互変異性体;又はトランスとして示されているC26、27CC結合がシスである異性体を含み;かつC53ケト存在する場合及びC15ヒドロキシル基とメタノールとの組み合わせによりケタールが形成されるメタノール付加物を含む、下記の式の化合物又はその医薬として許容し得る塩:式中、R1及びR2は、独立に、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルアリール、又はアルケニルヘテロアリールを表し、これらの基のいずれも単環式アリール又は単環式ヘテロアリールにより任意に置換されていてよく;或いは、R1は水素を表し;かつ、アリール又はヘテロアリール基の一部でないR1及び又はR2の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びSpから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは、0、1、又は2を表し、R1及び又はR2の1つ以上の炭素原子はカルボニルにより任意に置換されており;或いは、R1とR2とは結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成し、かつ該環の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びSpから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは0、1、又は2を表し、該環の1つ以上の炭素原子は任意にカルボニルにより置換されており、該複素環は任意にアリール又はヘテロアリール環に縮合していてよく;R1及び又はR2基の1つ以上の炭素原子は、1つ以上のハロゲン原子により任意に置換されていてよく;R3は、H、xアルキルを表し;R4は、H又はOHを表し;R5は、H、OH、又はOを表し;nが二重結合を表す場合にR4がHを表す場合を除いて、nは単結合又は二重結合を表し;かつmが二重結合を表す場合にR5がHを表す場合を除いて、mは単結合又は二重結合を表し;xは0又は1を表す。R1及びR2が、独立に、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルアリール、又はアルケニルヘテロアリールを表し、これらの基のいずれも単環式アリール又は単環式ヘテロアリールにより任意に置換されていてよく;或いは、R1が水素を表し;かつ、アリール又はヘテロアリール基の一部でないR1及び又はR2の1つ以上の炭素原子が、O、N、及びSpから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pが、0、1、又は2を表し、R1及び又はR2の1つ以上の炭素原子がカルボニルにより任意に置換されており;或いは、R1とR2とが結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成し、かつ該環の1つ以上の炭素原子が、O、N、及びSpから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pが0、1、又は2を表し、該環の1つ以上の炭素原子が任意にカルボニルにより置換されており、該複素環が任意にアリール又はヘテロアリール環に縮合していてよい、請求項1記載の化合物。R1が、単環式アリール若しくは単環式ヘテロアリールにより置換されているアリール若しくはヘテロアリール、C14アルキル、OC14アルキル、COC14アルキル、又はC24アルケニルを表す、請求項2記載の化合物。R2が、水素、C14アルキル、又はC14アルケニルを表す、請求項1~3のいずれか一項記載の化合物。R2が、水素又はC14アルキルを表す、請求項4記載の化合物。R1とR2とが、それらが結合している窒素と共に、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、又はピペラジン環などの5員~7員の複素環を表し、ピペラジンの4窒素がC14アルキルにより任意に置換されており、該環内の窒素原子に隣接する炭素原子が任意にカルボニルにより置換されている、請求項2記載の化合物。独立に、又は任意の組み合わせで:R3が、H又はxC14アルキルを表し、式中xが請求項1で定義されたとおりであり;nが単結合を表し;mが単結合を表し;R4がOHを表し;R5がOを表す、請求項1~6のいずれか一項記載の化合物。xが0を表す、請求項1~7のいずれか一項記載の化合物。互変異性体;又はトランスとして示されているC26、27CC結合がシスである異性体を含み;かつC53ケト存在する場合及びC15ヒドロキシル基とメタノールとの組み合わせによりケタールが形成されるメタノール付加物を含む、下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がエチルを表し、R2がエチルを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:又は下記の構造により表されるとおり、R1がCHMe2を表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:又は下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:又は下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がHを表し、R3がMeを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:又は下記の構造により表されるとおり、R1がCH2CHCH2を表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:又は下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がメチルを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが結合を表し、mが結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がCH2CHMe2を表し、R2がCH2CHMe2を表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが二重結合を表し、かつ、R5がHを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが二重結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1とR2とが共に6員の複素環に結合したCH2CH2OCH2CH2を表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1が4ビフェニリルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がシクロヘキシルを表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1とR2とが共に6員の複素環に結合したOCH2CH2CH2CH2を表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1が2ピリジニルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がシクロヘキシルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOHを表す:請求項1記載の化合物又はそのいずれか1つの医薬として許容し得る塩。互変異性体;又はトランスとして示されているC26、27CC結合がシスである異性体を含み;かつC53ケト存在する場合及びC15ヒドロキシル基とメタノールとの組み合わせによりケタールが形成されるメタノール付加物を含む、下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がエチルを表し、R2がエチルを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がCHMe2を表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がHを表し、R3がMeを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がCH2CHCH2を表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がメチルを表し、R2がメチルを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが結合を表し、mが結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がCH2CHMe2を表し、R2がCH2CHMe2を表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がOCH3を表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが二重結合を表し、かつ、R5がHを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1とR2とが共に6員の複素環に結合したCH2CH2OCH2CH2を表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1が4ビフェニリルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がシクロヘキシルを表し、R2がMeを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1がシクロヘキシルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1とR2とが共に6員の複素環に結合したOCH2CH2CH2CH2を表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:;又は下記の構造により表されるとおり、R1が2ピリジニルを表し、R2がHを表し、R3がHを表し、R4がHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表す:請求項1記載の化合物又はそのいずれか1つの医薬として許容し得る塩。互変異性体;又はトランスとして示されているC26、27CC結合がシスである異性体を含み;かつC53ケト存在する場合及びC15ヒドロキシル基とメタノールとの組み合わせによりケタールが形成されるメタノール付加物を含む、下記の構造により表されるとおり、R3がHを表し、R4がOHを表し、nが単結合を表し、mが単結合を表し、かつ、R5がOを表し:式中、R10が下記の表に示される基を表す:請求項1記載の化合物又はそのいずれか1つの医薬として許容し得る塩。医薬として使用するための、請求項1~11のいずれか一項記載の化合物。HCV、HBV、又はHIV感染などのウイルス感染の治療のための医薬として使用するための、請求項1~11のいずれか一項記載の化合物。請求項1~11のいずれか一項記載の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含む医薬組成物。請求項1~11のいずれか一項記載の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含み、第二の有効成分又はその後の有効成分をさらに含む医薬組成物。HCV、HBV、又はHIVなどのウイルス感染の治療の方法であって、対象に、治療上有効な量の請求項1~11のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、前記方法。請求項1~11のいずれか一項記載の化合物を製造する方法であって、式IIの化合物を:式中、R1及びR2は請求項1~11のいずれか一項に定義されたとおりであり、かつ、R8はC14アルキル又はベンジルを表すアルデヒド性マクロ環と反応させることを含む、前記方法:式中、R3、R4、R5、m、及びnは請求項1~11のいずれか一項に定義されたとおりである。互変異性体を含み;かつC53ケト及びC15ヒドロキシル基とメタノールとの組み合わせによりケタールが形成されるメタノール付加物を含む、下記の式若しくは式の化合物又はその医薬として許容し得る塩:。p基を含む場合、変数pは好適には0又は1を表す。一実施態様において、pは0を表し、他の実施態様において、pは1を表す。他の実施態様において、pは2を表す。R1及び又はR2がアルキルアリールを表す場合、例にはC12アルキルアリール、例えばベンジルがある。R1及び又はR2がアルケニルアリールを表す場合、例にはC23アルケニルアリール、例えばエテニルフェニルがある。R1及び又はR2がアルキルヘテロアリールを表す場合、例にはC12アルキルヘテロアリール、例えばメチルピリジニルがある。R1及び又はR2がアルケニルヘテロアリールを表す場合、例にはC23アルケニルヘテロアリール、例えばエテニルピリジニルがある。一実施態様において、R1は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルアリール、又はアルケニルヘテロアリールを表す。一実施態様において、R2は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルアリール、又はアルケニルヘテロアリールを表す。一実施態様において、R1は、単環式アリール又は単環式ヘテロアリールにより任意に置換されているアリール又はヘテロアリールを表す。R1は、例えば、フェニル環の一方が任意に置換されている4ビフェニリルを表すことがある。特定の実施態様において、R1及び又はR2の炭素原子はヘテロ原子により置換されており、例えば、R1及び又はR2の1、2、又は3個の、例えば1又は2個の、例えば1個の炭素原子複数可はヘテロ原子により置換されている。例えば、特定の実施態様において、NR1R2部分において、1、2、又は3個の、例えば、1又は2個の、例えば1個の炭素原子複数可はヘテロ原子により置換されている。CH3がNにより置換されている場合、形成される基はNH2である。CH2がNにより置換されている場合、形成される基はNHである。CHRがNにより置換されると、形成される基はNRである。したがって、R1及びR2内の窒素原子は、一級、二級、又は三級窒素原子になり得る。R1及び又はR2の炭素原子がヘテロ原子により置換される場合、好適にはO又はNにより、特にOにより置換される。特定の実施態様において、R1及び又はR2の炭素原子は、R1及び又はR2が、ヘテロシクリル、ヘテロシレニルpに示されているN基に隣接する末端CC部分を含まない。好適には、R2の炭素原子はヘテロ原子により全く置換されていない。いくつかの実施態様において、R1の炭素原子はヘテロ原子により全く置換されていない。好適には、R2は、水素、アルキル、又はアルケニルを表す。好適には、R2は、水素、C14アルキル、又はC14アルケニルを表し、特に、水素、C14アルキルを表す。一実施態様において、R2は水素を表す。他の実施態様において、R2はC14アルキルを表す。或いは、好適には、R1とR2とはそれらが結合している窒素と共に、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、又はピペラジン環などの5員~7員の複素環を表し、ピペラジンの4窒素がC14アルキルにより任意に置換されている。他の実施態様において、好適には、R1とR2とは、それらが結合している窒素と共に、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、又はピペラジン環などの5員~7員の複素環を表し、ピペラジンの4窒素がC14アルキルにより任意に置換されており、該環内の窒素原子に隣接する炭素原子が任意にカルボニルにより置換されている。このように、例えば、R1とR2とは、それらが結合している窒素と共にピペリジノンを表す。他の実施態様において、酸素原子は、R1及びR2が結合している窒素原子に隣接している。例えば、R1は、R1が結合している窒素原子に隣接している炭素原子がOを表すアルキル又はアルケニルを表すことがある。例えば、R1は、OC14アルキル、例えばOMeを表し得る。或いは、R1とR2とは結合し、R1が結合している窒素原子に隣接している炭素原子はOを表し、例えば、12オキサジナン環を形成する。好適には、xは0を表す。R1及び又はR2基の1つ以上の炭素原子が1個以上のハロゲン原子により置換される場合、例示的なハロゲン原子はF、Cl、及びBrであり、特にF及びCl、特にFである。例えば、R1及び又はR2部分は、最高6個のハロゲン原子pから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは、0、1、又は2を表し、R1及び又はR2の1つ以上の炭素原子はカルボニルにより任意に置換されており;或いは、R1とR2とは結合して、示されている窒素原子を含む飽和又は不飽和の複素環を形成し、かつ該環の1つ以上の炭素原子は、O、N、及びSpから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、式中pは0、1、又は2を表し、該環の1つ以上の炭素原子は任意にカルボニルにより置換されており、該複素環は任意にアリール又はヘテロアリール環に縮合していてよい。例示的なR1基には、メチル、CF3、エチル、プロピル、CH2CHCH、又はブチルがある。上述の例示的な基は、例えば、H、Me、エチル、プロピル、又はブチルを表すR2とまとめられることがある。さらなる例示的なR1基にはシクロペンチル又はシクロヘキシルがある。上述の例示的な基は、例えば、H、Me、エチル、プロピル又はOMeを表すR2とまとめられることがある。さらなる例示的なR1基には、任意に置換されているピリジニル又は任意に置換されているフェニル、例えば、フェニルにより置換されているフェニルがある。上述の例示的な基は、H、Me、又はOMeを表すR2とまとめられることがある。さらなる例示的なR1基には、OMe、OCF3、Oエチル、Oiプロピル、SMe、Onプロピル、Onブチル、Otブチル、Oiブチル、OCH2C3がある。上述の例示的な基は、例えば、H、Me、エチル、iプロピル、又はtブチルを表すR2とまとめられることがある。さらなる例示的なR1基には、O又はOがある。上述の例示的な基は、例えば、H又はMeを表すR2とまとめられることがある。NR1R2が共に形成する例示的な部分には、モルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、オキサジナン、及び下記の表に開示されているものがある。好適には、R3は、H又はxC14アルキル、例えば、H又はメチルなどのH又はC14アルキル、特にHを表す。好適には、nは単結合を表す。好適には、mは単結合を表す。好適には、R4はOHを表す。好適には、R5はOを表す。本発明の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はOCH3を表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はエチルを表し、R2はエチルを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はCHMe2を表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はメチルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はメチルを表し、R2はHを表し、R3はMeを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はCH2CHCH2を表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はメチルを表し、R2はメチルを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは結合を表し、mは結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はCH2CHMe2を表し、R2はCH2CHMe2を表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はOCH3を表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは二重結合を表し、かつ、R5はHを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はOCH3を表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは二重結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1とR2とは共に6員の複素環に結合したCH2CH2OCH2CH2を表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1は4ビフェニリルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はシクロヘキシルを表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はシクロヘキシルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1とR2とは共に6員の複素環に結合したOCH2CH2CH2CH2を表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1は2ピリジニルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はOCH3を表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOHを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はOCH3を表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はエチルを表し、R2はエチルを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はCHMe2を表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はメチルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はメチルを表し、R2はHを表し、R3はMeを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はCH2CHCH2を表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はメチルを表し、R2はメチルを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは結合を表し、mは結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はCH2CHMe2を表し、R2はCH2CHMe2を表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はOCH3を表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは二重結合を表し、かつ、R5はHを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1とR2とは共に6員の複素環に結合したCH2CH2OCH2CH2を表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1は4ビフェニリルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はシクロヘキシルを表し、R2はMeを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1はシクロヘキシルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の他の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1とR2とは共に6員の複素環に結合したOCH2CH2CH2CH2を表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。本発明の好適な実施態様において、下記の構造により表されるとおり、R1は2ピリジニルを表し、R2はHを表し、R3はHを表し、R4はHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。好適な実施態様の他の系列において、下記の構造により示されるとおり、R3はHを表し、R4はOHを表し、nは単結合を表し、mは単結合を表し、かつ、R5はOを表す:。これらの実施態様において、R10は下記の部分の1つを表す。いくつかの実施態様において、サングリフェリンAの構造を参照してC2627位の二重結合は、トランス形態の代わりにシス形態でもよい。本発明の好適な実施態様において、C2627位の二重結合は、下記の式により表されるとおり、シス形態である。そのような化合物は化学合成の間に製造できる。一般に、本発明の化合物は、サングリフェリンの半合成誘導体化により製造される。サングリフェリンは、その全体が組み込まれる国際公開第9702285号及び国際公開第9807743号に記載される方法又は本明細書に記載される追加の方法を利用して製造できる。サングリフェリンは、広範な実験操作の後で少量の物質を製造できる複雑な全合成化学によっても製造されてきた。サングリフェリンマクロ環アルデヒドを生成させる半合成方法は、米国特許第6124453号、Metternichら、1999年、Banteliら、2001年、及びSedraniら、2003年に記載されている。一般的に、式の特定の化合物又はその医薬として許容し得る塩を製造する方法は、下記を含む:サングリフェリンA又はサングリフェリンの他の天然のアナログ又は変数R3、R4、R5、n、及びmにより示される部位での変動を有するそのアナログのジヒドロキシ化;12ジオールの酸化開裂によるアルデヒドの生成;及び前記アルデヒドと、式IIの化合物を利用するホスホン酸エステルカルバニオンなどの安定化されたカルバニオン又はその標準的な形態とのカップリング。これは、下記に逆合成的に示される。式中、サングリフェリンAでは、R7はである。R8基は、同じでも異なっていてもよいが、独立に、アルキル又はベンジルを表す。このため、本発明の化合物を製造する方法は、式IIの化合物をアルデヒド性マクロ環式IIIの化合物と反応させることを含む。式IIIの化合物の製造は既に報告されている。簡単に述べると、SfAなどのサングリフェリンは、修飾されたシャープレス条件触媒性四酸化オスミウムを利用してジヒドロキシ化される。キラルなリガンドを使用すると選択性を高める助けになる。次いで、得られたジオールは、例えば過ヨウ素酸ナトリウムを利用して酸化開裂できる。次いで、得られた式IIIの化合物は、ホモログ化されたアミドへの誘導体化の基質として使用できる。典型的には、式IIの化合物は、非プロトン性溶媒に溶解され、冷却され、塩基、例えば水素化ナトリウムにより処理される。次いで、式IIIの化合物が加えられ、反応物は加温される。好適な期間の後、反応は停止されて、式Iの化合物は標準的な条件により精製される。基R4、R5、n、及びmに変化を導入するための誘導体化は、式IIIの化合物の生成前でも、ホモログ化されたアミドを形成する反応の後でも実施できる。簡単に述べると、R4のヒドロキシルは、トリエンを生成するために酸性条件中で好適な基質の処理により除去できる。R5のケトンは、水素化ホウ素ナトリウムなどの好適な還元剤による処理によりヒドロキシル基に還元できる。ヒドロキシル基はヨードに転化でき、次いでDBUなどの好適な塩基による処理により除去できる。式IIの化合物は、公知であるか、又は入手可能なアミンから容易に合成できる。スキーム1に示されているとおり、アミンを使用してクロロアセチルクロリド又は類似物を処理して、αクロロアミドを形成できる。次いで、αクロロアミドをアルブゾフ反応において処理して、式IIの化合物を生成させる。式IIの化合物に至る他の経路は当業者には明らかであろう。望まれる場合又は必要な場合、TWGreenPGMWutsの文献、有機合成における保護基の化合物における官能基を保護できる。メタノール付加物は、発酵及びブロスからの単離により製造でき、或いはサングリフェリンAから製造できる。本明細書に提供される具体的な方法及び引用文献に加え、当業者は、合成法に関して、ボーゲルの実用有機化学の教科書及びマーチの先端有機化学を含むが、これらに限定されない標準的な教科書を調べることもできる。R4Hかつn結合である式の化合物先に示されている式III及びIVの化合物参照の生成を可能にするポリケチド生合成工学法も記載されている。これは、サングリフェリンモジュール12の還元ループを、活性デヒドラターゼ、エノールレダクターゼ、及びケトレダクターゼ領域を与える還元ループ、エリスロマイシンモジュール4、又はサングリフェリンモジュール6由来の還元ループにより置換することを含む。当業者は、公表された配列に対する相同性に基づいてI型ポリケチドシンターゼモジュールにおいて好適な還元ループを特定でき、したがって、この変化が3種の活性領域DH、ER、及びKRを含む任意のそのようなループの導入により達成可能であることを認識するだろう。ポリケチド生合成工学の方法及び還元ループの概念は、国際公開第9801546号及び国際公開第0001827号に記載されている。これらの化合物が市販の化合物から新たに合成できる、すなわち全合成できることは当業者には明らかである。トリペプチドの合成及びその後のマクロ環形成は記載されている。このような方法を変更すれば、本発明の化合物を生成することができる。本発明の他の化合物は、それ自体で公知である方法又は先に記載されたものに類似の方法により製造できる。本発明のサングリフェリンマクロ環は、単独又は他の治療剤と組み合わせて投与できる。2種以上の薬剤の同時投与により、それぞれのより低い投与量を利用でき、そのため副作用が低減され、効力の向上をもたらすことができ、そのためより高いSVR及び耐性の低減をもたらすことができる。したがって、一実施態様において、本発明のサングリフェリンマクロ環は、標準治療から採用された、HCV感染の治療のための1種以上の治療剤と共に同時投与される。これはインターフェロンのことがある。代わりとなる実施態様において、本発明のサングリフェリンマクロ環は、STATCなどの1種以上の抗ウイルス剤と共に同時投与されるが、それは下記の1種以上になり得る:非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、若しくはVX759、ヌクレオシド又はヌクレオチドポリメラーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、SCH503034、TMC435350、MK7009、R7227ITMN191、EA058、EA063、若しくはVX985、NS5A阻害剤、シリマリン、NS4b阻害剤、セリンCパルミトイルトランスフェラーゼ阻害剤、ニタゾキサニド、又はウイルス侵入阻害剤。代わりとなる実施態様において、本発明のサングリフェリンマクロ環は、HIV治療のための1種以上の他の抗ウイルス剤などと共に同時投与されるが、それは下記の1種以上になり得る:ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、融合阻害剤、CCR5阻害剤、成熟阻害剤、CD4モノクローナル抗体、及びインテグラーゼ阻害剤。代わりとなる実施態様において、本発明のサングリフェリンマクロ環は、HBV治療のための1種以上の他の抗ウイルス剤と共に同時投与されるが、それは下記の1種以上になり得る:インターフェロン、ヌクレオシド若しくはヌクレオチドアナログ、他の免疫調節剤、又はHMGCoAレダクターゼ阻害剤。製剤は、簡便には単位剤形で呈すことができ、薬学の分野に周知である方法のいずれによっても製造できる。そのような方法は、有効成分を1種以上の副成分を構成する担体と混合する工程を含む。一般的に、製剤は、有効成分を、液体担体又は微粉砕固体担体又は両方と均一かつ密接に混合し、次いで、必要な場合生成物を成形することにより製造される。本発明の化合物は、通常、医薬として許容し得る剤形で、任意に非毒性の有機又は無機の酸、又は塩基、付加塩の形態にある有効成分を含む医薬製剤の形態で経口投与されるだろう。治療すべき疾患及び患者、並びに投与経路によって、組成物は種々の投与量で投与され得る。例えば、本発明の化合物は、即放、遅延放出、又は制御放出用途のために、着香剤又は着色剤を含み得る、錠剤、カプセル剤、座薬、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、及び特定の複合ケイ酸塩などの崩壊剤、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、スクロース、ゼラチン、及びアラビアゴムなどの造粒結合剤を含み得る。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、及びタルクなどの滑沢剤も含まれ得る。類似の種類の固体組成物は、ゼラチンカプセル中の充填剤としても利用できる。この点で好ましい賦形剤には、ラクトース、スターチ、セルロース、乳糖、又は高分子量ポリエチレングリコールがある。水性懸濁剤及び又はエリキシル剤では、本発明の化合物は、種々の甘味剤若しくは着香剤、着色剤若しくは染料と、乳化剤及び又は懸濁化剤と、水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリンなどの希釈剤と、及びこれらの組み合わせと組み合わせてもよい。錠剤は、任意に1種以上の副成分と共に圧縮又は成型により製造できる。圧縮錠は、好適な機械中で、結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤、界面活性剤又は分散剤と任意に混合された、粉末又は顆粒などの自由流動形態にある有効成分を圧縮することにより製造できる。湿性錠は、好適な機械中で、不活性な液体希釈剤により湿らした粉末状化合物の混合物を成型することにより製造できる。錠剤は任意にコーティング又は溝をつけてもよく、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを種々の比率で利用して有効成分の緩徐放出又は徐放性放出を与えて所望の放出プロファイルを与えるように製剤できる。経口投与に好適な本発明による製剤は、それぞれ所定量の有効成分を含む、カプセル剤、カシェ剤、若しくは錠剤などの分離した単位として;散剤若しくは顆粒剤として;水性液体若しくは非水性液体の液剤又は懸濁剤として;又は水中油型液体エマルション若しくは油中水型液体エマルションとして呈することができる。有効成分は、ボーラス、舐剤、又はペースト剤として呈することもできる。上記に詳細に言及された成分に加えて、本発明の製剤は、問題とする製剤の種類に関する分野に従来ある他の薬剤を含んでよく、例えば、経口投与に好適なものは着香剤を含んでよいことを理解されたい。好都合なことに、保存剤及び緩衝剤などの薬剤はビヒクル中に溶かすことができる。安定性を増すために、組成物を、バイアルに充填した後に凍結し、真空下で水を除去できる。次いで、凍結乾燥された乾燥散剤をバイアルに密封し、注射用の水の付随するバイアルを供給して、使用前に液体を再構成できる。本発明の化合物の投与すべき用量は、特定の化合物、関与する疾病、対象、及び疾病の性質及び重症度並びに対象の肉体的状態、選択された投与経路により変わるだろう。適切な用量は当業者により容易に決定できる。組成物は、投与の方法により、01重量、好ましくは5~60、より好ましくは10~30重量の本発明の化合物を含み得る。本発明の化合物の個別の用量の最適量及び間隔が、治療すべき病態の性質及び程度、投与の形態、経路、及び部位、並びに治療される特定の対象の年齢及び病態により決定され、最終的には利用すべき適切な用量を医師が決定するだろうことを当業者は認識するだろう。この用量は、適切なだけ頻繁に繰り返すことができる。副作用が現れた場合、用量の量及び又は頻度を、通常の診療に従って、変更又は低減できる。本発明のさらなる態様は下記を含む:医薬として使用するための本発明の化合物;HCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染特にRNAウイルス感染又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費などの他の疾病の治療のための医薬として使用するための本発明の化合物;本発明の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含む医薬組成物;本発明の化合物を、医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含み、第2又はそれに次ぐ有効成分、特にHCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費の治療に適応される有効成分をさらに含む、医薬組成物;HCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染特にRNAウイルス感染又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費の治療の方法であって、対象に治療上有効な量の本発明の化合物を投与することを含む方法;HCV、HBV、若しくはHIV感染などのウイルス感染又は筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、ベスレムミオパチー、多発性硬化症、糖尿病、筋萎縮性側索硬化症、双極性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、心筋梗塞、若しくは慢性アルコール消費の治療のための医薬の製造のための本発明の化合物の使用。一実施態様において、上述の病態は、HCV、HIV感染、及び筋ジストロフィーから選択される。他の実施態様において、上述の病態はHBV感染である。を、オートミール寒天培地、MAM、又はISP2上で28°Cで維持する。ストレプトマイセス属A92308110を、オートミール寒天上で、28°Cで7~10日増殖させた。寒天板の表面からでた胞子を、蒸留した20wv滅菌グリセロール中に回収し、05mlのアリコートで80°Cで保存した。凍結胞子ストックを、シード培地SGS又はSM253の接種に使用した。接種されたシード培地を、50又は25cmの行程で200~300rpmで振盪しながら、27°Cで24時間インキュベートした。発酵培地SGP2又はBT6を25~10のシード培養物により接種し、5又は25cmの行程で200~300rpmで振盪しながら、24°Cで4~5日間インキュベートした。次いで、培養物を抽出のために回収した。培地処方培地の調製に使用した水は、MilliporeElixAnalyticalGradeWaterPurificationSystemを使用して調製した。滅菌前のpHは、10MNaOH10MH2SO4でpH70に調整した121°C、20~30分加熱により滅菌備考消泡剤は、シードフラスコではなく、シード発酵槽にのみ使用最終体積を適宜調整して、シード体積とする滅菌前のpHは、10MNaOHでpH68に調整121°C、20~30分加熱により滅菌備考最終体積を適宜調整して、シード体積とする消泡剤は、フラスコではなく、発酵槽にのみ使用及び酢酸エチルを加え、15~30分間混合し、次いで10分間遠心分離する。04mLの有機層を回収し、蒸発乾固させ、次いで020mLのアセトニトリルに再溶解させる。HPLC条件:C18HypercloneBDSC18カラム3μ46mm×150mmPhenomenexAnalyticalC18SecurityGuardCartridgeを備えるカラム温度50°C流速1mL分240nmで紫外モニター20μLアリコートを注入溶媒勾配:0分:55B10分:55B65分:100B100分:100B1005分:55B130分:55B溶媒Aは、水01ギ酸である。溶媒Bは、アセトニトリル01ギ酸である。これらの条件下でSfAは55分に溶離する。これらの条件下でSfBは65分に溶離する。LCMSは、上述のクロマトグラフィー及び溶媒を利用する、ポジティブイオンモードで運転しているBrukerDaltonicsEsquire3000エレクトロスプレー質量分析器と組み合わせた一体型AgilentHP1100HPLCシステムで実施する。を備えるカラム温度50°C流速1mL分210、240、及び254nmで紫外モニター溶媒勾配:0分:10B20分:10B15分:100B17分:100B1705分:10B20分:10B溶媒Aは、水01ギ酸である。溶媒Bは、アセトニトリル01ギ酸である。で運転する。API4000装置を使用:UltimateAQC18カラム温度XX°C流速04mL分:02分:10B07分:60B11分:60B14分:98B23分:98B24分:10B35分:停止03分:10B09分:95B19分:95B20分:10B30分:停止溶媒Aは、H2O0025FA1mMNH4OACである。溶媒Bは、MeOH0025FA1mMNH4OACである。を含み、細胞増殖培地10FCS、1非必須アミノ酸、1ペニシリンストレプトマイシン、及び2ジェネティシンInvitrogen社製を補ったDMEM中で13~14の比で3~4日間75cm2の組織培養フラスコで継代培養したHuh52細胞を回収し、6500細胞ウェルの密度で96ウェル組織培養マイクロタイタープレート中で、アッセイ培地に播種した。マイクロタイタープレートを一晩インキュベートすると、非コンフルエントな細胞単層を生じる。希釈系列を準備する;各希釈系列を少なくとも二連で実施する。アッセイのセットアップ後に、マイクロタイタープレートを72時間インキュベートする。抗代謝効果の評価のために、アッセイ培地を吸引し、フェノールレッド不含培地中の75μLの5MTS溶液と替え、15時間インキュベートする。吸光度を498nmの波長で測定し、光学濃度を、非処理対照のパーセンテージに変換する。抗ウイルス効果の評価には、アッセイ培地を吸引し、細胞単層をPBSにより洗浄する。洗浄バッファを吸引し、25μLのGloLysisBufferを加え、その後室温で5分間溶解を進行させる。その後、50μLのLuciferaseAssaySystemを加え、ルシフェラーゼ発光シグナルを直ちに定量化する。相対発光単位を非処理対照のパーセンテージに変換する。EC50及びEC90は、それぞれ、ウイルス複製の50及び90の阻害が観察される濃度を表す。CC50は、細胞の代謝活性が非処理細胞の代謝活性の50に低下する濃度を表す。選択指数は、化合物の治療域を表すものであるが、CC50EC50として計算する。ある濃度の化合物は、特定の濃度で抗レプリコン効果が閾値の70を超え、代謝活性の30以下の低減が見られる場合に、HCVレプリコン系における真の抗ウイルス効果を惹起すると考えられる。のACNと混合する。試料を遠心分離し、次いでLCMSにより分析する。被験化合物を、10mMの濃度でDMSO中のストック溶液として調製する。ストック溶液を、二連で、15mLエッペンドルフ管中でpH74のPBSに希釈して、最終DMSO濃度1で100μMの標的濃度にする。次いで、試料管を室温で穏やかに4時間振盪する。試料を遠心分離し、未溶解の粒子を沈殿させる。次いで、上清を新しい管に移し、PBSで希釈するのMeOHと混合する。最後に、試料を、LCMSMS分析用の内部標準ヒドロキシマクロ環、6を含む同体積のACNと混合する。、能動輸送を調べる。LCMSMSを利用して、被験化合物及び標準対照化合物プロパノロール及びアセブトロールなどの両方のレベルを定量化する。及び経口的の両方で試験動物例えば、マウス又はラットに投与し、一定間隔で採血して、薬物の血漿濃度が時間とともに変動する様子を調査する。経時的な血漿濃度の経時変化を利用して、標準モデルを利用して化合物の絶対的なバイオアベイラビリティをパーセンテージとして計算できる。典型的なプロトコルの例を以下に記載する。マウスに、1、10、又は100mgkgの本発明の化合物又は親化合物を、iv又はpoで投薬する。5分、10分、15分、30分、45分、60分、90分、120分、180分、240分、360分、420分、及び2880分に採血し、試料中の本発明の化合物又は親化合物の濃度をHPLCにより決定する。次いで、血漿濃度の経時変化を利用して、血漿濃度時間曲線下面積などのキーパラメーターを誘導できるが、バイオアベイラビリティの正確な決定に利用できる追加の因子には下記がある:化合物の終末半減期、全身クリアランス、定常状態分布容積、及びF。次いで、これらのパラメーターを、非コンパートメント法又はコンパートメント法により分析して、計算されたバイオアベイラビリティのパーセンテージを与えるが、この種類の方法に関しては、Egorinら、2002、及び該文献の引用文献を参照されたい。及びMRP2トランスポーターの阻害及び活性化の評価には、SolvoBiotechnology社のインビトロATPアーゼアッセイが利用できる。化合物を、バナジン酸塩の非存在下と存在下の両方で、MDR1又はMRP2膜小胞と共にインキュベートし、潜在的なATPアーゼ活性化を試験する。さらに、トランスポーターATPアーゼ活性の起こりうる阻害を検出するために、ベラパミルスルファサラジンの存在下で類似のインキュベーションを実施する。ATPアーゼ活性は、無機のリン酸塩を分光測定により定量化して測定する。活性化は、ATPアーゼ活性のバナジン酸感受性増加から計算する。阻害は、ベラパミルスルファサラジンに媒介されるATPアーゼ活性の低下から決定する。。簡単に述べると、ヒトPBMCをFicollHypaqueで層状にすることにより鮮血から精製した。一次ヒトCD4T細胞を、抗CD4ダイナビーズによるポジティブ選択及びそれに続くデタッチャビーズを利用する放出により、PBMCから精製した。細胞を、10FCS、MEMアミノ酸、Lグルタミン、MEMビタミン類、ピルビン酸ナトリウム、及びペニシリンプラスストレプトマイシンを補ったRPMI培地1640中で培養し、その後、細菌性超抗原ブドウ球菌エンテロトキシンB及び他のドナー由来のマイトマイシンCに殺傷されたPBMCで活性化した。刺激の3日後、細胞を、IL2を含む培地中で12に分けた。次いで、培養物をIL2培地中で2日ごとに12に分け、刺激の7日後にHIVに感染させた。初代ヒトマクロファージを発生させるために、単球をネガティブ選択によりヒトPBMCから精製し、106mlの細胞濃度で、10FCS、MEMアミノ酸、Lグルタミン、MEMビタミン、ピルビン酸ナトリウム、及びペニシリン、ストレプトマイシン、及び50ngmlのリコンビナントヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を補ったDMEM中で活性化及び培養し、5CO2を補った加湿雰囲気中で37°Cに維持した。単球誘導マクロファージを得るために、細胞をプラスチックに付着させ、6日間培養して分化させた。CD4HeLa細胞、Jurkat細胞、活性化CD4末梢血Tリンパ球、及びマクロファージを、濃度を上げた被験物質の存在下でpNL43GFP又はpNL43BaLGFPと共にインキュベートした。48時間後、FACSによりGFP陽性細胞のパーセンテージを分析して感染を点数化し、EC50を計算した。を含む完全培地と替える。3日後、培地を、適切に希釈された被験化合物を含む新鮮な培地に替える。被験物質の最初の投与の6日後、細胞培養物上清を回収し、プロナーゼで処理し、次いで、リアルタイム定量的TaqManqPCRアッセイに使用する。増幅されたHBVDNAにハイブリダイズするクエンチされた蛍光プローブ分子のエキソヌクレアーゼ分解から生じる蛍光シグナルの増加をモニタリングすることにより、PCR増幅されたHBVDNAをリアルタイムに検出する。各PCR増幅に対して、精製されたHBVDNAの希釈物を使用して、検量線が同時に生成される。抗ウイルス活性は、HBVDNAレベルの低下から計算される。次いで、色素取り込みアッセイを利用して、細胞生存率を計算し、それを利用して毒性を計算する。治療指数をTC50IC50として計算する。アッセイ免疫抑制活性を下記のとおり試験した:末梢血単核細胞集団を、ヒストパック上での遠心分離を利用して、2名の正常な関連性のないボランティアドナーの血液から精製した。細胞を計数し、補助剤及び2ヒトAB血清を含むRPMI培地中で、96ウェルプレート中で1×105細胞ウェルで播種した。培養条件は下記のとおりであった:それぞれ6種の異なる濃度での被験物質の存在下又は非存在下の、細胞集団A及びBのみ並びに細胞A及びBの混合集団。化合物を、1logの増加分で10μM~00001μMの範囲の投与量で試験した。対照ウェルは、被験化合物ウェルに存在するものに相当する濃度のビヒクルを含んでいた。培養物を三連で96ウェルプレートに確立し、加湿雰囲気中で5CO2中37°Cでインキュベートした。3Hチミジンをアッセイセットアップの6日後に加え、24時間後に採取した。次いで、異なる培養条件の間の増殖のレベルを比較した。被験化合物の各希釈物がMLR中の増殖を阻害する能力を、阻害パーセンテージとして計算した。これにより、IC50の評価ができた。IC50を計算するために、X軸を対数スケールに変換した。非線形回帰を利用して、平均のデータポイントにフィッティングした。S状の可変の傾きを選択した。。NuncMaxiSorb8ウェルストリッププレートをGST又はGSTCypDにより4°Cで16時間コーティングし、ブロックした。リコンビナントNS5AHisを、50μLの結合緩衝液中4°Cで16時間ウェルに加えた。次いで、捕捉されたNS5AHisを、マウス抗His抗体及びウサギ抗マウスホースラディッシュペルオキシダーゼホスファターゼ抗体を使用して検出した。実験は全て、2つの異なるバッチのリコンビナントCypD及びNS5Aタンパク質を使用して2回行った。を、CypDの存在下での速度から引く。酵素反応の初期速度を、吸光度変化の経時変化の一次回帰分析により分析した。で24時間インキュベートした。シード培養物から、300mLを、15LBraun発酵器中の002消泡剤SAG471を含む15リットルの一次シード培地SGSに移した。出発攪拌の設定を300rpm以上、通気速度05VVM、溶存酸素レベルを撹拌カスケードレベルを撹拌カスケードにより制御して30空気飽和以上にして、発酵を24°Cで5日間実施した。SfAは、発酵ブロス中10~20mgLで産生されたのが観察された。を遠心分離により清澄化した。得られた細胞ペレットを酢酸エチルで2回抽出したが、それぞれオーバーヘッドパドル攪拌機により1時間攪拌し、溶媒をポンプで吸引する前に放置して沈降させることにより抽出した。次いで、酢酸エチル層を合わせ、溶媒を減圧下40°Cで除去して、油状の残渣を得た。次いで、この油状残渣を、8020メタノール水に懸濁させ、ヘキサンで2回抽出した。次いで、8020メタノール水分画を減圧下で乾燥させると、SfA及びSfBを含む粗製乾燥抽出物を与えた。この抽出物をメタノールに溶解させ、15gのシリカゲルと混合して乾燥させて粉末とした。該粉末を、100CHCl3に充填されているシリカゲルカラムに入れた。溶離溶媒1リットルごとに、メタノール濃度を段階的に1ずつ増加させ、250mlのフラクションを集めた。3リットルの溶媒溶離の後、メタノール濃度を段階的に2ずつ増加させて8にした。SfA及び又はSfBを含むフラクションを合わせて、真空中で蒸発乾固させ、SfA及びSfBを分取HPLCにより精製した。分取HPLCは、下記の時間表で20ml分で溶媒A及び溶媒Bを流すWatersXterraPrepMSC18OBD10mmカラムで行った。t0分、55Bt4分、55Bt30分、100Bt32分、100Bt36分、55BSfAを含むフラクションを合わせて、乾燥させた。の合成中のサングリフェリンA、5、2PHAL、四酸化オスミウムの25wttertブチルアルコール溶液、及びメタンスルホンアミドの攪拌溶液に、室温で、4mLの水中のフェリシアン化カリウム及び炭酸カリウムの溶液を加えた。1時間攪拌後、亜硫酸ナトリウムの飽和水溶液を加えた。生じた混合物を30分間攪拌し、次いで3回分の酢酸エチルにより抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、逆相カラムを使用してCombiflashにより精製すると、2627ジヒドロキシサングリフェリン、9を白色の固体として与えた。QCLCMSRT53分mz11248MH11227MH。のTHF及び水中の溶液に、過ヨウ素酸ナトリウムを加えた。生じた混合物を室温で2時間攪拌し、重炭酸ナトリウム飽和水溶液を加えた。この混合物を、3回分の酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、逆相カラムを使用してCombiflashにより精製すると、アルデヒド性マクロ環、8を白色の固体として与えた。QCLCMSRT40分、mz7614MNa7373MH。の無水THF中の懸濁液に、ジエチル2アミノ2オキソエチルホスホナートの無水THF溶液をN2雰囲気下で、3°Cで攪拌しながら滴加した。次いで、該溶液を、透明になるまで室温で攪拌した。8の無水THF溶液を該透明溶液に滴加し、混合物を室温で30分間攪拌した。該混合物を水によりクエンチし、THFを減圧下で除去した。残渣を酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、次いで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去すると、14mgの残渣を与えた。粗製の化合物をTLCプレートに載せ、アセトン石油エーテル32で展開した。目標とするバンドUVで可視化を回収し、アセトンと混合し、次いでシリカゲルのパッドで濾過した。濾過を真空下で濃縮した。最後に、得られた試料にアセトニトリル及び水を加え、溶液を凍結乾燥させると、所望の生成物を白色の固形粉末として与えた。LCMS824M1。1HNMRに関しては図2参照。及び亜リン酸トリメチルの混合物を180°Cで8時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却し、蒸留すると、中間体12を無色の油として与えた。の無水THF中の懸濁液に、ジエチル22オキソエチルホスホナートの無水THF溶液を、N2雰囲気下で3°Cで攪拌しながら滴加した。次いで、該溶液を、透明になるまで室温で攪拌した。8の無水THF溶液を、該透明溶液に滴加し、混合物を室温で30分間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、THFを減圧下で蒸発させた。残渣をEAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、次いで乾燥させた。溶媒を蒸発させて除くと、17mgの残渣を与えたが、それを分取TLCにより精製した。粗製化合物をTLCプレートに載せ、アセトン石油エーテル32で展開した。目標とするバンドを回収し、アセトンと混合し、次いでシリカゲルのパッドで濾過した。濾過を真空下で濃縮した。最後に、得られた試料にアセトニトリル及び水を加え、溶液を凍結乾燥させると、所望の生成物を白色の固形粉末として与えた。LCMS836M1。1HNMRに関しては図3参照。及び亜リン酸トリエチルの混合物を140°Cで8時間攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、200mgの試料を分取HPLCによる精製に使用すると、中間体15を無色の油として与えた。の無水THF中の懸濁液に、ジエチル22オキソエチルホスホナートの無水THF溶液を、N2雰囲気下で、3°Cで、攪拌しながら滴加した。次いで、該溶液を透明になるまで室温で攪拌した。8の無水THF溶液を、該透明溶液に滴加し、室温で30分間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、THFを減圧下で蒸発させた。残渣をEAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、次いで乾燥させた。溶媒を蒸発させて除くと、18mgの残渣を与え、それを分取TLCにより精製した。粗製化合物をTLCプレートに載せ、アセトン石油エーテル32で展開した。目標とするバンドを回収し、アセトンと混合し、次いでシリカゲルのパッドで濾過した。濾過を真空下で濃縮した。最後に、得られた試料にアセトニトリル及び水を加え、溶液を凍結乾燥させると、所望の生成物を白色の固形粉末として与えた。LCMS822M1。1HNMRに関しては図4参照。及び亜リン酸トリエチルの混合物を130°Cで8時間攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、分取HPLCにより精製すると、中間体18を無色の油として与えた。の無水THF中の懸濁液に、ジエチル22オキソエチルホスホナートの無水THF溶液を、N2雰囲気下で、3°Cで、攪拌しながら、滴加した。次いで、該溶液を透明になるまで室温で攪拌した。8の無水THF溶液を、該透明溶液に滴加し、混合物を室温で30分間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、THFを減圧下で蒸発させた。残渣をEAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、次いで乾燥させた。溶媒を蒸発により除くと、14mgの残渣を与え、これを分取TLCにより精製した。粗製化合物をTLCプレートに載せ、アセトン石油エーテル32で展開した。目標とするバンドを回収し、アセトンと混合し、次いでシリカゲルのパッドで濾過した。濾過を真空下で濃縮した。最後に、アセトニトリル及び水を得られた試料に加え、溶液を凍結乾燥させると、所望の生成物を白色の固形粉末として与えた。LCMS794M1。1HNMRに関しては図5参照。及び亜リン酸トリエチルの混合物を150°Cで一晩攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、分取HPLCにより精製すると、中間体21を与えた。のTHF溶液に、無水THF中のNaHを0°Cで攪拌しながら加えた。次いで、該溶液を透明になるまで室温で攪拌した。次いで、8を該透明溶液に加え、混合物を室温で1時間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、EAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を分取HPLCカラム:SpringC18、移動相:AH2OBアセトニトリル、勾配:10分間で30から40になるBにより精製すると、22を白色の固体として得た。LCMS808M1。1HNMRに関しては図6参照。3及び23の混合物を180°Cで6時間攪拌した。該反応物を冷却し、分取HPLCにより精製すると、中間体24を無色の油として得た。に溶かした24の溶液に、NaHを0°Cで加え、10分間攪拌した。次いで、該溶液を室温で攪拌し、化合物8を加えた。該反応物を室温で30分間攪拌し、水でクエンチした。該反応物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製すると、25を白色の固体として得た。1HNMRに関しては図7参照。に溶かした10の0°Cの溶液に、水素化ホウ素ナトリウムを加えた。該反応混合物を0°Cで3時間攪拌した。該反応物を重炭酸ナトリウム溶液に加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で除去した。残渣を直接次の工程に使用した。に溶かしたトリフェニルホスフィンの溶液に、イミダゾール及びヨウ素を加えた。該反応混合物を30分間攪拌し、0°Cに冷却した。化合物27を加え、該反応物を室温で45時間攪拌した。該反応物を、重炭酸ナトリウム飽和水溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をNa2S2O3飽和水溶液及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残渣を直接次の工程で使用した。に溶かした27の溶液に、0°CのDBUを加えた。該反応混合物を室温で2時間攪拌した。該反応物を、重炭酸ナトリウム飽和水溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製すると、28を白色の固体として与えた。1HNMRに関しては図8参照。に溶かした10の溶液に、HCl水溶液を加えた。該反応物を室温で4日間攪拌し、該反応物を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製すると、29を白色の固体として与えた。1HNMRに関しては図9参照。及び亜リン酸トリエチルの混合物を140°Cで6時間攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、combiflashにより精製すると、中間体31を与えた。のTHF溶液に、無水THF中のNaHを室温で攪拌しながら加えた。次いで、8を該透明溶液に加え、該混合物を室温で3時間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、EAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製すると、32を白色の固体として得た。LCMS892M1。1HNMRに関しては図10参照。及び亜リン酸トリエチルの混合物を140°Cで一晩攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、combiflashにより精製すると、中間体34を無色の油として与えた。のTHF溶液に、無水THF中のNaHを0°Cで攪拌しながら加えた。次いで、該溶液を透明になるまで室温で攪拌した。次いで、8を該透明溶液に加え、該混合物を室温で3時間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、EAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製すると、14mgの純粋な生成物35を白色の固体として得た。LCMS850M1。1HNMRに関しては図11参照。、アリルアミン、ナトリウムtertブトキシド、PdCl2、及びDPPFの20mLの無水THF中の混合物を80°Cに4時間加熱した。TLCにより、出発物質4ブロモビフェニルの完全な消失が示された。暗赤色の反応混合物をセライトに通して濾過し、真空中で濃縮すると、暗色の油を残した。該油を、PEEAを使用するシリカゲルのクロマトグラフィーにかけると、37を黄色の固体として与えた。、10PdC、及びメタンスルホン酸の混合物を2時間還流した。TLCにより、出発物質Nアリルビフェニル4アミンの消失が示された。該反応混合物をセライトのパッドに通して濾過し、NaOH水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、16gの粗生成物38を与え、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。中の粗製物38、Et3Nの溶液に、クロロアセチルクロリドを滴加した。該反応混合物を0~10°Cで3時間攪拌し、氷水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、薄黄色の固体を与えた。該固体を、PEEAにより分取TLCにより精製すると、所望の化合物39を与えた。2クロロアセトアミド39及び亜リン酸トリエチルの混合物を140□で一晩攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、combiflashにより精製すると、中間体40を薄黄色の固体として与えた。のTHF溶液に、無水THF中のNaHを0°Cで攪拌しながら加えた。次いで、該溶液を透明になるまで室温で攪拌した。次いで、8を該透明溶液に加え、該混合物を室温で3時間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、EAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製すると、94mgの純粋な生成物41を白色の固体として得た。LCMS932M1。1HNMRに関しては図12参照。、Et3Nの乾燥DCM溶液に、クロロアセチルクロリドを滴加した。該反応混合物を0~10°Cで3時間攪拌し、氷水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮すると、薄黄色の液体を与え、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。及び亜リン酸トリエチルの混合物を140°Cで一晩攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、combiflashにより精製すると、中間体44を薄黄色の液体として与えた。のTHF溶液に、無水THF中のNaHを0°Cで攪拌しながら加えた。次いで、該溶液を、透明になるまで室温で攪拌した。次いで、8を該透明溶液に加え、該混合物を室温で3時間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、EAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製すると、25mgの純粋な生成物45を白色の固体として得た。LCMS876M1。1HNMRに関しては図13参照。アセトアミド及び亜リン酸トリエチルの混合物を140°Cで6時間攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、combiflashにより精製すると、中間体47を与えた。のTHF溶液に、無水THF中のNaHを室温で攪拌しながら加えた。次いで、8を該透明溶液に加え、該混合物を室温で3時間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、EAで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を分取HPLCにより精製し、197mgの純粋な生成物48を白色の固体として得た。LCMS857M1。を該透明溶液に加え、該混合物を室温で3時間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣を分取TLC及び分取HPLCにより精製すると、24mgの純粋な生成物51を白色の固体として得た。LCMS862M1。1HNMRに関しては図14参照。、それらの大多数は該細胞系に対して低い細胞傷害性も示す。先に記載されたマクロ環サングリフェリンヒドロキシマクロ環、6はHCV阻害では効力が低く、シクロスポリンA、1及びサングリフェリンA、5は両方ともより高い細胞傷害性を示す。と比較して高い溶解度を有し、シクロスポリンAより高い溶解度を有する。における免疫抑制活性の評価免疫抑制活性は、抗ウイルス療法としての使用には望まれない副作用である。したがって、化合物を、全般的方法に記載されたとおり混合リンパ球反応において試験した。シクロスポリンA、1及びサングリフェリンA、5を比較として含めた。分かるとおり、本発明の化合物48及び55は両方とも非常に低レベルの免疫抑制活性を示し、CsA、1及びSfA、5よりも免疫抑制が低い。株の生成サングリフェリンモジュール12の還元ループは、サングリフェリン分子のC17のヒドロキシル基に関与するケトレダクターゼを含む。ラパマイシンモジュール13及びサングリフェリンモジュール6の両方由来の還元ループは、機能的領域の全てを含み、βケト基の完全な処理をもたらしメチレンを生み出す;具体的には、それらは、ケトをヒドロキシル基に還元するケトレダクターゼ、水を除いて二重結合をつくるデヒドラターゼ、及び二重結合をメチレンに還元するエノイルレダクターゼを含む。ベクターpMGo136及びpMGo137は、サングリフェリン生合成用の生合成クラスターのモジュール12の還元ループの、それぞれラパマイシンモジュール13又はサングリフェリンモジュール6由来の還元ループへの置換を操作するベクターである。この実施例に使用するDNAフラグメントの位置は2011年1月に利用可能な配列に基づいて与えられるが、GenbankDNA配列は更新され得るのでおおよその報告である。ベクターは下記のとおり構築する。は、サングリフェリンモジュール12の還元ループの上流に相同領域を、追加の配列5及び3の両方を共に含み、クローニングを助ける制限酵素配列を組み込んでいる。このフラグメントは、GenScriptにより合成され、GenScriptプロトコルにしたがって、この点を超えてクローニングに関与しない12の保護的フランキング塩基を両側に含んでpUC57中に提供され、プラスミドpMGo128をもたらした。及びMGo014を使用し、テンプレートとしてのコスミドpTL3102DNA及びKODHotStartDNAポリメラーゼを使用して、1994bpDNAフラグメントを標準的なPCR反応で増幅した。5伸長は、制限部位を導入して増幅されたフラグメントのクローニングを促進するように各オリゴにおいて設計した。或いは、ストレプトマイセス属A92308110由来のゲノムDNAを、このPCR反応のテンプレートとして使用して同じDNAフラグメントを与えることも可能であり、又はDNAフラグメントを、例えばGenScriptを利用してDNA合成から得ることも可能であった。生じた1995bpPCR産物は、サングリフェリンモジュール12の還元ループの下流に相同領域を含むが、望ましくない挿入Gが位置1978にある。1995bpPCR産物は、SmaIにより直線化され脱リン酸化されたpUC19中にクローニングされ、プラスミドpMGo123をもたらした。pUC19中の1995bpPCR産物の配向は、インサートのHindIII部位がpUC19ポリリンカーのHindIII部位に隣接するようなものであった。pMGo123中のインサートの配列は、シーケンシングにより確認した。追加の塩基を含む領域を避けるため、より短い下流領域を下記のとおり目標に定めた:オリゴMGo037及びMGo038を使用し、テンプレートとしてのプラスミドpMGo123DNA及びKODHotStartDNAポリメラーゼを使用して、1956bpDNAフラグメントを標準的なPCR反応で増幅した。5伸長は、制限部位を導入して増幅されたフラグメントのクローニングを促進するように各オリゴにおいて設計した。1956bpPCR産物は、サングリフェリンモジュール12の還元ループの下流に相同領域は、SmaIにより直線化され脱リン酸化されたpUC19中にクローニングされ、プラスミドpMGo125をもたらした。pUC19中の1956bpPCR産物の配向は、インサートのHindIII部位がpUC19ポリリンカーのHindIII部位に隣接するようなものであった。pMGo125中のインサートの配列は、シーケンシングにより確認した。がEcoRI及びHindIIIにより消化されるときに生じる大きな骨格フラグメントに、3パートライゲーションで一緒にクローニングする。両インサートを含む正しくクローニングされたプラスミドを制限酵素分析により特定し、正しいプラスミドの1つをpMGo130と称する。pMGo130を、好適なNheIBglIIフラグメント上の還元ループが、NheI及びBglII部位にクローニングされて、DNA配列がインフレームであるI型PKSモジュールの一部を生み出し、翻訳されてアミノ酸配列を与えるように設計する。入来ループ。ラパマイシンモジュール13ループは、その両側にアベルメクチンモジュール2由来の適切な相同領域があり、pPF137に存在する。pPF137は、Gaisserら、2003により記載されたとおりpJLK137から構築される。pJLK137の構築の完全な説明は、国際公開第00018271998号及びその中の引用文献に含まれている。手短な概要は下記のとおりである:ラパマイシンモジュール13ループを、導入された制限酵素部位を含む下記のオリゴを使用し、テンプレートラパマイシンコス31を使用して、PCR増幅により単離した。このフラグメントを、SmaIにより先に消化され脱リン酸化されているpUC18中にクローニングしてpJLK120を与えた。次いで、このループを、下記のとおり構築したpJLK133に導入した:BglIINheIフラグメント上でpJLK117からリンカーを除き、アベルメクチンモジュール2の2つの相同領域の間でクローニングして、pJLK133を与えた。ラパマイシンモジュール13還元ループを、BglIINsiIフラグメントとしてpJLK120から、BglllNsiIにより消化されたpJLK133中にクローニングした。pJLK117は、エリスロマイシン装入モジュールの最後とアシルキャリアタンパク質の最初の間のDNAセグメントが、下記の制限酵素、AvrII、BglII、SnaBI、PstI、SpeI、NsiI、Bsu36I、及びNheIの認識部位を含む合成オリゴヌクレオチドリンカーにより置換されている点が異なり、該特許出願に記載されるとおりに複数の工程で製造した。これらの制限酵素部位は、エリスロマイシンPKSのモジュール2における元のタンパク質配列の崩壊を最小限にして組み込むことができるので選択した。第1のリンカー含有ベクター、pJLK114は、アニーリングにより生成したオリゴPlf及びPlbを含む。プラスミドpJLK117は、pJLK114のリンカーの5末端を、唯一の違いが、HpaI部位、GTTAACがNheI部位、GCTAGCにより置換されていることであるフラグメントにより置換して構築した。この実施例のラパマイシンモジュール13還元ループの源はpPF137である。当業者は、このフラグメントを得るために、この複雑な工程の系列を追う必要がないことを認識するだろう。同じフラグメントは下記のとおり得られる:最初に、pUC18、又はpUC19の多重クローニング領域を、部位BglII、NsiI、及びNheIを含む合成リンカーにより置換できるが、例えば、これは、pUCベクターを、EcoRI及びHindIIIにより消化させ、アニールされると適切なオーバーハングを残し消化された骨格にライゲートする2つのオリゴヌクレオチドを使用して先に列記された部位を持つ合成リンカーを作ることにより達成できる。NsiI部位とNheI部位との間にpJLK117のリンカーの配列を組み込むことは、要求される配列の一部を与え、残りは、ラパマイシンコス31などのコスミド又はストレプトマイセスハイグロスコピカス及びMGo020を使用して、KODHotStartDNAポリメラーゼ及びテンプレートとしてのストレプトマイセス属A92308110由来のAlwNIにより消化されたゲノムDNAの5kb~6kbフラクションを使用して、3176bpDNAフラグメントを標準的なPCR反応において増幅する。このフラクションは、サングリフェリン遺伝子クラスターの5402bpAlwNIフラグメントを含む。或いは、ストレプトマイセス属A92308110由来の未消化のゲノムDNAをテンプレートとして使用する。ゲノムDNAは、EdgeBioSystems社製細菌ゲノムDNA精製キットを使用して得られる。5伸長は、制限部位を導入して、増幅されたフラグメントのフランキング領域とインフレームでのクローニングを促進するように、各オリゴにおいて設計する。3176bpPCR産物は、サングリフェリンモジュール6の還元ループを含む。3176bpPCR産物を、SmaIにより直線化され脱リン酸化されているpUC19中にクローニングして、プラスミドpMGo127をもたらす。pKC1139WMB02137及びpMGo127は、それぞれNheI及びBglIIにより消化されて、ラパマイシンモジュール13還元ループ及びサングリフェリンモジュール6還元ループを単離する。各ループは、NheI及びBglIIにより消化されたpMGo130中にクローニングされる。インサートを含むプラスミドを制限酵素分析により分析し、ラパマイシンモジュール13還元ループを含む1つの正しいプラスミドをpMGo132と称し、サングリフェリンモジュール6還元ループを含む1つの正しいプラスミドをpMGo133と称する。pMGo132及びpMGo133は、二重組換えによりサングリフェリンモジュール12中で還元ループ交換を実施するのに適切なDNAインサートをそれぞれ含む。各インサートを、EcoRIHindIIIフラグメントとして、EcoRI及びHindIIIにより消化されたpKC1139中にクローニングして、ストレプトマイセス属の形質転換及び形質転換体の選別のための好適なプラスミド機能並びに温度感受性起源を与える。インサート含有プラスミドを制限酵素分析により分析し、ラパマイシンモジュール13還元ループを持つフラグメントを含む1つの正しいプラスミドをpMGo136と称し、サングリフェリンモジュール6還元ループを持つフラグメントを含む1つの正しいプラスミドをpMGo137と称する。の接合及びサングリフェリンモジュール12における還元ループ交換の操作プラスミドpMGo136及びpMGo137を、標準的な技術を利用してエシェリキアコリET12567pUZ8002中に形質転換し、アプラマイシン、カナマイシン、及びクロラムフェニコールを含む2TYプレート上で選別する。生じた株を使用して、アプラマイシン、カナマイシン、及びクロラムフェニコールを含む3mLの液体2TYに接種し、37°C、250rpmで一晩インキュベートする。各培養物の08mLを使用して、50mLFalcon管中で、アプラマイシン、カナマイシン、及びクロラムフェニコールを含む10mLの液体2TYに接種し、約05のOD600nmに達するまで、37°C、250rpmでインキュベートする。生じた培養物を、4°C、3500rpmで10分間遠心分離し、遠心分離を利用して10mLの2TY培地で2回洗浄し、各洗浄後に細胞をペレットにする。生じたペレットを05mLの2TYに再懸濁させ、すぐ使用できるよう氷の上に保つ。このプロセスを、以下に記載するストレプトマイセス胞子の調製の完了と同時になるように時間を合わせる。ストレプトマイセス属A92308110の胞子を、1~2週経ったコンフルエントなプレートから、約3mLの20グリセロールに再懸濁させ、2つのエッペンドルフ管に等分することにより回収する。或いは、同様に調製した、約15mLの凍結保存された胞子懸濁液を使用する。胞子を遠心分離し、05mL50mMTES緩衝液に再懸濁させる前に1mLの50mMTES緩衝液で2回洗浄する。この管に、水浴中で50°Cで10分間ヒートショックを与え、その後05mLのTSB培地を加え、EppendorfThermomixercompact中で、37°Cで4~5時間インキュベートする。調製したエシェリキアコリET12567pUZ8002pMGo136及びエシェリキアコリET12567pUZ8002pMGo137を、それぞれ、11の比及び13の比でBIOT4370と混合し、直ちにR6プレートに拡げ、37°Cのインキュベーターに移す。およそ2時間のインキュベーションの後、これらのプレートを、ナリジクス酸を含む2mLの滅菌水で覆い、50μgLの最終プレート内濃度を与える。プレートを37°Cのインキュベーターに一晩戻し、アプラマイシンを含む2mLの滅菌水で覆い、20~25μgLの最終プレート内濃度を与える。或いは、プレートを最初に16~18時間インキュベートし、次いでナリジクス酸溶液で覆い、1~2時間乾燥させ、アプラマイシン溶液で覆う。接合完了体コロニーは約4~7日後に現れ、アプラマイシン及びナリジクス酸を含むISP4培地にパッチし、37°Cでインキュベートする。温度感受性起源がこの温度では機能しないので、アプラマイシン存在下での37°Cでのインキュベーションは、プラスミドの一体化が起こることを確実にするはずである。一体化は、ゲノムとプラスミドインサートとの間に相同性のあるフランキング領域の一方で起こるはずである。十分な菌糸成長が観察されると、アプラマイシンを含む37°CのISP4培地に再パッチし、胞子形成させる。次いで、ISP4にパッチし、37°Cで各回3~4日間インキュベートすることにより、株を3回継代培養する温度感受性プラスミドの除去を促進するため。最後に、株をISP4にパッチし、28°Cでインキュベートして胞子形成させる。胞子を回収し、28°CのISP4プレートで段階希釈し、単一のコロニーの選別を可能にする。胞子形成した単一のコロニーを、アプラマイシンを含む、又は含まないISP4プレートに二重にパッチして、プラスミドを放出するコロニーを特定し、約7日間成長させ、サングリフェリン及びサングリフェリンアナログの産生に関して試験する。分析のために選択された株は、アプラマイシンの存在下で成長しないものであり、望ましくは二次組換えによる耐性マーカーの損失を示している。、60gLグリセロール、21gLMOPSpH68を含む滅菌ファルコン管に移す。培養物を、1インチ工程の振盪インキュベーターで、24°C、300rpmで5日間成長させてから、採取する。各細菌培養物の08mLを除き、小分けの前に培養物中の樹脂の適切な廃棄を確実にしながら、2mLエッペンドルフ管に小分けする。08mLのアセトニトリル及び15μLのギ酸を加え、管を30分間混合する。混合物を遠心分離により清澄化し、150μLの抽出物を除いてHPLCバイアルに入れ、HPLCにより分析する。及び亜リン酸トリエチルの混合物を、130°Cで8時間攪拌した。該反応混合物を室温に冷却し、分取HPLCにより精製すると、中間体146を無色の油として与えた。を、室温の8及びCs2CO3の攪拌アセトン溶液に加えた。該混合物を室温で一晩攪拌し、真空中で濃縮した。残渣を酢酸エチルで抽出し、水で洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させ、残渣を分取TLCにより精製すると、22mgの147を得て、次の工程に直接使用した。中のNaHの懸濁液に、146の無水THF溶液を、N2雰囲気下3°Cで攪拌しながら滴加した。次いで、該溶液を透明になるまで室温で攪拌した。147の無水THF溶液を該透明溶液に滴加し、混合物を室温で30分間攪拌した。該混合物を水でクエンチし、THFを減圧下で蒸発させた。残渣を酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、次いで乾燥させた。溶媒を真空中で除去し、残渣を分取TLCにより精製すると、12mgの粗製の144を得たが、これを再び分取HPLCにより精製すると、生成物を白色の固体として与えた。LCMS808MH。引用文献本願において言及された特許及び特許出願を含む全引用文献は、引用により最大限に本明細書に組み込まれる。明細書及び以下の請求項において、文脈から反対の意味が要求されない限り、含むcompriseという言葉並びに含むcomprises及び含んでいるcomprisingなどの変形体は、述べられた整数若しくは工程又は整数の群の包含を意味するが、他の整数若しくは工程又は整数若しくは工程の群の排除を意味しないと理解されるだろう。