"表1、2、3又は4のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と、少なくとも約60同一のアミノ酸配列を含むペプチド模倣大環状分子。前記ペプチド模倣大環状分子のアミノ酸配列が、表1、2、3又は4のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約60同一であり、かつ、該大環状分子がトリアゾール又はチオエーテルを含まない、請求項1のペプチド模倣大環状分子。前記ペプチド模倣大環状分子のアミノ酸配列が、表1、2、3又は4のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約80同一である、請求項1のペプチド模倣大環状分子。前記ペプチド模倣大環状分子のアミノ酸配列が、表1、2、3又は4のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約90同一である、請求項1のペプチド模倣大環状分子。前記ペプチド模倣大環状分子のアミノ酸配列が、表1、2、3又は4のアミノ酸配列からなる群より選択される、請求項1のペプチド模倣大環状分子。該ペプチド模倣大環状分子がヘリックスを含む、請求項1のペプチド模倣大環状分子。該ペプチド模倣大環状分子がα-ヘリックスを含む、請求項1のペプチド模倣大環状分子。該ペプチド模倣大環状分子がα,α-二置換アミノ酸を含む、請求項1のペプチド模倣大環状分子。該ペプチド模倣大環状分子が少なくとも2つのアミノ酸のα位同士を連結する架橋剤を含む、請求項1のペプチド模倣大環状分子。前記2つのアミノ酸の少なくとも1つがα,α-二置換アミノ酸である、請求項9のペプチド模倣大環状分子。請求項1~10のいずれか1項に記載のペプチド模倣大環状分子であって、該ペプチド模倣大環状分子は式を有し、式中、A、C、D、及びEはそれぞれ独立して、天然又は非天然のアミノ酸であり、かつ、D及びEは独立してキャッピング基を含んでいてもよく;Bは、天然若しくは非天然のアミノ酸、アミノ酸類似体、[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]、又は[-NH-L3-]であり;R1及びR2は独立して、非置換又はハロ置換されている、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアルキル、又はヘテロシクロアルキルであり;R3は、R5で置換されていてもよい、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリールであり;Lは式-L1-L2-の大環状分子形成リンカーであり;L1及びL2は独立してアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、シクロアリーレン、ヘテロシクロアリーレン、又は[-R4-K-R4-]nであり、それぞれはR5で置換されていてもよく;R4はそれぞれアルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンであり;Kはそれぞれ、O、S、SO、SO2、CO、CO2、又はCONR3であり;R5はそれぞれ独立して、ハロゲン、アルキル、-OR6、-NR62、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R6はそれぞれ独立して、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R7は、R5で置換されていてもよい、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアリール若しくはヘテロシクロアリール、又はD残基を有する環状構造の一部であり;R8は、R5で置換されていてもよい、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアリール若しくはヘテロシクロアリール、又はE残基を有する環状構造の一部であり;v及びwは独立して1~1000の整数であり;uは1~10の整数であり;x、y及びzは独立して0~10の整数であり;並びにnは1~5の整数である。Lがチオエーテル又はトリアゾールを含まない、請求項11のペプチド模倣大環状分子。該ペプチド模倣大環状分子が、該ペプチド模倣大環状分子内の第一のアミノ酸の主鎖のアミノ基と第二のアミノ酸を連結する架橋剤を含む、請求項1のペプチド模倣大環状分子。請求項13のペプチド模倣大環状分子であって、該ペプチド模倣大環状分子は式IV又はIVaを有し、式中、A、C、D、及びEはそれぞれ独立して天然又は非天然のアミノ酸であり、かつ、D及びEは独立してキャッピング基を含んでいてもよく;Bは天然若しくは非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]、又は[-NH-L3-]であり;R1及びR2は独立して、非置換又はハロ置換されている、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアルキル若しくはヘテロシクロアルキル、又はE残基を有する環状構造の一部であり;R3は、R5で置換されていてもよい、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリールであり;L1及びL2は独立して、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、シクロアリーレン、ヘテロシクロアリーレン、又は[-R4-K-R4-]nであり、それぞれはR5で置換されていてもよく;R4はそれぞれ、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンであり;Kはそれぞれ、O、S、SO、SO2、CO、CO2、又はCONR3であり;R5はそれぞれ独立して、ハロゲン、アルキル、-OR6、-NR62、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R6はそれぞれ独立して、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R7は、R5で置換されていてもよい、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリールであり、v及びwは独立して1~1000の整数であり;uは1~10の整数であり;x、y及びzは独立して0~10の整数であり;並びにnは1~5の整数である。L1及びL2は、単独でも或いは組み合わせても、チオエーテル又はトリアゾールを含まない、請求項14のペプチド模倣大環状分子。L1及びL2が独立してアルキレン、アルケニレン又はアルキニレンである、請求項11のペプチド模倣大環状分子。L1及びL2が独立してC3-C10アルキレン又はアルケニレンである、請求項11のペプチド模倣大環状分子。L1及びL2が独立してC3-C6アルキレン又はアルケニレンである、請求項11のペプチド模倣大環状分子。R1及びR2がHである、請求項11のペプチド模倣大環状分子。R1及びR2が独立してアルキルである、請求項11のペプチド模倣大環状分子。R1及びR2がメチルである、請求項11のペプチド模倣大環状分子。請求項1のペプチド模倣大環状分子を対象に投与する工程を含む、対象の癌の治療方法。請求項1のペプチド模倣大環状分子を対象に投与する工程を含む、対象中のp53及び/又はHDM2及び/又はHDMXの活性の調節方法。請求項1のペプチド模倣大環状分子を対象に投与する工程を含む、対象中のp53とHDM2及び/又はp53とHDMXタンパク質間の相互作用を拮抗する方法。[0020]本明細書で使用する場合、大環状分子という用語は、少なくとも9個の共有結合した原子で形成されている環又は輪を含む化学構造を有する分子を指す。[0021]本明細書で使用する場合、ペプチド模倣大環状分子又は架橋ポリペプチドという用語は、同じ分子の中に、複数のペプチド結合で連結された複数のアミノ酸残基と、第一の天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸残基又は類似体と第二の天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸残基又は類似体との間に大環状分子を形成する少なくとも1つの大環状分子形成リンカーを含む化合物を指す。ペプチド模倣大環状分子は、大環状分子形成リンカーが第一のアミノ酸残基又は類似体のα炭素を第二のアミノ酸残基又は類似体のα炭素に連結している態様を含む。ペプチド模倣大環状分子は、1つ以上のアミノ酸残基及び/又はアミノ酸類似体残基との間に1つ以上の非ペプチド結合を含んでいてもよく、かつ、大環状分子を形成するアミノ酸残基又はアミノ酸類似体残基に加え、1つ以上の天然に存在しないアミノ酸残基又はアミノ酸類似体残基を含んでいてもよい。ペプチド模倣大環状分子に関連して対応する架橋されていないポリペプチドについて言及する場合、これは大環状分子と同じ長さで、大環状分子に対応する野生型配列に等価な天然のアミノ酸を含むポリペプチドに関すると理解される。[0022]本明細書で使用する場合、安定性という用語は、円二色性、NMR、または別の生物物理学的手段によって測定され、本発明のペプチド模倣大環状分子によって規定される溶液中の二次構造の維持、又はインビトロ若しくはインビボでのタンパク質分解に対する抵抗性を指す。本発明で考慮される二次構造の非限定的な例は、α-へリックス、β-ターン、およびβ-プリーツシートである。[0023]本明細書で使用する場合、らせん構造の安定性という用語は、円二色性又はNMRによって測定される、本発明のペプチド模倣大環状分子によるα-へリックス構造を維持することを指す。例えばいくつかの態様では、本発明のペプチド模倣大環状分子は対応する架橋されていない大環状分子と比較して、円二色性によって決定される少なくとも1.25、1.5、1.75又は2倍高いαらせん性を示す。[0024]α-アミノ酸又は単にアミノ酸という用語は、アミノ基とα-炭素と呼ばれる炭素に結合したカルボキシル基の両方を含む分子を指す。適切なアミノ酸としては、天然に存在するアミノ酸のD-及びL-異性体の両方、並びに有機合成又は他の代謝経路によって調製される天然に存在しないアミノ酸が挙げられるがこれらには限定されない。文脈上そうでないことが特に示されない限り、本明細書で使用する場合アミノ酸という用語はアミノ酸類似体を含むものとする。[0025]天然に存在するアミノ酸という用語は、自然界で合成されるペプチド中に一般的に見られ、一文字の略語、A、R、N、C、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、及びVによって知られている20種のアミノ酸のうちのいずれか1つを指す。[0026]アミノ酸類似体又は非天然アミノ酸という用語は、アミノ酸に構造的に類似しており、かつ、ペプチド模倣大環状分子の形成において、アミノ酸に置き換えることができる分子を指す。アミノ酸類似体としては、アミノ基とカルボキシル基の間に1つ以上のメチレン基をさらに包含すること例えばα-アミノ-β-カルボキシ酸、又は同様に反応基によってアミノ基若しくはカルボキシ基を置換すること例えば第二級若しくは第三級アミンで第一級アミンを置換すること又はエステルでカルボキシ基を置換することを除き、本明細書において定義されるアミノ酸と構造的に同一である化合物が挙げられるがこれらには限定されない。非天然アミノ酸は以下の構造を含む。[0027]非必須アミノ酸残基とは、その必須の生物学的又は生化学的活性例えば受容体への結合又は活性化を失うことも或いは実質的に変化させることもなく、ポリペプチドの野生型配列から変化させることが可能な残基である。必須アミノ酸残基とは、ポリペプチドの野生型配列から変化させた場合に、ポリペプチドの必須の生物学的若しくは生化学的活性を、消失或いは実質的に消失させる残基である。[0028]同類アミノ酸置換とは、アミノ酸残基を、類似した側鎖を有するアミノ酸残基と入れ替える置換である。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖例えばK、R、H、酸性側鎖例えば、D、E、非荷電極性側鎖例えば、G、N、Q、S、T、Y、C、非極性側鎖例えば、A、V、L、I、P、F、M、W、β分枝側鎖例えば、T、V、I、及び芳香族側鎖例えば、Y、F、W、Hをもつアミノ酸が挙げられる。従って、ポリペプチド内で非必須と予測されるアミノ酸残基を、例えば、好ましくは、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基と入れ替える。他の許容可能な置換の例は、等比体積の考慮例えば、メチオニンに対してはノルロイシン或いは他の特性例えば、フェニルアラニンに対する2-チエニルアラニンに基づく置換である。[0029]キャッピング基という用語は、対象ペプチド模倣大環状分子のポリペプチド鎖のカルボキシ末端又はアミノ末端のいずれかに生じる化学部分を指す。カルボキシ末端のキャッピング基としては、修飾されていないカルボン酸すなわち-COOH又は置換基を有するカルボン酸が挙げられる。例えばカルボキシ末端は、C-末端にカルボキサミドを生じさせるためにアミノ基によって置換される場合がある。様々な置換基としては第一級アミンやペグ化第二級アミンを含む第二級アミンが挙げられるがこれらには限定されない。代表的なC-末端に対する第二級アミンのキャッピング基には、が含まれる。アミノ末端のキャッピング基としては、修飾されていないアミンすなわち-NH2又は置換基を有するアミンが挙げられる。例えばアミノ末端は、N-末端にカルボキサドを生じさせるためにアシル基で置換される場合がある。様々な置換基としては、C1-C6カルボニル、C7-C30カルボニルを含む置換されたアシル基やペグ化カルバミン酸が挙げられるがこれらには限定されない。代表的なN-末端に対するキャッピング基には、が含まれる。[0030]大環状分子又は大環状分子形成リンカーと関連して本明細書で使用する場合、メンバーという用語は、大環状分子を形成する又は大環状分子を形成することができる原子を指し、かつ、置換基又は側鎖の原子を除外する。水素置換基若しくはフルオロ置換基又はメチル側鎖は大環状分子の形成に関与しないため、類推から、シクロデカン、1,2-ジフルオロ-デカン及び1,3-ジメチルシクロデカンは全て10員環の大環状分子と見なされる。[0031]上記の記号は分子構造の一部として用いられる場合、単結合又はトランス若しくはシス二重結合を指す。[0032]アミノ酸側鎖という用語は、アミノ酸の中のα-炭素に結合している部分を指す。例えば、アラニンのアミノ酸側鎖はメチルであり、フェニルアラニンのアミノ酸側鎖はフェニルメチルであり、システインのアミノ酸側鎖はチオメチルであり、アスパラギン酸のアミノ酸側鎖はカルボキシメチルであり、チロシンのアミノ酸側鎖は4-ヒドロキシフェニルメチルであるなどである。他の天然に存在しないアミノ酸側鎖、例えば自然に生じるもの例えばアミノ酸代謝物又は合成されるもの例えば、α,α二置換アミノ酸もまた含まれる。[0033]α,α二置換アミノ酸という用語は、2種の天然又は非天然アミノ酸側鎖に接している炭素α-炭素に結合しているアミノ基及びカルボキシル基の両方を含む分子又は部分を指す。[0034]ポリペプチドという用語は、共有結合例えばアミド結合によって連結している2個以上の天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸を包含する。本明細書に記載するポリペプチドには、完全長タンパク質例えば、完全に処理されたタンパク質及びより短いアミノ酸配列例えば、天然に存在するタンパク質の断片又は合成ポリペプチド断片が含まれる。[0035]本明細書で使用する場合、大環状化試薬又は大環状分子形成試薬という用語は、2つの反応基間の反応を媒介することで、本発明のペプチド模倣大環状分子を調製するために用いることができる任意の試薬を指す。反応基は、例えば、アジ化物およびアルキンであってもよく、この場合、大環状化試薬としては、CuBr、CuI、又はCuOTfなどの反応性のCuI種、並びにCuCO2CH32、CuSO4、及びCuCl2などのCuII塩アスコルビン酸又はアスコルビン酸ナトリウムなどの還元剤を添加することによってその場で活性CuI試薬に変換させることができる、を提供する試薬のようなCu試薬が挙げられるがこれらには限定されない。大環状分子化試薬としてはさらに、例えば、反応性のRuII種を提供することができるCpRuClPPh32、[CpRuCl]4、又は他のRu試薬などの、当該分野において既知のRu試薬を挙げることができる。他の例では、反応基は末端のオレフィンである。そのような態様では、大環状分子化試薬又は大環状分子形成試薬はメタセシス触媒であり、VIII族遷移金属カルベン触媒などの安定した後周期遷移金属カルベン錯体触媒を含むがこれらには限定されない。例えば、そのような触媒は、2酸化状態で、電子数が16、かつ五配位のRu金属中心及びOs金属中心である。その他の触媒は、GrubbsらのRingClosingMetathesisandRelatedProcessesinOrganicSynthesis有機合成における閉環メタセシスと関連過程AccChemRes199528446452及び米国特許第5,811,515号に開示されている。さらに他の例では、反応基はチオール基である。そのような態様では、大環状化試薬は例えば、2個のチオール反応基ハロゲン基などで官能化されたリンカーである。[0036]ハロ又はハロゲンという用語は、フッ素、塩素、臭素、若しくはヨウ素又はそのラジカルを指す。[0037]アルキルという用語は、表示されている数の炭素原子を含む、直鎖又は分枝鎖の炭化水素鎖を指す。例えばC1-C10は、その基がその中に1~10個両端を含むの炭素原子を有することを示す。いかなる数も明示されていない場合、アルキルとは、その中に1~20個両端を含むの炭素原子を有する鎖直鎖または分枝鎖である。[0038]アルキレンという用語は、二価アルキルすなわち-R-を指す。[0039]アルケニルという用語は、炭素-炭素二重結合を1つ以上もつ、直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖を指す。アルケニル部分は、示された数の炭素原子を含有する。例えばC2-C10は、その基がその中に2~10個両端を含むの炭素原子を有することを示す。低級アルケニルという用語はC2-C6アルケニル鎖を指す。いかなる数も明示されていない場合、アルケニルとは、その中に2~20個両端を含むの炭素原子を有する鎖直鎖または分枝鎖である。[0040]アルキニルという用語は、炭素-炭素三重結合を1つ以上もつ、直鎖又は分枝鎖の炭化水素鎖を指す。アルキニル部分は示された数の炭素原子を含有する。例えばC2-C10は、その基がその中に2~10個両端を含むの炭素原子を有することを示す。低級アルキニルという用語は、C2-C6アルキニル鎖を指す。いかなる数も明示されていない場合、アルキニルとは、その中に2~20個両端を含むの炭素原子を有する鎖直鎖又は分枝鎖である。[0041]アリールという用語は、炭素が6個の単環芳香族環系又は炭素が10個の二環式芳香族環系を指し、ここで各環の0、1、2、3、又は4個の原子は、置換基によって置換される。アリール基の例としては、フェニル、ナフチルなどが挙げられる。アリールアルキルという用語又はアラルキルという用語は、アリールで置換されているアルキルを指す。アリールアルコキシという用語は、アリールで置換されているアルコキシを指す。[0042]アリールアルキルとは、上で定義したアリール基であって、そのアリール基の水素原子のうちの1つが、上で定義したC1-C5アルキル基で置き換えられているものを指す。アリールアルキル基の代表例としては、2-メチルフェニル、3-メチルフェニル、4-メチルフェニル、2-エチルフェニル、3-エチルフェニル、4-エチルフェニル、2-プロピルフェニル、3-プロピルフェニル、4-プロピルフェニル、2-ブチルフェニル、3-ブチルフェニル、4-ブチルフェニル、2-ペンチルフェニル、3-ペンチルフェニル、4-ペンチルフェニル、2-イソプロピルフェニル、3-イソプロピルフェニル、4-イソプロピルフェニル、2-イソブチルフェニル、3-イソブチルフェニル、4-イソブチルフェニル、2-sec-ブチルフェニル、3-sec-ブチルフェニル、4-sec-ブチルフェニル、2-t-ブチルフェニル、3-t-ブチルフェニル、及び4-t-ブチルフェニルが挙げられるがこれらには限定されない。[0043]アリールアミドとは、アリール基の水素原子のうちの1つが1つ以上の-CONH2基で置き換えられている、上で定義したアリール基を指す。アリールアミド基の代表例としては、2-CONH2-フェニル、3-CONH2-フェニル、4-CONH2-フェニル、2-CONH2-ピリジル、3-CONH2-ピリジル、及び4-CONH2-ピリジルが挙げられる。[0044]アルキルヘテロ環とは、C1-C5アルキル基の水素原子のうちの1つがヘテロ環で置き換えられている、上で定義したC1-C5アルキル基を指す。アルキルヘテロ環基の代表例としては、-CH2CH2-モルホリン、-CH2CH2-ピペリジン、-CH2CH2CH2-モルホリン、及び-CH2CH2CH2-イミダゾールが挙げられるがこれらには限定されない。[0045]アルキルアミドとは、C1-C5アルキル基の水素原子のうちの1つが-CONH2基で置き換えられている、上で定義したC1-C5アルキル基を指す。アルキルアミド基の代表例としては、-CH2-CONH2、-CH2CH2-CONH2、-CH2CH2CH2CONH2、-CH2CH2CH2CH2CONH2、-CH2CH2CH2CH2CH2CONH2、-CH2CHCONH2CH3、-CH2CHCONH2CH2CH3、-CHCONH2CH2CH3、-CCH32CH2CONH2、CH2-CH2NH-CO-CH3、CH2-CH2NH-CO-CH3-CH3、及びCH2-CH2NH-CO-CH=CH2が挙げられるがこれらには限定されない。[0046]アルカノールとは、C1-C5アルキル基の水素原子のうちの1つがヒドロキシル基で置き換えられている、上で定義したC1-C5アルキル基を指す。アルカノール基の代表例としては、-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CHOHCH3、-CH2CHOHCH2CH3、-CHOHCH3及び-CCH32CH2OHが挙げられるがこれらには限定されない。[0047]アルキルカルボキシとは、C1-C5アルキル基の水素原子のうちの1つが、--COOH基で置き換えられている、上で定義したC1-C5アルキル基を指す。アルキルカルボキシ基の代表例としては、-CH2COOH、-CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2COOH、-CH2CH2CH2CH2COOH、-CH2CHCOOHCH3、-CH2CH2CH2CH2CH2COOH、-CH2CHCOOHCH2CH3、-CHCOOHCH2CH3及び-CCH32CH2COOHが挙げられるがこれらには限定されない。[0048]本明細書で使用する場合シクロアルキルという用語は、3~12個の炭素、好ましくは3~8個の炭素、より好ましくは3~6個の炭素を有する飽和環状炭化水素基及び部分的に不飽和の環状炭化水素基を含み、ここでそのシクロアルキル基はさらに置換されていてもよい。シクロアルキル基のいくつかとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられるがこれらには限定されない。[0049]ヘテロアリールという用語は、1~3個のヘテロ原子をもつ5~8員環の単環式、1~6個のヘテロ原子をもつ8~12員環の二環式、又は1~9個のヘテロ原子をもつ11~14員環の三環式の芳香族環系を指し、ここで前記ヘテロ原子はO、N、又はSから選択され例えば炭素原子と、単環式、二環式、又は三環式の場合にはそれぞれ、O、N、又はSの1~3個、1~6個、又は1~9個のヘテロ原子、各環の0、1、2、3、又は4個の原子は置換基によって置換されている。ヘテロアリールの例には、ピリジル、フリル又はフラニル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピリミジニル、チオフェニル又はチエニル、キノリニル、インドリル、チアゾリルなどが含まれる。[0050]ヘテロアリールアルキル又はヘテロアラルキルという用語は、ヘテロアリールで置換されているアルキルを指す。ヘテロアリールアルコキシという用語は、ヘテロアリールで置換されているアルコキシを指す。[0051]ヘテロアリールアルキル又はヘテロアラルキルという用語は、ヘテロアリールで置換されているアルキルを指す。ヘテロアリールアルコキシという用語は、ヘテロアリールで置換されているアルコキシを指す。[0052]ヘテロシクリルという用語は、1~3個のヘテロ原子をもつ5~8員環の単環式、1~6個のヘテロ原子をもつ8~12員環の二環式、又は1~9個のヘテロ原子をもつ11~14員環の三環式の非芳香族環系を指し、ここで前記ヘテロ原子はO、N、又はSから選択され例えば炭素原子と、単環式、二環式、又は三環式の場合にはそれぞれ、O、N、又はSの1~3、1~6、又は1~9個のヘテロ原子、各環の0、1、2、又は3個の原子が置換基によって置換されている。ヘテロシクリル基の例としては、ピペラジニル、ピロリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニルなどが挙げられる。[0053]置換基という用語は、任意の分子、化合物、若しくは部分上の水素原子のような第二の原子又は基に取って代わる基を指す。適した置換基としては、ハロ、ヒドロキシ、メルカプト、オキソ、ニトロ、ハロアルキル、アルキル、アルカリル、アリール、アラルキル、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アルコキシカルボニル、アミド、カルボキシ、アルカンスルホニル、アルキルカルボニル、及びシアノ基が挙げられるがこれらには限定されない。[0054]いくつかの態様では、本発明の化合物は1つ以上の不斉中心を含むため、ラセミ化合物及びラセミ混合物、単一の鏡像異性体、個々のジアステレオマー及びジアステレオマー混合物として生じる。これら化合物のそのような異性体形態は全て、別段の定めが明示されていない限り、本発明に含まれる。いくつかの態様では、本発明の化合物は複数の互変異性形態でも表される。そのような例では、本発明は、本明細書に記載するその化合物の全ての互変異性形態を含む例えば、環系のアルキル化が複数の部位でのアルキル化をもたらす場合、本発明は、そのような反応産物を全て含む。そのような化合物のそのような異性体形態は全て、別段の定めが明示されていない限り、本発明に含まれる。別段の定めが明示されていない限り、本明細書に記載する化合物の結晶形態は全て、本発明に含まれる。[0055]本明細書において用いる場合、増加及び減少という用語はそれぞれ、統計的に有意にすなわち、p<0.1、少なくとも5の増加又は減少を引き起こすことを意味する。[0056]本明細書で使用する場合、変数に関する数値範囲の記述は、その範囲内のいずれかの値に等しい変数で本発明が実施できることを伝えることを目的としている。従って本質的に不連続の変数については、変数は、数値範囲内のその範囲の終点を含む任意の整数値と等しい。同様に、本質的に連続した変数については、変数は、数値範囲内のその範囲の終点を含む任意の実際の値と等しい。非制限的な例としては、0から2までの値をもつと記載されている変数は、その変数が本質的に不連続の場合、0、1、又は2の値をとり、その変数が本質的に連続している場合、0.0、0.1、0.01、0.001の値か、或いは他の≧0から≦2までの任意の実際の値をとる。[0057]本明細書で使用する場合、特に指定のない限り又は若しくは、或いはという語は、及び/又はの包括的な意味で使用され、いずれか/又はの排他的な意味では使用されない。[0058]平均してという用語は、各データポイントにつき、独立した測定を少なくとも3回繰り返して得られた平均値を表す。[0059]生物学的活性という用語は、本発明の大環状分子の構造特性と機能特性を包含する。生物学的活性は例えば、構造的安定性、α-らせん性、標的に対する親和性、タンパク質分解に対する抵抗性、細胞透過性、細胞内安定性、インビボでの安定性、又はその任意の組合せである。[0060]本発明の1つ以上の特定の態様の詳細を、添付の図面及び以下の記述で説明する。本発明の他の特徴、目的、及び利点は、明細書、図面、及び特許請求の範囲から明かとなる。[0061]いくつかの態様では、ペプチド配列はp53タンパク質由来である。[0062]本発明で使用するのに適したp53ペプチドの非限定的な例の一覧を以下に示す。表3等において、Aibは2-アミノイソ酪酸残基を表し、Ac3cはアミノシクロプロパンカルボン酸残基を表す。ペプチド模倣大環状分子[0063]いくつかの態様において本発明のペプチド模倣大環状分子は式Iを有し、式中、A、C、D、及びEはそれぞれ独立して、天然又は非天然のアミノ酸であり、かつ、末端D及びEは独立して、キャッピング基を含んでいてもよく;Bは天然又は非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]、又は[-NH-L3-]であり;R1及びR2は独立して、非置換又はハロ-で置換されている、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアルキル、又はヘテロシクロアルキルでありR3は、R5で置換されていてもよい、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリールであり;Lは式L1L2の大環状分子形成リンカーであり;L1及びL2は独立して、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、シクロアリーレン、ヘテロシクロアリーレン、又は[-R4-K-R4-]nで、それぞれR5で置換されていてもよく;R4はそれぞれ、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンであり;Kはそれぞれ、O、S、SO、SO2、CO、CO2、又はCONR3であり;R5はそれぞれ独立して、ハロゲン、アルキル、-OR6、-NR62、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R6はそれぞれ独立して、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R7は、R5で置換されていてもよい、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリール、又はD残基を有する環状構造の一部であり;R8は、R5で置換されていてもよい、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリール、又はE残基を有する環状構造の一部であり;v及びwは独立して1~1000の整数であり;uは1~10の整数であり;x、y及びzは独立して0~10の整数であり;並びにnは1~5の整数である。[0064]一態様では、L1及びL2は、単独でも或いは組み合わせても、トリアゾール又はチオエーテルを形成しない。[0065]一例では、R1及びR2の少なくとも1つは、非置換又はハロ-で置換されているアルキルである。別の例では、R1及びR2は両方とも独立して、非置換又はハロ-で置換されているアルキルである。いくつかの態様では、R1及びR2の少なくとも1つはメチルである。他の態様では、R1及びR2はメチルである。[0066]本発明のいくつかの態様では、xyzは少なくとも3である。本発明の他の態様では、xyzは、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10である。本発明の大環状分子又は大環状分子前駆体におけるA、B、C、D又はEの発生はそれぞれ独立して選択される。例えば、式[A]xで表される配列は、xが3の場合、アミノ酸が同一でない、例えばGlnAspAlaの態様、及びアミノ酸が同一な、例えばGlnGlnGlnである態様を包含する。このことは、示された範囲内で、x、y、又はzのいずれの値にも適用される。同様にuが1よりも大きい場合、本発明の各化合物は同一の又は異なるペプチド模倣大環状分子を包含し得る。例えば、本発明の化合物は異なる長さのリンカー又は化学組成を含むペプチド模倣大環状分子を含んでもよい。[0067]いくつかの態様において本発明のペプチド模倣大環状分子は、α-ヘリックスの二次構造を含み、かつ、R8は-Hであり、ヘリックス内での水素結合を可能にしている。いくつかの態様では、A、B、C、D又はEの少なくとも1つはα,α-二置換アミノ酸である。一例では、Bがα,α-二置換アミノ酸である。例えば、A、B、C、D又はEの少なくとも1つは2-アミノイソ酪酸である。他の態様では、A、B、C、D又はEの少なくとも1つは、である。[0068]他の態様では、第一のCαから第二のCαまでとされる大環状分子形成リンカーLの長さは、所望されるペプチドの二次構造ペプチド模倣大環状分子の第一のCαから第二のCαまでの間の残基を含むが必ずしもこれらには限定されない残基によって形成されるα-ヘリックスなどを安定させるために選択される。[0069]一態様において式Iのペプチド模倣大環状分子は、であり、式中、R1及びR2はそれぞれ独立して、非置換又はハロ-で置換されている、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアルキル、又はヘテロシクロアルキルである。[0070]関連する態様において式Iのペプチド模倣大環状分子は、又はである。[0071]他の態様において式Iのペプチド模倣大環状分子は、以下に示す式のいずれかの化合物であり、式中、AAは天然又は非天然アミノ酸側鎖を表し、は上で定義した[D]v、[E]wであり、かつ、nは0~20、50、100、200、300、400又は500の間の整数である。いくつかの態様では、nは0である。他の態様では、nは50未満である。[0072]大環状分子形成リンカーLの具体的な態様を以下に示す。[0073]他の態様では、式Iの化合物中のD及び/又はEは細胞内取り込みを促進するためにさらに修飾される。いくつかの態様では、ペプチド模倣大環状分子の脂質付加又はペグ化は、細胞内取り込みを促進し、生物学的利用能を上昇させ、血液循環を向上し、薬物動態を変化させ、免疫原性を低下させ、及び/又は必要とされる投与頻度を低下させる。[0074]他の態様では、式Iの化合物中の[D]及び[E]の少なくとも1つは、ペプチド模倣大環状分子が少なくとも2つの大環状分子形成リンカーを含むような、別の大環状分子形成リンカーを含む部分を表す。特定の態様では、ペプチド模倣大環状分子は2つの大環状分子形成リンカーを含む。ある態様では、uは2である。[0075]本発明のペプチド模倣大環状分子では、本明細書に記載するいずれの大環状分子形成リンカーも、表1~4に示される配列のいずれか及び本明細書で示すR-置換基のいずれかとの任意の組み合わせにおいて使用することができる。[0076]いくつかの態様では、ペプチド模倣大環状分子は少なくとも1つのα-ヘリックスモチーフを含む。例えば、式Iの化合物中のA、B及び/又はCは1つ以上のα-ヘリックスを含む。通常、α-ヘリックスは1回転当たり3~4個のアミノ酸残基を含む。いくつかの態様では、ペプチド模倣大環状分子のα-ヘリックスは1~5回転で構成されており、3~20個のアミノ酸残基を含む。特定の態様では、α-ヘリックスは1回転、2回転、3回転、4回転、又は5回転で構成されている。いくつかの態様では、大環状分子形成リンカーは、ペプチド模倣大環状分子中に含まれているα-ヘリックスモチーフを安定化している。従って、いくつかの態様では、第一のCαから第二のCαまでの大環状分子形成リンカーLの長さは、α-ヘリックスの安定性を高めるために選択される。いくつかの態様において大環状分子形成リンカーは、α-ヘリックスの1回転から5回転にわたっている。いくつかの態様において大環状分子形成リンカーは、α-ヘリックスのおよそ1回転、2回転、3回転、4回転、又は5回転にわたっている。いくつかの態様では、大環状分子形成リンカーの長さは、α-ヘリックスの1回転当たりおよそ5Å~9Åであるか又はα-ヘリックスの1回転当たりおよそ6Å~8Åである。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ1回転にわたっている場合、その長さは、およそ5つの炭素-炭素結合~13の炭素-炭素結合、およそ7つの炭素-炭素結合~11の炭素-炭素結合、又はおよそ9つの炭素-炭素結合と等しい。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ2回転にわたっている場合、その長さは、およそ8つの炭素-炭素結合~16の炭素-炭素結合、およそ10の炭素-炭素結合~14の炭素-炭素結合、又はおよそ12の炭素-炭素結合と等しい。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ3回転にわたっている場合、その長さは、およそ14の炭素-炭素結合~22の炭素-炭素結合、およそ16の炭素-炭素結合~20の炭素-炭素結合、又はおよそ18の炭素-炭素結合に等しい。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ4回転にわたっている場合、その長さはおよそ20の炭素-炭素結合~28の炭素-炭素結合、およそ22の炭素-炭素結合~26の炭素-炭素結合、又はおよそ24の炭素-炭素結合に等しい。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ5回転にわたっている場合、その長さは、およそ26の炭素-炭素結合~34の炭素-炭素結合、およそ28の炭素-炭素結合~32の炭素-炭素結合、又はおよそ30の炭素-炭素結合に等しい。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ1回転にわたっている場合、その結合は、およそ4~12個の原子、およそ6~10個の原子、又はおよそ8個の原子を含む。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ2回転にわたっている場合、その結合は、およそ7~15個の原子、およそ9~13個の原子、又はおよそ11個の原子を含む。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ3回転にわたっている場合、その結合は、およそ13~21個の原子、およそ15~19個の原子、又はおよそ17個の原子を含む。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ4回転にわたっている場合、その結合は、およそ19~27個の原子、およそ21~25個の原子、又はおよそ23個の原子を含む。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ5回転にわたっている場合、その結合は、およそ25~33個の原子、およそ27~31個の原子、又はおよそ29個の原子を含む。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ1回転にわたっている場合、得られる大環状分子は、およそ17~25員環の、およそ19~23員環の、又はおよそ21員環の環を形成する。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ2回転にわたっている場合、得られる大環状分子は、およそ29~37員環の、およそ31~35員環の、又はおよそ33員環の環を形成する。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ3回転にわたっている場合、得られる大環状分子は、およそ44~52員環の、およそ46~50員環の、又はおよそ48員環の環を形成する。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ4回転にわたっている場合、得られる大環状分子は、およそ59~67員環の、およそ61~65員環の、又はおよそ63員環の環を形成する。大環状分子形成リンカーがα-ヘリックスのおよそ5回転にわたっている場合、得られる大環状分子は、およそ74~82員環の、およそ76~80員環の、又はおよそ78員環の環を形成する。[0077]他の態様では、本発明は式IV又はIVaのペプチド模倣大環状分子を提供し、式中、A、C、D、及びEはそれぞれ独立して、天然又は非天然のアミノ酸であり、かつ、末端D及びEは独立してキャッピング基を含んでいてもよく;Bは天然若しくは非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、[-NH-L3-CO-]、[-NH-L3-SO2-]、又は[-NH-L3-]であり;R1及びR2は独立して、非置換又はハロ-で置換された-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアルキル、若しくはヘテロシクロアルキル、又はE残基を有する環状構造の一部であり;R3は、R5で置換されていてもよい、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリールであり;Lは式-L1-L2の大環状分子形成リンカーであり;L1及びL2は独立して、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、シクロアリーレン、ヘテロシクロアリーレン、又は[-R4-K-R4-]nであり、それぞれR5で置換されていてもよく;R4はそれぞれ、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、又はヘテロアリーレンであり;Kはそれぞれ、O、S、SO、SO2、CO、CO2、又はCONR3であり;R5はそれぞれ独立して、ハロゲン、アルキル、-OR6、-NR62、-SR6、-SOR6、-SO2R6、-CO2R6、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R6はそれぞれ独立して、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、蛍光性部分、放射性同位元素又は治療薬であり;R7は、R5で置換されていてもよい、-H、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアリール、又はヘテロシクロアリールであり;v及びwは独立して1~1000の整数であり;uは1~10の整数であり;x、y及びzは独立して0~10の整数であり;並びにnは1~5の整数である。[0078]一例では、L1及びL2は、単独でも或いは組み合わせても、トリアゾール又はチオエーテルを形成しない。[0079]一例では、R1及びR2の少なくとも1つは、非置換又はハロ置換されているアルキルである。別の例では、R1及びR2は両方とも独立して、非置換又はハロ置換されているアルキルである。いくつかの態様では、R1及びR2の少なくとも1つはメチルである。他の態様では、R1及びR2はメチルである。[0080]本発明のいくつかの態様では、xyzは少なくとも1である。本発明の他の態様では、xyzは少なくとも2である。本発明の他の態様では、xyzは1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10である。本発明の大環状分子又は大環状分子前駆体中におけるA、B、C、D又はEの発生はそれぞれ独立して選択される。例えば、式[A]xで表される配列は、xが3の場合、アミノ酸が同一でない、例えばGlnAspAlaの態様、及びアミノ酸が同一な、例えばGlnGlnGlnである態様を包含する。このことは、示された範囲内で、x、y、又はzのいずれの値にも適用される。[0081]いくつかの態様において本発明のペプチド模倣大環状分子は、α-ヘリックスの二次構造を含み、かつ、R8は-Hであり、ヘリックス内での水素結合が可能になっている。いくつかの態様では、A、B、C、D又はEの少なくとも1つはα,α-二置換アミノ酸である。一例では、Bがα,α-二置換アミノ酸である。例えば、A、B、C、D又はEの少なくとも1つは2-アミノイソ酪酸である。他の態様では、A、B、C、D又はEの少なくとも1つは、である。[0082]他の態様では、第一のCαから第二のCαまでと判断される大環状分子形成リンカーLの長さは、所望されるペプチドの二次構造ペプチド模倣大環状分子の第一のCαから第二のCαまでの間の残基を含むが必ずしもこれらには限定されない残基によって形成されるα-ヘリックスなどを安定させるために選択される。[0083]大環状分子形成リンカー-L1-L2-の具体例を以下に示す。ペプチド模倣大環状分子の調製[0084]本発明のペプチド模倣大環状分子は、当該分野で公知の様々な方法のいずれかによって調製することができる。例えば、表1、2、3、又は4の中のXで示される残基はどれも、同じ分子内の第二の残基と架橋を形成することができる残基か、或いはそのような残基の前駆体で置換することができる。[0085]ペプチド模倣大環状分子の形成に影響を及ぼす様々な方法が当該分野で公知である。例えば、式Iのペプチド模倣大環状分子の調製については、SchafmeisteretalJAmChemSoc12258915892;SchafmeisterVerdineJAmChemSoc1225891;WalenskyetalScience30514661470;米国特許第7,192,713号及びPCT出願の国際公開第2008/121767号に記載されている。引用した文献中に開示されているα,α-二置換アミノ酸とアミノ酸前駆体をペプチド模倣大環状分子前駆体ポリペプチドの合成に使用してもよい。例えば、S5-オレフィンアミノ酸はS-α-2’-ペンテニルアラニンであり、R8オレフィンアミノ酸はR-α-2’-オクテニルアラニンである。そのようなアミノ酸を前駆体ポリペプチドに組み込むと末端のオレフィンがメタセシス触媒と反応し、ペプチド模倣大環状分子の形成を引き起こす。様々な態様では、以下のアミノ酸、をペプチド模倣大環状分子の合成に使用することができる。[0086]他の態様では、本発明ペプチド模倣大環状分子は式IV又はIVaの分子である。そのような大環状分子の調製方法は、例えば、米国特許第7,202,332号に記載されている。[0087]本発明を実施するのに適していると想定される、ペプチド模倣大環状分子を形成するための別の方法には、Mustapa、MFirouzMohdetalJOrgChem68pp81938198;YangBinetalBioorgMedChemLett14pp14031406;米国特許第5,364,851号;米国特許第5,446,128号;米国特許第5,824,483号;米国特許第6,713,280号;及び米国特許第7,202,332号に開示されている方法が含まれる。そのような態様では、α位に置換基R-をさらに含むアミノ酸前駆体が使用される。そのようなアミノ酸は大環状分子前駆体の所望の位置に組み込まれ、その位置は、架橋が置換される位置か、或いは大環状分子前駆体の配列のどこであってもよい。その後、前駆体の環化が指示された方法に従って達成される。試験[0088]本発明のペプチド模倣大環状分子の特性を、例えば以下に記載した方法により、試験した。いくつかの態様では、本発明のペプチド模倣大環状分子は、本明細書に記載の置換基を含まない、対応するポリペプチドと比較して、生物学的特性の向上が認められる。α-らせん性決定試験[0089]α-ヘリックスドメインをもつポリペプチドの二次構造は、溶液中では、ランダムコイル構造とα-ヘリックス構造との間の動的平衡に達し、これはしばしば、らせん性の百分率percenthelicityと表される。従って、例えば、α-ヘリックスドメインが溶液中で主にランダムコイルである場合、α-ヘリックス含量は通常、25未満である。一方、最適化したリンカーを含むペプチド模倣大環状分子のα-らせん性は例えば、対応する架橋されていないポリペプチドのα-らせん性よりも少なくとも2倍高い。いくつかの態様では、本発明の大環状分子のα-らせん性は50を上回る。本発明のペプチド模倣大環状分子のらせん性を試験する場合には、その化合物を水溶液に溶解する例えば、pH7の50mMリン酸カリウム溶液又は蒸留水に、25~50μMの濃度で溶解する。円二色性CDスペクトルを分光偏光計例えば、JascoJ710を用い、標準的な測定指標例えば温度、20°C;測定波長、190~260nm;データ取り込み間隔、0.5nm;走査速度、20nm/秒;蓄積、10;応答時間、1秒;バンド幅、1nm;光路長、0.1cmによって得る。平均残基モル楕円率例えば[Φ]222obsをモデルらせん状デカペプチドについて報告されている値Yangetal、MethodsEnzymol130208で除算することによって、各ペプチドのα-ヘリックス含量を算出する。融解温度Tm決定試験[0090]α-ヘリックスなどの二次構造を含む本発明のペプチド模倣大環状分子は例えば、対応する架橋されていないポリペプチドよりも高い融解温度を示す。通常、本発明のペプチド模倣大環状分子は60°Cを上回るTmを示し、これは水溶液中でもその構造の安定性が高いことを表している。大環状分子の形成が融解温度に及ぼす影響を試験するために、ペプチド模倣大環状分子又は修飾していないペプチドを蒸留水に溶解し例えば最終濃度が50μMになるように、温度を変えながら例えば4~95°C、分光偏光計例えば、JascoJ710を使用して、標準的な指標例えば測定波長222nm;データ取り込み間隔、0.5nm;走査速度、20nm/秒;蓄積、10;応答時間、1秒;バンド幅、1nm;温度上昇率:1°C/分;光路長、0.1cmで楕円率の変化を測定することによってTmを決定する。プロテアーゼ耐性試験[0091]ペプチド骨格のアミド結合はプロテアーゼによる加水分解の影響を受けやすいため、ペプチド化合物はインビボでは速やかに分解される。しかしながら、ペプチドヘリックスは通常、アミド骨格を覆うように形成されるため、アミド骨格をタンパク分解による切断から保護することができる。対応する架橋されていないポリペプチドとの分解速度の差を比較するために、本発明のペプチド模倣大環状分子をインビトロでのトリプシンによるタンパク質分解試験に用いてもよい。例えば、ペプチド模倣大環状分子と対応する架橋されていないポリペプチドをトリプシンアガロースと共にインキュベートし、遠心分離することによって反応を様々な時点で停止させ、その後、余剰の基質を定量するためにHPLCに注入して、紫外線吸収を280nmで測定する。簡単に説明すると、ペプチド模倣大環状分子及びペプチド模倣前駆体5mcgをトリプシンアガロースPierceS/E~125と共に0、10、20、90、及び180分間インキュベートする。卓上型遠心分離器を使用して高速で遠心分離することによって反応を停止させ、単離される上清中に残った基質を、HPLCを使用して280nmのピークを検出することによって定量する。タンパク質分解反応は一次速度則を示し、ln[S]を時間に対してプロットすることによりk=-1×勾配、速度定数Kを決定する。エクスビボでの安定性試験[0092]最適化したリンカーを有するペプチド模倣大環状分子は例えば、対応する架橋されていないポリペプチドの半減期よりも少なくとも2倍長いエクスビボでの半減期を有し、かつ、そのエクスビボでの半減期は12時間以上である。エクスビボでの血清安定性を調査するには、様々な試験を用いることができる。例えば、ペプチド模倣大環状分子と対応する架橋されていないポリペプチド2mcgをマウス、ラット及び/又はヒトの新鮮な血清2mLと共に、37°Cで0、1、2、4、8、及び24時間インキュベートする。完全な化合物のレベルを決定するためには、以下の手順を用いることができる。血清100μlを2mlの遠心管に移し、50のギ酸を10μLとアセトニトリル500μLを加え、その後14,000RPMで10分間、4±2°Cで遠心分離することによって、試料を抽出する。次に上清を新しい2mlの管に移し、Turbovapを使用して、N2<10psi、37°Cで蒸発させる。100μLのアセトニトリル:水50:50で試料を再構成し、LC-MS/MS解析にかける。インビトロでの結合試験[0093]ペプチド模倣大環状分子及びペプチド模倣前駆体の受容タンパク質への結合と親和性を試験するためには例えば、蛍光偏光試験FPAを用いる。FPA技術は偏光と蛍光トレーサーを使用して、分子の配向と移動度を測定する。偏光で励起された場合、見かけの分子量が大きい分子に結合している蛍光トレーサー例えば、大きいタンパク質に結合しているFITC標識ペプチドは、その回転速度がより小さい分子に結合している蛍光トレーサー例えば溶液中で遊離しているFITC標識ペプチドよりも遅いために、より高レベルの偏光蛍光を発する。[0094]例えば、蛍光で標識したペプチド模倣大環状分子25nM受容をタンパク質25~1000nMと共に、結合緩衝液140mMのNaCl、50mMのTris-HCL、pH7.4中で30分間、室温でインキュベートする。結合活性を例えば、発光分光光度計例えばPerkinElmerLS50Bを使用して、蛍光偏光によって測定する。Kd値は、例えばGraphpadPrismソフトウェアGraphPadSoftware社、サンディエゴ、CAを使用した非線形回帰解析により決定することができる。本発明のペプチド模倣大環状分子は例えば、対応する架橋されていないポリペプチドと同様の或いはより低いKdを示す。ペプチド-タンパク質相互作用の拮抗剤の特徴を解析するためのインビトロ置換試験[0095]ペプチドと受容タンパク質間の相互作用を拮抗する化合物の結合及び親和性を試験するには例えば、ペプチド模倣前駆体配列由来の蛍光標識したペプチド模倣大環状分子を用いた蛍光偏光試験FPAを行う。FPA技術は、偏光と蛍光トレーサーを使用して、分子の配向と移動度を測定する。偏光で励起されると、見かけの分子量が大きい分子に結合している蛍光トレーサー例えば大きいタンパク質に結合しているFITC標識ペプチドは、その回転がより小さい分子に結合している蛍光トレーサー例えば溶液中で遊離しているFITC標識ペプチドよりも遅いため、より高レベルの偏光蛍光を発する。競合的な結合FPA実験によって、蛍光標識したペプチド模倣大環状分子と受容タンパク質間の相互作用を拮抗する化合物を検出することができる。[0096]例えば、推定拮抗化合物1nM~1mMと蛍光標識したペプチド模倣大環状分子25nMを受容タンパク質50nMと共に結合緩衝液140mMのNaCl、50mMのTris-HCL、pH7.4中で30分間、室温でインキュベートする。拮抗剤結合活性を、例えば発光分光光度計例えばPerkinElmerLS50Bを使用して、蛍光偏光により測定する。Kd値を例えば、GraphpadPrismソフトウェアGraphPadSoftware社、サンディエゴ、CAを使用した非線形回帰解析により決定してもよい。[0097]この試験では、有機小分子、ペプチド、オリゴヌクレオチド又はタンパク質などのいかなるクラスの分子も推定拮抗剤として解析することができる。タンパク質-リガンド結合に関する、親和性選択-質量分析による試験[0098]試験化合物のタンパク質に対する結合と親和性を試験するには、例えば、親和性選択-質量分析が用いられる。タンパク質とリガンドの結合実験は、用いた実験系全体にわたる対照実験の概要について説明している以下の代表的な手順に従い、1μMのペプチド模倣大環状分子に5μMのhMDM2加えて行う。DMSOに溶解したペプチド模倣大環状分子の貯蔵液40μMのうちの1μL分割量を19μLのPBSリン酸緩衝生理食塩水:50mM、pH7.5、150mMのNaClを含むリン酸塩緩衝液に溶解する。得られた溶液をピペットの操作により混合し、10000gで10分間遠心分離して不純物を除去する。得られた上清のうちの4μL分割量に、hMDM2のPBS溶液10μMを4μL加える。従って8.0μLの各実験試料は、40pmol1.5μgのタンパク質濃度5.0μMのPBS溶液としてと1μMのペプチド模倣大環状分子、及び2.5のDMSOを含む。このようにして、各濃度点について調製した2つの同じ試料を室温で60分間インキュベートし、4°Cまで氷冷し、その後、5.0μLをサイズ排除クロマトグラフィー-LC-MS解析に用いる。標的タンパク質、タンパク質リガンド複合体、及び結合していない化合物を含む試料をSECカラムに注入する。複合体はSECカラム内で、高速でのSEC工程により、結合していない成分から分離される。UV検出器を用いてSECカラムからの溶出液を監視し、早期に溶出されるタンパク質画分SECカラムの空隙容積中に溶出されるが、カラム上に保持される未結合成分から十分分離されていることを確認する。タンパク質及びタンパク質-リガンド複合体を含むピークは最初のUV検出器から溶出されると試料用ループに進入し、ここでSEC段階の流路から切り離され、バルブ機構を介してLC-MSに直接移動する。ESI-MSによってペプチド模倣大環状分子のM3H3イオンは予測されるm/zとして観測され、これによってタンパク質-リガンド複合体の検出が確認される。タンパク質-リガンドKd滴定実験に関する試験[0099]試験化合物のタンパク質に対する結合及び親和性を試験するためには、例えば、タンパク質-リガンドKd滴定実験を行う。タンパク質-リガンドKd滴定実験は以下のように実施する。DMSOで連続希釈した5、2.5、...、0.098mM、滴定剤であるペプチド模倣大環状分子の貯蔵液のうちの2μL分割量を準備し、38μLのPBSに溶解する。ピペット操作により、得られた溶液を混合し、10000gで10分間遠心分離することによって不純物を除去する。得られた上清のうちの4.0μL分割量にhMDM2のPBS溶液10μMを4.0μL加える。従って、8.0μLの各実験試料は40pmol1.5μgのタンパク質濃度5.0μMのPBS溶液、様々な濃度125、62.5、...、0.24μMの滴定剤ペプチド、及び2.5のDMSOを含む。このようにして、各濃度点につき2つ重複して調製した試料を室温で30分間インキュベートし、その後4°Cまで氷冷し、次いでそのうちの2.0μLをSEC-LC-MS解析に用いた。ESI-MSによってMH1、M2H2、M3H3、及び/又はMNa1イオンを観測し、抽出されたイオンのクロマトグラムを定量する。その後結合親和性Kdを算出するために、AGeneralTechniquetoRankProteinLigandBindingAffinitiesandDetermineAllostericvsDirectBindingSiteCompetitioninCompoundMixturesタンパク質-リガンドの結合親和性のランク付け及び化合物混合物中で直接結合する部位に競合するアロステリックの決定に関する一般手法AnnisDANazefNChuangCCScottMPNashHMJAmChemSoc20041261549515503;また、ALISAnAffinitySelectionMassSpectrometrySystemfortheDiscoveryandCharacterizationofProteinLigandInteractionsALIS:タンパク質-リガンド相互作用の発見と解析のための親和性選択-質量分析システムDAAnnisCCChuangandNNazefInMassSpectrometryinMedicinalChemistryWannerKHofnerGWileyVCH2007121184MannholdRKubinyiHFolkersGMethodsandPrinciplesinMedicinalChemistryに記載されている式に当てはめる。親和性選択-質量分析による、競合結合実験に関する試験[0100]試験化合物がタンパク質に競合的に結合する能力を決定するためには例えば、親和性選択質量分析試験を行う。3種類の化合物それぞれの原液400μMのうちの2μL分割量を14μLのDMSOと混合することにより、1成分当たり40μMのリガンド混合物を調製する。次にこの1成分当たり40μMの混合物のうちの1μL分割量を、DMSOで連続希釈した10、5、2.5、...、0.078mM滴定剤ペプチド模倣大環状分子の貯蔵溶液のうちの1μL分割量と混合する。これらの2μLの試料を38μLのPBSに溶解する。ピペット操作を繰り返すことで得られた溶液を混合し、10000gで10分間遠心分離することによって不純物を除去した。得られた上清のうちの4.0μL分割量にhMDM2タンパク質のPBS溶液10μMを4.0μL加えた。従って、8.0μLの各実験試料は、40pmol1.5μgのタンパク質PBS中で5.0μMの濃度に加えて、0.5μMのリガンド、2.5のDMSO、及び様々な濃度125、62.5、...、0.98μMの滴定剤ペプチド模倣大環状分子を含む。このようにして各濃度点について調製した2つの重複した試料を室温で60分間インキュベートし、4°Cまで氷冷し、その後2.0μLをSEC-LC-MS解析に用いた。これらの詳細と他の方法は、AGeneralTechniquetoRankProteinLigandBindingAffinitiesandDetermineAllostericvsDirectBindingSiteCompetitioninCompoundMixturesタンパク質-リガンドの結合親和性のランク付け及び化合物混合物中で直接結合する部位に競合するアロステリックの決定に関する一般手法AnnisDANazefNChuangCCScottMPNashHMJAmChemSoc20041261549515503に、またALISAnAffinitySelectionMassSpectrometrySystemfortheDiscoveryandCharacterizationofProteinLigandInteractionsALIS:タンパク質-リガンド相互作用の発見と解析のための親和性選択-質量分析システムDAAnnisCCChuangandNNazefInMassSpectrometryinMedicinalChemistryWannerKHofnerGWileyVCH2007121184MannholdRKubinyiHFolkersGMethodsandPrinciplesinMedicinalChemistryに記載されている。無傷細胞での結合試験[0101]ペプチド又はペプチド模倣大環状分子のそれらの天然の受容体への結合を、無傷細胞中で免疫沈降実験によって測定することができる。例えば、無傷細胞を蛍光標識したFITC標識化合物と共に、血清を加えずに4時間インキュベートし、その後血清を加えて、4~18時間インキュベートする。その後細胞を沈降させ、溶解緩衝液50mMのTris[pH7.6]、150mMのNaCl、1のCHAPS及びプロテアーゼ阻害剤混合液中で10分間、4°Cでインキュベートする。抽出物を14,000rpmで15分間遠心分離し、上清を回収し、10μlのヤギ抗FITC抗体と共に2時間、回転させながら4°Cでインキュベートし、その後プロテインA/Gセファロース50μlの50ビーズスラリーと共にさらに2時間、4°Cでインキュベートする。短時間遠心分離した後、沈殿物を高濃度の塩例えば、150、300、500mMを含む溶解緩衝液で洗浄する。次いでビーズを150mMのNaCl予め平衡化し、SDS含有試料緩衝液に加え、その後沸騰させる。遠心分離した後、上清を任意に4~12の勾配Bis-Trisゲルで電気泳動し、Immobilon-P膜に移す。ブロッキング後ブロットを、FITCを検出する抗体や、ペプチド模倣大環状分子に結合しているタンパク質を検出する1種以上の抗体とも共にインキュベートしてもよい。細胞透過性試験[0102]ペプチド模倣大環状分子は例えば、対応する架橋されていない大環状分子よりも細胞透過性が高い。最適化したリンカーを有するペプチド模倣大環状分子は例えば、対応する架橋されていない大環状分子よりも少なくとも2倍高い細胞透過性を有し、用いられたペプチド模倣大環状分子の20以上が4時間後には細胞を透過していることがしばしば観察される。ペプチド模倣大環状分子と対応する架橋されていない大環状分子の細胞透過性を測定するためには、無傷細胞を蛍光標識したペプチド模倣大環状分子又は対応する架橋されていない大環状分子10μMと共に4時間、血清を含まない培地中、37°Cでインキュベートし、培地で2回洗浄し、その後トリプシン0.25と共に10分間、37°Cでインキュベートする。細胞を再度洗浄し、PBSで再懸濁する。細胞の蛍光を例えば、FACSCaliburフローサイトメーター又はCellomics’KineticScan登録商標HCSリーダーのいずれかを用いて分析する。細胞有効性試験[0103]特定のペプチド模倣大環状分子の有効性は、例えば、ヒト細胞集団又はマウス細胞集団由来の様々な腫瘍形成性の細胞株や非腫瘍形成性の細胞株及び初代細胞を使用した、細胞を用いた致死試験で決定される。細胞の生存率を例えば、ペプチド模倣大環状分子0.5~50μMと共にインキュベートする間、24~96時間にわたって監視し、細胞がEC50<10μMで致死となるペプチド模倣大環状分子を同定する。細胞の生存率を測定する複数の標準的な試験が市販されており、ペプチド模倣大環状分子の有効性を評価するために用いることができる。さらに、ペプチド模倣大環状分子がアポトーシス機構を活性化することによって細胞を殺すのかどうかを評価するために、アネキシンV及びカスパーゼ活性化を測定する試験を用いることができる。例えば、細胞の生存率を細胞内ATP濃度の関数として決定するCellTiterglo試験が用いられる。インビボでの安定性試験[0104]ペプチド模倣大環状分子のインビボでの安定性を調べるために、化合物を例えば、マウス及び/又はラットに、静脈、腹腔内、経口又は吸入経路によって0.1~50mg/kgの範囲の濃度で投与し、注入後0分、5分、15分、30分、1時間、4時間、8時間及び24時間目に血液検体を採取する。その後25μLの新鮮な血清中に含まれる完全な化合物のレベルをLC-MS/MSによって上述したように測定する。動物モデルのインビボでの有効性[0105]本発明のペプチド模倣大環状分子のインビボでの抗腫瘍形成活性を決定するために、化合物を例えば、単独で腹腔内、静脈、経口、吸入若しくは鼻腔内経路によって又は最適用量以下の関連する化学療法例えば、シクロフォスファミド、ドキソルビシン、エトポシドと併用して投与する一例では、ルシフェラーゼを安定に発現する5×106個のRS4;11細胞急性リンパ芽球性白血病患者の骨髄から樹立したを、全身照射してから3時間後のNOD-SCIDマウスの尾静脈内に注入する。処置しないまま放置した場合、この形態の白血病は、このモデルにでは3週間以内に死に至る病気である。この白血病は例えば、マウスにD-ルシフェリン60mg/kgを注入し、麻酔をかけた動物を画像化する例えば、XenogenInVivoImagingSystem、CaliperLifeSciences、ホプキントン、MAことによって容易に監視される。全身の生物発光は、光子束の積分光子/秒としてLivingImageソフトウェアCaliperLifeSciences、ホプキントン、MAによって定量される。単独で、或いは最適用量以下の関連する化学療法と併用して、ペプチド模倣大環状分子を例えば、白血病マウス注入の10日後/実験の1日目、生物発光が14~16の範囲に尾静脈又は腹腔内経路で、0.1mg/kg~50mg/kgの範囲の用量で7~21日間投与する。必要なら、実験中1日おきにマウスを画像化し、実験期間中、毎日生存を監視する。実験が終了したマウスは随意、実験終了の時点で解剖する。別の動物モデルとしては、ルシフェラーゼを安定に発現するヒト濾胞性リンパ腫由来の細胞株DoHH2の、NOD-SCIDマウスへの移植がある。これらのインビボ試験では必要に応じて、予備的な薬物動態データ、薬力学データおよび毒性データを作成する。臨床試験[0106]本発明のペプチド模倣大環状分子のヒトの治療への適合性を決定するためには、臨床試験を実施する。例えば、癌と診断されかつ、治療を必要とする患者を選択し、治療群と1つ以上の対照群とに分ける。治療群には本発明のペプチド模倣大環状分子を投与し対照群には偽薬又は既知の抗がん薬を投与する。従って、患者群間で生存率及び生活の質QOLなどの項目についての比較を行うことにより、本発明のペプチド模倣大環状分子の治療の安全性及び効果を評価することができる。この例では、ペプチド模倣大環状分子の治療を受けた患者群は、偽薬の投与を受けた患者群と比較して、高い長期生存率を示す。医薬組成物及び投与経路[0107]本発明のペプチド模倣大環状分子はまた、薬学上許容可能な誘導体又はそのプロドラッグを含む。薬学上許容可能な誘導体とは、受容者へ投与すると本発明の化合物を提供することができる直接又は間接的に、本発明の化合物の任意の薬学上許容可能な塩、エステル、エステルの塩、プロドラッグ又は他の誘導体を意味する。特に好ましい薬学上許容可能な誘導体は、哺乳類に投与した場合に本発明の化合物の生物学的利用能を高めるもの例えば、経口投与した化合物の血中への吸収を高めることによって、又は親種と比較して、活性化合物の生体組織の一部例えば脳又はリンパ系への送達を増加させるものである。いくつかの薬学上許容可能な誘導体としては、水溶解度又は胃腸粘膜を透過する能動輸送を向上させる化学基が挙げられる。[0108]いくつかの態様において本発明のペプチド模倣大環状分子は、選択的な生物学的特性を向上させるのに適した官能基を共有結合で又は非共有結合で連結することによって修飾される。そのような修飾には、特定の生体組織の一部例えば、血液、リンパ系、中枢神経系への生物学的な透過性を高める、経口での利用可能性を向上させる、可溶性を向上させて注入による投与を可能にする、代謝を変化させる、及び排泄率を変化させる修飾が挙げられる。[0109]本発明の化合物の薬学上許容可能な塩としては、薬学上許容可能な無機酸無機塩基及び有機酸有機塩基由来の塩が挙げられる。適した酸塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、パルモエート、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩及びウンデカン酸塩が挙げられる。適した塩基由来の塩としては、アルカリ金属例えばナトリウム塩、アルカリ土類金属例えばマグネシウム塩、アンモニウム塩及びN-アルキル4塩が挙げられる。[0110]本発明の化合物から医薬組成物を調製するための薬学上許容可能な担体には、固体又は液体いずれかの担体が含まれる。固形製剤には、粉末、錠剤、丸薬、カプセル、カシェ、座剤、及び分散性顆粒が含まれる。固形の担体は、希釈剤、矯味剤、結合剤、防腐剤、錠剤崩壊剤又はカプセル化材料としても機能する1種類以上の物質であってもよい。製剤処方及び投与技術の詳細は科学文献や特許文献に詳しく記載されており、例えば、RemingtonsPharmaceuticalSciencesレミントンの薬学MaackPublishingCoイーストン、PAの最新版を参照のこと。[0111]粉末剤の担体は固体の微粉であり、微粉化された有効成分とともに混合物中に含まれている。錠剤では、有効成分は必要とされる結合特性をもつ担体と適切な割合で混合され、かつ、所望の形状及び大きさに圧縮される。[0112]適切な固体の賦形剤は炭水化物又はタンパク質増量剤であり、糖ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む、デンプントウモロコシ、小麦、米、ジャガイモ、又は別の植物由来、セルロースメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル-セルロース若しくはカルボキシメチルセルロースナトリウムなど、及びゴムアラビアゴム及びトラガカントゴムを含む並びにタンパク質ゼラチン及びコラーゲンなどが挙げられるがこれらには限定されない。所望ならば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸若しくはその塩アルギン酸ナトリウムなどのような崩壊剤又は可溶化剤を加える。[0113]液体形態の製剤としては、溶液、懸濁液、及び乳液、例えば、水又は水/プロピレングリコール溶液が挙げられる。非経口注入用には、液体製剤を水性のポリエチレングリコール溶液として処方することができる。[0114]医薬製剤は好ましくは単位容量形態である。そのような形態では、製剤は、適切な量の有効成分を含む単位用量にさらに分けられる。単位容量形態を包装された製剤、すなわち、バイアル又はアンプル中に包装された錠剤、カプセル、及び粉末のような個別の量の製剤を含む包装としてもよい。また、単位容量形態をそれ自体のカプセル、錠剤、カシェ若しくはトローチ剤としてもよく、又はこれらのいずれかを適切な数含む、包装した形であってもよい。[0115]本発明の組成物が、ペプチド模倣大環状分子と1種類以上のさらなる治療薬又は予防薬の組み合わせを含む場合、化合物とさらなる薬剤は両方とも、単独治療の投与計画で通常投与される用量の約1~100の範囲の用量レベルで、より好ましくは約5~95の用量で含まれるべきである。いくつかの態様では、さらなる薬剤は頻回投与計画の一環として、本発明の化合物とは別に投与される。あるいはこれらの薬剤は、単一の組成物として本発明の化合物と混合されて、単一の剤形の一部分となっている。使用方法[0116]一側面において本発明は、新規のペプチド模倣大環状分子を提供し、これは、このペプチド模倣大環状分子が模倣しているタンパク質又はペプチドの天然のリガンドに結合する薬剤を同定するための、競合的結合試験に有用である。例えば、p53/HDMXの系では、p53に基づく標識されたペプチド模倣大環状分子をHDMXに競合的に結合する小分子と共にHDMX結合試験で使用することができる。競合結合試験では、p53/HDMX系に特異的な薬剤の候補を、インビトロで迅速に評価及び検出することができる。このような結合試験は、本発明で開示したペプチド模倣大環状分子のいずれか及びそれらの結合パートナーを用いて実施してもよい。[0117]本発明はさらに、ペプチド模倣大環状分子に対する抗体の生成を提供する。いくつかの態様では、これらの抗体は、ペプチド模倣大環状分子と前駆体ペプチドの両方に、例えばそのペプチド模倣大環状分子が関連しているp53に特異的に結合する。そのような抗体は例えば、天然のタンパク質-タンパク質相互作用例えばp53とHDMXの結合を阻害する。[0118]他の側面において本発明は、p53、HDM2又はHDMXを含む分子の異常例えば、不十分若しくは過剰な発現又は活性に関連する障害のリスクをもつ若しくは感受性の又はそのような障害を罹患している対象を治療する予防法及び治療法の両方を提供する。[0119]別の態様において障害は、少なくとも部分的には、p53又はHDM2又はHDMXのレベルの異常例えば、過剰発現若しくは発現不足、又は異常な活性を示しているp53又はHDM2又はHDMXの存在によって引き起こされる。そのため、p53由来のペプチド模倣大環状分子を用いて、p53若しくはHDM2若しくはHDMXのレベル及び/又は活性を低下、又はp53若しくはHDM2若しくはHDMXのレベル及び/又は活性を上昇させ、例えば、その障害の副作用を緩和又は軽減させる。[0120]別の側面において本発明は、結合パートナー間の例えば、p53とHDM2の間の又はp53とHDMXの間の相互作用又は結合を干渉することによって、過剰増殖性の疾患及び炎症性の障害を含む疾患を治療又は予防する方法を提供する。これらの方法は、有効量の本発明の化合物を、ヒトを含む温血動物に投与する工程を含む。いくつかの態様では、本発明の化合物の投与は、細胞成長の停止又はアポトーシスを誘導する。[0121]本明細書で使用する場合、治療という用語は、疾患、疾患の症状又は疾患に対する素因を、治療する、治癒する、軽減する、緩和する、変化させる、治す、改善する、好転させる、若しくは影響を与えるという目的で、その疾患、疾患の症状又は疾患に対する素因を有する患者に治療薬を使用若しくは投与すること、或いはそのような患者から単離した組織若しくは細胞株に治療薬を使用若しくは投与することとして定義される。[0122]いくつかの態様では、本発明のペプチド模倣大環状分子は、癌及び腫瘍性の状態を治療、予防及び/又は診断するために用いられる。本明細書で使用する場合、癌、過剰増殖性及び腫瘍性という用語は、自律的増殖能、すなわち、急速に増殖している細胞成長によって特徴付けられる異常な状態又は状況を有する細胞を指す。過剰増殖性及び腫瘍性疾患の状態を病的なもの、すなわち、疾患の状態を特徴付けている若しくは構成しているものとして分類してもよいし、又は非病的なもの、すなわち、正常な状態からは逸脱しているが疾患状態とは関連のないものとして分類してもよい。この用語は、組織病理学的な型又は浸潤度に関係なく、全ての型の癌性増殖過程又は腫瘍形成過程、転移性組織又は悪性転換した細胞、組織、若しくは器官を含むものと見なされる。転移性腫瘍は複数の型の原発性腫瘍から生じる可能性があり、このような原発性腫瘍には、乳房、肺、肝臓、結腸及び卵巣由来の腫瘍が含まれるがこれらには限定されない。病的過剰増殖性細胞は、悪性腫瘍成長によって特徴付けられる疾患状態で発生する。非病的な過剰増殖性細胞の例には、創傷回復に関連した細胞の増殖がある。細胞増殖性障害及び/又は分化性障害の例としては、癌、例えば、癌腫、肉腫、又は転移性障害が挙げられる。いくつかの態様では、ペプチド模倣大環状分子は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、そのような癌の転移などを制御するための新規治療薬である。[0123]癌又は腫瘍性の状態の例としては、繊維肉腫、筋肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、胃癌、食道癌、直腸癌、膵癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮癌、頭頸部癌、皮膚癌、脳腫瘍、扁平上皮細胞癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮肉腫、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、又はカポジ肉腫が挙げられるがこれらには限定されない。[0124]増殖性疾患の例としては造血器の腫瘍性疾患が挙げられる。本明細書で使用する場合、造血器の腫瘍性疾患という用語は、造血器由来の、例えば骨髄系、リンパ系又は赤血球系、又はこれらの前駆細胞から生じる、過剰増殖性/腫瘍性細胞を伴う疾患を含む。好ましくは疾患は、低分化急性白血病、例えば、赤芽球性白血病及び急性巨核芽球性白血病から生じる。その他の骨髄疾患の例としては、これらには限定されないが、急性前骨髄球性白血病APML、急性骨髄性白血病AML及び慢性骨髄性白血病CMLVaickus、CritRevOncolHemotol1126797で総括されているがあり、リンパ性悪性疾患としては、これらには限定されないが、急性リンパ芽球性白血病ALLB細胞系列性ALL及びT細胞系列性ALLを含む、慢性リンパ球性白血病CLL、前リンパ球性白血病PLL、有毛細胞白血病HLL及びヴァルデンストレームマクログロブリン血症WMがある。別の形態の悪性リンパ腫としては、これらには限定されないが、非ホジキンリンパ腫及びその変異体、末梢T細胞リンパ腫、成人T細胞白血病/リンパ腫ATL、皮膚T細胞リンパ腫CTCL、大型顆粒リンパ球白血病LGF、ホジキン病及びリードスタンバーグ疾患が挙げられる。[0125]乳房の細胞増殖性障害及び/又は分化性障害の例としては、これらには限定されないが、増殖性乳房疾患例えば、上皮過形成、硬化性腺症、及び小管乳頭腫など、腫瘍例えば、線維腺腫、葉状腫瘍、及び肉腫などの間質性腫瘍、並びに大管乳頭腫などの上皮腫瘍、上皮内非浸潤性癌上皮内乳管癌パジェット病を含む及び上皮内小葉癌を含む及び侵襲性浸潤性癌浸潤性腺管癌、浸潤性小葉癌、髄様癌腫、膠様粘液癌、管状癌、及び浸潤性乳頭癌を含むがこれらには限定されないを含む乳房の癌、並びに混合型悪性新生物が挙げられる。男性乳房の障害としては、女性化乳房及び癌腫が挙げられるがこれらには限定されない[0126]肺の細胞増殖性障害及び/又は分化性障害の例としては、これらには限定されないが、気管支原性癌腫瘍随伴症候群、細気管支肺胞癌、気管支カルチノイドを含む神経内分泌腫瘍、混合型腫瘍、及び転移性腫瘍など、胸膜の病気炎症性胸水、非炎症性胸水、気胸、及び、孤立性線維性腫瘍胸膜線維腫や悪性中皮腫を含む胸膜腫瘍などが挙げられる。[0127]結腸の細胞増殖性障害及び/又は分化性障害の例としては、これらには限定されないが、非腫瘍性ポリープ、腺腫、家族性症候群、結腸直腸発癌、結腸直腸癌、およびカルチノイド腫瘍が挙げられる。[0128]肝臓の細胞増殖性障害及び/又は分化性障害の例としては、これらには限定されないが、結節性過形成、腺腫、並びに肝臓の原発性癌及び転移性腫瘍を含む悪性腫瘍、が挙げられる。[0129]卵巣の細胞増殖性障害及び/又は分化性障害の例としては、これらには限定されないが、卵巣腫瘍体腔上皮の腫瘍、漿液性腫瘍、粘液性腫瘍、子宮内膜性腫瘍、明細胞腺癌、嚢胞性線維腺腫、ブレンナー腫瘍、表層上皮腫瘍など、胚細胞腫瘍成熟型良性奇形腫、単胚葉性奇形腫、未熟型悪性奇形腫、未分化胚細胞種、内胚葉洞腫瘍、絨毛癌など、性索間質性腫瘍顆粒膜夾膜細胞腫、莢膜細胞腫線維腫、アンドロブラストーマ、ヒルhill細胞腫瘍、及び性腺芽腫など並びにクルーケンベルグ腫瘍などの転移性腫瘍、が挙げられる。[0130]他の或いはさらなる態様では、本明細書に記載のペプチド模倣大環状分子は、過剰な細胞死又は生理的な障害による細胞死などによって特徴付けられる状態の治療、予防又は診断に用いられる。早期の若しくは望ましくない細胞死、あるいは望ましくない若しくは過剰な細胞増殖によって特徴付けられる状態の例としては、これらには限定されないが、低細胞性/低形成性の、無細胞性/無形成性の、又は細胞過形成性/過形成性の状態が挙げられる。いくつかの例では、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、サラセミア、先天性好中球減少症、及び骨髄形成異常症を含むがこれらには限定されない血液障害が含まれる。[0131]他の或いはさらなる態様では、アポトーシスを減少させる作用をもつ本発明のペプチド模倣大環状分子を、望ましくないレベルの細胞死と関連する障害の治療に使用する。従っていくつかの態様では、本発明の抗アポトーシスペプチド模倣大環状分子は、ウイルス感染例えばヒト免疫不全ウイルスHIVの感染に関連する感染に伴って細胞死を誘導する障害などの治療に用いられる。多くの神経疾患は、ニューロンの特定の組み合わせを徐々に消失することによって特徴付けられ、一例としてはアルツハイマー病ADがある。アルツハイマー病は、大脳皮質及び特定の皮質下領域でニューロン及びシナプスが消失することによって特徴付けられる。この消失により、罹患した領域全体が萎縮する。ADを患っている脳では、アミロイド斑と神経原線維変化の両方が見られる。アルツハイマー病は、異常に折り畳まれたA-ベータタンパク質及びタウタンパク質が脳に蓄積することに起因する、タンパク質の折り畳み異常の疾患であると認識されている。斑はβ-アミロイドから形成される。β-アミロイドは、アミロイド前駆タンパク質APPと呼ばれる、より大きなタンパク質由来の断片である。APPはニューロンの成長、生存及び損傷後の修復に重要である。ADでは、未知の過程を介してAPPは、酵素によるタンパク質分解を通じて、より小さい断片に切断される。これらの断片のうちの1つがβ-アミロイドの原繊維であり、これが老人斑として知られる、密集してニューロンの外側に沈着する塊を形成する。斑は広がり続け、神経細胞中で不溶性のねじれた繊維となり、これはしばしば、もつれと呼ばれている。そのため、β-アミロイドとその天然の受容体との間の相互作用を阻害することは、ADの治療において重要である。いくつかの態様では、本発明の抗アポトーシスペプチド模倣大環状分子が、ADや細胞のアポトーシスに関連する他の神経疾患の治療に用いられる。そのような神経疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症ALS色素性網膜炎、脊髄性筋萎縮症、及び様々な形態の小脳変性症が含まれる。これら疾患での細胞消失は炎症反応を引き起こさず、またアポトーシスは細胞死の機序であると考えられる。[0132]加えて、多くの血液疾患は血球の生産の低下と関連している。これらの障害には、慢性疾患に伴う貧血、再生不良性貧血、慢性好中球減少、及び骨髄異形成症候群が含まれる。骨髄異形成症候群やいくつかの形態の再生不良性貧血のような血球の生産障害は、骨髄中でのアポトーシス細胞死の増加に関連している。これらの障害は、アポトーシスを促進する遺伝子の活性化、間質細胞若しくは造血性生存因子の後天性欠乏、又は毒素及び免疫応答介在因子の直接の作用に起因する可能性がある。細胞死関連の2種類の一般的な障害としては心筋梗塞と脳卒中がある。どちらの障害においても、急激な血流減少の事象によって生じる虚血の中心部の細胞が、壊死の結果と同様に急速に死ぬと考えられている。しかしながら、虚血中心部の外側では、細胞はより長期間にわたって死に、形態学的にはアポトーシスによって死ぬように見える。他の或いはさらなる態様では、本発明の抗アポトーシスペプチド模倣大環状分子は、そのような望ましくない細胞死に関連する障害全ての治療に用いられる。[0133]本明細書に記載のペプチド模倣大環状分子で治療される神経疾患のいくつかの例としては、これらには限定されないが、アルツハイマー病、ダウン症候群、オランダ型遺伝性脳出血アミロイドーシス、反応性アミロイドーシス、蕁麻疹及び難聴を伴う家族性アミロイド腎症、マックルウェルズ症候群、特発性骨髄腫;マクログロブリン血症随伴性骨髄腫、家族性アミロイド多発性神経炎、家族性アミロイド心筋症、孤立性心アミロイド、全身性老人性アミロイドーシス、成人発症糖尿病、インスリノーマ、孤立性心房性アミロイド、甲状腺髄様癌、家族性アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、家族性アミロイド性多発性ニューロパシー、スクレイピー、クロイツフェルトヤコブ病、ゲルストマンストロイスラー-シャインカー症候群、ウシ海綿状脳症、プリオン介在疾患、およびハンチントン病が挙げられる。[0134]別の態様では、本明細書に記載のペプチド模倣大環状分子を、炎症性障害の治療、予防又は診断に用いる。炎症性障害には多くの種類がある。特定の炎症性疾患は免疫系、例えば自己免疫疾患に関連する。自己免疫疾患は、体内に自然に存在する物質や組織、すなわち自己抗原に対する身体の過剰な免疫応答を生じる。言いかえれば、免疫系が自己の細胞を攻撃する。自己免疫疾患は免疫介在疾患の主な原因である。自己免疫疾患の例としては関節リウマチがあり、この疾患では免疫系が関節を攻撃して、炎症すなわち、関節炎及び破壊を引き起こす。さらに、肺や皮膚などの複数の器官に傷害を与える場合もある。関節リウマチは、機能性及び可動性の実質的な喪失をもたらす可能性がある。関節リウマチは、血液検査、特にリウマチ因子試験で診断される。本明細書に記載のペプチド模倣大環状分子で治療される自己免疫疾患のいくつかの例としては、これらには限定されないが、急性散在性脳脊髄炎ADEM、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群APS、自己免疫溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、シャーガス病、チャーグストラウス症候群、慢性閉塞性肺疾患COPD、クローン病、皮膚筋炎、1型糖尿病、子宮内膜症、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群GBS、橋本病、化膿性汗腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患IBD、間質性膀胱炎、紅斑性狼蒼、限局性強皮症、多発性硬化症、重症筋無力症、ナルコレプシー、神経性筋強直症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、関節リウマチ、統合失調症、強皮症、シェーグレン症候群、側頭動脈炎巨細胞性動脈炎としても知られる、高安動脈炎、脈管炎、白斑およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。[0135]本明細書に記載のペプチド模倣大環状分子で治療される他の種類の炎症性障害のいくつかの例としては、これらには限定されないが、アレルギーアレルギー性鼻炎/副鼻腔炎、皮膚アレルギー蕁麻疹、血管性浮腫、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、薬物アレルギー、昆虫アレルギー及び、肥満細胞症などのまれなアレルギー障害など、喘息、関節炎変形性関節炎、関節リウマチ及び脊椎関節症など、CNSの原発性血管炎、サルコイドーシス、器官移植片拒絶、線維筋痛症、線維症、膵炎並びに骨盤の炎症性疾患が挙げられる。[0136]本発明のペプチド模倣大環状分子で治療又は予防される心血管障害例えば炎症性障害の例としては、これらには限定されないが、大動脈弁狭窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中、血栓症、動脈瘤、心不全、虚血性心疾患、狭心症、心臓突然死、高血圧性心疾患;非冠動脈疾患細動脈硬化症、小血管疾患、腎症、高グリセリド血症、高コレステロール血症、高脂血症、黄色腫症、喘息、高血圧症、気腫及び慢性肺疾患など、又は介入処置を伴う心臓血管状態処置による血管外傷。例えば血管形成術後の再狭窄、シャント、ステント、人工若しくは天然の移植片、留置カテーテル、弁又は他の移植可能な装置の設置などが挙げられる。好ましい心臓血管障害としては、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、動脈瘤、および発作が挙げられる。[0137]本発明の好ましい態様を本明細書で示し、かつ、記載してきたが、このような態様は例示のためだけに提供されていることが当業者には明白である。当業者は、本発明から逸脱することなく、多数の修正、変更、及び置換を考えつくことができよう。当然のことながら、本明細書に記載の本発明の態様の様々な代替法を、本発明を実施するために用いてもよい。以下の請求項は本発明の範囲を規定し、これらの請求項の範囲の方法及び構造並びにそれらの均等物がこれにより包含される。実施例1:6-クロロトリプトファンFmocアミノ酸の合成[0138]6-クロロ-3-ホルミル-1H-インドール-1-カルボン酸tert-ブチル、1。無水DMF12mLの溶液にPOCl33.92mL、43mmol、1.3当量をアルゴン雰囲気中0°Cで撹拌しながら1滴ずつ加えた。溶液を同じ温度で20分間撹拌し、その後6-クロロインドール5.0g、33mmol、1当量の無水DMF溶液30mLを1滴ずつ加えた。得られた混合物を室温に戻し、さらに2.5時間撹拌した。水50mLを加え、溶液を4MのNaOHpH約8水溶液で中和した。生じた固形物をろ過し、水で洗浄し、その後真空乾燥した。この材料をさらに精製することなく、そのまま次の工程に用いた。粗ホルミルインドール33mmol、1当量のTHF溶液150mLに、Boc2O7.91g、36.3mmol、1.1当量とDMAP0.4g、3.3mmol、0.1当量を室温のN2雰囲気中で撹拌しながら順次加えた。得られた混合物を室温で1.5時間撹拌し、溶媒を減圧蒸発させた。残留物をEtOAcに溶解し、1NのHClで洗浄し、乾燥して、濃縮したホルミルインドール1を白色固体として得た2工程で9g、98。1HNMRδ1707358211007。[0139]6-クロロ-3-ヒドロキシメチル-1H-インドール-1-カルボン酸tert-ブチル、2。化合物18.86g、32mmol、1当量のエタノール溶液150mLにNaBH42.4g、63mmol、2当量を加えた。反応液を3時間、室温で撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をジエチルエーテルと水に注いだ。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥し、白色固体になるまで濃縮した8.7g、98。この材料をさらに精製せずにそのまま次の工程に用いた。1HNMRδ165480721753816。[0140]3-ブロモメチル-6-クロロ-1H-インドール-1-カルボン酸tert-ブチル、3。化合物24.1g、14.6mmol、1当量のジクロロメタン溶液50mLに、アルゴン雰囲気中-40°Cでトリフェニルホスフィン4.59g、17.5mmol、1.2当量のジクロロメタン溶液50mLを加えた。反応液をさらに40°Cで30分間撹拌した。その後NBS3.38g、19mmol、1.3当量を加えた。得られた混合物を室温に戻し、一晩撹拌した。ジクロロメタンを蒸発させ、四塩化炭素100mLを混合物に加えて1時間撹拌し、次いでろ過した。ろ液を濃縮し、シリカプラグに通して、EtOAc25のヘキサン溶液で素早く溶出した。この溶液を白色泡状物になるまで濃縮した3.84g、77。1HNMRδ166463728757764818。[0141]αMe-6Cl-TrpBoc-Ni-S-BPB、4。S-Ala-Ni-S-BPB2.66g、5.2mmol、1当量及びKO-tBu0.87g、7.8mmol、1.5当量に、アルゴン雰囲気中で50mLのDMFを加えた。臭化物誘導体化合物32.68g、7.8mmol、1.5当量のDMF溶液5.0mLを、シリンジを使って加えた。反応混合物を周囲温度で1時間撹拌した。この溶液に5の含水酢酸を加えて反応を停止し、水で希釈した。所望の生成物をジクロロメタン中で抽出し、乾燥させ、濃縮した。油状生成物4を、順相のフラッシュクロマトグラフィー固体充填剤で精製した。溶出液にはEtOAcとヘキサンを使用し、赤色固体を得た1.78g、収率45。αMe6ClTrpNiSBPB4MH計算値77521MH実測値775261HNMRδ123156182220303324357及び429J128Hz662698714723732736750767798827。[0142]Fmoc-αMe-6Cl-TrpBoc-OH、6。3NのHCl/MeOH溶液1/3、15mLに50°Cで、化合物41.75g、2.3mmol、1当量のMeOH溶液5mlを1滴ずつ加えた。出発材料は3~4時間以内に消失した。その後この酸性溶液を氷浴中で0°Cまで冷却し、Na2CO3水溶液1.21g、11.5mmol、5当量で反応を停止させた。メタノールを除去し、懸濁液にさらに8当量のNa2CO31.95g、18.4mmolを加えた。次いでニッケルを捕捉するEDTA二ナトリウム塩二水和物1.68g、4.5mmol、2当量を加え、懸濁液を2時間撹拌した。Fmoc-OSu0.84g、2.5mmol、1.1当量のアセトン溶液50mLを加え、反応液を一晩撹拌した。その後、反応液をジエチルエーテル及び1NのHClで希釈した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。所望の生成物6を順相で、溶出液としてアセトン及びジクロロメタンを使用して精製し、白色泡状物を得た0.9g、収率70。FmocαMe6ClTrpOH6MH計算値57519MH実測値575371HNMR159168348422439547710718727739750775812。[0143]アルゴン雰囲気中で6Cl-TrpBoc-Ni-S-BPB、5。Gly-Ni-S-BPB4.6g、9.2mmol、1当量及びKO-tBu1.14g、10.1mmol、1.1当量に95mLのDMFを加えた。臭化物誘導体化合物33.5g、4.6mmol、1.1当量のDMF溶液10mLをシリンジで加えた。反応混合物を周囲温度で1時間撹拌した。この溶液に5の含水酢酸を加えて反応を停止させ、水で希釈した。所望の生成物をジクロロメタン中で抽出し、乾燥させ、濃縮した。油状生成物5を順相のフラッシュクロマトグラフィー固形充填物で、溶出液としてはEtOAc及びヘキサンを使用して精製し、赤色固体を得た5g、収率71。6ClTrpNiSBPB5MH計算値76120MH実測値761341HNMRδ158184196224300322345及び425J128Hz427665688707714728735739752796828。[0144]Fmoc-6Cl-TrpBoc-OH、7。3NのHCl/MeOH溶液1/3、44mLに化合物55g、6.6mmol、1当量のMeOH溶液10mlを50°Cで1滴ずつ加えた。出発材料は3~4時間以内に消失した。この酸性溶液をその後氷浴中で0°Cまで冷却し、Na2CO3水溶液3.48g、33mmol、5当量を加えて反応を停止させた。メタノールを除去し、懸濁液にさらに8当量のNa2CO35.57g、52mmolをさらに加えた。ニッケルを捕捉するEDTA二ナトリウム塩二水和物4.89g、13.1mmol、2当量を加え、懸濁液を2時間撹拌した。Fmoc-OSu2.21g、6.55mmol、1.1当量のアセトン溶液100mLを加え、反応液を一晩撹拌した。その後、この反応液をジエチルエーテル及び1NのHClで希釈した。その後有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。所望の生成物7を順相で、アセトン及びジクロロメタンを溶出液として使用して精製し、白色泡状物を得た2.6g、収率69。Fmoc6ClTrpOH7MH計算値56117MH実測値561371HNMR163326419439476535718728739750775814。実施例2:本発明のペプチド模倣大環状分子[0145]これまでに記載されているように、かつ、以下に記載するように、ペプチド模倣大環状分子を合成精製分析したSchafmeisteretalJAmChemSoc12258915892SchafmeisterVerdineJAmChemSoc1225891WalenskyetalScience30514661470;及び米国特許第7,192,713号。ペプチド模倣大環状分子は、天然に存在する2種以上のアミノ酸を対応する合成アミノ酸で置き換えることで設計した。置換は、i及びi4位、並びにi及びi7位に行った。ペプチドの合成は、手動或いは自動ペプチド合成機AppliedBiosystems、モデル433Aのいずれかにより、固相条件で、リンクアミドAM樹脂Novabiochem及びFmoc主鎖保護基化学反応を用いて行った。天然のFmoc-保護アミノ酸Novabiochemを結合させるため、10当量のアミノ酸及び、モル比が1:1:2の結合試薬であるHBTU/HOBtNovabiochem/DIEAを使用した。非天然のアミノ酸4当量は、モル比が1:1:2のHATUAppliedBiosystems/HOBt/DIEAで結合させた。合成ペプチドのN-末端はアセチル化し、C-末端はアミド化した。[0146]架橋化合物の精製は、逆相のC18カラムVarianを使用した高速液体クロマトグラフィーHPLCVarianProStarによって行い、純粋な化合物を得た。LC/MS質量分析Agilent1100HPLCシステムと連動させたMicromassLCT及びアミノ酸解析AppliedBiosystems、モデル420Aにより、純粋な生成物の化学組成を確認した。[0147]表4は、調製した本発明のペプチド模倣大環状分子の一覧を示している。[0148]表4等に示した配列中では以下の略語を使用している。Nleはノルロイシンを表し、Aibは2-アミノイソ酪酸を表し、Acはアセチルを表し、Prはプロピオニルを表す。で表されているアミノ酸は、全ての炭素iによって、二重結合を1つ含むi4架橋剤に結合されている、α-MeS5-ペンテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。r5で表されているアミノ酸は、全ての炭素iによって、二重結合を1つ含むi4架橋剤に結合されている、α-MeR5-ペンテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。s8で表されているアミノ酸は、全ての炭素iによって、二重結合を1つ含むi7架橋剤に結合されている、α-MeS8-オクテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。r8で表されているアミノ酸は、全ての炭素iによって、二重結合を1つ含むi7架橋剤に結合されている、α-MeR8-オクテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。Ahxは、アミノシクロヘキシルリンカーを表す。架橋剤は、各アミノ酸のα炭素間に8個又は11個の原子を含む、直鎖の全てが炭素の架橋剤である。/で表されているアミノ酸は、いずれの架橋剤によっても接続されていない、α-MeS5-ペンテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。/r5で表されているアミノ酸は、いずれの架橋剤によっても接続されていない、α-MeR5-ペンテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。/s8で表されているアミノ酸は、いずれの架橋剤によっても接続されていない、α-MeS8-オクテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。/r8で表されているアミノ酸は、いずれの架橋剤によっても接続されていない、α-MeR8-オクテニル-アラニンオレフィンアミノ酸である。Amwで表されているアミノ酸は、α-Meトリプトファンアミノ酸である。Amlで表されているアミノ酸は、α-Meロイシンアミノ酸である。2ffで表されているアミノ酸は、2-フルオロ-フェニルアラニンアミノ酸である。3ffで表されているアミノ酸は、3-フルオロ-フェニルアラニンアミノ酸である。Stで表されているアミノ酸は、2本のペンテニル-アラニンオレフィン側鎖を含むアミノ酸であり、各側鎖は、示されている別のアミノ酸と架橋されている。St//で表されているアミノ酸は、架橋されていない、2本のペンテニル-アラニンオレフィン側鎖を含むアミノ酸である。Stで表されているアミノ酸は、2本のペンテニル-アラニンオレフィン側鎖を含むアミノ酸であり、各側鎖は完全飽和した炭化水素架橋剤によって、示されている別のアミノ酸に架橋されている。[0149]例えば、SP-72、SP-56及びSP-138と表されている化合物は以下の構造を有する。[0150]例えば、その他の化合物は以下の構造を有する。実施例3:競合結合ELISAHDM2及びHDMX[0151]p53-His6タンパク質30nM/ウェルを、Immulon96ウェルプレート中、室温で一晩コーティングする。実験当日、自動ELISAプレート洗浄機を使い、1×PBS-ツイーン200.05でプレートを洗浄し、ELISAMicrowellBlockingで30分間、室温でブロッキングし、その後、プレートを1×PBS-ツイーン200.05で洗浄して過剰のブロッキング剤を洗い流す。ペプチドを10mMのDMSO貯蔵液から滅菌水で500μMの作業溶液に希釈し、DMSOの濃度が全ての試料で0.5に一定になるように、さらに希釈する。所望の濃度の2倍の濃度の50μl容量のペプチドをウェルに加え、その後、希釈したGST-HDM2又はGST-HMDXタンパク質を加える最終濃度:10nM。試料を室温で2時間インキュベートし、プレートをPBS-ツイーン200.05で洗浄し、その後、HRP-安定化緩衝液で0.5μg/mlに希釈したHRP-結合抗GST抗体[HypromatrixINC]を100μl加える。検出抗体と共に30分間インキュベートした後、プレートを洗浄し、1ウェル当たり100μlのTMB-E基質溶液を加えて最長30分間インキュベートする。1MのHCLで反応を停止させ、マイクロプレートリーダーで450nmの吸収を測定する。GraphPadPRISMソフトウェアでデータを解析する。実施例4:SJSA-1細胞の生死判別試験[0152]試験前日、SJSA1を96ウェルプレートに、1ウェル当たり5000個細胞/100μlの密度で播種する。試験当日、細胞をOpti-MEM培地で一回洗浄し、90μLのOpti-MEM培地を細胞に加える。ペプチドを10mMのDMSO貯蔵液から滅菌水で500μMの作業溶液になるように希釈し、DMSOの濃度が全ての試料で0.5に一定になるようにさらに希釈する。ペプチドの最終濃度μMの範囲は50、25、12.5、6.25、3.1、1.56、0.8及び0μMであり、1ウェル当たりの最終容量は100μLである。最終的に最も高いDMSO濃度は0.5であり、これを陰性対照として用いる。陽性対照としては、CaymanChemicalsの細胞を用いた試験--ニュートリン-310mMを使用する。ニュートリンをペプチドと同じ希釈手順で希釈し、所望の濃度の10倍濃度の希釈液10μlを、所望の最終濃度になるように適切なウェルに加える。その後細胞をペプチドと共に、37°Cで20~24時間、5CO2の湿潤条件でインキュベートする。インキュベート期間の後、細胞の生存率を、PromegaのCellTiterGlo試薬を使用し、製造業者の説明に従って測定する。実施例5:SJSA-1のp21上方制御試験[0153]試験前日、SJSA1細胞を6-ウェルプレートに1ウェル当たり80万個細胞/2mlの密度で播種する。試験当日、細胞をOpti-MEM培地で1回洗浄し、1350μLのOpti-MEM培地を細胞に加える。ペプチドを10mMのDMSO貯蔵液から滅菌水で500μMの作業溶液になるように希釈し、DMSOの濃度が全ての試料で0.5に一定になるように、さらに希釈する。最終的に最も高いDMSO濃度は0.5であり、これを陰性対照として用いる。陽性対照としては、CaymanChemicalsの細胞を用いた試験--ニュートリン-310mMを使用する。ニュートリンをペプチドと同じ希釈手順で希釈し、所望の濃度の10倍濃度の希釈液150μlを、所望の最終濃度になるように適切なウェルに加える。その後細胞をペプチドと共に、37°Cで18~20時間、5CO2の湿潤条件でインキュベートする。インキュベート期間の後、細胞を回収し、1×PBSCa/Mgを含まないで洗浄し、その後1×細胞溶解緩衝液CellSignalingtechnologiesの10×緩衝液を1×に希釈し、プロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤を加えたもの中、氷上で30分間かけて細胞を溶解させる。溶解物を微量遠心管に入れ、13000rpm、40°Cで8分間遠心分離する。不純物が除去された上清を回収し、-80°Cでその後使用するまで保存する。溶解物の総タンパク質含量をThermofisherのBCAタンパク質検出キットとBSA基準物質を用いて測定する。総タンパク質のうちの25μgをp21検出ELISA試験に使用する。ELISAプレートについては、各条件を3回重複して準備する。ELISA試験の手順は、製造業者の説明に従う。各ウェル当たり、25μgの総タンパク質を用い、各ウェルを3回重複して準備する。GraphPadPRISMソフトウェアを用いてデータを解析する。実施例6:p53のGRIP試験[0154]ThermoScientificBioImagep53Hdm2再分布試験で、薬剤化合物又は他の刺激に応答して起こる、GFP-タグ化p53とHdm2とのタンパク質相互作用、及びGFP-タグ化p53の細胞転移を監視する。ヒトp531-312を安定して発現する組換えCHO-hIR細胞を、増強緑色蛍光タンパク質EGFPとPDE4A4-Hdm21-124、すなわちPDE4A4とHdm21-124の融合タンパク質のC末端に融合させる。これによって、実験条件がp53とHdm2の相互作用に及ぼす影響を測定するための常時使用可能な試験系が提供される。画像化及び解析はHCSプラットフォームで行う。[0155]CHO-hIR細胞を定期的に、1のペニシリン-ストレプトマイシン、0.5mg/mlのジェネティシン、1mg/mlのゼオシン及び10のFBSを添加したハムF12培地で維持する。96ウェルプレートに細胞を1ウェル当たり7000個細胞/100μlの密度で播種し、その18~24時間後に培地を用いた試験を行う。翌日、培地を交換し、病巣形成を活性化させるために、最終濃度が3μMのPD-177を細胞に加える。対照のウェルにはPD-177溶液を加えないままにする。PD-177で刺激して24時間後に細胞をOpti-MEM培地で1回洗浄し、PD-1776μMを添加したOpti-MEM培地50μLを細胞に加える。ペプチドを10mMのDMSO貯蔵液から滅菌水で500μMの作業溶液になるように希釈し、DMSOの濃度が全ての試料で0.5に一定になるように、さらに希釈する。最終的に最も高いDMSO濃度は0.5であり、これを陰性対照として用いる。陽性対照としては、CaymanChemicals細胞を用いた試験--ニュートリン-310mMを用いる。ニュートリンをペプチドと同じ手順で希釈した。所望の濃度の2倍濃度の希釈液50μlを、所望の最終濃度になるように適切なウェルに加える。その後細胞をペプチドと共に、37°Cで6時間、5CO2の湿潤条件でインキュベートする。インキュベート期間の後、培地をそっと吸引し、1ウェル当たり150μlの固定溶液を加え、20分間、室温で固定する。固定した細胞を1ウェルにつき各回200μlのPBSで4回洗浄する。4回目の洗浄の終わりに、1μMのヘキスト染色液を100μl加える。プレートを密閉して少なくとも30分間、暗所でインキュベートし、PBSで洗浄して過剰な染色液を除去し、その後それぞれのウェルにPBSを加える。プレートは4°Cで3日間保存可能である。CellomicsArrayscan装置にヘキスト及びGFP用の10×対物レンズとXF-100フィルターのセットを取り付け、分子転移モジュールを使用してp53/HDM2の転移を画像化する。平均のCircRINGAveIntenRatio核と細胞質の平均蛍光強度の比率、平均としてを指標として出力した。画像解析に許容できる1ウェル当たりの最低細胞数を500個と設定した。実施例7:蛍光偏光FPを利用したhDM2の直接結合試験[0156]試験は、以下の一般的な手順に従って実施した。1.hDM2自家、41kDをFP緩衝液高塩緩衝液-200mMのNacl、5mMのCHAPS、pH7.5で希釈し、10μMの作業溶液を準備する。2.96ウェルの黒色HEマイクロプレートMolecularDevicesのA1ウェル及びB1ウェルに10μMのタンパク質貯蔵液を30μl加える。3.A2~A12、B2~B12、C1~C12、及びD1~D12のカラムを30μlのFP緩衝液で満たす。4.希釈の最終点でタンパク質濃度が0~9nMになるまで、タンパク質の貯蔵液をA1、B1からA2、B2へ、A2、B2からA3、B3へと2回或いは3回連続希釈する。5.1mM100DMSO溶液のFAMで標識した直鎖ペプチドをDMSOで100μM1:10希釈に希釈する。その後、水で100μMから10μM1:10希釈に希釈し、次いでFP緩衝液で10μMから40nM1:250希釈に希釈する。これが作業溶液となり1:4希釈、ウェル中での濃度は10nMである。FAMで標識したペプチドの希釈液は使用するまで暗所で保管する。6.10nMのFAM標識ペプチド10μlを各ウェルに加え、インキュベートし、その後様々な時点で測定する。5-FAM-BaLTFEHYWAQLTS-NH2のKdは約13.38nMである。実施例8:hDM2に関する競合蛍光偏光試験[0157]この試験は以下の一般的な手順に従って実施した。1.hDM2自家、41kDをFP緩衝液高塩緩衝液-200mMのNacl、5mMのCHAPS、pH7.5で希釈し、84nM2×の作業溶液を準備する。2.96ウェルの黒色HEマイクロプレートMolecularDevicesの各ウェルに84nM2×のタンパク質貯蔵液を20μl加える。3.1mM100DMSO溶液のFAMで標識した直鎖ペプチドをDMSOで100μM1:10希釈に希釈する。その後、100μMから10μM1:10希釈に水で希釈し、次いで10μMから40nM1:250希釈にFP緩衝液で希釈する。これが作業溶液となり1:4希釈、ウェル中での濃度は10nMである。FAMで標識したペプチドの希釈液は使用するまで暗所で保管する。4.FP緩衝液を用い、非標識ペプチドを入れたプレートを作成する。1μM最終濃度のペプチドを出発点として、以下の希釈手順に従って5回の連続希釈を行い、6点の希釈液を準備する。10mM100DMSO溶液をDMSOで5mM1:2希釈に希釈する。次いでH2Oで5mMから500μMに希釈1:10希釈し、その後FP緩衝液で500μMから20μMに希釈する1:25希釈。4μM4×から5段階の連続希釈を行い、6点とする。5.非標識ペプチドの連続希釈液10μlを、20μlのタンパク質84nMで満たしたそれぞれのウェルに移す。6.10nM4×のFAM標識ペプチド10μlをそれぞれのウェルに加え、3時間インキュベートし、その後測定する。実施例7及び8の結果を、図7A~DにHDM2のデータとして示す。実施例9:蛍光偏光FPを利用したhDMXの直接結合試験[0158]試験は、以下の一般的な手順に従って実施した。1.hDMX自家、40kDをFP緩衝液高塩緩衝液-200mMのNacl、5mMのCHAPS、pH7.5で希釈し、10μMの作業溶液を準備する。2.96ウェルの黒色HEマイクロプレートMolecularDevicesのA1ウェル及びB1ウェルに10μMのタンパク質貯蔵液を30μl加える。3.A2~A12、B2~B12、C1~C12、及びD1~D12のカラムを30μlのFP緩衝液で満たす。4.希釈の最終点でタンパク質濃度が0~9nMになるまで、タンパク質の貯蔵液をA1、B1からA2、B2;A2、B2からA3、B3;へと2回或いは3回連続希釈する。5.1mM100DMSO溶液のFAMで標識した直鎖ペプチドをDMSOで100μM1:10希釈に希釈する。その後、水で100μMから10μM1:10希釈に希釈し、次いでFP緩衝液で10μMから40nM1:250希釈に希釈する。これが作業溶液となり1:4希釈、ウェル中での濃度は10nMである。FAMで標識したペプチドの希釈液は使用するまで暗所で保管する。6.10nMのFAM標識ペプチド10μlを各ウェルに加え、インキュベートし、その後様々な時点で測定する。5-FAM-BaLTFEHYWAQLTS-NH2のKdはおよそ51nMである。実施例10:hDMXの競合蛍光偏光試験[0159]試験は、以下の一般的な手順に従って実施した。1.hDMX自家、40kDをFP緩衝液高塩緩衝液-200mMのNacl、5mMのCHAPS、pH7.5で希釈し、300nM2×の作業溶液を準備する。2.96ウェルの黒色HEマイクロプレートMolecularDevicesの各ウェルに300nM2×のタンパク質貯蔵液を20μl加える。3.1mM100DMSO溶液のFAMで標識した直鎖ペプチドをDMSOで100μM1:10希釈に希釈する。その後、水で100μMから10μM1:10希釈に希釈し、次いでFP緩衝液で10μMから40nM1:250希釈に希釈する。これが作業溶液となり1:4希釈、ウェル中での濃度は10nMである。FAMで標識したペプチドの希釈液は使用するまで暗所で保管する。4.FP緩衝液を用い、非標識ペプチドを入れたプレートを作成する。5μM最終濃度のペプチドを出発点として、以下の希釈手順に従って5回の連続希釈を行い、6点の希釈液を準備する。5.10mM100DMSO溶液をDMSOで5mM1:2希釈に希釈する。次いでH2Oで5mMから500μMに希釈1:10希釈し、次いでFP緩衝液で500μMから20μMに希釈する1:25希釈。20μM4×から連続希釈を5回行い、6点とする。6.非標識ペプチドの連続希釈液10μlを、20μlのタンパク質300nMで満たしたそれぞれのウェルに移す。7.10nM4×のFAM標識ペプチド10μlをそれぞれのウェルに加え、3時間インキュベートし、その後測定する。図7A~DのHDMXのデータに、実施例9及び10の結果を示す。実施例11:細胞の生死判別試験[0160]試験は、以下の一般的な手順に従って実施した。細胞のプレーティング:試験前日に、トリプシン処理し、計数した細胞を、予め決めされた密度で96ウェルプレートに播種する。使用する細胞株はそれぞれ、以下の密度で播種する。SJSA-1:7500個細胞/ウェルRKO:5000個細胞/ウェルRKO-E6:5000個細胞/ウェルHCT-116:5000個細胞/ウェルSW-480:2000個細胞/ウェルMCF-7:5000個細胞/ウェル[0161]試験当日、室温で、培地を11のFBSを含む新しい培地試験培地と交換する。1ウェル当たり180μLの試験培地を加える。対照のウェルには細胞を入れずに培地を200μl加える。[0162]ペプチドの希釈:全希釈液を室温で調製し、室温で細胞に加える。DMSOに溶解したペプチドの10mM貯蔵液を準備する。DMSOを希釈剤として用い、1:3の希釈手順で貯蔵液を連続希釈して10、3.3、1.1、0.33、0.11、0.03、0.01mMの溶液を得る。DMSOで連続希釈したペプチドを滅菌水で33.3倍に希釈する。これにより、10×の範囲の作業溶液が得られる。対照のウェル用に、DMSO/滅菌水3DMSOの混合液も準備する。従って、作業溶液の濃度μM範囲は、300、100、30、10、3、1、0.3及び0μMとなる。希釈の各工程では、多チャンネルを使用して十分に混合する。H列を対照とする。H1~H3には20μlの試験培地を加える。H4~H9には20μlの3のDMSO-水媒体を加える。H10~H12は細胞の入っていない培地のみの対照とする。陽性対照:HDM2小分子阻害剤である、ニュートリン-3a10mMを陽性対照として使用する。ニュートリンはペプチドと同じ希釈手順で希釈した。[0163]作業溶液の細胞への添加所望の濃度の10倍濃度の希釈液20μlを、ウェル中での全容積が200μlの最終濃度の溶液になるように適切なウェルに加える300μMのペプチド20μl細胞の入った培地180μl=最終濃度が30μMで1ウェル当たりの容積が200μl。ピペットを使って、数回ゆっくりと混合する。従って使用される最終濃度の範囲は、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03及び0μMとなる強力なペプチドについてはさらに希釈したものも含める。対照としては、ペプチドは含まないが、ペプチドを含むウェルと同じ濃度のDMSOを含むウェル、及び細胞を含まないウェルを準備する。72時間、37°Cで、5CO2の湿潤条件でインキュベートする。細胞の生存率をプロメガ社のMTT試薬で決定する。SJSA-1、RKO、RKO-E6、HCT-116細胞の生存率は3日目に、MCF-7細胞の生存率は5日目に、及びSW-480生存率を6日目に決定する。設定したインキュベート時間の終わりに、プレートを室温に戻す。各ウェルから試験培地80μlを除去する。各ウェルに15μlの融解したMTT試薬を加える。プレートを2時間、37°Cで、5CO2の湿潤条件でインキュベートし、100μlの可溶化試薬を製造業者による手順に従って加える。撹拌しながら、1時間、室温でインキュベートし、その後、SynergyBiotekマルチプレートリーダーで570nMの吸収を測定する。GraphPadPRISM解析ツールにより、DMSO対照に対する細胞の生存率を解析する。[0164]試薬インビトロジェン細胞用培地ファルコン96ウェル、表面処理済細胞培養用プレート、透明Nunc353072DMSOシグマ、D2650RPMI1640インビトロジェン、72400MTTプロメガ、G4000[0165]装置:吸収を測定するためのマルチプレートリーダーSynergy2実施例11の結果を、図7A~DにSJSA-1のEC50のデータとして示す。実施例12:P21のELISA試験[0166]試験は、以下の一般的な手順に従って実施した。細胞のプレーティング:試験前日に、トリプシン処理し、計数したSJSA1細胞を、1ウェル当たり7500個細胞/100μlの密度で96ウェルプレートに播種する。試験当日、培地をRPMI-11FBS試験培地と交換する。1ウェル当たり90μLの試験培地を加える。対照のウェルには細胞を入れずに培地を100μl加える。[0167]ペプチドの希釈:DMSOに溶解したペプチドの10mM貯蔵液を準備する。DMSOを希釈剤として用い、1:3の希釈手順で貯蔵液を連続希釈して10、3.3、1.1、0.33、0.11、0.03、0.01mMの溶液を得る。DMSOで連続希釈したペプチドを滅菌水で33.3倍に希釈する。これにより、10×の範囲の作業溶液が得られる。対照のウェル用に、DMSO/滅菌水3DMSOの混合液も準備する。従って、作業溶液の濃度μM範囲は、300、100、30、10、3、1、0.3及び0μMとなる。希釈の各工程では、多チャンネルを使用して十分に混合する。H列を対照とする。H1~H3には10μlの試験培地を加える。H4~H9には10μlの3のDMSO-水媒体を加える。H10~H12は細胞の入っていない培地のみの対照とする。陽性対照:HDM2小分子阻害剤である、ニュートリン-3a10mMを陽性対照として使用する。ニュートリンはペプチドと同じ希釈手順で希釈した。[0168]作業溶液の細胞への添加:所望の濃度の10倍濃度の希釈液10μlを、ウェル中での全容積が100μlの最終濃度の溶液になるように適切なウェルに加える300μMのペプチド10μl細胞の入った培地90μl=最終濃度が30μMで1ウェル当たりの容積が100μl。従って使用される最終濃度の範囲は、30、10、3、1、0.3及び0μMとなる。対照としては、ペプチドは含まないが、ペプチドを含むウェルと同じ濃度のDMSOを含むウェル、及び細胞を含まないウェルを準備する。20時間インキュベートした後、培地を吸引し、細胞を1×PBSCa/Mgを含まないで洗浄し、60μlの1×細胞溶解緩衝液CellSignalingtechnologies、10×緩衝液を1×に希釈し、プロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤を添加したもの中、氷上で30分間溶解させる。プレートを5000rpm、4°Cで8分間遠心分離し、不純物が除去された上清を回収し、-80°Cでその後使用するまで保存する。[0169]タンパク質の推定:溶解物の総タンパク質含量をThermofisherのBCAタンパク質検出キットとBSA基準物質を用いて測定する。通常、1ウェル当たりのタンパク質は約6~7μgであると予測される。p21ELISAには、1ウェル当たり50μlの溶解物を使用する。[0170]ヒトのトータルp21のELISA:ELISA試験の手順は、製造業者の説明の通りである。1ウェル当たり50μlの溶解物を用い、各ウェルを3回重複して準備する。[0171]試薬:細胞を用いた試験--ニュートリン-310mM:CaymanChemicals、カタログ番号600034OptiMEM、インビトロジェン、カタログ番号51985CellSignaling溶解緩衝液10×、Cellsignalingtechnology、カタログ番号9803プロテアーゼ阻害剤混合物錠剤小、RocheChemicals、カタログ番号04693124001ホスファターゼ阻害剤混合物錠剤、RocheChemicals、カタログ番号04906837001ヒトトータルp21ELISAキット、RDSystems、DYC10475STOP溶液1MHCL、CellSignalingTechnologies、カタログ番号7002[0172]装置:微量遠心器Eppendorf5415D及び吸収を測定するためのマルチプレートリーダーSynergy2実施例12の結果を、図7A~Dにp21のデータとして示す。実施例13:カスパーゼ3の検出試験[0173]試験は、以下の一般的な手順に従って実施した。細胞のプレーティング:試験前日に、トリプシン処理し、計数したSJSA1細胞を、1ウェル当たり7500個細胞/100μlの密度で96ウェルプレートに播種する。試験当日、培地をRPMI-11FBS試験培地と交換する。1ウェル当たり180μLの試験培地を加える。対照のウェルには細胞を入れずに培地を200μl加える。[0174]ペプチドの希釈:DMSOに溶解したペプチドの10mM貯蔵液を準備する。DMSOを希釈剤として用い、1:3の希釈手順で貯蔵液を連続希釈して10、3.3、1.1、0.33、0.11、0.03、0.01mMの溶液を得る。DMSOで連続希釈したペプチドを滅菌水で33.3倍に希釈する。これにより、10×の範囲の作業溶液が得られる。対照のウェル用に、DMSO/滅菌水3DMSOの混合液も準備する。従って、作業溶液の濃度μM範囲は、300、100、30、10、3、1、0.3及び0μMとなる。希釈の各工程では、多チャンネルを使用して十分に混合する。20μlの10×作業溶液を適切なウェルに加える。H列を対照とする。H1~H3には20μlの試験培地を加える。H4~H9には20μlの3のDMSO-水媒体を加える。H10~H12は細胞の入っていない培地のみの対照とする。陽性対照:HDM2小分子阻害剤であるニュートリン-3a10mMを陽性対照として使用する。ニュートリンはペプチドと同じ希釈手順で希釈した。[0175]作業溶液の細胞への添加:所望の濃度の10倍濃度の希釈液10μlを、ウェル中での全容積が100μlの最終濃度の溶液になるように適切なウェルに加える300μMのペプチド10μl細胞の入った培地90μl=最終濃度が30μMで1ウェル当たりの容積が100μl。従って使用される最終濃度の範囲は、30、10、3、1、0.3及び0μMとなる。対照としては、ペプチドは含まないが、ペプチドを含むウェルと同じ濃度のDMSOを含むウェル、及び細胞を含まないウェルを準備する。48時間インキュベートした後、培地80μlを各ウェルから吸引し、1ウェル当たり100μlのカスパーゼ3/7Glo試験試薬プロメガ、カスパーゼ3/7glo試験システム、G8092を加える。緩やかに振とうさせながら、1時間、室温でインキュベートする。発光をSynergyBiotekマルチプレートリーダーで測定する。DMSOで処理した細胞に対するカスパーゼ3の活性化としてデータを解析する。実施例13の結果を、図7A~Dに、p21のデータとして示す。"