"少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を含み、両方の抗体の、甲状腺刺激ホルモンTSHに対する解離定数Kdが1nM未満又は約1nM、たとえば、0.5nM以下又は0.15nM以下であり、捕捉抗体のKdが卵胞刺激ホルモンFSH、黄体形成ホルモンLH及び絨毛性ゴナドトロピンCGに対して、それぞれ、1000nM超、1000nM超、及び500nM超であり、単一洗浄ステップを用いる甲状腺刺激ホルモンTSHサンドイッチ免疫アッセイ。捕捉抗体及びシグナル抗体がそれぞれTSHに対して0.5nM以下のKdを有する、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体及びシグナル抗体がそれぞれTSHに対して0.15nM以下のKdを有する、請求項1に記載の免疫アッセイ。FSH、LH及びCGに対するシグナル抗体のKdが、それぞれ、250nM超、35nM超及び35nM超である、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体が、6000超の第1のKd比、KdFSH対KdTSHを有し、シグナル抗体、が1500超の第2のKd比、KdFSH対KdTSHを有する、請求項1に記載の免疫アッセイ。第1のKd比が3000超であり、第2のKd比が1800超である、請求項1に記載の免疫アッセイ。第1のKd比が1500~50000に及び、第2のKd比が1500~50000に及ぶ、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体が1000超のKdFSH、1000nM超のKdLH及び500nM超のKdCGを有し、シグナル抗体が300nM超のKdFSH、35nM超のKdLH及び35nM超のKdCGを有する、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体が1000~5000nMのKdFSH、1000~5000nMのKdLH及び500~5000nMのKdCGを有し、シグナル抗体が250~5000nMのKdFSH、35~5000nMのKdLH及び35~5000nMのKdCGを有する、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体及びシグナル抗体が、それぞれ、TSHのTSH-βサブユニット上の少なくとも2つの異なるエピトープに結合することができる、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体及びシグナル抗体がエピトープ適合性抗体である、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体及びシグナル抗体が、以下の捕捉/シグナル抗体対5409/T25C及びT25C/5409から選択される、請求項1に記載の免疫アッセイ。捕捉抗体及びシグナル抗体が、以下の捕捉/シグナル抗体対5409/10-1179-456及び10-1179-456/5409から選択される、請求項1に記載の免疫アッセイ。TSH免疫アッセイを実施するための方法であって、a液体試料を、TSHに対する捕捉抗体を有する免疫センサーを導管中に備えた装置に挿入するステップ、bシグナル抗体を前記液体試料に溶解させるステップ、c前記捕捉抗体、TSH及び前記シグナル抗体を含むサンドイッチ複合体を前記免疫センサー上で形成するステップ、d非複合体化シグナル抗体を洗浄液でセンサーから1回以下の洗浄ステップで洗浄するステップ、並びにe前記複合体化シグナル抗体に伴うシグナルを検出するステップを含み、捕捉抗体及びシグナル抗体それぞれがTSHに対して1nM以下の解離定数Kdを有する、上記方法。捕捉抗体及びシグナル抗体それぞれがTSHに対して0.5nM以下のKdを有する、請求項14に記載の方法。捕捉抗体及びシグナル抗体それぞれがTSHに対して0.15nM以下のKdを有する、請求項14に記載の方法。捕捉抗体及びシグナル抗体それぞれがTSHに対して0.15nM以下の解離定数Kdを有し、卵胞刺激ホルモンFSH、黄体形成ホルモンLH及び絨毛性ゴナドトロピンCGに対する捕捉抗体Kdが、それぞれ、1000nM超、1000nM超及び500nM超であり、FSH、LH及びCGに対するシグナル抗体Kdが、それぞれ、250nM超、35nM超及び35nM超である、請求項14に記載の方法。捕捉抗体が、6000超の第1のKd比、KdFSH対KdTSHを有し、シグナル抗体が、1500超の第2のKd比、KdFSH対KdTSHを有する、請求項14に記載の方法。サンドイッチ複合体が、前記捕捉抗体及び前記シグナル抗体と液体試料との実質的に非連続的な接触により形成される、請求項14に記載の方法。サンドイッチ複合体が、FSH、LH及びCGのうちの1つ又は複数との交差反応を軽減するための1つ又は複数の介在する洗浄ステップなしで形成される、請求項14に記載の方法。液体試料が、希釈された血液試料、非希釈血液試料、希釈された血漿試料又は非希釈血漿試料である、請求項14に記載の方法。捕捉抗体がマウスモノクローナル抗体Biospacificカタログ番号5409SPTNE-5を含み、シグナル抗体がマウスモノクローナル抗体Fitzgeraldカタログ番号10-T25Cを含む、請求項14に記載の方法。捕捉抗体がビーズに共有結合している、請求項14に記載の方法。シグナル抗体が、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ及び蛍光部分からなる群から選択されるレポーター分子にコンジュゲートしている、請求項14に記載の方法。検出ステップが電気化学的である、請求項14に記載の方法。検出ステップが光学的である、請求項14に記載の方法。試料及び非結合シグナル抗体を捕捉抗体から取り除くための単一洗浄ステップを含み、洗浄液が、レポーター分子の基質も含む、請求項14に記載の方法。計量チャンバーで液体試料を計量して1~500μLの容積を有する計量された試料を作るステップをさらに含む、請求項14に記載の方法。免疫センサーと流体連通している洗浄液ポーチを破裂させて、前記導管に5~500μLの洗浄液を放出するステップをさらに含む、請求項14に記載の方法。前記洗浄液中に複数の空気セグメントを作るステップをさらに含む、請求項14に記載の方法。捕捉抗体及びシグナル抗体が、それぞれ、TSHのTSH-βサブユニット上の少なくとも2つの異なるエピトープに結合することができる、請求項14に記載の方法。捕捉抗体及びシグナル抗体がエピトープ適合性抗体である、請求項14に記載の方法。捕捉抗体及びシグナル抗体が、以下の捕捉/シグナル抗体対5409/T25C及びT25C/5409から選択される、請求項14に記載の方法。捕捉抗体及びシグナル抗体が、以下の捕捉/シグナル抗体対5409/10-1179-456及び10-1179-456/5409から選択される、請求項14に記載の方法。非連続アッセイ及び低洗浄液サイクルのアッセイのための甲状腺刺激ホルモンTSHサンドイッチ免疫アッセイ抗体選択方法であって、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を選択するステップを含み、捕捉抗体の、卵胞刺激ホルモンFSH、黄体形成ホルモンLH及び絨毛性ゴナドトロピンCGに対するKdが、それぞれ、1000nM超、1000nM超及び500nM超であり、シグナル抗体の、TSHに対するKdが約1nM未満であり、FSH、LH及びCGに対するKdが、それぞれ、250nM超、35nM超及び35nM超である、上記方法。捕捉抗体及びシグナル抗体それぞれがTSHに対して0.5nM以下のKdを有する、請求項35に記載の方法。捕捉抗体及びシグナル抗体それぞれがTSHに対して0.15nM以下のKdを有する、請求項35に記載の方法。本発明は、高度に関連する内在性内分泌糖タンパク質ホルモンである、卵胞刺激ホルモンFSH、黄体形成ホルモンLH及び絨毛性ゴナドトロピンCGにより引き起こされる干渉を最小限に抑えつつ、液体試料において甲状腺刺激ホルモンTSHを検出するための装置、免疫アッセイ及び方法に関する。一実施形態では、本発明は、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を含み、TSHに対する両方の抗体の解離定数Kdが1nM未満又は約1nM、たとえば、0.5nM以下又は0.15nM以下であり、捕捉抗体のKdが卵胞刺激ホルモンFSHに対しては1000nM超、2500nM超又は3000nM超であり、黄体形成ホルモンLHに対しては500nM超、1000nM超又は3000nM超であり、絨毛性ゴナドトロピンCGに対しては200nM超、500nM超又は2500nM超であり、単一洗浄ステップを用いる甲状腺刺激ホルモンTSHサンドイッチ免疫アッセイに関する。別の実施形態では、本発明は、TSH免疫アッセイを実施するための方法であって、a液体試料を、TSHに対する捕捉抗体を有する免疫センサーを導管中に備えた装置に挿入するステップ、bシグナル抗体を前記液体試料に溶解させるステップ、c前記捕捉抗体、TSH及び前記シグナル抗体を含むサンドイッチ複合体を前記免疫センサー上で形成するステップ、d非複合体化シグナル抗体を洗浄液でセンサーから1回以下の洗浄ステップで洗浄するステップ、並びにe前記複合体化シグナル抗体に伴うシグナルを検出するステップを含む上記方法に関する。好ましくは、捕捉抗体とシグナル抗体はそれぞれ、TSHに対して1nM以下、0.5nM以下又は0.15nM以下の解離定数Kdを有する。サンドイッチ複合体は好ましくは、前記捕捉抗体及び前記シグナル抗体と液体試料との実質的に非連続的な接触により形成される。サンドイッチ複合体は好ましくは、FSH、LH及びCGのうちの1つ又は複数との交差反応を軽減するための1つ又は複数の介在する洗浄ステップなしで形成される。この方法は好ましくは、捕捉抗体から試料及び非結合シグナル抗体を取り除く単一洗浄ステップを含み、洗浄液はレポーター分子に対する基質も含む。この方法は計量チャンバーで液体試料を計量して、1~500μLの容積を有する計量された試料を作るステップをさらに含んでいてもよい。場合により、この方法は、免疫センサーと流体連通している洗浄液ポーチを破裂させて、前記導管に5~500μLの洗浄液を放出するステップを含む。場合により、洗浄液中に複数の空気セグメントを作って免疫アッセイの洗浄を促進させてもよい。別の実施形態では、本発明は、非連続アッセイ及び低洗浄液サイクルのアッセイのためのTSHサンドイッチ免疫アッセイ抗体選択方法であって、少なくとも1つの捕捉抗体と少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を選択するステップを含み、捕捉抗体の、TSHに対する解離定数Kdが約1nM未満、0.5nM未満又は0.15nM未満であり、捕捉抗体のKd値がFSHに対しては1000nM超、2500nM超又は3000nM超であり、LHに対しては500nM超、1000nM超又は3000nM超であり、CGに対しては200nM超、500nM超又は2500nM超であり、シグナル抗体の、TSHに対するKdが約1nM未満、0.5nM未満又は0.15nM未満であり、シグナル抗体のKdがFSHに対しては250nM超又は1000nM超であり、LHに対しては35nM超、200nM超又は250nM超であり、CGに対しては35nM超又は250nM超である、上記方法に関する。好ましい態様では、シグナル抗体のKdはFSHに対して好ましくは、250nM超又は1000nM超であり、LHに対しては好ましくは、35nM超、200nM超又は250nM超又は1000nM超であり、CGに対しては好ましくは、35nM超又は250nM超である。場合により、捕捉抗体のKd値はFSHに対しては好ましくは、1000nM超、好ましくは2500nM超又は3000nM超であり、LHに対しては500nM超、1000nM超又は3000nM超であり、CGに対しては好ましくは、200nM超、500nM超又は2500nM超である。範囲に関しては、捕捉抗体は場合により1000~5000nMのKdFSH、500~5000nMのKdLH及び200~5000nMのKdCGを有しており、シグナル抗体は好ましくは、250~5000nMのKdFSH、200~5000nMのKdLH及び35~5000nMのKdCGを有している。さらに好ましくは、捕捉抗体は1000~5000nMのKdLH及び500~5000nMのKdCGを有し、さらに好ましくは、シグナル抗体は35~5000nMのKdLHを有している。用いられる液体試料は好ましくは、希釈された血液試料、非希釈血液試料、希釈された血漿試料又は非希釈血漿試料を含む。捕捉抗体及びシグナル抗体はそれぞれが好ましくは、TSHのTSH-βサブユニット上の少なくとも2つの異なるエピトープに結合することができる。したがって、捕捉抗体及びシグナル抗体は好ましくは、エピトープ適合性抗体である。特に好ましい実施形態では、捕捉抗体及びシグナル抗体は次の捕捉/シグナル抗体対、5409/T25C及びT25C/5409から選択される。たとえば、捕捉抗体はマウスモノクローナル抗体Biospacificカタログ番号5409SPTNE-5を含んでいてもよく、シグナル抗体はマウスモノクローナル抗体Fitzgeraldカタログ番号10-T25Cを含んでいてもよい。一態様では、捕捉抗体は2500超、たとえば、3000超の第1のKd比、KdFSH対KdTSHを有し、シグナル抗体は1500超、たとえば、1800超の第2のKd比、KdFSH対KdTSHを有する。場合により、第1のKd比は1500~50000に及び、第2のKd比は1500~50000に及ぶ。さらに好ましくは、捕捉抗体は6000超の第1のKd比、KdFSH対KdTSHを有する。本発明は、以下の非限定的図に照らしてみればさらによく理解されることになる。序論様々な実施形態で、本発明は、好ましくは洗浄ステップが限られている又は洗浄ステップがない、干渉物質の存在下でサンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイELISAを実施するための免疫アッセイ、装置及び方法に関する。本発明は、これらの夾雑干渉物質の存在下で正確なアッセイ結果を可能にして有益である。第1の実施形態では、本発明は甲状腺刺激ホルモンTSHサンドイッチ免疫アッセイを行うための装置及び方法並びにそのような免疫アッセイ用の抗体を選択するための方法に関する。第2の実施形態では、本発明は、免疫アッセイに、特にTSH免疫アッセイに、並びに単一洗浄ステップを用いる又は洗浄ステップなしの関連する装置及び方法に関する。第3の実施形態では、本発明は、免疫アッセイに、特にTSH免疫アッセイに、並びにそのような夾雑物に伴う干渉を抑える又は取り除く内在性夾雑物に対する抗体で被覆されたスカベンジャービーズscavengerbeadを用いる関連する装置及び方法に関する。代わりに、そのような抗体はカートリッジ表面に共有結合していてもよいし、反応媒体中の遊離の抗体を含んでいてもよい。場合により、これらの実施形態のうちの1つ又は複数を互いに組み合わせてもよい。TSH免疫アッセイ及びTSH免疫アッセイ用の抗体を選択するための方法第1の実施形態では、本発明は、TSHについての免疫アッセイに並びにそのような免疫アッセイを行うための関連する装置及び方法に関する。本発明の免疫アッセイは、高度に関連する内在性内分泌糖タンパク質ホルモンである、卵胞刺激ホルモンFSH、黄体形成ホルモンLH及び絨毛性ゴナドトロピンCGが存在するにも関わらずTSHの正確な検出を提供して有益である。ある種の疾患状態では、これらの関連ホルモンは著しく高濃度で存在することがある。低洗浄容積プラットフォームである、i-STAT登録商標免疫アッセイプラットフォームAbbottPointofCareInc.、Princeton、NJ、USAに関するアッセイが本明細書に例示されている。共同所有されている米国特許第7,419,821号を参照されたい。この特許の全体は参照により本明細書に組み込まれる。本特許明細書では、用語低洗浄は、典型的には数十マイクロリットルから約5ミリリットルの桁で比較的少量の洗浄液を含むポーチを組み込んでいる有効な使い捨て検査装置又は類似する量の洗浄液が、装置が結合している機器から供給される類似の装置を含むと解釈される。いくつかの例となる実施形態では、装置と方法は5~500μL、たとえば、25~250μL又は50~150μL、好ましくは約100μLの洗浄量を用いる。本発明は、捕捉抗体、分析物及びシグナル抗体が混合されてサンドイッチ免疫アッセイを形成し、次に洗浄液を使用して、非結合分析物及び非結合シグナル抗体を含む試料を、たとえば磁性があってもよいビーズ上又はセンサー上などの、好ましくはある方法で固定化されている捕捉抗体上に形成されているサンドイッチから取り除くアッセイという構想も含む。これらの種類の装置及びシステムは一般には患者ケアの時点で検査することと関連している。別の態様では、本発明は、洗浄能力が限られているシステムにおいてサンドイッチELISAアッセイを実施するための抗体を選択する方法に関する。具体的には、交差反応性が減少した抗体が選択され、このことが今度はサンドイッチELISAにおける分析特異性を増加させる。これらの特徴は、低洗浄サンドイッチELISAアッセイにおいては特に有用である。特定の例として、内在性内分泌糖タンパク質ホルモンであるFSH、LH及びCGの存在下でi-STAT登録商標カートリッジを使用するTSHアッセイの性能は本明細書において実証されている。これとは対照的に、TSHをアッセイする典型的先行市販システムは複数の洗浄ステップを利用して、ある種の疾患状態下では高モル濃度で存在することができる内在性内分泌糖タンパク質ホルモンの存在を減少させる。しかし、これらの複数の洗浄システムは本明細書において開示されるこれらの特異性特徴を有する抗体の使用からも利益を得ること、また、本発明は限られた洗浄能力を用いる免疫アッセイシステム又は装置に限定されると考えるべきではないことは明らかである。好ましい実施形態では、2種類のサンドイッチ抗体は、主にTSH分子のベータサブユニット又は所望の程度の特異性を示しているこの領域と重複しているエピトープに対して選択される。これら2種類のサンドイッチ抗体の理想的特徴は、TSHのベータサブユニットのエピトープ好ましくは異なるエピトープを認識し、TSHのアルファサブユニットだけには限られないことである。この認識は、アルファサブユニットとベータサブユニットの両方にまたがるエピトープであって、TSHに対し高親和性を、その他の交差反応性種に対しては低親和性を示す上記エピトープを含むことができることが企図されている。さらに、これらの抗体は好ましくは、TSH分子には低Kdを示し、その他の内在性糖タンパク質ホルモンであるFSH、LH及びCGには高Kd値を有する。本明細書で使用されるように、用語解離定数又はKdとは、一般的反応の平衡定数のことであり、Aは抗体、Bは分析物、すなわち抗原である。この反応では、解離定数又はKd値は、として表される。一般的には、解離定数が低いほど、抗体Aが分析物Bに対して持つ親和性又は結合の程度はそれだけ大きくなる。これらの動力学値を決定する方法は当技術分野では周知である。たとえば、GoodrichKugel、2007、BindingandKineticsforMolecularBiologists、ColdSpringHarbourLaboratoryPress、ColdSpringHarbour、NewYorkを参照されたい。特に好ましい実施形態では、捕捉抗体及びシグナル抗体はTSHに対して高親和性低Kdを示す。低濃度では弱いシグナルを出す抗体は高可変性ノイズを有し、さらに高い測定される交差反応性と識別するのが困難になる。これらの抗体は候補抗体として選択すべきではない。特に好ましい実施形態では、TSH抗原に対して1nM以下、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下のKdを有する抗体が選択されて、本発明の免疫アッセイのための捕捉抗体及び/又はシグナル抗体として機能する。サンドイッチハイブリダイゼーションのために選択される2つ以上の抗体についての別の好ましい実施形態では、FSH、LH及びCGに対する最大のKd値を有する抗体は捕捉抗体として使用されることになる。別の態様では、2つの抗体が捕捉抗体及びシグナル抗体の候補として同定される場合、大きいほうのKd値たとえば、5~1000、20~100又は20~50大きいを有する抗体は捕捉抗体として好まれる場合がある。どちらの場合にも、TSHに対して低Kd値、たとえば1nM以下、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下を有することに加えて、抗体捕捉抗体及びシグナル抗体は、干渉する内在性糖タンパク質ホルモンであるFSH、LH及びCGのそれぞれに対しては比較的高Kd値を有することが望ましい。特に好ましい実施形態では、捕捉抗体は、1000nM超、2500nM超、3000nM超又は4000nM超のKdFSH、500nM超、800nM超、1000nM超、2500nM超又は4000nM超のKdLH、及び200nM超、500nM超、2500nM超又は4000nM超のKdCGを有する。範囲に関しては、捕捉抗体は、場合により1000~5000nM、1500~4000nM又は2500~3000nMに及ぶKdFSH、500~5000nM、750~1200nM又は800~1000nM、1000~5000nM又は1500~4000nMに及ぶKdLH及び35~5000nM、200~5000nM、210~2500nM又は220~500nMに及ぶKdCGを有する。同様に、シグナル抗体は好ましくは、250nM超、1000nM超又は4000nM超のKdFSH、35nM超、200nM超、250nM超、1000nM超、2500nM超又は4000nM超のKdLH、及び35nM超、250nM超又は2500nM超のKdCGを有する。範囲に関しては、シグナル抗体は、場合により250~5000nM、250~2500nM又は250~500nMに及ぶKdFSH、35~5000nM、200~5000nM、35~2500nM、200~2500nM、35~1000nM又は200~1000nMに及ぶKdLH及び35~5000nM、35~2500nM又は35~1000nMに及ぶKdCGを有する。この方法の特定の実施形態では、TSH結合種は好ましくは、抗体、抗体の断片たとえば、Fab断片、一本鎖抗体、アプタマー、受容体及び他の特異的結合種から選択される。本発明の好ましい実施形態は、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を含み、TSHに対する両方の抗体のKdが約1nM未満又は以下、たとえば、0.5nM以下、0.15以下又は0.1nM以下であり、FSH、LH及びCGに対する捕捉抗体のKdがそれぞれ約2500超、約500超及び約200nM超であり、FSH、LH及びCGに対するシグナル抗体のKdがそれぞれ約250超、約200超及び約35nM超である、TSHサンドイッチ免疫アッセイに取り組む。さらに好ましくは、CGに対する捕捉抗体のKdは約35nM超であり、LHに対するシグナル抗体のKdは約35nM超である。これに関連して、エピトープ適合性は、上記のように、対象の分析物上の異なるエピトープに選択的に結合することができることを意味する。TSH免疫アッセイでは、抗体は好ましくは、少なくとも一部がTSHのベータサブユニット上にある異なるエピトープに選択的に結合することができる。FSH、LH及びCGと比べたTSHに対する捕捉抗体及びシグナル抗体の相対的選択性は、Kd比、すなわちKd内分泌糖タンパク質ホルモン類似体、たとえばFSH、LH、CG又はその平均対KdTSHの比の点からも特徴付けることができる。この態様では、Kd比値が大きいほど、分母の内分泌糖タンパク質ホルモン類似体と比べたTSHに選択的に結合する抗体の能力はそれだけ大きくなる。一態様では、たとえば、固定化された抗体は、2500超、たとえば、3000超又は5000超の第1のKd比、KdFSH対KdTSHを有する。さらに又は代わりに、シグナル抗体は、1500超、たとえば、1800超又は2000超の第2の解離定数比、KdFSH対KdTSHを有する場合がある。範囲に関しては、固定化された抗体は好ましくは、1500~50000、たとえば、1800~30000又は2000~28000の第1のKd比、KdFSH対KdTSHを有し、シグナル抗体は、1500~50000、たとえば、1800~30000又は1900~20000の第2のKd比、KdFSH対KdTSHを有する場合がある。上記のように、免疫アッセイは好ましくは、2つの非重複エピトープでTSHに結合する一対の異なる抗体を用いる。特に好ましい実施形態では、捕捉抗体はTSH捕捉マウスモノクローナル抗体たとえば、Biospacificカタログ番号5409SPTNE-5を含み、シグナル抗体はシグナル伝達マウスモノクローナル抗体たとえば、Fitzgeraldカタログ番号10-T25Cを含む。この態様では、捕捉抗体は好ましくはビーズ、たとえばラテックス及び/又はポリスチレンビーズに共有結合しており、シグナル抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ及び蛍光又は光学的吸収部からなる群から選択されるレポーター分子にコンジュゲートしている。検出ステップは好ましくは、電気化学的、たとえば、電流測定であるが、光学的、たとえば、蛍光及び吸光であることも可能である。本発明は、リガンド結合アッセイとしても特徴付けることができる。たとえば、一実施形態では、本発明は、少なくとも1つの捕捉リガンド及び少なくとも1つのシグナルリガンドを含み、TSHに対する両方のリガンドの解離定数が約1nM未満又は以下、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下であり、FSH、LH及びCGに対する捕捉リガンドのKdがそれぞれ約2500超、約500超及び約200nM超であり、FSH、LH及びCGに対するシグナルリガンドのKdがそれぞれ約250超、約200超及び約35nM超である、TSHサンドイッチアッセイに関する。さらに好ましくは、捕捉リガンドのKdは、LHに対しては約1000nM超であり、CGに対しては約500nM超であり、LHに対するシグナルリガンドのKdは約35nM超である。ここでは、リガンドは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体の断片、アプタマー及び一本鎖抗体からなる群から選択してもよい。本発明は、TSHに対して高度に選択的でありFSH、LH及びCGなどの競合する内分泌糖タンパク質ホルモン類似体に対して非選択的である免疫アッセイを用いて、分析物、たとえばTSHを検出するための方法も目的とする。たとえば、一実施形態では、本発明は、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を使用して全血TSHサンドイッチアッセイを実施する方法に関する。TSHに対する両方の抗体のKdは1nM未満又は約1nM、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下である。FSH、LH及びCGに対する捕捉抗体のKd値は、それぞれ約2500超、約500超及び200nM超であり、FSH、LH及びCGに対するシグナル抗体のKd値は、それぞれ約250超、約200超及び約35nM超である。さらに好ましくは、FSH、LH及びCGに対する捕捉抗体のKd値は、それぞれ約1000超、約1000超及び1000nM超であり、LHに対するシグナル抗体のKd値は約35nM超である。この方法は、aTSHシグナル抗体及び電気化学的センサー上に固定化されたTSH捕捉抗体に全血試料を接触させてサンドイッチ複合体を形成するステップ、並びにb前記複合体化シグナル抗体に伴うシグナルを検出するステップを含む。本発明は、TSHの検出以外の有用性を有する。たとえば、一態様では、本発明は、少なくとも1つの捕捉抗体又はリガンド及び少なくとも1つのシグナル抗体又はリガンドを含む少なくとも2つの抗体又は他のリガンドを含む全血試料で実施される分析物サンドイッチ免疫アッセイであって、分析物の、前記少なくとも2つの抗体又はリガンドに対するKdが、少なくとも2つの選択された既知の交差反応物タンパク質配列夾雑抗原と密接な関係があるに対するKdより、少なくとも前選択したレベルで低い、たとえば、500分の1、1000分の1又は10000分の1である、上記分析物サンドイッチ免疫アッセイに関する。この態様では、サンドイッチは好ましくは、試料への実質的に非連続的抗体又はリガンド添加により形成される。アッセイは検出に先立つ単一洗浄ステップを用いて実施してもよい。ここで、たとえば、標的分析物は、TSH、FSH、LH及びCGのうちの1つであることが可能であり、交差反応物はTSH、FSH、LH及びCGからなる群から選択してもよいが、標的分析物ではない。したがって、本発明の他の実施形態では、標的分析物はTSHではなく、FSH、LH及びCGのうちの1つから選択してもよい。低洗浄サンドイッチ免疫アッセイFSH、LH及びCGなどの競合する内分泌糖タンパク質ホルモン類似体と比べたTSHに対する上記の抗体又はリガンドの選択性は、限定的な洗浄ステップを用いる免疫アッセイに特に適している本発明の免疫アッセイ、装置及び方法に役立つ。したがって、本発明は、相当量の洗浄液のためのスペースが十分にない分析検査カートリッジ又は装置を用いることがある、i-STAT登録商標免疫アッセイフォーマットなどのポイントオブケア検査装置の実行に特によく適している。従来のTSHアッセイでは、FSH、LH及びCGのうちの1つ又は複数を伴う交差反応を軽減するためには、複数の繰り返される洗浄ステップを用いることが正確な結果に決定的に重要である。本発明のいくつかの実施形態によれば、サンドイッチが試料への非連続的抗体添加により形成される、すなわち捕捉抗体及びシグナル抗体がこの試料にほぼ同時に、介在する洗浄ステップなしで接触する場合にアッセイは機能する。アッセイは、場合により、検出に先立つ単一洗浄ステップ、たとえば血液及び非結合シグナル抗体を捕捉抗体から取り除く1回に限定的な洗浄ステップを含む。したがって、第2の実施形態では、本発明は洗浄ステップが減らされた免疫アッセイに関する。この実施形態の一態様では、単一洗浄ステップを使用して非結合分析物及びシグナル抗体をサンドイッチアッセイから取り除く。この実施形態の一態様では、本発明は、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を含み、TSHに対する両方の抗体のKdが1nM未満又は約1nM、たとえば0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下であり、FSH、LH及びCGに対する捕捉抗体のKdが、それぞれ約2500nM超、約500nM超及び約200nM超であり、単一洗浄ステップを用いるTSHサンドイッチ免疫アッセイに関する。さらに好ましくは、FSH、LH及びCGに対する捕捉抗体のKdが、それぞれ、約1000nM超、約1000nM超及び約1000nM超である。これとの関連で、単一洗浄ステップとは、洗浄液好ましくは分析物及びシグナル抗体が実質的にないが免疫センサーに向けられて非結合分析物及び非結合シグナル抗体を免疫センサーの領域から取り除く洗浄ステップのことである。単一洗浄ステップにおいて用いられる洗浄液の量は大きく異なっていてもよいが、好ましくは1000μL未満、750μL未満、500μL未満又は250μL未満である。本発明において用いられる免疫センサーの種類は大きく異なっていてもよく、たとえば、電気化学センサー、弾力表面波センサー、表面プラズモン共鳴センサー、温度センサー、電界効果トランジスタセンサー、光学センサー、エバネッセント波センサー、導波管センサー、等から選択してもよい。本発明は、分析物、たとえば、TSHを1回以下の洗浄ステップを用いる免疫アッセイで検出するための方法も目的とする。たとえば、一実施形態では、本発明は、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を使用して全血TSHサンドイッチアッセイを実施する方法に関する。TSHに対する両方の抗体のKdは、1nM未満又は約1nM、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下である。FSH、LH及びCGに対する捕捉抗体のKd値は、それぞれ約2500nM超、約500nM超及び約200nM超であり、FSH、LH及びCGに対するシグナル抗体のKd値は、それぞれ約250nM超、約200nM超及び約35nM超である。さらに好ましくは、FSH、LH及びCGに対する捕捉抗体のKd値は、それぞれ約1000nM超、約1000nM超及び約1000nM超であり、LHに対するシグナル抗体のKd値は約35nM超である。この方法は、a全血試料をTSHシグナル抗体及び電気化学的センサー上に固定化されたTSH捕捉抗体に接触させてサンドイッチ複合体を形成するステップ、b試料及び非複合体化シグナル抗体を前記センサーから洗浄するステップ、並びにc前記複合体化したシグナル抗体に伴うシグナルを検出するステップを含む。この実施形態では、洗浄液は好ましくは、水及び1つ又は複数の添加物を含む液体を含み、望ましい程度にセンサーを洗浄することができなければならない。一態様では、洗浄液は酵素基質ANPPリン酸アミノニトロフェニルを含む。洗浄液pHは好ましくは、レポーター酵素に最適であるように維持され、これはアルカリホスファターゼでは、約9~10の最適アルカリ性pHである。洗浄液は好ましくは、電気化学アッセイにおける電気伝導度に影響を与える塩も含み、これは塩化ナトリウム及びマグネシウムにより供給される。マグネシウムはアルカリホスファターゼの補因子でもあり、低濃度で存在して酵素活性を増強することがある。他の酵素ベースのアッセイのための洗浄液は、溶液中での酵素安定性のために、電気化学であれば電気伝導度のために必要な適切な酵素基質、塩及び緩衝剤も、任意の適切な酵素補因子と共に含有すると考えられる。既知の干渉物質に対するスカベンジャービーズの包含第3の実施形態では、本発明は、1つ又は複数のスカベンジャービーズを用いるTSHサンドイッチ免疫アッセイに、並びにそのような免疫アッセイを行うための関連する装置及び方法に関する。分析物、たとえば、TSHに対するアッセイの選択性を増強するために、たとえば、交差反応物、たとえば、FSH、LH、CGに対する抗体で標識されたラテックス又はポリスチレンビーズを含むスカベンジャービーズが試料中に溶解する混合物に添加される実施形態が考案された。このようにして、交差反応物には、TSH捕捉抗体上の比較的好ましくない結合部位と試料中に溶解させたビーズ上の比較的好ましい結合部位とが与えられる。この実施形態の一態様では、たとえば、本発明は、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を含む免疫アッセイに関する。このアッセイは、FSH、LH、CGに対する抗体ビーズ抗体で被覆されたスカベンジャービーズをさらに含み、前記抗体のそれぞれのKdが、FSH、LH及びCGのそれぞれに対して、1nM未満又は約1nM、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下であり、TSHに対する前記ビーズ抗体のそれぞれのKdが約250nM超である。免疫アッセイにおいて用いられる捕捉抗体及びシグナル抗体のTSHに対するKdは、好ましくは、上記の通り、約1nM未満又は以下、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下である。したがって、一実施形態では、本発明は、少なくとも1つの捕捉抗体及び少なくとも1つのシグナル抗体を含む少なくとも2つのエピトープ適合性抗体を用い、1つ又は複数のスカベンジャービーズを使用して、そうでなければ競合する内分泌糖タンパク質ホルモン類似体であるFSH、LH及びCGにより引き起こされることがある干渉を抑えるTSHサンドイッチ免疫アッセイに関する。ここでは、TSHに対する捕捉抗体及びシグナル抗体のKdは好ましくは、1nM未満又は約1nM、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下である。添加されたスカベンジャービーズはFSH、LH及びCGに対するビーズ抗体で被覆されており、これらの抗体ごとに対するKdは好ましくは、それぞれFSH、LH及びCGごとに対して、1nM未満又は約1nM、たとえば、0.5nM以下、0.15nM以下又は0.1nM以下である。一態様では、ビーズは、競合する内分泌糖タンパク質ホルモン類似体ごとに選択的である単一種類の抗体で被覆されている。別の態様では、ビーズは複数種類の抗体で被覆されており、第1のビーズ抗体はFSHに対して選択的であり、第2のビーズ抗体はLHに対して選択的であり、第3のビーズ抗体はCGに対して選択的である。たとえば、第1のビーズ抗体はFSH及びLHに対して選択的であり、第2のビーズ抗体はCGに対して選択的であるビーズ抗体の他の組合せも可能である。別の態様では、複数の異なるビーズを用いてもよい。たとえば、競合する内分泌糖タンパク質ホルモン類似体に選択的に結合する、それぞれが異なる抗体を有する3種類の異なるビーズを用いてもよい。たとえば、免疫アッセイ、装置及び方法は、それぞれFSH、LH及びCGに選択的に結合する第1のビーズ、第2のビーズ及び第3のビーズを用いてもよい。さらに具体的には、第1のビーズはFSHに対して選択的な第1のビーズ抗体を含み、第2のビーズはLHに対して選択的な第2のビーズ抗体を含み、第3のビーズはCGに対して選択的な第3のビーズ抗体を含んでいてもよい。TSHがこれらのビーズに優先的に結合するのを回避するために、TSHに対するビーズ抗体1種類のビーズ上であれ複数種類のビーズ上であれのそれぞれのKdは約250nM超であることが望ましい。抗体標識化に関してのスカベンジャービーズの調製は、TSHに対する捕捉抗体について本明細書に記載されている方法に従う。上記の実施形態の場合と同じように、FSH、LH及びCGに対するTSH捕捉抗体のKdは、それぞれ約2500nM超、約500nM超及び約200nM超であることが好ましい。同様に、FSH、LH及びCGに対するTSHシグナル抗体のKdは、それぞれ約250nM超、約200nM超及び約35nM超であることが望ましい。スカベンジャービーズは非磁性であり、試料中に懸濁したままでも可能であり、したがって、洗浄ステップ及び検出ステップに先立って試料と一緒に廃棄物チャンバーに取り除かれることに留意されたい。代わりに、スカベンジャービーズは磁性があってもよく、TSH捕捉部位領域、たとえばTSH免疫センサーから離れている装置の領域に、磁界を適用することにより引き付けられる。代わりに、スカベンジャービーズは磁性があるが、磁界を適用して又は適用せずに廃棄物チャンバーに取り除かれてもよい。磁気ビーズを免疫センサーに磁気的に保持しておくための様々な手段は、Millerへの米国特許出願第61/371,066号明細書に記載されており、この特許文献の全体は参照により本明細書に組み込まれる。交差夾雑物干渉を抑える磁気スカベンジャービーズの使用は図8に図解されている。示されるように、LHに対して選択的なスカベンジャー抗体を有する磁気ビーズが試料に添加され、試料中に含有されるLHに選択的に結合する。たとえば、永久磁石から又は電磁石からの磁界は、センサーから離れた好ましくはその上流の領域に磁気ビーズを局在化するように、装置カートリッジにおいて又は装置読取り機においてのいずれかで印加される。これにより、交差反応する又は競合する分析物、ここではLHからの干渉が抑えられて有利である。好ましい実施形態では、犠牲ビーズsacrificialbeadは乾燥試薬被覆に取り込まれ、この被覆はいくつかの実施形態では、シグナル抗体を含有する同じ乾燥試薬被覆であってもよい。したがって、一実施形態では、分析装置には、aFSH、LH若しくはCGのうちの1つ若しくは複数の影響を軽減するのに適している犠牲ビーズ及び/又はbシグナル抗体若しくは標識分析物などのシグナル発生試薬のどちらか又は両方を含む乾燥試薬被覆が含まれる。乾燥試薬被覆は、好ましくはaFSH、LH若しくはCGのうちの1つ若しくは複数の影響を軽減するのに適している犠牲ビーズ及び/又はbシグナル抗体若しくは標識分析物などのシグナル発生試薬のどちらか又は両方も含む試薬カクテルから形成されてもよい。一態様では、試薬被覆及び/又はカクテルは、米国特許同時係属出願第12/411,325号明細書に開示されている、異好抗体により引き起こされる干渉を軽減するためのIgM又はその断片をさらに含んでおり、この特許文献は参照によりその全体を組み込まれている。試薬カクテルが置かれることになる表面は、好ましくは先ずコロナ処理されて、プリントされたカクテルの広がりを促進することになる荷電表面基を提供する。一般的には、乾燥試薬被覆を形成するのに使用される試薬カクテルは、水溶性タンパク質、アミノ酸、ポリエーテル、ヒドロキシル基を含有するポリマー、糖又は炭水化物、塩及び場合により色素分子をさらに含んでいてもよい。それぞれの成分の1つ又は複数を使用することができる。一実施形態では、カクテルは、ウシ血清アルブミンBSA、グリシン、塩、メトキシポリエチレングリコール、ショ糖及び場合により、プリンティング過程を視覚化するのに役立つ色を提供するブロモフェノールブルーを含有する。一実施形態では、1~20μLのカクテルが、分析装置の、たとえば保持チャンバー又は他の導管内の所望の表面にプリントされ、そのカバーと組み立てられる前に風乾させておく加熱して又は加熱せずに。好ましい態様では、試薬カクテル及びそこから形成される乾燥試薬被覆は、ラクチトール、DEAE-デキストラン、マグネシウム及び塩化ナトリウムなどの塩、IgG/IgM、ヘパリン、界面活性剤単数又は複数並びにローダミンのうちの1つ又は複数を含む。試薬カクテルは好ましくは、犠牲ビーズ及び場合により他の干渉低減試薬を含有するプリント可能な水溶液として処方される。生体試料、たとえば血液を導入すると、試料は好ましくは、アッセイの第1ステップで試薬と混合する。試薬はまた、化学的及び流体属性に関してアッセイ性能を最適化する無機塩及び界面活性剤を含んでいてもよい。他の任意の添加剤は、十分な抗凝血を保証するヘパリン及びプリント後の試薬の位置を視覚化するための色素を含んでいてもよい。場合により、微生物増殖を阻害するためのアジ化ナトリウムなどの安定化剤及びタンパク質の安定化のためのラクチトールとジエチルアミノエチル-デキストランAppliedEnzymeTechnologiesLtd.、MonmouthHouse、MamhiladPark、Pontypool、NP40HZUKの混合物も存在する。いったん装置に置かれると、置かれた試薬は、たとえば、温風流中で30~60分間乾燥させてもよい。一実施形態では、試薬は自動プリント機器を使用して装置の試料注入口にプリントされ、乾燥されて試薬被覆層を含有する犠牲ビーズを形成する。別の実施形態では、検査カートリッジは、複数の乾燥試薬被覆を含んでいてもよいその場合、被覆は、それを区別するために、それぞれ第1試薬被覆、第2試薬被覆、等と呼んでもよい。たとえば、犠牲ビーズは第1試薬被覆に含まれてもよく、第1試薬被覆は、たとえば、シグナル抗体を含有する第2試薬被覆に隣接していてもよい。この態様では、第2試薬被覆は第1試薬被覆の上流に又は下流に位置していてもよいが、シグナル抗体を含有する試薬被覆が犠牲ビーズを含有する試薬被覆の下流に位置しているのが好ましい。好ましい実施形態では、保持チャンバーは、犠牲ビーズ及び場合により様々な形態の干渉を軽減する他の試薬を含む第1試薬被覆で被覆されている。この態様では、シグナル抗体を含む第2試薬被覆は、好ましくは保持チャンバーの下流、すなわち免疫センサーのすぐ上流に位置している。さらに他の実施形態では、犠牲ビーズは、分析装置、たとえば、カートリッジの一部でなくてもよい。たとえば、犠牲ビーズは試料収集装置、たとえば、キャピラリー、バキュテナーVacutainer商標又は注射器に組み込まれていてもよい。たとえば、犠牲ビーズ被覆は、収集装置の内壁上で形成されてもよい。したがって、一実施形態では、本発明は、第1容器又は位置で血液試料を修正するのに先ず使用される犠牲ビーズを含む免疫アッセイを実施し、次に試料は捕捉抗体及びシグナル抗体を有する第2容器又は位置に通されるためのキットに関する。本明細書で考察されるビーズに加えて又はビーズの代わりとして、試料は、Campbelletal.への共同所有されている米国特許出願第12/620,179号明細書に記載されている種類の犠牲ビーズ場合により、白血球にオプソニン化されているで修正されてもよく、この特許文献の全体は参照により本明細書に組み込まれる。免疫センサー製作上記のように、本発明は、電気化学免疫センサーを使用するi-STAT登録商標システムを参照することにより最もよく説明される。免疫センサーの好ましい実施形態のウェハレベルの微細加工は以下の通りである。ベース電極は、15μmセンター上の正方形アレイの7μmゴールドディスクからなる。アレイはほぼ600μm径の円形領域をカバーし、Si/SiO2/TiW/Auを含む一連の層から作製される基材上に厚さ0.35μmの薄層のポリイミドを光パターン形成することにより達成される。7μmの微小電極のアレイは、露出金属のキャパシタンスに伴ういかなる電気化学バックグランド電流からの寄与も抑えて、高い収集効率の電気活性種を与える。金属上に、PVA層、たとえば、光形成性ポリビニルアルコールが含まれるとバックグランド電流の減少が著しく増強される。多孔質PVA層は好ましくは、ウェハ上の微小電極上にPVAとスチルバゾリウムstilbizonium光活動性架橋剤の水性混合物をスピンコートすることにより調製される。スピンコート混合物は、場合によりウシ血清アルブミンBSAを含む。次に、PVA層は、アレイ上及びアレイ周囲の領域のみを覆うように光パターン形成されてもよく、好ましくは約0.2~1.0μm、たとえば、0.4~0.8μm又は約0.6μmの厚みを有する。異なるTSH抗体に対する免疫センサーは、ビーズ上に抗体を被覆し、ビーズをそれが接着するセンサー表面に塗布することにより作製してもよい。下記のビーズ調製法を使用して、脱イオン水中、約0.6~2.0wt、たとえば、約0.8~1.6wt又は約1wt固体を含む、約30~60nL、たとえば、35~50nL、又は約40nLの液滴を、センサーを覆う光パターン形成された多孔質ポリビニルアルコール選択透過性層上に微粒分散させたとえば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第5,554,339号の方法及び装置を使用して、乾燥させておいてもよい。乾燥した粒子は、その血液試料又は洗浄液への溶解を実質的に防ぐ多孔質層に接着するべきである。捕捉ビーズ製作本発明のために使用される捕捉ビーズは、使用されるのが固定化された捕捉抗体のためでも任意のスカベンジャービーズ抗体のためでも、種々の技法により形成することができる。好ましい実施形態では、抗TSH及び抗HSAで被覆されたカルボン酸修飾ラテックス微粒子BangsLaboratoriesInc.及びSeradynMicroparticlesInc.より市販されているは両方とも同じ方法により調製される。粒子は好ましくは、先ず遠心分離によりバッファー交換され、続いて抗体が添加されて、これを粒子上に受動的に吸着させておく。次に、粒子上のカルボキシル基は好ましくは、たとえば、MESバッファー中のEDAC、pH6.2で活性化され、抗体へのアミド結合を形成する。いかなるビーズ凝集体も遠心分離により取り除いてよく、完成ビーズは、たとえば、約-80°Cで凍結保存されてもよい。カートリッジ設計図を参照すると、本発明において使用するための任意のカートリッジ設計は、カバー図1、図2、基部図4及び基部とカバーの間に配置された薄膜接着ガスケット図3を備えている。この時点で図1を参照すると、カバー1は、亀裂を生じることなく柔軟な蝶番部5、9、10で繰り返し変形することが可能な硬質物質、好ましくはプラスチックで作られている。カバーは蓋2を備え、この蓋は柔軟な蝶番9によりカバー本体に取り付けられている。実施中、試料の試料保持チャンバー34への導入後、蓋は試料入口4への入り口をしっかり閉めて、試料漏出を防ぐことができ、蓋はフック3により固定される。カバーは、カバー本体に対して取り外し可能であり、柔軟な蝶番部5、10によりカバー本体に取り付けられている2つのヘラ6、7をさらに備えている。実施中、ポンプ手段の作用を受けると、ヘラ6は、薄層ガスケット21に覆われている空洞43を備える浮袋に力を加えて液体をカートリッジの導管内に液体を移す。第2のポンプ手段による作用を受けると、ヘラ7はガスケット21に力を加え、ガスケットはそこに設けられた裂け目22及び23のせいで変形することができる。カートリッジは読取り装置への挿入のために改造されており、したがってこの目的のために複数の機械的及び電気的接続を有する。カートリッジの手動操作が可能であることも明白であるべきである。したがって、カートリッジを読取り装置に挿入すると、ガスケットは、空洞42に位置しているほぼ130μLの分析/洗浄溶液液で満たされた液体含有ホイルパック上に圧力を送り、スパイク38上でパッケージを破裂させて、液体を、基部において短い横断導管を介してセンサー導管に接続している導管39中に排出する。分析液は、毛細管ストップcapillarystopとして機能するテープガスッケトの小開口上に先ず液体を押し付ける分析導管の前を満たしている。カートリッジに適用される分析器機構の他の動きを使用して、分析導管内の制御された位置で分析液中に1つ又は複数の空気部分を注入してもよい。これらの部分を使用して、最小限の液体でセンサー表面と周囲の導管を洗浄するのに役立てる。カバーは、柔軟な薄層8で覆われている穴部をさらに備えている。実施中、薄層にかけられる圧力は、ガスケットの小さな穴部28を通って導管20内に1つ又は複数の空気部分を排出する。図2を参照すると、基部の下面は、第2の導管11及び第1の導管15をさらに備えている。第2の導管11は狭窄部12を含み、この狭窄部は液体の流れに抵抗力を与えることにより液体流を制御する。任意の被覆13、14は疎水性表面を提供し、これらの被覆はガスケット穴部31、32と一緒になって導管11、15間の液体流を制御する。基部の陥凹17は導管34において空気の経路を与えてガスケットの穴部27を通って導管34につながる。図3を参照すると、薄層ガスケット21は、基部及びカバー内の導管間の液体の移動を容易にし、必要な場合には圧力下でガスケットを変形させる様々な穴部及び裂け目を備えている。したがって、穴部24は液体を導管11から廃棄物チャンバー44に流してやることができ、穴部25は導管34と11の間に毛細管ストップを備えており、穴部26は陥凹18と導管40間で空気を流してやることができ、穴部27は陥凹17と導管34間に空気流動を与え、穴部28は、任意の閉じられる弁41を介して導管19から廃棄物チャンバー44に液体を流してやることができる。穴部30及び33は、それぞれカッタウェイ35及び37内に収納されている免疫センサーチップ上記を導管15内の液体に接触させることができる。特定の実施形態では、カッタウェイ37は接地電極及び/又は対基準電極を収納し、カッタウェイ35は少なくとも1つの分析物センサー及び場合により伝導度センサーを収納する。穴部29は下のフィルターを外部空気供給に接近させ、洗浄液流動中に噴き出される気泡を生成させる。気泡の縁は、センサー上の部分的洗浄を果たす洗浄液にはっきりした変化を生じる。典型的なELISAアッセイは、捕捉センサーの効果的な洗浄を可能にするはっきりしたバッファー変化部分的洗浄ではなくを利用する。図3及び図4を参照すると、導管34は、ガスケット21の開口部122を介して試料入口4を組み立てられたカートリッジの第1の導管11に接続する試料保持チャンバーである。カッタウェイ35は、分析物センサー単数又は複数又は分析物応答性表面を、任意の伝導度センサー単数又は複数と一緒に収納している。カッタウェイ37は、必要な場合には電気化学センサーのためのリターン電流経路として接地電極を収納しており、任意の伝導度センサーをも収納していてもよい。カッタウェイ36は、液体が第1と第2の導管間を通過することができるようにガスケット穴部31と32間に流体経路を与える。陥凹42は、読取り装置内に挿入されるとヘラ7にかかる圧力のせいでスパイク38により穴をあけられる液体含有パッケージ、たとえば、断裂可能ポーチを組み立てられたカートリッジに収納している。穴をあけられたパッケージから出る液体は39で第2の導管に流入する。浮袋はその上面をガスケット21により密封されている陥凹43を備えている。浮袋はポンプ手段の一実施形態であり、ヘラ6にかかる圧力により発動され、導管40中の空気を移動させそれによってこの試料を試料チャンバー34から第1の導管15に移動させる。空気が浮袋から試料チャンバーに入る位置ガスケット穴部27及び毛細管ストップ25を合わせて、試料チャンバーの既定の容積を規定する。いくつかの好ましい実施形態では、試料は1~500μL、たとえば、5~200μL又は10~50μL、好ましくは約20μLの試料容積に計量される。この容積に一致する試料の量は、ヘラ6が押えられているときに第1の導管に移される。したがって、この配置は未計量試料の計量された量をカートリッジの導管内に送達するための計量手段の1つの可能な実施形態である。本カートリッジでは、試料セグメントを計量するための手段は、基部プラスチック部分において与えられる。セグメントサイズは基部のコンパートメントのサイズ並びにテープガスケットにおける毛細管ストップ及び空気パイプ穴部の位置により制御される。この容積は、1~500μL、たとえば、1~200μLまで容易に変化させることが可能である。試料サイズのこの範囲の拡大は本発明の文脈内で可能である。液体は、センサー導管19でのその提示に先立って試料中への試薬を修正するたとえば、スカベンジャービーズ、シグナル抗体又は可溶性分子のうちの1つ又は複数を用いてのに使用することができる分析前導管11の中を押し通される。代わりに、修正試薬のうちの1つ又は複数は1つ又は複数の導管に位置していてもよい。たとえば、上記1つ又は複数の試薬は、部分16を超えて導管34及び/又は導管15に位置していてもよい。試料を分析前導管の中を押し進めることは、流体移動の発動に対するその応答性を軽減するダイアフラムポンプヘラ7に張力を導入するのにも役立つ。いくつかのアッセイでは、分析物の定量化が必要な場合は計量は有利である。廃棄物チャンバー44は、カートリッジの外面の汚染を防ぐために、導管から排出される試料及び/又は液体のために提供される。廃棄物チャンバーを外部の大気に接続する通気孔45も提供される。カートリッジの特色は、いったん試料が負荷されると、分析を完了することができ、試料に接触する操作員又はその他なしでカートリッジを破棄することができることである。この時点で図5を参照すると、51~57が、場合により試料又は液体を修正する乾燥試薬で被覆することができる導管及び試料チャンバーの一部である、カートリッジ及びコンポーネントの特色の回路図が提供される。試料又は液体を、それを溶解する乾燥試薬上を少なくとも1回は通過させる。カートリッジ内で試料又は液体を修正するのに使用される試薬は、抗体-酵素コンジュゲート、シグナル抗体、アッセイ化合物間の特異的若しくは非特異的結合反応のいずれかを防ぐブロッキング剤又は犠牲ビーズ上記を含んでいてもよい。可溶性ではないがアッセイ成分がカートリッジの内面に非特異的に吸着するのを防ぐのに役立つ表面被覆も提供することができる。試料又は液体のセグメント内では、修正物質を優先的に溶解させセグメントの既定の領域内に濃縮することができる。これはセグメントの位置と動きを制御することを通じて達成される。したがって、たとえば、先端など、セグメントの一部を修正物質上で交換しさえすれば、この物質の高局所濃度を先端近くで達成することができる。代わりに、物質の均一な分布が望まれる場合、たとえば、修正物質の既知の濃度が定量分析のために必要になる場合、試料又は液体がさらに交換されると、混合され均一に分布することになる。特定の実施形態では、閉じられる弁58が第1の導管と廃棄物チャンバーの間に提供される。一実施形態では、弁58は不透過性物質で被覆されている乾燥スポンジ材を備えている。実施中、スポンジ材を試料又は液体に接触させると、スポンジが膨張して空洞41を満たし、それによって廃棄物チャンバー44への液体のそれ以上の流入を実質的に遮断する。さらに、濡れた弁は第1の導管と廃棄物チャンバー間の空気の流れも遮断し、これにより試料チャンバーに接続された第1のポンプ手段は液体を第2の導管に移し、液体を第2の導管から以下のようにして第1の導管内に移すことができる。試料は、制御された時間センサーに曝露された後、分析後導管19内に移動され、そこで試料を別の試薬により修正することができる。次に、試料をセンサーに戻すことができ、第2の反応期間を開始することができる。代わりに、分析後導管は試料部分をセンサーから分離するためだけに役立つことも可能である。図6は、3つのポンプ手段61~63を備えている免疫センサーカートリッジのレイアウト図を示す。これらのポンプは特定の実施形態に関して描かれているが、ポンプ手段61~63のそれぞれの機能を果たすことができるいかなるポンプ手段でも本発明内で使用することができることは容易に理解されるであろう。したがって、ポンプ手段1、61は試料を試料保持チャンバーから第1の導管へ移すことができなければならず、ポンプ手段2、62は液体を第2の導管内に移すことができなければならず、ポンプ手段3、63は少なくとも1つのセグメントを第2の導管に挿入することができなければならない。操作好ましい実施形態では、第1ステップで、使用者は患者から試料を採血し又は以下の場合のように、既知TSH濃度の対照液体を使用する、数滴をカートリッジに挿入する。いったんカートリッジが計器に挿入されると、計器は検査サイクルの残りを制御する。シグナル抗体は好ましくは、試料中に溶解されてカートリッジ内の導管たとえば、保持チャンバーの壁に被覆されており、試料の一部はポンプにより免疫センサーの位置まで移動される。代わりに、シグナル抗体は免疫センサーの領域又は装置内の他の場所の、しかし理想的には免疫センサーの上流の位置の導管の被覆に配置されていてもよい。ポンプは試料を振動させて、センサー上でのサンドイッチ形成を促進するのにも役立つ。これには約1~20分、好ましくは2~14分、4~12分、又は理想的には約8分かかることがある。次に、ポンプは試料を廃棄物チャンバーに押し込む。別々の洗浄ステップを含む実施形態では、内部液体ポーチから出る洗浄液はポンプにより免疫センサー上に送られて、いかなる残余試料及び非結合シグナル抗体でも洗い流すことができる。液体の一部は、酵素基質も含有するが、センサー領域に残る。次に、免疫センサーで電流の測定が行われる。計器内のソフトウェアはその値、たとえば、実施例のセクションに表に示されている電流及び他のデータを記録する、又は実際の分析物濃度を計算し表示する。電流測定電気化学システムである、好ましい実施形態の操作中、ALPの活性から生じる免疫センサーでのp-アミノフェノールの酸化に伴う電流は分析器により記録される。様々なリン酸化基質のALP脱リン酸化の生化学は周知である。免疫センサーでの電位は、銀-塩化銀基準電極に対して平衡にされる。多くの種類の免疫アッセイ装置及び方法が記載されており、以下の共同所有の特許及び出願がある。血液試料中の分析物を首尾よく測定するための使い捨て感知装置は、米国特許第5,096,669号においてLauksにより開示されている。この装置は、血液試料中の分析物濃度を測定する目的で、読取り装置及び読取り装置に収まるカートリッジを用いる。Millerらへの米国特許第7,723,099号は、免疫基準電極を備えた免疫アッセイ装置を記載しており、Millerらへの米国特許第7,682,833号は改良された試料閉鎖装置を備えた免疫アッセイ装置を記載しており、Campbellらへの米国特許出願公開第2004/0018577号は多重ハイブリッド免疫アッセイを記載しており、Davisらへの米国特許第7,419,821号は分析物測定及び免疫アッセイのための装置及び方法を記載しており、Collierらへの米国特許出願公開第2010/0167301号はヌクレオチドコンジュゲートを使用する免疫アッセイ組成物及び方法を記載している。これらの特許及び特許出願はそれぞれが参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。免疫アッセイは様々な形態の干渉に感受性であることは当技術分野では周知である。たとえば、共同所有係属米国特許出願第12/411,325号‘325出願は、IgG試薬カクテルにIgMを含むことにより異好性抗体からの干渉を軽減することに取り組んでいる。‘325出願は参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。低洗浄TSHアッセイのための抗体選択への経験的対理論的アプローチTSHアッセイでは、いくつかの臨床状況において、関連ホルモンはTSHと比べて潜在的に高いモル濃度で見出される。したがって、FSH、LH及びCGは典型的には、それぞれ500、500及び200,000mIU/mLのレベルでTSHアッセイに添加されて、高濃度の交差反応種の存在下で実試料をシミュレートするArchitectProductDataInsert、Abbott、Chicago、IL。TSH、FSH、LH及びCGに対するこれらの濃度は、それぞれおよそ0.96、3000、760及び436,000pMである。理論的交差反応性平衡解離定数は測定されると、得られた解離定数に基づいて予想される交差反応性を比較するために理論的計算を実施することができる。これらの計算は実際のアッセイの結果を正確に予測することはできないが、抗体の親和性がアッセイを実施するのに十分であり、選択された抗体が低洗浄カートリッジ実験において試験された場合に著しくより良い成績を挙げることを保証する指針として使用してもよい。これらの計算は、開発のプロトタイプ段階において思いがけないアッセイ結果を同定することによりアッセイの開発を支援することもできる。たとえば、下の表1を参照されたい。計算は、2ステップアッセイ並びに洗浄手順に先立って1捕捉ステップ及び2検出ステップを含む2ステップアッセイを想定することにより実施された。捕捉ステップでは、4種のホルモン全てが捕捉抗体と結合し平衡に達すると想定される。このステップ後捕捉抗体に結合しているそれぞれのホルモンの濃度は捕捉されたホルモンと見なされる。検出ステップでは、捕捉されたホルモンは検出抗体に結合する際に平衡に達すると想定される。この第2ステップ後に検出抗体に結合しているそれぞれのホルモンの濃度は検出された濃度である。次に、交差反応性は干渉ホルモンの検出された濃度をTSHの検出された濃度で割り100を掛けることにより計算される。表8に与えられる抗体についての測定された解離定数は計算のために使用された。TSH、FSH、LH及びCGに対する濃度はそれぞれほぼ1、3000、760及び436,000pMである。これらの値は、典型的にはTSHアッセイにチャレンジするためにTSHアッセイに添加される値に匹敵する。この計算を使用して、選択された抗体が対照抗体よりも改善されたものであることを確かめる。計算は100pM捕捉抗体及び100pM検出抗体を想定している。モデルは、適合性抗体対を決定する又は捕捉抗体についての物質移行の影響などの他の要因として実際のアッセイにおける結果を正確に予測することはできないので、データは、抗体には利点があることを確かめ標的解離定数を見積もる指針として使用されるだけである。したがって、抗体を比較するために、交差反応性計算から決定される値は以下のようにして比較される。対照交差反応性値は、抗体TSHAb544及び414Bを使用して上の計算を実施することにより定義される。これらの対照抗体について得られる交差反応性の最良値は、改良しなければならない交差反応性であると解釈される。この値は、下の表1においてホルモンごとにアステリスク付きで示されている。いかなる候補抗体対も両方の構成におけるこれらの値よりも低い交差反応性を有するはずである。表のデータから、414Bと5409の組合せは、FSHとCGに対する交差反応性が対照値を上回っている状態を有していることが分かる。この結果により、この組合せがTSHアッセイのための最良の対ではない可能性が示唆される。表は、5409、ME130及びT25Cの組合せが、全てのホルモンについて、どちらの組合せでも対照値を下回る交差反応性の値を生じることも示している。これは、これらの抗体がアッセイにおいて使用するのに良好な候補である可能性があり、さらに調べられたことを示している。本発明は、以下の非限定的実施例に照らしてさらによく理解されることになる。例1:初期抗体スクリーニング67の抗体調製物が得られ表2、ニトロセルロースドットブロットアッセイを用いて試験された。さらに、TSH抗体544及びSeradyn抗アルファLHモノクローナル抗体Seradyn、カタログ番号MIT0414Bは、これらの研究において抗体のベンチマーク交差反応対として使用された。アッセイ標準を与えるため、抗原TSHカタログ番号T9265、Sigma、St.Louis、MO、FSHカタログ番号F4021、Sigma、St.Louis、MO、LHカタログ番号L5259、Sigma、St.Louis、MO、及びCGカタログ番号C0434、Sigma、St.Louis、MOは、TSH、FSH、LH及びCGについてそれぞれおよそ35,000μIU/mL、700,000mIU/mL、250,000mIU/mL、2×107mIU/mLの濃度まで1/5PBSバッファー中に再懸濁された。1μLのそれぞれの抗原は、ニトロセルロースの小片上にスポットされ乾燥された。ニトロセルロース片は先ずPBS中1粉末ミルクで遮断され、次に個々の小片は異なる抗体調製物のそれぞれと一緒にインキュベートされた。次に、小片はPBS、0.05Tween-20で洗浄され、続いてヤギ抗マウスIgGHLALP二次コンジュゲートカタログ番号4751-1806、KirkegaardPerry、Gaithersburg、MD、USAが添加され、必要な場合にはある種のポリクローナルには抗ウサギ、ヒツジ及びヤギIgGHLALPコンジュゲートが使用され、次にBCIP/NBTアルカリホスファターゼ基質1-成分カタログ番号50-81-07、KirkegaardPerry、Gaithersburg、MD、USAが添加された。反応は脱イオン水中ですすぐことにより停止された。追加の評価のために選択された抗体は、TSH抗原とは良好なシグナルを、且つFSH、LH及びCGとは低シグナルを示す小片を同定することにより決定された。これにより、対照としてTSHAb544及びSeradynMIT0414Bを含む、追加の評価のための25の候補抗体表3が得られた。次に25の候補抗体を使用して、下の例10、11に記載されている捕捉ビーズとALPコンジュゲートとの両方を作製した。これらの試薬はi-STAT登録商標カートリッジに組み込まれ、次に本明細書に記載される検査サイクルを使用して交差反応性についてスクリーニングされた。抗原対照検査液の濃度はTSHThermoFisher、カタログ番号ABT0315、FSH、LH及びCGについてそれぞれおよそ0.4mIU/L、500mIU/L、500mIU/L及び200,000mIU/Lであった。FSH、LH及びCG試薬は、上記と同じ供給源であった。アッセイは、TSH単独を用いて、並びにTSHとそれぞれCG、FSH及びLHを個々に組み合わせて実施された。パーセント交差反応性は、TSH単独により生じるシグナルで割るTSHシグナルそれ自体を差し引いて、交差反応抗原のうちの1つと一緒のTSHから生じる電気化学シグナル間の差により計算された。このスクリーニングにより追加の評価のための4つの候補抗体が得られた表4。TSHAb544及びMIT0414B抗体は、高交差反応対照として比較研究のために使用された。最も低い相対的交差反応性を有する抗体からの供給メーカー提供のデータは表4に収載されている。これらは使用された抗原試料と最も低いレベルの交差反応性を有していたことに注目すべきである。これらの抗原は微量のTSH抗原を含有しており、さらに純度の高い抗原Fitzgerald、NorthActon、MAより購入が使用された後の実験では見られなかったさらに高いレベルの交差反応性が観察されたことは、AbbottArchitecti2000SR機器Chicago、IL、USAを使用してこれらの干渉抗原を試験することにより後に同定され確認された。交差反応性レベルは試験されたその他の抗体と比べて低かったので、これらの抗体は最良の交差反応性能を有すると予想され、下に記載される他の技法によりさらに分析された。例2:FRETエピトープマッピング抗体対適合性は、フェルスター共鳴エネルギー転移FRETベースの競合アッセイにより決定された。およそ500~1000μgのそれぞれの内分泌糖タンパク質ホルモンTSHカタログ番号T9265、Sigma、St.Louis、MO、FSHカタログ番号30R-AF020、Fitzgerald、NorthActon、MA、LHカタログ番号30-AL15、Fitzgerald、NorthActon、MA及びCGカタログ番号30R-AC048、Fitzgerald、NorthActon、MAは、Alexa-Fluor登録商標488カルボン酸サクシニミジルエステルカタログ番号A20100、Invitrogen、Carlsbad、CAで標識された。抗体は、蛍光消光部分としてBHQ-10カルボン酸サクシニミジルエステルカタログ番号BHQ-10S、BiosearchTechnologies、Inc.、Novato、CAで標識された。タンパク質はRuanら2009、AnalyticalBiochemistry、vol393:196に従って標識された。抗体対は非標識抗体の存在下でのその消光力に基づいて選択された。過剰量の6つの抗体は、先ず蛍光標識された抗原と一緒にインキュベートされ、次にそれぞれの試料は6個の試験管に分割された。6個の試験管では、6つのBHQ標識抗体のうちの1つが添加された。したがって、表5に示されるように6×6の反応マトリックスが作製された。それぞれの試験管からの蛍光強度が、BHQ標識抗体を添加する前と後で測定された。蛍光強度が著しく変化すれば、陽性サンドイッチ対合であることが示された。蛍光強度が変化しない又はほとんど変化しなければ、同一分析物へのBHQ標識抗体の結合を遮断する非標識抗体が存在することが示された。蛍光は同一対について1.0の値に正規化された。表5は相対的蛍光値を与えている。例3:i-STAT登録商標カートリッジを用いたエピトープマッピング6つの抗体ごとにポリスチレンビーズとALPコンジュゲートの両方が作製された例2に記載されている。カートリッジは、電気化学的電流nAを発生する0.4mIU/LTSH組換えTSH、ThermoFisher、カタログ番号ABT0315、Fremont、CA、USAを用いて試験された。表6は適合性抗体対を示すいくつかの抗体対を収載している。同一の抗体対組合せは試験されなかった。たとえば、414Bは、結合の生物学のせいで高交差反応性を有すると予測されるアルファサブユニットを認識し、カートリッジでは試験されなかった。抗体を蛍光タグ又は蛍光消光部分のどちらかで標識することによりエピトープ遮断の可能性があり、特にBHQ標識5409及びM4と一緒のT25Cについて、FRETとサンドイッチELISA法の両方間の差を説明することができることは認識されるべきである。抗体対は、30mIU/L濃度でのTSH抗原を使用するi-STATカートリッジの電気化学免疫アッセイシステムにおいて試験された。表6の値は、測定された電流をnAで表示している。交差反応性評価のための抗体対は、FRET競合アッセイ及びi-STAT登録商標カートリッジデータに基づいて表7に収載されている。例4:Kd計算およそ500~1000μgのそれぞれの内分泌糖タンパク質ホルモンTSHカタログ番号T9265、Sigma、St.Louis、MO、FSHカタログ番号30R-AF020、Fitzgerald、NorthActon、MA、LHカタログ番号30-AL15、Fitzgerald、NorthActon、MA及びCGカタログ番号30R-AC048、Fitzgerald、NorthActon、MAは、Alexa-Fluor登録商標488カルボン酸サクシニミジルエステルカタログ番号A20100、Invitrogen、Carlsbad、CAで標識された。抗原は、蛍光消光部分としてBHQ-10カルボン酸サクシニミジルエステルカタログ番号BHQ-10S、BiosearchTechnologies、Inc.、Novato、CAでも標識された。タンパク質はRuanら2009、AnalyticalBiochemistry、vol393:196に従って標識された。およそ100~250nM濃度のBHQコンジュゲート抗体の、Alexa-Fluor登録商標488標識抗原のそれぞれのTSHでは100pmolからLH、CG及びFSHでの約1000pmolと一緒の添加は、Ruanら2009、AnalyticalBiochemistry、vol393:196に従ってSLM-AmincoModelSLM8100分光蛍光計を使用して実施された。データはIDLソフトウェアITT、Boulder、COを用いて解析され、Kd値nMを得た。データの例は図7に見られる。Kdデータの要約は表8に見られる。ME130、M4及び414Bは表9及び11の抗体特徴を有しておらず、したがって、低レベルの交差反応性を示していない。表8は、4つの異なる抗原を使用して6つの抗体についてのKd結合データを提供しており、値は全てnMである。交差反応性レベルは低シグナルではさらに高いので、抗体が十分なシグナルを発生することが重要である。したがって、表9において十分に低いKd値のない抗体TSHに対して高親和性は交差反応性については検討されなかった。これにより、交差反応性試験について考えられる抗体対の新たな一覧が得られた表10。表11に見られる抗体Kd特徴を有する抗体は低交差反応性を有すると予想された。例5:i-STAT登録商標交差反応性データコンジュゲート抗体ビーズ調製物及びアルカリホスファターゼALPコンジュゲートの組合せはi-STAT登録商標免疫アッセイカートリッジに組み込まれた。適合性抗体対表7、TSHに対する適切なKd値表9並びにFSH、LH及びCGに対する高Kd値表11に基づいて、表10の組合せが例1に記載される交差反応性について試験され、表12にまとめられている。干渉抗原のいずれについても5を超える交差反応性を示す抗体対はアステリスクで示された。5409捕捉抗体及びT25Cシグナル抗体のみが、表9及び11に記載される特徴を有する唯一の抗体なので、5未満の交差反応性を示した。捕捉として使用された5409と検出抗体として使用されたT25Cの抗体組合せは、適合性エピトープを認識するその能力と共に、その抗原結合特徴のせいで低交差反応性を与えることができる唯一の対であった。ME130はTSHに対してより良好な結合親和性を有し、これはより高い電流測定電流発生で示された。より高い電流測定シグナルを示す抗体は、システムのノイズから区別するのにより多くの問題をはらむより低い電流測定シグナルを発生する抗体対と比べて生じる交差反応性は低かった。表12は、0.4mIU/LTSHを使用し、抗原濃度の全てを添加するi-STAT登録商標カートリッジフォーマットにおいて抗原交差反応性を示している。以前決定された適合性抗体対のみが選択された。M4は、TSHに対して親和性が不十分で他の抗体組合せと比べてカートリッジアッセイにおいて低シグナルを発生していたので、選択からは取り除かれた表6及び表8。例6:抗FSH95784ビーズ調製抗FSH95784ビーズは以下の通りに調製された。15mgの1.01μmカルボキシル化されたポリスチレン微粒子10重量/容積パーツ番号PCO4N、BangsLaboratoriesInc.、USAを25mMの2-N-モルフォリノエタンスルホン酸MESバッファー、pH6.2中1.2mgの抗FSH95784と15分間反応させ、次に遠心分離して上澄みを取り除いた。25mMのMESバッファー中にペレットを再懸濁させた後、10mMのカルボジイミドEDACを試料に添加し4°Cで2時間反応させた。これに続いて、試料を遠心分離し、ペレットを1/5生理リン酸緩衝液で2度洗浄した。0.05Tween20を含むリン酸緩衝液中10固体で処方された試料は、さらに使用するために保存された。これらのビーズは、TSH捕捉抗体がFSHコンジュゲートビーズで置き換えられているFSH検出カートリッジの組立てに使用された。ビーズは、25タンパク質安定化溶液カタログ番号Q2030529P1、GwentGroup、Pontypool、UnitedKingdomを含む、1/5生理リン酸緩衝液中3.2固体に処方された。0.08Tween20中0.8固体、0.8タンパク質安定化溶液の処方はチップ上にプリントされ、FSHカートリッジに組み込まれた。およそ5~10mg/mL又は0.5~1固体のFSHビーズは、およそ500mIU/mLFSHを含有する試験試料内にスパイクspikeされ、ピペットを用いて垂直に混合され、直ちにFSH検出カートリッジの試料入口に注入された。ビーズはカートリッジの試料入口上にプリントし、後で試料がカートリッジ内に導入される際に試料中に溶解させることもできる。例7:LHビーズ調製LHポリスチレンビーズは、抗FSH95784の代わりにBiospacificLH5304抗体が使用される以外は、上の例6と同様に調製された。さらに、上の例6と同じように、これらのビーズを使用してLH検出カートリッジを作製した。例8:FSH磁気ビーズ調製FSH磁気ビーズは以下の通りに調製された。15mgの0.70μm超常磁性微粒子10重量/容積カタログ番号MC04、BangsLaboratoriesInc、USAは、50mMの2-N-モルフォリノエタンスルホン酸MESバッファー、pH6.2中30mMのカルボジイミドEDACと遠心管において15分間反応させた。この管は磁石上に置かれて、磁石の側に磁気ビーズを引き付け、上澄みは外に吸引した。50mMのMESで2回洗浄後、1.2mgの抗FSH95784AbbottDiagnosticsDivisionは4°Cで90分間ビーズと反応させた。ビーズは磁石を遠心管の横に置くことにより上澄みと分離され、次に上澄みは取り除いた。これに続いて、ペレットを1/5生理リン酸緩衝液で2回洗浄した。0.05Tween20を含むリン酸緩衝液中5固体で処方された試料はさらに使用するために保存された。およそ5~10mg/mL又は0.5~1固体のFSHビーズは、およそ500mIU/mLFSHを含有する試験試料内にスパイクされ、ピペットを用いて垂直に混合され、直ちにカートリッジ試料入口に注入された。ビーズはカートリッジの試料入口上にプリントし、後で試料がカートリッジ内に導入される際に試料中に溶解させることもできる。例9:LH磁気ビーズ調製LH磁気ビーズは、抗FSH95784の代わりにBiospacificLH5304モノクローナル抗体が使用される以外は、上の例8と同様に調製された。例10:TSHビーズ調製TSH5409ANAビーズは以下の通りに調製された。15mgの0.2μmカルボキシル化された微粒子10重量/容積パーツ番号13000550100390、Seradyn、Indianapolis、IN、USAを25mMの2-N-モルフォリノエタンスルホン酸MESバッファー、pH6.2中1.2mgのTSH5409mAbと15分間反応させ、次に遠心分離して上澄みを取り除いた。25mMのMESバッファー中にペレットを再懸濁させた後、10mMのカルボジイミドEDACを試料に添加し4°Cで2時間反応させた。これに続いて、試料を遠心分離し、ペレットを1/5生理リン酸緩衝液で2回洗浄した。タンパク質安定化溶液カタログ番号Q2030529P1、GwentGroup、Pontypool、UnitedKingdomを含む1/5生理リン酸緩衝液中3.2固体で処方された試料は、さらに使用するために保存された。これらのビーズは、TSHカートリッジを築くのに使用されるチップ上にプリントされた。TSH基準ビーズ調製は以下の通りであった。この方法は、反応において5409mAbの代わりに抗HSA抗体HyTastLtd、カタログ4T24Mab1C8、Joukahaisenkatu、Turku、Finlandを使用する以外は5409ANAビーズ方法と同じであった。免疫センサー製造及び操作における基準ビーズの使用は米国特許第7,732,099号に記載されており、特許文献の全体は参照により本明細書に組み込まれる。ここでは、免疫基準センサーを使用して、免疫センサーへのシグナル抗体の非特異的結合から生じるシグナルを減算する。例11A:TSHシグナル抗体コンジュゲート合成シグナル抗体コンジュゲート合成の好ましい実施形態は以下の通りである。TSHT25Cコンジュゲート調製は、ペプシン消化T25C全抗体を使用して、0.1Mクエン酸バッファーpH3.5中37°CでT25CFab2’を作製した。T25CFab2’画分の精製は、S-300サイズ排除カラムGEHealthcare、SE-75184Uppsala、Swedenを使用することにより実行された。塩酸モノエタノールアミンMEAを使用して、T25CFab2’をFab-SHに還元し、次にこれをLC-SMCCサクシニミジル-4-[N-マレイミドメチル]クロロヘキサン-1-カルボキシ-[6-アミドカプロン酸]及び活性化された単分子ALPアルカリホスファターゼと4°Cで一晩反応させた。次に、サイズ排除カラムを使用して、コンジュゲート画分を精製し、それを1/5生理リン酸緩衝されたタンパク質安定化溶液中に処方した。次に、これはさらに使用するために-80°Cで凍結保存された。例11B:LH及びFSHシグナル抗体コンジュゲート合成FSH及びLH実験では、アルファサブユニットを認識する414B抗体は上の例11Aに記載されるT25Cで置き換えられた。この抗体は検出抗体としてスカベンジャービーズ実験のために使用された。例12:スカベンジャー又は犠牲ビーズスカベンジャービーズアプローチの有用性は図9~図11に示されている。図9に示されるように、ポリスチレンビーズを使用すると、FSH干渉は100を超える交差反応性から15未満に著しく減少した。図9は、FSHビーズ例6がFSH検出カートリッジに組み込まれている実験である。試料は極度に高濃度500mIU/mLのFSHを含有している。FSHスカベンジャービーズを添加していないシグナルは100の値を割り当てられた。FSHスカベンジャービーズを添加後、シグナルは15まで減少した。図10は、例7からのLHスカベンジャービーズの影響に焦点を合わせている。例7及び11Bに記載される抗体組合せLH捕捉と414Bでは、LH交差反応性はスカベンジャービーズなしでは100であり、アッセイサイクルにスカベンジャービーズを添加すると干渉は4まで減少する。前述の例では、LH抗体はモノクローナル抗体ムス属ベータLH、カタログ番号5304SP-5であった。およそ0.5mg/mLのビーズが使用された。FSHmAbは抗FSH95784SP-5であった。下の表13は、本発明のこの実施形態に従ってスカベンジャービーズとして用いてもよい様々な市販の物質に関する追加の情報を提供している。図11は、磁気ビーズを用いることにより、FSH交差反応性が約100から10未満まで著しく減少することが示されている。この実験では、FSHポリスチレン捕捉ビーズを含有するFSH検出カートリッジが構築され例6、図8に示されるように、ニッケル被覆Nd2Fe4B永久磁石がカートリッジに組み込まれた。その上、超常磁性FSHスカベンジャービーズ例8は試料吸気口上にプリントされた図5、試料入口。これらのコンポーネント変更を用いて、カートリッジは、標準手順のように構築された。実験は、500mIU/mLのFSHをスパイクされた、およそ20μLのAbbottArchitect0TSHカリブレーターChicago、IL試料を添加することにより実施された。分析者は、カートリッジを用いてアッセイにおけるステップを実施し、アッセイにおいて発生し得られた電流は、スカベンジャービーズなしのカートリッジ試験について100に変換され、スカベンジャービーズがカートリッジにプリントされている試料はスカベンジャービーズなしの結果に基づいて計算され、シグナルの著しい減少が示され、スカベンジャービーズがアッセイにおいてバックグランドを減少させる能力が確かめられた。例13:代替モノクローナル抗体を求めるためのスクリーニング別の実施形態として、11の抗体調製物が、T25C及び/又は5409抗体の潜在的代替物としてAbbottDiagnosticDivisionADDのTSH抗体細胞系のストックから得られた。T25C及び/又は5409抗体に取って代わる潜在的代替モノクローナル抗体を求めるためのスクリーニングアプローチは、同じエピトープが特徴付けられていない抗体で見つかるのであれば、それらはT25C及び/又は5409抗体に類似する特性を潜在的に有するはずであるという仮説に基づいていた。およそ0.1μgのADDTSH全mAb候補は39mIU/LTSH試料と一緒にスパイクされ、よく混合され、捕捉抗体として5409を、且つ標識抗体としてT25Cを用いるi-STAT登録商標免疫アッセイカートリッジで試験された。2つの抗体クローン、10-518-308及び10-1179-45表14は検出シグナルの著しい減少を示し、これらのクローンが5409又はT25C抗体のどちらかと競合していることが示された。抗体クローン10-518-308及び10-1179-45が5409及び/又はT25Cの潜在的代替物として同定されると、次の試験ステップはこれらのモノクローナル抗体からビーズとコンジュゲートとを作製し、それらが使用可能なサンドイッチ適合性抗体エピトープ対を形成するかどうかを判定し、TSHについて良好なシグナルを、FSH、LH及びCGに対して良好な選択性を示すかどうかを判定することであった。ADDTSH抗体10-518-308はANAビーズにされ、センサーの上にプリントされ、コンジュゲートなしのカートリッジに組み込まれた。ADDTSH10-1179-45はFab2’に消化され、Fab断片にされ、さらにALPとコンジュゲートされてカートリッジ検査のためのコンジュゲートを形成した。5409ANA及びT25Cコンジュゲートは性能比較のために対照として使用された。評価における以下のステップのためには4つのカートリッジ組合せが存在する。これら4つのサブロットのカートリッジ表15は、感度及び線形評価のために、0.1、0.4、0.6、1、8、45、88mIU/Lレベルで裸のTSHプラズマを含む一連のTSH自社製対照に対して試験された。これらのカートリッジは、交差反応性評価のために0.4mIU/LTSH試料中500mIU/mlでスパイクされたLH、FSH及び200000mIU/mLでスパイクされたCGに対しても試験された。上の試験に基づいて、TSH抗体クローン10-1179-456は、FitzgeraldT25C抗体に取って代わって抗体Biospacific5409と対を形成する潜在的候補であることが確かめられた。なぜならば、この組合せはTSHに類似するシグナル応答、並びにT25C/5409組合せと比べてLH、FSH及びCG交差反応物と10未満の交差反応性を有するからである。本発明は様々な好ましい実施形態の点から説明されてきたが、当業者であれば、本発明の精神から逸脱することなく様々な修正、置換、省略及び変更を加えることができることは認識されるであろう。したがって、本発明の範囲は以下の特許請求の範囲のみによって限定されることが意図されている。"