"オクラトキシンを分解可能な単離されたアミダーゼ酵素。オクラトキシンがオクラトキシンAである、請求項1に記載のアミダーゼ。アミダーゼが、少なくとも1個、好ましくは少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、より好ましくは9個のアミノ酸配列モチーフ、すなわち、1x-P-G-x-x-D-x-H-x-H-x-xG、2G-x-T、3G-x-x-x-G-P、4G-H-x-D、5D-G-x-x-x-C-x-x-x-x-R-x-x-x-R-x-x-A-x-x-I-K、6G-G-V-x-S-x-x-D-x-P、7V-x-A-H-x-x-G-x-x-G、8H-x-x-x-x-D、9G-V-x-I-x-x-G-T-Dを含む、請求項1または2に記載のアミダーゼ。アミダーゼが、6個のヒスチジン残基と1個のリシン残基と1個のアスパラギン酸残基とを含む活性部位を含むTimバレル構造を有し、活性部位のアミノ酸残基が、アミダーゼの三次構造と配列番号1とを比較した場合、配列番号1の位置H111、H113、H191、K246、H287、H289、H307、およびD378に対応する、請求項1~4のいずれか一項に記載のアミダーゼ。アミダーゼが、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも97、または少なくとも99の純度である、請求項1~4のいずれか一項に記載のアミダーゼ。アミダーゼが、pH3~9および21~40°Cでインキュベートされたときにオクラトキシンを分解するものである、請求項1~5のいずれか一項に記載のアミダーゼ。アミダーゼ酵素が、配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つの配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つに対して、少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つと、1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、を含む、請求項1~6のいずれか一項に記載のアミダーゼ。アミダーゼ酵素が、配列番号1もしくは配列番号3で示される配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1もしくは配列番号3に対して少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1もしくは配列番号3と1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、または配列番号2で示される配列もしくはそれに対して少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含むポリヌクレオチド、もしくは遺伝暗号の縮重に起因して配列番号2と異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2と1個もしくは数個のヌクレオチド付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2の相補体にストリンジェント条件下でハイブリダイズする配列、もしくはそれに対して少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、の発現により産生されるポリペプチド、を含む、請求項1~7のいずれか一項に記載のアミダーゼ。アミダーゼが、pH7.0および40°Cでタンパク質1mgあたり毎分およそ少なくとも100、少なくとも200、少なくとも300、少なくとも400~約900ナノモルのオクラトキシンAを加水分解する、請求項1~8のいずれか一項に記載のアミダーゼ。オクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素を含む飼料添加物または食品添加物。オクラトキシンがオクラトキシンAである、請求項10に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼが単離されたものである、請求項10または11に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼが、少なくとも1個、好ましくは少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、より好ましくは9個のアミノ酸配列モチーフ、すなわち、1x-P-G-x-x-D-x-H-x-H-x-xG、2G-x-T、3G-x-x-x-G-P、4G-H-x-D、5D-G-x-x-x-C-x-x-x-x-R-x-x-x-R-x-x-A-x-x-I-K、6G-G-V-x-S-x-x-D-x-P、7V-x-A-H-x-x-G-x-x-G、8H-x-x-x-x-D、9G-V-x-I-x-x-G-T-Dを含む、請求項10~12のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼが、6個のヒスチジン残基と1個のリシン残基と1個のアスパラギン酸残基とを含む活性部位を含むTimバレル構造を有し、活性部位のアミノ酸残基が、アミダーゼの三次構造と配列番号1とを比較した場合、配列番号1の位置H111、H113、H191、K246、H287、H289、H307、およびD378に対応する、請求項10~13のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼが、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも97、または少なくとも99の純度である、請求項10~14のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼが、pH3~9および21~40°Cでインキュベートされたときにオクラトキシンを分解するものである、請求項10~15のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼ酵素が、配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つの配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つに対して、少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つと、1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチドを含む、請求項10~16のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼ酵素が、配列番号1もしくは配列番号3で示される配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1もしくは配列番号3に対して少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1もしくは配列番号3と1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、または配列番号2で示される配列もしくはそれに対して少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含むポリヌクレオチド、もしくは遺伝暗号の縮重に起因する配列番号2と異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2と1個もしくは数個のヌクレオチド付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2の相補体にストリンジェント条件下でハイブリダイズする配列、もしくはそれに対して少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、の発現により産生されるポリペプチド、を含む、請求項10~17のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼが、pH7.0および40°Cでタンパク質1mgあたり毎分およそ少なくとも100、少なくとも200、少なくとも300、少なくとも400~約900ナノモルのオクラトキシンAを加水分解する、請求項10~18のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼが組換え体である、請求項10~19のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。アミダーゼを発現可能な組換え細胞または組換え胞子を含む、請求項10~20のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。細胞は、大腸菌E.coli、ストレプトマイセス属Streptomyces、ハンゼヌラ属Hansenula、トリコデルマ属Trichoderma特にT.リーセイT.reesei、バチルス属Bacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、アスペルギルス属Aspergillus特にA.ニガーA.niger、植物細胞、および/またはバチルス属Bacillus、トリコデルマ属Trichoderma、もしくはアスペルギルス属Aspergillusの胞子から選択される、請求項21に記載の飼料添加物または食品添加物。少なくとも1つの生理学的に許容可能な担体をさらに含む、請求項10~22のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。生理学的に許容可能な担体が、マルトデキストリン、石灰石炭酸カルシウム、シクロデキストリン、コムギ、コムギフスマもしくはコムギ成分、コメもしくはコメヌカ、スクロース、デンプン、Na2SO4、タルク、およびPVA、ならびにそれらの混合物の少なくとも1つから選択される、請求項23に記載の飼料添加物または食品添加物。飼料添加物が1つ以上のさらなる酵素を含む、請求項10~24のいずれか一項に記載の飼料添加物または食品添加物。1つ以上のさらなる飼料酵素が、カルボキシペプチダーゼ、好ましくはカルボキシペプチダーゼA、カルボキシペプチダーゼY、A.ニガーA.nigerアスパラギン酸プロテアーゼのPEPAa、PEPAb、PEPAc、およびPEPAd、エラスターゼ、アミノペプチダーゼ、ペプシンまたはペプシン様プロテアーゼ、トリプシンまたはトリプシン様プロテアーゼ、およびスブチリシンやその変異体をはじめとする細菌プロテアーゼを含めて、タンパク質分解に関与するもの、ならびにデンプン代謝、繊維分解、脂質代謝に関与するもの、グリコーゲン代謝に関与するタンパク質または酵素、アミラーゼ、アラビナーゼ、アラビノフラノシダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、キモシン、クチナーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エピメラーゼ、エステラーゼ、-ガラクトシダーゼ、グルカナーゼ、グルカンリサーゼ、エンドグルカナーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースオキシダーゼ、βグルコシダーゼをはじめとする-グルコシダーゼ、グルクロニダーゼ、ヘミセルラーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、ヒドロラーゼ、インベルターゼ、イソメラーゼ、脂肪分解酵素、ラッカーゼ、リアーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、オキシドレダクターゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチンデポリメラーゼ、ペクチンメチルエステラーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、ラムノガラクツロナーゼ、リボヌクレアーゼ、タウマチン、トランスフェラーゼ、輸送タンパク質、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、ヘキソースオキシダーゼD-ヘキソース:O2-オキシドレダクターゼEC1.1.3.5、酸性ホスファターゼ、ならびに/または他のもの、またはそれらの組合せよりなる群から選択される、請求項25に記載の飼料添加物または食品添加物請求項10~26のいずれか一項に記載の飼料添加物を含む飼料材料または食品材料。請求項27に記載の食品材料または飼料材料を含む飼料または食料。a穀物、たとえば小穀物たとえば、コムギ、オオムギ、ライムギ、オートムギ、およびそれらの組合せおよび/またはメイズやソルガムなどの大穀物、b穀物からの副産物、たとえばトウモロコシグルテンミール、乾燥蒸留穀物かすDDGS、コムギフスマ、コムギミドリングス、コムギショーツ、コメヌカ、モミガラ、オートムギガラ、パーム核、およびシトラスパルプ、cサイレージ、dダイズ、ヒマワリ、ラッカセイ、ルピナス、エンドウマメ、ソラマメ、ワタ、カノーラ、魚粉、乾燥血漿タンパク質、肉骨粉、ジャガイモタンパク質、ホエー、コプラ、ゴマなどの供給源から得られるタンパク質、e植物源および動物源から得られる油脂、fミネラルおよびビタミンを含む群から選択される1つ以上の飼料材料を含む、請求項28に記載の飼料。前記食料が、穀物、たとえばトウモロコシ、コムギ、オオムギ、ソルガム、穀物製品、たとえばポリッジ、ヌードル、パンまたはケーキ、コーヒー、ココア、ワイン、ビール、豆、香辛料、乾燥果実、グレープジュース、ミルク、乳製品、たとえばチーズ、肉または肉製品を含む、請求項28に記載の食料。1kgの飼料/食料あたり約0.001mg/kg~約10gのレベルでアミダーゼを含む、請求項28~30のいずれか一項に記載の飼料または食料。好ましくは、家禽、ブタ、家庭用愛玩動物、魚、貝、および甲殻類よりなる群から選択される、単胃動物による摂取のための、請求項28~31のいずれか一項に記載の飼料。請求項10~27のいずれか一項に記載の食品添加物または飼料添加物を食品材料または飼料材料に添加する工程を含む、請求項28~32のいずれか一項に記載の食料または飼料の製造方法。アミダーゼを少なくとも1つの生理学的に許容可能な担体と混合する工程を含む、請求項10~27のいずれか一項に記載の食品添加物または飼料添加物の製造方法。少なくとも1つの生理学的に許容可能な担体が、マルトデキストリン、石灰石炭酸カルシウム、シクロデキストリン、コムギ、コムギフスマもしくはコムギ成分、コメもしくはコメヌカ、スクロース、デンプン、Na2SO4、タルク、PVA、およびそれらの混合物の少なくとも1つから選択される、請求項34に記載の方法。食品添加物または飼料添加物をホモジナイズする追加の工程を含む、請求項34または35に記載の方法。食品添加物または飼料添加物をペレット成形する追加の工程を含む、請求項34~36のいずれか1項に記載の方法。オクラトキシン汚染材料とオクラトキシン分解アミダーゼ酵素とを含む組成物。酵素がオクラトキシンA分解アミダーゼ酵素である、請求項38に記載の組成物。材料がオクラトキシンAおよび/またはオクラトキシンBで汚染されている、請求項38または39に記載の組成物。アミダーゼが単離されたものである、請求項38~40のいずれか一項に記載の組成物。アミダーゼが、少なくとも1個、好ましくは少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、より好ましくは9個のアミノ酸配列モチーフ、すなわち、1x-P-G-x-x-D-x-H-x-H-x-xG、2G-x-T、3G-x-x-x-G-P、4G-H-x-D、5D-G-x-x-x-C-x-x-x-x-R-x-x-x-R-x-x-A-x-x-I-K、6G-G-V-x-S-x-x-D-x-P、7V-x-A-H-x-x-G-x-x-G、8H-x-x-x-x-D、9G-V-x-I-x-x-G-T-Dを含む、請求項38~41のいずれか一項に記載の組成物。アミダーゼが、6個のヒスチジン残基と1個のリシン残基と1個のアスパラギン酸残基とを含む活性部位を含むTimバレル構造を有し、活性部位のアミノ酸残基が、アミダーゼの三次構造と配列番号1とを比較した場合、配列番号1の位置H111、H113、H191、K246、H287、H289、H307、およびD378に対応する、請求項38~42のいずれか一項に記載の組成物。アミダーゼが、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも97、または少なくとも99の純度である、請求項38~43のいずれか一項に記載の組成物。アミダーゼ酵素が、配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つの配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つに対して、少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つと、1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチドを含む、請求項38~44のいずれか一項に記載の組成物。アミダーゼ酵素が、配列番号1もしくは配列番号3で示される配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1もしくは配列番号3に対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1もしくは配列番号3と1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、または配列番号2で示される配列もしくはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含むポリヌクレオチド、もしくは遺伝暗号の縮重に起因して配列番号2と異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2と1個もしくは数個のヌクレオチド付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2の相補体にストリンジェント条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド、もしくはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、の発現により産生されるポリペプチド、を含む、請求項38~45のいずれか1項に記載の組成物。アミダーゼが、pH7.0および40°Cでインキューベートされたときにタンパク質1mgあたり毎分およそ少なくとも100、少なくとも200、少なくとも300、少なくとも400~約900ナノモルのオクラトキシンAを加水分解する、請求項38~46のいずれか1項に記載の組成物。アミダーゼが組換え体である、請求項38~47のいずれか1項に記載の組成物。アミダーゼを発現可能な組換え細胞を含む、請求項38~48のいずれか1項に記載の組成物。細胞は、大腸菌E.coli、ストレプトマイセス属Streptomyces、ハンゼヌラ属Hansenula、トリコデルマ属Trichoderma特にT.リーセイT.reesei、バチルス属Bacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、アスペルギルス属Aspergillus特にA.ニガーA.niger、植物細胞、および/またはバチルス属Bacillus、トリコデルマ属Trichoderma、もしくはアスペルギルス属Aspergillusの胞子から選択される、請求項49に記載の組成物。1つ以上のさらなる酵素を含む、請求項38~50のいずれか1項に記載の組成物。1つ以上のさらなる酵素が、カルボキシペプチダーゼ、好ましくはカルボキシペプチダーゼA、カルボキシペプチダーゼY、A.ニガーA.nigerアスパラギン酸プロテアーゼのPEPAa、PEPAb、PEPAc、およびPEPAd、エラスターゼ、アミノペプチダーゼ、ペプシンまたはペプシン様プロテアーゼ、トリプシンまたはトリプシン様プロテアーゼ、およびスブチリシンやその変異体をはじめとする細菌プロテアーゼを含めて、タンパク質分解に関与するもの、ならびにデンプン代謝、繊維分解、脂質代謝に関与するもの、グリコーゲン代謝に関与するタンパク質または酵素、アミラーゼ、アラビナーゼ、アラビノフラノシダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、キモシン、クチナーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エピメラーゼ、エステラーゼ、-ガラクトシダーゼ、グルカナーゼ、グルカンリサーゼ、エンドグルカナーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースオキシダーゼ、βグルコシダーゼをはじめとする-グルコシダーゼ、グルクロニダーゼ、ヘミセルラーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、ヒドロラーゼ、インベルターゼ、イソメラーゼ、脂肪分解酵素、ラッカーゼ、リアーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、オキシドレダクターゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチンデポリメラーゼ、ペクチンメチルエステラーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、ラムノガラクツロナーゼ、リボヌクレアーゼ、タウマチン、トランスフェラーゼ、輸送タンパク質、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、ヘキソースオキシダーゼD-ヘキソース:O2-オキシドレダクターゼEC1.1.3.5、酸性ホスファターゼ、ならびに/または他のもの、またはそれらの組合せよりなる群から選択される飼料酵素または食品用酵素である、請求項51に記載の組成物。マイコトキシン分解酵素、たとえばアフラトキシンデトキシザイム、ゼアラレノンエステラーゼ、ゼアラレノンラクトナーゼ、フモニシンカルボキシルエステラーゼ、フモニシンアミノトランスフェラーゼ、アミノポリオールアミンオキシダーゼ、デオキシニバレノールエポキシドヒドロラーゼよりなる群から選択される解毒酵素、マイコトキシン分解微生物、たとえばバチルスサブチリスBacillussubtilis、または少なくとも1つのポリマーたとえば微生物細胞壁もしくはベントナイトなどの無機材料を含む吸収剤すなわち、マイコトキシン結合剤、の少なくとも1つをさらに含む、請求項51または52に記載の組成物。前記組成物が、飼料組成物、発酵ブロス、または廃水である、請求項38~53のいずれか一項に記載の組成物。約0.001mg/kg~約10g/kgのレベルでアミダーゼを含む、請求項38~54のいずれか一項に記載の組成物。材料にオクラトキシン分解アミダーゼ酵素を添加する工程を含む、該材料のオクラトキシン汚染の低減方法。酵素がオクラトキシンA分解酵素である、請求項56に記載の方法。材料がオクラトキシンAおよび/またはオクラトキシンBで汚染されている、請求項56または57に記載の方法。アミダーゼが単離されたものである、請求項56~58のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼが、少なくとも1個、好ましくは少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、より好ましくは9個のアミノ酸配列モチーフ、すなわち、1x-P-G-x-x-D-x-H-x-H-x-xG、2G-x-T、3G-x-x-x-G-P、4G-H-x-D、5D-G-x-x-x-C-x-x-x-x-R-x-x-x-R-x-x-A-x-x-I-K、6G-G-V-x-S-x-x-D-x-P、7V-x-A-H-x-x-G-x-x-G、8H-x-x-x-x-D、9G-V-x-I-x-x-G-T-Dを含む、請求項56~59のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼが、6個のヒスチジン残基と1個のリシン残基と1個のアスパラギン酸残基とを含む活性部位を含むTimバレル構造を有し、活性部位のアミノ酸残基が、アミダーゼの三次構造と配列番号1とを比較した場合、配列番号1の位置H111、H113、H191、K246、H287、H289、H307、およびD378に対応する、請求項56~60のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼが、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも97、または少なくとも99の純度である、請求項56~61のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼ酵素が、配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つの配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つに対して、少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つと、1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチドを含む、請求項56~62のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼ酵素が、配列番号1もしくは配列番号3で示される配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1もしくは配列番号3に対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1もしくは配列番号3と1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、または配列番号2で示される配列もしくはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含むポリヌクレオチド、もしくは遺伝暗号の縮重に起因して配列番号2と異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2と1個もしくは数個のヌクレオチド付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2の相補体にストリンジェント条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド、もしくはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、の発現により産生されるポリペプチド、を含む、請求項56~63のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼが、pH7.0および40°Cでインキュベートされたときタンパク質1mgあたり毎分およそ少なくとも100、少なくとも200、少なくとも300、少なくとも400~約900ナノモルのオクラトキシンAを加水分解する、請求項56~64のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼが組換え体である、請求項56~65のいずれか一項に記載の方法。アミダーゼを発現可能な組換え細胞を含む、請求項56~66のいずれか一項に記載の方法。細胞は、大腸菌E.coli、ストレプトマイセス属Streptomyces、ハンゼヌラ属Hansenula、トリコデルマ属Trichoderma特にT.リーセイT.reesei、バチルス属Bacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、アスペルギルス属Aspergillus特にA.ニガーA.niger、植物細胞、および/またはバチルス属Bacillus、トリコデルマ属Trichoderma、もしくはアスペルギルス属Aspergillusの胞子から選択される、請求項67に記載の方法。1つ以上のさらなる酵素を添加する工程を含む、請求項56~68のいずれか一項に記載の方法。1種以上のさらなる酵素が、カルボキシペプチダーゼ、好ましくはカルボキシペプチダーゼA、カルボキシペプチダーゼY、A.ニガーA.nigerアスパラギン酸プロテアーゼのPEPAa、PEPAb、PEPAc、およびPEPAd、エラスターゼ、アミノペプチダーゼ、ペプシンまたはペプシン様プロテアーゼ、トリプシンまたはトリプシン様プロテアーゼ、およびスブチリシンやその変異体をはじめとする細菌プロテアーゼを含めて、タンパク質分解に関与するもの、ならびにデンプン代謝、繊維分解、脂質代謝に関与するもの、グリコーゲン代謝に関与するタンパク質または酵素、アセチルエステラーゼ、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、アラビナーゼ、アラビノフラノシダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、キモシン、クチナーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エピメラーゼ、エステラーゼ、-ガラクトシダーゼ、グルカナーゼ、グルカンリサーゼ、エンドグルカナーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースオキシダーゼ、βグルコシダーゼをはじめとする-グルコシダーゼ、グルクロニダーゼ、ヘミセルラーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、ヒドロラーゼ、インベルターゼ、イソメラーゼ、脂肪分解酵素、ラッカーゼ、リアーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、オキシドレダクターゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチンデポリメラーゼ、ペクチンメチルエステラーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、ラムノガラクツロナーゼ、リボヌクレアーゼ、タウマチン、トランスフェラーゼ、輸送タンパク質、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、ヘキソースオキシダーゼD-ヘキソース:O2-オキシドレダクターゼEC1.1.3.5、酸性ホスファターゼ、ならびに/または他のもの、またはそれらの組合せよりなる群から選択される、請求項69に記載の方法。マイコトキシン分解酵素、たとえばアフラトキシンデトキシザイム、ゼアラレノンエステラーゼ、ゼアラレノンラクトナーゼ、フモニシンカルボキシルエステラーゼ、フモニシンアミノトランスフェラーゼ、アミノポリオールアミンオキシダーゼ、デオキシニバレノールエポキシドヒドロラーゼよりなる群から選択される解毒酵素、マイコトキシン分解微生物、たとえばバチルスサブチリスBacillussubtilis、または少なくとも1つのポリマーたとえば微生物細胞壁もしくはベントナイトなどの無機材料を含む吸収剤すなわち、マイコトキシン結合剤、の少なくとも1つを添加する工程をさらに含む、請求項69または70に記載の方法。前記組成物が、飼料組成物、発酵ブロス、または廃水である、請求項56~71のいずれか一項に記載の方法。約0.001mg/kg~約10g/kgのレベルでアミダーゼを含む、請求項56~72のいずれか一項に記載の方法。請求項56~73のいずれか一項に記載の方法により取得可能な飼料材料。請求項28~32のいずれか一項に記載の有効量の飼料を動物に給餌する工程を含む、動物の成長速度増加および/または健康増進の方法。オクラトキシンを分解するアミダーゼ酵素をコードする組換え細胞または組換え胞子。アミダーゼ酵素がオクラトキシンAを分解する、請求項76に記載の細胞または胞子。アミダーゼが組換え体である、請求項76または77に記載の細胞または胞子。アミダーゼが単離されたものである、請求項76~78のいずれか一項に記載の細胞または胞子。アミダーゼが、少なくとも1個、好ましくは少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、より好ましくは9個のアミノ酸配列モチーフ、すなわち、1x-P-G-x-x-D-x-H-x-H-x-xG、2G-x-T、3G-x-x-x-G-P、4G-H-x-D、5D-G-x-x-x-C-x-x-x-x-R-x-x-x-R-x-x-A-x-x-I-K、6G-G-V-x-S-x-x-D-x-P、7V-x-A-H-x-x-G-x-x-G、8H-x-x-x-x-D、9G-V-x-I-x-x-G-T-Dを含む、請求項76~79のいずれか一項に記載の細胞または胞子。アミダーゼが、6個のヒスチジン残基と1個のリシン残基と1個のアスパラギン酸残基とを含む活性部位を含むTimバレル構造を有し、活性部位のアミノ酸残基が、アミダーゼの三次構造と配列番号1とを比較した場合、配列番号1の位置H111、H113、H191、K246、H287、H289、H307、およびD378に対応する、請求項76~80のいずれか一項に記載の細胞または胞子。アミダーゼが、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも75、少なくとも80、少なくとも85、少なくとも90、少なくとも95、少なくとも97、または少なくとも99の純度である、請求項76~81のいずれか一項に記載の細胞または胞子。アミダーゼ酵素が、配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つの配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つに対して、少なくとも70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1、配列番号3、もしくは配列番号5~11、13、14もしくは15のいずれか1つと、1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチドを含む、請求項76~82のいずれか一項に記載の細胞または胞子。アミダーゼ酵素が、配列番号1もしくは配列番号3で示される配列を有するポリペプチド配列、または配列番号1もしくは配列番号3に対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号1もしくは配列番号3と1個もしくは数個のアミノ酸付加、欠失および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、または配列番号2で示される配列もしくはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含むポリヌクレオチド、もしくは遺伝暗号の縮重に起因して配列番号2と異なるポリヌクレオチド、もしくは配列番号2と1個もしくは数個のヌクレオチド付加、欠失および/もしくは置本発明は、オクラトキシン、より特定的にはオクラトキシンAOTAを効率的に分解可能な酵素の同定および単離を行うべく本発明者らにより行われた研究に依拠する。本発明者らは、当初の仮説に反して、A.ニガーA.nigerおよびA.ニデュランスA.nidulansに由来するホルムアミダーゼ、さらにはAmano商標リパーゼ製品中に存在するホルムアミダーゼが、OTAに対しては活性を有していないが、予想どおり、ホルムアミドに対しては活性を有していることを見いだした。本発明者らは、驚くべきことに、A.ニガーA.nigerオープンリーディングフレームによりコードされる480アミノ酸の仮説タンパク質これ以降ではアミダーゼ2として参照されるが、オクラトキシン分解活性、特定的にはオクラトキシンA分解活性を有することを見いだした。さらに、本発明者らはまた、驚くべきことに、N末端配列またはシグナル配列を含むかつ約51kDaのMWを有する全長480アミノ酸のアミダーゼ2アミダーゼ2sigとして参照されるが、オクラトキシンA分解活性を有するうえに、約47kDaのMWを有する分泌される成熟した438アミノ酸のアミダーゼ2アミダーゼ2matとして参照されるも同様の活性を有することを見いだした。アミダーゼ2matの場合、N末端の42個のアミノ酸が切断されることを見いだした。すなわち、アミダーゼ2が培養培地中に分泌されるとき、A.ニガーA.nigerペプチダーゼにより、そのN末端の42aaが切断されて、成熟アミダーゼ2すなわち、アミダーゼ2matが形成される。本発明者らは、オクラトキシンAの分解に関与するアミダーゼ酵素をコードするA.ニガーA.niger遺伝子の単離およびクローニングを行い、その結晶構造を同定した。この遺伝子は、配列番号1で示される配列を有するポリペプチドアミダーゼ2sigをコードすることが確認された。さらに、この酵素は、N末端の42アミノ酸の配列の切断により、翻訳後修飾されることが確認され、この成熟アミダーゼ2は、配列番号3として示される。本発明の第1の態様によれば、オクラトキシンを分解可能な単離されたアミダーゼ酵素が提供される。より特定的にはオクラトキシンA本発明の第2の態様によれば、オクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素を含む食品添加物または飼料添加物が提供される。より特定的にはオクラトキシンA本発明の第3の態様によれば、本発明に係る飼料添加物を含む食品材料または飼料材料が提供される。本発明の第4の態様によれば、本発明に係る飼料材料を含む食料または飼料が提供される。本発明の第5の態様によれば、オクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素を、少なくとも1種の生理学的に許容可能な担体と、混合することを含む、食品添加物または飼料添加物の製造方法が提供される。本発明の第6の態様によれば、オクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素を材料に添加することを含む、材料中のオクラトキシン汚染を低減する方法が提供される。本発明の第7の態様によれば、オクラトキシン汚染材料とオクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素とを含む組成物が提供される。本発明の第8の態様によれば、本発明に係る食品添加物または飼料添加物を食品材料または飼料材料に添加することを含む、食料または飼料の製造方法が提供される。本発明の第9の態様によれば、本発明に係る有効量の飼料を動物に給餌することを含む、動物の成長速度増加および/または健康増進の方法が提供される。本発明の第10の態様によれば、食料または飼料の製造時におけるオクラトキシンを分解するアミダーゼの使用が提供される。本発明の第11の態様によれば、本発明に係る方法により取得可能な食料または飼料が提供される。本発明の第12の態様によれば、オクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素を含む組換え細胞が提供される。本発明の第13の態様では、配列番号1もしくは配列番号3に対して少なくとも30、35、40、50、60、70、80、90、95、98、99の同一性を有するポリペプチド配列、または配列番号1もしくは配列番号3と1つもしくは複数のアミノ酸付加、欠失、および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド配列、あるいは配列番号2に対して少なくとも30、35、40、50、60、70、80、90、95、98、99の同一性を有するポリヌクレオチドまたは配列番号2と1つもしくは複数のヌクレオチド付加、欠失、および/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド配列、を含むアミダーゼ酵素が提供されるが、ただし、前記ポリペプチドは配列番号1ではない。本発明の第14の態様によれば、オクラトキシンAを分解可能なペプチダーゼ酵素PEPAd配列番号12を含む食品添加物または飼料添加物が提供される。本発明の第15の態様によれば、第13の態様に係る飼料添加物を含む食品材料または飼料材料が提供される。本発明の第16の態様によれば、第14の態様に係る飼料材料を含む食料または飼料が提供される。以下の説明では、とくに明記されていないかぎり、説明された好ましい特徴のいずれもが、本発明のいずれの態様にもあてはまることは、理解されよう。さらに、好ましい特徴のいずれもが、適宜、組み合わせて使用されると想定されることは、理解されよう。さらに、オクラトキシンまたはオクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素という用語は、好ましい実施形態では、オクラトキシンAまたはオクラトキシンAを分解可能なアミダーゼ酵素を意味することは、理解されよう。本明細書で用いられる場合、アミダーゼアミドヒドロラーゼという用語は、アミドを加水分解することが可能なアミドヒドロラーゼスーパーファミリーの酵素を意味する。本発明者らは、オクラトキシン分解に関与するA.ニガーA.niger由来のアミダーゼ2酵素の単離およびクローニングを行った。この酵素は、オクラトキシンAを分解するうえでとくに効果的である。この酵素は、とくに基質特異性に関して生化学的に特性解析されていない特定の細菌アミダーゼに対して約40の同一性を示す仮説480アミノ酸A.ニガーA.nigerタンパク質An14g02080、受託番号XP_001400834をコードするORFにより発現されることが示された。データベース検索によれば、この推定アミドヒドロラーゼアミダーゼ2は、Sargasso海から単離された環境DNA配列によりコードされるカルボキシペプチダーゼSgx9355eBiochemistry482009:4567-4576などの特定のジペプチダーゼに対して36のアミノ酸配列同一性を有することが示唆される。Sgx9355eの3D構造は公知であり、それはアミドヒドロラーゼスーパーファミリーAHSのメンバーである。アミダーゼ2とSgx9355eとの配列アライメントから、アミダーゼ2は、AHSのメンバーであることが示唆される。これは、β/α8バレルTimバレル構造フォールドを含む顕著な基質多様性を有する一群の酵素である。このスーパーファミリー内の酵素のほとんどは、C-O、C-N、またはP-O結合の加水分解を触媒する。このスーパーファミリーのメンバーは、OTAの加水分解に関連付けされていない。アミダーゼすなわちアミドヒドロラーゼおよびオクラトキシンを分解可能なアミダーゼという用語が、とくに明記されていないかぎり、本明細書では同義的に用いられること、または異なる酵素が論じられていることが文脈から明らかであることは、理解されよう。アミダーゼおよびオクラトキシンAを分解可能なアミダーゼという用語は、サンプル中に存在するオクラトキシンAの少なくとも5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、75、80、90、95、97、98、99、または100をオクラトキシンαに分解可能な酵素を意味する。オクラトキシンを分解可能ないずれのアミダーゼも本発明で使用するのに好適であることは、当業者には明らかであろう。好ましくは、本発明のいずれの態様で使用されるアミダーゼも、少なくともオクラトキシンAを分解するアミダーゼである。好ましくは、本発明に係るアミダーゼ酵素は、以下のアミノ酸配列モチーフ、すなわち、1x-P-G-x-x-D-x-H-x-H-x-xG式中、2個のHis残基は、活性部位に存在する、2G-x-T、3G-x-x-x-G-P、4G-H-x-D式中、His残基は、活性部位に存在する、5D-G-x-x-x-C-x-x-x-x-R-x-x-x-R-x-x-A-x-x-I-K式中、Lys残基は、活性部位に存在する、6G-G-V-x-S-x-x-D-x-P式中、Val残基は、活性部位に存在する、7V-x-A-H-x-x-G-x-x-G式中、2個のHis残基は、活性部位に存在する、8H-x-x-x-x-D式中、His残基は、活性部位に存在する、9G-V-x-I-x-x-G-T-D式中、Asp残基は、活性部位に存在する、の少なくとも1つ、好ましくは、少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、少なくとも6つ、少なくとも7つ、少なくとも8つ、より好ましくは、9つを含む。好ましくは、モチーフは、以下のとおり、すなわち、1x1-P-G-x2-x3-D-x4-H-x5-H-x6-x7-G式中、2個のHis残基は、活性部位に存在する、2G-x8-T、3G-x9-x10-x11-G-P、4G-H-x12-D式中、His残基は、活性部位に存在する、5D-G-x13-x14-x15-C-x16-x17-x18-x19-R-x20-x21-x22-R-x23-x24-A-x25-x26-I-K式中、Lys残基は、活性部位に存在する、6G-G-V-x27-S-x28-x29-D-x30-P式中、Val残基は、活性部位に存在する、7V-x31-A-H-x32-x33-G-x34-x35-G式中、2個のHis残基は、活性部位に存在する、8H-x36-x37-x38-x39-D式中、His残基は、活性部位に存在する、9G-V-x40-I-x41-x42-G-T-D式中、Asp残基は、活性部位に存在する、である。ただし、x1=l/m、x2=l/m、x3=w/i、x4=c/v/s/a、x5=任意のアミノ酸、x6=f/y/l、x7=任意のアミノ酸、x8=y/f、x9=t/a/s/v/r、x10=i/f/a、x11=-任意のアミノ酸、x12=g/s、x13=v/e、x14=任意のアミノ酸、x15=e/d/g、x16=任意のアミノ酸、x17=任意のアミノ酸、x18=a/g/t、x19=v/a、x20=任意のアミノ酸、x21=q/m/a、x22=l/i/v、x23=r/h/c、x24=g/n、x25=k/r/t/e/d、x26=任意のアミノ酸、x27=l/m/v/g、x28=任意のアミノ酸、x29=任意のアミノ酸、x30=任意のアミノ酸、x31=a/s/h、x32=c/v/a、x33=h/q、x34=k/r、x35=任意のアミノ酸、x36=g/v/a、x37=s/t/i、x38=y/f/e、x39=l/a/i、x40=任意のアミノ酸、x41=a/v、x42=-l/a。任意のアミノ酸という用語が、アミノ酸G、A、V、L、I、M、F、W、P、S、T、C、Y、N、Q、D、E、K、R、H、もしくは非天然アミノ酸、またはアミノ酸誘導体のいずれか1つを意味することは、理解されよう。より好ましい実施形態では、モチーフは、以下のとおり、すなわち、1l/m-P-G-l/m-w-D-c-H-x-H-f-x-G式中、2個のHis残基は、活性部位に存在する、2G-y/f-T、3G-t-i-x-G-P、4G-H-g-D式中、His残基は、活性部位に存在する、5D-G-v-x-e-C-x-x-a-v-R-x-q-l-R-r-g-A-k-x-I-K式中、Lys残基は、活性部位に存在する、6G-G-V-l/-S-x-x-D-x-P式中、Val残基は、活性部位に存在する、7V-a-A-H-c-h-G-k-x-G式中、2個のHis残基は、活性部位に存在する、8H-g-s-y-l-D式中、His残基は、活性部位に存在する、9G-V-x-I-a-l-G-T-D式中、Asp残基は、活性部位に存在するである。オクラトキシンを分解可能な先行技術のカルボキシペプチダーゼ酵素が、列挙したモチーフのいずれをも含まず、本発明に係るアミダーゼに対して配列相同性を示さないことは、当業者であれば容易にわかるであろう。好ましい一実施形態では、アミダーゼは、その産生に用いられた培養培地中の他の成分を実質的に含まない単離されたアミダーゼである。さらなる好ましい実施形態では、アミダーゼは、少なくとも30、40、50、60、70、80、90、95、97、99の純度である。さらなる好ましい実施形態では、アミダーゼは、6個のヒスチジン残基と1個のリシン残基と1個のアスパラギン酸残基とを含む活性部位を含む歪んだTim様バレル構造を含むアミダーゼであり、活性部位のアミノ酸残基は、アミダーゼの三次構造と配列番号1とを比較した場合、配列番号1の位置H111、H113、H191、K246、H287、H289、H307、およびD378に対応する。当業者であれば、Timバレルが、ペプチド骨格に沿って交互に現れる8個のαヘリックスと8個の平行βストランドとで構成された保存タンパク質フォールドであることは、理解されよう。Timバレルは、単一ドメイン中に交互に現れるαヘリックスとβストランドとのパターンを含んでいるので、α/βタンパク質フォールドと考えられる。Timバレルでは、ヘリックスおよびストランド通常はそれぞれ8個は、トポロジー的にトロイドとして知られるドーナツ形状でそれ自体を閉じるように湾曲したソレノイドを形成する。平行βストランドは、ドーナツの内壁を形成し、一方、αヘリックスは、ドーナツの外壁を形成する。各βストランドは、ヘリックスの1つを含む長い右巻きループを介してバレル中の次の隣接するストランドに結合する。アミダーゼ2の構造は、2つのドメイン、すなわち、コア触媒ドメインと、より小さいβサンドイッチドメインと、に分けることが可能である。触媒ドメインは、αヘリックスにより外面上でフランキングされた8個の平行βストランドβ5~7、9~13のやや歪んだTIM様バレルを形成する残基107~425を含む。残基182に存在するストランドβ7の中央のキンクにより、2つの個別のストランドβ7aおよびβ7bに分けられる。このキンクは、バレル歪みを引き起こす特徴を示す。β7aは、ただ1つの隣接バレルストランドβ6を有するが、ストランドβ7bは、それに水素結合された2つの隣接部β8およびβ9を有する。前者は、バレルコアに結合された二次構造エレメントを示すが、形式上その一部ではない。バレル歪みの第2の原因は、β13のすぐ下流の残基375~378と、環を閉じると思われる第1のバレルストランドβ5と、のカノニカル水素結合相互作用の不在である。したがって、ドメインコアの全体的外観は、平行βシートのサンドイッチにやや類似しており、一方は、3個のストランドで構成され、他方は、7個のストランドで構成される。それらのうち、触媒ドメインの合計13個のヘリックス12個のαおよび1個のg、すなわち、バレルストランドおよびβ8のすぐ後のヘリックスは、バレルヘリックスとして帰属可能であり、一方、残り4個のヘリックスは、バレルの頂部および底部をライニングする追加の二次構造エレメントを示す。βサンドイッチドメインは、N末端およびC末端の両方の残基43~106、426~480を含む。C末端残基により形成される3個のストランドβ14~16は、2つのシートの大きい方の一部である。N末端残基により形成される4個のストランドのうち、β3は、より小さいシートに属し、一方、長い鋭く曲がったストランドβ1、β2、およびβ4は、両方シートの形成に寄与する。β1とβ4だけは、互いと平行である。ヘリカルターンγ16およびγ17は、β14とβ15の間に挿入されて、触媒ドメインを押し込める。β3とβ4の間に挿入されたヘリックスγ1およびα2は、反対方向を向いて、溶媒暴露される。標準的ソフトウェアパッケージ、たとえば、PyMOLwww.Pymol.orgをそのデフォルトパラメーターで用いて、所与のアミダーゼの三次構造を、図25に示される座標を有する配列番号1の三次構造と、容易に比較可能であることは、当業者であれば理解されよう。さらに、オクラトキシンを分解可能な先行技術のカルボキシペプチダーゼ酵素が、活性部位に指定の残基を含むTimバレル様構造を含まないことは、当業者であれば容易にわかるであろう。一実施形態では、アミダーゼは、RecommendationsoftheNomenclatureCommitteeoftheInternationalUnionofBiochemistryandMolecularBiologyIUBMBに準拠したEC3.5.1.Xの酵素である。ただし、Xは、この委員会による提供される指定番号である。先行技術のカルボキシペプチダーゼAおよびカルボキシペプチダーゼYが、それぞれ、EC3.4.17.1および3.4.16.5で表されることは、当業者であれば理解されよう。好ましい一実施形態では、アミダーゼは、pH3~9かつ21~40°CでインキュベートしたときにオクラトキシンAを分解するものである。以下の方法の節に記載のOTA分解アッセイを用いて、オクラトキシンAを分解するアミダーゼ酵素の能力を決定可能であることは、あきらかであろう。好適なアミダーゼは、それぞれ、配列番号1、3、5、6、7、8、9、10、11、13、14、および15として示される、アスペルギルスニガーAspergillusniger、アスペルギルスフラバスAspergillusflavus、タラロマイセススティピタタスTalaromycesstipitatus、ニューロスポラクラッサNeurosporacrassa、ストレプトマイセス属Streptomyces、たとえば、S.ロゼオスポラスS.roseosporus、サーモトガレティンガエThermotogalettingae、サリニスポラアレニコラSalinisporaarenicola、グロメレラグラミニコラGlomerellagraminicola、メタリジウムアニソプリアエMetarhiziumanisopliae、およびアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeに由来するもの、または配列番号1、3、5~11、13、14、もしくは15のいずれか1つに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含む。本発明の好ましい実施形態では、本発明に係る添加物、食品、飼料、使用、および方法で使用されるアミダーゼ酵素は、配列番号1もしくは配列番号3で示される配列または配列番号1もしくは配列番号3に対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を有するポリペプチド、または配列番号1もしくは配列番号3と1つもしくは複数のアミノ酸付加、欠失、および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、あるいは配列番号2を含むポリヌクレオチド、または配列番号2に対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有するポリヌクレオチド、または配列番号2と1つもしくは複数のヌクレオチド付加、欠失、および/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチド、または配列番号2の相補体にストリンジェント条件下でハイブリダイズする配列、またはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、97、98、もしくは99の同一性を有する配列、の発現により産生されるポリペプチド、を含む。さらなる好ましい実施形態では、本発明に係る酵素は、C-N、C-O、またはP-O、より好ましくはC-Nの化学結合切断を触媒する。当技術分野の任意の周知技術を用いて全長アミダーゼ2変異体を作製可能であることは、当業者には明らかであろう。N末端配列またはシグナル配列の切断に対して耐性のある安定な変異体は、ペプチド配列中のプロテアーゼ感受性ペプチド結合を突然変異させることにより産生可能である。たとえば、突然変異は、配列番号1に示される480aaのアミダーゼ2配列の以下の71個の部位の1つ以上で行うことが可能であり、これは、宿主生物によりその培地中に分泌されるペプチダーゼであるシグナルペプチダーゼおよびペプシンによる加水分解に対する感受性を改変可能であり:1831323334425556566469707879107114127128139146147156184185194195197202203220236262264269270304317318325335336336337343344351352354355359360374375386387388389390391400412420424425435436440446461462462480、以下の44個の部位での突然変異は、トリプシン耐性を改変可能であり:343648667588899299138141155166231232235239240243246256271279282291299303320322330346351361368395405426445451458461464476、以下の90個の部位での突然変異は、キモトリプシン耐性を改変可能である:111161923323439535657657079909198103107108112113114120121124128139144147151154157160179185191195203206209215216221236248254262265270287289295305307310316318319325326336337344349352355359360363375387389391398401413421425429436441447455457462463471479480。さらに、溶解性および熱安定性を改善するために、480aaのアミダーゼ2ポリペプチドまたはその変異体を、そのアスパラギンAsn残基、セリンSer残基、およびトレオニンThr残基のいずれかで、Nおよび/またはO-グリコシル化しうることは、理解されよう。本明細書に定義されるように、ストリンジェント条件という用語が、50°Cおよび0.2×SSC{1×SSC=0.15MNaCl、0.015MNa3シトレートpH7.0}での洗浄を意味することは、理解されよう。また、この条件が、65°Cおよび0.1×SSC{1×SSC=0.15MNaCl、0.015MNa3シトレートpH7.0}での洗浄として本明細書に定義される高ストリンジェント条件でありうることは、理解されよう。他の好ましい実施形態では、アミダーゼ酵素は、配列番号1、3、5~11、13、14、もしくは15を含むアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、97、98、99の同一性を有する配列を有するポリペプチド、または配列番号1、3、5~11、13、14、もしくは15と1つもしくは複数のアミノ酸付加、欠失、および/もしくは置換だけ異なるポリペプチド、をコードするポリヌクレオチドの発現により、産生される。より好ましくは、アミダーゼは、a配列番号2またはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含むポリヌクレオチド、または配列番号2と1つもしくは複数のヌクレオチド付加、欠失、および、/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチド、b遺伝暗号の縮重に起因して配列番号2と異なるポリヌクレオチド、c配列番号2の相補体、またはそれに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、80、90、95、98、99の同一性を有する配列、または配列番号2の相補体と1つもしくは複数のヌクレオチド付加、欠失、および/もしくは置換だけ異なるポリヌクレオチド、にストリンジェント条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド、から選択されるポリヌクレオチドによりコードされる。他の好ましい実施形態では、本発明で使用されるオクラトキシンAを分解するアミダーゼ酵素をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。ベクターが、任意の好適な発現ベクターでありうること、およびベクターの選択が、ベクターが挿入される細胞のタイプに依存して異なりうることは、当業者には明らかであろう。好適なベクターとしては、pGAPT-PG、pRAX1、pGAMD、およびpGPT-pyrG1が挙げられる。さらなる好ましい実施形態では、ベクターは細胞内に含まれる。さらなる実施形態では、細胞は胞子である。本明細書で用いられる場合、胞子という用語が、菌類または細菌の胞子内生胞子または外生胞子を意味することは、理解されよう。本発明に係る細胞は、任意の好適な細胞でありうる。より好ましくは、任意の好適な細菌細胞、菌類細胞、または植物細胞。さらにより好ましくは、細胞は、大腸菌E.coli、ストレプトマイセス属Streptomyces、ハンゼヌラ属Hansenula、トリコデルマ属Trichoderma特定的にはT.リーセイT.reesei、バチルス属Bacillus、ラクトバチルス属Lactobacillus、アスペルギルス属Aspergillus特定的にはA.ニガーA.niger、植物細胞、および/またはバチルス属Bacillus、トリコデルマ属Trichoderma、もしくはアスペルギルス属Aspergillusの胞子から選択される。より好ましい実施形態では、本発明で使用されるオクラトキシン好ましくはオクラトキシンAを分解するアミダーゼ酵素をコードするポリヌクレオチドを含む組換え細胞または組換え胞子が提供される。さらなる好ましい実施形態では、本発明で使用されるアミダーゼ酵素は組換え型である。本発明の好ましい態様では、オクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素を含む食品添加物または飼料添加物が提供される。好ましくは、アミダーゼ酵素は、少なくともオクラトキシンAを分解するであろう。より好ましくは、アミダーゼ酵素はまた、少なくとも1種の他のオクラトキシン、より好ましくは、少なくともオクラトキシンBを分解するであろう。さらなる実施形態では、酵素はまた、オクラトキシンBおよびオクラトキシンCを除く少なくとも1種のオクラトキシン誘導体ならびに/または少なくとも1種の麦角アルカロイドを分解するであろう。麦角アルカロイドが、アミド結合を含有する化合物であり、たとえば、エルゴコルニン、エルゴコルニニン、エルゴクリスチン、エルゴクリスチニン、エルゴクリプチン、エルゴクリプチニン、エルゴメトリン、エルゴシン、エルゴタミン、およびエルゴタミニンが挙げられることは、理解されよう。これらの化合物は、ヒトおよび家畜を含めて生物に対して毒性がある。動物により摂取される食料中または飼料中に存在する毒素のレベルを低減すべく、この食品添加物または飼料添加物をオクラトキシンで汚染された食品材料または飼料材料に添加することができることは、当業者には明らかであろう。オクラトキシンAは、穀物および他の高デンプン食品、さらには、たとえば、コーヒー、ココア、ワイン、ビール、豆、香辛料、乾燥果実、グレープジュース、非反芻動物の乳製品および肉製品の重要な汚染物質であることが知られている。オクラトキシンAは、たとえ低レベルでも存在すれば有害でありうる腎毒性、催奇形性、肝毒性、および発癌性の化合物である。より好ましい実施形態では、添加物は飼料添加物である。好ましい実施形態では、食品添加物または飼料添加物は、少なくとも0.001g/kg、少なくとも0.01g/kg、少なくとも0.1g/kg、少なくとも1g/kg、少なくとも5g/kg、少なくとも7.5g/kg、少なくとも10.0g/kg、少なくとも15.0g/kg、少なくとも20.0g/kg、少なくとも25.0g/kgのレベルでアミダーゼを含む。好ましくは、食品添加物または飼料添加物は、食品材料または飼料材料に添加したときに飼料材料が1~500mg/kg、1~100mg/kg、より好ましくは2~50mg/kgまたは2~10mg/kgの範囲内のアミダーゼを含むようなレベルでアミダーゼを含む。本発明の好ましい実施形態では、アミダーゼは、OTAが1μg/mlの濃度で存在する場合、pH7.0および40°Cで、タンパク質1mgあたり毎分少なくとも10、20、50、100、200、300、500、700、900、1000ナノモルのOTAを加水分解することが可能である。より好ましくは、本発明に係る食品添加物または飼料添加物は、オクラトキシンを分解可能なアミダーゼ酵素を発現可能な組換え細胞を含む。より好ましくは、アミダーゼ酵素は、少なくともオクラトキシンAを分解可能である。さらにより好ましくは、アミダーゼ酵素はまた、少なくとも1種のさらなるオクラトキシンもしくはオクラトキシン誘導体および/または少なくとも1種の麦角アルカロイド、より好ましくはオクラトキシンBを分解可能である。最も好ましくは、アミダーゼは、配列番号1、配列番号3、または配列番号5~11、13、14、もしくは15のいずれか1つ、または配列番号1、3、5~11、13、14、もしくは15のいずれか1つに対して少なくとも10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、95、98、99の同一性を有する配列を含む。他の好ましい実施形態では、細胞は、アスペルギルス属Aspergillusの細胞または胞子である。アスペルギルス属Aspergillusの細胞が、生細胞、死細胞、または破壊細胞でありうることは、当業者には明らかであろう。好ましい実施形態では、組換え細胞は、A.ニガーA.niger細胞である。より好ましくは、細胞は、同一種の非組換え細胞と比較した場合、増大されたOTA分解活性を有する。本発明で使用されるオクラトキシンAを分解可能なアミダーゼ酵素が、独立して、液状または固形/顆粒状のいずれかの組成物として提供することができることは、当業者であれば理解されよう。好ましくは、前記酵素が液体形態である場合、前記酵素は、前記酵素を含む細胞の培養後に培地中に分泌される。好ましくは、前記培地は無細胞であるすなわち、細胞は培地から分離されている。好ましくは、前記培地は濃縮される。培地を顆粒化して固形酵素組成物を提供することができることは、理解されよう。さらに、使用および/または適用形態および/または投与形態に依存して、溶液または固体の形態で本発明に係る食品添加物または飼料添加物を提供することができることは、理解されよう。さらなる実施形態では、添加物は、食品または飼料として使用される材料の前処理に使用することができる。たとえば、アミダーゼは、エタノールプラントから副産物として生産されるような液体の処理に使用することができる。この場合、添加物は、エタノール生産用の酵母または微生物の増殖に使用される培地中に見いだされるオクラトキシンA汚染物質を分解すべく、液体発酵ブロスに添加することができる。続いてブロスを乾燥させて動物に給餌しうることは、理解されよう。他の選択肢の実施形態では、添加物は、OTAで汚染されたミルクたとえば牛乳に添加することができる。一実施形態では、本発明に係る食品添加物または飼料添加物は、摂取に好適な液状製剤であり、好ましくは、そのような液状組成物はさらに、緩衝剤、塩、ソルビトール、および/またはグリセロールの少なくとも1つを含む。好ましくは、食品添加物または飼料添加物はさらに、少なくとも1種の生理学的に許容可能な担体を含む。生理学的に許容可能な担体は、好ましくは、少なくともの1つマルトデキストリン、石灰石炭酸カルシウム、シクロデキストリン、コムギまたはコムギ成分、スクロース、デンプン、Na2SO4、タルク、PVA、およびそれらの混合物から選択される。さらなる実施形態では、食品添加物または飼料添加物はさらに、金属イオンキレート化剤を含みうる。金属イオンキレート化剤は、EDTAまたはクエン酸から選択可能である。一実施形態では、アミダーゼ酵素は、生理学的に許容可能な担体上で乾燥される。一実施形態では、食品添加物または飼料添加物は、顆粒化または他の酵素と共顆粒化される。好ましい実施形態では、本発明で使用されるアミダーゼは、1種以上のさらなる酵素と組み合わせて使用することができる。好ましい実施形態では、1種以上のさらなる酵素は、カルボキシペプチダーゼ、好ましくは、カルボキシペプチダーゼA、カルボキシペプチダーゼY、A.ニガーA.nigerアスパラギン酸プロテアーゼのPEPAa、PEPAb、PEPAc、およびPEPAd、エラスターゼ、アミノペプチダーゼ、ペプシンまたはペプシン様プロテアーゼ、トリプシンまたはトリプシン様プロテアーゼ、およびスブチリシンやその変異体をはじめとする細菌プロテアーゼを含めて、タンパク質分解に関与するもの、ならびにデンプン代謝、繊維分解、脂質代謝に関与するもの、グリコーゲン代謝に関与するタンパク質または酵素、他の汚染物質を分解する酵素、アセチルエステラーゼ、アミラーゼ、アラビナーゼ、アラビノフラノシダーゼ、エキソおよびエンドペプチダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、キモシン、クチナーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エピメラーゼ、エステラーゼ、ホルムアミダーゼ、-ガラクトシダーゼ、たとえば、αまたはβガラクトシダーゼ、エキソグルカナーゼ、グルカンリサーゼglucanlysases、エンドグルカナーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースオキシダーゼ、-グルコシダーゼ、たとえば、αまたはβグルコシダーゼ、グルクロニダーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒドロラーゼ、インベルターゼ、イソメラーゼ、ラッカーゼ、フェノールオキシダーゼ、リパーゼ、リアーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、オキシドレダクターゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチンデポリメラーゼ、ペプチダーゼ、ペクチンメチルエステラーゼ、ペクチン分解酵素、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、ラムノガラクツロナーゼ、リボヌクレアーゼ、タウマチン、トランスフェラーゼ、輸送タンパク質、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、ヘキソースオキシダーゼD-ヘキソース:O2-オキシドレダクターゼEC1.1.3.5、酸性ホスファターゼ、ならびに/あるいは他のものまたはそれらの組合せよりなる群から選択される。これらは、たとえば、組成物または飼料の粘度を調整する酵素を含む。とくに好ましい実施形態では、酵素は、カルボキシペプチダーゼAと組み合わせて使用される。さらなる好ましい実施形態では、酵素は、PEPAdプロテアーゼと組み合わせて使用される。さらなる実施形態では、アミダーゼは、マイコトキシン分解酵素、たとえば、アフラトキシンデトキシザイムaflatoxindetoxizyme、ゼアラレノンエステラーゼ、ゼアラレノンラクトナーゼ、フモニシンカルボキシルエステラーゼ、フモニシンアミノトランスフェラーゼ、アミノポリオールアミンオキシダーゼ、デオキシニバレノールエクスポキシドexpoxideヒドロラーゼよりなる群から選択される解毒酵素、マイコトキシン分解微生物、たとえば、バチルスサブチリスBacillussubtilis、B.リケニフォルミスB.licheniformis、ラクトバチルス属Lactobacillus、または少なくとも1種のポリマーたとえば微生物細胞壁もしくはベントナイトなどの無機材料を含む吸収剤すなわち、マイクトキシンmyctoxin結合剤、の少なくとも1つと組み合わせて使用することができる。飼料添加物を任意の好適な動物に供しうることは、理解されよう。好ましい一実施形態では、動物は、単胃動物、たとえば、家禽、ブタ、魚、貝、および甲殻動物、たとえば、エビ、愛玩動物、たとえば、ネコやイヌなどである。他の選択肢の好ましい例では、動物は、たとえば、雌ウシもしくは他のウシ科動物、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、シカ、ラマ、アンテロープ、アルパカ、またはウィルドビーストから選択される反芻動物である。また、本発明に係る食品添加物または飼料添加物が、安定化剤および/またはバルキング剤および/または他の酵素などの他の成分をも含みうることは、当業者には自明であろう。好ましくは、本発明に係る食品添加物または飼料添加物は、約70°Cまで、約80°Cまで、または約95°Cまでの熱処理に対して熱安定性であろう。熱処理は、約0.5分間まで、約5分間まで、約10分間まで、約30分間まで、約60分間まで実施可能である。熱安定性という用語は、指定温度に加熱する前に添加物中に存在した/活性であった酵素成分の少なくとも約75が、室温に冷却した後、依然として存在する/活性であることを意味する。好ましくは、指定温度に加熱する前に添加物中に存在しかつ活性であった酵素成分の少なくとも約80は、室温に冷却した後、依然として存在しかつ活性である。本発明に係る食品添加物または飼料添加物は、約30週間超、約40週間超、約50週間超、約1年間超、約1.5年間超の貯蔵寿命を有しうる。貯蔵寿命とは、調製されたときに添加物中に存在しかつ活性であった酵素成分の少なくとも約80が、依然として存在しかつ活性であることを意味する。好ましくは、本発明に係る食品添加物または飼料添加物の調製方法は、オクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAを分解するアミダーゼ酵素を、任意選択的に、少なくとも1種の生理学的に許容可能な担体と、混合することを含む混合工程を含む。より好ましくは、アミダーゼ酵素はまた、少なくとも1種のさらなるオクラトキシンもしくはオクラトキシン誘導体および/または少なくとも1種の麦角アルカロイド、より好ましくはオクラトキシンBをも分解可能である。とくに好ましい実施形態では、食品添加物または飼料添加物は、粉末を生成すべくホモジナイズされる。他の選択肢の好ましい実施形態では、食品添加物または飼料添加物は、国際公開第2007/044968号パンフレット参照により本明細書に組み入れられるものとするに記載されるように、顆粒剤TPT顆粒剤として参照されるの形に製剤化される。他の好ましい実施形態では、食品添加物または飼料添加物が顆粒剤の形に製剤化される場合、顆粒剤は、タンパク質コアを覆うように被覆された水和したバリヤー塩を含む。そのような塩被覆の利点は、熱耐性の改良、貯蔵安定性の改良、およびそのままでは酵素に悪影響を及ぼす他の食品添加物または飼料添加物からの保護である。好ましくは、塩被覆に使用される塩は、20°Cで0.25未満の水分活性または60超の一定の湿度を有する。好ましくは、塩被覆はNa2SO4を含む。食品添加物または飼料添加物の調製方法はまた、粉末をペレット化するさらなる工程をも含みうる。粉末は、当技術分野で公知の他の成分と混合してもよい。粉末または粉末を含む混合物は、ダイに通して押し出してもよく、得られたストランドは、さまざまな長さの好適なペレット剤の形にカットされる。任意選択的に、ペレット化工程は、ペレット剤の形成前にスチーム処理またはコンディショニング段階を含んでもよい。粉末を含む混合物は、コンディショナー中、たとえば、スチーム注入機能を備えたミキサー中に配置してもよい。混合物は、60~100°Cなどの指定温度までコンディショナー中で加熱されるが、典型的な温度は、70°C、85°C、90°C、または95°Cであろう。滞留時間は、数秒間から数分間まで、さらには数時間まで、さまざまでありうる。たとえば、5秒間、10秒間、15秒間、30秒間、1分間、2分間、5分間、10分間、15分間、30分間、および1時間。さらなる態様では、本発明に係る食品添加物または飼料添加物を含む食品材料または飼料材料が提供される。本発明に係る食品添加物または飼料添加物が、任意の適切な食品材料または飼料材料への添加に好適であることは、理解されよう。予防工程として任意の食品材料または飼料材料に食品添加物または飼料添加物を添加することができることは、当業者には自明であろう。他の選択肢として、食品添加物または飼料添加物は、オクラトキシン汚染、好ましくはオクラトキシンA汚染を受けやすいことが知られている食品材料もしくは飼料材料に、またはオクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAで汚染されていることが示された食品材料もしくは飼料材料に、添加することができる。さらに、任意の好適な手段、たとえば、HPLC、ELISAにより、または市販のオクラトキシン検出ストリップHelicaBiosystems,Inc.,FullertonCAを用いて、オクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAの存在を確認可能であることは、当業者には明らかであろう。本明細書で用いられる場合、飼料材料という用語は、動物により摂取される基礎飼料材料を意味する。さらに、これが、たとえば、少なくとも1種の加工されていない子実、ならびに/または大豆粉や骨粉などの加工された植物性および/もしくは動物性の材料を含みうることは、理解されよう。いくつかの実施形態では、飼料材料は、次の成分、すなわち、a穀物、たとえば、小子実たとえば、コムギ、オオムギ、ライムギ、オートムギ、およびそれらの組合せおよび/またはメイズやソルガムなどの大子実、b穀物からの副産物、たとえば、トウモロコシグルテン粉、可溶性物質添加乾燥蒸留穀物残渣DDGS、コムギフスマ、コムギミドリング、コムギショート、コメヌカ、モミガラ、オートムギガラ、パーム核、およびシトラスパルプ、cサイレージ、たとえば、メイズサイレージ、dダイズ、ヒマワリ、ラッカセイ、ルピナス、エンドウマメ、ソラマメ、ワタ、カノーラ、魚粉、乾燥血漿タンパク質、肉粉および骨粉、ジャガイモタンパク質、ホエー、コプラ、ゴマなどの供給源から得られるタンパク質、e植物源および動物源から得られる油および脂肪、fミネラルおよびビタミンの1つ以上を含むであろう。本明細書で用いられる場合、飼料という用語は、1種以上の飼料添加物が添加された飼料材料を意味する。他の態様によれば、本発明に係る飼料材料を含む飼料が提供される。さまざまな動物がさまざまな飼料を必要とし、たとえ同一の動物であっても、動物を飼育する目的に依存して、異なる飼料を必要とすることもあることは、当業者であれば理解されよう。好ましくは、飼料は、メイズもしくはトウモロコシ、コムギ、オオムギ、ライコムギ、ライムギ、コメ、タピオカ、ソルガム、および/またはそれらの副産物のいずれか、さらにはダイズミーンmean、アブラナ種子粉、カノーラ粉、綿実粉、ヒマワリ種子ミーン、動物副産物粉、およびそれらの混合物のような高タンパク質成分を含む飼料材料を含みうる。より好ましくは、飼料は、動物脂肪および/または植物油を含みうる。任意選択的に、飼料はまた、たとえばカルシウムなどの追加のミネラルおよび/または追加のビタミンをも含有してもよい。本明細書で用いられる場合、食品材料という用語は、ヒトにより摂取される基礎食品を意味する。これが子実、植物性または動物性の材料を含んでもよいことは、理解されよう。いくつかの実施形態では、食品材料は、穀物または穀物製品、コーヒー、ココア、ワイン、ビール、豆、香辛料、乾燥果実、グレープジュース、ミルク、肉または肉製品の1つ以上を含みうる。本明細書で用いられる場合、食料という用語は、1種以上の食品添加物が添加された食品材料を意味する。他の態様によれば、本発明に係る食品材料を含む食料が提供される。好ましい実施形態では、食料または飼料は、約0.001mg~10g/kg、0.01mg~10g/kg、0.1mg~10g/kg、0.1mg~5g/kg、1mg~5g/kg、0.5g~1g/kg食料/飼料のレベルでアミダーゼを含む。要求された利点を本発明に係る食品添加物または飼料添加物に提供すべく、食料/飼料が、オクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAで汚染された食料/飼料でなければならないことは、当業者であれば容易にわかるであろう。他の態様では、飼料の生産方法が提供される。飼料は、典型的には、飼料ミルを用いて生産され、その際、原料は、最初に、好適な粒子サイズに粉砕され、次いで、適切な添加物と混合される。次いで、飼料は、マッシュまたはペレットとして生産可能であり、後者は、典型的には、温度を目標レベルに上昇させてから飼料をダイに通して特定のサイズのペレットを生産する方法を含む。ペレットを冷却させる。続いて、脂肪や酵素などの液状添加物を添加することが可能である。飼料の生産はまた、特定的には少なくともスチームの使用を含みうる好適な技術によりペレット化する前に、押出しまたは膨化を含む追加の工程をも含みうる。飼料は、任意の好適な動物用の飼料であってもよい。好ましくは、飼料は、飼養動物用または家畜用である。一実施形態では、動物は、単胃動物、たとえば、家禽たとえば、ブロイラー、産卵鶏、ブロイラー種鶏、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ、水鳥、ブタすべての年齢区分、魚、エビなどの甲殻動物を含めて貝甲殻類、愛玩動物たとえば、イヌ、ネコである。さらなる実施形態では、動物は、反芻動物、たとえば、ウシ科動物たとえば、雌ウシ、スイギュウ、バイソン、ヤク、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、シカ、ラマ、アンテロープ、アルパカ、またはウィルドビーストである。飼料は、少なくとも0.0001重量の飼料添加物を含みうる。好適には、飼料は、少なくとも0.0005、少なくとも0.0010、少なくとも0.0020、少なくとも0.0025、少なくとも0.0050、少なくとも0.0100、少なくとも0.020、少なくとも0.100、少なくとも0.200、少なくとも0.250、少なくとも0.500重量の飼料添加物を含みうる。さらなる態様では、食料または飼料のマイコトキシン汚染レベルを低減ための、食料または飼料の製造におけるオクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAを分解可能な少なくとも1種のアミダーゼ酵素の使用が提供される。好ましくは、アミダーゼ酵素はまた、少なくとも1種のさらなるオクラトキシンもしくはオクラトキシン誘導体および/または少なくとも1種の麦角アルカロイド、より好ましくはオクラトキシンBをも分解可能である。好ましくは、少なくとも1種のアミダーゼ酵素は、食品添加物または飼料添加物として製剤化される。より好ましくは、食品添加物または飼料添加物は、本発明に係る食品添加物または飼料添加物である。本発明のさらなる態様では、本明細書で説明されるように、オクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAで汚染された材料と、オクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAを分解するアミダーゼと、を含む組成物が提供される。本発明の好ましい実施形態では、組成物は、オクラトキシンA分解アミダーゼを発現可能な組換え細胞を含む。前記組成物が任意の好適なオクラトキシンA汚染材料を含みうることは、理解されよう。好ましい実施形態では、組成物は、食品材料もしくは飼料材料、発酵ブロスもしくは発酵プロセスの廃産物たとえばDDGS、廃水、または汚染土壌を含む。当業者であれば、食品材料や飼料材料以外の組成物のオクラトキシンA汚染が問題となりうることは、理解されよう。たとえば、工業プロセスに由来するオクラトキシンAを含有する廃水は、水路の汚染を引き起こしうる。また、オクラトキシン、好ましくはオクラトキシンAを分解可能なアミダーゼ酵素を汚染された材料に添加することを含む、材料中のオクラトキシン汚染を低減する方法も本発明により提供される。また、本発明に係る方法により取得可能な食品材料または飼料材料も本発明により提供される。本発明のさらなる態様では、本発明に係る有効量の飼料を動物に給餌することを含む、動物の成長速度増加および/または健康増進の方法が提供される。本文中で用いられる場合、健康という用語は、飼料中に存在するレベルのオクラトキシンから生じるオクラトキシン毒性に起因する動物への有害作用を低減することを意味する。実施例および図面を参照しながら本発明をさらに説明する。とくに定義されていないかぎり、本明細書で用いられる科学技術用語はすべて、本開示が属する技術分野の当業者により一般に理解されているものと同一の意味を有する。Singleton,etal.,DICTIONARYOFMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGY,20ED.,JohnWileyandSons,NewYork1994、およびHaleMarham,THEHARPERCOLLINSDICTIONARYOFBIOLOGY,HarperPerennial,NY1991は、本開示で用いられる用語の多くを含む一般的辞書を当業者に提供する。本開示は、本明細書に開示された例示的な方法および材料により限定されるものではなく、本明細書で説明されたものと類似のまたは均等Fな方法および材料はいずれも、本開示の実施形態の実施または試験に使用することができる。数値の範囲は、範囲を規定する数を包含する。とくに指定がないかぎり、それぞれ、核酸配列は、5’から3’方向に左から右に書かれており、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシ方向に左から右に書かれている。本明細書に提供される見出し語は、明細書全体を参照することにより得られる本開示の種々の態様または実施形態を限定するものではない。したがって、すぐ下に定義される用語は、明細書全体を参照すれば、より十分に定義される。アミノ酸は、本明細書では、アミノ酸の名称、三文字略号、または一文字略号を用いて参照される。本明細書で用いられる場合、同一性という用語は、アミノ酸配列およびヌクレオチド配列との特定の相同性を有する要素を意味する。これに関連して、同一性という用語は、以下でより詳細に説明されるアライメントアルゴリズムを用いて配列をアライメントした後の2種の酵素間の配列同一性パーセントを意味する。本発明に関連して、相同アミノ酸配列とは、配列に対して少なくとも30、40、50、60、70、75、80、85、または90の同一性、好ましくは少なくとも95、96、97、98、または99の同一性がありうるアミノ酸配列を含むものとみなされる。典型的には、相同体は、たとえば、対象アミノ酸配列と同一の活性部位を含むであろう。相同性はまた、類似性すなわち、類似の化学的性質/機能Aを有するアミノ酸残基に基づいて検討ことも可能であるが、本発明との関連では、配列同一性に基づいて相同性を表すことが好ましい。アミノ酸配列およびヌクレオチド配列に対して、相同性比較は、目測でまたはより一般的には容易に利用可能な配列比較プログラムを用いて実施可能である。こうした市販のコンピュータープログラムを用いて、2つ以上の配列間の相同性を計算することが可能である。相同性は、コンティグ配列にわたり計算可能である。すなわち、一方の配列を他方の配列にアライメントし、一方の配列中のそれぞれのアミノ酸を他方の配列中の対応するアミノ酸と1回に1残基ずつ直接比較する。これは、ギャップ無しアライメントと呼ばれる。典型的には、そのようなギャップ無しアライメントは、比較的短い残基数にわたり行われるにすぎない。これは非常に単純かつ一貫性のある方法であるが、たとえば、1つの挿入または欠失があると、それ以外は同一である配列対であっても、それ以降のアミノ酸残基がアライメントできなくなるという点が考慮されていないので、グローバルアライメントを行った場合、相同性が大幅に減少する可能性がある。したがって、ほとんどの配列比較法は、全相同性スコアに過度のペナルティーを課すことなく可能性のある挿入および欠失を考慮した最適アライメントを生成するようにデザインされる。これは、局所相同性を最大化するように試行して配列アライメント中にギャップを挿入することにより達成される。しかしながら、これらのより複合的な方法では、同一アミノ酸の個数が同数の場合、できるかぎり少ないギャップを有する配列アライメントが、2つの比較配列間のより高い関連性を反映して、多くのギャップを有するものよりも高いスコアを達成するように、アライメント中に生じるそれぞれのギャップにギャップペナルティーが割り当てられる。典型的には、ギャップの存在に比較的高いコストを課しかつギャップ中のそれぞれの後続残基により小さいペナルティーを課するアファインギャップコストが使用される。これは、最もよく使用されるギャップスコアリングシステムである。当然ながら、ギャップペナルティーが高ければ、より少ないギャップを有する最適化アライメントが生成されるであろう。ほとんどのアライメントプログラムでは、ギャップペナルティーを変更できるようになっている。しかしながら、配列比較用のそのようなソフトウェアを使用する場合、デフォルト値を使用することが好ましい。たとえば、GCGWisconsinBestfitパッケージを使用する場合、アミノ酸配列に対するデフォルトギャップペナルティーは、ギャップ1つにつき-12、各伸長ごとに-4である。したがって、最大相同性の計算では、最初に、ギャップペナルティーを考慮して最適アライメントを生成することが必要である。そのようなアライメントを行うのに好適なコンピュータープログラムは、GCGWisconsinBestfitパッケージDevereuxetal1984Nuc.AcidsResearch12p387である。配列比較を行いうる他のソフトウェアの例としては、BLASTパッケージAusubeletal.,1999ShortProtocolsinMolecularBiology,4thEd-Chapter18を参照されたい、FASTAAltschuletal.,1990J.Mol.Biol.403-410、およびGENEWORKS比較ツール一式が挙げられるが、これらに限定されるものではない。BLASTおよびFASTAはいずれも、オフライン検索およびオンライン検索で利用可能であるAusubeletal.,1999,ShortProtocolsinMolecularBiology,pages7-58to7-60を参照されたい。しかしながら、いくつかの用途では、GCGBestfitプログラムを使用することが好ましい。BLAST2Sequencesと呼ばれる新しいツールもまた、タンパク質およびヌクレオチドの配列の比較に利用可能であるFEMSMicrobiolLett19991742:247-50;FEMSMicrobiolLett19991771:187-8およびtatianancbi.nlm.nih.govを参照されたい。同一性に基づいて最終相同性を求めることが可能であるが、アライメント法自体は、典型的には、オールオアナッシング対比較に基づくものではない。その代わりに、化学的類似性または進化距離に基づいてそれぞれのペアワイズ比較にスコアを割り当てるスケール化類似性スコアマトリックスが広く使用される。一般に使用されるそのようなマトリックスの一例は、BLOSUM62マトリックス一連のBLASTプログラムのデフォルトマトリックスである。GCGWisconsinプログラムでは、一般的には、パブリックデフォルト値または供給されるのであればカスタムシンボル比較表のいずれかが使用されるさらに詳しくはユーザーマニュアルを参照されたい。いくつかの用途に対して、GCGパッケージではパブリックデフォルト値を、またはBLOSUM62などの他のソフトウェアの場合にはデフォルトマトリックスを、使用することが好ましい。他の選択肢として、CLUSTALHigginsDGSharpPM1988,Gene731,237-244に類似したアルゴリズムに基づくDNASIS商標HitachiSoftwareの多重アライメント機能を用いて、相同性パーセントを計算することが可能である。ソフトウェアを用いて最適アライメントを生成させた後、相同性、好ましくは配列同一性を計算することが可能である。典型的には、ソフトウェアにより配列比較の一部分としてこれを行い、数値結果を生成させる。本発明の好ましい態様では、配列相同性/同一性パーセントを計算するために、次のソフトウェアおよび設定値が使用される。アミノ酸配列では、可能性のあるそれぞれのアミノ酸配列ペアに対してAlignXVectorNTIInvitrogenCorporationCarlsbad,California,USA.製のVectorNTIAdvance9.1により、identities相同性またはpositivesのパーセントを計算する。設定値は、デフォルトパラメーターギャップ生成ペナルティー-10、ギャップ伸長ペナルティー0.1である。核酸配列では、identities相同性またはpositivesのパーセントは、可能性のあるそれぞれの核酸配列ペアに対してInformaxInc.USA製のAlignXVectorNTIプログラムにより計算する。設定値は、DNA用のデフォルト設定値である、すなわち、ギャップ生成ペナルティー:15およびギャップ伸長ペナルティー:6.66多重アライメントに対して同一の設定値。好ましくは、アミノ酸同一性相同性は、全長アミノ酸配列にわたり、または核酸ではそれぞれの全長アミノ酸配列をコードする対応するポリヌクレオチドに対して計算される。配列はまた、サイレント変化を起こして機能的に等価な物質を生じるアミノ酸残基の欠失、挿入、または置換を有しうる。アミノ酸の性質たとえば、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および/または親媒性の類似性に基づいて、意図的なアミノ酸置換を行ってもよく、したがって、アミノ酸を官能基でグループにまとめることが有用である。アミノ酸は、その側鎖の性質だけに基づいて、グループにまとめることが可能である。しかしながら、そのうえさらに突然変異データを含めるほうがより有用である。こうして誘導されるアミノ酸のセットは、おそらく構造的理由で保存されるであろう。これらのセットは、Venn図LivingstoneC.D.andBartonG.J.1993Proteinsequencealignments:astrategyforthehierarchicalanalysisofresidueconservationComput.ApplBiosci.9:745-756TaylorW.R.1986TheclassificationofaminoacidconservationJ.Theor.Biol.119;205-218の形態で記述可能である。保存的置換は、たとえば、一般に認められているアミノ酸のVenn図グループ分けを記述する以下の表に従って、行いうる。本発明はまた、行いうる相同的置換置換および置換えは、両方とも、本明細書では、既存のアミノ酸残基と他の選択肢の残基との交換を意味すべく用いられる、すなわち、類似のもの同士、たとえば、塩基性のもの同士、酸性のもの同士、極性のもの同士などの置換を包含する。また、非相同的置換、すなわち、一方のクラスの残基から他方のクラスの残基への置換、または他の選択肢として、オルニチンこれ以降ではZとして参照される、ジアミノ酪酸オルニチンこれ以降ではBとして参照される、ノルロイシンオルニチンこれ以降ではOとして参照される、ピリイルアラニンpyriylalanine、チエニルアラニン、ナフチルアラニン、フェニルグリシンなどの非天然アミノ酸の組込みを含む置換も行いうる。置換えはまた、非天然アミノ酸によっても行いうる。タンパク質という用語は、本明細書で用いられる場合、タンパク質、ポリペプチド、およびペプチドを含む。~と等価なアミノ酸残基、~に対応するアミノ酸という用語、およびそれらの文法的等価表現は、本明細書では、特定のタンパク質の特定のアミノ酸配列中に示されるものと類似の位置および作用を有するタンパク質のアミノ酸残基を意味すべく用いられる。当業者であれば、比較可能なタンパク質中の指定の残基の等価性についてわかるであろう。性質という用語またはその文法的等価表現は、ポリペプチドとの関連では、本明細書で用いられる場合、選択可能または検出可能なポリペプチドの任意の特性または属性を意味する。これらの性質としては、酸化安定性、基質特異性、触媒活性、熱安定性、温度活性および/またはpH活性プロファイル、飼料加工安定性、ならびに分泌能力が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書で用いられる場合、アミノ酸配列という用語は、ポリペプチドという用語および/またはタンパク質という用語と同義である。いくつかの場合、アミノ酸配列という用語は、ペプチドという用語と同義である。いくつかの場合、アミノ酸配列という用語は、酵素という用語と同義である。アミノ酸配列は、好適な供給源から調製/単離可能であるか、または合成的に作製可能であるか、または組換えDNA技術を用いて調製してもよい。タンパク質およびポリペプチドという用語は、本明細書では同義的に用いられる。本開示および特許請求の範囲では、アミノ酸残基に対して従来の一文字コードおよび三文字コードが使用される。アミノ酸の三文字コードは、IUPACIUBJointCommissiononBiochemicalNomenclatureJCBNに準拠して定義される。また、ポリペプチドは、遺伝暗号の縮重に基づいて2種以上のヌクレオチド配列によりコード可能であると理解される。シグナル配列またはシグナルペプチドという用語は、タンパク質の成熟形態または前駆体形態の分泌に関与するヌクレオチドおよび/またはアミノ酸の任意の配列を意味する。シグナル配列のこの定義は、機能的定義であり、タンパク質の分泌の遂行に関与する、タンパク質遺伝子のN末端部によりコードされるすべてのアミノ酸配列を含むものとする。それは、多くの場合、普遍的ではないが、タンパク質のN末端部または前駆体タンパク質のN末端部に結合される。機能性断片とは、そのポリペプチドのその特性を保持するポリペプチドの断片を意味する。本発明との関連では、アミダーゼ酵素の機能性断片は、全タンパク質のアミダーゼ酵素切断能力を保持する断片である。単離された、回収された、または精製されたという用語は、その元の環境から取り出された材料を意味する。実質的に精製されたという用語、材料が少なくとも実質的な程度まで精製されたことを意味する。一態様では、好ましくは、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、単離された形態である。単離されたという用語は、天然で配列に自然に会合するかつ天然で見いだされる少なくとも1つの他の成分が、配列に少なくとも実質的に含まれないことを意味する。用語の他の定義が、本明細書全体にわたり現れることもある。例示的実施形態をより詳細に説明する前に、本開示が記載の特定の実施形態に限定されるものではないことを理解すべきである。なぜなら、当然ながら、それらは変更してもよいからである。また、本開示の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で用いられる用語が、特定の実施形態を説明することだけを目的としたものにすぎず、限定を意図したものではないことも理解すべきである。値の範囲が提供される場合、文脈上明らかに異なる場合を除いて下限の単位の1/10まで、その範囲の上限と下限の間の各介在値もまた、特定的に開示されたものと理解される。指定範囲内の任意の指定値または介在値と、その指定範囲内の任意の他の指定値または介在値と、の間のより小さい範囲は各々、本開示に包含される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立して、その範囲内に包含しても除外してもよく、一方、皆無、または両方の限界値がより小さい範囲内に包含された各範囲もまた、指定範囲内の任意の特定的に除外された限界値に従って、本開示に包含される。指定範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界値の一方または両方を除外した範囲もまた、本開示の範囲内に含まれる。本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる場合、文脈上明らかに異なる場合を除いて、単数形のa、an、およびtheには、複数形の参照語が包含されることに留意しなければならない。したがって、たとえば、agene遺伝子の参照対象は、複数のそのような候補物を包含し、thecell細胞の参照対象は、1つ以上の細胞および当業者に公知のその均等F物の参照対象を包含し、他の場合も同様である。本明細書で検討される出版物は、単に本出願の出願日前に開示されたものとして提供されているにすぎない。本明細書の記載内容は、そのような出版物が、本明細書に添付されている特許請求の範囲に対して先行技術を構成することを容認するとみなされるべきものではない。本発明で使用される酵素は、バッチプロセス、フェドバッチプロセス、および連続フロープロセスを含めて、固体培養または液内培養のいずれかにより産生可能である。培養は、水性ミネラル塩培地、有機成長因子、炭素源材料およびエネルギー源材料、分子状酸素、ならびに当然ながら、1種以上の利用される特定の微生物種の出発接種物、を含む増殖培地中で達成される。炭素源およびエネルギー源、酸素、同化可能な窒素、および微生物の接種物に加えて、適正な微生物増殖を確保するために、微生物変換プロセスで細胞による炭素源およびエネルギー源の同化を最大化するために、ならびに発酵培地中で最大細胞密度で最大細胞収率を達成するために、適正割合で好適量のミネラル栄養素を供給することが必要である。水性ミネラル培地の組成は、当技術分野で公知のように、部分的には利用される微生物および基質に依存して、広範にわたりうる。ミネラル培地は、いずれも当技術分野で公知のように、窒素に加えて、好適量のリン、マグネシウム、カルシウム、カリウム、硫黄、およびナトリウムを、好適な可溶性の同化可能なイオン形および結合形で、含まなければならず、また、好ましくは、銅、マンガン、モリブデン、亜鉛、鉄、ホウ素、ヨウ素などの特定の微量元素が、同様に、好適な可溶性の同化可能な形態で、存在しなければならない。醗酵反応は、好気的プロセスであり、このプロセスでは、微生物種が盛んに増殖するのを支援するのに有効である好適な酸素分圧に発酵槽の内容物を維持すべく提供される、空気、酸素富化空気、さらには実質的に純粋な分子状酸素などの分子状酸素含有ガスにより、所要の分子状酸素が供給される。実際には、酸素化炭化水素基質を用いて、微生物の増殖に必要な酸素要求量を低減させる。それにもかかわらず、基質の同化および微生物の対応する増殖が部分的には燃焼プロセスであるので、増殖のために分子状酸素を供給しなければならない。通気速度はかなりの範囲にわたりうるが、通気は、一般的には、発酵槽内の液体体積あたり毎分約0.5~10、好ましくは約0.5~7体積利用圧力および25°Cでの範囲内の酸素含有ガスの速度で行われる。この量は、反応器に供給される通常の酸素含有率の空気に基づいており、純酸素に関しては、それぞれの範囲は、発酵槽内の液体体積あたり毎分約0.1~1.7、好ましくは約0.1~1.3体積利用圧力および25°Cでの酸素であろう。微生物変換プロセスに利用される圧力は、広範にわたりうる。圧力は、一般的には、装置および運転のコストと酸素溶解性とのバランスが達成されるように、約0~50psig、現時点で好ましくは約0~30psig、より好ましくは大気圧を少なくともわずかに超える範囲内である。大気圧よりも大きい圧力は、そのような圧力が水性発酵体中の溶存酸素濃度を増加させる傾向があり、結果的に、細胞増殖速度を増加させるのを支援しうるという点で、有利である。同時に、これは、高大気圧が装置および運転のコストを間違いなく増加させるという事実により、バランスがとられる。発酵温度はいくらか異なりうるが、アスペルギルスニガーAspergillusnigerやトリコデルマリーセイTrichodermareeseiなどの糸状菌では、温度は、一般的には、選択される微生物の株に依存して、約20°C~40°Cの範囲内、一般に好ましくは約25°C~34°Cの範囲内であろう。微生物はまた、同化可能な窒素源を必要とする。同化可能な窒素源は、微生物による代謝利用に好適な形態で窒素を放出可能な1種もしくは複数種の任意の窒素含有化合物でありうる。タンパク質加水分解物などのさまざまな有機窒素源化合物を利用することが可能であるが、通常は、安価な窒素含有化合物、たとえば、アンモニア、水酸化アンモニウム、尿素、および種々のアンモニウム塩、たとえば、リン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、ピロリン酸アンモニウム、塩化アンモニウム、または種々の他のアンモニウム化合物を利用することが可能である。アンモニアガス自体は、大規模運転に便利であり、好適量で水性発酵体発酵培地に通してバブリングすることにより、利用することが可能である。同時に、そのようなアンモニアはまた、pH調整を支援するためにも利用可能である。水性微生物発酵体発酵混合物のpH範囲は、約2.0~8.0の例示的範囲内になければならない。糸状菌では、pHは、通常、約2.5~8.0の範囲内であり、アスペルギルスニガーAspergilliusnigerまたはトリコデルマリーセイTrichodermareeseiでは、pHは、通常、約3.0~7.0の範囲以内である。特定の微生物に対するpH範囲の選好性は、ある程度、利用される培地、さらには特定の微生物に依存するので、当業者であれば容易に決定可能である培地の変化により、いくらか変化する。発酵槽内の発酵混合物の平均保持時間は、部分的には利用された発酵温度および培養物に依存して、かなり異なりうるが、一般的には約24~500時間、現時点で好ましくは24~400時間の範囲内であろう。好ましくは、発酵は、炭素含有基質を制限因子として制御することにより、炭素含有基質の良好な変換を細胞に提供し、実質的量の未変換基質による細胞の汚染を回避できるように、行われる。後者は、水溶性基質では、残留痕跡量が容易に洗浄除去されるので、問題ではない。しかしながら、非水溶性基質の場合、問題になって、好適な洗浄工程などの追加の産物処理工程が必要になることがある。以上で説明したように、このレベルに達する時間は、重要ではなく、特定の微生物および行われる発酵プロセスに応じて変化しうる。しかしながら、発酵培地中の炭素源濃度、および炭素源の所望のレベルが達成されたか否か、をいかに決定するかは、当技術分野で周知である。発酵をバッチ運転または連続運転として行うことが可能であるが、フェドバッチ運転は、制御のしやすさ、均一量の産物の産生、およびすべての装置の最も経済的な使用の点で、かなり好適である。所望により、水性ミネラル培地を発酵槽に供給する前に、炭素源材料およびエネルギー源材料の一部もしくは全部および/またはアンモニアなどの同化可能な窒素源の一部を水性ミネラル培地に添加することが可能である。反応器に導入される各ストリームは、好ましくは、所定の速度で、またはモニターにより決定可能な必要項目、たとえば、炭素基質およびエネルギー基質の濃度、pH、溶存酸素、発酵槽からのオフガス中の酸素または二酸化炭素、光透過率により測定可能な細胞密度などに応じて、制御される。種々の材料の供給速度は、炭素源およびエネルギー源の効率的な利用に合致したできるかぎり迅速な細胞増殖速度が得られるように、基質仕込み量に対してできるかぎり高い微生物細胞収率が得られるように、変更可能である。バッチ運転または好ましいフェドバッチ運転のいずれかで、装置、反応器、または発酵の手段、槽、もしくは容器、パイプ、付随する循環装置もしくは冷却装置などはすべて、通常、たとえば、少なくとも約15分間にわたり約121°Cでスチームを利用することにより、最初に滅菌される。次いで、滅菌された反応器に、酸素および炭素含有基質を含むすべての所要の栄養素の存在下で、選択された微生物の培養物を接種する。利用される発酵槽のタイプは重要ではないが、現時点で好ましいのは、15LBiolafitteSaint-Germain-en-Laye,France下の運転である。また、発酵ブロスからの本発明に係る酵素の捕集および精製は、当技術分野でそれ自体公知である手順によって行うことが可能である。発酵ブロスは、一般的には、細胞を含めて細胞デブリ、種々の懸濁物質、および他のバイオマス汚染物質、さらには好ましくは当技術分野で公知の手段により発酵ブロスから取り出される本発明に係る所望の酵素産物を含有するであろう。そのような取出しに好適なプロセスとしては、従来の固液分離技術、たとえば、遠心分離、濾過、透析、精密濾過、回転真空濾過、または無細胞濾液を生成するための他の公知のプロセスなどが挙げられる。限外濾過、蒸発、沈殿などの技術を用いて、発酵ブロスまたは無細胞濾液をさらに濃縮することが好ましいこともある。上清または濾液のタンパク質の成分の沈殿は、塩たとえば硫酸アンモニウムを利用して、達成可能である。任意選択的に、結晶化により、またはさまざまなクロマトグラフィー手順、たとえば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、または当技術分野で認められた類似の手順により、さらなる精製を達成することが可能である。変異体/誘導体本発明はまた、酵素の任意のアミノ酸配列またはそのような酵素をコードする任意のヌクレオチド配列の、変異体、相同体、および誘導体の使用を包含する。変異アミノ酸配列は、グリシン残基やβ-アラニン残基などのアミノ酸スペーサーに加えて、メチル基、エチル基、プロピル基などのアルキル基を含めて、配列の任意の2つのアミノ酸残基間に挿入可能である好適なスペーサー基を含みうる。変異のさらなる形態は、ペプトイド形の1種以上のアミノ酸残基の存在を含み、当業者であれば十分に理解されよう。疑問を生じないように述べておくが、ペプトイド形とは、α炭素置換基がα炭素上ではなく残基の窒素原子上に存在する変異アミノ酸残基を意味すべく用いられるものである。ペプトイド形のペプチドの調製プロセスは、当技術分野で、たとえば、SimonRJetal.,PNAS19928920,9367-9371およびHorwellDC,TrendsBiotechnol.1995134,132-134で公知である。他の成分本発明に係る飼料添加物または組成物は、他の成分または担体と組み合わせて使用することができる。飼料酵素に好適な担体としては、マルトデキストリン、石灰石炭酸カルシウム、シクロデキストリン、コムギ、コムギフスマまたはコムギ成分、コメまたはコメヌカ、スクロース、デンプン、Na2SO4、タルク、PVA、ならびにそれらの混合物が挙げられる。それに加えて、脂肪/ワックス被覆、植物ガム添加などに基づくものを含めて、いくつかのカプセル化技術が存在する。他の成分の例としては、増粘剤、ゲル化剤、乳化剤、結合剤、結晶調整剤、甘味剤人工甘味剤を含む、レオロジー調整剤、安定化剤、抗酸化剤、染料、酵素、担体、媒体、賦形剤、希釈剤、滑沢剤、風味剤、着色剤、懸濁化剤、崩壊剤、顆粒化結合剤などのうちの1つ以上が挙げられる。これらの他の成分は、天然物でありうる。これらの他の成分は、化学技術および/または酵素技術を用いて調製可能である。本明細書で用いられる場合、本明細書で用いられる増粘剤またはゲル化剤という用語は、不混和性液体、空気、または不溶性固体のいずれかのドロップレットである粒子の移動を減速または防止することにより分離を防止する製品を意味する。本明細書で用いられる安定化剤という用語は、製品たとえば食品の経時変化を防ぐ成分または成分の組合せとして定義される。本明細書で用いられる乳化剤という用語は、乳濁液の分離を防止する成分たとえば食品成分を意味する。本明細書で用いられる場合、結合剤という用語は、物理的または化学的な反応を介して製品を結合一体化する成分たとえば食品成分を意味する。本明細書で用いられる結晶調整剤という用語は、脂肪または水のいずれかの結晶化に影響を及ぼす成分たとえば食品成分を意味する。担体または媒体とは、化合物投与に好適な材料を意味し、当技術分野で公知の任意のそのような材料、たとえば、非毒性であるかつ組成物のいずれの成分とも有害な形で相互作用しない、任意の液体、ゲル、溶媒、液体希釈剤、可溶化剤などが挙げられる。栄養学的に許容可能な担体の例としては、たとえば、子実、水、塩溶液、アルコール、シリコーン、ワックス、石油ゼリー、植物油などが挙げられる。賦形剤の例としては、次のもの、すなわち、微結晶セルロースおよび他のセルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、グリシン、デンプン、乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールの1つ以上が挙げられる。崩壊剤の例としては、次のもの、すなわち、デンプン好ましくは、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、またはタピオカデンプン、ナトリウムデンプングリコレート、クロスカルメロースナトリウム、および特定の複合ケイ酸塩の1つ以上が挙げられる。顆粒化結合剤の例としては、次のもの、すなわち、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースHPMC、ヒドロキシプロピルセルロースHPC、スクロース、マルトース、ゼラチン、およびアカシアの1つ以上が挙げられる。滑沢剤の例としては、次のもの、すなわち、マグネシウムステアレート、ステアリン酸、グリセリルベヘネート、およびタルクの1つ以上が挙げられる。希釈剤の例としては、次のもの、すなわち、水、エタノール、プロピレングリコール、およびグリセリン、ならびにそれらの組合せの1つ以上が挙げられる。他の成分は、同時にたとえば、それらが混合一体化された状態の場合、さらにはそれらが異なる経路により送達される場合または逐次的にたとえば、それらは異なる経路により送達可能である使用してもよい。本明細書で用いられる場合、動物またはヒトが摂取するのに好適な成分という用語は、栄養学的利点がありうるか、繊維代替品でありうるか、または一般に消費者に有益な効果がありうる添加物として、本発明に係る組成物に添加されるまたは添加されうる化合物を意味する。例として、成分は、アルギネート、キサンタン、ペクチン、ローカストビーンガムLBG、イヌリン、グアーガム、ガラクトオリゴサッカリドGOS、フラクトオリゴサッカリドFOS、ラクトスクロース、ダイズオリゴサッカリド、パラチノース、イソマルトオリゴサッカリド、グルコオリゴサッカリド、キシロオリゴサッカリドなどのプレバイオティクスでありうる。単離された一態様では、好ましくは、本発明で使用されるアミダーゼ酵素は、単離された形態である。単離されたという用語は、天然でアミダーゼ酵素に自然に会合するかつ天然で見いだされる少なくとも1つの他の成分が、アミダーゼ酵素に少なくとも実質的に含まれないことを意味する。単離されたという用語は、産生に用いられる培養培地中の少なくとも1つの他の成分が、アミダーゼ酵素に少なくとも実質的に含まれないことを意味する。本発明に係るアミダーゼ酵素は、その物質にそのままでは会合されうるまたは酵素の産生に使用されうる1種以上の汚染物質が実質的に含まれない形態で提供することができる。したがって、たとえば、それは、細胞または汚染を引き起こす可能性のある1種以上のポリペプチドおよび/または核酸分子を実質的に含みえない。アミダーゼ酵素は、アミダーゼ酵素がブロス中に残存するように、発酵時または発酵後、細胞をブロスから分離することにより単離することができる。アミダーゼ酵素は、発酵ブロスを真空濾過による細胞分離に付すことにより単離することができる。一実施形態では、単離されたという用語は、産生に用いられる培養培地の他の成分が実質的に含まないように、アミダーゼがブロスから単離されることを意味する。精製された一態様では、好ましくは、本発明で使用されるアミダーゼ酵素は、精製された形態である。精製されたという用語は、所与の成分が高レベルで存在することを意味する。成分は、望ましくは、組成物中に存在する主成分である。好ましくは、それは、少なくとも約30、40、50、60、または少なくとも約65、または少なくとも約70、または少なくとも約75、または少なくとも約80、または少なくとも約85、または少なくとも約90、または少なくとも約95、または少なくとも約97、または少なくとも約99のレベルで存在する。ただし、前記レベルは、検討対象の全組成物を基準にして乾燥重量/乾燥重量に基づいて決定される。いくつかの実施形態では、量は、少なくとも約85である。ただし、前記レベルは、検討対象の全組成物を基準にして乾燥重量/乾燥重量に基づいて決定される。濃縮物一態様では、好ましくは、本発明で使用されるアミダーゼ酵素は、濃縮物として使用される。濃縮物は、酵素が排出された培地の濃縮形態であってもよい。好ましくは、濃縮物は、酵素が分泌されたかつ細胞が除去された培地の濃縮形態であってもよい。材料および方法オクラトキシンAは、Flukacat.no.32937-5MG製であった。カルボキシペプチダーゼAは、ウシ科動物膵臓由来であったSigma,cat.No.C9268。市販のアミダーゼおよび試薬を含めて他の酵素はすべて、Sigma製、Roche製、Merck製、およびDanisco製であった。Amano商標リパーゼは、天野エンザイム株式会社日本国名古屋製であった。フェニルセファロース、オクチルセファロース、ブチルセファロースを含むすべてのクロマトグラフィー媒体、陰イオン交換用、ゲル濾過PD10カラム用、およびタンパク質精製用の装置Aektaexplorerは、GEHealthcare製であった。マイクロプレートは、NuncA/SDenmark製およびCorningUSA製であった。マイクロプレートリーダーは、BiotekUSA製であった。トウモロコシ粉は、地方市場から入手したが、ダイズ-トウモロコシを原料とする飼料は、TheDanishTechnologicalInstituteatKoldingDenmarkから入手した。マイコトキシン分解アッセイ:ホルムアミダーゼ活性の測定方法使用した溶液:Megazymeギ酸アッセイキットK-form05/06ボトル1、4mlのミリQ水を添加してリン酸カリウム緩衝液pH7.6を生成する。5°Cに保つ。ボトル2、5.2mlの水を添加して適正NAD濃度を得る-20°Cに維持する。ボトル3、使用前のFDH振盪液であるそれを5°Cで維持する。ホルムアミドは、Sigma製の99.80の液状製品F90375°Cに維持するであり、さらなる希釈を行わずに使用した。アッセイ手順:96ウェル半領域uv透明性マイクロプレートに以下のものを添加する:10μlのリン酸カリウム緩衝液pH7.6キットの溶液1、10μlのNADキットの溶液2、2.5μlのギ酸デヒドロゲナーゼFDHキットの溶液3、1.6μlの100v/vホルムアミド溶液Sigma製、F9037、100μlのミリQ水。37°Cでマイクロプレートリーダーにより340nmのOD増加を1分ごとに読み取り、毎回読み取る前に15~60分間振盪する。読取り間隔:1分間。5分間の読取り後、5μl~20μlのA.ニガーA.niger調製物を添加する活性に依存する。反応速度最大直線傾きを取得する。対照:ホルムアミダーゼを添加せずに、その代わりに、緩衝液または水またはホルムアミダーゼ活性を有していない細胞抽出物を添加する。OTAの酵素分解の定量。アッセイで利用した緩衝液は、次のとおりであった。50mM酢酸ナトリウム緩衝液pH4、4.5、5、および5.5、50mMMES緩衝液pH6、6.5、および7、0.2MMops-NaOHpH7.0、50mMTris-HCl緩衝液pH7.5、8、および8.5。エタノール/水60/40に溶解された5mgのオクラトキシンASigma,ref.32937でオクラトキシンAOTA溶液1mg/mLを作製し、-20°Cで貯蔵した。300μLの最終体積で15μLのOTA溶液およびさまざまな酵素濃度たとえば、0.1~5mg/mlを用いて、スクリーニングアッセイを行った。一定した攪拌下で20時間±1時間にわたり37°Cで酵素反応を行った。HPLC分析用シリンジフィルター0.20μmを用いてサンプルを濾過した。HPLC装置は、DionexP580ポンプ、ならびにDionexRF-2000蛍光検出器λex=333nm、λem=460nmおよび257nmのDionexUVD340UUV検出器に接続されたDionexASI-100オートサンプラーで構成された。溶出は、0.6mL/分の流量で水/アセトニトリル/酢酸100:100:1、v/v/vをnucleosil100-5C18カラム250×4.6mm、粒子サイズ5μm、Chrompackを通して行った。カラムを30°Cに維持し、ガードカラムC18、1mm、Optimizetechnologiesに接続した。OTAおよびその分解産物を235nmuvおよび蛍光278nm励起、440nm発光の両方でモニターした。OTA活性に関するA.ニガーA.niger調製物のアッセイ。反応混合物は、50mMMes-NaOHの緩衝液pH7.0中に希釈された245μLのOTA1μg/mL、および5μLのサンプルA.ニガーA.nigerブロス、無細胞抽出物、アンモニウム分画およびクロマトグラフィーの後の画分またはA.ニガーA.niger由来の産物で構成された。反応を40°Cで30分間~2時間行った。95°Cで5分間加熱を用いて反応を停止させた。シリンジフィルター0.20μmを用いてサンプルを濾過し、5μLをHPLC装置に注入した。リパーゼアッセイおよびエステラーゼアッセイ。Sigmaから基質として購入したp-ニトロフェニルブチレートpNPBを用いて、リパーゼ活性およびエステラーゼ活性をアッセイした。アセトニトリル中に40mMで溶解された5マイクロリットルのpNPBを165μLの50mMTris-HCl緩衝液pH7.5および5μLの酵素溶液に添加し、これを用いてOTA分解を試験した。410nmで60分間にわたり光学濃度を追跡した。プロテアーゼ活性アッセイペトリ皿法。100mMリン酸水素二ナトリウム緩衝液pH6中に1カゼイン、1アガロースを含有するプレートを用いて、プロテアーゼ活性を確認した。プレートを37°Cで一晩培養し、酵素を含有するウェルの周りの帯白色リングの発生により、プロテアーゼ活性を明らかにした。タンパク質濃度アッセイ。製造業者により提供された手順に従ってBradfordの方法に基づいてBio-radタンパク質アッセイ試薬により、タンパク質濃度を定量した。標準としてBSAを使用し、各サンプルを二重反復方式で添加して、マイクロプレートで595nmのODを測定した。A.ニガーA.niger由来のOTA分解活性の精製硫酸アンモニウム分画。5グラムのAmanoリパーゼ酵素を100mLの50mMTris/HCl緩衝液pH7.5に溶解させた。40飽和に対応する硫酸アンモニウムの量を添加して、結晶を溶解させた。3500rpmで10分間遠心分離した後、上清を捕集し、60飽和に達するように硫酸アンモニウムを添加した。撹拌により結晶を溶解させ、再び溶液を遠心分離した。40~60硫酸アンモニウム飽和での沈殿物に対応するペレットを、4×40mLの50mMトリシン、1M硫酸アンモニウムpH7に溶解させ、0.22μmフィルターで濾過した。疎水性相互作用クロマトグラフィーHIC。1M硫酸アンモニウムを含有する50mMトリシンpH7緩衝液Aと平衡化されたフェニルセファロースFFカラム、ブチルセファロースカラム、またはオクチルセファロースCL4Bカラムに、硫酸アンモニウム分画からのサンプルを注入適用した。Aekta精製システムに接続されたカラムを緩衝液A10mL/分で洗浄し、結合されたタンパク質を50mMトリシン緩衝液Bのリニアグラジエントで溶出させた。10mLの画分を捕集し、OTA活性アッセイまたはホルムアミダーゼアッセイに使用した。陰イオン交換クロマトグラフィーAEX。OTAの高変換率を有する画分をプールし、20mMTris-HCl、pH7.5緩衝液Aで平衡化されたPD10カラムで脱塩した。脱塩されたサンプルを緩衝液A10ml/分で平衡化されたSourceQ30カラムに適用した。カラムを緩衝液Aで洗浄し、結合されたタンパク質を緩衝液A中の0~1MNaClのリニアグラジエントで溶出させた緩衝液Bは、1MNaClを含有する緩衝液Aと同一である。グラジエント時、5mlの画分を捕集した。タンパク質の濃縮。陰イオン交換クロマトグラフィーにより得られたOTA分解活性を有する画分を、再生セルロース膜分画分子量10kDaを備えたAmiconCentriprep商標コンセントレーターを用いて濃縮した。最適pHの決定。5マイクロリットルの酵素溶液を、次のさまざまな緩衝液中に1μg/mLで希釈された245μLのOTAと組み合わせた。50mM酢酸ナトリウム緩衝液pH4、4.5、5、および5.5、50mMMES-NaOH緩衝液pH6、6.5、および7、50mMTris-HCl緩衝液pH7.5、8、および8.5。反応を37°Cで30分間行い、95°Cで5分間加熱することにより停止させた。最適温度。5マイクロリットルの酵素溶液を最適pHで245μLのOTA1μg/mLと混合し、20、30、40、60、70°Cで30分間インキュベートした。95°Cで5分間加熱することにより、反応を停止させた。温度安定性。酵素溶液をさまざまな温度30、40、60、70、80、および90°Cで1時間インキュベートし、5μLを最適条件下でオクラトキシン分解反応のために245μLのOTA1μg/mLと混合した。95°Cで5分間加熱することにより、反応を停止させた。対照はインキュベートしなかった。SDS-PAGE。タンパク質の分離および解析を行うために、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動SDS-PAGEを使用された。40マイクロリットルのサンプルを10μLの5×充填緩衝液DDTおよびSDSを含有すると混合し、5分間煮沸した。20μLをNuPAGE4~12Bis-TrisゲルInvitrogen,USA上に充填した。製造業者の手順に従って電気泳動を行った。ゲルをCoomassieブリリアントブルーで染色した。質量分析。メスを用いて対象のタンパク質をゲル上記からカットし、Eppendorfチューブに移した。タンパク質を酵素主にトリプシンで消化した。消化後、ペプチドを抽出し、HPLC-MS/MSにより解析した。MS/MSスペクトルを同一性および特性解析の目的でタンパク質データベースに対して自動探索した。ホルムアミダーゼおよびアミダーゼ2の阻害アッセイ。1つのプロテアーゼ阻害剤カクテルPIC錠剤RocheAppliedScience,Mannhein,Germanyを1.5mLのミリQ水に溶解させて、7×ストック溶液を得た。ホルムアミダーゼ阻害アッセイでは、通常利用される100μLのミリQ水の代わりに、20μLの7×PICストック溶液および80μLのミリQ水を、ホルムアミダーゼ活性アッセイの節に列挙された他の成分と混合した。OTA分解活性では、35μLの7×PIC溶液を、210μLのOTA1μg/mLおよび5μLの酵素溶液と混合した。125mMEDTAストック溶液を調製し、10mMおよび50mMの最終濃度を得るのに適切な体積を、OTA1μg/mLおよび5μLの酵素と混合した。対照の場合、ホルムアミダーゼ活性アッセイでは、阻害剤溶液をミリQ水で置き換え、OTA分解活性では、MES-NaOHpH7緩衝液で置き換えた。結果実施例1OTA活性に関するスクリーニング種々のリパーゼ、プロテアーゼ、およびアミダーゼを含む30種の酵素を、オクラトキシンAを分解するそれらの能力に関して調べた表1。カルボキシペプチダーゼAおよびA.ニガーA.niger由来のリパーゼAmano商標Aだけが、既報のとおりOTAを分解可能であったPitout,1969、Standeretal.,2000。さらに、A.ニガーA.niger由来のアスパラギン酸プロテアーゼpepAd2Daniscoは、OTA変換活性を呈したが、これはそれほど効率的ではなかった。これらの3種の酵素の比較を容易にするために、PEPAdのタンパク質濃度を決定し、同一濃度1mg/mlでカルボキシペプチダーゼAおよびAmano商標リパーゼAの酵素溶液を調製した。分解の速度を調べた図1。図1は、Amano商標リパーゼAおよびカルボキシペプチダーゼAのOTA分解速度が類似していることを示している。37°Cで7時間反応させた後、OTAピークが見られなかったことは、OTAの完全変換が達成されたことを意味する。PEPAdでは、1日間反応させた後でさえも、完全変換は達成されなかった。Amano商標リパーゼA製品は、主要な活性がリパーゼであるさまざまな酵素の混合物であった。PEPAd以外に、他のA.ニガーA.nigerアスパラギン酸プロテアーゼのPEPAa、PEPAb、およびPEPAcWang、2010年、ブタエラスターゼ、ならびに酵母カルボキシペプチアーゼcarboxypeptiaseYはすべて、OTAに対して特定の活性を呈した。メタロプロテアーゼすなわち、カルボキシペプチダーゼA、Zn2依存性プロテアーゼ以外のアスパラギン酸プロテアーゼ、セリンプロテアーゼエラスターゼ、およびカルボキシペプチダーゼYが、OTAを分解可能であることを示したのは、これが初めてである。表1に列挙された他のプロテアーゼ、リパーゼ、およびアミダーゼは、OTAを分解可能でなかったデータは示されていない。実施例2A.ニガーA.niger発酵液または濾過ブロス無細胞に由来するオクラトキシンA分解活性の精製。最初に、硫安沈殿を利用した。いくつかの硫酸アンモニウム濃度をA.ニガーA.niger粗タンパク質抽出物に適用した。上清およびペレットの両方でOTA分解活性を定量した。硫酸アンモニウム濃度を増大させることにより、OTA分解活性を上清からペレットに移動させた。60硫酸アンモニウムでは、分解活性はすべて、ペレット中に見いだされた。このことから、40~60硫酸アンモニウムでの沈殿の酵素がマイコトキシンを加水分解可能であることが実証された。同一の塩濃度60で、わずかなリパーゼ活性がペレット中に残存したデータは示されていない。40~60での硫酸アンモニウム画分をさらなるオクラトキシン分解酵素精製の出発原料として利用した。以上で説明した疎水性相互作用クロマトグラフィーHICおよびそれに続く陰イオン交換クロマトグラフィーAEXを用いて、OTA分解活性からリパーゼ活性を分離した。1MNH42SO4を含有する50mMトリシン-HClpH7.0緩衝液A中に活性画分を懸濁させた。図2Aは、フェニルセファロースから得られた画分とOTAとを1時間反応させた後で得られたOTα面積パーセントを示している。この図は、画分番号51から64までOTA分解活性が増加し、一方、最大リパーゼ/エステラーゼ活性が画分番号65~68に見いだされることを示している。この観測から、オクラトキシン分解活性がAmano商標リパーゼ製品中のリパーゼ/エステラーゼ活性とは明らかに無関係であることが示唆されるこれまでは、Standeretal.,2000で、OTA分解活性がリパーゼ活性に起因することが示唆されていた。OTAを分解するタンパク質が90~100緩衝液B50mMトリシン-HClpH7.0で溶出されたことから、フェニルセファロースクロマトグラフィー媒体が明らかにアフィニティー媒体として機能したことが示唆される。OTAはまた、フェニル基をも含有ので、OTA分解酵素は、OTAまたはここで使用した分離媒体のいずれかのフェニル基に結合可能であるにちがいない。この工程から得られたすべての画分に存在していたリパーゼ/エステラーゼ活性に関して、それは100緩衝液Bで溶出された。これは予想外ではない。なぜなら、リパーゼ/エステラーゼは、非常に疎水性の基質である脂質およびトリグリセリドの加水分解を行い、したがって、フェニルセファロースのような疎水性マトリックスと密に結合するからである。図2Bは、AEX画分とOTAとを30分間反応させた後で得られたOTα面積パーセントを示している。最大OTA活性は、画分番号26中に見いだされた。しかしながら、それはまた、これらの画分の中で相対リパーゼ活性が最大であった。このことから、AEX工程はOTA分解活性からリパーゼ/エステラーゼ活性を分離できなかったことが示唆されるが、これは、OTA分解活性を精製しようとした試みの中の唯一のクロマトグラフィー工程として以前の研究者により使用されたものであるAbrunhosaetal.,2007。要約すると、図2Aおよび2Bから、リパーゼ/エステラーゼは、既報Standeretal.2000で仮定されたようにOTAの分解に関与する酵素でないこと図2A、およびOTA分解活性からのリパーゼ/エステラーゼ活性の分離は、Amano商標リパーゼからOTAを分解する酵素を精製しようとした試みの中で以前の研究者により実施されたAEXAbrunhosaetal.,2007により達成されなかったこと、が示唆される。以前の研究者は、疎水性の差に基づいてタンパク質を分離する疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体と通常みなされるフェニルセファロースクロマトグラフィー媒体が、OTA分解活性に関するアフィニティー分離媒体としてここで使用することができることを示さなかった。硫酸アンモニウム分画およびそれに続くフェニルセハロースSeharoseを用いたHIC/アフィニティークロマトグラフィーおよびAEXによる精製の後、OTA分解活性を含有した画分は、依然として、いくらかのリパーゼ/エステラーゼ活性を有していた。図4は、図2BのAEX精製手順で得られたOTA活性画分をSDS-PAGEにより解析した結果を示している。2つの主バンドAおよびBがゲル上に存在することがわかる。質量分析によるそれらのバンドの部分的配列決定およびそれに続くはタンパク質データベースでの相同性探索から、バンドAは、それぞれ、1:アスペルギルスオリザエAspergillusoryzae由来の予測アセトアミダーゼ/ホルムアミダーゼ45,012Da包括度272:アスペルギルスフミガタスAspergillusfumigatus由来のホルムアミダーゼ45,277Da包括度243:アスペルギルスニデュランスAspergillusnidulans由来のホルムアミダーゼ44,907Da包括度20に対応する少なくとも3種のタンパク質を含み、かつバンドBは、1:アスペルギルスオリザエAspergillusoryzae由来のグリオキシル酸/ヒドロキシピルビン酸レダクターゼ39,603Da包括度342:アスペルギルスアワモリAspergillusawamori由来のアセチルエステラーゼ32,640Da包括度93:アスペルギルスニガーAspergillusniger由来のエンド-1,4-β-キシラナーゼA前駆体35,486Da包括度17に対応する少なくとも3種のタンパク質を含むことが示唆される。図4に示される結果から、OTAを分解する酵素は、A.ニガーA.nigerホルムアミダーゼであると考えられた。他の同定された酵素は、理論上、OTA分解に無関係である。A.ニガーA.nigerホルムアミダーゼのさらなる精製を行った。実施例3はオクラトキシンA分解酵素の精製を改良した。さまざまな緩衝液およびさまざまなグラジェントプログラムを用いても、HICおよびAEXによる精製のさらなる改良は、達成されなかった。フェニルセファロースを用いた精製は、OTA分子がフェニル基を有するので、アフィニティー工程と見なすことが可能であるが、しかしながら、不純物は、高い疎水性を有し、フェニルセファロース媒体に密に結合するので、非常に遅く溶出する図4A。オクチルセファロースおよびブチルセファロースを利用した場合、OTA分解活性画分は、未吸着フロースルー画分中に見いだされた。このことから、それは、低い疎水性を有し、かつフェニルセパロースSepahroseへのその密な結合は、本質的に親和性によるものであり図4A、一方、高い疎水性を有する不純物は、フェニルセファロースの場合のように、密に結合して、遅く溶出したことが示唆される図4B。硫酸アンモニウム分画AS、フェニルセファロースによるHIC/アフィニティーHIC1、ブチルセファロースによるHICHIC2、およびAEXを用いて、手順をさらに改良し、活性画分を濃縮して10kDaのカットオフのモレキュラーシーブで脱塩した。図4に示された濃縮脱塩された画分5および6をSDS-PAGEで解析した図5。タンパク質バンドをゲルから単離し、トリプシンで消化した。消化物をRP-HPLCで分離し、MSにより解析してタンパク質バンドの同一性を同定した。MSの結果から、4工程の精製の後、OTA分解活性は、単一バンドに限局されなかったことが示唆され、その代わりに次の酵素が同定された強度の順。ホルムアミダーゼ配列包括度51、ホルムアミダーゼ分解産物プロテアーゼによりもたらされた30、細菌アミダーゼとの類似性25を有する注釈がないA.ニガーA.nigerタンパク質配列An14g02080、XP_001400834、グルタミルトランスペプチダーゼ17、およびアルドース1-エピメラーゼ14。これらの結果から、OTAを分解する可能性が最も高い同定された酵素は、図3および5の結果により示されるように、アスペルギルスニガーAspergillusnigerホルムアミダーゼであると考えられ、その次に、細菌アミダーゼとの類似点を有する注釈がないA.ニガーA.nigerタンパク質配列、およびグルタミルトランスペプチダーゼであり、3つのすべてが、OTA分子に存在するC-N結合に対して活性を有する。実施例4OTAを分解する能力を有しうる同定された酵素の特性解析。図3、4、5、および6の結果に基づいて、2つの推定アスペルギルス属Aspergillus酵素ホルムアミダーゼおよびグルタミルトランスペプチダーゼならびに仮説タンパク質An14g02080XP_001400834に関するさらなる研究を行った。アスペルギルス属Aspergillus起源の推定ホルムアミダーゼは、基質特異性を含めてその生化学的性質に関してこれまで特性解析されていないが、それは、A.ニデュランスA.nidulansからクローニングされ、β-ガラクトシダーゼ活性により間接に示唆されるように発現されたFraseretal.,2001。ホルムアミダーゼは、グリオキシル酸代謝およびジカルボン酸代謝、さらには窒素代謝に関与することが知られている。それは、水の存在下でホルムアミドをギ酸ホルメートおよびアンモニウムに変換するホルムアミドH2O→ギ酸塩NH3。ホルムアミダーゼ活性の存在は、以上の材料および方法の節に示されるように、Megazymeギ酸キットを用いてアッセイされた。AEX工程で得られる画分でこのアッセイを行ったとき、ホルムアミダーゼは、25~30の画分中に観測された図6A。これは、A.ニガーA.nigerから調製されたAmano商標リパーゼ製品を含めて菌類および菌類調製物が、ホルムアミドをギ酸およびアンモニウムに分解する活性ホルムアミダーゼを有することを示す第1の指標であった。同様に重要なこととして、ホルムアミダーゼ活性は、OTA活性を精製するようにデザインされた精製工程を用いて精製されたことから、菌類ホルムアミダーゼはOTAを分解することが示唆される。ホルムアミダーゼ活性に関して試験した同一の画分をOTAの分解に関してアッセイしたとき、変換は、画分26~32で増加した図6B。図6Aおよび図6Bからわかるように、2つの活性は、同一の画分中に存在した。データから、さらに、これまで特性解析されてこなかったA.ニガーA.nigerホルムアミダーゼまたはアスペルギルス属Aspergillusホルムアミダーゼは、OTA分解活性を有するという仮説を立てられた。実施例5A.ニデュランスA.nidulansホルムアミダーゼ遺伝子を保有するA.ニガーA.niger形質転換体でのホルムアミダーゼおよびOTA分解活性の解析A.ニガーA.nigerホルムアミダーゼ形質転換体をホルムアミダーゼ活性およびOTA分解活性に関して解析した。表2からわかるように、ホルムアミダーゼ活性は、15種の形質転換体のうち12種の形質転換体で検出された。驚くべきことに、明らかに、高いホルムアミダーゼ活性を有するがOTA分解活性が低いかまたはまったくない形質転換体に見られるように、ホルムアミダーゼA.ニガーA.nigerは、OTAを分解可能でなかった。このことから、菌類ホルムアミダーゼは、OTA分解活性を有していなくてもよいが、4つの精製工程を介してOTA活性と一緒に共精製されたことが示唆される。興味深いことに、A.ニデュランスA.nidulansホルムアミダーゼ遺伝子をA.ニガーA.nigerゲノム中に導入する場合のように外来DNAを組み込むことにより、本発明者らは、形質転換に使用した親株A.ニガーA.nigerと比較して、未知の機序により、より高いOTA分解活性を有する形質転換体の作製に成功した。たとえば、形質転換体7、2、8、11、15を参照されたい。16が野生型であったことに留意されたい親株。対照は、ブロスを添加しない反応であった。すべてのこれらアッセイに発酵ブロスを使用した。反応混合物は、10μlのブロス、50μlのOTA1μg/ml、100μlのリン酸ナトリウム67mM、pH7またはpH9を含有していた。対照では、振盪フラスコ発酵で5日間経過した培養物の10μlのブロスを10μlの水で置き換えた。反応終了時、160μlのアセトニトリルを添加して反応を停止させ、濾過し、10μlをHPLC分析のために注入した。アスペルギルス属Aspergilli菌のホルムアミダーゼがOTAを分解できなかったという驚くべき発見に基づいて、本発明者らは、OTA分解のための第2の候補、すなわち、本明細書でアミダーゼ2と記された仮説A.ニガーA.nigerタンパク質An14g02080、XP_001400834がOTA分解活性を有するかを確認するさらなる研究を行った。実施例6推定アミダーゼ2遺伝子発現プラスミドの構築アスペルギルスニガーAspergillusniger由来の推定アミダーゼ2遺伝子は、480アミノ酸のアミダーゼタンパク質配列番号1をコードする。A.ニガーA.nigerアミダーゼ2遺伝子に対する組換え発現プラスミドを作製するために、A.ニガーA.nigerUVK143株から得られたゲノムDNA鋳型を用いたPfuUltraIIPCR反応で、2つのプライマーGGAGATCTATCATGGTCCGCCGAATTGおよびAATCTAGACTAGTGATGGTGATGGTGATGCAGAAAAGGATTACGTGを使用されたWardetal.,Appl.Microbiol.Biotechnol.,39:738-743,1993。2つのプライマーを用いて、95°Cで30秒間、50°Cで30秒間、および72°Cで1分間を30サイクルで、PCR反応を行った。72°Cで最終の伸長を5分間行い、反応系を4°Cに冷却した。得られたPCRアンプリコンのコード領域のヌクレオチド配列を、Hisタグを含めずに、配列番号2として列挙する。QiagenスピンカラムでPCR断片を精製した。それを制限酵素BglIIおよびXbaIで消化し、BglIIおよびXbaIで消化されたpGAPTプラスミドベクターたとえば、米国特許第6,426,410号明細書を参照されたい中にクローニングした。得られたプラスミドpGAPT-アミダーゼ2図7に示されるが、A.ニガーA.nigerグルコアミラーゼプロモーターとA.ツビンゲンシスA.tubingensisグルコアミラーゼターミネーターとの間に挿入されたA.ニガーA.nigerアミダーゼ2を含む組換え遺伝子を有することを、DNA配列決定により確認した。対応するコードタンパク質配列は、配列番号4に示される。これは、タンパク質精製を支援するめにタンパク質のc末端に6個のヒスチジン残基が追加されたことを除いて、配列番号1と同等である。実施例7組換えアミダーゼ2産生株の構築PEG媒介プロトプラスト融合形質転換プロトコルを用いて、A.ニガーA.nigerのAP4株Berkaetal,Gene86:153-162,1990をpGAPT-アミダーゼ2プラスミドで形質転換した。形質転換プロトコルは、トリコデルマハージアナムTrichodermaharzianum由来の溶解酵素Sigma,L1412を用いて、Campbell法Campbelletat.,Curr.Genet.16:53-561989を参照されたいの変法を利用した。100種超の形質転換体を取得し、30種の形質転換体をMMプレートで選択した。最初に、対照AP4親株および15種の形質転換体を選択してCMAプレートで増殖させ、そして、CMAプレートの菌糸および胞子の両方を含有する菌糸寒天プラグを、30mlの培養培地を含有する振盪フラスコに移した。形質転換体を28°Cで6日間増殖させた。対照AP4株および15種すべての形質転換体からの菌糸ペレットを水で少なくとも2回洗浄した。菌糸ペレットをCelLyticY細胞溶解試薬Sigma,C4482中に懸濁させた。細胞内タンパク質を室温で2時間抽出した。懸濁液を遠心沈降し、抽出された細胞内タンパク質を含有する15μlの上清をSDS-PAGEゲルを用いて解析した図8。培養ブロスをマイクロ遠心分離機で10分間遠心沈降し、SDS-PAGEゲルを用いて15μlの上清細胞外タンパク質を解析した図8。表3は、30mlの媒体の入った250mlシリコナイズフラスコ中でアスペルギルスニガーAspergillusnigerおよびその形質転換体を増殖させるために使用した媒体1リットルあたりを示している。最初に、A.ニガーA.niger株をCMAプレートで3~5日間増殖させ、そして2cm2をフラスコに移して30°Cで5日間増殖させた。野生型対照株または親株620では、0.5mg/mlのウリジンを追加した。図8.アミダーゼ2遺伝子を保有するA.ニガーA.nigerの細胞内タンパク質のSDS-PAGE解析。アミダーゼ2のタンパク質バンドを矢印により示した。M.分子マーカー、AP4、A.ニガーA.nigerの親株。形質転換体には1~15の番号を付した。図9は、アミダーゼ2遺伝子を保有するA.ニガーA.nigerの細胞外タンパク質のSDS-PAGEを示している。アミダーゼ2のタンパク質バンドは、矢印により示される。アミダーゼ2バンドの上方の他の主要バンドは、A.ニガーA.nigerにより分泌されたα-アミラーゼおよびグルコアミラーゼであった。ゲルに充填したサンプルは、さまざまな形質転換体の発酵ブロスであった。SDS-PAGEで分離された推測アミダーゼ2バンドが実際にアミダーゼ遺伝子の産物であることを確認するために、バンドを切り取り、ゲル内消化によりトリプシンで消化した。消化物をRP-HPLCにより分離し、質量分析により解析した。これにより、推定アミダーゼ2配列配列番号1図18A中に見いだされる4つのアミノ酸配列が明らかにされた。同定された4つの配列は、以下のとおりである。1.EALQNGY、2.ALPAGEVLGSY、3.GAGPL、4.SVGPQAPL。実施例8OTA分解および生化学的触媒パラメーターに関する組換えアミダーゼ2の特性解析図10に示されるように、推定タンパク質コード遺伝子アミダーゼ2を保有するA.ニガーA.nigerの15種の形質転換体親株wtの細胞内画分および細胞外画分ブロスの両方を、OTAを分解するそれらの能力に関してアッセイした。図10は、驚くべきことに、GenbankAn14g02080、受託番号XP_001400834から得られた仮説タンパク質コードA.ニガーA.niger遺伝子が、OTA分解活性を有する活性酵素をコードし、この活性酵素が、細胞内および細胞外の両方に見いだされることを示している。細胞内画分または細胞外画分ブロスと共にインキュベートした後に検出可能なOTAが残存しないのですなわち、2pbbの検出可能レベル未満、最良の形質転換体が、形質転換体3、4、7、11、13、および14であることがわかる。親株wtA.ニガーA.nigerと比較して、形質転換体8、10、および15はまた、かなり高いOTA分解活性を有していた。組換えアミダーゼ2は、少なくともpH3~9でOTA分解活性であった。図11は、pH7.0で酵素活性が最も高く、続いて、pH6および8、pH5および9であることを示している。酵素が追加されていない対照と比較して、80°Cで5~30分間プレインキュベートし後に80超の活性が残存していたので、組換えアミダーゼ2は、図12からわかるように明らかに熱安定性であった。5μlの酵素と45μlの67mMリン酸ナトリウムpH7.0との反応混合物を80°Cで0~30分間インキュベートし、その後、さらなる50μlのリン酸緩衝液および25μlの1μg/mlOTAを添加し、30°Cで60分間インキュベートした。0.2酢酸v/vを含有する130μlのアセトニトリルを添加することにより、反応を停止させた。反応混合物を濾過し、HPLC分析のために注入した10μl。Ctrlは、アミダーゼが追加されていない対照であった。さらにまた、組換えアミダーゼ2は、pH6~9、70°Cでかなり安定であった。安定性は、pHの減少に伴って減少した図13。pH7.0および30°Cで活性をアッセイした。プレインキュベーション混合物は、5μlのアミダーゼ2混合物155μgタンパク質/ml、45μlの67mMリン酸緩衝液pH3、4、5、6、7、8、および9を含有していた。サンプルを70°Cで30分間プレインキュベートした。30°Cに冷却した後、エタノール中2μlの0.5mg/mlOTAおよび80μlの0.2MMops-NaOHpH7.0を添加し、反応系を30°Cで60分間インキュベートした。0.2HACを含有する130μlのアセトニトリルを添加することにより、反応を停止させ、濾過し、そして残存OTAをモニターするために5μlの注入を用いてRP-HPLCに注入した。実施例9アミダーゼ2遺伝子を保有するA.ニガーA.nigerの発酵ブロスからの組換えアミダーゼ2matの精製高OTA活性を有する形質転換体13のブロスを用いて図10、硫酸アンモニウム分画、フェニルセファロースを用いたアフィニティークロマトグラフィー、ブチルセファロースを用いたHIC、および以下で説明されるAEXにより、組換えアミダーゼ2matを精製した。1NH42SO4分画。A.ニガーA.nigerアミダーゼ2遺伝子を保有する40mlのA.ニガーA.nigerブロスに、NH42SO4を、撹拌により、40飽和になるように添加した。3500rpmで10分間遠心分離した後、上清を捕集し、NH42SO4を、撹拌により、60飽和になるように添加し、溶液を再び遠心分離した。40~60NH42SO4飽和での沈殿物に対応するペレットを、1MNH42SO4を含有する40mlの50mMトリシン-HClpH7.0に溶解させ、0.22μmフィルターで濾過した。2疎水性相互作用/アフィニティークロマトグラフィー。以上の工程から得られた濾過サンプルを、フェニルセファロースFFカラム2.6×10cmに充填した。1MNH42SO4を含有するトリシン-HClpH7.0を用いて洗浄を行った後、1M~0MのNH42SO4の50mMトリシン-HClpH7.0のリニアグラジエントを用いて、10ml/分の流量で、チューブ1つあたり10mlで、活性画分を溶出させた。Aekta精製システムを用いて精製を達成した。3陰イオン交換クロマトグラフィー。活性画分をプールし、20mMトリス/HCl、pH7.5緩衝液Aで平衡化されたPD10カラムで脱塩した。脱塩されたサンプルを緩衝液A10ml/分で平衡化されたSourceQ15カラムに適用した。カラムを緩衝液Aで洗浄し、結合されたタンパク質を、緩衝液A中の0~1MNaClのリニアグラジエントで溶出させた。グラジエント溶出時、5mlの画分を捕集した。活性画分をSDS-PAGEで解析したところ図14A、アミダーゼ2matが基本的には均一になるまで精製されたことが示唆される。活性は、SDS-PAGEで49kDaよりもわずかに低い分子質量を有するタンパク質バンドに関連付けられた図14。Maldi-tof測定による質量分析では、このタンパク質バンドは、47214Da±2の質量を有しうることが示唆される図14B。画分12のN末端配列決定では、アミダーゼ2matのN末端がSTDEAKVTI配列番号33で開始されたことが示唆される。6個のヒスチジン残基を含めて480aaのアミダーゼ2の全長は、51,983Daの分子質量を有すると推定され、一方、そのC末端に6個のヒスチジン残基を含むN末端42aaトランケートアミダーゼ2は、47,338Daの質量を有すると推測される。これらのことから、A.ニガーA.nigerブロス中に分泌されたアミダーゼ2、すなわち、アミダーゼ2matは、アミダーゼ2sig中のAla-Serのペプチド結合間で切断する培養ブロス中のシグナルペプチダーゼまたは他のペプチダーゼによりプロセシングされたアミダーゼ2であることが示唆される。実施例10アミダーゼ2の基質特異性km/Vmの決定:アミダーゼ2matのAEX工程で得られた画分を用いた場合、OTA分解酵素のKmおよびVmの速度定数は、Lineweaver-Burk計算法を用いて、それぞれ、0.29μM/分および13μMであった。オクラトキシンBの分解:AEX後に得られたアミダーゼ2matの酵素溶液を、オクラトキシンBに対して、1時間にわたり、最適条件下、同一濃度で、試験した。オクラトキシンBでの分解速度は、OTAと比較して8であった。実施例11純粋アミダーゼ2matのOTA分解活性アミダーゼ2遺伝子を保有するA.ニガーA.nigerの発酵ブロスから精製されたアミダーゼ2matのオクラトキシンAOTA分解活性を、その濃度の関数として、図15に示す。OTAの分解はアミダーゼ2mat濃度依存性であることが、図15からわかる。また、160ng/mlのアミダーゼ2mat濃度では、30分後、OTAは83低減したことがわかる。図15の直線領域から計算されたアミダーゼ2matの比活性は、1μg/ml反応混合物のOTA濃度、pH7.0および40°Cでは、タンパク質1mgあたり1分間に加水分解されるOTA換算で900ナノモルであった。材料および方法の節で説明したように、図15に対する反応を0.1Mops-NaOHpH7.0および40°Cで30分間行い、その後、0.2の酢酸を含有する等体積のアセトニトリルを添加することにより停止させ、そしてC18カラムを用いたRP-HPLCで解析した。実施例12A.ニガーA.nigerで見いだされる細胞内アミダーゼ2と細胞外アミダーゼ2との間のCa2に対する感受性の差。Amano商標リパーゼ製品から、またはアミダーゼ2遺伝子を保有するトランスジェニックA.ニガーA.nigerのブロスから、精製されたアミダーゼ2すなわち、アミダーゼ2matは、両方とも、そのOTA加水分解活性が8mMCaCl2により約40阻害されるが図16、トランスジェニックA.ニガーA.nigerのアミダーゼ2の細胞内画分アミダーゼ2sigは、8mMCaCl2ではCaCl2によりそれほど阻害されないことが観測された図17。これらの結果から、アミダーゼ2のN末端の喪失は、Ca2阻害への感受性を引き起こすことが示唆される。Ca2による阻害は、等モル量のEDTAを含む二価キレート化剤の添加により克服された。また、Amano商標リパーゼ製品のOTA分解活性は、EDTA感受性であることが知られている。この実施例からは、二価イオンを含有する系でのアミダーゼ2matの使用を、EDTAなどのキレート化剤の添加により支援しうることが示唆される。クエン酸および他の有機酸たとえばプロピオン酸は、飼料添加物として広く使用されおり、二価イオンまたは三価イオンをキレート化して、それらによるアミダーゼ2mat阻害を軽減することが可能である。一方、余分のEDTAはまた、組換えアミダーゼ2matを阻害したデータは示されていない。これらの結果から、アミダーゼ2matは、OTAの解毒に使用することができるが、二価イオンまたは三価金属イオンに対しておよびEDTAのようなキレート化剤に対して感受性があるので、ある程度の制約を受けることが示唆され、一方、アミダーゼ2sigは、二価イオンまたは三価金属イオンに対しておよびEDTAのようなキレート化剤に対してそれほど感受性がないことが見いだされたことから、A.ニガーA.nigerブロスで見いだされる分泌された、プロセシングされた、または成熟したアミダーゼ2すなわち、アミダーゼ2matではなく全長のアミダーゼ2の重要性が示唆される以下を参照されたい。実施例13A.ニガーA.nigerの細胞内画分アミダーゼ2sigから抽出されたアミダーゼ2によるOTAの分解。この実施例では、感受性の低い形態のアミダーゼ2すなわちアミダーゼ2sigを使用することの利点が示される。図17からわかるように、20mMCaCl2または20mMEDTAは、アミダーゼ2matと比較してアミダーゼ2sigに対して阻害を示すさなかった図16。これは、OTAを解毒するうえで、キレート化剤を含む添加物でアミダーゼ2sigを使用する明確な利点を提供する。反応には、60μlのmops-NaOH0.2M、pH7.0、20mMCaCl2、20mMEDTA、アミダーゼ遺伝子を保有するA.ニガーA.niger細胞から抽出されたアミダーゼ2sig0.46μgのタンパク質、2μlの25μg/mlOTA、および120μlの最終体積とするのに必要な水が含まれていた。反応を37°Cで30分間行い、0.2の酢酸を含有する150μlのアセトニトリルを添加することにより停止させた。5μlの注入でC18カラムを用いたRP-HPLCにより、OTAおよびその産物OTα=OTαを分析した。陽性対照PCは、緩衝液、アミダーゼ、およびOTA以外の添加物を含有していなかった。ブランクは、緩衝液およびOTAだけを含有していた。実施例14A.ニガーA.nigerの細胞内画分アミダーゼ2sigから抽出されたアミダーゼ2sigによるトウモロコシ粉中およびDDGS可溶性物質添加乾燥蒸留穀物残渣中のOTAの分解。トウモロコシは、OTAの主要な担体であり、さらに、バイオエタノール生産では、それは、DDGS中に担持され濃縮されうる。トウモロコシおよびDDGSは、飼料成分として広く使用される。DDGS中のマイコトキシンレベルは、飼料に添加することができるDDGSの量を制限する通常の因子である。ここでの実施例は、トウモロコシ粉中およびDDGS中のOTAを分解するアミダーゼ2sigの能力を示す。トウモロコシ粉の場合、50mgのトウモロコシ粉を、210μlの水、8μlのOTA25μg/ml、および20μlのアミダーゼ2sig3.1μgのタンパク質に添加し、混合し、そして37°Cで22時間インキュベートした。OTA濃度は、開始時の800ppbから終了時の14ppbに減少した。HPLCによるOTA分析は、以上の材料および方法の節に説明されている。DDGSの場合、NaOHで6.7にpH調整された10mlの水中に1gを懸濁させた。210μlのこのスラリーに8μlのOTA25μg/mlおよび20μlのアミダーゼ2sig3.1μgのタンパク質を添加し、混合し、そして37°Cで22時間インキュベートした。OTA濃度は、開始時の800ppbから終了時の5ppbまで減少した。HPLCによるOTA分析は、以上の材料および方法の節で説明した。実施例15アミダーゼ2matによるミルク中のOTAの分解。ミルクやチーズをはじめとする多くの食品は、OTAで汚染される可能性があることが知られている。この実施例では、アミダーゼ2matを用いてミルク中のOTAの分解を試験する。0.22μgのタンパク質を含有する、ArlaFoodsAmbaAarhus,Denmark製の0.15mlのライトミルク1.5脂肪、タンパク質3.4g、炭水化物4.7g、カルシウム120mg、リン95mg、100ml中、3μlのOTA2.5μg/ml、7.5μlの精製アミダーゼ2matアミダーゼ2遺伝子を保有するA.ニガーA.nigerのブロスに由来するを混合し、40°Cで2.5時間反応させた。OTAは、開始時の47ppbから2.5時間インキュベーション後の検出不能レベル<2ppbに減少した。HPLCによるOTA分析は、以上の材料および方法の節で説明した。実施例16トウモロコシ粉中のOTAの解毒におけるアミダーゼ2mat1.5mlエッペンドルフチューブ中の反応混合物C1~3には、60mgのトウモロコシフラワーflower、200μlのMops-NaOH0.2MpH7.0、40μlのアミダーゼ2混合物これは、アミダーゼ2遺伝子を有するA.ニガーA.niger形質転換体のブロス3、4、7、8、10、11、13、14、および15の同体積の混合物であった、20μlのOTA0.5mg/mlが含まれていた。3つの成分の全体積は、260μlであり、最終OTAは、38μg/mlまたは38ppmppm、百万分率であった。対照:対照C-4~6のチューブは、アミダーゼ調製物ブロスが水で置き換えられたこと以外はC1~3と同一であった。20時間にわたりスケーキングskakingしながら30°Cで反応を行い、その後、0.2酢酸を含有する等体積のアセトニトリル260μlの添加により反応を停止させ、OTAを抽出した。遠心分離および濾過を行った後、濾液をHPLCで分析した。HPLCの結果から、残留OTAが検出できなかったことが示唆されることから2ppb未満、アミダーゼ2matは、トウモロコシ粉中のOTAを38ppmから2ppb未満に低減させうることが示唆される。実施例17トウモロコシ-ダイズ系飼料中のOTAの解毒におけるアミダーゼ2mat。OTAで汚染されたダイズ-トウモロコシ系飼料その組成は表3に挙げられているを用いたアミダーゼ2matの試験は、トウモロコシ粉を用いた試験とまったく同じであった。すなわち、チューブS1~3実験にはブロスが入っており、一方、チューブS5~6対照ではブロスを水で置き換えた。20時間インキュベーション後、OTAレベルは、38ppmから6.6ppmに減少、すなわち、1/6に減少または82減少した。実施例18アミダーゼ2の結晶構造の解析表4に示されるようにアミダーゼ2の15種の結晶を得た。結晶AM7およびAM15のX線回折を行い、アミダーゼ2aa45~480のこれらの2種の結晶の構造を2.5Åの分解能で解析した。アミダーゼ2は、図20に示されるTimバレル構造に類似した構造および図21に示される活性部位を有することが示された。AM7結晶セットで解析された結晶構造のデータのまとめを以下に示す。Phaserを用いて5つの最も類似した構造のアンサンブルを解析することにより、構造解析を行った。アミダーゼ2配列番号1の活性部位は、少なくとも次の残基、すなわち、His111、His113、His191、Lys246、His287、His289、His307、Asp378、およびVal253を含むことが判明した。それは、触媒用および/構造用として少なくとも2つの金属イオンに収容することができ、いわゆる二核金属中心を形成する。四量体の形態で存在する酵素の1つの単量体の座標を図22に示す。実施例19。トリコデルマリーセイTrichodermareesei中での菌類種グロメレラグラミニコラGlomerellagraminicolaM1.001由来およびメタリジウムアニソプリアエMetarhiziumanisopliaeARSEF23由来のアミダーゼの発現。グロメレラグラミニコラGlomerellagraminicolaM1.001由来およびメタリジウムアニソプリアエMetarhiziumanisopliaeARSEF23由来のアミダーゼを発現するために、両方の遺伝子をT.リーセイT.reesei中で発現させるべくコドン最適化された配列として合成し、LifetechnologiesGermanyによりpDonor221ベクターInvitrogen,Carlsbad,CA,USA中にクローニングした。精製目的で6×Hisコドンを各遺伝子の3’コード領域に追加した。トリコデルマリーセイTrichodermareesei中で両方アミダーゼの発現を可能にするために、それらのコード配列を、Gateway登録商標LR組換え反応を介して、Gateway適合対象ベクターpTTT-pyrG13国際公開第2010/141779A1号パンフレットおよび国際出願PCT/US10/57531号明細書に説明されている中にクローニングした。このベクターは、対象の遺伝子の強い誘導発現を可能にするT.リーセイT.reeseicbhI由来のプロモーター領域およびターミネーター領域と、アセトアミドを唯一の窒素源としてまたはウリジンの不在下でまたはその両方のいずれでも形質転換体の増殖を引き起こすアスペルギルスニデュランスAspergillusnidulansamdSおよびpyrG選択マーカーと、菌類細胞内で非染色体プラスミドの維持を可能にするT.リーセイT.reeseiテロメア領域と、を含有する。cbhIプロモーター領域およびcbhIターミネーター領域は、バクテリオファージλ系特異的組換え部位attR1、attR2によりフランキングされた、クロラムフェニコール耐性遺伝子CmRおよび致死性大腸菌E.coli遺伝子ccdBにより分離される。そのような構成は、Gateway登録商標LR組換え反応を介して正しい向きでcbhI調節エレメントの制御下に対象の遺伝子を含有する組換え体の直接選択を可能にする。各アミダーゼ遺伝子のpEntryクローンと対象ベクターpTTT-pyrG13との間のLR組換え反応は、Invitrogenのプロトコルに従って、LRclonase商標II酵素を用いて行った。供給業者Invitrogenの説明どおり、産生された組換え産物をE.coliMaxEfficiencyDH5αに導入して形質転換させ、100μg/mlアンピシリンを含む2×YT寒天プレート16g/LBactoトリプトンDifco,USA、10g/LBacto酵母エキスDifco,USA、5g/LNaCl、16g/LBacto寒天Difco,USA上で、発現構築物pTTT-pyrG13-アミダーゼG.グラミニコラG.graminicolaおよびpTTT-pyrG13-アミダーゼM.アニソプリアM.anisopliaを含有するクローンを選択した。100μg/mlアンピシリンを含む2×YT培地で細菌培養物の増殖を行った後、単離されたプラスミドを制限分析に付し、適正な制限パターンのクローンを、4つの主要なセルラーゼcbhI、cbhII、eglI、eglIIが欠失したトリコデルマリーエイTrichodermareeei2830pyrG陰性株国際公開第2010/141779A1号パンフレットの形質転換に使用した。最終発現プラスミドpTTT-pyrG13-アミダーゼG.グラミニコラG.graminicolaおよびpTTT-pyrG13-アミダーゼM.アニソプリアエM.anisopliaeを図23~25に示す。記載のごとく、わずかな変更を行ってPEGプロトプラスト法を用いて、0.5~2μgの各発現プラスミドをT.リーセイT.reesei中に導入して形質転換を行った。プロトプラスト調製のために、150rpmで振盪しながら、トリコデルマ最少培地MM20g/Lグルコース、15g/LKH2PO4、pH4.5、5g/LNH42SO4、0.6g/LMgSO47H2O、0.6g/LCaCl22H2O、1ml1000XT.リーセイT.reesei微量元素溶液{5g/LFeSO47H2O、1.4g/LZnSO47H2O、1.6g/LMnSO4H2O、3.7g/LCoCl26H2O}中、24°Cで、胞子を16~24時間増殖させた。発芽胞子を遠心分離により収集し、菌類細胞壁の溶解のために50mg/mlのGlucanexG200NovozymesAG,Switzerland溶液で処理した。Penttilaeら[Gene611987155-164]の説明どおり、標準的方法によりプロトプラストのさらなる調製を行った。一般的には、200μlの全体積中に約1μgのDNAと1~5×107個のプロトプラストとを含有する形質転換混合物を2mlの25PEG溶液で処理し、2体積の1.2Mソルビトール/10mMTris、pH7.5/10mMCaCl2溶液で希釈し、1Mソルビトールと20mMアセトアミドとを含有する3選択トップアガロースMMNH42SO4をアセトアミドで置き換えた以外に以上に挙げたのと同一の最少培地と混合し、そしてアセトアミドを含む2選択アガロース上に注加した。プレートを28°Cで5~7日間インキュベートし、その後、形質転換体を増殖させて胞子形成を開始した。形質転換プレートから収集された胞子混合物106個の胞子/mlを用いて、産生培地1Lあたり、すなわち、グリシン産生培地4.7g/LNH42SO4、33g/L1,4-ピペラジンビスプロパンスルホン酸、pH5.5、6.0g/Lグリシン、5.0g/LKH2PO4、1.0g/LCaCl22H2O、1.0g/LMgSO47H2O、2.5ml/L400×T.リーセイT.reesei微量元素、20g/Lグルコース、6.5g/Lソホロースの入った振盪フラスコに接種した。対照として、10mMウリジンの存在下であること以外は同一条件下で、T.リーセイT.reeseiレシピエント2830株を増殖させた。30°Cおよび200rpmで5日発酵させた後、培養物を収集し、細胞外抽出物および細胞内抽出物の両方を酵素分析に付した。実施例20。アスペルギルスニガーAspergillusnigerGICC2445株中でのアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeアミダーゼの発現アスペルギルスニガーAspergillusniger中でA.オリザエA.oryzae由来の推定アミダーゼ遺伝子を発現させるために、後続のGateway法によるクローニングのためのattB1およびこattB2部位を5’末端および3’末端に含む遺伝子特異的プライマーを用いて、アミダーゼコード配列をアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeRIB40ゲノムDNAFungalGeneticsStockCollection,FGSC,USAから入手したから増幅した。それに加えて、リバースプライマーは、発現タンパク質の精製を容易にするために、6xHisをコードするトリプレットを含有する。以下のプライマーセット、すなわち、フォワード5’GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTCACCATGCACCGGATGCTCACAGACGACAGAC3’リバース5’ACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGTGATTTAATCAGCATGCCGCCACGC3’を使用した。供給業者により推奨された標準的条件下で高忠実度PhusionDNAポリメラーゼFinnzymesOY,Espoo,Finlandにより、すべてのPCR反応を増幅させた。0.8のアガロースゲル上で増幅DNA断片を分離した後、Nucleospin登録商標ExtractPCR精製キットMacherey-NagelGmbHco.KG,Duren,Germanyで精製し、供給業者の推奨に従ってpDonor221ベクターInvitrogen,Carlsbad,CA,USAで150ngを組み換えた。50μg/mlカナマイシンを含む2xYT寒天プレート上で、A.オリザエA.oryzaeアミダーゼを含有するpEntryクローンを含む大腸菌E.coliDH5αコロニーを選択した。細菌細胞から単離されたプラスミドをその制限消化パターンによりインサートの存在に関して解析し、ABI3100配列アナライザーAppliedBiosystemsを用いて配列解析により検査した。InvitrogenCarlsbad,CA,USAのプロトコルに従って、後続のGatewayLR反応を介して、米国特許第07459299号明細書に記載の対象ベクターpRAXdest2中にクローニングすべく、得られたpEntry-アミダーゼA.オリザエA.oryzaeプラスミドを使用した。供給業者Invitrogenの説明どおり、形成された組換え産物を大腸菌E.coliMaxEfficiencyDH5αに導入して形質転換させ、100μg/mlアンピシリンを含む2xYT寒天プレート16g/LBactoトリプトンDifco,USA、10g/LBacto酵母エキスDifco,USA、5g/LNaCl、16g/LBacto寒天Difco,USA上で、発現構築物pRAX-アミダーゼA.オリザエA.oryzae図25を含有するクローンを選択した。100μg/mlアンピシリンを含む2xYT培地中で細菌培養物の増殖を行った後、単離されたプラスミドを制限分析に付し、続いて、ABI3100配列アナライザーAppliedBiosystemsを用いて配列決定を行った。細菌配列以外に、最終発現プラスミドpRAX2-アミダーゼA.オリザエA.oryzaeは、A.ニガーA.nigerグルコアミラーゼプロモーターおよびターミネーターの制御下のA.オリザエA.oryzaeアミダーゼコード領域と、選択マーカーとしてアスペルギルスニデュランスAspergillusnidulanspyrG遺伝子と、菌類細胞内での自律複製のためのA.ニデュランスA.nidulansAMA1配列と、を含有する。0.5~2μgのこのプラスミドを、当技術分野で公知のまたは米国特許第0745929号明細書に記載の通常の形質転換手順を用いて、Genencorにより開発されたA.ニガーバルアワモリA.nigervarawamoriGICC2445株に導入して形質転換させた。この株は、内因性グルコアミラーゼglaA遺伝子が欠失しており、ウリジン原栄養性に関する形質転換体の選択を可能にする突然変異をpyrG遺伝子中に有する。A.ニガーA.niger形質転換体を37°Cで4~5日間にわたりMM培地窒素源としてアセトアミドの代わりに10mMNH4Clを使用した以外は、T.リーセイT.reesei形質転換に使用したのと同一の最少培地上で増殖させ、さまざまな形質転換プレートの胞子の全集団106個の胞子/mlを用いて、産生培地1Lあたり、すなわち、12gトリプトン、8gソイトン、15gNH42SO4、12.1gNaH2PO4H2O、2.19gNa2HPO42H2O、1gMgSO47H2O、1mlTween80、150gマルトース、pH5.8の入った振盪フラスコに接種した。30°Cおよび200rpmで5日発酵させた後、培養物を収集し、細胞外抽出物および細胞内抽出物の両方を酵素分析に付した。実施例21。オクラトキシン分解用の3種の追加の菌類由来のアミダーゼグロメレラグラミニコラGlomerellagraminicolaGMGM、メタリジウムアニソプリアエMetarhiziumanisopliae、およびアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeに由来する推定アミダーゼ配列はすべて、オクラトキシンAを分解した。表6は、トリコデルマリーセイTrichodermareeseiおよびアスペルギルスニガーAspergillusnigerで細胞内発現された、グロメレラグラミニコラGlomerellagraminicola、メタリジウムアニソプリアエMetarhiziumanisopliae、およびアスペルギルスオリザエAspergillusoryzaeに由来する3つの菌類アミダーゼの活性を示している。基質としてOTAを用いた反応混合物は、75μlのリン酸液67mM、pH7と、5μlのOTA2.4μg/mlと、20μlの細胞内無細胞画分と、で構成した。反応を23°Cで17時間行い、0.15mlのアセトニトリルを添加することにより停止させ、そして5μlの注入量でHPLCにより解析した。表中のデータから、G.グラミコラG.gramicola由来のアミダーゼは、オクラトキシンに対して最も高い活性を有し、一方、A.オリザエA.oryzae由来のアミダーゼは、この基質に対してより低い活性を有することが示唆される。実施例22推定アミダーゼ配列の配列比較配列比較は、デフォルトパラメーターギャップ生成ペナルティー-10、ギャップ伸長ペナルティー0.1を用いてAlignXVectorNTIプログラムInvitrogenCorporationによりポリペプチド配列の全長にわたり行った。表7に見られるように、推定アミダーゼは、低い全相同性を有すると思われる。しかしながら、図26からわかるように、配列番号5~11、13、14、および15で示されるポリペプチドはすべて、アミダーゼ2配列番号1および3と同一のモチーフを有する。Multalinバージョン5.4.1F.CORPET,1988,Nucl.AcidsRes.,16:10881-10890を用いて、配列のアライメントを行った。使用したパラメーター:blosum62、ギャップ加重:12、ギャップ長加重:2、コンセンサスレベル:高=90低=50、コンセンサス記号:はIVのいずれかであり、はLMのいずれかであり、はFYのいずれかであり、はNDQEBZのいずれかである。配列の説明およびそれらのウェブ受託番号括弧内:さらに、実施例21表6に示されるように、配列番号13~15は、オクラトキシン分解活性を有する。11個の配列の共通配列モチーフは、以下のコンセンサスを有する。1l/m-P-G-l/m-w/i-D-c/v/s/a-H-x-H-f/y/l-xG式中、2個のHis残基は、活性部位上に存在する、2G-y/f-T、3G-t/a/s/v/r-i/f/a-x-G-P、4G-H-g/s-D式中、His残基、活性部位上に存在する、5D-G-v/e-x-e/d/g-C-x-x-a/g/t-v/a-R-x-q/m/a-l/i/v-R-r/h/c-g/n-A-k/r/t/e/d-x-I-K式中、Lys残基は、活性部位上に存在する、6G-G-V-l/m/v/g-S-x-x-D-x-P式中、Val残基は、活性部位上に存在する、7V-a/s/h-A-H-c/v/a-h/q-G-k/r-x-G式中、2個のHis残基は、活性部位上に存在する、8H-g/v/a-s/t/i-y/f/e-l/a/i-D式中、His残基は、活性部位上に存在する、9G-V-x-I-a/v-l/a-G-T-D、式中、Asp残基は、活性部位上に存在する。配列番号1は、A.ニガーA.niger由来のアミダーゼ2であり、配列5は、A.ニガーA.niger由来の仮説タンパク質XP_001400981であり、配列番号6は、A.フラバスA.flavus由来の仮説タンパク質XP_002385313であり、配列番号7は、タラロマイセススティピタタスTalaromycesstipitatus由来の仮説タンパク質XP_002477972であり、配列番号8は、ニューロスポラクラッサNeurosporacrassa由来の仮説タンパク質XP_962238であり、配列番号9は、ストレプトマイセスロゼオスポラスStreptomycesroseosporus由来の推定アミドヒドロラーゼZP_04712156であり、配列番号10は、サーモトガレティンガエThermotogalettingae由来の推定アミドヒドロラーゼYP_001470371であり、配列番号11は、サリニスポラアレニコラSalinisporaarenicola由来の推定アミドヒドロラーゼYP_001536995であり、配列番号13は、グロメレラグラミニコラGlomerellagraminicola由来の推定アミドヒドロラーゼEFQ25792であり、配列番号14は、メタリジウムアニソプリアエMetarhiziumanisopliae由来の推定アミドヒドロラーゼEFZ00058であり、配列番号15は、アスペルギルスオリザエAspergillusoryzae由来の仮説タンパク質XP_001826758である。実施例23配列番号1とオクラトキシン分解活性を有するカルボキシペプチダーゼとの配列比較低いオクラトキシン分解活性を有する2種のカルボキシペプチダーゼ、すなわち、ウシカルボキシペプチダーゼAおよび酵母カルボキシペプチダーゼYは、公知であるLuisAbrunhosa,RobertR.M.PatersonandArmandoVenancio,BiodegradationofOchratoxinAforFoodandFeedDecontamination,Toxins2010,2,1078-1099。これらの酵素のオクラトキシン分解活性は、確認されている。しかしながら、図27からわかるように、これらの酵素は、配列番号1に対して相同性を示さず、オクラトキシン分解能力に関連する9個のモチーフのはいずれをも含有しない。さらに、これらの酵素は、アミダーゼ型Timバレル構造を有していない。配列リスト配列番号1A.ニガーA.niger由来のアミダーゼ2sig配列番号2配列タイプ:DNA、DNA名:アミダーゼ2を含有するDNA遺伝子、長さ:1443、生物:アスペルギルスニガーAspergillusniger配列番号3配列タイプ:タンパク質、タンパク質名:アミダーゼ2mat、長さ:438、生物:アスペルギルスニガーAspergillusniger配列番号4アミダーゼ2A.ニガーA.nigerc末端6H配列番号5配列タイプ:タンパク質、タンパク質名:推定アミダーゼ2相同体、長さ:420、生物:アスペルギルスニガーAspergillusniger配列番号6配列タイプ:タンパク質、タンパク質名:推定アミダーゼ2相同体、長さ:419、生物:アスペルギルスフラバスAspergillusflavus配列番号7配列タイプ:タンパク質、タンパク質名:推定アミダーゼ2相同体、長さ:405、生物:タラロマイセススティピタタスTalaromycesstipitatus配列番号8配列タイプ:タンパク質、タンパク質名:推定アミダーゼ2相同体、長さ:440、生物:ニューロスポラクラッサNeurosporacrassa配列番号9配列タイプ:タンパク質、タンパク質名:推定アミダーゼ2相同体、長さ:413、生物:ストレプトマイセスロゼオスポラスStreptomycesroseosporus配列番号10配列タイプ:タンパク質、タンパク質名称:推定アミダーゼ2相同体、長さ:407、生物:サーモトガレティンガエThermotogalettingae配列番号11配列タイプ:タンパク質、タンパク質名称:推定アミダーゼ2相同体、長さ:408、生物:サリニスポラアレニコラSalinisporaarenicola配列番号12配列タイプ:タンパク質、タンパク質名:pepAd2プロテアーゼ、長さ:480、生物:アスペルギルスニガーAspergillusniger配列番号13生物グロメレラグラミニコラGlomerellagraminicolaM1.001菌類、472aa配列番号14生物メタリジウムアニソプリアエMetarhiziumanisopliaeARSEF23.485aa、配列番号15A.オリザエA.oryzaeアミドヒドロラーゼ配列番号16ウシカルボキシペプチダーゼA419aa。受託番号:NP_777175。Sigma製品番号C0261。配列番号17パン酵母サッカロマイセスセレビシアエSaccharomycescerevisiae由来のカルボキシペプチダーゼY、532aa、受託番号:EDV11788。Sigma製品番号C3888。文献リスト1Abrunhosa,L.andVenancio,A.2007.IsolationandpurificationofanenzymehydrolyzingochratoxinAfromAspergillusniger.Biotechnol.Lett.29:1909-19142Abrunhosa,L.,Paterson,R.R.M.andVenancio,A.2010.BiodegradationofOchratoxinAforFoodandFeedDecontamination.Toxins,2:1078-10993Fraser,J.A.,Davis,M.A.,andHynes,M.J.2001.TheFormamidaseGeneofAspergillusnidulans:RegulationbyNitrogenMetaboliteRepressionandTranscriptionalInterferencebyanOverlappingUpstreamGene.Genetics157:191314Jelinek,C.F.,Pohland,A.E.,andWood,G.E.1989.WorldwideOccurrenceofMycotoxinsinFoodsandFeeds-AnUpdate.JournaloftheAssociationofOfficialAnalyticalChemists72:223-2305Li,S.,Marquardt,R.R.,Frohlich,A.A.,Vitti,T.G.,andCrow,G.1997.PharmacokineticsofochratoxinAanditsmetabolitesinrats.Toxicol.Appl.Pharmacol.145:82-906Pitout,M.J.1969.ThehydrolysisofochratoxinAbysomeproteolyticenzymes.Biochem.Pharmacol.18:485-4917Stander,M.A.,Bornscheuer,U.T.,Henke,E.,andSteyn,P.S.2000.ScreeningofcommercialhydrolasesforthedegradationofochratoxinA.J.Agric.FoodChem.48:5736-57398VanderMerwe,K.J.,Steyn,P.S.,andFourie,L.1965.Mycotoxins.II.TheconstitutionofochratoxinsA,B,andC,metabolitesofAspergillusochraceusWilh.J.Chem.Soc.[Perkin1]7083-70889WHO/FAO1998.Foodirradiation.ATechniqueforPreservingandImprovingtheSafetyofFood.WorldHealthOrganizationincollaborationwiththeFoodandAgriculturalOrganization,Geneva10Wang,H2010.Increasedproductionofasparticproteasesinfilamentousfungalcells.WO2010014574A2"