"親水性架橋重合体粒子からなる液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法であって、水性分散媒中に架橋性単量体を分散させて分散液を得る工程1と、前記架橋性単量体の融点以上、かつ、実質的に重合反応が進行しない温度で、前記分散液を1時間以上撹拌する工程2と、反応系を一定の温度に保持して重合開始剤の存在下で第1の重合反応を行い、架橋重合体粒子を得る工程3と、前記第1の重合反応における重合率が70~98の範囲にある段階で、反応系に親水性単量体を添加する工程4と、反応系を一定の温度に保持して第2の重合反応を行い、前記架橋重合体粒子の表面に親水性単量体を重合する工程5を有する液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法。工程4において、第1の重合反応における重合率が70~98の範囲にある段階で、反応系に親水性単量体とともに有機溶媒を添加する、請求項1記載の液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法。工程2における、架橋性単量体の融点以上、かつ、実質的に重合反応が進行しない温度が5~40°Cである、請求項1又は2記載の液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法。請求項1、2又は3記載の液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法により得られるカラム充填剤を用いる、液体クロマトグラフィーによる試料の測定方法。請求項4記載の液体クロマトグラフィーによる試料の測定方法を用いる、ヘモグロビン類の測定方法。測定系に生じる圧力値を9.8×103Pa以上、19.6×105Pa以下に設定する、請求項5記載のヘモグロビン類の測定方法。本発明は、性能の再現性が良好なカラム充填剤の製造方法を提供することを目的とする。また、本発明は、該カラム充填剤の製造方法を用いて得られるカラム充填剤を用いた液体クロマトグラフィーによる試料の測定方法、及び、ヘモグロビン類の測定方法を提供することを目的とする。本発明は、親水性架橋重合体粒子からなる液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法であって、水性分散媒中に架橋性単量体を分散させて分散液を得る工程1と、上記架橋性単量体の融点以上、かつ、実質的に重合反応が進行しない温度で、上記分散液を1時間以上撹拌する工程2と、反応系を一定の温度に保持して重合開始剤の存在下で第1の重合反応を行い、架橋重合体粒子を得る工程3と、上記第1の重合反応における重合率が70~98の範囲にある段階で、反応系に親水性単量体を添加する工程4と、反応系を一定の温度に保持して第2の重合反応を行い、上記架橋重合体粒子の表面に親水性単量体を重合する工程5を有する液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法である。以下に本発明を詳述する。本発明者らは、所定の温度、及び、所定の時間で単量体混合物の分散液を撹拌した後に第1の重合反応を行い、その後、第1の重合反応の重合率が70~98の範囲にある段階で、反応系に親水性単量体を添加して第2の重合反応を行うことにより、保持時間や分離性能等の再現性に優れ、高い分離性能を有するカラム充填剤を再現性良く製造することができることを見出し、本発明を完成させるに至った。本発明のカラム充填剤の製造方法は、水性分散媒中に架橋性単量体を分散させて分散液を得る工程1を有する。架橋性単量体は、1分子中にビニル基を2個以上有する単量体であることが好ましい。また、架橋性単量体は、イオン交換基を有さない、又は、イオン交換基を有していても微量である架橋性単量体が好ましい。更に架橋性単量体は、アクリル系の架橋性単量体がより好ましい。なお、本明細書において上記アクリル系とは、アクリル基又はメタクリル基を有することを意味する。また、メタアクリレートとは、アクリルレート又はメタクリレートを意味し、メタアクリル酸とは、アクリル酸又はメタクリル酸を意味する。架橋性単量体としては、例えば、ポリエチレングリコールジメタアクリレート類、ポリプロピレングリコールジメタアクリレート類、アルキレングリコールジメタアクリレート類、ヒドロキシアルキルジメタアクリレート類、分子内に少なくとも2個のメタアクリル基を有するアルキロールアルカンメタアクリレート類等が挙げられる。ポリエチレングリコールジメタアクリレート類としては、例えば、エチレングリコールジメタアクリレート、ジエチレングリコールジメタアクリレート、トリエチレングリコールジメタアクリレート、テトラエチレングリコールジメタアクリレート、ポリエチレングリコールジメタアクリレート等が挙げられる。ポリプロピレングリコールジメタアクリレート類としては、例えば、プロピレングリコールジメタアクリレート、ジプロピレングリコールジメタアクリレート、トリプロピレングリコールジメタアクリレート、テトラプロピレングリコールジメタアクリレート、ポリプロピレングリコールジメタアクリレート等が挙げられる。アルキレングリコールジメタアクリレート類としては、例えば、ポリテトラメチレングリコールジメタアクリレート、ポリプロピレングリコール-テトラメチレングリコール-ジメタアクリレート、ポリエチレングリコールポリプロピレングリコールポリエチレングリコール-ジメタアクリレート、1,3-ブチレングリコールジメタアクリレート、1,4-ブチレングリコールジメタアクリレート、1,6-ヘキサグリコールジメタアクリレート、1,9-ノナンジオールジメタアクリレート、ネオペンチルグリコールジメタアクリレート等が挙げられる。ヒドロキシアルキルジメタアクリレート類としては、例えば、2-ヒドロキシ-1,3-ジメタアクリロキシプロパン、2-ヒドロキシ-1-メタアクリロキシ-3-メタアクリロキシプロパン、2-ヒドロキシ-3-メタアクリロイルオキシプロピルメタアクリレート、グリセロールジメタアクリレート、グリセロールアクリレートメタクリレート、ウレタンメタジアクリレート、イソシアヌル酸ジメタアクリレート、イソシアヌル酸トリメタアクリレート、1,10-ジメタアクリロキシ-4,7-ジオキサデカン-2,9-ジオール、1,10-ジメタアクリロキシ-5-メチル-4,7-ジオキサデカン-2,9-ジオール、1,11-ジメタアクリロキシ-4,8-ジオキサウンデガン-2,6,10-トリオール等が挙げられる。分子内に少なくとも2個のメタアクリル基を有するアルキロールアルカンメタアクリレート類としては、例えば、トリメチロールプロパントリメタアクリレート、テトラメチロールプロパントリメタアクリレート、ジトリメチロールプロパンテトラメタアクリレート、テトラメチロールメタントリメタアクリレート、テトラメチロールメタンテトラメタアクリレート、トリメチロールエタントリメタアクリレート等が挙げられる。これらの架橋性単量体は単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。水性分散媒には、架橋性単量体以外に、必要に応じて非架橋性単量体を添加してもよい。非架橋性単量体は、アクリル系単量体が好ましく、具体的には例えば、メタアクリル酸アルキル類、水酸基を有する非架橋性アクリル系単量体等が挙げられる。メタアクリル酸アルキル類としては、例えば、メタアクリル酸メチル、メタアクリル酸エチル、メタアクリル酸プロピル、メタアクリル酸イソプロピル、メタアクリル酸ブチル、メタアクリル酸2-エチルヘキシル等が挙げられる。水酸基を有する非架橋性アクリル系単量体としては、例えば、ポリエチレングリコールモノメタアクリレート類、ポリプロピレングリコールモノメタアクリレート類、アルキレングリコールモノメタアクリレート類、その他の水酸基を有するメタアクリレート類等が挙げられる。ポリエチレングリコールモノメタアクリレート類としては、例えば、エチレングリコールモノメタアクリレート、ジエチレングリコールモノメタアクリレート、トリエチレングリコールモノメタアクリレート、テトラエチレングリコールモノメタアクリレート、ポリエチレングリコールモノメタアクリレート、メトキシトリポリエチレングリコールモノメタアクリレート、メトキシポリエチレングリコールモノメタアクリレート等が挙げられる。ポリプロピレングリコールモノメタアクリレート類としては、例えば、プロピレングリコールモノメタアクリレート、ジプロピレングリコールモノメタアクリレート、トリプロピレングリコールモノメタアクリレート、テトラプロピレングリコールモノメタアクリレート、ポリプロピレングリコールモノメタアクリレート等が挙げられる。アルキレングリコールモノメタアクリレート類としては、例えば、ポリエチレングリコールプロピレングリコールモノメタアクリレート、ポリエチレングリコールテトラメチレングリコールモノメタアクリレート、ポリプロピレングリコールテトラメチレングリコールモノメタアクリレート、オクトキシポリエチレングリコールポリプロピレングリコール-モノメタアクリレート等が挙げられる。その他の水酸基を有するメタアクリレート類としては、例えば、グリセリンモノメタアクリレート、2-ヒドロキシエチルメタアクリレート、2-ヒドロキシプロピルメタアクリレート、2,3-ジヒドロキシルエチルメタアクリレート、2,3-ジヒドロキシルプロピルメタアクリレート等が挙げられる。これらの非架橋性単量体は単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。非架橋性単量体を用いる場合、非架橋性単量体の添加量は、架橋性単量体100重量部に対して100重量部以下であることが好ましい。非架橋性単量体の添加量が100重量部を超えると、得られる架橋重合体粒子の架橋度が低下してカラム充填剤が耐圧性に劣るものとなり、膨潤や収縮が起きて分離精度が低下しやすくなる。工程1では、架橋性単量体、又は、架橋性単量体と非架橋性単量体との混合物以下、両者を合わせて単量体混合物ともいうを水性分散媒に添加する。なお、単量体混合物には、水性分散媒に添加する前に、後述する工程3で用いる重合開始剤を溶解しておくことが好ましい。水性分散媒としては、水、水溶性有機溶媒、水と水溶性有機溶媒との混合物等が挙げられる。水溶性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類、アセトン、アセトニトリル等が挙げられる。水溶性有機溶媒を水との混合物として用いる場合、水溶性有機溶媒の濃度の好ましい上限は20重量である。水性分散媒の使用量は、単量体混合物100重量部に対して、好ましい下限は200重量部、好ましい上限は1万重量部である。分散液は、必要に応じて、界面活性効果を有する物質以下、分散剤ともいうを含有してもよい。分散剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、デンプン、ヒドロキシセルロース、ポリビニルエーテル等の水溶性高分子化合物や、リン酸カルシウム等の無機塩類や、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム、ジアルキルスルホコハク酸ナトリウム等のイオン性界面活性剤や、ポリオキシエチレンノニルフェニールエーテル、ポリエチレングリコールモノステアリレート、ソルビタンモノステアリレート等の非イオン性界面活性剤等が挙げられる。分散液中の分散剤の含有量の好ましい下限は0.01重量、好ましい上限は20重量である。分散剤の含有量が0.01重量未満であると、添加した単量体が分散しにくくなり、凝集物が発生しやすくなる。分散剤の含有量が20重量を超えると、得られる親水性架橋重合体粒子の粒径が小さくなり、重合中に凝集物が発生しやすくなる。分散剤の含有量のより好ましい下限は0.1重量、より好ましい上限は10重量である。分散液は、その他に公知の各種添加剤を含有してもよい。添加剤としては、例えば、pH調節剤、消泡剤、得られる親水性架橋重合体粒子にマクロポアを形成させるための多孔質化剤、重合反応を制御するための各種連鎖移動剤、単量体混合物の溶解度を調節するための有機化合物又は無機化合物等が挙げられる。本発明の液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法は、架橋性単量体の融点以上、かつ、実質的に重合反応が進行しない温度で、上記分散液以下、反応系ともいうを1時間以上撹拌する工程2を有する。工程2における反応系の温度は、架橋性単量体の融点以上、かつ、実質的に重合反応が進行しない温度である。架橋性単量体の融点以上とは、複数の架橋性単量体を使用する場合は、全ての架橋性単量体の融点以上であることを意味し、非架橋性単量体を併用する場合は、使用する全ての架橋性単量体と全ての非架橋性単量体の融点以上であることを意味する。実質的に重合反応が進行しない温度とは、その温度で少なくとも1時間撹拌を行った場合に生じる重合物が、単量体混合物全量の10重量以下となる温度を意味する。具体的には、単量体混合物として上記例示したものを用い、重合開始剤として下記例示するものを用いる場合、工程2における反応系の温度は、5~40°Cであることが好ましい。工程2における反応系の温度が5°C未満であると、単量体混合物の一部が凍結して均一に撹拌することが困難となることがある。工程2における反応系の温度が40°Cを超えると、撹拌中に単量体類の一部が重合し、得られるカラム充填剤の性能の再現性が低下することがある。工程2における反応系の温度のより好ましい下限は10°C、より好ましい上限は30°Cである。工程2における撹拌時間の下限は1時間である。工程2における撹拌時間が1時間未満であると、分散液の単量体混合物が安定せず、得られる親水性架橋重合体粒子の粒径の再現性が悪くなる。工程2における撹拌時間の好ましい下限は3時間、より好ましい下限は5時間である。工程2における撹拌時間は、長時間行なっても操作時間が延長するのみで再現性や分離性能を向上する効果は得られない。また、反応系が上述した実質的に重合反応が進行しない温度であっても、重合が進行してしまう可能性があるため、実質的には、工程2における撹拌時間の好ましい上限は48時間である。本発明の液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法は、反応系を一定の温度に保持して重合開始剤の存在下で第1の重合反応を行い、架橋重合体粒子を得る工程3を有する。第1の重合反応としては、公知の重合方法を用いることができる。なかでも、重合開始剤を添加した後に、反応系を一定の温度に保持する方法が好ましく、重合開始剤を溶解した単量体混合物を水性分散媒中に添加した後に反応系を一定の温度に保持する方法がより好ましい。工程3で用いる重合開始剤は、水溶性又は油溶性の公知のラジカル重合開始剤を用いることが好ましく、例えば、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、過硫酸アンモニウム等の過硫酸塩や、クメンハイドロパーオキサイド、ベンゾイルパーオキサイド、ラウロイルパーオキサイド、オクタノイルパーオキサイド、o-クロロベンゾイルパーオキサイド、アセチルパーオキサイド、t-ブチルハイドロパーオキサイド、t-ブチルパーオキシアセテート、t-ブチルパーオキシイソブチレート、3,5,5-トリメチルヘキサノイルパーオキサイド、t-ブチルパーオキシ-2-エチルヘキサノエート、ジ-t-ブチルパーオキサイド等の有機過酸化物や、2,2’-アゾビスイソブチロニトリル、2,2’-アゾビス2,4-ジメチルバレロニトリル、4,4’-アゾビス4-シアノペンタン酸、2,2’-アゾビス2-メチルブチロニトリル、アゾビスシクロヘキサンカルボニトリル等のアゾ化合物や、これらの誘導体類等が挙げられる。工程3で用いる重合開始剤の使用量は、単量体混合物100重量部に対して、好ましい下限は0.05重量部、好ましい上限は5重量部である。重合開始剤の使用量が0.05重量部未満であると、第1の重合反応が充分に進行せず、未反応の単量体が反応系に残存する可能性がある。また、重合反応を完了させるために長時間を要し、作業効率が低下する。上記重合開始剤の使用量が5重量部を超えると、急激な反応の進行により、凝集物が発生しやすくなる。第1の重合反応において保持する温度の好ましい下限は40°C、好ましい上限は100°Cである。第1の重合反応において保持する温度が40°C未満であると、温度を制御することが困難であり、反応に長時間を要する場合がある。第1の重合反応において保持する温度が100°Cを超えると、凝集物が発生しやすくなる。また、第1の重合反応における反応時間の好ましい下限は0.3時間、好ましい上限は12時間である。第1の重合反応における反応時間が0.3時間未満であると、単量体混合物の重合が不充分となり、得られるカラム充填剤の性能の再現性が低下することがある。第1の重合反応における反応時間が12時間を超えると、凝集物が発生しやすくなる。第1の重合反応における反応時間のより好ましい下限は1時間、より好ましい上限は6時間である。本発明のカラム充填剤の製造方法は、第1の重合反応における重合率が70~98の範囲にある段階で、反応系に親水性単量体を添加する工程4を有する。第1の重合反応における重合率が70未満の段階で上記親水性単量体を添加すると、重合反応の途中で凝集物が発生しやすくなる。第1の重合反応における重合率が98を超える段階で親水性単量体を添加すると、得られるカラム充填剤を用いた際に分離性能が不充分となることがある。なお、本明細書において重合率は、重合中に反応系から重合物を取り出し、水及び有機溶媒で洗浄した後に乾燥して、重合物の乾燥重量を測定し、以下の式により求めることができる。重合率=得られた重合物の重量/単量体混合物の仕込み量×100親水性単量体は、重合性基、及び、親水性官能基を有する単量体であることが好ましい。親水性官能基は、重合後に得られる架橋重合体粒子に親水性を付与し、かつ、液体クロマトグラフィーによる測定の際に、試料中の各成分との相互作用により分離を行う役割を担う。従って、親水性単量体は、カラム充填剤として適用する測定モードによって、適宜選択できる。例えば、本発明のカラム充填剤の製造方法を用いて得られるカラム充填剤以下、本発明によるカラム充填剤というを、イオン交換クロマトグラフィーに用いる場合に使用する親水性単量体は、1分子中に1個以上のイオン交換基を有する親水性単量体以下、イオン交換性単量体ともいうであることが好ましい。イオン交換基としては、例えば、カルボキシル基、スルホン酸基、リン酸基等のカチオン交換基、3級アミノ基、4級アンモニウム基等のアニオン交換基等が挙げられる。なお、本明細書において、イオン交換基には、イオン交換基に付随する構造は問わないため、イオン交換基を末端に有する全ての官能基を含む。例えば、カルボキシル基とは、カルボキシルエチル基、カルボキシルプロピル基等、カルボキシル基が結合する官能基類全てを含む以下、官能基を記載する場合は同様の構造を意味する。カルボキシル基を有する単量体としては、例えば、メタアクリル酸、2-メタアクリロイルオキシエチルサクシネート、2-メタアクリロイルオキシエチルフタル酸等のメタアクリル酸誘導体類や、クロトン酸、イタコン酸、シトラコン酸、メサコン酸、マレイン酸、フマル酸及びこれらの誘導体等が挙げられる。スルホン酸基を有する有単量体としては、例えば、2-メタアクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸、2-スルホエチルメタアクリレート、3-スルホプロピルメタアクリル酸等のメタアクリル酸誘導体類や、スチレンスルホン酸、アリルスルホン酸、3-スルホプロピル-イタコン酸及びこれらの誘導体等が挙げられる。リン酸基を有する単量体としては、例えば、メタアクリロイルオキシエチルアシッドホスフェート、2-メタアクリロイルオキシエチルアシッドホスフェート、3-メタアクリロイルオキシプロピルアシッドホスフェート及びこれらの誘導体等が挙げられる。3級アミノ基を有する単量体としては、例えば、ジメチルアミノエチルメタアクリレート、ジエチルアミノエチルメタアクリレート、2-ヒドロキシ-3-ジメチルアミノプロピルメタアクリレート、N,N-ジメチルメタアクリルアミド、及びこれらの誘導体等が挙げられる。4級アンモニウム基を有する単量体としては、例えば、2-メタアクリロイルオキシエチルトリメチルアンモニウムクロライド、2-メタアクリロイルオキシエチルトリエチルアンモニウムクロライド、2-ヒドロキシ-3-メタアクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライド及びこれらの誘導体等が挙げられる。本発明によるカラム充填剤を、イオン交換クロマトグラフィーに用いるための他の方法としては、イオン交換性単量体を用いる代わりに、イオン交換基を有する化合物以下、イオン交換性化合物ともいうと反応可能な官能基以下、反応性基ともいうを有する親水性単量体以下、反応性単量体ともいうを上記架橋重合体粒子の表面に重合し、その後に、該反応性基にイオン交換性化合物を反応させる方法が挙げられる。反応性基は、非イオン性の親水性基であることが好ましい。非イオン性の親水性基としては、例えば、水酸基、グリコール基、エポキシ基、グリシジル基、1級アミノ基、2級アミノ基、シアノ基、アルデヒド基等が挙げられ、なかでも、水酸基、エポキシ基、グリシジル基、1級アミノ基、2級アミノ基が好ましく、水酸基、エポキシ基、グリシジル基がより好ましい。反応性単量体は、メタアクリル酸エステル類が好ましく、例えば、ポリエチレングリコールモノメタアクリレート類、ポリプロピレングリコールメタアクリレート類、アルキレングリコールモノメタアクリレート類、エポキシ化又はヒドロキシル化メタアクリレート類、アミノ化メタアクリレート類、アルデヒド化又はシアノ化メタアクリレート類等が挙げられる。ポリエチレングリコールモノメタアクリレート類としては、例えば、エチレングリコールモノメタアクリレート、ジエチレングリコールモノメタアクリレート、トリエチレングリコールモノメタアクリレート、テトラエチレングリコールモノメタアクリレート、ポリエチレングリコールモノメタアクリレート、メトキシトリポリエチレングリコールモノメタアクリレート、メトキシポリエチレングリコールモノメタアクリレート等が挙げられる。ポリプロピレングリコールメタアクリレート類としては、例えば、プロピレングリコールモノメタアクリレート、ジプロピレングリコールモノメタアクリレート、トリプロピレングリコールモノメタアクリレート、テトラプロピレングリコールモノメタアクリレート、ポリプロピレングリコールモノメタアクリレート等が挙げられる。アルキレングリコールモノメタアクリレート類としては、例えば、ポリエチレングリコールプロピレングリコールモノメタアクリレート、ポリエチレングリコールテトラメチレングリコールモノメタアクリレート、ポリプロピレングリコールテトラメチレングリコールモノメタアクリレート、オクトキシポリエチレングリコールポリプロピレングリコール-モノメタアクリレート等が挙げられる。エポキシ化又はヒドロキシル化メタアクリレート類としては、例えば、グリシジルメタアクリレート、グリセリンモノメタアクリレート、2-ヒドロキシエチルメタアクリレート、2-ヒドロキシプロピルメタアクリレート、2,3-ジヒドロキシルエチルメタアクリレート、2,3-ジヒドロキシルプロピルメタアクリレート等が挙げられる。アミノ化メタアクリレート類としては、例えば、2-アミノエチルメタアクリレート、2,3-ジアミノエチルメタアクリレート、2-アミノプロピルメタアクリレート、2,3-ジアミノプロピルメタアクリレート、メタアクリルアミド等が挙げられる。アルデヒド化又はシアノ化メタアクリレート類としては、例えば、メタアクロレイン、シアノメタアクリレート、メチルシアノアクリレート、エチルシアノアクリレート、ブチルシアノアクリレート、メタアクリロニトリル、等が挙げられる。これらの反応性単量体は、単独で用いてもよいし、二種以上を組み合わせて用いてもよい。反応性基にイオン交換性化合物を反応させる方法は、公知の化学反応を用いることができる。架橋重合体粒子の分解等の反応を伴わない条件であれば、これらの公知の化学反応を限定なく用いることができる。反応性基が水酸基の場合、例えば、ブロムエタンスルホン酸ナトリウム等のハロゲン化エタンスルホン酸類やクロロ酢酸ナトリウム等のハロゲン化酢酸類をイオン交換性化合物として用いる。これらのイオン交換性化合物と、表面に水酸基を有する架橋重合体粒子とを水酸化アルカリ水溶液中で反応させることにより、イオン交換基を導入できる。また、イオン交換基を有するアルデヒド化合物を、酸触媒下にてアセタール化反応により、表面に水酸基を有する架橋重合体粒子と反応させることにより、イオン交換基を導入できる。更に、例えば、トリカルバニル酸、ブタンテトラカルボン酸等の多官能カルボン化合物と水酸基との脱水反応によるエステル化により、上記架橋重合体粒子の表面にカルボキシル基を導入できる。加えて、1,3-プロパンスルトン、1,4-ブタンスルトン等を、水酸化アルカリの水溶液中又は有機溶媒溶液中で、表面に水酸基を有する架橋重合体粒子と反応させることによっても架橋重合体粒子の表面にスルホン酸基を導入できる。反応性基がエポキシ基又はグリシジル基の場合、表面にエポキシ基又はグリシジル基を有する架橋重合体粒子と硫酸ナトリウムやタウリン、グリコール酸等のイオン交換性化合物とを反応させる方法、表面にエポキシ基又はグリシジル基を有する架橋重合体粒子と三フッ化ホウ素エーテラートとを結合した後、亜硫酸ナトリウム水溶液中で加熱処理する方法等によりイオン交換基を導入できる。反応性基がアミノ基の場合、エピクロルヒドリンやトリグリシジルエーテルのようなエポキシ化合物を水酸化アルカリの水溶液中又は有機溶媒溶液中で反応させてエポキシ化した後、上記のエポキシ基又はグリシジル基の場合と同様の処理を行うことによりイオン交換基を導入できる。本発明によるカラム充填剤を、ゲル浸透クロマトグラフィーに用いる場合に使用する親水性単量体は、水酸基、又はエポキシ基のような非イオン性親水基を1分子中に1個以上有する親水性単量体であることが好ましい。例えば、上記のポリエチレングリコールモノメタアクリレート類、ポリプロピレングリコールジメタアクリレート類、アルキレングリコールモノメタアクリレート類、エポキシ化又はヒドロキシル化メタアクリレート類等の単量体類が挙げられる。本発明によるカラム充填剤を、順相クロマトグラフィーに用いる場合に使用する親水性単量体は、1級アミノ基、2級アミノ基、シアノ基、水酸基のような非イオン性親水基を1分子中に1個以上有する親水性単量体であることが好ましい。例えば、ポリエチレングリコールモノメタアクリレート類、ポリプロピレングリコールジメタアクリレート類、アルキレングリコールモノメタアクリレート類、アミノ化メタアクリレート類、アルデヒド化又はシアノ化メタアクリレート類を有する単量体の他に、メタアクリルアミド、N-メチルメタアクリルアミド、N-エチルメタアクリルアミド、N-イソプロピルメタアクリルアミド、等のアクリルアミド類及びこれらの誘導体等の単量体類が挙げられる。親水性単量体は、アクリル系単量体であることが好ましい。また、親水性単量体は、ナトリウム塩、カリウム塩等の塩類、塩化物等でもよい。親水性単量体は、2種類以上を混合して用いてもよく、上述した各測定モードに限定されず、他の測定モードに使用したり、他の測定モードに挙げた単量体類と混合して用いたりしてもよい。また、親水性単量体として、1分子中に同一の複数の官能基を有する単量体を用いてもよく、1分子中に異なる種類の官能基を有する単量体を用いてもよい。親水性単量体の添加量は、単量体混合物100重量部に対して、好ましい下限は10重量部、好ましい上限は200重量部である。親水性単量体の添加量が10重量部未満であると、得られるカラム充填剤を用いた場合の分離性能が低下することがある。親水性単量体の添加量が200重量部を超えると、親水性が大きくなり、耐圧性や耐膨潤性が低下することがある。また、複数の溶離液を用いて測定を行う場合に、溶離液の切り替え時における平衡化に長時間を要し、測定時間が延長することがある。反応系に親水性単量体を添加する方法は、使用する親水性単量体の種類、及び、添加量に応じて最適な手法を選択することができる。例えば、親水性単量体の全量を一括して添加する方法、その一部を分割して添加する方法、数分~数時間かけて添加する方法等が挙げられる。また、親水性単量体の添加時に、反応系の温度を変化させてもよい。工程4における親水性単量体の添加時において、親水性単量体とともに有機溶媒を添加してもよい。有機溶媒を添加することにより、親水性単量体の溶解度を変化させて、架橋重合体表面での親水性単量体の重合率を増大させることができる。添加する有機溶媒は、親水性単量体に対して良溶媒が好ましく、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール等のアルコール類や、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類や、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類や、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル等のエーテル類や、ジメチルホルムアミド等、公知の有機溶媒が挙げられる。有機溶媒の使用量は、単量体混合物100重量部に対して、好ましい下限は20重量部、好ましい上限は500重量部である。有機溶媒の使用量が20重量部未満であると、有機溶媒を添加する効果が得られない。有機溶媒の使用量が500重量部を超えると、第2の重合反応中に凝集物が発生しやすくなる。本発明のカラム充填剤の製造方法は、反応系を一定の温度に保持して第2の重合反応を行い、架橋重合体粒子の表面に親水性単量体を重合する工程5を有する。第2の重合反応において、保持する温度の好ましい下限は40°C、好ましい上限は100°Cである。第2の重合反応において保持する温度が40°C未満であると、温度を制御することが困難であり、反応に長時間を要する場合がある。第2の重合反応において保持する温度が100°Cを超えると、凝集物が発生しやすくなる。また、第2の重合反応における反応時間の好ましい下限は0.3時間、好ましい上限は12時間である。第2の重合反応における反応時間が0.3時間未満であると、親水性単量体の重合が不充分となり、得られるカラム充填剤の性能の再現性が低下することがある。第2の重合反応における反応時間が12時間を超えると、凝集物が発生しやすくなる。第2の重合反応時においては、上記第1の重合反応において挙げた重合開始剤を添加してもよいが、重合開始剤を添加せずに第2の重合反応を行う方法が好ましい。この場合は、第1の重合反応によって消費されなかった、反応系に残存する重合開始剤を用いて重合反応を行う。第2の重合反応を行った後、得られた重合物を反応系より取り出し、必要に応じて、水、有機溶媒、水と有機溶媒との混合物等で洗浄することにより、架橋重合体粒子の表面に親水性重合体を有する親水性架橋重合体粒子を得ることができる。また、得られた親水性架橋重合体粒子に、必要に応じて、公知の技術による親水化処理を行ってもよい。親水化処理は、例えば、特開2001-91505号公報に開示されている、ヘモグロビン、アルブミン、グロブリン等の蛋白質、糖類、ノニオン系界面活性剤等の親水基を有する化合物を吸着させる方法や、特開2004-295368号公報に記載の方法によるオゾン処理を行う方法等が好ましい。本発明によるカラム充填剤をカラムに充填することにより、液体クロマトグラフィーに適用することができる。本発明のカラム充填剤の製造方法により得られるカラム充填剤を用いる液体クロマトグラフィーによる試料の測定方法もまた、本発明の1つである。本発明の液体クロマトグラフィーによる試料の測定方法は、公知の構成による液体クロマトグラフ、及び、公知の組成による溶離液を用いることができる。本発明の液体クロマトグラフィーによる試料の測定方法は、ヘモグロビン類やその他のタンパク質類、糖類等の親水性物質を測定することができる。本発明の液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法もまた、本発明の1つである。本発明者らは、液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定において、測定精度が最も向上する圧力範囲を見出した。また、該圧力範囲における測定を安定して維持することにより、カラム寿命を延長させることができることを見出した。更に本発明者らは、本発明によるカラム充填剤を用いることにより、高い分離性能を維持したまま、測定系の圧力値を上記圧力範囲内に安定させることができることを見出した。本発明のヘモグロビン類の測定方法は、健常人血に含まれるヘモグロビン類、例えば、ヘモグロビンA0、ヘモグロビンA1c、ヘモグロビンF胎児性ヘモグロビンやヘモグロビンA2を短時間で高精度に測定することができる。更に、異常ヘモグロビン類、例えば、ヘモグロビンS、ヘモグロビンC、ヘモグロビンD、ヘモグロビンE等を測定することができる。本発明のヘモグロビン類の測定方法においては、測定系に生じる圧力値を9.8×103Pa以上、19.6×105Pa以下に設定することが好ましい。なお、本明細書において、上記測定系に生じる圧力値以下、単に圧力値ともいうとは、クロマトグラフィーの流路系において、カラムを含む、送液ポンプ以降の配管系流路全体により発生する圧力の値を意味する。この圧力値は、具体的には例えば、送液ポンプとカラムとの間に接続した圧力計により測定できる値である。本発明のヘモグロビン類の測定方法において、圧力値を9.8×103Pa未満に設定した場合、ヘモグロビン類の測定値の精度が低下したり、測定時間が長くなったりすることがある。また、圧力値が非常に小さいため、圧力値の制御が困難となる。圧力値を、19.6×105Paを超える値に設定した場合、測定精度が低下し、カラム寿命が短くなる。本発明のヘモグロビン類の測定方法では、本発明によるカラム充填剤を用いることにより、高い分離性能及び短い測定時間を維持したまま、上記圧力値を、再現性良く、19.6×105Pa以下にすることができる。本発明のヘモグロビン類の測定方法に用いられる液体クロマトグラフィーは、溶離液送液用のポンプ、検出器、試料導入装置等を備えた公知の液体クロマトグラフに、本発明によるカラム充填剤を充填したカラムを接続することにより行うことができる。本発明のヘモグロビン類の測定方法に用いる溶離液は、公知の塩化合物を含む緩衝液類や有機溶媒類を用いることが好ましく、具体的には例えば、有機酸、無機酸、及び、これらの塩類、アミノ酸類、グッドの緩衝液等が挙げられる。有機酸は、例えば、クエン酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸等が挙げられる。上記無機酸は特に限定されず、例えば、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、ホウ酸、酢酸等が挙げられる。アミノ酸類は、例えば、グリシン、タウリン、アルギニン等が挙げられる。また、上記緩衝液には、他に一般的に添加される物質、例えば、界面活性剤、各種ポリマー、親水性の低分子化合物、カオトロピックイオン類等を適宜添加してもよい。本発明のヘモグロビン類の測定方法において、ヘモグロビン類の測定を行う際の上記緩衝液の塩濃度の好ましい下限は10mmol/L、好ましい上限は1000mmol/Lである。緩衝液の塩濃度が10mmol/L未満の場合、イオン交換反応が充分行なわれず、ヘモグロビン類を分離することができなくなることがある。緩衝液の塩濃度が1000mmol/Lを超える場合、塩が析出しシステムに悪影響を及ぼすことがある。本発明のカラム充填剤の製造方法は、所定の温度、及び、所定の時間で単量体混合物の分散液を撹拌した後に第1の重合反応を行い、その後、第1の重合反応の重合率が70~98の範囲にある段階で、反応系に親水性単量体を添加して第2の重合反応を行うカラム充填剤の製造方法である。単量体混合物の分散液を、重合反応の前に一定の条件下で撹拌することにより、得られるカラム充填剤が保持時間や分離性能等の再現性に優れたものとなる。また、第2の重合反応において、架橋重合体粒子の表面に親水性単量体を重合することで、高い分離性能を有するカラム充填剤を再現性良く製造することができる。また、本発明のカラム充填剤を用いた液体クロマトグラフィーによる試料の測定方法は、ヘモグロビン類やその他のタンパク質類、糖類等の親水性物質を、短時間に精度よく測定することができる。更に、本発明によるカラム充填剤を用いたヘモグロビン類の測定方法は、従来よりも低い圧力値で、ヘモグロビン類を短時間で高精度に測定することができ、かつ、カラム寿命を延長することができる。以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されない。実施例1実施例1では、本発明のカラム充填剤の製造方法を用いて、カチオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を調製し、性能を確認した。1カラム充填剤の調製架橋性単量体として、テトラエチレングリコールジメタクリレート新中村化学工業社製150g、トリエチレングリコールジメタクリレート新中村化学工業社製140g、及び、2-ヒドロキシ-1,3-ジメタクリロキシプロパン新中村化学工業社製60gを混合して得られた単量体混合物に、重合開始剤として過酸化ベンゾイルキシダ化学社製1.0gを混合して溶解し、分散剤として5重量のポリビニルアルコール日本合成化学社製、ゴーセノールGH-20水溶液2000mLに分散させた。得られた分散液を、25°Cで15時間撹拌した撹拌工程。撹拌工程後の重合率は1.2であった。次に反応系を窒素雰囲気下で80°Cに加温して1.2時間重合反応を行った第1の重合反応。第1の重合反応後の重合率は90であった。反応系を30°Cに冷却した後、親水性単量体として2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸東亞合成社製180g、及び、ポリエチレングリコールモノメタクリレート日油社製60gと、有機溶媒としてメタノール100gを溶解したイオン交換水200mLとを反応系に添加して、30°Cで0.5時間撹拌した。その後、昇温して80°Cで2時間重合反応を行った第2の重合反応。得られた重合物を洗浄して、カラム充填剤を得た。粒度分布測定装置ナイコンプ社製、アキュサイザー780により、得られたカラム充填剤の粒度分布を測定した結果、平均粒子径は6.4μm、粒度分布のCV値は27.6であった。2カラムへの充填1カラム充填剤の調製で得られたカラム充填剤0.8gを、50mmol/Lリン酸緩衝液pH6.030mLに分散して撹拌し、スラリー化した。5分間超音波処理した後、スラリー全量を、ステンレス製空カラム4.6φ×35mmを接続したパッカーアズワン社製に注入した。パッカーに送液ポンプGLサイエンス社製、PU-614を接続し、圧力20MPaで送液して、定圧充填した。3液体クロマトグラフィーによる性能評価12カラムへの充填で得られたカラムを用いて、タンパク質類の標準物質混合物を測定した。測定条件を以下に示す。システム:LC-10Aシステム島津製作所社製検出波長:280nm溶離液A:100mmol/Lリン酸緩衝液pH6.9溶離液B:溶離液A530mmol/LNaClpH6.9溶出条件:溶離液A100から溶離液B100へのリニアグラジエント流速:1.5mL/分測定試料:トリプシノーゲン、α-キモトリプシノーゲン、リボヌクレアーゼA、リゾチーム以上、いずれもSigma-Aldrich社製の混合物得られたクロマトグラムを図1に示す。図1において、ピーク1はトリプシノーゲン、ピーク2はα-キモトリプシノーゲン、ピーク3はリボヌクレアーゼA、ピーク4はリゾチームを示す。図1より、各ピークが短時間で良好に分離できることを確認した。また、同様の測定を10回連続して繰り返した際の、リゾチームの保持時間の再現性を表1に示す。10回連続して測定した際のリゾチームの保持時間のCV値は1.2となり、再現性は良好であった。4液体クロマトグラフィーによる性能評価22カラムへの充填で得られたカラムを用いて、健常人血中のヘモグロビンA1cを含むヘモグロビン類の測定を行った。測定条件を以下に示す。システム:LC-10Aシステム島津製作所社製検出波長:415nm溶離液C:40mmol/Lリン酸緩衝液pH5.3溶離液D:250mmol/Lリン酸緩衝液pH8.0溶出条件:溶離液C100から溶離液D100へのステップグラジエント流速:1.5mL/分測定試料:フッ化ナトリウム採血した健常人血を、0.05のTritonX-100Sigma-Aldrich社製を含むリン酸緩衝液pH6.7により150倍に溶血希釈したもの得られたクロマトグラムを図2に示す。図2において、ピーク11はヘモグロビンF、ピーク12はヘモグロビンA1c、ピーク13はヘモグロビンA0を示す。図2より、各ピークが短時間で良好に分離できることを確認した。また、同様の測定を10回連続して繰り返した際の、ヘモグロビンA1cの保持時間の再現性を表1に示す。10回連続して測定した際のヘモグロビンA1cの保持時間のCV値は0.8となり、再現性は良好であった。5重合再現性の評価1カラム充填剤の調製と同様の条件により、カラム充填剤を20回20ロット調製した。各ロットについて、4液体クロマトグラフィーによる性能評価2を行い、ヘモグロビンA1cの保持時間の再現性を確認した。なお、各ロットの測定を3回実施した際の平均値を該当ロットの測定値とした。得られた結果を表1に示す。20ロット測定した際のヘモグロビンA1cの保持時間のCV値は2.1となり、再現性は良好であった。実施例2実施例2では、本発明のカラム充填剤の製造方法を用いて、アニオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を調製し、性能を確認した。1カラム充填剤の調製架橋性単量体として、ジエチレングリコールジメタクリレート新中村化学工業社製150g、テトラメチロールメタントリアクリレート新中村化学工業社製30g、及び、トリエチレングリコールジメタクリレート新中村化学工業社製140gを混合して得られた単量体混合物に、重合開始剤として過酸化ベンゾイル1.0gを混合して溶解し、5重量のポリビニルアルコール水溶液2000mLに分散させた。得られた分散液を、20°Cで10時間撹拌した撹拌工程。撹拌工程後の重合率は0.6であった。次に反応系を窒素雰囲気下で80°Cに加温して1時間重合反応を行った第1の重合反応。第1の重合反応後の重合率は87であった。反応系を30°Cに冷却した後、親水性単量体としてジエチルアミノエチルメタクリレート和光純薬工業社製220g、及び、有機溶媒としてメタノール100gを溶解したイオン交換水200mLを反応系に添加して、20°Cで5時間撹拌した。その後、昇温して80°Cで1.6時間重合反応を行った第2の重合反応。得られた重合物を洗浄して、カラム充填剤を得た。実施例1と同様にして、得られたカラム充填剤の粒度分布を測定した結果、平均粒子径は8.2μm、粒度分布のCV値は26.3であった。2カラムへの充填実施例1と同様に操作して、得られたカラム充填剤1.4gをステンレス製空カラム4.6φ×50mmに充填した。3液体クロマトグラフィーによる性能評価2カラムへの充填で得られたカラムを用いてタンパク質類の標準物質混合物を測定した。測定条件を以下に示す。システム:LC-10Aシステム島津製作所社製検出波長:280nm溶離液E:40mmol/Lトリス塩酸緩衝液pH8.1溶離液F:溶離液E400mmol/LNaClpH8.1溶出条件:溶離液E100から溶離液F100へのリニアグラジエント流速:1.3mL/分測定試料:コンアルブミン、オブアルブミン、トリプシンインヒビターの混合物得られたクロマトグラムを図3に示す。図3において、ピーク21はコンアルブミン、ピーク22はオブアルブミン、ピーク23はトリプシンインヒビターを示す。図3より、各ピークが短時間で良好に分離できることを確認した。また、同様の測定を10回連続して繰り返した際の、トリプシンインヒビターの保持時間の再現性を表1に示す。10回連続して測定した際のトリプシンインヒビターの保持時間のCV値は1.7となり、再現性は良好であった。4重合再現性の評価1カラム充填剤の調製と同様の条件により、カラム充填剤を20回20ロット調製した。各ロットについて、3液体クロマトグラフィーによる性能評価を行い、トリプシンインヒビターの保持時間の再現性を確認した。得られた結果を表1に示す。20ロット測定した際のトリプシンインヒビターの保持時間のCV値は2.4となり、再現性は良好であった。実施例3実施例3では、本発明のカラム充填剤の製造方法を用いて、水系ゲル浸透クロマトグラフィー用カラム充填剤を調製し、性能を確認した。1カラム充填剤の調製架橋性単量体としてテトラエチレングリコールジメタクリレート新中村化学工業社製200g、非架橋性単量体として、ポリエチレングリコールモノメタクリレート新中村化学工業社製150g、及び、トルエン350gを混合して得られた単量体混合物に、重合開始剤として過酸化ベンゾイル1.0gを混合して溶解し、4重量のポリビニルアルコール水溶液2000mLに分散させた。得られた分散液を、10°Cで20時間撹拌した撹拌工程。撹拌工程後の重合率は0.3であった。次に反応系を窒素雰囲気下で80°Cに加温して2.3時間重合反応を行った第1の重合反応。第1重合反応後の重合率は94であった。反応系を30°Cに冷却した後、親水性単量体として2,3-ジヒドロキシルエチルメタクリレート日油社製200gを溶解したイオン交換水200mLを反応系に添加して、25°Cで1時間撹拌した。その後、昇温して80°Cで2.5時間重合反応を行った第2の重合反応。得られた重合物を洗浄して、カラム充填剤を得た。実施例1と同様にして、得られたカラム充填剤の粒度分布を測定した結果、平均粒子径は8.6μm、粒度分布のCV値は28.1であった。2カラムへの充填実施例1と同様に操作して、得られたカラム充填剤3.2gをステンレス製空カラム6.0φ×100mmに充填した。3液体クロマトグラフィーによる性能評価2カラムへの充填で得られたカラムを用いて分子量標準物質の混合物を測定した。測定条件を以下に示す。システム:LC-10Aシステム島津製作所社製検出器:示差屈折計SE-51昭和電工社製溶離液G:80mmol/L硫酸ナトリウムを含む100mmol/Lリン酸緩衝液pH6.6流速:1.5mL/分測定試料:チログロブリン分子量64万、γ-グロブリン分子量155000、オブアルブミン分子量47000、リボヌクレアーゼ分子量13700以上、いずれも和光純薬工業社製の混合物得られたクロマトグラムを図4に示す。図4において、ピーク31はチログロブリン、ピーク32はγ-グロブリン、ピーク33はオブアルブミン、ピーク34はリボヌクレアーゼを示す。図4より、各ピークが短時間で良好に分離できることを確認した。また同様の測定を10回連続して繰り返した際の、リボヌクレアーゼの保持時間の再現性を表1に示す。10回連続して測定した際のリボヌクレアーゼの保持時間のCV値は1.3となり、再現性は良好であった。4重合再現性の評価1カラム充填剤の調製と同様の条件により、カラム充填剤を20回20ロット調製した。各ロットについて、3液体クロマトグラフィーによる性能評価を行い、リボヌクレアーゼの保持時間の再現性を確認した。得られた結果を表1に示す。20ロット測定した際のリボヌクレアーゼの保持時間のCV値は3.1となり、再現性は良好であった。実施例4実施例4では、本発明の液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法を用いて、順相クロマトグラフィー用カラム充填剤を調製し、性能を確認した。1カラム充填剤の調製架橋性単量体として、トリエチレングリコールジメタクリレート新中村化学工業社製200g、及び、テトラメチロールプロパントリアクリレート新中村化学工業社製50g、非架橋性単量体としてポリエチレングリコールモノメタクリレート新中村化学工業社製150gを混合して得られた単量体混合物に、重合開始剤として過酸化ベンゾイル1.0gを混合して溶解し、5重量のポリビニルアルコール水溶液2000mLに分散させた。得られた分散液を、30°Cで5時間撹拌した撹拌工程。撹拌工程後の重合率は2.8であった。次に反応系を窒素雰囲気下で80°Cに加温して1.8時間重合反応を行った第1の重合反応。第1の重合反応後の重合率は92であった。反応系を30°Cに冷却した後、親水性単量体として2-アミノエチルメタクリレート和光純薬工業社製200g、及び、有機溶媒としてメタノール50gを溶解したイオン交換水200mLを反応系に添加して、25°Cで2時間撹拌した。その後、昇温して80°Cで2.8時間重合反応を行った第2の重合反応。得られた重合物を洗浄して、カラム充填剤を得た。実施例1と同様にして、得られたカラム充填剤の粒度分布を測定した結果、平均粒子径は4.1μm、粒度分布のCV値は29.4であった。2カラムへの充填実施例1と同様に操作して、得られたカラム充填剤1.4gをステンレス製空カラム4.6φ×50mmに充填した。3液体クロマトグラフィーによる性能評価2カラムへの充填で得られたカラムを用いて糖類の標準物質混合物を測定した。測定条件を以下に示す。システム:LC-10Aシステム島津製作所社製検出波長:280nm溶離液H:アセトニトリル:水=75:25の混合水溶液流速:1.3mL/分測定試料:フルクトース、グルコース、シュクロース、マルトース以上、いずれも和光純薬工業社製の混合物得られたクロマトグラムを図5に示す。図5において、ピーク41はフルクトース、ピーク42はグルコース、ピーク43はシュクロース、ピーク44はマルトースを示す。図5より、各ピークが短時間で良好に分離できることを確認した。また同様の測定を10回連続して繰り返した際の、マルトースの保持時間の再現性を表1に示す。10回連続して測定した際のマルトースの保持時間のCV値は1.2となり、再現性は良好であった。4重合再現性の評価1カラム充填剤の調製と同様の条件により、カラム充填剤を20回20ロット調製した。各ロットについて、3液体クロマトグラフィーによる性能評価を行い、マルトースの保持時間の再現性を確認した。得られた結果を表1に示す。20ロット測定した際のマルトースの保持時間のCV値は2.6となり、再現性は良好であった。実施例5実施例5では、実施例1の撹拌工程の条件を変更してカチオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を調製し、性能を確認した。1カラム充填剤の調製実施例1における撹拌工程の条件を、5°C及び3時間に変更した以外は、実施例1と同様に操作してカラム充填剤を得た。実施例1と同様にして、得られたカラム充填剤の粒度分布を測定した結果、平均粒子径は6.1μm、粒度分布のCV値は29.3であった。2カラムへの充填、及び、液体クロマトグラフィーによる性能評価実施例1と同様の方法により、カラムへの充填、及びヘモグロビン類の測定を行った。10回連続して測定した際のヘモグロビンA1cの保持時間のCV値は1.5で、再現性は良好であった。3重合再現性の評価実施例1と同様の方法により、重合再現性を評価した。20ロット測定した際のヘモグロビンA1cの保持時間のCV値は3.0で、再現性は良好であった。実施例6実施例6では、実施例1の撹拌工程の条件を変更してカチオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を調製し、性能を確認した。1カラム充填剤の調製実施例1における撹拌工程の条件を、40°C及び1時間に変更した以外は、実施例1と同様に操作してカラム充填剤を得た。実施例1と同様にして、得られたカラム充填剤の粒度分布を測定した結果、平均粒子径は5.8μm、粒度分布のCV値は32.8であった。2カラムへの充填、及び、液体クロマトグラフィーによる性能評価実施例1と同様の方法により、カラムへの充填、及びヘモグロビン類の測定を行った。10回連続して測定した際のヘモグロビンA1cの保持時間のCV値は2.3で、再現性は良好であった。3重合再現性の評価実施例1と同様の方法により、重合再現性を評価した。20ロット測定した際のヘモグロビンA1cの保持時間のCV値は4.1で、再現性は良好であった。比較例1~6比較例では、本発明の液体クロマトグラフィー用カラム充填剤の製造方法における工程2撹拌工程の条件を満たさないカラム充填剤を調製した。比較例1~6における撹拌工程の条件、及び、撹拌工程終了後の重合率を表1に示す。撹拌工程以外の条件は、比較例1は実施例1、比較例2は実施例2、比較例3は実施例3、比較例4は実施例4、比較例5は実施例5、比較例6は実施例6と同様に操作してカラム充填剤を調製した。なお、比較例5は撹拌工程を行わなかった例、すなわち、単量体混合物を水性分散媒に添加した後、すぐに第1の重合反応を行った例を示す。得られた各カラム充填剤の粒度分布の測定結果を表1に示す。比較例4では、攪拌工程において、分散液中の単量体混合物の一部が凍結して均一に撹拌することができず、第1の重合反応中に凝集物が発生してカラム充填剤粒子が得られなかった。比較例における、保持時間による重合再現性n=20の評価結果を表1に示す。実施例に比較してCV値が大きな値となった。以上から、撹拌工程の条件を規定することにより、得られるカラム充填剤の重合再現性が向上した。ヘモグロビン類の測定性能評価撹拌工程の条件を規定したことによる、カラム充填剤の分離性能への影響を確認するため、実施例1、比較例1及び比較例6のカチオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を用いて、種々のヘモグロビン類を測定し、分離性能を評価した。1修飾ヘモグロビン類の測定実施例1、比較例1及び比較例6のカチオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を用いて、人為的に調製した修飾ヘモグロビン類の測定を行った。修飾ヘモグロビン類を含む試料として、不安定型ヘモグロビンA1c含有試料試料L、アセチル化ヘモグロビン含有試料試料A、カルバミル化ヘモグロビン含有試料試料Cの3種類を、公知の方法により調製した。試料Lは、健常人血に、グルコースを2500mg/dLとなるように添加し、37°Cで3時間加温して調製した。試料Aは、健常人血に、アセトアルデヒドを60mg/dLとなるように添加し、37°Cで2時間加温して調製した。試料Cは、健常人血に、シアン酸ナトリウムを60mg/dLとなるように添加し、37°Cで2時間加温して調製した。分離性能は、修飾ヘモグロビン類を含む試料のヘモグロビンA1c値から、修飾ヘモグロビン類を含む試料の調製に用いた健常人血非修飾品のヘモグロビンA1c値を差し引いた値Δ値を算出し、両者を比較して評価した。結果を表2に示す。表2より、実施例1のカラム充填剤を用いた場合のΔ値は、0.15以下と小さく、修飾ヘモグロビン類が含まれる試料においても、正確にヘモグロビンA1cが測定できた。比較例1及び比較例6のカラム充填剤を用いた場合はΔ値が大きく、ヘモグロビンA1c値が、修飾ヘモグロビン類の影響を受けた。2異常ヘモグロビン類の測定実施例1、比較例1及び比較例6のカチオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を用いて、異常ヘモグロビンであるヘモグロビンS及びヘモグロビンCを含む試料ヘレナ研究所社製、AFSCヘモコントロールを測定した。実施例1のカラム充填剤を用いて測定した結果、得られたクロマトグラムを図6に示す。図6において、ピーク14はヘモグロビンS、ピーク15はヘモグロビンCを示す。図6より、実施例1で得られたカラム充填剤を用いた場合は、異常ヘモグロビン類を良好に分離できた。比較例1で得られたカラム充填剤を用いた場合は、図7に示すように、異常ヘモグロビン類の分離性能は悪かった。比較例6で得られたカラム充填剤を用いた場合も比較例1の場合と同様に、異常ヘモグロビン類の分離性能は悪かった。3ヘモグロビンA2の測定実施例1、比較例1及び比較例6のカチオン交換クロマトグラフィー用カラム充填剤を用いて、ヘモグロビンA2を含む試料バイオラッド社製、A2コントロールレベル2を測定した。実施例1の充填剤を用いて測定して得られたクロマトグラムを図8に示す。図8において、ピーク16はヘモグロビンA2を示す。図8より、実施例1で得られたカラム充填剤を用いた場合は、ヘモグロビンA2を良好に分離できた。比較例1で得られたカラム充填剤を用いた場合は、図9に示すようにヘモグロビンA2を分離できなかった。比較例6で得られたカラム充填剤を用いた場合も比較例1の場合と同様に、ヘモグロビンA2を分離することはできなかった。上記のヘモグロビン類の測定性能評価から、撹拌工程の条件を規定したことにより、カラム充填剤の重合再現性だけでなく、分離性能も向上した。ヘモグロビン類の測定における、液体クロマトグラフィーの測定条件測定例1~12実施例1の1カラム充填剤の調製において、ポリビニルアルコール濃度、及び、撹拌時の回転数を表3に示すように制御して、平均粒径値の異なるカラム充填剤を調製し、各カラム充填剤を表3に示す内径、及び、長さの空カラムに充填した。なお、測定例7のカラム充填剤は実施例1で得られたカラム充填剤と同様のものである。得られたカラムを用いて、実施例1の4液体クロマトグラフィーによる性能評価2の条件で健常人血のヘモグロビン類の測定を行った。なお、測定時における流速を表3に示すように変更して圧力値が異なる状態にして比較した。性能評価1圧力値の測定圧力値は、以下の方法により測定した。まず、各カラムを、液体クロマトグラフ島津製作所社製、LC-10Aシステムに接続した。次に、送液ポンプとカラムの間に、デジタル圧力計長野計器社製、GC61を接続し、溶離液Cを送液した時の圧力計の表示値を読み取った。測定結果を表3に示す。2同時再現性評価健常人血を用いて、実施例1の4液体クロマトグラフィーによる性能評価2の条件でヘモグロビンA1cの測定を10回連続で行い、同時再現性の比較を行った。10回連続して測定した際のヘモグロビンA1c値のCV値を表3に示す。測定例3~10において、CV値は1.5以下であり、糖尿病患者のヘモグロビンA1c値の管理を行うための充分な測定精度を示した。一方、測定例1及び測定例2では、CV値が5以上と悪く、実用上問題のあるレベルであった。3カラム耐久性の評価各測定例において、健常人血を繰り返し測定し、ヘモグロビンA1c値の推移を確認した。測定結果を図10及び図11に示す。ヘモグロビンA1c値HbA1cは、測定例3、7、及び、10では、2000回測定まで安定していた。一方、測定例1、2、11、及び、12では、ヘモグロビンA1c値が大きく低下した。カラム耐久性の評価結果から、撹拌工程の条件、及び、圧力値を規定したことにより、カラム充填剤の分離性能は、多数の試料を測定しても維持された。"