の注射の有効性を大幅に向上させるGLAアジュバントの能力、低用量の組換えH5ワクチンが、防御免疫の2つの異なる動物モデルにおいて示されている。上記の記述から、例示のために特定の実施形態が本明細書に記載されているが、発明の精神および範囲を逸脱しない限り、種々の修正を行い得ることが理解されよう。従って、本発明は、添付される請求項による場合を除いて、制限されるものではない。"