"水素結合部位を含む化学構造を有する生物活性化合物と、水素結合部位を含み、チロシン誘導ジフェノールモノマーユニットを備え、生体適合性加水分解ポリカーボネートである第1のポリマーと、前記第1のポリマーより疎水性が低い生体適合性の第2のポリマーとを含み、前記第2のポリマーは加水分解して前記活性化合物の放出を促進する酸性分解産物を形成する、製剤。前記生物活性化合物は薬剤として活性がある、請求項1に記載の製剤。前記薬剤として活性な化合物はペプチドである、請求項2に記載の製剤。前記ペプチドは環状ペプチドである、請求項3に記載の製剤。前記ペプチドは血小板凝集阻害PAIペプチドである、請求項4に記載の製剤。前記PAIペプチドは糖タンパク質IIb/IIIaの合成環状ヘプタペプチである拮抗薬である請求項5に記載の製剤。前記第1ポリマーの前記ポリカーボネートはポリアルキレンオキシドとランダムブロック共重合される、請求項1に記載の製剤。前記チロシン由来ジフェノールモノマーはデスアミノチロシルチロシンエステルからなる、請求項1に記載の製剤。前記エステルはエチルエステルまたはヘキシルエステルである、請求項8に記載の製剤。前記第2のポリマーは、チロシン誘導ジフェノールモノマーユニットを備えた第2のポリカーボネート、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリグリコール酸-co-乳酸PGLA、ポリカプロラクトン、およびポリヒドロキシアルカン酸から選択される、請求項1または7に記載の製剤。前記第2のポリマーはPGLAである、請求項10に記載の製剤。水素結合部位を含む化学構造を有する生物活性化合物と、水素結合部位を含み、チロシン誘導ジフェノールモノマーユニットを備え、ポリアルキレンオキシドとランダムブロック共重合される生体適合性加水分解ポリカーボネートである第1のポリマーと、前記第1のポリマーより疎水性が低い生体適合性の第2のポリマーとを含み、前記第2のポリマーは加水分解して前記活性化合物の放出を促進する酸性分解産物を形成する、製剤。前記ペプチドは環状ペプチドである、請求項12に記載の製剤。前記チロシン誘導ジフェノールモノマーはデスアミノチロシルチロシンエステルからなる、請求項12に記載の製剤。前記第2のポリマーは、チロシン誘導ジフェノールモノマーユニットを備えた第2のポリカーボネート、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリグリコール酸-co-乳酸PGLA、ポリカプロラクトン、およびポリヒドロキシアルカン酸から選択される、請求項12に記載の製剤。活性化合物を非ヒト患者にパルス送達する方法であって、製剤を非ヒト患者に投与することからなり、該製剤が、水素結合部位を含む化学構造を有する生物活性化合物と、水素結合部位を含み、チロシン誘導ジフェノールモノマーユニットを備え、生体適合性加水分解ポリカーボネートである第1のポリマーと、前記第1のポリマーより疎水性が低い生体適合性の第2のポリマーとを含み、前記第2のポリマーは加水分解して前記活性化合物の放出を促進する酸性分解産物を形成する、方法。前記ペプチドは環状ペプチドである、請求項16に記載の方法。前記第1ポリマーの前記ポリカーボネートはポリアルキレンオキシドとランダムブロック共重合される、請求項16に記載の方法。発明の開示本開示に記載の技術は、先行技術からの逸脱を表すものである。この系では、ポリマーと活性化合物の間の結合相互作用を用いて、活性化合物をポリマーマトリクス中に封じ込める。いくつかの異なる種類の相互作用吸着、π-結合、イオン結合を想到することができるが、水素結合相互作用が最も好適であるように思われる。従って、本発明の1態様によれば、生理活性化合物を含む製剤であって、相補的水素結合部位を有する構造を有する第1のポリマーおよび分解することでその第1のポリマーからの活性化合物の放出を促進する分解産物を形成する第2のポリマーと混合した、水素結合部位を有する構造を持った製剤が提供される。従って、この製剤は3種類の成分、すなわち2種類のポリマーおよび生理活性化合物からなり、それら全てが混合されている。そこで本発明は、徐放的に薬理活性化合物もしくは生理活性化合物を放出することで、放出前の遅延時間の設計、パルス放出の設計、ならびにバースト例:非常に短い初期使用期間内でのかなりの量の装填薬剤の即時かつ未制御の放出に対して抵抗性である高装填の系の設計を可能とする新たな移植可能または注射可能な薬剤放出系を提供するものである。本発明は、一方のポリマーの分解産物を利用して、他方のポリマーからの活性化合物の放出を誘発するものである。さらに、活性化合物の遅延放出を、複雑かつ細かな製剤技術が必要な障壁系を使用することなく行うことができる。さらに本発明は、活性化合物と遅延分解性疎水性マトリクスポリマーとの間の水素結合形成に依存するものである。その特徴により、バースト上記で定義を起こすことなく、系に水溶性活性化合物を予想外に高い装填量で組み込むことが可能になる。一般に使用されるポリ乳酸、ポリグリコール酸またはポリジオキサノンなどのα-ヒドロキシ酸に基づくポリマーに水溶性ペプチドを組み込んだ場合に認められる挙動とは異なり、本発明の系においては、ポリマーマトリクスと活性化合物との間の水素結合介在相互作用の形成によって、極めて高い装填量であってもバーストが防止される。連続放出の形とは対照的に、パルス様式で患者に投与した場合により有効な薬剤が多くある。例えば、現在その種の投与系に関して非常に興味深い分野は単発免疫法である。免疫は、抗原のパルス投与によって最も良好に誘発されることから、追加免疫投与が必要である。破傷風トキソイドまたはgp120ADISワクチン用に現在開発中などの抗原用の投与系を患者に1回埋め込み、予めプログラムされた時間間隔で追加免疫用量を放出できるのであれば、特に第3世界諸国において、それが経済的かつ有効であると考えられることが提案されている。従って本発明は、本発明の製剤を患者に投与することで、処置を必要とする患者に対して生理活性化合物をパルス投与する方法をも含むものである。この種の薬剤投与は、ホルモンに基づく薬剤投与においても重要である。動物およびヒトの両方における妊娠および避妊薬物療法は連続的ではなく、それらの療法が月経周期および相当するホルモン増減と相乗的に働くことから、むしろ性質的には周期的である。それは、活性化合物の遅延および/またはパルス放出が適用可能と考えられる薬剤投与における別の方向性である。肥料、殺草剤および他の活性薬剤の持続性投与が必要な農業的利用分野が、本発明が重要であると考えられる別の領域である。好ましい実施形態の詳細な説明前記混合物における第1の第1のポリマーは、遅延分解性で比較的疎水性の生体適合性ポリマーである。生理活性化合物との水素結合相互作用形成を促進するため、第1のポリマーとして高官能性ポリマー系を選択することも必要である。最も広い実施形態においては、遅延分解性の疎水性生体適合性ポリマーは、化学構造の一部として水素結合部位を有するようないかなるポリマーであっても良い。最も好ましい実施形態では、その遅延分解性かつ疎水性のポリマーは、米国特許第5,216,115号およびWO第99/52962号これらのいずれの開示内容も、引用により本明細書に組み込まれるに開示のチロシン由来ポリアリレートに関するライブラリーから選択される。このライブラリーのものはいずれも、同じ高官能性構造基本形を共有するが、小さい構造的変化によって互いに区別される。主要基本形の官能基が、相互作用のための部位を提供する。その部位は、それの芳香環とペプチドの芳香環とのpiスタッキングまたはα-アミノカルボキシレート領域のペプチドにおける相当する基との水素結合である。構成員間の小さい構造的変化によって、これらの相互作用を微細に調整して、特定のタンパク質またはペプチドに適合させることができる。米国特許第5,587,507号のチロシン由来ジフェノール化合物およびWO第98/36013号のチロシン由来ジヒドロキシモノマー類から誘導することができるポリマーも好ましいこれらいずれの文献の開示内容も、引用により本明細書に組み込まれる。上記で引用のポリアリレート類以外の例として、米国特許第5,099,060号のポリカーボネート類、米国特許第4,980,449号のポリイミノカーボネート類、米国特許第5,912,225号のポリホスファゼン類およびポリホスホネート類、米国特許第5,242,997号のポリウレタン類などのポリウレタン類、米国特許第5,658,995号のランダムポリアルキレンオキサイドブロックコポリマー類、ならびに上記のチロシン由来ジフェノール化合物、チロシン由来ジヒドロキシ化合物および同様のペプチド類から誘導することができる広範囲の他のポリマー類などがある。上記の特許公開はいずれも、参照によって本明細書に組み込まれる。特に、チロシン由来ジヒドロキシ化合物の相当するポリマーは、チロシン由来ジフェノール化合物のポリマーを開示する上記のいずれかの特許のいずれかの方法によって製造することができる。特に好ましい第1のポリマーは、図1のポリアジピン酸デスアミノチロシルチロシンヘキシルエステルポリDTHアジペートy=4;R=ヘキシルである。重量平均分子量が約80,000~約200,000ダルトンであるポリDTHアジペートが特に好ましい。ポリマー混合物内で物理的に分散させることができる水素結合部位を有する生理活性部位を、放出用の生理活性化合物として用いることができる。水素結合部位の例としては、1級および2級アミン類、水酸基、カルボン酸基およびカルボキシレート基、カルボニルカルボキシル基などがある。天然および合成抗生物質、細胞毒性薬およびオリゴヌクレオチドなどの水素結合部位を有する活性化合物に本発明を適用することができるが、ペプチドおよびタンパク質などのアミノ酸由来薬剤が、この技術には最も適しているように思われる。本発明の組成物は、バーストおよび/または遅延効果を起こすことなく再現性の良い放出プロファイルを示す徐放デバイスを得るための従来の試みにおいて遭遇していた問題の一部を克服するものである。最も好ましい実施形態において活性化合物は、温和な酸性条件下で安定なペプチドである。本発明の組成物を含む製剤に好適なペプチド薬には、天然および合成のペプチド類、オリゴペプチド類、環状ペプチド類、ライブラリーで得られたオリゴペプチド類、ポリペプチド類およびタンパク質類、ならびにペプチド様作用物質および部分ペプチド類などがある。特に興味深いペプチド薬には、細胞表面糖タンパク質Iib/IIIaの拮抗薬であることから、血小板凝集を防止し、最終的に血塊形成を防止する血小板凝集阻害PAIペプチド類などがある。好ましいPAIペプチド類には、WO第90/15620号この開示内容は、引用により本明細書に組み込まれるに開示のPAIペプチド類などがあり、特には医薬的に有用である環状PAIヘプタペプチドであるインテグリリン商標図2である。ペプチド薬の場合、そのペプチドと第1のポリマーの間の相互作用によって、ペプチドの放出が阻害される。それらの相互作用は、水素結合と疎水性力から成る。これらの相互作用は、低pH条件下では弱まって、ペプチド放出を生じ得ることが発見されている。従って、それを行う一つの方法は、分解して酸性副生成物となる第2のポリマーを例えばポリグリコール酸-co-乳酸PGLAなどのマトリクスに混合するというものである。PGLA分解産物によってマトリクスのpHが低下することで、相互作用の中断およびその後のペプチド放出が生じる。放出の時期の制御は、この急速分解性ポリマーの初期分子量の選択、PGLAポリマー中での乳酸とグリコール酸のコポリマー比、ならびにコポリマーのキャッピングの選択によって容易に行うことができる。これらの要素全てが分解の速度論を決定することから、これらの要素を用いて、前記デバイスからの活性薬剤放出を制御することもできる。pH低下性酸性分解産物を生じる他の有用なポリマーには、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸およびポリヒドロキシ吉草酸のようなポリヒドロキシアルカン酸類などがある。留意すべき重要な点として、本発明は、第1のポリマーより相対的に親水性の高い第2のポリマーの選択に基づくものである。そこで、第1のポリマーの疎水性が高い場合、他の場合において通常であればやはり疎水性であると考えられるものであっても、相対的に疎水性の低いポリマーを第2のポリマーとして用いることができる。同様に、第2のポリマーの親水性が高い場合、他の場合において通常であればやはり親水性であると考えられるものであっても、相対的に親水性の低いポリマーを第1のポリマーとして用いることができる。従って、第1のポリマーが活性化合物と水素結合を形成し、第2のポリマーが第1のポリマーより親水性であって、分解して第1のポリマーからの生理活性化合物の放出を促進する分解産物を形成するのであれば、本明細書で挙げた2種類のポリマーを第1のポリマーとして用い、あるいは本明細書で挙げた2種類のポリマーを第2のポリマーとして用いて好適な組成物を製造することができる。通常の技術を有する者であれば、第1のポリマーの一方が第2のポリマーとして機能する組合せおよびその逆があることも理解できよう。本発明の組成物は、局所薬剤投与が望ましい用途、ならびに全身投与が望ましい状況で好適である。治療上有効な用量は、インビボまたはインビトロの方法によって決定することができる。本発明の特定化合物それぞれについて、個別の決定を行って、必要な至適用量を決定することができる。治療上有効な用量の範囲は当然のことながら、投与経路、治療目的および患者の状態によって影響される。各種の好適な投与経路に関しては、薬理学において公知の方法により、各薬剤について個別に吸収効率を求めなければならない。従って、至適な治療効果を得る上での必要に応じて、治療担当者が用量の力価測定を行い、投与経路を変更することが必要となる場合がある。有効用量レベル、すなわち所望の結果を達成するのに必要な用量レベルの決定は、当業者の裁量の範囲内である。代表的には化合物の投与は、相対的に比較的低いレベルから開始し、所望の効果が達成されるまで用量レベルを上昇させる。本発明の製剤からの薬剤の放出速度も、当業界における通常の技術の範囲内で変動させて、治療すべき治療状態に応じて有利なプロファイルを確認する。一般的な用量は、約0.001mg/kg~約1000mg/kg、好ましくは約0.01mg/kg~約100mg/kg、より好ましくは約0.10mg/kg~約20mg/kgの範囲となると考えられる。有利には、本発明の化合物は1日数回投与することができ、他の投与法も有用な場合がある。その組成物は、坐剤、埋込ペレット剤もしくは小シリンダ剤、エアロゾル、経口製剤ならびに軟膏、滴剤および経皮貼付剤などの局所製剤のような各種製剤を用いて、皮下投与、筋肉投与、結腸投与、直腸投与、経鼻投与、経口投与または腹腔内投与することができる。小単ラメラ小胞、大単ラメラ小胞および多ラメラ小胞などのリポソーム投与系も使用可能である。以下に記載の実施例は、本発明のある種の態様を説明するものであるが、本発明はこれらに限定されるものではない。注記しない限り、部およびパーセント表示はいずれも重量基準であり、温度はいずれも摂氏単位である。PAIペプチドは、シーオーアールセラピューティックス社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州所在CORTherapeuticsofSouthSanFranciscoCaliforniaから入手した。ポリDTHアジペートは、米国特許第5216115号の実施例2に記載の手順に従って製造した。使用したポリマーは、80~120kDaの範囲の分子量を有していた。PEGは、アルドリッチケミカルズ社、ウィスコンシン州ミルウォーキー所在AldrichChemicalsofMilwaukeeWisから入手した。D,L-PLAおよびポリs-カプロラクトンは、それぞれメディソルブMedisorbおよびアルドリッチから購入した。いずれも分子量は100kDaであった。薬剤およびポリマーは、それ以上の精製を行わずに使用した。溶媒はHPLC用であり、フィッシャーサイエンティフィック社、ペンシルバニア州ピッツバーグ所在FisherScientificofPittsburghPaから入手した。実施例インテグリリン抗血栓薬注射剤をモデルペプチドとして選択して、前記材料の薬物投与について調べた図2。この化合物は、非常に強力な糖タンパク質IIb/IIIa拮抗薬である、水に容易に可溶である合成環状ヘプタペプチドである。この化合物は、インビボで良好に抗血栓挙動を示しており、この特性を有するポリマーマトリクスにこのペプチドを組み込むことで製造されるデバイスは、多くの有用な心血管用途を有する。さらにこのポリマーはRGD配列を有することから、このペプチドを含むデバイスは、組織再生の足場における構成要素として利用可能である。インテグリリンおよびポリDTHアジペートの混合物は、米国特許第5,877,224号に記載されている。その特許では、共沈溶融-加圧法を用いてこれらの成分からフィルムを形成することで、PBS中37°Cでインキュベートした際にごく微量のペプチドしか放出しない試料が得られたと記載されている。ペプチドは容易に水に溶けることから、これは予想外であった。放出デバイスの作製30重量のペプチドおよび70重量のポリマーを含む共沈物から、圧縮成型フィルムを作製した。この共沈物は、ペプチド0.15gをメタノールHPLC用5mLに溶かし、ポリマー0.35gを塩化メチレンHPLC用5mLに溶かし、それら2種類の溶液を混合して透明溶液を形成することで得た。そうして得られた溶液を、-78°Cに維持した撹拌エチルエーテル100mLに滴下した。白色のスポンジ状沈殿が生成し、焼結ガラスフィルターを用いてそれを濾過し、真空乾燥した。乾燥後、共沈物を約34.5MPa5000psi下に90°Cで圧縮成型した。厚さ0.1mm±0.02mmのフィルムが得られた。デバイスの特性決定10mLメスフラスコ中、フィルム10.0mgをTHFHPLC用1.0mLに溶かし、10mLの線までPBSリン酸緩衝生理食塩水を加えることで、ペプチド装填量を求めた。混合物を最低6時間撹拌し、次に水系媒体中の薬剤含有量をHPLCによって分析した。PLAまたはポリs-カプロラクトンからなるサンプルの特性決定を行う場合には、THFに不溶であるため、THFに代えて塩化メチレンを用いた。ペプチド放出試験フィルムをカットして、複数の0.5cm2正方形とした。サンプルの平均重量は21mg±5であった。各試料を個別に、リン酸緩衝生理食塩水pH7.4、37°C10mLの入った20mL容量のガラス製シンチレーションバイアルに入れた。使用した標準PBS溶液は、10mMリン酸緩衝生理食塩水138mMNaClおよび2.7mMKClからなるものであった。各時点で緩衝液を変え、HPLCによってペプチド放出を分析した。各時点につき最低3個のサンプルとし、各サンプルは異なるフィルムから得たものとした。HPLC法では、3cmのC-18パーキンエルマーPerkinElmerカートリッジカラムを用い、移動相には、流量1mL/分で80水/20アセトニトリルから開始して、5分間で最終的に75水とする勾配を設けた。アセトニトリルと水のいずれにも、0.1体積のトリフルオロ酢酸を含有させた。カラムは、PBSに溶かした既知濃度のペプチドを用いて較正して較正曲線を得て、各サンプルの緩衝液に含まれるインテグリリンを、その曲線を用いて定量した。使用したHPLCポンプは、パーキンエルマーの410LCポンプシリーズであり、使用した検出器は、280nmに設定されたPELC-235ダイオードアレイUV-VIS検出器であった。収集データは、PEネルソンPENelson3000シリーズクロマトグラフィーデータシステムを用いて解析した。指定された時点でサンプルを取り出し、脱イオン水で洗浄し、キムワイプKimwipeティッシュで拭き取り、質量保持試験および分子量保持試験での真空乾燥用にバイアルに入れるか、あるいは熱重量分析TGA水取り込み試験に用いた。ゲル浸透クロマトグラフィーGPCまたはTGA試験に必要なかったデバイスは、乾燥後に有機溶媒に溶かし、ペプチド含有物を抽出して、全ての装填ペプチドが計算されるようにした。熱重量分析TGAを用いた含水量測定インキュベートしたサンプルによって吸収された水分量を、TGA951TAインスツルーメント社TAInstrumentsIncを用いて測定した。サンプルを緩衝液から取り出し、脱イオン水で洗浄して緩衝剤塩を除去し、キムワイプティッシュで拭き取って乾燥させた。試料から少量のサンプル10mgを切り取り、アルミニウム製のTGA皿に乗せた。サンプルを、窒素気流下に室温から225°Cまで10°C/分の速度で加熱した。サンプルを室温から150°Cまで加熱しながら、サンプルの重量損失によって水分取り込みを測定した。微量天秤を用いた含水量測定所定の時点で、サンプルを緩衝液から取り出し、脱イオン水で洗浄し、拭き取って乾燥させた。電子天秤を用いて、直ちにサンプルの湿重量Wwを測定した。サンプルを少なくとも2週間真空乾燥して恒量とした後、乾燥重量Wdを測定した。水分取り込み量を、下記式水分取り込み=[Ww-Wd/Wd]×100から計算した。ペプチドの融点およびポリマーフィルムでの溶融転移を測定するための示差走査熱量測定分析DSCDSCを用いて、ペプチドの融点を測定した。ペプチド約2mgのサンプルを秤取し、波形のアルミニウム製DSC皿に入れて密封した。サンプルを窒素気流下に室温から200°Cまで12°C/分で加熱した。DSCを用いて、30重量のペプチドを含むポリマーフィルムに関連する溶融転移があるか否かも確認した。フィルム6mgという量のサンプルを波形DSC皿に入れて密封し、窒素気流下に200°Cまで12°C/分で加熱した。融解の急峻な吸熱が起こった温度によって、サンプルの融点を求めた。データはいずれも、初回測定の温度記録図を用いて解析した。各実験では、空のアルミニウム皿を基準として用いた。使用した特定の装置は、DSC910TAインスツルメンツであり、装置は使用前にインジウム融点=156.61°Cで較正した。質量保持パーセント試験サンプルの質量保持パーセントを、次のようにして計算した。サンプルをPBSインキュベーション媒体から取り出し、脱イオン水で洗浄し、キムワイプティッシュで拭き取った。それを新品のバイアルに入れ、2週間真空乾燥した。その乾燥期間後、それを秤量したWd。インキュベーションおよび乾燥後の重量を、初期重量W0と比較した。質量保持パーセントの計算式は質量損失=[W0-Wd/W0]×100である。GPCを用いたポリマーの分子量測定フィルムサンプルをTHFに溶かして濃度5mg/mLとし、25μmガラス繊維フィルターで前濾過してから、0.45μmのPTFEフィルターで濾過して、GPCへの注入に供した。ポリDTHアジペートサンプルの分子量を、1セットの単分散ポリスチレン標準ポリマーラボラトリーズ社、チャーチステーション、英国所在PolymerLaboratoriesLtdChurchStationUKに対して計算し、それ以上の補正は行わなかった。GPCクロマトグラフィーシステムは、ウォーターズWaters510HPLCポンプ、ウォーターズ410示差屈折計検出器およびデータ処理用のデジタルベンチュリDigitalVenturiの466PCラニングミレニアムPCrunningMilleniumウォーターズ社ソフトウェアから成るものであった。長さ30cmの2本のPL-ゲルカラム孔径103および105Å;英国ポリマーラボラトリーズ社をTHF1mL/分の流量で直列で動作させた。PLAまたはPCLからなるサンプルをTHFではなく塩化メチレンに溶かし、それ以外についてはポリDTHアジペートサンプルの場合と同様にして分析を行った。ポリDTHアジペート/PLA混合物フィルムの作製D,L-PLAおよびポリDTHアジペート混合物からなる放出デバイスは、30重量のペプチドを含有していた。50/50D,L-PLA/ポリDTHアジペートの場合、インテグリリン0.15gをメタノール5mLに溶かし、PLA0.175gおよびポリDTHアジペート0.175gをそれぞれ塩化メチレン2.5mLに溶かした。溶液を全て混合して、透明溶液を形成した。この時点からは、ポリDTHアジペートデバイスの作製における手順に従った。75/25PLA/ポリDTHアジペートからなるデバイスは、インテグリリン0.15gをメタノール5mLに溶かし、D,L-PLA0.26gを塩化メチレン4mLに溶かし、ポリDTHアジペート0.09gを塩化メチレン2mLに溶かし、その3種類の溶液を混合することで作製した。その時点からは、ポリDTHアジペートデバイスの作製に関する手順に従った。フィルムの作製および酸性条件下でのインキュベーションこれらのフィルムについては、pH計で測定したpHが6.8から2に降下するまで、撹拌ペプチド/メタノール溶液に濃HCl12Mを滴下した以外、上記のものと同じ作製プロトコールに従った。pH2で行ったインビトロインキュベーション試験における酸性媒体は、次のようにして調製した。標準PBS溶液を用い、所望のpHが得られたことをpH計が示すまで、PBSに12MHClを滴下した。イオン強度条件を変化させながらのフィルムのインキュベーション3セットのフィルムを上記の標準法で製造し、1セットをHPLC水中でインキュベートし、そのまま用いた。もう1セットは標準PBS緩衝液中でインキュベートした。最後の1セットは、2倍濃度のPBS溶液であるPBS緩衝液中でインキュベートした。ポリDTHアジペートのガラス転移温度に対するペプチドの効果数セットのフィルムのガラス転移温度を、動的機械分析DMAを用いて測定した。測定は、撓み曲げ変形モードの応力で、TAインスツルーメンツ社からのDMA983で行った。各組のフィルムには、ペプチド0重量~30重量の範囲の異なる重量パーセントのペプチドを含有させた。大きさ約5×10×1mmのサンプルをフィルムから切り出し、軽量クランプを有する装置の較正を行った後に、軽量クランプを用いて装置に載置した。液体窒素冷却補助器具を用いて、サンプルを-30°Cまで冷却し、4°C/分の速度で70°Cまで加熱した。周波数を1Hzに固定し、振幅を1mmとした。ガラス転移をE′′ピークの最大値から読み取った。インテグリリン/PLGA/ポリDTHアジペート混合物フィルムの形成ペプチド0.075gをメタノール2mLに溶かし、PLGA0.21gを塩化メチレン3mLに溶かし、ポリDTHアジペート0.21gを塩化メチレン3mLに溶かすことで、インテグリリン/PLGA/ポリDTHアジペートからなるデバイスを製造した。PLGA溶液をポリDTHアジペート溶液にピペットで加えた。インテグリリン溶液を、混合ポリマー溶液にピペットで加えた。得られた透明溶液を、冷ジエチルエーテル-78°Cに滴下した。それ以降の手順は、上記のものと同様である。混合フィルムの特性決定ポリマーマトリクスを溶解させるのにTHFに代えて塩化メチレンを用いて、上記の方法と同様にしてフィルムのペプチド装填量を測定した。ポリマー混合フィルム中のPLGA/ポリDTHアジペート比について、核磁気共鳴NMRを用いて特性決定した図21。各フィルムについて、PGAメチレンプロトンの積分のPLAメチンプロトンの積分に対する比を、理論値と比較した。実験比と理論比が互いに10以内であることを確認した。次に、PGAメチレンプロトン4.8ppmの積分値を、4.1ppmのポリDTHアジペートのメチレンプロトンの積分値と比較した。この4.1ppmのピークは、懸垂鎖におけるエステルの酸素に隣接するメチレン基のプロトンに関連するものである。ポリDTHアジペートの上記プロトンに対するこれらPGAプロトンの理論比は3.86である。全てのフィルムについて、このように特性決定を行い、いずれの場合においても、PGA/ポリDTHアジペートの比の誤差は、PGA/PLAの比の誤差の範囲内であった。NMR分析については、フィルム20mgを重クロロホルム0.75mLに溶かした。その溶媒を選択したのは、ペプチドがそれに不溶であるために、NMRでは検出されないことで、スペクトルが不必要に複雑になることが防止されると考えられたからである。サンプルは、バリアンVarian200MHz装置を用いて分析した。積分は、256回の測定後におけるスペクトルについて行った。サンプルについての積分を3回繰り返して正確さを確保し、積分値の平均を3回の値の平均から得た。SEMを用いたフィルム表面の特性決定洗浄および真空乾燥後に、サンプルをSEMのスタブに取り付け、7リムの金パラジウムを用いて、バルツァーズBaltzersSCD004スパッタコータでスパッタコーティングした。それを、20kV、倍率=90倍のアムレーAmray18301SEMで観察した。DSCを用いたポリマー混合物の混和性測定DSC910TAインスツルーメンツ、DEを搭載したサーモアナリシスThermoAnalysis2100システムを用い、使用前にインジウム融点156.61°Cで較正した。重量既知の約4mgポリマーを、2個の波形アルミニウム製皿の間に密封した。そのサンプルについて、2連続加熱走査を行って、全サンプルについて同じ熱履歴となるようにした。最初の走査では、サンプルを10°C/分の速度で110°Cまで加熱した。温度を10分間等温に維持した後、液体窒素を用いてサンプルを-20°Cまで冷却した。この段階によって、サンプルの熱履歴が消去される。2回目の走査は、その後直ちに、10°C/分の速度で行った。2回目の走査で、ガラス転移に関連する吸熱段階転移の中点として、ガラス転移温度を測定した。ポリDTHアジペートを用いたインテグリリンの製剤5、10、15、20および30重量の装填量のペプチドを含むポリDTHアジペートからなるフィルムを製造した。最も高い装填量を含むフィルムであっても、透明かつ可撓性であった。それとは対照的に、同じペプチド装填量を含むD,L-PLAまたはポリE-カプロラクトンPCLのいずれかからなるフィルムは不透明で脆かった。ペプチド/ポリアリレートフィルムの透明さは、ペプチドおよびポリDTHアジペートの場合の相分離が十分に低下して、分離したポリマー領域とペプチド領域が非常に小さいために光の散乱が起こらないことを示していた。それは、D,L-PLAおよびペプチドまたはPCLおよびペプチドの混合物と比較して、ペプチドおよびチロシン由来ポリマーの適合性が高くなっていることを示すものであった。ペプチドといずれかの脂肪族ポリエステルからなるフィルムと比較した、ペプチドを含むポリアリレートフィルムの可撓性は、PLA52°Cと比較して低いポリアリレートのガラス転移温度37°CおよびPCLと比較したポリアリレートの非晶質性によって説明することができる。37°CおよびpH=7.4でインキュベートしたフィルムからのペプチドの放出この実験では、シミュレーションした生理条件下での各種ポリマーマトリクスからのペプチドのインビトロ放出挙動を観察した。予想に反して、両方の脂肪族ポリマーが、3時間以内にペプチドを完全に放出した。それとは対照的に、ポリDTHアジペートは、同一条件下において7日間の期間でごく微量の放出しか示さなかった図3および4。インキュベートしたサンプルの質量保持パーセント30重量のペプチドを含むポリDTHアジペートサンプルは、7日間のインキュベーション期間で平均5の重量を失った図5。それとは対照的に、ポリDTHアジペートサンプルと同じ方法で形成したD,L-PLAサンプルは、2時間以内でその重量の約30を失った図6。従って、これらの実験の結果は、HPLCから得られたデータと一致していた。30重量のペプチドを含むポリDTHアジペートフィルムの場合、HPLCデータは、これらのフィルムが装填ペプチドの10未満を放出したことを示している図3。これは、77日間の期間で、サンプル全体の質量損失が約3であることを意味している。これは、これらのサンプルについて認められた平均5の質量損失と一致している。非常に小さい質量損失を示したポリDTHアジペートサンプルとは対照的に、PLAサンプルはかなりの質量損失を示した。これらのフィルムサンプルも、30重量のペプチドを含有していた。HPLCデータは、これらのサンプルが、それに含まれていたペプチドを全て放出したことを示しており、それは3時間のインキュベーション期間で30の重量損失を意味する。その結果得られた質量保持パーセントデータは、これらのサンプルについては約70であることから、HPLC結果と一致している。さらに、PLAマトリクスおよびPCLマトリクスによってペプチドは非常に急速に放出されたことから、そのペプチドはポリマー鎖を通り抜けて容易に拡散するほど小さいものであり、フィルム内の深部に存在するペプチド分子を放出させるのに、多孔質構造および相互連絡通路を形成する必要はないと言うことができる。従って、ポリアリレートからのペプチドの放出における障壁は小さいはずである。インキュベーション時のポリマーフィルムによる吸水の測定30重量のペプチドを含むポリDTHアジペートの試料は、最初の日で約10重量の水を吸収し、全インキュベーション期間にわたりその膨潤レベルを維持した。さらに、ペプチドが存在することで、ポリマーの吸水量が約3重量から約10重量まで増加した図8。ポリDTHアジペートに対するペプチドの含有装填量が同じであるPLAおよびPCLのサンプルも、それらをインキュベートした2~3時間で、その範囲内の水を吸収した図7。前記ペプチドを用いた同じ方法で形成した場合の、上記3種類のポリマー間の水取り込みが類似していることは、吸水がペプチド放出における決定因子ではないことを示している。ポリマーの分子量に対するペプチドの影響ペプチド上のアミノ酸残基の1つはアスパラギン酸である。アスパラギン酸はポリマーをペプチドと混合した時にポリマーに酸に導入することのできる部分である。従って、ポリマーの分子量分解について調べ、純ポリDTHアジペート図9の分解速度と比較した。他の対照標準として、10重量のPEGと90重量のポリDTHアジペートからなるサンプルもこの試験で使用した。これらのサンプルはTGAで測定すると20重量の水を吸収するからである。これは30重量ペプチドを含むポリマーサンプルが吸収する水の量よりも多く、このため、このサンプルはポリマーの分子量分解への添加水の効果に対する対照標準とすることができる。ペプチドを含むサンプルの分解はペプチドを含まないサンプルよりも速いという結果が得られた。2ヶ月後、30重量ペプチドを含むポリDTHアジペートは40、分子量が減少した。対照的に、ペプチドを含まないサンプルではこの期間中ほとんど分子量が減少しなかった。さらに、ポリマーマトリクス中の水の量が増加しても分子量減少速度には全く影響しなかった。PEGを含むポリDTHアジペートサンプルと純サンプルとの間には分子量減少速度に有意の差はあるとは考えられない。そのため、ポリマーの分解に対し触媒効果を有するのはペプチドの存在であると結論づけることができる。しかしながら、分解速度の増加はペプチドの放出に影響するほど大きくはなかった。ペプチドの放出に対する媒体のイオン強度の影響30重量ペプチドを含むポリDTHアジペート膜を標準的な方法で調製した。インキュベーション媒体のpHは約7に維持したが、放出媒体のイオン強度は変化させた。HPLC水中、標準PBS溶液10mMの燐酸緩衝生理食塩水、138mMのNaCl、2.7mMのKCl中、および2倍濃度で調製したPBS緩衝液20mMの燐酸緩衝生理食塩水、276mMのNaCl、5.4mMのKCl中で、ペプチドのインビトロ放出を測定し、比較した図10。HPLC水中でのペプチドの放出速度は燐酸緩衝液中での放出速度の4倍であった。これらの結果からペプチドとポリマー間の疎水性相互作用、例えばペプチドのトリプトファン環のポリマーのフェノール環とのpiスタッキングが証明された。イオン強度の低い酸性条件における30重量ペプチドを含むポリDTHアジペート膜のインキュベーション30重量ペプチドを含むサンプルを標準条件下で調製し、0.1v/vのトリフルオロ酢酸を含むpHが2.2のHPLC水中でインキュベートした。ペプチドの放出速度は、インキュベーション媒体のpHとイオン強度の両方を減少させた方が、一方の因子だけを減少させた場合よりも大きくなった図11。pHのみを低くすると、3日間で12の装填ペプチドが放出された。イオン強度のみを減少させると、3日間で8の装填ペプチドが放出された。両方のパラメータを同時に減少させると、この期間内に20の装填ペプチドが放出された。これらの条件では放出が向上したが、ペプチドはD.L-PLAの場合のようにどっと放出されるdupmpedoutことはなく、ペプチドはポリDTHアジペートマトリクスから連続して拡散された。しかしながら、これらの条件下での水の吸収は予想外であった図12。インキュベーション第1日目のうちに、これらのサンプルは標準PBS溶液中でインキュベートしたサンプルの3倍膨らみ、第7日目までにはこれらのサンプルは7倍膨れた。図9から、純粋なポリマーそれ自体は標準PBS溶液中でインキュベートされても、最初の7日間に水の吸収は増加しなかったと判定することができる。さらに、このポリマーはかなり疎水性であるので、インキュベーション条件を変えても純粋ポリマーが取り込みする水のパーセンテージを増大させることはないと予測される。このため、このように多くの水を取り込みできるのはマトリクス内のペプチドによると推論することができる。そのため、標準PBS溶液中でのインキュベーションはペプチドと水との相互作用に比べポリDTH-アジペートとの相互作用に有利である。このように、これらの条件で何週もインキュベーションしても最初の10を超える膨張の増大はなかった。しかしながら、ペプチド-ポリマー相互作用が弱められる条件では、インキュベーション媒体のpHおよびイオン強度の両方共が低くされ、ペプチドが水と相互作用する駆動力がより大きくなり、その結果より多くのペプチド分子が水に暴露され水と相互作用するため膜の膨潤が着実に増大した。酸性度を増大させイオン強度を低下させるこれらの条件下では、膜サンプルはまた直ちに不透明になった。ポリDTHアジペート膜からのペプチドの放出が増大した状況下でのみ見られるこの不透明さは膜サンプルの水吸収能力の増大と関連すると考えられる。ペプチド-ポリマー相互作用の強さが弱くなると水の吸収能力が増大し、不透明になるがこれはポリマーマトリクス内の自由体積を占める水により起こるものである。脂肪族ポリマー類の場合、ペプチドの放出を完了するには10重量の水の吸収で十分であった。しかしながら、マトリクスがPLAの代わりにポリDTHアジペートからなるサンプルは70重量の水を吸収し、まだPLAおよびPCLマトリクスが10重量の水の吸収で放出したのと同じ放出ダンピング:dumping様式ではペプチドを放出しなかった。ペプチドとチロシン由来ポリアリレートの相互作用は、各繰り返しユニットのアミド結合が同じユニット内の垂下エステルに近接するポリマーの独特の構造から生じる。この領域全体は1つの官能基、α-アミドカルボキシル基と考えられ、ペプチド上の様々な官能基の水素結合用のポケットとして機能することができる。他のチロシン由来ポリマー類を用いたペプチド-ポリマー相互作用ペプチドの拡散のためにいくつかの他のポリマーのスクリーニングを行った。これらのスクリーニング実験において使用したペプチドの装填量はポリDTHアジペートと共に使用する場合よりも低かったが、妨げる相互作用が無ければ容易に水に溶けるペプチドの放出を期待するには十分であった。ポリDTHジオキサオクタンジオエートは調べた最初の代替物であるが、構造的に関連するポリマーであった。このポリマーはDTH繰り返しユニットを含み、このためポリDTHアジペートと類似している。しかしながら、このポリマーはアジピン酸の代わりにジオキサオクン二酸図13とDTHとを重合させることにより合成される。これらの膜からはペプチドは放出されなかった図14。これによりポリマーの親水性を増大させてもペプチドの放出には影響がないことが示された。膜の水取り込みもまた測定すると、10重量のペプチドを含む膜では5重量、20重量のペプチドを含む膜では10重量であることがわかった。これにより、ペプチドの装填量はこれらの試料では低かったが、30重量のペプチドを含むポリDTHアジペート試料では20重量のペプチドを含むポリDTHジオキサオクタンジオエートとバルクで同じ量の水が存在することが示される。さらに、このポリマーの構造は、フレキシブルなバックボーンユニットの構造の点においてのみポリDTHアジペートとは異なる。このポリマーの放出挙動はポリDTHアジペートの放出挙動と類似しており、2つのポリマー間の構造的な違いはバックボーンユニットの構造にのみ存在しているので、DTHユニットはペプチド-ポリマー相互作用において最も不可欠なものであると結論することができる。他のポリマー構造、ポリDTE0.95-co-PEG10000.05カーボネートをポリDTHアジペートの代わりとした。このポリマーはデアミノチロシルチロシンエチルエステルDTEとポリエチレングリコールPEGとのランダムコポリマー図15であり、基本のデアミノチロシルチロシンアルキルエステル繰り返しユニットをポリDTHアジペートと共有するが、バックボーンには炭酸結合を含むがエステルは含まず、二酸成分を含まない。二酸成分が無いこと、チロシン由来繰り返しユニットが類似性することによりさらに、ペプチドがこのポリマーから拡散できない場合、これらの相互作用において関係するのはチロシン由来成分であって二酸ではないことが確認された。10重量のペプチドを含む膜を調製した。これらのポリマーからのペプチドの放出はまた最小であった図16。これらのサンプルの水の取り込みについても測定した。インキュベーションの期間中、膜サンプルは10重量の水を吸収した。また、これはPLA、PCLおよびポリDTHアジペートサンプルが吸収した水の量と同じである。これらの膜中のペプチド装填量は低いが、水の取り込み量はこれらの他のポリマー系のサンプルと同じくらい多いことは驚きに値しない。というのは、PEGはこれのサンプルの親水性を増大させるからである。これらのデータからDTRユニットを含むポリマー類からのペプチドの放出が最小であるのは、チロシン由来の繰り返しユニットがポリマーからペプチドが拡散しない原因となる構造であることによることが証明される。ポリDTEカーボネートもまた15重量のペプチドを用いて調合した。このポリマー構造は炭酸結合を有するデアミノチロシルチロシンエチルエステルのみを含みPEGを含まない。これらの膜もまたチロシン由来ポリアリレート類と同じ挙動を示した図17。これらの膜の水取り込みもまた測定すると、インキュベーション期間中に6重量であることがわかった。ポリDTHアジペート/D,L-PLA混合物からのペプチドのインビトロ放出ポリDTHアジペートからのペプチドのインビトロ放出試験では、約5の装填ペプチドの放出が得られた。同じ条件下でのD,L-PLAマトリクスからのペプチドの放出では3時間以内に装填ペプチドが完全に放出された。D,L-PLA/ポリDTHアジペート混合物膜からのペプチドのインビトロ放出試験では、D,L-PLAからの放出に対しペプチドの放出は中程度のバーストで、延長された。ポリDTHアジペート:D,L-PLAの比が1:1のサンプルでは5日以内に全ペプチド装填量の18が放出された。D,L-PLA:ポリDTHアジペートの比が3:1のサンプルでは5日以内にペプチド装填量の40が放出された。どちらの製剤でも、最初のペプチドのバーストはD,L-PLA膜からのバーストに比べ減少した。さらに、放出はD,L-PLAマトリクスの場合の元々の3時間から延長された。モデル水溶性ペプチドのパルス送達:ペプチド、PLGA、およびポリDTHアジペートから成るフィルムの調製PLGAはポリ乳酸とポリグリコール酸から成る再吸収可能なコポリマーであり、分解プロセス中に酸性化合物を放出することが知られている図19。3セットの混合物膜を調製した。膜は全て、15重量±2のペプチドと、42重量のアンキャップドPLGAと、43のポリDTHアジペートとを含んでいた。違いは含まれるPLGAの分子量のみであった表1。混合物膜の視覚検査ペプチド/ポリDTHアジペート膜の透明な性質とは対照的に、これらの膜は均一に不透明であり、前述したペプチド、D,L-PLAおよびポリDTHアジペートから成る混合物と非常に類似し、ペプチド/ポリDTHアジペート膜に比べペプチド/PLGA/ポリDTHアジペートの相分離が増大することが示唆された。さらに、これらの膜はPLGA無しで作製された膜に比べ可撓性が低かった。予測された通り、脆性はPLGAの分子量の減少に伴い増加した。混合物膜の示差走査熱量測定分析PLGAとポリDTHアジペート混合物を含む膜全ての温度記録図で2つのガラス転移温度が明らかになり、これらの混合物膜に存在する相分離が確認された。約34°Cで生じる低いTgはポリDTHアジペートドメインと関連する。49°Cのより高いTgはPLGAドメインに対応する。2つのガラス転移の出現により、2つのポリマーは混和できず、そのため膜中にPLGAとポリDTHアジペートの別個のドメインが存在することが示される。200°Cまで加熱したサンプルでは対応する温度記録図において純粋ペプチドの特徴を示す吸熱はないことに注目すべきであり、これらのマトリクスでもペプチドは別個の結晶ドメインには存在しないことが示される。ポリDTHアジペート/PLGA混合物膜マトリクスからのペプチドの放出PLGAおよびポリDTHアジペート混合物の膜サンプルを37°C、PBS中でインキュベートした図20。予測通り、小さなバーストがあった。このババーストのサイズはPLGAの分子量と関連すると考えられる。一般に最も低い分子量のPLGAを含むサンプルは最も高い分子量のPLGAを含むサンプル装填ペプチドの6より大きなバースト装填ペプチドの11-18を示した。しかしながら、この様式では20重量を超える装填ペプチドを放出したサンプルはなかった。分子量の減少とバーストとの間のこの相関の原因はおそらく、分子量の低いポリマー中に存在する末端基の数が分子量の高いポリマーに比べ多いため、分子量の低いポリマーは分子量の高いポリマーよりも親水性が高いことであろう。そのため、分子量の低いポリマーはペプチドに対しより高い親和性を有する。分子量が増加するに伴い、親水性は減少し、最初の放出がより小さくなる。放出期間の間の遅滞時間はまたPLGAの最初の分子量との直接の関係を明らかにした。最も低い分子量のPLGAを含む膜に関連する遅滞時間は5日未満であった。さらに、遅滞時間後のペプチドの放出はかなり急速であった。装填ペプチドは全て12日で放出され、その大部分が約4日以内に放出された。25kDの分子量のPLGAを含むサンプルは18日から26日まで変動する遅滞時間を示したサンプルのほとんどが約18日の遅滞時間を示し、1つのサンプルのみが26日の遅滞時間を示した。遅滞期後のペプチドの放出はまたかなり迅速でペプチドの全装填量が約5日以内に放出された。最も高い分子量のPLGA63kDaを含むサンプルは27から34日までの遅滞時間を示した。サンプルのほとんどが27日の印の周りに集中した。遅滞時間後放出は迅速になったが、分子量の低いPLGAを有するサンプルほど迅速ではなかった。これらのサンプルは約10日の期間で装填ペプチドを放出した。遅滞期間中に、装填ペプチドの2未満が混合物膜から浸出した。これにより、製剤は真のバリヤを含んでいないが、遅滞期間中のペプチドの放出を防ぐのにペプチド-ポリマー相互作用のみをあてにしており、このシステムはバリヤ技術と同じようによく機能することが示される。対照標準として、15重量のペプチドを含むがPLGAを含まないポリDTHアジペートのサンプルを調合した。これらのサンプルはインキュベーション期間中ほとんどペプチドを放出しなかった。PLGAが酸性副産物を形成するのに十分なほど分解するのに必要な時間により遅滞時間の長さが制御される。最初の分子量が低いPLGAを含むサンプルでは臨界分解期間に到達するのに必要な時間が短い。そのため、分子量が最も低いPLGAを含むサンプルは最も短い遅滞時間を有し、最初の分子量が最も大きなサンプルでは放出前の遅滞時間が最も長かった。最初の分子量が最も大きなPLGAを含むサンプルはまた遅滞時間後の放出速度が最も遅かった。ペプチドを放出するのに十分な濃度の酸性副産物がポリマーマトリクス中に存在するが、その濃度は最初の分子量の低いポリマーを含むサンプルと同じレベルには到達しなかった。そのため、相互作用を弱める効果が弱く、ペプチドの放出が遅くなる。インキュベーション媒体のpHのモニタリングインビトロペプチド放出実験中に、緩衝液交換中の各時間点でインキュベーション媒体のpHをモニタした。対照標準として、15重量のインテグリリンINTEGRIRLIN、登録商標を含むポリDTHアジペート膜を同様にインキュベートし、pHを測定した。PLGA12,000のサンプルを9日間pH7.4に維持した。この期間後、これらのサンプルの緩衝液のpHは徐々に減少し、インキュベーション期間の終わりには緩衝液のpHは7.0に到達した。pHの最も鋭い低下は正確にペプチドの放出の最も鋭い増加を反映した。PLGA25,000のサンプルの緩衝液のpHはインキュベーションの最初の15日間は7.4であった。この期間後、緩衝液のpHは7.2となりこのpHが21日まで続き、その時に最も低いpH6.9となった。インキュベーション期間の残りの間、緩衝液のpHは7.0と7.2との間で揺れ動いた。最も高い分子量のPLGAを含むサンプルの緩衝液のpHは32日目まで生理学的なpHに維持された。この点でpHは7.0まで降下し、インキュベーション期間の残りの間、緩衝液のpHは7.0と7.3との間で揺れ動いた。緩衝液のpHの降下とペプチドの放出は一致して起きた。というのはサンプルのインキュベーション中、膜中のPLGA相では分子量分解プロセスが始まり、酸性分解生成物がマトリクスのバルク内に蓄積したからである。結局臨界酸濃度に到達すると、ペプチド-ポリマー相互作用は弱まり、ペプチドが放出された。しかしながら、水溶性分解生成物もまたマトリクスから拡散し、ペプチドと酸性分解生成物とが共に拡散同時拡散する。この同時拡散効果のため、緩衝液のpHの降下はペプチドの放出と一致する、あるいはペプチドの放出が開始して後短い時間内で起こる。混合物膜の質量保持パーセントペプチド、PLGAとポリDTHアジペート混合物から成るサンプルをインキュベーション後に水洗し、乾燥させ、その後に計量した。これらのサンプルの質量保持パーセントはすべて60から70の間表2であった。ペプチドのみが放出された場合、質量保持パーセントは約85であろう。質量損失が15を超えるという事実からいくらかの分解が起こっていることが示唆される。ペプチドとポリDTHアジペートのみを含む膜は有意の質量損失を示さなかったので、これらの混合物から失われた成分はPLGAであり、これは分解して水溶性オリゴマーとなった。混合物膜の質量保持パーセントこれらの混合物サンプル中のポリDTHアジペートの分子量もまた調べた。乾燥後、分子量を求めるためにGPCを用いて膜サンプルを分析した。対照標準として、15重量のペプチドを含むポリDTHアジペート膜もPBS中でインキュベートし、分子量保持パーセントをPLGAを含むサンプルと比較した。分子量保持パーセントを計算するために、インキュベーション後の膜の分子量を、膜を調製するのに使用した初使用のポリDTHアジペート100kDaの分子量に対し正規化した。初使用のポリマーを使用し、通常行うインキュベーション前の膜の分子量を使用しなかった。というのは混合されたPLGAでは人為的に低分子量部分の比率を増大させることにより、ポリDTHアジペートの分子量に対する真の値が著しく変動することがあるからである。その影響は膜をインキュベートする前の方がその後よりも大きかった。というのはインキュベーション中にPLGAは分解してオリゴマーとなり、インキュベーション後の膜のGPCトレースの主ピークにより表される分子量データは、大体はインキュベーション前と比べ、PLGAの分子量を含まないか、あるいはPLGAの分解部分を含むからである。その結果、データを初使用ポリマーに対し正規化することにより、インキュベーション中のポリDTHアジペートの分子量の変化が追跡されるが、PLGA混合物の分子量の変化は追跡されない表3。混合物膜の分子量保持パーセントとペプチドの放出との間には何の相関も見られなかった表3。PLGAの2つの分子量の低いポリマーを含むサンプルセットはPLGAを含まない対照標準膜と同じ程度まで分解した。しかしながら、PLGAを含む膜はペプチドを放出し対照標準は放出しなかった。そのため、ポリDTHアジペートの大規模な分解は起こらなかった。これはペプチドの放出の原因となる機構ではない。インキュベーション後の混合物膜表面の走査電子顕微鏡SEM観察15重量のペプチドを含むポリDTHアジペート/PLGA12000膜のインキュベーション中の表面形態の変化をSEMを用いて調べた。インキュベーション前後の表面形態の比較から、表面は元々比較的平滑であるが、かなり多孔性であることが示された。16日のインキュベーション期間後、表面はずっと粗くなりインキュベーション前に見られた平滑さとは似つかなくなった。さらに、多くの亀裂および穴が現れた。これらの細孔、穴および亀裂は、PLGAの分解およびその後の水溶性分解生成物の溶解により空になっているPLGA豊富なドメインである。これらのドメインはペプチド豊富なドメインを表していない。というのは、そのような相分離ではペプチドが即座に迅速に放出され、この遅滞応答とはならないからである。対照的に、15重量のペプチドと85重量のポリDTHアジペートから成る対照標準の表面は同じ16日間のインキュベーション期間で大きくは変化しなかった。これによりさらに、これらのサンプルがPLGAを含むサンプルが受けた変化と同じ劇的な変化を受けなかったことが確認される。このように、この発明のポリマー混合物により製剤において生物活性化合物の拍動的な放出が達成される。この製剤では活性化合物はかなり疎水性のポリマーマトリクス中に水素結合によりロックされており、ある時間が経過すると混合物の疎水性の低いポリマーが分解してより疎水性の高いポリマーからの活性化合物の放出を促進する。遅滞の長さおよび遅滞後の送達速度は材料の選択、使用量により再現性よく制御することができる。好ましい実施の形態の前述の例および記述は、特許請求の範囲により定義される本発明を例示するものであり、限定するものではないと考えるべきである。特許請求の範囲に記載された本発明の範囲内であれば、前述した特徴に関する多くの変更および組合せを使用することができることは容易に理解されるであろう。そのような変更は本発明の趣旨および範囲内にあり、そのような改変はすべて特許請求の範囲に含まれる。"