a対象から組織サンプルを得る段階b該組織サンプルにおけるH3K27の、存在すればそのジメチル化レベルを検出する段階、および該ジメチル化レベルを対照のジメチル化レベルと比較する段階c任意で、該組織サンプルにおけるH3K27の、存在すればそのトリメチル化レベルを検出する段階、および該トリメチル化レベルを対照のトリメチル化レベルと比較する段階を含む方法であって、該ジメチル化レベルが存在しないかもしくは該対照のジメチル化レベルよりも低い場合に、または該トリメチル化レベルが該対照のトリメチル化レベルと同じかもしくは該対照のトリメチル化レベルよりも高くかつ該ジメチル化レベルが存在しないかもしくは該対照のジメチル化レベルよりも低い場合に、該対象がEZH2阻害剤に対して反応性である、前記方法。d組織サンプルにおけるH3K27のジメチル化レベルとトリメチル化レベルの比率を得て、試験比率を得る段階、および該試験比率を対照比率と比較する段階をさらに含み、該試験比率が該対照比率よりも低い場合に、該対象がEZH2阻害剤に対して反応性である、請求項1記載の方法。対象が、がんを有する、請求項1記載の方法。検出する段階が、ウエスタンブロット分析、免疫組織化学、免疫蛍光、および質量分析より選択されるアッセイによって行われる、請求項1記載の方法。検出する段階が、組織サンプルを、ジメチル化H3K27およびまたはトリメチル化H3K27に特異的に結合する薬剤と接触させることを含む、請求項1記載の方法。薬剤が、抗体、ポリペプチド、アプタマー、またはそれらの断片である、請求項5記載の方法。前記請求項のいずれか一項記載の方法によりEZH2阻害剤に対して反応性であると判定されている対象に投与する段階を含む、その必要がある対象においてがんを処置する方法。がんが、濾胞性リンパ腫およびびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫より選択される、請求項3記載の方法。対象がY641変異EZH2ポリペプチドを発現する、請求項1~8のいずれか一項記載の方法。Y641変異体が、Y641F、Y641H、Y641N、およびY641Sより選択される、請求項9記載の方法。EZH2ポリペプチドのY641変異体を発現している対象に、治療的有効量のEZH2阻害剤を投与する段階を含む方法。EZH2ポリペプチドのY641変異体を発現している細胞を、治療的有効量のEZH2阻害剤と接触させる段階を含む方法。対象由来のサンプルにおけるEZH2ポリペプチドの、存在すればそのY641変異体を検出する段階を含む方法であって、Y641変異体の存在は、対象がEZH2阻害剤による処置の候補であることを示す、前記方法。阻害剤がY641変異EZH2ポリペプチドのヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する、請求項11~13のいずれか一項記載の方法。阻害が選択的阻害である、請求項14記載の方法。EZH2ポリペプチドのY641変異体が、Y641F、Y641H、Y641N、およびY641Sからなる群より選択される変異を有する、請求項11~15のいずれか一項記載の方法。EZH2のY641変異体を検出する段階がa全ゲノム再配列決定、bEZH2ポリペプチドのY641変異体をコードする核酸を検出する標的領域再配列決定、cEZH2ポリペプチドのY641変異体に特徴的なポリペプチドもしくはその断片に特異的に結合する抗体、またはdEZH2ポリペプチドのY641変異体に特徴的なポリペプチドもしくはその断片をコードする核酸とハイブリダイズする核酸プローブによるものである、請求項11~16のいずれか一項記載の方法。対象が、がんを有する、請求項11記載の方法。がんが、濾胞性リンパ腫およびびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫からなる群より選択される、請求項18記載の方法。EZH2阻害剤が、SアデノシルLホモシステインもしくはその薬学的に許容される塩、またはもしくはその薬学的に許容される塩である、前記請求項のいずれか一項記載の方法。化合物またはその薬学的に許容される塩。請求項21記載の化合物を含む、薬学的組成物。濾胞性リンパ腫またはびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫の処置における、またはその薬学的に許容される塩の使用。非メチル化H3K27、モノメチル化H3K27、ジメチル化H3K27、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるH3K27の形態を含むヒストン基質、メチル基供与体、ならびに試験化合物と、単離されたEZH2ポリペプチドのY641変異体とを混ぜ合わせて、試験混合物を形成させる段階およびヒストン基質におけるH3K27のメチル化を検出し、それによって、試験化合物の存在下でのH3K27のメチル化が試験化合物の非存在下でのH3K27のメチル化よりも少ない場合に、試験化合物をEZH2のY641変異体の阻害剤と特定する段階を含む方法。ヒストン基質におけるトリメチル化H3K27の形成を検出し、それによって、試験化合物の存在下でのトリメチル化H3K27の形成が試験化合物の非存在下でのトリメチル化H3K27の形成よりも少ない場合に、試験化合物をEZH2のY641変異体の阻害剤と特定する段階をさらに含む、請求項24記載の方法。モノメチル化H3K27、ジメチル化H3K27、およびモノメチル化H3K27とジメチル化H3K27との組み合わせからなる群より選択されるH3K27の形態を含むヒストン基質、メチル基供与体、ならびに試験化合物と、単離された野生型EZH2とを混ぜ合わせ、それによって対照混合物を形成させる段階試験混合物および対照混合物のそれぞれにおけるヒストン基質のトリメチル化を検出する段階試験化合物ありでのEZH2のY641変異体によるトリメチル化と試験化合物なしでのEZH2のY641変異体によるトリメチル化の比率を算出する段階試験化合物ありでの野生型EZH2によるトリメチル化と試験化合物なしでの野生型EZH2によるトリメチル化の比率を算出する段階比率を比率と比較する段階ならびに比率が比率未満である場合に、試験化合物をEZH2のY641変異体の選択的阻害剤と特定する段階をさらに含む、請求項25記載の方法。EZH2ポリペプチドのY641変異体が、Y641F、Y641H、Y641N、およびY641Sからなる群より選択される変異を有する、請求項24~26のいずれか一項記載の方法。検出する段階が、標識されたメチル基の取り込みを測定することを含む、請求項24~27記載の方法。標識されたメチル基が同位体で標識されたメチル基である、請求項28記載の方法。検出する段階が、ヒストン基質を、トリメチル化H3K27に特異的に結合する抗体と接触させることを含む、請求項24~26のいずれか一項記載の方法。詳細な説明クロマチン構造は、遺伝子調節および後成的遺伝において重要である。ヒストンの翻訳後修飾は高次クロマチン構造の確立および維持に関わっている例えば、ある特定のコアヒストンの尾部はアセチル化、メチル化、リン酸化、リボシル化およびまたはユビキチン化によって修飾される。EZH2は、ヒストンH3のリジン27のモノメチル化からトリメチル化までを触媒するPRC2複合体の触媒サブユニットである、ヒストンメチルトランスフェラーゼである。ヒストンH3K27トリメチル化は、ヒストン修飾の部位の近位にある特異的遺伝子の転写を抑制するための機構である。このトリメチル化は、前立腺がんのような、がんにおいて発現の変化を伴うがんマーカーであることが知られている。EZH2はポリコーム群タンパク質ファミリーに属する。ポリコーム群タンパク質は、標的遺伝子の転写抑制による細胞同一性の維持に役立つ。JacobsetalSeminCellDevBiol1022735JacobsetalBiochimBiophysActa160215161。DNAマイクロアレイにより、EZH2は、ホルモン抵抗性の転移性前立腺がんにおいて上方制御されていると特定された。DhanasekaranetalNature4128226VaramballyetalNature4196249。EZH2は浸潤性乳房腫瘍において上方制御されており、浸潤促進性の表現型のメディエータである。KleeretalProcNatlAcadSciUSA1001160611。不死化されたヒト乳房上皮細胞株におけるEZH2の過剰発現は、足場非依存性の増殖および細胞浸潤を促進する。Kleeretal。EZH2を介した細胞浸潤には、無傷のSETドメインおよびヒストンデアセチラーゼ活性が必要とされた。過去の研究から、EZH2発現の調節不全、転写抑制および悪性形質転換の間の機能的な関連性の証拠が提供された。VaramballyetalKleeretal。本発明の1つの局面は、EZH2のある特定の変異型を含む、EZH2の活性を阻害することに関する。1つの態様において、本発明は、EZH2のある特定の変異型の活性を選択的に阻害することに関する。EZH2の単一のアミノ酸残基でのEZH2遺伝子の点突然変異は、ヒトB細胞性リンパ腫のサブセットと関連していることが報告されている。MorinetalNatGenet421815。具体的には、Morinらは、EZH2のチロシン641の体細胞変異が濾胞性リンパ腫および胚中心B細胞様サブタイプのびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫と関連していることを報告した。変異対立遺伝子は疾患細胞において野生型対立遺伝子と結び付けられて常に見出され、変異は、非修飾ペプチド基質をメチル化するためのPRC2複合体の酵素活性を取り除くと報告された。今回、野生型EZH2酵素は、H3K27の非メチル化からモノメチル化反応の場合には最も高い触媒効率を示し、後続の反応の場合には低い効率を示しその一方で、全く対照的に、疾患に関連するY641変異は、最初のメチル化反応を行う能力が非常に限られていることを示すものの、しかし野生型酵素と比べて後続の反応に対して増強された触媒効率を有することが意外にも発見された。これらの結果から、疾患の悪性表現型では、トリメチル化形態へのH3K27の変換の増大のために、変異EZH2を含んだPRC2とともにH3K27モノメチル化酵素の複合活性が利用されることが暗示される。いずれかの1つの理論によって束縛されることを意図するわけではないが、EZH2におけるフェニルアラニン、ヒスチジン、アスパラギンまたはセリンへのY641の変異は、酵素二基質三重複合体の活性部位でのH結合パターンおよびまたは立体的な込み合いに影響を与え、反応性リジンの脱プロトン化に適した水チャネルの形成に影響を及ぼすことによって複数ラウンドのH3K27メチル化を促進しうるという仮説が立てられている。ZhangetalProcNatlAcadSciUSA105572832。この推定は、関連するタンパク質リジンメチルトランスフェラーゼLSMT、Dim5およびSET79におけるチロシン変異で認められる結晶学的および分子動力学的結果に例えて導き出される。例えば、組換えSET79のチロシン245がアラニンに変異された場合、基質特異性の変化が認められた。DillonetalGenomeBiol6227。H3K4の周辺配列に相当する、20残基の非修飾ペプチドをメチル化するY245A変異SET79の能力は、WT酵素の約20まで低減された。XiaoetalNature4216526。同時に、H3K4me1およびH3K4me2ペプチドをさらにメチル化するY245A変異体の能力は、WT酵素と比べて大いに増大された。しかしながら、EZH2のY641の変異に関する本開示とは対照的に、フェニルアラニンへのSET79Y245の変異はペプチドのモノメチル化からジメチル化もジメチル化からトリメチル化も増強しなかったむしろ、SET79のY245F変異体は全てのペプチド基質に対して最小限の触媒活性を示した。同様に、野生型酵素G9aはH3K9をジメチル化できるが、しかしジメチル化からトリメチル化への反応を行うことができない。しかし、G9aのチロシン1067がフェニルアラニンに変異される場合、この酵素は、今度は、H3K9をトリメチル化する能力を獲得する。WuHetalPLoSOne5e8570doi101371journalpone0008570。ヒトEZH2の核酸およびポリペプチドはこれまでに記述されている。例えば、ChenetalGenomics38307746アミノ酸SwissProtアクセッション番号Q15910746アミノ酸GenBankアクセッション番号NM004456およびNP004447ならびにGenBankアクセッション番号NM152998およびNP694543を参照されたく、これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。ヒトEZH2のアミノ酸配列ヒトEZH2、転写産物バリアント1のmRNA配列EZH2、アイソフォームaの全アミノ酸ヒトEZH2、転写産物バリアント2のmRNA配列EZH2、アイソフォームbの全アミノ酸上記のように、EZH2の触媒部位は、SETドメインとして知られるタンパク質の保存ドメインにあるものと考えられる。EZH2のSETドメインのアミノ酸配列は、SwissProtアクセッション番号Q15910のアミノ酸残基番号613~726にわたる以下の部分配列によって提供される。SEQIDNO6において下線を引いて示したチロシン残基は、SwissProtアクセッション番号Q15910におけるTyr641である。GenBankアクセッション番号NP004447のSETドメインは、アミノ酸残基番号618~731にわたり、SEQIDNO6と同一である。SEQIDNO6において下線を引いて示したSwissProtアクセッション番号Q15910におけるY641に対応するチロシン残基は、GenBankアクセッション番号NP004447におけるTyr646である。GenBankアクセッション番号NP694543のSETドメインは、アミノ酸残基番号574~687にわたり、SEQIDNO6と同一である。SEQIDNO6において下線を引いて示したSwissProtアクセッション番号Q15910におけるY641に対応するチロシン残基は、GenBankアクセッション番号NP694543におけるTyr602である。GenBankアクセッション番号NP004447のSETドメインをコードするヌクレオチド配列はであり、ここでY641をコードするコドンに下線を引いて示した。本出願の目的上、ヒトEZH2のアミノ酸残基Y641は、SwissProtアクセッション番号Q15910におけるY641であるか、またはそれに対応するチロシン残基をいうものと理解されたい。Y641変異EZH2の全アミノ酸配列また、本出願の目的上、ヒトEZH2のY641変異体、および、等しく、EZH2のY641変異体は、野生型ヒトEZH2のY641に対応するアミノ酸残基がチロシン以外のアミノ酸残基によって置換されているヒトEZH2をいうものと理解されたい。1つの態様において、EZH2のY641変異体のアミノ酸配列は、チロシン以外のアミノ酸残基による、野生型ヒトEZH2のY641に対応する単一のアミノ酸残基の置換によってのみ野生型ヒトEZH2のアミノ酸配列と異なる。1つの態様において、EZH2のY641変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトEZH2のY641に対応する単一のアミノ酸残基の代わりにフェニルアラニンを用いることによってのみ野生型ヒトEZH2のアミノ酸配列と異なる。この態様に対応するEZH2のY641変異体は、本明細書においてY641F変異体または、等しく、Y641Fといわれる。1つの態様において、EZH2のY641変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトEZH2のY641に対応する単一のアミノ酸残基の代わりにヒスチジンを用いることによってのみ野生型ヒトEZH2のアミノ酸配列と異なる。この態様に対応するEZH2のY641変異体は、本明細書においてY641H変異体または、等しく、Y641Hといわれる。1つの態様において、EZH2のY641変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトEZH2のY641に対応する単一のアミノ酸残基の代わりにアスパラギンを用いることによってのみ野生型ヒトEZH2のアミノ酸配列と異なる。この態様に対応するEZH2のY641変異体は、本明細書においてY641N変異体または、等しく、Y641Nといわれる。1つの態様において、EZH2のY641変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトEZH2のY641に対応する単一のアミノ酸残基の代わりにセリンを用いることによってのみ野生型ヒトEZH2のアミノ酸配列と異なる。この態様に対応するEZH2のY641変異体は、本明細書においてY641S変異体または、等しく、Y641Sといわれる。EZH2における複数のY641変異に対する寛容から、立体的な込み合いの解放がジメチル化からトリメチル化への反応の基質として適した、より大きなジメチルリジンのアライメントに対するさらに高いアクセスを可能にしうることが示唆される。タンパク質メチルトランスフェラーゼSET79およびG9aの結晶学的解析から、活性部位のチロシン残基の側鎖ヒドロキシルがメチル受容性リジンのアミンと直接的に、または介在する水分子を通じて間接的にH結合性相互作用に関わることが明らかにされている。Y641変異体のさらに大きな活性部位はジメチル化およびトリメチル化に好都合であるが、チロシンヒドロキシル水素結合アクセプタの喪失は、リジンアミンへの初期メチル転移には不都合な配向の活性部位をもたらしうる。ヒト疾患に対する本結果の含意は、表1にまとめられたデータによって明らかにされる。EZH2についてヘテロ接合性の細胞は、WT酵素によるH3K27me1の効率的な形成と、変異酵素形態による、H3K27me2および、とりわけ、H3K27me3へのこの前駆体種の効率的な後続の遷移に起因して、悪性表現型を示すものと予想されよう。H3K27me1の形成はWTEZH2触媒に依るだけではないことが報告されている。EZH2の、および別のPRC2サブユニットEEDのノックアウト研究から、H3K27me1の形成が、触媒サブユニットとしてEZH2または関連タンパク質EZH1のどちらかを含んだPRC2複合体によって触媒されうることが実証されている。ShenXetalMolCell32491502。ゆえに、変異EZH2種とWTEZH2またはWTEZH1のどちらかを含んだPRC2複合体との間の触媒的連関は、H3K27me23の形成を増大するのに、かくして、付随する悪性表現型を生み出すのに十分であると考えられる。それゆえ、このデータから、EZH2の変異型の発現と関連した、濾胞性リンパ腫および胚中心B細胞サブタイプのびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫の悪性表現型は、H3K27のトリメチル化形態の形成に関する全体的な機能獲得の結果であることが示唆される。このデータ解釈は、EZH2もしくはPRC2関連タンパク質のがんに関連した過剰発現の存在と、また、ヒストンH3K27デメチラーゼUTXに対する機能喪失遺伝子型を調和させる手助けにもなる。UTX活性の喪失は、EZH2に対する機能獲得と酵素的に等価であり、どちらの状況でも、がん細胞におけるトリメチル化H3K27のさらに高い定常状態レベルをもたらすと考えられる。ヒストンH3K27のモノメチル化、ジメチル化およびトリメチル化の状態は、転写制御での異なる機能と関連している。ヒストンH3K27のモノメチル化は、転写の態勢にある遺伝子の活性な転写と関連している。CuietalCellStemCell48093BarskiCell12982337。対照的に、ヒストンH3K27のトリメチル化は、ヒストンH3K4のトリメチル化がシス状態にある場合、転写の態勢にある転写的に抑制された遺伝子と関連している。CuietalKirmizisetalGenesDev1815921605BernsteinetalCell12531526。総合すれば、EZH2のY641変異を含めて、がんで報告されたPRC2複合体活性の変化は、ヒストンH3K27のトリメチル化状態の増加をもたらし、かくして、転写抑制をもたらすものと予測される。本発明の別の発見は、Y641変異EZH2を発現する細胞が、概して、WTEZH2を発現する細胞よりも小分子EZH2阻害剤に対して感受性であることである。具体的には、Y641変異EZH2を発現する細胞は、成長、分裂もしくは増殖の低減を示し、またはEZH2阻害剤での処理後にアポトーシスもしくはネクローシスを起こしさえする。対照的に、WTEZH2を発現する細胞は、EZH2阻害剤の抗増殖効果に対して反応性ではない。本発明の別の驚くべき発見は、WTEZH2を発現する細胞が、Y641EZH2を発現する細胞と類似のヒストンH3K27メチル化状態を示すことが可能であるということ、およびこのメチル化状態が、EZH2変異状態とは無関係にEZH2阻害剤に対する感受性とも相関しうることである。概して、全体的なH3K27me3レベルは、WTEZH2を発現する細胞株におけるよりもY641変異体を含んだ細胞株においてさらに高いかまたは類似しておりしかしながら、H3K27me2のレベルは他の野生型細胞株におけるよりもPfeiffer細胞株のような、ある特定の野生型細胞株およびEZH2Y641変異体細胞株において劇的に低い。したがって、Y641変異体系列およびPfeiffer細胞株におけるH3K27me2me3シグナルの比率は、他のWT系列において認められたものよりもはるかに低い。本データは、典型的なWTEZH2発現細胞株と比べて低いH3K27me2シグナルおよび類似のまたはさらに高いH3K27me3シグナルを有する細胞株が小分子EZH2阻害剤に対していっそう感受性であることをさらに実証する。具体的には、低いH3K27me2シグナルおよび通常のまたは高いH3K27me3シグナルを有する細胞は、分裂を停止し、またはEZH2阻害剤での処理後に死滅しさえする。対照的に、いっそう高い比率のH3K27me2me3シグナルを有する細胞は、EZH2阻害剤の抗増殖効果に対して反応性ではない。本発明は、患者でのウエスタンブロット、MSまたはIHCのような技法の使用を通じた、患者腫瘍におけるEZH2Y641変異の特定ならびにまたは対照と比べて低いH3K27me2レベルおよび通常のもしくは高いH3K27me3レベルの検出を用いて、どの患者がEZH2阻害剤での処置に反応するかを特定できるという、これまで知られていなかった予想外の結果を提供する。EZH2および他のタンパク質メチルトランスフェラーゼは、創薬のために魅力的な標的であることが示唆されている。CopelandetalNatRevDrugDiscov872432CopelandetalCurrOpinChemBiol1450510PollocketalDrugDiscoveryTodayTherapeuticStrategies6719。本データはまた、FLおよびGCBリンパ腫特異的な薬物の開発のための実験戦略を示唆する。WTと疾患に関連する変異体との間の基質認識の差異は遷移状態相互作用に由来するので、変異EZH2の遷移状態を、WT酵素の遷移状態と比べて選択的に模倣する小分子阻害剤は、変異を保持している細胞でのH3K27メチル化の遮断において有効であることが分かるはずである。この種の阻害剤は、標的を介した毒性がWT酵素しか保持していないどの細胞に対しても最小限であるので、大きな治療指数を示すものと予想されよう。遷移状態の擬態は、多くの疾患分野において薬物デザインのために有効な戦略であることが分かっている。例えば、CopelandRAEnzymesAPracticalIntroductiontoStructureMechanismandDataAnalysis2ndedを参照されたい。本結果は、濾胞性リンパ腫およびびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫の病因に対しての、H3K27モノメチル化を行う酵素とEZH2のある特定の変異型との間の酵素的連関への、これまでに認識されていない、驚くべき依存を指摘する。いずれかの1つの理論によって束縛されることを意図するわけではないが、このデータは、正常酵素と疾患に関連した変異酵素との間の触媒活性の、そのような連関に依存するヒト疾患の最初の実例を構成するものと考えられる。本発明の1つの局面は対象において、トリメチル化H3K27へのH3K27の変換を阻害するための方法である。阻害は対象において、モノメチル化H3K27への非メチル化H3K27の変換、ジメチル化H3K27へのモノメチル化H3K27の変換、トリメチル化H3K27へのジメチル化H3K27の変換、または、例えば、ジメチル化H3K27へのモノメチル化H3K27の変換およびトリメチル化H3K27へのジメチル化H3K27の変換を含めた、それらの任意の組み合わせを阻害することを伴うことができる。本明細書において用いられる場合、非メチル化H3K27は、リジン27のアミノ基に共有結合されているメチル基を持たないヒストンH3をいう。本明細書において用いられる場合、モノメチル化H3K27は、リジン27のアミノ基に共有結合されている単一のメチル基を持つヒストンH3をいう。モノメチル化H3K27は本明細書においてH3K27me1ともいわれる。本明細書において用いられる場合、ジメチル化H3K27は、リジン27のアミノ基に共有結合されている2つのメチル基を持つヒストンH3をいう。ジメチル化H3K27は本明細書においてH3K27me2ともいわれる。本明細書において用いられる場合、トリメチル化H3K27は、リジン27のアミノ基に共有結合されている3つのメチル基を持つヒストンH3をいう。トリメチル化H3K27は本明細書においてH3K27me3ともいわれる。ヒストンH3は136アミノ酸長のタンパク質であり、その配列は公知である。例えば、GenBankアクセッション番号CAB02546を参照されたく、その内容は参照により本明細書に組み入れられる。本明細書においてさらに開示されるように、全長ヒストンH3に加えて、全長ヒストンH3のK27に対応するリジン残基を含むヒストンH3のペプチド断片をEZH2に対する基質として用い、H3K27m2へのH3K27m1の変換およびH3K27m3へのH3K27m2の変換を評価することができる。1つの態様において、そのようなペプチド断片は、ヒストンH3のアミノ酸残基番号21~44に対応する。そのようなペプチド断片は、アミノ酸配列を有する。本方法は、EZH2のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害するEZH2阻害剤の治療的有効量を、EZH2のY641変異体を発現している対象に投与し、それによって対象におけるトリメチル化H3K27へのH3K27の変換を阻害する段階を伴う。1つの態様において、EZH2のY641変異体を発現している対象は、検出可能な量のY641変異EZH2ポリペプチドを有する対象をいう。1つの態様において、EZH2のY641変異体を発現している対象は検出可能な量の、Y641変異EZH2ポリペプチドをコードする核酸を有する対象をいう。Y641変異EZH2ポリペプチドは、任意の適当な方法を用いて検出することができる。例えば、Y641変異EZH2ポリペプチドは、Y641変異EZH2ポリペプチドに特異的に、またはY641変異EZH2ポリペプチドに特有であるペプチド断片に特異的に結合する抗体を用いて検出することができる。Y641変異EZH2ポリペプチドに特有であるペプチド断片は、例えば、チロシン以外のアミノ酸残基によるY641の置換を除き、SEQIDNO6に示されるSETドメインを含みうる。別の態様において、Y641変異EZH2ポリペプチドに特有であるペプチド断片は、例えば、チロシン以外のアミノ酸残基によるY641の置換を除き、SEQIDNO6に示されるSETドメインの10~113アミノ酸の断片を含みうるが、ただしこの断片は、Y641に対応するアミノ酸残基を含むことを条件とする。そのような抗体に対するエピトープは、野生型EZH2のY641に対応するアミノ酸残基を含むものと予想される。抗体は、その変異EZH2ポリペプチドまたはそのペプチド断片に結合するが、しかし対応する野生型EZH2ポリペプチドまたはそのペプチド断片に結合しない場合、Y641変異EZH2ポリペプチドに特異的に、またはY641変異EZH2ポリペプチドに特有であるペプチド断片に特異的に結合するものと考えられる。1つの態様において、そのような抗体は、その変異EZH2ポリペプチドまたはそのペプチド断片に、対応する野生型EZH2ポリペプチドまたはそのペプチド断片に対するよりも少なくとも約100倍を超える親和性で結合する場合、Y641変異EZH2ポリペプチドに特異的に、またはY641変異EZH2ポリペプチドに特有であるペプチド断片に特異的に結合するものと考えられる。1つの態様において、そのような抗体は、その変異EZH2ポリペプチドまたはそのペプチド断片に、対応する野生型EZH2ポリペプチドまたはそのペプチド断片に対するよりも少なくとも約1000倍を超える親和性で結合する場合、Y641変異EZH2ポリペプチドに特異的に、またはY641変異EZH2ポリペプチドに特有であるペプチド断片に特異的に結合するものと考えられる。抗体は、例えば、酵素免疫測定法またはウエスタンブロット法において用いることができる。1つの態様において、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、当技術分野において周知の従来の方法によって調製することができる。例えば、KohlerandMilsteinNature2564957を参照されたい。別の例として、Y641変異EZH2ポリペプチドは、質量分析、例えば、飛行時間と一体となったエレクトロスプレイイオン化または飛行時間と一体となったマトリックス支援レーザー脱離イオン化を用いて検出することができる。そのような方法は当技術分野において周知である。この分析では、関心対象の変異を含む1つまたは複数のペプチド断片、例えば、野生型EZH2でのY641に対応するアミノ酸にまたがる配列を含んだ12~24アミノ酸長のペプチドの特定を伴うと考えられる。Y641変異EZH2ポリペプチドまたはY641変異EZH2ポリペプチドに特有であるペプチド断片をコードする核酸は、任意の適当な方法を用いて検出することができる。例えば、Y641変異EZH2ポリペプチドをコードする核酸は、当技術分野において周知の方法にしたがって適切に選択されたDNA供給源およびポリメラーゼ連鎖反応プライマーを用い全ゲノム再配列決定または標的領域再配列決定によって検出することができる。例えば、BentleyCurrOpinGenetDev1654552、およびLietalGenomeRes19112432を参照されたい。この方法は、典型的および一般的には、ゲノムDNA精製、関心対象の領域を増幅させるためのPCR増幅、サイクル配列決定、配列決定反応クリーンアップ、キャピラリー電気泳動、およびデータ分析の段階を伴う。コンピュータ内でのプライマーデザインツールを用いて、関心対象の領域を網羅する高品質のPCRプライマーをデザインする。サイクル配列決定は、サーマルサイクラー内での連続的なラウンドの変性、アニーリングおよび伸長が伸長産物の線形増幅をもたらす簡単な方法である。産物は、典型的には、末端ヌクレオチド塩基をG、A、TまたはCとして特定する蛍光タグで終結される。キャピラリー電気泳動注入液に競合する可能性がある、取り込まれていない色素ターミネータおよび塩を、洗浄によって除去する。キャピラリー電気泳動中に、サイクル配列決定反応の産物は、重合体で満たされたキャピラリーを通って移動する。負に帯電したDNA断片は、正極の方へキャピラリーを通って移動するので、サイズにより分離される。電気泳動後、データ収集ソフトウェアによって生データのサンプルファイルが作成される。下流のソフトウェアアプリケーションを用い、さらなるデータ分析を行って、収集された色データ画像を、対応するヌクレオチド塩基に変換する。あるいはまたはさらに、この方法はマイクロアレイに基づく標的化領域のゲノムDNA捕捉およびまたは配列決定の使用を含みうる。適切なPCRプライマーの選択および再配列決定の実施のためのキット、試薬ならびに方法は、例えば、AppliedBiosystems、AgilentおよびNimbleGenから市販されている。これらのような方法は、JAK2および骨髄増殖性白血病遺伝子の変異を検出するために、ならびに真性赤血球増加症、本態性血小板血症および特発性骨髄線維症を診断するために用いられている。本発明で用いる場合、PCRプライマーは、例えば、SEQIDNO7の少なくとも関連性のある部分を増幅するように選択されうる。あるいはまたはさらに、Y641変異EZH2ポリペプチドをコードする核酸は、当技術分野において周知の方法によりサザンブロットを用いて検出されうる。1つの態様において、Y641変異EZH2ポリペプチドをコードするDNA配列は、高度にストリンジェントな条件の下で行われる核酸ハイブリダイゼーションを用いて検出される。核酸プローブは、その配列が、野生型EZH2のY641に対応する変異アミノ酸に対するコドンを含む標的核酸配列に相補的であるように選択される。配列特異的なプローブを、高度にストリンジェントな条件の下で試験されるサンプルと混ぜ合わせる。本明細書において用いられる高度にストリンジェントな条件という用語は、当技術分野で熟知されているパラメータをいう。核酸ハイブリダイゼーションのパラメータは、そのような方法を集めた参考文献、例えば、JSambrooketaledsMolecularCloningALaboratoryManualSecondEditionColdSpringHarborLaboratoryPressColdSpringHarborNewYork1989、またはFMAusubeletaledsCurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWileySonsIncNewYorkの中で見出すことができる。より具体的には、本明細書において用いられる、高度にストリンジェントな条件は、例えば、ハイブリダイゼーション用緩衝液、25mMNaH2PO4、05SDS、2mMEDTA中65°Cでのハイブリダイゼーションをいう。SSCは015M塩化ナトリウム0015Mクエン酸ナトリウムpH7でありSDSはドデシル硫酸ナトリウムでありおよびEDTAはエチレンジアミン四酢酸である。ハイブリダイゼーション後、DNAが転写されている膜を、例えば、2×SSC中にて室温で、その後、01~05×SSC01×SDSにて最大68°Cまでの温度で洗浄する。同程度のストリンジェンシーをもたらす、使用可能な他の条件、試薬などが存在する。当業者はそのような条件を熟知しているものと考えられ、したがって、本明細書ではそれらを示さない。しかしながら、当業者は、特に、EZH2のY641変異体をコードする核酸を含む、本発明のEZH2に関連する核酸の明確な特定を可能とするように条件を操作することができるものと理解されよう。当業者はまた、そのような分子の発現に向けて細胞およびライブラリをスクリーニングするための方法論を熟知しており、その後、それらは定法により単離され、引き続き関連のある核酸分子の単離および配列決定が行われる。治療的有効量のEZH2阻害剤を対象に投与する。本明細書において用いられる場合、EZH2阻害剤は、一般に、EZH2のヒストンメチルトランスフェラーゼ酵素活性を妨害できる、小分子、すなわち、約15キロダルトン未満の分子量の分子をいう。1つの態様において、EZH2阻害剤は、野生型EZH2のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。1つの態様において、EZH2阻害剤は、EZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。1つの態様において、EZH2阻害剤は、野生型EZH2のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性およびEZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。1つの態様において、EZH2阻害剤は、EZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を選択的に阻害する。本明細書において開示される場合、EZH2のある特定のY641変異体は、H3K27me1への非メチル化H3K27の変換には比較的不十分な触媒であるが、意外にも、H3K27me3へのH3K27me2の変換には有効な触媒である。逆に、野生型EZH2は、H3K27me1への非メチル化H3K27の変換には比較的有効な触媒であるが、意外にも、H3K27me3へのH3K27me2の変換には無効な触媒である。これは、H3K27のモノメチル化、ジメチル化およびトリメチル化状態が転写制御において異なる機能を示すので、重要である。例えば、H3K27me1は、転写の態勢にある遺伝子の活性な転写と関連しているが、H3K27me3は、H3K4トリメチル化がシスである場合に転写の態勢にある転写抑制された遺伝子と関連している。したがって、EZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性の選択的阻害は、H3K27のトリメチル化体の産生の選択的阻害をもたらし、それによって、H3K27me1と関連する転写に有利に働き、H3K27me3と関連する転写抑制に不利に働く。EZH2阻害剤は、野生型EZH2のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害するよりも効果的にEZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する場合に、EZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を選択的に阻害する。例えば、1つの態様において、選択的阻害剤は、野生型EZH2に対するIC50よりも少なくとも40パーセント低いEZH2のY641変異体に対するIC50を有する。1つの態様において、選択的阻害剤は、野生型EZH2に対するIC50よりも少なくとも50パーセント低いEZH2のY641変異体に対するIC50を有する。1つの態様において、選択的阻害剤は、野生型EZH2に対するIC50よりも少なくとも60パーセント低いEZH2のY641変異体に対するIC50を有する。1つの態様において、選択的阻害剤は、野生型EZH2に対するIC50よりも少なくとも70パーセント低いEZH2のY641変異体に対するIC50を有する。1つの態様において、選択的阻害剤は、野生型EZH2に対するIC50よりも少なくとも80パーセント低いEZH2のY641変異体に対するIC50を有する。1つの態様において、選択的阻害剤は、野生型EZH2に対するIC50よりも少なくとも90パーセント低いEZH2のY641変異体に対するIC50を有する。1つの態様において、EZH2のY641変異体の選択的阻害剤は、野生型EZH2に阻害効果を本質的に及ぼさない。阻害剤はH3K27me3へのH3K27me2の変換を阻害する。1つの態様において、阻害剤はH3K27のトリメチル化を阻害するといわれる。H3K27me2へのH3K27me1の変換はH3K27me3へのH3K27me2の変換に先行するので、H3K27me2へのH3K27me1の変換の阻害剤は、必然的に、H3K27me3へのH3K27me2の変換も阻害し、すなわち、その阻害剤はH3K27のトリメチル化を阻害する。H3K27me2へのH3K27me1の変換の阻害なしにH3K27me3へのH3K27me2の変換を阻害することも可能である。この種の阻害はまた、H3K27のジメチル化の阻害がないとはいえ、H3K27のトリメチル化の阻害を引き起こすと考えられる。1つの態様において、阻害剤はH3K27me2へのH3K27me1の変換およびH3K27me3へのH3K27me2の変換を阻害する。そのような阻害剤はH3K27me2へのH3K27me1の変換だけを直接阻害しうる。あるいは、そのような阻害剤はH3K27me2へのH3K27me1の変換およびH3K27me3へのH3K27me2の変換の両方を直接阻害しうる。阻害剤はヒストンメチラーゼ活性を阻害する。ヒストンメチラーゼ活性の阻害は、任意の適当な方法を用いて検出することができる。阻害は、例えば、ヒストンメチラーゼ活性の比率に関してまたはヒストンメチラーゼ活性の産物として測定することができる。これらの読み出しのどちらかに適した方法は、以下の実施例に含まれている。阻害は適当な陰性対照と比べて測定可能な阻害である。1つの態様において、阻害は適当な陰性対照と比べて少なくとも10パーセントの阻害である。すなわち、酵素活性の比率または阻害剤による生成物の量は、対応する比率または阻害剤なしで作出された量の90パーセント未満または90パーセントに等しい。さまざまな他の態様において、阻害は適当な陰性対照と比べて少なくとも20、25、30、40、50、60、70、75、80、90、または95パーセントの阻害である。1つの態様において、阻害は適当な陰性対照と比べて少なくとも99パーセントの阻害である。すなわち、酵素活性の比率または阻害剤による生成物の量は、対応する比率または阻害剤なしで作出された量の1パーセント未満または1パーセントに等しい。1つの態様において、阻害剤はSアデノシルLホモシステインである。SAHは構造式を有し、例えば、SigmaAldrichStLouisMOを含む、いくつかの供給業者から市販されている。SAHはSアデノシルメチオニン依存的なメチルトランスフェラーゼによるメチル基移転の阻害剤として記述されている。1つの態様において、阻害剤は化合物75またはその薬学的に許容される塩である。ある特定の態様において、本発明は、対象由来のサンプルにおけるEZH2のY641変異体を検出するためのアッセイを行う段階を含む。この種のアッセイは前述されている。本明細書において用いられる場合、対象由来のサンプルは、対象から得られたまたは対象に由来する細胞または細胞の成分を含有する任意の適当なサンプルをいう。1つの態様において、サンプルは、EZH2のY641変異体を発現することが疑われる細胞、例えば、がん細胞を含む。1つの態様において、サンプルは血液サンプルである。1つの態様において、サンプルは、例えば、リンパ組織または骨髄から得られた生検サンプルである。1つの態様において、サンプルは、リンパ組織もしくは骨髄以外のまたはリンパ組織もしくは骨髄の他の組織から得られた生検サンプルである。例えば、1つの態様において、サンプルはがん、例えば、がん細胞から構成される腫瘍由来の生検である。サンプル中の細胞は、サンプルの他の成分から単離することができる。例えば、末梢血単核細胞は、当業者に熟知されている方法にしたがって遠心分離された血液サンプル由来のバフィーコートとして単離することができる。対象由来のサンプルに関するアッセイの結果から、EZH2のY641変異体がサンプル中に存在することが示される場合、対象はEZH2のY641変異体を発現するものといわれる。実際に、1つの態様において、対象由来のサンプルに関するアッセイの結果から、EZH2のY641変異体がサンプル中に存在することが示される場合、対象は、EZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を選択的に阻害するEZH2阻害剤による処置の候補として特定される。がん由来のサンプルに関するアッセイの結果から、EZH2のY641変異体が、がん中に存在することが示される場合、がんは、EZH2のY641変異体を発現するものといわれる。同様に、がんを有する対象由来のがん細胞を含むサンプルに関するアッセイの結果から、EZH2のY641変異体がサンプル中に存在することが示される場合、対象は、EZH2のY641変異体を発現するものといわれる。本発明はまた、EZH2阻害剤に対する患者の反応性とH3K27me2レベルとの、または好ましくはH3K27meおよびH3K27me3のレベルとの、これまでに認識されていない、驚くべき相関を提供する。例えば、対照と比べて低いH3K27me2レベルおよび通常のまたは高いH3K27me3レベルを有する細胞は、通常のH3K27me2およびme3レベルを有する細胞よりもEZH2阻害剤の抗増殖効果に対してはるかに反応性が高い。本発明の1つの局面は、対象においてEZH2阻害剤に対する反応性を判定するための方法である。1つの態様において、本方法は、対象から組織サンプルを単離する段階組織サンプルにおけるH3K27のジメチル化レベルを検出する段階ジメチル化レベルを対照のジメチル化レベルと比較する段階およびジメチル化レベルが存在しないかまたは対照のジメチル化レベルよりも低い場合に、対象がEZH2阻害剤に対して反応性であると特定する段階を含む。1つの態様において、本方法は、組織サンプルにおけるH3K27のトリメチル化レベルを検出する段階トリメチル化レベルを対照のトリメチル化レベルと比較し、かつジメチル化レベルを対照のジメチル化レベルと比較する段階ならびにトリメチル化レベルが対照のトリメチル化レベルと同じかまたは対照のトリメチル化レベルよりも高く、かつジメチル化レベルが存在しないかまたは対照のジメチル化レベルよりも低い場合に、該対象がEZH2阻害剤に対して反応性であると特定する段階をさらに含む。別の態様において、本方法は、組織サンプルにおけるH3K27のジメチル化レベルとトリメチル化レベルの比率を得る段階対照のジメチル化レベルと対照のトリメチル化レベルの対照の比率を得る段階該比率を該対照の比率と比較する段階および該比率が該対照の比率よりも低い場合に、対象が該EZH2阻害剤に対して反応性であると特定する段階をさらに含む。好ましい態様において、対象はがんを有する。1つの態様において、がんは濾胞性リンパ腫である。あるいは、がんはびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫である。別の好ましい態様において、対象はY641変異EZH2を発現する。好ましい態様において、Y641変異体はY641F、Y641H、Y641N、またはY641Sである。ジメチル化H3K27またはトリメチル化H3K27の検出は、当技術分野における任意の適当な方法を用いて達成することができる。1つの態様において、メチル化レベルはジメチル化H3K27またはトリメチル化H3K27に特異的な抗体を用いて検出される。例えば、単離された組織は長期保存のためにホルマリン固定され、パラフィンブロックに包埋される。このブロックを用いて、メチル化H3K27に対する抗体での免疫組織化学染色または蛍光染色のためのスライドを調製することができる。あるいは、全細胞溶解物またはヒストン抽出物を、単離された組織サンプルから調製し、その後、免疫組織化学染色、ウエスタンブロット分析または蛍光染色のために用いることができる。別の態様において、メチル化レベルは、ジメチル化H3K27またはトリメチル化H3K27に特異的なポリペプチドまたはアプタマーを用いて検出される。別の態様において、メチル化レベルは、質量分析を用いて検出される。対照のジメチル化H3K27または対照のトリメチル化H3K27は対照サンプル、例えば、対象から単離された隣接する非腫瘍組織または健常対象由来の健常組織から確立することができる。あるいは、H3K27me2またはH3K27me3の対照メチル化レベルは、当技術分野において公知の方法で病理学者により確立されてもよい。スクリーニング方法本発明の1つの局面は、EZH2のY641変異体の阻害剤としての試験化合物を特定するための方法である。1つの態様において、本方法は、非メチル化H3K27、モノメチル化H3K27、ジメチル化H3K27、およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるH3K27の形態を含むヒストン基質、メチル基供与体のような、ならびに試験化合物と、単離されたEZH2のY641変異体とを混ぜ合わせる段階およびヒストン基質におけるH3K27のメチル化を検出するためのアッセイを行い、それによって、試験化合物の存在下でのH3K27のメチル化が試験化合物の非存在下でのH3K27のメチル化よりも少ない場合に、試験化合物をEZH2のY641変異体の阻害剤と特定する段階を含む。H3K27のメチル化を検出するためのアッセイは、メチル化の比率、メチル化の程度、またはメチル化の比率および程度の両方を測定するように選択することができる。EZH2のY641変異体はPRC2複合体またはその機能的等価体として単離される。本明細書において用いられる場合、単離されたという用語は、複合体が、天然に存在する際に見出されうる他の成分から実質的に分離されていることを意味する。化合物は、必ずしも精製されていなくても、単離されることができる。1つの態様において、EZH2の変異体は、EEDおよびSUZ12とともにEZH2のY641変異体の複合体として単離される。別の態様において、EZH2の変異体は、EED、SUZ12およびRbAp48とともにEZH2のY641変異体の複合体として単離される。適切な条件の下で、PRC2複合体またはその機能的等価体は、H3K27に対するヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を示す。1つの態様において、複合体は、組換えにより発現された成分ポリペプチド、例えば、RbAp48有りまたは無しでEZH2、EED、SUZ12から構成される。単離されたEZH2のY641変異体をヒストン基質と混ぜ合わせる。ヒストン基質は、EZH2に対する基質として働きうるヒストンポリペプチドまたはその断片の任意の適当な供給源を含む。1つの態様において、ヒストン基質は対象から単離されたヒストンを含む。ヒストンは任意の適当な方法を用いて対象の細胞から単離することができるそのような方法は当業者に周知であり、本明細書でさらに明記する必要はない。例えば、FangetalMethodsEnzymol37721326を参照されたい。以下の実施例によれば、1つの態様において、ヒストン基質はヌクレオソームとして提供される。以下の実施例によれば、1つの態様において、ヒストン基質は鳥類赤血球ヌクレオソームとして提供される。そのようにして提供されたヒストン基質は、H3K27メチル化状態特異的な抗体でのウエスタンブロッティングによって判断した場合に、さまざまなH3K27メチル化状態を含む、ヒストン修飾状態の混和物を含みうる。1つの態様において、ヒストン基質は、精製された全長ヒストンH3として提供されうる。そのような精製された全長ヒストンH3は、H3K27メチル化状態に関して均質な調製物として、またはさまざまなH3K27メチル化状態の混和物として提供されうる。H3K27メチル化状態に関して単離されたヒストンH3の均質な調製物は、一つには、適当なH3K27メチル化状態特異的な抗体を添加した免疫親和性カラムに通すことにより、または適当なH3K27メチル化状態特異的な抗体でコーティングした磁気ビーズを用いた免疫沈降により調製されうる。あるいはまたはさらに、H3K27のメチル化状態は、アッセイを行う一環として特徴付けることができる。例えば、出発材料のヒストン基質は、50パーセントの非メチル化H3K27、40パーセントのモノメチル化H3K27、10パーセントのジメチル化H3K27、および0パーセントのトリメチル化H3K27を含有すると特徴付けられうる。1つの態様において、ヒストン基質は、特に、H3K27を包含する配列を含めて、ヒストンH3に関連する1つまたは複数のアミノ酸配列を含んだペプチドライブラリまたは適当なペプチドを含む。例えば、1つの態様において、ヒストン基質は、ヒストンH3のアミノ酸残基番号21~44に対応するペプチド断片である。そのようなペプチド断片はアミノ酸配列を有する。ペプチドライブラリまたはペプチドは、当技術分野において周知の技法によるペプチド合成によって調製されることができ、H3K27に対応するリジンの任意の所望とされるメチル化度を取り込むように任意で修飾されてもよい。以下の実施例において記述されるように、そのようなペプチドは下流のアッセイの実施において有用な、ビオチンなどの、標識を取り込むように修飾されてもよい。1つの態様において、標識はペプチドのアミノ末端に付加される。1つの態様において、標識はペプチドのカルボキシ末端に付加される。H3K27メチル化特異的な抗体は、例えば、CellSignalingTechnologyおよびActiveMotifを含む、種々の市販の供給源から入手可能である。単離されたEZH2のY641変異体を試験化合物と混ぜ合わせる。本明細書において用いられる場合、試験化合物は、約15kDa未満の分子量を有する有機小分子をいう。1つの態様において、試験化合物は公知の化合物である。1つの態様において、試験化合物は新規の化合物である。1つの態様において、試験化合物は、例えば、何十もの、何百もの、何千もの、またはさらに多くの化合物を含む、そのような化合物のライブラリの一部として提供することができる。化合物のライブラリは、例えば、当技術分野において周知の一般的技法により試験化合物のアレイおよびロボット操作を用いて、高速大量処理スクリーニングアッセイで好都合にスクリーニングされうる。ある特定の態様において、試験化合物は、SAHの誘導体または化合物75の誘導体である化合物である。H3K27のメチル化の検出は、任意の適当な方法を用いて達成することができる。1つの態様において、供与体メチル基の供給源は、検出可能な標識で標識されているメチル基を含む。検出可能な標識は1つの態様において、同位体標識、例えば、トリチウムである。他の種類の標識は、例えば、蛍光標識を含みうる。トリメチル化H3K27の形成の検出は、任意の適当な方法を用いて達成することができる。例えば、トリメチル化H3K27の形成の検出は、クロマトグラフィー法またはサイズによって標識産物を分離する他の方法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動または高圧液体クロマトグラフィーと任意で組み合わされてもよい、上記のような、標識されたメチル基の取り込みを検出するアッセイを用いて達成することができる。あるいはまたはさらに、トリメチル化H3K27の形成の検出は、トリメチル化H3K27に特異的である抗体を用いて達成することができる。ジメチル化H3K27へのモノメチル化H3K27の変換の検出は、任意の適当な方法を用いて達成することができる。1つの態様において、変換は、モノメチル化H3K27およびジメチル化H3K27に特異的な抗体を用いて測定される。例えば、モノメチル化H3K27およびジメチル化H3K27の出発の量または濃度は、モノメチル化H3K27およびジメチル化H3K27に特異的な適切な抗体を用いて決定されうる。酵素、基質、メチル基供与体、および試験化合物を組み合わせた後に、結果として生じたモノメチル化H3K27およびジメチル化H3K27の量または濃度がその後、モノメチル化H3K27およびジメチル化H3K27に特異的な適切な抗体を用いて決定されうる。モノメチル化H3K27およびジメチル化H3K27の最初のおよび結果の量または濃度を次いで、比較することができる。あるいはまたはさらに、モノメチル化H3K27およびジメチル化H3K27の最初のおよび結果の量または濃度を次いで、陰性対照由来の対応する量または濃度と比較することができる。アッセイに試験薬剤が含まれていない、陰性対照反応を並行してまたは既存対照として行うことができる。そのような対照反応の結果は、上記の比較を行う前にまたは行うと同時に、実験反応の対応する結果から任意で差し引かれてもよい。H3K27のジメチル化形態は同じアッセイにおいてさらにメチル化されうるので、モノメチル化H3K27の量または濃度の低減がジメチル化H3K27の増加に直接対応しないように見えることもある。しかしながら、この場合には、モノメチル化H3K27の量または濃度の低減が、それ自体で、ジメチル化H3K27へのモノメチル化H3K27の変換を反映するものと推定することができる。トリメチル化H3K27へのジメチル化H3K27の変換の検出は、任意の適当な方法を用いて達成することができる。1つの態様において、変換は、ジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27に特異的な抗体を用いて測定される。例えば、ジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27の出発の量または濃度は、ジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27に特異的な適切な抗体を用いて決定されうる。酵素、基質、および試験化合物を組み合わせた後に、結果として生じたジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27の量または濃度がその後、ジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27に特異的な適切な抗体を用いて決定されうる。ジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27の最初のおよび結果の量または濃度を次いで、比較することができる。あるいはまたはさらに、ジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27の最初のおよび結果の量または濃度を次いで、陰性対照由来の対応する量または濃度と比較することができる。アッセイに試験薬剤が含まれていない、陰性対照反応を並行してまたは既存対照として行うことができる。そのような対照反応の結果は、上記の比較を行う前にまたは行うと同時に、実験反応の対応する結果から任意で差し引かれてもよい。試験薬剤は、試験化合物ありでのH3K27のメチル化が試験化合物なしでのH3K27のメチル化よりも少ない場合に、EZH2のY641変異体の阻害剤と特定される。1つの態様において、試験薬剤は、試験化合物の存在下でのトリメチル化H3K27の形成が試験化合物の非存在下でのトリメチル化H3K27の形成よりも少ない場合に、EZH2のY641変異体の阻害剤と特定される。本発明の1つの局面は、EZH2のY641変異体の選択的阻害剤を特定するための方法である。1つの態様において、本方法は、モノメチル化H3K27、ジメチル化H3K27、およびモノメチル化H3K27とジメチル化H3K27との組み合わせからなる群より選択されるH3K27の形態を含むヒストン基質、メチル基供与体、ならびに試験化合物と、単離されたEZH2のY641変異体とを混ぜ合わせ、それによって試験混合物を形成させる段階モノメチル化H3K27、ジメチル化H3K27、およびモノメチル化H3K27とジメチル化H3K27との組み合わせからなる群より選択されるH3K27の形態を含むヒストン基質、メチル基供与体、ならびに試験化合物と、単離された野生型EZH2とを混ぜ合わせ、それによって対照混合物を形成させる段階試験混合物および対照混合物のそれぞれにおけるヒストン基質のトリメチル化を検出するためのアッセイを行う段階試験化合物ありでのEZH2のY641変異体によるトリメチル化と試験化合物なしでのEZH2のY641変異体によるトリメチル化の比率を算出する段階試験化合物ありでの野生型EZH2によるトリメチル化と試験化合物なしでの野生型EZH2によるトリメチル化の比率を算出する段階比率を比率と比較する段階ならびに比率が比率未満である場合に、試験化合物をEZH2のY641変異体の選択的阻害剤と特定する段階を含む。1つの態様において、本方法は、試験混合物および対照混合物の一方または両方に対して試験化合物なしの陰性対照を考慮する段階をさらに含む。薬学的組成物1つまたは複数のEZH2アンタゴニストをヒト患者に単独で、または本明細書において記述される疾患もしくは状態を処置もしくは改善するための用量でそれらを適当な担体もしくは賦形剤と混合した薬学的組成物中で投与することができる。これらのEZH2アンタゴニストの混合物を患者に、単純混合物としてまたは適当な配合化された薬学的組成物中で投与することもできる。例えば、本発明の1つの局面は治療的有効用量のEZH2アンタゴニスト、またはその薬学的に許容される塩、水和物、鏡像異性体もしくは立体異性体および薬学的に許容される希釈剤または担体を含む薬学的組成物に関する。EZH2アンタゴニストの配合および投与のための技法はRemingtonのTheScienceandPracticeofPharmacy21stedLippincottWilliamsWilkins2005のような、当業者に周知の参考文献の中で見出されうる。適当な投与経路は、例えば、経口投与、直腸投与または腸内投与静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射または髄内注射、および髄膜注射、直接脳室内注射または眼内注射を含む、非経口送達点眼薬および経皮送達を含む、局所送達ならびに鼻腔内送達および他の経粘膜送達を含みうる。あるいは、EZH2アンタゴニストを全身的様式ではなく局所的様式で、例えば、多くの場合、デポー配合物または持続放出配合物中で、浮腫部位に直接的にEZH2アンタゴニストを注射することによって投与してもよい。1つの態様において、EZH2アンタゴニストは腫瘍またはリンパ節への直接的な注射によって投与される。さらに、EZH2アンタゴニストを標的薬物送達システムで、例えば、がん細胞特異的な抗体でコーティングされたリポソーム中で投与してもよい。本発明の薬学的組成物は、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥の過程によって製造されうる。本発明によって用いるための薬学的組成物はしたがって、薬学的に使用できる調製物への活性なEZH2アンタゴニストの加工処理を容易にする賦形剤および補助剤を含む1つまたは複数の生理学的に許容される担体を用い従来の様式で配合されうる。適切な配合は、選択した投与経路に依存する。注射の場合、本発明の薬剤は水溶液中で、好ましくは、ハンクス溶液、リンゲル溶液または生理的食塩緩衝液のような生理学的に適合する緩衝液中で配合されうる。経粘膜投与の場合、透過されるバリアに適した浸透剤が配合に用いられる。そのような浸透剤が当技術分野において一般に知られている。経口投与の場合、EZH2アンタゴニストは、活性なEZH2アンタゴニストを当技術分野において周知の薬学的に許容される担体と混ぜ合わせることによって容易に配合することができる。そのような担体は、本発明のEZH2アンタゴニストが、処置される患者によって経口摂取されるための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、溶液、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして配合されることを可能にする。経口用の薬学的調製物は、活性なEZH2アンタゴニストを固体賦形剤と混ぜ合わせ、得られた混合物を任意で粉砕し、顆粒の混合物を、錠剤または糖衣錠コアを得るために、必要なら、適当な補助剤を加えた後で、加工処理することによって得ることができる。適切な賦形剤は、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む、糖のような増量剤例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース調製物およびまたはポリビニルピロリドンを含む。必要なら、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩などの、崩壊剤が加えられてもよい。糖衣錠コアには、適当なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液が用いられてもよく、これはアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコールおよびまたは二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適当な有機溶媒または有機溶媒混合物を任意で含有してもよい。活性なEZH2アンタゴニストの用量の特定のために、または活性なEZH2アンタゴニストの用量のさまざまな組み合わせを特徴付けるために、染料または色素が錠剤または糖衣錠コーティングに加えられてもよい。経口的に使用できる薬学的調製物は、ゼラチンで作られている押し込み型のカプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールで作られている密封された軟質カプセルを含む。押し込み型のカプセルは、有効成分をラクトースのような増量剤、デンプンのような結合剤、およびまたはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤ならびに、任意で、安定剤との混和物で含有することができる。軟質カプセルでは、活性なEZH2アンタゴニストは脂肪油、流動パラフィンまたは液状ポリエチレングリコールなどの、適当な液体に溶解または懸濁されてもよい。さらに、安定剤が加えられてもよい。口内投与の場合、組成物は、従来の様式で配合される錠剤またはトローチ剤の形態を取ってよい。吸入による投与の場合、本発明によって用いるためのEZH2アンタゴニストは、好都合には、適当な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当なガスを用いて、加圧パックまたは噴霧器からのエアロゾルスプレイ提示物の形態で送達される。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、一定の量を送達するためのバルブを提供することによって決定されうる。EZH2アンタゴニストおよびラクトースまたはデンプンなどの適当な粉末基剤の粉末混合物を含有する、例えば、吸入器または注入器で用いるゼラチンのカプセルおよびカートリッジを配合することができる。EZH2アンタゴニストは、注射による非経口投与のために、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。注射用の配合物は、保存剤が添加された単位投与量形態で、例えば、アンプル中でまたは多用量容器中で提示されうる。組成物は、油性媒体または水性媒体における懸濁液、溶液または乳濁液のような形態を取ってよく、懸濁化剤、可溶化剤およびまたは分散化剤のような配合剤を含有してもよい。非経口投与のための薬学的配合物は、水溶性形態での活性なEZH2アンタゴニストの水溶液を含む。さらに、活性なEZH2アンタゴニストの懸濁液を適切な油性の注射用懸濁液として調製してもよい。適当な親油性溶媒または親油性媒体は、ゴマ油のような脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、あるいはリポソームを含む。水性の注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランのような、懸濁液の粘度を増大させる物質を含有してもよい。任意で、懸濁液はまた、適当な安定剤、または高濃度溶液の調製を可能にするためにEZH2アンタゴニストの溶解性を増大させる適当な薬剤を含有してもよい。あるいは、有効成分は、適当な媒体、例えば、無菌の発熱性物質除去水で使用前に再構成される粉末形態であってもよい。EZH2アンタゴニストはまた、例えば、カカオ脂または他のグリセリドなどの、従来の坐薬基剤を含んだ、坐薬または停留浣腸剤のような、直腸用組成物に配合されてもよい。前述の配合物に加えて、EZH2アンタゴニストはまた、デポー調製物として配合されてもよい。そのような長時間作用性配合物は埋め込みにより投与されうる。したがって、例えば、EZH2アンタゴニストは、適当な重合体材料もしくは疎水性材料とともに、またはイオン交換樹脂とともに、あるいは難溶性の誘導体として配合されうる。あるいは、疎水性の薬学的EZH2アンタゴニストのための他の送達システムが利用されてもよい。リポソームおよび乳濁液は、疎水性薬物のための送達媒体または担体の例である。ジメチルスルホキシドのような、ある特定の有機溶媒も利用されてよい。あるいは、EZH2アンタゴニストは、治療剤を含有する固体の疎水性重合体の半透過性マトリックスのような、持続放出システムを用いて送達されてもよい。さまざまな持続放出材料が確立されており、当業者によって周知である。持続放出カプセルは、その化学的性質に依存して、EZH2アンタゴニストを数週間から100日を超えるまで放出しうる。治療試薬の化学的性質および生物学的安定性に依存して、タンパク質安定化のためのさらなる方策が利用されてもよい。薬学的組成物はまた、適当な固相またはゲル相の担体または賦形剤を含んでもよい。そのような担体または賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、さまざまな糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールのような重合体が挙げられるが、これらに限定されることはない。処置の方法本明細書において提供されるのは、ヒストンまたは他のタンパク質のメチル化状態を調節することによって経過に影響が出る可能性のある、状態および疾患を処置または予防する方法であり、ここで該メチル化状態は、少なくともある程度は、EZH2の活性によって媒介される。順に、ヒストンのメチル化状態の調節が、メチル化によって活性化される標的遺伝子およびまたはメチル化によって抑制される標的遺伝子の発現のレベルに影響を及ぼしうる。例えば、本発明の1つの局面は、がんを処置するための方法に関する。本方法は、EZH2のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害するEZH2阻害剤の治療的有効量を、EZH2のY641変異体を発現しているがんを有する対象に投与し、それによってがんを処置する段階を含む。1つの態様において、阻害剤はEZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。1つの態様において、阻害剤はEZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を選択的に阻害する。1つの態様において、がんは濾胞性リンパ腫である。1つの態様において、がんはびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫である。本発明の1つの局面は、がんを処置するための方法に関する。本方法は、がんを有する対象由来のがん細胞を含むサンプルにおけるEZH2のY641変異体を検出するためのアッセイを行う段階およびEZH2のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害するEZH2阻害剤の治療的有効量を、EZH2のY641変異体を発現している対象に投与し、それによってがんを処置する段階を含む。1つの態様において、阻害剤はEZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。1つの態様において、阻害剤はEZH2のY641変異体のヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を選択的に阻害する。1つの態様において、がんは濾胞性リンパ腫である。1つの態様において、がんはびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫である。がんおよび神経疾患のような疾患をタンパク質メチル化の調節因子、例えば、ヒストンメチルトランスフェラーゼまたはヒストンデメチラーゼ酵素活性の調節因子の投与によって処置することができる。ヒストンメチル化は、がんにおけるある特定の遺伝子の異常な発現に関わること、および非ニューロン細胞におけるニューロン遺伝子のサイレンシングに関わることが報告されている。本明細書において記述される調節因子を用いて、そのような疾患を処置すること、すなわち、病的細胞においてヒストンのメチル化を阻害することができる。少なくとも、ヒストンメチル化の増大がある特定のがんと関連していることが判明したという事実に基づき、対象においてがんを処置するための方法は、それを必要としている対象に、メチル化を阻害するまたはメチル化を正常対応細胞における大体そのレベルまで回復する化合物の治療的有効量を投与する段階を含む。1つの態様において、対象においてがんを処置するための方法は、それを必要としている対象に、モノメチル化H3K27への非メチル化H3K27の変換を阻害する化合物の治療的有効量を投与する段階を含む。1つの態様において、対象においてがんを処置するための方法は、それを必要としている対象に、ジメチル化H3K27へのモノメチル化H3K27の変換を阻害する化合物の治療的有効量を投与する段階を含む。1つの態様において、対象においてがんを処置するための方法は、それを必要としている対象に、トリメチル化H3K27へのH3K27me2の変換を阻害する化合物の治療的有効量を投与する段階を含む。1つの態様において、対象においてがんを処置するための方法は、それを必要としている対象に、H3K27me2へのH3K27me1の変換およびH3K27me3へのH3K27me2の変換の両方を阻害する化合物の治療的有効量を投与する段階を含む。メチル化の疾患特異的な増加は、ヒストンまたはタンパク質メチル化の細胞レベルでの全体的な増加なしに重要なゲノム遺伝子座のクロマチンで起こりうることに留意することが重要である。例えば、重要な疾患関連遺伝子での異常な高メチル化は、ヒストンまたはタンパク質全体での低メチル化を背景にして起こることが可能である。一般的に、細胞増殖を調節するためにメチル化の調節因子を用いることができる。例えば、場合によっては、メチル化を減少させる薬剤で過剰な増殖が低減されてもよく、その一方、メチル化を増加させる薬剤で不十分な増殖が刺激されてもよい。したがって、処置されうる疾患は、良性細胞増殖および悪性細胞増殖のような、過剰増殖性疾患を含む。処置されうる例示的ながんには、濾胞性リンパ腫および、びまん性大細胞型B細胞性リンパ腫を含む、リンパ腫が含まれる。他のがんには、急性リンパ性白血病急性骨髄性白血病副腎皮質がんエイズによるがんエイズによるリンパ腫肛門がん星細胞腫、小児小脳星細胞腫、小児大脳基底細胞がん、皮膚がん参照胆管がん、肝外膀胱がん骨がん、骨肉腫悪性線維性組織球腫脳幹グリオーマ脳腫瘍脳腫瘍、小脳星細胞腫脳腫瘍、大脳星細胞腫悪性神経膠腫脳腫瘍、上衣腫脳腫瘍、髄芽腫脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉腫瘍脳腫瘍、視経路および視床下部膠腫乳がん気管支腺腫カルチノイドバーキットリンパ腫カルチノイド腫瘍カルチノイド腫瘍、胃腸原発不明がん中枢神経系リンパ腫、原発性小脳星細胞腫子宮頸がん小児がん慢性リンパ球性白血病慢性骨髄性白血病慢性骨髄性白血病、毛様細胞慢性骨髄増殖性疾患結腸がん結腸直腸がん皮膚T細胞性リンパ腫、菌状息肉腫およびセザリー症候群参照子宮内膜がん食道がんユーイングファミリーの腫瘍肝外胆管がん眼がん、眼内黒色腫眼がん、網膜芽細胞腫胆嚢がん胃がん消化管カルチノイド腫瘍胚細胞腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣妊娠性絨毛腫瘍神経膠腫神経膠腫、小児脳幹神経膠腫、小児大脳星細胞腫神経膠腫、小児視経路および視床下部有毛細胞白血病頭頸部がん肝細胞がん、成人肝細胞がん、小児ホジキンリンパ腫妊娠中のホジキンリンパ腫下咽頭がん視経路および視床下部膠腫眼内黒色腫島細胞がんカポジ肉腫腎臓がん腎臓がん喉頭がん白血病口唇がんおよび口腔がん肝臓がん、成人肝臓がん、小児肺がん、非小細胞肺がん、小細胞リンパ腫、原発性中枢神経系マクログロブリン血症、ヴァルデンストレーム骨悪性線維性組織球腫骨肉腫髄芽腫黒色腫メルケル細胞がん中皮腫中皮腫、成人悪性原発不明の転移性頸部扁平上皮がん多発性内分泌腫瘍症候群多発性骨髄腫多発性骨髄腫形質細胞腫菌状息肉腫骨髄異形成症候群骨髄異形成骨髄増殖性疾患骨髄性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性骨髄増殖性疾患、慢性副鼻腔および鼻腔がん鼻咽腔がん神経芽細胞腫非ホジキンリンパ腫妊娠中の非ホジキンリンパ腫口腔がん口腔がん、口唇および口腔咽頭がん骨肉腫骨悪性線維性組織球腫卵巣がん上皮性卵巣がん卵巣低悪性度腫瘍膵臓がん膵臓がん、島細胞副鼻腔および鼻腔がん副甲状腺がん陰茎がん褐色細胞腫松果体芽細胞腫およびテント上原始神経外胚葉腫瘍下垂体部腫瘍形質細胞腫多発性骨髄腫膜肺芽腫妊娠および乳がん前立腺がん直腸がん網膜芽細胞腫横紋筋肉腫唾液腺がん肉腫、ユーイング腫瘍肉腫、軟組織肉腫、子宮セザリー症候群皮膚がん皮膚がん小腸がん軟部組織肉腫扁平上皮がん、皮膚がん参照原発不明の頸部扁平上皮がん、転移性胃がん睾丸がん胸腺腫胸腺腫および胸腺がん甲状腺がん腎盂および尿管の移行上皮がん絨毛性腫瘍、妊娠性原発部位不明、のがん小児の珍しいがん尿道がん子宮がん、子宮内膜子宮肉腫膣がん小児視経路および視床下部膠腫外陰がんヴァルデンストレームマクログロブリン血症ウィルムス腫瘍ならびに女性のがんが含まれる。EZH2によって媒介される、後成的なメチル化が関与する他の任意の疾患は、本明細書において記述される化合物および方法を用いて処置可能または予防可能でありうる。例えば、処置されうる神経疾患は、てんかん、統合失調症、双極性障害または他の心理的およびもしくは精神的障害、神経障害、骨格筋萎縮、ならびに神経変性疾患、例えば、神経変性疾患を含む。例示的な神経変性疾患としては、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、およびパーキンソン病が挙げられる。別のクラスの神経変性疾患は、少なくとも部分的には、ポリグルタミンの凝集によって引き起こされる疾患を含む。このクラスの疾患は、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、脊髄小脳性失調症1、脊髄小脳性失調症2、マシャドジョセフ病、脊髄小脳性失調症6、脊髄小脳性失調症7、および脊髄小脳性失調症12を含む。本明細書において同様に提供されるのは、がんを有する対象に対する処置を選択するための方法である。本方法は、ジメチル化H3K27レベルによって、好ましくはジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27のレベルによってEZH2阻害剤に対する対象の反応性を判定する段階ならびに対象がEZH2阻害剤に反応性である場合にEZH2阻害剤を対象に提供する段階を含む。1つの態様において、がんは濾胞性リンパ腫である。あるいは、がんはびまん性大細胞型B細胞性リンパ腫である。別の好ましい態様において、対象はY641変異EZH2を発現する。好ましい態様において、Y641変異体はY641F、Y641H、Y641N、またはY641Sである。併用療法本発明の1つの局面において、EZH2アンタゴニスト、またはその薬学的に許容される塩を別の治療剤と併用して、がんおよびまたは神経障害などの疾患を処置することができる。例えば、さらなる薬剤は、本発明の化合物によって処置される疾患または状態を処置するのに有用であると当技術分野において認識されている治療剤でありうる。さらなる薬剤はまた、治療用組成物に有益な特性を与える薬剤でありうる。本発明によって企図される併用療法は、例えば、単一の薬学的配合物中での本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、およびさらなる薬剤の投与、ならびに別個の薬学的配合物中での本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、およびさらなる薬剤の投与を含む。言い換えれば、共投与は、両薬剤の併用の有益な効果を提供するように対象に少なくとも2つの薬剤を投与することを意味するものとする。例えば、薬剤は、同時にまたはある時間にわたって順次投与されてもよい。以下に記載される薬剤は、例示を目的としており、限定することを意図するものではない。本発明の一部である、併用は、本発明の化合物および以下の一覧から選択される少なくとも1つのさらなる薬剤であることができる。併用は、形成される組成物がその意図した機能を果たすことができるようなものであるなら、併用は2つ以上のさらなる薬剤、例えば、2つまたは3つのさらなる薬剤を含むこともできる。例えば、本発明の1つの局面は、がんおよびまたは神経障害の処置のための別の薬剤と併せてEZH2アンタゴニストを用いることに関する。1つの態様において、さらなる薬剤は、HDAC阻害剤のような、ヒストンメチル化に影響を与える化合物である抗がん剤である。ある特定の態様において、さらなる抗がん剤は、化学療法薬、Accutane、アクチノマイシンD、Adriamycin、Alimta、全トランス型レチノイン酸、アメトプテリン、AraC、アザシチジン、BCNU、Blenoxane、Camptosar、CeeNU、クロファラビン、Clolar、Cytoxan、塩酸ダウノルビシン、DaunoXome、Dacogen、DIC、Doxil、Ellence、Eloxatin、Emcyt、リン酸エトポシド、Fludara、FUDR、Gemzar、Gleevec、ヘキサメチルメラミン、Hycamtin、Hydrea、Idamycin、Ifex、イクサベピロン、Ixempra、Lアスパラギナーゼ、Leukeran、リポソームAraC、LPAM、リソドレン、Matulane、ミトラシン、マイトマイシンC、Myleran、Navelbine、Neutrexin、ニロチニブ、Nipent、ナイトロジェンマスタード、Novantrone、Oncaspar、Panretin、Paraplatin、Platinol、カルムスチンインプラントを伴うプロリフェプロスパン20、Sandostatin、Targretin、Tasigna、Taxotere、Temodar、TESPA、Trisenox、Valstar、Velban、Vidaza、硫酸ビンクリスチン、VM26、XelodaおよびZanosarのような生物製剤、Campath、Ergamisol、エルロチニブ、Herceptin、インターロイキン2、Iressa、レナリドマイド、Mylotarg、Ontak、Pegasys、Revlimid、Rituxan、Tarceva、Thalomid、Tykerb、VelcadeおよびZevalinのようなコルチコステロイドおよびDeltaCortefのようなホルモン療法、Aromasin、Casodex、Cytadren、Eligard、Eulexin、Evista、Faslodex、Femara、Halotestin、Megace、Nilandron、Nolvadex、PlenaxisおよびZoladexのようなならびに放射性医薬品、Metastron、PhosphocolおよびサマリウムSM153のようなからなる群より選択される。投与量本明細書において用いられる場合、治療的有効量または治療的有効用量は、状態の進行を完全にもしくは部分的に阻害するか、または状態の1つもしくは複数の症状を少なくとも部分的に軽減する、EZH2アンタゴニストまたは2つもしくはそれ以上のそのような化合物の組み合わせの量である。治療的有効量は、予防的に有効な量であることもできる。治療的に有効な量は、患者のサイズおよび性別、処置される状態、状態の重症度および求められる結果に依存すると考えられる。1つの態様において、治療的有効用量は、患者における症状の軽減をもたらすEZH2アンタゴニストのその量をいう。所与の患者について、治療的有効量は、当業者に公知の方法により判定されうる。EZH2アンタゴニストの毒性および治療効果は、例えば、最大耐量およびED50を判定するための、細胞培養物または実験動物における標準の薬学的手順によって判定することができる。毒性効果と治療効果との用量比が治療指数であり、これはMTDとED50との比として表すことができる。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトで用いるためのある範囲の投与量を配合するのに用いることができる。投与量は、病変組織または代用組織における酵素阻害の薬力学的マーカーに及ぼすEZH2アンタゴニストの効果をモニタリングすることによってガイドされてもよい。細胞培養または動物実験を用いて、薬力学的マーカーの変化に必要な用量と治療効果に必要な用量との関係を判定することができ、細胞培養もしくは動物実験または初期段階の臨床試験において判定することができる。そのようなEZH2アンタゴニストの投与量は、好ましくは、ほとんどまたは全く毒性なくED50を含む血中濃度の範囲内にある。投与量は、採用される投与量形態および利用される投与経路に依存して、この範囲内で変わってもよい。的確な配合、投与経路および投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択されうる。危機状態の処置においては、MTDに近づく緊急のボーラスまたは注入の施行が、急速な反応を得るために必要とされうる。投与量および間隔は、メチルトランスフェラーゼ調節効果、または最小限の有効濃度を、治療効果の達成に必要とされる時間、維持するのに十分な活性部分の血漿レベルを提供するために個々に調節されてもよい。MECはEZH2アンタゴニストごとに変わると考えられるが、インビトロでのデータおよび動物実験から推定することができる。MECを達成するために必要な投与量は、投与の個々の特徴および経路に依存すると考えられる。しかしながら、高圧液体クロマトグラフィーアッセイまたはバイオアッセイを用いて血漿濃度を判定することができる。投与間隔は、MEC値を用いて判定することもできる。ある特定の態様において、EZH2アンタゴニストは、症状の所望の改善が達成されるまで、10~90、好ましくは30~90および最も好ましくは50~90の時間にMECを超える血漿レベルを維持する投薬計画を用いて投与されるべきである。他の態様において、さまざまな時間、さまざまなMEC血漿レベルが維持されよう。局所投与または選択的摂取の場合、薬物の有効局所濃度は、血漿濃度に関連しなくてもよい。当業者は、種々の投与計画から選択することができ、投与されるEZH2アンタゴニストの量は、もちろん、処置される対象に依存するであろうし、対象の体重、苦痛の重症度、投与の方法および処方医師の判断に依存すると考えられる。化合物および薬学的組成物本発明の局面は、本発明の方法によって有用である化合物に関する。これらの化合物は、本明細書においてEZH2阻害剤および、等しく、EZH2アンタゴニストといわれる。化合物は、化合物それ自体、化合物の薬学的に許容される塩として、または薬学的組成物として提示されてもよい。そのような化合物は化合物75およびその薬学的に許容される塩を具体的に含む。本発明は、化合物75またはその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物をさらに含む。EZH2アンタゴニストおよび任意で他の治療用物質は、それ自体でまたは薬学的に許容される塩の形態で投与することができる。医学の分野で用いられる場合、塩は薬学的に許容されるべきであるが、薬学的に許容されない塩を好都合に用いて、その薬学的に許容される塩を調製することができる。本発明によって有用な化合物は塩として、薬学的に適合する対イオンで提供されてもよい。薬学的に許容される塩は、レシピエントへの投与により、直接的にまたは間接的に、本発明によって有用な化合物または化合物のプロドラッグを提供できる任意の無毒性の塩を意味する。薬学的に許容される対イオンは、対象への投与によって塩から放出された場合に無毒性である塩のイオン性部分である。薬学的に適合する塩は、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、およびコハク酸を含むが、これらに限定されない、多くの酸と形成されうる。塩は、その対応する遊離塩基形態よりも水または他のプロトン性溶媒に可溶性である傾向がある。本発明はそのような塩の使用を含む。薬学的に許容される酸付加塩には、塩酸および臭化水素酸のような鉱酸と形成されるもの、ならびにまた、マレイン酸のような有機酸と形成されるものが含まれる。例えば、薬学的に許容される塩を形成するためによく利用される酸には、二硫化水素、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸およびリン酸のような無機酸、ならびにパラトルエンスルホン酸、サリチル酸、酒石酸、重酒石酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸、ギ酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、乳酸、シュウ酸、パラブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸および酢酸のような有機酸、ならびに関連する無機酸および有機酸が含まれる。そのような薬学的に許容される塩にはしたがって、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン14二酸塩、ヘキシン16二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、βヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン1スルホン酸塩、ナフタレン2スルホン酸塩、マンデル酸塩などが含まれる。酸性官能基と薬学的に許容される塩を形成させるのに適した塩基には、ナトリウム、カリウムおよびリチウムのようなアルカリ金属の水酸化物カルシウムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金属の水酸化物アルミニウムおよび亜鉛のような他の金属の水酸化物アンモニア、および無置換またはヒドロキシ置換モノアルキルアミン、ジアルキルアミンもしくはトリアルキルアミンのような有機アミンジシクロヘキシルアミントリブチルアミンピリジン;NメチルNエチルアミンジエチルアミントリエチルアミンモノアミン、ビスアミンもしくはトリアミンのようなモノ、ビスもしくはトリ、2ヒドロキシtertブチルアミン、またはNNジメチルNアミンもしくはトリアミンのような、トリメチルアミン、NNジアルキルNアミンNメチルDグルカミンならびにアルギニン、リジンなどのようなアミノ酸が含まれるが、これらに限定されることはない。本発明によって有用なある特定の化合物およびその塩は、2種以上の結晶形態で存在してもよい本発明は結晶形態の各々およびその混合物の使用を含む。本発明によって有用なある特定の化合物は、1つまたは複数のキラル中心を含有してもよく、種々の光学的に活性な形態で存在してもよい。本発明によって有用な化合物が1つのキラル中心を含有する場合、化合物は2つの鏡像異性形態で存在し、本発明は鏡像異性体および鏡像異性体の混合物、例えばそのラセミ混合物の両方の使用を含む。鏡像異性体は当業者に公知の方法によって分割されうる例えば、鏡像異性体は、例えば、結晶化によって分離されうるジアステレオ異性体塩の形成例えば、結晶化、気体液体もしくは液体クロマトグラフィーによって分離されうるジアステレオ異性体の誘導体もしくは錯体の形成例えば、酵素的エステル化による、一方の鏡像異性体と鏡像異性体特異的試薬との選択的反応またはキラル環境中での、例えば、キラル支持体上でのもしくはキラル溶媒の存在下での気体液体もしくは液体クロマトグラフィーによって分割されうる。所望の鏡像異性体が上記の分離手順のうちの1つによってもう1つの化学的実体に変換される場合、所望の精製された鏡像異性体を遊離するためには、さらなる段階が必要になることがある。あるいは、特定の鏡像異性体は、光学的に活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を用いた不斉合成により、または不斉転換によって一方の鏡像異性体を他方に変換することにより合成されうる。本発明によって有用な化合物が2つ以上のキラル中心を含有する場合、化合物はジアステレオ異性形態で存在してもよい。ジアステレオ異性化合物は当業者に公知の方法によって分離されてもよく、個々の鏡像異性体が上記のように分離されてもよい。本発明は、本発明によって有用な化合物のさまざまなジアステレオ異性体、およびその混合物の使用を含む。本発明によって有用な化合物は、種々の互変異性形態でまたは種々の幾何異性体として存在してもよく、本発明は、本発明によって有用な化合物の各互変異性体およびまたは幾何異性体、ならびにその混合物の使用を含む。本発明によって有用な化合物は、両性イオンの形態で存在してもよい。本発明は、本発明によって有用な化合物の各両性イオンの形態、およびその混合物の使用を含む。キットEZH2アンタゴニストは、必要なら、EZH2アンタゴニストを含有する1つまたは複数の単位投与量形態を含んでよいキット中で与えられてもよい。包装は、例えば、ブリスタ包装のような、金属箔またはプラスチック箔を含んでもよい。包装または分注装置には投与のための使用説明書が付随していてもよい。適合する薬学的担体中に配合された本発明のEZH2アンタゴニストを含む組成物を、調製し、適切な容器中に配し、適応される状態の処置についてラベル付けしてもよい。使用説明書が提供されてもよい。本明細書において同様に提供されるのは、メチル化H3K27を検出する複数のメチル化検出試薬を含むキットである。例えば、キットはモノメチル化H3K27、ジメチル化H3K27およびトリメチル化H3K27検出試薬を含む。検出試薬は、例えば、抗体もしくはその断片、ポリペプチドまたはアプタマーである。キットは個別の容器中に、特に、アプタマーもしくは抗体、対照配合物、ならびにまたは検出可能な標識、例えばフルオレセイン、緑色蛍光タンパク質、ローダミン、シアニン色素、アレクサ色素、ルシフェラーゼ、放射性標識を含んでもよい。アッセイを行うための使用説明書がキット中に含まれてよい。アッセイは、例えば、当技術分野において公知のようにウエスタンブロット分析、免疫組織化学、免疫蛍光、および質量分析の形態であってよい。定義便宜上、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲内で利用される特定の用語をここに集める。本明細書において定義され使用される、全ての定義は、辞書的定義、参照により組み入れられる文章中の定義、およびまたは定義される用語の通常の意味に優先する。冠詞1つのおよび1つのは、この冠詞の文法上の対象の1つをまたは2つ以上をいうように本明細書において用いられる。例として、1つの要素は、1つの要素または2つ以上の要素を意味する。およびまたはという語句は、本明細書においておよび特許請求の範囲において用いられる場合、そのように等位接続される要素、すなわち、ある場合には接続的に存在し、他の場合には離接的に存在する要素の一方または両方を意味すると理解されるべきである。およびまたはを用いて列挙される複数の要素は、同じように、すなわち、要素の1つまたは複数がそのように等位接続されていると解釈されるべきである。具体的に特定される要素に関係しているか関係していないかを問わず、およびまたは節によって具体的に特定される要素以外の、他の要素が任意で存在してもよい。したがって、非限定的な例として、AおよびまたはBへの言及は、含むのような制約がない言語と連結して用いられる場合、1つの態様においては、Aのみをいうことができ別の態様においては、Bのみをいうことができさらに別の態様においては、AおよびBの両方などをいうことができる。本明細書においておよび特許請求の範囲において用いられる場合、またはは、上に定義されたようなおよび/またはと同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、一覧において項目を分離する場合、またはまたはおよびまたはは包括的である、すなわち、いくつかの要素または一覧の要素、および、任意で、一覧に載っていないさらなる項目の、少なくとも1つの包含であるが、それらの2つ以上をまた包むと解釈されるものとする。の1つだけもしくはの厳密に1つまたは特許請求の範囲において用いられる場合、からなるのような、それとは反対であることが明確に示された用語だけが、いくつかの要素または一覧の要素の厳密に1つの要素の包含をいう。一般に、本明細書において用いられるまたはという用語は、どちらか、の1つ、の1つだけまたはの厳密に1つのような、排他性の用語に先行される場合、排他的な別の可能性を示唆すると解釈されるにすぎないものとする。から本質的になるは、特許請求の範囲において用いられる場合、特許法の分野において用いられるようなその普通の意味を有するものとする。本明細書においておよび特許請求の範囲において用いられる場合、少なくとも1つという語句は、1つまたは複数の要素の一覧に関連して、要素の一覧における要素の任意の1つまたは複数から選択されるが、要素の一覧内に具体的に列挙されたありとあらゆる要素の少なくとも1つを必ずしも含む必要はなく、そして要素の一覧中の要素の任意の組み合わせを排除しない、少なくとも1つの要素を意味すると理解されるべきである。この定義はまた、具体的に特定される要素に関係しているか関係していないかを問わず、少なくとも1つという語句が言及する要素の一覧内で具体的に特定される要素以外の要素が、任意で存在してもよいことを可能にする。したがって、非限定的な例として、AおよびBの少なくとも1つは、1つの態様においては、Bがまったく存在せずに、少なくとも1つのBなどをいうことができる。それとは反対であることが明確に示されない限り、2つ以上の段階または行為を含む本明細書において主張される任意の方法において、この方法の段階または行為の順番が、この方法の段階または行為が列挙される順番に必ずしも限定されないことも理解されるべきである。上記の本明細書においてだけでなく、特許請求の範囲において、含む、含む、保有する、有する、含有する、伴う、保持する、から構成されるなどのような全ての移行句は、制約がないこと、すなわち、含むが限定されないことを意味するものと理解されるべきである。からなる、から本質的になるという移行句だけは、UnitedStatesPatentOfficeManualofPatentExaminingProceduresSection211103に記載されているように、それぞれ、制限されたまたは半ば制限された移行句であるものとする。共投与および共投与するという用語は、治療剤が患者の体内に同時にある程度、存在する限りは、同時投与および異なる時間での投与の両方をいう。本明細書において用いられる処置するという用語は、疾患、障害または状態の少なくとも1つの症状の軽減をいう。この用語は、状態の管理、または状態の治療を提供するという目的のための、対象への、本明細書において記述される1つまたは複数の化合物の投与およびまたは塗布を包含する。本開示の目的のための処置は、治療を提供してもよいが、提供しなければならないわけではなくむしろ処置は状態の管理の形態にあってもよい。本明細書において記述される化合物が、がんを含む、望ましくない増殖性細胞を処置するために用いられる場合、処置は、正常細胞に及ぼす破壊的影響は最小限で、望ましくない増殖性細胞の部分的または全面的破壊を含む。細胞レベルでの、がん細胞を含む、望ましくない急速増殖性細胞の処置の所望の機構はアポトーシスである。本明細書において用いられる予防するという用語は、臨床的に明らかな疾患進行の開始を完全に防ぐこともしくは遅らせること、またはリスクのある個体において前臨床的に明らかな疾患段階の開始を防ぐこともしくは遅らせることのどちらかを含む。これには、疾患を発症するリスクがあるものの予防的処置が含まれる。処置の目的のために本明細書において用いられる対象という用語は、障害と診断されている、障害の症状を有する、または障害を発症するリスクがある任意のヒト対象を含む。予防の方法の場合、対象は任意のヒト対象である。予防の目的上、例示するために、対象は、がんのような、望ましくない急速な細胞増殖によって特徴付けられる障害のリスクがある、または障害にかかる遺伝的素因があるヒト対象であってもよい。対象は、発がん物質への暴露、望ましくない急速な細胞増殖によって特徴付けられる障害にかかる遺伝的素因があることなどに起因したリスクがあってもよい。特に指定のない限り、組換えおよび合成ポリペプチド、融合タンパク質、抗体またはその抗原結合断片の産生、核酸配列の操作、形質転換細胞の作出などのために標準的な方法を用いることができる。そのような技法は当業者に公知である。例えば、SambrooketalMolecularCloningALaboratoryManual3rdEdFMAusubeletalCurrentProtocolsinMolecularBiologyを参照されたい。EZH2ポリペプチドという用語は、全長ポリペプチドの機能的断片、および実質的に類似のまたは実質的に同一のアミノ酸配列を有する前記のどちらかの機能的等価体を包含し、ここで機能的断片または機能的等価体は天然ポリペプチドの機能的特性の1つまたは複数を保持している。機能的とは、ポリペプチドが天然ポリペプチドの生物学的特性の1つまたは複数に関して同じまたは実質的に類似の活性、例えば、天然ポリペプチドの少なくとも約50、75、85、90、95もしくは98またはそれ以上の活性を有することを意味する。調節するという用語は、活性の増加または減少をいう。特定の態様において、増加させるまたは増強するという用語は、少なくとも約25、50、75、2倍、3倍、5倍、10倍、15倍、20倍またはそれ以上の上昇を意味する。特定の態様において、減少させるまたは低減するという用語は、少なくとも約25、40、50、60、75、80、85、90、95、98またはそれ以上の縮減を意味する。いくつかの態様において、示される活性、物質または他のパラメータは検出可能ではない。具体的に提供されるのは、EZH2のアンタゴニストである。薬力学的マーカーという用語は、薬物の投与を受けている患者において測定されうる薬物反応の分子マーカーをいう。このマーカーは、薬物標的の調節の直接的尺度でなければならず、用量に対する反応の定量的変化を示すことが可能でなければならない。EZH2アンタゴニストに対する潜在的な薬力学的マーカーは、疾患組織または代用組織でのヒストンH3K27メチル化のレベルでありうる。本明細書において用いられる場合、反応性という用語は、反応性の、感受性のおよび感受性という用語と互換的であり、EZH阻害剤の投与時に治療反応を示す対象、例えば、対象の腫瘍細胞または腫瘍組織がアポトーシスおよびもしくはネクローシスを起こし、ならびにまたは成長、分裂もしくは増殖の低減を示すことを意味する。対照または参照基準という用語は、対象から単離された隣接する非腫瘍組織において検出された、健常対象由来の健常組織において検出された、または当技術分野における標準的な方法で病理学者によって確立されたメチル化レベルをいう。サンプルとは、対象に由来する任意の生体サンプルを意味し、細胞、組織サンプルおよび体液を含むが、これらに限定されることはない。本発明を一般的に記述してきたが、本発明のある特定の局面および態様を例示する目的で単に含まれ、本発明を限定することを意図するものではない、以下の実施例を参照することによって、本発明はさらに容易に理解されよう。実施例1組換え5成分PRC2複合体バキュロウイルス発現システムを用いスポドプテラフルギペルダ細胞において、野生型EZH2またはTyr641変異体を野生型AEBP2、EED、SUZ12およびRbAp48と共発現させた。EED上のN末端FLAGタグを用いて、細胞溶解物から活性なPRC2複合体を精製した。最終のPRC2調製物の純度をSDSPAGEにより、クマシーブルー染色で評価した。実施例2H3、H4ペプチドパネル21stCenturyBiochemicalsにより、各15アミノ酸の44種のペプチドからなるライブラリを合成した。このペプチドパネルには、連続的なペプチド配列の間で5残基が重複するようにして、ヒトヒストンH3およびH4のアミノ酸の全てが包含された。各ペプチドのN末端にビオチンを付加し、C末端はアミドとして表した。液体クロマトグラフィー質量スペクトル分析によって、純度および同一性を確認した。酵素活性のH3K27メチル化状態依存に関する研究のため、非メチル化、モノメチル化、ジメチル化またはトリメチル化側鎖アミンとしたリジン27を有する残基番号21~44のヒトH3のアミノ酸配列に相当する、ペプチドを合成した。これらのペプチドは、各ペプチドのC末端にビオチンを付加させた状態でNewEnglandPeptideから購入した。実施例3細胞におけるH3K27メチル化状態の評価細胞株OCILY19、KARPAS422およびWSUDLCL2はDSMZから入手した。細胞株DBおよびSUDHL2はATCCから入手した。OCILY19、WSUDLCL2およびDB細胞株は、10FBSを含むRPMI1640中で増殖させ、KARPAS422およびSUDHL2細胞株は、20FBSを加えたRPMI1640中で増殖させた。細胞を細胞15~2×106個mLの密度まで増殖させ、細胞1×107個を264×gでの遠心分離によって収集し、氷冷PBS中で洗浄し、50mMTrisHCl、150mMNaCl、025DOC、1NP40および1mMEDTAに加えて01SDSおよびプロテアーゼ阻害剤錠剤を含有する10×ペレット容量のRIPA溶解緩衝液に再懸濁することによって溶解させた。溶解物を、設定3でMisonixXL2000を用い2ラウンドの101秒のバーストによって超音波処理し、効率的なヒストン抽出を確実とし、卓上遠心分離機を10分間14000rpmで用い4°Cでの遠心分離によって清澄化した。タンパク質濃度をBCAアッセイによって決定した。各溶解物4マイクログラムを4~20のTrisGlycineゲル上で分画し、PVDFに転写し、Odysseyブロッキング緩衝液中の以下の抗体マウス抗EZH2、ウサギ抗H3K27me3、ウサギ抗H3K27me2、ウサギ抗H3K27me1、およびマウス抗TotalH3でプローブした。一次Abインキュベーションの後、膜をIRDye800CWロバ抗マウスIgGまたはAlexaFluor680ヤギ抗ウサギIgG二次Abでプローブし、LiCOROdysseyシステムを用いて画像化した。実施例4酵素学上記のように、Tyr641での、疾患に関連した変化は、EZH2が触媒するH3K27のメチル化に関する機能の喪失をもたらすものとこれまでに結論付けられた。しかし、酵素のヘテロ接合性によるH3K27メチル化の比率の推定的低減は、殊のほか、H3K27トリメチル化の増大に関わる、EZH2の過剰発現、対応するH3K27デメチラーゼUTXにおける機能喪失型変異、またはPHF19PCL3のような、PRC2成分の過剰発現が、どれも、特定のヒトがんにおいて悪性の表現型をもたらすことを示す過去のデータを考慮すると、悪性の表現型の根拠として理論的に説明することが困難であった。MorinetalNatGenet421815MartinezGarciaetalNatGenet421001BrackenetalEMBOJ22532335KleeretalProcNatlAcadSciUSA1001160611VaramballyetalNature4196249SimonetalMutatRes647219vanHaaftenetalNatGenet415213WangetalGene3436978CaoetalMolCellBiol28186272およびSarmaetalMolCellBiol28271831。それゆえ、これらの変異の酵素学をさらに詳細に探った。組換えPRC2複合体をWTおよびTyr641変異体型のヒトEZH2で調製したMolCell155767を参照のこと。等しい濃度の各複合体を、標識SアデノシルメチオニンからH3K27周囲のアミノ酸配列に相当する非修飾ペプチドへのまたは天然の鳥類赤血球オリゴヌクレオソームへの3Hメチルの転移を触媒する能力について最初に試験した。これまでに報告されているようにNatGenet421815、WT酵素はこの非メチル化ペプチド基質へのメチル転移に対する強い活性を示すこと、しかし、変異酵素のどれも有意なメチルトランスフェラーゼ活性を示さないことが分かった。過去に報告されたデータおよび図1Aにおけるデータとは対照的に、変異EZH2構築体の全てが鳥類ヌクレオソーム基質に対して活性なメチルトランスフェラーゼであることが分かった。鳥類の天然源から単離されたヌクレオソームは、H3K27メチル化特異的な抗体でのウエスタンブロッティングによって判断した場合に、さまざまなH3K27メチル化状態を含む、ヒストン修飾状態の混和物に相当する。ペプチドおよびヌクレオソーム基質に対する変異体PRC2複合体の不一致な活性について可能な説明はいくつかある。1つの可能性は、酵素活性部位の遠位にある基質認識部位が基質結合および代謝回転の重要な決定因子でありこれらの部位は、小さなペプチド基質では利用できない、ヌクレオソームの相補的認識要素に結合しうるということである。しかし、大腸菌で発現された組換えヒトヒストンH3をWTおよび変異体PRC2複合体の基質として試験した場合、得られた活性パターンはペプチド基質で見られたものと同一であったつまり、WT酵素はH3基質に対して強いメチルトランスフェラーゼ活性を示し、Y641F変異体はWT複合体の活性の7を示し、他の全ての変異体はWT複合体の活性の1以下を呈した。ゆえに、エキソサイト結合が今回の結果の説明となる可能性は低いように見える。ヌクレオソームは、小さなペプチド基質に存在しないであろう潜在的なメチル化部位としてH3K27を超える多くのリジン残基を提示する。したがって、別の可能性は、Y641の変異がEZH2の基質特異性を変化させて、H3K27以外のリジン残基のメチル化をもたらすということである。小さなペプチド基質および組換えH3タンパク質基質に対する変異体の活性が極めて一致していることを考慮すると、この可能性は低い。本結果とこれまでに報告された結果との明らかな不一致は、WTおよび変異体PRC2複合体の酵素活性を、ヒストンH3およびヒストンH4の可能な全てのリジン残基に相当するペプチド基質のパネルに対して試験した場合に解決された。酵素形態の全てが、残基H3K27の等価体を含んだペプチドに対してのみ有意な活性を示した。しかしながら、変異体の特異的活性は、やはり、過去に報告された所見と一致して、WTY641FY641S~Y641HY641Nの順にWTと比べて大いに低減された。実施例5酵素学これらの変異体の酵素活性をさらに理解するために、およびペプチド基質に対する活性とヌクレオソーム基質に対する活性との明らかな矛盾に折り合いをつけるために、H32144ペプチドに関連してさまざまなH3K27メチル化状態のメチル化をさらに触媒する酵素形態の能力について調べた。上記のように、変異酵素の全てがWT酵素と比べて、非修飾H3K27ペプチドメチル化の不十分な触媒であることが分かった。しかしながら、顕著には、変異酵素の全てが、モノメチル化H3K27ペプチド、およびとりわけジメチル化H3K27ペプチドのさらなるメチル化の触媒においてはWT酵素よりも優れていることが分かった。したがって、このデータから、WT酵素が、非メチル化からモノメチル化の反応の触媒では最も効率的であることが示唆される。変異酵素はこの初期段階の触媒において欠陥があるものの、モノメチルH3K27からジメチルH3K27およびトリメチルH3K27に至る後続の段階の触媒においてはWT酵素よりも効率的である。WTおよび変異EZH2の示差的な基質特異性の由来を、定常状態酵素反応速度を通じて探った。表1にまとめられているように、変異は、ヌクレオソームに対するKmの、およびペプチド基質に対するK12の類似値によって示される通り、基底状態の基質認識にわずかな影響を与える。いかなる場合でも、ペプチド基質はS字状の結合挙動を示したゆえに半最大速度をもたらすペプチド濃度を、より一般的なミカエリス定数Kmの代わりにK12としてここに報告する。CopelandEvaluationofEnzymeInhibitorsinDrugDiscoveryAGuidetoMedicinalChemistsandPharmacologistsWiley。SAMのKmは同様に、208±50から304±64nMに及び、酵素形態の間で最小のバラツキを示した。代わりに、基質利用の差異は、さまざまな基質に対する酵素間のkcat値の差異によって示される通り、遷移状態認識に端を発するように見える。結果として、kcatK比として定量化した触媒効率は、異なるH3K27メチル化状態についてWT酵素と変異酵素との間で異なる。表1EZH2の野生型またはY641変異体を含有するPRC2によって触媒されるメチル化反応に対する定常状態反応速度パラメータa活性が低すぎて測定できない。実施例6酵素学表1に記載されている定常状態反応速度パラメータにより、WT酵素についてホモ接合性の細胞と比べて、さまざまな変異EZH2の形態についてヘテロ接合性の細胞に対して種々のH3K27メチル化状態の予想レベルを算出することが可能になった。これらの模擬実験を実施するため、定常状態酵素反応速度が細胞の状況においてPRC2により触媒されるH3K27メチル化と関連しているという、および全ての測定が細胞増殖における同じ時点で行われるという変異酵素およびWT酵素がヘテロ接合性細胞において等しいレベルで発現されるという、ならびに総EZH2レベルが全ての細胞において等しいというSAMの細胞濃度は、そのKmと比べて、飽和しており、細胞の間で変化しないというヌクレオソームの細胞濃度は、そのKmと類似しており、同様に、細胞の間で変化しないというEZH1により触媒されるH3K27のメチル化は重要ではなく、細胞の間で一定であったというならびにいずれのH3K27デメチラーゼ活性も細胞の間で一定であったという、いくつかの簡素化した仮定を立てた。適切にこのような仮定をすることで、図3Aに示されている予測をH3K27me3、H3K27me2およびH3K27me1の相対レベルについて得た。これらの模擬実験から明らかなパターンが浮かび上がる。H3K27me3のレベルは、変異体を持っている全ての細胞についてWT細胞と比べて増加し、Y641H変異体の場合30の増加からY641N変異体の場合400に及ぶ。同時に、H3K27me2のレベルは変異体の全てについてWTの50まで減少し、H3K27me1のレベルはWTと比べて、全ての変異体についておよそ半分に低減されている。WTEZH2についてホモ接合性であることが知られているB細胞性リンパ腫細胞株またはEZH2Y641Nについてヘテロ接合性であることが知られているB細胞性リンパ腫細胞株もしくはEZH2Y641Fについてヘテロ接合性であることが知られているB細胞性リンパ腫細胞株におけるH3K27メチル化状態の相対レベルを次に、ウエスタンブロッティングによって測定した。図3bにおいて見られる相対的なH3K27メチル化状態のパターンは、模擬実験において用いた仮定および基質としての非生理的ペプチド代用物の使用にもかかわらず、インビトロでの定常状態反応速度パラメータに基づく模擬実験の結果と極めてよく一致している。このように、H3K27me3の増加がWTと比べてY641変異体を持っている全ての細胞で認められ、H3K27me2の減少がWTと比べてY641変異体を持っている全ての細胞で認められ、かつH3K27me1の減少が4種の変異体細胞株のうちの少なくとも2種で認められた。WTならびにKARPAS422およびSUDHL6細胞におけるH3K27me1のほぼ同等のレベルは、WTおよび変異EZH2の異なる発現レベル、EZH1の異なる寄与、または模擬実験では説明されない他の要因を反映している可能性がある。とは言っても、H3K27メチル化状態の予測パターンと実験パターンとの一致は注目に値し、WTと変異EZH2との間の酵素的連関がH3K27me3の増加をもたらし、かくして、これらの変異体についてヘテロ接合性である細胞の悪性の表現型を引き起こすという考えを裏付けている。実施例7PRC2メチルトランスフェラーゼ活性のインビトロアッセイペプチド基質を用いたフラッシュプレートアッセイEZH2のWTおよびY641変異体の初期比較のため、800nMの濃度で非メチル化K27、モノメチル化K27またはジメチル化K27を含有するビオチン化ヒストンH32144ペプチドを1700nMのSアデノシルメチオニンClおよび300nMのトリチウム化SAMの混合物と混ぜ合わせた。この基質の組み合わせを次いで、アッセイ緩衝液pH76中のPRC2に加えた。反応を表示の時間間隔の間、進行させ、その後、過剰の非放射性SAMの添加により反応停止した。反応停止された反応混合物をストレプトアビジンでコーティングされたフラッシュプレートに移し、1時間結合させ、その後、TopCountNXTHTSシンチレーションおよび発光カウンタにて検出した。各時点は6回の個別反応の平均を表した。ペプチドまたはSAMの濃度は変化させ、一方で他の基質は飽和条件としたことを除き、同一の反応条件の下で定常状態反応速度パラメータを決定した。速度をさまざまな基質濃度の関数としてプロットし、データを未変形ミカエリスメンテン式または未変形S状反応速度式にあてはめて、Kおよびkcatの値を算出した。あてはめたパラメータの標準誤差が表1に記載されており、これを用いて、図2パネルBおよびCに示したエラーバーを作図した。kcatKに関連した誤差を標準的な誤差伝播法にしたがって算出したkcatKの相対誤差はとして決定したが、ここでμkcatはkcatの標準誤差であり、μKはKの標準誤差である。オリゴヌクレオソームを用いたフィルタプレートアッセイニワトリ赤血球オリゴヌクレオソームを既述のように精製した。FangetalMethodsEnzymol37721326。ヌクレオソームをSAMおよびトリチウム化SAMの混合物と混ぜ合わせ、アッセイ緩衝液中のPRC2に加えた。上記のように反応を行い、反応停止した。反応停止された反応混合物をガラス繊維フィルタプレートに移し、10トリクロル酢酸で3回洗浄し、乾燥させた。MicroscintZeroを加え、トリチウムの取り込みをTopCountシンチレーションおよび発光カウンタにて検出した。ヌクレオソームまたはSAMの濃度は変化させ、一方で他の基質は飽和条件としたことを除き、同一の反応条件の下で定常状態パラメータを決定した。速度をさまざまな基質濃度の関数としてプロットし、これを未変形ミカエリスメンテン式にあてはめて、上記のようにKmおよびkcatの値を導き出した。実施例8化合物75の調製A化合物37の調製9622ジメチルテトラヒドロフロ34d13ジオキソール4イル9Hプリン6アミンOrgLet1129762979のDCE溶液に、カルバミン酸メチルおよびNaB3Hを加え、混合物を室温で4時間撹拌した。K2CO3溶液を8~9のpHまで加えた。DCMを加え、有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮し、SGCにより精製して、37を得た。B化合物65の調製37のDCE溶液に、2アミノ4オキソブタン酸ベンジルおよびNaB3Hを加え、混合物を室温で4時間撹拌した。K2CO3溶液を8~9のpHまで加えた。DCMを加え、有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮し、SGCで精製して、65を得た。C化合物75の調製段階165BのDCM溶液に、Et2NHを加え、混合物を室温で4時間撹拌した。混合物を濃縮して粗製物72を得た。段階272のMeOH撹拌溶液に、2アセトアルデヒドを加え、20分間室温で撹拌した。その後、Na3BHおよびHOAcを加え、終夜撹拌した。その後、NaHCO3を加え、DCMで抽出し、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮した。粗生成物を分取TLCにより精製して、73を白色の粉末として得た。LCMS7797M1。段階373および10PdCのMeOH混合物を終夜H2下、室温で撹拌した。混合物をろ過し、ろ液を濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取TLCにより精製して、74を白色の粉末として得た。LCMS6897M1。段階474の90TFA溶液を1時間室温で撹拌し、固形物として濃縮し、TFAを除去して、化合物75を精製なしに無色の油状物として得た。LCMS5497M1。実施例9SAHによるEZH2野生型およびY641変異体の阻害SアデノシルLホモシステインを10点についてDMSO中で連続的に3倍希釈し、1μLを384ウェルマイクロタイタープレートに配した。陽性対照は終濃度100μMのSAHとし、陰性対照にはDMSO1μLを含めた。SAHを次いで、pH76のアッセイ緩衝液中8nMのEZH2野生型および変異体40μLウェルとともに30分間インキュベートした。pH76のアッセイ緩衝液中150nMのSアデノシルメチオニンClおよび100nMのトリチウム化SAMおよび150nMのビオチン化オリゴヌクレオソームを含めた基質混合物を、10μLウェルで加えた。反応停止された酵素反応液をストレプトアビジンでコーティングされたフラッシュプレートに移し、1時間結合させ、TopCountNXTHTSにて検出した。結果を図7に示す。IC50値を表2に示す。表2SAHによるWTEZH2およびEZH2のY641変異体の阻害実施例10化合物75によるEZH2野生型およびY641変異体の阻害化合物75を10点についてDMSO中で連続的に3倍希釈し、1μLを384ウェルマイクロタイタープレートに配した。陽性対照は終濃度100μMのSAHとし、陰性対照にはDMSO1μLを含めた。化合物75を次いで、pH76のアッセイ緩衝液中8nMのEZH2野生型および変異体40μLウェルとともに30分間インキュベートした。pH76のアッセイ緩衝液中150nMのSアデノシルメチオニンClおよび100nMのトリチウム化SAMおよび150nMのビオチン化オリゴヌクレオソームを含めた基質混合物を、10μLウェルで加えた。反応停止された酵素反応液をストレプトアビジンでコーティングされたフラッシュプレートに移し、1時間結合させ、TopCountNXTHTSにて検出した。結果を図8に示す。IC50値を表3に示す。表3化合物75によるWTEZH2およびEZH2のY641変異体の阻害実施例11H3K27me2me3比はEZH2阻害剤に対する感受性を予測するEZH2変異についてヘテロ接合性の腫瘍細胞株は、H3K27me3のレベルの増加を示し、H3K27のメチル化状態が腫瘍形成には重要であるものと考えられた。EZH2についてWTであった、またはEZH2変異についてヘテロ接合性であった細胞株のパネルにおけるH3K27のモノメチル化、ジメチル化またはトリメチル化形態のレベルを評価した。用いた細胞株は表4に記載されている。細胞株の大半はB細胞性リンパ腫系列であるが、しかし2種の黒色腫系列も含めた。IGR1は、EZH2におけるY641N変異を含むことが最近になって分かった黒色腫系列であり、A375細胞はWTEZH2の黒色腫対照系列として含めた。図9AおよびBは、H3K27me1、H3K27me2またはH3K27me3を認識する抗体で、この細胞株パネルから単離されたヒストンをプローブしたウエスタンブロット分析の結果を示す。概して、WTEZH2を排他的に発現している細胞株でよりもY641変異体を含んだ細胞株で全体的なH3K27me3レベルは高い。2つの例外はFarage細胞およびPfeiffer細胞であり、この場合にH3K27me3レベルはWT系列におけるものと類似していた。より顕著なのは、野生型細胞株と比べてEZH2Y641変異体細胞株におけるH3K27me2の劇的に低いレベルである。Y641変異体細胞株から抽出されたヒストンのウエスタンブロットにおいてH3K27me2シグナルは、ほとんどまたは全く認められなかったが、WT細胞株において同じ抗体で認められたシグナルは、H3K27me3に特異的な抗体で認められたシグナルよりも強かった。全体としては、WT細胞株において、HK27me2抗体でのウエスタンブロットシグナルはH3K27me3抗体で認められたシグナルよりも高かったが、Y641変異体細胞株では逆のことが当てはまった。このように、Y641系列におけるH3K27me3me2シグナルの比率は、WT系列で認められたものよりも高い。これに対する1つの例外はPfeiffer細胞株であり、この細胞株はY641EZH2変異を含まないが、しかし高いH3K27me3シグナルを持ち、H3K27me2シグナルをほとんどまたは全く持たない。Pfeiffer細胞は、それゆえ、Y641変異体細胞株と類似のH3K27me3me2比を有する。H3K27メチル化状態を質量分析法、つまり抗体試薬に依らない独立した方法によって調べることもできる。MS分析から、H3K27me3レベルは他のWT系列でよりもPfeiffer系列およびY641変異体系列で高いが、H3K27me2レベルについてはこの逆が当てはまることが実証された。Y641変異体系列およびPfeiffer系列において、H3K27me3レベルはH3K27me2レベルよりも高かったが、他のWT系列では逆のことが当てはまった。これらの結果は、図9AおよびBにおけるウエスタンブロット分析により認められたものと一致する。H3K27メチル化状態の差異は、H3K27me2またはH3K27me3に対する抗体を用いた免疫細胞化学によっても検出された。この免疫細胞化学アッセイは、ホルマリン固定されパラフィン包埋された患者腫瘍組織サンプルにおけるY641変異EZH2と関連する異常なH3K27me23比を検出するために用いられる。5種のWTおよび5種のY641変異体リンパ腫細胞株ペレットのパネルを固定し、パラフィンブロックに包埋し、抗H3K27me2抗体または抗H3K27me3抗体で染色した。全ての細胞が核ヒストンH3を含有するはずなので、ヒストンH3に対する抗体を陽性対照として含めた。図10は、H3K27me3およびH3の両染色に対して細胞の100で、全ての細胞株が陽性であったことを示す。これらの条件の下で、H3K27me3染色強度の明らかな差異は、WT細胞株とY641変異体細胞株との間で認められなかった。これは、他の検出法と比べて、発色性の免疫細胞化学染色のダイナミックレンジが限定されていることを反映している可能性がある。しかしながら、図11に示されるように、細胞株は、H3K27me2に対して陽性または陰性に染まるものに明らかに分けることができた。Pfeiffer細胞を除いて、全てのWT細胞株がH3K27me2について陽性に染色されたのに対し、全てのY641変異体細胞株およびPfeiffer細胞がH3K27me2抗体による染色を示さなかった。これらの結果は、ウエスタン分析およびMS分析によって得られた結果と一致している。理論によって束縛されることを望むわけではないが、機能獲得型EZH2変異と関連するH3K27me3レベルの増加は、EZH2変異を持つ細胞を、小分子EZH2阻害剤に対していっそう感受性にしうる。EZH2Y641変異なしのPfeiffer細胞において認められたH3K27me3レベルの増加およびまたはH3K27me2レベルの減少がまた、EZH2阻害剤に対する感受性と相関しているかどうか評価するために、それぞれ85nMおよび16nMのIC50を有し、生化学的アッセイにおいてEZH2の強力な阻害を示す2種の化合物を試験した。どちらかの化合物でのWSUDLCL2細胞の処理によって、全体的なH3K27me3レベルの阻害につながり、細胞に侵入し、細胞のEZH2メチルトランスフェラーゼ活性を阻害するその能力が確認された。各化合物に対するWTおよびY641変異体細胞株のパネルの感受性を増殖アッセイにおいて評価した。EZH2阻害剤の抗増殖活性は顕在化するのに数日かかるので、11日間の増殖アッセイにおいて化合物を評価した。図13は、試験化合物で処理されたWT、またはY641変異体細胞株に対する代表的な増殖曲線を示す。両化合物は抗増殖活性を、WSUDLCL2細胞に対して示したが、しかしOCILY19細胞に対してはほとんど示さなかった。阻害剤Aは阻害剤BよりもWSUDLCL2増殖の、より強力な阻害剤であったが、これは、阻害剤Aが生化学的アッセイにおいて、より強力なEZH2阻害剤であることと一致している。増殖アッセイを阻害剤Bで、WTおよびY641変異体リンパ腫細胞株のパネルにて行い、11日目のIC90値を導出した。図14Aは、EZH2Y641状態によって分類されたリンパ腫細胞株のIC90値を示す。全体としては、Y641変異体細胞株はWT細胞株と比べてEZH2阻害剤に対し感受性の増加を示したが、RLおよびSUDHL4細胞は他の変異体系列よりも感受性が顕著に低かった。Pfeiffer細胞はWTであるため、例外であるが、しかし両化合物の抗増殖効果に対し極めて感受性であり、低ナノモルまたはナノモル以下の範囲のIC90を有する。Pfeiffer細胞は高いH3K27me3レベルおよび低いH3K27me2レベルを示し、そのため、高いH3K27me3および低いH3K27me2にしたがって細胞株を分類することにより、図14Bで阻害剤Bに対して示されるようにEZH2阻害剤の感受性に関するさらに良好な識別が得られる。このように、高いH3K27me3レベルおよび低いH3K27me2レベルを用いて、変異状態に関する認識とは独立的に、EZH2阻害剤に対する感受性を予測することができる。Pfeiffer細胞において認められた異常なメチル化比は、EZH2活性に対する依存性をもたらす別の機構によって起こる。これらの結果は、患者腫瘍においてEZH2Y641変異を特定すること、およびまたは患者においてウエスタンブロット、MSもしくはIHCのような技法を使ってH3K27me3と比べH3K27me2のレベルの低さを検出することを用いて、どの患者がEZH2阻害剤での処置に反応するかを特定できることを実証している。表4本研究において用いた細胞株均等物本発明のいくつかの態様を本明細書において記述し、例示してきたが、当業者は、機能を果たすための、ならびにあるいは本明細書において記述される結果およびまたは利点の1つもしくは複数を得るための種々の他の手段およびまたは構造を容易に想定するものと考えられ、そのような変形およびまたは修正のそれぞれが本発明の範囲内にあると見なされる。より一般的には、当業者は、本明細書において記述される全てのパラメータ、寸法、材料および構成が例示的であると意図されること、ならびに実際のパラメータ、寸法、材料およびまたは構成は、本発明の教示が用いられる具体的な用途に依存することを容易に理解するであろう。当業者は、通常の実験を用いるだけで、本明細書において記述される本発明の具体的な態様の多くの均等物を認識するか、または均等物を確認することができるであろう。それゆえ、前述の態様は例として提示されているにすぎないこと、ならびに添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物の範囲内で、本発明は、具体的に記述され、主張されるようなもの以外の別のやり方で実践されてもよいことが理解されるべきである。本発明は、本明細書において記述される各個々の特徴、システム、物品、材料、キットおよびまたは方法に関する。さらに、2つまたはそれ以上のそのような特徴、システム、物品、材料、キットおよびまたは方法の任意の組み合わせは、そのような特徴、システム、物品、材料、キットおよびまたは方法が相互に矛盾していないなら、本発明の範囲内に含まれる。