"少なくとも1つの小ペプチドを含む細胞培養培地であって、該ペプチドが少なくとも2つのアミノ酸を含み、該アミノ酸の少なくとも1つがシステインまたはチロシンである、細胞培養培地。前記小ペプチドの残りのアミノ酸の少なくとも1つが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される、請求項1記載の細胞培養培地。前記小ペプチドの残りのアミノ酸の少なくとも1つが、アラニンまたはグリシンである、請求項2記載の細胞培養培地。前記小ペプチドの少なくとも1つが、Xチロシン、Xシステイン、チロシンX、およびシステインX、もしくはそれらの塩からなる群より選択されるジペプチドであり、かつXが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択され、かつまたは、1つもしくは該小ペプチドのN末端アミノ酸が遊離アミノ基を有する、請求項1記載の細胞培養培地。Xがアラニンまたはグリシンである、請求項1記載の細胞培養培地。液体である、請求項1~5のいずれか一項記載の細胞培養培地。乾燥粉末または粒状乾燥粉末である、請求項1~5のいずれか一項記載の細胞培養培地。炭水化物、およびアミノ酸またはその塩をさらに含む、請求項1~7のいずれか一項記載の細胞培養培地。前記炭水化物がヘキソースである、請求項8記載の細胞培養培地。前記アミノ酸またはその塩が、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンのうちの1つまたは複数である、請求項8または9記載の細胞培養培地。ビタミン、塩、緩衝剤、または無機元素をさらに含む、請求項1~10のいずれか一項記載の細胞培養培地。脂質、加水分解物もしくはその一部、または増殖因子を含まない、請求項1~11のいずれか一項記載の細胞培養培地。タンパク質を含まない、請求項1~12のいずれか一項記載の細胞培養培地。2×または2×超の配合物として濃縮される、請求項1~13のいずれか一項記載の細胞培養培地。1つまたは複数の前記ジペプチドが、アラニルチロシンおよびまたはアラニルシステインおよびまたはアラニルシスチン二量体である、請求項4~14のいずれか一項記載の細胞培養培地。1つまたは複数の前記ジペプチドが、約1gL~約16gLの濃度で存在する、請求項4~6または8~14のいずれか一項記載の細胞培養培地。1つまたは複数の前記ジペプチドが、約25gL~約85gLの濃度で存在する、請求項4~6または8~14のいずれか一項記載の細胞培養培地。2~8°Cで保存された前記液体が、12ヵ月超の間沈殿物のない状態のままである、請求項6または8~17のいずれか一項記載の細胞培養培地。細胞を培養する方法であって、該細胞の培養を支援する条件下で、細胞培養基礎培地と該細胞を接触させる段階、および請求項1~18のいずれか一項記載の濃縮供給物または濃縮培地を、該細胞培養基礎培地に補充する段階を含む方法。前記細胞培養基礎培地に、2日目以降に前記濃縮供給物または前記濃縮培地を補充する、請求項19記載の方法。前記細胞培養基礎培地への前記濃縮供給物または前記濃縮培地の補充を、細胞培養の開始後0日目、1日目、2日目、3日目、4日目、または5日目のいずれかから行い、かつ、その後13日目または14日目まで毎日補充する、請求項20記載の方法。前記細胞培養基礎培地への補充が、該細胞培養基礎培地の全出発量の約1~10または約5~20である、請求項19~21のいずれか一項記載の方法。前記細胞が、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、酵母細胞、藻類細胞、または魚類細胞である、請求項19~22のいずれか一項記載の方法。前記細胞が免疫グロブリンまたはその断片を産生する、請求項22記載の方法。前記細胞が、3000mgL超の免疫グロブリンまたはその断片を産生する、請求項24記載の方法。炭水化物、および少なくとも1つのアミノ酸またはその塩と、1つまたは複数の小ペプチドを混合する段階を含む、細胞培養培地を調製する方法であって、1つまたは複数の該小ペプチドがそれぞれシステインまたはチロシンを含む方法。システインまたはチロシン以外の、1つまたは複数の前記小ペプチドのアミノ酸が、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、アルギニン、グルタミン、またはグルタミン酸より選択される、請求項26記載の方法。システインまたはチロシン以外の、1つまたは複数の前記小ペプチドのアミノ酸が、アラニンまたはグリシンである、請求項27記載の方法。1つまたは複数の前記小ペプチドが、Xチロシン、Xシステイン、チロシンX、もしくはシステインX、またはそれらの塩より選択される1つまたは複数のジペプチドであり、Xが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、アルギニン、またはグルタミン酸より選択され、かつ1つまたは該ジペプチドのN末端アミノ酸が遊離アミノ基を有する、請求項26記載の方法。Xがアラニンまたはグリシンである、請求項29記載の方法。前記炭水化物がグルコースである、請求項26~30のいずれか一項記載の方法。少なくとも1つの前記アミノ酸またはその塩が、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンのうちの1つまたは複数である、請求項26~31のいずれか一項記載の方法。前記細胞培養培地が、ビタミン、塩、緩衝剤、または無機元素をさらに含む、請求項26~32のいずれか一項記載の方法。前記細胞培養培地が、脂質、加水分解物もしくはその一部、または増殖因子を含まない、請求項26~33のいずれか一項記載の方法。前記細胞培養培地がタンパク質を含まない、請求項26~34のいずれか一項記載の方法。前記細胞培養培地が2×または2×超の配合物として濃縮される、請求項26~35のいずれか一項記載の方法。1つまたは複数の前記ジペプチドが、アラニルチロシンおよびまたはアラニルシステインである、請求項29~36のいずれか一項記載の方法。1つまたは複数の前記ジペプチドが、約1gL~約16gLの濃度で前記細胞培養培地中に存在する、請求項29~37のいずれか一項記載の方法。1つまたは複数の前記ジペプチドが約25gL~約85gLの濃度で存在する、請求項29~37のいずれか一項記載の方法。2~8°Cで保存された前記細胞培養培地が、12ヵ月超の間沈殿物のない状態のままである、請求項29~39のいずれか一項記載の方法。細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地を解析するための方法であって、該培地中において、システインまたはチロシンを含む短いペプチドの存在または非存在を判定する段階を含む方法。質量分析、キャピラリー電気泳動、およびHPLCを含む群より選択される手法によって解析を行う、無血清で、タンパク質不含で、加水分解物不含である細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地を解析するための請求項41記載の方法。前記短いペプチドが2個、3個、4個、5個、または6個のアミノ酸を含む、無血清で、タンパク質不含で、加水分解物不含である細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地を解析するための請求項41記載の方法。前記短いペプチドがジペプチドである、培地を解析するための請求項41記載の方法。前記CHO細胞がウイルスを産生する、請求項23記載の方法。前記ウイルスが、組換えウイルスまたはウイルス様粒子である、請求項45記載の方法。前記ウイルスが、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、センダイウイルス、ワクシニアウイルス、または操作されたそれらのウイルス誘導体である、請求項46記載の方法。前記VLPが核酸を保有する、請求項46記載の方法。前記核酸がRNAである、請求項48記載の方法。前記ヘキソースが、グルコース、ガラクトース、フルクトース、およびマルトースからなる群より選択される、請求項9記載の細胞培養培地。システインまたはチロシンを含む小ペプチドを含み、無血清で、タンパク質不含で、かつまたは加水分解物不含である、細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。前記小ペプチドが2個、3個、4個、5個、または6個のアミノ酸を含む、請求項51記載の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。組換えタンパク質の産生を支援する、請求項1記載の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。前記組換えタンパク質が免疫グロブリンまたはその断片である、請求項53記載の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。請求項1記載の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地と、細胞とを含む、組成物。細胞培養培地中で組換えタンパク質を作製する方法であって、請求項1記載の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地と、細胞を接触させる段階;ならびに該細胞の増殖およびまたは該組換えタンパク質の発現に適した条件下で、該細胞を培養する段階を含む方法。1つまたは複数の容器を含む、インビトロで細胞を培養するためのキットであって、第1容器が、少なくとも1つのジペプチドを含む請求項1記載の培地を含み、かつ該培地が、培養中の該細胞の増殖、およびまたは組換えタンパク質の発現を支援する、キット。前記培養が懸濁培養であるかまたは接着培養である、請求項57記載のキット。前記増殖が高密度増殖である、請求項57記載のキット。請求項1記載の細胞培養培地、濃縮供給物、または再構成された培地中でウイルスまたはウイルス粒子を作製する方法であって、請求項1記載の細胞培養培地中で組換え細胞を培養する段階を含み、該培地が、該ウイルスまたは該ウイルス粒子の発現に適した条件下で該細胞の増殖を支援する、方法。請求項56記載の方法によって産生された、組換えタンパク質。請求項60記載の方法によって産生された、ウイルスまたはウイルス粒子。ウイルスまたは組換えタンパク質を産生するための、請求項1記載の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地の使用。請求項26記載の方法によって作製された、培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。前記小ペプチドが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、またはデカペプチドのいずれかである、請求項1または64記載の細胞培養培地。前記小ペプチドが少なくとも約2~10アミノ酸長である、請求項1または64記載の細胞培養培地。前記小ペプチドが少なくとも約10アミノ酸長である、請求項1または64記載の細胞培養培地。流加培養中に前記補充を行う、請求項22記載の方法。詳細な説明これより、様々な例示的態様について詳細に言及する。以下の詳細な説明は、読者に本発明の特定の態様、特徴、および局面の詳細をより十分に理解してもらうために提供されており、本発明の範囲の限定であると解釈されるべきでないことを理解されたい。1定義本発明がより容易に理解され得るように、特定の用語をまず定義する。さらなる定義は、詳細な説明を通して記載する。本明細書で用いられる細胞培養または培養とは、人工的な環境における細胞の維持を指す。しかしながら、細胞培養という用語は一般名称であり、個々の原核細胞または真核細胞のみならず、組織、器官、器官系、または全生物体の培養も包含するように用いられてよく、組織培養、器官培養、器官系培養、または器官型培養という用語は、細胞培養という用語と互換的に使用され得る場合もあることが理解されるべきである。本明細書で用いられる培養とは、細胞の活性状態または静止状態における、増殖、分化、または持続的な生存に好ましい条件下での、人工的な環境における細胞の維持を指す。したがって、培養は、細胞培養または上記のその同義語のいずれとも互換的に使用され得る。本明細書で用いられる細胞培養培地、培養培地、または培地とは、細胞の培養およびまたは増殖を支援する栄養組成物を指す。細胞培養培地は、完全な配合物、すなわち細胞を培養するために補充を必要としない細胞培養培地であってよく、不完全な配合物、すなわち補充を必要とする細胞培養培地であってよいか、または不完全な配合物を補充し得るか、もしくは完全な配合物である場合には培養もしくは培養結果を改善し得る培地であってよい。細胞培養培地、培養培地、または培地という用語は、文脈により他に示されない限り、細胞と共にインキュベートされていない非馴化細胞培地を指す。したがって、細胞培養培地、培養培地、または培地という用語は、培地の元の構成成分の多く、ならびに様々な細胞代謝物および分泌タンパク質を含み得る使用済みまたは馴化培地とは区別される。本明細書で用いられる小ペプチドとは、アミノ酸の少なくとも1つがチロシンまたはシステインである、1つまたは複数のペプチド結合または同等の結合によって結合された2~6個のアミノ酸の鎖を指す。好ましくは、チロシンまたはシステイン以外の、小ペプチド中のアミノ酸は、中性pHにおいて良好な溶解度特性を示す。したがって、1つの態様において、チロシンまたはシステイン以外の、小ペプチド中のアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、およびアルギニンより選択される。別の態様において、小ペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。本発明の1つの態様において、小ペプチドは、エタノールアミンなどの遊離アミノ基を、もしくは遊離カルボキシル基を含む非アミノ酸、または類似の化合物を含み得る。本明細書で用いられる抽出物とは、典型的には機械的または化学的のいずれかでの物質の処理によって形成された、物質の構成成分または物質のサブグループの濃縮調製物を含む組成物を指す。本明細書で用いられる成分という用語は、化学的起源のものであろうと生物学的起源のものであろうと、細胞の増殖の成長を維持または促進するために、細胞培養培地中で使用され得る任意の化合物を指す。構成成分、栄養素、および成分という用語は互換的に使用され得、いずれもそのような化合物を指すことが意図されている。細胞培養培地中で使用され得る典型的な成分には、アミノ酸、塩、金属、糖、炭水化物、脂質、核酸、ホルモン、ビタミン、脂肪酸、タンパク質などが含まれる。エクスビボで細胞の培養を促進または維持するその他の成分は、特定の必要性に従って当業者によって選択され得る。1×配合物とは、細胞培養培地中に見出されるいくつかまたはすべての成分を作用濃度で含む任意の水溶液を指す。1×配合物とは、例えば、細胞培養培地、またはその培地のための成分の任意のサブグループを指し得る。1×溶液中の成分の濃度は、インビトロで細胞を維持または培養するために用いられる細胞培養配合物中に見出されるその成分の濃度とほぼ同じである。細胞のインビトロ培養のために用いられる細胞培養培地は、定義により1×配合物である。多くの成分が存在する場合、1×配合物中の各成分は、細胞培養培地中のそれらの成分の濃度にほぼ等しい濃度を有する。例えば、RPMI1640培養培地は、成分の中でとりわけ、02gLLアルギニン、005gLLアスパラギン、および002gLLアスパラギン酸を含む。これらのアミノ酸の1×配合物は、溶液中ほぼ同じ濃度のこれらの成分を含む。したがって、1×配合物に言及する場合、溶液中の各成分が、記載される細胞培養培地中に見出される濃度と同じか、またはほぼ同じ濃度を有することが意図される。細胞培養培地の1×配合物中の成分の濃度は、当業者に周知である。その全体が参照により本明細書に組み入れられる、CellCultureTechnologyforPharmaceuticalandCellBasedTherapies4250を参照されたい。しかしながら、浸透圧およびまたはpHは、特により少数の成分が1×配合物中に含まれる場合、培養培地と比較して1×配合物において異なり得る。10×配合物は、その溶液中の各成分が、細胞培養培地中の同じ成分よりも約10倍濃縮されている溶液を指すことが意図される。例えば、RPMI1640培養培地の10×配合物は、成分の中でとりわけ、20gLLアルギニン、05gLLアスパラギン、および02gLLアスパラギン酸を含み得る。10×配合物は、1×培養培地中に見出される濃度の約10倍の濃度で、多くのさらなる成分を含み得る。容易に明らかなとおり、5×配合物、25×配合物、50×配合物、100×配合物、500×配合物、および1000×配合物は、1×細胞培養培地と比較して、それぞれ約5倍、25倍、50倍、100倍、500倍、または1000倍濃度の成分を含む溶液を示す。ここでも同様に、培地配合物および濃縮溶液の浸透圧およびpHは異なり得る。配合物は、特定の細胞培養プロトコールに関して1×で、しかし異なる培養プロトコールまたは異なる基礎培地に関しては、例えば2×、25×、5×、67×、9×、12×などの濃度で、構成成分または成分を含み得る。二量体は2つのジペプチドからなる。したがって、例えばAlaCysの二量体はAlaCysCysAlaを構成し、ここでcyscysはジスルフィド結合によって結合されている。AlaCysCysAlaはまた、NNジLアラニルLシステインとも称され得る。1小ペプチド本開示は、細胞培養培地中での、ジペプチドを含む小ペプチドの使用に関する。本出願人らは、チロシンおよびシステインなどの特定のアミノ酸の所望の濃度を含む細胞培養培地の調製が、チロシンの低溶解度およびシステインの低安定性のために不可能なままであることを見出した。チロシンおよびシステインの溶解度および安定性の問題は、水性細胞培養培地中でチロシンまたはシステインの所望の濃度よりも低い濃度を用いることによって対処したが、これにより、細胞培養中に栄養素が使用されるという理由で、それらは最適な細胞増殖およびまたはタンパク質産生の律速アミノ酸となる。チロシンおよびシステインの所望の濃度よりも低い濃度を用いることで、許容可能な水性保存期間、溶解度、および安定性をもたらすことができるが、所望の生産性を達成するためには、例えば流加培養システムにおいて、細胞培養補充中により大量の培地を添加することも必要となり得る。その上、システムの化学量論的な平衡、pH、およびまたは浸透圧も再調整される必要があるため、これは望ましくない。大量補充による問題は、濃縮供給補充物を用いることによって対処することができる。望ましい濃縮供給補充物は、流加培養システムにおいて栄養素枯渇培養システムを補充し、加えておよび望ましくは自動pH平衡特徴および自動浸透圧平衡特徴を有し得る、栄養的に複雑で化学量論的に平衡な栄養素添加物である。しかしながら、チロシンの低溶解度またはシステインの低安定性のために、高レベルのシステインおよびチロシンを含む濃縮供給組成物は、調製することが困難であった。このために、一般的には、システインまたはチロシンが時間と共に溶液から出現してくる。したがって、安定している単一部分のpH中性で既知組成の濃縮供給物は、合成が困難であった。この問題を回避するために、酸性またはアルカリ性の複数部分濃縮供給物が調製された。本出願人らは、細胞培養培地中の遊離アミノ酸、チロシンおよびシステインを、ジペプチドであるアラニルチロシン、グリシルチロシン、アラニルシステイン、もしくはグリシルシステインなどの小ペプチド、または1つもしくは複数のチロシンもしくはシステインを含むその他の小ペプチドで置換することが可能であることを発見した。これらのジペプチドまたはその他の小ペプチドを含む細胞培養培地は、遊離のチロシンおよびまたはシステインに関連した溶解度および安定性の問題を回避しつつ、最大の細胞増殖およびまたはタンパク質産生を支援するのに十分なチロシンおよびまたはシステインの濃度を細胞に提供する。本発明の小ペプチドは2~6個のアミノ酸を有し、アミノ酸の少なくとも1つはシステインまたはチロシンであり、残りのアミノ酸は任意のアミノ酸であってよい。好ましくは、チロシンまたはシステイン以外の、小ペプチド中のアミノ酸は、中性pHにおいて良好な溶解度特性を示す。1つの態様において、チロシンまたはシステイン以外の、小ペプチド中のアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸より選択される。別の態様において、小ペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。本発明の1つの態様において、小ペプチドは、エタノールアミンなどの遊離アミノ基を、もしくは遊離カルボキシル基を含む非アミノ酸、またはペプチド結合に寄与し得る類似の化合物を含み得る。別の態様において、小ペプチドは、スルフィド結合を介して二量体化されたシステインを含み得る。システインシステイン二量体化二量体化のために、本発明の小ペプチドは2~6個のアミノ酸の長さを有すると定義されるものの、本発明の培地または供給物内で起こり得る自発的なシステインシステイン二量体化のために、より長いペプチドをもたらす組成物も存在し得る。そのような化合物は、高濃度であってもやはり可溶性であり、したがって完全に本発明の範囲内である。他の態様において、小ペプチドは、2アミノ酸を有し、式:Xチロシン、Xシステイン、チロシンX、もしくはシステインX、またはそれらの塩によって示されるジペプチドであり、ここでXは任意のアミノ酸であり、ジペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。したがって、このジペプチドは、N末端アミノ酸のアミノ基に共有結合しているアシル基を必要とする、米国特許第5534538号において開示されているNアシルジペプチドとは異なる。米国特許第5534538号によれば、優れた安定性特性をジペプチドに付与するのはアシル基の存在である。好ましくは、Xは、良好な溶解度特性を有するアミノ酸である。1つの態様において、Xはアラニンまたはグリシンである。別の態様において、Xはセリン、バリン、プロリン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸である。1つの態様において、小ペプチドは、2アミノ酸を有するジペプチドであり、本発明の1つまたは複数のジペプチドは、Xチロシン、Xシステイン、チロシンX、およびシステインX、またはそれらの塩より選択され、ここでXは任意のアミノ酸であり、ジペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。1つの態様において、Xはアラニンまたはグリシンである。別の態様において、Xは、任意のアミノ酸、アミノ酸の誘導体、エタノールアミンなどのアミノ基を有する非アミノ酸である。この態様の1つの局面において、好ましいアミノ酸は、群:セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、アルギニン、グルタミン、またはグルタミン酸より選択される。別の態様において、小ペプチドは、3アミノ酸を有するトリペプチドであり、これには以下のトリペプチド:XXチロシン、XXシステイン、XチロシンX、XシステインX、チロシンXX、システインXX、またはそれらの塩が含まれ、ここでXは任意のアミノ酸である。1つの態様において、トリペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。好ましくは、Xは、良好な溶解度特性を有するアミノ酸である。1つの態様において、Xはアラニンまたはグリシンである。別の態様において、Xはセリン、バリン、プロリン、グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、またはアスパラギン酸である。本発明の特定の局面において、小ペプチド内にシステインおよびチロシンを含む上記の組成物は、細胞株におけるタンパク質産生を増加させるために用いられる。本発明の好ましい局面において、増加されるタンパク質は、小ペプチドを含まない培地中よりも高い力価で産生される抗体である。より高い抗体産生とは、約01gL~約10gL、約01gL~約5gL、約01gL~約25gL、約01gL~約1gL、好ましくは約1gL~約10gL、より好ましくは約2gL~約8gLなどを意味する。細胞および細胞の意図される用途に応じて、細胞培養培地、供給物、濃縮培地もしくは濃縮供給物などの1つまたは複数の小ペプチドまたはジペプチドは、細胞培養の性能を最適化するように化学量論的に平衡化された濃度で最適に存在する。例えば、いくつかの細胞培養培地中または濃縮供給物中の1つまたは複数の小ペプチドまたはジペプチドの濃度は、約05gL~約30gL、約05gL~約25gL、約05gL~約20gL、約05gL~約16gL、約05gL~約10gL、約05gL~約5gL、約05gL~約4gL、約1gL~約30gL、約1gL~約20gL、約1gL~約16gL、約1gL~約10gL、約1gL~約5gL、約25gL~約30gL、約25gL~約20gL、約25gL~約16gL、約25gL~約10gL、約25gL~約5gL、または約25gL~約45gL、約5gL~約30gL、約5gL~約25gL、約5gL~約20gL、約5gL~約16gL、約5gL~約10gL、約5gL~約5gL、約5gL~約4gLなどであってよい。いくつかの培地配合物または原型培地配合物において、1つもしくは複数の小ペプチドおよびまたは1つもしくは複数のジペプチドは、培地または原型培地中で約25gL~約85gLの濃度で存在し得る。加えて、本発明のいくつかの態様は、溶媒による再水和再構成に際して自動的に所望のpHになる自動pH培地または供給物粉末を調製する方法を提供する。本発明に従って、そのような培地または供給物は、粉末形態、高性能粉末、または高度造粒技術、または液体形態であってよい。本方法によって調製される動物細胞培養培地または動物細胞培養供給物は、再構成に際して、好ましくは約6~8もしくは約7~8または約60~63、より好ましくは約7~75または約72~74、最も好ましくはおよそ70のpHを有し;本方法によって調製される植物細胞培養培地または植物細胞培養供給物は、再構成に際して、好ましくは約4~8、好ましくは約45~7、5~6、もしくは55~6、または好ましくは約60~63のpHを有する。当然のことながら、特定の細胞型において用いられるべき所与の培養培地の最適pHはまた、当技術分野で公知の方法を用いて当業者によって経験的に決定され得る。2細胞培養培地細胞培養培地は多くの成分から構成され、これらの成分は培養培地ごとに異なる。上記のとおり、細胞培養培地は、完全な配合物、すなわち細胞を培養するために補充を必要としない細胞培養培地であってよく、不完全な配合物、すなわち補充を必要とする細胞培養培地であってよいか、または不完全な配合物を補充し得るか、もしくは完全な配合物である場合には培養もしくは培養結果を改善し得る補充物であってよい。一般的に、細胞培養培地は溶媒中に溶解している溶質を有する。溶質は浸透力を提供して、細胞膜を介した浸透圧の平衡を保つ。加えて、溶質は細胞に栄養素を提供する。いくつかの栄養素は、細胞の働きのための化学燃料であり;いくつかの栄養素は、同化作用において使用するための細胞の原材料であってよく;いくつかの栄養素は、細胞代謝を促進する酵素または担体などの機構であってよく;いくつかの栄養素は、細胞使用のための成分と結合し、これを緩衝するか、または有害な細胞産物と結合するもしくはこれを隔離する結合剤であってよい。細胞および細胞の意図される用途に応じて、細胞培養培地の成分は、最適には、細胞培養の性能を最適化するように平衡化された濃度で存在する。性能は、1つまたは複数の所望の特徴、例えば、細胞数、細胞量、細胞密度、O2消費、グルコースまたはヌクレオチドなどの培養成分の消費、生体分子の産生、生体分子の分泌、例えば代謝物といった老廃物または副産物の形成、指標またはシグナル分子に及ぼす作用などに従って測定される。したがって、それぞれのまたは選択された成分は、好ましくは、意図される目的のための作用濃度になるよう最適化される。本発明の培養培地または供給補充物は、水などの溶媒の添加のみを必要とする乾燥形式で得られ得る。好ましくは、乾燥形式粉末は、製粉、衝突、押し出しおよび切断または破壊、湿式造粒、高剪断造粒、パン造粒、ならびに流動床凝集からなる群より選択される少なくとも1つの方法によって調製される。乾燥形式には、乾燥粉末形式、凝集形式、高性能粉末培地、またはその他の適切な乾燥形式が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、ひとたび水が添加されたならば、直ちに溶解が起こるべきであり、結果として得られた溶液をろ過し、pH調整をすることなく細胞に直接添加することができる。再構成される培地または濃縮補充物は、可変のバルク量で調製されてよく、特にイオン化または紫外線照射による滅菌が可能である。a炭水化物細胞培養培地成分は典型的に、炭水化物、アミノ酸、塩、微量元素、およびビタミンを含む。哺乳動物細胞に関しては、細胞培養培地中で用いられる主要な炭水化物は、5~25nMで日常的に補充されるグルコースである。CellCultureTechnologyforPharmaceuticalandCellBasedTherapies51を参照されたい。グルコースに加えて、ガラクトース、フルクトース、もしくはマンノース、またはこれらの組み合わせなどの任意のヘキソースも使用され得る。加えて、哺乳動物はまた主要なエネルギー源としてグルタミンを使用し得る。グルタミンは、他のアミノ酸よりも高い濃度で含まれる場合が多い。しかしながら、上記のとおり、グルタミンは自発的に分解してアンモニアを形成し得、ある種の細胞株はアンモニアをより速く産生し、これは毒性がある。したがって、細胞培養培地中の毒性アンモニアの蓄積を減少させるために、グルタミンの代替物としてグルタミン酸およびグルタミンジペプチドが使用されている。bアミノ酸アミノ酸は、培養細胞の代謝機能を維持するために、細胞培養培地中で重要である。細胞培養培地は典型的に、必須アミノ酸およびある種の非必須アミノ酸を含む。非必須アミノ酸は典型的に、細胞株が該アミノ酸を合成することができない場合、または細胞株が最大の増殖を支援するのに十分な量の該アミノ酸を産生することができない場合に、細胞培養培地中に含められる。例示的なアミノ酸には、Lアラニン、Lアルギニン、Lアスパラギン、Lアスパラギン酸、Lシステイン、Lグルタミン酸、Lグルタミン、グリシン、Lヒスチジン、Lイソロイシン、Lロイシン、Lリジン、Lメチオニン、Lフェニルアラニン、Lプロリン、Lヒドロキシプロリン、Lセリン、Lスレオニン、Lトリプトファン、Lチロシン、およびLバリンが含まれる。c塩塩は、等張状態を維持し、浸透圧の不均衡を妨げるために、細胞培養培地に添加される。標準的な哺乳動物細胞培養培地の浸透圧は約300mOsmkgであるが、多くの細胞株はこの値のおよそ10の変動を許容し得る。いくつかの昆虫細胞培養物の浸透圧は300mOsmkgよりも高い傾向があり、これは300mOsmkgよりも05、1、2~5、5~10、10~15、15~20、20~25、25~30高くてよい。細胞培養培地中で最も一般的に使用される塩には、Na、K、Mg2、Ca2、Cl、S042、P043、およびHC03が含まれる。したがって、特定の細胞型を培養するための細胞培養培地の所望の浸透圧はまた、当技術分野で公知の方法を用いて当業者によって経験的に決定され得る。d無機元素全体が参照により本明細書に組み入れられるUS20050287666に記載されているとおり、血清中に微量で存在するその他の無機元素を細胞培養培地中に含めることができる。それらには、Mn、Cu、Zn、Mo、Va、Se、Fe、Ca、Mg、Si、およびNiが含まれる。それほど頻繁ではないが、細胞培養培地に添加されているその他の無機元素には、Al、Ag、Ba、Br、Cd、Co、Cr、F、Ge、J、Rb、およびZrが含まれる。これらの元素の多くは、酵素活性に関与する。それらは、CaCl2、Fe3、MgCl2、MgS04、MnCl2、NaCl、NaHC03、Na2HP04などの塩、ならびにセレン、バナジウム、および亜鉛などの微量元素のイオンの形態で提供され得る。これらの微量元素は、様々な形態で、好ましくはNa2Se03、NH4V03などの塩の形態で提供され得る。これらの無機塩および微量元素は、例えばSigmaから商業的に入手することができる。eビタミンビタミンは典型的に、補助因子として細胞によって使用される。各細胞株のビタミン要求は大きく異なるが、細胞培養培地が血清をほとんど含まない場合、または細胞を高密度で増殖させる場合には、一般的に余分のビタミンが必要とされる。例示的なビタミンには、ビオチン、塩化コリン、葉酸、iイノシトール、ニコチンアミド、DCaパントテン酸、ピリドキサール、リボフラビン、チアミン、ピリドキシン、ナイアシンアミド、A、B6、B12、C、D3、E、K、およびpアミノ安息香酸が含まれる。f血清凝固した血液の上清である血清は、細胞の増殖およびまたは生産性を促進する構成成分を提供するために、細胞培養培地地中で使用され得る。これらの血清構成成分には、接着因子、微量栄養素、増殖因子、および保護エレメントが含まれる。血清は、ウシまたはウマを含む様々な動物源から入手可能である。細胞培養培地中に含める場合、血清は典型的には5~10の濃度で添加される。特定の細胞培養培地は無血清である。g増殖因子血清の非存在下または血清低減培地中での細胞増殖を促進するために、以下のポリペプチドのうちの1つまたは複数を細胞培養培地に添加することができる:例えば、酸性FGFおよび塩基性FGFを含む線維芽細胞増殖因子、インスリン、インスリン様増殖因子、上皮細胞増殖因子、神経成長因子、血小板由来増殖因子、ならびにTGFαおよびTGFβを含むトランスフォーミング増殖因子、インターロイキン1、2、6、顆粒球刺激因子、白血病抑制因子などの任意のサイトカイン。特定の態様において、細胞培養培地は増殖因子を含まない。タンパク質不含培地では、その全体が参照により本明細書に組み入れられるWO9808934に記載されているとおり、インスリンが亜鉛または亜鉛含有化合物で置換され得る。h脂質1つまたは複数の脂質を細胞培養培地に添加することもできる。血清は典型的に、脂肪酸、リン脂質、レシチン、およびコレステロールなどの脂質を含む。あるいは、これらの脂質のうちの1つまたは複数を、無血清培地中に補充物として含めることもできる。ホスファチジン酸およびリゾホスファチジン酸は、MDCK、マウス上皮、およびその他の腎臓細胞株などのある種の足場依存性細胞の増殖を促進し、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、およびホスファチジルイノシトールは、無血清培地中でヒト線維芽細胞の増殖を促進する。エタノールアミンおよびコレステロールもまた、ある種の細胞株の増殖を促進することが示されている。特定の態様において、細胞培養培地は脂質を含まない。i担体タンパク質ウシ血清アルブミンまたはトランスフェリンなどの1つまたは複数の担体タンパク質を細胞培養培地に添加することもできる。担体タンパク質は、ある種の栄養素または微量元素の輸送に役立ち得る。BSAは典型的には、水溶液中で不溶性である、リノール酸およびオレイン酸などの脂質担体として用いられる。加えて、BSAはまた、Fe、Cu、およびNiなどのある種の金属の担体としても役立ち得る。タンパク質不含配合物では、シクロデキストリンなどの、BSAの非動物由来代替物が脂質輸送体として使用され得る。トランスフェリンは、細胞膜を介した鉄の輸送に関与する。場合によっては、下流の治療用途のために生成される産物にとって望ましい培養においてなど細胞の培養には、ヒト血清アルブミンが必要である場合がある。他の例では、組換えヒト血清アルブミンが、細胞を培養するための細胞培養培地中で使用され得る。特定の事例では、細胞の動物起源不含培養を提供するために、組換えヒト血清アルブミンは、コメ、トウモロコシ、ジャガイモ、コムギ、さらには酵母などのような植物、藻類、または真菌供給源に由来し得る。タンパク質不含配合物では、トランスフェリンは、その全体が参照により本明細書に組み入れられるWO9808934に記載されているとおり、三価鉄およびもしくは二価鉄塩と、またはその全体が参照により本明細書に組み入れられるUS20070254358に記載されているとおり、ヒドロキシピリジン誘導体と置換され得る。加えて、タンパク質不含配合物では、インスリンは、亜鉛、バナジウム、またはその他の適切な二価塩と置換され得る。j接着タンパク質足場依存性細胞の基材への接着を促進するのを助けるために、フィブロネクチン、ラミニン、およびプロネクチンなどの1つまたは複数の接着タンパク質を細胞培養培地に添加することもできる。k緩衝剤細胞培養培地は任意に、1つまたは複数の緩衝剤を含み得る。適切な緩衝剤には、N2ヒドロキシエチルピペラジンN2エタンスルホン酸、MOPS、MES、リン酸、炭酸水素、および細胞培養適用において使用するのに適したその他の緩衝剤が含まれるが、これらに限定されない。適切な緩衝剤は、培養される細胞に対する実質的な細胞毒性なしに緩衝能力を提供するものである。適切な緩衝剤の選択は、細胞培養の技術分野における通常の技術の範囲内である。lポリアニオン化合物またはポリカチオン化合物ポリアニオン化合物またはポリカチオン化合物は、細胞が凝集するのを防ぎ、懸濁液中で細胞の増殖を促進し得る。その全体が参照により本明細書に組み入れられるWO9808934を参照されたい。例示的なポリアニオン化合物には、ヘパリン、デキストラン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ペント酸ポリ硫酸、プロテオグリカンなどのようなポリスルホン化化合物またはポリ硫酸化化合物が含まれる。本明細書に記載される小ペプチドまたはジペプチドに加えて、細胞培養培地は、上記したものなどの1つまたは複数の成分を含む。1つの態様において、細胞培養培地は、上記のとおりの1つもしくは複数の小ペプチドまたは1つもしくは複数のジペプチドを含み、および任意に以下の成分のうちの1つまたは複数を含む:エタノールアミン、Dグルコース、HEPES、インスリン、サイトカイン、ヘパリン、デキストラン硫酸、リノール酸、リポ酸、フェノールレッド、PLURONICF68、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、トランスフェリン、Lアラニン、Lアルギニン、Lアスパラギン、Lアスパラギン酸、Lシステイン、Lグルタミン酸、Lグルタミン、グリシン、Lヒスチジン、Lイソロイシン、Lロイシン、Lリジン、Lメチオニン、Lフェニルアラニン、Lプロリン、Lセリン、Lスレオニン、Lトリプトファン、Lチロシン、Lバリン、ビオチン、塩化コリン、DCaパントテン酸、葉酸、iイノシトール、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンB12、1つまたは複数のカルシウム塩、Fe3、KCl、1つまたは複数のマグネシウム塩、1つまたは複数のマンガン塩、NaCl、NaHCO3、Na2HP04、1つまたは複数のセレン塩、1つまたは複数のバナジウム塩、および1つまたは複数の亜鉛塩。1つの態様において、1つまたは複数のジペプチドは、Xチロシン、Xシステイン、チロシンX、およびシステインX、またはそれらの塩より選択され、ここでXは任意のアミノ酸であり、ジペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。1つの態様において、Xはアラニンまたはグリシンである。別の態様において、Xはセリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸である。本明細書に記載される培地は1×配合物であってよいか、または個々の構成成分の溶解度が許す限り、1×配合物よりも濃いものとして、例えば2×、5×、10×、20×、50×、500×、もしくは1000×培地配合物として濃縮され得る。個々の培地成分が別々の濃縮溶液として調製される場合には、1×培地配合物を作製するために、各濃縮物の適量が希釈剤と混合される。典型的には、使用される希釈剤は水であるが、水性緩衝液、水性生理食塩水、またはその他の水溶液を含むその他の溶液も使用され得る。本明細書に記載される培地はまた、乾燥粉末培地、粒状調製物などの他の処理は必要としない、液体培地、または培地濃縮物などの異なる形態で調製され得る。3無血清培地バッチ間の変動、高タンパク質含量、汚染のリスク、限られた利用能、および高コストを含む、血清に関連した潜在的問題により、無血清培地の作製が推進された。さらに、血清が補充された培地中で増殖された細胞において見られる発現のレベルと比較して、無血清培地中で増殖された細胞から、組換えタンパク質発現のレベルの向上が得られ得る。これらの無血清培地において、血清は、明確なホルモンで、またはヒドロコルチゾン、インスリン、トランスフェリン、エタノールアミン、および亜セレン酸を含む、HITESもしくはITESなどのホルモン混合物で置換され得る。あるいは、無血清培地は、上皮細胞増殖因子または線維芽細胞増殖因子などの、内分泌腺からの増殖因子抽出物を含み得る。無血清培地はまた、血清の代替物として、精製タンパク質、ペプトン、アミノ酸、無機塩、および動物または植物加水分解物を含むその他の構成成分を含み得る。無血清培地は、既知組成であっても非既知組成であってもよい。既知組成培地では、構成成分の同一性およびそれらの量がわかっているのに対して、非既知組成培地ではその逆である。したがって、既知組成培地は、一つには、汚染のリスクを減少させるため、およびバッチ間の変動を減少させるために設計される。細胞培養培地に添加され得る既知組成補充物は、増殖因子、ホルモン、担体タンパク質、およびまたは接着因子を含む。好ましい態様において、小ペプチドを含む培地または供給物と共に用いられる基礎培地は、既知組成培地である。別の好ましい態様において、小ペプチドを含む本発明の濃縮細胞培養培地または濃縮供給物もまた、既知組成組成物である。さらに別の好ましい態様において、システインおよびチロシンを含む小ペプチドを含む本発明の濃縮供給物または濃縮培地は、単一部分供給物であり、かつ既知組成である。別の局面において、システインおよびチロシンを含む小ペプチドを含む上記組成物はすべて、自動的にpHが平衡化され、かつ自動的に浸透圧が平衡化される。さらに別の局面において、システインおよびチロシンを含む小ペプチドを含む上記組成物はすべて、化学量論的に平衡化される。4タンパク質不含培地無血清培地は、血清を含む細胞培養培地と比較して少量のタンパク質を含む。しかしながら、無血清培地は、アルブミン、フェチュイン、様々なホルモン、およびその他のタンパク質を含む様々な動物由来構成成分のうちの1つまたは複数をなお含み得る。タンパク質の存在により、組換えタンパク質の精製は困難になり、時間を要し、かつ高価になり、また産物の収量およびまたは純度の減少をもたらし得る。したがって、1つの態様において、細胞培養培地はタンパク質不含である。タンパク質不含培地は、無血清培地からいかなる残存タンパク質も除去するなどして、当技術分野で公知の方法によって得ることができる。細胞培養培地からそのようなタンパク質を除去することは、細胞増殖を支援する培地の能力を損ない得るが、培地からタンパク質を除去する影響を軽減するために、その他の構成成分が培地に添加され得る。例えば、上記のとおり、シクロデキストリンはBSAに取って代わることができ、鉄塩またはヒドロキシピリジン誘導体はトランスフェリンに取って代わることができる。その他の事例では、タンパク質不含培地を補充するために、動物組織または植物加水分解物が用いられている。5流加培養細胞の流加培養は典型的には、高い産物濃度および容積生産性を目的として、細胞濃度を増加させるためおよび培養寿命を延ばすために、タンパク質などの生体分子の産業生産に用いられる。流加培養は、基礎培地への、グルコース、アミノ酸などの、細胞によってすぐに利用される栄養素を含み得る供給物の形態の、1つまたは複数の栄養素の制御された添加を含む。栄養素は、栄養素の枯渇および副産物の蓄積を妨げようとすることによって細胞培養物の増殖を制御するのに、pH、浸透圧、およびCO2濃度などの重要なパラメータを、最適な産物発現のために細胞増殖を促進するかまたは細胞死を最小限にするレベル内に制御するのに役立つ。CellCultureTechnologyforPharmaceuticalandCellBasedTherapies349386を参照されたい。その場合でさえ、流加培養は、最終的に細胞生存度と適合しない高濃度の阻害性代謝物および高浸透圧をもたらす場合が多い。基礎培地は典型的には細胞培養を維持するために用いられ、アミノ酸、ビタミン、有機および無機塩、糖、ならびにその他の構成成分を含む多くの成分を含んでよく、各成分はインビトロで細胞の培養を支援する量で存在する。細菌および古細菌培養を含む原核細胞培養、ウイルス培養、植物細胞培養、昆虫細胞培養、哺乳動物細胞培養に有用な基礎培地は、小ペプチドと共に使用することができる。基礎培地の例には、イーグル基礎培地、イーグル最小必須培地、ダルベッコ改変イーグル培地、グラスゴー改変イーグル培地、ジョクリック改変イーグル培地、α改変イーグル培地、ロズウェルパーク記念研究所培地、フィッシャー培地、リーボビッツL15培地、トロウェルT8培地、ウィリアムズ培地E、ビガーズ培地、コンノート医学研究所1066培地、ハムF10培地、ハムF12培地、イスコフ改変ダルベッコ培地、MCDB104、MCDB110、MCDB153、培地199、NCTC135培地、およびウェイマウス培地MB7521が含まれる。CHO細胞については、好ましい基礎培地には、CDCHO、CDOptiCHO、およびCDFortiCHOが含まれる。CHO細胞のための好ましい濃縮供給補充物には、CHOCDEfficientFeedA、CHOCDEfficientFeedB、CHOCDEfficientFeedキット、CDEfficientFeedCAGTが含まれるが、これらに限定されない。流加培養では、典型的には、基礎培地を用いてバッチ様式で、細胞をある時点まで増殖させる。その後、量の増加または培養物の希釈を最小限にしつつ、栄養素を提供するために、単一または複数の栄養素の濃縮溶液を含む培地補充物を添加する。培地補充物が基礎培地に添加される場合、これにより、例えば、より迅速な細胞増殖、倍加時間の短縮、より高く達成可能な細胞密度、または例えば抗体もしくは治療的関心対象のその他のタンパク質といったタンパク質などの生体分子のより高い産生もしくは収量によって示されるとおり、細胞培養が改善される。基礎培地への補充に使用するのに適した本発明の細胞培養培地または濃縮供給物は、本明細書に記載されるとおりの、1つまたは複数のジペプチドを含む1つまたは複数の小ペプチドを含む。システインおよびチロシンを含む細胞培養培地または濃縮供給物は、任意に、別の供給物、例えば以下の成分のうちの1つまたは複数を含み得るアミノ酸の濃縮混合物と併用して使用され得る:アデニン、エタノールアミン、炭水化物源、ヘパリン、緩衝剤、ヒドロコルチゾン、リポ酸、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、トリヨードチロニン、チミジン、Lアラニン、Lアルギニン、Lアスパラギン、Lアスパラギン酸、Lシステイン、Lグルタミン酸、Lグルタミン、グリシン、Lヒスチジン、Lヒドロキシプロリン、Lイソロイシン、Lロイシン、Lリジン、Lメチオニン、Lフェニルアラニン、Lプロリン、Lセリン、Lスレオニン、Lトリプトファン、Lチロシン、Lバリン、Nアセチルシステイン、ビオチン、塩化コリン、DCaパントテン酸、葉酸、iイノシトール、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンB12、PluronicF68、組換えインスリン、カルシウム塩、CuS04、FeS04、FeCl3、Fe3、KCl、マグネシウム塩、マンガン塩、酢酸ナトリウム、NaCl、NaHCO3、Na2HP04、Na2S04、セレン塩、ケイ素塩、モリブデン塩、バナジウム塩、ニッケル塩、スズ塩、ZnCl2、ZnS04、またはその他の亜鉛塩。したがって、基礎培地を補充するために用いられるアミノ酸の濃縮混合物は、アミノ酸の化学量論的に平衡化された混合物から構成されてよく、システインおよびチロシンを含んでも含まなくてもよく、以下のもの:炭素源、ビタミン、微量元素のうちの1つまたは複数を任意に含んでよく、さらに脂質、加水分解物、または増殖因子を全く含まないという点で既知組成であってよい。場合によっては、アミノ酸の濃縮混合物は、動物起源不含加水分解物または加水分解物の一部、例えば植物加水分解物を含み得る。例えば、CHOCDEfficientFeedA、CHOCDEfficientFeedB、CHOCDEfficientFeedキット、CDEfficientFeedCAGTといった、任意の市販のアミノ酸の濃縮混合物が使用され得る。1つの態様において、基礎培地への補充に使用するのに適した、本発明のシステインおよびチロシン含有細胞培養培地または濃縮供給物は、タンパク質不含である。別の態様において、基礎培地への補充に使用するのに適した本発明の細胞培養培地または濃縮供給物は、タンパク質不含であり、加えて、脂質、加水分解物もしくはその一部、または増殖因子を含まず、したがって既知組成と見なされる。この態様の1つの局面において、本発明のシステインおよびチロシン含有細胞培養培地または濃縮供給物は、炭素源、ビタミン、微量元素のうちの1つまたは複数を任意に含んでよく、さらに脂質、加水分解物、または増殖因子を全く含まないという点で既知組成であってよい。6細胞本明細書に記載されるシステインおよびチロシン含有小ペプチドまたはジペプチドを含む培地は、様々な細胞を培養するために使用することもできる。本明細書に記載される培養培地および供給物を用いて増殖される細胞は、古細菌を含む任意の原核生物、藻類、酵母、真菌、植物、昆虫、動物、好ましくは哺乳動物、および最も好ましくはマウスまたはヒトに由来し得る。1つの態様において、培地は、植物細胞、または哺乳動物細胞、魚類細胞、昆虫細胞、両生類細胞、もしくは鳥類細胞などの動物細胞を含む真核細胞を培養するために用いられる。本明細書に記載される培地を用いて培養され得る哺乳動物細胞には、初代上皮細胞、ならびに樹立細胞株およびそれらの株細胞、911細胞、CRFK細胞、MDCK細胞、CHO細胞、BeWo細胞、Chang細胞、Detroit562細胞、HeLa229細胞、HeLaS3細胞、Hep2細胞、KB細胞、LS180細胞、LS174T細胞、NCIH548細胞、RPMI2650細胞、SW13細胞、T24細胞、WI28VA13、2RA細胞、WISH細胞、BSCI細胞、LLCMK2細胞、クローンM3細胞、110細胞、RAG細胞、TCMK1細胞、Y1細胞、LLCPK1細胞、PK細胞、GH1細胞、GH3細胞、L2細胞、LLCRC256細胞、MH1C1細胞、XC細胞、MDOK細胞、VSW細胞、およびTHI、B1細胞、またはそれらの誘導体、任意の組織または器官、肺、血管組織、リンパ組織、脾臓を含むがこれらに限定されないに由来する線維芽細胞、ならびに線維芽細胞および線維芽細胞様細胞株細胞、LM株細胞、LMTK細胞、NCTCクローン2472および2555、SCCPSA1細胞、Swiss3T3細胞、ホエジカ細胞、SIRC細胞、CII細胞、ならびにJensen細胞、Sp20、NSO、NS1細胞、またはそれらの誘導体が含まれる。本明細書において開示される方法に従って培養される細胞は、正常細胞、罹患細胞、形質転換細胞、変異細胞、体細胞、遺伝子操作された細胞、生殖細胞、幹細胞、前駆細胞、または胚細胞であってよく、これらはいずれも樹立細胞株もしくは形質転換細胞株であってよいか、または天然源から得られてもよい。細胞は、実験目的のために、または有用な構成成分の産生のために使用され得る。場合によっては、培養された細胞自体が産物であり、細胞療法における細胞に役立つ。細胞はまた、抗体産生を含むタンパク質産生、低分子RNA産生、ウイルスまたはVLP産生、DNAまたはウイルスベクターの作製および単離、核酸産生、ビタミン産生、所望の代謝物、バイオ燃料合成などのために培養され得る。1つの態様において、本明細書に記載される培地は、チャイニーズハムスター卵巣細胞を培養するために用いられる。CHO細胞は、チャイニーズハムスター卵巣に由来する上皮細胞および線維芽細胞の両方として分類されている。チャイニーズハムスター卵巣から出発した細胞株は、何年にもわたって培養されている。ほとんどのバイオ製薬会社は現在のところ、該細胞株が、ヒト様グリコシル化パターンなどの正確な翻訳後修飾を有し、ヒトウイルスの感染のリスクが低いという多くの利点から、CHO細胞においてタンパク質を産生している。7細胞の培養本明細書に記載される培養培地によって支援される細胞は、研究者によって決定される実験条件に従って培養することができる。以下の例は、ある種の哺乳動物細胞の培養に有用な培養条件の少なくとも1つの機能的セットを実証する。しかしながら、所与の動物細胞型の最適なプレーティングおよび培養条件は、日常的な実験のみを用いて当業者によって決定され得ることが理解されるべきである。本明細書に記載される細胞培養培地を用いた日常的な単層培養条件に関して、細胞は、接着因子なしで培養容器の表面上にプレーティングすることができる。あるいは、容器を天然、組換え、または合成の接着因子またはペプチド断片で予めコーティングすることもでき、それらは、例えば、LifeTechnologiesCorp、RDSystemsInc、Genzyme、およびSigmaから市販されている。細胞はまた、予め形成されたコラーゲンゲルまたは合成生体高分子材料などの天然または合成の三次元支持基質内または該基質上に播種することもできる。懸濁培養に関しては、細胞を典型的には、本明細書に記載される培養培地中に懸濁し、スピナーフラスコ、潅流装置、またはバイオリアクターなどの、懸濁液中での細胞の培養を容易にする培養容器中に導入する。CellCultureTechnologyforPharmaceuticalandCellBasedTherapies156174を参照されたい。場合によっては、培地および懸濁細胞のいくらかのレベルの撹拌が必要である。撹拌は、培養中の培地構成成分の変性および細胞の剪断を回避するように、最小限にされ得る。各実験条件についての細胞播種密度は、用いられる特定の培養条件に関して最適化され得る。プラスチック培養容器中での日常的な単層培養については、1~5×105個の細胞cm2の開始播種密度が好ましいと考えられ、懸濁培養ついては、より高い播種密度が使用され得る。哺乳動物細胞は典型的には、好ましくは約37°Cの細胞インキュベーター内で培養されるが、これは30°C~39°Cの範囲であってもよい。非哺乳動物細胞は、培養に関してその他の好ましい温度を有し得る。哺乳動物細胞および非哺乳動物細胞の培養は、例えば、最適な細胞増殖のためのある温度において、および最適なタンパク質ペプチド断片またはウイルス産生のための別の温度において、段階的に行われ得る。インキュベーター雰囲気は加湿されてよく、空気中の約3~10の二酸化炭素、より好ましくは空気中の約5~10の二酸化炭素、および最も好ましくは空気中の約3~8の二酸化炭素を含み得るが、ある種の細胞株の培養は、最適な結果を得るために空気中の20もの二酸化炭素を必要とし得る。培養培地pHは、細胞型に応じた好ましい範囲内、例えば約6~85、好ましくは約71~76、もしくは好ましくは約71~74、もしくはより好ましくは約71~73、または昆虫細胞については好ましくは約6~63であってよい。閉鎖培養中またはバッチ培養中の細胞は、細胞が約15~20×106個の細胞mlの密度に達した時点で、完全な培地交換を受けるべきである。潅流培養における細胞は、持続的な再循環基準で新鮮な培地を受け取る。8ウイルス産生懸濁培養または単層培養における細胞の培養に加えて、本培地は、哺乳動物細胞からウイルスを産生させる方法において使用することもできる。そのような方法は、ウイルスによる細胞の感染を促進するのに適した条件下で、細胞をウイルスと接触させる段階;および細胞によるウイルスの産生を促進するのに適した条件下で、本明細書に記載される小ペプチドまたはジペプチド含有細胞培養培地中で該細胞を培養する段階を含む。細胞は、培養培地中での細胞の培養前、培養中、または培養後のいずれかに、ウイルスと接触させることができる。哺乳動物細胞にウイルスを感染させるための最適な方法は当技術分野で周知であり、当業者によく知られている。本明細書に記載される培養培地中で培養されたウイルス感染哺乳動物細胞は、本明細書に記載される細胞培養培地以外の細胞培養培地中で培養された細胞よりも高いウイルス力価を生じることが予測され得る。これらの方法は、アデノウイルスおよびその誘導体、アデノ随伴ウイルスおよびその誘導体、レトロウイルスおよびその誘導体、レンチウイルスおよびその誘導体、バキュロウイルスなどの昆虫ウイルスおよびその誘導体、センダイウイルスおよびその誘導体などを含むがこれらに限定されない、様々な哺乳動物ウイルスまたは哺乳動物細胞に感染するように適合化されたウイルス、ウイルス様粒子、およびウイルスベクターを産生するために使用することができる。本明細書に記載される培養培地中で感染細胞を培養した後、組換えウイルスであってよいウイルス、ウイルスベクター、ウイルス粒子、またはそれらの構成成分を含む使用済みの培地を、ワクチン産生、miRNA、siRNAなどのような阻害性RNA分子の産生、細胞トランスフェクションまたは遺伝子療法で使用するためのウイルスベクターの産生、動物または細胞培養物の感染、ウイルスタンパク質およびまたは核酸の研究などを含む、様々な目的のために使用することができる。または、ウイルス、ウイルスベクター、ウイルス粒子またはそれらの構成成分は任意で、当業者によく知られている、タンパク質単離およびまたは核酸単離のための技術によって、使用される培養培地から単離されてもよい。1つの態様において、細胞はVLPを産生する。VLPまたはウイルス様粒子とは、脂質、炭水化物、タンパク質、および核酸などの生体物質を含む1つまたは複数の化合物を細胞内に送達するための媒体である。VLPを用いて送達され得るその他の化合物には、色素、標識、および薬物が含まれる。VLPは一般的に、少なくとも1つのウイルスタンパク質を含む。典型的には、ウイルスタンパク質は化合物を取り囲む。しかしながら、特定の事例では、送達されるべき化合物を、VLP内への封入以外の手段によってVLPと会合させることができる。例えば、化合物をウイルスタンパク質に結合させることができ、または存在する場合には外被に組み込むことができる。1つの局面においては、VLPを、DNA、RNA,RNAおよびDNAの両方、もしくはRNADNAハイブリッド、または当技術分野で公知の誘導体などの様々な型の核酸と会合させることができる。VLPの例には、VIRAPOWERアデノウイルスおよびレンチウイルスベクターキットを用いて産生されるウイルス粒子産物が含まれる。VLPを調製するために使用され得るウイルスには、例えば、ファージ、T奇数系ファージ、バクテリオファージφ29、λファージなど、バキュロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、センダイウイルス、ポックスウイルス、およびアルファウイルスが含まれる。VLPを調製するために使用され得るウイルスのさらなる例、およびVLPを調製する方法は、本明細書の他所に記載されている。9組換えタンパク質産生本培養培地はまた、上記の細胞、好ましくは哺乳動物細胞、および特に懸濁液中で増殖された哺乳動物細胞から、組換えタンパク質を産生させる方法において使用することもできる。本培養培地は、哺乳動物細胞の迅速で高密度の懸濁培養を提供するため、本方法によって組換えタンパク質の産生向上が容易になる。タンパク質とは、全長タンパク質、タンパク質断片、ペプチド、切断タンパク質産物、架橋タンパク質産物、タグ化ペプチドまたはタンパク質などのいずれかを意味する。タンパク質とはまた、組換えタンパク質、変異タンパク質、操作されたタンパク質、キメラタンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、活性タンパク質、プロセシングされたタンパク質などを含む、天然および改変タンパク質のすべての型を意味する。タンパク質は細胞もしくは細胞株によって天然で発現されてもよいし、または細胞株が、トランスフェクション、形質導入、エレクトロポレーションなどを含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の標準的な遺伝子操作法を用いて、これを発現するように操作されてもよい。結果として得られたタンパク質またはペプチドは、所望のレベルの純度まで精製または単離され得る。本発明の培地およびまたは供給物組成物を用いて産生または発現され得るタンパク質もしくはペプチドまたはそれらの断片には、ラミニン、フィブロネクチン、インテグリンなどのような細胞外タンパク質、カスパーゼ、プロテアーゼ、スブチリシン、キナーゼ、RNAse、DNAseなどのような酵素、インスリン、PTHrPなどのようなペプチドホルモン、膜タンパク質、受容体、核タンパク質、小胞体タンパク質などを含む細胞内タンパク質、抗体、抗体の重鎖または軽鎖などの抗体断片、抗原結合部位またはモチーフ、キメラ抗体などが含まれるが、これらに限定されない。キメラ抗体は、種種キメラまたはクラスクラスキメラであってよい。本発明の組成物および培地供給物を用いて産生され得る発現されたタンパク質またはポリペプチドは、治療における下流の用途のために外来性作用物質を含まない動物起源不含タンパク質を産生するために、植物細胞などの非動物細胞株において発現されるヒトまたは哺乳動物由来タンパク質配列であってよい。本発明に従ってポリペプチドを産生する方法は、細胞によるポリペプチドの発現に適した条件下で、本明細書に記載される小ペプチドまたはジペプチド含有細胞培養培地中で、ポリペプチドを産生するように遺伝子操作された細胞を培養する段階を含む。関心対象のポリペプチドを発現するように哺乳動物細胞を遺伝子操作するための最適な方法は、当技術分野で周知であり、したがって当業者によく知られている。例えば、CellCultureTechnologyforPharmaceuticalandCellBasedTherapies1540を参照されたい。本発明の培地中で培養する前に、細胞を遺伝子操作することができ、または該培地中での培養に供した後に、細胞に1つもしくは複数の外因性核酸分子をトランスフェクトすることもできる。遺伝子操作された細胞は、上記の方法に従って、単層培養として、またはより好ましくは懸濁培養として、本培養培地中で培養することができる。細胞の培養後、当業者によく知られているタンパク質単離の技法に従って、関心対象のポリペプチドを細胞およびまたは使用済みの培養培地から任意に精製することができる。10培養培地中または濃縮供給物中の小ペプチドの検出本明細書に記載される小ペプチドおよびジペプチドは、酸加水分解、液体クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動A661279285、HPLCA7631122、または質量分析を含むがこれに限定されない、アミノ酸およびまたは小ペプチドを検出するための、当技術分野で公知の任意の技法を用いて検出することができる。アミノ酸組成物および濃縮物のクロマトグラフィー解析のためのペプチドの酸加水分解は、当技術分野で周知である。酸加水分解の前と後のアミノ酸ピークのクロマトグラフィープロファイルの比較から、培地、供給物、または補充物中のアミノ酸の組成および濃度、ならびにひいては小ペプチドが示され得る。例えば、培地中の小ペプチド内にチロシンが存在する場合には、その濃度は培地試料の酸加水分解物中で、酸加水分解の前の同一培地試料のピーク高領域と比較して増加する。例として、本明細書に記載されるアラニルチロシンおよびアラニルシステインジペプチドを、AccQTagUltraカラムにおける6アミノキノリルNヒドロキシスクシンイミジルカルバメート誘導体化アミノ酸混合物のHPLC分離を含む、vanWandelenetalJChromA7631122に記載されている方法論を用いて検出した。検出器のパラメータは以下のとおり設定した:波長モード:単一波長;波長:260nm;サンプリング速度:20;時定数:04000。例示的な実行においてこれらのパラメータを用いて、アラニルチロシンジペプチドの試料は、内部標準の直後の約6172分のピーク溶出時間を有し、別の例示的な実行において、アラニルシステインジペプチドの試料は、リジンとチロシンの間の6631分のピーク溶出速度を有した。したがって、超高速液体クロマトグラフを用いるこのAccQTagUltraプレカラム誘導体化法は、任意の試料培地または供給補充物が、システインまたはチロシンを含む小ペプチド、例えばジペプチドであるアラニルチロシンまたはアラニルシステインを含むかどうかを見るためにこれを試験するための1つの方法を提供する。これと同じ方法はまた、関心対象の他のジペプチドを含むその他の小ペプチドを検出するために使用することもできる。加えて、本明細書に記載されるジペプチドは、液体クロマトグラフィーと質量分析検出によって定量することもできる。四重極時間飛行型質量分析計SYNAPTHDMSシステム、MilfordMAと連結された逆相液体クトマログラフィーカラムHSST318μm、内径21mm×150mmを用いて、分離を行った。極性化合物の最適な分離のためのイオン対形成剤として、全フッ素置換カルボン酸を使用した。移動相Aは、水中の01ギ酸および005パーフルオロペンタン酸であり、移動相Bは、80アセトニトリル中の01ギ酸および005パーフルオロペンタン酸であった。試薬はすべてLCMS等級であった。超高速液体クロマトグラフィー勾配は、15分間にわたり04mL分の流速で、移動相Bの1~45にわたって直線的であった。質量スペクトルを、連続体の、正エレクトロスプレー、かつVモードにおいて、70~1000Da内で05秒ごとに収集した。プロトン化LアラニルLシステイン二量体およびプロトン化LアラニルLチロシンイオンは、全イオンクロマトグラムからそれぞれ383105Daおよび253118Daとして抽出された。プロトン化LアラニルLシステイン二量体およびプロトン化LアラニルLチロシンイオンの保持時間は、それぞれ960分および875分であった。特に定義されていない限り、本明細書で用いられる技術用語および科学用語はすべて、当業者によって共通して理解されている意味と同じ意味を有する。矛盾する場合は、定義を含めて本明細書が優先する。本明細書に記載される方法および適用に対するその他の適切な修正および適合化が明らかであり、本発明またはその任意の態様の範囲から逸脱することなくそれらがなされ得ることは、当業者には容易に明白であろう。加えて、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、限定を意図するものではない。本明細書において引用される出版物、特許出願、特許、およびその他の参考文献はすべて、その全体が参照により組み入れられる。実施例1:ジペプチド含有培養培地の作製ジペプチドであるアラニルチロシンおよびアラニルシステインを含む例示的な細胞培養培地を調製した。具体的には、グルコースおよび濃縮アミノ酸の混合物を含む水性細胞培養基礎培地に、ジペプチドであるアラニルチロシンおよびアラニルシステインを乾燥粉末として添加し、溶解するまで混合した。アラニルチロシンは、約40gLの濃度で細胞培養培地に添加した。アラニルシステインは、約30gLの濃度で細胞培養培地に添加した。水中で観察されるジペプチドの溶解度は、AlaTyrについては約154gL、AlaCysについては>100gL、およびAlaCys2二量体については約87gLであった。比較として、水中でのLチロシンの溶解度は、20°Cで約038gLである。遊離のLシステインは容易に酸化されてシスチンになる。塩酸Lシステインは酸性水溶液中でかなり安定しているが、中性またはアルカリ性水溶液中では、これはまた好気的酸化によりLシスチンに変換される。水中でのLシスチンの溶解度は、25°Cで約011gLであった。実施例2:流加試験細胞培養基礎培地CDFortiCHO中で増殖され、グルコースグルコース;図1:黒四角の曲線およびフォワードスラッシュのバー、または低レベルのシステインもしくはチロシンを含む濃縮アミノ酸混合物で、グルコースの混合物実施例1に記載されるジペプチド含有培養培地もしくは供給物aaDP供給物FP2およびFP3;図1を参照されたい:黒丸の曲線および白いバー;黒菱形の曲線およびバックワードスラッシュのバーのいずれかで補充された、IgG産生CHO細胞を用いて、統合流加試験を行った。図1中のaaは、低レベルのシステインおよびチロシンを含む濃縮アミノ酸混合物とグルコースの混合物を指す。試験したその他の細胞培養基礎培地は、CDOptiCHO、CDCHOであった。いずれもLifeTechnologiesCorp、CarlsbadCAによる。使用された好ましい培地は、CDFortiCHOであった。濃縮アミノ酸の例示的な混合物は、例えば、CHOCDEfficientFeedA、CHOCDEfficientFeedB、CHOCDEfficientFeedキット、CDEfficientFeedCAGTである。本発明の細胞培養培地または補充供給物中のシステインおよびチロシン含有小ペプチドは、当業者によって判断され得るとおり、任意の例示的な細胞培養基礎培地と、所望の細胞型の増殖に適したグルコース、ビタミン、微量元素などを任意に含む任意の例示的な化学量論的に平衡化された濃縮アミノ酸の混合物と共に使用されるように設計されている。pH制御設定点を70005とし、かつpO2制御設定点を30として、作用量500mLのDasGipバイオリアクター中で細胞を増殖させた。グルコースが補充されるCHO細胞には、グルコースレベルが2gLに達した際にはいつでも3gLのグルコースが自動的に供給された。ジペプチドが補充されるCHO細胞は、2つの供給スケジュールに供した。第1の供給スケジュールでは、CHO細胞に、4日目から13日目まで毎日、2のジペプチド含有培地が供給された。第2の供給スケジュールでは、CHO細胞に、5日目から14日目まで毎日、2のジペプチド含有培地が供給された。CDFortiCHO培地中で増殖され、かつグルコースが補充された細胞は、CDOptiCHOまたはCDCHOに基づく流加工程に匹敵するか、またはそれよりも優れたIgG生産性を有した。CDFortiCHO中で増殖され、かつ濃縮アミノ酸および実施例1のジペプチド含有培地が補充されたCHO細胞は、12日後の生存度が向上し、また15日目におけるCDFortiCHOグルコースの約1600mgLのIgG力価と比較して、15日目までに約3200mgLのIgG力価となり、生産性レベルが倍増した。CDFortiCHOaaジペプチド供給物に関する2つの供給スケジュールのうち、両者ともが良好に働き、IgG産生の匹敵するレベルを示した。FP3プロファイルは、FP2よりもより良好に維持されたグルコースレベルおよびIgG産生のより一定したレベルを有したが、FP2プロファイルはより高いピーク細胞密度を促進した。注目すべきは、ジペプチド含有細胞培養培地は、著しく減少した容積供給率で、増強された細胞密度および生産性レベルをもたらし、本明細書に記載されるジペプチド含有細胞培養培地を使用することのさらに別の利点を提供する。ジペプチドであるアラニルチロシンおよびアラニルシステインを含む液体細胞培養培地または供給物溶液は、2~8°Cで保存することができ、10ヵ月超の間沈殿物のない状態のままであり、したがってそのような濃縮溶液について予測される液体安定性よりも、有意により長い液体安定性を実証する。本明細書において引用される特許、特許出願、および公開された参考文献はすべて、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。本発明をその好ましい態様を参照して詳細に示し、記載してきたが、添付の特許請求の範囲によって包含される本発明の範囲から逸脱することなく、本発明において形式および詳細における様々な変更がなされ得ることが当業者によって理解されよう。"